(57)【要約】アザライド異性体の混合物と製薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物の抗生組成物の単回用量を投与することによって、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法が開示される。アザライド異性体の混合物と製薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物の抗生組成物の単回用量を投与することによって、哺乳動物において急性若しくは慢性の注射部位寛容を高める方法も開示される。アザライド異性体の混合物と製薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物、及び単回用量投与における使用のための使用説明書を含んでなる組み合わせ物も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法であって、そのような治療若しくは予防の必要な哺乳動物へ、
（ａ）式（Ｉ）：
【化１】
2004516233.tif 000034
の化合物又はその製薬的に許容される塩と、
式（ＩＩ）：
【化２】
2004516233.tif 000035
の化合物又はその製薬的に許容される塩［式中：両方のＲ基は同一であり、水素、Ｃ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル基、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基からなる群から選択される］の混合物；及び
（ｂ）製薬的に許容される賦形剤：
を含んでなる組成物の有効量の単回用量を投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項２】
式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩が、それぞれ約９０％±４％と約１０％±４％の比で存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒがｎ−プロピルである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
製薬的に許容される賦形剤が：
（ａ）水；
（ｂ）混合物の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモルの全体濃度で存在する１種又はそれ以上の酸；及び
（ｃ）組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の水混和性共溶媒を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項５】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒が、エタノール、イソプロパノール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールジブチルエーテル、ポリエチレングリコール−３００、ポリエチレングリコール−４００、プロピレングリコール、グリセリン、２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、グリセロールホルマル、ジメチルスルホキシド、ジブチルセベケート、ポリソルベート８０、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒がプロピレングリコールである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
プロピレングリコールが組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの量で存在する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の抗酸化剤をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
１種又はそれ以上の抗酸化剤が、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、ｌ−アスコルビン酸、エリトルビン酸、アセチルシステイン、システイン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、チオ尿素、ジチオスレイトール、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレチック酸、没食子酸プロピル、α−トコフェロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
１種又はそれ以上の抗酸化剤がモノチオグリセロールである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
モノチオグリセロールが組成物の１ｍＬにつき約４ｍｇ〜約６ｍｇの量で存在する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の保存剤をさらに含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１３】
１種又はそれ以上の保存剤が、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム、フェノール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
１種又はそれ以上の保存剤がフェノールであり、組成物の１ｍＬにつき約２．０〜約３．０ｍｇの量で存在する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
１種又はそれ以上の酸が、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−及びＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−及びＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンフルスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−グルカル酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、ラクトビオン（ｌａｃｔｏｂｉｏｎｉｃ）酸、リジン酸、マンデル酸、ナパジシル（ｎａｐａｄｉｓｙｌｉｃ）酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
細菌若しくは原生動物感染症が、ウシ呼吸系疾患、ブタ呼吸系疾患、ウシ感染性角結膜炎、ウシコクシジウム症、ブタ回腸炎、ウシ乳腺炎、仔ウシ腸疾患、ブタ腸疾患、イヌ肺炎、ネコ肺炎、イヌ膿皮症、ネコ膿皮症、パスツレラ症、アナプラズマ症、感染性ケラチン炎；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（インフルエンザ菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（モラクセラ・カタラーリス）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ぶどう球菌）又は Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ペプトストレプトコッカス）種による感染に関連した肺炎、中耳炎、副鼻腔炎、気管支炎、扁桃炎、及び乳突炎；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿連鎖球菌）、連鎖球菌Ｃ及びＧ群、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ 又は Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ による感染に関連した咽頭炎、リウマチ熱、及び糸球体腎炎；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎マイコプラズマ）、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ（レジオネラ・ニューモフィラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した気道感染症；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陽性ぶどう球菌（即ち、Ｓ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓ． ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、等）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ストレプトコッカス・アガラクチエ）、Ｃ〜Ｆ群連鎖球菌（微小コロニー連鎖球菌）、ビリダンス連鎖球菌、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ（コリネバクテリウム・ミヌチシマム）、クロストリジウム種、又は Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ による感染に関連した非合併性皮膚及び軟組織感染症、膿瘍、骨髄炎、及び産褥熱；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ（腐生ぶどう球菌）又は Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（腸球菌）種による感染に関連した非合併性急性尿路感染症；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（トラコーマ・クラミジア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳菌）、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒トレポネーマ）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ（ウレアプラズマ・ウレアリチカム）又は Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ（淋菌）による感染に関連した性交伝染病；Ｓ． ａｕｒｅｕｓ 又は連鎖球菌Ａ、Ｂ及びＣ群による感染に関連した毒素疾患；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）による感染に関連した潰瘍；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ（回帰熱ボレリア）による感染に関連した全身熱性症候群；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ボレリア・バルグドルファ）による感染に関連したライム病；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ、Ｓ． ａｕｒｅｕｓ��Ｓ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ． ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｈ． ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、又は Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ． による感染に関連した結膜炎、角膜炎、及び涙嚢炎；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ（トリ型結核菌）又はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ（マイコバクテリウム・イントラセルラーレ）による感染に関連した播種性マイコバクテリウム・アビウム複合（ＭＡＣ）疾患；Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ（カンピロバクター・イェユニ）による感染に関連した胃腸炎；Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．（クリプトスポリジウム種）による感染に関連した腸内原生動物；ビリダンス連鎖球菌による感染に関連した歯性感染症；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（百日咳菌）による感染に関連した永続性の咳；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（クロストリジウム・ペルフリンゲンス）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．（バクテロイデス種）による感染に関連した気腫壊疽；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した動脈硬化症；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．（フゾバクテリウム種）による感染に関連したウシ腐蹄症；Ｅ． ｃｏｌｉ（大腸菌）による感染に関連したウシ子宮炎；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ（フゾバクテリウム・ネクロフォールム）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｎｏｄｏｓｕｓ（バクテロイデス・ノドーズス）による感染に関連したウシ毛性いぼ（ｈａｉｒｙ ｗａｒｔｓ）；原生動物による感染に関連したウシ早発性流産；Ｅ． ｃｏｌｉ による感染に関連したイヌ及びネコの尿路感染症；Ｓｔａｐｈ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ぶどう球菌）、Ｓｔａｐｈ． ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、ｃｏａｇｕｌａｓｅ ｎｅｇ． Ｓｔａｐｈ． 又は Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ による感染に関連したイヌ及びネコの皮膚及び軟組織感染症；Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐｐ．（アルカリゲネス種）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．、 Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（エンテロバクター種）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ユウバクテリウム）、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ、又は Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ による感染に関連したイヌ及びネコの歯若しくは口の感染症；Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｑｕｉ（アクチノバシラス・エクイ）、Ｒｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ（ストレプトコッカス・エクイ）、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ（ストレプトコッカス・ズーエピデミクス）に関連したウマの感染症からなる群から選択される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１７】
哺乳動物において急性若しくは慢性の注射部位寛容を高める方法であって、それの必要な哺乳動物へ、
（ａ）式（Ｉ）：
【化３】
2004516233.tif 000036
の化合物又はその製薬的に許容される塩と、
式（ＩＩ）：
【化４】
2004516233.tif 000037
の化合物又はその製薬的に許容される塩［式中：両方のＲ基は同一であり、水素、Ｃ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル基、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基からなる群から選択される］の混合物；及び
（ｂ）製薬的に許容される賦形剤：
を含んでなる組成物の有効量の単回用量を投与することを含んでなる、前記方法。
【請求項１８】
式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩が、それぞれ約９０％±４％と約１０％±４％の比で存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒがｎ−プロピルである、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２０】
製薬的に許容される賦形剤が：
（ａ）水；
（ｂ）混合物の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモルの全体濃度で存在する１種又はそれ以上の酸；及び
（ｃ）組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の水混和性共溶媒を含む、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項２１】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒が、エタノール、イソプロパノール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールジブチルエーテル、ポリエチレングリコール−３００、ポリエチレングリコール−４００、プロピレングリコール、グリセリン、２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、グリセロールホルマル、ジメチルスルホキシド、ジブチルセベケート、ポリソルベート８０、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒がプロピレングリコールである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
プロピレングリコールが組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの量で存在する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の抗酸化剤をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
１種又はそれ以上の抗酸化剤が、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、ｌ−アスコルビン酸、エリトルビン酸、アセチルシステイン、システイン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、チオ尿素、ジチオスレイトール、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレチック酸、没食子酸プロピル、α−トコフェロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
１種又はそれ以上の抗酸化剤がモノチオグリセロールである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
モノチオグリセロールが組成物の１ｍＬにつき約４ｍｇ〜約６ｍｇの量で存在する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の保存剤をさらに含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
１種又はそれ以上の保存剤が、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム、フェノール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
１種又はそれ以上の保存剤がフェノールであり、組成物の１ｍＬにつき約２．０〜約３．０ｍｇの量で存在する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
１種又はそれ以上の酸が、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−及びＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−及びＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンフルスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−グルカル酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、ラクトビオン（ｌａｃｔｏｂｉｏｎｉｃ）酸、リジン酸、マンデル酸、ナパジシル（ｎａｐａｄｉｓｙｌｉｃ）酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３２】
細菌若しくは原生動物感染症が、ウシ呼吸系疾患、ブタ呼吸系疾患、ウシ感染性角結膜炎、ウシコクシジウム症、ブタ回腸炎、ウシ乳腺炎、仔ウシ腸疾患、ブタ腸疾患、イヌ肺炎、ネコ肺炎、イヌ膿皮症、ネコ膿皮症、パスツレラ症、アナプラズマ症、感染性ケラチン炎；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（インフルエンザ菌）、Ｍｏｒｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（モラクセラ・カタラーリス）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ぶどう球菌）又は Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ペプトストレプトコッカス）種による感染に関連した肺炎、中耳炎、副鼻腔炎、気管支炎、扁桃炎、及び乳突炎；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿連鎖球菌）、連鎖球菌Ｃ及びＧ群、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ 又は Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ による感染に関連した咽頭炎、リウマチ熱、及び糸球体腎炎；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎マイコプラズマ）、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ（レジオネラ・ニューモフィラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した気道感染症；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陽性ぶどう球菌（即ち、Ｓ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓ． ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、等）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ストレプトコッカス・アガラクチエ）、Ｃ〜Ｆ群連鎖球菌（微小コロニー連鎖球菌）、ビリダンス連鎖球菌、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ（コリネバクテリウム・ミヌチシマム）、クロストリジウム種、又は Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ による感染に関連した非合併性皮膚及び軟組織感染症、膿瘍、骨髄炎、及び産褥熱；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ（腐生ぶどう球菌）又は Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（腸球菌）種による感染に関連した非合併性急性尿路感染症；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（トラコーマ・クラミジア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳菌）、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒トレポネーマ）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ（ウレアプラズマ・ウレアリチカム）又は Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ（淋菌）による感染に関連した性交伝染病；Ｓ． ａｕｒｅｕｓ 又は連鎖球菌Ａ、Ｂ及びＣ群による感染に関連した毒素疾患；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）による感染に関連した潰瘍；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ（回帰熱ボレリア）による感染に関連した全身熱性症候群；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ボレリア・バルグドルファ）による感染に関連したライム病；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ、Ｓ． ａｕｒｅｕ��、Ｓ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ． ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｈ． ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、又は Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ． による感染に関連した結膜炎、角膜炎、及び涙嚢炎；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ（トリ型結核菌）又はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ（マイコバクテリウム・イントラセルラーレ）による感染に関連した播種性マイコバクテリウム・アビウム複合（ＭＡＣ）疾患；Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ（カンピロバクター・イェユニ）による感染に関連した胃腸炎；Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．（クリプトスポリジウム種）による感染に関連した腸内原生動物；ビリダンス連鎖球菌による感染に関連した歯性感染症；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（百日咳菌）による感染に関連した永続性の咳；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（クロストリジウム・ペルフリンゲンス）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．（バクテロイデス種）による感染に関連した気腫壊疽；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した動脈硬化症；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．（フゾバクテリウム種）による感染に関連したウシ腐蹄症；Ｅ． ｃｏｌｉ（大腸菌）による感染に関連したウシ子宮炎；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ（フゾバクテリウム・ネクロフォールム）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｎｏｄｏｓｕｓ（バクテロイデス・ノドーズス）による感染に関連したウシ毛性いぼ（ｈａｉｒｙ ｗａｒｔｓ）；原生動物による感染に関連したウシ早発性流産；Ｅ． ｃｏｌｉ による感染に関連したイヌ及びネコの尿路感染症；Ｓｔａｐｈ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ぶどう球菌）、Ｓｔａｐｈ． ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、ｃｏａｇｕｌａｓｅ ｎｅｇ． Ｓｔａｐｈ． 又は Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ による感染に関連したイヌ及びネコの皮膚及び軟組織感染症；Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐｐ．（アルカリゲネス種）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．、 Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（エンテロバクター種）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ユウバクテリウム）、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ、又は Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ による感染に関連したイヌ及びネコの歯若しくは口の感染症；Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｑｕｉ（アクチノバシラス・エクイ）、Ｒｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ（ストレプトコッカス・エクイ）、及びＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ（ストレプトコッカス・ズーエピデミクス）に関連したウマの感染症からなる群から選択される、請求項１７又は１８に記載の方法。
【請求項３３】
（ａ）（１）式（Ｉ）：
【化５】
2004516233.tif 000038
の化合物又はその製薬的に許容される塩［式中：両方のＲ基は同一であり、水素、Ｃ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル基、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基からなる群から選択される］の混合物；及び
（２）製薬的に許容される賦形剤：
を含んでなる組成物；及び
（ｂ）単回用量投与での使用についての使用説明書：
を含んでなる組み合わせ物（ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）。
【請求項３４】
式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩が、それぞれ約９０％±４％と約１０％±４％の比で存在する、請求項３３に記載の組み合わせ物。
【請求項３５】
Ｒがｎ−プロピルである、請求項３３又は３４に記載の組み合わせ物。
【請求項３６】
製薬的に許容される賦形剤が：
（ａ）水；
（ｂ）混合物の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモルの全体濃度で存在する１種又はそれ以上の酸；及び
（ｃ）組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の水混和性共溶媒を含む、請求項３３又は３４に記載の組み合わせ物。
【請求項３７】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒が、エタノール、イソプロパノール、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ジエチレングリコールジブチルエーテル、ポリエチレングリコール−３００、ポリエチレングリコール−４００、プロピレングリコール、グリセリン、２−ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、グリセロールホルマル、ジメチルスルホキシド、ジブチルセベケート、ポリソルベート８０、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項３６に記載の組み合わせ物。
【請求項３８】
１種又はそれ以上の水混和性共溶媒がプロピレングリコールである、請求項３７に記載の組み合わせ物。
【請求項３９】
プロピレングリコールが組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの量で存在する、請求項３８に記載の組み合わせ物。
【請求項４０】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の抗酸化剤をさらに含む、請求項３９に記載の組み合わせ物。
【請求項４１】
１種又はそれ以上の抗酸化剤が、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、ｌ−アスコルビン酸、エリトルビン酸、アセチルシステイン、システイン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、チオ尿素、ジチオスレイトール、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレチック酸、没食子酸プロピル、α−トコフェロール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項４０に記載の組み合わせ物。
【請求項４２】
１種又はそれ以上の抗酸化剤がモノチオグリセロールである、請求項４１に記載の組み合わせ物。
【請求項４３】
モノチオグリセロールが組成物の１ｍＬにつき約４ｍｇ〜約６ｍｇの量で存在する、請求項４２に記載の組み合わせ物。
【請求項４４】
組成物が、組成物の１ｍＬにつき約０．０１〜約１０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の保存剤をさらに含む、請求項３６に記載の組み合わせ物。
【請求項４５】
１種又はそれ以上の保存剤が、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム、フェノール、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項４４に記載の組み合わせ物。
【請求項４６】
１種又はそれ以上の保存剤がフェノールであり、組成物の１ｍＬにつき約２．０〜約３．０ｍｇの量で存在する、請求項４５に記載の組み合わせ物。
【請求項４７】
１種又はそれ以上の酸が、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−及びＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−及びＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンフルスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−グルカル酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、ラクトビオン（ｌａｃｔｏｂｉｏｎｉｃ）酸、リジン酸、マンデル酸、ナパジシル（ｎａｐａｄｉｓｙｌｉｃ）酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項３６に記載の組み合わせ物。
【請求項４８】
単回用量が、体重ｋｇにつき（ｍｇ／ｋｇ）式１及び２の化合物を一緒にして約０．５ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの範囲にある、請求項１に記載の方法。
【請求項４９】
単回用量が、体重ｋｇにつき（ｍｇ／ｋｇ）式１及び２の化合物を一緒にして約１．２５ｍｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲にある、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
単回用量が、体重ｋｇにつき（ｍｇ／ｋｇ）式１及び２の化合物を一緒にして約２．０ｍｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの範囲にある、請求項４９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
背景技術
本発明は、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防するためにアザライド（ａｚａｌｉｄｅ）抗生化合物の異性体の混合物を含んでなる医薬組成物を使用する方法に関する。さらに本発明は、アザライド抗生物質の異性体の混合物を投与することを含んでなる、哺乳動物において急性若しくは慢性の注射部位寛容を高める方法に関する。本発明はまた、アザライド抗生物質の異性体の混合物、製薬的に許容される賦形剤、及び、単回用量投与における使用のための使用説明書を含んでなる組み合わせ物にも関する。
【０００２】
哺乳動物、魚、及びトリの多種多様な細菌若しくは原生動物感染症に抗して活性なマクロライド抗生剤については以前に報告されている（例えば、国際特許公開ＷＯ９８／５６８０２号及びＷＯ９９／１２５５２号を参照のこと）。一般に、これらの化合物は、１つ又はそれ以上の糖部分が付いた１２〜２２の炭素原子のマクロ環式ラクトン環を有する。マクロライド抗生物質は５０Ｓリボソームサブユニットに作用して微生物のタンパク合成を阻害する。マクロライド抗生物質の例には、リンコマイシン、エリスロマイシンＡの誘導体であるアジスロマイシン、及び他のアザライド化合物が含まれる。
【０００３】
アザライド化合物を有効成分として含有する医薬組成物の開発は、重大な諸問題を提起してきた。あるアザライドは溶液中で異性化し得る。それ故に、単一の異性体又は一定比の諸異性体を含んでなる再現性のある抗生組成物の生産は困難であった。第二に、特定のアザライド異性体の一定量を含有する組成物は経時的に変化する可能性がある。第三に、アザライドのラクトン環及び糖は穏和な酸性若しくは塩基性ｐＨ環境においてさえ容易に加水分解され、抗生組成物の力価及び貯蔵寿命を減少させる。
【０００４】
本発明の目的は、上記の欠点を克服する抗生組成物を使用して哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法を提供することである。
環境若しくは食事の変化によるか、又は馴染みのない病原体を担っている新参の動物と一緒に収容されていることによってストレスを受ける家畜動物は、特に疾患に罹りやすい。ストレスが通常発生するのは、この動物たちが初めて売られたときであり、従って、これらの動物はリスク状態にあると知られている。多くの疾患はきわめて伝染性であり、群れにおいて高い死亡率及び有病率を引き起こす場合がある。ほとんどの抗生物質は ｉｎ ｖｉｖｏ では短い半減期を有する傾向があるので、病気の予防には多用量がしばしば必要とされる。さらに、病気の動物はこれら薬物の反復用量を必要とする。
【０００５】
従って、アザライド抗生化合物の異性体の混合物の単回用量を投与することを含んでなる、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法を提供することが本発明の目的である。
【０００６】
本明細書での参考文献の引用は、そのような参考文献が本発明の先行技術であることを示すものとして解釈されてはならない。
発明の要約
第一の態様では、本発明は、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法に関し、前記方法は、そのような治療若しくは予防の必要な哺乳動物へ、（ａ）式（Ｉ）：
【０００７】
【化６】
2004516233.tif 000002
の化合物又はその製薬的に許容される塩と
式（ＩＩ）：
【０００８】
【化７】
2004516233.tif 000003
の化合物又はその製薬的に許容される塩［式中：両方のＲ基は同一であり、水素、Ｃ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル基、及びＣ３〜Ｃ７シクロアルキル基からなる群から選択される］の混合物；及び（ｂ）製薬的に許容される賦形剤を含んでなる組成物の有効量の単回用量を投与することを含んでなる。
【０００９】
第二の態様では、本発明は、哺乳動物において急性若しくは慢性の注射部位寛容を高める方法に関し、前記方法は、それの必要な哺乳動物へ、（ａ）式（Ｉ）の化合物又はその製薬的に許容される塩と式（ＩＩ）の化合物又はその製薬的に許容される塩の混合物；及び（ｂ）製薬的に許容される賦形剤を含んでなる組成物の有効量の単回用量を投与することを含んでなる。
【００１０】
第三の態様では、本発明は、（ａ）（１）式（Ｉ）の化合物又はその製薬的に許容される塩と式（ＩＩ）の化合物又はその製薬的に許容される塩の混合物；及び（２）製薬的に許容される賦形剤；及び（ｂ）単回用量投与での使用についての使用説明書を含んでなる組み合わせ物に関する。
【００１１】
本発明は、「発明の詳細な説明」と、本発明の非限定的な態様を具体的に説明することを意図した代表的な実施例を参考にしてさらに十分に理解され得る。
発明の詳細な説明
【００１２】
【化８】
2004516233.tif 000004
本発明は、式（Ｉ）の化合物又はその製薬的に許容される塩と式（ＩＩ）の化合物又はその製薬的に許容される塩（式中：Ｒは上記に定義される）の混合物；及び、製薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物の有効量の単回用量を投与することを含んでなる、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防する方法に関する。好ましくは、Ｒはｎ−プロピルである。
【００１３】
１５員のアザライドである式Ｉの化合物は、１３員のアザライドである式ＩＩの化合物に関して異性体である。従って、本明細書で使用されるように「異性体の混合物」という用語は、式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と、式ＩＩの化合物である、その対応する１３員のアザライド異性体又はその製薬的に許容される塩との混合物を意味する。好ましい態様では、異性体の混合物は、式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物を、それぞれ約９０％±４％と約１０％±４％の比で含む。Ｒがｎ−プロピルである式Ｉの化合物（「Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ」）の化学名は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ，８Ｒ，１０Ｒ，１１Ｒ，１２Ｓ，１３Ｓ，１４Ｒ）−１３−（（２，６−ジデオキシ−３−Ｏ−メチル−３−Ｏ−メチル−４−Ｃ−（（プロピルアミノ）−メチル）−α−Ｌ−リボ−へキソピラノシル）オキシ−２−エチル−３，４，１０−トリヒドロキシ−３，５，８，１０，１２，１４−ヘキサメチル−１１−（（３，４，６−トリデオキシ−３−（ジメチルアミノ）−β−Ｄ−キシロ−へキソピラノシル）オキシ）−１−オキサ−６−アザシクロペンタデカン−１５−オンである。Ｒがｎ−プロピルである式ＩＩの化合物（「Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩ」）の化学名は、（３Ｒ，６Ｒ，８Ｒ，９Ｒ，１０Ｓ，１１Ｓ，１２Ｒ）−１１−（（２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−メチル−３−Ｏ−メチル−４−Ｃ−（（プロピルアミノ）メチル）−α−Ｌ−リボ−へキソピラノシル）オキシ）−２−（（１Ｒ，２Ｒ）−１，２−ジヒドロキシ−１−メチルブチル）−８−ヒドロキシ−３，６，８，１０，１２−ペンタメチル−９−（（３，４，６−トリデオキシ−３−（ジメチルアミノ）−β−Ｄ−キシロ−へキソピラノシル）オキシ）−１−オキサ−４−アザシクロトリデカン−１３−オンである。式Ｉの化合物は、式ＩＩの化合物のトランスラクトン化（ｔｒａｎｓｌａｃｔｏｎｉｚａｔｉｏｎ）反応から形成され得る。同様に、式ＩＩの化合物は、式Ｉの化合物のトランスラクトン化反応から形成され得る。
【００１４】
ＲがＨ又はＣ１〜Ｃ１０アルキルである式Ｉの化合物を入手する方法は、参照により本明細書に組込まれている、国際特許公開ＷＯ９８／５６８０２号に開示されている。国際特許公開ＷＯ９８／５６８０２号に開示されている方法はまた、特にＣ１〜Ｃ１０アルキルアミン若しくはアンモニア同等物の代わりに所望のＣ３〜Ｃ７シクロアルキルアミンを選択することによって、ＲがＣ３〜Ｃ７シクロアルキルである式Ｉの化合物を入手するために使用され得る。式ＩＩの化合物を入手する方法は本明細書で記載される。式Ｉ及び式ＩＩの化合物は、活性のある抗生剤である。
【００１５】
式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物を約９０％±４％と約１０％±４％の比で含んでなる組成物は、それらの出発比率から独立して、本明細書に開示される方法を使用して、速やかに入手され得る。式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩の約９０％±４％と約１０％±４％という比率は異性体の平衡混合物を構成すると考えられている。従って、本明細書で使用されるように「異性体の平衡混合物」という用語は、式Ｉの化合物又はその製薬的に許容される塩と式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩がそれぞれ約９０％±４％と約１０％±４％の比で存在する、異性体の混合物を意味する。異性体の平衡混合物を含んでなる抗生組成物は一貫して生産され得て、試験若しくは消費者使用についての標準品を提供する。このように、異性体の平衡混合物を含んでなる組成物はきわめて望ましい。
【００１６】
Ｃ１〜Ｃ１０直鎖若しくは分岐鎖アルキル基の例には、限定しないが、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−ブチル、２−メチル−１−プロピル、２−メチル−２−プロピル、１−ペンチル、２−ペンチル、３−ペンチル、２−メチル−１−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−３−ブチル、２，２−ジメチル−１−プロピル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−１−ペンチル、３−メチル−１−ペンチル、４−メチル−１−ペンチル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、２，２−ジメチル−１−ブチル、３，３−ジメチル−１−ブチル、２−エチル−１−ブチル、１−ヘプチル、２−ヘプチル、３−ヘプチル、２−メチル−１−ヘキシル、３−メチル−１−ヘキシル、４−メチル−１−ヘキシル、２−メチル−２−ヘキシル、３−メチル−２−ヘキシル、４−メチル−２−ヘキシル、２，２−ジメチル−１−ペンチル、３，３−ジメチル−１−ペンチル、４，４−ジメチル−１−ペンチル、１−オクチル、２−オクチル、３−オクチル、４−オクチル、２−メチル−１−ヘプチル、３−メチル−１−ヘプチル、４−メチル−１−ヘプチル、２−メチル−２−ヘプチル、２，２−ジメチル−１−ヘキシル、２−エチル−１−ヘキシル、３−エチル−１−ヘキシル、４−エチル−１−ヘキシル、１−ノニル、２−ノニル、３−ノニル、４−ノニル、２−メチル−１−オクチル、３−メチル−１−オクチル、４−メチル−１−オクチル、５−メチル−１−オクチル、２，２−ジメチル−１−ヘプチル、２−エチル−１−ヘプチル、３−エチル−１−ヘプチル、４−エチル−１−ヘプチル、１−デシル、２−メチル−１−ノニル、３−メチル−１−ノニル、４−メチル−１−ノニル、５−メチル−１−ノニル、２，２−ジメチル−１−オクチル、２−エチル−１−オクチル、３−エチル−１−オクチル、４−エチル−１−オクチル、及び５−エチル−１−オクチルが含まれる。
【００１７】
Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例には、限定しないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロヘプチル基が含まれる。
「製薬的に許容される塩」という語句には、本明細書で使用されるように、限定しないが、本組成物に使用される化合物中に存在する塩基性アミノ基の塩が含まれる。本来塩基性である、本発明の方法に有用な化合物は、様々な無機及び有機酸と多種多様な塩を形成することが可能である。そのような塩基性化合物の製薬的に許容される酸付加塩を製造するために使用され得る酸は、無毒の酸付加塩即ち、製薬的に許容されるアニオンを含有する塩を形成するものであり、限定しないが、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−及びＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−及びＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンフルスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−グルカル酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、ラクトビオン酸、リジン酸、マンデル酸、ナパジシル酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、及びこれらの混合物が含まれる。上記中の無機酸は、好ましくは、その水溶液の形態で使用され；より好ましくは、無機酸は、その希釈（例、＜２Ｍ）水溶液の形態で使用される。上記中の有機酸は、希釈水溶液又は有機溶液の形態で使用され得て、ここで有機溶液は、この有機酸と式Ｉの化合物の両方を十分に溶媒和する溶媒を含む。
【００１８】
本発明の方法に有用な化合物は、上記の酸に加えて、様々なアミノ酸と製薬的に許容される塩を形成する場合がある。
式ＩＩの化合物は、式Ｉの化合物を酸又は塩基と接触させることによって入手され得る。
【００１９】
この点で有用な酸には、限定しないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、硫酸及び硝酸のような無機酸；及び、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸のような有機酸が含まれる。無機酸は、好ましくは、その水溶液の形態で使用され；より好ましくは、無機酸は、その希釈（例、＜２Ｍ）水溶液の形態で使用される。有機酸は、希釈水溶液又は有機溶液の形態で使用され得て、ここで有機溶液は、この有機酸と式Ｉ及びＩＩの化合物の両方を十分に溶媒和する溶媒を含む。
【００２０】
この点で有用な塩基には、ナトリウム、リチウム、カリウム、マグネシウム、又はカルシウムの水酸化物；ナトリウム、リチウム、又はカリウムの炭酸塩及び重炭酸塩；及び、マグネシウムの炭酸塩、又は重炭酸若しくは炭酸カルシウムのような無機塩基が含まれる。また有用であるのは、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、コリジン、ルチジン、及びこれらの混合物のような有機塩基である。好ましくは、無機塩基は、希釈水溶液の形態で使用される。好ましくは、有機塩基は、希釈有機溶液の形態で使用される。無機若しくは有機塩基は、無機若しくは有機酸よりも好ましい。
【００２１】
式Ｉの化合物は酸若しくは塩基へ加えることが可能であるか、又はその逆も可能である。いずれのやり方でも、式Ｉの化合物の酸若しくは塩基との反応は、式Ｉの化合物と酸若しくは塩基の混合物を、ほぼ室温〜約１００℃の温度で、好ましくはほぼ室温〜約６０℃の温度で、そしてより好ましくは約３０℃〜約４０℃の温度で加熱することによって促進される。そのような加熱は、約２０分〜約４８時間の間、好ましくは約１時間〜約３６時間の間、起こり得る。
【００２２】
式ＩＩの化合物又はその製薬的に許容される塩はまた、式Ｉの化合物を溶媒の存在下で加熱することによって入手され得る。
そのような加熱は、ほぼ室温〜約１００℃の温度で、好ましくはほぼ室温〜約６０℃の温度で、そしてより好ましくは約３０℃〜約４０℃の温度で達成される。この加熱は、約２０分〜約４８時間の間、好ましくは約１時間〜約３６時間の間、起こり得る。
【００２３】
有用な溶媒は式Ｉの化合物を十分に溶媒和するものであり、限定しないが、低級アルカノール、ジエチルエーテル、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、塩化メチレン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリジノン、等、さらにこれらの混合物が含まれる。
【００２４】
しかしながら、式Ｉの化合物の式ＩＩの化合物への変換は、プロトン溶媒を含む溶媒系で最も速やかに進行する。有用なプロトン溶媒には、限定しないが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソ−ブタノール、及びｓｅｃ−ブタノールのような低級アルカノール；フェノール、ハロフェノール、ナフトール、等のようなフェノール性化合物；水、及びこれらの混合物が含まれる。しかしながら、指摘しておくべきは、プロトン溶媒がカルボン酸ではないことである。
【００２５】
溶媒系がプロトン溶媒を含む場合、このプロトン溶媒は、約１０％〜約７５％容量の量で、好ましくは約２５％〜約６０％容量の量で存在する。
当業者には、加熱温度で加熱される場合、式Ｉの化合物が加熱される溶媒においてこのプロトン溶媒が混和可能となることが理解されよう。
【００２６】
好ましくは、溶媒系はアセトニトリルを含む。より好ましくは、溶媒系は低級アルカノール又は水をさらに含む。溶媒系が低級アルカノールを含む場合、この低級アルカノールは、好ましくはメタノールである。
【００２７】
式ＩＩの化合物は、標準的な手段、例えば再結晶；カラム、調製プレート、又はＣＨＲＯＭＡＴＯＴＲＯＮ（登録商標）装置を使用するクロマトグラフィーを介して、又は当業者によって知られているその他の手段によって、単離若しくは精製され得る。クロマトグラフィーを利用して式ＩＩの化合物を単離するか又は精製すると、本発明者たちは、炭化水素溶媒及び有機アミンを含む溶出系が、他の溶出系に比べ、高められた分離結果を提供することを発見した。この点で有用な炭化水素溶媒には、限定しないが、ペンタン、ヘキサン若しくはヘキサン類（ｈｅｘａｎｅｓ）、ヘプタン、石油エーテル、ベンゼン、トルエン、キシレン、等が含まれる。好ましくは、炭化水素溶媒は、ヘキサン若しくはヘキサン類である。有用な有機アミンには、限定しないが、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン、コリジン、ルチジン、及びこれらの混合物が含まれる。好ましくは、有機アミンは、ジエチルアミンである。
【００２８】
有利にも、炭化水素溶媒及び有機アミンを含む溶出系は、極性有機溶媒をさらに含む。溶出系への極性有機溶媒の追加は、極性有機溶媒を含まない溶出系に比べ、式ＩＩの化合物の、他の化合物からのよりよい分離を提供する。有用な極性有機溶媒には、限定しないが、低級アルカノール、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリジノン、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、等が含まれる。好ましくは、極性有機溶媒は、アセトニトリルである。より好ましくは、溶出系は、ヘキサン類、ジエチルアミン、及びアセトニトリルを含む。
【００２９】
炭化水素溶媒、有機アミン、及び場合による極性有機溶媒の比率は変化し得るが、一般には、炭化水素溶媒の有機アミンに対する比は、約１０：１〜約１：１、好ましくは約７：１〜約２：１の範囲にある。溶出系が極性有機溶媒をさらに含む場合、溶出系は、約１％〜約１５％容量の間で、好ましくは約１．５％〜約１０％容量の間で極性有機溶媒を含有する。
【００３０】
本発明の方法に有用な医薬組成物は、哺乳動物への適切な投与用の形態を提供するように、異性体の混合物を、好適な量の製薬的に許容される賦形剤と一緒に含む。
【００３１】
特定の態様では、「製薬的に許容される」という用語は、哺乳動物での使用について、連邦若しくは州政府の規制当局により承認されているか、又は米国薬局方又は他の一般に認知されている薬局方に収載されていることを意味する。「賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）」という用語は、異性体の混合物がともに投与される希釈剤、アジュバント、添加物、又は担体を意味する。そのような医薬賦形剤は、水及び油類のような液体であり得て、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油、等のような、石油、動物、植物、又は合成の起源のものが含まれる。医薬賦形剤は、生理食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素、等であり得る。さらに、助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤、及び着色剤が使用され得る。哺乳動物へ投与される場合、本発明の化合物と製薬的に許容される賦形剤は、好ましくは無菌である。本発明の組成物が静脈内投与される場合、水が好ましい賦形剤である。生理食塩水溶液と水性デキストロース及びグリセロール溶液もまた、液性の賦形剤として、特に注射溶液のために利用され得る。好適な医薬賦形剤にはまた、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米粒、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール、等のような添加物が含まれる。本組成物は、所望されるならば、少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝化剤も含有し得る。好ましい態様では、製薬的に許容される賦形剤は、（ｉ）水；（ｉｉ）混合物の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモルの全体濃度で存在する１種又はそれ以上の酸；及び（ｉｉｉ）組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で存在する１種又はそれ以上の水混和性共溶媒を含む。
【００３２】
本組成物は、溶液、懸濁液剤、乳濁液剤、錠剤、丸剤、ペレット、カプセル剤、液体含有カプセル剤、散剤、徐放性製剤、坐剤、乳濁液剤、エアゾール剤、噴霧剤の形態、又は使用に適した他の形態をとり得る。１つの態様では、製薬的に許容される賦形剤はカプセル剤である（例えば、米国特許第５，６９８，１５５号を参照のこと）。他の好適な医薬賦形剤の例は、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ による「レミントン製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」に記載されている。
【００３３】
本発明に有用である、異性体の平衡混合物を含んでなる組成物は、以下のように製造され得る。異性体の平衡混合物は混合異性体の溶液から入手される。好ましくは、異性体の平衡混合物を製造するために使用される、異性体の混合物は、実質的に純粋である式Ｉの化合物を含む。「実質的に純粋である」とは、本明細書で使用されるように、他に明記しなければ、少なくとも９７％の純度を有することを意味する。一般に、異性体の平衡混合物は、異性体の混合物の水溶液を１種又はそれ以上の酸の存在下で加熱することによって産生される。好ましい態様では、異性体の混合物と１種又はそれ以上の酸の水溶液が、約５．０〜約８．０、好ましくは約６．０〜約８．０のｐＨで、約５０℃〜約９０℃、好ましくは約６０℃〜約８０℃の間の温度まで、約０．５〜約２４時間、好ましくは約１〜約１０時間加熱される。最も好ましくは、異性体の混合物の溶液が、１種又はそれ以上の酸の存在下、約６．５〜約７．５のｐＨで、約６５℃〜約７５℃の間の温度まで、約１〜約８時間加熱される。平衡化される異性体の混合物の濃度は、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約５００ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約１００ｍｇ／ｍＬ〜約３００ｍｇ／ｍＬ、及び、最も好ましくは約２２５ｍｇ／ｍＬ〜約２７５ｍｇ／ｍＬの溶液に変化し得る。
【００３４】
異性体の平衡混合物を入手するのに有用な好適な酸には、限定しないが、酢酸、ベンゼンスルホン酸、クエン酸、臭化水素酸、塩酸、Ｄ−及びＬ−乳酸、メタンスルホン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、Ｄ−及びＬ−酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、アジピン酸、アスパラギン酸、カンフルスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ラウリル硫酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、リンゴ酸、ムチン酸、硝酸、ナフタレンスルホン酸、パルミチン酸、Ｄ−グルカル酸、ステアリン酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、安息香酸、コール酸、エタンスルホン酸、グルクロン酸、グルタミン酸、馬尿酸、ラクトビオン酸、リジン酸、マンデル酸、ナパジシル酸、ニコチン酸、ポリガラクツロン酸、サリチル酸、スルホサリチル酸、トリプトファン酸、及びこれらの混合物が含まれる。好ましくは、１種又はそれ以上の酸は、クエン酸及び塩酸である。存在する場合、クエン酸は、溶液の１ｍＬにつき約０．０２ミリモル〜約０．３ミリモルの濃度で存在する。１つの態様では、溶液の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモルの酸濃度が使用される。理論に縛られることなく言えば、異性体の混合物の溶液への酸の追加から形成される酸は、アザライド異性体そのものが塩基として作用するので、緩衝化効果を発揮すると考えられている。当業者には、どの酸を使用するかに従って所望のｐＨに必要な酸の量が変化すること、そして、所望の範囲内にｐＨを維持するには、酸と異性体の混合物の溶液へ追加の酸及び／又は塩基を加える場合があることがわかるだろう。好適な塩基には、限定しないが、アルカリ金属の水酸化物及び炭酸塩、アルカリ金属の重炭酸塩、及びアルカリ土類金属の水酸化物及び炭酸塩が含まれる。水酸化ナトリウムと水酸化カリウムが好ましい。上記に記載の酸及び塩基は、好便にも、その水溶液の形態で使用される。
【００３５】
異性体の混合物を含んでなる組成物は、哺乳動物の細菌若しくは原生動物感染症を治療するか又は予防するのに有用である。この組成物は、安定化した組成物と安定化した平衡化組成物の形成の中間体としても有用である。
【００３６】
本発明の方法において有用である、安定化組成物をつくる方法は、異性体の混合物を１種又はそれ以上の水混和性有機溶媒（「共溶媒」）で希釈することを含む。本発明の方法においても有用である、安定化した平衡化組成物をつくる方法は、異性体の平衡化混合物を１種又はそれ以上の共溶媒で希釈することを含む。共溶媒は、組成物における式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物の比に有意には影響を及ぼさないで、実際は、それらの構造強度を保存する。式Ｉの化合物、又は式ＩＩの化合物の「構造強度を保存すること」には、本明細書で使用されるように、限定しないが、例えばデスクラジノース（ｄｅｓｃｌａｄｉｎｏｓｅ）アザライドへの加水分解の速度を遅らせること、及び、例えば、ホルムアルデヒドと以下に定義されるアセトアルデヒド挿入生成物の副生成物形成の速度を遅らせることが含まれる。理論に縛られることなく言えば、共溶媒での希釈は、異性体の混合物の安定性を向上させると考えられている。さらに、共溶媒の存在のおかげで、安定化組成物又は安定化した平衡化組成物の注射時に経験される疼痛は、さほど安定化されていない組成物の注射から経験されるものより少ない可能性がある。組成物を安定化するのに有用な共溶媒には、限定しないが、エタノール及びイソプロパノールのようなアルコール；ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールブチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、及びジエチレングリコールジブチルエーテルのようなグリコールエーテル；ポリエチレングリコール−３００及びポリエチレングリコール−４００のようなポリエチレングリコール；プロピレングリコール及びグリセリンのようなグリコール；２−ピロリドン及びＮ−メチル−２−ピロリドンのようなピロリドン；グリセロールホルマル；ジメチルスルホキシド；ジブチルセベケート（ｄｉｂｕｔｙｌ ｓｅｂｅｃａｔｅ）；ポリソルベート８０のようなポリオキシエチレンソルビタンエステル；及びこれらの混合物が含まれる。好ましくは、注射溶液において組成物を安定化するのに有用な共溶媒には、限定しないが、エタノール、ポリエチレングリコール−３００及びポリエチレングリコール−４００のようなポリエチレングリコール、プロピレングリコール及びグリセリンのようなグリコール、２−ピロリドン及びＮ−メチル−２−ピロリドンのようなピロリドン、グリセロールホルマル、ジメチルスルホキシド、ポリソルベート８０のようなポリオキシエチレンソルビタンエステル、及びこれらの混合物が、より好ましくは、グリセロールホルマル、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、及びプロピレングリコールが、そして最も好ましくは、プロピレングリコールが含まれる。１つの態様では、医薬組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量の共溶媒がそれらを安定化するために使用される。好ましい態様では、医薬組成物の１ｍＬにつき約４００〜約６００ｍｇの共溶媒が使用される。
【００３７】
最も好ましい態様では、医薬組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの共溶媒が使用される。
１つの態様では、１種又はそれ以上の共溶媒が平衡化に先立って異性体の混合物へ加えられる。この場合、生じた混合物が、約５．０〜約８．０のｐＨで、好ましくは約６．０〜約８．０のｐＨで、約５０℃〜約９０℃、好ましくは約６０℃〜約８０℃の間の温度まで、約０．５〜約２４時間、好ましくは約１〜約１０時間加熱される。好ましい態様では、異性体の混合物の平衡化が共溶媒の不在下で行われ、それは平衡化組成物がほぼ室温まで冷えた後で、それへ加えられる。
【００３８】
共溶媒の追加後に、生じた溶液のｐＨを再調整して組成物の安定性をさらに高めることができる。ｐＨは、例えば、上記の酸若しくは塩基（例、１０％（ｗ／ｗ）ストック溶液）のある量を加え、そして、生じた溶液のｐＨを、例えばｐＨ計を使用して測定することによるような、当技術分野の当業者には知られた方法により調整される。１つの態様では、生じた溶液のｐＨが、必要ならば、約４．５〜約７．５、好ましくは約５．０〜約６．０、最も好ましくは約５．２〜約５．６へ調整される。
【００３９】
異性体の混合物と製薬的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物は、本発明の方法に有用である。好ましくは、医薬組成物は、水、１種又はそれ以上の酸、及び１種又はそれ以上の水混和性共溶媒をさらに含む。医薬組成物における異性体の混合物の量は、医薬組成物の１ｍＬにつき約５０ｍｇ〜医薬組成物の１ｍＬにつき約２００ｍｇに及ぶ。好ましくは、医薬組成物は、医薬組成物の１ｍＬにつき約７５ｍｇ〜約１５０ｍｇ、より好ましくは約９０〜約１１０ｍｇの異性体の混合物を含む。
【００４０】
医薬組成物は、なおさらに１種又はそれ以上の抗酸化剤を含み得る。抗酸化剤は、医薬組成物の酸化分解の速度を遅らせるか又はそれを防止する。好適な抗酸化剤には、限定しないが、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、ｌ−アスコルビン酸、エリトルビン酸、アセチルシステイン、システイン、モノチオグリセロール、チオグリコール酸、チオ乳酸、チオ尿素、ジチオスレイトール、ジチオエリスレイトール、グルタチオン、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレチック酸、没食子酸プロピル、α−トコフェロール、及びこれらの混合物が含まれる。当業者には、どの抗酸化剤を使用するかに従って抗酸化剤の量が変化することがわかるだろう。好ましい態様では、抗酸化剤は、存在する場合、医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの量で存在する。より好ましい態様では、抗酸化剤はモノチオグリセロールであり、医薬組成物の１ｍＬにつき約１ｍｇ〜約８ｍｇの量で存在する。最も好ましい態様では、抗酸化剤はモノチオグリセロールであり、医薬組成物の１ｍＬにつき約４ｍｇ〜約６ｍｇの量で存在する。
【００４１】
医薬組成物は、場合により、１種又はそれ以上の保存剤を含む。保存剤は、特に医薬組成物が空気に曝される場合、微生物の増殖の速度を遅らせるか又はそれを防止するのに有用である。有用な保存剤は、微生物の広域スペクトルに抗して有効であり；医薬組成物の貯蔵寿命にわたり物理的、化学的、及び微生物学的に安定であり；無毒であり；十分可溶性であり；組成物の他の成分と適合し；味及びにおいに関して許容される。好適な保存剤には、限定しないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、安息香酸、ベンジルアルコール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム、フェノール、及びこれらの混合物が含まれる。好ましい態様では、１種又はそれ以上の保存剤が、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、メチルパラベン／プロピルパラベンブチルパラベン複合物、及びフェノールからなる群から選択される。存在する場合、１種又はそれ以上の保存剤は、医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０１〜約１０ｍｇの量で存在する。好ましくは、１種又はそれ以上の保存剤はフェノールであり、医薬組成物の１ｍＬにつき約２．０〜約５．０ｍｇ、より好ましくは約２．０〜約３．０ｍｇの量で存在する。当業者には、本組成物に使用される保存剤の量がどの保存剤を選択するかに依存すること、そして、ある保存剤はより低い濃度で、医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇよりずっと低い濃度で使用され得ることがわかるだろう。
【００４２】
１つの態様では、本発明の方法に有用な医薬組成物は、約５．０〜約７．０のｐＨを有し、（１）医薬組成物の１ｍＬにつき約５０ｍｇ〜約２００ｍｇの量で存在する異性体の混合物；（２）医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０２ミリモル〜約０．３ミリモルの濃度で存在するクエン酸と、場合により、上記のｐＨ範囲を達成するのに有効な量の塩酸；（３）医薬組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で存在するプロピレングリコール；（４）医薬組成物の１ｍＬにつき約１ｍｇ〜約１５ｍｇの量で存在するモノチオグリセロール；及び（５）医薬組成物の１ｍＬにつき約１００〜約７５０ｍｇの量で存在する水を含む。好ましい態様では、異性体の混合物は、異性体の平衡混合物である。より好ましい態様では、異性体の平衡混合物は、Ｒがｎ−プロピルであるものである。
【００４３】
好ましい態様では、本発明の方法に有用な医薬組成物は、約５．０〜約６．０のｐＨを有し、（１）医薬組成物の１ｍＬにつき約７５ｍｇ〜約１５０ｍｇの量で存在する異性体の混合物；（２）医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０５ミリモル〜約０．１５ミリモルの量で存在するクエン酸と、場合により、上記のｐＨ範囲を達成するのに有効な量の塩酸；（３）医薬組成物の１ｍＬにつき約４００〜約６００ｍｇの量で存在するプロピレングリコール；（４）医薬組成物の１ｍＬにつき約１ｍｇ〜約８ｍｇの量で存在するモノチオグリセロール；及び（５）医薬組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約５５０ｍｇの量で存在する水を含む。より好ましくは、異性体の混合物は、異性体の平衡混合物である。より好ましい態様では、異性体の平衡混合物は、Ｒがｎ−プロピルであるものである。
【００４４】
より好ましい態様では、本発明の方法に有用な医薬組成物は、約５．２〜約５．６のｐＨを有し、（１）医薬組成物の１ｍＬにつき約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇの量で存在する異性体の混合物；（２）医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０７５ミリモル〜約０．１２５ミリモルの量で存在するクエン酸と、上記のｐＨ範囲を達成するのに有効な量の塩酸；（３）医薬組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの量で存在するプロピレングリコール；（４）医薬組成物の１ｍＬにつき約４ｍｇ〜約６ｍｇの量で存在するモノチオグリセロール；及び（５）医薬組成物の１ｍＬにつき約３００〜約５００ｍｇの量で存在する水を含む。最も好ましくは、異性体の混合物は、異性体の平衡混合物である。より好ましい態様では、異性体の平衡混合物は、Ｒがｎ−プロピルであるものである。
【００４５】
場合により、本発明の方法に有用な医薬組成物は、エンドユーザー、例えば、医師又は獣医師へ、単回用量投与での使用についての使用説明書と一緒に供給され得る。従って、本発明は、本発明の組成物と単回用量投与での使用についての使用説明書を含んでなる組み合わせ物を提供する。
【００４６】
医薬組成物は以下のようにして製造され得る。場合により窒素オーバーレイ（ｏｖｅｒｌａｙ）が付いたステンレス製のスチール若しくはガラスで裏打ちされたジャケット容器に試薬を加える。この反応容器へ注入用の水を加え、撹拌を開始する。この混合物を連続的に振り混ぜながら、それぞれの追加成分を加える。水の１ｍＬにつき約０．０２ミリモル〜約０．５ミリモルの濃度で酸を加え、溶かす。場合により、酸の水溶液、例えば塩酸の１０％（ｗ／ｗ）水溶液を加え、所望の範囲へｐＨを調整し、この溶液を混合する。この時点で、この水及び酸の混合物へ異性体の混合物を、凝集化を避けるためにゆっくりと少量づつ加える。ここでは、式Ｉの化合物を式ＩＩの化合物を加えることに先立って加え得るか、式ＩＩの化合物を式Ｉの化合物を加えることに先立って加え得るか、又は式Ｉの化合物と式ＩＩの化合物を一緒に加えることができる。異性体の混合物を溶かし、生じた溶液のｐＨを測定する。１つの態様では、異性体の混合物は、生じた溶液の１ｍＬにつき約５０ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約１００〜約３００ｍｇ／ｍＬ、そして最も好ましくは約２２５〜約２７５ｍｇ／ｍＬである。次いで、この溶液を約７０℃±１０℃の温度まで加熱し、異性体の平衡混合物が得られるまでこの温度で維持する。異性体の平衡混合物が得られたことを決定する方法には、ゲルクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、及び高速液体クロマトグラフィーが含まれる。一般に、本明細書に記載の諸条件を使用すれば、異性体の平衡混合物が約１〜約８時間で得られる。異性体の平衡混合物が得られたならば、生じた溶液を約２５℃±１０℃まで冷やす。この溶液を医薬組成物として使用し得る。好ましくは、この医薬組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約７５０ｍｇの量で共溶媒を加える。場合により、この医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０１ｍｇ〜約１０ｍｇの量で抗酸化剤を加える。存在するならば、医薬組成物の１ｍＬにつき約０．０１〜約１０ｍｇの量で保存剤を加え、例えば、１０％（ｗ／ｗ）水溶液としてか又は固体形態で酸及び／又は塩基を加えることによって、ｐＨを約５．０〜約８．０へ、好ましくは約５．０〜約６．０へ調整する。生じた混合物を所望の量へ希釈する。１つの態様では、異性体の平衡混合物の最終濃度は、生じた医薬組成物の１ｍＬにつき約５０ｍｇ〜約２００ｍｇ、好ましくは約７５ｍｇ〜約１５０ｍｇ、そして最も好ましくは約９０ｍｇ〜約１１０ｍｇである。
【００４７】
生じた組成物は、好ましくは、例えばプレフィルター（例、５〜１０ミクロンフィルター）に次いで、すでに滅菌済みの０．２ミクロン最終滅菌フィルターにこの医薬組成物を通すことによって滅菌される。滅菌フィルターは、１２１℃で６０分の湿式加熱オートクレーブにより滅菌し、滅菌前と製品濾過後にプレッシャーホールド法を使用して滅菌の完全性を試験する。この無菌溶液を、滅菌して、２５０℃で２４０分、乾式加熱トンネルにおいて発熱物質を除去した好適な容器（例、ガラス瓶）へ加える。この容器のヘッドスペースを不活性気体、例えばアルゴン、又は、好ましくは窒素で満たす。洗浄により発熱物質を除去し、１２１℃で６０分の湿式加熱オートクレーブにより滅菌したストッパーでこの容器の栓をする。次いで、この容器をさらに密封する。当業者には、無菌組成物を製造するのに、上記への些細な諸変更を使用し得ることがわかるだろう。
【００４８】
本発明は哺乳動物を治療するか又は予防する方法に関し、この方法は、そのような治療の必要な哺乳動物へ、医薬品として有効な量の医薬組成物を投与することを含む。この医薬組成物は、限定しないが、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ（パスツレラ・ムルトシダ）、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ（パスツレラ・ヘモリチカ）、Ｈ． ｐａｒａｓｕｉｓ、Ｂ． ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｓ． ｃｈｏｌｅｒａｅｓｕｉｓ、Ｓ． ｐｉｌｏ、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖｉｓ（ウシモラクセラ）、Ｈ． ｓｏｍｎｕｓ、Ｍ． ｂｏｖｉｓ、Ｅｉｍｅｒｉａ ｚｕｅｒｎｉｉ、Ｅｉｍｅｒｉａ ｂｏｖｉｓ（ウシ・エイメリア）、Ａ． ｍａｒｇｉｎａｌｅ、Ｍ． ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ、及び Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ（ぶどう球菌）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ（サルモネラ）、 Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（クラミジア）、Ｃｏｃｃｉｄｉａ（コクシジア）、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉａ（クリプトスポルジア）、Ｅ． ｃｏｌｉ（大腸菌）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ（ヘモフィルス）、Ｎｅｏｓｐｏｒａ（ネオスポラ）、及び Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（連鎖球菌）の種を含むグラム陽性細菌、グラム陰性細菌、原生動物、及びマイコプラズマによる感染症を治療するために使用され得る。
【００４９】
感染症を「治療する」という用語は、本明細書で使用されるように、他に明記しなければ、本発明の方法に提供されるような細菌感染症若しくは原生動物感染症の重篤性を軽減するか又はそれを一掃することを意味する。感染症を「予防する」という用語は、本明細書で使用されるように、他に明記しなければ、哺乳動物の体内における１種又はそれ以上の細菌若しくは原生動物の確立と有害な増殖を予防することを意味する。
【００５０】
本明細書で使用されるように、他に明記しなければ、「細菌感染症」及び「原生動物感染症」という用語には、本発明の化合物のような抗生物質を投与することによって治療され得るか又は予防され得る、哺乳動物、魚、トリにおいて起こる細菌感染症及び原生動物感染症、並びに、細菌感染症及び原生動物感染症に関連した障害が含まれる。そのような細菌及び原生動物の感染症と、そのような感染症に関連した障害には、限定しないが、以下が含まれる：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（インフルエンザ菌）、Ｍｏｒｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ（モラクセラ・カタラーリス）、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（黄色ぶどう球菌）又は Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ（ペプトストレプトコッカス）種による感染に関連した肺炎、中耳炎、副鼻腔炎、気管支炎、扁桃炎、及び乳突炎；Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（化膿連鎖球菌）、連鎖球菌Ｃ及びＧ群、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ 又は Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ による感染に関連した咽頭炎、リウマチ熱、及び糸球体腎炎；Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎マイコプラズマ）、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ（レジオネラ・ニューモフィラ）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した気道感染症；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、コアグラーゼ陽性ぶどう球菌（即ち、Ｓ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｓ． ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ、等）、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（ストレプトコッカス・アガラクチエ）、Ｃ〜Ｆ群連鎖球菌（微小コロニー連鎖球菌）、ビリダンス連鎖球菌、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍｕｍ（コリネバクテリウム・ミヌチシマム）、クロストリジウム種、又は Ｂａｒｔｏｎｅｌｌａ ｈｅｎｓｅｌａｅ による感染に関連した非合併性皮膚及び軟組織感染症、膿瘍、骨髄炎、及び産褥熱；Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ（腐生ぶどう球菌）又は Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（腸球菌）種による感染に関連した非合併性急性尿路感染症；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（トラコーマ・クラミジア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳菌）、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒トレポネーマ）、Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ ｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍ（ウレアプラズマ・ウレアリチカム）又は Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ（淋菌）による感染に関連した性交伝染病；Ｓ． ａｕｒｅｕｓ 又は連鎖球菌Ａ、Ｂ及びＣ群による感染に関連した毒素疾患（食物中毒と有毒ショック症候群）；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ（ヘリコバクター・ピロリ）による感染に関連した潰瘍；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｒｅｃｕｒｒｅｎｔｉｓ（回帰熱ボレリア）による感染に関連した全身熱性症候群；Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ボレリア・バルグドルファ）による感染に関連したライム病；Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ、Ｓ． ａｕｒｅｕｓ、Ｓ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ． ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ、Ｈ． ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、又は Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐｐ． による感染に関連した結膜炎、角膜炎、及び涙嚢炎；Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ（トリ型結核菌）又はＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ（マイコバクテリウム・イントラセルラーレ）による感染に関連した播種性マイコバクテリウム・アビウム複合（ＭＡＣ）疾患；Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ（カンピロバクター・イェユニ）による感染に関連した胃腸炎；Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．（クリプトスポリジウム種）による感染に関連した腸内原生動物；ビリダンス連鎖球菌による感染に関連した歯性感染症；Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ（百日咳菌）による感染に関連した永続性の咳；Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ（クロストリジウム・ペルフリンゲンス）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．（バクテロイデス種）による感染に関連した気腫壊疽；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ 又は Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（クラミジア・ニューモニエ）による感染に関連した動脈硬化症。哺乳動物において治療され得るか又は予防され得る、細菌及び原生動物感染症とそのような感染症に関連した障害には以下が含まれる：Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ、Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｂｏｖｉｓ（ウシ型結核菌）、Ｈ． ｓｏｍｎｕｓ 又はＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｓｐｐ．（ボルデテラ種）による感染に関連したウシ呼吸系疾患；大腸菌又は原生動物（即ち、コクシジア、クリプトスポルジア、等）による感染に関連した仔ウシ腸疾患；Ｓｔａｐｈ． ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔｒｅｐ． ｕｂｅｒｉｓ、Ｓｔｒｅｐ． ａｇａｌａｔｉａｅ、Ｓｔｒｅｐ． ｄｙｓｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ．、又は大腸菌による感染に関連した乳牛の乳腺炎；Ａ． ｐｌｅｕｒｏ．、Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ、又は Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ． による感染に関連したブタ呼吸系疾患；大腸菌、Ｌａｗｓｏｎｉａ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、又は Ｓｅｒｐｕｌｉｎａ ｈｙｏｄｙｓｉｎｔｅｒｉａｅ による感染に関連したブタ腸疾患；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｐ．（フゾバクテリウム種）による感染に関連したウシ腐蹄症；大腸菌による感染に関連したウシ子宮炎；Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｅｃｒｏｐｈｏｒｕｍ（フゾバクテリウム・ネクロフォールム）又は Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｎｏｄｏｓｕｓ（バクテロイデス・ノドーズス）による感染に関連したウシ毛性いぼ（ｈａｉｒｙ ｗａｒｔｓ）；Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｂｏｖｉｓ による感染に関連したウシ感染性角結膜炎（ピンクアイ）；原生動物（即ち、ネオスポラ）による感染に関連したウシ早発性流産；ブタ回腸炎；ウシコクシジウム症；大腸菌による感染に��連したイヌ及びネコの尿路感染症；Ｓｔａｐｈ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（表皮ぶどう球菌）、Ｓｔａｐｈ． ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ、ｃｏａｇｕｌａｓｅ ｎｅｇ． Ｓｔａｐｈ． 又は Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ による感染に関連したイヌ及びネコの皮膚及び軟組織感染症；Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐｐ．（アルカリゲネス種）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｓｐｐ．、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｐｐ．、 Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｐ．（エンテロバクター種）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ（ユウバクテリウム）、Ｐｅｐｔｏｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ、又は Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ による感染に関連したイヌ及びネコの歯若しくは口の感染症；ネコ及びイヌの膿皮症；ネコ及びイヌの肺炎；Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｅｑｕｉ（アクチノバシラス・エクイ）、Ｒｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ（ストレプトコッカス・エクイ）、及び Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ（ストレプトコッカス・ズーエピデミクス）に関連したウマの感染症。本発明の方法に従って治療され得るか又は予防され得る、他の細菌感染症及び原生動物感染症については、Ｊ． Ｐ． Ｓａｎｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，「サンフォードの抗菌療法手引き（Ｔｈｅ Ｓａｎｆｏｒｄ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ）」２６版（アンチミクロビアル・セラピー社、１９９６）に述べられている。
【００５１】
細菌及び原生動物の病原体に抗する本発明の方法に有用な異性体の混合物の抗菌及び抗原生動物活性は、定義された系統のヒト若しくは哺乳動物病原体の増殖を阻害する、混合物の能力によって証明される。
【００５２】
アッセイＩ
以下に記載のアッセイＩは、従来の方法論及び判断基準を利用して、明確化されたマクロライド抵抗性の機序を回避する化合物をもたらし得る化学修飾の方向性を提供するように設計されている。アッセイＩでは、特性決定されたマクロライド抵抗性の機序を有する代表物を含む、多種多様なターゲット病原種を含むように菌株のパネルが組み立てられている。このパネルの使用により、効力、活性のスペクトル、及び、抵抗性の機序を回避するために必要となり得る構造上の要素若しくは修飾に関する化学構造／活性相関性を決定することが可能になる。このスクリーニングパネルを含む細菌病原体を以下の表に示す。多くの場合、マクロライド感受性の親株と、それから誘導されたマクロライド抵抗性の株の両方が、抵抗機序を回避する本化合物の能力のより正確な評価を提供するために利用可能である。ｅｒｍＡ／ｅｒｍＢ／ｅｒｍＣの名称を有する遺伝子を含有する菌株は、Ｅｒｍメチラーゼによる２３Ｓ  ｒＲＮＡ分子の修飾（メチル化）により、マクロライド、リンコサミド、及びストレプトグラミンＢ抗生物質に対して抵抗し、それにより、３種の構造クラスすべての結合を一般に防止する。マクロライド流出については２つの型が記載されている；ｍｓｒＡは、マクロライド及びストレプトグラミンのエントリーを防止する、ぶどう球菌の流出系の成分をコード化し、一方、ｍｅｆＡ／Ｅは、マクロライドだけを流出させると思われる膜貫通タンパク質をコード化する。マクロライド抗生物質の不活性化は、２’−ヒドロキシルのリン酸化（ｍｐｈ）、又はマクロ環式ラクトンの開裂（エステラーゼ）のいずれかにより起こり得るか又は仲介され得る。菌株は、従来のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を使用すること、及び／又は抵抗性決定因子の配列を決定することによって特性決定され得る。この応用におけるＰＣＲ技術の使用については、Ｊ． Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ ｅｔ ａｌ．，「エリスロマイシン抵抗性決定因子のＰＣＲによる検出（Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｂｙ ＰＣＲ）」 Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ， ４０（１１）， ２５６２−２５６６ （１９６６） に記載されている。このアッセイはマイクロタイター・トレイにおいて実施され、国立臨床検査標準法委員会（ＮＣＣＬＳ）ガイドラインにより公表された、「抗菌平板感受性試験の標準法（Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｄｉｓｋ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｓ）第６版；公認標準法」に従って解釈され；最小阻止濃度（ＭＩＣ）を使用して菌株を比較する。異性体の混合物は、はじめに４０ｍｇ／ｍｌのストック溶液としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かす。
【００５３】
【表１】
2004516233.tif 000005
アッセイＩＩは、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ に抗する活性を試験するために活用され、アッセイＩＩＩは、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ に抗する活性を試験するために活用される。
【００５４】
アッセイＩＩ
このアッセイは、マイクロタイターフォーマットでの液体希釈法に基づく。Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ（５９Ａ０６７株）の単一コロニーを、５ｍｌの脳−心インフュージョン（ＢＨＩ）ブロスへ接種する。１ｍｇの異性体の混合物を１２５μｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かすことによって溶液を調製する。異性体の混合物の希釈液を、未接種のＢＨＩブロスを使用して調製する。使用される異性体の混合物の濃度は、２倍連続希釈により２００μｇ／ｍｌ〜０．０９８μｇ／ｍｌに及ぶ。Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ を接種したＢＨＩを未接種のＢＨＩブロスで希釈し、２００μｌにつき１０４個の細胞の懸濁液を作る。このＢＨＩ細胞懸濁液を、異性体の混合物の各連続希釈液と混合し、３７℃で１８時間インキュベートする。最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、未接種対照との比較により決定されるように、Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ の増殖の１００％阻害を示す混合物の濃度に等しい。
【００５５】
アッセイＩＩＩ
このアッセイは、ステアズ・レプリケーター（Ｓｔｅｅｒｓ Ｒｅｐｌｉｃａｔｏｒ）を使用する寒天希釈法に基づく。寒天プレートから単離した２〜５個のコロニーをＢＨＩブロスへ接種して、振り混ぜながら（２００ｒｐｍ）３７℃で一晩インキュベートする。翌朝、３００μｌの完全に増殖した Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ のプレ培養物を３ｍｌの新鮮ＢＨＩブロスへ接種し、振り混ぜながら３７℃で（２００ｒｐｍ）インキュベートする。適正量の異性体の混合物をエタノールに溶かし、２倍希釈溶液の系列を調製する。各連続希釈液の２ｍｌを１８ｍｌの融解ＢＨＩ寒天と混合し、固まらせる。接種した Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ 培養物が０．５マクファーランド（ＭｃＦａｒｌａｎｄ）標準密度に達したとき、約５μｌの Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ 培養物を、ステアズ・レプリケーターを使用して、様々な濃度の異性体の混合物を含有するＢＨＩ寒天プレート上に接種し、３７℃で１８時間インキュベートする。混合物の開始濃度は１００〜２００μｇ／ｍｌに及ぶ。ＭＩＣは、未接種対照との比較により決定されるように、Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ の増殖の１００％阻害を示す混合物の濃度に等しい。
【００５６】
最も好ましくは、このミクロ希釈アッセイは、参照により本明細書に組込まれる、ＮＣＣＬＳガイドラインＭ３１−Ａ、第１９巻、１１号「動物から単離した細菌に対する抗菌平板／希釈感受性試験の標準法（Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ ｆｏｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｄｉｓｋ ａｎｄ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ ｂａｃｔｅｒｉａ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ａｎｉｍａｌｓ）」１９９９年６月（ＩＳＢＮ  １−５６２３８−３７７−９）に従って、カチオン調整ミュラー・ヒントンブロスを使用して実施される。このアッセイは、Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ と Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ の両方に抗する化合物のＭＩＣを決定するために使用され得る。例えば、この標準法に従って、異性体の平衡混合物を Ｐ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ（ＡＴＣＣ  １４００３）に対して試験し、１μｇ／ｍＬのＭＩＣを有することを見出した。この標準法に従って、異性体の平衡混合物を Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ（ＡＴＣＣ  ４３１３７）に対して試験したとき、ＭＩＣが１μｇ／ｍＬであることを見出した。
【００５７】
アッセイＩＶ
本発明の医薬組成物の ｉｎ ｖｉｖｏ 活性は、通常マウスにおいて行われる、当業者によく知られた従来の動物保護試験によって決定され得る。
【００５８】
到着後すぐにマウスをケージに割付け（１０匹／ケージ）、使用前に少なくとも４８時間馴化させる。３ｘ１０３ＣＦＵ／ｍｌの細菌懸濁液（Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ ５９Ａ００６株）の０．５ｍｌを動物に腹膜内接種する。各実験は、少なくとも３つの非処置対照群を有し、０．１Ｘチャレンジ用量で感染させる１群と１Ｘチャレンジ用量で感染させる２群を含み；１０Ｘチャレンジデータの群も使用する場合がある。一般に、特に（Ｃｏｒｎｗａｌｌ（登録商標）シリンジのような）反復シリンジを使用してチャレンジを投与する場合は、１回の試験ですべてのマウスに３０〜９０分以内でチャレンジし得る。チャレンジが開始してから３０分後に、最初の医薬組成物の処置量を与える。３０分経ってもすべての動物がチャレンジされていなかったならば、第二の人物が医薬組成物の投薬をはじめることが必要となる場合もある。投与の経路は皮下若しくは経口の用量である。皮下用量が頚部の後ろのたるんだ皮膚へ投与されるのに対し、経口用量は給餌針により与えられる。いずれの場合でも、マウス１匹につき０．２ｍｌの容量を使用する。組成物は、チャレンジから３０分、４時間、及び２４時間後に投与される。同じ経路で投与される、既知効力の対照組成物を各試験に含める。動物を毎日観察し、各群の生存数を記録する。Ｐ． ｍｕｌｔｏｃｉｄａ のモデル・モニタリングはチャレンジ後９６時間（４日間）継続する。
【００５９】
ＰＤ５０は、試験された医薬組成物が、処置がなければ致命的である細菌感染による死亡から１群のマウスの５０％を保護する計算された用量である。
本発明の方法に有用な医薬組成物は、上記アッセイの１つ、特にアッセイＩＶにおいて、抗菌活性を示す。
【００６０】
さらに本発明は、哺乳動物において急性若しくは慢性の注射部位寛容を高める方法に関し、前記方法は、そのような治療の必要な哺乳動物へ（ａ）異性体の混合物と（ｂ）製薬的に許容される賦形剤を含んでなる組成物の医薬品として有効な量を投与することを含んでなる。「急性の注射部位寛容を高める」とは、本明細書で使用されるように、本発明の組成物が注射を介して投与される場合、注射部位での腫脹及び／又は炎症の量、特に、注射後約２４〜４８時間で存在するそれの量を、例えばＭＩＣＯＴＩＬのような、異性体の混合物以外の抗生剤での注射後約２４〜４８時間で存在する腫脹及び／又は炎症の量に比較して、減少させることを意味する。「慢性の注射部位寛容を高める」とは、本明細書で使用されるように、注射後約２週間で存在する注射部位での組織壊死の量を、例えばＭＩＣＯＴＩＬのような、異性体の混合物以外の抗生剤での注射後約２週間で存在する注射部位での組織壊死の量に比較して、減少させることを意味する。好ましい態様では、異性体の混合物は異性体の平衡混合物である。もう１つの態様では、異性体の混合物は、Ｒがｎ−プロピルであるものである。
【００６１】
本発明の方法に有用な医薬組成物は、そのような治療の必要な、ヒト、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、ネコ、イヌ、及び他の哺乳動物を治療するために使用され得る。特に、本発明の方法に有用な医薬組成物は、とりわけ、ウシ呼吸系疾患、ブタ呼吸系疾患、ウシ感染性角結膜炎、ウシコクシジウム症、ブタ回腸炎、ウシ乳腺炎、ウシ腸疾患、ブタ腸疾患、イヌ膿皮症、ネコ膿皮症、イヌ肺炎、ネコ肺炎、イヌ軟組織疾患、ネコ軟組織疾患、パスツレラ症、アナプラズマ症、感染性ケラチン炎を治療するために使用され得る。医薬組成物は、経口、筋肉内、静脈内、皮下、眼内、腸管外、局所、膣内、又は直腸内の経路を介して投与され得る。ウシ、ブタ、又は他の家畜動物への投与については、医薬組成物は、飲薬組成物として給餌若しくは経口で投与され得る。好ましくは、医薬組成物は、筋肉内、静脈内、又は皮下に注射される。好ましい態様では、医薬組成物は、体重ｋｇにつき（ｍｇ／ｋｇ）異性体の混合物の約０．５ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇに及ぶ単回用量で投与される。より好ましい態様では、医薬組成物は、約１．２５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇに及ぶ単回用量で投与される。最も好ましい態様では、医薬組成物は、約２．０ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇに及ぶ単回用量で投与される。最も好ましくは、医薬組成物は、皮下に投与される。
【００６２】
異性体の混合物以外の抗菌薬及び／又は抗原生動物薬を、本組成物の投与と同時に、それに先立って、又はその後で投与することが可能であり、そのような薬物の多用量が有用である場合もある。しかしながら、本組成物は、一回だけ、即ち単回用量で投与される。「単回用量」とは、本明細書で使用されるように、医薬組成物の単回投与で細菌若しくは原生動物の感染症を治療するか又は予防することが可能であることを意味する。即ち、医薬組成物の後続用量は追加の利益を提供するかもしれないが、本方法ではそれを必要としない。さらに、単回用量で投与される場合、本発明の組成物は、多用量で投与される場合に存在することになる、より多量の異性体の混合物を含むに及ばない。
【００６３】
本発明の方法は、異性体の混合物が組織及び末梢循環において長い半減期（約２８時間）を有するという、出願人の驚くべき発見に一部基づいている。当業者は、生物種、治療される被検者の体重及び状態、医薬組成物に対するその個別の応答、及び選択される特定の投与経路に依存して、投与量の変動が起こり得ることを容易に理解するだろう。上記範囲の下限より低い投与量レベルが治療的に有効であり得る事例もあれば、ずっと多い用量が有害な副作用を引き起こすことなく利用され得る事例もあろう。但し、そのようなより多い量は、初めは、１日全体での投与のためにいくつかの少量へ分割される。
【００６４】
以下の実施例は、本発明の方法に有用な組成物を入手する方法をさらに詳しく説明する。以下に提供される実施例の特殊な詳細に本発明が限定されないことを理解するべきである。
【００６５】
【実施例】
実施例１
Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの合成：２Ｌの三角フラスコへ、デスメチルアジスロマイシン（１９０．５ｇ，２５９．２ミリモル）、塩化メチレン（５７２ｍＬ）、及び硫酸マグネシウム（３８ｇ）を加えた。この混合物を１０分撹拌し、次いで５Ｌの丸底フラスコへ濾過した。追加の塩化メチレン（２２８５ｍＬ）を加え、この溶液を０〜５℃へ冷やした。次いで、ＣＢＺ−Ｃｌ（５８．４ｍＬ）を１０分にわたり加えた。この反応物を約０℃で６時間、次いで周囲温度で一晩撹拌した。ＨＰＬＣ分析が残留した出発材料の存在を示したので、この反応物を約０℃へ再冷却し、追加のＣＢＺ−Ｃｌ（１９．５ｍＬ）を一分量で加えた。この反応物を０℃で５．５時間、次いで周囲温度で２．５時間撹拌した。ＴＬＣは完全な反応を示した。この反応を飽和重炭酸ナトリウム水溶液（９５３ｍＬ）で止め、相を分離させた。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで濾過し、濃縮して式（ＩＩＩ）：
【００６６】
【化９】
2004516233.tif 000006
の化合物を得た。
【００６７】
塩化メチレン（９０１ｍＬ）及びＤＭＳＯ（４５０ｍＬ）中に式（ＩＩＩ）の化合物（２２５．３ｇ）を含有する５Ｌの丸底フラスコへ−６５℃で無水トリフルオロ酢酸（８２．４ｍＬ）を加えた。９分で完了する添加の間中、温度を約−６０℃に維持した。この反応物を−６５〜−７０℃で２０分撹拌した。この反応をトリエチルアミン（１４５ｍＬ）で止め、次いで−６０°〜−６５℃で２０分撹拌した。次いで、この反応混合物へ水（１１２７ｍＬ）を３分にわたり加えると、この時点で温度が−２℃へ上昇した。この反応混合物を１０分撹拌し、相を分離させた。有機相を水（６７５ｍＬ）に次いで飽和塩化ナトリウム水溶液（６７５ｍＬ）で洗浄した。この有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、次いで濾過し、有機溶媒を蒸留により除去した。ＭＴＢＥを加え、蒸留して微量の塩化メチレン及びＤＭＳＯをすべて除去した。追加のＭＴＢＥを全量３３８０ｍＬになるまで加えた。ＭＴＢＥ（１１２６ｍＬ）中のジベンゾイル−Ｄ−酒石酸一水和物（８７．８ｇ）を加えると、濃厚なスラリーを形成した。この混合物を還流まで加熱し、一晩撹拌した。周囲温度へ冷やしてから、ブフナー漏斗で固形物を回収し、ＭＴＢＥで濯いだ。この固形物を４０℃の乾燥オーヴンで乾燥させ、式（ＩＶ）：
【００６８】
【化１０】
2004516233.tif 000007
の化合物のジベンゾイル酒石酸塩を２５８．３ｇ得た。
【００６９】
３Ｌの丸底フラスコへ塩化メチレン（８００ｍＬ）と式（ＩＶ）の化合物のジベンゾイル酒石酸塩（１８８ｇ）を加えた。水（４００ｍＬ）と炭酸カリウム（４５．５ｇ）を加え、この混合物を周囲温度で５分撹拌した。有機相を分離し、次いで水（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過により乾燥剤を除去し、生じた溶液を窒素流の下で６２３ｍＬの最終量まで蒸発させ、フリー塩基のケトンを得た。
【００７０】
５Ｌの丸底フラスコへＴＨＦ（６２３ｍＬ）と臭化トリメチルスルホニウム（７４．７ｇ）を加えた。生じたスラリーを−１０℃へ冷やし、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（５４．４ｇ）を加えた。この反応混合物を−１０℃で１０分撹拌し、次いで５分にわたり−７０℃へ冷やした。温度を−６０〜−６５℃の間に保ちながら、フリー塩基ケトンの溶液を１１分にわたり加えた。ＨＰＬＣは、９０分後に反応が完了していることを示した。この反応を、水（１８００ｍＬ）中の塩化アンモニウム（３１５ｇ）の溶液を使用して−６０℃で止めた。この停止の間に温度は−５℃へ上昇した。この反応混合物を５〜１０℃へ温め、相を分離させた。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させてから濾過し、濃縮して式Ｖの化合物（１１７．４ｇ）を黄色の泡状物として得た。ＨＰＬＣは、ピーク面積により、６１．４％の純度を示した。
【００７１】
【化１１】
2004516233.tif 000008
乾燥メタノール（２．７５Ｌ）中の式（Ｖ）の化合物（２７５ｇ，３１２ミリモル）の溶液へヨウ化カリウム（５１８ｇ，３．１２ミリモル）とｎ−プロピルアミン（２５０ｍＬ，３．０４モル）を加えた。この混合物を４５℃で一晩撹拌した。ＴＬＣは完全な反応を示した。この反応物を回転式蒸留器で濃縮し、水（２．５Ｌ）と塩化メチレン（２．５Ｌ）の間で残渣を分画した。３Ｎ  ＨＣｌ水溶液を使用して、水相のｐＨを６．７へ調整した。この抽出をさらにもう１回繰り返した。合わせた水相を新鮮な塩化メチレン（１．５Ｌ）と合わせ、固形の炭酸カリウムを使用して、水相のｐＨを８．５へ調整した。相を分離させ、この水相を追加の塩化メチレンで２回再抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させてから、濾過した。濾液を回転式蒸留器で濃縮し、ベージュ色の泡状物（２３０ｇ）を得た。１９／３（ｖ／ｖ）ヘキサン−ジエチルアミンを移動相として使用するスラリー充填シリカゲルカラムでこの泡状物の精製を実行した。このやり方で、１２５ｇの粗生成物から７２ｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉを白色の無定形泡状物として得た。
【００７２】
Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉを周囲温度でアセトニトリル（０．５Ｌ）に溶かした。次いで脱イオン水（１Ｌ）を加えると、沈殿を引き起こした。次いで追加のアセトニトリル（０．５Ｌ）を加えると均一な溶液が得られ、これを周囲温度で３０時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、全ピーク面積の約２０％を含む新たな成分の形成を示した。
【００７３】
有機溶媒を回転式蒸留器で除去した。水性の残渣へ炭酸カリウム（３０ｇ）に次いで塩化メチレン（０．３Ｌ）を加えた。この混合物を振り混ぜ、下部の有機相を除去した。２回の追加抽出（２ｘ０．３Ｌ）も実施した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで濾過し、生じた溶液を乾燥した泡状物（約１０ｇ）になるまで濃縮した。
【００７４】
生じたＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物を、塩化メチレン及び１９／３（ｖ／ｖ）ヘキサン−ジエチルアミンの混合液に溶かし、スラリー充填シリカゲルカラム上に置き、次いでこの１９／３系で溶出させた。分画５６で溶出液を１９／６ヘキサン−ジエチルアミンへ変更した。分画９〜１７を合わせ、乾燥した泡状物になるまで濃縮したが、これは未反応の出発材料だけを含んだ。分画５２〜７２を合わせて濃縮すると、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩ（ＨＰＬＣによれば純度７９％）を含んでいた。
【００７５】
実施例２
以下の表１は、平衡反応速度と平衡後の主要不純物レベルに対する、ｐＨ、温度、酸のタイプ、及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの濃度の効果を示す。重複実験（データ示さず）は諸結果の再現性を示した。Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体ＩとＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡比率（それぞれ、約９０％±４％と約１０％±４％）はすべての実験で一貫していた。このデータの分析は、平衡化に必要な時間に対してｐＨと温度が有意な影響を及ぼすことを示している。理論に縛られることなく言えば、より低い平衡温度又はより低いｐＨ値は、概して実質的により長い平衡時間をもたらす。平衡時間はまた、とりわけ、出発材料の濃度と、使用する酸のタイプ及び濃度に依存する。組成物１ｍＬにつき約３００ｍｇまでの濃度のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉを、混合物の１ｍＬにつき約０．２ミリモル〜約１．０ミリモル濃度である１種又はそれ以上の酸の存在下、約６．５〜約７．５のｐＨを達成するのに十分な量の塩酸とともに、約４０℃〜約８０℃の温度へ約２０時間まで加熱すると、約９５％〜９８％純粋である異性体の平衡混合物を生じた。平衡動力学的パラメーターとＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡化についての不純物レベルを、ｐＨ、平衡温度、酸のタイプ、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの濃度の関数として決定し、表１に列挙する。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）、核磁気共鳴分光法（「ＮＭＲ」）、ガスクロマトグラフィー（「ＧＣ」）、質量分析法（「ＭＳ」）、液体クロマトグラフィー／質量分析法（「ＬＣ／ＭＳ」）、ＧＣ／ＭＳ、及び薄層クロマトグラフィー（「ＴＬＣ」）を含む、既知の方法を使用して、この不純物を同定し得る。「ＤＳ」は平衡化に先立つＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉを意味し、比較のために含める。
【００７６】
異性体の平衡混合物を製造し、以下のようにアッセイした。実験１Ａ〜１１Ａのそれぞれで４０ｍＬの溶液を調製し、様々な時点でより容易に平衡化をモニターするために、加熱に先立って、各溶液を１ｍＬのアリコートへ分割した。実験１２Ｂ〜２４Ｂのそれぞれで２０ｍＬの溶液を調製し、加熱に先立って、各溶液を０．７ｍＬのアリコートへ分割した。実験２５Ｃ〜２８Ｃのそれぞれで１００ｍＬの溶液を調製し、実験２９Ｃ〜３０Ｃのそれぞれで２００ｍＬの溶液を調製し、これらの溶液から取った０．５ｍＬアリコートから平衡化をモニターした。実験３１Ｄ〜３３Ｄと３５Ｄ〜４１Ｄのそれぞれで６０ｍＬの溶液を調製し、実験３４Ｄでは１７０ｍＬの溶液を調製し、これらの溶液から取った０．５ｍＬのアリコートから平衡化をモニターした。実験４２Ｅ〜４６Ｅのそれぞれでは７，２００ｍＬ〜５４，０００ｍＬの溶液を調製し、これら溶液から２ｍＬ〜５ｍＬを取ることによって平衡化をモニターした。実験４７Ｆ〜５０Ｇのそれぞれでは３５ｍＬ〜５０ｍＬの溶液を調製し、加熱に先立って、各溶液を１ｍＬのアリコートへ分割した。水に次いで表１のカラム４に列挙される酸のタイプ及び量を適正な容器へ加えた。酸のタイプに先行する「ｑｓ」という用語は、、カラム２に列挙されるｐＨを達成するのに十分な酸の量を意味する。０．１Ｍのクエン酸若しくは酒石酸を使用した場合、カラム２に列挙されるｐＨを得るのに十分な量の塩酸も加えた。酸の濃度がカラム４に引用される場合（例、「０．１Ｍ  クエン酸」）、これは、１００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在するＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物を有する溶液中の酸の濃度を意味する。水及び酸の混合物をすべての酸が溶けるまで（より少量では約５分又はそれ未満で、より多量では約２０分）撹拌した。凝集化を避けるためにＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉをゆっくりと少量づつ加え、生じた混合物を溶けるまで（より少量では約３０分未満で、より多量では約６０〜１２０分）激しく撹拌した。Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの溶解の後で、生じた溶液のｐＨを測定した。このｐＨがカラム２に列挙されるｐＨより低ければ、１０％水酸化ナトリウムを用いて、カラム２に列挙されるｐＨまでそれを高めた。このｐＨがカラム２に列挙されるｐＨより高ければ、適正な酸を用いて、それを低めた。各実験につき、カラム３に記載の温度で溶液を加熱し、以下に記載のＨＰＬＣアッセイの１つにより決定されるような、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物を得た。ある実験では、平衡化に必要な時間より長い時間（カラム８で１００％より高い比率）混合物を加熱し、不純物の程度に対する延長加熱の効果を決定した。
【００７７】
平衡化をモニターするために、平衡化の間の様々な時点でＨＰＬＣにより反応混合物のアリコートをアッセイした。表１に示す大部分の平衡化実験では、４０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）でアリコートを希釈し、全サンプル量の１ｍＬにつき約０．５ｍｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの濃度とし、アプライド・バイオシステムズの７８３Ａプログラマブル（Ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ）吸光検出器が外部に付いたＨＰ  １０９０液体クロマトグラフでアサヒパック（Ａｓａｈｉｐａｋ）ＯＤＰ−５０，５μｍ，２５０ｘ４．０ｍｍカラム（４０％アセトニトリル／３５％メタノール／２５％  ４０ｍＭリン酸カリウム；ｐＨ８．５、移動相；流速０．７ｍＬ／分；室温）を使用するクロマトグラフィーにかけた。２１０ｎｍでの紫外線吸収をモニターすることによってピークを検出した。表１に示す残りの平衡化実験（実験３１Ｄ〜４６Ｅ）では、２０％アセトニトリル／５０％メタノール／３０％  ５０ｍＭリン酸カリウム（ｐＨ５．５）でアリコートを希釈し、全サンプル量の１ｍＬにつき１．０ｍｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの濃度とし、内部ＵＶ検出器が付いたＨＰ  １０９０液体クロマトグラフでＹＭＣ  Ｐｒｏ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８，３μｍ，５０ｘ２．０ｍｍカラム（２０％アセトニトリル／５０％メタノール／３０％  ５０ｍＭリン酸カリウム；ｐＨ７．０、移動相；流速０．５ｍＬ／分；室温）を使用するクロマトグラフィーにかけた。２１０ｎｍでの紫外線吸収をモニターすることによってピークを検出した。Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの相対量は、それらの相対クロマトグラムピーク面積の比をとることによって決定した。上記のＨＰＬＣ条件の下では、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉは約１３〜２３分の保持時間を有し、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩは約０．８〜０．９の相対保持時間（「ＲＲＴ」）を有する。「ＲＲＴ」は、上記ＨＰＬＣ条件の下でＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの保持時間に対する保持時間を意味する。
【００７８】
表１の平衡化サンプルの純度は、３つの方法の１つに従ってＨＰＬＣを使用しして決定した。実験１Ａ〜２４Ｂ、４８Ｆ、及び５０Ｇでは、２５ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ５．５）でアリコートを希釈し、全サンプル量の１ｍＬにつき１．２５ｍｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの濃度とし、ＢＡＳ  ＣＣ−５／ＬＣ−４Ｃ電流測定（Ａｍｐｅｒｏｍｅｔｒｉｃ）検出器の付いたウォーターズ・アライアンス（Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ）２６９０分離モジュールでエクリプス（Ｅｃｌｉｐｓｅ）ＸＤＢ−Ｃ８，５μｍ，２５０ｘ４．６ｍｍカラム（２２％アセトニトリル／５８％メタノール／２０％  ２５ｍＭリン酸カリウム；ｐＨ８．０、移動相；流速０．６ｍＬ／分；室温）を使用してアッセイした。＋０．７０Ｖの第一電極、＋０．８８Ｖの第二電極、そして０．５μＡの範囲で電気化学的にピークを検出した。実験２５Ｃ〜４１Ｄでは、５０ｍＭクエン酸（ｐＨ５．５）でアリコートを希釈し、全サンプル量の１ｍＬにつき０．２５ｍｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物の濃度とし、上記ウォーターズ・アライアンスのシステムでＹＭＣ  Ｐｒｏ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８，３μｍ，１５０ｘ４．６ｍｍカラム（７０％メタノール／３０％  ５０ｍＭリン酸；ｐＨ７．０、移動相；流速１ｍＬ／分；室温）を使用してアッセイした。＋０．９０Ｖの第一電極だけで電気化学的にピークを検出した。実験４２Ｅ〜４３Ｅでは、５０ｍＭクエン酸（ｐＨ５．５）でアリコートを希釈し、全サンプル量の１ｍＬにつき０．２５ｍｇのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物の濃度とし、ＢＡＳ  ＣＣ−５／ＬＣ−４Ｃ電流測定検出器の付いたＨＰ  １０９０液体クロマトグラフでＹＭＣ  Ｐｒｏ−Ｐａｃｋ  Ｃ１８，３μｍ，１５０ｘ４．６ｍｍカラム（７０％メタノール／３０％  ５０ｍＭリン酸；ｐＨ７．０、移動相；流速１ｍＬ／分；室温）を使用してアッセイした。＋０．９０Ｖの第一電極だけで電気化学的にピークを検出した。アッセイされたサンプルに対する、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物の比率（カラム９）と不純物の比率（カラム１０）を、クロマトグラムのピーク下面積を使用して決定した。検出された不純物のいくつかは：デスクラジノースアザライド（そのＲＲＴは、エクリプスＸＤＢ−Ｃ８カラムで約０．２６である）、アセトアルデヒド挿入生成物（そのＲＲＴは、エクリプスＸＤＢ−Ｃ８カラムで約１．７５である）、及びホルムアルデヒド挿入生成物（そのＲＲＴは、エクリプスＸＤＢ−Ｃ８カラムで約１．６である）であった。
【００７９】
デスクラジノースアザライドは以下の構造を有し：
【００８０】
【化１２】
2004516233.tif 000009
アセトアルデヒド挿入生成物は以下の構造を有し：
【００８１】
【化１３】
2004516233.tif 000010
ホルムアルデヒド挿入生成物は以下の構造を有する：
【００８２】
【化１４】
2004516233.tif 000011
デスクラジノースアザライド、アセトアルデヒド挿入生成物、及びホルムアルデヒド挿入生成物とこれらの製薬的に許容される塩は抗生特性を有し、抗生剤として有用である。
【００８３】
表１の（実験番号に続く文字により同定される）実験群Ａ及びＢは、平衡化に対する、ｐＨ、温度、酸のタイプ、酸の濃度、及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの濃度の効果を決定するために実施した。表１のＣ群の実験は、平衡化に対するｐＨ及び温度の効果を示す。表１のＤ群の実験は、平衡化に対する、ｐＨ、温度、及び酸の濃度の効果を示す。表１のＥ群の実験は、好ましい平衡化の方法、即ち、約７．０のｐＨ、約７０℃の平衡温度、及び、約２５０ｍｇ／ｍＬのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ濃度を示す。Ｆ群の実験は他の酸及び平衡温度の効果を試験し、実験Ｇは５０％ポリエチレングリコール共溶媒の存在下で実施した。
【００８４】
上記の実験の諸結果は、多様な条件の下でも、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物の平衡化が、約９０％±４％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉと約１０％±４％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの形成をもたらすことを示す。平衡温度とｐＨは、平衡速度に対して最大の効果を及ぼすようであり、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの濃度がより高い場合でも、温度が高くなるにつれて概してより速い速度をもたらす。しかしながら、ほとんどの場合、より長い平衡時間はより高濃度の不純物をもたらすので、それ故に、最適な平衡化条件は相対的に高い平衡速度をもたらすもの、すなわち、１〜３時間でＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物を形成させるものである。
【００８５】
【表２】
2004516233.tif 000012
【００８６】
【表３】
2004516233.tif 000013
【００８７】
【表４】
2004516233.tif 000014
【００８８】
【表５】
2004516233.tif 000015
【００８９】
【表６】
2004516233.tif 000016
実施例３
５０℃で１２週間保管して共溶媒で安定化させた、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物を含んでなる組成物の安定性を以下の表２に示す。この諸結果は、共溶媒を含有しない組成物が、組成物の１ｍＬにつき約２５０〜約５００ｍｇの量で共溶媒を含有する組成物より有意により安定でないことを示す（実験１Ａ〜１１Ｂ）。約５．４のｐＨを有し、組成物の１ｍＬにつき約４５０〜約５５０ｍｇの量でプロピレングリコールを含有する組成物が最も安定である。他の共溶媒も組成物を安定化させるために使用し得る（実験１Ｅ〜２Ｅ）が、プロピレングリコールが好ましい。表２に示されるように、安定性はｐＨに依存していて、それはまた、使用される酸のタイプ及び量と、平衡化した異性体の混合物の濃度にも依存し得る。
【００９０】
上記の組成物は以下のように調製した。所望の温度（カラム２）まで加熱し、水、酸、及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉの混合物をカラム３に示す時間だけ平衡化させた後で、異性体の平衡混合物を室温まで冷やした。この混合物が室温に達したとき、所望される共溶媒の適正量（カラム６）を加えた。カラム６に示す共溶媒の比率は、重量／体積比である（例えば、５０％  ＰＧは、医薬組成物の１ｍＬにつき５００ｍｇのプロピレングリコールである）。抗酸化剤又は保存剤を使用する場合、適正量を加えた（カラム８と９）。溶液のｐＨを測定し、１種又はそれ以上の酸、及び／又は１０％ｗ／ｗの水酸化ナトリウムを加えることによって、カラム５の値へ調整した。次いで、水を加えることによって、生じた溶液の体積を調整した。この組成物を０．２ミクロンの滅菌フィルターに通して濾過した。層流フードにおいて瓶に詰め、瓶のヘッドスペースを適正なガス混合物（カラム１０）で満たしてから、密封した。
【００９１】
上記実施例２で記載のようなＨＰＬＣを使用して、平衡化と純度をモニターした。ガラス瓶に密封された、安定化され、平衡化した組成物の安定性を、５０℃で１２週間の保存後に決定した。Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物の濃度、ｐＨ、共溶媒の量及びタイプ、酸のタイプ及び濃度、空気への曝露、保存剤の存在、及び抗酸化剤の存在の諸効果をモニターした。結果を表２に示す。
【００９２】
実験１Ａ〜３Ａは、安定性に対する平衡混合物の濃度の効果をモニターするために実施した。実験２Ａ、６Ａ、及び７Ａは、安定性に対するｐＨの効果をモニターするために実施した。実験２Ａ、４Ａ、及び５Ａは、安定性に対する共溶媒の量の効果を示し、実験３Ａ及び８Ａは、酸性のｐＨを得るのに、クエン酸及びリン酸の混合物に対して、クエン酸だけを使用することの効果を示す。実験１Ｂ〜１１Ｂは、安定性に対するｐＨとプロピレングリコール（「ＰＧ」）共溶媒の効果を示す。実験１Ｃ及び２Ｃは、酸性のｐＨを得るのに、酒石酸及び塩酸の混合物に対して、酒石酸だけを使用することの効果を示す。実験９Ｂ〜１１Ｂと３Ｃは、混合物の安定性に対する保存剤の効果を示し、実験９Ｂ〜１１Ｂ、４Ｃ、及び５Ｃは、混合物の安定性に対する抗酸化剤の効果を示す。実験６Ｃ及び７Ｃは、酒石酸及び塩酸の混合物又はクエン酸及び塩酸の混合物を使用することの安定性に対する効果を示す。実験１Ｄ〜１２Ｄは、安定性に対する、様々な量のモノチオグリセロール（「ＭＴＧ」）抗酸化剤と様々な程度の酸素曝露の効果を示す。実験４Ｄ〜６Ｄと１３Ｄ〜１８Ｄは、安定性に対する組成物のｐＨ及び酸濃度の効果を示す。
【００９３】
上記の実験の結果は、５０℃で１２週間の保存後、少なくとも５０％のプロピレングリコールを含有し、約５．２〜約５．５に及ぶｐＨを有する平衡化組成物が、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物の初期濃度の９３％より多くを保持することを示す。共溶媒を有さない組成物では、最高レベルの不純物が見出された（実験４Ａ）。従って、共溶媒の存在は、驚くべきことに、そして予期せずして、不純物の量を制限する。４０％未満の共溶媒と５．０未満のｐＨを有する組成物では、１２週間後に高レベルの不純物が見出された。酸の濃度もこの医薬組成物の安定性に影響を及ぼす。比較的低濃度の酸（約２０ｍＭ）と約５．４のｐＨを有する組成物は、保存後に最高の安定性を示す。しかしながら、低い酸濃度は弱い緩衝力をもたらし、それがｐＨの揺動をもたらすので、他の時間若しくは温度の条件下では、比較的高い程度の不純物をもたらす可能性がある。
【００９４】
【表７】
2004516233.tif 000017
【００９５】
【表８】
2004516233.tif 000018
【００９６】
【表９】
2004516233.tif 000019
【００９７】
【表１０】
2004516233.tif 000020
【００９８】
【表１１】
2004516233.tif 000021
実施例４
組成物の１ｍＬにつきＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物の１００ｍｇを含有する注射用医薬組成物の５２リットルを以下のように調製した。窒素（ＮＦグレード）を散布した１６．５８４ｋｇの注射水（ＵＳＰグレード）をステンレス鋼混合器へ加え、撹拌を開始した。オーバーレイとして窒素も使用して、製造の間に混合器中の溶液の酸素曝露を抑えた。約１ｋｇの無水クエン酸（ＵＳＰグレード）をこの水へ加え、生じた溶液をこの酸が溶けるまで撹拌した。引き続き、１．５１１ｋｇの１０％（ｗ／ｗ）塩酸（ＮＦグレート）水（ＵＳＰグレード）溶液をこの混合物へ加えた。ほぼ９７％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩ（約９９：１の比）と３％の１種又はそれ以上の不純物を含有する混合物の５．３５７ｋｇをこの撹拌混合物へゆっくりと加え、溶かした。生じた溶液のｐＨを、０．２２４ｋｇの１０％（ｗ／ｗ）塩酸水溶液を加えることによって、７．０±０．５へ調整した。この溶液を７０℃±１０℃へ１０５分加熱することによって、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡化を達成した。ＨＰＬＣを使用して定量されるように、平衡化が完了したらすぐに溶液を２５℃±１０℃まで冷やし、２６．００８ｋｇのプロピレングリコール（ＵＳＰグレード）をこの撹拌混合物へ加えた。プロピレングリコールが完全に混ざった後で、この溶液へ０．２６ｋｇのモノチオグリセロール（ＮＦグレード）を加え、２．３４９ｋｇの１０％（ｗ／ｗ）塩酸水溶液を加えることによって、ｐＨを５．４±０．３へ再調整した。１．８４３ｋｇの水を加えることによって、最終量を５２．０１５リットルへ調整した。生じた組成物は、組成物の１ｍＬにつきＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物の１００ｍｇ、プロピレングリコールの５００ｍｇ／ｍＬ、０．１Ｍ濃度のクエン酸、及び、組成物１ｍＬにつき５ｍｇの濃度のモノチオグリセロールを含有した。
【００９９】
この組成物を６ミクロンのプレフィルターに次いで、１２１℃で６０分の湿式加熱オートクレーブにより滅菌し、滅菌前と濾過後の両方でプレッシャーホールド法を使用して滅菌の完全性を試験した、０．２ミクロンの最終滅菌フィルターに通して濾過した。２０ｍＬのフリントＩ型血清ガラス瓶（Ｗｈｅａｔｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ミルヴィル、ニュージャージー）を滅菌し、２５０℃で２４０分、乾式加熱トンネルにおいて発熱物質を除去した。２０ｍｍの４４３２／５２灰色クロロブチリシリコン処理ストッパー（ウェスト・カンパニー、Ｌｉｏｎｖｉｌｌｅ，ＰＡ）を洗浄して発熱物質を除去し、６０分１２１℃の湿式加熱オートクレーブにより滅菌した。２，５２５個の瓶のそれぞれに、無菌条件の下で、生じた組成物の２０ｍＬ＋０．６ｍＬの余剰（ｏｖｅｒｆｉｌｌ）を充填し（実際の薬物のロット効力が９７．１％であることに基づけば、２０．６ｍＬ／瓶は、１００ｍｇ／ｍＬのＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物で１瓶あたり２．０６ｇの単位効力の医薬組成物である）、瓶のヘッドスペースを窒素で満たし、瓶にストッパーで栓をして、さらにシールした（２０ｍｍのアルミシール、製品番号５１２０−１１２５、ウェスト・カンパニー、Ｌｉｏｎｖｉｌｌｅ，ＰＡ）。
【０１００】
実施例５
５．４のｐＨを有し、医薬組成物の１ｍＬにつき１００ｍｇの量で存在するＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物（ここで、１００ｍｇ／ｍＬは、「実効力」数である）；医薬組成物の１ｍＬにつき０．１ミリモルの量で存在するクエン酸；医薬組成物の１ｍＬにつき濃塩酸（３６〜３８％の重量力価）の１９．５８ｍｇの量で存在する塩酸；医薬組成物の１ｍＬにつき１．０Ｍ水酸化ナトリウム溶液の０．０９ｍｇの量で存在する水酸化ナトリウム；医薬組成物の１ｍＬにつき５０１．２５ｍｇの量で存在するプロプレングリコール；及び、医薬組成物の１ｍＬにつき４１８．２０ｍｇの量で存在する水を含有する医薬組成物の約０．１２５ｍＬ〜約０．５ｍＬを、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ を感染させたブタへ投与し、その治療効果を決定した。「実効力」数は、本明細書で使用されるように、本発明の医薬組成物に存在するＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの実質的に純粋な混合物又は平衡混合物の、１ｍＬあたりの実際のｍｇを意味する。
【０１０１】
６０頭の動物のプールから、一貫してほぼ１０ｋｇの体重を有する、臨床的に正常で健常な５０頭のブタを選択した。選択した動物（各処置１０頭）を無作為に処置へ割付けて、それに従って檻へ振り分けた。０日目、各動物に２５ｍＬの Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ チャレンジ培養液を気管内接種した。各ロットの動物に、接種からほぼ１時間後に、以下の溶液の１つを単回用量で筋肉内注射した：（１）約１．５ｍＬの滅菌０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）；（２）１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量でダノフロキサシン２５ｍｇ／ｍＬの約０．５ｍＬ；（３）１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約０．１２５ｍＬ；（４）２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約０．２５ｍＬ；又は（５）５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約０．５ｍＬ。ダノフロキサシンだけは、翌２日間のいずれも再投与した。他の処置はすべて単回用量の注射で与えた。チャレンジから６時間後、チャレンジから２４時間後からはじめて１日１回、体温と疾患スコアを記録した。重篤な肺炎（即ち、４の疾患スコア）を発症した動物は安楽死させ、死亡数としてリストした。実験の経過の間に死亡した動物は剖検した。その肺を取り出し、肺炎の病巣を概ね検査した。罹患した肺組織の比率の評価を決定し、記録した。チャレンジから５日目に生存動物をすべて安楽死させ、上記のように剖検した。
【０１０２】
一日平均疾患スコア、体温、肺病巣スコアの比較に基づいて、効果の評価を決定した。１日平均直腸温と疾患スコアの比較を、反復測定分散分析により評価した。各処置の平均肺病巣スコアの差は、要因分散分析法を使用して評価した。処置群間の死亡率の比較を、χ（カイ）２乗分析及びフィッシャーの正確（Ｅｘａｃｔ）検定を使用して実施した。
【０１０３】
本試験における疾患チャレンジは比較的重篤だった。チャレンジ後６時間で、ブタは抑うつを伴い、チアノーゼ状態になり、呼吸困難の徴候を示した。すべての処置群で直腸温を評価した。本試験の全体死亡率は１８％（ブタ５０頭のうち９頭）であった。１日平均直腸温の計算は、この数値における統計的有意差を
処置群間で示さなかった。チャレンジから６時間後に全群で体温が上昇したが、全処置群の１日平均体温はすべて正常の範囲にとどまった。５ｍｇ／ｋｇ（体重）、又は２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物、又はダノフロキサシンで処置した動物は、生理食塩水を注射した動物の１日平均疾患スコア（約３）に比較して、１日平均疾患スコア（約２）の統計的に有意な低下を示した。３回用量のダノフロキサシンで処置した動物を、５ｍｇ／ｋｇ（体重）又は２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物の単回用量で処置した動物と比較すると、有意差は観察されなかった。医薬組成物での処置の比較では、５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物で処置したブタが１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物で処置したブタより統計的に有意に（ｐ＜０．０５）低い臨床疾患スコアを示した。５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物又は２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の医薬組成物で処置したブタの間には疾患スコアにおいて有意差が見られなかった。
【０１０４】
様々な処置の死亡率及び肺病巣スコアに対する効果を以下の表３に要約する。死亡率は、被処置動物において０％〜４０％に及んだ。生理食塩水対照群の動物の４０％（４／１０）がチャレンジ後４８〜７２時間の間に肺炎で死亡した。医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）で処置した群では１頭の死亡、医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）で処置した群では４頭の死亡（４０％）があった。ダノフロキサシン、又は医薬組成物の５ｍｇ／ｋｇ（体重）で処置した群では死亡がなかった。
【０１０５】
生理食塩水対照ブタの平均肺病巣スコアは４４％であった。ダノフロキサシン、又は医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）若しくは５ｍｇ／ｋｇ（体重）で処置したブタは、生理食塩水対照に比較して、平均肺病巣スコアの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。被処置動物を比較すると、ダノフロキサシン、又は医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）若しくは５ｍｇ／ｋｇ（体重）で処置したブタは、医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）に比較して、平均肺病巣スコアの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。
【０１０６】
【表１２】
2004516233.tif 000022
実施例６
４．９のｐＨを有し、医薬組成物の１ｍＬにつき２００ｍｇの量で存在する、約９５〜約９９％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉと約１％〜約５％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの比である、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物（ここで、２００ｍｇ／ｍＬは、「実効力」数である）；医薬組成物の１ｍＬにつき８５．０９ｍｇの量で存在するクエン酸；医薬組成物の１ｍＬにつき２５３．４０ｍｇの量で存在するプロプレングリコール；及び、医薬組成物の１ｍＬにつき５４１．４６ｍｇの量で存在する水を含有する医薬組成物の約１．２５ｍＬ〜約５．０ｍＬを、天然に存在する細菌性ウシ呼吸系疾患を有する仔ウシへ投与した。
【０１０７】
２１３頭の仔ウシ（平均体重２００ｋｇ）を購入し、集合場所でほぼ２〜３日一緒にし、ほぼ１，０００マイルを搬送トラックにより動物施設まで輸送した。獲得又は試験前処理の間、抗菌処置を施さなかった。到着後すぐに動物を受入れ檻へ降ろし、耳にタグを付け、水と飼料を摂れるようにした。変性した生ウイルスのＩＢＲ、ＰＩ、ＢＶＤ及びＢＲＳＶを含有するＢＯＶＩＳＨＩＥＬＤ  ４＋Ｌ５ワクチンと、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ に抗する５つの ｓｅｒｖｏｖａｒ を含有するバクテリン（ｂａｃｔｅｒｉｎ）（ファイザー・アニマル・ヘルス；Ｐｆｉｚｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）で動物を予防接種した。さらに、それらを抗寄生虫剤のＤＥＣＴＯＭＡＸ（ファイザー・アニマル・ヘルス）で処置し、成長促進剤（ＳＹＮＯＶＥＸ−Ｃ，シンテックス・ラボラトリーズ）を注入した。到着後の日からはじめて、すべての動物を、ウシ呼吸系疾患に一致した臨床徴候について毎日観察した。急性呼吸系疾患の臨床徴候を示す動物を選択し（引出し）、それらの直腸温を記録した。この試験に含めるための選択基準は、急性呼吸系疾患に一致した臨床症状（即ち、１以上４未満の疾患スコア）と発熱（１０４．０°Ｆ以上の直腸温）とした。選択したならば、無作為ブロック割付けを使用して、５つの処置群の１つへ動物を無作為に割付けた。すべての処置を各試験の檻（動物２頭／処置／檻）で等しく実施した。各ロットの動物に、選択基準を満足した日に、以下の溶液の１つを単回用量で皮下注射した：（１）約６．６ｍＬの滅菌０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）；（２）１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量でＭＩＣＯＴＩＬ  ３００の約６．６ｍＬ；（３）１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約１．２５ｍＬ；（４）２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約２．５ｍＬ；又は（５）５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約５ｍＬ。すべての溶液を単回用量の皮下注射で投与した。処置後の観察期間中は、さらに医薬品を投与しなかった。処置後１４日間、すべての動物について体温と疾患スコアを毎日記録した。処置後４８時間からはじめて、１以上の疾患スコアと１０４°Ｆ以上の体温を示した動物は、データ解析時に再引出し動物（ｒｅ−ｐｕｌｌｓ）として同定した。重篤な肺炎（即ち、４の疾患スコア）を発症した動物は安楽死させ、死亡数としてリストした。実験の経過の間に死亡した動物は、体重を量り、剖検した。その肺を取り出し、肺炎の病巣を概ね検査した。罹患した肺組織の比率の評価を決定し、記録した。可能ならば、典型的に病んでいる領域からの肺サンプルをすべての動物から細菌培養のために収集した。１４日目、生存動物をすべて安楽死させた。動物を剖検し、その肺を上記のように病巣について概ね評価した。すべての動物の肺サンプルを細菌培養のために収集した。個々の体重増加を評価することによって、動物のパフォーマンスを判定した。各動物を７日目と１４日目に体重測定した。
【０１０８】
一日平均疾患スコア、体温、肺病巣スコアの分析に基づいて、効果の評価を決定した。各処置において成功した応答動物（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）の比率を、各処置の開始動物数−（死亡数＋再引出し動物数）として１４日目に決定した。１４日目に疾患スコア０（正常）又は１以上を示す各群内の動物の比率に関する処置群間比較を、χ２乗分析及びフィッシャーの正確（Ｅｘａｃｔ）検定を使用して評価した。反復測定ＡＮＯＶＡを使用して、処置群間の温度及び体重増加の差を評価した。死亡率と応答動物率の処置群間比較も、χ２乗分析及びフィッシャーの正確検定を使用して実施した。
【０１０９】
この自然疾患試験における呼吸系疾患の発生はきわめて重篤であった。生理食塩水対照の死亡率は７５％であった。生理食塩水対照の平均肺病巣スコアは、３８．４％であった。疾患の臨床徴候の発症の経時変化は、この年齢及び背景の仔ウシのいる商業農場で通常観察されるものに典型的であった。１日平均直腸温の計算は、すべての処置群の１日平均直腸温において、生理食塩水対照と比較した場合、統計的に有意な（ｐ＜０．０１）低下を示した。処置群の体温は、試験の７日目以降、生理食塩水対照のそれより低いままであった。医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物より有意に（ｐ＜０．０１）低い１日平均直腸温を示した。医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇで処置した動物の温度応答は、ＭＩＣＯＴＩＬ対照のそれと同様であった。ＭＩＣＯＴＩＬ又は任意用量レベルの医薬組成物のいずれかによる動物の治療的処置は、生理食塩水対照に比較して、１日平均疾患スコアの有意な（ｐ＜０．０１）低下をもたらした。これらの処置を比較すると、２．５ｍｇ／ｋｇの医薬組成物で処置した仔ウシは、ＭＩＣＯＴＩＬ処置仔ウシに比較して、有意に（ｐ＜０．０５）減少した平均１日スコアを示した。１．２５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかの医薬組成物で処置した仔ウシは、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した仔ウシと同様である１日平均疾患スコアを示した。
【０１１０】
再引出し率、死亡数、及び肺病巣スコアのデータを以下の表４に要約する。この試験では、生理食塩水対照の７５％が再引出しの判断基準を満たした。ＭＩＣＯＴＩＬ又は１．２５ｍｇ／ｋｇの医薬組成物の投与は、生理食塩水対照に対して、再引出し動物の発生を減少させた（それぞれ、５５％と４０％）。対照的に、医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した動物の再引出し率は、生理食塩水対照のそれより有意に（ｐ＜０．０１）低かった。医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇで処置した動物の再引出し率は、ＭＩＣＯＴＩＬで観察されたものより有意に低かった。医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した動物の再引出し率は、ＭＩＣＯＴＩＬに対して低下した。２０頭の生理食塩水対照のうち１５頭（７５％）が研究を行う間に肺炎で倒れた。ＭＩＣＯＴＩＬの投与は、生理食塩水対照に対して、死亡率（２５％）の有意な（ｐ＜０．０１）低下をもたらした。生理食塩水対照に対する死亡率の有意な（ｐ＜０．０１）低下は、医薬組成物で処置した動物の３群すべてでも観察された。ＭＩＣＯＴＩＬ処置仔ウシに対して、比較死亡率は、５ｍｇ／ｋｇで投与した医薬組成物で処置された動物で有意に（ｐ＜０．０１）低かった。医薬組成物の２つの低用量では、ＭＩＣＯＴＩＬに比べて死亡率の減少をもたらした。生理食塩水処置仔ウシの平均肺病巣スコアは３８．４％であった。ＭＩＣＯＴＩＬ又は任意用量レベルの医薬組成物のいずれかで処置した動物は、生理食塩水対照に対して、平均肺病巣スコアの有意な（ｐ＜０．０１）低下を示した。２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与された医薬組成物は、ＭＩＣＯＴＩＬに対して、平均肺病巣スコアの低下をもたらした。医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇで処置した動物の肺病巣スコアは、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物のそれと同様であった。
【０１１１】
【表１３】
2004516233.tif 000023
各処置の応答動物の比率を、各処置につき開始動物数から死亡数及び再引出し動物数を差引くことによって計算した。応答動物率を表５に要約する。ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物の２５％が応答動物の判断基準を満たした。医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した動物の応答率は、ＭＩＣＯＴＩＬ処置動物に対して、有意に（それそれ、ｐ＜０．０１とｐ＜０．０５）向上した。１．２５ｍｇ／ｋｇで処置した動物の応答率は、ＭＩＣＯＴＩＬ処置動物で観察されるものより高かった。臨床的に健常な仔ウシは、１４日目に０の疾患スコアを有するものと定義した（表５）。この試験では、生理食塩水対照では１頭だけが１４日目に臨床的に健常であった。ＭＩＣＯＴＩＬの治療的投与は、１４日目の健常動物数の増加をもたらした。医薬組成物で処置した各群で、１４日目に臨床的に健常として特徴づけられた動物の比率は、生理食塩水対照群の比率より有意に（ｐ＜０．０５）高かった。同様に、すべての医薬組成物処置群で、臨床的に健常な動物の比率は、ＭＩＣＯＴＩＬ群の臨床的に健常な動物の比率より高かった。
【０１１２】
【表１４】
2004516233.tif 000024
以下の表６は、７日目と１４日目での体重増加に対する治療的処置の効果を要約する。ＭＩＣＯＴＩＬ又は医薬組成物のいずれかで処置した動物は、生理食塩水対照に対して、７日目と１４日目の両方で、有意に（ｐ＜０．０１）増加した１日平均増加量を示した。医薬組成物の２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかで処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物に対して向上した体重増加を示した。医薬組成物の１．２５ｍｇ／ｋｇで処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置したそれと同様の体重増加を示した。
【０１１３】
【表１５】
2004516233.tif 000025
実施例７
６．０のｐＨを有し、医薬組成物の１ｍＬにつき２００ｍｇの量で存在する、約９５〜約９９％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉと約１％〜約５％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの比である、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物（ここで、２００ｍｇ／ｍＬは、「実効力」数である）；医薬組成物の１ｍＬにつき６０．００ｍｇの量で存在するクエン酸；医薬組成物の１ｍＬにつき２５１．０１ｍｇの量で存在するプロプレングリコール；及び、医薬組成物の１ｍＬにつき５６９．００ｍｇの量で存在する水を含有する医薬組成物の約１．２５ｍＬ〜約５ｍＬを、細菌性ウシ呼吸系疾患を発症するリスクが高い仔ウシへ投与した。
【０１１４】
２２２頭の仔ウシ（平均体重２００ｋｇ）を購入し、集合場所でほぼ２日間一緒にし、ほぼ１，０００マイルを搬送トラックにより動物施設まで輸送した。獲得又は試験前処理の間、抗菌処置を施さなかった。到着後すぐに動物を受入れ檻へ降ろし、耳にタグを付け、水と飼料を摂れるようにした。変性した生ウイルスのＩＢＲ、ＰＩ、ＢＶＤ及びＢＲＳＶを含有するＢＯＶＩＳＨＩＥＬＤ  ４＋Ｌ５ワクチンと、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ に抗する５つの ｓｅｒｖｏｖａｒ を含有するバクテリン（ｂａｃｔｅｒｉｎ）（ファイザー・アニマル・ヘルス；Ｐｆｉｚｅｒ Ａｎｉｍａｌ Ｈｅａｌｔｈ）ですべての動物を予防接種した。さらに、それらを抗寄生虫剤のＤＥＣＴＯＭＡＸ（ファイザー・アニマル・ヘルス）で処置した。到着後の日（第０日）に、各動物の臨床状態を評価し、疾患スコアを記録した。割付の日（第０日）、疾患の臨床徴候がないのに、軽い抑うつ症状や第一胃が一杯になっていないことを含む疲労の症状を示した動物では、１以上の臨床スコアの資格がなかった。１以下の臨床スコアと１０４°Ｆ未満の体温を示した動物を本試験に含めるものとして選択した。選択したならば、体系的な無作為ブロック割付けを使用して、５つの処置群の１つへ動物を無作為に割付けた（各群２０頭の仔ウシ）。最初に選択した１０頭の動物を第一の檻へ割り付けた。後続の動物は、すべての檻が一杯になってから、各１０頭の群で檻を割当てた。各檻には、各処置群の１頭又はそれ以上の動物が含まれた。第０日での処置に先立って、各動物の体重、体温、及び疾患スコアを記録した。各ロットの動物に、到着後最初の３０時間以内に、以下の溶液の１つを単回用量で皮下注射した：（１）約６．６ｍＬの滅菌０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）；（２）約６．６ｍＬのＭＩＣＯＴＩＬ；（３）１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約１．２５ｍＬ；（４）２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約２．５ｍＬ；又は（５）５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約５ｍＬ。すべての溶液を単回用量の注射で投与した。急性の注射部位寛容の観察を注射後２４及び４８時間で実施した。すべての動物について体温と疾患スコアを毎日記録した。１以上の疾患スコアと１０４°Ｆ以上の体温を示した動物は、データ解析時に有病（引出し動物；ｐｕｌｌｓ）として同定した。実験の経過の間に死亡した動物は、体重を量り、剖検した。その肺を取り出し、肺炎の病巣を概ね検査した。罹患した肺組織の比率の評価を決定し、記録した。可能ならば、典型的に病んでいる肺の領域からの肺サンプルをすべての動物から細菌培養のために収集した。１４日目、生存動物をすべて安楽死させ、剖検し、上記のように、肺サンプルを病巣について概ね評価し、細菌培養のために収集した。個々の体重増加を評価することによって、動物のパフォーマンスを判定した。各動物を７日目と１４日目に体重測定した。
【０１１５】
一日平均疾患スコア、体温、及び肺病巣スコアの比較に基づいて、効果の評価を決定した。各処置において成功した応答動物（ｒｅｓｐｏｎｄｅｒｓ）の比率を、各処置の開始動物数−（死亡数＋引出し動物数）として１４日目に決定した。１４日目に疾患スコア０（正常）又は１以上を示す各群内の動物の比率に関する処置群間比較を、χ２乗分析及びフィッシャーの正確（Ｅｘａｃｔ）検定を使用して評価した。反復測定ＡＮＯＶＡにより、処置群間の温度及び体重増加の差を評価した。死亡率、有病率、及び応答動物率の処置群間比較も、χ２乗分析及びフィッシャーの正確検定を使用して実施した。
【０１１６】
この自然疾患試験における呼吸系疾患の発生はやや重篤であった。生理食塩水対照の有病率は６０％で、これらの動物の２５％が急性肺炎で死亡した。生理食塩水対照の平均肺病巣スコアは、２４．３％であった。疾患の臨床徴候の発症の経時変化は、この年齢及び背景の仔ウシのいる商業農場で通常観察されるものに典型的であった。１日平均直腸温では、すべての処置群で、生理食塩水対照と比較した場合、統計的に有意な（ｐ＜０．０１）低下が見られた。処置群の体温は、試験の１０日目以降、生理食塩水対照のそれより低いままであった。３つの用量の医薬組成物のいずれかで処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物より統計的に有意に（ｐ＜０．０１）低い１日平均直腸温を示した。この差の大きさは、２．５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかの医薬組成物で処置された動物で最大であった。ＭＩＣＯＴＩＬ又はの医薬組成物のいずれかによる仔ウシのメタ予防的（ｍｅｔａｐｈｙｌａｃｔｉｃ）処置は、生理食塩水対照に比較して、１日平均疾患スコアの有意な（ｐ＜０．０１）低下をもたらした。抗生物質の処置を比較すると、５ｍｇ／ｋｇの医薬組成物で処置した仔ウシは、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物に比較して、平均１日疾患スコアにおいて、統計的に有意な（ｐ＜０．０１）減少を示した。１．２５ｍｇ／ｋｇ又は５ｍｇ／ｋｇのいずれかの医薬組成物で処置した動物の疾患スコア応答は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した仔ウシと同様であった。
【０１１７】
有病率、死亡率、及び肺病巣スコアのデータを以下の表７に要約する。このやや重篤な自然感染試験では、生理食塩水対照が６０％の有病率を示した。抗生物質の処置はすべて、生理食塩水対照に対して、有病率の有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。医薬組成物で処置した動物はＭＩＣＯＴＩＬ対照に対して有病率の数的低下を示したが、いずれの違いも統計的に有意ではなかった。２０頭の生理食塩水対照仔ウシのうち６頭（３０％）が試験の経過の間に気管支肺炎で倒れた。ＭＩＣＯＴＩＬの投与は、生理食塩水対照に対して、死亡数の低下をもたらした。生理食塩水対照に対する死亡率の有意な（ｐ＜０．０５）低下が、医薬組成物で処置した動物の３群すべてで観察された。生理食塩水対照仔ウシの平均肺病巣スコアは２４．３％であった。ＭＩＣＯＴＩＬ又は医薬組成物で処置した動物は、生理食塩水対照に対して、平均肺病巣スコアの有意な（ｐ＜０．０１）低下を示した。５ｍｇ／ｋｇの医薬組成物で処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物より有意に（ｐ＜０．０１）低い肺病巣スコアを示した。１．２５ｍｇ／ｋｇ又は２．５ｍｇ／ｋｇのいずれかの医薬組成物で処置した動物は、ＭＩＣＯＴＩＬで処置した仔ウシに対し、平均肺病巣スコアの低下を示した。
【０１１８】
【表１６】
2004516233.tif 000026
各処置の応答動物の比率を、各処置につき開始動物数から死亡数及び引出し数を差引くことによって計算した。応答動物率を表８に要約する。様々な処置について観察された相対応答動物率の差は、有病率についての上記の差と同様であった。臨床的に健常な仔ウシは、１４日目に０の疾患スコアを有するものと定義した。この試験では、生理食塩水対照では１頭だけが１４日目に臨床的に健常であった。ＭＩＣＯＴＩＬ又は医薬組成物のいずれかで処置した動物の有意に（ｐ＜０．０１）高い比率が、生理食塩水対照に比べて、１４日目に臨床的に健常であると観察された。同様に、医薬組成物いずれかの用量で処置した動物のより高い比率が、ＭＩＣＯＴＩＬで処置されたものより臨床的に健常であると判定された。しかしながら、上記の差は、統計的に有意で（ｐ＜０．０５）なかった。
【０１１９】
【表１７】
2004516233.tif 000027
表９は、７日目と１４日目での体重増加に対するメタ予防的処置の効果を要約する。ＭＩＣＯＴＩＬ又は医薬組成物のいずれかで処置した動物は、生理食塩水対照に対して、７日目と１４日目の両方で、有意に（ｐ＞０．０５）増加した１日平均増加量を示した。様々な抗生物質処置の体重増加応答は同様であった。
【０１２０】
【表１８】
2004516233.tif 000028
２４及び４８時間で急性の注射部位を検査し、以下の尺度を使用して評価を行なった：０＝罹患領域（腫脹／炎症）が観察されない；１＝直径６インチ未満のやや罹患した領域（腫脹／炎症）；２＝直径６〜８インチの中位に罹患した領域（腫脹／炎症）；３＝直径が８インチを超える大きな罹患領域（腫脹／炎症）；４＝８インチを超える極度の罹患領域（腫脹／炎症）及び／又は胸部への広がり、又は跛行の誘発。急性の罹患領域のサイズ及び程度に基づいてグレードを割当てた。２４及び４８時間での評価を表１０に要約する。この試験では、注射後２４時間で、２以上のスコアの比率において各処置群間で統計的有意差を評価した。処置間で統計的有意差はなかった。しかしながら、異常な注射部位の数は、医薬組成物で処置した動物よりもＭＩＣＯＴＩＬで処置した動物の方が多かった。
【０１２１】
【表１９】
2004516233.tif 000029
実施例８
６．１のｐＨを有し、医薬組成物の１ｍＬにつき５０ｍｇの量で存在する、約９５〜約９９％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉと約１％〜約５％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの比である、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの混合物（ここで、５０ｍｇ／ｍＬは、「実効力」数である）；医薬組成物の１ｍＬにつき１５．００ｍｇの量で存在するクエン酸；医薬組成物の１ｍＬにつき２５０．１３ｍｇの量で存在するプロプレングリコール；及び、医薬組成物の１ｍＬにつき７３４．４３ｍｇの量で存在する水を含有する医薬組成物の約０．５ｍＬ〜約２ｍＬを、Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ 感染症を発症するリスクが高いブタへ投与した。
【０１２２】
ほぼ１０ｋｇの平均体重を有する１３０頭の臨床的に健常なブタを購入し、耳タグで同定し、２日間試験施設に馴らしてから試験を開始した。１日目、すべての動物の体重を測定し、体重の一貫性（約１０ｋｇ）と臨床異常の徴候がないことにより１００頭の動物を選択した。選択した動物（各処置につき２０頭）を各処置へ無作為に割付け、ここの檻へ区分けした。さらに２５頭の動物の群を種ブタ（ｓｅｅｄｅｒ ｐｉｇｓ）として無作為に割付けた（各処置につき５頭）。０日目、以下の溶液の１つを単回用量で動物に筋肉内注射した：（１）約１．５ｍＬの滅菌０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）；（２）１．２５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量でダノフロキサシン２５ｍｇ／ｍＬの約０．５ｍＬ；（３）２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約０．５ｍＬ；（４）５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約１ｍＬ；又は１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約２ｍＬ。ダノフロキサシンだけは、翌２日間のいずれも再投与した。他の処置はすべて単回用量の注射で与えた。０日目に、２５頭の種ブタを同時に Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ チャレンジ培地の３ｍＬ／外鼻孔でチャレンジした。各檻２０頭の試験動物へ５頭の感染した種動物を加えた。試験動物と種ブタを一緒にした。試験の間に死亡した種ブタは檻から除去した。チャレンジから４８時間後、生存している種ブタを処置群の檻から取り出し、安楽死させた。体温と疾患スコアを毎日記録した。実験の経過の間に死亡した動物は剖検した。その肺を取り出し、肺炎の病巣を概ね検査した。罹患した肺組織の比率の評価を決定し、記録した。５％以上の肺病巣スコアを有する動物を有病とみなした。７日目、すべての生存動物を安楽死させた。動物を剖検し、肺を除去し、肺炎病巣について概ね検査した。
【０１２３】
一日平均疾患スコア、体温、及び肺病巣スコアの比較に基づいて、効果の評価を決定した。１日平均直腸温と疾患スコアの差は、反復測定分散分析により評価した。各処置の平均肺病巣スコアの差は、要因分散分析法を使用して評価した。７日目に０（正常）又は１以上の疾患スコアを示す各群内の動物の比率の処置群間比較を、χ２乗分析及びフィッシャーの正確（Ｅｘａｃｔ）検定を使用して評価した。有病（５％以上の肺病巣スコア）率及び死亡率の処置群間比較を、χ２乗分析及びフィッシャーの正確（Ｅｘａｃｔ）検定を使用して実施した。
【０１２４】
種ブタの８０％がチャレンジの２４時間以内に肺炎で死亡し、細菌の病原体への試験動物の十分な曝露を示した。生理食塩水で処置したブタの体温は曝露後１日目に上昇しはじめ、医薬組成物−及びダノフロキサシン−処置群と比較して、試験の期間を通して有意に上昇したままであった。５ｍｇ／ｋｇ及び１０ｍｇ／ｋｇの医薬組成物処置群の１日平均直腸温は、ダノフロキサシン処置のブタより有意に（ｐ＞０．０５）低かった。２．５ｍｇ／ｋｇの医薬組成物で処置したブタでは、ダノフロキサシンで処置したブタと比較して、体温の初期低下が起きた。しかしながら、これら２つの処置間の１日平均直腸温における差は、統計的に有意（ｐ＜０．０５）ではなかった。生理食塩水で処置したブタでは、１日平均疾患スコアにおける統計的に有意な（ｐ＜０．０５）上昇が、ダノフロキサシン−及び医薬組成物−処置動物に比較した場合に見られた。しかしながら、ダノフロキサシン処置ブタと医薬組成物処置ブタの間では、１日平均疾患スコアにおいて差がなかった。７日目に０（正常）又は１以上の疾患スコアを示す各群内の動物の比率を処置群間で比較しても、処置群の間で差を示さなかった。
【０１２５】
有病率及び死亡率を要約するデータを表１１に示す。５％以上の平均肺病巣スコアを有するブタから有病性の判断基準を確定した。本試験の生理食塩水対照群では、ダノフロキサシン−及び医薬組成物−処置ブタに比較した場合、有病率の統計的に有意な（ｐ＜０．０５）増加が見られた。しかしながら、ダノフロキサシン処置ブタと医薬組成物処置ブタの間では、有病率において差がなかった。
【０１２６】
【表２０】
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死亡率及び肺病巣スコアに対する様々な処置の効果を以下の表１２に要約する。生理食塩水対照の平均肺病巣スコアは２２．２％であった。ダノフロキサシンで処置したブタと医薬組成物で処置したブタは、生理食塩水対照と比較した場合、平均肺病巣スコアの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。しかしながら、ダノフロキサシン処置ブタと医薬組成物処置ブタの間では、平均肺病巣スコアにおいて統計的に有意な（ｐ＜０．０５）差がなかった。
【０１２７】
【表２１】
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実施例９
５．４のｐＨを有し、医薬組成物の１ｍＬにつき１００ｍｇの量で存在する、約９５〜約９９％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉと約１％〜約５％のＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの比である、Ｎ−（ｎ−プロピル）異性体Ｉ及びＮ−（ｎ−プロピル）異性体ＩＩの平衡混合物（ここで、１００ｍｇ／ｍＬは、「実効力」数である）；医薬組成物の１ｍＬにつき０．１ミリモルの量で存在するクエン酸；医薬組成物の１ｍＬにつき濃塩酸（３６〜３８％の重量力価）の１９．５８ｍｇの量で存在する塩酸；医薬組成物の１ｍＬにつき１．０Ｍ水酸化ナトリウム溶液の０．０９ｍｇの量で存在する水酸化ナトリウム；医薬組成物の１ｍＬにつき５０１．２５ｍｇの量で存在するプロプレングリコール；及び、医薬組成物の１ｍＬにつき４１８．２０ｍｇの量で存在する水を含有する医薬組成物の約３ｍＬ〜約６ｍＬを、１２５，０００個の胞子形成した嚢胞体（種の比率は、Ｅｉｍｅｒｉａ ｂｏｖｉｓ ９３％、Ｅｉｍｅｒｉａ ａｕｂｕｒｎｅｎｉｓ ４％、及び Ｅｉｍｅｒｉａ ｚｕｅｍｉｉ ３％のコクシジウム嚢胞体）を含有するコクシジウムのチャレンジ培養液２ｍＬでチャレンジした仔ウシへ投与した。
【０１２８】
約１１０〜１２５ｋｇの体重であるネーティブ仔ウシ６０頭を地元の酪農家から購入し、体重を測定し、耳タグで同定し、全般健康評価について観察した。身体的に異常であるか、サイズ不足であるか、又は死にかけていると到着時にみなされた動物は試験から除外した。ウシを５つの収容檻へ収容した（１２頭の動物／檻）。チャレンジに先立つ７日間は仔ウシを維持し、施設に馴らせた。試験に先立ち、研究者の判断で数頭の仔ウシをこの試験から除外した。チャレンジ前の６、４、２日目に、半定量的な嚢胞体のカウント用に糞サンプルを得た。チャレンジ前４日目で、嚢胞体は、存在していれば、種分化していた。
【０１２９】
到着後８日目（試験０日目）に、Ｅｉｍｅｒｉａ 培養液を仔ウシに経口接種した。１日目からはじめて、試験期間の毎日ほぼ同じ時刻に、体温を決定して記録した。姿勢、水和（ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）、及び糞粘稠度を毎日評価した。チャレンジ後、２、４、６、８、及び１０日目に糞サンプルを採取した。嚢胞体はチャレンジ後１０日目で種分化していた。チャレンジ後１０日目に、無作為ブロック割付けを使用して、５０頭の動物を５つの処置群の１つへ無作為に割付けた。処置はそれぞれの檻で等しく行われた。以下の溶液の１つを単回用量で動物に皮下注射した：（１）約４ｍＬの滅菌０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水）；（２）１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量でＭＩＣＯＴＩＬ  ３００ｍｇ／ｍＬの約４ｍＬ；（３）５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約６ｍＬ；（４）２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で本医薬組成物の約３ｍＬ；又は（５）１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の用量で９．６％経口溶液で約２オンスのアンプロリウムを動物へ経口で飲ませて投薬した。アンプロリウムだけは以下の４日間毎日再投与した。他の処置はすべて単回用量の注射で与えた。糞サンプルをコクシジウム嚢胞体の発散（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）について、処置後１２、１４、１６、及び１８日目に半定量的に検査した。１９日目にはじめて、２８日目まで継続し、毎日の糞サンプルを半定量カウントのために評価した。発散した嚢胞体の種分化を１９〜２１、２３、２６、及び２８日目に実施した。試験の経過の間に死亡したか、又は臨床コクシジウム症に関連した瀕死状態により安楽死させた仔ウシは死亡動物として計数した。死亡動物は剖検し、全般所見を記録した。２８日目の試験終了時に、残っている動物をすべて体重測定し、安楽死させ、検死解剖した。
【０１３０】
１日平均臨床スコア、体温、及び嚢胞体の発散に基づいて薬効の評価を決定した。異なる処置間の臨床スコア及び温度の差は反復測定ＡＮＯＶＡにより評価した。体重増加の差は要因ＡＮＯＶＡにより決定した。死亡率及び嚢胞体発散の処置群間比較を、χ２乗分析及びフィッシャーの正確検定を使用して実施した。
【０１３１】
チャレンジ後１９日目に、嚢胞体の発散が検出された。各処置の１日平均直腸温は、試験期間の間、正常範囲を保った。処置群間で有意差（ｐ＞０．０５）は検出されなかった。臨床スコアの評価には、糞粘稠度、水和、及び姿勢のスコアが含まれた。姿勢及び糞のスコアは、ＭＩＣＯＴＩＬ、アンプロリウム、又はいずれかの用量レベルの医薬組成物で処置された仔ウシが、生理食塩水対照の仔ウシと比較して、処置に対して好ましく応答することを示した。糞スコア、水和スコア、及び姿勢スコアの増加は、嚢胞体の検出可能な発散の時期（１９日目）に対応した。アンプロリウム、ＭＩＣＯＴＩＬ、又はいずれかの用量レベルの医薬組成物で処置された仔ウシは、生理食塩水対照の仔ウシと比較して、１日平均糞粘稠度スコアの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。糞スコアの増加は嚢胞体の発散に先立つ２〜３日の間に起こり、２８日間の試験の間、上昇したままであった。アンプロリウム、ＭＩＣＯＴＩＬ、又は医薬組成物で処置した仔ウシの比較では差が検出されなかった。アンプロリウムで処置した仔ウシは、生理食塩水処置仔ウシと比較して、１日水和スコアの統計的に有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。アンプロリウム、ＭＩＣＯＴＩＬ、又は医薬組成物で処置した仔ウシの間では、水和スコアに差が見られなかった。アンプロリウム、ＭＩＣＯＴＩＬ、又はいずれかの用量レベルの医薬組成物での仔ウシの処置は、生理食塩水対照と比較して、１日平均姿勢スコアの有意な（ｐ＜０．０５）低下を示した。嚢胞体発散のピーク時に、アンプロリウム処置仔ウシと生理食塩水処置仔ウシの間で姿勢スコアの差が認められた。ＭＩＣＯＴＩＬ、又はいずれかの用量レベルの医薬組成物で処置された動物は、試験の最終７日間の間に、生理食塩水対照仔ウシに対して姿勢スコアの数的低下を示した。ＭＩＣＯＴＩＬ、アンプロリウム、又は医薬組成物処置の群間では、有意差（ｐ＞０．０５）が見られなかった。
【０１３２】
死亡率を表１３に要約する。本試験では、５頭の仔ウシがコクシジウム症で死亡した。チャレンジ後２３日目に３頭の仔ウシが死亡し、感染後２８日目に２頭の仔ウシが死亡した。生理食塩水処置群とＭＩＣＯＴＩＬ処置群のそれぞれで２頭の動物が死亡した。アンプロリウム処置群の１頭の動物が試験の経過中に死亡した。医薬組成物で処置した動物の間では死亡がなかった。生理食塩水以外で処置された動物の間では、死亡率において統計的に有意な（ｐ＞０．０５）差はなかった。
【０１３３】
【表２２】
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表１４は、体重増加に対する処置の効果を要約する。すべての処置群で正の１日平均増加が見られた。生理食塩水処置群とＭＩＣＯＴＩＬ処置群の動物と比較すると、医薬組成物で処置した仔ウシとアンプロリウムで処置した仔ウシでは、体重増加の亢進が見られた。ＭＩＣＯＴＩＬ−及び生理食塩水−処置動物は、２１日目の１日平均増加を評価すると、同様に応答していた。しかしながら、生理食塩水以外で処置された群の間では、体重増加において統計的な差は見られなかった。
【０１３４】
【表２３】
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Ｅｉｍｅｒｉａ 嚢胞体の発散をチャレンジの前と後でモニターした。嚢胞体の発散がはじめて検出されたのはチャレンジ後１９日目である。この試験では、ＭＩＣＯＴＩＬ−、アンプロリウム−、及び医薬組成物−処置動物と比較した場合、生理食塩水処置動物において、嚢胞体発散の統計的に有意な（ｐ＜０．０５）増加が見られた。また、ＭＩＣＯＴＩＬ処置動物は、アンプロリウムで処置した動物と比較して、嚢胞体発散の統計的に有意な（ｐ＞０．０５）増加を示した。しかしながら、ＭＩＣＯＴＩＬ−及びアンプロリウム−処置仔ウシをいずれかの用量の医薬組成物で処置した仔ウシと比較した場合、嚢胞体の発散において統計的に有意な（ｐ＜０．０５）差は見られなかった。
【０１３５】
この試験では、生理食塩水対照群の動物の４０〜１００％がチャレンジ後１９、２０、２１、２３、２６及び２８日目に一貫して嚢胞体を発散していた。アンプロリウム、ＭＩＣＯＴＩＬ、医薬組成物で処置した動物は、生理食塩水対照と比較して、減少した嚢胞体の発散を示した。この試験では、Ｅ． ｂｏｖｉｓ が発散嚢胞体のサンプルあたり約６０〜１００％を占めていた。Ｅ． ａｕｂｕｍｅｎｉｓ と Ｅ． ｚｕｅｒｎｉｉ が発散嚢胞体のサンプルあたり約１０〜４０％を占めていた。チャレンジ後２８日目には、Ｅ． ｚｕｅｒｎｉｉ 嚢胞体の発散が明らかに増加し、このことは、Ｅ． ｂｏｖｉｓ 嚢胞体の発散の減少に対応した。しかしながら、発散をモニターした全期間で、試験した化合物のいずれも発散嚢胞体の種分化プロフィールを有意に変えるとは思われなかった。
【０１３６】
剖検すると、大多数の動物は、中位〜重篤なコクシジウム感染症に一致した一般病理を示した。この試験では、すべての処置群の仔ウシが出血性回腸炎及び結腸炎の徴候を示した。本試験で剖検時に一般病理を示さなかったの１４％（７／５０）である。しかしながら、各処置群の仔ウシに由来する発散嚢胞体は、これらの動物にもあるレベルのコクシジウム感染があることを示唆した。
【０１３７】
本発明は、本発明のいくつかの側面についての説明として意図されている、実施例に開示された特定の態様により特許請求の範囲が制限されてはならない。機能的に同等であるいかなる態様も本発明の範囲内に含まれる。実際、本明細書で示されて記載されたものに加えて本発明の様々な変更が当業者には明らかであろうが、それらは付帯の特許請求項に該当することになる。
【０１３８】
本明細書に開示されるすべての参考文献は、そのまま参照により本明細書に組込まれる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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2004516233.tif 000112