(57)【要約】本発明は、診断または光力学治療における使用のための注射可能な生薬製剤、ならびにこれを調製するための方法に関する。該製剤は：感光剤として、アルカリ金属塩の形態の１０ｍｇ／ｍｌを超えない量の一般式（Ｉ）の化合物（式中、Ｒ２は、基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は、水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり；Ｒ３は、Ｈ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシを表し；ならびに＊は、不斉炭素を表す）、および該感光剤用の可溶化剤として、ベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコールを含有する水相中の担体、および該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量の界面活性剤を少なくとも含有する。
2004537562.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤であって、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌを超えない量のアルカリ金属塩の形態の以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
2004537562.tif 000017
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシを表し、＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相中の医薬的に許容可能な担体
を含有し、この水相中の医薬的に許容可能な担体が、
該感光剤用の可溶化剤として作用する、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および
該感光剤の凝集を抑えることが可能な界面活性剤
を少なくとも含有し、該界面活性剤が、該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量で含有されることを特徴とする、注射可能な生薬製剤。
【請求項２】
式（Ｉ）の前記感光剤が、アルカリ金属塩の形態の以下の式（ＩＩ）：
【化２】
2004537562.tif 000018
により表されるパラジウム−バクテリアフェオホルビドａ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ）であることを特徴とする、請求項１に記載の注射可能な製剤。
【請求項３】
式（Ｉ）の前記化合物または式（ＩＩ）の前記化合物がナトリウム塩の形態であることを特徴とする、請求項１または２に記載の生薬製剤。
【請求項４】
前記可溶化剤が、前記製剤の全重量に対して５体積％を超えない量で該製剤中に含有されるベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項５】
前記可溶化剤が、２０：８０（Ｖ／Ｖ）の比のベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の注射可能な生薬製剤。
【請求項６】
前記可溶化剤が、前記製剤の全重量に対して５体積％を超えない量で該製剤中に含有されるプロピレングリコールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項７】
前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P または Solutol HS 15（商標）であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項８】
前記の注射可能な生薬製剤が、前記界面活性剤として、該製剤の全重量に対して５重量％を超えない量の Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P を含有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の注射可能な生薬製剤。
【請求項９】
診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤の調製方法であって、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌまでの量のアルカリ金属塩の形態の以下の式（Ｉ）：
【化３】
2004537562.tif 000019
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシを表し、＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相中の医薬的に許容可能な担体
を含有し、該方法が、
該感光剤用の可溶化剤として作用する、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および
該感光剤の凝集を抑えることが可能な界面活性剤
を少なくとも含有し、該界面活性剤が、以下に指し示される順序で：
（１）酸の形態の式（Ｉ）の該感光剤を、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコールから構成される可溶化剤で湿潤させ；
（２）該製剤の最終重量に対して２０重量％を超えない量の界面活性剤を加え；
（３）式（Ｉ）の該感光剤の酸の官能基を中和するに充分な量のアルカリ金属水酸化物を加え；
（４）この水相中の混合物を、該感光剤のその塩への完全な変換およびその完全な可溶化を確実にするに充分攪拌し；
（５）ｐＨを生理学的に許容可能な７．２±０．４の値に調整するためにデザインされた緩衝剤を加え；
（６）必要な場合は、該製剤の体積を注射可能な調製物用に水で調整する
ことからなる段階を包含する方法。
【請求項１０】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、酸の形態の式（Ｉ）の前記感光剤が、以下の式（ＩＩ）：
【化４】
2004537562.tif 000020
により表されるパラジウム−バクテリアフェオホルビドａ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ）であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、前記可溶化剤が、前記溶液の全重量に対して５体積％を超えない量で加えられることを特徴とする、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記可溶化剤が、２０：８０の比のベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P または Solutol HS 15（商標）であることを特徴とする、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P であり、該製剤の全重量に対して５重量％を超えない量で加えられることを特徴とする、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、アルカリ金属水酸化物が水酸化ナトリウムであることを特徴とする、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、ｐＨを調整するためにデザインされて加えられる前記緩衝剤がクエン酸であることを特徴とする、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、前記段階（１）〜（６）が、不活性気体の雰囲気下に行われることを特徴とする、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項９〜１７のいずれか１項に記載の方法により得られる注射可能な生薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、修飾されたバクテリアクロロフィル由来の感光剤および医薬的に許容可能な担体を水相中に含有する、診断または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤に関する。
【０００２】
本発明はまた、この注射可能な生薬製剤の調製のための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
５０年以上前、ポルフィリンが腫瘍組織中に蓄積可能であり、更に照射時にその場で光を吸収することにより、これらの腫瘍組織中で蛍光を発することが可能であったことが論証されている。
【０００４】
それらの特性により、これらのポルフィリンは、蛍光を局在化させることにより、腫瘍を検出するための興味深い手段を提供することが可能であったことが論証されている。
【０００５】
近年、癌の治療における感光剤の使用が、数多くの研究の対象となっており、これは非常に確証が高いことが判って、「光力学治療」またはＰＤＴとして知られるこの技術における興味が増大し続けている。
【０００６】
光力学治療（ＰＤＴ）のこの技術において、感光剤が投与されるが、これはそれ自体を、細胞が増殖する組織中にとどめる能力があり、該組織は、単色光源（レーザー）または多色光源（ランプ）からの、該感光剤により吸収される波長を持つ光に曝露される。
【０００７】
該感光性生成物は、それ自体無毒であるが、光子の吸収により励起された後、エネルギーを周辺の酸素に移動させて、１重項酸素（ＩＩ型光酸化）および／または酸素化フリーラジカル（Ｉ型光酸化）を形成することにより、その基底状態へと戻る性質を持っている。
【０００８】
これらの酸素誘導体は非常に反応性で毒性があり、それらが接触する全ての組織構成物を酸化する。
【０００９】
更に、それらの拡散は非常に限られ、その寿命は短く、該感光剤の光に対しての曝露により誘導される光毒性効果は、局在化されたままとなる。
【００１０】
光力学治療に関しての主な指標は、癌学、ウィルス学、眼科学、特に老人斑変性（ＳＭＤ）の治療、心臓学（血管形成後の再狭窄）、リューマチ学および皮膚科学にある。
【００１１】
非常に数多くの感光性分子が、光力学治療におけるそれらの使用に関して研究されてきた。
【００１２】
光力学治療における、ヘマトポルフィリン誘導体の、および特に Photofrin（登録商標）（Quadra Logic Technologies, Inc.（バンクーバー、ブリティッシュ・コロンビア州、カナダ）により上市されているジヘマトポルフィリンのエーテルおよびエステルの混合物であるナトリウムポルフィマー）の使用は、大いに治験されてきた（例えば、Dougherty, T. J., Photochem. Photobiol., 46, 569(1987); Kessel et al., Photochem. Photobiol., 46, 563(1987); Dougherty, T. J., Semin. Surg. Oncol., 2, 24(1986); McCaughan, J. S., Photochem. Photobiol., 46, 903(1987); および Gomer, C. J., Semin. Hematol., 26(1)27(1989)参照）。
【００１３】
大部分の臨床研究において、ポルフィリン化合物（ポルフィリン、ヘマトポルフィリン、ヒドロキシ−エチル−ビニル−重水素ポルフィリン、プロトポルフィリンのモノマー、およびポルフィリンのダイマー／ポリマー）の混合物から構成されるヘマトポルフィリン誘導体（ＨＰＤ）が使用された（例えば、Daugherty, T. J. Photochem. Photobiol. 46, 569 (1987) 参照）。
【００１４】
これらの研究の結果として、ヘマトポルフィリンのこれらの誘導体の治療的利用が、２つの主要な欠点を被ることが見出された。
【００１５】
第１のものは、該化合物を活性化する光の波長において、この光は組織中へ充分深く浸透せず（例えば、Doiron et al., pp. 281-291 in : Porphyrins in Tumor Phototherapy, Edited by A. Andreoni and R. Cuulbreddu, Plenum Press, New York, 1984 参照）、これらの化合物の使用は小さな大きさの腫瘍の治療に限られ、組織中深くに局在されている腫瘍の治療には不適当である。
【００１６】
ヘマトポルフィリンのこれらの誘導体の第２の主要な欠点は、それらが患者の組織中に蓄積する傾向があり、特に皮膚および目に関する感光を引き起こし、これらは該治療後４〜８週に亘って持続し得、これは、例えば日光へ曝露されることが避けられること、日光遮断剤を含有するクリームが皮膚上に適用されること、ならびに適切な衣服およびサングラスが装着されることのような特別な注意が払われることを要求する。
【００１７】
光力学治療におけるその使用に関して市場認可（ＭＡ）が認められているヘマトポルフィリン誘導体の唯一のケースは、Photofrin（登録商標）のそれであり（ＭＡが１９９４年アメリカ合衆国において、１９９６年ヨーロッパにおいて認められている）、これは、６３０ｎｍにおいて光を吸収するポルフィリン化合物の混合物を含有し、皮膚および目に関する感光を引き起こす注射可能な水溶液であり、これは投与後２ヶ月さえも持続する。
【００１８】
前記のヘマトポルフィリン誘導体の欠点を克服するために、新世代の感光剤が開発され、これらはよく定められた構造を持ち、６５０ｎｍ〜８００ｎｍの範囲中に位置される波長において光を吸収する純粋な化合物であることを共通の特徴として持っている。
【００１９】
光力学治療において使用され、この第２世代に属する感光剤の例として、ベンゾポルフィリンの誘導体を挙げることが出来る（例えば：A. M. Richter, S. Yip, H. Meadows et al. "Photosensitizing potencies of the structural analogues of benzoporphyrin derivatives in different biological test systems" J Clin Laser Med Surg 1996, 14, 335-341; J. G. Levy, A. Chan, H. A. Strong "The clinical status of benzoporphyrin derivative" SPIE 1996, 2625: 86-95; U. Schmidt-Erfurht, W. Bauman, E. Gragoudas et al. "Photodynamic therapy of experimental choroidal melanoma using lipoprotein-delivered benzoporphyrin" Ophthalmonogy 1994, 101:89-99 参照）。
【００２０】
ベンゾポルフィリン誘導体は、これらの化合物が、ヘマトポルフィリン誘導体を活性化する光よりもより高い波長（約６９０ｎｍ）を持つ光により活性化されるという利点を供し、この光は組織中へより深く浸透する。
【００２１】
更に、ベンゾポルフィリンのこれらの誘導体の使用は、それらの皮膚および目に関する感光効果が非常に抑えられたことを示している。
【００２２】
しかしながら、ベンゾポルフィリン誘導体（ＢＰＤ）は、それらが水性媒体に不溶であるという主要な欠点を供し、非経口投与によるそれらの医薬的利用が難しくなってしまっている。
【００２３】
米国特許第ＵＳ−Ａ−５ ２８９ ３７８号は、該ベンゾポルフィリン誘導体をリポソーム中へ取り込むことにより、この欠点を治療に提案している。
【００２４】
老人斑変性（ＳＭＤ）の目に見える中枢血管新生を優位に治療するための光力学治療における使用のためのベンゾポルフィリン誘導体を含有する注射可能なリポソーム製剤の例として、感光性分子としてベルテポルフィン（verteporfin）化合物を含有する Visudyne（登録商標）（Ciba-Vision）を挙げることが出来るが、これは６９０ｎｍの波長において光を吸収し、皮膚および目に関する感光を引き起こすが、これは結局限定されたものである。
【００２５】
光力学治療において有用な感光剤の他の例として、この新世代に属するのであるが、特に以下の一般式のバクテリアクロロフィル誘導体を挙げることが出来る。
【００２６】
【化１】
2004537562.tif 000003
【００２７】
式中、Ｍは１原子の金属または２原子の水素を表し、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、各々が独立に、１原子の水素または１つの可変基を表す。
【００２８】
これらの化合物は、例えば：
ＭがＭｇを表し、
Ｒ１がフィチル（phytyl）基を表し、
Ｒ２が水素原子を表し、
Ｒ３が−ＣＯＯＣＨ３基を表す場合、
Ｂｃｈｌまたはバクテリアクロロフィル；
ＭがＭｇを表し、
Ｒ１が水素原子を表し、
Ｒ２が水素原子を表し、
Ｒ３が−ＣＯＯＣＨ３基を表す場合、
Ｂｃｈｌｉｄｅまたはバクテリアクロロフィリド；および
Ｍが２原子の水素を表し、
Ｒ１が水素原子を表し、
Ｒ２が水素原子を表し、
Ｒ３が−ＣＯＯＣＨ３基を表す場合、
Ｂｐｈｅｉｄｅまたはバクテリアフェオホルビド
と名付けられる。
【００２９】
これらの誘導体の内の幾つかは、特にＤＥ−Ａ−４１ ２１ ８７６、ＥＰ−Ａ−０５８４ ５５２およびＷＯ９７／１９０８１中に記載されている。
【００３０】
他のバクテリアクロロフィル誘導体は、特に興味深いことが判ったが、バクテリアクロロフィルの誘導体であり、ここでマグネシウム原子は、例えばＷＯ００／３３８３３において記載されているように、パラジウム原子で置き換えられている。
【００３１】
金属において修飾され、ＷＯ００／３３８３３において記載されているバクテリアクロロフィル誘導体の中で、以下の一般式（Ｉ）：
【００３２】
【化２】
2004537562.tif 000004
【００３３】
を持つ化合物（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシ、および＊は不斉炭素を表す）またはこれらの塩は、特に興味あるものであることが判り、該式（Ｉ）のこれらの化合物の中で、以下の式（ＩＩ）：
【００３４】
【化３】
2004537562.tif 000005
【００３５】
を持つＰｄ−バクテリアフェオホルビドまたはこの塩が、やがて、バクテリアクロロフィルの他の誘導体の光毒性および安定性よりも、はるかに大きな光毒性および安定性を持つことが判った。
【００３６】
更に該Ｐｄ−バクテリアフェオホルビドａは、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａとも呼ばれるが、約７６０ｎｍの波長、つまり他の感光剤のそれよりも長い波長における光を吸収し、このことは組織中へこの光をより深く浸透させるようにし、皮膚に関する感光を全くまたは殆ど引き起こさない。
【００３７】
しかしながら、前記式（Ｉ）を持つ全ての化合物は、水性媒体中で凝集体を形成する非常に強い傾向を有する親油性の特徴を強く記しており、このことは非経口投与によるそれらの医薬的使用を難しくしている。
【００３８】
ＷＯ００／３３８３３は特に、前記式（Ｉ）の化合物、好ましくは前記式（ＩＩ）のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ、および医薬的に許容可能な担体を包含する医薬的組成物を請求している。
【００３９】
しかしながらＷＯ００／３３８３３の記載中、全身ルートにより投与され得るこのような医薬組成物を調製するためには、この化合物を可溶化するに充分な量の、毒性のない界面活性剤を加えることが必要であるということが挙げられている。
【００４０】
特にＷＯ００／３３８３３において記載され、動物での in vivo 試験に使用されるＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する組成物は、該感光剤を可溶化するために必要と判っている非常に多い量の Cremophore（登録商標）EL（２０〜５０％）を含有する。
【００４１】
これらの組成物において、Cremophore（登録商標）EL は、凝集体の形成を抑え、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを可溶化することの出来る界面活性剤として機能する。
【００４２】
Cremophore（登録商標）EL は、ポリオキシエチレン化ひまし油タイプの乳化剤賦形剤であり、これは販売されており、医薬組成物中で広範囲の親油性活性成分を可溶化するその能力のために知られる。
【００４３】
しかしながら、アレルギーような望まれない効果を引き起こす既知の危険性のために、５％より多い Cremophore（登録商標）EL を含有する組成物は、ヒトにおいて全身ルートにより投与することが難しい。
【００４４】
Solutol HS 15（商標）、プロピレングリコール、ポリソルベート８０（polysorbate 80）、大豆レシチン、卵黄レシチンおよびＮ−メチル−ピロリドン（Pharmasolve（登録商標））のような、注射可能な溶液中の親油性成分のための可溶化剤としての使用に関して知られている他の界面活性剤により Cremophore（登録商標）EL を置き換えることを狙いとした試みは、満足な結果を生み出していない。
【００４５】
前記式（Ｉ）の化合物の特に興味深い特性、特に光力学治療のための感光剤としての前記（ＩＩ）式のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａの特に興味深い特性のために、賦形剤による合併症の危険性なしに静脈ルートによりヒトへ投与され得る前記式（Ｉ）の化合物を含有する生薬製剤を提供することが必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４６】
本発明の目的は、前記式（Ｉ）の化合物が完全に可溶化され、強く抑制された量の界面活性剤を含有する注射可能な生薬製剤を提供することである。
【００４７】
驚くべきことに、少量の非水性共溶媒の添加、特に少量のベンジルアルコール／エタノール混合物またはプロピレングリコールのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａへの添加が、その塩への変換後に水溶液中でＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを可溶化させることを可能にすることを本発明者らが発見して、この目的が達成された。
【課題を解決するための手段】
【００４８】
第１の態様によれば、本発明は、診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤に関し、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌを超えない量のアルカリ金属塩の形態の以下の一般式（Ｉ）：
【００４９】
【化４】
2004537562.tif 000006
【００５０】
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシ、および＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相における医薬的に許容可能な担体
を含有し、この水相における医薬的に許容可能な担体が少なくとも、感光剤用の可溶化剤として作用する１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および該感光剤の凝集を抑えることが可能な界面活性剤を、該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量で含有することを特徴とする。
【００５１】
第２の態様によれば、本発明は、診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤の調製方法に関し、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌまで量のアルカリ金属塩の形態の以下の式（Ｉ）：
【００５２】
【化５】
2004537562.tif 000007
【００５３】
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシ、および＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相における医薬的に許容可能な担体
を含有し、該方法は、以下に指し示される順序で：
（１）酸の形態の式（Ｉ）の感光剤を、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコールから構成される可溶化剤で湿潤させ；
（２）該製剤の最終重量に対して２０重量％を超えない量の界面活性剤を加え；
（３）式（Ｉ）の該感光剤の酸の官能基を中和するに充分な量のアルカリ金属水酸化物を加え；
（４）この水相中のこの混合物を、該感光剤のその塩への完全な変換およびその完全な可溶化を確実にするに充分攪拌し；
（５）ｐＨを生理学的に許容可能な７．２±０．４の値に調整するようデザインされた緩衝剤を加え；
（６）必要な場合には、注射可能な調製物用に該製剤の体積を水で調整することからなる段階を包含する。
【００５４】
第３の態様によれば、本発明は、この方法により得られる注射可能な生薬製剤に関する。
【００５５】
本発明の該生薬製剤は、強く抑制された量の界面活性剤を含有し、これは本質的に凝集体の形成を抑えるように機能する。
【００５６】
従って、本発明は生薬製剤を提供し、ここで前記感光剤つまり前記式（Ｉ）の化合物は塩の形態で完全に可溶化され、光力学治療の関連において、ヒトに対する危険性を最小化して注射され得る。
【００５７】
本発明の他の利点は、以下の本発明の詳細な記載から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５８】
本発明によれば、光力学治療における使用のための注射可能な生薬製剤は：
感光剤として、アルカリ金属塩の形態の式（Ｉ）：
【００５９】
【化６】
2004537562.tif 000008
【００６０】
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシ、および＊は不斉炭素を表す）の化合物、および
水相における医薬的に許容可能な担体を含有する。
【００６１】
本発明の該生薬製剤において、前記式（Ｉ）の化合物は、好ましくはアルカリ金属塩の形態の以下の式（ＩＩ）のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａである。
【００６２】
【化７】
2004537562.tif 000009
【００６３】
式（Ｉ）の化合物の、または式（ＩＩ）の化合物のアルカリ金属塩は、ナトリウム塩またはカリウム塩であり得る。
【００６４】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物の、または式（ＩＩ）の化合物のアルカリ金属塩は、ナトリウム塩である。
【００６５】
前記式（Ｉ）の化合物、および特に前記式（ＩＩ）により表されるＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａは、それらのアルカリ金属塩と同様、ＷＯ００／３３８３３中で記載されているように調製され得る。
【００６６】
本発明の注射可能な生薬製剤中に含有される感光剤の量は、この量が１０ｍｇ／ｍｌより多い場合、該感光剤が完全に可溶化されないので、１０ｍｇ／ｍｌを超えないべきである。
【００６７】
この注射可能な生薬製剤が光力学治療の関連における利用のためにデザインされる場合、該製剤中に含有される感光剤の量は、この濃度を下回ると投与されるべき該製剤の体積が重要になり過ぎるので、好ましくは０．１ｍｇ／ｍｌ未満であるべきである。
【００６８】
しかしながら、本発明の注射可能な生薬製剤が光力学治療の関連における治療について意図される場合、０．１ｍｇ／ｍｌ未満の量の感光剤が目論まれ得る。
【００６９】
本発明の注射可能な生薬製剤中に含有される水相中の医薬的に許容可能な担体は、該製剤の長期の安定性を確実にする一方、該感光剤を可溶化するためにデザインされる。
【００７０】
この水相中の医薬的に許容可能な担体は、該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量で、該感光剤用の該可溶化剤としてのベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および該感光剤の凝集を抑えることを可能にする界面活性剤を少なくとも含有する。
【００７１】
この医薬的な担体が該可溶化剤としてベンジルアルコール−エタノール混合物を含有する場合、このベンジルアルコール：エタノール混合物の比は１５：８５〜２５：７５（Ｖ／Ｖ）であるべきである。
【００７２】
該混合物が１５部未満のベンジルアルコールを含有する場合、該感光剤は完全には可溶化されない。
【００７３】
該混合物が２５部より多いベンジルアルコールを含有する場合、該混合物はもはや水と混和しない。
【００７４】
本発明の特に好ましい場合では、該担体は、２０：８０のベンジルアルコール：エタノール比で、ベンジルアルコール−エタノール混合物を含有する。
【００７５】
該ベンジルアルコール−エタノール混合物は、好ましくは、該製剤の全体積に対して５体積％を超えない量で該担体中に含有される。
【００７６】
本発明の注射可能な生薬製剤中に含有されるベンジルアルコールおよびエタノールは、注射可能な製剤に関して設定された、特に欧州薬局方および米国薬局方（ＵＳＰ）中の純度に関する要求を満たさなければならない。
【００７７】
該医薬的担体が湿潤剤としてプロピレングリコールを含有する場合、このプロピレングリコールは、好ましくは該製剤の全体積に対して５体積％を超えない量で該担体中に含有される。
【００７８】
本発明の注射可能な生薬製剤中に含有されるプロピレングリコールは、注射可能な製剤に関して設定された、特に欧州薬局方および米国薬局方（ＵＳＰ）中の純度に関する要求を満たさなければならない。
【００７９】
前記水相の医薬的に許容可能な担体中に含有される前記界面活性剤は、この注射可能な生薬製剤中の感光剤の凝集を抑える能力を持つ如何なる界面活性剤でもあり得、該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量でこの中に含有されるべきである。
【００８０】
この界面活性剤は、例えば Cremophore (登録商標) EL (BASF, Germany)、Cremophore (登録商標) EL P (BASF, Germany)、Solutol HS 15(商標)(BASF, Germany)、プロピレングリコール、ポリソルベート８０、大豆レシチン、卵黄レシチンおよびＮ−メチルピロリドン(Pharmasolve (登録商標), BASF, Germany) であり得る。
【００８１】
好ましくは、該界面活性剤は、Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P または Solutol HS 15(商標)(BASF, Germany) である。
【００８２】
本発明の特に好ましい製剤は、該界面活性剤として、該製剤の全体積に対して５体積％を超えない量の Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P を含有する。
【００８３】
本発明の特に好ましい場合では、該製剤は、０．２５％（Ｗ／Ｗ）のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ、２０：８０のベンジルアルコール：エタノール比を持つ５％（Ｖ／Ｗ）のベンジルアルコール−エタノール混合物、および５％（Ｗ／Ｗ）の Cremophore (登録商標) EL P を含有する。
【００８４】
本発明の注射可能な生薬製剤は、以下に指し示される順序で：
（１）酸の形態の式（Ｉ）の感光剤を、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコールから構成される可溶化剤で湿潤させ；
（２）該製剤の最終重量に対して２０重量％を超えない量の界面活性剤を加え；
（３）式（Ｉ）の該感光剤の酸の官能基を中和するに充分な量のアルカリ金属水酸化物を加え；
（４）この水相中のこの混合物を、該感光剤のその塩への完全な変換およびその完全な可溶化を確実にするに充分攪拌し；
（５）ｐＨを生理学的に許容可能な７．２±０．４の値に調整するようデザインされた緩衝剤を加え；
（６）必要な場合には、注射可能な調製物用に、該製剤の体積を水で調整することからなる段階を含む方法により調製され得る。
【００８５】
本発明の好ましい実施形態において、該可溶化剤は、好ましくは該全製剤の体積に対して５体積％を超えない量で加えられる。
【００８６】
本発明による方法において、該感光剤を湿潤させるために加えられる該可溶化剤は、好ましくは２０：８０の比のベンジルアルコール−エタノール混合物である。
【００８７】
純粋なベンジルアルコールで湿潤させることは、希釈された水酸化ナトリウム溶液とのベンジルアルコールの非混和性により可能ではない。
【００８８】
指し示された比率でのエタノールのベンジルアルコールへの添加は、この希釈された水酸化ナトリウム溶液とのこの有機湿潤相の混和性を確実にする。
【００８９】
該感光剤を湿潤させるために加えられるベンジルアルコールおよびエタノール、またはプロピレングリコールは、注射可能な製剤におけるそれらの使用に関する欧州薬局方および米国薬局方（ＵＳＰ）において設定されているような、純度に関する要求を満たさなければならない。
【００９０】
この注射可能な生薬製剤中の該感光剤の凝集を抑えるために加えられる該界面活性剤は、例えば、Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P、Solutol HS 15（商標）、プロピレングリコール、ポリソルベート８０、大豆レシチン、卵黄レシチンおよびＮ−メチルピロリドン (Pharmasolve (登録商標)) である。
【００９１】
好ましくは、加えられる該界面活性剤は、Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P、または Solutol HS 15（商標）である。
【００９２】
加えられる界面活性剤の量は、使用される該界面活性剤に、および該製剤中の該感光剤の最終濃度に依存して変動するであろう。
【００９３】
しかしながらこの量は、該製剤の最終重量に対して２０重量％を超えないであろう。
【００９４】
本発明の方法の特に好ましい場合では、加えられる該界面活性剤は、該製剤の全体積に対して５重量％を超えない量の Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P である。
【００９５】
本発明の方法において使用されるアルカリ金属水酸化物は、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムであり得、水溶液の形態で加えられる。
【００９６】
アルカリ金属水酸化物は、式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）の化合物の酸の官能基を、全てそれらの塩へと変換するに充分な量で、酸の形態である式（Ｉ）の化合物または酸の形態である式（ＩＩ）の化合物へ加えられる。
【００９７】
好ましくは、使用されるアルカリ金属水酸化物は水酸化ナトリウムであり、このことにより、得られる注射可能な生薬製剤が、式（Ｉ）の化合物、および好ましくはそのナトリウム塩の形態の式（ＩＩ）の化合物を含有するようになる。
【００９８】
該感光剤のその塩への完全な変換および前記担体中での該塩の全ての可溶化を可能にするために、充分な攪拌が確実に行われるべきである。
【００９９】
本発明の方法においてｐＨを調整するために使用される物質は、例えばクエン酸、リン酸およびそのナトリウム塩（一塩基性および二塩基性）、Ｄ−酒石酸、Ｌ−酒石酸、Ｄ−リンゴ酸およびＬ−リンゴ酸であり得る。
【０１００】
このｐＨを調整するために使用される物質は、この注射可能な製剤を７．２±０．４の生理学的に許容可能なｐＨへと緩衝化するに必要な量で加えられる。
【０１０１】
本発明の特に好ましい実施形態において、このｐＨを調整するために使用される物質はクエン酸である。これは、やがて空気存在下に改善された安定性を該製剤に与えるからである。
【０１０２】
本発明の方法により得られる注射可能な製剤の該安定性を改善するために、該方法の（１）〜（６）の異なる段階が、不活性気体の雰囲気下に行われるであろう。
【０１０３】
本発明の方法により得られる注射可能な生薬製剤において、式（Ｉ）の化合物、または好ましくは式（ＩＩ）の化合物は完全に可溶化され、このことは該製剤が透明であり如何なる沈殿をも有さないという事実により例証される。
【０１０４】
更に、本発明の方法により得られる注射可能な製剤は、やがて優れた安定性を呈する。
【０１０５】
本発明の生薬製剤において、式（Ｉ）の化合物および好ましくは式（ＩＩ）の化合物は、モノマーの形態で存在するが、凝集体（オリゴマー）を形成するある量の該化合物を有する。
【０１０６】
しかしながら、本発明の注射可能な生薬製剤の注射時に、生理学的な液体、特に血と接触するようになる場合、該製剤中に存在する該オリゴマー体は、急速にモノマーへと変形され、この活性な感光性生成物は、全てモノマーへと変換されるようになる。
【０１０７】
ＵＶ分光学による本発明の注射可能な製剤の分析は、該製剤に含有されるＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａに関する興味深い示唆を提供し得る。該Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａは７６０ｎｍの近傍にピークを呈するので、その凝集は、約８１５ｎｍにおける近隣のピークの発生から決定可能であり、その分解は、特に酸化を通して、その極大、特に７６０ｎｍの近傍における極大の浅色偏移から推論され得る。
【０１０８】
以下の実施例は、本発明を例示するために与えられる。しかしながら、如何なる場合においても、これらは本発明の範囲を限定するものとして考えられるべきではない。
【実施例】
【０１０９】
他に特定されない場合、この後実施例において使用される全ての反応剤は、特にＳＤＳ（BP 4-Valdonne, F-13124 Peypin）、Ｍｅｒｃｋ Ｅｕｒｏｌａｂ（Europarc, F-33608 Pessac Cedex）、ＢＡＳＦ（Germany）、フルカ（Buchs, Switzerland）等から商業上入手可能な反応剤である。
【０１１０】
［感光剤Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａの調製］
記：全体の調製は、化学作用のない光の下、窒素雰囲気下に行われた。
【０１１１】
１）バクテリアクロロフィルａ（ＢＣｈｌａ）の抽出
使用された反応剤：
Ｒｈｏｄｏｖｏｌｕｍ  Ｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍ細胞                １１ｋｇ
メタノール［ＳＤＳまたはＭｅｒｃｋ、合成用に純粋、純度≧９９．８％］１２６ｌ
使用された方法：
凍結乾燥されたＲｈｏｄｏｖｏｌｕｍ  Ｓｕｌｆｉｄｏｐｈｉｌｕｍ細胞（１１ｋｇ）が２５℃にてメタノール（５７ｌ）で抽出され、この溶媒が濾過された。該細胞の残渣は４７ｌのメタノール中再び懸濁され、濾過された。該残渣を２２ｌのメタノールですすいだ後、この濾過物は一緒に貯えられ、減圧下に濃縮された。
７０ｇのＢＣｈｌａ（ＢＣｈｌａの量は、ＵＶ分析により決定）を含有する約３５００ｇの粗生成物。
【０１１２】
２）バクテリアフェオホルビドａの合成
使用された反応剤：
段階１）にて得られた７０ｇのバクテリアクロロフィルａを含有する粗生成物３５００ｇ
トリフルオロ酢酸［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９％］              ７    ｌ
クロロホルム［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９．９％］            １１．２ｌ
使用された方法：
この７０ｇのバクテリアクロロフィルａ（３５００ｇ）を含有する粗生成物がクロロホルム中で可溶化され、トリフルオロ酢酸（７ｌ）が加えられた。この反応の進行は、ＴＬＣによりモニターされた。初期の（粗）生成物がもうこれ以上検出されなくなった時点で、５６ｌの水および１４ｌのクロロホルムが該反応溶媒に加えられた。この混合物を攪拌して静置した後、得られた２相が分離された。得られた有機相は水（２５ｌ）で洗浄され、このクロロホルムは６ｌの体積まで減圧下に濃縮された。
この粗Ｂｐｈｅｉｄｅはこのクロロホルム溶液として得られ、その精製前には単離されなかった。
【０１１３】
３）バクテリアフェオホルビドａの精製
使用された反応剤：
段階２）にて得られた粗Ｂｐｈｅｉｄｅのクロロホルム溶液
シクロヘキサン［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９％］                  １０ｌ
ペンタン［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９％］                          ７ｌ
メタノール［ＳＤＳまたはＭｅｒｃｋ、合成用に純粋、純度≧９９．８％］    ３ｌ
シリカ［ＳＤＳ、６０ＡＣ．Ｃ．、７０〜２００μｍ］                  ３００ｇ
酢酸エチル［Ｍｅｒｃｋ、純粋、純度９９．５％］                          ６ｌ
使用された方法：
このシクロヘキサン（１０ｌ）がＢｐｈｅｉｄｅのクロロホルム粗溶液に加えられ、この溶媒は減圧下に留去され、このクロロホルムが除去されて、７ｌの体積に至るまでシクロヘキサンが加えられた。生成物は、その後ペンタン（７ｌ）の添加を通じて沈殿され、３０℃にて１５分間攪拌され、濾過された。真空オーブン（３０℃）中で乾燥した後、６０ｇの半ば精製された生成物が得られた（ＵＶによる純度：５０〜６０％）。
この半ば精製された生成物（６０ｇ）が、クロロホルム／メタノール＝９５／５の混合物（６ｌ）中溶解され、３００ｇのシリカが加えられた。１０分間攪拌した後、この溶媒は濾過された。この濾過物は６ｌの酢酸エチルで希釈され、この溶媒は減圧下に留去された。この濃縮が進行するに連れ、０．９の比重を持つ蒸留物を得るまで酢酸エチルが加えられた。この溶液の体積は、その後３．０ｌへと調整された。該溶液は濾過され、得られた粉末は３０℃にて真空下にオーブン中で乾燥された。
約３５ｇの精製Ｂｐｈｅｉｄｅが得られた（ＵＶによる純度：８０％）。
【０１１４】
４）パラジウム−バクテリアフェオホルビドａの合成
使用された反応剤：
段階３）にて得られた粗Ｂｐｈｅｉｄｅのクロロホルム溶液            ６．２５ｇ
酢酸パラジウム［ＳＤＳまたはＭｅｒｃｋ、含量≧９９Ｗ／Ｗ］      １３．１５ｇ
アスコルビン酸［ＳＤＳ、純度≧９９％］                        １０５      ｇ
クロロホルム［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９．９％］            ２．２  ｌ
メタノール［ＳＤＳ、分析用に純粋、純度≧９９．８％］              ３．３  ｌ
無水硫酸ナトリウム［ＳＤＳ、分析用、純度≧９９．５％］            １．５ｋｇ
使用された方法：
アスコルビン酸（１０５ｇ）が３．３ｌのメタノールに溶解され、この溶液が３５℃にて加熱された。１．５ｌのクロロホルム中可溶化されたこのＢｐｈｅｉｄｅ（６．２５ｇ）が、該溶液に１０分間で加えられた。１０分間攪拌した後、０．７ｌのクロロホルム中可溶化されたこの酢酸パラジウム（１３．１５ｇ）が、この反応溶媒に１０分間で加えられた。該反応の進行は、ＵＶ分析によりモニターされた。１５分後、この混合物は２０℃へと冷却され、２０ｌの水中へと注がれた。該混合物を攪拌して静置した後、得られた相が分離された。得られた有機相は、ｐＨ≧５に達するまで水（２０ｌ）で洗浄され、その後硫酸ナトリウム（１．５ｋｇ）で乾燥された。減圧下でのこの溶媒の濃縮の後、５．８５ｇの粗生成物が得られた（ＵＶによる純度：８５％）。
【０１１５】
５）パラジウム−バクテリアフェオホルビドａの精製
使用された反応剤：
段階４）にて得られた粗Ｂｐｈｅｉｄｅ    ５．８５ｇ（ＵＶによる純度：８５％）
クロロホルム［ＳＤＳ、合成用に純粋、純度≧９９．９％］            １７５ｍｌ
使用された方法：
この粗生成物（５．８５ｇ）がクロロホルム中へ投入され、５分間攪拌された。この懸濁は濾過されて、得られた固体はオーブン（３０℃）中真空下に乾燥された。
５．０ｇの精製Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅが単離された（ＨＰＬＣによる純度＞９７％）。
クロロホルム中でのＵＶ／ＶＩＳの相対強度：
３３０（λｍａｘ［ｎｍ］）にて０．７９８；
３８５（λｍａｘ［ｎｍ］）にて０．５９７；
５３５（λｍａｘ［ｎｍ］）にて０．２９２；
７６０（λｍａｘ［ｎｍ］）にて１．７１１。
Ｄ６−アセトン中でのＮＭＲ−１Ｈ［ｐｐｍ］：
９．２７、８．８６、８．７７（各ｓ、１Ｈ、５−、１０−、２０−Ｈ）；
６．０１（ｓ、１Ｈ、１３２−Ｈ）；
４．７〜４．０（４ｍ、１Ｈ、７−、８−、１７−、１８−Ｈ）；
３．８６（ｓ、３Ｈ、１３２−ＣＯ２ＣＨ３）；
３．５１（ｓ、３Ｈ、２−ＣＨ３）；
３．３４（ｓ、３Ｈ、１２−ＣＨ３）；
３．０７（ｓ、３Ｈ、３−ＣＯＣＨ３）；
２．７〜２．１（３ｍ、２Ｈ、８−、１７１−、１７２−ＣＨ２）；
１．７９、１．６９（各ｄ、３Ｈ、７−、１８−ＣＨ３）；
１．０９（ｔ、３Ｈ、８−ＣＨ２ＣＨ３）
Ｃ３５Ｈ３６Ｎ４Ｏ６Ｐｄについて計算されたＭＳ（質量分析）：
７１４．１６７０（Ｍ＋）。
見出されたＭＳ（質量分析）：
７１４．１６８８（Ｍ＋）。
元素分析：
計算された％：  Ｃ：５８．７９、Ｈ：５．０７、Ｎ：７．８３、Ｏ：１３．４２、Ｐｄ：１４．８８
見出された％：  Ｃ：５９．１３、Ｈ：５．１２、Ｎ：７．７２、Ｏ：１３．３３、Ｐｄ：１４．６９
上記にて得られたＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａはこの後、注射可能な製剤を調製するために使用された。
【０１１６】
［注射可能な製剤１］
［感光剤として２．５ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する製剤１］
担体：
有機相：ベンジルアルコール／エタノール（２０／８０）５％（Ｖ／Ｗ）
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL P ５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．０２８Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
製剤１は、以下のように調製された：
前記のように調製された２．５ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌの２０：８０（Ｖ／Ｖ）のベンジルアルコールおよびエタノールの混合物が加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後、５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL P が該混合物に加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが８．４×１０−３Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は、注射可能な調製物用に水で１ｇへとされて、完成された（ＷＩＰＰ）。
製剤１の精確な組成は、この後表１において与えられる。
【０１１７】
【表１】
2004537562.tif 000010
【０１１８】
本発明のこの製剤１は透明であるが、強度に着色しており（暗紫色）、痕跡量の沈殿も全く含有せず、このことはＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全に可溶化されていることを指し示している。
本発明のこの製剤１中のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａのＵＶ吸収スペクトルは、３４４、３８５、５３８、７６３および８１８ｎｍにおいて５つの主なピークを呈し、７６３／８１８の吸光度の比は１を超え、スペクトル的には前記モノマーが生成物の５０％より多い量となったと決定されることを指し示している。
ＩＣＨの条件下にこの製剤１は、ＨＰＬＣおよびＵＶ分析により証明された如く、少なくとも６ヶ月間４℃にて安定である。
異なる動物種に対して、単回注射または繰り返し注射として非経口で投与された注射可能な製剤１に関して毒性研究が行われた：
雄ラット（Sprague Dawley）：各投与量（２×５、２×１０および２×２０ｍｇ／ｋｇ）について６〜１２匹。該生成物は尾の静脈中へ非経口で注射された。
ウサギ（ニュージーランド白ウサギ）：５匹が５ｍｇ／ｋｇの投与量を受けた。該生成物は、一回は動脈内に、一回は静脈の周囲に、非経口で３回注射された。
サル（Cynomolgus、体重は２．５〜３．２ｋｇで変動）：各投与量（１、２、５および６ｍｇ／ｋｇ）について各性別６〜１２匹。該生成物は、１４日間各１日１回、伏在静脈または橈側皮静脈中へ非経口で注射された。
サル（Cynomolgus、体重は２．２５〜４．７ｋｇで変動）：各投与量（２および５ｍｇ／ｋｇ）について３〜６匹。該生成物は、伏在静脈または橈側皮静脈中へ非経口で注射された。
これらの動物の査定は、臨床的兆候、血および尿に関して行われた生物学的分析、心臓血管検査、および組織病理学検査に基づいて行われた。
これらの研究は、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａおよびその注射可能な製剤１が、４ｍｌ／分までの注射スピードにてよく寛容されることを示した。
【０１１９】
［注射可能な製剤２］
［感光剤として５ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する製剤２］
担体：
有機相：ベンジルアルコール／エタノール（２０／８０）５％（Ｖ／Ｗ）
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL ５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．０２８Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
製剤２は、以下のように調製された：
前記のように調製された５ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌの２０：８０（Ｖ／Ｖ）のベンジルアルコールおよびエタノールの混合物が加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後、５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL が該混合物に加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．０２８Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
製剤２の精確な組成は、この後表２において与えられる。
【０１２０】
【表２】
2004537562.tif 000011
【０１２１】
本発明のこの製剤２は透明であるが、強度に着色しており（暗紫色）、痕跡量の沈殿も全く含有せず、このことはＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全に可溶化されていることを指し示している。
本発明のこの製剤２中のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａのＵＶ吸収スペクトルは、３４４、３８５、５３８、７６３および８１８ｎｍにおいて５つの主なピークを呈し、７６３／８１８の吸光度の比は１に近く、スペクトル的には前記モノマーが生成物の５０％の量となったと決定されることを指し示している。
ＩＣＨの条件下にこの製剤２は、ＨＰＬＣおよびＵＶ分析により証明された如く、少なくとも６ヶ月間４℃にて安定である。
以下の生物学的試験は、凝集形態のモノマー形態への還元に関してと同様、該活性成分の良好な可溶化に関しての重要な役割および必要性を例証することを可能にした。
一旦注射されてしまうと、この製剤された生成物の解離の調査は、３〜４ｋｇの体重のニュージーランド白ウサギを用いて行われる。
３匹のウサギが、この調査において使用された。
これらのウサギは、耳介静脈中へ５ｍｇ／ｋｇの投与量、つまり３ｋｇのウサギに対して５ｍｇ／ｍｌを含有する３ｍｌのこの注射可能な製剤１を受けた。
注入のスピードは、０．３〜１ｍｌ／分で変動した。
Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａの吸収スペクトルは、多チャンネル検出系を使用して、スペクトルの反射率により継続的に測定された。この系は、生きている動物の組織中の該生成物の検出を可能にし、この器官におけるこの凝集の進展をモニターすることを可能にする。
指し示された条件下に、モノマーを生成するオリゴマーの in vivo での解離は、非常に速く進行し、１５〜３０分を要求する。
該製剤中に Cremophore がなければ、n vivo において解離は得られず、生成される該モノマーの濃度は、非常に低いままであろう。
異なる動物種に対して、単回注射または繰り返し注射として非経口で投与された注射可能な製剤２に関して毒性研究が行われた：
１−ネズミ（ＯＦ、体重は２５〜３５グラムで変動）：各投与量（２×２５、２×５０、２×７５および１×１００ｍｇ／ｋｇ）について各性別１０匹。該生成物は、尾の静脈中へ注射された。
２−ラット（Sprague Dawley、体重は１５０〜２３０グラムで変動）：各投与量（４〜２００ｍｇ／ｋｇ）について各性別４〜１０匹。該生成物は尾の静脈中へ注射された。
３−サル（Cynomolgus、体重は１．８ｋｇ〜３．５ｋｇで変動）：各投与量（８、１６および２４ｍｇ／ｋｇ）について各性別１匹。該生成物は、７日間１日１回、伏在静脈または橈側皮静脈中へ注射された。
これらの動物の査定は、臨床的兆候、血および尿に関して行われた生物学的分析、および組織病理学検査に基づいて行われた。
これらの研究は、もしこの注射が、存在するオリゴマーがモノマーへと漸進的に解離出来るようにゆっくり行われれば、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａおよびその注射可能な製剤２がよく寛容されることを示した。
【０１２２】
［注射可能な製剤３］
［感光剤として５ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する製剤３］
担体：
有機相：ベンジルアルコール／エタノール（２０／８０）５％（Ｖ／Ｗ）
界面活性剤：Solutol HS 15、１０％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．０２８Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
製剤３は、以下のように調製された：
前記のように調製された５ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌの２０：８０（Ｖ／Ｖ）のベンジルアルコールおよびエタノールの混合物が加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後、１００ｍｇの Solutol HS 15 １０％（Ｗ／Ｗ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．０２８Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
製剤３の精確な組成は、この後表３において与えられる。
【０１２３】
【表３】
2004537562.tif 000012
【０１２４】
本発明のこの製剤３は透明であるが、強度に着色しており（暗紫色）、痕跡量の沈殿も全く含有せず、このことはＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全に可溶化されていることを指し示している。
本発明のこの製剤３中のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａのＵＶ吸収スペクトルは、３４４、３８５、５３８、７６３および８１８ｎｍにおいて５つの主なピークを呈し、７６３／８１８の吸光度の比は１に近く、スペクトル的にはこのモノマーが生成物の５０％の量になったと決定されることを指し示している。
ＩＣＨの条件下にこの製剤３は、ＨＰＬＣおよびＵＶ分析により証明された如く、少なくとも６ヶ月間４℃にて安定である。
【０１２５】
［注射可能な製剤４］
［感光剤として１ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する製剤４］
担体：
有機相：ベンジルアルコール／エタノール（２０／８０）５％（Ｖ／Ｗ）
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL、５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．００７Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
製剤４は、以下のように調製された：
前記のように調製された１ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌの２０：８０（Ｖ／Ｖ）のベンジルアルコールおよびエタノールの混合物が加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後、５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL が該混合物に加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．００７Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
製剤４の精確な組成は、この後表４において与えられる。
【０１２６】
【表４】
2004537562.tif 000013
【０１２７】
本発明のこの製剤４は透明であるが、強度に着色しており（暗紫色）、痕跡量の沈殿も全く含有せず、このことはＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全に可溶化されていることを指し示している。
本発明のこの製剤４中のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａのＵＶ吸収スペクトルは、３４４、３８５、５３８、７６３および８１８ｎｍにおいて５つの主なピークを呈し、７６３／８１８の吸光度の比は８０／２０であり、スペクトル的にはこのモノマーが生成物の８０％の量となったと決定されることを指し示している。
ＩＣＨの条件下にこの製剤４は、ＨＰＬＣおよびＵＶ分析により証明された如く、少なくとも６ヶ月間４℃にて安定である。
【０１２８】
［注射可能な製剤５］
［感光剤として１ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する製剤５］
水相中の担体：
有機相：プロピレングリコール５％（Ｖ／Ｗ）
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL、５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．００７Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
製剤５は、以下のように調製された：
前記のように調製された１ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌのプロピレングリコールが加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後、５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL が該混合物に加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．００７Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
製剤５の精確な組成は、この後表５において与えられる。
【０１２９】
【表５】
2004537562.tif 000014
【０１３０】
本発明のこの製剤５は透明であるが、強度に着色しており（暗紫色）、痕跡量の沈殿も全く含有せず、このことはＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全に可溶化されていることを指し示している。
本発明のこの製剤５中のＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａのＵＶ吸収スペクトルは、３４４、３８５、５３８、７６３および８１８ｎｍにおいて５つの主なピークを呈し、７６３／８１８の吸光度の比は６０／４０であり、スペクトル的にはこのモノマーが生成物の６０％の量となったと決定されることを指し示している。
ＩＣＨの条件下にこの製剤５は、ＨＰＬＣおよびＵＶ分析により証明された如く、少なくとも６ヶ月間４℃にて安定である。
【０１３１】
［比較製剤１］
［１ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する比較製剤１］
担体：
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL、５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．００７Ｍ
０．０１Ｍクエン酸で７．２±０．４に調整されたｐＨ
比較製剤１は、以下のように調製された：
前記のように調製された１ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL が加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．００７Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
比較製剤１の精確な組成は、この後表６において与えられる。
【０１３２】
【表６】
2004537562.tif 000015
【０１３３】
この比較製剤１は沈殿を含有し、このことは、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが、ベンジルアルコール／エタノール混合物またはプロピレングリコール非存在下では完全には可溶化されないことを例証している。
【０１３４】
［比較製剤２］
［１ｍｇ／ｍｌのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する比較製剤２］
担体：
エタノール５％
界面活性剤：Cremophore (登録商標) EL、５％（Ｗ／Ｗ）
ＮａＯＨ：０．００７Ｍ
７．２±０．４に調整されたｐＨ
比較製剤２は、以下のように調製された：
前記のように調製された１ｍｇのＰｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａを含有する適切な大きさのガラス容器中に、５０μｌのエタノールが加えられ、得られた混合物は穏やかに攪拌された。その後５０ｍｇの Cremophore (登録商標) EL が加えられ、得られた混合物は「Vortex」で攪拌された。この後、５００μｌの水酸化ナトリウム溶液（ＮａＯＨが０．００７Ｍ）が該混合物に加えられ、得られた混合物は数秒間「Vortex」で攪拌された。得られた混合物はその後、時々手で攪拌しながら３０分間超音波に付された（温度＜２５℃）。その後、このｐＨは０．０１Ｍのクエン酸で７．２±０．４に調整され、得られた混合物は注射可能な調製物用に、水で１ｇへとされて完成された（ＷＩＰＰ）。
比較製剤２の精確な組成は、この後表７において与えられる。
【０１３５】
【表７】
2004537562.tif 000016
【０１３６】
この比較製剤２は、ベンジルアルコールの非存在下に綿状の沈殿となり、Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａが完全には可溶化されないことが判った。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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2004537562.tif 000065
【手続補正書】
【提出日】平成15年10月3日(2003.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤であって、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌを超えない量のアルカリ金属塩の形態の以下の一般式（Ｉ）：
【化１】
2004537562.tif 000066
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシを表し、＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相中の医薬的に許容可能な担体
を含有し、この水相中の医薬的に許容可能な担体が、
該感光剤用の可溶化剤として作用する、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および
該感光剤の凝集を抑えることが可能な界面活性剤
を少なくとも含有し、該界面活性剤が、該製剤の全重量に対して２０重量％を超えない量で提供され、但し該界面活性剤が Cremophore である場合、その量は該製剤の全重量に対して５重量％を超えないことを特徴とする、注射可能な生薬製剤。
【請求項２】
式（Ｉ）の前記感光剤が、アルカリ金属塩の形態の以下の式（ＩＩ）：
【化２】
2004537562.tif 000067
により表されるパラジウム−バクテリアフェオホルビドａ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ）であることを特徴とする、請求項１に記載の注射可能な製剤。
【請求項３】
式（Ｉ）の前記化合物または式（ＩＩ）の前記化合物がナトリウム塩の形態であることを特徴とする、請求項１または２に記載の生薬製剤。
【請求項４】
前記可溶化剤が、前記製剤の全重量に対して５体積％を超えない量で該製剤中に含有されるベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項５】
前記可溶化剤が、２０：８０（Ｖ／Ｖ）の比のベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の注射可能な生薬製剤。
【請求項６】
前記可溶化剤が、前記製剤の全重量に対して５体積％を超えない量で該製剤中に含有されるプロピレングリコールであることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項７】
前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL、Cremophore (登録商標) EL P または Solutol HS 15（商標）であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の注射可能な製剤。
【請求項８】
前記の注射可能な生薬製剤が、前記界面活性剤として、該製剤の全重量に対して５重量％を超えない量の Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P を含有することを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の注射可能な生薬製剤。
【請求項９】
診断における、または光力学治療（ＰＤＴ）における使用のための注射可能な生薬製剤の調製方法であって、該生薬製剤は：
感光剤として、１０ｍｇ／ｍｌまでの量のアルカリ金属塩の形態の以下の式（Ｉ）：
【化３】
2004537562.tif 000068
（式中、Ｒ２は基Ｈ、ＯＨまたはＣＯＯＲ４を表し、ここでＲ４は水素またはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルであり、Ｒ３はＨ、ＯＨまたはＣ１〜Ｃ１２アルキルまたはアルコキシを表し、＊は不斉炭素を表す）により表される化合物、および
水相中の医薬的に許容可能な担体
を含有し、該方法が、
該感光剤用の可溶化剤として作用する、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコール、および
該感光剤の凝集を抑えることが可能な界面活性剤
を少なくとも含有し、該界面活性剤が、以下に指し示される順序で：
（１）酸の形態の式（Ｉ）の該感光剤を、１５：８５〜２５：７５の比のベンジルアルコール−エタノール混合物またはプロピレングリコールから構成される可溶化剤で湿潤させ；
（２）該製剤の最終重量に対して２０重量％を超えない量の界面活性剤を加え；
（３）式（Ｉ）の該感光剤の酸の官能基を中和するに充分な量のアルカリ金属水酸化物を加え；
（４）この水相中の混合物を、該感光剤のその塩への完全な変換およびその完全な可溶化を確実にするに充分攪拌し；
（５）ｐＨを生理学的に許容可能な７．２±０．４の値に調整するためにデザインされた緩衝剤を加え；
（６）必要な場合は、該製剤の体積を注射可能な調製物用に水で調整することからなる段階を包含する方法。
【請求項１０】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、酸の形態の式（Ｉ）の前記感光剤が、以下の式（ＩＩ）：
【化４】
2004537562.tif 000069
により表されるパラジウム−バクテリアフェオホルビドａ（Ｐｄ−Ｂｐｈｅｉｄｅ  ａ）であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、前記可溶化剤が、前記溶液の全重量に対して５体積％を超えない量で加えられることを特徴とする、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記可溶化剤が、２０：８０の比のベンジルアルコール−エタノール混合物であることを特徴とする、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P または Solutol HS 15（商標）であることを特徴とする、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、加えられる前記界面活性剤が、Cremophore (登録商標) EL または Cremophore (登録商標) EL P であり、該製剤の全重量に対して５重量％を超えない量で加えられることを特徴とする、請求項９〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、アルカリ金属水酸化物が水酸化ナトリウムであることを特徴とする、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、ｐＨを調整するためにデザインされて加えられる前記緩衝剤がクエン酸であることを特徴とする、請求項９〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
注射可能な生薬製剤の調製方法であって、前記段階（１）〜（６）が、不活性気体の雰囲気下に行われることを特徴とする、請求項９〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項９〜１７のいずれか１項に記載の方法により得られる注射可能な生薬製剤。
【国際調査報告】
2004537562.tif 000070
2004537562.tif 000071
2004537562.tif 000072
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