(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、モノクローナル抗体を産生する２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマを提供する。本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出する方法を提供する。本発明は、癌細胞の表面上のＴＩＰ−２抗原を検出する方法を提供する。本発明は、患者の癌を診断する方法を提供する。本発明は、ヒト患者のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に外来物質を送達する方法を提供する。本発明は、ヒト患者の癌を治療する方法を提供する。本発明は、アミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）及びＳｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を有する単離されたペプチドを提供する。本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在について組織切片を免疫組織学的にスクリーニングする方法を提供する。本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在を検出するためのキットを提供する。本発明は、ＴＩＰ−２抗原の存在を検出する方法を提供する。本発明は、組織切片の免疫組織学的スクリーニング法を提供する。本発明は、癌の進行をモニタリングする方法であって、前記癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有細胞である方法を提供する。本発明は、ＴＩＰ−２の発現を伴う癌を診断する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト癌細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し、該抗原と複合体を形成するモノクローナル抗体であって、ハイブリドーマ２７．Ｂ１（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はハイブリドーマ２７．Ｆ７（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７と同一の抗原に結合するモノクローナル抗体。
【請求項２】
請求項１のマウスモノクローナル抗体。
【請求項３】
請求項１のキメラモノクローナル抗体。
【請求項４】
請求項１のヒト化モノクローナル抗体。
【請求項５】
請求項１のヒトモノクローナル抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体２７・Ｂ１と同一のエピトープに結合する請求項１のモノクローナル抗体。
【請求項７】
ハイブリドーマ２７．Ｂ１（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１。
【請求項８】
請求項１のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞。
【請求項９】
２７．Ｂ１という名称の請求項８のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９）。
【請求項１０】
検出可能なマーカーによって標識された請求項１のモノクローナル抗体。
【請求項１１】
前記検出可能なマーカーが、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１０のモノクローナル抗体。
【請求項１２】
治療剤に結合された請求項１のモノクローナル抗体。
【請求項１３】
前記治療剤が放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である請求項１２のモノクローナル抗体。
【請求項１４】
造影剤に結合された請求項１のモノクローナル抗体。
【請求項１５】
前記造影剤が放射性同位体である請求項１４のモノクローナル抗体。
【請求項１６】
モノクローナル抗体２７．Ｆ７と同一のエピトープに結合する請求項１のモノクローナル抗体。
【請求項１７】
ハイブリドーマ２７．Ｆ７（ＡＴＣＣ表示番号１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７。
【請求項１８】
２７．Ｆ７と表示される請求項８のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号１５９８）。
【請求項１９】
試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体又はＦａｂ断片は検出可能に標識されている）、
ａ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｂ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の指標である方法。
【請求項２０】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識からなる群から選択される請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１９の方法。
【請求項２２】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１９の方法。
【請求項２３】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１９の方法。
【請求項２４】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１９の方法。
【請求項２５】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１９の方法。
【請求項２６】
前記モノクローナル抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１９の方法。
【請求項２７】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項１９の方法。
【請求項２８】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１９の方法。
【請求項２９】
前記試料が培地である請求項１９の方法。
【請求項３０】
試料中のＴＩＰ−２保有癌細胞を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識される）、
ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｃ）前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｂ）の前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を接触させることと、
（ｄ）（ｃ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、
（ｅ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法。
【請求項３１】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項３０の方法。
【請求項３２】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項３０の方法。
【請求項３３】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項３０の方法。
【請求項３４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３０の方法。
【請求項３５】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項３０の方法。
【請求項３６】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項３０の方法。
【請求項３７】
前記モノクローナル抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項３０の方法。
【請求項３８】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項３０の方法。
【請求項３９】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項３０の方法。
【請求項４０】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、
ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、
ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【請求項４１】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項４０の方法。
【請求項４２】
前記患者がヒトである請求項４０の方法。
【請求項４３】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項４０の方法。
【請求項４４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４０の方法。
【請求項４５】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項４０の方法。
【請求項４６】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項８４の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項８４の方法。
【請求項４８】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項８４の方法。
【請求項４９】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項８４の方法。
【請求項５０】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、
ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、
ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはモノクローナル抗体／Ｆａｂ断片又はそのＦａｂ断片によって認識される）、
ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体中に結合しなかった全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｄ）前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｃ）の前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、
ｅ）（ｄ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、
ｆ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【請求項５１】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１０８の方法。
【請求項５２】
前記患者がヒトである請求項１０８の方法。
【請求項５３】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項１０８の方法。
【請求項５４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１０８の方法。
【請求項５５】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１０８の方法。
【請求項５６】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項８４の方法。
【請求項５７】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１０８の方法。
【請求項５８】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項１０８の方法。
【請求項５９】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１０８の方法。
【請求項６０】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって、患者の癌を診断するインビボ法であって、
ａ）ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で、前記患者に投与することと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した前記検出可能に標識された抗体の存在を決定することとを備え、
細胞に結合した検出可能に標識された抗体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【請求項６１】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１１６の方法。
【請求項６２】
前記患者がヒトである請求項１１６の方法。
【請求項６３】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項１１６の方法。
【請求項６４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１１６の方法。
【請求項６５】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項６６】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項６７】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１１６の方法。
【請求項６８】
前記患者中の細胞の表面に結合した抗体又はそのＦａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である請求項１１６の方法。
【請求項６９】
前記撮像装置が核磁気共鳴装置である請求項１１６の方法。
【請求項７０】
前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である請求項１１６の方法。
【請求項７１】
ヒト患者のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に外来物質を送達する方法であって、前記外来物質の抱合体を担持するリポソームを前記患者に投与することを備え、前記癌細胞への送達を誘導するために、抗体又は該抗体のＦａｂ断片が前記リポソームの外側表面に結合されている方法。
【請求項７２】
前記外来物質が、抗癌剤、放射性同位体、毒素、抗生物質、プロドラッグ、酵素、及び化学療法化合物からなる群から選択される請求項１３８の方法。
【請求項７３】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞が、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞である請求項１３８の方法。
【請求項７４】
特異的な免疫反応を誘発させることによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【請求項７５】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である請求項１４１の方法。
【請求項７６】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞の活性化である請求項１４１の方法。
【請求項７７】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）を含む請求項１４１の方法。
【請求項７８】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を含む請求項１４１の方法。
【請求項７９】
癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【請求項８０】
特異的な免疫反応を誘発することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、
ａ）前記患者から樹状細胞を採取することと、
ｂ）工程（ａ）の樹状細胞を、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に接触させることと、
ｃ）工程（ｂ）の樹状細胞を前記患者に再導入することとを備えた方法。
【請求項８１】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）を含む請求項１４７の方法。
【請求項８２】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を含む請求項１４７の方法。
【請求項８３】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である請求項１４７の方法。
【請求項８４】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞又はマクロファージの活性化である請求項１４７の方法。
【請求項８５】
前記特異的な免疫応答が、前記患者中での完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に対する抗体の産生である請求項１４７の方法。
【請求項８６】
癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【請求項８７】
受動免疫によってヒト患者の癌を治療する方法であって、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対する抗体又はそのペプチド断片を投与することを備えた方法。
【請求項８８】
前記抗体が、ＴＩＰ−２抗原保有細胞のアポトーシスを誘導する請求項１５４の方法。
【請求項８９】
アミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）を有する単離されたペプチド。
【請求項９０】
アミノ酸Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を有する単離されたペプチド。
【請求項９１】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在について、腫瘍試料から得た組織切片を免疫組織学的にスクリーニングする方法であって、
ａ）前記組織切片中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記腫瘍試料から得た前記組織切片を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体／Ｆａｂ断片は検出可能に標識されている）、
ａ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｂ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中にＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞が存在することの指標である方法。
【請求項９２】
前記組織切片が、新鮮な状態で凍結した保存組織又はホルマリン固定された組織である請求項１５８の方法。
【請求項９３】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１５８の方法。
【請求項９４】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１５８の方法。
【請求項９５】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１５８の方法。
【請求項９６】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１５８の方法。
【請求項９７】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項９８】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項９９】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１５８の方法。
【請求項１００】
試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在を検出するためのキットであって、
ａ）同一でも異なってもよい共有結合された複数のプローブを有し、各プローブがＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体又はそのＦａｂ断片を備える固相支持体と、
ｂ）モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する手段とを備えたキット。
【請求項１０１】
モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する前記手段が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体に特異的に結合する検出可能に標識された第二の抗体である請求項１６５のキット。
【請求項１０２】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、前記エピトープが２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１６５のキット。
【請求項１０３】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｂ１であり、前記エピトープが２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１６５のキット。
【請求項１０４】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１６５のキット。
【請求項１０５】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１６５のキット。
【請求項１０６】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１６５のキット。
【請求項１０７】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１６５のキット。
【請求項１０８】
前記抗体がヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１６５のキット。
【請求項１０９】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項１６５の方法。
【請求項１１０】
前記試料が培地である請求項１６５のキット。
【請求項１１１】
前記試料が腫瘍試料である請求項１６５のキット。
【請求項１１２】
生物の体液中のＴＩＰ−２抗原の存在を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記生物の体液の試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｃ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体を除去することと、
ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法。
【請求項１１３】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１７８の方法。
【請求項１１４】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１７８の方法。
【請求項１１５】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１７８の方法。
【請求項１１６】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【請求項１１７】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項１１８】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項１１９】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【請求項１２０】
前記生物の体液が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、及びリンパ液からなる群から選択される請求項１７８の方法。
【請求項１２１】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１７８の方法。
【請求項１２２】
前記生物の体液が培地である請求項１７８の方法。
【請求項１２３】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、ＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１７８の方法。
【請求項１２４】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたマウスモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【請求項１２５】
前記ＴＩＰ−２抗原が、前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞上に存在している請求項１７８の方法。
【請求項１２６】
癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、
ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープは抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在を決定することと、
ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体の存在と比較することとを備え、
（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法。
【請求項１２７】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項２０９の方法。
【請求項１２８】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項２０９の方法。
【請求項１２９】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項２０９の方法。
【請求項１３０】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項２０９の方法。
【請求項１３１】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項１３２】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【請求項１３３】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項２０９の方法。
【請求項１３４】
前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である請求項２０９の方法。
【請求項１３５】
前記撮像装置が核磁気共鳴装置である請求項２０９の方法。
【請求項１３６】
前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である請求項２０９の方法。
【請求項１３７】
ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、
（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、
（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）各プライマーがＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡと特異的にハイブリダイズし、前記プライマーが配列番号    の配列中に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチドを含む少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、工程（ｂ）で調製した前記ｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、
（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの存在を検出することとを備え、
このような増幅されたＤＮＡの存在が、ＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の診断指標となる方法。
【請求項１３８】
工程（ｄ）における増幅されたＤＮＡの存在が、前記増幅されたＤＮＡと特異的にハイブリダイズする標識オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出される請求項２４９の方法。
【請求項１３９】
前記標識プローブが３２Ｐ又は３３Ｐで放射性標識されている請求項２４９の方法。
【請求項１４０】
ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、
（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、
（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）工程（ｂ）で調製したｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、
（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの量を測定することと、
（ｅ）予め測定した増幅されたＤＮＡの標準量と、工程（ｄ）で測定した増幅されたＤＮＡの量とを比較し、各標準量がＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の段階の指標となることとを備えた方法。
【請求項１４１】
前記段階が前癌状態の癌又は良性異形成である請求項２５２の方法。
【請求項１４２】
前記癌が、腫瘍、リンパ節中の癌、又は転移性癌である請求項２５２の方法。
【請求項１４３】
適切な担体と有効量のモノクローナル抗体とを含む組成物であって、前記モノクローナル抗体が、
（ａ）如何なる抗体も産生しないヘテロミエローマをヒトリンパ球と融合させることによって得られ且つ如何なる抗体も産生しないトリオーマと、抗体を産生し得るリンパ球とを融合させてテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）前記テトローマ細胞による抗体の産生が可能な条件下で、工程（ａ）で形成された前記テトローマ細胞をインキュベートして、前記モノクローナル抗体を産生させることと、
（ｃ）このようにして産生されたモノクローナル抗体を回収することとを備えた方法によって産生される組成物。
【請求項１４４】
前記モノクローナル抗体が、患者の症状に関連する抗原に対して特異的である請求項７９の組成物。
【請求項１４５】
前記症状が癌であり、モノクローナル抗体の量が前記癌の増殖を抑え又は前記癌を消滅させるのに十分な量である請求項８０の組成物。
【請求項１４６】
前記癌が、乳癌、甲状腺癌、又は前立腺癌である請求項８１の組成物。
【請求項１４７】
前記症状が感染症であり、モノクローナル抗体の量が感染因子の増殖を抑え又は感染因子を死滅させるのに十分な量である請求項８０の組成物。
【請求項１４８】
前記感染因子が、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである請求項８３の組成物。
【請求項１４９】
前記症状が毒素を伴い、モノクローナル抗体の量が前記毒素の量を減少させ又は前記毒素を破壊するのに十分な量である請求項８０の組成物。
【請求項１５０】
前記毒素が、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である請求項８５の組成物。
【請求項１５１】
前記症状が自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体の量が原因抗体の量を減少させ又は原因抗体を破壊するのに十分な量である請求項８０の組成物。
【請求項１５２】
前記自己免疫疾患が、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである請求項８７の組成物。
【請求項１５３】
前記モノクローナル抗体がエフェクター分子に結合されている請求項８０の組成物。
【請求項１５４】
前記エフェクター分子が、細胞毒性因子、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である請求項８９の組成物。
【請求項１５５】
前記モノクローナル抗体が担体に結合されている請求項８０の組成物。
【請求項１５６】
前記担体がリポソームである請求項９１の組成物。
【請求項１５７】
患者の症状を治療する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の請求項８０の組成物を前記患者に投与して前記患者の前記症状を治療することを備えた方法。
【請求項１５８】
患者の症状を予防する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の請求項８０の組成物を前記患者に投与して前記患者の前記症状を予防することを備えた方法。
【請求項１５９】
前記患者が前記症状を以前に呈した請求項９４の方法。
【請求項１６０】
前記症状が、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素の機能不全、ホルモンの機能不全、自己免疫疾患、免疫機能不全、ウイルス抗原、細菌抗原、真核細胞抗原、又は移植組織の拒絶に伴う請求項９３又は９４の方法。
【請求項１６１】
前記症状が、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である請求項９６の方法。
【請求項１６２】
甲状腺癌、乳癌、又は前立腺癌である請求項９６の方法。
【請求項１６３】
前記感染因子が、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである請求項９６の方法。
【請求項１６４】
前記毒素が、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である請求項９６の方法。
【請求項１６５】
前記腫瘍が良性である請求項９６の方法。
【請求項１６６】
前記酵素機能不全が酵素の機能亢進又は過剰産生である請求項９６の方法。
【請求項１６７】
前記ホルモン機能不全がホルモンの機能亢進又は過剰産生である請求項９６の方法。
【請求項１６８】
前記免疫機能不全がＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される請求項９６の方法。
【請求項１６９】
前記自己免疫疾患が、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである請求項９６の方法。
【請求項１７０】
前記ヘテロミエローマ細胞がＢ６Ｂ１１という名称の細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）である請求項７９の組成物。
【請求項１７１】
前記ヘテロミエローマ細胞がＢ６Ｂ１１様細胞である請求項７９の組成物。
【請求項１７２】
前記ヒトリンパ球がミエローマ細胞である請求項７９の組成物。
【請求項１７３】
前記ヒトリンパ球が脾細胞又はリンパ節細胞である請求項７９の組成物。
【請求項１７４】
前記トリオーマ細胞が、ＭＦＰ−２という名称の細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８２）である請求項７９の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本出願では、様々な出版物を著者名と日付により参照する。本明細書の末尾、特許請求の範囲の直前に、これら引用した出版物のすべてをアルファベット順に列挙する。技術水準をより完全に説明するために、これら出版物全体の開示内容を参照により本出願に援用する。
【０００２】
【発明の背景】
ＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．とＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、１９７５）による、既定の抗原に特異的なモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を分泌可能なマウス「ハイブリドーマ」の将来性ある発見によって、実験免疫学に新時代の到来が告げられた。抗血清に関連する多数の問題が回避された。ハイブリドーマ細胞株のクローン選択及び不死によって、抗体産物の単クローン性が確保され、その恒久的な入手が可能になった。しかし、このような抗体は、ヒトにおいては外来タンパク質であり、抗原として作用することから、臨床レベルでこれらの抗体を使用することには明らかに限界がある。
【０００３】
ＫｏｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．とＭｉｌｓｔｅｉｎ、Ｃ．、１９７５）の報告以来、マウスモノクローナル抗体の産生はルーチン化されている。しかし、インビボでの診断及び治療に異種モノクローナル抗体を適用すると、ヒト抗マウス免疫グロブリン応答などの有害な効果を伴うことが多い。また、モノクローナル抗体は、画像診断用ツールとして大きな可能性がある。さらに、治療的処置は、ヒトモノクローナル抗体（ｈｕｍＡｂｓ）の産生手段を探索する動機となった（Ｌｅｖｙ，Ｒ．とＭｉｌｌｅｒ  ＲＡ．、１９８３）。しかし、マウスミエローマ細胞の特性に類似した特性を有する融合パートナーとして適したヒトミエローマがないことが、この分野での進歩を妨げてきた（Ｐｏｓｎｅｒ  ＭＲ等、１９８３）。エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）を使用すると、ヒトリンパ球の不死化に極めて効率的であることが判明したが（Ｋｏｚｂｏｒ  ＤとＲｏｄｅｒ  Ｊ．、１９８１；Ｃａｓｕａｌ  Ｏ、１９８６）、抗体分泌速度が遅い、抗体分泌細胞株のクローン原性が乏しい、染色体が不安定で頻繁にサブクローニングする必要があるなど一定の限界がある。未分化のヒトリンパ芽球様細胞株は、それよりも魅力的に見える。分化したミエローマ細胞とは対照的に、これらの細胞株は、低収率と不安定な分泌の問題が未解決のままではあるが、培養条件に容易に順応する（Ｇｌａｓｓｙ  ＭＣ、１９８３；Ｏｌｌｓｏｎ  Ｌ等、１９８３）。最も可能性のある融合パートナーは、タンパク質合成機構が十分発達した同系のミエローマ細胞である（Ｎｉｌｓｓｏｎ  Ｋ．とＰｏｎｔｅｎ  Ｊ．、１９７５）。しかし、培養が困難なため、インビトロでの増殖に順化して生きているハイブリッドを産生することのできる細胞株はほとんどなかった（Ｇｏｌｄｍａｎ−Ｌｅｉｋｉｎ  ＲＥ、１９８９）。既存のミエローマは、モノクローナル抗体を比較的安定して産生するが、融合収率が低く、ハイブリッドの増殖が遅い（Ｂｒｏｄｉｎ  Ｔ、１９８３）。遺伝的な不安定性は、種間ハイブリッドの主要な欠点のひとつである。例えば、不死化のパートナーとしてマウスミエローマを使用する場合がこれに該当する。マウス−ヒト細胞ハイブリッドの産生は困難ではなく、これらの細胞は、通常のマウス−マウスハイブリドーマの増殖特性に類似したインビトロでの増殖特性を有する（Ｔｅｎｇ  ＮＮＨ、１９８３）。しかし、ヒト染色体が自然に排除されると、ｍＡｂを安定に分泌する確率が著しく低下する（Ｗｅｉｓｓ  ＭＣとＧｒｅｅｎ  Ｈ．、１９６７）。増殖特性及びヒトモノクローナル抗体産生の安定性を改善するために、マウスミエローマ細胞とヒトリンパ球とのヘテロハイブリッド（Ｏｅｓｔｂｅｒｇ  ＬとＰｕｒｓｃｈ  Ｅ．、１９８３）並びにヘテロミエローマ（Ｋｏｚｂｏｒ  Ｄ等、１９８４）が融合パートナーとして使用される。
【０００４】
癌における体液性免疫の役割はあまり理解されていない。癌患者における腫瘍特異的抗腫瘍抗体の存在は多数のデータにより実証されている。このような抗体は、幾つかの生理機序のうちのいずれかにより、腫瘍細胞を排除できる潜在的な防御性抗腫瘍反応に関与することができる。悪性組織を持つ動物の免疫化を通して研究室で開発される抗腫瘍抗体は、診断と画像診断において大いに期待されるものであるが、このような抗体自体が強い免疫反応を起こすことがあり、重要な生体機能を欠く可能性があるので、臨床応用には重大な欠点がある。最近まで、ヒト抗体を多量に作製できるヒトハイブリドーマを構築するために必要なヒト融合パートナー細胞株が不適当であったので、腫瘍関連抗原に対する完全なヒト抗体は入手できなかった。
【０００５】
完全なヒトモノクローナル抗体をＢ細胞を用いて癌患者から直接発生させるという概念が、数年前に議論された。しかし、適当な融合パートナー細胞株が最近開発されて初めて、このアイデアを実施することが可能になった。現在は、このような抗体を産生する特異的Ｂ細胞を捕捉し、それらを培養して、目的とする抗体を収集することができる。
【０００６】
本発明は、リンパ節、脾臓、扁桃、又は末梢血由来のヒトリンパ球と融合する特有の融合パートナー細胞株を包含する。この細胞株は、ハイブリドーマ技術によって、癌特異的Ｂ細胞を不死化することができる。得られるハイブリッドは、免疫グロブリンと称するヒト免疫物質の安定な産生株であることが証明され、免疫療法用ヒト抗体の信頼できる供給源である。特許権で保護されＭＦＰ−２と命名された融合パートナー細胞株を使用して、ヒト乳癌及びヒト前立腺癌に対して特異性を有する２、３のヒト抗体産生ハイブリドーマが樹立され、それによってヒト乳癌及びヒト前立腺癌に対して特異的な免疫反応性を有する幾つかのモノクローナル抗体が開発された。これらの抗体は、ヒト癌細胞株及び原発腫瘍組織の両者と反応した。これらの完全なヒト抗体は、ヒト癌細胞株並びに原発癌組織に対し特異性を示す。これらの抗体のうち幾つかに対しては抗原標的が同定された。癌抗原に対して特異抗体を分泌するヒトリンパ節又は末梢血リンパ球を取り込むことができるハイブリドーマ融合系も開発された。これらの完全なヒト抗体は、新規な腫瘍関連抗原の同定を補助するために使用することができ、或いはインビボでの癌の診断治療及び免疫療法的治療に使用することができる。
【０００７】
ヒトモノクローナル抗体の潜在的な利点として、抗体の分子標的を同定できる可能性が挙げられる。このような標的が、全く新規な分子、又は癌との関連自体が新規な既知の分子と判明することがある。数年前、Ｌｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈの科学者が、癌患者の血液中に存在する自発的な抗体によって新規腫瘍関連抗原を同定できるＳＥＲＥＸ法を開発した。彼らの作業は、新規な腫瘍マーカーを同定することに特に集中された。本発明では、正常組織から癌組織を区別できるヒトモノクローナル抗体を開発することに当初の焦点を合わせた。分子標的の同定は、本研究では副次的なものであった。
【０００８】
本発明では、幾つかの抗体の分子標的を同定し、それらが癌細胞にのみ特異的であることを示した。出現した標的の一つは、ヒト乳癌細胞のサイトゾル及び細胞膜の両者に局在するＰＤＺドメイン含有タンパク質である。このタンパク質は、ＧＩＰＣ又はＴＩＰ−２（Ｔａｘ相互作用タンパク質クローン２）と称され、小胞の輸送及びタンパク質ネットワークの形成に関与する。このタンパク質は、ＲＧＳ−Ｇａ相互作用タンパク質、Ｃドメインへの結合能、ＨＴＬＶ−１癌遺伝子ｔａｘへの結合能、ａ−アクチニンとグルコーストランスポーター１双方への結合能などの幾つかの特性を有する。このタンパク質の正確な生理学的役割は未知であるが、乳癌細胞においては一貫した過剰発現を示し、前立腺癌細胞ではたとえ発現するとしても極僅かであり、ヒト線維芽細胞では発現しない。このタンパク質はすでに記述されているが（２）、それと癌との関連性は不明であった。このマーカーに対する自発的な抗体応答が乳癌患者で起こることも知られていなかった。
【０００９】
本発明の利点の一つは、ＴＩＰ−２と悪性形質転換との関連性を確立することによって、インビトロ及びインビボでの免疫組織病理学的解析並びに免疫化学的試験用診断マーカーとして、この抗原／タンパク質を適用することが可能になることである。癌患者の循環血液中にこのタンパク質が見出されるかもしれない。このタンパク質は、原発腫瘍において特異的に発現することから、治療目的の分子標的として働く可能性もある。このタンパク質は、乳癌患者及び前立腺癌患者における、癌の診断、癌の進行、及び癌の治療のモニタリングのための可溶性腫瘍マーカーとしても使用することができる。このタンパク質は癌細胞の表面に発現するので、薬物が添加されたリポソームを特異抗体によって送達するための標的、又は抗体に複合された薬物、プロドラッグ、毒物、又は細胞増殖阻害剤の標的として使用することができる。細胞の生存に対するＴＩＰ−２の関連性が証明されれば、この新規マーカーを癌の免疫治療用ワクチン開発の候補として検討することができる。
【００１０】
乳癌患者のリンパ球由来のＴＩＰ−２に対する抗体は、インビボでの診断（画像診断）及び免疫療法用ベクター（例えば、薬物を添加したリポソーム、放射性免疫複合体、又は免疫毒性複合体の腫瘍部位への送達用）として使用することができる。ＴＩＰ−２に対する完全なヒトモノクローナル抗体は、それらの生物学的価値が証明されたならば、診断及び治療に利用する目的で、調製に必要な量のＴＩＰ−２を乳癌細胞又は原発腫瘍から単離するために、また、高親和性マウス抗体を開発するために使用することができ、また、使用されるであろう。本発明は、この新規腫瘍マーカーを検出し測定するための特異的イムノアッセイ又は免疫組織化学キットの開発を可能にする基礎も提供する。
【００１１】
本発明の利点の一つは、ＴＩＰ−２に対するヒト抗体を、このタンパク質を単離しさらにその化学構造（アミノ酸組成、タンパク質配列、修飾）の特性を決定するための免疫吸着ツールとして使用できることである。
【００１２】
本発明の別の利点は、ヒト抗ＴＩＰ−２モノクローナル抗体をもとに調製された免疫吸着剤が、この抗原の単離を可能にし、ＴＩＰ−２イムノアッセイ用のより優れたツールの開発に使用できる高親和性且つ高特異性のマウスモノクローナル抗体の開発に使用できるということである。
【００１３】
本発明の別の利点は、ＴＩＰ−２のＤＮＡ配列及び該配列の癌との関連性を知ることで、このマーカーの発現について、正常組織並びに癌組織の異なる組織のスクリーニングが可能となることである。
【００１４】
本発明の別の利点は、ＴＩＰ−２に対するヒトモノクローナル抗体が入手可能であり、ある種の診断及び治療目的によりいっそう効率的な非ヒト抗体を開発できる可能性が大きいので、免疫療法及びインビボでの診断（画像診断）用の標的の候補としてＴＩＰ−２を使用できる可能性が極めて高いということである。
【００１５】
別の利点は、ＴＩＰ−２は乳癌患者において自然発生する抗体を通じて同定されたので、この抗原がヒトにおいては免疫原性である可能性があり、したがって抗癌ワクチンを開発するための出発候補として考えることができるという仮説がその存在によって支持されるということである。
【００１６】
【発明の概要】
本発明は、いかなる抗体も産生せず、且つヒトリンパ系細胞と融合してもいかなる抗体も産生しないトリオーマ細胞を産生可能なヘテロミエローマ細胞であって、このようにして産生されたトリオーマ細胞が、第２のヒトリンパ系細胞と融合すると、抗原に対して特異的な結合親和性を有するモノクローナル抗体を産生するテトローマ細胞を産生可能であり、さらにこのような第２のヒトリンパ系細胞が前記抗原に対する特異的結合親和性を有する抗体を産生するヘテロミエローマ細胞（但し、前記ヘテロミエローマ細胞はＢ６Ｂ１１（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）ではない）を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、ヘテロミエローマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合して得られるいかなる抗体も産生しないトリオーマ細胞を提供する。
【００１８】
本発明は、いかなる抗体も産生しない上述のトリオーマ細胞を、抗原に対して特異的結合親和性を有する抗体を産生可能なヒトリンパ系細胞と融合することによって得られる、前記抗原に対する特異的結合親和性を有するモノクローナル抗体を産生可能なテトローマ細胞も提供する。
【００１９】
本発明はさらに、上述のテトローマによって産生されるモノクローナル抗体を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、上述のトリオーマ細胞を生成させる方法であって、
（ａ）いかなる抗体も産生しないヘテロミエローマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合させ、それによってトリオーマ細胞を生成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたトリオーマ細胞を、トリオーマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）いかなる抗体も生成しないトリオーマ細胞を選択することとを備える方法を提供する。
【００２１】
さらに、本発明は、テトローマ細胞を生成させる方法であって、
（ａ）上述のトリオーマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）モノクローナル抗体を産生可能なテトローマ細胞を選択することとを備える方法を提供する。
【００２２】
本発明はまた、モノクローナル抗体を産生する方法であって、
（ａ）抗体を産生可能なリンパ系細胞を上述のトリオーマ細胞と融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）モノクローナル抗体を産生可能なテトローマ細胞を選択することと、
（ｄ）前記モノクローナル抗体を産生するように、（ｃ）のテトローマ細胞を培養することとを備える方法を提供する。
【００２３】
また、本発明は、患者における所定の症状に関連した抗原に特異的なモノクローナル抗体を産生する方法であって、
（ａ）抗体を産生可能なリンパ系細胞を上述のトリオーマ細胞と融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）モノクローナル抗体を産生するテトローマ細胞を選択することと、
（ｄ）（ｃ）のモノクローナル抗体と、（１）所定の症状の患者から採取した試料又は（２）所定の症状のない患者から採取した試料とを、モノクローナル抗体と試料の複合体を形成するように接触させることと、
（ｅ）前記モノクローナル抗体と試料との間で形成される任意の複合体を検出することと、
（ｆ）（ｅ）で形成された複合体の量を測定することと、
（ｇ）所定の症状の患者から採取した試料に対して（ｆ）で測定した複合体量を、所定の症状のない患者から採取した試料に対して（ｆ）で測定した複合体量と比較して、所定の症状の患者から採取した試料に対する複合体形成量の方が多いことにより、症状に特異的な抗原に対する特異的モノクローナル抗体が産生されたことを示すことを備える方法を提供する。
【００２４】
さらに、本発明は、試料中の所定の症状に関連する抗原を同定する方法であって、
（ａ）上述の方法によって産生されるモノクローナル抗体を、モノクローナル抗体と試料の複合体の形成を許容する条件下で、試料と接触させることと、
（ｂ）（ａ）で形成された任意の複合体を検出することと、
（ｃ）（ｂ）で検出した任意の複合体を単離し、それによって前記試料中の症状に関連した抗原を同定することとを備える方法を提供する。
【００２５】
本発明はさらに、患者における所定の症状を診断する方法であって、
（ａ）患者から採取した試料を上述の方法によって産生したモノクローナル抗体と、モノクローナル抗体と試料の複合体の形成を許容する条件下で接触させることと、
（ｂ）前記モノクローナル抗体と試料との間で形成された任意の複合体の形成を検出し、このように形成された複合体の検出によって、所定の症状に特異的な抗原が試料中に存在することを示し、それによって患者における所定の症状を診断することとを備える方法を提供する。
【００２６】
本発明はさらに、本明細書に記載する方法によって記述されるモノクローナル抗体と適切な担体とを含む組成物を提供する。
【００２７】
さらに、本発明はまた、治療有効量の本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む治療用組成物を提供する。
【００２８】
また、本発明はさらに、患者における所定の症状を治療する方法であって、患者の症状を治療するために効果的な一定量の上述の治療用組成物を患者に投与することを備える方法を提供する。
【００２９】
本発明は、患者における所定の症状を抑制する方法であって、患者の症状を抑制するために効果的な一定量の上述の治療用組成物を患者に投与することを備える方法も提供する。
【００３０】
本発明は、ヒト癌細胞の表面に位置するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し且つ複合体を形成するモノクローナル抗体であって、前記ＴＩＰ−２抗原がモノクローナル抗体２７．Ｂ１が特異的に結合する抗原であるモノクローナル抗体を提供する。
【００３１】
本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１を提供する。
【００３２】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を提供する。
【００３３】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００３４】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【００３５】
本発明は、ヒト癌細胞の表面に位置するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し且つ複合体を形成するモノクローナル抗体であって、前記ＴＩＰ−２抗原がモノクローナル抗体２７．Ｆ７が特異的に結合する抗原であるモノクローナル抗体を提供する。
【００３６】
本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９８のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７を提供する。
【００３７】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を提供する。
【００３８】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
【００３９】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【００４０】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出する方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体のＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体若しくはＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープが前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識されており、前記抗体又はＦａｂ断片が検出可能に標識されていることと、
（ｂ）（ａ）で形成させた抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体において結合していないすべての標識された抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｃ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体の有無を判定し、抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体の存在によって試料中のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４１】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出する方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体のＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記抗体若しくはＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることと（前記エピトープが前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識される）、
（ｂ）（ａ）で形成させた抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体において結合していないすべての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｃ）（ｂ）の抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体を、抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に特異的に結合する検出可能に標識された第２の抗体と、第２の標識抗体が抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合することを可能にする適切な条件下で接触させることと、
（ｄ）（ｃ）の抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体産物に結合していない第２の標識抗体のすべてを除去することと、
（ｅ）前記第２の抗体の標識を検出することによって、第２の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体の有無を判定し、抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体の存在によって試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４２】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
ｂ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｃ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４３】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）ＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片によりそのエピトープが認識されるＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はそのＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての抗体又はそのＦａｂ断片を除去することと、
（ｃ）（ｂ）の抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合する検出可能に標識された第２の抗体と、第２の標識抗体が抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合することを可能にする適当な条件下で接触させることと、
（ｄ）（ｃ）の抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していないすべての第２の標識抗体を除去することと、
（ｅ）前記第２の抗体の標識を検出することによって、第２の標識抗体に結合した抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４４】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はそのＦａｂ断片により認識されることと、
（ｂ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｂ１−ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体を除去することと、
（ｃ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４５】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はそのＦａｂ断片と試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はそのＦａｂ断片により認識されることと、
（ｂ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての抗体／そのＦａｂ断片を除去することと、
（ｃ）（ｂ）の抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合する検出可能に標識された第２の抗体と、第２の標識抗体が抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合することを可能にする適当な条件下で接触させることと、
（ｄ）（ｃ）の抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していないすべての第２の標識抗体を除去することと、
（ｅ）前記第２の抗体の標識を検出することによって、第２の標識抗体に結合した抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００４６】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血から試料を採取することと、
（ｂ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片により認識されることと、
（ｃ）（ｂ）で形成された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｄ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００４７】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血から試料を採取することと、
（ｂ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片により認識されることと、
（ｃ）（ｂ）で形成された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｄ）（ｃ）の抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合する検出可能に標識された第２の抗体と、第２の標識抗体が抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合することを可能にする適当な条件下で接触させることと、
（ｅ）（ｄ）における抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していないすべての第２の標識抗体を除去することと、
（ｆ）前記第２の抗体の標識を検出することによって、第２の標識抗体に結合した抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００４８】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血から試料を採取することと、
（ｂ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｃ）（ｂ）で形成された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｄ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００４９】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血から試料を採取することと、
（ｂ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料とを、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片又はそのＦａｂ断片により認識されることと、
（ｃ）（ｂ）で形成された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｄ）（ｃ）の抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合する検出可能に標識された第２の抗体と、第２の標識抗体が前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合することを可能にする適当な条件下で接触させることと、
（ｅ）（ｄ）の抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していないすべての第２の標識抗体を除去することと、
（ｆ）前記第２の抗体の標識を検出することによって、第２の標識抗体に結合した抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００５０】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するためのインビボでの方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
（ｂ）患者内の細胞の表面に結合した前記検出可能な標識抗体２７．Ｆ７の有無を判定し、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００５１】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞を検出することによって患者内の癌を診断するためのインビボでの方法であって、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｂ）患者内の細胞の表面に結合した前記検出可能な標識抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｂ１の有無を判定し、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在によって、患者内の癌を診断することとを備える方法を提供する。
【００５２】
本発明は、外来材料の複合物を保有するリポソームを患者に投与することを備える、ヒト患者のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞に外来材料を送達するための方法であって、癌細胞を標的にして送達するために、抗体２７．Ｂ１又は２７．Ｂ１のＦａｂ断片がリポソームの外面に結合している方法を提供する。
【００５３】
本発明は、外来材料の複合物を保有するリポソームを患者に投与することを備える、ヒト患者のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞に外来材料を送達するための方法であって、癌細胞を標的にして送達するために、抗体２７．Ｆ７又は２７．Ｆ７のＦａｂ断片がリポソームの外面に結合している方法を提供する。
【００５４】
本発明は、特異的免疫応答を誘発することによって、ヒト患者の癌を治療するための方法であって、全ＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を患者に投与することを備える方法を提供する。
【００５５】
本発明は、癌細胞のアポトーシスを誘発することによって、ヒト患者の癌を治療するための方法であって、全ＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を患者に投与する方法を提供する。
【００５６】
本発明は、特異的免疫応答を誘起することによって、ヒト患者の癌を治療するための方法であって、
（ａ）前記患者から樹状細胞を採取することと、
（ｂ）（ａ）の樹状細胞を全ＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片と接触させることと、
（ｃ）（ｂ）の樹状細胞を前記患者に再導入することとを備える方法を提供する。
【００５７】
本発明は、癌細胞のアポトーシスを誘発することによって、ヒト患者の癌を治療するための方法であって、全ＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を患者に投与する方法を提供する。
【００５８】
本発明は、受動免疫によってヒト患者の癌を治療するための方法であって、ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する抗体又はそのペプチド断片を投与することを備える方法を提供する。
【００５９】
本発明は、Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号  ）のアミノ酸配列を有する単離されたペプチドを提供する。
【００６０】
本発明は、Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号  ）のアミノ酸配列を有する単離されたペプチドを提供する。
【００６１】
本発明は、腫瘍試料から得た組織切片をＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞の存在について免疫組織化学的なスクリーニングを行うための方法であって、
（ａ）腫瘍試料から得た組織切片を、ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と、組織切片中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
（ａ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
（ｂ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００６２】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞の存在を検出するためのキットであって、
（ａ）同一でも異なっていてもよい共有結合された複数のプローブであって、その各プローブがＴＩＰ−２抗原のエピトープに対するモノクローナル抗体又はそのＦａｂ断片を備えるプローブを有する固体支持体と、
（ｂ）モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を判定するための手段とを備えるキットを提供する。
【００６３】
本発明は、体液中のＴＩＰ−２抗原の存在を検出するための方法であって、
（ａ）体液試料を、ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
（ｃ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体を除去することと、
（ｄ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、体液中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００６４】
本発明は、体液中のＴＩＰ−２抗原の存在を検出するための方法であって、
（ａ）体液試料を、ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と、試料中の細胞の表面にある任意のＴＩＰ−２抗原に結合した前記検出可能な標識抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体を産生するために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｃ）（ａ）で形成させた抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体において結合していないすべての標識抗体を除去することと、
（ｄ）前記検出可能な標識抗体の標識を検出することによって、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の有無を判定し、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体の存在によって、体液中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００６５】
本発明は、腫瘍試料から得た組織切片をＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞の存在について免疫組織化学的なスクリーニングを行うための方法であって、
（ａ）腫瘍試料から得た組織切片を、ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片又はそのＦａｂ断片と、試料中の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で接触させることであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｂ）前記試料中の細胞に結合していないすべての標識抗体を除去することと、
（ｃ）前記試料中の細胞に結合した抗体２７．Ｂ１の有無を判定し、細胞に結合した抗体２７．Ｂ１の存在によって、腫瘍試料中のＴＩＰ−２抗原を有するヒト癌細胞を示すこととを備える方法を提供する。
【００６６】
本発明は、患者における癌の進行をモニタリングする方法であって、癌細胞がＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞であり、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で、癌と診断された患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
（ｂ）試料中の癌細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原を検出するための上述の方法に従って、患者内の細胞の表面に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の有無を判定することと、
（ｃ）細胞に結合した検出可能な標識抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｆ７の（ｂ）における存在を、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７の（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後の存在と比較し、（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも多量に存在することによって患者における癌の進行を示し、並びに（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも少量で存在することによって患者における癌の退行を示すこととを備える方法を提供する。
【００６７】
本発明は、患者における癌の進行をモニタリングする方法であって、癌細胞がＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞であり、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で、癌と診断された患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｂ）試料中の癌細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原を検出するための上述の方法に従って、患者内の細胞の表面に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の有無を判定することと、
（ｃ）細胞に結合した検出可能な標識抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｂ１の（ｂ）における存在を、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後の存在と比較し、（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも多量に存在することによって患者における癌の進行を示し、並びに（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも少量で存在することによって患者における癌の退行を示すこととを備える方法を提供する。
【００６８】
本発明は、患者における癌の進行をモニタリングする方法であって、癌細胞がＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞であり、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で、癌と診断された患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７により認識されることと、
（ｂ）試料中の癌細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原を検出するための上述の方法に従って患者内の細胞の表面に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の量を測定することと、
（ｃ）細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の（ｂ）における量を、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後の存在と比較し、（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも多量であることによって患者における癌の進行を示し、並びに（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも少量であることによって患者における癌の退行を示すこととを備える方法を提供する。
【００６９】
本発明は、患者における癌の進行をモニタリングする方法であって、癌細胞がＴＩＰ−２抗原を有する癌細胞であり、
（ａ）ＴＩＰ−２抗原のエピトープに対する検出可能な標識抗体又はそのＦａｂ断片を、患者内の任意の細胞の表面にあるＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるために適当な条件下で、癌と診断された患者に投与することであって、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９と命名されたハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１により認識されることと、
（ｂ）ＰＴＡ−１５９９の上述の方法に従って患者内の細胞の表面に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の量を測定することと、
（ｃ）細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の（ｂ）における量を、細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１の（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後の存在と比較し、（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも多量であることによって患者における癌の進行を示し、並びに（ｂ）における細胞に結合した検出可能な標識抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片が（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後よりも少量であることによって患者における癌の退行を示すこととを備える方法を提供する。
【００７０】
本発明は、ヒト患者におけるＴＩＰ−２抗原の発現に関連した癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血試料からｍＲＮＡを得ることと、
（ｂ）（ａ）で得たｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応法によって、（ｂ）において調製されたｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することであって、前記各プライマーがＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡと特異的にハイブリッド形成し、前記プライマーが配列番号  の配列内に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチドを含むことと、  （ｄ）生じたあらゆる増幅ＤＮＡの存在を検出し、このような増幅ＤＮＡの存在によりＴＩＰ−２抗原の発現に関連する癌を診断することとを備える方法。
【００７１】
本発明は、ヒト患者におけるＴＩＰ−２抗原の発現に関連した癌を診断するための方法であって、
（ａ）患者の末梢血試料からｍＲＮＡを得ることと、
（ｂ）（ａ）で得たｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応法によって、（ｂ）において調製されたｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することであって、前記各プライマーがＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡと特異的にハイブリッド形成し、前記プライマーが配列番号  の配列内に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチドを含むことと、
（ｄ）生じたあらゆる増幅ＤＮＡの量を測定することと、
（ｅ）（ｄ）において測定された増幅ＤＮＡの量を、各標準量がＴＩＰ−２抗原の発現に関連する癌の個別のステージの指標となる予め測定した増幅ＤＮＡ標準量と比較することとを備える方法。
【００７２】
本発明はさらに、本明細書に記載する方法によって産生されるモノクローナル抗体及び適切な担体を含むワクチンを提供する。
【００７３】
本発明はまた、有効量の本発明のモノクローナル抗体及び薬学的に許容される担体を含むワクチンを提供する。
【００７４】
本発明はさらに、患者の症状を治療する方法であって、症状に関連した抗原を結合させるために有効な上述のワクチンの一定量を患者に投与し、それによって患者の症状を治療することを備えた方法を提供する。
【００７５】
最後に、本発明は、患者の症状を抑制する方法であって、症状に関連した抗原を結合させるために有効な上述のワクチンの一定量を患者に投与し、それによって患者の症状を抑制することを備えた方法を提供する。
【００７６】
【発明の詳細な記述】
本発明は、いかなる抗体も産生せず、且つヒトリンパ系細胞と融合してもいかなる抗体も産生しないトリオーマ細胞を産生可能なヘテロミエローマ細胞であって、こうして産生されたトリオーマ細胞が、第２のヒトリンパ系細胞と融合すると、抗原に対して特異的結合親和性を有するモノクローナル抗体を産生するテトローマ細胞を産生可能であり、さらにこのような第２のヒトリンパ系細胞が前記抗原に対する特異的結合親和性を有する抗体を産生するヘテロミエローマ細胞（但し、前記ヘテロミエローマ細胞はＢ６Ｂ１１（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）ではない）を提供する。
【００７７】
本発明は、ヘテロミエローマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合して得られるいかなる抗体も産生しないトリオーマ細胞も提供する。本発明の一実施態様においては、ヘテロミエローマ細胞はＢ６Ｂ１１（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）と命名された細胞である。別の実施態様では、トリオーマはＢ６Ｂ１１様細胞である。本発明では、Ｂ６Ｂ１１様細胞には、Ｂ６Ｂ１１細胞に遺伝レベルで実質的に同一であり、Ｂ６Ｂ１１細胞に機能的に等価である細胞が含まれる。すなわち、Ｂ６Ｂ１１様細胞には特に、クローン、又はＢ６Ｂ１１の突然変異体及びそのクローンを含むＢ６Ｂ１１由来の他の細胞が含まれる。本発明の特定の実施態様においては、ヒトリンパ系細胞は、ミエローマ細胞である。本発明の別の実施態様においては、ヒトリンパ系細胞は脾細胞又はリンパ節細胞（リンパ球）である。本発明の特定の実施態様によれば、トリオーマ細胞は、ＭＦＰ−２（ＡＴＣＣ受託番号１２４８２）と命名される細胞である。
【００７８】
本発明はまた、抗原に対して特異的結合親和性を有する抗体を産生可能なヒトリンパ系細胞といかなる抗体も産生しない上述のトリオーマ細胞とを融合させて得られる、前記抗原に対して特異的結合親和性を有するモノクローナル抗体を産生可能なテトローマ細胞を提供する。前記ヒトリンパ系細胞は、末梢血リンパ球、脾細胞、リンパ節細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、扁桃腺リンパ球、単球、マクロファージ、赤芽球様細胞又はパイエル板細胞であり得る。本発明の一実施態様においては、トリオーマ細胞はＭＦＰ−２（ＡＴＣＣ受託番号１２４８２）と命名される細胞である。
【００７９】
本発明の特定の実施態様によれば、前記抗原は、腫瘍関連抗原、細胞特異的抗原、組織特異的抗原、酵素、核酸、免疫グロブリン、毒素、ウイルス抗原、細菌抗原、又は真核生物抗原である。一実施態様では、前記抗原は、哺乳動物、昆虫、真菌、大腸菌、又はクレブシエラの抗原である。
【００８０】
本発明は、上述のテトローマによって産生されるモノクローナル抗体を提供する。本発明はまた、上述のテトローマによって産生されるモノクローナル抗体をコードする単離された核酸を提供する。前記核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ，オリゴヌクレオチド類縁体、ベクター、発現ベクター又はプローブであり得るが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明は、モノクローナル抗体又はその一部を発現できる宿主細胞中に導入されるモノクローナル抗体をコードする核酸を発現しようとするものである。
【００８１】
本発明は、このようなモノクローナル抗体の抗体結合領域の全部又は一部を含む単離された核酸も提供し、且つこのような抗体（例えば、単鎖抗体それ自体又はファージディスプレイによる単鎖抗体（ｓＦｖ−ａ抗体）の一部）を発現するためのこのような核酸の使用も提供する。
【００８２】
さらに、マウスミエローマ又はＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞をトランスフェクトして、このようなモノクローナル抗体又はその一部の産生の増加を可能にするために、このような核酸の全部又は一部をコードする核酸を使用することができる。
【００８３】
本発明はさらに、上述のトリオーマ細胞を生成させるための方法であって、
（ａ）いかなる抗体も産生しないヘテロミエローマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合させ、それによってトリオーマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたトリオーマ細胞を、トリオーマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）いかなる抗体も産生しないトリオーマ細胞を選択することとを備える方法を提供する。
【００８４】
本発明の一実施態様によれば、（ａ）のヘテロミエローマ細胞は、Ｂ６Ｂ１１（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）と命名される。本発明の別の実施態様によれば、ヒトリンパ系細胞は、リンパ節リンパ球又は脾細胞である。本発明の特定の実施態様によれば、本方法は、無血清培地で増殖可能なトリオーマ細胞を選択することをさらに備える。別の実施態様は、末梢血リンパ球又はリンパ節リンパ球と融合可能なトリオーマ細胞を選択することを備える。本発明はさらに、上述の方法によって生成されるトリオーマ細胞を提供する。
【００８５】
さらに、本発明は、テトローマ細胞を生成させる方法であって、
（ａ）上述のトリオーマ細胞をヒトリンパ系細胞と融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）モノクローナル抗体を産生可能なテトローマ細胞を選択することとを備える方法を提供する。本発明の一実施態様によれば、（ａ）のトリオーマ細胞は、ＭＦＰ−２（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８２）と命名される。本発明の一実施態様によれば、前記ヒトリンパ系細胞は、末梢血リンパ球、脾細胞、リンパ節細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、扁桃腺リンパ球、単球、マクロファージ、赤芽球様細胞又はパイエル板細胞である。本発明の幾つかの実施態様においては、ヒトリンパ系細胞は抗原に対して特異的結合親和性を有する抗体を産生し、テトローマ細胞はこのような抗原に対して特異的結合親和性を有するモノクローナル抗体を産生する。本発明の特定の実施態様によれば、前記抗原は、腫瘍関連抗原、細胞特異的抗原、組織特異的抗原、酵素、核酸、免疫グロブリン、毒素、ウイルス抗原、細菌抗原、又は真核生物抗原である。本発明の幾つかの実施態様においては、前記抗原は、哺乳動物、昆虫、大腸菌、又はクレブシエラの抗原である。本発明はさらに、上述の方法によって生成されるテトローマ細胞を提供する。
【００８６】
本発明はまた、ヒトハイブリドーマ融合パートナー細胞株ヘテロミエローマＢ６Ｂ１１、及びヒトハイブリドーマ融合パートナー細胞株トリオーマＭＦＰ−２を提供する。これらのハイブリドーマ細胞株は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定に基づいて、１９９８年３月１７日に、米国菌培養収集所（ＡＴＣＣ）、１２３０１  Ｐａｒｋｌａｗｎ  Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ  ２０８５２、Ｕ．Ｓ．Ｓ．に寄託された。これらのハイブリドーマには、それぞれＡＴＣＣ受託番号ＨＢ１２４８１及びＨＢ−１２４８２が与えられた。
【００８７】
本発明はまた、モノクローナル抗体を産生する方法であって、
（ａ）抗体産生可能なリンパ系細胞と上述のトリオーマ細胞を融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートして、それによってモノクローナル抗体を産生することとを備える方法を提供する。
【００８８】
また、本発明は、患者における所定の症状に関連する抗原に対して特異的なモノクローナル抗体を産生する方法であって、
（ａ）抗体産生可能なリンパ系細胞を上述のトリオーマ細胞と融合させ、それによってテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたテトローマ細胞を、テトローマ細胞による抗体産生を許容する条件下でインキュベートすることと、
（ｃ）モノクローナル抗体を産生するテトローマ細胞を選択することと、
（ｄ）（ｃ）のモノクローナル抗体を（１）所定の症状を示す患者から採取した試料又は（２）所定の症状を示さない患者から採取した試料と、モノクローナル抗体と試料の複合体形成を許容する条件下で接触させることと、
（ｅ）前記モノクローナル抗体と試料との間で形成された複合体を検出することと、
（ｆ）（ｅ）において形成された複合体の量を測定することと、
（ｇ）症状を示す患者から採取した試料に対して（ｆ）で測定した複合体量を、無症状の患者から採取した試料に対して（ｆ）で測定した量と比較して、症状を示す患者から採取した試料に対する複合体形成量が多いことによって、前記症状に対して特異的な抗原に対するモノクローナル抗体が産生されたことを示すこととを備える方法を提供する。
【００８９】
本発明の一実施態様においては、（ａ）は、リンパ系細胞を凍結することをさらに備える。本発明の一実施態様によれば、（ｃ）は、細胞複製を許容する条件下で、選択されたテトローマ細胞をインキュベートすることをさらに備える。本発明の特定の実施態様によれば、前記テトローマの複製は、インビトロ又はインビボで行われる。本発明の一実施態様によれば、前記トリオーマ細胞は、ＭＦＰ−２（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８２）と命名された細胞である。本発明は、症状に関連した抗原に対して特異的な、上述の方法で同定されたモノクローナル抗体を提供する。本発明はまた、上述のモノクローナル抗体をコードする単離された核酸を提供する。前記核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ，オリゴヌクレオチド類似体、ベクター、発現ベクター又はプローブであり得るが、これらに限定されるものではない。さらに、本発明は、モノクローナル抗体又はその一部を発現できる宿主細胞に導入されたモノクローナル抗体をコードする核酸を発現しようとするものである。
【００９０】
本発明は、このようなモノクローナル抗体の抗体結合領域の全部又は一部を含む単離された核酸も提供し、且つこのような抗体（例えば、単鎖抗体それ自体又はファージディスプレイによる単鎖抗体（ｓＦｖ−ａ抗体）の一部）を発現するためのこのような核酸の使用も提供する。
【００９１】
さらに、そのような核酸の全部又は一部をコードする核酸は、マウスミエローマ又はＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞をトランスフェクトして、このようなモノクローナル抗体又はその一部の産生の増加を可能にするために使用することができる。
【００９２】
本発明の一実施態様によれば、前記所定の症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素障害、ホルモン障害、自己免疫疾患、免疫障害、ウイルス抗原、細菌抗原、真核生物抗原、移植された組織の拒絶、中毒、又は毒物中毒と関連がある。さらに、前記症状は、感染、癌、自己免疫障害、心血管疾患、又は移植に起因する異常を含む他の任意の異常であり得る。本発明の一実施態様においては、前記所定の症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の特定の実施態様においては、前記癌は、肺癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、骨癌、甲状腺癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の特定の実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌、クレブシエラ、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスであり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の特定の実施態様によれば、前記毒素は、破傷風菌、炭疽菌、ボツリヌス毒素、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明の一実施態様においては、前記腫瘍は良性である。別の実施態様においては、前記酵素障害は、酵素の機能亢進又は過剰産生である。さらに別の実施態様では、前記ホルモン障害は、ホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記免疫障害は、ＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらに別の実施態様においては、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又はリウマチ様関節炎である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記症状は任意の異常である。さらに別の実施態様においては、前記症状は正常な状態である。
【００９３】
また、本発明は、試料中の所定の症状に関連した抗原を同定する方法であって、
（ａ）上述の方法によって作製したモノクローナル抗体を試料と、該モノクローナル抗体と該試料との複合体の形成を許容する条件下で接触させることと、
（ｂ）（ａ）で形成させたあらゆる複合体を検出することと、
（ｃ）（ｂ）で検出した複合体を単離し、それによって前記症状に関連する試料中の抗原を同定することとを備える方法を提供する。
【００９４】
上述の方法の一実施態様においては、前記症状は腫瘍である。
【００９５】
上述の方法の別の実施態様においては、前記抗原は未知のものである。
【００９６】
本発明は、上述の方法によって同定される未知の腫瘍抗原も提供する。
【００９７】
本発明は、試料中の腫瘍を診断するための方法であって、上述の方法によって同定される腫瘍抗原の存在を検出することを備え、前記症状が腫瘍であり、前記抗原の存在によって患者内の腫瘍の存在を示す方法も提供する。
【００９８】
本発明はまた、前記検出することが、
（ａ）腫瘍抗原を含有する適当な試料を患者から採取することと、
（ｂ）抗体と抗原の複合体の形成が可能な条件下で、前記腫瘍抗原に特異的に結合可能な抗体と前記試料を接触させることと、
（ｃ）形成された複合体を検出し、それによって前記腫瘍抗原の存在を検出することとを備える、上述の方法を提供する。
【００９９】
本発明の特定の実施態様においては、本方法は、前記モノクローナル抗体−抗原複合体から前記モノクローナル抗体を分離することをさらに備える。幾つかの実施態様においては、前記分離は、サイズによる分画、例えば、ポリアクリルアミド又はアガロースゲル電気泳動法によって行われるサイズ分画による。
【０１００】
本発明の特定の実施態様によれば、前記所定の症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素障害、ホルモン障害、自己免疫疾患、免疫障害、ウイルス抗原、細菌抗原、真核生物抗原、移植組織の拒絶、中毒（ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ）、又は毒物中毒（ｖｅｎｏｍ  ｉｎｔｏｘｉｃａｔｉｏｎ）と関連がある。さらに、前記症状は、感染、癌、自己免疫機能不全、心血管疾患、又は移植に起因する異常を含む他の任意の異常の場合もある。本発明の一実施態様においては、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の幾つかの実施態様においては、前記癌は、肺癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、骨癌、甲状腺癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の幾つかの実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスであり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の幾つかの実施態様によれば、前記毒素は、破傷風菌、炭疽菌、ボツリヌス毒素、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明の一実施態様においては、前記腫瘍は良性である。別の実施態様においては、前記酵素障害は、酵素の機能亢進又は過剰産生である。さらに別の実施態様では、前記ホルモン障害は、ホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記免疫障害は、ＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらに別の実施態様においては、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又はリウマチ様関節炎である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記症状は任意の異常である。さらに別の実施態様においては、前記症状は通常の症状である。
【０１０１】
本発明はさらに、患者の症状を診断する方法であって、
（ａ）患者から採取した試料を上述の方法によって産生されるモノクローナル抗体と、モノクローナル抗体と試料の複合体の形成を許容する条件下で接触させることと、
（ｂ）前記モノクローナル抗体と試料との間で形成されたいかなる複合体をも検出し、このような複合体を検出したことによって、患者の症状の診断と相関する症状に特異的な抗原が試料中に存在することを示すこととを備える方法を提供する。
【０１０２】
本発明の一実施態様によれば、前記モノクローナル抗体には、検出可能なマーカーが結合している。本発明の一実施態様においては、検出可能なマーカーは、放射標識、フルオロフォア、又は蛍光分子、酵素、リガンド、比色マーカー、又は磁気ビーズである。
【０１０３】
本発明の幾つかの実施態様によれば、前記所定の症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素障害、ホルモン障害、自己免疫疾患、免疫障害、ウイルス抗原、細菌抗原、真核生物抗原、移植組織の拒絶、中毒、又は毒物中毒であるか、これらと関連がある。さらに、前記症状は、感染、癌、自己免疫障害、心血管疾患、又は移植に起因する異常を含む他の任意の異常の場合もある。本発明の特定の実施態様においては、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の幾つかの実施態様においては、前記癌は、肺癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、骨癌、甲状腺癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の別の実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスであり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の幾つかの実施態様によれば、前記毒素は、破傷風菌、炭疽菌、ボツリヌス毒素、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明の一実施態様においては、前記腫瘍は良性である。別の実施態様においては、前記酵素障害は、酵素の機能亢進又は過剰産生である。さらに別の実施態様では、前記ホルモン障害は、ホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記免疫障害は、ＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらに別の実施態様においては、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又はリウマチ様関節炎である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記症状は任意の異常である。さらに別の実施態様においては、前記症状は通常の症状である。
【０１０４】
本発明はさらに、本明細書に記載の方法によって産生されるモノクローナル抗体と適切な担体とを含む組成物を提供する。
【０１０５】
さらに、本発明はまた、治療有効量の本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む治療用組成物を提供する。
【０１０６】
本発明の特定の実施態様によれば、前記症状は癌であり、モノクローナル抗体量は癌の増殖を抑制する又は癌を消失させるために十分な量である。特定の実施態様によれば、前記症状は感染症であり、モノクローナル抗体量は感染因子の増殖を抑制する又は感染因子を死滅させるために十分な量である。本発明の特定の実施態様によれば、前記症状は毒素と関連があり、モノクローナル抗体量は毒素の量を低減し又は毒素を破壊するために十分な量である。さらに別の実施態様においては、前記症状は自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体量は、有害な抗体又はそのサブユニットの量を低減し、或いは有害な抗体又はそのサブユニットを破壊するために十分な量である。さらに別の実施態様においては、前記症状は心血管疾患であり、モノクローナル抗体量は前記症状を緩和するために十分な量である。さらに別の実施態様においては、前記症状は移植拒絶であり、モノクローナル抗体量は前記症状を緩和するために十分な量である。
【０１０７】
本発明の特定の実施態様によれば、モノクローナル抗体はエフェクター化合物に結合している。本発明の特定の実施態様においては、エフェクター化合物は、細胞毒性の薬剤、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である。本発明の特定の実施態様においては、前記モノクローナル抗体は担体に結合している。本発明の別の実施態様によれば、前記担体はリポソームである。
【０１０８】
また、本発明は、さらに、患者の所定の症状を治療する方法であって、患者の症状を治療するのに有効な量の上述の治療用組成物を前記患者に投与することを備えた方法を提供する。本発明の一実施態様によれば、前記治療用組成物を別の患者に投与する。
【０１０９】
本発明の一実施態様によれば、前記所定の症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素障害、ホルモン障害、自己免疫疾患、免疫障害、ウイルス抗原、細菌抗原、真核生物抗原、移植組織の拒絶、中毒、又は毒物中毒であるか、これらと関連がある。さらに、前記症状は、感染、癌、自己免疫障害、心血管疾患、又は移植に起因する異常を含む他の任意の異常の場合もある。本発明の一実施態様においては、前記所定の症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の特定の実施態様においては、前記癌は、肺癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、骨癌、甲状腺癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の一実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスであり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の特定の実施態様によれば、前記毒素は、破傷風菌、炭疽菌、ボツリヌス毒素、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明の一実施態様においては、前記腫瘍は良性である。別の実施態様においては、前記酵素障害は、酵素の機能亢進又は過剰産生である。さらに別の実施態様では、前記ホルモン障害は、ホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記免疫障害は、ＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらに別の実施態様においては、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又はリウマチ様関節炎である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記症状は任意の異常である。さらに別の実施態様においては、前記症状は通常の症状である。
【０１１０】
最後に、本発明は、患者の症状を抑制するために効果的な一定量の上述の治療用組成物を患者に投与することを備える、患者における所定の症状を抑制する方法を提供する。本発明の一実施態様においては、患者は以前に前記症状を示している。本発明の一実施態様によれば、前記治療用組成物を別の患者に投与する。
【０１１１】
本発明の特定の実施態様によれば、前記症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素障害、ホルモン障害、自己免疫疾患、免疫障害、ウイルス抗原、細菌抗原、真核生物抗原、移植組織の拒絶、中毒、又は毒物中毒であるか、これらと関連がある。さらに、前記症状は、感染、癌、自己免疫障害、心血管疾患、又は移植に起因する異常を含む他の任意の異常の場合もある。本発明の特定の実施態様においては、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の幾つかの実施態様においては、前記癌は、肺癌、肝臓癌、白血病、リンパ腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、髄膜腫、骨癌、甲状腺癌、大腸癌、卵巣癌、膀胱癌、膵癌、乳癌、又は前立腺癌であり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の一実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスであり得るが、これらに限定されるものではない。本発明の幾つかの実施態様によれば、前記毒素は、破傷風菌、炭疽菌、ボツリヌス毒素、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明の一実施態様においては、前記腫瘍は良性である。別の実施態様においては、前記酵素障害は、酵素の機能亢進又は過剰産生である。さらに別の実施態様では、前記ホルモン障害は、ホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記免疫障害は、ＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらに別の実施態様においては、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又はリウマチ様関節炎である。本発明のさらに別の実施態様においては、前記症状は任意の異常である。さらに別の実施態様においては、前記症状は通常の症状である。
【０１１２】
本発明は、所定の症状とは関連していない抗原に対する抗体であるが、ヒトの免疫系中の全抗体レパートリーの成分を適宜に構成する抗体の作製も提供する。
【０１１３】
さらに、本発明は、患者の所定の症状に関連する新規な抗原の同定、並びに患者の所定の症状の診断及び治療におけるその使用を提供する。本発明は、正常者及び病的症状を示す者の中に自然に存在している抗体のレパートリーの同定も提供する。一実施態様においては、前記症状は毒物の解毒（中和）であり得る。例えば、前記症状は、サソリ、クモ、ガラガラヘビ、又は毒カエルの咬創又は毒物への暴露に起因することもある。本発明は、このような症状に対して解毒剤として作用する抗体を提供する。
【０１１４】
本発明のトリオーマ細胞は、マクロファージ、単球、Ｔリンパ球、及び赤芽球様細胞と融合させてもよい。このような融合から得られるハイブリドーマ細胞は、増殖因子、サイトカイン、酵素、ヘモグロビンを産生することがある。
【０１１５】
本明細書で使用するヒト−マウスハイブリドーマ（「不死化ハイブリドーマ」）とは、マウスミエローマ又は他のマウス腫瘍細胞と正常者由来のヒトリンパ系細胞との融合によって得られる不死細胞株である。本明細書の以下に記述するように、綿密な選択と突然変異によって、染色体の安定性が改善された不死化ハイブリドーマはヒトの特性を有し、さらに、免疫グロブリンを分泌しない不死化ハイブリドーマが得られる可能性がある。得られたこのようなトリオーマの抗体分泌能力は、免疫されたヒト個体のＢ細胞から、又は不死化されたＢ細胞によって典型的には誘導される第３の細胞融合によって提供することができる。
【０１１６】
本明細書で使用する「Ｂ６Ｂ１１」細胞とは、マウスミエローマ６５３とヒトミエローマＲＰＭＩ８２２６の融合によって産生される雑種細胞である。
【０１１７】
本明細書で使用する「Ｂ６Ｂ１１様」細胞とは、マウスミエローマ６５３関連細胞とヒトミエローマＲＰＭＩ８２２６関連細胞の融合によって産生される雑種細胞である。
【０１１８】
本明細書で使用する「ＭＦＰ」細胞とは、Ｂ６Ｂ１１細胞とヒトリンパ球の融合によって産生される雑種細胞である。Ｂ６Ｂ１１様細胞は、機能属性及び機能特性をＢ６Ｂ１１ヘテロミエローマ細胞と共有している。
【０１１９】
本明細書で使用する「ＭＦＰ様」細胞は、Ｂ６Ｂ１１様細胞とヒトリンパ球の融合によって産生される雑種細胞である。ＭＦＰ様細胞は、機能属性及び機能特性をＭＦＰトリオーマ細胞と共有している。
【０１２０】
本明細書で使用する「非分泌」又は「非産生」ハイブリドーマとは、継続的な生殖が可能であるために不死であり、且つ免疫グロブリンを産生しないハイブリドーマを指す。
【０１２１】
本明細書で使用する「ヒトの特性を有する」ハイブリドーマとは、検出可能なヒト由来の染色体（細胞表面で発現され得るヒトＨＬＡ抗原を産生する染色体など）を保有するハイブリドーマを指す。
【０１２２】
本明細書で使用する「所定の決定基に対して免疫された」リンパ系細胞とは、その決定基を有する抗原に曝された患者由来のリンパ系細胞を指す。例えば、輸血又は以前の妊娠を通した暴露によって種々の血液型の抗原決定基に対する抗体を産生するように、或いは過去の感染又はワクチン摂取を通した暴露によって特定のウイルス又は細菌の抗原決定基に対する抗体を（そのリンパ系Ｂ細胞から）産生するように患者を誘導することができる。
【０１２３】
本明細書で使用する「細胞株」とは、個々の細胞、採集した細胞、及び細胞を含有する培養物を含む（但し、これらに限定されるものではない）様々な態様を指し、記載の細胞株の細胞に由来するものである限り、祖先細胞又は祖先培養物と正確に同一でなくてもよく、本明細書にいう細胞株は全て、このような変種（ｖａｒｉａｎｔ）をも含むものである。
【０１２４】
本明細書で使用する「トリオーマ」とは、元来別個の３つの細胞株譜から生ずる成分を包括して含有する細胞株を指す。これらトリオーマは、ヒト−マウスハイブリドーマとヒトリンパ系細胞の融合から得られる安定な不死化細胞である。
【０１２５】
本明細書で使用する「テトローマ」は、元来別個の４つの細胞株譜から生ずる成分を包括的に含有する細胞株を指す。これらテトローマは、抗体を産生可能なヒトリンパ系細胞とトリオーマとの融合から得られる安定な不死化抗体産生細胞である。
【０１２６】
本明細書で使用する「自家性に」とは、同一患者が、細胞免疫グロブリンのソースであり、且つ細胞、免疫グロブリン又は治療用組成物の標的でもある状況を指す。
【０１２７】
本明細書で使用する「異種性に」とは、ある患者が細胞又は免疫グロブリンのソースであり、別の患者が細胞、免疫グロブリン又は治療用組成物の標的である状況を指す。
【０１２８】
本発明の任意の方法を実施する際における或いは任意の薬学的組成物を調製する際における「治療的有効量」とは、症状に関連した抗原に結合できる量である。したがって、この有効量は、治療患者並びに治療すべき症状に応じて変動する。本発明では、投与方法は、皮膚への投与、皮下投与、静脈投与、非経口投与、経口投与、局所投与、又は噴霧剤による投与とすることができるが、これらに限定されるものではない。
【０１２９】
本明細書で使用する「薬学的に許容される適切な担体」という語は、リン酸塩緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョン又はトリグリセリドエマルジョンなどのエマルジョン、種々のタイプの湿潤剤、リポソーム、錠剤、被覆錠剤、カプセル、ＲＢＣシャドウ（ｓｈａｄｏｗｓ）などの薬学的に許容される任意の標準的な担体を包含する。前記化合物の静脈投与及び腹腔内投与に有用な許容されるトリグリセリドエマルジョンの例は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）として商用的に知られるトリグリセリドエマルジョンである。
【０１３０】
典型的には、このような担体には、デンプン、ミルク、糖、ある種の粘土、ゼラチン、ステアリン酸、タルク、植物油脂、ガム、グリコール、他の既知の賦形剤などの賦形剤が含まれる。このような担体は、着香及び着色添加剤、又は他の成分を含んでいてもよい。
【０１３１】
本発明は、前記症状に関連した抗原に結合できる薬学的組成物であって、適切な希釈剤、防腐剤、溶解剤、乳化剤、アジュバント、及び／又は担体を含む薬学的組成物も提供する。このような組成物は、液体、凍結乾燥体、さもなければ乾燥製剤であり、様々な緩衝剤含有物の希釈剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ．、アセテート、ホスフェート）、ｐＨ及びイオン強度、表面への吸収を防ぐアルブミン又はゼラチンなどの添加剤、界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ  ２０、Ｔｗｅｅｎ  ８０、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、膨張性物質又は張性調整剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリエチレングリコールなどのポリマーの前記化合物に対する共有結合付加、金属イオンとの錯体形成、或いはポリ乳酸、ポリグリコール酸、ヒドロゲルなどのポリマー化合物の粒状調製物中又は粒状調製物上、リポソーム上、マイクロエマルジョン上、ミセル上、単層又は多層小胞上、赤血球ゴースト上、又はスフェロプラスト上への前記化合物の取り込みを含む。このような組成物は、前記化合物又は組成物の物理的状態、溶解性、安定性、インビボでの放出速度、及びインビボでのクリアランス速度に影響するはずである。
【０１３２】
制御放出組成物又は徐放組成物には、親油性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、オイル）中の製剤が含まれる。ポリマー（例えば、ポロクサマー又はポロクサミン）でコートされた粒状組成物、及び組織特異的受容体、リガンド、又は抗原に対する抗体に結合した化合物、或いは組織特異的受容体のリガンドに結合した化合物も本発明に包含される。本発明の組成物の別の実施態様には、粒状保護コーティング、プロテアーゼ阻害剤、又は非経口、肺、経鼻、及び経口を含む様々な投与経路に対する浸透増強物が含まれる。
【０１３３】
化合物は、投与されると、循環から速やかに排除されることが多く、それゆえ比較的短期間の薬理活性しか誘発されないことがある。したがって、治療効力を持続させるために、比較的高用量の生理活性化合物を頻繁に注射する必要がある場合もある。ポリエチレングリコール、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、又はポリプロリンなどの水溶性ポリマーの共有結合付加によって修飾された化合物は、対応する被修飾化合物よりも、静脈注射後相当長い血中半減期を示すことが知られている（Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ等、１９８１；Ｎｅｗｍａｒｋ等、１９８２；及びＫａｔｒｅ等、１９８７）。このような修飾は、水溶液中における前記化合物の溶解度も増加させ、凝集を防ぎ、前記化合物の物理的及び化学的安定性を高め、前記化合物の免疫原性と反応性を大いに低下させることがある。その結果、このようなポリマー化合物付加体を被修飾化合物よりも低頻度又は低用量で投与することによって、所望のインビボでの生物活性を達成できる可能性がある。
【０１３４】
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は哺乳動物においては極めて低毒性であるので、化合物へのＰＥＧの付加は特に有用である（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ等、１９７１）。例えば、アデノシンデアミナーゼのＰＥＧ付加体は、重篤な複合免疫不全症候群の治療に対してヒトへの使用が米国で認可された。ＰＥＧの結合によってもたらされる第２の利点は、異種化合物の免疫原性及び抗原性を効果的に低下させる利点である。例えば、ヒトタンパク質のＰＥＧ付加体は、激しい免疫応答を起こす危険を伴わず、他の哺乳動物種における疾病の治療に有用かもしれない。前記担体には、前記化合物を産生し得る化合物又は細胞に対する宿主の免疫応答を軽減又は防止するように、マイクロカプセル化デバイスが含まれる。本発明の化合物は、リポソームなどの膜中にマイクロカプセル化して送達することもできる。
【０１３５】
ＰＥＧなどのポリマーは、アミノ末端アミノ酸のα−アミノ基、リシン側鎖のεアミノ基、システイン側鎖のスルフヒドリル基、アスパルチル及びグルタミル側鎖のカルボキシル基、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基、チロシン側鎖などのタンパク質中に存在する１以上の反応性アミノ酸残基、或いはある種のアスパラギン、セリン、又はトレオニン残基に付加したグリコシル鎖の活性誘導体に適宜に付加させることができる。
【０１３６】
タンパク質との直接反応に適したＰＥＧの活性型が多数記述されてきた。タンパク質アミノ基との反応に有用なＰＥＧ試薬には、活性なカルボン酸エステル又はカーボネート誘導体、特に、脱離基がＮ−ヒドロキシスクシンイミド、ｐ−ニトロフェノール、イミダゾール又は１−ヒドロキシ−２−ニトロベンゼン−４−スルホネートであるものが含まれる。マレイミド基又はハロアセチル基含有ＰＥＧ誘導体は、無タンパク質のスルフヒドリル基の修飾に有用な試薬である。同様に、アミノヒドラジン基若しくはヒドラジド基含有ＰＥＧ試薬は、タンパク質中の糖基の過ヨウ素酸酸化によって生成するアルデヒドとの反応に有用である。
【０１３７】
本発明は、修飾された細胞融合パートナー、トリオーマ細胞株、及びリンパ節由来のヒトリンパ球、脾臓、パイエル板、又はヒト患者の任意の他のリンパ組織又は末梢血を用いて、腫瘍関連抗原、腫瘍細胞、感染因子、感染に特異的な抗原、及び自己抗原に対するヒトモノクローナル抗体を産生するものである。
【０１３８】
抗体は、培養細胞、精製抗原、ヒト一次細胞及び組織、及びリンパ系細胞の自己ドナーから得られた細胞及び組織を含む抗体スクリーニング関連のコンビナトリアルライブラリーを使用して選択する。
【０１３９】
本発明は、ヒト癌細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し、該抗原と複合体を形成するモノクローナル抗体であって、ハイブリドーマ２７．Ｂ１（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はハイブリドーマ２７．Ｆ７（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７と同一の抗原に結合するモノクローナル抗体を提供する。本発明のある実施態様によれば、本発明の前記モノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、又はヒトモノクローナル抗体である。本発明のある実施態様において、本発明の前記モノクローナル抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって特異的に認識されるエピトープに結合することができる。
【０１４０】
本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１を提供する。
【０１４１】
本発明は、本発明の前記モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を提供する。本発明の一実施態様において、前記ハイブリドーマ細胞はＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９を有する。
【０１４２】
ハイブリドーマ２７．Ｂ１は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定に基づいて、２０００年３月２８日に、米国菌培養収集所（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ、ＵＳＡに寄託された。２７．Ｂ１には、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９が付与された。
【０１４３】
本発明のある実施態様では、本発明のモノクローナル抗体は、検出可能なマーカーで標識されている。本発明の別の実施態様では、前記検出可能なマーカーは、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は治療剤に結合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）されている。本発明の別の実施態様では、前記治療剤は放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は造影剤に結合されている。本発明のさらに別の実施態様では、前記造影剤は放射性同位体である。
【０１４４】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。
【０１４５】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【０１４６】
本発明は、ヒト癌細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し、該抗原と複合体を形成するモノクローナル抗体であって、前記ＴＩＰ−２抗原が、モノクローナル抗体２７．Ｆ７が特異的に結合する抗原であるモノクローナル抗体を提供する。本発明のある実施態様によれば、本発明の前記モノクローナル抗体は、マウスモノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、又はヒトモノクローナル抗体である。本発明のある実施態様において、本発明の前記モノクローナル抗体は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９８を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって特異的に認識されるエピトープに結合することができる。
【０１４７】
本発明は、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９８を有するハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７を提供する。
【０１４８】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞を提供する。本発明のある実施態様では、前記ハイブリドーマ細胞はＡＴＣＣ受託番号はＰＴＡ−１５９８を有する。
【０１４９】
ハイブリドーマ２７．Ｆ７は、特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規定に基づいて、２０００年３月２８日に、米国菌培養収集所（ＡＴＣＣ）、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖａ、ＵＳＡに寄託された。２７．Ｆ７には、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９８が付与された。
【０１５０】
本発明のある実施態様では、本発明のモノクローナル抗体は、検出可能なマーカーで標識されている。本発明の別の実施態様では、前記検出可能なマーカーは、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は治療剤に結合されている。本発明の別の実施態様では、前記治療剤は放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は造影剤に結合されている。本発明のさらに別の実施態様では、前記造影剤は放射性同位体である。
【０１５１】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提供する。
【０１５２】
本発明は、本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【０１５３】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出する方法であって、（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体又はＦａｂ断片は検出可能に標識されている）、（ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１５４】
本明細書で使用する「抗体／Ｆａｂ断片」は、抗体又は抗体のＦａｂ断片を意味する。
【０１５５】
本発明の何れの方法を実施するに際しても、結合していない抗体又はその断片は、被検試料を完全に洗浄することによって除去されるのが通常である。
【０１５６】
本発明の何れの方法を実施するに際しても、まず前記断片を調製し、次いで目的の標識で該断片を標識するのが経済的である。
【０１５７】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識から選択される
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０１５８】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１５９】
本発明のある実施態様では、前記抗体は、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１６０】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０１６１】
本発明のある実施態様では、前記試料は培地である。
【０１６２】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２保有癌細胞を検出する方法であって、（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識される）、（ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｂ）の前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を接触させることと、（ｄ）（ｃ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、（ｅ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１６３】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０１６４】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０１６５】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１６６】
本発明のある実施態様では、前記抗体は、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１６７】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０１６８】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０１６９】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体又はそのＦａｂ断片は検出可能に標識されている）、ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１７０】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識からなる群から選択される。
【０１７１】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０１７２】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０１７３】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１７４】
本発明のある実施態様では、前期抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１７５】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０１７６】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０１７７】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片によって認識される）、（ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片―ＴＩＰ−２抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｂ）の前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、（ｄ）（ｃ）における前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、（ｅ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１７８】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０１７９】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０１８０】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１８１】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１８２】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０１８３】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０１８４】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体又はそのＦａｂ断片は検出可能に標識されている）、（ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｂ１−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１８５】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識からなる群から選択される。
【０１８６】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０１８７】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０１８８】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１８９】
本発明のある実施態様では、前期抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１９０】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０１９１】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０１９２】
本発明は、試料中の癌細胞の表面のＴＩＰ−２抗原を検出する方法であって、
（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はその断片によって認識される）、（ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての抗体／そのＦａｂ断片を除去することと、（ｃ）前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片―ＴＩＰ−２抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｂ）の前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、（ｄ）（ｃ）における前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、（ｅ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０１９３】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０１９４】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０１９５】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０１９６】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０１９７】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０１９８】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０１９９】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２００】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、（ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２０１】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２０２】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２０３】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である。
【０２０４】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２０５】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２０６】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２０７】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２０８】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、（ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片によって認識される）、（ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体中に結合しなかった全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｄ）前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｃ）の前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、（ｅ）（ｄ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、（ｆ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２０９】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２１０】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２１１】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である選択される
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２１２】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２１３】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２１４】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２１５】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、（ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２１６】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２１７】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２１８】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である。
【０２１９】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２２０】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２２１】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２２２】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２２３】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、（ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はそのＦａｂ断片によって認識される）、（ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体中に結合しなかった全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｄ）前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片ＴＩＰ−２抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｃ）の前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、（ｅ）（ｄ）における前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、（ｆ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２２４】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２２５】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２２６】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である選択される
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２２７】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２２８】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２２９】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２３０】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって、患者の癌を診断するインビボ法であって、（ａ）ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で、前記患者に投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した前記検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７の存在を決定することとを備え、細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２３１】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２３２】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２３３】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である選択される。
【０２３４】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２３５】
本発明のある実施態様では、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２３６】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した抗体２７．Ｆ７又はそのＦａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０２３７】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置は核磁気共鳴装置である。
【０２３８】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置はＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０２３９】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって、患者の癌を診断するインビボ法であって、（ａ）ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で、前記患者に投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した前記検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｂ１の存在を決定することとを備え、細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法を提供する。
【０２４０】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２４１】
本発明のある実施態様では、前記患者はヒトである。
【０２４２】
本発明のある実施態様では、前記癌は、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である選択される。
【０２４３】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２４４】
本発明のある実施態様では、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０２４５】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２４６】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した抗体２７．Ｂ１又はその断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０２４７】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置は核磁気共鳴装置である。
【０２４８】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置はＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０２４９】
本発明は、ヒト患者のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に外来物質を送達する方法であって、前記外来物質の抱合体を担持するリポソームを前記患者に投与することを備え、前記癌細胞への送達を誘導するために、抗体２７．Ｂ１又は２７．Ｂ１のＦａｂ断片が前記リポソームの外側表面に結合されている方法を提供する。
【０２５０】
本発明のある実施態様では、前記外来物質は、抗癌剤、放射性同位体、毒素、抗生物質、プロドラッグ、酵素、及び化学療法化合物からなる群から選択される。
【０２５１】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞は、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞。
【０２５２】
本発明は、ヒト患者のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に外来物質を送達する方法であって、前記外来物質の抱合体を担持するリポソームを前記患者に投与することを備え、前記癌細胞への送達を誘導するために、抗体２７．Ｆ７又は２７．Ｆ７のＦａｂ断片が前記リポソームの外側表面に結合されている方法を提供する。
【０２５３】
本発明のある実施態様では、前記外来物質は、抗癌剤、放射性同位体、毒素、抗生物質、プロドラッグ、酵素、及び化学療法化合物からなる群から選択される。
【０２５４】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞は、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞。
【０２５５】
本発明は、特異的な免疫反応を誘発させることによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法を提供する。
【０２５６】
上記の方法において、前記完全なＴＩＰ−２又はＴＩＰ−２由来のペプチドは、（１）直接注入すること、又は（２）担体タンパク質に結合すること、又は（３）アジュバントとの混合物中に存在すること、又は（４）（例えば、破傷風毒素に結合することによって）その他の方法で改変して、全てのＴＩＰ−２保有細胞に対して誘導された免疫反応を強化することができる。
【０２５７】
本発明のある実施態様では、前記特異的な免疫反応は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である。
【０２５８】
本発明のある実施態様では、前記特異的な免疫反応は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞の活性化である。
【０２５９】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片はアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号    ）を含む。
【０２６０】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を含む。
【０２６１】
本発明は、癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法を提供する。
【０２６２】
本発明は、特異的な免疫反応を誘発することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、（ａ）前記患者から樹状細胞を採取することと、（ｂ）工程（ａ）の樹状細胞を、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に接触させることと、（ｃ）工程（ｂ）の樹状細胞を前記患者に再導入することとを備えた方法を提供する。
【０２６３】
上述の方法において、前記樹状細胞は自家免疫系に前記抗原を提示することによって、前記患者に抗体を誘導する。
【０２６４】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片はアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号    ）を含む。
【０２６５】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号    ）を含む。
【０２６６】
本発明のある実施態様では、前記特異的な免疫反応は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である。
【０２６７】
本発明のある実施態様では、前記特異的な免疫反応は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞又の活性化である。
【０２６８】
本発明のある実施態様では、前記特異的な免疫反応は、前記患者中での完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に対する抗体の産生である。
【０２６９】
上述の方法では、癌に対する免疫反応を誘発するために患者に注入される抗体は、完全なヒト抗体、ヒト化抗体、又はそれらの断片の何れかであり得、毒素、薬物若しくはプロドラッグ、酵素、放射性核種に、又は毒素、薬物若しくはプロドラッグ、酵素、放射性核種を積載したリポソームに直接的又は間接的に結合することができる。このような抗体は、エフェクター細胞（ナチュラルキラー細胞及びマクロファージ）を活性化することによって免疫反応を誘発し、ＡＤＣＣを引き起こすことができ、補体を活性化し、ＣＤＣを引き起こすことができ、又はアポトーシスを介して直接的に作用することができる。このような抗体は、抗イディオタイプ抗体のカスケードを誘導することもでき、Ａｂ２（抗原（本ケースではＴＩＰ−２）の模倣体）はＡｂ３（元の抗ＴＩＰ−２Ａｂ１の模倣体）を誘導することによってさらに強い抗ＴＩＰ−２免疫反応を引き起こすであろう。
【０２７０】
本発明は、癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法を提供する。
【０２７１】
本発明は、受動免疫によってヒト患者の癌を治療する方法であって、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対する抗体又はそのペプチド断片を投与することを備えた方法を提供する。
【０２７２】
本発明のある実施態様では、前記抗体は、ＴＩＰ−２抗原保有細胞のアポトーシスを誘導する。
【０２７３】
本発明は、アミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号    ）を有する単離されたペプチドを提供する。
【０２７４】
本発明は、アミノ酸Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号    ）を有する単離されたペプチドを提供する。
【０２７５】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在について、腫瘍試料から得た組織切片を免疫組織学的にスクリーニングする方法であって、（ａ）前記組織切片中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記腫瘍試料から得た前記組織切片を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体／Ｆａｂ断片は検出可能に標識されている）、（ａ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、（ｂ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中にＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞が存在することの指標である方法を提供する。
【０２７６】
本発明のある実施態様では、前記組織切片は、新鮮な状態で凍結した保存組織又はホルマリン固定された組織である。
【０２７７】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２７８】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０２７９】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０２８０】
本発明のある実施態様では、前記抗体はヒトモノクローナル抗体である。
【０２８１】
本発明は、試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在を検出するためのキットであって、（ａ）同一でも異なってもよい共有結合された複数のプローブを有し、各プローブがＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体又はそのＦａｂ断片を備える固相支持体と、（ｂ）モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する手段とを備えたキットを提供する。
【０２８２】
本発明のある実施態様では、モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する前記手段は、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体に特異的に結合する検出可能に標識された第二の抗体である。
【０２８３】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体は、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、前記エピトープがＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される。
【０２８４】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体は、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｂ１であり、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される。
【０２８５】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体は、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたマウスモノクローナル抗体であり、前記エピトープがＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体によって認識される。
【０２８６】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２８７】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０２８８】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０２８９】
本発明のある実施態様では、前記試料は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される。
【０２９０】
本発明のある実施態様では、前記試料が培地である。
【０２９１】
本発明のある実施態様では、前記試料は腫瘍試料である。
【０２９２】
本発明は、生物の体液中のＴＩＰ−２抗原の存在を検出する方法であって、（ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記生物の体液の試料を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｃ）工程（ａ）で形成された前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体を除去することと、（ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０２９３】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０２９４】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０２９５】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０２９６】
本発明のある実施態様では、前記生物の体液は、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、及びリンパ液からなる群から選択される。
【０２９７】
本発明のある実施態様では、工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される。
【０２９８】
本発明のある実施態様では、前記生物の体液は培地である。
【０２９９】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される。
【０３００】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｂ１であり、前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される。
【０３０１】
本発明のある実施態様では、ＴＩＰ−２抗原の前記エピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたマウスモノクローナル抗体である。
【０３０２】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原は前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞上に存在する。
【０３０３】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在について、腫瘍試料から得た組織切片を免疫組織学的にスクリーニングする方法であって、（ａ）前記試料中の任意の細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に抗体を結合させるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された検出可能に標識された抗体又はそのＦａｂ断片と前記腫瘍試料から得た前記組織切片を接触させることと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される）、（ｂ）前記試料中の前記細胞に結合しなかった全ての標識抗体を除去することと、（ｃ）前記試料中の前記細胞に結合した抗体２７．Ｂ１の存在を決定することとを備え、細胞に結合した抗体２７．Ｂ１の存在が、前記腫瘍試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法を提供する。
【０３０４】
本発明のある実施態様では、前記組織切片は、新鮮な状態で凍結した保存組織又はホルマリン固定された組織である。
【０３０５】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０３０６】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０３０７】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３０８】
本発明のある実施態様では、前記抗体はモノクローナル抗体である。
【０３０９】
本発明のある実施態様では、前記モノクローナル抗体はヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である。
【０３１０】
本発明は、癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、（ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、（ｂ）請求項２３の方法に従って、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在を決定することと、（ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｆ７の存在を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７の存在と比較することとを備え、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法を提供する。
【０３１１】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０３１２】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である。
【０３１３】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３１４】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０３１５】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置が核磁気共鳴装置である。
【０３１６】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０３１７】
本発明は、癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、（ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識され、前記抗体／Ｆａｂ断片は検出可能に標識されている）、（ｂ）請求項２３の方法に従って、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の存在を決定することと、（ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｂ１の存在を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１の存在と比較することとを備え、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の存在が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の存在が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法を提供する。
【０３１８】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０３１９】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である。
【０３２０】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３２１】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０３２２】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置が核磁気共鳴装置である。
【０３２３】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０３２４】
本発明は、癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、（ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識され、前記抗体／断片は検出可能に標識されている）、（ｂ）請求項２３の方法に従って、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の量を決定することと、（ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の量を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の存在と比較することとを備え、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の量が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７／Ｆａｂ断片の量が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法を提供する。
【０３２５】
上述の方法において、腫瘍細胞の不均一性が高ければ、より多くの抗原を担持する細胞と、少ない抗原を担持する細胞があってもよい。前記抗原の量は、疾病の異なる段階を決定し得る、すなわち、前癌状態の病変部と癌状態の病変部とを識別し得る。
【０３２６】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０３２７】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である。
【０３２８】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３２９】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｆ７の量が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０３３０】
本発明の上記実施態様では、放射性核種で標識した抗体の蓄積量の推計は、撮像装置を使用することによって行うことができる。公式は、蓄積が特異的であるか否かを結論付けるのを補助する。
【０３３１】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置が核磁気共鳴装置である。
【０３３２】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０３３３】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２保有癌細胞はヒト癌細胞である。
【０３３４】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３３５】
本発明は、癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、（ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープはＰＴＡ−１５９９という名称のハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識され、前記抗体／Ｆａｂ断片は検出可能に標識されている）、（ｂ）請求項２７の方法に従って、前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の量を決定することと、（ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片２７．Ｂ１の量を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１の存在と比較することとを備え、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の量が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の量が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法を提供する。
【０３３６】
本発明のある実施態様では、前記検出可能な標識は、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である。
【０３３７】
本発明のある実施態様では、前記患者中の細胞の表面に結合した抗体２７．Ｂ１／Ｆａｂ断片の量が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である。
【０３３８】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置が核磁気共鳴装置である。
【０３３９】
本発明のある実施態様では、前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である。
【０３４０】
本発明のある実施態様では、前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である。
【０３４１】
本発明のある実施態様では、前記癌細胞は、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される。
【０３４２】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、（ｃ）各プライマーがＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡと特異的にハイブリダイズし、前記プライマーが配列番号    の配列中に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチドを含む少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、工程（ｂ）で調製した前記ｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの存在を検出することとを備え、このような増幅されたＤＮＡの存在が、ＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の診断指標となる方法を提供する。
【０３４３】
上記方法では、ＴＩＰ−２の核酸構造が公知であり、完全なｍＲＮＡ配列が公知が公知で、それ故、フルサイズのｃＤＮＡを作製することができるので、当業者であれば、ノーザンブロットによってＴＩＰ−２  ｍＲＮＡの発現を測定し得るであろう。発現を測定するための別の方法は、公知のｍＲＮＡ配列を基にした１８−２１マーのプライマーを使用する定量的ＰＣＲによることである。当業者であれば、特異的なプライマー又はフルサイズのｃＤＮＡを作製することもできるであろう。ＧＩＰＣ（ＧＡＩＰ相互作用タンパク質、Ｃ末端）の完全なｍＲＮＡ配列は図２４に示されており、ＴＩＰ−２配列に対応する部分に下線が付されている。
【０３４４】
本発明のある実施態様では、工程（ｄ）における増幅されたＤＮＡの存在は、前記増幅されたＤＮＡと特異的にハイブリダイズする標識オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出される。
【０３４５】
本発明のある実施態様では、前記標識プローブが３２Ｐ又は３３Ｐで放射性標識されている。
【０３４６】
本発明は、ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、（ｃ）工程（ｂ）で調製したｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの量を測定することと、（ｅ）予め測定した増幅されたＤＮＡの標準量と、工程（ｄ）で測定した増幅されたＤＮＡの量とを比較し、各標準量がＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の段階の指標となることとを備えた方法を提供する。
【０３４７】
本発明のある実施態様では、前記段階前癌状態の癌又は良性異形成である。
【０３４８】
本発明のある実施態様では、前記癌は、腫瘍、リンパ節中の癌、又は転移性癌である。
【０３４９】
最も広く用いられている癌の進行段階システムは、いわゆるＴＮＭシステムに基づくものである（Ｔ、腫瘍；Ｎ、リンパ節、Ｍ、転移）。第０期は、腫瘍なしのページェット病、すなわちリンパ節に及ばず且つ転移がないインサイチュでの癌腫に相当する。第１期は、転移がないか又はリンパ節に及ばない２ｃｍ以下の腫瘍である。第２期は、付随するリンパ節に転移しているが、遠隔転移はない５ｃｍ超の腫瘍である。第３期は、第２期と同じであり、一連の転移したリンパ節が互いに又は他の構造物に定着し、乳腺のリンパ節に進展したケースである。第４期は最も進展した疾病であり、全てのサイズの腫瘍が含まれ、リンパ節への転移が広大であって、遠隔転移を伴う。
【０３５０】
本明細書で使用する「完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質」は、図２３に示されたアミノ酸配列（配列番号    ）を備える。
【０３５１】
本発明は、さらに、本発明に記載されている方法によって作製されたモノクローナル抗体と適切な担体とを含むワクチンを提供する。
【０３５２】
本発明は、有効量の本発明のモノクローナル抗体と薬学的に許容される担体とを含むワクチンも提供する。
【０３５３】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は癌であり、モノクローナル抗体の量は前記癌の増殖を抑え又は前記癌を消滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記癌は、乳癌、甲状腺癌、又は前立腺癌である。ある実施態様によれば、前記症状は感染症であり、モノクローナル抗体の量は感染因子の増殖を抑え又は感染因子を死滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。ある実施態様によれば、前記症状は毒素を伴い、モノクローナル抗体の量は前記毒素の量を減少させ又は前記毒素を破壊するのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。ある実施態様によれば、前記症状は自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体の量は原因抗体の量を減少させ又は原因抗体を破壊するのに十分な量である。本発明のある実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３５４】
本発明のある実施態様によれば、前記モノクローナル抗体はエフェクター分子に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記エフェクター分子は、細胞毒性因子、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は担体に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記担体はリポソームである。
【０３５５】
本発明は、患者の症状を治療する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を治療することを備えた方法を提供する。
【０３５６】
本発明は、さらに、患者の症状を予防する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を予防することを備えた方法を提供する。本発明のある実施態様では、前記患者は前記症状を以前に呈した。本発明の別の実施態様では、前記ワクチンは別の患者に投与される。
【０３５７】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素の機能不全、ホルモンの機能不全、自己免疫疾患、免疫機能不全、ウイルス抗原、細菌抗原、真核細胞抗原、又は移植組織の拒絶に伴う。本発明の別の実施態様では、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の別の実施態様によれば、前記癌は、甲状腺がん、乳癌、又は前立腺癌である。本発明の別の実施態様では、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。本発明の別の実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明のさらなる実施態様では、前記腫瘍は良性である。本発明のさらに別の実施態様では、前記酵素機能不全は酵素の機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらなる実施態様では、前記ホルモン機能不全はホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明の別の実施態様では、前記免疫機能不全はＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらなる実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３５８】
本発明は、さらに、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２を含むワクチンと適切な担体とを含むワクチンを提供する。
【０３５９】
本発明は、有効量の完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２を含むワクチンと薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【０３６０】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は癌であり、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２の量は前記癌の増殖を抑え又は前記癌を消滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記癌は、乳癌、甲状腺癌、又は前立腺癌である。ある実施態様によれば、前記症状は感染症であり、モノクローナル抗体の量は感染因子の増殖を抑え又は感染因子を死滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。ある実施態様によれば、前記症状は毒素を伴い、モノクローナル抗体の量は前記毒素の量を減少させ又は前記毒素を破壊するのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。ある実施態様によれば、前記症状は自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体の量は原因抗体の量を減少させ又は原因抗体を破壊するのに十分な量である。本発明のある実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３６１】
本発明のある実施態様によれば、前記完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２はエフェクター分子に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記エフェクター分子は、細胞毒性因子、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は担体に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記担体はリポソームである。
【０３６２】
本発明は、さらに、患者の症状を治療する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を治療することを備えた方法を提供する。
【０３６３】
本発明は、さらに、患者の症状を予防する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を予防することを備えた方法を提供する。本発明のある実施態様では、前記患者は前記症状を以前に呈した。本発明の別の実施態様では、前記ワクチンは別の患者に投与される。
【０３６４】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素の機能不全、ホルモンの機能不全、自己免疫疾患、免疫機能不全、ウイルス抗原、細菌抗原、真核細胞抗原、又は移植組織の拒絶に伴う。本発明の別の実施態様では、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の別の実施態様によれば、前記癌は、甲状腺がん、乳癌、又は前立腺癌である。本発明の別の実施態様では、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。本発明の別の実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明のさらなる実施態様では、前記腫瘍は良性である。本発明のさらに別の実施態様では、前記酵素機能不全は酵素の機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらなる実施態様では、前記ホルモン機能不全はホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明の別の実施態様では、前記免疫機能不全はＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらなる実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３６５】
本発明は、さらに、患者から採取し、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２に接触させた樹状細胞と適切な担体とを含むワクチンを提供する。
【０３６６】
本発明は、さらに、患者から採取し、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２に接触させた有効量の樹状細胞と薬学的に許容される担体とを含むワクチンを提供する。
【０３６７】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は癌であり、患者から採取し、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２に接触させた樹状細胞の量は前記癌の増殖を抑え又は前記癌を消滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記癌は、乳癌、甲状腺癌、又は前立腺癌である。ある実施態様によれば、前記症状は感染症であり、モノクローナル抗体の量は感染因子の増殖を抑え又は感染因子を死滅させるのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。ある実施態様によれば、前記症状は毒素を伴い、モノクローナル抗体の量は前記毒素の量を減少させ又は前記毒素を破壊するのに十分な量である。ある実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。ある実施態様によれば、前記症状は自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体の量は原因抗体の量を減少させ又は原因抗体を破壊するのに十分な量である。本発明のある実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３６８】
本発明のある実施態様によれば、患者から採取し、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はペプチド形態のＴＩＰ−２に接触させた樹状細胞はエフェクター分子に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記エフェクター分子は、細胞毒性因子、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である。本発明の別の実施態様では、前記モノクローナル抗体は担体に結合されている。本発明の別の実施態様によれば、前記担体はリポソームである。
【０３６９】
本発明は、さらに、患者の症状を治療する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を治療することを備えた方法を提供する。
【０３７０】
本発明は、さらに、患者の症状を予防する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の上記ワクチンを前記患者に投与して前記患者の前記症状を予防することを備えた方法を提供する。本発明のある実施態様では、前記患者は前記症状を以前に呈した。本発明の別の実施態様では、前記ワクチンは別の患者に投与される。
【０３７１】
本発明のある実施態様によれば、前記症状は、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素の機能不全、ホルモンの機能不全、自己免疫疾患、免疫機能不全、ウイルス抗原、細菌抗原、真核細胞抗原、又は移植組織の拒絶に伴う。本発明の別の実施態様では、前記症状は、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である。本発明の別の実施態様によれば、前記癌は、甲状腺がん、乳癌、又は前立腺癌である。本発明の別の実施態様では、前記感染因子は、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである。本発明の別の実施態様によれば、前記毒素は、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である。本発明のさらなる実施態様では、前記腫瘍は良性である。本発明のさらに別の実施態様では、前記酵素機能不全は酵素の機能亢進又は過剰産生である。本発明のさらなる実施態様では、前記ホルモン機能不全はホルモンの機能亢進又は過剰産生である。本発明の別の実施態様では、前記免疫機能不全はＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される。本発明のさらなる実施態様では、前記自己免疫疾患は、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである。
【０３７２】
ヒト癌細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原と特異的に結合し、該抗原と複合体を形成するモノクローナル抗体であって、ハイブリドーマ２７．Ｂ１（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１又はハイブリドーマ２７．Ｆ７（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７と同一の抗原に結合するモノクローナル抗体。
【０３７３】
請求項１のマウスモノクローナル抗体。
【０３７４】
請求項１のキメラモノクローナル抗体。
【０３７５】
請求項１のヒト化モノクローナル抗体。
【０３７６】
請求項１のヒトモノクローナル抗体。
【０３７７】
モノクローナル抗体２７・Ｂ１と同一のエピトープに結合する請求項１のモノクローナル抗体。
【０３７８】
ハイブリドーマ２７．Ｂ１（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１。
【０３７９】
請求項１のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞。
【０３８０】
２７．Ｂ１という名称の請求項８のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１５９９）。
【０３８１】
検出可能なマーカーによって標識された請求項１のモノクローナル抗体。
【０３８２】
前記検出可能なマーカーが、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１０のモノクローナル抗体。
【０３８３】
治療剤に結合された請求項１のモノクローナル抗体。
【０３８４】
前記治療剤が放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である請求項１２のモノクローナル抗体。
【０３８５】
造影剤に結合された請求項１のモノクローナル抗体。
【０３８６】
前記造影剤が放射性同位体である請求項１４のモノクローナル抗体。
【０３８７】
モノクローナル抗体２７．Ｆ７と同一のエピトープに結合する請求項１のモノクローナル抗体。
【０３８８】
ハイブリドーマ２７．Ｆ７（ＡＴＣＣ表示番号１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７。
【０３８９】
２７．Ｆ７と表示される請求項８のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号１５９８）。
【０３９０】
試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体又はＦａｂ断片は検出可能に標識されている）、
ａ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｂ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の指標である方法。
【０３９１】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識からなる群から選択される請求項１９の方法。
【０３９２】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１９の方法。
【０３９３】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫、精巣癌細胞、及びリンパ腫からなる群から選択される請求項１９の方法。
【０３９４】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１９の方法。
【０３９５】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１９の方法。
【０３９６】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１９の方法。
【０３９７】
前記モノクローナル抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１９の方法。
【０３９８】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の癌からなる群から選択される請求項１９の方法。
【０３９９】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１９の方法。
【０４００】
前記試料が培地である請求項１９の方法。
【０４０１】
試料中のＴＩＰ−２保有癌細胞を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体又はＦａｂ断片を含む抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体のＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識されでいる）、
ｂ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に結合していない全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｃ）前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｂ）の前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体を接触させることと、
（ｄ）（ｃ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、
（ｅ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−抗原複合体の存在が、前記試料中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法。
【０４０２】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項３０の方法。
【０４０３】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項３０の方法。
【０４０４】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項３０の方法。
【０４０５】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項３０の方法。
【０４０６】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項３０の方法。
【０４０７】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項３０の方法。
【０４０８】
前記モノクローナル抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項３０の方法。
【０４０９】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項３０の方法。
【０４１０】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項３０の方法。
【０４１１】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、
ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、
ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【０４１２】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項４０の方法。
【０４１３】
前記患者がヒトである請求項４０の方法。
【０４１４】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項４０の方法。
【０４１５】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項４０の方法。
【０４１６】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項４０の方法。
【０４１７】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項８４の方法。
【０４１８】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項８４の方法。
【０４１９】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項８４の方法。
【０４２０】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項８４の方法。
【０４２１】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって患者の癌を診断する方法であって、
ａ）前記患者の末梢血の試料を取得することと、
ｂ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記試料を接触させることと（前記エピトープはモノクローナル抗体／Ｆａｂ断片又はそのＦａｂ断片によって認識される）、
ｃ）工程（ｂ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体中に結合しなかった全ての抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｄ）前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に特異的に結合し且つ検出可能に標識された第二の抗体に、該第二の標識抗体を前記抗体／Ｆａｂ断片抗原複合体に結合させ得る適切な条件下で、工程（ｃ）の前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を接触させることと、
ｅ）（ｄ）における前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体産物に結合していない全ての第二の標識抗体を除去することと、
ｆ）前記第二の抗体の標識を検出することによって、前記第二の標識抗体に結合した前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【０４２２】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１０８の方法。
【０４２３】
前記患者がヒトである請求項１０８の方法。
【０４２４】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項１０８の方法。
【０４２５】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１０８の方法。
【０４２６】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１０８の方法。
【０４２７】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項８４の方法。
【０４２８】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１０８の方法。
【０４２９】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項１０８の方法。
【０４３０】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１０８の方法。
【０４３１】
６０．  ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞を検出することによって、患者の癌を診断するインビボ法であって、
ａ）ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で、前記患者に投与することと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した前記検出可能に標識された抗体の存在を決定することとを備え、
細胞に結合した検出可能に標識された抗体の存在が、前記患者中の癌の診断の指標である方法。
【０４３２】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１１６の方法。
【０４３３】
前記患者がヒトである請求項１１６の方法。
【０４３４】
前記癌が、ヒト黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮細胞癌、神経芽細胞腫、多形性膠芽細胞腫、骨髄性白血病、乳癌、大腸癌、子宮内膜癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、骨肉腫、精巣癌、及びリンパ腫である請求項１１６の方法。
【０４３５】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１１６の方法。
【０４３６】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【０４３７】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【０４３８】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１１６の方法。
【０４３９】
前記患者中の細胞の表面に結合した抗体又はそのＦａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である請求項１１６の方法。
【０４４０】
前記撮像装置が核磁気共鳴装置である請求項１１６の方法。
【０４４１】
前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である請求項１１６の方法。
【０４４２】
ヒト患者のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に外来物質を送達する方法であって、前記外来物質の抱合体を担持するリポソームを前記患者に投与することを備え、前記癌細胞への送達を誘導するために、抗体又は該抗体のＦａｂ断片が前記リポソームの外側表面に結合されている方法。
【０４４３】
前記外来物質が、抗癌剤、放射性同位体、毒素、抗生物質、プロドラッグ、酵素、及び化学療法化合物からなる群から選択される請求項１３８の方法。
【０４４４】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞が、ヒト黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞である請求項１３８の方法。
【０４４５】
特異的な免疫反応を誘発させることによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【０４４６】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である請求項１４１の方法。
【０４４７】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞の活性化である請求項１４１の方法。
【０４４８】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）を含む請求項１４１の方法。
【０４４９】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を含む請求項１４１の方法。
【０４５０】
癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【０４５１】
特異的な免疫反応を誘発することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、
ａ）前記患者から樹状細胞を採取することと、
ｂ）工程（ａ）の樹状細胞を、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に接触させることと、
ｃ）工程（ｂ）の樹状細胞を前記患者に再導入することとを備えた方法。
【０４５２】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号    ）を含む請求項１４７の方法。
【０４５３】
ＴＩＰ−２抗原の前記ペプチド断片がアミノ酸配列Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号    ）を含む請求項１４７の方法。
【０４５４】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の補体依存性細胞溶解である請求項１４７の方法。
【０４５５】
前記特異的な免疫反応が、ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞に対するナチュラルキラー細胞又はマクロファージの活性化である請求項１４７の方法。
【０４５６】
前記特異的な免疫応答が、前記患者中での完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片に対する抗体の産生である請求項１４７の方法。
【０４５７】
癌細胞のアポトーシスを誘導することによってヒト患者の癌を治療する方法であって、完全なＴＩＰ−２抗原タンパク質又はＴＩＰ−２のペプチド断片を前記患者に投与することを備えた方法。
【０４５８】
受動免疫によってヒト患者の癌を治療する方法であって、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対する抗体又はそのペプチド断片を投与することを備えた方法。
【０４５９】
前記抗体が、ＴＩＰ−２抗原保有細胞のアポトーシスを誘導する請求項１５４の方法。
【０４６０】
アミノ酸配列Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｇｌｙ  Ｇｌｎ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｌｅｕ（配列番号）を有する単離されたペプチド。
【０４６１】
アミノ酸Ｓｅｒ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｙ  Ｃｙｓ  Ａｒｇ  Ｈｉｓ  Ｔｙｒ  Ｇｌｕ  Ｖａｌ（配列番号）を有する単離されたペプチド。
【０４６２】
ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在について、腫瘍試料から得た組織切片を免疫組織学的にスクリーニングする方法であって、
ａ）前記組織切片中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記腫瘍試料から得た前記組織切片を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又は前記Ｆａｂ断片によって認識され、前記抗体／Ｆａｂ断片は検出可能に標識されている）、
ａ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体／Ｆａｂ断片を除去することと、
ｂ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記試料中にＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞が存在することの指標である方法。
【０４６３】
前記組織切片が、新鮮な状態で凍結した保存組織又はホルマリン固定された組織である請求項１５８の方法。
【０４６４】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１５８の方法。
【０４６５】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１５８の方法。
【０４６６】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１５８の方法。
【０４６７】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１５８の方法。
【０４６８】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【０４６９】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【０４７０】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１５８の方法。
【０４７１】
試料中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞の存在を検出するためのキットであって、
ａ）同一でも異なってもよい共有結合された複数のプローブを有し、各プローブがＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体又はそのＦａｂ断片を備える固相支持体と、
ｂ）モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する手段とを備えたキット。
【０４７２】
モノクローナル抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定する前記手段が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体に特異的に結合する検出可能に標識された第二の抗体である請求項１６５のキット。
【０４７３】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、前記エピトープが２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１６５のキット。
【０４７４】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｂ１であり、前記エピトープが２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１６５のキット。
【０４７５】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１６５のキット。
【０４７６】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１６５のキット。
【０４７７】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１６５のキット。
【０４７８】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１６５のキット。
【０４７９】
前記抗体がヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１６５のキット。
【０４８０】
前記試料が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、リンパ液、骨髄、乳房生検、組織、リンパ節、前立腺組織、乳房及び前立腺転移由来の組織、培地、及びＴＩＰ−２が関連抗原であり得るその他の腫瘍からなる群から選択される請求項１６５の方法。
【０４８１】
前記試料が培地である請求項１６５のキット。
【０４８２】
前記試料が腫瘍試料である請求項１６５のキット。
【０４８３】
生物の体液中のＴＩＰ−２抗原の存在を検出する方法であって、
ａ）前記試料中の細胞の表面上に存在する任意のＴＩＰ−２抗原に結合した検出可能に標識された抗体を含む抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体を生じせしめるのに適した条件下で、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片と前記生物の体液の試料を接触させることと（前記エピトープは前記抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｃ）工程（ａ）で形成された前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体に結合していない全ての標識抗体を除去することと、
ｄ）前記検出可能に標識された抗体の標識を検出することによって、前記抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在を決定することとを備え、
抗体／Ｆａｂ断片−ＴＩＰ−２抗原複合体の存在が、前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有ヒト癌細胞の指標である方法。
【０４８４】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項１７８の方法。
【０４８５】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項１７８の方法。
【０４８６】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項１７８の方法。
【０４８７】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【０４８８】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【０４８９】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【０４９０】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【０４９１】
前記生物の体液が、血清、血漿、唾液、涙、粘膜排出物、尿、腹腔液、脳脊髄液、及びリンパ液からなる群から選択される請求項１７８の方法。
【０４９２】
工程（ａ）に先立って、ＴＩＰ−２が、アルコール沈殿によって、前記試料から濃縮される請求項１７８の方法。
【０４９３】
前記生物の体液が培地である請求項１７８の方法。
【０４９４】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された前記モノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたヒトモノクローナル抗体２７．Ｆ７であり、ＰＴＡ−１５９８という名称のハイブリドーマによって産生されたモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１７８の方法。
【０４９５】
ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたモノクローナル抗体が、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導されたマウスモノクローナル抗体である請求項１７８の方法。
【０４９６】
前記ＴＩＰ−２抗原が、前記生物の体液中のＴＩＰ−２抗原保有癌細胞上に存在している請求項１７８の方法。
【０４９７】
１２６．  癌細胞がＴＩＰ−２抗原保有癌細胞である患者の癌の進行をモニタリングする方法であって、
ａ）癌を有すると診断された患者に、ＴＩＰ−２抗原上のエピトープに対して誘導された抗体又はそのＦａｂ断片を、前記患者中の何れかの細胞の表面上に存在するＴＩＰ−２抗原に前記抗体を結合させるのに適した条件下で投与することと（前記エピトープは抗体又はそのＦａｂ断片によって認識され、前記抗体は検出可能に標識されている）、
ｂ）前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在を決定することと、
ｃ）工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在を、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後における細胞に結合した検出可能に標識された抗体の存在と比較することとを備え、
（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が増加していることが、前記患者の癌が進行していることの指標となり、（ｉ）診断時又は（ｉｉ）治療後に比べて、工程（ｂ）における細胞に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が減少していることが、前記患者の癌が退行していることの指標となる方法。
【０４９８】
前記検出可能な標識が、放射性同位体、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項２０９の方法。
【０４９９】
前記ＴＩＰ−２抗原保有癌細胞がヒト癌細胞である請求項２０９の方法。
【０５００】
前記癌細胞が、黒色腫細胞、基底細胞癌細胞、扁平上皮細胞癌細胞、神経芽細胞腫細胞、多形性膠芽細胞腫細胞、骨髄性白血病細胞、乳癌細胞、大腸癌細胞、子宮内膜癌細胞、肺癌細胞、卵巣癌細胞、前立腺癌細胞、子宮頚癌細胞、骨肉腫細胞、精巣癌細胞、及びリンパ腫細胞からなる群から選択される請求項２０９の方法。
【０５０１】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項２０９の方法。
【０５０２】
前記エピトープが、２７．Ｆ７という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９８）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｆ７によって認識される請求項１２０の方法。
【０５０３】
前記エピトープが、２７．Ｂ１という名称のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ表示番号ＰＴＡ−１５９９）によって産生されるモノクローナル抗体２７．Ｂ１によって認識される請求項１２０の方法。
【０５０４】
前記抗体が、ヒトモノクローナル抗体又はマウスモノクローナル抗体である請求項２０９の方法。
【０５０５】
前記患者中の細胞の表面に結合した検出可能に標識された抗体／Ｆａｂ断片の存在が工程（ｂ）において検出され、前記検出可能な標識を検出する手段が撮像装置である請求項２０９の方法。
【０５０６】
前記撮像装置が核磁気共鳴装置である請求項２０９の方法。
【０５０７】
前記撮像装置がＸ線免疫シンチグラフィー撮像装置である請求項２０９の方法。
【０５０８】
ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、
（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、
（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）各プライマーがＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡと特異的にハイブリダイズし、前記プライマーが配列番号    の配列中に含まれる配列を有するオリゴヌクレオチドを含む少なくとも２つのオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、工程（ｂ）で調製した前記ｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、
（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの存在を検出することとを備え、
このような増幅されたＤＮＡの存在が、ＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の診断指標となる方法。
【０５０９】
工程（ｄ）における増幅されたＤＮＡの存在が、前記増幅されたＤＮＡと特異的にハイブリダイズする標識オリゴヌクレオチドプローブを用いて検出される請求項２４９の方法。
【０５１０】
前記標識プローブが３２Ｐ又は３３Ｐで放射性標識されている請求項２４９の方法。
【０５１１】
ＴＩＰ−２抗原の発現を伴うヒト患者の癌を診断する方法であって、
（ａ）前記患者の末梢血の試料からｍＲＮＡを取得することと、
（ｂ）工程（ａ）で得た前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを調製することと、
（ｃ）工程（ｂ）で調製したｃＤＮＡ中に存在するＴＩＰ−２抗原をコードするＤＮＡを増幅することと、
（ｄ）生じた増幅されたＤＮＡの量を測定することと、
（ｅ）予め測定した増幅されたＤＮＡの標準量と、工程（ｄ）で測定した増幅されたＤＮＡの量とを比較し、各標準量がＴＩＰ−２抗原の発現を伴う癌の段階の指標となることとを備えた方法。
【０５１２】
前記段階が前癌状態の癌又は良性異形成である請求項２５２の方法。
【０５１３】
前記癌が、腫瘍、リンパ節中の癌、又は転移性癌である請求項２５２の方法。
【０５１４】
適切な担体と有効量のモノクローナル抗体とを含む組成物であって、前記モノクローナル抗体が、
（ａ）如何なる抗体も産生しないヘテロミエローマをヒトリンパ球と融合させることによって得られ且つ如何なる抗体も産生しないトリオーマと、抗体を産生し得るリンパ球とを融合させてテトローマ細胞を形成させることと、
（ｂ）前記テトローマ細胞による抗体の産生が可能な条件下で、工程（ａ）で形成された前記テトローマ細胞をインキュベートして、前記モノクローナル抗体を産生させることと、
（ｃ）このようにして産生されたモノクローナル抗体を回収することとを備えた方法によって産生される組成物。
【０５１５】
前記モノクローナル抗体が、患者の症状に関連する抗原に対して特異的である請求項７９の組成物。
【０５１６】
前記症状が癌であり、モノクローナル抗体の量が前記癌の増殖を抑え又は前記癌を消滅させるのに十分な量である請求項８０の組成物。
【０５１７】
前記癌が、乳癌、甲状腺癌、又は前立腺癌である請求項８１の組成物。
【０５１８】
前記症状が感染症であり、モノクローナル抗体の量が感染因子の増殖を抑え又は感染因子を死滅させるのに十分な量である請求項８０の組成物。
【０５１９】
前記感染因子が、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである請求項８３の組成物。
【０５２０】
前記症状が毒素を伴い、モノクローナル抗体の量が前記毒素の量を減少させ又は前記毒素を破壊するのに十分な量である請求項８０の組成物。
【０５２１】
前記毒素が、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である請求項８５の組成物。
【０５２２】
前記症状が自己免疫疾患であり、モノクローナル抗体の量が原因抗体の量を減少させ又は原因抗体を破壊するのに十分な量である請求項８０の組成物。
【０５２３】
前記自己免疫疾患が、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである請求項８７の組成物。
【０５２４】
前記モノクローナル抗体がエフェクター分子に結合されている請求項８０の組成物。
【０５２５】
前記エフェクター分子が、細胞毒性因子、薬物、酵素、色素、又は放射性同位体である請求項８９の組成物。
【０５２６】
前記モノクローナル抗体が担体に結合されている請求項８０の組成物。
【０５２７】
前記担体がリポソームである請求項９１の組成物。
【０５２８】
患者の症状を治療する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の請求項８０の組成物を前記患者に投与して前記患者の前記症状を治療することを備えた方法。
【０５２９】
患者の症状を予防する方法であって、前記症状に関連する抗原を結合するのに有効な量の請求項８０の組成物を前記患者に投与して前記患者の前記症状を予防することを備えた方法。
【０５３０】
前記患者が前記症状を以前に呈した請求項９４の方法。
【０５３１】
前記症状が、癌、腫瘍、毒素、感染因子、酵素の機能不全、ホルモンの機能不全、自己免疫疾患、免疫機能不全、ウイルス抗原、細菌抗原、真核細胞抗原、又は移植組織の拒絶に伴う請求項９３又は９４の方法。
【０５３２】
前記症状が、敗血症、セプシス、敗血症ショック、ウイルス血症、菌血症、又は真菌血症である請求項９６の方法。
【０５３３】
甲状腺癌、乳癌、又は前立腺癌である請求項９６の方法。
【０５３４】
前記感染因子が、ハンタウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶＩＩ、ＨＩＶ、ヘルペスウイルス、インフルエンザウイルス、エボラウイルス、ヒトパピローマウイルス、ブドウ球菌、連鎖球菌、クレブシエラ菌、大腸菌、炭疽菌、又はクリプトコッカスである請求項９６の方法。
【０５３５】
前記毒素が、破傷風、炭疽、ボツリヌス、ヘビ毒、又はクモ毒である請求項９６の方法。
【０５３６】
前記腫瘍が良性である請求項９６の方法。
【０５３７】
前記酵素機能不全が酵素の機能亢進又は過剰産生である請求項９６の方法。
【０５３８】
前記ホルモン機能不全がホルモンの機能亢進又は過剰産生である請求項９６の方法。
【０５３９】
前記免疫機能不全がＣＤ３又はＣＤ４によって媒介される請求項９６の方法。
【０５４０】
前記自己免疫疾患が、狼瘡、甲状腺炎、移植片対宿主病、移植拒絶、又は関節リウマチである請求項９６の方法。
【０５４１】
前記ヘテロミエローマ細胞がＢ６Ｂ１１という名称の細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８１）である請求項７９の組成物。
【０５４２】
前記ヘテロミエローマ細胞がＢ６Ｂ１１様細胞である請求項７９の組成物。
【０５４３】
前記ヒトリンパ球がミエローマ細胞である請求項７９の組成物。
【０５４４】
前記ヒトリンパ球が脾細胞又はリンパ節細胞である請求項７９の組成物。
【０５４５】
前記トリオーマ細胞が、ＭＦＰ−２という名称の細胞（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−１２４８２）である請求項７９の組成物。
【０５４６】
本発明は、以下の実験の詳細によってよりよく理解されるであろう、しかしながら、当業者であれば、記載されている具体的な方法及び結果は、その後に記載されている特許請求の範囲においてさらに完全に記載されている本発明を例示したものにすぎないことを容易に理解できるであろう。
【０５４７】
【実験の詳細】
第１群の実験
例１：ヒトモノクローナル抗体産生のためのマウス−ヒトヘテロミエローマ作製。
序
抗体を分泌しないものとして選択したヒトミエローマ細胞とマウスミエローマ細胞の融合によって、Ｂ６Ｂ１１又はＢ６Ｂ１１様細胞を作製し得る。ヘテロミエローマＢ６Ｂ１１の具体的な作製及び適用について、本明細書の以下に記述されている。前記マウスのＨＡＴ−感受性及びＧ−４１８耐性ミエローマ  Ｘ６３．Ａｇ８．６５３とラムダ軽鎖を分泌しないことに関して選択されたヒトミエローマＲＰＭＩ  ８２２６のサブクローンとを融合してＢ６Ｂ１１を得た。ヒト脾細胞とＢ６Ｂ１１細胞を融合すると、１０７個の細胞に対して３０〜５０のハイブリッドの融合頻度となった。これは、マウスのハイブリドーマ形成の頻度に類似している。前記ハイブリッドは、限界希釈で容易にクローニングされ、少なくとも１０ヶ月間抗体を産生して、無血清培地で増殖する。グラム陰性菌のリポ多糖（ＬＰＳ）に対して反応するヒト  ＩｇＭを分泌する２個のクローンを得た。前記クローンは、免疫化したヒト脾細胞をインビトロで前記Ｂ６Ｂ１１細胞と融合させることによって得た。抗リピドＡマウス  ｍＡｂは、敗血症ショックの発生を予防することが知られている（Ｓｈｎｙｒａ ＡＡら、１９９０年）。ヒト  ｍＡｂには重要な臨床適用がある。
【０５４８】
結果
ヘテロミエローマＢ６Ｂ１１。ヘテロミエローマＢ６Ｂ１１は、マウスのミエローマ６５３（ＨＡＴ感受性、Ｇ−４１８）とヒトのＲＰＭＩ  ８２２６のＰＥＧ−融合によって産生され、ラムダ鎖を分泌しないものを選択した。ＨＡＴ及びＧ−４１８の存在下で、ハイブリッドを選択した。２．５〜３週間にわたって２μｇ／ｍｌから２０μｇ／ｍｌへと８−Ａｇ濃度を徐々に増加させることによって、８−Ａｇの耐性に関する選択を行った。前記ＨＡＴ感受性ハイブリッド集団６５３ｘ８２２６を２度クローン化した。ヒトリンパ球とハイブリッドを生じる能力についてクローンを検査した。Ｂ６Ｂ１１と名づけられた１つのクローンを選択した。Ｂ６Ｂ１１細胞は、５〜６日の間に、アミノプテリンを含有する培地で死滅し、１８ヶ月以上の間、復帰突然変異体は検出されなかった。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を追加したＲＰＭＩ１６４０中で、前記株は、約２５〜３０時間の倍加時間を有し、７５ｃｍ２ フラスコ中での最大密度は、約１．５ｘ１０６細胞／ｍｌ（３０ｍｌの容量）であった。ウサギの抗ヒト免疫グロブリンを使用して固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって、ヒトの免疫グロブリンの存在についてＢ６Ｂ１１培地を検査した。Ｂ６Ｂ１１は、ＩｇＧ、ＩｇＭ又はＩｇＡの分泌を示した。ＰＡＰ法によってＭＡＨ−Ｌ、Ｈを用いて前記細胞調製物を染色したが、細胞質の軽鎖及び重鎖のヒト免疫グロブリンの痕跡は検出されなかった。
【０５４９】
核型分析．図１は、染色体含量による親細胞及びＢ６Ｂ１１細胞の分布を示している。前記ヘテロミエローマ細胞の染色体分析は、染色体数が６０から８２の間で変動することを示した。
【０５５０】
図２は、Ｂ６Ｂ１１細胞のＧバンド核型の断片を示す。正常なマウスの染色体は、約８４％の前記核型を構成する。再編成された染色体が幾つか存在する。再編成されたヘテロミエローマ（ヒト−マウスキメラ）染色体の他に、マウスのミエローマ染色体のマーカーが幾つか存在する。大きな末端動原体型染色体が１つ、検査した全てのＢ６Ｂ１１中期板に現れた。このことは、この染色体の基部がマウスの３番染色体の遺伝物質、末端部がヒトの３番染色体の遺伝物質を含むことを示唆した（３ｐ２１．１−３ｐ  ｔｅｒ）。ヒトの物質の分布を記述のとおり（３３）決定した。分析したＢ６Ｂ１１の中には、ヒト細胞の１９番染色体及びヒトの７番染色体が欠失したものが存在した。
【０５５１】
ヒトのリンパ球とＢ６Ｂ１１細胞の融合。
単離したばかりの末梢血リンパ球（ＰＢＬ）及び脾リンパ球（ＳＰＬ）とＢ６Ｂ１１細胞の融合を、以下の本明細書の実験操作の部に記述したとおりに行った。末梢血リンパ球（ＰＢＬ）及びアメリカヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）末梢血リンパ球（ＰＢＬ）処理したと融合するとハイブリドーマ収率は低かったが（１０７のリンパ球に対して１〜５ハイブリッド）、脾リンパ球（ＳＰＬ）及びアメリカヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）処理した脾リンパ球（ＳＰＬ）と融合すると１０７細胞に対して３０〜６０ハイブリッドが得られた（表１参照）。前記融合後、１ウェルにつき１．５ｘ１０５細胞の密度で細胞を播種した。１：１〜１：２の細胞比率の変動（ヘテロミエローマ：リンパ球）は、ＰＢＬ又はＳＰＬの融合効率に影響を及ぼさなかった。しかし、リンパ球の比率が１：４〜１：８のＢ６Ｂ１１では、融合効率が劇的に減少した。
【０５５２】
表１  Ｂ６Ｂ１１細胞とヒトリンパ球の融合
【表１】
2004518630.tif 000002
【０５５３】
図３には、様々なマイトジェンによる脾細胞の刺激が融合効率に及ぼす影響が示されている。ＰＷＭ処理によって、ＣｏｎＡ処理、ＰＨＡ処理、ＬＰＳ処理又は未処理のＳＰＬと比較して、ＳＰＬハイブリダイゼーションの効率が有意に増加した。融合効率は前記ＨＡＴ添加の時期に左右された。融合直後にＨＡＴを添加した時に、該収率は、１０７のリンパ球につき１０〜１５のハイブリッドに減少した（ＳＰＬの場合）。
【０５５４】
ＳＰＬ及びＰＢＬとのハイブリッドのクローニング（刺激及び非刺激）は、ＰＢＬをハイブリドーマ形成に使用できなかったことを示した。５０％上皮馴化培地（ＥＣＭ）（９６ウェルのプレート中、２４時間３７℃でプレインキュベートした）及び１５％ＦＣＳを含有する５０％のＲＰＭＩ１６４０中で融合後に、クローニングを４〜６週間行った。２〜２．５週間の時点で結果を測定した。クローニング効率（１ウェルにつき１．５〜２細胞）は、ＳＰＬで５０〜８０％、ＰＢＬで１０〜３０％であった。ウサギの抗ヒト免疫グロブリン及びＭＡＨ−Ｌ、Ｈを用いたＥＬＩＳＡによって、ＰＢＬとの増殖ハイブリッドの９０〜９５％及びＳＰＬハイブリドーマとの８０〜８５％に、産生された免疫グロブリンの総てが存在することを示した。ＳＰＬに基づいて、ＰＷＭ刺激及びインビトロ免疫化に関して選択した。
【０５５５】
ハイブリダイゼーションの効率を増加させるために、２．５ｍＭのＬｅｕ−Ｏｍｅで脾細胞を処理し、１：１又は１：２（Ｂ６Ｂ１１：ＳＰＬ）の比率でＢ６Ｂ１１細胞と融合した（表２参照）。ＰＷＭとともに１８〜２４時間培養した後に、この処理の効果が明白となった。一方、Ｌｅｕ−Ｏｍｅ処理をしなかったＳＰＬは、３日後になって初めて芽細胞を生じた。Ｌｅｕ−Ｏｍｅ処理したＳＰＬのハイブリダイゼーション効率（８０％）は、非処理のＳＰＬ（７２％）と比較してやや高かった。この処理によって、Ｉｇ分泌ハイブリッドの数が著しく増加した（９３％）。
【０５５６】
表２  脾細胞のＬｅｕ−Ｏｍｅ処理が脾細胞のＢ６Ｂ１１細胞とのハイブリダイゼーションの効率に及ぼす効果（３つの脾臓から得られたデータ）
【表２】
2004518630.tif 000003
【０５５７】
ＰＷＭ及びマウスの胸腺細胞馴化培地（ＴＣＭ）の存在下で、サルモネラミネソタＲｅ５９５（Ｒｅ５９５）で免疫化したＬｅｕ−Ｏｍｅ処理脾細胞とヘテロミエローマ細胞を融合した（表３）。ハイブリッドの増殖の様々な段階（（１）反応を示した集団を２４ウェルのプレートに移した後、（２）クローニング及びその後のクローン増殖後）に、抗細菌抗体に関して前記ハイブリドーマの培養上清を検査した。抗細菌抗体を産生する２つの独立したクローンを選択した。固定化リポ多糖（ＬＰＳ）又は溶液中の固定化Ｒｅ５９５及びＬＰＳを用いたＥＬＩＳＡによって、両クローンによって産生された抗体がＬＰＳと反応することが明らかとなった。
【０５５８】
固定化Ｒｅ５９５モノクローナルマウス抗ヒトアイソタイプ及び、ヒト免疫グロブリンを吸収させたヤギの抗マウスペルオキシダーゼ抱合体を用いたＥＬＩＳＡによって、前記抗体のアイソタイプがＩｇＭ−カッパであることが決定された。１０％のＦＣＳを含有する増殖培地と徐々に置き換えることによって、無血清培地（ＳＦＭ）に両クローンを適応させた。ＳＦＭ中で培養したときの最大密度は約１．２ｘ１０６細胞／ｍｌであった。ＳＦＭに適応させた細胞を上記どおりにクローン化した。前記効率及びクローニング時間は、血清を追加したＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した前記細胞のものと類似していた。
【０５５９】
表３  インビトロで免疫化した脾細胞１とＢ６Ｂ１１細胞の融合
【表３】
2004518630.tif 000004
【０５６０】
ＤＮＡ分析．図４は、親細胞株、Ｂ６Ｂ１１ヘテロミエローマ及びＢ６Ｂ１１脾細胞のハイブリッドによるＤＮＡ含量の分布を示している。ヘテロミエローマ細胞のＤＮＡは、全親ＤＮＡの７８．７％からなる。Ｂ６Ｂ１１脾細胞のハイブリッド細胞のＤＮＡ含有量は、Ｂ６Ｂ１１細胞よりも３％多い。
【０５６１】
考察
ヒトモノクローナル抗体産生用のパートナー細胞株は、マウスのＸ６３．Ａｇ８．６５３及びヒトのＲＰＭＩ  １６４０ミエローマ細胞の体細胞ハイブリダイゼーションによって産生された。８−Ａｇ培地への適応、ハイブリダイゼーション効率によるその後のクローニング及び選択によって、Ｂ６Ｂ１１と名づけられたヘテロハイブリッドクローンが得られた。ヘテロハイブリッド株とリンパ球との融合で、産生能を有する実質的に安定なハイブリッドが得られる（Ｒａｉｓｏｎ  ＲＬら、１９８２年）。この現象の基礎を成すメカニズムは不明である。最初の融合後に前記パートナー株の中に保持されたヒト染色体又はそれらの断片が細胞内の環境を改変されて、二度目の融合後に前記ヒトのリンパ球染色体又は断片が安定化されることが示唆されている（Ｏｅｓｔｂｅｒｇ  ＬとＰｕｒｓｃｈ  Ｅ．、１９８３年）。多数の染色体、ハイブリッドマーカー染色体の存在、及びＤＮＡ含量の増加が、本明細書に記載した実験で観察され、Ｂ６Ｂ１１細胞がハイブリッドの性質を有していることが確認された。Ｂ６Ｂ１１−ＳＰＬ  ハイブリッド細胞のＤＮＡ含有量も増加した。細胞内の重鎖及び軽鎖の免疫細胞化学検査及び免疫グロブリン分泌に関するＥＬＩＳＡ法で、Ｂ６Ｂ１１細胞が、免疫グロブリンも重鎖及び軽鎖も産生しないことを立証した。Ｂ６Ｂ１１をＰＢＬと融合させるよりも、ＳＰＬと融合させるほうがより多くのハイブリッドを産生した（１〜５／１０７ＰＢＬ対して、３０〜５０／１０７のＳＰＬ化合物）。ＳＰＬとのクローニング効率は５０〜８０％に対して、ＰＢＬでは１０〜３０％であった。従って、融合に関してはＳＰＬの方が好ましいパートナーであった。内皮細胞によって培地を馴化したが、このことは前記ハイブリッドの生存度及びクローン原性にとって極めて重要であると思われた。Ｂ６Ｂ１１−ＰＢＬハイブリッドの場合には、前記ハイブリッドの最大９５％に免疫グロブリン分泌が検出された。ＳＰＬ（最大９３％）との融合後、免疫グロブリン分泌ハイブリッドの収率を増加させるために、Ｌｅｕ−Ｏｍｅを使用した。ほぼ全てのハイブリッドが未知の特異性を有する抗体を分泌した。Ｂ６Ｂ１１ハイブリッドによる前記抗体産生は少なくとも１０ヶ月間は安定していた。前記ハイブリッドは容易に無血清培地に適合することによって、エクスビボの抗体産生を促進した。
【０５６２】
免疫化したＳＰＬをＢ６Ｂ１１細胞と融合した後に、２個の抗体産生クローン（サルモネラミネソタＲＥ５９５のＬＰＳに対して恐らく同様の特異性を有する）が得られた。本明細書で立証されているように、ヒト−マウスのヘテロミエローマＢ６Ｂ１１は、様々な抗原に対するヒトモノクローナル抗体を産生するのに有用である。リンパ球をインビトロで適切に感作することも、ヒト抗体の産生に非常に重要である。
【０５６３】
実験操作
細胞培養．  ８−アザグアニン（８−Ａｇ）耐性マウスのミエローマＸ６３．ＡＧ８．  ６５３（６５３）細胞に、以下に記載されているように、プラスミド  ｐＢｇｌ−ｎｅｏＲ（Ｄｒ．  Ａ  Ｉｂｒａｇｉｍｏｖ）をトランスフェクトした。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、４ｍＭのＬ−グルタミン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、可欠アミノ酸及びビタミン（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を追加したＤＭＥＭ培地中で、前記ミエローマ細胞を維持した。融合前に、２０μｇ／ｍｌの８−Ａｇ（Ｓｉｇｍａ）及び５００μｇ／ｍｌのＧ−４１８（Ｇｉｂｃｏ）の存在下で前記細胞を三度継代した。
【０５６４】
上述の添加物を補充したＲＰＭＩ  １６４０培地（レギュラーＲＰＭＩ  １６４０）中で、ヒトミエローマ細胞株ＲＰＭＩ  ８２２６（８２２６）を培養した。１０％ＦＣＳを加えたレギュラーＲＰＭＩ  １６４０又は無血清培地中で、前記ハイブリッドヘテロミエローマＢ６Ｂ１１を培養した。この無血清培地は、Ｉｓｃｏｖｅの改変Ｄｕｌｂｅｃｃｏ培地（ＩＭＤＭ）と、２ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン画分＃５（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ）、５μｇ／ｍｌのウシインスリン（Ｓｅｒｖａ）、５μｇ／ｍｌのヒトトランスフェリン（Ｓｉｇｍａ）、６ｎｇ／ｍｌのプロゲステロン（Ｇｉｂｃｏ）、６０ｎｇ／ｍｌのヒドロコルチゾン（Ｇｉｂｃｏ）を追加したＨＡＭ  Ｆ−１２（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）との１：１混合物であった。１０％ＦＣＳを含有する増殖培地と徐々に交換することによって、この無血清培地（ＳＦＭ）にハイブリドーマを適応させた。５．５％のＣ０２／９４．５％の空気の加湿雰囲気中、３７℃で全細胞を培養した。
【０５６５】
製造業者の指示通りに、リンパ球分画培地（ＬＳＭ）（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、ヒトの末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を単離した。死後２時間以内の剖検で収集した脾臓（５０〜６０歳の男性）をホモジナイズし、脾細胞（ＳＰＬ）をＬＳＭ中で単離した。
【０５６６】
ジェネティシン（Ｇ−４１８）耐性６５３  ミエローマ  細胞の産生。
【０５６７】
Ｃａ＋＋  又はＭｇ＋＋を有しない無菌リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で細胞を洗浄した。ＢａｍＨｌによって直鎖化したｐＢｇｌ−ｎｅｏＲプラスミドＤＮＡ（Ｐ．  Ｃｈｕｍａｋｏｖ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＳＲ、Ｍｏｓｃｏｗ、ＵＳＳＲ）が作製）を前記細胞懸濁液に添加した。前記細胞懸濁液にＤＮＡを添加する前に、４℃でフェノールエーテルを使用して、前記ＤＮＡを２度フェノール抽出し、９６％エタノール沈殿を行い、無菌状態下で乾燥した。
【０５６８】
Ｌ．  Ｃｈｅｒｎｏｍｏｒｄｉｋ  （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＳＲ，  Ｍｏｓｃｏｗ，  ＵＳＳＲ）が作製したユニットを使用して、４℃で、エレクトロポレーションによってトランスフェクションを行った。８０μｌのエレクトロポレーション容器中で、約４Ｘ１０６の６５３ミエローマ細胞と３．５μｇのプラスミドＤＮＡを併せた。ＤＮＡの前記最終濃度は４４μｇ／ｍｌであった）。１．７Ｋｖ／ｃｍの電流インパルスを、１００μ秒間、前記容器に流した。１０分間の休止後に、５Ｘ１０３及び２Ｘ１０４細胞／ウェルで、１６  ｍｍ２ウェル中の完全培地０．５ｍｌに前記細胞を移した。３６時間後に、１ｍｇ／ｍｌのジェネティシン（Ｇ−４１８）を含有する０．５ｍｌの培地を、最終濃度０．５ｍｇ／ｍｌになるように添加した。続いて、前記培地の容量の５０％を、１２日間、２日ごとに交換した。
【０５６９】
ヘテロミエローマの産生．  Ｇ−４１８耐性６５３  細胞を１：１の比率で、８２２６  細胞と混合し、ペレット状にした。常に撹拌しながら５０％（Ｖ／Ｖ）ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）３３５０（Ｓｉｇｍａ）を１分間添加した（４−５Ｘ１０７細胞につき２００〜３００μｌ）。無血清ＲＰＭＩ  １６４０（ＲＰＭＩ−Ｓ−）を５分間（最初の１０ｍｌ）、１分間（１０ｍｌ）及び１分間（３０ｍｌ）添加した。細胞をペレット状にし、２０％  ＦＣＳ、ヒポキサンチン（１Ｘ１０４Ｍ）、アミノプテリン（４Ｘ１０７Ｍ）、チミジン（１、６ｘ１０５Ｍ）（ＨＡＴ、Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）及び５００  μｇ／ｍｌのＧ−４１８を加えたレギュラーＲＰＭＩ  １６４０中に再懸濁して、１ウェルにつき１０５細胞の密度で９６ウェルのプレート（Ｌｉｎｂｒｏ）中に播種した。２週間の時点で、前記培地（１／２容量）を、ヒポキサンチン（２Ｘ１０４Ｍ）、チミジン（３．２ｘ１０５Ｍ）（ＨＴ、Ｆｌｏｗ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）及びＧ−４１８（５００μｇ／ｍｌ）を含有する培地と交換した。前記処置を２週間後に繰り返した。
【０５７０】
ヒトモノクローナル抗体の産生。上記の方法に以下のように改変を加えて、ヒトリンパ球とＢ６Ｂ１１細胞を融合した。１：１又は１：２の比率で、リンパ球をＢ６Ｂ１１と混ぜ合わせ、ペレット状にして、ＲＰＭＩ  １６４０−Ｓ−で洗浄し、常に撹拌しながらＰＥＧ（１０５細胞につき６００μｌ）とともに３分間インキュベートした。添加したＲＰＭＩ−Ｓ−の一部は以下のとおりであった：１０ｍｌ／１０分，１０ｍｌ／１０５分，  １０ｍｌ／１分。細胞をペレット状にして、１５％ＦＣＳを追加したレギュラーＲＰＭＩ中に再懸濁して９６ウェルのプレート中に播種した（１ウェルにつき１．５ｘ１０５細胞）。２４時間後にＨＡＴ培地を添加した。前記増殖培地（１／２容量）を、７〜９日で新しいＨＡＴと交換した。１５〜１８日の時点でＨＡＴ培地をＨＴ培地と交換した。
【０５７１】
クローニング．ヒトの臍帯又は大動脈の内皮細胞によって馴化した培地中で、限界希釈方法によって親ヘテロミエローマ及びハイブリドーマ細胞をクローン化した（Ａｎｔｏｎｏｖ  ＡＳら、１９８６年）（Ｄｒ．  Ａ．  Ａｎｔｏｎｏｖから贈与）（ＥＣＭ）。９６ウェルのプレート中で、１００μｌ／ウェルを１晩３７℃でインキュベートした。１ウェルにつき約１〜２個の細胞を植え付けた。前記培地の抗体の検査を、２．５〜３週間で行った。
【０５７２】
インビトロで免疫化．２．５ｍＭのＬロイシンメチルエステル（Ｌｅｕ−ＯＭｅ）（Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，  ＣＡＫら、１９８７年）を含むＲＰＭＩ−Ｓ−中に、１ｍｌにつき１０７細胞の最終濃度になるように、単離した直後のリンパ球を再懸濁した。４０分の室温でインキュベーションした後、細胞をＲＰＭＩ−Ｓ−で３度洗浄して、１５％  ＦＣＳを追加したレギュラーＲＰＭＩ  １６４０中に再懸濁した。マウスの胸腺細胞（ＴＣＭ）によって馴化した培地を、リンホカインの源として使用した（Ｒｅａｄｉｎｇ  ＣＬ．、１９８２年）。最終濃度５μｇ／ｍｌのアメリカヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）（Ｆｌｏｗ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＴＣＭ（２５％）、及び様々な濃度の抗原を、前記細胞懸濁液に添加した。前記細胞懸濁液（４−６Ｘ１０６細胞／ｍｌ）をフラスコ（３０ｍｌ／７５ｃｍ２のフラスコ）に移した。培養の７〜９日後に融合を行った。ＰＷＭの代わりに、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）（Ｆｌｏｗ、５〜１０μｇ／ｍｌ）、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）（Ｆｌｏｗ、５〜１０μｇ／ｍｌ）及びリポ多糖（ＬＰＳ）（ＳＩＧＭＡ、１０〜１５μｇ／ｍｌ）を使用した。サルモネラミネソタＲｅ５９５（Ｄｒ．  Ｏ．  Ｌｕｄｅｒｉｔｚ、Ｍａｘ  Ｐｌａｎｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｆｕｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｅ、Ｆｅｉｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙから贈与）を、抗原として使用した。１６ｇ／ｌのトリプシン大豆ブイヨン（ＴＳＢ）、Ｄｉｆｃｏ）、１６ｇ／ｌの脳心臓輸液（ＢＨＩ）（Ｄｉｆｃｏ）、及び４ｇ／ｌの酵母エキス（ＹＥ）（ＤＩＦＣＯ）を含む培地中にて、前記細菌を３７℃で１８時間、常に撹拌しながら増殖させた後に、熱で不活化した。前記抗原濃度は、１０７〜１０１０細胞／ｍｌの間を変動した。
【０５７３】
抗体及び非特異的Ｉｇ産生の測定。
サルモネラミネソタＲｅ５９５及びＬＰＳに対する抗体の存在に関し、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）を用いてハイブリドーマ上清を検査した。
【０５７４】
細菌に対して反応性を有するｍＡｂｓのスクリーニング。
室温で２時間、グルタルアルデヒド（１％、１００μｌ／ウェル）で９６ウェルのプレートを覆った。前記プレートを蒸留水で３度洗浄した。５０ｍＭの炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ９．６）中に細胞を再懸濁して、プレートに移し（ウェル当たり１００μの中にｌ５Ｘ１０７細胞）、７８０ｘｇで３０分間遠心分離して蒸留水で４度洗浄した。検査した前記上清（１００μｌ）に０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０（Ｆｌｕｋａ）を追加して、細菌を含有するウェルに入れ、室温で１時間、インキュベートした。その後、前記培地を取り出して、前記ウェルを蒸留水で洗浄した。０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含有するトリス緩衝液（ＴＢＳ、５０ｍＭ、ｐＨ  ７．４）中に希釈された、アフィニティ精製したアルカリホスファターゼ（ＲＡＨ−ＡＰ）抱合ウサギ抗ヒト免疫グロブリンを、ウェル当たり１００μｌ中に１μｇになるように添加した。室温で１時間インキュベートし、蒸留水で６度洗浄した後に、ジエタノールアミン緩衝液（１０％  ジエタノールアミン、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ  ９．８）中の４−ニトロフェニル−リン酸塩１００μｌ（１ｍｇ／ｍｌ，Ｓｉｇｍａ）を添加した。１時間後に、４０５ｎｍのＭｕｌｔｉｓｃａｎ（Ｆｌｏｗ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して結果を読み取った。負の対照群は、１５％のＦＣＳを追加した培地ＲＰＭＩ  １６４０であった。
【０５７５】
リポ多糖に対して反応するｍＡｂｓのスクリーニング．  記述どおりに（Ｇａｌａｎｏｓ  Ｇら、１９６９年）、ＬＰＳをサルモネラミネソタＲｅ５９５から精製した。ＬＰＳ調製物を超音波処理して、５ｍＭの炭酸アンモニウムバッファー（ｐＨ  ９．６）中に、２．５μｇ／ウェルでプレートに移した。室温で一晩中インキュベートした後に、細菌に対して反応するｍＡｂを決定するために上記の処置を行った。
【０５７６】
ｍＡｂｓの非特異的産生のスクリーニング。１００μｌのウサギの抗ヒト免疫グロブリン（リン酸緩衝液、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍｌ、ｐＨ  ７．２）又は１００μｌ／ウェル（ＰＢＳ中１０ｎｇ／ｍｌ）のマウスモノクローナル抗体をヒト免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖（ＭＡＨ−Ｌ，  Ｈ）（Ｒｏｋｈｌｉｎ  ＯＶ、１９８９年）（Ｏ．  Ｒｏｃｈｌｉｎから贈与、ＣＲＣ、Ｍｏｓｃｏｗ）  に添加した後、免疫グロブリン及びそれぞれの鎖の非特異的産生を評価した。その後の処置は記述どおりに行った。
分泌抗体のアイソタイプの決定。
ペルオキシダーゼを結合させてヒト免疫グロブリンで吸収させたマウス抗ヒト軽鎖及び重鎖（ＭＡＨ−Ｌ，  Ｈ）及びヤギの抗マウス免疫グロブリン（２５  μｇ／ｍｌ）を使用して、ヒト抗体のアイソタイプをＥＬＩＳＡによって決定した。
【０５７７】
細胞質の軽鎖又は重鎖の産生の測定。
ペルオキシダーゼ抗ペルオキシダーゼ複合体系（ＰＡＰ）を使用して、ハイブリドーマ、Ｂ６Ｂ１１、及び前記親細胞株中での細胞質の軽鎖及び／又  重鎖の産生を免疫細胞化学的に評価した。細胞の塗末標本を風乾し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ、１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ６．６）中で１０％ホルムアルデヒド（ｖ／ｖ）及び４５％アセトン（ｖ／ｖ）で４５秒間固定して、ＭＡＨ−Ｌ、Ｈ（２００μｌ、５〜１０ｍｇ／ｍｌ）とともにインキュベートした。その後、１ｍｌのウサギ抗マウス免疫グロブリン（ＰＢＳ中３８ｍｇ／ｍｌ）を添加した。インキュベーション全ては３０分であった。ＰＢＳを使用して１０分間、洗浄した。
【０５７８】
染色体分析。
以下の技法によって、中期の染色体の調製物を得た。指数関数増殖期（親細胞株及びＢ６Ｂ１１細胞へ１．５〜２時間）期の細胞にコルヒチンを添加した。その後、細胞をトリプシン処理して、記述どおりにＧバンドを染色した（Ｓｅａｂｒｉｇｈｔ  Ｓ．、１９７１年）（各株から１０〜１５プレート）。染色体数を数えるために、各細胞株につき少なくとも５０の中期標本を分析した。
【０５７９】
フローサイトメトリーによるＤＮＡ分析．  ＤＮＡ含量を評価するために、前記細胞（１Ｘ１０６）を７０％エタノール１ｍｌで固定して、洗浄し、ハンクス液（ｐＨ７．４）中の０．３ｍｇ／ｍｌのリボヌクレアーゼＡ（Ｓｅｒｖａ）とともに２〜３時間インキュベートして、プロピジウムヨウ化物（０．０５ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ）で２時間染色した。前記ＤＮＡ含量をＦＡＣＳ−ＩＩ細胞蛍光測定法（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で測定した。４００ｍＷの出力で４８８ｎｍのアルゴンイオンレーザー（１６４−０５  Ｍｏｄｅｌ，  Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｐｈｙｓｉｃｓ）によって蛍光を励起し、６００ｎｍのロングパス干渉フィルタ（Ｄｉｔｒｉｃ  Ｏｐｔｉｃａ）の背後で記録した。
【０５８０】
親株。１０  ＦＣＳ、  ２０ｎｇ／ｍｌの８−アザグアニン、及び５００μｇ／ｍｌのＧ−４１８を追加したＤＭＥＭ中に、ミエローマ株６５３を維持した。１０％  ＦＣＳを含むＲＰＭＩ−Ｃ中で、ヒトＩｇのラムダ鎖を産生する前記ミエローマ系８２２６を培養した。ヘテロミエローマを作製するために、ＥＣＭ中でのクローニングによって、８２２６系の非産生クローンを選択した（１ウェルにつき２細胞）。ＭＡＨ−Ｌ，  Ｈを使用して、ラムダ鎖の産生を２〜２．５週の時点で評価した。非分泌クローンの頻度は１ｘ１０−３であった。
【０５８１】
例２：トリオーマ  ＭＦＰ−２、ヒトモノクローナル抗体産生のための融合パートナー
序
８−アザグアニン（８−Ａｇ）及びジェネティシン４１８（Ｇ−４１８）の両者に耐性のある市販のヒトミエローマ細胞株ＲＰＭＩ  ８２２６及びマウスミエローマ  Ｘ６３．  Ａｇ８．６５３のハイブリダイゼーションによって、前駆体ハイブリドーマ細胞株を得た。得られたクローンのうち１つＢ６Ｂ１１を、Ｇ−４１８の存在下で選択した。濃度が増加した８＝Ａｇの存在下でＢ６Ｂ１１を増殖させ、Ｇ−４１８及び８−Ａｇの両者に耐性がある（例１参照）。
【０５８２】
ヒトのリンパ節由来のリンパ球又は脾臓由来のリンパ球と融合させることによってヒトハイブリドーマを作るためにＢ６Ｂ１１を使用することができるが、Ｂ６Ｂ１１は、ヒト末梢血リンパ球（ＰＢＬ）と融合できないか、又は極めて低いハイブリッド収率を与えた（例１参照）。
【０５８３】
この問題を克服するために、Ｂ６Ｂ１１をヒトリンパ節のリンパ球と融合して、幾つかのハイブリッドを得た。ヒト免疫グロブリンの産生又はそれぞれの免疫グロブリン鎖の産生について、得られた前記細胞を分析した。融合能力及び抗体分泌能についてさらに評価するために、免疫グロブリンも免疫グロブリン鎖も合成しなかった前記クローンを選択した。これらのハイブリッドは非常に安定していることが明らかとなった。これらの融合生成物を「改変融合パートナー」（ＭＦＰ）細胞と名づけた。前記Ｂ６Ｂ１１ハイブリドーマとリンパ球との融合生成物であるこれらのＭＦＰ細胞は、実際には３つの融合細胞の産物であるので、本明細書では「トリオーマ」細胞と呼ぶ。前記クローンのうちの１つＭＦＰ−２は、あらゆる多様な起源（すなわち、リンパ節、脾臓、パイエル板等）のヒトリンパ球との融合だけではなく、末梢血リンパ球との融合に対しても極めて高い効率を示した。ＭＦＰ−２の優れた特性と安定性に基づいて、ＭＦＰ−２を融合パートナーとして選択し、本明細書の以下に記述した実験で使用した。
【０５８４】
前記ＭＦＰ  トリオーマ細胞とリンパ球の融合生成物は、本質的に４つの融合細胞の生成物であるので、本明細書では「テトローマ」細胞と呼ぶ。
【０５８５】
結果
免疫グロブリン産生。ヒトハイブリドーマ（トリオーマ）の融合パートナー細胞株ＭＦＰ−２が、ヒトのリンパ球と融合し、安定して免疫グロブリンを産生する高収率のハイブリッドを産生できることを立証するために、様々な源からのヒトリンパ球を使用して実験を行った。
【０５８６】
ヘテロミエローマ細胞株、Ｂ６Ｂ１１（ＭＦＰ−２の前駆体）は、高い効率でリンパ節及び脾臓のリンパ球と融合することができる（例１参照）。生じたハイブリッドの最大９０％が、ＩｇＧ又は  ＩｇＭを産生した。しかし、Ｂ６Ｂ１１は末梢血由来のリンパ球（ＰＢＬｓ）とは融合できなかった。前記トリオーマ細胞株ＭＦＰ−２（Ｂ６Ｂ１１とヒトリンパ節のリンパ球が融合して生じた）は、この課題を克服してＰＢＬとの高い融合効率を示し、生じたテトローマハイブリッドによる高い免疫グロブリン産生率をもたらした。ＭＦＰ−２のＰＢＬとの融合能を２つの方法で検査した。：（１）単離した直後のリンパ球と懸濁液中で融合させる、及び（２）様々な期間にわたって冷凍保存していたリンパ球を解凍して融合させる（実験操作を参照）。これらの実験の結果を図５に示す。
【０５８７】
融合効率は１０５であった（１０５リンパ球につき１ハイブリッド）。３０の初代ハイブリドーマ（テトローマ）集団を得て、免疫グロブリンを分泌する能力を分析した（初代ハイブリドーマ集団は、２以上の単独クローンの混合物である可能性が高い）。２７の集団（９０％）は、バックグラウンドの５倍を超えるレベルでＩｇＭを産生した。２４の集団（８０％）は、バックグラウンドの５倍を超えるレベルでＩｇＥを分泌した。ＭＦＰ−２を凍結融解したリンパ球懸濁液と融合させても、免疫グロブリン産生ハイブリッドが得られた。これらのハイブリドーマ集団の１９％及び１１％が、それぞれヒトＩｇＭ及びＩｇＧを産生した。融合効率そのものは、凍結融解処置によって影響を受けなかった。抗体を産生できるヒトハイブリドーマを産生するために冷凍ＰＢＬｓ及び単離直後のＰＢＬｓを使用できることを、これらの結果は実証している。
【０５８８】
腫瘍関連抗原の同定及びＭＦＰ−２融合パートナーを使用した特異的な抗体の産生：チログロブリンに対するヒトモノクローナル抗体
【０５８９】
この実験では、甲状腺腺癌と診断された患者のリンパ節を使用して、ヒトの抗チログロブリン抗体をＭＦＰ−２融合によって作製した。女性の甲状腺癌患者のリンパ節切除手術中に鎖骨周辺のリンパ節を切除し、リンパ球を単離してＭＦＰ−２と融合し、テトローマ細胞を得た。
【０５９０】
固層酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、チログロブリンに対して反応するヒト抗体産生について、得られたハイブリドーマ（テトローマ）を検査した。精製したヒトのチログロブリンを使用して、マイクロタイタープレートをコーディングした。結果を図６に示す。１４４のテトローマのうち３３はチログロブリン抗原に対する反応を示した。これらのうち８は特に強かった（図６参照）。このように、この甲状腺癌の患者のリンパ節由来のテトローマは、抗チログロブリン抗体を産生していた。この患者は自己免疫（すなわち抗甲状腺抗体）疾患の病歴がなかったので、これは予想外の驚くべき結果であった。このことは、この患者の中で産生されたチログロブリンに対する抗体が、癌性の甲状腺腺癌細胞の存在によって誘発されたことを示唆している。癌性の甲状腺腺癌細胞はチログロブリンを分泌することが知られている。腫瘍関連抗原に対する体液性免疫反応を腫瘍細胞が誘発し得ること、及びヒト抗腫瘍モノクローナル抗体を産生するために、前記ＭＦＰ−２融合パートナーを用い、本明細書に記述の技術を通じて抗体産生細胞を同定し、不死化できることをこの実験は実証している。
【０５９１】
乳癌関連抗原に対するヒトモノクローナル抗体の産生。
別の実験では、乳癌患者からのリンパ節及び末梢血リンパ球を使用して、癌関連抗原に対するヒトモノクローナル抗体を産生した。乳房切除術又は乳腺腫瘤摘出術を受けた乳癌患者から、腋窩リンパ節を切除した。これらのリンパ節から単離したリンパ球をＭＦＰ−２と融合させ、得られたテトローマを乳癌細胞株のＭＣＦ７、ＳＫ−ＢＲ−３、ＺＲ−７５−１に対してスクリーニングした。ほぼ全てのテトローマがＩｇＧ又はＩｇＭを産生していた（それぞれ、約８５％及び１０％）。驚くべきことに、乳癌細胞株に対してアッセイを行ったテトローマのほぼ１５％が、癌細胞に対する特異的な抗体を産生した。テトローマ上清を二通りの方法：（１）生きている細胞に対してＣＥＬＩＳＡ  法（細胞のＥＬＩＳＡ）、及び（２）細胞ライセートを用いたウェスタンブロット法で検査した。ヒトモノクローナル抗体によって認識される特異的抗原の分子量は２５〜１６０ｋＤＡであった。抗原標的の性質を描出するために、免疫沈降後にミクロシークエンシングを行う。さらに、ランダムペプチドコンビナトリアルライブラリーを使用して、癌特異抗体の分子標的を同定する。
【０５９２】
第ＩＶ期の乳癌患者１名では、リンパ節を入手できなかったので、ＰＢＬｓをＭＦＰ−２と融合して１５６のテトローマを得た。免疫グロブリン産生及び癌特異抗体産生について、前記テトローマを分析した。２８のテトローマによってＩｇＭが産生された。８７のテトローマがＩｇＧを産生した。前記ＩｇＭ抗体のうち４つ及び前記ＩｇＧ抗体の７つが、細胞抗原に対して反応性を有するとして同定された。３つのＩｇＭ抗体及び４つのＩｇＧ抗体が、乳癌細胞に対して特異的であった。前記テトローマの残りは、ヒトの前立腺癌細胞株、ヒトの２倍体線維芽細胞及びヒトの皮膚線維芽細胞等のその他の細胞種に対して免疫反応性を示した。これら後者の抗体は、恐らく、共通の抗原（正常細胞と癌細胞に共通）に対する抗体であった。
【０５９３】
患者の免疫系に抑制効果を及ぼすはずであると考えられていた７７サイクルの化学療法を受けた患者の血液から、ＰＢＬｓを単離した。しかしながら、この患者は、ＭＦＰ−２との融合に適した抗癌抗体をなお産生した。
【０５９４】
ＭＦＰ−２と前立腺癌のリンパ球の融合から産生されたヒトテトローマを、ＰＳＡ−特異抗体及び前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰ、ＤＵ−１４５及びＰＣ−３に対する抗体の存在について検査した。
【０５９５】
感染症関連抗原に対するヒトの抗体の産生。
一般に、感染症には、十分に発達した体液及び細胞の免疫応答が伴う。ある種の感染症患者は、多数の特異抗体産生細胞が有していることが多い。本発明に記載した前記抗体免疫療法の重要な応用の一つは、敗血症ショックに関係する炎症誘発性サイトカインに対するヒトモノクローナル抗体の産生である。これらの標的の中には、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）及びインターロイキン−１ａ（ＩＬ−１ａ）等のサイトカインがある。その他の標的には、別のサイトカイン及びリンホカイン、感染因子、及び破傷風毒素、炭疽毒素、ボツリヌス毒素及びリピドＡ等のその毒素が含まれる。細菌、真菌、原生動物又はウイルスに感染した患者の末梢血には、一般に循環抗体産生細胞が含まれており、該細胞は単離して、ＭＦＰ−２との融合のための源として使用できる。例えば、敗血症ショック、ハンタウイルス感染症、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ−Ｉ、ＨＴＬＶ−ＩＩ、インフルエンザ、肝炎又はヘルペスウイルスの患者から得たＰＢＬｓをＭＦＰ−２と融合することができ、生じたテトローマ細胞はそれぞれの抗原に対してスクリーニングできる。ＡＩＤＳの場合では、特に、自家又は異種的な態様で受動免疫療法に使用するために、本明細書に記載の技法を使用して患者のリンパ球を不死化し、抗ＨＩＶ抗体を大量に産生することができる。
【０５９６】
自己免疫疾患に対するヒト抗体の産生。
自己免疫疾患にヒトモノクローナル抗体を使用することについての一般的な考えは、自己抗体を遮断又は自己免疫細胞の細胞毒性に関わるＣＤ４＋Ｔ細胞を遮断することである。ある種のアプローチでは、前記ＭＦＰ−２トリオーマ細胞と融合させた後に、ＣＤ４＋細胞に対するヒトモノクローナル抗体が産生される。抗ＣＤ４抗体を産生する得られたテトローマ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞を減少又は枯渇させ、それにより自己免疫細胞の攻撃を軽減するために使用される。別のアプローチでは、ＭＦＰ−２を使用して、特異自己抗体に対する抗イディオタイプの抗体を産生できるテトローマ細胞を産生する。例えば、自己免疫甲状腺炎は、患者の血漿中に高力価の抗チログロブリン抗体が存在する自己免疫機能不全である。ＭＦＰ−２と融合するために、このような患者からＰＢＬ由来のリンパ球を単離する。チログロブリンと反応する自己抗体に対して誘導される実質的な抗イディオタイプ免疫応答を有する抗体を産生することができるテトローマ細胞を、得られたテトローマ細胞からスクリーニングする。その後、これらの抗イディオタイプ抗体を使用して、前記抗チログロブリン抗体を減少又は枯渇させることによって自己免疫疾患を調節する。このようなアプローチは自家性又は異種性に使用されることもある。自家性のアプローチでは、抗イディオタイプ抗体産生細胞を治療すべき患者の末梢血で同定した後、単離してＭＦＰ−２と融合させ、次いで特異的抗抗チログロブリン抗体について選択し、元の患者に受動投与する。異種性のアプローチでは、前記抗抗チログロブリン抗体を別の患者に投与する。
【０５９７】
その他の応用：  移植された臓器の拒絶、血液凝固の予防。
ヒトモノクローナル抗体のその他の適用には、ＯＫＴ−３（抗ＣＤ３）マーカーでＴ細胞を遮断することによる臓器移植拒絶の予防がある。接着分子に対する抗体（抗インテグリン抗体）も免疫細胞の移動を予防するが、これは、例えば、関節リウマチにおいて重要である。血液凝固は、例えば、血小板のＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａに対するヒトモノクローナル抗体を使用して、急性心虚血後の冠動脈再建術で調節されることもある。免疫グロブリンを静脈注入すると、血小板又はその他の血液細胞の前Ｆｃ受容を媒した細胞凝集の中和に役立つ（例えば、血小板減少性紫斑病）。
【０５９８】
さらに、このアプローチは、毒素又は毒液の曝露を解毒又は中和するために使用されることもある。このような曝露は、ヘビ、クモ、又はガマ毒の咬創、又はスズメバチ又はサソリの針がある。現在、ガラガラヘビの毒液の中和に使用されているウマの血清は、症例の３０％に血清病を引き起こす。
この種類の治療に必要な天然のヒト免疫グロブリンが不足している。本明細書に記述したヒトモノクローナル抗体産生システムによれば、特定の需要に適合するように選択することができる無限の量のヒト免疫グロブリンを、インビトロでの作製することが容易となる。例えば、Ｆｃ受容体を遮断する免疫グロブリンの場合、ごく僅かな割合の分子が必要な性状を保有する免疫グロブリンの調製物をプールして患者を治療するのではなく、本明細書に記載した融合パートナーを使用して、必要な特性を有する分子の免疫グロブリンの調製物を作製することができる。
【０５９９】
考察
癌の診断、治療及びモニタリング用のヒトモノクローナル抗体が必要とされるようになって久しい。臨床試験では異種抗体の使用が試みられてはいるが、有望な結果はまだ得られていない。例えば、前記異種抗体のエフェクター特性はヒト免疫系の成分と一致しないので、マウスから得た非ヒト抗体は、ヒトの抗マウス免疫応答の発生、最終的にアナフィラキシー反応となる可能性を有する異種蛋白に対する感作現象、及び生物学的な効果の欠如の原因となる。ヒトモノクローナル抗体には非常に多くの利点がある。一つの利点として、ヒトモノクローナル抗体はヒトにおいてのみ免疫原となる腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を同定できるが、ほとんどの場合、異種抗体は、宿主で免疫優性を発現する抗原及びエピトープを認識する。他の利点としては、ヒトモノクローナル抗体と宿主の免疫系のエフェクター成分（補体等）との相互作用が十分に生じるということである。さらに、ヒトモノクローナル抗体はヒト患者と同系であるので、注入可能なヒトモノクローナル抗体に対するアレルギー及び／又アナフィラキシー反応は懸念するほどではない。前記マウスの免疫グロブリンのＦｃ部分をヒトＩｇＧ−Ｆｃと置換したキメラ抗体（一部はヒトで一部はマウス）等の抗体を開発する別種の試みが行われてきた。ヒト化抗体は、マウスの特異抗体のＣＤＲ領域を移植したヒト免疫グロブリンである。ファージディスプレイライブラリを使用して、単鎖（Ｆｃ）のヒト化抗体をファージ中で生じさせることが行われてきた。これらの３つのアプローチの不利な面は、得られた抗体が天然のものではないということ、癌又は感染因子に対する自然の免疫応答の一部として出現したものではないことである。
【０６００】
本明細書に記述したハイブリドーマ技術を使用し、及び本明細書に記述したＭＦＰ−２トリオーマ融合パートナー細胞株を利用できることによって、抗原に対する天然の液性免疫応答の結果としてインビボで出現する抗体産生細胞の同定、不死化、及びイクスビボでの増殖が容易になる。このような細胞は天然の免疫系応答の一部なので、これらの細胞により産生された抗体は、免疫系のその他の成分と緊密に関連しており、効果的で特異的な生物反応を与えることができる。
【０６０１】
ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ムチン１及びムチン２、ｐ５３、ｃ−ｍｙｃ、血液抗原Ｔ、Ｔｎ及びシアリル−Ｔｎ、末端切断型のＥＧＦ、Ｌｅｗｉｓ−Ｙ抗原等の多数の乳癌特異抗原が、癌の免疫療法における標的となり得ることが記載されている。癌患者中には、これらの抗原に対する循環抗体が存在することも記載されている（Ｇ．  Ｍｏｌｌｅｒ、１９９５年）。リンパ節は前記抗体産生細胞の重要な部位である。リンパ節（又は末梢血）リンパ球を単離し、ヒトハイブリドーマ融合パートナーＭＦＰ−２と融合して不死化することによって、癌関連抗原に対する抗体を産生するハイブリッド（テトローマ）が得られる。上述のように、特異的なモノクローナル抗体産生細胞を同定して、（バイオリアクター、ＳＣＩＤマウス等を用いて）非拘束的な様式にてイクスビボで産生し得る。前記抗体は、同一の患者に対して自家性に又は異なる患者に対して異種性に、受動免疫療法として治療に使用し得る。重複する腫瘍抗原が存在すれば、その他の癌でさえ治療できる。
【０６０２】
ヒトモノクローナル抗体を同系又は同種間で使用すると、抗異種間免疫応答の発生リスク又は脅威なしに、何度も抗体を注入できるので、極めて有効である記注入した抗体は、そのエフェクター機能に依存しているので、（ＮＫ又はＣＴＬ細胞による）標的腫瘍細胞の補体依存性細胞溶解又は抗体依存性細胞性細胞傷害反応（ＡＤＣＣ）を初期化し、又はアポトーシスを介した直接的な細胞傷害効果を与えることができる。
【０６０３】
要約
特異的なヒトモノクローナル抗体の産生に使用できる独特な融合パートナー細胞株ＭＦＰを得た。これらのモノクローナル抗体は、インビボで感染因子、癌細胞又は自己免疫障害に対する天然の免疫応答に基づいて、又はインビトロでのヒトリンパ球細胞の免疫化によってインビトロで作成できる。
【０６０４】
特異的なモノクローナル抗体を作製するための本明細書に記載した方法は、自家性処置又は異種性処置のうち何れとしても、養子液性免疫療法を提供するために使用できる。癌又は感染症の患者から単離したリンパ球を、ＭＦＰ−２と融合して不死化する。それぞれの抗原に対する抗体を産生する得られたテトローマをインビトロで選択する。選択後に、これらの抗体産生細胞を増殖させ、バイオリアクター又は免疫不全マウス（例えば、ヌードマウス又はＳＣＩＤマウス）を使用して抗体を産生してもよい。かかる抗体は、その後、自家の養子免疫療法処置として元のドナーの治療をするために使用してもよいし、又は異種性の養子免疫処置として異なる患者を治療するために使用してもよい。
【０６０５】
前記発達した抗体は、観血的診断（イメージング、免疫シンチグラフィ）又は治療（薬物標的、放射免疫療法、補体依存細胞溶解、ＡＤＣＣ、アポトーシスの細胞溶解等）にも適用できる。このアプローチは、新規腫瘍マーカー又は新規感染因子抗原を同定する方法も提供する。免疫系は、外来構造の様々な成分に対する抗体を産生することによって癌細胞又は感染因子に反応し、様々な新エピトープを認識することができる。新規腫瘍マーカー又は感染因子を同定するために、腫瘍又は感染因子の抗原に対して反応性を示す免疫グロブリンとＭＦＰ−２との融合を使用することができる。かかる抗体は、特定の癌又は感染因子に対する治療及び特異的なイメージング及び診断技術を得る上で重要である。ヒトの抗腫瘍抗体又は抗感染抗体を得るための従来の試みにおいては、精製又は単離した抗原で患者を強制的、すなわち人工的に免疫する必要があった。本発明では、前記抗原は未知であってもよい。抗体開発を開始するための素材は、インビボにおいて自然な形態及び自然な環境で提示された外来抗原に対する天然の免疫応答の一環として現れた免疫担当リンパ球のプールである。自家性に使用する場合には、目的の自家組織（例えば、腫瘍の生検）を使用して選択を実施することができるので、正しい抗体を選択する機会が増大する。また、同一のドナーから細胞傷害性抗体を選択するために、自家の血漿及び白血球細胞を使用できる。
【０６０６】
従って、ＭＦＰ融合パートナーは、（１）高レベルのハイブリッドをもたらす末梢血リンパ球との融合を可能とする、（２）個体レベルで養子体液免疫療法を検討することを可能とする（リンパ球を取得したドナーと同じドナーに由来する腫瘍細胞又は感染因子に対する抗体の選択、及び患者の自家性治療）、（３）インビトロで免疫化を行うドナーのリンパ球との融合、（４）凍結したリンパ球又は血漿交換療法由来のリンパ球を抗体産生細胞源として使用することを可能とする。
【０６０７】
実験方法
非産性のヘテロミエローマ  Ｂ６Ｂ１１を鎖骨横のリンパ節から単離したヒトリンパ球と融合させることによって、ハイブリドーマ融合パートナーＭＦＰ−２をトリオーマ細胞株として開発した。
【０６０８】
リンパ球の単離。
転移性の甲状腺癌と診断された患者の鎖骨横のリンパ節を、手術中に切除して、Ｌグルタミン（４ｍＭ）、非必須アミノ酸（１００Ｘストック）、ビタミン（１００Ｘストック）、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）及びゲンタマイシン（２ｘ濃度）を追加した無菌保存培地ＲＰＭＩ１６４０に入れた。同一培地の１００ｍｍ組織培養ＴＣシャーレにリンパ節組織を移し、鉗子及びハサミで静かに分断した。ガラスの乳棒を用いて、分断した前記組織を金属の篩（５０メッシュ）にかけた。リンパ球分離培地  （Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ  １．０７７  Ｓｉｇｍａ）を下層として含有する１５ｍｌの無菌コニカルチューブの中に、２：１（リンパ球懸濁液：Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ）の比率で、懸濁液を移した。４００Ｘｇで２０分間遠心分離した後、層の境界に不透明な輪が形成された。前記チューブの底に小球として赤血球（ＲＢＣ）が存在した。ＲＢＣが最初のリンパ球懸濁液に存在しない場合には（リンパ節の場合、これは極めて正常な状態である）分離を省略できる。パスツールピペットを用いて、リンパ球を含有する不透明な輪を慎重に収集し、レギュラー無血清ＲＰＭＩ  １６４０で１０倍に希釈した。３００Ｘｇ  で１０分間細胞を回転させ、培地で２度洗浄した。
【０６０９】
最終のリンパ球懸濁液を培地で希釈し、０．０５％トリパンブルーを使用して細胞の数を数えた。単離後の細胞生存度は通常９５％であった。総収率は約４Ｘ１０７細胞であった。
【０６１０】
Ｂ６Ｂ１１の調製  １０％のｃｏｓｍｉｃ  ｃａｌｆ  ｓｅｒｕｍ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、抗生物質を加えない標準的なサプリメント群（Ｌグルタミン、４ｍＭの非必須アミノ酸、ビタミン、ピルビン酸ナトリウム）とともに、ヘテロミエローマ  Ｂ６Ｂ１１  をＲＰＭＩ  １６４０中で増殖させた。融合の前に、ＨＡＴ感受性細胞が野生型に復帰するのを防ぐために、８−Ａｇ（２０μｇ／ｍｌ）の存在下で細胞を培養した。対数増殖期に１０％の密度で細胞を増殖させた。
【０６１１】
細胞融合．  培地に残った全てのタンパク質を除去するために、Ｂ６Ｂ１１  細胞及びリンパ節のリンパ球の両者を、３００Ｘｇで５分間遠心分離して３度洗浄した。５：１（リンパ球：ミエローマ）の比率で細胞を混合して３００Ｘｇで１０分間回転させた。前記上清を慎重且つ完全に除去し、ペレットを静かに「ひと吹き」し、室温に暖めた１００μｌのＰＥＧ／ＤＭＳＯ溶液を３分間穏やかにたたいた前記細胞混合物に添加した。その後、１５ｍｌのハンクスの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）及びＰＢＳ（１：１）（１０ｘストックから、Ｃｅｌｌｇｒｏ）を以下のように添加した：１０ｍｌをゆっくりと１０分間、その後５ｍｌを５分以上、次に１０ｍｌの完全培地（細胞培養用培地）を５分以上、最後に５ｍｌを１分以上。総容量は３０ｍｌであった。その後、（１０×原液の）６００μｌのＨＴ溶液及び１滴のＤＭＳＯ（約２０〜３０μｌ）を前記チューブに添加した。前記細胞懸濁液をチューブで混ぜて、ペトリ皿（１ＯＯｘ１５）に入れ、３７℃のＣＯ２インキュベーターで一晩中インキュベートした。その後、前記細胞を収集して３００Ｘｇで１０分間かけてペレットにし、ＨＡＴ溶液及びＨＴ溶液（両方５０Ｘストックから）を追加した完全培地で再懸濁した後に、１ウェルにつき約２５０，０００細胞、２００μｌの容量で９６ウェルのプレートに置いた。１週間に２度、前記培地の５０％を新しい培地と交換した。抗体産生に関するスクリーニングを行う前の１４〜２０日間、ＨＡＴ及びＨＴの存在下で細胞を培養した。
【０６１２】
非特異的免疫グロブリンのＥＬＩＳＡスクリーニング．  １００μｌの播種用緩衝液（０．１Ｍ  炭酸ナトリウム、ｐＨ９．０）中に存在するポリクロナールヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異性）（Ｓｉｇｍａ）、ヤギ抗ヒトＩｇＭ（μ−特異性）（Ｓｉｇｍａ）又は、ヤギ抗ヒト  Ｉｇ（Ｇ＋Ｍ＋Ａ）Ｈ鎖（Ｓｉｇｍａ）で、１ウェルにつき１００ｎｇになるようにＥＬＩＳＡ  のプレートを覆った。前記プレートをパラフィルム又は密封カバーで密封して、４℃で一晩中インキュベートした。抗原を蒸留水で２度洗浄した。残留水滴を除去し、２００  μｌのブロッキング溶液（ＰＢＳ中に０．４％  乾燥脱脂乳）を前記ウェルに添加した。完全な細胞培地を負の対照とした。ヒト血清（１：２０００）を正の対照として使用した。室温で２時間、又は４℃で一晩中プレートをインキュベートした。プレートを蒸留水で４度洗浄し、０．４％の乳／ＰＢＳと１：２０００で希釈した二次抗体（捕獲抗体と同一であるがＨＲＰに結合している）を前記ウェルに添加した。室温で１時間インキュベートした後に、前記ウェルをＨ２Ｏで４度洗浄して、ペルオキシダーゼ基質（過酸化物入りのリン酸塩−クエン酸緩衝液中のオルトフェニレンジアミン）を前記プレートに添加した。２０μｌの１０％硫酸を添加して、呈色反応を止めた。Ａ４９２のマルチスキャンリーダー上で比色測定を行った。バックグラウンドの少なくとも３倍の増加を示した試料は、免疫グロブリン産生細胞であると考えた。
【０６１３】
免疫グロブリン又はそれらの各鎖の細胞内での（非分泌）存在に関するアッセイ。
細胞内の免疫グロブリン−免疫反応性物質の存在について、前記上清培地中で免疫グロブリンを分泌しなかった細胞を検査した。上記のとおりに、ヤギ−抗ヒトのカッパ鎖（Ｓｉｇｍａ）、ヤギ−抗ヒトのラムダ鎖（Ｓｉｇｍａ）及びヤギ−抗ヒトＩｇＨ（Ｇ、Ｍ、Ａ）で、ＥＬＩＳＡのプレートを覆った。１ｍｌにつき１０６細胞の密度になるまで細胞を７５ｃｍ２のフラスコで増殖させ、収集してＨＢＳＳで３度洗浄した。細胞をＰＢＳで再懸濁して超音波処理で分断させた（氷上で２５ＭＨｚ、８ｘ１５秒）。前記懸濁液を１０，０００Ｘｇで１５分間回転させ、前記懸濁液を免疫グロブリン検査に使用した。２Ｘ１０６相当の細胞を使用した。同量のタンパク質でマウス線維芽細胞３Ｔ３を負の対照群として使用した。前記プロトコルの残りは、ハイブリドーマ上清について上記したプロトコルと同一であった。前記対照細胞と同等又はそれ以下のシグナルを示したクローンを、ヒトの末梢血リンパ球と融合させるための潜在的な候補として選択した。これらのトリオーマクローンは、改変融合パートナー系列（ＭＦＰ−Ｓ）と名づけ、連続番号を付与した（ＭＦＰ−１、ＭＦＰ−２、ＭＦＰ−３等）。さらに分析を行うために６個の非産生、非分泌性トリオーマを選択した。
【０６１４】
８−Ａｇ耐性ＭＦＰ変異体の選択。
【０６１５】
ＭＦＰトリオーマ細胞を融合パートナーとして使用するために、徐々に増加する量の８−Ａｇを含有する完全培地中に前記ＭＦＰ細胞を入れた。酵素ＨＧＰＲＴの機能障害又はその欠如によって、８−Ａｇに対する耐性を決定する。従って、８−Ａｇの存在下で生き残った細胞に集中して選択した。これより低い濃度の８−Ａｇ（５μｇ／ｍｌ）で５〜１０の継代した後に、さらに高い濃度（１０μｇ／ｍｌ）とともに生存細胞を培地中で培養した。濃度が２０μｇ／ｍｌに達するまでこれを繰り返した。８−Ａｇ（２０μＧ／ｍｌ）の存在下で５〜６継代した後、ＨＡＴ培地での細胞の生存度を検査した。ＨＡＴの存在下で３日間培養した後に、８−Ａｇ上で増殖させた細胞の中に生き残ったものはなかった。
【０６１６】
融合効率。リンパ節のリンパ球及びＰＢＬと融合する能力について、前記ＭＦＰクローンを検査した。ＭＦＰ−２は、１０５のリンパ節リンパ球につき約２〜３のハイブリッド、及び１０５のＰＢＬにつき０，７〜１．５のハイブリッドを産生した。ＭＦＰ−２を使用して得た前記ハイブリッドの免疫グロブリン分泌率は７ヶ月にわたって減少せず、０．  〜１５μｇ／ｍｌの範囲であった。
【０６１７】
第２群の実験
１．ヒト末梢血のＢリンパ球及びヒトリンパ節のＢリンパ球との融合に使用されるトリオーマ細胞株ＭＦＰ−２は、ヒト末梢血及びリンパ節Ｔ細胞の融合にも使用でき、安定したハイブリッドを産生する。
【０６１８】
２．トリオーマ細胞株ＭＦＰ−２は、サルの免疫グロブリン産生ハイブリッドを産生する２種の霊長類の（アカゲザル（Ｍａｃａｑｕｅ  ｍｕｌａｔｔａ）及びヒヒ（Ｐａｐｉｏ  ｈａｍａｄｒｙａｓ））末梢血とリンパ節リンパ球との融合に使用できる。霊長類のモデルで様々な病原菌を検査するために必要な感染因子に対するサルモノクローナル抗体の開発において応用される可能性がある。
【０６１９】
３．トリオーマ融合パートナー細胞株ＭＦＰ−２は無タンパク質培地中での増殖に適合され、血清を含む培地又は無血清培地（タンパク質追加培地）で培養したときの増殖特性と相違しない増殖特性を有する。
【０６２０】
４．ＭＦＰ−２は無タンパク質培地で培養できるので、同一の無タンパク質培地に、これに由来するハイブリドーマを適応させるのは比較的簡単であろうと推察された。
【０６２１】
５．６個のハイブリドーマのうち４個が、増殖特性を変化させ及び抗体産生を緩和することなく、無タンパク質培地にうまく適応した。無タンパク質培地で増殖できるハイブリドーマを開発する上で、この特性は、ＭＦＰ−２のさらなる利点となる。
【０６２２】
６．乳房及び前立腺関連抗原に対するヒトモノクローナル抗体を産生する２７個のヒトハイブリドーマは、乳癌及び前立腺癌患者のＭＦＰ−２及び末梢血並びにリンパ節Ｂリンパ球を使用して開発された。
【０６２３】
７．２３個のヒトハイブリドーマは乳癌患者由来、４個は前立腺患者由来である。
【０６２４】
８．  前立腺癌由来のハイブリドーマ：
１．  ハイブリドーマ（３２−Ｂ８）は、２つのヒト前立腺腺癌細胞株及び１つのヒト乳癌腺癌細胞株と特異的に反応し、且つタンパク質ではない可能性が最も高い未知の抗原に対するＩｇＭ、λ抗体（ウェスタンブロットは陰性。しかし、恐らく、前記抗原はタンパク質であるが、抗原決定基が立体的で不安定である）を産生する
２．  ハイブリドーマ（３２−Ｆ６）は、前立腺及び乳房の腺癌細胞の両者に反応し、分子量が６０−ｋＤａのタンパク質性抗原を認識するＩｇＭ、λ抗体も産生する。
【０６２５】
３．  ハイブリドーマ（３９−Ａ７）は、乳房及び前立腺の腺癌の両者に特異的な未知のタンパク質標的に対するＩｇＭ、λ抗体でもある。
【０６２６】
４．  ハイブリドーマ（５０−１Ｂ３）は、未知の性質の分子標的に対して乳房及び前立腺の腺癌の両者に誘導されるＩｇＭ、κ抗体を産生する。
９．  乳癌関連ハイブリドーマは以下のとおり：
１．  ハイブリドーマ（１３−４２）、ＩｇＭ、κは、腺癌細胞（乳房及び前立腺）の表面及び細胞内の両者に存在するがヒトの正常線維芽細胞中には存在しない分子重量が約４２ｋＤａのタンパク抗原を認識する。
【０６２７】
２．  ハイブリドーマ（１３−７４）、ＩｇＭ、κは乳腺癌細胞に特異的な約６５ｋＤａのタンパク抗原であって、細胞表面と同様に細胞内でも発現するタンパク抗原と反応する。
【０６２８】
３．  ハイブリドーマ（１３−８２）、ＩｇＭ、κは、乳房及び前立腺の腺癌細胞にのみ特異的でヒトの皮膚線維芽細胞に対しては特異的でない細胞内タンパク抗原と反応する。
【０６２９】
４．  ハイブリドーマ（１３−２Ｃ１）、ＩｇＭ、κは、腺癌及び正常な線維芽細胞の両者に存在する約１００ｋＤａのタンパク質に反応する。
【０６３０】
５．  ハイブリドーマ（２２−３Ｅ９）アイソタイプは決定されていないが、腺癌及び線維芽細胞の両者に存在する分子重量が３５、４５及び２５０ｋＤａの幾つかのタンパク質標的（全て関連している可能性あり）を認識する。前記抗原は細胞の表面上に最も多い。一次癌病巣に特異的に反応する。
【０６３１】
６．  ハイブリドーマ（２２−６Ｅ７）、ＩｇＭ、λ、前記抗原は未知であり、前記抗体は培養された乳腺癌細胞にのみ反応する。
【０６３２】
７．  ハイブリドーマ（２２−８Ｄ１１）、ＩｇＭ、λ、抗原は未知で、培養されたヒトの乳房及び前立腺の腺癌細胞に反応する。
【０６３３】
８．  ハイブリドーマ（２７−Ｆ７）、ＩｇＭ、κは、培養された乳腺癌細胞のみと反応する。前記抗原は、分子重量が約３５−４０ｋＤａのＴＡＸ相互作用タンパク質２である。
【０６３４】
９．  ハイブリドーマ（２７−Ｂ１）は２７−Ｆ７と同一であり、原発腫瘍中の癌性病巣と高度に特異的な反応性を示すが、結合組織又は正常な乳房の上皮細胞との交叉感受性は示さない。
【０６３５】
１０．  ハイブリドーマ（３６−Ｇ７）抗体アイソタイプは決定されていない。特異性は２７−Ｂ１と同一である。
【０６３６】
１１．  ハイブリドーマ（２７−Ｆ１０）、ＩｇＧ、λは乳腺癌細胞の約２００ｋＤａのタンパク質と反応する。
【０６３７】
１２．  ハイブリドーマ（３３−２Ｆ１０）、ＩｇＭ、κ、抗原は未知で、乳腺癌細胞と反応する。
【０６３８】
１３．  ハイブリドーマ（３３−２Ｈ６）、ＩｇＭ、λはヒトの皮膚の線維芽細胞ではなく、乳房及び前立腺の腺癌細胞上に６５ｋＤａのタンパク質を認識する。
【０６３９】
１４．  ハイブリドーマ（５９−３Ｇ７）、ＩｇＭ、λは腺癌細胞中の７０ｋＤａのタンパク質Ｌａｍｉｎ  Ａ又はＣに反応する。その他の細胞の交叉感受性については検査していない。
【０６４０】
１５．  ハイブリドーマ（５９−２Ｆ６）、ＩｇＧ、λは未知の抗原を有する乳腺癌細胞とのみ反応する。
【０６４１】
１６．  ハイブリドーマ（６９−Ｃ１２）、ＩｇＭ、κは、主として乳腺癌細胞と反応し、５０ｋＤａのタンパク質  １７に対して誘導される。ハイブリドーマ（７６−２Ｆ６）、ＩｇＭ、λは乳腺癌細胞上のみに存在する未知の抗原と反応する。
【０６４２】
１８．  ハイブリドーマ（８３−３Ａ６）、アイソタイプは決定されていない。乳腺癌細胞のみに反応する。
【０６４３】
１９．  ハイブリドーマ（８５−Ｅ１）、ＩｇＭ、λは、Ｈｅｒ２／ｎｅｕを発現する乳腺癌細胞のみに反応する。抗原はまだ同定されていない。
【０６４４】
２０．  ハイブリドーマ（８８−１Ｄ８）、アイソタイプはまだ決定されていない。乳癌細胞のタンパク質抗原を認識する。分子量は７０、９０、１００ｋＤａと変動する。
【０６４５】
２１．  ハイブリドーマ（８９）アイソタイプは決定されていない。Ｈｅｒ２／ｎｅｕを有しない腺癌細胞のみと反応する。抗原は未知。
【０６４６】
２２．  ハイブリドーマ（１００−１Ｆ４）、ＩｇＭ、κは乳腺癌細胞とのみ反応する。抗原は未知。
【０６４７】
２３．  ハイブリドーマ（１００−２Ｈ３）は１００−１Ｆ４と類似している。
第２群の実験のための参考文献
【参考文献１】
2004518630.tif 000005
2004518630.tif 000006
【０６４８】
第３群の実験
例Ｉ：  完全なヒトモノクローナル抗体の開発
序文
本発明は、リンパ節、脾臓、扁桃腺又は末梢血由来のヒトリンパ球と融合する独特な融合パートナー細胞株を含む。得られたハイブリッドは、免疫グロブリンと呼ばれるヒト免疫物質を安定に生産し、免疫療法用ヒト抗体の信頼し得る入手源となることが証明された。ＭＦＰ−２と名づけられたこの融合パートナー細胞株を使用して、本発明者らは、ヒトの乳癌及び前立腺癌に対して特異的な反応性を有する幾つかのモノクローナル抗体を開発した。
【０６４９】
結果
ハイブリドーマ技術
特許に係る融合パートナー細胞株ＭＦＰ−２及び、乳房切除及びリンパ節切除を受けた第ＩＶ期の女性乳癌患者のリンパ節から単離したヒトリンパ節リンパ球（ＬＮＬ）を使用して、完全なヒトモノクローナル抗体（ｆｈＭＡｂ）をハイブリドーマ技術を通じて開発した。ＭＦＰ−２をＬＮＬと融合すると、確立された乳癌細胞株であるＳＫ−ＢＲ−３、ＭＣＦ−７及びＺＲ−７５−１と特異的に反応する抗体を産生する幾つかのクローンを産生した。前記抗体のうち２つは２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１と名付けられ、還元条件下及び非還元条件下の両者で行った前記細胞のライセートのウェスタンブロット分析法によって示されたように、分子重量約４３ｋＤのこれらの細胞から得られるタンパク質標的と特異的に反応した。分裂停止期に、フラスコ／ＴＣ皿の中で、１．５ｘ１０６細胞／ｍｌの密度に達するまで無血清培地で増殖するように、前記ハイブリドーマ細胞株を適応した。前記細胞株２７．Ｆ７には、中空繊維のバイオリアクター中で増殖する能力も有しており、密度が２０−２５ｘ１０６／ｍｌとなり、前記細胞株２７．Ｂ１は、スピナフラスコ中で効果的に増殖していた。前記抗体の産生は、２７．Ｆ７では１７μｇ／ｍｌ／１０６細胞／２４時間、２７．Ｂ１では４９μｇ／ｍｌ／１０６細胞／２４時間であった。何れの抗体もＩｇＭ、κであった。これらの抗体の分子標的についてさらに研究を進めるために、無血清培地を使用して細胞を大量に培養し、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＴＭＳ−２００（Ｈｉｇｈ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）のサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。ＩｇＭがボイドボリュームに現れた。
【０６５０】
例ＩＩ−癌細胞株と結合する抗体
産生された抗体は、ヒト癌細胞株及び原発腫瘍組織の両者と反応した。これらの抗体の幾つかに対する抗原標的を同定した。２つの抗体、２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１は、同一の抗原に対する抗体であり、これはＴａｘ相互作用タンパク質クローン２（ＴＩＰ−２）として同定された。前記抗体２７．Ｂ１及び２７．Ｆ７は、３つのヒトの乳癌細胞株ＭＣＦ−７、ＳＫ−ＢＲ−３及びＺＲ−１−７５と反応し、ヒトの前立腺癌細胞とは殆ど又は全く反応せず、ヒト線維芽細胞には陰性である。
【０６５１】
結果
ＥＬＩＳＡアッセイ
細胞のＥＬＩＳＡアッセイは、２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１が特異的な態様でヒトの乳癌細胞株と結合し、ヒトの皮膚又は躯幹の線維芽細胞とは結合しないことを立証した。
【０６５２】
フローサイトメトリー
前記抗原標的は、ホルムアルヒデド固定した細胞のサイトゾルのみならず生きている細胞の表面にも到達できることがフローサイトメトリーの研究で明らかになった。しかし、前記細胞と結合する抗体のパターンが様々であったので、これらの抗体は恐らく一つの同じ抗原の異なるエピトープを認識することを示している。抗体２７．Ｂ１は、乳がん細胞ＳＫ−ＢＲ−３及びＭＣＦ−７の表面と反応したが、生きている前立腺癌細胞ＰＣ−３及びＬＮＣａＰ並びに生きているヒト線維芽細胞とは反応しなかった（図７）。しかし、ホルムアルデヒド固定した細胞をフローサイトメトリー分析で使用した時に、２７．Ｂ１抗体はヒト線維芽細胞に対しては未だに陰性であったが、乳癌細胞株及び前立腺癌細胞ＬＮＣａＰの両者と反応することがフローサイトメトリーによって示された。抗体２７．Ｆ７は様々なパターンの反応性を見せた。固定した一次線維芽細胞、明らかに幾つかの細胞内エピトープと反応した。細胞ライセートを使用して、３つの乳癌細胞株（ＳＫ−ＢＲ−３、  ＭＣＦ−７及びＺＲ−７５−１）、３つの前立腺癌細胞株（ＬＮＣａＰ、ＰＣ−３及びＤｕ−１４５）及び２つのヒト線維芽細胞株（Ｈｓ５５６．Ｓｋ及びＨＳ１４３．Ｗｅ）から調製した。
【０６５３】
ウェスタンブロット
ウェスタンブロット分析法は、２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１の両抗体が、２重バンドとしてブロット上に現れる約４３ｋＤのタンパク質と反応することを立証した。このタンパク質は、３つの全ての乳癌細胞株中で著しく発現したが、２つのヒト線維芽細胞株では全く発現せず、また前立腺細胞ＰＣ−３及びＤｕ−１４５での発現は極めて弱かった。このタンパク質のどのレベルにおいても、ＬＮＣａＰ細胞は極めて低い発現を明白に示す（図８）。
【０６５４】
免疫細胞及び組織化学的研究
ヒトの樹立細胞株並びに多数の乳癌及び前立腺癌患者からの腫瘍組織の一次病巣及び転移病巣を使用した免疫細胞及び組織化学的研究によって、乳癌及び前立腺癌細胞（図９）、リンパ節の原発腫瘍（図１０、１１、１２及び１３）、及び転移病巣（図１４）の免疫染色に非常に特異的なパターンが示された。固定した腫瘍組織及び素早く凍結させた腫瘍組織は何れも、抗体２７．Ｂ１及び２７．Ｆ７で免疫染色したときに陽性であった（図１５）。ｆｈＭＡｂの２７．Ｂ１で免疫組織化学的に検査した乳癌の１０例のうち、１０例全てが陽性であったが、同数の正常な乳房の上皮試料の全てが陰性であると判明した。これらの二種の癌に加えて、男性の乳癌及び精上皮腫の染色も陽性であったことが観察された（図１６）。
【０６５５】
２７．Ｂ１／２７．Ｆ７の免疫反応性の存在に関してその他の組織を検査したが、そのうち、正常な大腸粘膜、大腸癌、腎癌、正常な腎糸球体、正常な肝臓並びに正常及び癌性の肺組織等全てが陰性であった（図１７）。同時に、正常な乳房上皮、病気に冒されていないリンパ節及び良性の前立腺肥大の免疫染色は陰性であった。これらのｆｈＭＡｂｓに対して乳癌及び前立腺癌が特異性を持つことを示唆する。
【０６５６】
考察
開発した二つの抗体（何れもＩｇＭ、κ）は、ＧＩＰＣ又はＴＩＰ−２と呼ばれる癌特異抗原に反応する。ＧＩＰＣは、ＧＡＩＰ（Ｇａ相互作用タンパク質、Ｇタンパク質情報伝達の制御因子）相互作用タンパク質Ｃドメインを表し、ＴＩＰ−２は、Ｔａｘ相互作用タンパク質クローン２を表している。このタンパク質の存在は乳癌細胞にのみ付随し、前立腺癌細胞には存在するとしてもごく微量であった。ヒト線維芽細胞は、ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２抗原の存在に関して陰性であった。ＳＫ−ＢＲ−３細胞  （ＴＩＰ−２陽性細胞）のＴＩＰ−２抗原のコピー数をスキャッチャード分析すると、１つの細胞につき約３００  ０００のコピーがあることが明らかになった。２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１の両者が、ｉｎ  ｓｉｔｕの浸潤性小葉癌、浸潤性脈管癌及び腺癌の３つの主な乳癌の全てを陽性に染色することが免疫組織化学研究によって見出された。これらの抗体は前立腺癌も染色するが、正常な乳房上皮及び良性の前立腺肥大（ＢＰＨ）は陰性であった。前記抗体は、正常及び癌性の肺組織、正常な大腸粘膜、大腸癌、正常及び癌性の腎組織に関しても陰性であった。従って、ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２  マーカーは、癌組織標本の組織病理学評価にとって非常に貴重な免疫組織化学マーカーである。
【０６５７】
例  ＩＩＩ−抗原の同定
上記の抗体に基づいて、乳房及び前立腺の腺癌に対して特異的な新規腫瘍関連抗原をＧＩＰＣ（Ｔａｘ相互作用タンパク質２）として同定した。この新規腫瘍関連抗原の同定に使用した方法は、ＳＥＲＥＸ（組換え発現クローニングによる抗原の血清学的分析−ＳＥｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ    ａｎｔｉｇｅｎｓ  ｂｙ  ＲＥｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＥＸｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｃｌｏｎｉｎｇ−すなわち、腫瘍関連抗原に対する自発的な抗体の反応）であった（図２０）。この方法は、癌患者の血漿又は血清中で発見された抗体に対する特異的なタンパク質を同定する目的で、最初にＬｕｄｗｉｇ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅで開発された（１）。本発明は、いわゆるＰＤＺドメイン含有タンパク質に属する４３−ｋＤａタンパク質について記述する。ＰＤＺドメインは、８０〜１００のアミノ酸のタンパク質のモチーフで、ＧＬＧＦの反復コンセンサスが独特の特性である。前記ＰＤＺドメイン（哺乳類のシナプス後密度タンパク質ＰＳＤ−９５、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）のディスクの巨大タンパク質Ｄｌｇ、及び哺乳類のタイトジャンクションタンパク質ＺＯ−１にちなんで命名）は、５０以上のタンパク質で発見されているが、ほとんどが互いに無関係のようである。これらのタンパク質は一般的に、Ｇタンパク質を介した情報伝達経路等の情報伝達ネットワークに関係している。例えば、ＰＤＺドメインは、Ｄｌｇ、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）、タンパク質チロシンホスファターゼ、粘膜関連グアニル酸キナーゼ  （ＭＡＧＵＫ）等の情報伝達分子で発見されている。
【０６５８】
ＰＤＺドメイン含有タンパク質の多くは、細胞骨格に関連しており、多量体のタンパク質複合体の形成に関係していることが明らかである（２、３）。ヒトの大腸癌に関連している唯一のＰＤＺドメイン含有タンパク質についてはＳｃａｎｌａらが記述した（４，５）。この抗原ＮＹ−Ｃｏ−３８／ＰＤＺ−７３は、大腸癌患者で発生したＩｇＧ自己抗体によって同定された。この著者らは、２、３の組織に特異的なＰＤＺ−７３のアイソフォームについても記述しているが、これは、１又は２のＰＤＺドメイン（本来のＰＤＺ−７３型は３つのドメインを有する）を含む末端切断型であるようだ。これらのタンパク質は、ＭＡＧＵＫタンパク質ファミリーと構造的に類似しているが、その機能については未知である。ＰＤＺドメインは、その具体的な機能については未知であるが、タンパク質同士の相互作用及び大きなタンパク質のネットワーク形成に関与すると考えられている。
【０６５９】
ＴＩＰ−２は、Ｔａｘ腫瘍性タンパク質のＰＤＺドメインを通じてそのＣ末端と交互作用する機能が未知の６つの細胞性タンパク質の１つとして、Ｒｏｕｓｓｅｔら（１）によって最近同定された。Ｃ末端のモチーフＳ／ＴＸＶはＰＤＺドメインと交互作用するため重要であるので、重要なＣ末端のバリンが、例えば、アラニンと交換されても、Ｔａｘ  腫瘍タンパク質はＴＩＰ−２との交互作用を保つのに対して、その他全てのＴａｘ結合性ＰＤＺドメイン含有タンパク質はその結合能力を失うことが判明した。
【０６６０】
結果
ヒトの乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３から調製したｃＤＮＡ発現ライブラリに対して乳癌患者Ｂ細胞由来の抗体をスクリーニングすることによって、ＴＩＰ−２を同定した。簡単に述べると、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡを前記細胞から単離して、ｃＤＮＡに転写し、ラムダ偽溶解ファージと結合して、約５Ｘ１０５の組換え体を得た。前記ファージをＥ．ＣＯＬＬ  Ｙ１０９０中で増幅した後、ヒト抗体で処理されたニトロセルロース膜に転写した。抗体に曝露した後、前記膜を西洋ワサビペルオキシダーゼと結合した、抗ｕ鎖のウサギのポリクロナール抗体で処理した。陽性のｃＤＮＡクローンを、インビボで切除してプラスミド型に変え、前記プラスミドＤＮＡを精製して配列分析に供した。得られた配列を、遺伝子銀行データベースを用いたホモロジー検索に供した。乳癌患者のリンパ節のＢ細胞から発生した２つのヒトモノクローナル抗体（２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１）を、ＴＩＰ−２と反応する抗体として同定したが、明らかに異なるエピトープを有していた。
【０６６１】
抗体の１つ、２７．Ｆ７をバイオリアクター中で大量生産して、前記ＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセートのＴＩＰ−２の免疫沈降に使用した。沈殿物は、ＴＩＰ−２に特有の分子量を有し、細胞ライセートのウェスタンブロット中で抗ＴＩＰ−２抗体によって認識されるバンドに対応する２つのバンドを与えた。Ｂａｌｂ／Ｃマウスを免疫するために、ＴＩＰ−２のバンドを含有する前記ニトロセルオース膜の細片をＢａｌｂ／Ｃマウスの皮下に移植した。ＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセートに対するマウス血清のウェスタンブロット分析で証明されたように、２度の移植後に、ＴＩＰ−２に対する重要な免疫応答がマウスに生じた（図２１及び２８）。実際の腫瘍組織の免疫組織化学において、これらのマウスの免疫血清は陽性であった（図２３）。マウスの抗ＴＩＰ−２  モノクローナル抗体をさらに生じせしめるためには、これらのマウスが使用されることになるだろう。
【０６６２】
ｆｈＭＡｂ  ２７．Ｆ７を使用して、その親和性及び、ＳＫ−ＢＲ−３の表面上のＴＩＰ−２分子の数も概算した。ＴＩＰ−２分子には、２７．Ｆ７に対する親和性が異なる２つのサブセットがあることが認められた（ウェスタンブロットのデータに対応する）。ＴＩＰ−２のサブセット（アイソフォーム）のうち一方は、１細胞当たり約６０  ０００コピー存在し、Ｋａ＝４．２ｘｌＯｌｌＭ−ｌを有する２７．Ｆ７と結合する。他方は、Ｋａ＝３．  ３Ｘ１Ｏ９Ｍ−１を有し、１細胞当たり２３０  ０００コピーで存在する（図２４）。原発腫瘍のライセートに加えてヒトの乳癌細胞ライセートも用いたウェスタンブロット分析は、前腫瘍病巣中にＴＩＰ−２の強い発現を示したが、腫瘍に冒されていない正常な乳房上皮中には該抗原を示さなかった（図２５）。これらのデータは、同一の臨床例から得た組織切片の免疫組織化学研究と一致していた（データ示さず）。
【０６６３】
２７．Ｆ７のリポソームへの結合
リポソーム運搬ベクターとして抗ＴＩＰ−２抗体を使用する可能性を探るために、２７．Ｆ７をリポソームに結合するための２、３の異なる方法について調べた。前記抗体がＩｇＭ、κアイソタイプであるという事実を考えれば、ＩｇＭをリポソームに結合させる化学反応に伴う課題が予想された。プロトコルの１つが最も有効であることが明らかとなり、ウェスタンブロットで立証されたところによれば、このプロトコルはリポソームへの高い抗体結合率を与え、抗体を損なわすことなくＴＩＰ２への反応性を保った（図２６）。
【０６６４】
乳癌患者におけるＴＩＰ−２同定
乳癌患者の血清又は血症中にＴＩＰ―２を同定する実験も試みた。ＴＩＰ−２は細胞の表面上に発現されているので、ＴＩＰ−２の一部は循環血流中に流出する可能性があり、またそうでなくても、腫瘍の壊死の結果又は化学療法治療の結果、進行した段階の患者には出現する可能性があるということが、かかる仮説の論拠である。このような検査用のＥＬＩＳＡアッセイは存在しないので、全血清試料及びｆｈＭＡｂ２７．Ｆ７をタグとするウェスタンブロットを使用して、ＴＩＰ−２に関して患者の血清を検査した。この方法は技術的な問題のためにうまくいかなかった。ヒト血清中のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が大量なために、ＴＩＰ−２が現れると予想されていたゲル上の領域を隠してしまうからである。血清試料をＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセート（ＴＩＰ−２を含有）で固定すると、ウェスタンブロットによってヒト血清及びヒト血漿の両者にＴＩＰ−２が同定され得ることを示した。血清中のＴＩＰ−２の同定をさらに確実にするために、ＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセートで固定したヒト血清のアルコール画分を段階的に行って、ＴＩＰ−２を沈殿させるのに十分なアルコール濃度を同定した。１０％アルコールでＴＩＰ−２を完全に沈殿させることができたが、ＨＳＡ及び免疫グロブリン（ヒト血清の場合、主なタンパク質成分）が未だに溶液中に残存していたことを示した（図２７）。これによって、ウェスタンブロットを使用した血清中でのＴＩＰ−２の同定がさらに容易になる。高い親和性を有するマウスの抗体を使用した、２サイト免疫酵素アッセイは、ＴＩＰ−２抗原同定の別の方法を与えるであろう。
考察
現れた標的のうちの一つが、ヒト乳癌細胞のサイトゾル及び細胞膜の両者に存在するＰＤＺドメイン含有タンパク質である。このタンパク質は、ＧＩＰＣ又はＴＩＰ−２（Ｔａｘ相互作用タンパク質クローン２）と呼ばれているが、小胞輸送及びタンパク質ネットワークの形成に関係している。これには、ＲＧＳ−Ｇａ相互作用タンパク質に結合する能力、Ｃドメインへの結合能、ＨＴＬＶ−１発癌遺伝子ｔａｘに結合、並びにａ−アクチニン及びグルコース輸送体１の両者への結合等の幾つかの特性を有している。このタンパク質の正確な生理学的役割は未知であるが、乳癌細胞中で常に過剰発現され、前立腺癌細胞では発現があってもごくわずかで、ヒト線維芽細胞では発現されていない。ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２は４２ｋＤａのタンパク質であり、恐らくそのＮ末端に２つのオープンリーディングフレームがあるために、二本のバンドの形でウェスタンブロット上に存在している。ＳＫ−ＢＲ−３ヒト乳癌細胞あたりのコピー数は極めて多く、１細胞につき約３００，０００コピーである。この抗原を同定した２つの完全なヒト抗体  はＩｇＭアイソタイプに属し、異なるエピトープ特異性を有する。前記抗体のうちの１つである２７．Ｂ１は、ＴＩＰ−２陽性の細胞表面に対して有意な免疫反応性を有するが、もうひとつの２７．Ｆ７は固定した細胞にのみ、すなわち細胞内で反応する。２７．Ｂ１は重大な内部移行能力も発現するが、２７．Ｆ７は発現しない。補体の存在及び不在下で、２７．  Ｂ１の生物学的効果を検査すると、この抗体は、補体なしで細胞の細胞溶解／細胞静止作用を引き起こせることが明らかになった。この効果のメカニズムはアポトーシスである可能性が最も高い。
【０６６５】
本明細書で同定したタンパク質は、最近、ＧＩＰＣ（ＧＡＩＰ相互作用タンパク質Ｃ末端）（そのＰＤＺドメインにより標的タンパク質の前記Ｃ末端モチーフと結合するタンパク質）として記述された（６）。この例では、前記標的タンパク質はＧＡＩＰ（Ｇａｉ３相互作用タンパク質）、膜固定ＲＧＳ（Ｇタンパク質情報伝達の制御因子）タンパク質であり、これは、Ｇタンパク質のａｉ３サブユニットと相互作用してそのＧＴＰ加水分解酵素活性を高め、前記Ｇタンパク質の非活性化を促進する（図１８、１９）（７）。ＧＩＰＣは、現在のところ、ＧＡＩＰのＣ末端に結合すると記載されている唯一のタンパク質である。この相互作用の機能的意義については未知である。最近では、Ｒｏｕｓｓｅｔら（８）が、ＨＴＬＶ−１のＴａｘトランス活性化因子タンパク質をおとりとして使用して、不完全なＧＩＰＣ  ｃＤＮＡを単離した。彼らは、このＧＩＰＣ  ＴＩＰ−２型をＴａｘ相互作用タンパククローン２と呼び、この型が効果的にＴａｘ腫瘍性タンパク質のＣ末端と相互作用することを証明した。Ｔａｘ腫瘍性タンパク質は、そのＣ末端を介してＰＤＺドメインと結合する唯一の腫瘍性タンパク質ではない。ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）のＥ６腫瘍性タンパク質（９）及びＤアデノウイルス９型（Ａｄ９）のＥ４腫瘍性タンパク質も、ＰＤＺドメインと結合するＣ末端モチーフを有する（１０）。このような結合が、ＨＰＶに関連する癌の発達又は乳房腫瘍のＥ４腫瘍性タンパク質の場合に根底を成す機序でるかもしれない（メスのラットのエストロゲン依存性乳癌にのみ誘発されるという点において、Ａｄ９は他に類がない［１１］）。３つの腫瘍性タンパク質の全てにおいて、Ｃ末端領域は、形質転換の潜在能力を誘発する上で重大である（８、９、１０）。Ｓ／ＴＸＶは、Ｃ末端モチーフとして、ＰＤＺドメインとの相互作用において重要である。重大なＣ末端のバリンが、例えば、アラニンと交換されても、Ｔａｘ腫瘍性タンパク質はＴＩＰ−２と相互作用を保持するが、その他全てのＴａｘ結合性ＰＤＺドメイン含有タンパク質はその結合能を失うことが判明した。ヒトの乳癌細胞株ＳＫ−ＢＲ−３から調製したｃＤＮＡ発現ライブラリに対して、乳癌患者から得たＢ細胞由来の抗体をスクリーニングすることによってＴＩＰ−２を同定した。簡単に言うと、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡを前記細胞から単離し、ｃＤＮＡに転写してラムダ偽溶解ファージとライゲートし，約５Ｘ１０５の組換え体を得た。前記ファージをＥ．ｃｏｌｉ  Ｙ１０９０中で増幅した後、ニトロセルロース膜に転写し、ヒト抗体で処理をした。抗体に曝露した後に、前記膜を西洋ワサビペルオキシダーゼに結合した抗ｕ鎖のウサギポリクロナール抗体で処理した。陽性のｃＤＮＡクローンをインビボで切除してプラスミド型に変え、前記プラスミドＤＮＡを精製して配列分析に供した（図８）。得られた配列を、遺伝子銀行データベースを利用してホモロジー検索に供した。乳癌患者のリンパ節のＢ細胞から発生した二つのヒトモノクローナル抗体（２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１）が、ＴＩＰ−２と（明らかに異なるエピトープと）反応する抗体として同定された。
【０６６６】
このタンパク質に関する遺伝子バンク／タンパク質データベースの情報は以下のとおりである。ＮＣＢＩレファレンス−ＮＰ００５７０７．１ＰＧＧＬＵＴ１ＣＢＰ；  ホモサピエンス  ＲＧＳ−ＧＡＩＰ相互作用タンパク質ＧＩＰＣ  ｍＲＮＡ、  完全ｃｄｓ（ＡＦ０８８９８１６）；  ホモサピエンスＴａｘ相互作用タンパク質２  ｍＲＮＡ、部分ｃｄｓ  （ＡＦ０２８８２４）。本発明は該抗原、Ｔａｘ相互作用タンパク質２（ＴＩＰ−２）が、乳房及び前立腺の腺癌において独特の特異的なマーカーとなり得ることを立証する。
【０６６７】
実験の要約
特異的な融合パートナー細胞株ＭＦＰ−２を使用して、乳房及び前立腺の癌関連抗原に対する２つの完全ヒト抗体を開発した。何れの抗原も、ＳＥＲＥＸ技術によって、Ｇａ相互作用タンパク質、Ｃ末端又はＴａｘ相互作用タンパク質クローン２として同定された４２ｋＤａのタンパク質標的と反応した。このタンパク質は３つのヒト乳癌細胞株のＳＫ−ＢＲ−３、ＭＣＦ−７及びＺＲ−１−７５中で特異的に過剰発現しており、ヒト前立腺癌系のＰＣ−３、ＬＮＣａＰ及びＤＵ−１４５中での発現レベルは発現しているとしても極めて低く、２つのヒト線維芽細胞株中では発現していない。全ての乳癌組織及び前立腺癌のほとんどにおいて、前記ＴＩＰ−２抗原が発現することが認められた。正常な乳房上皮は良性前立腺肥大（ＢＰＨ）組織と同様に、抗ＴＩＰ−２抗体との染色は陰性であった。ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２に対する２つの完全なヒトモノクローナル抗体は異なるエピトープを標的とし、ヒト乳癌細胞との免疫反応性のパターンが異なっていた。抗体２７．Ｆ７は、ホルマリン固定された癌細胞及び生きた癌細胞ＳＫ−ＢＲ−３及びＭＣＦ−７の何れとも反応したが、抗体２７．Ｂ１は、生きたＳＫ−ＢＲ−３細胞と固定したＳｋ−ＢＲ−３、及び固定したＭＣＦ−７細胞のみと反応した。抗体２７．Ｂ１は急速な内部移行を示したが、２７．Ｆ７は内部移行しないであろう。また、補体の存在及び不在下で細胞溶解性／細胞静止作用の検査を行ったときに、２７．Ｆ７は前記細胞に対していかなる細胞傷害効果も引き起こさないのに対して、２７．Ｂ１は補体に依存しない細胞傷害効果を引き起こすようであった。１細胞あたりのＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２抗原のコピー数をスキャッチャード分析すると、このように、抗原は、１細胞あたり約３００  ０００コピーに達するほど極めて大量のコピー数で存在することが示された。これは、表面上及びサイトゾルの両者に存在するＴＩＰ−２分子の総数を含む。前記ヒト抗体２７．Ｆ７を免疫沈降法のおとりとして使用して、少量のＴＩＰ−２を単離し、この抗原に対する幾つかのマウスモノクローナル抗体を産生させることができた。前記抗体は全て、ウェスタンブロット中でＴＩＰ−２に対応するタンパク質バンドと反応し、特有且つ特異的に癌細胞お呼び原発腫瘍組織を陽性染色する。ヒト抗体を使用することによって、通常、ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２は、癌細胞によって分泌又は流出されないが、細胞が破壊されたときだけ培地中に見出すことができるということが明らかとなった。増量するタキソールでＳＫ−ＢＲ−３細胞を処理すると、ＴＩＰ−２抗原が容量依存的に培地中に放出されるのが見られ、従って、このマーカーが腫瘍病巣の自然壊死または化学療法により誘発された壊死をモニタリングするのに役立つことが示されている。
第３群の実験のための参考文献
【参考文献２】
2004518630.tif 000007
2004518630.tif 000008
【０６６８】
第４群の実験
乳癌及び前立腺癌患者のＢ細胞から得られた天然のヒトモノクローナル抗体によって同定されたタンパク質抗原
序
ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２に加えて、第３群の実験（上記）に記載した方法は、以下に列記されたものを含むその他のタンパク質を同定するためにも使用し得る。
【０６６９】
例Ｉ：ＫＩＡＡ０３３８遺伝子、部分ｃｄｓ
完全なヒトモノクローナル抗体（ｆｈＭＡｂ）１３．４２は、ＫＩＡＡ０３３８と称される遺伝子として知られる未知の抗原ヒトｍＲＮＡ（配列は図３２に示されている）を認識する。該乳癌関連マーカーの計算上の分子量（ＭＷ）は１０３．５ｋＤａであるが、ウェスタンブロット上では、約４０ｋＤａの分子量のタンパク質として示される。前記配列から３つのＭＨＣ  Ｉ結合ペプチドが推定され、これらのペプチドは、ペプチドワクチンの候補として検討され得るかもしれない。
【０６７０】
例ＩＩ：ヒト非筋肉α−アクチニンｍＲＮＡ、完全なｃｄｓ；ヒトアクチニン、α４（ＡＣＴＮ４）ｍＲＮＡ
ｆｈＭＡｂ１３．２Ｃ１は、ＭＷ  １０５ｋＤａの非筋肉α−アクチニン（図３３に示された配列）（多くのヒト組織には見られないが、該マーカーと乳癌との関連についての報告が存在する）を認識する。本発明者らは、乳癌に対するペプチドワクチン候補として検討することができる３つのＭＨＣ拘束ペプチドを推定した。ｆｈＭＡｂ１３．２Ｃ１は、ヒトのアクチニン、α４（ＡＣＴＮ４）のｍＲＮＡ（配列は図３４に示されている）も認識する。
【０６７１】
例ＩＩＩ：ヒトクラスリンコート集合タンパク質５０（ＡＰ５０）のｍＲＮＡ  ｆｈＭＡｂ２２．８Ｄ１１は、分子量５０ｋＤａのヒトクラスリンコート集合タンパク質５０（ＡＰ５０）である乳癌及び前立腺癌関連マーカーに対する抗体である。そのｍＲＮＡ（配列は図３４に示されている）は、卵巣腫瘍を含む幾つかのヒト組織中に報告されたが、該タンパク質産物は、乳癌と前立腺癌に関連しているようである。本発明者らの知る限りでは、該マーカーがこの種の癌と関連しているという報告は以前にはなかった。本発明者らは、４つのＭＨＣ  Ｉ拘束ペプチドがペプチドワクチン候補として重要である可能性があると推定した。
【０６７２】
例ＩＶ：ヒトｇｐ１３０関連タンパク質ＧＡＭ  ｍＲＮＡ；ヒトのスプリットアミノ末端エンハンサー（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ；アンチキチン１ｍＲＮＡ
ｆｈＭＡｂ  ３３．２Ｈ６は、分子量約２２ｋＤａのヒトｇｐ１３０関連タンパク質ＧＡＭに対する抗体である。該タンパク質のｍＲＮＡ（配列は図３７に示されている）が卵巣腫瘍中に見出されていたが、該タンパク質が乳癌関連抗原であることは以前には全く報告されていなかった。その相同体であるヒトのスプリットアミノ末端エンハンサー（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（配列は図３８に示されている）は未知の機能を有しているが、ヒト癌抗原の候補として提案されている。本発明者らは、ペプチドワクチンの候補となり得るＭＣＨ  Ｉ結合ペプチドを１つ推定した。同抗体はアンチキチン１（分子量約５５ｋＤａ）――２６ｇ膨圧タンパク質相同体（配列は図３９に示されている）に対して反応した。該抗原に対する部分ｍＲＮＡが多数のヒト組織中に見出されたが、乳癌との関連はこれまでに全く報告されていなかった。本発明者らは、該タンパク質のアミノ酸配列から３つのＭＨＣ  Ｉ拘束ペプチドを推定した。
【０６７３】
例Ｖ：ＡＲＰ２／３タンパク質複合体４１ｋＤサブユニット（Ｐ４１−ＡＲＣ）、ｍＲＮＡ
ｆｈＭＡｂ３９．Ａ７は、ＡＲＰ２／３タンパク質複合体４１ｋＤａサブユニと（Ｐ４１−ＡＲＣ）に対する抗体である。該タンパク質は、これまでに乳癌と関連していることは知られていなかった。本発明者らは、ペプチドに基づくワクチンの候補としてＭＨＣ  Ｉ拘束ペプチドを１つ推定した（図４０に示された配列）。
【０６７４】
例ＶＩ：ヒトｓｅｂ４Ｄ  ｍＲＮＡ；ヒトｓｅｂ４Ｂ  ｍＲＮＡ
ｆｈＭＡｂ５０．１Ｂ３は、分子量約２５ｋＤａのｓｅｂ４Ｂ／４Ｄ抗原として同定された乳癌及び前立腺癌組織中のタンパク質を認識する。該タンパク質も、乳癌と特異的に関連していることは知られていなかった。機能は未知であるが、そのｍＲＮＡは数多くの正常なヒト組織中に見出された。本発明者らは、該タンパク質の一次配列から２つのＭＨＣ  １拘束ペプチドを推定した（配列は図４１ａと４１ｂに示されている）。
【０６７５】
例ＶＩＩ：ヒトラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）  ｍＲＮＡ
ｆｈＭＡｂ  ５９．３Ｇ７は、そのｍＲＮＡが多くのヒト組織中に見出されているヒトラミンＡ／Ｃ中間径フィラメントタンパク質に対して反応する。該タンパク質に対するＭＷは約６５ｋＤａである。該タンパク質は、癌患者中に見出された血清抗体を通じて、異なる研究グループによって以前に同定された。該タンパク質は、乳腺癌の他、他の幾つかの種類の癌の中で過剰発現されると考えられている。本発明者らは、ペプチドに基づくワクチンの候補となり得る３つのＭＨＣ  Ｉ拘束を推定した（配列は図４２Ａ−Ｃに示されている）。
【図面の簡単な説明】
【図１】
染色体数による細胞の分布。Ｘ軸は染色体の数を示す。Ｙ軸は表記の染色体数を有する細胞のパーセンテージを示す。該データは、各系につき５０以上の分裂中期板の分析に基づいた平均を表す。図１Ａ、Ｐ３．Ｘ６３．Ａｇ８．６５３、図１Ｂ、ＲＰＭＩ８２２６、図１Ｃ、Ｂ６Ｂ１１。
【図２】
Ｂ６Ｂ１１株のＧバンド核型の断片。矢印は、ヒト由来と推定される遺伝物質を示す。３番染色体及び１９番染色体の３ｐ部分。
【図３】
新しく単離した脾細胞及び培養脾細胞とのＢ６Ｂ１１の融合効率。前記細胞の一部をＢ６Ｂ１１細胞と融合し、ＣｏｎＡ、ＬＰＳ、ＰＨＡ、ＰＷＭの存在下で又は分裂促進因子なしで、１５％  ＦＣＳを含むＲＰＭＩ−Ｃ中で、残りのＳＰＬを７〜９日間、インビトロで培養した直後に、ＳＰＬをＬＳＭ中で単離し、その後、これらの細胞をＢ６Ｂ１１とも融合させた。５μｇ／ｍｌの濃度のＰＷＭは、効果的に前記融合効率に影響を与えた。
【図４】
親細胞６５３（図４Ａ）及び８２２６（図４Ｂ）、ヘテロミエローマ  Ｂ６Ｂ１１（図４Ｃ）及びＢ６Ｂ１１脾細胞ハイブリッド（図４Ｄ）のＤＮＡヒストグラム。Ｂ６Ｂ１１のＤＮＡの量は、６５３ＤＮＡに８２２６ＤＮＡを加算した総量の約１００％を占める。Ｂ６Ｂ１１−ＳＰＬハイブリッドのＤＮＡ含有量は、Ｂ６Ｂ１１よりも多い。
【図５Ａ】
ＭＦＰ−２とＰＢＬｓの融合由来のハイブリドーマ（テトローマ）による免疫グロブリン産生。図５Ａは、新しいリンパ球懸濁液とＭＦＰ−２の融合の結果を示す。
【図５Ｂ】
図５Ｂは、凍結／融解されたリンパ球懸濁液とＭＦＰ−２の融合の結果を示す。黒の長方形はＩｇＭ産生を示す。灰色の長方形はＩｇＧ産生を示す。Ｙ軸は、前記ＭＦＰ−２トリオーマ株（Ｘ軸）と融合して発生した様々なハイブリドーマの試料（テトローマ）のＡ４９０での吸光度を示す。点線は、１：５００希釈したＩｇＭ抗体のＡ４９０での吸光度を示す。破線は、１：５００希釈したＩｇＧ抗体のＡ４９０での吸光度を示す。
【図６】
融合パートナーＭＦＰ−２細胞に融合した甲状腺癌リンパ節リンパ球による抗チログロブリン抗体産生。Ｙ軸は、前記ＭＦＰ−２トリオーマ株（Ｘ軸）との融合から得られた様々なハイブリドーマ試料（テトローマ）のＡ４０５（ＯＤ４０５）での吸光度を示す。３３のテトローマはチログロブリンに陽性反応する抗体を産生した。そのうち８つが特に強い反応性を示した。
【図７】
抗ＴＩＰ−２  ｆｈＭＡｂｓで処理した固定細胞又は生きた細胞のフローサイトメトリー分析。緑＝対照、赤＝抗体で処理した細胞。
【図８】
ＴＩＰ−２の存在についての、乳癌及び前立腺癌の細胞ライセートのウェスタンブロット分析。２つの非形質転換ヒト線維芽細胞株を負の対照として使用した。ヒトモノクローナル抗ＴＩＰ−２抗体２７．ＢＩ及び２７．Ｆ７をタグとして使用した。７ｍｇの総細胞ライセートタンパク質を各株に適用した。強いＴＩＰ−２発現が乳癌細胞に観察できる。
【図９】
ヒトモノクローナル抗ＴＩＰ−２抗体２７．Ｂ１及び２７．Ｆ７によるホルマリン固定ヒト細胞の免疫蛍光染色。サイズバーは２０ｍｍを表す。免疫蛍光染色を示す本図及びその他の図において、赤は、細胞核を対比染色するプロビジウムヨウ化物であり、緑はＦＩＴＣ標識抗体染色である。ＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞に対して共焦点顕微鏡検査を行った。
【図１０】
ヒトの抗ＴＩＰ−２モノクローナル抗体２７．Ｂ１を用いた正常及び癌のヒト乳房組織の免疫蛍光染色。上段パネル−浸潤性導管腺癌の様々な症例。下段パネル−正常な乳房組織。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１１】
ヒト抗ＴＩＰ−２モノクローナル抗体２７．Ｂ１を用いたヒトの前立腺組織の免疫蛍光染色。上段パネル−前立腺の腺癌の様々な症例。下段パネル−負の対照群として良性前立腺肥大。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１２】
図４と同じであるが、ｆｈＭＡｂ２７．Ｆ７を用いた。
【図１３】
図５と同じであるが、ｆｈＭＡｂ２７．Ｆ７を用いた。
【図１４】
乳癌が転移したリンパ節の免疫蛍光染色。本実験では、ヒトモノクローナル抗ＴＩＰ−２抗体２７．Ｂ１及び２７．Ｆ７を使用した。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１５】
２つの抗ＴＩＰ−２抗体２７．Ｂ１及び２７．Ｆ７を用いた乳腺癌のホルマリン固定切片及び新鮮な状態で凍結した切片。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１６】
ｆｈＭＡｂｓ２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１を用いた男性の乳房分泌管内癌及び精上皮腫を免疫蛍光染色。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１７】
ｆｈＭＡｂｓ  ２７．Ｆ７及び２７．Ｂ１を使用した乳癌及びその他の癌組織並びに正常組織の免疫蛍光染色。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図１８】
Ｇタンパク質情報伝達系の模式図
【図１９】
Ｇ情報伝達系の調節物質及びＰＤＺドメイン含有タンパク質。
【図２０】
ＳＥＲＥＸ技術の原理。
【図２１】
ヒト抗ＴＩＰ−２抗体での免疫沈降及びウェスタンブロット法を用いたＴＩＰ−２に対するマウスの免疫化。
【図２２】
ＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセートから得たＴＩＰ−２とのポリクロナールマウス抗ＴＩＰ−２抗血清の免疫反応性。ヒト抗体２７．Ｆ７を正の対照として使用した。
【図２３】
ＴＩＰ−２で免疫化したマウスの免疫血清を用いた乳腺癌の免疫組織化学的染色。サイズバーは２０ｍｍを表す。
【図２４】
抗ＴＩＰ−２抗体２７．Ｆ７のＫａの分析及びＳＫ−ＢＲ−３細胞に存在するＴＩＰ−２のコピー数の算出。
【図２５】
正常及び癌性乳房上皮におけるＴＩＰ−２の発現。
【図２６】
抗ＴＩＰ−２抗体２７．Ｆ７のリポソームへの結合。
【図２７】
ＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセートを加えたヒト血清由来ＴＩＰ−２のアルコール沈殿。
【図２８】
様々な濃度のタキソールで処理したＳＫ−ＢＲ−３細胞の細胞培地中へのＴＩＰ−２抗原の放出。前記系統は以下のとおり（左から右へ）：１）約７０，０００細胞から調製したＳＫ−ＢＲ−３細胞ライセート、２）空のレーン、３）タキソール、約２５０，０００細胞を含む３５ｍｍの組織プレートに８８μＭを添加、４）タキソールと同様、４４μＭ、５）タキソールと同様、２２μＭ、７）タキソールと同様、１１μＭ、８）タキソールと同様、５．５μＭ、９）タキソールで処理していない細胞から調製した細胞ライセート；１０）タキソールで処理した後の残存死細胞の残遺物から調製したライセート，８８μＭ。
【図２９】
ＧＩＰＣ／ＴＩＰ−２タンパク質のアミノ酸配列。イタリック体は、ＴＩＰ−２のみのアミノ酸配列。下線は、強いＨＬＡ−＊Ａ０２０１結合剤（理論計算）として同定された２つのペプチドである。
【図３０】
ＧＩＰＣのｍＲＮＡ配列。ＴＩＰ−２に対応する前記配列部分に下線を引いている。
【図３１Ａ−１】
乳癌及び前立腺癌患者のＢ細胞から生じた天然ヒトモノクローナル抗体によって同定されたタンパク質抗原。
【図３１Ａ−２】
乳癌及び前立腺癌患者のＢ細胞から生じた天然ヒトモノクローナル抗体によって同定されたタンパク質抗原。
【図３１Ａ−３】
乳癌及び前立腺癌患者のＢ細胞から生じた天然ヒトモノクローナル抗体によって同定されたタンパク質抗原。
【図３１Ａ−４】
乳癌及び前立腺癌患者のＢ細胞から生じた天然ヒトモノクローナル抗体によって同定されたタンパク質抗原。
【図３２Ａ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３２Ｂ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３２Ｃ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３２Ｄ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３２Ｅ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３２Ｆ】
ＫＩＡＡ０３３８遺伝子のヒトｍＲＮＡ配列、部分ｃｄｓ。
【図３３Ａ】
ヒトの非筋アルファアクチニンｍＲＮＡ配列、完全なｃｄｓ−ＡＣＴＮ４（アクチニン−４）と称される第二非筋アルファアクチニンアイソフォーム。
【図３３Ｂ】
ヒトの非筋アルファアクチニンｍＲＮＡ配列、完全なｃｄｓ−ＡＣＴＮ４（アクチニン−４）と称される第二非筋アルファアクチニンアイソフォーム。
【図３３Ｃ】
ヒトの非筋アルファアクチニンｍＲＮＡ配列、完全なｃｄｓ−ＡＣＴＮ４（アクチニン−４）と称される第二非筋アルファアクチニンアイソフォーム。
【図３３Ｄ】
ヒトの非筋アルファアクチニンｍＲＮＡ配列、完全なｃｄｓ−ＡＣＴＮ４（アクチニン−４）と称される第二非筋アルファアクチニンアイソフォーム。
【図３４Ａ】
ヒトアクチニン、アルファ４（ＡＣＴＮ４）ｍＲＮＡ配列。
【図３４Ｂ】
ヒトアクチニン、アルファ４（ＡＣＴＮ４）ｍＲＮＡ配列。
【図３４Ｃ】
ヒトアクチニン、アルファ４（ＡＣＴＮ４）ｍＲＮＡ配列。
【図３５Ａ】
クラスリン被覆集合タンパク質ＡＰ５０ｍＲＮＡ配列。
【図３５Ｂ】
クラスリン被覆集合タンパク質ＡＰ５０ｍＲＮＡ配列。
【図３５Ｃ】
クラスリン被覆集合タンパク質ＡＰ５０ｍＲＮＡ配列。
【図３６Ａ】
ヒトＧＬＵＴ１Ｃ末端結合タンパク質（ＧＬＵＴ１ＣＢＰ）ｍＲＮＡ配列。
【図３６Ｂ】
ヒトＧＬＵＴ１Ｃ末端結合タンパク質（ＧＬＵＴ１ＣＢＰ）ｍＲＮＡ配列。
【図３６Ｃ】
ヒトＧＬＵＴ１Ｃ末端結合タンパク質（ＧＬＵＴ１ＣＢＰ）ｍＲＮＡ配列。
【図３７】
ｇｐ１３０関連タンパク質ＧＡＭ配列。
【図３８】
ヒトのスプリットアミノ末端エンハンサー分割（ＡＥＳ、ａｍｉｎｏ−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｅｎｈａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｓｐｌｉｔ）のｍＲＮＡ配列。
【図３９Ａ】
アンチキチン１（アンチキチン＝２６ｇ膨圧タンパク質相同体）、ｍＲＮＡ配列。
【図３９Ｂ】
アンチキチン１（アンチキチン＝２６ｇ膨圧タンパク質相同体）、ｍＲＮＡ配列。
【図３９Ｃ】
アンチキチン１（アンチキチン＝２６ｇ膨圧タンパク質相同体）、ｍＲＮＡ配列。
【図４０】
ＡＲＰ２／３タンパク質複合体４１ＫＤサブユニット（Ｐ４１−ＡＲＣ）、ｍＲＮＡ配列。
【図４１Ａ】
ヒトのｓｅｂ４Ｄ  ｍＲＮＡ配列。
【図４１Ｂ】
ヒトのｓｅｂ４ＢｍＲＮＡ配列。
【図４２Ａ】
ヒトのラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）ｍＲＮＡ配列。
【図４２Ｂ】
ヒトのラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）ｍＲＮＡ配列。
【図４２Ｃ】
ヒトのラミンＡ／Ｃ（ＬＭＮＡ）ｍＲＮＡ配列。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
2004518630.tif 000022
【図１４】
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【図１５】
2004518630.tif 000024
【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ−１】
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【図３１Ａ−２】
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【図３１Ａ−３】
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【図３１Ａ−４】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３２Ｃ】
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【図３２Ｄ】
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【図３２Ｅ】
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【図３２Ｆ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３３Ｃ】
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【図３３Ｄ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３４Ｃ】
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【図３５Ａ】
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【図３５Ｂ】
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【図３５Ｃ】
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【図３６Ａ】
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【図３６Ｂ】
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【図３６Ｃ】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９Ａ】
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【図３９Ｂ】
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【図３９Ｃ】
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【図４０】
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【図４１Ａ】
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【図４１Ｂ】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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