(57)【要約】本発明は、式Ｉ【化１】2006503814.tif 000066〔式中、記号および置換基は明細書で定義の通りである。〕のエポシロン誘導体、このような誘導体を含む医薬組成物およびこのような誘導体の、特に腫瘍のような増殖性疾患の処置のための医薬組成物の製造における使用に関する。
2006503814.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2006503814.tif 000031
〔式中、式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体である場合、Ｘは酸素またはＣＨ２であり、式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ−異性体である場合、ＸはＣＨ２であり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体であり、Ｘが酸素である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化２】
2006503814.tif 000032
(式中、Ｒ２は−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化３】
2006503814.tif 000033
(式中、Ｒ２は−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルまたは水素であり；
Ｒ１がメチルである場合、Ｒは
【化４】
2006503814.tif 000034
からなる群から選択されるラジカルであり、Ｒ１が水素である場合、
Ｒは
【化５】
2006503814.tif 000035
からなる群から選択されるラジカルである。〕
の化合物、または塩形成基が存在する場合、式Ｉの化合物の塩。
【請求項２】
式II：
【化６】
2006503814.tif 000036
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化７】
2006503814.tif 000037
を有する群から選択されるラジカルである。〕
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
以下の式：
【化８】
2006503814.tif 000038
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
以下の式：
【化９】
2006503814.tif 000039
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
以下の式：
【化１０】
2006503814.tif 000040
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項６】
以下の式：
【化１１】
2006503814.tif 000041
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項７】
以下の式：
【化１２】
2006503814.tif 000042
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項８】
以下の式：
【化１３】
2006503814.tif 000043
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項９】
以下の式：
【化１４】
2006503814.tif 000044
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化１５】
2006503814.tif 000045
からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、化合物。
【請求項１０】
以下の式：
【化１６】
2006503814.tif 000046
の化合物である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
以下の式の化合物である、請求項２記載の化合物。
：
【化１７】
2006503814.tif 000047
の化合物である、請求項９記載の化合物。
【請求項１２】
以下の式：
【化１８】
2006503814.tif 000048
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
以下の式：
【化１９】
2006503814.tif 000049
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
式IV：
【化２０】
2006503814.tif 000050
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化２１】
2006503814.tif 000051
からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
以下の式：
【化２２】
2006503814.tif 000052
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
以下の式：
【化２３】
2006503814.tif 000053
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１７】
以下の式：
【化２４】
2006503814.tif 000054
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１８】
以下の式：
【化２５】
2006503814.tif 000055
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１９】
以下の式：
【化２６】
2006503814.tif 000056
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項２０】
式Ｖ：
【化２７】
2006503814.tif 000057
〔式中、Ｒは−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
以下の式
【化２８】
2006503814.tif 000058
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
以下の式
【化２９】
2006503814.tif 000059
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２３】
以下の式
【化３０】
2006503814.tif 000060
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２４】
以下の式
【化３１】
2006503814.tif 000061
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２５】
以下の式
【化３２】
2006503814.tif 000062
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２６】
以下の式：
【化３３】
2006503814.tif 000063
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項２７】
以下の式：
【化３４】
2006503814.tif 000064
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項２８】
請求項１−２７のいずれかに記載の化合物の治療的量を、薬学的に許容される担体と共に含む、哺乳動物の増殖性疾患の処置のための医薬組成物。
【請求項２９】
哺乳動物がヒトである、請求項２８記載の医薬組成物。
【請求項３０】
薬学的に許容される担体または希釈剤と、請求項１から２７のいずれかに記載の化合物、または可能である場合、その薬学的に許容される酸または塩基付加塩を含む、医薬組成物。
【請求項３１】
増殖性疾患の処置用医薬の製造における、請求項１から２７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項３２】
ヒトまたは動物身体を処置する方法に使用するための、請求項１から２７のいずれかに記載の化合物。
【請求項３３】
増殖性疾患の処置法であり、そのような処置を必要とする哺乳動物に治療的有効量の請求項１から２７のいずれかに記載の化合物、または可能である場合、その薬学的に許容される酸または塩基付加塩を投与することを含む、方法。
【請求項３４】
式VI
【化３５】
2006503814.tif 000065
〔式中、ＸおよびＲは請求項１から２７で定義した任意の意味を有し、ＰＧはヒドロキシ官能基の保護基である。〕
の化合物を、第１段階で、所望により触媒の存在下、エステル化反応により縮合し、
第２段階で保護基を離して式Ｉの化合物のラクトンをもたらすことを含む、
請求項１から２７のいずれかに記載の化合物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
記述
技術分野：
本発明は、抗腫瘍剤に関する。より具体的に、本発明は、抗腫瘍剤としてのエポシロンＢのアナログである、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ−１２,１３−シクロプロピルエポシロンＢならびにｃｉｓおよびｔｒａｎｓ−１２,１３−エポキシドエポシロンＢに関する。
【０００２】
要約：
本発明は、Taxol(登録商標)−耐性腫瘍細胞を含む、種々の細胞系に対して強力な細胞毒性活性を有する、エポシロンＢのアナログ、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ−１２,１３−シクロプロピルエポシロンＢならびにｃｉｓおよびｔｒａｎｓ−１２,１３−エポキシドエポシロンＢに関する。本発明の例示的実施態様は、図１に記載の化合物３、６、および８−１４ならびに図１１に記載の化合物３、４９、および５０−６０を含む。本発明の他の態様は、このような化合物の細胞毒性剤としての使用に関する。
【０００３】
本発明の一つの態様は、式Ｉ：
【化１】
2006503814.tif 000003
〔式中、式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体である場合、Ｘは酸素またはＣＨ２であり、式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ−異性体である場合、ＸはＣＨ２であり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体であり、Ｘが酸素である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化２】
2006503814.tif 000004
(式中、Ｒ２は−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化３】
2006503814.tif 000005
(式中、Ｒ２は−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
【０００４】
式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルまたは水素であり；
Ｒ１がメチルである場合、Ｒは
【化４】
2006503814.tif 000006
からなる群から選択されるラジカルであり、Ｒ１が水素である場合、
Ｒは
【化５】
2006503814.tif 000007
からなる群から選択されるラジカルである。〕
の化合物、または塩形成基が存在する場合、式Ｉの化合物の塩に関する。
【０００５】
化合物、塩などに関して複数形を使用する場合、単数の化合物、塩なども意味すると解されるべきである。
【０００６】
塩は、主に式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩である。
【０００７】
このような塩は、例えば、酸付加塩として、好ましくは有機または無機酸と、塩基性窒素原子を有する式Ｉの化合物から形成され、とりわけ薬学的に許容される塩である。適当な無機酸は、例えば、塩酸のような水素化ハライド酸、硫酸、またはリン酸である。適当な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキシ酪酸、グルコン酸、グルコースモノカルボン酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、または、グルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎ−メチルグリシン、アセチルアミノ酢酸、Ｎ−アセチルアスパラギンまたはＮ−アセチルシステインのようなアミノ酸、ピルビン酸、アセト酢酸、ホスホセリン、２−または３−グリセロリン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、１−または３−ヒドロキシナフチル−２−カルボン酸、３,４,５−トリメトキシ安息香酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、メタン−またはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレン−ジスルホン酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−またはＮ−プロピル−スルファミン酸、または、アスコルビン酸のような他の有機プロトン酸である。
【０００８】
塩形成基を有する式Ｉの化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造し得る。式Ｉの化合物の酸付加塩は、例えば酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得られ得る。
【０００９】
塩は通常遊離化合物に、例えば適当な塩基性剤、例えばアルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩、またはアルカリ金属水酸化物、典型的に炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムでの処理により変換できる。
【００１０】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない、例えば、ピクリン酸または過塩素酸を使用することも可能である。薬学的に許容される塩または遊離化合物のみ(必要があれば、医薬製剤の形で)が治療的使用を達成し、したがって、これらが好ましい。
【００１１】
遊離形の新規化合物と、例えば、新規化合物の精製または同定に中間体として使用できる塩を含むその塩の形の新規化合物の密接な関係の観点から、前記および後記で、遊離化合物に関する記載は適当であり、予測される場合、対応する塩もまた意味すると理解されるべきである。
【００１２】
本発明の他の態様は、式II：
【化６】
2006503814.tif 000008
の化合物に関する。
【００１３】
式IIにおいて、Ｒは以下の構造式：
【化７】
2006503814.tif 000009
を有する群から選択されるラジカルである。
【００１４】
本発明のこの態様の好ましい実施態様は、以下の式：
【化８】
2006503814.tif 000010
で示される化合物を含む。
【００１５】
本発明の他の態様は、式III：
【化９】
2006503814.tif 000011
の化合物に関する。
【００１６】
式IIIにおいて、Ｒは以下の構造式：
【化１０】
2006503814.tif 000012
を有する群から選択されるラジカルである。
【００１７】
本発明のこの態様の好ましい実施態様は、以下の式：
【化１１】
2006503814.tif 000013
により示される。
【００１８】
本発明の他の態様は、以下の構造式：
【化１２】
2006503814.tif 000014
により示される化合物に関する。
【００１９】
本発明の他の態様は、以下の構造式：
【化１３】
2006503814.tif 000015
により示される化合物に関する。
【００２０】
本発明の他の態様は、式IV：
【化１４】
2006503814.tif 000016
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化１５】
2006503814.tif 000017
からなる群から選択されるラジカルである。〕
の化合物に関する。
【００２１】
本発明のこの態様の好ましい実施態様は、以下の構造式：
【化１６】
2006503814.tif 000018
【化１７】
2006503814.tif 000019
【化１８】
2006503814.tif 000020
【化１９】
2006503814.tif 000021
【化２０】
2006503814.tif 000022
により示される化合物を含む。
【００２２】
本発明の他の態様は、式Ｖ：
【化２１】
2006503814.tif 000023
〔式中、Ｒは−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである。〕
の化合物に関する。本発明のこの態様の好ましい実施態様は、以下の構造式：
【化２２】
2006503814.tif 000024
【化２３】
2006503814.tif 000025
【化２４】
2006503814.tif 000026
【化２５】
2006503814.tif 000027
【化２６】
2006503814.tif 000028
で示される化合物を含む。
【００２３】
本発明の別の態様は、以下の構造式：
【化２７】
2006503814.tif 000029
により示される化合物に関する。
【００２４】
本発明の他の態様は、本明細書に記載の上記の化合物またはその中間体の合成法、特に式Ｉ、II、III、IVまたはＶの化合物の製造法であり、式VI
【化２８】
2006503814.tif 000030
〔式中、ＸおよびＲは前記で定義の任意の意味を有し、ＰＧはヒドロキシ官能基の保護基である。〕
の化合物を、第１段階で、所望により触媒の存在下、エステル化反応により縮合し、
第２段階で保護基を離して式Ｉの化合物のラクトンをもたらすものである。
【００２５】
本明細書で使用する“ヒドロキシ基の保護基”は、ヒドロキシ基のための酸不安定保護基を意味し、このような基はそれ自体既知である。容易に、すなわち、望ましくない二次反応なしに、典型的に加溶媒分解、還元、光分解、さらにまた酵素活性により、例えば、生理学的条件と類似の条件下で除去され、最終生成物に存在しないのが保護基の特徴である。当業者は、どの保護基が前記および後記の反応に適しているか知っており、また容易に確証できる。
【００２６】
ヒドロキシ基の保護基による保護、保護基それ自体およびその開裂反応は、J. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Wiley, New York 1981, in “The Peptides”; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in “Methoden der organischen Chemie” (Methods of organic chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jescheit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine”(Amino acids, peptides, proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate”(Chemistry of carbohydrates: monosaccharides and derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974のような標準参考資料に記載されている。
【００２７】
好ましい保護基は、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シリル(ＴＢＳ)エーテル、トリエチルシリル(ＴＥＳ)エーテル、トリイソプロピルシリル(ＴＩＰＳ)エーテル、ジエチルイソプロピルシリル(ＤＥＩＰＳ)エーテル、イソプロピルジメチルシリル(ＩＰＤＭＳ)エーテルまたはテキシルジメチルシリル(ＴＤＳ)エーテルのような酸不安定であるシリルエーテルである。
【００２８】
図面の簡単な説明：
図１は、選択した天然の、および計画したエポシロンの構造を説明する。灰色四角は、本試験で合成した化合物を示す。
【００２９】
図２は、３７℃で、競合リガンドによる微小管結合部位(５０nM)からの蛍光タキソイドFlutax-2(５０nM)の置換を示すチャートを記載する。
【００３０】
図３は、２−(チオメチル)チアゾールエポシロンＢ(３)の、Stilleカップリングによる合成を示す。
【００３１】
図４は、ｔｒａｎｓ−シクロプロピルエポシロンＢアナログ(１−６、８、１０、および１２−１４)の逆合成解析を示す。
【００３２】
図５は、アルデヒド３２の構築を示す。
【００３３】
図６は、ヨウ化ビニル２０ｃ−ｇの構築を示す。
【００３４】
図７は、エポシロンアナログ８−１４の合成を示す。
【００３５】
図８は、パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択した１Ａ９ヒト卵巣癌細胞およびβ−チューブリン変異細胞系に対する、エポシロン１から１４およびパクリタキセルの細胞毒性を示す表を記載する。
【００３６】
図９は、チューブリン重合化力およびエポシロン１−８、１０−１４およびパクリタキセルの、ヒト類表皮癌細胞系に対する細胞毒性を示す表を記載する。
【００３７】
図１０は、微小管のタキソイド結合部位へのエポシロンアナログの結合親和性を記載する表を示す。
【００３８】
図１１は、種々の指定したエポシロンＡおよびＢアナログの一連の構造と、エポシロンＡおよびＢの構造を示す。
【００３９】
図１２は、ヨウ化ビニル１５からの多くのアナログの合成の最終段階を示すスキームである。
【００４０】
図１３は、図１２のスキームに使用するスタンナンの合成に必要な段階を示すスキームである。
【００４１】
図１４は、エポシロンＢのシクロプロピルアナログの骨格を形成するための合成経路を説明するスキームである。
【００４２】
図１５は、シクロプロピルアナログ４８および５０の合成に使用する最終段階を示すスキームである。
【００４３】
図１６は、パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択したヒト癌細胞およびβ−チューブリン変異体細胞系に対するエポシロン４８、５０および５１−６０の細胞毒性の表である。
【００４４】
図１７は、選択したエポシロンのヒト類表皮細胞系ＫＢ−３およびＫＢ−８５１１に対する細胞毒性(nMでのＩＣ５０)である。
【００４５】
本発明の他の態様は、治療的用量の上記の式Ｉ、II、III、IVまたはＶの化合物のいずれかを含む、哺乳動物の増殖性疾患の処置のための医薬組成物に関する。好ましい様式において、哺乳動物はヒトである。
【００４６】
詳細な記載
化学合成による種々の側鎖を有するエポキシドとシクロプロパンエポシロンの構築と生物学的評価を記載する。本発明の中心エポシロンライブラリーの設計は、現在の構造活性相関(ＳＡＲ)の知識、具体的に：(１)エポシロンＢ(２)はエポシロンＡ(１)よりも相対的により強力である；(２)チアゾール部分のメチル基のチオメチル置換は有効性を上昇させる(Nicolaou, K. C.; et al. Angew. Chem. 1998, 110, 2120-2153; Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 2014-2045. Nicolaou, K. C.; et al. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432; Nicolaou, K. C.; et al. Angew. Chem. 1998, 110, 89-92; Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 37, 84-87.)；(３)チアゾール環のピリジンのようなヘテロ環(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Biol. 2000, 7, 593-599.)への置換は、生物学的活性のために窒素の正確な位置を維持する必要がある；そして(４)シクロプロパン環は、活性の損失無しにエポキシド部分と置換できる(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323; Nicolaou, K. C.; et al. ChemBioChem. 2001, 2, 69-75; Johnson, J. A.; et al. Org. Lett. 2000, 2, 1537-1540.)という事実に基づくものである。これらの理由から、エポシロン３、６および８−１４(図１)ならびに４８、５０および５１−６０(図１１)は、化学合成と生理学的評価の第一の候補化合物とみなした。これらの化合物の生物学的評価は、細胞毒性およびチューブリン重合化特性に関してエポシロンの生理学的活性を改善する、望ましい薬理作用団(pharmacophoric group)としてのチオメチルチアゾール側鎖の同定を導いた。増強された活性は、試験化合物の効果を細胞とインビトロの両方で測定した３つの別々の生物学的アッセイにより確認された。
【００４７】
エポシロンアナログの設計および化学合成：
最初の進出として、我々は、エポシロンＢシリーズにおけるメチル置換基と比較したメチルチオ基によるエポシロン骨格に与えられた効果の増強を確認することを決めた。したがって、メチルチオチアゾールエポシロンＢ(３)を、図３に示すようなスタンナン１６(Nicolaou, K. C.; et al. Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 665-697)とヨウ化ビニル１５(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Eur. J. 2000, 6, 2783-2800)のStilleカップリングにより合成した(８０％収率)。観察されたアナログ３の腫瘍細胞系に対する高い効果(表１参照)は、我々がメチルチオアナログの全ファミリーならびに新しいピリジン−含有エポシロンを設計し、合成を続ける励みとなった。
【００４８】
設計したエポシロンアナログ(５１−６０)は、図１２に示すようなヨウ化ビニル１５(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Eur. J. 2000, 6, 2783-2800.)と対応する芳香族性スタンナンから収束的な方法で合成した(試薬および保護基の略語に関しては、図の詳細な記載を参照)。このように、１５と、適当なスタンナン(６４ａ−ｄ、６６ａ−ｄ、６７および６８)とのStilleタイプのカップリングは、ＰｄＣｌ２(ＭｅＣＮ)２、ＣｕＩおよびＡｓＰｈ３の存在下、ＤＭＦ中、環境温度で行い、示した収率で所望のエポシロン(５１−６０)を直接導いた。望ましい芳香族性スタンナンを、図１３に要約したように製造した。このように、チアゾール化合物６４ａ−６４ｄに関して、市販の２,４−ジブロモチアゾール(６２)を対応するチオールとＮａＨの存在下反応させ、より反応性の２−ブロミド置換基の置換を介して、最初に中間体硫化物(６３ａ−６３ｄ)を導いた。続くこれらの基質とＭｅ３ＳｎＳｎＭｅ３のＰｄ(ＰＰｈ３)４存在下、トルエン中の１００℃でのカップリングは、第二のブロミド残基の反応を介して所望の生成物６４ａ−６４ｄをもたらした。ピリジルスタンナン６６ａ−６６ｄを、同様に容易に入手できる２−ブロモピリジン６５ａ、６５ｂ(Virgilio, N. J. Org. Chem. 1973, 38, 2660-2664)、６５ｃ(Nicolaou, K. C.; et al. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432)および６５ｄ(Testaferri, L.; et al. Tetrahedron 1985, 41, 1373-1384)から、金属−ハロゲン交換(ｎＢｕＬｉ)、続く得られた２−リチオ誘導体(Gilman, H.; et al. J. Org. Chem. 1951, 16, 1788-1791)のｎＢｕ３ＳｎＣｌでのクエンチを介して同様に合成した。スタンナン６７(Dinnell, K.; et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 1237-1240)および６８(Jessie, S.; Kjell, U. Tetrahedron 1994, 50, 275-284)を、各々のハライドから対応する文献の方法により製造した。
【００４９】
図４は逆合成形式で、シクロプロピルエポシロンＢアナログの構築に関する経路を概説した。我々の先に報告した概念に基づき、採用したシーケンスは、合成の初期に１２,１３−シクロプロピル部位を確率するためのCharetteシクロプロパン化反応(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323; Charette, A. B.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 11943-11952)、二つの立体中心にＣ６−Ｃ７結合を構築するための我々の最適化方法にしたがったアルドール反応(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Eur. J. 2000, 6, 2783-2800)、側鎖を挿入するための野崎−檜山−岸カップリング(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323; Takai, K.; et al. Tetrahedron Lett. 1983, 24, 5281-5284; Jin, H.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1986, 108, 5644-5646)、そして大環状構造を完成させるための山口マクロラクトン化(macrolactonizaion)(Inanaga, J.; et al. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1979, 52, 1989-1993; Mulzer, J.; et al. Synthesis 1992, 215-228; Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 7974-7991)を必要とする。重要な基礎単位１８または６９と１９および２０は、このようにこれらの構築の出発点と定義した。対応するエポシロンＡアナログの構築は、先に我々が報告したのと同じ方法で行うべきであると考えた(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323)。
【００５０】
図５および図１４は、必要なアルデヒド３２または８２の、容易に入手可能なゲラニオール(１８または６９)からの合成を概説する。このように、１８のCharetteシクロプロパン化(Ｅｔ２Ｚｎ−ＣＨ２Ｉ２、キラルリガンド２１の存在下)(Charette, A. B.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 11943-11952)は、シクロプロピルアルコール２２を、８７％収率、９３％ｅｅまたは７１を８０％収率、９５％ｅｅでもたらした。２２または７１のヒドロキシ基の保護(ＮａＨ−ＢｎＢｒ)(試薬および保護基の略語に関しては、スキームの説明文参照)、続く残りの二重結合のオゾン分解(Ｏ３；ＮａＢＨ４)は、化合物２３または７２を各々８９％または８３％の全体的収率でもたらした。アルコール２３または７２の対応するヨウ化物(２４、９５％収率または７３、９１％)への転換は、メシル化および続くＮａＩとの反応により達成した。(−)−プロピオンアルデヒドＳＡＭＰヒドラゾン(２５)(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 7974-7991; Enders, D. Aymmetric Synth. 1984, 3, 275-339; Enders, D.; Klatt, M. Synthesis 1996, 1403-1418)の、ヨウ化物２４または７３によるＬＤＡ影響下でのアルキル化は、化合物２６または７５(各々８４％収率、８７％収率)をもたらし、その開裂(ＭｅＩ；ＨＣｌａｑ)は、８６％収率でアルデヒド１７をまたは９１％収率で７６を導いた。得られたＣ−８エピマーの比率は、アルデヒド１７由来のＭＴＰＡエステルの１Ｈ  ＮＭＲ分析により、約９７：３であると決定した(Tsuda, M.; Endo, T.; Kobayashi, J. J. Org. Chem. 2000, 65, 1349-1352およびその中に記載の引用文献)。ケトン１９とアルデヒド１７または７６の、先に記載の条件下[ＬＤＡ(２.４当量)、ケトン１９(２.３当量)、−７８から−４０℃、３０分；次いでアルデヒド１７または７６、−７８℃、５分](Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Eur. J. 2000, 6, 2783-2800)でのアルドール縮合は、アルドール生成物２７または７８をもたらし、それを純粋なジアステレオマー形に単離した(８１％収率)。２７または７８の二級アルコールのＴＢＳエーテル(ＴＢＳＯＴｆ、２,６−ルチジン)としての保護、続く１級ＴＢＳ基(ＨＦ・ｐｙ)の選択的開裂は、８８％の全体的収率でアルコール２８をまたは８６％の全体的収率でアルコール７９をもたらした。化合物をカルボン酸に段階的に酸化し(ＤＭＰ；次いでＮａＣｌＯ２)、それを次いでＴＭＳＥエステル２９または８０(ＴＭＳＥ−ＯＨ、ＥＤＣ、４−ＤＭＡＰ)として７５％または７３％の全体的収率で保護した。２９または８０のベンジルエーテルの水素化分解、続くＤＭＰでの酸化は、アルデヒド３０または８２(８４％収率、８７％収率)を導き、高級アルデヒド３２または８３へのそのホモロゲーション(ＮａＨＭＤＳ−ＭｅＯＣＨ２ＰＰｈ３Ｃｌ；次いでＰＰＴＳ)は円滑に進行し、ビニルエーテル３１(約１：１  Ｅ：Ｚ比)を経由し、８２％の全体的収率であった。
【００５１】
側鎖(２０ａ−ｇ、スキーム４および６４ａ−ｄ、６６ａ−ｄ、８４ａおよび８４ｂ、スキーム１５)を、先に報告のように(２０ａ、２０ｂおよび８４ａ)(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323)、(８４ｂ)(Nicolaou, K. C.; et al. J. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432)、または対応するアリールハライド(３３(Ellingboe, J. W.; et al. J. Med. Chem. 1994, 37, 542-550)、３７、３８、３９)から、スキーム４に示すように合成した。４−ヒドロキシメチル−２−ピリジルブロミド３３のトリチルエーテル(ＴｒＣｌ、４−ＤＭＡＰ、１００％)としての保護、続く、得られたアリールブロミド３４のプロピン[Ｐｄ(ＰＰｈ３)２Ｃｌ２−ＣｕＩ、９６％]での薗頭カップリング(Arcadi, A.; et al. Tetrahedron 1994, 50, 437-452)は、アセチレン化合物３５を導き、これは、ヨウ化ビニル２０ｃ(ｎ−ＢｕＬｉ；次いで(ｎ−Ｂｕ３Ｓｎ)２、ＣｕＣＮ、ＭｅＯＨ；次いでＩ２、８０％収率)への前駆体として働いた。３５のトリチルのＭＯＭ基への交換[ＨＣｌ(ｇ)、ＣＨＣｌ３；次いでＮａＨ、ＭＯＭ−Ｃｌ、３４％の全体的収率](Betzer, J.-F.; et al. Tetrahedron Lett. 1997, 38, 2279-2282)は、得られた中間体３６を、３５から２０ｃへの変換に関して上記のものと同じ条件下にさらすことによりヨウ化ビニル２０ｄ(６７％収率)に接近させた。同様の化学反応を、スキーム４に示すように、各々３７−３９からヨウ化ビニル２０ｅ−２０ｇの構築に用いた。
【００５２】
二つの重要な結合の形成と、二つの付随する脱保護は、重要な基礎単位３２(本試験でエポシロンＢアナログのために製造)、４０(先に記載のようにエポシロンＡアナログに関して製造)(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323)および２０ａ−ｇ(側鎖のため)を標的エポシロンアナログから分離する。最初の操作は、アルデヒド３２および４０のヨウ化ビニル２０ａ−ｇとの野崎−檜山−岸カップリング(Takai, K.; et al. Tetrahedron Lett. 1983, 24, 5281-5284; Jin, H.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1986, 108, 5644-5646)であった。この炭素−炭素結合形成反応は、この例では十分に働き(ＣｒＣｌ２、ＮｉＣｌ２、４−ｔ−ＢｕＰｙ、ＤＭＳＯ)、ＴＢＡＦ−誘導カルボン酸精製後、カップリング生成物(４１ａ、４１ｂ、４１ｄ−ｇ、４２ｃ、４２ｅ、８５および８８)を、スキーム５および１５に記載の収率でもたらした(Ｃ−１５ジアステレオマーの約１：１混合物として)。ヒドロキシ酸ジアステレオマー(４１ａ、４１ｂ、４１ｄ−ｇ、４２ｃ、４２ｅ、８５および８８)の各混合物を、次いで山口大環状化(２,４,６−トリクロロベンゾイルクロライド、４−ＤＭＡＰ)(Inanaga, J.; et al. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1979, 52, 1989-1993; Mulzer, J.; et al. Synthesis 1992, 215-228)に付し、所望の１５(Ｓ)ラクトンを、示した(非最適化)収率で、その１５(Ｒ)エピマーと共に得た。この時点での二つのエピマーの分離は、それらのシリカゲルでの相当に非常に異なるＲｆ値により容易であった。保護誘導体の２０％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液(４３ａ、４３ｂ、４３ｅ−ｇ、４４ｃ、４４ｅ、８６および８９)またはＴＭＳＢｒ−４Å  ＭＳのＣＨ２Ｃｌ２溶液、続く２０％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液(４３ｄ)での最終の脱保護により、エポシロン６、８−１４を示した(非最適化)収率で得た(スキーム５および１５)。クロマトグラフ的におよび分光的に純粋な化合物を下記の生物学的評価に付した。
【００５３】
生物化学：
合成したエポシロンの生物学的活性を、細胞毒性、インビトロチューブリン重合化およびチューブリン結合アッセイを介して評価した。細胞毒性を、親細胞系(ｌＡ９)および３つの薬剤耐性細胞系、すなわち、パクリタキセル耐性株(Giannakakou, P.; et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 17118-17125)ｌＡ９／ＰＴＸ１０およびｌＡ９／ＰＴＸ２２およびエポシロン−耐性株(Giannakakou, P.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2000, 97, 2904-2909)１Ａ９／Ａ８を含む、一連の卵巣癌細胞系で最初に評価した。これらの耐性細胞系は、異なる獲得β−チューブリン変異を持ち、これは薬剤−チューブリン相互作用に影響し、タキソンおよびエポシロン−駆動チューブリン重合化を妨害する。これらの生物学的試験の結果を表１に要約する(Skehan, P.; et al. J. Natl. Cancer Inst. 1990, 82, 1107-1112)。さらに、細胞毒性およびインビトロチューブリン重合化アッセイを、親細胞系(ＫＢ−３１)およびパクリタキセル−耐性(Ｐｇｐ過発現のため)細胞系(ＫＢ−８５１１)を含む、一連の類表皮癌細胞系で行った。これらの試験の結果を表２に要約する(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Biol. 2000, 7, 593-599; Meyer, T.; et al. Int. J. Cancer 1989, 43, 851-856)。
【００５４】
一般に、試験化合物のインビトロチューブリン重合化力と、１Ａ９ヒト卵巣癌細胞およびＫＢ−３１ヒト類表皮癌細胞に対する細胞毒性プロフィールの間には良好な一致がある。天然に存在するエポシロンＡおよびＢでの元々の観察との一致において、本明細書で試験したエポシロンＡまたはＢアナログは、いずれも薬剤排出ポンプＰ−グリコプロテイン(Ｐｇｐ)の良好な基質でないように見える。これは、ＫＢ−８５１１細胞に対して２１４倍活性が低いパクリタキセル−既知のＰｇｐ基質−と対照的な、これらのアナログの各々とＰｇｐ発現細胞系ＫＢ−８５１１の交差耐性の欠失により証拠付けられる(図９および図１７参照)。すべてのエポシロンアナログが、エポシロンＡ(１)およびエポシロンＢ(２)と比較して、β−チューブリン変異体に対してより活性であることは注目すべきである(図８および図１６、ＲＲ値参照)。これは、化合物１０−１４、５２、５４、５８および６０でもっとも促進され、それらの相対的耐性値(ＲＲ)は、ＰＴＸ１０(β２７０)およびＡ８(β２７４)細胞に対して、ＥｐｏＡ(１)およびＥｐｏＢ(２)が９.４−２４.９  ＲＲ値であるのと比較して、１.６−９.３の範囲である(図８)。さらに、本試験において、かつ先の試験(Nicolaou, K. C.; et al. ChemBioChem 2001, 2, 69-75; Giannakakou, P.; et al. J. Biol. Chem. 1997, 272, 17118-17125; Giannakakou, P.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2000, 97, 2904-2909)と一致して、我々は、パクリタキセル選択変異体ＰＴＸ２２(β３６４)が、エポシロンおよび本報告で試験した全エポシロンアナログにほとんど完全な感受性を保持することを発見した(ＲＲ値≒３.３)。
【００５５】
置換エポシロンＢアナログの１Ａ９ヒト卵巣およびＫＢ−３１ヒト類表皮癌細胞に対する相対的効能の一般的一致がある。まとめると、これらの細胞毒性アッセイの結果は、エポシロンファミリー内の構造−活性相関に対する興味深い情報を示す。第一に、Ｃ１２−Ｃ１３エポキシド部分が、シクロプロパン環で置換されている化合物４および６は、本明細書に示す全エポシロンＢアナログの中で、二つのもっとも強力な化合物である。この結果は、先に記載されたように、Ｃ１２−Ｃ１３エポキシド部分が生物学的活性に必要ではないことを再確認する(Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313-9323; Nicolaou, K. C.; et al. ChemBioChem. 2001, 2, 69-75; Johnson, J. A.; et al. Org. Lett. 2000, 2, 1537-1540.)。化合物４は、１Ａ９ヒト卵巣癌細胞に対して、親エポシロンＢ(２)よりも６倍活性であり(図６)、さらに、チアゾール側鎖のメチル基のチオメチル基への置換は、活性の増加を導くことを確認した。この結果は、Ｃ１２−Ｃ１３エポキシドの置換がないエポシロンＢ(すなわち化合物３)での類似の置換による先のデータと一致する(Nicolaou, K. C.; et al. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432)。後者の化合物(３)は、親エポシロンＢよりも２倍活性であり、一方化合物４はエポシロンＢよりも６倍活性である。この結果から、化合物４が、１Ａ９細胞系に対して、今日まで合成されたもっとも活性なエポシロンＢアナログであることが結論づけられ、エポキシドのシクロプロパン部分による置換とチアゾール部分のメチル置換基のチオメチル基への同時の置換が相乗的に働き、生物学的活性の観察される促進を導くことを示唆する。興味深いことに、チアゾール環のメチル基のより大きな分子への置換(化合物７−１０)(化合物７のＩＣ５０は、１Ａ９細胞系に対して２.５nMであることが判明した)は、エポシロンＢと比較して、生物学的活性の減少を導いた(図６および７)。
【００５６】
ピリジン環の５位に置換ピリジン側鎖を有するエポシロンＢアナログ(化合物５５−５７および５９)の中で、チオメチルアナログ(化合物５７)がもっとも強力であり、続いてブロモ−置換誘導体(化合物５５)、さらにクロロ−置換系(化合物５６)が続く。チオメチル基をピリジン環の５位(化合物５７)から６位(化合物５８)に移動させた場合、活性の損失が起こり、ＩＣ５０値が０.４nM(化合物５７)から３.３nM(化合物５８)に落ちる(図１６)。さらに、ピリジン環の５位のチオメチル基(化合物５７)のトリフルオロメチル基(化合物５９)への置換は、１０倍の活性の損失をもたらした。最後に、もっとも活性の低い合成エポシロンＢアナログは化合物６０であり、チオメチル置換を有するピリミジン側鎖で、親化合物のチアゾール側鎖が置換されている。
【００５７】
上記生物学的アッセイに加えて、各エポシロンアナログの相対的効果を、蛍光タキソイド置換アッセイにより測定した(Andreu, J. M.; Barasoain, I. Biochemistry 2001, 40, 11975-11984)。これらの実験の目的は、微小管がそのタキサン部位で試験したエポシロンアナログと結合する平行定数を比較するためであった。十分に特徴付けされた蛍光タキソイドFlutax-2(Souto, A. A.; et al. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1995, 34, 2710-2712; Diaz, J. F.; et al. J. Biol. Chem. 2000, 275, 26265-26276; Abal, M.; et al. Cell. Motil. Cytoskeleton 2001, 49, 1-15)の微小管への結合のエポシロンアナログによる阻害を３７℃で測定した(図２)。表３に示す得られた平行解離定数は、エポシロンＡ(１)が試験したエポシロンアナログの中で最低の結合親和性を有することを示す(Ｋｄ＝３４Å４)。このアッセイで測定した中でもっとも強力なリガンドは化合物３であり、０.６４Å０.２４nMのＫｄ値を有し、化合物８、１１−１３が、１.６から１.９nMの間に入るＫｄ値で続いた。化合物１３の可能性を除いて、試験したアナログの結合親和性は細胞増殖阻害およびインビトロチューブリン重合化アッセイの両方での各々の活性を正確に映していた。
【００５８】
本明細書で用いた全３つの生物学的アッセイをまとめて、エポシロンファミリー内の構造−活性相関の観点から多くの結論を導くことができた。第１に、Ｃ１２メチル基の付加はｔｒａｎｓ−シクロプロピルシリーズの活性を増強せず(化合物５対６、７対８、９対１０)、エポシロンＢ(２)がエポシロンＡ(１)よりも少なくとも１０倍活性であるｃｉｓ−エポキシドシリーズと対照的な結果であった。これは、ｃｉｓおよびｔｒａｎｓ化合物におけるＣ１２メチル基の異なる配向、または、ｃｉｓとｔｒａｎｓ化合物の間の立体配置の全体的な差によるものである可能性があるが、詳細はまだこれから解明しなければならない。第２に、２−チオメチルチアゾール側鎖の挿入は、天然２−メチルチアゾール側鎖(化合物２対３、５対１１、および６対１２)と比較して活性を増強する。この効果は、以前エポシロンＣおよびＤアナログで見られていた(Nicolaou, K. C.; et al. Angew. Chem. 1997, 109, 2181-2187; Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1997, 36, 2097-2103; また: Sinha, S. C.; et al. ChemBioChem 2001, 2, 656-665も参照)。第３に、ピリジン側鎖シリーズのメチル基のチオメチル基での置換(化合物８対１３)は効果を減少させ、上記チアゾール側鎖で得られた結果と対照的である。これは、細胞での細胞毒性およびインビトロチューブリン重合化データに基づくが、蛍光タキソイド置換アッセイでは、ピリジン側鎖のメチル基のチオメチル部分での置換は結合親和性に関しては無関係であった。この矛盾は、単に試験化合物の細胞取り込みおよび透過性の差、または、二つのチューブリンアッセイの感受性の差を反映している可能性がある。この矛盾にもかかわらず、これらのデータから、チアゾール側鎖へのチオメチル基の挿入は、ピリジン側鎖へのチオメチル基の挿入よりも好ましいことが明らかであり、これは、二つの側鎖骨格による立体的要求の差によるものである可能性がある。ｃｉｓ−ピリジンエポシロンアナログ(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Biol. 2000, 7, 593-599)で得られたデータと一致して、ピリジン側鎖のチオメチル基の５位(化合物１３)から６位(化合物１４)への移動は、有意な活性の減少を導いた。第４に、５−メチルピリジン側鎖(化合物７および８)を５−ヒドロキシメチルピリジン側鎖(化合物９および１０)で置換した化合物７対９および８対１０で入り交じった結果が得られた。この置換は、１Ａ９ヒト卵巣癌細胞に対する細胞毒性では無関係であるように見え(表１)、各ペアで非常に類似したＩＣ５０値が得られた(例えば化合物７および９について各々０.６および０.７nM；化合物８および１０について１.７nM)。他方、ヒト類表皮癌細胞ＫＢ−３１において、化合物１０はそのカウンターパート化合物８よりも２倍活性であり、各々ＩＣ５０は０.４４対０.９nMである。この異なる結果の説明となる二つのヒト癌細胞系における増殖速度の小さな差を考慮して、我々は、５−ヒドロキシメチルピリジン側鎖の挿入は、少なくともエポシロンファミリーのｔｒａｎｓ−１２,１３−シクロプロピルアナログの活性を増強しないようであると結論付ける。
【００５９】
これらの可能性のため、化合物は増殖性疾患、とりわけ転移を含む腫瘍疾患；例えば肺腫瘍、乳房腫瘍、結腸直腸腫瘍、前立腺腫瘍、黒色腫、脳腫瘍、膵臓腫瘍、頚部腫瘍、膀胱腫瘍、神経芽腫、咽喉腫瘍のような固形癌だけでなく、白血病のような血液細胞の増殖性疾患の処置；およびまた乾癬のような微小管脱重合化阻害剤での処置に応答する他の疾患の処置に適している。
【００６０】
式Ｉの化合物は単独で、または１個またはそれ以上の他の治療剤との組み合わせで投与でき、可能性のある組み合わせ治療は固定された組み合わせの形を取り、または本発明の化合物と１個またはそれ以上の他の治療剤の投与が交互であり、または互いに独立して投与し、または、固定組み合わせの組み合わせと１個またはそれ以上の他の治療剤の組み合わせ投与である。式Ｉの化合物は、化学療法、放射線療法、免疫療法、外科的介入、またはこれらの組み合わせとは別に、またはこれらに加えて投与できる。長期治療は、上記の他の治療戦略との関連で、アジュバント療法として等しく可能である。他の可能性のある処置は、例えば、危険性のある患者における、腫瘍緩解後、または、予防的化学療法中でさえ、患者の状態を維持するための治療として可能である。
【００６１】
組み合わせる可能性のある治療剤は、とりわけ１個またはそれ以上の増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性化合物、例えば、古典的化学療法剤、ポリアミン生合成の阻害剤、プロテインキナーゼの阻害剤、とりわけプロテインキナーゼＣのようなセリン／スレオニンプロテインキナーゼの阻害剤、または表皮成長因子レセプタープロテインチロシンキナーゼのようなチロシンキナーゼの阻害剤、サイトカイン、ＴＧＦβまたはＩＦＮ−βのような負の増殖制御剤、アロマターゼ阻害剤、および古典的細胞増殖抑制性剤からなる群から選択される１個またはそれ以上の化学療法剤である。
【００６２】
本発明の化合物は、ヒトの(予防的および好ましくは治療的)処置のためだけでなく、他の温血動物、例えば商業的に有用な動物、例えば、マウス、ウサギまたはラット、またはモルモットのような齧歯類の処置のためでもある。それらはまた他の化合物との比較を可能にするための上記試験系における対照標準としても有用であり得る。
【００６３】
式Ｉの化合物はまた、診断目的でも使用し得、該化合物に対する感受性を調べるために、例えば温血動物“宿主”、とりわけヒトから腫瘍を得、マウスに移植してこのような化合物での処置後の増殖の減少に関して試験し、そうして元の宿主における新生物疾患の可能性のある治療法の検出および決定を改善する。
【００６４】
立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物は、それ自体既知の方法で、適当な分離法の手段により対応する異性体に分離できる。ジアステレオマー混合物は、分画結晶化、クロマトグラフィー、溶媒分配および類似の方法の手段により個々のジアステレオマーに分離し得る。この分離は、出発物質の一つ、または式Ｉの化合物それ自体のいずれかの段階で行い得る。エナンチオマーは、ジアステレオ異性体塩の形成を介して、例えば、エナンチオマー的に純粋なキラル酸との塩形成により、またはクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣにより、キラルリガンドのクロマトグラフ基質を使用して分離し得る。(エナンチオマー分離は通常中間体段階で行う)。
【００６５】
医薬製剤、方法および使用
本発明はまた活性成分として式Ｉの化合物を含み、とりわけ上記の疾患の処置に使用できる医薬製剤にも関する。温血動物、とりわけヒトへの経鼻、バッカル、経直腸、とりわけ、経口投与のような経腸投与用および静脈内、筋肉内または皮下投与のような非経腸投与用製剤が、とりわけ好ましい。製剤は活性成分を単独で、または好ましくは、薬学的に許容される担体と共に含む。活性成分の投与量は処置する疾患、および種、年齢、体重、個々の状態、個々の薬物動態データおよび投与の形態に依存する。
【００６６】
増殖性疾患、好ましくは腫瘍の阻害に用いる式Ｉの化合物の厳密な投与量は、宿主、処置する状態の性質および重症度、投与の形態および用いる特定の化合物を含む数個の因子に依存する。しかしながら、一般に、式Ｉの化合物を、１サイクル(サイクル＝３−６週間)あたり１回量１−３００mg／kg体重を、または、ほとんどの大型霊長類の場合、処置サイクルあたり５０−５０００mgを、非経腸的に、例えば、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、筋肉内、また経直腸、または経腸的、例えば、経口で、好ましくは静脈内または経口で、より好ましくは静脈内に投与した場合、腫瘍の十分な阻害が達成される。好ましい３−６週間の処置サイクルあたりの静脈内１回投与量は、１−７５mg／kg体重であるか、またはほとんどの大型霊長類の場合、一日量５０−１５００mgである。典型的な静脈内投与量は３週間毎に４５mg／kgである。
【００６７】
通常、最初は少量を投与し、処置下の宿主の最適投与量が決定するまで投与量を徐々に増やす。上限は副作用により決定されるものであり、処置する宿主に対する試験により決定できる。
【００６８】
本発明はまたヒトまたは動物身体の予防的またはとりわけ治療的処置のための方法に使用する医薬製剤、(特に腫瘍の処置のための組成物の形への)その製造法および上記疾患、主に新生物疾患、とりわけ上記のものの処置法に関する。
【００６９】
本発明はまた、式Ｉの化合物を活性因子(活性成分)として含む医薬製剤の製造法および該製造における式Ｉの化合物の使用にも関する。
【００７０】
微小管脱重合化の阻害に応答する疾患、例えば、乾癬またはとりわけ新生物疾患に罹患した温血動物、とりわけヒトまたは商業的に価値のある哺乳動物の処置に適し、有効量の式Ｉの化合物または、塩形成基が存在する場合、その薬学的に許容される塩を、少なくとも一つの薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物が好ましい。
【００７１】
処置を必要とする、とりわけ新生物および他の増殖性疾患に罹患した温血動物、とりわけヒトまたは商業的に価値のある動物の、新生物および他の増殖性疾患の予防的またはとりわけ治療的処置のための、活性成分として式Ｉの新規化合物または、その薬学的に許容される塩を、該疾患に対する予防的またはとりわけ治療的に活性な量で含む、医薬製剤が同様に好ましい。
【００７２】
医薬製剤は、約０.０００００１％から９５％の活性成分を含み、したがって非経腸投与の場合、１回投与形は好ましくは約０.００００１％から９０％の、および複数回投与形は、好ましくは約０.０００１から０.５％の活性成分を、または経腸投与の製剤の場合、１％から２０％の活性成分を含む。単位投与形は、例えば、被覆および非被覆錠、アンプル、バイアル、坐薬またはカプセルである。さらなる投与形は、例えば、軟膏、クリーム、ペースト、フォーム、チンキ、口紅型、飴、スプレー、分散剤などである。例は、約０.０００２ｇから約１.０ｇ活性成分を含むカプセルである。
【００７３】
本発明の医薬製剤はそれ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。
【００７４】
非経腸投与に適した製剤は、主に水溶性形、例えば、水溶性塩形の活性成分の水溶液([または、ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)３００またはＰＥＧ４００のようなポリエチレングリコールへの溶液の希釈により得ることができる生理食塩水中]、または、増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランと、適当な場合、安定化剤を含む、水性注射用懸濁液である。活性成分は、必要な場合、賦形剤と共に凍結乾燥の形であり得、非経腸投与の前に、適当な溶媒の添加により溶液とすることができる。
【００７５】
例えば、非経腸投与に使用するための溶液はまた輸液としても使用できる。
【００７６】
本発明は、同様に、上記の一つの病理学的状態、とりわけ微小管脱重合化の阻害に応答する疾患、とりわけ対応する新生物疾患の処置のための過程または方法に関する。式Ｉの化合物を、それ自体、または、医薬製剤の形で、予防的または治療的、好ましくは該疾患に対して有効な量で、処置を必要とする温血動物、例えばヒトに投与でき、化合物はとりわけ医薬組成物の形で使用する。約７０kgの体重の個体の場合、投与する用量は、本発明の化合物約０.１mgから約１ｇ、好ましくは約０.５mgから約２００mgである。投与は、好ましくは、例えば１から４週間毎、例えば毎週、２週毎、３週間毎または４週間毎に行う。
【００７７】
本発明はまた特に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、とりわけ好ましい化合物として挙げた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の、それ自体の、または少なくとも一つの薬学的に用いることができる担体を含む医薬製剤の、上記疾患の一つまたはそれ以上の治療的およびまた予防的処置のための使用に関する。
【００７８】
本発明はまた特に式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩、とりわけ好ましい化合物として挙げた式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩の、上記疾患の一つまたはそれ以上の治療的およびまた予防的処置のための医薬製剤の製造における使用に関する。
【００７９】
実験
一般
すべての反応は、特記しない限り、アルゴン雰囲気下で、無水条件下乾燥溶媒と共に行った。無水溶媒は、溶媒を市販の活性化アルミナカラムに通すことにより得た。すべての試薬は市販の最高品質を購入し、さらに精製することなく使用した。反応は、一般に、０.２５mm  E. Merckシリカゲル粒子(６０Ｆ−２５４)で行った薄層クロマトグラフィーにより追跡した。E. Merckシリカゲル(６０、粒子径０.０４０−０.０６３mm)をフラッシュクロマトグラフィーに使用した。分取薄層クロマトグラフィー(ＰＴＬＣ)分離は、０.２５、０.５０または１mm  E. Merckシリカゲル粒子(６０Ｆ−２５４)で行った。融点(ｍｐ)は未補正であり、Thomas-Hoover Unimelキャピラリー融点装置で記録した。最適ローテーションをPerkin-Elmer 241偏光計で記録した。ＮＭＲスペクトルをBruker DRX-600、DRX-500、AMX-400またはAC-250装置で記録し、残った非重水素化溶媒を内部対象として使用して計算した。炭素原子のすべての番号付け、例えばＣ１５はエポシロンＡ(１)の番号付けを参照する(図１参照)。ＩＲスペクトルはPerkin-Elmer 1600シリーズFT-IR分光計で記録した。高解像度マススペクトルをPerSeptive Biosystems Voyager(登録商標)IonSpec質量分析計(ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ)またはAPI 100 Perkin-Elmer質量分析計(ＥＳＩ)で記録した。
【００８０】
エポシロン３の合成
ヨウ化ビニル１５とスタンナン１６のStilleカップリング。
Ｐｄ２(ｄｂａ)３(ＣＨＣｌ３(３.９mg、３.８μmol)、ＡｓＰｈ３(４.６mg、１５μmol)、およびＣｕＩ(７.２mg、３８μmol)のＤＭＦ(脱気、０.５mL)水溶液を、２５℃でヨウ化物１５(１０mg、１９μmol)(Nicolaou, K. C., et al., Chem. Eur. J. 2000, 6, 2783-2800)およびスタンナン１６(１１mg、３８μmol)(Nicolaou, K. C., et al., Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 665-697)のＤＭＦ(脱気、０.５mL)溶液に添加し、得られた溶液を２時間撹拌した。水(１０mL)を添加し、混合物をＥｔＯＡｃ(３(１０mL)で抽出した。合わせた有機相を水(３０mL)、塩水(３０mL)で洗浄し、乾燥した(Ｎａ２ＳＯ４)。揮発物の蒸発後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１(１：１)で精製し、エポシロン３を白色固体として得た(７.２mg、７２％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)；[α]Ｄ２２−５３(ｃ  ０.５１、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４７２(ｂｒ)、２９６７、２９２０、１７３１、１６８４、１４６１、１４２０、１３７８、１２４９、１１４３、１０３２、９７３、８７９、７３２、６６７cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５６２.２２６７(ＭＮａ＋)、Ｃ２７Ｈ４１ＮＯ６Ｓ２Ｎａの計算値  ５６２.２２６７。
【００８１】
アルデヒド３２の構築
アルコール２３。シクロプロピルアルコール２２(４.０８ｇ、２４mmol)(Charette, A. B.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 11943-11952)のＤＭＦ(４０mL)溶液に、水素化ナトリウム(１.４５ｇ、３６mmol、鉱油中６０％)を徐々に撹拌しながら０℃で添加した。０.５時間、２５℃で撹拌後、混合物を０℃に冷却し、臭化ベンジル(４.３mL、３６mmol)を２分間にわたり添加し、撹拌を１２時間、２５℃で続けた。反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和、５０mL)でクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ(３(５０mL)で抽出し、合わせた抽出物を塩水(２(１００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ４：１(６０mL)に溶解し、溶液を−７８℃で２１分間オゾン処理(１００Ｌ／ｈ、約５ｇＯ３／ｈ)した。(注：ベンジルエーテルの対応するベンゾエートへの酸化を防止するために、長い反応時間は避けるべきである。)過剰のオゾンをＮ２を１分間フラッシュすることにより除去し、次いでＮａＢＨ４(２.７５ｇ、７３mmol)を少しずつ添加し(注意！発熱性！)、続いてメタノール(２０mL)を添加した。混合物を２５℃で１時間以上暖め、反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和、２０mL)の添加によりクエンチした。混合物をＣＨ２Ｃｌ２(２(５０mL)で抽出し、合わせた抽出物を塩水(１００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：２)で精製し、２３を黄色油状物として得た(５.０７ｇ、８９％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２０(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ３：１)；[α]Ｄ２２−７.５(ｃ  １.７６、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３９０(ｂｒ)、２９３３、２８５９、１４５２、１０７０、７３９、６９８cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ２５７.１５１９(ＭＮａ＋)、Ｃ１５Ｈ２２Ｏ２Ｎａの計算値  ２５７.１５１２。
【００８２】
ヨウ化物２４。シクロプロピルアルコール２３(１０.０８ｇ、４３.０mmol)の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２(１００mL)溶液に、０℃でメタンスルホニルクロライド(４.２mL、５４mmol)、続いてトリエチルアミン(９.０mL、６５mmol)を滴下した。白色沈殿が直ぐにできはじめた。混合物を２５℃で１時間撹拌し、次いでＮＨ４Ｃｌ(飽和、５０mL)および水(５０mL)を添加し、相を分離した。水性相をＥｔＯＡｃ(１００mL)で抽出し、合わせた有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣を乾燥アセトン(２００mL)に溶解し、ヨウ化ナトリウム(１９.３ｇ、１２９mmol)を添加した。最初はほとんど透明な溶液を４０分間還流し、その間に白色沈殿が形成した。水(１００mL)を添加し、混合物をエーテル(５００＋２５０mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)で精製し、２４を無色油状物として得た(１４.１６ｇ、９５％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.６６(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−１６(ｃ  ２.０５、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９１６、２８４８、１４５３、１２１７、１０９８、１０７３、７３５、６９７cm−１；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３６７(ＭＮａ＋)、Ｃ１５Ｈ２１ＩＯＮａの計算値  ３６７。
【００８３】
ヒドラゾン２６。ＬＤＡの溶液を、ｎ−ＢｕＬｉ(１３.１mL、２１.０mmol、ヘキサン中１.６Ｍ)をジイソプロピルアミン(２.９４mL、２１.０mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に−７８℃で添加し、次いで溶液を０℃に暖め、１０分間撹拌することにより調製した。このＬＤＡ溶液に、プロピオンアルデヒドＳＡＭＰヒドラゾン２５(３.３２ｇ、１９.５mmol)(Nicolaou, K. C., et al., J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 7974-7991; Enders, D. Aymmetric Synth. 1984, 3, 275-339; and Enders, D., et al., Synthesis 1996, 1403-1418)を添加し、混合物を６時間、０℃で撹拌し、その間に白色沈殿が形成した。混合物を−９８℃(ＭｅＯＨ／Ｎ２(ｌ)浴)に冷却し、ヨウ化物２４(５.１６ｇ、１５.０mmol)のＴＨＦ(２０mL)溶液を、０.５時間にわたり添加した。反応混合物を次いで−１０℃に１４時間にわたり暖め、次いで反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和、１０mL)でクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ(１００mL＋２(５０mL)で抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ６：１(４：１)で精製し、ヒドラゾン２６を黄色油状物として得た(４.８８ｇ、８４％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３８(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−６１(ｃ  １.４５、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２６、１４５４、１０９７、７３６、６９７cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ３８７.３００８(ＭＨ＋)、Ｃ２４Ｈ３９Ｎ２Ｏ２の計算値  ３８７.３００６。
【００８４】
アルデヒド１７。ヒドラゾン２６(３.８２ｇ、９.９mmol)のヨードメタン(１０mL)溶液を６０℃(還流凝縮器)で３時間加熱し、次いで２５℃に冷却した。過剰のヨードメタンを蒸発させ、残った微量をオイル・ポンプバキューム下で除去した。残った黄色シロップを３Ｎ  ＨＣｌ(１９０mL)およびペンタン(１９０mL)と、３時間、２５℃で激しく撹拌し、相を分離し、水性相をペンタン(１００mL)で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４、ＮａＨＣＯ３)、蒸発させ、アルデヒド１７を黄色油状物として得た(２.３８ｇ、８８％)。[α]Ｄ２２  ＋２(ｃ  １.３、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３１、２８５６、１７２４、１４５４、１０９５、１０７４、７３６、６９８cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ２９７.１８３０(ＭＮａ＋)、Ｃ１８Ｈ２６Ｏ２Ｎａの計算値  ２９７.１８２５。
【００８５】
Ｃ８(エポシロン番号付け)での配置的不安定性のため、アルデヒドは直ぐに次段階に使用しなければならない。Ｃ８のジアステレオマー比(ｄｒ)を下記のように評価した：１７のサンプルを、過剰のＮａＢＨ４のメタノール溶液で１０分間処理した。反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和)でクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣を(Ｒ)−(−)−ＭＴＰＡＣｌ(２−３当量)、過剰のトリエチルアミンおよび４−ＤＭＡＰのＣＨ２Ｃｌ２溶液で３時間処理した。分取ＴＬＣによる精製により、(Ｓ)−ＭＴＰＡエステルのサンプルを得、１Ｈ  ＮＭＲ分析で、主要異性体としてのＣ８の正確な絶対立体化学と共に、ｄｒ＝９７：３であることが示された(Tsuda, M., et al., J. Org. Chem. 2000, 65, 1349-1352)。同様の結果が、(Ｓ)−(＋)−ＭＴＰＡＣｌを用いて得られた。
【００８６】
アルドール生成物２７。ＬＤＡの溶液を、ｎ−ＢｕＬｉ(７.５mL、１２mmol、ヘキサン中１.６Ｍ)をジイソプロピルアミン(１.６８mL、１２mmol)のＴＨＦ(１２mL)溶液に−７８℃で添加し、次いで溶液を短く０℃に暖め、最後に再び−７８℃に冷却することにより製造した。ケトン１９(４.６３ｇ、１１.５mmol)(Nicolaou, K. C., et al., J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 7974-7991)のＴＨＦ(１２mL)溶液を２分間にわたり滴下し、混合物を１時間、−７８℃で、次いで０.５時間、−４０℃で撹拌した。それを再び−７８℃に冷却し、−７８℃に予め冷却したアルデヒド１７(１.３７ｇ、５.０mmol)のＴＨＦ(２５mL)溶液を、カニューレを介して１分間にわたり添加し、移す間暖めるのが最低限であるように注意した。混合物を５分間撹拌し、反応を次いでＡｃＯＨ(１.４mL)のＴＨＦ(４.２mL)溶液の急速な注入によりクエンチした。５分間、−７８℃の後、混合物を２５℃に暖め、ＮＨ４Ｃｌ(飽和、５０mL)とエーテル(５０mL)に分配した。水性相をエーテル(２(５０mL)で抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：エーテル２０：１(６：１)で精製し、回復したケトン１９(１.７１ｇ、４.２５mmol)、続いて純粋なジアステレオマー形のアルドール生成物２７(２.７３ｇ、８１％)を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３４(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−４０(ｃ  １.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３５０２(ｂｒ)、２９５４、２９２８、２８５６、１６８１、１４７２、１２５５、１０９８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ６９９.４７９６(ＭＮａ＋)、Ｃ３９Ｈ７２Ｏ５Ｓｉ２Ｎａの計算値  ６９９.４８１６。
【００８７】
アルコール２８。アルドール生成物２７(２.７１ｇ、４.０mmol)および２,６−ルチジン(１.４０mL、１２mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)溶液を−２０℃に冷却し、次いでＴＢＳＯＴｆ(１.８４mL、８.０mmol)を滴下した。混合物を１時間、−２０℃で撹拌し、反応を次いでＮＨ４Ｃｌ(飽和、２５mL)の添加によりクエンチした。混合物を２５℃に暖め、相を分離し、水性相をＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)およびエーテル(２５mL)で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をシリカのプラグを通して濾過し、ヘキサン：エーテル１０：１で溶出した。濾液を蒸発させ、得られた粗シリルエーテル(３.１４ｇ、４.０mmol、９９％)をＴＨＦ(４０mL)に溶解した。これに、冷却(０℃)したＨＦ・ピリジン複合体(６.４mL)およびピリジン(１８mL)のＴＨＦ(３２mL)溶液を０℃で添加し(この溶液はＨＦ・ピリジン複合体を、ピリジンのＴＨＦ溶液に０℃でゆっくり添加することにより製造した；注意！ＨＦ・ピリジンは非常に腐食性。ＨＦ・ピリジンのピリジン−ＴＨＦ溶液への添加は非常に発熱性、はねを防止するために、氷浴中で撹拌かつ冷却しながら行わなければならない)、得られた溶液を２５℃で４時間撹拌した。混合物をＥｔＯＡｃ(１００mL)で希釈し、氷浴中に置き、ＮａＨＣＯ３(飽和、１００mL)および、中和を確実にするのに必要な量のＮａＨＣＯ３(注意！泡立つ！)の注意深い添加によりクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ(３(１００mL)で抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)で精製し、２８を無色油状物として得た(２.４０ｇ、８９％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−２６(ｃ  １.１、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４５８(ｂｒ)、２９２９、２８５６、１６９３、１４７２、１４６２、１２５５、１０９３、９８６、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ６９９.４８０７(ＭＮａ＋)、Ｃ３９Ｈ７２Ｏ５Ｓｉ２Ｎａの計算値  ６９９.４８１６。
【００８８】
エステル２９。アルコール２８(２.４０ｇ、３.５mmol)、Dess-Martinペルヨージナン(３.７５ｇ、８.８mmol)、ＮａＨＣＯ３(０.７４ｇ、８.８mmol)および水(７６μL、４.２mmol)をＣＨ２Ｃｌ２(８０mL)中で混合し、得られた懸濁液を１時間撹拌した。混合物をエーテル(２００mL)、水(１００mL)およびＮａＨＣＯ３(飽和、１００mL)で希釈し、次いで濾過した。相を分離し、水性相をエーテル(２(１００mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をシリカのプラグを通して濾過し、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ６：１で溶出した。濾液を蒸発させ、得られた粗アルデヒド(２.１５ｇ、３.２mmol、９０％)をＴＨＦ(８０mL)、ｔ−ＢｕＯＨ(１４５mL)および２−メチル−２−ブテン(２５mL)の混合物に溶解した。この溶液に、ＮａＨ２ＰＯ４(０.９５ｇ、６.７mmol)およびＮａＣｌＯ２(１.１４ｇ、１０mmol)の水(３１mL)溶液を添加し、得られた混合物を１時間激しく撹拌した。揮発物を蒸発により除去し、残渣をＥｔＯＡｃ(１００mL)と塩水(１００mL)に分配した。相を分離し、水性相をＥｔＯＡｃ(３(１００mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をＤＭＦ(５mL)に溶解し、再び蒸発させて微量のｔ−ＢｕＯＨを除去した。このようにして得た粗酸(２.４ｇ、約３.２mmol＞１００％)を再びＤＭＦ(１０mL)に溶解し、これに２−(トリメチルシリル)エタノール(１.８３mL、１２.７mmol)、ＥＤＣ(０.９２ｇ、４.８mmol)、４−ＤＭＡＰ(４０mg、０.３３mmol)を添加した。得られた懸濁液を１４時間撹拌し、その後透明溶液を得た。水(１０mL)を添加し、混合物をエーテル(３(５０mL)で抽出した。合わせた抽出物を水−塩水混合物(１００＋１００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)で精製し、エステル２９を粘性、薄黄色油状物として得た(２.０８ｇ、７４％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.５７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)；[α]Ｄ２２−３３(ｃ  １.２、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９５４、２９３０、２８５６、１７３５、１６９５、１４７２、１３８５、１２５２、１０９０、９８８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８１３.５３１５(ＭＮａ＋)、Ｃ４４Ｈ８２Ｏ６Ｓｉ３Ｎａの計算値  ８１３.５３１１。
【００８９】
アルデヒド３０。ベンジルエーテル２９(２.０８ｇ、２.６３mmol)のＥｔＯＨ：ＥｔＯＡｃ  １：１(５０mL)の溶液に、２０％Ｐｄ(ＯＨ)２／炭素(２.１ｇ、６０％水分)を添加し、混合物を１時間水素化した。それを次いでセライトを通して濾過して触媒を除去し、濾液を蒸発させ、残渣をベンゼンと共蒸発させて微量のＥｔＯＨを除去した。得られた粗アルコール(１.８９ｇ、約２.６mmol、＞１００％)をＣＨ２Ｃｌ２(６０mL)に溶解し、Dess-Martinペルヨージナン(２.７６ｇ、６.５mmol)、ＮａＨＣＯ３(０.５５ｇ、６.５mmol)および水(５６μL、３.１mmol)を添加し、得られた懸濁液を１時間撹拌した。混合物をエーテル(１５０mL)、水(７５mL)およびＮａＨＣＯ３(飽和、７５mL)で希釈し、次いで濾過した。相を分離し、水性相をエーテル(２(７５mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)で精製し、アルデヒド３０を粘性油状物として得た(１.５５ｇ、８４％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２４(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)；[α]Ｄ２２−４７(ｃ  １.３、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９５４、２８５６、１７３４、１７０３、１２５１、１１７３、１０８４、９８８、８３７、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７２１.４６７１(ＭＮａ＋)、Ｃ３７Ｈ７４Ｏ６Ｓｉ３Ｎａの計算値  ７２１.４６８５。
【００９０】
エノールエーテル３１。ＭｅＯＣＨ２ＰＰｈ３Ｃｌ(３.０９ｇ、９.０mmol)のＴＨＦ(２０mL)中の懸濁液に、０℃でＮａＨＭＤＳ(８.５mL、８.５mmol、ＴＨＦ中１Ｍ)を滴下した。赤色になった。混合物を０℃で０.５時間撹拌し、それを次いで−４０℃に冷却した。アルデヒド３０(２.１２ｇ、３.０mmol)のＴＨＦ(７mL)溶液を添加し、混合物を−１０℃に２時間にわたり暖めた。反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和、１５mL)でクエンチし、相を分離し、水性相をＥｔＯＡｃ(２(７５mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ３０：１)で精製し、エノールエーテル３１を無色、粘性油状物として得た(１.８５ｇ、８４％、１Ｈ  ＮＭＲにより、オレフィンｃｉｓ：ｔｒａｎｓ  約１：１)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２３(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ３０：１)；[α]Ｄ２２−３６(ｃ  １.２、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９５４、２９３０、２８５６、１７３５、１６９５、１２５１、１１７１、１１０５、９８８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７４９.４９９６(ＭＮａ＋)、Ｃ３９Ｈ７８Ｏ６Ｓｉ３Ｎａの計算値  ７４９.４９９８。
【００９１】
アルデヒド３２。エノールエーテル３１(８４７mg、１.１６mmol)のジオキサン：水  ９：１(１２mL)中の溶液に、パラ−トルエンスルホン酸ピリジニウム(２.３４ｇ、９.３１mmol)を添加し、混合物を７０℃でＴＬＣで反応の完了が示されるまで撹拌した(６−１０時間)。反応を次いでＮａＨＣＯ３(飽和、１５mL)でクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ(３(５０mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)で精製し、３２を無色、粘性油状物として得た(６８１mg、８２％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)；[α]Ｄ２２−３４(ｃ  １.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９５４、２８５６、１７３１、１６９５、１２５１、１０８６、９８８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７３５.４８２３(ＭＮａ＋)、Ｃ３８Ｈ７６Ｏ６Ｓｉ３Ｎａの計算値  ７３５.４８４２。
【００９２】
ヨウ化ビニル２０ｃ−ｇの構築
２−ブロモ−５−[(トリチルオキシ)メチル]ピリジン３４。塩化トリチル(３.９０ｇ、１４mmol)、４−ＤＭＡＰ(２.０８ｇ、１７mmol)および２−ブロモ−５−ヒドロキシメチルピリジン３３(１.８８ｇ、１０mmol)(Ellingboe, J. W., et al., J. Med. Chem. 1994, 37, 542-550)をＤＭＦ(１５mL)に溶解し、その溶液を８０℃で４８時間撹拌した。この間に白色沈殿が形成された。冷却後、混合物をＮａＨＣＯ３(飽和、２５mL)で希釈し、ＥｔＯＡｃ(３(５０mL)で抽出した。合わせた抽出物を、数滴のＮａＯＨ(１Ｍ)を添加した塩水(２(１００mL)で洗浄した。乾燥および蒸発後、固体残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)で精製し、３４を白色固体として得た(４.４６ｇ、１００％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３０(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３０５７、１４４８、１０８６、７６４、７００、６３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ４３０.０７９２(ＭＨ＋)、Ｃ２５Ｈ２１ＢｒＮＯの計算値  ４３０.０８０１。
【００９３】
臭化アリール(aryl bromdes)(３４、３７、３８、３９)とプロピンの薗頭カップリング(一般法)。短く脱酸素した(Ａｒバブリング)、アリールブロミド３４、３７、３８または３９(３.５mmol)のＤＭＦ(３mL)中およびジイソプロピルアミン(２.５mL)中の溶液に、Ｐｄ(ＰＰｈ３)２Ｃｌ２(２５mg、３６μmol)およびＣｕＩ(１３mg、７０μmol)をＡｒ(ｇ)下添加し、次いで不活性雰囲気をプロピンで置き換えた(１気圧、バルーン)。混合物を２５℃で３時間撹拌した。この間に、沈殿が形成し、反応混合物は濃褐色に変わった。水(１５mL)を添加し、混合物をＥｔＯＡｃで抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。純粋１−アリールプロピンを、フラッシュクロマトグラフィーにより得た(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)。
【００９４】
プロピニルピリジン３５。褐色泡状物(９６％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２３(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３０５７、２２２９、１５９４、１５６０、１４７８、１４４８、１０７５、７０２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ３９０.１８５１(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ２４ＮＯの計算値  ３９０.１８５２。
【００９５】
ピリジン３６。トリチルエーテル３５(１.３８ｇ、３.５４mmol)のＣＨＣｌ３(１５mL)溶液を０℃に冷却し、次いでＨＣｌ(ｇ)で飽和させた。１時間、０℃の後、反応をＮａＨＣＯ３(飽和、５０mL)の添加によりクエンチし、相を分離した。水性相をＣＨ２Ｃｌ２(５０mL)で抽出し、合わせた有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２＋５％ＭｅＯＨ)により、５−ヒドロキシメチル−２−プロプ−１−イニルピリジンを黄色、粘性油状物として得た(０.３６ｇ、６９％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２＋５％ＭｅＯＨ)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３２６２、２９１６、２２３０、１５９６、１５６１、１０２３、８３８cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １４８.０７５４(ＭＨ＋)、Ｃ９Ｈ１０ＮＯの計算値  １４８.０７５７。このアルコール(０.４０ｇ、２.７mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、０℃でＮａＨ(０.１３ｇ、３.３mmol、油中６０％)を添加した。５分間撹拌後、クロロメチルメチルエーテル(０.２５mL、３.３mmol)を添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。反応を次いでＮａＣｌ(飽和)でクエンチし、数滴のＮａＯＨ(１Ｍ)を添加した。混合物をＥｔＯＡｃ(３(５０mL)で抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)で精製し、３６を薄黄色油状物として得た(０.２６ｇ、５０％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９４７、２２３０、１５９５、１５６０、１４７８、１１４９、１１０４、１０４７、９１９、８３０cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １９２.１０１４(ＭＨ＋)、Ｃ１１Ｈ１４ＮＯ２の計算値  １９２.１０１９。
【００９６】
３７からの薗頭カップリング生成物。反応はおそらくＰｄのチオエーテル部分への配位のために非常に遅かった；したがって、１０mol％Ｐｄ(ＰＰｈ３)２Ｃｌ２および２０mol％ＣｕＩを使用した。生成物を褐色油状物として得た(４２％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３１１０、２９１４、２２４０、１４９３、１４１７、１２７８、１０３７、９６６、７３５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １７０.００９２(ＭＨ＋)、Ｃ７Ｈ８ＮＳ２の計算値  １７０.００９３。
【００９７】
３８からの薗頭カップリング生成物。褐色油状物(９７％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９０８、２２２６、１５６７、１５３１、１４６１、１４３１、１３６１、１１０８、１００８、８３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １６４.０５２７(ＭＨ＋)、Ｃ９Ｈ１０ＮＳの計算値  １６４.０５２８。
【００９８】
３９からの薗頭カップリング生成物。黄色油状物(７０％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３６(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２０：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２４、２２３１、１５６６、１５５４、１４３１、１１５６、１１４０、７９０cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １６４.０５２６(ＭＨ＋)、Ｃ９Ｈ１０ＮＳの計算値  １６４.０５２８。
【００９９】
ヒドロスタンニル化−ヨード化(一般法)。これは、先に報告された方法の改作である(Betzer, J.-F., et al., Tetrahedron Lett. 1997, 38, 2279-2282)。ヘキサブチル二スズ(１０.１mL、２０mmol)の乾燥ＴＨＦ(４０mL)溶液に、−７８℃でｎ−ＢｕＬｉ(１２.９mL、２０mmol、ヘキサン中１.５５Ｍ)を添加し、得られた透明溶液を−４０℃で３０分間撹拌した。それを次いでカニューレを介して、ＣｕＣＮ(０.９０ｇ、１０mmol)のＴＨＦ(２mL)中の懸濁液に−７８℃で移した。透明黄色溶液が形成され、それを５分間、−４０℃で撹拌し、その後−７８℃に再び冷却した。次いで乾燥メタノール(２３mL、０.５７mol)を添加して赤色溶液とし、それを−４０℃で１５分間撹拌し、その後アリールプロピン(５.０mmol)のＴＨＦ(５mL)溶液を添加した。オレンジ色−赤色溶液を−１０℃で一晩撹拌し(幾分かのＣｕおよび／またはＣｕ２＋塩が沈殿)、次いで−２０℃に冷却し、続いてメタノール(１０mL)を添加した。１５分間、−２０℃の後、水(１０mL)を添加し、撹拌をさらに１５分間続け、その間２５℃に暖めた。混合物をエーテルで抽出し、有機相を塩水で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)により中間体ビニルスタンナンを得、それをＣＨ２Ｃｌ２(５mL)に溶解した。ヨウ素(１.０５当量)のＣＨ２Ｃｌ２(４０ｍＬ／ｇＩ２)溶液を次いでこの溶液に０℃で滴下した。最後の数滴の後、Ｉ２の色が続き、反応をさらに５分間、０℃で続けた。次いで溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルに溶解した。ＫＦ(１Ｍ水溶液、３当量)およびＮａ２Ｓ２Ｏ３(飽和、基質mmolあたり１０mL)を添加し、混合物を１５分間、２５℃で撹拌し、その間に白色沈殿が形成した。混合物をセライトを通して濾過し、有機相を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)で精製し、所望のヨウ化ビニルを得た。
【０１００】
ヨウ化ビニル２０ｃ。白濁フィルム(８０％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２５(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２０：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３０６０、２９１９、１６１９、１５９６、１４８４、１４４３、１３７３、１２１４、１０６１、９８５、８７３、７６１、７０３、６３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５１８.０９９０(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ２５ＩＮＯの計算値  ５１８.０９７５。
【０１０１】
ヨウ化ビニル２０ｄ。黄色油状物(６７％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.５１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２４、１７１６、１６１９、１５９６、１４８１、１３７２、１２１１、１１４９、１１０２、１０４５、９１８、８７３、６０９、５１７cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ３２０.０１４２(ＭＨ＋)、Ｃ１１Ｈ１５ＩＮＯ２の計算値  ３２０.０１４２。
【０１０２】
ヨウ化ビニル２０ｅ。中間体ビニルスタンナンは、容易に主要脱スタニル化する(protodestannylated)；したがって、この中間体のフラッシュクロマトグラフィーは、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：Ｅｔ３Ｎ  ５０：１：１を溶離剤として使用しなければならず、このようにして得たビニルスタンナンは他のブチルスズ化合物を含む。一般法にしたがい、混合物を十分量のＩ２で処理し、褐色が添加の終了後続く(約２当量のＩ２)。フラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５０：１)後、ヨウ化ビニル２０ｅを黄色油状物として得た(７４％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５０：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３１０２、２９２３、１６２０、１４２３、１３００、１０６５、１０３５、９６４、８６３、７２３、５６２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ２９７.９２１５(ＭＨ＋)、Ｃ７Ｈ９ＩＮＳ２の計算値  ２９７.９２１６。
【０１０３】
ヨウ化ビニル２０ｆ。黄色固体(８０％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.１９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４０：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９１９、１６１９、１５６７、１４６７、１４３１、１３７３、１１０８、１０６７、１０１４、９６１、８６７、８２０、５２１cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ２９１.９６５５(ＭＨ＋)、Ｃ９Ｈ１１ＩＮＳの計算値  ２９１.９６５１。
【０１０４】
ヨウ化ビニル２０ｇ。黄色油状物(８３％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２８(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４０：１)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９１９、１６２０、１５４９、１４２５、１１５５、１１３８、１０６１、９９１、９６１、８６１、７８５、７３２、５５０cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ２９１.９６５３(ＭＨ＋)、Ｃ９Ｈ１１ＩＮＳの計算値  ２９１.９６５１。
【０１０５】
エポシロンアナログ８−１４４の合成。
アルデヒド(３４、４０)とビニルスタンナン(２０ａ−ｇ)の野崎−檜山−岸カップリング(一般法)。短く真空−脱気したアルデヒド３２(１０７mg、０.１５mmol)、必須のヨウ化ビニル２０(０.４５mmol)、４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン(６６５μL、４.５mmol)のＤＭＳＯ(３mL)溶液に、無水ＣｒＣｌ２(１８４mg、１.５mmol)および無水ＮｉＣｌ２(４mg、０.０３mmol)を添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌し、その後さらにヨウ化ビニル(０.４５mmol)を添加し、撹拌をさらに３時間続けた。これをもう一回繰り返し、その後撹拌を一晩続けた。反応を次いで水(５mL)でクエンチし、ピリジン(１mL)を添加してＣｒ−生成物複合体が水相に抽出されるのを防ぎ、混合物をＥｔＯＡｃ(３(２５mL)で抽出した。合わせた抽出物を塩水(２(１００mL)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)により、カップリング生成物が得られ、ほとんどの場合、過剰の４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンと分離できなかった。
【０１０６】
２０ａおよび３２からの生成物。黄色油状物(Ｃ１５エピマーの約１：１混合物として８５％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２６(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４：１)；[α]Ｄ２２−２５(ｃ  ０.３６、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９４３、２８６０、１７３１、１６９６、１４６７、１３８４、１２９０、１２４９、１１７３、１０７９、９８５、８３２、７７３cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８６０.５１２８(ＭＮａ＋)、Ｃ４４Ｈ８３ＮＯ６ＳＳｉ３Ｎａの計算値  ８６０.５１４１。
【０１０７】
２０ｂおよび３２からの生成物。このカップリング生成物は、４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンと分離できず、粗混合物としてＴＢＡＦ脱保護条件(下を見よ)に付した。
【０１０８】
２０ｄおよび３２からの生成物。このカップリング生成物は４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンと分離できず、粗混合物としてＴＢＡＦ脱保護条件(下を見よ)に付した。
【０１０９】
２０ｅおよび３２からの生成物。黄色ガラス(７８％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４０(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−２８(ｃ  ２.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４１６(ｂｒ)、２９２９、２８５６、１７３２、１６９４、１４７２、１２５１、１０３７、９８８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ９０６.５０２１(ＭＨ＋)、Ｃ４５Ｈ８５ＮＯ６Ｓ２Ｓｉ３Ｎａの計算値  ９０６.５０１８。
【０１１０】
２０ｆおよび３２からの生成物。このカップリング生成物は４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンと分離できず、粗混合物としてＴＢＡＦ脱保護条件(下を見よ)に付した。
【０１１１】
２０ｇおよび３２からの生成物。このカップリング生成物は４−ｔｅｒｔ−ブチルピリジンと分離できず、粗混合物としてＴＢＡＦ脱保護条件(下を見よ)に付した。
【０１１２】
２０ｃおよび４０からの生成物。黄色ガラス(Ｃ１５エピマーの約１：１混合物として、アルデヒド４０からの２段階で８７％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.１５(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ４：１)；[α]Ｄ２２−２３(ｃ  ０.１９、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３１、２８６１、１７３１、１６９０、１４６７、１３８４、１３５５、１２４９、１１６７、１０６１、９８５、８３２、７７３、７０３cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  １１１２.６６３４(ＭＮａ＋)、Ｃ６５Ｈ９９ＮＯ７Ｓｉ３Ｎａの計算値  １１１２.６６２１。
【０１１３】
２０ｅおよび４０からの生成物。無色ガラス(５９％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ５：１)；[α]Ｄ２２−２８(ｃ  ２.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３９６(ｂｒ)、２９２８、２８５５、１７３４、１６９３、１４７２、１２５１、１０３７、９８８、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８９２.４８６１(ＭＮａ＋)、Ｃ４４Ｈ８３ＮＯ６Ｓ２Ｓｉ３Ｎａの計算値  ８９２.４８６２。
【０１１４】
ＴＢＡＦ脱保護(一般法)。野崎−檜山−岸カップリングの生成混合物をＴＨＦ(１.５mL)に溶解し、ＴＢＡＦ(ＴＨＦ中１Ｍ、０.３０mL、０.３０mmol)を０℃で添加した。１時間、０℃の後、さらにＴＢＡＦ(０.３０mL、０.３０mmol)を添加し、混合物を２５℃で１時間撹拌した。反応をＮＨ４Ｃｌ(飽和、５mL)でクエンチし、混合物をＥｔＯＡｃ(４(２０mL)で抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)で精製し、所望のヒドロキシ酸をＣ１５エピマーの約１：１混合物として得た(この段階では分離不可能)。
【０１１５】
ヒドロキシ酸４１ａ。脱保護からの反応混合物を短くシリカゲルのプラグを通して濾過し、この粗生成物(アルデヒド３２から７３％収率)をさらに精製せずに山口マクロラクトン化(下を見よ)に付した。
【０１１６】
ヒドロキシ酸４１ｂ。黄色固体(５７％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.１９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−６(ｃ  １.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３６９(ｂｒ)、２９３０、２８５７、１７８３、１６９４、１４７１、１２５１、１０８５、１０８４、９８８、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７６８.５０２８(ＭＮａ＋)、Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ６Ｓｉ２Ｎａの計算値  ７６８.５０２５。
【０１１７】
ヒドロキシ酸４１ｄ。黄色ガラス(Ｃ１５エピマーの約１：１混合物として、アルデヒド３２から２段階で、４９％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２０(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)；[α]Ｄ２２  ＋１(ｃ  ０.１９、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３３、２８５８、１６９４、１６００、１５６３、１４６３、１３８２、１３５７、１２５１、１１４５、１０９６、１０４６、９８９、８３４、７７２、６６６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８０６.５４３７(ＭＨ＋)、Ｃ４４Ｈ８０ＮＯ８Ｓｉ２の計算値  ８０６.５４１７。
【０１１８】
ヒドロキシ酸４１ｅ。黄色固体(７９％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−２３(ｃ  ２.３、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３５６(ｂｒ)、２９２９、２８５６、１７１２、１４７２、１２５３、１０８５、１０３８、９８８、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８０６.４２８２(ＭＮａ＋)、Ｃ４０Ｈ７３ＮＯ６Ｓ２Ｓｉ２Ｎａの計算値  ８０６.４３１５。
【０１１９】
ヒドロキシ酸４１ｆ。無色ガラス(６３％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−３(ｃ  ０.４４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３３、２８５８、１６９３、１４６７、１２５３、１０８６、９８４、８３３、７７４cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８００.４７５４(ＭＮａ＋)、Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ６ＳＳｉ２Ｎａの計算値  ８００.４７４６。
【０１２０】
ヒドロキシ酸４１ｇ。黄色ガラス(Ｃ１５エピマーの約１：１混合物として、アルデヒド３２から２段階で、４６％)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４６(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−１１(ｃ  ０.１９、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３３、２８５８、１７０６、１５５７、１４６３、１４２６、１３６４、１２５１、１０８３、９８９、８３４、７７２、６６６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８００.４７４６(ＭＮａ＋)、Ｃ４２Ｈ７５ＮＯ６ＳＳｉ２Ｎａの計算値  ８００.４７４６。
【０１２１】
ヒドロキシ酸４２ｃ。脱保護からの反応混合物を短くシリカゲルのプラグを通して濾過し、この粗生成物(アルデヒド４０から４６％収率)をさらに精製せずに山口マクロラクトン化(下を見よ)に付した。
【０１２２】
ヒドロキシ酸４２ｅ。薄黄色ガラス(６６％、Ｃ１５エピマーの約１：１混合物)。ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３９(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−２０(ｃ  １.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３５４(ｂｒ)、２９２８、２８５６、１７１３、１４７１、１２５３、１０８７、９８８、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７９２.４１６１(ＭＮａ＋)、Ｃ３９Ｈ７１ＮＯ６Ｓ２Ｓｉ２Ｎａの計算値  ７９２.４１５３。
【０１２３】
山口マクロラクトン化(一般法)。ヒドロキシ酸(９５μmol)の乾燥ＴＨＦ(８ml)溶液に、０℃でトリエチルアミン(７９μL、０.５７mmol)および２,４,６−トリクロロベンゾイルクロライド(４０μL、０.２３mmol)を添加した。０℃で１時間撹拌後、得られた溶液を２時間にわたり４−ＤＭＡＰ(２６mg、０.２１mmol)のトルエン(２０mL)溶液に、７５℃でシリンジポンプを使用して添加した。撹拌を７５℃でさらに１時間続け、その後トルエンを減圧下で蒸発させた。残渣を直接フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)に付し、マクロラクトンおよびその(１５Ｒ)−エピマーを得、容易に分離できた。すべての例で、所望の(１５Ｓ)−エピマーが極性の低い(１５Ｒ)−エピマーの後に溶出した。
【０１２４】
マクロラクトン４３ａ。無色ガラス(アルデヒド３２およびヨウ化ビニル２０ａの野崎−檜山−岸カップリング生成物から２段階で２８％。)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２０：１)；[α]Ｄ２２−３３(ｃ  ０.５６、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３２、２８５５、１７３９、１６８９、１４６５、１３８３、１２５２、１１８１、１１５３、１０９９、１０６６、１０１７、９８４、８６９、８３６、７７６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７３４.４６３９(ＭＨ＋)、Ｃ４０Ｈ７２ＮＯ５ＳＳｉ２の計算値  ７３４.４６６４。
【０１２５】
マクロラクトン４３ｂ。無色ガラス(２８％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)；[α]Ｄ２２−２８(ｃ  １.０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２９、２８５６、１７４０、１６９５、１４７２、１３８４、１２５３、１１００、１０２０、９８６、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７２８.５１０９(ＭＨ＋)、Ｃ４２Ｈ７４ＮＯ５Ｓｉ２の計算値  ７２８.５１０６。
【０１２６】
マクロラクトン４３ｄ。黄色ガラス(３５％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.１４(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ６：１)；[α]Ｄ２２−２８(ｃ  ０.１２、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３１、２８６１、１７３７、１６９０、１５９６、１４６７、１３７８、１２４９、１１４９、１１０２、１０４９、９８５、８３２、７７３cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ８１０.５１１６(ＭＮａ＋)、Ｃ４４Ｈ７７ＮＯ７Ｓｉ２Ｎａの計算値  ８１０.５１３０。
【０１２７】
マクロラクトン４３ｅ。この生成物を粗混合物として単離し、これをさらに精製せずに広範囲の脱シリル化条件(下を見よ)に付した。
【０１２８】
マクロラクトン４３ｆ。無色ガラス(４５％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２０(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)；[α]Ｄ２２−０.３０(ｃ  ０.１０、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３３、２８５、１７３７、１６６８、１４６３、１３８２、１３５７、１２５１、１１０２、１０１５、９８３、８７１、８３４、７７２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７６０.４７９９(ＭＨ＋)、Ｃ４２Ｈ７４ＮＯ５ＳＳｉ２の計算値  ７６０.４８２０。
【０１２９】
マクロラクトン４３ｇ。黄色ガラス(３７％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)；[α]Ｄ２２−１４(ｃ  ０.３１、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２９、２８５６、１７４０、１６９６、１５５７、１４６１、１４３１、１３７９、１２５０、１０９９、１０７、９７９、８３６、７７４cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７６０.４８０２(ＭＨ＋)、Ｃ４２Ｈ７４ＮＯ５ＳＳｉ２の計算値  ７６０.４８２０。
【０１３０】
マクロラクトン４４ｃ。無色ガラス(アルデヒド４０およびヨウ化ビニル２０ｃの野崎−檜山−岸カップリング生成物から２段階で３３％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４６(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １０：１)；[α]Ｄ２２−１７(ｃ  ０.５６、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９３１、２８６１、１７４３、１６９６、１４６７、１３７８、１２４９、１１６１、１０７３、１０２０、９８５、８７３、８３３、７７３、７０３、５７９cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ９７２.５９６９(ＭＨ＋)、Ｃ６０Ｈ８６ＮＯ６Ｓｉ２の計算値  ９７２.５９８８。
【０１３１】
マクロラクトン４４ｅ。無色ガラス(４７％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３１(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １５：１)；[α]Ｄ２２−１９(ｃ  ０.５０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ２９２９、２８５５、１７４１、１６９７、１４７２、１２５４、１１０２、１０３６、９８６、８３６、７７５cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ７７４.４０５６(ＭＮａ＋)、Ｃ３９Ｈ６９ＮＯ５Ｓ２Ｓｉ２Ｎａの計算値  ７７４.４０４８。
【０１３２】
広範囲の脱シリル化(一般法)。マクロラクトンを、２０％ｖ／ｖ  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液に溶解し、溶液を２５℃で３時間保ち、その後揮発物を加熱せずに蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、溶液をＮａＨＣＯ３(飽和)で洗浄し、乾燥させ(Ｎａ２ＳＯ４)、蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ混合物)により純粋エポシロンを得た。
【０１３３】
エポシロン６。無色ガラス(７３％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２５(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−３４(ｃ  ０.１１、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４７２(ｂｒ)、２９３１、１７３２、１６８４、１４５６、１３７８、１２５８、１１７９、１１４９、１０６７、１０４３、１０１２、９７３、８７３、７３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５０６.２９３１(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４４ＮＯ５Ｓの計算値  ５０６.２９３５。
【０１３４】
エポシロン８。無色ガラス(４８％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.５２(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)；[α]Ｄ２２−５４(ｃ  ０.３０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４４５(ｂｒ)、２９３６、１７３２、１６８２、１４５４、１３８３、１２５９、７５６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５００.３３６９(ＭＨ＋)、Ｃ３０Ｈ４６ＮＯ５の計算値  ５００.３３７６。
【０１３５】
エポシロン１０。一般法は、ＭＯＭ保護基をきれいに開裂できない。したがって、この基を、下記のように、最初にブロモトリメチルシランを使用して除去した：保護エポシロン４３ｄ(１１mg、１４μmol)の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２(０.４mL)溶液に、粉末４Å  ＭＳ(５mg)を添加し、得られた混合物を−３０℃に冷却した。ブロモトリメチルシラン(１８.４μL、１４０μmol)を滴下し、混合物を−３０℃で１時間撹拌し、その後反応をＮａＨＣＯ３(飽和)でクエンチし、ＥｔＯＡｃで５回抽出した。合わせた抽出物を乾燥させ、蒸発させ、残渣を広範囲の脱シリル化法に付し、１０を無色ガラス(５６％)として得た；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４２(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：４)；[α]Ｄ２２−５２(ｃ  ０.１２、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４０１(ｂｒ)、２９３１、１７３１、１６８４、１５９６、１５６１、１４６１、１３７８、１３３１、１２９０、１２５５、１１７３、１１４９、１０４４、１００８、９７９、８７９、７３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５１６.３３３０(ＭＨ＋)、Ｃ３０Ｈ４６ＮＯ６の計算値  ５１６.３３１９。
【０１３６】
エポシロン１２。粘性油状物(４１ｅから１７％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.３８(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−５２(ｃ  ０.５０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４９０(ｂｒ)、２９３３、１７３２、１６８６、１２５５、１０３８、７５６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５３８.２６６６(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４４ＮＯ５Ｓ２の計算値  ５３８.２６５５。
【０１３７】
エポシロン１３。無色ガラス(６８％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.５７(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：１)；[α]Ｄ２２−４６(ｃ  ０.３４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４８４(ｂｒ)、２９３２、１７３１、１６８４、１４６９、１３６７、１２５５、１１５０、１０４４、１００９、９７３、８７９、８２６、７３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５５４.２９１５(ＭＮａ＋)、Ｃ３０Ｈ４５ＮＯ５ＳＮａの計算値  ５５４.２９１０。
【０１３８】
エポシロン１４。無色ガラス(４８％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.４２(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−３８(ｃ  ０.３４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４７８(ｂｒ)、２９３０、１７３２、１６８２、１５５６、１４３４、１３７８、１２５７、１１４９、１１３７、１０６７、１０４４、１０１２、９７９、７８５、７３２cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５３２.３０７８(ＭＨ＋)、Ｃ３０Ｈ４５ＮＯ５Ｓの計算値  ５３２.３０９１。
【０１３９】
エポシロン９。無色ガラス(５４％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.１３(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  １：２)；[α]Ｄ２２−２４(ｃ  ０.１４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３３７９、２９２０、２８５７、１７２５、１６８８、１６００、１４５９、１３７０、１２５５、１１５１、１０４７、１０１０、９７９、８８０、７３４cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５２４.３００４(ＭＮａ＋)、Ｃ２９Ｈ４３ＮＯ６Ｎａの計算値  ５２４.２９８２。
【０１４０】
エポシロン１１。無色ガラス(６８％)；ＴＬＣ  Ｒｆ＝０.２８(シリカ、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１)；[α]Ｄ２２−２６(ｃ  ０.３０、ＣＨＣｌ３)；ＩＲ(フィルム)νｍａｘ  ３４４４(ｂｒ)、２９２５、１７３１、１６９３、１４５４、１２５８、１０３７、７５６cm−１；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ  ｍ／ｚ  ５４６.２３３０(ＭＮａ＋)、Ｃ２７Ｈ４１ＮＯ５Ｓ２Ｎａの計算値  ５４６.２３１８。
【０１４１】
化合物４８：Ｒｆ＝０.１９(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝３／７)；[ａ]Ｄ２０−１９.３(ｃ  ０.１４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＩＲ(フィルム)：νｍａｘ  ３４８４(ｂｒ)、２９３２、１７２９、１４５９、１３７５、１２４９、１０４３、９８２、７３３cm−１；１Ｈ  ＮＭＲ(４００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３)：ｄ＝６.９７(ｓ、１Ｈ)、６.４７(ｓ、１Ｈ)、５.２５(ｄｄ、Ｊ＝５.７、７.１  Ｈｚ、１Ｈ)、４.０４(ｄｄ、Ｊ＝３.０、８.１  Ｈｚ、１Ｈ)、３.９１(ｄｄ、Ｊ＝４.１、４.１  Ｈｚ、１Ｈ)、３.２３(ｍ、１Ｈ)、２.６９(ｓ、３Ｈ)、２.５２(ｄｄ、Ｊ＝８.４、１４.９  Ｈｚ、１Ｈ)、２.４６(ｄｄ、Ｊ＝２.６、１４.９  Ｈｚ、１Ｈ)、２.１１(ｓ、３Ｈ)、２.０４(ｄｄ、Ｊ＝４.０、１４.５  Ｈｚ、１Ｈ)、１.６６−１.７２(ｍ、１Ｈ)、１.４４−１.６２(ｍ、４Ｈ)、１.３６(ｓ、３Ｈ)、１.２２−１.３５(ｍ、２Ｈ)、１.１７(ｄ、Ｊ＝７.５  Ｈｚ、３Ｈ)、１.１６(ｓ、３Ｈ)、１.０４−１.１５(ｍ、１Ｈ)、０.９９(ｄ、Ｊ＝７.０  Ｈｚ、３Ｈ)、０.９７(ｓ、３Ｈ)、０.４８(ｍ、１Ｈ)、０.４０(ｄｄ、Ｊ＝３.９、８.８  Ｈｚ、１Ｈ)、−０.１１ppm(ｂｒ  ｔ、Ｊ＝４.６  Ｈｚ、１Ｈ)；１３Ｃ  ＮＭＲ(１００  ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３)：ｄ＝２２１.５、１７１.１、１６５.７、１５２.９、１３８.６、１２０.１、１１６.２、８２.０、７３.８、７３.２、５２.０、４２.９、３９.４、３６.５、３５.０、３３.２、３１.６、２４.６、２３.５、２２.５４、２２.４９、２１.１、２０.８、１９.４、１７.４、１６.８、１５.０、１３.２ppm；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５３８.２６３２(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４４ＮＯ５Ｓ２の計算値  ５３８.２６５５。
【０１４２】
化合物５０：Ｒｆ＝０.２７(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−６１(ｃ  ０.１２、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５００.３３７６(ＭＨ＋)、Ｃ３０Ｈ４６ＮＯ５の計算値  ５００.３３７０。
【０１４３】
化合物５１：Ｒｆ＝０.３７(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−４４(ｃ  ０.１４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５５４.２６０４(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４４ＮＯ６Ｓ２の計算値  ５５４.２６０４。
【０１４４】
化合物５２：Ｒｆ＝０.３１(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−３２(ｃ  ０.３３、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ６０８.２３３４(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４１Ｆ３ＮＯ６Ｓ２の計算値  ６０８.２３２２。
【０１４５】
化合物５３：Ｒｆ＝０.３８(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−４３(ｃ  ０.１２、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５６８.２７７７(ＭＨ＋)、Ｃ２９Ｈ４６ＮＯ６Ｓ２の計算値  ５６８.２７６１。
【０１４６】
化合物５４：Ｒｆ＝０.２７(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−２８(ｃ  ０.２６、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ６２８.２３７６(ＭＮａ＋)、Ｃ３１Ｈ４３ＮＯ７Ｓ２Ｎａの計算値  ６２８.２３７３。
【０１４７】
化合物５５：Ｒｆ＝０.２４(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−４９(ｃ  ０.４５、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５６６.２１１６(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４１ＢｒＮＯ６の計算値  ５６６.２１１２。
【０１４８】
化合物５６：Ｒｆ＝０.３６(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−２７(ｃ  ０.１５、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５４４.２４１９(ＭＮａ＋)、Ｃ２８Ｈ４０ＣｌＮＯ６Ｎａの計算値  ５４４.２４３６。
【０１４９】
化合物５７：Ｒｆ＝０.２８(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−４９(ｃ  ０.４５、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５３４.２９０７(ＭＨ＋)、Ｃ２９Ｈ４４ＮＯ６Ｓの計算値  ５３４.２８８４。
【０１５０】
化合物５８：Ｒｆ＝０.３５(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−５０(ｃ  ０.６２、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５５６.２７２４(ＭＮａ＋)、Ｃ２９Ｈ４３ＮＯ６ＳＮａの計算値  ５５６.２７０３。
【０１５１】
化合物５９：Ｒｆ＝０.３７(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−３４(ｃ  ０.２４、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５５６.２８９１(ＭＨ＋)、Ｃ２９Ｈ４１Ｆ３ＮＯ６の計算値  ５５６.２８８０。
【０１５２】
化合物６０：Ｒｆ＝０.３４(シリカゲル、酢酸エチル／ヘキサン＝１／１)；[ａ]Ｄ２０−３３(ｃ  ０.８０、ＣＨ２Ｃｌ２)；ＭＡＬＤＩ−ＦＴＭＳ：ｍ／ｚ  ５３５.２８２０(ＭＨ＋)、Ｃ２８Ｈ４３Ｎ２Ｏ６Ｓの計算値  ５３５.２８３６。
【０１５３】
実施例：軟カプセル
前記実施例に記載の式Ｉの化合物の一つ、例えば実施例１、２、３または４の化合物を活性成分として各々０.０５ｇ含む、５０００個の軟カプセルを下記のように製造する：
組成
活性成分    ２５０ｇ
ラウログリコール２リットル
製造法：粉砕した活性成分をLauroglykol(登録商標)(プロピレングリコールラウレート、Gattefosse S.A., Saint Priest, France)に懸濁し、湿式粉砕機中で約約１から３μｍの粒子サイズまで挽く。各々０.４１９ｇずつの混合物を次いでカプセル充填機により軟ゼラチンカプセルに充填する。
【０１５４】
実施例：輸液
実施例１、２、３または４の化合物を、１mg／mlの濃度でポリエチレングリコール３００(ＰＥＧ３００)に溶解し、２mlバイアルに充填する。注入に際して、この溶液を５０から１００mlの０.９％生理食塩水で、米国薬局方にしたがい希釈する。
【０１５５】
図面の詳細な説明
図１は、選択した天然の、および計画したエポシロンの構造を説明する。灰色四角は、本試験で合成した化合物を示す。
【０１５６】
図２は、３７℃で、競合リガンドによる微小管結合部位(５０nM)からの蛍光タキソイドFlutax-2(５０nM)の置換を示すチャートを記載する。点線は獲得したデータ点を示し、線は同部位への１対１の結合と仮定して、各競合剤の結合平行定数の最適な適合値が得られるように作った。アッセイしたリガンドは、パクリタキセル(Taxol(登録商標))(濃青色)、エポシロンＡ(１)(赤色)、エポシロンＢ(２)(紫色)、化合物３(黄色)、化合物４(明褐色)、化合物８(緑色)である選択したエポシロンアナログ(３、４、８)の代表的曲線を、表３の各化合物でどのように結合親和性を測定したかを例示するために本図に示す。
【０１５７】
図３は、２−(チオメチル)チアゾールエポシロンＢ(３)の、Stilleカップリングによる合成を示す。試薬および条件：Ｐｄ２(ｄｂａ)３・ＣＨＣｌ３(０.２当量)、ＣｕＩ(２.０当量)、ＡｓＰｈ３(０.８当量)、ＤＭＦ、２５℃、８０％。ｄｂａ＝ジベンジリデンアセトン。
【０１５８】
図４は、ｔｒａｎｓ−シクロプロピルエポシロンＢアナログ(１−６、８、１０、および１２−１４)の逆合成解析を示す。
【０１５９】
図５はアルデヒド３２の構築を示す。試薬および条件：(ａ) Nicolaou, K. C., et al. ChemBioChem 2001, 2, 69-75; Charette, A. B.; et al. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 11943-11952参照；(ｂ)ＮａＨ(１.５当量)、ＢｎＢｒ(１.５当量)、ＤＭＦ、０→２５℃、１２時間；(ｃ)Ｏ３、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ４：１、−７８℃、２１分；次いでＮａＢＨ４(３.０当量)、−７８→２５℃、１時間、２段階で８９％；(ｄ)ＭｓＣｌ(１.３当量)、Ｅｔ３Ｎ(１.５当量)、ＣＨ２Ｃｌ２、２５℃、１時間；(ｅ)ＮａＩ(３.０当量)、アセトン、還流、４０分間、２段階で９５％；(ｆ)ＬＤＡ(１.４当量)、２５(１.３当量)、ＴＨＦ、０℃、６時間；次いで２４、−９８→−１０℃、１４時間、８４％；(ｇ)ＭｅＩ、６０℃、３時間；(ｈ)３Ｎ  ＨＣｌ：ペンタン１：１、２５℃、３時間、２段階で８８％；(ｉ)ＬＤＡ(２.４当量)、１９(２.３当量)、ＴＨＦ、−７８℃、１時間；次いで−４０℃、０.５時間；次いで−７８℃、５分間、１７、８１％；(ｊ)ＴＢＳＯＴｆ(２.０当量)、２,６−ルチジン(３.０当量)、ＣＨ２Ｃｌ２、−２０℃、１時間；(ｋ)ＨＦ・ｐｙ、ピリジン、ＴＨＦ、２５℃、４時間、２段階で８９％；(ｌ)ＤＭＰ(２.５当量)、ＮａＨＣＯ３(２.５当量)、Ｈ２Ｏ、ＣＨ２Ｃｌ２、２５℃、１時間；(ｍ)ＮａＣｌＯ２(３.１当量)、ＮａＨ２ＰＯ４(２.１当量)、２−メチル−２−ブテン(７４当量)、ｔ−ＢｕＯＨ、ＴＨＦ、Ｈ２Ｏ、２５℃、１時間；(ｎ)２−(トリメチルシリル)エタノール(４.０当量)、ＥＤＣ(１.５当量)、４−ＤＭＡＰ(０.１当量)、ＤＭＦ、２５℃、１４時間、３段階で７４％；(ｏ)２０％Ｐｄ(ＯＨ)２／Ｃ、Ｈ２(１気圧)、ＥｔＯＨ：ＥｔＯＡｃ  １：１、２５℃、１時間；(ｐ)ＤＭＰ(２.５当量)、ＮａＨＣＯ３(２.５当量)、Ｈ２Ｏ、ＣＨ２Ｃｌ２、２５℃、１時間、８４％２段階で；(ｑ)ＭｅＯＣＨ２ＰＰｈ３Ｃｌ(３.０当量)、ＮａＨＭＤＳ(２.８当量)、ＴＨＦ、−４０→−１０℃、２時間、８４％；(ｒ)ＰＰＴＳ(８.０当量)、ジオキサン：Ｈ２Ｏ  ９：１、７０℃、６時間、８２％。４−ＤＭＡＰ＝４−(ジメチルアミノ)ピリジン；ＤＭＥ＝１,２−ジメトキシ−エタン；ＤＭＰ＝Dess-Martinペルヨージナン；ＥＤＣ＝１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミドヒドロクロライド；ＨＦ・ｐｙ＝水素フルオリド−ピリジン複合体；ＮａＨＭＤＳ＝ナトリウムヘキサメチルジシラジド；ＰＰＴＳ＝パラ−トルエンスルホン酸ピリジニウム；ＴＭＳＥ＝２−トリメチルシリルエチル。
【０１６０】
図６はヨウ化ビニル２０ｃ−ｇの構築を示す。試薬および条件：(ａ)ＴｒＣｌ(１.４当量)、４−ＤＭＡＰ(１.７当量)、ＤＭＦ、８０℃、４８時間、１００％；(ｂ)Ｐｄ(ＰＰｈ３)２Ｃｌ２(０.０１当量)、ＣｕＩ(０.０２当量)、ＨＣｅＣＣＨ３(１気圧)、ＤＭＦ、ｉ−Ｐｒ２ＮＥｔ、２５℃、３時間、３５：９６％；(ｃ)(ｉ)ｎ−ＢｕＬｉ(４.０当量)、(ｎ−Ｂｕ３Ｓｎ)２(４.０当量)、ＣｕＣＮ(２.０当量)、ＭｅＯＨ、ＴＨＦ、−１０℃、１２時間；(ii)Ｉ２(１.０５当量)、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃、５分間、２０ｃ：３５から８０％；２０ｄ：から６７％；２０ｅ：３７から３７％；２０ｆ：３８から９７％；２０ｇ：３９から５８％；(ｄ)(ｉ)ＨＣｌ(ｇ)、ＣＨＣｌ３、０℃、１時間、６９％；(ii)ＭＯＭＣｌ(１.２当量)、ＮａＨ(１.２当量)、ＴＨＦ、０℃、１時間、５０％。ＴｒＣｌ＝トリフェニルメチルクロライド；４−ＤＭＡＰ＝４−(ジメチルアミノ)ピリジン；ＭＯＭＣｌ＝クロロメチルメチルエーテル。
【０１６１】
図７はエポシロンアナログ８−１４の合成を示す。試薬および条件：(ａ)ＣｒＣｌ２(１０当量)、ＮｉＣｌ２(０.２当量)、４−ｔ−ブチルピリジン(３０当量)、２０(３.０当量)、ＤＭＳＯ、２５℃、一晩；(ｂ)ＴＢＡＦ(４.０当量)、ＴＨＦ、０℃、１時間；次いで２５℃、１時間；(ｃ)Ｅｔ３Ｎ(６.０当量)、２,４,６−トリクロロベンゾイルクロライド(２.４当量)、４１または４２、ＴＨＦ、０℃、１時間；次いで４−ＤＭＡＰ(２.２当量)、トルエン、７５℃、３時間；(ｄ)２０ｖ／ｖ％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液、２５℃、３時間(４３ｄ以外)；(ｅ)１Ｈ  ＮＭＲで概算；(ｆ)４３ｄの脱保護：ＴＭＳＢｒ(１０当量)、４Å  ＭＳ、ＣＨ２Ｃｌ２、−３０℃、１時間；次いで２０ｖ／ｖ％ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液、２５℃、３時間。ＴＢＡＦ＝テトラブチルアンモニウムフルオリド；４−ＤＭＡＰ＝４−(ジメチルアミノ)ピリジン；ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸；ＴＭＳＢｒ＝トリメチルシリルブロミド；ＭＳ＝モレキュラー・シーブ。
【０１６２】
図８は、パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択した１Ａ９ヒト卵巣癌細胞およびβ−チューブリン変異細胞系に対する、エポシロン１から１４およびパクリタキセルの細胞毒性を示す表を記載する。試験化合物の親１Ａ９およびパクリタキセル−およびエポシロン−選択薬剤耐性クローン(各々ＰＴＸ１０、ＰＴＸ２２およびＡ８)に対する抗−増殖性効果を、ＳＲＢ(スルホローダミン−Ｂ)アッセイを使用した７２時間増殖阻害アッセイで評価した(Skehan, P.; et al. J. Natl. Cancer Inst. 1990, 82, 1107-1112)。各化合物のＩＣ５０値をnMで示し、３−９回の独立した実験の平均と、Å平均の標準誤差を示す。相対的耐性(ＲＲ)を、各耐性サブラインを親細胞系(１Ａ９)の値で割ったＩＣ５０値として計算する。ＣＰ＝シクロプロピル；ｐｙ＝５−メチルピリジン側鎖；ｐｙＯＨ＝５−ヒドロキシメチルピリジン側鎖；５ｔｍｐｙ＝５−チオメチルピリジン側鎖；６ｔｍｐｙ＝６−チオメチルピリジン側鎖；ｔｍｔ＝２−チオメチルチアゾール側鎖。
【０１６３】
図９は、チューブリン重合化力およびエポシロン１−８、１０−１４およびパクリタキセルの、ヒト類表皮癌細胞系に対する細胞毒性を示す表を記載する。(ａ)４μＭ化合物によるブタのチューブリン重合化(ＴＰ)を、記載のように２５μＭエポシロンＢ(１００％として定義)に対して数量化した(Nicolaou, K. C.; et al. Chem. Biol. 2000, 7, 593-599)。(ｂ)細胞増殖の最大阻害に必要な薬剤濃度(nMで記載したＩＣ５０値)を、記載のように９６時間薬剤に暴露した後の、タンパク質色素法を使用した細胞塊の定量により評価した(Meyer, T.; et al. Int. J. Cancer 1989, 43, 851-856)。ＫＢ−３１：類表皮Taxol(登録商標)−感受性細胞、ＫＢ−８５１１：類表皮Taxol(登録商標)−耐性細胞(Ｐｇｐ過発現のため)。相対的耐性(ＲＲ)を、耐性細胞系のＩＣ５０値を感受性細胞系の値で割って計算した。(ｃ)ｒｅｆ.３からのデータ(Taxol(登録商標)、ＥｐｏＡおよびＥｐｏＢの％ＴＰ値は各々４９、６９および９０)。ＣＰ＝シクロプロピル；ｐｙ＝５−メチルピリジン側鎖；ｐｙＯＨ＝５−ヒドロキシメチルピリジン側鎖；５ｔｍｐｙ＝５−チオメチルピリジン側鎖；６ｔｍｐｙ＝６−チオメチルピリジン側鎖；ｔｍｔ＝２−チオメチルチアゾール側鎖。
【０１６４】
図１０は、微小管のタキソイド結合部位へのエポシロンアナログの結合親和性を記載する表を示す。(ａ)異なるリガンドの微小管のタキソイド部位への結合を、蛍光Taxol(登録商標)誘導体(Flutax-2)をその結合部位から置換ことにより測定した(図２)(Diaz, J. F.; et al. J. Biol. Chem. 2000, 275, 26265-26276)。各リガンドのFlutax-2置換等温線を、先の報告の修飾法で、少なくとも２回蛍光分極マイクロプレートリーダーで測定した(Andreu, J. M.; Barasoain, I. Biochemistry 2001, 40, 11975-11984)。液体窒素下に貯蔵した架橋安定化微小管を用いた。参照リガンドFlutax-2の結合定数を、各温度での遠心および蛍光異方性により測定した(Diaz, J. F.; et al. J. Biol. Chem. 2000, 275, 26265-26276)。得られた参照値は２.２であった(３７℃で１０７Ｍ−１)。(ｂ)平行解離定数(Ｋｄ)をnMで示す。(ｃ)標準結合解離エネルギー(ＤＧ０ａｐｐ)をｋＪ  mol−１で示す。
【０１６５】
図１１は、種々の指定したエポシロンＡおよびＢアナログの一連の構造と、エポシロンＡおよびＢの構造を示す。現在のエポシロンエポキシドライブラリーの設計は、現在のの構造活性相関(ＳＡＲ)の知識、具体的に：エポシロンＢ(２)はエポシロンＡ(１)よりも相対的により強力である；チアゾール部分のメチル基のチオメチル置換は有効性を上昇させる；そしてチアゾール側鎖のピリジンまたはピリミジンのようなヘテロ環への置換は、生物学的活性のために窒素の正確な位置を維持する必要がある。
【０１６６】
図１２は、ヨウ化ビニル１５と対応する芳香族性スタンナンからの多くのアナログの合成の最終段階を示すスキームである。１５と適当なスタンナンのStille−タイプカップリングは、ＰｄＣｌ２(ＭｅＣＮ)２、ＣｕＩおよびＡｓＰｈ３の存在下、ＤＭＦ中、環境温度で行い、記載の収率で直接アナログを導いた。試薬および条件：ａ. ＰｄＣｌ２(ＭｅＣＮ)２(０.５当量)、ＣｕＩ(２.０当量)、ＡｓＰｈ３(１.０当量)、６４ａ−６４ｄ、６６ａ−６６ｄ、６７−６８(２.５当量)、ＤＭＦ、２５℃、１−３時間、４１−８０％。
【０１６７】
図１３は、図１２のスキームに使用するスタンナンの合成に必要な段階を示すスキームである。チアゾール化合物(６４ａ−６４ｄ)は、市販の２,４−ジブロモチアゾール(６２)から、対応するチオールとＮａＨのジブロモチアゾール存在下での反応により合成した。生成物のＭｅ３ＳｎＳｎＭｅ３との、Ｐｄ(ＰＰｈ３)４存在下、トルエン中の１００℃でのカップリングにより、所望の生成物６４ａ−６４ｄを得た。試薬および条件：ａ)ＮａＨ(３当量)、ＲＳＨ(３当量)、ｉ−ＰｒＯＨ、２４時間、７０−８１％；ｂ)(Ｍｅ３Ｓｎ)２(５−１０当量)、Ｐｄ(ＰＰｈ３)４(５mol％)、トルエン、１００℃、１−３時間、７１−８８％；ｃ)ｎ−ＢｕＬｉ(１.１当量)、エーテル、−７８℃、１時間、次いでｎ−Ｂｕ３ＳｎＣｌ(１.２当量)、−７８から２５℃、１時間、４９−６２％。
【０１６８】
図１４は、エポシロンＢのシクロプロピルアナログの骨格を形成するための合成経路を説明するスキームである。試薬および条件：(ａ)Nicolaou, K. C.; et al. J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 9313およびJessie, S; Kjell, U. Tetrahedron 1994, 50, 275；(ｂ)ＮａＨ(１.５当量)、ＢｎＢｒ(１.２当量)、ＤＭＦ、０からｒｔ、１２時間、１００％；(ｃ)Ｏ３、ＣＨ２Ｃｌ２、ＭｅＯＨ(４：１)、−７８℃、次いでＮａＢＨ４(３当量)、−７８℃からｒｔ、１時間、８３％；(ｄ)ＭｓＣｌ(１.３当量)、Ｅｔ３Ｎ(１.５当量)、ＤＣＭ、ｒｔ、１時間；(ｅ)ＮａＩ(３当量)、アセトン、ｒｔ、１２時間、９１％(２段階)；(ｆ)ＬＤＡ(１.４当量)、２５(１.３当量)、ＴＨＦ、０℃、６時間、次いで７３、−９８から−１０℃、１４時間、８７％；(ｇ)ＭｅＩ、還流、３時間；(ｈ)３Ｎ  ＨＣｌ：ペンタン(１：１)、ｒｔ、３時間、９１％(２段階)；(ｉ)ＬＤＡ(２.４当量)、１９(２.３当量)、ＴＨＦ：エーテル(１：１)、−７８℃、１時間、次いで−４０℃、３０分間、次いで、−７８℃、５分間、７６、８０％；(ｊ)ＴＢＳＯＴｆ(１.５当量)、２,６−ルチジン(２当量)、ＤＣＭ、−２０℃、１時間；(ｋ)ＨＦ・ｐｙ、ピリジン、ＴＨＦ、０℃、８時間、８６％(２段階)；(ｌ)(ＣＯＣｌ)２(１.２当量)、ＤＭＳＯ(２.０当量)、ＤＣＭ、−７８℃、５分間、次いで７９(１当量)、２０分間、次いでＥｔ３Ｎ(３当量)、−７８から０℃；(ｍ)ＮａＣｌＯ２(５当量)、ＮａＨ２ＰＯ４(３当量)、２−メチル−２−ブテン(７５当量)、ｔ−ＢｕＯＨ、ＴＨＦ、Ｈ２Ｏ、ｒｔ、１時間；(ｎ)２−(トリメチルシリル)エタノール(４当量)、ＥＤＣ(１.５当量)、ＤＭＡＰ(０.１当量)、ＤＭＦ、ｒｔ、１２時間、７３％(３段階)；(ｏ)２０％Ｐｄ(ＯＨ)２／Ｃ、Ｈ２、ＥｔＯＨ：ＥｔＯＡｃ(１：１)、ｒｔ、２時間、８９％；(ｐ)(ＣＯＣｌ)２(１.２当量)、ＤＭＳＯ(２.０当量)、ＤＣＭ、−７８℃、５分間、次いで８１(１当量)、２０分間、次いでＥｔ３Ｎ(３当量)、−７８から０℃、９９％；(ｑ)ＭｅＯＣＨ２ＰＰｈ３Ｃｌ(３当量)、ｎ−ＢｕＬｉ(２.８当量)、ＴＨＦ、０℃、１時間、次いで８２、−７８から０℃、２時間、７９％；(ｒ)ＰＰＴＳ(１０当量)、ジオキサン：水(９：１)、７０℃、１２時間、８１％。
【０１６９】
図１５は、シクロプロピルアナログ４８および５０の合成に使用する最終段階を示すスキームである。試薬および条件：(ａ)ＣｒＣｌ２(１０当量)、ＮｉＣｌ２(０.２当量)、４−ｔ−ＢｕＰｙ(３０当量)、８４ａまたは８４ｂ(３当量)、ＤＭＳＯ、２５℃、２４時間；(ｂ)ＴＢＡＦ(２当量)、ＴＨＦ、ｒｔ、２時間；(ｃ)Ｅｔ３Ｎ(６当量)、２,４,６−トリクロロベンゾイルクロライド(２.４当量)、８５または８８、ＴＨＦ、０℃、１時間、次いでＤＭＡＰ(２.２当量)、トルエン、７５℃、３時間；(ｄ)２０％ｖ／ｖ  ＴＦＡのＣＨ２Ｃｌ２溶液、ｒｔ、３時間。
【０１７０】
図１６は、パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択したヒト癌細胞およびβ−チューブリン変異体細胞系に対するエポシロン４８、５０および５１−６０の細胞毒性の表である。親１Ａ９およびパクリタキセル−およびエポシロン−選択薬剤耐性クローン(各々ＰＴＸ１０、ＰＴＸ２２およびＡ８)に対する、試験化合物の抗増殖効果をＳＲＢ(スルホローダミン−Ｂ)アッセイを使用した７２時間増殖阻害アッセイで評価した(Skehan, P.; et al. J. Natl. Cancer. Inst. 1990, 82, 1107-1112.)。各化合物のＩＣ５０値をnMで示し、３回の別々の独立した実験の平均と、Å平均の標準誤差を示す。相対的耐性(ＲＲ)を、各耐性サブラインを親細胞系(１Ａ９)の値で割ったＩＣ５０値として計算する。化合物３の結果は、Nicolaou, K. C.; et al. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432から取った。
【０１７１】
図１７は、選択したエポシロンのヒト類表皮細胞系ＫＢ−３およびＫＢ−８５１１に対する細胞毒性(nMでのＩＣ５０)である。試験化合物の抗増殖性効果を、親細胞系(ＫＢ−３１)およびTaxol(登録商標)−耐性(Ｐｇｐ過剰発現のため)細胞系(ＫＢ−８５１１)を含む二つのヒト類表皮癌細胞系で試験した。ＥｐｏＢおよび３の結果は、Nicolaou, K. C.; et al. Tetrahedron 2002, 58, 6413-6432から取った。
【図面の簡単な説明】
【０１７２】
【図１】選択した天然の、および計画したエポシロンの構造を説明する。灰色四角は、本試験で合成した化合物を示す。
【図２】３７℃で、競合リガンドによる微小管結合部位(５０nM)からの蛍光タキソイドFlutax-2(５０nM)の置換を示すチャートを記載する。
【図３】２−(チオメチル)チアゾールエポシロンＢ(３)の、Stilleカップリングによる合成を示す。
【図４】ｔｒａｎｓ−シクロプロピルエポシロンＢアナログ(１−６、８、１０、および１２−１４)の逆合成解析を示す。
【図５】アルデヒド３２の構築を示す。
【図６】ヨウ化ビニル２０ｃ−ｇの構築を示す。
【図７】エポシロンアナログ８−１４の合成を示す。
【図８】パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択した１Ａ９ヒト卵巣癌細胞およびβ−チューブリン変異細胞系に対する、エポシロン１から１４およびパクリタキセルの細胞毒性を示す表を記載する。
【図９】チューブリン重合化力およびエポシロン１−８、１０−１４およびパクリタキセルの、ヒト類表皮癌細胞系に対する細胞毒性を示す表を記載する。
【図１０】微小管のタキソイド結合部位へのエポシロンアナログの結合親和性を記載する表を示す。
【図１１】種々の指定したエポシロンＡおよびＢアナログの一連の構造と、エポシロンＡおよびＢの構造を示す。
【図１２】ヨウ化ビニル１５からの多くのアナログの合成の最終段階を示すスキームである。
【図１３】図１２のスキームに使用するスタンナンの合成に必要な段階を示すスキームである。
【図１４】エポシロンＢのシクロプロピルアナログの骨格を形成するための合成経路を説明するスキームである。
【図１５】シクロプロピルアナログ４８および５０の合成に使用する最終段階を示すスキームである。
【図１６】パクリタキセルまたはエポシロンＡで選択したヒト癌細胞およびβ−チューブリン変異体細胞系に対するエポシロン４８、５０および５１−６０の細胞毒性の表である。
【図１７】選択したエポシロンのヒト類表皮細胞系ＫＢ−３およびＫＢ−８５１１に対する細胞毒性(nMでのＩＣ５０)である。
【図１】
2006503814.tif 000067
【図２】
2006503814.tif 000068
【図３】
2006503814.tif 000069
【図４】
2006503814.tif 000070
【図５】
2006503814.tif 000071
【図６】
2006503814.tif 000072
【図７】
2006503814.tif 000073
【図８】
2006503814.tif 000074
【図９】
2006503814.tif 000075
【図１０】
2006503814.tif 000076
【図１１】
2006503814.tif 000077
【図１２】
2006503814.tif 000078
【図１３】
2006503814.tif 000079
【図１４】
2006503814.tif 000080
【図１５】
2006503814.tif 000081
【図１６】
2006503814.tif 000082
【図１７】
2006503814.tif 000083
【手続補正書】
【提出日】平成16年10月7日(2004.10.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2006503814.tif 000084
〔式中、式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体である場合、Ｘは酸素またはＣＨ２であり、式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ−異性体である場合、ＸはＣＨ２であり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ−異性体であり、Ｘが酸素である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化２】
2006503814.tif 000085
(式中、Ｒ２は−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
式Ｉの化合物がｃｉｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルであり、Ｒは
【化３】
2006503814.tif 000086
(式中、Ｒ２は−Ｍｅ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである)
からなる群から選択されるラジカルであり；
式Ｉの化合物がｔｒａｎｓ異性体であり、ＸがＣＨ２である場合、Ｒ１はメチルまたは水素であり；
Ｒ１がメチルである場合、Ｒは
【化４】
2006503814.tif 000087
からなる群から選択されるラジカルであり、Ｒ１が水素である場合、
Ｒは
【化５】
2006503814.tif 000088
からなる群から選択されるラジカルである。〕
の化合物、または塩形成基が存在する場合、式Ｉの化合物の塩。
【請求項２】
式II：
【化６】
2006503814.tif 000089
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化７】
2006503814.tif 000090
を有する群から選択されるラジカルである。〕
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
以下の式：
【化８】
2006503814.tif 000091
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
以下の式：
【化９】
2006503814.tif 000092
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
以下の式：
【化１０】
2006503814.tif 000093
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項６】
以下の式：
【化１１】
2006503814.tif 000094
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項７】
以下の式：
【化１２】
2006503814.tif 000095
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項８】
以下の式：
【化１３】
2006503814.tif 000096
の化合物である、請求項２記載の化合物。
【請求項９】
以下の式：
【化１４】
2006503814.tif 000097
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化１５】
2006503814.tif 000098
からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、化合物。
【請求項１０】
以下の式：
【化１６】
2006503814.tif 000099
の化合物である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
以下の式の化合物である、請求項２記載の化合物。
：
【化１７】
2006503814.tif 000100
の化合物である、請求項９記載の化合物。
【請求項１２】
以下の式：
【化１８】
2006503814.tif 000101
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
以下の式：
【化１９】
2006503814.tif 000102
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
式IV：
【化２０】
2006503814.tif 000103
〔式中、Ｒは以下の構造式：
【化２１】
2006503814.tif 000104
からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
以下の式：
【化２２】
2006503814.tif 000105
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
以下の式：
【化２３】
2006503814.tif 000106
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１７】
以下の式：
【化２４】
2006503814.tif 000107
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１８】
以下の式：
【化２５】
2006503814.tif 000108
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１９】
以下の式：
【化２６】
2006503814.tif 000109
の化合物である、請求項１４記載の化合物。
【請求項２０】
式Ｖ：
【化２７】
2006503814.tif 000110
〔式中、Ｒは、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＳＭｅおよび−ＣＦ３からなる群から選択されるラジカルである。〕
で示される、請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
以下の式
【化２８】
2006503814.tif 000111
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
以下の式
【化２９】
2006503814.tif 000112
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２３】
以下の式
【化３０】
2006503814.tif 000113
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２４】
以下の式
【化３１】
2006503814.tif 000114
の化合物である、請求項２０記載の化合物。
【請求項２５】
以下の式：
【化３２】
2006503814.tif 000115
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項２６】
以下の式：
【化３３】
2006503814.tif 000116
の化合物である、請求項１記載の化合物。
【請求項２７】
請求項１から２６のいずれかに記載の化合物の治療的量を、薬学的に許容される担体と共に含む、哺乳動物の増殖性疾患の処置のための医薬組成物。
【請求項２８】
哺乳動物がヒトである、請求項２７記載の医薬組成物。
【請求項２９】
薬学的に許容される担体または希釈剤と、請求項１から２６のいずれかに記載の化合物、または可能である場合、その薬学的に許容される酸または塩基付加塩を含む、医薬組成物。
【請求項３０】
増殖性疾患の処置用医薬の製造における、請求項１から２６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項３１】
ヒトまたは動物身体を処置する方法に使用するための、請求項１から２６のいずれかに記載の化合物。
【請求項３２】
増殖性疾患の処置法であり、そのような処置を必要とする哺乳動物に治療的有効量の請求項１から２６のいずれかに記載の化合物、または可能である場合、その薬学的に許容される酸または塩基付加塩を投与することを含む、方法。
【請求項３３】
式VI
【化３４】
2006503814.tif 000117
〔式中、ＸおよびＲは請求項１から２６で定義した任意の意味を有し、ＰＧはヒドロキシ官能基の保護基である。〕
の化合物を、第１段階で、所望により触媒の存在下、エステル化反応により縮合し、
第２段階で保護基を離して式Ｉの化合物のラクトンをもたらすことを含む、
請求項１から２６のいずれかに記載の化合物の製造法。
【国際調査報告】
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