(57)【要約】本発明は、カフェオイルキナ酸およびフラボノイドといった典型的なアーティチョーク葉成分の、確定した絶対パーセンテージおよび固有の相対パーセンテージを特徴とする、アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属（Cynarae）の葉）抽出物に関する。本発明の葉抽出物の活性スペクトルは既知のアーティチョーク葉抽出物とは実質的に異なっており、前記の本発明の葉抽出物はまた、相互に異なる。本発明はまた、前記抽出物の製造方法およびそれらの応用分野にも関わるものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属（Cynarae）の葉）の抽出物であって、該抽出物の総量に対して少なくとも6%、好ましくは10から50%の、モノ-CQAおよびジ-CQAを含む総CQA含量、ならびに該抽出物の総量に対して、少なくとも3%、好ましくは4%、より好ましくは7から30%のフラボノイド含量を有する、上記抽出物。
【請求項２】
モノ-CQA含量が、総CQA含量に対して、30%未満、好ましくは3から30%、特に好ましくは10から30%である、請求項１に記載の抽出物。
【請求項３】
モノ-CQA含量のフラボノイド含量に対する比が1未満である、請求項１または２に記載の抽出物。
【請求項４】
−    生の、もしくは乾燥したアーティチョーク葉から、水で抽出することによって、または一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、好ましくはメタノール、エタノール、またはこれらの化合物と水との混合物から選択される有機溶媒で抽出することによって得られた一次抽出物を、一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物、もしくはこれらの化合物の混合物から選択される非水性有機溶媒を用いて液−液抽出する、および
−    有機相を取得するの工程を含んでなる、請求項１〜３のいずれか1項に記載のアーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）の抽出物の製造方法。
【請求項５】
一次抽出物を抽出するための有機溶媒が2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
−    一次抽出物容量を濃縮する、または抽出物の含水量が50%を超えるまで一次抽出物に水を添加する、
−    好ましくは一連のアルカン類、アルケン類、エーテル類、エステル類もしくは塩素化炭化水素から選択される無極性で水に非混和性の溶媒によって抽出物を洗浄する：有機相の分離および処分、という先行工程を含んでなる、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）の抽出物であって、該抽出物の総量に対して少なくとも1%、好ましくは2から15%の、モノ-CQAおよびジ-CQAを含む総CQA含量、該抽出物の総量に対して、最大で2%、好ましくは0.02%から1.5%のフラボノイド含量、ならびに総CQA含量に対して少なくとも70%、好ましくは少なくとも75%のモノ-CQA含量を有する、上記抽出物。
【請求項８】
モノ-CQA含量のフラボノイド含量に対する比が4から35の間であり、好ましくは5から35の間である、請求項７に記載の抽出物。
【請求項９】
−    生の、もしくは乾燥したアーティチョーク葉から、水で抽出することによって、または一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、好ましくはメタノール、エタノール、またはこれらの化合物と水との混合物から選択される有機溶媒で抽出することによって得られた一次抽出物を、一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物、もしくはこれらの化合物の混合物から選択される非水性有機溶媒を用いて液−液抽出する、および
−    水相を取得するの工程を含んでなる、請求項７または８に記載のアーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）の抽出物の製造方法。
【請求項１０】
一次抽出物を抽出するための有機溶媒が2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
−    一次抽出物容量を濃縮する、または抽出物の含水量が50%を超えるまで一次抽出物に水を添加する、
−    好ましくは一連のアルカン類、アルケン類、エーテル類、エステル類もしくは塩素化炭化水素類から選択される無極性で水に非混和性の溶媒によって抽出物を洗浄する：有機相の分離および処分、という先行工程を含んでなる、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
医薬品製造のための、請求項１〜３、７および８のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１３】
食品製造のための、請求項１〜３、７および８のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１４】
治療食（dietetic foods）製造のための、請求項１〜３、７および８のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１５】
化粧品製造のための、請求項１〜３、７および８のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１６】
抗酸化作用、細胞保護作用および臓器保護作用を有する請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項１〜３のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１７】
高コレステロール血症および高脂血症の治療および予防を目的とする請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項１〜３のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１８】
心臓血管疾患および動脈硬化の治療および予防を目的とする請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項１〜３のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項１９】
痴呆の治療および予防を目的とする請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項１〜３のいずれか1項に記載の抽出物の使用。
【請求項２０】
抗セロトニン作動性、鎮痙性、抗胆汁鬱滞性、胆汁分泌促進性、制吐性、および消化管運動促進性（prokinetic）の作用を有する請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項７または８に記載の抽出物の使用。
【請求項２１】
消化不良の治療のため、およびIBS(過敏性腸症候群)の治療のために小胞分泌および脂肪分解を増加させる請求項１２〜１５に記載の製品を製造するための、請求項７または８に記載の抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アーティチョークの葉（チョウセンアザミ属（Cynarae）の葉）からの抽出物、その製造方法、および様々な応用分野でのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
アーティチョークの葉（Cynara scolymus L.）から調製された製品は、機能性消化不良愁訴の治療に広く用いられている。生の葉から圧搾された液汁、ならびに生の、および乾燥した葉から得られた純粋な水性、および水性／アルコール性抽出物（一次抽出物）が使用される。
【０００３】
機能性消化不良治療のための主要な作用形態である胆汁分泌促進（胆汁排出促進）効果は、in vitroおよびin vivoでの実験によって、水性の、もしくはアルコール性／水性の一次抽出物について明白に立証されており、科学的に確証されていると考えられる(Brand N. Cynara Monograph、Hansel R, Keller K, Rimpler H, Schneider G. 編: Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 第5版、第4巻より: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302)。こうした抽出物は、消化不良症状の治療のために公認されている(preparation monograph for Cynarae folium, Artischocken-blatter, BAnz 122, July 6, 1988、 BAnz 164, September 1, 1990、の修正版より)。
【０００４】
前記の効果について、アーティチョークの葉およびその抽出物の次のような構成成分を、特異的指標物質および潜在的活性物質として検討する：1.モノ-、ジ-カフェオイルキナ酸（CQA）および2.フラボノイド。他の未だ同定されていない化合物が、アーティチョーク抽出物および抽出物画分の薬理学的および臨床的な活性スペクトルに関与することが想定される。分析用RP-HPLCグラジエント法を用いて、アーティチョーク葉およびその抽出物から、モノ-およびジ-CQA、ならびにフラボノイドのそれぞれを分離して定量することができる(BRAND and WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21)。水性アーティチョーク葉抽出物のHPLCフィンガープリントクロマトグラムによって、4種のモノ-CQA異性体および5種までのジ-CQA異性体、ならびに少なくとも2種のフラボノイドを同定することができる。この分析法では、より親水性の強いモノ-CQAが最初に溶出され、続いてサイナリン（1,5-ジ-CQA）、および2〜3のフラボン配糖体が溶出される。これらの次に、残りの、より親油性のジ-CQA、および、条件によっては、より小量の他のフラボン配糖体およびフラボンアグリコンが続いて溶出される（図1）。構成成分の定量は、通常、総和によって行われるが、それによってCQA含量はクロロゲン酸（モノ-CQA）として、フラボノイド含量はルテオリン-7-グルコシド（シナロシド、cynaroside）として算出される。
【０００５】
主要な性質である「胆汁分泌増加」作用に加えて、アーティチョーク葉抽出物は抗胆汁鬱滞効果、抗酸化効果、細胞刺激効果、および細胞保護効果、ならびに脂質代謝への好ましい影響を有するとの指摘がある。こうした知見は、in vitro、動物およびヒトの薬理学的および臨床的研究から得られた(BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302; BRAND N. Cynara Monograph ( HANSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER G 編、Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 第5版, 第4巻より): Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0958 828)。
【０００６】
糖尿病、および癌治療時の放射線もしくは細胞増殖抑制剤によって引き起こされる損傷の治療を目的として、免疫賦活、ならびに白血球減少症、顆粒球減少症、リンパ球減少症および骨髄損傷の治療のための、血清グルコース、クレアチニンおよびビリルビン値の減少に関するアーティチョーク葉抽出物の効果のデータも存在する(DE-A-196 27 376; WO 98/01143; DE-A-198 50 543)。
【０００７】
ラット肝細胞およびヒトHepG2細胞（肝細胞）に対する、アーティチョーク葉の水性一次抽出物のin vitro研究が明らかにしたところでは、内在性コレステロール生合成の鍵酵素であるHMG-CoAレダクターゼの間接的な阻害によってコレステロール生合成の中程度の濃度依存性阻害が引き起こされる。アーティチョーク葉の水性一次抽出物は、臨床的に、コレステロールおよびLDL値の低下に穏やかな効果があること、およびHDL/LDL比にプラスの影響を及ぼすことが立証された(FINTELMANN V. Z. Allg. Med. 1996; 72: 48-57; KRAFT K. ら、Phytomedicine 1997; 4: 369-378; ENGLISCH W. ら、Arzneim.-Forsch./Drug Res. 2000; 50: 260-265; SIEDEK H. ら、Wiener klinische Wochenschrift 1963; 75: 460-463; SCHONHOLZER G. Schweizerische Medizinische Wochenzeitschrift 1939; 69: 1288-1290)。HMG-CoAレダクターゼ活性に対する阻害作用を有するアーティチョーク葉の成分は、肝細胞を用いたin vitro実験によって、その一次抽出物から、ルテオリングリコシドおよび遊離のルテオリン、ならびに1,5-ジカフェオイルキナ酸（サイナリン）と同定されている。しかしながら、ヒトの治療に用いる場合の前記化合物の効果は、不明である(GEBHARDT R. J. Pharmacol. Exp. Therap. 1998; 286: 1122-1128; GEHARDT R. Phytotherap. Res. 2001; 15: 1-5; GEBHARDT R. Medwelt 1995; 46: 348-350; EP 0 807 435 A2; Mars G. ら、Med. Welt 1974; 25: 1572-1574; PRISTAUTZ H. Wiener Med. Wochenzeitschr. 1975; 49: 705-709)。
【０００８】
アーティチョーク葉抽出物から単離された前述の個々の化合物および他の個別の化合物は、こうした化合物を上記および下記の指示にしたがって治療上の用途に使用することができるという結論を正当化する、薬理学的効果を有することが判明している。(BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302; BRAND N. Cynara Monograph, HANSEL R, KELLER K, RIMPLER H, SCHNEIDER G編: Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis, 第5版,  第4巻: Drogen A-D. Springer Verlag, Berlin, Heidelberg, New York 1992: 1117-1122; EP-A-0958 828)。現在までに、これらの単離された物質のうちでヒトの治療に用いられたものはない。
【０００９】
要約すると、アーティチョーク葉の一次抽出物について、数多くのまったく異なる多様な分野での応用が記載されており、たとえば、胃腸病（たとえば消化不良）への適用、脂質代謝に関連する問題、糖尿病患者および癌患者の細胞保護の強化、および免疫賦活性について、記載されているといえる。しかしながら、応用分野が多数であることは、アーティチョーク葉の一次抽出物が、生物体の他の領域における副作用なしに特定の疾病に向けた治療を行うことはできないという、好ましくない特性も有することを意味する。
【００１０】
市販のアーティチョーク葉製品は、上記の複雑な薬理的ならびに臨床的作用プロフィールを有するアーティチョーク葉一次抽出物をもっぱら含有するが、目標とする、副作用のない治療のための「限定された」効果を有する「特別な抽出物」は含まない(BRAND N. Zeitschr. Phytother. 1999; 20: 292-302)。先行技術は、圧搾液汁、一次水性、メタノール性およびエタノール性抽出物を包含するが、それらのうち基本的に乾燥抽出物の形をとる水性抽出物のみが、主に固形薬の形で商業的に利用されている（表1）。加えて、エタノール抽出物も液体製品（滴剤、ジュース）として利用されている。しかしながら、これらは一般的ではない。
【発明の開示】
【００１１】
一次抽出物の製造は、通常、生の、もしくは乾燥した葉から高温で徹底的に抽出することによって行われる。水で抽出する場合には、抽出物1部に対して、概ね、薬剤3-8部、あるいは生の葉20-40部が必要である（生の葉の水分含量：80-90%）。この抽出物の収率は葉の品質、抽出条件および使用された抽出試薬に依存する。
【００１２】
先行技術ではCQA含量は水性一次抽出物に対して6 % 未満と考えられる。このうち、55-69 % がモノ-CQAであり、31-45 %がジ-CQAであると考えられる。薬剤の品質に応じて、水性一次抽出物のフラボノイド含量は0.1 % から1 % の間である（表1）。
【表１】
2004537578.tif 000002
【００１３】
要約すると、水もしくは水性アルコールによる抽出は、抽出物中のCQAおよびフラボノイドの量的な濃縮を引き起こすといえる。しかしながら、これらの化合物相互の相対比は実質的には不変である。したがって、もとになる薬剤およびそれから製造された水性または水性／アルコール性抽出物の、既知の複雑な薬理学的／臨床的作用プロフィールが定性的に同一であるという結論を出すことができる。有効な活性だけが、分析される化合物の濃度の関数であるべきである。
【００１４】
本発明の目的は、有害な副作用のない目的の治療上の応用（たとえば、消化不良防止作用のない脂質低下作用またはその反対）を確実にするために、水性もしくはアルコール性／水性一次抽出物の、異なった、時に分岐する作用プロフィールを識別することである。このために、一次抽出物を本発明の方法によって2つの抽出画分AおよびBに分割するが、これらは異なる活性スペクトルを有する。抽出画分Aは脂質低下および細胞保護（抗酸化）作用を有するが、一次抽出物の消化不良防止作用はもはやない。抽出画分Bはあきらかに有効性が一次抽出物より高い消化不良防止薬であるが、もはや脂質／コレステロール低下特性がほとんどない。もう一つの目的は、このような抽出画分の製造法を提供することである。
【００１５】
発明の概要
本発明の第1の態様は、下記を含有する、アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）の抽出物に関する：抽出物の総量に対して少なくとも6%、好ましくは10から50%のモノ-CQAおよびジ-CQAを含む総CQA含量、抽出物の総量に対して少なくとも3%、たとえば4%、好ましくは7から30%のフラボノイド含量。好ましい実施形態によれば、本発明の抽出物のモノ-CQA含量は総CQA含量に対して30%未満、たとえば3から30%、より好ましくは10から30%であるが、さらに好ましい実施形態では、フラボノイド含量に対するモノ-CQA含量の比は、1より小さい。
【００１６】
本発明のこのような抽出物は、アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）から前述の抽出物を製造する方法によって得られるが、この方法は次の工程を含んでなる：
−    生の、もしくは乾燥したアーティチョーク葉から、水で抽出することによって、または一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、好ましくはメタノール、エタノール、またはこれらの化合物と水との混合物から選択される有機溶媒で抽出することによって得られた一次抽出物を、一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物、もしくはこれらの化合物の混合物から選択される非水性有機溶媒を用いて液−液抽出する、および
−    有機相を取得する。
【００１７】
2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物が、本発明にしたがって特に使用される。
【００１８】
好ましい実施形態において、本発明の方法に先行して、次の工程をおく：
−    一次抽出物容量を蒸発濃縮する、または抽出物の含水量が50%を超えるまで一次抽出物に水を添加する。
【００１９】
−    好ましくは一連のアルカン類、アルケン類、エーテル類、エステル類もしくは塩素化炭化水素類から選択される無極性で水に非混和性の溶媒によって抽出物を洗浄する。
【００２０】
−    有機相の分離および処分。
【００２１】
本発明の第2の態様において、アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属（Cynarae）の葉）の抽出物が調製されるが、これは下記を含んでなる：
抽出物の総量に対して相対的に、少なくとも1%、好ましくは2-15%のモノ-CQAおよびジ-CQAを含む総CQA含量、抽出物の総量に対して相対的に、最大で2%、好ましくは0.02-1.5%のフラボノイド含量、さらに総CQA含量に対して相対的に、少なくとも70%、たとえば75%のモノ-CQAの含量。フラボノイド含量に対するモノ-CQA含量の比はこれによって4から35の間が望ましいが、たとえば5から35の間である。
【００２２】
この前述の抽出物を、アーティチョーク葉（チョウセンアザミ属の葉）から、次の工程を含んでなる以下の方法を用いて製造することができる：
−    生の、もしくは乾燥したアーティチョーク葉から、水で抽出することによって、または一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、好ましくはメタノール、エタノール、またはこれらの化合物と水との混合物から選択される有機溶媒で抽出することによって得られた一次抽出物を、一連のアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物、もしくはこれらの化合物の混合物から選択される非水性有機溶媒を用いて液−液抽出する、および
−    水相を取得する。
【００２３】
好ましい実施形態において、一次抽出物を抽出するための有機溶媒は、2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物であるが、この方法の前に、更に次の工程をおくことができる：
−    一次抽出物容量を蒸発濃縮する、または抽出物の含水量が50%を超えるまで一次抽出物に水を添加する。
【００２４】
−    好ましくは一連のアルカン類、アルケン類、エーテル類、エステル類もしくは塩素化炭化水素類から選択される無極性で水に非混和性の溶媒によって抽出物を洗浄する；有機相の分離および処分。
【００２５】
上記の抽出物を医薬品、食品、治療食（dietetic foods）および化粧品の製造に使用することができる。
【００２６】
本発明による、第1に言及した抽出物は、抗酸化、細胞-および臓器-保護作用を有し、これを、高コレステロール血症および高脂血症の治療および予防のために、心臓血管疾患および動脈硬化および痴呆の治療および予防のために、使用することができる。
【００２７】
本発明の第2の態様による抽出物は、抗セロトニン作動性、鎮痙性、抗胆汁鬱滞性、胆汁分泌促進性、制吐性、消化管運動促進性（prokinetic）の作用を有し、消化不良の治療のため、およびIBS(過敏性腸症候群)の治療のために、この抽出物を用いて小胞分泌および脂肪分解を増加させることができる。
【００２８】
2つの抽出物はいずれも、好ましくない副作用をまったく伴わずに関連性のある効果を有することを特徴とする。
【００２９】
発明の詳細な説明
本発明は、本発明にしたがって、有機溶媒、例えばアルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物、たとえば脂肪族アルコールもしくはカルボン酸エステル、またはそれらの混合物等の非水性抽出試薬を用いて液-液抽出による分画を行うことによって、水性もしくは水性／アルコール性一次抽出物を2つの異なる画分に分離することができるという驚くべき発見に基づく。この2つの画分は、たとえば、モノ-CQA、ジ-CQAおよびフラボノイドの絶対的および相対的含量に関して、さらに薬理学的活性プロフィールについて、明確に相互に異なっている。加えられた抽出試薬を抽出後に蒸発させることによって得られる抽出物の成分は、あわせて、以下「抽出物画分A」と称する。水相に残存する成分は、あわせて「抽出物画分B」と称する。
【００３０】
本発明の抽出物画分Aは、一次抽出物のうち、より親油性の化合物の濃縮、または、より親水性の化合物の減少を特徴とする。この濃縮もしくは減少は、モノ-CQA含量の明白な減少およびモノ-CQA／フラボノイド比率の大幅な低下によって示される（図1を参照し、表3を表7と比較されたい）。水性一次抽出物を用いる場合には、少なくとも6%、通常は10から30%の総CQA含量が検出され、アルコール性／水性一次抽出物を使用する場合には、少なくとも6%、好ましくは少なくとも10%、特に好ましくは15-50%の総CQA含量が検出される。一次抽出試薬の種類にかかわらず、この画分の総CQAのうちのモノ-CQA含量は、一次抽出物に比して30%未満にまで低下し、たとえば3から30%まで、好ましくは10から30%にまで低下する。抽出物画分Aのフラボノイド含量は、たとえば水性およびアルコール性／水性一次抽出物に関して少なくとも3%であり、好ましくは水性およびアルコール性／水性一次抽出物について7から20%である。画分Aのモノ-CQA／フラボノイド比率は、本発明によって、水性およびアルコール性／水性一次抽出物に比較して1未満の値まで低下する。
【００３１】
本発明の抽出物画分Bは、より親油性の化合物の減少、または、より親水性の化合物の濃縮を特徴とする。この減少もしくは濃縮は、モノ-CQA含量の明白な増加、およびモノ-CQA／フラボノイド比率の大幅な増加によって示される（図1を参照し、表3を表7と比較されたい）。
【００３２】
水性一次抽出物を用いる場合には、少なくとも1%、通常は2から10%の総CQA含量が検出され、アルコール性／水性一次抽出物を使用する場合には、通常3から15%の総CQA含量が検出される。一次抽出試薬の種類にかかわらず、総CQA含量のうちのモノ-CQA含量は、少なくとも70%、たとえば少なくとも75%であり、一般的には75%を超えて85%までである。抽出物画分Bのフラボノイド含量は、水性およびアルコール性／水性一次抽出物では最大で2%であり、好ましくは0.02から1.5%である。一次抽出試薬にかかわらず、画分Bのモノ-CQA／フラボノイド比率は、一次抽出物に比して4から35までの間の値に増加し、たとえば5から35の間である。
【００３３】
本発明にしたがって実施された、高品質の薬剤から一次抽出物を4画分に分画することについての結果の実例（実施例8から11）を、表7に示す。
【００３４】
本発明の方法で用いる抽出試薬は、有機溶媒のような非水性抽出試薬である。例として挙げられるものは、アルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、芳香族化合物などである。脂肪族アルコールおよびカルボン酸エステルが特に好適である。こうした溶媒を単独で、もしくは上記化合物の混合物として使用することができる。特に好ましい実施形態において、用いられる抽出試薬は、2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物である。
【００３５】
本発明の方法の好ましい実施形態において、破砕した薬剤を水で抽出する。次に、一次抽出物の容量を減圧下でおよそ半分だけ減少させることができ、さらにこの抽出物を室温で2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物によって抽出する。有機相に溶解する画分を分離し、蒸発乾固する（画分A）。この抽出物は上記の量のCQA誘導体およびフラボノイド、ならびに他の未同定物質を含有する。残りの水性画分も乾燥させる（画分B）。
【００３６】
本発明の方法の別の好ましい実施形態において、破砕した薬剤を最初にアルコール性／水性抽出試薬で抽出する（一次抽出物）。第一級もしくは第二級アルコールはC1からC4までの鎖長を有する。アルコール性-水性一次抽出物のうちの妨げとなる植物成分（たとえばクロロフィル、ワックス）を、濃縮された水相から適当な水-非混和性、無極性の有機溶媒を用いて抽出することによって除去するが、こうした溶媒の例としては、ヘキサン、石油エーテルもしくはジクロロメタンがある。水相（一次抽出物）を室温で2-ブタノールおよび酢酸エチルの混合物で抽出する。溶媒混合物中の可溶性画分を分離して蒸発乾固する（画分A）。この抽出物は上記の量のCQA誘導体およびフラボノイドならびに他の未同定物質を含有する。残りの水性画分も乾燥させる（画分B）。
【００３７】
抽出物画分AおよびBは、CQAおよびフラボノイドの含量および組成の点で明らかに、該当する初発の一次抽出物、および先行技術の一般的な一次抽出物のいずれとも異なっている。
【００３８】
上記の結果得られた抽出物画分AおよびBは、驚くべきことに、まったく異なる薬理学的活性プロフィールを示す。抽出物画分Aは、コレステロール生合成の強力な阻害剤であり、フリーラジカルの生成を抑制することができる、非常に高い抗酸化能を有する。この薬理学的効果は一次抽出物の効果よりもはっきりと高いことが明らかになった。他方では、一次抽出物または抽出物画分Bとは異なり、画分Aは消化不良に関するテストモデルでは、まったく効果がない、またはごくわずかしか効果がない（表4-6を参照されたい）。
【００３９】
これに対して、抽出物画分Bは、一次抽出物とは異なり、消化不良モデルで高い活性を示すが、コレステロール生合成には何ら有意な阻害を示さない。画分Bの抗酸化特性はより低い（下記の表4-6を参照されたい）。
【００４０】
前記抽出物AおよびBを加工して、一般的な固体、半固体および液体の医薬品の形態で、および他の投与形態で適用することができるが、その形態はたとえば、粉末、溶液、懸濁液、錠剤、フィルムコート錠、コート錠、カプセル、発泡錠、発泡顆粒、チュアブル錠およびロゼンジ、座剤、クリーム剤、軟膏、ゲルである。ここで、それぞれの投与形態にふさわしい一般的な助剤、たとえば、セルロース、シリカ、乳糖、合成ポリマー、塩、着色料、香料、脂肪、油、界面活性剤、水およびアルコールを使用することができる。
【実施例】
【００４１】
下記の実施例を参照して、より詳細に本発明を説明する。しかしながら、本発明はこうした実施例に限定されない。
【００４２】
測定された成分パーセンテージおよび含量は、どの場合にも、BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21に記載のように測定された。
【００４３】
実施例1a
300gのアーティチョーク葉の薬剤（市販薬A）を、2段階浸漬法によって、全体で4.5lの水を用いて80-90℃（5時間／3時間）で抽出した。2つの溶出液を合わせて、2.5lの容量まで濃縮した。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがってCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【００４４】
実施例2aおよび3a
市販薬BおよびCを実施例1aと同様に処理して、含量を同様に測定した。その結果を表2および表3に示す。
【００４５】
実施例1b
300gのアーティチョーク葉の薬剤（市販薬A）を、5時間の浸出法によって55-60℃にて5lのメタノール／水（80/20 v/v）を用いて抽出した。溶出液を合わせた。全溶出液を、約1/3の容量まで濃縮し、水で1:1(v/v)に希釈した後、いずれの場合も500mlのジクロロメタンで3回洗浄した。有機相を捨てた。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがって水相中のCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【００４６】
実施例2bおよび3b
市販薬BおよびCを実施例1bと同様に処理して、含量を同様に測定した。その結果を表2および表3に示す。
【００４７】
実施例4
300gのアーティチョーク葉の薬剤を、2段階浸漬法によって、全体で4.5lの水を用いて80-90℃（5時間／3時間）で抽出した。2つの溶出液はあわせて約124gの乾燥物質を含有したが、これらを合わせて、2.5lの容量にまで濃縮した。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがってCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【００４８】
実施例5
別のバッチ（バッチ2）に由来するアーティチョーク葉の薬剤300gを、2段階浸漬法によって80-90℃（5時間／3時間）にて全体で4.5lの水を用いて抽出した。2つの溶出液はあわせて約121gの乾燥抽出物を含有したが、これらを合わせて、2.5lの容量まで濃縮した。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがってCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【００４９】
実施例6
300gのアーティチョーク葉の薬剤を、5時間の浸出法によって55-60℃にて5lのメタノール／水（80/20 v/v）を用いて抽出した。溶出液を合わせた。合わせた溶出液は乾重量108gの物質を含有した。全溶出物を、約1/3の容量まで濃縮し、水で1:1(v/v)に希釈した後、いずれの場合も500mlのジクロロメタンで3回洗浄した。有機相を捨てた。水相は86gの乾燥残留物を含有した。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがってCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【００５０】
実施例7
300gのアーティチョーク葉の薬剤（バッチ2）を、5時間の浸出法によって55-60℃にて5lのメタノール／水（80/20 v/v）を用いて抽出した。溶出液を合わせた。合わせた溶出物は85gの乾燥抽出物を含有した。全溶出液を、約1/3の容量まで濃縮し、水で1:1(v/v)に希釈した後、いずれの場合も500mlのジクロロメタンで3回洗浄した。有機相を捨てた。水相は71gの乾燥残留物を含有した。BRAND および WESCHTA 1991, Zeitschr. Phytother. 1991; 12: 15-21にしたがってCQAおよびフラボノイド含量を測定した。結果を表2および表3に示す。
【表２】
2004537578.tif 000003
【００５１】
アーティチョーク葉一次抽出物のCQAおよびフラボノイド含量は、親薬剤の含量および抽出試薬の選択に依存する。種類、原産地、収穫時期、栽培、乾燥および保存条件によって、高品質のアーティチョーク葉薬剤は1から7％のCQAおよび0.2から1.2%のフラボノイドを含有し、これよりモノ-CQAは総CQA含量の40から60%を占める。表2および表3は、異なる抽出試薬を用いて品質の異なる薬剤から製造された一次抽出物に関する実験結果を示す。水性抽出物およびメタノール性-水性抽出物のうちで最大のCQA含量は、それぞれ11%および20%である。水性抽出物のフラボノイド含量は2.5%以下で、アルコール性／水性抽出物の同含量は3%以下と考えられる。
【表３】
2004537578.tif 000004
【００５２】
総CQA含量のうちモノ-CQAの割合は、水性抽出物では49から65%の間で、メタノール性/水性抽出物では44から59%の間でさまざまである。水での抽出の場合には、その抽出物におけるモノ-CQA／フラボノイドの比は2.0から3.2の間であり、メタノール／水での抽出の場合には、2.0から2.7の間である。二つのパラメーターは親薬剤における比をほぼ正確に反映している（表3）。したがって、水性および水性／アルコール性抽出物はいずれも相互に、および親薬剤との比較においても定性的にほぼ同等であることが立証できる。
【００５３】
実施例8
実施例4による一次抽出後、いずれの場合も室温で3-5分間、600mlの酢酸エチル／2-ブタノール（60/40 v/v）を用いて、5回の液-液抽出を行った。有機相を合わせ、40℃で減圧下にて蒸発乾固し、次に60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。18.65gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分A）。
【００５４】
有機溶媒抽出された下層の水相を40℃で減圧下にて蒸発させ、60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。93.45gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分B）。
【００５５】
実施例9
実施例5による一次抽出後、いずれの場合も室温で3-5分間、600mlの酢酸エチル／2-ブタノール（60/40 v/v）を用いて、5回の液-液抽出を行った。有機相を合わせ、40℃で減圧下にて蒸発乾固し、次に60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。11gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分A）。
【００５６】
有機溶媒抽出された下層の水相を40℃で減圧下にて蒸発させ、60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。96gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分B）。
【００５７】
実施例10
実施例6の水相を約1/3の容量となるまで減圧濃縮し、いずれの場合も室温で3-5分間、500mlの酢酸エチル／2-ブタノール（60/40 v/v）を用いて、5回抽出した。有機相を合わせた。40℃にて、減圧下で溶媒を除去した。次に残渣を、60℃にて減圧下で2時間乾燥した。16gの乾燥抽出物を得た（抽出物画分A）。
【００５８】
有機溶媒抽出された下層の水相を40℃で減圧下にて蒸発させた後、60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。61gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分B）。
【００５９】
実施例11
実施例7の水相を約1/3の容量となるまで減圧濃縮し、いずれの場合も室温で3-5分間、500mlの酢酸エチル／2-ブタノール（60/40 v/v）を用いて、5回抽出した。有機相を合わせた。40℃にて、減圧下で溶媒を除去した。次に残渣を、60℃にて減圧下で2時間乾燥した。11gの乾燥抽出物を得た（抽出物画分A）。
【００６０】
有機溶媒抽出された下層の水相を40℃で減圧下にて蒸発させた後、60℃で減圧下にて2時間乾燥させた。57gの乾燥抽出物が得られた（抽出物画分B）。
【００６１】
薬理学的研究：
コレステロール生合成の阻害
コレステロール生合成の阻害の測定は、MERTENS K.ら、Toxic. in vitro 1993; 7: 439-441にしたがって実施した。
【表４】
2004537578.tif 000005
【００６２】
抗酸化能
抗酸化能の測定は、GUGELER N., Peroxidationsreaktionen bei der Artherogenese: Modulatoren der LDL-Oxidation und der Radikal-bildung von Makrophagen, Dissertation 1997, Faculty of Biology at the University of Tubingen, Germanyにしたがって行った。
【表５】
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【００６３】
消化不良防止作用
消化不良防止作用の測定はBONISCH H. ら、Brit. J. Pharmacol. 1993; 108: 436-442にしたがって行った。
【表６】
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【表７】
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【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】水性のアーティチョーク葉乾燥一次抽出物の典型的なRP-HPLCクロマトグラムを示す。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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