(57)【要約】治療体重有効量のリバビリンおよび治療有効量のＰＥＧ化、例えばＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂまたは−２ａを含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるリバビリンおよび／またはＰＥＧ化インターフェロンαの使用を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療体重有効量のリバビリンを治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαと共に含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるリバビリンの使用。
【請求項２】
治療体重有効量のリバビリンを治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαと共に含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるＰＥＧ化インターフェロンαの使用。
【請求項３】
治療体重有効量のリバビリンを治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαと共に含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるリバビリンおよびＰＥＧ化インターフェロンαの使用。
【請求項４】
投与されるリバビリンの治療体重有効量が８００ｍｇ〜１４００ｍｇ／日、好ましくは８００ｍｇ／日、１０００ｍｇ／日または１２００ｍｇ／日である、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
投与されるリバビリンの治療体重有効量が少なくとも１０．６ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは少なくとも１３ｍｇ／ｋｇ／日である、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
ＰＥＧ化インターフェロンαがインターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−２ｃ、インターフェロンαｎ−１、インターフェロンαｎ−３およびコンセンサスインターフェロンからなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
ＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ化インターフェロンα−２ａである、請求項１〜６のいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
ＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂである、請求項１〜７のいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
ＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂであり、投与されるＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂの量が少なくとも２４週間、好ましくは４８週間、毎週ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ　１．５μｇ／ｋｇ／週である、請求項１〜８のいずれか１項記載の使用。
【請求項１０】
慢性Ｃ型肝炎感染がＨＣＶ遺伝子型１であり、初期ウイルス負荷がＣ型肝炎ウイルス２×１０６コピー／ｍｌ血清未満である、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１１】
慢性Ｃ型肝炎感染がＨＣＶ遺伝子型１であり、初期ウイルス負荷がＣ型肝炎ウイルス２×１０６コピー／ｍｌ血清超である、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１２】
慢性Ｃ型肝炎感染がＨＣＶ遺伝子型２および／または３であり、初期ウイルス負荷がＣ型肝炎ウイルス２×１０６コピー／ｍｌ血清未満である、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１３】
慢性Ｃ型肝炎感染がＨＣＶ遺伝子型２および／または３であり、初期ウイルス負荷がＣ型肝炎ウイルス２×１０６コピー／ｍｌ血清超である、請求項１〜９のいずれか１項記載の使用。
【請求項１４】
リバビリンの治療体重有効量が体重６０〜６５ｋｇの患者については８００ｍｇ／日であり、体重６５ｋｇ超８５ｋｇ未満の範囲の患者については１０００ｍｇ／日であり、体重８５ｋｇ超の患者については１２００ｍｇ／日であり、週に一回ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ　１．５μｇ／ｋｇである、請求項１〜１３のいずれか１項記載の使用。
【請求項１５】
リバビリンの治療体重有効量が少なくともリバビリン１０．６ｍｇ／ｋｇ患者体重／日　８００ｍｇ／日であり、週に一回ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ　１．５μｇ／ｋｇである、請求項１〜１４のいずれか１項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の背景）
本発明は、検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡを根絶し、処置期間の終了後少なくとも１２週間の期間にわたって検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡがないことを維持するために十分な処置期間の、治療体重有効量のリバビリンおよび治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαを含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるリバビリンおよびＰＥＧ化インターフェロンαの使用に関する。
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルスでの慢性感染は、クオリティ・オブ・ライフに対する重大な衝撃を有する潜伏性の徐々に進行する疾患である。Ｃ型肝炎ウイルスでの慢性感染の結果、最終的に、肝硬変、代償不全肝疾患および／または肝細胞ガンが生じる。
【０００３】
国際公開ＷＯ９８／４８８４０はＣ型肝炎感染を処置するためのＰＥＧ化インターフェロンαの使用を開示している。
【０００４】
Ｎｉｅｆｏｒｔｈ， ｅｔ ａｌ．，（Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｈｅｒ．， １９９６， ５９：６３６−６４６）は健常ボランティアにおけるＲｏｆｅｒｏｎＲＡおよびポリエチレングリコール修飾ＲｏｆｅｒｏｎＲＡのインビボ活性の比較を報告している。しかしその結果は、コンジュゲートが１週間に２回未満で投与され得ず、それゆえ非修飾対応物を上回る治療的利点をほとんど提供しなかったことを示唆した。
【０００５】
同時係属共有米国特許出願第０８／７４２，３０５号は、サイトカインでの処置に感受性の個体にポリマー−サイトカインコンジュゲートを投与する方法を開示している。ＷＯ／００／３７１１０も参照のこと。いずれの文献も本発明の方法を開示していない。
【０００６】
他のタンパク質のポリエチレングリコール修飾はＦｕｅｒｔｇｅｓ， ｅｔ ａｌ．，（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ， １９９０， Ｖｏｌ．１１：１３９−４８）によって報告されている。
【０００７】
慢性Ｃ型肝炎を処置するための２４週間のインターフェロンα−２ｂおよびリバビリンの併用治療はＲｅｉｃｈａｒｄ， ｅｔ ａｌ．，（Ｌａｎｃｅｔ １９９８； ３５１；８３−８７）によって開示されている。
【０００８】
Ｔ． Ｐｏｙｎａｒｄ， ｅｔ ａｌ．，（Ｌａｎｃｅｔ， １９９８， Ｖｏｌ． ３５２， １４２６−１４３２）は、インターフェロンでもリバビリンでも処置されたことのない慢性Ｃ型肝炎患者の、４８週間にわたる１日当り３ＭＩＵのインターフェロンα−２ｂ　ＴＩＷ＋１０００〜１２００ｍｇのリバビリンでの処置の結果、患者の４３％において処置後２４週間の時点で持続したウイルス学的応答が生じたことを開示している。Ｊ． Ｇ． ＭｃＨｕｔｃｈｉｎｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．，（Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， １９９８， ３３９：１４８５−１４９２）も参照のこと。Ｇ． Ｌ． Ｄａｖｉｓ， ｅｔ ａｌ．，（Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． ３３９：１４９３−１４９９）は、インターフェロンでの処置の後に再発した慢性Ｃ型肝炎患者の４８週間にわたる１日当り３×１０６国際単位（「ＭＩＵ」）のインターフェロンα−２ｂを週に三回（「ＴＩＷ」）＋１００〜１２００ｍｇのリバビリンでの処置の結果、インターフェロン単独での処置よりも持続したウイルス学的応答の率が高くなることを開示している。
【０００９】
より多数の患者において処置の終了後少なくとも１２週間の時点での持続したウイルス学的応答を生じるように改良された慢性Ｃ型肝炎患者を処置するための治療を提供する必要性が存在する。
【００１０】
（発明の概要）
本発明は、検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡを根絶し、処置期間の終了後少なくとも１２週間の期間にわたって検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡがないことを維持するために十分な処置期間の、治療体重有効量のリバビリンおよび治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαを含む慢性Ｃ型肝炎感染処置用医薬組成物の製造におけるリバビリンおよび／またはＰＥＧ化インターフェロンαの使用を提供する。
【００１１】
好ましい実施態様において、本発明は、検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡを根絶し、処置期間の終了後少なくとも１２週間にわたって検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡがないことを維持するために十分な処置期間、１日当り治療体重有効量のリバビリン、すなわち慢性Ｃ型肝炎感染を有し体重６５ｋｇ未満の患者については８００ｍｇ／日、慢性Ｃ型肝炎感染を有し体重６５ｋｇ〜８５ｋｇの範囲の患者については１０００ｍｇ／日、慢性Ｃ型肝炎感染を有し体重８５ｋｇ以上の患者については１２００ｍｇ／日、および治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンα、すなわち週に一回ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂタンパク質　１．５μｇ／ｋｇ患者体重を医薬組成物が含有することを特徴とする。
【００１２】
（詳細な説明）
本発明は、治療体重有効量のリバビリンおよび治療有効量のＰＥＧ化インターフェロンαタンパク質を、検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡを少なくとも処置期間の終了時まで根絶し、処置期間の終了後少なくとも１２週間にわたって検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡがないことを維持するするために十分に長い処置期間にわたって投与する工程を包含する慢性Ｃ型肝炎感染患者の処置方法を提供する。本発明の好ましい実施態様において、リバビリンおよびＰＥＧ化インターフェロンα両方の治療有効量は患者の体重に従って投薬される。従って、好ましい実施態様において、週に一回（「ＱＷ」）ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂタンパク質約１．５μｇ／ｋｇ患者体重、および１日当り少なくとも約１０．６ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１３ｍｇ／ｋｇのリバビリンを投与することによって、処置期間の間ＨＣＶ−ＲＮＡは根絶され（すなわちＨＣＶ−ＲＮＡ　１００コピー／ｍｌ血清未満まで低下され）、その結果、期間の終了時および処置期間の終了後少なくとも１２週間の時点で検出可能なレベルのＨＣＶ−ＲＮＡが検出されない。処置期間は少なくとも約２４週間、好ましくは約４０〜５０週間、さらに好ましくは約４８週間である。
【００１３】
ＩＣＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．， Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ， Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから入手可能なリバビリン、１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール　３−カルボキシアミド（ＲｅｂｅｔｏｌＲとしても知られる）はＭｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ， ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｎｏ． ８１９９， Ｅｌｅｖｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎに記載されている。その製造および処方は米国特許第４，２１１，７７１号に記載されている。処置期間に投与されるリバビリンの有効量は、患者の体重に依存して、約８００ｍｇ〜約１６００ｍｇ／日、好ましくは約８００ｍｇ〜約１４００ｍｇ／日、さらに好ましくは約８００ｍｇ／日、約１０００ｍｇ／日または約１２００ｍｇ／日である。
【００１４】
「治療体重有効量のリバビリン」なる用語は、処置後少なくとも約１２週間、好ましくは処置後少なくとも約２４週間、さらに好ましくは処置後４８週間にわたって、持続したウイルス学的応答を生じるために十分な量を意味する。
【００１５】
本発明の好ましい実施態様において、リバビリンの治療体重有効量は、少なくともリバビリン約１０．６ｍｇ／ｋｇ患者体重（「１日当りリバビリン１０．６ｍｇ／ｋｇ」）、好ましくは１日当りリバビリン少なくとも約１３ｍｇ／ｋｇ〜約１４．５ｍｇ／ｋｇの範囲、好ましくは１日当りリバビリン少なくとも約１３ｍｇ／ｋｇである。別の好ましい実施態様において、リバビリンの好ましい治療体重有効量は、体重約６５ｋｇ未満の人については約８００ｍｇ／日であり、体重約６５ｋｇ〜約８５ｋｇの範囲の人については約１０００ｍｇ／日であり、体重約８５ｋｇ超の人については約１２００ｍｇ／日である。
【００１６】
以下、ＰＥＧ化インターフェロンα投与の好ましい実施態様を示す。
【００１７】
本明細書において用いる「ＰＥＧ化インターフェロンα」なる用語は、インターフェロンα、好ましくはインターフェロンα−２ａおよび−２ｂのポリエチレングリコール修飾コンジュゲートを意味する。好ましいポリエチレングリコール−インターフェロンα−２ｂコンジュゲートはＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂである。本明細書において用いる「分子量１２，０００のポリエチレングリコール結合インターフェロンα」および「ＰＥＧ１２０００−ＩＦＮα」なる用語は、国際出願ＷＯ９５／１３０９０の方法に従って製造されるようなコンジュゲートであって、インターフェロンα−２ａまたは−２ｂのアミノ基と、１２０００の平均分子量を有するポリエチレングリコールとの間にウレタン結合を含むコンジュゲートを意味する。
【００１８】
好ましいＰＥＧ１２０００−インターフェロンα−２ｂは、ＰＥＧポリマーをＩＦＮα−２ｂ分子のリジン残基のεアミノ基に結合させることにより製造される。単一のＰＥＧ１２０００分子をＩＦＮα−２ｂ分子の遊離アミノ基にウレタン結合を介して結合させる。このコンジュゲートは、結合したＰＥＧ１２０００の分子量によって特徴づけられる。ＰＥＧ１２０００−ＩＦＮα−２ｂコンジュゲートを注射用凍結乾燥粉末として処方する。ＩＦＮαとＰＥＧとの結合の目的は、その血漿半減期を有意に延長することによりタンパク質の送達を改善し、それによってＩＮＦαの活性を延長させることである。
【００１９】
本明細書においてＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂに関して用いる「ＰＥＧ化インターフェロンαタンパク質」および「ＰＥＧ化インターフェロンαタンパク質マイクログラム／ｋｇ」なる用語は、患者体重１キログラム（「ｋｇ」）当りのインターフェロンα−２ｂのポリエチレングリコール修飾コンジュゲート中のインターフェロンα−２ｂのマイクログラム（μｇ）を意味する。
【００２０】
本明細書において用いる「インターフェロンα」なる用語は、ウイルス複製および細胞増殖を阻害し、免疫応答を調節する、非常に相同な種特異的タンパク質のファミリーを意味する。代表的な適切なインターフェロンαは、限定するものではないが、以下を包含する：Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ， Ｎ．Ｊ．から入手可能なＩｎｔｒｏｎ−ＡＲインターフェロンのような組換えインターフェロンα−２ｂ、Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ， Ｎｕｔｌｅｙ， Ｎ．Ｊ．から入手可能なＲｏｆｅｒｏｎＲインターフェロンのような組換えインターフェロンα−２ａ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ， Ｉｎｃ．， Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ， ＣＴ．から入手可能なＢｅｒｏｆｏｒ　α２インターフェロンのような組換えインターフェロンα−２ｃ、Ｓｕｍｉｔｏｍｏ， Ｊａｐａｎから入手可能なＳｕｍｉｆｅｒｏｎＲのような天然αインターフェロンの精製混合物であるインターフェロンα−ｎ１、またはＧｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｌｔｄ．， Ｌｏｎｄｏｎ， Ｇｒｅａｔ Ｂｒｉｔａｉｎから入手可能なＷｅｌｌｆｅｒｏｎＲインターフェロンα−ｎ１（ＩＮＳ）、あるいは米国特許第４，８９７，４７１号および同第４，６９５，６２３号（特にその実施例７、８または９）に記載されるようなコンセンサスαインターフェロン、およびＡｍｇｅｎ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗｂｕｒｙ Ｐａｒｋ， ＣＡから入手可能な特定の製品、またはＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｓｃｉｅｎｃｅｓにより製造されＰｕｒｄｕｅ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃｏ．， Ｎｏｒｗａｌｋ， ＣＴから商品名Ａｌｆｅｒｏｎのもとに入手可能な天然αインターフェロン混合物であるインターフェロンα−ｎ３。インターフェロンα−２ａまたはα−２ｂの使用が好ましい。全てのインターフェロンの中で、インターフェロンα−２ｂが慢性Ｃ型肝炎感染の処置に関して世界中で最も広く承認されているので、それが最も好ましい。インターフェロンα−２ｂの製造は米国特許第４，５３０，９０１号に記載されている。
【００２１】
処置期間に投与されるＰＥＧ化インターフェロンαタンパク質の有効量は、少なくとも約２４〜約４８週間、ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂタンパク質約０．５〜約９μｇ／ｋｇ体重（「μｇ／ｋｇ」）を週に一回（ＱＷ）の範囲、好ましくは約１．５μｇ／ｋｇ〜約９μｇ／ｋｇ　ＱＷの範囲であり、さらに好ましくは約４８週間、約１．５μｇ／ｋｇのＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ、ＱＷである。
【００２２】
投与されるＰＥＧ化インターフェロンαがＰＥＧ化インターフェロンα−２ａである場合、本発明に従って投与されるＰＥＧ化インターフェロンα−２ａの治療有効量は、１週間当り約５０μｇ〜約５００μｇの範囲、好ましくは１週間当り約１５０μｇ〜約２５０μｇ、または好ましくは１週間当り約１８０μｇ〜約２５０μｇ、または好ましくは１週間当り約１５０μｇ〜約１８０μｇ、またはさらに好ましくは１週間当り約１８０μｇであり、あるいは有効量は約５０μｇ〜約５００μｇを週に一回（「ＱＷ」）の範囲、好ましくは約１５０μｇ〜約２５０μｇ　ＱＷ、または好ましくは約１８０μｇ〜約２５０μｇ　ＱＷ、または好ましくは約１５０μｇ〜約１８０μｇ　ＱＷ、またはさらに好ましくは約１８０μｇ　ＱＷであり、あるいは有効量は約２５μｇ〜約２５０μｇを週に二回（「ＢＩＷ」）の範囲、好ましくは約７５μｇ〜約１２５μｇ　ＢＩＷ、好ましくは約７５μｇ〜約１２５μｇ　ＢＩＷ、または好ましくは約７５μｇ〜約９０μｇ　ＢＩＷ、またはさらに好ましくは約９０μｇ　ＢＩＷである。
【００２３】
インターフェロンαを水溶性ポリマーとカップリングさせることによって他のインターフェロンαコンジュゲートを製造することができる。そのようなポリマーの非限定的なリストは、ポリプロピレングリコールのような他のポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマーならびにそれらのブロックコポリマーを包含する。ポリアルキレンオキシドをベースにしたポリマーの代替物として、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、炭水化物をベースにしたポリマー等のような有効に非抗原性の材料を使用することができる。そのようなインターフェロンα−ポリマーコンジュゲートは米国特許第４，７６６，１０６号、米国特許第４，９１７，８８８号および同第５，７９２，８３４号、欧州特許出願第０　２３６　９８７号、欧州特許出願第０５１０　３５６号、同第０　５９３　８６８号および同第０８０９８　９９６号（ＰＥＧ化インターフェロンα−２ａ）ならびに国際公開ＷＯ９５／１３０９０およびＷＯ／６４０１６に記載されている。
【００２４】
非経口投与に適切なＰＥＧ化インターフェロンαの医薬組成物を、注射用滅菌水中、適切な緩衝液、例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸またはリン酸緩衝液（例えば、二塩基リン酸ナトリウム／一塩基リン酸ナトリウム緩衝液）、および医薬上許容される賦形剤（例えば、スクロース）、担体（例えば、ヒト血清アルブミン）、張性剤（例えば、ＮａＣｌ）、保存料（例えば、チメロサール、クレゾールまたはベンジルアルコール）、および界面活性剤（例えば、ツイーンまたはポリソルベート）と共に製剤化してもよい。ＰＥＧ化インターフェロンαを凍結乾燥粉末として２℃〜８℃で冷蔵して貯蔵してもよい。再構成された水溶液は２℃〜８℃で貯蔵した場合に安定であり、再構成の２４時間以内に使用する。例えば、米国特許第４，４９２，５３７号、同第５，７６２，９２３号および同第５，７６６，５８２号参照。ＰＥＧ−Ｉｎｔｒｏｎ（ＰＥＧインターフェロンα−２ｂ）はＳｃｈｅｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙから入手可能であり、ＰＥＧＡＳＹＳ（ＰＥＧインターフェロンα−２ａ）はＨｏｆｆｍａｎｎ Ｌａ Ｒｏｃｈｅ， Ｎｕｔｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙから入手可能である。
【００２５】
本明細書において用いる「慢性Ｃ型肝炎感染患者」なる用語は、慢性Ｃ型肝炎を有するいずれかの患者を意味し、処置ナイーブの患者、再発者および無応答者を包含する。
【００２６】
これらの慢性Ｃ型肝炎患者は、１型を含む複数のＨＣＶ遺伝子型に感染した患者ならびにとりわけＨＣＶ遺伝子型２および／または３、およびＨＣＶ遺伝子型２、３、４、５および／または６、および他の可能なＨＣＶ遺伝子型に感染した患者を包含する。
【００２７】
本明細書において用いる「処置ナイーブの患者」なる用語は、リバビリンでもいずれものインターフェロン（限定するものではないが、インターフェロンα、またはＰＥＧ化インターフェロンαを包含する）でも処置されたことのない慢性Ｃ型肝炎患者を意味する。
【００２８】
本明細書において用いる「再発者」なる用語は、以前のインターフェロン単独でのまたはリバビリンとの組み合わせでの処置に対する初期応答の後に再発した慢性Ｃ型肝炎患者を意味する。
【００２９】
本明細書において用いる「無応答者」なる用語は、以前のいずれかのインターフェロン単独でのまたはリバビリンとの組み合わせでの処置に対して応答しなかった慢性Ｃ型肝炎患者を意味する。
【００３０】
慢性Ｃ型肝炎感染を患う人は、以下の徴候または症状の１つ以上を示す可能性がある：
（ａ）ＡＬＴ上昇、
（ｂ）抗ＨＣＶ抗体試験陽性、
（ｃ）血清中ＨＣＶ−ＲＮＡ存在試験陽性によって実証されるＨＣＶの存在、
（ｄ）慢性肝臓疾患の臨床的標候、
（ｅ）肝細胞損傷。
【００３１】
本発明を実施するために、ＰＥＧ化インターフェロンαおよびリバビリンの併用治療を上記の徴候または症状の１つ以上を示す患者に、処置期間に、１つ以上の徴候または症状を排除するかまたは少なくとも軽減するために十分な量で投与する。
【００３２】
リバビリンをＰＥＧ化インターフェロンαと共に患者に投与する。すなわち、ＰＥＧ化インターフェロンα用量を、患者がリバビリンの用量を受けるのと同じ期間の間に投与する。ＰＥＧ化インターフェロンα処方物は経口投与すると有効でない。それで、好ましいＰＥＧ化インターフェロンαの投与方法は非経口、好ましくは皮下、ＩＶまたはＩＭ注射である。リバビリンを、ＰＥＧ化インターフェロンαの非経口投与と共に、カプセルまたは錠剤の形態で経口投与してもよい。もちろん、鼻腔スプレー、経皮、坐薬、除放性剤形および肺吸入のような、利用可能になる、両方の医薬の他の型の投与が意図される。有効成分を破壊することなく適正な投与量が送達される限り、いずれもの投与形態が作動する。
【００３３】
本発明に関連して「検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡがないこと」なる用語は、定量的な、多サイクル逆転写酵素ＰＣＲ法によって測定した場合に、患者の血清１ｍｌ当り１００コピーより少ないＨＣＶ−ＲＮＡが存在することを意味する。好ましくは、本発明において、ＨＣＶ−ＲＮＡを下記の方法によって測定する。本明細書において、この方法をＨＣＶ−ＲＮＡ／ｑＰＣＲという。ＨＣＶ−ＲＮＡの検出下限は１００コピー／ｍＬである。
【００３４】
ＲＮＡをグアニジウムチオシアネート−フェノール−クロロホルム混合物を使用して患者血清から抽出し、続いてエタノール−酢酸アンモニウム沈殿する。沈殿させたＲＮＡを遠心分離し、生じたペレットをＣｅｎｔｒｉｖａｐコンソール（Ｌａｂｃｏｎｃｏ， Ｋａｎｓａｓ Ｃｉｔｙ， Ｍｏ．）中で乾燥させる。次いで、乾燥ペレットを３０μｌのＲｎａｓｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）、ジチオトレイトールおよびジエチルピロカーボネート処理水混合物中に再懸濁する。ＲＮＡ逆転写（ＲＴ）およびＰＣＲまでサンプルを−２０℃以下（好ましくは−７０℃以下）で維持する。
【００３５】
ＲＴ反応においてＲＮＡ配列全体をｃＤＮＡに変換するために、ランダムヘキサデオキシリボヌクレオチド（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， ＮＪ）をファーストストランドｃＤＮＡ合成用プライマーとして使用する。２アリコートの再懸濁サンプル３μｌを１００ｎｇ／μｌランダムプライマー３μｌに添加し、７０℃で変性させ、次いで４０℃で１時間、Ｍ−ＭＬＶ逆転写酵素（ＵＳＢ， Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ， ＯＨ）を使用して、５ｍＭ　ＭｇＣｌ２を含有する標準緩衝液中で逆転写する。最終ＲＴ反応容量は２６μｌである。逆転写直後にＰＣＲを開始する。
【００３６】
改変型のＰＣＲ法を、ｃＤＮＡを増幅するために熱安定Ｔａｑポリメラーゼを使用して実施する。７５μｌのＰＣＲミックスをＲＴ反応容量全体（２６μｌ）に添加して、１０１μｌの総容量中で最終ＭｇＣｌ２濃度を１．５ｍＭとする。次いで、各々１０１μｌのサンプルを５０．５μｌに分割し、蒸発を防止するために鉱油層を上に置く。
【００３７】
ＰＣＲサイクルはアニーリング９０秒、伸長９０秒および変性９０℃、それぞれ５５℃、７４℃および９４℃からなる。熱サイクルするサンプルを最終の７４℃での伸長に１０分間供する。４つの異なるサイクルセットを使用する。サンプルを２連で負荷し、これらのサンプルをＲＴ後に均等に分割することによって、１個のサンプルから４個のチューブができる。４個のチューブの各々に異なるサイクル数を与え、定量プロセスにおける感度および正確性を増強する。温度サイクル効率を、６０個のチューブの各セットに含まれるコピー数既知のＲＮＡ標準品の満足な増幅によって評価する。２個のプライマーセットを増幅用に使用し、その両方はＨＣＶゲノムの５’非翻訳領域に由来する。これらのプライマーセットの両方は高度に保存されており、全ての既知のＨＣＶサブタイプを検出する。プライマーセット１：上流５’−ＧＴＧ ＧＴＣ ＴＧＣ ＧＧＡ ＡＣＣ ＧＧＴ ＧＡＧ Ｔ−３’、下流５’−ＴＧＣ ＡＣＧ ＧＴＣ ＴＡＣ ＧＡＧ ＡＣＣ ＴＣ−３’（これは１９０ｂｐの産物を生じる）。プライマーセット２：上流５’−ＣＴＧ ＴＧＡ ＧＧＡ ＡＣＴ ＡＣＴ ＧＴＣ ＴＴＣ−３’、下流５’−ＣＣＣ ＴＡＴ ＣＡＧ ＧＣＡ ＧＴＡ ＣＣＡ ＣＡＡ−３’（これは２５６ｂｐの産物を生じる）。
【００３８】
次いで、増幅したｃＤＮＡを３％アガロースゲルで電気泳動し、ナイロン膜に移す。非放射性ジゴキシゲニン標識ＤＮＡプローブを使用して、標的ＤＮＡをサザンブロッティングおよび免疫染色によって検出する。これらの手順を、ＰＣＲ熱サイクル、アガロースゲル電気泳動、バキュームトランスファーサザンブロット、ハイブリダイゼーションおよび免疫染色用の自動化装置を使用して実施する。各膜はコピー数既知の段階希釈した標準品を含み、これを使用して、検体バンドの定量的測定用標準曲線を構築する。もとの標準曲線を慎重に希釈した転写クローン由来のＨＣＶ−ＲＮＡから作成する。放射能取り込み研究、ゲル電気泳動およびＯＤ　２６０を転写物に対して実施して、それらが予想の長さのものであることを決定する。ＲＮＡ転写物定量クローン標準品の生成後に、「プール」した標準品を生成する。これは天然感染において遭遇するＨＣＶの不均質な性質をより良く表す。これらのプールを、既知の感染個体由来の多量の血清または血漿を合することによって作製する。血清／血漿プールをＰＣＲを用いてクローン転写物に対して較正し、次いで既知のＰＣＲ陰性液体中で希釈する。最後に、プールのより高いコピー数のサンプルをＣｈｉｒｏｎ Ｉｎｃ．（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ， ＣＡ）のｃＤＮＡ　Ｑｕａｎｔｉｐｌｅｘ核酸検出システムに対してチェックする。これらの「二重定量」したプールを小分けにし、−７０℃で貯蔵する。５，０００，０００、１，０００，０００、５００，０００、１００，０００、１０，０００および１０００コピー／ｍｌの希釈液を各実験において使用する。
【００３９】
各サザンブロット膜を、現像の間間隔をおいて自動化スキャナー／デンシトメーターを使用してコンピューターにスキャンして、標準曲線が最も直線的である時を決定する。次いで、得られた電子画像をバンド面積および平均バンド密度について測定する。全ての読み取りを、積分したバンド密度に対して標準化し、標準曲線に対して比較して、各バンドについてのウイルスコピー数の数値を得る。
【００４０】
本発明に関連して用いる「持続したウイルス学的応答」なる用語は、併用治療処置の終了後少なくとも１２週間、本発明に従って処置した患者において検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡが存在しないことを意味する。好ましくは、持続したウイルス学的応答の期間は、処置の終了後少なくとも２４週間、より好ましくは少なくとも１年　−　またはそれ以上　−である。ＨＣＶ遺伝子型決定のためには、ＩＮＮＯ−Ｌ　ＰＡ　ＨＣＶ（Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ， Ｚｅｉｊｍａｕｒｄｅ， Ｂｅｌｇｉｕｍ）第２世代アッセイを使用してもよい。
【００４１】
以下の臨床プロトコルを本発明の併用治療の投与に使用してもよい。
【００４２】
研究設計
慢性Ｃ型肝炎：Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ（ＰＥＧ化インターフェロンα−２ｂ）＋ＲＥＢＥＴＯＬ（リバビリン）対ＲＥＢＥＴＲＯＮ
１５２９人の患者を、４８週間の処置期間にわたる３つの処置養生法に均等に無作為化した。３つの処置養生法は以下のとおりである：
１）Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋８００ｍｇ／日リバビリン
２）Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇから０．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋１０００〜１２００ｍｇ／日リバビリン
３）ＲＥＢＥＴＲＯＮ：Ｉｎｔｒｏｎ　Ａ（インターフェロンα−２ｂ）３ＭＩＵ　ＴＩＷ＋１０００〜１２００ｍｇ／日リバビリン
【００４３】
すなわち、養生法１において、患者に１．５μｇ／ｋｇのＰｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎを週に一回（「ＱＷ」）、８００ｍｇ／日のリバビリンとともに４８週間与えた。養生法２において、患者に１．５μｇ／ｋｇのＰｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎを週に一回、１０００〜１２００ｍｇ／日のリバビリンと組み合わせて４週間、続いて０．５μｇ／ｋｇのＰｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎを週に一回、１０００〜１２００ｍｇ／日のリバビリンと組み合わせて４４週間与えた。最後に、養生法３において、患者に３×１０６国際単位（「３ＭＩＵ」）のＩｎｔｒｏｎ　Ａを週に三回、１０００〜１２００ｍｇ／日のリバビリンと組み合わせて与えた。
【００４４】
本研究についての効力の一次目標は、処置の１２週間後における血清ＨＣＶ−ＲＮＡの持続した消失であり、以下に示す結果を処置の１２時間後に得た。以前の研究によって、処置後１２週間の時点での研究結果が処置後２４週間の時点での結果と１〜２％以内で類似していることが実証されている。
【００４５】
以下の表に、処置群内で、処置およびリバビリンの体重調整用量によって分析したデータをまとめる。
【００４６】
全ての処置患者についてのＨＣＶ１対ＨＣＶ２／３による応答
３つの処置養生法の結果全体を表１にまとめる。表１に示すように、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ＋８００ｍｇ／日のリバビリンによって患者集団の５４％において良好な応答が得られた。一方、治療養生法２および３の両方によって有意に低下した応答率４７％が得られた。従って、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５ｍｇ／ｋｇ＋８００ｍｇリバビリンは、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５から０．５μｇ／ｋｇ＋１０００〜１２００ｍｇリバビリンおよびＲＥＢＥＴＲＯＮの両方より有意に有効である（ｐ＝０．０１）。
【００４７】
ＨＣＶ遺伝子型は、治療に対する応答の最も有意な予言者である。合衆国および欧州における患者の約７０％が遺伝子型１である。全処置患者に関しては、ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／８００ｍｇリバビリンは、ＨＣＶ１の処置にとってより有効である。遺伝子型２または３の患者が遺伝子型１の患者よりも全ての治療形態に対して一般に良好に応答したことに留意すべきである。
【００４８】
【表１】
2004511513.tif 000002
・＊全遺伝子型　ｐ＝０．０１２５　Ｐｅｇ　１．５μｇ／ｋｇ＋８００ｍｇリバビリン対ＲＥＢＥＴＲＯＮ
＊全遺伝子型　ｐ＝０．０１６　Ｐｅｇ　１．５μｇ／ｋｇ＋８００ｍｇリバビリン対Ｐｅｇ　１．５μｇ／ｋｇ→０．５μｇ／ｋｇ＋１０００〜１２００ｍｇリバビリン
【００４９】
ＨＣＶ遺伝子型およびベースラインＨＣＶレベルの効果
ベースラインＨＣＶレベルも遺伝子型内の患者の応答に対する有意な効果を有し得る。高ウイルス負荷を有した遺伝子型１の患者が最低の応答率を有する。高ウイルス負荷は、ＨＣＶ　ＲＮＡ　２×１０６コピー／ｍｌ血清超を有することとして定義される。Ｒｅｂｅｔｒｏｎ登録試験において、低ウイルス負荷患者と高ウイルス負荷患者との間の応答率の差は６％であった。低ウイルス負荷は、ＨＣＶ　ＲＮＡ　２×１０６コピー／ｍｌ血清以下を有することとして定義される。
【００５０】
【表２】
2004511513.tif 000003
【００５１】
示すように、処置養生法２および３に比較して、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ　ＱＷ＋８００ｍｇ／日のリバビリンは、低ウイルス負荷および高ウイルス負荷両方の集団において優れた結果を示した。
【００５２】
患者体重の応答に対する効果
処置分析の２４週目で、特にＰｅｇＩｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋８００ｍｇ／日リバビリン群において、患者体重がＨＣＶ−ＲＮＡ応答の消失に対して効果を有するようであることが観察された。研究における患者の体重の範囲は大きく（３８〜１８１ｋｇ）、大多数の患者（６３％）は７５ｋｇ超の体重であった。研究結果を再分析し（表３、４および５）、応答率を患者に与えたリバビリンのｍｇ／ｋｇに基いて決定した（患者体重／リバビリン用量）。表３に示すように、応答率はμｇ／ｋｇ／ＱＷでのＰｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎの用量およびｍｇ／ｋｇ／日でのリバビリンの用量の両方に関連付けられる。
【００５３】
【表３】
2004511513.tif 000004
【００５４】
Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋８００ｍｇ／日の群における７５ｋｇの人において、１０．６ｍｇ／ｋｇ用量のリバビリンは約８００ｍｇ／日（すなわち、７９５ｍｇ／日）である；処置養生法の患者の３７％のみにこの用量を与え、残りはより少量であった。対照的に、他の２つの処置群の大多数には１０．６ｍｇ／ｋｇリバビリンより多くを与えた。従って、ｋｇ患者体重当りのリバビリンの用量を増加させることによって、予想外に良好な効力の増加６６％が示され、これは処置群２および３の効力４９％および５０％に比較して、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋８００ｍｇ／日リバビリン治療において最も顕著である。
【００５５】
表４はＨＣＶ遺伝子型によるそれぞれの応答を示す。明らかなように、ＨＣＶ遺伝子型１を有する患者がＰｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎの用量およびリバビリンの用量の増加から最大の恩恵を受ける。Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇ／ＱＷ＋８００ｍｇ／日Ｒｅｂｅｔｏｌ（リバビリン）養生法の効力は、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　μｇ／ｋｇ用量およびリバビリンｍｇ／ｋｇ用量が増加するとともに、この処置を受けた患者集団内および他の治療養生法との比較の両方で実質的に増加した。
【００５６】
【表４】
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【００５７】
表５にＨＣＶ遺伝子型およびベースラインＨＣＶ−ＲＮＡウイルス負荷による応答をまとめる。ＨＣＶ遺伝子型１、高ウイルス負荷、Ｐｅｇ−Ｉｎｔｒｏｎ　１．５μｇ／ｋｇおよびリバビリン＞１３．２ｍｇ／ｋｇでの処置の患者について、この処置困難集団において応答の改善が存在した。
【００５８】
【表５】
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【００５９】
この効力の増強は疾患の全ての局面を含み、その結果以下が生じる：
・検出可能なＨＣＶ−ＲＮＡの持続した根絶；
・肝臓炎症の改善；
・ＡＬＴの正常化；
・ＨＱＬの改善。
【００６０】
当業者には明らかであるように、本発明の多数の改変および変形をその精神および範囲から逸脱することなしに行うことができる。本明細書に記載する具体的な実施態様は例示のためのみに提供され、本発明は添付の特許請求の範囲および特許請求の範囲に与えられる均等物の全範囲によってのみ限定されるものである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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