(57)【要約】本発明は、ジャノヒゲ（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ）、カラスビシャク（ｐｉｎｅｌｌｉａ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ）、及び生カンゾウ（ｒａｗ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ，  Ｒａｄｉｘ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ）と、長柄菊（ｌａｎｔｅｒｎ  ｔｒｉｄａｘ，  Ｈｅｒｂａ  Ｔｒｉｄａｃｉｓ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｔｉｓ）、台湾アデノステマ（Ｔａｉｗａｎ  ａｄｅｎｏｓｔｅｍａ，  Ｈｅｒｂａ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍａｔｉｓ）、又はハートリーフドクダミ（ｈｅａｒｔｌｅａｆ  ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ，  Ｈｅｒｂａ  ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ）の何れか一つとを含む医薬組成物を提供する。５番目のハーブとして、トウジン（ｔａｎｇ−ｓｈｅｎ，  Ｒａｄｉｘ  Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｔｉｓ））あるいはアメリカニンジン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｇｉｎｓｅｎｇ，  Ｒａｄｉｘ  Ｐａｎｃｉｓ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｉ）の何れかを任意に添加することができる。これらの医薬組成物は、免疫学的疾患、特に喘息、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎及び関節リウマチなどのＩｇＥ介在性疾患の患者の治療に有効である。また、本発明は、このような医薬組成物の製造方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジャノヒゲ（Ｔｕｂｅｒ  Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ）、カラスビシャク（Ｔｕｂｅｒ  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ）、及び生カンゾウ（Ｒａｄｉｘ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ）と、長柄菊（Ｈｅｒｂａ  Ｔｒｉｄａｃｉｓ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｔｉｓ）、台湾アデノステマ（Ｈｅｒｂａ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍｍａｔｉｓ）、及びハートリーフドクダミ（Ｈｅｒｂａ  Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ）から選ばれる一つのハーブとを有効量含む免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２】
請求項１記載の医薬組成物において、前記ハーブが長柄菊であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項３】
請求項２記載の医薬組成物において、前記ジャノヒゲが水性抽出物であり、
前記カラスビシャク、生カンゾウ、及び長柄菊が粉末状であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項４】
請求項２記載の医薬組成物において、ジャノヒゲ、カラスビシャク、  生カンゾウ、及び長柄菊が、約３：２：１：１の重量比であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項５】
請求項２記載の医薬組成物において、さらにトウジン（Ｒａｄｉｘ  Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｔｉｓ）を有効量含むことを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項６】
請求項５記載の医薬組成物において、前記トウジンが粉末状であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項７】
請求項５記載の医薬組成物において、前記ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びトウジンが、約３：２：１：１：１の重量比であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。。
【請求項８】
請求項２記載の医薬組成物において、さらにアメリカニンジン（Ｒａｄｉｘ  Ｐａｎｃｉｓ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｉ）を有効量含むことを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項９】
請求項８記載の医薬組成物において、前記アメリカニンジンが粉末状であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１０】
請求項８記載の医薬組成物において、前記ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びアメリカニンジンが、３：２：１：１：１の重量比であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１１】
請求項８記載の医薬組成物において、前記ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、  長柄菊、及びアメリカニンジンが水性抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１１記載の医薬組成物において、ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びアメリカニンジンの前記水性抽出物を、それぞれ別々に濾過及び濃縮して、ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びアメリカニンジンの各濃縮物とすることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１２記載の医薬組成物において、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びアメリカニンジンの前記各濃縮物を別々に顆粒化してそれぞれの顆粒を調製し、これら顆粒をジャノヒゲの前記濃縮物と混合して混合顆粒とすることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１３記載の医薬組成物において、顆粒化の前に、カラスビシャク、生カンゾウ、長柄菊、及びアメリカニンジンの前記各濃縮物に賦形剤を添加することを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１５】
請求項１４記載の医薬組成物において、前記賦形剤がコーンスターチであることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１１記載の医薬組成物において、ジャノヒゲの前記水性抽出物が、水抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１１記載の医薬組成物において、カラスビシャクの前記水性抽出物が、水抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１８】
請求項１１記載医薬組成物において、生カンゾウの前記水性抽出物が、水抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項１９】
請求項１１記載の医薬組成物において、長柄菊の前記水性抽出物が、アルコール抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２０】
請求項１９記載の医薬組成物において、前記長柄菊アルコール抽出物が、５０％アルコール抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２１】
請求項１１記載の医薬組成物において、アメリカニンジンの水性抽出物が、水抽出物であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１２記載の医薬組成物において、ジャノヒゲの前記濃縮物の固型分がジャノヒゲに対し約２０〜３０重量％、カラスビシャクの前記濃縮物の固型分がカラスビシャクに対し約１５〜２５重量％、生カンゾウの前記濃縮物の固型分が生カンゾウに対し約１５〜２５重量％、アメリカニンジンの前記濃縮物の固型分がアメリカニンジンに対し約１９〜２９重量％、及び長柄菊の前記濃縮物の固型分が長柄菊に対し約５〜１０重量％であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２３】
請求項１３記載の医薬組成物において、前記カラスビシャク顆粒がカラスビシャクに対し約１０〜２０重量％、前記生カンゾウ顆粒が生カンゾウに対し約２〜１０重量％、前記アメリカニンジン顆粒がアメリカニンジンに対し約５〜１５重量％、及び前記長柄菊顆粒が長柄菊に対し約９〜１５重量％であることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２４】
請求項１記載の医薬組成物において、前記医薬組成物が免疫学的疾患患者を治療することを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２５】
請求項２４記載の医薬組成物において、前記免疫学的疾患が、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、及び関節リウマチからなる群から選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする免疫学的疾患治療用医薬組成物。
【請求項２６】
カラスビシャク、生カンゾウ、及び長柄菊を粉砕してハーブ粉末を調製し、
ジャノヒゲを水中で煮沸してジャノヒゲの水性抽出物を調製し、
前記ハーブ粉末と前記ジャノヒゲ水性抽出物とを混合してハーブ混合物とすることを特徴とする請求項３記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項２７】
請求項２６記載の方法において、さらにトウジンを粉砕してトウジン粉末を調製し、このトウジン粉末を前記ハーブ混合物と混合することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項２８】
請求項２６記載の方法において、さらにアメリカニンジンを粉砕してアメリカニンジン粉末を調製し、このアメリカニンジン粉末を前記ハーブ混合物と混合することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項２９】
請求項２６〜２８の何れかに記載の方法において、ハーブ混合物を顆粒化することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３０】
請求項２９記載の方法において、前記顆粒化したハーブ混合物をカプセル化することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３１】
請求項２記載の医薬組成物の有効量を免疫学的疾患患者に投与することを特徴とする免疫学的疾患患者の治療方法。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、前記免疫学的疾患が、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、アトピー性湿疹、及び関節リウマチからなる群から選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする免疫学的疾患患者の治療方法。
【請求項３３】
請求項２記載の医薬組成物の有効量を含むことを特徴とする免疫学的疾患治療剤。
【請求項３４】
ジャノヒゲを水中で煎じて抽出し、このジャノヒゲ水抽出物を濾過及び濃縮してジャノヒゲ濃縮物を調製し、
カラスビシャクを水中で煎じて抽出し、このカラスビシャク水抽出物を濾過及び濃縮してカラスビシャク濃縮物とし、さらにこのカラスビシャク濃縮物をスプレードライにより顆粒化し、
生カンゾウを水中で煎じて抽出し、この生カンゾウ水抽出物を濾過及び濃縮して生カンゾウ濃縮物とし、さらにこの生カンゾウ濃縮物をスプレードライにより顆粒化し、
長柄菊をアルコール中還流して抽出し、この長柄菊アルコール抽出物を濾過及び濃縮して長柄菊濃縮物とし、さらにこの長柄菊濃縮物をスプレードライにより顆粒化し、
カラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊の顆粒をジャノヒゲ濃縮物と一緒に混合して混合顆粒とすることを特徴とする請求項１１記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項３５】
請求項３４記載の方法において、長柄菊のアルコール抽出物が、５０％アルコール抽出物であることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３６】
請求項３４記載の方法において、顆粒化前に、前記カラスビシャク、生カンゾウ、及び長柄菊の各濃縮物に賦形剤を添加することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３７】
請求項３６記載の方法において、前記賦形剤がコーンスターチであることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３８】
請求項３４記載の方法において、さらに、アメリカニンジンを水中で煎じて抽出し、このアメリカニンジン水抽出物を濾過及び濃縮してアメリカニンジン濃縮物とし、このアメリカニンジン濃縮物をスプレードライにより顆粒化し、このアメリカニンジン顆粒を前記混合顆粒と混合することを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項３９】
請求項３４記載の方法において、ジャノヒゲ濃縮物の固形分がジャノヒゲに対して約２０〜３０重量％、カラスビシャク濃縮物の固形分がカラスビシャクに対して約１５〜２５重量％、生カンゾウ濃縮物の固形分が生カンゾウに対し約１５〜２５重量％、アメリカニンジン濃縮物の固形分がアメリカニンジンに対し約２０〜３０重量％、長柄菊濃縮物の固形分が長柄菊に対し約５〜１０重量％であることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項４０】
請求項３４記載の方法において、カラスビシャク顆粒がカラスビシャクに対し約１０〜２０重量％、生カンゾウ顆粒が生カンゾウに対し約２〜１０重量％、アメリカニンジン顆粒がアメリカニンジンに対し約５〜１５重量％、長柄菊顆粒が長柄菊に対し約９〜１５重量％であることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項４１】
請求項３４記載の方法において、前記濃縮物は、約５５℃、約３０ｔｏｒｒの減圧下で減圧濃縮されたものであることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項４２】
請求項３４記載の方法において、各前記濃縮物を入口温度約１０５℃及び出口温度約７６〜７７℃でスプレードライすることを特徴とする医薬組成物の製造方法。
【請求項４３】
請求項１１記載の医薬組成物の有効量を免疫学的疾患患者に投与することを特徴とする免疫学的疾患患者の治療方法。
【請求項４４】
請求項４３記載の方法において、前記免疫学的疾患が、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、アトピー性湿疹、及び関節リウマチからなる群から選ばれる少なくとも一つであることを特徴とする免疫学的疾患患者の治療方法。
【請求項４５】
請求項１１記載の医薬組成物の有効量を含むことを特徴とする免疫学的疾患治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学的疾患患者治療用の医薬組成物、ならびにその製造方法に関する。特に、この医薬組成物は、（１）ジャノヒゲ（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ）、（２）カラスビシャク（ｐｉｎｅｌｌｉａ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ）、及び（３）生カンゾウ（ｒａｗ  ｌｉｃｏｒｉｃｅ，  Ｒａｄｉｘ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ）、ならびに（４）長柄菊（ｌａｎｔｅｒｎ  ｔｒｉｄａｘ，  Ｈｅｒｂａ  Ｔｒｉｄａｃｉｓ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｔｉｓ）、台湾アデノステマ（Ｔａｉｗａｎ  ａｄｅｎｏｓｔｅｍａ，  Ｈｅｒｂａ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍａｔｉｓ）、及びハートリーフドクダミ（ｈｅａｒｔｌｅａｆ  ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ，  Ｈｅｒｂａ  ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ）のうちの一つのハーブを含む。また、５番目のハーブとして、トウジン（ｔａｎｇ−ｓｈｅｎ，  Ｒａｄｉｘ  Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｔｉｓ）あるいはアメリカニンジン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｇｉｎｓｅｎｇ，  Ｒａｄｉｘ  Ｐａｎｃｉｓ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｉ）を任意に配合することができる。本ハーブ系医薬組成物は、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）介在性疾患に有効な治療に使用され、このような疾患としては、特に限定されないが、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、アトピー性湿疹、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、高ＩｇＥ症候群（ｈｙｐｅｒ  ＩｇＥ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、及び関節リウマチが含まれる。
【背景技術】
【０００２】
抗原誘発性、特にアレルゲン誘発性の免疫学的疾患は、全世界の人口の２０％を超える人々を苦しめ、重篤な健康上の問題を引き起こす。このような免疫学的疾患の一例が喘息である。近年、アレルギー関連性の免疫学的疾患の症状の発現が若年層にシフトしてきており、ますます多くの子供や青年がアレルゲン誘発性免疫学的疾患の徴候を発現してきている。
【０００３】
例えば、台湾では、小児喘息の患者が１９７４年の１．３％から１９８５年には５．０７％に、１９９１年には５．８％に増加した。また、アレルギー性鼻炎の発生率は、１９８５年の７．８４％から１９９１年の２０．６７％に増加した。さらに、アトピー性湿疹の発生は、１９７４年には１．４３％であったが、１９８５年には１．２３％、１９９１年には３．８４％に上昇した。アレルゲン関連性免疫学的疾患の早期の発現は、環境汚染によるのかもしれない。
【０００４】
呼吸器アレルギーは、ＩｇＥ介在性免疫反応である（Ｂｒｉｎｋｅｒ，  Ｊ．  Ｎａｔｕｒｏｐａｔｈｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ４：  ６４−６８  （１９９３））。主要な呼吸器アレルギー反応は２つあり、それはアレルギー性鼻炎とアレルギー性気管支喘息である。アレルギー性鼻炎は花粉症としても知られるが、これは抗原／ＩｇＥの感作マスト細胞及び好塩基球への結合により起こる。この結合はｃＡＭＰの減少を起こし、これが次々と好酸球走化因子及びヒスタミンの放出をもたらす。そして、ヒスタミンがＨ１−受容体に結合し、血管拡張、毛細管透過性、及び平滑筋収縮の増大を起こし、これらは水様分泌物、くしゃみ、及び目のかゆみを伴った鼻のうっ血として現れる。
【０００５】
アレルギー性喘息はもう一つのＩｇＥ介在性の免疫反応であり、この反応においてはマスト細胞がヒスタミン、ブラジキニン、及びアナフィラキシーならびにトロンボキサン／プロスタグランジン気管支収縮剤のロイコトリエン遅反応性物質を含むアラキドン酸代謝産物を放出する。血小板活性化因子は、たくさんの白血球から放出される別の強力な喘息メディエーターである。このような状況下で、ｃＡＭＰの減少後に放出されるヒスタミンは、Ｈ１−受容体に作用して気管支痙攣を起こす。また、ヒスタミンはコリン作動性反射作用及びアナフィラキシーにおけるプロスタグランジン生成の半分であることにより、気管支収縮の原因となる。
【０００６】
罹患人口のパーセンテージ及び疾患の深刻度は上昇しており、アレルギー性反応の治療方法は、科学的なアプローチよりもまだ主として経験的な偶然の発見に依存している。ほとんどのアレルギー患者は、効果細胞によるメディエーターの放出の結果生じた症状をコントロールすることを目的とした薬剤で治療される。いくつかの薬剤は、副作用なしに短期間の症状解消に効果的なようである。しかしながら、いかなる副作用もなく長期にわたって疾患進行を防止し、永久的に病気を撲滅する効果を有する薬剤はこれまで見出されていない。例えば、ステロイド治療のような喘息を治療するための長期経口療法は、成長遅滞、骨粗鬆症、及び副腎皮質機能抑制のような多数の衰弱作用を伴うことが現在知られている。
【０００７】
伝統的な中国のハーブ及び医薬用の組み合わせは、免疫学的疾患治療の選択肢を提供する。伝統的中国ハーブ及びハーブの組み合わせは、免疫系機能を改善し、様々な慢性免疫学的疾患を治療するものとして知られている。例えば、Ｈａｍａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  （１９９７）  ５６：１２３−１３１は、漢方薬シンピ湯（Ｓｈｉｎｐｉ−Ｔｏ）を開示し、これは、ラット好塩基球性白血病−２Ｈ３細胞におけるＩｇＥ介在性ロイコトリエン合成を阻害する。シンピ湯は、Ｅｐｈｅｄｒａｅ  ｈｅｒｂａ  （Ｅｐｈｅｄｒａ  ｓｉｎｉｃａ  Ｓｔａｐｆ），  Ａｒｍｅｎｉａｃａｅ  ｓｅｍｅｎ  （Ｐｒｕｎｕｓ  ａｒｍｅｎｉａｃａ  Ｌｉｎｎｅ），  Ｍａｇｎｏｌｉａｅ  ｃｏｒｔｅｘ  （Ｍａｇｎｏｌｉａ  ｏｂｏｖａｔａ  Ｔｈｕｎｂｅｒｇ），  Ａｕｒａｎｔｉｉ  ｎｏｂｉｌｉｓ  Ｐｅｒｉｃａｒｐｉｕｍ  （Ｃｉｔｒｕｓ  ｕｎｓｈｉｕ  Ｍａｒｋｏｖｉｃｈ），  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  ｒａｄｉｘ  （Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｕｖａｌｅｎｓｉｓ  Ｆｉｓｃｈｅｒ），  Ｂｕｐｌｅｕｒｉ  ｒａｄｉｘ  （Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ  ｆａｌｃａｔｕｍ  Ｌ．），  ａｎｄ  Ｐｅｒｉｌｌａｅ  ｈｅｒｂａ  （Ｐｅｒｉｌｌａ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  Ｂｒｉｔｔｏｎ  ｖａｒ．  ａｃｕｔａ  Ｋｕｄｏ）を含む７つの薬用ハーブの抽出物から調製されたフリーズドライの顆粒状漢方薬である。シンピ湯は、小児喘息の治療に有用である。
【０００８】
Ｔｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  （１９８８）  ２４：３０３−３０９は、漢方薬サイボク湯（Ｓａｉｂｏｋｕ−Ｔｏ）を開示しており、これはマウス腹膜マスト細胞からのヒスタミン放出に抑制効果を示す。サイボク湯は、喘息の治療に有用であり、Ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ  ｆａｌｃａｔｕｍ  Ｌ．，  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ  ｔｅｒｎａｔａ  Ｂｒｅｉｔｅｎｂａｃｈ，  Ｐｏｒｉａ  ｃｏｃｏｓ  Ｗｏｌｆ．，  Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ  ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ  Ｇｅｏｒｇｉ，  Ｚｉｚｙｐｈｕｓ  ｖｕｌｇａｒｉｓ  Ｌａｍ．，  Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ．Ａ．  Ｍｅｙｅｒ，  Ｍａｇｎｏｌｉａ  ｏｂｏｒａｔａ  Ｔｈｕｍｂｅｒｇ，  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ  ｇｌａｂｒａ  Ｌ．，  Ｐｅｒｉｌｌｌａｅ  ｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓ  Ｂｒｉｔｔｏｎ  ｖａｒ．  ａｃｕｔａ  Ｋｕｄｏ，  ａｎｄ  Ｚｉｎｇｉｂｅｒ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ  Ｒｏｓｃｏｅを含む１０の薬用ハーブを含む。
【０００９】
Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  （１９９９），  ４３：１１−２１は、漢方薬ホチュエッキ湯（Ｈｏｃｈｕ−Ｅｋｋｉ−Ｔｏ）を開示し、これはストレス誘発性免疫抑制を復活する効果を示す。ホチュエッキ湯は、Ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒｘ．，  Ａｔｒａｃｔｙｌｏｄｉｓ  ａｌｂａ  Ｒｚ．，  Ａｓｔｒａｇａｌｉ  Ｒｘ．，  Ａｎｇｅｌｉｃａｅ  ｓｉｎｅｎｓｉｓ  Ｒｘ．，  Ｊｕｊｕｂａｅ  Ｆｒ．，  Ｃｉｔｒｉ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔａｅ  Ｐｃ．，  Ｂｕｐｌｅｕｒｉ  Ｒｘ．，  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｒｘ．  Ｐｒｅｐａｒａｔａ，  Ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ  ｒｅｃｅｎｓ  Ｒｚ．，  ａｎｄ  Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ  Ｒｚ  を含む１０の成分からなる。
【００１０】
Ｚｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍａｇａｚｉｎｅ，  ５２９−５３２  （１９９６）は、寒冷タイプの喘息患者の治療のための漢方薬ウェンヤントンロウ混合物（Ｗｅｎｙａｎｇ  Ｔｏｎｇｌｕｏ  ｍｉｘｔｕｒｅ）を開示している。これは、肺換気機能改善効果、末梢血リンパ球のアドレナリン作動性β−受容体の調節効果、及び５−ヒドロキシトリプタミンの血清レベルの減少効果を示す。ウェンヤントンロウ混合物は、Ｒｅｄ  Ｇｉｎｓｅｎｇ，  Ｚｈｉ  Ｆｕ  Ｐｉａｎ，  Ｙｉｎ  Ｙａｎｇ  Ｈｕｏ，  Ｄｒｉｅｄ  Ｇｉｎｇｅｒ  （Ｚｉｎｇｉｂｅｒｉｓ  ｒｅｃｅｎｓ  Ｒｚ．），  Ｚｈｉ  Ｈｕａｎｇ  Ｚｈｉ，  Ａｎｇｅｌｉｃａｅ  ｓｉｎｅｓｉｓ  Ｒｘ．，  Ｅｐｈｅｄｒａ，  Ｐｏｌｙｇａｌａｅ  Ｒｘ．，  Ｓａｎｇ  Ｂａｉｐｉ，  Ｓｈｅｎｇ  Ｓｈｉ  Ｇａｏ，  Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａｅ  Ｆｒ．，  ａｎｄ  Ｌｉｃｏｒｉｃｅ  （Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｒｘ．  Ｐｒｅｐａｒａｔａ）を含むの１２の薬用ハーブを含む。
【００１１】
気管支炎及び気管支喘息治療用の煎薬が、インターネットで公開されている（ｗｗｗ．ｈｅｒｂ．ｃｏｍ．ｔｗ）。この煎薬は、Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ  Ｒｘ．，  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ  Ｒｚ．  Ｐｒｅｐａｒａｔａ，  Ｏｒｙｚａｅ  Ｓｍ．，  Ｊｕｊｕｂａｅ  Ｆｒ．，  Ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｒｘ．，  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｒｘを含む６のハーブの組み合わせからなる。
漢方薬の品質管理は、ハーブから医薬組成物を開発する上で重要である。ハーブの含有量及び活性成分は、生育条件や生育地、収穫時期や収穫技術、収穫したハーブの製造方法や加工方法などの因子で変動することがある。これら重要な因子が揃わなければ、漢方薬の有効性は脅かされる。にもかかわらず、漢方薬の品質を確実にモニターする科学的な方法は報告あるいは採用されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、主として中国及び台湾で見られるハーブに由来する新規で無毒な医薬組成物を提供するものである。これらハーブの組み合わせ使用は、何れの文献や報告にも認められない。これら医薬組成物は、免疫学的疾患、特にＩｇＥ介在性疾患の患者の治療に有効である。本発明の医薬組成物は、インターロイキン４（ＩＬ−４）合成のダウンレギュレーション及びＩｇＥ抑制に顕著な効果を示す。また、本発明においては、ハーブの品質を効果的にコントロールするために、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて各ハーブの指紋をとり、組成物に用いた各ハーブが一貫した再現性のある成分を含むことを保証する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、必須ハーブとして、ジャノヒゲ（Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ）、カラスビシャク（Ｐｉｎｅｌｌｉａ，  Ｔｕｂｅｒ  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ）、及び生カンゾウ（ｒａｗ  Ｌｉｃｏｒｉｃｅ，  Ｒａｄｉｘ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ）と、長柄菊（Ｌａｎｔｅｒｎ  Ｔｒｉｄａｘ，  Ｈｅｒｂａ  Ｔｒｉｄａｃｉｓ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｔｉｓ）、台湾アデノステマ（Ｔａｉｗａｎ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍａ，  Ｈｅｒｂａ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍａｔｉｓ）、及びハートリーフドクダミ（Ｈｅａｒｔｌｅａｆ  Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ，  Ｈｅｒｂａ  Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ）からなる群から選ばれたハーブを含む医薬組成物を提供する。本発明の医薬組成物は、さらにトウジン（ｔａｎｇ−ｓｈｅｎ，  Ｒａｄｉｘ  Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｔｉｓ）あるいはアメリカニンジン（Ａｍｅｒｉｃａｎ  ｇｉｎｓｅｎｇ，  Ｒａｄｉｘ  Ｐａｎｃｉｓ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｉ）の何れかのハーブを含む。好ましいハーブの重量比は、ジャノヒゲ：カラスビシャク：生カンゾウ：アメリカニンジン／トウジン：長柄菊／台湾アデノステマ／ハートリーフドクダミが３：２：１：１：１である。
【００１４】
最も好ましい医薬組成物は、  ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊を含む。これらハーブの有効成分は、水あるいは有機溶媒により抽出することができるか、あるいはハーブを直接粉砕して得られた粉末状であることができる。
【００１５】
一つの例として、この医薬組成物は水性抽出物のジャノヒゲ、及び粉末であるその他のハーブを含む。ジャノヒゲの水性抽出物は、好ましくは水中での抽出により調製される。
もう一つの例として、この医薬組成物は、ジャノヒゲ、  カラスビシャク、生カンゾウ、及びアメリカニンジンの水性抽出物、好ましくは水抽出物と、長柄菊水性抽出物、好ましくはアルコール抽出物（最も好ましくは５０％アルコール抽出物）とを含む。
【００１６】
また、本発明は、ハーブの水性抽出物及び／又は粉末を調製することを含む医薬組成物の製造方法を提供する。一つの例としては、ジャノヒゲ以外のその他の全てのハーブを細かく切り、乾燥、粉砕し、ふるいにかけてハーブ粉末を調製する。ジャノヒゲの成分は、ジャノヒゲを水中で煮沸、濃縮して抽出する。ジャノヒゲ抽出物（濾過したもの）は、濃縮されたジャノヒゲ−水混合物を濾過することにより得られる。次いで、このジャノヒゲ  濾液を前記ハーブ粉末と混合してハーブ混合物を得る。このハーブ混合物を、顆粒化のために流動床式造粒機に入れる。この顆粒は、ふるいにかけて均一なサイズの顆粒とすることができる。顆粒はさらにカプセル化することができる。
【００１７】
もう一つの例としては、次のようにして調製された医薬組成物が挙げられる。
（ａ）  ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊の水性抽出物をそれぞれ、好ましくは別々に濾過及び濃縮する。
（ｂ）ジャノヒゲは顆粒化せず、これ以外のカラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊の濃縮物をそれぞれ別々に濃縮物から顆粒化して、それぞれの顆粒を調製する。
（ｃ）  顆粒化の前に、顆粒に適した状態とするために、賦形剤、好ましくはコーンスターチを濃縮物に添加する。
（ｄ）  それぞれの顆粒及びジャノヒゲの濃縮物を一緒に混合して混合顆粒を調製し、これをその後カプセル化する。
【００１８】
好ましくは、ジャノヒゲ濃縮物の固形分は、ジャノヒゲの原材料の約２０〜３０重量％、好ましくは約２５重量％である。濃縮物の固形分は、濃縮物から水を除いたものである。ジャノヒゲの場合、濃縮物は大量の水を含む（すなわち、ジャノヒゲ濃縮物の約５８％が水である）。その他のハーブの固形分は、濃縮物とほとんと同じである（すなわち、水分含量はわずかであった）。カラスビシャク濃縮物は、カラスビシャク原材料に対し約１５〜２５重量％、好ましくは約２０重量％である。生カンゾウ濃縮物は、生カンゾウ原材料に対し、約１５〜２５重量％、好ましくは約２０重量％である。アメリカニンジン濃縮物は、アメリカニンジン原材料に対し、約１９〜２９重量％、好ましくは約２４．３％である。長柄菊濃縮物は、長柄菊原材料に対し、約５〜１０重量％、好ましくは約７．８重量％である。
【００１９】
カラスビシャク顆粒は、カラスビシャク原材料に対し、約２０〜３０重量％、好ましくは約２５重量％である。生カンゾウ顆粒は、生カンゾウ材料に対し、約１６〜２６重量％、好ましくは約２１重量％である。アメリカニンジン顆粒は、アメリカニンジン原材料に対し、約２７〜３７重量％、好ましくは約３２重量％である。長柄菊顆粒は、長柄菊原材料に対し、約３７〜４７重量％、好ましくは約４２重量％である。
【００２０】
また、その本方法では、ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊の抽出を別個に行うことが必要である。さらに、ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、及びアメリカニンジンは、水中で煎じることによって抽出する。長柄菊は、アルコール中、好ましくは５０％アルコール中で還流により抽出する。抽出後、それぞれの抽出物を濾過して残存するハーブを除去する。濾液はその後、約５５℃、約３０ｔｏｒｒの減圧条件下で減圧濃縮し、濃縮物を調製する。充分な量の賦形剤、好ましくはコーンスターチをジャノヒゲ以外の各濃縮物に添加し、抽出物ペーストを調製する。このペーストを、入口温度約１０５℃、出口温度約７６〜７７℃でスプレードライし、顆粒化する。カラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊から得られたそれぞれの顆粒は、ジャノヒゲ濃縮物と混合し、混合顆粒を調製する。この混合顆粒は、カプセル化することができる。
【００２１】
また、水性抽出剤容量のハーブ重量に対する比は、約２０：１である。水抽出では、好ましい煎出時間は約３０分である。好ましいアルコール抽出時間もまた約３０分である。
【００２２】
本発明の２つの医薬組成物、一つは、ジャノヒゲ水性抽出物と他のハーブの粉末とを含むものであり、もう一つは、全てのハーブの水性抽出物を含むものであるが、これらは、両方とも免疫学的疾患の治療に有効である。しかしながら、全てのハーブの水性抽出物を含む医薬組成物の方が、ジャノヒゲ水性抽出物と他のハーブの粉末とを含む医薬組成物よりも良好な薬効評価及び効率を示すので、やや好ましい。これら２つの方法の治療効果の違いは、抽出中活性成分の放出が増加する効果によるのかもしれない。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の医薬組成物は、免疫学的疾患、特にＩｇＥ介在性疾患の患者の治療に有効である。ＩｇＥ介在性疾患は、特に限定されないが、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、食物アレルギー、高ＩｇＥ症候群、アトピー性湿疹、及び関節リウマチを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
抗原あるいはアレルゲン介在性喘息は、主として慢性炎症反応に起因する呼吸器疾患である。この炎症反応は、細胞からの血小板活性化因子、ヒスタミン、プロスタグランジン、及びロイコトリエンなどの炎症性因子の放出により仲介される。炎症反応は、Ｔリンパ球（Ｔ  ｃｅｌｌｓ）、特にＣＤ４＋細胞における抗原反応を刺激する。ＣＤ４＋細胞には２つのタイプがあり、それはＴｈ１及びＴｈ２  ＣＤ４＋細胞である。Ｔｈ１タイプのＣＤ４＋細胞は、サイトカイン（ＩＦＮ−γ）を分泌する。Ｔｈ２タイプのＣＤ４＋細胞は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）を分泌する。アレルギー性喘息患者のほとんどは、Ｔｈ２タイプである。アレルゲンは、Ｔｈ２細胞を刺激して、過剰のＩＬ−４を産生し、これが次々にＢリンパ球からＩｇＥの産生及び分泌を引き起こす。
【００２５】
本発明は、ＳＴＡ−３１、ＳＴＡ−３２、ＳＴＡ−３３、ＳＴＡ−３４、ＳＴＡ−３５、ＳＴＡ−３６、及びＳＴＡ−４の７つの医薬組成物を提供する。これら組成物は全て、免疫学的疾患、特にＩｇＥ産生の抑制及びインターロイキン−４（ＩＬ−４）遺伝子合成のダウンレギュレーションにおいて薬学的効果を有する。本ハーブ系医薬組成物のハーブの内容を、表１に示す。
【００２６】
【表１】
2004518648.tif 000002
【００２７】
７つの組成物のうち、好ましい組成物はＳＴＡ−３６であり、最も好ましい組成物はＳＴＡ−４である。ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４は、ＩｇＥ産生の抑制を含む免疫学的疾患の治療に特に有効である。
各医薬組成物は、５つのハーブを含み、このうち３つが必須ハーブである。必須ハーブは、ジャノヒゲ（ｂｌａｃｋ  ｌｅｅｋとしても知られる）、カラスビシャク、及び生カンゾウである。４番目のハーブはトウジンあるいはアメリカニンジンの何れかとすることができる。５番目のハーブは、台湾アデノステマ、長柄菊、及びハートリーフドクダミからなる群から選択される。台湾アデノステマ及びハートリーフドクダミは、入手可能なハーブの文献によれば、台湾にのみ認められる。長柄菊は、台湾ならびに南米で認められる。薬学名、植物学名、科、及び組成物の主要成分を表２に示す。
【００２８】
【表２】
2004518648.tif 000003
【００２９】
ジャノヒゲ（Ｒａｄｉｘ  Ｏｐｈｉｏｐｏｇｏｎｉｓ）は、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）に属する。ジャノヒゲの塊茎（根）は、医学的な効果を有する。ジャノヒゲの最適収穫期は夏である。収穫後、ジャノヒゲの塊茎をきれいに洗って、望ましくない汚れや細根を取り除き、次いで太陽下で乾燥して、後の使用のために保存する。ジャノヒゲ塊茎は、根の大きくなった部分である。ジャノヒゲは、中国の浙江省、四川省、及び江蘇省などで見つけることができた。ジャノヒゲの水性抽出物は、Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．（１９９１），  Ｃｈｉｎａ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍａｔｅｒｉａ  Ｍｅｄｉｃａ，  １６：５８４−５８５によりマウスにおける静脈炭粒子のクリアランスを増強すること、ならびにクロポスアミド（ｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）により生じた白血球減少を中和することが報告された。ハーブ組成物において有効に使用するために、ジャノヒゲ塊茎は水あるいは他の有機溶媒による水性抽出物により調製することができる。このハーブの投薬形態は、水による抽出が好ましい。
【００３０】
トウジン（Ｒａｄｉｘ  Ｃｏｄｏｎｏｐｓｉｔｉｓ  Ｐｉｌｏｓｕｌａｅ）は、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）に属する。トウジンの医学的効果は根にある。トウジンは、野生あるいは栽培のものを集めることができる。トウジンの代表的な収穫期は秋である。収穫後トウジンの根を太陽下で乾燥し、後の使用のためにセグメントに切断した。トウジンは、台湾の南投県及び台中県で見つけることができた。ハーブ組成物において有効に使用するため、該ハーブは水あるいは他の有機溶媒による水性抽出物により調製するか、あるいは原材料のハーブを粉砕した粉末により調製することができる。このハーブの好ましい投薬形態は、水により抽出された水性抽出物あるいは粉砕粉末である。
【００３１】
アメリカニンジン（Ｒａｄｉｘ  Ｐａｎａｃｉｓ  Ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｉ）は、ウコギ科（Ａｒａｌｉａｃｅａｅ）に属する。アメリカニンジンの医学的効果は根にある。アメリカニンジは北アメリカ及びカナダで見つけることができる。また、アメリカニンジンは、フランス及び中国北部でも広く栽培されてきた。アメリカニンジンの最適収穫期は、秋である。ハーブ組成物において有効に使用するために、このハーブは水あるいは他の有機溶媒による水性抽出物、あるいは粉砕粉末の状態に調製することができる。このハーブの好ましい投薬形態は、水により抽出された水性抽出物あるいは粉砕粉末である。
【００３２】
カラスビシャク（Ｔｕｂｅｒ  Ｐｉｎｅｌｌｉａｅ，  Ｒｈｉｚｏｍａ  Ｐｉｎｅｌｌｉａ  Ｔｅｒｎａｔａｅ）は、サトイモ科（Ａｒａｃｅａｅ）に属する。カラスビシャクの塊茎（コルク層を取り除いた後）は、医学的効果を有する。この植物は、中国の四川省、湖北省、河南省、貴州省、及び安徽省で生育する。カラスビシャクの通常の収穫期は、７月から９月の間である。カラスビシャクは、台湾の台中県で見つけることができる。ハーブ組成物において有効に使用するために、このハーブは水あるいは有機溶媒による水性抽出物あるいは粉砕粉末の状態に調製することができる。このハーブの好ましい投薬形態は、水による水性抽出物あるいは粉砕粉末である。
【００３３】
生カンゾウ  （Ｒａｄｉｘ  Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｅ  Ｕｒａｌｅｎｓｉｓ）は、マメ科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）に属する。生カンゾウの根及び走根（ｓｔｏｌｏｎ）は、周皮（ｐｅｒｉｄｅｒｍ）を剥離するしないに関わらず、医学的効果を有する。生カンゾウは、乾燥した原材料に対し２．５％以上のグリチルリチン酸  （Ｃ４２Ｈ６２Ｏ１６）を含み、これは生カンゾウの化学マーカーとして使用することができる。生カンゾウは、内蒙古、甘粛、新疆、及び中国北東部で見つけることができる。生カンゾウの最適収穫期は、春か秋である。台湾では、生カンゾウは台中県で見つけることができる。カンゾウの根は抗炎症性を有し、それだけで喘息の症状を開放するのを助けるのに用いることができる。Ｈ．Ｗ．  Ｍｏｒｎｉｎｇｓｔａｒ，  Ｓｅｎｔｉｅｎｔ  Ｔｉｍｅｓ：  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｆｏｒ  Ｐｅｒｓｏｎａｌ  ａｎｄ  Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  （１９９８），  ６：１６−１７を参照。また、カンゾウの根は気管支炎治療にも有用である。Ｔ．  Ｄａｖｉｄ，  Ｍｉｒａｃｌｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｒａｉｎｆｏｒｅｓｔ：  Ａ  Ｄｏｃｔｏｒ´ｓ  Ｒｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ  Ｗｏｒｋ  Ｗｉｔｈ  Ｃａｎｃｅｒ  Ａｎｄ  ＡＩＤＳ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  （１９９７），  ｐｐ．  ６６−７９を参照。ハーブ組成物において有効に使用するために、本ハーブは、水あるいは他の有機溶媒による水性抽出物、あるは粉砕粉末の状態に調製することができる。好ましい投薬形態は、水による水性抽出物あるいは粉砕粉末である。
【００３４】
長柄菊（Ｈｅｒｂａ  Ｔｒｉｄａｃｉｓ  ｐｒｏｃｕｍｂｅｎｔｉｓ）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する。長柄菊の医学的効果はその乾燥した植物全体から来る。長柄菊は、台湾の南投県、台中県、及びユンリンＹｕｎｌｉｎ県、及び台中市で見つけることができる。また、長柄菊は、南米でも見られている。Ｄｉｗａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｄｉａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  （１９８３），  ２７：  ３２−３６は、長柄菊の葉から抽出された液汁が、外傷縮小及び肉芽におけるデキサメサゾン様の効果を有するが、抗張力（ｔｅｎｓｉｌｅ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ）及び上皮化（ｅｐｉｔｈｅｌｉｚａｔｉｏｎ）におけるデキサメサゾンの効果を有意に抑制することを開示している。Ｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｉｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ａｎｎｕａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  （１９７７），  ８：  ５２６は、長柄菊の葉が炎症の減少、発熱症状の緩和、及び肺炎や風邪の治療に有用であると開示している。
【００３５】
ハーブ組成物において有効に使用するために、長柄菊は水あるいは他の有機溶媒による水性抽出物、又は粉砕粉末の状態に調製することができる。このハーブの好ましい投薬形態は、粉砕粉末あるいはアルコール、好ましくは５０％アルコールによる水性抽出物である。
【００３６】
台湾アデノステマ（Ｈｅｒｂａ  Ａｄｅｎｏｓｔｅｍｍａｔｉｓ）は、キク科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）に属する。台湾アデノステマは、一般に、水辺あるいは湿地に生育する。台湾アデノステマの医学的効果は、フレッシュのあるいは乾燥状態の植物全体から来る。最適収穫期は夏あるいは初秋である。台湾アデノステマは、台湾だけでなく、中国の雲南省、広西省、貴州省、江西省、及び浙江省で見つけることができる。台湾アデノステマは、１１−ヒドロキシル化カウレン酸（１１−ｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅｄ  ｋａｕｒａｎｉｃ  ａｃｉｄ）を含む。ハーブ組成物において有効に使用するために、このハーブは粉砕粉末の状態に調製することができる。このハーブの好ましい投薬形態は粉砕粉末である。
【００３７】
ハートリーフドクダミあるいはドクダミハーブ（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ  Ｈｅｒｂ）（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ  ｃｕｍ  Ｒａｄｉｃｅ  Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａｅ  Ｃｏｒｄａｔａｅ）は、Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ  ｃｏｒｄａｔａ  Ｔｈｕｎｂｅｒｇの地上部である。これは、ドクダミ科（Ｓａｕｒｕｒａｃｅａｅ）に属する。ハートリーフドクダミは、長江流域及び中国南部にかけて生育する。最適収穫期は、晩夏から初秋の花期の間である。Ｈａｎｈｏｎｇ  Ｈｅａｒｔｌｅａｆ  ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａは、台湾の台中県で見られる。ハーブ組成物において有効に使用するために、このハーブは、粉砕粉末の状態に調製できる。このハーブの好ましい投薬形態は、粉砕粉末である。
【００３８】
一般的に、本組成物は次のように調製される。
Ａ．ＳＴＡ−３１、ＳＴＡ−３２、ＳＴＡ−３３、ＳＴＡ−３４、ＳＴＡ−３５、及びＳＴＡ−３６の調製：
（１）  カラスビシャク、生カンゾウ及びアメリカニンジンの根、ならびに長柄菊の植物全体を切断、乾燥、粉砕、及びふるいにかけ（好ましくは４０−１２０メッシュ）、ハーブ粉末を得た。
【００３９】
（２）  ジャノヒゲの根は、細断し、煎出器中で水に浸漬した。水量は、ジャノヒゲの最上部から上方に少なくとも１０ｃｍであった。浸水したジャノヒゲを、９７〜１０３℃で約６０分２回加熱し、ジャノヒゲ抽出液を得た。その後、このジャノヒゲ抽出液を濾過した（約１００メッシュ）。濾液を集め、このジャノヒゲ濾液を５０〜６０℃、４００〜６５０ｍｍ−Ｈｇの減圧下で濃縮し、所望の濃度の液状濃縮物を得た。この液状濃縮物はジャノヒゲ濾液の約１／１４であることが好適であった。
【００４０】
（３）  ジャノヒゲの液状濃縮物を他のハーブのハーブ粉末と混合した。この混合物を流動床式造粒機に移し、濾布（ｆｉｌｔｅｒｅｄ  ｆａｂｒｉｃ）でできたスプレーチューブ中に置いた。造粒機は、９０〜１１０℃にセットした。約５分の予備加熱後、前記混合物を一回あたり約４０〜５５秒で適当な回数スプレーし、スプレーチューブは１０秒に一回の頻度で軽くたたいた。造粒後、顆粒を乾燥及び冷却した。顆粒は、ふるいにかけ、ＰＥバッグに入れた。顆粒の好ましい水分含量は、６％未満であった。顆粒は、さらに、通常用いられる何れのカプセル中にもカプセル化することができる。例えば、天然ゼラチン、ペクチン、カゼイン、コラーゲン、プロテイン、加工澱粉、及びポリビニルピロリドンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４１】
Ｂ．ＳＴＡ−４ハーブ組成物の調製：
ＳＴＡ−４ハーブ組成物は、次の方法で調製した。
【００４２】
Ｉ．長柄菊：
（１）  長柄菊の植物全体を細断した。
（２）  ５０％アルコール  （ｖ／ｖ）（抽出溶媒）約２０部（容量）を、長柄菊の細片約１部（重量）に添加、混合した。
（３）  このハーブを抽出溶媒と一緒に約３０分加熱還流した。この操作により、長柄菊のアルコール抽出物を調製した。
【００４３】
（４）  冷却後、この長柄菊アルコール抽出物を濾過した（約１００メッシュ）。濾液を集め、５０〜６０℃（好ましくは５５℃）、減圧下（３０ｔｏｒｒ）で減圧濃縮し、濃縮物を得た。好ましくは、濃縮物の固形分は、原材料の約７．８重量％である。濃縮物の固形分は、５０％アルコールを除いた濃縮物の量である。長柄菊の場合、濃縮物固形分は濃縮物重量とほぼ同じである（濃縮物中に水がほとんど含まれないため）。
（５）  適量のコーンスターチ（賦形剤）をこの濃縮物に添加しハーブペーストを得た。
（６）  ハーブペーストは、スプレードライ法により乾燥し、長柄菊顆粒を調製した（好ましくは、原材料に対して約４２重量％）。
【００４４】
ＩＩ．カラスビシャク、生カンゾウ及びアメリカニンジン：
（１）  カラスビシャクの塊茎、カンゾウ及びアメリカニンジンの根を、別々に細断した。
（２）  各ハーブについて、約２０部（容量）の水を、各ハーブの細片約１部（重量）にそれぞれ添加、混合した。
（３）  各ハーブは、水に浸漬し、約３０分煎出により加熱して、ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、及びアメリカニンジンの水性抽出物をそれぞれ調製した。
【００４５】
（４）  それぞれの抽出物を冷却後、各抽出物を別々に濾過した（約１００メッシュ）。濾液を各々集め、５０〜６０℃（好ましくは５５℃）、減圧下（３０ｔｏｒｒ）の減圧条件下で濃縮し、各ハーブの液状濃縮物を得た。カラスビシャク濃縮物の固形分は、カラスビシャク原材料に対し約２０％、生カンゾウ濃縮物の固形分は、生カンゾウ原材料に対し約２０％、アメリカニンジン濃縮物の固形分は、アメリカニンジン原材料に対し約２４．３％であることが好適である。カラスビシャク、生カンゾウ、あるいはアメリカニンジンの濃縮物の固形分は、水を除いた濃縮物の量である。
（５）  十分な量のコーンスターチ（賦形剤）を各濃縮物に添加後、スプレードライ法により顆粒化して、それぞれの顆粒を調製した。
（６）  それぞれの顆粒を、長柄菊の顆粒と一緒に混合し、混合顆粒とした。
【００４６】
ＩＩＩ．  ジャノヒゲ：
ジャノヒゲの塊茎は、ＩＩ（１）−（４）の操作に従い濃縮した。ジャノヒゲ濃縮物と、カラスビシャク、生カンゾウ、及びアメリカニンジン濃縮物との唯一の違いは、ジャノヒゲ濃縮物はかなりの量の水を含んでいるが、その他の濃縮物は水をほとんど含まないことであった。９ｇのジャノヒゲ原材料に対し、濃縮物は約５．４ｇで、これは約２．２５ｇの固形分と３．１５ｇの水からなっていた。
ジャノヒゲの液状濃縮物は、その他のハーブの顆粒と混合した。
原材料、ＳＴＡ−３６、及びＳＴＡ−４におけるハーブのｇ重量を下記表３ａに比較して示す。
【００４７】
【表３ａ】
2004518648.tif 000004
【００４８】
表３ａ中、「原材料」の行は、各ハーブの加工前の重量を示す。「ＳＴＡ−３６」及び「ＳＴＡ−４」の行は、（１）各ハーブの最終形態、及び（２）各ハーブの最終重量を示す。例えば、ＳＴＡ−３６において、ジャノヒゲは濃縮物の形態であるが、ジャノヒゲ以外のカラスビシャク、生カンゾウ、アメリカニンジン、及び長柄菊は全てハーブ粉末の形態であった。また、ジャノヒゲはその原材料よりも少ない重量であったが、ＳＴＡ−３６中では、ジャノヒゲ以外のその他のハーブ粉末は、それらの原材料と同じ重量を維持していた。
【００４９】
ＳＴＡ−４においては、ジャノヒゲだけがＳＴＡ−３６中と同じ最終形態、すなわち、濃縮物であった。その他のハーブの抽出、濃縮、及び顆粒化後のｇ重量は、表３ａに示すように、実質的に減少していた。さらに、顆粒化の間の濃縮物の安定化を助けるため、賦形剤  （例えば、コーンスターチ）を各ハーブ濃縮物にそれぞれ添加した。各濃縮物に添加したコーンスターチ量は、濃縮物の安定性により変えた。ＳＴＡ−４とＳＴＡ−３６とは同量の原材料から得られたものであるにもかかわらず、ＳＴＡ−４最終製品は顆粒状で、ＳＴＡ−３６の重量の約半分であった。ＳＴＡ−４は、総ｇ重量は減少したが、ＳＴＡ−３６と同等あるいはそれ以上の免疫学的疾患治療効果を有する。これは、患者が同等あるいはそれ以上の治療効果を得るために２倍量のハーブを取らなくてもよいことを意味し、ＳＴＡ−３６に対するもう一つの改良点となった。
【００５０】
以下の実施例は説明するためのものであり、本発明の範囲を制限するものではない。合理的な技術者が行うような合理的な変更はここに含まれ、本発明の範囲から逸脱するものではない。
【実施例１】
【００５１】
ＳＴＡ−３１、ＳＴＡ−３２、ＳＴＡ−３３、ＳＴＡ−３４、ＳＴＡ−３５、及びＳＴＡ−３６の調製
医薬組成物の内容を表１に、組成物中のハーブ重量を表３に示す。
【００５２】
【表３】
2004518648.tif 000005
【００５３】
医薬組成物の調製方法は、主として前記の一般的な組成物調製方法と同じであった。
（１）  ジャノヒゲ以外の全ての適用ハーブを表３に示すような量で切断、乾燥、粉砕、及びふるいにかけ（好ましくは、４０〜１２０メッシュ）、ハーブ粉末を得た。
（２）  表３に示す量のジャノヒゲを、フライングボイリングコンテナー中で水に浸漬した。水は、ジャノヒゲ最上部の上方少なくとも１０ｃｍであった。浸水したジャノヒゲは、９７〜１０３℃で約６０分加熱を２回行い、ジャノヒゲ抽出液を調製した。ジャノヒゲ抽出液を濾過（約１００メッシュ）し、濾液を集めた。ジャノヒゲ濾液を５０〜６０℃、４００〜６５０ｍｍ−Ｈｇの減圧条件下で濃縮し、所望の濃度の液状濃縮物を得た。液状濃縮物は、ジャノヒゲ濾液の約１／１４であることが好適であった。
【００５４】
（３）  ジャノヒゲの液状濃縮物をその他のハーブのハーブ粉末と混合した。この混合物を、流動床式造粒機に移し、濾布（ｆｉｌｔｅｒｅｄ  ｆａｂｌｉｃ）でできたスプレーチューブに入れた。造粒機は、９０〜１１０℃にセットした。５分間の予備加熱後、前記混合物を１回約４０〜５５秒で適当な回数スプレーし、スプレーチューブは１０秒毎に１回の頻度で軽くたたいた。造粒後、顆粒を乾燥し、冷却した。顆粒をふるいにかけ、ＰＥバックに入れた。顆粒の好ましい水分量は、６％未満であった。顆粒は、さらに、通常用いられる何れのカプセル中にもカプセル化することができる。例えば、天然ゼラチン、ペクチン、カゼイン、コラーゲン、プロテイン、加工澱粉、及びポリビニルピロリドンなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【実施例２】
【００５５】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた医薬組成物の品質管理
ハーブの品質を保証するためにＨＰＬＣ技術を用いた本発明は、充分な管理下にあった。３つのＨＰＬＣ法は、各ハーブの化学的及び生理学的特徴に適合するように改良した。３つのＨＰＬＣ法を以下に説明する。
【００５６】
（Ａ）ＨＰＬＣ分析方法１
方法１は、エンドキャッププレカラムＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  ＲＰ−１８  （５μｍ、４．０  ＩＤ  Ｘ  １０  ｍｍ、メルク）、及びＣｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＭＳカラム（５μｍ、ナカライテスク  ５Ｃ１８−ＭＳ、４．６  ＩＤ  Ｘ  ２５０  ｍｍ）を室温で用いた。カラムの移動相は、（Ａ）  Ｈ２Ｏ：  ＫＨ２ＰＯ４：  １０％  Ｈ３ＰＯ４  （１０００  ｍｌ  ：  ２．７２  ｇ  ：  １  ｍｌ、ｖ／ｗ／ｖ）、（Ｂ）  ＣＨ３ＣＮ、（Ｃ）  Ｈ２Ｏ、及び（Ｄ）  ＣＨ３ＯＨを含むグラジェントであった。溶出グラジエントを表４に示す。流速は１．０ｍｌ／分、検出波長は２５０ｎｍ、分析の総リテンションタイムは６０分であった。
【００５７】
【表４】
2004518648.tif 000006
【００５８】
（Ｂ）ＨＰＬＣ分析方法２
ＨＰＬＣ分析方法２では、エンドキャッププレカラムＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  ＲＰ−１８（５μｍ、４．０  ＩＤ  Ｘ  １０  ｍｍ、メルク）、及びＣｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＭＳカラム（５μｍ、ナカライテスク  ５Ｃ１８−ＭＳ、４．６  ＩＤ  Ｘ  ２５０  ｍｍ）を３５℃で用いた。カラム移動相は、  （Ａ）  １０  ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４  ＋  １０  ｍＭ  Ｋ２ＨＰＯ４  ＋  ０．０１％  Ｈ３ＰＯ４  （ＫＨ２ＰＯ４  ：  Ｋ２ＨＰＯ４  ：  １０％  Ｈ３ＰＯ４  ：  Ｈ２Ｏ ＝ １．３６  ｇ  ：  １．７４  ｇ  ：    １  ｍｌ  ： １０００  ｍｌ）、（Ｂ）  ＣＨ３ＣＮ、（Ｃ）  Ｈ２Ｏ、及び（Ｄ）  ＣＨ３ＯＨを含むグラジエントであった。溶出グラジエントを表５に示した。流速は１．０ｍｌ／分、検出波長は２６０ｎｍ、分析の総リテンションタイムは６０分であった。
【００５９】
【表５】
2004518648.tif 000007
【００６０】
（Ｃ）ＨＰＬＣ分析方法３
ＨＰＬＣ分析方法３では、エンドキャッププレカラムＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ  ＲＰ−１８（５μｍ、４．０  ＩＤ  Ｘ  １０  ｍｍ、メルク）、及びＣｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ１８−ＭＳカラム（５μｍ、ナカライテスク  ５Ｃ１８−ＭＳ、４．６  ＩＤ  Ｘ  ２５０  ｍｍ）を３５℃で用いた。カラム移動相は、（Ａ）  Ｈ２Ｏ：  ＫＨ２ＰＯ４  （１０００  ｍｌ  ：  ２．７２ｇ、ｖ／ｗ）、（Ｂ）  ＣＨ３ＣＮ、（Ｃ）  Ｈ２Ｏ、及び（Ｄ）  ＣＨ３ＯＨを含むグラジエントであった。溶出グラジエントを表６に示した。流速は１．０ｍｌ／分、検出波長は２０３ｎｍ、分析の総リテンションタイムは６０分であった。
【００６１】
【表６】
2004518648.tif 000008
【００６２】
組成物に用いたハーブのＨＰＬＣ分析は、各ハーブの方法、主要マーカー、ならびに検出波長を含み、それらを表７に要約する。ＳＴＡ−３６ハーブのＨＰＬＣクロマトグラムを図１〜５に示す。
【００６３】
【表７】
2004518648.tif 000009
【００６４】
ＨＰＬＣ分析の前に、０．５ｇのハーブサンプルを７０％メタノール含有溶液２０ｍｌと混合した。サンプル溶液を室温で１５分間超音波処理し、４０℃の回転式水槽中に１６０ｒｐｍの回転速度で２０分間置いた。その後、サンプル溶液を約３０分間放置して、残渣を沈降させた。１０ｍｌの上澄液をピペットで採り、０．４５μｍのフィルターを通した。濾液をＨＰＬＣ分析のために用意した。２０μｌの濾液をＨＰＬＣ分析に供した。
【００６５】
結果：
ジャノヒゲのＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。表７に示すように、ＨＰＬＣ分析方法１を２１４ｎｍでジャノヒゲを検出するのに用いた。６１１５−１及び６１１５−２の２つの別々のピークが、ジャノヒゲＨＰＬＣクロマトグラムで認められた。６１１５−１のリテンションタイムは１１．５分、６１１５−２のリテンションタイムは１３分であった。これら２つのピークの化学的成分はまだ同定されていないが、ジャノヒゲの品質を保証する目的のために使用することが可能であった。
【００６６】
カラスビシャクのＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。表７に示すように、ＨＰＬＣ分析方法２を用いて波長２５０ｎｍでカラスビシャクを検出すると、カラスビシャクは２つの特有の化学マーカー、すなわち、アデニンとグアノシンを示した。両者は、核酸の構成成分である。また、アデニンは、血清アルドラーゼを上昇する効果も有する。アデニンのリテンションタイムは１４．８分、グアノシンのリテンションタイムは１７分であった。
【００６７】
図３に生カンゾウのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。表７のように、ＨＰＬＣ分析方法１を用いて波長２５０ｎｍで生カンゾウを検出すると、化学マーカーである「グリチルリチン」が生カンゾウのＨＰＬＣクロマトグラムに認められた。グリチルリチン（Ｃ４２Ｈ６２Ｏ１６）は、非常に甘みのある物質で、解毒作用、抗炎症作用、及び溶血作用を有すること、ならびにアジソン病の治療に用いられることが知られている。グリチルリチンのリテンションタイムは４６．４分である。
【００６８】
アメリカニンジンのＨＰＬＣクロマトグラムを図４に示す。表７のように、方法３を用いて波長２０３ｎｍでアメリカニンジンを検出すると、化学マーカーである「ジンセノシド（ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｂ１」がアメリカニンジンのＨＰＬＣクロマトグラムにおいて認められた。ジンセノシドＲｂ１は、血管拡張、疲労回復、溶血回避において医学的な効果を有する。
【００６９】
長柄菊のＨＰＬＣクロマトグラムを図５に示す。表７のように、ＨＰＬＣ分析方法１を用いて波長２５０ｎｍで長柄菊を検出すると、４つの特有のピークであるＦＹ−１〜ＦＹ−４が認められた。ＦＹ−１のリテンションタイムは２８．０分、ＦＹ−２のリテンションタイムは３１．６分、ＦＹ−３のリテンションタイムは３３．５分、ＦＹ−４のリテンションタイムは１８．３分であった。これら４つのピークは常に認められるので、これら４つのピークに関連する化学的成分はまだ同定されていないけれども、これらを長柄菊の同定ならびに品質保証の目的のために使用することができた。
【実施例３】
【００７０】
生カンゾウ、ジャノヒゲ、カラスビシャク、及び長柄菊の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）特性試験
生カンゾウ、ジャノヒゲ、カラスビシャク、及び長柄菊などのＳＴＡ−３６組成物で使用したいくつかのハーブは、ＨＰＬＣの他に、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）法により評価することができる。
【００７１】
ＴＬＣ法は、シリカゲル６０  Ｆ２５４固定相（ＴＬＣプレートに結合している）、及び、ハーブの特徴に応じて３つの移動相（あるいは解離）溶媒を用いた。第１の溶媒は、酢酸エチル、４Ｎアンモニア水、及びエタノールを容量比４  ：  １  ：  ２  （ｖ／ｖ／ｖ）で含んでいた。この第１溶媒は、生カンゾウの特性試験に特に有用であった。第２の溶媒は、ブタノール、４Ｎアンモニア水、及びエタノールを容量比５  ：  ２  ：  １  （ｖ／ｖ／ｖ）で含んでいた。この第２溶媒は、ジャノヒゲ及びアメリカニンジンの特性試験に特に有用であった。第３の溶媒は、クロロホルム（ＣＨＣｌ３）及びメタノールを容量比５  ：  １  （ｖ／ｖ）で含んでいた。この第３溶媒は、長柄菊の特性試験に特に有用であった。それぞれのＴＬＣ分析において、５μｌのサンプルをＴＬＣプレートの開始点に添加した。プレートを、移動相溶媒が入ったＴＬＣチャンバー内に置き、溶媒を９ｃｍ上方まで移動させた。ＴＬＣ分析結果を以下に記載する。
【００７２】
（Ａ）生カンゾウ
生カンゾウは、ＴＬＣプレートに付着したシリカゲル  ６０  Ｆ２５４  固定相、及び酢酸エチル  ：  ４Ｎアンモニア水  ：  エタノール＝  ４：１：２  （ｖ／ｖ／ｖ）を含む移動相溶媒  を用いたＴＬＣにより分析した。サンプル添加後、ＴＬＣプレートを、移動相溶媒の最上部の液線がサンプル添加点より高くならないように移動相溶媒を入れたＴＬＣチャンバー内に置いた。溶媒をサンプル添加点から９ｃｍ上方まで移動させ、その後、ＴＬＣプレートをＴＬＣチャンバーから取り出し、風乾した。乾かしたＴＬＣプレートにバニリン／Ｈ２ＳＯ４を含む噴霧試薬をスプレーした。その後、プレートを１０５℃で２分間加熱して活性化した。生カンゾウを示す黄色のスポットをプレート上約Ｒｆ＝０．５に認めた。Ｒｆ＝（スポットとサンプル添加点の間の距離［ｃｍ］／総移動距離［すなわち、９ｃｍ］である。
【００７３】
（Ｂ）ジャノヒゲ
ジャノヒゲは、ＴＬＣプレート付着シリカゲル  ６０  Ｆ２５４  固定相、及びブタノール：  ４Ｎアンモニア水  ：  エタノール＝  ５：２：１  （ｖ／ｖ／ｖ）  を含む移動相溶媒を用いたＴＬＣにより分析した。サンプル添加後、ＴＬＣプレートを、移動相溶媒の最上液線がサンプル添加点より高くならないように移動相溶媒を入れたＴＬＣチャンバー内に置いた。溶媒をサンプル添加点から９ｃｍ上方まで移動させ、その後、ＴＬＣプレートをＴＬＣチャンバーから取り出して風乾した。乾かしたＴＬＣプレートに、バニリン／Ｈ２ＳＯ４を含む噴霧試薬をスプレーし、１０５℃で２分間加熱してプレートを活性化した。ジャノヒゲを示す褐色のスポットをプレート上約Ｒｆ＝０．４に認めた。
【００７４】
（Ｃ）アメリカニンジン
アメリカニンジンは、ＴＬＣプレート付着シリカゲル  ６０  Ｆ２５４固定相、及びブタノール：  ４Ｎアンモニア水  ：  エタノール＝  ５：２：１  （ｖ／ｖ／ｖ）を含む移動相溶媒を用いたＴＬＣにより分析した。サンプル添加後、ＴＬＣプレートを、移動相溶媒の最上液線がサンプル添加点より高くならないように移動相溶媒を入れたＴＬＣチャンバー内に置いた。溶媒をサンプル添加点から９ｃｍ上方まで移動させ、その後、ＴＬＣプレートをＴＬＣチャンバーから取り出して風乾した。乾かしたＴＬＣプレートに、バニリン／Ｈ２ＳＯ４を含む噴霧試薬をスプレーし、１０５℃で２分間加熱してプレートを活性化した。アメリカニンジンを示す紫がかったスポットをプレート上約Ｒｆ＝０．３に認めた。
【００７５】
（Ｄ）長柄菊
長柄菊は、ＴＬＣプレート付着シリカゲル  ６０  Ｆ２５４固定相、及びクロロホルム  ：  メタノール＝  ５  ：  １  （ｖ／ｖ）  を含む移動相溶媒を用いたＴＬＣにより分析した。サンプル添加後、ＴＬＣプレートを、移動相溶媒の最上液線がサンプル添加点より高くならないように移動相溶媒を入れたＴＬＣチャンバー内に置いた。溶媒をサンプル添加点から９ｃｍ上方まで移動させ、その後、ＴＬＣプレートをＴＬＣチャンバーから取り出して風乾した。乾かしたＴＬＣプレートをＵＶ検出器の下に置き、波長３６６ｎｍで検出した。長柄菊を示す淡黄色の蛍光スポットをプレート上約Ｒｆ＝０．３に認めた。
【実施例４】
【００７６】
マウスのアレルゲン誘発性ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩＬ−４における５つの漢方煎薬製剤の効果
アレルゲン誘発性免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）抑制、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）合成、及びインターロイキン−４  （ＩＬ−４）遺伝子発現における５種の漢方煎薬製剤の効果を、Ｄ．Ｐ．（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ）アレルゲン「Ｄｅｒ  ｐ  ５」で感作したＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて調べた。Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  は、ハウスダストダニで、抗原として作用し、アトピーのヒトにアレルギー性喘息反応を引き起こす。
５つの漢方煎薬製剤を表８に示す。これらの漢方煎薬群は、喘息などの肺関連病の患者の治療に特に効果があることが知られている。
【００７７】
【表８】
2004518648.tif 000010
【００７８】
試験方法：
（Ａ）ハーブ材料の調製：
上記ハーブ製剤各５０ｍｇ  （全てＳｕｎ  Ｔｅｎ  Ｓｃｉ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｃｏｒｐ．，  Ｔａｉｐｅｉ，  Ｔａｉｗａｎから）をそれぞれ別々に１８０μｌのツイーン８０と混合し、ホモジナイズした（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ  ＤＣ−３Ｓ，  Ｘｉｎｇｕａｎｇ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｌｉｍｉｔｅｄ，  Ｉｎｃ．，  Ｔａｉｗａｎ）。水をホモジネートに添加して終容量２ｍｌ、終濃度２５ｍｇ／ｍｌとした。各マウスに、このハーブ組成物溶液の１種、あるいはプラセボを０．４ｍｌ／２０ｇ  体重、１日おきに１４日間投与した。
【００７９】
（Ｂ）動物
４〜６週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ−ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ  ｏｆ  Ｃｈｉｎａから入手し、試験に用いた。マウスは、各実験で週齢、性別を合わせた。
【００８０】
（Ｃ）アレルゲン  Ｄｅｒｐ５  （Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ  ｇｒｏｕｐ  ５  ａｌｌｅｒｇｅｎ）の精製
ｐＧＥＸ−２Ｔプラスミドを用い、大腸菌中でＤｅｒ  ｐ  ５−グルタチオン  Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を発現させた。融合タンパクの分子量は、約４２ｋＤであった。このタンパクをグルタチオン結合アガロースゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  陽性細菌株の単一コロニーを、アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）を含むＬＢ培養液上でトランスフェクトした大腸菌を増殖させることにより選別した。このＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  陽性大腸菌コロニーをさらに培養して相当量のＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴを生産した。その後、この細菌培地を集め、遠心分離した。上澄液を除き、ペレットをＴＢＳ（ｐＨ７．５）で洗浄し、遠心管中に集めた。ＴＢＳ洗浄後直ちに、０．１Ｍフェニルメチルスルホニルフッ化物をペレットに添加し、次いでデオキシリボヌクレアーゼ  Ｉ（ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ツイーン２０、及びリゾチームを添加した。ペレットを凍結融解操作により溶菌して、Ｄｅｒ  ｐ  ５  ＋  ＧＳＴタンパクを放出させた。次に、ＥＤＴＡを細胞溶菌液に添加し、その後、遠心分離した。ペレットを除き、上澄液をグルタチオン結合アガロースゲルカラム吸着カラムに注入し、Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  タンパクをカラムに吸着させた。カラムを最初に４℃のＴＢＳ緩衝液により洗浄し、その後トリス塩基（ｐＨ８．０）中還元グルタチオンで洗浄して、アガロースゲルカラムからＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴを分離した。Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  タンパクの純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認した。タンパクの定量は、通常のタンパク分析法により測定した。
【００８１】
（Ｄ）動物感作
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、初め１０μｇのＤｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ｇｒｏｕｐ  ５  （Ｄｅｒ  ｐ  ５）  アレルゲン及び４ｍｇの水酸化アルミニウム（Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｐｕｎｃｈｂｏｗｌ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）で腹腔内感作した。最初の感作の７日後、プラセボコントロールグループを除いたマウスに漢方煎薬を与えた。
【００８２】
最初の感作から３週間後、マウスに再度Ｄｅｒ  ｐ  ５を追加注射した。２回目の追加注射から３日後、マウスを円形のプラスティック容器に入れ、マウスをさらに０．１％Ｄｅｒ  ｐ  ５スプレーで惹起した。
追加注射後毎回、翌日に各マウスの尾部静脈から５０μｌの血液を採取した。血液は室温で１時間放置後、遠心分離した。血清を集め、後述のＥＬＩＳＡ分析のために−８０℃で保存した。
【００８３】
（Ｅ）Ｄｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ及びＩｇＥの測定
Ｄｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ及びＩｇＥの量を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定した。タンパク高結合プレートをコーティング緩衝液（０．１  Ｍ  ＮａＨＣＯ３、ｐＨ  ８．２）で５μｇ／ｍｌの濃度に希釈した精製Ｄｅｒ  ｐ  ５  １００μｌでコーティングした。４℃で一晩インキュベーションした後、プレートを３回洗浄し、３％（ｗｔ／ｖｏｌ）ＢＳＡ−ＰＢＳ緩衝液で２５℃で２時間ブロックした。血清を、ＩｇＧ測定には１：１００希釈で、ＩｇＥ測定には１：１０希釈で、デュプリケートで用いた。４℃で一晩インキュベーションした後、０．０５％ゼラチン緩衝液で希釈したビオチン結合モノクローナルラット抗マウスＩｇＥｍＡｂ、あるいはラット抗マウスＩｇＧｍＡｂをもう１時間添加した。アビジン−アルカリフォスファターゼ（１：１０００）を添加し、２５℃で１時間インキュベートした後、６回洗浄した。フォスファターゼ基質ｐ−ニトロフェニルフォスフェート２ナトリウムを添加して、呈色反応を行った。プレートはマイクロプレートオートリーダー（Ｍｅｔｅｒｔｅｃｈ，  Ｔａｉｗａｎ）で４０５ｎｍで読みとった。読みとりには、マウス抗ＴＮＰｍＡｂ、ＩｇＧ１（１０７．３）、ＩｇＧ２ａ（Ｇ１５５−１７８）、及びＩｇＥ（ＩｇＥ−３）の市販アイソタイプ標品を参照した。
【００８４】
（Ｆ）ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応）による脾細胞中のＩＬ−４遺伝子の発現
Ｄｅｒ  ｐ  ５  アレルゲンで感作及び惹起後、表８記載の５つのハーブ煎薬あるいはプラセボでそれぞれ処置したＢＡＬＢ／ｃマウスから脾細胞を分離した。この脾細胞をＤｅｒ  ｐ  ５（１５μｇ／ｍｌ）で４時間インキュベートした。ＲＮＡをＴｒｉｄｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｕ．Ｓ．Ａ）を用いて抽出した。抽出したＲＮＡは、Ｒｅａｄｙ  ｔｏ  ｇｏ  Ｔ−Ｐｒｉｍｅｄ  Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｋｉｔ  （Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｃｈ，  ＵＳＡ）を用いたｃＤＮＡ産生に使用した。ｃＤＮＡは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のテンプレートとして用いた。次の配列を有する一対のＩＬ−４特異的プライマーをＩＬ−４遺伝子のＰＣＲ増幅及び検出に用いた。
2004518648.tif 000011
【００８５】
また、次の配列を有する一対のＨＰＲＴ（ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ）特異的プライマーを、ＨＰＲＴのＰＣＲ増幅及び検出に用いた。
2004518648.tif 000012
ＰＣＲ条件は次の通り：９５℃変性を５分間、続いて、９５℃１分間、７２℃１分間、５５℃３分間のサイクルをサーモサイクラー（Ｔｈｅｒｍｏ−ｃｙｃｌｅｒ）中で３５サイクル。ＰＣＲ産物は、２％アガロースゲルで電気泳動した。
【００８６】
（Ｇ）統計学的分析
Ｄｅｒ  ｐ  ５惹起後のＤｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩＬ−４／ＨＰＲＴ比の変化を評価するために、ＡＮＯＶＡについて繰り返し測定を行い、グループ間の差異を比較した。分散分析の後、ダンカン多重範囲検定（Ｄｕｎｃａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒａｎｇｅ  ｔｅｓｔ）を用いて、試験グループとコントロールグループの間の差を調べた。ｐ＜０．０５は、統計学的有意差を示すのに使用した。
【００８７】
結果：
図６に示すように、Ｄｅｒ  ｐ  ５惹起後５種の漢方煎薬で処置したマウスのＩｇＧ及びＩｇＥレベルは、コントロール（プラセボ）グループに対して有意差はなかった。瀉白散グループ（Ａ）、小青竜湯グループ（Ｂ）、麦門冬湯グループ（Ｃ）、清燥救肺湯グループ（Ｄ）、蘇子降気湯グループ（Ｅ）、及びプラセボグループ（Ｆ）におけるＩｇＧのＥＬＩＳＡユニットは、それぞれ７０．９±４２、６２．５±４４、６３．３±４４、６３．３±４３、５９．７±３８、及び６７．４±４２であった。瀉白散グループ（Ａ）、小青竜湯グループ（Ｂ）、麦門冬湯グループ（Ｃ）、清燥救肺湯グループ（Ｄ）、蘇子降気湯グループ（Ｅ）、及びプラセボグループ（Ｆ）におけるＩｇＥのＥＬＩＳＡユニットは、それぞれ９９．３±２３、１０６．３±３４、１０４．９±２３、１０５．７±２３、９３．９±２１、及び９７．８±１９であった。
【００８８】
図６の結果は、５つの漢方煎薬はＩｇＥ産生を抑制しなかったことを示すものである。
図７のように、麦門冬湯は、ＩＬ−４／ＨＰＲＴにおいて有意な減少を示したが、これ以外の漢方煎薬は、ＩＬ−４遺伝子産生の抑制に関して効果がない。
【実施例５】
【００８９】
マウスのアレルゲン誘発性ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩＬ−４におけるＳＴＡ−３１、ＳＴＡ−３２、ＳＴＡ−３３、ＳＴＡ−３４、ＳＴＡ−３５、及びＳＴＡ−３６中の各ハーブの効果
ジャノヒゲ、カラスビシャク、生カンゾウ、及びトウジンの各ハーブ、ならびにＳＴＡ−３６のアレルゲン誘発性ＩｇＧ、ＩｇＥ、及びＩＬ−４における効果を、Ｄ．Ｐ．アレルゲン「Ｄｅｒ  ｐ  ５」感作ＢＡＬＮ／ｃマウスを用いて調べた。試験方法は、前記実施例５に記載した方法と同じであった。
【００９０】
結果：
アレルゲン  Ｄｅｒ  ｐ  ５惹起後ジャノヒゲ、トウジン、カラスビシャク、及び生カンゾウで処置したマウス血清中のＩｇＧレベルを図８に示す。この結果により、ジャノヒゲ、トウジン及びカラスビシャク処置と、プラセボ処置との間にＩｇＧレベルの有意差がないことが示された。生カンゾウ処置後のＩｇＧレベルは、プラセボ処置の場合よりも有意に低かった。
しかし、図９のように、Ｄｅｒ  ｐ  ５惹起後ジャノヒゲ、トウジン、及びＳＴＡ−３６組成物で処置したマウス血清中のＩｇＥレベルはプラセボの場合よりも有意に低かった。実際、ＳＴＡ−３６組成物処置後、ＩｇＥレベルは、２．５倍以上低下した。カラスビシャク及び生カンゾウ処置後のＩｇＥレベルは、プラセボ処置の場合に対して有意差はなかった。
【００９１】
図１０のように、Ｄｅｒ  ｐ  ５惹起後ジャノヒゲ、トウジン、カラスビシャク、及び生カンゾウでそれぞれ処置したマウスの脾細胞におけるＩＬ−４遺伝子の発現（ＲＴ−ＰＣＲにより測定、ＩＬ−４／ＨＰＲＴ比で表す）は、プラセボ処置に対し有意差はなかった。しかし、ＳＴＡ−３６処置後のＩＬ−４遺伝子の発現は、プラセボよりも有意に低下し、ＳＴＡ−３６がＩＬ−４遺伝子の発現をダウンレギュレーションできることを示した。
【実施例６】
【００９２】
動物中のＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩＬ−４及びＩＦＮ−γの測定方法
アレルゲン誘発性免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、及びインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の抑制におけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４ハーブ組成物ならびに各ハーブの効果をＤ．Ｐ．（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ）アレルゲン「Ｄｅｒ  ｐ  ５」感作ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて調べた。Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓは、ハウスダストダニで、抗原として作用し、アトピーのヒトにアレルギー性喘息反応を引き起こす。
【００９３】
試験方法：
（Ａ）動物
４〜６週齢、体重約２０ｇの雌ＢＡＬＢ／ｃマウスをｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ−ｂｒｅｅｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ，  Ｒｅｐｕｂｌｉｃ  ｏｆ  Ｃｈｉｎａから入手し、試験に用いた。マウスは、各実験で週齢、性別を合わせた。
【００９４】
（Ｂ）アレルゲン  Ｄｅｒｐ５  （Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ  ｇｒｏｕｐ  ５  ａｌｌｅｒｇｅｎ）の精製
ｐＧＥＸ−２Ｔプラスミドを用いて、大腸菌中でＤｅｒ  ｐ  ５−グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を発現させた。融合タンパクの分子量は、約４２ｋＤであった。このタンパクをグルタチオン結合アガロースゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  陽性細菌株の単一コロニーを、アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）を含むＬＢ培養液上でトランスフェクトした大腸菌を増殖させることにより選別した。このＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ陽性大腸菌コロニーをさらに培養して相当量のＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴを生産した。その後、この細菌培地を集め、遠心分離した。上澄液を除き、ペレットをＴＢＳ（ｐＨ７．５）で洗浄し、遠心管中に集めた。ＴＢＳ洗浄後直ちに、０．１Ｍフェニルメチルスルホニルフッ化物をペレットに添加し、次いでデオキシリボヌクレアーゼ  Ｉ（ＤＮａｓｅ  Ｉ）、ツイーン２０、及びリゾチームを添加した。ペレットを凍結融解操作により溶菌して、Ｄｅｒ  ｐ  ５  ＋  ＧＳＴタンパクを放出させた。次に、ＥＤＴＡを細胞溶菌液に添加し、その後、遠心分離した。ペレットを除き、上澄液をグルタチオン結合アガロースゲルカラム吸着カラムに注入し、Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  タンパクをカラムに吸着させた。カラムを最初に４℃のＴＢＳ緩衝液により洗浄し、その後トリス塩基（ｐＨ８．０）中還元グルタチオンで洗浄して、アガロースゲルカラムからＤｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴを分離した。Ｄｅｒ  ｐ  ５−ＧＳＴ  タンパクの純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより確認した。タンパクの定量は、通常のタンパク分析法により測定した。
【００９５】
（Ｃ）動物感作
ＢＡＬＢ／ｃマウスを、初めに１０μｇのＤｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ｇｒｏｕｐ  ５（Ｄｅｒ  ｐ  ５）アレルゲン及び４ｍｇの水酸化アルミニウム（Ｗｙｅｔｈ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，  Ｐｕｎｃｈｂｏｗｌ，  Ａｕｓｔｒａｌｉａ）で腹腔内感作した。最初の感作の７日後、プラセボコントロール群を除いたマウスにＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４ハーブ組成物を２１日目の終わりまで与えた。
２１日めの最後に、マウスにＤｅｒ  ｐ  ５の２回目の追加注射を行った。２回目の追加注射から４８時間後、マウスを円形のプラスティック容器に入れ、０．１％Ｄｅｒ  ｐ  ５スプレーでさらに惹起した。
【００９６】
惹起から数時間後、マウスを１００ｍｇ／ｍｌフェノバルビタールで麻酔した。尾部静脈又は心臓から血液を採取した。血液は室温で１時間放置後、１０００ｒｐｍで約１０分間遠心分離し、血清を集め、後述のＩｇＥ及びＩｇＧ２ａのＥＬＩＳＡ分析のために−８０℃で保存した。肺胞洗浄から集めた流動体を１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その上澄液をサイトカイン、インターロイキン−４  （ＩＬ−４）及びインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）の分析に用いた。流動体のペレット（細胞を含む）は、ＰＢＳを用いて再度分離し、炎症細胞に対しサイトスピンカウント（ｃｙｔｏｓｐｉｎ  ｃｏｕｎｔ）を行った。
【００９７】
（Ｄ）Ｄｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ及びＩｇＥのＥＬＩＳＡ分析
Ｄｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ及びＩｇＥの量を酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定した。高タンパク高結合マイクロウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，  Ｎｏ．  ３５９０）をコーティング緩衝液（３％ＢＳＡ含有ＰＢＳ溶液、ｐＨ７．４）で５μｇ／ｍｌの濃度に希釈した精製Ｄｅｒ  ｐ  ５  １００μｌ（１０ｍｇ／ｍｌ）でコーティングした。４℃で一晩インキュベーションした後、プレートを０．０５％ツイーン２０含有ＰＢＳ溶液（ｐＨ７．４）中で３回洗浄し、３％（ｗｔ／ｖｏｌ）ＢＳＡ−ＰＢＳ緩衝液で２５℃で２時間ブロックした。
【００９８】
血清を、ＩｇＧ測定には１：１００希釈で、ＩｇＥ測定には１：１０希釈で、デュプリケートで用いた。４℃で一晩インキュベーションした後、０．０５％ゼラチン緩衝液中希釈したビオチン結合モノクローナルラット抗マウスＩｇＥｍＡｂ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  ０２１２２Ｄ）、あるいはラット抗マウスＩｇＧｍＡｂ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅ，  ０２０２２Ｄ）をさらに２時間添加した。アビジン−アルカリフォスファターゼ（１：１０００）  （Ｓｔｒｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＰ，  ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １３０４３Ｅ）を添加し、２５℃で１時間インキュベートした後、６回洗浄した。フォスファターゼ基質ｐ−ニトロフェニルフォスフェート２ナトリウム（ｐＮＰＰ  ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ，  Ｓｉｇｍａ  Ｎ−２７７０）を添加して、呈色反応を行った。プレートはマイクロプレートオートリーダー（ＥＬＩＳＡ  ｒｅａｄｅｒ，  Ｄｙｎｅｘ  ＭＲＸ）で４０５ｎｍで読みとった。読みとりには、マウス抗ＴＮＰｍＡｂ、ＩｇＧ１（１０７．３）、ＩｇＧ２ａ（Ｇ１５５−１７８）、及びＩｇＥ（ＩｇＥ−３）の市販のアイソタイプ標品を参照した。
【００９９】
（Ｅ）サイトカイン（ＩＬ−４及びＩＦＮ−γ）のＥＬＩＳＡ測定
高タンパク高結合マイクロウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ，  Ｎｏ．  ３５９０）を、精製抗サイトカイン抗体（ＩＬ−４にはＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １８１９１ＤからのＩＬ−４抗体２μｇ／ｍｌを用い、ＩＦＮ−γには、３μｇ／ｍｌのＩＦＮ−γ抗体、ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １８１８１Ｄを用いた）でコーティングした。このプレートを３％ＢＳＡ含有ＰＢＳ溶液でコーティング後、０．０５％ツイーン２０含有ＰＢＳ溶液、ｐＨ７．４で洗浄した。
【０１００】
肺胞の流動物からの上澄液１００μｌをマイクロウエルにサイトカイン標準液と一緒に添加し、４℃で一晩反応した。その後、ビオチン−抗マウスＩＬ−４  （ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １８０４２Ｄ，  １μｇ／ｍｌ）あるいはビオチン−抗マウスＩＦＮ−γ  （ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １８１１２Ｄ，  １μｇ／ｍｌ）  １００μｌをマイクロウエルに添加した。２時間反応後、１００μｌのアビジン−アルカリホスファターゼ  （１：１０００）  （ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＡＰ，  ＰｈａｒＭｉｎｇｅ  １３０４３Ｅ）をマイクロウエルに添加し、１時間振盪した。２００μｌのフォスファターゼ基質ｐ−ニトロフェニルフォスフェート２ナトリウム（ｐＮＰＰ  ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ，  Ｓｉｇｍａ  Ｎ−２７７０）をマイクロウエルに添加し、発色させた。プレートは、マイクロプレートオートリーダー（ＥＬＩＳＡ  ｒｅａｄｅｒ，  Ｄｙｎｅｘ  ＭＲＸ）で４０５ｎｍで読みとった。
【０１０１】
（Ｆ）肺機能の測定
１００ｍｇ／ｍｌのフェノバルビタールをマウスに静脈注射後、ＰＥ５０チューブを気管に挿入した。チューブを圧力検出装置に接続し、吸入及び呼気の間の呼吸圧の変化を測定した。別のＰＥ５０チューブを食道に挿入し、食道肺内外圧差（ＴＰＰ）の代用として食道圧を測定した。圧力シグナルをＢｉｏ−Ｒｅｃｏｒｄｅｒ  ＢＲ８０００に送り、シグナルを増幅して呼吸及び食道肺内外圧差の量に変換し、気管圧を算出した。試験の間、針を尾部静脈に保持してアセチルコリン（Ａｃｈ）注射を行い、気管圧の変化を誘発した。
【０１０２】
（Ｇ）統計
試験データは全て、「平均値±平均標準誤差」で算出した。ＰＣ  １００に変換後アセチルコリンにより誘発された気管抵抗性変化（ｔｒａｃｈｅａ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｃｈａｎｇｅ）はμｇ／ｋｇで測定した。ＩｇＥ及びＩｇＧ２ａ測定は、光吸収値に基づいて示した。アンペアドスチューデント検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ  ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｔ  ｔｅｓｔ）を用いて、グループ間の有意差を決定した。ｐ＜０．０５は、統計学的有意差を示すのに用いた。
【実施例７】
【０１０３】
ＩｇＧ及びＩｇＥにおけるハーブの水性抽出の効果
様々な水性抽出方法をアメリカニンジン及び長柄菊に試みて、ハーブ組成物に用いる水性抽出物の最適な形態を決定した。
【０１０４】
（１）  粉末、（２）９５％アルコール抽出物、（３）水抽出物、及び（４）５０％アルコール抽出物の形態のアメリカニンジンをＩｇＥ及びＩｇＧ２ａの抑制における医学的効果について試験した。図１１のように、５０％アルコールで抽出されたアメリカニンジンは、ＩｇＧ２ａ減少におけるアメリカニンジンの効果は９５％アルコールで抽出された場合ほど良くなかったにもかかわらず、最も高いＩｇＥ抑制効果を示した。抗原誘発性免疫学的疾患は、主としてＩｇＥ介在性疾患であるので、ハーブ組成物中に５０％アルコール抽出のアメリカニンジンを用いることは、組成物に対して最もよいＩｇＥ減少結果を与えるように思われる。しかし、アメリカニンジンのアルコール抽出物から調製した顆粒を他の顆粒に添加すると、アメリカニンジンの水抽出物から調製した顆粒は、ＩｇＥ抑制及びＩｇＧ上昇の両方においてより高い効果を発揮した。よって、ＳＴＡ−４組成物においてアメリカニンジンは水により抽出した。
【０１０５】
（１）粉末、（２）９５％アルコール抽出物、（３）水抽出物、及び（４）５０％アルコール抽出物の長柄菊についても、ＩｇＥ、ＩｇＧ２ａ、ＩＬ−４及びＩＦＮ−γの抑制における医学的効果を試験した。図１２に示すように、長柄菊の水抽出物は、ＩＬ−４及びＩＦＮ−γを最も抑制する効果を示したが、５０％アルコールで抽出した長柄菊は、最も高いＩｇＥ及びＩｇＧ２ａ抑制効果を示した。しかし、長柄菊の水抽出物は試験中動物の血液凝固を誘発したので、ヒトに使用することは検討しなかった。
【実施例８】
【０１０６】
ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩＬ−４、ＩＦＮ−γ及び肺機能におけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４の効果の比較
ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩＬ−４、及びＩＦＮ−γ、ならびに肺機能におけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４のハーブ組成物の医学的効果の比較検討を、前記実施例３記載の試験動物で行った。検討の結果を図１３〜１５に示した。
【０１０７】
図１３にマウスのＩｇＧ及びＩｇＥにおけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４のハーブ組成物の効果の比較検討を示した。図１３のように、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４ハーブ組成物は共に、コントロールに比較してＩｇＥ抑制効果を示し、ＳＴＡ−４の効果はＳＴＡ−３６よりも大きかった。ＳＴＡ−４によるＩｇＥ抑制効果は、コントロールに対して統計的に有意であった。しかしながら、ＳＴＡ−３６もＳＴＡ−４もＩｇＧにおける抑制効果を示さなかった。実際には、逆に、ＩｇＧレベルは、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４処置群共にコントロールに比較して増加した。
【０１０８】
図１４に、マウスの肺機能におけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４の効果を示した。ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４は共に、コントロールよりも肺機能の有意な改善を示した（ｐ＜０．０５）。おそらく各試験群において動物の数が十分でなかったことによると思われるが、ＳＴＡ−４及びＳＴＡ−３６の間の値には有意差はなかったけれども、ＳＴＡ−４はＳＴＡ−３６よりも肺機能の改善を示した。
【０１０９】
図１５に、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩＬ−４及びＩＦＮ−γにおける、ＳＴＡ−４の効果をケトチフェン、プレドニゾロン、及びアミノフィリンという通常の喘息薬と比較した。その結果、ＳＴＡ−４だけがＩｇＥの有意な減少と、ＩｇＧ、ＩＬ−４、及びＩＦＮ−γの有意な増加を示し、ＳＴＡ−４がケトチフェン、プレドニゾロン、及びアミノフィリンよりも喘息治療において良好な治療効果を有することが示唆された。
【０１１０】
また、図１５の結果は、ＳＴＡ−４の治療効果は、前記喘息薬がＩＬ−４の合成を抑制し、これが間接的にＩｇＥレベルを減少させるという通常のメカニズムとは異なるかもしれないことを示唆した。本発明の場合、ＳＴＡ−４摂取後ＩＬ−４及びＩＦＮ−γは大幅に増加したので、ＩｇＥの減少はＩＬ−４の減少によるものではなかった。逆に、ＩＦＮ−γ（ＴＨ１細胞により産生及び分泌された）の量は、ＳＴＡ−４処置後有意に増加した。ＩＦＮ−γは、Ｂ細胞を刺激し、ＩｇＧ２ａを合成、分泌するが、これはＳＴＡ−４処置の間ＩｇＧ２ａ量がなぜ増加したのかということを説明するものである。このように、ＳＴＡ−４の効果は、少なくとも部分的にＩｇＧ２ａに由来し、これがアレルゲンとの２回目の接触でアレルゲンと相互作用してアレルギー性反応を減少させると仮定される。
【実施例９】
【０１１１】
ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４ハーブ組成物の毒性試験
ハーブ組成物を、２８日間の亜急性経口毒性試験により毒性を試験し、死亡率、眼科診察、臨床的徴候、及び全体剖検について調べた。結果を表９〜１１に示した。
【０１１２】
【表９】
2004518648.tif 000013
【０１１３】
【表１０】
2004518648.tif 000014
【０１１４】
【表１１】
2004518648.tif 000015
【０１１５】
表９〜１１の結果により、本試験において、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４は共に亜急性毒性の徴候を全く示さなかったことが示された。
詳細且つ好ましい形態により本発明を記載したが、請求項に定義した本発明の範囲を逸脱せずに当業者が修正や変更を行うことは可能であろう。
【図面の簡単な説明】
【０１１６】
【図１】図１は、ジャノヒゲのＨＰＬＣクロマトグラムである。クロマトグラムプロファイル全体は、ＨＰＬＣ分析方法１を用いて波長２１４ｎｍで検出した。このクロマトグラムに示されるように、６１１５−１及び６１１５−２の２つの別々のピークがあり、これらはそれぞれ１１．５分及び１３分のリテンションタイムを有していた。これら２つのピークは、ジャノヒゲの同定に用いることができた。
【図２】図２は、カラスビシャクのＨＰＬＣクロマトグラムである。２つの化学マーカー、アデニンとグアノシンをＨＰＬＣ分析方法２を用いて波長２６０ｎｍで検出した。アデニンのリテンションタイムは１４．８分、グアノシンのリテンションタイムは１７分であった。
【図３】図３は、生カンゾウのＨＰＬＣクロマトグラムである。化学マーカーであるグリチルリチン（Ｇｌｙ）は、ＨＰＬＣ分析方法１を用いて波長２５０ｎｍで検出した。Ｇｌｙのリテンションタイムは４６．４分であった。
【図４】図４は、アメリカニンジンのＨＰＬＣクロマトグラムである。化学マーカーであるジンセノシドＲｂ１（Ｒｂ１）は、ＨＰＬＣ分析方法３を用いて波長２０３ｎｍで検出した。Ｒｂ１のリテンションタイムは３７．５分であった。
【図５】図５は、長柄菊のＨＰＬＣクロマトグラムである。４つの特有のピークであるＦＹ−１〜ＦＹ−４をＨＰＬＣ分析方法２を用いて波長２５０．０ｎｍで検出した。ＦＹ−１のリテンションタイムは２８分、ＦＹ−２のリテンションタイムは３１．６分、ＦＹ−３のリテンションタイムは３３．５分、ＦＹ−４のリテンションタイムは１８．３分であった。
【図６】図６は、Ｄｅｒ  ｐ  ５（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ａｌｌｅｒｇｅｎ  ５）吸入惹起後５つの煎薬グループ（Ａ−Ｆ）で処置した後のＤｅｒ  ｐ  ５特異的ＩｇＧ及びＩｇＥ抗体のレベルを示す。血清ＩｇＧ及びＩｇＥレベルは、ＥＬＩＳＡで測定した。値は、平均値±平均標準誤差であり、バーは平均標準誤差を示す。Ａ：瀉白散グループ、Ｂ：小青竜湯グループ、Ｃ：麦門冬湯グループ、Ｄ：清燥救肺湯グループ、Ｅ：蘇子降気湯グループ、及びＦ：プラセボグループである。
【図７】図７は、Ｄｅｒ  ｐ  ５吸入惹起後５つの煎薬グループ（Ａ−Ｆ）で処置した後の脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ）におけるＩＬ−４遺伝子発現を示す。ＩＬ−４遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲ法（逆転写酵素  −  ポリメラーゼ連鎖反応）により検出した。値は、平均値±平均標準誤差であり、バーは平均標準誤差を示す。Ａ：瀉白散グループ、Ｂ：小青竜湯グループ、Ｃ：麦門冬湯グループ、Ｄ：清燥救肺湯グループ、Ｅ：蘇子降気湯グループ、及びＦ：プラセボグループである。＊はｐ＜０．０５を示す。
【図８】図８は、アレルゲンＤｅｒ  ｐ  ５  （Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ａｌｌｅｒｇｅｎ  ５）による惹起及び各々のハーブで処置後のマウス  血清ＩｇＧレベルを示す。レーン１は、ジャノヒゲ処置の効果を示す。レーン２は、トウジン処置の効果を示す。レーン３は、カラスビシャク処置の効果を示す。レーン４は、生カンゾウ処置の効果を示す。レーン５は、プラセボ処置を示す。血清  ＩｇＧレベルは、ＥＬＩＳＡで測定した。値は、平均値±平均標準誤差であり、バーは平均標準誤差を示す。
【図９】図９は、Ｄｅｒ  ｐ  ５  （Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ａｌｌｅｒｇｅｎ  ５）による惹起及び各ハーブあるいは医薬組成物（すなわち、ＳＴＡ−３６）処置後のマウス血清ＩｇＥレベルを示す。レーン１は、ジャノヒゲ処置の効果を示す。レーン２は、トウジン処置の効果を示す。レーン３は、カラスビシャク処置の効果を示す。レーン４は生カンゾウ処置の効果を示す。レーン５は、ＳＴＡ−３６処置の効果を示す。レーン６はプラセボ処置を示す。血清ＩｇＧレベルは、ＥＬＩＳＥＡで測定した。値は、平均値±平均標準誤差であり、バーは平均標準誤差を示す。
【図１０】図１０は、Ｄｅｒ  ｐ  ５  （Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｍｕｓ  ａｌｌｅｒｇｅｎ  ５）による惹起及び各ハーブあるいは医薬組成物（すなわち、ＳＴＡ−３６）処置後のマウス脾細胞におけるＩＬ−４遺伝子の発現を示す。ＩＬ−４遺伝子の発現は、ＲＴ−ＰＣＲ法（逆転写酵素  −ポリメラーゼ連鎖反応）で測定した。レーン１は、ジャノヒゲ処置の効果を示す。レーン２は、トウジン処置の効果を示す。レーン３は、カラスビシャク処置の効果を示す。レーン４は、生カンゾウ処置の効果を示す。レーン５は、ＳＴＡ−３６処置の効果を示す。レーン６はプラセボ処置を示す。
【図１１】図１１は、（１）粉末、（２）９５％アルコール中の水性抽出物、（３）水中の水性抽出物、及び（４）５０％アルコール中の水性抽出物の形態でのアメリカニンジンの効果を、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＥレベルで比較したものである。値は、平均値±平均標準誤差である。図は、５０％アルコールで抽出されたアメリカニンジンが、水抽出物よりもＩｇＥ減少ならびにＩｇＧ増加の点で、わずかによい効果を発揮することを示している。
【図１２】図１２は、（１）粉末、（２）  ９５％アルコール中の水性抽出物、（３）水中の水性抽出物、及び（４）５０％アルコール中の水性抽出物の形態での長柄菊の効果を、ＩｇＥ、ＩｇＧ２ａ、ＩＬ−４、及びＩＦＮ−γレベルで比較したものである。値は、平均値±平均標準誤差である。＊は、コントロールに対する有意差を示す。結果は、長柄菊の５０％エタノール抽出物がＩｇＥ抑制及びＩｇＧ増加において、最も有効であったことを示している。
【図１３】図１３は、雌ＢＡＬＢ／ｃマウスの血清中のＩｇＧ及びＩｇＥにおける  ＳＴＡ−３６、ＳＴＡ−４、及びコントロール（プラセボグループ）の効果の比較検討である。＊は、  ＳＴＡ−４とコントロールの間の有意差  （ｐ＜０．０５）を示す。値は、平均値±平均標準誤差である。ＳＴＡ−３６の投与量（２０ｍｇ／２０ｇ  マウス）は、ＳＴＡ−４  の投与量（１０ｍｇ／２０ｇ  マウス）の２倍であった（すなわち、ＳＴＡ−３６：ＳＴＡ−４  ＝  ２：  １）。結果は、ＩｇＥに関して、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４が共にＩｇＥを抑制したが、ＳＴＡ−４だけがコントロールに対し統計的に有意であることを示している。ＩｇＧについては、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４は共にＩｇＧの増加を示す。しかし、ＳＴＡ−３６はＳＴＡ−４よりもＩｇＧレベルの増加が大きいように見えるが、何れもコントロールに対して有意差はない。
【図１４】図１４は、肺機能におけるＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４の比較検討である。値は、平均値±平均標準誤差である。ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４は共に、（アセチルコリン測定により判定されるように）コントロールに比べて肺機能の有意な改善を示す（Ｐ＜０．０５）。ＳＴＡ−４はＳＴＡ−３６よりも効果があるように見えるが、ＳＴＡ−３６及びＳＴＡ−４の間の差異は、おそらく各グループで用いた動物数が充分でないことによると思われるが、統計的に有意なものではない。ＳＴＡ−３６の投与量（２０ｍｇ／２０ｇ  マウス）は、ＳＴＡ−４の投与量（１０ｍｇ／２０ｇ  マウス）の２倍であった。
【図１５】ＳＴＡ−４のＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩＬ−４、及びＩＦＮ−γにおける効果を、ケトチフェン、プレドニゾロン、及びアミノフィリンを含む従来の（喘息治療のための）薬剤の効果と比較したものである。値は、平均値±平均標準誤差である。＊はコントロールに対する  有意差を示す。本検討結果は、ＳＴＡ−４はＩｇＥレベルを有意に低下し、ＩｇＧ２ａ、ＩＬ−４及びＩＦＮ−γレベルを有意に増加したことを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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