(57)【要約】本発明は、超常磁性酸化鉄でドープされた架橋ビーズポリマー、該ビーズポリマーの製造方法、ならびに、核酸診断におけるその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩基性アミノ基を含み、かつ、超常磁性酸化鉄でドープされた架橋ビーズポリマーであって、ビーズポリマーが親水性（メタ）アクリレートおよびアミノ（メタ）アクリレートの共重合単位を含有することを特徴とする架橋ビーズポリマー。
【請求項２】
親水性（メタ）アクリレートが（メタ）アクリルアミドであることを特徴とする請求項１に記載の架橋ビーズポリマー。
【請求項３】
アミノ（メタ）アクリレートがアミノアルキルメタクリレートであることを特徴とする請求項１または２に記載の架橋ビーズポリマー。
【請求項４】
ビーズポリマーが、（メタ）アクリルアミドおよびジアルキルアミノアルキル（メタ）アクリレートの共重合単位および架橋剤としてメチレンビス（メタ）アクリルアミドを含有することを特徴とする請求項３に記載の架橋ビーズポリマー。
【請求項５】
５〜１００μｍの粒子サイズを有することを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の架橋ビーズポリマー。
【請求項６】
粒子サイズ分布Ｄｖ／Ｄｚが２．５未満であることを特徴とする請求項５に記載の架橋ビーズポリマー。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれかに記載のビーズポリマーを用いる核酸の単離方法。
【請求項８】
架橋ビーズポリマーの製造方法であって、親水性（メタ）アクリレート、アミノ（メタ）アクリレート、架橋剤、および適するならば他のモノマーのモノマー混合物を、逆懸濁重合によってビーズに重合させ、次いでこの後者を、鉄塩溶液を用いる後処理によって超常磁性酸化鉄でドープ処理することを特徴とする方法。
【請求項９】
アミノ（メタ）アクリレートを、部分的または全体的にアンモニウム塩の形態で使用することを特徴とする請求項８に記載の架橋ビーズポリマーの製造方法。
【請求項１０】
粒子表面でのＰＣＲ、特にタックマンＰＣＲによる核酸の増幅方法であって、粒子が請求項１〜６のいずれかに記載のビーズポリマーであることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、超常磁性酸化鉄でドープされた架橋ビーズポリマー、該ビーズポリマーの製造方法、ならびに、核酸診断におけるその使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
近年、いわゆる遺伝診断がますます重要になっている。
遺伝診断は、ヒト疾患の診断（特に、病原体の検出、ゲノム突然変異の検出、循環腫瘍細胞の発見、ならびに、疾患への傾向に対する危険因子の同定）に関与するようになっている。しかし現在では、遺伝診断は、獣医薬、環境分析および食品試験においても応用を見い出しつつある。さらなる応用分野には、法的問題の枠内または病理学／細胞学の研究所内での研究が含まれる。しかし、遺伝診断は、現在ではさらに、品質制御の目的（例えば、病原体の不存在についての血液試料の研究）にも使用されており、将来的には法律によってこのような試験を規定するように法制化が計画されている。また、遺伝診断にも使用される方法（例えば、ハイブリダイゼーションおよび増幅技術、例えばＰＣＲ、ｂＤＮＡまたはＮＡＳＢＡ技術）は、基礎科学研究における常法に含まれる。
【０００３】
遺伝診断における重要な工程は、細胞、血液、血清または尿などの生物学的材料から遺伝子試料を得ることである。
【０００４】
欧州特許ＥＰ０７０７０７７は、可溶性の弱塩基性ポリマーを用いて生物学的材料から核酸を単離する方法を記載している。この方法においては、沈殿生成物を、酸性ｐＨ範囲において核酸および可溶性の弱塩基性ポリマーから生成させ、この沈殿生成物を、沈殿しなかった生物学的材料の構成成分から分離し、洗浄し、核酸を、塩基性ｐＨに調節することにより沈殿生成物から再び遊離させる。
【０００５】
欧州特許ＥＰ０７０７０７７の方法の１つの欠点は、その操作（特に、沈殿生成物の分離および精製）が困難であり、非常に時間を要することである。さらに、この方法は、困難な条件下においてのみ自動分析機を用いて実施することができるにすぎないか、またはそれが全く不可能である。
【０００６】
米国特許ＵＳ４３３９３３７およびＵＳ５３５６７１３は、磁性粒子を用いてビニル芳香族ポリマーの磁性ビーズを製造する方法を記載している。しかし、これらのビーズポリマーは、核酸を結合するためのどのような官能基をも含有していない。さらに、このビーズは、顕著な残留磁気作用（残留磁気）を示し、これがビーズの分散性を妨げる。
【０００７】
国際特許出願ＷＯ８３／０３９２０は、磁性ポリマー粒子の製造方法であって、ポリマー粒子を例えば鉄塩の溶液で処理することからなる方法を記載している（鉄は水酸化鉄の形態で析出する）。この方法においては、析出した鉄化合物は、ポリマー粒子中およびポリマー粒子表面の両方に存在する。表面の鉄化合物は、ある種の応用、例えばタックマン（Ｔａｑｍａｎ）ＰＣＲによる核酸の増幅の妨げとなりうる。
【０００８】
米国特許ＵＳ５２０６１５９は、超常磁性ポリアクリルアミド担体の製造方法を記載している。しかし、この担体は、核酸の取り出しには適していない。
【０００９】
米国特許ＵＳ５７０５６２８は、磁性ミクロ粒子にＤＮＡを結合するための方法を記載している。この磁性ミクロ粒子は、好ましくは１μｍの粒子サイズを有しており、カルボキシル基で被覆された表面を有している。粒子へのＤＮＡの結合を達成するために、特定の塩濃度の使用、ならびに、特定の分子量を有する規定された濃度のポリエチレングリコールの添加を必要とする。
【００１０】
（発明の開示）
ここに、塩基性アミノ基を含み、かつ、超常磁性酸化鉄でドープされたある種の架橋ビーズポリマーが、核酸の直接的な自動単離に顕著に適することを見い出した。
【００１１】
本発明は、塩基性アミノ基を含み、かつ、超常磁性酸化鉄でドープされた架橋ビーズポリマーであって、ビーズポリマーが親水性（メタ）アクリレートおよびアミノ（メタ）アクリレートの共重合単位を含有することを特徴とするビーズポリマーに関する。
（メタ）アクリレートなる用語は、アクリル酸およびメタクリル酸の誘導体を意味する。
【００１２】
（発明を実施するための最良の形態）
親水性（メタ）アクリレートとは、そのホモポリマーが２５℃の水中において２．５％以上の溶解性を有するものである。挙げることができる例は、次の通りである：２−ヒドロキシエチルメタクリレート、２−ヒドロキシプロピルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート、トリエチレングリコールモノメタクリレート、テトラエチレングリコールモノメタクリレート、グリセロールモノメタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミドおよびＮ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド。アクリルアミドが好ましい。
【００１３】
本発明の目的のためのアミノ（メタ）アクリレートは、好ましくは第二および第三アミノ基を有するアクリル酸およびメタクリル酸の誘導体である。このアミノ基は、脂環式または芳香族環の一部であってもよい。適当なアミノ（メタ）アクリレートは、例えば、Ｎ−（３−アミノプロピル）メタクリルアミド、Ｎ−（３−イミダゾリルプロピル）メタクリルアミド、Ｎ−（２−イミダゾリルエチル）メタクリルアミド、Ｎ−（３−アミノプロピル）アクリルアミド、Ｎ−（３−イミダゾリルプロピル）アクリルアミド、Ｎ−（２−イミダゾリルエチル）アクリルアミド、Ｎ−（１，１−ジメチル−３−イミダゾリルプロピル）メタクリルアミド、Ｎ−（１，１−ジメチル−３−イミダゾイルプロピル）アクリルアミド、Ｎ−（３−ベンズイミダゾリルプロピル）メタクリルアミドおよび（３−ベンズイミダゾリルプロピル）アクリルアミドである。好ましいアミノ（メタ）アクリレートは、アミノアルキル（メタ）アクリレートであり、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリレート、およびＮ−ｔｅｒｔ−ブチルアミノプロピルメタクリレートである。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートおよびＮ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルメタクリレートが特に好ましい。本発明のビーズポリマー中のアミノ基は、その全部または一部がプロトン化された形態にあってよい（例えば、塩酸塩として）。
【００１４】
適当な架橋剤は、次の通りである：エチレングリコールジメタクリレート、ブタンジオールジメタクリレート、ヘキサンジオールジメタクリレート、ペンタエリトリトールジメタクリレート、グリセロール１，２−ジメタクリレート、グリセロール１，３−ジメタクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレート、テトラエチレングリコールジメタクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、ペンタエリトリトールトリメタクリレート、ペンタエリトリトールテトラメタクリレート、エチレングリコールジアクリレート、ブタンジオールジアクリレート、ペンタエリトリトールジアクリレート、グリセロール１，３−ジアクリレート、トリエチレングリコールジアクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、ペンタエリトリトールトリアクリレート、ペンタエリトリトールテトラアクリレート、アリルメタクリレート、アリルアクリレート、ジエチレングリコールジビニルエーテルおよびメチレン−Ｎ，Ｎ’−ビスアクリルアミド。メチレン−Ｎ，Ｎ’−ビスアクリルアミドが好ましい。
【００１５】
親水性（メタ）アクリレート、アミノ（メタ）アクリレートおよび架橋剤の合計を基準に、親水性（メタ）アクリレートの量は、３０〜８９重量％、好ましくは４０〜７５重量％であり、アミノ（メタ）アクリレートの量は、１０〜６９重量％、好ましくは２０〜５０重量％であり、架橋剤の量は、１〜２５重量％である。
【００１６】
本発明の超常磁性ビーズポリマー中の酸化鉄の含量は、未膨潤のビーズポリマーの重量を基準に、２〜８０重量％、好ましくは４〜５０重量％、特に好ましくは５〜３５重量％である。
【００１７】
本発明のビーズポリマーは超常磁性である。即ち、これらは低い残留磁化性（残留磁気）および小さい保磁力を有している。これらの磁気飽和は高く、これらは不均一な磁場によって強く引き寄せられる。磁場のスイッチを切った後に、これらを、水または水性緩衝溶液中で容易かつ完全に分散させることができる。
【００１８】
本発明のこれら超常磁性ビーズポリマーの粒子サイズは、１〜２００μｍ、好ましくは５〜１００μｍ、特に好ましくは１０〜５０μｍである。顕微鏡画像分析が、平均粒子サイズ（φ）および粒子サイズ分布の測定に極めて適している。
【００１９】
ビーズポリマーの粒子サイズ分布の幅の尺度として、平均体積分布（Ｄｖ）および平均数分布（Ｄｚ）から比を求める。本発明の目的のための狭い粒子サイズ分布は、Ｄｖ／Ｄｚ＜２．５、好ましくはＤｖ／Ｄｚ＜２、特に好ましくはＤｖ／Ｄｚ＜１．５を意味する。狭い粒子サイズ分布を有する本発明のビーズポリマーが、核酸の単離に特に適しており、ビーズポリマー表面での増幅法において特に良好な再現性を有する結果を与えることがわかった。
【００２０】
本発明のビーズポリマーは水に膨潤性である。これらは、１．２５〜８、好ましくは２〜６の膨潤指数を有する（２５℃で測定）。この膨潤指数は、膨潤したビーズポリマー体積と膨潤しないビーズポリマー体積の商と定義される。
【００２１】
膨潤指数の実験的測定のために、乾燥し、ふるい分けしたビーズポリマー（１０ｍｌ）を、１００ｍｌの目盛付きシリンダーに重さを量って入れる。ベッド体積（Ｖ０）と重量測定した量（ｍ）の商が嵩体積（Ｖｂｕｌｋ）である。この目盛付きシリンダーを水で１００ｍｌにし、２５℃で１０〜２０時間放置する。この間に、シリンダーを時々振盪し、現れる空気泡の全てが逃げうることを確実にする。膨潤したベッドの体積を読み取り、これをＶ１とする。Ｖ１とＶ０の商が膨潤指数である。
【００２２】
さらに本発明は、架橋ビーズポリマーの製造方法であって、親水性（メタ）アクリレート、アミノ（メタ）アクリレート、架橋剤、および適するならば他のモノマーのモノマー混合物を、逆懸濁重合によってビーズに重合させ、次いでこの後者を、鉄塩溶液を用いる後処理によって超常磁性酸化鉄でドープ処理することを特徴とする方法に関する。
【００２３】
本発明の目的に対して、逆懸濁重合は、親水性（メタ）アクリレート、アミノ（メタ）アクリレート、架橋剤、および適するならば他のモノマーのモノマー混合物を、該モノマー混合物に可溶性のフリーラジカル生成剤で活性化し、この活性化したモノマー混合物を、非水性溶媒中で分散助剤の添加により乳化させて小滴を生成させ、次いで、この生成させた小滴を、温度の上昇により硬化させる方法を意味する。
【００２４】
親水性（メタ）アクリレート、アミノ（メタ）アクリレートおよび架橋剤は、上記した化合物に一致する。このアミノ（メタ）アクリレートは、さらに有利には、少なくとも部分的にアンモニウムの形態で、例えば塩酸塩として使用することができる。他のモノマーとして適するのは、例えば、全モノマー混合物を基準に約２５重量％までの量の、Ｎ−ビニルピロリドン、ビニルイミダゾール、スチレン、α−メチルスチレン、クロロメチルスチレン、アクリロニトリル、酢酸ビニルおよび無水マレイン酸である。モノマー混合物を、水または水／アルコール混合物で希釈するのが有利である。適当な量の希釈剤は、例えば、モノマー混合物を基準に、１０〜２００重量％、好ましくは５０〜１５０重量％である。
【００２５】
適当なフリーラジカル生成剤は、アゾ化合物およびペルオキシ化合物である。水を希釈剤として使用するときには、ペルオキソ二硫酸カリウムおよびペルオキソ二硫酸ナトリウムが極めて適しており、また、重亜硫酸塩または亜硫酸水素と組み合わせてもよい。他の好ましいフリーラジカル生成剤は、アゾ化合物、例えば２，２’−アゾビス［２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン］・二塩酸塩および２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）・二塩酸塩である。フリーラジカル生成剤は、全モノマー混合物を基準に、０．０２〜２．５重量％、好ましくは０．１〜１重量％の量で使用する。
【００２６】
本発明の目的に対して、非水性溶媒として適するのは、第１に炭化水素およびハロゲン化炭化水素、ならびに、低粘度シリコーン油である。直鎖、分岐鎖および環式の脂肪族炭化水素が好ましい。挙げることができる例は、ヘキサン、ヘプタン、ｎ−オクタン、イソオクタン、イソドデカンおよびシクロヘキサンである。勿論、異なる炭化水素の混合物を使用することもできる。
【００２７】
適当な分散助剤は、分子量が２０００〜１００００００の油溶性ポリマーである。Ｃ６〜Ｃ２２アルキル（メタ）アクリレートおよび／またはＣ６〜Ｃ２２カルボン酸ビニルエステルの共重合単位を含むポリマーが好ましい。挙げることができる例は、ステアリルメタクリレート、ラウリルメタクリレートおよびビニルステアレートの共重合単位を含むポリマーである。Ｃ６〜Ｃ２２アルキル（メタ）アクリレートおよびＣ６〜Ｃ２２カルボン酸ビニルエステルおよび親水性モノマーのコポリマーが特に適する。ここで、親水性モノマーとは、全体的または部分的（２０℃で２．５重量％以上）に水に可溶性である、重合可能なオレフィン性不飽和の化合物を意味する。挙げることができる例は、次の通りである：アクリル酸およびそのアルカリ金属およびアンモニウム塩、メタクリル酸およびそのアルカリ金属およびアンモニウム塩、ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシエチルアクリレート、ジエチレングリコールモノアクリレート、ジエチレングリコールモノメタクリレート、トリエチレングリコールモノアクリレート、トリエチレングリコールモノメタクリレート、テトラエチレングリコールモノアクリレート、テトラエチレングリコールモノメタクリレート、グリセロールモノアクリレート、アミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミド、ビニルピロリドンおよびビニルイミダゾール。ヒドロキシエチルメタクリレート、アミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミド、ビニルピロリドンおよびビニルイミダゾールが好ましい。
【００２８】
特に好ましい分散助剤は、以下のものからなるコポリマーである：
・７５〜９９重量％のＣ６〜Ｃ２２アルキル（メタ）アクリレートおよび／またはＣ６〜Ｃ２２カルボン酸ビニルエステル、および
・１〜２５重量％の、ヒドロキシエチルメタクリレート、アミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、アクリルアミド、メタクリルアミド、ビニルピロリドンおよびビニルイミダゾールからなる群からの親水性モノマー。
【００２９】
分散助剤の使用量は、非水性溶媒を基準に、通常は０．１〜８重量％、好ましくは０．５〜５重量％である。
【００３０】
重合中の撹拌速度は、粒子サイズを調節するために重要である。本発明の方法において、得られるビーズポリマーのサイズは、撹拌速度が速くなるにつれて小さくなる。特定の予め決めたビーズサイズに調節するための正確な撹拌速度は、それぞれの場合に、反応器の大きさ、反応器の幾何構造および撹拌機の幾何構造に大きく依存する。実験によって必要な撹拌速度を見い出すのが得策であることがわかった。ゲート撹拌機を装着した０．５Ｌの反応容量を有する実験室反応器に対しては、通常、８００〜１０００ｒｐｍの速度で分散助剤としてメタクリル酸Ｃ１３エステルおよびヒドロキシエチルメタクリレートのコポリマーを使用したときに、１０〜２５μｍのビーズ直径が得られる。
【００３１】
重合温度は、使用した開始剤の分解温度および非水性溶媒の沸点に依存する。それは、通常は５０〜１５０℃であり、好ましくは５５〜１００℃である。重合には、０．５〜数時間（例えば１０時間）を要する。
【００３２】
重合の後に、常法（例えば、濾過またはデカンテーション）によってポリマーを単離することができ、適当であれば１またはそれ以上の洗浄工程の後に、乾燥することができる。得られたビーズポリマーを、物理的な方法によって分別して、狭い粒子サイズ分布に調節することができる。適当な分別法は、例えば、ふるい分け、沈降法および空気等級分けである。
【００３３】
超常磁性酸化鉄でドープするための後処理は、水性のＦｅ２＋およびＦｅ３＋塩溶液の混合物を用いて行う。対応する塩化物が非常に適している。Ｆｅ２＋：Ｆｅ３＋モル比は、この場合には２：１〜１：２であるべきである。さらに、異なるＦｅ２＋：Ｆｅ３＋比の鉄塩溶液から始め、酸化剤または還元剤を用いることにより最適Ｆｅ２＋：Ｆｅ３＋比にすることもできる。酸化剤の例はペルオキソおよびニトロ化合物であり、適当な還元剤の例は重亜硫酸ナトリウムである。鉄塩溶液の濃度は、通常は１０〜５０重量％、好ましくは２０〜４０重量％である。
【００３４】
鉄塩溶液を、好ましくは、乾燥した無水のビーズポリマーと接触させる。ここで、ビーズポリマーが全部の鉄塩溶液を取り込むことによって膨潤し、過剰の鉄塩溶液がビーズの表面または間隙に残存しないならば、特に有利である。
【００３５】
膨潤したビーズポリマーによって取り込まれた鉄塩を、塩基の添加によって対応する鉄水酸化物に変換する。水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウムまたはアンモニアのアルカリ性溶液が極めて適している。過剰量を蒸発によって容易に除去することができるので、アンモニアが好ましい。生成したアンモニウム塩を、水による洗浄によって除去する。
【００３６】
水酸化鉄を、ビーズポリマーの加熱によって酸化鉄（脱水された）に変換する。この場合の加熱処理は、６５〜１００℃で水性懸濁液において単純な方法で行うことができる。適当な加熱時間は０．５〜５時間である。水酸化鉄から酸化鉄への変換は、淡褐色から暗褐色または黒色への色の変化により明らかである。次いで、このビーズポリマーを取り出し、乾燥する。
【００３７】
必要なら、このようにして得られた超常磁性酸化鉄でドープされた乾燥ビーズポリマーを、上記の方法でもう一度処理することができる。この場合には、超常磁性酸化鉄の含量を増加させることができる。このようにして、酸化鉄の含量を５０重量％以上に設定することができる。
【００３８】
さらに本発明は、試料から核酸を単離するための方法であって、以下の工程：　（Ａ）ｐＨ７またはそれ以下で、試料をビーズポリマーと混合して、核酸を吸着させ；
（Ｂ）吸着した核酸を含むビーズポリマーを、磁場を用いて取り出し；そして
（Ｃ）このビーズポリマーを、ｐＨ７を超える水相と混合して、吸着した核酸を遊離させる；
を含んでなり、
該ビーズポリマーが、超常磁性酸化鉄でドープされており、親水性（メタ）アクリレートおよびアミノ（メタ）アクリレートの共重合単位を含んでいることを特徴とする方法に関する。
【００３９】
本発明の方法は、種々起源の核酸（例えば、細胞、組織材料、血液または病原体に由来する核酸）を単離および／または精製するのに適している。核酸を単離する前に、調べようとする材料を、自体既知の方法で破壊する（例えば、プロテアーゼ消化による破壊）。これにより、後の工程（Ａ）〜（Ｃ）に適する試料である溶解産物を得る。適当であれば、工程（Ａ）の後に挿入した工程において、生物学的材料を溶解する。他の適当な破壊方法は、ドイツ特許出願公開ＤＥ−Ａ−４３３３８０５に記載されている。
【００４０】
試料を本発明のビーズポリマーと、ｐＨ７またはそれ以下で、好ましくは２〜６の範囲、特に好ましくは２〜３の範囲のｐＨで、室温にて混合する。このビーズポリマーを、磁場の助けを借りて取り出す。次いで、このようにして得られた核酸とビーズポリマーの複合体を、適当な緩衝液を用いる洗浄によって精製することができる。
【００４１】
この複合体から結合核酸を遊離させるために、次いで、複合体のｐＨを、７を超えるｐＨ値、好ましくは８〜１４、特に好ましくは１２〜１４の範囲内のｐＨに調節する。
【００４２】
本発明のビーズポリマーは、欧州特許出願公開ＥＰ−Ａ−０７０７０７７に記載されている可溶性ポリマーよりも高い吸着および放出速度を与える。単離を、より容易に、即ち、より少ない工程およびより短い時間で行うことができる。単離した核酸の純度は高く、特に、阻害性の副生成物を比較的少ししか含んでいないので、核酸の増幅（例えば、いわゆる「ＰＣＲ」および「ＲＴ−ＰＣＲ」）が特によく起こる。また、本発明の方法は、得られる核酸の制限酵素消化の点においても、ＥＰ−Ａ−０７０７０７７に記載された方法よりも優れている。
【００４３】
さらに、本発明のビーズポリマーは、例えば、ビーズポリマー上での直接的ないわゆる「タックマンＰＣＲ」（即ち、工程Ｃを含まない）によって、吸着した核酸を増幅するためにも極めて適している。
【００４４】
（実施例）
実施例１：本発明のビーズポリマーの製造
（１ａ） 分散助剤の調製
ゲート撹拌機、ガス入口管およびガス出口管を備えた４Ｌの反応容器中の、シクロヘキサン（１３２４ｇ）、メタクリル酸Ｃ１３エステル（５１１ｇ）、ヒドロキシエチルメタクリレート（５７ｇ）および過酸化ジベンゾイル（３．８ｇ）の溶液を、窒素雰囲気下、３００ｒｐｍで２時間にわたり、７８℃に加熱し、この温度で１０時間維持し、次いで９０℃に加熱し、この温度でさらに１．５時間維持した。次いで、これを２５℃まで冷却した。３０．５重量％の分散剤溶液（１８３５ｇ）が得られた。２５℃においてウッベローデ粘度計を用いて測定したシュタウディンガー指数は、７２．６ｍｌ／ｇであった。
【００４５】
（１ｂ） 架橋ビーズポリマーの調製
（１ａ）からの分散剤溶液（４１．２５ｇ）およびシクロヘキサン（２４０ｇ）を、ゲート撹拌機、還流コンデンサーおよび熱センサーを備えた０．５Ｌの反応容器に入れ、撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート（９．３８ｇ）を、水（１３．３ｇ）および３７％濃度の塩酸（５．８９ｇ）と共に５分間撹拌し、１Ｎ ＮａＯＨ（０．６ｇ）で中和した。次いで、この溶液を反応容器に加えた。この混合物に、メタノール（８ｇ）に溶解したアクリルアミド（２０．３１ｇ）およびメチレン−Ｎ，Ｎ’−ビスアクリルアミド（１．５６ｇ）を加えた。この反応混合物に、水（４．２５ｇ）およびメタノール（２ｇ）の混合物に溶解したペルオキソ二硫酸カリウム（０．０６３ｇ）を加え、次いで、これに窒素ガスを４５０ｒｐｍで１０分間流した。次いで、撹拌速度を１０００ｒｐｍまで上げ、温度を１時間で６０℃まで上げ、この温度に１０時間維持した。冷却した後、得られたポリマーを、デカンテーションにより反応溶液から取り出し、それぞれシクロヘキサン、水およびメタノールで３回精製し、４０℃の真空オーブン中で乾燥した。平均粒子サイズが１２μｍおよび２５℃の水中での膨潤指数が６である乾燥ビーズポリマー（１４．７ｇ）が得られた。
【００４６】
（１ｃ） 酸化鉄によるビーズポリマーのドープ処理
磁気スターラーおよび温度計を備えた撹拌容器において、塩化鉄（ＩＩ）・四水和物（３．６２５ｇ）、塩化鉄（ＩＩＩ）（無水）（１．５ｇ）および重亜硫酸ナトリウム（０．３ｇ）を、水（５．７５ｍｌ）に溶解した。
【００４７】
乾燥ビーズポリマー（１ｂ）（５ｇ）を１００ｍｌの３口フラスコに入れ、氷で外側から冷却し、次いで、上記の鉄塩溶液を加えた。得られた懸濁液を３５分間撹拌し、次いで、懸濁液が固体混合物になるまで、沸騰水で外部から加熱した。次いで、このビーズポリマーを、水（６７．５ｍｌ）および２６％濃度のアンモニア溶液（８．５ｍｌ）のアルカリ性溶液（ｐＨ＝９）を入れた別の５００ｍｌフラスコ中で１時間撹拌し、水（２５０ｍｌ）で希釈した。この溶液をデカンテーションした後、この操作を数回繰り返した。
【００４８】
鉄塩溶液で処理したビーズポリマーを、水（３００ｍｌ）と混合し、空気流のもとで３０分間撹拌し、次いで７２℃に加熱した。操作中にアンモニア溶液を添加することによってｐＨを９に合わせた。次いで、ペルオキソ二硫酸カリウム（０．１５５ｇ）を溶液に加え、これを７２℃でさらに２．５時間加熱した。液体をデカンテーションによって除いた後、固体を水で５回洗浄し、超音波で処理した。鉄含量が６重量％であり、不均一磁場によって強く引き寄せられる黒色ビーズポリマー（５．１ｇ）が得られた。
【００４９】
実施例２：本発明のビーズポリマーの製造
（２ａ） 架橋ビーズポリマーの調製
（１ａ）からの分散助剤溶液（４１ｇ）およびシクロヘキサン（２４０ｇ）を、ゲート撹拌機、還流コンデンサーおよび熱センサーを備えた０．５Ｌの反応容器に入れ、撹拌した。Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート（９．３８ｇ）を、水（１３．３ｇ）および３７％濃度の塩酸（６ｇ）と共に５分間撹拌した。次いで、この溶液を反応容器に加えた。この混合物に、メタノール（８ｇ）に溶解したアクリルアミド（１８．７５ｇ）およびメチレン−Ｎ，Ｎ’−ビスアクリルアミド（３．１３ｇ）を加えた。この反応混合物に、水（４．２５ｇ）およびメタノール（２ｇ）の混合物に溶解した２，２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）・二塩酸塩（０．３１３ｇ）を加え、次いで、これに窒素ガスを４５０ｒｐｍで１０分間流した。次いで、温度を８００ｒｐｍにおいて１時間で６０℃まで上げ、この温度で１０時間にわたり反応させた。冷却した後、得られたポリマーを、デカンテーションにより反応溶液から取り出し、それぞれシクロヘキサン、水およびメタノールで３回精製し、４０℃の真空オーブン中で乾燥した。平均粒子サイズが２０μｍおよび２５℃の水中での膨潤指数が５である乾燥ビーズポリマー（１５ｇ）が得られた。
【００５０】
（２ｂ） 酸化鉄によるビーズポリマーのドープ処理
（２ａ）からのビーズポリマー（５ｇ）を、（１ｃ）に記載したようにして酸化鉄でドープ処理した。ここでは、全操作を２回行った。鉄含量が８．３重量％であり、不均一磁場によって強く引き寄せられる黒色ビーズポリマー（５．４ｇ）が得られた。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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