(57)【要約】微量分析の特徴的適用のための改良された組合わせ体非発光性微孔膜と固体支持体が開示される。具体的には、転相方法により形成された有孔性膜を持ち、転相方法により形成された非発光性微孔膜に十分に共有結合的に結合するために基材を準備する表面処理剤を介して基材に共有結合することにより効果的に付着されたマルチ・セル非発光性基材であり、その結果このように作られた組合わせ体が微小配列適用に有効であり、ここで有孔性非発光性ナイロン・マルチ・セル基材が固体ベース膜たとえばガラス、マイラー顕微鏡スライドに共有結合的に結合され、その結果それにより作られた組合わせ体が微小配列適用に有用である。非発光性マルチ・セル基材を製作する装置と方法がまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体高分子の微小配列を担持するために有用な非発光性マルチ・セル基材の作成方法であって、上記方法が、
非有孔性基材を準備する行為と、
転相方法により形成される非発光性微孔膜を準備する行為と、
からなり、
前記方法が、溶媒、１つ以上の非溶媒、不透明固体、およびポリアミドを含む成形用濃厚液を製剤する行為と、
前記成形用濃厚液を混合と配合して前記ポリアミドと前記不透明固体を内部に溶解・分散させる行為と、
不透明固体充満転相成形用濃厚液を調製する行為と、
前記不透明固体充満転相成形用濃厚液の薄い一部を成形する行為と、
前記不透明固体充満転相成形用濃厚液の前記成形された一部を冷却して基材を形成する行為と、
表面処理剤を準備する行為と、
前記表面処理を非有孔性基材に適用する行為と、
前記表面処理剤を有する前記非有孔性基材を非発光性微孔膜と混合して、前記非有孔性基材が前記非発光性微孔膜に十分に共有結合的に結合させる行為と、ここで生まれた結合体が微小配列適用に有用であり、
からなる方法。
【請求項２】
前記表面処理剤が、３−アミノプロピルトリエトキシシラン、Ｎ−（２−アミノエチル）−３−アミノプロピルトリメトキシシラン、３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン、（１０−カルボメトキシデシル）ジメチルクロロシラン、または２−（３，４−エポキシシクロヘキシル）エチルトリメトキシシランからなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記表面処理剤がポリアミド−ポリアミンエピクロロヒドリン樹脂を用いる処理に続かれる３−アミノプロピルトリエトキシシランからなる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記非有孔性基材がガラス、マイラー、セラミック、アクリル、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリスルフォン、ポリアミドおよびポリアラミドからなる群から選択ざれる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記非有孔性基材がガラスである請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記非有孔性基材がポリエステルである請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記非有孔性基材がマイラーである請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記マイラーの表面を硫酸またはコロナ放電で酸化して、前記表面をポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン重合体に結合可能にする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記不透明固体が炭素粒子である請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記炭素粒子が５μｍ未満の大きさである請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記炭素粒子がポリアミド支持体の全域に均一に分配されている請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記炭素粒子がポリアミド支持体中に部分的に組入れられている請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記炭素粒子がポリアミド支持体中に全体として組入れられている請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリアミド支持体が電荷修正されている請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
生体高分子の微小配列を担持するに有用なマルチ・セル基材であって、前記基材が、
約３００ｎｍ乃至約７００ｎｍの、転相方法により形成された、弱い蛍光を与える非反射性微孔膜からなり、前記非反射性微孔膜が、
転相支持体と、
前記転相支持体と化学的に非反応性であり且つ前記転相に密接に結合され、および／または部分的に／完全に内部に含まれる複数の不透明固体と、
非有孔性基材と、
前記非有孔性基材を前記微孔性膜に十分に共有結合的に結合するために、前記非反射性微孔性膜と前記非孔性基材の間に有効に位置決めされた表面処理剤と、ここで、つくられた結合体マルチ・セル基材が微小配列適用に有効であり、
からなる基材。
【請求項１６】
前記表面処理剤が３−アミノプロピルトリエトキシシラン、Ｎ−（２−アミノエチル）−３−アミノプロピルトリメトキシシラン、３−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン、（１０−カルボメトキシデシル）ジメチルクロロシラン、または２−（３，４−エポキシシクロヘキシル）−エチルトリメトキシシランからなる群から選択される請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項１７】
前記非有孔性基材がガラス、マイラー、セラミック、アクリル、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリスルフォン、ポリアミドおよびポリアラミドからなる群から選択ざれる請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項１８】
前記表面処理剤がポリアミド−ポリアミンエピクロロヒドリン樹脂を用いる処理に続かれる３−アミノプロピルトリエトキシシランからなる請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項１９】
前記非有孔性基材がガラスである請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２０】
前記非有孔性基材がポリエステルである請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２１】
前記非有孔性基材がマイラーである請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２２】
前記転相膜がナイロン６６、ナイロン４６、ナイロン６、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリビニリデンジフロライド（ＰＶＤＦ）からなる群から選択される請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２３】
前記転相支持体がポリアミドである請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２４】
前記不透明固体が顔料である請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２５】
前記不透明固体が顔料である請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２６】
前記不透明固体が炭素粒子である請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２７】
前記転相支持体が電荷修正されている請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２８】
前記炭素粒子が前記ポリアミド支持体の全域に均一に分配されている請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項２９】
前記炭素粒子が前記ポリアミド支持体中に部分的に組入れられている請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３０】
前記炭素粒子が前記ポリアミド支持体中に全体的に組入れられている請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３１】
前記ポリアミドが電荷修正されている請求項１５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３２】
生体高分子の微小配列を担持するために有用であるマルチ・セル基材であって、前記基材が、
転相支持体および、光学的に受動的な基材が約３００乃至７００ｎｍの全波長で光を吸収するような前記転相支持体との重量比における、前記転相支持体と化学的に非反応性の、不透明固体からなる前記光学的に受動的な基材と、
非有孔性基材と、
前記非有孔性基材を前記微孔性膜に十分に共有結合的に結合するために、前記微孔性膜と前記非有孔性基材の間に有効に位置決めされた表面処理剤と、ここで、つくられた結合体マルチ・セル基材が微小配列適用に有効であり、
からなる基材。
【請求項３３】
前記転相支持体がポリアミドからなる請求項３２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３４】
前記転相支持体が膜の形状である請求項３２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３５】
前記不透明固体が炭素粒子である請求項３２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３６】
前記炭素粒子が約５μｍ未満の大きさである請求項３５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３７】
前記炭素粒子が前記ポリアミド支持体の全域に均一に分配されている請求項３５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３８】
前記炭素粒子が前記ポリアミド支持体中に部分的に組入れられている請求項３５に記載のマルチ・セル基材。
【請求項３９】
前記基材が約３００乃至約７００ｎｍの全波長で光を吸収する請求項３７に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４０】
前記ポリアミドが電荷修正されている請求項３２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４１】
前記基材が前記波長範囲内の任意の波長で入射光の５０％以下の反射率を有する請求項３９に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４２】
前記転相支持体が親水性である請求項３２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４３】
前記転相支持体がスキンレスである請求項４２に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４４】
前記転相支持体がナイロンからなる請求項４３に記載のマルチ・セル基材。
【請求項４５】
前記転相支持体がナイロン６６、ナイロン４６、ナイロン６、ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、ポリビニリデンジフロライド（ＰＶＤＦ）からなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
この出願は、２０００年８月１０日に出願したオストライチャー外（Ｏｓｔｒｅｉｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ）の「微量分析特徴的適用のための改良された低蛍光性ナイロン／ガラス複合体」と題する出願番号第６０／２２４，１４１号の米国特許仮出願の継続出願であり、且つ２０００年７月５日に出願したアンドレオリ（Ｒｉｔａ Ｊ． Ａｎｄｒｅｏｌｉ）の「改良された非発光性基材」と題する出願番号第６０／２１６，２２９号の米国特許仮出願と２０００年７月６日に出願したアミン外（Ｍ． Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ）の「微量分析の特徴的適用のための微孔膜と固体支持体の改良された組合わせ体」と題する出願番号第６０／２１６，３９０号の米国特許仮出願に関し、各出願の開示事項は本明細書に参照により取込んでいる。
【０００２】
発明の背景
本発明は、その表面上に生体高分子の微小配列を担持するために有用であるマルチ・セル非発光性基材に関し、さらに具体的には、転相方法により形成され、転相方法により形成された微孔膜へ十分に共有結合的に結合させるために基材を準備する表面処理剤を介して基材に共有結合することにより効果的に取付けられた有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材に関する。その結果、これにより作られた組合わせ体が微小配列適用に有用であり、最も具体的には、マルチ・セル非発光性基材に有用であり、ここで有孔性ナイロン・マルチ・セル基材は固体ベース膜たとえばガラス、またはマイラー顕微鏡スライドに共有結合的に結合され、その結果このように作られた結合体が微小配列適用に有用であり、そのようなマルチ・セル非発光基材を製造する工程に有用である。
【０００３】
現在は種々の方法が、生体巨大分子の配列たとえば核酸分子またはたん白質の配列をつくるために利用できる。有孔膜上にＤＮＡの整列配列をつくるための１つの方法は「ドット・ブロット」アプローチである。この方法では真空多岐管により、複数たとえば９６のＤＮＡの水性試料を３ｍｍ直径の井戸から有孔性膜へ移送する。この手順の別形が、井戸が高度に延ばされた楕円形状を持つ「スロット−ブロット」法である。
【０００４】
ＤＮＡは、膜を焼き固めるまたは膜をＵＶ照射に暴露することにより有孔膜上に固定する。これは１つの配列を一度につくるために実用的な手を使う方法であり、通常配列当たり９６試料に限定される。「ドット・ブロット」法はそれゆえ数銭の試料を測定しなければならない場合には不適切である。
【０００５】
ゲノムのフラグメント（たとえばＰＣＲの産物）の整列配列の作成に採用されるさらに効率がよい方法は、試料の配列を基材たとえば有孔性膜に移送するために、井戸たとえばミクロタイトレ・プレートの９６井戸中に浸漬されたピンの配列を使用する。１つの配列が、２２×２２ｃｍの区域に９２１６スポットの配列をつくるために、ジグザグ方式で膜をスポットするように設計されたピンを含む（Ｌｅｈｒａｃｈ， ｅｔ ａｌ．， １９９０年）。このアプローチに関する制約は、各配列の各画素にスポットされるＤＮＡの容量が高度に変動することである。加えて、各浸漬に関してつくることができる配列の数が通常かなり小さい。
【０００６】
幾つかの特許には、微小配列適用におけるマルチ・セル基材の使用が記述されている。これらは、「修正されない核酸のシラン処理された固体相面への付着」と題する米国特許第５，９１９，６２６号明細書、「核酸ハイブリッド形成分析試験用固体支持体」と題する米国特許第５，６６７，９７６号明細書および「ガラス基材へのＤＮＡのアミノシラン／カルボジイミド・カップリング」と題する米国特許第５，７６０，１３０号明細書であり、これらの開示事項は本発明の開示事項と矛盾しない程度に本明細書に参照により取込んでいる。
【０００７】
マルチ・セル基材は当該技術に公知である。シュライヒャーとシュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ）は、商業的に入手できるＣＡＳＴ（登録商標）スライドにてグルーまたは同様の接着剤を用いてナイロン膜をガラスに付着させることを試みた。しかしながら、グルーまたは接着剤の層が付加的厚さをナイロン／ガラス・スライド結合体に加え、且つグルー／接着剤法がスクリム補強ナイロン膜を必要とする。グルー／接着剤と補強スクリムにより引起される、全体のナイロン膜／ガラス・スライドの結合体の余分な厚さが、微小配列適用に不利である。付加的に、スクリムによってナイロン膜／ガラス・スライドの結合体の膜面が表面塗布の観点から一様でなく、理想的でなくなる。さらにまた、ナイロン膜をガラス・スライドに付着させるために使用するグルーまたは接着剤の化学が、結合体を有効にするに必ずしも最適ではなく、且つグルーまたは接着剤がアナライトと干渉または反応するので、それは製品が受容されるように意図される生体分子またはアナライトと必ずしも両立しない。
【０００８】
同様に、現在商業的に入手できる既知の別の製品には以下が含まれる。すなわち、核酸またはたん白質を膜を使用せずに結合する修正ガラス、コーニングＧＡＰＳスライドたとえばＣＭＴ−ＧＡＰＳ（登録商標）コート・スライド、ＦＡＳＴ（登録商標）としてシュライヒャーとシュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ）から入手できるガラス上に成形されたニトロセルロース有孔膜、ガラス基材にグルーされたまたは接着されたスクリム補強ナイロンおよびシュライヒャーとシュエル（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ）ＣＡＳＴ（登録商標）スライドである。これらの商業的に入手できる製品に関するおよびそれぞれの製造業者から容易に入手できる詳細な記述は当該技術に公知である。
【０００９】
しかしながら、微小配列適用では、核酸またはたん白質を直接的にガラス基材に結合することはある種の不利を有する。具体的には、核酸またはたん白質を結合するための著しく小さな表面区域が、匹敵する大きさの微孔性膜／ガラス・スライドの結合対と共によりも利用される。結合表面区域が広ければ広いほど、生体高分子またはアナライトのシグナル強さは知れ抱け良好になることにより、生体高分子またはアナライトのより小さな試料の検出が可能になる。また、微孔膜／ガラス・スライドの結合体の微孔膜部分は生体分子とアナライトを自然に吸収し、微孔膜／ガラス・スライドの結合体上適当なところにそれらを保持する。だが一方、生体分子とアナライトの吸着が起きないので、スライドの微孔膜部分なしに、生体分子またはアナライトがガラス表面の頂部上に存在する。また、生体分子のガラス上への固定化効率は実質的に１００％未満であり、ナイロン上への目標の固定化に比較して５０％未満であるようである。このことは重要であり、引続く検出段階は、（ＤＮＡ検出試料において）ラベルされたプローブとのハイブリッド形成のために入手できる同量の可能なアナライトまたは目的生体分子を必要とする。固定化に引続き、ブロッキング、洗浄、ハイブリッド形成バッファー暴露等を含む典型的にいくつかの液体浸漬段階が存在する。各段階がガラス表面からアナライトを除去する潜在性を持ち、シグナルの潜在的強さを減少する。ナイロンは、他の商業的に入手できる高分子または他の薬剤処理された基材と比較して、最も高い生体分子結合効率を有すると一般的に考えられる。ナイロンはまた、ナイロン表面にこのように結合したアナライトの官能基の最も高いアクセシビリティを与えると考えられる。
【００１０】
ナイロン膜、特定の種類の微孔膜は、転相方法により形成され、ナイロンが元来親水性である点においてニトロセルロース膜より優れる一部の利点を有する。ナイロン膜はまた、ニトロセルロースより大きなたん白質とＤＮＡ結合容量を有する。このより大きな結合容量が、分析試験におけるより良いシグナル強さとより低い検出閾値を意味する。
【００１１】
ナイロン膜有孔構造体はニトロセルロース膜有孔構造体よりも容易に管理可能であり、ニトロセルロース膜よりも物理的に強固である。ニトロセルロース膜はナイロン膜より脆弱であり、より大きな孔変動を有し、且つ極めて燃焼しやすい。ニトロセルロース膜の物理的弱さ、変動性および燃焼性が結合されて、ニトロセルロース膜がナイロン膜より製造費用が高価になっている。
【００１２】
上述のように、グルーでまたは別にガラス基材に接着されたスクリム補強ナイロンには少なくとも３つの不利益が存在する。第１に、グルーまたは接着剤の層がスクリム補強ナイロン／ガラス・スライドの結合体に付加的厚さを加える。ナイロン膜にブロットする配列用ロボットが狭い特別の許容誤差を有し、且つ任意の付加厚さが、スクリム補強ナイロン／ガラス・スライドの結合体の配列用ロボットに対する正確な位置決めについて付加的不確実性を表す。第２に且つさらに重要なことには、不利益は、スクリム補強ナイロン／ガラス・スライドの結合体上のスクリム補強膜が微小規模で不規則な表面を有することである。このことは重要な表面塗布問題である。これは、膜の上につくられるスポット・サイズが類似の大きさにならないためである。最後に、グルー／接着剤とアナライトは両立しない。具体的には、付着のために過剰な官能基化された部分を含む接着剤は、アナライトを検出のために有用でなくするような方法でアナライトを無差別に結合することができる。この結合は、（ＤＮＡ試料において）ハイブリッド形成を妨害する分子に結合することによって、または、付着が永続的でなくなり且つアナライトが検出に先立つ液体浸漬の段階で抜け落ちるように、アナライトに可逆的に結合することによってなされる。最後に、接着剤自体は検出に先立つ多段階工程にて分解されることが可能であり、抽出その他の手段により、移動可能な種になることができる。接着剤のフラグメントは、アナライトに結合されている場合、検出位置を越えた位地または区域に置換される、または自体は、検出が実施される形式によって、誤りのバックグラウンド・シグナルの一部となる。
【００１３】
これらの形式のマルチ・セル基材またはスライドでは、平坦で、均質で且つ可能な限り薄いナイロン微孔層を有することが有用である。電荷修正スライドの場合、電荷修正の程度が全スライド表面に渡って均一でなければならない。使用環境では、本出願に記述される革新的スライドに関して想像されるように、ナイロンとベース膜たとえばガラス・スライドマタハマイラー・シートとの結合が、水、水酸化ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、および他の過酷な化学薬品中で長時間且つ高い温度で安定性を維持しなければならない。ナイロン膜が湿潤されるとき、ナイロン膜層とガラス基材との間に発生する高い空気圧の故に、それらの間の結合もまた物理的に強くなければならない。
【００１４】
さらに、望ましくない化学反応の潜在性を増加することなく蛍光分析試験の検出感度を高めることが可能な場合は、同位元素分析試験に対して、蛍光分析試験を使用することが望ましい。蛍光分析試験が実施される基材がそのような暴露によって蛍光を発生しない場合は感度を上げることができるけれども、幅広い有用性を持つ（多くのアナライトに関して）そのような基材の分離は今までのところでは当該技術を回避した。
【００１５】
具体的には、多くの種類の分析試験システが試料中のアナライトの存在と濃度を検出するために開発されてきた。たとえば、生体親和性と酵素的に活性化された触媒反応が、生体試料を分析するため関心事の生体物質を検出して定量するために医薬と科学に広く用いられる。これらの分析試験システムの多くは、１つの化学的実体の関心事の物質との結合（またはその修正された形態）および接合体たとえば抗原−抗体、相補的な核酸ストランドに対する核酸ストランド、（「ハイブリッド形成」）およびたん白質リジャンド接合体の検出に左右される。接合体は結合物質の１つ以上に付着する、検出可能なシグナルを与えるラベルによって典型的に検出される。接合体は、始めに遊離フラクションと結合フラクションにおけるラベルの量を測定し、次に演算法と飼料を比較する組の標準を用いて存在量を計算することにより定量することが多い。
【００１６】
アナライト結合分析試験に用いられる最も一般的なラベルは放射性同位元素と発光化合物である。発光は、エネルギ転移により引起され、放射体の温度にだけは寄与することができない光放射を称する。発光性ラベルは光化学的（いわゆる「光発光」）、化学的（いわゆる「化学発光」）および電気化学的（いわゆる「電気化学発光」）手段により発光するためにつくられる。光発光は、蛍光とりん光を含み、物質が電磁放射たとえば可視光、赤外線または紫外線放射を吸収するときにそれにより物質が発光を誘起されるプロセスである。化学発光は明らかな温度変化をしない化学反応の結果として起きる発光を称する。電気化学発光は電気化学プロセスの結果としての発光を称する。
【００１７】
同位元素ラベルは、ある種のアナライト・システムにおいて発光ラベルよりも著しく良好な検出を提供する。たとえば、核酸を検出する最も感度のよい方法は同位元素ラベルの使用を典型的に含み、３２Ｐによる放射性ラベルを含むことが多い。
【００１８】
特定のシーケンスをゲノムのデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）内に集中するには、サザーン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）により記述される転移技術が典型的に採用される。ＤＮＡは多くの場合１つ以上の制限酵素を用いて消化され、得られたフラグメントはゲルを介するエレクトロフォレシスにより大きさにより分けることにより分離される。便宜的には、ＤＮＡは次に元の場所にて変性され、ゲルから固体支持体に転移され、ＤＮＡフラグメントの相対的位置が固体支持体への転移中と転移後に保存される。固体支持体に付着したＤＮＡは放射ラベル付きのＤＮＡまたはリボ核酸（「ＲＮＡ」）にハイブリッド形成される、且つオートラジオグラフィが用いられプローブに相補的なバンドの位地を探し出す。
【００１９】
長年に渡り、変性されたＤＮＡの固定化とハイブリッド形成が、固体支持体としてニトロセルロースをほぼ独占的に用いて実施された。しかしながら、時が経過するに従って、ニトロセルロースが理想的ではない固体相ハイブリッド形成マトリクスであることが明らかになった。この理由は、核酸が教諭結合的相互作用よりもむしろ疎水的相互作用によりニトロセルロースに付着され、且つ核酸がハイブリッド形成と高温での洗浄の間にマトリクスから徐々に開放されるからである。この問題を克服するために、電荷修正セルロース支持体が、ＤＢＭ（ジアゾベンジルオキシメチル）セルロースとＡＰＴ−セルロースを含めて、改良された核酸結合を提供するために１９８０年代の初期に導入された。しかしながら、これらのマトリクスは、ニトロセルロース自体のように、マトリクスが乾燥しているとき脆弱であり、１または２サイクル以上のハイブリッド形成と洗浄すなわち「リプロービング」を耐えることができないという重要な不利益を受ける。
【００２０】
今日、広範囲の使用が、特定のナイロン・マトリクスにおいて、核酸の固定とハイブリッド形成用の固体支持体としてポリアミド・マトリクスからつくられる。種々の種類のナイロンが核酸を不可逆的に結合するために知られ、ニトロセルロースよりも大幅に耐久性がある。核酸は低イオン強度のバッファー内でナイロン上に固定することができるので、ゲルからナイロン・マトリクスへの核酸の転移はエレクトロフォレティカルに実施することができる。これは、毛管作用または真空によるＤＮＡの転移が有効でない場合に実施される。２つの基本的種類のナイロン膜が商業的に入手可能であり、これらは修正されないナイロンと電荷修正されたナイロンである。電荷修正ナイロンは、その増加した正電荷表面が核酸を結合する大きな容量を持つので、転移とハイブリッド形成のために好まれる（たとえば米国特許第４，４７３，４７４号明細書参照、これの開示事項は本明細書に全体的に参照により取込んでいる）。ナイロン膜は、ＤＮＡが転移された後に徹底的な乾燥または小量の紫外線照射（２５４ｎｍ）への暴露により、ＤＮＡを固定するために処理しなければならない。
【００２１】
ポリアミド・マトリクスが放射性同位元素分析試験システムに著しく使用されることが判明したけれども、そのようなマトリクスは蛍光分析試験システムに幅広くは使用されていないことが判明した。これは、ポリアミド基材を採用する蛍光分析試験システムが望ましい感度より低い感度を示すためのようである。そのような感度減少は主として２つの因子に起因している。これらは、ナイロン自体によりつくられるバックグランド蛍光と反応媒体と接触する固体物質による光散乱である（たとえばリアクタントが付着する基材または測定が行われる容器の壁）。ポリアミドたとえばナイロンは、フルオロフォア付きアナライトから放射されるＵＶ−可視の範囲と符合することができる光励起内生蛍光放射と光反射を示す。励起波長帯の光が指示材料の蛍光を引起すとき、フルオロフォアの放射波長帯が同じように重なる場合は、検出と共に干渉が起きる。
【００２２】
同位元素分析試験は全体的に非常にセンシティブであるけれども、それは多くの不利益を受ける。主として、任意の放射性同位元素の使用は、廃棄物処理、安全、取扱い、報告および許認可に関して健康問題と規定する多数の義務とを自動的に訴求する。現在の発光分析試験は同位元素ラベルに代わるものを提供するけれども、そのような分析試験の感度は、生医学、ジーンの研究、および麻薬発見のコミュニティにおける多くの分野から切望される範囲内には今なお存在しない。さらに、同位元素ラベルは複合の分析試験には使用することができない。この場合、自己の特有な波長放射の発光分子に関して個別にラベルされた２つ以上の核酸プローブが同時にハイブリッド形成することができ、続いて重合体基材に固定された、結合された核酸ターゲットの配列上で同時に検出される。マルティプルの実施がターゲットの所定配列上で疑問であるとき引き剥がしと再プローブの従来からの段階に比較して、複合処理は意味の有る費用と時間を節約する。複合処理はまた、マルティプル再プローブが伴う誤差とシグナル衰退を低減する。
【００２３】
このようにして、微量分析特徴的適用のために有用な比較的薄く、マルチ・セルの非発光性基材への必要性が存在する。そのようなマルチ・セル非発光性基材構造体は自然に親水性である。そのようなマルチ・セル非発光性基材は容易に管理されなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は従来技術のニトロセルロース膜スライドよりも物理的により健全でなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は比較的容易に製造されなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は、膜／基材結合体に厚さを付加する、膜と固体基材間のいかなるグルー／接着剤層を、削除できない場合には、少なくとも最小化しなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は、基材に対する転相方法表面処理により形成された有孔性膜を有しなければならない。その処理は、転相方法により形成された微孔膜に有効に共有結合的に結合するように基材を準備し、その結果それによってつくられた結合体が微小配列適用において有用である。そのようなマルチ・セル非発光性基材は、微小配列適用に有用な、転相方法により形成された有孔膜を持つマルチ・セル基材の全体厚さに不均一性を付加する、識別できる有限厚さまたは質量を有しない表面処理を含まなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は、微小配列適用に有用な、転相方法により形成された有孔膜を持つマルチ・セル基材による核酸またはたん白質のアナライトの結合または検出におけるこの処理の関与を、削除できない場合には、少なくとも最小にする表面処理を含まなければならない。そのようなマルチ・セル非発光基材は、アナライトの検出のために使用される有孔膜部に対して固体基材部を接合するために用いられる物質の妨害を最小にする固体基材への表面処理を含む、微小配列適用に有用な転相方法により形成された有孔膜を含まなければならない。そのようなマルチ・セル非発光基材は、制限厚さまたは質量をもつ第３成分を接合剤として使用することに関連する、基材／膜結合構造体の全体厚さの不均一性を除去する表面処理を含む、微小配列適用に有用な転相方法により形成された有孔膜を含まなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は微小規模において規則的な表面を有しなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材はグルー／接着剤とアナライト間の両立性問題を除去しなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は経済的に生産されなければならない。そのようなマルチ・セル非発光性基材は資料中のアナライトを検出するためのより大きな感度に導く発光性分析試験に使用されなければならない。そのようなマルチ・セル基材は、多重アナライト分子の同時検出のために異なる蛍光的にラベルされたタグの同時使用を可能にしなければならあない。
【００２４】
発明の概要
本発明の目的は、つくられた結合体が微小配列適用に有用であるように、転相方法により形成された微孔膜に有効に共有結合的に結合するために基材を準備する、基材用転相表面処理により形成された有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材を提供することである。
【００２５】
本発明の別の目的は、微小配列適用に有用で転相方法により形成された有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材の全体厚さに不規則性を付加する可能性がある、いかなる識別できる制限厚さまたは質量をも持たない表面処理を提供することである。
【００２６】
本発明のさらなる目的は、微小配列適用に有用な転相方法により形成された有孔性膜を持つマルチ・セル非発光性基材の核酸またはたん白質のアナライトの結合または検出における関与を最小にする表面処理を提供することである。
【００２７】
本発明のそれ以上の目的は、アナライトの検出に関して固体基材部を有孔性膜部に接合するために使用される物質の妨害を最小にする表面処理を含む、微小配列適用に使用の転相方法により形成された有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材を提供することである。
【００２８】
本発明のさらに別の目的は、つくられた結合体が微小配列適用に有用であるように、転相方法により形成された微孔膜に十分に共有結合的に結合するように基材を準備する、基材用転相方法表面処理により形成された有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材を製作する方法を提供することである。
【００２９】
本発明のさらに別の目的は、接合剤として制限厚さまたは質量をもつ第３成分を用いることと関連する、基材／膜結合構造体の全体厚さの不規則性を排除する表面処理を含む、微小配列適用に使用の転相方法により形成された有孔膜を持つマルチ・セル非発光性基材を提供することである。
【００３０】
これらのおよびこれ以上の目的に従って、本発明の１つの側面は、生体高分子の微小配列と担持するに有用なマルチ・セル基材を含む。この基材は、転相方法により形成された、約３００乃至約７００ｎｍの弱い蛍光を与える実質的に非反射性微孔膜を有し（この膜は転相支持体を有し）、且つ転相支持体と実質的に化学的に非反応性であり且つ転相に密接に結合されおよび／または部分的に／完全に含まれる複数の不透明固体を有し、非有孔性基材を有し、且つ微孔膜に非有孔性基材を十分に共有結合的に結合するために、微孔膜と非有孔基材間に有効に位置する表面処理剤を有し、ここで、このようにつくられる結合マルチ・セル基材は微小配列適用に有用である。
【００３１】
本発明の別の側面は、生体高分子の微小配列を担持するに有用な非発光性マルチ・セル基材を製作する方法を含み、この方法は、非有孔基材を準備する行為と、転相方法により形成された非発光性微孔膜を準備する行為と、ここでこの方法は、溶媒、１つ以上の非溶媒、不透明固体およびポリアミドからなる成形用濃厚液を製剤する行為と、ポリアミドと不透明固体の混合・溶解を引起すために成形用濃厚液を混合・配合する行為と、成形用濃厚液の不透明固体充填転相をつくる行為と、不透明固体充填転相成形用濃厚液の薄い部分を成形する行為と、基材を形成するために不透明固体充填転相成形用濃厚液の成形された部分を急冷する行為と、からなり、
表面処理剤を準備する行為と、表面処理剤を非有孔性基材に付与する行為と、非有孔基材が非発光性微孔膜に十分に共有結合的に結合するように、表面処理剤を持つ非有孔性基材を非発光性微孔膜と混合する行為と、ここで、このようにつくられた結合体が微小配列適用に有用であり、を含む。
【００３２】
本発明の第３の側面は、光学的に受動的な基材からなる生体高分子の微小配列を担持するに有用なマルチ・セル基材を含み、この基材は、光学的に受動的な基材が約３００乃至約７００ｎｍの実質的に全波長で光を吸収するような転相支持体との重量比における、転相支持体と転相支持体に対し実質的に化学的に非反応性である不透明固体と、非有孔性基材と、非有孔性基材を微孔膜に十分に共有結合的に結合するために、微孔膜と非有孔性基材との間に有効に位置する表面処理剤と、ここで、このようにつくられた結合マルチ・セル基材が微小配列適用に有用であり、
を含む。
【００３３】
本発明の別の側面は、膜が大きな正電化を含むような非発光性微孔膜の後処理を含んでよい。そのような処理は圧倒的に負に荷電されている生体高分子を保有する微孔膜能力を増大するのに有用である。
【００３４】
本発明の別の目的と効果は以下に記述、添付の図面および付属の請求の特許請求の範囲から明らかである。
【００３５】
代表的実施例の詳細な説明
別に指示されない場合、以下に定義される用語は下記の意味を有する。
【００３６】
“アナライト”または“アナライト分子”は、その存在、量、および／または同一性が測定されようとしている分子、典型的に巨大分子たとえばポリニュークレオチド、またはポリペプチドを称する。アナライトはリガンド／アンチ−リガンド対の一員である。
【００３７】
“アナライト特定分析試験試薬”は所定のアナライト分子に特定して結合するに有効な分子を称する。試薬はリガンド／アンチ−リガンド結合対の対向する一員である。
【００３８】
“固体支持体上の区域の配列”は好ましくは隔離された区域の直線的、二次元配列または三次元配列であり、各区域は固体支持体表面上に形成された制限面積を有する。
【００３９】
“微小配列”は少なくとも約１００個／ｃｍ２の、好ましくは少なくとも約１０００個／ｃｍ２の隔離区域密度を持つ区域の配列である。微小配列中の区域は約１０−２５０μｍの範囲の寸法たとえば直径を典型的に有し、配列中ではほぼ同じ間隔で他の区域から分離される。
【００４０】
“転相方法”は、“転相膜”をつくるために、種々の形態での転相を含む有孔膜製造技法の公知技術を包含するように意味する。“転相膜”によって、高分子膜構造体のゲル化または沈積により“転相成形用濃厚液”から形成される有孔膜を意味する。“転相成形用濃厚液”は、連続相内に分散する１つ以上の非溶媒の隔離相と共存する、良溶媒に溶解した高分子の連続相からなる。一般的に認められる工業的慣行に従って、高分子膜構造体の形成は、濃厚液の薄層を成形して急冷却する工程を一般的に含み、高分子の沈積と連続相互連結孔構造体中への隔離部（非溶媒相）の転移を効果的に行う。１つの説明方法では、非溶媒（時折“孔形成体”と称される）隔離相から連続体の連結孔へのこの転移は一般的に“転相”として知られる。そのような膜は当該技術に公知である。時折、そのような膜と方法は、成形用濃厚液の組成を３つの主要成分、高分子、溶媒および非溶媒の用語にて記述する可能性に特に関連して“三元転相膜”と方法と呼ばれる。３つの主要成分の存在は“三元”系からなる。この系の種類には、液体転相、蒸発転相、熱転相（ここでは成形して急冷却する前に溶解が高い温度で達成されて持続される）およびその他が含まれる。
【００４１】
複合微小配列スライドは、固体裏材、典型的には顕微鏡ガラス・スライドに結合された有孔ナイロンまたは別の高分子膜からなる。微小配列スライドは、数千のハイブリッド形成分析試験が単葉の微小配列スライドの表面上で同時に実施される、ジーン・シーケンシングと表現解析に使用される。
【００４２】
転相法により形成された微孔ナイロン膜が成形後にまだ湿っているときに、ナイロン膜は乾燥後よりも厚い厚さを有する。膜が表面の全域で伸張され、次に乾燥される場合、ナイロン膜は厚さ方向に収縮する。ナイロン膜はまたそれが接触する表面にしっかりと結合する。ナイロン膜が一度乾燥され次に再湿潤された場合、ナイロン膜は上述の結合特性を発揮しない。さらに重要なことには、一旦ナイロン膜が表面にしっかりと結合された後に湿潤されると、ナイロン膜は結合特性を失う。
【００４３】
ナイロン膜の上述の特性が与えられたとすると、ナイロン膜と基材間の結合が実際に経験される種々の既知の厳しい条件に曝された後に影響を受けないままであるように、基材たとえばガラスへのナイロン膜の付着に関するメカニズムを見出すことを試みることが決められた。たとえば、ナイロン／固体複合スライドは約８０℃、約１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液への浸漬に耐えなければならない。
【００４４】
本出願のために、有機シランは以下の式を有する。
【００４５】
ＲＳｉ（Ｘ）３−ＮＡＮ
ここで、Ｘはエトキシ、メトキシまたは塩素基、およびＲはナイロンと、またはナイロンに結合することができる中間物質と相互に作用する官能基である。“Ａ”基は存在しても存在しなくともよい（Ｎが０、１または２であるかどうかによって）付加的非反応性基である。ナイロンの場合、たとえば、Ｒは、ウレイド、アミノ、カルボキシ、エポキシ、またはナイロンまたはナイロンに結合することができる一部の中間物質に直接結合することができる他の官能基を含むことができる。
【００４６】
種々の実験に基づいて、一部の有機シラン処理材は、膜の化学的または物理的特性に影響しない方法で、有孔ナイロン膜をガラスに結合することがまさしく可能であるように思えた。
【００４７】
ナイロンを固体基材に結合する有効な方法が開発された。この方法では、最初に、ガラス・スライドを３−アミノプロピルトリエトキシシラン（あるアミノシラン）の２％水性エタノール溶液に２分間浸漬した。処理したスライドを約１日間室温で硬化した後、スライドをテトラエチレンペンタアミン（ＴＥＰＡ）を含むポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂（具体的にはチバ社（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）により製造される“レジカート（Ｒｅｓｉｃａｒｔ） Ｅ”）の約３．５％固形分溶液に約１時間浸漬した。スライドを次に、ＤＩ水で洗浄し、膜と積層し、且つオーブン中役１２０℃で約１時間さらに硬化した。新しく調製された複合体は試験する前に次に少なくとも１日間硬化した。この方法はアミノシラン−レジカート−コート（Ａｍｉｎｏｓｉｌａｎｅ−Ｒｅｓｉｃａｒｔ−Ｃｏａｔ（ＡＲＣ））と称された。
【００４８】
レジカートＥは本来的に正に荷電されているけれども、複合体の機能表面はレジカートＥの正電荷特性を示さない。これは、レジカートＥがナイロンとガラスの間の界面に存在するだけであり、ナイロン膜の内表面または外表面上の被覆物としては存在しないという理由による。すなわち、レジカートＥはナイロンに対する表面電荷修正体として機能していない。
【００４９】
ＡＲＣ複合体を荷電修正するためには、別個の電荷修正工程が必要である。たとえば、硬化した試料をＴＥＰＡを有する約３．５％固形分レジカートＥに３分間浸漬し、ＤＩ水でよく洗浄し、振って過剰水を除去し（表面から水の光沢を取除き）、オーブン中焼く０℃で乾燥するまで加熱する。膜のナイロン部を荷電修正する別の方法が可能であり、たとえば、スプレー、ブラシ掛け、または膜の上方表面への電化修正剤の泡適用である。代わりに、ナイロン微孔膜の事前修正層をナイロン成形用濃厚液に対する電荷修正薬品の直接添加によりつくることができる。
【００５０】
１．０％ＳＤＳ溶液中８０℃での膜−ガラス複合体スライドの培養は変化しないＡＲＳ試料を基材から分離しなかった。浸漬後の上述の非修正スライドの表面被覆外観と結合強さは概ね良好であった。結合強さは、複合体を沸点近くの１％ＳＤＳに約１時間曝した後ですら、膜の引張り強さよりも強かった。
【００５１】
上述の電荷修正ＡＲＣ試料はまた結合状態を維持しかが、結合強さは非修正スライドよりも弱い傾向であった。電荷修正ＡＲＣ複合体を試験前に長く硬化した（室温で）ほどそれだけ、結合が強かった。結果は、複合体を荷電処理１日後に試験する場合、複合体はＳＤＳ暴露後にかなりの結合強さを持ったに過ぎない。１週間以上硬化させた場合、複合体の結合強さは極めて良好になる傾向であった。メタニル黄色染料（負に荷電された化合物）の希薄溶液に浸漬したとき、荷電されたＡＲＣ試料は表面上に染料の均一結合を示した。これは均一な正電荷分布を現している。複合体の界面層（荷電されたおよび荷電されない）は染料の高い結合も示した。これはレジカートＥが界面に存在することを現している（期待されるように）。それゆえ、ナイロン構造体の全厚さの全表面（内部および外部）が電荷修正された。上述のように、異なる応用技法により電荷修正を上部表面に制限することが可能でなければならない。
【００５２】
理論に拘束されることを望まないが、間もなく信じられるように、以下に記述されるのは、上述のおよび具体例に記述されるナイロン／ガラス複合体スライドのガラスに対するナイロンの結合を制御する化学である。
【００５３】
第１段階としてナイロンのガラス基材への結合に関する図１に示されるように、約２ｍｌの有機シランを約９５ｍｌのエタノールと約５ｍｌの水とを含む溶液中へ混合する。示されるように、代表的有機シランは４つの官能基を含む。
【００５４】
本出願に関し、シングル「Ｒ」官能基の化学が特に興味深い。有機シランの残りの３つの官能基については、少なくとも１つが加水分解可能な「Ｘ」基である。本出願では、代表的有機シランは、「Ｒ」官能基（定義されるであろう）および「Ｘ」官能基（これはエトキシ、メトキシまたはクロライドであり、いずれも本出願の目的に十分である）と異なる別の種類の官能基を含んでも含まなくともよい。有機シランが別の種類の官能基を含む場合（殆ど水素またはアルキル基の場合が多い）、これらは非反応性であり、図では「Ａ」により表示される。
【００５５】
図２に描かれた反応により示されるように、有機シランが伴う溶液中の水がＸ官能基を加水分解して、有機シラノールをつくる。この反応工程は多くて５分を要する。
【００５６】
図３に示されるように、一旦有機シラノールが形成されると、溶液はガラスと反応する。説明されるように、有機シラノールはガラス表面に結合して、ガラスに「Ｒ」官能基の表面化学を与える。
【００５７】
「Ｒ」がアミノまたはカルボキシ官能基である場合、ガラス・スライドを次にポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂の約３．５％固形分溶液に暴露する。この反応では、樹脂高分子のエポキシ基が、図４ａと図４ｂにそれぞれ説明されるように、アミノ官能基またはカルボキシル官能基と結合する。
【００５８】
ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン高分子の他の末端基は、ナイロンに存在するアミノまたはカルボキシル官能基に結合可能な他のエポキシ官能基を持つ。
【００５９】
工程のこの時点で、成形時のように湿潤しているナイロン膜が、湿潤され薬品処理されたガラス・スライドの頂部上に載せられ、伸張され、適当なところにクリップ止めされる。約１時間約１２０℃で乾燥した後、膜が乾燥することによりガラス表面に結合し、且つエピクロロヒドリン高分子のエポキシ官能基がナイロンのアミノまたはカルボキシル官能基に結合する。
【００６０】
この反応は、図４ａと図４ｂに示すように、基がアミノ官能基であるかカルボキシル官能基であるかに従って、それぞれに進行する。
【００６１】
有機シラノールの「Ｒ」官能基が始めにエポキシ官能基を含む場合、有機シラノールの「Ｒ」官能基はポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン高分子に曝露せずにナイロンと直接結合することができる。従前のように、エポキシ基は、図４に示すように、ナイロンのアミノ官能基またはカルボキシル官能基に結合する。ナイロン膜は、上述のように、膜全体に渡って伸張され、クリップ止めされ且つ乾燥される。
【００６２】
図５は、「Ｒ」基が現す官能基の特定の種類による、ナイロン／ガラス複合体スライドの最終的化学構造を示す。図５ａは、「Ｒ」基がアミノ官能基（具体的には、シランは３−アミノプロピルトリエトキシシランである）で終わるナイロン／ガラス複合体スライドを示す。図５ｂは、「Ｒ」基がカルボキシル官能基（具体的には、１０−カルボメトキシ−デシル−ジメチルクロロシラン）で終わるナイロン／ガラス複合体スライドを示す。図５ａと図５ｂでは、ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン高分子の分子が有機シラン末端基とナイロン基の間にブリッジを形成することに注目を要する。
【００６３】
図５ｃは「Ｒ」基がエポキシ官能基（具体的にはグリシドキシプロピルトリメトキシシラン）である複合体を示す。有機シラン末端基とナイロン基の間に高分子の分子のブリッジが存在しないことに注目を要する。
【００６４】
以下の具体例に従いつくられたナイロン／ガラス複合体スライドの分析から、ガラスとナイロンの重要な部分が直接接触していることにより、２つのスライド成分間の完全分離層を避けている。このようにして、ガラスに対するナイロンの結合は、なんらかの感知できる厚さを持つ接着剤またはグルー層を伴わずに完成した。
【００６５】
生体高分子の微小配列をその表面上に担持に有用なマルチ・セル基材が、具体的にはガラス基材に有効に接合されるナイロン・マルチ・セル基材が、以下に記述される。
【００６６】
金属の半円筒形ドラムは、そのようなスライドの製造に有用であり、図６に示される。永続性テフロン被覆剤（たとえば柄なし小鍋に入れて）でプレコートされた外面をもつ金属のドラムを使用することが有利である。図６の金属の半ドラムを用いて、上述のように処理されたスライドをその上に載せる。次に、各々処理されたスライドの成形時のように湿潤しているナイロン膜と接面する表面をＤＩ水で被覆する。各処理されたスライドを被覆するに十分な量の成形時のように湿潤しているナイロン膜を伸張して処理されたスライドの全面に位置決めして、ガラスと成形時のように湿潤しているナイロン膜との間にいかなる気泡も存在しないように確保する。一旦、成形時のように湿潤しているナイロン膜が処理されたスラライドの全面に位置決めされると、成形時のように湿潤しているナイロン膜は普通の用具たとえばクリップを用いて適切な位置に固着される。
【００６７】
成形時のように湿潤しているナイロン膜／ガラス・スライド結合体は、約１時間の間約１２０℃で対流オーブンに置く。乾燥工程の完了時に、ガラス対膜結合が形成され、付着が強固になる。膜とガラス・スライドの結合シートが、テフロン被覆金属ドラムから容易に剥離され、且つ次に過剰なナイロン膜が、任意の適切なトリミング技法（かみそり切除、打抜き切除、せん断切除等）により、ガラス・スライドから取除かれる。
【００６８】
上記の方法論は、生体高分子の微小配列をその表面上に担持するに有用な正規の非処理マルチ・セル非発光性基材に向けられた。しかしながら、本発明は、蛍光ラベルを採用するアナライト分析試験に用いられる望ましいとはいえない固体基材に関連する多くの問題を克服し、ろ過を含めて多くの他の適用に有用な製品を提供する。
【００６９】
参照により本明細書に組み込んでいる、非発光性基材に向けられた仮出願に開示されるように、配合され（十分にまたは部分的に）被覆され、表面結合された（または同一物の結合）転相基材は、転相支持体と非反応性である且つ部分的にまたは完全に転相支持体の内部にまたはこれと不可逆的に結合した不透明固体を有し、これに関連する従来技術の問題を、取除くことができない場合には、少なくとも低減した。その出願の好ましい実施例では、基材は膜であり、膜は電化を担っても担わなくともよい。蛍光ラベルに基づくアナライト分析試験に採用されるときは、そのような不透明固体を含む基材は、多くの条件下で無数のアナライトのかなり高い検出を与えることが判明した。そのような基材は、不透明固体を欠いているポリアミド基材よりもかなり少ない固有の蛍光と光散乱を与えることが見られた。
【００７０】
用語“転相支持体”は、アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願にて、“転相成形用濃厚液”から高分子膜構造体のゲル化または沈積により形成された高分子支持体として定義された。“転相成形用濃厚液”は、アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願に定義されるように、連続相内に分散した１つ以上の非溶媒の隔離相と共存する、良好な溶媒に溶解した高分子の連続相からなる。高分子膜構造体の形成は、高分子の沈積と連続した相互連結孔構造体中への隔離部（非溶媒相）の転移に影響する、制御された条件下で濃厚液の薄層を成形して急冷却する工程を含んだ。非溶媒（時折“孔形成体”と称される）の隔離相から連続した相互連結孔へのこの転移は、“転相”として一般に知られる。そのような膜が当該技術に公知である。
【００７１】
典型的には、転相支持体は、選択された高分子を混和しやすい溶媒と非溶媒の混合物に溶解し、支持プレ成形体を成形し、次に支持プレ成形体の表面を溶媒と混和しやすい非溶媒（液体または空気）希釈剤と接触させて置く（それにより孔構造体を沈積またはゲル化する）ことにより形成される。
【００７２】
用語“不透明な“は、アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願に、可視光を透過しないという特性を表すとして定義された。用語“固体”は完全には液体でもまたは気体でもまたはいずれでもない物体の構造として定義された。“固体”は内部の孔または溝を有しても有しなくともよい。内部の孔または溝を有する“固体”は。内部の孔または溝内に液体または気体を含んでもよい。
【００７３】
用語“密接に結合した”は、アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願に、１つの物質が他の物質から容易には話されないように１つの物質が別の物質に結合しているとして定義された。アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願とこの出願に用いられるように、“密接に結合した”は、１つの物質と他の物質間で主として化学結合によっている結合を含まない。
【００７４】
アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）出願に開示された好ましい転相は、１つ以上の種類のモノマー間のアミド結合の形成により形成されたポリアミド、有機高分子を含んだ。アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）発明で特に有用なポリアミドはナイロンであった。ナイロンはアミド基の間の脂肪族炭素鎖、通常はアルキレン基を有する。ナイロンのアミド基は非常に極性であり、相互に水素結合することができ、且つＣ−Ｎ結合の部分的二重結合特性に起因して本質的に平面である。ナイロンは中程度の結晶性の高分子であり、結晶性は強い水素結合をＣ＝Ｏ基と形成するＮＨ基の能力に起因している。ナイロンは典型的に異なる大きさと完成度の結晶からなる。拡散散乱ハローを加えるのはナイロンの無定形含有量である。ナイロン６６は、アジピン酸をヘキサメチレンジアミンと反応させることにより典型的に合成され、本発明に特に好まれるナイロンである。ナイロン６６は典型的に、普通の抽出技法では抽出することができない、蛍光性とりん光性の種類を含む。これらの種類は、高分子の分子骨格の熱酸化により形成されるα−ケトイミド構造体の存在と関連し、且つシクロペンタノンの環式エノン二量体とジエノン三量体のアルドール縮合生成物に関連する、または生成物から生じる。これらは全て製造されたとして高分子に存在する（参照：Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ａｎｄ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ Ｎｙｌｏｎ−６６， Ｅｕｒ． Ｐｏｌｙｍ． Ｊ．， ２１（６）， ｐｐ． ５１７−５２６， １９８５）。
【００７５】
アンデオリ（Ａｎｄｒｅｏｌｉ）発明の炭素−ポリアミド基材は、カーボン・ブラックで、ポリアミド支持体たとえばメッシュの表面を被覆する、またはポリアミド支持体たとえばメッシュを含浸することによりつくられる。
【００７６】
ポリアミド、たとえばナイロン６６は成形用濃厚液中に混合されたカーボン・ブラックと共につくられ、そのような濃厚液は米国特許第３，８７６，７３８号明細書および／または米国特許第４，６４５，６０２号明細書に記述され、結果としてカーボン・ブラック充填ポリアミド微孔膜基材が形成される。
【００７７】
ポリアミド基材は平面の固体支持体、容器およびフィルターに形成することができる。好ましいポリアミド基材は、基材が接触しようとしている液体と迅速に濡れることができることであり、好ましくは親水性である。好ましいポリアミド基材はまた有孔性である。ポリアミド基材は微孔膜を有してよい。基材は好ましくはスキンレスであり、すなわち高分子有機体はポリアミドの外部表面から内部表面まで変化しない。ナイロン６６は好ましいポリアミドであり、具体的にはスキンレスの形状であり親水性の微孔膜である。
【００７８】
転相支持体と非反応性であり且つ、望ましい蛍光急冷却特性を持つ転相支持体中に部分的にまたは完全に収容されるまたはこの支持体に不可逆的に結合されるに十分な大きさの任意の不透明固体が使用されてよいけれども、黒色固体特にたとえばカーボン・ブラックが有利に採用される。カーボン・ブラックはエネルギを吸収することによりナイロン６６膜により生成された蛍光性バックグランドをクエンチする。カーボン・ブラックの単純化学は、一旦膜に組み込まれると、核酸結合分析試験、特にサザーン・ブロット（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ）転移ＤＮＡ結合を妨害しないことが判明した。
【００７９】
代わりに、部分的にまたは大部分で高分子マトリクス内に配合された、または適切に且つ密接にそのような微孔膜の表面に結合された顔料（それにより、知覚できる発光なしに、光または所定の波長を反射する一方他の波長の光を吸収する固体を意味する）の適正被覆物がまた採用されてよい。これは特に、アナライトとの相互作用に利用できる顔料の機能性を持つことが望ましいときである。
【００８０】
“改良された非発光性基材”出願の発明者は、活性化された炭素が被覆されたポリアミド基材、特にナイロン基材、および内部に部分的に包含される（すなわち、ポリアミド基材の表面上に露出する一部の活性化された炭素粒子を持つ）活性化炭素を持つポリアミド基材が粒子除去と同様に良好に飲料水中の有機不純物の高い除去を提供することを発見した。ナイロン単独または活性化された炭素単独に反して活性化された炭素−ポリアミド基材を使用して証明される、流体から有機不純物の除去の増加は、活性化された炭素粒子がポリアミド支持体の中に分散されるときに提供される大きな表面に起因する。本出願は、「微量分析の特徴的適用のための微孔膜と固体支持体の改良された組み合わせ体」出願と「改良された非発光性基材」出願の組み合わせに向けられている。この組み合わせは本発明を説明するために設定された以下の具体例に最も良く記述されると信じるが、本発明を限定することは何ら意図していない。
【００８１】
具体例１：低蛍光性ナイロン／ガラス複合体の調製
以下の具体例は、カーボン・ブラック配合（混ぜ込まれた）ナイロン膜の成形、これに続く膜のガラス・スライドに対する永続的付着による複合体の形成を記述する。最終の複合体は約０．０５０８ｍｍ（２ｍｉｌ）厚さである、０．２μｍ名目孔径の微孔性カーボン・ブラック配合ナイロン膜と積層された、２５×７５ｍｍのガラス・スライドからなる。約１６重量％のナイロン６６（モンサント（登録商標）ビディン（Ｖｙｄｙｎｅ）（登録商標）６６Ｚ）、約７７重量％のギ酸、および約７重量％のメタノールからなる濃厚液製剤を米国特許第３，６７６，７３８号明細書と米国特許第４，６４５，６０２号明細書に開示される方法を用いて調製した。各特許に開示事項が本明細書に全体的に参照により取りこんでいる。これは（白色）対照膜の調製に用いる標準製剤と方法である。
【００８２】
本具体例のカーボン・ブラック含有膜調製するために、方法は同様であるが、溶媒にナイロンを添加する前にカーボン・ブラックを添加することにより変更する。この実施例で調製した濃厚液用の具体的最終組成は、各成分に対して重量％で表して、表１Ａに示す。
【００８３】
手短に言えば、変更した方法は以下の工程からなった。すなわち、液体成分ギ酸とメタノールを組み合わせて、閉鎖混合容器で完全に反応させた。ギ酸とメタノールを組み合わせた後、カーボン・ブラックを表１Ｂに示すような重量比でナイロン６６の添加に先立ち混合物に添加した。これは、閉鎖容器を開き、カーボン・ブラックの必要量を液体濃厚液溶媒混合物に直接添加することにより完了した。次に、ナイロン６６を混合物に添加し、得られた組成物を、全ナイロンが溶解するまで、テクネ（Ｔｅｃｈｎｅ）Ｃ−８５Ｄ恒温水レサーキュレーターを用いて高温浴中で約３４℃の最高温度にジャー・ミル内で回転させた。ジャーをジャー・ミルから取除いた。プロペラ軸用密封用具付きカップを、揮発損失を最小にするため組立てジャーに取付けた。濃厚液を次に、カーボン粒子を完全に分散させるように試みて、同じ容器内にでＴ−ｌｉｎｅ（登録商標）モデル＃１３４−１実験用ミキサーに取付けられた３．１７５ｃｍ（１．２５ｉｎ）３ブレード・マリン・プロペラで混合した。この第２の混合工程を約１時間約４５０ｒｐｍで継続した。小部分（約２０ｍｌ）の濃厚液を後で成形して、実験装置で急冷却し、米国特許第３，８７６，７３８号明細書に記述された成形方法をまねて、約０．１２７ｍｍ（５ｍｉｌ）の湿潤時厚さの単層、非補強の微孔ナイロン膜を調製した。膜をその後脱イオン水で洗浄し、その上に折り重ね（約０．２５４ｍｍ（１０ｍｉｌ）湿潤の構造体を形成し）、拘束条件下で乾燥し縦方向（ｘ方向）または幅方向（ｙ方向）における収縮を防止する。膜は物理的に十分に強く、その後の加工（すすぎ、乾燥、取扱い等）に耐えることが判明した。添加カーボンを伴わない膜と同様であった。膜を激しく摩擦したとき、または接着テープを適用して取除いたとき、物理的に損傷され且つ取除かれナイロン部分に捕らえられたものを除いて、いかなるカーボンも移らなかった。実質的に残存する全てのカーボンがナイロン・マトリクスに密接に結合した。
【００８４】
収縮（ｚ方向、崩壊湿潤孔構造が完成した後）後で約０．２０３ｍｍ（８ｍｉｌ）の結合厚さを持つ、乾燥された、２層の非補強ナイロン膜が得られ、これにつき多くの物理的測定を以下のように実施した。
【００８５】
初期泡点（“ＩＢＰ”）と泡総括点（“ＦＡＯＰ”）を、米国特許第４，６４５，６０２号明細書に従い湿潤流体として脱イオン水を用いて測定した。平均流動孔（“ＭＦＰ”）試験をＡＳＴＭ　Ｆ３１６−７０とＡＮＳＩ／ＡＳＴＭ　Ｆ３１６−７０のように行った。非補強微孔ナイロン膜の水流動速度測定を米国特許第４，４７３，４７５号明細書に記述されるように実施した。乾燥膜厚さを１．２７ｃｍ（０．５ｉｎ）プラテン・目盛盤式厚さ表示計（精度＋−０．００１２７ｍｍ（＋−０．０５ｍｉｌ））を用いて測定した。膜の蛍光を、パーキン−エルマーＬＳ５０Ｂ蛍光分光光度計を励起／放射をそれぞれ２９０／３２０ｎｍにセットして測定した（励起／放射スリットを共に２．５ｎｍにセット）。Ｌ（明度）値をマクベス・カラーアイ３１００色度計を用いて測定した。Ｌ値は色度解析にためのＣＩＥＬ＊ａ＊ｂ＊標準の一部であり、１００が純粋白色で、０が全黒色である。Ｌ値は灰色の濃度につき有用な測定値を提供する。
【００８６】
ＭＦＰ、ＩＢＰ、ＦＡＯＰおよび流動が、製剤への炭素の添加に従いカーボン濃度の増加と直接的には相関しないで変化することが認められる。直接的相関関係は濃厚溶液の混合の間の熱蓄積における差異に起因するとは認められなかった。濃厚溶液の構造が元の製剤温度を超えた温度上昇により変化されることができることは公知である（参照：２０００年５月２日発行の米国特許第６，０５６，５２９号明細書、この開示事項は本明細書に参照により取込んでいる）。蛍光強度は、一方、基材中のカーボン粒子の濃度に相関した。１：５２のカーボン：ナイロン混合基材は標準白色ナイロン基材よりも約９３．１３％弱い蛍光を示すことが判明した。１：１５のカーボン：ナイロン混合基材は標準白色ナイロン基材よりも約８２．８４％弱い蛍光を示すことが判明した。
【００８７】
【表１Ａ】
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【００８８】
【表１Ｂ】
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【００８９】
しかしながら、一旦乾燥すると、成形物はガラス・スライド上へ複合体として結合することができなかった。べつの成形物をガラスに結合するために特別につくった。この成形物は湿潤成形の厚さを決める成形間隙を除いて、同じ濃厚溶液製剤、装置および技法を用いてつくった。薄い単一層が生成する小さな間隙を選択した。この成形物を湿潤状態に保持して、積層工程用に保存した。
【００９０】
方法の次の工程、ガラス・スライドへの湿潤成形物の積層は、約９５％エタノールと約５％水（容量％）の約１００ｍｌ溶液を調製することで開始した。約２ｍｌの３−アミノプロピルトリエトキシルシラン（ユナイテド・ケミカル（Ｕｎｉｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｉｓ）社製造、カタログ＃Ａ０７５０）を上記溶液に添加した。結合された溶液を完全に混合し、約５分間静置した。
【００９１】
４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライド（部品＃４８３００−０２５）を蒸発皿に置き、３−アミノプロピルトリエトキシルシラン溶液をＶＷＲブランド・ミクロスライドを持つ蒸発皿中に注入した。４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドは３−アミノプロピルトリエトキシルシラン溶液に約２分間沈んだ状態を維持した。不純物混入の可能性を低減するため、４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドを常に個人用着用手袋により取り扱った。
【００９２】
３−アミノプロピルトリエトキシルシラン溶液を蒸発皿から排出し、４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドをすすぐために蒸発皿中にエタノールを注入した。次に、４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドをエタノール溶液から取除き（手袋をはめた手で）、紙タオルで吸取り乾燥した。乾燥処置の間に、４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドの表面にかき傷をつけないように注意を払った。
【００９３】
この時点で、４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドを目視欠点、または別の欠陥につき検査する。目視欠点または別の欠陥を持つ４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドいずれをも排除して使用しなかった。
【００９４】
４枚のＶＷＲブランド・ミクロスライドを次に、蒸発皿に入れ、対流オーブン中で約１２０℃に約１０分間加熱した。生き残ったＶＷＲブランド・ミクロスライドに覆いをして一夜硬化した。
【００９５】
翌日、ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂（米国特許第４，７１１，７９３号明細書に記述される）の約３．５％固形分溶液を、下記のものを５００ｍｌフラスコに添加して新成分の添加工程後毎に完全に混合するすることによりつくった：
すなわち、約４．４ｇＮａＯＨ、次に
約４０７．５ｇＤＩ水、次に
約８７．５ｇ２０％固形分ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂（具体的には、「レジカートＥ」、チバ社（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）が製造）、次に
約０．１２５ｇＴＥＰＡ（テトラエチレンペンタアミン）。
【００９６】
ＶＷＲブランド・ミクロスライドを次に、樹脂溶液に約半時間沈めた。ＶＷＲブランド・ミクロスライドを溶液から取り出すとき、ＶＷＲブランド・ミクロスライドをＤＩ水で十分にすすぎ、直ちに金属半ドラム上に載せた。
【００９７】
次に、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜（上記および米国特許第３，８７６，７３８号明細書と米国特許第４，７０７，２６５号明細書に記載される実験室成形方法によりつくられた）をＶＷＲブランド・ミクロスライドの全面に有効に位置決めし、伸張した。成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜は個人的着用手袋により取り扱った。使用した、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜は成形され、急冷却され、ＤＩ水で洗浄されたが、未だ乾燥工程には曝されなかった。それゆえ、用語“成形時のように湿潤している”を使用した。成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜は約０．２μｍの公称孔径と約３１００００（４５ｐｓｉ）の目標初期泡点（一旦乾燥した）を有した。
【００９８】
ＤＩ水を、スライドをすすいで、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜／ＶＷＲブランド・ミクロスライド結合体の表面からいかなる粒子をも取除いた。この工程の間に、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜で被覆する前にＶＷＲブランド・ミクロスライドの上にＤＩ水の層を残すことによって、ＶＷＲブランド・ミクロスライドの周りに膜を適用して移動する能力が高くなり、且つ従ってそれらの間の気泡を除去する能力が高くなることが見出された。
【００９９】
ＶＷＲブランド・ミクロスライドへの成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜の適用の間に、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜と各ＶＷＲブランド・ミクロスライドの間のいかなる気泡も確実に除去されるように注意を払った。成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜を各ＶＷＲブランド・ミクロスライド上へ平らに広げ、全てのしわを取除いた。この処置の説明につき図５を参照ください。
【０１００】
ＶＷＲブランド・ミクロスライド上へ一旦位置決めしたとき、成形時のように湿潤している有孔性ナイロン膜を、規則的間隔で半ドラムの周囲のまわりに適用した複数クリップで適切な位置にクリップ止めした。特定のクリップはテフロン被覆の保持クリップであった。このクリップは当該技術に知られるように乾燥後の膜に接着しない。次に、全組み立て体を対流オーブン中約１２０℃で約１時間加熱した。加熱後、過剰の今や乾燥した有孔性ナイロン膜を、公知技術に従いＶＷＲブランド・ミクロスライドから不要部を切落として取除いた。
【０１０１】
得られたナイロン／ガラス複合体スライドを電荷修正する場合、複合体を次に蒸発皿に入れ、３．５％固形分ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂溶液の別に新たにつくった溶液を、得られたナイロン／ガラス複合体スライドを持つ蒸発皿中に注入した。
【０１０２】
得られたナイロン／ガラス複合体スライドを蒸発皿に５分間沈んだままにしておき、次に蒸発皿から取り出し、ＤＩ水ですすいだ。大部分の過剰水を得られたナイロン／ガラス複合体スライドから振り払って、得られたナイロン／ガラス複合体スライドを蒸発皿に入れ、乾燥するまで対流オーブン中約６０℃で約２０乃至約３０分間加熱した。
【０１０３】
得られたナイロン／ガラス複合体スライド（荷電されたおよび荷電されなかった）はガラス表面にしっかリ結合した有孔性ナイロン膜の非常に薄く平滑な層を示した。膜の表面は奇形、傷跡または粒子を有しないようであった。
【０１０４】
得られたナイロン／ガラス複合体スライドをＤＩ水、約０．４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液、または約１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）水溶液、中で試験したとき、ナイロン部は即座に湿潤した。一般には、複合体のナイロン部とガラス部間の結合は強力であり、ナイロン部はガラス部から引き剥がすことができなかった。
【０１０５】
得られたナイロン／ガラス複合体スライドのナイロン／ガラス結合は、ナイロン／ガラス複合体スライドをＤＩ水またはＳＤＳの沸騰溶液中に垂直に急速に沈めたときですら、強力のままであった。そのような沸騰溶液中への急速浸漬は膜を徐々に湿潤しない、且つ高圧気泡がナイロン膜とガラス間に発現することができる。処理の過酷さにもかかわらず、変化しなかったガラス／ナイロン複合体スライドはその引き剥がし強度を保有した、すなわちナイロン膜はガラスから剥がれる前に破れるであろう。
【０１０６】
上述のようにつくられたガラス／ナイロン複合体がメタニル黄色染料でスポットされたとき、ナイロン膜はスポットされた区域の全域に均一な着色を示した。ナイロン膜とガラスの界面は、この界面がエピクロリン樹脂を含んだ故に、特に強く着色した。具体的には、ポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン樹脂の第４アミン基の正電荷がナイロンのアミン基よりもさらにより強く負に荷電した染料分子を付着したと信じられる。
【０１０７】
上記に見られるように、この具体例が示していることは、生体高分子の微小配列をその表面上に担持するに有用なマルチ・セルが、成形時のように湿潤しているナイロン膜とガラス基材を用いて、ガラス基材に対する成形時のように湿潤しているナイロン膜の共有結合を容易にする表面処理剤でガラス基材を処理することにより、微小配列に有用であるように、つくられたことである。
【０１０８】
表１Ｂから分かるように、カーボン・ブラックの添加により２９０乃至３２０ｎｍの励起／放射での膜の蛍光が減少する。色度計のＬ値は、明度の尺度であり、カーボン・ブラックの添加により膜が暗色化することを示している。
【０１０９】
このようにして、明確なことは、進歩性を持つカーボン・ブラック配合ナイロン膜は、進歩性を持つ表面処理剤と組み合わせたときに、進歩性を持つマルチ・セル非発光性基材複合体を形成し、複合体は、共有結合により非有孔性基材に効果的に付着されたカーボン・ブラック配合有孔性ナイロン膜を有し、その結果これによりつくられた結合体が微小配列適用に有用である、ことである。
【０１１０】
カーボン・ブラック配合は蛍光の減少に有効であったが、拡大下で注目されたことは、顕微鏡レベルでの構造体全域におけるカーボンの分散が完全に均一程でなかったことである。期待されることは、薬品の混合と配合により、分散の均一性が、それ故微小配列検出適用におけるこの進歩性を持つ複合体の有効性が改良されることである。
【０１１１】
本明細書に含まれる物品、物品を作るための装置と方法が本発明の好ましい実施例を構成するけれども、本発明がこれらのまさしくその物品、装置および方法に限定されない、且つ付属の特許請求の範囲に定められる本発明の範囲から逸脱することなしに変更がなされることを理解しなければならない。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は本出願で用いる代表的有機シランの図式描写である。
【図２】
図２は本出願で用いる有機シラノールをつくる有機シランの加水分解の代表的図式描写である。
【図３】
溶液中のシラノールがガラス表面上のシラノールと縮合して、水を放出し且つ本出願の処理されたガラス表面をつくるシラノール縮合反応の代表的図式描写である。
【図４ａ】
本出願に有用な、エポキシとアミノ官能基と反応の代表的図式描写である。
【図４ｂ】
本出願に有用な、エポキシとカルボキシル官能基と反応の代表的図式描写である。
【図５ａ】
３−アミノプロピルトリエトキシシランとポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン高分子の使用から得られる、本出願に有用なナイロンとガラス間結合の代表的図式描写である。
【図５ｂ】
１−カルボメトキシ−デシル−ジメチルクロロシランとポリアミドポリアミンエピクロロヒドリン高分子の使用から得られる、本出願に有用なナイロンとガラス間結合の代表的図式描写である。
【図５ｃ】
グリシドキシプロピルトリメトキシシランの使用から得られる、本出願に有用なナイロンとガラス間結合の代表的図式描写である。
【図６】
図６は本発明に有用なガラス・スライドの配置を描く代表的金属半円筒形体の図式描写である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図５ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004502928.tif 000058
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