(57)【要約】本発明は、化粧用及び医薬用組成物、及び緑色発光物質の使用方法に関する。処理した皮膚細胞対未処理の対照における酸素ラジカル濃度に対して観察された緑色光の効果に基づき、緑色発光物質を抗酸化剤として使用して、酸素フリーラジカルによって引き起こされる障害に対して皮膚細胞を保護し、並びにＵＶ照射の障害作用に対して皮膚を保護することができる。緑色発光物質の例としては、顔料または鉱物等の緑色燐光または蛍光物質が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化剤として有効な量の少なくとも１種の緑色燐光発光物質を含む、医薬用または化粧用組成物。
【請求項２】
燐光物質が、銅もしくはマンガンまたはその組み合わせをドーピングした硫化亜鉛、アルミン酸ストロンチウム、燐光発光性方解石、希土類元素をドーピングしたセラミック酸化物、銅または希土類元素をドーピングしたホウケイ酸亜鉛、銅または希土類元素でプレーティングした金属、及びセシウム塩からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
燐光発光物質がアルミン酸ストロンチウム、硫化亜鉛、または燐光発光性方解石である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
組成物の約０．０１から約５０重量％の範囲で含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
組成物の約１から約１０重量％の範囲で含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
更に緑色蛍光物質を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
蛍光物質が、蛍光鉱物粉体、蛍光生体分子、及び蛍光有機及び無機色素からなる群から選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
蛍光物質が蛍光鉱物粉体である、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
サンスクリーン製品である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
更にサンスクリーン剤を含む、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
緑色光源を提供する少なくとも１種の化合物を含む組成物を皮膚に適用することを含む、酸素フリーラジカルの皮膚に対する障害を防止または低減する方法。
【請求項１２】
組成物が緑色燐光物質、緑色蛍光物質、またはその組み合わせを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
燐光物質が、銅もしくはマンガンまたはその組み合わせをドーピングした硫化亜鉛、アルミン酸ストロンチウム、燐光発光性方解石、希土類元素をドーピングしたセラミック酸化物、銅または希土類元素をドーピングしたホウケイ酸亜鉛、銅または希土類元素でプレーティングした金属、及びセシウム塩からなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
蛍光物質が鉱物粉体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
組成物が硫化亜鉛またはアルミン酸ストロンチウム、及び蛍光鉱物粉体を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
組成物に緑色燐光物質、緑色蛍光物質、またはその組み合わせを組み込むことを含む、化粧用または医薬用組成物に対する酸素フリーラジカルの障害を防止または低減する方法。
【請求項１７】
組成物が緑色燐光物質を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
緑色燐光物質、緑色蛍光物質、またはその組み合わせを含む組成物を皮膚に適用することを含む、皮膚に対するＵＶ暴露の影響を防止または低減する方法。
【請求項１９】
組成物をＵＶ暴露の前に適用する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
組成物が、銅もしくはマンガンまたはその組み合わせをドーピングした硫化亜鉛、アルミン酸ストロンチウム、燐光発光性方解石、希土類元素をドーピングしたセラミック酸化物、銅または希土類元素をドーピングしたホウケイ酸亜鉛、銅または希土類元素でプレーティングした金属、及びセシウム塩からなる群から選択される燐光物質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
組成物が、蛍光鉱物粉体、蛍光生体分子、及び蛍光有機及び無機色素からなる群から選択される蛍光物質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
組成物が約０．０１から約５０％の燐光物質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
組成物が約１から約１０％の燐光物質を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
燐光物質が硫化亜鉛またはアルミン酸ストロンチウムである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
組成物が少なくとも１種の蛍光鉱物粉体を含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
組成物が燐光物質と蛍光物質の双方を含む、請求項１８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、化粧用及び医薬用組成物ならびにそれらを用いる方法に関する。より具体的には、本発明は抗酸化またはフリーラジカル除去活性を有する組成物に関する。
【０００２】
本発明の背景
生体内では、いかなる所与の時点においても数千に及ぶ生化学的プロセスが進行している。これらの内在する好気的プロセスの多くは、副産物として、非常に反応性の高い分子を必然的に生ずる。これらの反応性分子の多くは、一般に、不対電子を有する１原子または原子集団として定義されるフリーラジカルとして知られている。しかしながら、他のフリーラジカル以外の反応種もまた、これらのプロセスによって生成される。反応性物質を生成するプロセスは、酵素によるもの、例えば、食作用、呼吸、チトクロームＰ−４５０系、およびプロスタグランジン合成に関与するものでありうるが、酵素によらないもの、例えば有機化合物と酸素との反応または電離性放射線によって開始される反応などもありうる。これらの反応性分子は、制御されない場合、迅速かつランダムにその近傍にある分子と反応して、身体の正常な生理的プロセスを妨げ得る毒性生成物を生じる可能性がある。しかしながら身体は、これらの内因性反応によって生じ得る障害を通常の環境下でかなりの程度まで阻止した状態に保つことができる、多くの防御手段を有している。
【０００３】
さらに、これらの望ましくない反応には多くの外来性の原因が存在する。現代人が日常的に曝されている多くの環境因子、例えば様々な食物成分、殺虫剤、日光、煙草の煙、大気汚染物質、麻酔薬、および芳香族炭化水素はまた、高反応種を生成し得る。したがって、これらの反応の累積的効果が身体の正常な修復機構を壊滅させ得ること、そしておそらくは常に結局は壊滅させてしまうことは、驚くべきことではない。抑制されないフリーラジカル反応が、多くの疾病状態（例えば、気腫、炎症、癌、アテローム硬化症および白内障）に主たる関与ではなくてもある程度関与しているということについて、多くの証拠が存在している。またフリーラジカル反応は、自然老化プロセスに対して主要な寄与効果を有すると広く考えられている。
【０００４】
通常生成される全ての反応種のうち最も反応性の高いものであって、かつ生物学的に最も重要なものとして、酸素含有物が挙げられる。これらとしては、例えば部分的に還元された酸素フリーラジカル（例えばスーパーオキシドアニオンラジカル、過酸化水素、およびヒドロキシルイオン）ならびに一重項酸素が挙げられる。これらの反応性酸素種は、細胞構成要素に重大な障害を引き起こし得る数多くの反応に関与している。例えば酸化性（ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ）ラジカルは、ＤＮＡの塩基および糖分子を攻撃してその分子構造を改変し、それによって生物学的機能を妨げ得る。それらはまた、細胞膜中の不飽和脂肪酸と相互作用して脂質の過酸化を引き起こすこともあり得る。その結果、前記膜のタンパク質：脂質相互作用の改変だけでなく、望ましくない効果（例えばＤＮＡ合成、アデニルシクラーゼおよびグルコース−６−ホスフェートの阻害、毛細管透過性の増大、ならびに血小板凝集の阻害等）を宿主に及ぼし得る分解産物の生成をももたらす。
【０００５】
酸素分子は事実上いかなる場所にも存在し、また電子を自由に受容することから、これらの酸素を中心とする（ｏｘｙｇｅｎ−ｃｅｎｔｅｒｅｄ）ラジカルは、おそらく細胞性フリーラジカル反応の最も一般的なメディエーターである。もちろん、それらは好気的代謝の結果として日常的に生成される。しかしながら、非常に多くの量が光化学反応の結果として生成される。有機化合物または無機化合物の多くはＵＶ照射をある程度吸収するであろうし、吸収されたエネルギーが化学反応を促進するであろう。光が酸素を中心とするラジカルの生成を引き起こすための機構として、様々な機構が認められている。しかしながら、機構には関係なく、曝露された皮膚上での日光と有機物質または無機物質との相互作用によって、皮膚上で１種以上の反応性酸素種が生成され得ることは明らかである。
【０００６】
おそらくは皮膚上の酸素ラジカルの存在が、日光への長時間曝露の多数の望ましくない影響の原因であることが、近年になって認められてきた。例えば、身体全体に一般的に観察される老化現象が、光老化の結果としてしばしばより早い時期に皮膚にて観察される。他の影響の中でもこの光老化は、エラスチンおよびコラーゲンの劣化プロセスを加速するのである。また、あらゆる種類の皮膚癌のリスクが増大する。この必要性に対し、スキンケア産業は、新規でより有効性の高い抗酸化剤、すなわちフリーラジカルによって媒介される酸化プロセスを何らかの方法で妨げる化合物、の探索を続けてきた。抗酸化剤は、反応を完全に妨げるか、またはすでに開始された反応の段階の連鎖を中断することにより、作用し得る。多くの化合物、例えばフェノールまたは硫化物が、酸化プロセスを妨げることができることが知られている。しかしながら、そのような化合物は、皮膚上で使用することは適切ではなかったり、化粧品もしくは医薬品として許容される様式で配合することが困難であったりする場合がある。
【０００７】
本発明は、皮膚上のフリーラジカルを抑制または除去するための可視光の使用に関連した新規概念および観察結果に基づく、新規の抗酸化剤組成物を提供する。
【０００８】
発明の概要
本発明は、皮膚に対するフリーラジカルによる障害を阻止または低減する方法であって、緑色波長の光源を含む局所用組成物を皮膚に適用することを含む方法に関する。緑色光は、フリーラジカルの生成を明らかに抑制する（ｑｕｅｎｃｈ）かまたは妨げ、それによりそれが適用される皮膚をフリーラジカルによる障害から保護し、さらに上記組成物をも該組成物中に存在するフリーラジカルの潜在的な破壊作用から保護することが可能であると思われる。本発明はまた、緑色波長の光源を１種以上含む、新規の局所用化粧用または医薬用組成物を提供する。該組成物中での使用に特に好ましいのは、緑色燐光物質と緑色蛍光物質との組み合わせであり、該組成物は単に日光に曝露されることによって活性化され得る。
【０００９】
発明の詳細な説明
緑色光が特定物質の化学的挙動を変化させる能力はすでに開示されている。「コモロザン効果」として知られるように、乾燥酵素基質に対し、それを溶解する前に緑色光（λ＝５４６ ｎｍまたは当該範囲内）によって所定の曝露時間にわたり照射することにより、該酵素の反応速度が増大することが示されている（Ｃｏｍｏｒｏｓａｎら， Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ ３： ３４３， １９７１； Ｃｏｍｏｒｏｓａｎ， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｑｕａｎｔｕｍ Ｃｈｅｍ．： Ｑｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｓｙｍｐ． Ｉ： ２２１， １９７４； Ｃｏｍｏｒｏｓａｎら， Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ １２： ４９７， １９８０）。しかし逆に、フィルム現像剤に同様に照射する場合、同様の効果が観察されるが、それは照射された物質に対するフィルムの不透過性の低下につながる（Ｐｅｓｃｈｅｌら， Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． Ｐｈｙｓｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｄ． ＮＭＲ １９： ２７１−２７４， １９８７）。しかしながら、観察結果が興味深いものであるが、それらはその現象を広く実用的な市販用途につながっていない。
【００１０】
今回、緑色光の曝露が化学組成物における抗酸化効果を示すという予期しない発見がなされた。より具体的には、過酸化物ラジカルを生成するように特別に設計された実験において、フリーラジカルを生成する組成物を緑色光によって処理することにより、処理組成物中に認められるフリーラジカルのレベルが、対照と比較して低減することが見出された。認められたこの効果は、２つの理由のために特に興味深い。第１には、固体状態で生じるコモロザン効果とは異なり、この効果が水系に対して初めて伝えられたことである。第２には、緑色光の光源は上記処理の有効性に影響を及ぼさないことである。つまり、緑色光は外的光源、すなわち組成物に照射するために用いられるランプに由来するものであっても、内部光源、すなわち組成物に含有された緑色光発光物質であってもよい。どちらの場合でも、フリーラジカルは相当量低減される。本発明のさらなる驚くべき側面は、観察した処理は特定の曝露時間に限定されないことであり、これは緑色光の活性が厳密な曝露時間の間にのみ見出されるという本現象の以前の観察結果とは異なっている。対照的に、本発明の緑色光の効果は、処理した物質に緑色光を長時間曝露することによって活性を低下させることなく得ることができ、さらに該効果は、特定の曝露時間に決定論的に依存するものではない。
【００１１】
好ましい実施形態においては、組成物の処理は該組成物に直接緑色光源を含有させることによって達成される。このことは、組成物中へ緑色燐光性顔料を含有させることによって、最も容易に達成される。本明細書の記載における「燐光性顔料」は、下記に列挙するような従来の意味での燐光性顔料だけでなく、約５００〜５５０ｎｍの波長範囲の燐光を発する、化粧品として許容される任意の物質をも意味する。燐光性顔料の存在により、緑色光源が組成物中に継続的に存在するようになる。すなわち、燐光が通常光のＵＶ成分に曝露されることによって活性化され、その効果は数時間にわたり持続する。緑色燐光特性を有することが知られている数種の異なる化合物が存在しており、限定するものではないが、硫化亜鉛（銅および／またはマンガンを添加したもの）、アルミン酸ストロンチウムもしくは燐光発光性方解石、希土類元素（例えばユーロピウム、テルビウム、またはジスプロシウム）をドーピングしたセラミック酸化物、銅もしくは希土類元素をドーピングしたホウケイ酸亜鉛（ガラス）、銅もしくは希土類元素でプレーティングしたモリブデン等の金属、およびセシウム塩が挙げられる。本発明における使用のために特に好ましいものは、硫化亜鉛およびアルミン酸ストロンチウムである。
【００１２】
実際の使用において、顔料は、そのままの状態で、または、その光安定性を増大させるかもしくは製剤中でのその分散を促進するために被覆もしくはマイクロカプセル封入して、用いることができる。上記顔料に対して用いられる被覆剤は、慣用の化粧用顔料を被覆するために通常用いられる任意のものであってよい。有用な顔料被覆剤の例としては、メチコン、ジメチコン、シラン、ポリエチレン、金属石鹸、レシチン、ワックス、ナイロン、またはフルオロケミカル等の疎水性被覆剤がある。親水性被覆剤の例としては、ジメチコンコポリオールが挙げられる。被覆剤の性質は選択するビヒクルの種類に依存するであろう。使用する顔料の量は選択する顔料の燐光強度に依存するが、通常は組成物全体の重量の約０．０１〜約５０重量％、好ましくは約１〜約１０重量％であり、顔料を被覆する場合には通常この範囲の上限の量が特に有用である。
【００１３】
特に好適な実施形態においては、燐光性顔料は蛍光緑色光源と組み合わせられる。緑色蛍光の好適な光源は、蛍光鉱物の粉体である。特に好適なものは、緑色〜青緑色の蛍光を発する鉱物である。この種の鉱物としては、限定するものではないが、アンダルサイトおよび空晶石（ケイ酸アルミニウム）、アンブリゴナイト（塩基性リチウムアルミニウムホスホレート）、フェナサイト（ケイ酸ベリリウム）、バリシア石（含水リン酸アルミニウム）、蛇紋石（塩基性ケイ酸マグネシウム）、アマゾナイト（ケイ酸アルミニウムカリウム）、アメシスト（二酸化ケイ素）、金緑石（酸化アルミニウムベリリウム）、トルコ石（銅含有塩基性リン酸アルミニウム）、無色、黄色もしくはピンク色のトルマリン（ホウケイ酸塩）、琥珀（琥珀酸塩／各種樹脂）、オパール（含水二酸化ケイ素）、白鉛鉱（炭酸鉛）、フクサイト（ケイ酸アルミニウムカリウム）、透輝石（ケイ酸マグネシウムカルシウム）、曹灰硼石（含水ホウ酸カルシウムナトリウム）、アラゴナイト（炭酸カルシウム）、およびケイ酸亜鉛鉱（ケイ酸亜鉛）が挙げられる。これらのうち特に好適なものはケイ酸塩であり、特に好適なのは強力な蛍光を発するもの、例えばフクサイト、透輝石、曹灰硼石、アラゴナイト、およびケイ酸亜鉛鉱である。
【００１４】
蛍光粉体は、標準的な製粉技術、例えばジェットミル、ローラーミル、または粉砕などによって調製することができる。粉体の平均粒子サイズは、美的な理由から、通常は約４５μを超えないものである。該粒子サイズは好ましくは０．５〜２０μであり、より好ましくは約０．５〜５μであるが、より硬質の鉱物はこの推奨範囲以内で製粉することが好ましい。粉体の量は鉱物の蛍光強度および色に応じて様々になる可能性があり、約０．０１〜約５０％の量で存在すればよいが、より好ましくは用いるその量は約０．０１〜約１０％であろう。
【００１５】
蛍光鉱物粉体が特に好ましいが、他の蛍光物質もまた用いることができる。その例として、限定するものではないが蛍光生体分子が挙げられ、例えば緑色蛍光タンパク質、蛍光プランクトン、または蛍光有機もしくは無機色素であり、それらは場合によりポリマーと結合していても良い。これらの物質は、それらの相対蛍光強度を考慮しながら、蛍光鉱物粉体と同等の量で使用することができる。
【００１６】
緑色光源は、化粧品製剤に通常用いられる任意の好都合な形態に含有させることができる。有用な形態の例としては、加熱注入製剤、油中水型エマルジョン、水中油型エマルジョン、ゲル剤、スティック剤、噴霧剤、無水製剤、および押圧粉末または散状粉末が挙げられる。製品はまた、メイクアップ製品またはスキンケア製品であってよい。緑色光発光成分を含有することにより、局所用製剤において多数の異なる効果を達成することができる。記載する第１としては、抗酸化剤としてそれを用いることは当然可能であり、それによって２つの生じ得る効果を達成する。その第１は、その存在によって、それを含有させた配合物の分解が遅延するかまたは妨げられ、すなわちそれが保存剤として作用する。また、フリーラジカル生成という環境刺激への通常の曝露もしくは長時間曝露によって皮膚上に通常生じるであろう酸素フリーラジカルの数を低減または除去することにより、上記製剤を適用する皮膚を保護するようにも作用する。同様に、ＵＶ照射の障害作用に対する、皮膚細胞保護効果が示される。
【００１７】
本発明の組成物は、様々な方法で適用することができるが、その方法は最終製品の意図する用途に依存する。例えば、組成物は皮膚に対する日常的な抗酸化処置剤として用いることができ、その適用によって、フリーラジカル生成刺激への日常的曝露のために生じ得るフリーラジカルによるあらゆる障害が妨げられるかまたは軽減される。したがって、この目的上、上記組成物の恩恵を得るための好適な方法は、常時適用である。例えば、上記組成物の局所適用は、皮膚１ｃｍ２当たり約０．１ｍｇ〜２ｍｇの量で、１週当たりおよそ１回から１日当たりおよそ４〜５回、好ましくは１週間におよそ３回から１日当たりおよそ３回、最も好ましくは１日当たりおよそ１または２回の範囲で行う。「常時」適用と言うとき、本明細書では、局所適用の期間が使用者の生存期間を通じてのものである場合があり、好ましくは少なくとも約１ヶ月の期間であり、より好ましくは約３ヶ月〜約２０年であり、さらに好ましくは約６ヶ月〜約１０年であり、なお好ましいのは約１年〜約５年であることを意味しており、それによって短期的には皮膚上のフリーラジカルの存在量を速やかに低減し、最終的、長期的には光老化もしくは時間的老化の内的兆候および外的兆候の両方を治療または阻止する。
【００１８】
記載のように、上記組成物は、ＵＶ照射の障害作用を治療または阻止するために用いることもできる。この実施形態においては、組成物は上述の通り、偶然のＵＶ曝露に対する通常の保護剤として適用することができる。しかしさらに、この使用においては、例えば使用者が太陽の下でかなりの時間を過ごす長時間のアウトドア活動を予期している場合は日光に曝露する前に、および／またはそのような曝露時間中に、上記組成物を適用することが好ましいだろう。
【００１９】
本発明を以下の実施例によってさらに説明するがそれら実施例は限定的なものではない。
【００２０】
実施例
実施例１
本実施例は、フリーラジカル生成環境における酸素フリーラジカルの量を低減する上での緑色光の効果を示すものである。
【００２１】
緑色光の抗酸化特性を試験するために、２種の緑色光源について評価する。緑色光は、アルミン酸ストロンチウム燐光性顔料、ならびに５４７ｎｍフィルターで濾光する水銀蒸気ランプを用いて発せられる。顔料を用いる研究では、反応キュベットの全ての側面を４枚のカバースリップで囲み、アルミニウム箔の薄片で覆った広口瓶中に収納する。各カバースリップは上記顔料で被覆し、一方被覆しないカバースリップを対照として用いる。顔料被覆したカバースリップは、広口瓶中に入れられる直前にＵＶＡランプを用いて１０分間にわたり活性化する。
【００２２】
ランプ生成緑色光を用いる実験には、２種の実験構成を用いた。第１の「暗黒」設置は、厚紙箱の内部に配置し、キュベットに対して上から照射するものである。第２の「周囲（ａｍｂｉｅｎｔ）」設置は、十分な周囲光または低レベルの周囲光（キュベットを箔でゆるく覆う）のいずれかの下に配置し、下から照射するものである。対照処理においては、上記ランプは点灯しているが、その光は遮断されキュベットには到達しない。どちらの場合においても、対照条件と処理条件との間の温度差は０．４℃以下である。
【００２３】
抗酸化活性を証明するために、スーパーオキシドを過酸化水素から化学的に生成させ、スーパーオキシドの濃度に対する緑色光の効果を測定する。過酸化水素から生成するスーパーオキシドの量は、以下の通り行うアッセイにおいて、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎとの結合によって測定することができる。ＮａＯＨ（０．２５ｍｌ， ４Ｎ）を４％エタノール中Ｔｗｅｅｎ（１ｍｌ， ２％）の存在下でＨ２Ｏ２（１ｍｌ， ０．６％）を加えてインキュベートする。反応は、スクリューキャップを備え、膜を有する密封した石英キュベット中で行う。６分間穏やかに振とうした後（Ｆｌｏｗ Ｌａｂｓから入手したＴｉｔｅｒｔｅｋ振とう機を設定６で使用）、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎ（０．５ｍｌ， １０ｍＭ）を２５ゲージのシリンジを用いて膜を通して注入する。蛍光スペクトルは、４６５ｎｍでその溶液を励起し、６分間にわたって５０８ｎｍで１分毎の発光をモニターする（速度論プログラムを使用）ことにより、取得する。その傾きを算出し、最終的な数値データとして使用する。その傾きを算出し、統計解析のための最終的な数値データとして使用する。最適状態に及ばない（ｓｕｂｏｐｔｉｍａｌ）Ｈ２Ｏ２濃度（０．６％）を使用して、上記アッセイの感度を増加させる。
【００２４】
緑色光の活性を試験する際、スーパーオキシドフリーラジカルを、上述のようにして、６分間にわたり生成させる。６分間の間、反応キュベットは緑色光に曝露させるかまたは曝露させない（対照）。試験時間の後、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎを添加し、５０８ｎｍでの蛍光発光の速度論を測定する（６分間）ことによって、フリーラジカルを定量する。ランプによる実験では、実験の所定の実行は、対照実験１つと処理実験１つからなる。その一対の実行順はランダムに変更される。顔料による実験では、一連の対照実験を全て実施し、その後一連の処理実験を行う。量的情報は、フリーラジカル生成後、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎ蛍光の速度論から得る（図１〜４）。
【００２５】
ランプを用いた実験では、別個の群の実験を実施して、δ値を算出する。δ値は所定の実行で行う一対の実験に対して、対照と処理蛍光との数値減算の絶対値として得られる。周囲環境については６分後の蛍光値を用い、暗黒環境については３分後の蛍光を用いる。対照δ値は、実行する一対の実験がそれぞれ２つの非曝露対照からなる、別個の実験の組み合わせから得られる。全ての実験において、処理δ値は常にマイナス値であり、このことは、その応答の度合いが実施毎に様々であるが、緑色光曝露は抗酸化剤として常に有効であることを示している。結果は全て統計学的に有意であり、顔料の場合にｐ＜０．０００１、十分な周囲光＋緑色光の場合にｐ＝０．０１３、低レベルの周囲光＋緑色光の場合にｐ＝０．０１４、および暗黒＋緑色光の場合にｐ＝０．００９である。したがって、この抗酸化効果は全ての光条件下で認められる。しかしながら低レベルの周囲光の存在下での緑色光が最も有効でありかつ最も再現性が高いようであり、十分な周囲光および暗黒下の場合には、その効果は多少再現性が低いが、なお統計学的に有意である。
【００２６】
追跡実験は、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎの添加とデータ収集の間で遅延が起こらないように、Ｌｕｃｉｇｅｎｉｎを添加後、直ちに傾きを算出するように、実施する。スーパーオキシドフリーラジカルは、キュベット内にＮａＯＨおよびＴｗｅｅｎ／エタノールが存在する状態で、過酸化水素の化学的酸化によって１２分間にわたり生成させる。次にＬｕｃｉｇｅｎｉｎを添加し、蛍光を５０８ｎｍで、続く３分間の間モニターする。水銀蒸気ランプを緑色光源として使用し、フリーラジカルを生成させる１２分間の間、様々な時間にわたり上記キュベットに照射する。対照実行は緑色光を当てず、実験実行と同じ熱および光条件に曝露した。傾きを算出し、個々の実験全てについての平均を求める。陽性対照としては、さらに既知の抗酸化剤であるＢＨＴを用いた試験を行った。結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
2004501178.tif 000002
この結果から、第１の実験で示された抗酸化活性が確認され、またこの活性がＢＨＴによって示される活性に匹敵することが示される。
【００２８】
実施例２
本実験では、ＵＶ障害から皮膚細胞を保護する上での燐光顔料によって産生される緑色光の効果を示す。
【００２９】
マウスメラニン細胞培養物（ＢＣ１）をアルミン酸ストロンチウム顔料から放出される緑色光で処理する。顔料被覆表面をＵＶＡ光で予め活性化した後、細胞を含有するペトリ皿を顔料の上に置く。５時間後、細胞をＵＶＢ光に暴露し、次いで直ちに活性化直後の顔料に暴露する。次いで細胞を続く２４時間の間、更に４回光処理に暴露する。その時点で細胞をニュートラルレッドで処理し標準的手順に従って細胞生存率を数量化する。各実験条件を４重に行い、これら４個のサンプルの平均として最終細胞生存率の値を算出する（５４０ｎｍにおける吸収）。データはまた、緑色光またはＵＶ光で処理しない対照と比較した細胞生存率の減少率としても表す。結果の確認のために実験を繰り返す。結果を表２に示す。
【００３０】
【表２】
2004501178.tif 000003
この結果から、緑色光がＵＶ障害に対して保護効果を有することが示される。しかしながら、保護効果の大きさは用量に依存し、緑色光はより高いＵＶＢ用量にたいしては保護効果が低い。
【００３１】
実施例３
本実験では、第２の燐光性顔料によって産生される緑色光の細胞生存率の増大における効果を示す。
【００３２】
マウスメラニン細胞培養物（ＢＣ１）を硫化亜鉛顔料から放出される緑色光で処理する。顔料被覆表面を上記のようにＵＶＡ光で予め１０分間活性化した後、細胞を含有するペトリ皿を活性化された顔料の上に置く。ほとんどの実験において、メラニン細胞を３−４時間ごとに顔料を再活性化することによって１−２日間前処理する。細胞を１０ｍＪ／ｃｍ２または２０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢ光に暴露し、次いで続く２４時間かけて更に４回の緑色光処理に暴露する。その時点で細胞をニュートラルレッドで処理し、ニュートラルレッド色素の取り込みアッセイを用いて細胞生存率を評価する。各実験条件を４重に行い、これら４個のサンプルの５４０ｎｍにおける吸収の平均値として最終細胞生存率の値を算出する。データはまた、未処理の対照と比較した細胞生存率の減少率としても表す。ＵＶ単独処理対ＵＶ＋緑色光処理で、処理した細胞における統計学的有意性を決定する。結果を表３に示す。
【００３３】
【表３】
2004501178.tif 000004
2004501178.tif 000005
この結果から、細胞生存率の減少によって測定されるように、全ての場合においてＵＶ−誘導性障害が緑色光の存在によって有意に低減されることが示される。緑色光は、低用量のＵＶＢに対してこの保護特性がより効果的であるが、より高い用量においても有意な効果が観察される。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、酸素フリーラジカルのレベルに対する緑色光源としての緑色燐光性顔料の効果を示す。
【図２】図２は、酸素フリーラジカルのレベルに対する緑色光源としての緑光ランプの周囲光を用いた条件下における効果を示す。
【図３】図３は、酸素フリーラジカルのレベルに対する緑色光源としての緑光ランプの低レベルの周囲光を用いた条件下における効果を示す。
【図４】図４は、酸素フリーラジカルのレベルに対する緑色光源としての緑光ランプの暗黒箱中の条件下における効果を示す。
【国際公開パンフレット】
2004501178.tif 000006
2004501178.tif 000007
2004501178.tif 000008
2004501178.tif 000009
2004501178.tif 000010
2004501178.tif 000011
2004501178.tif 000012
2004501178.tif 000013
2004501178.tif 000014
2004501178.tif 000015
2004501178.tif 000016
2004501178.tif 000017
2004501178.tif 000018
2004501178.tif 000019
2004501178.tif 000020
2004501178.tif 000021
2004501178.tif 000022
2004501178.tif 000023
【国際調査報告】
2004501178.tif 000024
2004501178.tif 000025
2004501178.tif 000026