(57)【要約】エズリンのヘプレセプターのドメインＡまたはＢの断片と少なくとも８０％の同一性を有するペプチドが、インターフェロンと共に、ウイルス性肝炎の治療において、同時に、別々に、または順次に使用するための併用製剤として使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス性肝炎の治療において同時に、別々にまたは順次に使用するための併用製剤としての、ペプチドとインターフェロンとを含む製品であって、ペプチドが、エズリンのヘプレセプターのドメインＡまたはＢの断片と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、かつ、ペプチドが、少なくともＨＥＰ１と同程度の高い親和性でヘプレセプターに結合する製品。
【請求項２】
ペプチドが、ＴＥＫＫＲＲＥＴＶＥＲＥＫＥまたはその活性断片を含む、請求項１に記載の製品。
【請求項３】
ウイルス性肝炎がＣ型肝炎である、請求項１または２に記載の製品。
【請求項４】
ウイルス性肝炎を有し、かつインターフェロンによる治療を受けている患者の治療に用いるための医薬の製造への、請求項１または２に定義されたペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明はＨＣＶ併用療法に関する。
【０００２】
発明の背景
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染症は、世界的に重要な医療上の問題である。世界保健機構は、１億７千万人の人が感染しているが、この疾患は長い潜伏期間を有するため、このうちのほとんどがまだ症状を示していないと推測している。これらの人の１０から２０％が、肝硬変または癌などの重篤な肝疾患に罹る恐れがある。アメリカ国立衛生研究所によれば、ＨＣＶのために毎年１０，０００人のアメリカ人が死亡し、ＨＣＶが原因で肝移植を待つ人は年間１７，０００人いる。毎年依然として３００から４００万件の新たなＨＣＶ感染が起こっている。感染者の約７０％が肝疾患を、１〜５％が癌を発症することになろう。ＨＣＶ用のワクチンはない。
【０００３】
既存のＨＣＶの治療法は、インターフェロンα２、またはペグ化インターフェロンもしくはペグインターフェロンとして知られている、ポリエチレングリコールと結合したインターフェロンα２に基づくものである。現行の治療法には伴うのは、深刻な副作用と、乏しい治療効果である。治療の通常の過程は、３００万単位の組換えインターフェロンαを週３回、１２カ月にわたって注射することを含む。一部の研究では、何らかの治療効果を得ているのは、インターフェロン治療を受けている患者の半数未満であった。
【０００４】
抗ウイルス薬であるリバビリンが、有効性を高めるために、インターフェロン療法と併用されている。併用療法は、遺伝子型２または遺伝子型３のＨＣＶに感染している場合は、治療から利益を受ける患者の割合を改善する。しかしながら、米国で最も一般的な遺伝子型であるＨＣＶ−１Ｂに感染した患者の４０％のみが併用療法に反応する。
【０００５】
既存のインターフェロン治療が深刻なインフルエンザ様の症状を引き起こし、インターフェロンとリバビリンとの併用による副作用が、インターフェロン単独による副作用よりも一般的に悪いことはよく知られている。インターフェロンαによる長期の治療は、さらなる副作用の発症を伴い、これは治療の過程で悪化していく。患者の大半が、脱力感、いらいら、不眠、頭痛および筋肉痛、および関節痛（関節の痛み）を、治療の過程で訴えている。インターフェロン療法の頻出する合併症としては、貧血、好中球減少症、血小板減少症および脱毛があげられる。まれに、患者は甲状腺機能低下症、毛細血管の病理的損傷、狼瘡、サルコイドーシスおよび皮膚の水疱性の損傷、鬱病および精神病、および重篤な多臓器毒作用のうちの１つまたは複数を発症する。
【０００６】
米国特許第５７７３５７３号は、ＨＥＰ１（Ｇｅｐｏｎ）について記載している。ＧＢ２３５４２４１Ａは、エズリンの調節／アンフォールディングペプチドについて記載している。これらのペプチドは免疫増幅剤であり、ウイルス疾患を治療するのに用いることができる。
【０００７】
発明の概要
本発明は、ＨＥＰ１（Ｇｅｐｏｎ）またはエズリンの調節／アンフォールディングペプチドのいずれか一方が、インターフェロン、例えばインターフェロンα、またはペグインターフェロンと組み合わせて用いると、インターフェロン療法の副作用を低減し、かつインターフェロンの効果を増強するという所見に基づくものである。一例として、インターフェロンの副作用を低減し、かつ抗ウイルス治療の有効性を高めた、組換えインターフェロンαと免疫調節剤ＨＥＰ１（Ｇｅｐｏｎ）との有効な併用療法が提供される。
【０００８】
本発明の一態様によれば、ペプチドとインターフェロンとを含む製品であって、ペプチドがエズリンのヘプレセプター（Hepreceptor）のドメインＡまたはＢの断片と少なくとも８０％の同一性を有する配列を含み、かつペプチドが、少なくともＨＥＰ１と同程度の高い親和性でヘプレセプターに結合する製品は、ウイルス性肝炎の治療において同時に、別々にまたは順次使用するための併用製剤である。
【０００９】
本発明の別の態様によれば、このペプチドは、ウイルス性肝炎を有し、かつインターフェロンによる治療を受けている患者の治療に使用するための医薬の製造に用いられる。
【００１０】
発明の説明
本発明に用いるペプチドは、好ましくは５〜５０個のアミノ酸を有する。これは、エズリンの断片であるか、またはこれを含むか、またはこれに密接に関連している。したがって、これは、例えばＴＥＫＫＲＲＥＴＶＥＲＥＫＥ（配列番号１）であってもよい；例えば米国特許第５７７３５７３号（この内容は本明細書中に参照により組み込まれる）を参照。配列番号１は、エズリンのアミノ酸３２４〜３３７に相当する。この配列、またはエズリンの任意の断片と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％の同一性（または１００％の同一性）を有し、かつ、少なくとも実質的に同じ活性を有する任意のペプチドを用いることができる。ヘプレセプタードメインＡおよびＢからの、エズリンの好適な断片は、ＧＢ２３５４２４１Ａおよび２００１年５月１７日に出願された米国特許出願第０９／８５６０７０号に記載されており、その内容は本明細書中に参照により組み込まれる（特に請求項６、９および１９を参照）。
【００１１】
本発明に用いられる活性物質は知られているか、または既知の方法により調製することができる。特に、インターフェロンα、およびＨＥＰ１、すなわちアミノ酸配列ＴＥＫＫＲＲＥＴＶＥＲＥＫＥを有するペプチド、またはエズリンの調節／アンフォールディングペプチドなどのペプチドの合成方法は、当業者に知られている。
【００１２】
それぞれの活性物質は、いずれかの順序で、または同時に、例えば同一の組成物で投与することができる。これらは、一緒にまたは別個に、好ましくは、経口または非経口投与に適した形態に製剤することができる。
【００１３】
本発明に用いられる有効成分の製剤、組合せ経路および投与量は知られているか、当業者が通常の因子に基づいて決定することができる。例えば、ＨＥＰ１またはエズリンの調節／アンフォールディングペプチドを、１日１〜５回、または週３５回まで、経口により１〜１０ｍｇ、または注射により０．１〜１ｍｇ投与することが、インターフェロン療法用の標準的な治療プロトコルとの併用に好適である。
【００１４】
以下の実施例は、本発明を例証するものである。「ＨＥＰ１」は、配列番号１を有するペプチドである。
【００１５】
実施例
慢性のＨＣＶ感染症（ＨＣＶ血清ＲＮＡのＰＣＲにより測定）および肝疾患（アスパラギン酸トランスアミナーゼおよびアラニントランスアミナーゼレベルの上昇により測定）を有する１１名の患者を、組換えインターフェロンα２の注射と、２ｍｇのＨＥＰ１（Ｇｅｐｏｎ）を水５ｍｌに溶解した溶液の１日２回の内服により治療した（治療群）。慢性のＨＣＶ感染症を有する１０名の患者を、組換えインターフェロンα２単独で治療した（対照群）。
【００１６】
結果は、治療群において、ＨＣＶウイルス量の減少が対照群に比べて少なくとも２０倍促進され、トランスアミナーゼ量は健常レベルへ低下した（対照群は、依然として有意に血中トランスアミナーゼレベルが上昇していた）。さらに、治療群において、インターフェロンによる副作用、特に全身痛、関節痛、口内の不快感および脱力感について、予想外の顕著な低減がみられた。
【００１７】
データを以下の表に示す（各データポイントは群平均である）。
【００１８】
【表１】
2006515011.tif 000002
【００１９】
研究の詳細
１８〜５５歳の、慢性Ｃ型肝炎に罹患した２１名の患者（女性１２名、男性９名）が、モスクワの第一臨床感染症病院の消化器病センター（Gastroenterological Center in the Clinical Infectious HospitalNo.21, Moscow）における研究に参加した。慢性Ｃ型肝炎の診断は、患者の血中におけるＨＣＶに対する特異的な抗体の少なくとも６カ月間の存在に基づいて行った。末梢血中のＨＣＶ  ＲＮＡの存在は、ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）により決定し、本治験におけるすべての患者が、ＨＣＶ感染の複製期にあった。臨床データ、および血液の生化学検査の結果によれば、患者の大半で、慢性Ｃ型肝炎疾患の中程度の活動が十分に確立された。
【００２０】
この調査に参加したすべての患者は、週３回、３００万単位の用量の組換えインターフェロンα（ｒｅａｆｅｒｏｎ）による治療を受けた。バックグラウンドのインターフェロン療法に加えて、１１名の患者は、１日１回、２ｍｇのＧｅｐｏｎの経口による治療（製剤を水５ｍｌに溶解し、口内に２〜３分保持してから嚥下した）を３カ月間毎日受けた。患者は２群、すなわち治療群（インターフェロン抗ウイルス療法とＧｅｐｏｎとの併用を受けた１１名の患者）、および対照群（インターフェロン抗ウイルス療法のみを受けた１０名の患者）に分けた。
【００２１】
本調査の枠組み内の治療は、３カ月継続した。その後、インターフェロンによる治療は、Ｇｅｐｏｎによる治療で血液からＨＣＶ  ＲＮＡが消失した場合でも、最長１年間まで続けられた。この試験の期間中、すべての患者は、少なくとも４回、治療を開始する直前と、治療の開始後１、２および３カ月に、指定した医師のもとを訪れた。同期間中、臨床的な検査以外に、血液の臨床および生化学分析を行い、ウイルス量を半定量ＰＣＲアッセイにおけるＨＣＶ  ＲＮＡにより評価した。治療の有効性の最終的な評価は、治療の開始の３カ月後に行った。有効性の基準は、症状の有病率、肝酵素Ａｌ−ＡＴ、Ａｓ−ＡＴ、ガンマＧＴの活性の改善（または正常化）の頻度、血液の臨床指標の改善の頻度、およびＨＣＶ  ＲＮＡのＰＣＲ分析の結果（ウイルスの複製）であった。治療の結果の統計学的処理は、「Ｓｔａｔｇｒａｐｈｉｃｓ」と呼ばれるコンピュータープログラムを用いて行った。
【００２２】
患者の初期臨床状態（治療前）
治療群および対照群のいずれの患者も、治療の開始前には、肝臓胆管系の肝炎疾患に特徴的な症状の存在および発現については同様であった。右肋骨弓下部の疼痛の訴えは、患者２１名中１６名（７６％）でみられた。口中の苦味は、１５名の患者（７１％）が知覚した。全身性の自律神経無力症候群（general asthenovegetative syndrome）の徴候の１つである明確な脱力感は、１１名の患者（５２％）にはっきりと現れた。
【００２３】
診察時に、対象の１名のみが既存の皮膚および強膜の黄疸を有していた。肝腫脹および脾腫脹は、患者のうち２０名（９５％）および１７名（８１％）でそれぞれ発生した。肝実質のびまん性の変化は、ＵＺＩにより、２１名の患者のうち２０名（９５％）で記録された。１名の患者は、反応性の膵炎を有していた。一部のケースでは、胆嚢の病変が観察され、これは９名の患者における胆嚢壁の肥厚、６名の患者における胆管の変形、および１名の患者における胆石の形成を含むものであった。
【００２４】
治療過程中における臨床徴候の動態
治療過程の間、消化不良現象（右肋骨弓下部の疼痛、口中の苦味）、自律神経無力症候群（脱力感、イライラ感）、および関節痛の存在および発現を評価した。対照群では、はっきりとした全身的な脱力感の訴えの頻度は、５０％から８０％に、イライラ感は０％から１００％に、そして関節痛は０％から９０％に増加した。インターフェロン療法の過程中の患者健康の付随的悪化は、すべてのインターフェロン製剤によって引き起こされる広く知られた副作用により説明することができる。
【００２５】
治療群においては、全身的な脱力感の訴えの頻度は５４％から１８％に（ｐ＜０．０５）、関節痛は、２７％から１８％に（ｐ＜０．１）減少した。イライラ感は、治療の最初の月には５４％の患者で認められたが、治療のその後の月には、この指標は１８％に減少した（ｐ＜０．０５）。これらの結果は、ＨＣＶ患者におけるインターフェロン療法の副作用および有害反応に対するＧｅｐｏｎの好ましい影響を示した。
【００２６】
両群の大半の患者において、治療の開始の前に、肝疾患に伴う症状が存在した。７０〜８０％の患者が、右肋骨弓下部に疼痛を認め、口中の苦味を知覚していた。対照群においては、インターフェロンのみによる３カ月の治療の過程中、右肋骨弓下部の疼痛および口中の苦味の訴えの頻度は変わらなかった。治療群においては、右肋骨弓下部の疼痛の訴えは８０％から１８％に減少した（ｐ＜０．０５）。２〜３カ月の治療の後、口中の苦味は、治療群のわずか９％にしか知覚されず、これに対し、治療前の患者数と比較した対照においては６４％（ｐ＜０．０５）であった。
【００２７】
慢性肝炎の特徴が存在した。治療前において、肝腫脹が９０〜１００％の患者で、そして脾腫脹が７０〜９０％の患者で、担当医師により認められた。両患者群において、治療は肝腫脹および脾腫脹を低減することについては同様に有効であった。３カ月の治療過程の後、肝腫脹および脾腫脹の頻度は、３０〜４０％に低下した。
【００２８】
血液中のＣ型肝炎ウイルス量の動態
調査した患者２１名すべてにおいて、血液中のＨＣＶ  ＲＮＡ量の半定量的ＰＣＲによる評価を行い、ＨＣＶ  ＲＮＡの力価は、試験の開始時には１０３から１０４の範囲であった。対照群において、３カ月の治療の後、１０名中７名（７０％）でＨＣＶ  ＲＮＡの力価が、前治療量よりも確実に低かった。ＨＣＶ  ＲＮＡは、患者１０名中２名（２０％）で検出されなくなった。平均して、ＨＣＶ  ＲＮＡの力価は、対照群において１．３ｌｏｇ低減した。対照群において、３名の患者（３０％）がインターフェロン治療に反応せず、これらの患者の１人では、ウイルスの量は、インターフェロン治療の過程の最中に１０倍増加した。
【００２９】
治療群においては、ウイルス複製の抑制は、対照群においてよりもはるかに有効であった。すべての患者は併用治療に好ましい応答を示し、患者１１名中１０名（９１％）が、血液中のＨＣＶ  ＲＮＡ濃度の確実な低減を示していた。治療群におけるＨＣＶ  ＲＮＡの平均力価は、２．２ｌｏｇすなわち１５８倍減少し、これは、対照群におけるよりもほぼ２０倍のウイルス量の減少である。治療群における患者１１名中４名（３６％）において、ＨＣＶ  ＲＮＡは検出されなくなった。治療群の患者のいずれも、ウイルス量の増大は記録しなかった。
【００３０】
血液の生化学的指標
本試験に参加した患者は、慢性Ｃ型肝炎を患っており、肝細胞の破壊的な炎症の指標である、血液中のＡｌ−ＡＴおよびＡｓ−ＡＴの血中レベルが中程度の増加を示した。両方の群において、わずか１カ月の治療の後、血液中のＡｌ−ＡＴおよびＡｓ−ＡＴのレベルの顕著な減少が生じ、これは次の月においても継続した。対照群においては、このレベルは、３カ月目に再び増加する傾向にあった。治療群においては、Ａｌ−ＡＴおよびＡｓ−ＡＴの漸進的かつより大きな減少への明瞭な傾向があった。総ビリルビンの平均値は、両患者群において正常量の上限を超えていた。治療の過程で、血中の総ビリルビン量は、１５〜２０％減少して正常値となった。
【００３１】
血液学的指標
組換えインターフェロンによる長期治療の副作用は、血液の多くの指標の変化として現れる。対照群においては、ヘモグロビンレベルの維持、血小板の数、および特に成熟好中性顆粒球の量の顕著な減少が観察され、同時にリンパ球、好酸球およびマクロファージ／単球の量が増大した。治療群においては、Ｇｅｐｏｎとインターフェロンとの組合せは、発生する病的変化の大半を防止し、好中球、顆粒球、好酸球、リンパ球およびマクロファージ／単球の量は、３カ月の治療の間正常値のままであった。
【配列表】
2006515011000001.app
【国際調査報告】
2006515011.tif 000003
2006515011.tif 000004
2006515011.tif 000005
2006515011.tif 000006