(57)【要約】本発明は、バニロイド受容体結合アッセイで有用なレシニフェラトキシン誘導体およびその製造方法に関する。
2004511488.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩ）
【化１】
2004511488.tif 000029
のホモバニリン酸誘導体化合物のフェニル環上のオルト位をヨウ素化して式（ＩＩＩ）
【化２】
2004511488.tif 000030
の中間体化合物を形成させること；および
式（ＩＩＩ）の中間体化合物を、式（ＩＶ）；
【化３】
2004511488.tif 000031
のレシニフェロナールオルトフェニルアセテートアルコール化合物とカップリングさせて、式（Ｉ）の化合物を形成させること
を含んで成る、
式（Ｉ）：
【化４】
2004511488.tif 000032
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２はヨウ素であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシおよびヒドロキシよりなる群から選択される置換基である］
のレシニフェラトキシン誘導体化合物の製造方法。
【請求項２】
Ｒ１がアセチルでありかつＲ３がメトキシである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ２が１２７ヨウ素である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
Ｒ２が１２５ヨウ素および１３１ヨウ素よりなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項５】
式（ＶＩ）；
【化５】
2004511488.tif 000033
［式中、式（ＶＩ）の化合物のヒドロキシル基はＣ１−５アルキルでエステル化される］
の中間体化合物のカルボン酸を保護して式（ＶＩＩ）
【化６】
2004511488.tif 000034
のエステル化された中間体化合物を形成させること；
式（ＶＩＩ）の化合物をスタンニル化して式（ＶＩＩＩ）
【化７】
2004511488.tif 000035
のスタンニル化された中間体化合物を形成させること；
式（ＶＩＩＩ）の化合物をヨウ素化して式（ＩＸ）
【化８】
2004511488.tif 000036
の標識中間体化合物を形成させること；
式（ＩＸ）の化合物を脱保護して式（Ｘ）
【化９】
2004511488.tif 000037
の標識中間体化合物を形成させること；および
式（Ｘ）の標識中間体化合物を、式（ＩＶ）
【化１０】
2004511488.tif 000038
のレシニフェロナールオルトフェニルアセテートアルコール化合物とカップリングして、式（Ｖ）の化合物を形成させること
を含んで成る、
式（Ｖ）：
【化１１】
2004511488.tif 000039
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシである］
の標識レシニフェラトキシン誘導体化合物の製造方法。
【請求項６】
Ｃ１−５アルキルがｉ−プロピル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルよりなる群から選択される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
Ｃ１−５アルキルがｔ−ブチルであり、Ｒ１がアセチルでありかつＲ３がメトキシである、請求項６記載の方法。
【請求項８】
式（Ｉ）
【化１２】
2004511488.tif 000040
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２はヨウ素であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシおよびヒドロキシよりなる群から選択される置換基である］
のレシニフェラトキシン誘導体化合物。
【請求項９】
Ｒ１が、水素、ホルミル、アセチル、エチルカルボニルおよびプロピルカルボニルよりなる群から選択される置換基である、請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が水素、ホルミルおよびアセチルよりなる群から選択される置換基である、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１が水素およびアセチルよりなる群から選択される置換基である、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２が１２５ヨウ素、１２７ヨウ素および１３１ヨウ素よりなる群から選択される置換基である、請求項８記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が１２７ヨウ素である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２が１２５ヨウ素である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３がメトキシ、エトキシ、プロポキシおよびブトキシから選択される置換基である、請求項８記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３がメトキシである、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
式：
【化１３】
2004511488.tif 000041
［式中、Ｒ１およびＲ２は
【表１】
2004511488.tif 000042
から選択される］
のものよりなる群から選択される、請求項８記載の化合物。
【請求項１８】
前記化合物を膜とともに約３７℃で約６０分間インキュベートすることを含んで成る、
式（Ｉ）
【化１４】
2004511488.tif 000043
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２はヨウ素であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシおよびヒドロキシよりなる群から選択される置換基である］
のレシニフェラトキシン誘導体化合物の使用方法。
【請求項１９】
膜が、細胞膜および組織膜よりなる群から選択される、請求項１８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ヨウ素化もしくは標識されたバニロイド受容体リガンドの製造方法に関する。より具体的には、本発明は、ヨウ素化もしくは標識されたレシニフェラトキシン誘導体およびその同種物（ｃｏｎｇｅｎｅｒ）の製造方法、ならびにバニロイド受容体結合アッセイでの使用方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
有害な化学的、熱的および機械的刺激は、知覚神経節（例えば後根、節状および三叉神経節）中の小径の知覚ニューロン（侵害受容器）の末梢神経末端を興奮させ、そして疼痛として認識されるシグナルを発する。これらのニューロンは、炎症もしくは虚血状態の間に細胞外間隙中で変化を生じさせる、有害なもしくは潜在的に有害な刺激（熱）ならびに組織損傷（Ｈ＋（局所組織アシドーシス）および／もしくは伸長）の検出に決定的に重要である（Ｗａｌｌ，Ｐ．Ｄ．とＭｅｌｚａｃｋ，Ｒ．，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｐａｉｎ、１９９４、ニューヨーク：チャーチル　リビングストーン（Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ　Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ））。
【０００３】
「辛い」トウガラシ中の主刺激成分、カプサイシン（Ｎ−［（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）メチル］−８−メチル−６−ノネンアミド）は、バニロイド受容体（ＶＲ）と呼ばれる特定の膜認識部位と相互作用する。これらのタンパク質は侵害受容および神経因性炎症に関与する一次知覚ニューロンによりほとんど独占的に発現される（Ｂｅｖａｎ，Ｓ．とＳｚｏｌｃｓａｎｙｉ、Ｊ．，Ｓｅｎｓｏｒｙ　ｎｅｕｒｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｔｒｅｎｄｓ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．、１９９０、１１、３３０−３）。カプサイシンそれ自身は、薄く有鞘もしくは無鞘の侵害受容求心体（ａｆｆｅｒｅｎｔ）の選択的活性化物質である（Ｃａｐｓａｉｃｉｎ　Ｓｔｕｄｙ，Ｐａｉｎ，Ｊ．Ｎ．Ｗｏｏｄ編：アカデミック（Ａｃａｄｅｍｉｃ）、英国・ロンドン、１９９３、ｐｐ．１−２６中、Ｓｚｏｌｃｓａｎｙｉ、Ｊ．，Ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ｏｎ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；およびＳｚｏｌｃｓａｎｙｉ、Ｊ．，Ｃａｐｓａｉｃｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ｎｅｒｖｅ　ｔｅｒｍｉｎａｌｓ　ｗｉｔｈ　ｌｏｃａｌ　ａｎｄ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｅｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ：ｆａｃｔｓ　ａｎｄ　ｓｃｏｐｅｓ　ｏｆ　ａｎ　ｕｎｏｒｔｈｏｄｏｘ　ｎｅｕｒｏｒｅｇｕｌａｔｏｔｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ、Ｐｒｏｇ．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．、１９９６、１１３、３４３−３５９）。
【０００４】
カプサイシンおよび構造的に関係した誘導体は構造機能関係を示し、そしてこれらの効果は選択的アンタゴニスト、カプサゼピンにより封鎖されることができる。三環性ジテルペン、レシニフェラトキシン（ＲＴＸ）（Ｓｚｏｌｃｓａｎｙｉ，Ｊ．，Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．，Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ｚ．，Ｊｏｏ，Ｆ．，とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ：Ａｎ　ｕｌｔｒａｐｏｔｅｎｔ　ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ　ｏｆ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ａｆｆｅｒｅｎｔ　ｎｅｕｒｏｎｓ．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９１、６３２、４７３−５）は、カプサイシン結合部位で結合し、そしてラット体性および内臓一次知覚ニューロンでのカプサイシン受容体の非常に局在化された分布を示している（Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．，Ｎｉｌｓｓｏｎ，Ｓ．，Ｆａｒｋａｓ−Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ｔ．，Ｂｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｈｏｅｋｆｅｌｔ，Ｔ．とＬｕｎｄｂｅｒｇ，Ｊ．Ｍ．，Ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ｃａｐｓａｉｃｉｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ，ｒｅｇｉｏｎａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ，ａｘｏｎａｌ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒｙ，ａｎｄ　ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．、１９９５、７０３、１７５−８３）。興味深いことに、節状および後根神経節中のＲＴＸ受容体部位の密度は、内臓および坐骨神経の連結後に増大した（Ｓｚａｌｌａｓｉら、１９９５）。
【０００５】
知覚ニューロンへのカプサイシンの複数の影響が特徴づけられている（Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｎｅｗ　ｉｎｓｉｇｈｔｓ　ｅｎｈａｎｃｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｓ　ａ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｔａｒｇｅｔ，Ｐａｉｎ、１９９６、６８、１９５−２０８）。カプサイシンは、カルシウム流入、ＣＧＲＰおよびＳＰのような多様なニューロペプチドの放出（Ｐｕｒｋｉｓｓ，Ｊ．，Ｗｅｌｃｈ，Ｍ．，Ｄｏｗａｒｄ，Ｓ．とＦｏｓｔｅｒ，Ｋ，Ｃａｐｓａｉｃｉｎ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　Ｐ　ｆｒｏｍ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｄｏｒｓａｌ　ｒｏｏｔ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　ｎｅｕｒｏｎｓ：ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２０００、５９、１４０３−１４０６）、ならびにサイトカイン放出（Ｖｅｒｏｎｅｓｉ，Ｂ．，Ｏｏｒｔｇｉｅｓｅｎ，Ｍ．，Ｃａｒｔｅｒ，Ｊ．Ｄ．とＤｅｖｌｉｎ，Ｒ．Ｂ．，Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ　ｍａｔｔｅｒ　ｉｎｉｔｉａｔｅｓ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ａｎｄ　ａｃｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ，Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９９、１５４、１０６−１１５）をもたらすニューロンを興奮させる。これらの事象は疼痛状態および炎症に寄与すると考えられる。加えて、カプサイシンおよびＲＴＸは、動物において低下された侵害受容の状態として明示されるバニロイド受容体脱感作を引き起こす可能性がある（Ａｃｓ，Ｇ．，Ｂｉｒｏ，Ｔ．，Ａｃｅ，Ｐ．，Ｍｏｄａｒｒｅｓ，Ｓ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ｎｅｕｒｏｎｓ　ｂｙ　ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１９９７、１７、６５２２−５６２８）。この現象は、神経障害性疼痛（Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．，Ｂｅｖａｎ，Ｓ．とＣａｍｐｂｅｌｌ，Ｅ．Ａ．，Ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ａｎｄ　ｐａｉｎ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ，Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．、１９９５、７５、１５７−１６８）および他の疼痛状態の治療に対する新規アプローチを構成するかもしれない。しかしながら、ある条件下では、カプサイシンおよびＲＴＸは神経毒性である可能性がある（ＢｅｖａｎとＳｚｏｌｃｓａｎｙｉ、１９９０）。
【０００６】
最近、カプサイシンの１受容体タンパク質がラットからクローン化され（Ｃａｔｅｒｉｎａ，Ｍ．Ｊ．，Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｍ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｔ．Ａ．，Ｌｅｖｉｎｅ，Ｊ．Ｄ．とＪｕｌｉｕｓ，Ｄ．，Ｔｈｅ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ　ｈｅａｔ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｉｏｎ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｉｎ　ｐａｔｈｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、１９９７、３８９、８１６−８２４）、そしてＨ＋（低ｐＨ）および熱の同時検出体（ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｓｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ）であることが示された（Ｔｏｍｉｎａｇａ，Ｍ．，Ｃａｔｅｒｉｎａ，Ｍ．Ｊ．，Ｍａｌｍｂｅｒｇ，Ａ．Ｂ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｔ．Ａ．，Ｇｉｌｂｅｒｔ，Ｈ．，Ｓｋｉｎｎｅｒ，Ｋ．，Ｒａｕｍａｎｎ，Ｂ．，Ｂａｓｂａｕｍ，Ａ．Ｉ．とＪｕｌｉｕｓ，Ｄ．，Ｔｈｅ　ｃｌｏｎｅｄ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎｔｅｇｒａｔｅｓ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｐａｉｎ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｓｔｉｍｕｌｉ，Ｎｅｕｒｏｎ、１９９８、２１、５３１−５４３）。ＶＲ１は顕著な外への整流性を示すリガンド依存性の非選択的陽イオンチャンネルである（Ｃａｔｅｒｉｎａら、１９９７）。バニロイド（「カプサイシン」）受容体ＶＲ１はカプサイシンおよびＲＴＸにより活性化され、また、ＶＲ１の活性化はアンタゴニスト、カプサゼピン（ＣＰＺ）（Ｂｅｖａｎ，Ｓ．，Ｈｏｔｈｉ，Ｓ．，Ｈｕｇｈｅｓ，Ｇ．，Ｊａｍｅｓ，Ｉ．Ｆ．，Ｒａｎｇ，Ｈ．Ｐ．，Ｓｈａｈ，Ｋ．，Ｗａｌｐｏｌｅ，Ｃ．Ｓ．Ｊ．とＹｅａｔｓ，Ｊ．Ｃ．，Ｃａｐｓａｚｅｐｉｎｅ：ａ　ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ　ａｎｔａｇｉｎｉｓｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ｎｅｕｒｏｎ　ｅｘｃｉｔａｎｔ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、１０７、５４４−５２）およびルテニウムレッド（ＲＲ）（Ｗｏｏｄ，Ｊ．Ｎ．，Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．，Ｊａｍｅｓ，Ｉ．Ｆ．，Ｒａｎｇ，Ｈ．Ｐ．，Ｙｅａｔｓ，Ｊ．とＢｅｖａｎ，Ｓ．，Ｃａｐｓａｉｃｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｏｎ　ｆｌｕｘｅｓ　ｉｎ　ｄｏｒｓａｌ　ｒｏｏｔ　ｇａｎｇｌｉｏｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１９８８、８、３２０８−２０）により封鎖される。ＶＲ１受容体はバニロイド、熱およびプロトンに対し感受性であり、そして従ってこれらのタンパク質は疼痛の開始、調節および改変に広範に関与すると考えられる（Ｗｏｏｌｆ，Ｃ．Ｊ．とＳａｌｔｅｒ，Ｍ．Ｗ．，Ｎｅｕｒｏｎａｌ　ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ：ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｇａｉｎ　ｉｎ　ｐａｉｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２０００、２８８、１７６５−１１７６８）。さらに、ＶＲ１は後根神経節の小型の侵害受容ニューロン中で発現され、末梢疼痛の調節におけるその役割と矛盾しない（Ｔｏｍｉｎａｇａら、１９９８；およびＭｉｃｈａｅｌ，Ｇ．Ｊ．とＰｒｉｅｓｔｌｅｙ，Ｊ．Ｖ．，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｕｂｔｙｐｅ　１　ｉｎ　ｃａｌｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｄｕｌｔ　ｒａｔ　ｄｏｒｓａｌ　ｒｏｏｔ　ａｎｄ　ｎｏｄｏｓｅ　ｇａｎｇｌｉａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｄｏｗｎｒｅｇｌｕｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｘｏｔｏｍｙ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．、１９９９、１９、１８４４−１８５４）。
【０００７】
特許出願第ＷＯ　９９／０９１４０号明細書は、バニロイド受容体（ＶＲ）を、知覚ニューロン中で発現されかつ痛覚過敏のような侵害受容過程に関与するリガンド依存性の非選択的陽イオンチャンネルとして同定する。天然に存在するテルペノイドホルボール誘導体、レシニフェラトキシンは、ナノモル濃度以下の親和性でＶＲタンパク質に結合し、そして機能的アゴニストとして挙動する（カルシウム流入を刺激する）。従って、ヨウ素化かつ標識されたＲＴＸ誘導体は、バニロイド受容体への結合において同様に強力であるかも知れず、そして従って、受容体結合アッセイで利用される場合にバニロイド受容体に対する親和性を有する化合物の同定において有用であるかもしれない。事実、トリチウム化ＲＴＸはＶＲに対するナノモル濃度の親和性を表すことが知られ、そしてこの受容体にまた結合する化合物を同定するもしくは示すために使用することができる。
【０００８】
いくつかの［３Ｈ］ＲＴＸに基づくＶＲ結合アッセイが開示されている。すなわち、濾過アッセイ（Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｏｆ　ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ，ａｎ　ｕｌｔｒａｐｏｔｅｎｔ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ａｎａｌｏｇ，ｂｙ　ｄｏｒｓａｌ　ｒｏｏｔ　ｇａｎｇｌｉａ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ，Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．、１９９０、５２４、１０６−１１１；およびＨａｒｖｅｙ，Ｊ．Ｓ．，Ｄａｖｉｓ，Ｃ．，Ｊａｍｅｓ，Ｉ．Ｆ．とＢｕｒｇｅｓｓ，Ｇ．Ｍ．，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ａｎａｌｏｇｕｅ　ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　ｉｎ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ｎｅｕｒｏｎｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、１９９５、６５、１３０９−１３１７）、ならびに遠心分離アッセイ（Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．，Ｇｏｓｏ，Ｃ．，Ｂｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．とＭａｎｚｉｎｉ，Ｓ．，Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｂｙ　ｃａｐｓａｚｅｐｉｎｅ　ｏｆ　［３Ｈ］ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｏ　ｃｅｎｔｒａｌ（ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ　ａｎｄ　ｄｏｒｓａｌ　ｒｏｏｔ　ｇａｎｇｌｉａ）ａｎｄ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ（ｕｒｉｎａｒｙ　ｂｌａｄｄｅｒ　ａｎｄ　ａｉｒｗａｙｓ）ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ｃａｐｓａｉｃｉｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｔ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９３、２６７、７２８−３３；Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．とＧｏｓｏ，Ｃ．，Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ　［３Ｈ］ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎ　ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ｃａｐｓａｉｃｉｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｉｎ　ｐｏｓｔ−ｍｏｒｔｅｎ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９９４、１６５、１０１−１０４；およびＡｃｓ，Ｇ．，Ｐａｌｋｏｖｉｔｓ，Ｍ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，［３Ｈ］Ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ｃａｐｓａｉｃｉｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ　Ｒｅｓ．、１９９４、２３、１８５−９０）。濾過アッセイプロトコルの使用は高い非特異的結合により妨げられる。遠心分離アッセイを使用して、ＶＲ１受容体は、後根神経節、脊髄、後迷走神経複合体（ｄｏｒｓａｌ　ｖａｇａｌ　ｃｏｍｐｌｅｘ）、気管および主気管支ならびに膀胱のようないくつかの組織中で見出された。ＶＲ１受容体に対する［３Ｈ］ＲＴＸの親和性は異なる組織で異なった（Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，Ｖａｎｉｌｌｏｉｄ（ｃａｐｓａｉｃｉｎ）ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、１９９９、５１、１５９−２１１）。ＶＲ１受容体の高発現はヒトおよびラットの脊髄および後根神経節組織中で観察された（Ｓｚａｌｌａｓｉら、１９９３；ＳｚａｌｌａｓｉとＧｏｓｏ、１９９４；およびＡｃｓら、１９９４）。ラット脊髄中でのＶＲ１受容体に対する［３Ｈ］ＲＴＸの親和性は、ヒト脊髄中でのものより高い（ＳｚａｌｌａｓｉとＧｏｓｏ、１９９４）。
【０００９】
１９９１年４月１５日出願のＢｌｕｍｂｅｒｇらへの米国特許出願第５４６，１４１　Ａ０号明細書は、好ましい式：
【００１０】
【化１５】
2004511488.tif 000003
【００１１】
を有する標識ＲＴＸもしくはその標識同種物（ここで代表的放射標識はトリチウム、１２５ヨウ素［１２５Ｉ］および１３１ヨウ素［１３１Ｉ］を包含する）を記述しする。
【００１２】
ＲＴＸの他の代表的同種物は、式：
【００１３】
【化１６】
2004511488.tif 000004
【００１４】
［式中
ｎは０ないし１０、好ましくは２であり、そしてＲ’は蛍光標識である］
のものを包含する。放射標識されたＲＴＸの代わりに、Ｂｌｕｍｂｅｒｇの出願は、ＲＴＸの生物学的に活性の同種物は、トリチウム化ＲＴＸについてと同一の合成経路を使用して放射標識することができることを記述し、ここで、こうした同種物は、一般構造：
【００１５】
【化１７】
2004511488.tif 000005
【００１６】
を有し、
式中、Ｒは：
【００１７】
【化１８】
2004511488.tif 000006
【００１８】
であり、Ｒ３はＯＨであり、ｘは０もしくは１であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５はそれぞれ：Ｈ、ＯＨ、ｎ＝０ないし１０を伴うＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＨ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＨである。上の同種物の標識化合物中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４もしくはＲ５の最低１個が例えば３Ｈ、１２５Ｉもしくは１３１Ｉで標識される。この式中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５の１個もしくはそれ以上が３Ｈである。Ｒ３は誘導体が活性であるようにＯＨであるべきである。１２５Ｉもしくは１３１Ｉ標識ＲＴＸ、チニアトキシン、および置換フェニル酢酸側鎖上に未置換のｍ−水素を所有するその同種物が記述されており、ここで、こうした化合物は、クロラミンＴを使用するヨウ素化、またはグルコースオキシダーゼもしくはラクトペルオキシダーゼを使用することにより製造することができ、そして、記述された化合物中で、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５の１個もしくはそれ以上が１２５Ｉもしくは１３１Ｉであってよい。
【００１９】
ＢｌｕｍｂｅｒｇらへのＰＣＴ特許出願第ＷＯ　９８／２０８６７号明細書は、カプサイシンアゴニスト、カプサイシンアンタゴニストおよび製薬学的に許容
できる担体を含んで成る製薬学的組成物を記述し、ここで、カプサイシンアゴニストは、式：
【００２０】
【化１９】
2004511488.tif 000007
【００２１】
のものであり、
式中、Ｒ１は：
【００２２】
【化２０】
2004511488.tif 000008
【００２３】
であり、Ｒ２はヒドロキシもしくはメトキシであり；Ｒ３は１ないし３個の環を有する低級アルキルアリールもしくはアリール基であり；ならびに、同一もしくは異なってよいＲ４ないしＲ７は、水素、ヒドロキシ、メトキシ、スルフヒドリル、ニトロ、アミノ、エトキシ、ハロおよびＯＣＯＣＨ３よりなる群から独立に選択される。
【００２４】
どの参考文献も、これまで、ヨウ素化もしくは標識されたレシニフェラトキシン誘導体の製造方法を開示していない。本発明の目的は、ヨウ素化レシニフェラトキシン誘導体およびその同種物の製造方法を提供することである。本発明の別の目的は、標識レシニフェラトキシン誘導体およびその同種物の製造方法を提供することである。本発明のまた別の目的は、パラ−Ｏ−アセチル化バニロイド受容体中間体の特定の部位のヨウ素化もしくは標識方法を提供することである。本発明のさらなる一目的は、バニロイド受容体結合アッセイにおけるヨウ素化もしくは標識レシニフェラトキシン誘導体およびその同種物の使用方法を提供することである。
【００２５】
（発明の要約）
本発明は、式（ＩＩ）；
【００２６】
【化２１】
2004511488.tif 000009
【００２７】
のホモバニリン酸誘導体化合物のフェニル環上のオルト位をヨウ素化して式（ＩＩＩ）
【００２８】
【化２２】
2004511488.tif 000010
【００２９】
の中間体化合物を形成させること；および
式（ＩＩＩ）の中間体化合物を、式（ＩＶ）；
【００３０】
【化２３】
2004511488.tif 000011
【００３１】
のレシニフェロナールオルトフェニルアセテートアルコール化合物とカップリングさせて、式（Ｉ）の化合物を形成させること
を含んで成る、式（Ｉ）：
【００３２】
【化２４】
2004511488.tif 000012
【００３３】
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２はヨウ素であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシおよびヒドロキシよりなる群から選択される置換基である］
のレシニフェラトキシン誘導体化合物の製造方法を提供する。
【００３４】
本発明の方法の好ましい一態様は、Ｒ１がアセチルであり；かつＲ３がメトキシであるレシニフェラトキシン誘導体化合物を包含する。より好ましい一態様は、Ｒ２が１２７ヨウ素であるレシニフェラトキシン誘導体化合物を包含する。最も好ましい態様は、Ｒ２が１２５ヨウ素および１３１ヨウ素よりなる群から選択される標識レシニフェラトキシン誘導体化合物を包含する。
【００３５】
本発明の標識レシニフェラトキシン誘導体の製造方法の前述の記述に関して、本発明の別の態様は、式（ＶＩ）；
【００３６】
【化２５】
2004511488.tif 000013
【００３７】
［式中、式（ＶＩ）の化合物のヒドロキシル基はＣ１−５アルキルでエステル化される］
の中間体化合物のカルボン酸を保護して式（ＶＩＩ）
【００３８】
【化２６】
2004511488.tif 000014
【００３９】
のエステル化された中間体化合物を形成させること；
式（ＶＩＩ）の化合物をスタンニル化して式（ＶＩＩＩ）
【００４０】
【化２７】
2004511488.tif 000015
【００４１】
のスタンニル化された中間体化合物を形成させること；
式（ＶＩＩＩ）の化合物をヨウ素化して式（ＩＸ）
【００４２】
【化２８】
2004511488.tif 000016
【００４３】
の標識中間体化合物を形成させること；
式（ＩＸ）の化合物を脱保護して式（Ｘ）
【００４４】
【化２９】
2004511488.tif 000017
【００４５】
の標識中間体化合物を形成させること；および
式（Ｘ）の標識中間体化合物を、式（ＩＶ）；
【００４６】
【化３０】
2004511488.tif 000018
【００４７】
のレシニフェロナールオルトフェニルアセテートアルコール化合物とカップリングして、式（Ｖ）の化合物を形成させること
を含んで成る、式（Ｖ）：
【００４８】
【化３１】
2004511488.tif 000019
【００４９】
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシである］
の標識レシニフェラトキシン誘導体化合物の製造方法である。
【００５０】
好ましい一態様において、Ｃ１−５アルキルはｉ−プロピル、ｉ−ブチルおよびｔ−ブチルよりなる群から選択される。より好ましい一態様において、Ｃ１−５アルキルはｔ−ブチルである。
【００５１】
本発明はまた、バニロイド受容体結合アッセイでの使用のための、式（Ｉ）：
【００５２】
【化３２】
2004511488.tif 000020
【００５３】
［式中
Ｒ１は水素、Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２はヨウ素であり；ならびに
Ｒ３はＣ１−４アルコキシおよびヒドロキシよりなる群から選択される置換基である］
のレシニフェラトキシン誘導体化合物も提供する。
【００５４】
（詳細な記述）
レシニフェラトキシン受容体に結合する化合物を同定するための現在の参照標準は、トリチウム［３Ｈ］でのこうしたＲＴＸ化合物の標識である。［３Ｈ］標識ＲＴＸ化合物の使用は、しかしながら、異なる組織に対する異なる親和性および高い非特異的結合を有するこうした化合物により制限される。さらに、ヨウ素化もしくは標識レシニフェロナール−バニロイド誘導体ＲＴＸ化合物の現在の製造方法は、バニロイド基質の芳香環上の指図されないヨウ素化により制限されており、従って多様なおよび複数の位置でのヨウ素化もしくは標識をもたらす。従来技術の指図されないヨウ素化もしくは標識は、ヨウ素化化合物の分離できない混合物、バッチごとの変動、［３Ｈ］標識誘導体より有意により乏しい結合親和性、および再現不可能な非生産的アッセイデータをもたらす。
【００５５】
本明細書で使用されるところの「ヨウ素」という用語は、ヨウ素の非放射活性および放射活性双方の同位体を包含することを意図している。好ましいヨウ素同位体は化学反応で普遍的に使用されるものである。こうした普遍的に使用される同位体は、非放射活性同位体１２７ヨウ素［１２７Ｉ］ならびに放射活性同位体１２５ヨウ素［１２５Ｉ］および１３１ヨウ素［１３１Ｉ］を包含する。
【００５６】
あるいは、われわれは最近、ヨウ素化ＲＴＸ類似物もしくは標識ＲＴＸ類似物（とりわけ、１２５Ｉもしくは１３１Ｉを使用して標識されたそれらの類似物が本発明の範囲に包含されることを意図している）が、［３Ｈ］標識ＲＴＸ誘導体を上回る改良された結合親和性の利点を有し、従って、それらの受容体をアッセイするためにより低いリガンド濃度を使用する際により少量の受容体部位が検出されることを可能にすることを発見した。
【００５７】
われわれはまた、ＲＴＸ誘導体のヨウ素化反応および結果としてのヨウ素化もしくは標識が、バニロイド基質上の単一の位置に一貫して向けられ、従って従来の製造方法に固有の限界を含まない単一のヨウ素化部位を含有するＲＴＸ化合物を提供するかもしれないことも発見した。さらに、本発明の方法は、単一のバニロイド基質部位をヨウ素化することを含んで成り、ここで単一のヨウ素原子が一貫して取り込まれてよい。従って、本方法は、ＲＴＸ誘導体化合物のパラ−Ｏ−カルボニルアルキル置換ホモバニリン酸基質のフェニル環上のオルト位をヨウ素化するのに使用してよい。ＲＴＸ誘導体化合物の対応するパラデスカルボニルアルキル置換ホモバニリン酸基質が本発明の範囲内に包含される。ＲＴＸ誘導体化合物をヨウ素化もしくは標識するための本方法の好ましい一態様は、単一のヨウ素原子もしくはヨウ素に基づく標識、好ましくは１２５Ｉで、ホモバニリン酸酢酸エステル誘導体基質のフェニル環上のオルト位をヨウ素化もしくは標識すること；ならびに、ヨウ素化もしくは標識されたバニロイド誘導体をレシニフェロナールオルトフェニルアセテートアルコールとカップリングして本発明のレシニフェロトキシンもしくは標識レシニフェロトキシン誘導体化合物を形成させることを含んで成る。
【００５８】
本発明の方法の利点は、単一のヨウ素置換基がホモバニリン酸基質もしくは中間体化合物の単一の特定の酸素中心上に特異的に導入される「指図されたヨウ素化」で例示される。本発明の方法において、ヨウ素化はＯ−アセテート保護基によりバニロイド酸基質中のフェニル基のオルト位に向けられる。われわれはまた、オルト位のヨウ素化が、他の普遍的保護基、とりわけホモバニリン酸の芳香族系から電子密度を吸引しないものを使用して到達可能でないことも発見した。
【００５９】
Ｃ１−４アルキルカルボニルおよびホルミル以外のホモバニリン酸基質のＲ１基の置換基の使用（好ましくは、Ｒ１はアセチルおよびホルミルから選択され；そしてより好ましくはＲ１はアセチルである）は、非常に清浄なヨウ素化反応もしくは高度の位置選択性を与えなかった。ホモバニリン酸およびホモバニリン酸エチルエステルの以前に開示されたヨウ素化反応が、本発明の４−アセトキシ−３−メトキシフェニル酢酸基質のヨウ素化がそうであったように、オルトがヨウ素化された生成物を位置選択的に生じなかったことが決定された。ホモバニリン酸基質についての以前に開示されたヨウ素化反応の使用から生じる特異性の欠如に比較した本方法の効率は、限定されるものでないがＨＰＬＣのような当業者に既知の技術を使用して特徴づけすることができる。
【００６０】
さらに、われわれは、［３Ｈ］標識ＲＴＸ類似物が、本発明のヨウ素化もしくは標識ＲＴＸ誘導体より一般に３ないし４桁より少ない、バニロイド受容体に対する結合親和性を有することを発見した。アリール環の修飾が結合にどのように影響を及ぼすかを考慮に入れれば（Ｃ．Ｓ．Ｗａｌｐｏｌｅ，Ｓ．Ｂｅｖａｎ，Ｇ．Ｂｌｏｏｍｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂｒｅｃｋｅｎｒｉｄｇｅ，Ｉ．Ｆ．Ｊａｍｅｓ，Ｔ．Ｒｉｔｃｈｉｅ，Ａ．Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ｊ．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｒ．Ｗｒｉｇｇｌｅｓｗｏｒｔｈ，Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ　Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｏｆ　Ｃａｐｓａｉｃｉｎ　ａｎｄ　Ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　Ａｎａｌｏｇｕｅｓ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１９９６、３９、２９３９−２９５２）、本ヨウ素化ＲＴＸ誘導体がバニロイド受容体に対するナノモル濃度以下の親和性を再現可能に表し、かつ、普遍的に使用されかつ当業者に既知の［３Ｈ］標識誘導体に類似であった結合親和性を維持したことは、まさに驚くべきことであった。
【００６１】
本発明の範囲は、ホモバニリン酸中間体のヨウ素化方法、ホモバニリン酸中間体の標識方法、およびＲＴＸ結合アッセイにおけるこうした中間体の使用方法を包含する。さらに、本発明の方法によりヨウ素化もしくは標識される化合物もしくは中間体は、独特かつ新規のヨウ素化部位を担持する他の新規ＲＴＸ化合物をその後製造するのに使用してよい。例えば、Ｒ１が水素である化合物は、上述された方法による製造に適していないかもしれない。Ｒ１が水素である特定の一段階は、ヨウ素化もしくは標識ホモバニリン酸中間体化合物が製造されるその段階で適していないかもしれない。こうした段階については、Ｒ１がＣ１−４アルキルカルボニルもしくはホルミルであることが好ましい。製造されてよいＲ１が水素である化合物は、２方法のいずれかによる、Ｒ１がＣ１−４アルキルカルボニルもしくはホルミルである類似化合物からのものである。Ｒ１がＣ１−４アルキルカルボニルもしくはホルミルである化合物のための第一の方法において、Ｒ１基は普遍的な文献の方法を使用する、もしくはとりわけ本明細書に開示されるところのピロリジンを用いる別個の化学反応で化学的に切断してよい。結合アッセイで使用されるＲ１がＣ１−４アルキルカルボニルもしくはホルミルである化合物のための第二の方法において、その場のエステラーゼもしくはｐＨ条件がＲ１基を水素に切断するかもしれない。
【００６２】
式（Ｉ）の化合物についての上の包括的記述に関して、式（Ｉ）のある種の化合物が好ましい。好ましい態様は、
Ｒ１が水素、ホルミル、アセチル、エチルカルボニルおよびプロピルカルボニルよりなる群から選択される置換基であり；
より好ましくは、Ｒ１が水素、ホルミルおよびアセチルよりなる群から選択される置換基であり；
最も好ましくは、Ｒ１が水素およびアセチルよりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ２が、１２５ヨウ素、１２７ヨウ素および１３１ヨウ素よりなる群から選択される置換基であり；
より好ましくは、Ｒ２が１２５ヨウ素および１２７ヨウ素よりなる群から選択される置換基であり；
Ｒ３がＣ１−４アルコキシから選択される置換基であり；
より好ましくは、Ｒ３がメトキシ、エトキシ、プロポキシおよびブトキシから選択される置換基であり；そして
最も好ましくはＲ３がメトキシである
化合物である。
【００６３】
本発明の例示される化合物は、式：
【００６４】
【化３３】
2004511488.tif 000021
【００６５】
のものであり、
式中、Ｒ１およびＲ２は
【００６６】
【表２】
2004511488.tif 000022
【００６７】
から選択される。
【００６８】
本発明を記述することにおいて使用される用語は普遍的に使用されかつ当業者に既知である。本明細、とりわけスキームおよび実施例で使用される略語は以下のとおりである：
ＤＣＣ ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＭＡＰ　　　４−ジメチルアミノピリジン
Ｉ２　 ヨウ素
ＡｇＯ２ＣＣＦ３　　 トリフルオロ酢酸銀
ＮａＩ ヨウ化ナトリウム
Ｆｅ２ＳＯ４　硫酸鉄
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
一般的合成方法
本発明の代表的化合物は下述される一般的合成方法に従って合成することができ、そして後に続くスキームでより具体的に具体的に説明される。該スキームは具体的説明であるため、本発明は表される化学反応および条件により制限されるとして解釈されるべきでない。スキーム中で使用される多様な出発原料の製造法は当業者の熟練内に十分ある。
【００６９】
スキームＡは、電子吸引基の使用によるレシニフェラトキシン誘導体のヨウ素化バニロイド基質の製造方法を具体的に説明し、これによりホモバニリン酸のヒドロキシル基が誘導体化され、かつ、ヨウ素化の部位を指図するのに必要な酢酸エステル基が形成される。
【００７０】
出発原料として使用される化合物Ａ１は、過剰の酢酸無水物および触媒量の硫酸を使用してヒドロキシル部分を誘導体化することおよび酢酸エステル基を形成することによりホモバニリン酸から生じさせた。その後、化合物Ａ１を、その場で生成される親電子ヨウ素種で室温で２４時間処理し、それは化合物Ａ２をもたらした。その後、ヨウ素化されたホモバニリン酸化合物Ａ２を、適する条件下でジメチルアミノピリジンに媒介される触媒反応およびカルボジイミドに媒介されるエステル化によりレシニフェロノールオルトフェニルアセテートアルコール化合物Ａ３とカップリングして、２時間後に標的化合物Ａ４を形成させた。
【００７１】
【化３４】
2004511488.tif 000023
【００７２】
スキームＢは、ピロリジンのようなアミン塩基で化合物Ａ４からアセチルＲ１置換基を切断させて化合物Ｂ１を生じさせることによる、Ｒ１が水素であるレシニフェラトキシン誘導体のヨウ素化バニロイド基質の製造方法を具体的に説明する。この反応は、ジクロロメタン中室温で２時間実施した。
【００７３】
【化３５】
2004511488.tif 000024
【００７４】
スキームＣは、化合物Ｃ１を形成させるための酸化剤の存在下で熱ヨウ化ナトリウムを使用するホモバニリン酸化合物Ａ１の直接標識による、レシニフェラトキシン誘導体の標識バニロイド基質の製造方法を具体的に説明する。この反応はジクロロメタン中室温で数時間実施する。
【００７５】
【化３６】
2004511488.tif 000025
【００７６】
スキームＤは、文献中に十分に記述されかつ代替の一製造経路を提供する方法を取り込む、本発明のヨウ素化化合物のトリメチルスズ化合物へのスタンニル化、およびトリメチルスズの１２５Ｉもしくは１３１Ｉ標識化合物へのその後の転換による、レシニフェラトキシン誘導体の標識バニロイド基質の製造方法を具体的に説明する。
【００７７】
スキームＤにおいて、４−アセチルホモバニリン酸化合物Ａ２のカルボン酸部分が、ｉ−プロピル、ｉ−ブチルもしくはｔ−ブチルのようなＣ１−５アルキル基でのエステル化により保護されてエステル化合物Ｄ１を形成する。その後、２−ヨード−４−アセチルホモバニリン酸化合物Ｄ１上のヨウ素が、パラジウムに触媒されるメタレーション（ｍｅｔａｌｌａｔｉｏｎ）を介してトリメチルスズ基に転化され、そしてその後、ヨウ化ナトリウムおよび酸化剤を使用して１２５Ｉもしくは１３１Ｉ標識化合物Ｄ２に転化される。エステル化化合物Ｄ２からのＣ１−５アルキル基は、酢酸エステルの存在下に酸加水分解を使用して選択的に切断されて化合物Ｄ３を形成する。その後、１２５Ｉ標識ホモバニリン酸化合物Ｄ３を、スキームＡに示されたカルボジイミドエステル化を介してレシニフェロノールオルトフェニルアセテート化合物Ａ３とカップリングして、化合物Ｄ４を形成させる。
【００７８】
【化３７】
2004511488.tif 000026
【００７９】
特定の合成方法
本発明を代表する特定の化合物は、具体的説明としてそして制限としてでなく提供される以下の実施例により製造してよい。反応のいずれにおいても得られる収量を至適化するための試みはなされていない。当業者は、反応時間、温度、溶媒および／もしくは試薬の慣例の変動によりこうした収量を増大させる方法を知っているであろう。
手順１
２−ヨード−４−アセトキシ−５−メトキシフェニル酢酸
【００８０】
【化３８】
2004511488.tif 000027
【００８１】
４−アセトキシ−３−メトキシフェニル酢酸（２００ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸銀（２１７ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）およびヨウ素（２３７ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）を合わせ、そして無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）中アルゴン下で２時間攪拌した。反応を濾過した。濾液を洗浄し（飽和ＮａＣｌ溶液）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）かつ分離して表題化合物を白色粉末（収量＝２７９ｍｇ；８９％）として得た。分析的逆相ＨＰＬＣ（勾配１０−９０％ＭｅＣＮ、０．１％水性ＴＦＡ）ｔＲ＝３．５６分、約９９％；１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、３００ＭＨｚ）δ７．４６（ｓ、１Ｈ）、７．１０（ｓ、１Ｈ）、３．７９（ｓ、３Ｈ）、３．７８（ｓ、２Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）；１３Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ、３００ＭＨｚ）δ１７４．４、１７０．７、１５３．３、１４０．９、１３８．８、１３４．１、１１６．５、８８．８、５６．９、４６．９、２０．７。元素分析、Ｃ１１Ｈ１１Ｏ５Ｉ１の計算値：Ｃ、３７．７４；Ｈ、３．１７。実測値：Ｃ、３７．９３；Ｈ、３．３１。
手順２
２−１２５ヨード−４−アセトキシ−５−メトキシフェニル酢酸
硫酸鉄（ＩＩＩ）（１１．３ｎｍｏｌ）、１２５ヨウ化ナトリウム（６．６ｎｍｏｌ）、水（１００マイクロリットル）およびジクロロメタン（１５０マイクロリットル）を、攪拌子を含む１ｍＬのｖ−バイアルに入れる。混合物を周囲温度で４０分間活発に攪拌し、そしてシリンジを使用して紫色の有機層を取り出す。その後、該溶液を、４．９７ｎｍｏｌの３−メトキシ−４−アセトキシフェニル酢酸および硫酸マグネシウムを含有するｖ−バイアルに添加する。この攪拌された混合物に、色が薄黄色に変化するまでトリフルオロ酢酸銀の小量の部分を添加し；反応混合物を追加の１時間攪拌する。
実施例１
９，１３，１４−オルトフェニルアセチルレシニフェロニル−２０−（３−アセトキシ−４−メトキシ−６−ヨードフェニルアセテート）（化合物１）
丸底フラスコ（１０ｍＬ）に以下の試薬を添加した。すなわち、ジクロロメタン（４ｍＬ）、レシニフェロノール−９，１３，１４−オルトフェニルアセテート（１０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．２８ｍｇ、０．００２２ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４．８ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）、手順１で製造された２−ヨード−４−アセトキシ−５−メトキシフェニル酢酸（８．２ｍｇ、０．０２３ｍｍｏｌ）。反応をアルゴン下室温でかつ暗所で２４時間攪拌した。溶媒を真空中で除去し、そして残渣をシリカゲル（クロロホルム）でクロマトグラフィー分離した。溶媒を適切な画分から分離して化合物１を白色固形物として生じた（収量＝１０ｍｇ；５９％）。分析的逆相ＨＰＬＣ（勾配６０−９０％ＭｅＣＮ、０．１％水性ＴＦＡ）ｔＲ＝４．２７分、約９５％；１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ７．４４（ｓ、１Ｈ）、７．３５（ｓ、１Ｈ）、７．２９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝６．８）、７．２２−７．１５（ｍ、２Ｈ）、６．８４（ｓ、１Ｈ）、５．８０（ｓ、１Ｈ）、４．６３（ｓ、２Ｈ）、４．５１（ｓ、２Ｈ）、４．１５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝２．１）、３．７９−３．６６（ｍ、６Ｈ）、３．１３（ｓ、２Ｈ）、２．９９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１４．３）、２．５１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．６）、２．３９（ｓ、１Ｈ）、２．２６（ｓ、１Ｈ）、２．２２（ｓ、３Ｈ）、２．０９−１．９６（ｍ、３Ｈ）、１．７４（ｓ、１Ｈ）、１．４３（ｓ、１Ｈ）、０．８８（ｄ、４Ｈ、Ｊ＝７）；１３Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ２０８．２、１６９．７、１６８．９、１５７．８、１５１．４、１４６．３、１３９．０、１３６．５、１３６．３、１３４．９、１３４．０、１３３．０、１３０．８、１２８．６、１２７．６、１２６．５、１１７．７、１１４．２、１１０．７、８７．９、８４．４、８１．０、８０．５、７３．１、７１．３、５６．０、５５．２、４６．３、４０．９、３９．９、３９．０、３５．６、３３．９、３２．９、２４．９、２０．６、１９．９、１８．８、１０．３。正確な質量（ＦＡＢ　ＭＨ＋）：Ｃ３９Ｈ４１Ｉ１Ｏ１０：についての計算値、７９７．１９５１；実測値、７９７．１８２２。
実施例２
９，１３，１４−オルトフェニルアセチルレシニフェロニル−２０−（３−ヒドロキシ−４−メトキシ−６−ヨードフェニルアセテート）（化合物２）
９，１３，１４−オルトフェニルアセチルレシニフェロニル−２０−（３−アセトキシ−４−メトキシ−６−ヨードフェニルアセテート）（１７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解し、そしてアルゴン下室温で攪拌した。その後ピロリジン（５９．７μＬ、０．７１ｍｍｏｌ）を添加し、そして反応を２時間攪拌し、その時間の後に出発原料がＴＬＣにより見えなかった。溶媒を真空中で除去し、そして残渣をＴＬＣ調製プレート（シリカゲル、ＣＨＣｌ３）上で精製した。生成物をシリカから抽出し（クロロホルム）、そして溶媒を濾過後に蒸発させて、化合物２を白色固形物として生じた（収量＝１１ｍｇ；６８％）。分析的逆相ＨＰＬＣ（勾配４０−９０％ＭｅＣＮ、０．１％水性ＴＦＡ）ｔＲ＝４．８３分、約９０％；ＩＲ（ＫＢｒ）２８５０、１７３２、１７０５、１５０４、１２７０、１０２７ｃｍ−１；１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ７．３７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝１．９）、７．３１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１．５）、７．２３−７．１５（ｍ、１Ｈ）、６．７６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０）、６．７２−６．６７（ｍ、２Ｈ）、５．８０（ｓ、１Ｈ）、５．４８（ｓ、１Ｈ）、４．６３（ｓ、２Ｈ）、４．５９（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝１２．１）、４．１２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．７）、３．８（ｓ、３Ｈ）、３．４９（ｓ、２Ｈ）、３．１４（ｓ、２Ｈ）、３．０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１３．４）、２．４７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝７．５）、２．３５（ｄ、１Ｈ、１８．９）、２．０９−１．９９（ｍ、３Ｈ）、７．５（ｓ、３Ｈ）、１．６１−１．５９（ｓ、１Ｈ　ｂｒｏａｄ）、１．４４（ｓ、３Ｈ）、０．８８（ｄ、４Ｈ、Ｊ＝７．１）；１３Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、５００ＭＨｚ）δ２０８．４、１７１．４、１５８．２、１４６．５、１４６．２、１３６．５、１３４．９、１３４．０、１３０．８、１２８．５、１２７．７、１２６．５、１２５．６、１２２．２、１１７．７、１１４．３、１１１．７、１１０．７、８４．４、８１．０、８０．５、７３．３、７０．５、６５．８、５５．９、５５．３、４１．０、４０．９、３９．９、３９．０、３５．６、３３．０、１９．８、１８．８、１０．３。正確な質量（ＦＡＢ　ＭＨ＋）：Ｃ３７Ｈ３９Ｉ１Ｏ９についての計算値、７５５．１７４１；実測値、７５５．１７１７。
生物学的実施例
本発明のヨウ素化ＲＴＸ誘導体を、［３Ｈ］ＲＴＸ結合アッセイにて、ｈＶＲ１受容体への［３Ｈ］ＲＴＸの結合を阻害するそれらの能力について試験した。膜の調製
ＨＥＫ２９３細胞を、１９９９年４月１５日出願のＤｕｂｉｎ，Ａ．らへの米国特許出願第０９／２９２７００号明細書（引用することにより本明細書に組み込まれる）に記述されるとおりヒトＶＲ１バニロイド受容体でトランスフェクトし、そしてハンクス液で洗浄し、細胞解離緩衝液（シグマ（Ｓｉｇｍａ））で解離させ、そしてその後１０００×ｇで５分間遠心分離した。細胞ペレットを、５．８ｍＭ　ＮａＣｌ、３２０ｍＭショ糖、２ｍＭ　ＭｇＣｌ２、０．７５　ＣａＣｌ２および５ｍＭ　ＫＣｌを含有する冷２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．４中でホモジェナイズし、そして１０００×ｇで１５分間遠心分離した。結果として生じる上清をその後４０，０００×ｇで１５分間遠心分離した。ペレットにされた膜を−８０℃の冷凍庫中で保存した。
【００８２】
アッセイ手順は、Ｓｚａｌｌａｓｉ，Ａ．とＢｌｕｍｂｅｒｇ，Ｐ．Ｍ．，“［３Ｈ］Ｒｅｓｉｎｉｆｅｒａｔｏｘｉｎ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｖａｎｉｌｌｏｉｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｓｐｅｃｉｆｉｃ−ｒｅｌａｔｅｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ，ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｓｕｌｆｈｙｄｒｙｌ　ｒｅａｇｅｎｔｓ”（Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ　Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９３、３４７、８４−９１）に記述されたものから改変した。簡潔には、膜からの約１２０μｇタンパク質／ｍｌを、０．２５ｍｇ／ｍＬの脂肪酸を含まないウシ血清アルブミンを含有する０．５ｍｌのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）中で、示された濃度の［３Ｈ］ＲＴＸとともに３７℃で６０分間インキュベートした。反応混合物をその後４℃に冷却し、０．１ｍｇのα１−酸糖タンパク質を各サンプルに添加し、そして４℃で１５分間インキュベートした。サンプルを１８５００×ｇで１５分間遠心分離した。ペレットを含有する微小遠心管の先端を切り離した。結合された放射活性をシンチレーション計数により定量した。非特異的結合は２００ｎＭの未標識ＲＴＸの存在下で試験した。
［３Ｈ］ＲＴＸおよびヨウ素化ＲＴＸ誘導体との膜のインキュベーション
膜を、［３Ｈ］ＲＴＸ（０．４ｎＭ）および変動する濃度のヨウ素化ＲＴＸ誘導体とともに３７℃で６０分間インキュベートした。表１に示されるとおり、データは二重でアッセイされた各点での２回の実験を代表する。該結果は、この研究で使用されたヨウ素化バニロイド類似物が［３Ｈ］ＲＴＸ結合を用量依存的に阻害したことを示した。
ｈＶＲ１受容体へのヨウ素化ＲＴＸ誘導体結合の結果
表１に示されるとおり、化合物１および化合物２は、ＲＴＸ誘導体よりもｈＶＲ１受容体への結合に対する３ないし４倍より高い親和性を立証した。
【００８３】
【表３】
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【００８４】
前述の明細は本発明の原理を教示し、実施例は具体的説明の目的上提供される一方、本発明の実務は、以下の請求の範囲およびそれらの同等物の範囲内にあるところの通常の変形、翻案および／もしくは改変の全部を包含することが理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【図１】
発明にかかる、ヨウ素化ＲＴＸ誘導体の対数モル（Ｍ）でのＩＣ５０薬物濃度値の関数としての、１分あたりカウント（ｃｐｍ）でのｈＶＲ１受容体への［３Ｈ］ＲＴＸ結合の阻害を示す。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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