(57)【要約】ａ）　細胞内抗原を認識して結び付けることのできる抗体の領域をコードするヌクレオチド配列を含む第一のベクター、及びペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む第二のベクターによって、細胞の同時形質転換を行うステップと、ｂ）　細胞内抗原を認識して結び付け可能な抗体領域が第一の分子と結合し、ペプチドが第二の分子と結合し、第一の分子と第二の分子との相互作用が選択可能な表現型及び／又は認識可能なシグナルを生じ、かつ第一の分子と第二の分子との相互作用が抗体領域及びペプチドが相互に認識して相互作用するときのみ生じることに起因して、抗体領域及びペプチドが相互に認識して相互作用する細胞のみが、再生され、及び／又は認識されるような環境において、同時形質転換された細胞を育成するステップと、ｃ）ｂ）の細胞を選択して、エピトープとしての該ペプチドを同定するステップとを含む細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法、を記載する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法であって、
ａ）　該細胞内抗原を認識して結び付けることのできる抗体の領域をコードするヌクレオチド配列を含む第一のベクター、及びペプチドをコードして全体としてペプチドライブラリライブラリーを形成するヌクレオチド配列を含むベクターファミリーによって、細胞の同時形質転換を行うステップと、
ｂ）　該細胞内抗原を認識して結び付け可能な該抗体領域が第一の分子と結合し、該ペプチドが第二の分子と結合し、該第一の分子と該第二の分子との相互作用が選択可能な表現型及び／又は認識可能なシグナルを生じ、かつ該第一の分子と該第二の分子との相互作用が該抗体領域及び該ペプチドが相互に認識して相互作用するときのみ生じることに起因して、
該抗体領域及び該ペプチドが相互に認識して相互作用する細胞のみが、複製され、及び／又は認識されるような環境において、該同時形質転換された細胞を育成するステップと、
ｃ）該ｂ）の細胞を選択して、エピトープｉとしての該ペプチドを同定するステップとを、
含む細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法。
【請求項２】
該ペプチドライブラリーが、抗原ペプチド断片ライブラリー、抗原ライブラリー、多数の抗原点変異体、多数の同系統抗原変異体、又は少なくとも１の共通蛋白若しくはアプタマーペプチド断片のライブラリーを含み、安定骨格に融合される多数の抗原である、請求項１に記載の細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法。
【請求項３】
該細胞が、酵母細胞である、請求項１又は２に記載の細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法。
【請求項４】
該細胞内抗原が、タウ蛋白、同系列変異体、疾患関連変異体、それらのスプライシングアイソフォーム、又は微細管に結合可能な他の蛋白である前記各請求項に記載の細胞内抗原におけるエピトープの生体内同定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、細胞内エピトープの生体内同定方法に関する。より詳しくは、本発明は、通常、細胞内に存在する抗原エピトープを、細胞内の抗体を用いて、生体内でマッピングする方法に関する。
【０００２】
細胞内抗体に限らず、抗体を効率的に利用するために不可欠な要素は、エピトープを同定すること、即ち、抗体自体が認識する抗原の一部を同定することである。実際、研究、診断、及び治療のためには、抗原のエピトープを知ること、及びそれに結合可能な抗体を選択することが望ましい。
【０００３】
多くの異なった手法が、抗原のエピトープのマップを作製するために用いられているが、その総て手法は、生体外技術を使用するものであり、大変骨の折れる手順を要する。生体外技術による限界は、抗原−抗体結合が、抗原の本来の機能を発揮する状況、即ち細胞内の環境で調べられていないという事実に由来する。
【０００４】
ある方法（ペプチドスキャニング法）では、ａ）極僅かのアミノ酸で重複し、かつ全体として調査された抗原の完全アミノ酸配列を構成する複数のペプチドの合成、及びｂ）抗体による各ペプチドの刺激誘発を利用する。その方法は、大変時間を要し、骨が折れ、費用を要するとともに、概して必ずしも満足な結果が得られるとは限らない。実際、抗体によって認識されるエピトープは、必ずしも、線状のアミノ酸配列からなるわけではない。
【０００５】
現在のところ、各種抗体によって認識されるエピトープの同定に最も有用な技術としては、ペプチド−ファージライブラリーから選択され、或いは人工的に合成されるランダムな配列を有するペプチドを用いることである。更に、その方法は、エピトープが抗原の一次アミノ酸配列と相同性のないときに、活性ペプチドを同定することができ、その結果、不連続なエピトープや立体配座を持つエピトープを得ることができる。従って、その方法は、開始抗原と構造的な相関性がなくとも、ある特定の抗体によって認識されたエピトープの実質的なコレクションを作ることができる。
【０００６】
選択的に変異させられ、切り取られ、又は欠失させられた標的抗原は、適当な細胞系で設計されて発現し、精製され、個々に分析され得る。明らかに、この手順もまた大変骨の折れるものである。
【０００７】
本願発明の発明者は、今回、細胞内の環境で発現して活性を有する抗体（細胞内抗体）により、生体内、即ち自然な状態で、細胞内抗原のエピトープを同定する方法を提供する。
【０００８】
細胞内抗体、即ち細胞内で発現し活性を有する抗体又はその一部の使用は、その生理的細胞内環境で、蛋白の機能と相互作用する有効な技術を提示する（Ｃａｔｔａｎｅｏ ＆ Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，１９８７；Ｃａｒｌｓｏｎ，１９８８；Ｂｉｏｃｃａ ＆ Ｃａｔｔａｎｅｏ，１９９５；Ｃａｔｔａｎｅｏ ＆ Ｂｉｏｃｃａ，１９９７；Ｃａｔｔａｎｅｏ ＆ Ｂｉｏｃｃａ，１９９９；Ｍａｒａｓｃｏ，１９９７）。
従って、その技術は、標的蛋白質の機能的ノックアウトを達成でき、その結果、適当な細胞内抗体によって、所定の表現型を、細胞又は生物体に与えることができる。
【０００９】
細胞内抗体の技術は、以下の２つの有利な側面に基づいている：
１）蛋白に対する高親和性や特異反応性にとって好適な分子の根源を提供する、免疫系総て（自然的又は人工的なものを含む）を、実質的に非制限的に利用可能とすること；
２）蛋白（及び抗体）を、特定の目的に当てられ、自律的かつ支配的な細胞内局在シグナルによって、様々な細胞内区画に割り当てることを可能とすること。
【００１０】
その技術は、研究や生物工学への応用に有効に利用でき、特に人間や動物の病気に対する遺伝子治療のため、実験用の病原体モデルを提供するため、及び植物生物工学において病原体耐性のトランスジェニック植物を産生するために、有効に利用することができる。
【００１１】
人間及びその他の種の遺伝子配列決定技術における最近の大きな発展は、増大する要求を、同定された遺伝子の機能を解明するために適当な技術を提供することに向かわせ、かくして、ゲノム機能解析と呼ばれるような、新たな研究分野を生み出すに至った。それは、同時に実行可能な手法、即ち高処理能力を有し自動化に適当な手法で、遺伝子機能を同定するために適当な方法及び技術を含む。
現在、この段階は、産業にとって、特に遺伝子から新種の薬を生み出す手順にとって顕著な障害を提示している。
【００１２】
最近、細胞内抗体技術の開発が展開されており、ゲノム機能解析計画にとっての選択的な方法として利用可能となっている（いわゆるＩＴＴ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ ｔｒａｐ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）。その方法は、標的蛋白に対して向けられる総ての抗体の中から、生体内、即ち細胞内の環境で効率的に取り扱い得る一部抗体群を分離又は選択することを可能とする。その技術は、ＷＯ００／５４０５７、国際特許出願に記載されており、この言及により、本明細書中に組み込むものとする。要約すれば、それは、細胞内環境で抗原結合能を与えるために、ファージライブラリー又は免疫された脾臓細胞から抗体を選択する方法からなる。その方法は、細胞内抗体技術の限界、即ち、抗原と生体外で結合できる抗体の総てが、細胞質抗体として発現したとき、同じ抗原に結合できるわけではないという事実を克服できる。２ハイブリッドシステムに基づくＩＴＴ処理手順によって選択される抗体は、細胞内環境中に正確に折り重なり、かつそこで標的抗原に結合できる。それ故、それら抗体は、細胞内抗体として使用することの有効性が確認されている（ｖｉｓｉｎｔｉｎ等、１９９９）。ＩＴＴの適用の総ておいて、抗原は、抗体ライブラリーで、刺激誘発される。
【００１３】
本願発明の発明者は、エピトープ、即ち抗体を認識し結合できる抗原部位の同定にこの技術を有利に適用、修正した。その選択的技術によって、そのようなエピトープは、生体内で抗体そのものによって認識される。本願発明の技術によれば、ＩＴＴと反対に、抗体が、ライブラリー又は一連の抗原で刺激誘発される不断の要素である。特定の細胞内抗体が生体内エピトープのマッピングをする新しい技術は、知られている生体外技術に代わる有効な技術を提示する。
【００１４】
この技術の簡易さは、同様なことを、大規模なスクリーニングに適用可能とする。この方法の利点は、ペプチドの合成を要さずにエピトープの同定が生体内で起こるという事実からも生じる。但し、公知の方法より精度が高くない場合には、ペプチドの合成を要する。この方法は、臨床上、診断上、又は薬理上で有用なエピトープの同定を、生理的な競合状態で大規模なスクリーニングによって、促進することができる。
【００１５】
さらにまた、蛋白の活性サイトは、その全体の構造よりも、保存されていることが明らかにされているので、類似の機能を有する先祖の蛋白を同定することができる。しかして、この方法は、細胞内蛋白のエピトープの生体内同定を可能とする。多くの細胞内蛋白は、構造的に相同なドメイン又はモジュールを含み、それらが、蛋白−蛋白相互作用（例えば、ＳＨ２，ＳＨ３，ＰＨ，ＷＷ，ＰＴＢ，ＰＤＺのドメインがある（ｐａｗｓｏｎ，１９６５）。）又は蛋白−ＤＮＡ相互作用（例えば、ジンクフィンガー、ホメオボックス、へリックス−ループ−へリックス、クロモドメイン、ブロモドメイン）に関係することが知られている。あるドメインに対する抗体特異性を知り得ることは、他の蛋白に属する類似のドメインに関し、細胞内抗体を設計する上で重要な前提条件を提示する。
【００１６】
その抗体特異性に関する情報は、従来における総ての抗体の使用においても重要であり、即時方法の簡易さは、この要求に対して容易な解決策を提供する。従って、これら蛋白モジュールまたは蛋白ドメインの１つを標的とする有益な抗体は、同じファミリーの蛋白ドメインライブラリーで刺激誘発される。
【００１７】
同様に、本発明の方法は、関連蛋白のファミリーに対するある特定の抗体の特異性のみならず、蛋白のアイソフォーム（例えば、選択的なスプライシングにより生じるアイソフォーム）、および進化関連蛋白のファミリーに対するある特定の抗体の特異性も同定することができる。これにより、生理学的な研究は、大変容易に実行できるようになる。
【００１８】
更に、本発明によって実現可能となった大変興味深い応用としては、ある特定の蛋白の変異体に対して特異的な抗体を、より容易に分離することを提示するものがある。この態様において、抗原ライブラリーは、有益な抗原蛋白の点変異体コレクションで構成される。タウ症候群のような神経変性病において示されている（Ｈｏｎｇ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ ＭＧ等，１９９８；Ｇｏｅｄｅｒｔ等，１９９９）タウ細胞内蛋白の変異体に対する抗体の分離、或いは、多くの人悪性腫瘍において示されている（Ｂａｒｂａｃｉｄ，１９８７；Ｇｒａｎｄ ａｎｄ Ｏｗｅｎ，１９９１）Ｐ２１ラスの変異体に対する抗体の分離は、以前よりずっと容易に行なうことができる。
【００１９】
模範的な実験システムとして、発明者は、タウ蛋白、即ちアルツハイマー病で生じる蛋白を用いた。しかし、本発明は、エピトープ同定の一般的な方法に向けられるものである。
【００２０】
従って、本発明の対象は、細胞内抗原のエピトープの生体内同定方法であって、ａ）細胞内抗原を認識して細胞内抗原に結合することのできる抗体の領域をコードするヌクレオチド配列を含む第一のベクター、及びペプチドをコードして全体としてペプチドライブラリーを形成するヌクレオチド配列を含むベクターファミリーによって、細胞の同時形質転換を行なうステップと、ｂ）細胞内抗原を認識して結び付け可能な抗体領域が第一の分子と結合し、ペプチドが第二の分子と結合し、第一の分子と第二の分子との相互作用が選択可能な表現型及び／又は認識可能なシグナルを生じ、かつ第一の分子と第二の分子との相互作用が抗体領域及びペプチドが相互に認識して相互作用するときのみ生じることを条件に、該抗体領域及び該ペプチドが相互に認識して相互作用する細胞のみが、複製され、及び／又は認識されるような環境において、同時形質転換された細胞を育成するステップと、ｃ）ｂ）の細胞を選択しエピトープとしてのペプチドを同定するステップとを有する方法である。
【００２１】
好ましい実施の形態によれば、ペプチドライブラリーは、抗原のペプチド断片のライブラリー、抗原のライブラリー、抗原の一連の点変異体、多くの系統変異体、又は少なくとも１つの共通ドメイン（例えば、ＳＨ２，ＳＨ３，ＰＤＺ，ＰＨ，ＰＴＢ，ＷＷ，ＳＨＡＮＫ，アンキリン繰り返しドメイン、微細管結合ドメイン，ジンクフィンガードメイン、オメオドメイン（ｏｍｅｏｄｏｍａｉｎｓ）、へリックス−ループ−へリックスドメイン）を有する変異体、若しくは、安定骨格（例えばＴＲＸＡチオレドキシン、ＲＯＰ）と融合されたアプタマーペプチド断片のライブラリーを有する一連の抗原である。
【００２２】
好ましい実施の形態によれば、本発明の方法における細胞は、酵母細胞である。
【００２３】
好ましい実施の形態によれば、細胞内抗原は、タウ蛋白、その系統変異体、その疾患関連変異体、そのスプライシングアイソフォーム、または微細管に結合可能な他の蛋白（例えば、ＭＡＰ蛋白、より具体的にはＭＡＰ１、ＭＡＰ２）である。
【００２４】
ここで、本発明を、以下の図面を参照し、好ましい実施の形態によって詳述する。図１は、タウ蛋白欠失変異体の概略図である。図２は、抗ｌｅｘＡポリクロナール抗体（図ａ）、一般的抗タウ蛋白モノクロナール抗体（Ｔａｕ−１）（図ａ）、他の一般的抗タウ蛋白モノクロナール抗体（７．５１）（図ｃ）の使用によって明らかになったｌｅｘＡ−タウ欠失変異体融合蛋白のウエスタンプロットの分析結果を示す。図３は、ｆａｓｕｌｏ等、２００に記載されているようなタウ欠失変異体の地図（図ａ）、生体内の各種欠失変異体に関する、ｓｃＦｖ２断片、ｓｃＦｖ１４断片、およびｓｃＦｖ５２断片の抗タウ特異性（図ｂ）を示す。エピトープ−ｓｃＦｖ結合は、ＨＩＳ３およびＬａｃＺ遺伝子の転写活性を計測するＩＴＴ技術によって検出され、その結果、ヒスチジンのない培地中で生育し、β−グルコシダーゼを合成する細胞の能力が検出される。
【００２５】
実施例１　タウ変異体およびｌｅｘＡとの融合体
タウ蛋白の欠失変異体を、骨格中、ｌｅｘＡ結合ドメインに融合した。
そのようなＤＮＡ結合ドメインは、大腸菌リプレッサー蛋白によって誘導される（Ｂｒｅｎｔ ＆ Ｐａｔｓｈｎｅ，１９８５、Ｇｏｌｅｍｉｓ ＆ Ｂｒｅｎｔ，１９９２、Ｓｉｌｖｅｒ等，１９８６）。
ｌｅｘＡ結合サイトは、レポーター遺伝子に対して上流の転写活性化領域、即ちプロモータに位置させる。ｌｅｘＡ−タウ欠失変異体蛋白の結合体は、ｌｅｘＡ結合サイトに達し、ｌｅｘＡ結合サイトに結合できるが、転写活性化ドメインの欠乏のため、レポータ遺伝子の転写を活性化することはできない。
【００２６】
各タウ断片は、図１中で説明されており、それらは、
微小管に結合可能な、プロリンリッチドメイン、及びＲ１繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−２７４；
微小管に結合可能な、プロリンリッチドメイン、並びにＲ１及びＲ２繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−３０５；
微小管に結合可能な、プロリンリッチドメイン、並びにＲ１、Ｒ２、及びＲ３繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−３３６；
微小管に結合可能な、プロリンリッチドメイン、並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−３６８；
微小管に結合可能な、プロリンリッチドメイン、並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の３９１グルタミン残基まで延長された繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−３９１；
プロリンリッチドメイン、及び４０２アスパラギン残基まで延長された総ての繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−４０２；
プロリンリッチドメイン、及び４１２セリン残基まで延長された総ての繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−４１２；
プロリンリッチドメイン、及び４２２セリン残基まで延長された総ての繰り返し配列を含んでいるタウ１５１−４２２；又は
アルツハイマー病の患者で観察されるＲＨＦフィラメント核を構成する最小領域を含むｄＧＡＥである。
【００２７】
実施例２　タウ変異体での形質転換及びその発現性
タウ蛋白欠失変異体へ融合されたｌｅｘＡドメインをコードするプラスミドＤＮＡを、Ｌ４０酵母株（Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ等、１９９５）を形質転換するために用い、透過性の酵母細胞を作成するために、酢酸リチウムを含有する標準的な方法を用いる。その方法は、先に公表された報告書（Ｇｉｅｔｚ等、１９９２；Ｈｉｌｌ等、１９９１；Ｓｃｈｉｅｓｔｌ　＆　Ｇｉｅｔｚ、１９８９）に基づいてクローンテックによって提供されたものである。酵母細胞を、キャリアーとして、０．１μｇプラスミドＤＮＡおよび１００μｇサーモン精液を用いて、酢酸リチウム、ポリエチレングリコール、及びジメチルスルフォキシドを含有する溶液中で、形質転換する。形質転換された細胞は、得られる表現型を同定するために、トリプトファンを除く他は全アミノ酸を含有する最小限培地（合成脱落培地）で培養する。実際、タウ欠失変異体蛋白に融合されるｌｅｘＡドメインを発現するために使用されるベクターは、トリプトファンの欠乏から生じる栄養上の欠損を補足することができ、その結果、当該アミノ酸なしで酵母を生育することができる。
【００２８】
酵母細胞によって生産されるハイブリッド蛋白は、１０％β−メルカプトエタノール（ｍｅｒｃａｐｔｅｔｈａｎｏｌ）、２％ＳＤＳ、０．１％ブロモフェノールブルー、及び１０％グリセロールを含有する抽出用緩衝液を使用して、形質転換された酵母培養液から抽出する。融合蛋白の発現レベルは、抗ｌｅｘＡ蛋白ポリクロナール抗体（図２ａ）、抗タウｍＡｂｓ：Ｔａｕ−１（ロッシュ）（図２ｂ）、及び７．５１（Ｎｏｖａｋ等、１９９１）（図２ｃ）を使用して、ウエスタンプロット法によって評価される。
【００２９】
実験は、タウ欠失変異体が、２つの抗タウ抗体によって異なって認識されることを示し、その結果、十分に発現した蛋白は、適切な分子量を有し、その上、正しく形質転換されて既知のエピトープを正しく発現し、使用された各種抗体によって認識されることを示唆した。
【００３０】
実施例３　ＩＴＴ方法によって選択される、単鎖（ｓｃＦｖ）抗タウ抗体フラグメントの、タウ変異体との同時形質転換
実験では、ＩＴＴ技術（Ｖｉｓｉｎｔｉｎ等、１９９９、およびＷＯ００／５４０５７）で選択される１区画の単鎖ＦＶフラグメント（ｓｃＦｖ）を用いた。線状バクテリオファージの表面に露出するｓｃＦＶフラグメントライブラリーは、固層に結合された精製組換えタウ蛋白でスクリーニングされた。２つの吸着サイクル、溶出、大腸菌中での溶出ファージの生育の後、抗タウ蛋白結合能が高められた抗体フラグメントの多クローン性個体群が、２ハイブリッド発現ベクター中でサブクローニングされ、２ハイブリッドシステムで、タウ蛋白結合能を試験された。ヒスチジンの欠損した状態で選択された酵母細胞から、抗タウｓｃＦｖ抗体フラグメントが分離され、それは、タウ蛋白に細胞内で結合できた。
【００３１】
タウ異性体及び各ＩＴＴ選択ｓｃＦＶで形質転換された酵母コロニーは、その発現によって、ヒスチジンの欠損状態で細胞の生育を可能とするｌｅｘＡ結合サイトの制御の下にある、栄養上の報告因子ＨＩＳ３で表現型を同定する選択培地で培養される。
【００３２】
抗原−抗体特殊相互作用による転写因子の再構成が、ＨＩＳ３およびｌａｃＺの両リポーター遺伝子の転写を可能とする。そのような相互作用の同定は、ヒスチジンの欠乏状態で生育されたコロニーの定性分析で実行され、β−ガラクトシダーゼの発現に向けられた比色分析で、同じコロニーの色の変化（白から青）によって分析される。
【００３３】
一区画のタウ抗体フラグメントに対する３つの異なるｓｃＦｖ（２，１４，５２）フラグメントの特異性は、図３に示し、表１に、その要約を示した。
【００３４】
【表１】
2004512529.tif 000002
【００３５】
図３は、抗タウ単鎖可変フラグメントｓｃＦｖ２、ｓｃＦｖ１４、ｓｃＦｖ５２によるタウ蛋白エピトープの同定結果を示す。ヒスチジン欠乏培地での生育及びβガラクトシダーゼ発現型は、３つのｓｃＦＶフラグメントのうち一以上でタウペプチドとの相互作用を示している。特に、Ｓ４１２−Ｓ４２２及びＮ３６８−Ｅ３９１断片では、生体内で認識可能なエピトープを含んでいる。
【００３６】
実施例４　ＩＡＣＴ方法での選択
ＰＣＴ出願ＷＯ００／５４０５７で開示されている方法に従って、一連の１８の新たな抗タウｓｃＦｖｓ（ＡからＹ）が選択され、ｄＧＡＥを除く他は、実施例１のタウ欠失変異体の同じ区画によって特性を示した。
【００３７】
各抗体は、ＷＯ００／５４０５７の方法に従って、各タウ欠失変異体により生体内で刺激誘発された。結果は、表２に示す通りであり、その結果は、本発明の方法が、ＩＡＣＴ法で選択される抗体によって認識されるタウの主な３つの領域（Ｉ１５１−２７４；Ｎ３６８−Ｅ３９１；Ｄ４０２−Ｓ４１２）の同定を可能にすることを実証した。
【００３８】
【表２】
2004512529.tif 000003
【００３９】
その結果、選択方法（ＩＶＥＭ）は、予め、ＩＡＣＴ法で選択されるｓｃＦｖｓによって、生体内で認識されるエピトープの迅速な同定を可能とし、それゆえ、従来の高い費用を要し、時間のかかる方法に対して、有効な代替手段を提示する。その上、即時技術によってのみ、生体内認識抗原領域の容易かつ精密な同定が達成される。
【００４０】
2004512529.tif 000004
2004512529.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【図１】
タウ蛋白欠失変異体の概略図である。
【図２】
抗ｌｅｘＡポリクロナール抗体（図ａ））、一般的抗タウ蛋白モノクロナール抗体（Ｔａｕ−１）（図ａ））、他の一般的抗タウ蛋白モノクロナール抗体（７．５１）（図ｃ））の使用によって明らかになったｌｅｘＡ−タウ欠失変異体融合蛋白のウエスタンプロットの分析結果を示す。
【図３】
ｆａｓｕｌｏ等、２００に記載されているようなタウ欠失変異体の地図（図ａ）、生体内の各種欠失変異体に関する、ｓｃＦｖ２断片、ｓｃＦｖ１４断片、およびｓｃＦｖ５２断片の抗タウ特異性（図ｂ）を示す。
【国際公開パンフレット】
2004512529.tif 000006
2004512529.tif 000007
2004512529.tif 000008
2004512529.tif 000009
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2004512529.tif 000019
2004512529.tif 000020
2004512529.tif 000021
2004512529.tif 000022
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004512529.tif 000023
【国際調査報告】
2004512529.tif 000024
2004512529.tif 000025
2004512529.tif 000026