(57)【要約】本明細書では、アスタキサンチンを利用する、コンパニオンアニマルに有用な方法及び組成物を開示する。当該組成物はアスタキサンチンを含み、コンパニオンアニマルによる使用に適合されている。当該方法は、炎症の軽減、免疫の増強、寿命の延長、及びこれらの組み合わせから成る群から選択され、有効量のアスタキサンチンを含む組成物をコンパニオンアニマルに投与することを含む。コンパニオンアニマルは、好ましい実施形態では、イエイヌ又はイエネコである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンパニオンアニマルによる使用に適合された、アスタキサンチンを含む組成物。
【請求項２】
前記組成物の約３重量％未満のアスタキサンチンを含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物の約０．０００１重量％〜約２重量％のアスタキサンチンを含む、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
ドッグフード組成物、キャットフード組成物、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物の約０．００１重量％〜約１重量％のアスタキサンチンを含む、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物の約０．００１重量％〜約０．５重量％のアスタキサンチンを含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が栄養補助剤である、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物の約０．０００１重量％〜約２重量％のアスタキサンチンを含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
炎症の軽減、免疫の増強、寿命の延長、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される方法であって、有効量のアスタキサンチンを含む組成物をコンパニオンアニマルに投与することを含む方法。
【請求項１１】
１日に約０．００１ｍｇ〜約４０ｍｇのアスタキサンチンをコンパニオンアニマルに投与することを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記免疫反応が細胞性免疫反応である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記免疫反応が体液性免疫反応である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記コンパニオンアニマルがイエイヌである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
１日に約１ｍｇ〜約４０ｍｇのアスタキサンチンがイエイヌに投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記コンパニオンアニマルがイエネコである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
１日に約０．００１ｍｇ〜約１０ｍｇのアスタキサンチンがイエネコに投与される、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コンパニオンアニマルにおいて炎症を軽減し、免疫反応を増強し、又は寿命を延長させるのに有用な、アスタキサンチンが利用される方法及び組成物を目的とする。
【背景技術】
【０００２】
近年、酸化防止剤の健康上の効果に関心が高まってきている。酸化防止剤は、通常の代謝の副産物として生成される有害なフリーラジカル又は活性酸素種の作用を無効化する。抗酸化栄養素は、有害なフリーラジカルを中和するのと類似する能力を有する様々な化合物を含んでおり、それには、ビタミンＡ、ビタミンＣ、及びビタミンＥのような、一般に知られているいくつかのビタミン類が含まれる。
【０００３】
カロチノイド類は、酸化防止剤の一種である。カロチノイド類は、様々な種によって種々の程度まで吸収される、自然に存在する植物色素である。一般的なカロチノイド類には、例えば、β−カロチン、ルテイン、リコピン、アスタキサンチン、及びカンタキサンチンが含まれる。一部の酸化防止剤はまた、特定の動物種において抗癌性を有することが示されている。例えば、β−カロチンは、ヒトの神経芽細胞腫の細胞増殖を抑制することが判明しており、カンタキサンチンは、マウスにおいて化学物質誘発性の発癌を防ぐことが示されている。
【０００４】
また、一部の動物種の免疫系に対する効果が、特定のカロチノイド類に関連付けられてきた。例えば、カンタキサンチンは、ラットにおいてリンパ球の増殖を増加させ、ハムスターにおいてマクロファージによる腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の産生を促進する。培養細胞アッセイでは、アスタキサンチン及びβ−カロチンが、Ｔ依存性抗原に対するマウス脾細胞のインビトロ抗体反応を増大させる能力を示した（ジョウノウチ（Jyonouchi）ら）。
【０００５】
カロチノイド類については多くのことが知られているが、ある動物における１つのカロチノイドの効果について知られていることから推定して、同一の動物で別のカロチノイドがもち得る効果を判断することは困難である。また、異なるタイプの動物における過去の発見に基づいて、ある動物において単一のカロチノイドの効果がどのようになり得るかを判断することも困難である。カロチノイドの吸収及び代謝が、種に特異的であることが測定された。例えば、ウシ及びウマは、β−カロチンを吸収するが、ヤギ及びヒツジは、カロチノイド類を全く吸収しない（シュヴァイゲルト，Ｆ．Ｊ．（Schweigert,F.J.）、１９９８）。１９３１年の研究で、ネコに与えたβ−カロチンの大部分が吸収されないことが実証された後、チュー（Chew）ら（２０００）が、イエネコがβ−カロチンを容易に吸収すると判断し、シュヴァイゲルト（Schweigert）ら（２００２）が、この吸収がβ−カロチンのビタミンＡへの変化を伴わないことを実証して、ネコにおけるβ−カロチンの効果がビタミンＡ前駆体としての働きによるものではないことが示唆されるまで、多くの人は、ネコがβ−カロチンを利用できないと考えた。
【０００６】
単一の動物内であっても、カロチノイド類は、特異な吸収パターンを示すことがある。ルテイン及びゼアキサンチンは、ヒトの網膜に集まる様子が見られるが、β−カロチンは、一般に、血液網膜関門を越えることができないので網膜組織には存在しないと考えられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
コンパニオンアニマルの栄養学分野では、動物の免疫機能にプラスの効果を有する栄養成分が望ましい。特定の種において免疫機能を増強する栄養成分を特定することが課題である。コンパニオンアニマルの免疫機能を増強することによって当該動物に効果をもたらす栄養配合及び使用方法が、必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、アスタキサンチンを利用する、コンパニオンアニマルに有用な方法及び組成物を目的とする。当該組成物はアスタキサンチンを含み、コンパニオンアニマルによる使用に適合されている。当該方法は、炎症の軽減、免疫の増強、寿命の延長、及びこれらの組み合わせから成る群から選択され、有効量のアスタキサンチンを含む組成物をコンパニオンアニマルに投与することを含む。コンパニオンアニマルは、好ましい実施形態では、イエイヌ又はイエネコである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
例えば刊行物及び特許を含め、様々な文書が本開示全体を通して引用される。このようなすべての文書が本明細書に参考として組み込まれる。所与のいかなる文献の引用も、それが本発明に関する先行技術であるとの承認として解釈されるべきではない。
百分率及び比率はすべて、特に指示がない限り、重量で計算される。百分率及び比率はすべて、特に指示がない限り、総組成物を基準にして計算される。
【００１０】
本明細書で参照するのは、本発明で使用される様々な成分を含めた構成成分の商品名である。本発明者らは、本明細書で、ある特定の商品名の物質だけに制限されることを意図していない。本明細書の記載では、商品名によって参照されるものと同等の物質（例えば、異なる名称又は参照番号で異なる供給元から得られる物質）に置き換えて、それらを利用してよい。
【００１１】
本発明の説明では、様々な実施形態又は個々の特徴が開示される。当業者には明らかなように、このような実施形態及び特徴のすべての組み合わせが可能であり、そのようなすべての組み合わせが本発明の好ましい実施をもたらすことができる。
本明細書の組成物は、本明細書に記載のどの特徴若しくは実施形態を含んでもよく、本質的に成ってもよく、又は成ってもよい。
【００１２】
本発明の様々な実施形態及び個々の特徴を示し、記載したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、他の様々な変更及び修正を実施することができる。やはり明らかなように、上記開示で教示された実施形態及び特徴のすべての組み合わせが可能であり、そのようなすべての組み合わせが本発明の好ましい成果をもたらすことができる。
【００１３】
（本発明の組成物）
本明細書の組成物は、コンパニオンアニマルによる使用に適合されている。本明細書で使用するとき、用語「コンパニオンアニマル」は、家畜を意味しており、好ましくは、（例えば）イヌ、ネコ、ウマ、ブタ（例えばダルマ豚）、ウサギなどがそれに含まれる。イエイヌ及びイエネコが特に好ましい。この点で、当業者にはよく理解されるように、本明細書に記載の組成物の主な用途は、コンパニオンアニマル用であり、したがって、組成物は、そのように配合される。
【００１４】
アスタキサンチン（３，３’−ジヒドロキシ−β、β−カロチン−４，４’−ジオン）、オキシカロチノイド、又はα−ヒドロキシ−ケトカロチノイドは、有力な酸化防止剤である（マーティン（Martin）ら、１９９９）。それは、主に赤色色素であるので、一般に養殖及び養鶏業において飼料添加物として使用される。特定の活性酸素種に対するアスタキサンチンの抗酸化活性は、β−カロチン、カンタキサンチン、ルテイン、α−トコフェロール、ツナキサンチン、及びゼアキサンチンの抗酸化活性よりも高いことが観察された（ナギーブ（Naguib）、２０００；ミキ（Miki）、１９９１）。アスタキサンチンを豊富に含んだ酵母を与えられたニジマスは、酸化油誘発性の酸化応力を低減する能力の増大を示し（ナカノ（Nakano）ら、１９９９）、また、血清過酸化脂質及びアミノ基転移酵素活性のレベルの低下を示した（ナカノ（Nakano）ら、１９９５、及びナカノ（Nakano）ら、１９９６）。アスタキサンチンは、その抗酸化活性に直接的に関係するにせよ、間接的に関係するにせよ、げっ歯類において、体液性免疫反応（ジョウノウチ（Jyonouchi）ら、１９９５）及び細胞性免疫反応（チュー（Chew）ら、１９９９ｂ）の両方を増強し、乳腺腫瘍の成長（チュー（Chew）ら、１９９９ａ）及び膀胱腫瘍の成長（タナカ（Tanaka）ら、１９９４）を抑制した。また、マウスにおいて、マイトジェン誘発性の脾細胞増殖を促進することも示された（チュー（Chew）ら、１９９９）。ヘリコバクター・ピロリに感染したマウスにアスタキサンチンを豊富に含む藻類抽出物を与えると、細菌量が減少し、胃炎が軽減したが、これは明らかに、Ｔリンパ球が、ＩＦＮ−γの優勢なＴｈ１反応からＩＦＮ−γ及びＩＬ−４を伴うＴｈ１／Ｔｈ２混合反応へとシフトしたことによるものである（ベンネドセン（Bennedsen）ら、１９９９）。
【００１５】
しかし、これまでに、コンパニオンアニマル（例えば、イヌやネコ）がアスタキサンチンを薬理学的有効量で吸収して利用できるのかどうかはわかっておらず、また、ネコ若しくはイヌにおけるそのような吸収の効果も割り出されていない。本発明者らが実施した研究では、アスタキサンチンを与えられたイエイヌ及びイエネコは、血液、及び血中白血球のすべての細胞内小器官による、かなりの量の取り込みを示す。したがって、本発明は、例えば１日に約０．００１ｍｇ〜約４０ｍｇのアスタキサンチンを提供するのに十分な量で、アスタキサンチンを成分若しくは食品添加物として含有する組成物をコンパニオンアニマルに投与するのに有用な組成物及び方法を提供する。そのような食餌は、動物によって吸収され、動物において、血液、例えば血漿や血中白血球に供給される、十分なアスタキサンチンを提供する。
【００１６】
本発明者らは、イエイヌ及びイエネコの両方が食餌アスタキサンチンを吸収可能であることを発見した。
さらに本発明者らは、そのような動物において、循環アスタキサンチンが、血中白血球によってかなりの量吸収され、高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）に結合することを発見した。本発明者らはまた、アスタキサンチンが様々な細胞内小器官にも分配されることを発見した。このように、白血球の様々な小器官にアスタキサンチンが吸収されると、（１）これらの細胞を酸素フリーラジカルの攻撃から保護し、且つ／又は（２）核に関わる事象を直接的に調節すると考えられている。故に、イヌ及びネコのようなコンパニオンアニマルに有効量のアスタキサンチンを含有する組成物を与えると、当該動物の体内組織内の重要な細胞部位にアスタキサンチンが供給され、それが、これらの動物における免疫機能の上方調節及び健康の改善をもたらす。
【００１７】
アスタキサンチンを、遊離型アスタキサンチン又はアスタキサンチンジエステルとして提供することができる。自然に生成されるアスタキサンチンを、菌類、甲殻動物類、及び藻類、例えば、ヘマトコッカス種（Haematococcus sp.）から得ることができる（例えば、米国特許第５，７４４，５０２号に記載）。アスタキサンチンはまた、野生型及び遺伝子組換えパフィア酵母（Pfaffia yeast）によって生成され、アーチャー・ダニエルズ・ミッドランド社（Archer Daniels Midland Co.）；アクアサーチ社（Aquasearch Inc.）；アスタカロチンＡＢ（AstaCarotene AB）；シアノテック社（Cyanotech Corporation）、及びマイクロ・ガイア社（Micro Gaia,Inc.）から市販されている。また、合成的に生成されるアスタキサンチンは、ホフマン−ラロシュ・リミテッド（Hoffman-LaRoche,Ltd.）から市販されている。投与されるアスタキサンチンの形態は、より生物学的に入手可能な製品、例えば、ビードレット（beadlet）や含油樹脂などとしての投与を提供するように選択することができる。
【００１８】
本明細書で使用される組成物は、好ましい実施形態では、ペットフード組成物である。本明細書で使用するとき、用語「ペットフード組成物」は、コンパニオンアニマルによる摂取が意図された組成物を意味する。これらには、必要な食餌所要量を供給することが意図された食品、並びにトリーツ（例えばイヌ用ビスケット）又は他の食品栄養補助剤が有利に含まれる。本明細書の組成物は、所望により、ドライ組成物（dry composition）（例えばキブル）、セミモイスト組成物（semi-moist composition）、ウェット組成物（wet composition）、又はこれらのいずれかの組み合わせのようなペットフード組成物であってよい。代替的に、又は追加的に、当該組成物は、グレービー、飲料水、ヨーグルト、粉末、懸濁液、チューイング製品（chew）、トリーツ（例えばビスケット）、又は他の供給形態のような、栄養補助剤である。一例として、アスタキサンチンを、必要とされる有益量を提供するように組成物の他の構成成分とブレンドしてよく、又は、組成物を動物に与える前に、例えば粉末を振りかけることによって、当該組成物に添加してよい。
【００１９】
一例として、一実施形態では、当該組成物は、栄養的にバランスのとれたものである。本明細書で使用するとき、コンパニオンアニマル用の組成物に関する用語「栄養的にバランスのとれた」は、当該組成物が、コンパニオンアニマルの栄養学分野の第一人者の推奨に基づいた適切な量及び割合で、生命を維持するために必要な既知の栄養素を有することを意味する。栄養的にバランスのとれた組成物は、当該技術分野において広く知られ、広く使用されている。
【００２０】
本明細書で使用される組成物は、任意で、１以上のさらなる構成成分を含んでよい。他の構成成分は、本明細書で使用される組成物に含めるのに有益であるが、本発明の目的には任意である。一実施形態では、食品組成物は、乾燥物を基準として、当該食品組成物の約２０重量％〜約５０重量％の粗タンパク質、或いは約２０重量％〜約４０重量％の粗タンパク質、或いは約２０重量％〜約３５重量％の粗タンパク質を含んでよい。粗タンパク質物質は、大豆、綿種子、及びピーナッツのような植物性タンパク質、又はカゼイン、アルブミン、及び肉タンパク質のような動物性タンパク質を含んでよい。本明細書で有用な肉タンパク質の非限定例には、牛肉、豚肉、子羊肉、鶏肉、魚、野菜、及びこれらの混合物から成る群から選択されるタンパク質源が含まれる。
【００２１】
組成物は、乾燥物を基準として、当該食品組成物の約５重量％〜約４０重量％の脂肪、或いは約１０重量％〜約３５重量％の脂肪を含んでよい。
本発明の組成物は、炭水化物源をさらに含んでよい。米、トウモロコシ、ミロ、サトウモロコシ、大麦、小麦などのようなグレイン又はシリアルが、供給源の例である。
組成物はまた、乾燥ホエイ及び他の乳製品副産物のような他の物質も含有してよい。
【００２２】
組成物はまた、胃腸の健康の改善のために少なくとも１つの繊維源を含んでよい。このような繊維源は、例えば、少なくとも１つの中度発酵性繊維（moderately fermentable fiber）を含んでよい。中度発酵性繊維は、これまでに、コンパニオンアニマルの免疫系に効果をもたらすと記載されてきた。中度発酵性繊維、或いは、当業者に公知の、プレバイオティク（prebiotic）組成物を供給して腸内のプロバイオティク微生物の成長を促進する他の組成物も、本発明によって動物の免疫系にもたらされる効果の増進に役立つように、当該組成物に組み込んでよい。さらに、例えば乳酸菌（Lactobacillus）又はビフィズス菌（Bifidobacterium）種のようなプロバイオティク微生物を組成物に添加してもよい。
【００２３】
本発明の開示を考えると、当業者は、組成物のタイプ（例えば、栄養的にバランスのとれたペットフード組成物であるか栄養補助物であるか）、様々な動物による特定のタイプの組成物の平均消費量、及びフードが調製される製造条件を考慮して、アスタキサンチンの適切な量を決定することができる。一例として、組成物は、特定の実施形態では、当該組成物の約３重量％未満のアスタキサンチンを含んでよい。さらに他の実施形態では、組成物は、当該組成物の約０．０００１重量％〜約２重量％、又は約０．００１重量％〜約１重量％、又は約０．００１重量％〜約０．５重量％のアスタキサンチンを含んでよい。
【００２４】
（本発明の方法）
本発明の方法は、炎症の軽減、免疫反応の増強、寿命の延長、又はこれらの組み合わせのために、コンパニオンアニマル、最も好ましくはイエイヌ又はイエネコに、本発明の組成物を経口投与する（すなわち、摂食による）ことを含む。
【００２５】
本発明はまた、イヌ又はネコの免疫反応を増強するのに効果的な用量でアスタキサンチンを供給する方法を提供するが、その際、アスタキサンチンが高比重リポタンパク質（ＨＤＬ）に結合する。当該方法はまた、アスタキサンチンが動物の白血球によって吸収されるように、動物の食餌に十分な量のアスタキサンチンを提供する。
【００２６】
本発明の方法は、イヌ又はネコにおいて細胞性免疫反応を増大させるのに効果的なレベルで、アスタキサンチンを提供する。当該方法はまた、コンパニオンアニマルにおいて体液性免疫反応を増大させ、並びにＩｇＧ及びＩｇＭの生体内産生を増大させる、効果的なレベルのアスタキサンチンを提供する。
【００２７】
動物に免疫機能の改善をもたらすことによって、本発明はまた、動物が免疫反応を引き出す能力をアスタキサンチンが増進させるのに十分な時間にわたって、有効量のアスタキサンチンを含む食餌を動物に与える工程を含む、コンパニオンアニマルにおいて寿命を延ばす方法も提供する。
【００２８】
本発明の組成物は、（例えば）炎症の軽減（attenuation or inflammation）、免疫反応の増強、おいしい食料源、又は飢え若しくは栄養的需要を満たすための手段を必要とするコンパニオンアニマルによって摂取される。当該組成物はまた、通常の食餌所要量に対する栄養補助物として摂取されてもよい。
【００２９】
本明細書で使用するとき、コンパニオンアニマルに関する用語「経口投与」は、動物が摂食すること、又は本明細書の１以上の組成物を動物に与えるように人が指示されること、若しくは人が与えることを意味する。好ましくは、当該組成物は、本明細書で前述したように、ペットフード組成物又は栄養補助物である。その際、人が組成物を与えるように指示されるが、そのような指示は、組成物を使用することで、言及された効果、例えば炎症の軽減や免疫反応の増強をもたらし得、且つ／又はもたらすことになることを、人に教え、且つ／又は人に知らせるものであってよい。例えば、そのような指示は、口頭指示（例えば、医師、獣医、若しくは他の保健専門家からの口頭指導を通じた指示、又はラジオやテレビ媒体（すなわち、広告）を通じた指示）、又は書面での指示（例えば、医師、獣医、若しくは他の保健専門家からの書面による指示（例えば、手書きメモ）を通じた指示、専門販売員若しくは組織からの書面による指示（例えば、広告用チラシ、パンフレット、若しくは他の教育用品による指示）を通じた指示）、文字媒体（例えば、インターネット、電子メール、若しくは他のコンピュータ関連媒体）、及び／又は、組成物に関連付けられたパッケージ（例えば、組成物を入れる容器上に存在するラベル）であってよい。本明細書で使用するとき、「書面の」は、言葉、絵、記号、及び／又はその他の視覚的記述子によることを意味する。そのような情報が、本明細書で使用される実際の語、例えば、「軽減」、「炎症」、「増強」、「免疫」、「反応」などを使用する必要はなく、むしろ、それと同一又は類似の意味を伝達する語、絵、記号などの使用が本発明の範囲内で企図される。
【００３０】
本明細書に記載の組成物は、通常の食餌所要量に対する栄養補助物として使用してよく、又はコンパニオンアニマル用の主食としてもよい（そのようなものとして、栄養補助物又は食品が、栄養的にバランスのとれたものであることができる）。投与は、必要なとき又は望ましいときに応じたものであってよく、例えば、月１回、週１回、又は毎日（１日に複数回を含む）であってよい。通常の食餌所要量に対する栄養補助物として利用されるときには、当該組成物を、哺乳類に直接投与してよく、或いは別法として、毎日の飼料若しくは食物に接触させ、又は混合してもよい。毎日の飼料又は食物として利用されるときには、その投与は、当業者には周知である。
【００３１】
使用される組成物の量は、コンパニオンアニマルの状態及び／又は年齢、ペットフード組成物又は栄養補助物の品質（適用可能な場合）、並びにコンパニオンアニマルのサイズ又は品種（適用可能な場合）を含め、様々な因子に左右され得る。参考として、コンパニオンアニマルには、１日に約０．００１ｍｇ〜約４０ｍｇのアスタキサンチンを投与してよい。さらなる一例として、ネコには、１日に約０．０２ｍｇ〜約１０ｍｇのアスタキサンチンを投与してよい。さらなる一例として、イヌには、１日に約１ｍｇ〜約４０ｍｇのアスタキサンチンを投与してよい。
【００３２】
さらに、アスタキサンチンの血漿濃度は、ネコでは、組成物投与後に約２０ｎｍｏｌ／Ｌ〜約０．１４μｍｏｌ／Ｌに増加してよい。イヌにおけるアスタキサンチンの血漿濃度は、組成物投与後に約０．０１μｍｏｌ／Ｌ〜約０．１４μｍｏｌ／Ｌに増加してよい。
【００３３】
本発明について、以下の非限定例によって説明する。
【実施例】
【００３４】
（実施例１）
（イヌにおけるアスタキサンチン補給の効果）
（材料及び方法）
メスのビーグル犬（生後９〜１０ヶ月；体重８．２±０．２ｋｇ；コバンス・リサーチ・プロダクツ社（Covance Research Products Inc.）、ミシガン州カラマズー（Kalamazoo））をランダムに割り振って、１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチン（ヘマトコッカス・プルビアリス（Haematococcus pluvialis）由来のアスタキサンチン１０９ｇ／含油樹脂１ｋｇの濃縮物、アストラザンシン（astraZanthin）（商標）、ラ・エー・ラボラトリーズ（La Haye Laboratories）、ワシントン州レドモンド（Redmond））を１６週間与えた（ｎ＝１４／処置）。アスタキサンチンを市販の基礎食餌（アイムス社（The Iams Co.）、オハイオ州ルイスバーグ（Lewisburg））に組み込み、１日に２回与えた（食品２００ｇ／日）。食餌組成物は、次の通り（ｇ／ｋｇ）であった：水分８５．３、タンパク質２７５．８、灰分６０．７、脂肪１１５．０、Ｃａ９．９、Ｐ９．３、粗繊維２１．３、総エネルギー１８，９１４ｋＪ／ｋｇ；ｎ−６：ｎ−３脂肪酸比は７．９であった。イヌを、温度調節（２０〜２２℃）及び光調節（１４時間光（hour light））施設内で、２×３ｍの檻（１つの檻にイヌ２匹）で飼育した。第０週、第４週、第８週、及び第１６週に体重を記録した。免疫機能を評価するために、第０週、第６週、及び第１２週に血液を採取した。すべてのイヌに第１２週及び第１４週の２回ワクチンを接種し（ヴァンガード５（Vanguard 5）（商標）、スミスクライン・ビーチャム（Smithkline Beacham）、ペンシルベニア州ウェストチェスター（West Chester））、ワクチン接種後の免疫反応を評価するために、第１６週に再び血液を採取した。
【００３５】
遅延型過敏症。遅延型皮膚過敏症（ＤＴＨ）を評価するために、前述（チュー（Chew）ら、２０００）のように、第１２週（ワクチン接種前）及び第１６週（ワクチン接種後）にすべてのイヌに１００マイクロリットルの（１）生理食塩水（８．５ｇ／Ｌ；陰性対照）、（２）イヌジステンパー・ウイルス、アデノウイルス２型、パラインフルエンザ・ウイルス、及びパルボウイルスを含有する弱毒化多価ワクチン（希釈せず；ヴァンガード５（Vanguard 5）（商標）、スミスクライン・ビーチャム（Smithkline Beacham）、ペンシルベニア州ウェストチェスター（West Chester））、並びに（３）フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ、０．５ｇ／Ｌ）を皮内注射した。注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に、皮膚硬化を測定した。
【００３６】
血液学。ＥＤＴＡ処理した血液を使用し、血液学的分析装置（動物用ＡＢＣ血液学的分析装置（Vet ABC-Hematology Analyzer）、ヘスカ（Heska）、コロラド州フォートコリンズ（Fort Collins））で、全血球算定（白血球、ＲＢＣ及び血小板総数、リンパ球、単球及び顆粒球分画、ヘマトクリット、ヘモグロビン、並びに平均赤血球容積、ヘモグロビン及びヘモグロビン濃度、並びに血小板容積）を実施した。
【００３７】
リンパ球増殖。全血培養を使用して、第０週、第６週、第１２週、及び第１６週に、ＰＨＡ（最終濃度２ｍｇ／Ｌ及び１０ｍｇ／Ｌ）、コンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ；１ｍｇ／Ｌ及び５ｍｇ／Ｌ）、並びにヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ；０．２５ｍｇ／Ｌ及び１．２５ｍｇ／Ｌ）に対する末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の増殖反応を評価した（チュー（Chew）ら、２０００）。生体内の状態を模すために全血を培養した。
【００３８】
白血球サブセット。第０週、第６週、第１２週、及び第１６週に、フローサイトメトリーによって、ＣＤ３（全Ｔ）、ＣＤ４（Ｔｈ）、ＣＤ８（Ｔｃ）、ＭＨＣＩＩ（活性化リンパ球）、及びＣＤ２１（成熟Ｂ細胞）の亜集団（subpopulation）の量を計った（チュー（Chew）ら、２０００）。
【００３９】
ＩｇＧ及びＩｇＭ。市販のキット（ベッチル・ラボラトリーズ社（Bethyl Lab.,Inc.）、テキサス州モンゴメリー（Montgomery））を使用して、ＥＬＩＳＡによって血漿中のＩｇＧ（ヒツジ抗イヌＩｇＧ；感度＝１６マイクログラム／Ｌ）及びＩｇＭ（ヤギ抗イヌＩｇＭ；感度＝３１マイクログラム／Ｌ）の濃度を分析した。
【００４０】
ナチュラルキラー細胞の細胞毒性。イヌの甲状腺癌細胞（標的細胞）を、ウシ胎児血清１００ｍＬ／Ｌ、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ、硫酸ストレプトマイシン１００ｇ／Ｌを含有するダルベッコ改変イーグル培地（Dulbecco's Modified Eagles Medium）（シグマ（Sigma）、ミズーリ州セントルイス）に再懸濁して、２×１０5細胞／ｍＬとした。フィコール分離したＰＢＭＣ（エフェクター細胞）を、１×１０6及び２×１０6細胞／ｍＬまで再懸濁し、１００マイクロリットルを９６ウェル平底プレート内の標的細胞に加えて、エフェクター：標的の比を５：１及び１０：１とした。８時間インキュベートした後、ＭＴＴ２０マイクロリットル（５ｇ／Ｌ）を加え、４時間インキュベートした。上清を除去し、ホルマザンをイソプロパノール１００マイクロリットル中に再懸濁した。５５０ｎｍで光学密度を測定し、特異的細胞毒性のパーセントを次のように計算した：
特異的細胞毒性（％）＝１−（ＯＤエフェクター+標的−ＯＤエフェクター）／ＯＤ標的×１００。
【００４１】
Ｃ反応性タンパク質。固相サンドイッチ免疫測定法（solid-phase sandwich immunoassay）（トリ・デルタ・ダイアグノスティクス（Tri Delta Diagnostics）、ニュージャージー州モリスプレーンズ（Morris Plains））において、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ標識された抗イヌＣＲＰを使用してＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度を測定することによって、血漿中の急性期タンパク質の変化を評価した。
【００４２】
ＤＮＡの酸化的損傷。血漿ＥＬＩＳＡ（ＢＩＯＸＹＴＥＣＨ（商標）８−ＯＨｈｄＧ−ＥＩＡキット、オキシスリサーチ（OxisResearch）、オレゴン州ポートランド（Portland）；感度＝０．５マイクログラム／Ｌ）で、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）を測定した。
【００４３】
（結果）
研究全体を通じて、食餌は、体重に有意な影響を及ぼさなかった。第０週及び第１６週の平均体重は、それぞれ、８．１８±０．１６ｋｇ及び８．５７±０．１１ｋｇであった。アスタキサンチンは、補給前のすべてのイヌの血漿中で検出されず、補給されなかったイヌの血漿では研究の間検出されなかった。しかし、アスタキサンチンは、１６週を通じて、用量依存的に増加した（図５）。最高血中濃度は、補給されたイヌすべてにおいて第６週までに観察された。
【００４４】
遅延型過敏症。第０週及び第８週には、食餌は、生理食塩水、ＰＨＡ、又はワクチンに対する皮膚硬化反応に有意な影響を及ぼさなかった。しかし、第１２週の皮内ワクチン投与（intradermal challenge with the vaccine）の４８時間後及び７２時間後に、１０ｍｇ、２０ｍｇ、及び４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌが、ＤＴＨ反応の増大を示した（図５）。この反応は、イヌが第１２週及び第１４週にワクチン接種された後、第１６週に、より早期に（２４時間後及び４８時間後）観察された。ＰＨＡでは、同様の反応は観察されなかった。
血液学。研究全体を通じて、血液学は一般に、食事の影響を示さなかった。
【００４５】
リンパ球増殖。アスタキサンチン２０ｍｇを与えられたイヌは、第１２週に、補給されなかったイヌよりも、ｃｏｎＡ誘発性のＰＢＭＣ増殖が高かった。しかし、すべての期間で、アスタキサンチンは、ＰＨＡ又はＰＷＭ刺激によるＰＢＭＣ増殖の変化に影響を及ぼさなかった。
【００４６】
白血球亜集団。食餌アスタキサンチンは、第６週及び第１２週に、用量依存的にＢ細胞の集団を一般に増加させた（図６）。第１６週のワクチン接種後には、アスタキサンチン２０ｍｇを与えられたイヌが、最も高い反応を示した（図６）。研究を実施したいずれの期間にも、アスタキサンチンは、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＭＨＣクラスＩＩ集団の変化をもたらさなかった。しかし、アスタキサンチン４０ｍｇを与えられたイヌは、ＣＤ３集団の一時的な減少を示した。
【００４７】
免疫グロブリン産生。血漿ＩｇＧ濃度は、アスタキサンチン２０ｍｇを与えられたイヌで、第１２週により高く、第１６週のワクチン接種後にもやはり高かった（図７）。より高濃度（４０ｍｇ）の食餌アスタキサンチンは、ＩｇＧ産生に同一の刺激をもたらさなかった。血漿ＩｇＭ濃度は、ワクチン接種前（第０週〜第１２週）には食餌アスタキサンチンによる影響を受けなかった（図７）。第１２週及び第１４週のワクチン接種は、一般にすべてのイヌで血漿ＩｇＭ濃度を約３００％増大させた。アスタキサンチン２０ｍｇを与えられたイヌは、第１６週に有意に高いＩｇＭ濃度を示した。研究開始時には、ＩｇＧ及びＩｇＭ濃度は、処置群間で同様であった。
【００４８】
ナチュラルキラー細胞の細胞毒性。食餌アスタキサンチンは、第６週にＮＫ細胞活性の用量依存的な増大をもたらし、アスタキサンチン４０ｍｇを与えられたイヌは、対照群よりも有意に高かった（図８）。第１２週には、アスタキサンチンを４０ｍｇ与えられたイヌでなく、２０ｍｇ与えられたイヌが、対照群よりも高いＮＫ細胞の細胞毒性を有していた。これと同じ傾向が、第１６週の終わりまで続いた。第０週には、処置による差異は、観察されなかった。
【００４９】
Ｃ反応性タンパク質。血漿ＣＲＰ濃度は、研究の第１２週の終わりまで同様であった（平均４．４８ｍｇ／Ｌ）。しかし、食餌アスタキサンチンは、第１６週のワクチン接種後に血漿Ｃ反応性タンパク質濃度を減少させた。
【００５０】
ＤＮＡの酸化的損傷。第１２週には、８−ＯＨｄＧの濃度に食餌の影響はなかった（図１０）。Ｃ反応性タンパク質の場合と同様に、食餌アスタキサンチンは、補給されたイヌの血漿中の８−ＯＨｄＧの産生を抑制した。アスタキサンチン４０ｍｇを与えられたイヌでは、血漿８−ＯＨｄＧ濃度のそれ以上の減少はなかった。
【００５１】
食餌アスタキサンチンは、イヌにおいて、細胞性免疫反応及び体液性免疫反応の両方を増強した。１日１０〜４０ｍｇの用量のアスタキサンチンは、給餌の１２週までに、特異的抗原（ワクチン）に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を増大させたが、非特異的抗原であるＰＨＡに対しては増大させなかった。ワクチン接種後、ＤＴＨ反応は、食餌アスタキサンチンによって同様に増強された。しかし、全体的な皮膚硬化反応は、ワクチン接種前（皮内投与（intradermal challenge）の４８時間後）よりも、ワクチン接種後（皮内投与の２４時間後に観察）に、より急速であった。また、イヌでは、イヌにおける生体内Ｔ細胞機能の評価のための信頼性のある臨床方法と一般に見なされている（ミヤモト（Miyamoto）ら、１９９５）皮膚反応によって決定される、β−カロチン（チュー（Chew）ら、２０００）及びルテイン（キム（Kim）ら、２０００）を含め、これまでに調査された他のカロチノイド類のＤＴＨ反応を超える、アスタキサンチン給餌によるＤＴＨ反応の高まりも観察された。
【００５２】
ＤＴＨ反応の高まりは、Ｔ細胞マイトジェンであるｃｏｎＡに対する、より高いリンパ球増殖反応と一致する。この研究では、アスタキサンチン２０ｍｇの場合に、最も高い幼若化反応が観察された。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、腫瘍に対する免疫監視システムの働きをし、食餌アスタキサンチンはまた、ＮＫ細胞の活性を増強する能力を示した。
【００５３】
また、食餌アスタキサンチンは、体液性免疫を刺激して、ワクチン接種後に非補給対照群を上回ってＩｇＧ及びＩｇＭ産生を増大させたが、これらの研究における最適反応は、１日２０ｍｇのアスタキサンチン補給の場合に観察された。この研究では、抗体反応の高まりが、Ｂ細胞亜集団の増加に対応した。実際、第１６週に、２０ｍｇを与えられたイヌが、最大のＢ細胞亜集団並びに最高のＩｇＧ及びＩｇＭ濃度の両方を有していた。このことは、以前にβ−カロチン２０ｍｇ（チュー（Chew）ら、２０００）及びルテイン２０ｍｇ（キム（Kim）ら、２０００）を用いてイヌに実施された研究と矛盾しておらず、それらの研究では、補給されたイヌは、やはり、補給されなかった動物よりも高い血漿ＩｇＧ濃度を示した。
【００５４】
アスタキサンチンを補給されたイヌはまた、ワクチン投与後に循環ＣＲＰ濃度の低下を示した。血中ＣＲＰ濃度は、感染、炎症、並びに組織壊死を伴う他の疾病状態に応じて増大し、これらすべてが高い酸化応力の指標になり得る。
【００５５】
（実施例２）
（ネコにおけるアスタキサンチン補給の効果）
（材料及び方法）
メスの短毛のイエネコ（生後８〜９ヶ月；体重３．２±０．０４ｋｇ；リバティ・ファームズ（Liberty Farms）、ニューヨーク州ウェイバリー（Waverly））をランダムに割り振って、１日に（平均摂取食品量９０ｇ／日に基づいて）０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチン（ヘマトコッカス・プルビアリス（Haematococcus pluvialis）由来のアスタキサンチン１０９ｇ／含油樹脂１ｋｇの濃縮物、アストラザンシン（astraZanthin）（商標）、ラ・エー・ラボラトリーズ（La Haye Laboratories）、ワシントン州レドモンド（Redmond））を１２週間与えた（ｎ＝１４／食餌）。アスタキサンチンを市販の基礎食餌（アイムス社（The Iams Co.）、オハイオ州ルイスバーグ（Lewisburg））に組み込み、適宜与えた。食餌組成物は、次の通り（ｇ／ｋｇ）であった：水分６３．１、タンパク質３５０．６、灰分６２．７、脂肪２１３．６、Ｃａ１０．０、Ｐ７．６、粗繊維７．１、総エネルギー２１，７０７ｋＪ／ｋｇ；ｎ−６：ｎ−３脂肪酸比は９．９であった。ネコを、温度調節（２０〜２２℃）及び光調節（１４時間光）施設内で飼育し、第０週、第４週、第８週、及び第１２週に体重を測定した。免疫機能を評価するために、第０週及び第８週に血液を採取した。抗原投与後の免疫反応に対するアスタキサンチンの食餌効果を評価するために、すべてのネコに、ワクチン（フェロセル（Felocell）（商標）、ファイザー（Pfizer）、ニューヨーク）を２回（第８週及び第１０週）接種し、第１２週に血液を採取して同一の免疫パラメータを測定した。
【００５６】
遅延型過敏症。第０週及び第８週（ワクチン接種前）並びに第１２週（ワクチン接種後）に、キム（Kim）ら、２０００ｂに記載のように、遅延型皮膚過敏症（ＤＴＨ）反応を評価した。ネコに、１００μｌの（１）生理食塩水（８．５ｇ／Ｌ；陰性対照）、又は（２）特異免疫を測定するために、ネコヘルペスウイルス−１、カリシウイルス、パルボウイルス、及びクラミジア・シッタシ（Chlamydia psittaci）を含有する弱毒化多価ワクチン（フェロセル（Felocell）（商標）、ファイザー（Pfizer）、ニューヨーク州ニューヨーク）、並びに（３）コンカナバリンＡ（ｃｏｎＡ、０．５ｇ／Ｌ）を皮内注射した。注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に、皮膚硬化を測定した。
【００５７】
血液学。血液学的分析装置（動物用ＡＢＣ血液分析装置（Vet ABC-Hematology Analyzer）、ヘスカ（Heska）、コロラド州フォートコリンズ（Fort Collins））を使用して、血液学的パラメータ（白血球、ＲＢＣ及び血小板総数、リンパ球、単球及び顆粒球分画、ヘマトクリット、ヘモグロビン、並びに平均赤血球容積、ヘモグロビン及びヘモグロビン濃度、並びに血小板容積）を測定した。
【００５８】
リンパ球増殖。前述（チュー（Chew）ら、２０００）のように、ＰＨＡ（最終濃度０．２５ｍｇ／Ｌ及び１．２５ｍｇ／Ｌ）、ｃｏｎＡ（０．５ｍｇ／Ｌ及び２．５ｍｇ／Ｌ）、並びにヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ；０．０２５ｍｇ／Ｌ及び０．１２５ｍｇ／Ｌ）の存在下で全血をインキュベートすることによって、マイトジェン誘発性の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の増殖を評価した。生体内の状態を模すために全血を使用した。結果を、刺激指数（マイトジェン刺激物のｃｐｍ÷非刺激培養物のｃｐｍ）として報告する。
【００５９】
白血球サブセット。第０週、第８週、及び第１２週に採取した血液を、前述（チュー（Chew）ら、２０００）のように、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳカリバー（FACSCalibur）、ベクトン・ディキンソン（Becton Dickenson）、カリフォルニア州サンノゼ（San Jose））によって、ＣＤ３（全Ｔ）、ＣＤ４（Ｔｈ）、ＣＤ８（Ｔｃ）、ＭＨＣＩＩ（活性化リンパ球）、及びＣＤ２１（成熟Ｂ細胞）の集団について表現型を決定する。
【００６０】
ＩｇＧ及びＩｇＭ。市販のキット（ベッチル・ラボラトリーズ社（Bethyl Lab.,Inc.）、テキサス州モンゴメリー（Montgomery））を使用して、ＥＬＩＳＡによって血漿中のＩｇＧ（ヒツジ抗ＩｇＧ；感度＝１６μｇ／Ｌ）及びＩｇＭ（ヤギ抗ＩｇＭ；感度＝３１μｇ／Ｌ）の濃度を分析した。
【００６１】
ナチュラルキラー細胞の細胞毒性。クランデル（Crandell）のネコ腎線維芽細胞（ＣｒＦＫ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９７６１；クランデル（Crandell）ら、１９７３）の培養物を、ウシ胎児血清１０％、ペニシリン１００Ｕ／ｍＬ、及び硫酸ストレプトマイシン１００ｇ／Ｌを含んだダルベッコ改変イーグル培地（シグマ（Sigma）、ミズーリ州セントルイス）内で成長させた。７０〜９０％コンフルエントで、細胞をトリプシン処理し、洗って、２×１０5細胞／ｍＬに調節した。細胞懸濁液１００マイクロリットルをピペットで取り、９６ウェル平底プレート（ナンクロン（Nunclon）、デンマーク）の各ウェルに入れ、３７℃で８時間インキュベートした。フィコール分離したＰＢＭＣを１×１０6／ｍＬ又は２×１０6／ｍＬに調節し、細胞懸濁液１００μｌをＣｒＦＫ標的細胞に加えて、エフェクター：標的細胞の比を５：１及び１０：１とした。８時間インキュベートした後、ＭＴＴ２０μｌ（５ｇ／Ｌ）を加え、混合物を４時間インキュベートした。上清を除去し、ホルマザンをイソプロパノール１００μｌ中に再懸濁した。５５０ｎｍで光学密度を測定し、特異的細胞毒性のパーセントを次のように計算した：
特異的細胞毒性（％）＝１−（ＯＤエフェクター+標的−ＯＤエフェクター）／ＯＤ標的×１００。
【００６２】
（結果）
第０週及び第１２週の平均体重は、それぞれ３．２３±０．０４ｋｇ及び３．２２±０．０６ｋｇで、処置間に有意な差はなかった。補給されなかったネコの血漿ではアスタキサンチンは検出されなかったが、アスタキサンチン濃度には、通常、用量依存的な増加があった（図７）。第８週に血漿アスタキサンチン濃度が最初に急速に増加した後、血漿アスタキサンチンは、緩やかになったものの、第１２週の終わりまで増加を続けた。
【００６３】
遅延型過敏症。食餌アスタキサンチンは、第８週に、特異的抗原（ワクチン）及び非特異的抗原（ｃｏｎＡ）投与の両方に対するＤＴＨ反応を刺激したが（図８）、生理食塩水（図示せず）に対しては刺激しなかった。ワクチンに対する最大の皮膚硬化反応は、注射の７２時間後に観察され、アスタキサンチン１０ｍｇを与えられたネコで、有意な増進が観察された。アスタキサンチン５ｍｇ又は１０ｍｇを与えられたネコは、皮内投与の２４時間後及び４８時間後に、ｃｏｎＡに対してより高いＤＴＨ反応を有していた（図８）。食餌アスタキサンチンによるＤＴＨ反応は、第１２週のワクチン接種後にいくらか低下した。アスタキサンチン１０ｍｇを与えられたネコは、注射の２４時間後以外、やはりワクチンに対するＤＴＨ反応の増進を示した（図８）。ｃｏｎＡに対する反応は、アスタキサンチン１ｍｇだけで有意であった。
【００６４】
血液学。食餌アスタキサンチンは、通常、血液学的パラメータ（白血球、ＲＢＣ及び血小板総数、リンパ球、単球及び顆粒球分画、ヘマトクリット、ヘモグロビン、並びに平均赤血球容積、ヘモグロビン及びヘモグロビン濃度、並びに血小板容積）に影響を及ぼさず、これらすべての値が正常範囲内であった。
【００６５】
リンパ球増殖。食餌アスタキサンチンは、第８週までは、マイトジェン誘発性のＰＢＭＣ増殖に影響を及ぼさなかったが、第１２週のワクチン接種後に、アスタキサンチン１ｍｇを与えられたネコは、ＣｏｎＡ、ＰＨＡ、及びＰＷＭに対してより高い増殖反応を示し、それより多くの量のアスタキサンチンを与えられたネコは示さなかった（図９）。
【００６６】
白血球亜集団。食餌アスタキサンチンは、第８週及び第１２週までに、ＣＤ５＋全Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔヘルパー（Ｔｈ）細胞の集団を増加させた（図１０）。増加は、概ね用量依存的であった。対照的に、アスタキサンチンは、Ｂ細胞の集団を減少させた。食餌は、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（Ｔｃ）（平均４．７±０．４）集団の分布にも、ＭＨＣクラスＩＩ（平均９４．１±１．０）集団の分布にも影響を及ぼさなかった。
【００６７】
免疫グロブリン産生。血漿ＩｇＧ及びＩｇＭ濃度は、第８週に、アスタキサンチン１０ｍｇを与えられたネコには、より高かった（図１１）。これらのネコでは、第１２週のワクチン接種後に依然として数値的にはＩｇＧ及びＩｇＭの両方の濃度が高かったが、アスタキサンチン５ｍｇを与えられたネコだけが有意であった。
【００６８】
ナチュラルキラー細胞の細胞毒性。第８週には、ＮＫ細胞の細胞毒性における食餌処置による差異はなかった。しかし、アスタキサンチンは、第１２週に、エフェクター：標的の比５：１（アスタキサンチン５ｍｇ及び１０ｍｇ）又は１０：１（アスタキサンチン１ｍｇ、５ｍｇ、及び１０ｍｇ）で、ＮＫ細胞の細胞毒性を刺激した（図１２）。
【００６９】
アスタキサンチンを与えられたネコは、ワクチン及びｃｏｎＡの両方に対するＤＴＨ反応の増大を示した。イヌは、ワクチンに対する有意なＤＴＨ反応を示した。ＤＴＨ反応の高まりは、アスタキサンチンを与えられたネコでは全Ｔ及びＴｈリンパ球集団の増加を伴ったが、イヌでは同様の反応は見られなかった。
【００７０】
マイトジェン誘発性のＰＢＭＣ増殖は、一般に、アスタキサンチンを与えられたネコ及びイヌで増進した。加えて、ＮＫ細胞の細胞毒性は、アスタキサンチンを含有する食餌組成物を与えられたネコ及びイヌで高められた。
【００７１】
食餌アスタキサンチンはまた、アスタキサンチン補給がワクチン接種の前後両方でＩｇＧ及びＩｇＭ産生の増大をもたらすことで、ネコ及びイヌの両方において体液性免疫を刺激した。同様に、ワクチン接種を通じて抗原に曝露された後で、通常、抗体産生が高められた。イヌとは対照的に、アスタキサンチンを補給されたネコにおける抗体産生の増進は、補給されなかったネコに比べると、Ｂ細胞集団の減少を伴った。しかし、アスタキサンチンを与えられたネコにおける全Ｔ及びＴｈ細胞の集団は、より多かった。アスタキサンチンは、ネコにおいて、Ｔ細胞の機能を刺激することによって抗体産生を増加させた可能性があり、このことは、げっ歯類においてアスタキサンチン補給によるＴ細胞媒介性の抗体産生の増加を実証した、過去の研究の発見（ジョウノウチ（Jyonouchi）ら、１９９４）と一致する。
【００７２】
本発明者らによって、アスタキサンチンがイヌにおいて脂質の過酸化を低減することが実証されたので、アスタキサンチンによるネコの免疫機能の増強は、アスタキサンチンの抗酸化特性に起因する可能性がある。要約すれば、ネコにアスタキサンチンを与えると、血漿アスタキサンチンの用量依存的増加がもたらされる。同時に、食餌アスタキサンチンは、特異的及び非特異的抗原に対するＤＴＨ反応、ＰＢＭＣ増殖、ＮＫ細胞の細胞毒性の増進、並びに全Ｔ及びＴｈ細胞の集団の増加によって示されたように、細胞性免疫反応を高めた。
【００７３】
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【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】１日に０ｍｇ、０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、２．５ｍｇ、１０ｍｇ、又は４０ｍｇの用量のアスタキサンチンを経口的に与えられたイヌにおける、血漿アスタキサンチン濃度のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝８）。
【図２】０ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．４ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇの用量のアスタキサンチンを経口的に与えられたネコにおける、血漿アスタキサンチン濃度のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝８）。
【図３】１日に０ｍｇ、０．０２ｍｇ、０．０８ｍｇ、０．４ｍｇ、２ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇの用量のアスタキサンチンを経口的に与えられたイヌにおける、血漿アスタキサンチン濃度のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝８）。
【図４】１６週にわたって０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを含有する食餌を与えられたイヌにおける、血漿アスタキサンチン濃度を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図５ａ】１２週（図５ａ）又は１６週（図５ｂ）にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、多価ワクチンの皮内注射に対する遅延型過敏症反応（０時間で測定された皮膚の厚さのパーセンテージとして表される）を示す図。皮膚硬化は、注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に測定された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図５ｂ】１２週（図５ａ）又は１６週（図５ｂ）にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、多価ワクチンの皮内注射に対する遅延型過敏症反応（０時間で測定された皮膚の厚さのパーセンテージとして表される）を示す図。皮膚硬化は、注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に測定された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図６】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチン与えられたイヌにおける、ＣＤ２１＋Ｂリンパ球のパーセンテージ（細胞表面マーカに関して陽性に染色された細胞の数をリンパ球の総数のパーセンテージとして表すことによって計算される）を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図７ａ】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、血漿ＩｇＭ（７ａ）及びＩｇＧ（７ｂ）濃度のグラフ。すべてのイヌは、第１３週及び第１５週にポリクローナルワクチンを接種された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図７ｂ】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、血漿ＩｇＭ（７ａ）及びＩｇＧ（７ｂ）濃度のグラフ。すべてのイヌは、第１３週及び第１５週にポリクローナルワクチンを接種された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図８】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、死滅させたパーセントとして表されたナチュラルキラー細胞の細胞毒性を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図９】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、血漿１ミリリットル当たりのナノグラムで表された血漿Ｃ反応性タンパク質濃度を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１０】１６週にわたって１日に０ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、又は４０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたイヌにおける、血漿８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）濃度のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１１】１２週にわたって０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを含有する食餌を与えられたネコにおける、血漿アスタキサンチン濃度を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１２ａ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、多価ワクチンの皮内注射に対する遅延型過敏症反応のレベル（０時間で測定された皮膚の厚さのパーセンテージとして表される）を示す図。皮膚硬化は、注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に測定された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１２ｂ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、多価ワクチンの皮内注射に対する遅延型過敏症反応のレベル（０時間で測定された皮膚の厚さのパーセンテージとして表される）を示す図。皮膚硬化は、注射の０時間後、２４時間後、４８時間後、及び７２時間後に測定された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１３ａ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ｃｏｎＡ−（２．５μｇ／ｍＬ）、ＰＨＡ−（１．２５μｇ／ｍＬ）、又はＰＷＭ−（２．５μｇ／ｍＬ）誘発性のＰＢＭＣ増殖による、［3Ｈ］−チミジンの組み込みを示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１３ｂ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ｃｏｎＡ−（２．５μｇ／ｍＬ）、ＰＨＡ−（１．２５μｇ／ｍＬ）、又はＰＷＭ−（２．５μｇ／ｍＬ）誘発性のＰＢＭＣ増殖による、［3Ｈ］−チミジンの組み込みを示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１３ｃ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ｃｏｎＡ−（２．５μｇ／ｍＬ）、ＰＨＡ−（１．２５μｇ／ｍＬ）、又はＰＷＭ−（２．５μｇ／ｍＬ）誘発性のＰＢＭＣ増殖による、［3Ｈ］−チミジンの組み込みを示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１４ａ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ＣＤ５＋全Ｔ細胞（図１４ａ）、ＣＤ４＋Ｔｈ細胞（図１４ｂ）、及びＣＤ２１＋Ｂ細胞（図１４ｃ）のパーセンテージ（細胞表面マーカに関して陽性に染色された細胞の数をリンパ球の総数のパーセンテージとして表すことによって計算される）を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１４ｂ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ＣＤ５＋全Ｔ細胞（図１４ａ）、ＣＤ４＋Ｔｈ細胞（図１４ｂ）、及びＣＤ２１＋Ｂ細胞（図１４ｃ）のパーセンテージ（細胞表面マーカに関して陽性に染色された細胞の数をリンパ球の総数のパーセンテージとして表すことによって計算される）を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１４ｃ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ＣＤ５＋全Ｔ細胞（図１４ａ）、ＣＤ４＋Ｔｈ細胞（図１４ｂ）、及びＣＤ２１＋Ｂ細胞（図１４ｃ）のパーセンテージ（細胞表面マーカに関して陽性に染色された細胞の数をリンパ球の総数のパーセンテージとして表すことによって計算される）を示す図。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１５ａ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、血漿ＩｇＧ（図１５ａ）及びＩｇＭ（図１５ｂ）濃度を示す図。すべてのネコは、第９週及び第１０週にポリクローナルワクチンを接種された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１５ｂ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、血漿ＩｇＧ（図１５ａ）及びＩｇＭ（図１５ｂ）濃度を示す図。すべてのネコは、第９週及び第１０週にポリクローナルワクチンを接種された。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１６ａ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ナチュラルキラー細胞の細胞毒性のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１６ｂ】１２週にわたって１日に０ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、又は１０ｍｇのアスタキサンチンを与えられたネコにおける、ナチュラルキラー細胞の細胞毒性のグラフ。値は、平均値±ＳＥＭ（ｎ＝１４）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２ａ】
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【図１２ｂ】
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【図１３ａ】
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【図１３ｂ】
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【図１３ｃ】
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【図１４ａ】
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【図１４ｂ】
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【図１４ｃ】
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【図１５ａ】
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【図１５ｂ】
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【図１６ａ】
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【図１６ｂ】
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【国際調査報告】
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