(57)【要約】本発明は概して摂食障害、例えば神経性食思不振症および神経性大食症に関連するセロトニンレセプター１Ｄ遺伝子、デルタ・オピオイドレセプター遺伝子、およびドーパミンレセプターＤ２遺伝子での多型に関する。本発明はまた組成物スクリーニング系および摂食障害の診断および予後アッセイにも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
表１の多型より成る群から選択される摂食障害に関連する変種遺伝子を含む単離された核酸分子。
【請求項２】
摂食障害が、神経性食思不振症である、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】
摂食障害が、神経性大食症である、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】
遺伝子が、ＨＴＲ１Ｄ−０５、ＨＴＲ１Ｄ−０３、ＨＴＲ１Ｄ−０７、およびＨＴＲ１Ｄ−０６より成る群から選択されるＨＴＲ１Ｄ変種である、請求項２または３に記載の単離された核酸分子。
【請求項５】
遺伝子が、ＯＰＲＤ１−０６、ＯＰＲＤ１−０１、ＯＰＲＤ１−０３、ＯＰＲＤ１−０７およびＯＰＲＤ１−０５より成る群から選択されるＯＰＲＤ１変種である、請求項２または３に記載の単離された核酸分子。
【請求項６】
遺伝子が、ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２より成る群から選択されるＤＲＤ２変種である、請求項２または３に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】
遺伝子が、ＡＤＲＢ１−０２、ＡＤＲＢ２−０１、ＡＤＲＢ２−０２、ＡＤＲＢ２−０３、ＡＤＲＢ２−０４、ＡＤＲＢ３−０１、ＡＤＲＢ３−０２、ＡＤＲＢ３−０３、ＡＤＲＢ３−０６、ＣＯＭＴ−０１、ＣＯＭＴ−０３、ＣＯＭＴ−０４、ＣＯＭＴ−０６、ＤＲＤ１−０３、ＤＲＤ１−０４、ＤＲＤ１−０５、ＤＲＤ３−０１、ＤＲＤ４−０１、ＤＢＨ−０１、ＤＢＨ−０９、ＧＯＬＦ−０１、ＨＣＲＴＲ２−０３、ＨＣＲＴＲ２−０４、５ＨＴＴ−０１、５ＨＴＴ−０６、ＨＴＲ１Ｂ−０１、ＨＴＲ１Ｂ−０２、ＨＴＲ１Ｂ−０３、ＨＴＲ２Ａ−０１、ＨＴＲ２Ａ−０６、ＨＴＲ２Ａ−１０、ＨＴＲ２Ａ−１８、ＨＴＲ２Ｃ−０１、ＨＴＲ２Ｃ−０２、ＨＴＲ５Ａ−０１、ＨＴＲ５Ａ−０３、ＴＨ−０１、ＴＲＨ−０４、ＴＲＨ−０５、ＴＲＨ−０６、ＴＲＨＲ−０４、およびＴＲＨＲ−０５より成る群から選択される変種である、請求項２または３に記載の単離された核酸分子。
【請求項８】
変種が、ジェンバンク受け入れ番号ＡＬ３５３５８５、ＡＦ０５０７３７、またはＵ０７８８２に相対する少なくとも１個の一塩基多型を含む、請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項９】
請求項１に記載のレセプター変種を特異的に認識する単離された抗体。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の核酸分子を含有するように形質転換された宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
前記宿主が、原核細胞宿主および真核細胞宿主より成る群から選択される、請求項１２に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
請求項１から７のいずれか一項に記載の核酸分子で形質転換された宿主細胞を前記核酸分子によりコードされるタンパク質を発現する条件下で培養する工程を含むポリペプチドを生成するための方法。
【請求項１５】
前記宿主細胞が、原核細胞宿主および真核細胞宿主より成る群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
請求項１に記載のセロトニンレセプター１Ｄ、デルタ・オピオイドレセプター、またはドーパミンレセプターＤ２をコードする核酸分子の発現を変調する作用物質を同定する方法であって、
核酸を発現する細胞を作用物質に暴露する工程、および
作用物質が前記核酸の発現を変調するかどうかを決定し、それによりセロトニンレセプター１Ｄ、デルタ・オピオイドレセプター、またはドーパミンレセプターＤ２をコードする核酸分子の発現を変調する作用物質を同定する工程、
を含む、前記方法。
【請求項１７】
請求項１に記載のセロトニンレセプター１Ｄ、デルタ・オピオイドレセプター、またはドーパミンレセプターＤ２の少なくとも１つの活性を変調する作用物質を同定する方法であって、
タンパク質を発現する細胞を作用物質に暴露する工程、および
作用物質が前記レセプターの少なくとも１つの活性を変調するかどうかを決定し、それによりセロトニンレセプター１Ｄ、デルタ・オピオイドレセプター、またはドーパミンレセプターＤ２の少なくとも１つの活性を変調する作用物質を同定する工程、
を含む、前記方法。
【請求項１８】
作用物質がタンパク質の１つの活性を変調する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
対象に由来する核酸サンプル中の１個またはそれ以上の一塩基多型の存在または不在を検出することを含む対象における摂食障害に対する遺伝的素因を診断する方法であって、一塩基多型が表１の多型より成る群から選択される、前記方法。
【請求項２０】
摂食障害が、神経性食思不振症または神経性大食症である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
変種ＨＴＲ１Ｄ−０５、ＨＴＲ１Ｄ−０３、ＨＴＲ１Ｄ−０７、またはＨＴＲ１Ｄ−０６の一塩基多型に相当する位置でヌクレオチド多型の存在または不在を検出することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
変種ＯＰＲＤ１−０６、ＯＰＲＤ１−０１、ＯＰＲＤ１−０３、ＯＰＲＤ１−０７、またはＯＰＲＤ１−０５の一塩基多型に相当する位置でヌクレオチド多型の存在または不在を検出することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
変種ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、またはＤＲＤ２−４２の一塩基多型に相当する位置でヌクレオチド多型の存在または不在を検出することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
変種ＡＤＲＢ１−０２、ＡＤＲＢ２−０１、ＡＤＲＢ２−０２、ＡＤＲＢ２−０３、ＡＤＲＢ２−０４、ＡＤＲＢ３−０１、ＡＤＲＢ３−０２、ＡＤＲＢ３−０３、ＡＤＲＢ３−０６、ＣＯＭＴ−０１、ＣＯＭＴ−０３、ＣＯＭＴ−０４、ＣＯＭＴ−０６、ＤＲＤ１−０３、ＤＲＤ１−０４、ＤＲＤ１−０５、ＤＲＤ３−０１、ＤＲＤ４−０１、ＤＢＨ−０１、ＤＢＨ−０９、ＧＯＬＦ−０１、ＨＣＲＴＲ２−０３、ＨＣＲＴＲ２−０４、５ＨＴＴ−０１、５ＨＴＴ−０６、ＨＴＲ１Ｂ−０１、ＨＴＲ１Ｂ−０２、ＨＴＲ１Ｂ−０３、ＨＴＲ２Ａ−０１、ＨＴＲ２Ａ−０６、ＨＴＲ２Ａ−１０、ＨＴＲ２Ａ−１８、ＨＴＲ２Ｃ−０１、ＨＴＲ２Ｃ−０２、ＨＴＲ５Ａ−０１、ＨＴＲ５Ａ−０３、ＴＨ−０１、ＴＲＨ−０４、ＴＲＨ−０５、ＴＲＨ−０６、ＴＲＨＲ−０４、またはＴＲＨＲ−０５の一塩基多型に相当する位置でヌクレオチド多型の存在または不在を検出することを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
核酸位置２１９０に相当する位置でグアニンを含む変種、核酸位置１０８０に相当する位置でチミジンを含む変種、核酸位置−６２８に相当する位置でシトシンを含む変種、および核酸位置−１１２３に相当する位置でシトシンを含む変種より成る群から選択されるセロトニンレセプター１Ｄ変種の存在または不在を検出することを含む摂食障害に対する遺伝的素因を診断する方法。
【請求項２６】
核酸位置８０に相当する位置でグアニンを含む変種、核酸位置４７８２１に相当する位置でグアニンを含む変種、核酸位置５１５０２に相当する位置でチミジンを含む変種、核酸位置８２１４に相当する位置でシトシンを含む変種、および核酸位置２３３４０に相当する位置でアデノシンを含む変種より成る群から選択されるデルタ・オピオイドレセプター変種の存在または不在を検出することを含む摂食障害に対する遺伝的素因を診断する方法。
【請求項２７】
核酸位置９３２に相当する位置でグアニンを含む変種、核酸位置９５７に相当する位置でチミジンを含む変種、核酸位置１４６６４に相当する位置でチミジンを含む変種、核酸位置２４４９０に相当する位置でチミジンを含む変種、核酸位置９３９に相当する位置でシトシンを含む変種、核酸位置２７３９に相当する位置でシトシンを含む変種、および核酸位置−１４１に相当する位置でシトシンを含む変種より成る群から選択されるドーパミンレセプターＤ２変種の存在または不在を検出することを含む摂食障害に対する遺伝的素因を診断する方法。
【請求項２８】
摂食障害に関連するセロトニンレセプター１Ｄをコードする遺伝子における多型を検出する対立遺伝子特異的プライマー。
【請求項２９】
摂食障害に関連するデルタ・オピオイドレセプターをコードする遺伝子における多型を検出する対立遺伝子特異的プライマー。
【請求項３０】
摂食障害に関連するドーパミンレセプターＤ２をコードする遺伝子における多型を検出する対立遺伝子特異的プライマー。
【請求項３１】
摂食障害が、神経性食思不振症または神経性大食症である、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の対立遺伝子特異的プライマー。
【請求項３２】
請求項２８から３０のいずれか一項に記載のプライマーを含むキット。
【請求項３３】
表１の多型より成る群から選択される多型の１個の対立遺伝子に特異的にハイブリダイズできる少なくとも１個のオリゴヌクレオチドを含む固体支持体。
【請求項３４】
少なくとも３個の異なるオリゴヌクレオチドを含む請求項３３に記載の固体支持体であって、各々のオリゴヌクレオチドが、表１の多型より成る群から選択される多型の１個の対立遺伝子に特異的にハイブリダイズできる、前記固体支持体。
【請求項３５】
少なくとも５個の異なるオリゴヌクレオチドを含む請求項３３に記載の固体支持体であって、各々のオリゴヌクレオチドが、表１の多型より成る群から選択される多型の１つの対立遺伝子に特異的にハイブリダイズできる、前記固体支持体。
【請求項３６】
ＨＴＲ１Ｄ−０５、ＨＴＲ１Ｄ−０３、ＨＴＲ１Ｄ−０７、およびＨＴＲ１Ｄ−０６より成る群から選択される１個またはそれ以上の多型に特異的にハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドを含む、請求項３３に記載の固体支持体。
【請求項３７】
ＯＰＲＤ１−０６、ＯＰＲＤ１−０１、ＯＰＲＤ１−０３、ＯＰＲＤ１−０７、およびＯＰＲＤ１−０５より成る群から選択される１個またはそれ以上の多型に特異的にハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドを含む、請求項３３に記載の固体支持体。
【請求項３８】
ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２より成る群から選択される１個またはそれ以上の多型に特異的にハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドを含む、請求項３３に記載の固体支持体。
【請求項３９】
ＡＤＲＢ１−０２、ＡＤＲＢ２−０１、ＡＤＲＢ２−０２、ＡＤＲＢ２−０３、ＡＤＲＢ２−０４、ＡＤＲＢ３−０１、ＡＤＲＢ３−０２、ＡＤＲＢ３−０３、ＡＤＲＢ３−０６、ＣＯＭＴ−０１、ＣＯＭＴ−０３、ＣＯＭＴ−０４、ＣＯＭＴ−０６、ＤＲＤ１−０３、ＤＲＤ１−０４、ＤＲＤ１−０５、ＤＲＤ３−０１、ＤＲＤ４−０１、ＤＢＨ−０１、ＤＢＨ−０９、ＧＯＬＦ−０１、ＨＣＲＴＲ２−０３、ＨＣＲＴＲ２−０４、５ＨＴＴ−０１、５ＨＴＴ−０６、ＨＴＲ１Ｂ−０１、ＨＴＲ１Ｂ−０２、ＨＴＲ１Ｂ−０３、ＨＴＲ２Ａ−０１、ＨＴＲ２Ａ−０６、ＨＴＲ２Ａ−１０、ＨＴＲ２Ａ−１８、ＨＴＲ２Ｃ−０１、ＨＴＲ２Ｃ−０２、ＨＴＲ５Ａ−０１、ＨＴＲ５Ａ−０３、ＴＨ−０１、ＴＲＨ−０４、ＴＲＨ−０５、ＴＲＨ−０６、ＴＲＨＲ−０４、またはＴＲＨＲ−０５より成る群から選択される１つまたはそれ以上の多型に特異的にハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドを含む、請求項３３に記載の固体支持体。
【請求項４０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の核酸分子を含有するように修飾されたヒト以外のトランスジェニック動物。
【請求項４１】
核酸分子がコードされたタンパク質の発現を防御する変異を含有する、請求項４０に記載のトランスジェニック動物。
【請求項４２】
摂食障害に関連すると同定された１つまたはそれ以上のＳＮＰに関するＳＮＰ対立遺伝子頻度情報を含むデータベースであって、コンピューター可読媒体上にある前記データベース。
【請求項４３】
ＳＮＰが表１の多型より成る群から選択される、請求項４２に記載のデータベース。
【請求項４４】
環境因子、その他の遺伝的因子、非限定例としては生化学的マーカーなどを含む関連する因子、挙動および／または非限定例としては低頻度ＳＮＰなどを含むその他の多型、反復、挿入および欠失より成る群から選択される１つまたはそれ以上の因子に関する情報をさらに含む、請求項４３に記載のデータベース。
【発明の詳細な説明】
［発明者］
【０００１】
Ｍｅｒｅｄｉｔｈ  ＹｅａｇｅｒおよびＡｃｄｒｅｗ  Ｗ．Ｂｅｒｇｅｎ
【関連出願】
【０００２】
本出願は、米国仮特許出願６０／３０５１５３；６０／３０６４４０；６０／３３１２８５；６０／３４０８４３および６０／３４０８４４（出展明示によりその全てを本明細書の一部とする）の優先権を主張する。
【発明の分野】
【０００３】
本発明は、遺伝子および一塩基遺伝子多型（ＳＮＰ）と摂食障害、例えば神経性食思不振症および大食症との関連に関する。本発明はとりわけＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＯＰＲＤ２およびその他の遺伝子における多型ならびにこれらの多型と摂食障害、例えば神経性食思不振症および大食症との関連および連鎖を見出したことに関する。
【発明の背景】
【０００４】
種々の生命を脅かす摂食およびエネルギー恒常性障害が、医学文献において認識されている。かかる障害には、例えば摂食障害神経性食思不振症（ＡＮ）および神経性大食症（ＢＮ）、ならびに肥満などがある。ＡＮおよびＢＮは、およそ３％の女性を冒す有意な罹患率および死亡率を伴う重篤な精神医学的な病気である。体重の喪失に加えて、ＡＮの患者はカヘキシー、心臓機能障害、白血病、骨粗鬆症および種々の胃腸管系および精神神経医学的症状を被り得る。例えば、Ｗａｌｌｉｎｇ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｆａｍｉｌｙ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ  ８：２５２８（２０００）参照。加えて、ＡＮ患者は典型的には自尊心が低く、そしていくつかの症例で強迫傾向があることが解っている。
【０００５】
ＡＮ（〜０．５％  罹患率）を以下の精神医学的基準により定義および診断することができる。体重を維持することに対する拒絶、体重が増えることの恐れ、ならびに患者の体重および体型の認知における不安および自己評価に及ぼすその影響。ＢＮ（〜２．５％  罹患率）を以下の精神医学的基準により定義および診断することができる。過食が日常的にあること、過食中のコントロール不能感、体重増加を避けるための不適切な代償的な挙動（例えば浄化）、ならびに体型および体重を認知することによる患者の自己評価における不安（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  （１９９４）<U>Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，</U>Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）。その他の摂食障害には異食症（不適切または非栄養的な物質、例えば、粘土、絵具または氷を摂食すること）および反芻（反復性の食物の逆流、通常、幼児期に起こる）などがある。
【０００６】
摂食障害およびその他の精神医学的障害（例えばうつ病、ＯＣＤ、不安障害、双極性障害）および極端な性格特性の同時罹患率について記載されている（Ｇｏｄａｒｔら、Ｅｕｒ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １５：３８−４５（２０００）；Ｌｉｌｅｎｆｅｌｄら、Ａｒｃｈ．Ｇｅｎ．Ｐｓｙｃｈａｔｒｙ  ５５：６０３−６１０（１９９８）；Ｓｉｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｎｅｒｖ．Ｍｅｎｔ．Ｄｉｓ．１８０：７１９−７２２（１９９６）；Ｂｒａｕｍら、Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｍｅｄ．２４：８５９−８６７（１９９４）；Ｋｌｕｍｐら、Ｊ．Ｎｅｒｖ．Ｍｅｎｔ．Ｄｉｓ．１８８：５５９−５６７（２０００））。相対的な危険性はＡＮでおよそ１１、ＢＮでおよそ４（Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｅａｔ．Ｄｉｓｏｒｄｅｒ  ２２：３３９−３６０（１９９７））であり、そして摂食障害の危険性に及ぼす相加的な遺伝的影響は５０から８０％  の範囲である（Ｋｅｎｄｌｅｒら、Ａｍ．Ｊ，Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １４８：１６２７−１６３７（１９９１）；Ｗａｄｅら、Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｍｅｄ．２９：９２５−９３４（１９９４）；Ｂｕｌｉｋら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ４４：１２１０−１２１８（１９９８））。さらに、ＡＮを伴うヒトは、独特な人格および、完全主義、調節できない、剛直性、および不都合の回避などの気質上の特性集団を有する傾向がある。これらは体重および摂食が正常化した後、病前的に生じ、そして頻繁によく持続されるので、かかる挙動は素因となる特性を構成し得る。これらの家族歴および遺伝率研究により、摂食障害の感受性因子の研究に対する分子遺伝学研究法を正当化するために必要な証拠が提供される。
【０００７】
最も無能力化されそして致死的な精神医学的障害の中でもＡＮはしばしば、特に長期間の処置に抵抗する（ＷａｌｓｈおよびＤｅｖｌｉｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８０：１３８７−１３９０（１９９８））。ＡＮ患者ではいくつかの特性、例えば強迫性挙動、完全主義、および不安性人格の危険性が増大している（Ｈｉｎｎｅｙら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４１０：１４７−１５９（２０００）；Ｋａｙｅら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４５：１２８５−１２９２（１９９９）；Ｋａｙｅら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．５１：２９９−３１３（２０００））。加えて、ＢＮの進行に関しても危険性の増大は存在する。ＢＮの処置を提示するおよそ３分の１の患者はＡＮの既往歴を有している。ＡＮ発端者の一等親血縁者の中でのＡＮの危険性の増大に加えて、双子実験により、一卵性対二卵性双子に関して高い一致率が示され、遺伝率は．５−．８の範囲であると推定される（Ｂｕｌｉｋら（２０００））。ＡＮは、複数の遺伝子および環境危険性因子により影響を受ける、非常に複雑な障害である可能性がある（Ｋａｙｅら、（２０００））。
【０００８】
<U>候補遺伝子関連性研究</U>
ＡＮの研究は、最初体重制御（すなわちレプチン遺伝子、メラノコルチンレセプター遺伝子）およびセロトニン作動系に関与する遺伝子に集中していた。これらのほとんどが罹患している個体および罹患していない個体の双方におけるＤＮＡ多型に存在する遺伝子型を分析し、そして次いで対立遺伝子および遺伝子型頻度の疾患状態に対する関連性分析を実施する（Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｉｓｏｄｅｒｓ，第３版（ＤＳＭ−ＩＩＩＲ）ｏｒ  ＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ  ａｎｄ  ＢＮ）。
【０００９】
６個のセロトニン作動性候補遺伝子、すなわちレセプター１Ｂ、２Ａ、２Ｃおよび７、セロトニントランスポーター、およびヒト脳におけるセロトニン合成の律速酵素であるトリプトファン・ヒドロキシラーゼが公開の対象であった。セロトニンレセプター１Ｂおよび７の多型とＡＮとの間の関連性研究は陰性であった（Ｈｉｎｎｅｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓ．Ｒｅｌａｔ．Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｏｒｄ．２３：７６０−７６３（１９９９））。ＨＴＲ２Ａ遺伝子座をフランキングする配列多型（−１４３８Ｇ＞Ａ）は、ＡＮおよびＯＣＤの双方に関連しており、例えばＣｏｌｌｉｅｒら、Ｌａｎｃｅｔ  ３５０：４１２（１９９７）；Ｅｎｏｃｈら、Ｌａｎｃｅｔ  ３５１：１７８５−１７８６（１９９８）；およびＥｎｏｃｈら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４９：３８５−３８８（２００１）参照。概説文献に基づいて、６６５症例および１１２４対照の７つの研究にわたるＡＮとの関連性に関するオッズ比は１．４７であり、これは報告された関連性が真実であることを示唆している。ノルエピネフリンの主要代謝物である３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニルエチルエネグリコール（ＭＨＰＧ）と関連する機能的なＨＴＲ２Ｃアミノ酸の多型（Ｃｙｓ２３Ｓｅｒ、Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４６：８２１−８２６（１９９９）；Ｌａｐｐａｌａｉｎｅｎら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２７：２７４−２７９（１９９５））は以前からアルツハイマー病の過食症および幻聴に関連しており（Ｈｏｌｍｅｓら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．７：１５０７−１５０９（１９９８））、そしてＨＴＲ１Ａノックアウトマウスは肥満の表現型を有する（Ｔｅｃｏｔｔら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４２−５４６（１９９５））が、しかしながらいずれのレセプターも拒食症または過食症には関連していない。
【００１０】
典型的には、たいていのこれらの遺伝子での単一の多型は１または２個の研究者グループにより患者対照試験計画で研究されているが、セロトニン２Ａレセプター遺伝子（ＨＴＲ２Ａ）およびセロトニントランスポーター遺伝子（ＳＬＣ６Ａ４）は多くのグループから注目を集めている。平均の摂食障害サンプルサイズ（ＡＮまたはＢＮ）は約８５人の個体であり、一方平均の対照サンプルは約１７０人の個体であるが、しかしながら、対照サンプルは非常に多様であり、そして精神医学的にスクリーニングされた、またはスクリーニングされていないサンプルの双方、正常体重、低体重、および肥満サンプル、ならびに両性からなる。数グループのみが、親または罹患していない兄弟姉妹（ｓｉｂｓ）を含むサンプルを有する。家族サンプルにより関連性分析および連鎖の双方が可能になり、そしてII型エラー（偽陰性）の増加を犠牲にしてI型エラー（偽陽性）の可能性を低減させる。公開された家族サンプルは５５までの家族からの親および４５人の罹患していない兄弟姉妹を各々含むが、最近の研究では摂食および代謝障害に関する分子遺伝学調査の対象であるおよそ３００の３人組みの家族サンプルについて記載している（Ｈｉｎｎｅｙら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４１０：１４７−１５９（２０００））。患者対照サンプルにおけるいずれかの陽性の関連性の知見を別の患者対照サンプルで、および家族サンプルで評価して、摂食障害に関する配列変化と危険性との間の提起された関係を評価しなければならない。
【００１１】
<U>セロトニンレセプター１Ｄ遺伝子およびタンパク質についての記載</U>
今日までに、セロトニンレセプター１Ｄと摂食障害との間の関連性の科学的根拠は公開されていない。セロトニンレセプター１Ｄ、ジェンバンク記録ＯＭＩＭ＃１８２１３３およびジェンバンク受け入れ番号ＡＬ３５３５８５（配列番号：１）（双方ともに参照として本明細書に組み入れられる）はＧプロテイン結合レセプターである。クローニング、推定アミノ酸配列、薬理学的特性、および一対のヒトセロトニンレセプター１Ｄ遺伝子のセカンドメッセンジャー結合についてＷｅｉｎｓｈａｎｋら（Ｐｒｏｃ，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：３６３０−３６３４（１９９２））が記載した。その強い類似性のためにこれらを遺伝子１Ｄα（ＨＴＲ１Ｄ）および１Ｄβ（ＨＴＲ１Ｂ）と称した。
【００１２】
ＨＴＲ１Ｄコード化遺伝子が単離され、そしてそのコード化領域にはイントロンを有さず、そして３７７個のアミノ酸（１１３４ｂｐ）からなることが報告されている（ＨａｍｂｌｉｎおよびＭｅｔｃａｌｆ、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：１４３−１４８（１９９１））。これは染色体１の１ｐ３６．３−ｐ３４．３に位置している（Ｌｉｂｅｒｔら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １１：２２５−２２７（１９９１）；Ｊｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：５７３５−５７３８（１９９２））。ＨＴＲ１Ｂ遺伝子は染色体６のｑ１３に割り当てられている（Ｊｉｎら（１９９２））。ＨＴＲ１Ｄによりコードされるアミノ酸配列はＨＴＲ１Ｂのものとおよそ５５％の同一性を呈する。薬理学的結合特性はヒト、ウシおよびモルモットセロトニンレセプター１Ｄ部位の特性と密接に適合する。双方のレセプター遺伝子はヒト大脳皮質において発現され、そしてレセプターはアデニレート・シクラーゼ活性の阻止に連結されている。セロトニン１Ｄレセプターは血液循環、歩行活動、および体温制御に関係し得る（ＺｉｆａおよびＦｉｌｌｉｏｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．４４：４０１−４５８（１９９２））。
【００１３】
<U>ドーパミン系および摂食障害</U>
ＡＮは、１次摂食障害および／または食物摂取の低下に至る気分障害として分類されている。ドーパミン作動系は双方の症例に関係している。ドーパミン放出は楽しいおよび満足できる事象と関連していることが知られており、そして摂食のプラス面を強化し得ると考えられている（Ｓｚｃｚｙｐｋａら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２５：１０２−１０４（２０００））。これは空腹に関係する知覚の合図を組み込むことを助けることにより作動し得る。Ｓｚｃｚｙｐｋａの研究では、ドーパミンを欠損したマウスが徐々に嚥下不能になり、そして飢餓により死亡した。Ｌ−ＤＯＰＡを投与されたドーパミン欠損マウスは、歩行運動および摂食を回復した。ドーパミンレセプターは多くの障害、例えば、統合失調症、パーキンソン病、トゥーレット症候群、遅発性ジスキネジア、およびハンチントン病と関連付けられている（Ｃｒａｖｃｈｉｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２６０１３−２６０１７（１９９６））。さらに、回復した制限性食思不振症は、ドーパミン代謝（ホモバニリン酸（ＨＶＡ））レベルを有意に低下させたことが示されており、恐らくドーパミン代謝における形質に関連する妨害の結果であろう（Ｋａｙｅら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４５：１２８５−１２９２（１９９９））。
【００１４】
現在、５個の公知のヒトドーパミンレセプター、Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３、Ｄ４およびＤ５がある。その薬理学的特性および物理学的機能に従って、レセプターを２個のサブファミリー、Ｄ１様（Ｄ１およびＤ５）およびＤ２様（Ｄ２、Ｄ３およびＤ４）に分けることができる（Ｃｒａｖｃｈｉｋら）。Ｄ２様レセプターのうち、ドーパミンレセプターＤ２（ＤＲＤ２）は脳で優勢なレセプターであり、そしてドーパミンに富んでいる典型的な脳部分にて高レベルで見出される。
【００１５】
最近では、肥満を被るヒトは正常体重の対象よりもＤＲＤ２が、少ないことが示されている（Ｗａｎｇら、Ｌａｎｃｅｔ  ３５７：３５４−３５７（２００１））。ドーパミンレセプターＤ３およびＤ４に関する研究ではレセプターのどちらか１個とＡＮとの間の関連性は実証されていない（Ｈｉｎｎｅｙら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．８８：５９４−５９７（１９９９）；Ｂｒｕｉｎｓ−Ｓｌｏｔら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４３：７６−７８（１９９８））。
【００１６】
ドーパミン作動性遺伝子、ＣＯＭＴについてさらに２つの研究があり（Ｋａｒｗａｕｔｚら、Ｐｓｙｃｈｏｌ．Ｍｅｄ．３１：３１７−３２９（２００１）；Ｆｒｉｓｃｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ６：２４３−２４５（２００１））、ここでＡＮに関して一致しない双子の研究（Ｎ＝４５）ではＣＯＭＴ対立遺伝子に対する関連性が観察されず、そしてＡＮ発端者、親および対照の研究では３人組サンプルでＣＯＭＴの高活性対立遺伝子の統計的に有意な伝達過剰、および患者：対照サンプルで統計的に有意なＡＮとの対立遺伝子関連性（過剰な高活性対立遺伝子を伴う）が観察された（双方共にｐ＝０．０１５）（Ｆｒｉｓｃｈら、２００１）。摂食行動および食思不振症に対するこれらの表現型、神経化学および遺伝的関連性はさらなるドーパミン作動性遺伝子座、例えばＤＲＤ２の調査を支持する。
【００１７】
<U>ドーパミンレセプターＤ２遺伝子およびタンパク質についての記載</U>
ドーパミンレセプターＤ２（ＤＲＤ２）、ジェンバンク記録ＯＭＩＭ＃１２６４５０およびジェンバンク受け入れ番号ＡＦ０５０７３７（配列番号：２）（双方ともに参照として本明細書に組み入れられる）は、ドーパミンと結合し、そしてアデニレート・シクラーゼを阻止し（ＫｅｂａｂｉａｎおよびＣａｌｎｅ、Ｎａｔｕｒｅ  ２７７：９３−９４（１９７９））、そしてその他の膜貫通性レセプターおよび細胞性タンパク質と相互作用する（Ｒｏｃｈｅｖｉｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８８：１５４−１５７（２０００））７回膜貫通性Ｇプロテイン結合レセプターである。Ｄ２レセプターは、ドーパミン作動性媒介報酬状態（reward states）における（ＷｉｓｅおよびＢｏｚａｒｔｈ、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．Ｂｕｌｌ．１２：２０３−２０８（１９８４））、およびいわゆる報酬欠損症候群（reward deficiency syndrome）（ＣｏｍｉｎｇｓおよびＢｌｕｍ、Ｐｒｏｇ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１２６：３２５−３４１（２０００））におけるその役割のために集中的な研究の対象となっている。関連性研究に関する遺伝子多型マーカーは１９８９年に利用可能となった（Ｇｒａｎｄｙら、Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．４５：７７８−７８５（１９８９））。ＤＲＤ２のアゴニスト、例えばアポモルフィンは食思不振症誘発性であることが示されている（Ｂａｒｚａｇｈｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２５：９０９−９１１（１９７３））。
【００１８】
ＤＲＤ２遺伝子は、２７０ｋｂにおよび、そしてレセプタータンパク質をコードするエクソンから第１のエクソンを分けるおよそ２５０ｋｂのイントロンを含む（Ｅｕｂａｎｋｓら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １４：１０１０−１０１８（１９９２））。単一多型および都合のよい対照サンプルを用いる関連性研究の不十分さを認識すること（Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒら、ＪＡＭＡ  ２６９：１６７３−１６７７（１９９３））は、候補遺伝子分析に利用可能なゲノムデータ、推定される機能的多型および集団遺伝子情報を考慮に入れるべきであることを示唆している。
【００１９】
<U>デルタ・オピオイドレセプター遺伝子およびタンパク質についての記載</U>
ドーパミン作動系に類似して、オピオイド系は痛み、報酬および耽溺の調節に関係する。デルタ・オピオイドレセプター（ＯＰＲＤ１）遺伝子、ジェンバンク記録ＯＭＩＭ＃１６５１９５およびジェンバンク受け入れ番号ＡＵ０７８８２（配列番号：３）（双方ともに参照として本明細書に組み入れられる）は７回膜貫通性、Ｇプロテイン結合レセプターをコードする３個のエクソンを含有する（Ｚａｋｉら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：３７９−４０１（１９９６））。ＯＰＲＤ１遺伝子をＡＮまたはＢＮにおける役割に関連付ける研究はない。
【発明の概要】
【００２０】
本発明は、その生成物がセロトニン、ドーパミン、ノルアドレナリン作動性およびオピオイド作動性神経伝達物質に、ならびに食欲制御の中枢神経系調節に関係する遺伝子におけるヌクレオチド多型の発見に基づいている。より具体的には、本発明はＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１およびＤＲＤ２遺伝子における多型ならびにこれらの多型と摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮとの関連性および連鎖の発見に基づいている。
【００２１】
本明細書では、ＤＲＤ２遺伝子座での７個のＳＮＰ、ＨＴＲ１Ｄ遺伝子座での４個のＳＮＰ、およびＯＰＲＤ１遺伝子座での５個のＳＮＰの対立遺伝子、ハプロタイプ、および遺伝子型頻度における差異をＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ診断基準、ＤＭＳ−ＩＶ摂食障害診断でのＡＲＰ、および関連する家族のメンバー対関連しない女性、正常体重、ＤＳＭ−ＩＩＩＲ  Ａｘｉｓ  Ｉスクリーニング陰性対照を満足する個体のサンプルにおいて評価する。
【００２２】
本発明のいくつかの態様では、表１に列挙する１個またはそれ以上のＳＮＰの対立遺伝子、ハロタイプ、および遺伝子型頻度における差異を試験される対象に由来するサンプルにおいて評価することができる。対象は、摂食障害の徴候を有してよく、または無徴候性でもよい。
【００２３】
本発明の別の態様では、摂食障害の素因の診断に適したキットを提供する。キットは、ＳＮＰ位置でヌクレオチドの存在を同定するのに適した１個またはそれ以上のオリゴヌクレオチドを含むことができる。いくつかの好ましい実施形態では、１個またはそれ以上のオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの３‘末端ヌクレオチドがＳＮＰ位置で整列されているような配列を有することができる。
【００２４】
本発明はまた、本発明の多型に関連する情報を含むデータベースをも提供する。いくつかの態様では、本発明は、摂食障害に関連すると同定された１個またはそれ以上のＳＮＰに関するＳＮＰ対立遺伝子頻度情報を含むデータベースを提供し、ここでデータベースはコンピューター可読媒体である。本発明のデータベースは表１で同定された少なくとも１個のＳＮＰに関する情報を含むのが好ましい。本発明のデータベースは場合によっては、環境因子、その他の遺伝的因子、非限定例としては生化学的マーカーなどの関連する因子、挙動、および／または非限定例としては低頻度ＳＮＰ、反復、挿入および欠失などのその他の多型より成る群から選択される１個またはそれ以上の因子に関する情報を含むことができる。
【具体的な実施形態】
【００２５】
ＡＮまたはＢＮに関する現在の処置は、体重の正常化、体重減少への不合理なこだわりを是正すること、および体重減少を防御することを目指す。多くの患者は、最終的には完全に回復するが、長期転換は少なくとも５０％の症例で期待はずれである。うつ状態の頻度が高く、そして社会的および職業的な機能はしばしば損なわれ、一方多くの患者は決して正常な体重を獲得しない（ＷａｌｓｈおよびＤｅｖｌｉｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８０：１３８７−１３９０（１９９８））。飢餓の合併症のために、または自殺から致死率は、実質的に１０年の追跡調査あたりおよそ５％である（Ｓｕｌｌｉｖａｎ、Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １５２：１０７３−１０７４（１９９５））。ＡＮの処置に有利である薬理学的作用物質は確立されていない（ＭａｙｅｒおよびＷａｌｓｈ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ５９：２８−３４（１９９８））。ＡＮおよびＢＮに関係する生物学的メカニズムをよりよく理解することで、未来の処置プログラムの成功を改善し得る医薬品を開発することができる。
【００２６】
先立つ研究では、摂食障害におけるセロトニン、オピオイド、およびドーパミンの関与の可能性を示している。生物学的視点から、セロトニン、オピオイド、およびドーパミン制御に関与する遺伝子は、摂食障害において重要である２つの局面、食物摂取および気分に関連しているので、摂食障害のための良好な候補遺伝子であると思われる。
【００２７】
本実験でＡＮにおけるＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、およびＤＲＤ２遺伝子座の関与を発見した。食思不振症の発端者のサンプルおよび２個の対照サンプルにおいてＤＲＤ２遺伝子座での７個のＳＮＰ、ＨＴＲ１Ｄ遺伝子座での４個のＳＮＰ、およびＯＰＲＤ１遺伝子座での５個のＳＮＰが分類された。患者：対照試験計画においてＡＮに対する統計学的に有意な遺伝子型、対立遺伝子およびハプロタイプ関連性が、ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１で観察され、ＨＴＲ１Ｄに関する個体ＳＮＰのエフェクトサイズは２．６３（９５％  ＣＩ＝１．２１−５．７５）であり、そしてＯＰＲＤ１に関しては１．６１（９５％  ＣＩ＝１．１１−２．４４）であった。親およびＡＮ発端者に関する遺伝子型データを用いてＨＴＲ１Ｄで３個のＳＮＰが有意な伝達不均衡を呈することが見出された（ｐ＜０．０５）。
【００２８】
ＡＮ、ＡＮ１およびＡＮ２発端者サンプルならびにＥＡＦ対照サンプルにおける対立遺伝子および遺伝子型絶対および相対頻度を表２に示す。家族データセットにおいてのみ遺伝子型分類されたＤＲＤ２−２３（ＳＮＰ００００００１８１）は稀で、ＡＮ発端者において２％の小さな対立遺伝子頻度であり、そして罹患している親戚および親の１１人においてのみ存在し、そして遺伝子型および対立遺伝子関連性および伝達不均衡分析に含まれなかった。ＤＲＤ２  ＳＮＰ  ＤＲＤ２−４３（ＩＮＤ０００００２５４９）、ＤＲＤ２−１１（ＳＮＰ０００００３２８８）、ＤＲＤ２−２３（ＳＮＰ００００００１８１）、ＤＲＤ２−２４（ＳＮＰ００００００４０３）、ＤＲＤ２−２５（ＳＮＰ０００００６６２９）、ＤＲＤ２−３５（ＳＮＰ０００００７２９７）、およびＤＲＤ２−４２（ＳＮＰ０００００３２８６）に関してＡＮ発端者サンプルにおいて観察された完成率は９７％、８６％、９５％、９６％、９６％、８６％、および９２％（平均＝９３±０．０５％）であった。ＤＲＤ２  ＳＮＰ  ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、およびＤＲＤ２−４２に関してＥＡＦサンプルにおいて観察された完成率は９６％、８７％、９４％、８７％、９０％、８６％（平均＝９０±０．０４％）であった。ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２に関して２検体ずつのサンプルに基づいて観察された不一致率は０％、ＤＲＤ２−４３に関しては５．９％であった。再検討すると、ＤＲＤ２−４３で観察された不一致はＢｓｔＮＩ  ＲＦＬＰ遺伝子型アッセイにおける不完全な消化かまたは、一例では消化の欠如のいずれかに合致した。ＤＲＤ２−４３およびＤＲＤ２−２３で観察された非メンデル伝達の数はゼロであり、ＤＲＤ２−２４では１であり、そしてＤＲＤ２−２５では２であった。不一致のまたは非メンデル伝達を呈するとして同定された全ての遺伝子型をさらなる分析から除外した。ＡＮ、ＡＮ１、ＡＮ２発端者およびＥＡＦサンプルにおけるＤＲＤ２  ＳＮＰ遺伝子型はＨＷＥ平衡（ｐ＞０．０５）であった。実施したＨＷＥは２５試験あり、そのうち１７は独立試験であった（ＡＮ発端者サンプルに由来するＡＮ１およびＡＮ２発端者サンプルは独立試験ではなかった）。
【００２９】
ＤＲＤ２−４３  ＳＮＰは、患者：対照分割分析（control contingency analysis）でＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮに統計学的に有意に（遺伝子型、対立遺伝子およびハロタイプ的に）関連することが、および（対立遺伝子的に）伝達不均衡を呈することが見出された。本発明では、ＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子は、ＥＡＦ対照サンプル（１１．２％）よりもＡＮ発端者（５．９％）において低頻度であった。本発明のＥＡＦ対照サンプルにおけるＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度（０．１１２４±０．０２３７（Ｓ．Ｅ．））は（ピアソンχ<SP>２</SP>＝０．１９８、ｐ＝０．６５６４）文献中の１０人の異なる白色人種の対象サンプルにおける、推定されたおおよそのＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度（おおよその非加重平均＝０．０９９６±０．０−１６９（Ｓ．Ｄ．）、おおよその平均＝０．１０１６４±０．００５５８（Ｓ．Ｅ．）、合わせた対照サンプルの全Ｎは１４６６である）（Ｂｒｅｅｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．８８：４０７−４１０（１９９９）；Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５１：２１−２６（１９９８）；Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒら、Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２０：６４０−６４９（１９９９）；Ｆｕｒｌｏｎｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．８１：３８５−３８７（１９９８）；Ｊｏｎｓｓｏｎら、Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒ．Ｒｅｓ．４０：３１−３６（１９９９）；Ｌｉら、Ｓｃｈｉｚｏｐｈｒ．Ｒｅｓ．３２：８７−９２（１９９８）；Ｎｏｂｌｅら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．９６：６２２−６３１（２０００）；Ｐａｒｓｉａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．９６：４０７−４１１（２０００）；Ｔａｌｌｅｒｉｃｏら、Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  Ｒｅｓ．８５：２１５−２１９（１９９９））に合致した。統合失調症、双極性障害またはアルコール性統合失調症、双極性障害またはアルコール症を被る白色人種の個体からなる１３人のサンプルにおける推定されたおおよそのＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度の平均（おおよその非加重平均＝０．１０８６３±０．０２９２８（Ｓ．Ｄ．）、おおよその平均＝０．１１７００±０．００５４１（Ｓ．Ｅ．）、合わせた症例サンプルの全Ｎは１６３６である）（Ａｒｒａｎｚら、Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｅｔｉｃｓ  ８：４８１−４８４（１９９８）；Ｂｒｅｅｎら（１９９９）；Ｂｌｏｍｑｖｉｓｔら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．９６：６５９−６６４（２０００）；Ｇｅｌｅｒｎｔｅｒら（１９９９）；Ｆｕｒｌｏｎｇ（１９９８）；Ｊｏｎｓｓｏｎら（１９９９）；Ｌｉら、（１９９８）；Ｎｏｂｌｅ（２０００）；Ｐａｒｓｉａｎ（２０００）；Ｔａｌｌｅｒｉｃｏら（１９９９））はおおよその対照ＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度の平均よりも有意に大きく（ピアソンχ<SP>２</SP>＝３．８５９、ｐ＝０．０４９４）、そしてＥＡＦサンプルＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度に類似した（ピアソンχ<SP>２</SP>＝０．０３５、ｐ＝０．８５１）。おおよそのＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度の推定値のこの評価は本発明と対照的であり、ここでＥＡＦサンプルに比較して、ＡＮサンプルにおいて統計学的に有意に低いＤＲＤ２−４３欠失対立遺伝子頻度が観察された。
【００３０】
<U>Ａ．定義</U>
本明細書で用いる「セロトニンレセプター１Ｂ」、「セロトニンレセプター１Ｂ遺伝子」または「ＨＴＲ１Ｂ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニンレセプター１Ｂ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニンレセプター１Ｂ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＴＲ１Ｂ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第５染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニンレセプター１Ｂ」、「セロトニンレセプター１Ｂ遺伝子」または「ＨＴＲ１Ｂ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００３１】
本明細書で用いるＨＴＲ１Ｂのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００３２】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター１Ｂ変種」、「セロトニンレセプター１Ｂ多型」、「ＨＴＲ１Ｂ変種」または「ＨＴＲ１Ｂ多型」、ならびにＨＴＲ１Ｂ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００３３】
本明細書で用いる「セロトニン１Ｂレセプター媒介疾患」または「ＨＴＲ１Ｂ媒介疾患」なる用語は、「ＨＴＲ１Ｂ変種」もしくは「ＨＴＲ１Ｂ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００３４】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター１Ｄ」、「セロトニンレセプター１Ｄ遺伝子」または「ＨＴＲ１Ｄ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニンレセプター１Ｄ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニンレセプター１Ｄ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＴＲ１Ｄ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニンレセプター１Ｄ」、「セロトニンレセプター１Ｄ遺伝子」または「ＨＴＲ１Ｄ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００３５】
本明細書で用いるＨＴＲ１Ｄのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００３６】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター１Ｄ変種」、「セロトニンレセプター１Ｄ多型」、「ＨＴＲ１Ｄ変種」または「ＨＴＲ１Ｄ多型」、ならびにＨＴＲ１Ｄ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００３７】
本明細書で用いる「セロトニン１Ｄレセプター媒介疾患」または「ＨＴＲ１Ｄ媒介疾患」なる用語は、「ＨＴＲ１Ｄ変種」もしくは「ＨＴＲ１Ｄ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００３８】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター２Ａ」、「セロトニンレセプター２Ａ遺伝子」または「ＨＴＲ２Ａ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニンレセプター２Ａ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニンレセプター２Ａ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＴＲ２Ａ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１３染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニンレセプター２Ａ」、「セロトニンレセプター２Ａ遺伝子」または「ＨＴＲ２Ａ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００３９】
本明細書で用いるＨＴＲ２Ａのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００４０】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター２Ａ変種」、「セロトニンレセプター２Ａ多型」、「ＨＴＲ２Ａ変種」または「ＨＴＲ２Ａ多型」、ならびにＨＴＲ２Ａ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００４１】
本明細書で用いる「セロトニン２Ａレセプター媒介疾患」または「ＨＴＲ２Ａ媒介疾患」なる用語は、「ＨＴＲ２Ａ変種」もしくは「ＨＴＲ２Ａ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００４２】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター２Ｃ」、「セロトニンレセプター２Ｃ遺伝子」または「ＨＴＲ２Ｃ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニンレセプター２Ｃ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニンレセプター２Ｃ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＴＲ２Ｃ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第Ｘ染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニンレセプター２Ｃ」、「セロトニンレセプター２Ｃ遺伝子」または「ＨＴＲ２Ｃ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００４３】
本明細書で用いるＨＴＲ２Ｃのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００４４】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター２Ｃ変種」、「セロトニンレセプター２Ｃ多型」、「ＨＴＲ２Ｃ変種」または「ＨＴＲ２Ｃ多型」、ならびにＨＴＲ２Ｃ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００４５】
本明細書で用いる「セロトニン２Ｃレセプター媒介疾患」または「ＨＴＲ２Ｃ媒介疾患」なる用語は、「ＨＴＲ２Ｃ変種」もしくは「ＨＴＲ２Ｃ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００４６】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター５Ａ」、「セロトニンレセプター５Ａ遺伝子」または「ＨＴＲ５Ａ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニンレセプター５Ａ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニンレセプター５Ａ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＴＲ５Ａ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第７染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニンレセプター５Ａ」、「セロトニンレセプター５Ａ遺伝子」または「ＨＴＲ５Ａ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００４７】
本明細書で用いるＨＴＲ５Ａのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００４８】
本明細書で用いる「セロトニンレセプター５Ａ変種」、「セロトニンレセプター５Ａ多型」、「ＨＴＲ５Ａ変種」または「ＨＴＲ５Ａ多型」、ならびにＨＴＲ５Ａ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００４９】
本明細書で用いる「セロトニン５Ａレセプター媒介疾患」または「ＨＴＲ５Ａ媒介疾患」なる用語は、「ＨＴＲ５Ａ変種」もしくは「ＨＴＲ５Ａ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００５０】
本明細書で用いる「デルタ・オピオイドレセプター」、「デルタ・オピオイドレセプター遺伝子」または「ＯＰＲＤ１」なる用語は、いずれかの哺乳動物デルタ・オピオイドレセプター遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトデルタ・オピオイドレセプター遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＯＰＲＤ１遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１染色体に位置決定されている。しかしながら「デルタ・オピオイドレセプター」、「デルタ・オピオイドレセプター遺伝子」または「ＯＰＲＤ１」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００５１】
本明細書で用いるＯＰＲＤ１のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００５２】
本明細書で用いる「デルタ・オピオイドレセプター変種」、「デルタ・オピオイドレセプター多型」、「ＯＰＲＤ１変種」または「ＯＰＲＤ１多型」、ならびにＯＰＲＤ１変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００５３】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ１」、「ドーパミンレセプターＤ１遺伝子」または「ＤＲＤ１」なる用語は、いずれかの哺乳動物ドーパミンレセプターＤ１遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトドーパミンレセプターＤ１遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＤＲＤ１遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第５染色体に位置決定されている。しかしながら「ドーパミンレセプターＤ１」、「ドーパミンレセプターＤ１遺伝子」または「ＤＲＤ１」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００５４】
本明細書で用いるＤＲＤ１のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００５５】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ１変種」、「ドーパミンレセプターＤ１多型」、「ＤＲＤ１変種」または「ＤＲＤ１多型」、ならびにＤＲＤ１変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００５６】
本明細書で用いる「ドーパミンＤ１レセプター媒介疾患」または「ＤＲＤ１媒介疾患」なる用語は、「ＤＲＤ１変種」もしくは「ＤＲＤ１多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００５７】
本明細書で用いる「デルタ・オピオイドレセプター媒介疾患」または「ＯＰＲＤ１媒介疾患」なる用語は、「ＯＰＲＤ１変種」もしくは「ＯＰＲＤ１多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００５８】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ２」、「ドーパミンレセプターＤ２遺伝子」または「ＤＲＤ２」なる用語は、いずれかの哺乳動物ドーパミンレセプターＤ２遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトドーパミンレセプターＤ２遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＤＲＤ２遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１１染色体に位置決定されている。しかしながら「ドーパミンレセプターＤ２」、「ドーパミンレセプターＤ２遺伝子」または「ＤＲＤ２」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００５９】
本明細書で用いるＤＲＤ２のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００６０】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ２変種」、「ドーパミンレセプターＤ２多型」、「ＤＲＤ２変種」または「ＤＲＤ２多型」、ならびにＤＲＤ２変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００６１】
本明細書で用いる「ドーパミンＤ２レセプター媒介疾患」または「ＤＲＤ２媒介疾患」なる用語は、「ＤＲＤ２変種」もしくは「ＤＲＤ２多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００６２】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ３」、「ドーパミンレセプターＤ３遺伝子」または「ＤＲＤ３」なる用語は、いずれかの哺乳動物ドーパミンレセプターＤ３遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトドーパミンレセプターＤ３遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＤＲＤ３遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第３染色体に位置決定されている。しかしながら「ドーパミンレセプターＤ３」、「ドーパミンレセプターＤ３遺伝子」または「ＤＲＤ３」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００６３】
本明細書で用いるＤＲＤ３のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００６４】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ３変種」、「ドーパミンレセプターＤ３多型」、「ＤＲＤ３変種」または「ＤＲＤ３多型」、ならびにＤＲＤ３変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００６５】
本明細書で用いる「ドーパミンＤ３レセプター媒介疾患」または「ＤＲＤ３媒介疾患」なる用語は、「ＤＲＤ３変種」もしくは「ＤＲＤ３多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００６６】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ４」、「ドーパミンレセプターＤ４遺伝子」または「ＤＲＤ４」なる用語は、いずれかの哺乳動物ドーパミンレセプターＤ４遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトドーパミンレセプターＤ４遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＤＲＤ４遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１１染色体に位置決定されている。しかしながら「ドーパミンレセプターＤ４」、「ドーパミンレセプターＤ４遺伝子」または「ＤＲＤ４」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００６７】
本明細書で用いるＤＲＤ４のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００６８】
本明細書で用いる「ドーパミンレセプターＤ４変種」、「ドーパミンレセプターＤ４多型」、「ＤＲＤ４変種」または「ＤＲＤ４多型」、ならびにＤＲＤ４変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００６９】
本明細書で用いる「ドーパミンＤ４レセプター媒介疾患」または「ＤＲＤ４媒介疾患」なる用語は、「ＤＲＤ４変種」もしくは「ＤＲＤ４多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００７０】
本明細書で用いる「ハイポクレチンレセプター２」、「ハイポクレチンレセプター２遺伝子」、「オレキシン２レセプター」、「オレキシン２レセプター遺伝子」または「ＨＣＲＴＲ２」なる用語は、いずれかの哺乳動物ハイポクレチンレセプター２遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトハイポクレチンレセプター２遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＨＣＲＴＲ２遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第６染色体に位置決定されている。しかしながら「ハイポクレチンレセプター２」、「ハイポクレチンレセプター２遺伝子」、「オレキシン２レセプター」、「オレキシン２レセプター遺伝子」または「ＨＣＲＴＲ２」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００７１】
本明細書で用いるＨＣＲＴＲ２のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００７２】
本明細書で用いる「ハイポクレチンレセプター２変種」、「ハイポクレチンレセプター２多型」、「オレキシンレセプター２変種」、「オレキシンレセプター２多型」、「ＨＣＲＴＲ２変種」または「ＨＣＲＴＲ２多型」、ならびにＨＣＲＴＲ２変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００７３】
本明細書で用いる「ハイポクレチンレセプター２媒介疾患」または「ＨＣＲＴＲ２媒介疾患」なる用語は、「ＨＣＲＴＲ２変種」もしくは「ＨＣＲＴＲ２多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００７４】
本明細書で用いる「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ」、「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ遺伝子」または「ＤＢＨ」なる用語は、いずれかの哺乳動物ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＤＢＨ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第９染色体に位置決定されている。しかしながら「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ」、「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ遺伝子」または「ＤＢＨ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００７５】
本明細書で用いるＤＢＨのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００７６】
本明細書で用いる「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ変種」、「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ多型」、「ＤＢＨ変種」または「ＤＢＨ多型」、ならびにＤＢＨ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００７７】
本明細書で用いる「ドーパミン・ベータ・ヒドロキシラーゼ媒介疾患」または「ＤＢＨ媒介疾患」なる用語は、「ＤＢＨ変種」もしくは「ＤＢＨ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００７８】
本明細書で用いる「チロシン・ヒドロキシラーゼ」、「チロシン・ヒドロキシラーゼ遺伝子」または「ＴＨ」なる用語は、いずれかの哺乳動物チロシン・ヒドロキシラーゼ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトチロシン・ヒドロキシラーゼ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＴＨ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１１染色体に位置決定されている。しかしながら「チロシン・ヒドロキシラーゼ」、「チロシン・ヒドロキシラーゼ遺伝子」または「ＴＨ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００７９】
本明細書で用いるＴＨのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００８０】
本明細書で用いる「チロシン・ヒドロキシラーゼ変種」、「チロシン・ヒドロキシラーゼ多型」、「ＴＨ変種」または「ＴＨ多型」、ならびにＴＨ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００８１】
本明細書で用いる「チロシン・ヒドロキシラーゼ媒介疾患」または「ＴＨ媒介疾患」なる用語は、「ＴＨ変種」もしくは「ＴＨ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００８２】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子」または「ＴＲＨ」なる用語は、いずれかの哺乳動物甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒト甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＴＲＨ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第３染色体に位置決定されている。しかしながら「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン遺伝子」または「ＴＲＨ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００８３】
本明細書で用いるＴＲＨのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００８４】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン変種」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン多型」、「ＴＲＨ変種」または「ＴＲＨ多型」、ならびにＴＲＨ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００８５】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン媒介疾患」または「ＴＲＨ媒介疾患」なる用語は、「ＴＲＨ変種」もしくは「ＴＲＨ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００８６】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター遺伝子」または「ＴＲＨＲ」なる用語は、いずれかの哺乳動物甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒト甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＴＲＨＲ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第８染色体に位置決定されている。しかしながら「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター遺伝子」または「ＴＲＨＲ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００８７】
本明細書で用いるＴＲＨＲのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００８８】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター変種」、「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター多型」、「ＴＲＨＲ変種」または「ＴＲＨＲ多型」、ならびにＴＲＨＲ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００８９】
本明細書で用いる「甲状腺刺激ホルモン放出ホルモンレセプター媒介疾患」または「ＴＲＨＲ媒介疾患」なる用語は、「ＴＲＨＲ変種」もしくは「ＴＲＨＲ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００９０】
本明細書で用いる「セロトニントランスポーター」、「セロトニントランスポーター遺伝子」または「５ＨＴＴ」なる用語は、いずれかの哺乳動物セロトニントランスポーター遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトセロトニントランスポーター遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒト５ＨＴＴ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１７染色体に位置決定されている。しかしながら「セロトニントランスポーター」、「セロトニントランスポーター遺伝子」または「５ＨＴＴ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００９１】
本明細書で用いる５ＨＴＴのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００９２】
本明細書で用いる「セロトニントランスポーター変種」、「セロトニントランスポーター多型」、「５ＨＴＴ変種」または「５ＨＴＴ多型」、ならびに５ＨＴＴ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００９３】
本明細書で用いる「セロトニントランスポーター媒介疾患」または「５ＨＴＴ媒介疾患」なる用語は、「５ＨＴＴ変種」もしくは「５ＨＴＴ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００９４】
本明細書で用いる「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット」、「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット遺伝子」、「Ｇ−アルファ−ＯＬＦ」または「ＧＯＬＦ」なる用語は、嗅覚に関係するいずれかの哺乳動物Ｇタンパク質アルファ・サブユニット遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、嗅覚に関係するヒトＧタンパク質アルファ・サブユニット遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＧＯＬＦ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１８染色体に位置決定されている。しかしながら「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット」、「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット遺伝子」または「ＧＯＬＦ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００９５】
本明細書で用いるＧＯＬＦのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【００９６】
本明細書で用いる「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット変種」、「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット」、「ＧＯＬＦ変種」または「ＧＯＬＦ多型」、ならびにＧＯＬＦ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【００９７】
本明細書で用いる「Ｇタンパク質アルファ・サブユニット媒介疾患」または「ＧＯＬＦ媒介疾患」なる用語は、「ＧＯＬＦ変種」もしくは「ＧＯＬＦ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【００９８】
本明細書で用いる「β１−アドレナリン作動性レセプター」、「ベータ１−アドレナリン作動性レセプター」、「β１−アドレナリン作動性レセプター遺伝子」または「ＡＤＲＢ１」なる用語は、いずれかの哺乳動物アドレナリン作動性レセプターβ１遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトアドレナリン作動性レセプターβ１遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＡＤＲＢ１遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第１０染色体に位置決定されている。しかしながら「β１−アドレナリン作動性レセプター」、「ベータ１−アドレナリン作動性レセプター」、「β１−アドレナリン作動性レセプター遺伝子」または「ＡＤＲＢ１」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【００９９】
本明細書で用いるＡＤＲＢ１のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【０１００】
本明細書で用いる「β１−アドレナリン作動性レセプター変種」、「ベータ１−アドレナリン作動性レセプター変種」、「β１−アドレナリン作動性レセプター多型」、「ＡＤＲＢ１変種」または「ＡＤＲＢ１多型」、ならびにＡＤＲＢ１変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【０１０１】
本明細書で用いる「β１−アドレナリン作動性レセプター媒介疾患」または「ＡＤＲＢ１媒介疾患」なる用語は、「ＡＤＲＢ１変種」もしくは「ＡＤＲＢ１多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【０１０２】
本明細書で用いる「β２−アドレナリン作動性レセプター」、「ベータ２−アドレナリン作動性レセプター」、「β２−アドレナリン作動性レセプター遺伝子」または「ＡＤＲＢ２」なる用語は、いずれかの哺乳動物アドレナリン作動性レセプターβ２遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトアドレナリン作動性レセプターβ２遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＡＤＲＢ２遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第５染色体に位置決定されている。しかしながら「β２−アドレナリン作動性レセプター」、「ベータ２−アドレナリン作動性レセプター」、「β２−アドレナリン作動性レセプター遺伝子」または「ＡＤＲＢ２」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【０１０３】
本明細書で用いるＡＤＲＢ２のヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【０１０４】
本明細書で用いる「β２−アドレナリン作動性レセプター変種」、「ベータ２−アドレナリン作動性レセプター変種」、「β２−アドレナリン作動性レセプター多型」、「ＡＤＲＢ２変種」または「ＡＤＲＢ２多型」、ならびにＡＤＲＢ２変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【０１０５】
本明細書で用いる「β２−アドレナリン作動性レセプター媒介疾患」または「ＡＤＲＢ２媒介疾患」なる用語は、「ＡＤＲＢ２変種」もしくは「ＡＤＲＢ２多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【０１０６】
本明細書で用いる「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ」、「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ遺伝子」または「ＣＯＭＴ」なる用語は、いずれかの哺乳動物カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ遺伝子またはタンパク質および、とりわけ非限定例であるが、ヒトカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ遺伝子およびタンパク質を意味する。前記したように、ヒトＣＯＭＴ遺伝子はクローン化されているので、発現はマッピングされ、そして遺伝子はヒトの第２２染色体に位置決定されている。しかしながら「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ」、「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ遺伝子」または「ＣＯＭＴ」なる用語は、これらの特定の配列に限定するものではない。例えば、該用語は、天然発生サブタイプおよび対立遺伝子変種、ならびに前記で具体的に言及したものとアミノ酸配列がわずかに異なっている人工置換、挿入または欠失変異体をも意味する。
【０１０７】
本明細書で用いるＣＯＭＴのヒトアミノ酸配列に関連するタンパク質のファミリーとは、ヒトに加えて生物から単離されているタンパク質を意味する。これらのタンパク質に関連するタンパク質のファミリーのその他のメンバーを同定および単離するのに用いる方法、例えばハイブリダイゼーションおよび配列または相同性スクリーニング法などは容易に利用可能であり、そして分子生物学の当業者に公知である。
【０１０８】
本明細書で用いる「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ変種」、「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ多型」、「ＣＯＭＴ変種」または「ＣＯＭＴ多型」、ならびにＣＯＭＴ変種または多型のいずれかをコードする遺伝子なる用語は、摂食障害、例えばＡＮまたはＢＮに対する遺伝的素因に関連するレセプターまたはそのコード化遺伝子の形態を意味する。
【０１０９】
本明細書で用いる「カテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ媒介疾患」または「ＣＯＭＴ媒介疾患」なる用語は、「ＣＯＭＴ変種」もしくは「ＣＯＭＴ多型」の存在が病理学的な状態、例えば前記で定義されたような摂食およびエネルギー代謝障害に至る様式でシグナル発生もしくはその他の生物学的経路に関連するかまたは関与する障害または病理を意味する。
【０１１０】
本発明のタンパク質は好ましくは単離された形態である。本明細書で用いるタンパク質は、物理学的、機械的または化学的方法を用いて通常タンパク質に関連する細胞成分からタンパク質が除去されている場合、単離されているとされる。当業者は標準的な精製方法を容易に用いてかかる単離されたタンパク質を得ることができる。レセプタータンパク質、またはそのペプチドフラグメントを置換、化学的、酵素的、またはその他の適当な手段により、天然発生アミノ酸以外の基（例えば酵素または放射性同位元素のごとき検出可能な基）を用いて共有結合的に修飾することもできる。
【０１１１】
本明細書で用いる核酸分子は、核酸分子が、夾雑物または本発明の核酸が通例関連している別のポリペプチドをコードする別の核酸分子からおよびこれらに対して実質的に分離されている場合、「単離されている」とされる。本発明の核酸分子は、適当な宿主細胞で複製および／または発現させるためにいずれかの入手可能なベクターにクローン化することができる。次いで宿主細胞を用いてコードされたタンパク質を組換えにより生成することができる。適当なベクター、宿主細胞および発現方法は広く利用可能である。
【０１１２】
<U>Ｂ．多型を用いる方法</U>
本発明は、患者サンプルにおいて本明細書に記載した１個またはそれ以上の位置で変種ヌクレオチドの存在または不在を検出すること、およびＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１またはＤＲＤ２遺伝子における多型を参照することにより個体の状態を決定することの工程を含むＨＴＲ１Ｄ−、ＯＰＲＤ１−、ＤＲＤ２または本明細書で記載したようなその他の遺伝子媒介疾患、例えば摂食障害の診断のための方法を提供する。好ましい方法では、多型は表３に示すようにＨＴＲ１Ｄ−０５、ＨＴＲ１Ｄ−０３、ＨＴＲ１Ｄ−０７、ＨＴＲ１Ｄ−０６、ＯＰＲＤ１−０６、ＯＰＲＤ１−０１、ＯＰＲＤ１−０３、ＯＰＲＤ１−０７もしくはＯＰＲＤ１−０５に相当する位置で、または表４に示すようにＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、ＤＲＤ２−４２およびＤＲＤ２−４３に相当する位置で検出される。
【０１１３】
試験される患者または対象に由来する細胞または核酸を含むいずれかのサンプルを用いることができる。好ましいサンプルは患者または対象から容易に得られる。かかるサンプルには、非限定例としては血液、末梢リンパ球、上皮細胞塗布、気管支肺胞洗浄液、痰、または個体から得られるその他の体液もしくは組織などがある。対立遺伝子変種の分析の前に被験サンプルがいずれかの都合のよい技術、例えばＰＣＲを用いて増幅されているＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２またはその他の核酸を含むことができることは理解されよう。以下に記載するように、本発明の（複数の）配列多型を検出するいずれかの利用可能な手段を該方法において用いることができる。
【０１１４】
本発明の別の方法では、本明細書に記載する診断方法を、摂食障害に関連するＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２または本明細書に記載するその他の遺伝子の１個またはそれ以上の対立遺伝子変種を選択的に標的にする新たな薬物治療の開発に用いる。１つの様式では、本発明の診断アッセイを用いて一般集団から摂食障害に対する遺伝的素因を有する患者を分離することにより患者集団を階層化することができる。特定の対立遺伝子変種と疾患の進展に対する素因または薬物治療に対する応答の間の連関を同定することは、薬物の効果または患者の特定の集団に及ぼす影響の分析を補助することにより新たな薬物の設計に有意な影響力を有することができる。例えば、別の変種に及ぼす影響を最小限にして、疾患過程に関係付けられた変種の生物学的活性を制御するために薬物を設計することができる。
【０１１５】
<U>Ｃ．多型の検出</U>
前記したように、本発明のＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２またはその他の多型は一般にサンプル、好ましくは患者サンプル中のＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２またはその他の遺伝子の配列の少なくとも一部を、本明細書に記載した１個またはそれ以上の位置で決定する工程を含む。
【０１１６】
いずれかの分析手順を用いて本発明の１個またはそれ以上の多型の位置で変種ヌクレオチドの存在または不在を検出することができる。概して、対立遺伝子変種の検出には変異識別技術、場合によっては増幅反応、および場合によってはシグナル発生系が必要である。対立遺伝子変種の検出のための多くの現行の方法はＮｏｌｌａｕら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３：１１１４−１１２０（１９９７）；ならびに標準的な参考書では例えばＬａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｕ．Ｌａｎｄｅｇｅｒｎ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）およびＰＣＲ、第２版、Ｎｅｗｔｏｎ＆Ｇｒａｈａｍ，ＢＩＯＳ  Ｓｃｅｉｎｅｔｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ（１９９７）により概説されている。
【０１１７】
変異検出または識別の多くの手段を用いることができる。例えば、ＤＮＡシークエンシング、スキャニング法、ハイブリダイゼーション、伸長基盤の方法（extension-based methods）、組み込み基盤の方法（incorporation-based methods）、制限酵素基盤の方法（restriction enzyme-based methods）およびライゲーション基盤の方法（ligation-based methods）を本発明の方法において用いることができる。シークエンシング法には、非限定例としては、直接シークエンシングおよびハイブリダイゼーションによるシークエンシングなどがある。スキャニング法には、非限定例としては、タンパク質トランケーション試験（ＰＴＴ）、一本鎖ＤＮＡ高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、変性グラジエントゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）、温度グラジエントゲル電気泳動（ＴＧＧＥ）、切断、ヘテロ二本鎖分析、化学的ミスマッチ切断（ＣＭ）および酵素的ミスマッチ切断などがある。
【０１１８】
検出のハイブリダイゼーション基盤の方法には、非限定例としては、固相ハイブリダイゼーション、例えばドットブロット、複対立遺伝子特異的診断アッセイ（ＭＡＳＤＡ）、逆ドットブロット、およびオリゴヌクレオチドアレイ（ＤＮＡチップ）などがある。液相ハイブリダイゼーション増幅法、例えばＴａｚｍａｎ（登録商標）を用いることもできる。
【０１１９】
伸長基盤の方法には、非限定例としては増幅不応性変異系（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ：ＡＲＭＳ）、増幅不応性変異系直線伸長（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｙｓｔｅｍ  ｌｉｎｅａｒ  ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ：ＡＬＥＸ）、および競合オリゴヌクレオチドプライミング系（ＣＯＰＳ）などがある。
【０１２０】
組み込み基盤の検出法には、非限定例としては、ミニ・シークエンシング、整列プライマー伸長（ＡＰＥＸ）などがある。制限酵素基盤の検出法には、非限定例としては、ＲＦＬＰ、および制限部位生成ＰＣＲなどがある。最後にライゲーション基盤の検出法には、非限定例としては、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ（ＯＬＡ）などがある。
【０１２１】
本発明の方法に用いることができるシグナル発生または検出系には、非限定例としては、蛍光法、例えば蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）、蛍光消光、蛍光極性化ならびにその他の化学ルミネサンス、電気化学ルミネサンス、ラマン、放射活性、比色法、ハイブリダイゼーション保護アッセイおよび質量分析法などがある。
【０１２２】
別の増幅法には、非限定例としては、持続性自己複製（ＳＳＲ）、核酸配列基盤増幅（ＮＡＳＢＡ）、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）、鎖置換増幅（ＳＤＡ）および分岐ＤＮＡ（ｂ−ＤＮＡ）などがある。
【０１２３】
<U>Ｄ．ヌクレオチドプライマーおよびプローブ</U>
本発明はさらに、本発明の多型を検出できるヌクレオチドプライマーを提供する。本発明の１つの実施形態では、本明細書に記載した１個またはそれ以上の位置でＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、またはその他の遺伝子多型を検出できるプライマーが調製される。好ましいプライマーによりＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または摂食障害に関連するその他の遺伝子多型、例えば本明細書で記載した表の多型に対応するＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２遺伝子における多型の検出が可能になる。
【０１２４】
対立遺伝子特異的プライマーは典型的には増幅反応、例えばＰＣＲ反応における定常的なプライマーと一緒に用いられ、それにより特定の配列位置での１個の対立遺伝子の選択的な増幅により対立遺伝子間の区別が為されるようになる。対立遺伝子特異的プライマーは好ましくは約１０、１２、１５、１７、１９または約５０までまたはそれ以上のヌクレオチドの長さであり、より好ましくは約１７から３５ヌクレオチドの長さであり、そしてより好ましくは約１７から３０ヌクレオチドの長さである。
【０１２５】
対立遺伝子特異的プライマーは好ましくは検出すべき対立遺伝子と正確に対応するが、対立遺伝子特異的プライマーは、３‘末端の約６から８個のヌクレオチドが検出すべき対立遺伝子に対応し、そして、１０個まで、例えば８、６、４、２または１個の残りのヌクレオチドがプライマーの特性に有意に影響することなく変化し得る誘導体でよい。
【０１２６】
いずれかの都合のよい合成法を用いてプライマーを製造することができる。かかる方法の実例は標準的な参考書、例えば：Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，<U>Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ｓｅｒｉｅｓ</U>；２０巻；Ｓｕｄｈｉｒ  Ａｇｒａｗａｌ編，Ｈｕｍａｎａ  ＩＳＢＮ：０−８９６０３−２４７−７（１９９３）初版に見出すことができる。必要な場合、検出を促すために（複数の）プライマーを標識することができる。
【０１２７】
本発明はまた、ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または摂食障害に関連するその他の多型を検出することができる対立遺伝子特異的プローブをも提供する。好ましいプローブによりＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または摂食障害に関連するその他の多型、例えば表で指定した多型に対応するＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２遺伝子における多型の検出が可能になる。本発明のプライマーおよびプローブは好ましくは３‘および５’末端で標識されており、より好ましくは５‘末端でＺｉｐＣｏｄｅ（商標）配列により標識されている（Ｙｅら、Ｈｕｍ．Ｍｕｔａｔ．１７：３０５−３１６（２００１））。
【０１２８】
かかるプローブはいずれかの都合のよい長さ、例えば約５０塩基またはそれ以上まで、４０塩基まで、およびさらに都合よいのは３０塩基までの長さ、例えば８から２５または８から１５塩基の長さである。概して、かかるプローブは対応する野生型または遺伝子の変種遺伝子座に全体的に相補的である塩基配列を含む。しかしながら、必要な場合、オリゴヌクレオチドプローブの識別力が過度に影響されなければ、１個またはそれ以上のミスマッチを導入することができる。かかるプローブを、ミスマッチがオリゴヌクレオチドプローブのハイブリダイゼーション特性を崩壊するような、約８０塩基またはそれ以上までにすることができる。本発明のプローブは検出を促すために１個またはそれ以上の標識を担持することができる。
【０１２９】
本発明の別の態様に従って、少なくとも１個の本発明の対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプローブもしくはプライマーおよび／または本発明の対立遺伝子非特異的プライマーを含む診断キットを提供する。診断キットは、適当な包装および本発明の方法における使用のための指示書を含むことができる。かかるキットは、さらに適当な（複数の）バッファー、ヌクレオチド、および（複数の）ポリメラーゼ、例えば熱安定性ポリメラーゼ、例えばＴａｑポリメラーゼを含むことができる。プローブまたはプライマーは場合によっては固体支持体に結合していてよい。
【０１３０】
本発明はまた、媒体に保存した少なくとも１個の本発明の新規のポリヌクレオチド配列、例えば本明細書に記載したＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、またはその他の遺伝子における多型に及ぶヌクレオチド配列を含むコンピューター可読媒体をも含む。コンピューター可読媒体を例えば相同性検索、マッピング、ハロタイプ分類、遺伝子型分類または薬理遺伝学的分析もしくはいずれかその他のバイオインフォーマティクス分析に用いることができる。
【０１３１】
本発明のポリヌクレオチド配列またはその部分、とりわけ本明細書にて同定された一塩基多型に関連し、そしてそれを同定するものは、例えばハロタイプおよびその他のサブグループ分け、例えば特定の薬物での処置に対する感受性の調査に関して個体を特徴づけるために貴重な情報源を提示する。配列情報をコンピューター可読媒体に保存することにより、そして次に標準的なバイオインフォーマティクスプログラムにおいて情報を使用することにより、または最先端の検索ツールを用いて配列データベースを検索するために、これらの研究法を最も容易にする。従って、本発明のポリヌクレオチド配列は配列同一性およびその他の検索分析に有用なデータベースの構成要素としてとりわけ有用である。本明細書で用いる、「本発明のポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列」に関連したコンピューター可読媒体における配列情報の保存および配列データベースの使用は、具体的な媒体、例えばコンピューターディスク、好ましくはコンピューター可読形態に縮小、変換、または保存できる本発明のポリヌクレオチドの検出可能ないずれかの化学的または物理学的特性に及ぶ。例えば、クロマトグラフィースキャンデータまたはピークデータ、写真のスキャンまたはピークデータ、質量分析データ、配列ゲル（またはその他の）データを含めることができる。
【０１３２】
配列同定を実施するためのコンピューター基盤もまた提供され、該方法はコンピューター可読媒体中に本発明の多型を含むポリヌクレオチド配列を提供すること、およびポリヌクレオチド配列を含む該多型を少なくとも１個の別のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列と比較して同一性（相同性）を同定すること、すなわち多型の存在をスクリーニングすることの工程を含む。
【０１３３】
<U>Ｅ．ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、またはその他の遺伝子の発現を変調する作用物質を同定する方法</U>
本発明の別の実施形態は、ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または本発明のその他の遺伝子変種をコードする核酸の発現を変調する作用物質を同定するための方法を提供する。かかるアッセイは、本発明の核酸の発現レベルにおける変化をモニター観察するのに利用可能ないずれかの手段を利用することができる。本明細書で用いる作用物質は、細胞における核酸の発現を上方または下方制御できる場合、本発明の核酸の発現を変調するとされる。
【０１３４】
１個のアッセイ様式では、細胞または組織サンプルにおけるＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または本発明のその他の遺伝子をコードする核酸の発現を本発明の核酸へのハイブリダイゼーションにより直接モニター観察する。細胞系または組織を試験される作用物質に適当な条件および時間の下で暴露し、そして標準的な手順、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、<U>Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ</U>（１９８９）（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）に開示されるような手順により、全ＲＮＡまたはｍＲＮＡを単離する。
【０１３５】
作用物質に暴露された細胞と対照細胞との間のＲＮＡ発現レベルの差異を検出するためのプローブを前記したように調製することができる。公知の方法、例えばＳａｍｂｒｏｏｋら、およびＡｕｓｕｂｅｌらにより記載される方法を用いて各プローブに必要なようにハイブリダイゼーション条件を修飾する。全細胞性ＲＮＡまたはポリＡ  ＲＮＡで富化されたＲＮＡのハイブリダイゼーションをいずれかの利用可能な様式で達成することができる。例えば、全細胞性ＲＮＡまたはポリＡ  ＲＮＡで富化されたＲＮＡを固体支持体に固定させ、そして固体支持体を少なくとも１個の本発明の配列または１個の本発明の配列の部分を含む少なくとも１個のプローブに、プローブが特異的にハイブリダイズする条件下で暴露させることができる。また別に、本発明の配列の少なくとも１個または１個の部分を含む核酸フラグメントを固体支持体、例えばシリコンチップまたは多孔性ガラスウエハーに固定させることができる。次いで固定された配列がＲＮＡに特異的にハイブリダイズする条件下でチップまたはウエハーをサンプルに由来する全細胞性ＲＮＡまたはポリＡ  ＲＮＡに暴露させることができる。特定のプローブが未処理細胞集団に由来する、および作用物質に暴露された細胞集団に由来するＲＮＡサンプルに特異的にハイブリダイズ能力に関して試験することにより、発現を上方または下方制御する作用物質を同定する。
【０１３６】
<U>Ｆ．ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、ＤＲＤ２、または本発明のその他の遺伝子産物のレベルまたは少なくとも１つの活性を変調する作用物質を同定する方法</U>
本発明の別の実施形態は、本発明のタンパク質の細胞レベルまたは濃度または少なくとも１つの活性を変調する作用物質を同定するための方法を提供する。かかる方法またはアッセイは望ましい活性をモニター観察または検出するいずれかの手段を利用することができる。
【０１３７】
１つの様式では、試験される作用物質に暴露されている細胞集団間での本発明のタンパク質の相対量を、暴露されていない細胞集団と比較して検定することができる。この様式では、プローブ、例えば特異的抗体を用いて、異なる細胞集団におけるタンパク質の異なる発現をモニター観察する。適当な条件および時間の下で細胞系または集団を試験される作用物質に暴露する。暴露された細胞系または集団および対照、すなわち暴露されていない細胞系または集団から細胞ライゼートを調製することができる。次いで細胞ライゼートをプローブで分析する。
【０１３８】
本発明のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質を用いて適当な免疫プロトコルで適切な哺乳動物宿主を免疫することにより抗体プローブを調製し、プローブが十分な長さである場合、または免疫原性を増強することを望む場合、もしくは必要とする場合には適当なキャリヤに抱合させる。キャリヤ、例えばＢＳＡ、ＫＬＨまたはその他のキャリヤタンパク質との免疫原性抱合体を調製するための方法は当該分野で公知である。ある環境では、例えばカルボジイミド試薬を用いる直接抱合が有効である。別の例では、連結試薬、例えばＰｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、イリノイ州）により供給されるものがハプテンに接近しやすくするのに望ましい。例えばキャリヤへの連結を促進するために、ハプテンペプチドをアミノまたはカルボキシ末端のいずれかでシステイン残基で伸長できるかまたはシステイン残基を散在させることができる。概して免疫原の投与を適当な時間をかけて、および適切なアジュバントを用いて注射により実施し、これは概して技術分野で理解される。免疫スケジュールの間、抗体形成の妥当性を決定するために抗体の力価に頼る。
【０１３９】
このように生成されたポリクローナル抗血清はいくつかの適用で、医薬用組成物で満足できるものであるが、モノクローナル調製物の使用が好ましい。望ましいモノクローナル抗体を分泌する不死化細胞系をＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎの標準的な方法（Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７（１９７５））または一般に公知であるリンパ球または脾臓細胞の不死化に影響する修飾を用いて調製することができる。望ましい抗体を分泌する不死化細胞系を、抗原がペプチドハプテン、ポリペプチド、またはタンパク質であるイムノアッセイによりスクリーニングする。望ましい抗体を分泌する適当な不死化細胞培養が同定される場合、インビトロでかまたは腹水中での生成のいずれかにより細胞を培養することができる。
【０１４０】
次いで望ましいモノクローナル抗体を培養上澄から、または腹水上澄から回収する。免疫学的に重要な部分を含有するモノクローナルのフラグメントまたはポリクローナル抗体抗血清アンタゴニストおよび無傷の抗体として用いることができる。とりわけ治療の局面で、免疫学的に反応性のフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ‘、Ｆ（ａｂ’）<SB>２</SB>フラグメントの使用がしばしば好ましいが、これらのフラグメントが免疫グロブリン全体よりも概して免疫原性が少ないためである。
【０１４１】
現行の技術を用いて、組換えの手段により抗体またはフラグメントを生成することもできる。タンパク質の望ましい領域に特異的に結合する抗体領域を、複数の種起源でのキメラの局面で、例えばヒト化抗体を生成することもできる。
【０１４２】
前記の方法で検定された作用物質を無作為に選択または合理的に選択または設計することができる。作用物質が本発明のタンパク質単独またはその関連する基質、結合パートナー等との関連性に関わる特定の配列を考慮しないで無作為に選択された場合、本明細書で用いる作用物質は無作為に選択されるとされる。無作為に選択される作用物質の実例は化学ライブラリーもしくはペプチドコンビナトリアルライブラリー、または生物の成長ブロスの使用である。
【０１４３】
作用物質の作用と関連付けて標的部位および／またはそのコンフォメーションの配列を考慮に入れる非無作為基盤で作用物質を選択する場合、本明細書で用いる作用物質は合理的に選択されるとされる。これらの部位を作り上げるペプチド配列を利用することにより作用物質を合理的に選択または合理的に設計することができる。例えば、合理的に選択されたペプチド作用物質は、そのアミノ酸配列がいずれかの機能的コンセンサス部位と同一であるか、またはその誘導体であるペプチドでよい。
【０１４４】
本発明の作用物質は、例えばペプチド、小型分子、ビタミン誘導体、核酸分子、例えば変種デルタ・オピオイドレセプターおよび炭水化物を特異的に認識するアンチセンス分子でよい。優性阻害タンパク質、これらのタンパク質をコードするＤＮＡ、これらのタンパク質に対する抗体、これらのタンパク質のペプチドフラグメント、またはこれらのタンパク質の擬似物質を細胞に導入して機能に影響させることができる。本明細書で用いる「擬似物質」なる用語は、親ペプチドとは化学的に異なるが、組織分布的および機能的に親化合物に類似する構造を提供するためのペプチド分子の１個の領域またはいくつかの領域の修飾を意味する（Ｇｒａｎｔ：Ｍｅｙｅｒｓ（編）、<U>Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ</U>（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、６５９−６６４頁（１９９５））参照）。当業者は本発明の作用物質の構造特性に関して限定されないことを容易に認識できる。
【０１４５】
技術分野で公知の標準的な固相（または液相）ペプチド合成方法を用いて本発明のペプチド作用物質を調製することができる。加えて、これらのペプチドをコードするＤＮＡを市販により入手可能なオリゴヌクレオチド合成装置を用いて合成し、そして標準的な組換え生成系を用いて生成することができる。非遺伝子コード化アミノ酸を含める場合、固相ペプチド合成を用いる生成が必要である。
【０１４６】
<U>Ｇ．固体支持体</U>
本発明のＳＮＰを同定するためのオリゴヌクレオチドプローブを含有する固体支持体はフィルター、塩化ポリビニル皿、シリコンまたはガラス基盤のチップ等でよい。かかるウエハーおよびハイブリダイゼーション法、例えばＢｅａｔｔｉｅ（国際公開公報第９５／１１７５５号）に記載される方法を広く利用することができる。直接的または間接的のいずれかで、共有結合的または非共有結合的のいずれかでオリゴヌクレオチドが結合するいずれかの固体表面を使用することができる。好ましい固体支持体は高密度アレイまたはＤＮＡチップである。これらはアレイ上の予め決定された位置に特定のオリゴヌクレオチドプローブを含有する。各々の予め決定された位置は１個以上のプローブの分子を含有できるが、予め決定された位置内になる各分子は同一の配列を有している。かかる予め決定された位置を特徴（ｆｅａｔｕｒｅ）と称する。単一の固体支持体上のかかる特徴（ｆｅａｔｕｒｅ）は例えば約２、１０、１００、１０００から１００００、１０００００、４０００００または１００００００存在し得る。
【０１４７】
技術分野で公知のいずれかの技術に従ってオリゴヌクレオチドプローブアレイを作製および使用することができる（例えばＬｏｃｋｈａｒｔら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：１６７５−１６８０（１９９６）；ＭｃＧａｌｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１３５５５−１３４６０（１９９６）参照）。かかるプローブアレイは本明細書で記載する２個またはそれ以上のＳＮＰに相補的であるかまたはハイブリダイズする少なくとも２個またはそれ以上のオリゴヌクレオチドを含有できる。かかるアレイは本明細書で記載する少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、５０またはそれ以上のＳＮＰに相補的であるかまたはハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを含有することもできる。
【０１４８】
最低限の数の合成工程でオリゴヌクレオチドの高密度アレイを実施する方法がわかっている。非限定例としては光指向性化学的カップリング、および機械的指向性カップリングなどの種々の方法によりオリゴヌクレオチドアナログアレイを固体基質上に合成することができる（Ｐｉｒｒｕｎｇら（１９９２）、米国特許第５１４３８５４号；Ｆｏｄｏｒら（１９９８）、米国特許第５８００９９２号；Ｃｈｅｅら（１９９８）、５８３７８３２参照）。
【０１４９】
簡単には、ガラス表面上のオリゴヌクレオチドアレイの光指向性コンビナトリアル合成は自動ホスホラミダイト化学およびチップマスキング技術を用いて進行する。１個の具体的な装置では、ガラス表面は官能基を含有するシラン試薬、例えば感光保護基により遮断されたヒドロキシルまたはアミノ基で誘導体化されている。光リソグラフィーマスクによる光分解を選択的に用いて、次に入射５‘光保護ヌクレオシドホスホラミダイトと反応する用意のある官能基に選択的に暴露する。ホスホラミダイトは照射される（そして従って、感光性遮断基の除去により暴露される）部位とのみ反応する。従って、先の工程から選択的に暴露される部分にのみホスホラミダイトを加える。固体表面上で配列の望ましいアレイが合成されるまでこれらの工程を繰り返す。アレイ上の異なる位置での異なるオリゴヌクレオチドアナログのコンビナトリアル合成を合成中の照射パターンおよびカップリング試薬の添加順序により決定する。
【０１５０】
前記に加えて、単一の基質上でオリゴヌクレオチドアレイを作製するのに用いることができる別の方法はＦｏｄｏｒら（１９９３）、国際公開公報第９３／０９６６８号に記載されている。予め決定された位置に予め作られたまたは天然の核酸を堆積させることにより高密度核酸アレイを組み立てることもできる。光指向性標的化およびオリゴヌクレオチド指向性標的化により基質の特定の位置に合成または天然核酸を堆積させる。別の実施形態は、特定のスポットに核酸を堆積させるために領域から領域へと移動するディスペンサーを使用する。
【０１５１】
<U<Ｈ．データベース</U>
本発明は、摂食障害に関連するＳＮＰに関する情報、例えばＳＮＰ対立遺伝子頻度および対立遺伝子と摂食障害等との関連性の強度に関する情報を含有するデータベースを含む。データベースは、特定の多型に関連する情報、例えば多型と特定の摂食障害とのとの関連性の可能性についての説明的な情報をも含有することができる。本発明のデータベースに含まれ得るその他の情報には、非限定例としては、ＳＮＰ配列情報、ＳＮＰハロタイプに関して分析された組織サンプルの臨床状態に関する説明的な情報、またはサンプルが由来した対象などがある。異なる部分、例えばＳＮＰ頻度データベースおよびＳＮＰ配列データベースを含むようにデータベースを設計することができる。データベースを設定および構築する方法は広く利用可能であり、例えばＡｋｅｒｂｌｏｍら（１９９９）米国特許第５９５３７２７号（出展明示によりその全てを本明細書の一部とする）参照。
【０１５２】
本発明のデータベースを外側の、すなわち外部のデータベースにリンクさせることができる。好ましい実施形態では、外部データベースは、Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにより管理されているＨＧＢＡＳＥデータベース、ＳＮＰコンソーシアム（ＴＳＣ）および／または米国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）により管理されているデータベース、例えばジェンバンクでよい。
【０１５３】
いずれかの適当なコンピュータープラットフォームを用いてＳＮＰ対立遺伝子頻度および関連する障害およびデータベース中のまたはインプットとして提供されたいずれか別の情報との必要な比較を実施することができる。例えば、多くのコンピューターワークステーションを種々の製造者から、例えばＳｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓから入手可能である。クライアント・サーバー環境、データベースサーバーおよびネットワークもまた広く利用可能であり、そして本発明のデータベースにプラットフォームを充当する。
【０１５４】
本発明のデータベースを対象におけるＳＮＰ対立遺伝子を同定する情報を提示することもでき、かかる提示を用いて対象が摂食障害を進行させる可能性を予測することができる。さらに、本発明のデータベースは本発明のＳＮＰに関連する１個またはそれ以上の遺伝子の発現レベルに関係する情報を含むことができる。
【０１５５】
本発明により同定されたＳＮＰを用いて関連する遺伝子の発現パターンおよび摂食障害を進行させる可能性に相関する発現パターンを分析することができる。種々組織における発現パターンを決定し、そしてそれを用いて特定の発現パターン、一過性発現パターンおよび種々の外部刺激、例えば化学物質または電磁波照射により誘起される発現パターンを同定することができる。
【０１５６】
さらに説明することなく、当業者が前記の記載および以下の説明用の実施例を用いて本発明の化合物を作製および利用し、特許請求する方法を実行することができると考えられる。従って以下の実用的な実施例は具体的に本発明の好ましい実施形態を指摘し、そして残りの開示をいかなるようにも限定することを意図するものではない。
【０１５７】
<U>実施例</U>
<U>実施例１：対象および対照の同定</U>
<U>１．対象</U>
<U>ＡＮ−ＡＲＰデータベース</U>
発端者（ｎ＝１９６）は、摂食障害に関与する遺伝子および関連する形質を同定することを目的とする多施設試験（multicenter study）の参加人であった。全発端者は、ＡＮ生涯診断のためのＤＳＭ−ＩＶ基準（ＤＳＭ−ＩＶ定義、１９９４）に合致した。発端者はＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ１、制限サブタイプ（restricting subtype）、およびＡＮ２、浄化サブタイプ（purging subtype）の双方からなる（各々５５％および４５％）。試験参加のための別の要件は、女性は１３歳から６５歳で、発症年齢２５歳以下、且つ、確認前の少なくとも３年間、ＡＮの基準を達成していることであった。発端者は過去のＢＭＩの最低値が１４．２±２．８８であった。１８２人の発端者の親および２６０人の罹患した親戚をも含めた。発端者、親および罹患した親戚を同一の試験に募集し、この場合罹患した親戚はＡＮ、ＢＮおよび別に指定された摂食障害のための米国精神科学会議基準を達成した。サンプルおよび方法の詳細な説明をＫａｙｅら（２０００）に見出すことができる。
【０１５８】
<U>ＢＮ−ＡＲＰデータベース</U>
ＢＮ−ＡＲＰデータセットは、発端者および罹患した親戚からなる。全ての発端者はＢＮのためのＤＳＭ−ＩＶ基準に合致し、最低６か月間、少なくとも週２回の大食および嘔吐を伴った。ＡＮ（ＢＮ＋ＡＮ）の別の生涯病歴診断を受けたものもあった。全ての罹患した親戚はＢＮ、ＡＮ、ＡＮ（ＢＮ＋ＡＮ）の生涯病歴を伴うＢＮ、または摂食障害ＮＯＳに関するＤＳＭ−ＩＶ基準に合致した。方法はＳＣＩＤ  ＩおよびＩＩ評価を追加したＰＦＡＮ  ＡＲＰ試験に類似した。１８７人のＢＮ発端者および１９４人のＢＮ＋ＡＮ発端者から評価が得られた（この数値は双方の診断を受けた発端者を含む）。遺伝子分類に利用できるＤＮＡを有する発端者は３４６人いた。全体で、３７８人の親戚の対が連鎖分析に利用可能であった。ＢＮ発端者・親戚対のうち以下の診断が報告された。３３．７％  ＢＮ、２１．４％  ＢＮ＋ＡＮ、２５．１％  ＡＮ、および１８．２％  摂食障害ＮＯＳ。ＢＮ＋ＡＮの発端者・親戚対のうち以下の診断が報告された。２２．２％  ＢＮ、２５．３％  ＢＮ＋ＡＮ、３６．１％  ＡＮ、および１６．９％  摂食障害ＮＯＳ。各対象に関して５０ｃｃの血液を収集した。ＢＮ−ＡＲＰデータセットはＡＮＲまたはＡＮＲＰのみの発端者を排除した（発端者はＡＮＲまたはＡＮＲＰの別の診断を有することができた。彼らは排除診断のようなものを有することはできなかった）。
【０１５９】
<U>２．対照サンプル</U>
欧米の女性サンプル（ＥＡＦ、ｎ＝９８）の対照サンプルを、広告を通して募集した。このサンプルをスクリーニングして肥満の個体（＞２０％  理想体重）、およびＤＳＭ−ＩＩＩ−Ｒ（ＳＣＩＤ）に関する体系的臨床的面接により評価されたＡｘｉｓ  Ｉ障害の生涯基準の存在を排除した（Ｓｈｅｅｈａｎら、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １２：２３２−２４１（１９９７））。Ｃｏｒｉｅｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｉｅｓから得られたフランスのヒト多型研究センターの非関連性ＤＮＡサンプルを再シークエンシング、遺伝子型アッセイ開発および個体対照ＤＮＡのホモ接合性状態の配列検証に使用した。
【０１６０】
<U>実施例２：分子遺伝的方法</U>
<U>１．配列評価およびアノテーション</U>
公の配列および変種データベースを用いてＤＮＡおよびゲノム配列および配列変種の評価を達成した。Ｓｅｑｕｅｎｃｈｅｒ（商標）配列評価パッケージ・バージョン４．０．５（Ｇｅｎｅ  Ｃｏｄｅｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ミシガン州）を用いてゲノムおよびｃＤＮＡ配列のアラインメントおよびアノテーションを達成した。ＮＣＢＩ（ｄｂＳＮＰ，ｈｔｔｐ：／／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ；ＨＧＢａｓｅ，ｈｔｔｐ：／／ｈｇｂａｓｅ．ｃｇｒ．ｋｉ．ｓｅ／）、ＳＮＰコンソーシアム（ＴＳＣ，ｈｔｔｐ：／／ｓｎｐ．ｃｓｈｌ．ｏｒｇ／）などの変種データベースの試験およびＢｉｏｇｎｏｓｉｓラボラトリー内での再シークエンシングによりＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、およびＤＲＤ２遺伝子座での多型（表１）を同定した。
【０１６１】
本研究では、ＡＮ関連性分析における遺伝子方分類のための多型に関して多くの候補遺伝子をスクリーニングした。シークエンシングの結果を以下の表にまとめる。遺伝子型分類された候補遺伝子多型の要旨を表１に見出すことができる。
[表]
2004537311.tif 000002
【０１６２】
<U>２．再シークエンシング</U>
ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１のためのプライマーを表２に列挙する。シークエンシングのための一般的なＰＣＲ条件は（反応物５０μｌあたり）、ゲノムＤＮＡ  ５０ｎｇ、各２５ｎＭの順行および逆行プライマー、１０ｍＭ  ｄＮＴＰ、５０ｍＭ  ＭｇＣｌ<SB>２</SB>、１６０ｍＭ  （ＮＨ<SB>４</SB>）<SB>２</SB>ＳＯ<SB>４</SB>、６７０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ（２５℃でｐＨ８．８）、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０、および２．５単位  Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ（Ｂｉｏｌｉｎｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、ニュージャージー州）であった。ＰＣＲの一般的な条件は、９４℃で１分間、続いて９４℃で１５分の３０サイクル、Ｔ<SB>ａ</SB>℃で３０秒（ここで以下の例外を除いて全プライマー対でＴ<SB>ａ</SB>℃は６５℃：ＰＦ−００７５／ＰＲ−００７４、ＰＦ−００１０／ＰＲ−００１１およびＰＦ−００８７／ＰＲ−００８８に関しては６２℃、ＰＦ−００７８／ＰＲ−００７９に関しては５５℃）、７２℃で１分間、最終伸長工程は７２℃で５分間であった。
【０１６３】
ＰＣＲの後、各産物５０μｌをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  ＰＣＲ精製系（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）により精製した。次いで産物を再度定量し（２６０ｎｍでのＯ．Ｄ．）、産物０．２５μｇを２５ｐＭ  プライマー、  Ｂｉｇ  Ｄｙｅ  ターミネーター（ＰＥ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）４μｌと混合し、水で容量を２０μｌにした。以下のＰＣＲ条件を用いてサイクルシークエンシングを実施した：９６℃で５分間、続いて９６℃で１０秒間を３５サイクル、５０℃で１０秒間、および６０℃で３．５分間、４℃を維持する。
【０１６４】
<U>３．遺伝子型分類</U>
ＤＲＤ２遺伝子分類
ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２での遺伝子型分類に供したＡＮ発端者ＤＮＡサンプルの数は各々Ｎ＝１８３、１３２、１８３、１９１、１９１、１３２および１３２であった。ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、およびＤＲＤ２−２５での遺伝子型分類に供したＡＮ−ＡＲＰ家族のメンバー数はＮ＝４５７であった。ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２での遺伝子型分類に供したＥＡＦ  ＤＮＡサンプルの数Ｎ＝９８であった。全サブクループからの６７の２検体ずつのＤＮＡサンプルのサンプルを遺伝子分類し、ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２４、ＤＲＤ２−２５、ＤＲＤ２−３５、およびＤＲＤ２−４２  ＳＮＰ遺伝子型分類アッセイの再現性を評価した。ＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−２３、ＤＲＤ２−２４、およびＤＲＤ２−２遺伝子型を明瞭な非メンデル性の伝達（apparent non-Mendelian transmission）に関して評価した。５‘エクソヌクレアーゼアッセイ（ＴａｑＭａｎ（商標））を用いてＤＲＤ２  ＳＮＰを遺伝子型分類した（Ｍｏｒｉｎら（１９９９））が、例外としてＤＲＤ２−４３は記載されるように分類し（Ａｒｉｎａｍｉら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．６：５７７−５８２（１９９７））、ＤＲＤ２−２３は記載されるように遺伝子型分類した（Ｆｕｊｉｗａｒａら、Ｅｕｒ．Ｎｅｕｒｏｌ．３８：６−１０（１９９７））。
【０１６５】
ＰｒｏｂｅＩＴＹ（Ｃｅｌａｄｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｐａｒｋ、メリーランド州）を用いて５‘エクソヌクレアーゼプローブおよびプライマーを選択し、そしてＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）により合成した。１７％のＡＮ発端者および対照群サンプルからなる検証プレートを遺伝子型分類してアッセイの再現性を評価した。実験室でのその他の品質管理手順には遺伝子型アッセイ品質管理のための鋳型なしの対照などがある。プライマーおよびプローブセットは以下の通りである：ＤＲＤ２−１１：順行プライマー−５’−ＡＧＣＡＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＴＧ−３‘（配列番号：４）、逆行プライマー−５’−ＡＡＴＧＡＴＧＣＣＴＧＧＡＴＧＣ−３‘（配列番号：５）、プローブ１−ＦＡＭ−ｔｃｃｃｔａｇｔｃＡａａｃｃｃａａｇｇｃｔ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：６）、プローブ２−ＴＥＴ−ｔｃｃｃｔａｇｔｃＧａａｃｃｃａａｇｇｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：７）；ＤＲＤ２−２４：順行プライマー−５’−ＣＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＣ−３‘（配列番号：８）、逆行プライマー−５’−ＣＴＴＧＧＧＧＴＧＧＴＣＴＴＴＧ−３‘（配列番号：９）、プローブ１−ＦＡＭ−ｃｃａｃｃａＣｇｇｔｃｔｃｃａｃｇｇｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１０）、プローブ２−ＶＩＣ−ｃｃａｃｃａＴｇｇｔｃｔｃｃａｃｇｇｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１１）；ＤＲＤ２−２５：順行プライマー−５’−ＣＣＣＡＴＴＣＴＴＣＴＣＴＧＧＴＴＴ−３‘（配列番号：１２）、逆行プライマー−５’−ＣＴＧＡＣＴＣＴＣＣＣＣＧＡＣ−３‘（配列番号：１３）、プローブ１−ＦＡＭ−ｃｇｇｇｇｃｔｇｔｃＡｇｇａｇｔｇｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１４）、プローブ２−ＶＩＣ−ｃｇｇｇｇｃｔｇｔｃＧｇｇａｇｔ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１５）；ＤＲＤ２−３５：順行プライマー−５’−ＴＡＴＧＧＧＧＡＧＡＧＧＡＡＣＴＣ−３‘（配列番号：１６）、逆行プライマー−５’−ＧＡＧＡＡＧＧＧＡＴＡＣＡＴＴＧＣＡ−３‘（配列番号：１７）、プローブ１−ＦＡＭ−ａｇｃｃｃａｃｃｃｔＧｃｔｇｃｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１８）、プローブ２−ＴＥＴ−ａｇｃｃｃａｃｃｃｔＴｃｔｇｃｃｔｔ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：１９）；ＤＲＤ２−４２：順行プライマー−５’−ＣＡＡＣＡＣＡＧＣＣＡＴＣＣＴＣ−３‘（配列番号：２０）、逆行プライマー−５’−ＴＣＡＣＴＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＣ−３‘（配列番号：２１）、プローブ１−ＦＡＭ−ｃｔｇｇｔｃＡａｇｇｃａｇｇｃｔｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：２２）、プローブ２−ＶＩＣ−ｔｇｇｔｃＧａｇｇｃａｇｇｃｇｃ−ＴＡＭＲＡ（配列番号：２３）。ＰＣＲの反応あたりの一般的な条件および終点読み取りＴａｑＭａｎ（商標）は記載された通りである（Ｍｏｒｉｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２７：５３８−５４０、５４２、５４４（１９９９））が、例外としてＤＲＤ２−２４および−２５；アニーリング温度６０℃でＰＣＲ反応条件を最適化した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ７７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）で当業者による手動で遺伝��型識別を実施した。
【０１６６】
ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１遺伝子型分類
各々の遺伝子に関して、位置決定の基準、対立遺伝子頻度および多型効果を用いて５‘エクソヌクレアーゼアッセイを用いて遺伝子型分類に関して複数のＳＮＰを選択した。プローブおよびプライマーはＰｒｏｂｅＩＴＹ（Ｃｅｌａｄｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ  Ｐａｒｋ、メリーランド州）を用いて選択し、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）により合成した。終点読み取りＴａｑＭａｎ（商標）ＰＣＲに関する一般条件は記載されている（Ｍｏｒｉｎら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２７：５３８−５４０（１９９９））が、例外としてＯＰＲＤ１（４７８２１Ａ＞Ｇ）では各々３０ｎＭの２個のプローブを用い、そしてＨＴＲ１Ｄ（−１１２３Ｔ＞Ｃ）では３００ｎＭのＴＥＴプローブを用いた。これらのＴａｑＭａｎ遺伝子型分類およびシークエンシングアッセイに用いたプライマーおよびプローブ配列に関しては表５を参照。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ  ７７００（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カリフォルニア州）でＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓソフトウェアを用いて、当業者による手動で遺伝子型決定を実施した。各アッセイに関して、６５３人のＡｎ発端者、罹患した兄弟姉妹、およびその他の家族のメンバーを、そして異なる供給源からのさらなる２４４の対照サンプルを遺伝子型分類した。１７％のＡＮ発端者および対照群サンプルからなる検証プレートを遺伝子型分類してアッセイの再現性を評価した。実験室でのその他の品質管理手順には、遺伝子型分類誤差率を評価するための２検体ずつのサンプル（Ｎ＝７２）遺伝子型アッセイ品質管理のための鋳型なし（ゲノムＤＮＡがない）の対照、および全体の遺伝子型の誤り検査のためのＨａｒｄｙ−Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡（ＨＷＥ）試験などがある。遺伝子型の不一致が観察されたものは分析から削除した。
【０１６７】
<U>実施例３：統計手順および分析</U>
<U>１．統計手順</U>
表１２は、ＡＮ−ＡＲＰ発端者および親で分類された多型で実施したＴＤＴ分析に関するデータを提示し、ここで１個の対立遺伝子に関する結果が存在するが、その他の対立遺伝子により異なる結果が得られる場合（ＯＰＲＤ１−０７）、および２個以上の対立遺伝子が存在する場合（ＤＡＴ、ＤＲＤ４）を除く。
【０１６８】
遺伝子型および対立遺伝子計数の分割表分析（χ<SP>２</SP>およびＦｉｓｈｅｒ試験）を用いてＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ診断に対する関連性分析を２９個（Ｎ＝２９）の候補遺伝子で７３個のＤＮＡ多型（Ｎ＝７３）で実施した。各々のＳＮＰに関して、候補遺伝子多型での遺伝子型および対立遺伝子計数ならびにＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮまたは食思不振症サブタイプ間の関連性を実施した。種々分析で用いた表現型は、ＤＳＭ−ＩＶ  ３０７．１またはＡＮ、またＡＮ１と称する制限サブタイプ、またＡＮ２と称する浄化サブタイプ、およびＤＳＭ−ＩＶ  ３０７．５１またはＢＮであった。遺伝子型計数（３試験）および対立遺伝子計数（３試験）を用いて各々のＳＮＰに関して６個の（Ｎ＝６）関連性の試験について報告する（ＡＮ−１、ＡＮ−２、および全てのＡＮ対ＥＡＦ対照サンプル）。ＡＮ−ＡＲＰデータベースに関するこれらの分割分析に結果の要旨を表１９に提示する。
【０１６９】
ＢＮ−ＡＲＰデータセットｄｘコード階層−サブタイプを分析時には利用できないので、「事例性」のようなＢＮ−ＡＲＰ発端者状態を用いて、そして遺伝子型および対立遺伝子（２試験）を用いて分割表分析を実施した。ＢＮ−ＡＲＰデータセットからのこれらの分割分析の結果の要旨を表２０に提示する。
【０１７０】
１８の（Ｎ＝１８）候補遺伝子で３９の（Ｎ＝３９）ＤＮＡ多型で、ＴＤＴ検定を用いてＡＮ−ＡＲＰ発端者および親を用いてＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ診断に対するＳＮＰ関連性の伝達不均衡分析を実施し、そして結果の要旨を表２で利用できる。アルファ＝０．０５または０．１０レベルで有意性を呈するＳＮＰは表１９に含まれる。
【０１７１】
ＢＮ−ＡＲＰデータセットの１２の（Ｎ＝１２）の候補遺伝子で３１の（Ｎ＝３１）ＳＮＰで、ＴＤＴ検定を用いて全てのＤＳＭ−ＩＶ摂食障害診断に対するＳＮＰ関連性の伝達不均衡分析を実施した。表２２はＢＮ発端者および親のみのＴＤＴ分析の結果を示す。ＢＮ−ＡＲＰデータセットの１２の（Ｎ＝１２）の候補遺伝子で３１の（Ｎ＝３１）ＳＮＰで、ＢＮ−ＡＲＰ発端者状態（ＤＳＭ−ＩＶ  ＢＮ発端者）に対するＳＮＰ関連性のＴＤＴ分析を実施した。表２３は全ＢＮ−ＡＲＰデータセットに関する分析の結果を示す。
【０１７２】
ＡＮ−ＡＲＰデータセットのＴＤＴ分析
クリーニング処理したマスターデータセットからのデータ（見かけの非メンデル伝達が除去されている）で、ＳｐｉｅｌｍａｎのＴＤＴ（ｈｔｔｐ:／／ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｍｅｄ．ｕｐｅｎｎ．ｅｄｕ／ｓｐｉｅｌｍａｎ／ＴＤＴ．ｈｔｍ）を伝達不均衡分析試験で使用した。表２１は統計学的に有意な伝達不均衡を呈する５個の遺伝子からの６個の多型を提示する：
１）セロトニントランスポーター遺伝子（ｃｈ．１７ｑ１１．１−ｑ１２）で１個のＳＮＰ−５ＨＴＴ−０６、Ｚ＝２．０４１、ｐ＝０．０４１。
２）β２アドレナリン作動性レセプター遺伝子（ｃｈ．５ｑ３１．１−ｑ３２）で１個のＳＮＰ−ＡＤＲＢ２−０１、Ｚ＝１．９６０、ｐ＝０．０５０。
３＆４）ドーパミンレセプターＤ２遺伝子（ｃｈ．１１ｑ２３）で２個のＳＮＰ−ＤＲＤ２−２５およびＤＲＤ２−４３、ＤＲＤ２−２５：Ｚ＝２．６０４、ｐ＝０．００９およびＤＲＤ２−４３：Ｚ＝２．５８２、ｐ＝０．０１０。
５）ドーパミンレセプターＤ３遺伝子（ｃｈ．３ｑ１３．３）で１個のＳＮＰ−ＤＲＤ３−０１（ｃｈ．１７ｑ１１．１−ｑ１２）、Ｚ＝２．６３５、ｐ＝０．００８．
６）セロトニン１Ｄレセプター遺伝子で１個のＳＮＰ−ＨＴＲ１Ｄ−０３（ｃｈ．１７ｐ３６．３．１−ｐ３４．３）、Ｚ＝２．０００、ｐ＝０．０４６。
【０１７３】
ＢＮ−ＡＲＰデータベースのＴＤＴ分析
発端者状態とその他の摂食障害（ＡＲＰにおける）との間に異なる影響があるかどうかを決定するために２個の異なる伝達不均衡（ＴＤＴ）分析を実施した。ＴＤＴ分析を２個の方法で実施した：１）全ＢＮ−ＡＲＰデータセット（Ｎ〜９２９）において、ならびに２）発端者およびその親のみにおいて（Ｎ〜５２８）。結果を各々表２２および表２３に提示する。ＦＢＡＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｓｔａｔ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／〜ｆｂａｔ／ｄｅｆａｕｌｔ．ｈｔｍｌ）を用いて発端者／親ＴＤＴ分析を実施し、そしてＳ．Ａ．Ｇ．Ｅ．（ＴＤＴＥＸ）を用いて全ＡＲＰデータセットを分析した。
【０１７４】
ＢＮ−ＡＲＰデータセットにおいて４個の遺伝子での５個のＳＮＰが統計的に有意な伝達不均衡を示した（表２２）。表２２は対立遺伝子および遺伝子型に関するＴＤＴ、並べ替えマクネマー、漸近マクネマー、漸近限界、および並べ替え限界の４個の異なる試験のデータを提示する（ＳＮＰあたり全部で８個の試験）。報告した値は、適用可能な場合標準誤差を伴う、各試験のｐ値である。
【０１７５】
１）８個の試験のうち１個でのみコレシストキニン遺伝子（ｃｈ．３ｐ２２−ｐ２１．３）のＳＮＰ−ＣＣＫ−０１で非常に限界的なＴＤＴ結果が得られた（対立遺伝子：並べ替え限界、ｐ＝０．０５）。
【０１７６】
２＆３）ドーパミンＤ２遺伝子（ｃｈ．１１ｑ２３）の２個のＳＮＰ−ＤＲＤ２−１１およびＤＲＤ２−２４はＴＤＴに関して有意性を示した。８個の試験のうち４個でＤＲＤ２−１１に関して有意であった（対立遺伝子：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．０１９；漸近マクネマー、ｐ＝０．０１５；漸近限界、ｐ＝０．０１５；および並べ替え限界、ｐ＝０．０２０）。ＤＲＤ２−２４に関しては８個の全試験で有意な伝達不均衡が報告された（対立遺伝子：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．００９；漸近マクネマー、ｐ＝０．００７；漸近限界、ｐ＝０．００７；および並べ替え限界、ｐ＝０．０１０；遺伝子型：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．０２１；漸近マクネマー、ｐ＝０．０２６；漸近限界、ｐ＝０．００８；および並べ替え限界、ｐ＝０．００８）。この遺伝子は予めＡＮとの関連性に関して証拠が示されていた（Ｂｉｏｇｎｏｓｉｓ、Ｂｅｒｇｅｎら、近刊）。
【０１７７】
４）セロトニン１Ｂレセプター遺伝子（ｃｈ.６ｑ１３）の１個のＳＮＰ−ＨＴＲ１Ｂ−０３はＴＤＴに関して有意性を示した。８個の試験のうち５個で有意な伝達不均衡が報告された（対立遺伝子：漸近マクネマー、ｐ＝０．０４８；漸近限界、ｐ＝０．０４８；遺伝子型：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．００８；漸近マクネマー、ｐ＝０．０１２；並べ替え限界、ｐ＝０．０４７）。この遺伝子での２個の別のＳＮＰは患者：対照関連性の証拠が示されなかったことに留意されたい（ＨＴＲ１Ｂ−０１および−０２）。
【０１７８】
５）セロトニンレセプター２Ａ遺伝子（ｃｈ.１３ｑ１４−ｑ２１）の１個のＳＮＰ−ＨＴＲ２Ａ−１８は非常に限界的なＴＤＴ結果を示した。ＨＴＲ２Ａ−１８に関して、８個の試験の各々で有意なＴＤＴ結果を生み出した（対立遺伝子：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．００７；漸近マクネマー、ｐ＝０．００５；漸近限界、ｐ＝０．００５；および並べ替え限界、ｐ＝０．００７；遺伝子型：並べ替えマクネマー、ｐ＝０．０１６；漸近マクネマー、ｐ＝０．０２３；漸近限界、ｐ＝０．００７；および並べ替え限界、ｐ＝０．００９）。
【０１７９】
ＢＮ発端者／親データセットにおいて２個の遺伝子での３個のＳＮＰが統計学的に有意な伝達不均衡を示した（表２３）。
【０１８０】
１＆２）ドーパミンレセプターＤ２遺伝子（ｃｈ.１１ｑ２３）の２個のＳＮＰ−ＤＲＤ２−２４およびＤＲＤ２−３５は統計学的に有意な伝達不均衡を示した。ＤＲＤ２−２４（Ｚ＝３．１１１；ｐ＝０．００２）およびＤＲＤ２−３５（Ｚ＝２．１１７；ｐ＝０．０３４）。ＤＲＤ２−２４はエクソン７に位置するサイレント変異であるが、一方ＤＲＤ２−３５は遺伝子の３‘に位置する（表２３）。ＤＲＤ２での多型はＡＮに関係付けられている（２００１年１１月１３日出願の米国仮特許出願第６０／３３１２８５号）。
【０１８１】
３）セロトニン２Ａレセプター遺伝子（ｃｈ.１３ｑ１４−ｑ２１）の１個のＳＮＰ−ＨＴＲ２Ａ−１８は統計学的に有意な伝達不均衡を示した。ＨＴＲ２Ａ−１８（Ｚ＝２．９８２；ｐ＝０．００３）（表２３）。このＳＮＰは遺伝子の５‘に位置する。
【０１８２】
ＤＲＤ２統計分析
ＳｉｇｍａＳｔａｔ（Ｊａｎｄｅｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ、カリフォルニア州）を用いて遺伝子型、対立遺伝子、およびハロタイプ計数の分割表分析（χ<SP>２</SP>）を実施した。ＳＡＳのＰＲＯＣＦＲＥＱを用いて９５％信頼区間が得られた。伝達不均衡分析にＳｐｉｅｌｍａｎのＴＤＴ（ｈｔｔｐ：／／ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｍｅｄ．ｕｐｅｎｎ．ｅｄｕ／ｓｐｉｅｌｍａｎ／ＴＤＴ．ｈｔｍｌ）を用いた（Ｓｐｉｅｌｍａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．５２：５０６−５１６（１９９３））。１２５の（Ｎ＝１２５）ＡＮ発端者および８７の（Ｎ＝８７）ＥＡＦサンプルからのＤＲＤ２−４３、−１１、−２４、−２５、−３５、−４２  ＳＮＰの多座遺伝子型をＶｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃユーティリティーでアセンブルした。有意検定を伴う尤度比検定を用いてＡｒｌｅｑｕｉｎ（ｈｔｔｐ：／／ｌｂｇ．ｕｎｉｇｅ．ｃｈ／ａｒｌｅｑｕｉｎ／）を用いる並べ替えにより，得られた多座遺伝子型計数を対での連鎖不均衡に関して試験した。ＥＭアルゴリズムを別個に用いて多座ハロタイプ頻度を推定した。Ｐｅｄｃｈｅｃｋ２を用いてＡＮ−ＡＲＰ家族サンプルにおける見かけの非メンデル伝達を同定した。ＡＮ、ＡＮ１およびＡＮ２発端者およびＥＡＦサンプルのＨＷＥを、分割表（χ<SP>２</SP>）分析を用いて評価した。
【０１８３】
表６は、６個のＤＲＤ２多型に関する患者対対照の遺伝子型および対立遺伝子割表（χ<SP>２</SP>）分析の結果を示す。遺伝子型および対立遺伝子レベルの双方でＤＲＤ２−４３−１４１  Ｉｎｄｅｌ  ＳＮＰで患者と対照との間に統計学的に有意な頻度差があった（各々χ<SP>２</SP>＝５．２０、ｐ＝０．０２３およびχ<SP>２</SP>＝４．７７、ｐ＝０．０２９）。２個のＤＲＤ２−４３−１４１  Ｉｎｄｅｌ  ＳＮＰ対立遺伝子に関連するリスクの推定（表６）は、ＤＲＤ２−４３−１４１Ｃ（対立遺伝子２）に関する疾患感受性リスクが２．０２（９５％  信頼性区間が１．０７−３．８３）およびＤＲＤ２−４３−１４１Ｄｅｌ（対立遺伝子１）に関する保護オッズ比が０．４９（９５％  信頼性区間が０．２６−０．９４）であった。ＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮサブタイプ（ＡＮ１およびＡＮ２）によるＤＲＤ２−４３−１４１Ｃの分析は統計学的に有意なＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ１診断との関連性を示した（各々遺伝子型的および対立遺伝子的にｐ＝０．０３９およびｐ＝０．０４９）が、ＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮ２診断との関連性は示さなかった（遺伝子型ｐ＝０．０８７、対立遺伝子ｐ＝０．１０４）。ＡＮ２サンプルでは、ＤＲＤ２−４２は遺伝子型レベルで統計学的に有意な関連性を呈した（ｐ＝０．０３５）が、対立遺伝子レベルでは呈さなかった。発端者サンプルおよび対照サンプルにおいて遺伝子型または対立遺伝子計数を比較した場合、試験したその他のＤＲＤ２  ＳＮＰでＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮに対する関連性を示したものはなかった。
【０１８４】
ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１統計学的手順
分割分析を用いてＨＷＥを評価した。多座ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１遺伝子型をＶｉｓｕａｌ  Ｂａｓｉｃユーティリティーでアセンブルし、そして得られた多座遺伝子型計数を用いて、Ａｒｌｅｑｕｉｎを用いる実証的有意検定を伴う尤度比検定（１００００−１６０００並び替えを用いる）を用いて遺伝子内および遺伝子間の対での連鎖不均衡に関して試験した。
【０１８５】
ＡＮと対照サンプルとの間のＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１およびＨＣＲＴＲ１遺伝子座での遺伝子および対立遺伝子頻度における有意な差異をＳＡＳのカイ２乗（χ<SP>２</SP>）分析を用いて評価した。予測される差異頻度<U>＜</U>５の場合、ｐ値はフィッシャーの直接確率検定に基づいた。１００００並び替えを用いるプログラムＥＨ＋でノンパラメトリック異質性統計（Ｔ５）を用いて、ＡＮと対照サンプルとの間のハロタイプ頻度の実証的有意性の差異を評価した（Ｚｈａｏら、Ｈｕｍ．Ｈｅｒｅｄ．５０：１３３−１３９（２０００））。個々のＳＮＰで伝達不均衡を検出するのに検出力を最大にするために、伝達不均衡分析（ＴＤＴ）にＦＢＡＴを用いた（Ｈｏｒｖａｔｈら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．９：３０１−３０６（２００１））。統計学的に有意な結果を示す全分析においてｐ値＜０．０５が記載されるが、一方統計学的有意性に対する傾向を示す分析においてｐ値<U>＞</U>０．０５および＜０．１０が記載される。
【０１８６】
ＤＲＤ２連鎖不均衡
統計学的に有意な対での連鎖不均衡（ＬＤ）がＤＲＤ２  ＳＮＰの中でＡＮ発端者およびＥＡＦサンプルの双方で観察された（表７）。ＡＮサンプルの有意ＬＤにおけるマーカー対のパーセンテージは８７％であった。ＥＡＦサンプルではパーセンテージは６０％であった。ＡＮサンプルにおけるＬＤの統計学的有意性は、統計学的に有意なＬＤの全てのマーカー対に関して、ＥＡＦサンプルよりも実質的に大きかった。ＬＤの物理的程度はＥＡＦサンプルよりもＡＮサンプルにおいて大きかった。試験したＳＮＰ（ＤＲＤ２−４３／１１／２４／２５／３５／４２）は領域＞２７０ｋｂにわたる。ＡＮサンプルではＬＤの２個のブロックが観察された。一方は〜２６０ｋｂにわたるＤＲＤ２−４３／１１／２４／２５ＳＮＰ（５‘ブロック）に関連し、他方は〜２２ｋｂにわたるＤＲＤ２−１１／２４／２５／３５／４２ＳＮＰ（３‘ブロック）に関連した。１個の高度な５’多型（ＤＲＤ２−４３）と２個の最も高度な３‘多型（ＤＲＤ２−３５および−４２）との間でＬＤは統計学的に有意ではなかった。ＥＡＦサンプルでは、ＤＲＤ２−４３といずれかの３’ＳＮＰ（ＤＲＤ２−１１／２４／２５／３５／４２）との間に統計学的に有意なＬＤはなかったが、ＥＡＦサンプルはＡＮサンプルと同様に統計学的に有意である３‘ＬＤブロック（ＤＲＤ２−１１／２４／２５／３５／４２）を有した。
【０１８７】
本発明で観察されたＬＤにより、患者：対照および家族データにおけるＤＲＤ２  ＳＮＰおよびＡＮとの間の関連性の結果を内部一致すると解釈することが可能になる、すなわち患者：対照および家族サンプルにおいてＡＮと統計学的に有意に関連すると観察された同一および異なるＳＮＰは各々統計学的に有意なＬＤであり、利用できない内部一致が１個のサンプルのみである場合、比較型または単一のＤＲＤ２多型を調査した。
【０１８８】
ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、およびＨＣＲＴＲ１連鎖不均衡
ＡＮ発端者およびＥＡＦサンプル（データは示していない）の全てのＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１、およびＨＣＲＴＲ１  ＳＮＰに関してＨＷＥ不均衡（実施したＨＷＥの２６試験）を観察した。ＡＮ発端者サンプルのみでＨＷＥからの偏差の傾向がＯＰＲＤ１（８０Ｔ＞Ｇ）およびＨＣＲＴＲ１（８４６Ａ＞Ｇ）で観察された。ＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１  ＳＮＰの中でＡＮ発端者およびＥＡＦサンプルの双方で有意な対での連鎖不均衡が観察された（ＡＮ発端者サンプル連鎖不均衡を表９に示し、ＥＡＦデータは示していない）。ＡＮおよびＥＡＦサンプルの全ＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰ対の中でＨＴＲ１Ｄ遺伝子内の対でのＬＤは完全であり、すなわち各ＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰ対で予測された４個のハロタイプのうちの３個のみが観察された。ＯＰＲＤ１  ＳＮＰ対の中で有意な遺伝子内ＬＤがＡＮ発端者およびＥＡＦ参照の双方で１０個のＯＰＲＤ１  ＳＮＰ対のうち８個が観察され、この場合ＡＮ発端者サンプルで１０個のＯＰＲＤ１  ＳＮＰ対のうち３個が高度に有意に関連する（ｐ＜１０<SP>−５</SP>）ことが観察された。ＯＰＲＤ１（８２１４Ｔ＞Ｃ）／ＯＰＲＤ１（２３３４０Ａ＞Ｇ）ＳＮＰ対がＡＮおよびＥＡＦサンプル（データは示していない）の双方で完全な連鎖不均衡にあった。ＡＮサンプルの２０個の遺伝子間ＨＴＲ１Ｄ／ＯＰＲＤ１  ＳＮＰ対のうち２個で有意な連鎖不均衡が観察された（表９）。
【０１８９】
ＤＲＤ２ハロタイプ分析
最大尤度を用いてＡＮ発端者サンプルおよび対照サンプルにおける対でのハロタイプ頻度を推定し、ＡＮ発端者と対照との間のハロタイプ頻度を比較した。平均の推定される２個の遺伝子座ハロタイプ計数はＡＮ発端者から２３０（Ｎ＝２３０）であり、そして対照サンプルから１５４（Ｎ＝１５４）であり、この場合これらの平均は、個々の発端者または一緒に考えられる２個のＤＲＤ２  ＳＮＰで遺伝子型分類された対照個体のみを含めたものの結果である。対でのハロタイプ計数の分割分析を表２４に示す。ハロタイプ分割の結果によりＡＮ表現型との関連性の同一のパターンが示され、この場合ＤＲＤ２−４３／ＤＲＤ２−２４ハロタイプを有するＡＮ１サンプルでＡＮ表現型またはサブタイプに対する最も有意なハロタイプ関連性を生じるＤＲＤ２−４３に対する関連性が観察される（χ<SP>２</SP>＝１２．１８３、ｐ＝０．００７）。
【０１９０】
ＡＮ発端者サンプル（Ｎ＝７）の共同ＤＲＤ２−４３／ＤＲＤ２−２３遺伝子型は全てＤＲＤ２−４３ホモ接合体／ＤＲＤ２−２３  Ｃ／Ｇヘテロ接合体になることが観察された。従って、７個のＤＲＤ２−２３  Ｇ対立遺伝子全てが、ＡＮおよびＡＮ１サンプルにおいて有意に過剰に表される対立遺伝子であるＤＲＤ２−２３  Ｃ対立遺伝子に関連することが観察された。観察されたＤＲＤ２−４３／ＤＲＤ２−１１／ＤＲＤ２−２４／ＤＲＤ２−２５遺伝子型頻度に関して条件付けしたＤＲＤ２−４３  Ｃ／ＣおよびＤＲＤ２−２３  Ｃ／Ｇ遺伝子型を伴う７個のＡＮ発端者でのＤＲＤ２−１１、ＤＲＤ２−２４およびＤＲＤ２−２５遺伝子型の検査は、ＤＲＤ２−４３  Ｃ／ＤＲＤ２−２３  Ｇハロタイプ対立遺伝子がＤＲＤ２−１１対立遺伝子２、ＤＲＤ２−２４対立遺伝子２、ＤＲＤ２−２５立遺伝子２立体配置を有していることを示唆している。
【０１９１】
ＨＴＲ１Ｄ、ＯＰＲＤ１およびＨＣＲＴＲ１  ＳＮＰのＤＳＭ−ＩＶ  ＡＮに対する関連性
ＡＮ表現型に対するＨＴＲ１ＤおよびＯＰＲＤ１  ＳＮＰの統計学的に有意な関連性が１個のＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰ、ＨＴＲ１Ｄ（１０８０Ｃ＞Ｔ）、双方の遺伝子型および対立遺伝子で、ならびに５個のＯＰＲＤ１  ＳＮＰのうちの３個、ＯＰＲＤ１（８２１４Ｔ＞Ｃ）、対立遺伝子、ＯＰＲＤ１（２３３４０Ａ＞Ｇ）、対立遺伝子、およびＯＰＲＤ１（４７８２１Ａ＞Ｇ）、双方の遺伝子型および対立遺伝子で観察された（表１３）。有意な関連性に対する傾向が２個のＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰ、ＨＴＲ１Ｄ（２１９０Ａ＞Ｇ）、対立遺伝子およびＨＴＲ１Ｄ（−６２８Ｔ＞Ｃ）、遺伝子型で、ならびに１個のＯＰＲＤ１  ＳＮＰ、ＯＰＲＤ１（５１５０２Ａ＞Ｔ）、遺伝子型で観察された。ＡＮ発端者サンプルの男性（Ｎ＝１０）の除去（これにより全て女性の患者および対照サンプルになる）により、全ての統計学的検定の有意性が２個のうち１個の因子までで上昇し、個々の対立遺伝子のリスク効果で少し上昇した（データは示していない）。
【０１９２】
ＡＮ発端者とＥＡＦサンプルとの間で有意なＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰハロタイプ頻度異質性（表１４）が、ＨＴＲ１Ｄ（１０８０Ｃ＞Ｔ）ＳＮＰを含有するハロタイプで観察されるが、４個全てのＳＮＰを含有するＨＴＲ１Ｄハロタイプでは観察されない。ＡＮ発端者とＥＡＦサンプルとの間で有意なＯＰＲＤ１  ＳＮＰハロタイプ頻度異質性がＯＰＲＤ１  ＳＮＰハロタイプ（８２１４Ｔ＞Ｃ）／（４７８２１Ａ＞Ｇ）および４個全てのＳＮＰを含有するＳＮＰハロタイプで観察される。有意なハロタイプ頻度異質性に対する傾向が残りの４７８２１Ａ＞Ｇを含有するＯＰＲＤ１  ＳＮＰハロタイプで観察される。
【０１９３】
前記した患者：対照分析で用いた同一の親族でない発端者を伝達不均衡分析に関して罹患した子供として用いた（表１５）。分子遺伝学的分析に利用できる親ＤＮＡの平均数は発端者あたり１人の親未満であり、分析に利用できる３人組の数を限定している。それにもかかわらず、３個のＨＴＲ１Ｄ  ＳＮＰで有意な伝達不均衡、および２個のＯＰＲＤ１  ＳＮＰで有意な伝達不均衡に対する傾向が観察された。
【０１９４】
ＢＮデータセットで実施した分析
ＢＮ発端者（Ｎ〜３４６）対ＥＡＦ（Ｎ〜８９）サンプルを用いて患者：対照分割分析を実施した。利用できるＤＸコード階層がないので、発端者状態のみの患者状態を用いて患者：対照を評価した。２個の異なるＴＤＴ分析を実施して、ＢＮ−ＡＲＰデータセットの罹患した親戚の対で発端者状態とその他の摂食障害との間で関連性が異なるかどうかを決定した。１）全ての摂食障害診断を罹患したとして処理するＡＲＰデータセット全体に関して、および２）発端者およびその親のみでＴＤＴを実施した。Ｓ．Ａ．Ｇ．Ｅ．（ＴＤＴＥＸ）を用いてＡＲＰデータセット全体を分析し、そしてＦＢＡＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｓｔａｔ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／〜ｆｂａｔ／ｄｅｆａｕｌｔ．ｈｔｍｌ）を用いて発端者／親ＴＤＴ分析を実施した。４個の遺伝子、ＡＤＲＢ３、ＥＳＲ１、ＨＴＲ１ＢおよびＨＴＲ１Ｄで６個のＳＮＰが遺伝子型および／または対立遺伝子レベルで統計学的に有意なＢＮ発端者状態対ＥＡＦ対照サンプルとの関連性を示した。全ての患者：対照結果に関しては表１６を参照。
【０１９５】
４個の遺伝子での４個のＳＮＰは、全ＢＮ−ＡＲＰデータセットにおいて統計学的に有意な伝達不均衡を示した。表１７はＴＤＴで評価された全てのＳＮＰに関する並べ替えマクネマーＴＤＴ検定統計値、および４個の対立遺伝子ＴＤＴ検定統計値のうちの１個でｐ＜０．１０またはそれよりも良好な結果が得られたこれらのＳＮＰに関する４個の対立遺伝子ＴＤＴ検定統計値からのｐ値および標準誤差を提示する。ＤＲＤ２遺伝子での２個のＳＮＰであるＤＲＤ２−１１およびＤＲＤ２−２４、ＨＴＲ１Ｂ遺伝子での１個のＳＮＰであるＨＴＲ１Ｂ−０３、ならびにＨＴＲ２Ａ遺伝子での１個のＳＮＰであるＨＴＲ２Ａ−１８はＴＤＴに関して有意性を示した。ＤＲＤ２遺伝子での２個のＳＮＰであるＤＲＤ２−２４およびＤＲＤ２−３５、ならびにＨＴＲ２Ａ遺伝子での１個のＳＮＰであるＨＴＲ２Ａ−１８はＢＮ発端者／親データセットで統計学的に有意な伝達不均衡を示した（表１８参照）。
【０１９６】
ＢＮ（Ｎ〜３４６）対ＸＸＦ（Ｎ〜８９）サンプルを用いて患者：対照分割分析を実施した。ＤＸコード階層が利用できないので、発端者状態のみによる算入を用いて患者：対照を評価した。
【０１９７】
４個の遺伝子での６個のＳＮＰは遺伝子型および／または対立遺伝子レベルでＢＮ発端者状態対ＸＸＦ対照サンプルとの統計学的に有意な関連性を示した。
【０１９８】
１）β３アドレナリン作動性レセプター遺伝子（ｃｈ．８ｐ１２−ｐ１１．２）での１個のＳＮＰ−ＡＤＲＢ３−０１は遺伝子型（χ<SP>２</SP>＝９．２８２；ｐ＝０．０１０）および対立遺伝子（χ<SP>２</SP>＝９．４２２；ｐ＝０．００９）レベルの双方で関連した。この非同義語多型、Ｗ６４Ｒは以前から高インスリン血症に関連していた。このデータベースのこの遺伝子で１個の別の多型を分類したが、ＢＮとの有意な関連性は示されなかった。
【０１９９】
２）エストロゲンレセプター１（α）遺伝子（ｃｈ．６ｑ２５．１）での１個のＳＮＰ−ＥＳＲ−０２は遺伝子型（χ<SP>２</SP>＝１１．１７９；ｐ＝０．００４）および対立遺伝子（χ<SP>２</SP>＝９．３６６；ｐ＝０．００９）レベルの双方で関連した。文献上ではエストロゲンレセプター２（β）遺伝子（１４ｑ）とＡＮとの間の関連性に関してわずかな有意性の証拠がある（Ｒｏｓｅｎｋｒａｎｚら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ．  ８３：４５２４−４５２７（１９９８））。
【０２００】
３＆４）セロトニン１Ｂレセプター遺伝子（ｃｈ．６ｑ１３）での２個のＳＮＰ−ＨＴＲ１Ｂ−０１およびＨＴＲ１Ｂ−０２がＢＮに関連した。ＨＴＲ１Ｂ−０１は遺伝子型（χ<SP>２</SP>＝８．６７５；ｐ＝０．０１３）および対立遺伝子（χ<SP>２</SP>＝８．９８１；ｐ＝０．０１１）レベルの双方で関連し、ＨＴＲ１Ｂ−０２も同様であった（遺伝子型：χ<SP>２</SP>＝７．４９３；ｐ＝０．０２４；対立遺伝子：χ<SP>２</SP>＝７．４１４；ｐ＝０．０２５）。これらの多型は双方共にサイレント変異である。この遺伝子での別の２個のＳＮＰをＢＮデータセットで分類したが、ＢＮとの有意な関連性は示されなかった。文献上でＢＮ女性のＨＴＲ１ＢとＢＭＩとの間の関連性についての報告がある（Ｌｅｖｉｔａｎら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ５０：６４０−６４３（２００１））。
【０２０１】
５＆６）セロトニン１Ｄレセプター遺伝子（ｃｈ．１ｐ３６．３−ｐ３４．３）での２個のＳＮＰ−ＨＴＲ１Ｄ−０２およびＨＴＲ１Ｄ−０３がＢＮに関連した。ＨＴＲ１Ｄ−０２は遺伝子型レベル（χ<SP>２</SP>＝７．９９０；ｐ＝０．０１８）でＢＮにのみ関連した。ＨＴＲ１Ｄ−０３は遺伝子型（χ<SP>２</SP>＝１３．０８４；ｐ＝０．００１）および対立遺伝子（χ<SP>２</SP>＝１０．５３５；ｐ＝０．００５）レベルの双方で関連性を示した。この遺伝子での多型は以前にＡＮに統計学的に有意に関連することが見出されていた（Ｂｅｒｇｅｎら、提出した）。２個のさらなる多型がこの遺伝子で部類されたが、いずれもＢＮとの有意な関連性を示さない。
【０２０２】
前記の実施例を参照して本発明を詳細に説明してきたが、本発明の精神から逸脱することなく種々の修飾を行うことができることは理解される。従って、本発明は以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。全ての引用した特許、特許出願、配列、ジェンバンク引用、および本出願に言及するその他の出版物は出展明示によりその全てを本明細書の一部とする。
【表１−１】
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【表１−２】
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【表１−３】
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【表１−４】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５−１】
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【表５−２】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２−１】
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【表１２−２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６−１】
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【表１６−２】
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【表１７−１】
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【表１７−２】
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【表１８】
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【表１９−１】
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【表１９−２】
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【表１９−３】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２−１】
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【表２２−２】
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【表２３】
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【表２４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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