(57)【要約】【課題】種々の病気を治療するのに有用である、hCGホルモンのような水溶性で生理学的に活性なたんぱく質およびポリペプチドの薬剤組成物を提供する。【解決手段】この薬剤組成物は生理学的に活性なたんぱく質又は水中油エマルジョンの形に処方されたペプチドと、任意に添加されるムラミルペプチドとを含有する。より具体的には、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ゴナドトロピン）（hCG）および関連するホルモンに関係する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイマーhCGおよびムラミルペプチドを含むことを特徴とする薬剤組成物。
【請求項２】
乳化剤を更に含む請求項１記載の薬剤組成物。
【請求項３】
界面活性剤を更に含む請求項２記載の薬剤組成物。
【請求項４】
油を更に含む請求項３記載の薬剤組成物。
【請求項５】
該ダイマーhCGの含有量が少なくとも0.01重量％である請求項１記載の薬剤組成物。
【請求項６】
（a）リポソームと関連させたダイマーhCGの治療的有効量と；（ｂ）該リポソームを囲む油を含む水中油エマルジョンとを含有し；該エマルジョンが、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量を以って含有されていることを特徴とする薬剤組成物。
【請求項７】
該油がスクアレンである請求項６記載の薬剤組成物。
【請求項８】
該hCGが少なくとも0.1容量％の該油を含む請求項６記載の薬剤組成物。
【請求項９】
更に付加的に乳化剤を含む請求項６記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
該付加的乳化剤が、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソルビタン・モノ‐、ジ‐又はトリエステル、ポリオキシエチレン脂肪酸、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルおよびこれらの組合せからなる群から選択されるものである請求項９記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
佐剤を更に含む請求項６記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
佐剤が、N-アセチル‐グルコサミニル‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン（GMDP）、N-アセチル‐D-グルコサミニル(ベータ‐1-4)‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン、N-アセチル-グルコサミニル‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン酸（GMDP-A）、ムラミル・ジペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、ムラミル・トリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、ムラミル・トリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、CGP11637(nor-ＭＤＰ)、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐D‐アラニル‐D−イソグルタミン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐D‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐(1,2-ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐ヒドロキシホスホリルオキシ)エチルアミド、グルコアスミニルムラミルペプチド、ムラメチド、ムラブチド、ムラヂメチド、ミラミスチン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐トレオニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、6‐O‐ステアロイル‐N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐バリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐デスメチルムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐グルタミン・ブチルエステル、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐セリル‐D‐イソグルタミン、N‐ブチリル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐トレオニル‐D‐イソグルタミン、ビス(6‐O‐ムラミルジペプチド)O‐パルミトイルタルトロネート、ムラミルトリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐(1,2‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐（ヒドロキシホスホリルオキシ)）エチルアミド、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐グルタミン・ブチルエステル、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐1,2‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐（ヒドロキシホスホリルオキシ)）エチルアミド（MTP‐PE）、コレステリル‐ＭＤＰ、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミンのベータ‐ブチルグリコシド、2‐アセトアミド‐4,6‐ジ‐O‐アセチル‐2‐デオキシ‐3‐O‐[（R）‐1‐(メトキシカルボニル)エチル] ‐アルファ‐D‐グルコピラノース、(ベータ‐ブチル‐MDP,MTPO-26,ベータ‐コレステリル‐MDP)、サポニン（Taurosid I）、N‐アセチルノル‐ムラミル‐L‐N‐メチルアラニル‐D‐イソグルタミン・オクチルアミド、UDP‐N‐アセチル‐ムラミル‐ペンタペプチド、L4‐MDP‐ONB、L‐アラ���ル‐ガンマ‐D‐グルタミル‐メソ‐ジアミノピメレート、1,6‐アンヒドロ・ムラミルジペプチド、N‐アセチルグルコサミン‐ベータ‐1,4‐N‐アセチル‐ムラミル‐ペンタペプチド‐ピロホスホリル‐ウンデカプレノール、3‐O‐[N‐アセチル‐ムラミル‐D‐イソグルタミニル]-1,2-ジ‐O‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、L‐トレオニル‐MDP‐GDP、L‐アロトレオニル‐MDP‐GDP、トレハロース6,6‐ジエステル、ムラミルジペプチド、B30‐ムラミルジペプチドおよびムラミルジペプチド‐リシンからなる群から選択されるものである請求項１１記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
ＨＩＶ感染者を治療するための方法であって、該患者に有効量のhCGを投与することからなり、該hCGが水中油型エマルジョンの形で投与され、該エマルジョンを、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量で含むことを特徴とする方法。
【請求項１４】
更に、ムラミルペプチドの有効量を含み、該ムラミルペプチドを、1−500μg/kg体重の量で投与する請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
該hCGをリポソームと関連させて提供するようにした請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
がん患者を治療するための方法であって、該患者に有効量のhCGを投与することからなり、該hCGが水中油型エマルジョンの形で投与され、該エマルジョンを、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量を含むことを特徴とする方法。
【請求項１７】
更に、ムラミルペプチドの有効量を含み、該ムラミルペプチドを、1−500μg/kg体重の量で投与する請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
該hCGをリポソームと関連させて提供するようにした請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
該hCGが、静脈内、腹膜内、内包膜内、筋肉内、皮下、皮内、頬内、経口、鼻腔内、病変内、局所内を介して投与される請求項１６記載の方法。
【請求項２０】
連続的水相と非連続的油相とを有すると共に、ダイマーhCGを少なくとも0.01重量％含む水中油型エマルジョンを含有することを特徴とする薬剤組成物。
【請求項２１】
ムラミルペプチドの治療有効量を更に含む請求項２０記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
該油相が、鉱油、スクアレン、ピーナッツ油、植物油又はシリコーンオイルを含む請求項２０記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
該エマルジョンが、ソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソルビタン・モノ‐、ジ‐又はトリエステル、ポリオキシエチレン脂肪酸、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルおよびこれらの組合せからなる群から選択される界面活性剤を含む請求項２０記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
該界面活性剤が、ポリソルベート（“TWEEN”又はソルビタンモノオレート）、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、ポリエトキシ化ひまし油（“CREMOPHOR”）、NP-40、ジメチルジオクタデシル・アンモニウム・ブロミド（“DDA”）、線状ポリオキシプロピレン‐ポリオキシエチレン(POP-POE)ブロックポリマー、poloxamer 401、Pluronic L62LF、Pluronic L101、Pluronic L64、PEG1000、Tetronic 1501、Tetronic 150R1、Tetronic 701、Tetronic 901、Tetronic 1301、Atmos 300、Tween 20、Tween 40、Tween 60、Tween 80、およびTetronic 130R1、Arlacel A、Arlacel 80、Span ８０およびマンニド・モノオレートを含む請求項２３記載の薬剤組成物。
【請求項２５】
該水相が、水自体、ホスフェート緩衝塩液、塩水、リンゲル液又はこれらの組合せを含む請求項２０記載の薬剤組成物。
【請求項２６】
薬剤処方を製造するための方法であって、hCGを含む水性懸濁液、少なくとも1つの油性成分および十分な量の少なくとも1種の乳化剤を混合し、水中油型エマルジョンとして該処方を得ることを特徴とする方法。
【請求項２７】
更に、治療有効量のムラミルペプチドを該水中油型エマルジョン中に添加する工程を含む該請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
水中油型エマルジョンと、少なくとも１種の天然又は組換え水溶性生物学的活性たんぱく質と、任意の少なくとも１種のムラミルペプチドとを含むことを特徴とする薬剤組成物。
【請求項２９】
該生物学的活性たんぱく質が、ソマトトロピン、ヒト成長ホルモン（HGH）、ウシ成長ホルモン（BGH又はBST）、ブタ成長ホルモン（PGH又はPST）、表皮成長因子(FGF)、インターフェロン・アルファ、インターフェロン・アルファ‐2a、インターフェロン・アルファ‐2b、インターフェロン・アルファ‐N1、インターフェロン・アルファ‐n3、インターフェロン・ベータ、インターフェロン・ベータ‐1 al、インターフェロン・ベータ‐1b、インターフェロン・ガンマ‐Ia、インターフェロン・ガンマ‐Ib、インターフェロン・オメガ、インターフェロン・タウ、インターロイキン‐1、インターロイキン‐1アルファ、インターロイキン‐1ベータ、インターロイキン‐10、インターロイキン‐11、インターロイキン‐12、インターロイキン‐15、インターロイキン‐2、インターロイキン‐3、インターロイキン‐4、インターロイキン‐5、インターロイキン‐7、インターロイキン‐8、赤血球生成促進因子(EPO)、パラチロイドホルモン(PTH)、セレノたんぱく質P、シスタチンB、内毒素中和たんぱく質、巨大核細胞模擬因子(MGDF)、顆粒性白血球マクロファージ・コロニー模擬因子(GM‐CSF)、シトキン合成抑制剤因子(CSIF)、ゲノフィブレート、アルファ・カルシトニン、ベータ・カルシトニン、腫瘍壊死因子(TNF)、リンパ球移動抑制因子(LIF)、腫瘍侵入抑制因子、トランスアクト調節たんぱく質(TAT) 、プロテアーゼ抑制剤、BPC157、脂肪減少ホルモン、インシュリン、グルカゴン、ガストリン、アンギオテンシン、セクレチン、ラクトトロピックホルモン、チロトロピックホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン(LH)、小胞刺激ホルモン(FSH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、トロンボポイエチン（TPO）、黄体形成ホルモン刺激ホルモン、ヒト更年期障害ゴナドトロピン、バソプレシン、オキシトシン、プロチレリン、コルチコトロピン、SOD、ウロキナーゼ、リソチーム、G‐CSF、M-CSF、LIF、インヒビンA、インヒビンB、アクチビンA、アクチビンB、NAP-1、MCP-1、MIP-1アルファ、MIP-1ベータ、MIP-2、SISベータ、SISデルタ、SISエプシロン、PF4、PBP、ガンマーIP-10、MGSA、aFGF、ｂFGF、KGF、PDGF-A、PDGF-B、PD-ECGF、INS、IGF-I、IGF-II、NGF-ベータ、GRO/MGSA、PF4、PBP/CTAP/ベータTG、IP-10、KC、9E3、MCP-1/MCAF、MCAF、ACT-2/PAT 744/G26、LD-78/PAT 464、RANTES、G26、I309、JE、TCA3、B7.1、B7.2、ICAM-1、ICAM-2、LFA-1、LFA-3、CD72、CTAPIII、ENA-78、GRO、I-309、PF-4、LD-78、エオシノフィル誘起神経毒(ＥＤＮ)、抗腫瘍形成尿タンパク(ＡＮＵＰ)、リボヌクレアーゼ、アンギオスタチン、これらの類似体および変異体からなる群から選択されるものである請求項２８記載の薬剤組成物。
【請求項３０】
該生物学的活性たんぱく質が、表1に列挙したものから選択される請求項２８記載の薬剤組成物。
【請求項３１】
薬剤組成物の即座の製造のためのキットであって、（１）エマルジョンを収容する第1の容器であって、該エマルジョンがスクアラン又はスクアレンと、アルラセルと、水性溶液とを有してなるものと；（2）水性溶液に溶かした、又は粉体としての治療効果量のダイマーhCGを収容した第2の容器とを具備してなり；各容器中の成分の濃度が、双方の容器中の成分を組み合わせたときに、１ないし３０％のアルラセル、１ないし３０％のスクアラン又はスクアレン、０．０００１ないし３０％のムラミルペプチド、０．０１ないし９９％のhCGの処方を生じさせるものであることを特徴とするキット。
【請求項３２】
該第1又は第2の容器内に添加した治療有効量のムラミルペプチドを更に含む請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
別の容器に収容した治療有効量のムラミルペプチドを更に含む請求項３１記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は大略的に種々の病気を治療するのに有用であるところの、hCGホルモンのような水溶性で生理学的に活性なたんぱく質およびポリペプチドの薬剤処方に関する。特に、ウイルス誘起疾患、免疫性疾患および悪性疾患は、本発明の組成物により治療するのに適している。より具体的には、ヒトにおいて後天的免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）および関連するガンを生じさせるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のようなウイルスを原因とする病気に対する治療が期待される。
【背景技術】
【０００２】
ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（ゴナドトロピン）（hCG）は糖タンパクホルモンの種に属しており、この種のものとしては、黄体化ホルモン（ルトロピン、ＬＨ）、フォリトロピン（ＦＳＨ）およびチロトロピン（ＴＳＨ）が含まれる。これらホルモンは夫々、２つの非類似で、非共有結合的に結合したサブユニット、アルファおよびベータからなっている。これらホルモンは共通のアルファサブユニットを共有し、ベータサブユニットは長さおよびアミノ酸配列が異なり、各ホルモンに特有のものである。最も近いホルモンはhCGおよびＬＨであり、これらは、hCGのカルボキシ末端でのアミノ酸配列を除いては８５％が同一である。hCGおよびＬＨは共通するレセプターを介して作用する。hCGおよび関連するホルモンは正常なヒトの生理機能で役割を果たしていると従来から信じられている。例えば、hCGは妊娠性ホルモンとして既に確立されており、妊娠中における生殖生理機能において重要な役割を果たしている。hCGについての広範な背景情報が本発明者による評論記事（Herna F. Acevedo "Human chorionic gonadotropin (hCG): The hormone of life and death, A review"参照として、ここに組み入れるものとする）に提供されている。
【０００３】
最近、hCGホルモンがＨＩＶ/ＡＩＤＳおよびガン治療に有用であるということが提案されている。例えば、米国特許No.5,700,781; No.5,811,390; No.5,851,997; No.5,997,871; 5,877,148; 5,677,275又はBourinbaiar AS, Nagorny R.による原文、リンパ球および単核白血球により感染されたＨＩＶ-１における逆転写酵素活性に対するヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（hCG）の作用.FEMS Microbiol Lett. 1992年9月1日;75(1):27-30およびBourinbaiar AS, Nagorny R. 「リンパ球から栄養芽層へのＨＩＶ伝染に対するヒト絨毛性性腺刺激ホルモン（hCG）の抑制作用」FEMS Lett. 1992年8月31日;309(1):82-4(これらの内容は参照としてここに組み込まれるものとする)。しかし、或る研究者は、市販のhCG調剤に見られる汚染因子が抗ＨＩＶおよび抗ガン活性に影響を与えているものとし、hCGが抗ウイルスおよびガン活性に作用するという考えに反論している。例えば、Lee-Huang S, Huang PL, Sun Y, Huang PL, Kung HF, Blithe DL, Chen HC.「ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンのベータ‐コア製剤における抗ＨＩＶ成分としてのリソチームおよびNRアーゼ」Proc Natl Acad Sci USA. 1999年3月16日;96(6):2678-81; Sairam MR, Antakly T. DebunkinghCG. Nat Biotechno. 1997年11月(12):1228; Albini A, Paglieri I, Orengo G, Carlone S, Aluigi MG, DeMarchi R, Matteucci C Mantovani A, Carozzi F, Donini S, Benelli R. 「ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンのベータ‐コアフラグメントがカポジ肉腫誘起細胞および新規の不滅化カポジ肉腫細胞株の生育を抑制する」AIDS. 1997年３月; 11(6):713-21; Lunardi-Iskandar Y, Bryant JL, Blattner WA, Hung CL, Flamand L, Gill P, Hermans P, Birken S, Gallo RC. 「初期妊娠中の婦人からの尿因子のＨＩＶ、ＳＩＶおよび関連する疾患に対する影響」Nat Med. 1998年4月；4(4):428-34; Sispas NV, Aroni K, Tsavaris N, Mavragani K, Paikos S, Kordossis T. 「ＡＩＤＳ-関連皮膚カポジ肉腫：ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンでの治療不全」 J Chemother. 1999年 2月;11(1):78-9; Masood R, McGravey ME, Zheng T, Cai J, Arora N, Smith DL, Sloane N, Gill PS. 「抗腫瘍性尿タンパクがin vitroおよびin vivoでのカポジ肉腫および血管形成を抑制する」Blood. 1999年 2月1日;93(3):1038-44; Griffiths SJ, Adams DJ, Talbot SJ. リボヌクレアーゼがカポジ肉腫を抑制する。Nature. 1997年12月11日;390(6660):568; Darzynkiewicz Z. 「バトラーが成し遂げた：ヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの調剤におけるカポジ肉腫細胞のキラーについての調査」J Natl Cancer Inst.1999年1月20日；91(2):104-6; 及び、Noonan D、Albini A.Anti-KS activity still a mystery.Nat Med. 1998年7月;4(7):748, そのアブストラクトは参照として、ここに組み込まれるものとする。混乱させる結果のため、何人かの著者は、妊婦からの尿および粗臨床グレードのhCGの市販の調剤が抗カポジ肉腫および抗ＨＩＶ活性を伴った種々の他の因子を含むことを提案している。研究者はとりわけ、エオシノフィル誘起神経毒(ＥＤＮ)、抗腫瘍形成尿タンパク(ＡＮＵＰ)、インヒビン、アクチビンＡおよび血管発育阻止剤のような尿因子を見出している。更に、或る著者は、hCGが反対の作用を有し、かえって発ガンを促進させると公然と警告しており、抗ガン剤又は抗ウイルス剤としてのhCGの有用性を実質的に否定している。例えば、Simonartら(Simonart T, Hermans P, Van Vooren JP, Meuris S. 「ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン調剤の逆説的プロカポジ肉腫活性」Blood. 1999年7月;94(1):376-7)。
【０００４】
hCG又は或る種の汚染因子が抗ウイルス／抗ガン活性を有するか否かについて、従来技術において、依然として可なりの議論が存在する傍ら、市販のhCG製剤におけるこのホルモン又は汚染因子は実用的観点からして都合の悪いものである。他の多くの水溶性糖タンパクホルモンと同様にhCGは体内で急速に代謝され、従って、その半寿命は比較的短く、そのため、このホルモンをしばしば使用するか、又はhCGの非常に多量に含む投与を必要としている。そのいずれも、実用的ではなく、かつ、高価なものとなる。例えば米国特許No.5,700,781、 “カポジ肉腫およびＨＩＶ感染の治療方法”；Harris(参照として、ここに組み込まれるものとする)。
【０００５】
hCG放出のいわゆる“緩慢放出”又は“持続的放出”型としてのhCG放出の変形型が先に提案されているが、いずれも成功裡に履行されていない。なぜならば、このホルモンの特殊型についての特定の実施ガイダンスがないからである。例えば米国特許No.5,851,997、“免疫強化抗ウイルス剤としてのヒト絨毛性性腺刺激ホルモンの使用”；Harris。この特許において、HarrisはhCGについての緩慢放出方法の種々の型を引用している。特に、Harrisは経皮用hCGパッチとしてのhCGの持続的放出型を教示している。これはDURAGESIC（登録商標）にならったもので、hCGのようなたんぱく質の経皮的放出がイオン導入的又は電気浸透的に、すなわち、電界の影響下で行われる。Harrisにより考案された他のhCGの持続的放出型は、移植hCG放出システムである。このカテゴリーの装置の代表的タイプであるNORPLANT（登録商標）レボノルゲストレル・インプラントと同様に、これは、例えば、ヒドロゲル又は微孔質ポリマーからなる非生物分解性速度制限膜部材を介してhCGを消極的に放出させるものである。Harrisにより考案された他のhCG移植の他の型は、ホルモンを投与するためにポンプ機能を組み込んだものである。このポンプ機能は浸透的に駆動され、又は患者により活動化される。このように、HarrisはhCG投与の種々の代替モードを教示している。しかし、考案されている放出モードは特定の持続性放出薬剤投与装置、すなわち、経皮パッチおよび種々のタイプのインプラント又はポンプを介してのものである。薬剤投与の信頼性並びに実用的なモードとしての、hCG投与の他の形態については何ら教示されていない。
【０００６】
ムラミルペプチド単独でレトロウイルス複製を抑止し得ることが上記発明者等により報告されている(Acevedo HF, Raikow RB, Acevedo HO, Delgado TF, Pardo M., CGP 11637,合成ムラミルジペプチド類似体によるマウスにおける発ガン性ウイルス感染の防止. Antimicrob Agents Chemother. 1985年11月；28(5):589-96; Lazdins JK, Woods-Cook K, Walker M, Alteri E., 親油性ムラミルペプチドMTP-PEはマクロファージにおけるＨＩＶ複製の有効な阻害剤である. AIDS Res Hum Retroviruses. 1990年10月; 6(10):1157-61; Masihi KN, Lange W, Rohde-Schulz B, Chedid L., ムラミルジペプチドは、in vitroでヒト免疫不全ウイルスの複製を抑制する. AIDS Res Hum Retroviruses. 1990年3月; 6(3):393-9）。
【０００７】
しかし、hCGとムラミルペプチドとの組合せは、当業者の現在の考え方に反するものである。なぜならば、ムラミルペプチドは殆どの場合、ワクチン調剤に存在する抗原、すなわちhCGに対する免疫反応を高めるワクチン佐剤としてされるからである（例えば、米国特許No.5,840,313又はNo.5,876,724）。従って、この組合せはhCGを効果的に不活性にし、かえって病気の経過を悪化させる可能性がある。或る種のムラミルペプチドがＨＩＶ複製を実際に向上させるという或る研究者の考察に鑑み、ムラミルペプチドの臨床的使用がＨＩＶ疾患を悪化させるという予測は特に悩みの種となる(Schreck R, Bevec D, Dukor P, Baeuerle PA, Chedid L, Bahr GM., AIDSワクチンのための有力な佐剤として、核因子‐カッパーBの活性化欠乏に基づくムラミルペプチドの選択. Clin Exp Immunol. 1992年11月; 90(2):188-93; Masihi KN, Lange W, Rohde-Schulz B., バクテリア免疫モジュレータによるプロ単核細胞におけるヒト免疫不全ウイルス感染の悪化. J Acquir Immune Defic Syndr. 1990;3(3):200-5)。今日まで、天然資源から分離されたMDPおよび合成MDPの双方は、哺乳動物に投与したときの有意な毒性と関連づけられてきた。この毒性はMDPの臨床での使用を可なり制限してきた。時折、ムラミルペプチドは生理学的に活性なたんぱく質と組合せたとき有用であることが教示されている。例えば、米国特許No.5,932,208にはムラミルペプチドをサイトキンと組合わせた組成物が開示されているが、hCGとの組合せについては教示されていない。
【０００８】
しかし、hCG変異体とムラミルペプチドとの組合せが従来技術において、主に排卵誘発ワクチン又はガンワクチンとして知られている。これらのワクチンはhCGのベータ鎖又はhCGのベータ鎖のカルボキシ末端ペプチドをもっぱら含有し、更に、全部ではないが、ダイマーhCGも含有する(例えば、米国特許No.4,313,871; No.4,256,629; No.4,310,455; No.6,146,633; No.6,143,305; No.6,096,318; No.6,039,948; No.5,891,992; No.5,817,753; No.5,698,201; No.5,106,619; No.5,006,334; No.4,855,285; No.4,791,062; No.4,767,842; No.4,762,913)。ベータ鎖hCG又はそのペプチドを選択的に優先するのは、ダイマー又は全hCGで予防接種することが、関係する糖タンパクホルモン、例えばLH, FSHおよびTSHに対する好ましくない交差反応を生じさせ、その結果、宿主に対し有害な結果を生じさせることを主に配慮したためである。今日まで、従来の文献にはhCGダイマーをムラミルペプチドと組合せたものは全く開示されていない。
【０００９】
従来技術に広く認識されている従来の考えとは反対に、本発明者は意外にも、全又はダイマーhCG分子とムラミルペプチドとの組合せがin vivoでのhCGの抗ＨＩＶおよび抗ガン活性を相乗的に増大させ、宿主に対する有害な作用を生じさせないことを見出したものである。更に、ムラミルペプチドを伴って又は伴わずに、hCGを水中油エマルジョンの形で調剤したものも同様の有効な臨床的作用を有することも意外にも見出した。
【特許文献１】
米国特許No.5,700,781
【特許文献２】
米国特許No.5,811,390
【特許文献３】
米国特許No.5,851,997
【特許文献４】
米国特許No.5,997,871
【特許文献５】
米国特許No 5,877,148
【特許文献６】
米国特許No 5,677,275
【特許文献７】
米国特許No.5,840,313
【特許文献８】
米国特許No.5,876,724
【特許文献９】
米国特許No.5,932,208
【特許文献１０】
米国特許No.4,313,871
【特許文献１１】
米国特許No.4,256,629
【特許文献１２】
米国特許No.4,310,455
【特許文献１３】
米国特許No.6,146,633
【特許文献１４】
米国特許No.6,143,305
【特許文献１５】
米国特許No.6,096,318
【特許文献１６】
米国特許No.6,039,948
【特許文献１７】
米国特許No.5,891,992
【特許文献１８】
米国特許No.5,817,753
【特許文献１９】
米国特許No,5,698,201
【特許文献２０】
米国特許No.5,106,619
【特許文献２１】
米国特許No.5,006,334
【特許文献２２】
米国特許No.4,855,285
【特許文献２３】
米国特許No.4,791,062
【特許文献２４】
米国特許No.4,767,842
【特許文献２５】
米国特許No.4,762,913
【特許文献２６】
米国特許No.5,709,879
【特許文献２７】
米国特許No.5,506,204
【特許文献２８】
米国特許No.5,534,492
【特許文献２９】
米国特許No.4,158,052
【特許文献３０】
米国特許No.4,220,637
【特許文献３１】
米国特許No.4,323,559
【特許文献３２】
米国特許No.4,323,560
【特許文献３３】
米国特許No.4,409,209
【特許文献３４】
米国特許No.4,423,038
【特許文献３５】
米国特許No.4,185,089
【特許文献３６】
米国特許No.4,406,889
【特許文献３７】
米国特許No.4,082,735
【特許文献３８】
米国特許No.4,082,736
【特許文献３９】
米国特許No.4,427,659
【特許文献４０】
米国特許No.4,461,761
【特許文献４１】
米国特許No.4,314,998
【特許文献４２】
米国特許No.4,101,536
【特許文献４３】
米国特許No.4,369,178
【特許文献４４】
米国特許No.5,075,287
【特許文献４５】
米国特許No.5,376,369
【特許文献４６】
米国特許No.5,264,431
【特許文献４７】
米国特許No.5,709,879
【特許文献４８】
米国特許No.5,643,605
【特許文献４９】
米国特許No.5,075,109
【特許文献５０】
米国特許No.4,293,539
【特許文献５１】
米国特許No.4,919,929
【特許文献５２】
米国特許No.4,767,628
【特許文献５３】
米国特許No.4,962,091
【特許文献５４】
米国特許No.4,849,228
【特許文献５５】
米国特許No.4,728,721
【特許文献５６】
米国特許No.4,902,515
【特許文献５７】
米国特許No.4,719,246
【特許文献５８】
米国特許No.4,990,336
【特許文献５９】
米国特許No.4,897,268
【特許文献６０】
米国特許No.4,533,254
【特許文献６１】
米国特許No.6,110,492
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
従って、本発明の目的は、当該分野における上記並びに他の欠点を克服することができる新規な組成物を提供することである。すなわち、本発明は特別に処方されウイルス性疾患およびガンの治療に有用な水溶性ホルモンを実際に使用可能としたものである。これらおよびその他の点に鑑みて検討した結果、ムラミルペプチドと共にhCGを投与することにより、現在入手可能な市販のhCGの非変性型と比較してより良好な臨床的作用又は応答が得られることが本発明者等により見出された。更に、hCGはムラミルペプチドの併用の有無に拘わりなく、水中油エマルジョンの形に製剤し得ることが期待される。リポソームカプセル化放出のような他の形態の製剤も等しく有効である。従って、本発明は、新規で、治療有効型のダイマーhCGを有する組成物をも意図している。
【００１１】
本発明の他の目的は、従来技術の欠点を克服し得る組成物の製造方法を提供することである。
【００１２】
本発明は更に、ウイルス性感染に冒されている、又は冒されつつある患者の治療又は予防に対し臨床的に有効な量のhCGを含む処方を患者に投与することも意図している。
【００１３】
本発明の他の形態として、ヒトを含む動物のガンの成育を除去又は防止するのに有効な投与量を以って本発明の組成物を投与することにより動物のガンを治療する方法が提供される。
【００１４】
本発明者により好ましい用途として見込まれているものは、病気の治療、例えば、ＡＩＤＳ、カポジ肉腫(風土病およびＨＩＶ関連タイプの双方)、多発性骨髄腫、リンパ腫、黒色腫、他の型のガン腫および白血病である。
【００１５】
特に限定を意図するものでないが、これらの薬剤組成物は溶液として形成されることが好ましく、それにより非経口的投与、特に、皮下投与、筋肉内投与、静脈投与又は輸液などにより投与が行われるようにする。本発明の組成物は、それ単独又はその保護を確実にする生薬の形、例えばカプセル又はマイクロスフェア又はリポソームにカプセル化し胃壁を透過し得るようにして同じく有利に投与してもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、ムラミルジペプチド(ＭＤＰｓ)がワクチンの抗原性決定子に対し免疫を誘起するワクチン製剤の成分として一般に使用されているという事実にも拘らず、これらのムラミルペプチド化合物はin vivoにおいてhCG活性を拮抗するよりもむしろ佐薬として実際に作用し得ることを発見したことに基づいてなされたものである。従って、上記の従来技術の教唆にも拘らず、hCGとの組合せでのムラミルペプチド化合物はＨＩＶ感染並びにガンのような他の生命に脅威を与える病気の治療、防御又は管理において有用である。
【００１７】
以下に使用されている“持続的放出装置”の用語は、薬剤を含んだ経皮パッチ、皮下インプラントおよびポンプのような特定の装置を表すものである。
【００１８】
以下に使用されている“緩慢放出処方”の用語は、持続的放出装置以外の薬剤放出の形を表すもので、hCGの処方に関係する従来技術では教示されていないhCG処方を含むものである。
【００１９】
“佐剤”の用語で定義するものは、抗原に組み込まれ、抗原と同時に注入される物質を指す。この佐剤は抗原に対する免疫応答を非特異的に薬効強化するものである。免疫治療佐剤を使用する主たる目的は、同等の水性抗原を投与することにより達成されるものよりも低いレベルの抗原をより少ない投与量で用いることにより、持続性がより大きく、高いレベルの体液又は細胞媒介免疫を達成することである。佐剤はワクチンの製造のため、非生物的薬剤(生活微生物の代りに)との組合せで使用される。佐剤は更に、低又は非免疫原性腫瘍細胞又は体内に既に存在し、自然に顕在化された免疫応答により適当に阻止されない細胞内病原体で感染された細胞に対する効果的免疫応答を増大させる。
【００２０】
以下に使用されている“乳化剤”の用語は、アルキレンオキシドおよび/又はヘキサハイドリックアルコールおよび/又は高級天然脂肪酸、例えばエステル又はエステル‐エーテルから誘導される非イオン性界面活性化合物を表すものである。
【００２１】
“完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）”の用語は、実験ベースで多くの抗原で成功裡に使用されている強力な免疫促進剤を表す。このＣＦＡは鉱油と、Arlacel Aなどの乳化/安定剤と、ミコバクテリア結核菌などの不活化ミコバクテリアからなる。水性抗原/たんぱく質溶液をこれらの成分と混合し油中水型エマルジョンを形成させる。しかし、このＣＦＡは激しい副作用、例えば苦痛、膿瘍、発熱などを伴い、ヒト又は家畜用ワクチンでの使用が出来ない。この副作用は主としてＣＦＡのミコバクテリア成分に対する患者の反応によるものである。
【００２２】
“不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）”はＣＦＡと類似するが、バクテリア成分を有していない．米国での使用は承認されていないが、ＩＦＡは他の国において幾つかのタイプのワクチンに有用なものである。ＩＦＡはインフルエンザおよびポリオワクチン、狂犬病、犬ディステンパー、口蹄疫などの幾つかの動物ワクチンとしてヒトにおいて有効に使用されてきた。実験によって、このＩＦＡに使用されている油および乳化剤はマウスに腫瘍を生じさせることが判明し、そのため、ヒトでの使用については別の佐剤の使用が望ましいことが示された。
【００２３】
ムラミルジペプチド(ＭＤＰ)はミコバクテリア細胞壁錯体の最小単位を表し、これはＣＦＡで観察される佐剤的活性を有する。このＭＤＰの多くの合成類似体が開発され、これらは広範な佐剤効能および副作用を有する。その内、ワクチン佐剤として特に有用な3種の類似体、ＭＤＰのトレオニル誘導体、ＭＤＰのｎ−ブチル誘導体およびムラミルトリペプチドの脂肪親和性誘導体(米国特許No.5,709,879参照)を挙げることができる。これらの化合物は体液性、細胞媒介免疫を効果的に刺激し、毒性も低い。このムラミルペプチドはリン脂質テールを有し、これによりその分子の疎水性部の脂質環境との結合を可能となり、他方、ムラミルペプチド部は水性環境と結合する。このようにＭＴＰ−ＰＥ自体が乳化剤として作用し安定な水中油型エマルジョンが形成されることになる。
【００２４】
“ムラミルペプチド”の用語は当業者にとって明確であろう。特に、それは1又はそれ以上の糖残渣を含む化合物であって、この糖残渣の少なくとも１つ（しばしばムラミン酸残渣である）は少なくとも1又はそれ以上の(通常、2又はそれ以上)のアミノ酸残渣で置換されている。ムラミルペプチド化合物は哺乳動物において細胞抗原性応答を向上させることができ、又、原型ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）又はその類似体又は誘導体でもあるペプチドグリカンであってもよい。
【００２５】
ムラミルペプチド化合物のグループは先に進行性敗血症、敗血性ショックを治療又は防止するのに有用であること、および免疫強化抗バクテリア活性を有することが開示されている。しかし、ムラミルペプチドは免疫適性宿主においてのみ有効である。ムラミルペプチドの代表的例が米国特許No.5,506,204およびNo.5,534,492(参照として本明細書に組み込まれるものとする)に記載されている。
【００２６】
原型ムラミルジペプチドの様々な類似体が知られており、その幾つかは免疫機能の回復又は免疫システムの非特異的刺激のための治療薬として提案されている。これらの類似体および原型ＭＤＰ自体が一般に“ムラミルペプチド”として呼ばれている。
【００２７】
本発明の第1の形態によれば、ムラミルペプチド化合物を水溶性生理学的活性たんぱく質(例えば、hCG)との組み合わせからなる組成物が提供される。
【００２８】
hCGに限らず、他の治療薬も使用可能であり、例えば、インシュリン、グルカゴン、カルシトニン、心房性ナトリウム利尿ペプチド、セクリチン、コレシストキニン、甲状腺刺激ホルモン放出チモペンチン、副腎皮質刺激ホルモン、成長ホルモン放出因子、エンケファリン、オキシトシン、バソプレシン、黄体形成ホルモン放出ホルモンなどを挙げることができる。これらの組成物は更にマトリックス物質中に調剤させてもよい。この場合のマトリックス物質の例としては、キトーサン、アルギン、飽和ポリ糖分解グリセリド、グリセロール・パルミトステアレート、ポリアルコールの飽和Ｃ12ないしＣ22脂肪酸エステル、グリセリルおよびポリエチレングリコール・ベヘネート、ポリエチレンオキシド、アンモニウム・グリチルリジネートなどを挙げることができる。
【００２９】
佐剤としては、モノホスホリル脂質Ａ、脂質Ａ、キーホール・ヒンペット・ヘモシアニン、ヒスチジン‐タグ、アラム、フロイントアジュバント、ベータ‐ガル、パルミチン酸、サポニン、リポポリサッカリド、ＢＣＧ細胞壁スケレトン、トレハロース・モノマイコレート、トレハロース・ジマイコレート、リピドＸ、イソプリノシン、リソスペルマン(Ａ，Ｂ又はＣ)、ムラミルジペプチド(ＭＤＰ)リピド・コンジュゲートなどから選択される。リピドは飽和又は不飽和リン脂質又は糖脂質であってもよい。好ましいリピドの例としては、1,2−ジミリストイルホスファチジルコリン、1,2−ジパルミトイルホスファチジルコリン、1,2−ジミリストイルホスファチジルグリセロール、コレステロールおよびこれらの組合せなどを挙げることができる。
【００３０】
本発明の組成物の製造に適した固体脂質の例としては、鎖長がＣ10−Ｃ18の天然の偶数、枝なし脂肪酸からなるトリグリセリド、天然産の飽和、偶数、枝なし脂肪酸の微結晶質グリセロール・トリエステル、例えばトリカプリン、トリラウリン、トリミリスチン、トリパルミチン、トリステアリンなど挙げることができる。一般に、バルクで測定したとき、室温(25℃)で固相であるところの任意の脂質成分又は脂質成分の混合物を脂質コアとして好適に使用することができる。
【００３１】
本発明の組成物を作成するのに使用することができる好ましいリン脂質の例は、天然のリン脂質、例えば大豆レシチン、卵レシチン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジル‐エタノールアミン、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリン、ジホスファチジルグリセロール、ホスファチジルスクリン、ホスファチジル‐コリン、カルジオリピンなど;或いは合成リン脂質、例えばジミリストイル・ホスファチジルコリン、ジミリストイル・ホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルコリン、モノホスホリル・リピドＡ、ジホスホリル・リピドＡなど;その他、水素化又は一部水素化レクチンおよびリン脂質を挙げることができる。
【００３２】
非天然界面活性剤および洗浄剤を適宜、本発明の組成物に任意の割合で添加することができる。ここで、“界面活性剤”又は“洗浄剤”の用語は、水溶液中でミセルを形成し得るもので、親油性ドメインおよび親水性ドメインの双方を有する種々の人造分子を包含する。一般に、乳化剤はソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソルビタン・モノ‐、ジ‐又はトリエステル、ポリオキシエチレン脂肪酸、ポリオキシエチレン脂肪酸エーテルおよびこれらの組合せを含む。非天然界面活性剤の例としては、限定されるものではないが、ポリソルベート（“TWEEN”又はソルビタンモノオレート）、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、ポリエトキシ化ひまし油（“CREMOPHOR”）、NP-40、および他の多くの合成分子を挙げることができる。更に、幾つかの他の合成界面活性剤、例えば、ジメチルジオクタデシル・アンモニウム・ブロミド（“DDA”）および或る線状ポリオキシプロピレン‐ポリオキシエチレン(POP-POE)ブロックポリマー（PLURONICの商標で市販されている）がアジュバント(佐剤)活性を有するものとして報告されている。これらの内、poloxamer 401、Pluronic L62LF、Pluronic L101、Pluronic L64、PEG1000、Tetronic 1501、Tetronic 150R1、Tetronic 701、Tetronic 901、Tetronic 1301、Atmos 300、Tween 20、Tween 40、Tween 60、Tween 80、およびTetronic 130R1が特に好ましい。乳化剤には更に、Arlacel A又はArlacel 80又はSpan 80(いわゆる、マンニド・モノオレート)が含まれる。これらの界面活性剤は種々の投与量で使用することができる。例えば、本発明の組成物のArlacel A、 Arlacel 80又はSpan 80の好ましい範囲は約2−15重量％、Tween 80の範囲は例えば0.2−4重量％である。一般に、界面活性剤はこの組成物全重量の30%未満、好ましくは25%未満、より好ましくは10%未満、最も好ましくは5%未満含有することができる。
【００３３】
ＭＤＰの機能的均等物の例としては以下のものが含まれるが、これらに限定されるものではない。すなわち、ムラミル・ジ‐又はトリペプチド様N-アセチル‐グルコサミニル‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン（GMDP）、N-アセチル‐D-グルコサミニル(ベータ‐1-4)‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン、N-アセチル-グルコサミニル‐N-アセチル‐ムラミル‐L-アラニル‐D-イソグルタミン酸（GMDP-A）、ムラミル・ジペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、ムラミル・トリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、ムラミル・トリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、CGP11637(nor-ＭＤＰ)、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐D‐アラニル‐D−イソグルタミン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、アルファ(N‐アセチル‐ムラミル‐D‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン)ベータ，ガンマ‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐(1,2-ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐ヒドロキシホスホリルオキシ)エチルアミド、グルコアスミニルムラミルペプチド、ムラメチド、ムラブチド、ムラヂメチド、ミラミスチン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐トレオニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、6‐O‐ステアロイル‐N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐バリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐デスメチルムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐グルタミン・ブチルエステル、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐セリル‐D‐イソグルタミン、N‐ブチリル‐ムラミル‐L‐アルファ‐アミノブチリル‐D‐イソグルタミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐トレオニル‐D‐イソグルタミン、ビス(6‐O‐ムラミルジペプチド)O‐パルミトイルタルトロネート、ムラミルトリペプチド‐ホスファチジル‐エタノールアミン、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐(1,2‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐（ヒドロキシホスホリルオキシ)）エチルアミド、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミン・ブチルエステル、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミニル‐L‐アラニン‐2‐1,2‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロ‐3‐（ヒドロキシホスホリルオキシ)）エチルアミド（MTP‐PE）、コレステリル‐ＭＤＰ、N‐アセチル‐ムラミル‐L‐アラニル‐D‐イソグルタミンのベータ‐ブチルグリコシド、2‐アセトアミド‐4,6‐ジ‐O‐アセチル‐2‐デオキシ‐3‐O‐[（R）‐1‐(メトキシカルボニル)エチル] ‐アルファ‐D‐グルコピラノース、(ベータ‐ブチル‐MDP,MTPO-26,ベータ‐コレステリル‐MDP)、サポニン（Taurosid I）、N‐アセチルノル‐��ラミル‐L‐N‐メチルアラニル‐D‐イソグルタミン・オクチルアミド、UDP‐N‐アセチル‐ムラミル‐ペンタペプチド、L4‐MDP‐ONB、L‐アラニル‐ガンマ‐D‐グルタミル‐メソ‐ジアミノピメレート、1,6‐アンヒドロ・ムラミルジペプチド、N‐アセチルグルコサミン‐ベータ‐1,4‐N‐アセチル‐ムラミル‐ペンタペプチド‐ピロホスホリル‐ウンデカプレノール、3‐O‐[N‐アセチル‐ムラミル‐D‐イソグルタミニル]-1,2-ジ‐O‐ジパルミトイル‐sn‐グリセロール、L‐トレオニル‐MDP‐GDP、L‐アロトレオニル‐MDP‐GDP、トレハロース6,6‐ジエステル、ムラミルジペプチド、B30‐ムラミルジペプチドおよびムラミルジペプチド‐リシンなどを挙げることができる。
【００３４】
アミノアシル残基は以下の基から選択される任意のアミノアシル成分であってもよいことを理解されたい。すなわち、アラニル基、バリル基、ロイシル基、イソロイシル基、アルファ‐アミノブチリル基、トレオニル基、メチオニル基、システイニル基、グルタミル基、イソグルタミル基、グルタミニル基、イソグルタミニル基、アスパルチル基、フェニルアラニル基、チロシル基、トリプトファニル基、リシル基、オルニチニル基、アルギニル基、ヒスチジル基、アスパリンギニル基、プロリル基、ヒドロキシプロピル基、セリル基、グリシル基などから選択することができる。
【００３５】
他のムラミルペプチド誘導体としては、ムラミルペプチド基のL‐アラニル残基をL‐トレオニル残基で置換したものが含まれる。更に、サッカリド基の1,4又は6位に置換基を有する任意のアジュバント・ムラミルペプチドを使用することができるが、その場合、上述の好ましいムラミルペプチドと同様の好ましい効果を有することが条件となる。上記ムラミルペプチド誘導体以外にも、米国特許No.4,158,052; No.4,220,637; No.4,323,559; No.4,323,560; No.4,409,209; No.4,423,038; No.4,185,089; No.4,406,889; No.4,082,735; No.4,082,736; No.4,427,659; No.4,461,761; No.4,314,998; No.4,101,536; No.4,369,178; No.5,075,287; No.5,376,369; No.5,264,431; No.5,709,879(参照として、ここに組み込まれるものとする)に記載されているものも本発明において等しく有用である。
【００３６】
上記組成物において、他の有用な添加剤として以下のものが含まれる。すなわち、N‐シクロヘキサノイル・アルギニン；N‐シクロヘキサノイルチロシンと、N‐シクロヘキサノイルロイシンとの混合物;N‐フェニルスルホニルバリンと、N‐フェニルスルホニルロイシンと、N‐フェニルスルホニルフェニルアラニンと、N-フェニルスルホニルリシンと、N‐フェニルスルホニルアルギニンとの混合物；N‐ベンゾイルバリンと、N‐ベンゾイルロイシンと、N‐ベンゾイルフェニルアラニンと、N‐ベンゾイルリシンと、N‐ベンゾイルアルギニンと、ナトリウム・2‐シクロヘキシルブチレートのような安定剤との混合物などを挙げることができる。
【００３７】
上記成分以外に、オバルブミン、コレラ毒素、アシル化アミノ酸又はその塩、少なくとも１つのアシル化アミノ酸又はその塩を含むポリアミノ酸、スルホン化アミノ酸又はその塩、又はこれらの組合せなどを使用し得ることは当業者にとって明らかであろう。この組成物は微小球を含むものであってもよい。
【００３８】
微小球を形成するためのポリマーマトリックスは公知である。例えば、酵素、ホルモン、ワクチンおよび他の生物製剤を含有する半透過性微小球が米国特許No.5,643,605に開示されている。他の米国特許No.5,075,109には、対生物活性剤を含む少なくとも２つの微小球固体群の混合物であって、微小球固体群の1つが約1−10ミクロンのサイズであるものを投与することにより免疫応答を向上させる方法が開示されている。米国特許No.4,293,539には、約60ないし95重量％の乳酸と、約40ないし4重量％のグリコール酸とから得られるコポリマー中から活性成分を制御しつつ放出させる調剤が開示されている。米国特許No.4,919,929には、生適合性マトリックス物質の成形体に抗原物質を含有させたものを投与することについて開示がなされている。米国特許No.4,767,628には、活性、酸安定性ポリポプチドおよびポリラクチドからなる組成物であって、これを水性生理学的環境に置いたとき、ほぼ一定の速度で、かつ、基本的に単一相状態でポリペプチドを放出させるものが開示されている。米国特許No.4,962,091には、ポリアクチドマトリックスに懸濁させた水溶性高分子ポリペプチドのミクロ懸濁液が開示されている。米国特許No.4,849,228およびNo.4,728,721には、生分解性高分子量ポリマーが開示されていて、これは水溶性低分子量化合物の含量が、それが一塩基酸であるという仮定で計算して、高分子量ポリマー100g当り0.01モル未満であることを特徴とするものである。米国特許No.4,902,515およびNo.4,719,246には、ポリ(R-ラクチド)のセグメントをポリ(S-ラクチド)のセグメントと結合させたものを含むポリラクチド組成物が開示されている。米国特許No.4,990,336には、生物腐食性カプセル化ポリマーの微小球にカプセル化したアレルゲン抽出液を有する多相持効システムであって、アレルゲンの持続的多相放出を可能にするものが開示されている。このシステムはアレルゲンの抽出液の第1の部分を含み、これは注射したとき、最初のアレルギー誘発性が抑制され、従来の低いアレルゲン投与量で通常観察されるものと同様の緩やかな局所反応を生じさせるように放出され、更にアレルゲンの抽出液の第２の部分を含み、これはアレルゲンの抽出液の第1の部分の放出を別にすれば、投与におけるアレルゲン抽出液の実質的に高いレベルのものを提供し、これは患者に重要な反応を生じさせる虞がある。米国特許No.4,897,268にはマイクロカプセル放出システムが開示されており、この場合、各成分が種々のモル比の生分解性コポリマー賦形剤中にカプセル化され、各成分の放出が長期間に亘って一定速度で行われるようになっている。このように、微小球を製造し、使用するための様々な手段が公知であり、本発明の目的のために容易に適用することができる。
【００３９】
本発明の微小球は更に、リポソームを含んでいてもよい。リポソームを形成するのに適した組成物については、これに関する多数の技術文献から公知である。好ましい脂質組成物はリン脂質を活動させるもの、例えばホスファチジルコリン(炭素原子12−20からなる脂肪酸誘導体)(特に、炭素原子16-20からなるもの)、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロールおよびホスファチジン酸である。これらのリン脂質は単独又は混合して使用することができる。更に、合成又は天然ジステアリル‐ホスファチジルコリン（DSPC）又はホスファチジルコリンの混合物、ホスファチジルグリセリン（PS）の混合物、又はホスファチジルグリセロール（PG）の混合物とすることが特に有利である。好ましくは、上記リポソームは最後に述べたリン脂質を、PSが1ないし10、好ましくは3容量部に対し、DSPC又はホスファチジルコリン（PC）を7容量部の割合で含有する混合物から形成されたものが好ましい。本発明の誘導体を含有するこれらリポソームの生物学的活性はリポソームが単層のものであっても、複層のものであっても同様に有効であることが判明している。好ましくは、リポソームの粒径は0.1ミクロン以上、例えば1ないし10ミクロンの大きさとする。
【００４０】
本発明の組成物は免疫応答および非特異的免疫の全身的向上についての非特異的抗菌抵抗のモジュレータとして有用である。
【００４１】
従って、例えば、免疫応答減退の病状の治療処置および支持療法(すなわち、更なる治療の特異的又は支持形態と共に)において、特に、細胞および体液免疫応答減退の病状および遅延型の過敏反応減少の病状、更に免疫応答の調節が望まれる一般的な病状の治療に有用である。
【００４２】
更に、突発性免疫不全又は老人患者又は重症の火傷又は全身性感染を患っている患者に見られるタイプの免疫不全に関係する病気の治療又は支持療法において有用である。
【００４３】
更に、散在性ヘルペス、散在性水痘感染のようなウイルス性感染、HIV感染、悪性腫瘍などの治療又は支持療法にも有用である。
【００４４】
緩慢なhCGの放出はRNAおよびDNAウイルスにおける使用も考えられる。これらの例としては、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、風邪ウイルス、ラフトバリー熱ウイルスが含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
所定の効果を得るのに必要な活性成分の正確な投与量については、特定の化合物、治療を施すべき患者の大きさ、年齢および状態に応じて適宜、選択し得ることは当業者にとって自明であろう。これらの投与量は当業者に公知の慣例的方法により容易に決定し得るであろう。
【００４６】
本発明の佐剤組成物およびワクチンは一般に注射により投与される。しかし、経口投与のようなより容易な投与モードを作成することもできる。本発明の組成物が直接、臨床的治療および予防のために使用する場合、それを経口調剤又は非経口調剤の形とすることができる。この“非経口”の用語は、皮下、静脈内、硬膜外、灌注法、筋肉内、放出ポンプ、輸液などを含む。限定を意図するものでないが、この組成物は関節内、滑液内、内包膜内、骨膜、腫瘍内、近腫瘍内、病変部内、近病変部内、舌下、頬内、経皮、局所的又は吸入を介して投与することもできる。この組成物は傷、病変部のための包帯を介して投与することもできる。しかし、この組成物は経口投与が特に好ましい。経口投与の場合、本発明の組成物は単独で、又は薬理学的に許容し得る担体との組合せで、薬理学的調剤、例えば、カプセル、ピル、トローチ剤、錠剤、糖衣錠、サッシー、ティーバッグ、顆粒、粉体、塗膜錠剤、糖衣タブレット、ウエハー、シュガーキューブ、ゲル、ヒドロゲル（例えば親水性吸湿性ポリサッカリド、泡、座薬、吸入薬、ジュース、シェーク、チューインガム、歯磨きペースト、歯磨き剤、うがい薬、キャンディー、エマルジョンなどの形で使用することができる。
【００４７】
適当な薬理学的担体の例としては、充填剤(例えば、ラクトース、スクロース、マンニトール、グルコース、澱粉、ソルビトール、グリシン、燐酸カルシウム、微結晶セルロース);バインダー(例えば、澱粉、カゼイン、ゼラチン、アラビアゴム、グルコース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、トラガカントゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロポキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、２‐メチル‐５‐ビニルピリジンン/メチルメタクリレート/エチルアクリレート・コポリマー、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム);アルギン酸塩ゲル;潤滑剤(例えば、ステアリン酸、硬化油、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリオキシエチレン・モノステアレート、タルク、酸化ケイ素、ポリエチレングリコール);崩壊剤(例えば、ジャガイモ澱粉、界面活性剤を含む澱粉など);湿潤剤(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム)などを挙げることができる。
【００４８】
本発明の組成物はリポソームの形で投与することもできる。公知のように、リポソーム又は人造脂質小胞は一般にリン脂質又は他の脂質物質から得ることができる。更に、これらはムラミルペプチド、代謝可能な油および所望に応じ、更に他の乳化剤を含有してもよい。リポソームは単層又は多層水和液晶を水性媒体に分散させたものから形成することができる。本発明のカプセル化組成物を含有するリポソームからなるリポソーム調剤を製造する典型的なプロセスは、脂質又はリポソームを、カプセル化すべき物質の溶液で水和する工程と;乾燥脂質又は乾燥リポソーム調剤の複数の部分を用意する工程と；この複数の部分のそれぞれをカプセル化すべき物質からなる溶液で水和する工程と；この複数の部分を夫々を組合せ単一のリポソーム調剤を形成し、それにより上記カプセル化された物質を含むリポソームを含有するリポソーム調剤を形成する。非毒性の生理学的に許容され、かつ、代謝可能な脂質であってリポソームを形成し得るものを使用することができる。リポソームの形態のこの組成物は本発明の化合物の他、安定剤、保存剤、賦形剤などを含有してもよい。好ましい脂質の例は、リン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）であり、これらは天然のもの、又は合成のものであってもよい。リポソームを形成する方法は公知である。例えば、生物学的に関連する分子成分と、負に荷電された脂質成分と、二価のカチオン成分とを含有するココレートである。このココレートの貯蔵寿命は乾燥状態でも長い。好都合には、ココレートは摂取することができる。
【００４９】
上述の徴候に対し、使用される投与量は勿論、治療すべき病気の性質および重度、投与様式および使用される化合物の形態に依存する。平均的患者の場合、適当な投与量は約100IUないし20,000IUであり、これは単一の投与でも、若しくは別々の投与として用いてもよい。繰返し投与として、一日当り1ないし4回、又は、更に間を置いて、３日毎に1回、一週間毎に1回、二週間毎に1回、一月に1回、三月に1回でもよい。単位投与形態として、繰返し投与の場合、本発明の化合物を約100IUないし10,000IU、好ましくは1回の注射において、約1,000IUないし5,000IUの量で使用することができる。治療のため単一の投与が望まれる場合、投与量を約20,000IUまで増やすこともできる。hCGの市販の調剤で提供される製品説明に基づいて、hCGのIU単位をIII重量単位に変換したり、又は、その逆を行うことは当業者にとって容易であろう。
【００５０】
本発明の組成物は治療目的と関係のない種々の他の方法に使用することができる。例えば、この組成物は種々の免疫検定、生物検定などにおいて、hCGの検出又はhCGに対する後退の検出のための標識付き又は標識無し試薬として使用することができる。好ましい標識の例としては、ラジオアイソトープ、酵素、蛍光分子、化学発光ラベル、酵素基材又は共同因子、酵素阻害剤、粒子、染料などを挙げることができる。このような識付き試薬は公知の種々の検定、例えば放射免疫検定、酵素免疫検定、例えばELISA、蛍光免疫検定などに使用することができる。
【００５１】
本発明は、本発明の組成物を従来から種々の病気カテゴリーに通常使用されている薬剤又は化合物と共に使用することを包含する。これら化合物の内、以下のカテゴリーおよび/又はカテゴリーのメンバーの活性薬剤を挙げることができる。すなわち、副腎皮質ステロイド、副腎皮質抑制剤、アルドステロン拮抗薬、アミノ酸、同化剤、アンドロゲン、抗AIDS薬、駆虫薬、抗アクネ剤、抗アドレナリン剤、抗アレルギー剤、抗アメーバ剤、抗アンドロゲン剤、抗貧血剤、抗アンギナ剤、抗関節炎剤、抗喘息剤、抗アテローム性動脈硬化剤、抗バクテリア剤、抗胆石剤、抗胆石原剤、抗コリン作用薬、抗凝血剤、抗球虫剤、抗糖尿病薬、抗下痢剤、抗利尿薬、解毒剤、抗エストロゲン剤、抗フィブリン溶解剤、抗真菌薬、抗緑内障剤、抗血友病剤、抗出血病剤、抗ヒスタミン剤、抗高脂血症剤、抗高リポ蛋白血症剤、抗高血圧症剤、抗低血圧症剤、抗感染症剤、抗局所感染症剤、抗炎剤、抗角質化剤、抗マラリア剤、抗菌剤、抗有糸分裂剤、抗糸状菌症剤、抗腫瘍形成剤、抗好中球減少症薬、抗寄生虫剤、抗逆蠕動剤、抗ニューモシスチス剤、抗前立腺肥大症剤、抗原生動物症剤、抗掻痒症剤、抗乾癬症剤、抗リウマチ症剤、抗住血吸虫症剤、抗脂漏症剤、抗分泌抑制剤、鎮痙攣剤、抗血栓症剤、咳き止め剤、抗潰瘍剤、抗尿石症、抗ウイルス剤、食欲抑制剤、良性前立腺肥大治療薬、骨溶解抑制剤、気管支拡張剤、炭酸脱水酵素抑制剤、心臓抑制剤、心臓保護剤、強心薬、心臓血管剤、利胆薬、コリン作用薬、コリン作用作動薬、コリンステアラーゼ不活性化剤、コクシジウム症鎮静剤、診断補助剤、利尿剤、外部寄生虫殺虫剤、酵素抑制剤、エストロゲン、フィブリン溶解剤、遊離酸素ラジカル除去剤、グルココルチコイド、生殖腺刺激素、毛髪生育刺激剤、止血剤、ホルモン、低コレステロール治療薬、血糖降下薬、低脂肪血症薬、低血圧治療薬、免疫化剤、免疫モジュレータ、免疫調節剤、免疫刺激剤、免疫抑制剤、性不能治療佐剤、抑制剤、角質溶解剤、LHRH作動薬、肝不全治療薬、ルテオリシン、ムコ多糖類分解酵素、散瞳薬、鼻腔うっ血除去剤、神経筋ブロック剤、非ホルモン系ステロール誘導体、分娩促進薬、プラスミノーゲン活性化剤、血小板活性化因子拮抗薬、血小板凝集抑制剤、薬効強化剤、プロゲスチン、プロスタグランジン、前立腺成長抑制剤、プロチロトロピン、肺サーファクタント、放射能剤、レギュレータ、弛緩剤、分配剤、抗疥癬虫薬、硬化症剤、選択的アデノシンAl拮抗薬、ステロイド、抑止剤、徴候的多発性硬化症薬、共同薬、甲状腺ホルモン、甲状腺抑制剤、甲状腺類似薬、筋萎縮性側索硬化症薬、変形性骨炎治療薬、不安定アンギナ治療薬、尿酸排泄促進剤、血管収縮神経薬、血管拡張剤、傷薬、外傷治療薬、キサンチン・オキシダーゼ抑制剤などを挙げることができる。
【００５２】
本発明で有用な化合物は薬剤カクテルの形で投与することができる。このカクテルは上記化合物の任意のものを本発明の組成物と組み合わせた混合物である。この混合物は必ずしも物理的に混合する必要はなく、これら薬剤を別々に、連続的に、又は同時に投与してもよい。
【００５３】
AIDSに加えて、特に興味のある薬剤は抗がん剤であり、これを本発明の組成物と共に投与することができる。抗腫瘍剤の例としては、特に限定されないが、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾールヒドロクロリド、AcrQnine、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、アメタントロンアセテート、アミノグルテチミド、アンサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレンヒドロクロリド、ビスナフィドジメシレート、ビゼレシン、ブレオマイシンスルフェート、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシンヒドロクロリド、カルゼレシン、セデフィンゴール、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトールメシレート、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシンヒドロクロリド、デシタビン、デクソルマプラチン、デザグアニン、デザグアニンメシレート、ダイアジクオン、ドデタキセル、ドクソルビシン、ドクソルビシンヒドロクロリド、ドロロキシフェン、ドロロキシフェンシトレート、ドロモスタノロンプロピオネート、ジュアゾマイシン、エダトレキサート、エフロミチンヒドロクロリド、エレサミトルシン、エンロプラチン、エンプロメート、エピプロピジン、エピルビシンヒドロクロリド、エルブロゾール、エソルビシンヒドロクロリド、エストラムスチン、エストラムスチンホスフェートナトリウム、エタニダゾール、エチオダイズドオイルI 131、エトポシド、エドポシドホスフェート、エトプリン、ファドロゾールヒドロクロリド、ファザラビン、フェンレチニド、フロキシウリジン、フルダラビンホスフェート、フルオロウラシル、フルオロシタビン、フォスキドン、フォストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、ゲムシタビンヒドロクロリド、Gold  AU 198、ヒドロキシ尿素、イダルビシンヒドロクロリド、アイフォスファミド、イルモフォシン、インターフェロン・アルファ‐2a、インターフェロン・アルファ‐2b、インターフェロン・アルファ‐n3、インターフェロン・ベータ‐Ia、インターフェロン・ガンマ‐Ib、アイプロプラチン、イリノテカンヒドロクロリド、ランレオチドアセテート、レトロゾール、ロイプロリドアセテート、リアロゾールヒドロクロリド、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロソキサントロンヒドロクロリド、マソプロコール、メイタンシン、メクロレタミンヒドロクロリド、メゲストロールアセテート、メレンゲストロールアセテート、メレファラン、メノガリル、メルカプトピュリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトプリン、メトウレンデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、メトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、ミトマイシン、ミトスパー、ミトタン、ミトキサントロンヒドロクロリド、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシンスルフェート、ペルフォスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピロキサントロンヒドロクロリド、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジンヒドロクロリド、プロマイシン、プロマイシンヒドロクロリド、ピラゾファリン、リボプリン、ログレチマイド、サフムゴール、サフィンゴールヒドロクロライド、セムスチン、シムトラゼン、スパルフォセートナトリウム、スパルソマイシン、スピロゲルマニウムヒドロクロリド、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ストロンチウムクロリドSr 89、スロフェヌル、タリソマイシン、タキサン、タキソイド、テコガランナトリウム、テガファ、テロキサントロンヒドロクロリド、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポテカンヒドロクロリド、トレミフェンシトレート、トレストロンアセテート、トリシリビンフォスフェート、トリメトレキサート、トリメトレキサートグルクロネート、トリプトレリン、チュブロゾールヒドロクロリド、ウラシルムスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチンスルフェート、ビンクリスチンスルフェート、ビンデシン、ビンデシンスルフェート、ビネピジンスルフェート、ビンブリシネートスルフェート、ビンロイロシンスルフェート、ビノレルビンタートレート、ビンロシジンスルフェート、ビンゾリジンスルフェート、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾルビシンヒドロクロリドを挙げることができる。
【００５４】
他の抗腫瘍化合物の例としては、20‐epi‐1,25ジヒドロキシビタミンD3、5‐エチニルウラシル、アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ALL‐TK拮抗剤、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドックス、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アンルビシン、アトルサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォリド、アンギオジェネシス抑制剤、拮抗薬D、拮抗薬G、アンタレリックス、抗ドルサル化（dorsalizing）形態形成たんぱく‐１、抗アンドロゲン、前立腺癌腫、抗エストロゲン、抗新生物薬、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリン・グリシネート、アポプトシス遺伝子モジュレータ、アポプトシス調整剤、アプリン酸、ara-CDP‐DL‐PTBA、アルギニン・デアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン1、アキシナスタチン2、アキシナスタチン3、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バクカチンIII誘導体、バラノール、バチマスタット、BCR/ABL拮抗薬、ベンゾコリン、ベンゾイルスタウロスポリン、ベータ・ラクタム誘導体、ベータ・アレチン、ベータクラマイシンB、ベツリン酸、bFGF抑制剤、ビカルタミド、ビサントレン、ビサジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビスストラテンA、ビゼレシン、ブレフレート、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニン・スルフォキシミン、カルシポトリオール、カルフォスチンC、カムプトテシン誘導体、カナリポックスIL‐2、カペシタビン、カルボキシアミド‐アミノ‐トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、CaRest M3、CARN 700、軟骨誘導抑制剤、カルゼレシン、カゼインキナーゼ抑制剤(ICOS)、カスタノスパーミン、セクロピンB、セトロレリックス、クロリン、クロロキノキサリンスルホアミド、シカプロスト、シス‐ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンA、コリスマイシンＢ、コムブレタスタチンA4、コムブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシジン816、クリスナトール、クリプトフィシン8、クリプトフィシンA誘導体、クラシンA、シクロペンタントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビン・オクフォスフェート、細胞溶解因子、細胞成長抑制剤、ダクリキシマブ、デシタビン、デヒドロジデムニンB、デスロレリン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジキノン、ジデムニンB、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ‐5‐アザシチジン、ジヒドロタクソール9‐、ジオサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、ズオカナイシンSA、エブセレン、エコムスチン類似体、エドルフォシン、エドレコロマグ、エフロニチン、エレメン、エミテクール、エピルバイシン、エプリステリド、エストラムスチン・アナログ、エストロゲン作動薬、エストロゲン拮抗薬、エタニダゾール、エトポシドホスフェート、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチン、フマステリド、フラボピリドール、フレンゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、フルオロダウノルニシンヒドロクロリド、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウム・テキサフィリン、ガリウムトレート、ガロシタビン、ガニレリックス、ゲラチナーゼ抑制剤、ゲムシタビン、グルタチオン抑制剤、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレン・ビサセタミド、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激性ペプチド、インシュリン様成長因子‐1レセプター抑制剤、インターフェロン作動薬、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、イオドドクソルビシン、イポメアノール4‐、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンB、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドF、ラメラリン‐Nトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、レンチナンスルフェート、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球アルファインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプルロレリン、レバミソール、リアロゾール、線状ポリアミン類似体、親油性ジサッカリドペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド7、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソクサントロン、ロバスタチン、ロクソリビン、ルルトテカン、ルテチウム・テキサフィリン、リソフィリン、細胞溶解性ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンA、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン抑制剤、マトリックス・メタロプロテイナーゼ抑制剤、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、MIF抑制剤、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、不整合二重線RNA、ミトグラゾン、ミトラクトール、ミトマイシン類似体、ミトナフィド、ミトトキシンフィブロブラスト成長因子‐サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローン抗体、ヒト絨毛膜ゴナドトロフィン、モノホスホリ脂質A+ミオバクテリア細胞壁sk、モピダモール、多重薬剤抵抗ジニー抑制剤、多重腫瘍抑制剤1に基づく治療薬、ムスタード抗がん剤、ミカペロキシドB、ミコバクテリア細胞壁抽出液、ミリアポロン、N‐アセチルジナリン、N‐置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、酸化窒素モジュレータ、ニトロキシド抗酸化剤、ニトルリン、O6‐ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オラシン、オーラル・サイトキン・インジューサー、オルマプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルヒゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、ペントサンポリスルフェートナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルフォスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノ���イシン、フェニルアセテート、ホスファターゼ抑制剤、ピシバニル、ピロカルピンヒドロクロリド、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンA、プラセチンB、プラスミノーゲン・アクチベータ抑制剤、白金錯体、白金化合物、白金トリアミン錯体、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プロピル・ビス‐アクリドン、プロスタグランジンJ2、プロテアソーム抑制剤、たんぱくAに基づく免疫モジュレータ、たんぱくキナーゼC抑制剤、たんぱくキナーゼC抑制剤ミクロアルガル、たんぱくチロシン・フォスファターゼ抑制剤、プリン・ヌクレオシド・ホスホリラーゼ抑制剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビン・ポリオキシエチレン共役物、raf拮抗薬、ラルチトレキシド、ラモセトロン、rasファルネシルたんぱくトランスフェラーゼ抑制剤、ras抑制剤、ras‐GAP抑制剤、脱メチル化レテリプチン、レニウムRe186エチドロネート、リゾキシン、リボ酵素、RIIレチナミド、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメックス、ルビギノンB1、ルボキシル、サフィンゴール、サイントピン、SarCNU、サルコフィトールA、サルグラモスチム、Sdi 1 ミメチクス、セムスチン、セネセンス誘導抑制剤1、センス・オリゴニクレオチド、シグナル・トランスダクション抑制剤、シグナル・トランスダクション調整剤、単鎖抗原結合たんぱく、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウム・ボロカプテート、フェニル酢酸ナトリウム、ソルベロール、ソマトメジン結合たんぱく質、ソネルミン、スパルフォシン（sparfosic）酸、スピカマイシンD、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、幹細胞抑制剤、幹細胞分割抑制剤、スチピアミド、ストロメリシン抑制剤、スルフモシン、超活性血管作用腸内ペプチド拮抗薬、スラジスタ、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェン・メチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガラン・ナトリウム、テガファー、テルラピリリウム、テロメラーゼ抑制剤、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テラゾミン、タリブラスチン、タリドミド、チオコラリン、トロンボプロティン、擬似トロンボプロティン、チマルファシン、チモたんぱくレセプター作動薬、チモトリナン、チロイド刺激ホルモン、錫エチルエチオプルプルリン、チラパザミン、チタノセン・ジクロリド、トポテカン、トプセチン、トレミフェン、全能性幹細胞因子、トランスレーション抑制剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキサート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツルステリド、チロシンキナーゼ抑制剤、チルホスチン、UBC抑制剤、ウベニメックス、尿生殖シナス‐誘導成長抑制因子、ウロキナーゼレセプター拮抗薬、バプレオチド、バリオリンB、ベクターシステム、赤血球遺伝子治療剤、ベラレソール、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンクサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコルブ、ジノスタチン・スチマラマーなどを挙げることができる。
【００５５】
hCGの代わりに、他の生物学的活性水溶性たんぱく質およびペプチドを含有する処方を製造することも本発明の目的である。このようなたんぱく質は成長ホルモン又はソマトトロピン、例えばヒト成長ホルモン（HGH）、ウシ成長ホルモン（BGH又はBST）、ブタ成長ホルモン（PGH又はPST）、これらの類似体および誘導体、表皮成長因子(FGF)およびその類似体である。他の考えられるたんぱく質は、インターロイキン、インターロイキンレセプター、インターロイキンレセプター作動薬、ケモキンおよびインターフェロンである。例えば、インターフェロン・アルファ‐2a、インターフェロン・アルファ‐2b、インターフェロン・アルファ‐N1、インターフェロン・アルファ‐n3、インターフェロン・ベータ、インターフェロン・ベータ‐1 al、インターフェロン・ベータ‐1b、インターフェロン・ガンマ‐Ia、インターフェロン・ガンマ‐Ib、インターフェロン・オメガ、インターフェロン・タウ、インターロイキン‐1、インターロイキン‐1アルファ、インターロイキン‐1ベータ、インターロイキン‐10、インターロイキン‐11、インターロイキン‐12、インターロイキン‐15、インターロイキン‐2、インターロイキン‐3、インターロイキン‐4、インターロイキン‐5、インターロイキン‐7、インターロイキン‐8、MIP‐1アルファおよびベータ、RANTESなどを挙げることができる。更に、たんぱく質は血球成長刺激因子および前駆物質、赤血球生成促進因子(EPO)およびその類似物質から選択することができる。他の等しく好ましいたんぱく質は、パラチロイドホルモン(PTH)、セレノたんぱく質P、シスタチンBおよびその肝チオール・プロテアーゼ抑制剤類似物質、内毒素中和たんぱく質、リンパ球移動抑制因子(LIF)、マスト細胞成長因子(MGF)、巨大核細胞模擬因子(MGDF)、顆粒性白血球マクロファージ・コロニー模擬因子(GM‐CSF)、ゲノフィブレート、アルファ・カルシトニン、ベータ・カルシトニン、腫瘍壊死因子(TNF)、腫瘍侵入抑制因子、TGF‐ベータ型サイトカイン、HIVおよび他のレトロウイルスのトランスアクト調節たんぱく質(TAT) 、プロテアーゼ抑制剤、BPC157、脂肪減少ホルモン、これらのたんぱく質の類似体および変異体などである。更に考えられるものとしては、インシュリン、グルカゴン、ガストリン、アンギオテンシン、セクレチン、ラクトトロピックホルモン、チロトロピックホルモン、メラニン細胞刺激ホルモン、黄体形成ホルモン(LH)、小胞刺激ホルモン(FSH)、甲状腺刺激ホルモン(TSH)、トロンボポイエチン（TPO）、黄体形成ホルモン刺激ホルモン、ヒト更年期障害ゴナドトロピン、バソプレシン、オキシトシン、プロチレリン、コルチコトロピン、SOD,ウロキナーゼおよびリソチームなどである。その他のサイトカインも公知であり、これらを本発明の組成物に等しく好適に使用することができる。上述の生物学的活性たんぱく質に限定されるものではなく、他のポリペプチド、例えばG‐CSF、M-CSF、LIF、インヒビンA、インヒビンB、アクチビンA、アクチビンB、NAP-1、MCP-1、MIP-1アルファ、MIP-1ベータ、MIP-2、SISベータ、SISデルタ、SISエプシロン、PF4、PBP、ガンマーIP-10、MGSA、aFGF、ｂFGF、KGF、PDGF-A、PDGF-B、PD-ECGF、INS、IGF-I、IGF-II、NGF-ベータ、GRO/MGSA、PF4、PBP/CTAP/ベータTG、IP-10、KC、9E3、MCAF、ACT-2/PAT 744/G26、LD-78/PAT 464、RANTES、G26、I309、JE、TCA3���ICAM-1、ICAM-2、LFA-1、LFA-3、CD72、CTAPIII、ENA-78、GRO、I-309、PF-4、LD-78などを挙げることができる。
【００５６】
上記たんぱく質に限定されるものでなく、下記表1に示すような遺伝子によりコード化されたたんぱく質も本発明の組成物において使用することができる。
表１
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実施例１
【００５７】
本発明の組成物は当業者に公知の任意の方法により製造することができる。種々の用途に要求されるＨＬＢ値は、油中水乳化剤（例えば、アルラセル＋スクアレン）の場合は３−６；湿潤剤の場合は７−９；水中油乳化剤の場合は８−１３；洗浄剤の場合は１３−１５；可溶化剤（例えば、アルミニウム又はマグネシウム・ステアレート）の場合は１５−１８である。これらの値は、特定の目的のための乳化剤の選択における目安として文献に広く引用されている。これらは非イオン性乳化剤との使用のために設計される。アナログシステムがアニオン又はカチオン乳化剤のために開発されているが、これらは非イオン性乳化剤についてのものと比較して有用性が小さい。ＨＬＢ値が多くの非イオン性乳化剤について文献に記載されている。この特別の使用において、油相が約0.5ないし55％、乳化剤が約0.1ないし15％、非イオン性界面活性剤が約0.05ないし5％、治療薬が0.00001ないし10％、更に水性連続相を有する水中油エマルジョンが最も適当である。この組成物における乳化剤は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンからなる群から選択されるホスホリピド化合物又はホスホリピドの混合物である。乳化剤の実施例は、Arlacel Aである。界面活性剤は、脂肪アルコール、脂肪酸のポリエチレングリコールエステル、ポリエトキシル化脂肪酸エステル、ポリエトキシル化脂肪アルコールエーテル、1又はそれ以上の水酸基を有する有機化合物のアルキレンオキシド縮合物およびポリエトキシル化アルキルフェニルエーテルからなる群から通常、選択される。界面活性剤は天然の生物学的に相容性を有する界面活性剤、例えばレシチン又は薬理学的に許容し得る人工界面活性剤、例えばTWEEN-80であってもよい。レシチンに関係する天然成分の適当なものとしては、例えば、EPICURON 120（Lucas Meyer,ドイツ国）（これは約70％のホスファチジルコリンと、12％のホスファチジルエタノールアミンと、約15％の他の種類のホスホリピドとの混合物）；OVOTHIN 160（Lucas Meyer,ドイツ国）（これは約60％のホスファチジルコリンと、18％のホスファチジルエタノールアミンと、約12％の他の種類のホスホリピドとの混合物）；精製ホスホリピド混合物-LIPOID E-75又はLIPOID E-80（Lipoid,ドイツ国）（これは約80％のホスファチジルコリンと、8％のホスファチジルエタノールアミンと、約3.6％の非極性リピドと、約２％のスフィンゴミエリンとの混合物）を挙げることができる。精製卵黄ホスホリピド、大豆油ホスホリピド又は他の精製ホスホリピド混合物もこの成分として有用である。この列挙したものは代表例であり、これに限定することを意図したものではない。なぜならば、当業者に公知の他の種類のホスホリピドも使用することができるからである。界面活性剤の他の例として、ひまし油などの原料からの脂肪酸のポリエチレングリコールエステル（EMULFOR）；ポリエトキシル化脂肪酸、例えばステアリン酸（SIMULSOL M-53）；NONIDET；ポリエトキシル化イソオクチルフェノール/ホルムアルデヒドポリマー（TYLOXAPOL）；ポリオキシエチレン脂肪アルコールエーテル（BRIJ）；ポリオキシエチレン��ノンフェニルエーテル（TRITON N）；ポリオキシルエチレン・イソオクチルフェニルエーテル（TRITON X）などを挙げることができる。他の例において、エマルジョンを1又はそれ以上の共界面活性剤を実質的に含まずに形成、安定化させることができる。この場合の共界面活性剤の例としては、非ハロゲン化脂肪族C3-C6アルコール、遊離脂肪酸、モノ‐又はジ‐グリセリド、ポリグリセロール脂肪酸エステル、又はリソホスファチジルコリンを挙げることができる。しかし、これらとは別の組成物も等しく好適に使用可能であり、当業者にとって容易に製造することができよう。例えば、この組成物には、5.0％のPLURONIC、10％のスクアレン、0．4％のTween-80、qsホスフェート緩衝塩液（pH＝7.4）を含むものであってもよい。これらの成分は試験管に添加され、ミルキーエマルジョンが得られるまで渦流混合される。この組成物は投与直前に製造され、４℃で冷凍される。組成物２は例えば、5.0％のTETRONIC 1501、10％のスクアラン、0．4％のTween-80、qsホスフェート緩衝塩液（pH＝7.4）を含むものである。これら組成物に対して、固体N-アセチルムラミル-L-トレオニル-D-イソグルタミン（Thr-MDP）が500ug/mLの濃度まで添加され、“濃縮物”が得られる。この濃縮物はついで、抗原の2x濃度溶液（塩水中、hCG；1mg／mL）と混合され、本発明の処方が得られる。このhCGは好ましくは、この組成物の約0.00001ないし10重量％、好ましくは約0.0001ないし5重量％、最も好ましくは約0.001ないし1重量％の範囲で含有される。更に、ｐHはhCGの安定性に適した範囲とすべきである。この組成物の連続相は水性であり、これに更に、塩、糖、抗酸化剤、保存剤、殺菌剤、緩衝塩液、浸透圧剤、凍結防止剤、他の薬理学的に有用な添加物又は溶質を含有させてもよい。典型的な保存剤の例としては、チメロサール、クロルブタノールおよびメチル、エチル、プロピル又はブチルパラベンなどを挙げることができる。典型的な浸透圧調整剤の例としては、グリセロールおよびマンニトールが含まれ、特にグリセロールが好ましい。好ましい油相抗酸化剤の例としては、アルファ-トコフェロール又はアルファ-トコフェロール・スクシネートを挙げることができる。上記水相にはポリアミンカルボン酸の抗酸化剤、例えば、エチレンジアミノテトラ酢酸又はその薬理学的許容塩などを含んでいてもよい。
実施例２
【００５８】
この組成物は2つの部分からなる。部分Iは、N-アセチルムラミル-L-トレオニル-D-イソグルタミン（Thr-MDP）、すなわち、ミコバクテリウム細胞壁成分の誘導体である。部分IIは、最終濃度が5％のスクアラン、1．25％のプルロン酸および0.2％のTWEEN 80（ビヒクル）のものを含むホスフェート緩衝塩液からなるものである。実際的目的のため、hCGの所望量をミクロ流動化ビヒクル（部分II）と混合させて均質エマルジョンを得る。ついで、MDPを添加し、簡単に混合する。この混合物中のMDPの濃度を調節し、臨床応答を得るための最適な濃度を決定する。佐剤対照として、生産者のマニュアル（Piece Chemicla, Rockford, I11.）に従った明礬又は完全フロイントアジュバント（CFA）と混合した可溶性hCGをマウスに注射する。
【００５９】
当業者は、このようなモデルマウスは、均等の経験および治療がヒト、家畜又は農業用動物においても同様の臨床的応答を生じさせることを示すということを認識されるであろう。所望の臨床結果を生じさせるのに有効な書法およびhCGの量は、過大な実験を要することなく、当業者に周知の常套の手法により経験的に決定し得るであろう。このような混合物での治療による副作用を最小にするため、ヒト、家畜又は農業用動物にとって効果的な応答を得、それにより所望の臨床的結果を得るのに必要な最小投与量を決定することも当業者にとって可能であろう。通常の使用の場合、この混合物は標準的手法の任意の1つにより注入することができよう。しかし、特に好ましい方法は、皮下注射又は筋肉内注射を、このエマルジョンが数日又は数週間、安定に留まるような部位に施すことである。
実施例３
【００６０】
hCGの水性懸濁液はホモジナイザーで攪拌しながら、室温で油相中に添加する。この水相の添加は、油相5−6部に対し、hCGの水性懸濁液が3−5の割合に達したときに停止する。攪拌は水相の小滴サイズが約0.05−0.5ミクロンになるまで継続する。この油相は、93.6％のMarcol 52(白色パラフィンEsso oil)と；6.0％のアルラセルA又はアルラセル80又はSpan 80(マンニド・モノオレート)；0.4％のTween 80(ポリオキシエチレン20ソルビタン・モノオレート)を含有する。この油相の化合物は別途、オートクレーブ中で110℃まで加熱したり、又は混合物として滅菌ろ過させてもよい。このエマルジョンの安定性は、（1）乳化後に小滴を直接、ピペットで採取し、水面に落し、その小滴が広がらずにそのままに維持されるか否かを知ることにより、更に、（2）37℃で4週間貯蔵し、それでも水相が形成されないということを知ることにより判定することができる。このようにして製造されたエマルジョンの最終濃度は、薬10％のhCGを含み、この調剤は患者に対して筋肉内又は皮下を介して0.5ｍLの投与量で使用される。
実施例４
【００６１】
上記実施例に限定されることなく、ダイマーhCGを含む本発明の組成物は、安定性を更に向上させるため、2種類の乳化剤を同時に含有するものでもよい。この組成物において、第1の乳化剤は、ポリオキシプロピレン・ポリオキシエチレン・ブロックコポリマー、グリセロール・モノオレート、グリセロール・ジオレート、ソルビタン・セスキオレート、Brij 93ポリオキシエチレン・アルコール、ソルビタン・モノオレートおよびこれらの混合物からなる群から選択される。第２の乳化剤は、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、プルロン酸F68エチレンオキシド、卵レシチンおよびこれらの混合物からなる群から選択される。この組成物における油分は、トリカプロイン、トリカプリリン、トリパルミチンおよびこれらの混合物からなる群から選択されるトリグリセリドである。他の適当な油相の例には、植物油および動物油が含まれる。適当な植物油の例としては、オリーブ油、ベニバナ油、ゴマ油、大豆油などである。動物油の例としては、グリセロールエステルを含有するものなどである。好ましい鉱油の例としては、No.40ホワイトオイル、カーネーション・ライトオイルおよびクレアロール・ライトオイルなどである。これらのオイルの混合物も等しく使用することができる。
【００６２】
鉱油を使用する第1次エマルジョンの場合、約1ないし50容量％、好ましくは約2ないし40容量％の水性hCG溶液；約8ないし58容量％、好ましくは約14ないし25容量％の鉱油；約2ないし30容量％、好ましくは約5ないし15容量％の第1の乳化剤が混合される。水性hCG溶液は好ましくは、例えば磁気攪拌機を使用した激しい攪拌下で、油相に徐々に添加され、この攪拌が約15分ないし60分間、好ましくは約25分ないし35分間、継続される。この混合された第1次エマルジョンに対し、ついで、マイクロ流動化装置を用いて高剪断乳化が行われ、この場合、剪断速度は約100，000ないし5,000,000/秒、好ましくは約500，000ないし1,000,000/秒、圧力降下は約1,000ないし10,000psi、好ましくは約1,000ないし3,000psi、最も好ましくは約1,800ないし2,000psiとする。このマイクロ流動化装置についてのより完全な情報は米国特許、No.4,533,254に記述されている。このマイクロ流動化装置は短時間（1秒足らず）の高い剪断速度を与えることができ、hCGなどのたんぱく質の変質を生じさせない。この第1次エマルジョンは、5ミクロン親水性ポリビニリデン・ジフルオリド・フィルター（Duropore,Millipore社）を用いてろ過される。乳化工程の前に、hCG溶液に対し、アルブミンを約1ないし5g％、好ましくは約2ないし3g％の割合で添加し、多重エマルジョンサイズ分布を更に安定化させるようにしてもよい。水性hCGを鉱油又は固定油に分散させた第1エマルジョンは本発明の液状多重エマルジョンの製造に適している。これによって、第1次エマルジョン小滴の径を5ミクロン未満、好ましくは3ミクロン未満にさせることができるからである。
実施例５
【００６３】
0.25％のコポリマーP123を有する50％v/vの塩類の外側水相を含む水中油中水（水/油/水）多重エマルジョンが作られる。残りの50％v/vは、72％の塩水と、18％のSpan 80と、エマルジョン0.5mL当り32mgのコポリマーL310および0.5mgのTNP-HEAとからなる油中水相である。このエマルジョンはエマルジョン0.5mL当り1mgのhCGを含有する。このエマルジョンの顕微鏡的外観は油中水型エマルジョンの粒径が1.0ないし20ミクロンのものである。子の組成物のための他の適当な油中水型乳化剤は、SF 1328、アルラセルP135、DC 3225C、DC 5200、Abil EM-90およびAbil WE-09である。幾つかの他の油中水型乳化剤を上記の成分の代わりに使用し得ることは当業者にとって明らかであろう。
実施例６
【００６４】
hCGを含むリポソームが当業者に公知の標準的手法により作られる（例えば、米国特許No.6,110,492）。以下のような成分を使用することができる。すなわち、DLPCジラウロイル・ホスファチジル・コリン；DMPCジミリストイル・ホスファチジル・コリン；DPPCジパリトイル・ホスファチジル・コリン；DSPCジステアロイル・ホスファチジル・コリン；DOPCジオレイル・ホスファチジル・コリン；DLｎPCジリノレオイル・ホスファチジル・コリン；DMPGジミリストイル・ホスファチジル・グリセロール；CHOLコレステロール；LAリピドAで或る。典型的製造において、多層リポソームがDMPC：DMPG：CHOL：LA(モル比＝９：１：7.5：0.011)から作られる。リピド（脂質）Aは佐剤として含有させる。この脂質混合物は回転蒸発される。つまり、梨型フラスコ中のクロロホルム溶液から約４０℃、真空中で蒸発されて乾燥した薄膜に形成される。有機溶媒を完全に除去させるため、乾燥器内でフラスコを非常に低い真空下（約0.05mmHg）、室温で一晩乾燥させる。乾燥後、脂質を脱イオン化・滅菌・無発熱原水中にて渦攪拌させながら注意深く膨潤させる。得られた懸濁液を-55℃で凍結させ、Virtis Unitop 800SL Freeze Mobileを用い、-20℃で一晩、ついで翌日、0−10℃で凍結乾燥する。この凍結乾燥された脂質を、カプセル化されるべき物質、すなわちhCGの存在下で再構築させ、この物質を含む多層リポソームを得る。適当な再構築緩衝液はホスフェート緩衝塩液（PBS）又はトリス-グリシン/NaClである。この再構築緩衝液中のリポソーム・ホスホリピド濃度は10−200mMである。カプセル化されなかったhCGは除去される。つまり、リポソームを、0.15M NaClを用い、27000xgで10分間、10℃で3回洗浄することによりhCGが除去される。得られたリポソームは0.15M NaCl中、又は適当な等張性緩衝液中に懸濁させ、最終ホスホリピド濃度が10−200mMのものを得る。別の方法として、この洗浄工程を省略し、調剤中にカプセル化されないhCGおよびカプセル化されたhCGの双方を残すようにしてもよい。
実施例７
【００６５】
この実施例はhCGをMDPに結合させるものである。この手法は第１の反応をチオール化合物で冷却する必要がある。この反応は2-[N-モルホリノ]エタンスルホン酸（MES）（pH：4.5−5.0）中で行われる。凍結乾燥され、MES（0.5mL）（pH：4.5−5.0）中に再懸濁されたMDP(10mg)と、MES（pH：4.5−5.0）中に溶解された0.5mLのEDC(0.5mg又は約2mM)とが一緒にされ、室温で15分間、反応に供せられる。2-メルカプトエタノール（20mMの最終濃度）が添加されEDCが冷却され、遠心分離により分離される。この反応混合物が1回、MESで洗浄され、ついで0.5mLのMES（pH：4.5−5.0）中に再懸濁される。MESに溶解させたhCGが活性化MDPに対し、約2：1のモル比で添加される。この反応混合物のｐHを、MES（0.5M,pH=8.5）の添加により15分に亘り徐々に8.5まで増加させ、室温で2時間反応させる。MDPに添加されたhCGの濃度は、MDPの末端カルボキシル基の定量分析から計算され、mgMDP当りのモルとして表される。この反応はヒドロキシアミンを10mMの最終濃度まで添加することにより冷却される。この冷却方法は、未反応のMDP活性化部位を加水分解させ、当初のカルボキシルを再生させる。他の冷却の手段には、20-50mMのトリス、リシン、グリシン又はエタノールアミンの添加が含まれる。その他の生物学的応答改質剤（例えば、IL2）は当業者にとって周知であり、hCGに加えて、この目的のために使用することができる。分別は遠心分離,洗浄工程,選択された緩衝液への再懸濁により行うことができる。
実施例８
【００６６】
本発明の組成物は、クリームとして使用することができ、これを局所的に適用することにより皮膚中に浸透させることができる。この局所用組成物の1例として、2％のグリセロール・ソルビタン・オレオステアレート（アルラセル481）；6％のポリエトキシ化脂肪酸（アルラセル989）；15％のデシルオレート（セチオールC）；8％の枝分かれ鎖パラフィン（アルラモールHD）；1％のマイクロワックス；1％のMDP;4％のグリセリン；0.7％のマグネシウム・スルフェート・7水和物；0.2%のソルビン酸ナトリウム塩；1％のhCG；0.1％のジアンモニウム・ヒドロゲノシトレート；クエン酸（pHを4−5に調節するため）；100％となる量の脱ミネラル水からなるものである。
実施例９
【００６７】
18歳を超えた男性および妊娠していない女性を、ウエスターン・ブロット法(Western Blot)に記載されているHIV感染の血清診断に基づき、AIDS確定基準、臨床的徴候を有する者、および検査前30日以内でCD4 Tリンパ球数値が＜300細胞/ULの者を選択する。標準的臨床および実験パラメータを用いて薬効を評価する。この臨床パラメータには、日和見感染性の変化、体重の変化、胃腸機能の変化（便通の規則性、頻度）、エネルギーレベルの変化、食欲、体力および忍耐力の変化、および生活の質の総体的変化が含まれる。実験パラメータには、CD4およびCD8リンパ球数、選択されたヘマトロジー、血液化学および尿検査、更に可能な場合、PCRによるウイルス性RNAの測定によるウイルス負荷の変化が含まれる。
【００６８】
本発明の趣旨に従ってhCG処方の使用により、HIV陽性患者が臨床的に改善され、日和見感染性の減少、体重の増加、胃腸機能の変化（下痢の軽減を含む）、エネルギーレベルの増加、食欲増大、愛欲の増大、体力および忍耐力の改善、生活の質の総体的改善が認められた。実験パラメータにおいては、CD4およびCD8リンパ球数の増加、ヘマトロジー、血液化学および尿検査の数値の改善、PCRによるウイルス性RNAの測定によるウイルス負荷の減少、TCIDにより測定したときの伝染力の減少など、多くの改善が認められた。hCG処方の使用により、若干の副作用が見られたが、それは軽い発熱、悪寒、頭痛、筋肉痛に限定されたものである。
実施例１０
【００６９】
C3H経歴（H2k/k,Harlan Sprague Dawley）のメスのマウスをこれら検査に使用する。これら動物は“Guide for the Care and Use of Laboratory Animals（実験動物の取り扱い注意ガイド）"(DHHS,NIH)に従って維持され、食事および水が無制限に与えられる。腫瘍細胞ラインHOPE2がin vitroでの連続的通過により維持される。腫瘍は、150,000のin vitro通過細胞の皮下注射により先天性C3Hマウスに開始される。腫瘍は2週間おきに2垂直方向で測定される。各治療グループは、治療を受けていない対照グループと比較される。治療はHOPE2細胞の接種後10日から、すなわち腫瘍の多くが触知可能（略50−75mm３）となった時点から開始される。治療は、MDP混合物又はAlumアジュバントに可溶性hCGたんぱく質を添加したものをマウスに注射すること（合計0.2mLを皮下注射）により開始される。接種直前に、hCGをHanksバランスド塩溶液（HBSS）中のMDPと60秒間混合し、各マウスが、ヒトに相当するところの、2,000又は5,000IUのhCGたんぱく質を0.2mL、投与されるようにする。生産者の指示に従ってAlum(Pierce Chemical社)をhCGと混合し、各マウスが、ヒトに等価の、5,000IUのhCGを0.2mL、投与されるようにする。この実施例において、腫瘍細胞接種後、41日目において、可溶性hCGの単一の注射を受けたマウス（夫々2,000又は5,000IU）の内の5/8および4/8が多少の腫瘍を示すに過ぎなかった。対照的に、Alumに添加したhCGを用いて注射したマウスの全て（8/8）が著しく成長しつつある腫瘍を示した。更に、腫瘍成長の可なりの抑制がMDPにhCGを添加したものを用いて注射したグループにおいてのみ認められ、これは対照（治療しない）グループ又はAlumで治療したグループとは、その差が全く対照的である。腫瘍成長の抑制又は腫瘍緩解向上は、Alumに添加したhCGを用いて単一注射したマウスにおいては認められなかった。
【００７０】
従って、本発明は、ダイマーhCGおよびムラミルペプチドを含む薬剤組成物によって特徴づけられる。その他、本発明は、（a）リポソームと関連させたダイマーhCGの治療的有効量と；（ｂ）該リポソームを囲む油を含む水中油エマルジョンとを含有し；該エマルジョンが、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量を以って含有されている薬剤組成物によって特徴づけられる。更に、本発明は、ＨＩＶ感染者を治療するための方法であって、該患者に有効量のhCGを投与することからなり、該hCGが水中油型エマルジョンの形で投与され、該エマルジョンを、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量で含む方法を提供する。更に、本発明は、がん患者を治療するための方法であって、該患者に有効量のhCGを投与することからなり、該hCGが水中油型エマルジョンの形で投与され、該エマルジョンを、該エマルジョンが存在しないときのhCGおよびリポソームとの関連で治療応答を増大させるのに十分な量で含む方法を提供する。本発明は更に、連続的水相と非連続的油相とを有すると共に、ダイマーhCGを少なくとも0.01重量％含む水中油型エマルジョンを含有する薬剤組成物を提供する。本発明は更に、薬剤処方を製造するための方法であって、hCGを含む水性懸濁液、少なくとも1つの油性成分および十分な量の少なくとも1種の乳化剤を混合し、水中油型エマルジョンとして該処方を得る方法を提供する。本発明は更に、水中油型エマルジョンと、少なくとも１種の天然又は組換え水溶性生物学的活性たんぱく質と、任意の少なくとも１種のムラミルペプチドと含む薬剤組成物を提供する。本発明は更に、薬剤組成物の即座の製造のためのキットであって、（１）エマルジョンを収容する第1の容器であって、該エマルジョンがスクアラン又はスクアレンと、アルラセルと、水性溶液とを有してなるものと；（2）水性溶液に溶かした、又は粉体としての治療効果量のダイマーhCGを収容した第2の容器とを具備してなり；各容器中の成分の濃度が、双方の容器中の成分を組み合わせたときに、１ないし３０％のアルラセル、１ないし３０％のスクアラン又はスクアレン、０．０００１ないし３０％のムラミルペプチド、０．０１ないし９９％のhCGの処方を生じさせるものであるものを提供する。
【００７１】
以上、本発明を現在、最も実際的で、好ましい実施例と思われるものとの関連で詳細に説明したが、ここに記載した原理および概念から逸脱することなく、多く変形し得ることは当業者に明らかであろう。従って、本発明の正しい範囲は付記した請求の範囲の最も広い解釈により判定されるべきであり、上述のような変形例を全て含むと共に、明細書に記載した均等の関係のあるものも全て包含するものと解されるべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004529147.tif 000104
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