(57)【要約】本発明は新規な、向精神作用のないカンナビノール、およびこれらの新規化合物からなる医薬組成物であり、神経毒性、免疫または炎症障害を防止するために活性成分として立体特異的な（＋）エナンチオマー、すなわち（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有するΔ６テトラヒドロカンナビノール型の化合物からなる医薬組成物を提供する。この組成物は、中枢神経系の急性傷害、たとえば機械的外傷、心停止もしくは卒中に際して起こる血液供給の減弱もしくは低下による神経毒性の緩和または防止にとくに有効な医薬組成物に関する。この組成物はまたある種の炎症性障害、神経細胞の喪失を特徴とする慢性的変性疾患、および神経学的疼痛を含む慢性的疼痛の処置にも有効である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有し、本質的に（３Ｒ，４Ｒ）エナンチオマーを含まない一般式（Ｉ）の化合物、
2004501145.tif 000040
［式中、Ａ−−−−Ｂは任意の１（２）または６（１）二重結合を表し、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状、飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ、
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和もしくは不飽和環状残基、芳香族もしくは異項環残基
から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ５アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）を任意に含有するＣ１−５アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）である、
ただしＲ１は、不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］。
【請求項２】
Ｒ１は０〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなる１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有する飽和または不飽和の環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、各環内の上記ヘテロ原子はそれぞれ独立にＮ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、さらに低級アルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、−ＳＲ’’’， −ＮＨＲ’’’， −Ｎ（Ｒ’’’）２， −ＯＲ’’’， −ＣＯＲ’’’， −Ｃ（Ｏ）ＯＲ’’’，またはＮＨ−ＣＯＲ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）から構成される群より選択される少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい「請求項１」記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群より選択される異項環残基であり、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される置換基で置換されていてもよい「請求項１」記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１はイミダゾリルである「請求項１」記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１はピラゾリルである「請求項１」記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリニルである「請求項１」記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項１」記載の化合物。
【請求項８】
Ａ−−−−Ｂは６（１）二重結合であり、Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項１」記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２は１，１−ジメチルヘプチルまたは１，２−ジメチルヘプチルである「請求項９」記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１はイミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、テトラヒドロピリジン、ピラゾリン、オキサゾリン、ピロリジン、イミダゾリン、２−チオ−イミダゾール、２−メチルチオ−イミダゾリン、４−メチル−２−イミダゾリン、４，４−ジメチル−２−イミダゾリン、メチルスルフィド、メチルスルホキシド、アセトアミド、ベンズアミド、シアノ、１，２，４−トリアゾール、１，３，４−トリアゾール、１，２，３，４−テトラゾール、１，２，３，５−テトラゾール、チオフェン、フェニル、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、グリセロール、ピペラジン、ピペリジン、４−メチルピペリジンおよびテトラヒドロピランからなる群より選択され、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される置換基で置換されている「請求項９」記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１はイミダゾールである「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１はピラゾールである「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリンである「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１５】
Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１６】
Ａ−−−−Ｂは存在しない「請求項１０」記載の化合物。
【請求項１７】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−ピペリジノピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−メチルピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランからなる群より選択される「請求項１」記載の化合物。
【請求項１８】
活性成分として、（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有し、本質的に（３Ｒ，４Ｒ）エナンチオマーを含まない一般式（Ｉ）：
2004501145.tif 000041
［式中、Ａ−−−−Ｂは任意の１（２）または６（１）二重結合を表し、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状の飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和もしくは不飽和環状残基、芳香族もしくは異項環残基
から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ５アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）を任意に含有するＣ１−５アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）である、
ただしＲ１は、不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１９】
Ｒ１は各環が０〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなる１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有する飽和または不飽和の環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、各環内の上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、さらに低級アルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、−ＳＲ’’’， −ＮＨＲ’’’， −Ｎ（Ｒ’’’）２， −ＯＲ’’’， −ＣＯＲ’’’， −Ｃ（Ｏ）ＯＲ’’’またはＮＨ−ＣＯＲ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）から構成される群より選択される少なくとも１個の置換基で置換されていてもよい「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２０】
Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群より選択される異項環残基であり、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシ、またはニトロからなる群より選択される置換基で置換されていてもよい「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２１】
Ｒ１はイミダゾリルである「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２２】
Ｒ１はピラゾリルである「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２３】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリニルである「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２４】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２５】
Ａ−−−−Ｂは６（１）二重結合であり、Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項１８」記載の組成物。
【請求項２６】
Ｒ２は１，１−ジメチルヘプチルまたは１，２−ジメチルヘプチルである「請求項２５」記載の組成物。
【請求項２７】
Ｒ１はイミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、テトラヒドロピリジン、ピラゾリン、オキサゾリン、ピロリジン、イミダゾリン、２−チオ−イミダゾール、２−メチルチオ−イミダゾリン、４−メチル−２−イミダゾリン、４，４−ジメチル−２−イミダゾリン、メチルスルフィド、メチルスルホキシド、アセトアミド、ベンズアミド、シアノ、１，２，４−トリアゾール、１，３，４−トリアゾール、１，２，３，４−テトラゾール、１，２，３，５−テトラゾール、チオフェン、フェニル、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、グリセロール、ピペラジン、ピペリジン、４−メチルピペリジンおよびテトラヒドロピランからなる群より選択され、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシ、またはニトロからなる群より選択される置換基で置換されている「請求項２６」記載の組成物。
【請求項２８】
Ｒ１はイミダゾールである「請求項２７」記載の組成物。
【請求項２９】
Ｒ１はピラゾールである「請求項２７」記載の組成物。
【請求項３０】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリンである「請求項２７」記載の組成物。
【請求項３１】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項２７」記載の組成物。
【請求項３２】
Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項２７」記載の組成物。
【請求項３３】
Ａ−−−−Ｂは存在しない「請求項３２」記載の組成物。
【請求項３４】
一般式（Ｉ）の化合物が（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−ピペリジノピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−メチルピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランからなる群より選択される「請求項１８」記載の組成物。
【請求項３５】
担体または希釈剤は医薬的に許容される共溶媒、天然もしくは合成のイオン性もしくは非イオン性界面活性剤により調製されたミセル溶液、またはこのような共溶媒およびミセル溶液の混合物からなる水性共溶媒溶液である「請求項１８」記載の組成物。
【請求項３６】
担体はエタノール、界面活性剤、および水の溶液からなる「請求項３５」記載の組成物。
【請求項３７】
担体はトリグリセライド、レシチン、グリセロール、乳化剤、抗酸化剤、および水からなる乳化液である「請求項３５」記載の組成物。
【請求項３８】
炎症性疾患または障害、虚血による損傷、中枢神経系に対する損傷および神経変性障害、疼痛、自己免疫疾患の処置または防止方法において、（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有し、本質的に（３Ｒ，４Ｒ）エナンチオマーを含まない式（Ｉ）：
2004501145.tif 000042
［式中、Ａ−−−−Ｂは任意の１（２）または６（１）二重結合を表し、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状、飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和もしくは不飽和環状残基、芳香族もしくは異項環残基
から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ５アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）を任意に含有するＣ１−５アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）である。
ただしＲ１は、不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］の化合物からなる医薬組成物の治療有効量を患者に投与することからなる方法。
【請求項３９】
Ｒ１は各環が０〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなる１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有する飽和または不飽和の環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、各環内の上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、さらに低級アルキル、ハロゲン、ニトロ、シアノ、−ＳＲ’’’， −ＮＨＲ’’’， −Ｎ（Ｒ’’’）２， −ＯＲ’’’， −ＣＯＲ’’’， −Ｃ（Ｏ）ＯＲ’’’またはＮＨ−ＣＯＲ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−５アルキルである）から構成される群より選択される少なくとも１個の置換基で置換されている「請求項３８」記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群より選択される異項環残基であり、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される置換基で置換されている「請求項３８」記載の方法。
【請求項４１】
Ｒ１はイミダゾリルである「請求項３８」記載の方法。
【請求項４２】
Ｒ１はピラゾリルである「請求項３８」記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリニルである「請求項３８」記載の方法。
【請求項４４】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項３８」記載の方法。
【請求項４５】
Ａ−−−−Ｂは６（１）二重結合であり、Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項３８」記載の方法。
【請求項４６】
Ｒ２は１，１−ジメチルヘプチルまたは１，２−ジメチルヘプチルである「請求項４５」記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ１はイミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、テトラヒドロピリジン、ピラゾリン、オキサゾリン、ピロリジン、イミダゾリン、２−チオ−イミダゾール、２−メチルチオ−イミダゾリン、４−メチル−２−イミダゾリン、４，４−ジメチル−２−イミダゾリン、メチルスルフィド、メチルスルホキシド、アセトアミド、ベンズアミド、シアノ、１，２，４−トリアゾール、１，３，４−トリアゾール、１，２，３，４−テトラゾール、１，２，３，５−テトラゾール、チオフェン、フェニル、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、グリセロール、ピペラジン、ピペリジン、４−メチルピペリジンおよびテトラヒドロピランからなる群より選択され、異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシ、またはニトロからなる群より選択される置換基で置換されている「請求項４６」記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ１はイミダゾールである「請求項４７」記載の方法。
【請求項４９】
Ｒ１はピラゾールである「請求項４７」記載の方法。
【請求項５０】
Ｒ１は２−メチルチオ−２−イミダゾリンである「請求項４７」記載の方法。
【請求項５１】
Ｒ１は４−メチルピペリジンである「請求項４７」記載の方法。
【請求項５２】
Ｇは−ＯＨまたは低級アシロキシである「請求項４７」記載の方法。
【請求項５３】
Ａ−−−−Ｂは存在しない「請求項５２」記載の方法。
【請求項５４】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラム；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（１Ｈ−イミダゾール２−イルスルファニルメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−ピペリジノピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン；（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−メチルピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランとして指示されたリストより選択される「請求項３８」記載の方法。
【請求項５５】
興奮性アミノ酸によって誘導される神経毒性に対する保護のために上記組成物を患者に投与することからなる「請求項３８」記載の方法。
【請求項５６】
浮腫による神経損傷、脳の虚血による神経損傷、頭部外傷による神経損傷、中枢神経系の中毒、心停止、卒中、眼性神経障害または脊髄損傷に伴う症状を発現している患者に上記組成物を投与することからなる「請求項３８」記載の方法。
【請求項５７】
てんかん、ハンチントン病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症またはアルツハイマー病に伴う症状を発現している患者に上記組成物を投与することからなる「請求項３８」記載の方法。
【請求項５８】
患者における慢性的疼痛および神経障害性疼痛を含む疼痛、または炎症を遮断または防止する方法において、上記患者に「請求項１８」記載の医薬組成物の治療有効量を投与することからなる方法。
【請求項５９】
上記化合物の１日投与量は０．０１〜２５ ｍｇ／ｋｇである「請求項３８または５８」記載の方法。
【請求項６０】
神経学的疾患、中枢神経系に対する外傷性損傷、中枢神経系に対する虚血性損傷、神経系の神経変性疾患、中枢神経系の炎症性疾患を処置するための神経保護医薬の調製における「請求項１〜１７」のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項６１】
多発性硬化症、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、グレーヴズ病、橋本甲状腺炎を含む炎症性疾患および／または自己免疫疾患、炎症性腸疾患を処置または防止するための抗炎症性または鎮痛性医薬の調製における「請求項１〜１７」のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項６２】
心筋梗塞、アテローム、不安定性狭心症、再狭窄、または心脈管系に対する虚血性損傷を処置、緩和または防止するための医薬の調製における「請求項１〜１７」のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項６３】
肺臓、肝臓もしくは腎臓虚血または慢性関節リウマチもしくは敗血症ショックのような疾患に関連する肺臓、肝臓、腎臓または関節を含む生体に対する虚血性および／または炎症性損傷を処置または緩和するための医薬の調製における「請求項１〜１７」のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項６４】
緑内障、網膜変性または嘔吐の処置または防止のための医薬の調製における「請求項１〜１７」のいずれかに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、向精神作用のないカンナビノイドのファミリー、ならびにそれらを含有し、神経毒性および炎症の防止および緩和に有用な医薬組成物に関する。上記医薬組成物は、それらの活性成分として以下に定義される一般式（Ｉ）：
2004501145.tif 000002
のΔ６−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）型化合物の（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有する立体特異的な（＋）エナンチオマーからなる。
【０００２】
（背景技術）
マリハナ（Ｃａｎｎａｂｉｓ ｓａｔｉｖａ）の活性成分としてのテトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）は医化学者に多くのカンナビノイド類似体を開発させるきっかけとなった（Ｂａｒｔｈ， Ｅｘｐ． Ｏｐｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔｅｎｔｓ ８： ３０１−３１３， １９９８に総説されている）。これらの新規化合物はその治療的有用性を限定する向精神作用を伴わないＴＨＣの有益な作用を発揮するように設計された。治療的応用の可能性には、古典的に知られているマリハナ自体の特性たとえば抗嘔吐、鎮痛、抗緑内障および食欲刺激作用が包含される。さらに最近になって認められたカンナビノイドの非向精神作用的役割には、神経保護作用および抗炎症作用がある。
【０００３】
神経保護活性
慢性の変性的変化ならびに中枢神経系（ＣＮＳ）に対する直接の損傷に続く遅延性または二次的損傷は、脳の内因性神経化学システムに病的な変化を生じることがある。二次的損傷を誘導する正確な機構はあまりよく知られていないが、外傷後の神経化学的変化には神経伝達物質の放出もしくは再取り込みの過剰活性化、シナップス前もしくはシナップ後の受容体結合における変化または内因性因子の病的な放出もしくは合成が包含される。これらの因子およびＣＮＳ損傷後の神経化学的なカスケードのタイミングの同定および特性解析は、合成、放出、受容体結合を修飾する薬理学的物質、または神経損傷後の緩和および結果の改善を招来する生理学的活性による処置の機会のレーダーを提供する。薬理学的介入による損傷後の現象の修飾は、様々な動物モデルおよび臨床的なＣＮＳ損傷の両面における機能的な回復を促進できることが多くの試験によって示唆されている。このような広範な薬理学的物質、たとえば抗コリン性物質、興奮性アミノ酸アンタゴニストたとえば特異的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、内因性オピオイドアンタゴニスト、カテコールアミン、セロトニンアンタゴニスト、アラキドン酸のモジュレーター、抗酸化剤および遊離ラジカルのスカベンジャー、ステロイドおよびリピド過酸化阻害剤、血小板活性化因子アンタゴニスト、陰イオン交換阻害剤、マグネシウム、ガングリオシドおよびカルシウムチャンネルアンタゴニストによる内因性システムの薬理学的操作はすべて、脳損傷後の機能的結果を改善する可能性を示唆している（ＭｃＩｎｔｏｓｈ， Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ １０： ２１５−２４３， １９９３）。
【０００４】
神経学的障害の広範なグループの病因は興奮性アミノ酸受容体の過剰な活性化に関連する。これらの障害には、てんかん、病巣性および全般性虚血、ＣＮＳ外傷、ならびに様々な形態の神経細胞変性たとえばハンチントン舞踏病、パーキンソン病およびアルツハイマー病が包含される。治療剤としての興奮性アミノ酸受容体アンタゴニストの開発には、多岐にわたる努力が払われてきた（Ｒｏｇａｗｓｋｉ， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｓｃｉ． １４： ３２５−３３１， １９９３；Ｄａｎｂｏｌｔ， Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏ− ｂｉｏｌｏｇｙ ６５： １−１０５， ２００１）。
【０００５】
神経細胞の損傷または変性には有効性が証明された治療はまだ知られていない。たとえば多くの国において、卒中は単独で死亡の主要な原因の一つになっていて、このような治療的な興奮アミノ酸アンタゴニストたとえば特異的なＮＭＤＡアンタゴニストを見出すことの重要性は自明の通りである。ある種のＮＭＤＡ受容体アンタゴニストが特異的疾患状態において他のアンタゴニストより有効であるかまたは副作用が少ないかを決定することは重要である。
【０００６】
一般式（Ｉ）の一部の化合物は米国特許４，１７９，５１７および４，８７６，２７６に開示されている。それらの米国特許に開示されているように、これらの実質的に純粋な合成（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−ＴＨＣ誘導体および同族体は望ましくないカンナビノール模倣性の向精神性副作用を欠いている。これらの既知化合物は、鎮痛、抗嘔吐および抗−緑内障活性を有すると記載されている。
【０００７】
式Ｉの興味ある特定の化合物は１，１−ジメチルヘプチル−（３Ｓ，４Ｓ）−７−ヒドロキシ−Δ６−テトラヒドロカンナビノールであり、米国特許４，８７６，２７６に開示され、そこではＨＵ−２１１と命名され、以後に化学俗名、デキサナビノールが割り当てられた。ＨＵ−２１１は予期に反して神経保護的属性を有することが発見され、その活性は、米国特許５，２８４，８６７および５，５２１，２１５に開示されているように、ＮＭＤＡ受容体における非競合的アンタゴニストに帰することができる。デキサナビノールのある種のエステル誘導体も米国特許６，０９６，７４０に開示されているように、さらに米国特許５，５３８，９９３および５，６３５，５３０に開示されているようにＨＵ−２１１のカルボン酸誘導体も神経保護に活性である。
【０００８】
抗炎症活性
ＮＭＤＡ受容体遮断活性のほかに、デキサナビノールおよびそのエステル誘導体はさらに抗酸化性および抗炎症性を有することが示され、これは、組織に対する虚血損傷の防止または緩和におけるそれらの効果に寄与する。
【０００９】
さらに、ＨＵ−２１１（デキサナビノール）の誘導体は驚くべきことに、米国特許５，９３２，６１０に開示されているように、腫瘍壊死因子αを阻害するそれらの能力により免疫修飾作用を有する。
【００１０】
ある種の天然の非向精神性カンナビノイドは、カンナビジオールの誘導体を含めて、ＷＯ９９／５３９１７に開示されているようにＮＭＤＡ受容体アンタゴニズムには無関係な抗酸化性を有することが見出されている。
【００１１】
カンナビノイド受容体の内因性リガンド（Ｍｅｃｈｏｕｌａｍら， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３５９： １−１８， １９９８）は、アラキドニル誘導体たとえば２−アラキドニルグリセロールおよびアラキドニル−エタノールアミド（アナンダミド）として同定されている。したがって、これらのエンドカンナビノイドはアラキドン酸経路におけるある種の代謝物に化学的に関連する。
【００１２】
炎症性を発揮することが知られている化合物のファミリーはプロスタグランジン（ＰＧ）である。プロスタグランジンは、ＰＧＨシンターゼとしても知られるシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の活性によって産生されるアラキドン酸代謝物である。ＣＯＸには２つの異性体、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２が同定されている。いずれも同じ触媒活性を示すが、それらは組織分布、調節および発現において異っている（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ ＤｕＢｏｉｓ， Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７０： Ｇ３９３−４００， １９９６）。
【００１３】
ＣＯＸ−１は構成的に発現され、ＰＧの生理学的産生に関与するように思われる。ＣＯＸ−２は一部の生体組織では正常な発現パターンを示すが、それは一時的に化学メディエーターたとえばサイトカインおよびエンドトキシンに長期に暴露された場合に発現する誘導型である（Ｇｏｌｄｅｎ ＆ Ａｂｒａｍｓｏｎ， Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ ２５： ３５９− ３７８， １９９９に総説）。ある種の病的過程における疼痛および炎症はＰＧＥ２の産生に依存するＣＯＸ−２によって誘導される。ＣＯＸ−２の活性およびＰＧＥ２の生合成を遮断し、アラキドン酸／プロスタグランジン（ＡＡ／ＰＧ）生合成経路の活性化を生じる抗炎症性の治療戦略の開発にはかなり興味がある。
【００１４】
ＣＯＸ−２活性の減弱は疼痛、炎症および発熱の低下に相関する。たとえばＮＳＡＩＤ（非ステロイド抗炎症薬）はＣＯＸ酵素を遮断することによって作用する。アスピリン（一般的ＮＳＡＩＤ）の予防用量を投与された米国の心脈管系患者中、結腸癌発症率の４０〜５０％の低下もＣＯＸ−２の発現における減少に関係することが示された（Ｓｍａｌｌｅｙ ＆ ＤｕＢｏｉｓ， Ａｄｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３９： １−２０， １９９７）。
【００１５】
この経路を標的とする治療戦略は、様々な疾患および症状たとえば、アルツハイマー病またはパーキンソン病のような疾患における神経細胞変性、けいれんを伴う神経細胞外傷、脳またはＣＮＳ損傷、慢性リウマチに伴う炎症；骨再吸収、ならびに結腸ポリープおよび直腸癌の防止および処置が追求されている（Ｌｉｐｓｋｙ， Ｊ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ． ２６： Ｓｕｐｐｌ ５６： ２５−３０， １９９９の総説参照）。米国特許５，８４０，７４６には、ＣＯＸ−２を特異的に結合する非ステロイドＣＯＸ−２阻害剤を投与することによる神経変性疾患の処置方法が開示されている。炎症も心筋梗塞、アテローム、不安定狭心症および他の心障害の一部として解釈されている（Ｒｏｓｓ， Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ． ３４０： １１５−１２６， １９９９）。
【００１６】
複数の機構によって効果を発揮する新規な非向精神性カンナビノイド化合物をもつことは有益であり、その必要性はまだ満たされていない。理想的には上記鎮痛、抗嘔吐および抗緑内障活性に加えて、それらはまた上述の疾患および症状に有効であることが望ましい。これらの多面的作用に関与する機構には、それらの興奮性アミノ酸受容体遮断剤たとえばＮＭＤＡ−受容体もしくはグルタミン酸遮断剤またはグリシン受容体との相互作用、または酸化性、サイトカイン、酸化窒素もしくはＡＡ／ＰＧ経路たとえばシクロオキシゲナーゼおよびリポオキシナーゼ経路のいずれかの阻害剤としての作用が包含される。
【００１７】
本発明から米国特許４，８７６，２７６， ５，５３８，９９３および６，０９６，７４０に開示された既知化合物が除外されることは当然である。
【００１８】
（発明の開示）
本発明の目的は薬理学的に許容される非向精神作用性カンナビノイドを提供することにある。本発明の更なる目的は、抗炎症活性および／または抗酸化活性、および／またはシクロオキシゲナーゼもしくはリポオキシゲナーゼ経路または酸化窒素またはサイトカイン経路を遮断する能力、および／または特異的受容体における相互作用によって興奮性アミノ酸たとえばグルタミン酸受容体仲介毒性の遮断により神経保護作用を与えることができる物質の提供にある。さらに本発明の目的は、抗炎症、抗酸化および／またはグルタミン酸受容体遮断作用の機構の組み合わせによって神経保護を与えることができる物質の提供にある。
【００１９】
本発明の他の目的においては、活性成分として非向精神作用性カンナビノイドからなる医薬組成物を提供することにある。これらの組成物は、ＣＮＳならびに他の組織たとえば腎臓、肺臓、肝臓、心臓、および関節における虚血の処置または防止に有用である。これらの組成物は神経変性疾患ならびに緑内障、疼痛、炎症および嘔吐の防止または処置に有用であると思われる。
【００２０】
本発明は、炎症および中毒が関与する多くの異常状態の緩和および処置に効果的な新規化合物および組成物を開示する。本発明の化合物は、神経保護および／または抗炎症性を提供する多様な機構を介して作用することに注目すべきである。
【００２１】
本発明のある種の実施態様は、興奮性アミノ酸による神経毒性の緩和、さらに防止にとくに効果的である。グルタミン酸神経中毒は中枢神経系（ＣＮＳ）に対する急性損傷時、たとえば長期にわたるけいれんによる損傷、血液供給の減弱または低下、グルコース供給の欠乏および機械的外傷によって起こる。本発明の組成物はまた、毒物誘導けいれんから生じるようなＣＮＳに対する他の損傷、それらに限定されるものではないが、グルタミン酸受容体以外のアミノ酸受容体たとえばグリシン受容体に伴うと考えられる障害の緩和にも効果的である。予期に反して、神経保護はＮＭＤＡ受容体に高い親和性をもたない一部の新規化合物の特徴でもある。
【００２２】
本発明の組成物はまた、漸進的な選択的神経細胞の喪失によって特徴づけられるある種の慢性変性疾患の処置に有効な可能性がある。この関連で、本発明の組成物は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病および萎縮性側索硬化症の処置に治療的に有効であると考えられる。驚くべきことに、このグループの化合物のさらに好ましい実施態様では神経再生を促進できることが実験的に示された。
【００２３】
本発明の組成物は全身的低酸素虚血発作、低酸素症単独または血流低下の組み合わせ、たとえば心臓、不安定な心筋、腎臓および肝臓の虚血ならびに心臓停止の場合および脳動脈の突然の閉塞（卒中）の場合にとくに価値がある。
【００２４】
本発明の組成物はまた、このクラスの化合物における既知の属性である鎮痛剤としてもとくに有用である。本組成物はまた、神経系の炎症性または免疫性疾患たとえば多発性硬化症および他の自己免疫疾患、脳炎およびＨＩＶ−誘導神経細胞変性；関節炎たとえば慢性関節リウマチおよび他の炎症；心脈管系疾患たとえば心筋梗塞、冠疾患、冠状血管の再狭窄および心筋炎；肺システムの疾患たとえば喘息または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）にとくに価値がある。
【００２５】
本発明のさらに他の目的は、ＣＯＸ−２を調節またはそれによって調節されるＡＡ／ ＰＧシグナリング経路を阻害できるたとえば胃腸系腫瘍たとえば直腸癌および結腸ポリープの発生または増殖の防止または処置用の組成物を提供することにある。
【００２６】
本発明の治療剤は、向精神作用をもたないカンナビノイドの新規な誘導体からなる。本発明の第一の実施態様においては、（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有し、本質的に（３Ｒ，４Ｒ）エナンチオマーを含まない式（Ｉ）：
2004501145.tif 000003
［式中、Ａ−−−−Ｂは任意の１（２）または６（１）二重結合を表し、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状、飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ、
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）を任意に含有するＣ１−６アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり、；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）である。
ただしＲ１は、不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］の新規化合物を提供する。
【００２７】
本明細書の目的においては、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６アルキルチオは飽和および不飽和の直鎖状、分岐状または環状構造を包含することを意図する。
【００２８】
現時点でさらに好ましい化合物は、Ｇがヒドロキシまたは低級アシルオキシであり、Ｒ２はジメチルヘプチルの化合物である。
【００２９】
本発明はさらに、上記の目的において、活性成分として一般式（Ｉ）：
2004501145.tif 000004
［式中、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状、飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ、
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）を任意に含有するＣ１−６アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり、；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）である。
ただしＲ１は、不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］の化合物からなる医薬組成物に関する。
【００３０】
本明細書の目的においては、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６アルキルチオは飽和および不飽和の直鎖状、分岐状および環状構造を包含することを意図する。
【００３１】
現時点でさらに好ましい化合物は、Ｇがヒドロキシまたは低級アシルオキシであり、Ｒ２はジメチルヘプチルの化合物である。
【００３２】
本発明の現時点で好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群より選択される異項環残基である。
【００３３】
さらに本発明の現時点で好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群から選択される異項環残基であり、各環状残基はさらに任意に異項環残基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキル、チオ、ケト、カルボキシ、ニトロ、飽和もしくは不飽和環状残基または芳香環もしくは異項環残基からなる群より選択される置換基で置換されていて、この場合各環は、それぞれＮ，ＯおよびＳからなる群より独立に選択されるヘテロ原子によって中断される３〜８個の炭素からなり、各環はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される１または２以上の基で置換されていてもよい。
【００３４】
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、テトラヒドロピリジン、ピラゾリン、オキサゾリン、ピロリジン、イミダゾリン、２−チオ−イミダゾール、２−メチルチオ−イミダゾリン、４−メチル−２−イミダゾリン、４，４−ジメチル−２−イミダゾリン、メチルスルフィド、メチルスルホキシド、アセトアミド、ベンズアミド、シアノ、１，２，４−トリアゾール、１，３，４−トリアゾール、１，２，３，４−テトラゾール、１，２，３，５−テトラゾール、チオフェン、フェニル、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、グリセロール、ピペラジン、４−ピペリジノピペリジン、４−メチルピペリジンおよびテトラヒドロピランからなる群より選択される。
【００３５】
本発明のさらに好ましい付加的実施態様によれば、Ｒ１はモノまたはジ置換アミンからなる群から選択される。この場合の置換基はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、イミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルからなる群より選択され、この場合、各環状構造はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される少なくとも１個の値換基で置換され、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６アルキルチオは、飽和および不飽和、直鎖状、分岐状および環状構造を包含する意図である。
【００３６】
本発明の範囲には、神経学的、神経変性、炎症および虚血障害の処置のための化合物および組成物の使用が包含される。
【００３７】
本発明はさらに、その必要がある患者に本発明の化合物からなる組成物の治療有効量を投与することからなる処置方法に関する。
【００３８】
本発明者らは現時点で請求された組成物の現時点で最も好ましい式（Ｉ）のある種の新規化合物が、効果的な抗炎症作用たとえばプロスタグランジン合成の阻害ならびに腫瘍壊死因子の産生阻害、酸化窒素の産生阻害、さらにＮＭＤＡ受容体の遮断および抗酸化活性を表す、Ｒ１が異項環残基のデキサナビノールの誘導体であることを発見した。
【００３９】
予期に反して本発明者らは、現時点で請求された組成物の現時点で最も好ましい式（Ｉ）のある種の新規化合物が、効果的な抗炎症作用、たとえばプロスタグランジン合成の阻害ならびに腫瘍壊死因子の産生阻害、酸化窒素の産生阻害、さらにＮＭＤＡ受容体の遮断および抗酸化活性を表す、Ｒ１が上に定義した置換アミンのデキサナビノール誘導体であることを発見した。
【００４０】
図面の簡単な説明
図１は、出発原料としてデキサナビノールを用いて、ＰＲＳ−２１１と命名されたある種の好ましい化合物を合成するために使用される合成図を示す。
図２は、標識ＭＫ−８０１の置換によって測定した、ＮＭＤＡ受容体への本発明による化合物の結合曲線を示す。
図３は、新規なデキサナビノール誘導体によるＴＮＦαの阻害を示す。
図４は、新規なデキサナビノール誘導体によるＰＧＥ２の阻害を例示する。
図５は、新規なデキサナビノール類似体による酸化窒素シンターゼの阻害を例示する。
図６〜８は、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体で処置したラットにおける一過性の中脳動脈閉塞後死亡率の低下ならびに臨床的および神経学的結果の改善を示す。
図９および１０は、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体の炎症阻害作用を耳浮腫試験で評価したＥＤ５０を示す。
図１１は、階段試験により評価した、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体で処置した動物における逆側性パフォーマンスの改善を例示する。
図１２は、一過性ＭＣＡｏ試験で評価した、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体処置処置動物における脳梗塞のサイズの変化を示す。
図１３敗血症ショック、心筋虚血モデルで評価した、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体処置動物における壊死面積の変化を示す。
【００４１】
発明の詳細な説明
本発明は向精神作用をもたないカンナビノイドのクラスに属する新規な化合物ならびにこれらの化合物からなる医薬組成物およびこのような化合物の使用方法を提供する。このクラスの化合物は、嘔吐、緑内障および疼痛の処置および防止に有効な物質であり、神経保護および抗炎症作用を有することが示されている。
【００４２】
本発明の組成物は、神経学的損傷たとえばそれらに限定されるものではないが、ＣＮＳの急性損傷または中毒、長期にわたるけいれんによる損傷、血液供給の減弱または低下、グルコース供給の欠乏および機械的外傷、およびたとえばストリキニーネ、ピクロトキシンまたは有機リン化合物による神経損傷を低下、または防止さえするのに効果的である。
【００４３】
本発明の組成物はまた、漸進的、選択的な神経細胞の喪失によって特徴づけられるある種の慢性変性疾患の処置に有効である。この関連で、本発明の組成物はハンチントン舞踏病、萎縮性側索硬化症、パーキンソン病およびアルツハイマー病の処置に神経保護および／または神経再生の機構を介して治療的に有効であると考えられている。
【００４４】
上述のように、本発明の組成物は、てんかん、全身的低酸素虚血発作、低酸素症、単独または血流低下の組み合わせ（たとえば心筋の虚血、不安定狭心症、肺、腎臓および肝臓虚血）ならびに心停止の場合および脳動脈の突然の閉塞（卒中）の場合にとくに価値がある。
【００４５】
本発明の組成物は神経保護作用を有し、それらの神経保護作用は多様な機構、たとえばそれらに限定されるものではないが、抗炎症および／または抗酸化作用を介して生じ、それらの一部はとくに中枢神経系（ＣＮＳ）に急性の損傷をもたらすグルタミン酸神経毒性、長期にわたるけいれん、血液供給の減弱または低下、グルコース供給の欠乏および機械的外傷による損傷の緩和および防止にさえ有効である。本発明の組成物はまた、ＣＮＳ様中毒誘導けいれんによる他の損傷の緩和にも有効であり、グルタミン酸受容体以外のアミノ酸受容体たとえばグリシン受容体に関連するものと考えられる。
【００４６】
本発明の組成物はまた、疼痛たとえば慢性疼痛および神経障害性疼痛の処置または防止にも有効である。
【００４７】
それらの抗炎症性からみて、本発明の組成物は多発性硬化症、関節炎たとえば慢性関節リウマチおよび他のタイプの局所的／全身的炎症、脳炎ならびにＨＩＶ−誘導神経変性によって例示される病因または病的過程が関与する炎症性または自己免疫性機構を有するさらに広範囲の適応症に有用であると考えられる。
【００４８】
本発明の他の特徴は胃腸管腫瘍たとえば直腸癌および結腸ポリープの発生および増殖を防止または処置するその能力である。
【００４９】
本発明の医薬組成物のセットは、ＣＯＸ−２を調節またはそれによって調節されるＮＯＳおよびサイトカインならびにＡＡ／ＰＧシグナリング経路に対する阻害活性を表す。本発明の治療剤は非向精神作用性カンナビノイドの新規な誘導体からなる。
【００５０】
本発明は、上掲の目的のために、活性成分が（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションを有し、本質的に（３Ｒ，４Ｒ）エナンチオマーを含まない一般式（Ｉ）：
2004501145.tif 000005
［式中、Ａ−−−−Ｂは任意の１（２）または６（１）二重結合を表し、
Ｒ１は、
Ａ）Ｒ３（Ｒ３は、ａ）１〜３個のヘテロ原子で中断された１〜８個の炭素原子からなる直鎖状または分岐状、飽和または不飽和炭素側鎖、またはｂ）飽和または不飽和環状残基、芳香族残基または異項環残基であり、環状残基は１または２個の環構造からなる５〜２０個の原子を有し、各環は１〜４個のヘテロ原子で中断された３〜８個の炭素原子からなり、上記ヘテロ原子はそれぞれ独立に、Ｎ，ＯおよびＳから構成される群から選択され、各環はさらに任意に、
ｉ）Ｃ１−６アルキル、
ｉｉ）Ｃ１−６アルコキシ、
ｉｉｉ）Ｃ１−６アルキルチオ、
ｉｖ）ハロ、
ｖ）カルボキシル、
ｖｉ）−ＣＯ２−Ｃ１−４アルキル、
ｖｉｉ）ケト、
ｖｉｉｉ）ニトロ、
ｉｘ）上記ｂにおいて定義された飽和または不飽和環状残基、芳香族または異項環残基から選択される１または２以上の基で置換される）；
Ｂ）上記Ｒ３に定義された少なくとも１個の置換基で置換されたアミンまたはアミド；
Ｃ）上記Ｒ３に定義された１個の置換基で任意に置換されたチオール、スルフィド、スルホキシド、スルホン、チオエステルまたはチオアミド；
Ｄ）エーテル−ＯＲ３（式中、Ｒ３は上に定義した通りである）であり；
Ｇは（ａ）ハロゲン、（ｂ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、または（ｃ）−ＯＲ（式中、Ｒは（ａ’）−Ｒ’’（Ｒ’’は水素または末端−ＯＲ’’’もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’’’残基（Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）を任意に含有するＣ１−６アルキルである）または（ｂ’）−Ｃ（Ｏ）Ｒ’’’（Ｒ’’’は先に定義した通りである）であり；
Ｒ２は（ａ）Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、（ｂ）−ＯＲ’’’’（Ｒ’’’’は直鎖状または分岐状Ｃ２〜Ｃ９アルキルであり、その末端炭素原子はフェニル基によって置換されていてもよく、（ｃ）−（ＣＨ２）ｎＯＲ’’’（式中、ｎは１〜７の整数であり、Ｒ’’’は水素またはＣ１−６アルキルである）である。
ただしＲ１は不安定な水素原子を有する異項環残基以外であり、上記残基はカルボン酸類似体として働く］である組成物に関する。
【００５１】
本明細書の目的においてはＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびＣ１−６アルキルチオは飽和および不飽和の直鎖状、分岐状または環状構造を包含することを意図する。異項環構造はヘテロ原子により中断されることが明瞭に意図されている。
【００５２】
現時点でより好ましい化合物は、Ｇがヒドロキシまたは低級アシロキシであり、Ｒ２がジメチルヘプチルの化合物である。
【００５３】
本発明の現時点で好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群から選択される異項環残基である。
【００５４】
本発明の現時点でさらに好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群から選択される異項環残基であり、各環状基はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシ、ニトロ、飽和もしくは不飽和環状残基または芳香環もしくは異項環残基からなる群より選択される置換基で置換され、この場合各環は、それぞれＮ，ＯおよびＳからなる群より独立に選択されるヘテロ原子１〜４個によって中断される３〜８個の炭素からなり、各環はさらに任意にＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される１または２以上の基で置換されていてもよい。
【００５５】
本発明のさらに好ましい実施態様によれば、Ｒ１はイミダゾール、ピラゾール、オキサゾール、イソキサゾール、テトラヒドロピリジン、ピラゾリン、オキサゾリン、ピロリジン、イミダゾリン、２−チオ−イミダゾール、２−メチルチオ−イミダゾリン、４−メチル−２−イミダゾリン、４，４−ジメチル−２−イミダゾリン、メチルスルフィド、メチルスルホキシド、アセトアミド、ベンズアミド、シアノ、１，２，４−トリアゾール、１，３，４−トリアゾール、１，２，３，４−テトラゾール、１，２，３，５−テトラゾール、チオフェン、フェニル、モルホリン、チオモルホリン、チアゾリジン、グリセロール、ピペラジン、４−ピペリジノピペリジン、４−メチルピペリジンおよびテトラヒドロピランからなる群より選択される。
【００５６】
本発明の付加的はさらに好ましい実施態様によれば、Ｒ１はモノまたはジ置換アミンからなる群から選択され、この場合、置換基はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、イミダゾリル、イミダゾリニル、モルホリノ、ピペリジル、ピペラジニル、ピラゾリル、ピロリル、ピロリジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリルから構成される群から選択され、各環状構造はさらに任意に少なくとも１個のＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、ケト、カルボキシまたはニトロからなる群より選択される置換基で置換され、この場合Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルキルオキシおよびＣ１−６アルキルチオは飽和および不飽和の直鎖状、分岐状および環状構造を包含する意図である。
【００５７】
現時点で好ましい化合物群において、Ｒ２は少なくとも計７個の炭素原子を有する１，１−ジメチルアルキルラジカルまたは１，２−ジメチルアルキルラジカルを意味する。また、このような化合物の前駆体も好ましい。とくに好ましい化合物は、Ｒ２が１，１−ジメチルヘプチルまたは１，２−ジメチルヘプチルの化合物である。これらのＲ２の実施態様はＴＨＣおよびその最も強力な類似体に見出される。しかしながら本発明の特徴である神経保護活性のためには、任意の低いまたは中等度の範囲のアルキル置換基がこの位置に適当である。
【００５８】
本明細書を通じて本発明の化合物は、それらの完全な化学名よりもむしろそれらの内部参照番号によって表示される。このシリーズの化合物の接頭部はＰＲＳ−２１１であり、これにこのシリーズの各特異的化合物について３数字コードが続く。
【００５９】
多くの生理学的実験が行われた結果、現時点でとくに好ましい化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランである。上記化合物は以下ＰＲＳ−２１１，０９５と呼ぶ。
【００６０】
多くの生理学的実験が行われた結果、現時点でとくに好ましい他の化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランである。上記化合物は以下ＰＲＳ−２１１，２２０と呼ぶ。
【００６１】
多くの生理学的実験が行われた結果、現時点でとくに好ましい他の化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランである。上記化合物は以下ＰＲＳ−２１１，０９２と呼ぶ。
【００６２】
望ましいＰＧＥ２およびＮＯＳ阻害活性を有する現時点でとくに好ましい他の化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−ピペリジノピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランである。上記化合物は以下ＰＲＳ−２１１，２５７と呼ぶ。
【００６３】
望ましいＰＧＥ２およびＮＯＳ阻害活性を有する現時点でとくに好ましい他の化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−メチルピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピランである。上記化合物は以下ＰＲＳ−２１１，２５１と呼ぶ。
【００６４】
すべての化合物は（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）コンフィギュレーションであり、実質的に（−）−（３Ｒ，４Ｒ）−エナンチオマーを含まないことが重要である。後者は望ましくない向精神作用の副作用をもつことが知られている。すなわち、たとえば合成カンナビノイド７−ヒドロキシ−Δ６−テトラヒドロカンナビノール１，１−ジメチルヘプチル同族体のエナンチオマーが記載されている（Ｍｅｃｈｏｕｌａｍ Ｒら， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ １： ３１５−３１９， １９９０；Ｍｅｃｈｏｕｌａｍ Ｒら， Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ４４： ７６２− ７６４， １９８８）。ここではＨＵ−２１０と呼ぶ（−）−（３Ｒ， ４Ｒ）−エナンチオマーはきわめて強力なカンナビノール模倣体である（ハシシの活性成分Δ−１−テトラヒドロカンナビノールよりほぼ百倍活性が高い）。ここではＨＵ−２１１と呼ぶ（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）エナンチオマーは化学名、デキサナビノールによっても知られ、鎮痛剤および制吐剤として活性であることが知られているが、カンナビノール模倣薬としては不活性でＥＤ５０はＨＵ−２１０より数千倍高い（Ｍｅｃｈｏｕｌａｍ Ｒら， Ｅｘｐｅｒｉｅｎｔｉａ ４４： ７６２− ７６４， １９８８）。
【００６５】
上述のように、本明細書で定義される一般式（Ｉ）の化合物はカンナビノール模倣の中枢神経系活性を実質的に欠いている。
【００６６】
本発明の化合物はすべて、天然に存在する（−）カンナビノイドの立体特異的な（＋）エナンチオマーである。（＋）立体特異性は向精神活性を欠く化合物を与え、中枢神経系のカンナビノイド受容体ＣＢ１に実質的に結合しないことが示されている。これらの新規化合物のＣＢ１受容体に対する結合のＩＣ５０は３００ ｎＭ以上、さらに好ましくは１μＭ以上、最も好ましくは５μＭ以上である。
【００６７】
薬理
新規な組成物は活性成分に加えて、慣用の医薬的に許容される担体、希釈剤等を含有する。経口投与用の固体組成物たとえば錠剤、丸剤、カプセル等は、活性成分を慣用の医薬的に許容される成分たとえばトーモロコシデンプン、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸ニカルシウムおよびゴムならびに医薬的に許容される希釈剤と混合することによって調製される。錠剤または丸剤はコーティングしてもよく、また長期の作用または持続放出を与える投与剤形を提供することが本技術分野で周知の医薬的に許容される材料を用いて成型される。他の固体組成物は直腸投与用の坐剤として製造することができる。液体剤形は経口投与用、または皮下、経皮、静脈内、鞘膜内および他の非経口投与経路を含む注射用に調製される。液体組成物には、他の有機共溶媒とともにまたはそれを含まない水溶液、水または油懸濁液、食用油との矯味乳化液ならびにエリキシルおよび類似の医薬ビヒクルが包含される。さらに本発明の組成物は吸入および類似の投与のためにエアゾルの形態に調製することができる。
【００６８】
ヒトにおける活性用量は一般に１日に１〜４回の基準で０．０５ ｍｇ〜約５０ ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。しかしながら、薬物がかなり長時間作用型であれば、隔日の投与も可能である。好ましい投与量範囲は０．１ ｍｇ〜約２０ ｍｇ／ｋｇ体重である。しかしながら本技術分野の熟練者には、投与量は処置される疾患、投与方法、患者の年齢、体重、禁忌等に応じて担当医師によって決定されることが明らかである。
【００６９】
上に定義された化合物はすべて、ＮＭＤＡ−受容体遮断剤または酸化的もしくは炎症経路阻害剤のいずれかとして有効であり、１または同時に数種の上に定義した疾患の症状の処置において医薬組成物の活性成分として使用することができる。有効投与量は本質的にＮＭＤＡ−受容体遮断剤の場合と同様であり、これらの化合物の既知特性に加えて、より著しい作用はＮＭＤＡ−受容体遮断作用である。しかしながら、本発明の化合物および組成物は、必ずしもＮＭＤＡ−受容体メディエーターではないけいれんに対しても良好な遮断活性を示すことに留意することが重要である。たとえば、本発明の組成物はストリキニーネ、有機リン化合物および亜酸化窒素によって引き起こされる中毒を防止し、少なくともそれを緩和することができる。
【００７０】
本発明の化合物は上に定義した目的で、必要な溶媒、希釈剤、賦形剤等により生理学的に許容される製剤を製造して、慣用の医薬形態として投与することができる。それらは任意の慣用の投与経路で投与することができる。ヒトに必要な用量範囲は単位剤形あたり０．００５ ｍｇ／ｋｇ〜約５０ ｍｇ／ｋｇである。最も好ましい用量範囲は約０，１ ｍｇ／ｋｇ〜約２０ ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００７１】
本発明の医薬組成物における最も適当な投与は、処置される障害または疾患のタイプに依存することになる。すなわち、急性頭部外傷、卒中または心停止から生じる虚血性損傷の処置は、傷害の誘導後可能な限り速やかに薬物の全身投与が必要である。他方、慢性的変性傷害、炎症または胃腸管癌の治療には持続的な投与基準が必要である。
【００７２】
ＰＲＳ−２１１化合物は、頭部外傷のインビボモデルにおいて様々な重要な神経保護ならびに一過性および永久的な脳虚血を招来する。これは、上に詳述したＣＮＳ疾患、中毒または損傷の広範なスペクトルでの神経保護、たとえば軸索損傷たとえば脊髄損傷の可能性が示唆される。ＰＲＳ−２１１化合物はまた、外傷、感染腫瘍または開頭術および脊髄操作を含む外科的操作に伴う神経浮腫の処置に有用である。
【００７３】
さらに、ＰＲＳ−２１１化合物の神経保護および抗炎症作用の組み合わせ、ならびにこのクラスの化合物の抗−緑内障作用は、虚血性損傷またはとくに生化学的な不良環境に伴う網膜疾患に対する特定の考慮が導かれる。一部の非限定的な実例には、糖尿病性網膜症、加齢による黄斑性変性、比較的に一般的でかなりの虚血性損傷を生じる網膜血管の閉塞がある。静脈および動脈のすべての網膜閉塞、たとえば視神経（眼神経障害性虚血）ならびに未熟児網膜症（未熟児における酸素毒性）はこのカテゴリーに包含され、二次的神経損傷とそれに続く直接的な網膜細胞死たとえばレーザー火傷傷害のような外科的外傷を包含する外傷、炎症、感染および変性過程、慢性的虚血損傷たとえば緑内障視神経傷害および中毒性傷害（たとえばクロロキン中毒）および慢性的栄養不良を招く傷害が包含される。
【００７４】
本発明者らは、ある種の式（Ｉ）の新規化合物を発見した。現時点で請求されている好ましい活性物質は、たとえばＰＲＳ−２１１，０９２， ＰＲＳ−２１１，０９５， ＰＲＳ−２１１，１２８， ＰＲＳ−２１１，１３２， ＰＲＳ−２１１，２２０， ＰＲＳ−２１１，２５１であり、神経保護および抗炎症、たとえばプロスタグランジンおよびロイコトリエン合成の阻害機構、ならびに酸化窒素合成の阻害（酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）の阻害により測定）＊およびサイトカインたとえば腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびインターロイキン−１βの産生、加えてＮＭＤＡ遮断および抗酸化活性の機構の組み合わせを発揮する。
【００７５】
式（Ｉ）のある種の新規化合物たとえばＰＲＳ−２１１のアミン誘導体たとえばＰＲＳ− ２１１，２５１， ＰＲＳ−２１１，２５３， ＰＲＳ−２１１，２５５またはＰＲＳ−２１１，２５７は実質的にＮＭＤＡ受容体結合を示さないが、それらの効果をＡＡ／ＰＧ経路および／または抗酸化経路の阻害を介して発揮する。本発明のより好ましい化合物を表１に表にして表し、ＮＭＤＡ結合の意味でそれらの多様な活性パターン、抗炎症および抗酸化活性を表２に示す。これらの表には比較のために既知化合物、ＨＵ−２１１（デキサナビノール）を含む。
2004501145.tif 000006
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【００７６】
本発明はまた、本発明の組成物の治療有効量を患者に投与することによる上述の様々な病理学的状態の処置方法に関する。本明細書において用いられる投与の語には経口、非経口、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、鞘膜内、直腸内および鼻内投与が包含される。
【００７７】
結合試験では、本発明のある種の実施態様が立体特異的な様式でＮＭＤＡ受容体を遮断し、他のある種の非競合的ＮＭＤＡアンタゴニストまたはグルタミン酸およびグリシンの結合部位から離れた結合部位（単数または複数）で相互作用が起こることを示している。これおよび式（Ｉ）による他の化合物は、したがって、ＮＭＤＡ受容体仲介神経毒性に対して保護作用を示す非向精神薬として有用なことが証明される。
【００７８】
試験システム
新規なＰＲＳ−２１１化合物の治療効果の評価は、これらの薬物の神経保護物質、抗炎症剤および抗酸化剤としての有用性を支持する一連の実験系において実施された。これらの作用はインビトロおよびインビボの両者で評価され、以下のシステムを用いて確証された。
【００７９】
（ａ）ＮＭＤＡ受容体連結チャンネル：化合物ＭＫ−８０１が初期の例であるＮＭＤＡの非競合的アンタゴニストはＮＭＤＡ受容体チャンネル内の部位に結合し、したがって受容体チャンネル複合体の活性化、その結果、神経毒性を防止する。様々な化合物が脳の膜にトリチウム標識ＭＫ−８０１の結合と競合する能力は、それらのＮＭＤＡ非競合アンタゴニストとしての効果の指標と考えられる。
【００８０】
（ｂ）プロスタグランジン産生の阻害：
デキサナビノールの新規誘導体のプロスタグランジン合成に対する阻害作用はマクロファージ細胞の培養、ついでＬＰＳに暴露して炎症応答を誘発させて評価した。これらのアッセイは個々の同族体における抗炎症活性の指標である。
【００８１】
（ｃ）腫瘍壊死因子αの阻害：
炎症応答カスケードの特異的態様はサイトカインＴＮＦαによって誘導される。
新しい同族体によるＴＮＦα産生の阻害および／またはＴＮＦα放出の阻害はＬＰＳで活性化されたマクロファージ細胞培養液中でアッセイされる。これは新規化合物の全身性抗炎症の可能性における他の指標として働く。
【００８２】
（ｄ）酸化窒素のアッセイ：
新規な類似体の抗酸化作用の可能性は、酵素酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）を阻害するそれらの能力を試験した。このアッセイも、抗炎症カスケードならびに抗酸化機構の他の指標として働く。
【００８３】
（ｅ）耳浮腫モデル：
新しい同族体の抗炎症活性はマウスにおける耳浮腫モデルを用いてスクリーニングする。この試験では炎症誘発剤としてクロトン油またはアラキドン酸を使用する。試験化合物がこれらの刺激剤に対する炎症応答を防止または減弱させる能力はそれらの全身性抗炎症能力の指標である。
【００８４】
（ｆ）ラットにおける閉鎖頭部傷害後の臨床結果の改善：
重篤な頭部傷害は高い死亡率と重篤な神経学的欠陥を伴う。コントロール様式で頭部外傷を負荷した動物は治療的な可能性がある薬物を試験するモデルとして有効である。試験化合物は臨床結果の改善および閉鎖脳傷害により誘導された浮腫の低下の両者で評価することができる。化合物が神経学的症状を低下させる能力および脳浮腫を低下させる能力は、それらが脳損傷を低下させる可能性の指標と考えられる。
【００８５】
（ｇ）一過性の中脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）：
中脳動脈はヒトで最も卒中を起こしやすい脳血管である。動物における凝血、永久結紮または動脈内への閉塞糸の配置はＭＣＡ領域が冒される永久的焦点卒中を生じる。一過性結紮または閉塞は一過性の焦点卒中を生じる。一過性および永久的焦点卒中の両者は冒された脳領域に様々な程度の浮腫および梗塞を生じる。浮腫および梗塞の容量を低下させる能力はそれらの抗卒中処置としての可能性の指標である。
【００８６】
（ｈ）視神経の破壊：ラットの視神経に機械的圧力を適用すると軸索の破壊損傷を生じ、これは酸化的代謝における即時の変化ならびに遅延性の軸索死および失明を伴う。化合物が軸索を保護し、軸索の発芽を促進する能力はこのアッセイでＧＡＰ−４３として知られている神経細胞成長円錐のための特異的タンパク質の追跡によって決定される。
【００８７】
（ｉ）パーキンソン病：ＭＰＴＰとして知られる化合物、１，２，３，６−テトラヒドロ−１−メチル−４−フェニルピリジンは黒質のドーパミン作動性神経の変性を生じることが知られ、したがってパーキンソン病（ＰＤ）のモデルを提供する。マウスのＭＰＴＰ−誘導モデルが、ＰＤに対する治療物質としての新規ＰＲＳ−２１１化合物の価値評価に使用される。
【００８８】
（ｊ）心筋保護：虚血および再灌流のラットモデルが、梗塞の容量を低下させる化合物の能力の試験に使用され、心保護物質としてのそれらの可能性における指標として考慮される。
【００８９】
これらのシステムそれぞれは、医薬物質により介入しやすい神経炎症、神経毒性または虚血の態様を表す。本発明の化合物は、複数個の機構によってそれらの証明された神経保護および抗炎症作用を発揮する。本発明のある種の実施態様はＮＭＤＡ受容体への結合によってそれの作用を発揮する。本発明の化合物中、アミン誘導体はとくに、ＮＭＤＡ受容体遮断活性をほとんどまたは全く示さず、それらの作用はシクロオキシゲナーゼ、リポオキシゲナーゼまたは酸化的経路を介して発揮される。それにもかかわらず、それらの活性が他の受容体またはさらに別の機構によって仲介される可能性は除外することができない。
【００９０】
この評価は、ＰＲＳ−２１１化合物が単にＮＭＤＡ受容体アンタゴニストとして作用するものではないとの考え方を明瞭に支持するものである。むしろＰＲＳ−２１１化合物の治療効果は、その他の機構たとえば腫瘍壊死因子の阻害、抗酸化剤およびラジカルスカベンジャー作用、抗コリン作用、血小板活性化因子アンタゴニズム、アラキドン酸の直接的または間接的修飾による抗炎症活性、またはとくにリピド過酸化に帰することができる。これらのタイプの薬理学的物質は脳損傷後の機能的結果を改善する可能性が示唆された。これらのすべての機構がＣＮＳに対する損傷後の遅延性、二次的または慢性の神経細胞傷害に関与するものと考えられる（ＭｃＩｎｔｏｓｈ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ ２０： ２１５−２４３， １９９３）。
【００９１】
ＮＭＤＡ遮断活性の評価に用いられたプロトタイプの薬物は、その毒性のためにヒトの治療には使用できない強力な選択的ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストである化合物ＭＫ−８０１である。本発明者らはＭＫ−８０１と新規なＰＲＳ−２１１化合物の生物学的活性の類似性および差異を評価した。
【００９２】
化合物
本発明による現時点で好ましい化合物は、米国特許４，８７６，２７６に開示されているリード化合物のＨＵ−２１１とも呼ばれるデキサナビノールの新規な類似体である。デキサナビノールの神経保護作用は米国特許５，２８４，８６７に開示されている。
【００９３】
試験された新規化合物中、位置１においてメチレンブリッジを介して異項環残基を有するデキサナビノールの同族体が現時点ではより好ましい。これらの化合物の一部、とくにデキサナビノールに比べて残基Ｒ２として短縮した尾部を有する化合物は、母体化合物は著しく疎水性であるのに対し、ある種の水溶液に溶けやすいという付加的な利点がある。
【００９４】
本発明によるこれらの好ましい化合物は、出発原料としてデキサナビノールを用い、図１に掲げた反応スキームに従って合成するのが便利である。また他の経路を使用することもできる。
【００９５】
（実施例）
以下の実施例は本発明を例示する意図であり、これらは非限定的実施例を構成する。
合成実施例
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ブロモメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１）の合成
2004501145.tif 000015
操作
アセトニトリル（８ ｍＬ）中デキサナビノール（１．８ ｇ， ４．６６ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（１．６３ ｇ， ６．２ミリモル）の懸濁液を窒素雰囲気下、−１０℃〜−５℃で攪拌した。アセトニトリル（８ ｍＬ）中四臭化炭素（２．０５ ｇ， ６．２ミリモル）を少量ずつ加えた。約−１０℃に１時間置いたのち、反応混合物を室温まで加温した。ついで１８℃で４８時間攪拌を続けた。溶媒を減圧下３０℃で蒸発させた。残留物をトルエンとともに蒸留し、得られた溶液を、トルエンを溶出液として用いてシリカゲルカラム（４０ ｇをトルエンに懸濁）を通してろ過した。１．９ ｇ（収率＝９１％）が得られた。純度はＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで定量した。
【００９６】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物２）の合成
2004501145.tif 000016
操作
化合物１（１００ ｍｇ， ０．２２ミリモル）、イミダゾール（１５０ ｍｇ， ２．２ミリモル）およびキシレン（２．６３ ｇ， ６．５ ｍＬ）混合物を減圧下、約１ ｍＬに濃縮した。この混合物を無水ＴＨＦ（４ ｍＬ）に溶解し、この溶液を窒素雰囲気下−１０℃で攪拌した。ブチルリチウム（０．９ ｍＬ， １８ミリモル）を少量ずつ加えた。反応混合物を徐々に室温まで加温し、２．５時間攪拌した。反応混合物を−２０℃に一夜放置した。反応混合物を砕氷（約４ ｇ）中に注ぎ、酢酸で中和し、エーテル（３×２０ ｍＬ）で抽出した。有機相を水（２０ ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。生成物を、シリカゲル（５ ｇ）上溶出液として酢酸エチルを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。５８ ｇ（収率＝６０％）の化合物２が得られ、純度はＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで定量した。
【００９７】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（トリアゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物３ａ ＆ ３ｂ）の合成
2004501145.tif 000017
操作
化合物１（１００ ｍｇ， ０．２２ミリモル）およびトリアゾールを窒素雰囲気下、約−５℃で攪拌した。ＤＢＵ（０．２６ ｍＬ， １．７８ミリモル）を加え、反応混合物を室温で一夜放置した。反応混合物を氷上に注ぎ、酢酸で中和し、エチルエーテル（３×１０ ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥した。ＴＬＣで２つの主要生成物が認められ、ＭＰＬＣで分離した。
化合物３ａ（酢酸エチルで溶出）−４７ ｍｇ，
化合物３ｂ（メタノール−酢酸エチル（１０：９０）で溶出）−１０ ｍｇ
純度はＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで定量した。
【００９８】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（テトラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物４ａ ＆ ４ｂ）の合成
2004501145.tif 000018
操作
化合物１（０．２５ ｍｇ， ０．５６ミリモル）およびテトラゾールの乾燥ＴＨＦ（２０ ｍＬ）中混合物を窒素雰囲気下、約−５℃（メタノール／氷浴）で攪拌した。ＤＢＵ（０．６５ ｍＬ， ４．４ミリモル）を（少量ずつ）加え、反応混合物を室温まで徐々に加温し、一夜放置し、さらに２４時間４０℃に放置して、出発原料を完全に溶解させた。反応混合物を氷上に注ぎ、酢酸で中和し、エチルエーテル（３×３０ ｍＬ）で抽出した。有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。ＴＬＣ上に２つの主要生成物が認められ、これらはシリカゲル（８０ ｇ）上カラムクロマトグラフィーによって分離された。化合物４ａ（トルエン中３％酢酸エチルで溶出）−１１０ ｍｇ， 化合物４ｂ（トルエン中１５％酢酸エチルで溶出）−１２０ ｍｇが得られた。化合物を２回飽和ＮａＨＣＯ３溶液、ついで水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。
化合物４ａ−６４ ｍｇ， 化合物４ｂ−６５ ｍｇ
純度はＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで定量した。
【００９９】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピラゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物５）の合成
2004501145.tif 000019
操作
化合物１（１ ｇ， ２．２ミリモル）およびピラゾール（１．５０ ｇ， ２２ミリモル）の無水ＴＨＦ（２０ ｍＬ）中混合物を窒素雰囲気下に冷却しながら攪拌した。Ｎ−ブチルリチウム（７ ｍＬ， １１ミリモル）を少量ずつ加え、反応混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を砕氷（約４ ｇ）中に注ぎ、酢酸で中和し、酢酸エチル（３×２０ ｍＬ）で抽出した。有機相を水（２０ ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。生成物を、シリカゲル（５ ｇ）上溶出液として石油エーテル中１０％酢酸エチルを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製すると、化合物４７０ ｍｇ（収率＝６０％）の化合物２が得られ、純度はＭＳおよび１Ｈ−ＮＭＲで定量した。
【０１００】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４，４−ジメチル−２−イミダゾロメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物６）の合成
2004501145.tif 000020
操作
ＴＨＦ中、化合物１（５０ ｍｇ， ０．４ミリモル）の溶液に４，４−ジメチル−２−イミダゾリン（０．４ ｍＬ）を加え、混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を砕氷上に注ぎ、酢酸で酸性（ｐＨ ５）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を合わせてアセトニトリルおよび水に溶解し、凍結乾燥した。収量：１５０ ｍｇ
【０１０１】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピロリノメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物７）の合成
2004501145.tif 000021
操作
化合物１（２００ ｍｇ， ０．４５ミリモル）の無水ＴＨＦ（５ ｍＬ）中の溶液にピロリン（０．３ ｍＬ）を注入し、混合物を一夜室温で攪拌した。反応は窒素雰囲気下に実施した。混合物を砕氷中に注ぎ、酢酸で酸性（ｐＨ ５）にし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。凍結乾燥後、生成物１２０ ｍｇを収集した。
【０１０２】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（ピロリジノメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物８）の合成
2004501145.tif 000022
操作
乾燥ＴＨＦ中化合物１（０．５ ｇ， １．１ミリモル）およびピロリジ（０．５ ｍＬ）の混合物を一夜室温で攪拌した。反応物を水中に注ぎ、酢酸で酸性（ｐＨ ６）にし、ＥｔＯＡｃ（３×２０ ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて水で洗浄し、乾燥し、蒸発させた。残留物をシリカゲルカラム上クロマトグラフィーに付してＥｔＯＡｃ中１５％メタノールで溶出した。得られた生成物を凍結乾燥すると２７０ ｍｇの純粋な生成物が得られた。
【０１０３】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（メチルスルフィドメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物９）の合成
2004501145.tif 000023
操作
ＴＨＦ中化合物１（１００ ｍｇ， ０．２ミリモル）の溶液にメチルスルフィドナトリウムを加えた。反応混合物を一夜攪拌し、蒸発させ、シリカゲル上クロマトグラフィーに付すと、１００ ｍｇの化合物９が得られた。
【０１０４】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（メチルスルホキシドメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１０）の合成
2004501145.tif 000024
操作
乾燥ジクロロメタン（１２０ ｍＬ）中化合物１（１．７ ｇ， ４ミリモル）の溶液を−２０℃に冷却し、これにｍ−クロロ過安息香酸（０．８３ ｇ， ４．８ミリモル）を加え、混合物を上記温度で３０分間攪拌した。反応混合物をついで過剰の亜硫酸塩を含む７％炭酸水素ナトリウム溶液（２５０ ｍＬ）に注いだ。生成物をジクロロメタン（３×１００ ｍＬ）で抽出し、水（２×１５０ ｍＬ）で洗浄し、蒸発させた。残留物をシリカゲルカラム上クロマトグラフィーに付し、ＥｔＯＡｃ中５％ＥｔＯＨにより溶出した。得られた生成物を凍結乾燥すると、１．２ ｇの白色粉末が得られた。
【０１０５】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（２−メチルチオ−２−イミダゾリノメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１１）の合成
2004501145.tif 000025
操作
無水ＴＨＦ（５ ｍＬ）中２−メチルチオ−２−イミダゾリンヨウ化水素酸塩（０．３ ｇ， １．２ミリモル）の混合物にＤＢＵ（０．１８ ｍＬ， １，２２ミリモル）を加え、混合物を窒素雰囲気下に室温で攪拌した。無水ＴＨＦ（２ ｍＬ）中化合物１（０．２ ｇ， ０．４ミリモル）の溶液を注入し、混合物を室温で一夜攪拌した。反応混合物を氷中に注ぎ、酢酸で酸性（ｐＨ ５）にし、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。残留物をシリカゲル上クロマトグラフィーに付し、溶出システムとして酢酸エチル中２５％メタノールを用いて溶出した。１２０ ｍｇの化合物が得られた。
【０１０６】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（フタルイミドメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１２）の合成
2004501145.tif 000026
操作
化合物１（１．２ ｇ， ２．１５ミリモル）、フタルイミドカリウム塩（１．８５ ｇ）のメチルスルホキシド（６．０ ｍＬ）中混合物をアルゴン下に５０℃で１８時間得られた混合物を砕氷（２０ ｇ）上に注ぎ、酢酸でｐＨ ６の酸性にし、クロロホルム（２×２０ ｍＬ）で抽出した。抽出物を炭酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下に濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィーに付し、トルエンおよびトルエン／酢酸エチルを用いて溶出すると、生成物０．４ ｇが得られた。
【０１０７】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（アミノメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１３）の合成
2004501145.tif 000027
操作
化合物１２（０．５１６ ｇ， １ミリモル）およびヒドラジン一水和物（０．１５９ ｍＬ， ３．１ミリモル）のエタノール（１５ ｍＬ）中溶液をアルゴン下に２時間還流加熱した。濃塩酸（０．５ ｍＬ， ６ミリモル）を含む水（０．５ ｍＬ）を加え、還流をさらに１時間続けた。この溶液を２２℃に一夜放置した。混合物をトルエン（１０ ｍＬ）で希釈した。沈殿をろ去し、エタノール（５ ｍＬ）で洗浄した。ろ液および洗液を合し、酢酸エチル（１０ ｍＬ）で希釈、５％炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機相を分離し、炭酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を減圧下に蒸発させた。残留物をアセトニトリルから再結晶すると０．３ ｇが得られた。
【０１０８】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（アセトアミドメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１４）の合成
2004501145.tif 000028
操作
化合物１３（０．１５ ｇ， ０．３９ミリモル）を無水酢酸に室温で溶解した。３時間後に沈殿が生成する。混合物２２℃に１時間放置した。メタノール（５ ｍＬ）を加えると沈殿はすべて溶消して澄明な溶液が得られた。溶液を２２℃に１８時間保存し、溶媒を蒸発させた。残留物を真空オーブン中で乾燥すると、固体０．１６ ｇが得られ、これをアセトニトリルから再結晶して結晶０．１ ｇを得た。
【０１０９】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１５）の合成
2004501145.tif 000029
操作
化合物１（２．５ ｇ， ５．６ミリモル）および２−メルカプトイミダゾール（２．２ ｇ， ２２ミリモル）の混合物を窒素雰囲気下に攪拌した。トリエチルアミンを徐々に加え、得られた混合物を室温で一夜攪拌した。反応混合物を水中に注ぎ、酢酸で中和し、数回酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、水で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、蒸発させると粗生成物が得られ、これをさらにシリカゲルカラム（石油エーテル中２５％酢酸エチルで溶出）により精製した。凍結乾燥後、化合物１５が白色粉末として得られた（収量：１．８７ ｇ， ７１％）。
【０１１０】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−（１−ピロジニル）−ピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１６）の合成
2004501145.tif 000030
操作
化合物１（０．３ ｇ， ０．６ミリモル）および４−（１−ピロリジニル）−ピペリジン（０．２ ｇ， １．２ミリモル）を乾燥ＴＨＦ（５０ ｍＬ）に溶解した溶液を一夜室温で攪拌した。反応混合物を水（３０ ｍＬ）で希釈し、ついで酢酸により酸性にし、酢酸エチル（３×５０ ｍＬ）で抽出した。有機分画を合わせ、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾固した。所望の生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−石油エーテルの混合物で溶出して精製すると、純粋な生成物（収率：８５％）が得られた。
【０１１１】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−ピペリジノピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１７）の合成
2004501145.tif 000031
操作
化合物１（０．３ ｇ， ０．６ミリモル）および４−ピペリジンピペリジン（０．２１ ｇ， １．３ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（５０ ｍＬ）溶液を一夜室温で攪拌した。反応混合物を水（１００ ｍＬ）で希釈し、ついで酢酸により酸性にし、酢酸エチル（３×５０ ｍＬ）で抽出した。有機相を水（５０ ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾固した。所望の生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−石油エーテルの混合物で溶出して精製すると、純粋な生成物（収率：７８％）が得られた。
【０１１２】
（＋）−（Ｓ，Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（Ｎ−ベンジルアニリンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物１８）の合成
2004501145.tif 000032
操作
化合物１（０．３ ｇ， ０．６ミリモル）およびＮベンジルアニリン（０．２３ ｇ， １．３ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（５０ ｍＬ）溶液を一夜室温で攪拌した。反応混合物を水（１００ ｍＬ）で希釈し、ついで酢酸により酸性にし、酢酸エチル（３×５０ ｍＬ）で抽出した。有機相を水（５０ ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾固した。所望の生成物はシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチル−石油エーテルの混合物で溶出して精製すると、純粋な生成物（収率：８６％）が得られた。
2004501145.tif 000033
【０１１３】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（Ｎ−（２−アミノエチル）ピロリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物２０）の合成
2004501145.tif 000034
操作
化合物１９（０．５ ｇ， １．３ミリモル）およびＮ−（２−アミノエチル）ピロリジン（０．４４ ｇ， ３．９ミリモル）をメタノール（３０ ｍＬ）に溶解し、室温で１時間攪拌した。水素化シアノホウ素ナトリウム（０．７２ ｇ）を加え、反応混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を希塩酸（１Ｎ）で酸性にし、酢酸エチル（３×５０ ｍＬ）で抽出した。有機分画を水（５０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下に蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、溶出システムとして酢酸エチル−石油エーテルを用いると所望の生成物（収率：６９％）が得られた。
【０１１４】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（Ｎ−ジエタノールアミンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物２１）の合成
2004501145.tif 000035
操作
化合物１９（０．５ ｇ， １．３ミリモル）およびジエタノールアミン（０．３５ ｇ， ３．３ミリモル）をメタノール（３０ ｍＬ）に溶解し、室温で１時間攪拌した。水素化シアノホウ素ナトリウム（０．７２ ｇ）を加え、反応混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を希塩酸（１Ｎ）で酸性にし、酢酸エチル（３×５０ ｍＬ）で抽出した。有機分画を水（５０ ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下に蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、溶出システムとして酢酸エチル−石油エーテルを用いると所望の生成物（収率：６９％）が得られた。
【０１１５】
（＋）−（３Ｓ，４Ｓ）−６，６−ジメチル−（１，１−ジメチルヘプチル）−１−ヒドロキシ−９−（４−メチルピペリジンメチル）−６ａ，７，１０，１０ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ジベンゾ［ｂ，ｄ］ピラン（化合物２２）の合成
2004501145.tif 000036
操作
４−メチルピペリジン（０．４７ ｍＬ， ６ミリモル）を乾燥ＴＨＦ（５０ ｍＬ）中化合物１（１．０ ｇ， ２．２４ミリモル）の溶液に加え、得られた混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を水中に注ぎ、酢酸で中和し、酢酸エチルで数回抽出した。有機相を合わせて水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ４上で乾燥し、蒸発させると粗生成物が得られ、これをフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付した（石油エーテル中２５％酢酸エチルで溶出）。凍結乾燥後、化合物２２が白色粉末（０．６２ ｇ）として得られた。
【０１１６】
生理学的実施例
生理学的実施例１
放射性リガンド結合試験によるＰＲＳ−２１１類似体の解析
ＰＲＳ−２１１類似体の可能な結合部位の同定は、ラット前脳膜へのＭＫ−８０１の結合を阻害するこれらのＰＲＳ−２１１の能力を測定することにより実施した。放射性リガンド結合試験では、化合物ＨＵ−２１１が膜へのＭＫ−８０１の結合と競合することが証明されたが、それはＡＭＰＡまたはカイニン酸結合を阻害することはできない。
【０１１７】
前脳膜プレパレーション：Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから、断頭後５分以内に脳を除去した。膜プレパレーションは以前に記載された操作（Ｅｓｈｈｂａｒら， Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． ４７６： ５７， １９８９）に従い単離した。放射性リガンドの結合を測定する前に、膜を４℃で実施した１０ ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ， ｐＨ ２．２による３〜４回の膜の連続洗浄に付し、膜に存在する内因性グルタミン酸をプレパレーションから除去した。
【０１１８】
放射性リガンド結合試験：新規類似体のＮＭＤＡ受容体への特異的結合は、ラット前脳プレパレーションにおけるＮＭＤＡ受容体から、それらが［３Ｈ］ＭＫ−８０１を置換する能力によって決定した。とくに、ラット前脳膜（０．１ ｍｇ）を１０ ｎＭのトリチウム化ＭＫ−８０１およびＰＲＳ化合物それぞれ３用量と室温で２時間インキュベートした。非特異的結合は０．１ ｍＭのＭＫ−８０１の使用により決定した。インキュベーション後、結合した放射性リガンドを非結合リガンドからＧＦ／Ｂフィルターを通してろ過した。フィルターをβ−カウンター中でカウントし、同族体の濃度対［３Ｈ］ＭＫ−８０１の特異的結合の％を対数でプロットした。このプロットからＩＣ５０を計算した。
【０１１９】
膜に対する［３Ｈ］ＭＫ−８０１の結合は３０μＭのグリシンおよび１０μＭのＬ−グルタミン酸の存在下に実施した。膜（２５０μｇタンパク質）を５０ ｍＭのＴｒｉｓ−酢酸塩ｐＨ ７．４緩衝液に再懸濁し、１０ ｎＭの［３Ｈ］ＭＫ−８０１とともに、単独でまたは０．１〜１００μＭ濃度のＰＲＳ−２１１化合物の存在下室温（ＲＴ）で３時間インキュベートした。異なる放射性リガンド結合試験に使用した反応緩衝液には、１０％のエタノール／Ｅｍｕｌｐｈｏｒ ６２０／脱イオン水混合物を含有させた。混合物中の各成分の比（容量）は２０／３／５７とした。この混合物はＰＲＳ−２１１化合物を３０μＭ以上の濃度に可溶化するために必要である。反応容量は１ ｍＬとした。非特異的な［３Ｈ］ＭＫ−８０１の結合は１００μＭの非標識ＭＫ−８０１の存在下に決定した。
【０１２０】
［３Ｈ］ ＭＫ−８０１の結合の阻害に対するある種のＰＲＳ−２１１類似体の濃度依存性は図１に例示する。ＰＲＳ−２１１，００７によって置換された阻害定数（ＫＩ）の値は１１．０±１．３μＭであった。数種のデキサナビノール誘導体のＩＣ５０を図２に示す。たとえば、ＨＵ−２１１（ＰＲＳ−２１１，００７）の平均ＩＣ５０は１０μＭであり、ＰＲＳ−２１１，０９５（イミダゾール誘導体）の２．５μＭ対ＰＲＳ−２１１，１２８の＞２０μＭおよびＰＲＳ−２１１，１３２の４．５μＭおよびＰＲＳ−２１１，２２０（ピラゾール誘導体）の０．３５μＭに匹敵した。
【０１２１】
生理学的実施例２
ラット浮腫モデルにおけるＰＲＳ−２１１化合物のインビボ抗炎症作用
新規同族体の抗炎症活性は炎症誘発剤としてクロトン油（ＣＯ）またはアラキドン酸（ＡＡ）を用いたマウス耳浮腫モデルで確立された。
【０１２２】
略述すれば、動物を麻酔し、試験同族体または同容量のビヒクルのいずれかを腹腔内に注射した。アセトンで希釈したＣＯまたはＡＡ溶液を一方の耳に注射した（耳／耳）。反対側の耳は対照として使用し、等容量の希釈剤を与えた。注射１〜３時間後に動物を安楽死させ、低張力のバネ付きダイアルマイクロメーターを用いて、耳の厚さを２回測定した。マイクロメーターのパッドの縁を耳の外側の縁に置いた。厚さは０．０１ ｍｍの単位まで測定した。組織の重さは金属パンチを用いて耳のロブから直径６ ｍｍの耳組織のディスクを切り取って測定した。炎症／浮腫は、新規同族体またはビヒクルのいずれかを注射された動物における処置対希釈剤処理逆側耳の厚さ／重さの増加として表す。少なくとも４用量における用量応答曲線を用いて各試験薬物の効力（ＥＤ５０）および最大効力（浮腫の最大阻害％）を計算した。
【０１２３】
生理学的実施例３
Ａ．抗炎症活性のインビトロスクリニング
プロスタグランジン合成の阻害
プロスタグランジン合成に対するデキサナビノールの新規類似体の阻害作用はマクロファージ培養細胞において評価した。マクロファージを２４ウエルＮＵＮＣプレートに接種し、ＤＭＥＭメジウムと２４時間インキュベートしてプラスチックに付着させた。ウエルを真空にして、別の新規同族体を１時間添加する。処理は三重に行う。ついでＬＰＳをさらに３〜２４時間の間添加して炎症応答を誘導した。上清を集めて、酵素イムノアッセイＢｉｏｔｒａｋキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いてＰＧＥ２を解析した。ある種の好ましい新規類似体で得られた結果を上記表２にまとめた。
【０１２４】
Ｂ．ＴＮＦαの阻害
マクロファージ細胞培養液の増殖のための方法はＰＧＥ２アッセイに記載の方法と同一である。ＬＰＳによる刺激後に集めた上清のアリコートを、抗−ＴＮＦα抗体および発色反応の基質としてのペルオキシダーゼに接合したＨＲＰを用いる酵素連結イムノアッセイによりＴＮＦαを定量した。ペルオキシダーゼ触媒発色反応は酸性にすることによって停止させ、４５０ ｎｍにおける吸収を測定する。この波長における吸収は、ＴＮＦα標準の濃度とそれらの吸収をプロットした標準曲線から定量されたサンプル中のＴＮＦαの濃度に比例する。ある種の好ましい新規同族体で得られた結果を上記表２にまとめる。
【０１２５】
Ｃ．酸化窒素シンターゼ（ＣＯＳ）の阻害
ＮＯＳの最終産物は亜硝酸（ＮＯ２）および硝酸（ＮＯ３）である。インビボ蛍光アッセイは、主要なＮＯ産物である亜硝酸を測定する正確な方法である。蛍光アッセイの原理は、新規同族体および刺激されたＬＰＳとインキュベートしたマクロファージ細胞培養液から収集した上清のアリコートへのＤＡＮ（２，３−ジアミノナフタレン）の添加に基づいている。ついで、ＮａＯＨを加えて亜硝酸を蛍光化合物、１（Ｈ）−ナフトトリアゾールに変換した。蛍光を直ちに、励起波長３６５ ｎｍおよび発光波長４５０ ｎｍを用いフルオロメーターで測定した。ある種の好ましい新規同族体で得られた結果を上記表２にまとめる。
【０１２６】
生理学的実施例４
閉鎖頭部損傷のラットモデルにおける脳浮腫に対するＰＲＳ−２１１化合物の作用
ＰＲＳ−２１１化合物の脳保護作用はラットにおける頭部外傷（ＨＴ）のモデルで評価された。損傷は麻酔ラットにおいて重量物落下デバイスにより誘発させたのち、４８時間までの回復期間を置いた。このタイプの外傷は、脳浮腫（すなわち、水含量の上昇、脳の比重の低下）、血液脳関門（ＢＢＢ）の破壊および臨床的機能不全を生じる。ラットの臨床状態は損傷後１， ２４および４８時間に脳浮腫の程度の測定とともに評価された。Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｓｃｏｒｅ（ＮＳＳ）と命名された基準セットによって評価された神経学的欠陥は頭部外傷の開始１時間後に最大となる。ＮＮＳはＨＴの開始から時間とともに徐々に低下し、ラットは徐々に自発的に回復した。
【０１２７】
新規類似体ＰＲＳ−２１１−０９５は、ＨＴの前（３０分）および直後（０分）またはＨＴ後（１および２時間）に投与した場合、浮腫の形成およびＢＢＢの破壊を有意に低下させた。
【０１２８】
有意な神経保護に必要な用量は投与様式および用量範囲０．５〜２０ ｍｇ／ｋｇに依存する。ＰＲＳ−２１１−０９５の投与により、ＮＳＳ、主として特異的な運動機能（たとえば、ビーム歩行および平衡）が有意に改善されたことに留意することも重要である。実際、インパクトの１時間後に投与されたＰＲＳ−２１１−０９５の５ ｍｇ／ｋｇ １回の投与でもＨＴの２４時間後に測定された浮腫は効果的に減少し、臨床結果は改善された。
【０１２９】
実験操作：
このモデルはＳｈａｐｉｒａら， Ｃｒｉｔ． Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． １６： ２５８−２６５， １９８８に詳細に記載されている。ラットは重量物落下デバイスによって頭部外傷（ＨＴ）に付し、生存したラットは１週間後まで追跡した。この間、ラットには飼料および水を自由に与え、２〜３匹のラットケージに入れた。予め指定された時間（１５分， １， ４， ２４， ４８時間等）にラットを屠殺した。ついで脳を速やかに摘出し、皮質組織を取り、水含量、イオンおよび試験された特定の代謝カスケードにおける興味ある代謝物を定量した。回復期間に、基準セット（ＮＳＳ）により臨床状態を評価した。
【０１３０】
外傷は脳組織の比重（ＳＧ）を有意に低下させ、頭部損傷後の水含量を上昇させた。水が細胞外（血管起源）または細胞内（細胞毒性）空間のいずれかにさらに蓄積するので浮腫は進展する。浮腫を測定するために使用された方法は、ブロモベンゼンおよびケロセン（ＳＧのため）の線状勾配カラムならびに乾燥オーブン中での乾燥に基づく水含量に基づくものである。組織片（各２０ ｍｇ）はカラムのトップに置き、標準曲線を用いてＳＧをカラムの平衡位置から計算した。
【０１３１】
結果
表３には新規類似体ＰＲＳ−２１１−０９５を用量５〜１０ ｍｇ／ｋｇで注射した典型的な実験の結果をまとめる。薬物は外傷の誘導の半時間前または半時間後に投与し、浮腫および臨床結果に対するその作用を１または２４時間後に評価した。結果は、外傷ラットに対するＰＲＳ−２１１−０９５処置の結果、頭部外傷（ＣＨＩ）後に発症した浮腫の程度の有意な（ｐ＝０．００３）低下ならびに神経学的欠陥評点のきわめて有意な（ｐ＜０．００１）の低下を指示した。
2004501145.tif 000037
ＰＲＳ−２１１類似体の効果は、対照の非処置ラットにおける浮腫を１００％とした％浮腫形成によって計算した。ＳＧにおける減少は次のように計算した。
ＳＧ（シャム（Ｓｈａｍ））−ＳＧ（薬物）／ＳＧ（シャム）−ＳＧ（対照）×１００
水含量の増加は次のように計算した。
［％Ｈ２Ｏ（薬物）−％Ｈ２Ｏ（シャム）／％Ｈ２Ｏ（対照）−％Ｈ２Ｏ（シャム）］×１００
表に示した結果はすべて対照外傷付与ビヒクル処置ラットと有意に（ｐ＜０．０５）相違した。
【０１３２】
ＨＴ前３０分またはＨＴ直後に投与して浮腫に対する効果が確立されたのち、本発明者らは「治療ウインドウ」すなわち２５ ｍｇ／ｋｇのＰＲＳ−２１１をＨＴ後１， ２または３時間後に腹腔内投与して検討した。そのＮＳＳに対する効果（および特異的運動機能に対する効果）ならびに浮腫およびＢＢＢの統合性に対する効果を評価した。図６〜８にはこれらの試験結果をまとめる。図から明らかなように、ＰＲＳ−２１１は、損傷後２時間までに投与した場合完全に有効であり、外傷３時間後には効果はそれほど著明ではなかった。
【０１３３】
結論
重篤な頭部損傷または脳虚血は高い死亡率（５０％を越える）と劣化した機能的結果を伴う。広範囲の臨床的および実験的研究にもかかわらず、これらの状態には十分確立された治療がない。今日、脳損傷に利用可能な処置はほとんどなく、脳外傷後に起こる漸進的に進行する生化学的変化は永久的な神経細胞の傷害を招来することがある。これらの結果は、本発明の化合物すなわちＰＲＳ−２１１化合物が閉鎖頭部損傷において脳保護作用を有することを明瞭に証明するものである。
【０１３４】
生理学的実施例５
一過性中脳動脈閉塞（ＭＣＡｏ）におけるＰＲＳ−２１１化合物による神経保護：梗塞のサイズの評価
実験デザイン：デザインは薬物またはビヒクルのいずれが投与されたかを隠す様式で行われる無作為な設計であり、ほぼ等しい数の薬物およびビヒクル処置動物が発生するような試みが行われた。
【０１３５】
材料
ａ．雄性ラット（処置群８匹）３２０〜３８０ ｇ（Ｈａｒｌａｎ Ｉｓｒａｅｌ）
ｂ．ハロタン（Ｒｈｏｎｅ Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｆｒａｎｃｅ）
ｃ．ペントバルビトン（Ｐｅｎｔａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ， ＣＴＳ Ｉｓｒａｅｌ）
ｄ．ポリ−Ｌ−リジン（Ｓｉｇｍａ， ＵＳＡ）
ｅ．絹縫合糸材料３−０および４−０
ｆ．ナイロン（Ｐｏｌｙａｍｉｄ）縫合糸材料３−０． ４ ｃｍ片を切断し、１％ポリ−Ｌ−リジン溶液に１分間置き、オーブン（６０℃）で６０分間乾燥する。各片の先端を焔で丸める。
ｇ．食塩水（Ｔｅｖａ Ｍｅｄｉｃａｌ）
ｈ．ブランクのクレモフォア−エタノール共溶媒（Ｐｈａｒｍｏｓ）
ｉ．クレモフォア−エタノール共溶媒中デキサナビノール５０ ｍｇ／ｋｇ（薬物投与前にデキサナビノールおよびビヒクルの両者は食塩水で希釈する）
ｊ．クレモフォア−エタノール共溶媒中、同族体ＰＲＳ−２１１，０９２， ＰＲＳ−２１１，０９５， ＰＲＳ− ２１１，１２８， ＰＲＳ−２１１，１３２およびＰＲＳ−２１１，２２０， ５０ ｍｇ／ｋｇ
ｋ．薬物投与前に同族体は食塩水で希釈した。
【０１３６】
方法
一過性ＭＣＡｏ
ａ．デキサナビノール類似体の試験に使用されたＭＣＡｏ法の手術の詳細はＢｅｌａｙｅｖらにより提示されている（Ｂｅｌａｙｅｖ， Ｂｕｓｔｏ， Ｗｅｉｚｈａｏ ＆ Ｇｉｎｓｂｅｒｇ， Ｓｔｒｏｋｅ ２６： ２３１３−２３１０， １９９５）。これは引用によりその全体が本明細書に導入される。
ｂ．ＭＣＡｏの開始２時間後に動物をハロタンで再麻酔し、頸部の傷を再び開口し、内部頚動脈（ＩＣＡ）からナイロン縫合糸を引き出した。ついで皮膚の傷を３−０絹縫合糸材料で閉じ、動物を麻酔から回復させた。
ｃ．３セットの動物を試験した。第一の試験では、糸を除去する直前（２＋０時間）に動物にＰＲＳ−２１１，０９５， ＰＲＳ−２１１，１２８， ＰＲＳ− ２１１，１３２またはデキサナビノール（ＰＲＳ−２１１，００７）いずれかの同族体を５ ｍｇ／ｋｇの投与量で静脈内に注射した。１群の動物は５ ｍｇ／ｋｇのビヒクル単独で処置した。他の群では、動物を「シャム」手術に付し、縫合糸を上述のようにＩＣＡに通したが直ちに引き抜いた。第二のセットでは、デキサナビノール、ＰＲＳ−２１１，０９２， ＰＲＳ−２１１，０９５および ＰＲＳ− ２１１，２２０を２＋０時間に使用した。第三のセットではデキサナビノール、ＰＲＳ−２１１，０９２， ＰＲＳ− ２１１，０９５およびＰＲＳ−２１１，２２０を縫合糸の除去１時間後（２＋１時間）に投与した。レーザードップラー流量計（ＬＤＦ）によりＭＣＡｏの成功を決定した。その後、脳血流の５０％以上の低下もＭＣＡｏ成功の徴候とみなした。ＬＤＦは有用な確証的な徴候であったが、臨床的な結果は最終の含有／排除基準を維持していたので、ＰＲＳ−２１１，２２０の場合を除いて、階段ケース試験は試験の初期にのみ導入された。
【０１３７】
行動／神経学的結果の評価
神経学的なパフォーマンスの詳細な検討はＭＣＡｏ後１日目、３日目および７日目に実施した。２つのパラメーター、すなわち、姿勢反射および屈筋反射（Ｎｏｋｏｎ ＆ Ｃｈｕａｎｇ， ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ ９， １９９８： ２０８１−２０８４に基づく）を検査した。動物はそれらのパフォーマンスに従って評点を与えた。
姿勢評点
０−なし（正常）
１−軽度のトゥイスティング
２−著しいトゥイスティング
３−著しいトゥイスティングおよび前肢の屈曲
屈曲反射評点
０−なし（正常）
１−軽度の欠損
２−中等度の欠損
３−重度の欠損
【０１３８】
梗塞のサイズの形態学的評価
虚血発作の１週後に、動物をペントバルビトン１００ ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により安楽死させた。動物をＰＢＳ（ｐＨ ７）中ヘパリン化ホルムアルデヒド溶液により心臓を通じて潅流した。ついで脳を摘出し、脳の梗塞容量を組織学的に評価するため調製前に同じ溶液中に保持した。
【０１３９】
統計解析
梗塞のサイズはＤｕｎｃａｎのｐｏｓｔ ｈｏｃ検定に従いＡＮＯＶＡ（分散分析）を用いて比較した。
結果
ａ．死亡率
シャムおよび２１１，０９５処置ラットには死亡例は認められなかった。デキサナビノール処置動物においては、死亡率は低かった（９０％）。他の処置群（ビヒクル、２１１，１２８および２１１，１３２）中の死亡率は類似していた（約２５％）。
ｂ．行動／神経学的結果
類似体ＰＲＳ−２１１，０９５で処置された動物では、他の処置群に比べてわずかな神経学的欠損が認められたのみで、回復も早かった。
ｃ．神経病理学
平均梗塞容量および反対側半球に比較したサイズ％は、最初に０．５ ｍｇ／ｋｇのＰＲＳ−２１１，２２０， ＰＲＳ−２１１，０９２およびＰＲＳ−２１１，０９５で処置された動物では少なくとも２１１，１３２で処置された動物の値と同様であった（ＰＲＳ−２１１，２０４も５０％までの保護を与えた）。梗塞サイズの低下はＰＲＳ−２１１，０９５， ＰＲＳ−２１１，０９２およびデキサナビノール（ＨＵ−２１１， ＰＲＳ−２１１，００７）でそれぞれ６０％、５２％および４８％であった。
【０１４０】
結論
これらの結果は、新規類似体、ＰＲＳ−２１１，０９５， ＰＲＳ−２１１，０９２およびＰＲＳ−２１１，２２０がＭＣＡｏ後の機能の維持および脳損傷サイズ低下の両方の意味で、強力であることを示している。これらのデータは、ＮＭＤＡ受容体に対するＰＲＳ−２１１，０９５および ＰＲＳ−２１１，０９２の比較的高い親和性ならびに強力なＣＯＸ−２阻害剤であることの関連で解釈することができる。これに反して、ＰＲＳ−２１１，１２８はＮＭＤＡ受容体に対して検知可能な親和性をもたず、機能、死亡率の低下および脳の形態学の意味で不活性であった。これらの構造活性相関はＮＭＤＡ受容体に対する親和性が重要ではあるが、虚血に対する神経保護のための唯一の成分ではないことを示唆する。ＰＲＳ−２１１，０９２は、ＮＭＤＡ受容体に対する親和性は低く、他の未同定の機構が神経保護に重要であることを示唆している。
【０１４１】
生理学的実施例６
一過性ＭＣＡｏにおけるＰＲＳ化合物の神経保護：階段試験による評価
この試験は前肢（手）が飼料ペレットのような小さい対象物を確認し、掴み、正確に操作する能力における皮質の運動、感覚および触覚認知機能にチャレンジする。小さい対象物を確認し、掴み、正確に操作する能力の喪失は前脳−頭頂骨皮質の損傷を反映し、ヒトにおける卒中に共通な有害度の大きい欠損である。
【０１４２】
材料
この操作における材料は、ＰＲＳ−２１１，０９５の濃度を除いて、生理学的実施例５の操作の場合と同じである。操作上の差は次の通りである：
雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット、２３０〜２７０ ｇ（Ｈａｒｌａｎ， Ｉｓｒａｅｌ）を使用した。
以下の化合物およびそれらの各濃度を試験した：
ＰＥＧエタノール共溶媒中、デキサナビノールおよび同族体ＰＲＳ−２１１，０９５および ＰＲＳ−２１１，２２０， ５０ ｍｇ／ｍＬ，
デキサナビノール、その同族体およびそれらのビヒクルは薬物投与の前に、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）２０％（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で希釈した。
【０１４３】
方法
１．機能評価のための訓練
操作はＭｏｎｔｏｙａらによって本質的に記載されている（Ｍｏｎｔｏｙａ， Ｃａｍｐｂｅｌｌ− Ｈｏｐｅ， Ｐｅｍｂｅｒｔｏｎ ＆ Ｄｕｎｎｅｔ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｍｅｔｈ． ３６： ２１９−２２８， １９９１）。動物は３〜５日間緩和な飼料欠乏状態下に保持し、１日１回（１６：００から１７：００の間）飼料を与え、水の摂取は自由にした。動物は試験前３日間、Ｓｈａｒｋｅｙらのプロトコールにより訓練された（Ｓｈａｒｋｅｙ， Ｃｒａｗｆｏｒｄ， Ｂｕｔｃｈｅｒ ＆ Ｍａｒｔｓｏｎ， Ｓｔｒｏｋｅ ２７： ２２８２− ２２８６， １９９６）。
【０１４４】
略述すれば、階段ボックスはそれぞれ７段の階段２列を含有する。４５ ｍｇの２個の飼料ペレットを各段に置いた。動物は１５分の期間ボックスに入れた。期間終了時に摂取された（掴まれた）ペレットおよび移動されたペレットを数えて記録した。動物は１日２回、４時間置いて試験した。第一の期間は８〜９ＡＭに、第二の期間は１２〜１３ＰＭに実施した。動物は２回の連続した期間に各セットの階段から少なくとも８個のペレットを掴む（摂取する）まで訓練した。訓練期間が成功したのち１週間までに、動物に一過性ＭＣＡｏを実施した。一過性ＭＣＡｏは本質的には生理学的実施例５に記載の様式で実施したが、工程１には以下のような修飾を行った：縫合糸の除去の２分前に、ラットを再麻酔し、デキサナビノール５ ｍｇ／ｋｇ、同族体ＰＲＳ−２１１，２２０または ＰＲＳ−２１１，０９５を０．５， ２．５， ５または１０ ｍｇ／ｋｇまたはビヒクル５ ｍＬ／ｋｇを腹腔内投与した。さらに１群にはシャム手術を施した。
【０１４５】
２．一過性焦点虚血後の機能性評価
動物は５日間手術から回復させた。緩和な飼料欠乏を虚血発作以降も再使用した。上記方法を用いて９〜１２日に階段ボックスで試験した。この期間には週に２回、動物の体重を測定した。
【０１４６】
３．梗塞のサイズの形態学的評価
評価期間の終わりに、動物をペントバルビトン１００ ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により安楽死させた。動物をＰＢＳ（ｐＨ ７．４）中ヘパリン化ホルムアルデヒド溶液により心臓を通じて灌流した。ついで、脳を摘出し、同じ溶液中に少なくとも２４時間保持した。ついで、脳を皮質の吻側から小脳に、ＰＢＳ中３０％スクロースに沈め、凍結切断し（２０μｍ）、乾燥し、脳の梗塞容量を組織学的に評価するためチオニンで染色した。ブレグマからレベル３．３， ＋２．８， ＋１．８， ＋０．８， −０．４， −１．４， −２．２および−３．４の８つのセクションを測定した（Ｓｗａｎｓｏｎ， Ｒａｔ Ｂｒａｉｎ Ａｔｌａｓ， １９９２）。セクションをＣＤＡカメラ（Ｖ−ｔｅｃｈ Ｍ−４７０）で撮影し、画像を解析した（Ｓｃｉｏｎ画像１．６２Ａ）。梗塞のサイズは一連の８セクションから、一連の２隣接セクションの平均損傷領域を加算し、それらの間の距離を乗じて梗塞の容量（ｍｍ３）を計算するか、または逆半球のサイズの％としての平均梗塞サイズを計算するか、または逆半球のサイズの％として平均生存同側サイズを計算するか、または逆半球の脳室の％として平均同側脳室を計算することにより決定した。
【０１４７】
４．統計解析
ａ．梗塞のサイズはＤｕｎｃａｎのｐｏｓｔ ｈｏｃ検定に従いＡＮＯＶＡ（分散分析）を用いて比較した。
ｂ．階段試験のパフォーマンスはデータを収集したのち、データを６試行の４ブロックに圧縮して評価した。
第一のブロック−術前試験の最終日
第二のブロック−虚血発作後６， ７および８日からの試験
第三のブロック−虚血発作後９， １０および１１日（または１２もしくは１３日）からの試験（第二の３日のプール）
第四のブロック−虚血発作後１４〜１８日からの試験
ｃ．データはＴｕｋｅｙのｐｏｓｔ ｈｏｃ検定に従いＡＮＯＶＡ（分散分析）を用いて解析した。
【０１４８】
結果
ａ．生理学的パラメーター
２つの生理学的測定値（血中グルコースおよび腎臓温度）には、異なる処置群または異なる処置時間で差は検出されなかった。
【０１４９】
ｂ．死亡率
本試験における死亡率は表４および５に示すように低かった。
2004501145.tif 000038
【０１５０】
ｃ．体重増加
階段ケース試験の間（週末を除く）、動物は緩和な飼料欠乏下に保持された。これらの条件下に、以下の結果が観察された。
シャムおよびＰＲＳ−２１１，０９５， １０ ｍｇ／ｋｇ処置ラットでは最大の体重増加を示した（ベースラインに比較して、それぞれ１５および１７％）。これは、体重が全く増加しなかったビヒクル処置ラット（それらはそれらの体重の４％減少さえを示した）に対し有意な差（ｐ＜０．０５）であった。デキサナビノールおよびＰＲＳ−２１１，０９５（いずれも５ ｍｇ／ｋｇ）ならびにＰＲＳ−２１１，２２０， ０．１， ０．５， ２．５および５ ｍｇ／ｋｇ処置ラットは中等度の体重増加を示した（それぞれ、ＰＲＳ−２１１，０９５で７および４％、ＰＲＳ− ２１１，２２０で ３， １０， ５および４％）。これらの差は有意ではなかった。他の群（ＰＲＳ− ２１１，０９５ ０．５および２．５ ｍｇ／ｋｇ）では体重は増加しなかった。
【０１５１】
ｄ．階段試験パフォーマンス
同側性パフォーマンスには異なる処置群間で有意差は見られなかった。試験あたりの平均のペレット消費数は８〜１１であった。虚血発作後（発作後最初の週末）に続く最初の期間では、すべての処置群において検出されるペレットの消費数は若干低下した。この低下は一過性で、次の期間には消失した。
【０１５２】
著しい障害の逆側性パフォーマンスが、ビヒクル処置ラットに明瞭であった。ペレットの消費は虚血発作後次の最初の期間に３未満に低下した。これは第三の期間には５ペレットまで上昇した。ＰＲＳ−２１１，０９５処置ラットでは用量関連性様式でのパフォーマンスの改善が証明された。ＰＲＳ−２１１，０９５の０．５および２．５ ｍｇ／ｋｇ処置動物はペレットの消費に中等度の改善を示したが、５および１０ ｍｇ／ｋｇの用量レベルでは明らかな改善が証明された（ビヒクルと比較してｐ＜０．０５）。
【０１５３】
デキサナビノール５ ｍｇ／ｋｇは類似の作用を示した。ＰＲＳ−２１１，０９５ ５ ｍｇ／ｋｇは１０ ｍｇ／ｋｇの投与量およびデキサナビノールより期間１のみで優れていた。デキサナビノール０．５ ｍｇ／ｋｇ処置ラットでは改善は認められなかった。ＰＲＳ−２１１，２２０処置ラットでは用量関連性様式でパフォーマンスの改善が証明された。ＰＲＳ− ２１１，２２０の０．１， ２．５および５．０ ｍｇ／ｋｇ処置動物は中等度のペレット消費の改善を示したが（ビヒクルより２０〜３０％改善）、０．５ ｍｇ／ｋｇの用量レベルでは明らかな改善（ビヒクル単独の場合に比べて６０％以上の改善：ｐ＜０．０５）が認められた。最善のパフォーマンスは最終期間（期間３）にＰＲＳ−２１１，２２０ ０．５ ｍｇ／ｋｇで認められた。
【０１５４】
類似の現象が移動されたペレットのパラメーターでも検知された。ビヒクル処置ラットでは最高数のペレットが移動されたが、シャム手術ラットで移動された数は最低であった。ＰＲＳ−２１１，０９５およびデキサナビノー ５ ｍｇ／ｋｇならびにＰＲＳ−２１１，２２０ ０．５ ｍｇ／ｋｇでは、前のパラメーターに類似のパフォーマンスの改善が誘発された。図１１は、階段試験における逆側のパフォーマンスを示す。Ａ．ＰＲＳ−２１１，０９５についての摂取されたペレットおよび移動されたペレットの結果、ならびにＢ．ＰＲＳ−２１１，２２０についての摂取されたペレットおよび移動されたペレットの結果である。
【０１５５】
ｅ．組織病理学
３つの処置群における７〜８匹の動物についての組織病理学的解析：
デキサナビノール５ ｍｇ／ｋｇ， ＰＲＳ−２１１，０９５ ２．５および５ ｍｇ／ｋｇ：処置条件下に、デキサナビノールおよびＰＲＳ−２１１，０９５ ５ ｍｇ／ｋｇは、ビヒクルに比較して梗塞容量を３５％低下させた。この作用は統計的に有意な差ではなかった。他の投与量でも神経保護は認められなかった。図１２は、一過性ＭＣＡｏ試験で評価した、ある種の好ましいデキサナビノール誘導体処置動物の脳梗塞サイズの変化を示す。左側のパネルは好ましいＰＲＳ−２１１化合物の２＋０時アッセイにおける結果であり、好ましい化合物はＭＣＡｏの完成直後に投与した。右側のパネルは好ましいＰＲＳ−２１１化合物の２＋１時アッセイにおける結果である。
【０１５６】
結論
第一に、類似体ＰＲＳ−２１１，０９５およびデキサナビノールは一過性ＭＣＡｏの１２０分後に同様の神経保護を示した。これは、階段における同側性パフォーマンスならびに梗塞サイズの低下から明らかであった。０．５ ｍｇ／ｋｇのＰＲＳ−２１１，２２０は階段試験の期間３で最も強力な作用を示した。これは、ＰＲＳ−２１１，０９５およびデキサナビノールより少なくとも１０倍強力であった。第二に、ＰＲＳ−２１１，０９５はすべての用量レベルで、階段ケース試験においてパフォーマンスの改善を示したが、最高の改善は５ ｍｇ／ｋｇの用量で認められた。ＰＲＳ−２１１，２２０は０．５ ｍｇ／ｋｇの用量で、ＰＲＳ−２１１，０９５またはデキサナビノールのいずれも５ ｍｇ／ｋｇの用量の場合よりも優れていたことは銘記すべきである。
組織病理学的評価では、デキサナビノールおよびＰＲＳ−２１１，０９５の両者は（いずれも５ ｍｇ／ｋｇの用量で）、梗塞のサイズを３５％（ビヒクルに比較して）まで低下させた。
【０１５７】
生理学的実施例７
パーキンソン病（ＰＡ）のＭＰＴＰモデルにおけるデキサナビノール類似体による神経保護
パーキンソン病のＭＰＴＰ−マウスモデルを、ＰＤ症状を防止する化合物の効果を試験するために使用した。
材料
ａ．１９０匹の８週齢雄性Ｃ５７／ＢＬマウス（Ｈａｒｌａｎ Ｉｓｒａｅｌ）
ｂ．ＭＰＴＰ−ＨＣｌ（Ｓｉｇｍａ ＵＳＡ）
ｃ．食塩水（ＴｅｖａＭｅｄｉｃ Ｉｓｒａｅｌ）
ｄ．ＭＡＣ−１またはＦ４／８０に対するラット抗体（Ｓｅｒｏｔｅｃ）
ｅ．ウサギ抗−ＧＦＡＰ（Ｓｉｇｍａ）
ｆ．ウサギ抗−ｅ， ｎまたはｉＮＯＳ（Ｓｅｒｏｔｅｃ）
ｇ．ヒツジ抗−チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）
ｈ．二次抗体（Ｚｙｍｅｄ）
ｉ．ペントバルビトンナトリウム２００ ｍｇ／ｍ（ＣＴＳ Ｉｓｒａｅｌ）
ｊ．ヘパリン（５００ ＩＵ／ｍＬ， Ｃｈａｏｉ Ｆｒａｎｃｅ）
ｋ．４％ホルムアルデヒド緩衝溶液（Ｆｒｕｔａｒｏｍ Ｉｓｒａｅｌ）
【０１５８】
方法
プロトコールは、Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅらの記載に基づいている（Ｌｉｂｅｒａｔｏｒｅ， Ｊａｃｋｓｏｎ− Ｌｅｗｉｓ， Ｖｕｋｏｓａｖｉｃ， Ｍａｎｄｉｒ， Ｖｉｌａ， ＭｃＡｕｌｉｆｆｅ， Ｄａｗｓｏｎ， Ｄａｗｓｏｎ ＆ Ｐｒｚｅｄｂｏｒｓｋｉ， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ５： １４０３−９， １９９９）。
処置群は以下の通りである。
−ＭＰＴＰ投与の直前にビヒクル５ ｍｇ／ｋｇ 腹腔内１回
−ＭＰＴＰ投与の直前にデキサナビノールまたは類似体１０ ｍｇ／ｋｇ 腹腔内１回
−ＭＰＴＰ投与の直前にデキサナビノールまたは類似体２０ ｍｇ／ｋｇ 腹腔内１回
−ＭＰＴＰ投与の直前にデキサナビノールまたは類似体２０ ｍｇ／ｋｇ 腹腔内１回＋さらに２４時間後に追加
【０１５９】
表６はＭＰＴＰモデルにおいて最も有効な処置を決定するための実験的戦略を示す。１９群の動物は次の通りである。
ＭＰＴＰ投与７日後にマウスを安楽死させ、摘出した脳を切断し、モノアミン作動性ニューロンにおける律速酵素、チロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ−ＩＲ）に対する抗血清を用いて染色した。染色は線状体に投射するドーパミン作動性ニューロンからなる黒質、ｐａｒｓ ｃｏｍｐａｃｔａ（ＳＮｐｃ）に集中する。パーキンソン病で変性を受けるのはこれらのニューロンである。ＭＰＴＰはこれらのニューロンに特異的なニューロトキシンとして作用する。この目的はＭＰＴＰが誘発する神経変性を新規ＰＲＳ− ２１１化合物により緩解することができるか否かを決定することである。
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【０１６０】
生理学的実施例８
視神経破壊モデル
材料
ａ．成熟雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラット３５０〜５５０ ｇ（Ｈａｒｌａｎ Ｉｓｒａｅｌ）
ｂ．クレモフォア−エタノール（Ｐｈａｒｍｏｓ）中デキサナビノールまたは同族体５％
ｃ．ブランクのクレモフォア−エタノール（Ｐｈａｒｍｏｓ）
ｄ．ペントバルビトン（Ｐｅｎｔａｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ， ＣＴＳ， Ｉｓｒａｅｌ）１ ｍｇ／ｋｇ， 食塩水で１：５に希釈
ｅ．キシラジン（Ｖｉｔａｍｅｄ）１ ｍｇ／ｋｇ， 食塩水で１：５に希釈
ｆ．抗体：Ｍａｂ抗−ＧＡＰ４３（Ｓｉｇｍａ， Ｇ−９２６４）， 抗−ＧＦＡＰ（Ｓｉｇｍａ）
【０１６１】
方法
方法はＤｕｖｄｅｖａｎｉらにより記載された通りである（Ｄｕｖｄｅｖａｎｉ， Ｒｏｓｎｅｒ， Ｂｅｌｋｉｎ， Ｓａｕｔｔｅｒ， Ｓａｂｅｌ ＆ Ｓｃｈｗａｒｔｚ， Ｒｅｓｔ． Ｎｅｕｒｏｌ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． ２： ３１−３８， １９９０）。
【０１６２】
評価
視神経
実験の終了時（８週）に動物をペントバルビトン６０ ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により深く麻酔し、４％ヘパリン化ホルムアルデヒド溶液で心臓を灌流した。眼および視神経を眼球から視交叉まで摘出し、さらに４％ホルムアルデヒドに一夜浸漬して固定した。視神経（眼球から視交叉まで）および脳（側方膝状体の領域および上丘）を３０％スクロース中で凍結保護し、凍結して切断した（連続切断：視神経−縦、１６μｍ；脳−皮質、３０μｍ）。網膜は全体を封入して調製した。網膜および切片を抗−ＧＡＰ−４３および抗−ＧＦＡＰで免疫組織学的に染色した。ＧＡＰ−４３は酸性で、ＣＮＳおよびＰＮＳに存在する、軸索によりトランスポートされる膜タンパク質である。この存在は再生増殖を指示し（Ｓｋｅｎｅ ＆ Ｗｉｌｌａｒｄ， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． １： ４１９− ２６， １９８１）、一方、ＧＦＡＰはグリアの原線維酸性タンパク質であり、星状細胞のマーカーである。ＧＡＰ−４３陽性の標識は再生増殖を指示し、ＧＦＡＰ標識はグリアの瘢痕形成を指示する。ＧＡＰ−４３の陽性標識を示す処置は電子顕微鏡による分析のために反復して処理する。各処理において、神経保護の指標としての可視軸索、ならびに再生の指標としてのミエリン化していない軸索、わずかにミエリン化した軸索および成長円錐を、損傷部位から１ ｍｍの距離の断面で比較する。再生増殖を示す動物では、本発明者らは再生軸索の長さを測定する。
【０１６３】
生理学的実施例９
心筋虚血のラットモデル
心臓保護物質としての可能性の指標と考えられる梗塞容量を低下させる化合物の能力を試験するため、心筋梗塞および心不全の次のモデルを使用した。
【０１６４】
材料および方法
使用した方法は本質的にＬｅｏｒ ＆ Ｋｌｏｎｎｅｒによって記載されている（Ｌｅｏｒ ＆ Ｋｌｏｎｎｅｒ， Ａｍ． Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｌ． ７５： １２９２−３， １９９５）。実験は盲験様式で実施した。略述すれば、Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、閉塞前に、ビヒクルまたはＰＲＳ−２１１，０９２を投与した。それらは４５分間の閉塞、ついで４時間の再灌流に付し、冠動脈を再び閉塞し、Ｕｎｉｓｐｅｒｓｅ（登録商標）染料０．２５ ｍＬを静脈内注射して危険面積（ＡＲ）を決定した。ラットを安楽死させ、塩化トリフェニルテウアゾリウムの１％溶液を用いて３７℃で１５分、閉塞のサイズを分析した。各心臓の壊死面積（ＡＮ）を危険面積の％として表した。これに各スライスの重量を乗じて危険および壊死面積の重量を求めた。
【０１６５】
結果および結論
図１３は、Ｒ（ＰＲＳ−２１１，０９２）およびＳ（ビヒクル）を投与した場合の危険面積あたりの壊死面積（ＡＮ／ＡＲ）ならびに左室の壊死面積（ＳＮ／ＬＶ）を示す。Ｙ軸は閉塞容量（ｍｍ３）に対する効果を測定する。新規なデキサナビノール誘導体、ＰＲＳ−２１１，０９２で処置された動物では閉塞サイズが明らかに減少する。
【０１６６】
本発明を以上、それを例示するためにその多様な特異的実施態様に関して説明してきた。このような特異的に開示された実施態様を限定と解釈すべきではない。多くの他の特異的な実施態様が、ここに記載された本発明者らの開示に基づき、本技術分野の熟練者には自明の通りであり、本発明は特許請求の範囲に定義された本発明の精神および範囲によってのみ拘束されるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
出発原料としてデキサナビノールを用いて、ＰＲＳ−２１１と命名されたある種の好ましい化合物を合成するために使用される合成図を示す。
【図２】
標識ＭＫ−８０１の置換によって測定した、ＮＭＤＡ受容体への本発明による化合物の結合曲線を示す。
【図３】
新規なデキサナビノール誘導体によるＴＮＦαの阻害を示す。
【図４】
新規なデキサナビノール誘導体によるＰＧＥ２の阻害を例示する。
【図５】
新規なデキサナビノール類似体による酸化窒素シンターゼの阻害を例示する。
【図６〜８】
好ましいデキサナビノール誘導体で処置したラットにおける一過性の中脳動脈閉塞後死亡率の低下ならびに臨床的および神経学的結果の改善を示す。
【図９および１０】
好ましいデキサナビノール誘導体の炎症阻害作用を耳浮腫試験で評価したＥＤ５０を示す。
【図１１】
階段試験により評価した、好ましいデキサナビノール誘導体処置動物における逆側性パフォーマンスの改善を例示する。
【図１２】
一過性ＭＣＡｏ試験で評価した、好ましいデキサナビノール誘導体処置処置動物における脳梗塞のサイズの変化を示す。
【図１３】
敗血症ショック、心筋虚血モデルで評価した、好ましいデキサナビノール誘導体処置動物における壊死面積の変化を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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