(57)【要約】本発明は、歯科修復材料及び有効量のカゼインホスホペプチド(CPP)-非結晶リン酸カルシウム(ACP)複合体又はカゼインホスホペプチド(CPP)-非結晶フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体を含む歯科修復組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
歯科修復材料及び有効量のカゼインホスホペプチド(CPP)-非結晶リン酸カルシウム(ACP)複合体又はカゼインホスホペプチド(CPP)-非結晶フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体を含む歯科修復組成物。
【請求項２】
CPPがアミノ酸配列-Ser(P)-Ser (P)-Ser (P)-を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ACPがアルカリ条件下で形成される、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
ACPが、x≧1である式Ca3(PO4)2.x H2Oのものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
ACFPがアルカリ条件下で形成される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
ACFPが、x≧1である式Ca2F(PO4)2.x H2Oのものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
ACFPが更にACPを含み、ACPとACFPがn:1の比にあり、nが１以上の整数である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
歯科修復材料が歯科用セメントである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
歯科用セメントがグラスアイオノマーセメントである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
有効量のCPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体が0.01〜80重量%である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
有効量が0.5〜10重量%である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
有効量が1〜5重量%である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
２〜１０のpHを有する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
pHが５〜９である、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
pHが７〜９である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
歯科修復材料に対するACP又はACFP、及びCPPの添加を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の製造方法。
【請求項１７】
歯科修復材料に対するCPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体の添加を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の製造方法。
【請求項１８】
動物の虫歯の処置及び／又は予防を目的とする医薬の調製のための、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物、あるいは少なくとも１６又は１７に記載の方法によって製造される組成物の使用。
【請求項１９】
動物がヒトである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
動物の虫歯の処置及び／又は予防の方法であって、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物、あるいは少なくとも１６又は１７に記載の方法によって製造される組成物を提供し、そして処置及び／又は予防が必要な動物の歯に適用すること、を含む方法。
【請求項２１】
動物がヒトである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
(a)歯科修復材料並びに(b)CPP-ACP複合体及び／又はCPP-ACFP複合体と、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の調製にそれらを使用するための説明書とを一緒に含むパーツキット。
【請求項２３】
(a)歯科修復材料、(b)カゼインホスホペプチド、(c)カルシウムイオン及び(d)リン酸イオン、そして任意にフッ化物イオンと、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物の調製にそれらを使用するための説明書とを一緒に含むパーツキット。
【請求項２４】
更にフッ化物イオンを含む、請求項２３に記載のパーツキット。
【請求項２５】
いずれかの実施例を参照して本明細書に実質的に記載されている、請求項１に記載の組成物。
【請求項２６】
いずれかの実施例を参照して本明細書に実質的に記載されている、請求項１６に記載の製造方法。
【請求項２７】
いずれかの実施例を参照して本明細書に実質的に記載されている、請求項１８に記載の使用。
【請求項２８】
いずれかの実施例を参照して本明細書に実質的に記載されている、請求項２０に記載の虫歯の処置及び／又は予防の方法。
【請求項２９】
いずれかの実施例を参照して本明細書に実質的に記載されている、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載のパーツキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホスホペプチドによって安定化された、非結晶リン酸カルシウム及び／又は非結晶フッ化リン酸カルシウムを含む歯科修復材料に関する。これらの歯科修復材料は、それらが修復の周囲で進行しうる初期段階の虫歯を再石灰化（修復）するというように、歯牙構造を保護する優れた抗う蝕性(anticariogenic)の特性を有する。本発明の歯科修復材料の作製方法並びに虫歯の処置及び予防方法も提供する。本発明はまた、ホスホペプチドによって安定化された非結晶リン酸カルシウム及び／又は非結晶フッ化リン酸カルシウムを含むパーツキットも提供する。
【背景技術】
【０００２】
虫歯は、歯垢の歯科病原性(odontopathogenic)細菌によって食物中の糖の発酵から産生される有機酸による歯の硬組織の脱灰によって開始される。
【０００３】
虫歯は未だに主要な公衆衛生問題であり、そして修復された歯の表面は、修復物の辺縁の周囲で更なる虫歯にかかりやすいことがある。
【０００４】
溶液中のカゼインホスホペプチド−非結晶リン酸カルシウム複合体(CPP-ACP)及びCPP安定化非結晶フッ化リン酸カルシウム複合体(CPP-ACFP)は、動物及びヒトのin situの虫歯モデルにおいて、エナメル質の脱灰を防ぎ、そしてエナメル質表層下病変の再石灰化を促進することが証明されている[Reynolds 1997 patent application, PCT/AU98/00160]。
【０００５】
活性CPPは、米国特許第5,015,628号において明記されており、そして以下のようにペプチドであるBos αs1−カゼイン X-5P (f59-79) [1]、Bos β−カゼイン X-4P(f1-25) [2]、Bos αs2−カゼイン X-4P (f46-70) [3]及びBos αs2−カゼイン X-4P (f1-21) [4]を含む：
【化１】
2004531553.tif 000002
【化２】
2004531553.tif 000003
【０００６】
これらのペプチドは、非常に可溶性の非結晶リン酸カルシウム及び非結晶フッ化リン酸カルシウムの新規形態を安定化する[Reynolds 1997 patent application, PCT/AU98/00160]。
【０００７】
グラスアイオノマーセメント(GIC)は水性であり、歯の色をしており、そして基材及び修復物として歯科分野において使用される化学的接着材料である。修復物周辺の微小漏洩は尚も重要な問題であり、これは基礎をなしている歯牙組織のう蝕に至ることがある(Bergenholtz etal., 1982; Davisef al., 1993; Pachuta andMeiers, 1995)。しかしながら、GICはイオン放出材料であり、そして前記セメント由来のフッ化物イオン取り込み及び徐放は有意な抗う蝕特性をもたらす(Forss, 1993; Williamset al, 1999)。
【０００８】
GIC内へのCPP-ACPの包含がGICマトリックス内へのカルシウムイオンの取り込みをもたらし、それらを利用不能にすることは予期されるが、驚いたことに、我々は、標準的な、市販のGIC内へのCPP-ACPの取り込みがマイクロテンザイルの結合強度の観点で予期しなかった優れた特性を有するGICをもたらしたことを発見した。総合力及びイオン放出。事実、驚いたことに、CPP-ACPを含むGICが、根底をなす象牙質を有意に再石灰化することができたのに対し、標準的なGICはできなかった。これらのことは、優れた物理化学的特性及び抗う蝕特性を有する、CPP-ACP又はCPP-ACFPを含む新規な歯科修復材料である本発明の基礎に起因する。
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、歯科修復材料及び有効量のカゼインホスホペプチド(CPP)−非結晶リン酸カルシウム(ACP)複合体又はカゼインホスホペプチド(CPP)−非結晶フッ化リン酸カルシウム(ACFP)複合体を含む歯科修復のための組成物に関する。
【００１０】
本発明の１つの観点により、アミノ酸配列-Ser(P)-Ser (P)-Ser (P)-を含むホスホペプチドによって安定化された、.非結晶リン酸カルシウム(ACP)又は非結晶フッ化リン酸カルシウム(ACFP)を添加した歯科修復材料を含む、歯科修復のための組成物が提供される。好ましくは、ACP及びACFPはアルカリ条件下で形成される。非結晶リン酸カルシウムは、好ましくは、近似式Ca3(PO4)2.x H2O（ここで、x≧1であり、すなわち、Ca3(PO4)2当たり１又は複数のH2Oが存在する）のものである。リン酸カルシウム誘導体は、近似式Ca2F(PO4). x H2O（ここで、x≧1である）のフッ化リン酸カルシウムであってもよく、これは非結晶フッ化リン酸カルシウム(ACFP)を提供する。更に好ましくは、リン酸カルシウム誘導体は、n:1のACPとACFPの混合物であってもよく、ここで、nは１以上の整数であり、例えば1:1はCa5F(PO4)3をもたらし、又は2:1はCa8F(PO4)5をもたらす。
【００１１】
上述の正確な比、及び非結晶リン酸カルシウム中の成分の比率は、例えば、成分間の相互作用に起因して、最終組成物において異なるであろうことが予想される。
【００１２】
ホスホペプチドは任意の供給源由来のものでもよく；カゼイン又は他のリン酸(phospho-acid)に富むタンパク質のトリプシン消化によって、あるいは化学合成又は組換え合成によっても得られるが、但し、それはコア配列-Ser(P)Ser(P)-Ser(P)-を含んで成る。このコア配列に隣接している配列は任意の配列でよい。しかしながら、αs1(59-79)[1], β(1-25) [2],αs2(46-70) [3]及びαs2(1-21) [4]の隣接配列が好ましい。当該隣接配列は、任意に、１又は複数の残基の欠失、付加又は保存的置換によって修飾されうる。隣接領域のアミノ酸組成及び配列は、ペプチドの高次構造が維持され、そしてカルシウムイオンと相互作用するその全てのホスホリル及びカルボキシル基がモチーフの構造的作用に寄与するように維持される限り、重要でない。
【００１３】
歯科修復材料の基礎は、グラスアイオノマーセメント、複合材料又は適合可能で任意な他の修復材料であってもよい。歯科修復材料に含まれるCPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体の量が0.01〜80重量%、好ましくは0.5〜10重量%、そして更に好ましくは1〜5重量%であることが好ましい。上述の因子を含む本発明の歯科修復材料が、歯科業務に応用可能な種々の形態で調製され、そして使用されうる。本発明に従う歯科修復材料は更に、特定の歯科修復材料の型及び形態に依存して、他のイオン、Zn2+, Ag+等又は他の追加成分を含むことがある。CPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体のpHが、２〜１０の間、更に好ましくは５〜９の間、そしてより更に好ましくは７〜９の間であることが好ましい。CPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体を含む歯科修復材料のpHが、２〜１０の間、更に好ましくは５〜９の間、そしてより更に好ましくは７〜９の間であることが好ましい。
【００１４】
本発明はまた、修復組成物の製造方法に関する。好ましくは、当該方法は、基礎の歯科修復材料に対する、上述のようにホスホペプチドによって安定化される、ACP及び／又はACFPの添加を含む。
【００１５】
本発明はまた、虫歯の処置及び／又は予防のための上述のような修復組成物の使用に関する。
【００１６】
本発明はまた、動物の虫歯の処置及び／又は予防の方法であって、本発明に従う組成物又は本発明に従い製造された組成物を提供し、そして処置及び／又は予防が必要な動物の歯に適用すること、を含む方法を提供する。
【００１７】
本発明はまた、(a)歯科修復材料及び(b)CPP-ACP複合体又はCPP-ACFP複合体を、歯科修復組成物の調製のための使用のための説明書と一緒に含むパーツキットに関する。
【００１８】
本発明はまた、(a)歯科修復材料(b)カゼインホスホペプチド(c)カルシウムイオン及び(d)リン酸イオン、そして任意にフッ化物イオンを、歯科修復組成物の調製のためのそれらの使用のための説明書と一緒に含むパーツキットに関する。
【００１９】
本明細書はヒトにおける適用に特に言及しているが、本発明が獣医の目的にとっても有用であることがはっきりと理解されるだろう。このように、全ての観点において、本発明は、家畜、例えばウシ、ヒツジ、ウマ及び家禽にとって；コンパニオンアニマル、例えばネコ及びイヌにとって；そして動物園の動物にとって有用である。
【００２０】
本発明の詳細な説明
本発明は、以下の限定しない実施例のみの参照によって詳細に説明される。
【実施例１】
【００２１】
実施例１ グラスアイオノマーセメント内へのCPP-ACPの取り込み
圧縮強度アッセイ及び湿式硬化時間アッセイ(wet setting time assay)のためのCPP-ACPを含むGICの調製
圧縮強度試験のために、4mmの直径ｘ6mmの長さの２４個のシリンダーが、グラスアイオノマーセメント(GIC)から作製され、そして正味の硬化時間試験のために、10mmの直径ｘ5mmの厚さの１２枚のディスクが作製された。４つのグループ（A、B、C、D）が標本により形成された(表１）。１グループ当たり６つの標本が圧縮強度試験のために作製され、そしてグループ当たり３つの検体が正味の硬化時間試験のために作製された。
【００２２】
グループA（コントロール）が自然硬化グラスアイオノマーセメント(Fuji IX GP, 液体のバッチ番号080561及び粉末のバッチ番号061051, GC International, Tokyo, Japan)を用いて調製された。グループB、C及びDは、それぞれ３．６：１の粉末：液体の比率でそれぞれ取り込まれた０．７８、１．５６及び３．９１%w/wを含む同一のGICから調製した。CPP-ACP(Recaldent(商標))は、Bonlac foods Ltd (Melbourne, Australia)から入手した。実験グループの場合、CPP-ACPとGIC粉末を手動で混合し、そしてプラスチック容器中で振とうし、そして標本の調製まで４℃で維持した。全ての標本に使用するGICの液体及び粉末：液体の比は、GICの製造業者によって指示された通りである。生成物は、混合前に室温に到達するように放置された。全てのグループの場合、前記粉末及び前記液体は手動で２０秒間混合され、そして次に、混合物は、それぞれの相当する試験につき、型の中に据えられた。圧縮強度及び正味の硬化時間の試験は、ISOの方法(ISO, 1991)に従い実施された。
【００２３】
象牙質に対するマイクロテンザイル結合強度
チモールを含む塩溶液中で保存されたう蝕のない人の臼歯が、抜き取りから２ヶ月以内に使用された。半分がGICで、半分が象牙質の１７個の棒状の標本が、上述のように、1.56% w/w CPP-ACPを含むGIC(Fuji IX GP, バッチ番号9909021, GC International, Tokyo, Japan)を用いて調製された。コントロールの標本(n=17)は通常のGICを用いて調製された。全ての標本の液体及び粉末：液体の比は、市販の製品と同一のままであった。マイクロテンザイル結合強度は、既述の方法(Phrukkanon et al., 1998 ; Tanumiharjaet al., 2000)に従い、破壊するまで、1mm/分のクロスヘッドスピードの張力で力をかけて実施された。平均結合強度の値は、標準的な式(ISO, 1991)を用いて計算され、そして破砕した標本は、走査型電子顕微鏡(SEM 515; Philips, Eindhoven, The Netherlands)において、破壊の形態を評価するために観察された。
【００２４】
イオン測定及びCPP検出
6mmの直径ｘ2mmの厚さの１２枚のディスクを、1.56% w/w CPP-ACPを含む実験用GICの処方を用いて調製し、そして１２のコントロールを、未修飾GICから調製した。GICは上述のように混合し、型に注入され、濃縮され、そして３７℃及び１００％RHに設定されるよう１時間放置された。硬化の間、充填された型の下部及び上部が、手の圧力のもと、マイラーストリップ(mylar strip)及び顕微鏡スライドによって覆われた。ディスクは型から取り除かれ、そして個別に封をされたチューブ内に据えられた。実験用ディスクのうち６つがpH6.9の2mlの脱イオン水(Milli-Q Reagent water System, Millipore Corporation)中、そして残りの６つは、pH5.0の50mMの乳酸ナトリウム(Ajax Chemicals, Auburn, NSW)緩衝液中で、３７℃でインキュベートされた。同一の手順がコントロールでたどられた。溶液は２４時間毎に３日間交換され、そしてカルシウム、無機リン酸塩及びフッ化物イオンの放出が各溶液中で測定された。カルシウム濃度は原子吸光分析を用いて決定され(Adamson and Reynolds, 1995)、無機リン酸塩は比色定量により(Itaya and Ui, 1966)、そしてフッ化物イオンは選択電極を用いて(Ion 85 Radiometer, Copenhagen, Denmark)決定された。イオンの放出は、μmol/mm2（曝露されたGICの表面積）で表した。
【００２５】
溶液中のCPPの存在は、2,5-デヒドロキシ安息香酸/66%の水、33%CH3CN及び1%ギ酸のマトリックスによる、マトリックス支援レーザーイオン化質量分析(MALDI-MS)(Voyager-DE, Perspective Biosystems; Farmingham, MA, USA)を用いて決定された。
【００２６】
統計解析
圧縮強度及び正味の硬化時間の試験からのデータは、圧縮強度に最小有意差(LSD)を、そして正味の硬化時間にボンフェローニテストを用いる、一元配置分散分析(ANOVA)にかけられた。マイクロテンザイル結合強度由来のデータは、スチューデントｔ検定(p＜0.05)を用いて比較された。カイ自乗分布(p＜0.05)は、破砕された標本の破壊の型を検出するためにしようされた。イオン放出解析由来のデータは、スチューデントｔ検定(p＜0.05)を用いて比較された。
【００２７】
結果
圧縮強度及び正味の硬化時間
GICについての圧縮強度及び正味の硬化時間の平均値を表１に示す。全ての標本についての平均圧縮強度は、118.3MPa〜169.6MPaに及び、最高値は1.56% CPP-ACPを含むGICで得られた。平均の硬化時間は523s〜186sに及んだが、3.91% CPP-ACPを含む標本（グループD）のみが他のものと有意に異なった。
【００２８】
象牙質に対するマイクロテンザイル結合強度
表２は、1.56% w/wのCPP-ACPを含むGIC及びコントロールについての平均マイクロテンザイル結合強度の値並びに破砕した標本の破壊の型を示す。有意により高い結合強度の値が、コントロール(7.97±2.61 MPa)よりも、CPP-ACP含有GIC(10.59±4.00 MPa)において見られた。SEMを用いて解析された場合の破壊の型の分布も、有意に異なることが明らかとなった(p＜0.05)。タイプ２の破砕はCPP-ACP含有GICでよりしばしば起こり、一方、タイプ４はコントロールでよりしばしば起こった（表２）。３６０倍の倍率でSEMによって試験された２つのセメントの微細構造は、CPP-ACP含有セメントと比較してコントロールはより多孔性があり、そして粗い破砕面であると思われるが、おおむね類似しているようであった。
【００２９】
イオン及びCPPの放出
1.56% w/wのCPP-ACPを含むGIC及びコントロールのGICからの、水(pH6.9)及び乳酸ナトリウム緩衝液(pH 5.0)中でのフッ化物、カルシウム及びリン酸塩の放出の平均値を表３，４及び５に示す。水中でのフッ化物の放出パターンは試料とコントロールとの間で類似しており、最高の放出は最初の２４時間の間に起こり、そして遅いが持続性の放出が次の２４時間の期間内に起こった（表３）。フッ化物の放出は、CPP-ACPを含むGIC及びコントロールのGICの両方の材料とも、pH6.9の水の中よりも、ph5.0の乳酸ナトリウム緩衝液中の方が有意により多かった。有意により多いフッ化物の放出は、両方のpH値においてコントロールよりもCPP-ACP含有GICに見られた（表３）。
【００３０】
GICからのカルシウム放出の値を表４に示す。中性pHの水においては、CPP-APC含有GIC又はコントロールのいずれからもカルシウムは放出されなかった。カルシウム放出は、pH5.0の乳酸ナトリウム緩衝液中でのCPP-APC含有GICにおいてのみ見られた。当該放出はフッ化物と比較して少ないが、３つの２４時間の期間の間持続性であった（表４）。
【００３１】
水(pH 6.9)及び乳酸ナトリウム緩衝液(pH 5.0)中でのGICからの無機リン酸塩の放出を表５に示す。両方のpH値において、リン酸塩の放出は、最初の２４時間の期間の間、コントロールからよりもCPP-ACP含有GICからのほうが有意により多かった。無機リン酸塩の放出は、両方の材料ともに、pH 6.9の水中よりもpH 5.0の乳酸ナトリウム緩衝液中で有意により多かった。
【００３２】
1.56% w/w CPP-ACPを含むGIC及びコントロールGICとの２４時間のインキュベーション後の、乳酸ナトリウム緩衝液(pH 5.0)及び水(pH 6.9)のMALDI-MS解析は、CPPが、CPP-ACPを含むGICとのインキュベーション後にのみpH 5.0の緩衝液中で検出されうることを明らかにした。得られた質量スペクトルは、標準的なCPP-ACPで観察されたものと同一であった。
【００３３】
結論
CPP-ACPの安定型複合体は、GICのガラス粉末内に取り込まれ、そして予想されていたものに反して、カルシウムイオン、リン酸イオン及びCPPがGICマトリックス内に結合しなかったが、放出されて優れた物理化学的特性及び抗う蝕特性を有するセメントを産生した。
【００３４】
種々の臨床的な適用においてGICを用いる主な理由は、異なる表面、例えば、エナメル質、象牙質、及び樹脂合成物に対して化学結合するそれらの能力にある(Akinmade and Nicholson, 1993)。GICは樹脂合成物と一緒に(Li et al., 1996; Pereira et al., 1998)、非外傷性修復処置(Atraumatic Restorative Treatment(ART))(Frencken et al., (1996)、トンネルの修復(tunnel restoration)(Svanberg, 1992)及び乳歯の修復(Frankenberger et al., 1997)において慣習的に使用されている。したがって、結合強度は、GICの重要な特性である。CPP-ACP含有GICの平均マイクロテンザイル結合強度の値は、コントロールのGICのものより優れていた。使用する試験方法は、異なる象牙質の厚さ、象牙質細管を有する標本及び罹患した象牙質の標本上で連続的に使用された(Phrukkanon, et al., 1998)。したがって、象牙質質の基板の質、深さ及び水分のような因子(Burrow et al., 1994;Tagami et al., 1993)はこの研究結果に影響を及ぼさなかった。
【００３５】
マイクロテンザイル結合強度試験中のGICと象牙質との間の接着における最も一般的な破壊の型はタイプ４、すなわちGIC内凝集破壊である(Tanumiharja et al., 2000)。これは、この研究においてみられるコントロールGICの破壊の支配的な型である。CPP ACP-含有GICについての破壊の支配的な型はタイプ２、すなわちGIC内の部分的凝集破壊及びGICと象牙質との間の部分的接着破壊である。
【００３６】
CPP ACP-含有GIC及びコントロールからのイオンの放出に関して、pH 5.0の乳酸ナトリウム緩衝液中でのフッ化物の放出は水(pH 6.9)よりも有意に高かったことが示された。この発見は通常のGICで既に報告されている(Forss, 1993; Kuhn and Wilson, 1985)。しかしながら、この研究において、フッ化物の放出は、両方のpH値で、コントロールよりもCPP ACP-含有GICからの方が有意により多く、これは予想しなかった結果であった。あらゆる理論に縛られることなく、CPP-ACPは、恐らくはセメントマトリックスから放出されるカゼインホスホペプチド−非結晶フッ化リン酸カルシウム(CPP-ACFP)複合体によって、GICからのフッ化物イオンの放出を促進するようである。
【００３７】
無機リン酸塩が、コントロールGICから放出されるものよりも、両方のpH(5.0及び6.9)でCPP-ACP GICから有意により放出された。
【００３８】
この実施例において、pH 5.0で７２時間後のCPP ACP-含有GICからの総放出率は、フッ化物が72.25±9.99μmol/mm2、無機リン酸塩が1.85±0.1μmol/mm2、そしてカルシウムイオンが0.92±0.15μmol/mm2であった。CPP ACP-含有GICのマイクロテンザイル結合強度及びCPP-ACFP複合体を放出するセメントの能力がより高いことは、1.56% CPP ACP-含有GICが、向上したう蝕性能を有する、優れた修復物／基材であったことを示す。
【００３９】
実施例２  GIC含有CPP-ACFPからのCPP-ACFPの放出による象牙質の再石灰化
通常の塩溶液中で保存された、ひび及び欠損のない、新たに引き抜かれた虫歯を持たない人の第三大臼歯は、円筒のダイヤモンドドリル、高速タービン及びエア−ウォータークーラントを用いて、近心及び遠心の両方の表面のセメントとエナメル質の接合に沿って、7mmの長さｘ3mmの幅の２つの箱型の窩洞を調製するために使用された。窩洞の縁は、９０度にできる限り近い窩洞面の角度を達成するために、低速円筒ダイヤモンドドリルを用いて仕上げられた。歯は、２つのグループ（A、B）に分けられた。グループA由来の歯は、自然硬化GIC(Fuji IX GP カプセル型、バッチ番号140493, GC International, Tokyo, Japan)で修復され、そして実験用のグループであるグループB由来の歯は、同一のGIC+実施例１のように調製した1.56% w/w CPP-ACPを用いて修復した。全ての検体についてのGICの液体及び粉末：液体の比は市販の製品のままとした。材料は室温で混合され、プラスチックのスパチュラを用いて窩洞内に据えられ、そして３７℃及び１００％RHに設定されるよう１時間放置された。修復が完了すると、全ての縁が曝露されるように流水のもとでファインポリッシングディスク(Soflex)を用いて研磨し、そして各窩洞面の縁の完全性が光学顕微鏡のもと２０倍の倍率で確認された。
【００４０】
GIC修復物を含む歯根は、大量の散水のもとで低速ダイヤモンドソーを用いて切断された。２つのマニキュア液のコートが、窩洞の縁の周囲の1mmの窓(window)のみを残して、歯の全面に適用される。各歯は、2.2mMの塩化カルシウム、2.2mMのオルトリン酸二水素ナトリウム及びpH 5.0の50mMの酢酸から成る25mlの酸緩衝液を含む個々のプラスチック容器中で保存された。歯は当該溶液中で４日間保存され、そして溶液は２４時間毎に新しいものに交換された。検体を脱灰溶液から取り出し、水道水で徹底的にすすぎ、そして、100μmの厚さに研磨された縦断面を作るために、水冷ダイヤモンドソーマイクロトームで修復物を通り越して切断した。生じたスライドは、阻害媒体(inhibition medium)としてキノリンを用いる偏光顕微鏡を用いて病変形成について評価された。
【００４１】
図１は、フッ化物放出GICによって提供される非常に小さな保護による、GIC修復物に近接している象牙質中の実質的な表層下の病変を示す。他方で、図２は、GICからのCPP-ACFPの放出によって提供される劇的な保護（再石灰化）による、ほとんど形成しなかった表層下の病変を示す。これらの結果は、フッ化物放出GIC内へのCPP-ACPの包含が、GIC修復物周囲の初期段階の虫歯を再石灰化（修復）する顕著な能力を生み出すことを示す。
【００４２】
他の利点及び当該基本発明の改良及びその構築は、上述のように当業者に自明であり、そして全ての改良及び応用は本発明の範囲内に含まれる。
【表１】
2004531553.tif 000004
【表２】
2004531553.tif 000005
【表３】
2004531553.tif 000006
【表４】
2004531553.tif 000007
【表５】
2004531553.tif 000008
【表６】
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【表７】
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【表８】
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【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】酸性緩衝液で処理されたGICで再石灰化され、そして偏光顕微鏡を用いて可視化された縦断面図。
【図２】酸性緩衝液で処理された、CPP-ACFPを含むGICで再石灰化され、そして偏光顕微鏡を用いて可視化された縦断面図。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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