(57)【要約】生分解性マイクロスフェアーが定位注入によって腫瘍へ、腫瘍周辺領域（peritumoral area）へ、あるいは同時に腫瘍および腫瘍周辺領域へ直接的に投与される、手術不能な腫瘍のヒトにおける処置における使用のための医薬品の製造のための抗ガン剤を放出する生分解性マイクロスフェアーの使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生分解性マイクロスフェアーが定位注入によって腫瘍へ、腫瘍周辺領域（peritumoral area）へ、あるいは同時に腫瘍および腫瘍周辺領域へ直接的に投与される、手術不能な腫瘍のヒトでの処置における使用のための医薬品の製造のための抗ガン剤を放出する生分解性マイクロスフェアーの使用。
【請求項２】
生分解性マイクロスフェアーが、抗ガン剤の放出を遅らせ且つ実質空間（parenchymal space）において少なくとも３週間、好ましくは少なくとも４週間の期間のあいだ治療的に有効な濃度を維持するポリマーでコーティングされる(coated)、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
手術不能な腫瘍が、深部の腫瘍または機能的な領域中に局在する腫瘍である、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
手術不能な腫瘍がグリア芽細胞腫のような脳腫瘍、耳鼻咽喉球（otorhinolaryngologic sphere）の腫瘍、直腸腫瘍、骨、肝臓または脳の転移、あるいは頭蓋咽頭腫（craniopharyngiomas）のような非悪性の嚢胞性腫瘍(cystic tumors)である、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
腫瘍が脳腫瘍である、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
脳腫瘍がグリア芽細胞腫、転移および頭蓋咽頭腫（craniopharyngiomas）のような非悪性の嚢胞性腫瘍(cystic tumors)の１つである、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
抗ガン剤が、放射線増感抗ガン化合物(radiosensitizing anticancer compound)または少なくとも１つの放射線増感抗ガン化合物を含む抗ガン化合物の混合物からなり、該ガン化合物は、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、白金剤（カルボプラチンおよびシスプラチンのような）、タキサン（ドセタキセルおよびパクリタセル(paclitasel)のような）を含む群より選択される、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項８】
抗ガン剤が５−フルオロウラシルである、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
神経保護化合物が添加される、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
マイクロスフェアーが、１〜１．５％（好ましくは１．２５％）（重量／体積）の粘度調節剤（viscosity modifier）（カルボキシメチルセルロースナトリウムのような）、０．５〜１．５％（好ましくは１％）の界面活性剤（Polysorbate８０（登録商標）のような）、および３．５〜４．５％（好ましくは４％）の等張化剤（例えば、マンニトール）を含む滅菌溶液中で懸濁される、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１１】
懸濁液が３ｍｌの滅菌溶液および７００〜８００ｍｇの生分解性マイクロスフェアーを含む、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
５−ＦＵの量が５０〜２００ｍｇである、請求項８に記載の使用。
【請求項１３】
マイクロスフェアーが、１回以上繰り返される定位注入によって投与される、請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
マイクロスフェアーの投与の後に放射線療法が行われる、請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
マイクロスフェアーが、抗ガン剤およびポリマーが有機溶媒中で分散している有機相を調製すること、該有機相および水相を乳化すること、水を添加することによって有機溶媒を抽出すること、および最後に、このようにして得られるマイクロスフェアーの懸濁液を濾過することを包含する方法によって調製される、請求項１に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本特許出願は、手術不能な腫瘍（特に、グリア芽細胞腫（glioblastomas）のような脳腫瘍、耳鼻咽喉球（otorhinolaryngologic sphere）の腫瘍、直腸腫瘍、骨、肝臓または脳の転移（brain matastasis）、あるいは頭蓋咽頭腫（craniopharyngiomas）のような非悪性の嚢胞性腫瘍(cystic tumors)）のヒトにおける処置に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリア芽細胞腫は、National  Organization for Rare Disordersによって挙げられた奇病の群の中に含まれる。
【０００３】
悪性グリア腫瘍(malignant glial tumors)は、系統に依存して、頭蓋内の腫瘍の１３〜２２％を代表する中枢神経系の原発性腫瘍（primitive tumors）である。組織学的に、２つの型の悪性グリア腫（未分化星状細胞腫（anaplasic astrocytomas）およびグリア芽細胞腫）が実際に分類されており、後者はこれらの腫瘍の最も少ない分化型を代表する。
【０００４】
現在のところ、悪性グリア腫瘍に対する有効な処置は存在していない。グリア芽細胞腫に罹患した患者は、外科手術が化学療法および放射線治療と組み合わされた場合でさえ、１年以上の間生存しない。
【０００５】
悪性グリア腫の処置は、主に３つの現象（phenomena）によって制限される。
【０００６】
第１は、中枢神経系を体の他の部分（the rest）から隔てる血液−脳関門（ＢＢＢ）の存在である。このＢＢＢは、小さな脂溶性分子のみを通過させる。他の分子は、中枢神経系に到達させるために非常に高い用量で投与されなければならず、この投与は重い全身性副作用という代償を払わされる。
【０００７】
グリア腫瘍の処置の有効性を制限する第２のファクターは、これらの腫瘍の浸潤する性質である。脳は高度に機能的な器官であるので、その用語の腫瘍学的意味の範囲内で、これに広範囲な外科手術を行うことは不可能である。可能である最も完全な切除は、顕微鏡による完全切除のみであり、切除腔（excision cavity）の壁の中に多数の浸潤する腫瘍細胞を残すだろう。多くの著者が、さらに、外科手術され且つ放射線で処置された悪性グリア腫瘍の９０％がもとの腫瘍位置の２センチメートル以内に再発を示すことを明らかにしてきた。
【０００８】
グリア腫瘍の処置の有効性を制限する最後のファクターは、低い治療指数である。腫瘍細胞は、何らかの方法で、極度に壊れやすく且つ例えば放射線治療または特定の抗ガン剤によって引き起こされる攻撃に敏感な正常組織の後ろへ隠れる。それゆえ、正常な神経細胞を破壊することなく腫瘍細胞を破壊することは困難である。
【０００９】
グリア腫瘍の処置においてなされる進歩は不十分である（Kornblith P.L., Walker M., Chemotherapy for malignant gliomas. J.  Neurosurg., 68: 1-17, 1988; Shapiro W.R., Green S.B., Burger P.C., Selker R.G., VanGilder  J. C., Robertson J.T., Mahaley S.M., A randomized comparison of intra-arterial versus intravenous BCNU with or without intravenous 5−fluorouracil, for newly diagnosed patients with malignant glioma, J. Neurosurg., 76: 772-781, 1992）。
【００１０】
現在のところ、外科的切除の後のグリア芽細胞腫の標準的な処置は、外部放射線療法に基づく。これは、１年より長い生存期間を達成させない。１−（２−クロロエチル）−３−シクロヘキシル−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）を用いる化学療法と放射線療法の組み合わせは、未分化星状細胞腫（lasic astrocytomas）においてのみ有効である。これは、１８ヶ月での生存者のパーセンテージを引き上げるだけであり、生存期間を改善しないので、適度に貢献しているに過ぎない。
【００１１】
さらに、免疫療法はこの領域において確立されておらず、また遺伝子治療は、さらに立証されるべきである。
【００１２】
抗ガン剤の局所濃度を増大させる目的でいくつかの技術が研究されてきている（例えば、血液−脳関門の浸透圧破裂（osmotic rupture）、脳脊髄液への注入、頚動脈内注入（intracarotid infusion）および皮下レザバー（subcutaneous reservoirs）を用いた腫瘍内投与 (Tamargo R.J. and Brem H., Drug  delivery to the central nervous system, Neurosurgery Quarterly, 2: 259-279, 1992)）。これらの技術はいずれも、患者の生存時間を長期化することなく、またこれらのうちいくつかは非常に有毒であることが証明された。
【００１３】
ここ数年、製剤薬学研究により、有効物質（active substances）を分解から保護し、そして所定の期間にわたり、それらの制御された局所的放出を可能にし、一方それと同時に全身性副作用を軽減するためのインプラント可能な（implantable）ポリマーシステムの開発が可能になってきている。これらのインプラント可能なポリマーシステムの利点は、最近、いくつかのチームに中枢神経系の病理学におけるそれらの適用を研究するきっかけを与えている(Larger R., Polymer implants for drug delivery in the brain, J. Controlled Release, 16:53-60,1991)。特に、悪性神経膠腫（malignant  gliomas）の腫瘍切除壁へインプラントされるこのようなシステムは、腫瘍の再発を遅らせ、そして患者の生存を長期化する。分離された（isolated）悪性細胞は、手術を施した腔（operating cavity）の周りで生き残り、これらの細胞は、手術位置の２センチメートル以内に生じる再発の９０％の原因である。この領域において、神経組織は機能的であり、また血液−脳関門は依然として完全な状態であり、このことは従来の化学療法および放射線療法の作用（action）を制限する。
【００１４】
活性分子を放出する種々のインプラント可能なポリマーシステムは、動物において開発され、そして試験されてきた。
【００１５】
臨床研究における適度な結果にも関わらず、ＢＣＮＵ（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））を放出するＰＣＰＰ−ＳＡ（ポリ［１，３−ビス（カルボキシフェノキシ）プロパン−コ−セバシン酸］）からなる生分解性ディスクのシステムが開発されてきた(Brem H.,Polymers to treat brain tumors, Biomaterials 11: 699-701, 1990; Brem H., Mahaley M.S., Vick N.A., Black K.L., Schold S.C., Eller T.W., Cozzens J. W., Kenealy J.N.Interstitial chemotherapy with drug polymer implants for the treatment of recurrent gliomas, J. Meurosurg. 74: 441-446, 1991; Brem. H., Walter K.A., Langer R., Polymers as controlled drug delivery devices for the treatment of malignant brain tumors, Eur. J. Pharm. Biopharm., 39 (1): 2-7, 1993, Brem H., Piantadosi S., Burger P.C., Walker M. et al., Placebo-controlled trial of safety and efficacy of intraoperative controlled delivery by biodegradable polymers of chemotherapy for recurrent glioma, Lancet, 345: 1008-1012, 1995)。
BCNUを放出するマイクロスフェアーが開発されたが、動物実験の結果は特に有望なものではなかった(Torres A.I.,Boisdron-Celle M., Benoit J.P., Formulation of BCNU-loaded microspheres: influence of drug stability and solubility on the design of the microencapsulation procedure, J. Microencapsulation, 13: 41-51, 1996； Painbeni T., Venier- Julienne M.C., Benoit J.P., Internal morphology of poly(D,L-lactide-co-glycolide) BCNU-loaded microspheres. Influence on drug stability, Eur. J. Pharm. Biopharm, 1998, 45,31-39)。
【００１６】
５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を放出するマイクロスフェアーは、本発明者らによって開発され、ＷＯ  ００／６９４１３に開示される。これらのマイクロスフェアーは、放射線療法の前（即ち、腫瘍の切除の後）に、組織内注入によって手術位置へインプラントされる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
これらのマイクロスフェアーを使用することによって、本発明者らは、実に好都合に、グリア芽細胞腫を患う患者の生存期間を二倍にすることに成功した。この理由は、本発明に従うマイクロスフェアーの使用によって、少なくとも９０週間の生存期間を達成することが可能になったことである。
【００１８】
最近、Emerich D.F., Winn S.R., Snodgrass P., LaFreniere D.,  Agostino  M., Wiens T., Xiong H. and Bartus R.T. in Injectable chemotherapeutic   microspheres and glioma II: Enhanced survival following implantation into deep inoperable tumors (Pharm. Res., 2000, 17, ｎ°7, 776- 781) により、ラットにおける手術不能な腫瘍への化学療法剤の送達が、生存を促すことが示された。
【００１９】
ここに、本発明者らは、驚くべきことに、手術不能な腫瘍（特に、グリア芽細胞腫のような脳腫瘍、耳鼻咽喉球（otorhinolaryngologic sphere）の腫瘍、直腸の腫瘍、骨、肝臓または脳の転移、あるいは頭蓋咽頭腫（craniopharyngiomas）のような非悪性の嚢胞性腫瘍(cystic tumors)）の症例において、腫瘍の切除を行わずに、これらのマイクロスフィアがヒトにおいて良い結果をもたらすことを示した。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
結果的に、本発明は、手術不能な腫瘍のヒトでの処置における使用のための医薬品の製造のための抗ガン剤を放出する生分解性マイクロスフェアーの使用に関し、ここで、生分解性マイクロスフェアーは、定位注入によって、腫瘍または腫瘍周辺領域（peritumoral area）へ直接的に、あるいは腫瘍および腫瘍周辺領域へ同時に、直接的に投与される。
【００２１】
本発明に従って、手術不能な腫瘍は、深部腫瘍または機能的な領域（functional zones）（脳の機能的な領域のような）に位置する腫瘍である。
【００２２】
手術不能な腫瘍の例としては、以下が挙げられる：グリア芽細胞腫のような脳腫瘍、耳鼻咽喉球（otorhinolaryngologic sphere）の腫瘍、直腸腫瘍、骨、肝臓または脳の転移、あるいは頭蓋咽頭腫のような非悪性の嚢胞性腫瘍。
【００２３】
本発明に従う好ましい実施形態において、腫瘍は脳腫瘍である。
【００２４】
さらに好ましい実施形態において、脳腫瘍は、グリア芽細胞腫、転移、頭蓋咽頭腫のような非悪性の嚢胞性腫瘍のうちの１つである。
【００２５】
本発明の別の実施形態において、抗ガン剤を放出するマイクロスフェアーは、ＷＯ  ００／６９４１３に開示される。
【００２６】
これらの生分解性マイクロスフェアーは、抗ガン剤の放出を遅らせ且つ実質空間（parenchymal space）において少なくとも３週間、好ましくは、少なくとも４週間という期間のあいだ治療的に有効な濃度を維持するポリマーを用いて、コーティングされる(coated)。
【００２７】
ポリマーは、エチルセルロース、ポリスチレン、ポリ（ε−カプロラクトン、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸）およびポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）から選択される。ポリマーは、好ましくは、ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）、またはＰＬＡＧＡ（これは、徐放性ガレヌス製剤（sustained-release galenic preparations）の処方において許可される生分解性ポリマーである（長期スケールの臨床的使用に対して認可されていないＰＣＰＰ−ＳＡとは異なる）。
【００２８】
ポリ（ｄ，ｌ−乳酸−コ−グリコール酸）は、好ましくは５０：５０ＰＬＡＧＡ（すなわち、同量の乳酸およびグリコール酸を含む）であり、例えば、ＢＩ  Ｃｈｉｍｉｅ  （フランス）によって供給されるＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ５０６（これは、７２，０００に等しい重量平均分子量、１．８に等しい多分散性指数(polydispersity index)、さらに０．８０ｄｌ／ｇの内部粘度（２５℃にて０．１％ポリマー  クロロホルム溶液）を有する）である。
【００２９】
ＰＬＡＧＡは疎水性コポリマーであり、加水分解反応によって引き起こされるその分解は、２つの正常な生物学的基質（好気性解糖の終りにＣＯ2およびＨ2Ｏに代謝される乳酸およびグリコール酸）を生じさせる。既に長年に渡り確立されてきた研究によって、呼吸経路がこれら２つの基質の排除の主要な経路であることが示されてきた。ＰＬＡＧＡの生分解速度は、乳酸及びグリコール酸のそれぞれの割合に依存する。ＰＬＡＧＡは完全に生体適合性であり、穏やかな異物反応を引き起こす(Visscher GE, RL Robinson, HV Mauding, Fong JW, Pearson JE, Argentieri GJ, Biodegradation of and tissue reaction to 50:50 poly(DL-lactide-co-glycolide) microcapsules, J. Biomed. Mat. Res. 19: 345-365, 1985)。ＰＬＡＧＡは、外科手術縫合糸（sutures） (Frazza EJ,  Schmidt EE, A new absorbable suture, J. Biomed. Mater. Res., 5: 43-58, 1971) および皮下にインプラント可能なガレヌス形態（galenic forms）の構成要素である(Jalil R. Nixon JR, Biodegradable poly(lactic acid) and poly(lactide-co- glycolide) microcapsules: problems associated with preparative  techniques  and release properties (Review), J. Microencapsulation, 7: 297-325,  1990)。５０：５０ＰＬＡＧＡマイクロスフェアーがγ線−照射によって滅菌され得ること、および、一旦定位手術によってげっ歯動物の脳にインプラントされると、それらは２ヶ月以内に完全に生分解され、非特異的な星状細胞および組織球型の穏やかな反応を引き起こすだけであること、が実証されてきた(Menei P. Daniel V, Montero-Menei C, Brouillard M, Pouplard-Barthelaix A, Benoit JP: Biodegradation and brain tissue  reaction to poly(DL-lactide-co-glycolide) microspheres, Biomaterials 14: 470-478, 1993；Menei P. Croue A, Daniel V, Pouplard-Barthelaix A, Benoit JP: Fate and biocompatibility of three types of microspheres implanted into the brain, J. Biomed Mat Res, 28, 1079-1085, 1994)。後者の結果は、その後Kou JH, Emmett C, Shen P et al., Bioerosion and biocompatibility of  poly(d,l-lactic-co-glycolic acid) implants in brain, J Control Release, 43, 123-130, 1997によって確かめられた。
【００３０】
本発明において使用される生分解性マイクロスフェアーは、好ましくは４８±２０μｍ、好ましくは４６±７μｍの平均直径を有する。それらは、１５〜３５重量％の抗ガン剤、好ましくは１９〜２７重量％の５−ＦＵ、さらにより好ましくは２０％の５−ＦＵ、および６５〜８５重量％のポリマーを含む。
【００３１】
別のさらに好ましい実施形態において、マイクロスフェアーは、抗ガン剤およびポリマーが有機溶媒中に分散する有機相を調製することを包含する方法によって調製される。この有機相および水相は乳化され、次いで有機溶媒は、水を添加することによって抽出される。最終的に、得られたマイクロスフェアーの懸濁液は、濾過される。
【００３２】
ポリマーを添加する前に、勢いよく攪拌しながら、抗ガン剤を有機溶媒中に分散させる。
【００３３】
先行技術の方法に対してなされる適応に依存して、有効成分は、プラネタリーボールミル（planetary ball mill）中で粉砕される。得られる結晶のサイズは、１５〜５０μｍである。カプセル化される結晶のサイズおよびそれらの分散度は、実際、カプセル化の程度を制御するため、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏ放出速度論（in vitro release kinetics）において、必要不可欠な基準である。
【００３４】
その後、ポリマーを添加する前に、ホモジェナイゼーションロッド（homogenization rod）を用いて攪拌しながら、丸底試験管中で、その有効成分を有機溶媒（好ましくは、ジクロロメタン）中に分散させる。
【００３５】
この均質化は、均質な懸濁液を与え、ある粉砕バッチと別の粉砕バッチとの差異を少なくし、そして有効成分の結晶のサイズを小さくする。
この有機相は、補助溶媒(cosolvent)を含まない溶媒中で調製される。補助溶媒を存在させないことによって、乳化相の間のポリマーの沈殿がゆっくり起こり、得られる粒子が低多孔性になる。
この有効成分分散物（dispersion）は、第一リアクターへ移される。
【００３６】
ポリマーは、８〜１３％（好ましくは１１％に等しい）の質量比で添加される。得られる有機相は、２〜４時間のあいだ常に攪拌されながら室温にて維持され、その後、約１５分間のあいだ１〜５℃（好ましくは２℃に等しい）の温度にて維持される。室温における有機相の攪拌時間の延長は、溶媒中のポリマーの全体的な可溶化を確実にする。
【００３７】
水相は、これを好ましくは有機相と同じ温度（好ましくは２℃）に維持する第二リアクター中で調製される。水相および有機相の温度の低下は、それらの粘度の増大およびカプセル化の程度の増大をもたらす。水相は、例えば、水性１０％ＰＶＡ溶液である。
【００３８】
２つのジャケット付リアクターが使用され、そしてこの２つのリアクター中を冷却水が連続して循環する。２つの相が混合されるとき、有機および水相の温度は、好都合には同じ（好ましくは２℃）である。温度の上手な制御によって、粒子サイズ、有効成分の溶解速度および溶媒の抽出速度のコンディションが同時に効率的に整えられる。
【００３９】
有機相は、第一リアクターから第二リアクターへ移される。水相／有機相の体積比は、８０／３〜１２０／３の間（好ましくは１００／３に等しい）である。
【００４０】
得られるエマルジョンは、少なくとも３分、好ましくは３〜６分、さらにより好ましくは５分間、攪拌される。この時間の長さの選択は、放出速度論および特に２４―４８時間にわたる「破裂（burst）」効果と直接的に相関関係がある。
【００４１】
十分な乳化時間と共に補助溶媒を存在させないことによって、表面に存在しているか、またはあまりコーティングされていない（poorly coated）有効成分の解離（dissolution）が可能になり、初期段階における放出速度がより良く制御される。
【００４２】
有機溶媒を抽出するために、１／４〜１／２（好ましくは１／３に等しい）のエマルジョン／水  体積比で、水がエマルジョンへ添加される。抽出水の温度は、１〜５℃の間（好ましくは４℃に等しい）である。
【００４３】
乳化および抽出工程は、あるバッチと別のバッチとのばらつき（variability）を制限し、また時間を節約するために、同じリアクターにおいて行われる。有効成分の過剰な解離（dissolution）を制限するために、抽出水の温度は低い。
【００４４】
得られるマイクロスフェアーの懸濁液は、数分間混合され、次いで不活性雰囲気（inert atmosphere）下において濾過される。不活性雰囲気下での作業によって、産物のコンタミネーション（contamination）の危険性を制限することができる。
【００４５】
上記に示された方法に従って得られ得るマイクロスフェアーは、有利に、凍結乾燥される。
【００４６】
１０ｍｌの滅菌水が２〜５ｇのマイクロスフェアー粉末（濾過ケーク）へ加えられる。この混合物を−４０℃にて凍結され、その後フリーズ−ドライヤー（freeze-dryer）中へ導入される。凍結乾燥は、１８時間続く。この操作の終りに、二次乾燥温度は、１０℃以下に維持されるべきである。
【００４７】
マイクロスフェアーは、乾燥状態のときでさえも＋４℃で貯蓄されるべきである。
【００４８】
本発明の状況において好ましく使用されるマイクロスフェアーは、好ましくは親水性であり、および／または血液−脳関門を通らない抗ガン剤を含む。有利に、抗ガン剤は、中枢神経毒性を有さない。この抗ガン剤は、好ましくは、細胞分裂すに作用する。
【００４９】
抗ガン剤は、放射線増感抗ガン化合物(radiosensitizing anticancer compound)か、または少なくとも１つの放射線増感抗ガン化合物を含む抗ガン化合物の混合物からなり、前記抗ガン化合物は、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、白金剤（カルボプラチンおよびシスプラチンのような）、タキサン（ドセタキセルおよびパクリタキセルのような）、ゲムシタビン（gemcitabine）、  ＶＰ１６、マイトマイシン、イドクスウリジン、トポイソメラーゼ  １  阻害剤（イリノテカン、トポテカンおよびカンプトテシンのような）、ニトロソウレア（ＢＣＮＵ、ＡＣＮＵまたはＭＣＮＵのような）、メトトレキサート、ブレオマイシン、アドリアマイシン、サイトキサンおよびビンクリスチン、免疫調節性サイトカイン（例えば、ＩＬ２、ＩＬ６、ＩＬ１２およびＩＬ１３）、およびインターフェロンから選択される。
【００５０】
抗ガン剤は、好ましくは、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）である。
【００５１】
本発明の状況において、５−ＦＵを運搬する５０：５０  ＰＬＡＧＡマイクロスフェアーが特に好ましい。
【００５２】
５−ＦＵは古く且つ良く知られた抗有糸分裂剤（antimitotic agent）である。これは、血液−脳関門を非常に弱く横切る親水性分子であり、それゆえその活性は、局所投与によって高められる。
【００５３】
【表１】
2004529865.tif 000002
2004529865.tif 000003
【００５４】
５−ＦＵの活性はまた、持続性投与によって高められる。
【００５５】
５−ＦＵは、本来、急速に再生される組織において活性であり、非常に神経毒性である。５−ＦＵは、急速に増殖する組織がそれらの増殖および再生を確実にするために特に必要とする核酸の合成を妨げる。言うまでもなく、これは、正常な状態において有糸分裂が稀である大脳組織については当てはまらず、グリア集団においてのみ起こる。その全身投与を制限する５−ＦＵの毒性の影響は、本質的に血液的（hematological）および胃腸的(gastrointestinal)である。５−ＦＵの稀な神経学的副作用が公表されているが、比較的知られていないこれらの病因病原性は、恐らく、多因子性（５−ＦＵの異化代謝産物によるＫｒｅｂｓサイクルの阻害または予め存在するチアミン欠乏症の悪化）である (Aoki N., Reversible leukoencephalopathy  caused by 5-fluorouracil derivatives, presenting as akinetic mutism,  Surg.  Neurol., 25: 279-282, 1986; Moore D. H., Fowler W.C., Crumpler L.S., 5 fluorouracil neurotoxicity, case report,  Gynecol. Oncology, 36: 152-154, 1990)。
【００５６】
最後に、５−ＦＵは、放射線−増感性である(Koutcher J.A., Alfieri A.A., Thaler  H.  et al., Radiation enhancement by biochemical modulation and 5-FU, Int. J.  Radit. Biol. Phys., 39: 1145-1152, 1997)。これらの別々の処置の各々において、５−ＦＵ／放射線療法の組み合わせの優れた点が、動物モデルおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける腫瘍細胞におにて、１９６０年代以降に実証されてきた(Bagshaw M., A possible role of potentiation in radiation therapy, Amer. J. Roentgenol, 85: 822-833, 1961; Vietti T., Eggerding F., Valeriote F., Combined effect of X radiation and 5-fluorouracil on survival of transplanted leukemic cells, J. Natl. Inst., 47: 865-870, 1971)。この相乗効果は、腫瘍細胞集団の同調化（synchronization）および５−ＦＵに伴う細胞修復のメカニズムにおける低下によるものであると考えられる。放射線療法および抗ピリミジン（５−ＦＵまたはＢｒｕｄＲ）の組み合わせは、すでにヒトにおいて試みられている (Goffman T.E., Dachowski L.J., Bobo H et al., Long term follow-up on  national cancer institute phase I/II study of glioblastoma multiforme treated with iododeoxyuridine and hyperfractionated irradiation, J. Clinical Oncology, 10: 264-268, 1992)。ここで、明瞭な効き目がないことはまた、薬物投与の全身的な経路によって説明され得る。
【００５７】
抗ガン剤が５−ＦＵである場合、脳脊髄液における抗ガン剤の濃度（これは、実質空間（parenchymal space）における濃度の反映である）は、３〜２０ng/mlである。
【００５８】
本発明の状況において使用されるマイクロスフェアー中に含まれる抗ガン剤の神経毒性を制限するために、好都合に、神経保護化合物が該抗ガン剤へ添加され得る。この神経保護化合物は、例えば、ペプチド成長因子（ＮＧＦまたはＢＤＮＦのような）から選択される。
【００５９】
好都合に、マイクロスフェアーは滅菌溶液中に懸濁され、この懸濁液は、腫瘍または腫瘍周辺領域へ、あるいは腫瘍および腫瘍周辺領域へ同時に直接的に投与される。
【００６０】
この滅菌溶液は、好ましくは以下を含む：
−  １〜１．５％、好ましくは１．２５％（重量／体積）の粘度調節剤（viscosity modifier）（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム）、
−０．５〜１．５％、好ましくは１％の界面活性剤（例えば、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（登録商標））、および
−３．５〜４．５％、好ましくは４％の等張化剤（例えば、マンニトール）。
【００６１】
この滅菌溶液は、１０００〜２５００ｍＰａ、好ましくは２０００〜２５００ｍＰａである動粘度（cinematic viscosity）を有する。
【００６２】
このマイクロスフェアーは、好ましくは、使用時に（注入の直前に）懸濁される。この懸濁液は、好ましくは、上記に示された３ｍｌの滅菌溶液および７００〜８００ｍｇの生分解性マイクロスフェアーを含む。
【００６３】
抗ガン剤が５−ＦＵである場合、注入される懸濁液の総用量は、５−ＦＵ  ５０〜２００ｍｇの量に相当する。
【００６４】
本発明の状況において使用されるマイクロスフェアーは、乳化−抽出技術（emulsification-extraction technique）によって、Boisdron Celle M., Menei P., Benoit J.P.:  Preparation  of biodegradable 5-fluoro-uracil-loaded microspheres, J. Pharm.  Pharmacol., 47, 108-114, 1995に記載される方法の改変に従って、調製され得る。
【００６５】
１回以上繰り返されるマイクロスフェアーの定位注入は、腫瘍へ、または腫瘍周辺組織へ直接的に、あるいは腫瘍および腫瘍周辺組織へ同時に、直接的に行われる。
【００６６】
脳腫瘍の処置の場合、その定位手順は、脳腫瘍の生検のために使用されるものと同じである；前投薬の後、定位フレームが局所的に麻酔をうけたところに（under local anesthesia）置かれ、そして座標が磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）によって決定される；その後、クレードル（cradle）が座標に従って置かれ、そして頭蓋にドリルで穴が開けられた（drill）後、針が腫瘍のレベルおよび／またはその周辺領域のレベルに位置付けられ、そしてマイクロスフェアーが注入される。この注入は、生検自体と同時に行われ得る。
【００６７】
腫瘍体積が手術前のＭＲＩによって決定され、最良の状態で分配されるために、定位手順により、５つのインプランテーション経路が決定される。解剖学的条件に従って、５つのインプランテーションは、穿孔器(trepan)で開けられた穴（trepan hole）を介してか、またはいくつかのドリルで開けられた穴（drills holes）を介して腫瘍および腫瘍周辺領域へ直接的に行われるであろう。マイクロスフェアー懸濁液の全体積がこれらの５つの経路上に分配される（distributed）であろう（例えば、５ｍｎで１００μｌの体積で、Ｂａｃｋｌｕｎｄ  ＥＬＥＫＴＡ（登録商標）針を用いて、１〜５ｃｍの高さに、１経路に対して０．５ｍｌが分配される）。定位手順の終りに、スキャナーを用いてコントロールが実行される。
【００６８】
本発明に従って、マイクロスフェアーを用いた処置の後に、放射線療法が行われ得る。
【００６９】
放射線療法は、治療（healing）の問題がないとされる次の日に開始され得る。
【００７０】
６−週間の放射線療法は、マイクロスフェアー（例えば、週５日間の１．８Ｇｙに分けられる６０Ｇｙ）のインプランテーションの７日後に開始され得る。照射される体積は、おおよそ、ＭＲＩによって定量された腫瘍の体積に相当する。
【００７１】
放射線療法の間、臨床的な観察（supervision）が行われる。臨床的な検査（check-up）は、インプランテーションの２４時間後、１０日後、２０日後、３０日後、次いで３ヶ月毎に一年まで行われる。ＭＲＩは、インプランテーションの１０日後、３０日後、３ヶ月後および一年まで３ヶ月ごとに、実行される。血液およびCSFサンプルは、インプランテーションの１０日後および３０日後ならびに最後の照射日に採取される。
【００７２】
５−ＦＵのマイクロスフェアーの注入、次いで注入の７日後に放射線療法を行うヒトにおける試験的研究（pilot study）（嚢胞腫瘍を有する患者、完全な腫瘍を有する二人の患者および中程度の腫瘍を有する一人の患者を含む研究）の結果は、５−ＦＵが患者のＣＳＦ中においても血液中においても検出されないことから、良好な耐性（tolerance）を示す。
【００７３】
主に、腫瘍およびその周辺組織内における化学治療薬の濃度が腫瘍細胞を殺すのに十分な程高くないという理由から、全身性化学療法は効果的でない。注入可能なマイクロスフェアーを用いる間質化学療法（interstitial chemotherapy）は、長時間のあいだ、腫瘍内で薬物濃度を局所的に上昇させる。
【００７４】
脳腫瘍の内部および周辺の組織へマイクロスフェアーを容易に注入することができることによって、腫瘍細胞が原発腫瘍塊から移動（migrate）するときに十分な薬物濃度をそれらへ送達する可能性が高められる。さらに、腫瘍細胞の移動の成功を最小限にする試みにおいて、より大きな流れ（bulk flow）のそれらの領域を意図的に標的化するマイクロスフェアーの複数の注入が行われ得る。腫瘍を取り囲む薬物領域（腫瘍周辺領域および腫瘍細胞の移動が起こり得る近くの領域）を変化させる能力は、原発腫瘍部位およびその浸潤の最も起こりそうな経路の両方を処置する機会を最大にする。
【００７５】
これらの結果により、マイクロスフェアーがヒトにおいて脳へ容易に注入され、深部の手術不能な腫瘍床（tumor bed）への５−ＦＵのような化学治療薬の持続的放出を提供し得、腫瘍周辺の組織への注入ならびに腫瘍および周辺組織への同時の注入もまた効果的であり得ることが確立された。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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