(57)【要約】本発明は、１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩（Ｏｒｇ　１２９６２）の結晶形態Ａ及びＢ、それらの結晶形態の調製のための方法及びうつ病、不安、肥満、又は尿失禁の治療において有用な結晶形態Ｂを含有する医薬組成物に関する。【化１】2004512282.tif 000007
2004512282.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩（Ｏｒｇ　１２９６２）であって、該化合物が、完全に又は事実上完全に他の結晶形態を含まない、純粋な結晶形態であることを特徴とする化合物。
【請求項２】
１７．５０°、１７．８０°、２３．８５°、２４．５０°、２５．５５°、２７．７５°及び２９．４０°の２−シータ（２θ）値にピークを有するＣｕＫα１放射線で得られるＸ線粉末回折パターン、及び８２．２ｃｍ−１、１０６．６ｃｍ−１、１９４．７ｃｍ−１、２１１．２ｃｍ−１、３５６．５ｃｍ−１、１０３７．６ｃｍ−１、１２６８．２ｃｍ−１、２９９７．０ｃｍ−１、３００６．５ｃｍ−１及び３１２２．４ｃｍ−１にピークを有するラマン吸収スペクトルによって特徴付けられる純粋な結晶形態Ａから成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
２０．４０°、２１．０５°、２４．８０°、２５．８０°及び２８．１０°の２−シータ（２θ）値にピークを有するＣｕＫα１放射線で得られるＸ線粉末回折パターン、及び１０４．６ｃｍ−１、１４７．７ｃｍ−１、１９２．８ｃｍ−１、２０９．５ｃｍ−１、３６０．６ｃｍ−１、１０３５．９ｃｍ−１、１２６５．３ｃｍ−１、２９９７．１ｃｍ−１、３００１．８ｃｍ−１及び３１１７．２ｃｍ−１にピークを有するラマン吸収スペクトルによって特徴付けられる純粋な結晶形態Ｂから成る、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
エタノール／水混合物中の１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩の濃縮溶液を急速に０℃以下に冷却し、冷却後に自発核形成が開始されることを特徴とする、請求項２に記載の化合物の調製方法。
【請求項５】
エタノール−水溶液中の１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジンの濃縮溶液を還流温度で過剰の塩酸によって処理し、それによって還流温度で核形成を開始させ、核形成が開始した後、溶液を緩やかに外界温度に冷却することを特徴とする、請求項３に記載の化合物の調製方法。
【請求項６】
エタノール／水混合物中の多形１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩の懸濁液を、形態Ｂへの転換が完了するまで保持することを特徴とする、請求項３に記載の化合物の調製方法。
【請求項７】
前記懸濁液を還流温度に保持する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｏｒｇ　１２９６２が、２０．４０°、２１．０５°、２４．８０°、２５．８０°及び２８．１０°の２−シータ（２θ）値にピークを有するＣｕＫα１放射線で得られるＸ線粉末回折パターン、及び１０４．６ｃｍ−１、１４７．７ｃｍ−１、１９２．８ｃｍ−１、２０９．５ｃｍ−１、３６０．６ｃｍ−１、１０３５．９ｃｍ−１、１２６５．３ｃｍ−１、２９９７．１ｃｍ−１、３００１．８ｃｍ−１及び３１１７．２ｃｍ−１に吸収ピークを有するラマン吸収スペクトルを示す実質的に純粋な結晶形態Ｂであることを特徴とする、薬学的に許容される賦形剤とＯｒｇ　１２９６２を含有する医薬組成物。
【請求項９】
哺乳類におけるうつ病、不安、肥満、又は尿失禁を治療する方法であって、請求項３に記載の純粋な結晶形態Ｂの１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩を治療上有効な量、投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩の新規な結晶形態Ａ及びＢ、それらの形態の調製のための方法及び結晶形態Ｂを含む医薬組成物に関する。
【０００２】
Ｏｒｇ　１２９６２と称する、１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩は、欧州特許第３７０　５６０号（Ａｋｚｏ　Ｎｏｂｅｌ　Ｎ．Ｖ．）より既知であり、中枢神経系の疾患、特にうつ病（Ｌｅｙｓｅｎ，Ｄ．Ｃ．Ｍ．Ｄｒｕｇｓ，２，１０９−１２０，１９９９）及び不安（Ｌｅｙｓｅｎ，Ｄ．とＫｅｌｄｅｒ，Ｊ．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ＩＩ，４９−６１，１９９８　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｂ．Ｖ．，Ｈ．ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｇｒｏｏｔ編集）の治療において有用であると述べられている。それに加えて、該化合物は尿失禁の治療において潜在的に有用である（ＷＯ９８３３５０４号：Ａｋｚｏ　Ｎｏｂｅｌ　Ｎ．Ｖ．）。Ｏｒｇ　１２９６２は、欧州特許第３７０　５６０号の中で（表Ｉ、化合物Ｎｏ．３）明確に定義された融点を持たない化合物であると記述されている。該化合物の物理的形態に関する教示はない。
【０００３】
【化１】
2004512282.tif 000003
【０００４】
欧州特許第３７０　５６０号に記述されている方法に従って調製したとき、該化合物は多形性であり、２つの純粋な結晶形態の混合物から成ることが認められた。
【０００５】
一般に、均一で定義された組成物の治療薬を調製することが望ましい。多形化合物に関しては、それらの生物活性は多形化合物を構成する純粋な結晶形態のものと同等又は同一であると期待されうる。それでもやはり、多形化合物を薬剤として使用する場合には、その純粋な結晶成分と比較したとき大きな欠点が付随する。結晶構造の相違は、しばしば多形化合物中の結晶形態によって強く影響される、安定性、溶解速度、バイオアベイラビリティー、分析データ等のような物理化学的パラメータの相違を導くことがある。実際に、多形化合物の各々のバッチをその組成物に関して厳密に同一にすることは実質的に不可能であるので、これはなおいっそう重要である。これらの相違の結果として、薬剤中に多形化合物を組み込むことはしばしば望ましくないとみなされ、時には多形化合物の純粋な結晶成分の１つだけを使用することが要求される。
【０００６】
完全に又は事実上完全に他の結晶形態を含まない、Ｏｒｇ　１２９６２化合物の実質的に純粋な結晶形態を提供することが本発明の目的である。
【０００７】
「完全に又は事実上完全に他の結晶形態を含まない結晶性純粋形態」なる語句は、もう１つ別の結晶形態を１０％未満、好ましくは５％未満含む結晶形態を意味する。
【０００８】
特定結晶化法を使用することにより、多形化合物Ｏｒｇ　１２９６２から形態Ａ、形態Ｂ及び形態Ｃと称する３つの純粋な結晶形態が得られることが本発明の１つの局面である。
【０００９】
さらに、Ｏｒｇ　１２９６２の結晶形態Ｂが熱力学的に最も安定な形態であることが認められた。結晶形態Ｂは、その上に、様々な製薬補助物質との混合物として、特にラクトース及び／又はコーンスターチを含む混合物として暗所に保存したとき形態Ａよりも安定である。それ故、本発明は、もう１つの局面では、純粋な結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２を含有する、固体Ｏｒｇ　１２９６２の製薬製剤の提供に関する。このタイプの医薬組成物は、再現性が評価しうる程度に高く、許容される範囲内の物理的データが常に同じであるという利点を持つ。
【００１０】
欧州特許第３７０　５６０号で述べられている一般的手順に従って、エタノール中の１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジンの遊離塩基の溶液を塩酸で処理することによってＯｒｇ　１２９６２を調製したとき、形態Ａと形態Ｂの量の割合がバッチによって大きく変化する、無定形又は多形生成物が得られる。
【００１１】
形態Ａ及びＢの純粋な結晶形態は、エタノール又はエタノール−水混合物から、制御された条件下で１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジンの塩酸塩を結晶化することによって調製できる。
【００１２】
純粋形態Ａは、エタノール／水混合物中の該塩酸塩の濃縮溶液を還流温度から０℃以下に急速に冷却し、０℃以下の深冷温度で核形成を開始させることによって調製することができる（冷却結晶化法）。急速な冷却は、例えば結晶化フラスコを氷−アセトン（約−１０℃）中に保持することによって実施できる。
【００１３】
純粋形態Ｂは、エタノール（又はエタノール−水）溶液中の遊離塩基、１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジンを還流温度で過剰（５当量まで）の塩酸によって処理し、それによって還流温度で核形成を開始させ、核形成が開始した後、結晶塩を緩やかに外界温度に冷却することによって調製できる（反応結晶化）。
【００１４】
熱力学的に最も安定な形態Ｂはまた、エタノール／水混合物中のＯｒｇ　１２９６２の多形バッチの懸濁液を、形態Ｂへの転換が完了するまで攪拌することによっても調製できる。この工程は、室温で実施したとき数日間を要する［例えば、２０℃でエタノール−水＝３：１中、２０グラムバッチの完全な転換のためには９６時間］。好ましい実施形態では、形態Ｂへの転換が数時間で完了するように懸濁液を還流温度で攪拌する［例えば、還流温度でエタノール−水＝３：１中、１グラムバッチの完全な転換については３時間］。
【００１５】
Ｏｒｇ　１２９６２の第三の結晶形態は、２−メチル−ブタン−２−オールから該化合物を結晶化することによって得られる。この形態Ｃは、−２０℃でも自発的に形態Ｂに転換する準安定結晶形態である。
【００１６】
結晶形態ＡとＢの融点は大きくは異ならない。どちらの純粋形態も２８２−２８４℃で融解する。
【００１７】
本発明の結晶形態は、それらのＸ線粉末回折パターンならびにラマンスペクトルによって特徴づけることができ、それによって互いを識別することができる。
【００１８】
図１は、Ｏｒｇ　１２９６２の結晶形態Ａ及びＢのＸＲＰＤスペクトルを示す。各々のスペクトルは、回折角度２シータ（θ）のある特定値の強度ピークによって特徴付けられる。形態Ａは、２シータ＝１７．５０°、１７．８０°、２３．８５°、２４．５０°、２５．５５°、２７．７５°及び２９．４０°に特徴的なピークを持つ。
【００１９】
形態Ｂは、２−シータ＝２０．４０°、２１．０５°、２４．８０°、２５．８０°及び２８．１０°のピークによって特徴付けられる。
【００２０】
形態Ｂの単一結晶のＸ線分析から、結晶の空間群はＰ２１／ｃ、単斜晶系であり、ａ＝１２．８４８Å、ｂ＝７．１５１Å、ｃ＝１４．１６４Å、β＝１０４．８５°、及びＶ＝１２５７．９Å３のセル寸法を持つことが確認された。
【００２１】
形態Ａの同様の分析は、結晶が空間群Ｐｃａ２１及びセル寸法：ａ＝１３．８２３Å、ｂ＝７．２２６Å、ｃ＝２５．２５６Å及びＶ＝２５２２．７０Å３を有する斜方晶系であることを明らかにした。
【００２２】
結晶形態Ａ及びＢのＦＴラマンスペクトルを図２に示す。各々の結晶形態は表Ｉに示す特徴的な吸収ピークを持つ。これらのピークは、純粋な形態Ｂ中の結晶形態Ａの量の定量的測定及び他の同様の方法のために使用することができる。
【００２３】
【表１】
2004512282.tif 000004
【００２４】
本発明による固体Ｏｒｇ　１２９６２の製薬製剤は、１又はそれ以上の薬学的に許容される添加物又は賦形剤と共に純粋な結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２を含有する。
【００２５】
そのような製薬製剤は一般に錠剤、カプセル又は坐薬のような投与単位の形態をとるが、他の固体又は乾燥製薬製剤も包含される。好ましい製薬製剤は錠剤の形態である。錠剤は、有効成分である純粋な結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２に加えて、錠剤に満足しうる加工及び圧縮特性を与えるのに役立つ、希釈剤、結合剤、すべり剤（ｇｌｉｄａｎｔ）及び潤滑剤のようなある種の賦形剤、ならびに完成品錠剤に付加的な望ましい物理的特性を与える崩壊剤及び着香剤を含みうる。
【００２６】
そのような投与単位を作製するための方法は、例えば標準参考文献、Ｇｅｎｎａｒｏら、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、（第１８版、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０、特に第８部：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ）に記述されているような標準的手法に従って公知である。
【００２７】
うつ病、不安、肥満、又は尿失禁の治療に適したＯｒｇ　１２９６２の投与単位は、約５〜５００ｍｇの有効成分、より一般的には約１０〜１００ｍｇを含みうる。好ましい投与単位は、２０〜４０ｍｇの結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２を含み、それを１日２回服用する。
【００２８】
本発明を下記の実施例によって例示する。
【００２９】
実施例
一般手順：
一次ゲルマニウムモノクロメータ、Ｃｕ−Ｋα１放射線を使用し、３５ｋＶ及び４０ｍＡの設定でＳｉｅｍｅｎｓ　Ｄ５０００透過型回折計によりＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）スペクトルを得た。使用したスリット：散乱防止スリット２ｍｍ、検出器スリット０．２ｍｍ。測定条件：段階サイズ０．０２°、段階当りの時間１０秒。試料をスコッチテープの間に挟んで測定し、測定中１５ｒｐｍの速度で回転させた。純粋な結晶形態Ａ及びＢのＸＲＰＤスペクトルを図１に示す。
【００３０】
１０６４ｎｍ　Ｎｄ−ＹＡＧレーザー（Ａｄｌａｓ　ＤＰＹ　４２１Ｎ型）を備えたＢｒｕｋｅｒ　ＲＦＳ　１００　Ｒａｍａｎ分光計を用いてＦＴ−ラマンスペクトルを記録した。２００ｍＷのレーザー出力を用いて２ｃｍ−１の分解能でスペクトルを測定した。典型的には、各々のスペクトルについて２５６インターフェログラムを収集した。レーザースポットは試料位置で約３０μの直径であった。結晶形態Ａ及びＢのラマンスペクトルを図２に示す。
【００３１】
実施例１
Ｏｒｇ　１２９６２の調製
Ａ：１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジンの調製
ピペラジン（１０．３３７ｇ；１２０ｍｏｌ）を９５％の含水エタノール（３６ｌ）に溶解した。溶液を還流下、加熱し、その後９５％の含水エタノール（９ｌ）中の２，６−ジクロロ−３−（トリフルオロメチル）ピリジン（８６４０ｇ；４０ｍｏｌ）の溶液を２時間かけて加えた。さらに２時間、還流を維持した。混合物を外界温度に冷却し、沈殿したピペラジンの塩酸塩をろ過によって除去した。エタノールを真空下で除去した。残留物を酢酸エチル（３０ｌ）に溶解した。この溶液を水（１５ｌ）で２回洗い、硫酸マグネシウムで乾燥して、その後、真空中で溶媒を除去した。残留物を攪拌しながら水（１５ｌ）に注ぎ入れた。生じた固体をろ過して取り、水で十分に洗った。
【００３２】
Ｂ：１−［６−クロロ−５−（トリフルオロメチル）−２−ピリジニル］ピペラジン塩酸塩［Ｏｒｇ　１２９６２］
Ａに記した含水固体を９６％の含水エタノール（１２ｌ）に溶解した。その溶液を１回ろ過して不溶性物質を除去した。ろ液を９６％の含水エタノール（１５ｌ）で希釈し、その後塩化水素ガスを溶液に通した。塩を生成の間、温度を上げて還流した。０℃に冷却した後、沈殿物をろ過して取り、粗生成物（７６００ｇ）を得て、それを加熱しながら９６％の含水エタノール（１１ｌ）と水（２．７ｌ）に再溶解した。外界温度に冷却した後、塩酸塩をろ過して取り、低温エタノール（４ｌ）で洗って、真空中１１０℃で乾燥して、Ｏｒｇ　１２９６２（５５００ｇ；４５．５％）を得た。
【００３３】
ラマン分光法は、この生成物が結晶形態Ａ（７７％）とＢ（２３％）の混合物から成ることを明らかにした。
【００３４】
元素分析：
Ｃ１０Ｈ１２Ｎ３Ｃｌ２Ｆ３についての計算値（％）：
Ｃ：３９．７５；Ｈ：４．０１；Ｎ：１３．９１
実測値（％）：
Ｃ：３９．８１；Ｈ：４．０７；Ｎ：１３．８５
１Ｈ−Ｎｍｒ（ＤＭＳＯｄ６中３００ＭＨｚ）：ｐｐｍでのδ：３．２６（４Ｈ；トリプレット、Ｊ＝５．３Ｈｚ）；３．９９（４Ｈ；トリプレット、Ｊ＝５．３Ｈｚ）；７．０８（１Ｈ；ダブレット、Ｊ＝９．０Ｈｚ）；８．０４（１Ｈ；ダブレット、Ｊ＝９．０Ｈｚ）；９．７６（２Ｈ；ブロードシングレット：Ｎ−Ｈ，ＨＣｌ）
【００３５】
実施例２
純粋な結晶形態ＡのＯｒｇ　１２９６２の調製
９６％の含水エタノール（１ｌ）中のＯｒｇ　１２９６２（３５ｇ）の溶液を、磁気攪拌子で攪拌しながら、還流温度から−１０℃まで氷／アセトン浴で急速に冷却した。０℃以下の温度で自発的に核形成が起こった。混合物を−１０℃で２時間攪拌したあと、結晶性物質をろ過して取り、少量の低温エタノールで洗って、真空下、室温で乾燥した。
【００３６】
実施例３
純粋な結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２の調製
実施例１で記述したようにして調製した多形Ｏｒｇ　１２９６２（１０ｋｇ）を、エタノール（８０ｌ）と水（１１ｌ）の混合物に溶解した。その溶液を還流温度に加熱し、混合物の容量が約１５ｌまで減少して結晶化が開始するまで、溶媒を留去した。生じた混合物を１７℃／時の傾斜状冷却で２±２℃まで緩やかに冷却した。結晶塊をろ過して取り、エタノール（４ｌ）で洗って、真空下、６０℃で２４時間乾燥した。
【００３７】
実施例４
賦形剤との混合物中での結晶形態Ａ及びＢの安定性
結晶形態ＡのＯｒｇ　１２９６２（実施例２で記述したようにして調製し、形態Ａを９２％、形態Ｂを８％含むことが認められたバッチ）のアリコート（５〜１０ｍｇ）を計量して丸底試験管に入れた。表ＩＩに列挙した賦形剤を各々のアリコートに加え、次いで水１０μｌを加えた後、懸濁液を十分に混合した。
【００３８】
結晶形態ＢのＯｒｇ　１２９６２（１００％形態Ｂ）のアリコート（５〜１０ｍｇ）を計量して丸底試験管に入れた。表ＩＩに列挙した賦形剤を各々のアリコートに加え、次いで水１００μｌを加えた。ガラスビーズ（２５０〜３００ｍｇ）を各試験管に加えた後、サンプルを１分間十分に混合した。残留水を真空下、室温で蒸発させた。試験管を２０℃又は６０℃で１４日間暗所において保存した。試料を２５ｍＭリン酸ｐＨ２．６緩衝液とアセトニトリルの７０：３０混合物２０．０ｍｌに溶解した。試験管を超音波発生器中に２０分間保持することによって溶解を実施した。
【００３９】
試験管当りのＯｒｇ　１２９６２の量の定量的分析を、次の有効性確認された方法のいずれかを用いて高速液体クロマトグラフィー（ｈｐｌｃ）によって実施した：（１）流速１．０ｍｌ／分で、１５ｍＭオクタンスルホン酸を同時に含む２５ｍＭリン酸ｐＨ２．６緩衝液とアセトニトリルの６９：３１（ｖ／ｖ）混合物を溶離液として用いて、４０℃で操作したＳｙｍｍｅｔｒｙ　Ｓｈｉｅｌｄ　Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐｈａｓｅ　ＲＰ１８カラム（１５０×４．６ｍｍ）を使用するか、又は（２）流速１．５ｍｌ／分で、５ｍＭオクタンスルホン酸を同時に含むメタノールと水の５５：４５（ｖ／ｖ）混合物を溶離液として用いて、外界温度で操作したＬｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ　６０　ＲＰ　Ｓｅｌｅｃｔ　Ｂカラム（１２５×４．０ｍｍ）を使用した。保存後に試料中に残存したＯｒｇ　１２９６２の含量を最初の量のパーセンテージ（％）として表ＩＩに示す。
【００４０】
【表２】
2004512282.tif 000005
【００４１】
表ＩＩのデータは、製薬賦形剤との混合物中のＯｒｇ　１２９６２が、純粋な結晶形態Ａと比較して純粋な結晶形態Ｂであるときにより安定であることを示している。保存が６０℃のストレス条件であるとき、Ｏｒｇ　１２９６２の製薬製剤の２つの主要成分であるラクトース及びコーンスターチとの混合物である場合に純粋な結晶形態Ｂの改善された安定性が特に顕著であった。
【００４２】
実施例５
Ｏｒｇ　１２９６２の純粋な結晶形態Ｂを含有する製薬製剤
次の組成物を有するＯｒｇ　１２９６２の錠剤を調製した：
【００４３】
【表３】
2004512282.tif 000006
【００４４】
Ｏｒｇ　１２９６２を充填剤ラクトース及び崩壊剤コーンスターチと均一に混合し、結合剤ヒドロキシプロピルセルロースの粘質物による低せん断操作において顆粒化した混合物を得る。湿性塊をスクリーニングし、流動床で乾燥して、再びスクリーニングし、最後にコロイド状二酸化ケイ素及び潤滑剤ステアリン酸マグネシウムと混合する。生じた顆粒を錠剤コアに圧縮する。
【図面の簡単な説明】
【図１】
Ｏｒｇ　１２９６２の結晶形態Ａ及びＢのＸＲＰＤスペクトルを示す。
【図２】
結晶形態Ａ及びＢのＦＴラマンスペクトルを示す。
【図１】
2004512282.tif 000008
【図２】
2004512282.tif 000009
【国際公開パンフレット】
2004512282.tif 000010
2004512282.tif 000011
2004512282.tif 000012
2004512282.tif 000013
2004512282.tif 000014
2004512282.tif 000015
2004512282.tif 000016
2004512282.tif 000017
2004512282.tif 000018
2004512282.tif 000019
2004512282.tif 000020
2004512282.tif 000021
2004512282.tif 000022
2004512282.tif 000023
2004512282.tif 000024
【国際調査報告】
2004512282.tif 000025
2004512282.tif 000026
2004512282.tif 000027