(57)【要約】一般構造式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの化合物およびそれらの塩及び溶媒和物の治療薬としての使用。【化１】2004501920.tif 000033
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
【化１】
2004501920.tif 000025
（ここで、Ｒ０は、独立に、ハロおよびＣ１−６アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択される任意に置換された単環式芳香族環、並びに任意に置換された二環式環
【化２】
2004501920.tif 000026
からなる群より選択され、ここで融合環Ｂは、飽和であるか、または部分的もしくは完全に不飽和である５または６員環であり、かつ炭素原子並びに、任意に、酸素、イオウ、および窒素から選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を含み；
Ｙは５、６、もしくは７員置換環の３、４、もしくは５員炭素鎖であるか、またはＹは５、６、もしくは７員非置換もしくは置換環の３、４、もしくは５員ヘテロ原子鎖であり、ここで、該ヘテロ原子鎖は酸素、イオウ、および窒素からなる群より独立に選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を含み；
Ｒ２は、独立に、
ニトロ、
トリフルオロメチル、
トリフルオロメトキシ、
ハロゲン、
シアノ、
ＯＲａで任意に置換されたＣ１−６アルキル、
Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、
ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａ、
Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
Ｃ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ
ＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ１−４アルキレンＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＳＯ２ＲＣ、
Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
１以上のＯＲａで任意に置換されたＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンアリール、
Ｃ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、
Ｃ２−６アルケニレンＮＲａＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲＣ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＯＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＲａ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、
ＯＣ１−４アルキレンＣＨ（ＯＲａ）ＣＨ２ＮＲａＲｂ、
ＯＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＣ２−４アルキレンＯＲａ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、
ＮＲａＲｂ、
ＮＲａＣ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、
ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、
ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、
Ｎ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）２、
ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）、
ＳＯ２ＮＲａＲｂ、
およびＯＳＯ２トリフルオロメチル
からなる群より選択され；
Ｈｅｔは酸素、窒素、およびイオウからなる群より選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む５もしくは６員ヘテロシクロアルキル基であり、かつ任意にＣ１−４アルキルで置換されており；
ＲａおよびＲｂは同じであっても異なっていてもよく、かつ水素およびＣ１−６アルキルから独立に選択され；
ＲＣはフェニルまたはＣ４−６シクロアルキルであり、ここで、該フェニルまたはＣ４−６シクロアルキルはハロゲン原子、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、およびＯＲａからなる群より選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく；
ｑは０、１、２、３、または４であり；
ｔは０、１、または２である）
を有する化合物、並びにそれらの薬学的に許容し得る塩および水和物。
【請求項２】
式
【化３】
2004501920.tif 000027
で表される請求項１の化合物並びにそれらの薬学的に許容し得る塩及び溶媒和物。
【請求項３】
Ｙが５、６、または７員置換環の３、４、または５員炭素鎖である請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｙが５、６、または７員非置換または置換環の３、４、または５員ヘテロ原子鎖であり、Ｙが酸素、イオウ、および窒素からなる群より選択される１つまたは２つのヘテロ原子を含む請求項１の化合物。
【請求項５】
置換されているか、または非置換であるＹが、ＸＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＸＣＨ２、ＸＣＨ２Ｘ、ＸＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２、ＸＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＸＣＨ２ＸＣＨ２、Ｘ（ＣＨ２）４、ＣＨ２Ｘ（ＣＨ２）３、ＣＨ２ＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＸＣＨ２ＸＣＨ２、ＸＣＨ２ＣＨ２ＸＣＨ２、およびＸＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２からなる群より選択され、ここでＸは独立にＮＲａ、Ｓ、またはＯである、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択される任意に置換された単環式芳香族環である、請求項１の化合物。
【請求項７】
Ｒ１がナフタレン、インデン、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイソキサゾール、ベンズイミダゾール、キノリン、インドール、ベンゾチオフェン、およびベンゾフランからなる群より選択される任意に置換された二環式環である、請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が
【化４】
2004501920.tif 000028
（ここで、Ｎは整数１または２であり、かつＧは、独立に、Ｃ（Ｒａ）２、Ｏ、Ｓ、またはＮＲａである）
である、請求項１の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が置換されているか、または非置換の
【化５】
2004501920.tif 000029
からなる群より選択される、請求項１の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１がハロゲン、Ｃ１−３アルキル、ＯＲａ、シアノ、ニトロ、およびＮＲａＲｂからなる群より選択される置換基で置換されている、請求項９の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がトリフルオロメチル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲＣ、ＯＲａ、Ｃ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、および１つ以上のＯＲａで任意に置換されたＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンアリールからなる群より選択される、請求項１の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２がＣＨ２ＮＲａＲｂ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、および１つまたは２つのＯＲａで任意に置換されたＣ（＝Ｏ）ＣＨ２アリールからなる群より選択される、請求項１１の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がＣＨ２ＮＨ２、ＣＯ２Ｈ、１つまたは２つのＯＣＨ３で置換されたＣ（＝Ｏ）ＣＨ２Ｃ６Ｈ５からなる群より選択される、請求項１１の化合物。
【請求項１４】
置換されているか、または非置換であるＹが、ＣＨ２ＸＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２Ｘ、およびＣＨ２ＣＨ２ＸＣＨ２からなる群より選択され、ここでＸはＮＲａ、Ｓ、およびＯからなる群より選択される、請求項１の化合物。
【請求項１５】
Ｘがイオウまたは窒素であり、かつＲ２がトリフルオロメチル、Ｃ１−６アルキル、Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲＣ、ＯＲａ、Ｃ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、および１つ以上のＯＲａで任意に置換されたＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンアリールからなる群より選択される、請求項１４の化合物。
【請求項１６】
Ｙが３または４員炭素鎖であり、かつｔが１または２である請求項１の化合物。
【請求項１７】
【化６】
2004501920.tif 000030
【化７】
2004501920.tif 000031
【化８】
2004501920.tif 000032
からなる群より選択される化合物並びにそれらの薬学的に許容し得る塩及び溶媒和物。
【請求項１８】
請求項１の化合物を薬学的に許容し得る希釈剤または担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１９】
ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥの阻害が治療上有益なものである状態について雄性または雌性動物を治療する方法であって、請求項１の化合物を薬学的に許容し得る希釈剤または担体と共に含む医薬組成物の有効量を該動物に投与することを含む方法。
【請求項２０】
状態が雄性の勃起不全である請求項１９の方法。
【請求項２１】
治療が経口治療である請求項２０の方法。
【請求項２２】
状態が雌性の覚醒障害である請求項１９の方法。
【請求項２３】
治療が経口治療である請求項２２の方法。
【請求項２４】
状態が、安定狭心症、不安定狭心症、および変異狭心症、高血圧、肺性高血圧、慢性閉塞性肺疾患、悪性高血圧、褐色細胞腫、急性呼吸困難症候群、うっ血性心不全、急性腎不全、慢性腎不全、アテローム性動脈硬化、血管開放度が減少した状態、末梢血管疾患、血管障害、血小板血症、炎症性疾患、心筋梗塞、脳卒中、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、十二指腸潰瘍、腸の運動性の障害、経皮経腔後冠状動脈血管形成、頸動脈血管形成、バイパス術後移植片狭窄、骨粗鬆症、早産、前立腺肥大、および過敏性腸症候群からなる群より選択される、請求項１９の方法。
【請求項２５】
ヒト又は非ヒト動物身体においてｃＧＭＰ特異的ＰＤＥの阻害が治療上有益なものである状態を治療する方法であって、治療上有効な量の請求項１の化合物を該身体に投与することを含む方法。
【請求項２６】
雄性の勃起不全または雌性の覚醒障害を治癒的または予防的に処置するための方法であって、有効用量の請求項１の化合物、並びにそれらの薬学的に許容し得る塩及び溶媒和物を動物に投与することを含む方法。
【請求項２７】
ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥの阻害が治療上有益なものである状態を治癒的または予防的に処置するための医薬の製造への請求項１の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
（発明の分野および背景）
本発明は、一連の化合物、それらの化合物の調製方法、それらの化合物を含む医薬組成物、および治療薬としてのそれらの使用に関する。特には、本発明は、環状グアノシン３’，５’−モノホスフェート特異的ホスホジエステラーゼ（ｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ）、特にはＰＤＥ５、の強力な選択的阻害剤であり、かつ心血管障害および勃起障害の治療を含む、そのような阻害が有益であると考えられる様々な治療領域において有用性を有する化合物に関する。
（発明の詳細な説明）
本発明は、一般構造式（Ｉ）：
【０００１】
【化９】
2004501920.tif 000002
【０００２】
（ここで、Ｒ０は、独立に、ハロおよびＣ１−６アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１は、ベンゼン、チオフェン、フラン、およびピリジンからなる群より選択される任意に置換された単環式芳香族環、並びに任意に置換された二環式環
【０００３】
【化１０】
2004501920.tif 000003
【０００４】
からなる群より選択され、ここで融合環Ｂは、飽和であるか、または部分的もしくは完全に不飽和である５または６員環であり、かつ炭素原子並びに、任意に、酸素、イオウ、および窒素から選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を含み；
Ｙは５、６、もしくは７員置換環の３、４、もしくは５員炭素鎖であるか、またはＹは５、６、もしくは７員非置換もしくは置換環の３、４、もしくは５員ヘテロ原子鎖であり、ここで、該ヘテロ原子鎖は酸素、イオウ、および窒素からなる群より独立に選択される１つもしくは２つのヘテロ原子を含み；
Ｒ２は、独立に、
ニトロ、
トリフルオロメチル、
トリフルオロメトキシ、
ハロゲン、
シアノ、
ＯＲａで任意に置換されたＣ１−６アルキル、
Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ、
ＯＣ（＝Ｏ）Ｒａ、
Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
Ｃ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ
ＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ１−４アルキレンＯＣ１−４アルキレンＣ（＝Ｏ）ＯＲａ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＳＯ２ＲＣ、
Ｃ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンＨｅｔ、
１以上のＯＲａで任意に置換されたＣ（＝Ｏ）Ｃ１−４アルキレンアリール、
Ｃ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、
Ｃ２−６アルケニレンＮＲａＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲＣ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＯＲｂ、
Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＲａ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＲｂ、
ＯＣ１−４アルキレンＣＨ（ＯＲａ）ＣＨ２ＮＲａＲｂ、
ＯＣ１−４アルキレンＨｅｔ、
ＯＣ２−４アルキレンＯＲａ、
ＯＣ２−４アルキレンＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ、
ＮＲａＲｂ、
ＮＲａＣ１−４アルキレンＮＲａＲｂ、
ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、
ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、
Ｎ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）２、
ＮＲａ（ＳＯ２Ｃ１−４アルキル）、
ＳＯ２ＮＲａＲｂ、
およびＯＳＯ２トリフルオロメチル
からなる群より選択され；
ＲａおよびＲｂは同じであっても異なっていてもよく、かつ水素およびＣ１−６アルキルから独立に選択され；
ＲＣはフェニルまたはＣ４−６シクロアルキルであり、ここで、該フェニルまたはＣ４−６シクロアルキルはハロゲン原子、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、およびＯＲａからなる群より選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよく；
ｑは０、１、２、３、または４であり；
ｔは０、１、または２である）
を有する化合物、並びにそれらの薬学的に許容し得る塩および水和物に向けられる。
【０００５】
ここで用いられる場合、「アルキル」という用語は、指示された数の炭素原子を含有する直鎖および分岐鎖炭化水素基、典型的には、メチル、エチル、並びに直鎖および分岐鎖プロピルおよびブチル基を含む。炭化水素基は１６までの炭素原子を含むことができる。「アルキル」という用語は「シクロアルキル」、すなわち、環状Ｃ３−Ｃ８炭化水素基、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロヘキシル、およびシクロペンチル、並びに「架橋アルキル」、すなわち、Ｃ６−Ｃ１６二環式または多環式炭化水素基、例えば、ノルボルニル、アダマンチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、またはデカヒドロナフチルを含む。
【０００６】
「アルキレン」という用語は置換基を有するアルキル基を指す。例えば、「Ｃ１−３アルキレンアリール」という用語は、１ないし３個の炭素原子を含み、かつアリール基で置換されているアルキル基を指す。ここで用いられる「アルケニレン」という用語は同様に定義され、指示された数の炭素原子および炭素−炭素二重結合を含み、かつエチエニレンのような直鎖および分岐鎖アルケニレン基を含む。
【０００７】
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、ここでは、フッ素、臭素、塩素、及びヨウ素を含むように定義される。
【０００８】
「ハロアルキル」という用語は、ここでは、１つ以上のハロ置換基、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヨード、またはそれらの組合せのいずれかで置換されているアルキル基と定義される。同様に、「ハロシクロアルキル」は１つ以上のハロ置換基を有するシクロアルキル基と定義される。
【０００９】
「アリール」という用語は、ここでは、単独で、または組合せで、非置換であるか、または、例えば、１つ以上、特には１ないし３のハロ、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルで置換されていてもよい単環式または多環式芳香族基、好ましくは単環式または二環式芳香族基、例えば、フェニルまたはナフチルと定義される。例示的なアリール基には、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、２−クロロフェニル、３−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メトキシフェニル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−ニトロフェニル等が含まれる。
【００１０】
「ヘテロアリール」という用語は、ここでは、１つもしくは２つの芳香族環を含み、かつ少なくとも１つの窒素、酸素、もしくはイオウを芳香族環内に含む単環式または二環式環系と定義され、これは非置換であるか、または、例えば、１つ以上、特には１ないし３の、ハロ、アルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アシルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、およびアルキルスルホニルのような置換基で置換されていてもよい。ヘテロアリール基の例には、チエニル、フリル、ピリジル、オキサゾリル、キノリル、イソキノリル、インドリル、トリアゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、イミジゾリル、ベンゾチアゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、チアゾリル、およびチアジアゾリルが含まれる。
【００１１】
「Ｈｅｔ」という用語は、５もしくは６員ヘテロシクロアルキル基、例えば、モルホリニル、ピペリジル、ピロリジニル、もしくはピペラジニル、および上に例示されるヘテロアリール基と定義される。
【００１２】
「アルコキシアルキル」及び「アリールオキシアルキル」という用語は、水素が、それぞれ、アルコキシ基又はアリールオキシ基で置換されているアルキルと定義される。「（アルキルチオ）アルキル」、「（アリールチオ）アルキル」及び「（アラルキルチオ）アルキル」という用語は、同様に、酸素原子ではなくイオウ原子が存在することを除いて、上記３種類の基と定義される。
【００１３】
「ヒドロキシ」という用語は−ＯＨと定義される。
【００１４】
「アルコキシ」及び「アリールオキシ」という用語は−ＯＲと定義され、ここでＲはアルキルまたはアリールである。
【００１５】
「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキル基に付随するヒドロキシ基と定義される。
【００１６】
「アミノ」という用語は−ＮＨ２と定義され、および「アルキルアミノ」という用語は−ＮＲ２と定義され、ここで少なくとも１つのＲはアルキルであり、かつ第２のＲはアルキルもしくは水素である。
【００１７】
「アシルアミノ」という用語はＲＣ（＝Ｏ）Ｎと定義され、ここでＲはアルキルまたはアリールである。
【００１８】
「アルキルチオ」という用語は−ＳＲと定義され、ここでＲはアルキルである。
【００１９】
「アルキルスルフィニル」という用語はＲ−ＳＯ２と定義され、ここでＲはアルキルである。
【００２０】
「アルキルスルホニル」という用語はＲ−ＳＯ３と定義され、ここでＲはアルキルである。
【００２１】
「ニトロ」という用語は−ＮＯ２と定義される。
【００２２】
「トリフルオロメチル」という用語−ＣＦ３と定義される。
【００２３】
「トリフルオロメトキシ」という用語は−ＯＣＦ３と定義される。
【００２４】
「シアノ」という用語は−ＣＮと定義される。
【００２５】
「Ｙ」という用語は、ここで用いられる場合およびこれ以降、５、６、または７員環の３、４、または５員成分を指す。環の他の２つの成分は、構造式（Ｉ）に示されるように、隣接する環の炭素原子および窒素原子である。一態様においては、Ｙは３、４、または５員炭素鎖である。この態様において、Ｙは任意に１つもしくは２つのＲ２置換基で置換される。
【００２６】
別の態様においては、Ｙは以下の非限定的な構造を有する３、４、または５員ヘテロ原子鎖である：
ＸＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＸＣＨ２、ＸＣＨ２Ｘ、ＸＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２、
ＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２、ＸＣＨ２ＣＨ２Ｘ、ＸＣＨ２ＸＣＨ２、Ｘ（ＣＨ２）４
ＣＨ２Ｘ（ＣＨ２）３、ＣＨ２ＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２、ＣＨ２ＸＣＨ２ＸＣＨ２、
ＸＣＨ２ＣＨ２ＸＣＨ２、またはＸＣＨ２ＸＣＨ２ＣＨ２、ここでＸは、独立に
ＮＲａ、Ｓ、またはＯである。
【００２７】
このヘテロ原子鎖は非置換、すなわち、ｔが０であっても、置換されていても、すなわち、１つもしくは２つの水素原子がＲ２置換基で置換（ｔが１または２）されていてもよい。
【００２８】
好ましい態様においては、Ｒ１は任意に置換された二環式環系
【００２９】
【化１１】
2004501920.tif 000004
【００３０】
（ここで、二環式環は、例えば、ナフタレンもしくはインデン、または複素環、例えば、ベンゾキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンズイソキサゾール、ベンズイミダゾール、キノリン、インドール、ベンゾチオフェン、もしくはベンゾフランを表すことができる）
または
【００３１】
【化１２】
2004501920.tif 000005
【００３２】
（ここで、ｎは整数１または２であり、かつＧは、独立に、Ｃ（Ｒａ）２、Ｏ、Ｓ、またはＮＲａである）
である。Ｒ１を含む二環式環は、典型的には、フェニル環炭素原子によって残りの分子に結合する。
【００３３】
式（Ｉ）の化合物の好ましい群においては、Ｒ１は任意に置換された二環式環
【００３４】
【化１３】
2004501920.tif 000006
【００３５】
（ここで、ｎは１または２であり、かつＧは、独立に、ＣＨ２またはＯである）
によって表される。特に好ましいＲ１置換基には、
【００３６】
【化１４】
2004501920.tif 000007
【００３７】
が含まれる。この化合物群内で、二環式環の置換基の非限定的な例には、ハロゲン（例えば、塩素）、Ｃ１−３アルキル（例えば、メチル、エチル、またはｉ−プロピル）、ＯＲａ（例えば、メトキシ、エトキシ、またはヒドロキシ）、ＣＯ２Ｒａ、ハロメチルまたはハロメトキシ（例えば、トリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシ）、シアノ、ニトロ、およびＮＲａＲｂが含まれる。
【００３８】
式（Ｉ）の一般的な範囲内にある化合物の特に好ましいサブクラスは、式（ＩＩ）の化合
物
【００３９】
【化１５】
2004501920.tif 000008
【００４０】
（ここで、ＹおよびＹが結合する原子はピペリジン、ピペラジン、チオモルホリン、モルホリン、ピロリジン、イミダゾリジン、またはチアゾリジン環系を形成する）
並びにそれらの薬学的に許容し得る塩及び溶媒和物（例えば、水和物）によって表される。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物は１つ以上の非対称中心を含むことができ、したがって、立体異性体として存在することができる。本発明は、式（Ｉ）の化合物の個々の立体異性体の混合物および別々のものを含む。式（Ｉ）の化合物は互変異性体形態で存在することもでき、本発明はそれらの個々の互変異性体の混合物および別々のものの両者を含む。
【００４２】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る塩は薬学的に許容し得る酸と共に形成される酸付加塩であり得る。適切な塩の例には、これらに限定されるものではないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、リン酸水素、酢酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、およびｐ−トルエンスルホン酸塩が含まれる。式（Ｉ）の化合物は、塩基との薬学的に許容し得る金属塩、特には、アルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩をも提供することができる。例には、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、およびカルシウム塩が含まれる。
【００４３】
本発明の化合物はｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ５の強力かつ選択的な阻害剤である。したがって、式（Ｉ）の化合物は治療における使用、特には、ＰＤＥ５の選択的阻害が有益であると考えられる様々な状態の治療について興味深いものである。
【００４４】
ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は環状ヌクレオチド、例えば、環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）および環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の加水分解を触媒する。ＰＤＥは少なくとも７つのアイソザイム・ファミリーに分類されており、多くの組織中に存在する（Ｊ．Ａ． Ｂｅａｖｏ， Ｐｈｙｓｉｏｌ． Ｒｅｖ．， ７５， ｐ．７２５（１９９５））。
【００４５】
ＰＤＥ５の阻害は特に魅力的な標的である。ＰＤＥ５の強力かつ選択的な阻害剤は血管拡張、弛緩、および利尿効果を提供し、これらのすべては様々な疾患状態の治療において有益である。この領域における研究は、ｃＧＭＰの基本構造に基づいて、幾つかのクラスの阻害剤につながっている（Ｅ． Ｓｙｂｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｔ． Ｏｐｉｎ． Ｔｈｅｒ． Ｐａｔ．， ７， ｐ．６３１（１９９７））。
【００４６】
ＰＤＥ５阻害剤の生化学的、生理学的、および臨床的効果は、平滑筋、腎臓、止血、炎症、および／または内分泌機能の調節が望ましい様々な疾患状態におけるそれらの有用性を示唆する。したがって、式（Ｉ）の化合物は、多くの障害、安定、不安定、および変異（Ｐｒｉｎｚｍｅｔａｌ）狭心症、高血圧、肺性高血圧、うっ血性心不全、慢性閉塞性肺疾患、悪性高血圧、褐色細胞腫、急性呼吸困難症候群、急性および慢性腎不全、アテローム性動脈硬化、血管開放度が減少した状態（例えば、経皮経腔後冠状動脈もしくは頸動脈血管形成、またはバイパス術後移植片狭窄）、末梢血管疾患、血管障害、例えば、Ｒａｙｎａｕｄ病、血小板血症、炎症性疾患、心筋梗塞、脳卒中、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、骨粗鬆症、早産、前立腺肥大、十二指腸潰瘍、男性の勃起不全、女性の性的不全、並びに腸の運動性の障害を特徴とする疾患（例えば、過敏性腸症候群）の治療における有用性を有する。
【００４７】
特に重要な用途は、性交不能の一形態であり、かつ一般的な医学的問題である男性の勃起不全の治療である。性交不能は男性における性交する力の欠如と定義することができ、陰茎勃起もしくは射精またはその両者の達成の不能を含み得る。勃起不全の発生率は年齢と共に増加し、４０歳を超える男性の約５０％がある程度の勃起不全を患う。
【００４８】
加えて、さらなる重要な用途は、女性の性的覚醒障害とも呼ばれる女性の覚醒障害の治療である。女性の覚醒障害は、性的行為の完了までの性的興奮の適切な潤滑／湿潤応答の獲得または維持の再発性の不能と定義される。この覚醒応答は骨盤における血管収縮、膣潤滑、並びに外部生殖器の拡張および湿潤からなる。
【００４９】
したがって、式（Ｉ）の化合物が男性の勃起不全および女性の性的覚醒障害の治療において有用であることが想像される。したがって、本発明は、ヒトを含む、雄性動物における勃起不全および雌性動物における覚醒障害を治療もしくは予防処置するための医薬の製造への、式（Ｉ）の化合物、またはそれらの薬学的に許容し得る塩、またはいずれかを含む医薬組成物の使用に関する。
【００５０】
「治療」という用語は、治療する状態または症状の進行または重篤度の防止、低減、停止、または逆転を含む。そのようなものとして、「治療」という用語は、適切さに応じて、医学的治療および／または予防管理の両者を含む。
【００５１】
「式（Ｉ）の化合物」またはそれらの生理学的に許容し得る塩もしくは溶媒和物は正味の化合物として、またはいずれかを含む医薬組成物として投与できることも理解される。
【００５２】
本発明の化合物は、主として、ヒトにおける性的不全、例えば、男性の勃起不全および女性の覚醒障害の治療用であることが想像されるが、他の疾患状態の治療にも用いることができる。
【００５３】
したがって、本発明のさらなる側面は、安定、不安定、および変異（Ｐｒｉｎｚｍｅｔａｌ）狭心症、高血圧、肺性高血圧、悪性高血圧、褐色細胞腫、慢性閉塞性肺疾患、うっ血性心不全、急性呼吸困難症候群、急性および慢性腎不全、アテローム性動脈硬化、血管開放度が減少した状態（例えば、ＰＴＣＡ後またはバイパス術後移植片狭窄）、末梢血管疾患、血管障害、例えば、Ｒａｙｎａｕｄ病、血小板血症、炎症性疾患、心筋梗塞の予防、脳卒中の予防、脳卒中、気管支炎、慢性喘息、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、緑内障、骨粗鬆症、早産、前立腺肥大、男性および女性の勃起不全、または腸の運動性の障害を特徴とする疾患（例えば、ＩＢＳ）の治療において使用するための式（Ｉ）の化合物を提供することである。
【００５４】
本発明の別の側面によると、上記状態および障害を治療するための医薬の製造への式（Ｉ）の化合物の使用が提供される。
【００５５】
さらなる側面においては、本発明は、ヒト又は非ヒト動物身体において上記状態および障害を治療する方法であって、治療上有効な量の式（Ｉ）の化合物を該身体に投与することを含む方法を提供する。
【００５６】
本発明の化合物は適切な経路、例えば、口腔、頬、吸入、舌下、直腸、膣、経尿道、鼻、局所、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、すなわち、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、または非経口（静脈内、筋肉内、皮下、および環状動脈内を含む）投与によって投与することができる。非経口投与は、針およびシリンジを用いることによって、またはＰＯＷＤＥＲＪＥＣＴ（商標）のような高圧技術を用いることによって達成することができる。
【００５７】
本発明の化合物の経口投与が好ましい経路である。経口投与は最も便利であり、かつ他の投与経路に関与する不利な点が回避される。嚥下障害または経口投与後の薬物吸収の障害を患う患者に対しては、薬物を非経口的に、例えば、舌下または頬で投与することができる。
【００５８】
本発明において用いるのに適する化合物および医薬組成物には、活性成分がその目的を達成するのに有効な量で投与されるものが含まれる。より具体的には、「治療上有効な量」は、治療を受ける被験者の発症の防止、または既存の症状の軽減に有効な量を意味する。有効量の決定は、特にはここで提供される詳細な開示に鑑み、十分に当該技術分野における熟練者の能力の範囲内にある。
【００５９】
「治療上有効な用量」は、結果として所望の効果を達成する化合物の量を指す。そのような化合物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）を決定するための、細胞培養物又は実験動物における標準な薬学的手順によって決定することができる。毒性効果および治療効果の間の比が治療指数であり、これはＬＤ５０とＥＤ５０との比として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。そのようなデータから得られるデータは、ヒトにおいて用いるための一続きの投与量の処方において用いることができる。そのような化合物の投与量は、好ましくは、毒性がほとんどないか、または全くなしにＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。投与量は、用いられる投与形態、および利用される投与経路に依存して、この範囲内を変化し得る。
【００６０】
正確な処方、投与経路、および投与量は、個々の医師が患者の状態に照らして選択することができる。投与量および間隔は、治療効果を維持するのに十分である活性部分の血漿レベルが提供されるように個別に調整することができる。
【００６１】
投与される組成物の量は、治療を受ける被験者、被験者の体重、苦痛の重篤度、投与様式、および処方する医師の判断に依存する。
【００６２】
具体的には、上で同定される状態および障害の治癒的もしくは予防的処置におけるヒトへの投与について、式（Ｉ）の化合物の経口投与量は、一般には、平均的な成人患者（７０ｋｇ）に対して１日約０．５ないし約１０００ｍｇである。したがって、典型的な成人患者に対して、個々の錠剤またはカプセルは、１回もしくは複数回用量で１日当たり１回もしくは数回投与するため、適切な薬学的に許容し得るビヒクルもしくは担体中に、０．２ないし５００ｍｇの活性化合物を含む。静脈内、頬、または舌下投与のための投与量は、典型的には、必要に応じて１回の用量当たり０．１ないし５００ｍｇである。実際には、個々の患者に最も適する正確な投薬計画は医師が決定し、投与量はその患者の年齢、体重および応答に応じて変化する。上記投与量は平均的な事例を例示するものであるが、より多い、もしくはより少ない投与量に利点がある個別の場合が存在し、それらは本発明の範囲内にある。
【００６３】
ヒトでの使用については、式（Ｉ）の化合物は単独で投与することができるが、一般には、目的とする投与経路および標準的な薬学的実務に関して選択される医薬担体と混合して投与される。したがって、本発明に従って用いるための医薬組成物を、通常の方法で、式（Ｉ）の化合物の薬学的に用いることができる調製品への処理を容易にする賦形剤および助剤を含む１種類以上の生理学的に許容し得る担体を用いて処方することができる。
【００６４】
これらの医薬組成物は、通常の方法、例えば、通常の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、磨砕、乳化、封入、エントラッピング、または凍結乾燥プロセスによって製造することができる。適切な処方は選択される投与経路に依存する。治療上有効な量の本発明の化合物を経口投与する場合、組成物は、典型的には、錠剤、カプセル、粉末、溶液、またはエリキシルの形態である。錠剤形態で投与される場合、組成物は、さらに、ゼラチンまたは佐剤のような固体担体を含むことができる。錠剤、カプセル、および粉末は約５ないし約９５％の本発明の化合物、好ましくは約２５ないし約９０％の本発明の化合物を含む。液体形態で投与される場合、液体担体、例えば、水、石油、または動物もしくは植物起源の油を添加することができる。液体形態の組成物は、さらに、生理食塩水、デキストロースもしくは他の糖類溶液、またはグリコールを含むことができる。液体形態で投与される場合、組成物は約０．５ないし約９０重量％の本発明の化合物、好ましくは約１ないし約５０％の本発明の化合物を含む。
【００６５】
治療上有効な量の本発明の化合物を静脈内、皮膚、または皮下注射によって投与する場合、組成物は発熱物質非含有の非経口的に許容し得る水溶液の形態にある。ｐＨ、等張性、安定性等に関して適切である、そのような非経口的に許容し得る溶液の調製は、当該技術分野における技術のうちにある。静脈内、皮膚、または皮下注射に好ましい組成物は、典型的には、本発明の化合物に加えて、等張性ビヒクルを含む。
【００６６】
経口投与については、式（Ｉ）の化合物を当該技術分野において公知の薬学的に許容し得る担体と組み合わせることによってこれらの化合物を容易に処方することができる。そのような担体は、治療を受ける患者が経口摂取するため、本発明の化合物を錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として処方することを可能にする。経口用途の医薬調製品は、式（Ｉ）の化合物を固体賦形剤と共に添加し、任意に得られる混合物を粉砕し、かつ、所望であれば適切な助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して錠剤または糖衣錠の核を得ることによって得ることができる。適切な賦形剤には、例えば、充填剤およびセルロース調製品が含まれる。所望であれば、崩壊剤を添加することができる。
【００６７】
吸入による投与については、加圧パックまたは噴霧器からのエアロゾル・スプレー提示の形態で、適切な噴霧剤を用いて、本発明の化合物を好都合に送達する。加圧エアロゾルの場合、秤量された量を送達するのに弁を用意することによって投与単位を決定することができる。化合物および適切な粉末基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含む、吸入器または吹き入れ器において用いるための、例えばゼラチンの、カプセルおよびカートリッジを処方することができる。
【００６８】
注入、例えば、大量瞬時投与または連続注入による非経口投与用に化合物を処方することができる。注入用の処方は、保存剤を添加した単位投与形態で、例えば、アンプルまたは多用量容器中に提示することができる。組成物は、油性もしくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルジョンのような形態をとることができ、かつ懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤のような配合剤を含むことができる。
【００６９】
非経口投与用の医薬処方は水溶性形態にある活性化合物の水溶液を含む。加えて、活性化合物の懸濁液を適切な油性注入懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒またはビヒクルには、脂肪油または合成脂肪酸エステルが含まれる。水性注入懸濁液は、その懸濁液の濃度を高める物質を含むことができる。任意に、この懸濁液は適切な安定化剤または化合物の溶解度を高め、かつ高度に濃縮された溶液の調製を可能にする薬剤も含むことができる。その代わりに、本発明の組成物は、使用前に適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質非含有水を用いて構成するための粉末形態であってもよい。
【００７０】
本発明の化合物は直腸組成物、例えば、座剤または、例えば通常の座剤基剤を含む、保持浣腸に処方することもできる。前述の処方に加えて、これらの化合物はデポー調製品として処方することもできる。そのような長期作用性処方は、移植（例えば、皮下または筋肉内）によって、または筋肉内注射によって投与することができる。したがって、例えば、これらの化合物は適切なポリマー性もしくは疎水性物質（例えば、許容し得る油中のエマルジョン）、またはイオン交換樹脂、または可溶性の不十分な誘導体、例えば、可溶性の不十分な塩を用いて処方することができる。
【００７１】
本発明の化合物の多くは薬学的に適合し得る対イオンとの塩として提供することができる。そのような薬学的に許容し得る塩基付加塩は、遊離酸の生物学的有効性および特性を保持し、かつ適切な無機もしくは有機塩基との反応によって得られるものである。
【００７２】
特には、式（Ｉ）の化合物は、賦形剤、例えば、デンプンもしくはラクトースを含む錠剤の形態で、またはカプセルもしくはオビュール（ｏｖｕｌｅ）中に単独で、もしくは賦形剤と混合して、または香料もしくは着色料を含むエリキシルもしくは懸濁液の形態で、経口、頬、もしくは舌下投与することができる。そのような液体調製品は、薬学的に許容し得る添加物、例えば、懸濁剤を用いて調製することができる。化合物は非経口的に、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、または環状動脈内に投与することもできる。非経口投与については、化合物は、血液と等張性である溶液を作製するために他の物質、例えば、塩または単糖類、例えば、マンニトールもしくはグルコースを含むことができる無菌水溶液の形態で最良に用いられる。
【００７３】
獣医学的用途については、式（Ｉ）の化合物またはそれらの非毒性塩を通常の獣医学的実務に従って適切に許容し得る処方として投与する。獣医師は、特定の動物に最も適する投薬計画および投与経路を容易に決定することができる。
【００７４】
したがって、本発明は、さらなる側面において、式（Ｉ）の化合物をそれらの薬学的に許容し得る希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。さらに、式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物の調製方法であって、式（Ｉ）の化合物をそれらの薬学的に許容し得る希釈剤または担体と共に混合することを含む方法も本発明によって提供される。
【００７５】
特定の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物またはそれらの薬学的に許容し得る塩を薬学的に許容し得る希釈剤または担体と共に含有する、ヒトを含む雄性動物における勃起不全または雌性動物における覚醒障害の治癒的または予防的処置のための医薬組成物を含む。
【００７６】
式（Ｉ）の化合物は、当該技術分野において公知のあらゆる適切な方法によって、または本発明の一部を形成する以下のプロセスによって調製することができる。下記の方法において、Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、およびＹは上記構造式（Ｉ）において定義される通りである。特には、Ｄａｕｇａｎ米国特許第５，８５９，００６号（これは参照することによりここに組み込まれる）が構造式（ＩＩＩ）の化合物の調製を開示する。
【００７７】
【化１６】
2004501920.tif 000009
【００７８】
簡潔に述べると、構造式（ＩＩＩ）の化合物、すなわち、Ｄａｕｇａｎ 米国特許第５，８５９，００６号の中間体１および２のシス異性体は、以下の反応スキームに従って調製した：
【００７９】
【化１７】
2004501920.tif 000010
【００８０】
【化１８】
2004501920.tif 000011
【００８１】
構造式（Ｉ）の化合物は、構造式（ＩＩＩ）の化合物を構造式（ＩＶ）の化合物と反応させることによって調製する：
【００８２】
【化１９】
2004501920.tif 000012
【００８３】
構造式（ＩＶ）の化合物は、構造式（Ｖ）の化合物を保護化合物と反応させることによって、すなわち、
【００８４】
【化２０】
2004501920.tif 000013
【００８５】
によって調製する。ベンジルクロロホルメートおよびトリクロロエチルクロロホルメートのような保護化合物および保護基は当該技術分野における熟練者に公知であり、例えば、Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ｅｔ ａｌ． ”Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，” Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， ＮＹ， ＮＹ（１９９９）を参照のこと。
【００８６】
続いて、構造式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物を反応させて構造式（ＶＩ）の化合物を形成し、次に保護基を除去することでそれを環化して構造式（Ｉ）の化合物を形成する。構造式（Ｉ）の化合物の構造は、例えば、ピペロナールとは異なるアルデヒドを用いてＲ１の素性を変化させることにより、ハロもしくはアルキルフェニル置換トリプトファンエステルを用いることにより、および構造式（Ｖ）の適切に置換された化合物を用いることにより変化させることができる。
【００８７】
【化２１】
2004501920.tif 000014
【００８８】
式（Ｉ）の化合物は式（Ｉ）の他の化合物に変換することができる。したがって、例えば、Ｒ１が置換ベンゼン環である場合、他の適切に置換された式（Ｉ）の化合物を調製することができる。適切な相互変換の例には、これらに限定されるものではないが、ニトロからアミノ、適切な手段による（例えば、還元剤、例えば、ＳＮＣｌ２、またはパラジウム触媒、例えば、炭素付着パラジウムを用いる）ＯＲａからヒドロキシ、またはアミノから置換アミノ、例えば、標準的なアシル化もしくはスルホニル化条件を用いるアシルアミノもしくはスルホニルアミノが含まれる。Ｒ１が置換二環式系を表す場合、適切な相互変換には、例えばパラジウム触媒での処理（これにより、例えば、ベンジル置換基が適切な二環式環系から除去される）による、置換基の除去が含まれ得る。同様の相互変換、すなわち、カルボン酸からエステルもしくはアミドへの変換、またはアミノから置換アミノへの変換をＲ２置換基に対して行うことができる。
【００８９】
式（Ｉ）の化合物は、上記方法により、式（ＩＩＩ）の適切な立体異性体から個々の立体異性体として、または式（ＩＩＩ）の適切なラセミ化合物からラセミ混合物として調製することができる。本発明の化合物の個々の立体異性体は、ラセミ化合物から、ラセミ混合物をそれらの構成立体異性体への分離について当該技術分野において公知の方法、例えば、Ｈｙｐｅｒｓｉｌナフチル尿素のようなキラルカラムでのＨＰＬＣ、または立体異性体の塩の分離を用いる分離によって調製することができる。本発明の化合物は、適切な溶媒からの結晶化、またはその蒸発によって、溶媒分子に関して単離することができる。
【００９０】
塩基性中心を含む式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容し得る酸付加塩は通常の方法で調製することができる。例えば、遊離塩基の溶液を正味の、または適切な溶液中の適切な酸で処理し、得られる塩を濾過または反応溶媒の真空下での蒸発によって単離する。薬学的に許容し得る塩基付加塩は、同様の方法で、式（Ｉ）の化合物の溶液を適切な塩基で処理することによって得ることができる。両タイプの塩は、イオン交換樹脂技術を用いて形成し、または相互変換することができる。したがって、本発明のさらなる側面によると、式（Ｉ）の化合物または塩もしくは溶媒和物（例えば、水和物）を調製し、（Ｉ）塩形成、または（ｉｉ）溶媒和物（例えば、水和物）形成がそれに続く方法が提供される。
【００９１】
以下、添付の例において、以下の略語を用いる：ｒｔ（室温）、ｍｉｎ（分）、ｈ（時間）、ｇ（グラム）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｍ．ｐ．（融点）、ｅｑ（当量）、Ｌ（リットル）、ｍＬ（ミリリットル）、μＬ（マイクロリットル）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＣＨ２Ｃｌ２（ジクロロメタン）、ＣＨＣｌ３（クロロホルム）、ＩＰＡ（イソプロピルアルコール）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＥｔＯＨ（エタノール）、ＭｅＯＨ（メタノール）、Ｅｔ３Ｎ（トリエチルアミン）、およびＴＨＦ（テトラヒドロフラン）。
実施例１の調製
【００９２】
【化２２】
2004501920.tif 000015
【００９３】
実施例１は、中間体１および２から、以下の合成スキームに示されるように調製した。中間体１は、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、ＷＩから商業的に入手可能である２−カルボキシピペラジン二塩酸塩から調製した。
【００９４】
【化２３】
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【００９５】
中間体１
Ｎ，Ｎ−ビス−Ｃｂｚ−２−カルボキシピペラジンの調製
０℃の２−カルボキシピペラジン二塩酸塩（５．０８ｇ、２５ｍｍｏｌ）、１，３−ジオキソラン（４５ｍＬ）、および水（３０ｍＬ）の混合物に５０％水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）水溶液（６ｍＬ）を滴下により添加した。次に、ベンジルクロロホルメート（ＢｚＣＯＣｌ）（７．８ｍＬ、５５ｍｍｏｌ）を滴下により、ｐＨを８−１１の間に維持するために５０％水酸化ナトリウム水溶液（４ｍＬ）と交互に、得られた混合物に添加した。反応の温度は、３０分の添加期間の間、１５℃未満に維持した。得られた二相性混合物を０℃でさらに３０分間攪拌した後、その反応物を２Ｎ塩酸（ＨＣｌ）でｐＨ２に酸性化し、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を食塩水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、水層を酢酸エチル（２０ｍＬ）で再抽出した。その後、合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥させ、濾過して減圧下で濃縮した。残滓を、塩化メチレン／メタノール（４０：１から１０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、ビス保護ピペラジンを白色固体として得た（７．０ｇ、７０％）：ＴＬＣ ＲＦ（１０：１塩化メチレン／メタノール）＝０．５５；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４０−７．２０（ｍ、１０Ｈ）、５．０１−５．２７（ｍ、４Ｈ）、４．９２−４．６０（ｍ、２Ｈ）、４．２０−３．８１（ｍ、２Ｈ）、３．４０−２．８２（ｍ、３Ｈ）。
中間体２
メチル１，２，３，４−テトラヒドロ−１−（３，４−メチレンジオキシフェニル）−９Ｈ−ピリド［３，４−ｂ］インドール−３−カルボキシレート
中間体２、すなわち、構造式（ＩＩＩ）の化合物を、Ｄａｕｇａｎ米国特許第５，８５９，００６号（参照することによりここに組み込まれる）に記載される通りに調製した。
中間体３
シス−アミドの調製
０℃の、中間体１（４．５ｇ、１１．３ｍｍｏｌ）のクロロホルム（ＣＨＣｌ３）（５０ＭＬ）溶液に、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２．３ｇ、１１．２ｍｍｏｌ）を一度に添加した。得られた白色スラリーを０℃で４０分間攪拌した後、中間体２（３．９ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた黄色スラリーを６０℃で３時間加熱した後、その混合物を５０℃でさらに２０時間加熱した。次に、そのスラリーを室温に冷却して真空濾過し、固体を塩化メチレンで洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、その残滓を、塩化メチレン／酢酸エチル（１：０から２０：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、中間体の３のシス−アミドを黄色固体として得た（６．１ｇ）：ＴＬＣ ＲＦ（２０：１塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．２９。
実施例１
（５ａＲ，１２Ｒ）−１２−ベンゾ（１，３）ジオキソール−５−イル−５，５ａ，８，９，１０，１０ａ，１２，１３−オクタヒドロ−７Ｈ−６ａ，９，１１ａ，１３−テトラザ−インデオ［１，２−ｂ］アントラセン−６，１１−ジオンの調製
メタノール（２００ｍＬ）中のＣｂｚ保護中間体３を触媒量の５％炭素付着パラジウム（０．５５ｇ、約５５％湿潤）で処理した。その混合物を水素雰囲気下、６０℃で６時間攪拌した後、パラジウム触媒をＣｅｌｉｔｅ栓を通す真空濾過によって除去し、メタノールで溶出した。濾液を減圧下で濃縮し、その残滓を、塩化メチレン／酢酸エチル／メタノール／アセトニトリル（４：１：０．２：０．１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、実施例１の化合物を得た（１．７９ｇ、２工程にわたって３８％、ジアステレオマーの１：１混合物）：ｍｐ ２２６−２３７℃；ＴＬＣ ＲＦ（４：１：０．２塩化メチレン／酢酸エチル／メタノール）＝０．５０；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ８．０４（ｓ、０．５Ｈ）、７．９７（ｓ、０．５Ｈ）、７．６０−７．５０（ｍ、２Ｈ）、７．２５−７．０２（ｍ、３Ｈ）、６．８７−６．７４（ｍ、１Ｈ）、６．７０−６．６０（ｍ、２Ｈ）、６．００（ｓ、０．５Ｈ）、５．９４（ｓ、０．５Ｈ）、５．８５（ｓ、１Ｈ）、５．８２（ｓ、１Ｈ）、４．７０−４．５９（ｍ、０．５Ｈ）、４．５５−４．４２（ｍ、０５．Ｈ）、４．４０−４．２４（ｍ、１Ｈ）、４．０８−３．７９（ｍ、２Ｈ）、３．５６−３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．２０−２．８９（ｍ、２Ｈ）、２．８７−２．４８（ｍ、３Ｈ）、１．９２（ｂｓ、２Ｈ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ１６７．３、１６６．３、１６６．１、１６３．９、１４７．９、１４７．０、１３６．７、１３６．１、１３５．８、１３２．８、１２６．２、１２２．５、１２０．４、１２０．１、１１９．９、１１８．６、１１１．１、１０８．４、１０８．３、１０７．１、１０６．７、１０６．５、１０１．１、５９．６、５７．８、５７．６、５７．２、５６．７、５６．４、４９．９、４９．３、４４．９、４４．７、４３．０、４２．３、２５．５、２５．０ｐｐｍ；ＡＰＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３１（Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ４＋Ｈ）＋；［α］Ｄ２５℃＝＋８６．５°（Ｃ＝０．５、ＤＭＳＯ）。
【００９６】
Ｃ２４Ｈ２２Ｎ４Ｏ４・Ｈ２Ｏについて算出された分析値：Ｃ、６４．２８；Ｈ、５．３９；Ｎ、１２．４９。実測：Ｃ、６４．３６；Ｈ、５．２１；Ｎ、１２．４６。
実施例２の調製
【００９７】
【化２４】
2004501920.tif 000017
【００９８】
実施例２は中間体２および４から以下の合成スキームに示されるように調製した。Ｌ−チアプロリンはＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．から商業的に入手可能である。
【００９９】
【化２５】
2004501920.tif 000018
【０１００】
【化２６】
2004501920.tif 000019
【０１０１】
中間体４
ＴＲＯＣ保護チアプロリンの調製
Ｌ−チアプロリン（３．０ｇ、２２．５ｍｍｏｌ）を２Ｍ水酸化ナトリウム（１１．２５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を０℃に冷却した。この混合物に、トリクロロエチルクロロホルメート（３．４ｍＬ、２４．６ｍｍｏｌ）および２Ｍ水酸化ナトリウム（１５．５ｍＬ）を、０℃の反応温度を維持しながら、滴下により、１時間にわたって同時に添加した。添加が完了した後、得られた混合物を、攪拌しながら合計で１２時間、室温まで徐々に暖めた。その混合物をジエチルエーテル（３×５０ｍＬ）で抽出し、水層を２Ｍ ＨＣｌでｐＨ１に酸性化した。その水層を酢酸エチル（３×５０ｍＬ）でさらに抽出し、合わせた有機抽出物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮して、ＴＲＯＣ保護チアプロリン中間体４を無色の油として得た（２．７８ｇ、４０％）：１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ９．６１（ｂｒ ｓ、１Ｈ）、４．９９−４．９０（ｍ、１Ｈ）、４．８５−４．７１（ｍ、３Ｈ）、４．６０（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８−３．３０（ｍ、２Ｈ）。
中間体５
シス−β−カルボリンアミドの調製
ＴＲＯＣ保護チアプロリン中間体４（２．０ｇ、６．５ｍｍｏｌ）の塩化チオニル（７ｍＬ）溶液を還流温度で４時間加熱した後、過剰の塩化チオニルを減圧下で除去した。その残滓を塩化メチレン（１０ｍＬ）で希釈した。この残留溶液を、塩化メチレン（ＣＨ２Ｃｌ２）（５０ｍＬ）中の中間体２（２．３４ｇ、６．１０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ）（２．６０ｍＬ、１８．７ｍｍｏｌ）の混合物に０℃、アルゴン雰囲気下で滴下により添加した。得られた混合物を１２時間にわたって室温まで徐々に暖め、塩化メチレン（１００ｍＬ）で希釈した後、水（１００ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（ＮａＨＣＯ３）溶液、および食塩水で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させて濾過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の泡状残滓を得た。この残滓を、塩化メチレン／酢酸エチル（９７：３）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、シス−β−カルボリンアミド中間体５を黄色の泡として得た（１．８ｇ、４６％）：ＴＬＣ ＲＦ（９５：５塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．５３。
実施例２の調製
１Ｍ酢酸アンモニウム（ＮＨ４ＯＡＣ）（４０ｍＬ）の溶液を中間体５（２．００ｇ，３．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）溶液に添加し、次いで新たに活性化した亜鉛顆粒（１２．９５ｇ、０．２０ｍｏｌ）を添加した。この活性化亜鉛は、亜鉛顆粒を２Ｍ ＨＣｌで洗浄した後、洗浄液がｐＨ紙に対して中性となるまで水ですすぐことによって調製した。次に、活性化亜鉛をアセトンおよびジエチルエーテルで洗浄した後、室温、減圧下で急速に乾燥させた。得られた混合物を室温、アルゴン雰囲気下で３日間攪拌した後、亜鉛を真空濾過によって除去してＴＨＦ（３×１０ｍＬ）で洗浄した。得られた濾液を減圧下で濃縮して黄色の泡を得、それを酢酸エチル（３００ｍＬ）と０．１Ｍ ＨＣｌ（１００ｍＬ）とに分配した。酢酸エチル層を水（２００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２００ｍＬ）、および食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を減圧下で除去して黄色の泡を得た。その残滓を、塩化メチレン／酢酸エチル（８：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色の泡を得た。この残滓をスラリー、次いで真空濾過によって精製して黄色粉末を得、それを真空下、７０℃で一晩乾燥させて実施例２を淡黄色粉末として得た（０．３８ｇ、２８％、Ｃ３でのジアステレオマーの２：１混合物）：ｍｐ １８８−１９２℃；ＴＬＣ Ｒｒ（８：１塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．４１；１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１１．１０（ｓ、２Ｈ）、１０．８（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．３２（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．０８−６．９７（ｍ、１２Ｈ）、６．９０−６．８７（ｍ、２Ｈ）、６．８２（ｓ、２Ｈ）、６．７８−６．７５（ｍ、３Ｈ）、６．７２−６．７０（ｍ、２Ｈ）、６．２４（ｓ、２Ｈ）、５．９６−５．９０（ｍ、７Ｈ）、５．２４（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．８６（ｄ、Ｊ＝９．８Ｈｚ、２Ｈ）、４．６４（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．６１−４．５８（ｄｄ、Ｊ＝５．１、１１．６Ｈｚ、２Ｈ）、４．４８−４．４６（ｍ、３Ｈ）、４．４２−４．３８（ｍ、１Ｈ）、４．２３（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、３．５６−３．５２（ｄｄ、Ｊ＝３．４、１５．６Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８−３．４４（ｄｄ、Ｊ＝５．０、１６．０Ｈｚ、２Ｈ）、３．４１−３．２０（ｍ、５Ｈ）、３．１２−３．０８（ｍ、２Ｈ）、３．０２−２．９７（ｄｄ、Ｊ＝１１．７、１５．７Ｈｚ、２Ｈ）ｐｐＭ；ＣＩ ＭＳ ｍ／ｚ ４３４（Ｃ２３Ｈ１９Ｎ３Ｏ４Ｓ＋Ｈ）＋；［α］Ｄ２５℃＝＋５３．３°（Ｃ＝０．５、クロロホルム）。Ｃ２３Ｈ１９Ｎ３Ｏ４Ｓ・０．２５Ｈ２Ｏについての算出分析値：Ｃ、６３．０７；Ｈ、４．４４；Ｎ、９．５９。実測：Ｃ、６３．０３；Ｈ、４．４３；Ｎ、９．３９。キラルＨＰＬＣ分析（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤカラム、２５０×４．６ｍｍ、保持時間＝４９．２および５８．３分；１：１イソプロパノール／ヘキサン；流速＝０．５ｍＬ／分；２５４ｎｍでの検出器；２５℃）は、それぞれ６７：２９の比であり、かつ９６．２％の総純度を有する２つの��要ピークを示した。実施例２の相対立体化学は一連のＮＯＥ差実験によってシス異性体であることが確認された：４．６０ｐｐｍおよび４．４０ｐｐｍのＣ１２ａプロトンから６．２４ｐｐｍおよび５．９６ｐｐｍのＣ６プロトンまでの正のＮＯＥ増強；６．２４ｐｐｍおよび５．９６ｐｐｍのＣ６プロトンから４．６０ｐｐｍおよび４．４０ｐｐｍのＣ１２ａプロトンまでの正のＮＯＥ増強。
実施例３の調製
【０１０２】
【化２７】
2004501920.tif 000020
【０１０３】
実施例３は実施例１から以下の合成反応によって調製した。
【０１０４】
【化２８】
2004501920.tif 000021
【０１０５】
【化２９】
2004501920.tif 000022
【０１０６】
（５ａＲ，１２Ｒ）−１２−ベンゾ（１，３）ジオキソル−５−イル−９−［２−（３，４−ジメトキシフェニル）エタノイル］−５，５ａ，８，９，１０，１０ａ，１２，１３−オクタヒドロ−７Ｈ−６ａ，９，１１ａ，１３−テトラアザインデノ［１，２−ｂ］アントラセン−６，１１−ジオンの調製
塩化（３，４−ジメトキシフェニル）アセチル（中間体６、１３９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を実施例１（１３８ｍｇ． ０．３２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０５８ｍＬ、０．４２ｍｍｏｌ）の混合物のクロロホルム（４．０ｍＬ）溶液中に室温、窒素層の下で一度に添加し、得られた混合物を５時間攪拌した。その溶液を塩化メチレン（６０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で連続的に洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、溶媒を減圧下で除去した。単離した固体を塩化メチレン（２×１ｍＬ）で洗浄した後、真空オーブン内、室温で１８時間乾燥させ、実施例３をオフホワイトの固体として得た（９８ｍｇ、５０％）：ｍｐ ２８４−２８９℃；ＴＬＣ Ｒｆ（５：１塩化メチレン／酢酸エチル）＝０．３３；１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）；δ１１．００−１０．８０（ｍ、１Ｈ）、７．５５−７．５０（ｍ、１Ｈ）、７．３１−７．２４（ｍ、１Ｈ）、７．１０−６．６８（ｍ、８Ｈ）、６．０９−５．８８（ｍ、３Ｈ）、４．７２−３．８７（ｍ、４Ｈ）、３．８７−３．４０（ｍ、８Ｈ）、３．３０−２．５５（ｍ、４Ｈ）；ＡＰＩ ＭＳ ｍ／ｚ ６０９［Ｃ３４Ｈ３２Ｎ４Ｏ７＋Ｈ］＋；［α］Ｄ２５℃＝＋４９．７（Ｃ＝１．０、ＤＭＳＯ）。ＨＰＬＣ分析（Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤカラム、２５０×４．６ｍｍ、保持時間＝３４．４分；１：１イソプロパノール／ヘキサン；流速＝０．５ｍＬ／分； ２５４ｎｍでの検出器；周囲温度）は９６．７％の純度を有する単一ピークを示した。
【０１０７】
以下の化合物は、実施例１−３の調製に類似する方法によって調製することができる構造式（Ｉ）の化合物の２つのさらなる例である。
【０１０８】
【化３０】
2004501920.tif 000023
【０１０９】
【化３１】
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【０１１０】
本発明の化合物は経口投与用の錠剤に処方することができる。例えば、式（Ｉ）の化合物を、ＷＯ ９６／３８１３１（参照することによりここに組み込まれる）に記載される共沈殿法によってポリマー性担体との分散物に形成することができる。この共沈殿分散物を賦形剤と配合した後、任意にフィルムコーティングされる錠剤に圧縮することができる。
【０１１１】
構造式（Ｉ）の化合物を、ＰＤＥ５を阻害する能力について試験した。ＰＤＥ５の活性を阻害する化合物の能力はその化合物のＩＣ５０値、すなわち、酵素活性の５０％阻害に必要な阻害剤の濃度に関連する。組換えヒトＰＤＥ５を用いて構造式（Ｉ）の化合物のＩＣ５０値を決定した。
【０１１２】
本発明の化合物は、典型的には、組換えヒトＰＤＥ５に対して約５０μＭ未満、好ましくは約２５μＭ未満、より好ましくは約１５μＭ未満のＩＣ５０値を示す。本発明の化合物は、典型的には、組換えヒトＰＤＥ５に対して約１μＭ未満、しばしば約０．０５μＭ未満のＩＣ５０値を示す。本発明の完全な利点を達成するには、本発明のＰＤＥ５阻害剤は約０．１ｎＭないし約１５μＭのＩＣ５０を有する。
【０１１３】
組換えヒトＰＤＥの産生およびＩＣ５０の決定は当該技術分野において公知の方法によって達成することができる。例示的な方法を以下に説明する：
ヒトＰＤＥの発現
サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）（酵母）における発現
ヒトＰＤＥ１Ｂ、ＰＤＥ２、ＰＤＥ４Ａ、ＰＤＥ４Ｂ、ＰＤＥ４Ｃ、ＰＤＥ４Ｄ、ＰＤＥ５、およびＰＤＥ７の組換え産生は、Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ．， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ， １８５， ｐｐ． ３０８−３１８（１９９０）に記載される基本ＡＤＨ２プラスミドから誘導され、組み込まれた酵母ＡＤＨ２プロモーターおよびターミネーター配列並びにサッカロミセス・セレビシエ宿主が１９９８年８月３１日にバージニア州Ｍａｎａｓｓａのアメリカン・タイプ・カルチャ・コレクションに受付番号ＡＴＣＣ ７４４６５で寄託されたプロテアーゼ欠失株ＢＪ２−５４である酵母形質転換ベクターを用いたことを除いて、米国特許第５，７０２，９３６号（参照することによりここに組み込まれる）の実施例７に記載されるものと同様に行った。形質転換された宿主細胞を、痕跡量の金属およびビタミンを含有する２Ｘ ＳＣ−ｌｅｕ培地、ｐＨ６．２で成長させた。２４時間後、ＹＥＰ培地含有グリセロールを２Ｘ ＹＥＴ／３％グリセロールの最終濃度まで添加した。約２４時間後、細胞を回収して洗浄し−７０℃で保存した。
ヒトホスホジエステラーゼの調製
ホスホジエステラーゼ活性の決定
調製品のホスホジエステラーゼ活性は以下のように決定した。木炭分離技術を用いるＰＤＥアッセイを、本質的にはＬｏｕｇｈｎｅｙら（１９９６）に記載される通りに行った。このアッセイにおいては、ＰＤＥ活性が、存在するＰＤＥ活性の量に比例して［３２Ｐ］ｃＡＭＰまたは［３２Ｐ］ｃＧＭＰを対応する［３２Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［３２Ｐ］５’−ＧＭＰに変換する。次に、［３２Ｐ］５’−ＡＭＰまたは［３２Ｐ］５’−ＧＭＰを、ヘビ毒５’−ヌクレオチダーゼの作用によって遊離［３２Ｐ］リン酸および非標識アデノシンまたはグアノシンに定量的に変換した。したがって、遊離される［３２Ｐ］リン酸の量は酵素活性に比例する。アッセイは、３０℃で、４０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１μＭ ＺｎＳＯ４、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、および０．１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）（最終濃度）を含有する１００μＬ反応混合物中で行った。ＰＤＥ酵素は基質の総加水分解の＜３０％を生じる量で存在していた（線形アッセイ条件）。アッセイは基質（１ｍＭ［３２Ｐ］ｃＡＭＰまたはｃＧＭＰ）を添加することによって開始し、その混合物を１２分間インキュベートした。次に、７５μｇのクロタルス・アトロックス（Ｃｒｏｔａｌｕｓ ａｔｒｏｘ）ヘビ毒を添加し、インキュベーションを３分間継続した（合計１５分）。２００μＬの活性炭（０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４、ｐＨ４中の２５ｍｇ／ｍＬ懸濁液）を添加することによって反応を停止させた。遠心（７５０×ｇで３分間）して木炭を沈降させた後、シンチレーションカウンターにおける放射能決定のために上清の試料を取り、ＰＤＥ活性を算出した。
Ｓ．セレビシエからのＰＤＥ５の精製
細胞ペレット（２９ｇ）を、氷上で、等容積の溶解バッファ（２５ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ８、５ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭベンズアミジン、および１０μＭ ＺｎＳＯ４）を用いて解凍した。細胞を、Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（登録商標）（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ Ｃｏｒｐ．）において、窒素を２０，０００ｐｓｉで用いて溶解した。溶解物を遠心し、０．４５μＭ使い捨てフィルタを通して濾過した。その濾液を、Ｑ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標） Ｆａｓｔ−Ｐｌｏｗの１５０ｍＬカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に適用した。カラムを１．５容積のバッファＡ（２０ｍＭビス−トリスプロパン、ｐＨ６．８、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭ ＤＴＴ、１０μＭ ＺｎＳＯ４）で洗浄し、バッファＡ中の１２５ｍＭ ＮａＣｌの段階的勾配、次いでバッファＡ中の１２５−１０００ｍＭ ＮａＣｌの直線勾配で溶出した。直線勾配からの活性画分をバッファＢ（２０ｍＭビス−トリスプロパン（ｐＨ６．８）、１ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．２５ｍＭ ＤＴＴ、１０μＭ ＺｎＳＯ４、および２５０ｍＭ ＫＣｌ）中で１８０ｍＬヒドロキシアパタイトカラムに適用した。積載後、カラムを２容積のバッファＢで洗浄し、バッファＢ中の０−１２５ｍＭリン酸カリウムの直線勾配で溶出した。活性画分をプールし、６０％硫酸アンモニウムで沈殿させ、バッファＣ（２０ｍＭビス−トリスプロパン、ｐＨ６．８、１２５ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＤＴＴ、および１０μＭ ＺｎＳＯ４）に再懸濁させた。そのプールをＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（登録商標） Ｓ−３００ ＨＲの１４０ｍＬカラムに適用し、バッファＣで溶出した。活性画分を５０％グリセロールまで希釈し、−２０℃で保存した。
【０１１４】
得られた調製品はＳＤＳ−ＰＡＧＥで約８５％の純度であった。これらの調製品は、タンパク質ミリグラム当たり毎分約３μｍｏｌ ｃＧＭＰの加水分解の特異的活性を有していた。
ｃＧＭＰ−ＰＤＥに対する阻害効果
本発明の化合物のｃＧＭＰ−ＰＤＥ活性を、Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， ３８４， ４３０（１９７５）から適合させた１工程アッセイを用いて測定した。反応媒体は５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、５ｍＭ酢酸マグネシウム、２５０μｇ／ｍｌ ５’−ヌクレオチダーゼ、１ｍＭ ＥＧＴＡ、および０．１５μＭ ８−［Ｈ３］−ｃＧＭＰを含んでいた。他に指示されない限り、用いた酵素はヒト組換えＰＤＥ５（ＩＣＯＳ Ｃｏｒｐ．、Ｂｏｔｈｅｌｌ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）であった。
【０１１５】
本発明の化合物を、アッセイにおいて最終的に２％で存在するようにＤＭＳＯに溶解した。インキュベーション時間は３０分であり、その間、総基質変換は３０％を超えなかった。
【０１１６】
試験した化合物のＩＣ５０値を、典型的には１０ｎＭないし１０μＭの範囲の濃度を用いる濃度−応答曲線から決定した。標準方法論を用いる他のＰＤＥ酵素に対する試験は、本発明の化合物がｃＧＭＰ特異的ＰＤＥ酵素に対して選択的であることを示した。
生物学的データ
本発明による化合物は、典型的には、５００ｎＭ未満のＩＣ５０値を示すことが見出された。本発明の代表的な化合物である実施例１および３を用いるイン・ビトロ試験は、それぞれ、１．７ｎＭおよび３．９ｎＭのＩＣ５０対ＰＤＥ５をもたらした。
【０１１７】
明らかに、前述される本発明の多くの変更および変形をそれらの精神および範囲から逸脱することなく行うことができ、したがって、添付の請求の範囲によって指示されるような限定のみが課されるべきである。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004501920.tif 000093
2004501920.tif 000094
2004501920.tif 000095
2004501920.tif 000096