(57)【要約】本発明は、新規な分子、その製造法、並びに特にヒトの医学及び獣医学の分野、及び化粧品におけるその使用に関する。本発明の化合物は、部分脂肪酸誘導体であり、有利な薬理学的及び化粧品の性質を示す。本発明はまた、該化合物の種々の使用、これらを含む薬剤組成物、及びこれらの製造方法に関する。本発明の化合物は、特に、異常脂肪血症、心血管疾患、Ｘ症候群、再狭窄、糖尿病、肥満、高血圧、ある種の癌、皮膚疾患の予防又は治療のために、そして化粧品においては、皮膚の加齢及びその影響に対して、特にしわなどに対して対抗するために有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）：
【化１】
2004537595.tif 000057
［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１３〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）を有する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を有する基である）］により表される化合物。
【請求項２】
同一であるか又は異なるＲ基が、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１〜２０個の炭素原子、好ましくは７〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
同一であるか又は異なるＲ′基が、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１３〜２０個の炭素原子、更に好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項４】
同一であるか又は異なるＲ基が、Ｃ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）、Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3［ｘは、１〜１１の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ′は、１〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″は、１〜５の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″′は、０〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下である］よりなる群内で選択される、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項５】
同一であるか又は異なるＲ′基が、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）、Ｃ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）、Ｃ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45、（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2及び（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3［ｘは、１〜１１の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ′は、１〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″は、１〜５の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″′は、０〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２０以下である］よりなる群内で選択される、請求項１又は３記載の化合物。
【請求項６】
同一であるか又は異なるＲ基が、１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基を表す、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
同一であるか又は異なるＲ′基が、１３〜１７個、好ましくは１４〜１６個、更に好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和の直鎖アルキル基である、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
アルキル基が、ハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）並びにＯＨ、＝Ｏ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＣＮ、ＣＨ2−Ｏ、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3及びＣＯＯＺ基（ここで、Ｚは、水素原子又は１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）よりなる群内で選択される、同一であるか又は異なる１個以上の置換基により置換されている、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが、硫黄又はセレン原子、好ましくは硫黄原子である、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０】
Ｇ基が、酸素原子又はＮ−Ｒ４基を表し、そしてＧが、Ｎ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表す、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎが、１ではなく、そして特に０である、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、更に好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和の直鎖アルキル基である）を表す、前請求項のいずれか１項記載の式（Ｉ）により表される化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）に対応する基、特に式：ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29に対応する基である、前請求項のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、水素原子又はＣＯ−Ｒ基を表す、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基を表す、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の２個が、同一であるか又は異なるＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が、同一であるか又は異なって、好ましくは同一であって、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）に対応する基、そして特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である、請求項１〜１２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２及びＲ３基の一方及び／又は両方が、水素原子を表す、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２及びＲ３基の一方及び／又は両方が、同一であるか又はそうでないＣＯ−Ｒ基を表す、請求項１８記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の１個が、ＣＯＣＨ3基である、請求項１〜１６及び１８〜２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２２】
薬剤学的に許容しうるビヒクル中に、請求項１と同義の一般式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される少なくとも１つの化合物を含む、薬剤組成物。
【請求項２３】
化粧品として許容しうるビヒクル中に、請求項１と同義の一般式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される少なくとも１つの化合物を含む、化粧品組成物。
【請求項２４】
化合物が、式（Ｉ）（ここで、Ｒ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が９〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）により表される、請求項２２又は２３記載の組成物。
【請求項２５】
式（Ｉ）により表される化合物が、請求項１〜２１のいずれか１項と同義である、請求項２２〜２４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２６】
異常脂肪血症、心血管疾患、Ｘ症候群、再狭窄、糖尿病、肥満、高血圧、癌又は皮膚疾患の予防及び／又は治療用薬剤組成物を製造するための、請求項１と同義の一般式（Ｉ）により表される化合物の使用であって、この化合物が、式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される、使用。
【請求項２７】
皮膚の加齢及びその影響の予防及び／又は治療用、しわの出現又は進行に対する皮膚の保護用の化粧品組成物を製造するための、請求項１と同義の一般式（Ｉ）により表される化合物の使用であって、この化合物が、式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される、使用。
【請求項２８】
循環血中トリグリセリド及び／又はコレステロール濃度の低下用、又はＬＤＬの酸化変性の阻害用の薬剤組成物を製造するための、請求項１と同義の一般式（Ｉ）により表される化合物の使用であって、この化合物が、式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される、使用。
【請求項２９】
ミトコンドリア及びペルオキシソームのβ酸化に関係する酵素の発現の誘導、及び／又は肝脂肪酸の酸化能力の増大、及び／又はＩ型及びII型筋線維におけるミトコンドリアの増殖の誘導、及び／又はＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγの活性化用の薬剤組成物を製造するための、請求項１と同義の一般式（Ｉ）により表される化合物の使用であって、この化合物が、式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される、使用。
【請求項３０】
腫瘍細胞の増殖の低下用の薬剤組成物を製造するための、請求項１と同義の一般式（Ｉ）により表される化合物の使用であって、この化合物が、式（Ｉ）［式中、
−  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
−  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）に対応する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′に対応する基である）］により表される、使用。
【請求項３１】
化合物が、式（Ｉ）［式中、Ｒ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が９〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である］により表される、請求項２６〜３０のいずれか１項記載の使用。
【請求項３２】
式（Ｉ）により表される化合物が、請求項１〜２１のいずれか１項と同義である、請求項２６〜３０のいずれか１項記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な分子、その製造法、並びに特にヒトの医学及び獣医学の分野におけるその使用に関する。本発明の化合物は、部分脂肪酸誘導体であり、有利な薬理学的性質の抗酸化性及び抗炎症性を示す。本発明はまた、該化合物の種々の使用、これらを含む薬剤及び化粧品組成物、並びにこれらの製造方法に関する。本発明の化合物は、特に、心血管疾患、Ｘ症候群、再狭窄、糖尿病、肥満、高血圧、ある種の癌、皮膚疾患の予防又は治療のために、そして化粧品においては、皮膚の加齢、特にしわの出現などの影響の予防又は治療のために有用である。
【０００２】
アテローム動脈硬化及びその心血管合併症は、高度な工業国における疾病及び死亡の主な原因である。アテローム動脈硬化及びその合併症はまた、II型糖尿病の重大な帰結である。異常脂肪血症と心血管疾患の間に、明確な因果関係が証明されている。循環血中ＬＤＬ−コレステロール濃度の上昇は好ましくない。高ＬＤＬ−コレステロールに伴うリスクは、トリグリセリド濃度の上昇により増幅される。心血管発作の発生におけるアテローム動脈硬化病変の安定性の重要性もまた証明されている。アテローム斑の発生及びその衰えにおけるＬＤＬ酸化の役割は、理解が進んでいる。
【０００３】
アテローム動脈硬化の薬物治療は、コレステロール及びトリグリセリドの循環血中濃度の低下、アテローム斑の安定性の上昇、血管への機械的拘束の低減（血圧の低下）並びに糖尿病のような付帯的危険因子の縮小を目的とする。
【０００４】
フィブラート類（fibrates）及びスタチン類（statins）は、異常脂肪血症の治療において現在使用されている医薬の中に含まれる。チアゾリジンジオン類は、II型糖尿病の治療に使用される。
【０００５】
フィブラート類は、高トリグリセリド血症の治療に広く使用されている。これらはまた、高コレステロール血症に及ぼす有益な作用を持つ。一般に、これらは忍容性が良好であるが、皮膚反応、神経作用、筋肉及び胃腸作用のような副作用を引き起こすこともある。毒性は稀である（腎、筋肉、関節、皮膚、肝炎など）。これらの発癌可能性は、齧歯類では高いが、ヒトでは証明されていない。
【０００６】
スタチン類は、高コレステロール血症の治療に広く使用されている。最初の血管発作を起こした患者を治療すると、再発のリスクはかなり低下することが証明されている。肝炎又はミオパシーの徴候又は症候が時折報告されている。
【０００７】
チアゾリジンジオン類（トログリタゾン（troglitazone））は最近、インスリン抵抗性の治療に関して用いられるようになった。このため、市販後経験は、これらの薬物の完全な有害作用プロフィールの客観的評価を行うには不十分である。これに関連して、結腸癌に罹りやすい動物モデル（ＡＰＣ遺伝子突然変異を持つミン（Min）マウス）において結腸腫瘍の頻度の上昇が観測されたことは好ましくない。更には、１つのチアゾリジンジオン（トログリタゾン）が、肝毒性の問題のため、極めて最近になって市場から撤退した。
【０００８】
アテローム動脈硬化の薬物治療に使用される主要な薬物（フィブラート類、スタチン類）は、多面的範囲の作用を有する。フィブラート類は、脂質輸送又は代謝を担うタンパク質の発現を統合することに関係する、ある種の核内受容体（ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲγなど）を活性化する。フィブラートの作用の範囲の多面性は、ＰＰＡＲ標的遺伝子の多様性による。スタチン類は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害することにより、コレステロールのデノボ合成を減少させる。
【０００９】
本発明は、種々の病気の予防的又は治療的処置に有用な、有利な薬理学的性質を示す新規なファミリーの化合物を提案する。
【００１０】
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）：
【００１１】
【化２】
2004537595.tif 000002
【００１２】
［式中、
・  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
・  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１３〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基及びＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）を有する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を有する基である）］により表される。
【００１３】
本発明は同様に、一般式（Ｉ）により表される化合物を含む、薬剤組成物に関する。
【００１４】
本発明は更に、一般式（Ｉ）により表される化合物を含む、化粧品組成物に関する。
【００１５】
本発明はまた、目的として、種々の病気、特に脂質代謝の調節崩壊に関係する病気を治療するための医薬としての上述の化合物の使用を含む。
【００１６】
本発明はまた、上述されたような化合物の製造方法に関する。
【００１７】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｇ基は、有利には酸素原子又はＮ−Ｒ４基を表す。更に、ＧがＮ−Ｒ４であるとき、Ｒ４は、好ましくは水素原子又はメチル基を表す。
【００１８】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、同一であるか又は異なるＲ基は、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１〜２０個の炭素原子、更に好ましくは７〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。
【００１９】
本発明の一般式（Ｉ）により表される化合物において、同一であるか又は異なるＲ′基は、好ましくは、飽和又は不飽和の、置換されているか又はされていない、その主鎖が、１３〜２０個の炭素原子、更に好ましくは１４〜１７個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基を表す。
【００２０】
飽和長鎖アルキル基：Ｒ又はＲ′の具体例（例えば、７個以上の炭素）は、特にＣ7Ｈ15、Ｃ10Ｈ21、Ｃ11Ｈ23、Ｃ13Ｈ27、Ｃ14Ｈ29、Ｃ16Ｈ33、Ｃ17Ｈ35、Ｃ15Ｈ31、Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）及びＣ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）基である。
【００２１】
Ｃ20:5（５，８，１１，１４，１７）は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）であり、そしてＣ22:6（４，７，１０，１３，１６，１９）は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。
【００２２】
不飽和長鎖アルキル基の例は、特にＣ14Ｈ27、Ｃ14Ｈ25、Ｃ15Ｈ29、Ｃ17Ｈ29、Ｃ17Ｈ31、Ｃ17Ｈ33、Ｃ19Ｈ29、Ｃ19Ｈ31、Ｃ21Ｈ31、Ｃ21Ｈ35、Ｃ21Ｈ37、Ｃ21Ｈ39、Ｃ23Ｈ45基である。
【００２３】
分岐長鎖アルキル基の例は、特に（ＣＨ2）n′−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、（ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）−（ＣＨ2）2）n″−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）2又は（ＣＨ2）2x+1−Ｃ（ＣＨ3）2−（ＣＨ2）n″′−ＣＨ3基［ｘは、１〜１１の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ′は、１〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″は、１〜５の間に含まれる（両端を含む）整数であり、ｎ″′は、０〜２２の間に含まれる（両端を含む）整数であり、そして（２ｘ＋ｎ″′）は、２２以下である］である。
【００２４】
特定の実施態様において、同一であるか又は異なるＲ基はまた、有利には１〜６個の炭素原子を含む低級アルキル基を表す。具体例は、特にメチル、エチル、プロピル及びブチル基（好ましくは、メチル及びエチル）を含む。
【００２５】
更に、Ｒ又はＲ′置換基のアルキル基はまた、（特にＲ基では）環状であってもよい。環状アルキル基の例は、特にシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルである。
【００２６】
上述されるように、アルキル基は、場合により、同一であるか又は異なる１個以上の置換基により置換されていてもよい。置換基は、好ましくはハロゲン原子（ヨウ素、塩素、フッ素、臭素）及びＯＨ、＝Ｏ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＣＮ、ＣＨ2−Ｏ、ＣＨ2ＯＣＨ3、ＣＦ3又はＣＯＯＺ基（Ｚは、水素原子又は好ましくは１〜６個の炭素原子を含むアルキル基である）よりなる群内で選択される。
【００２７】
一般式（Ｉ）により表される化合物において、Ｒ及びＲ′アルキル基は、同一であっても異なっていてもよい。しかし好ましい化合物は、Ｒ′アルキル基が、同一であるか、又は同様の鎖長を有する（即ち、炭素原子約３個以下の違い）。
【００２８】
Ｒ′基の特に好ましい例は、有利には１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、更に好ましくは１４個の原子を含む、飽和の直鎖アルキル基である。
【００２９】
更に、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、Ｘは、最も好ましくは硫黄又はセレン原子、そして有利には硫黄原子を表す。
【００３０】
更に、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基において、ｎは、好ましくは１ではなく、特に０である。
【００３１】
本発明のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基の特定の例は、ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基である。
【００３２】
よって本発明の好ましい化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個が、ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（ここで、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子、好ましくは１４〜１６個、更に好ましくは１４個の炭素原子を含む、飽和の直鎖アルキル基である）を表す、上述の一般式（Ｉ）を有する化合物である。
【００３３】
この点に関して、特定の発明の化合物は、Ｒ２が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）を有する基、特に式：ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基である化合物である。
【００３４】
該化合物において、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、有利には水素原子又はＣＯ−Ｒ基、好ましくはＣＯ−Ｒ基を表す。
【００３５】
他の特定の発明の化合物は、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の２個が、同一であるか又は異なるＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）、特に式：ＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基である化合物である。
【００３６】
特に好ましい化合物は、一般式（Ｉ）［式中、
・  Ｇは、Ｎ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子又はメチル基である）であり、そして
・  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも２個は、同一であるか又は異なる、好ましくは同一の、上記と同義のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物である。
【００３７】
他の好ましい化合物は、上述の一般式（Ｉ）［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、好ましくは同一であって、上記と同義のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）、そして特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基を表す］により表される化合物である。
【００３８】
好ましい化合物の別のファミリーは、上述の一般式（Ｉ）［式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の１個は、上記と同義のＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の別の１個は、上記と同義のＣＯ−Ｒ基であり、そしてＲ１、Ｒ２及びＲ３基の３個目は、水素原子である］を有する化合物を含む。
【００３９】
特別なファミリーは、Ｒ１が、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（好ましくは式中、Ｘは、セレン原子若しくは好ましくは硫黄原子を表し、かつ／又はＲ′は、１３〜１７個の炭素原子を含む飽和の直鎖アルキル基であり、更に好ましくは式中、ｎは、０である）を有する基であり、そして特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基であるファミリーである。該ファミリーにおいて、Ｒ２及びＲ３基の一方及び／又は両方は、有利には、同一であるか又は異なる、水素原子又は好ましくはＣＯ−Ｒ基を表す。
【００４０】
発明の化合物の別のファミリーは、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の１個が、ＣＯＣＨ3基であるファミリーである。
【００４１】
本発明の範囲における好ましい化合物は、上述の一般式（Ｉ）［式中、
・  Ｒ２は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基であり、そして好ましくは、Ｒ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、水素原子又はＣＯ−Ｒ基を表す。Ｒ１及びＲ３が、同一であるか又は異なって、両方ともＣＯ−Ｒ基を表す該化合物が好ましいか；あるいは
・  Ｒ１は、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を有する基、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29基であり、そして好ましくは、Ｒ２及びＲ３基の一方及び／又は両方は、同一であるか又は異なる、水素原子又はＣＯ−Ｒ基を表すか；あるいは
・  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であって、式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′、特にＣＯ−ＣＨ2−Ｓ−Ｃ14Ｈ29を有する基を表す］により表される化合物である。
【００４２】
本発明の好ましい化合物の例は、図１Ａ及び１Ｂに示される。
【００４３】
本発明の化合物は、好ましくは薬剤又は化粧品の使用に適合性の塩、特に塩基性又は酸性付加塩の形態であってもよい。薬剤として又は化粧品として許容しうる酸の非限定例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、アスコルビン酸、ショウノウ酸などを含む。薬剤として又は化粧品として許容しうる塩基の非限定例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン、ｔｅｒｔ−ブチルアミンなどを含む。
【００４４】
本発明はまた、薬剤又は化粧品の分野における、一般式（Ｉ）により表される化合物、そして特に上述の化合物の使用に関する。
【００４５】
よって本発明は、特に心血管疾患、Ｘ症候群、再狭窄、糖尿病、肥満、高血圧、癌又は皮膚疾患のような種々の病気の予防及び／又は治療用薬剤組成物を製造するための、一般式（Ｉ）により表される化合物、そして特に上述の化合物の使用に関する。更に本発明は、皮膚を保護するための、皮膚の加齢及びその影響と戦うための、しわの出現又は進行などに対して戦うための化粧品組成物を製造するための、一般式（Ｉ）により表される化合物、そして特に上述の化合物の使用に関する。
【００４６】
よって、薬剤又は化粧品分野において有用な化合物は、一般式（Ｉ）［式中、
・  Ｇは、酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子、又は飽和若しくはそうでない、場合により置換されている、１〜５個の炭素原子を含む、直鎖若しくは分岐のアルキル基である）を表し、
・  Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、（ｉ）水素原子、（ii）ＣＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が１〜２５個の炭素原子を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）、又は（iii）式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′（ここで、Ｘは、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基であり、ｎは、０〜１１の間に含まれる整数であり、好ましくは０又は１であり、更に好ましくは０であり、そしてＲ′は、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が２〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上（好ましくは０、１又は２個、更に好ましくは０又は１個）のヘテロ基（酸素原子、硫黄原子、セレン原子、ＳＯ基又はＳＯ2基よりなる群内で選択される）を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である）を有する基を表す（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３基の少なくとも１個は、上記と同義の式：ＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′を有する基である）］により表される。
【００４７】
この点に関して、使用される好ましい化合物は、Ｒ′が、飽和又はそうでない、場合により置換されている、その主鎖が、９〜２３個の炭素原子及び場合により１個以上のヘテロ基を含む、直鎖又は分岐のアルキル基である、式（Ｉ）を有する化合物に対応する。
【００４８】
有利には、使用される式（Ｉ）を有する化合物は、上記と同義のものである。
【００４９】
発明の化合物の使用は、実際トリグリセリド及びコレステロールの循環血中濃度を低下させ、ＬＤＬの酸化変性を阻害し、ミトコンドリア及びペルオキシソームのβ酸化に関係する酵素の発現を誘導し、肝脂肪酸の酸化能力を増大させ、Ｉ型及びII型筋線維におけるミトコンドリアの増殖を誘導し、ＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγを活性化し、あるいは腫瘍細胞増殖を縮小させることを可能にする。
【００５０】
この点に関して、本発明の化合物は、有利には肝臓に対する親和性の改善を示し、よって経口又は全身経路により投与することができる。更には、これらの構造により本発明の化合物は長時間持続作用がある。
【００５１】
本発明は、少なくとも１つの発明の化合物を、場合により薬剤学的に許容しうるビヒクルと合わせて含む薬剤組成物を開発することを目的とする。
【００５２】
本発明はまた、少なくとも１つの発明の化合物を、場合により化粧品として許容しうるビヒクルと合わせて含む化粧品組成物に関する。
【００５３】
本発明は更に、上記と同義の少なくとも１つの化合物を含む栄養組成物に関するものであり、そしてこれは単独で、又は他の物質と組合せて使用することができる。
【００５４】
本発明はまた、哺乳動物に有効量の本発明の化合物を投与することを特徴とする治療方法に関する。関係する哺乳動物は、家畜か他の動物、又はヒトであってよい。
【００５５】
本発明の化合物又は組成物は、種々の方法及び種々の剤形で投与することができる。例えば、これらは、経口経路により、非経口的に、吸入により、あるいは例えば、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、動脈内経路などのような注射により、全身的に投与することができる。注射には、本化合物は一般に、液体懸濁剤の剤形に調製され、これはシリンジにより、又は例えば点滴により注入することができる。この点に関して、本化合物は一般に、当業者には知られている、薬剤学的に適合性の塩分を含む生理的な等張性の緩衝液などに溶解される。例えば、本組成物は、分散剤、可溶化剤、乳化剤、安定剤、保存料、緩衝剤などから選択される、１つ以上の物質又はビヒクルを含んでいてもよい。液体及び／又は注射用処方に使用することができる物質又はビヒクルは、特に、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリソルベート８０、マンニトール、ゼラチン、乳糖、植物油、アラビアゴム、リポソームなどを含むことを特徴とする。
【００５６】
よって本化合物は、ゲル剤、油剤、錠剤、坐剤、粉剤、ゼラチンカプセル剤、カプセル剤、エーロゾルなどの剤形で、場合により徐放及び／又は遅延放出を可能にする製剤学的剤形又は装置により投与することができる。この型の処方には、有利にはセルロース、カーボネート又はデンプンのような物質が使用される。
【００５７】
本化合物は、使用される物質又はビヒクルが、好ましくは水、ゼラチン、ゴム、乳糖、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、タルク、油、ポリアルキレングリコールなどから選択される場合には、経口投与することができる。
【００５８】
非経口投与には、本化合物は、特に水、油又はポリアルキレングリコールを含む、好ましくは液剤、懸濁剤又は乳剤として投与されるが、ここには保存料、安定剤、乳化剤などの他に、浸透圧を調整するための塩、緩衝剤などを加えることができる。
【００５９】
化粧品としての使用には、本発明の化合物は、例えば、スキンケアクリーム、サンクリームのようなクリーム、オイル、ジェルなどの剤形で投与することができる。
【００６０】
当然のことながら、注入速度及び／又は注入用量は、患者、病気、投与の様式などに応じて当業者が調整することができる。典型的には、本化合物は、１用量当たり１μg〜２ｇ、好ましくは１投与当たり０．１mg〜１ｇの範囲の用量で投与される。用量は、場合に応じて、１日に１回又は１日に数回投与することができる。更には、本発明の組成物はまた、他の活性物質又は活性剤を含んでいてもよい。
【００６１】
本発明の化合物は、当業者に既知の化学反応の組合せを利用して、市販の製品から調製することができる。本発明はまた、上記化合物の製造方法に関する。
【００６２】
本発明の第１法では、式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素又は硫黄原子であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、式（Ｉ）［式中、Ｇは、それぞれ酸素又は硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］を有する化合物、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ［式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｃｌ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）よりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物から、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で得られる。
【００６３】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、種々の方法で得られる。
【００６４】
第１の実施態様では、グリセロール分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ１［式中、Ａ１は、例えば、ＯＨ、Ｃｌ及びＯＲ″（Ｒ″は、アルキル基である）よりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させる。該反応により、いわゆる対称化合物（ここで、Ｒ１及びＲ３は、同義である）が合成できる。該反応は、例えば、Feugeら, J. Am. Oil Chem. Soc., 1953, 30, 320-325；Gangadharら, Synth. Commun., 1989, 19, 2505-2514；Hanら, Biorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 59-64；又はRobinson, J. Pharm. Pharmacol., 1960, 12, 685-689に記載されるプロトコールを改変することにより実行することができる。
【００６５】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物はまた、本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物（この式（Ｉ）の特定の形の化合物は、化合物（IV）と称される）、及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物から、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で得られる。該反応は有利には、例えば、Daubertら, J. Am. Chem. Soc., 1943, 65, 2144-2145；FeugeとLovegren, J. Am. Oil Chem. Soc., 1956, 33, 367-372；Katochら, Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 2753-2758又はStrawnら, J. Med. Chem., 1989, 32, 643-648に記載されるプロトコールにより実行される。
【００６６】
上述の化合物（IV）は、以下を特徴とする方法により調製することができる：
【００６７】
ａ）一般式（II）：
【００６８】
【化３】
2004537595.tif 000003
【００６９】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることにより、一般式（III）：
【００７０】
【化４】
2004537595.tif 000004
【００７１】
［式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物を得ること；及び
【００７２】
ｂ）化合物（III）を、酸（酢酸、トリフルオロ酢酸、ホウ酸、硫酸など）により脱保護することによって、上記と同義の一般式（IV）の化合物を得ること。
【００７３】
本発明の別の特定の方法により、式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物（化合物（IV））から、以下の工程により得られる：
【００７４】
ａ）化合物（IV）を、化合物ＰｘＥ（ここで、Ｐｘは、保護基であり；そしてＥは、例えば、ＯＨ及びハロゲンよりなる群内で選択される反応性基である）と反応させることにより、一般式（Ｖ）［式中、Ｒ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物を得ること。有利には、本反応は、GaffneyとReese, Tet. Lett., 1997, 38, 2539-2542に記載された方法を改変することにより実行することができる（ここで、ＰｘＥは、化合物９−フェニルキサンテン−９−オール又は９−クロロ−９−フェニルキサンテンを表すことができる）。
【００７５】
【化５】
2004537595.tif 000005
【００７６】
ｂ）式（Ｖ）を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることにより、一般式（VI）［式中、Ｒ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＰｘは、保護基である］に対応する化合物を得ること。
【００７７】
【化６】
2004537595.tif 000006
【００７８】
ｃ）化合物（VI）を酸性媒体中で脱保護することにより、一般式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ３は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ２は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物を得ること。
【００７９】
別の特定の発明の方法では、一般式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、以下を特徴とする方法により得られる：
【００８０】
ａ）式（VII）：
【００８１】
【化７】
2004537595.tif 000007
【００８２】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることにより、一般式（VIII）：
【００８３】
【化８】
2004537595.tif 000008
【００８４】
［式中、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物を得ること；及び
【００８５】
ｂ）式（VIII）により表される化合物を酸性媒体中で、又は接触水素化により脱保護することによって、一般式（Ｉ）［式中、Ｇは、酸素原子であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子を表し、そしてＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］を有する化合物を得ること。
【００８６】
有利には、上述の工程は、Bodaiら, Syn. Lett., 1999, 6, 759-761；Parisら, J. Med. Chem., 1980, 23, 9-12；Scribaら, Arch. Pharm. (Weinheim), 1993, 326, 477-481又はSeltzmanら, Tet. Lett., 2000, 41, 3589-3592に記載されたプロトコールにより実行することができる。
【００８７】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２は、水素原子であり、そしてＲ１及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得られる：
【００８８】
【化９】
2004537595.tif 000009
【００８９】
ａ）化合物（IX）と式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３［式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する第１の化合物とを反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３［式中、第１の化合物とは独立に、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する第２の化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させること、
【００９０】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９１】
該方法は、有利にはAvetaら, Gazz. Chim. Ital., 1986, 116(11), 649-652に記載されるプロトコールにより遂行される。
【００９２】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、硫黄原子であり、Ｒ２及びＲ３は、水素原子であり、そしてＲ１は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、式（IX）により表される化合物から、以下の方法により得られる：
【００９３】
ａ）化合物（IX）を式：Ａ°−ＣＯ−Ａ３［式中、Ａ３は、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する第１の化合物と化学量論量で、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させること、
【００９４】
ｂ）酢酸水銀によりチオール基を脱保護すること。
【００９５】
式（IX）により表される化合物は、以下を特徴とする方法により調製することができる：
【００９６】
ａ）２−ハロゲノマロン酸ジメチルをトリチルチオールと反応させることにより、式（Ｘ）：
【００９７】
【化１０】
2004537595.tif 000010
【００９８】
により表される化合物を得ること、
【００９９】
ｂ）ＬｉＡｌＨ4でアセタート官能基を還元すること。
【０１００】
式（Ｉ）［式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一であるか又は異なって、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表す］により表される化合物は、式（Ｉ）［式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］により表される化合物（化合物（XI））から、以下の方法により得られる：
【０１０１】
化合物（XI）と式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する第１の化合物とを反応させ、次に式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、第１の化合物とは独立に、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する第２の化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させること。
【０１０２】
該方法は、有利には、Terradasら, J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 390-396に記載されたプロトコールにより実行される。
【０１０３】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基であり、そして式中、Ｒ１及びＲ２は、ＣＯ−Ｒ又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基を表し、そしてＲ３は、水素原子である］により表される化合物は、化合物（XI）及び式：Ａ°−ＣＯ−Ａ２［式中、Ａ２は、例えば、ＯＨ及びＣｌの間で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物を化学量論量で、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることにより得られる。
【０１０４】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］により表される化合物（化合物（XIa））は、種々の方法で得ることができる。
【０１０５】
第１法では、２−アミノプロパン−１，３−ジオールの分子を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ［式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させる。
【０１０６】
該反応は、例えば、DaniherとBashkin, Chem. Commun., 1998, 10, 1077-1078；Khanolkarら, J. Med. Chem., 1996, 39, 4515-4519；Haradaら, Chem. Pharm. Bull., 1996, 44(12), 2205-2212；Kurfuerstら, Tetrahedron, 1993, 49(32), 6975-6990；Shabanら, Carbohydr. Res., 1977, 59, 213-233；PutnamとBashkin, Chem. Commun., 2000, 767-768に記載されたプロトコールを改変することにより実行することができる。
【０１０７】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、ＮＨ基であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］により表される化合物（化合物（XIa））はまた、以下の方法により得られる：
【０１０８】
ａ）式（XII）：
【０１０９】
【化１１】
2004537595.tif 000011
【０１１０】
により表される化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ［式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることによって、一般式（XIII）：
【０１１１】
【化１２】
2004537595.tif 000012
【０１１２】
により表される化合物を得ること、
【０１１３】
ｂ）化合物（XIII）を脱保護すること。
【０１１４】
該方法は、有利には、Haradaら, Chem. Pharm. Bull., 1996, 44(12), 2205-2212に記載されたプロトコールにより実行される。
【０１１５】
本発明の式（Ｉ）［式中、Ｇは、Ｎ−Ｒ４基（ここで、Ｒ４は、水素原子ではない）であり、Ｒ１及びＲ３は、水素原子であり、Ｒ２は、ＣＯ−Ｒ基又はＣＯ−（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］により表される化合物（化合物（XIb））は、以下の方法により得られる：
【０１１６】
ａ）式（XII）：
【０１１７】
【化１３】
2004537595.tif 000013
【０１１８】
を有する化合物を、式：Ａ°−ＣＯ−Ａ［式中、Ａは、例えば、ＯＨ、Ｏ−ＣＯ−Ａ°、ＯＲ″及びＣｌよりなる群内で選択される反応性基であり、そしてＡ°は、Ｒ基又は（ＣＨ2）2n+1−Ｘ−Ｒ′基である］を有する化合物と、場合により当業者に既知のカップリング剤又はアクチベーターの存在下で反応させることによって、一般式（XIII）：
【０１１９】
【化１４】
2004537595.tif 000014
【０１２０】
により表される化合物を得ること、
【０１２１】
ｂ）化合物（XIII）を、Ｒ４−Ａ４型（ここで、Ａ４は、Ｃｌ又はＢｒよりなる群内で選択される反応性基である）の化合物と、塩基性媒体中で反応させること、
【０１２２】
ｃ）化合物（XIII）を脱保護すること。
【０１２３】
本発明の実行可能性、実現性及び他の利点は、以下の実施例において明らかになろうが、これらの実施例は、説明の目的で与えられるものであり、限定を目的とするものではない。
【０１２４】
図面の説明：
図１Ａ：本発明のアシルグリセロールの構造（実施例２ａ、２ｃ、４ａ〜ｎ）。
【０１２５】
図１Ｂ：本発明の特定の化合物の構造（実施例５ａ〜ｂ）。
【０１２６】
図２：ラットにおける血漿中コレステロール代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１２７】
図２Ａは、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した、脂肪粒子（lipoparticles）におけるコレステロール分布に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるスプラーク・ドーリー（Spraque-Dawley）ラットの処置の効果を示す。コレステロールは、異なるサイズの数種の脂肪粒子分類において典型的分布を示した。実施例４ａの化合物による動物の処置後に、種々の脂肪粒子分類においてコレステロールの低下が、特に大粒子（ＶＬＤＬ）及び小粒子（ＨＤＬ）で見られた。この低下は、ＰＰＡＲαアクチベーターの作用に特有である。
この低下により、図２Ｂに示されるように、総血漿中コレステロール濃度が減少した。
【０１２８】
図３：ラットにおける血漿中トリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１２９】
図３Ａは、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した、脂肪粒子におけるトリグリセリド分布に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるスプラーク・ドーリーラットの処置の効果を示す。トリグリセリドは、典型的には主として大きな脂肪粒子分類に分布した。実施例４ａの化合物による動物の処置後に、この脂肪粒子分類においてトリグリセリドの低下が見られた。この低下は、ＰＰＡＲαアクチベーターの作用に特有である。この低下により、図３Ｂに示されるように血漿中トリグリセリド濃度が減少した。
【０１３０】
図４：ラットにおける血漿中リン脂質代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１３１】
図４Ａは、サイズ排除クロマトグラフィーにより評価した、脂肪粒子におけるリン脂質分布に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるスプラーク・ドーリーラットの処置の効果を示す。異なるサイズの数種の脂肪粒子分類において、リン脂質の典型的分布が観測された。実施例４ａの化合物による動物の処置後に、種々の脂肪粒子分類においてリン脂質の低下が、特に大粒子（ＶＬＤＬ）で見られた。
この低下により、図４Ｂに示されるように総血漿中リン脂質濃度が減少した。
【０１３２】
図５：ラットにおける肝遺伝子の発現に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１３３】
図５Ａは、ペルオキシソーム（ＡＣＯ）又はミトコンドリア（ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II）の脂肪酸のβ酸化に関係する遺伝子の肝発現に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるスプラーク・ドーリーラットの処置の効果を示す。ＰＰＡＲαの主要な標的遺伝子の１つであるＡＣＯの肝発現の強力な活性化が観測されたが、このことは、肝ペルオキシソームによる脂肪酸異化能力の強力な活性化を示唆している。同時に、ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II遺伝子の発現のこれよりは小さな上昇があったが、このことは、肝ミトコンドリアによる脂肪酸異化能力の活性化を示唆している。
【０１３４】
図５Ｂは、コレステロール（ＡｐｏＡＩ）又はトリグリセリド（ＡｐｏＣIII）の輸送に関係する遺伝子の肝発現に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるスプラーク・ドーリーラットの処置の効果を示す。肝ＡｐｏＡＩ発現におけるわずかな低下が観測されたが、これによって、血漿中コレステロール濃度の低下を一部説明できるかもしれない。また、ＡｐｏＣIII発現の更に顕著な低下があったが、これによって、血漿中トリグリセリドの低下を一部説明できるかもしれない。
【０１３５】
図６：ズッカー（Zucker）ラットにおける血漿中コレステロール及びトリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１３６】
図６Ａは、総血漿中コレステロールに及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるズッカーラットの処置の効果を示す。ズッカーラットは、インスリン抵抗性であり、血漿中コレステロールの緩やかな上昇を特徴とする。図１ａは、対照群におけるこの上昇を図解する。これはまた、実施例４ａの化合物による動物の処置後、該上昇が緩慢になったことを示す。図６Ａは、血漿中トリグリセリドに及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるズッカーラットの処置の効果を示す。ズッカーラットはまた、血漿中トリグリセリドの緩やかな上昇を示す。図６Ｂは、対照群におけるこの上昇を図解する。これはまた、実施例４ａの化合物による動物の処置後、該上昇が顕著に緩慢になったことを示す。
【０１３７】
図７：ズッカーラットにおける血漿中インスリン及びブドウ糖均衡に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１３８】
図７は、血漿中インスリン及びブドウ糖に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるズッカーラットの処置の効果を示す。ズッカーラットは、インスリン抵抗性であり、血漿中インスリン濃度の緩やかな代償的上昇を示す。図７Ａは、対照群におけるこの上昇を図解する。図７Ｂは、実施例４ａの化合物による動物の処置後、特に１４日後、該上昇が緩慢になったことを示す。この２群においてブドウ糖濃度は同等であったため（図７Ａ及び７Ｂ）、実施例４ａの化合物による処置は、インスリン感受性を上昇させた。
【０１３９】
図８：ズッカーラットにおけるブドウ糖負荷試験中のインスリン濃度に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１４０】
図８は、ブドウ糖負荷試験中の血漿中インスリン濃度に及ぼす、実施例４ａの化合物（３００mg/kg/d）によるズッカーラットの処置の効果を示す。この結果は、化合物（４ａ）で処置したラットが、試験の開始時のブドウ糖注入に応答してインスリンをあまり利用しなかったことを示す。よって実施例４ａの化合物による処置は、インスリン感受性の上昇を導いた。
【０１４１】
図９：ラットにおける血漿中脂質及び肝遺伝子の発現に及ぼす化合物（４ｇ）の効果の評価。
【０１４２】
図９Ａ及び９Ｂは、処置の１４日後、それぞれ血漿中コレステロール及び血漿中トリグリセリドに及ぼす、実施例４ｇの化合物（３００mg/kg/d）によるウィスター（Wistar）ラットの処置の効果を示す。この結果は、処置が、循環血中コレステロール及びトリグリセリド濃度の低下を導いたことを示す。図９Ｃは、脂肪酸のペルオキシソームβ酸化に関係する遺伝子（ＡＣＯ）の肝発現に及ぼす、実施例４ｇの化合物（３００mg/kg/d）によるウィスターラットの処置の効果を示す。ＰＰＡＲαの主要な標的の１つである、ＡＣＯ遺伝子の肝発現の顕著な活性化が観測された。
【０１４３】
図１０：ズッカーラットにおける血漿中トリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）に関する用量作用関係の評価。
【０１４４】
図１０は、血漿中トリグリセリド濃度に及ぼす、０〜６００mg/kg/dの用量での実施例４ａの化合物によるズッカーラットの処置の効果を示す。トリグリセリド濃度の緩やかな用量依存的低下が見られた。
【０１４５】
図１１：インビトロのＰＰＡＲα活性化に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１４６】
図１１は、Ｇａｌ４転写因子のＤＮＡ結合ドメインとＰＰＡＲαのリガンド結合ドメインよりなるキメラを用いて評価した、ＨｅｐＧ２細胞におけるインビトロのＰＰＡＲα活性化に及ぼす化合物（４ａ）の効果を示す。結果は、実施例４ａの化合物が、ＰＰＡＲα核内受容体の非常に強力な活性化を誘導し、そしてこれを用量依存的に誘導したことを示す。
【０１４７】
図１２：ヒトマクロファージにおけるインビトロのＡＢＣＡ１遺伝子発現に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価。
【０１４８】
図１２は、実施例１２のように調製したヒトマクロファージにおけるインビトロのＡＢＣＡ−１遺伝子発現に及ぼす、実施例６により可溶化した実施例４ａの化合物の効果を示す。結果は、実施例４ａの化合物が、ヒトマクロファージにおけるＡＢＣＡ１遺伝子発現の非常に強力な活性化を誘導し、そしてこれを用量依存的に誘導したことを示す。
【０１４９】
実施例：
実施例１：脂肪酸誘導体の調製
実施例１ａ：テトラデシルチオ酢酸の調製
水酸化カリウム（３４．３０ｇ、０．６１１mol）、メルカプト酢酸（２０．９ml、０．２９４mol）及び１−ブロモテトラデカン（５０ml、０．１８４mol）をこの順序でメタノール（４００ml）に加えた。該混合物を室温で一晩撹拌した。次に水（８００ml）に溶解した濃塩酸溶液（６０ml）を反応混合物に加えた。テトラデシルチオ酢酸の沈殿が起こった。この混合物を室温で一晩撹拌した。次に沈殿物を濾過し、水で５回洗浄して、デシケーター中で乾燥した。この生成物をメタノール中で再結晶した（収率：９４％）。
【０１５０】
【表１】
2004537595.tif 000015
【０１５１】
実施例１ｂ：４−（ドデシルチオ）ブタン酸の調製
ドデカンチオール（２．０１ｇ、１０mmol）及びブロモ酪酸エチル（１．９７１ｇ、１０mmol）を室温で不活性雰囲気下で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウム（１．３６ｇ、２１mmol）をゆっくり加えた。反応混合物を３時間加熱還流した。エタノールを真空下で蒸発させた。残渣を水にとって、酸性にした。生成した沈殿物を濾過し、水で洗浄して乾燥した（収率：９０％）。
【０１５２】
【表２】
2004537595.tif 000016
【０１５３】
実施例１ｃ：６−（デシルチオ）ヘキサン酸の調製
デカンチオール（４．５７ｇ、２５mmol）及び４−ブロモ酪酸（５ｇ、２５mmol）を室温で不活性雰囲気下で撹拌した。エタノール５０mlに溶解した水酸化カリウムをゆっくり加えた。反応混合物を３時間加熱還流した。エタノールを真空下で蒸発させた。残渣を水にとって、酸性にした。生成した沈殿物を濾過し、水で洗浄して乾燥した（収率：９５％）。
【０１５４】
【表３】
2004537595.tif 000017
【０１５５】
実施例１ｄ：テトラデシルセレノ酢酸の調製
二セレン化テトラデシルの調製
セレン（１．１９ｇ、１５mmol）を不活性雰囲気下、ＴＨＦ／水の１：１混合物（５０ml）に加えた。氷浴中で反応混合物を冷却後、四水素化ホウ素ナトリウム（１．３２５ｇ、３５mmol）をゆっくり加えた。セレンの第２部（１．１９ｇ、１５mmol）を加えた。反応混合物を室温で１５分間撹拌し、次に加熱還流することにより、全ての試薬を溶解した。ＴＨＦ  ２５mlに溶解したブロモテトラデカン（９ml、３０mmol）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。次に反応混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせて、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して蒸発乾固した。生成物は、更に精製することなく使用した。
【０１５６】
【表４】
2004537595.tif 000018
【０１５７】
テトラデシルセレノ酢酸の調製
不活性雰囲気で、二セレン化ジテトラデシル（８．５ｇ、１７mmol）をＴＨＦ／水の混合物（１５０ml／５０ml）に溶解して、氷浴中で冷却した。四水素化ホウ素ナトリウム（２．９ｇ、６１mmol）をゆっくり加え（溶液が白くなる）、続いてＴＨＦ／水の混合物（２５ml／２５ml）に溶解したブロモ酢酸（８．５ｇ、６１mmol）を加えた。反応混合物を室温で６時間撹拌した。次に反応混合物をエーテルで抽出して、水相を酸性にした。生じた沈殿物を濾過し、水で数回洗浄して乾燥した（収率：２９％）。
【０１５８】
【表５】
2004537595.tif 000019
【０１５９】
実施例１ｅ：テトラデシルスルホキシ酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（５ｇ、１７．４mmol）（実施例１ａ）をメタノール／ジクロロメタンの混合物（１６０ml／８０ml）に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却し、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（Oxone）（登録商標）（１２．８ｇ、２１mmol）をゆっくり加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に生成した沈殿物を水切りし、水で数回洗浄して乾燥した（収率：９０％）。
【０１６０】
【表６】
2004537595.tif 000020
【０１６１】
実施例１ｆ：６−（デシルスルホキシ）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｅ）により調製した。
収率：９４％。
【０１６２】
【表７】
2004537595.tif 000021
【０１６３】
実施例１ｇ：テトラデシルスルホニル酢酸の調製
テトラデシルチオ酢酸（５ｇ、１７．４mmol）（実施例１ａ）を、メタノール／ジクロロメタンの混合物（１６０ml／８０ml）に溶解した。反応混合物を撹拌し、氷浴中で冷却して、次に水（１６０ml）に溶解したオキソン（登録商標）（２１．８ｇ、３５mmol）をゆっくり加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残った水相に生成した沈殿物を水切りし、水で数回洗浄して乾燥した（収率：８９％）。
【０１６４】
【表８】
2004537595.tif 000022
【０１６５】
実施例１ｈ：６−（デシルスルホニル）ヘキサン酸の調製
本生成物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）から上述の手順（実施例１ｇ）により調製した。
収率：８７％。
【０１６６】
【表９】
2004537595.tif 000023
【０１６７】
実施例１ｉ：ドコシルチオ酢酸の調製
本生成物は、メルカプト酢酸及びブロモドコサンから上述の手順（実施例１ａ）により得られた。
収率：９０％。
【０１６８】
【表１０】
2004537595.tif 000024
【０１６９】
実施例２：モノアシルグリセロールの調製
実施例２ａ：１−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
テトラデシルチオ酢酸（２，３−Ｏ−イソプロピリデン）プロピルの調製
氷浴に浸したフラスコで、テトラデシルチオ酢酸（４ｇ、１３．８６mmol）をテトラヒドロフラン（１００ml）に溶解し、次にＥＤＣｌ（２．６５８ｇ、１３．８６mmol）、ジメチルアミノピリジン（１．６９４ｇ、１３．８６mmol）及びソルケタール（１．７２ml、１３．８６mmol）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４日間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ  ＨＣｌの水溶液、次に１０％  ＮａＨＣＯ3の水溶液、そして最後に飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して溶媒を真空下で留去した。残留油状物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル−シクロヘキサン、１：９）により精製した。生成物は、黄色の油状物として得られた（収率：８０％）。
【０１７０】
【表１１】
2004537595.tif 000025
【０１７１】
１−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
テトラデシルチオ酢酸（２，３−Ｏ−イソプロピリデン）プロピル（４．１６３ｇ、１０．３５６mmol）を酢酸（６０ml）に溶解して室温で撹拌した。１１日間の反応後、反応混合物を水に希釈し、次に酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して溶媒を留去した。生じた白色の粉末をヘプタン中で再結晶した（収率：９０％）。
【０１７２】
【表１２】
2004537595.tif 000026
【０１７３】
実施例２ｂ：１−パルミトイルグリセロールの調製
この化合物は、ソルケタール及びパルミチン酸から出発して上述の手順（実施例２ａ）により合成した。
【０１７４】
パルミチン酸（２，３−Ｏ−イソプロピリデン）プロピル
【０１７５】
【表１３】
2004537595.tif 000027
【０１７６】
１−パルミトイルグリセロール
【０１７７】
【表１４】
2004537595.tif 000028
【０１７８】
実施例２ｃ：２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ベンジリデングリセロールの調製
グリセロール（３０ｇ、０．３２６mol）、ベンズアルデヒド（３４．５ｇ、０．３２６mol）及びｐ−トルエンスルホン酸（５０mg）をトルエン３５０mlに溶解して、還流下デーン・シュターク（Dean-Stark）装置に１８時間入れた。反応混合物を乾燥した。残留生成物は、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：シクロヘキサン／酢酸エチル、８：２〜７：３）により精製して再結晶した（収率：２０％）。
【０１７９】
【表１５】
2004537595.tif 000029
【０１８０】
テトラデシルチオ酢酸（１，３−Ｏ−ベンジリデン）プロピルの調製
氷浴に浸したフラスコで、テトラデシルチオ酢酸（０．８００ｇ、２．７７４mmol）をＴＨＦ（７５ml）に溶解し、次にＥＤＣｌ（０．５３２ｇ、２．７７４mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．３３９ｇ、２．７７４mmol）及び１，３−ベンジリデングリセロール（０．５ｇ、２．７７４mmol）をこの順序で加えた。この混合物を室温で１６時間撹拌した。溶媒を真空下で留去した。残渣をジクロロメタンにとって、１Ｎ塩酸、次に１０％  炭酸カリウム溶液、そして最後に飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過して乾燥した。残渣を石油エーテルにとった。生成した沈殿物を濾過し、次にシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン、２：８）により精製することによって、目的の化合物が白色の粉末として生成した（収率：５０％）。
【０１８１】
【表１６】
2004537595.tif 000030
【０１８２】
２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
テトラデシルチオ酢酸（１，３−Ｏ−ベンジリデン）プロピル（０．５７６ｇ、１．２７８mmol）をジオキサンとホウ酸トリエチルの５０：５０（V/V）混合物に溶解し、次にホウ酸（０．３１７ｇ、５．１１２mmol）を加えた。反応混合物を１００℃で４時間加熱した。ホウ酸２当量（０．１５８ｇ、２．５５６mmol）を加え、続いて反応５．５時間後及び７時間後に２当量を加えた。反応２４時間後、ホウ酸トリエチルを留去した。残渣を酢酸エチルにとって、水で洗浄した。水相をＮａＨＣＯ3で中和し、次にジクロロメタンで抽出した。有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過して乾燥した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：酢酸エチル−シクロヘキサン、５：５）により精製した（収率：６２％）。
【０１８３】
【表１７】
2004537595.tif 000031
【０１８４】
実施例３：１，３−ジアシルグリセロールの調製
実施例３ａ：１，３−ジパルミトイルグリセロールの調製
グリセロール（１０ｇ、０．１０９mol、１当量）、パルミチン酸（５５．６９ｇ、０．２１７mol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４４．７７ｇ、０．２１７mol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２６．５１ｇ、０．２１７mol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。生成したジシクロヘキシル尿素を濾過して、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物は、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン）により精製した（収率：４５％）。
【０１８５】
【表１８】
2004537595.tif 000032
【０１８６】
実施例３ｂ：１，３−ジリノレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びリノール酸から上述の手順（実施例３ａ）により得られた。本生成物は、無色の油状物として得られた（収率：２６％）。
【０１８７】
【表１９】
2004537595.tif 000033
【０１８８】
実施例３ｃ：１，３−ジステアリルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びステアリン酸から上述の手順（実施例３ａ）により得られた。本生成物は、白色の粉末として得られた（収率：２１％）。
【０１８９】
【表２０】
2004537595.tif 000034
【０１９０】
実施例３ｄ：１，３−ジオレイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びオレイン酸から上述の手順（実施例３ａ）により得られた。本生成物は、無色の油状物として得られた（収率：１５％）。
【０１９１】
【表２１】
2004537595.tif 000035
【０１９２】
実施例３ｅ：１，３−ジテトラデカノイルグリセロールの調製
この化合物は、グリセロール及びテトラデカン酸から上述の手順（実施例３ａ）により得られた。本生成物は、白色の粉末として得られた（収率：３０％）。
【０１９３】
【表２２】
2004537595.tif 000036
【０１９４】
実施例３ｆ：１−オレイル−３−パルミトイルグリセロールの調製
パルミチン酸グリセロール（実施例２ｂ）（５．５１６ｇ、０．０１７mol）をジクロロメタン（５００ml）に溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（５．１６５ｇ、０．０２５mol）、ジメチルアミノピリジン（３．０５８ｇ、０．０２５mol）及びオレイン酸（４．７１４ｇ、０．０１７mol）を加えた。反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、真空下で濾液から溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ＣＨ2Ｃｌ2）により精製することによって、目的化合物を白色の固体として得た（収率：２３％）。
【０１９５】
【表２３】
2004537595.tif 000037
【０１９６】
実施例４：１，２，３−トリアシルグリセロールの調製
実施例４ａ：１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
グリセロール（１ｇ、１０．８６mmol）をジクロロメタン（２００ml）に溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．８４ｇ、３８．０１mmol）、ジメチルアミノピリジン（４．６４ｇ、３８．０１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（９．４０ｇ、３２．５８mmol）を加えた。この混合物を室温で撹拌した。４８時間の反応後、ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、濾液から溶媒を留去した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ＣＨ2Ｃｌ2−シクロヘキサン、４：６）により精製した。１，２，３−トリテトラデシルチオアセチルグリセロールが、白色の粉末として得られた（収率：６５％）。
【０１９７】
【表２４】
2004537595.tif 000038
【０１９８】
実施例４ｂ：１，２，３−トリ−（４−ドデシルチオ）ブタノイルグリセロールの調製
この化合物は、４−（ドデシルチオ）ブタン酸（実施例１ｂ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）により得られた。
【０１９９】
【表２５】
2004537595.tif 000039
【０２００】
実施例４ｃ：１，２，３−トリ−（６−デシルチオ）ヘキサノイルグリセロールの調製
この化合物は、６−（デシルチオ）ヘキサン酸（実施例１ｃ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）により得られた。
【０２０１】
【表２６】
2004537595.tif 000040
【０２０２】
実施例４ｄ：１，２，３−トリテトラデシルスルホキシアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホキシ酢酸（実施例１ｅ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）により得られた。
【０２０３】
【表２７】
2004537595.tif 000041
【０２０４】
実施例４ｅ：１，２，３−トリ−（テトラデシルスルホニル）アセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルスルホニル酢酸（実施例１ｇ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）により得られた。
【０２０５】
【表２８】
2004537595.tif 000042
【０２０６】
実施例４ｆ：１，２，３−トリ−テトラデシルセレノアセチルグリセロールの調製
この化合物は、テトラデシルセレノ酢酸（実施例１ｄ）及びグリセロールから上述の手順（実施例４ａ）により得られた。
【０２０７】
【表２９】
2004537595.tif 000043
【０２０８】
実施例４ｇ：１，３−ジパルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１，３−ジパルミトイルグリセロール（５．６４ｇ、９．９mmol、１当量）、テトラデシルチオ酢酸（５．７４ｇ、１９．８mmol、２当量）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１ｇ、１９．８mmol、２当量）及びジメチルアミノピリジン（２．４２ｇ、１９．８mmol、２当量）をジクロロメタンに溶解した。反応混合物を室温で３日間撹拌した。生成したジシクロヘキシル尿素を濾過して、ジクロロメタンで数回洗浄した。濾液を乾燥した。残留生成物は、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン／シクロヘキサン、４：６）により精製した（収率：８０％）。
【０２０９】
【表３０】
2004537595.tif 000044
【０２１０】
実施例４ｈ：１，３−ジリノレイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジリノレイルグリセロール（実施例３ｂ）及びテトラデシルチオ酢酸（実施例１ａ）から上述の手順（実施例４ｇ）により得られた。本生成物は、無色の粘性油状物として得られた（収率：５６％）。
【０２１１】
【表３１】
2004537595.tif 000045
【０２１２】
実施例４ｉ：１，３−ジステアリル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジステアリルグリセロール（化合物（３ｃ））及びテトラデシルチオ酢酸（化合物（１ａ））から上述の手順（実施例４ｇ）により得られた。
【０２１３】
【表３２】
2004537595.tif 000046
【０２１４】
実施例４ｊ：１，３−ジオレイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジオレイルグリセロール（化合物（３ｄ））及びテトラデシルチオ酢酸（化合物（１ａ））から上述の手順（実施例４ｇ）により得られた。本生成物は、無色の粘性油状物として得られた（収率：３２％）。
【０２１５】
【表３３】
2004537595.tif 000047
【０２１６】
実施例４ｋ：１，３−ジテトラデカノイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジテトラデカノイルグリセロール（化合物（３ｅ））及びテトラデシルチオ酢酸（化合物（１ａ））から上述の手順（実施例４ｇ）により得られた（収率：２８％）。
【０２１７】
【表３４】
2004537595.tif 000048
【０２１８】
実施例４ｌ：１−パルミトイル−２，３−ジテトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
１−パルミチン酸グリセロール（４．８０４ｇ、０．０１４mol）をジクロロメタン（３００ml）に溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（７．４９８ｇ、０．０３６mol）、ジメチルアミノピリジン（４．４３９ｇ、０．０３６mol）及びテトラデシルチオ酢酸（８．３８６ｇ、０．０２９mol）を加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過して、ジクロロメタンで洗浄した。濾液を乾燥した。残渣は、シリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン−シクロヘキサン、４：６）により精製することによって、目的化合物を白色の粉末として得た（収率：４２％）。
【０２１９】
【表３５】
2004537595.tif 000049
【０２２０】
実施例４ｍ：１−オレイル−３−パルミトイル−２−テトラデシルチオアセチルグリセロールの調製
３−オレイル−１−パルミトイルグリセロール（２ｇ、０．００３mol）をジクロロメタン（１５０ml）に溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．０４０ｇ、０．００５mol）、ジメチルアミノピリジン（０．６１６ｇ、０．００５mol）及びテトラデシルチオ酢酸（１．４５５ｇ、０．００５mol）を加えた。この混合物を室温で２４時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過し、ジクロロメタンで洗浄して、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ＣＨ2Ｃｌ2−シクロヘキサン、４：６）により精製することによって、目的化合物を油状物として得た（収率：４９％）。
【０２２１】
【表３６】
2004537595.tif 000050
【０２２２】
実施例４ｎ：１，３−ジパルミトイル−２−ドコシルチオアセチルグリセロールの調製
この化合物は、１，３−ジパルミトイルグリセロール（実施例３ａ）及びドコシルチオ酢酸（実施例１ｉ）から上述の手順（実施例４ｇ）により得られた。
【０２２３】
【表３７】
2004537595.tif 000051
【０２２４】
実施例５：２−アミノグリセロール誘導体の調製
実施例５ａ：２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオールの調製
テトラデシルチオ酢酸（２．８７８ｇ、０．０１０mol）及び２−アミノ−１，３−プロパンジオール（１ｇ、０．０１１mol）をフラスコに入れて、１９０℃で１時間加熱した。室温まで冷却後、媒体をクロロホルムにとって、水で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、次に溶媒を留去することにより、固体の黄土色の残渣が生成した。この残渣をジエチルエーテル中で１２時間撹拌した。生成物は、濾過により、白色の粉末の形状で単離した（収率：６％）。
【０２２５】
【表３８】
2004537595.tif 000052
【０２２６】
実施例５ｂ：２−テトラデシルチオアセトアミド−１，３−ジテトラデシルチオアセチルオキシプロパンの調製
２−テトラデシルチオアセトアミドプロパン−１，３−ジオール（１ｇ、２．７７mmol）（実施例５ａ）をジクロロメタン（１８０ml）に溶解し、次にジシクロヘキシルカルボジイミド（１．４２７ｇ、６．９１mmol）、ジメチルアミノピリジン（０．８４５ｇ、６．９１mmol）及びテトラデシルチオ酢酸（１．９９５ｇ、６．９１mmol）（実施例１ａ）をこの順序で加えた。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。ジシクロヘキシル尿素沈殿物を濾過してジクロロメタンで洗浄し、濾液を濃縮した。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶離液：ジクロロメタン−シクロヘキサン、７：３）により精製した。目的化合物は、白色の粉末として得られた（収率：６６％）。
【０２２７】
【表３９】
2004537595.tif 000053
【０２２８】
実施例６：本発明のトリアシルグリセロールの可溶化方法。
実施例２〜５に記載された本発明の化合物は、実施例４ａについて記載されるように可溶化することができる。
このような可溶化は、インビトロ実験を実施するのに有用である。
【０２２９】
Spoonerら（Spoonerら, JBC, 1988, 263: 1444-1453）により記載されたように、実施例４ａの化合物及びホスファチジルコリン（ＰＣ）を含むエマルションを調製した。化合物（４ａ）をＰＣと４：１（m/m）比でクロロホルム中で混合し、この混合物を窒素下で乾燥し、次に一晩真空蒸発させた；生じた粉末を、０．０１Ｍ  ＥＤＴＡを含む０．１６Ｍ  ＫＣｌにとって、この脂質粒子を超音波により３７℃で３０分間分散させた。こうして生成したリポソームを次に超遠心分離（ＸＬ８０超遠心分離機、ベックマン・コールター（Beckman Coulter）、ヴィルパント（Villepinte）、フランス）により２５，０００rpmで４５分間分離することにより、１００nmを超えてキロミクロンに近いサイズのリポソームを回収した。陰性対照として使用するために、ＰＣだけからなるリポソームを同時に調製した。
【０２３０】
リポソーム中の化合物（４ａ）の濃度は、酵素比色トリグリセリド測定法キットを用いて推定した。この測定法は、脂質較正物質のＣＦＡＳ、参照番号７５９３５０（ベーリンガー・マンハイム社（Boehringer Mannheim GmbH）、ドイツ）で作製した標準曲線に対して実行した。この標準曲線は、１６〜５００μg/mlの範囲の濃度を包含した。滴定プレート（９６ウェル）上に１ウェルにつき各試料希釈液又は較正標準液１００μlを滴下した。次にトリグリセリド試薬、参照番号７０１９１２（ベーリンガー・マンハイム社、ドイツ）２００μlを各ウェルに加え、プレート全体を３７℃で３０分間インキュベートした。光学密度（ＯＤ）は、分光光度計で４９２nmで読みとった。各試料におけるトリグリセリド濃度は、一次関数：ｙ＝ａｘ＋ｂ［式中、ｙは、ＯＤを表し、そしてｘは、トリグリセリド濃度を表す］としてプロットした標準曲線から計算した。
【０２３１】
こうして調製した化合物（４ａ）のリポソームは、インビトロ実験に使用することができる。
【０２３２】
実施例７：インビトロのＰＰＡＲ活性化の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２３３】
異常脂肪血症及び糖尿病の治療に外来で広く使用されている２つの主な薬物分類（フィブラート系及びグリタゾン系（glitazones））により活性化される、ＰＰＡＲサブファミリーの核内受容体は、脂質及びブドウ糖のホメオスタシスにおいて重要な役割を演じる。具体的には、ＰＰＡＲα受容体は特に、脂質の輸送に関係するアポリポタンパク質をコードする遺伝子の発現を調節し、そして一方ではＡＣＯ遺伝子、また他方ではＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II遺伝子の発現（それぞれ、ペルオキシソーム及びミトコンドリアのβ酸化に関係する）を調節する。以下の実施例により、本発明の化合物が、インビトロでＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγを活性化することを証明する。
【０２３４】
ＰＰＡＲの活性化は、ＰＰＡＲ標的遺伝子の発現を測定することにより、並びに酵母Ｇａｌ４転写因子のＤＮＡ結合ドメイン及び種々のＰＰＡＲのリガンド結合ドメインよりなるキメラの転写活性を測定することにより、ラット肝細胞初代培養物においてインビトロで評価した。このような後者の結果は次に、後述のプロトコールにより細胞株で確認した。
【０２３５】
１）肝細胞初代培養物
ａ．培養プロトコール
体重１７５〜２２５ｇの間のオスＯＦＡウィスターラット（チャールス・リバー（Charles River）、ラルブレール（L′Arbresle）、フランス）から、コラゲナーゼとサーモリシンの混合物（ブレンドザイム３（Blendzyme 3）、ロシュ（Roche）、バーゼル、スイス）での肝臓の灌流によってラット肝細胞を単離した。ペントバルビタール麻酔下のラットの肝臓は、以前に報告されているプロトコール（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）の改変法により、最初に灌流緩衝液（肝臓灌流媒体（Liver perfusion medium）、ギブコ（Gibco）、ペーズリー（Paisley）、英国）１００ml、次に以下の消化媒体：１０mMヘペス（ｐＨ７．６）、４mM  ＣａＣｌ2及びブレンドザイム３  ７mgを補足した、ＣａＣｌ2及びＭｇＳＯ4の欠乏したＨＢＳＳ（シグマ（Sigma）、セントルイス、ミズーリ州、米国）２００mlで、門脈経由で灌流した。トリパンブルー試験（シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国）により測定した細胞生存率が８０％を超えたとき、肝細胞は、トランスフェクション実験のために７．５×１０4細胞/cm2の割合で２４ウェル培養皿に塗布したか、あるいはメッセンジャーＲＮＡの定量のために１０5細胞/cm2で６ウェル培養皿に塗布した。細胞を接種して、１００U/mlペニシリン（ギブコ、ペーズリー、英国）、２mM  Ｌ−グルタミン（ギブコ、ペーズリー、英国）、２％（V/V）ウルトロＳＥＲ  ＳＦ（UltroSER SF）（バイオセプラ（Biosepra）、セルジー・サン・クリストフ（Cergy St-Christophe）、フランス）、０．２％（m/V）ウシ血清アルブミン（シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国）、１μMデキサメサゾン（シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国）及び１００nM  Ｔ３（シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国）を補足したウィリアムズＥ（Williams E）培地中で４時間インキュベートした。次にウルトロセル（Ultroser）を欠いた同一培地中で実験を続けた。試験化合物は、所定の濃度で培地に直接加えた。
【０２３６】
ｂ．トランスフェクションプロトコール
上述のように単離及び培養したラット肝細胞は、ウルトロセルを欠いた培地中で、レポータープラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３（１０ng/ウェル）、ｐＧａｌ４−φ、ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲδ発現ベクター（１０ng/ウェル）及びトランスフェクション効率制御ベクターｐＲＬ−Ｎｕｌｌ（１ng/ウェル）（プロメガ（Promega）、マディソン（Madison）、ウィスコンシン州、米国）で、供給業者のプロトコールによりリポフェクチン（ギブコ、ペーズリー、英国）又はエフェクテン（Effecten）（キアゲン（Qiagen）、Courtaboeuf、フランス）を用いて一晩トランスフェクションした。トランスフェクション後、細胞は、以前に報告（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）されているように処理して３６時間インキュベートした。実験の最後に、細胞を溶解して、以前に報告（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）されているように、供給業者の指示書によりデュアル−ルシフェラーゼ（Dual-Luciferase）（商標）レポーターアッセイシステム（Reporter Assay System）（プロメガ、マディソン、ウィスコンシン州、米国）でルシフェラーゼ活性を定量した。次に、供給業者の指示書によりバイオ−ラッド・タンパク質アッセイ（Bio-Rad Protein Assay）キット（バイオ−ラッド、ミュンヘン、ドイツ）で細胞抽出物中のタンパク質濃度を求めた。
【０２３７】
ｃ．プラスミドの性状
プラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ及びｐＧａｌ４−φは、以前に報告されている（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）。ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα及びｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲδ作成体は、マウスＰＰＡＲα及びヒトＰＰＡＲδ核内受容体のＤＥＦドメインに対応するＰＣＲ増幅ＤＮＡ断片をｐＧａｌ４−φベクター中にクローン化することにより得られた。
【０２３８】
ｄ．メッセンジャーＲＮＡ定量
メッセンジャーＲＮＡは、ラット肝細胞初代培養液から、供給業者の指示書によりトリ−試薬（Tri-Reagent）（シグマ、セントルイス、ミズーリ州、米国）で抽出し、分光光度計により測定して、ライト・サイクラー・システム（Light Cycler System）（ホフマン・ラ・ロシュ（Hoffman-La Roche）、バーゼル、スイス）でライト・サイクラー・ファスト・スタートＤＮＡマスター・サイバー・グリーンＩ（Light Cycler Fast Start DNA Master Sybr Green I）キット（ホフマン・ラ・ロシュ、バーゼル、スイス）を用いる、半定量又は定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。ＰＰＡＲα標的である、ＡＣＯ及びＡｐｏ  ＡII遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。３６Ｂ４、β−アクチン及びＧＡＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマー対を対照プローブとして使用した（後記表Ｉを参照のこと）。
【０２３９】
【表４０】
2004537595.tif 000054
【０２４０】
２）細胞株
ａ．培養プロトコール
ＨｅｐＧ２及びＲＫ１３細胞は、ＥＣＡＣＣ（ポートン・ダウン（Porton Down）、英国）から得て、１０％（V/V）ウシ胎仔血清、１００U/mlペニシリン（ギブコ、ペーズリー、英国）及び２mM  Ｌ−グルタミン（ギブコ、ペーズリー、英国）を補足したＤＭＥＭ培地で増殖させた。培地は、２日毎に置換した。細胞は、３７℃で加湿５％  ＣＯ2／９５％空気雰囲気中で保持した。
【０２４１】
ｂ．トランスフェクション
２４ウェル培養皿にＨｅｐＧ２細胞は１０5細胞／ウェル、ＲＫ１３細胞は５×１０4細胞／ウェルの比率で接種したＨｅｐＧ２及びＲＫ１３細胞は、以前に報告されているプロトコール（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）により、レポータープラスミドｐＧ５ＴｋｐＧＬ３（１０ng/ウェル）、発現ベクターｐＧａｌ４−φ、ｐＧａｌ４−ｍＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲα、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲγ、ｐＧａｌ４−ｈＰＰＡＲδ（１０ng/ウェル）及びトランスフェクション効率制御ベクターｐＲＬ−ｎｕｌｌ（プロメガ、マディソン、ウィスコンシン州、米国）（２０ng/ウェル）で２時間トランスフェクションして、試験化合物と一緒に３６時間インキュベートした。この実験の最後に、細胞を溶解（ギブコ、ペーズリー、英国）して、以前に報告されている（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）ように、供給業者の指示書によりデュアル−ルシフェラーゼ（商標）レポーターアッセイシステム（プロメガ、マディソン、ウィスコンシン州、米国）でルシフェラーゼ活性を測定した。次に、供給業者の指示書によりバイオ−ラッド・タンパク質アッセイキット（バイオ−ラッド、ミュンヘン、ドイツ）で細胞抽出物中のタンパク質濃度を求めた。
【０２４２】
結果は、図１１に与えられた。これらは、試験化合物がＰＰＡＲα核内受容体の非常に強力な活性化を誘導することを示す。
【０２４３】
実施例８：インビボの脂質代謝に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２４４】
先進工業国における疾病及び死亡の主な原因の１つである、アテローム動脈硬化の発生に関係する異常脂肪血症の治療のためのヒトの医療において広く使用されているフィブラート類は、ＰＰＡＲα核内受容体の強力なアクチベーターである。後者は、脂質の輸送（ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＡII及びＡｐｏＣ−IIIのようなアポリポタンパク質、ＦＡＴのような膜トランスポーター）又は異化（ＡＣＯ、ＣＰＴ−Ｉ又はＣＰＴ−II）に関係する遺伝子の発現を調節する。よってＰＰＡＲαアクチベーターで齧歯類を処置すると、血漿中コレステロール及びトリグリセリド濃度が低下する。
【０２４５】
以下のプロトコールは、循環血中トリグリセリド及びコレステロール濃度の低下を証明するため、また心血管疾患の予防及び／又は治療に関する本発明の化合物の影響力を強調するために策定した。
【０２４６】
１）動物の処置
体重２００〜２３０ｇのスプラーク・ドーリー又はウィスターラット（チャールス・リバー、ラルブレール、フランス）は、１２時間の明／暗サイクルで２０±３℃の一定温度で飼育した。１週間の順化期間後、ラットを秤量して、血漿中コレステロール及びトリグリセリド濃度が同様であるように選択された８匹ずつの群に分配した。試験化合物をカルボキシメチルセルロースに懸濁して、１日１回１５日間、胃洗浄により所定の用量で投与した。ラットには飼料と水を自由に摂らせた。実験の最後に、５時間の絶食後ラットを秤量して、麻酔下で屠殺した。血液をＥＤＴＡに回収した。血漿は、３０００rpmで２０分間の遠心分離により単離した。肝臓試料を摘出して、以降の分析まで液体窒素中に凍結貯蔵した。
【０２４７】
２）血清中脂質及びアポリポタンパク質の測定
比色定量法（バイオ・メリュー（Bio-Merieux）、マルシ・レトワール（Marcy l′Etoile）、フランス）により供給業者の指示書にしたがい、血漿中の脂質濃度（総コレステロール及び遊離型コレステロール、トリグリセリド及びリン脂質）を測定した。アポリポタンパク質ＡII、ＡＩ及びＣIIIの血漿濃度は、以前に報告されている（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999、Asset Gら, Lipids, 34, 39-44, 1999）ように求めた。
【０２４８】
サイズによりリポタンパク質を分離するために、血漿３００μlをセファロース６ＨＲ１０／３０カラム（ファルマシア（Pharmacia）、ウプサラ、スウェーデン）に載せて、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中で一定流量（０．２ml/分）で溶出した。溶出液の光学密度は２８０nmで記録した。画分０．３mlを回収した。比色定量法（バイオ・メリュー、マルシ・レトワール、フランス）により供給業者の指示書にしたがい、種々の画分の脂質濃度を求めた。結果は、図２、３、４、９Ａ及び９Ｂに与えられる。
【０２４９】
３）ＲＮＡ分析
総ＲＮＡは、以前に報告されている（Raspeら, J. Lipid Res. 40, 2099-2110, 1999）ように、チオシアン酸グアニジン／フェノール酸／クロロホルムの混合物での抽出により、肝臓断片から単離した。メッセンジャーＲＮＡは、ライト・サイクラー・システム（ホフマン・ラ・ロシュ、バーゼル、スイス）でライト・サイクラー・ファスト・スタートＤＮＡマスター・サイバー・グリーンＩキット（ホフマン・ラ・ロシュ、バーゼル、スイス）を用いる、半定量又は定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。ＡＣＯ、ＡｐｏＣIII、ＡｐｏＡＩ、ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。３６Ｂ４、β−アクチン及びＧＡＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマー対は、対照プローブとして使用した（表Ｉを参照のこと）。結果は、図５及び９Ｃに示す。
【０２５０】
実施例９：本発明の化合物の抗酸化性の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２５１】
ＬＤＬの酸化は、アテローム動脈硬化及び心血管疾患に至る炎症過程の根底にある。よってこのような酸化を遅延させるか、又は阻害する化合物は、有益な防御作用を有する。
【０２５２】
１．銅又はアゾビス（２−アミノプロパン）二塩酸塩（ＡＡＰＨ）により誘導されたＬＤＬ酸化に対する防御
ＬＤＬの酸化は、アテローム動脈硬化の発症及び進展において主要な役割を演じる、重要な変性である（Jurgens, Hoffら, 1987）。以下のプロトコールにより、化合物の抗酸化性を証明することができる。他に記載がなければ、全ての試薬はシグマ製である（サンカンタン（St Quentin）、フランス）。
ＬＤＬは、Lebeauら（Lebeau, Furmanら, 2000）に報告されたように調製した。
試験化合物の溶液は、最終濃度が、１％（V/V）の総エタノール濃度で１〜１００μMの範囲になるように調製した。
【０２５３】
酸化の前に、ＰＢＳに対する透析により、ＥＤＴＡをＬＤＬ調製物から除去した。次に、１６．６μM  ＣｕＳＯ4溶液又は２mM  ＡＡＰＨ溶液２０μlを、ＬＤＬ（１２５μgタンパク質/ml）１６０μl及び試験化合物溶液２０μlに加えることにより、酸化反応を３０℃で行った。追跡すべき種であるジエンの生成は、銅（又はＡＡＰＨ）で処理又は非処理の、本化合物で処理した試料中の２３４nmの光学密度により測定した。２３４nmの光学密度は、１０分毎に８時間、サーモスタット付き分光光度計（コントロン・ユビコン（Kontron Uvikon）９３０）で測定した。分析は三重測定で行った。化合物の活性は、対照のそれと比較した遅滞期（酸化の開始前の潜伏時間）のシフト百分率として表した。対照試料の遅滞期潜伏時間を二倍にするならば、化合物は１００％の抗酸化活性を有すると考えた。本出願人らは、実施例２〜５に記載された本発明の化合物が、ＬＤＬ酸化（銅により誘導）を遅延させることを証明したが、このことは、該化合物が、固有の抗酸化活性を有することを示している。
【０２５４】
２．脂質過酸化反応に対して本発明の化合物により与えられる防御の評価：
ＬＤＬ酸化は、ＴＢＡＲＳ法により測定した。
上述のものと同じ原理により、ＬＤＬをＣｕＳＯ4の存在下で酸化させて、脂質過酸化反応を以下のように評価した：
ＴＢＡＲＳは、分光光度法により測定し、脂質ヒドロペルオキシド化は、脂質過酸化物依存性のヨウ素へのヨウ化物の酸化を利用して測定した。結果は、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）のnmolとして、又はnmolヒドロペルオキシド/mgタンパク質として表される。
結合ジエン生成の阻害を測定することにより上記で得られた結果は、ＬＤＬ脂質過酸化反応を測定する実験により確認した。また本発明の化合物によって、銅（酸化剤）に誘導された脂質過酸化反応に対するＬＤＬの効率的防御ができた。
【０２５５】
実施例９では、本発明の化合物が、ＬＤＬの酸化変性を阻害することを証明した。
【０２５６】
実施例１０：ミトコンドリア及びペルオキシソームのβ酸化に関係する酵素の発現に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２５７】
脂肪酸は、エネルギーの絶対不可欠なリザーバーである。ミトコンドリア及びペルオキシソームの脂肪酸のβ酸化は、主要な異化経路であり、これによってエネルギーが動員される。よってこれら２つのプロセスは、遊離脂肪酸の血清中濃度を制御する上で、及びトリグリセリド合成を調節する上で重要な役割を演じる。ペルオキシソームのβ酸化の律速酵素は、ＡＣＯである。ミトコンドリアのβ酸化は、ミトコンドリアへの脂肪酸の輸送により制限され、これは酵素のＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−IIの活性に依存する。酵素ＡＣＯ、ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−IIの発現の調節は、それぞれペルオキシソーム及びミトコンドリアのβ酸化を制御する上で決定的な工程である。
【０２５８】
本発明の化合物は、ＡＣＯ、ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴIIの発現を誘導する。該活性は、以下の方法で証明した：
【０２５９】
実施例７に記載されたラット肝細胞初代培養物から、又は実施例８に記載されたように試験化合物で処理したラットから摘出した肝臓断片から単離したＲＮＡを、実施例７及び８に記載されたように、ＡＣＯ、ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II遺伝子に特異的なプライマー対を使用して、半定量又は定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。
【０２６０】
実施例１１：脂肪酸酸化能力の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２６１】
脂肪酸の酸化能力は、遊離脂肪酸の血清中濃度並びにトリグリセリド合成のポテンシャルを決定する。血液中の遊離脂肪酸の蓄積又は脂肪組織の外側のトリグリセリドの蓄積は、インスリン抵抗性を招く。更に、血漿中トリグリセリド濃度の上昇は、今や心血管疾患の危険因子であると考えられている。よって脂肪酸の酸化能力の増大は、治療上重要である。
【０２６２】
本発明の化合物は、ミトコンドリア及びペルオキシソームによる脂肪酸酸化を活性化する。該能力は、以下のように証明した：
【０２６３】
ミトコンドリアＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−II活性は、Madsenら, 1999, Biochem. Pharmacol. 57, 1011-1019に報告された方法により試験した。
ＡＣＯ活性は、Asieduら, 1995, Eur. J. Biochem., 227, 715-722にあるように測定した。
ミトコンドリア及びペルオキシソームの脂肪酸のβ酸化は、Hovikら, 1990, Biochem. J. 270, 167-173に報告されたように評価した。
【０２６４】
実施例１２：コレステロール逆転送に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２６５】
ＨＤＬ−コレステロール濃度と心血管疾患の間の負の相関は、今では充分に確立されている。コレステロール逆転送（ＲＣＴ）を増大させる化合物の能力は、ＨＤＬがアテローム動脈硬化に対して防御する機序と考えられる。
【０２６６】
ＲＣＴは、肝外組織に存在する過剰なコレステロールを回収することができ、そして肝臓へ運び出すことができるプロセスであって、そして肝臓でコレステロールは胆汁酸への変換を受けて、次に胆汁中に排出される。
【０２６７】
マクロファージ由来泡沫細胞の存在は、アテローム動脈硬化の病変の形成における第１工程を特徴づける。
【０２６８】
よってマクロファージからのコレステロールの流出は、泡沫細胞の形成を防ぐための決定的に重要な相であり、そして結果として、アテローム動脈硬化の進展に対して防御的に作用する。ＲＣＴの決定的に重要な工程は、過剰なコレステロール及び細胞膜リン脂質の発生期ＨＤＬへの移行である。この点に関して、ＡＢＣＡ１（ＡＴＰ結合カセットＡ１）トランスポーターは、このプロセスにおいて重要な役割を演じ、そしてその発現は、マクロファージからのコレステロール流出の刺激によるアテローム動脈硬化プラーク発生の減少と相関している。
【０２６９】
また最近になって、ＡＢＣＡ１が、ＬＸＲα核内受容体（それ自体が、ＰＰＡＲα及びＰＰＡＲγ受容体の標的遺伝子である）の標的遺伝子であることが証明されている。
【０２７０】
本発明の化合物は、ＬＸＲα及びＡＢＣＡ１の発現を誘導し、そして初代及びＴＨＰ１マクロファージの２つのインビトロモデルにおいてコレステロール流出を刺激した。
【０２７１】
１／ＡＢＣＡ１及びＬＸＲα発現の測定：
ａ／初代及びＴＨＰ−１ヒトマクロファージの分化及び処理
ＴＨＰ−１単球（ＡＴＣＣ、ロックビル（Rockville）、メリーランド州、米国）は、ＰＭＡ（ホルボールミリステートアセテート）及びウシ胎仔血清の存在下で６ウェル培養皿に入れ、３７℃で４８時間インキュベートすることにより、マクロファージに分化させた。
【０２７２】
初代マクロファージを得るために、以前に報告されている（Chinettiら, Nat. Medecine 7(1), 53-58, 2001）ようにヒト血液から単核細胞を単離し、６ウェル培養皿に入れ、ヒト血清の存在下で１０日間増殖させることにより、初代単球をマクロファージに接着及び分化させることができた。
【０２７３】
ヒト又はウシ胎仔血清を含まないが、１％ニュートリドーマＨＵシーラム（Nutridoma HU serum）（ベーリンガー（Boehringer））を補足した培地中で、種々の化合物での処理を４８時間行った。
【０２７４】
ｂ／メッセンジャーＲＮＡ定量
総ＲＮＡは、ミニＲＮイージーキット（mini RNeasy kit）（キアゲン、ヒルデン（Hilden）、ドイツ）で供給業者の指示書により処理したマクロファージから抽出し、分光法により測定して、ライト・サイクラー・システム（ホフマン・ラ・ロシュ、バーゼル、スイス）でライト・サイクラー・ファストＤＮＡマスター・グリーンＩキット（ホフマン・ラ・ロシュ、バーゼル、スイス）を用いる定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。ＡＢＣＡ１及びＬＸＲα遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。
結果は図１２に示される。
【０２７５】
２／コレステロール流出の測定：
ａ／初代及びヒトＴＨＰ−１マクロファージの分化及び処理
マクロファージは、ＴＨＰ−１又は初代単球から前の実験（１−ＡＢＣＡ１及びＬＸＲα発現の測定）にあるように分化させた。
【０２７６】
ｂ／マクロファージのコレステロール負荷及び流出の測定
マクロファージは、本化合物で２４時間前処理し、それだけでなく実験の期間にわたって２４時間毎に処理した。コレステロール負荷は、１％ニュートリドーマＨＵ（ベーリンガー）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地中でアセチル化ＬＤＬ（トリチウム標識コレステロールを含む５０μg/ml）の存在下での４８時間のインキュベーションにより達成した。
【０２７７】
この工程後、細胞をＰＢＳで２回洗浄して、ニュートリドーマを含まず、アポリポタンパク質Ａ−１を含むか又は含まない、ＲＰＭＩ培地中で２４時間インキュベートした。この工程の終了後、培地を回収して、細胞内脂質をヘキサン／イソプロパノールの混合物で抽出し、次に窒素下で乾燥した。
【０２７８】
流出は、トリ−カーブ（Tri-Carb）（登録商標）２１００ＴＲシンチレーションカウンター（パッカード（Packard）、メリデン（Meriden）、コネチカット州、米国）で、培地中でカウントされる崩壊の数を、培地中及び細胞内でカウントされる崩壊の総数で割ることにより定量した。
【０２７９】
実施例１３：代謝症候群（Ｘ症候群）及び糖尿病に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２８０】
インスリン抵抗性は、代謝症候群の根底をなすものであり、そしてこれは、耐糖能異常、高インスリン血症、異常脂肪血症及び高血圧を特徴とする。アテローム動脈硬化に続発する心血管疾患のリスクの増大を導く幾つかの心血管危険因子の組合せは、２型糖尿病に関連する疾病及び死亡のほとんどの原因である。よって代謝症候群の薬理学的処置は、主にインスリン抵抗性を標的とする。
【０２８１】
本発明の化合物は、遊離脂肪酸の上昇、高インスリン血症、高血糖症及びブドウ糖に対するインスリン血応答（ブドウ糖負荷試験）のような、代謝症候群（Ｘ症候群）の症状発現、並びに代謝症候群に関係したインスリン抵抗性の２つの動物モデル［高脂肪飼料で維持したＣ５７ＢＬ／６マウス、及び肥満ズッカーラット（fa/fa）］における糖尿病の症状発現を減衰させた。これらの性質は、以下のように証明した：
【０２８２】
１）動物の処置
実験の開始時に６週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー、ラルブレール、フランス）を、体重分布が同様になるように６匹ずつの群にランダムに分割した。マウスに低脂肪飼料（ＵＡＲ  ＡＯ４）、高脂肪飼料（２９％（m/m）ココナツ油）又は試験化合物を補足した同じ栄養強化飼料を与えた。５又は２１週齢のオスの肥満ズッカーラット（fa/fa）又は非肥満ラット（fa/+）（チャールス・リバー、ラルブレール、フランス）を、血漿中コレステロール及びトリグリセリド濃度の分布が同様になるように選択した８匹ずつの群に分割して、標準飼料で維持した。動物は、１２時間の明／暗サイクルで２０℃±３℃の一定温度で飼育した。動物には食物と水を自由に摂らせた。食物摂取量及び体重増加を記録した。試験化合物は、カルボキシメチルセルロースに懸濁して、１日１回１５日間、胃洗浄により所定の用量で投与した。処置の最後に、後述されるように動物数匹にブドウ糖負荷試験を行った。実験の最後に、５時間の絶食後、他の動物を秤量して、麻酔下で屠殺した。血液をＥＤＴＡに回収した。血漿は、３０００rpmで２０分間の遠心分離により調製した。肝臓試料を摘出して、次の分析のために液体窒素中に凍結貯蔵した。
【０２８３】
２）遊離脂肪酸及び脂質の測定
糖尿病ラットでは遊離脂肪酸濃度は様々であった。血清又は血漿中の遊離脂肪酸濃度は、血清又は血漿での比色酵素反応「ＮＥＦＡ／ＦＦＡ」ＷＡＫＯ（ラボ・イミュノ・システムズ（Labo Immuno Systems）、ノイス（Neuss）、ドイツ）により測定した。
【０２８４】
血漿中脂質濃度（総コレステロール及びトリグリセリド）は、比色測定法（バイオ・メリュー、マルシ・レトワール、フランス）により供給業者の指示書にしたがい測定した。
結果は、図６及び１０に与えられる。
【０２８５】
３）血糖症測定
血中ブドウ糖は、比色酵素測定法（シグマ・アルドリッチ（Sigma Aldrich）、セントルイス、ミズーリ州、米国）により測定した。
結果は図７に与えられる。
【０２８６】
４）インスリン測定
代謝疾患に特有の高インスリン血症を証明するために、放射測定法キット（メルコディア（Mercodia）、ウプサラ、スウェーデン）でインスリン濃度を測定した。インスリン血症は、ＥＤＴＡに回収した血清又は血漿で測定した。
結果は、図７に与えられる。
【０２８７】
５）ブドウ糖負荷試験
８時間絶食後ラットをペントバルビタールナトリウム（５０mg/kg）の腹腔内注入により麻酔した。ブドウ糖負荷試験を開始するために、ブドウ糖（１g/kg）を腹腔に注入し、次いでブドウ糖負荷の０、１５、３０、４５、及び６０分後に尾静脈からヘパリン処理試験管中に血液試料を回収した。試料は、氷上に貯蔵し、血漿を単離して、分析まで−２０℃で貯蔵した。
結果は、図８に示される。
【０２８８】
実施例１４：肥満に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２８９】
肥満は、インスリン抵抗性の増大、２型糖尿病並びに心血管疾患及び癌のリスクの増大を伴う。よって肥満は、先進工業世界で流行する病気の幾つかにおいて中心的役割を演じており、したがって薬理学的に大きな課題を提起する。
【０２９０】
本発明の化合物は、肥満の２つの動物モデル［高脂肪飼料を与えたＣ５７ＢＬ／６マウス、及び肥満ズッカーラット（fa/fa）］において体重増加を軽減した。これらの性質は、以下のとおり証明した：
【０２９１】
１）動物の処置
実験の開始時に６週齢のオスＣ５７ＢＬ／６マウス（チャールス・リバー、ラルブレール、フランス）を、体重分布が同様になるように６匹ずつの群にランダムに分割した。マウスに低脂肪飼料（ＵＡＲ  ＡＯ４）、高脂肪飼料（２９％（m/m）ココナツ油）又は試験化合物を補足した同じ栄養強化飼料を与えた。５週齢のオスの肥満ズッカーラット（fa/fa）又は非肥満ラット（fa/+）（チャールス・リバー、ラルブレール、フランス）を、血漿中コレステロール及びトリグリセリド濃度の分布が同様になるように選択した８匹ずつの群に分割して、試験化合物を補足した標準飼料で１５日間維持した。動物は、１２時間の明／暗サイクルで２０℃±３℃の一定温度で飼育した。動物には食物と水を自由に摂らせた。食物摂取量及び体重増加を記録した。実験の最後に、動物は秤量して、麻酔下で屠殺した。血漿は、３０００rpmで２０分間の遠心分離により調製した。肝臓及び脂肪組織試料を摘出して、秤量し、次の分析のために液体窒素中に凍結貯蔵した。
【０２９２】
２）レプチンの測定
肥満マーカーであるレプチンは、リンコ・リサーチ（Linco Research）（セントチャールズ（St Charles）、ミシガン州、米国）製の「ラットレプチンアッセイ（Rat Leptin assay）」キットにより測定した。
【０２９３】
実施例１５：細胞増殖に及ぼす効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２９４】
本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖を低下させた。
【０２９５】
この活性は、Hvattumら, Biochem. J. 294, 917-921, 1993に報告されたプロトコールを用いて観測した。
【０２９６】
実施例１６：再狭窄に及ぼす本化合物の効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０２９７】
平滑筋細胞の増殖は、アテローム発生、再狭窄及び心血管疾患に伴う高血圧の主要構成成分の１つである。よって該増殖のインヒビターの同定は、薬理学における価値ある課題である。
【０２９８】
本発明の化合物は、血管平滑筋細胞の増殖をインビトロで低下させ、ラットバルーン血管形成モデルにおいてインビボで再狭窄を減少させた。これらの性質は、以下のとおり証明した：
【０２９９】
１）平滑筋細胞増殖の測定
冠動脈又は大動脈からの平滑筋細胞をプロモセル（Promocell）（ハイデルベルク（Heidelberg）、ドイツ）から得て、供給業者の指示書により、１０％ウシ胎仔血清を補足した特別な平滑筋細胞培地で培養した。５０％コンフルエンスになるまで増殖した細胞は、血清を２４時間除外することにより静止状態にした。次に細胞は、マイトジェン（１０％血清、２０ng/ml  βＦＧＦ又は２U/ml  α−トロンビン）及び本発明の化合物の存在下で３〜６日間処置した。実験の最後に、細胞はトリプシン処理して、血球計で数えた。
【０３００】
２）ラットバルーン冠血管形成モデルにおける再狭窄の測定
体重２００〜３００ｇの成体スプラーク・ドーリーラット（イッファ・クレド（Iffa Credo）、ラルブレール、フランス）は、１２時間の明／暗サイクルで２０℃±３℃の一定温度で飼育した。１週間の順化期間後、ラットを秤量して、体重分布が同様になるように選択した６匹ずつの群に分割した。左内冠動脈を以前に報告された（Ruefら, Arterioscl., Thromb. and Vasc. Biol. 20, 1745-1758, 2000）ようにバルーンで損傷させた。本発明の化合物をカルボキシメチルセルロースに懸濁して、１日１回４、１０及び２１日間、胃洗浄により種々の用量で投与した。ラットには飼料と水を自由に摂らせた。次いでラットを屠殺して、冠動脈を固定して、以前に報告された（Ruefら, Arterioscl., Thromb. and Vasc. Biol. 20, 1745-1758, 2000）ように分析した。
【０３０１】
実施例１７：高血圧に及ぼす本化合物の効果の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０３０２】
高血圧は、心血管疾患の主要な危険因子であり、そして重要な薬理学的課題に相当する。
【０３０３】
本発明の化合物は、高血圧のモデルの自然発生高血圧ラット（ＳＨＲラット）に投与すると、インビボで血圧を低下させた。これらの性質は、以下のように証明した：
【０３０４】
１）動物の処置
体重２００〜３００ｇの成体ＳＨＲラット（ハーラン・フランス（Harlan France）、Gannat、フランス）を１２時間の明／暗サイクルで２０℃±３℃の一定温度で飼育した。１週間の順化期間後、ラットを秤量して、体重分布が同様になるように選択した６匹ずつの群に分割した。本発明の化合物をカルボキシメチルセルロースに懸濁して、１日１回７日間、胃洗浄により種々の用量で投与した。ラットには飼料と水を自由に摂らせた。
【０３０５】
２）血圧測定
血圧は、SiragyとCarey（J. Clin. Invest., 100, 264-269, 1997）に報告されたプロトコールにより測定した。
【０３０６】
実施例１８：細胞培養物に及ぼす抗酸化性の評価
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０３０７】
ａ）正常ヒト角化細胞の獲得及び培養
正常ヒト角化細胞（ＮＨＫ）は、皮膚試料から培養した。試料は、最初にＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水−インビトロゲン（Invitrogen）、フランス）中で４回洗浄し、次に７０％エタノールの２個の連続浴に３０秒間浸漬することにより浄化した。次にできる限り多くの脂肪組織及び真皮を入念に取り除いて、３mm幅ストリップを切り出した。次いでこのストリップを０．２５％トリプシン溶液（インビトロゲン、フランス）中で３７℃で４時間インキュベートした。
【０３０８】
真皮から表皮の分離後、表皮調製物を濾過して、１０００rpmで５分間遠心分離した。ペレットをＫＨＮ−Ｄ培地（ＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）＋ヒドロコルチゾン０．４μg/ml＋ＥＧＦ  １０ng/ml＋１０-9Ｍコレラ毒素（シグマ、サンカンタン、フランス））にとった。細胞を数え、次いで１０×１０6細胞／７５cm2に接種した。
【０３０９】
２４時間培養後、培地を交換し、細胞をＰＢＳ中で洗浄して、次いでＫ−ＳＦＭ増殖培地（インビトロゲン、フランス）を使用した。細胞を所望の密度で接種した。細胞は、５％  ＣＯ2雰囲気で３７℃で培養して、培地を４８時間毎に交換した。細胞がコンフルエンスに達する前（７０〜８０％）に本発明の化合物での処理を行う（又は行わない）が、このとき本化合物は、１〜１００μMの範囲の濃度で培地に直接加えた。
【０３１０】
ｂ）ヒト線維芽細胞の獲得及び培養
正常ヒト線維芽細胞は、皮膚試料から培養した。試料は、最初にＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水−インビトロゲン、フランス）中で４回洗浄し、次に７０％エタノールの２個の連続浴に３０秒間浸漬することにより浄化した。約５mm2の面積を有する真皮の断片を、ペトリ皿の底に入れた。この断片が支持体に接着したら（約５分）、これらを２０％  ＦＣＳを補足したＤＭＥＭ培地４mlで覆った。培地を２日毎に置換した。１週間後細胞は外植片から遊走して、ペトリ皿にコロニーを作った。細胞が支持体にコロニーを作ったら、トリプシン処理し、再接種して、ＤＭＥＭ＋１０％  ＦＣＳ（インビトロゲン、フランス）中で３７℃で５％  ＣＯ2雰囲気で培養した。コンフルエンスに達したら細胞を処理したが、このとき本発明の化合物は、１〜１００μMの範囲の濃度で培地に直接加えた。
【０３１１】
ｃ）メッセンジャーＲＮＡ定量
ｍＲＮＡは、本発明の化合物で処理した（又はしていない）正常ヒト角化細胞及び線維芽細胞培養液から抽出した。抽出は、アブソリュートリーＲＮＡ  ＲＴ−ＰＣＲミニプレップキット（Absolutely RNA RT-PCR miniprep kit）（ストラタジーン（Stratagene）、フランス）の試薬で供給業者の指示書により実行した。次にｍＲＮＡは、分光法により測定して、ライト・サイクラー・システム（ロシュ、フランス）でライト・サイクラー・ファスト・スタートＤＮＡマスター・サイバー・グリーンＩキット（ロシュ）を用いる、定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。２つの抗酸化酵素である、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）及びグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）をコードする遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。３６Ｂ４、β−アクチン及びＧＡＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマー対を対照として使用した（表Ｉを参照のこと）。
【０３１２】
ｄ）グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性の測定
グルタチオンペルオキシダーゼ活性は、１〜１００μMの範囲の濃度で本発明の化合物で処理した（又はしていない）細胞（角化細胞、線維芽細胞）のタンパク質抽出物で測定した。ＧＰｘ活性はまた、細胞内ストレス（０．５mMパラコート又は０．６mM  Ｈ2Ｏ2、これらは反応性酸素種の生成を誘導する）の条件下で測定した。タンパク質抽出物の活性は、グルタチオンペルオキシダーゼ細胞内活性アッセイキット（Glutathione Peroxidase Cellular Activity Assay Kit）（シグマ）で供給業者の指示書により測定した。間接測定は、グルタチオンペルオキシダーゼにより触媒される、酸化型グルタチオンへのグルタチオンの酸化に基づく。非酸化型への再変換は、グルタチオンレダクターゼ及びＮＡＤＰＨ（β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）により触媒される。ＮＡＤＰＨ吸光度の低下は、シマヅ（Shimazu）１５０１分光蛍光計（島津製作所（Shimadzu Corporation）、京都、日本）で３４０nmで測定したが、これは、ＧＰｘがこの反応における律速因子であるため、ＧＰｘ活性を反映している。
【０３１３】
ｅ）脂質過酸化反応の測定
他に記載がなければ、試薬はシグマ（サンカンタン、フランス）製である。
【０３１４】
脂質過酸化反応は、チオバルビツール酸（ＴＢＡ）を用いてマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）をアッセイすることにより測定した。処理後、細胞上清を回収（９００μl）してブチル化ヒドロキシトルエン９０μlを加えた（Morliere P.ら, (1991), 培養ヒト線維芽細胞におけるＵＶＡ誘導脂質過酸化反応, Biochim Biophys Acta 1084, 261-8）。１５％トリクロロ酢酸を含む０．２５Ｍ  ＨＣｌ中のＴＢＡの０．３７５％溶液１ミリリットルもこの上清に加えた。この混合物を８０℃で１５分間加熱し、氷上で冷却して、有機相をブタノールで抽出した。有機相は、シマヅ１５０１分光蛍光計（島津製作所、京都、日本）で、分光蛍光法（λｅｘ＝５１５nm及びλｅｍ＝５５０nm）により分析した。ＴＢＡＲＳは、テトラ−エトキシプロパンを標準として使用してＭＤＡ当量として表された。結果は、細胞のタンパク質含量に対して標準化した。脂質過酸化反応は、ウェルを０．５mMパラコート（反応性酸素種の誘導物質）又は０．６mM過酸化水素で４時間処理することにより誘導した。１〜１００μMの濃度で本発明の化合物により提供される抗ラジカル防御は、脂質過酸化反応の誘導前の２４時間の前処理により評価した。
【０３１５】
実施例１９：再建表皮に及ぼす抗炎症性の評価
再建表皮は、スキンエシック（SkinEthic）（ニース（Nice）、フランス）により供給された。表皮は、角質層が存在し、かつ表皮の超微細構造がインビボのヒト表皮と似てくる１７日目（０．６３cm2）に使用した。再建表皮は、供給業者に教示されるように培養液中で維持した。再建表皮は、２〜１０mg/cm2の範囲の用量で２４及び７２時間、本発明の化合物で処理した。
【０３１６】
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０３１７】
ａ）抗炎症性の測定
再建表皮は、２〜１０mg/cm2の範囲の濃度で本発明の化合物と共に２４時間プレインキュベートし、次に０．４％  ＳＤＳ又はＴＰＡ（１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−アセテート）１μgで６時間処理した。化合物の抗炎症性の潜在能力は、ＥＬＩＳＡ法により評価した。対照又は処理表皮の培地（下記）を回収して−２０℃で凍結した。インターロイキン１−α（ＩＬ１−α）は、ＥＬＩＳＡ  ＩＬ１−αキット（Ｒ＆Ｄシステム、英国）で供給業者の指示書により定量した。
【０３１８】
ｂ）メッセンジャーＲＮＡ定量
ｍＲＮＡは、上述のように本発明の化合物で処理した（又はしていない）再建表皮から抽出した。抽出は、アブソリュートリーＲＮＡ  ＲＴ−ＰＣＲミニプレップキット（ストラタジーン）の試薬で供給業者の指示書により実行し、そして次にｍＲＮＡは、分光法により測定して、ライト・サイクラー・システム（ロシュ）でライト・サイクラー・ファスト・スタートＤＮＡマスター・サイバー・グリーンＩキット（ロシュ）を用いる定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。ＩＬ１（インターロイキン１）及びＩＬ６遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。３６Ｂ４、β−アクチン及びＧＡＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマー対を対照プローブとして使用した（表Ｉを参照のこと）。
【０３１９】
実施例２０：再建表皮に及ぼす抗酸化性の評価
再建表皮は、スキンエシック（ニース、フランス）により供給された。表皮は、角質層が存在し、かつ表皮の超微細構造がインビボのヒト表皮と似てくる１７日目（０．６３cm2）に使用した。再建表皮は、供給業者に教示されるように培養液中で維持した。再建表皮は、２〜１０mg/cm2の範囲の用量で２４及び７２時間、本発明の化合物で処理した。
【０３２０】
試験した本発明の化合物は、その製造法が上記実施例２〜５に記載された化合物である。
【０３２１】
ａ）メッセンジャーＲＮＡ定量
ｍＲＮＡは、角化細胞（本発明の化合物で処理した（又はしていない）再建表皮由来）から抽出した。抽出は、アブソリュートリーＲＮＡ  ＲＴ−ＰＣＲミニプレップキット（ストラタジーン）の試薬で供給業者の指示書により実行し、そして次にｍＲＮＡは、分光法により測定して、ライト・サイクラー・システム（ロシュ）でライト・サイクラー・ファスト・スタートＤＮＡマスター・サイバー・グリーンＩキット（ロシュ）を用いる定量ＲＴ−ＰＣＲにより定量した。２つの抗酸化酵素である、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）及びグルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）をコードする遺伝子に特異的なプライマー対をプローブとして使用した。３６Ｂ４、β−アクチン及びＧＡＰＤＨ遺伝子に特異的なプライマー対を対照プローブとして使用した（表Ｉを参照のこと）。
【０３２２】
ｂ）グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰｘ）活性の測定
グルタチオンペルオキシダーゼ活性は、本発明の化合物（２〜１０mg/cm2）で処理した（又はしていない）再建表皮のタンパク質抽出物で測定した。ＧＰｘ活性はまた、細胞内ストレス（反応性酸素種の誘導物質である、０．５mMパラコート）の条件下で測定した。タンパク質抽出物の活性は、グルタチオンペルオキシダーゼ細胞内活性アッセイキット（シグマ）で供給業者の指示書により測定した。間接測定は、グルタチオンペルオキシダーゼにより触媒される、酸化型グルタチオンへのグルタチオンの酸化に基づく。非酸化型への再変換は、グルタチオンレダクターゼ及びＮＡＤＰＨ（β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸）により触媒される。ＮＡＤＰＨ吸光度の低下は、シマヅ１５０１分光蛍光計（島津製作所、京都、日本）で３４０nmで測定したが、これは、ＧＰｘがこの反応における律速因子であるため、ＧＰｘ活性を反映している。
【０３２３】
【表４１】
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【０３２４】
【表４２】
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【図面の簡単な説明】
【０３２５】
【図１Ａ】本発明のアシルグリセロールの構造（実施例２ａ、２ｃ、４ａ〜ｎ）である。
【図１Ｂ】本発明の特定の化合物の構造（実施例５ａ〜ｂ）である。
【図２】ラットにおける血漿中コレステロール代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図３】ラットにおける血漿中トリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図４】ラットにおける血漿中リン脂質代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図５】ラットにおける肝遺伝子の発現に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図６】ズッカー（Zucker）ラットにおける血漿中コレステロール及びトリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図７】ズッカーラットにおける血漿中インスリン及びブドウ糖均衡に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図８】ズッカーラットにおけるブドウ糖負荷試験中のインスリン濃度に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図９】ラットにおける血漿中脂質及び肝遺伝子の発現に及ぼす化合物（４ｇ）の効果の評価である。
【図１０】ズッカーラットにおける血漿中トリグリセリド代謝に及ぼす化合物（４ａ）に関する用量作用関係の評価である。
【図１１】インビトロのＰＰＡＲα活性化に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図１２】ヒトマクロファージにおけるインビトロのＡＢＣＡ１遺伝子発現に及ぼす化合物（４ａ）の効果の評価である。
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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