(57)【要約】本発明は、ＤＮＡ副溝および配列−選択的アルキル化剤（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）（一般クラスＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶとして表され、ここでＸが良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド、メシレート、トシレート、アセテート、第四級アンモニウム部分、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のような）である）の新規のアキラルｓｅｃｏ−アナログに関する。Ｒ１はＤＮＡの特定の配列とアキラルｓｅｃｏ−シクロプロパンインドール（ＣＩ）またはアキラルｓｅｃｏ−デュオカルマイシンとの相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は、表４に示される。好ましいＤＮＡ結合剤は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＩである。Ｒ１としてはまた、以下が挙げられ得る：ｔ−ブトキシ、ベンジルオキシ、９−フルオレニルメチルオキシまたはアミンに対する他の一般の保護基（ここでＸは良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド、メシレート、トシレート、アセテート、第四級アンモニウム部分、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のいずれかであるような）である。Ｒ１はＤＮＡの特定の配列との共有結合反応性アキラルｓｅｃｏ−ファーマコフォアの相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は、表４に示される。ＤＮＡ結合剤の例は表４中に与えられる。好ましいＤＮＡ結合剤は、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、ＫおよびＬである。Ｒ２およびＲ３は、それぞれ水素または短鎖アルキル（Ｃ１−Ｃ５）基であり得、好ましくは両方とも水素原子である。このアルキル基は直鎖または分岐鎖であり得、そしてエチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルのような基が挙げられる。Ｒ４およびＲ５は、水素原子、短アルキル基、トリフルオロメチル部分、およびアルキルオキシカルボニル基であり得る。好ましいＲ４およびＲ５基は、メトキシカルボニルおよびトリフルオロメチルである。Ｒは、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、水素原子、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、またはＮ’−メチルピペラジニル−Ｎ−カルボニル基のいずれかであり得る（ここでＸは良い脱離基であり、Ｒ１は副溝結合剤（アドゼレシンおよびデュオカルマイシンの結合ユニット、ネトロプシン、ならびにビスベンゾイミドのような）である）。Ｒ２およびＲ３は、それぞれ水素または短鎖アルキル（Ｃ１−Ｃ５）基であり得る。Ｒ４およびＲ５は、水素原子、短アルキル基、トリフルオロメチル部分、およびアルキルオキシカルボニル基であり得る。Ｒは、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、水素原子、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、またはＮ’−メチルピペラジニル−Ｎ−カルボニル基のいずれかであり得る。本発明はさらに、目的化合物を使用するガンの治療方法と同様、それの薬学的組成物に関する。
2004511466.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
2004511466.tif 000153
ここでＸは、良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド、メシレート、トシレート、アセテート、第四級アンモニウム部分、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基など、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のいずれか）である。
Ｒ１は、ＤＮＡの特定の配列とアキラルｓｅｃｏ−シクロプロパンインドール（ＣＩ）またはアキラルｓｅｃｏ−デュオカルマイシンの相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は、第４表中に示される。該好ましいＤＮＡ結合剤は、基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＩである。Ｒ１としてはまた、以下が挙げられる：ｔ−ブトキシ、ベンジルオキシ、９−フルオレニルメチルオキシまたはアミンに対する他の一般的な保護基。
ここでＸは良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド、メシレート、トシレート、アセテート、第四級アンモニウム部分、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基など、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のいずれか）である。
Ｒ１は、ＤＮＡの特定の配列と共有結合反応性アキラルｓｅｃｏ−ファーマコフォア（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）の相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は、第４表中に示される。該好ましいＤＮＡ結合剤は、基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、ＫおよびＬである。
Ｒ２およびＲ３は、水素または短鎖アルキル（Ｃ１−Ｃ５）基であり得、好ましくは両方とも水素原子である。該アルキル基は直鎖または分岐鎖であり得、そしてエチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルのような基を含み得る。
Ｒ４およびＲ５は、水素原子、短いアルキル基、トリフルオロメチル部分、およびアルキルオキシカルボニル基であり得る。好ましいＲ４およびＲ５基は、メトキシカルボニルおよびトリフルオロメチルである。
Ｒは、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、水素原子、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、またはＮ’−メチルピペラジニル−Ｎ−カルボニル基のいずれかであり得る。
【請求項２】
Ｘがクロロ、ブロモ、ヨード、メルカプト、第四級アンモニウム部分、またはメシレート、トシレート、アセテート、Ｃ１−Ｃ６アルキルスルホキシルまたはＣ１−Ｃ６アルキルスルホニル基である、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｘがクロロ、ブロモまたはヨードである、請求項２の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が第４表の基である、請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ２およびＲ３が両方とも水素である、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ４およびＲ６が独立してメトキシカルボニルまたはトリフルオロメチルである、請求項１の化合物。
【請求項７】
アルキル化剤療法に感受性のガンをこのような処置を必要とする患者において処置する方法であって、前記方法が抗ガン有効量の請求項１の化合物を該患者に投与することを包含する、方法。
【請求項８】
該量が約０．１〜約１００ｍｇ／患者体重のｋｇである、請求項７の方法。
【請求項９】
ＣＣ−１０６５の、またはデュオカルマイシンのアキラルｓｅｃｏ−アルキル化ファーマコフォアをＤＮＡの選択配列へ送達する方法であって、該方法が、該ファーマコフォアをＤＮＡ副溝結合剤へ複合体化させ、複合体を形成すること、および該選択配列への複合体の結合を達成させるのに十分な時間該選択配列を該複合体と接触させること、を包含する、方法。
【請求項１０】
前記接触させる工程がｉｎ　ｖｉｖｏである、請求項９の方法。
【請求項１１】
請求項１の化合物およびその薬学的に許容される担体を含む、アルキル化剤療法に感受性のガンの処置に適する、薬学的組成物。
【請求項１２】
以下からなる群より選択される化合物：
Ｎ−（２−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
Ｎ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
Ｎ−［２−（２−ブロモエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）フェニル］−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］ベンゾフラン−２−カルボキサミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−ブロモエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（Ｎ−メチルピペラジン−Ｎ’−カルバメート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（クロロエチル）−３−［２−（４−Ｎ，Ｎ−（ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール６−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（２−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（３−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（４−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（２，６−ジメトキシ−５−ピリジル）−Ｅ−エテン−１−イルカルボキサミド）フェノール
ジメチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−２，３−ジカルボキシレート
ジメチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−［５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］インドール−２，３−ジカルボキシレート
メチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−２−トリフルオロメチル−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−３−カルボキシレート
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリン
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド）］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド）］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン
Ｎ−（ブトキシカルボニル）−４−（２−クロロエチル）−３−ニトロ−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフトール
Ｏ−ベンジル−４−（２−クロロエチル）−３−（ブトキシカルボキサミド）フェノール。
【請求項１３】
該化合物が４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミンである、請求項１２の化合物。
【請求項１４】
該化合物が４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）フェノールである、請求項１２の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本出願は、米国特許出願シリアル番号第０９／６６６，１６０の一部継続であり、その内容は全体として本明細書中において参考として援用される。
【０００２】
発明の分野
本発明は、（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）のアキラルｓｅｃｏ−アナログならびに前記アキラルアナログを含む薬学的組成物に関する。（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンのアキラルアナログは、抗ガン剤として有用である。
【０００３】
発明の背景
最近多くの注目を受けてきている化合物の１つのクラスは、ＤＮＡの特定の配列をアルキル化することによって抗ガン活性を発揮するＤＮＡ副溝結合剤（ＤＮＡ　ｍｉｎｏｒ　ｇｒｏｏｖｅ　ｂｉｎｄｅｒｓ）である（１ａ）。副溝は、概して水和の背（ｓｐｉｎｅ　ｏｆ　ｈｙｄｒａｔｉｏｎ）によってふさがれているだけであり、それゆえ抗ガン剤に対してより接近できることから、副溝相互作用剤は、インターカレート剤（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）および主溝結合剤よりも魅力的である。さらに、副溝内の共有結合修飾は一般的に、タリムスチン（ｔａｌｌｉｍｕｓｔｉｎｅ）対Ｌ−フェニルアラニンマスタード（１ｂ）のように、それらの主溝アルキル化等価物よりも細胞に対してより細胞毒性である。強力な抗ガン活性を有する副溝およびＡＴ配列選択的アルキル化剤の例は、（＋）−ＣＣ−１０６５（１ｃ、ｄ、ｅ、２）およびデュオカルマイシン（２、３）である。ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシン（（＋）−デュオカルマイシンＳＡ（またはＤＵＭＳＡ）（２）によって例示され、また第１表に図示される）は、信じられないほど強力な細胞毒性特性を有する一群の天然産物に属する（ｃａ．表１において、マウスＬ１２１０白血病細胞の増殖に対してｐＭ範囲におけるＩＣ５０値）。
【０００４】
【表１】
2004511466.tif 000003
【０００５】
第１表．（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンＳＡ（ＤＵＭＳＡ）の構造および生物学的特性の要約
これらの化合物（これらはそれぞれ、Ｓｔｒｅｐｔｍｙｃｅｓ　ｚｅｌｅｎｓｉｓ（４）およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．（５）の両方の発酵物から単離された）は、ＤＮＡの特定配列の副溝内のアデニン−Ｎ３基と主に反応することによって、それらの抗ガン活性を誘導する。アデニン−Ｎ３共有結合反応の確認は、熱的に開裂されるＤＮＡ−薬物付加物からのアデニン−ＣＣ１０６５付加物（６）およびアデニン−デュオカルマイシンＳＡ付加物（７）の単離から達成された。（＋）−ＣＣ１０６５は、５’−Ａまたは５’−Ｔ残基の側面に位置するアデニン−Ｎ３基をアルキル化することに対して優先傾向を示す。３−塩基ＡＴ−リッチアルキル化部位に対する配列優先性は以下の順序に従う：５’−ＡＡＡ＝５’−ＴＴＡ＞５’−ＴＡＡ＞５’−ＡＴＡ（アルキル化部位は、下線部の塩基により示される）。さらに、この化合物は、ＡまたはＴ残基である４番目の５’−塩基に対してより強い優先性、ＡまたはＴ塩基である５番目の５’−塩基に対してより弱い優先性、そしてプリンであるアルキル化部位より前の３’塩基に対して弱い優先性を示した。（＋）−ＣＣ−１０６５についてのコンセンサス配列５’−ＰｕＮＴＴＡ−３’および５’−ＡＡＡＡＡ−３’が示唆される（６、８）。（＋）−ＣＣ１０６５および（＋）−ＤＵＭＳＡは概して類似する配列選択性を有するが、いくつかの微細な相違（特にＣＣ１０６５による５’−ＧＣＡＡＡでのアルキル化の欠如）が観察された（２、３、７）。
【０００６】
ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンがＤＮＡの特定配列と反応するメカニズムは、依然として激しい論争の主題である（９）。それらの配列選択的ＤＮＡアルキル化に対する２つのモデルが提唱されてきている。Ｂｏｇｅｒのグループ（９）によって提唱される「非共有結合モデル」は、ＤＮＡアルキル化を安定化する力が、ＣＣ１０６５のシクロプロピピロロインドロン（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｐｙｒｒｏｌｏｉｎｄｏｌｏｎｅ）（ＣＰＩ）サブユニットとＤＮＡのアデニン−Ｎ３との間の立体電子的に制御される共有結合形成、ならびにＣＣ１０６５についてのＰＤＥ−Ｉサブユニット、およびＤＵＭＳＡのＴＭＩ（トリメトキシインドール）ユニットの疎水性およびファンデルワールス接触（ｃｏｎｔａｃｔｓ）に由来する安定化非共有結合相互作用の組合せであることを提唱した。Ｈｕｒｌｅｙおよび共同研究者ら（１０）によって提唱される「アルキル化部位モデル」において、（＋）−ＣＣ１０６５によって例示される化合物の共有結合配列特異性は、コンセンサス配列の独特なコンフォメーション特性（これにおいて、この配列は、薬物分子の認識のための一時的に折り曲げられるコンフォメーションをとるのに十分フレキシブルである）にあるとされてきた。さらに、この独特なコンフォメーションは、一般酸触媒によってＣＰＩ系を活性化し得るホスフェート上の酸性プロトンを提供する。いずれの場合においても、１Ｈ−ＮＭＲ研究によって、（＋）−ＣＣ１０６５が二重鎖
【０００７】
【化２】
2004511466.tif 000004
【０００８】
（イタリック体の配列中の下線部のＡ残基でのアルキル化）のアデニン−Ｎ３を効率的にアルキル化し、ＴＴＡ配列で１７−２２°の折り曲げを誘導することが示された（１１）。同様に、ｄ−（ＧＡＣＴＡＡＴＴＧＡＣ）．ｄ−（ＧＴＣＡＴＴＡＧＴＣ）を有するＤＵＭＳＡの１Ｈ−ＮＭＲ研究はまた、薬物が副溝への結合時に顕著なコンフォメーション変化（これは、引き続きその共有結合反応性を高める）を受けることを明らかにしてきた（１１ｄ）。ＤＮＡ上のこのようなコンフォメーション変化は、遺伝子発現および複製の生物学的制御に重要であるかも知れないＤＮＡにおける構造を捕捉すると仮定されてきた（１２）。ＤＮＡアルキル化のためのデュオカルマイシンＳＡファーマコフォア（ｐｈａｒｍａｃｏｐｈｏｒｅ）の活性化に関する最近の密度機能的および最初からの研究が報告された（１３）。この研究において著者らは、インドリン−アミド−Ｎ結合（Ｘ２）のひねり（ｔｗｉｓｔｉｎｇ）が加溶媒分解（ｓｏｌｖｏｌｙｓｉｓ）に比べて百万倍高いＤＮＡアルキル化を十分には説明していないことを見出した。
【０００９】
（＋）−ＣＣ１０６５は強力な細胞毒性特性を有するけれども、抗ガン薬としてのその有用性は、治療用量でのマウスにおける遅延性致死という毒性制限（ｌｉｍｉｔｉｎｇ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ）によって妨げられる（４ｂ）。興味深いことに、ＤＵＭＳＡにはこの有毒な副作用が無く（２ａ）、そしてこれは、このクラスの化合物において最も加溶媒分解的に安定であり且つ最も強力である（２，１４）。Ｕｐｊｏｈｎ科学者によって合成されたＣＣ１０６５のアナログの広範囲な整列（ａｒｒａｙ）によって促進されるように（１ａ、ｂ、４ｃ）、構造−活性相関が明瞭に定義され（１０ｂ、１１）、そしてエタノ架橋（ｅｔｈａｎｏ　ｂｒｉｄｇｅｓ）（図１を参照のこと）が所望されない遅延致死性の原因であることが見出された。これらのエタノ基は、薬物−ＤＮＡ複合体（１１ａ、ｂ）を安定化する副溝の床上のアデニン−Ｈ２原子との好ましいファンデルワールスおよび疎水性相互作用へ加わる。これによって（＋）−ＣＣ１０６５およびそのＣＤＰＩ２アナログ（第２表を参照のこと）の遅延致死性が、それらの「可逆的に」ＤＮＡをアルキル化する能力を有さないこと（ｉｎａｂｉｌｉｔｙ）の結果であると示唆された（７、１５）。エタノ基に起因するこれらの化合物の強力な非共有結合は、アルキル化が起こった後の可逆反応を防ぎ得るか（７、１５ａ）、または同じ部位を再アルキル化するために薬物結合を維持する（１５ｂ）。この示唆と一致して、アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）（１５ｂ）およびＤＵＭＳＡ（１５ａ、１６）のようなエタノ架橋を欠くＣＣ１０６５アナログには遅延毒性の問題が無く、そのうえそれらは強力な抗ガン活性を示す。
【００１０】
【表２】
2004511466.tif 000005
【００１１】
第２表．　（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシの報告される構造アナログ。ＣＢＩはシクロプロピルベンゾインドロン（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｂｅｎｚｏｉｎｄｏｌｏｎｅ）、ＣＰｚＩはシクロプロピルピラゾロインドロン（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｐｙｒａｚｏｌｏｉｎｄｏｌｏｎｅ）、ＣＦＩはシクロプロピルフラノインドロン（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｆｕｒａｎｏｉｎｄｏｌｏｎｅ）、そしてＣＩはシクロプロピルインドロン（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｉｎｄｏｌｏｎｅ）である。
【００１２】
アドゼレシン（ａｄｏｚｅｌｅｓｉｎ）（１ｂ、４ｃ、１７、特許１）カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）（１８）、ビゼレシン（ｂｉｚｅｌｅｓｉｎ）（１９、特許２）、およびＫＷ２１８９（２０、特許３）は、ガンの処置のための臨床試験を現在受けている（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンのアナログの例である。アドゼレシンのフェーズＩ臨床試験は、黒色腫患者において部分的な応答を示していた（１７ｅ）。カルゼレシンは、カルバメート加水分解の際にｓｅｃｏ−プロドラッグＵ７６０７３（これは、対応するシクロプロパン含有ＣＰＩ「薬物（ｄｒｕｇ）」Ｕ７６０７４へ容易に環化する）を提供するプロドラッグである（１８）。カルゼレシンがアドゼレシンよりもＬ１２１０白血病に対する高いｉｎ−ｖｉｖｏ抗ガン活性を有する（１５０±８％　ＩＬＳ，２／６生存　対　９０±１１％，０／６生存）ことに留意することは価値のあることである（１８）。この結果は、カルゼレシンのより低い毒性に起因しているようであり、そして結果としてこれはより高い用量（アドゼレシンに対して１００μｇ／ｋｇ　対　４００μｇ／ｋｇ）で投与され得る（１８）。ビゼレシンは、２つのｓｅｃｏ−ＣＰＩアルキル化ユニットを結合するＤＮＡ鎖間架橋剤であり、そして（＋）−ＣＣ１０６５自体よりも約２０−３０倍強力である（ＩＣ５０（Ｌ１２１０）＝１ｐＭ　対　２０ｐＭ）（１９）。ＫＷ２１８９（半合成デュオカルマイシンＢ２誘導体）（これは改良された抗ガン活性、水溶性、及び安定性を有する）は、日本における臨床評価に選ばれてきた（２０）。その活性化のメカニズムはまた、カルバメート基の加水分解を含み、環化し、実際のシクロプロパン含有薬物を生産するｓｅｃｏ−プロドラッグ、またはＤＣ−８６を放出する。
【００１３】
これらの臨床的に研究された化合物の生物学的特性によって、ｓｅｃｏ−プロドラッグがそれらのシクロプロパン含有ＣＰＩ対応物と同程度活性であるけれども（＋）−ＣＣ１０６５によって示される遅延性毒性を引き起こさないことが示される。ｓｅｃｏ−プロドラッグはまた、薬物自体よりも安定であり且つ取り扱い易いので、この型のファーマコフォアを有する化合物がこの開示において記載される。さらに、インドール−ベンゾフラン（Ｉｎ−Ｂｆ）（４ｃ）、インドール−インドール（Ｉｎ−Ｉｎ）（４ｃ）、トリメトキシインドール（ＴＭＩ）（３）、および第２表中に与えられるジピロール（Ｐｙ−Ｐｙ）（２１）非共有結合ユニットによって例示されるようなジスタマイシンのアナログが、本発明の化合物の構造に結合されるであろう。これらのＤＮＡ結合ユニットは、それらがこのクラスの化合物の細胞毒性強度を高めることが示されてきており、且つそれらが遅延性毒性の問題を有さないので、選択される。
【００１４】
ＣＣ１０６５の非共有結合部分における系統的な修飾の他に、このクラスの化合物がそれらの活性を発揮するメカニズムを解明するためにファーマコフォアの改変がまた行われた。ＣＢＩ（シクロプロピルベンゾインドロン）（２、３、２２）、ＣＦＩ（シクロプロピルフラノインドロン）（２３）、ＣＰｚＩ（シクロプロピルピラゾロインドロン）（２４）、およびＣＩ（シクロプロピルインドロン）（２、３、２５）のような、第２表に表されるデュオカルマイシンＳＡ（ＤＵＭＳＡ）およびＣＣ１０６５のＣＰＩユニットのアナログ（１−４）が設計および調製されてきた。これらのファーマコフォアの構造−活性相関の研究は、最も大きな加溶媒分解安定性を有するアナログがまた最も強力な抗ガン活性を示すことを実証してきた（９ｂ、１４）。さらに、第３表に中に示されるアミノ−含有ｓｅｃｏ−ＣＩおよびＣＢＩアナログはまた、ガン細胞の増殖を阻害することにおいてもとのｓｅｃｏ−ＣＩおよびＣＢＩ化合物と同程度に強力であることが示されてきた（２６）。
【００１５】
【表３】
2004511466.tif 000006
【００１６】
第３表．ＣＩおよびＣＢＩのｓｅｃｏ−アミノアナログの構造
このクラスの化合物の生物学的活性に及ぼすキラル中心の影響もまた、研究されてきた。ＤＵＭＳＡの非天然（−）−（Ｒ）鏡像異性体は、ＤＮＡをアルキル化することにおいて天然（＋）−（Ｓ）鏡像異性体よりも１０倍低く有効であり、そしてこのことは（−）−鏡像異性体についての細胞毒性において１０倍低いのと矛盾しない（２、７）。（＋）−ＣＣ１０６５に類似して、（＋）−ＤＵＭＳＡの結合方向は、ＡＴ−リッチ３−５塩基対部位に渡って３’−＞５’であり、反対の鏡像異性体は５’−＞３’方向に向く。（−）−ＣＣ１０６５が（＋）−鏡像異性体よりも遅いＤＮＡアルキル化速度を示す一方、ＤＮＡアルキル化の全体的な有効性は同じであり、さらにそれらのｉｎ−ｖｉｔｒｏおよびｉｎ−ｖｉｖｏ抗ガン活性も同じであることは、注目に値する（２７）。ＣＰＩ−ＣＤＰＩ１およびＣＰＩ−ＰＤＥ−Ｉ１（一般構造については第２表を参照のこと）の両鏡像異性体に関するさらなる詳細な研究により、それらの細胞毒性が天然（＋）−異性体に有利に約１５０倍だけ異なることが明らかにされた（２ａ、２７ｂ）。ＣＰＩ−Ｉｎ−Ｉｎの鏡像異性体について、天然（＋）−異性体が約２５０倍細胞毒性が大きい（２７ｃ）。
【００１７】
それゆえ、光学異性的に純粋な化合物が調製され、そして臨床薬に開発され得る前に生物学的に評価されなければならないことは決定的に重要である（２８ａ）。現在では、光学的に純粋な形態のこのクラスの化合物の合成は、ＨＰＬＣによるキラルカラム上の分離（２９）またはそれぞれ順相ＨＰＬＣおよび再結晶化法を用いる中間体のジアステレオメリックマンデレート（ｄｉａｓｔｅｒｅｏｍｅｒｉｃ　Ｍａｎｄｅｌａｔｅ）（２、２１、３０ａ、ｂ）またはＮ−ＢＯＣ−Ｌ−トリプトファンエステル（３０ｃ）の分離のいずれかによる化学的分割工程を必要とする。光学的に活性なＣＰＩを合成するためにラセミアルコール中間体を分割するためのリパーゼ触媒エステル化反応を用いる報告もまた存在する（３１）。これらの方法は少なくともスモールスケールにおいて実行可能であるが、一方それらは、化学的分割工程において所望されない鏡像異性体の全てが廃棄されなければならないので、非効率的である。さらに、ＣＦＩ（２３）、ＣＢＩ（３２）、およびデュオカルマイシンＡ（２９）の調製における唯一の適切な不斉誘導（それぞれ不斉ハイドロボレーションまたはシャープレスジヒドロキシレーション（Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ　ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎ）法のいずれかを用いる）の報告がなされてきた。
【００１８】
それゆえ本発明に記載されるＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンのアキラルアナログは、ガンのような疾患の処置における使用のためのこのクラスの副溝結合剤の開発において、現在の状況に顕著な改善を表すであろう。この開示に記載されるアキラルアナログの合成は、化学的分割工程を軽減するだけではないであろう（それらのＤＮＡとの相互作用は単純化され得、そしてそれらの細胞毒性強度および抗ガン活性が保持される）。本発明に記載される標的化合物（ｔａｒｇｅｔ　ｃｖｏｍｐｏｕｎｄｓ）の設計は、４−（２−ハロエチル）フェノール（ハライド＝Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）がＤＮＡアルキル化および細胞毒性活性を生み出し得るという報告に基づく（２８ｂ）。４−（２−ハロエチル）フェノールはまた、ＨＸを容易に脱離し、最終的にＤＮＡをアルキル化するスピロ（２，５）オクタ−１，４−ジエン−３−オン中間体を生成することが示された（２８ｃ）。
【００１９】
この開示において、デュオカルマイシン、ＣＣ−１０６５およびアドゼレシンの一連のアキラルｓｅｃｏアナログの調製並びに生物学的およびＤＮＡ相互作用特性の評価が記載される。この発明のｓｅｃｏ−アキラル化合物の構造は、一般クラスＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶとして表される。このアキラル化合物は、多数の非−共有結合的ＤＮＡ結合サブユニット（インドール−インドール、インドール−ベンゾフラン、ピロール−ピロール、トリメトキシインドール、Ｎ−マスタード（Ｈ）および第４表に示されるような「ヘアピン」（Ｊ）基が挙げられるが、これらに限定されない）に複合体化されるアキラルファーマコフォアから構成される。該「ヘアピン」サブユニットは、デュオカルマイシンＡおよびジスタマイシン（３３ａ、ｂ）またはレキシトロプシン（ｌｅｘｉｔｒｏｐｓｉｎｓ）（３３ｃ、ｄ）の１：１且つ隣接する（ｓｉｄｅ−ｂｙ−ｓｉｄｅ）化合物が高度のＤＮＡ配列アルキル化特異性を示すという最近の知見に基づいて設計された。さらに、ジスタマイシンおよびレキシトロプシンに関係する「ヘアピン」デュオカルマイシン−オリゴペプチド複合体は、予測可能且つ高レベルな配列特異性を表すことが示されてきた（３４）。またさらに、レキシトロプシン由来の隣接し且つヘアピンのオリゴペプチドが広範囲に研究されてきた。この研究は、隣接するピロール−ピロール対合がＡ／ＴまたはＴ／Ａ塩基対のいずれかを認識することを明らかにした。それぞれ、ピロール−イミダゾール対合はＣ／Ｇ塩基対を特異的に認識し、一方イミダゾール−ピロール対合はＧ／Ｃ塩基対に特異的に結合する（３５）。最近、本発明者らはまた、イミダゾール−イミダゾール対合が特定のＤＮＡ配列内のＧ／ＣまたはＣ／Ｇのいずれかを認識するであろうことを実証してきた（３６）。さらに、隣接するイミダゾール−イミダゾール対合は、ミスマッチＴ／Ｇ塩基対に結合することに対してよりいっそう選択的であることが見出され、このようなミスマッチＤＮＡ塩基対を標的化する分子を開発する特別な機会をもたらした（３７）。
【００２０】
本発明の要旨
本発明は、ＤＮＡ副溝アルキル化剤（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンの新規アキラルアナログ（一般クラスＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶとして示される）に関する：
【００２１】
【化３】
2004511466.tif 000007
【００２２】
ここでＸは良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド（ｉｏｄｉｄｅ）、メシレート（ｍｅｓｙｌａｔｅ）、トシレート（ｔｏｓｙｌａｔｅ）、アセテート、第四級アンモニウム部分（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ　ａｍｍｏｎｉｕｍ　ｍｏｉｅｔｙ）、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のような）である。
【００２３】
Ｒ１は、ＤＮＡの特定配列とのアキラルｓｅｃｏ−シクロプロパンインドール（ＣＩ）またはアキラルｓｅｃｏ−デュオカルマイシンの相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は第４表に示される。好ましいＤＮＡ結合剤は、基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、ＫおよびＬである。Ｒ１としてはまた、以下が挙げられ得る：ｔ−ブトキシ、ベンジルオキシ、９−フルオレニルメチルオキシまたはアミンに対する他の一般的な保護基。
【００２４】
【表４】
2004511466.tif 000008
【００２５】
第４表．本発明に記載される化合物中の副溝結合コンポーネントの例
Ｒ２およびＲ３は、水素または短鎖アルキル（Ｃ１−Ｃ５）基であり得、好ましくは両方とも水素原子である。該アルキル基は直鎖または分岐鎖であり得、そしてエチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルのような基を含む。
【００２６】
Ｒ４およびＲ５は、水素原子、短いアルキル基、トリフルオロメチル部分、およびアルキルオキシカルボニル基であり得る。好ましいＲ４およびＲ５基は、メトキシカルボニルおよびトリフルオロメチルである。
【００２７】
Ｒは、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、水素原子、４−ニトロベンジルオキシカルボニル、またはＮ’−メチルピペラジニル−Ｎ−カルボニル基のいずれかであり得る。
【００２８】
本発明の別の局面は、ガンの増殖の阻害をもたらすのに十分な時間のあいだおよび条件下で本発明の化合物を患者に投与することによるガンの処置方法に向けられる。
【００２９】
本発明の別の局面は、疾患原因遺伝子の制御領域内の配列を含む特定のＤＮＡ配列への本発明に記載される化合物の認識および標的化のための方法に向けられる。このような薬剤は、ゲノムに特有な配列の同定および潜在的な遺伝子制御特性としての使用への適用を有し得る（３８）。
【００３０】
本発明のさらに別の局面は、薬学的担体と組み合わされた本発明の化合物を含む薬学的組成物を提供する。
【００３１】
本発明の詳細な説明
本発明は、ＤＮＡ副溝および配列選択的アルキル化剤（＋）−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシン（一般クラスＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶおよびＶとして表される）の新規アキラルアナログに関する：
【００３２】
【化４】
2004511466.tif 000009
【００３３】
ここでＸは良い脱離基（クロライド、ブロマイド、ヨージド、メシレート、トシレート、アセテート、第四級アンモニウム部分、メルカプタン、アルキルスルホキシル、またはアルキルスルホニル基、好ましくは、クロライド、ブロマイド、またはヨージド基のような）である。
【００３４】
Ｒ１は、ＤＮＡの特定配列とアキラルｓｅｃｏ−シクロプロパンインドール（ＣＩ）またはアキラルｓｅｃｏ−デュオカルマイシンとの相互作用を増強するための適切な副溝結合剤である。ＤＮＡ結合剤の例は第４表中に与えられる。好ましいＤＮＡ結合剤は、基Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨおよびＩである。Ｒ１としてはまた、以下が挙げられ得る：ｔ−ブトキシ、ベンジルオキシ、９−フルオレニルメチルオキシまたはアミンに対する他の一般的な保護基。
【００３５】
本発明の好ましい化合物が以下に列挙される。
【００３６】
Ｎ−（２−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
Ｎ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
Ｎ−［２−（２−ブロモエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）フェニル］−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］ベンゾフラン−２−カルボキサミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−ブロモエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（Ｎ−メチルピペラジン−Ｎ’−カルバメート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール
４−（クロロエチル）−３−［２−（４−Ｎ，Ｎ−（ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキサミド］フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（２−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（３−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（４−メトキシシンナモイルアミド）フェノール
４−（２−クロロエチル）−３−（２，６−ジメトキシ−５−ピリジル）−Ｅ−エテン（ｅｔｈｅｎ）−１−イルカルボキサミド）フェノール
ジメチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−２，３−ジカルボキシレート
ジメチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−［５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］インドール−２，３−ジカルボキシレート
メチル　４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−２−トリフルオロメチル−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−３−カルボキシレート
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリン
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド）］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド）］グルタロジアミド　ハイドロクロライド
４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン
Ｎ−（ブトキシカルボニル）−４−（２−クロロエチル）−３−ニトロ−ｌ−ナフチルアミン
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフトール
Ｏ−ベンジル−４−（２−クロロエチル）−３−（ブトキシカルボキサミド）フェノール
本発明の一般クラスＩに属する化合物は、当該分野で認められる方法によって調製され得る。一般的な合成方法は、スキーム１において記載され且つ図解される。
【００３７】
【化５】
2004511466.tif 000010
【００３８】
スキーム１．一般クラスＩに属する本発明の化合物の合成
提案されるアキラルｓｅｃｏ−ＣＩ化合物のための合成方法は、容易に入手可能なジエチル２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）マロネート（４ｃ）から出発する。エタノール中のＮａＯＨを用いたジエチル２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）マロネートの処理（２５−８０℃）は、好ましくは還流し、次いで酸性化および緩やかな加温（２５−１００℃）（好ましくは還流しながら）を行い、この溶液は所望の４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル酢酸を９５％収率で与えた。ＴＨＦ中で０−５０℃にて（好ましくは室温にて）ボランを用いるカルボン酸の選択的還元は、２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エタノールを９５％の収率で生成した。次いでアルコールは、ＣＨ２Ｃｌ２中でトリフェニルホスフィンおよびカーボンテトラクロライドを用いて、０−５０℃にて（好ましくは室温にて）塩素化され、２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライドを９７％収率で与えた。２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルブロマイドは、２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エタノールをアセトニトリル中でトリフェニルホスフィンおよびカーボンテトラブロマイドと反応させた後、９２％の収率で得られた。２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライドおよび２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルブロマイドの触媒的還元は、大気圧にて、また０−５０℃にて（好ましくは室温にて）、ＴＨＦ中で１０％　Ｐｄ／Ｃを用いて、それぞれ２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドおよび２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイドを与える。２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイドは、０−５０℃にて（好ましくは室温にて）、ＥＤＣＩ［１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド］およびＤＭＦの存在下において、５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸と直接的に結合され、化合物４−（２−ブロモエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後の２工程に対して２％の低い収率で与えた。同様に、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドの５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸とのＥＤＣＩの存在下におけるカップリングは、４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールをカラムクロマトグラフィーの後に２工程に対して２８％の収率で与えた。
【００３９】
０−５０℃での（好ましくは５℃での）トリエチルアミンの存在下における４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールの４−ニトロベンジルクロロホルメートとの反応は、所望されるプロドラッグ４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールを８４％の収率で与えた。さらに、４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールの４−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応後、０−５０℃での（好ましくは５℃で、その後室温まで徐々に加温する）Ｎ−メチルピペラジンおよびトリエチルアミンとの反応は、カルバメートプロドラッグ４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（Ｎ−メチルピペラジン−Ｎ’−カルバメート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールを、シリカゲルカラム精製後、３７％の収率で与えた。
【００４０】
ネトロプシン部分を含むアキラルｓｅｃｏ−化合物の調製において、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドは、０−５０℃にて（好ましくは室温にて）、ＤＭＦ中でＥＤＣＩの存在下においてＮ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）−ピロール−２−カルボン酸と反応され、シリカゲルカラム精製後、所望される化合物Ｎ−（２−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドを６％の収率で与えた。同様に、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイドのＮ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）−ピロール−２−カルボン酸とのカップリングは、Ｎ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドを４０％の収率で与えた。トリメチルアミンの存在下における０−５０℃での（好ましくは５℃での）４−ニトロベンジルクロロホルメートとのＮ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミド−ピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドの続く反応は、プロドラッグＮ−［２−（２−ブロモエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）フェニル］−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドを１２％の収率で与えた。
【００４１】
０−５０℃での（好ましくは室温での）２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドの２−（４−（Ｎ，Ｎ−ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボン酸または５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸とのＥＤＣＩを用いる反応は、カラムクロマトグラフィーの後、所望の化合物４−（２−クロロエチル）−３−［２−（４−Ｎ，Ｎ−（ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキサミド］フェノールおよび４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノールをそれぞれ１１および１３％の収率で与えた。
【００４２】
本発明の化合物の代替的な合成経路がスキーム２に示される。例えば、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノールはまた、１０−１００ｐｓｉ（好ましくは５５ｐｓｉ）、０−３５℃（好ましくは室温）での酸化白金上における接触水素化により２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライドのニトロ基のアミノ基への選択的還元によって、調製された。生じるアミンは、０−５０℃（好ましくは室温）にて、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）およびジイソプロピルエチルアミンの存在下において、５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸と直接的にカップリングされ、ベンジル ４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェニルエーテルを６６％の収率で与えた。ベンジル基は、大気圧で、０−５０℃（好ましくは室温）における１０％Ｐｄ−Ｃ上の接触水素化によって取り除かれ、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノールを５０％の収率で与えた。
【００４３】
【化６】
2004511466.tif 000011
【００４４】
スキーム２．アキラルｓｅｃｏ−ＣＩ誘導体の合成
本発明の一般クラスＩ化合物のアナログを含む安息香酸マスタードの調製は、スキーム３に図示される。
【００４５】
【化７】
2004511466.tif 000012
【００４６】
スキーム３．本発明の一般クラスＩ化合物のアナログを含む安息香酸マスタード（ｂｅｎｚｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｕｓｔａｒｄ）の調製
２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドは、ＥＤＣＩを用いて０−５０℃（好ましくは室温）にてＤＭＦ中で５−ニトロインドール−２−カルボン酸とカップリングされ、４−（２−クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノールを１４％の収率で与えた。４−（２−クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノールの０−５０℃（好ましくは室温）でのＴＨＦ中で５％Ｐｄ−Ｃを用いる続く接触水素化はアミンを与え、これを０−５０℃（好ましくは室温）で安息香酸マスタード（ｐ−Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミノ安息香酸）およびＥＤＣＩと直接的に反応させて、所望される化合物４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールを２４％の収率で与えた。０−５０℃（好ましくは５℃）での４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールの４−ニトロベンジルクロロホルメートおよびトリエチルアミンとの反応は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後、プロドラッグ４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールを１３％の収率で与えた。調製されたすべての化合物の構造は、ＩＲ、１Ｈ−ＮＭＲ（１Ｈおよび１３Ｃ）スペクトロスコピーおよびＦＡＢマススペクトロメトリー（正確な質量測定を含む）を用いて確かめられた。
【００４７】
本発明に記載される一般クラスＩＩに属する化合物は、当該分野で認められる方法によって合成され得る。一般合成スキームは、スキーム４に示される。
【００４８】
【化８】
2004511466.tif 000013
【００４９】
スキーム４．一般クラスＩＩの化合物の合成
一般クラスＩＩの化合物を合成する際に、４−クロロ−３−ニトロアニリンが出発物質として使用された。そのアミノ部分は、ベンジルオキシカルボニルまたは「Ｚ」保護基で保護された。所望される黄色固体生成物は、溶媒としての蒸留ジクロロメタンと共にベンジルクロロホルメートおよびトリエチレンアミンを用いて、アニリンを乾燥管（ｄｒｙｉｎｇ　ｔｕｂｅ）のもとで３０−１００℃にて、好ましくは還流しながら加温することによって、４６％の収率で与えられる。５０−１５０℃、好ましくは１１０℃での窒素雰囲気下における乾燥ジメチルスルホキシド中における保護クロライドのジエチルマロネートおよび水素化ナトリウムとの反応は、所望されるジエステルを６３％収率で与えた。このジエステルの酢酸部分への変換は、このジエステルをエタノールおよび水性１０％水酸化ナトリウム中で４時間５０−１００℃にて、好ましくは還流しながら加温することによって、９１％収率で達成された。酸ワークアップ後に、該酸は粘性黄色オイルを提供した。カルボン酸は、蒸留ＴＨＦを溶媒として用いる窒素雰囲気下における０−５０℃（好ましくは５℃、その後徐々に室温まで加温）でのボラン／ＴＨＦを用いる還元を介して、第一級アルコールへ変換された。無色油性アルコールが９３％収率で得られた。次いでこのアルコールは、トリフェニルホスフィン、溶媒としてカーボンテトラクロライドおよび蒸留ジクロロメタンを用いる０−５０℃（好ましくは室温）での窒素雰囲気下にける反応を介して、対応する第一級クロライドへ変換された。オレンジ色／黄色油性クロライド（ｃｈｌｏｉｄｅ）が８１％収率で得られた。このクロライドのニトロ部分は、１０−１００ｐｓｉ（好ましくは５５ｐｓｉ）で０−３５℃（好ましくは室温）におけるＰｔＯ２上での水素化によって、アミンに還元された。この不安定なアミンは直ぐに、０−５０℃（好ましくは室温）にて、溶媒としての蒸留ジクロロメタンと共にトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）および蒸留Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下において、５，６，７−トリメトキシインドールカルボン酸（ＴＭＩ）へカップリングされた。透明泡沫状生成物が３６％収率で生産された。Ｚ保護基は、０−３５℃（好ましくは室温）におけるＴＨＦ中の炭素上１０％Ｐｄ上における水素化によって、取り除かれた。アキラルアミノｓｅｃｏ−ＣＩＴＭＩ化合物は、粘性無色オイルとして８０％の収率で与えられた。
【００５０】
本発明の一般クラスＩＩＩに属する化合物はまた、当該分野で認められる方法によって調製され得る。一般的な合成方法は、スキーム５において記載され且つ図解される。
【００５１】
【化９】
2004511466.tif 000014
【００５２】
スキーム５．一般クラスＩＩＩに属する本発明の化合物の合成
一般クラスＩＩＩの化合物の合成は、０−５０℃（好ましくは室温）における２−アミノ−４−クロロ−５−ニトロフェノールの、ＤＭＦ中の炭酸カリウムおよびテトラ−Ｎ−ブチルアンモニウムヨージドの存在下における臭化ベンジルとの反応で始まり、２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロアニリンを５６％収率で与える。２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロアニリン（２５−８０℃）の、好ましくは還流しながら、トリエチルアミン存在下におけるベンジルクロライドとの続く反応は、Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロフェニル）ベンズアミドを８５％収率で提供した。８０−１５０℃（好ましくは１１０℃）におけるＤＭＳＯ溶液中における一晩中のＮ−（２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロフェニル）ベンズアミドのナトリウムジメチルマロネートアニオン（ＤＭＳＯ中における水素化ナトリウムとのジメチルマロネートの反応によって生成される）との反応は、ジメチル２−（５−ベンズアミド−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルマロネートを３６％収率で与えた。ジメチル２−（５−ベンズアミド−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルマロネートが２５−１００℃における、好ましくは還流しながら、エタノール中のＮａＯＨで処理され、次いでＨＣｌを用いる酸性化および２５−１００℃での穏やかな加温（好ましくは還流しながら）が行われ、所望される化合物２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニル酢酸が９３％の収率で提供された。ＴＨＦ中ボランを用いる０−５０℃（好ましくは５℃で、次いで徐々に室温まで加温）での２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニル酢酸の処理は、選択的にこのカルボン酸基を、５２％収率でアルコール、２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルエタノールに還元した。
【００５３】
２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルエタノールは、メタノール中、ジメチルアセチレンジカルボキシレートと共に２５−１００℃にて加温され、好ましくは還流しながら、ジメチル２−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートを９６％収率で与えた。メチレンクロライド中における四塩化炭素およびトリフェニルホスフィンを用いる０−５０℃、好ましくは室温でのジメチル　２−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートの続く処理は、ジメチル２−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートを８５％収率で提供した。次いで、ジメチル２−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートは、４０−１２０℃（好ましくは７０℃）にてＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中のパラジウム（ＩＩ）アセテートで処理され、ジメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２，３−ジカルボキシレートを２３％収率で与えた。水素の大気圧における０−３５℃（好ましくは室温）でのＴＨＦ中の１０％パラジウム上炭素（ｐａｌｌａｄｉｕｍ−ｏｎ−ｃａｒｂｏｎ）を用いるジメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２，３−ジカルボキシレートの処理はアミン中間体を与え、これは０−５０℃（好ましくは室温）で、３日間室温にてＤＭＦ中のＥＤＣＩの存在下において５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸および５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸と直接的にカップリングされ、目的のアキラル−ｓｅｃｏデュオカルマイシンアナログジメチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−（５，６，７−トリエトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−２，３−ジカルボキシレートおよびジメチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−［５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］インドール−２，３−ジカルボキシレートをそれぞれ２０％および１６％収率で与えた。
【００５４】
トリフルオロメチル−含有アナログの合成において、２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルエタノールは、３０−７５℃にて、好ましくは還流しながら、メタノール中におけるメチル４，４，４−トリフルオロ−２−ブチノエート（ｂｕｔｙｎｏａｔｅ）と反応され、メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブタノネートを８７％の収率で与えた。塩化メチレン中での四塩化炭素およびトリフェニルフォスフィンとの０−５０℃（好ましくは室温）におけるメチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノナートの続く反応は、メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテネノナートを５７％の収率で与えた。次いで、メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノナートは、５０−１２０℃（好ましくは７０℃）にて、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中でパラジウム（ＩＩ）アセテートで処理され、メチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−２−トリフルオロメチル−５−ニトロインドール−３−カルボキシレートを２９％の収率で与えた。水素大気圧における０−３５℃（好ましくは室温）でのＴＨＦ中の１０％パラジウム上炭素でのメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２−トリフルオロメチル−３−カルボキシレートの処理は、アミン中間体を与え、このアミン中間体は、３日間室温におけるＤＭＦ中のＥＤＣＩの存在下において、５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸と０−５０℃、好ましくは室温において直接的にカップリングされ、目的のアキラルｓｅｃｏ−デュオカルマイシンアナログ メチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−２−トリフルオロメチル−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−３−カルボキシレートを２％収率で与えた。
【００５５】
本発明に記載される一般クラスＩＶの化合物はまた、当該分野で認められる方法を用いて調製され、また一般スキームはスキーム６において与えられる。
【００５６】
【化１０】
2004511466.tif 000015
【００５７】
スキーム６．一般クラスＩＶの化合物の調製
ＤＭＳＯ中の水素化ナトリウムを用いる２０−１５０℃（好ましくは１１０℃）におけるｔ−ブチルエチルマロネートとの１−クロロ−２，４−ジニトロナフタレン（３９）の反応は、ジエステルを７８％収率で与えた。塩酸を用いる０−１００℃（好ましくは室温）での非対称的な（ｕｎｓｙｎｍｍｅｔｒｉｃａｌ）ジエステルの処理は、エチルエステルを７０％の収率で与えた。硫化ナトリウムとの２０−１００℃、好ましくは還流しながらの４−ニトロ基の還元、続くベンジルオキシカルボニル「Ｚ」基を用いる０−７０℃、好ましくは０℃でのアミノ基の保護は、保護エステルをそれぞれ１１％および２６％で与えた。０−１００℃、好ましくは還流温度におけるエステルの加水分解、続くボランを用いる０−５０℃、好ましくは室温におけるカルボン酸の還元は、所望されるアルコールをそれぞれ１１％および５８％で与えた（ｇａｃｅ）。四塩化炭素およびトリフェニルフォスフィンを用いる０−５０℃、好ましくは室温におけるこのアルコールの処理は、クロライドを９６％収率で与えた。１０−１００ｐｓｉ、好ましくは５５ｐｓｉでの０−３５℃、好ましくは室温におけるＰｔＯ２上での水素化によるこのニトロ基の還元は、アミン中間体を与えた。このアミンは、ＰｙＢＯＰおよびＨｕｎｉｇ’ｓ塩基の存在下において、０−５０℃、好ましくは室温にてトリメトキシインドール−２−カルボン酸とカップリングされ、所望されるアミドを４０％収率で与えた。大気圧における０−３５℃、好ましくは室温での１０％Ｐｄ／Ｃ上での水素化によるＺ保護基の除去は、所望されるアキラルｓｅｃｏ−アミノＣＩ−ＴＭＩ生成物を１８％収率で与えた。
【００５８】
本発明の化合物は抗ガン剤として有用である。
【００５９】
共有結合付加物の形成は、当該分野で認められる方法によって測定され得る。例えば、ＤＮＡの副溝内のプリン−Ｎ３のアルキル化は、熱的に誘導されるＤＮＡ鎖切断の形成を介して測定され得（４０）、また本発明の化合物の共有結合配列特異性は、Ｔａｑポリメラーゼストップアッセイを使用して測定され得る（４１）。
【００６０】
本発明の化合物は、抗ガン剤として有用であり得る。これらは特に、腫瘍細胞に対する細胞増殖抑制特性を示し、その結果例えば様々なガン（例えば、癌腫（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（乳房の癌腫、肺の癌腫、膀胱の癌腫、膵臓の癌腫、結腸の癌腫）、卵巣、結腸、直腸、前立腺、および子宮内膜癌（ｃａｎｃｅｒ）のような）の増殖を抑制するのに有用であり得る。本発明の化合物が適用を見出し得る他のガンは、例えば、肉腫（例えば、軟組織および骨肉腫）、および血液学的悪性疾患（白血病のような）である。
【００６１】
本発明の化合物は、通常の経路（例えば、非経口に（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ）（例えば、注入の静脈内注射（可溶性の場合）、筋肉内、鼻腔内、皮内、皮下、腸管外（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ）、腸内など）によって投与され得る。投与の経路に依存して、この薬学的組成物は保護コーティングを必要とする。
【００６２】
本発明の薬学的組成物は通常、慣用的方法に従って調製され、そして薬学的に適切な形態で投与される。例えば、注入の静脈注射のための溶液は、担体として例えば滅菌水を含み得、または好ましくは、それらは滅菌水性等張生理食塩水または糖溶液の形態をとり得る。
【００６３】
筋肉内注射のための懸濁液または溶液は、活性化合物と共に、薬学的に許容される担体（例えば、滅菌水、オリーブオイル、エチルオレエート、グリコール類、および所望の場合適切な量の塩酸リドカイン）を含み得る。
【００６４】
適用のための局所的な形態（例えば、皮膚科学的処置における使用のためのクリーム、ローションまたはペースト）において、有効成分が慣用的な油脂性（ｏｌｅａｇｉｍｏｕｓ）または乳化性賦形剤と混合され得る。
【００６５】
固体経口形態（例えば、タブレットおよびカプセル）は、有効成分と共に、希釈剤（例えば、ラクトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン）；滑沢剤（例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸（ｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄ）、マグネシウムまたはカルシウムストレアート（ｓｔｒｅａｔｅ）、および／またはポリエチレングリコール）；結合剤（例えば、デンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）；解離剤（ｄｉｓａｇｇｒｅｇａｔｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）（例えば、デンプン、アルギン酸、アルギネート、ソジウムスターチグリコレート）；飽和剤（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｉｎｇ　ｍｉｘｔｕｒｅｓ）；色素、甘味料；湿潤剤（例えば、レシチン、ポリソルベート、ラウリルサルフェート；および一般的に、薬学的処方において使用される無毒且つ薬理学的に不活性な物質を含み得る。上記薬学的製剤は、公知の方法（例えば、混合、顆粒化、タブレット化、糖コーティング、またはフィルムコーティングによる）で製造され得る。
【００６６】
その用量は患者の年齢、体重、および状態および投与経路に依存する。例えば、成人ヒトへの投与に適切な用量は、一日に１−４回用量で、約０．１から約２００−２５０ｍｇまでの範囲をとり得る。
【００６７】
以下の実施例は本発明を例示するが、限定しない。
【００６８】
実施例１
２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイドおよび２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドの調製
ジエチル２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）マロネート（４ｃ）（２．００ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を含む丸底フラスコへ、ＥｔＯＨ（４５ｍＬ）および１０％　ＮａＯＨ（６０ｍＬ）を添加し、暗褐色溶液を生成した。この溶液を３時間還流し、そしてＴＬＣ（ＣＨＣｌ３）によってチェックした（このとき、この溶液はわずかに黄色がかった透明であった）。ＥｔＯＨを減圧下において取り除き、黄色懸濁液を形成し、そして十分なＴＨＦ（３０ｍＬ）を添加し、透明黄色溶液を作製し、これを氷浴中に置き、そしてかき混ぜた。６Ｍ　ＨＣｌ（３０ｍＬ）をｐＨ１に達するまでこの溶液へゆっくり添加した。この淡橙色溶液をさらに１時間還流し、このとき２つの層が形成された。上部ＴＨＦ層を回収し、そしてこの水溶液をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥した。次いでこの溶液を濾過し、そしてこの濾液を濃縮し、４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル酢酸を橙色固体として作製した。次いでこの固体を高真空に置き、そして乾燥した（１．４１ｇ、４．９１ｍｍｏｌ、９５％）。
【００６９】
【数１】
2004511466.tif 000016
【００７０】
４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル酢酸（６．３８ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）を新たに蒸留された乾燥ＴＨＦ（６０ｍＬ）に溶解し、Ｎ２下において氷浴中で攪拌した。５分後、カニューレを用いてボラン（５５．６ｍＬ、５５．５ｍｍｏｌ、１Ｍ　ＴＨＦ溶液）を攪拌溶液上に置かれた滴下漏斗へ移した。次いでＢＨ３−ＴＨＦ溶液をこの溶液へゆっくりと添加し、多くの起沸を生じさせた。この赤色溶液を１０分間氷浴中で攪拌しまま放置し、次いで４ｈの間、室温にて攪拌させた。この反応をＴＬＣ（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックした。起沸が生じなくなるまで、水（１５０ｍＬ）をこのフラスコにゆっくり添加した。無水硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥し、そして重力濾過した。次いでこの溶液を濃縮し、褐色オイルを生産した。カラムクロマトグラフィー（溶解度／ヘキサン勾配溶出のためのＳｉＯ２，１０−６０％　ＥｔＯＡｃ／５％　ＣＨＣｌ３）は、２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エタノール（５．７２ｇ、２１．０ｍｍｏｌ、９５％）を帯褐色固体として与えた。
【００７１】
【数２】
2004511466.tif 000017
【００７２】
トリフェニルホスフィン（１．９８ｇ、７．５５ｍｍｏｌ）、ＣＣｌ４（２．１８ｍＬ、２２．６２ｍｍｏｌ）および乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１３．７ｍＬ）を丸底フラスコ中の２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エタノール（１．０３ｇ、３．７７ｍｍｏｌ）へ添加した。桃色沈殿物を含む赤色溶液が形成されたが、３０分後に溶解した。この溶液を窒素の正圧下において一晩中攪拌させた。この溶液をＴＬＣ（２０％エチルアセテート／石油エーテル）によってチェックし、次いで回転エバポレーターを用いて濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーおよび１０％　エチルアセテート、５％ＣＨＣｌ３、および８５％　石油エーテル溶媒系を用いて、褐色油性残渣を精製した。２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライドは、冷蔵庫の中に置くと凝固する濃厚な帯黄色オイルとして単離された（１．０６ｇ、３．６４ｍｍｏｌ、９７％　収率）。
【００７３】
【数３】
2004511466.tif 000018
【００７４】
Ｐｄ／Ｃ　１０％（４５ｍｇ）を２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（１３２ｍｇ、０．４５３ｍｍｏｌ）へ添加した。次いでこの混合物をフリーザー冷却ＴＨＦ（３０ｍＬ）中で懸濁した。この懸濁液を脱気し、そして水素を用いて３回パージし、そして室温で大気圧下において還元する。３ｈ後、その溶液をＴＬＣ（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックし、そしてこの溶液をセライト上で吸引（ｓｕｃｔｉｏｎ）濾過した。この濾過残渣をさらなるＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そしてその濾液を減圧下において濃縮し、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドを白色固体として得た（６０．７ｍｇ、０．３５４ｍｍｏｌ、７８％）。
【００７５】
【数４】
2004511466.tif 000019
【００７６】
２−（２−アミノ−４−ベンジルオキシフェニル）エチルクロライド（４４８ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２１ｍｇ、０．１７ｍｏｌ）、ジ−ｔ−ブチルジカルボナート（４４７ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（５ｍＬ）中に溶解した。この溶液を６０時間室温にて乾燥管の下で攪拌した。溶媒の除去の際に、その残渣をクロロホルム（３０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）に分配した。この有機層を０．１Ｍ　ＨＣｌ（５ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥した。有機抽出物の濃縮によって、シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム）によって精製される油性残渣を得、所望の生成物Ｏ−ベンジル−４−（２−クロロエチル）−３−（ブトキシカルボキサミド）フェノールを白色固体として得た（２１３ｍｇ、３４．５％）。
【００７７】
【数５】
2004511466.tif 000020
【００７８】
トリフェニルホスフィン（１．９２ｇ、７．３３ｍｍｏｌ）、ＣＢｒ４（７．２８ｇ、２１．９６ｍｍｏｌ）および乾燥ＣＨ３ＣＮ（１６．６ｍＬ）を２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エタノール（１．００ｇ、３．６６ｍｍｏｌ）を含む丸底フラスコへ添加した。窒素の正圧下で一晩中攪拌させ、赤色溶液を生じた。この溶液をＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によってチェックし、回転エバポレーターで濃縮した。過剰なＣＢｒ４を真空ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留（ｖａｃｕｕｍ　ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ　ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）（６０℃、０．２５ｍｍＨｇ）によって取り除いた。カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、１０％　ＥｔＯＡｃ／５％　ＣＨＣｌ３／８５％　石油エーテル勾配溶出）は、２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルブロマイドを帯褐色固体（１．３３ｇ、３．５６ｍｍｏｌ、９２％）として与えた。
【００７９】
【数６】
2004511466.tif 000021
【００８０】
Ｐｄ／Ｃ　１０％（２７０ｍｇ）および２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルブロマイド（５４０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ中で共に混合した。その混合物をフリーザー冷却ＴＨＦ（１５ｍＬ）中に懸濁した。次いでこの溶液を脱気し、そして３回およびパージし、そして大気圧および室温下において還元させた（２４ｈ）。この溶液をＴＬＣ（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックし、そしてセライト上で吸引濾過した。この濾過パッドをＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、そしてその濾液を真空において濃縮し沈殿物を得、これを乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて２回コエバポレートさせた。２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイド（オフホワイト色固体）を、さらなる使用まで高真空に置いた（５４０ｍｇ、２．５０ｍｍｏｌ、１００％）。
【００８１】
【数７】
2004511466.tif 000022
【００８２】
実施例２
Ｎ−（２−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドおよびその誘導体の調製
冷メタノール（１００ｍＬ）をメチル　Ｎ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ニトロピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキシレート（３．００ｇ、９．８ｍｍｏｌ）および５％　Ｐｄ／Ｃ（１．２ｇ）の混合物へ添加した。この反応混合物を１８ｈの間水素化し、そしてＴＬＣ（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックした。完全な還元の後、このアミンをセライトおよび焼結漏斗上で吸引濾過し、そしてその濾液を乾燥するまでｒｏｔｅｖａｐ留去し（ｒｏｔｅｖａｐｐｅｄ）、そして２回コエバポレートさせた（ｃｏｅｖａｐｏｒａｔｅｄ）。
【００８３】
蒸留メチレンクロライド（３０ｍＬ）およびブチリルクロライド（１．００ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ）を、シリンジによって、セプタム（ｓｅｐｔｕｍ）を通して滴下漏斗へ添加した。次いで、このアミンを乾燥ＴＨＦ（７５ｍＬ）中に溶解し、そしてＥｔ３Ｎ（１．５ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。このアミン混合物を氷浴中にて５分間攪拌し、そして次いでこのブチリルクロライド混合物をゆっくり滴下した。淡桃色混合物が生じ、そしてこれをドライライト（ｄｒｉｅｒｉｔｅ）乾燥管の下一晩中（１８ｈ）攪拌させた。次いでこのフラスコに水（１００ｍＬ）およびクロロホルム（１００ｍＬ）を添加し、そしてその内容物を攪拌した。この溶液を分液漏斗へ加えた。２すくい（ｓｃｏｏｐｓ）の塩を添加し、そしてその分液漏斗を振り混ぜ、空気抜きした（ｖｅｎｔｅｄ）。有機層を回収し、そして水層をクロロホルム（５０ｍＬ）を用いてさらに抽出した。次いで無水硫酸ナトリウムを用いて、この混合させたクロロホルム抽出物を乾燥した。この溶液を５００ｍＬ丸底フラスコ中へ重力濾過し、そして乾燥するまでｒｏｔｅｖａｐ留去し、淡黄褐色泡沫を形成した。カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、０−２％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３グラディエント溶出）によって、メチルＮ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキシレートをオフホワイト色泡沫として得た（６．５１ｇ、１８．８ｍｍｏｌ、８２％）。
【００８４】
【数８】
2004511466.tif 000023
【００８５】
化合物メチルＮ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキシレート（２．００ｇ，５．７８ｍｍｏｌ）をメタノール（７０ｍＬ）および１０％ＮａＯＨ（７０ｍＬ）中に溶解し、そしてこの溶液を加温し、３ｈの間還流した。還流後、メタノール層をｒｏｔｅｖａｐ留去した（ｒｏｔｏｖａｐｐｅｄ　ｄｏｗｎ）。次いで、氷および水（４０ｍＬ）をこの溶液へ添加した。次いで３モルＨＣｌ（約５０ｍＬ）を、この溶液がｐＨ１に達するまでゆっくり添加した。この反応液を氷浴中で冷却した後、沈殿したＮ−メチル−４−（４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール２−カルボン酸を吸引濾過によって回収し、そして真空オーブン（０．２ｍｍＨｇにて５０℃）中で一晩中乾燥し、ベージュ色粉末（１．５８ｇ，４．７６ｍｍｏｌ，８２％）を生成した。
【００８６】
【数９】
2004511466.tif 000024
【００８７】
Ｎ−（２−（２−クロロエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド
２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）を含む反応フラスコへＥＤＣＩ（８３８ｍｇ，４．３７ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボン酸（４８５ｍｇ，１．４６ｍｍｏｌ）、および乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この溶液をＮ２雰囲気下室温にて４８ｈの間攪拌させた。４０℃および０．１ｍｍＨｇにおいてｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置を用いて溶媒を取り除いたところ、褐色オイルが残った。この油性残渣を、ＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）および水（２５ｍＬ）を用いて分配した。その水層をＣＨＣｌ３（各７０ｍＬ）で３回抽出し、そして混合された有機層を５％水性重炭酸ナトリウムで洗浄し、次いで乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。この濾液の濃縮は残渣を与え、これは１０％エチルアセテート／ＣＨＣｌ３溶媒系を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製され、ここで、ＥｔＯＡｃのパーセンテージは５０ｍＬごとに１０％増加で１００％ＥｔＯＡｃになるまで増大され、これに対してＭｅＯＨは５０ｍＬごとに１０％増加で添加された。所望の化合物は、白色固体として得られた（４１．６ｍｇ，０．０８４ｍｍｏｌ，６％）。
【００８８】
【数１０】
2004511466.tif 000025
【００８９】
２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルブロマイド（２５０ｍｇ，１．１５ｍｍｏｌ）を含む反応フラスコへＥＤＣＩ（１．４９ｇ，７．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチル−４−（Ｎ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）−ピロール−２−カルボン酸（８３０ｍｇ，２．５０ｍｍｏｌ）および乾燥ＤＭＦ（１２ｍＬ）を添加した。この溶液をＮ２の雰囲気下に保ち、そして攪拌させた（４８ｈ）。ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置を用いてＤＭＦを取り除いた。次いで、残った油性残渣を、ＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）および水（２５ｍＬ）を使用して分配した。ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を用いてこの水層を抽出し、ＮａＨＣＯ３で洗浄し、そして乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。この濾液の濃縮は残渣を与え、これは２０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨＣｌ３溶媒系を用いるカラムクロマトグラフィーによって精製され（ここで、エチルアセテートは５０ｍＬごとに１０％増加で１００％ＥｔＯＡｃに達するまで増大され、これに対してＭｅＯＨは５０ｍＬごとに１０％増加で添加された）、Ｎ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドをオフホワイト色泡沫として与えた（２３０ｍｇ、０．４６２ｍｍｏｌ、４０％）。
【００９０】
【数１１】
2004511466.tif 000026
【００９１】
ｐ−ニトロベンジルクロロホルメート（６０．９ｍｇ，０．２８２ｍｍｏｌ）をＮ−（２−（２−ブロモエチル）−４−ヒドロキシフェニル）−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミド（６０ｍｇ，０．１１３ｍｍｏｌ）の溶液へ添加し、そして乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（６ｍＬ）中に溶解した。この混合物を溶解するために、この溶液を少し加温しなければならなかった。トリエチルアミン（３２μＬ）を、窒素下氷浴中で攪拌しながらゴムセプタム（ｒｕｂｂｅｒ　ｓｅｐｔｕｍ）で密封された溶液へ添加した。この溶液を一晩中攪拌させ、そしてその反応液をＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックした。この反応混合物をＣＨＣｌ３（１５０ｍＬ）で希釈し、そして５％ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）およびブライン（３０ｍＬ）を用いて洗浄した。この有機層を回収し、そして無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥した。この溶液を重力濾過し、そしてその濾液を濃縮して黄色固体を生成し、これをプレパラティブＴＬＣ（１０％ＣＨＣｌ３）によって精製し、Ｎ−［２−（２−ブロモエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）フェニル］−ｌ−メチル−４−（ｌ−メチル−４−ブタンアミドピロール−２−カルボキサミド）ピロール−２−カルボキサミドを白色粉末（８．４ｍｇ，０．０１３ｍｍｏｌ，１２％）として生成した。
【００９２】
【数１２】
2004511466.tif 000027
【００９３】
実施例３
４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールおよびその誘導体の調製
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライド（３１０ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ−Ｃ（２３３ｍｇ）の懸濁液を、室温および大気圧にて水素化した。濾過による触媒の除去、および濾液の濃縮によって、アミンを白色固体として得た。５−ニトロインドール−２−カルボン酸（３７２ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（１．０４ｇ，５．４２ｍｍｏｌ）および乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この反応混合物を、窒素雰囲気下および室温にて２日間攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を用いてこの溶媒を除去し、そしてその残渣をＣＨＣｌ３および水中において分配した。エチルアセテートを用いてこの水層を抽出した（二回）。この混合された有機抽出物を乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。褐色油性残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（０−＞５０％エチルアセテート：クロロホルム５０ｍＬごと）によって精製し、そして４−（クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノールを黄色固体（７０ｍｇ，１４％）として単離した。
【００９４】
【数１３】
2004511466.tif 000028
【００９５】
４−（２−クロロエチル）−３−（５−ニトロインドール−２−カルボキサミド）フェノール（２５０ｍｇ，０．６９ｍｍｏｌ）および１０％　Ｐｄ−Ｃ（１８７ｍｇ）の新たに蒸留されたＴＨＦ（２０ｍＬ）懸濁液を、大気圧および室温にて一晩中水素化した。セライトのパッド上でのこの懸濁液の吸引濾過および真空中におけるこの濾液の濃縮は、アミンを黄色固体として与えた。この固体へｐ−Ｎ，Ｎ−ビス−（２−クロロエチル）アミノ安息香酸（２１９ｍｇ，０．８４ｍｍｏｌ），ＥＤＣＩ（４３６ｍｇ，２．２８ｍｍｏｌ）および新たに蒸留された乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この反応混合物を、窒素下および室温にて２日間攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を用いて、この反応混合物を濃縮し、そしてその残渣をクロロホルムおよび水に分配した。この水層を、エチルアセテートでさらに二回抽出した。この混合された有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして濃縮した。この残渣をカラムクロマトグラフィー（０−＞クロロホルム中の１０％メタノール；シリカゲル）によって精製した。４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールを白色固体（９６ｍｇ，２４％）として得た。
【００９６】
【数１４】
2004511466.tif 000029
【００９７】
０℃および乾燥管の下において、乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）および乾燥トリエチルアミン（１７．５μＬ，０．１２ｍｍｏｌ）中の４−（２−クロロエチル）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノール（３６ｍｇ，０．０６３ｍｍｏｌ）溶液へ、ニトロベンジルクロロホルメート（２０．３ｍｇ，０．０９４ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を窒素雰囲気下において保ち、そして室温に一晩中加温した。その後、さらなる量のニトロベンジルクロロホルメート（１０．２ｍｇ，０．０４７ｍｍｏｌ）を添加した。０．５時間後、この反応混合液を濃縮し、そしてその残渣をエチルアセテート中に溶解し、そしてその溶液を５％ＮａＨＣＯ３で洗浄し、次いで乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。この残渣をプレパラティブＴＬＣ（１０％　ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ３）によって精製し、４−（クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［［５−（４−ビス−（２−クロロエチル）アミノ）ベンズアミド］インドール−２−カルボキサミド］フェノールをオフホワイト色固体（６．１　ｍｇ，１３％）として得た。
【００９８】
【数１５】
2004511466.tif 000030
【００９９】
実施例４
４−（２−ブロモエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールおよび４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールおよびその誘導体の調製
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェノール）エチルブロマイド（３００ｍｇ，０．８９３ｍｍｏｌ）を冷ＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。その溶液へ１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１５０ｇ）を添加し、次いで真空下においてＨ２を用いて３回パージした。この溶液を、Ｈ２下において１６時間、室温および大気圧にて攪拌した。焼結漏斗（ｃｉｎｔｅｒ　ｆｕｎｎｅｌ）中のＣｅｌｉｔｅパッドを介してこの溶液を濾過し、そしてＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。この濾液を減圧下にて濃縮し、そして乾燥ＣＨ２Ｃｌ２を用いて２回コエバポレートした。このアミンへ５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸（０．２８６ｇ，０．８９４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（０．５１４ｇ，２．６８ｍｍｏｌ）を添加し、そして乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解した。この溶液をＮ２正圧下および室温にて３日間攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（４０℃，０．１ｍｍＨｇ）を用いてＤＭＦを取り除いた。この油性溶液をクロロホルム（２００ｍＬ）、エチルアセテート（５０ｍＬ）中に溶解し、そして水（５０ｍＬ）および５％重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。この有機層を回収し、硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において濃縮した。４−（２−ブロモエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールをシリカゲルカラム上で精製した。この生成物は、オフホワイト色固体（８．１ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ，２％）であった。
【０１００】
【数１６】
2004511466.tif 000031
【０１０１】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（０．４０６８ｇ，１．４０ｍｍｏｌ）を冷ＴＨＦ（−２０℃）中に溶解した。その溶液へ１０％　Ｐｄ／Ｃ（０．２００ｇ）を添加し、次いでＨ２を用いて真空下において３回パージした。この溶液を、Ｈ２下において室温および大気圧にて４５時間攪拌した。この溶液をシンター漏斗中のＣｅｌｉｔｅパッドを介して濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２を用いて洗浄した。この濾液を減圧下において濃縮し、そして乾燥ＣＨ２Ｃｌ２を用いて２回コエバポレートし、白色固体を生成した。このアミンへ５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸（０．３６ｇ，１．１２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣＩ（０．８１ｇ，４．２０ｍｍｏｌ）を添加し、次いで乾燥ＤＭＦ中に溶解した。この溶液をＮ２正圧下および室温にて、４日間攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（４０℃，０．１ｍｍＨｇ）を用いてＤＭＦを取り除いた。この油性残渣をクロロホルム（２００ｍＬ）中に溶解し、そして水（５０ｍＬ）および５％重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。有機層を回収した。クロロホルム（２００ｍＬ）を用いて、この水層を３回抽出した。この有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において濃縮した。この生成物をシリカゲルカラムで精製した。このカラムは、１００％クロロホルムおよびエチルアセテートグラディエントにおいて操作された（ｒｕｎ）。４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールをオフホワイト色固体として得た。この生成物は、ＣＨ２Ｃｌ２／石油エーテル（２９９ｍｇ，０．６３２ｍｍｏｌ，２８％）から沈殿され得た。
【０１０２】
【数１７】
2004511466.tif 000032
【０１０３】
乾燥トリエチルアミン（０．０４５ｍＬ，０．３２２ｍｍｏｌ）を４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール（７４．１ｍｇ，０．１５６ｍｍｏｌ）へ添加し、そして蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に溶解し、Ｎ２下としながら、次いで氷浴中に置いた。４−ニトロベンジルクロロホルメート（０．０８７ｇ，０．４０２５ｍｍｏｌ）をこの溶液へ添加し、そしてＮ２下において氷浴中で攪拌した。乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）を添加し、そしてその内容物を超音波処理し、この混合物を完全に溶解した。その溶液を氷浴において４０分間、次いで室温にて２０時間、攪拌した。２０時間後、ＴＬＣによるとこの反応は完了しておらず、そしてさらに４−ニトロベンジルクロロホルメート（０．０８７ｇ）をこの混合物へ添加し、そして３時間攪拌した。その混合物をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、そして飽和ＮａＣｌおよび５％重炭酸ナトリウムを用いて抽出した。水性洗浄液（ｗａｓｈ）をエチルアセテートで抽出した。有機層を混合し（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）、そして硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において黄−褐色固体になるまで濃縮した。この生成物を、１％メタノール、９９％クロロホルムにおけるシリカゲルカラム操作（ｒｕｎ）で精製した。４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（４−ニトロベンジルカルボナート）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールをオフホワイト色固体（８５．７ｍｇ，０．１３１ｍｍｏｌ，８４％）として得た。
【０１０４】
【数１８】
2004511466.tif 000033
【０１０５】
トリエチルアミン（０．１１３ｍＬ，０．８１０ｍｍｏｌ）を４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノール（１９１．８ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）へ添加し、そして乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶解した。ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（０．２０４ｍｍｏｌ，１．０１３ｍＬ）をこの溶液へ添加した。この溶液をＮ２正圧下にて攪拌し、そして氷浴上で２０分間攪拌した。この溶液を室温にて２時間攪拌した。次いでこの溶液を氷浴中で再冷却し、そしてＮ−メチルピペラジン（０．１１ｍＬ，１．２１５ｍｍｏｌ）をこの溶液へ添加した。この溶液を室温にて２２時間攪拌し、次いで１時間還流した。この溶液をクロロホルム（５０ｍＬ）で希釈し、そして飽和ＮａＣｌを用いて洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下で濃縮した。この生成物を、クロロホルムを用いて開始し、５０ｍＬの溶媒ごとに１％の増加率のメタノールを用いるクロロホルムメタノールグラディエントのシリカゲルカラム精製した。この回収された分画を混合し、そして濃縮し、４−（２−クロロエチル）−Ｏ−（Ｎ−メチルピペラジン−Ｎ’−カルバマート（ｃａｒｂａｍａｔｏ））−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］フェノールを白色泡沫（９０ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ，３７％）として得た。
【０１０６】
【数１９】
2004511466.tif 000034
【０１０７】
実施例５
４−（２−クロロエチル）−３−［２−（４−Ｎ，Ｎ−（ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキサミド］フェノールの調製
３，４−ジニトロ安息香酸（５．０１ｇ，２３．６ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＯＨ（１５０ｍＬ）、およびＨ２ＳＯ４（２０ｍＬ）を加温し、２２．５ｈの間還流した。Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）の添加後すぐに白色固体が形成された。次いでこの生成物をＣＨＣｌ３（３×１００ｍＬ）で抽出し、そして混合された有機層を飽和ＮａＨＣＯ３（２７ｍＬ）およびＨ２Ｏ（８０ｍＬ）の混合物で洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４を用いてこの有機層を乾燥し、そして減圧下における溶媒の除去によって、メチル３，４−ジニトロベンゾエートを白色固体（４．７７ｇ，８９．４％）として得た。
【０１０８】
【数２０】
2004511466.tif 000035
【０１０９】
メチル３，４−ジニトロベンゾエート（１ｇ，４．４２ｍｍｏｌ）および１０％　Ｐｄ／Ｃ（２５０ｍｇ）をＣＨ３ＯＨ（６０ｍＬ）中に溶解し、そしてＨ２下において、一晩中攪拌させた。次いで、Ｃｅｌｉｔｅを通してこの反応混合物を真空濾過し、そしてロータリーエバポレーターで濃縮し、ジアミンを得た。乾燥ＣＨ２Ｃｌ２を用いてこの残渣を２回コエバポレートした後（それぞれ１０ｍＬ）、これを次の工程に直接使用した。
【０１１０】
メチル３，４−ジアミノベンゾエート（０．７３ｇ，４．４２ｍｍｏｌ）、４−（ジエチルアミノ）ベンズアルデヒド（３．０ｇ，１６．９ｍｍｏｌ）をニトロベンゼン（３０ｍＬ）中に溶解し、そして１４５℃油浴において一晩中還流した。次いでこのニトロベンゼンを、真空中においてＫｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（６０℃，０．１ｍｍＨｇ）を使用して除去した。残った油性残渣をＣＨＣｌ３中に溶解し、そして水（３×５０ｍＬ）で洗浄した。混合された有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。次いでこの粗製のオイルを、１％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３の溶媒系を用いるカラムクロマトグラフィーを介して精製し、メチル２−（４−（Ｎ，Ｎ−ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキシレートを帯黄色固体として得た（１．１７ｇ，８２％収率）。
【０１１１】
【数２１】
2004511466.tif 000036
【０１１２】
メチル２−（４−（Ｎ，Ｎ−ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキシレート（０．５００ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）へ１０％　ＮａＯＨ（７．０ｍＬ）およびＥｔＯＨ（３０ｍＬ）を添加した。この混合物を４ｈの間還流した。この混合物を冷却し、そしてそのエタノールを留去した。次いで６Ｍ　ＨＣｌをｐＨ１（この点で黄色結晶が溶液から沈殿する）になるまでこの混合物へ添加した。この懸濁液を冷却するため氷浴に放置した。次いでオフホワイト色固体２−（４−（Ｎ，Ｎ−ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボン酸を吸引濾過し、真空中にて一晩中６０℃にて乾燥させた（０．３７ｇ，７７．８％収率）。
【０１１３】
【数２２】
2004511466.tif 000037
【０１１４】
２−（４−（Ｎ，Ｎ−ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボン酸（０．３５０ｇ，１．１３ｍｍｏｌ）、２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライド（０．３００ｇ，１．７５ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．５９２ｇ，３．０８ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、そして室温にて３日間Ｎ２下において攪拌させた。次いでこのＤＭＦをＫｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ、＜７０℃）によって除去し、そして残った粗生成物をＣＨＣｌ３中に溶解し、そして水（３×４０ｍＬ）で洗浄した。この有機層を回収し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。精製は、溶媒グラディエントとして１０−５０％　ＥｔＯＡｃ／ＣＨＣｌ３を用いるカラムクロマトグラフィーを介し、４−（２−クロロエチル）−３−［２−（４−Ｎ，Ｎ−（ジエチル）アミノフェニル）ベンゾイミダゾール−６−カルボキサミド］フェノールを白色固体（０．０７ｇ，１３％収率）として得た。
【０１１５】
【数２３】
2004511466.tif 000038
【０１１６】
実施例６
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノールおよびそのアナログの調製
２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライド（４４９ｍｇ，１．７２ｍｍｏｌ）を、既に報告されている手順によって合成した。かなり不安定なこれを、５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸（４２９．０ｍｇ，１．７１ｍｍｏｌ）、３当量のＥＤＣＩ（９８７．７ｍｇ，５．１６ｍｍｏｌ）、およびＤＭＦ（１５ｍＬ）で素早く処理した。この溶液を窒素下において３日間攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（６０℃、１ｍｍＨｇ）を用いてＤＭＦを除去し、そしてその油性残渣をＣＨＣｌ３（２００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（７５ｍＬ）の間で分配した。その有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、そして濃縮した。カラムクロマトグラフィーによる精製（１．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３グラディエント溶出）によって、４−（クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキシアミノ）フェノールをオフホワイト色固体（７７．８ｍｇ，１１％収率）として得た。
【０１１７】
【数２４】
2004511466.tif 000039
【０１１８】
水素化フラスコへ２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（１．００５ｇ、３．４４ｍｍｏｌ）、酸化白金（ＰｔＯ２（２００ｍｇ）およびフリーザー冷却ＴＨＦ（５０ｍＬ）を添加した。次いでこのチャンバー（ｃｈａｍｂｅｒ）を真空にし、Ｈ２を用いて３回パージし、さらに５５ｐｓｉにて１時間振とうさせた。次いでこの溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、ｒｏｔｏｖａｐで濃縮し、そしてその残渣を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（各５ｍＬ）を用いてコエバポレートした。真空下に置かれるオフホワイト色の薄片状固体が生じた。得られた２−（２−アミノ−４−ベンジルオキシフェニル）エチルクロライドを乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に溶解し、次いでセプタムを介して５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸（９６１ｍｇ，３．８３ｍｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（２．００ｇ，３．８４ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（４４０ｍＬ）中攪拌懸濁液へ添加した。この反応混合物をＮ２でフラッシュし（ｆｌｕｓｈｅｄ）、そして室温にて１０分間攪拌させた。シリンジを用いて、新たに蒸留された乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．５ｍＬ，８．６ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの時点でこの懸濁液は黄色溶液になった。一晩中室温にてＮ２下において、この溶液を攪拌させた。この反応をＴＬＣ（１６：１　ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ）によってチェックした後、この溶液を１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、そして水（１００ｍＬ）を用いて１回、１０％ＨＣｌ（１Ｍ）（１００ｍＬ）を用いて１回、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１００ｍＬ）を用いて１回、および飽和ＮａＣｌ（１００ｍＬ）を用いて１回洗浄した。有機層を回収し、無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、そして濃縮した。この生成物を、１６：１　ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃシリカゲルカラムを用いて精製した。次いでこの生成物を回収し、そして１０％　ＮａＯＨ（１００ｍＬ）を用いて、さらに水（１００ｍＬ）を用いて１回素早く洗浄した。この有機層を回収し、そして無水硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、そして濃縮し、ベンジル　４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェニルエーテルを淡黄色泡沫として得た（１．１３ｇ，２．２９ｍｍｏｌ，６６％）。
【０１１９】
【数２５】
2004511466.tif 000040
【０１２０】
ベンジル４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェニルエーテル（２．１７ｇ，４．３８ｍｍｏｌ）を含むフラスコへ、２５％　ＮＨ４ＨＣＯ２（１７．６０ｍＬ，０．０６９７ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１００ｍＬ）の水溶液を添加した。この溶液を氷浴中で１０分間攪拌させた。この冷溶液へＰｄ／Ｃ　１０％（４５０ｍｇ）を添加した。次いでこのフラスコをＨ２下において一晩中攪拌させた。この反応混合物のＴＬＣ分析（２．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）は、脱ベンジル化が完了したことを示した。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてｒｏｔｅｖａｐにて濃縮した。生じるオイルをＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）中に溶解し、そして水（１００ｍＬ）を用いて１回、そしてブライン（１００ｍＬ）を用いて１回洗浄した。この有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｅｖａｐにて濃縮した。生じる帯黄色オイルを、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３から始めるシリカゲルカラムを用いて精製した。ＭｅＯＨのパーセンテージは、１００ｍＬごとに０．５％増加で増大された。この生成物を回収し、そして濃縮において濃縮し、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキシアミノ）フェノールを白色泡沫として生成した（８８０ｍｇ，２．１７ｍｍｏｌ，５０％）。
【０１２１】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）を冷（−２０℃）ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に懸濁した。このフラスコを真空にし、そしてＨ２を用いて３回パージし、そして大気圧にて室温で２４時間攪拌させた。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして濃縮した。生じる緑色油性残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて２回コエバポレートし、淡緑色の薄片状固体を生産した。次いで生じる２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドを高−真空下に置いた。フレーム乾燥された（ｆｌａｍｅ　ｄｒｉｅｄ）１００ｍＬ丸底フラスコへ、５−メトキシインドール−２カルボン酸（１８０ｍｇ，０．９４１ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（４９５ｍｇ，２．５６ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、そしてＮ２を用いてフラッシュした。セプタムを介して、乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この溶液を１０分間攪拌させた。乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解したアミンを、この反応混合物へ添加した。透明淡黄褐色懸濁液を室温にてＮ２下において３日間攪拌させた。この溶液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、そしてブフナー漏斗を介して濾過した。この濾液を分液漏斗へ加え、そして水（１００ｍＬ）を用いて３回洗浄した。次いでこの有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｅｖａｐにて濃縮し、暗褐色オイルを得た。この粗生成物を、１％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３を用いるシリカゲルカラムで精製し、４−（２−クロロエチル）−３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミノ）フェノールをオフホワイト色残渣として生成した（２９ｍｇ，０．０８４２ｍｍｏｌ，１０％）。
【０１２２】
【数２６】
2004511466.tif 000041
【０１２３】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）を冷（−２０℃）ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に懸濁した。このフラスコを真空にし、そしてＨ２を用いて３回パージし（ｐｕｒｇｅｄ）、そして大気圧にて、室温において２４時間攪拌させた。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして濃縮した。結果生じる緑色油性残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）と共に２回コエバポレートし、淡緑色、薄片状固体を生産した。次いで、生じる２−（２−アミノ−４−ヒドロキシフェニル）エチルクロライドを高−真空下に置いた。フレーム乾燥されたフラスコへ、２−メトキシケイ皮酸（１６８ｍｇ，０．９４２ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（４９２ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、Ｎ２を用いてフラッシュした。セプタムを介して、乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この溶液を１０分間攪拌させた。乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解したアミンを、この反応混合物へ添加した。透明淡黄褐色懸濁液を室温にてＮ２下において３日間攪拌させた。この溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ブフナー漏斗を介して濾過した。この濾液を分液漏斗へ加え、そして水（１００ｍＬ）を用いて４回洗浄した。次いでこの有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐにて濃縮し、淡褐色油性残渣を生産した。この粗生成物を、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３シリカゲルカラムを用いて精製した。このグラディエント溶媒系は、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３から始めて使用された。ＭｅＯＨのパーセンテージは５０ｍＬの後１％まで増大され、次いでさらなる５０ｍＬごとに１％ずつ増大され、４−（２−クロロエチル）−３−（２−メトキシシンナモイルアミド）フェノールをオフホワイト色泡沫として生成した（７０．４ｍｇ，０．２１３ｍｍｏｌ，２５％）。
【０１２４】
【数２７】
2004511466.tif 000042
【０１２５】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）を冷（−２０℃）ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に懸濁した。このフラスコを真空にし、そしてＨ２を用いて３回パージし、そして大気圧にて室温において２４時間攪拌させた。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして濃縮した。生じる緑色油性残渣をＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて２回コエバポレートし、淡緑色の薄片状固体を生産した。フレーム乾燥させたフラスコへ、４−メトキシケイ皮酸（１６８ｍｇ，０．９４２ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（４９２ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、Ｎ２を用いてフラッシュした。セプタムを介して、乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この溶液を数分間攪拌させた。乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解したアミンを、この反応混合物へ添加した。透明淡黄色懸濁液を室温にてＮ２下において３日間攪拌させた。この溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ブフナー漏斗を介して濾過した。この濾液を分液漏斗へ加え、そして水（１００ｍＬ）を用いて４回洗浄した。次いでこの有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐにて濃縮し、淡黄色固体を得た。この固体を０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３中に懸濁し、そしてＨｉｒｓｃｈ漏斗を介して濾過し、淡黄褐色固体（５０．９ｍｇ）を生産した。次いでこの濾液を０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３シリカゲルカラムで精製した。このグラディエント溶媒系は、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３から始めて使用された。ＭｅＯＨのパーセンテージは、５０ｍＬの後１％まで増大され、次いでさらなる５０ｍＬごとに１％ずつ増大され、４−（２−クロロエチル）−３−（４−メトキシシンナモイルアミド）フェノールを淡黄褐色／黄色固体として生成した（２３．３ｍｇ；総収量７４．２ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ，２６％）。
【０１２６】
【数２８】
2004511466.tif 000043
【０１２７】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）を冷（−２０℃）ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に懸濁した。このフラスコを真空にし、そしてＨ２を用いて３回パージし、そして大気圧にて室温において２４時間攪拌させた。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして濃縮した。生じた緑色油性残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて２回コエバポレートし、淡緑色の薄片状固体を生産した。フレーム乾燥したフラスコへ、３−メトキシケイ皮酸（３−ｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍｉｃ　ａｃｉｄ）（１６８ｍｇ，０．９４２ｍｍｏｌ、２５％）、およびＥＤＣＩ（４９２ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、Ｎ２を用いてフラッシュした。セプタムを介して、乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）を添加した。この溶液を数分間攪拌させた。乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解したアミンを、この反応混合物へ添加した。透明淡黄色懸濁液を室温にてＮ２下において３日間攪拌させた。この溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、ブフナー漏斗を介して濾過した。この濾液を分液漏斗へ加え、そして水（１００ｍＬ）を用いて４回洗浄した。次いでこの有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そして濃縮し、冷却すると凝固する淡褐色油性残渣を得た。この生成物を０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３に懸濁し、そしてＨｉｒｓｃｈ漏斗を介して濾過し、４−（２−クロロエチル）−３−（３−メトキシシンナモイルアミド）フェノールを黄色固体（５４．７ｍｇ）として生産した。次いでこの濾過物を０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３中に溶解し、そして０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３シリカゲルカラムで精製した。ＭｅＯＨのパーセンテージは、５０ｍＬの後１％まで増大され、次いでさらなる５０ｍＬごとに１％増加で増大され、４−（２−クロロエチル）−３−（３−メトキシシンナモイルアミド）フェノールを淡黄色固体として生成した（４５．９ｍｇ；総収量１００．６ｍｇ，０．３０３ｍｍｏｌ，３５％）。
【０１２８】
【数２９】
2004511466.tif 000044
【０１２９】
２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド（２５０ｍｇ，０．８５６ｍｍｏｌ）、１０％　Ｐｄ／Ｃ（７５ｍｇ）を冷（−２０℃）ＴＨＦ（３０ｍＬ）中に懸濁した。このフラスコを真空にし、そしてＨ２を用いて３回パージし、そして大気圧にて室温において２４時間攪拌させた。この溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして濃縮した。生じる緑色油性残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて２回コエバポレートし、淡緑色薄片状固体を生産した。フレーム乾燥したフラスコへ、３−（２，６−ジメトキシ−５−ピリジル）アクリル酸（２４５ｍｇ，１．０９ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（５７０ｍｇ，２．９７ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、Ｎ２を用いてフラッシュした。セプタムを介して、乾燥ＤＭＦ（１５ｍＬ）を添加した。この溶液を数分間攪拌させた。乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）中に溶解したアミンを、この反応混合物へ添加した。透明淡黄色懸濁液を室温にてＮ２下において３日間攪拌させた。この溶液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、そしてブフナー漏斗を介して濾過した。この濾液を分液漏斗へ加え、そして水（１００ｍＬ）を用いて４回洗浄した。次いでこの有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐにて濃縮し、オイル（これは、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３シリカゲルカラムで精製される）を生産した。このグラディエント溶媒系は、０．５％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３から始めて使用された。ＭｅＯＨのパーセンテージは、５０ｍＬの後１％まで増大され、次いでさらなる５０ｍＬごとに１％ずつ増大され、４−（２−クロロエチル）−３−（２，６−ジメトキシ−５−ピリジル）−Ｅ−エテン−１−イルカルボキサミド）フェノールを淡黄色固体（３９．７ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ，１２％）として生成した。
【０１３０】
【数３０】
2004511466.tif 000045
【０１３１】
実施例７
ヘアピン化合物　Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドおよびアナログの合成
アキラル２−（４−ベンジルオキシ−２−ニトロフェニル）エチルクロライド化合物（０．５００ｇ，１．７１ｍｍｏｌ）をフリーザー−冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中に溶解し、そしてＰｔＯ２（０．１５０ｇ）を添加した。この反応液を真空下において脱気しながら攪拌し、続いて水素気体に暴露した。この脱気／水素暴露サイクルを３回繰り返し、その時点でこの反応液を、５０ｐｓｉの水素下において、室温にて１時間攪拌させた。このアミン溶液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そして減圧下において濃縮した。次いで、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）を用いて３回コエバポレートした（ｃｏｅｖａｐｏｒａｔｅｄ）。黄褐色オイルが生じ、そして高真空下に置かれ、３０分間ホイルで覆われた。次いで、５−ニトロベンゾフラン−２−カルボン酸（０．３９４ｇ，１．９０ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（０．９９９ｇ，１．９２ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２２０ｍＬ）中に懸濁した。次いでこのアミンを乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中に溶解し、そしてセプタムを通るシリンジを介してこの懸濁液へ添加した。この反応液を１０分間攪拌させ、その時点で乾燥Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．７５ｍＬ，４．２９ｍｍｏｌ）をこの懸濁液へ添加した。この溶液は透明黄色へ変化した。これをホイルで覆い、そしてこの溶液を窒素下において室温にて２日間攪拌した。この溶液を真空濾過し、そしてその濾液を水（１×７５ｍＬ）、１０％ＨＣｌ（１×７５ｍＬ）、飽和重炭酸ナトリウム（１×７５ｍＬ）およびブライン（１×７５ｍＬ）で洗浄した。その有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空濾過し、そして減圧下において濃縮し、黄色固体を生成した。その残渣を、５−２０％　ＥｔＯＡｃ／ヘキサン溶媒系を用いるシリカゲルカラムで精製し、所望の生成物２−（４−ベンジルオキシ−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボキサミド）フェニル）エチルクロライドを黄色固体（０．１７３ｇ、２２％収率）として得た。
【０１３２】
【数３１】
2004511466.tif 000046
【０１３３】
アキラル２−（４−ベンジルオキシ−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボキサミド）フェニル）エチルクロライド（０．０９９ｇ，０．２２０ｍｍｏｌ）のＰｔＯ２（０．０３０ｇ）との混合物をフリーザー冷却したＴＨＦ（２５ｍＬ）中に懸濁し、さらにこの懸濁液を５０ｐｓｉにおいて室温にて４５分間水素化（振とうさせながら）した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上において濾過し、そしてその濾液を減圧において濃縮した。このアミン中間体は不安定であるので、直接使用された。
【０１３４】
上記のアミンへＮ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］グルタルアミドモノカルボン酸（０．１３２ｇ，０．２５６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（０．０８４ｇ，０．４３９ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物［ＨＯＢＴ］（０．０３０ｇ，０．２２０ｍｍｏｌ）を添加し、次にこれをＤＭＦ（７．５ｍＬ）中に溶解した。超音波処理によって溶解を助け、そしてフラスコをホイルで覆い、この懸濁液を窒素下において室温にて３日間攪拌した。そこで、ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を介して、ＤＭＦを取り除いた。その残渣を、ＣＨＣｌ３から７％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３溶媒系を用いるシリカゲルで精製し、所望の生成物Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドを黄褐色固体（０．１０８ｇ、５２％収率）として得た。
【０１３５】
【数３２】
2004511466.tif 000047
【０１３６】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．１０８ｇ，０．１１４ｍｍｏｌ）をフリーザー冷却したＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。この溶液へ（ｔｗｏ　ｔｈｉｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１０％　Ｐｄ／Ｃ（０．０７０ｇ）を添加した。この反応液を真空下において脱気しながら攪拌し、その後水素気体へ暴露した。脱気／水素暴露サイクルを３回繰り返し、その時点でこの反応液を水素雰囲気下において室温にて１日間攪拌し続けた。この時点では、ＴＬＣ分析がこの還元が完了していないことを示し、それゆえ上記の脱気手順を繰り返し、そして再びこの反応液を窒素雰囲気下においてさらに１日間攪拌した。この時点でＴＬＣは、この反応が完了したことを示した。この反応液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過した。ＴＨＦを用いてＣｅｌｉｔｅを洗浄し、そしてこの溶媒を真空下において取り除いた。結果はオフホワイト色油性フィルム（ｆｉｌｍ）Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．０８０ｇ，８２％収率）であった。
【０１３７】
【数３３】
2004511466.tif 000048
【０１３８】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．０８０ｇ，０．０９３ｍｍｏｌ）を、超音波処理しながら乾燥エチルアセテート（モレキュラーシーブ３Å上）（２０ｍＬ）中に溶解した。窒素雰囲気下および室温において、無水３Ｍ塩酸／エチルアセテート（１０ｍＬ）を透明淡黄色（ｐａｌｅ　ｙｅｌｌｏｗ）溶液へ添加すると、これは直ぐに濁った。この反応液を３−４時間攪拌させた後、攪拌を停止し、そしてその沈殿物を冷凍庫の中で１時間置いた（ｓｉｔ）。パスツールピペットを用いて、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃのいくらかを吸い出した。沈殿物の残留溶液を、予め重量測定した試験管中で遠心分離した。次いで、試験管中の回収された固体を乾燥エチルアセテート（６ｍＬ）で再び洗浄した。このエチルアセテートを可能な限り吸い出した。これを３回繰り返し、次いでこの試験管を１枚の紙およびゴムバンドで覆った。次に、この覆われた試験管及び内容物を真空オーブン中で一晩中乾燥し（０．１ｍｍＨｇ，４０℃）、オフホワイト色の帯黄色固体Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドハイドロクロライド（０．０３８ｇ，５２％収率）を得た。
【０１３９】
【数３４】
2004511466.tif 000049
【０１４０】
２−（４−ベンジルオキシ−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボキサミド）フェニル）エチルクロライド（０．２１９ｇ，０．４８６ｍｍｏｌ）のＰｔＯ２（０．０６０ｇ）との混合物をフリーザー冷却したＴＨＦ（２５ｍＬ）中に懸濁し、そしてその懸濁液を５０ｐｓｉにて室温において１時間水素化（振とうさせながら）した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。このアミンを２つのフラスコへ均等に分けた。このアミン中間体は不安定であるので、直接使用された。
【０１４１】
２−（４−ベンジルオキシ−２−（５−アミノベンゾフラン−２−カルボキサミド）フェニル）エチルクロライド（０．２４３ｍｍｏｌ）へＮ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］グルタルアミドモノカルボン酸（０．１３３ｇ，０．２５８ｍｍｏｌ），ＥＤＣＩ（０．０９３ｇ，０．４８６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物［ＨＯＢＴ］（０．０３３ｇ，０．２４４ｍｍｏｌ）を添加し、次いでこれをＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解した。溶解を超音波処理によって助け、そしてフラスコをホイルで覆い、その懸濁液を窒素下において室温にて２日間攪拌した。その時点で、ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を介して、ＤＭＦを取り除いた。生じるオイルをＣＨＣｌ３中に溶解し、水（１×７５ｍＬ）に続いてブライン（１×７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。次いでこれを濾過し、そして減圧下において濃縮し、生成物Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドを褐色オイル（０．１２５ｇ，５１％収率）として生成した。
【０１４２】
【数３５】
2004511466.tif 000050
【０１４３】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．１２５ｇ，０．１３２ｍｍｏｌ）をフリーザー冷却したＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。この溶液へ（ｔｗｏ　ｔｈｉｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１０％　Ｐｄ／Ｃ（０．１００ｇ）を添加した。この反応液を真空下において脱気しながら攪拌し、その後水素ガスへ暴露した。脱気／水素暴露サイクルを３回繰り返し、その時点でこの反応液を水素雰囲気下において室温にて１日間攪拌し続けた。この時点で、ＴＬＣ分析はこの反応が完了したことを示した。この反応液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過した。ＴＨＦを用いてＣｅｌｉｔｅを洗浄し、そしてこの溶媒を真空下において取り除いた。この結果生じたオイルを、１０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３の溶媒系を用いる調製用ＴＬＣによって精製した。上部のバンドを取り除き、所望の生成物Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドを無色油性フィルム（０．０５０ｇ，４４％収率）として生成した。
【０１４４】
【数３６】
2004511466.tif 000051
【０１４５】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．０５０ｇ，０．０５８ｍｍｏｌ）を、超音波処理しながら乾燥エチルアセテート（２０ｍＬ）中に溶解した。窒素雰囲気下において無水３Ｍ塩酸／エチルアセテート（１５ｍＬ）を透明淡黄色溶液へ添加すると、これは直ぐに濁った。この反応液を２．５時間攪拌させた後、攪拌を停止し、そしてその沈殿物を１時間沈降（ｓｅｔｔｌｅ）させた。ピペットを介して、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）のいくらかを吸い出した。乾燥ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を用いてこの固体を２回洗浄し、各回ピペットを用いてＥｔＯＡｃを取り除いた。残りの溶媒を窒素の穏やかな流れによって取り除いた。この固体を、高真空下（０．１ｍｍＨｇ）において室温にてさらに乾燥した。その結果、白色固体Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルイミダゾール−４−（Ｎ−メチルピロール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドハイドロクロライド生成物（０．０３６ｇ，８１％収率）を生じた。
【０１４６】
【数３７】
2004511466.tif 000052
【０１４７】
２−（４−ベンジルオキシ−２−（５−アミノベンゾフラン−２−カルボキサミド）フェニル）エチルクロライド（０．２４３ｍｍｏｌ）へＮ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］グルタルアミドモノカルボン酸（０．１３３ｇ，０．２５８ｍｍｏｌ），ＥＤＣＩ（０．０９３ｇ，０．４８６ｍｍｏｌ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物［ＨＯＢＴ］（０．０３３ｇ，０．２４４ｍｍｏｌ）を添加し、次いでこれをＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解した。超音波処理によって溶解を助け、そしてフラスコをホイルで覆い、その懸濁液を窒素下において室温にて２日間攪拌した。その時点で、ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を介して、ＤＭＦを取り除いた。生じたオイルをＣＨＣｌ３中に溶解し、水（１×７５ｍＬ）に続いてブライン（１×７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。次いでこれを濾過し、そして減圧下において濃縮し、生成物Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド）］グルタロジアミドを褐色オイル（０．１６６ｇ，６８％収率）として生成した。Ｒｆ＝０．４０（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）。
【０１４８】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（３−ベンジルオキシ−２−（２−クロロエチル）フェニル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．１６６ｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）をフリーザー冷却したＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解した。この溶液へ（ｔｗｏ　ｔｈｉｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ）１０％　Ｐｄ／Ｃ　（０．１００ｇ）を添加した。この反応液を真空下において脱気しながら攪拌し、その後水素ガスへ暴露した。脱気／水素暴露サイクルを３回繰り返し、その時点でこの反応液を水素雰囲気下において室温にて１日間攪拌し続けた。この時点で、ＴＬＣはこの反応が完了したことを示した。この反応液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過した。ＴＨＦを用いてＣｅｌｉｔｅを洗浄し、そしてこの溶媒を真空下において取り除いた。生じたオイルを、１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３の溶媒系を用いる調製用ＴＬＣによって精製した。上部のバンドを取り除き、所望の生成物Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドを黄褐色残渣（０．０７６ｇ，５０％収率）として生成した。Ｒｆ＝０．２８（１０％　ＭｅＯＨ／ＣＨＣ１３）。
【０１４９】
Ｎ−［（Ｎ−ＢＯＣ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミド（０．０７６ｇ、０．０８８ｍｏｌ）を、超音波処理しながら乾燥エチルアセテート（２０ｍＬ）中に溶解した。窒素雰囲気下において無水３Ｍ塩酸／エチルアセテート（１５ｍＬ）を透明淡黄色溶液へ添加すると、これは直ぐに濁った。この反応液を２．５時間攪拌させた後、攪拌を停止し、そしてその沈殿物を沈降させた。ピペットを介して、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）のいくらかを吸い出した。乾燥ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）を用いてこの固体を２回洗浄し、各回ピペットを用いてＥｔＯＡｃを取り除いた。残った溶媒を窒素の流れで取り除いた。この固体を高真空下において（０．１ｍｍＨｇ）室温にてさらに乾燥した。その結果、白色固体Ｎ−［（Ｎ−（４−アミノブチル）−Ｎ−メチルピロール−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド）−２−カルボキサミド）］−Ｎ−［５−（４−（２−クロロエチル）フェノール−３−イル）ベンゾフラン−２−カルボキサミド］］グルタロジアミドハイドロクロライド（０．０６２ｇ，９１％収率）を生成した。
【０１５０】
【数３８】
2004511466.tif 000053
【０１５１】
実施例８
ジメチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−２，３−ジカルボキシレートおよびそのアナログの合成
２−アミノ−４−クロロ−５−ニトロフェノール（２０．０３ｇ，０．１３３ｍｏｌ）、無水炭酸カリウム（２０．０ｇ，０．１４５ｍｏｌ）およびテトラブチルアンモニウムヨージド（０．０２５ｇ，０．０６８ｍｍｏｌ）を乾燥５００ｍＬへ添加し、そしてセプタムで覆った。新たに蒸留した乾燥ＤＭＦ（９０ｍＬ）を添加し、次いで臭化ベンジル（１３．８ｍＬ，０．１１６ｍｏｌ）、そしてこの反応を一晩中室温にてＮ２下において攪拌した。次いでこの溶液を、Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（５０℃，０．２５ｍｍＨｇ）でＤＭＦを取り除くことによって濃縮した。この油性残渣をＣＨＣｌ３中に溶解し、過剰な炭酸カリウムを取り除くために吸引濾過し、そして水を用いて洗浄した。濾液を、黄色固体が残るまでｒｏｔｏｖａｐで濃縮した。その粗生成物を先ず、クロロホルムシリカゲルカラムを用いて精製した。生成物（２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロアニリン）を最初のわずかな画分から回収した。次いでその生成物を、２０％エチルアセテート／ヘキサン溶出液を用いるシリカゲルカラムで精製した。その生成物を回収し、ｒｏｔｏｖａｐで濃縮し、そして高真空下において乾燥し、２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロアニリンを黄色固体（１３．４４ｇ，４８．３４ｍｍｏｌ，５６％）として得た。
【０１５２】
【数３９】
2004511466.tif 000054
【０１５３】
２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロアニリン（３１．６３ｇ，０．０８２８ｍｍｏｌ）を乾燥２５０ｍＬ丸底中の３００ｍｌの乾燥メチレンクロライド中に溶解し、そしてセプタムで密封した。次いでトリエチルアミン（１３．２ｍＬ，０．０９４７ｍｏｌ，１．１当量）を添加した。次にベンゾイルクロライド（３１．１ｍＬ，０．２６８ｍｏｌ，３当量）、自動平衡化滴下漏斗（ｓｅｌｆ−ｅｑｕａｌｉｚｉｎｇ　ｄｒｏｐｐｉｎｇ　ｆｕｎｎｅｌ）中の乾燥メチレンクロライド（１００ｍＬ）へ添加し、次いで乾燥管で覆った。そのベンゾイルクロライド溶液を丸底へ滴下した。この反応混合物を、ベンゾイルクロライド溶液の添加後１５分間攪拌させた。次いでこの溶液を一晩中乾燥管の下において還流した。この溶液をクロロホルム（１００ｍＬ）で希釈し、そして５％重炭酸ナトリウム（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を用いて洗浄した。無水硫酸ナトリウムを用いて有機層を乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐで濃縮した。エチルエーテル（１５０ｍＬ）をこの固体へ添加し、懸濁液（これは、次いで吸引濾過される）を形成し、Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロフェニル）ベンズアミドを桃色固体（３１．６３ｇ，０．０８２８ｍｏｌ，８５％）として生成した。
【０１５４】
【数４０】
2004511466.tif 000055
【０１５５】
全てのガラス器具をオーブンの中で終夜乾燥したか、またはフレーム乾燥した。ミネラルオイル中の６０％分散物のＮａＨ（０．６３２ｇ，１５．６ｍｍｏｌ）および乾燥ヘキサン（５ｍＬ）を、Ｎ２下において２５０ｍＬ丸底へ添加した。この懸濁液を１０分間攪拌し、そして沈降させた。シリンジを用いて、ヘキサンをこのフラスコから注意深く取り除いた。乾燥および新たに蒸留されたＤＭＳＯ（２０ｍＬ）をＮａＨへ添加した。この混合物を攪拌し、そして氷浴中に置いた。乾燥および新たに蒸留されたジメチルマロネート（１．９２ｍＬ，１６．４ｍｍｏｌ）を、シリンジを介してゆっくり添加した。ジメチルマロネートを添加する間、Ｈ２が生成され、小さな針をセプタムに挿入することによって過剰な圧力を放出した。次いでこの溶液を室温まで加温した。乾燥Ｎ−（２−ベンジルオキシ−５−クロロ−４−ニトロフェニル）ベンズアミド（２．００ｇ，５．２４ｍｍｏｌ）を、セプタムで覆われた１００ｍｌ丸底フラスコ中に置き、そしてＮ２でフラッシュした。乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）をＮ２下においてこの桃色固体へ添加した。この固体を、１００℃に設定された油浴中において数分間攪拌することによって、ＤＭＳＯ中に溶解した。次いでこの橙色溶液を、シリンジを介して、ジメチルマロネートアニオン溶液へ移した。針を用いて、反応フラスコ中の過剰なＮ２およびＨ２ガスを排気した。暗橙色溶液を油浴（１００℃）中に置き、そして一晩中攪拌した。Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置でＤＭＳＯを取り除いた。次いで、残った褐色スラッジをクロロホルム（２００ｍＬ）中に溶解し、そして水（３×７５ｍＬ）を用いて洗浄した。このエマルジョンを、エタノール（１５ｍＬ）の添加によって破壊した（ｂｒｅａｋ　ｕｐ）。次に有機層をブライン（３×７５ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムを用いてこの有機層を乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐにて濃縮した。その内容物をクロロホルム中に溶解し、そして５％クロロホルム／１５％エチルアセテート／８０％ヘキサンシリカゲルカラムで精製した。回収された生成物を出発物質と混合し、そしてそれゆえに１００％クロロホルム中のシリカゲルカラムで再び精製し、ジメチル２−（５−ベンズアミド−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルマロネートを、冷凍庫中で置くと凝固する黄色オイル（０．８８ｇ、１．９０ｍｍｏｌ、３６％）として生成した。
【０１５６】
【数４１】
2004511466.tif 000056
【０１５７】
２５０ｍＬ丸底フラスコ中で、ジメチル２−（５−ベンズアミド−４−ベンジルオキシ−３−ニトロ）フェニルマロネート（１．５９ｇ，３．４１ｍｍｏｌ）をメタノール（４０ｍＬ）中に溶解し、そして１０％ＮａＯＨ（２４ｍＬ）をゆっくり添加し、暗褐色溶液を生成した。この溶液を３時間還流し、黄色溶液を生成した。このメタノールを回転気化機（ｒｏｔｏｖａｐｏｒａｔｏｒ）で取り除き、黄色懸濁液を得た。ＴＨＦ（５０ｍＬ）を添加し、透明黄色溶液を生成し、これは、氷浴上に置かれ、５分間攪拌された。ｐＨ〜１に達するまで、６Ｍ　ＨＣｌ（１３ｍＬ）をゆっくり添加した。この反応液は鮮明な黄色へ変化し、そして１時間還流された。この丸底を室温まで冷却し、そしてその溶液をクロロホルム（７５ｍＬ）で希釈した。この混合液を分液漏斗へ加え、そしてその有機層を回収した。次いで水層を、クロロホルム（３×５０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐで濃縮し、２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニル酢酸を黄色固体（１．２５ｇ，４．１４ｍｍｏｌｅｓ，９３％）として生成した。
【０１５８】
【数４２】
2004511466.tif 000057
【０１５９】
全てのガラス器具をフレーム乾燥するか、または一晩中オーブンの中で乾燥した。２−（５−アミノ−４ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニル酢酸（５．７０ｇ，１８．８ｍｍｏｌ）を乾燥および新たに蒸留されたＴＨＦ（１２０ｍＬ）中に溶解し、そして氷浴中において５分間Ｎ２下にて攪拌した。シリンジを介して、ボラン（４５．２ｍＬ，４５．２ｍｍｏｌ，１Ｍ　ＴＨＦ溶液）を、攪拌している溶液上に置いた滴下漏斗へ移した。次いでこのＢＨ３−ＴＨＦ溶液をこの溶液へゆっくり添加し、多くの泡立ち（ｅｆｆｅｒｖｅｓｃｅｎｃｅ）を生じさせた。暗橙色溶液を氷浴中において１０分間攪拌したまま放置し、次に室温にて６時間攪拌させた。この反応をＴＬＣ（５．０％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ３）によってチェックした。水（１５０ｍＬ）を、泡立ちが生じなくなるまで、フラスコへゆっくり注意深く添加した。次いでこの溶液を、エチルアセテート（それぞれ１００ｍＬ）を用いて３回抽出した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして濃縮し、２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルエタノールを橙色固体として得た。この固体を、シリカゲルクロロホルムカラムを用いて精製した。（２．８２ｇ，９．７９ｍｍｏｌ，５２％）。
【０１６０】
【数４３】
2004511466.tif 000058
【０１６１】
２−（５−アミノ−４−ベンジルオキシ−２−ニトロ）フェニルエタノール（０．０５１ｇ，０．１７４ｍｍｏｌ）を、５０ｍｌ丸底フラスコ中に置き、真空オーブン（５０℃，０．２５ｍｍＨｇ）中で乾燥した。一旦乾燥したら、その丸底フラスコをセプタムで密封し、Ｎ２でフラッシュし、メタノール（２ｍＬ）中に溶解し、黄色溶液を生成した。次いでジメチルアセチレンジカルボキシレート（０．１１ｍＬ，０．８７ｍｍｏｌ）を添加した。次いでセプタムを冷却器および乾燥管と置き換え、そして緩やかに一晩中還流した。次いでその溶液を、減圧下において黄色オイルになるまで濃縮した。次にこの黄色オイルをＣＨＣｌ３におけるシリカゲルカラム操作で精製し、ジメチル２−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートを黄色固体（０．０７３ｇ，０．１７０ｍｍｏｌ，９６％）として生成した。
【０１６２】
【数４４】
2004511466.tif 000059
【０１６３】
トリフェニルホスフィン（０．６１０ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）、ＣＣｌ４（０．６７ｍＬ，６．９６ｍｍｏｌ）、および乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）を、丸底フラスコ中のジメチル２−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］マレート（０．５０ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）へ添加した。この黄色溶液をＮ２でフラッシュし、そして一晩中攪拌した。この溶液を、ＴＬＣ（３０％エチルアセテート／石油エーテル）によってチェックし、次に減圧下において濃縮した。この残渣を、３０％エチルアセテート／石油エーテル溶媒系におけるシリカゲルカラムの操作で精製し、ジメチル２−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］マレートを黄色固体（０．４４ｇ，０．９８ｍｍｏｌ，８５％）として得た。
【０１６４】
【数４５】
2004511466.tif 000060
【０１６５】
ジメチル２−Ｎ−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］マレート（０．５１９ｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を、高真空下において丸底フラスコ中で乾燥した。パラジウムＩＩアセテート（０．５２ｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を添加し、次いでそのフラスコをセプタムで覆い、そしてＮ２でフラッシュした。次いで、乾燥ジメチルアセトアミド（６０ｍＬ）を、Ｎ２下においてシリンジを介して添加した。次いで、この溶液を真空下において３回脱気し、そしてＮ２でパージした。次いでこの溶液を、７０℃の油浴中で３時間半攪拌した。次いで、この溶液をＣＨＣｌ３（２００ｍＬ）で希釈し、そして水（５０ｍＬ）を用いて３回洗浄した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐで濃縮した。ジメチルアセトアミドを、高真空Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留（５０℃、０．２５ｍｍＨｇ）下において取り除いた。この残渣を、５％クロロホルム／１５％エチルアセテート／８０％石油エーテル溶媒系におけるシリカゲルカラムで精製し、ジメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２，３−ジカルボキシレートを黄色固体（０．１１９ｇ，０．２６７ｍｍｏｌ，２３％）として生成した。
【０１６６】
【数４６】
2004511466.tif 000061
【０１６７】
１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０３５ｇ）を、ジメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２，３−ジカルボキシレート（０．０７１８ｇ，０．１６１ｍｍｏｌ）へ添加し、そして冷却ＴＨＦ（５ｍＬ）をフラスコへ素早く添加した。この混合液を減圧下に置き、そしてＨ２で３回パージした。ＴＬＣ分析によって示されるように出発物質が残らなくなるまで、この反応物をＨ２下において室温および大気圧にて攪拌した。この溶液を、シンター漏斗（ｃｉｎｔｅｒ　ｆｕｎｎｅｌ）中のＣｅｌｉｔｅパッドを介して濾過し、そしてＴＨＦを用いて洗浄した。このアミン溶液を減圧下において濃縮し、そしてその残渣を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（それぞれ３ｍｌ）を用いて２回コエバポレートした。このアミンへＥＤＣＩ（０．０６１７ｇ，０．３２２ｍｍｏｌ）および５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸（０．０４０４ｇ，０．１６１ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコをセプタムで密封し、そしてＮ２でフラッシュした。次いでこの混合物を乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）中に溶解し、そしてＮ２下において３日間攪拌した。次いでその黄色溶液をエチルアセテート（１５０ｍＬ）で希釈し、水（３回）（それぞれ１００ｍＬ）および５％ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において濃縮した。この化合物を、クロロホルムシリカゲルカラム（溶媒系が、２５ｍＬ溶媒ごとに０．５％ＭｅＯＨ／クロロホルム増大する）で精製し、ジメチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−２，３−ジカルボキシレートをオフホワイト色固体（１７．８ｍｇ，０．０３２ｍｍｏｌ，２０％収率）として得た。
【０１６８】
【数４７】
2004511466.tif 000062
【０１６９】
１０％　Ｐｄ／Ｃ（０．０３５ｇ）を、ジメチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロインドール−２，３−ジカルボキシレート（０．０７０８ｇ，０．１５９ｍｍｏｌ）へ添加し、そして冷ＴＨＦ（７ｍＬ）をフラスコへ素早く添加した。この混合液を減圧下に置いて、そしてＨ２で３回パージした。ＴＬＣ分析によって示されるように出発物質が残らなくなるまで、この反応物を、Ｈ２下において室温および大気圧下にて攪拌した。この溶液を、シンター漏斗（ｃｉｎｔｅｒ　ｆｕｎｎｅｌ）中のＣｅｌｉｔｅパッドを介して濾過し、そしてＴＨＦを用いて洗浄した。このアミン溶液を減圧下において濃縮し、そしてその残渣を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（それぞれ３ｍｌ）を用いて２回コエバポレートした。このアミンへＥＤＣＩ（０．０９１４ｇ，０．４７７ｍｍｏｌ）および５−（ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボン酸（０．０５１ｇ，０．１５９ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコを覆い、そしてＮ２でフラッシュし、次いで乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）を添加した。この溶液を室温にて３日間Ｎ２下において攪拌した。次いでその黄色溶液をエチルアセテート（１５０ｍＬ）で希釈し、水（３回）（それぞれ１００ｍＬ）および５％ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において濃縮した。メチレンクロライド（２０ｍＬ）を添加すると、生成物が沈殿した。この懸濁液を遠心分離し、そして有機層を沈殿生成物から取り除いた。母液をクロロホルムカラム（溶媒系が２５ｍＬごとに１％ＭｅＯＨ／クロロホルム増大する）で精製し、ジメチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−５−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］インドール−２，３−ジカルボキシレートをオフホワイト色固体（０．０１５５ｇ，０．０２４７ｍｍｏｌ，１６％）として得た。
【０１７０】
【数４８】
2004511466.tif 000063
【０１７１】
２−（３−アミノ−４−ベンジルオキシ−６−ニトロ）フェニルエタノール（０．１００ｇ，０．３４７ｍｍｏｌ）を２５ｍｌ丸底中に置き、そして真空オーブン（５０℃，０．２５ｍｍＨｇ）中で乾燥した。この丸底を密封し、Ｎ２でフラッシュし、そして乾燥メタノール（６ｍＬ）を添加し、黄色溶液を生成した。次いでメチル４，４，４−トリフルオロ−２−ブチノエート（ｂｕｔｙｎｏａｔｅ）（０．２６ｇ，１．７４ｍｍｏｌ）を添加した。セプタムを冷却器（ｃｏｎｄｅｎｓｏｒ）および乾燥管と置き換え、そして７時間緩やかに還流した。次いでこの溶液を、減圧下において黄色オイルになるまで濃縮した。次いでこの黄色オイルを、ＣＨＣｌ３におけるシリカゲルカラム操作で精製し、メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノエート（ｂｕｔｅｎｏａｔｅ）を、冷却すると結晶化される黄色オイルとして生成した。総収量：０．１３３ｇ（０．３０２ｍｍｏｌ，８７％）。
【０１７２】
【数４９】
2004511466.tif 000064
【０１７３】
トリフェニルホスフィン（２．５７ｇ，９．７７ｍｍｏｌ）、ＣＣｌ４（２．８３　ｍＬ，　２９．３ｍｍｏｌ）、および乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）を丸底フラスコ中のメチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−ヒドロキシエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノエート（２．１０ｇ，４．８９ｍｍｏｌ）へ添加した。この黄色溶液をＮ２でフラッシュし、そして一晩中攪拌した。この溶液を、ＴＬＣ（２０％　エチルアセテート／石油エーテル）によってチェックし、次に減圧下において濃縮した。この残渣を、１０％エチルアセテート／石油エーテル溶媒系におけるシリカゲルカラム操作で精製し、メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノエートを得た。総収率：１．２５ｇ（２．７１ｍｍｏｌ，５７％）。
【０１７４】
【数５０】
2004511466.tif 000065
【０１７５】
メチル３−［２−ベンジルオキシ−５−（２−クロロエチル）−４−ニトロアニリノ］−４，４，４−トリフルオロ−２−ブテノエート（０．０３５ｇ，０．０７６３ｍｍｏｌ）を高真空下において丸底フラスコ中で乾燥した。パラジウムＩＩアセテート（０．０３４ｇ，０．１５３ｍｍｏｌ）を添加し、次いでそのフラスコをセプタムで覆い、そしてＮ２でフラッシュした。次いで、乾燥ジメチルアセトアミド（２０ｍＬ）を、Ｎ２下においてシリンジを介して添加した。次いで、この溶液を真空下において３０分間３回脱気し、そしてＮ２でパージした。次いでこの溶液を、６８℃で油浴中で６時間１５分攪拌した。次いで、この溶液をＣＨＣｌ３（１００ｍＬ）で希釈し、そして水（１００ｍＬ）を用いて３回洗浄した。有機層を、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そしてｒｏｔｏｖａｐで濃縮した。ジメチルアセトアミドを、高真空Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ蒸留（５０℃、０．２５ｍｍＨｇ）下において取り除いた。この残渣を、メチレンクロライドを溶媒として用いるシリカゲルカラムにて精製し、メチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロ−２−トリフルオロメチルインドール−３−カルボキシレートを黄色固体として生成した。総収率：０．０１０ｇ（０．０２２ｍｍｏｌ、２９％）
【０１７６】
【数５１】
2004511466.tif 000066
【０１７７】
１０％Ｐｄ／Ｃ（０．０２３ｇ）を、メチル７−ベンジルオキシ−４−（２−クロロエチル）−５−ニトロ−２−トリフルオロメチルインドール−３−カルボキシレート（０．０４６８ｇ，０．１０２ｍｍｏｌ）へ添加し、そして冷ＴＨＦ（７ｍＬ）をフラスコへ素早く添加した。この混合液を減圧下に置き、そしてＨ２で３回パージした。ＴＬＣにより完了されるまで、この反応物をＨ２下において室温および大気圧にて攪拌した。この溶液を、焼結漏斗（ｓｉｎｔｅｒ　ｆｕｎｎｅｌ）中のＣｅｌｉｔｅパッドを介して濾過し、そしてＴＨＦを用いて洗浄した。次いでこのアミンを減圧下において濃縮し、そして乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）を用いて２回コエバポレートした。このアミンへＥＤＣＩ（０．０４０ｇ，０．２０８ｍｍｏｌ）および５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボン酸（０．０２６ｇ，０．１０４ｍｍｏｌ）を添加した。このフラスコを覆い、そしてＮ２でフラッシュした。次いでこのアミンを乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、そしてＮ２下において４日間攪拌した。次いでその黄色溶液をエチルアセテート（１００ｍＬ）で希釈し、水（３回）（１００ｍＬ）および５％ＮａＨＣＯ３（７５ｍＬ）で洗浄した。有機層を回収し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、重力濾過し、そして減圧下において濃縮した。次いでこの残渣を、２．５％メタノールクロロホルムにおけるプレパラティブＴＬＣで精製し、粗生成物を生成した。この生成物をメチレンクロライドにおけるプレパラティブＴＬＣでさらに精製し、メチル４−（２−クロロエチル）−７−ヒドロキシ−２−トリフルオロメチル−５−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）インドール−３−カルボキシレートを黄色固体として生成した。総収率：０．００１ｇ（０．００２ｍｍｏｌ，２％）。
【０１７８】
【数５２】
2004511466.tif 000067
【０１７９】
実施例９
アキラルアミノｓｅｃｏ−ＣＩアナログの合成
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリンの合成
４−クロロ−３−ニトロアニリン（それぞれ２０．０ｇ，０．１１６ｍｏｌ）の２つの等しいバッチを、ドライライト乾燥管の下において、新たに蒸留されたジクロロメタン（Ｐ２Ｏ５上）（それぞれ１５０ｍＬ）および乾燥トリエチルアミン（それぞれ１．１ｅｑ．、１８ｍＬ，０．１２８ｍｏｌ）中に別々に溶解した。この反応混合物の各々を氷浴中で冷却し、そしてベンジルクロロホルメート（それぞれ５０ｍＬ，０．３４８ｍｏｌ）をゆっくり添加した。生じる溶液を加温し、４日間還流し、次いで混合し、そして濃縮した。その残渣をさらに、ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を用いて真空下において濃縮し、濃厚なオイルを得た。この油性物質をクロロホルム（３００ｍＬ）中に溶解し、ブライン（１００ｍＬ）を用いて洗浄した。この有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして真空下において濃縮した。この粗生成物を、２．５％メタノール／クロロホルムを溶媒として使用するシリカゲルカラムで精製した。総収量３２．２ｇ（４６％収率）のＮ−ベンジルオキシカルボニル−４−クロロ−３−ニトロアニリンを、冷凍すると凝固する黄色オイルとして単離した。
【０１８０】
【数５３】
2004511466.tif 000068
【０１８１】
水素化ナトリウム（１．５ｇの６０％ミネラルオイル懸濁物，０．０３８ｍｏｌ）を、窒素雰囲気下に保たれる乾燥反応フラスコ中で、乾燥ヘキサンを用いて洗浄した。ヘキサンを取り除き、そして乾燥ジメチルスルホキシド（１５ｍＬ）を添加した。この反応混合物を氷浴中において冷却し、そしてジエチルマロネート（４．０ｍＬ，０．０３２５ｍｏｌ）をゆっくり添加した。分液フラスコ（ｓｅｐａｒａｔｅ　ｆｌａｓｋ）中において、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−４−クロロ−３−ニトロアニリン（１．０ｇ，３．３ｍｍｏｌ）を乾燥ジメチルスルホキシド（１５ｍＬ）中に溶解し、そしてそれを冷水素化物（ｈｙｄｒｉｄｅ）／マロネート反応混合物へゆっくり添加した。生じる溶液を油浴中で１０５−１１５℃にて６４時間加温した。その溶媒を、Ｋｕｇｅｌｒｏｈｒ装置（０．１ｍｍＨｇ，６０℃）を使用する蒸留によって取り除き、粘性残渣を得、これは、クロロホルム（３００ｍＬ）を用いて溶解された。その有機層を、水（それぞれ１５０ｍＬ）を用いて２回洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥した。有機層の濃縮は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５−１０　％エチルアセテート／ヘキサングラディエント溶媒系を用いる）によって精製される油性残渣を与えた。所望される生成物ジエチル（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）マロネートを、冷却すると固化する橙色オイル（０．８８ｇ，６３％）として単離した。
【０１８２】
【数５４】
2004511466.tif 000069
【０１８３】
ジエチル（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）マロネート（０．５００ｇ’ｓ，１．１６ｍｍｏｌ）のエタノール（１５ｍＬ）および１０％ＮａＯＨ（ａｑ）（１８ｍＬ）溶液を４時間還流した。その時点で、真空下においてエタノールを取り除き、そしてＴＨＦ（２０ｍＬ）を添加した。この溶液を氷浴中において冷却したときに、この溶液を６Ｍ　ＨＣｌでｐＨ１に調整した。次いでこの溶液を１時間還流した。この２相性混合物からＴＨＦを（ピペットを用いて）取り除いた後に、水相をクロロホルム（２×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、次いで真空下において暗褐色オイルになるまで濃縮した。その粗生成物を、クロロホルムを用いるシリカゲルでクロマトグラフィーし、（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）酢酸を濃厚な黄色オイル残渣（０．３５ｇ，９１％）として得た。
【０１８４】
【数５５】
2004511466.tif 000070
【０１８５】
（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）酢酸（０．３５ｇ，１．０６ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中に溶解し、そして窒素下に保ち、次いでその溶液を氷浴中で冷却した。ボラン−ＴＨＦ複合体の溶液（３．６ｍＬの１．０Ｍ溶液，３．６ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、そしてその混合物を室温にて２．５時間攪拌した。その反応混合物を、水でゆっくりクエンチした（ｑｕｅｎｃｈｅｄ）。ＴＨＦ層を取り除き、そして水相をジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、次いで真空下においてオイルになるまで濃縮した。その粗生成物を、グラディエント溶媒系（クロロホルムから５％メタノール／クロロホルム）を用いるシリカゲルでクロマトグラフィーし、２−（（Ｎベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）エタノールを濃厚な無色オイル（０．３３ｇ，９３％．）として得た。
【０１８６】
【数５６】
2004511466.tif 000071
【０１８７】
窒素下に保たれる２−（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）エタノール（０．３３ｇ，１．０４ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（０．５５ｇ，２．０９ｍｍｏｌ）の新たに蒸留されたジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液中へ、四塩化炭素（０．６ｍＬ，３．８５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温にて１日間攪拌した後、これをオイルになるまで濃縮した。クロロホルムを用いるシリカゲルカラムでの油性残渣の精製によって、２−（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）エチルクロライドを濃厚な橙色／黄色オイル（０．２７ｇ，８１％）として得た。
【０１８８】
【数５７】
2004511466.tif 000072
【０１８９】
２−（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−ニトロアニリン−４−イル）エチルクロライド（１．０１ｇ）のＰｔＯ２（２５０ｍｇ）との混合物を冷ＴＨＦ（６０ｍＬ）中に懸濁し、そしてその懸濁液を、５５ｐｓｉおよび室温において１時間水素化した（振とうしながら）。その懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。その油性残渣を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２回）を用いてコエバポレートし、次いで高真空下において保った。このアミン中間体は不安定であるので、直接使用された。
【０１９０】
３−アミノ−２−（（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）アニリン−４−イル）エチルクロライド（１６９ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）のサンプルを乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に溶解した。次いでこの溶液を、窒素下において保たれる５，６，７−トリメトキシ−２−カルボン酸（１５０ｍｇ，０．６０ｍｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（２９６ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（５５ｍＬ）中の攪拌懸濁液へ添加した。新たに蒸留したＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２２ｍＬ，１．２８ｍｍｏｌ）を添加し、そして生じた透明溶液を一晩中室温にて攪拌した。その時点で、その反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）で希釈し、次いで水（５０ｍＬ）、１Ｍ　ＨＣｌ（５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）、その後ブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。次いでその有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして濃縮した。残渣を、２．５％　ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２溶媒系を用いるシリカゲルカラムで精製し、２−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリン−４−イル）エチルクロライドを透明無色泡沫（１０６ｍｇ，３６％）として得た。
【０１９１】
【数５８】
2004511466.tif 000073
【０１９２】
２−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリン−４−イル）エチルクロライド（１８７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を１０％　Ｐｄ／Ｃ（９５ｍｇ）と混合し、次いでＴＨＦ（２０ｍＬ、冷却）中に懸濁した。この懸濁液をパージし（３回）、そして水素下において大気圧および室温にて３日間保った。初日後、さらなる量のＴＨＦ（６ｍＬ）を添加した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその黄色溶液を真空下において濃縮した。この黄色−褐色残渣をＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ３グラディエント（０−６％）溶媒系を用いるシリカゲルカラムによって精製し、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）アニリン（１１７ｍｇ，８０％）を透明且つ濃厚な無色オイルとして得た。
【０１９３】
【数５９】
2004511466.tif 000074
【０１９４】
実施例１０
アキラルアミノｓｅｃｏ−ＣＢＩアナログの合成
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−１−ナフチルアミンおよびアナログの調製
Ｋ２ＣＯ３（４．０４ｇ，２９．２２ｍｍｏｌ）を１−クロロ−２，４−ジニトロナフタレン（６．０４ｇ、２３．９１ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチルエチルマロネート（５．０ｇ，２６．５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）溶液へ添加し、この混合物を加温し、一晩中還流した。この混合物を冷却および濾過し、次いでその濾液を減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２０−５０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテルグラディエント溶出）によって、ｔ−ブチルエチル（２，４−ジニトロナフタレン−１−イル）マロネート（７．６ｇ，５４％）を淡赤色固体として得た。
【０１９５】
【数６０】
2004511466.tif 000075
【０１９６】
濃縮ＨＣｌ（１．５ｍＬ）を、ｔ−ブチルエチル（２，４−ジニトロナフタレン−１−イル）マロネート（０．６０ｇ，１．４８ｍｍｏｌ）のＡｃＯＥｔ（６ｍＬ）溶液へ添加し、そしてこの混合物を一晩中攪拌した。この混合物をＡｃＯＥｔ（３０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＯ３（１０ｍＬ）、および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。この有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。再結晶化（エーテル）によって、エチル（２，４−ジニトロナフタレン−１−イル）アセテート（０．３１ｇ，６９％）を淡橙色固体として得た。
【０１９７】
【数６１】
2004511466.tif 000076
【０１９８】
Ｎａ２Ｓ（６０％，４．２７ｇ，３２．８７ｍｍｏｌ）をエチル（２，４−ジニトロナフタレン−１−イル）アセテート（１０．０ｇ，３２．８７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２００ｍＬ）還流溶液へ添加し、そして０．５ｈ攪拌した。その混合物を水（２００ｍＬ）へ注ぎ込み、濃縮し、そしてＡｃＯＥｔ（３００ｍＬ）で抽出した。その有機層をＨ２Ｏ（１００ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。各水層をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で抽出した。混合した有機層を飽和水性ＮａＣｌ（５０ｍＬ）、で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、エチル（４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル）アセテート（１．０ｇ，１１％）を暗紫色固体として得た。
【０１９９】
【数６２】
2004511466.tif 000077
【０２００】
ベンジルクロロホルメート（１．５６ｍＬ，１０．９４ｍｍｏｌ）を、０℃にてＮ２雰囲気下であるエチル（４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル）アセテート（１．０ｇ，３．６５ｍｍｏｍｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．５６ｍＬ，４．０１ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）溶液へ、ゆっくり添加した。この混合物を３日間加熱還流し、そして濃縮した。その残渣をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）中に溶解し、そしてＨ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（２５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ３に対して２０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、エチル［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．３９ｇ，２６％）を橙色固体として得た。
【０２０１】
【数６３】
2004511466.tif 000078
【０２０２】
ＮａＯＨ（０．１７ｇ，４．３１ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（２０ｍＬ）溶液を、エチル［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．８ｇ，１．９６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（２０ｍＬ）懸濁液へ添加し、その混合物を加温し、２ｈｒ加熱還流した。ＥｔＯＨを留去し、そしてＥｔ２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄した。その水層を、６Ｍ　ＨＣｌを用いて酸性（ｐＨ１）にした。生じる沈殿物を濾過し、そして一晩中放置し（ｌｅｆｔ　ｏｕｔ）、［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］酢酸（０．６６ｇ，８９％）を橙色固体として得た。
【０２０３】
【数６４】
2004511466.tif 000079
【０２０４】
ＢＨ３−ＴＨＦ複合体（１．０Ｍ ｓｏｌ．，０．１３ｍＬ，０．１３ｍｍｏｌ）を、［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］酢酸（４０．０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液へＮ２雰囲気下において添加し、一晩中攪拌した。この反応混合物を、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ（１ｍＬ）で処理し、そしてＡｃＯＥｔ（２０ｍＬ）で抽出した。この有機層を飽和水性ＮａＣｌ（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２５％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］エタノール（２１．２ｍｇ，５３％）を暗赤色固体として得た。
【０２０５】
【数６５】
2004511466.tif 000080
【０２０６】
ＣＣｌ４（０．２ｍＬ，２．１８ｍｍｏｌ）を、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］エタノール（０．１ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）およびＰｈ３Ｐ（０．２９ｇ，１．０９ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液へＮ２雰囲気下において添加し、３ｈの間攪拌した。フラッシュクロマトグラフィー（１０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．１ｇ，９６％）を橙色固体として得た。
【０２０７】
【数６６】
2004511466.tif 000081
【０２０８】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．１ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液をＰｔＯ２（５０ｍｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液へ添加し、そしてこの懸濁液を５５ｐｓｉおよび室温において１時間水素化した（振とうしながら）。その懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮し、淡黄色固体（９０．０ｍｇ）として得た。
【０２０９】
この還元された化合物（９０．０ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）溶液を、５，６，７−トリメトキシ−２−カルボン酸（７１．７８ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）およびベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）（０．１４ｇ，０．２７ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）懸濁液へＮ２雰囲気下において添加した。次いで、蒸留Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ，０．６０ｍｍｏｌ）をこの混合物へ添加した。この透明溶液を一晩中攪拌した。この反応混合物を濃縮し、そしてＡｃＯＥｔ（２０ｍＬ）で希釈し、そして１０％　ＨＣｌ（５ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（５％　ＡｃＯＥｔ−ＣＨ２Ｃｌ２）によって、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（６２．０ｍｇ，４１％）を淡黄色泡沫として得た：
【０２１０】
【数６７】
2004511466.tif 000082
【０２１１】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（６０．０ｍｇ，０．１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液をＨ２雰囲気下において室温にて３日間水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。プレパラティブＴＬＣ（５０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン（８．２ｍｇ，１８％）を淡黄色固体として得た。
【０２１２】
【数６８】
2004511466.tif 000083
【０２１３】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．１ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液をＨ２雰囲気下において室温にて３日間水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。この残渣を、ジイソプロピルエーテルを用いて結晶化し、２−［４−アミノ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．０６４ｇ，８４％）を白色固体として得た：
【０２１４】
【数６９】
2004511466.tif 000084
【０２１５】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．１４ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１ｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液をＨ２雰囲気下において室温にて３日間水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。この残渣を、ジイソプロピルエーテルを用いて結晶化し、２−［４−アミノ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．０８３ｇ，７６％）を淡黄色固体として得た：
【０２１６】
【数７０】
2004511466.tif 000085
【０２１７】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−アミノナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（０．３ｇ，０．７９ｍｍｏｌ）のピリジン（３ｍＬ）溶液へ、５−メトキシ−２−カルボン酸（０．２３ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１６ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（０．２３ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下室温にて添加し、次いでその混合物を２日間攪拌し、そして６０℃にて２日間加温した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、そして１０％　ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮し、褐色泡沫として２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（０．５２ｇ，定量的）を生成した：
【０２１８】
【数７１】
2004511466.tif 000086
【０２１９】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（０．５ｇ，０．９１ｍｍｏｌ）のメタノール：テトラヒドロフラン＝１：１溶液（１０ｍＬ）へ、室温にて炭酸カリウム（０．１３ｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、一晩中攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、そしてＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮し、褐色泡沫として２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．４２ｇ，９４％）を生成した：
【０２２０】
【数７２】
2004511466.tif 000087
【０２２１】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−ｌ−イル］エタノール（０．４ｇ，０．７８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４４ｍＬ，３．１４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）溶液へ、メタンスルホニルクロライド（０．２４ｍＬ，３．１４ｍｍｏｌ）を添加し（氷浴を用いる）、そして１ｈ攪拌した。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、そしてＨ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、そして減圧下において濃縮した。その残渣をシリカゲルカラム（３０％　ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって精製し、黄色泡沫として２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．２８ｇ，６１％）を生じた：
【０２２２】
【数７３】
2004511466.tif 000088
【０２２３】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．２７ｇ，０．４６ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ、ＬｉＣｌ（０．３９ｇ，９．１９ｍｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、３日間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（５ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３０％　ＡｃＯＥｔ−−石油エーテル）によって、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．１６ｇ，６６％）を黄色泡沫として得た：
【０２２４】
【数７４】
2004511466.tif 000089
【０２２５】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（６８ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液を、Ｈ２雰囲気下において室温にて一晩中水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。この残渣を、ジエチルエーテルを用いて結晶化し、４−（２−クロロエチル）３−（５−メトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフチルアミン（４０ｍｇ，７８％）を白色固体として生成した：
【０２２６】
【数７５】
2004511466.tif 000090
【０２２７】
無水酢酸（４．０ｍＬ，４２．３９ｍｍｏｌ）を、２−［４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エタノール（３．３ｇ，１４．２１ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン（３３ｍＬ）溶液へ室温にて添加し、そして２ｈの間攪拌した。その混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈した。有機層をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（３０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３３％ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、２−［４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルアセテート（１．０ｇ，２６％）を橙色固体として得た。；
【０２２８】
【数７６】
2004511466.tif 000091
【０２２９】
ジ−ｔ−ブチルジカルボナート（３．１８ｇ，１４．５７ｍｍｏｌ）を、２−［４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルアセテート（１．０ｇ，３．６５ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン（１０ｍＬ）溶液へ室温にて添加し、そして一晩中攪拌した。その混合物を濃縮し、そしてＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈した。有機層をＨ２Ｏ（３０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（３０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２５％ＡｃＯＥｔ−石油エーテル）によって、２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（１．０ｇ，７３％）を黄色固体として得た。；
【０２３０】
【数７７】
2004511466.tif 000092
【０２３１】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルアセテート（１．０ｇ，２．６７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ−Ｃ（０．１ｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液を、５５ｐｓｉにおいて室温にて１時間水素化した（振とうしながら）。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮し、２−［２−アミノ−４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ナフタレン−１−イル］エチルアセテートを橙色泡沫として得た。この化合物をジイソプロピルエーテルで洗浄し、淡黄色固体（０．４８ｇ，５２％）として与えた。：
【０２３２】
【数７８】
2004511466.tif 000093
【０２３３】
２−［２−アミノ−４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．２３ｇ，０．６７ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍＬ）溶液へ、（２Ｅ）−３−［６−メトキシ（３−ピリジル）］プロプ（ｐｒｏｐ）−２−エノイックアシッド（０．１８ｇ，１．００ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１４ｇ，１．００ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（０．１９ｇ，１．００ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下にて室温において添加し、次いでこの混合物を２日間攪拌し、そして６０℃にて３日間加温した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。この残渣をジエチルエーテルで洗浄し、白色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．１９ｇ，５６％）を得た：
【０２３４】
【数７９】
2004511466.tif 000094
【０２３５】
２−［２−アミノ−４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．２３ｇ，０．６７ｍｍｏｌ）のピリジン（４ｍＬ）溶液へ、（２Ｅ）−３−［２，６−ジメトキシ（３−ピリジル）］プロプ（ｐｒｏｐ）−２−エノイックアシッド（０．２１ｇ，１．００ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１４ｇ，１．００ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（０．１９ｇ，１．００ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下にて室温において添加し、次いでこの混合物を２日間攪拌し、そして６０℃にて３日間加温した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮した。この残渣をジエチルエーテルで洗浄し、白色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．２２ｇ，６１％）を得た：
【０２３６】
【数８０】
2004511466.tif 000095
【０２３７】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（０．１９ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）のメタノール（４ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液へ、炭酸カリウム（０．０６ｇ，０．４５ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、一晩中攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮し、２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エタノールを淡褐色泡沫（０．１７ｇ，９７％）を生成した：
【０２３８】
【数８１】
2004511466.tif 000096
【０２３９】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．２２ｇ，０．４１ｍｍｏｌ）のメタノール（４ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）溶液へ、炭酸カリウム（０．０７ｇ，０．４９ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、一晩中攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮し、淡褐色泡沫として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エタノール（０．２０ｇ，９９％）を生成した：
【０２４０】
【数８２】
2004511466.tif 000097
【０２４１】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エタノール（０．１６ｇ，０．３５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２ｍＬ，１．４３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＨＦ＝１：１（６ｍＬ）溶液へ、メタンスルホニルクロライド（０．１ｍＬ，１．２９ｍｍｏｌ）を氷浴を用いて添加し、そして１ｈの間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）そして減圧下において濃縮した。その残渣をジエチルエーテルで洗浄し、白色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルメタンスルホネート（０．１７ｇ，９０％）を生成した：
【０２４２】
【数８３】
2004511466.tif 000098
【０２４３】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エタノール（０．１７ｇ，０．３４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２ｍＬ，１．４３ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２：ＴＨＦ＝１：１（６ｍＬ）溶液へ、メタンスルホニルクロライド（０．１ｍＬ，１．２９ｍｍｏｌ）を氷浴を用いて添加し、そして１ｈの間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）そして減圧下において濃縮した。その残渣をジエチルエーテルで洗浄し、黄色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルメタンスルホネート（０．１８ｇ，９３％）を生成した：
【０２４４】
【数８４】
2004511466.tif 000099
【０２４５】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルメタンスルホネート（０．１５ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ、ＬｉＣｌ（０．６９ｇ，１６．２８ｍｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、そして３日間攪拌した。この反応混合物はＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加され、そしてその沈殿物が濾過された。この固体をＭｅＯＨで洗浄し、２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルクロライド（０．１２ｇ，９１％）を白色固体として得た：
【０２４６】
【数８５】
2004511466.tif 000100
【０２４７】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．１６ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３ｍＬ）溶液へ、ＬｉＣｌ（０．７２ｇ，１７．００ｍｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、そして４日間攪拌した。その反応混合物は、ＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加され、そしてその沈殿物が濾過され、２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．１２ｇ，８４％）を白色固体として生成した。：
【０２４８】
【数８６】
2004511466.tif 000101
【０２４９】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルクロライド（０．１２ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）懸濁液へ、ＡｃＯＥｔ（３ｍＬ，９ｍｍｏｌ）中の３Ｎ　ＨＣｌを室温にて添加し、そして生じる溶液を一晩中攪拌した。その沈殿物を濾過し、４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−４−メトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミンジハイドロクロライド（０．１１ｇ，１００％）を淡黄色固体として生成した：
【０２５０】
【数８７】
2004511466.tif 000102
【０２５１】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．１２ｇ，０．２３ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）懸濁液へ、ＡｃＯＥｔ（３ｍＬ，９ｍｍｏｌ）中の３Ｎ　ＨＣｌを室温にて添加し、そして生じる溶液を一晩中攪拌した。その沈殿物を濾過し、４−（２−クロロエチル）−３−（３−アザ−２，４−ジメトキシシンナモイルアミド）−ｌ−ナフチルアミンジハイドロクロライド（０．１１ｇ，９７％）を黄色固体として生成した。：
【０２５２】
【数８８】
2004511466.tif 000103
【０２５３】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−アミノナフタレン−ｌ−イル］エチルアセテート（０．３ｇ，０．７９ｍｍｏｌ）のピリジン（３ｍＬ）溶液へ、カルボン酸（０．３８ｇ，１．１９ｍｍｏｌ），１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１６ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（０．２３ｇ，１．１９ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下において室温にて添加し、次いでその混合物を３日間攪拌した。この反応混合物へ１Ｍ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）を添加し、次いでその沈殿物を濾過し、そして水およびＭｅＯＨで洗浄し、淡褐色固体２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．６４ｇ，定量的（ｑｕａｎｔ．））を生成した：
【０２５４】
【数８９】
2004511466.tif 000104
【０２５５】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．６４ｇ，０．９４ｍｍｏｌ）のメタノール：テトラヒドロフラン＝１：１（４０ｍＬ）溶液へ、室温にて炭酸カリウム（０．１３ｇ、０．９４ｍｍｏｌ）を添加し、一晩中攪拌した。この沈殿物を濾過し、そしてＭｅＯＨで洗浄し、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．３２ｇ，５３％）を淡黄色固体として生成した：
【０２５６】
【数９０】
2004511466.tif 000105
【０２５７】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．３ｇ，０．４７ｍｍｏｌ）のピリジン（３ｍＬ）溶液へ、メタンスルホニルクロライド（０．１５ｍＬ，１．８８ｍｍｏｌ）を氷浴を用いながら添加し、そして１ｈの間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、次いでその有機層を１Ｍ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄した。この有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そして減圧下において濃縮し、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．３２ｇ，９５％）を褐色オイルとして生成した；
【０２５８】
【数９１】
2004511466.tif 000106
【０２５９】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−ｌ−イル］エチルメタンスルホネート（０．３ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（６ｍＬ）溶液へ、ＬｉＣｌ（０．３５ｇ，８．３７ｍｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、そして３日間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、そしてその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに減圧下において濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３０％　ＡｃＯＥｔ−−石油エーテル）によって、２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（８４ｍｇ，３０％）を黄色固体として生成した。：
【０２６０】
【数９２】
2004511466.tif 000107
【０２６１】
２−［４−（Ｎ−ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−（５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（７０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液を、Ｈ２雰囲気下において室温にて一晩中水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。この残渣をジエチルエーテルで結晶化し、４−（２−クロロエチル）−３−［５−（５−ベンゾフラン−２−カルボキサミド）インドール−２−カルボキサミド］−ｌ−ナフチルアミン（１６ｍｇ，２９％）を淡黄色固体として生成した：
【０２６２】
【数９３】
2004511466.tif 000108
【０２６３】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−アミノナフタレン−１−イル］エチルアセテート（１．５ｇ，７．２４ｍｍｏｌ）のピリジン（３０ｍＬ）溶液へ、５−ニトロ−２−ベンゾフランカルボン酸（２．２５ｇ，１０．８６ｍｍｏｌ），Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１．９ｍＬ），１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（１．４７ｇ，１０．８６ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（２．０８ｇ，１０．８６ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下において室温にて添加し、そしてこの混合物を２日間攪拌し、さらに６０℃で３日間加温した。この反応混合物を濃縮し、そしてその残渣へＨ２Ｏ（５０ｍＬ）を添加した。沈殿物を濾過し、淡褐色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（２．１　ｇ，５４％）を生成した：
【０２６４】
【数９４】
2004511466.tif 000109
【０２６５】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（２．１ｇ，３．９４ｍｍｏｌ）のメタノール（４０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）溶液へ、炭酸カリウム（０．６５ｇ，４．７２ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、一晩中攪拌した。この反応混合物を濾過し、そしてその濾液をエバポレートした。この残渣をシリカ−ゲルカラムＡｃＯＥｔ／石油エーテル＝１／２）によって精製し、淡褐色固体として２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（０．７ｇ，３６％）を生成した：
【０２６６】
【数９５】
2004511466.tif 000110
【０２６７】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（１．５ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．８５ｍＬ，６．１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液へメタンスルホニルクロライド（０．５ｍＬ，６．４７ｍｍｏｌ）を添加し（氷浴を用いて）、そして０．５ｈの間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、そしてＨ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに減圧下において濃縮し、黒色オイルとして２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（１．８ｇ，定量的（ｑｕａｎｔ））を生成した；
【０２６８】
【数９６】
2004511466.tif 000111
【０２６９】
２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（１．８ｇ，３．０５ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（６０ｍＬ）溶液へＬｉＣｌ（５．１７ｇ，０．１２ｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、そして３日間攪拌した。この反応混合物はＨ２Ｏ（２０ｍＬ）を添加され、その沈殿物は濾過され、２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．５２ｇ，混合物）を生成した。ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−ニトロベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（０．５２ｇ，混合物）を、１０％Ｐｄ−Ｃ（０．５ｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、その懸濁液を５５ｐｓｉにおいて室温にて１時間水素化した（振とうしながら）。その懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮した。この残渣をＭｅＯＨで洗浄し、白色固体として生成した（２−［４−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−２−（５−アミノベンゾフラン−２−カルボザミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライドから５．５％、８０ｍｇ）。
【０２７０】
【数９７】
2004511466.tif 000112
【０２７１】
実施例１１
アキラルｓｅｃｏ−ＣＢＩアナログの合成
４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−１−ナフトールの調製
３５％Ｈ２ＳＯ４（５０ｍＬ）へエチル２−［４−アミノ−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（１．０ｇ，３．６５ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、そして一晩中攪拌し、塩を完全に作製した。この懸濁液へ＋３℃以下の冷却水（１ｍＬ）のＮａＮＯ２（０．３３ｇ，４．７４ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、そしてその混合物を５分間攪拌した。尿素のわずかな結晶をこの混合物へ添加し、すべての過剰なＮａＮＯ２を分解した。この氷冷混合物へ＋１０℃以下のＣｕ（ＮＯ３）２・３Ｈ２Ｏ（１４．０９ｇ，５８．３３ｍｍｏｌ）水溶液（総体積は１４０ｍＬである）を添加した。勢い良く攪拌しながら、この混合物へＣｕ２Ｏ（０．４８ｇ，３．３５ｍｍｏｌ）を添加し、３ｈの間攪拌した。
【０２７２】
この混合物をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を水（５０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、そしてエバポレートした。この残渣をシリカゲルカラム（ＡｃＯＥｔ：石油エーテル＝１：６）によって精製し、エチル２−［４−ヒドロキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．４２ｇ，４２％）を黄色固体として生成した。
【０２７３】
【数９８】
2004511466.tif 000113
【０２７４】
無水Ｋ２ＣＯ３（０．５０ｇ，３．６８ｍｍｏｌ）をエチル２−［４−ヒドロキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．４２ｇ，１．５３ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（０．４４ｍＬ，３．６８ｍｍｏｌ）のアセトン（４ｍＬ）溶液へ室温にて添加し、その混合物を一晩中攪拌した。この反応混合物を濾過し、そしてその濾液を濃縮した。その残渣をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、そしてその混合物へＮ−メチルピペラジン（３ｍＬ）を添加し、すべての過剰な臭化ベンジルを取り除いた。この混合物を水（１０ｍＬ）、ｌＭ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらにエバポレートし、エチル２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．３５ｇ，６３％）を黄色固体として生成した。
【０２７５】
【数９９】
2004511466.tif 000114
【０２７６】
ＤＩＢＡＬ−Ｈ（１．０Ｍ，３．８４ｍＬ，３．８４ｍｍｏｌ）をエチル２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］アセテート（０．３５ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液へＮ２雰囲気下において０℃にてゆっくり添加し、そして１５分間攪拌した。この混合物を冷１Ｎ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）へゆっくり注ぎ込み、そしてその混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で抽出した。有機層を１Ｍ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらにエバポレートし、２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エタノール（０．３３ｇ，定量的（ｑｕａｎｔ．））を暗褐色固体として生成した。
【０２７７】
【数１００】
2004511466.tif 000115
【０２７８】
無水酢酸（０．３５ｍＬ，３．７１ｍｍｏｌ）を２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エタノール（（０．３ｇ，０．９３ｍｍｏｌ）の乾燥ピリジン（３ｍＬ）溶液へ室温において添加し、一晩中攪拌した。この混合物を濃縮し、そしてＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）中に溶解した。この有機層を１Ｍ　ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いでこの有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに濃縮した。この残渣をシリカ−ゲルカラム（ＡｃＯＥｔ：石油エーテル＝１：６）によって精製し、２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルアセテート（（０．２１ｇ，６２％）を黄色固体として生成した。
【０２７９】
【数１０１】
2004511466.tif 000116
【０２８０】
２−［４−ベンジルオキシ−２−ニトロナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３０ｍＬ）溶液を、ＰｔＯ２（１００ｍｇ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてその懸濁液を５５ｐｓｉにて室温において１ｈの間水素化した（振とうしながら）。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧下において濃縮し、２−［４−ベンジルオキシ−２−アミノナフタレン−１−イル］エチルアセテートを褐色固体（０．１８ｇ，９７．５８％）として生成した。
【０２８１】
【数１０２】
2004511466.tif 000117
【０２８２】
２−［４−ベンジルオキシ−２−アミノナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．１６ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）のピリジン（３ｍＬ）溶液へ、５，６，７−トリメトキシ−２−カルボン酸（０．１８ｇ，０．７２ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（０．１０ｇ，０．７２ｍｍｏｌ）および１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド（０．２７ｇ，１．４３ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下において室温にて添加し、次いでこの混合物を３日間攪拌し、さらに２日間加温した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、そして１０％ＨＣｌ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＨＣＯ３（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下において濃縮した。この残渣をシリカゲルカラム（ＡｃＯＥｔ：石油エーテル＝１：４）によって精製し、橙色泡沫として２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．１０ｇ，３７％）を生成した：
【０２８３】
【数１０３】
2004511466.tif 000118
【０２８４】
２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルアセテート（０．１０ｇ，０．１８ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（２ｍＬ）溶液へ、炭酸カリウム（２９．１５ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を室温にて添加し、そして一晩中攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（５０ｍＬ）で希釈し、そしてＨ２Ｏ（１０ｍＬ）、飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いでその有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下において濃縮し、黄色オイルとして２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（８２ｍｇ，８７％）を生成した。；
【０２８５】
【数１０４】
2004511466.tif 000119
【０２８６】
２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エタノール（８０ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０９ｍＬ，０．６１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）溶液へ、メタンスルホニルクロライド（０．０５ｍＬ，０．６１ｍｍｏｌ）を添加し（氷浴を用いて）、次いでこの混合物を１ｈの間攪拌した。この反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、次いでＨ２Ｏ（１０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（２０ｍＬ）で洗浄し、次いで有機層を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、さらに減圧下において濃縮し、褐色オイルとして２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．１１ｇ，定量的（ｑｕａｎｔ））を生成した。；
【０２８７】
【数１０５】
2004511466.tif 000120
【０２８８】
２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルメタンスルホネート（０．１１ｇ，０．１７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）溶液へＬｉＣｌ（０．２９ｇ，６．９４ｍｍｏｌ）を室温にてＮ２雰囲気下において添加し、３日間攪拌した。この反応混合物をＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）および飽和水性ＮａＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）さらに減圧下において濃縮した。この残渣をシリカゲルカラム（ＡｃＯＥｔ：石油エーテル＝１：４）によって精製し、白色固体として２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（７５ｍｇ，８１％）を生成した：
【０２８９】
【数１０６】
2004511466.tif 000121
【０２９０】
２−［４−ベンジルオキシ−２−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）ナフタレン−１−イル］エチルクロライド（７０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）溶液を１０％　Ｐｄ／Ｃ（５０ｍｇ）の冷ＴＨＦ（１０ｍＬ）懸濁液へ添加し、そしてこの懸濁液をＨ２雰囲気下において室温にて一晩中水素化した。この懸濁液をＣｅｌｉｔｅ上で濾過し、そしてその濾液を減圧にて濃縮した。この残渣をジエチルエーテルで結晶化し、４−（２−クロロエチル）−３−（５，６，７−トリメトキシインドール−２−カルボキサミド）−ｌ−ナフトール（５４ｍｇ，９１％）を白色固体として生成した。：
【０２９１】
【数１０７】
2004511466.tif 000122
【０２９２】
実施例１２
ヒト慢性骨髄性白血病細胞における細胞毒性研究
培養物中のガン細胞の増殖に対する本発明の化合物の細胞毒性を研究し、そしてその結果をテーブル１において提供する。細胞毒性を、ＭＴＴテトラゾリウム染色アッセイ（４２）を使用して測定した。Ｋ５６２ヒト慢性骨髄性白血病細胞を、１０％ウシ胎児血清および２ｍＭグルタミンを補足したＲＰＭＩ　１６４０培地において、３７℃にて、５％ＣＯ２を含む湿潤雰囲気において維持し、そして特定用量の薬物と共に、１時間または連続的に３日間、３７℃にて暗所中でインキュベートした。このインキュベーションを遠心分離（５分間、３００ｇ）によって終了し、そしてこの細胞を、薬物を含まない（ｄｒｕｇ−ｆｒｅｅ）培地で１回洗浄した。適切な薬物処理の後に、この細胞を９６−ウェルマイクロタイタープレートへ移した（１ウェル当たり１０４細胞、１サンプル当たり８ウェル）。次いでプレートを、５％ＣＯ２を含む湿潤雰囲気において３７℃にて暗所中で保った。このアッセイは、生存細胞の黄色可溶性テトラゾリウム塩（３−４，５−ジメチルチアゾール−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ，Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ．））を不溶性紫色ホルマザン沈殿物へ還元する能力に基づく。このプレートの４日間のインキュベーション後（コントロール細胞を数において１０倍増加させるため）、２０μＬの５ｍｇ／ｍＬのＭＴＴのリン酸緩衝生理食塩水溶液を各ウェルへ添加し、そしてそのプレートをさらに５時間インキュベートした。次いでこのプレートを５分間３００ｇで遠心分離し、そして１ウェル当たり１０−２０μＬを残して、培地の大部分を細胞ペレットからピペットで取った（ｐｉｐｅｔｔｅｄ）。２００μＬ　ＤＭＳＯを各ウェルへ添加し、そして完全な混合を確実にするために、そのサンプルをかき混ぜた（ａｇｉｔａｔｅ）。次いで光学密度はタイターテックマルチスキャン（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ　Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ）ＥＬＩＳＡプレートリーダー上の５５０ｎｍの波長で読み取られ、さらにその用量−応答曲線が作成された。各曲線について、最終光学密度をコントロール値の５０％まで減少させるのに必要とされる用量として、ＩＣ５０値を読み取った。
【０２９３】
テーブル１　本発明の化合物についてのＫ５６２細胞に対する
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞毒性データ　ＩＣ５０（μＭ）
【０２９４】
【表５】
2004511466.tif 000123
【０２９５】
【化１１】
2004511466.tif 000124
【０２９６】
【化１２】
2004511466.tif 000125
【０２９７】
細胞毒性研究からの結果は、培養物中のヒト白血病細胞の増殖を阻害することにおいて本発明の化合物が有意な活性を有することを示す。このデータはまた、細胞の上記薬物への長引く暴露が活性にいくらかの増強を導くことを実証する。
【０２９８】
実施例１３
ヒト結腸（ｃｏｌｏｎ）、前立腺、および乳ガン細胞における細胞毒性研究
ヒト結腸腺癌細胞系（ＬＳ　１７４Ｔ）をＥｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅｓ，　ＣＡＭＲ，　Ｐｏｒｔｏｎ　Ｄｏｗｎ，　Ｕ．Ｋ．から入手した。ＬＳ　１７４Ｔ細胞を、１％非−必須アミノ酸、１０％熱不活性型ウシ胎児血清、２ｍＭ　Ｌ−グルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンで補足したＥａｇｌｅ’ｓ　ＭＥＭにおいて、３７℃にて、５％ＣＯ２、９５％空気−湿潤インキュベーター中で、慣用的な手順によって培養した。細胞を９６−ウェルマイクロタイタープレート中に１０００細胞／ウェルの密度でシーディングした（ｓｅｅｄｅｄ）。実験期間を通してコンロトールウェルにおける指数関数的な増殖を確実にするため、またスルホローダミンＢ（ＳＲＢ）アッセイ（４３）により分析する際に４９２ｎｍにおける吸光度と細胞数との間の直線関係を得るために、最適なシーディング濃度（ｓｅｅｄｉｎｇ　ｄｅｎｓｉｔｙ）を決定した。シーディングの２４時間後、細胞を、１時間または連続的に３日間薬物（濃度範囲０．０１〜５００μＭ）と共にインキュベートした。細胞を１回洗浄し、次いで薬物を含まない（ｄｒｕｇ　ｆｒｅｅ）培地中で６日間インキュベートした。インキュベーションの終了時に、細胞増殖をＳＲＢアッセイ（これは、生存細胞を、それらの総細胞タンパク質含有量を測定することによって定量する）によって測定した。ＩＣ５０（ｉｎ−ｖｉｔｒｏにおいて５０％の生存を与える薬物の濃度）は、阻害のパーセンテージ対ｌｏｇモル薬物濃度をプロットすることによって得られる用量−応答曲線（三次スプラインによって補間される（ｉｎｔｅｒｐｏｌａｔｅｄ））から計算された。ＰＣ３（ヒト前立腺ガン細胞）およびＭＣＦ−７（ヒト乳ガン細胞）の増殖に対して、同様の研究を行った。
【０２９９】
テーブル２．本発明の化合物についてのｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞毒性データ
ＩＣ５０（μＭ）
【０３００】
【表６】
2004511466.tif 000126
【０３０１】
これらの細胞毒性研究からの結果はさらに、培養物中におけるガン細胞の増殖に対する本発明の化合物の活性を実証する。１時間の暴露に続いて、アキラルｓｅｃｏ−プロドラッグ１および９は、Ｋ５６２細胞のように、ＬＳ１７４Ｔ細胞に対して同様に活性を示した。同様に、１時間の暴露を行うと、Ｋ５６２およびＬＳ１７４Ｔ細胞の両方について化合物７（ブロモ含有化合物）は活性でなかった。これは、固有の高反応性およびそれによる水溶液中での低安定性に帰する可能性がある。４−ニトロベンジルカルボナート誘導体（化合物１３−１５）の有意に低い細胞毒性はさらに、化合物が強力な活性を表すためには遊離Ｃ４−ヒドロキシ基を有する必要性があることを示した。この結果は、ｓｅｃｏ−ＣＣ１０６５およびデュオカルマイシンが、それらの対応するシクロプロパン−含有薬物の形成を介してＤＮＡと反応するという報告された証拠と矛盾しない。本発明者らの場合、４−ニトロベンジルカルボナート基がＨＣｌの迅速な放出を妨げ、活性なシクロプロパン−含有薬物を形成する。
【０３０２】
実施例１４
マウスＬ１２１０白血病およびＰ８１５肥満細胞腫細胞についての
細胞毒性研究
Ｐ８１５およびＬ１２１０細胞系を、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）より入手した。この細胞系を、１０％ウシ胎児血清、Ｈｅｐｅｓ緩衝液（２ｍＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ　Ｃｅｌｌｇｒｏ，２５−０６０−ＣＩ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ、Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ　Ｃｅｌｌｇｒｏ）およびペニシリン／ストレプトマイシン（５０，０００ユニットペニシリン、５０，０００ｍｇストレプトマイシン，Ａｔｌａｎｔａ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）で補足したＤｅｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ，Ａｔｌａｎｔａ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）において増殖させた。細胞を３７℃にて５％湿潤ＣＯ２雰囲気において維持した。培養細胞を、ヘモサイトメーター（ｈｅｍｏｃｙｔｏｍｅｔｅｒ）を使用してカウントし、新しいＤＭＥＭ中に８×１０５細胞／ｍＬの濃度で再懸濁した。この細胞懸濁液（１００μＬ）を９６ウェル平底細胞培養プレートへ加えた。この濃度で、８０．０００細胞を各ウェルにシーディングした（ｓｅｅｄｅｄ）。薬物溶液（ＤＭＳＯ中に溶解し、そしてＤＭＥＭ中に希釈した）を各ウェル（５μＬ／ウェル）へ添加し、１×１０−４から１×１０−１２Ｍの範囲の最終濃度にした。各薬物濃度に対して４つの同じ（ｑｕａｄｒｕｐｌｉｃａｔｅ）ウェルを調製した。このプレートを７２ｈｒの間３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気においてインキュベートした。ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド）をＰＢＳ（５ｍｇ／ｍｌ）中に溶解した。所定の細胞インキュベーション時間の後、このストックＭＴＴ溶液の１０μＬを各ウェルへ添加し、そしてそのプレートをさらに４ｈの間３７℃にて５％ＣＯ２雰囲気においてインキュベートした。この最終インキュベーションの後、１００μＬ酸イソプロパノール溶液（５ｍＬイソプロパノール中に１６μＬの１２．１Ｎ　ＨＣｌ）を各ウェルへ添加した。この細胞懸濁液を上下にピペッティングすることによってウェルの内容物を混合し、そして紫色の完全な顕色（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）を可能にするために、このプレートを室温にて１５分間放置させた。このプレートを、５７０ｎｍの試験波長（ｔｅｓｔ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）および６３０ｎｍの基準波長（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）を用いて、Ｄｙｎｅｘ　Ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ　３．２ソフトウェアを使用するＤｙｎａｔｅｃｈ　Ｐｌａｔｅ　Ｒｅａｄｅｒで読み取った。５０％増殖を阻害する用量（ＩＣ５０）を、吸光度データの平均（４点／濃度）に基づいて生成される曲線から外挿した（ｅｘｔｒａｐｏｌａｔｅｄ）。
テーブルＡ３．アキラルな薬剤についてのＩＣ５０値（μＭ）
【０３０３】
【表７】
2004511466.tif 000127
【０３０４】
実施例１５
ＮＣＩ　ｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞毒性スクリーン
Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，　Ｂｅｔｈｅｓｄａ，　ＭＤ（４４）にて、本発明の化合物をまた６０のヒトガン細胞系のパネルに対して試験した。この細胞毒性研究は、４８時間の暴露を用い且つスルホローダミンＢ−由来の色の光学密度を測定して行われた。用量−応答曲線がＧＩ５０（５０％増殖を阻害するのに必要な薬物濃度）、ＴＧＩ（総増殖阻害）、およびＬＣ５０（細胞の５０％を殺すのに必要な濃度）について生成された。化合物１、３、７、９、２２、２５および２６をＮＣＩへ付託し、そして化合物１、３、２２、２５および２６についての結果を以下に示す。
【０３０５】
【表８】
2004511466.tif 000128
【０３０６】
テーブル５．６０のガン細胞系に対する化合物１からのＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値
【０３０７】
【表９】
2004511466.tif 000129
【０３０８】
テーブル６．６０のガン細胞系に対する化合物１のＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値のグラフ図
【０３０９】
【表１０】
2004511466.tif 000130
【０３１０】
テーブル７．６０のガン細胞系に対する化合物３からのＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値
【０３１１】
【表１１】
2004511466.tif 000131
【０３１２】
テーブル８．６０のガン細胞系に対する化合物３のＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値のグラフ図
【０３１３】
【表１２】
2004511466.tif 000132
【０３１４】
テーブル９．６０のガン細胞系に対する化合物２２からのＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値
【０３１５】
【表１３】
2004511466.tif 000133
【０３１６】
テーブル１０．６０のガン細胞系に対する化合物２２のＧＩ５０、ＴＧＩおよびＬＣ５０の値のグラフ図
【０３１７】
【表１４】
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【０３１８】
テーブル１１．ＮＣＩによる化合物２５のｉｎ−ｖｉｔｒｏ抗ガンスクリーニング
【０３１９】
【表１５】
2004511466.tif 000135
【０３２０】
テーブル２．ＮＣＩによる化合物２６のｉｎ−ｖｉｔｒｏ抗ガンスクリーニング
ＮＣＩ細胞毒性スクリーンからの結果は、本発明の化合物が広範囲のヒトガン細胞に渡り有意な細胞毒性効力を有することを明白に実証する。化合物１、３、２２、２５および２６はかなり異なる構造を有するけれども、いずれの化合物（ｂｏｔｈ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）も多くの類似する生物学的特性を示した。第１に、これらはマイクロモルの範囲において活性を示した。第２に、これらの化合物のいずれも白血病細胞に対して多くの活性を示さなかったのに、それらは固形腫瘍細胞に対して強い活性を示した。第３に、それらは、黒色腫細胞、さらにある程度乳房、卵巣および肺細胞に対しても活性であった。これらの化合物の新規構造およびこれらの化合物の特有の生物学的プロフィールに基づいて、これらは、ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって、ｉｎ−ｖｉｔｒｏホローファイバーアッセイ（ｈｏｌｌｏｗ　ｆｉｂｅｒ　ａｓｓａｙ）（４５）のために選択されてきた。
【０３２１】
実施例１６
予備ｉｎ　ｖｉｖｏ試験のためのホローファイバーアッセイ
Ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｂｒａｎｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｐｒｏｇｒａｍは、ラージ−スケールｉｎ−ｖｉｔｒｏ細胞スクリーンによって同定された化合物の潜在的な抗ガン活性を評価するために、予備ｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニング手段を採用した。これらのアッセイのために、ヒト腫瘍細胞をポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ）ホローファイバーにおいて培養し、そして各細胞系のサンプルをマウスにおける２つの生理学的コンパートメント（腹腔内および皮下）の各々へ移植した。各試験マウスは、３つの異なるガン細胞系を代表する計６ファイバー（３つが腹腔内的に、３つが皮下的に）を受容する。３匹のマウスを、２種類の試験用量の各々での潜在的な抗腫瘍化合物を用い、腹腔内経路によって、ＱＤ×４処理スケジュールを用いて、処理する。ビヒクルコントロールは、化合物希釈剤のみを受容する６匹のマウスからなる。処理の最終日の次の日に、ファイバー培養物（ｃｕｌｔｕｒｅ）を回収した。抗ガン効果を評価するために、細胞系の各々について、ホルマザン染色（ＭＴＴ）変換アッセイ（ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ａｓｓａｙ）を用いて、生存細胞マスを測定する。これより、ビヒクルコントロールの平均光学密度によって割り算した化合物処理サンプルの平均光学密度を用いることによって、％Ｔ／Ｃが計算され得る。さらに、マウスへの移植の日にファイバー培養物のサンプルが生存細胞マスについて評価されるのと同様に、各サンプルについて細胞マスにおける正味の増加（ｎｅｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅ）が測定され得る。それゆえに、試験化合物の細胞増殖抑制および細胞破壊の能力が評価され得る。
【０３２２】
概して、各化合物は、最低１２のヒトガン細胞系に対して試験された。各々の実験が３細胞系を含むので、これは合計４の実験を表す。データは、腹腔内および皮下サンプルについて計算される異なる値を用いて、細胞系の各々に対する２つの化合物用量の各々についての％Ｔ／Ｃとして報告される。
【０３２３】
いくつかのホローファイバーアッセイ判定基準に基づく標準的な皮下異種移植モデルにおけるさらなるｉｎ　ｖｉｖｏ試験のために、化合物が選択される。これらとしては、以下：（１）４８の可能な試験的組み合わせ（１２細胞系×２部位×２化合物用量）の１０において５０以下の％Ｔ／Ｃ；（２）２４の可能な組み合わせの最低４つにおける少し離れた距離（腹腔内薬物／皮下培養物）での活性および／または（３）各移植部位における１つ以上の細胞系の正味の細胞殺傷（ｎｅｔ　ｃｅｌｌ　ｋｉｌｌ）が挙げられる。評価を単純化するために、所与の化合物の活性の迅速な観察を可能にするポイントシステム（ｐｏｉｎｔ　ｓｙｓｔｅｍ）を採用してきた。これのために、生存細胞マスにおいて５０％以上の減少をもたらす各化合物用量に対して２の値が割り当てられる（ａｓｓｉｇｎｅｄ）。腹腔内および皮下サンプルは別々にスコアをつけられ、それによって判定基準（１）および（２）が評価され得る。ＩＰ＋ＳＣスコア≧２０、ＳＣスコア≧８または１つ以上の細胞系の正味の細胞殺傷の組み合わせを伴う化合物が異種移植試験に適用される（ｒｅｆｅｒｒｅｄ）。これらの判定基準は、ホローファイバーアッセイおよび異種移植試験における＞８０のランダムに選択される化合物の活性結果を比較することによって、統計的に実証された。この比較は、ホローファイバーアッセイが最初のｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニング手段として使用されるならば、活性化合物を見逃す可能性が非常に低いことを示した。これらの判定基準に加えて他のファクター（例えば、特有の構造、作用のメカニズム）も、これらの判定基準を満たす化合物を有さない標準的な異種移植試験について、化合物の適用をもたらし得る。
【０３２４】
化合物３についての実験は今なお進行中である。しかしながら、化合物１の研究は完了し、そしてその結果は以下のようである：ヒトＨ５２２肺ガンについては、８のＩＰスコア、１０のＳＣスコア（１８のＩＰ＋ＳＣスコアを与える）であり、また有意な細胞殺傷を観察した。これらの結果に基づいて、化合物１は、ＮＣＩ’ｓ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって、ヌードマウスにおいてヒト腫瘍異種移植を使用するｉｎ−ｖｉｖｏ試験についてさらに選択された。この計画は、少なくとも３つの異なる固形腫瘍を調べる（Ｈ５２２肺ガンであるものを含む）ことである。化合物２５について行われたホローファイバー研究では、５４（ＩＰ＝４６、およびＳＣ＝８）の複合スコアが得られ、細胞殺傷が観察された。この化合物は現在、２つの乳ガン（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＤＡ−ＭＢ−４３５）および肺ガン（ＮＣＩ−Ｈ２３）に対してＮＣＩで異種移植試験を受けている。
【０３２５】
実施例１７
ｐＢＲ３２２鎖ニッキングアッセイ（ｎｉｃｋｉｎｇ　ａｓｓａｙ）
化合物がＤＮＡの副溝内のプリン−Ｎ３へ共有結合すると、その付加物は熱的に不安定である。これは容易に加水分解され、ＤＮＡ鎖を生み出す（２）。結果的に、アデニン−Ｎ３（またはグアニン−Ｎ３）アルキル化付加物の形成が、単鎖破壊の形成の結果として、スーパーコイルｐＢＲ３２２　ＤＮＡ（Ｉ型）のニックオープン閉環ＤＮＡ（ｎｉｃｋｅｄ　ｏｐｅｎ　ｃｌｏｓｅｄ−ｃｉｒｃｕｌａｒ　ＤＮＡ）（ＩＩ型）への熱的変換によって検出され得る。次いで、ｐＢＲ３２２ＤＮＡのこれらの２つの異なる型をアガロースゲル電気泳動によって分離し得、メチレンブルー染色ゲルのデンシトメトリーによって各型の相対的な量を測定し得る（３９）。ｐＢＲ３２２ＤＮＡのスーパーコイル型は、開環型よりコンパクトであり、その結果として陽極の方向へゲルをさらに下方へ移動する。
【０３２６】
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中に溶解した薬物の溶液を、０．１０ｍＭ濃度で作製し、そして常に冷蔵庫の中で保存した。
【０３２７】
ｐＨ７．４で２５℃および０．０１０ＭにおけるＴｒｉｓ緩衝溶液を、蒸留水で１００ｍＬ体積に希釈したＴｒｉｓ　ＨＣｌ（０．６６１ｇ）、Ｔｒｉｓベース（０．０９７）から作製した。次いでＥＤＴＡ−Ｎａ２−２Ｈ２Ｏ（０．１８６ｇ）およびＫＣｌ（３．７２ｇ）をこのＴｒｉｓ　ＨＣｌ溶液へ添加し、そして蒸留水で５００ｍＬ体積になるまで希釈した。ＴＢＥ溶液を、脱イオン水で３リットルの体積になるまで希釈したＣａｒｏｌｉｎａ　Ｌｏｔ　＃　４０２０６０２　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｂｕｆｆｅｒ　２０×ＴＢＥから調製した。アガロースゲルを、ＴＢＥ緩衝液（４０ｍＬ）中に溶解し、さらに電子レンジ中で溶解するまで加温したａｇａｒｏｓｅ　ｌｏｗ　ＥＥＯ（０．３２ｇ）から調製した。
【０３２８】
Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＢｉｏｔｅｃｈからのｐＢＲ３２２　ＤＮＡ（１００μｇ／１００μＬ）は緩衝液（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ　ｐＨ７．５、および１ｍＭ　ＥＤＴＡ）中に存在した。このＤＮＡはＥ．ｃｏｌｉ　ＨＢ１０１からアルカリ溶解法によって単離されたプラスミドＤＮＡから調製され、そしてＳｅｐｈａｒｃｒｙｌ　Ｓ−１００クロマトグラフィーによって精製された後、ＣｓＣｌ−エチジウムブロマイド遠心分離された。
【０３２９】
ＤＮＡ（１０μＬ）、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ　ＫＣｌ緩衝液（１８μＬ）、および化合物（２μＬ）を１００μＭの濃度でエッペンドルフチューブ（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ　ｔｕｂｅｓ）へ添加することによって、アルキル化サンプルを調製した。このサンプルを４０℃で４０時間インキュベートした。このサンプル移動し（ｒｅｍｏｖｅ）、次いで１分間遠心分離した。１０％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）（２μＬ）、５０％グリセロール（５μＬ）、およびブロモフェノールブルー（２μＬ）をこのサンプルへ添加した。このチューブの内容物を、ボルテックスミキサー（Ｖｏｒｔｅｘ　ｍｉｘｅｒ）を用いて混合し、次いでこのサンプルを固めるために遠心した。アガロースゲルを、チャンバー（ｃｈａｍｂｅｒ）中においてＴＢＥ−緩衝液で覆った。このサンプルをアガロースゲル上へロードし、そして４０Ｖにて３時間（すなわち、そのバンドがゲルの下方約３／４になるとき）泳動した。
【０３３０】
ゲルを移し、そしてメチレンブルーで染色した（４５ｍｉｎ）。その時点で、染色ゲルをウォーターチャンバー中に一晩中置いた。各バンド（すなわち、ＩＩおよびＩ型）の強度を、デンシトメトリーを用いて測定した。アキラル化合物１、３および９をこの研究に供し、その結果をテーブル４に示した。
テーブルＡ４．本発明の化合物におけるＤＮＡアルキル化研究。
【０３３１】
【表１６】
2004511466.tif 000136
【０３３２】
テーブルＡ４からの結果は、ＤＮＡ鎖の破壊が薬物−ＤＮＡ溶液の４０℃にて４０時間のインキュベーション後に生成されることを示す。この鎖切断は、付加物Ａ−Ｎ３またはＧ−Ｎ３部位の熱的開裂反応の結果として形成され、それゆえこれらの化合物が副溝へ優先的に結合し、そしてその中においてアルキル化することの証拠が提供される。
【０３３３】
実施例１８
Ｔａｑポリメラーゼストップアッセイ
本発明の化合物の特定配列でＤＮＡをアルキル化する能力を、Ｔａｑポリメラーゼストップアッセイを用いて研究した。使用した手順は、Ｐｏｎｔｉら（４１）によって以前に記載された。薬物／ＤＮＡインキュベーションより前に、プラスミドｐＢＲ３２２　ＤＮＡを適切な制限酵素で直線化し、プライマーから下流のＴａｑについて停止させた。Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼおよび［γ３２−Ｐ］−ＡＴＰ（５０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ．ＵＫ）を用いる増幅の前に、オリゴデオキシヌクレオチドプライマーを５’−末端標識した。この標識プライマーを、Ｂｉｏ−Ｒａｄスピンカラムを通す溶出によって精製した。合成プライマー５’−ＧＣＡＧＣＡＧＡＴＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡ−３’（ＳＣＡとして同定される）は、位置３０９０−３１０９で相補鎖に結合し、そしてボトム鎖（ｂｏｔｔｏｍ　ｓｔｒａｎｄ）におけるアルキル化を調べるために使用された。プライマー５’−ＧＣＡＴＴＧＧＴＡＡＣＴＧＴＣＡＧＡＣＣ−３’（ＳＲＭとして同定される）は、配列３３０３−３２８４において結合し、そして上部鎖（ｔｏｐ　ｓｔｒａｎｄ）を調べるために使用された。ＤＮＡの直線的増幅を、０．５μｇのテンプレートＤＮＡ、５０ｐｍｏｌの標識プライマー、２５０μＭの各ｄＮＴＰ、１Ｕ「Ｒｅｄ　Ｈｏｔ」Ｔａｑポリメラーゼ、２０ｍＭ（ＮＨ４）２ＳＯ４、７５ｍＭ　Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ９．０）、０．０１％Ｔｗｅｅｎ、２．５ｍＭ　ＭｇＣｌ２、および０．０１％ゼラチンを含む総体積１００μｌ中で行った。９４℃にて４分間の最初の変性の後、サイクル条件を以下のようにした：計３０サイクルについて、９４℃で１分間、６０℃で１分間、および７２℃で１分間。増幅した後、このサンプルをエタノール沈殿し、そして７０％エタノールで洗浄した。サンプルをホルムアミドローディング染色剤（ｌｏａｄｉｎｇ　ｄｙｅ）中に溶解し、２分間９０℃にて加温し、氷上で冷却し、そして２５００−３０００Ｖにて３ｈの間８０ｃｍ×２０ｃｍ×０．４ｍｍ　６％アクリルアミド変性シーケンシングゲル（Ｓｅｑｕａｇｅｌ，Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）上で電気泳動した。このゲルを乾燥し、そしてｘ−線フィルムをこのゲルに曝露した（ｅｘｐｏｓｅｄ）（Ｈｙｐｅｒｆｉｌｍ，Ａｍｅｒｓｈａｍ．ＵＫ）。Ｂｉｏ−Ｒａｄ　ＧＳ−６７０イメージングデンシトメーターでデンシトメトリーを行った。
【０３３４】
化合物１，２および２７についてのテーブル１３および１４に示されるゲルは、それぞれＰｖｕＩＩフラグメント、およびＳｃａＩフラグメントについて行われた。これらの化合物の各々は、２がクロロ脱離基の代わりにブロモを含むという相違のみを有するアキラルな「弾頭（ｗａｒｈｅａｄ）」を有する。化合物２７が１および２に共通するより大きなインドール−ベンゾフラン基の代わりに５−ニトロインドール基を含むこと以外は、これらの３つ化合物の非共有結合部分はまた、類似している。結果によって示されるようにこれらの特徴は重要であると証明された。化合物１および２の両方ともが２７よリ大きな配列選択性を示す（これは、もし化合物１および２とＤＮＡとのより大きな非共有結合相互作用に起因するならば、推定できる）。
【０３３５】
【化１３】
2004511466.tif 000137
【０３３６】
【表１７】
2004511466.tif 000138
【０３３７】
テーブル１３．ＰｖｕＩＩプライマーを用いるＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイ；レーン１、コントロールＤＮＡ；レーン２、１００μＭ　クロラムブシル処理；レーン３　化合物２７（１０μＭ、５ｈ）；レーン４　化合物２７（１００μＭ、５ｈ）；レーン５　化合物２７（１０μＭ、８ｈ）；レーン６　化合物２７（１００μＭ、８ｈ）；レーン７　化合物１（１０μＭ、５ｈ）；レーン８　化合物１（１００μＭ、５ｈ）；レーン９　化合物１（１０μＭ、８ｈ）；レーン１０　化合物１（１００μＭ、８ｈ）；　レーン１１　化合物２（１０μＭ、５ｈ）；　レーン１２　化合物２（１００μＭ、５ｈ）；レーン１３　化合物２（１０μＭ、８ｈ）；レーン１４　化合物２（１００μＭ、８ｈ）。
【０３３８】
【表１８】
2004511466.tif 000139
【０３３９】
テーブル１４．ＳｃａＩＩプライマーを用いるＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイ；レーン１、コントロールＤＮＡ；レーン２、１００μＭ　クロラムブシル処理；レーン３　化合物２７（１０μＭ、５ｈ）；レーン４　化合物２７（１００μＭ、５ｈ）；レーン５　化合物２７（１０μＭ、８ｈ）；レーン６　化合物２７（１００μＭ、８ｈ）；レーン７　化合物１（１０μＭ、５ｈ）；レーン８　化合物１（１００μＭ、５ｈ）；レーン９　化合物１（１０μＭ、８ｈ）；レーン１０　化合物１（１００μＭ、８ｈ）；　レーン１１　化合物２（１０μＭ、５ｈ）；　レーン１２　化合物２（１００μＭ、５ｈ）；レーン１３　化合物２（１０μＭ、８ｈ）；レーン１４　化合物２（１００μＭ、８ｈ）。
【０３４０】
テーブル１３中に表されるＰｕｖＩＩフラグメントについて、強力なアルキル化部位が５’−ＡＡＡＡＡ（＃３２０７，３２０８）、５’−ＴＴＡＴ（＃３２０２）、５’−ＡＡＧＧＧ（＃３１８６）、５’−ＡＡＡＡ（＃３１７１）、およびＧ（＃３１１５）において見出された。ＳｃａＩ　ＤＮＡフラグメントについては、ＡＡ（＃３２３９）、ＴＴ（＃３２６３）、およびＡ（＃３３２１）において見出された。同様のＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイを両方のＰｕｖＩＩとｓｃａＩフラグメントについて行い、そしてＣＣ−１０６５およびアドゼレシンと比較した。結果（データは示さない）は、ＣＣ−１０６５およびアドゼレシンならびに本発明の化合物（ヘアピン化合物（１７、１８および１９）を除く）の共有結合配列選択性の間の類似性を示した。これらのヘアピン化合物は、ＤＮＡの異なる配列をアルキル化する優先傾向を示した。具体的には、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイから、このヘアピン化合物１７−１９は、５’−ＡＡＡＡＡ配列（ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンのほとんどのアナログによる主要アルキル化部位）をアルキル化しなかった。その代わり、それらは３’−ＡＴＴＴ−５’配列でアルキル化選択性を示した。化合物１８については、さらなる特有の強力なアルキル化部位が３’−ＧＣＡＡＣＧ−５’において見出された。化合物１９については、特有であるけれども弱いアルキル化部位が３’−（Ｇ）ＣＡ−５’に局在した。本発明において記載される化合物（とりわけ配列特異的認識およびアルキル化の新規モチーフを使用するヘアピン化合物）の特有の配列特異性ゆえに、それらは、遺伝子発現を制御することにおける適用に加え、ゲノム中の特定配列を同定することにおける潜在的な用途を有し得る。
【０３４１】
テーブル１３および１４における結果はまた、ブロモ−含有アナログ２が、対応するクロロ−化合物１よりもＤＮＡをアルキル化すること（それゆえＴａｑＤＮＡポリメラーゼの活性をブロックすること）において非効率的であることを示唆する。これはおそらく、より良い脱離基であり、それゆえにより加溶媒分解反応性であるブロモの結果である。
【０３４２】
化合物２５、２６および化合物２８（ｓｅｃｏ−ＣＢＩ−トリメトキシインドー基準化合物（ｓｅｃｏ−ＣＢＩ−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｉｎｄｏｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｃｏｍｏｐｕｎｄ）について行ったＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイからの結果をテーブル１５に示す。この結果は、テーブル１３および１４に記載されるような化合物と同様に、共有結合ＤＮＡ　ＡＴ配列選択性（優先的に５つの連続的なＡ（８６５）ＡＡＡＡ配列における）を表す。
【０３４３】
【化１４】
2004511466.tif 000140
【０３４４】
【表１９】
2004511466.tif 000141
【０３４５】
テーブル１５．化合物２５および２６についてのＴａｑＤＮＡポリメラーゼストップアッセイ。ＫＣＭＬは基準化合物である；ｓｅｃｏ−ＣＢＩ−トリメトキシインドール（化合物２８）。レーンは、これらの化合物の異なる濃度（μＭにて）に相当する。
【０３４６】
特許文献
【０３４７】
【表２０】
2004511466.tif 000142
【０３４８】
参考文献
【０３４９】
【表２１】
2004511466.tif 000143
【０３５０】
【表２２】
2004511466.tif 000144
【０３５１】
【表２３】
2004511466.tif 000145
【０３５２】
【表２４】
2004511466.tif 000146
【０３５３】
【表２５】
2004511466.tif 000147
【０３５４】
【表２６】
2004511466.tif 000148
【０３５５】
【表２７】
2004511466.tif 000149
【０３５６】
【表２８】
2004511466.tif 000150
【０３５７】
【表２９】
2004511466.tif 000151
【０３５８】
【表３０】
2004511466.tif 000152
【国際公開パンフレット】
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2004511466.tif 000155
2004511466.tif 000156
2004511466.tif 000157
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2004511466.tif 000160
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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