(57)【要約】本発明は、一般式（Ｉ）で示される化合物、該化合物の製造方法、該化合物を含有する医薬組成物、ならびに、炎症性疾患の治療のための医薬組成物を製造するための該化合物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）で示される化合物およびその薬学的に許容しうる塩：
【化１】
2004511460.tif 000019
［式中、Ｒ１は、４〜９員の飽和、不飽和または芳香族の環式基であり、
この基は、Ｎ、ＳおよびＯの群から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を含むことができ、
Ｒ１は、−Ｒ１−１−Ｚにより置換されており、
ここで、Ｒ１−１は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ１−２、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される３個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ１−１は、所望により、Ｒ１−３基から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１−２は、所望により、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０アルキニルであってよく、
Ｒ１−３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される３個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＺ−１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＺ−２ＲＺ−３、−ＳＯ２ＮＲＺ−２ＲＺ−３、−ＳＯ（ＯＲＺ−１）、−ＳＯ２（ＯＲＺ−１）、−Ｐ（Ｏ）ＲＺ−１（ＯＲＺ−３）または−ＰＯ（ＯＲＺ−１）（ＯＲＺ−３）であり、
ここで、ＲＺ−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＲＺ−４または−ＳＯ２ＲＺ−４であり、
ＲＺ−４は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
ＲＺ−１およびＲＺ−３は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
ＲＺ−１およびＲＺ−３は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノの群から選択される１〜３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１は、所望により、０〜２個の置換基Ｒ１−４、ハロゲン、ニトロ、アミノ、シアノおよびオキソにより置換されていてもよく、
ここで、Ｒ１−４は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルアミノ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルの群から選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり、
Ｒ２は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソの群から独立して選択される１〜３個の基により置換されていてもよく、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ３は、所望により、１〜３個のＲ３−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ３−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ３−２、−ＳＲ３−２、ＮＲ３−３Ｒ３−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ３−２、−ＳＯ２Ｒ３−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）Ｒ３−３、−ＳＯ２ＮＲ３−３Ｒ３−４、ＮＲ３−２ＳＯ２Ｒ３−３、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＣＯ２Ｒ３−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ３−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ３−３およびＲ３−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ３−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ４は、所望により、１〜３個のＲ４−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ４−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ４−２、−ＳＲ４−２、ＮＲ４−３Ｒ４−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ４−２、−ＳＯ２Ｒ４−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ４−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）Ｒ４−３、−ＳＯ２ＮＲ４−３Ｒ４−４、ＮＲ４−２ＳＯ２Ｒ４−３、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ４−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＣＯ２Ｒ４−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ４−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ４−３およびＲ４−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ４−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであるか、
あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素または硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜７員の飽和もしくは不飽和の環を形成し、この環は所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、また、３〜７員の単素環式もしくは複素環式の飽和、不飽和もしくは芳香環と融合していてもよく、
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり、
Ｒ５は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソにより３個まで置換されていてもよく、
Ｒ６は、フェニル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から独立して選択される３個までのヘテロ原子を含む５〜６員の芳香族複素環式基であり、
この基は、−ＮＲ６−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ６−３Ｒ６−４または−ＮＲ６−２Ｃ（Ｓ）ＮＲ６−３Ｒ６−４により置換されており、さらに所望により、ハロゲンにより置換されていてもよく、
ここで、Ｒ６−２およびＲ６−３は、水素もしくはＣ１−Ｃ４アルキルの群から独立して選択されるか、または、一緒になって以下の基を形成し：
【化２】
2004511460.tif 000020
Ｒ６−４は、フェニルであり、
Ｒ６−４は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、トロフルオロメトキシまたはシアノの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ７は、所望により、１〜３個のＲ７−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ７−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ７−２、−ＳＲ７−２、ＮＲ７−３Ｒ７−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ７−２、−ＳＯ２Ｒ７−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）Ｒ７−３、−ＳＯ２ＮＲ７−３Ｒ７−４、ＮＲ７−２ＳＯ２Ｒ７−３、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ７−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＣＯ２Ｒ７−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ７−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ７−３およびＲ７−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ７−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ８は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ８は、所望により、１〜３個のＲ８−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ８−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ８−２、−ＳＲ８−２、ＮＲ８−３Ｒ８−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ８−２、−ＳＯ２Ｒ８−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）Ｒ８−３、−ＳＯ２ＮＲ８−３Ｒ８−４、ＮＲ８−２ＳＯ２Ｒ８−３、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ８−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＣＯ２Ｒ８−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ８−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ８−３およびＲ８−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ８−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであるか、
あるいは
Ｒ７およびＲ８は、一緒になって、酸素、窒素または硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜７員の飽和もしくは不飽和の環を形成し、この環は所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、また、３〜７員の単素環式もしくは複素環式の飽和、不飽和もしくは芳香環と融合していてもよく、
Ｘは、結合または（−ＣＲＸ−１ＲＸ−２−）ｎであり、
ここで、ＲＸ−１およびＲＸ−２は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニルの群から選択してよく、
また、ＲＸ−１およびＲＸ−２は、独立して、所望によりＣ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
ｎは、整数０または１である］。
【請求項２】
Ｒ１がフェニル環である、請求項１に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項３】
Ｒ１−１が結合であり、ＺがＣＯＯＲＺ−１であり、ここで、ＲＺ−１が上記の意味を有する、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ６がフェニルであり、これが−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ６−４により置換されており、ここで、Ｒ６−４がメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されている、請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
ＲＸ−１およびＲＸ−２が水素である、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３およびＲ４が一緒になって６員の単素環を形成している、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が水素であり、Ｒ８が３−メトキシフェニル基または３，４−ジメトキシフェニル基である、請求項１〜６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が１，４−置換されたフェニル環である、請求項２に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれかに記載の一般式（Ｉ）で示される化合物の製造方法であって、一般式（Ｉ’）：
【化３】
2004511460.tif 000021
で示されるカルボン酸またはその活性化誘導体を、一般式（Ｉ’’）：
【化４】
2004511460.tif 000022
で示される化合物と、不活性溶媒中で反応させることを含んでなる方法。
【請求項１０】
疾患の治療のための、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項１１】
インテグリンが介在する状態の治療または予防のための薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
アテローム硬化症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー、糖尿病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、心筋虚血、慢性関節リウマチ、移植拒絶、ならびに、他の炎症性、自己免疫および免疫疾患を治療または予防するための薬剤の製造における、請求項１〜７のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれかに記載の化合物および薬学的に許容しうる担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
以下の一般式（Ｉ’）で示される化合物：
【化５】
2004511460.tif 000023
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８は、上記の意味を有し、ＰＧ１は、
カルボキシル基の保護基である］。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、式（Ｉ）：
【化６】
2004511460.tif 000002
で示される化合物、その製造、ならびに、その医薬組成物としての使用（インテグリンアンタゴニスト、特にα４β１および／またはα４β７および／またはα９β１インテグリンアンタゴニストとしての使用）、および特に、細胞付着および細胞付着が介在する疾患の抑制または予防に適する医薬組成物の製造のための使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
白血球と内皮細胞の間の付着相互作用は、炎症部位への白血球の通行に重要な役割を果たす。これらの現象は、病原体に対する正常な宿主の防御および組織損傷の修復に必須であるが、種々の炎症性および自己免疫疾患の病理に関与することもできる。実際のところ、組織への好酸球およびＴ細胞の浸潤が、アレルギー性炎症（喘息など）の基本的な特徴として知られている。
【０００３】
循環している白血球と血管の管腔表面の付着分子との相互作用は、白血球の移行を調整するようである。これらの血管細胞付着分子は、循環している白血球を阻止し、これにより、感染または炎症した組織部位へのその補充の第１工程として働く。次いで、血管外空間に到達した白血球は、結合組織細胞（例えば、線維芽細胞）ならびに細胞外マトリックスタンパク質（例えば、フィブロネクチン、ラミニンおよびコラーゲン）と相互作用する。従って、白血球上および血管内皮上の付着分子は、白血球移動に必須であり、多くの炎症性疾患における介入のための興味ある治療学的標的である。
【０００４】
炎症部位への白血球補充は段階的に起こり、血管内側の内皮細胞への白血球の束縛から始まる。これに続いて、白血球の回転、活性化、強固な付着、および移行が起こる。これら４つの補充工程に関与する多くの細胞付着分子が、これまでに同定され、特性化されている。これらの中で、血管細胞付着分子１（ＶＣＡＭ−１）と超後期抗原４（ＶＬＡ−４、α４β１インテグリン）の間の相互作用、ならびに、粘膜アドレシン（ａｄｄｒｅｓｓｉｎ）細胞付着分子１（ＭＡｄＣＡＭ−１）とα４β７インテグリンの間の相互作用が、生理学的流動条件下での、内皮細胞へのリンパ球および好酸球（好中球ではなく）の束縛、回転および付着を媒介することが知られている。このことは、ＶＣＡＭ−１／ＶＬＡ−４および／またはＭＡｄＣＡＭ−１／α４β７インテグリン媒介の相互作用が、インビボでの白血球サブ集団の選択的補充を主に媒介しうることを示唆するものである。この相互作用の抑制が、治療学的介入の出発点である［Ａ．Ｊ．Ｗａｒｄｌａｗ， Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ． １９９９， １０４， ９１７−２６］。
【０００５】
ＶＣＡＭ−１は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーの１員であり、炎症部位への白血球通行の重要な調節物質の１つである。ＶＣＡＭ−１は、細胞内付着分子１（ＩＣＡＭ−１）およびＥ−セレクチンと共に、インターロイキン１（ＩＬ−１）や腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）などのサイトカインにより、ならびに、リポ多糖（ＬＰＳ）により、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）依存性経路によって活性化された炎症内皮において発現される。しかし、これらの分子は、休眠内皮においては発現されない。ＶＣＡＭ−１によって媒介される細胞付着は、多くの生理学的および病理学的過程（筋発生、造血、炎症反応、および自己免疫疾患の発症を含む）に関与することができる。インテグリンＶＬＡ−４およびα４β７の両方が、ＶＣＡＭ−１のための白血球受容体として機能する。
【０００６】
インテグリンα４β１は、全ての循環白血球（成熟好中球を除く）において実質レベルで発現されるヘテロ二量体タンパク質である。これは、正常なリンパ球の通行および炎症反応中の組織への細胞移動を調節する。ＶＬＡ−４は、異なる一次配列決定基、例えばＶＣＡＭ−１のＱＩＤＳＰモチーフおよびフィブロネクチンの別法によりスプライスされたＩＩＩ型結合セグメントドメイン（ＣＳ−１）の主細胞型特異的な付着部位のＩＬＤＶＰ配列に結合する。
【０００７】
中和性モノクローナル抗体および阻害性ペプチドを用いたインビボでの研究は、白血球媒介の炎症におけるα４インテグリン相互作用の重要な役割を示した。即ち、ＶＬＡ−４／リガンド相互作用のブロックは、種々の炎症性、自己免疫および免疫疾患における治療学的介入に対する期待を抱かせた［Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ，Ｃ．： Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ １９９９， ９， １２９−１３３］。
【０００８】
さらに、置換基としてビサリル尿素部分を含む化合物が、α４β１インテグリン受容体アンタゴニストとして開示されている：国際特許出願公開ＷＯ９６／２２９６６、ＷＯ９７／０３０９４、ＷＯ９９／２０２７２、ＷＯ９９／２６９２３、ＷＯ９９／３３７８９、ＷＯ９９／３７６０５、ＷＯ００／００４７７。しかし、α４β１インテグリン受容体アンタゴニスト活性を有するβ−アミノ酸またはその同族体は開示されていない。
【０００９】
また、α４β１インテグリンアンタゴニスト活性に加えて、本発明の化合物を、α４β７またはα９β１インテグリンアンタゴニストとして使用することもできる。
【００１０】
（発明の開示）
本発明の目的は、炎症性、自己免疫および免疫疾患の治療のための、新規なβ−アミノ酸またはその同族体に由来するインテグリンアンタゴニストを提供することであった。
【００１１】
即ち、本発明は、以下の一般式（Ｉ）で示される化合物およびその薬学的に許容しうる塩に関する：
【化７】
2004511460.tif 000003
［式中、Ｒ１は、４〜９員の飽和、不飽和または芳香族の環式基であり、
この基は、Ｎ、ＳおよびＯの群から独立して選択される０〜３個のヘテロ原子を含むことができ、
Ｒ１は、−Ｒ１−１−Ｚにより置換されており、
ここで、Ｒ１−１は、結合、−Ｏ−、−Ｓ−、ＮＲ１−２、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される３個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ１−１は、所望により、Ｒ１−３基から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１−２は、所望により、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニルまたはＣ２−Ｃ１０アルキニルであってよく、
Ｒ１−３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される３個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｚは、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＺ−１、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＺ−２ＲＺ−３、−ＳＯ２ＮＲＺ−２ＲＺ−３、−ＳＯ（ＯＲＺ−１）、−ＳＯ２（ＯＲＺ−１）、−Ｐ（Ｏ）ＲＺ−１（ＯＲＺ−３）または−ＰＯ（ＯＲＺ−１）（ＯＲＺ−３）であり、
ここで、ＲＺ−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、−Ｃ（Ｏ）ＲＺ−４または−ＳＯ２ＲＺ−４であり、
ＲＺ−４は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
ＲＺ−１およびＲＺ−３は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
ＲＺ−１およびＲＺ−３は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノの群から選択される１〜３個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ１は、所望により、０〜２個の置換基Ｒ１−４、ハロゲン、ニトロ、アミノ、シアノおよびオキソにより置換されていてもよく、
ここで、Ｒ１−４は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルアミノ、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルの群から選択され、
Ｒ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり、
Ｒ２は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソの群から独立して選択される１〜３個の基により置換されていてもよく、
Ｒ３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ３は、所望により、１〜３個のＲ３−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ３−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ３−２、−ＳＲ３−２、ＮＲ３−３Ｒ３−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ３−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ３−２、−ＳＯ２Ｒ３−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ３−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）Ｒ３−３、−ＳＯ２ＮＲ３−３Ｒ３−４、ＮＲ３−２ＳＯ２Ｒ３−３、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＮＲ３−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ３−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３−３Ｒ３−４、−ＣＯ２Ｒ３−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ３−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ３−３およびＲ３−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ３−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ４は、所望により、１〜３個のＲ４−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ４−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ４−２、−ＳＲ４−２、ＮＲ４−３Ｒ４−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ４−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ４−２、−ＳＯ２Ｒ４−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ４−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）Ｒ４−３、−ＳＯ２ＮＲ４−３Ｒ４−４、ＮＲ４−２ＳＯ２Ｒ４−３、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＮＲ４−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ４−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ４−３Ｒ４−４、−ＣＯ２Ｒ４−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ４−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ４−３およびＲ４−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ４−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであるか、
あるいは
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素原子と一緒になって、酸素、窒素または硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜７員の飽和もしくは不飽和の環を形成し、この環は所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、また、３〜７員の単素環式もしくは複素環式の飽和、不飽和もしくは芳香環と融合していてもよく、
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはＣ３−Ｃ７シクロアルキルであり、
Ｒ５は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソにより３個まで置換されていてもよく、
Ｒ６は、フェニル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から独立して選択される３個までのヘテロ原子を含む５〜６員の芳香族複素環式基であり、
この基は、−ＮＲ６−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ６−３Ｒ６−４または−ＮＲ６−２Ｃ（Ｓ）ＮＲ６−３Ｒ６−４により置換されており、さらに所望により、ハロゲンにより置換されていてもよく、
ここで、Ｒ６−２およびＲ６−３は、水素もしくはＣ１−Ｃ４アルキルの群から独立して選択されるか、または、一緒になって以下の基を形成し：
【化８】
2004511460.tif 000004
Ｒ６−４は、フェニルであり、
Ｒ６−４は、所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、トロフルオロメトキシまたはシアノの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
Ｒ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ７は、所望により、１〜３個のＲ７−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ７−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ７−２、−ＳＲ７−２、ＮＲ７−３Ｒ７−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ７−２、−ＳＯ２Ｒ７−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）Ｒ７−３、−ＳＯ２ＮＲ７−３Ｒ７−４、ＮＲ７−２ＳＯ２Ｒ７−３、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＮＲ７−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ７−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−３Ｒ７−４、−ＣＯ２Ｒ７−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ７−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ７−３およびＲ７−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ７−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ８は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ２−Ｃ１０アルケニル、Ｃ２−Ｃ１０アルキニル、Ｃ６もしくはＣ１０アリール、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、または、酸素、窒素もしくは硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜９員の飽和もしくは不飽和の複素環式基であり、
Ｒ８は、所望により、１〜３個のＲ８−１基により置換されていてもよく、
ここで、Ｒ８−１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、−ＯＲ８−２、−ＳＲ８−２、ＮＲ８−３Ｒ８−４、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８−２、Ｓ（Ｏ）Ｒ８−２、−ＳＯ２Ｒ８−２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８−２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）Ｒ８−３、−ＳＯ２ＮＲ８−３Ｒ８−４、ＮＲ８−２ＳＯ２Ｒ８−３、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＮＲ８−２Ｃ（Ｏ）ＯＲ８−３、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ８−３Ｒ８−４、−ＣＯ２Ｒ８−５、ハロゲン、シアノ、ニトロまたはオキソであり、
Ｒ８−２は、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであり、
Ｒ８−３およびＲ８−４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールまたはベンジルの群から選択され、
Ｒ８−５は、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、Ｃ６もしくはＣ１０アリールであるか、
あるいは
Ｒ７およびＲ８は、一緒になって、酸素、窒素または硫黄の群から選択される２個までのヘテロ原子を含む４〜７員の飽和もしくは不飽和の環を形成し、この環は所望により、Ｃ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、また、３〜７員の単素環式もしくは複素環式の飽和、不飽和もしくは芳香環と融合していてもよく、
Ｘは、結合または（−ＣＲＸ−１ＲＸ−２−）ｎであり、
ここで、ＲＸ−１およびＲＸ−２は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ２−Ｃ４アルケニル、Ｃ２−Ｃ４アルキニルの群から選択してよく、
また、ＲＸ−１およびＲＸ−２は、独立して、所望によりＣ１−Ｃ４アルキル、フェニル、ベンジル、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルオキシ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、オキソの群から選択される１〜２個の置換基により置換されていてもよく、
ｎは、整数０または１である］。
【００１２】
（発明を実施するための最良の形態）
本発明において、アルキルは、直鎖または分岐鎖のアルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ペンチルである。他に特記することがなければ、Ｃ１−Ｃ１０アルキルが好ましく、Ｃ１−Ｃ６アルキルが極めて好ましい。
【００１３】
アルケニルおよびアルキニルは、１またはそれ以上の二重または三重結合を含む直鎖または分岐鎖の基、例えばビニル、アリル、イソプロピニル、エチニルである。他に特記することがなければ、Ｃ１−Ｃ１０アルケニルまたはアルキニルが好ましく、Ｃ１−Ｃ６アルケニルまたはアルキニルが極めて好ましい。
【００１４】
シクロアルキルは、環式アルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルである。単環式のＣ３−Ｃ７シクロアルキルが好ましい。
【００１５】
本発明におけるハロゲンは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素である。他に特記することがなければ、塩素またはフッ素が好ましい。
単素環は、炭素原子からなる環である。
【００１６】
４〜９員の飽和、不飽和または芳香族の環式基は、４〜９個の環原子を含み、０、１またはそれ以上の二重結合を含む単環式の系であり、環内の炭素原子またはヘテロ原子を介して結合することができ、例えばフェニル、チアゾリル、ピリジル、シクロペンチルである。
【００１７】
アリールは、６または１０個の環炭素原子を含む単環式のヒュッケルの芳香族環系である。
ヘテロアリールは、４〜９個の環原子を含む単環式のヘテロ芳香族系であり、環内の炭素原子または窒素原子を介して結合することができ、例えばフラン−２−イル、フラン−３−イル、ピロール−１−イル、ピロール−２−イル、ピロール−３−イル、チエニル、チアゾリル、オキサゾリル、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジルまたはピリダジニルである。
【００１８】
飽和または不飽和の複素環式基は、４〜９個の環原子を含む複素環式の系であり、１またはそれ以上の二重結合を含むことができ、環炭素原子または窒素原子を介して結合することができ、例えばテトラヒドロフラ−２−イル、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペリジン−４−イル、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イル、モルホリン−１−イル、１，４−ジアゼピン−１−イルまたは１，４−ジヒドロピリジン−１−イルである。
【００１９】
他に特記することがなければ、本発明におけるヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ、ＮまたはＰであるのが好ましい。
【００２０】
好ましい態様において、本発明は、Ｒ１がフェニル環である一般式（Ｉ）の化合物に関する。
別の好ましい態様において、本発明は、Ｒ１−１が結合であり、ＺがＣＯＯＲＺ−１であり、ここで、ＲＺ−１が上記の意味を有する一般式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに別の好ましい態様において、本発明は、Ｒ６がフェニルであり、これが−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ６−４により置換されており、ここで、Ｒ６−４がメチルまたはトリフルオロメトキシにより置換されている一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２１】
さらに別の好ましい態様において、本発明は、ＲＸ−１およびＲＸ−２が水素である一般式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに別の好ましい態様において、本発明は、Ｒ３およびＲ４が一緒になって６員の単素環を形成している一般式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに別の好ましい態様において、本発明は、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７が水素であり、Ｒ８が３−メトキシフェニル基または３，４−ジメトキシフェニル基である一般式（Ｉ）の化合物に関する。
さらに別の好ましい態様において、本発明は、Ｒ１が１，４−置換されたフェニル環である一般式（Ｉ）の化合物に関する。
【００２２】
特に好ましい化合物は、以下に挙げる化合物およびこれらそれぞれの安息香酸ｔｅｒｔ−ブチルである：
・４−｛［（１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝安息香酸、
・４−［（｛［１−（｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンジル］アミノ｝カルボニル）シクロヘキシル］メチル｝アミノ）カルボニル］安息香酸、
・４−｛［（１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンジル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝安息香酸、
・４−｛［（１−（３−メトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンジル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝安息香酸。
【００２３】
また、一般式（Ｉ）で示される化合物の好ましい製造方法をも見い出した。この方法は、一般式（Ｉ’）：
【化９】
2004511460.tif 000005
で示されるカルボン酸またはその活性化誘導体を、一般式（Ｉ’’）：
【化１０】
2004511460.tif 000006
で示される化合物と、不活性溶媒中で反応させることを含んでなる。この方法を、本明細書の他の箇所でさらに詳しく説明する。
【００２４】
上記の中間体（Ｉ’）［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ７およびＲ８は、上記の意味を有し、ＰＧ１は、カルボキシル基の保護基である］も、本発明の一部である。
【００２５】
驚くべきことに、本発明の化合物は、良好なインテグリンアンタゴニスト活性を示す。従って、これら化合物は、疾患の治療に、特にα４β１および／またはα４β７および／またはα９β１インテグリンアンタゴニストとして、ならびに、インテグリンが介在する状態の治療または予防のための薬剤の製造において、特に細胞付着および細胞付着が介在する疾患の抑制または予防のための医薬組成物の製造に適している。その例は、アテローム硬化症、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アレルギー、糖尿病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、心筋虚血、慢性関節リウマチ、移植拒絶、ならびに、他の炎症性、自己免疫および免疫疾患の治療および予防である。
【００２６】
本発明のインテグリンアンタゴニストは、上記した生理学的状態の治療に有用であるだけでなく、インテグリンの精製および活性の試験などの機能においても有用である。
【００２７】
上記した疾患の治療に対して、本発明の化合物は、非全身性または全身性の活性を示すことができ、この後者が好ましい。全身性の活性を得るために、活性化合物を、特に経口または非経口で投与することができ、経口投与が好ましい。
【００２８】
非経口投与のためには、粘膜（即ち、口腔、舌、舌下、直腸、鼻、肺、結膜または膣内）への、または身体内部への投与形態が特に適している。投与は、吸収を避けることにより（即ち、心臓内、動脈内、静脈内、脊髄内または腰椎内投与）、または吸収を含むことにより（即ち、皮膚内、皮下、経皮、筋肉内または腹腔内投与）行うことができる。
【００２９】
上記目的のために、活性化合物を、それ自体でまたは投与形態で投与することができる。
経口投与のための適当な投与形態は、特に、通常のおよび腸被覆した錠剤、カプセル、被覆錠剤、丸剤、顆粒、ペレット、粉末、固体および液体エーロゾル、シロップ、乳剤、懸濁剤および液剤である。非経口投与のための適当な投与形態は、注射および注入液剤である。
【００３０】
活性化合物は、投与形態中に、０．００１〜１００重量％の濃度で存在することができる。好ましくは、活性化合物の濃度は、０．５〜９０重量％、即ち、指定した範囲の用量を可能にするのに十分な量であるべきである。
【００３１】
活性化合物を、不活性な非毒性の薬学的に適する助剤（例えば、賦形剤、溶媒、ビヒクル、乳化剤および／または分散剤など）を用いて、既知の方法で上記の投与形態に変換することができる。
【００３２】
以下の助剤を例として挙げることができる：即ち、水、固体賦形剤、例えば粉砕した天然または合成無機物（例えば、タルカムまたはケイ酸塩）、糖（例えば、ラクトース）、非毒性の有機溶媒、例えばパラフィン、植物油（例えば、ゴマ油）、アルコール（例えば、エタノール、グリセロール）、グリコール（例えば、ポリエチレングリコール）、乳化剤、分散剤（例えば、ポリビニルピロリドン）および潤滑剤（例えば、硫酸マグネシウム）。
【００３３】
経口投与の場合、錠剤は、勿論、クエン酸ナトリウムなどの添加剤ならびにデンプン、ゼラチンなどの添加剤をも含有することができる。また、香味増強剤または着色剤を、経口投与のための水性調製物に加えることもできる。
【００３４】
非経口投与の場合に効果的な結果を得るためには、通常は約０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の量を投与するのが有利であることがわかった。経口投与の場合には、この量は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００３５】
しかし、関連の体重、投与方法、活性化合物に対する個々の反応、調製物の種類および投与の時間または間隔に依存して、上記した量をはずれる量を用いるのが必要になることもある。
【００３６】
酸性部分を含む本発明の化合物の薬学的に許容しうる塩には、有機または無機塩基を用いて形成させた付加塩が含まれる。このような塩基に由来する塩形成イオンは、金属イオン、例えばアルミニウム、アルカリ金属イオン、例えばナトリウムもしくはカリウム、アルカリ土類金属イオン、例えばカルシウムもしくはマグネシウム、またはアミン塩イオンであってよく、この目的に多くのものが知られている。その例には、アンモニウム塩、アリールアルキルアミン、例えばジベンジルアミンおよびＮ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、低級アルキルアミン、例えばメチルアミン、ｔ−ブチルアミン、プロカイン、低級アルキルピペリジン、例えばＮ−エチルピペリジン、シクロアルキルアミン、例えばシクロヘキシルアミンまたはジシクロヘキシルアミン、１−アダマンチルアミン、ベンザチン、あるいは、アミノ酸（アルギニン、リジンなど）に由来する塩が含まれる。生理学的に許容しうる塩、例えばナトリウムまたはカリウム塩およびアミノ酸塩を、下記のように薬剤において使用することができ、また好ましい。
【００３７】
塩基性部分を含む本発明の化合物の薬学的に許容しうる塩には、有機または無機酸を用いて形成させた付加塩が含まれる。このような酸に由来する塩形成イオンは、ハライドイオンまたは天然もしくは非天然のカルボン酸もしくはスルホン酸のイオンであってよく、この目的に多くのものが知られている。その例には、クロリド、アセテート、トリフルオロアセテート、タルトレート、あるいは、アミノ酸（グリシンなど）に由来する塩が含まれる。生理学的に許容しうる塩、例えばクロリド塩、トリフルオロ酢酸塩およびアミノ酸塩を、下記のように薬剤において使用することができ、また好ましい。
【００３８】
必ずしも生理学的に許容性ではないこれらおよび他の塩は、下記の目的に許容しうる生成物の単離または精製において有用である。
【００３９】
本発明の化合物は、異なる立体異性体形で存在することができる。これらは、互いにエナンチオマー様式（像および鏡像）あるいはジアステレオマー様式（鏡像とは異なる像）で関連している。本発明は、これらエナンチオマーおよびジアステレオマーならびにこれらの混合物に関する。これらは、常法に従って分離することができる。
【００４０】
一般的な化合物合成
一般式（Ｉ）で示される化合物の合成を、以下の反応式１で示すことができる：
反応式１
【化１１】
2004511460.tif 000007
【００４１】
カルボン酸誘導体（ＩＩ）とアミン（ＩＩＩ）とを結合させることにより、アミド（ＩＶ）を得ることができる。保護基ＰＧ１の除去、それに続くアミン（Ｖ）との結合により、アミド（ＶＩ）が得られる。保護基ＰＧ２を使用したときには、これを除去することにより、タイプ（ＶＩＩ）のカルボン酸が得られる。
【００４２】
上記の反応式において、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＶ）および（ＶＩ）において示した環は、Ｒ１により形成される環部分を示す。ＡＧは、ヒドロキシルまたは適当な活性化基（活性化カルボン酸誘導体を形成する）を表す。この種の活性化カルボン酸誘導体は、当業者に知られており、例えば以下に挙げる通常の教科書に詳しく記載されている：（ｉ）Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ， Ｍｏｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ （有機化学の方法）， Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ， Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、または（ｉｉ）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｂ．Ｍ．Ｔｒｏｓｔ編， Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄ， １９９１。カルボン酸は活性化されているのが好ましく、例えば、ＡＧ＝１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールおよびカップリング剤、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド×ＨＣｌ（ＥＤＣＩ）、２−（７−アザ−３−オキシド−１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェートである。他の活性化カルボン酸誘導体、例えば対称性無水物、混合無水物、Ｎ−カルボキシ無水物、ハライド、あるいは、別の活性化エステル、例えばスクシニルまたはペンタフルオロフェニルエステルを使用することもできる。
【００４３】
上記の反応式において、ＰＧ１および／またはＰＧ２は、カルボキシル基の適当な保護基を表すか、または、ＣＯＯＰＧ１および／またはＣＯＯＰＧ２は、固相合成に適するポリマー樹脂に結合したカルボキシル基を表す。この種の保護基は、当業者に知られており、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ， Ｐ．Ｇ．Ｗｕｔｓ， Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， 第３版， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９９に詳しく記載されている。カルボキシル基はエステル化されているのが好ましく、ＰＧ１は、Ｃ１−６アルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、Ｃ３−７シクロアルキル、例えばシクロプロピル、シクロプロピルメチル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アリール、例えばフェニル、ベンジル、トリル、またはこれらの置換誘導体である。
【００４４】
工程Ａ
アミド（ＩＶ）の形成は、それぞれのカルボン酸（ＩＩ）の活性化形、例えば１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールエステルを、所望のアミン（ＩＩＩ）またはその許容性の塩と反応させることによって行うことができる。
【００４５】
（ＩＩ）の１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールエステルは、例えば、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールとカルボン酸（ＩＩ）を、カップリング剤、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド×ＨＣｌ（ＥＤＣＩ）、２−（７−アザ−３−オキシド−１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェートの存在下に反応させることによって製造することができる。酸（ＩＩ）の別の活性化誘導体、例えば他の無水物、ハライド、エステル、例えばスクシニルまたはペンタフルオロフェニルエステルまたはとの反応によって得られる活性化カルボン酸を使用することもできる。
【００４６】
例えば、タイプ（ＩＶ）のアミドは、次のように製造することができる。
１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾールエステル法
不活性溶媒中のカルボン酸、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド×ＨＣｌ（ＥＤＣＩ）の溶液を室温で撹拌する。アミンおよび非求核性塩基（例えば、エチルジイソプロピルアミンまたは炭酸カリウム）を加えた後、撹拌を室温または高温で続ける。蒸発させた後、残留物を酢酸エチルに再溶解し、酸水溶液および塩基水溶液で洗浄し、乾燥し、蒸発させる。必要なら、この生成物を、トリチュレーションまたはフラッシュクロマトグラフィーによって精製するか、あるいは、さらに精製することなく使用する。
【００４７】
一般式（ＩＩ）の化合物は、市販されているか、既知であるか、または市販の前駆体から出発して常法により製造することができる。
一般式（ＩＩＩ）の化合物は、市販されているか、既知であるか、または既知のカルボン酸誘導体から出発して常法により製造することができる。
【００４８】
工程Ｂ
保護基ＰＧ１の除去は、ＰＧ１の性質に依存して、酸（例えば、トリフルオロ酢酸）または塩基（例えば、水酸化カリウムまたは水酸化リチウム）のどちらかにより行うことができる。反応は、水性の不活性有機溶媒中で、例えばアルコール（例えば、メタノールまたはエタノール）、エーテル（例えば、テトラヒドロフランまたはジオキサン）あるいは極性非プロトン性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で行う。必要なら、上記溶媒の混合物を使用することもできる。
【００４９】
アミド（ＶＩ）の形成は、それぞれのカルボン酸（ＩＶ）［カップリング剤、例えばＤＣＣとＨＯＢｔ；ＥＤＣＩとＨＯＢｔまたはＨＡＴＵによって活性化した］を、所望のアミン（Ｖ）またはその許容性の塩と反応させることによって行うことができる。酸（ＩＶ）の活性化誘導体、例えば無水物、ハライドおよびエステル、例えばスクシニルまたはペンタフルオロフェニルエステルを使用することもできる。
【００５０】
例えば、アミド（ＶＩ）は次のように製造することができる。
不活性溶媒中のカルボン酸、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）および１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド×ＨＣｌ（ＥＤＣＩ）の溶液を室温で撹拌する。アミンおよび非求核性塩基（例えば、エチルジイソプロピルアミンまたは炭酸カリウム）を加えた後、撹拌を室温または高温で続ける。蒸発させた後、残留物を酢酸エチルに再溶解し、酸水溶液および塩基水溶液で洗浄し、乾燥し、蒸発させる。必要なら、この生成物を、トリチュレーションまたはフラッシュクロマトグラフィーによって精製するか、あるいは、さらに精製することなく使用する。
【００５１】
一般式（Ｖ）の化合物は、市販されているか、既知であるか、または既知のカルボン酸誘導体から出発して常法により製造することができる。ビスアリール尿素は、アミノフェニル酢酸誘導体とフェニルイソシアネートのカップリングによって製造することができる。
【００５２】
工程Ｃ
保護基ＰＧ２の除去は、ＰＧ２の性質に依存して、酸（例えば、トリフルオロ酢酸）または塩基（例えば、水酸化カリウムまたは水酸化リチウム）のどちらかにより行うことができる。反応は、水性の不活性有機溶媒中で、例えばアルコール（例えば、メタノールまたはエタノール）、エーテル（例えば、テトラヒドロフランまたはジオキサン）あるいは極性非プロトン性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド）中で行う。必要なら、上記溶媒の混合物を使用することもできる。
【００５３】
（実施例）
短縮形
ＡｃＯＨ：酢酸
Ｂｏｃ：ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＥＤＣＩ：１−エチル−３−（３’−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド×ＨＣｌ
ｅｑ．：当量
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル
ＦＣ：フラッシュクロマトグラフィー
ＧＣ：ガスクロマトグラフィー
ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−３−オキシド−１Ｈ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ：Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＩＣＡＭ−１：細胞内付着分子１
ＩＬ−１：インターロイキン１
ＬＰＳ：リポ多糖
ＭＡｄＣＡＭ−１：粘膜アドレシン細胞付着分子１
ＭｅＯＨ：メタノール
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ｍｉｎ．：分
Ｍ．ｐ．：融点
ＮＦ−κＢ：核因子κＢ
ＮＭＲ：核磁気共鳴
ｎ．ｄ．：測定せず
ＰＥ：軽質石油
ｒ．ｔ．：室温
Ｒｆ：ＴＬＣのＲｆ値＝移動したスポットの距離／移動した溶媒前部の距離
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＣＬ：薄層クロマトグラフィー
ＴＮＦ−α：腫瘍壊死因子α
ｔＲ：ＨＰＬＣによって測定した保持時間
ＶＣＡＭ−１：血管細胞付着分子１
ＶＬＡ−４：超後期抗原４
【００５４】
全般的な注
以下の実施例において、他に特記することがなければ、全ての量のデータは、重量％である。
フラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル６０、４０〜６３μｍ（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， ドイツ）を用いて行った。
薄層クロマトグラフィーは、シリカゲル６０Ｆ２５４被覆したアルミニウムシート（Ｅ．Ｍｅｒｃｋ， Ｄａｒｍｓｔａｄｔ， ドイツ）を用い、表示した移動相を用いて行った。
融点は、開口キャピラリーにおいて測定し、補正しなかった。
質量測定は、電子噴霧イオン化（ＥＳＩ）法を用い、ＨＰＬＣ系からのループ注入またはスプリット注入を用いて行った。
【００５５】
前駆体の合成
実施例Ｉ：Ｎ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−（２−メチルフェニル）尿素
【化１２】
2004511460.tif 000008
２−メチルフェニルイソシアネート（２４．６ｇ、１８４．９ｍモル）を、ＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）中の１，４−ジアミノベンゼン（２０．００ｇ、１８４．９ｍモル）の溶液に、０℃で滴下した。室温で２時間撹拌した後、生成物を濾過により集めた（４２．７ｇ、１７７．０ｍモル）。
融点：＞３００℃；
ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ １／４）：Ｒｆ ０．３２；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ ２．１０（ｓ、３Ｈ）、４．７６（ｓ、２Ｈ）、６．５９（ｍｃ、２Ｈ）、６．８９（ｍｃ、１Ｈ）、７．０７−７．１５（ｍ、４Ｈ）、７．７３（ｓ、１Ｈ）、７．８５（ｍｃ、２Ｈ）、８．５０（ｓ、１Ｈ）。
【００５６】
実施例ＩＩ：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンジルカルバメート
【化１３】
2004511460.tif 000009
２−メチルフェニルイソシアネート（７．５７ｇ、５９．８３ｍモル）を、ＤＣＭ（１２０ｍｌ）中の（４−アミノベンジル）カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１３．３０ｇ、５９．８３ｍモル：Ｍｏｌｏｎｅｙ， Ｇｅｒａｒｄ Ｐ．； Ｍａｒｔｉｎ， Ｇｒａｅｍｅ Ｒ．； Ｍａｔｈｅｗｓ， Ｎｅｉｌ； Ｍｉｌｎｅ， Ａｙｎｓｌｅｙ； Ｈｏｂｂｓ， Ｈｅａｔｈｅｒら， Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ． １９９９， ４２， ２５０４−２５２６）の溶液に、０℃で滴下した。この反応液を、還流下に１６時間加熱し、室温まで冷却し、沈殿した生成物を濾過により集め、真空下に乾燥した（１９．２０ｇ、５４．００ｍモル）。
融点：２００〜２０２℃；
ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ １／１）：Ｒｆ ０．６５；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ １．３９（ｓ、９Ｈ）、２．２４（ｓ、３Ｈ）、４．０６（ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、２Ｈ）、６．９３（ｍｃ、１Ｈ）、７．１２−７．１７（ｍ、４Ｈ）、７．３２（ｍｃ、１Ｈ）、７．４０（ｍｃ、２Ｈ）、７．８５（ｍｃ、１Ｈ）、７．９０（ｓ、１Ｈ）、８．９８（ｓ、１Ｈ）。
【００５７】
実施例ＩＩＩ：Ｎ−［４−（アミノメチル）フェニル］−Ｎ’−（２−メチルフェニル）尿素
【化１４】
2004511460.tif 000010
ＣＨ２Ｃｌ２（１２０ｍｌ）中のｔｅｒｔ−ブチル ４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）ベンジルカルバメート（２．００ｇ、５．６３ｍモル）の溶液に、ＴＦＡ（３６ｍｌ）を０℃で加え、室温で２時間撹拌した。この反応混合物を蒸発させ、生成物を集めた（２．７２ｇ、ＴＦＡ塩）。
融点：１４２〜１４３℃；
ＴＬＣ（ＰＥ／ＥｔＯＡｃ ３／２）：Ｒｆ ０．１４；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ ２．２４（ｓ、３Ｈ）、３．９７（ｑ、Ｊ＝５Ｈｚ、２Ｈ）、６．９６（ｍｃ、１Ｈ）、７．１３−７．１９（ｍ、２Ｈ）、７．３６（ｍｃ、２Ｈ）、７．５１（ｍｃ、２Ｈ）、７．８１（ｍｃ、２Ｈ）、８．０６（ｓ、１Ｈ）、８．０８（ｓ、３Ｈ）、９．２３（ｓ、１Ｈ）。
【００５８】
化合物の合成
工程Ａ
実施例ＩＶ：ｔｅｒｔ−ブチル ４−（｛［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−エトキシ−３−オキソプロピル］アミノ｝カルボニル）ベンゾエート
【化１５】
2004511460.tif 000011
４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）安息香酸（４２ｍｇ、０．１９ｍモル）をＭｅＣＮに溶解し、ＨＯＢｔ（２８ｍｇ、０．２１ｍモル）、ＥＤＣＩ（４１ｍｇ、０．２１ｍモル）、ＤＩＰＥＡ（５０μｌ、０．２９ｍモル）およびエチル ３−アミノ−３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロパノエート＊ＨＣｌ（５６ｍｇ、０．２１ｍモル）を室温で加えた。２４時間の撹拌の後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）に溶解し、１０％クエン酸水溶液（５０ｍｌ）、飽和ソーダ水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥した（ＮａＳＯ４）。溶媒を真空下に蒸発させ、生成物を無色固体として集めた（４７ｍｇ、０．１０ｍモル、５３％）。
融点：１０８℃；
ＴＬＣ（シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ ７／３）：Ｒｆ ０．１７；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ １．２０（ｔ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、１．２６（ｍｃ、１Ｈ）、１．６０（ｓ、９Ｈ）、２．９６（ｍｃ、２Ｈ）、３．８６（ｓ、３Ｈ）、３．８７（ｓ、３Ｈ）、４．１２（ｑ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、２Ｈ）、５．３７（ｍｃ、１Ｈ）、６．８３（ｍ、１Ｈ）、６．８９（ｍｃ、１Ｈ）、７．５５（ｍｃ、１Ｈ）、７．８５（ｍｃ、２Ｈ）、８．０５（ｍｃ、２Ｈ）。
【００５９】
【表１】
2004511460.tif 000012
【００６０】
工程Ｂ
実施例ＶＩＩ：ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛［（１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝ベンゾエート
【化１６】
2004511460.tif 000013
ｔｅｒｔ−ブチル ４−（｛［１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−エトキシ−３−オキソプロピル］アミノ｝カルボニル）ベンゾエート（４０ｍｇ、０．０９ｍモル）をＴＨＦ／水（ｖ／ｖ １／１）に溶解し、水酸化リチウム（２．３ｍｇ、０．１ｍモル）を室温で加え、この反応混合物を２４時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、３−｛［４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）ベンゾイル］アミノ｝−３−（３，４−ジメトキシフェニル）プロピオン酸のリチウム塩を単離した（３７ｍｇ、０．０９ｍモル）。この後者化合物（１８ｍｇ、０．０４ｍモル）をＭｅＣＮ（１ｍｌ）に溶解し、ＨＯＢｔ（５．５ｍｇ、０．０５ｍモル）、ＥＤＣＩ（８．８ｍｇ、０．０５ｍモル）およびＮ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−（２−メチルフェニル）尿素（１０．０ｍｇ、０．０５ｍモル）を加えた。２４時間の撹拌の後、溶媒を蒸発させ、残留物をＥｔＯＡｃ（２００ｍｌ）に溶解し、１０％クエン酸水溶液（５０ｍｌ）、飽和ソーダ水溶液（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥した（ＮａＳＯ４）。溶媒を真空下に蒸発させ、生成物を無色固体として集めた（２７ｍｇ、０．１０ｍモル、９８％）。
融点：２１０〜２１５℃；
ＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９／１）：Ｒｆ ０．２１；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、Ｄ６−ＤＭＳＯ）：δ １．５６（ｓ、９Ｈ）、２．２３（ｓ、３Ｈ）、２．８６（ｍｃ、１Ｈ）、２．９３（ｍｃ、１Ｈ）、３．７１（ｓ、３Ｈ）、３．７４（ｓ、３Ｈ）、５．４４（ｍｃ、１Ｈ）、６．８８（ｍｃ、１Ｈ）、７．０６（ｍｃ、１Ｈ）、７．１４（ｍｃ、１Ｈ）、７．３６（ｍｃ、２Ｈ）、７．４５（ｍｃ、２Ｈ）、７．６７（ｍｃ、１Ｈ）、７．８１（ｍｃ、１Ｈ）、７．９０−８．０２（ｍ、６Ｈ）、９．０５（ｓ、１Ｈ）、９．１０（ｓ、２Ｈ）、９．９４（ｓ、１Ｈ）。
【００６１】
【表２】
2004511460.tif 000014
【００６２】
工程Ｃ
実施例１：４−｛［（１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝安息香酸
【化１７】
2004511460.tif 000015
ｔｅｒｔ−ブチル ４−｛［（１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−｛［４−（｛［（２−メチルフェニル）アミノ］カルボニル｝アミノ）フェニル］アミノ｝−３−オキソプロピル）アミノ］カルボニル｝ベンゾエート（３０ｍｇ、０．０５ｍモル）をＤＣＭ（１０ｍｌ）に溶解し、ＴＦＡ（０．１８ｍｌ、２．３０ｍモル）を０℃で加え、この反応混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を真空下に除去し、生成物を単離した（２５ｍｇ、９１％）。
融点：１６６℃；
ＥＳＩ−ＭＳ：５９８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６３】
【表３】
2004511460.tif 000016
【００６４】
インビトロアッセイ：固定化ＶＣＡＭ−１（ドメイン１〜３）へのラモス（Ｒａｍｏｓ）細胞の付着
ＶＣＡＭ−１（細胞外ドメイン１〜３）の調製
ＶＣＡＭ−１の７−ドメイン形態をコードしている相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）［ＧｅｎＢａｎｋ 受託番号＃Ｍ６０３３５］を、宝遺伝子分析センター（滋賀、日本）において、Ｒａｐｉｄ−Ｓｃｒｅｅｎ ＴＭ ｃＤＮＡライブラリーパネル（ＯｒｉＧｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ．）を用いて得た。使用したプライマーは、５’−ＣＣＡ ＡＧＧ ＣＡＧ ＡＧＴ ＡＣＧ ＣＡＡ ＡＣ−３’（センス）および５’−ＴＧＧ ＣＡＧ ＧＴＡ ＴＴＡ ＴＴＡ ＡＧＧ ＡＧ−３’（アンチセンス）であった。３−ドメインＶＣＡＭ−１ ｃＤＮＡのＰＣＲ増幅を、Ｐｆｕ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）と以下の組のプライマーとを用いて行った：（Ｕ−ＶＣＡＭｄｌ−３） ５’−ＣＣＡ ＴＡＴ ＧＧＴ ＡＣＣ ＴＧＡ ＴＣＡ ＡＴＴ ＴＡＡ ＡＡＴ ＣＧＡ ＧＡＣ ＣＡＣ ＣＣＣ ＡＧＡ Ａ−３’；（Ｌ−ＶＣＡＭｄｌ−３） ５’−ＣＣＡ ＴＡＴ ＡＧＣ ＡＡＴ ＣＣＴ ＡＧＧ ＴＣＣ ＡＧＧ ＧＧＡ ＧＡＴ ＣＴＣ ＡＡＣ ＡＧＴ ＡＡＡ−３’。ＰＣＲサイクルは、９４℃で４５秒間、５５℃で４５秒間、７２℃で２分間であり、１５サイクル繰り返した。ＰＣＲ生成物の精製後に、フラグメントをＫｐｎＩ−ＡｖｒＩＩで消化した。この消化したフラグメントを、ＫｐｎＩ−ＸｈｏＩで消化することにより線状化したｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩＳＫ（−）（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ）中に連結した。この連結に続いて、Ｄａｍ／Ｄｃｍメチラーゼ不含の大腸菌株ＳＣＳ１１０（Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ）に導入して、ドナープラスミドｐＨＨ７を創製した。ＶＣＡＭ−１分子を昆虫細胞分泌経路に指向させるために、ＶＣＡＭ−１コード配列を、ミツバチ メリチン（ｍｅｌｉｔｔｉｎ）のシグナルペプチド配列に融合させた。得られたメリチン−ＶＣＡＭ融合体を、バキュロウイルス ポリヘドリン プロモーターに正しい配向で導入した。ＶＣＡＭ−１の第１の３−ドメイン形態を含むバキュロウイルス転移ベクター（ｐＨ１０）を、ｐＨ７のＡｖｒＩＩ／クレノウ／ＢｃｌＩ消化物からの０．９ｋｂフラグメントをｐＭｅｌＢａｃＢ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）のＳａｌＩ／クレノウ／ＢａｍＨＩ消化物に連結することによって構築した。組換えバキュロウイルスを、Ｂａｃ−Ｎ−ＢｌｕｅＴＭ トランスフェクションキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用い、製造元の指示に従って創製した。この組換えウイルスを、Ｈｉｇｈ−ＦｉｖｅＴＭ昆虫細胞に５〜６日間にわたり感染させることによって増幅し、ウイルス力価をプラークアッセイによって測定した。
【００６５】
Ｈｉｇｈ−ＦｉｖｅＴＭ昆虫細胞を、１０００ｒｐｍで５分間遠心することによって、２２５ｍｌの円錐管中でペレット化した。上清を破棄した後、このペレットを、１．５×１０９ｐｆｕ（ＭＯＩ＝５）の高力価ウイルス溶液に再懸濁し、次いで室温で１．５時間インキュベートした。細胞を再びペレット化し、新鮮なＥｘｐｒｅｓｓ ＦｉｖｅＴＭ血清不含培地で１回洗浄した。細胞を再びペレット化し、最後に、新鮮なＥｘｐｒｅｓｓ ＦｉｖｅＴＭ培地（２００ｍｌ）に再懸濁し、１０００ｍｌの振盪フラスコに移し、２７℃、１３０ｒｐｍで４８時間にわたり振盪フラスコ中でインキュベートし、次いで培養物上清を集めた。この培養物上清からのＶＣＡＭ−１の３−ドメイン形態の精製を、１工程のアニオン交換クロマトグラフィーによって行った。タンパク質濃度を、クーマッシー タンパク質アッセイ試薬（Ｐｉｅｒｃｅ）を用い、製造元の指示に従って測定した。
【００６６】
ＶＣＡＭ−１被覆した微量滴定プレートの調製
組換えヒトＶＣＡＭ−１（細胞外ドメイン１〜３）を、ＰＢＳに１．０μｇ／ｍｌで溶解した。微量滴定プレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｆｌｕｏｒｏ−ｎｕｎｃ Ｃｅｒｔ， ４３７９５８）の各ウエルを、基質（１００μｌ）またはバックグラウンド対照のために緩衝液単独を用いて、４℃で１５時間被覆した。基質溶液を破棄した後、各ウエルを、１５０μｌ／ウエルのブロック溶液（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ５０−６１−０１）を用いて、９０分間ブロック処理した。このプレートを、アッセイの直前に、２４ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２７ｍＭ ＫＣｌおよび２ｍＭ ＭｎＣｌ２を含む洗浄緩衝液で洗浄した。
【００６７】
ラモス細胞を用いるインビトロアッセイ
蛍光ラベルしたラモス細胞の調製
ラモス細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ， Ｃｌｏｎｅ ＣＲＬ−１５９６）を、湿度調整したインキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２で、１０％ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ， Ａ−１１１９−Ｌ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， １５１４０−１２２）および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ， １５１４０−１２２）を追加したＲＰＭＩ培地（Ｎｉｋｋｅｎ Ｂｉｏ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， ＣＭ１１０１）において培養した。
【００６８】
ラモス細胞を、２５μＭの５（および−６）−カルボキシフルオレセイン ジアセテート、スクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ、Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ３４５−０６４４１）を含むリン酸バランス化溶液（ＰＢＳ、Ｎｉｓｓｕｉ， ０５９１３）を用い、室温で２０分間、５分毎に穏やかに回転させながらインキュベートした。１０００ｒｐｍで５分間の遠心の後、細胞ペレットを、付着アッセイ緩衝液を用いて４×１０６細胞／ｍｌの細胞密度で再懸濁した。付着アッセイ緩衝液は、２４ｍＭ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、２７ｍＭ ＫＣｌ、４ｍＭグルコース、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ、Ｓｉｇｍａ， Ａ９６４７）および２ｍＭ ＭｎＣｌ２からなっていた。
【００６９】
アッセイ法（ラモス細胞）
それぞれの試験化合物または５μｇ／ｍｌの抗−ＣＤ４９ｄモノクローナル抗体（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ， ０７６４）を含むアッセイ溶液を、ＶＣＡＭ−１被覆プレートに移した。それぞれの試験化合物の最終濃度は、５μＭ、１０μＭ、あるいは、通常の５−ポイント連続希釈を用いて０．０００１〜１０μＭの範囲内の種々の濃度であった。ラベルしたラモス細胞を含むアッセイ溶液を、ＶＣＡＭ−１被覆プレートに２×１０５細胞／ウエルの細胞密度で移し、３７℃で１時間インキュベートした。付着しなかった細胞を、洗浄緩衝液で３回、プレートを洗浄することによって除去した。付着した細胞を、１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００（Ｎａｃａｌａｉ Ｔｅｓｑｕｅ， ３５５−０１）の添加によって破壊した。放出されたＣＦＳＣを、蛍光計（Ｗａｌｌａｃ， ＡＲＶＯ １４２０ 多ラベルカウンター）での蛍光測定によって定量した。
【００７０】
ＶＣＡＭ−１へのラモス細胞の付着を、以下の式によって算出した結合パーセントにより分析した：
【数１】
2004511460.tif 000017
［式中、ＦＴＢは、試験化合物を含まないＶＣＡＭ−１被覆ウエルからの全蛍光強度であり；
ＦＢＧは、抗−ＣＤ４９ｄモノクローナル抗体を含むウエルからの蛍光強度であり；
ＦＴＳは、本発明の試験化合物を含むウエルからの蛍光強度である］。
【００７１】
インビトロ活性
ラモスＶＣＡＭ−１アッセイにおいて観察されたＩＣ５０値の範囲を、以下の表４に示す。Ｃ＞１０μＭ＞Ｂ＞１μＭ＞Ａ
【表４】
2004511460.tif 000018
【国際公開パンフレット】
2004511460.tif 000024
2004511460.tif 000025
2004511460.tif 000026
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【国際調査報告】
2004511460.tif 000068
2004511460.tif 000069
2004511460.tif 000070
2004511460.tif 000071
2004511460.tif 000072