(57)【要約】本発明は、メシル酸イマチニブなどのＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体とラパマイシンなどのＰＩ３Ｋインヒビターとの組み合わせを用いた血管の狭窄又は再狭窄の治療方法を特徴とするものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管形成術後の血管の狭窄又は再狭窄の発症を予防又は治療するための方法であって、（ｉ）血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の生物活性を阻害可能な第１化合物及び（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を、狭窄又は血管形成術後の再狭窄の発症を予防又は軽減するのに十分な量及び時間で患者に投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
第１化合物がＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｎ−フェニル−２−ピリミジン誘導体がメシル酸イマチニブである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
第１化合物がＰＤＧＦＲβの生物活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
第１化合物が、ＰＤＧＦ−ＢＢリガンドによって刺激されたＰＤＧＦＲの生物活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物が、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路上のタンパク質の生物活性を阻害する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
化合物がｍＴＯＲの生物活性を阻害する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
化合物がラパマイシンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
再狭窄が平滑筋細胞の内膜への遊走を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
再狭窄が血管平滑筋細胞の増殖を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
再狭窄が細胞外マトリックスの沈着を特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
再狭窄が、治療のための血管形成術及びステントの使用に付随する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ステントは、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物とＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物とが塗布されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物がメシル酸イマチニブであり、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物がラパマイシンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
血管狭窄が血管形成術及びステントの使用によって治療される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ステントは、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物とＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物とが塗布されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物がメシル酸イマチニブであり、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物がラパマイシンである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物とＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を、医薬的に許容可能な担体と組み合わせて投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記量が、血管平滑筋細胞の過形成を予防又は軽減するのに十分な量である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
１）血管新生インヒビター、
２）抗増殖化合物、
３）免疫抑制化合物、
４）抗遊走化合物、
５）抗血小板剤、及び
６）抗線維化化合物、
から成る群より選択される少なくとも１つの追加の化合物を患者に投与することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
追加の化合物が、抗体；ＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体；ＶＥＧＦ受容体に結合し、ＶＥＧＦ結合をブロックする抗体；アバスチン；エンドスタチン；アンジオスタチン；レスチン；タムスタチン；ＴＮＰ−４７０；２−メトキシエストラジオール；サリドマイド；抗血管新生タンパク質のペプチド断片；カンスタチン；アレスチン；ＶＥＧＦキナーゼインヒビター；ＣＰＴＫ７８７；ＳＦＨ−１；抗血管新生タンパク質；トロンボスポンジン−１；血小板因子−４；インターフェロンα；ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２又はＰＩＨ１２のシグナル伝達をブロックする薬剤；細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤；細胞外ＶＥ−カドヘリンドメインに結合する抗体；テトラサイクリン；ペニシラミン；ビンブラスチン；サイトキサン；エデルホシン；テガフール；ウラシル；クルクミン；緑茶；ゲニステイン；レスベラトロール；Ｎ−アセチルシステイン；カプトプリル；ｃｏｘ−２インヒビター；セレコキシブ；及びロフェコキシブからなる群より選択される血管新生インヒビターである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
追加の化合物が、ラパマイシン；タキソール；トログリタゾン；ＶＥＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦ−サポリンに結合する抗体；スタチン；ＡＣＥインヒビター；スラミン；１７β−エストラジオール；アトルバスタチン；フルバスタチン；ロバスタチン；プラバスタチン；シンバスタチン；セリバスタチン；ペリンドプリル；キナプリル；カプトプリル；カプトプリル；リシノプリル；エナラプリル；フォシノプリル；シラザプリル；ラミプリル；及びキナーゼインヒビターから成る群より選択される抗増殖化合物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ＶＥＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ｂＦＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
追加の化合物が、プレドニゾン；ＦＴＹ７２０；メチルプレドニゾロン；α−トコフェロール；アザチオプリン；クロラムブシル；シクロホスファミド；ＩＬ−２受容体又はＣＴＬＡ４に結合する抗体；メトトレキセート；ミコフェノール酸モフェチル；シクロスポリン；マクロファージ機能を妨げる薬剤；Ｐ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４、ＶＣＡＭ−１又はＭａｃ−１生体機能を阻害する薬剤；及びＦＴＹ７２０から成る群より選択される免疫抑制化合物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
追加の化合物が、シプロヘプタジン；エンドセリン受容体アンタゴニスト；セロトニン受容体アンタゴニスト；メチセルジド；ボセンタン；ＹＭ０８７；シプロヘプタジン；ケタンセリン；及びアンプラーグからなる群より選択される抗遊走化合物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２７】
追加の化合物が、アスピリン；チクロピジン；シロスタゾール；ジピリダモール；アブシキシマブ；クロピドグレル；ジピリジモール；糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター；アデノシン再取り込みインヒビター；ＡＤＰインヒビター；エプチフィバチド；チロフィバン；ホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビター；及びチクロピジンから成る群より選択される抗血小板剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２８】
追加の化合物が、ＴＧＦ−βシグナル伝達をブロックするか又はプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１のプロモーター活性の活性化を阻害する薬剤；ＴＧＦ−β又はＴＧＦ−β受容体に結合する抗体；ＴＧＦ−β受容体Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩに結合する抗体；キナーゼインヒビター；ＣＴＧＦシグナル伝達をブロックする薬剤；プロリルヒドロキシラーゼを阻害する薬剤；プロコラーゲンＣ−プロテイナーゼを阻害する薬剤；ピルフェニドン；シリマリン；ペントキシフィリン；コルチシン；エンブレル；レミケード；ＴＧＦ−βに拮抗する薬剤；ＣＴＧＦに拮抗する薬剤；及びＶＥＧＦを阻害する薬剤から成る群より選択される、抗線維化化合物である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
（ｉ）ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物及び（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を含む、医薬組成物。
【請求項３０】
（１）血管新生インヒビター、（２）抗増殖化合物、（３）免疫抑制化合物、（４）抗遊走化合物、（５）抗血小板剤、及び（６）抗線維化化合物から成る群より選択される少なくとも１つの追加の化合物を更に含む、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
追加の化合物が血管新生インヒビターである、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
血管新生インヒビターが、抗体；アバスチン；エンドスタチン；アンジオスタチン；レスチン；タムスタチン；ＴＮＰ−４７０；２−メトキシエストラジオール；サリドマイド；抗血管新生タンパク質のペプチド断片；カンスタチン；アレスチン；ＶＥＧＦキナーゼインヒビター；ＣＰＴＫ７８７；ＳＦＨ−１；抗血管新生タンパク質；トロンボスポンジン−１；血小板因子−４；インターフェロンα；ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２又はＰＩＨ１２のシグナル伝達をブロックする薬剤；細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤；テトラサイクリン；ペニシラミン；ビンブラスチン；サイトキサン；エデルホシン；テガフール；ウラシル；クルクミン；緑茶；ゲニステイン；レスベラトロール；Ｎ−アセチルシステイン；カプトプリル；ｃｏｘ−２インヒビター；セレコキシブ；及びロフェコキシブから成る群より選択される、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
抗体がＶＥＧＦ−Ａに結合する、請求項３２に記載の抗体。
【請求項３４】
抗体がＶＥＧＦ受容体に結合し、ＶＥＧＦ結合をブロックする、請求項３２に記載の抗体。
【請求項３５】
細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤が抗体である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
追加の化合物が抗増殖化合物である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
抗増殖化合物が、ラパマイシン；タキソール；トログリタゾン；ＶＥＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦ−サポリンに結合する抗体；スタチン；ＡＣＥインヒビター；スラミン；１７β−エストラジオール；アトルバスタチン；フルバスタチン；ロバスタチン；プラバスタチン；シンバスタチン；セリバスタチン；ペリンドプリル；キナプリル；カプトプリル；カプトプリル；リシノプリル；エナラプリル；フォシノプリル；シラザプリル；ラミプリル；及びキナーゼインヒビターから成る群より選択される、請求項３６に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
ＶＥＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
ｂＦＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
追加の化合物が免疫抑制化合物である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
免疫抑制化合物が、プレドニゾン；ＦＴＹ７２０；メチルプレドニゾロン；α−トコフェロール；アザチオプリン；クロラムブシル；シクロホスファミド；ＩＬ−２受容体又はＣＴＬＡ４に結合する抗体；メトトレキセート；ミコフェノール酸モフェチル；シクロスポリン；マクロファージ機能を妨げる薬剤；Ｐ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４、ＶＣＡＭ−１又はＭａｃ−１生体機能を阻害する薬剤；及びＦＴＹ７２０から成る群より選択される、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
追加の化合物が抗遊走化合物である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
抗遊走化合物が、シプロヘプタジン；エンドセリン受容体アンタゴニスト；セロトニン受容体アンタゴニスト；メチセルジド；ボセンタン；ＹＭ０８７；シプロヘプタジン；ケタンセリン；及びアンプラーグから成る群より選択される、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
追加の化合物が抗血小板剤である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
抗血小板剤が、アスピリン；チクロピジン；シロスタゾール；ジピリダモール；アブシキシマブ；クロピドグレル；ジピリジモール；糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター；アデノシン再取り込みインヒビター；ＡＤＰインヒビター；エプチフィバチド；チロフィバン；ホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビター；及びチクロピジンから成る群より選択される、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
追加の化合物が抗線維化化合物である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
抗線維化化合物が、ＴＧＦ−βシグナル伝達をブロックするか又はプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１のプロモーター活性の活性化を阻害する薬剤；ＴＧＦ−β又はＴＧＦ−β受容体に結合する抗体；ＴＧＦ−β受容体Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩに結合する抗体；キナーゼインヒビター；ＣＴＧＦシグナル伝達をブロックする薬剤；プロリルヒドロキシラーゼを阻害する薬剤；プロコラーゲンＣ−プロテイナーゼを阻害する薬剤；ピルフェニドン；シリマリン；ペントキシフィリン；コルチシン；エンブレル；レミケード；ＴＧＦ−βに拮抗する薬剤；ＣＴＧＦに拮抗する薬剤；及びＶＥＧＦを阻害する薬剤から成る群より選択される、請求項４６に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
（ｉ）ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物、（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物、並びに（ｉｉｉ）（ａ）血管新生インヒビター；（ｂ）抗増殖化合物；（ｃ）免疫抑制化合物；（ｄ）抗遊走化合物；（ｅ）抗血小板化合物；及び（ｆ）抗線維化化合物から成る群より選択される追加の化合物、並びに（ｉｖ）狭窄若しくは血管形成術後の再狭窄と診断された患者又はそれらが発症する危険性がある患者に化合物（ｉ）、（ｉｉ）、及び（ｉｉｉ）を投与するための使用説明書、を含むキット。
【請求項４９】
ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物がＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体である、請求項４８に記載のキット。
【請求項５０】
Ｎ−フェニル−２−ピリミジン誘導体がメシル酸イマチニブである、請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
狭窄又は再狭窄が、平滑筋細胞の内膜への遊走、血管平滑筋細胞の増殖、及び細胞外マトリックス沈着のうちの１つを特徴とする、請求項４８に記載のキット。
【請求項５２】
追加の化合物が血管新生インヒビターである、請求項４８に記載のキット。
【請求項５３】
血管新生インヒビターが、抗体；ＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体；ＶＥＧＦ受容体に結合し、ＶＥＧＦ結合をブロックする抗体；アバスチン；エンドスタチン；アンジオスタチン；レスチン；タムスタチン；ＴＮＰ−４７０；２−メトキシエストラジオール；サリドマイド；抗血管新生タンパク質のペプチド断片；カンスタチン；アレスチン；ＶＥＧＦキナーゼインヒビター；ＣＰＴＫ７８７；ＳＦＨ−１；抗血管新生タンパク質；トロンボスポンジン−１；血小板因子−４；インターフェロンα；ＴＩＥ−１、ＴＩＥ−２又はＰＩＨ１２のシグナル伝達をブロックする薬剤；細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤；細胞外ＶＥ−カドヘリンドメインに結合する抗体；テトラサイクリン；ペニシラミン；ビンブラスチン；サイトキサン；エデルホシン；テガフール；ウラシル；クルクミン；緑茶；ゲニステイン；レスベラトロール；Ｎ−アセチルシステイン；カプトプリル；ｃｏｘ−２インヒビター；セレコキシブ；及びロフェコキシブから成る群より選択される、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
抗体がＶＥＧＦ−Ａに結合する、請求項５３に記載のキット。
【請求項５５】
抗体がＶＥＧＦ受容体に結合し、ＶＥＧＦ結合をブロックする、請求項５３に記載のキット。
【請求項５６】
細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤が抗体である、請求項５３に記載のキット。
【請求項５７】
追加の化合物が抗増殖化合物である、請求項４８に記載のキット。
【請求項５８】
抗増殖化合物が、ラパマイシン；タキソール；トログリタゾン；ＶＥＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦを阻害する薬剤；ｂＦＧＦ−サポリンに結合する抗体；スタチン；ＡＣＥインヒビター；スラミン；１７β−エストラジオール；アトルバスタチン；フルバスタチン；ロバスタチン；プラバスタチン；シンバスタチン；セリバスタチン；ペリンドプリル；キナプリル；カプトプリル；カプトプリル；リシノプリル；エナラプリル；フォシノプリル；シラザプリル；ラミプリル；及びキナーゼインヒビターから成る群より選択される、請求項４８に記載のキット。
【請求項５９】
ＶＥＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
ｂＦＧＦを阻害する薬剤が抗体である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
追加の化合物が免疫抑制化合物である、請求項４８に記載のキット。
【請求項６２】
免疫抑制化合物が、プレドニゾン；ＦＴＹ７２０；メチルプレドニゾロン；α−トコフェロール；アザチオプリン；クロラムブシル；シクロホスファミド；ＩＬ−２受容体又はＣＴＬＡ４に結合する抗体；メトトレキセート；ミコフェノール酸モフェチル；シクロスポリン；マクロファージ機能を妨げる薬剤；Ｐ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４、ＶＣＡＭ−１又はＭａｃ−１生体機能を阻害する薬剤；及びＦＴＹ７２０から成る群より選択される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
追加の化合物が抗遊走化合物である、請求項４８に記載のキット。
【請求項６４】
抗遊走化合物が、シプロヘプタジン；エンドセリン受容体アンタゴニスト；セロトニン受容体アンタゴニスト；メチセルジド；ボセンタン；ＹＭ０８７；シプロヘプタジン；ケタンセリン；及びアンプラーグから成る群より選択される、請求項６３に記載のキット。
【請求項６５】
追加の化合物が抗血小板剤である、請求項４８に記載のキット。
【請求項６６】
抗血小板剤が、アスピリン；チクロピジン；シロスタゾール；ジピリダモール；アブシキシマブ；クロピドグレル；ジピリジモール；糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター；アデノシン再取り込みインヒビター；ＡＤＰインヒビター；エプチフィバチド；チロフィバン；ホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビター；及びチクロピジンからなる群より選択される、請求項６５に記載のキット。
【請求項６７】
追加の化合物が抗線維化化合物である、請求項４７に記載のキット。
【請求項６８】
抗線維化化合物が、ＴＧＦ−βシグナル伝達をブロックするか又はプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１のプロモーター活性の活性化を阻害する薬剤；ＴＧＦ−β又はＴＧＦ−β受容体に結合する抗体；ＴＧＦ−β受容体Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩに結合する抗体；キナーゼインヒビター；ＣＴＧＦシグナル伝達をブロックする薬剤；プロリルヒドロキシラーゼを阻害する薬剤；プロコラーゲンＣ−プロテイナーゼを阻害する薬剤；ピルフェニドン；シリマリン；ペントキシフィリン；コルチシン；エンブレル；レミケード；ＴＧＦ−βに拮抗する薬剤；ＣＴＧＦに拮抗する薬剤；及びＶＥＧＦを阻害する薬剤から成る群より選択される、請求項６７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、血管の狭窄又は再狭窄を治療するための方法及び組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
冠動脈疾患（ＣＡＤ）は、７百万人のアメリカ人に影響を及ぼす、米国における疾病率及び死亡率の最も一般的な原因である。ＣＡＤは、狭窄、又は動脈管腔の狭細化の結果であることが多く、それにより心筋への血液供給が減少するか又は完全にブロックされる。狭窄は、動脈内膜において血中の脂肪片の沈着を伴って始まる。内弾性板や中膜由来の平滑筋細胞は内膜の中で増殖する。こうした細胞で産生されるコラーゲンやエラスチンが蓄積し、線維性斑を生ずる。こうしたプロセスが継続するにつれて線維性斑内に蓄積したコレステロールに富んだ物質や壊死細胞が動脈管腔へ進入する。最終的に線維性斑は石灰化し、硬化する。狭細化した動脈管腔は血流が適切でなく、心筋部分を虚血にする。進行した線維性斑が破裂し、血管内の血餅又は血栓を生ずる部位で血小板が凝集するかもしれない。通常、線維性斑の破裂及び／又は血栓によって心筋への血液供給が突然危機的に減少すると、急性心筋梗塞をもたらす。
【０００３】
狭窄動脈の治療には通常２つのオプション：バイパス手術又は経皮経管血管形成術（ＰＴＡ）のうちの１つが含まれる。バイパス手術は、血流の代替経路の提供に有効であるが、危険性が高く高価な方法である。逆に、ＰＴＡはより安全で煩雑でなく、費用のかからない治療法である。
【０００４】
血管形成術として一般的に知られるＰＴＡは、閉塞又は狭窄した血管を開き、血流を回復させる成功した治療方法であることが証明されている。しかしながら、血管腔の再狭窄、又は再狭細化が頻繁に起こることがわかっている。冠動脈血管形成術の場合、再狭窄は処置６カ月以内の症例のおよそ２０〜５０％に起こる。１９９３年における保険金請求の分析により、再狭窄単独の治療費は年間１６億ドルであると概算された。
【０００５】
再狭窄は、血管形成術のあいだの動脈内皮へのバルーン障害の後に起こる創傷治癒プロセスの開始により生ずると考えられている。内皮障害は血小板の接着及び凝集並びに成長因子の放出を許容し、障害に応答して遊走した平滑筋細胞によって増殖及び細胞外マトリックス合成がもたらされる。このプロセスの最終結果は動脈管腔の新生内膜過形成及び再狭細化である。
【０００６】
メシル酸イマチニブ（グリーベック（登録商標））はＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体であり、Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ活性、並びにｃ−ｋｉｔ、ｃ−Ａｂｌ及びＰＤＧＦＲのチロシンキナーゼ活性を阻害することが示されている。メシル酸イマチニブを用いた慢性骨髄性白血病患者を治療するための臨床試験はかなり成功している。
【０００７】
ＰＩ３Ｋは、イノシトールリン脂質の３’ヒドロキシル基をリン酸化して、細胞成長や増殖に関与する多くの細胞内シグナル伝達経路を刺激することができる脂質キナーゼファミリーである。細胞周期調節や増殖に関与することが知られているＰＩ３Ｋ経路のうちの１つは、ＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲ経路である。ラパマイシンなどのＰＩ３Ｋ経路阻害化合物はこの経路上の特定タンパク質の活性を阻害するが、細胞成長をブロックすると思われ、抗がん療法剤としての展望を示している。
【発明の開示】
【０００８】
発明の概要
本発明は、血管の狭窄又は血管形成術後の再狭窄の治療方法を提供するものである。これらの方法は、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の生物活性を阻害するＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体（例えばメシル酸イマチニブ）などの化合物と、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）経路インヒビター化合物（例えばラパマイシン）とを組み合わせた使用を特徴とする。
【０００９】
より詳細には、本発明は、式：
【００１０】
【化１】
2006526652.tif 000002
【００１１】
のＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体、又は少なくとも１つの塩形成基を含有するＮ−フェニル−２−ピリミジン化合物の医薬的に許容可能な塩の使用に関するものであり、
式中、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり；Ｒ２は水素又はＣ１〜Ｃ３アルキルであり；Ｒ３は２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−メチル−３−ピリジル、４−メチル−３−ピリジル、２−フリル、５−メチル−２−フリル、２，５−ジメチル−３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、５−メチル−２−チエニル、２−フェノチアジニル、４−ピラジニル、２−ベンゾフリル、Ｎ−オキシド−２−ピリジル、Ｎ−オキシド−３−ピリジル、Ｎ−オキシド−４−ピリジル、１Ｈ−インドール−２−イル、１Ｈ−インドール−３−イル、１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル、４−キノリニル、１−メチル−ピリジニウム−４−イルヨージド、ジメチルアミノフェニル、又はＮ−アセチル−Ｎ−メチル−アミノフェニルであり；Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、−ＣＯ−ＣＯ−Ｏ−Ｃ２Ｈ５、又はＮ，Ｎ−ジメチルアミノエチルであり；Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８のうちの少なくとも１つはＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、クロロ、ブロモ、ヨード、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、フェニル、アミノ、モノ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）アミノ、ジ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）アミノ、Ｃ２〜Ｃ４アルカノイル、プロペニルオキシ、カルボキシ、カルボキシメトキシ、エトキシカルボニルメトキシ、スルファニルアミド、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１〜Ｃ３アルキル）スルファニルアミド、Ｎ−メチルピペラジニル、ピペリジニル、１Ｈ−イミダゾール−１−イル、１Ｈ−トリアゾール−１−イル、１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル、１−ナフチル、シクロペンチル、３，４−ジメチルベンジル、又は下式のうちの１つのラジカルであり：−ＣＯ２Ｒ、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｎ（Ｒ）ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｏ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）Ｒ、−ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ２）ｎＮ（Ｒ）Ｒ、−ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨＣＨＯ、−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ＝Ｎ−ＯＨ、−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ＝Ｎ−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ（ＣＨ３）ＮＨ２、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２（Ｃ＝Ｏ）Ｎ（Ｒ）Ｒ、
【００１２】
【化２】
2006526652.tif 000003
【００１３】
−（ＣＨ２）ｍＲ１０、−Ｘ−（ＣＨ２）ｍＲ１０、又は
【００１４】
【化３】
2006526652.tif 000004
【００１５】
ここで、ＲはＣ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｘは酸素又は硫黄であり、ｍは１、２又は３であり、ｎは２又は３であり；Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、クロロ、ブロモ、ヨード、又はトリフルオロメチルであり；Ｒ１０は１Ｈ−イミダゾール−１−イル又はモルホリニルであり；そしてＲ１１はＣ１〜Ｃ３アルキル又は非置換フェニル、又はＣ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン若しくはトリフルオロメチルで１置換されたフェニルである；そして残りの置換基Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８は水素である、
化合物はＰＤＧＦＲの生物活性を阻害し、血管の狭窄又は血管形成術後の再狭窄を予防又は治療するのに十分な用量で投与される。
【００１６】
式Ｉの化合物及びその調製については、本明細書中に援用されるＥＰ−Ａ−０  ２３３  ４６１号並びに米国特許第４，８７６，２５２号；第５，５１６，７７５号；第５，７０５，５０２号；及び第５，５２１，１８４号に開示されている。
【００１７】
１つの好ましい態様では、化合物は式：
【００１８】
【化４】
2006526652.tif 000005
【００１９】
を有するものである。
この化合物を、以後、メシル酸イマチニブという（グリーベック（商標）としても知られている）。
【００２０】
１つの側面では、本発明は、血管の狭窄又は血管形成術後の再狭窄の発症を予防又は治療するための方法を特徴とする。この方法は、（ｉ）血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の生物活性を阻害可能な第１化合物、及び（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を患者に投与することを包含し、狭窄又は血管形成術後の再狭窄の発症を予防又は軽減するのに十分な量及び時間で投与する。１つの態様では、第１化合物はＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体（例えばメシル酸イマチニブ）である。他の態様では、第１化合物はＰＤＧＦＲβの生物活性を阻害する。更に他の態様では、第１化合物はＰＤＧＦ−ＢＢリガンドによって刺激されたＰＤＧＦＲの生物活性を阻害する。更に他の態様では、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物はＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲシグナル伝達経路上のタンパク質の活性を阻害する。１つの好ましい態様では、前記化合物（例えばラパマイシン）はｍＴＯＲの活性を阻害する。種々の態様では、再狭窄は、平滑筋細胞の内膜への遊走、血管平滑筋細胞の増殖、又は細胞外マトリックスの沈着を特徴とする。他の好ましい態様では、血管狭窄は、血管形成術及びステントの使用によって処置される。１つの好ましい態様では、治療ための血管形成術及びステントの使用の後に再狭窄が起こる。他の態様では、ステントは、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物及びＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物が塗布されている。他の好ましい態様では、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物はメシル酸イマチニブであり、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物はラパマイシンである。更に他の態様では、ステントは、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物及びＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物が塗布されている。更に他の態様では、ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物及びＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物は、医薬的に許容可能な担体と組み合わせて投与される。他の態様では、その量は血管平滑筋細胞の過形成を予防又は軽減するのに十分な量である。更に他の好ましい態様では、この方法は、血管新生インヒビター、抗増殖化合物、免疫抑制化合物、抗遊走化合物、抗血小板剤、及び抗線維化化合物から成る群より選択される少なくとも１つの化合物を患者に投与することを更に包含する。
【００２１】
関連する側面では、本発明は、（ｉ）ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物、及び（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を含有する医薬組成物を特徴とする。１つの好ましい態様では、医薬組成物は、血管新生インヒビター、抗増殖化合物、免疫抑制化合物、抗遊走化合物、抗血小板剤、及び抗線維化化合物のうちの１以上から成る群より選択される少なくとも１つの追加の化合物を更に含有する。好ましい態様では、第１化合物はＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体（例えばメシル酸イマチニブ）である。
【００２２】
他の側面では、本発明は、（ｉ）ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物、（ｉｉ）ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物、並びに（ｉｉｉ）以下から成る群より選択される追加の化合物：血管新生インヒビター、抗増殖化合物、免疫抑制化合物、抗遊走化合物、抗血小板剤、及び抗線維化化合物；並びに（ｉｖ）ＰＤＧＦＲの生物活性を阻害可能な化合物及び第２化合物を、狭窄又は血管形成術後の再狭窄と診断された患者又はそれらが発症する危険性がある患者に投与するための使用説明書、を含有するキットを特徴とする。１つの態様では、ＰＤＧＦＲインヒビターはＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体（例えばメシル酸イマチニブ）である。好ましい態様では、狭窄又は再狭窄は、平滑筋細胞の内膜への遊走、血管平滑筋細胞の増殖、又は細胞外マトリックスの沈着を特徴とする。他の好ましい態様では、追加の化合物は、血管新生インヒビター、抗増殖化合物、免疫抑制化合物、抗遊走化合物、抗血小板剤、及び抗線維化化合物から成る群より選択される。
【００２３】
血管新生インヒビターの非限定的な例としては、以下のうちの１以上が挙げられる：抗体（例えばＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体、血管内皮成長因子ＶＥＧＦ受容体に結合し、ＶＥＧＦ結合をブロックする抗体）；アバスチン；エンドスタチン；アンジオスタチン；レスチン（restin）；タムスタチン；ＴＮＰ−４７０；２−メトキシエストラジオール；サリドマイド；抗血管新生タンパク質のペプチド断片；カンスタチン；アレスチン；ＶＥＧＦキナーゼインヒビター；ＣＰＴＫ７８７；ＳＦＨ−１；抗血管新生タンパク質；トロンボスポンジン−１；血小板因子−４；インターフェロンα；ＴＩＥ−１若しくはＴＩＥ−２のシグナル伝達又はＰＩＨ１２シグナル伝達をブロックする薬剤；細胞外血管内皮（ＶＥ）カドヘリンドメインをブロックする薬剤；細胞外ＶＥ−カドヘリンドメインに結合する抗体；テトラサイクリン；ペニシラミン；ビンブラスチン；サイトキサン；エデルホシン；テガフール又はウラシル；クルクミン；緑茶；ゲニステイン；レスベラトロール；Ｎ−アセチルシステイン；カプトプリル；ｃｏｘ−２インヒビター；セレコキシブ（例えばセレブレックス）；及びロフェコキシブ（例えばビオックス）。
【００２４】
先の側面の他の好ましい態様では、抗増殖化合物には以下のうちの１以上が含まれる：ラパマイシン；タキソール；トログリタゾン；ｂＦＧＦに結合する抗体；ｂＦＧＦ−サポリンに結合する抗体；スタチン；ＡＣＥインヒビター；スラミン；１７β−エストラジオール；アトルバスタチン；フルバスタチン；ロバスタチン；プラバスタチン；シンバスタチン；セリバスタチン；ペリンドプリル；キナプリル；カプトプリル；カプトプリル；リシノプリル；エナラプリル；フォシノプリル；シラザプリル；ラミプリル；及びキナーゼインヒビター。
【００２５】
免疫抑制化合物の非限定的な例としては、以下のうちの１以上が挙げられる：プレドニゾン；ＦＴＹ７２０；メチルプレドニゾロン；α−トコフェロール；アザチオプリン；クロラムブシル；シクロホスファミド；ＩＬ−２受容体又はＣＴＬＡ４に結合する抗体；メトトレキセート；ミコフェノール酸モフェチル；シクロスポリン；マクロファージ機能を妨げる薬剤；Ｐ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４、ＶＣＡＭ−１を阻害するか又はＭａｃ−１生体機能をブロックする薬剤；及びＦＴＹ７２０。
【００２６】
抗遊走化合物の非限定的は例としては、シプロヘプタジン、メチセルジド、ボセンタン、ＹＭ０８７、シプロヘプタジン、ケタンセリン、及びアンプラーグのうちの１以上が挙げられる。
【００２７】
抗血小板剤の非限定的な例としては、チクロピジン、シロスタゾール、ジピリダモール、アブシキシマブ、クロピドグレル、ジピリジモール（dipyridimole）、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター、エプチフィバチド、チロフィバン、及びホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビターのうちの１以上が挙げられる。
【００２８】
抗線維化化合物の非限定的な例としては、以下のうちの１以上が挙げられる：トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦ−β）シグナル伝達をブロックするか又はプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１のプロモーター活性の活性化を阻害する薬剤；ＴＧＦ−β又はＴＧＦ−β受容体に結合する抗体；ＴＧＦ−β受容体Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩに結合する抗体；キナーゼインヒビター；結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）シグナル伝達をブロックする薬剤；プロリルヒドロキシラーゼを阻害する薬剤；プロコラーゲンＣ−プロテイナーゼを阻害する薬剤；ピルフェニドン；シリマリン；ペントキシフィリン；コルチシン；エンブレル（エタネルセプト）；レミケード（インフリキシマブ）；ＴＧＦ−βに拮抗する薬剤；ＣＴＧＦに拮抗するか又は阻害する薬剤；及びＶＥＧＦを阻害する薬剤。
【００２９】
多くの化合物は１以上の活性を有することに注目すべきである。例えば、セロトニン受容体アンタゴニストは、抗遊走活性と抗増殖活性を有し得る。こうしたカテゴリーは化合物を限定することを意味するものではなく、各化合物の潜在的活性について広範な説明を提供するためのものである。
【００３０】
「アリール」とは、炭素環式芳香環又は環系を意味する。特に明記しない限り、アリール基は炭素が６〜１８個である。アリール基の例としては、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基、フルオレニル基、及びインデニル基が挙げられる。
【００３１】
「ヘテロアリール」とは、少なくとも１つの環ヘテロ原子（例えばＯ、Ｓ、Ｎ）を含有する芳香環又は環系を意味する。特に明記しない限り、ヘテロアリール基は炭素が１〜９個である。ヘテロアリール基には、フラニル基、チエニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、トリアゾリル基、オキサジアゾリル基、オキサトリアゾリル基、ピリジル基、ピリダジル基、ピリミジル基、ピラジル基、トリアジル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフラニル基、ベンゾチエニル基、インドール基、インダゾリル基、インドリジニル基、ベンズイソオキサゾリル基、キノリニル基、イソキノリニル基、シノリニル基、キナゾリニル基、ナフチリジニル基、フタラジニル基、フェナントロリニル基、プリニル基、及びカルバゾリル基が含まれる。
【００３２】
「複素環」とは、少なくとも１つの環ヘテロ原子（例えばＯ、Ｓ、Ｎ）を含有する非芳香環又は環系を意味する。特に明記しない限り、複素環基は炭素原子が１〜９個である。複素環基には、例えばジヒドロピロリル基、テトラヒドロピロリル基、ピペラジニル基、ピラニル基、ジヒドロピラニル基、テトラヒドロピラニル基、テトラヒドロフラニル基、ジヒドロチオフェン基、テトラヒドロチオフェン基、及びモルホリニル基が含まれる。
【００３３】
「ハロゲン化物」又は「ハロゲン」又は「ハロ」とは、臭素、塩素、ヨウ素、又はフッ素を意味する。
アリール基、ヘテロアリール基、又は複素環基は、非置換であっても、Ｃ１〜６アルキル、ヒドロキシ、ハロ、ニトロ、Ｃ１〜６アルコキシ、Ｃ１〜６アルキルチオ、トリフルオロメチル、Ｃ１〜６アシル、アリールカルボニル、ヘテロアリールカルボニル、ニトリル、Ｃ１〜６アルコキシカルボニル、アリールアルキル（ここで、アルキル基は炭素原子が１〜６個である）、及びヘテロアリールアルキル（ここで、アルキル基は炭素原子が１〜６個である）から成る群より選択される１以上の置換基によって置換されていてもよい。
【００３４】
「血管形成術」又は「経皮経管血管形成術（ＰＴＡ）」とは、粥状斑、血栓、塞栓、及び／又はミネラル沈着の存在によるか、バルーン拡張法、熱剥離、レーザー粥腫切除術、機械的切削、摘出、又は超音波粉砕などの多くの手段のいずれかによって引き起こされる血管内の狭窄を減少させる経皮経管法を意味する。例としては、ＰＴＣＡとしても知られる冠動脈血管形成術、及び末梢血管疾患の治療に用いられる腿骨-膝窩筋血管形成術のような血管形成術が挙げられる。
【００３５】
「抗線維化剤」とは、フィブロネクチン、プロテオグリカン、コラーゲン、及びエラスチンを含むがこれらに限定されない細胞外マトリックス成分の産生を減少又は阻害することができる薬剤を意味する。抗線維化剤の例としては、限定されるものではないが、ＴＧＦ−βアンタゴニスト及びＣＴＧＦアンタゴニストが挙げられる。
【００３６】
「抗遊走化合物」とは、平滑筋細胞の移動又は遊走をブロックする化合物を意味する。抗遊走化合物には、平滑筋細胞の遊走を誘導することが知られている細胞内シグナル伝達タンパク質を阻害できる化合物も含まれる。抗遊走活性を有する化合物の例としては、限定されるものではないが、セロトニン（例えば５−ＨＴ２）受容体アンタゴニスト（例えばシプロヘプタジン又はメチセルジド）、エンドセリン−１受容体ＥＴＡ及びＥＴＢのいずれかに拮抗する化合物（例えばボセンタン）、並びにバソプレシン受容体アンタゴニスト（例えばＹＭ０８７）が挙げられる。
【００３７】
「抗血小板剤」とは、血小板活性化（即ち、血小板形状変化、血小板顆粒内容物の分泌、及び血小板凝集）をもたらす１以上の工程を阻害することができる化合物を意味する。これらの化合物はＰＤＧＦ産生を阻害することが好ましい。抗血小板剤の例としては、限定されるものではないが、シクロオキシゲナーゼインヒビター（例えばアスピリン）、ＡＤＰインヒビター（例えばチクロピジン及びクロピドグレル）、ホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビター（例えばシロスタゾール及びジピリダモール）、及び糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター（例えばアブシキシマブ）が挙げられる。
【００３８】
「抗増殖化合物」とは、血管平滑筋細胞又は内皮細胞の増殖を軽減又は阻害することができる化合物を意味する。抗増殖化合物には、平滑筋細胞の増殖を誘導することが知られている細胞内シグナル伝達タンパク質を阻害することができる化合物が含まれる。抗増殖化合物の例としては、限定されるものではないが、ｂＦＧＦインヒビター、スタチン、ＡＣＥインヒビター、スラミン、パクリタキセル（タキソール）、１７β−エストラジオール、及びトログリタゾンが挙げられる。
【００３９】
「有効量」とは、血管の狭窄又は血管形成術後の再狭窄を予防又は改善するのに十分な量を意味する。所定の適用の有効量を決定するための当該技術分野に公知の方法が数多く存在することが理解されるであろう。例えば、治療状況に薬理学的な用量決定法を用いることができる。
【００４０】
「免疫抑制化合物」とは、化学物質、生物物質又は物理物質によって誘導される自然な免疫応答を軽減又は阻害することができる薬剤を意味する。免疫抑制化合物は、以下の４つの方法のうちの１つで単球又はマクロファージの活性を阻害できることが好ましい：１）単球の産生を減少させるか又は除去を増加させる、２）単球のマクロファージへの分化を妨げる、３）単球の過形成領域への遊走を妨げる、及び４）マクロファージ活性化をブロックする。マクロファージ活性とは、外来抗原を抗原応答性リンパ球へ提示する能力並びに液性及び細胞性免疫応答を誘導する能力を意味する。
【００４１】
好ましい免疫抑制化合物の非限定的な例としては、ステロイド（例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン）及びＦＴＹ７２０（例えば、Ｓｈｕｕｒｍａｎら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ７４：９５１−９６０、２００２；Ｄｒｏｏｇａｎら、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５０：２２４−２２９、１９９８）が挙げられる。免疫抑制化合物の更なる例には、ｍａｃ−１の産生若しくは機能をブロックする抗体又は化合物、遊出に重要であることが知られているマクロファージ上の抗原（例えば、Ｅｓｌａｍｉら、Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．３４：９２３−９２９、２００１；Ｓｈａｎｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１９７０−１９７９、１９９８）、単球化学遊走物質タンパク質（ＭＣＰ−１）の産生又は機能又は両方をブロックする化合物（Ｉｋｅｄａら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．２５：１４３−１４７、２００２）、α−トコフェロールのような抗酸化剤（Ｄｅｖａｒａｊら、Ｎｕｔｒ．Ｒｅｖ．６０：８−１４、２００２；Ｔｅｒａｓａｗａら、Ｂｉｏｆａｃｔｏｒｓ  １１：２２１−２３３、２０００）、及びＰ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４又はＶＣＡＭ−１の活性をブロックする化合物（Ｈｕｏら、Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．１７３：３５−４３、２００１）が含まれる。
【００４２】
「遊走」とは、血管の１つの領域から他の領域へ細胞が移動することを意味する。特に、遊走とは、ｉｎ  ｖｉｖｏで平滑筋細胞が血管の中膜から内膜へ移動することを意味する。
【００４３】
「新生内膜過形成」とは、内膜へ遊走後の平滑筋細胞の異常増殖を意味する。本明細書において異常とは細胞の分割又は増殖を意味するが、正常に機能している同種細胞において典型的に起こるよりも急速に又は著しく広範囲で起こるがん細胞を意味するものではない。
【００４４】
「医薬的に許容可能な担体」とは、処置される哺乳動物にとって生理学的に許容可能であり、一方でそれとともに投与される化合物の治療特性を保持する担体を意味する。医薬的に許容可能な担体物質の１例は生理食塩水である。他の生理学的に許容可能な担体及びそれらの製剤は当業者に公知であり、例えば、レミントンの『薬学』（第２０版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、フィラデルフィア、ペンシルバニア州に記載されている。
【００４５】
「ＰＩ３Ｋ経路」とは、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）ファミリーメンバーからのシグナル伝達イベントによって開始される細胞内シグナル伝達経路を意味する。ＰＩ３Ｋファミリーメンバーは、ホスホイノシチドの３−ヒドロキシル位をリン酸化する。ＰＩ３Ｋは、アポトーシス、増殖、細胞運動、及び接着を含めた非常に多くの細胞内プロセスに関与している。ＰＩ３Ｋシグナル伝達経路の下流の標的は非常に多く、多様であり、その多くは依然として同定されていない。こうしたさまざまなシグナル伝達経路及び基質タンパク質のありとあらゆるものが含まれるが、好ましい経路は、遺伝子転写、細胞周期移行、及び細胞増殖の活性化に応答性のＰＩ３Ｋ−Ａｋｔ−ｍＴＯＲシグナル伝達経路である。さまざまなＰＩ３Ｋシグナル伝達経路の総説として、Ｂｌｕｍｅ−Ｊｅｎｓｅｎ及びＨｕｎｔｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ、４１１：３５５−３６５、２００１）を参照されたい。「ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物」とは、ＰＩ３Ｋ活性又はＰＩ３Ｋ活性によって活性化される下流のシグナル伝達タンパク質の活性を低下させ又は弱めることができる化合物を意味する。ＰＩ３Ｋ経路のインヒビターはＰＩ３Ｋのキナーゼ活性を標的とすることが好ましく、ＰＩ３Ｋと他のタンパク質との相互作用を阻害してもよい。ＰＩ３Ｋインヒビターの例としては、ウォートマンニン及びＬＹ２９４００２が挙げられる。ＰＩ３Ｋインヒビターの総説として、Ｗａｌｋｅｒら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ、６：９０９−９１９、２０００）を参照されたい。下流のシグナル伝達タンパク質であるＡｋｔもキナーゼであり、この分子のインヒビターはそのキナーゼ活性を軽減若しくは排除し、又はタンパク質−タンパク質相互作用をブロックすることが好ましい。ｍＴＯＲはＦＫ５０６結合タンパク質としても知られる他の下流のシグナル伝達タンパク質であるが、これはｐ７０ｓ６ｋを含めたタンパク質をリン酸化するキナーゼである。ｍＴＯＲの好ましいインヒビターはキナーゼ活性を阻害し、又はタンパク質−タンパク質相互作用をブロックするであろう。新規ｍＴＯＲインヒビターの１例はＡＰ２３５７３であり、これは現在Ａｒｉａｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって開発中である。ｍＴＯＲインヒビターの好ましい例はラパマイシンである。ラパマイシンの使用について記載している文献は非常に多く存在しており、その中にはＧｒｕｎｗａｌｄら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：６１４１−６１４５、２００２）、Ｍｏｒａｌｅｓ  ＪＭ（Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔ．Ｓｕｐｐｌ．、８２：８１−８７、２００２）、Ｋｅｎｅｒｓｏｎら（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、６２：５６４５−５６５０、２００２）、Ｃｏｔｔｅｒｅｌｌら（Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｓｐｌａｎｔ．、１６  ｓｕｐｐｌ．７：４９−５１、２００２）、及びＰｅｎｅら（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１：６５８７−６５９７、２００２）が含まれる。
【００４６】
「血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の生物活性」とは、ＰＤＧＦＲのありとあらゆる機能を意味する。ＰＤＧＦＲは、細胞内で細胞分裂誘起反応及び走化性反応を惹起するように機能する。その機能には：３種の２量体型ＰＤＧＦリガンド（ＡＡ、ＡＢ、又はＢＢ）のいずれかを含み得るリガンド結合、受容体２量体化、チロシン残基の自己リン酸化、基質ポリペプチド又はタンパク質のチロシン残基上でのトランスリン酸化、及びＳＨ２ドメイン含有タンパク質の動員、を挙げることができる。ＰＤＧＦＲ生物活性に関し、当該技術分野に公知の標準アッセイは多く存在し、それらのいずれかを用いて、ＰＤＧＦＲ生物活性の阻害能について潜在的化合物をアッセイすることができる。例として、ＢｒｄＵ標識及び細胞計数実験のような細胞増殖アッセイ；３Ｈ−チミジン取り込みのようなＤＮＡ合成の定量アッセイ；リガンド結合アッセイ及びスキャッチャードプロット解析；受容体２量体化アッセイ；並びに細胞内リン酸化アッセイ（例えば、Ｂｉｏｕｋａｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２１４５７−６３、１９９９；Ｃｏｎｗａｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３３７：１７１−７、１９９９；Ｖｉｇｎａｉｓら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９：３７２７−３５、１９９９；Ｂａｘｔｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１７０５０−５、１９９８；ＤｅＭａｌｉら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１８：２０１４−２２；及びＤａｖｉｅｓら、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８６：７７９−７８６、２０００を参照されたい）が挙げられる。ＰＤＧＦＲ生物活性に関する好ましいアッセイの１つは、抗リン酸化チロシン抗体（例えば４Ｇ１０、アップステート  バイオテクノロジー社）を用いたリン酸化アッセイである。この抗体を用いて全細胞融解物の免疫ブロットを行い、細胞内チロシンリン酸化の全体的な増加をアッセイすることができる。Ｓｒｃ又はｐ４２／ｐ４４  ＭＡＰキナーゼのようなＰＤＧＦＲの特定の基質のチロシンリン酸化は、基質タンパク質を免疫沈降し、抗リン酸化チロシン抗体を用いて免疫ブロットすることにより分析することもできる。ＰＤＧＦＲを免疫沈降し、抗リン酸化チロシン抗体で免疫ブロットすることによってＰＤＧＦＲ自体の自己リン酸化を測定することもできる。上記アッセイはそれぞれ定量化することができ、ＰＤＧＦＲ生物活性の潜在的インヒビターの効果を、ＰＤＧＦＲ生物活性に影響しない対照化合物と比較して決定するために用いることができる。生物活性の阻害は使用するアッセイに依存するが、通常、対照と比較して、アッセイした活性の少なくとも１０％の低下、好ましくは少なくとも２５％、より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％の低下を意味する。
【００４７】
「予防又は軽減」とは、特定血管に関し血流が正常と考えられる値を下回らないような血管腔径狭細化の減少を意味する。当該技術分野に熟練した臨床医又は開業医は、特定血管の血流の正常値に熟知しているであろう。本明細書において、「予防又は軽減」とは、新生内膜過形成に関して用いることもあり得、血管平滑筋細胞の増殖率又は全体数の２０％以上（より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％以上）の減少を含む。本明細書において、「予防又は軽減」とは、処置後腔径が処置前腔径の０〜２５％、好ましくは２５〜５０％、最も好ましくは５０％以上であるような血管腔径狭細化の減少も意味し得る。
【００４８】
「増殖」とは、即ち細胞の有糸分裂による、細胞数の増加を意味する。本明細書において、増殖とは腫瘍性細胞増殖を意味するものではない。
「放射線療法」とは、正常に機能する能力を制限するように、又は細胞を完全に破壊するように、細胞に十分な障害を誘導するために方向づけられたγ線又はβ線の使用を意味する。治療の線量及び期間を決定するための当該技術分野に公知の方法が数多く存在することが認識されるであろう。典型的な処置は１回照射で行われ、典型的な線量範囲は、１日あたり１０〜２００単位（グレイ）である。
【００４９】
「再狭窄」とは、血管形成術又はステント処置のような治療がすでに行われたのと同一部位における動脈の再狭細化又は閉塞を意味する。動脈に留置したステント内で再狭窄が起こる場合は技術的に「ステント内再狭窄」と呼ばれ、最終結果は、いずれ血流をブロックし得る物質の積層によって引き起こされる動脈の狭細化である。再狭窄は組織学的に血管狭窄に類似しており、動脈内膜層における細胞及びマトリックスの出現並びに血管外膜の集中的陥没を特徴とする（Ｇａｒａｓら、Ｐｈａｒｍａ．＆Ｔｈｅｒ．、９２：１６５−１７８、２００１）。
【００５０】
「平滑筋細胞」とは、血管中膜及び外膜由来の細胞を意味する。平滑筋細胞の特徴には、紡錘状の組織学的形態（光学顕微鏡観察下）が挙げられ、細胞の中央には核小体が存在する楕円形の核が局在し、筋形質には筋原線維を有する。電子顕微鏡観察下では、平滑筋細胞は、核近傍の筋形質に長細いミトコンドリア、粗面小胞体の数個の管状要素、及び遊離リボソームの多数のクラスターを有する。小さなゴルジ複合体も核の１つの極近傍に局在し得る。筋形質の大部分は、細くて平行な筋フィラメントで占められており、これは大部分で筋細胞の長軸に配向している。これらアクチン含有筋原線維は束になって配列しており、ミトコンドリアがその中に散在している。楕円形の高密度領域も細胞の収縮物質を介して分散しており、同様の高密度領域が原形質膜の内側面に沿って所々に分布している。
【００５１】
「狭窄」とは、血管の病的狭細化を意味する。
「ステント」とは、支持体を提供し、完全だが収縮した内腔の開通性を保証するために用いられる、血管腔内に留置する細い糸、棒、又はカテーテルを意味する。
【００５２】
「血栓」とは、心血管系において内腔を詰まらせることなく閉塞し又は血管に付着し得る血餅の形成又は存在を意味する。
「チロシンキナーゼ活性」とは、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）から基質ポリペプチド又はタンパク質上のチロシン残基へのリン酸基の転移を触媒する能力を意味する。
【００５３】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の好ましい態様の説明及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５４】
詳細な説明
冠動脈疾患は世界的に主要な健康問題であり、通常血管狭窄によって引き起こされる。血管形成術としても知られるＰＴＡは、症候性ＣＡＤ又は血管狭窄患者の治療に広く用いられている。血管形成術処置は、最初は成功することが多いが、処置の２０〜５０％において６カ月以内に高頻度に再狭窄を伴う。この費用のかかる血管形成術療法の限界を処置するための利用可能な治療方法は知られていない。メシル酸イマチニブなどのＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体はチロシンキナーゼインヒビターとして機能し、慢性骨髄性白血病のような疾患の治療に非常に有効であることが証明されている。ラパマイシンは、抗増殖作用を有することが知られている、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路のインヒビターである。本発明は、メシル酸イマチニブなどのＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体とラパマイシンなどのＰＩ３Ｋインヒビターとの組み合わせを用いた血管の狭窄又は再狭窄の治療方法を特徴とする。ＰＤＧＦＲからの分裂促進シグナル伝達を妨げ、細胞増殖をブロックすることによって、血管平滑筋細胞の過増殖が阻害される。この阻害によって新生内膜過形成が減少し、血管の狭窄又は再狭窄の発症を予防又は軽減する。
【００５５】
本明細書に提示した詳細な説明は具体的にＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体のメシル酸イマチニブに言及しているが、詳細な説明は、本明細書中に援用される米国特許第４，８７６，２５２号；第５，５１６，７７５号；第５，７０５，５０２号；及び第５，５２１，１８４号に記載のようなＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体、又は他のＰＤＧＦＲインヒビターにも適用できることは当業者には明らかであろう。本明細書に提示した詳細な説明はＰＩ３Ｋ経路インヒビターとして具体的にラパマイシンに言及しているが、詳細な説明は、ＰＩ３Ｋ又はＡｋｔ若しくはｍＴＯＲのような下流のエフェクター分子のあらゆるインヒビターにも適用できることは当業者には明らかであろう。
【００５６】
治療用途
本発明は、メシル酸イマチニブなどのＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体とラパマイシンなどのＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路インヒビターとの組み合わせを投与することによる、血管の狭窄又は血管形成術に関連した再狭窄の治療方法を特徴とする。メシル酸イマチニブとラパマイシンは、互いに６カ月以内、２カ月以内、１カ月以内、１４日以内、１０日以内、５日以内、２４時間以内、又は１時間以内に投与することができる。メシル酸イマチニブとラパマイシンは同時に投与されることが好ましい。メシル酸イマチニブとラパマイシンは、医薬的に許容可能な希釈剤、担体、又は賦形剤とともに単位剤形で投与される。非経口、静脈内、皮下、経口、又は動脈の障害部位に局所的に投与され得る。
【００５７】
本組成物は、経口投与用には丸剤、錠剤、カプセル、液体、若しくは徐放性錠剤の形態；又は静脈内、皮下若しくは非経口投与用には液体の形態；又は局所投与用にはポリマー又は他の徐放性ビヒクルの形態であり得る。
【００５８】
製剤を製造するための当該技術分野に周知の方法は、例えば『レミントン：薬学の科学と実践』（第２０版、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ  ＡＲ．編、２０００、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、フィラデルフィア、ペンシルバニア州）に見出される。非経口投与用製剤は、例えば、賦形剤、滅菌水、又は生理食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物由来の油、又は水素化ナフタレンを含有することができる。生体適合性、生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリド  コポリマー、又はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン  コポリマーを用いて、化合物の放出を制御することができる。ナノ粒子状製剤（例えば生分解性ナノ粒子、固形脂質ナノ粒子、リポソーム）は、化合物の生体内分布を制御するために用いることができる。他の潜在的に有用な非経口送達系には、エチレン−酢酸ビニル  コポリマー粒子、浸透圧ポンプ、植え込み型注入システム、及びリポソームが含まれる。製剤中の化合物濃度は、投与薬物の用量及び投与経路を含めた多くの因子に応じて変化するであろう。
【００５９】
本化合物は、場合により、製薬業界で一般に用いられる非毒性の酸付加塩又は金属複合体のような医薬的に許容可能な塩として投与することができる。酸付加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモン酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、又はトリフルオロ酢酸などのような有機酸；タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのようなポリマー酸；及び塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などのような無機酸が挙げられる。金属複合体は亜鉛、鉄などを含む。
【００６０】
経口用製剤には、非毒性の医薬的に許容可能な賦形剤との混合物中に活性成分を含有する錠剤が含まれる。これら賦形剤は、例えば、不活性希釈剤又は充填剤（例えばショ糖及びソルビトール）、潤滑剤、流動促進剤、及び粘着防止剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、硬化植物油、又はタルク）であり得る。
【００６１】
経口用製剤は、咀嚼剤として、又は活性成分を不活性固形希釈剤と混合した硬ゼラチンカプセルとして、又は活性成分を水又は油性媒体と混合した軟ゼラチンカプセルとして提供することもできる。
【００６２】
メシル酸イマチニブの経口用途に関し、用量範囲は５０ｍｇ〜５０００ｍｇ／日、より好ましくは１００ｍｇ〜１０００ｍｇ／日、最も好ましくは１００ｍｇ〜８００ｍｇ／日であり、１日用量、２日用量、又は４日用量までで投与される。ラパマイシンの用量は、ラパマイシンの血中レベルが０．００１μｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌ、好ましくは０．００５μｇ／ｍｌ〜０．１μｇ／ｍｌとなるように提供される。
【００６３】
局所投与では、血管形成術部位へ化合物を直接注入することができる。本発明の好ましい態様では、血管に機械的な支持体を提供し、抗増殖化合物を障害部位へ送達するために、メシル酸イマチニブ又はラパマイシン又は両方を塗布したステントが挿入されるであろう。
【００６４】
ラパマイシン及びメシル酸イマチニブは、最も有効であることが証明された、経口投与、全身投与、及び局所投与のあらゆる組み合わせで投与することができる。例えば、両化合物を経口投与することができ、両化合物を局所投与することができ、両化合物を全身投与することができ、又は１方を経口投与して他方を局所若しくは全身投与することができる。
【００６５】
本発明の化合物を投与するタイミングは、患者の総合的な健康、ＣＡＤの診断、及び心筋梗塞の相対危険度を含めたさまざまな臨床学的因子に依存するであろう。一般に、薬物化合物は、血管形成術処置の前、あいだ、後、又はそれらの組み合わせで投与することができる。薬物化合物は、ステントも挿入された血管形成術処置の前、あいだ、後、又はそれらの組み合わせで投与することもできる。薬物化合物は、ステント挿入時に、「ステント内再狭窄」が検出された場合は後で、又は両方で投与することができる。血管形成術及びステント挿入の前、あいだ及び／又は後の薬物化合物の投与は全身的にも局所的にも行うことができる。
【００６６】
一般に、各化合物の１用量は、血管形成術処置の１週間前に投与され、−７〜３６５日、好ましくは−７〜１８０日、より好ましくは−７〜１２０日、最も好ましくは−７〜９０日のあいだ継続することができる。ここで、０日は血管形成術処置日である。したがって、−７日は血管形成術日の７日前である。局所投与の反復適用を必要としてもよく、これには反復注入、化合物の反復適用又は薬物塗布ステントの反復交換が含まれるであろう。
【００６７】
ステント
ステントは、血管に構造的支持体を提供する足場として作用する。ステント又は小さな拡張性のワイヤチューブは、冠動脈疾患の治療に用いられることが多い。血管形成術のあいだ、バルーンをステント内部に入れて膨張させ、これがステントを広げて動脈壁部分に押しやる。ステントは取り外せないように留置され、ステントは網目状であるため、しばしば、血管内を覆う細胞がステントを介して及びその周りに成長してステントが固定されるのを助ける。ステントは、心臓への適正な血流を回復及び維持するため、並びに動脈壁が再び崩壊又は閉塞するのを防ぐため、血管形成術において一般的に用いられる。
【００６８】
本発明では、治療上有効量のメシル酸イマチニブ又はラパマイシン又は両方、及び所望により他の化合物を塗布したステントを用いて、血管形成術後の再狭窄の発症を予防し又はその危険性を軽減するための方法を提供する。
【００６９】
ステントは当該技術分野に公知の標準法を用いて塗布される。ステントの塗布法は一般に知られており、本明細書中に援用される米国特許第６，１５３，２５２号；第６，２５８，１２１号；及び第５，８２４，０４８号に例を見出すことができる。本願に列挙した治療用化合物のそれぞれに関し、治療剤の使用量は、採用する特定の薬物に依存するであろう。典型的には、薬物の量は、塗布物の約０．００１〜約７０重量％、より典型的には約０．００１〜約６０重量％、最も典型的には約０．００１〜約４５重量％に相当する。
【００７０】
追加の化合物の使用
上記のように、血管の狭窄及び閉塞をもたらす新生内膜過形成を開始し、持続させる細胞内シグナル伝達経路は、多種多様である。上流の刺激物質には、血小板、好中球又はマクロファージを含めた分裂促進因子及びサイトカインを含めることができる。古典的な増殖シグナル伝達経路及び細胞内遊走シグナル伝達経路、並びに血管新生シグナル伝達経路、免疫応答経路、細胞外マトリックス沈着、及び細胞接着経路も上方制御される。新生内膜過形成のこれらの側面のそれぞれを調節する細胞内タンパク質は多様である。したがって、血管の狭窄及び再狭窄に有効な治療的アプローチを設計する場合、これらの経路の１以上を標的とすることが有益である。関与する多様な経路を指向した追加の化合物の使用は、より大きな治療上の成功を可能にし、一方で、化合物の毒性及び必要とされる用量を軽減することができる。これらの狭窄病変は事実上慢性であるため、複数の経路を標的としてこれらの化合物の毒性を軽減する能力は、バルーン血管形成術単独のような最近の治療的アプローチにおいて見られるよりも、血管の狭窄及び再狭窄の軽減における長期有効性を引き延ばすことができる。更に、各細胞種は各化合物への応答性が異なり得るため、追加の化合物の使用は、狭窄病変に関与する複数の細胞種のうちの１以上を標的とすることにも役立つであろう。
【００７１】
また、本発明は、ＰＤＧＦＲ生物活性を阻害可能なＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物、並びに所望により、（ｉ）血管新生インヒビター、（ｉｉ）抗増殖化合物、（ｉｉｉ）免疫抑制化合物、（ｉｖ）抗遊走化合物、（ｖ）抗血小板剤、及び（ｖｉ）抗線維化化合物から選択される少なくとも１つの追加の化合物を含む医薬組成物を提供する。
【００７２】
血管新生インヒビターには、限定されるものではないが、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体、ＶＥＧＦ受容体のうちの１つに対する抗体、及びＶＥＧＦ受容体のうちの１つのチロシンキナーゼ活性を阻害する小分子化合物などの血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）インヒビターが含まれる。血管新生インヒビターの更なる例には、エンドスタチン、アンジオスタチン、レスチン、タムスタチン、並びにＴＮＰ−４７０、２つのメトキシエストラジオール、及びサリドマイドなどの他の小分子インヒビターが含まれる。
【００７３】
血管新生インヒビターの用量は、ヒト又は動物の体重及び状態並びに化合物の投与経路のような他の臨床学的因子に依存するであろう。ヒト又は動物を治療するには、およそ０．１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の血管新生インヒビターを投与することができる。より好ましい範囲は０．５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重である。特定の動物又はヒトにおける血管新生インヒビターの半減期に応じて、血管新生インヒビターを１日数回〜１週間に１回のあいだで投与することができる。本発明の方法は単回投与及び複数回投与を提供するものであり、いずれも同時に又は長期間にわたって投与される。
【００７４】
抗増殖化合物には、血管平滑筋細胞又は内皮細胞の増殖を軽減又は阻害することができるあらゆる化合物が含まれる。抗増殖化合物の例としては、限定されるものではないが、ｂＦＧＦインヒビター、パクリタキセル（タキソール）、トログリタゾン、１７β−エストラジオール、ＡＣＥインヒビター、スタチン、及びスラミンが挙げられる。
【００７５】
抗増殖化合物の用量は、ヒト又は動物の体重及び状態並びに化合物の送達経路のような臨床学的因子に依存する。一般に、ヒト又は動物を治療するには、およそ０．１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の抗増殖化合物を投与することができる。より好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重である。特定の動物又はヒトにおける抗増殖化合物の半減期に応じて、抗増殖化合物を、１日数回〜１週間に１回のあいだで投与することができる。本発明の方法は単回投与及び複数回投与を提供するものであり、いずれも同時に又は長期間にわたって投与される。
【００７６】
タキソールは、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ体重の週用量範囲で静脈内投与される。より好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜２．５ｍｇ／ｋｇ体重である。トログリタゾンは、およそ０．５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重の日用量範囲で経口又は静脈内投与される。より好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００７７】
スタチンは、正式には３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ  ＣｏＡ）還元酵素インヒビターとして知られる薬物クラスの一般名である。これらの薬物は、低密度リポタンパク質コレステロール値を下げる。平滑筋細胞の増殖は粥腫発生の特徴であり、したがって、スタチンのようにこの代謝経路に影響を与える薬物は、平滑筋細胞の増殖を減少させることができる。米国で現在市販されているスタチンには、アトルバスタチン（リピトール）、フルバスタチン（レスコール）、ロバスタチン（メバコール）、プラバスタチン（プラバコール）、シンバスタチン（ゾコール）、セリバスタチン（バイコール、２００１年８月に市場から排除された）、及び他の多くの製剤が含まれる。スタチンの用量は、各製剤について製薬会社から得ることができる。推奨日用量は、使用する特定の製剤に応じて０．２０〜１００ｍｇの範囲である。例えば、フルバスタチンの推奨日用量は２０〜４０ｍｇである。
【００７８】
アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビターは、アンジオテンシンＩＩの作用をブロックする、強力な血管収縮薬である。その血管収縮特性に加えて、アンジオテンシンは血管平滑筋細胞の増殖をも刺激する。ＡＣＥインヒビターは、血管のリコイル及び血管リモデリングの予防並びに炎症及び細胞増殖の予防を通して再狭窄の予防に有効であり得る。米国において近年市販されているＡＣＥインヒビターにはいくつかある。例として、ペリンドプリル（アセオン）、キナプリル、カプトプリル（カポテン）、リシノプリル（プリニビル、ゼストリル）、エナラプリル（バソテック）、フォシノプリル（モノプリル）、ベナゼプリル（ロテンシン）、シラザプリル、及びラミプリル（アルテース）が挙げられる。ＡＣＥインヒビターの用量は、各製剤について製薬会社から得ることができる。推奨日用量は、使用する特定の製剤に応じて１〜５００ｍｇの範囲である。例えば、ペリンドプリルの好ましい用量は２ｍｇ〜２０ｍｇ／日であり、一方、カポテンの好ましい用量は２５〜１５０ｍｇを１日２回又は３回であり、最大用量は４５０ｍｇ／日である。
【００７９】
スラミンはポリアニオン化合物であるが、抗寄生虫薬としての使用から１０年後、平滑筋細胞の増殖に必要なオートクリン及びパラクリン成長因子をブロックする能力が認識された。スラミンは、新生物治療のための動物実験に近年使用されている。スラミンは、アントリポールやスルモンチールを含めたいくつかのブランド名で市販されている。スラミンの用量は、各製剤について製薬会社から得ることができる。推奨日用量は、使用する特定の製剤に応じて５０〜２００ｍｇの範囲である。
【００８０】
免疫抑制化合物には、動物の自然な免疫応答を抑制することができるあらゆる化合物が含まれる。好ましい化合物は、単球又はマクロファージ又は両方の活性を抑制するであろう。免疫抑制化合物は、以下の４つの方法のうちのいずれか１つで単球及びマクロファージの活性を阻害できることが好ましい：１）  単球の産生を減少させるか又は除去を増加させる、２）  単球のマクロファージへの分化を妨げる、３）  単球の過形成領域への遊走を妨げる、及び４）  マクロファージの活性化をブロックする。好ましい免疫抑制化合物の非限定的な例としては、ｍａｃ−１の産生又は機能をブロックする抗体又は化合物、ＭＣＰ−１の産生又は機能又は両方をブロックする化合物、α−トコフェロールなどの抗酸化剤、及びＰ−セレクチン、ＰＳＧＬ−１、ＶＬＡ−４又はＶＣＡＭ−１をブロックする化合物が挙げられる。ステロイドは、免疫抑制化合物のクラスのもう１つの例である。ステロイドの非限定的は例としてはプレドニゾン及びメチルプレドニゾロンが挙げられる。免疫抑制化合物の他の例はＦＴＹ７２０であり、これは近年ノバルティスによって開発中である。ＦＴＹ７２０の用量は、第ＩＩ相及び第ＩＩＩ相臨床試験で得られた情報に基づいて決定されるであろう。予備実験に基づいた現在の用量は、１日あたり２〜５ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【００８１】
抗遊走化合物には、平滑筋細胞の移動又は遊走を軽減又は予防することができるあらゆる化合物が含まれる。特定の非限定的は例としては、セロトニン受容体（５−ＨＴ２）アンタゴニスト、エンドセリン−１受容体アンタゴニスト、及びバソプレシン受容体アンタゴニストが挙げられる。エンドセリン−１（ＥＴ−１）は、内皮細胞及び平滑筋細胞によって分泌される強力な血管収縮薬である。２つの受容体があり、ＥＴＡは血管平滑筋細胞に局在し、ＥＴＢは内皮細胞及び血管平滑筋細胞に局在する。エンドセリン−１は血管平滑筋細胞の増殖及び遊走を、単独で及び他のサイトカインとともに刺激する。細胞外マトリックス合成も刺激する。ＥＴ−１及びアンジオテンシンＩＩが血管平滑筋細胞に対して相乗的に作用できることを示唆するいくつかの証拠がある。ＥＴ−１受容体アンタゴニスト及びＥＴ−変換酵素インヒビターは新生内膜過形成の予防に有用であるという動物実験に基づいた証拠もある。これらのデータは、エンドセリン−１受容体アンタゴニストが平滑筋細胞の遊走を予防するのに有用であることを示唆している。
【００８２】
セロトニンは主に血小板から分泌され、５−ＨＴ１受容体及び５−ＨＴ２受容体を介して血管に作用する。過去１０年間にわたり、何人かの研究者は、セロトニンが血管平滑筋細胞の増殖及び遊走に関与し得ることを示唆している。５−ＨＴ２受容体アンタゴニストであるケタンセリン及びアンプラーグは、ウサギの頚動脈バルーン血管形成術モデル及び静脈移植内膜過形成モデルにおいて新生内膜過形成の予防に有効であることが示されており、これらが平滑筋細胞の増殖及び遊走の予防に有用であることを示唆している。
【００８３】
抗遊走化合物の特定の例としては、シプロヘプタジン、ボセンタン、ケタンセリン、アンプラーグ及びＹＭ０８７が挙げられる。各化合物の用量は製造業者から得ることができ、患者の体重及び状態並びに化合物の投与経路に応じて変化するであろう。
【００８４】
抗血小板剤には、シクロオキシゲナーゼインヒビター（例えばアスピリン）、ＡＤＰインヒビター（例えばチクロピジン）、ホスホジエステラーゼＩＩＩインヒビター（例えばシロスタゾール及びジピリダモール）、又は糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ  インヒビター（例えばアブシキシマブ）を含めることができる。各化合物の用量は製造業者から得ることができ、患者の体重及び状態並びに化合物の投与経路に応じて変化するであろう。
【００８５】
抗線維化化合物には、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）又は結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）のアンタゴニストが含まれる。抗線維化剤の用量は、ヒト又は動物の体重及び状態並びに化合物の投与経路のような他の臨床学的因子に依存するであろう。ヒト又は動物を治療するには、およそ０．１ｍｇ／ｋｇ〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の抗線維化剤を投与することができる。より好ましい範囲は０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重であり、最も好ましい範囲は１ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ体重である。特定の動物又はヒトにおける抗線維化剤の半減期に応じて、抗線維化剤は、１日数回〜１週間に１回のあいだで投与することができる。本発明の方法は単回投与及び複数回投与を提供するものであり、いずれも同時に又は長期間にわたって投与される。
【００８６】
各化合物を化合物の具体的カテゴリーによって列挙したが、これらのカテゴリーは範囲を限定することを意味するものではないことに注意すべきである。多くの化合物は１以上の活性を有しており、したがって、１以上のカテゴリーに含まれることができる。例えば、セロトニン受容体アンタゴニストは、抗増殖活性及び抗遊走活性を有し得る。
【００８７】
列挙した各化合物に関し、上記投与様式を全て用いることができる。前記化合物のいくつかは経口投与又は全身投与すると毒性を示すため、局所投与（例えば血管形成術時に動脈に挿入されるステントを塗布することによって）を用いることもできる。一般に、化合物の組成％は、用いた塗布材料に対する化合物の重量で、０．０５〜５０重量％の範囲であろう。
【００８８】
また、本発明は、治療上有効量のＰＤＧＦＲ生物活性を阻害可能な化合物及びラパマイシンの、放射線療法と組み合わせた使用を提供する。治療の用量及び期間を決定するための当該技術分野に公知の方法が数多く存在することが認識されるであろう。放射線療法には、γ線又はβ線が、正常に機能する能力を制限し又は細胞を完全に破壊するように細胞に十分な障害を誘発するのに足る量で用いられる。典型的な用量は、１０〜２００単位（グレイ）の範囲である。放射線療法に用いられる最も一般的なシステムは、カテーテルに基づいたステント又は放射性ステントである。カテーテルに基づくシステムでは、強い放射線源が、特別に設計されたカテーテルの末端に付着した細いワイヤ又は小さなペレットの形態で血管形成術部位へ導入される。照射は３〜５分間継続することができ、その後線源を引き戻す。あるいは、少量の放射性物質とともに挿入したステントを取り外せないように血管形成術部位に留置する。機械的な支持体を提供することに加えて、平滑筋細胞の増殖をブロックする放射線量を送達する。これらの方法はともに当該技術分野に周知である（例えばＲｅｇａｌら、Ｅｕｒ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．、２３：１０３８−１０４４、２００２；Ｌｅｏｎら、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、２００２；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒ、Ｈｅｒｚ  ２３：３６６−３７２、１９９８；Ｓｕｎｔｈａｒａｌｉｎｇａｍら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓ．５２：１０７５−１０８２，２００２を参照されたい）。
【００８９】
有効性の決定方法
本発明の化合物で治療されるヒトの患者は、治療の成功を追跡するために典型的には内科医によって見守られる。治療失敗の兆候には、症状再発に対する患者の不満、標準ストレス試験の不出来、並びに血流減少、虚血及び心筋梗塞のような疾患の指標の再発が含まれる。更に、冠動脈血管造影を用いて治療血管の腔径を測定することが多い。処置前と比較して、処置後２５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％以上の腔径増加が治療効果の指標である。治療血管径は、基準の遠位部及び近位部と比較して治療効果を決定することもできる。治療効果を測定するための更なる方法には、磁気共鳴血管造影及び血管内超音波（ＩＶＵＳ）が含まれ、これは新生内膜形成、管腔径、プラーク領域及び容積の定量を可能にする。患者を短期（初期治療後６カ月まで）及び長期（初期治療後６カ月以上）にモニターして、本発明の化合物を用いた治療の有効性を測定する。
【００９０】
以下に記載する動物モデルを用いて、化合物の用量及び毒性をｉｎ  ｖｉｖｏで測定することができる。例えば、バルーンカテーテル留置による血管障害のラットモデルを用いて、有効性及び毒性に関し、各化合物及び化合物の組み合わせを試験することができる（Ｐｏｗｅｌｌら、Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１６：Ｓ４２−９、１９９０を参照されたい）。有効性試験には、新生内膜／中膜の横断面測定値の割合としての新生内膜形成の測定及び動脈血圧測定が含まれる。更に、平滑筋細胞培養によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ系を用いて各化合物の有効用量及び化合物安定性を決定することができる。例えば、特定数の細胞を培地に蒔き、成長因子又はアンジオテンシンＩＩのような公知の分裂促進因子で刺激し、漸増濃度の各薬物化合物で処置することができる。毎日培地中の細胞数を計数し、増殖を測定することができる（Ｐｏｗｅｌｌら、上記を参照されたい）。陽性の結果は、分裂促進因子単独で処理した細胞と比較して、少なくとも１０％、好ましくは２５％、より好ましくは５０％以上の増殖率低下であると考えられる。
【００９１】
動物実験
本発明において提供される治療方法は、治療上有効量のＰＤＧＦＲ生物活性を阻害可能なＮ−フェニル−２−ピリミジン誘導体及びＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物を、血管の狭窄又は再狭窄を予防し又は軽減するのに十分な用量で、血管の狭窄又は再狭窄を患う温血動物に投与することも含む。そのような動物は、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン誘導体、ＰＩ３Ｋ経路インヒビター化合物、並びに所望により、（ｉ）血管新生インヒビター；（ｉｉ）抗増殖化合物；（ｉｉｉ）免疫抑制化合物；（ｉｖ）抗遊走化合物；（ｖ）抗血小板剤；及び（ｖｉ）抗線維化化合物のうちの少なくとも１つの組み合わせで処置することもできる。
【００９２】
本明細書において、温血動物には、限定されるものではないが、マウス、イヌ、ブタ、ヒヒ、ラット、ウサギ、及びサルが含まれる。冠動脈血管形成術又は動脈狭窄の動物モデルも含まれ、治療の用量及び有効性を試験するために用いることができる（例えばＧａｒａｓら、上記を参照されたい）。
【実施例１】
【００９３】
ブタ冠動脈モデルにおける塗布ステントのｉｎ  ｖｉｖｏ試験。
この予備実験は、ε−カプロラクトン−コ−グリコリド  コポリマーを塗布したステントから溶出するラパマイシンのｉｎ  ｖｉｖｏ内膜過形成阻害能を評価するために行う。ラパマイシン負荷ステント又は対照ポリマーを塗布したステントを与えてから１４日後、雄性ヨークシャーブタを安楽死させて冠動脈を取り出し、血管を組織学的評価用に調製し、内膜増殖量を分析した。対照金属ステント及びポリマーのみを含有するステントとの比較により、ラパマイシンのｉｎ  ｖｉｖｏ新生内膜増殖防止能を測定することができる。
【００９４】
エチレンオキシドで滅菌したパルマッツ−シャッツステントを、体重３８〜４８ｋｇの麻酔した養殖ブタに滅菌条件下で挿入する。ステント挿入の２４時間前、動物にアスピリン（３２５ｍｇ、経口、１日４回）及びチクロピジン（２５０ｍｇ、経口、１日４回）を投与して慢性血栓を制御する；アスピリンとチクロピジンはともに屠殺するまで毎日継続する。ケタミン（２０ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）、キシラジン（２ｍｇ／ｋｇ、筋肉内）及びペントバルビタールナトリウム（必要に応じて１０ｍｇ／ｋｇ）で麻酔を誘導し、酸素中の１〜２％イソフルラン内に維持した。８Ｆｒシースを無菌的に単離した左頚動脈内に定置し、続いて、冠動脈血管造影用の８Ｆｒ  ＪＬ３．５  ガイドカテーテルを通すために、又は適切な冠動脈へのステントバルーン送達のための０．０１４インチガイドワイヤを挿置するために用いる。ヘパリン（１５０単位／ｋｇ）を内部手続的に（intraprocedurally）投与して急性血栓を予防する。４つの実験群を採用する；１）金属ステント対照；２）４５／５５（ｗ／ｗ）ε−カプロラクトン  グリコリド  コポリマー（ＣＡＰ／ＧＬＹ）を塗布した金属ステント；３）ＣＡＰ／ＧＬＹ中に製剤化した３２μｇのラパマイシン／ステント；４）ＣＡＰ／ＧＬＹ中に製剤化した１６６μｇのラパマイシン／ステント。ＬＡＤ冠動脈とＬＣＸ冠動脈とにステントを配置する。ステント挿入の前、あいだ、及び直後に血管造影を行い、バルーン径を選択する（３．０、３．５又は４．０ｍｍ）ための血管サイズ及びバルーン／動脈比を決定するための測定値を得る。８〜１０ａｔｍで３０秒間送達バルーンを拡張することによってステントを配置する。挿入後１４日にも血管造影を実施し、最終血管径を得る。処置群を無作為に抽出し、処置に関して盲目の研究者が個々のステントを挿入する。しかしながら、いずれの所定のブタにも唯一の処置を採用する。挿入後１４日に動物を安楽死させ、１０％ホルマリンを用いて血管を１００ｍｍＨｇで１０分間灌流固定し、そして１０％緩衝化ホルマリン中に保存する。
【００９５】
組織学的評価のため、ステントを挿入した血管をグリコールメタクリレート中に包埋する。ステントの長さに沿って等間隔で採取した４枚の３〜５μｍ厚横断切片をスライドグラス上におき、ミラーのエラスチン染色によって調製する。顕微鏡観察及びコンピューター画像解析によって各切片の組織形態学的測定を行う。各実験群について内膜：中膜比を決定する。陽性の結果は、ラパマイシン処置を受けていない対照動物と比較して少なくとも１０％、好ましくは２５％、最も好ましくは５０％以上の内膜：中膜比の減少である。
【実施例２】
【００９６】
平滑筋細胞の増殖及び遊走に対するグリーベック及びラパマイシンの効果。
グリーベック及びラパマイシンのヒト動脈血管平滑筋細胞（ＨＡＳＯＭ細胞）に対する用量反応を調べるため、Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験を実施した。２４ウェルのボイデンチャンバー（コーニング・コースター社、ケンブリッジ、マサチューセッツ州）を用いて細胞遊走を測定した。各ウェルは、孔径８μｍのポリカーボネートフィルターを含有する挿入物を有する。これらのメンブレンを０．１％ゼラチンで８時間コーティングし、次に吸引して２時間乾燥させた。細胞を７０％コンフルエントになるまで増殖させ、次に、遊走アッセイ前の４８時間、１％ウシ胎仔血清及び薬物化合物（グリーベック単独、ラパマイシン単独、及びグリーベックとラパマイシンとの組み合わせを図１に示す濃度で）を含有する培地で処理した。このアッセイでは、４８時間インキュベーションを行わないとラパマイシンは遊走をブロックしないことに注意すべきである（Ｐｏｏｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８：２２７７−２２８３、１９９６）。細胞を０．０５％トリプシン中に回収し、Ｍ−１９９培地中に再懸濁し、コーティングメンブレン上に４０００細胞／ウェルの濃度でグリーベック及び／又はラパマイシンとともに蒔いた。０．５％ＢＳＡ及び２０ｎｇ／ｍｌのヒトＰＤＧＦ−Ｂ（ｈＰＤＧＦ−ＢＢ）を含有するＭ−１９９培地をボイデンチャンバーの下部に入れた。細胞を５％ＣＯ２中、３７℃で１２時間インキュベートし、メンブレンの上部表面にある細胞をかき集めた。メンブレンを取り外し、メンブレン下部表面の細胞をヘマトキシリンで染色した。メンブレン下部表面の５つの無作為高倍率視野中の細胞を計数することによって細胞遊走を定量化した。全てのアッセイは３回行った。このアッセイの結果は、グリーベック単独、ラパマイシン単独、及びグリーベックとラパマイシンとの組み合わせは、ＰＤＧＦで誘導されるＨＡＳＯＭ細胞の遊走を用量依存的に強力に阻害することを示した（図１）。更に、グリーベックとラパマイシンとの組み合わせは遊走阻害を促進した（図１）。ラパマイシンの有効濃度は免疫抑制を典型的に引き起こす濃度よりもかなり低いことに注目されたい（おおよそ５〜１５ｎｇ／ｍｌ）。
【００９７】
新生内膜過形成病変の発症機序において平滑筋細胞の遊走は重要なイベントである。これらの実験は、グリーベック及びラパマイシンが、ＰＤＧＦ−ＢＢ／血清で誘導される平滑筋細胞の遊走を阻害することを証明している。これまでに見られた最大阻害はおよそ７０〜８０％であるが、これはグリーベック又はラパマイシンでブロックされないシグナルを誘導する因子を含有すると思われる血清がアッセイ中に少量存在するという事実によるものかもしれないことにも注意すべきである。血管形成術病変の微小環境から外挿すると、本明細書中に記載したような追加の化合物の使用により、平滑筋細胞の遊走の阻害をほぼ最大レベルまで増加させることが可能である。
【００９８】
他の態様
上記説明から、さまざまな用途及び条件に採用するために前記発明に改変及び修飾を行い得ることは明らかである。そのような態様も以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【００９９】
本明細書中に言及した全ての出版物は、それぞれ個々の出版物又は特許出願が具体的に且つ個々に援用されることが示されている場合と同一範囲で本明細書中に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】図１は、ｈＰＤＧＦ−ＢＢ（２０ｎｇ／ｍＬ）によって誘導されるヒト動脈血管平滑筋細胞の遊走の、グリーベック単独（Ｇ）、ラパマイシン単独（Ｒ）、及びグリーベックとラパマイシンとの組み合わせによる用量反応阻害を示す。Ｇの薬物濃度はｎｇ／ｍＬ、Ｒの薬物濃度はｐｇ／ｍＬである。第１レーンにはＰＤＧＦを添加しておらず、最初の２レーンには薬物化合物を添加していない。結果は３回の測定値の平均＋Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表す。
【図１】
2006526652.tif 000006
【国際調査報告】
2006526652.tif 000007