(57)【要約】炭水化物含有溶液を解毒する方法、並びに該方法で使用するための装置、炭水化物含有医用溶液を同定し、そしてその毒性を測定する方法、および炭水化物含有医用溶液それ自体が開示される。また、炭水化物含有細胞培養液または液体形態をした同食品を解毒する方法、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの製造方法、および乱れた炭水化物の代謝または炭水化物分解生成物の弱まった除去を伴う疾病治療用の医用溶液を製造するための３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン解毒剤の使用も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭水化物含有溶液を解毒する方法であって、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げるか、その量レベルを低下させるか、またはその量を実質的に除去するために、解毒剤を該炭水化物含有溶液と接触させる上記の方法。
【請求項２】
炭水化物含有溶液が医用溶液、細胞培養液、または食品、好ましくは液体形態の食品である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
炭水化物含有溶液を、解毒剤を含む溶液と直接、接触させるか、場合によってビーズまたは粒子に結合されている３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと結合または反応する解毒剤と接触させるか、或いは膜またはカラムにカップリングされている３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと結合または反応する解毒剤と接触させ、そして減少した量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを有する溶液を引き出す、請求項１および２のいずれか１項記載の方法。
【請求項４】
解毒剤が、アミノ基、亜硫酸基および／またはスルフィドリル基を含む物質、好ましくはＮａＨＳＯ３、Ｎａ２Ｓ２Ｏ５またはＮａ２ＳＯ３；ペプチド構造体またはアミノ酸、好ましくはポリリシンまたはアルギニン；３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの転化に特異性の酵素；および非常に低いｐＨ、好ましくは約３のｐＨを与える製剤上許容できる物質より成る群から選ばれ、そして解毒剤がビーズ若しくは粒子に結合されているか、または膜若しくはカラムにカップリングされているときは、解毒剤は、また、ポリスチレンジビニルベンゼン重合体およびオクタデシルシリカまたはそれらの組み合わせを含む群から選ぶことができる、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
解毒剤が０．００１〜１０ｍＭ、好ましくは０．００１〜０．２ｍＭ、さらに好ましくは０．００１〜０．１ｍＭの濃度の一亜硫酸化合物若しくは亜硫酸水素化合物、または０．０００５〜５ｍＭ、好ましくは０．０００５〜０．１ｍＭ、さらに好ましくは０．０００５〜０．０５ｍＭの濃度の二亜硫酸化合物である、請求項４記載の方法。
【請求項６】
炭水化物がグルコース、フルクトース、マンノース、それらの重合体若しくは誘導体またはそれらの混合物、好ましくはグルコースである、請求項１〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
炭水化物含有溶液が無菌医用溶液または滅菌されるべき医用溶液、好ましくは透析溶液、最も好ましくは腹膜透析溶液；および供血目的または血液成分貯蔵のための液体である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合するための解毒剤がカップリングされている膜またはカラムを含み、該膜またはカラムが場合によって多区画室容器中の区画室間にまたはチューブ中に配置されている、請求項１〜７のいずれか１項記載の方法で使用するための装置。
【請求項９】
解毒剤がポリスチレンジビニルベンゼン重合体若しくはオクタデシルシリカまたはそれらの組み合わせである、請求項８記載の装置。
【請求項１０】
体液中に３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含んでいる哺乳動物の体液、好ましくは血液または腹部の液体を解毒する方法であって、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含んでいる体液を、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合するための請求項３および４で定義される解毒剤がカップリングされている膜またはカラムと体外接触させる、上記の方法。
【請求項１１】
免疫系を有害な方向に活性化する病状になっている哺乳動物の治療方法であって、非毒性量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを上記哺乳動物に免疫抑制剤として投与する上記の方法。
【請求項１２】
炭水化物含有溶液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの存在および量の両者を測定することを含む、該溶液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定および測定方法であって、該溶液をＨＰＬＣにかける上記の方法。
【請求項１３】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの製造方法であって、炭水化物、好ましくはグルコースを水に溶解し、そのようにして得られた溶液を加熱し、その後、グルコース含有溶液中に生成した３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンが結合されるカラムを通して抽出し、続いてその３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを溶離して得る上記の方法。
【請求項１４】
請求項３および４で定義される解毒剤を含む炭水化物含有溶液、好ましくは医用溶液。
【請求項１５】
炭水化物がグルコース、フルクトース、マンノース、それらの重合体若しくは誘導体またはそれらの混合物、好ましくはグルコースである、請求項１４記載の炭水化物含有溶液。
【請求項１６】
炭水化物含有溶液が熱滅菌された医用溶液である、請求項１４および１５のいずれか１項記載の炭水化物含有溶液。
【請求項１７】
炭水化物含有溶液が腹膜透析溶液である、請求項１４〜１６のいずれか１項記載の炭水化物含有溶液。
【請求項１８】
請求項１４〜１７のいずれか１項記載の炭水化物含有溶液を含む区画室容器。
【請求項１９】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合するための、請求項３および４で定義される３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤を含む膜またはカラム。
【請求項２０】
炭水化物分解生成物の弱まった除去の乱れた炭水化物機構を伴う疾病の治療用に炭水化物を含んでいる医用溶液、好ましくは透析溶液を製造するための、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン解毒剤の使用。
【請求項２１】
炭水化物含有溶液を、解毒剤を含む溶液と直接、接触させるか、場合によってビーズまたは粒子に結合されている３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと結合または反応する解毒剤と接触させるか、或いは膜またはカラムにカップリングされている３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと結合または反応する解毒剤と接触させ、そして減少した量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを有する炭水化物含有医用溶液を引き出す、請求項２０記載の使用。
【発明の詳細な説明】
（発明の背景）
【０００１】
本発明は、主として、炭水化物含有医用溶液を解毒する方法、該方法で使用するための装置、炭水化物含有医用溶液を同定し、そしてその毒性を測定する方法、および炭水化物含有医用溶液それ自体に関する。本発明は、また、炭水化物含有細胞培養液または液体形態をした食品を解毒する方法、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの製造方法、および乱れた炭水化物の代謝または炭水化物分解生成物の弱まった除去を伴う疾病の治療用医用溶液の製造に対する３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン解毒剤の使用に関する。
【０００２】
（背景技術）
種々の疾病および障害の治療に際しての医学療法内では、様々なタイプの炭水化物含有医用溶液が使用される。１例は、例えば腎不全を有する患者の治療で使用される透析溶液である。これらの患者は、一般に、膜に基づく透析装置を用いる体外血液透析（ＨＤ）療法か、または腹膜透析（ＰＤ）のいずれかで治療される。血液透析中は、代謝老廃物は体外の人造膜によって取り除かれるが、これに対して、腹膜透析中は、老廃物は腹膜、即ち腹膜の膜である生体膜で取り除かれる。ＰＤでは、実際の交換は腹膜中の血液と注入透析溶液との間で起こる。この溶液は、患者の腹腔中に、恒久的に埋め込まれた腹膜内カテーテルを通して１日数回注入される。ＰＤ治療には、特別に設計された高浸透圧透析溶液が入っているプラスチックバッグが用いられる。
【０００３】
腹膜透析（ＰＤ）を受けている患者は、治療に依存して毎日８〜２０リットルの透析溶液を使用する。この結果、１．５〜４％のグルコースを含む溶液の消費量は毎年３〜７トン（５０〜１７５ｋｇの純グルコース）となり（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ、 １９９６、Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ， １１： ９５８−９５９）、そのグルコースは、また、それが分解を受けるならば無視できない量の分解化合物であることを意味する。患者の中には透析液の流入中に痛みを経験するものがいることはよく知られている。この痛みはグルコースの分解生成物の結果である可能性があること（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ等、１９８５、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｄｉａｌｙｓｉｓ、Ｗｉｎｃｈｅｓｔｅｒ編、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｆｉｅｌｄ， Ｒｉｃｈ， ２６１−２６４）、およびその分解生成物は基底細胞毒性を仲介すること（Ｂａｒｉｌｅ ＦＡ、１９９４、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ、Ｆｌｏｒｉｄａ： ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、２７−３５）が推測された。これは、それらは膜完全性、ミトコンドリア活性または蛋白質およびＤＮＡの合成のような生きている細胞全てに共通する構造および機能を含む基本的な生命プロセスに作用することを意味する。これらの基底細胞機能が器官特異性細胞機能を支えている。かくして、基底細胞活性に影響を及ぼし得るグルコース分解生成物（ＧＤＰ類）は、単核細胞からのＩＬ−１放出のような特異性細胞機能も妨害する可能性がある。
【０００４】
Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等は、市販ＰＤ溶液の主要な銘柄品は全て濾過で滅菌されたＰＤ溶液とは対照的に毒性であると報告した（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９１、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、４０： ７７−７９）。これらＰＤ溶液は、培養線維芽細胞について細胞増殖培養液による希釈後に試験された。さらに、Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等は、グルコース分解生成物も宿主側防御に関係する機能性応答に影響を及ぼすと報告している（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９５、Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｉｎｔ．、１５、補遺）。ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、メチルグリオキサール、３−デオキシグルコソン、５−ＨＭＦおよびグリオキサールのような一部の毒性化合物は、上記グルコース分解に由来することが知られている。
【０００５】
さらに、糖尿病を持つ患者は、重い合併症、即ち糖尿病性腎障害または腎臓病、網膜の破壊に起因して失明を引き起こす糖尿病性網膜症、末梢神経機能の損失を伴う糖尿病性神経障害、および毛細血管損傷に起因する循環問題等々に罹ることが多いことはよく知られている。糖尿病由来の病理と加齢の結果としてもたらされる病理との間の類似性が、広範囲にわたって報告されている。糖尿病関連の病理学的状態と加齢の両方に共通する生化学的基礎として色々な機構が提案された。ヒト対象からのデータによって最も強く支持された仮説は、非酵素的グリコシレーション機構を前提とするものである。この仮説は、加齢プロセスおよび上記のもののような糖尿病関連の病理学的状態は、少なくとも一部は、グルコースおよびグルコース誘導代謝産物によるＭａｉｌｌａｒｄ（メイラード）反応経由での蛋白質の変性および架橋によって引き起こされると述べる（Ｍｏｎｎｉｅｒ等、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ、１９８４、８１： ５８３）。
【０００６】
Ｍａｉｌｌａｒｄ反応が、（アミノ酸、蛋白質および核酸からの）第一アミンと糖とのシッフ塩基を形成する反応を通して開始され、そのシッフ塩基が転位を受けてアマドリ反応生成物を形成することはよく知られている。アマドリ転位反応生成物のさらなる転位は褐変および蛍光生成物の原因であって、それら生成物が後生的（ａｄｖａｎｃｅｄ）グリコシレーション最終生成物（ＡＧＥ類）の形成をもたらす。Ｍａｉｌｌａｒｄ反応における中間体の１つは３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンであり、これは略して３，４−ＤＧＥとも呼ばれる。この化合物はグルコースと５−ＨＭＦ（５−ｈｙｄｒｏｘｙｅｍｔｈｙｌｆｕｒｆｕｒａｌｅ：５−ヒドロキシメチルフルフラール）との間の中間体である。この化合物は、ＡＧＥ生成物形成の誘発物質としての物質３−ＤＧ（３−デオキシグルコソン）により置き換えられてはならないが、このことはＰｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、１９９９年、第１９巻、第３２５−３３３頁の「グルコースに基づく腹膜透析液の熱滅菌中における後生的グリケーション最終生成物の形成での中間体である１，２−ジカルボニル化合物の誘導（Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ １，２−ｄｉｃａｒｂｏｎｙｌ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ， ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄ−ｐｒｏｄｕｃｔｓ， ｄｕｒｉｎｇ ｈｅａｔ−ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ−ｂａｓｅｄ ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｆｌｕｉｄｓ）」の中でＳｃｈａｌｗｉｊｋ Ｃ． Ｇ．等によって述べられている。３−ＤＧはグルコース分解における３，４−ＤＧＥの前駆体である。さらに、ＷＯ００／６２６２６号明細書において、３−ＤＧはＡＧＥ生成物の中では有毒な物質であると指摘され、そして３−ＤＧまたはその前駆体に結合する化合物を加えることによってその形成を妨げることが提案されている。
【０００７】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、また、免疫抑制効果を有すると報告されている（Ｋａｔｏ等のＪ． Ａｇｒｉｃ． Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、１９９４、４２， ２０６８−２０７３「Ｍａｉｌｌａｒｄ反応における中間体である３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの免疫抑制効果（Ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ３，４−ｄｉｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｏｎｅ−３−ｅｎｅ， ａｎ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｍａｉｌｌａｒｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ）」）。さらに、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンはフルクトースの分解生成物として報告されている（Ａｎｅｔ：「炭水化物ＩＩＩの分解（Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ＩＩＩ）」）。
【０００８】
これまでに、例えば腹膜透析に用いられる医用溶液中の、有毒で、合併症を引き起こすグルコース分解生成物の全てを何とかして同定しようと、またはこの面において無毒性であるその種の医用溶液を作ろうとしたものはいない。
【０００９】
かくして、炭水化物含有医用溶液の毒性を測定するのみならず解毒する方法も提供し、そしてまたその種の無毒性炭水化物含有医用溶液を提供する大きな必要が存在する。
【００１０】
（発明の概要）
本発明の目的は上記の諸問題を無くし、または少なくすることである。
【００１１】
この目的は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げるか、その量のレベルを低下させるか、またはその量を実質的に除去するために、解毒剤を炭水化物含有医用溶液と接触させる、炭水化物含有医用溶液の解毒方法によって達成される。
【００１２】
本発明は、また、毒性化合物の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含んでいる炭水化物含有医用溶液の使用を避け、それによって３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンにより引き起こされる合併症および望ましくない副作用を少なくするために、そのような炭水化物含有医用溶液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを同定および測定する方法に関する。
【００１３】
さらに、本発明は、上記の方法で使用するための、即ち３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンによって引き起こされる合併症を少なくするために、体液中での３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げるか、その量レベルを低下させるか、またはその量を実質的に除去するための装置に関する。
【００１４】
さらに、本発明は、解毒剤を含み、そして３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを低下したレベルで有するか、または実質的に含んでいない無毒性炭水化物含有医用溶液に関する。
【００１５】
本発明は、また、炭水化物分解生成物の弱まった除去（ｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ ｒｅｍｏｖａｌ）の乱れた炭水化物機構を伴う疾病の治療用の炭水化物を含有する医用溶液、好ましくは透析溶液を製造するための３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン解毒剤の使用にも関する。
【００１６】
１つの態様において、本発明は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの製造のための新規な方法に関する。
【００１７】
本発明の種々の態様に関連して述べられる炭水化物含有医用溶液は、医用溶液が最も好ましいとはいえ、医用溶液には必ずしも限られない。望ましくない量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含んでいる他の炭水化物含有溶液も適用可能である。例えば、もう１つの態様では、本発明は炭水化物含有細胞培養液、または食品、好ましくは液体形態をした食品を解毒する方法であって、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げるか、その量レベルを低下させるか、またはその量を実質的に除去するために解毒剤を上記の培養液または食品に加える上記の方法に関する。
【００１８】
さらにもう１つの態様において、本発明は、体液中に３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを有する哺乳動物の体液を解毒する方法であって、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含む上記体液を、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの結合用解毒剤がカップリングされている膜またはカラムに、好ましくは体外で加える上記の方法に関する。
【００１９】
さらに、なおももう１つの態様において、本発明は、免疫系を有害な方向に活性化する病状になっている哺乳動物の治療方法であって、非毒性量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを上記哺乳動物に免疫抑制剤として投与する上記の方法に関する。
【００２０】
さらに具体的に述べると、本発明による炭水化物含有医用溶液の解毒方法において、この溶液は、その溶液中で、解毒剤に直接、接触させるか、場合によってビーズまたは粒子に結合されている解毒剤と接触せしめられるか、或いは解毒剤、即ち３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンをカラムまたは膜に結合させるための３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤がカップリングされている、重合体カラムまたは重合体膜のようなカラムまたは膜と接触せしめられ、そして減少した量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを有する上記炭水化物含有医用溶液が引き出される。
【００２１】
炭水化物含有医用溶液、同食品または同細胞培養溶液の毒性を測定する装置の態様に関し、本発明のさらなる態様は：
【００２２】
解毒剤を含む膜、すなわち３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合するための３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤を含む膜；および
【００２３】
解毒剤を含む膜、すなわち３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合するための３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤を含むカラム
である。
【００２４】
炭水化物含有医用溶液または同細胞培養溶液または同食品液の中の炭水化物は、グルコース、フルクトース、マンノース、それらの重合体若しくは誘導体、またはそれらの混合物、好ましくはグルコースである。
【００２５】
本発明は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンが医用溶液中における新規なＧＤＰに該当し、かつそれは極めて細胞毒性であって、炭水化物含有医用溶液中における臨床上の生体不適合性の原因とされる主たる候補物質であるという、本発明者による驚くべき発見に基づく。また、炭水化物含有医用溶液からの３，４−ＤＧＥの除去は、たとえその溶液中に多少有毒な他の全ての化合物が依然として存在しているとしても、哺乳動物に対するこのような溶液の投与に普通関連する有害な副作用を顕著に低下させることも見いだされた。
【００２６】
本発明により、今や、炭水化物含有医用溶液中の、最高でないにしても、最も有毒な物質の１つを、この有毒物質を上記溶液から除去し、またはその溶液全体を廃棄するために同定することが可能である。これによって、このような溶液で治療される患者が痛み或いはその有毒物質に関連した他の合併症を被るのを防ぐことが可能であり、それがまた患者に対して向上した生活の質をもたらす。
【００２７】
さらに、本発明によれば、上記の有毒化合物を含む炭水化物含有医用溶液を患者の治療において使用する前に、その溶液を同定し、廃棄することが可能であり、このことが総合的な治療をさらに効率的かつ経済的にする。
【００２８】
（発明の詳しい説明）
上記から明らかなように、本発明は、炭水化物含有医用溶液中の物質・３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定、特にグルコース含有医用溶液中のそのような化合物の同定に関するが、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの毒性の測定および炭水化物含有医用溶液の解毒にも関する。
【００２９】
本発明者は、炭水化物含有医用溶液中に高毒性分解生成物としての３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを見いだし、そして細胞毒性試験でその３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンが線維芽細胞に対して有毒であることを見いだした。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、メチルグリオキサール、３−デオキシグルコソンおよびグリオキサールのようなグルコース溶液の滅菌および／または貯蔵中に生成する既知の他の有毒化合物よりも毒性が大きいことが見いだされた。これら５種の記載化合物のいずれにも、ＰＤ液中に見いだされる濃度において単独でも或いは混合物としても、試験されたＬ−９２９系で毒性を示すものはない（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９５、Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｉｎｔ．、１５： ３４８−３５１；Ｗｉｔｏｗｓｋｉ等、２０００、Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．、２２： ７２９−７３９）。
【００３０】
本願の明細書および特許請求の範囲全体を通じて用いられる用語および表現の一部は、下記において定義される。
【００３１】
本発明によれば、用語「３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン」は、次の化学式で表される、そのシスおよびトランスの両異性体をカバーしようとするものである：
【００３２】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン（シス）
2004516888.tif 000002
【００３３】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン（トランス）
2004516888.tif 000003
【００３４】
用語「炭水化物含有医用溶液」は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン、そのシスおよび／またはトランス異性体が、炭水化物含有医用溶液、例えば透析の目的に向けられた溶液の滅菌および／または貯蔵中に、その炭水化物（１種または２種以上）から分解化合物として生成せしめられる任意の医用溶液を意味しようとするものである。本発明による炭水化物含有医用溶液の１例は、腹膜透析に用いられる１つまたは２つ以上の区画室中に存在するグルコース含有医用溶液である。この医用溶液は無菌医用溶液であるのが好ましい。
【００３５】
用語「炭水化物」は、グルコース、フルクトースおよびマンノース、それらの天然若しくは合成重合体、またはそれらの誘導体若しくは混合物のような、分解生成物として３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを生成させる任意の炭水化物を意味しようとするものである。
【００３６】
用語「グルコース」は、グルコース分子、グルコースの天然若しくは合成重合体、またはそれらの誘導体若しくは混合物を意味しようとするものである。
【００３７】
用語「解毒剤」は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げ、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを分解し、取り除き、および／または変性することによってその量を低下させ、または実質的に除去する能力を有する薬剤を意味しようとするものである。
【００３８】
解毒剤は、アミノ基を含む物質、例えばアセチルシステイン、亜硫酸基および／またはスルフィドリル（ｓｕｌｐｈｙｄｒｙｌ）基を含む物質或いは製剤上許容できる物質、例えば、ＨＣｌおよびＣＯ２のような非常に低いｐＨ、好ましくは約３のｐＨを与える有機または無機の酸の群から選ばれるのが好ましい。或いはまた、解毒剤がビーズ若しくは小粒子に結合されているか、または膜若しくはカラムにカップリングされている場合は、解毒剤は、また、ポリスチレンジビニルベンゼン重合体およびオクタデシルシリカを含む群から選ぶこともできるし、或いはそれらの組み合わせを用いることもできる。さらに、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを転化させるための特定の活性な酵素を用いてもよい。
【００３９】
解毒剤は、好ましくは亜硫酸基含有化合物、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアンモニウムのようなカチオンに結合されている任意の一亜硫酸イオン（ＳＯ３２−）、亜硫酸水素イオン（ＨＳＯ３−）または二亜硫酸イオン（Ｓ２Ｏ３２−）である。有用な亜硫酸化合物は、ＮａＨＳＯ３、Ｎａ２Ｓ２Ｏ５およびＮａ２ＳＯ３、または任意の他の亜硫酸化合物若しくはその天然または合成誘導体、或いはそれらの混合物である。
【００４０】
加えられるべき解毒剤の量は溶液中の炭水化物の量に依存するが、この技術分野の当業者であれば容易に規定できるであろう。
【００４１】
一亜硫酸化合物が用いられるとき、それは０．００１〜１０ｍＭ、好ましくは０．００１〜０．２ｍＭ、さらに好ましくは０．００１〜０．１ｍＭの最終溶液中一亜硫酸化合物の最終濃度を与える量で加えることができる。同じ濃度が亜硫酸水素化合物に関して適用される。二亜硫酸化合物が用いられるとき、それは０．０００５〜５ｍＭ、好ましくは０．０００５〜０．１ｍＭ、さらに好ましくは０．０００５〜０．０５ｍＭの範囲内の二亜硫酸化合物の最終濃度を与えるように加えられるのが好ましい。
【００４２】
用語「解毒すること」とは、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げ、例えば炭水化物含有医用溶液の滅菌中および／または貯蔵中に生成した３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを分解し、取り除き、および／または変性することによってその量を低下させ、または実質的に除去することを意味しようとするものである。用語「実質的に除去すること」とは、解毒後に溶液中に痕跡量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンが残っていてもよいことを意味する。３，４−ＤＧＥの推奨できる最高濃度は４％グルコース溶液中で約０．７μＭである。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン２μＭの大きさより低い濃度では生物学的影響があるとは思われない。
【００４３】
用語「医用溶液を含む区画室容器」とは、１つまたは２つ以上の区画室、特に２つまたは３つの区画室（但し、３つの区画室に限定されない）を含む任意の容器を意味しようとするものである。１例は、腹膜透析溶液に使用される多重区画室容器である。
【００４４】
用語「腹膜透析溶液」とは、電解質、緩衝剤および浸透圧化合物を含む溶液を意味しようとするもので、この場合電解質はナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムイオンのようなイオンを含み；緩衝剤は酢酸塩、乳酸塩若しくは重炭酸塩またはそれらの混合物のような成分を含み；そして浸透圧化合物は前記で定義した炭水化物である。さらに、このような溶液中には他の任意の製剤上許容できる添加剤が存在していることができる。
【００４５】
用語「重合体」とは、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンに可逆的にまたは不可逆的に結合することができるように設計されている重合体それ自体またはカラムの形をした重合体を意味しようとするものである。
【００４６】
用語「膜」とは、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンに可逆的にまたは不可逆的に結合する能力を有する平らなまたは中空の繊維膜を意味しようとするものである。
【００４７】
用語「亜硫酸（ｓｕｌｐｈｉｔｅ）」とは、一亜硫酸（ｍｏｎｏｓｕｌｐｈｉｔｅ）、亜硫酸水素（ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｓｕｌｐｈｉｔｅ）および／または二亜硫酸（ｄｉｓｕｌｐｈｉｔｅ）を意味しようとするものである。
【００４８】
用語「体液」とは、ここでは、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含んでいるかもしれない任意の体液、好ましくは血液または腹膜液を意味しようとするものである。
【００４９】
材料および方法
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定および測定
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、Ｃ１８カラムまたはＨＰＸ−８７Ｈカラムを使用する在来ＨＰＬＣによって同定および測定することができる。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを測定する２つの異なるＨＰＬＣ法が説明される；即ちＣ１８カラムでの逆相（ＲＰ）クロマトグラフィーを用いるもの（方法１）、およびイオン交換カラムを用いるもの（方法２）であって、両者ともダイオードアレイ検出法（ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）による。Ａｎｅｔ；Ａｕｓｔ． Ｊ． Ｃｈｅｍ．、１９６２： １５； ５０３−５０９によれば、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンのシス形は２２８ｎｍに、またそのトランス形は２３３ｎｍに最大吸収を有する。このことが、これらの吸収特性はアルファ−ベータケトン類に典型的であるので同定に利用された。上記の第一の方法は、分子の質量を確認するために質量検出器に合うように修正された。
【００５０】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを検出する可能な他の方法（本明細書には記載しない）は、薄相クロマトグラフィー、ＮＭＲおよびＵＶ分光分析法である。
【００５１】
細胞毒性の試験管内検定
腹膜透析に用いられる炭水化物含有医用溶液が１部の細胞増殖培養液と混合され、そして１０％（容量／容量）のウシ胎仔血清が加えられた（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９１、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、４０： ７７−７９）。腹膜透析に用いられるこの医用溶液の基底細胞毒性は、先に記載した（Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９３、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ Ｄｉａｌｙｓ．、９： ３１−３５）マウスの線維芽細胞Ｌ−９２９（ＣＣＬ−１；ＡＴＴＣ、米国、ＭＤ州、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）について測定され、細胞増殖阻害率（ＩＣＧ）として表された。
【００５２】
炭水化物含有医用溶液の解毒方法
解毒剤、例えば３，４−ＤＧＥ結合剤を炭水化物含有医用溶液と溶解状態で直接接触させるか、または膜若しくはカラムにカップリングさせる、炭水化物含有医用溶液を解毒する本発明による方法の１つの好ましい態様において、解毒剤との接触は滅菌プロセスの前および／または後、好ましくは滅菌に先立って行われる。
【００５３】
炭水化物含有医用溶液は、熱、圧力、または放射、例えばＵＶ放射、放射性放射またはマイクロ波を用いる放射のようないかなる種類の滅菌法によっても滅菌することができる。この方法は、熱滅菌されるグルコース含有溶液のような腹膜透析に用いられる炭水化物含有医用溶液の調製に利用されるのが好ましい。
【００５４】
炭水化物含有医用溶液は、３区画室容器のような腹膜透析用の多重区画室容器中で使用することができる。
【００５５】
腹膜透析溶液として使用するための炭水化物含有医用溶液の例は、Ｗｉｅｓｌａｎｄｅｒ等、１９９１、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．、４０： ７７−７９中に見いだすことができる。この腹膜透析溶液は他の製剤上許容できる添加剤をさらに含んでいることができる。この腹膜透析溶液は、透析前に１つまたは２つ以上の区画室中に存在することができる。多重区画室の場合、それら溶液は腹膜透析前に混合される。
【００５６】
この方法は、腹膜透析に用いられる多重区画室容器中での溶液の調製にも利用することができ、この場合解毒剤は１つの区画室中のグルコース含有溶液に加えられるか、或いは多重区画室の他の区画室中における電解質溶液に加えるかのいずれであってもよい。別法として、解毒剤はグルコース含有溶液と電解質溶液の両者に加えてもよい。
【００５７】
解毒剤は炭水化物含有溶液にそのまま直接加えることもできるし、或いはビーズまたは小粒子上に固定化されたものとして加えることもでき、この場合解毒剤は炭水化物含有溶液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと反応し、および／または３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンに結合する。
【００５８】
解毒剤がビーズまたは小粒子上に固定化されているとき、解毒剤と３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンとの間の反応で得られる生成物は、炭水化物含有溶液、例えば腹膜透析溶液が体に投与される前に、在来のフィルター装置の使用によって濾別してもよい。
【００５９】
別法として、解毒剤は、多重区画室容器中の異なる区画室間に、または炭水化物含有溶液、例えば腹膜透析溶液が体に投与されるチューブの中に配置された膜またはカラムに結合させてもよい。
【００６０】
１つの試験において、４％グルコースを含有するＰＤ溶液であるＧａｍｂｒｏｓｏｌＴＭ ｔｒｉｏが、Ｉｓｏｌｕｔ ＥＮＶカラムによって解毒された。
【００６１】
試験されたＰＤ溶液は０．０７８ｐｐｍの３，４−ＤＧＥに相当する０．５４μＭの３，４−ＤＧＥを含んでいた（以下の表を参照されたい）。
【００６２】
2004516888.tif 000004
【００６３】
１０ｍＬのＧａｍｂｒｏｓｏｌＴＭ ｔｒｉｏをＥＮＶカラムを通過させることによって解毒すると、３，４−ＤＧＥの量が０．０２８ｐｐｍまで低下せしめられた。この試験は、医用溶液は少量の３，４−ＤＧＥを既に含んでいるときでも、本発明によってさらに解毒され得ることを確認した。解毒効果は、解毒されるべき溶液の量が多くなると低下する。しかし、これはこの特定の例で使用したカラムの限られた効果に依存している。カラムの増加した大きさが、解毒されるべき溶液の増加した量に同じ効果を与えるのである。
【００６４】
炭水化物含有医用溶液
前記で定義された本発明により解毒された炭水化物含有医用溶液は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを低下したレベルで含むか、または実質的に含んでいない。４％グルコース溶液では、それは０．７μＭ未満の量で存在することができる。前記のように、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、グルコースおよび／またはフルクトースのような炭水化物の分解中に、例えば炭水化物含有医用溶液の滅菌および／または貯蔵中に生成する。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、方法「３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定および測定」を用いて同定することができ、また３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの毒性は、「細胞毒性の試験管内検定」に従って測定することができるが、この両方法は共に前記で材料および方法の下で説明されている。
【００６５】
さらに、本発明の一態様による炭水化物含有医用溶液は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを低下したレベルで含むか、または実質的に含まず、そして前記で定義された少なくとも１種の解毒剤を含むことができる。この溶液は、また、炭水化物の分解が開始されてしまうか、または３，４−ＤＧＥの生成まで進んでしまう前に解毒剤が炭水化物含有医用溶液に加えられているならば、３，４−ＤＧＥを完全に含んでいないこともできる。１つの好ましい態様では、この医用溶液は無菌の炭水化物含有医用溶液であり、そして解毒剤が滅菌の前および／または後に加えられていてもよい。
【００６６】
本発明の１つの好ましい態様による無菌炭水化物含有医用溶液は、区画室容器、特に腹膜透析（ＰＤ）に合うようにされた区画室容器に含まれていることができ、この場合炭水化物含有医用溶液は１つまたは２つ以上の区画室の中に存在し、そして３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを実質的に含んでいない。区画室の内の１つまたは２つ以上は、グルコースおよび／またはフルクトースのような、滅菌および／または貯蔵中に分解されて３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを形成することがある炭水化物、および３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの生成を妨げ、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを非毒性化合物に分解し、取り除き、および／または変性することによって３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンのレベルを下げ、または３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを実質的に除去する能力を有する少なくとも１種の解毒剤を含む。本発明の無菌炭水化物含有医用溶液は、熱滅菌された腹膜透析溶液であるのが好ましい。
【００６７】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを同定および測定する方法および装置
本発明の態様の１つでは、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの濃度が炭水化物含有医用溶液の毒性レベルの指標として測定される。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、炭水化物含有医用溶液の毒性の直接的な標識として機能するのである。かくして、この標識が検出されることは、炭水化物含有医用溶液が有毒であり、従って哺乳動物の治療に使用されるべきではないことを意味する。
【００６８】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの他の同定方法は、酵素反応および／または呈色反応に基づく方法であるだろう。
【００６９】
装置に関し、本発明の他の態様による膜またはカラムは、炭水化物含有医用溶液中に存在する３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合する能力を有する。
【００７０】
膜は重合体膜、膜表面に１種または２種以上の解毒剤、例えばアミノ化合物、亜硫酸化合物および／またはスルフィドリル化合物を含んでいるか、またはそのような解毒剤にカップリングされている重合体膜であることができる。或いはまた、重合体膜は、ポリスチレンジビニルベンゼン重合体、オクタデシルシリカまたはそれらの組み合わせから作られていてもよい。
【００７１】
カラムは、ポリスチレンジビニルベンゼン重合体、オクタデシルシリカまたはそれらの組み合わせから作られている重合体カラムであることができる。
【００７２】
膜は、血液中または腹部液中のような体液中に望ましくない量の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを有する哺乳動物が好ましくは体外治療される、本発明による態様に使用することができる。１例は、糖尿病に罹患している哺乳動物である。アミン、例えばスルフィドリルアミノ酸のような３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤は、これを解毒剤として膜にカップリングさせることができ、そうすると３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン含有体液は膜と接触せしめられて、その体液を３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの汚れを取り除いて浄化する。
【００７３】
膜およびカラムは別として、他の固相基体が本発明により使用することができ、このような基体の例はビーズ、ＥＬＩＳＡプレート、試験ストリップ、診断用アレイ、または創傷包帯若しくは組織（ｔｉｓｓｕｅ）工学用の固体基体である。基体は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを解毒剤、即ち３，４−ＤＧＥ結合剤を介して結合するための有機または無機起源のいかなる基体であってもよい。有用な無機基体の例は、シリカ、変性ガラスまたは炭素（活性化または非活性化）である。
【００７４】
もう１つの態様において、治療は生体内治療であることができ、この場合３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン結合剤、即ち解毒剤を含む組成物が、治療されるべき患者に、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを結合する、即ち解毒するために注入される。
【００７５】
免疫系を活性化する病状になっている哺乳動物の治療方法
本発明の態様の１つにおいて、本発明は治療を必要としている、即ち３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを非毒性量で含んでいる溶液により免疫系を有害な仕方で活性化する病状になっている哺乳動物を治療する方法に関する。このような方法で、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの免疫抑制作用が免疫反応を低下させ、それによって哺乳動物の症状を改善し、または無くする。
【００７６】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定および３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの毒性の測定
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、市販標準である３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン製剤（Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、カナダ、トロント）を用いて同定された。ＨＰＬＣシステムは、ダイオードアレイ検出器（ＤＡＤ）を備えたＨｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄモデル１１００であった。２つの異なる分離カラムが用いられた。方法１は、メタノール−水より成る勾配液で溶離されるＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ Ｃ１８カラム（Ｓｕｐｅｌｃｏ社、米国、ＰＡ州、Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ）を用いた。流量は１ｍＬ／分であり、勾配は５分で５％のメタノールおよび９５％の水から初め、５分から４０分までメタノール含有量が１００％まで直線的に増加され、次いで１分の間に５％まで戻され、その後次の注入前にさらに５分間保持された。
【００７７】
方法２は、直列に連結され、そして０．５ｍＬ／分の流量を持つ０．００５ＭのＨ２ＳＯ４で平等に溶離される２つのＢｉｏ−Ｒａｄ Ａｍｉｎｅｘ ８７−Ｈカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、米国、ＣＡ州、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）を用いた。注入容量は両方法とも２０μＬで、ＤＡＤ検出器は２３０ｎｍに設定された。標準曲線は除菌ＰＤ液で作成され、そしてＰＤ溶液中における３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの含有量は、オートクレーブ処理ＰＤ液中における３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンのピーク高さを測定し、その濃度を計算することによって求められた。方法１は、また、分子質量の測定により上記同定を確認するために質量検出器と共に用いられた。
【００７８】
マウスの線維芽細胞（Ｌ−９２９）がＪａｒｋｅｌｉｄ等の２０００、ＡＴＬＡ、２８， ４１５−４２５に従って増殖およびインキュベートされた。細胞増殖の抑制率は、次の組成：
【００７９】
グルコース        ４．０％
カルシウム        １．７５ｍＭ
ラクテート        ４０ｍＭ
ナトリウム        １３２ｍＭ
マグネシウム      ０．５ｍＭ
【００８０】
を有する４％ＰＤについて測定された。
【００８１】
さらに、用量反応曲線がＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ：最小必須培養液）中で作成された。
【００８２】
下記の図および表において、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは３，４−ＤＧＥと略記される。３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの標準溶液の方法１で得られたクロマトグラム（図１）は、２２８ｎｍまたは２３３ｎｍに最大吸収を持つ１つの主ピークと２つの小ピークを示す。主ピークの保持時間は５，８９４分であり、また小ピークのそれは４，２７４分および３５，６５８分であって、最後のピークは３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンのトランス形である。４％ＰＤ液のクロマトグラムは図２に与えられている。
【００８３】
方法１、および除菌腹膜透析（ＳＥ ＰＤ）液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンにより得られた標準曲線を用いると、２３μＭの３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの主たるシス異性体について計算された濃度が与えられる。
【００８４】
異なる分離機構を得るために方法２が適用された。図３は、標準３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エン溶液のクロマトグラムを示し、また図４は４％ＰＤ溶液の対応するクロマトグラムを示す。この方法で得られた４％ＰＤ液中の濃度は１９μＭであった。
【００８５】
クロマトグラム中の異なる異性体のピーク高さを比較するとき、異性体の割合はＰＤ液中および標準液中でほぼ同じであることは明らかであった。
【００８６】
ＭＥＭ中に加えられた合成３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンと共に行われたＬ−９２９細胞のインキュベーションからの結果が、図５にプロットされる値を示す下記の表に与えられる。４％ＰＤ溶液がオートクレーブ処理され、同時にＰＤ液が除菌された。ＰＤ溶液は２回試験され（％ ＩＣＧ１および％ ＩＣＧ２）、そして平均ＩＣＧが計算された。ＭＥＭ中での用量反応曲線（図５）は１６μＭのＥＣ５０値を与えた。
【００８７】
２３μＭを保持している４％ＰＤ溶液は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンがＰＤ溶液中の主要毒物であるという結論に導く７２％というＩＣＧ値を与えた。
【００８８】
表１  ＭＥＭ中における３，４−ＤＧＥの用量反応曲線
2004516888.tif 000005
【００８９】
薄層クロマトグラフィーを使用しての商業的供給業者の知見の結果によれば、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは異なる異性体形で存在することを示している。主たるシス異性体に加えて、可能な副次的なシス異性体、そしてまたトランス異性体も見いだされた。これらの可能な異性体は、標準溶液中およびＰＤ溶液中の両方で確認することができる。
【００９０】
２つの独立のクロマトグラフ法をダイオードアレイ検出法（ＤＡＤ）と共に使用するＰＤ溶液中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの同定、およびＬＣ−質量による確認は、ＧＤＰとしてのその存在を強く支持する。
【００９１】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの測定は、ＤＡＤ検出法を用いてなされた。そのスペクトルは全く純粋なピークを示してはいなかったが、不純物の影響は小さい、即ち１０％未満であると見積もられた。加えて、不純物は標準溶液中およびＰＤ溶液中の両者で検出されたが、それはこの方法の精度に対するその影響をさらに減少させるだろう。通常のＵＶ検出器により達成される測定は、３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの日常的な測定に対するその使用を支持するＤＡＤ検出に関して比較可能な結果を示した。
【００９２】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンは、ＰＤ溶液中に見いだされるそれらの濃度で細胞毒性を引き起こす最初に報告されたグルコース分解生成物であり、そして、本発明によれば、その有毒化合物を含む炭水化物含有医用溶液を哺乳動物に対する使用前に廃棄し、また３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンによって引き起こされる合併症を減少させることが可能である。
【００９３】
本発明は、乱れたグルコースの代謝またはグルコース分解生成物の弱まった除去を伴う疾病、例えば糖尿病および尿毒症の治療に関連してまたはその治療において特に適用できる。本発明は、また、この病状の治療用医用溶液の製造に対する３，４−ＤＧＥの使用に関する。
【００９４】
それは、また、供血目的または血液成分貯蔵に使用される液体との組み合わせでも、このような液体は血液成分の安定剤または栄養剤としてグルコースを含んでいることが多いので有用であるだろう。さらに、それは、細胞培養技術用の炭水化物含有、例えばグルコース含有液体と共に、例えば組織工学のための長期培養が考えられるときに使用することができる。
【００９５】
なおもさらに、本発明は、好ましくは液体の形をした機能性食品、特に糖尿病患者用または重症患者用の食品中の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの量を低下させるか、または実質的に除去するために、このような機能性食品との関連において有用であるだろう。
【００９６】
３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの製造方法
本発明は、また、非常に高価な化合物をもたらす３，４−ＤＧＥの既知の製造方法とは対照的に、以下において説明される、３，４−ＤＧＥを実験室規模で、低コストで製造する新規な方法に関する。この発明方法の初めの抽出工程では、５００ｍＬの水に溶解された２０ｇのグルコースがオートクレーブ中で１２１℃において２０分間加熱された。５００ｍＬのオートクレーブ処理グルコースが、５ｇのＥＮＮ固相抽出カラム（収着剤）を通して２０ｍＬ／分の流量で給送された。
【００９７】
次の精製工程で、上記カラムは次に５０ｍＬのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水で洗浄され、そして５０ｍＬの５０％エタノールで溶離された。次いで、そのエタノール部分が凍結乾燥で乾燥状態にされ、そして水に溶解されて０．５ｇ／Ｌ（３．５ｍＭ）の３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを保有する溶液を与えた。
【００９８】
このようにして、ＥＮＶカラムは妨害を避けるために水で洗浄することができ、そして、例えばグルコースから取り除くことができ、この場合３，４−ＤＧＥが従来未知の方法で生成される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
第一の方法で得られた３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含む標準溶液のクロマトグラムである。
【図２】
第一の方法で得られた４％ＰＤ溶液のクロマトグラムである。
【図３】
第二の方法で得られた３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンを含む標準溶液のクロマトグラムである。
【図４】
第二の方法で得られた４％ＰＤ溶液のクロマトグラムである。
【図５】
細胞増殖培養液中における３，４−ジデオキシ−グルコソン−３−エンの用量反応曲線である。
【図１】
2004516888.tif 000006
【図２】
2004516888.tif 000007
【図３】
2004516888.tif 000008
【図４】
2004516888.tif 000009
【図５】
2004516888.tif 000010
【国際公開パンフレット】
2004516888.tif 000011
2004516888.tif 000012
2004516888.tif 000013
2004516888.tif 000014
2004516888.tif 000015
2004516888.tif 000016
2004516888.tif 000017
2004516888.tif 000018
2004516888.tif 000019
2004516888.tif 000020
2004516888.tif 000021
2004516888.tif 000022
2004516888.tif 000023
2004516888.tif 000024
2004516888.tif 000025
2004516888.tif 000026
2004516888.tif 000027
2004516888.tif 000028
2004516888.tif 000029
2004516888.tif 000030
2004516888.tif 000031
2004516888.tif 000032
2004516888.tif 000033
2004516888.tif 000034
2004516888.tif 000035
2004516888.tif 000036
2004516888.tif 000037
2004516888.tif 000038
2004516888.tif 000039
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004516888.tif 000040
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004516888.tif 000041
【国際調査報告】
2004516888.tif 000042
2004516888.tif 000043
2004516888.tif 000044
2004516888.tif 000045
2004516888.tif 000046