(57)【要約】本発明は式（１）、Ｒ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｒ２で表される化合物を提供する。式中、ｌは０、１または２であり、Ｒ１は不安定なアミノ保護基であり、Ｒ２はヒドロキシ基または活性化されたエステルの残基またはハロゲン原子であり、Ｒ３およびＲ４は独立に水素原子またはＣ１〜Ｃ４アルキル鎖である。その調製、および選択的抗癌活性を付与された、これらのリンカーをベースとする水溶性抱合体も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表される化合物。
Ｒ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｒ２
（１）
［式中、
ｌは０、１または２であり、
Ｒ１は不安定なアミノ保護基であり、Ｒ２はヒドロキシ、活性化されたエステルの残基またはハロゲン原子であり、かつ、同一であるかまたは異なっており、Ｒ３およびＲ４は独立に水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである］
【請求項２】
ｌが１であり、Ｒ３およびＲ４が水素原子であり、Ｒ１がｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチレンおよびトリフェニルメチル基から選択され、Ｒ２がｐ−ニトロフェノールまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミド残基または塩素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（２）で表される化合物。
Ｗ−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（２）
［式中、
Ｄは、エステル結合を介して結合している第二または第三ヒドロキシル基を有する薬剤の残基であり、
Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なっており、独立に水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
ｌは０、１または２であり、
Ｓ０は、腫瘍部位で活性型で発現された酵素によってその部位で選択的に切断され得るペプチドであり、
Ｙは、非置換の、またはヒドロキシルで置換されている、Ｃ２〜Ｃ１２直鎖または分枝アルキレン鎖であり、
ｐは０または１であり、
Ｗは水溶性ポリマーまたは水溶性低分子量化合物である］
【請求項４】
Ｙが−（ＣＨ２）５−を表し、ｐが１であり、Ｗがポリピロールカルボキサミドナフタレン誘導体、ポリグルタミン酸、アカルボキシル化デキストラン、カルボキシル化ポリエチレングリコール、またはヒドロキシプロピルメタクリロイルアミドをベースとするポリマーを表す請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ＷがＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドをベースとする水溶性ポリマーである請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
ペプチドＳ０が４〜５個の天然または合成アミノ酸配列を含む請求項３から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｓ０が次式の配列を表す請求項３から６のいずれか一項に記載の化合物。
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（０）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ。
【請求項８】
Ｓ０が次式の配列を表す請求項３から７のいずれか一項に記載の化合物。
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕまたはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
【請求項９】
抗腫瘍薬Ｄがカンプトテシン、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、細胞傷害性ヌクレオシドまたはポドフィロトキシンのクラスに属する細胞傷害性薬剤である請求項１から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
抗腫瘍薬Ｄがカンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、４’−エピドキソルビシン、４−デメトキシダウノルビシン、３’−（２−メトキシモルホリノ）ドキソルビシン、４−デアセチルビンブラスチン、４−デアセチル−ビンクリスチン、ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドである請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
式ＩＩで表される化合物を
Ｒ’１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ’２
ＩＩ
［式中、Ｒ３およびＲ４およびｌは請求項１で定義の通りであり、Ｒ’１はＮ保護基であり、かつ、Ｒ’２はＣ１〜Ｃ４アルキル、フェニル、またはフェニル−Ｃ１〜Ｃ４アルキルである］
フッ化剤と反応させ、次いで、
式ＩＩＩで表される、得られる化合物からＮ保護基およびエステル残基を除去し、
Ｒ’１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ’２
ＩＩＩ
［式中、Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ３、Ｒ４およびｌは前記で定義の通り］
次いで、式ＩＶで表される、得られたアミノ酸誘導体に、請求項１で定義される不安定なＮ保護基Ｒ１および場合によっては請求項１で定義される活性化エステル残基Ｒ２を導入して
Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＨ
ＩＶ
［式中、Ｒ３、Ｒ４およびｌは前記で定義の通り］
式（１）の所望の化合物を得ることを含む請求項１で定義された式（１）の化合物の調製方法。
【請求項１２】
Ｎ保護基Ｒ’１がフタロイル保護基であり、フッ化剤がＤＡＳＴである請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
式（１８）で表される化合物を、
Ｈ−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１８）
［式中、Ｙ、ｐ、Ｓ０、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは請求項３で定義の通り］
化合物（１８）とのカップリングに適した官能基を有する、ポリマーまたは水溶性分子Ｗと反応させることを含む請求項３で定義された式（２）の化合物の調製方法。
【請求項１４】
ポリマーＷの化合物（１８）との結合に適した官能基がカルボキシル基または活性化されたカルボキシル基を含む請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１３に記載の式（１８）の抗腫瘍誘導体または式（１８’）の対応する塩誘導体。
【請求項１６】
式（１６）の誘導体から酸性条件下でＮ保護基を除去すること、および
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１６）
［式中、Ｒｌ、Ｙ、ｐ、Ｓ０、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは請求項３で定義の通り］
場合によっては、緩塩基処理によって一般式（１８’）の得られる化合物を対応する遊離アミノ型誘導体（１８）に変換することを含む請求項１５に記載の式（１８）の化合物または塩（１８’）の調製方法。
【請求項１７】
Ｎ保護基Ｒ１がｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチレンまたはトリフェニルメチル基を表す請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
（ｉ）式（２６）で表されるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドユニット８５〜９７ｍｏｌ％
【化１】
2004537592.tif 000021
（ｉｉ）式（２７）で表されるユニット３〜１５ｍｏｌ％、および
【化２】
2004537592.tif 000022
［式中、Ｙ、ｐ、ｌ、Ｓ０、Ｒ３、Ｒ４およびＤは請求項３で定義の通り］
（ｉｉｉ）式（２８）で表されるＮ−メタクリロイル−グリシンまたはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイル−グリシンアミドユニット０〜１２ｍｏｌ％
【化３】
2004537592.tif 000023
［式中、Ｒ６はヒドロキシ基または次式−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３の残基を表す］
からなる薬剤抱合体である請求項３に記載の化合物。
【請求項１９】
請求項１５に記載の式（１８）の化合物またはその塩を、本質的に
（ｉ）請求項１８に記載の式（２６）によって表されるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドユニット８５〜９７ｍｏｌ％、および
（ｉｉ）式（２９）で表されるＮ−メタクリロイル−グリシルユニット３〜１５ｍｏｌ％
【化４】
2004537592.tif 000024
［式中、Ｒ７は活性エステルの残基である］
からなる活性化されたポリマーＷ’から本質的になる活性化された水溶性ポリマー（Ｗ’）と反応させると、および残存する活性エステル基を１−アミノ−２−プロパノ−ルで場合によって置換することを含む請求項１８に記載の薬剤抱合体の調製方法。
【請求項２０】
製薬上許容される賦形剤または担体と、有効成分として請求項３から１０または１８のいずれか一項に記載の高分子抱合体または請求項１５に記載の式（１８）もしくは（１８’）の化合物とを含む医薬組成物。
【請求項２１】
治療によってヒトまたは動物の身体を処置する方法に用いられる請求項３から１０または１８のいずれか一項に記載の高分子抱合体または請求項１５に記載の式（１８）もしくは（１８’）の化合物。
【請求項２２】
白血病または固形腫瘍を治療する医薬の製造における請求項３から１０または１８のいずれか一項に記載の高分子抱合体または請求項１５に記載の式（１８）もしくは（１８’）の化合物の使用。
【請求項２３】
充実腫瘍が大腸、結腸直腸、卵巣、乳房、前立腺、肺または腎臓の腫瘍またはメラノーマである請求項２２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アミノジフルオロアルカン酸誘導体、その調製、および酵素によって活性化される薬剤抱合体のリンカーとしてのその使用に関する。詳しくは、本発明は式（１）で表される化合物を提供する。
【０００２】
Ｒ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｒ２
（１）
［式中、
−ｌは０、１または２であり、
−Ｒ１は不安定なアミノ保護基であり、Ｒ２はヒドロキシ、活性化されたエステルの残基またはハロゲン原子であり、かつ、
−同一であるかまたは異なっている、Ｒ３およびＲ４は独立に水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルである］
好ましくは、ｌは１であり、Ｒ３およびＲ４は水素原子であり、不安定なアミノ保護基はｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、トリフェニルシリル、ジフェニルメチレンおよびトリフェニルメチルから選択され、活性化されたエステル残基はｐ−ニトロフェノール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび塩素などのハロゲン原子から選択される。
【０００３】
本発明のさらなる目的は、式（２）で表される化合物である。
【０００４】
Ｗ−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（２）
［式中、
−Ｄはエステル結合を介して結合している第二または第三ヒドロキシル基を有する薬剤の残基であり、
−Ｒ３およびＲ４は、同一であるかまたは異なっており、独立に水素またはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
−Ｓ０は腫瘍部位で活性型で発現された酵素によってその部位で選択的に切断され得るペプチドであり、
Ｙは非置換の、またはヒドロキシルで置換されているＣ２〜Ｃ１２直鎖または分枝アルキレン鎖であり、
ｐは０または１であり、
Ｗは水溶性ポリマーまたは水溶性低分子量化合物である］
本発明はまた、式（２）の化合物の調製方法および哺乳類の悪性腫瘍、主に固形腫瘍を治療するためのその使用を提供する。
【０００５】
薬剤と直接結合している直鎖または分枝非αアミノ酸残基は、エステル結合に血漿安定性を付与するのに決定的に重要であり、他方、式（２）の化合物中のアミノ基に対してβ位にフッ素原子を導入することにより、酵素の基質Ｓ０がタンパク質分解された後、薬剤放出が可能となる。実際、本発明者らは４−アミノブチリックアシッド、５−アミノペンタン酸、４−アミノ−３，３’−ジメチルブチリックアシッド、６−アミノヘキサン酸などＣ４〜Ｃ５炭素骨格の直鎖または分枝非αアミノ酸が、次式Ｈ２Ｎ−Ｘ−Ｄ（式中、Ｘは前記の非αアミノ酸のアシル残基であり、かつ、Ｄは先に定義の通り）の対応する薬剤抱合体のエステル結合に血漿安定性を付与するが、アミノ基のｐＫａが高い（＞７．５）ために薬剤放出が可能にならないことを見出した。こうした条件では、５または６員環ラクタムの形成および活性薬剤の放出をもたらす内部の化学的転位は生じ得ない。他方、アミノ基に対してβ位にフッ素原子が存在すると、アミノ基のｐＫａ値が低下し、７より低いｐＨでも薬剤放出が可能となる。
【０００６】
したがって、式（２）の薬剤抱合体中の基質Ｓ０のタンパク質分解による切断後に生じる、次式Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ（式中、ｌ、Ｒ３およびＲ４は前記で定義の通り）の化合物は、式（３）の４〜７員環ラクタムの形成および活性薬剤Ｄの作用部位での放出をもたらす。
【０００７】
【化１】
2004537592.tif 000002
［式中、ｌ、Ｒ３およびＲ４は前記で定義の通り］
したがって、本発明は式（１）および（２）の化合物を提供する。後者はリンカーＬが存在することで血漿中で安定化され、マトリックメタロプロテイナーゼ（主に、ゼラチナーゼ）などの酵素によってその特異的基質Ｓ０がタンパク質分解によって消化された後に化合物（３）に転位し、活性薬剤Ｄの、特に腫瘍部位での放出が可能となる。
【０００８】
薬剤、詳しくは、細胞傷害性のものなどの抗癌剤の悪性部位での選択的放出は、抗癌剤の望まれない末梢毒性および治療効率の低さを克服するものと期待される。腫瘍部位で活性型で過剰発現された酵素は酵素基質Ｓ０と結合している薬剤の選択的放出を媒介し得る。数種のプロテイナーゼが基底膜構成要素を分解することによって腫瘍浸潤および転移のプロセスと関係していることは十分に知られている（Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ、３９：１４２、１９８７）。これら酵素の重要なクラスに、ＩＶ型コラゲナーゼ／ゼラチナーゼなどの、マトリックスメタロプロテイナーゼがある（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、９０７：１９１、１９８７）。マトリックスメタロプロテイナーゼ、特に、ＭＭＰ２またはゼラチナーゼＡの腫瘍分泌と実験上の転移との間の相関が報告されている（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．、８１：５５６、１９８７；Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４７：４８６９、１９８７）。
【０００９】
したがって、式（２）の酵素によって活性化される抗腫瘍薬抱合体は、マトリックスメタロプロテイナーゼなどの酵素による基質Ｓ０の切断、前記で定義した次式Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄの中間体を形成するための残存するアミノ酸のタンパク質分解による消化、および化合物（３）へのその内部の化学的転位を意味する複数の機構を介して腫瘍部位で活性な薬剤を放出すると推定される。
【００１０】
本発明のもう１つの態様は、一般式（２）の新規薬剤抱合体を投与することを含む、固形腫瘍を治療する方法を提供することである。
【００１１】
可溶化剤Ｗは水溶性ポリマーまたは低分子量化合物である。
【００１２】
例えば、ポリピロールカルボキサミドナフタレン誘導体などの水溶性低分子量がＷＯ９６２６９５０に記載されている。
【００１３】
好ましくは、Ｗはポリグルタミン酸、カルボキシル化デキストラン、カルボキシル化ポリエチレングリコール、またはヒドロキシプロピルメタクリロイルアミドをベースとしたポリマーなどの水溶性ポリマーを表す。最も好ましくは、ＷはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミド（ＨＰＭＡ）をベースとしたポリマーである。
【００１４】
最も好ましくは、Ｙは−（ＣＨ２）５−を表し、ｐは１である。
【００１５】
Ｓ０は腫瘍部位で活性型で発現された酵素によってその部位で選択的に切断されるように設計されたどのペプチドも表すが、以下の実施例では、Ｓ０の意味を限定することなく、ゼラチナーゼによって選択的に切断されるペプチド配列を報告する。例えば、Ｓ０は４〜５個の天然または合成アミノ酸を含む配列を表し得る。より好ましくは、Ｓ０は本発明者らの先のＰＣＴ国際出願、２００１年７月９日のＥＰ／０１／０７８８３にすでに記載されている配列のうちの１つを表す：Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（０）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ。
【００１６】
最も好ましいペプチド配列Ｓ０は：
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−ＬｅｕまたはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙである。
【００１７】
ここで、Ｍｅｔ（Ｏ）はメチオニンスルホキシドであり、Ｃｙｓ（Ｂｎ）はＳ−ベンジルシステインであり、ＳｍｃはＳ−メチルシステインであり、Ｔｈａはチエニルアラニンであり、ｐＦＦはｐ−フルオロフェニルグリシンである。
【００１８】
好ましくは、Ｄは、薬剤がそれによりエステル結合を介してリンカーと結合している、第二または第三ヒドロキシル基を有する抗腫瘍薬の残基である。好ましい、第二または第三ヒドロキシル基を有する抗腫瘍薬としては、カンプトテシン、アントラサイクリン、タキサン、ビンカアルカロイド、細胞傷害性ヌクレオシド、ポドフィロトキシンのクラスに属する薬剤が挙げられる。それらのクラスの代表的なものとしては、カンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、４’−エピドキソルビシン、４−デメトキシダウノルビシン、３’−（２−メトキシモルホリノ）ドキソルビシン、４−デアセチルビンブラスチン、４−デアセチルビンクリスチン、ビンデシン、パクリタキセル、ドセタキセル、エトポシドが挙げられる。本発明のその他の抗腫瘍薬としては、腫瘍細胞周期阻害剤または腫瘍増殖および転移に関与している酵素の阻害剤が挙げられる。最も好ましくは、Ｄは７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（４）の残基を表す。
【００１９】
【化２】
2004537592.tif 000003
【００２０】
本発明はまた、式ＩＩの化合物を
Ｒ’１−ＨＭ−ＣＨ２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ’２
ＩＩ
［式中、Ｒ３およびＲ４は前記で定義の通りであり、Ｒ’１はＮ保護基であり、Ｒ’２はＣ１〜Ｃ４アルキル、フェニルまたはフェニル−Ｃ１〜Ｃ４アルキルである］
ＤＡＳＴなどのフッ化剤と反応させ、次いで、
式ＩＩＩで表される、得られた化合物からＮ保護基およびエステル残基を除去し、
Ｒ’１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ’２
ＩＩＩ
［式中、Ｒ’１、Ｒ’２、Ｒ３、Ｒ４およびｌは前記で定義の通り］
次いで、式ＩＶで表される、得られたアミノ酸誘導体に、先に定義した不安定なＮ保護基Ｒ１および場合によっては、前記で定義された活性化エステル残基Ｒ２を導入して
Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＨ
ＩＶ
［式中、Ｒ３、Ｒ４およびｌは前記で定義の通り］
式（１）の所望の化合物を得ることを含む、式（１）の化合物の調製方法を提供する。Ｎ保護基Ｒ１は通常、フタロイル保護基Ｃ６Ｈ４（ＣＯ）２などのかなり安定な基である。
【００２１】
例えば、式（１’ｄ）（式中、Ｒ１はｔ−ブトキシなどのアミノ保護基であり、Ｒ２はｐ−ニトロフェノールなどの活性化されたエステルの残基であり、Ｒ３およびＲ４は双方とも水素原子であり、ｌは１である）で表される化合物は、フタロイルなどの二官能性基で保護されている、式（７’）のアミノ保護５−アミノ−４−オキソ−ペンタン酸のエチルエステルを、ＤＡＳＴなどのフッ化剤と反応させることによって調製する。次いで、得られるジフルオロ誘導体（１’ａ）からアミノ保護基およびエステル基も除去すると、５−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタン酸（１’ｂ）が得られ、このアミノ基を酸不安定性ｔ−ブトキシカルボニル基、化合物（１’ｃ）で保護し、カルボキシルを活性化してｐ−ニトロフェニルエステル、化合物（１’ｄ）とする。式（７’：Ｒ３＝Ｒ４＝Ｈ）の化合物は５−アミノレブリン酸（５’）から出発して調製してもよく、知られている合成手順に従って、これをまずＮ−フタロイル誘導体、化合物（６’）に、次いで、エチルエステル（７’）に変換する。式（７）の化合物（式中、Ｒ３およびＲ４もアルキル鎖または水素原子を表す）のより一般的な調製方法は、Ｂａｏｑｕｉｎｇ  ＬｉらによってＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ、９：２６２９頁（１９９９）に記載されたようにＮ−フタロイルグリシン（８）をメルドラム酸（Ｍｅｌｄｒｕｍ’ｓ  ａｃｉｄ）と縮合させ、次いで、得られる付加物（９）をベンジルアルコールで処理してβ−ケトエステル（１０）を形成し、これを、水素化ナトリウムの存在下で、一般式Ｒ５−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ６（式中、Ｒ５はハロゲン原子、好ましくは臭素であり、Ｒ３およびＲ４は前記で定義のとおりであり、Ｒ５はアルキル残基、好ましくはメチルまたはエチルである）で表される、適したα−ハロエステル誘導体でアルキル化し、次いで、水素化してベンジルエステル基を除去し、脱炭酸して（７）を形成することであり得る。例えば、一般式Ｒ５−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ６のα−ハロエステル誘導体には、市販の
プロパン酸、２−ブロモ−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
プロパン酸、２−ブロモ−２−メチル−、メチルエステル（Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ６＝ＣＨ３）、
ブタン酸、２−ブロモ−２−メチル−、エチルエステル（Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ブタン酸、２−ブロモ−、メチルエステル、（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ６＝ＣＨ３）、
ペンタン酸、２−ブロモ−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ｎＣ３Ｈ７、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ブタン酸、２−ブロモ−３−メチル−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ｉＣ３Ｈ７、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
プロパン酸、２−ブロモ−２−メチル−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ブタン酸、２−ブロモ−２−メチル−、メチルエステル（Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ６＝ＣＨ３）、
ブタン酸、２−ブロモ−２−メチル−、メチルエステル、（Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝Ｃ２Ｈ５、Ｒ６＝ＣＨ３）、
ペンタン酸、２−ブロモ−２−メチル−エチルエステル（Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝ｎＣ３Ｈ７、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ブタン酸、２−ブロモ−２−エチル−エチルエステル（Ｒ３＝Ｒ４＝Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ペンタン酸、２−ブロモ−、メチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ｎＣ３Ｈ７、Ｒ６＝ＣＨ３）、
ヘキサン酸、２−ブロモ−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ｎＣ４Ｈ９、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ブタン酸、２−ブロモ−２，３−ジメチル−、エチルエステル（Ｒ３＝ＣＨ３、Ｒ４＝ｉＣ３Ｈ９、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）、
ペンタン酸、２−ブロモ−４−メチル−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ｉＣ４Ｈ９、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）
ペンタン酸、２−ブロモ−３−メチル−、エチルエステル（Ｒ３＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３ＣＨＣ２Ｈ５、Ｒ６＝Ｃ２Ｈ５）のα−ブロモエチルまたはメチルエステル誘導体（Ｒ５＝ＢｒかつＲ６＝Ｃ２Ｈ５またはＣＨ３）がある。
【００２２】
注目されるのは、化合物（７）における両アミノ水素原子をフタロイル部分などで保護することの重要性である。
【００２３】
実際、本発明者らは、一官能性アミノ保護基ではＤＡＳＴの存在下で４，４’−ジフルオロ誘導体を形成できず、未決定の化合物の混合物が生じるということを見出した。化合物（７）中に存在するフタロイルアミノ保護基は、反応条件でかなり安定であり、所望の化合物の形成が可能となる。
【００２４】
例えば、塩基性水性媒質中で、例えば、炭酸ナトリウムの存在下で、５−アミノレブリン酸（５’）をＮ−エトキシカルボニルフタルイミドと反応させるとアミノ保護フタロイル誘導体（６’）が得られ、これはＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋ装置中でエタノール／トルエンとｐ−トルエンスルホン酸などの触媒を用いた還流でエチルエステル（７’）に容易に変換する。ケトンのＣ−４位でのフッ素化は、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７、７３５頁（１９８５）に記載されたように、−１０〜１０℃の温度で、好ましくは４℃で１〜７日間、二塩化メチレンなどの非プロトン溶媒中で、４〜７当量のジエチルアミノスルファートリフルオリド（ＤＡＳＴ）を用いて実施する。次いで、得られた４，４’−ジフルオロ誘導体（１’ａ）を強酸条件で、例えば、６Ｎの塩酸などの鉱酸を用いて還流で加水分解してアミノ保護基を除去する。かかる条件では、エチルエステル基も加水分解し、５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタン酸（１’ｂ）が塩酸塩として回収され、それが０〜５℃の温度、好ましくは４℃でトリエチルアミンなどの有機塩基の存在下でジ−ｔ−ブチルジカーボネートで処理することによって酸不安定性Ｎ−ＢＯＣ誘導体（１’ｃ）に迅速に変換する。薬剤のヒドロキシル基とのカップリング反応に用いる、活性化されたエステル誘導体、例えば、ｐ−ニトロフェニルエステル、化合物（１’ｄ）は、ジシクロヘキシルカルボジイミドなどの縮合剤の存在下でｐ−ニトロフェノールと反応させると形成される。
【００２５】
もう１つの実施例では、フタロイルグリシン（８）を、０〜４０℃温度で２４〜７２時間、好ましくは２４時間、１，１’−カルボニルジイミダゾールなどの縮合剤の存在下で、ジメチルホルムアミドなどの極性有機溶媒に溶かした１０％モル過剰のメルドラム酸と反応させて中間体（９）を得る。この反応は室温で２４時間実施することが好ましい。次いで、化合物（９）を還流で１８時間ベンジルアルコールと反応させるとベンジルＮ−フタロイル−４−アミノ−３−オキソ−ブチルレート（１０）が得られ、これを先に記載したものと同一条件下で、一般式Ｒ５−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯＯＲ６の適したα−ハロエステル誘導体を用いてアルキル化する。
【００２６】
これらの反応をスキームＩに示す。
【００２７】
【化３】
2004537592.tif 000004
【００２８】
本発明はまた、式（１８）で表される化合物を、
Ｈ−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１８）
［式中、Ｙ、ｐ、Ｓ０、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
化合物（１８）とのカップリングに適した官能基を有する、ポリマーまたは水溶性分子Ｗとの化合物を反応させることを含む、式（２）の化合物の調製方法を提供する。化合物（１８）との結合に適したＷの官能基は、カルボキシル基、またはｐ−ニトロフェニルエステルやイミダゾイルエステルなどの活性化されたカルボキシル基を含む。式（１８）の化合物および対応する塩誘導体（１８’）も本発明によって提供される。酸性条件下で式（１６）の誘導体からＮ保護基を除去し、
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１６）
［式中、Ｒ１、Ｙ、ｐ、Ｓ１、Ｓ０、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
−場合によっては、緩塩基処理によって一般式（１８’）の得られる化合物を対応する遊離アミノ型誘導体（１８）に変換することによる、式（１８）の化合物の調製方法も提供する。
【００２９】
好都合には、式（１６）の化合物を本発明の式（１）の新規化合物から出発し、種々の合成法に従って調製することができる。
【００３０】
一方法は、
（ａ）先に定義されたような、Ｒ１がアミノ保護基、好ましくはｔ−ブトキシカルボニルであり、Ｒ２が好ましくは脱離基、より好ましくはｐ−ニトロフェノールである、式（１）の化合物を、場合によっては縮合剤の存在下で、薬剤Ｄのヒドロキシル基と反応させて式（１１）の化合物を形成すること、
Ｒ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１１）
［式中、Ｒ１、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
（ｂ）得られる化合物からアミノ保護基Ｒ１を除去して式（１２）の化合物を得ること、および
Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１２）
［式中、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
（ｃ）得られた化合物を式（１３）または（１４）の誘導体と反応させて、
Ｒ１−Ｓ１−Ｒ２（１３）
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−Ｒ２（１４）
［式中、Ｙ、ｐ、Ｓ０、Ｒ１およびＲ２は前記で定義の通りであり、Ｓ１は配列Ｓ０の第１のアミノ酸を表す］
それぞれ式（１５）および（１６）の誘導体（後者は先に定義された通り）を得ること、次いで
Ｒ１−Ｓ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１５）
［式中、Ｒ１、Ｙ、ｐ、Ｓ１、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
（ｄ）式（１５）の化合物からアミノ保護基を除去して誘導体（１７）を得ること、次いで
Ｈ−Ｓ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（１７）
［式中、Ｒ１、Ｓ１、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
（ｅ）式（１７）の前記化合物を式（１９）の化合物と反応させて前記で定義された同じ誘導体（１６）を得ることを含み、
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−１−Ｒ２
（１９）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｙｐは先に定義の通りであり、Ｓ０−１はＳ１と結合させると前記で定義されたペプチド残基Ｓ０を形成するペプチドを表す］
（ｆ）あるいは、化合物（１７）を式（２０）の誘導体と反応させて、
Ｒ１−Ｓ２−Ｒ２
（２０）
［式中、Ｒ１およびＲ２は前記で定義の通りであり、Ｓ２は残基Ｓ０の第２のアミノ酸を表す］
式（２１）の化合物を形成し、
Ｒ１−Ｓ２−Ｓ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（２１）
［式中、Ｒ１、Ｓ１、Ｓ２、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
得られた化合物を加水分解して遊離アミノ型（２２）を得、
Ｈ−Ｓ２−Ｓ１−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ
（２２）
［式中、Ｓ１、Ｓ２、ｌ、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
得られた化合物を式（２３）で表される化合物と反応させて、前記で定義された式（１６）の同じ誘導体を得ることもできる。
【００３１】
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓ０−２−Ｒ２
（２３）
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｙ、ｐは前記で定義の通りであり、Ｓ０−２はＳ２−Ｓ１と結合させると前記で定義されたペプチド前記Ｓ０を形成するペプチド配列Ｓ０の残基を表す］
式（１６）の化合物を調製するより一般的な方法は、式（２４）の化合物を、場合によっては縮合剤の存在下で、式（２５）で表される化合物と反応させることを含む。
【００３２】
Ｈ−Ｓｘ−ＨＮ−ＣＨ２−ＣＦ２−（ＣＨ２）ｌ−ＣＲ３Ｒ４−ＣＯ−Ｄ（２４）
Ｒ１−［−ＨＮ−Ｙ−ＣＯ−］ｐ−Ｓｙ−Ｒ２（２５）
［式中、ｌ、Ｙ、Ｄ、ｐ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は前記で定義の通りであり、Ｓｘ、Ｓｙは独立に、互いに結合させると前記で定義されたペプチド残基Ｓ０を形成することを特徴とする、アミノ酸またはペプチド残基である］
ＳｘおよびＳｙがそれぞれＳ１およびＳ０−１を表す場合には、式（２４）および（２５）は式（１７）および（１９）と同じ意味をもつことができる。
【００３３】
もう１つの場合に、ＳｘおよびＳｙがそれぞれジペプチドＳ１−Ｓ２および残基Ｓ０−２であるとき、式（２４）および（２５）は化合物（２２）および（２３）を表すことができる。
【００３４】
Ｓ１はＧｌｙ、Ｌｅｕ、Ｔｒｐ、ｐＦＦを表し、Ｓ２はＣｙｓ（Ｂｎ）、Ｇｌｙ、Ｔｒｐ、ｐＦＦ、Ｔｈａ、Ｍｅｔを表すことが好ましい。
【００３５】
Ｓ０−１はＭｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）ＳＥ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕを表し、かつ、Ｓ０−２はＭｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕを表すことが好ましい。
【００３６】
ＳｙはＭｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｇｌｙを表し、ＳｘはＣｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｔｈａ−Ｔｒｐ、Ｍｅｔ−Ｔｒｐ、Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−ＧｌｙまたはＬｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙを表すことが好ましい。
【００３７】
Ｓ１がＬｅｕであり、Ｓ０−２がＭｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）であることがより好ましい。
【００３８】
本発明はまた、式（１７）、（１８）、（２２）および（２４）の化合物、ならびにそれぞれ（１７’）、（１８’）、（２２’）および（２４’）で表すことができるその水溶性酸性塩を提供する。
【００３９】
塩誘導体を形成するためには、適切などの酸を用いてもよいが、これらの酸性塩誘導体は塩酸塩またはトリフルオロ酢酸塩の形態であることが好ましい。例えば、式（１８’）の塩は対応する遊離塩基と同一構造を有するが適切な酸部分と会合している。
【００４０】
式（１３）、（１４）、（１９）、（２０）、（２３）および（２５）の化合物の調製はペプチド調製のための知られている手順に従う。例えば、Ｗａｎｇ樹脂などの固体樹脂に結合されている鎖を伸ばすために、アミノ保護されたアミノ酸を逐次付加することによる固相合成を用いることによる。Ｎ保護基はＦｍｏｃとすることが好ましい。したがって、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）などの有機塩基の存在下、塩化メチレンなどの非プロトン有機溶媒中でＮ保護されたアミノ酸のＣ末端を樹脂に結合させる。脱保護／カップリングサイクルの標準的な反復によって鎖の伸長を完成させる。Ｆｍｏｃ保護基をＮ−メチル−２−ピロリドン中２０％ピペリジンで除去し、カップリングステップはＮ−メチル−２−ピロリドン中ＴＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡを用いて実施することが好ましい。樹脂の切断は、塩化メチレン、酢酸、トリフルオロ酢酸（３／１／１ｖ／ｖ）または塩化メチレン、トリフルオロアセチック（９９／１ｖ／ｖ）の混合物を用いて行うことができる。
【００４１】
式（１８）の化合物の調製は、本発明者らの先のＰＣＴ国際公開ＷＯ９９／１７８０５およびＷＯ９９／１７８０４、ならびに米国特許第５，７７３，５５２号および同５，６１８，７９０号に記載されたものと同様の合成手順に従う。
【００４２】
式（１８）の化合物、薬剤抱合体（２）を調製するための中間体の調製を以下の合成スキームに示す。例えば、スキーム２では７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−（５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノイル）］−カンプトテシン（１８ａ）の調製を示す。この合成方法は７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（４）へのＮ保護されたアミノ酸の逐次結合を含む。詳しくは、アルゴン下、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などの活性化剤の存在下、ジメチルスルホキシドなどの無水非プロトン溶媒中で、（４）をモル過剰の、例えば２．５モル当量までの４−ニトロフェニル、ｔ−ブトキシカルボニル−５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノエート（１’ｄ）と反応させる。このようにして、保護されているアミノ酸を、化合物（４）の、ヒドロキシル化された位置Ｃ−１０およびＣ−２０の両方に導入する。この反応は、通常、８〜４８時間で達成できる。この反応は、通常、１５〜４０℃の温度で実施する。Ｃ−１０位の置換基をモルホリンや１−アミノ−プロリノールなどの第二級アミンの存在下で除去してＣ−２０で一置換されたＮ−Ｂｏｃ誘導体（１１ａ）を得る。アミノ保護基を１０°〜３０℃の温度で１０分〜６時間、好ましくは室温で３０分間、酢酸中の１ＮのＨＣｌなどで酸処理することによって除去して、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノイル）カンプトテシン誘導体（１２’ａ）を塩の形態で得ることもできる。１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラ−フルオボレート（ＴＢＴＵ）、ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）などの縮合剤の存在下、無水非プロトン溶媒、好ましくはジメチルホルムアミド中で、化合物（１２’ａ）をモル過剰の、例えば２モル当量までのＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシンと反応させることによって第２のアミノ酸ロイシンを導入することもできる。この反応は、通常、８〜４８時間で達成できる。この反応は、通常、１５〜４０℃の温度で実施する。化合物（２１ａ）のＮ保護基の、モルホリンでの処理とそれに続く酸性置換によって７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［ロイシル−（５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノイル）カンプトテシンが酸性塩の形態（２２’ａ）で得られる。この化合物を、ロイシンの結合について先に記載したのと同条件で、順にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−（６−アミノヘキサノイル−メチオニルスルホキシド−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイン）で処理し、アミノ保護基を除去した後に最終中間体（１８’ａ）がトリフルオロアセテート塩誘導体などの塩の形態で得られる。
【００４３】
【化４】
2004537592.tif 000005
【００４４】
先に例示したように、本発明はまた、式（２）の化合物、好ましくは酵素によって活性化される薬剤抱合体の水溶性ポリマーも提供する。これは、式（１８）化合物を、化合物（１８）とカップリングするのに適した官能基を有する化合物Ｗと縮合させることによって調製する。化合物Ｗ、好ましくはポリマーの、化合物（１８）との結合に適した官能基は、カルボキシル基、またはｐ−ニトロフェニルエステルやイミダゾリルエステルなどの活性化されたカルボキシル基を含む。
【００４５】
本発明の範囲を限定するものではないが、以下では、水溶性ポリマーＷがＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミド（ＨＰＭＡ）ベースのものである、式（２）の高分子薬剤抱合体の実施例を報告する。かかる場合には、酵素によって活性化される高分子薬剤抱合体（２）は
（ｉ）式（２６）で表されるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドユニット８５〜９７ｍｏｌ％
【００４６】
【化５】
2004537592.tif 000006
【００４７】
（ｉｉ）式（２７）で表されるユニット３〜１５ｍｏｌ％
【００４８】
【化６】
2004537592.tif 000007
［式中、Ｙ、ｐ、ｌ、Ｓ０、Ｒ３、Ｒ４およびＤは前記で定義の通り］
【００４９】
（ｉｉｉ）式（２８）で表されるＮ−メタクリロイルグリシンまたはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイル−グリシンアミドユニット０〜１２ｍｏｌ％
【００５０】
【化７】
2004537592.tif 000008
［式中、Ｒ６はヒドロキシ基または次式−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３の残基を表す］
からなる、可溶性ポリマーＷを含む。
【００５１】
この高分子薬剤抱合体（２）はまた以下のように表すこともできる。
【００５２】
［（２６）］ｘ；［（２７）］ｙ；［（２８）］ｚ、ここで、（２６）、（２７）および（２８）は前記で定義された式のユニットであり、ｘは８５〜９７ｍｏｌ％であり、ｙは３〜１５ｍｏｌ％であり、かつ、ｚは０〜１２ｍｏｌ％である。
【００５３】
前記で定義された、この、酵素によって活性化される高分子薬剤抱合体（２）は式（２６）で表されるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドユニットを９０％以上、より好ましくは９０％の割合で含むことが好ましい。この抱合体はまた、式（２７）で表される３〜１０ｍｏｌ％のメタクリロイル−グリシル−誘導体ユニットを、より好ましくは１０ｍｏｌ％のかかるユニットを含むこともできる。
【００５４】
（２）は式（２８）の残基を含まない、すなわち、ｚは０であることが好ましい。
【００５５】
かかる場合には、式（２）の酵素によって活性化される薬剤抱合体の水溶性ポリマーの調製方法は、一般式（１８）の化合物を、本質的に
（ｉ）前記で定義された式（２６）によって表されるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドユニット８５〜９７ｍｏｌ％、および
（ｉｉ）式（２９）で表されるＮ−メタクリロイル−グリシルユニット３〜１５ｍｏｌ％からなる活性化されたポリマーＷ’と反応させること、および
【００５６】
【化８】
2004537592.tif 000009
［式中、Ｒ７は活性エステルの残基である］
場合によっては、残存する活性エステル基を１−アミノ−２−プロパノ−ルと置換することを含む。
【００５７】
式Ｗ１のポリマーは、Ｍａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１７８：２１５９頁  １９７７にすでに記載されている。式（２）の酵素によって活性化される薬剤抱合体の水溶性ポリマーを調製するための、式（２９）中のＲ４が活性エステルの残基を表すポリマー（Ｗ１）と式（１８）の化合物間の反応は、ジメチルスルホキシドなどの無水の極性有機溶媒中で実施することが好ましい。反応は、通常、１５〜３０℃の温度で、好ましくは室温で１５時間実施することができ、次いで、残った活性エステル基のアミノ分解は、１−アミノ−２−プロパノ−ルの存在下、室温で０．５〜１時間実施することができる。抱合体は酢酸エチルで沈殿させ、エタノールで溶解し、酢酸エチルで沈殿させるのが適切である。
【００５８】
例えば、乾燥ジメチルスルホキシド中１５％（ｗ／ｖ）の濃度で提供される、式（２８）のＲ４がｐ−ニトロフェノールなどの活性エステルの残基を表す、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシンとポリマーＷ１の、酵素によって活性化される水溶性抱合体の調製物を、ＤＩＰＥＡまたはトリエチルアミンなどの第三アミンの存在下、室温で１５時間、式（１８ａ）の化合物、３％（ｗ／ｖ）で処理する。次いで、ＤＭＦ中０．１％（ｗ／ｖ）１−アミノ−２−プロパノールを加え、反応混合物を８時間室温に維持する。得られた高分子薬剤抱合体（２ａ）を酢酸エチルで沈殿させ、回収し、酢酸エチルで洗浄し、次いで、無水エタノールで１０％（ｗ／ｖ）の濃度に溶解し、スルホン酸樹脂で処理し、濾過し、酢酸エチルで再度沈殿させることができる。
【００５９】
この方法をスキーム３に示す。
【００６０】
【化９】
2004537592.tif 000010
【００６１】
本発明の高分子抱合体中の活性薬剤含量は、ＨＰＬＣまたは吸光度分光分析によって求める。
【００６２】
式（２）の酵素によって活性化される薬剤抱合体の水溶性ポリマーは、分子量５．０００〜４５．０００、好ましくは１０．０００〜２５．０００の範囲にある。本発明の式（２）の化合物およびその他の化合物は水溶性であり、かつ、遊離型の薬剤と比べて抗腫瘍活性の増強および毒性の低下を示す。それらは白血病および大腸、結腸直腸、卵巣、乳房、前立腺、肺、腎臓などの固形腫瘍およびメラノーマ腫瘍の治療でも有用である。したがって、治療有効量の本発明の高分子抱合体をヒトに投与することを含む方法によって、ヒトを治療することができる。したがって、ヒト患者の症状が改善され得る。
【００６３】
使用する投薬量の範囲は、投与経路および治療される患者の年齢、体重および症状によって異なる。式（ｘｘ）の高分子薬剤抱合体は通常、非経口経路、例えば、筋内、静脈内によって、またはボーラス注入によって投与する。適した用量範囲は、体表面積ｍ２当たり活性薬剤相当物１〜１０００ｍｇ、例えば、１０〜５００ｍｇ／ｍ２である。
【００６４】
酵素によって活性化される薬剤抱合体（２）の水溶性ポリマーは、製薬上の担体または賦形剤とともに医薬組成物に製剤することができる。一般に、それらは、例えば、注射用水または生理食塩水に溶解することによって非経口投与用に処方する。
【００６５】
酵素アッセイ
式（２）の酵素によって活性化される薬剤抱合体の水溶性ポリマーの、バッファー中、および数種のタンパク質分解酵素（マトリックスメタロプロテイナーゼ、ＭＭＰ、セリンプロテアーゼ（エラスターゼ）の存在下、および血漿中でのｉｎ  ｖｉｔｒｏ分解を調べた。
【００６６】
化合物（２）を１０ｍＭの標準濃度で滅菌蒸留水に溶解にした。濃度はポリマー含有パーセンテージ（５〜１０重量％薬剤）によって薬剤相当物として算出した。化合物（２）は０．１５ＭのＮａＣｌ、１０μＭのＣａＣｌ２、０．０１ｍＭの酢酸Ｚｎ、および０．０５％のＣ１２Ｅ９を含有する５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ  ｐＨ７．４バッファー中でアッセイした。化合物（２）を、濃度を５〜１０００μＭに変更して３７℃でバッファー中で５分間平衡化した。反応は酵素（ＭＭＰ）を５０μＭの最終濃度まで添加することによって開始した。酵素反応は、０．０５％のＴＦＡバッファー（ｐＨ２．５）を添加することによって高分子薬剤抱合体の加水分解を５％内で停止させ、次いでａｑｕａｐｏｒｅのＯＤ３００カラムを通してＲＰ−ＨＰＬＣによって分析した。
【００６７】
反応産物の定量はＲＰ−ＨＰＬＣによって行った。例えば、ＩＳＳ２００自動サンプラー、シリーズ２００ＬＣポンプ、ＬＣ２４０蛍光検出器からなるＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＨＰＬＣ、あるいは７１７プラス自動サンプラー、モデル６００ポンプ、モデル４７４フルオリメーターからなるＷａｔｅｒｓ  ＨＰＬＣを用いて。
【００６８】
本発明者らは、本発明の式（２）の化合物が、ゼラチナーゼの存在下で抗腫瘍薬Ｄを選択的に放出し、血漿中およびその他のタンパク質分解酵素の存在下で実質的に安定であり、対応する遊離型の薬剤のものよりも高い抗腫瘍効力を示すことを見出した。
【００６９】
以下の実施例により本発明を例示するが、本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００７０】
Ｎ−フタロイル−５−アミノ−４−オキソ−ペンタン酸（６’）
５−アミノレブリン酸塩酸塩（５’；９．４ｇ、５６ｍｍｏｌ）を水（６５ｍｌ）に溶解し、Ｎ−エトキシカルボニルフタルイミド（１２．３ｇ、５６ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（８．９ｇ、８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で攪拌下で４時間維持し、次いで、濾別し、白色固体を水で洗浄し、廃棄した。水層を４Ｎの塩化水素水溶液でｐＨ１〜２に合わせた結果、生成物の沈殿が生じる。標題化合物を含有する固体を濾過し、少量の水で洗浄し、乾燥させて化合物（６’；６．７ｇ）を得た。収率４６％。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４５。
【００７１】
【化１０】
2004537592.tif 000011
【実施例２】
【００７２】
エチルＮ−フタロイル−５−アミノ−４−オキソ−ペンタノエート（７’）
実施例１に記載されたように調製した、Ｎ−フタロイル−５−アミノ−４−オキソ−ペンタン酸（６’；６．８ｇ、２６ｍｍｏｌ）をトルエン（２００ｍｌ）、無水エタノール（２０ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を加え、Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ装置を取り付けた丸底首つきフラスコ中で２時間還流した。溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を酢酸エチルで希釈した。
【００７３】
有機層を重炭酸ナトリウム水溶液（３×１００ｍｌ）およびブラインで１回洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させると、標題化合物（７’、７．５ｇ）が定量的収率で単離された。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール（９５：５ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．８５。
【実施例３】
【００７４】
ベンジルＮ−フタロイル−４−アミノ−３−オキソ−ブチルレート（１０）
フタロイルグリシン（８；２０．５ｇ；１００ｍｍｏｌｅ）およびメルドラム酸（１７．２８ｇ；１２０ｍｍｏｌｅ）をジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）に溶解し、１，１’−カルボニルジイミダゾール（１９．４４ｇ；１２０ｍｍｏｌｅ）を加え、室温で攪拌下、２４時間維持した。その後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をエチルエーテル（５００ｍｌ）に取り、焼結ガラス漏斗上に回収した。この固体を同一溶媒（３×２００ｍｌ）で洗浄して、中間体（９；４４ｇ）を得た。
【００７５】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ３３０。
【００７６】
【化１１】
2004537592.tif 000012
【００７７】
化合物（９）をアセトニトリル（４００ｍｌ）に溶解し、ベンジルアルコール（５６ｍｌ）を用いて還流で１８時間処理した。冷却した後、室温でｎ−ヘキサン（１Ｌ）を加えた。得られた沈殿をまず二塩化メチレン（２００ｍｌ）で溶解し、次いで、ｎ−ヘキサン（２００ｍｌ）の存在下でシリカゲル（５０ｇ）に吸着させた。シリカゲルに吸着された化合物を、溶媒を蒸発させた後、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。溶出系は順に、副生成物を除去するための、ｎ−ヘキサンとエチルエーテルの混合物（１：１ｖ／ｖ）、次いで、標題化合物（１０；２１ｇ）を回収するための、二塩化メチレンとアセトンの混合物（９５：５ｖ／ｖ）とした。これをｎ−ヘキサンから結晶化させた。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系ジエチルエーテル／ｎ−ヘキサン（２：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４。
【００７８】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ３３６。
【００７９】
【化１２】
2004537592.tif 000013
【実施例４】
【００８０】
エチルＮ−フタロイル−５−アミノ−４−オキソ−ペンタノエート（７’）
パラフィン中８０％水素化ナトリウム（２．２ｇ；７４ｍｍｏｌｅ）を乾燥テトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）に懸濁し、０℃に冷却し、化合物（１０；２１ｇ；６２ｍｍｏｌｅ）の乾燥テトラヒドロフラン（２５０ｍｌ）溶液を滴下した。１時間後、反応混合物にエチルブロモアセテート（８．２ｍｌ；８０ｍｍｏｌｅ）の乾燥テトラヒドロフラン（７５ｍｌ）溶液を加えた。この反応混合物を０℃で２時間攪拌下におき、次いで、乾燥ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）を加え、室温で２４時間維持した。その後、反応混合物を４℃に冷却し、１Ｎの塩酸水溶液（４５０ｍｌ）で処理し、酢酸エチル（１Ｌ）で抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。残渣を攪拌下、メタノール（１５０ｍｌ）で溶解し、Ｐｄ／Ｃ１０％（５ｇ）を加え、４℃に冷却し、シクロヘキサジエン（９０ｍｌ）を加えた。この反応混合物を１５時間５０℃とし、次いで、室温に冷却し、濾過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、溶出系としてまずｎ−ヘキサン／ジエチルエーテルの混合物、１：１ｖ／ｖ、次いで塩化メチレンとメタノールの混合物１：２ｖ／ｖを用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、標題化合物（７’；９．４ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系ジエチルエーテル／ｎ−ヘキサン（１５：１０ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２１。
【００８１】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ３０７。
【００８２】
【化１３】
2004537592.tif 000014
【実施例５】
【００８３】
エチルＮ−フタロイル−５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノエート（１’ａ）
実施例２または４に記載されたように調製した、化合物（７’；６．７ｇ；２３ｍｍｏｌｅ）を二塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解し、４℃に冷却し、ジエチルアミノスルファートリフルオリド、ＤＡＳＴ（１７ｍｌ；１２３ｍｍｏｌｅ）で処理した。この反応混合物を室温で３日間放置し、次いで、水と氷に注ぎ入れ、塩化メチレン（５００ｍｌ）で抽出した。有機相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。残渣を、溶出系として二塩化メチレンおよびアセトンを用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけた。回収された化合物（１’ａ；３．４ｇ）をジエチルエーテル／ｎ−ヘキサン（１：１ｖ／ｖ）から結晶化させた。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系ジエチルエーテル／ｎ−ヘキサン（２：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３８。
【００８４】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ３１２。
【００８５】
【化１４】
2004537592.tif 000015
【実施例６】
【００８６】
ｔ−ブトキシカルボニル−５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタン酸（１’ｃ）
実施例５に記載されたように調製した、化合物（１’ａ；４．４ｇ；１４ｍｍｏｌｅ）を６Ｎの塩酸水溶液（２００ｍｌ）を用いて還流で８時間処理した。次いで、減圧下で溶媒を除去し、４℃に冷却した、化合物（１’ｂ）を含有する残渣を、トリエチルアミンの１０％メタノール溶液で溶解し、ジ−ｔ−ブチルジカーボネート（１２．３ｇ；５６ｍｍｏｌｅ）を加えた。２時間後、減圧下で溶媒を除去し、１Ｎの塩酸水溶液（１５０ｍｌ）で残渣を懸濁し、酢酸エチル（５００ｍｌ）で抽出した。有機相を分離し、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。油状残渣を、溶出系として塩化メチレンとメタノールの混合物（９７：３ｖ／ｖ）を用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、標題化合物（１’ｃ；２．６ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系塩化メチレン／メタノール（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．４１。
【００８７】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ２５２。
【００８８】
【化１５】
2004537592.tif 000016
【実施例７】
【００８９】
４−ニトロフェニル、ｔ−ブトキシカルボニル−５−アミノ−４，４’−ジフルオロ−ペンタノエート（１’ｄ）
実施例６に記載されたように調製した、化合物（１’ｃ；２．５ｇ、１０ｍｍｏｌｅ）とｐ−ニトロフェノール（１．６ｇ；１２ｍｍｏｌｅ）の混合物をテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．４ｇ；１２ｍｍｏｌｅ）のテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）溶液を滴下した。この反応混合物を０℃にて攪拌下で４時間、次いで、室温で４時間および４℃で一晩維持した。その後、反応混合物を濾過し、溶液を蒸発乾固させた。この残渣を酢酸エチル（１００ｍｌ）に取り、４℃で２時間冷却し、再濾過した。減圧下で溶媒を除去し、残渣を、二塩化メチレンで溶出する、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、標題化合物（１’ｄ；３．６ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／アセトン（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５６。
【実施例８】
【００９０】
７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［５’−アミノ−４’，４’−ジフルオロペンタノイル］−カンプトテシンヒドロクロリド（１２’ａ）
７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（４；１．６８ｇ；４ｍｍｏｌ）を無水ジメチルスルホキシド（２０ｍｌ）に溶解し、実施例７に記載されたように調製した、５−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−５−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタン酸ｐ−ニトロフェニルエステル（１’ｄ；３．６ｇ；１０ｍｍｏｌ）およびジメチルアミノピリジン（１．４ｇ；１２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で攪拌下、アルゴン雰囲気中に２４時間維持した。その後、モルホリン（１．９ｇ；２０ｍｍｏｌｅ）を加え、反応混合物を室温で攪拌下で２時間維持した。次いで、二塩化メチレン（４００ｍｌ）および０．５Ｎ塩酸水溶液（１００ｍｌ）を加えた。有機相を分離し、水（２×２００ｍｌ）で洗浄し、減圧下で有機溶媒を除去し、残渣を、溶出系として二塩化メチレンとアセトンの混合物（９：１ｖ／ｖ）を用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［５’−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル］−カンプトテシン（ｌｌａ；１．８ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／アセトン（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２１。
【００９１】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ６２８。
【００９２】
【化１６】
2004537592.tif 000017
【００９３】
化合物（１１ａ；１．８ｇ）を酢酸中、１Ｎの塩酸溶液（３０ｍｌ）に溶解し、室温に２時間放置した。この反応混合物を小容量に濃縮し、標題化合物（１２’ａ；１．６ｇ）をエチルエーテルから沈殿させた。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３９。
【００９４】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ５２８。
【００９５】
【化１７】
2004537592.tif 000018
【実施例９】
【００９６】
７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［ロイシル−（５−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル）］−カンプトテシンヒドロクロリド（２２’ａ）
実施例８に記載されたように調製した、化合物（１２’ａ；１．６ｇ、２．８ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシン（１．４ｇ；５．６ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．８３ｇ、５．６ｍｍｏｌ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオボレート（ＴＢＴＵ）（１．８ｇ、５．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３０ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２．９ｍｌ、１６．８ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で攪拌下で一晩維持した。次いで、モルホリン（２．４ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６時間攪拌した。その後、減圧下で溶媒を留去し、残渣を塩化メチレン（２００ｍｌ）で溶解し、０．５ＮのＨＣｌ水溶液（２００ｍｌ）および水（２×１００ｍｌ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、減圧下で溶媒を除去した。残渣を、溶出系として二塩化メチレンとアセトンの混合物（８：２ｖ／ｖ）を用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシル−（５’−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル）］−カンプトテシン（２１ａ；２ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール（９７：３ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．１８。化合物（２１ａ；２ｇ）を酢酸中１Ｎの塩酸（３０ｍｌ）に溶解し、室温に２時間放置した。その後、反応混合物を小容量に濃縮し、ジエチルエーテルで沈殿させた後、標題化合物（２２’ａ；１．７ｇ）を回収した。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール（８：２ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．５６。
【００９７】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ６４１。
【００９８】
【化１８】
2004537592.tif 000019
【実施例１０】
【００９９】
７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［（６−アミノヘキサノイル）−メチオニルスルホキシド−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−（５’−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル）］−カンプトテシントリフルオロアセテート（１８’ａ）
実施例９に記載されたように調製した、化合物（２２’ａ；０．７５ｇ；１．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−（６−アミノヘキサノイル−メチオニルスルホキシド−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイン）（１．４ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシ−ベンゾ−トリアゾール（ＨＯＢｔ）（０．３３ｇ、２．２ｍｍｏｌ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオボレート（ＴＢＴＵ）（０．７ｇ、２．２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（２．２ｍｌ、１３ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で攪拌下で一晩維持した。次いで、乾燥ピペラジン（０．４３ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を室温で１時間攪拌した。その後、反応混合物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で希釈し、０．５Ｎの塩酸水溶液（１００ｍｌ）、冷水（２×１００ｍｌ）で洗浄した。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で溶媒を除去した。残渣を、溶出系として二塩化メチレンとメタノールの混合物（９７：３ｖ／ｖ）を用いた、シリカゲルでのフラッシュクロマトグラフィーにかけて、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−（６−アミノヘキサノイル）−メチオニルスルホキシド−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−（５’−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル）］−カンプトテシン（１６ａ；１ｇ）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレンおよびメタノール（９：１ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．２７。化合物（１６ａ；１ｇ）をトリフルオロ酢酸水の混合物（９５：５ｖ／ｖ；２０ｍｌ）に溶解し、攪拌下で１時間放置した。その後、メタノール（５ｍｌ）を加え、ジエチルエーテルで沈殿させた後、標題化合物（１８’ａ；１ｇ）を回収した。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）、溶出系二塩化メチレン／メタノール／酢酸／水（８０：２０：７：３ｖ／ｖ）でのＴＬＣ  Ｒｆ＝０．３５。
【０１００】
ＦＤ−ＭＳ：ｍ／ｚ１１５１。
【０１０１】
【化１９】
2004537592.tif 000020
【実施例１１】
【０１０２】
Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルアミドおよび７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−［メタクリロイル−グリシル−６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−（５−アミノ−４，４’−ジフルオロペンタノイル）］−カンプトテシンとＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリロイルグリシンアミドの共重合体（２ａ）
ポリマー（Ｗ１；３．１７ｇ；ｐ−ニトロフェニルの１．６２百万当量）の無水ジメチルスルホキシド（１６ｍｌ）溶液に、実施例１０に記載されたように調製した、化合物（１８’ａ；１ｇ；０．８１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２２５ｍｌ、１．６２ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を室温で攪拌下、アルゴン雰囲気中で２４時間維持した。次いで、１−アミノ−２−プロパノールの３％ジメチルホルムアミド溶液（４．２３ｍｌ）を加え、攪拌を８時間続けた。その後、攪拌下でこの反応混合物に酢酸エチル（６００ｍｌ）を加えた。沈殿を回収し、酢酸エチル（３×３０ｍｌ）で洗浄し、エタノール（３０ｍｌ）で溶解し、ＤＯＷＥＸ５０スルホン酸で３０分間処理した。この溶液を濾過し、酢酸エチルで沈殿させた。得られた固体をジエチルエーテルで洗浄し、恒量に乾燥させて、標題化合物（２ａ：３．７３ｇ）を得た。分子量２０．８００、多分散性１．４８、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシンの含量６．６％（ｗ／ｗ％）。
【国際公開パンフレット】
2004537592.tif 000025
2004537592.tif 000026
2004537592.tif 000027
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2004537592.tif 000058
2004537592.tif 000059
【国際調査報告】
2004537592.tif 000060
2004537592.tif 000061