(57)【要約】開示されるのは、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント、またはその相同体、変異体、誘導体、または模倣体と生組織を接触させることによって生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または改善する方法であり、ここでＮＴＰのセグメント、またはその相同体、変異体、誘導体、または模倣体は、細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または寛解するのに有効な量で存在する。本方法は、細胞死および／または組織壊死の予防、阻害、および／または寛解を必要とする状態を治療することが可能である。
2004529179.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントと生組織を接触させることを含んでなり、それによりＮＴＰのセグメントは細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在する、生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害する方法。
【請求項２】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｊ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｋ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項１の方法。
【請求項３】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントと生組織を接触させることを含んでなり、それによりＮＴＰのセグメントは細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在する、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法。
【請求項４】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｌ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｍ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項３の方法。
【請求項５】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントを含有する組成物と生きた哺乳動物脳組織を接触させることによって生きた哺乳動物脳組織中の細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害する方法であって、それにより組成物はＮＴＰのセグメントが血液脳関門を通過することを可能にする成分をさらに含む、前記方法。
【請求項６】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｎ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｏ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項５の方法。
【請求項７】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントを含有する組成物と生きた哺乳動物脳組織を接触させることによって神経変性障害を治療する方法であって、それにより組成物はＮＴＰのセグメントが血液脳関門を通過することを可能にする成分をさらに含む、前記方法。
【請求項８】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｐ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｑ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項７の方法。
【請求項９】
神経変性障害がアルツハイマー病である、請求項７の方法。
【請求項１０】
神経変性障害がアルツハイマー病である、請求項８の方法。
【請求項１１】
ＮＴＰのセグメントとＮＴＰのセグメントが血液脳関門を通過することを可能にする成分を含んでなる、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療するための組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｒ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｓ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項１１の方法。
【請求項１３】
ＮＴＰが治療目的のために投与された部位にかまたはその近くにある生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、変調、制御、改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）および／または阻害する方法であって、少なくとも１つのＮＴＰのセグメントと生組織を接触させることを含んでなり、それによりＮＴＰのセグメントは、ＮＴＰの治療上の投与により引き起こされる細胞死および／または組織壊死を予防、変調、制御、改善および／または阻害するのに十分な量で存在する、前記方法。
【請求項１４】
少なくとも１つのＮＴＰのセグメントが：
ａ）ＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；
ｂ）ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；ＡＲＬＩＦ；
ｃ）ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ；
ｄ）ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ；
ｅ）ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ；
ｆ）ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ；
ｇ）ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ；
ｈ）ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ；
ｉ）ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ；
ｔ）ＳＨＨＡＲＬＩＬ；並びに、
ｕ）ＨＡＲＬＭＬ；ＨＡＲＬＶＬ；およびＨＡＫＬＩＬ
からなる群より選択されるアミノ酸配列、並びにその変異体、相同体、誘導体、および模倣体を含有する、請求項１３の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、「神経線維タンパク質（Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｈｒｅａｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）のセグメントを使用する細胞死の予防法」と題した、米国仮特許出願第６０／２９０，９７１号への優先権を主張し、前記出願の開示はそのまま本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は、細胞死を予防する方法、並びに、細胞死および組織壊死の予防、阻害、および／または改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）を必要とする状態を治療する方法に関する。本発明には、神経線維タンパク質（ＮＴＰ）のセグメント、またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体を、細胞死を体験している哺乳動物へ投与することが含まれる。このセグメントは、筋肉内、経口、静脈内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、腫瘍内、病巣内、皮内、鞘内、鼻腔内、眼球内、動脈内、局所的、経皮的に、エアゾール、注入、ボーラス注射、埋込み器具、持続放出系などにより、単独でかまたは担体へコンジュゲートして投与可能である。あるいは、セグメントは、当該セグメントを発現する遺伝子を投与することによって、こうした産生を誘導するワクチンを投与することによって、または、該セグメントをｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞、細菌、またはウイルスを導入することによって、遺伝子修飾かまたは他の方法のいずれかによりｉｎ  ｖｉｖｏで発現させてもよい。
【０００３】
２．関連技術
アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶、行動、言語、および視空間の能力の進行性障害を特徴とし、最終的には死で終わる、複雑な神経変性障害である。易損性領域内の特徴的な病理には、細胞外β−アミロイド沈着、細胞内神経原線維のもつれ、シナプス損失、および広範なニューロン細胞死が含まれる。アルツハイマー病の原因および治療に関する研究は、研究者を数多くの研究手段へ導いてきた。かなりの証拠が、ヒトアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の産生若しくはプロセシングにおける改変がこの疾患の病因であることを示唆している。しかしながら、詳細な研究は、ＡＤが、多くの異なる、おそらくは重複している病因のある多因子疾患であることを証明している。
【０００４】
このために、当該技術分野の研究者は、脳の内部と神経細胞の異なる集団の内部の両方における構造の欠損症、化学変化、および機能異常を研究するために、有意義なリサーチや臨床調査を行ってきた。こうした調査および試験の深さは、以下の刊行物に代表されるが、これはこの分野における膨大な報告のひと握りでしかない：「アルツハイマー病の神経生物学（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ）」（Ｄ．ＤａｗｂａｒｎおよびＳ．Ｊ．Ａｌｌｅｎ監修），Ｂｉｏｓ，オックスフォード  １９９５；「痴呆症（Ｄｅｍｅｎｔｉａ）」（Ｊ．Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ監修），Ｆ．Ａ．デービス・カンパニー、フィラデルフィア、１９９３；「アルツハイマー病：老人性痴呆症と関連障害（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｓｅｎｉｌｅ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」（Ｋａｔｚｍａｎ，Ｒ，およびＲ．Ｌ．Ｂｉｃｋ監修）、ラヴェンプレス、ニューヨーク、１９９４  ４７−５１頁；「アルツハイマー病と関連障害、病因、病理発生、および治療薬（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｅｔｉｏｌｏｇｙ，Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」（Ｉｑｂｏｌ，Ｋ．ら，監修），ウィリー、チチェスター、１９９９；「アルツハイマー病：臨床および基礎研究の進歩（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」（Ｃｏｒａｉｎ，Ｂ．監修）、ウィリー、ニューヨーク、１９９３；「アルツハイマー病：臨床および治療の展望（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ）」（Ｃｕｔｌｅｒ，Ｎ．Ｒ．ら，監修）、ウィリー、チチェスター、１９９５；「アルツハイマー病；治療戦略（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ）」（Ｇｉａｃｏｂｉｎｉ，Ｅ．，Ｂｅｃｋｅｒ，Ｒ．監修）、バークハウザー、ボストン、１９９４；Ｐａｙｋｅｌら，Ａｒｃｈ．Ｇｅｎ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．，５１：３２５−３３２（１９９４）；Ａｍａｄｕｃｃｉら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，３６：９２２−９３１（１９８６）；ＭｃＫｈａｎｎら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３４：９３９−９４４（１９８４）；Ｈｅｓｔｏｎら，Ａｒｃｈ．Ｇｅｎ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ３８：１０８５−１０９０（１９８１）；「脳の老化（Ａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒａｉｎ）」（ＧｉｓｐｅｎおよびＴｒａｂｅｒ，監修者）、エルセヴィエ・サイエンス・パブリッシャーズ、アムステルダム、１９８３，２７５−２８１頁；Ｈｅｙｍａｎら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ  １５：３３５−３４１（１９８４）；Ｂｒａｙｎｅ  Ｃ．およびＰ．Ｃａｌｌｏｗａｙ，Ｌａｎｃｅｔ  １：１２６５−１２６７（１９８８）；Ｒｏｔｈら，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １４９：６９８−７０９（１９８６）；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｕｎｃｉｌ（医学研究協議会），「ＮＲＣアルツハイマー病ワークショップ報告」、ロンドン、イングランド、１９８７；Ｍｏｒｒｉｓら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ４１：４６９−４７８（１９９１）；および、これら刊行物のそれぞれの中で引用されている参考文献。
【０００５】
今日、アルツハイマー病は、米国で三番目に高額な疾患であり、毎年ほぼ１０００億ドルを社会に課している。これは、高齢者集団に最も蔓延している病気の１つであり、社会の高齢化に伴って、さらに重大なものとなろう。ＡＤに関連したコストには、ナーシングホームでのケアのような直接医療コスト、在宅日のケアのような直接非医療コスト、患者およびケア提供者の損失生産性のような間接コストが含まれる。医学的治療と行動療法（ｂｅｈａｂｉｏｒ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）は、認知低下の速度を遅らせること、施設収容を先延ばしにすること、ケア提供者の時間を削減すること、および生命の質を向上させることによって経済的な利益をもたらす可能性がある。ファルマコエコノミクス評価は、薬物療法および行動療法のナーシングホーム配置（プレースメント）、認知、およびケア提供者の時間に及ぼす効果に関してプラスの結果を示している。
【０００６】
神経線維タンパク質（ＮＴＰ）は、最近特性決定された脳タンパク質のファミリーである。このファミリーの１つのメンバーであるＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは、神経炎突起に関連した機能を有する〜４１ｋＤの膜結合性リンタンパク質である（ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−３１０４（１９９７）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚ．Ｒｅｐ．，２：３２７−３３２（１９９９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅ  ＳＭおよびＷａｎｄｓ  ＪＲ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，３：３４５−３５３（２００１））。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰをコードする遺伝子とＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの予測タンパク質配列が同定され、記載されている（ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−３１４０（１９９７））。〜４１ｋＤａの種に加えて、他の種の神経線維タンパク質（〜２６ｋＤａ，〜２１ｋＤａ，〜１７ｋＤａ，および〜１５ｋＤａ）が同定され、神経外胚葉腫瘍、星状細胞腫および膠芽腫や、低酸素症、シェマ（ｓｃｈｅｍａ）、または脳梗塞による損傷に関連づけられてきた（Ｘｕら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５３：３８２３−３８２９（１９９３）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５５（１０）：１０３８−５０（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３８（１−２）：２６−３５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３５（２）：１１８−２５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−３１０４（１９９７）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚ．Ｒｅｐ．，２：３２７−３３２（１９９９））。
【０００７】
数種の神経線維タンパク質が、いずれも「神経線維タンパク質の遺伝子発現とアルツハイマー病の検出」についての米国特許第５，９４８，６３４号；５，９４８，８８８号；および５，８３０，６７０号、並びに「神経学的疾患若しくは機能不全の検出法」についての米国特許第６，０７１，７０５号に記載され、特許請求されている。これらの特許の開示は、そのまま本明細書に特別に援用される。そこに記載されるように、ＮＴＰは、細胞死の間にアップレギュレートされ、産生される。従って、死んだ神経細胞や瀕死の神経細胞は、ＮＴＰを過剰産生しているとして記載され、故に、その存在は神経細胞の死やアルツハイマー病（ＡＤ）の発症のしるしとなる。
【０００８】
他の神経線維タンパク質の種は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子の他の産物（例、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質データベース寄託番号ＸＰ＿０３２３０７  ＰＩＤｇ１５９２８９７１に記載される１１２アミノ酸タンパク質）として、または神経線維タンパク質に類似のもの（例、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質データベース寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤｇ１５９２８９７１に記載される１０６アミノ酸タンパク質、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質データベース寄託番号ＸＰ＿０３９１０２  ＰＩＤｇ１８５９９３３９に記載される別の１０６アミノ酸タンパク質、およびＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質データベース寄託番号ＡＡＨ０２５３４  ＰＩＤｇ１２８０３４２１に記載される６１アミノ酸タンパク質）として同定された。
【０００９】
神経線維タンパク質の特にＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ種を、ＡＤとＡＤにおける細胞死の間のそのアップレギュレーションと結びつける有力な証拠がある。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰのｍＲＮＡが対照に比べてＡＤ脳においてアップレギュレートされている；脳中およびＣＳＦ中のＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質レベルが対照よりもＡＤにおいてより高い；そして、老人斑において、神経原線維のもつれ（ＮＦＴ）において、ＡＤおよびダウン症候群の脳の変性ニューロン、神経線維網の線維、および栄養失調性神経炎突起においてＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの免疫反応性が見出される（Ｏｚｔｕｒｋら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：４１９−４２３（１９８９）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８６（３）：１００４−１３（１９９０）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１１３（２）：１５２−６４（１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，３２（６）：７３３−４２（１９９２）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５５（１０）：１０３８−５０（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３８（１−２）：２６−３５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３５（２）：１１８−２５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−３１０４（１９９７）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚ．Ｒｅｐ．，２：３２７−３３２（１９９９））。免疫細胞化学により、ＡＤおよびダウン症候群の両方の脳において、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質が細胞の内部、神経線維網内の微細突起内に局在化しているか、または細胞外にあることが実証された。ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，３２（６）：７３３−４２（１９９２）。ニューロンと星状細胞という２種類の細胞がＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する（同上）。罹患したニューロンは大錐体種となり、典型的には、ＡＤ脳において公知の神経原線維のもつれを含有する（同上）。
【００１０】
ＡＤ患者のＣＳＦおよび尿の両方において上昇レベルのＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質が見出されていて、この破壊的な病気の生化学マーカーとしてのその正確度を示している（ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，Ｆｒｏｎｔ  Ｂｉｏｓｃｉ  ７：９８９−９６（２００２）；ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ３：３４５−３５３（２００１）；Ｍｕｎｚａｒら，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ４：６１−６５（２００１）；Ｋａｈｌｅら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５４：１４９８−１５０４（２０００）およびＡｖｅｒｂａｃｋ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５５：１０６８（２０００）；Ｍｕｎｚａｒら，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ３：１５５−１５９（２０００）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２：３２７−３３２（１９９９）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ａｎａｌ  １２：２８５−２８８（１９９８）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｌａｂ  Ａｎａｌ  １２：２２３−２２６（１９９８）；Ｇｈａｎｂａｒｉら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １９９８；４Ａ：２−６（１９９８）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  １００：３０９３−３１０４（１９９７））。
【００１１】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子の過剰発現もアルツハイマー病における細胞死のプロセスに関連づけられてきた（ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏ．ａｎｄ  Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏ．，６０：１９５−２０７（２００１）；ｄｅ  ｌａ  ＭｏｎｔｅおよびＷａｎｄｓ，Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ５８：８４４−４９（２００１））。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは、ダウン症候群の脳組織においても同定された（Ｗａｎｄｓら，国際特許公報第ＷＯ９０／０６９９３号；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  １３５：１１８−２５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚ．Ｒｅｐ．，２：３２７−３３２（１９９９））。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子の過剰発現が正常眼圧緑内障にも関連している可能性があるという証拠もある（Ｇｏｌｕｂｎｉｔｓｃｈａｊａ−Ｌａｂｕｄｏｖａら，Ｃｕｒｒ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ  ２１：８６７−７６（２０００））。
【００１２】
「神経線維タンパク質を使用して腫瘍と関連状態を治療する方法」と題した、出願中の米国特許出願第＿号（この開示はそのまま本明細書に援用される）に開示されるように、本発明者は、最近、遊離されたＡＤ７Ｃ−ＮＴＰタンパク質が（瀕死の細胞そのものにより産生されるアップレギュレートされたＡＤ７Ｃ−ＮＴＰと比べて）細胞傷害性であり、組織中の他の細胞へ細胞死を引き起こすことが可能であることを発見した。従って、特にＡＤ脳中の神経線維タンパク質に関連した細胞死および組織壊死を予防する、阻害する、変調させる、または改善することは望ましいであろう。
【００１３】
「神経線維タンパク質の好ましいセグメントとそれを使用する方法」と題した、出願中の米国特許出願第０９／６９７，５９０号（この開示はそのまま本明細書に援用される）に開示されるように、ＮＴＰのセグメントが結合アッセイ、ＮＴＰの精製、およびＮＴＰの代用品としての診断薬として使用可能であることも最近発見された。
【００１４】
関連技術に関する上記の記載を含め、本記載を通し、いずれかおよびすべての米国特許を含む、本明細書に記載のいずれかおよびすべての公的に利用可能な文献がそのまま本明細書に特別に援用される。関連技術に関する上記の記載は、出願中の米国特許出願を含め、そこに記載された文献がいずれも本発明への先行技術であるという公認を意図するものではない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明の概要
細胞死および組織壊死を予防、阻害、変調および／または改善する方法を開発することへのニーズが存在する。特に、脳中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または改善することが可能な方法を開発することへのニーズが存在する。細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法を開発することへのニーズも存在する。生きた哺乳動物脳組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害および／または改善することによってＡＤのような神経変性障害を治療する方法を開発することへのニーズも存在する。ヒトにおける良性若しくは悪性腫瘍のような有害であるかまたは望まれない組織若しくは細胞要素を除去するかまたは破壊するために投与されるＮＴＰにより引き起こされる、生組織中の細胞死および／または組織壊死を制御、阻害、変調、または改善する方法を開発することへのニーズも存在する。
【００１６】
故に、細胞死および／または組織壊死を予防、阻害および／または改善する方法を提供することが本発明の態様の特徴である。この方法には、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）と生組織を接触させることが含まれ、それにより該セグメントは細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、抑制、制御および／または改善するのに十分な量で存在する。
【００１７】
本発明の態様の別の特徴によれば、細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または改善するのに十分な量で存在する、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）を含有する成分と生きた哺乳動物脳組織を接触させることによって、生きた哺乳動物脳組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害および／または改善する方法が提供される。該成分は、血液脳関門を通過することが可能である。
【００１８】
本発明の態様の別の特徴によれば、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）を含有する成分と生きた哺乳動物脳組織を接触させることによって神経変性障害を治療する方法が提供される。該成分は、血液脳関門を通過することが可能である。
【００１９】
本発明の態様のさらに別の特徴によれば、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）と生組織を接触させることを含んでなる、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法が提供される。ＮＴＰのセグメントは、細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在する。この方法によれば、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が、細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を有する哺乳動物へ投与される。
【００２０】
本発明の態様の別の特徴によれば、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）とＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が血液脳関門を通過することを可能にする成分を含んでなる組成物が提供される。
【００２１】
本発明の態様のさらに別の特徴によれば、遺伝子をその必要な哺乳動物へ投与することを含んでなり、それにより該遺伝子は少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）を発現し、そしてそれによりこの投与はＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が生組織と接触することをもたらす、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法が提供される。該遺伝子は、ＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在するようなやり方で投与される。
【００２２】
本発明の態様の追加の特徴によれば、ワクチンをその必要な哺乳動物へ投与することを含んでなり、それにより該ワクチンは少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）を発現するかまたは他のやり方で産生するように哺乳動物を誘導し、そしてそれによりこの投与は少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が生組織と接触することをもたらす、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法が提供される。該ワクチンは、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在するようなやり方で投与される。
【００２３】
本発明の態様のさらに別の特徴によれば、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）をｉｎ  ｖｉｖｏで発現することが可能である細胞、細菌またはウイルスをその必要な哺乳動物へ導入または投与、または埋込むことを含んでなり、それにより該細胞、細菌、またはウイルスは、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）を発現し、そしてそれによりこの投与は少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が生組織と接触することをもたらす、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法が提供される。該細胞、細菌またはウイルスは、少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）が細胞死および／または組織壊死を予防、阻害および／または改善するのに十分な量で存在するようなやり方で、そしてそのような量で導入、投与または埋込みされる。
【００２４】
本発明の上記および他の特徴は、以下に続く詳細な説明を読めば、当業者には容易に明らかになろう。しかしながら、詳細な説明と特定の実施例は、本発明の好ましい態様を示すが、本発明の精神および範囲内での様々な変更および修飾が本記述から当業者に明らかとなるので、例示のためにのみ与えられると理解されるべきである。他に特定しなければ、本明細書に引用される文献のそれぞれの内容は、そのまま本明細書に援用される。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
好ましい態様の詳細な説明
用語「ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ」は、ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−１０４（１９９７），米国特許第５，９４８，６３４号、５，９４８，８８８号、および５，８３０，６７０号の配列１２０および１２１、並びにＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質データベース寄託番号ＡＦ０１０１４４に記載される、〜４１ｋＤのタンパク質とそれをコードする遺伝子および核酸配列を意味する。
【００２６】
本記載を通し、用語「ＮＴＰ」または「神経線維タンパク質」は、神経線維タンパク質と（膵臓線維タンパク質を含む）関連分子、並びにそれらタンパク質をコードする核酸配列を意味し、以下のタンパク質とこれらタンパク質のアミノ酸配列をコードする核酸配列が（限定されないが）含まれる：
（ａ）ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ；
（ｂ）米国特許第５，９４８，６３４号、５，９４８，８８８号、５，８３０，６７０号、および６，０７１，７０５号、並びにｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５５（１０）：１０３８−５０（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３８（１−２）：２６−３５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，１３５（２）：１１８−２５（１９９６）；ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００：３０９３−３１０４（１９９７）；およびｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ａｌｚ．Ｒｅｐ．，２：３２７−３３２（１９９９）に記載される、〜４２、〜２６、〜２１、〜１７、〜１４、および〜８ｋＤの神経線維タンパク質の種；
（ｃ）寄託番号ＨＢ−１２５４６としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、バージニア州マナッサスに保管されたモノクローナル抗体＃２、または寄託番号ＨＢ−１２５４５としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、バージニア州マナッサスに保管されたモノクローナル抗体＃５により特異的に認識されるタンパク質；
（ｄ）ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ遺伝子によりコードされるタンパク質；
（ｅ）米国特許第５，８３０，６７０号、５，９４８，６３４号、および５，９４８，８８８号からの配列４０に記載され、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４７，ＰＩＤｇ１００４８５４０に収載される１２２アミノ酸の神経線維タンパク質（このアミノ酸配列を図２に図示する）；
（ｆ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＸＰ＿０３２３０７，ＰＩＤｇ１４７２５１３２に収載される１１２アミノ酸の神経線維タンパク質（このアミノ酸配列を図３に図示する）；
（ｇ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤｇ１５９２８９７１に収載される１０６アミノ酸の神経線維タンパク質様タンパク質（このアミノ酸配列を図４に図示する）；
（ｈ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＸＰ＿０３９１０２，ＰＩＤｇ１８５９９３３９に収載される１０６アミノ酸の神経線維タンパク質様タンパク質（このアミノ酸配列を図５に図示する）；
（ｉ）米国特許第５，８３０，６７０号、５，９４８，６３４号、および５，９４８，８８８号からの配列３０に記載され、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ１３６１２，ＰＩＤｇ１００４８５３８に収載される９８アミノ酸の神経線維タンパク質（このアミノ酸配列を図６に図示する）；
（ｊ）米国特許第５，８３０，６７０号、５，９４８，６３４号、および５，９４８，８８８号からの配列４８に記載され、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４８，ＰＩＤｇ１００４８５４１に収載される７５アミノ酸の神経線維タンパク質（このアミノ酸配列を図７に図示する）；
（ｋ）米国特許第５，８３０，６７０号、５，９４８，６３４号、および５，９４８，８８８号からの配列３６に記載され、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４６，ＰＩＤｇ１００４８５３９に収載される６８アミノ酸の神経線維タンパク質（このアミノ酸配列を図８に図示する）；
（ｌ）ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＨ０２５３４，ＰＩＤｇ１２８０３４２１に収載される６１アミノ酸の神経線維タンパク質様タンパク質（このアミノ酸配列を図９に図示する）；
（ｍ）膵臓線維タンパク質；
（ｎ）米国特許第６，０７１，７０５号に記載の神経膵臓線維タンパク質（ｎＰＴＰ）；並びに
（ｏ）アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに保管されたＨＢ９９３４、ＨＢ９９３５、およびＨＢ９９３６からなる群からのハイブリドーマにより産生される抗体により特異的に認識されるタンパク質。
【００２７】
用語「ＮＴＰ」にはまた、哺乳動物組織に由来するかまたは組換え技術を使用して産生されるＮＴＰが含まれ、ＮＴＰの断片、変異体、誘導体、および相同体が含まれる。
本明細書に記載のアミノ酸およびアミノ酸残基は、以下の表に提供する公認の１文字若しくは３文字コードに従って言及してよい。他に特定しなければ、これらのアミノ酸または残基は、天然に存在するＬ立体異性体の型である。
【００２８】
【表１】
2004529179.tif 000003
【００２９】
本明細書で使用する用語「Ｈａｒｌｉｌ配列」または「Ｈａｒｌｉｌペプチド」は、以下の配列の１以上を含むかまたは含有する生物学的に活性なペプチドを意味する：
１．図１に記載のＴＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；およびＨＨＡＲＬＩＦ；
２．ＨＨＡＲＬ；ＨＡＲＬ；ＨＡＲＬＩ；ＨＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＩＬ；ＨＨＡＲＬＩＦ；ＴＨＡＲＬＩＬ；ＡＲＬＩ；ＡＲＬ；ＨＡＲＬＣＬ；ＡＲＬＣＬ；ＡＲＣＬ；ＭＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩＬ；ＦＡＲＬＩ；ＦＡＲＬ；ＨＡＲＬＩＦ；およびＡＲＬＩＦ；
３．ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ（「ＮＴＰ−１」）；
４．ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ（「ＮＴＰ−２」）；
５．ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ（「ＮＴＰ−３」）；
６．ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ（「ＮＴＰ−４」）；
７．ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ（「ＮＴＰ−５」）；
８．ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ（「ＮＴＰ−６」）；
９．ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ（「ＮＴＰ−７」）；
１０．ＳＨＨＡＲＬＩＬ（「ＮＴＰ−８」）；並びに、
１１．ＨＡＲＬＭＬ，ＨＡＲＬＶＬ，およびＨＡＫＬＩＬ。
【００３０】
本明細書で使用する用語「Ｈａｒｌｉｌ配列」または「Ｈａｒｌｉｌペプチド」には、Ｈａｒｌｉｌ配列またはＨａｒｌｉｌペプチドの生物学的に活性な変異体、相同体、誘導体、およびペプチド模倣体も含まれ、上記の副項１〜１１に列挙された諸配列のいずれかの配列をＨａｒｌｉｌ配列の前または後にあるリンカーペプチドの追加のアミノ酸残基とともに含有する生物学的に活性なペプチドが含まれる。
【００３１】
本明細書で使用する用語「ＮＴＰのセグメント」は、ある種のＮＴＰ、好ましくはＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの生物学的に活性な断片を意味し、特にＨａｒｌｉｌ配列およびＨａｒｌｉｌペプチドが（限定されないが）含まれる。
【００３２】
用語「生物学的に活性な」は、ＮＴＰまたは他の分子へ結合する能力を有するタンパク質、ペプチド、Ｈａｒｌｉｌペプチド、またはＮＴＰのセグメントを意味する。
用語「断片」は、ＮＴＰタンパク質またはＮＴＰのセグメントのアミノ酸配列の隣接するサブ配列からなるタンパク質若しくはポリペプチドを意味し、スプライス変異体のような天然に存在する断片と天然に存在するｉｎ  ｖｉｖｏプロテアーゼ活性から生じる断片が含まれる。こうした断片は、アミノ末端、カルボキシ末端で、および／または（天然のスプライシングのように）内部で切り取られる場合がある。こうした断片は、アミノ末端メチオニンがあってもなくても調製可能である。用語「断片」には、同一のＮＴＰタンパク質またはＮＴＰのセグメントに由来し、直接的にかまたはリンカーを介するかのいずれかで一緒に連結する隣接アミノ酸配列を共有するかまたはしない、同一であるかまたは異なる断片が含まれる。
【００３３】
用語「変異体」は、ＮＴＰタンパク質またはＮＴＰのセグメントのアミノ酸配列に比べて、１以上のアミノ酸の置換、欠失、および／または挿入が存在するタンパク質またはポリペプチドを意味し、ＮＴＰタンパク質またはＮＴＰのセグメントの天然に存在する対立遺伝子変異体または選択的スプライス変異体が含まれる。用語「変異体」には、ペプチド配列中の１以上のアミノ酸を、類似または相同の（諸）アミノ酸、または似ていない（諸）アミノ酸で置き換えることが含まれる。類似または相同なものとしてアミノ酸を等級付けることが可能な多くの尺度がある（Ｇｕｎｎａｒ  ｖｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ，「分子生物学の配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」１２３−３９頁（アカデミック・プレス、ニューヨーク州ニューヨーク  １９８７）。好ましい変異体には、１以上のアミノ酸位置でのアラニン置換が含まれる。他の好ましい置換には、タンパク質の全体の正味電荷、極性、または疎水性にほとんどまたはまったく影響を及ぼさない保守的な置換が含まれる。保守的な置換を以下の表２に示す。
【００３４】
【表２】
2004529179.tif 000004
【００３５】
表３は、別のアミノ酸置換のスキームを示す。
【００３６】
【表３】
2004529179.tif 000005
【００３７】
他の変異体は、（ａ）例えば、シート若しくはらせんのコンホメーションのような、置換の領域にあるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷または疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさを維持することに及ぼすその効果がより有意に異なる残基を選択することのような、より保守的ではないアミノ酸置換からなる場合がある。機能に対してより有意な効果を及ぼすことが概して予期される置換は、（ａ）グリシンおよび／またはプロリンが別のアミノ酸により置換されるか、または欠失または挿入される；（ｂ）親水性残基、例えばセリルまたはスレオニルが、疎水性残基、例えばロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリル、またはアラニルで（または、により）置換される；（ｃ）システイン残基が他のいずれかの残基で（または、により）置換される；（ｄ）電気陽性側鎖、例えばリジル、アルギニル、またはヒスチジルを有する残基が電気陰性電荷を有する残基、例えばグルタミルまたはアスパルチルを有する残基で（または、により）置換される；または（ｅ）大きい側鎖を有する残基、例えばフェニルアラニンをこうした側鎖を有さないもの、例えばグリシンで（または、により）置換するものである。他の変異体には、新規のグルコシル化および／またはリン酸化部位を産生するように設計されたもの、または既存のグリコシル化および／またはリン酸化部位を欠失させるように設計されたものが含まれる。変異体には、グリコシル化部位、タンパク分解切断部位、および／またはシステイン残基での少なくとも１つのアミノ酸置換が含まれる。変異体には、ＮＴＰまたはＮＴＰのセグメントのアミノ酸配列の前または後にあるリンカーペプチドに追加のアミノ酸残基を有する、ＮＴＰタンパク質またはＮＴＰのセグメントも含まれる。例えば、ＮＴＰのセグメントのアミノ末端とカルボキシ末端の両方でシステイン残基を加え、ジスルフィド結合の形成によるＮＴＰのセグメントの環化を可能にしてよい。用語「変異体」には、Ｈａｒｌｉｌペプチドの３’または５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１つで２５までの追加アミノ酸が付いたＨａｒｌｉｌペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドも含まれる。
【００３８】
用語「誘導体」は、プロセシングや他の翻訳後修飾のような天然のプロセスによるだけでなく、例えば、１以上のポリエチレングリコール分子、糖、リン酸、および／または他のこうした分子の付加によるような化学修飾技術により（ここで、上記の分子または諸分子は、天然では野生型ＮＴＰタンパク質若しくはセグメントへ付かない）化学的に修飾された、化学修飾タンパク質若しくはポリペプチドを意味する。誘導体には塩が含まれる。こうした化学修飾は、基本テキストやより詳細な研究論文、並びに大部の研究文献に十分に記載され、それらは当業者に公知である。同じ種類の修飾があるタンパク質またはポリペプチド中のいくつかの部位に同一であるかまたは変動する度合いで存在してよいと理解されよう。また、あるタンパク質またはポリペプチドは、多くの種類の修飾を含有してよい。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、およびアミノ若しくはカルボキシル末端を含む、タンパク質またはポリペプチドのどこで生じてもよい。修飾には、例えば、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有付加、ヘム部分の共有付加、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有付加、脂質または脂質誘導体の共有付加、ホスファチジルイノシトールの共有付加、架橋形成、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋連結の形成、システインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク分解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質付加、硫酸化、グルタミン酸残基のγ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル化、硫酸化、（アルギニル化のような）転移ＲＮＡ仲介性のアミノ酸のタンパク質への付加、およびユビキチン化が含まれる。例えば、「タンパク質−構造と分子特性（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−−Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ）」第２版，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ監修、Ｗ．Ｈ．フリーマン・アンド・カンパニー、ニューヨーク（１９９３）と、「タンパク質の翻訳後共有修飾（Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｖａｌｅｎｔ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」，Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓｏｎ監修、アカデミック・プレス、ニューヨーク（１９８３）中、Ｗｏｌｄ，Ｆ．，「翻訳後タンパク質修飾：将来展望（Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ）」１−１２頁；Ｓｅｉｆｔｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８２：６２６−６４６（１９９０）、およびＲａｔｔａｎら，「タンパク質合成：翻訳後修飾と老化（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ａｇｉｎｇ）」，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８−６２（１９９２）を参照されたい。用語「誘導体」には、タンパク質またはポリペプチドが分岐鎖になるか、または分岐化を伴うかまたは伴わずに環式になる化学修飾が含まれる。環式、分��鎖、および分岐鎖−環式のタンパク質またはポリペプチドは、翻訳後の天然プロセスから生じる場合があり、完全に合成の方法により作製してもよい。
【００３９】
用語「相同体」は、場合により、２つのポリペプチドのアミノ酸の位置の類似性を比較するために通常使用される標準法により決定されるように、ＮＴＰタンパク質、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ、またはＮＴＰのセグメントのアミノ酸配列において少なくとも７５％同一であるタンパク質を意味する。２つのタンパク質間の類似性若しくは同一性の度合いは既知の方法により容易に計算可能であり、それには、限定されないが、「計算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．監修，オックスフォード大学出版局、ニューヨーク、１９８８；「バイオコンピューティング：インフォーマティクスとゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」，Ｓｍｉｔｈ  Ｄ．Ｗ．監修、アカデミック・プレス、ニューヨーク、１９９３；「配列データのコンピュータ解析、第Ｉ部（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ）」，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．監修、ヒュマナ・プレス、ニュージャージー、１９９４；「分子生物学における配列解析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．アカデミック・プレス、１９８７；「配列解析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．監修、Ｍ  ストックトン・プレス、ニューヨーク、１９９１；並びに、Ｃａｒｉｌｌｏ  Ｈ．およびＬｉｐｍａｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ，Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載の方法が含まれる。同一性を決定するための好ましい方法は、検査する配列間で最大の適合（マッチ）を与えるように設計される。同一性および類似性を決定する方法は、公的に利用可能なコンピュータ・プログラムに体系化されている。
【００４０】
２つの配列間の同一性および類似性を決定するのに有用な好ましいコンピュータ・プログラム方法には、限定されないが、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２（１）：３８７（１９８４）），ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＩＮ，およびＦＡＳＴＡ，Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０）が含まれる。ＢＬＡＳＴ  Ｘプログラムは、ＮＣＢＩや他の供給元より公的に利用可能である（ＢＬＡＳＴマニュアル、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら，ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  メリーランド州ベテスダ、２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３−４１０（１９９０））。例えば、ＧＡＰ（遺伝学コンピュータ・グループ、ウィスコンシン大学、ウィスコンシン州マジソン）のようなコンピュータ・アルゴリズムを使用して、配列パーセント同一性を決定すべき２つのタンパク質若しくはポリペプチドをそれぞれのアミノ酸の最適マッチング（アルゴリズムにより決定されるような「適合スパン」）のために並列する。
【００４１】
ギャップ空白ペナルティ（平均項（ａｖｅｒａｇｅ  ｄｉａｇｏｎａｌ）の３ｘ（倍数）として計算する；「平均項」は、使用される比較マトリックスの項の平均であり；「項」は、特別の比較マトリックスによりそれぞれの完全なアミノ酸へ割り当てられるスコアまたは数である）とギャップ延長ペナルティ（これは、通常、ギャップ空白ペナルティの１／１０倍である）、並びにＰＡＭ２５０またはＢＬＯＳＵＭ６２のような比較マトリックスをアルゴリズムと一緒に使用する。標準的な比較マトリックス（ＰＡＭ２５０比較マトリックスについては、「タンパク質の配列および構造アトラス（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」第５巻、補遺３［１９７８］中：Ｄａｙｈｏｆｆら，を参照されたい；ＢＬＯＳＵＭ６２比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９［１９９２］を参照されたい）もこのアルゴリズムにより使用可能である。次いで、パーセント同一性をこのアルゴリズムにより計算する。相同体は、典型的には、ＮＴＰ、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ、ＮＴＰのセグメント、またはＨａｒｌｉｌ配列と比べて、１以上のアミノ酸置換、欠失、および／または挿入を有するものである。
【００４２】
用語「ペプチド模倣体」または「模倣体」は、ペプチドまたはタンパク質の生物学的活性を模倣するが、もはや化学的性質がペプチドではない、生物学的に活性な化合物を意味し、即ち、それはもはやペプチド結合（つまり、アミノ酸間のアミド結合）を含有しない。ここで、用語「ペプチド模倣体」は、偽性ペプチド、半ペプチド、およびペプトイドのような、性質がもはや完全にはペプチドではない分子を包含するようにより広義に使用される。この広義のペプチド模倣体の例（ここでは、ペプチド結合を欠く構造によりペプチドの一部が置き換えられている）を以下に記載する。完全に非ペプチドであれ、または部分的に非ペプチドであれ、本発明によるペプチド模倣体は、ペプチド模倣体に基づいた抗体、抗体誘導体、または抗体断片における活性基の三次元配置にきわめてよく似ている反応化学部分の空間配置を提供する。この類似の活性部位幾何学の結果として、ペプチド模倣体は、ペプチドの生物学的活性に似ている効果を生物学的システムに及ぼす。
【００４３】
本発明のペプチド模倣体は、好ましくは、三次元形状と生物学的活性の両方において、本明細書に記載のＮＴＰのセグメントに実質的に類似している。ペプチド模倣体を創製するためにペプチドを構造的に修飾する、当該技術分野で知られた方法の例には、骨格のキラル中心を転換してＤ−アミノ酸残基をもたらすことが含まれ、これは、特にＮ末端で、活性に悪影響を及ぼすことなくタンパク分解的な破壊に対して高められた安定性をもたらす。１例が論文「トリチウム化Ｄ−ａｌａ1−ペプチドＴ結合（Ｔｒｉｔｒｉａｔｅｄ  Ｄ−ａｌａ1−Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔ  Ｂｉｎｄｉｎｇ）」，Ｓｍｉｔｈ  Ｃ．Ｓ．ら，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｒｅｓ．，１５，３７１−３７９頁（１９８８）に示される。第二の方法は、ＮからＣへの鎖間イミドおよびラクタムのような、安定性のための環式構造を改変することである（ＳｍｉｔｈおよびＲｉｖｉｅｒ（監修）「ペプチド：化学と生物学（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，エスコム、ライデン（１９９１）中：Ｅｄｅら，２６８−２７０頁）。この例は、その開示がそのまま本明細書に援用される、米国特許第４，４５７，４８９号（１９８５），Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｇ．ら，に開示されるような、コンホメーションが束縛されたサイモペンチン（ｔｈｙｍｏｐｅｎｔｉｎ）様化合物において示される。第三の方法は、ＮＴＰのセグメント中のペプチド結合を、タンパク分解への抵抗性を与える偽性ペプチド結合に置換することである。
【００４４】
ペプチドの構造および生物学的活性に概して影響を及ぼさないいくつかの偽性ペプチド結合が記載されている。このアプローチの１つの例は、逆反転（ｒｅｔｒｏ−ｉｎｖｅｒｓｏ）偽性ペプチド結合に置換することである（Ｒｉｖｉｅｒ，Ｊ．Ｅ．およびＭａｒｓｈａｌｌ，Ｇ．Ｒ．（監修）「ペプチド、化学、構造、および生物学（Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」，エスコム、ライデン（１９９０）中：「生物学的に活性なサイモペンチンの逆反転類似体（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｒｅｔｒｏｉｎｖｅｒｓｏ  ａｎａｌｏｇｕｅｓ  ｏｆ  ｔｈｙｍｏｐｅｎｔｉｎ）」，Ｓｉｓｔｏ  Ａ．ら，７２２−７７３頁、およびＤａｌｐｏｚｚｏら（１９９３），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，４１：５６１−５６６，本明細書に援用される）。この修飾によれば、ペプチドのアミノ酸配列は、１以上のペプチド結合が逆反転偽性ペプチド結合に置き換えられることを除けば、上記のＮＴＰのセグメントの配列に同一であり得る。好ましくは、最もＮ末端のペプチド結合が置換される。なぜなら、こうした置換がＮ末端に作用するエクソペプチダーゼによるタンパク分解への抵抗性をもたらすからである。アミノ酸の化学基を類似構造の他の化学基で置き換えることによって、さらなる修飾を行ってもよい。生物学的活性の喪失を少しも、またはほとんど伴わずに酵素的切断に対する安定性を高めることが知られている別の好適な偽性ペプチド結合は、還元された同配体の偽性ペプチド結合である（Ｃｏｕｄｅｒら（１９９３），Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．，４１：１８１−１８４，そのまま本明細書に援用される）。
【００４５】
このように、これらペプチドのアミノ酸配列は、１以上のペプチド結合が同配体偽性ペプチド結合に置き換えられていることを除けば、ＮＴＰのセグメントの配列またはＨａｒｌｉｌ配列に同一であり得る。好ましくは、最もＮ末端のペプチド結合が置換される。なぜなら、こうした置換がＮ末端に作用するエクソペプチダーゼによるタンパク分解への抵抗性をもたらすからである。１以上の還元された同配体偽性ペプチド結合を有するペプチドの合成は、当該技術分野で知られている（Ｃｏｕｄｅｒら（１９９３），上記に引用）。他の例には、ケトメチレン若しくはメチルスルフィド結合を導入してペプチド結合を置き換えることが含まれる。
【００４６】
ＮＴＰのセグメントまたはＨａｒｌｉｌ配列のペプトイド誘導体は、生物学的活性に重要な構造決定基を保持しながらもペプチド結合を除去し、それによりタンパク分解への抵抗性を与える別のクラスのペプチド模倣体を表す（Ｓｉｍｏｎら，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：９３６７−９３７１，そのまま本明細書に援用される）。ペプトイドは、Ｎ置換グリシンのオリゴマーである。天然アミノ酸の側鎖にそれぞれ対応する、いくつかのＮ−アルキル基が記載されている（Ｓｉｍｏｎら（１９９２），上記に引用）。ＮＴＰのセグメントまたはＨａｒｌｉｌ配列のアミノ酸のいくつかまたは全部を、置き換えられるアミノ酸に対応するＮ置換グリシンに置き換えてよい。
【００４７】
用語「ペプチド模倣体」または「模倣体」には、以下に定義されるような逆Ｄ−ペプチドおよび鏡像異性体も含まれる。
用語「逆Ｄ−ペプチド」は、ＮＴＰのセグメントまたはＨａｒｌｉｌ配列のＬ−アミノ酸配列に比べて逆の順序で配置されたＤ−アミノ酸からなる生物学的に活性なタンパク質若しくはペプチドを意味する。従って、ＮＴＰのＬ−アミノ酸セグメントのカルボキシ末端残基が、このＤ−アミノ酸ペプチドのアミノ末端になる、という具合である。例えば、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ断片のＨＡＲＬＩＬは、ＬdＩdＬdＲdＡdＨdとなり、ここでＡd、Ｈd、Ｉd、Ｌd、およびＲdは、Ｌ−アミノ酸のＡ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、およびＲにそれぞれ対応するＤ−アミノ酸である。
【００４８】
用語「鏡像異性体」は、ＮＴＰのセグメントのアミノ酸配列中の１以上のＬ−アミノ酸残基が対応するＤ−アミノ酸残基で置き換えられている、生物学的に活性なタンパク質若しくはペプチドを意味する。
【００４９】
本記載を通し、用語「神経変性障害」は：
１．以下の徴候の１つ以上を特徴とする病理学的状態：脳萎縮、細胞消失、神経原線維のもつれ、アミロイド斑、および／または、組織および／または体液におけるＮＴＰの存在；
２．アルツハイマー病の疾患群、即ち、アルツハイマー病（初老性痴呆症、老人性痴呆症）；ダウン症候群に関連したアルツハイマー病；家族性アルツハイマー病；プレセニリン１、プレセニリン２、等のような突然変異による遺伝性アルツハイマー病；パーキンソン病、リューイ小体病、および脳血管系疾患のような他の中枢神経系疾患に関連したアルツハイマー病；
３．（家族性または非家族性アルツハイマー病に関連または非関連の）親コンゴ染料性脈管障害；
４．異常原線維（「アミロイド原線維」）および／または関連の非原線維アミロイド前駆体または非前駆体分子の沈着を特徴とする病理学的状態；
５．前頭側頭痴呆症、進行性核上麻痺（ＰＳＰ）、皮質脳幹神経節変性（ＣＢＤ）、およびタウ遺伝子の突然変異に関連した状態を含む、タウの異常沈着を特徴とする病理学的状態；および／または
６．その開示がそのまま本明細書に援用される米国特許第６，００１，３３１号に開示されるような他の障害および疾患。
【００５０】
本記載を通し、表現「アミロイド斑」および「アミロイド原線維」は、老人斑、神経炎性斑、アミロイド斑、アミロイド星状体、アミロイド中核、初期斑、標準斑、枯渇（バーンアウト）斑、拡散斑、陰影斑、神経原線維のもつれ、アミロイド原線維、対合らせんフィラメント、等を明示する。
【００５１】
本記載を通し、用語「哺乳動物」は、すべての哺乳動物を明示し、好ましくは、ヒツジ、ウシ、イヌ、ネコ、無尾猿、有尾猿、マウス、ラット、およびヒトを明示し、最も好ましくは、ヒトを明示する。
【００５２】
本記載を通し、表現「ＮＴＰのセグメント」、「Ｈａｒｌｉｌ配列」、および「Ｈａｒｌｉｌペプチド」は、相互交換可能的に使用される。「ＮＴＰのセグメント」、「Ｈａｒｌｉｌ配列」、または「Ｈａｒｌｉｌペプチド」が使用されるときはいつでも、本発明にはその好適な相同体、変異体、誘導体、およびペプチド模倣体が含まれる。
【００５３】
本記載を通し、表現「ＮＴＰを含有する組織」は、ＮＴＰの全部または一部を含有する組織、ＮＴＰと細胞情報伝達していて、それを含有し得るかまたは他のやり方ではそれを含有し得ない組織、ＮＴＰと接触したことがあるが、もはやそれをその原形では含有しない組織、並びに、ある時点でＮＴＰと接触する可能性がある組織を明示する。
【００５４】
本発明は、細胞死および／または組織壊死を予防する方法へ向けられる。ＮＴＰは知られていて、文献に記載されてきたが、ＮＴＰを産生する細胞以外の細胞の細胞死の原因がＮＴＰであることは、これまで知られていなかった。ある理論に束縛されるつもりはないが、本発明者は、生組織におけるＮＴＰの存在は、以前から報告されてきたように、特定の神経細胞死を示唆するだけでなく、他の生組織の細胞死を引き起こす限りにおいて、有毒でもあると考えている。本発明者は、特に生きた哺乳動物脳組織中に存在するＡＤ７Ｃ−ＮＴＰがアルツハイマー病（ＡＤ）のマーカーであり、それが存在する生組織中で細胞死および／または組織壊死を引き起こすことによってＡＤを悪化させると考えている。
【００５５】
従って、哺乳動物がＡＤに罹患すると、神経細胞死により、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを選好的に産生する遺伝子がアップレギュレートされ、それによりその部位でＡＤ７Ｃ−ＮＴＰが産生されると考える。次いで、このように産生されたＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは、その近傍にある他の生組織（例、他の神経細胞、グリア細胞、等）を破壊しはじめ、それによりこの疾患の進行を悪化させる。故に、本発明者は、例えば、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの効果を中和することが、例えば、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または改善することに役立つと考える。ＮＴＰのセグメントがＡＤ７Ｃ−ＮＴＰへ結合し、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、および／または改善することが可能であることを見出したのは驚くべきことであった。
【００５６】
ＮＴＰは既知であり、例えば、その開示が本明細書にそのまま援用される、米国特許第５，９４８，６３４号、５，９４８，８８８号、５，８３０，６７０号、および６，０１７，７０５号に記載されている。ＮＴＰを組換え的にかまたは他のやり方で作製する方法が上記の文献に開示される。ＡＤや他の関連障害および疾患を診断し得るようにＮＴＰに対する抗体を産生することも上記の文献に開示される。ＮＴＰの相同体、誘導体、模倣体、および変異体、並びに多様な供給源（例、天然、膵臓、精製、合成、または様々なｉｎ  ｖｉｔｒｏ発現系、など）由来のＮＴＰを使用して、本発明に有用なセグメントをいずれも作製可能であることが当業者には明らかであろう。
【００５７】
本発明は、細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害する方法へ向けられる。本発明には少なくとも１つのＮＴＰのセグメントと生組織を接触させることが含まれ、それにより該セグメントは、細胞死および／または組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量で存在する。ＮＴＰのセグメントは、好ましくはＡＤ７Ｃ−ＮＴＰのサブ配列であり、最も好ましくは、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの以下のリピート配列の少なくとも１つを含有する：
（ａ）４５−５１        ＴＨＡＲＬＩＬ
（ｂ）９０−９６        ＨＨＡＲＬＣＬ
（ｃ）２６３−２６９    ＭＦＡＲＬＩＬ
（ｄ）２９１−２９７    ＨＨＡＲＬＩＦ
図１を参照されたい。
【００５８】
本発明には、領域（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）のいずれかの配列を有するペプチド、またはこれらの（限定されないが、「ＨＡＲＬＭＬ」を含む）相同体、誘導体、変異体、および模倣体が含まれる。Ｈａｒｌｉｌペプチドはまた、Ｈａｒｌｉｌ配列の前または後でリンカーペプチドに追加のアミノ酸残基を有する場合がある。追加のアミノ酸残基またはリンカーペプチドは、Ｈａｒｌｉｌ配列の前および後のＮＴＰ配列に見出されるものであってよい。例えば、アミノ酸残基ＧＩＴＧＭＣＴが残基４６の前に現れ、アミノ酸残基ＹＦＦＬＶがＮＴＰ配列のアミノ酸５１の後に現れる。従って、本発明におけるＮＴＰのセグメントとして有用なＨａｒｌｉｌペプチドには、ＮＴＰペプチド：ＧＩＴＧＭＣＴＨＡＲＬＩＬＹＦＦＬＶが含まれてよい。（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）に列挙されるＨａｒｌｉｌペプチドについては、追加のアミノ酸残基は、好ましくは、ＮＴＰ配列中のこのＨａｒｌｉｌ配列に隣接するものである。好ましくは、追加のアミノ酸残基を有するＨａｒｌｉｌペプチドは、長さにおいて全２５アミノ酸残基を超えない。
【００５９】
Ｈａｒｌｉｌリピート配列は、好ましくは、ＮＴＰへ結合するユニークな特性を有する。ＮＴＰへ結合するこの能力は、Ｈａｒｌｉｌリピート配列が、ＮＴＰを含有する生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防、阻害、または改善するのに有用であることを示唆する。
【００６０】
本発明は、Ｈａｒｌｉｌ配列ペプチドとその相同体、誘導体、変異体、およびペプチド模倣体の、細胞死および／または組織壊死に関連した状態の治療のためのＮＴＰや他の分子のアフィニティー結合パートナーとしての使用に向けられる。本発明はまた、細胞死および／または組織壊死に関連した状態を治療する方法、並びに、ｂｂｂを通過することが可能である、Ｈａｒｌｉｌペプチドまたはその相同体、誘導体、変異体、およびペプチド模倣体を含有する組成物へ向けられる。
【００６１】
Ｈａｒｌｉｌペプチドとその相同体、誘導体、および変異体は、慣用のペプチド合成技術を使用して作製可能である。Ｈａｒｌｉｌペプチドの模倣体は、コンビナトリアルケミストリー技術を使用して開発することが可能である。
【００６２】
Ｈａｒｌｉｌペプチドに対応する核酸は、例えば、（ａ）標準組換え法、（ｂ）合成技術、または（ｃ）これらの組み合わせを使用して作製可能である。
Ｈａｒｌｉｌ配列は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰや他の分子へ結合する。その開示がそのまま本明細書に援用される、「神経線維タンパク質の好ましいセグメントとそれを使用する方法」と題した、出願中の米国特許出願第０９／６９７，５９０号を参照されたい。
【００６３】
本発明には、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰへ結合可能であるＨａｒｌｉｌ配列が、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する生組織中の細胞死および／または組織壊死を予防または阻害し得るという驚くべき発見が含まれる。
【００６４】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰが神経変性カスケードに参画するという証拠がある。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを標的にすることによってこのカスケードを妨害するかまたは向けなおす能力は、治療機会を提供する。例えば、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ結合部位と相互作用するＨａｒｌｉｌペプチドの能力を使用し、それによりＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの潜在的な活性部位を遮断することによって、治療的に介入することが可能になるかもしれない。
【００６５】
あるいは、本発明のＨａｒｌｉｌペプチドは、Ｈａｒｌｉｌペプチドを発現する細胞へ薬物を標的化すること、またはＨａｒｌｉｌ配列の発現をｉｎ  ｖｉｖｏで誘導する遺伝子またはワクチンを創製するのに有用であるかもしれない。
【００６６】
Ｈａｒｌｉｌ配列が作動する実際の機序はまだ知られていないが、本発明者は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する生組織へのＨａｒｌｉｌ配列の投与が、Ｈａｒｌｉｌ配列の非存在下では別な具合に生じる細胞死および組織壊死を予防および／または阻害および／または改善することを見出した。
【００６７】
「ＨＡＲＬＩＬ」部位が他の脳タンパク質と相互作用し、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰおよび／または他のＮＴＰまたは他の分子の機能性においてある役割を担い得る可能性がある。
こうしたＨａｒｌｉｌ配列、またはその機能的な相同体若しくは類似体を作製して検出する方法が、その開示がそのまま本明細書に援用される、「神経線維タンパク質の好ましいセグメントとそれを使用する方法」と題した、同時出願中の米国特許出願第０９／６９７，５９０号に記載されている。
【００６８】
本発明の文脈において特に有用であるＮＴＰのペプチドセグメントは、上記に記載され、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰのＨＡＲＬＩＬアミノ酸配列の少なくとも一部を包含するものである。有用なＨａｒｌｉｌ配列には、以下のリストより選択されるアミノ酸配列が含まれる：
（ａ）ＨＨＡＲＬ；
（ｂ）ＨＡＲＬ；
（ｃ）ＨＡＲＬＩ；
（ｄ）ＨＡＲＬＩＬ；
（ｅ）ＨＨＡＲＬＣＬ；
（ｆ）ＡＲＬＩＬ；
（ｇ）ＨＨＡＲＬＩＦ；
（ｈ）ＴＨＡＲＬＩＬ；
（ｉ）ＡＲＬＩ；
（ｊ）ＡＲＬ；
（ｋ）ＨＡＲＬＣＬ；
（ｌ）ＡＲＬＣＬ；
（ｍ）ＡＲＣＬ；
（ｎ）ＭＦＡＲＬＩＬ；
（ｏ）ＦＡＲＬＩＬ；
（ｐ）ＦＡＲＬＩ；
（ｑ）ＦＡＲＬ；
（ｒ）ＨＡＲＬＩＦ；
（ｓ）ＡＲＬＩＦ；
および、その相同体、変異体、誘導体、および模倣体。
【００６９】
上記のリストより選択される様々なペプチドとその相同体、変異体、誘導体、および模倣体は、本発明において、ＮＴＰのセグメントとして使用可能である。例えば、ペプチドはアミノ酸配列ＡＲＬＩを有し、このペプチドの３’若しくは５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１から２５までの追加アミノ酸を含んでよい。ペプチドはまた、アミノ酸配列ＨＡＲＬＩを有し、このペプチドの３’若しくは５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１から２５までの追加アミノ酸を含んでよい。さらに、ペプチドはアミノ酸配列ＦＡＲＬを有し、このペプチドの３’若しくは５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１から２５までの追加アミノ酸を含んでよい。ペプチドはまた、アミノ酸配列ＡＲＬを有し、このペプチドの３’若しくは５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１から２５までの追加アミノ酸を含んでなるものより選択してよい。本発明においてさらに別の有用なペプチドには、アミノ酸配列ＡＲＬＣを有し、このペプチドの３’若しくは５’末端のいずれかに隣接する少なくとも１から２５までの追加アミノ酸を含んでなるものが含まれる。最後に、ＮＴＰのセグメントは、Ｈａｒｌｉｌペプチドの少なくとも２つの繰り返しを含んでなる、このペプチド配列のポリマーであってよい。
【００７０】
Ｈａｒｌｉｌ配列が以下のアミノ酸配列を有するペプチドであることは、本発明においてさらにより好ましい。
１．（ＮＴＰ−１）  ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ
２．（ＮＴＰ−２）  ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ
３．（ＮＴＰ−３）  ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ
４．（ＮＴＰ−４）  ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ
５．（ＮＴＰ−５）  ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ
６．（ＮＴＰ−６）  ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ
７．（ＮＴＰ−７）  ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ
８．（ＮＴＰ−８）  ＳＨＨＡＲＬＩＬ
上記の配列は、システインを介して担体タンパク質へコンジュゲートしてよい。従って、１以上のシステイン残基の存在により、ペプチドＮＴＰ−１およびＮＴＰ−２から産生される混合コンジュゲートが生じる。故に、ペプチドＮＴＰ−５およびＮＴＰ−６では、第二のシステインをアセトアミドメチル（Ｃ3Ｈ6ＮＯ）（ＡＣＭ）で遮断した。
【００７１】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ中に同定される配列の位置を図１から見ることが可能である。Ｈａｒｌｉｌ類似体のすべてはいくらかの反応性を示したが、特に好ましいＨａｒｌｉｌ類似体は、ＮＴＰ−１、ＮＲＰ−３、およびＮＴＰ−７より選択されるものである。Ｈａｒｌｉｌ類似体ＮＴＰ−１においては、第一アミノ酸の「Ｌ」をリジンまたは「Ｋ」で置き換えてもよいことに注目すべきである。
【００７２】
Ｈａｒｌｉｌ配列、またはＮＴＰのセグメントを、好ましくは、ＮＴＰを含有する生組織と接触させる。ＮＴＰを含有する生組織、ＮＴＰに接触してＮＴＰがもはや存在しないかその原形においては存在しない生組織、またはある時点ではＮＴＰを含有する可能性がある生組織がいずれも本発明に含まれる。好ましくは、組織は、哺乳動物組織より選択される組織である。
【００７３】
本発明の態様には、ＮＴＰを含有する生組織の壊死により引き起こされる状態を治療する方法が含まれる。この文脈において、生組織の壊死と細胞死は、ＮＴＰを産生する瀕死の細胞以外の細胞の細胞死および／または組織壊死を明示する。この方法においては、こうした状態に罹患している哺乳動物へＮＴＰのセグメントまたはＨａｒｌｉｌ配列が投与される。Ｈａｒｌｉｌ配列は、生組織壊死を予防および／または阻害するのに十分な量において、そして十分な時間の間、投与される。
【００７４】
当業者は、Ｈａｒｌｉｌ配列を直接投与することの代わりに、Ｈａｒｌｉｌ配列またはその相同体、変異体、誘導体、または模倣体を、遺伝子発現（例、遺伝子治療）を介してかまたはワクチンを介して哺乳動物により産生または発現させることが可能であることを理解されよう。当業者は、Ｈａｒｌｉｌ配列、またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体の発現を誘導するのに有用な好適な遺伝子またはワクチンを、本明細書に提供されるガイドラインを使用して創製、単離、および精製することが可能である。
【００７５】
例えば、遺伝子治療は、様々な哺乳動物疾患を治療し、特定のタンパク質や他の細胞産物の産生を亢進させる方法として広い関心をひきつけてきた。遺伝子治療は、一般に、外来の遺伝物質を哺乳動物患者の細胞へ導入することによって達成される。導入された遺伝物質は、哺乳動物患者の異常（欠陥）遺伝子に置き換わるように設計可能である（「遺伝子置換療法」）か、またはいかなる欠陥遺伝子の置換もせずに、コードされるタンパク質や他の治療産物の発現用に設計可能である（「遺伝子増強法」）。多くの先天性および獲得性医学障害は様々な遺伝子産物の不十分な産生から生じるので、遺伝子治療は、治療産物をコードする外来核酸の一過性または安定した発現を介してこれらの疾患を治療する手段を提供する。
【００７６】
遺伝子治療は、哺乳動物被検者内の標的細胞の直接的な形質転換（ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子治療）によるか、または細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで形質転換した後でこの形質転換細胞を哺乳動物被検者へ埋込むこと（ｅｘ  ｖｉｖｏ遺伝子治療）のいずれかにより達成可能である。ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子治療は、本発明における使用に特に好ましい。体細胞の修復だけでなく、ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子治療はまた、遺伝子治療に広い適用がある、全身治療の領域にも使用可能であることが一般に知られている。全身治療には、標的細胞を目的のＤＮＡでトランスフェクトすること、コードタンパク質をその細胞中で発現させること、並びにその製造されたタンパク質をその後血液へ分泌する形質転換細胞の能力が関与する。
【００７７】
機械的な手段（例、核酸の標的細胞への直接注入、または粒子衝突）、組換えウイルス、リポソーム、および受容体仲介性エンドサイトーシス（ＲＭＥ）を含む多様な方法が、ｉｎ  ｖｉｖｏ形質転換を達成するために開発されてきた（概説については、Ｃｈａｎｇら，１９９４  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０６：１０７６−８４；Ｍｏｒｓｙら，１９９３  ＪＡＭＡ  ２７０：２３３８−４５；および、Ｌｅｄｌｅｙ  １９９２  Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｎｕｔｒ．１４：３２８−３７を参照されたい）。
【００７８】
Ｈａｒｌｉｌ配列またはＮＴＰのセグメント、またはその相同体、変異体、誘導体、または模倣体のｉｎ  ｖｉｖｏ発現を誘導するのに適した遺伝子およびワクチンを開発して投与する好適な方法は、例えば、米国特許第６，２１０，９１９号および６，２２５，２９０号に開示される。これら特許のそれぞれの開示は、そのまま本明細書に援用する。
【００７９】
細胞死および壊死に関連したどの状態も本発明に従って治療可能である。好ましくは、状態は、ＡＤ、ピック病、リューイ小体病、またはパーキンソン病のような神経変性疾患より、または卒中、脳腫瘍や他の脳疾患、または緑内障より選択される。
【００８０】
本発明の好ましい態様によれば、本方法には、細胞死および／または組織壊死を予防するのに十分な量の少なくとも１つのＮＴＰのセグメント（またはその相同体、誘導体、変異体、または模倣体）と生組織を接触させることが含まれる。ＮＴＰのセグメントを投与する方法には、ＮＴＰのセグメントを筋肉内、経口、静脈内、腹腔内、大脳内（実質内）、脳室内、腫瘍内、病巣内、皮内、鞘内、鼻腔内、眼球内、動脈内、局所的、経皮的に、エアゾール、注入、ボーラス注射、埋込み器具、持続放出系などにより、単独でかまたは担体へコンジュゲートして投与することが含まれる。さらに、ＮＴＰのセグメントは、上記のように、当該タンパク質を発現する遺伝子の投与により、こうした産生を誘導するワクチンの投与により、または、該セグメントをｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞、細菌、またはウイルスの導入によりｉｎ  ｖｉｖｏで発現または産生させてよい。
【００８１】
神経系障害や他の脳関連障害の治療は、動物または患者における神経系の機能若しくは機能不全に影響を及ぼす薬物を投与することによって達成可能である。典型的には、こうした薬物は、経口によるかまたは全身経路により、末梢適用によって投与される。血液脳関門（ｂｂｂ）を通過することが可能である薬物もあれば、ｂｂｂを効率的に通過しないか、またはまったく通過せず、脳へ直接投与するときしか有効でない薬物もある。本明細書で使用する用語「血液脳関門」または「ｂｂｂ」は、厳格な意味でのｂｂｂだけでなく、血液脊髄関門も意味する。脳血管の内皮、基底膜、および神経膠細胞からなる血液脳関門は、物質の脳への浸透を制限するように作用する。時々、ｂｂｂの構造は、内皮若しくは毛細血管関門と上衣関門という２つの成分へ細分される。Ｂａｎｋｓ，Ｗ．Ａ．，Ｋａｓｔｉｎ，Ａ．Ｊ．，Ｂａｒｒｅｒａ，「中枢神経系へのペプチドの搬送：ジレンマと戦略（Ｄｅｌｉｖｅｒｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ：Ｄｉｌｅｍｍａｓ  ａｎｄ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ）」，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８：１３４５−１３５０（１９９１）。
【００８２】
ｂｂｂを通過する物質浸透の本質はまだ決定されていないが、サイトカイン、トランスフェリン、エンケファリン、およびエンドルフィンのような脳機能のレギュレーターの多くは血管からｂｂｂを通って脳へ通過し得ることが知られている。Ｒａｅｉｓｓｉ，Ｓ．，Ａｕｄｕｓ，Ｊ．，「δ睡眠誘発ペプチドに対する血液脳関門透過性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ特性決定（Ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ｄｅｌｔａ  ｓｌｅｅｐ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ）」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈｙ．４１：８４８−８５２（１９８９）；Ｚｌｏｋｏｖｉｃｈ，Ｂ．，Ｓｕｓｉｅ，Ｖ．Ｔ．，Ｄａｖｓｏｎ，Ｈ．Ｂｅｇｌｅｙ，Ｄ．Ｊ．，Ｊａｎｋｏｖ，Ｒ．Ｍ．，Ｍｉｔｒｉｖｉｃ，Ｂ．Ｍ．，Ｌｉｐｏｖａｃ，Ｍ．Ｎ．，「血管灌流モルモット脳の血液脳関門でのδ睡眠誘発ペプチド（ＤＳＩＰ）の飽和可能機序（Ｓａｔｕｒａｂｌｅ  ｍａｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｄｅｌｔａ  ｓｌｅｅｐ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ＤＳＩＰ）  ａｔ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖａｓｃｕｌａｒｌｙ  ｐｅｒｆｕｓｅｄ  ｇｕｉｎｅａ  ｐｉｇ  ｂｒａｉｎ）」，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １０：２４９−２５４（１９８９）；および、Ｚｌｏｋｏｖｉｃｈ，Ｂ．，「血液脳関門でのペプチド相互作用を研究するためのｉｎ  ｖｉｖｏアプローチ（Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  ｓｔｕｄｙｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ａｔ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ）」，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．１３：１８５−２０１（１９９０）．しかしながら、アデノシン、β−エンドルフィン、内因性ペプチドの合成類似体のような、中枢神経系（またはＣＮＳ）に影響を及ぼすことが可能である多くの物質、並びにある種の興奮性および阻害性アミノ酸や栄養因子は、ｂｂｂをわずかに通過するか、またはまったく通過しない。Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．Ｓｗａｎ，Ｒ．Ｗ．，Ｌｉ，Ｃ．Ｈ．，「β−エンドルフィン：ラットおよびウサギにおけるトリチウム化ペプチドの静脈内注射後の安定性、クリアランス行動、および中枢神経系へのエントリー（β−Ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ：Ｓｔａｂｉｂｉｌｉｔｙ，ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ｂｅｈａｖｉｏｒ  ａｎｄ  ｅｎｔｒｙ  ｉｎｔｏ  ｔｈｅ  ｃｅｎｔｒａｌ  ｎｅｒｖｏｕｓ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｒｉｔｉａｔｅｄ  ｐｅｐｕｔｉｄｅ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ａｎｄ  ｒａｂｂｉｔｓ）」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４５８８−４５９１（１９８０）；Ｌｅｖｉｎ，Ｅ．Ｒ．，Ｆｒａｎｋ，Ｈ．Ｊ．Ｋ．，Ｗｅｂｅｒ，Ｍ．Ａ．，Ｉｓｍａｉｌ，Ｍ．，Ｍｉｌｌｓ  Ｍ．，「心房性ナトリウム利尿因子による血液脳関門の浸透に関する研究（Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｂｙ  ａｔｒｉａｌ  ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４７：１２２６−１２３１（１９８７）；Ｓａｋａｎｅ，Ｔ．，Ｔａｎａｋａ，Ｃ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ａ．，Ｈａｓｈｉｄａ，Ｍ．，Ｓｅｓａｋｉ，Ｈ．，Ｕｅｄａ，Ｈ．，Ｔａｋａｇｉ，Ｈ．，「ポリソルベート８０の脳取込みに及ぼす効果とＤ−ｋｙｏｔｏの鎮痛効果（Ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０  ｏｎ  ｂｒａｉｎ  ｕｐｔａｋｅ  ａｎｄ  ａｎａｌｇｅｓｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｄ−ｋｙｏｔｏ）」，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．５７：７７−８３（１９８９）．現在のところ、ｂｂｂ浸透性がないかまたはｂｂｂ浸透性が乏しい薬物は、直接のＣＮＳ注入によるか、または制御放出ポリマーの埋込みによってのみ与えることができる（例えば、米国特許第４，８８３，６６６号、Ｓａｂｅｌら，を参照されたい）。
【００８３】
従来の薬物療法の限界のいくつかを克服する１つのやり方は、ｂｂｂを通過する薬物の相対量を増加させることである。これは、ある薬物または診断物質の末梢用量を減らしながら、ｂｂｂを通過する薬物の量を増やすことができれば、所望の効果を脳中で維持すると同時に、薬物の末梢での副作用もさほど重篤でなくなるという考え方である。ｂｂｂを通過する薬物浸透を高めるのに有効なものとしていくつかのアプローチが記載されてきた。
【００８４】
１つのアプローチは、ｂｂｂそのものの機能を改変させることであった。例えば、浸透剤を末梢より（静脈内注射によるようにして）与えると、ｂｂｂの開口をもたらす。さらに、ＣＮＳに作用する薬物には、他の物質へのｂｂｂの透過性を変化させ得るものがある；例えば、コリン模倣性のアレコリンは、ｂｂｂを通過する薬物浸透の変化を誘発すると報告された。Ｓａｉｊａ，Ａ．，Ｐｒｉｎｃｉ，Ｐ．，Ｄｅ  Ｐａｓｑｕａｌｅ，Ｒ．，Ｃｏｓｔａ，Ｇ．，「ハロペリドールではなく、アレコリンは、ラットの血液脳関門の透過性に変化をもたらす（Ａｒｅｃｏｌｉｎｅ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ  ｐｒｏｄｕｃｅｓ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ）」，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａ．４２：１３５−１３８（１９９０）．
ｂｂｂの透過性を改変させるために投与可能である他の薬物は、米国特許第５，０５９，４１５号および５，１２４，１４６号（いずれもＥ．Ａ．Ｎｅｕｗｅｌｔへ発行）に開示される。ブラジキニンは、こうした効果のある１つの特定の薬物である（米国特許第５，１１２，５９６号、Ｍａｌｆｒｏｙ−Ｃａｍｉｎｅへ発行）。別の方法は、Ａ−７やその配座類似体のような易透過剤（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅｒ）ペプチドを投与することを含む（ＷＯ９２／１８５２９，Ｊ．Ｗ．Ｋｏｚａｒｉｃｈらの出願）。ｂｂｂを開けるためにＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（肺炎連鎖球菌）のような真性細菌の精製された細胞壁若しくは細胞壁断片の非経口注射液を投与する、Ａ．ＴｏｍａｓｚおよびＥ．Ｔｕｏｍａｎｅｎ（ＷＯ９１／１６０６４）による比較的侵襲的な方法が提唱された。
【００８５】
米国特許第５，２６０，２１０号（Ｌ．Ｌ．Ｒｕｂｉｎらへ発行）は、サイクリックＡＭＰ濃度を低下させるかまたはそれに緩衝するか、またはサイクリックＧＭＰ濃度を高める剤を投与することによって血液脳関門の透過性を高める方法を開示する。
【００８６】
別のアプローチは、薬物分子そのものの修飾である。例えば、タンパク質のような高分子はｂｂｂをまったく通過しないか、またはかろうじて通過するか、またはタンパク質の効力に不都合に影響する改変を伴って通過する。例えば、この高分子の活性部位、即ち、生物学的に望ましいイベントの引き金となる分子の部分をはじめに単離してから、この活性部位のみを使用することが可能である。大きさは、ｂｂｂの透過を可能にする要因の１つであるので、より小さい分子がｂｂｂを通過し得るように、縮小したサイズが使用可能である。ｂｂｂの通過を試みる高分子への他の修飾には、タンパク質を糖化（ｇｌｙｃａｔｅ）することによりそのｂｂｂ浸透性を亢進させること、またはプロドラッグを形成させることが含まれる。米国特許第５，２６０，３０８号（Ｊ．Ｆ．ＰｏｄｕｓｉｏおよびＧ．Ｌ．Ｃｕｒｒａｎへ発行）はタンパク質の糖化について論じ、一方、米国特許第４，９３３，３２４号およびＷＯ８９／０７９３８（いずれも、Ｖ．Ｅ．Ｓｈａｓｈｏｕａの出願）はプロドラッグの形成を開示する。これらのプロドラッグは、脂肪酸担体とそれ自身ではｂｂｂを通過することができない神経活性薬から形成される。同様の系がＷＯ９８／０７９３８に開示される。
【００８７】
さらに別のアプローチは、有効成分をマトリックス系から放出する制御放出ポリマーを神経組織へ直接埋込むことである。しかしながら、このアプローチは侵襲的であり、脳や脊髄へ直接埋込むならば、外科的介入を必要とする（Ｓａｂｅｌら，米国特許第４，８８３，６６６号；および、Ｓａｂｅｌら，米国特許出願第０７／４０７，９３０号を参照されたい）。また、その開示がそのまま本明細書に援用される、米国特許第５，８００，３９０号に開示されるように、組成物を脳の内側部分へ直接投与することも知られている。上記の方法は、持続放出の固形調製物および半固形調製物を脳組織へ直接搬送することを可能にする。
【００８８】
これらの限界を克服するために、リポソーム、赤血球ゴースト、抗体コンジュゲート、およびモノクローナル抗体コンジュゲートのような薬物担体系を使用する別のアプローチが試されてきた。標的化ドラッグ・デリバリー（薬物搬送）の主要な問題の１つは、注射された担体が細網内皮系（ＲＥＳ）により、特に肝臓および脾臓中のマクロファージにより速やかにオプソニン処置をされて取込まれることである。この障害は、リポソームの場合は、ホスファチジルイノシトール、モノシアロガングリオシド、またはスルホガラクトシルセラミドのようないわゆる「偽装（ｓｔｅａｌｔｈ）」脂質の取込みにより一部克服することが可能である。
【００８９】
米国特許第５，１８２，１０７号および５，１５４，９２４号（いずれもＰ．Ｍ．Ｆｒｉｄｅｎへ発行）は、薬物を抗体とコンジュゲートする方法を教示し、ここで抗体は、トランスフェリン受容体と反応する。トランスフェリン受容体は、脳毛細血管の内皮細胞に位置し、それにより神経成長因子のような薬物を、ｂｂｂを通して輸送することができる。米国特許第５，００４，６９７号（Ｐａｒｄｒｉｄｇｅへ発行）は、特定の等電点を有するカチオン化抗体を提供することによって、こうした抗体−コンジュゲート法を改善する（ＰａｒｄｒｉｄｇｅによるＷＯ８９／０１３４３も参照されたい）。
【００９０】
別のアプローチは、活性剤をコンジュゲートするキメラペプチドを創製することである（米国特許第４，８０１，５７５号、やはりＰａｒｄｒｉｄｇｅへ発行）。こうした系については、米国特許第４，９０２，５０５号（ＰａｒｄｒｉｄｇｅおよびＳｃｈｉｍｍｅｌへ発行）でもさらに考察され、ここでは、ヒストンのようなキメラペプチドがトランスサイトーシスによりｂｂｂを通過することが可能である。
【００９１】
米国特許第５，１８７，１５８号および５，０１７，５６６号（いずれもＮ．Ｓ．Ｂｏｄｏｒへ発行）は、脳特異的な薬物搬送法を開示し、ここでは中枢作用性の薬物が、ドーパミンのようなジヒドロピリジン反応−ピリジン塩酸化還元担体の還元された生物酸化可能なリポイド型とともに投与される（米国特許第４，８８０，８１６号（やはりＢｏｄｏｒへ発行）も参照されたい）。
【００９２】
遺伝物質を脳へ搬送するには、かなり侵襲的なアプローチが採られる。これは、例えば、ｂｂｂを化学的に破壊してから、ｂｂｂを通して遺伝子を搬送するウイルスを使用することによってなされる（米国特許第４，８６６，０４２号（Ｅ．Ａ．Ｎｅｕｗｅｌｔへ発行）を参照されたい）。ここでは、矯正的な遺伝物質をウイルスへ取込ませてから、このウイルスを血流へ注射する。
【００９３】
最後に、ｂｂｂを通過して薬物を搬送するさらに別の担体系は、Ｆ．Ｄ．ＣｏｌｌｉｎｓおよびＲ．Ｃ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（ＷＯ９１／０４０１４）により開示されるように、リポソームの使用である。ここでは、ｂｂｂを通過して特定のリガンドを輸送する特定の内因性脳輸送系へリポソームを標的化する。
【００９４】
別のアプローチが米国特許第６，１１７，４５４号（Ｋｒｅｕｔｅｒらへ発行）に開示される。Ｋｒｅｕｔｅｒ特許の主題事項には、広範囲の薬物の薬物担体（または標的指向分子）として界面活性剤でコートしたナノ粒子を使用してｂｂｂを通過する薬物または診断剤の浸透を高めるための方法、組成物、および薬物標的指向系が含まれる。
【００９５】
別のアプローチは、薬物を鼻腔内に投与して、脳への直接アクセスを可能にし、血流を回避することである。これは、３つの神経ペプチド、メラノコルチン、バソプレッシン、およびインスリンでは実験モデルにおいて成功裡になされた：Ｂｏｒｎ  Ｊ  ら，「吸鼻性の神経ペプチド：ヒト脳への経鼻アプローチ（Ｓｎｉｆｆｉｎｇ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ：ａ  ｔｒａｎｓｎａｓａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｂｒａｉｎ）」，Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  アドバンス・オンライン・パブリケーション：２００２年５月６日、ＤＯＩ：１０．１０３８／ｎｎ８４９。
【００９６】
経口投与用の固形剤形には、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が含まれる。こうした固形剤形では、通常、活性化合物を以下の少なくとも１つと混合する：（ａ）クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムのような、１以上の不活性賦形剤（または担体）；（ｂ）デンプン、乳糖、スクロース、グルコース、マンニトール、および珪酸のような、充填剤または増量剤；（ｃ）カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシアのような、結合剤；（ｄ）グリセロールのような、加湿剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔｓ）；（ｅ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合珪酸塩、および炭酸ナトリウムのような、崩壊剤；（ｆ）パラフィンのような、溶解遅延剤；（ｇ）四級アンモニウム化合物のような、吸収促進剤；（ｈ）アセチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロールのような、湿潤剤；（ｉ）カオリンおよびベントナイトのような、吸着剤；および（ｊ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはこれらの混合物のような、滑沢剤。カプセル剤、錠剤、および丸剤では、剤形が緩衝剤も含んでよい。
【００９７】
経口投与用の液体剤形には、製剤的に許容される乳剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。液体剤形は、活性のあるＨａｒｌｉｌ配列化合物に加えて、水または他の溶媒、可溶化剤、および乳化剤のような当該技術分野で通常使用される不活性希釈剤を含んでよい。例示の乳化剤は、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油のようなオイル、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物、等である。こうした不活性希釈剤以外に、組成物には、湿潤剤、乳化および懸濁剤、甘味剤、芳香剤、および発香剤のようなアジュバントも含めてよい。
【００９８】
ＮＴＰのセグメントを投与する別の方法は、経皮または経皮膚的（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）経路による。こうした態様の１つの例は、パッチの使用である。特に、パッチは、例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、または綿実油とＤＭＳＯの混合物中のＮＴＰのセグメントの微細懸濁液を用いて調製し、治療部位から離れた哺乳動物の皮膚と接触させることが可能である。組成物は、皮膚ポケットの内側に存在してよい。他の媒体または他の溶媒および固形支持体とその混合物も、同様に機能するだろう。パッチは、ＮＴＰのセグメントを溶液または懸濁液の型で含有することが可能である。次いで、例えば、皮膚にひだを作り、縫合し、クリップ、または他の固定器具により皮膚を一緒に固定することによって形成される患者の皮膚ポケットへパッチを挿入することにより、それを患者の皮膚へ適用することが可能である。このポケットは、皮膚との継続的な接触が哺乳動物の干渉を受けずに確保されるようなやり方で利用されるべきである。皮膚ポケットを使用すること以外に、皮膚と接触したパッチのしっかりとした位置を確実にするどんな器具を使用してもよい。例えば、接着ガーゼ包帯を使用してパッチを皮膚上に固定してよい。
【００９９】
本発明の組成物にある有効成分の実際の投与量レベルは、特別の組成物と投与の方法に対して望ましい組織壊死阻害性の治療応答を得るのに有効であるＮＴＰのセグメント含有組成物を得るために変動する場合がある。故に、選択される投与量レベルは、所望の治療効果、投与の経路、所望の治療期間、および他の要因に依存する。
【０１００】
ヒトを含む哺乳動物では、体表面積に基づいて有効量を投与することが可能である。様々な大きさの動物、種、およびヒトへの投与量の相互関係（ｍｇ／体表面積（Ｍ2）に基づく）が、Ｅ．Ｊ．Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．，５０（４）：２１９（１９６６）に記載されている。体表面積は、個体の身長および体重から近似的に決定可能である（例えば、「科学表（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔａｂｌｅｓ）」、ガイギー・フェーマシューティカルズ、ニューヨーク州アーズリィ、５３７−５３８頁を参照されたい）。
【０１０１】
宿主へ投与されるＮＴＰのセグメントの全１日量は、単回用量または分割用量であってよい。投与単位組成物は、１日用量を構成するために使用可能であるような、そうした量のそうしたまとまり（ｓｕｂｍｕｌｔｉｐｌｅｓ）を含有してよい。しかしながら、特別な患者への特定の用量レベルは、体重、一般健康状態、性別、食事、投与の時間および経路、投与薬物の効力、吸収および排泄の速度、他の薬物との組み合わせ、および治療される特別な疾患の重症度を含む、様々な要因に依存するものである。
【０１０２】
本発明のＮＴＰのセグメント含有組成物は、好ましくは、生きた脳組織を治療するために、ＮＴＰのセグメントが血液脳関門を通過することを可能にする成分を含有する。上記の多様な成分はいずれもセグメントが血液脳関門を通過することを可能にするために使用可能である。例えば、ＮＴＰのセグメントは、血液脳関門を横断するほどに小さい場合がある。この場合、追加の成分は必要とされないだろう。
【０１０３】
ＮＴＰのセグメントは、米国特許第５，２６０，３０８号に開示されるように、ｂｂｂの透過性を高めるために糖化されるか、または米国特許第４，９３３，３２４号およびＷＯ８９／０７９３８に開示されるように、プロドラッグへ形成してもよい。これらのプロドラッグは、好ましくは、脂肪酸担体と、それ自身ではｂｂｂを通過し得ないＮＴＰのセグメントから形成される。
【０１０４】
代わりのアプローチは、ＮＴＰのセグメントをマトリックス系から神経組織中へ直接放出する制御放出ポリマーの埋込みである（Ｓａｂｅｌら，米国特許第４，８８３，６６６号；およびＳａｂｅｌら，米国特許出願第０７／４０７，９３０号を参照されたい）。リポソーム、赤血球ゴースト、抗体コンジュゲート、およびモノクローナル抗体コンジュゲートのような薬物担体系を使用することも可能である。本発明のこの態様によれば、ホスファチジルイノシトール、モノシアロガングリオシド、またはスルホガラクトシルセラミドのようないわゆる「偽装」脂質が、上記の抗体および抗体コンジュゲートを含有するリポソームを形成するために使用可能である。
【０１０５】
米国特許第５，１８２，１０７号および５，１５４，９２４号に開示されるように、ＮＴＰのセグメントは、トランスフェリン受容体と反応する抗体とコンジュゲートさせることが可能である。トランスフェリン受容体は、脳毛細血管の内皮細胞に位置し、それにより神経成長因子のような薬物、またはＮＴＰのセグメントを、ｂｂｂを通して輸送する。上記に記載のＮＴＰのセグメント−抗体コンジュゲートは、米国特許第５，００４，６９７号およびＷＯ８９／０１３４３に開示されるように、特定の等電点を有するカチオン化抗体を提供することによって、さらに向上させることが可能である。
【０１０６】
本発明の別の態様には、米国特許第４，８０１，５７５号に開示されるように、ＮＴＰの活性セグメントがコンジュゲートされるキメラペプチドを創製することが含まれる。キメラペプチドは、好ましくはヒストンであり、これは、米国特許第４，９０２，５０５号に開示されるように、トランスサイトーシスによりｂｂｂを通過することが可能である。本発明のさらなる態様には、米国特許第４，８８０，８１６号、５，１８７，１５８号、および５，０１７，５６６号に開示されるように、ドーパミンのようなジヒドロピリジン反応−ピリジン塩酸化還元担体の還元された生物酸化可能なリポイド型と一緒にＮＴＰのセグメントを提供することが含まれる。
【０１０７】
ＮＴＰのセグメントを脳へ搬送するために、別のアプローチも採ってよい。これは、米国特許第４，８６６，０４２号に開示されるように、ｂｂｂを化学的に破壊してから、ｂｂｂを通してＮＴＰのセグメントを搬送するウイルスを使用することによってなし得る。ここでは、矯正的な遺伝物質をウイルスへ取込ませてから、このウイルスを血流へ注射する。ｂｂｂを通過してＮＴＰのセグメントを搬送するために使用可能であるさらに別の担体系は、Ｆ．Ｄ．ＣｏｌｌｉｎｓおよびＲ．Ｃ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ（ＷＯ９１／０４０１４）により開示されるように、リポソームの使用である。ここでは、好ましくは、ｂｂｂを通過して特定のリガンドを輸送する特定の内因性脳輸送系へリポソームを標的化する。米国特許第６，１１７，４５４号に開示されるように、界面活性剤でコートしたナノ粒子も、本発明のＮＴＰのセグメントがｂｂｂを通過するその浸透を高めるための薬物担体（または標的指向分子）として使用可能である。
【０１０８】
別のアプローチは、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼを使用して血漿レベルのＮＴＰのセグメントを還元し、ＮＴＰのセグメントのｂｂｂを通過する輸送を可能にすることである。こうしたアプローチは、その開示がそのまま本明細書に援用される、米国特許第５，６９５，７５１号により詳しく記載されている。
【０１０９】
本発明による別のアプローチは、ＮＴＰのセグメントを含んでなる組成物を局所的に投与することである。組成物を脳の内側部分へ投与するのに有用な器具が、例えば、その開示がそのまま本明細書に援用される、米国特許第５，８００，３９０号に記載されている。持続放出の固形調製物および半固形調製物を脳組織へ直接投与してよい。こうした投与は、場合により頭部の中に埋込まれるこうした脳内器具の針状部分を、ガイドの遠位端を投与の部位に位置づけるように挿入することによって達成可能である。
【０１１０】
細胞死および／または組織壊死に関連した状態に罹患している哺乳動物への投与に好ましい本発明の組成物は、ＮＴＰのセグメントと、ＮＴＰのセグメントがｂｂｂを通過することを可能にする成分を含有する。本発明の他の好ましい組成物には、ＮＴＰのセグメントを発現する遺伝子と、遺伝子がｂｂｂを通過することを可能にする成分が含まれる。本発明の追加の好ましい組成物には、ＮＴＰのセグメントの発現を誘導するワクチンと、ワクチンがｂｂｂを通過することを可能にする成分が含まれる。
【０１１１】
本発明において、生組織に接触するＮＴＰのセグメントの量は、細胞死および／または組織壊死を阻害、予防、および／または改善するのに十分な量であることが好ましい。当業者は、本明細書に提供されるガイドラインを使用して、特定の量を決定することができる。ＮＴＰのセグメントが存在せず、細胞死が抑制されていない対照に比較して、細胞死および／または組織壊死を５０％より多く抑制するのに十分なＮＴＰのセグメントが投与されることが好ましい。より好ましくは、ＮＴＰのセグメントが存在せず、細胞死または組織壊死が抑制されていない対照に比較して、細胞死または組織壊死を６０％より多く、さらにより好ましくは７０％より多く、そして最も好ましくは７５％より多く抑制するためにＮＴＰのセグメントが投与される。
【０１１２】
こうした量は、特別の組織の種類、使用するＮＴＰのセグメント、並びにＮＴＰまたは他の分子標的の量に常に依存するものである。上記の米国特許第５，９４８，６３４号、５，９４８，８８８号、５，８３０，６７０号、および６，０７１，７０５号のいずれにも開示される方法を使用して、存在するＮＴＰまたは他の分子標的の相対量を推定してから、上記の米国特許に開示される供給源のいずれかのような様々な供給源から入手される哺乳動物組織を使用する一連のｉｎ  ｖｉｔｒｏ実験を実施し、ＮＴＰまたは他の分子標的の組織中の量を決定してから、必要な度合いの細胞死または組織壊死の予防（即ち、好ましくは、対照に比較したときに６０％より大きい）を得るために求められる必要なＮＴＰのセグメントの量を決定することができる。当業者は、本明細書に提供されるガイドラインを使用するだけでなく、当該技術分野で知られた技術を使用して、これらの実験を行うことが可能である。
【０１１３】
次いで、哺乳動物へ投与すべきＮＴＰのセグメントの量が、哺乳動物の体重と組織への予測される搬送量に基づいて容易に決定可能である。哺乳動物脳組織へ搬送されることが予測されるＮＴＰのセグメントの量は、ＮＴＰのセグメントがｂｂｂを通過することを可能にするために利用される特別の機序に依存する。同じことは、ＮＴＰのセグメントを発現する遺伝子の投与と、ＮＴＰのセグメントの発現または産生を誘導するワクチンの投与にもあてはまる。また、当業者は、そのまま本明細書に援用される上記特許に記載の技術を使用して、そして上記特許と本明細書に提供されるガイドラインを使用して、哺乳動物へ投与すべき遺伝子、ワクチン、ＮＴＰのセグメントの適正な用量を決定することが可能である。
【０１１４】
以下の実施例は、本発明を例示するために提供する。しかしながら、これらの実施例に記載される特定の条件または詳細事項に本発明は制限されないと理解されるべきである。
【実施例１】
【０１１５】
実施例１
本実施例は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの存在による生組織中（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の細胞死を明示する。
【０１１６】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは、米国特許第５，９４８，６３４号、５，９４８，８８８号、５，８３０，６７０号、および６，０７１，７０５号のいずれかに概説される手順に従って入手した。
【０１１７】
８匹の正常ラットの皮膚および皮下に、それぞれ３つの異なる病巣（ｆｏｃｉ）において、プラスチックシリンジからステンレス鋼２６ゲージ針を通して搬送される、生理食塩水中０．１〜１．０μｇ／ｍＬの濃度の精製組換えＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを注射した。
【０１１８】
動物を２４時間観察し、２４時間目に無痛的に屠殺した。２４個の浸潤病巣を切除し、１０％ホルマリンに固定し、パラフィンに埋込み、標準的な組織病理法により染色して検査した。
【０１１９】
対照ラットの類似群には、（１）生理食塩水中のウシ血清アルブミン、（２）正常ヒト血清、および（３）生理食塩水を注射し、上記と同じように検査して屠殺し、注射の切除病巣を上記のように処理した。
【０１２０】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの注射は、すべての実施例において、注射部位に組織の急性壊死をもたらした。この壊死は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを注射した部位にある筋肉組織、皮下結合組織、および真皮において明らかである。２４時間の時点で、細胞は色が薄くなり、萎縮し、壊死したように見え、炎症細胞を伴う浸潤が存在する。この壊死は注射の領域に相関し、注射部位の先へ広がるようには見えない。
【０１２１】
対照は壊死や細胞損失の証拠を示さなかった。対照の注射には、軽度〜ごくわずかな急性炎症と針による局所性の微量出血があった。
【実施例２】
【０１２２】
実施例２
本実施例の目的は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ神経線維タンパク質のいくつかのＨａｒｌｉｌ配列を同定し、そのＡＤ７Ｃ−ＮＴＰとの反応性を決定することであった。
【０１２３】
以下のＨａｒｌｉｌ配列を合成し（シンペップ［Ｓｙｎｐｅｐ］、カリフォルニア州ダブリン）、マレイミド活性化ウサギＩｇＧ（ジャクソン・イムノリサーチ、ペンシルヴェニア州ウェストグローブ）へコンジュゲートし、そのＮＴＰ免疫反応性について評価した。ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰの９０−９６ＨＨＡＲＬＣＬ配列の前または後に出現する、このタンパク質配列の繰り返し部分であるリンカーを加えた。
【０１２４】
１．（ＮＴＰ−１）  ＬＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＲＮＲＶ
２．（ＮＴＰ−２）  ＬＡＲＬＣＬＡＮＦＣＧＮＮＮＶ
３．（ＮＴＰ−３）  ＣＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＭ
４．（ＮＴＰ−４）  ＨＨＡＲＬＰＬＡＮＦＣＧ
５．（ＮＴＰ−５）  ＲＴＧＨＨＡＲＬＣＬＡＮＦＣ
６．（ＮＴＰ−６）  ＣＥＳＡＲＹＲＴＧＨＨＡＲＬＣ
７．（ＮＴＰ−７）  ＤＮＴＨＨＡＲＬＩＬ
８．（ＮＴＰ−８）  ＳＨＨＡＲＬＩＬ
担体タンパク質へのコンジュゲーションは、システインを介した。従って、ペプチドＮＴＰ−１およびＮＴＰ−２は、１以上のシステイン残基があるために、混合コンジュゲートの結果を生じた。故に、ペプチドＮＴＰ−５およびＮＴＰ−６では、第二のシステインをアセトアミドメチル（Ｃ3Ｈ6ＮＯ）（ＡＣＭ）で遮断した。
【０１２５】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ中に同定される配列の位置を図１に見ることが可能である。上記のように、Ｈａｒｌｉｌペプチドの相同体、誘導体、模倣体、および変異体も本発明の範囲に含まれる。本実施例の相同ペプチドの構築には、相同アミノ酸を使用した。使用する置換の判断基準は電荷および／またはサイズであった。従って、ＮＴＰペプチド３においてシステインにメチオニンを代用する選択は、これら２つのアミノ酸間の全体的な類似性とこの特別なアミノ酸のストレッチから反応性システインを除去する欲求に基づいた。システインにプロリンを代用する選択は、それがタンパク質中にあってシステインがジスルフィド連結にある場合のペプチドのコンホメーション型がこれにより模倣できるかどうかを見るための試みであった。
【０１２６】
アフィニティー相互作用に影響を及ぼすかまたはそれを試験するための当業者に知られた他の変化には、限定されないが、例えば、ロイシンを、イソロイシン、バリン、アラニン、またはグリシンのような他の疎水性アミノ酸と相互交換すること；酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸を相互交換すること；ヒスチジンをフェニルアラニンと相互交換して、電荷対空間の効果を決定すること；アスパラギンをアスパラギン酸と、またはグルタミンをグルタミン酸と相互交換して電荷対空間の効果を評価すること；並びに、セリンをスレオニンと、スレオニンをシステインと、アスパラギン酸をグルタミン酸と、アルギニンをリジンまたはヒスチジンと、そしてチロシンをトリプトファンまたはフェニルアラニンと相互交換することが含まれる。隣接配列へ導入される変化を行って、ペプチドをより非塩基性または疎水性にした。
【実施例３】
【０１２７】
実施例３
本実施例は、ＮＴＰへ結合するＮＴＰのセグメント、またはその相同体、変異体、模倣体、または誘導体を、ＮＴＰを含有する組織へ投与することによって生組織の壊死を（ｉｎ  ｖｉｖｏで）予防および／または阻害することを明示する。
【０１２８】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰは、実施例１において上記に記載されるようにして入手した。
上記の実施例２に従って調製したＨａｒｌｉｌ配列のＮＴＰ−１、ＮＴＰ−３、およびＮＴＰ７を本実施例に使用した。
【０１２９】
組換えＡＤ７Ｃ−ＮＴＰサンプル（１００ｎｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ）を、上記のＨａｒｌｉｌ配列とともに室温で５分〜１時間インキュベートしてから、実施例１に記載のようにラットへ注射した。
【０１３０】
あるいは、Ｈａｒｌｉｌ配列の溶液を、１マイクログラム／ｍＬ〜１ミリグラム／ｍＬの範囲の濃度で調製した。組換えＡＤ７Ｃ−ＮＴＰを含有する溶液も、Ｈａｒｌｉｌ配列の添加なしに、上記のように調製した。約１００マイクロリットルのＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ溶液と約１００マイクロリットルのＨａｒｌｉｌ溶液を動物に注射した。
【０１３１】
動物を２４時間観察し、２４時間目に無痛的に屠殺した。２４の個別の浸潤病巣を切除し、１０％ホルマリンに固定し、パラフィンに埋込み、標準的な組織病理法により染色して検査した。
【０１３２】
対照ラットの類似群には、（１）実施例１に記載のＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独、（２）生理食塩水中のウシ血清アルブミン、（３）正常ヒト血清、および（４）生理食塩水を注射し、上記と同じように検査して屠殺し、注射の切除病巣を上記のように処理した。
【０１３３】
ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独の対照注射は、実施例１に記載されるように、組織壊死をもたらした。ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、正常ヒト血清、および生理食塩水は、壊死や細胞損失の証拠を示さなかった。上記の対照注射には、軽度〜ごくわずかな急性炎症と針による局所性の微量出血があった。
【０１３４】
Ｈａｒｌｉｌ配列のＮＴＰ−１、ＮＴＰ−３、およびＮＴＰ−７のそれぞれと一緒に注射したＡＤ７Ｃ−ＮＴＰサンプルは、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ単独で注射した対照サンプルに比べて、組織壊死の９５％を超える抑制を示した。微小結節形成を伴う炎症細胞病巣の局所性の小結節が時々存在したが、これはおそらくＡＤ７Ｃ−ＮＴＰとＨａｒｌｉｌ配列の凝集物であるように見えた。全体的な組織損傷は、ＡＤ７Ｃ−ＮＴＰだけを注射した対照と比べると、ＮＴＰのセグメント（またはＨａｒｌｉｌ配列）の投与により＞９５％抑制された。
【０１３５】
本発明を特に好ましい態様および実施例を参照にして詳しく記載したが、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更を本発明に対してなし得ることを理解されよう。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】図１は、完全なＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ配列と完全なＡＤ７Ｃ−ＮＴＰ配列内のＨａｒｌｉｌ配列の位置を示す（ｄｅ  ｌａ  Ｍｏｎｔｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５５：１０３８−１０５０（１９９６））。
【図２】図２は、１２２アミノ酸の神経線維タンパク質の完全なアミノ酸配列（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列４０；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４７）を示す。
【図３】図３は、１１２アミノ酸の神経線維タンパク質の完全なアミノ酸配列（ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＸＰ＿０３２３０７）を示す。
【図４】図４は、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＨ１４９５１  ＰＩＤｇ１５９２８９７１に収載される１０６アミノ酸の神経線維タンパク質を示す。
【図５】図５は、ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＸＰ＿０３９１０２，ＰＩＤｇ１８５９９３３９に収載される１０６アミノ酸の神経線維タンパク質を示す。
【図６】図６は、９８アミノ酸の神経線維タンパク質の完全なアミノ酸配列（米国特許第５，８３０，６７０号からの配列３０；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ１３６１２）を示す。
【図７】図７は、７５アミノ酸の神経線維タンパク質の完全なアミノ酸配列（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列４８；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４８）を示す。
【図８】図８は、６８アミノ酸の神経線維タンパク質の完全なアミノ酸配列（米国特許第５，９４８，６３４号からの配列３６；ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＥ２５４４６）を示す。
【図９】図９は、６１アミノ酸の神経線維タンパク質様タンパク質の完全なアミノ酸配列（ＮＣＢＩ  Ｅｎｔｒｅｚ−タンパク質寄託番号ＡＡＨ０２５３４）を示す。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004529179.tif 000066
2004529179.tif 000067
【国際調査報告】
2004529179.tif 000068
2004529179.tif 000069
2004529179.tif 000070