(57)【要約】本発明は、一般式【化１】2004531516.tif 000012で表される新規ベンジリデンアミノグアニジンおよびそれらベンジリデンアミノグアニジンのメラノコルチンレセプターアゴニストまたはアンタゴニストとしての使用に関する。本発明は、さらに、MC1およびMC4メラノコルチンレセプターに対しアゴニストおよび／またはアンタゴニストとして選択性を示すベンジリデンアミノグアニジンに関する。
2004531516.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で表される化合物または薬理学的に活性なその塩。
【化１】
2004531516.tif 000010
式中、Ｒ2は、ハロゲン、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択され、
式中、Ｒ3は、水素、ヒドロキシ、フルオロ、クロロまたはトリフルオロメチル基から選択され、
式中、Ｒ4は、水素、ニトロ、ヨードまたはブロモ基から選択され、
式中、Ｒ5は、水素、フルオロまたはエトキシ基から選択され、
式中、Ｒ6は、水素、ニトロ、ブロモまたはメトキシ基から選択され、
かつ、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6のうち少なくとも一つは水素ではなく、
そして、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6が水素である場合は、Ｒ2は、フルオロ、ブロモ、ヨード、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択され、
そして、Ｒ4がニトロである場合は、Ｒ2は、ハロゲン、メチルまたはメトキシ基から選択され、
そして、Ｒ3がフルオロである場合は、Ｒ2は、ハロゲン、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択される。
【請求項２】
Ｒ6が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ5が水素である請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ2がブロモまたはヨードである請求項１〜３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2がヨードである請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3がクロロである請求項１〜５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
下記のうちいずれか一つの新規化合物または薬理学的に活性なその塩。
（化合物名）
N-(3-chloro-2-Iodobenzylideneamino)guanidine
N-(3-Fluoro-2-Methyl-6-Nitrobenzylideneamino)guanidine
N-(2-chloro-3-Hydroxy-4-Nitrobenzylideneamino)guanidine
N-(2,3-Dichloro-4-Nitrobenzylideneamino)guanidine
N-(5-Ethoxy-2-Nitro-3-Trifluoromethylbenzylideneamino)guanidine
N-(2,6-Dibromobenzylideneamino)guanidine
N-(2-Bromo-4-Iodobenzylideneamino)guanidine
N-(2,5-Difluorobenzylideneamino)guanidine
N-(2,6-Dimethoxybenzylideneamino)guanidine
N-(2,3-Dihydroxybenzylideneamino)guanidine
N-(4-Bromo-2-iodobenzylideneamino)guanidine
【請求項８】
標識または毒物をさらに含む請求項１〜７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
前記標識が放射性の標識である請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかで定義される化合物を、一種類以上の補助剤(adjuvants)、担体(carriers)または賦形剤(excipients)と共に含む薬学的組成物。
【請求項１１】
式（II）で表される化合物を式（III）で表される化合物またはその塩と反応させ、さらに必要に応じてその生成物の塩を形成させることを含む、請求項１に記載の化合物の製造方法。
【化２】
2004531516.tif 000011
式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6は請求項１で定義した通りである。
【請求項１２】
薬剤として使用する請求項１〜９のいずれかに記載の化合物。
【請求項１３】
メラノコルチン(melanocortin)レセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患(diseases)、障害(disorders)および／または病的状態(pathological conditions)の治療用の、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
メラノコルチンレセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患、障害および／または病的状態のin vivo診断用の、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれかに記載の化合物または請求項１０に記載の組成物の有効量を患者に投与することを含む、前記患者のメラノコルチンレセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患、障害および／または病的状態の治療方法。
【請求項１６】
請求項１〜９のいずれかで定義される化合物または請求項１０に記載の組成物の使用または投与を含む、メラノコルチンレセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患、障害および／または病的状態のin vivo診断方法。
【請求項１７】
メラノコルチンレセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患、障害および／または病的状態の治療用薬剤を製造するために、請求項１〜９のいずれかで定義される化合物を使用する方法。
【請求項１８】
メラノコルチンレセプターおよび／もしくはα−ＭＳＨまたはそれらの関連系に関係する疾患、障害および／または病的状態のin vivo診断用薬剤を製造するために、請求項１〜９のいずれかで定義される化合物を使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ベンジリデンアミノグアニジンに関する。より具体的には、本発明は、メラノコルチンレセプターに働くベンジリデンアミノグアニジンおよびそれらのメラノコルチンレセプターアゴニストまたはアンタゴニストとしての使用方法に関する。さらに、本発明は、MC1およびMC4メラノコルチンレセプターに対しアゴニストおよび／またはアンタゴニストとして選択性を示すそれら新規ベンジリデンアミノグアニジンに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来技術において、メラノコルチン（MC）レセプターに対し高度に特異的な結合を示す大分子量の直鎖状および環状ペプチドが多数知られている。これらペプチドの作動的(agonistic)および／または拮抗的(antagonistic)特性もまた公知である。例えば、Dooley, Girten および Houghtenによる "Melanocortin Receptor ligands and methods of using same" (WO 99/21571)をご参照いただきたい。メラノコルチンレセプターに対し活性を示す小分子を含む二件の特許出願(WO 99/55679 および WO 99/64002)が公開されている。しかしながら、本出願の化合物は、これまでに公開されたメラノコルチンアゴニストとは構造が異なり、そして、それゆえに、予期せぬ効果が観測される。
【０００３】
この技術分野でこれまでに知られているのは、キサンタンオキシダーゼ／キサンタンデヒドロゲナーゼ酵素に対する活性が証明されているヒドロキシグアニジン（例えばWO98/23267）である。他の当業者公知の化合物は、抗鬱効果を示しているベンジリデンアミノグアニジン(US 4060640)である。その他の当業者公知の薬理学的活性グアニジンの例は、特許US3982020 および GB1223491に述べられている。その他の適用領域もまた当業者公知であり、そして、特許DE1165013 および US3941825に述べられている。グアナベンズは、抗高血圧薬として当業者周知の化合物である(US Pharmacopeia, 1999, The United States Pharmacopeial Convention, Inc, ISBN 1-889788-03-1)。グアナベンズは構造的に本発明の化合物と同様に見えるであろうが、メラノコルチンレセプターに対し親和性を示さない。したがって、本発明のベンジリデンアミノグアニジン化合物がメラノコルチンレセプターに対しアゴニストおよび／またはアンタゴニストとして親和性を示すということは大変驚くべきことである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、本発明の一面は、メラノコルチンレセプターに対し活性を示し、そして、経口投与後に吸収されても良く、かつ、血液脳関門を通じて十分に浸透しても良い低分子量化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一面では、本発明は、一般式（Ｉ）で表される新規化合物を提供する。
【０００６】
【化３】
2004531516.tif 000003
式中、Ｒ2は、ハロゲン、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択され、
式中、Ｒ3は、水素、ヒドロキシ、フルオロ、クロロまたはトリフルオロメチル基から選択され、
式中、Ｒ4は、水素、ニトロ、ヨードまたはブロモ基から選択され、
式中、Ｒ5は、水素、フルオロまたはエトキシ基から選択され、
式中、Ｒ6は、水素、ニトロ、ブロモまたはメトキシ基から選択され、
かつ、
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6のうち少なくとも一つは水素ではなく、
そして、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6が水素である場合は、Ｒ2は、フルオロ、ブロモ、ヨード、ヒドロキシ、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択され、
そして、Ｒ4がニトロである場合は、Ｒ2は、ハロゲン、メチルまたはメトキシ基から選択され、
そして、Ｒ3がフルオロである場合は、Ｒ2は、ハロゲン、メチル、メトキシまたはニトロ基から選択される。
本発明は、式Ｉの化合物の薬理学的に活性な塩にも及ぶ。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本文では、「ハロゲン」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを表す。
【０００８】
好ましくは、Ｒ6は水素である。
【０００９】
好ましくは、Ｒ5は水素である。
【００１０】
好ましくは、Ｒ2はハロゲンであり、より好ましくはブロモまたはヨードであり、そして、最適には、Ｒ2はヨードである。
【００１１】
好ましくは、Ｒ3はクロロである。
【００１２】
本発明では、下記新規化合物群およびそれらの化合物の使用方法を提供する。
【００１３】
【数１】
2004531516.tif 000004
【００１４】
我々にとって驚くべきことに、上記化合物群はメラノコルチンレセプターに対し活性を示した。
【００１５】
本発明は、新規ベンジリデンアミノグアニジン、およびメラノコルチンレセプターに対し活性を有するベンジリデンアミノグアニジンの使用に関する。本発明の化合物をメラノコルチン系で生物学的に試験したところ、驚くべきことに、メラノコルチンレセプターに結合可能であることを示し、かつ、機能的アッセイにおいて活性を示した。
【００１６】
本発明の化合物は、特定の一つのMC-レセプターまたはいくつかのMC-レセプター、例えばMC1、MC3、MC4および／またはMC5レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストであっても良い。
【００１７】
単一のポリペプチドにより構成されるG-プロテイン結合レセプターのクラスに属するMC-レセプターは、７の膜貫通ドメインを形成する。そのようなレセプターの、MC1, MC2, MC3, MC4 および MC5と名付けられた５つのタイプがこれまでに記述されている。これらMCレセプターのシグナリングは、主としてcAMPを通じて仲介されるが、他の信号伝達経路も知られている。それらは身体中に別々に分配される。
【００１８】
MC-レセプターは、種々の生理的活動と結びついており、それらは、別々のMC-レセプターの亜型により仲介されると考えられている。しかしながら、多くのケースでは、どの亜型が特定の効果の原因であるのか完全に明らかではない。
【００１９】
本発明が提供する化合物のいくつかは、メラノコルチン関連系の調節に使用可能であり、そして、それゆえに、メラノコルチンレセプターおよび関連系、例えばメラニン細胞刺激ホルモンと結びついた、薬物乱用、摂食障害、免疫調節剤作用、苦痛、皮膚および性的機能／機能不全等の疾患の治療に使用される。
【００２０】
MSH-ペプチドは、モチベーション、学習、記憶、行動、炎症、体温、苦痛知覚、血圧、心拍数、血管緊張、脳血流量、神経成長、胎盤発生、アルドステロン合成および放出(release)、チロキシン放出、精子形成、卵巣肥大(ovarian weight)、プロラクチンおよびFSH分泌、女性における子宮出血、皮脂およびフェロモン分泌、血中グルコースレベル、子宮内における胎児の成長、およびその他の分娩に関わる事象等の多くの異なるプロセスに影響を与えることが可能であり(Eberle, AN: The melanotropins: Chemistry, physiology and mechanisms of action. Basel: Karger, Switzerland. 1988, ISBN 3-8055-4678-5; Gruber, and Callahan, Am. J. Physiol. 1989, 257, R681-R694; De Wildt et al., J. Cardiovascular Pharmacology. 1995, 25, 898-905)、かつ、ナトリウム排泄増加を引き起こす(Lin et al., Hypertension. 1987, 10, 619-627)ことが、長く知られている。
【００２１】
本発明の化合物のいくつかは、cAMP等の第二メッセンジャー構成要素のin vivo形成の阻害または刺激に有用である。そのような阻害／刺激は、in vitroでの細胞または破壊細胞系において、例えば分析または診断目的に使用できる。
【００２２】
分析および診断目的のために、本発明の化合物は、１個またはそれ以上の放射活性標識またはガンマもしくはポジトロン放射性同位体を含む放射活性形態で使用しても良く、MC-レセプターの定量および組織局在化のために、解離／結合定数の分析のために、そしてシンチグラフィー、陽電子放出断層撮影法(PET)もしくは単一光子放射形コンピュータ断層撮影法(SPECT)を用いたin vivo結合のイメージングのために、または疾患の診断および悪性細胞がMCレセプターを含む全ての悪性腫瘍の治療のために結合する放射性リガンドとして使用できる。
【００２３】
その他、本発明の化合物は、個々の化合物を検出可能にするために、任意の他のタイプの標識、例えば蛍光、ビオチン、またはガンマ線放射、光量子放射(light photons)もしくは生化学的方法、もしくは光もしくは紫外光（後者は、光親和性手法によりMCレセプターの共有結合標識に有用な化合物を得るために）により活性化された標識で標識しても良い。
【００２４】
式（Ｉ）の化合物のうちいくつか、または薬理学的に許容可能なその塩は、毒物（すなわち、ドキソルビシン、リシン、ジフテリアトキシンまたはその他）で標識してMCレセプターを含む悪性細胞への的確な輸送(targeted delivery)に使用しても良く、または、悪性腫瘍およびその他MCレセプターが発現する疾患の治療のために、免疫系を刺激するための、内因性免疫系活性化に好適な化合物（例として、T-細胞抗原例えばCD3またはその他に結合するのに適した、モノクローナル抗体またはその他の化合物）で標識しても良い。このようにして形成したハイブリッド化合物は、悪性黒色腫細胞またはMC1-レセプターを含む悪性細胞の方に細胞毒性細胞を誘導し、そして腫瘍成長を阻害するであろう。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物または薬理学的に許容可能なその塩は、抗体に対し、化学的に、共有または非共有結合により結合していても良い。
【００２６】
本発明の化合物は、動物、特に人間の疾患(diseases)、障害(disorders)および／または病的状態(pathological conditions)の治療および診断のために使用しても良い。
【００２７】
本発明は、動物または人間への投与に基づき本発明の化合物へと変換されるプロドラッグにも関する。式（Ｉ）の化合物のプロドラッグおよびそれらの薬理学的に活性な塩は、本発明の化合物について本明細書に記述していることおよび下記実施例に開示していることと同じ目的のために使用しても良い。
【００２８】
本発明の化合物は、任意の望ましい構造を持つ他の一個のまたは何個かの分子に対し共有的にまたは非共有的に結合していても良い。そのように形成された修飾化合物または錯体は、本発明の化合物について本明細書に記述していることおよび下記実施例に開示していることと同じ目的のために使用しても良い。本発明の特に重要な実施形態では、放射性に標識した分子が式（Ｉ）の化合物または薬理学的に許容可能なその塩に共有結合し、式（Ｉ）の化合物または薬理学的に許容可能なその塩を放射性に標識している。
【００２９】
本発明は、製造のための方法、および、本発明の化合物の一種類またはそれ以上を含む薬学的調製物、およびそれらの、メラニン細胞刺激ホルモンレセプターに関連している種々の医学的および獣医学的業務への使用にも関する。
【００３０】
（製造方法）
本発明は、さらに、式（Ｉ）の化合物の製造方法を提供する。この化合物は、下記の一般的方法で製造することができる。
【００３１】
（方法１）
【００３２】
【化４】
2004531516.tif 000005
【００３３】
式IIの化合物（式中、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は前記の定義の通り）をアミノグアニジン（III）またはその塩と反応させて、式（Ｉ）の化合物を得る。
【００３４】
一般式IIのベンズアルデヒド出発原料の多くは市販ルートで入手可能であり、そして、それらおよびその他は、当該技術分野で周知の任意の一般的方法で製造しても良い。
【００３５】
（実施例）
下記実施例は、本発明を例示することを意図し、指定した化合物は意図した目的のために特に有用であるが、本発明の範囲を限定することを意図しない。それらの化合物は、ナンバーコードａ：ｂで指定しており、ここで、ａはその化合物の製造について述べている実施例番号を意味し、そして、ｂは、その実施例にしたがって製造された化合物の順序を表す。したがって、実施例１：２は、実施例１にしたがって製造された２番目の化合物を意味する。
【００３６】
化合物の構造は、IR, NMR, MSおよび元素分析で確認した。融点を示している場合、それらは未補正値である。
【実施例１】
【００３７】
（化合物１：１の製造）
N-(3-Chloro-2-Iodobenzylideneamino)guanidine
３−クロロ−２−ヨード−ベンズアルデヒド(0.32 g, 1.2 mmol), アミノグアニジン重炭酸塩(0.15 g, 1.1 mmol) および酢酸 (3 ml)を5分間加熱還流させた。その反応混合物を室温に冷却し、そして、その溶液をエバポレートした。その残渣に50 mlのエーテルを加え、そして、その溶液を20分間攪拌した。その溶媒をデカンテーションし、そして、その後、20 mlのアセトニトリルを加えた。その溶液をさらに30分間攪拌し、そして、その後、前記溶液を濾過し、標題化合物１：１を収量0.18 g (42 %)で得た。融点は231-232.5℃であった。
【００３８】
（化合物１：２〜１：１３の製造）
化合物１：２〜１：１３を、実質的に１：１と同じアプローチを用いて、方法１により製造した。化合物を、それらのデータとともに以下に示す。
【００３９】
【数２】
2004531516.tif 000006
【実施例２】
【００４０】
本実施例は、式（Ｉ）の化合物の効力およびそれらの治療的活性な酸付加塩を例示する。
【００４１】
（試験１．MC1-レセプターへの親和性）
この結合アッセイは、I125-NDP-αMSHをリガンドとして用い、本質的にLunec et al., Melanoma Res. 1992; 2; 5-12の記述通りに行った。
【００４２】
（試験２．MC3-レセプター、MC4-レセプターおよびMC5-レセプターへの親和性）
この結合アッセイは、I125-NDP-αMSHをリガンドとして用い、本質的にSzardenings et al., J. Biol. Chem. 1997; 272; 27943-27948 および Schioeth et al., FEBS Lett. 1997; 410; 223-228の記述通りに行った。
【００４３】
本質的に、異なるメラノコルチンレセプターに対する前記化合物群の親和性は、組換え型のヒトMC3、MC4またはMC5レセプターに感染した昆虫細胞(Sf9)またはCOS細胞を用いて測定した。MC1レセプターに対する親和性の測定には、（マウス）MC1レセプターを内因的に発現するB16マウス黒色腫細胞を使用した。
【００４４】
前記化合物群は、異なる濃度において、それらの、各レセプターから125I-標識 NDP-MSHを置換する能力を試験した。インキュベーションは、50,000 細胞/ウェル（Sf9 または COS 細胞）から200,000 細胞/ウェル（マウス黒色腫細胞）までを用い、96ウェルプレートで行った。
【００４５】
前記試験化合物または標準（NDP-MSH）は、適切な濃度（一般的には 10-4 M と10-12 Mとの間）で、標識したトレーサー（約50,000 cpm/ウェル）と共に加え、そして2時間インキュベートした（Sf9細胞については室温で、そしてCOS細胞およびマウス黒色腫細胞については＋37℃で）。
【００４６】
インキュベーション後、前記細胞を２回洗浄して過剰のトレーサーおよび化合物を除き、そして、前記細胞を0.1 M NaOHで溶解させた。その溶解物をガンマカウンターでカウントし、結合を計算し、そして親和性を決定した。
【００４７】
【表１】
2004531516.tif 000007
【実施例３】
【００４８】
（食物摂取におけるin vivo効果）
化合物群を、ラットの食物摂取および体重に対するそれらの効果について試験した。
【００４９】
化合物群の「拮抗効果」すなわち食物摂取の減少を調べるために、夜間プロトコール（nocturnal protocol）を用いた。
【００５０】
Sprague-Dawleyの雄のラットを用い、その脳室内に（intracerebroventricularly）カニューレを挿入した。ステンレス針ガイドカニューレを側脳室に配置し、そして、頭蓋骨内に固定した。動物は、実験を行うに先立ち１週間新環境に順応させた。実験を行った後、前記ラットを殺し、そして、前記カニューレの配置をチェックした。
【００５１】
（夜間プロトコール）
ラットは、上述の通りにカニューレ挿入した。それらは、予備的飢餓なしに用い、そして、化合物群は、午後５時に、全体積5μlで投与した。使用した化合物群の用量は、0.25から50 nmolesの間であった。食物摂取は、投与の3、15および24時間後に測定し、そして、体重は24時間時に記録した。比較のために、周知のMC4レセプターアゴニストであるメラノタンII(Melanotan II (MTII))を用量1 nmoleで使用した。
【実施例４】
【００５２】
（抗炎症効果）
｛対照｝
雌のBALB/cマウス達（体重20〜22 g）を、剃毛した腹部を30 μlの0.5% 2,4−ジニトロフルオロベンゼン（DNFB）で処理して鋭敏化させた(sensitized)。４日後、それらの足に10 μlの0.3 ％ DNFBでチャレンジした(challenged)。チャレンジしなかったマウスの足を対照として供した。最終のチャレンジから24時間後、足重量の相違を、炎症（足のむくみ）の指標として測定した。
【００５３】
｛アルファ−MSHおよびプレドニゾロン対照｝
マウス達を対照として処理したが、さらにα−MSH (0.5 mg/kg)またはプレドニゾロン(20 mg/kg)を、鋭敏化（第0日）の２時間前に腹膜腔内へ(i.p.)注入し、そして、それに等しい用量を、鋭敏化後に連続して４日間、繰り返し投与した。足のむくみの阻害は、上述と同様に測定した。
【００５４】
｛新規化合物群の研究｝
マウス達を対照として処理したが、さらに種々の用量（0.05, 0.15または0.25, 0.375, 0.5, 0.75 ならびに後の研究ではさらに1.5, 3 および時折6 mg/kg）の各化合物を、鋭敏化（第0日）の２時間前に腹膜腔内へ(i.p.)注入し、そして、それに等しい用量を、鋭敏化後に連続して４日間、繰り返し投与した。足のむくみの阻害は、上述と同様に測定した。
【００５５】
全ての実験には、それぞれ少なくとも10匹のマウスを含む群を用いた。
【００５６】
血液分析は、QBC（登録商標）Autoread（商標） Plus & QBC（登録商標）Accutube System (Becton Dickinson)を用いて行った。全てのケースにおいて、血液試料は最終のチャレンジから２４時間後に採集した。
【実施例５】
【００５７】
（カプセルを含む製剤の実施例）
2004531516.tif 000008
より多量の活性成分が必要な場合、ラクトースの使用量を減らしても良い。
【００５８】
（好適な錠剤である製剤の実施例）
2004531516.tif 000009
【００５９】
注射による非経口投与のための溶液は、前記作用物質の水溶性で薬学的に許容可能な酸付加塩の水溶液として、好ましくは0.1 重量%から約5 重量%濃度で調製できる。それら溶液は、安定剤および／または緩衝剤を含んでいても良い。
【国際公開パンフレット】
2004531516.tif 000013
2004531516.tif 000014
2004531516.tif 000015
2004531516.tif 000016
2004531516.tif 000017
2004531516.tif 000018
2004531516.tif 000019
2004531516.tif 000020
2004531516.tif 000021
2004531516.tif 000022
2004531516.tif 000023
2004531516.tif 000024
2004531516.tif 000025
2004531516.tif 000026
2004531516.tif 000027
2004531516.tif 000028
2004531516.tif 000029
2004531516.tif 000030
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004531516.tif 000031
【国際調査報告】
2004531516.tif 000032
2004531516.tif 000033
2004531516.tif 000034