(57)【要約】集めた血液を洗浄する方法において、採血の間に、不活性な抗凝固剤を使用する。不活性な抗凝固剤は、赤血球の凝集を妨げず、このため、重力沈降分離が容易となる。好適な抗凝固剤はＣＰＤである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液及び抗凝固剤を含む液から、沈降によって、赤血球を分離する方法において、前記抗凝固剤が、本質的に不活性な抗凝固剤でなることを特徴とする、赤血球の分離法。
【請求項２】
不活性な抗凝固剤がＣＰＤである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＣＰＤを血液とＣＰＤ１部：血液１５部以下の割合で混合する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
不活性な抗凝固剤がヘパリンである、請求項１記載の方法。
【請求項５】
血液及び抗凝固剤を含む液から、沈降によって、赤血球を分離する方法において、前記抗凝固剤が、本質的に、ＣＰＤ及びヘパリンでなる群から選ばれる抗凝固剤でなることを特徴とする、赤血球の分離法。
【請求項６】
不活性な抗凝固剤を含む血液を用意する工程、この血液を洗浄液と混合する工程、及び赤血球を、沈降によって、前記洗浄液から分離させる工程を包含することを特徴とする、血液の洗浄法。
【請求項７】
不活性な抗凝固剤がＣＰＤである、請求項６記載の方法。
【請求項８】
洗浄液がデンプン液を含む、請求項７記載の方法。
【請求項９】
洗浄液がヘタスターチを含むものである、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
洗浄液が６％ヘタスターチである、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
不活性な抗凝固剤がヘパリンである、請求項６記載の方法。
【請求項１２】
血液、抗凝固剤及び洗浄液を含有してなる液において、前記抗凝固剤が、ＣＰＤ及びヘパリンでなる群から選ばれるものであることを特徴とする、液。
【請求項１３】
洗浄液がデンプンを含有するものである、請求項１２記載の液。
【請求項１４】
デンプンがヘタスターチである、請求項１３記載の液。
【請求項１５】
本質的に血液、抗凝固剤及び洗浄液からなることを特徴とする、液。
【請求項１６】
不活性な抗凝固剤がＣＰＤである、請求項１５記載の液。
【請求項１７】
不活性な抗凝固剤がヘパリンである、請求項１５記載の液。
【請求項１８】
血液が血液の沈降層である、請求項１５記載の液。
【請求項１９】
沈降層が、血液の赤血球の大部分を含有するものである、請求項１８記載の液。
【請求項２０】
沈降層がヘマトクリット値約３０−６４である、請求項１９記載の液。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願は、米国仮特許出願第６０／２５１，０４７号（２００１年１２月５日出願）の優先権を主張する。
【０００２】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液を集め、洗浄し、患者に戻す方法に係る。特に、本発明は、患者に赤血球を注入するために、洗浄液又は他の液から赤血球を効果的に分離する方法に係る。
【０００３】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
血液を集め、これを患者に戻すために処理する方法は公知である。例えば、手術中の出血血液は、手術中に輸血する目的で、しばしば集められる。集められた血液は、再注入され前に洗浄される。この操作は、集めた血液を洗浄液と混合し、ついで、液から赤血球を分離することからなるが、分離された赤血球は、不要な物質を保持している。公知のいくつかのシステムでは、赤血球は重力法によって分離される。この方法では、赤血球は、混合物中の洗浄液及び他の成分よりも密度が高いため、容器の底に沈降する。細胞の洗浄に遠心装置が使用されることも知られており、遠心力を適用することによって、液体と赤血球との間の分離が行われる。
【０００４】
沈降によって赤血球を分離する公知の装置としては、米国特許第５，２８２，９８２号及び公開されたＰＣＴ出願（ＷＯ ９９／４４７１１）に開示されたものがある。一般に、これらの装置は、赤血球及び洗浄液の混合物を収容するための浅い容器を使用して、作動される。容器には傾斜が設けられており、これにより、密度の相違のため液から沈降してくる赤血球は、重力によって容器の底表面を流下して、再注入装置への排出のための収集ロートに至る。
【０００５】
上記の従来のシステムを使用して行われる方法は、抗凝固剤としてＡＣＤ−Ａ（酸・クエン酸塩・ブドウ糖−Ａ）を収容する容器に血液を集める工程及び赤血球の凝集を容易にする試薬を添加する工程を包含する。好適な試薬はヘタスターチ（ｈｅｔａｓｔａｒｃｈ）であり、離れた赤血球が相互に電気的に吸引し合うことを可能にし、これによって、赤血球が凝集し、「連銭状態」（ｒｏｕｌｅａｕ）として知られている堆積ロール形状のクランプを形成する。ヘタスターチ分子は、離れた赤血球の間で電気的ブリッジを形成することによって、連銭状態の形成を促進するものと考えられる。この連銭状態は、液中において、より小さい抵抗を示し、このようにして、より迅速に容器の底に沈降することが予測される。
【０００６】
発明者らが直面している問題は、上記方法が実用において信頼性に乏しいことである。すなわち、上記方法における連銭状態は、しばしば、、要求どおりには形成されず、あるいは、患者への再注入に適したヘマトクリット値をもつ液を提供するために、適正な時間で血漿−ヘタスターチ液を沈降させることができないことである。
【０００７】
【課題を解決するための手段及び発明の効果】
発明者らは、従来の方法における重大な障害が、使用した抗凝固剤が、方法の実行可能性に対して多大の影響を有していることにあることを見出した。このように、発明者らは、出血血液と混合される抗凝固剤が通常のＡＣＤ−Ａではない場合に、明らかに改善された結果を提供することを見出し、本発明に至った。すなわち、本発明によれば、出血血液を不活性な抗凝固剤のみと混合し、ついで、ヘタスターチの如き試薬を含有する洗浄液と混合する赤血球回収方法では、重力沈降法において赤血球を効果的に分離できる。
【０００８】
ここで使用しているように、「不活性な」又は「不活性な抗凝固剤」とは、凝固を阻止するが、沈降による分離にとって効果的に連銭状態を形成する赤血球の能力には影響を及ぼさない抗凝固剤を意味する。発明者らによって開発された不活性な抗凝固剤の１つはＣＰＤ（クエン酸塩・リン酸塩・ブドウ糖）である。他の不活性な抗凝固剤はヘパリンであり、ヘパリンは連銭状態の形成を妨げない。しかしながら、通常、血液は患者に戻すことを目的として保存されるため、ヘパリンは、本発明の方法での使用には必ずしも好適ではない。ヘパリンは患者にとって望ましくない影響を呈することがあり、このような血液を患者に戻すことは適切とは言えない。このように、ＣＰＤは赤血球の沈降を妨げず、患者がＣＰＤを容易に代謝できるため、ＣＰＤは好適な抗凝固剤である。
【０００９】
発明者らは、従来の方法が有効でない理由は、これらの方法で使用されていた抗凝固剤、すなわち、ＡＣＤ−Ａが、赤血球に対して逆効果を有するためと考えている。詳述すれば、赤血球によるＡＣＤ−Ａの吸収が、赤血球が所望の連銭状態を形成すること及び望みどおりに重力によって沈降することを妨げるような赤血球に対して物理的影響を有するものと考えている。発明者らによって開発された１つの理論は、ＡＣＤ−Ａの吸収が、赤血球の形状を変化させ、赤血球を膨潤させ、その連銭状態を形成する能力を妨げると言うものである。抗凝固剤による妨害に関する他の理由も存在するであろう。
【００１０】
ＣＰＤ及びヘパリン以外の不活性な抗凝固剤も発見又は開発されるであろう。さらに、ＡＣＤ−Ａを物理的又は化学的に処理して、この目的に適する不活性なものとなるようにすることも可能であろう。
【００１１】
さらに、ヘタスターチ以外の試薬を含有する洗浄液が使用できるであろう。赤血球が相互に電気的に吸引し合うこと、及びヘタスターチが、離れた赤血球の間に電気的なブリッジを提供することによって連銭状態の形成を援助することは公知である。ペンタスターチ（ｐｅｎｔａｓｔａｒｃｈ）の如き他のデンプン試薬を含む他の試薬が、連銭状態の形成を促進することが認められるであろう。このように、本発明は、他の試薬を含有する他の洗浄液の使用も包含するものである。
【００１２】
【発明の実施の形態】
好適な具体例では、採血中の赤血球に対する障害を低減するため、小さい圧力差の制御された真空を負荷する真空装置によって、血液を容器に集める。これは、ＷＯ ９９／４４７１１に開示されたシステム又は当分野で公知の他のシステムによって達成される。集めた血液を、採取に伴って、不活性な抗凝固剤としてのＣＤＰと混合する。ＣＰＤを血液に、処理の間における血液の凝固を防止するに適したＣＰＤ：血液の比ないし割合で添加する。この割合は、ＣＰＤ１部：血液１５部以下、好ましくは１：５から１：１５の範囲、さらに好ましくはＣＤＰ１部：集めた血液１０部の割合である。
【００１３】
ついで、集めた血液を、試薬を含有する洗浄液（好ましくは、ヘタスターチ６％をもつ塩溶液）と混合し、処理のため、沈降チャンバーに置く。好ましくは、ヘタスターチを、ヘタスターチ８部：血液／抗凝固剤混合物５部の比率で添加するが、血液から不要の物質を除去するためには、大きい範囲の比率も有効であろう。
【００１４】
ついで、赤血球の多く（全量でない場合）が連銭状態を形成し、容器の底に沈降するように、液を一定時間撹拌することなく放置する。この時間は変動するが、約２０分で充分であることが確認されている。常法に従って赤血球を容器から取り出し、患者に再注入する。
【００１５】
ＷＯ ９９／４４７１１に開示された装置を使用して上記方法を臨床的に実施したテストでは、赤血球が洗浄液から分離され、保存された赤血球のヘマトクリット値（Ｈｃｔ）が３０−６４であることが示された。
【００１６】
以上、本発明の方法の実施形態を説明したが、請求の範囲の精神の範囲内での変更は、当業者にとって明白であろう。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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