(57)【要約】本発明は、ワクチンに使用するための新規アジュバント組成物に関する。特に、本発明のアジュバント組成物は免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せを含有する。また、本発明では、本発明のアジュバント組成物と少なくとも１つの抗原を含有するワクチンも提供する。さらに、本発明のアジュバント組成物およびワクチンの製造方法、ならびにそれらの医薬としての使用も提供する。加えて、本発明は、本発明のワクチンを非経口または粘膜投与することによる疾患に罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せ物を含むアジュバント組成物。
【請求項２】
トコールが水中油型乳剤の形態をしている、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項３】
水中油型乳剤がスクアレンを更に含有する、請求項２記載のアジュバント組成物。
【請求項４】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン配列を含み、ここで、ＣおよびＧはメチル化されていない、請求項１〜３のいずれか１項記載のアジュバント組成物。
【請求項５】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドが、ＴＣＣ　ＡＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴＣ　ＣＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴ（配列番号１）、ＴＣＴ　ＣＣＣ　ＡＧＣ　ＧＴＧ　ＣＧＣ　ＣＡＴ（配列番号２）、ＡＣＣ　ＧＡＴ　ＧＡＣ　ＧＴＣ　ＧＣＣ　ＧＧＴ　ＧＡＣ　ＧＧＣ　ＡＣＣ　ＡＣＧ（配列番号３）、ＴＣＧ　ＴＣＧ　ＴＴＴ　ＴＧＴ　ＣＧＴ　ＴＴＴ　ＧＴＣ　ＧＴＴ（配列番号４）、ＴＣＣ　ＡＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴＣ　ＣＴＧ　ＡＴＧ　ＣＴ（配列番号５）よりなる群から選ばれる、請求項１〜３のいずれか１項記載のアジュバント組成物。
【請求項６】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドが少なくとも３個のヌクレオチドにより分離された少なくとも２つの非メチル化ＣＧリピートを含有する、請求項１〜３のいずれか１項記載のアジュバント組成物。
【請求項７】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドが６個のヌクレオチドにより分離された少なくとも２つの非メチル化ＣＧリピートを含有する、請求項６項記載のアジュバント組成物。
【請求項８】
トコールが一般式：
【化１】
2004511529.tif 000008
［式中、ＲはＨであるか、またはアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、ヒドロキシ、スルフェート、およびホスフェート基よりなる群から選ばれる１個以上の同一のまたは異なる置換基であり、Ｒ１およびＲ３は互いに独立してＨまたはアルキルであり、Ｒ２はＨまたはアルキルであって、各単位において異なっていてもよく、破線は１単位中の追加の炭素−炭素結合の存在または不在を示し、ｎは１〜１０の値であり、特にＲ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３におけるアルキル基は、メチル、エチル、ブチルまたはイソブチルなどの炭素原子数１〜４の直鎖または分岐炭素鎖から選択される］
で表される、請求項１記載のアジュバント組成物。
【請求項９】
トコールがＤ，Ｌ，α−トコフェロールである、請求項８記載のアジュバント組成物。
【請求項１０】
前記アジュバントが別の免疫刺激剤を更に含有する、請求項１〜９のいずれか１項記載のアジュバント組成物。
【請求項１１】
別の免疫刺激剤がＬＰＳもしくはその誘導体、３Ｄ−ＭＰＬ、サポニン、またはＱＳ２１から選択される、請求項１０記載のアジュバント組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項記載のアジュバント組成物、および抗原または抗原組成物を含んでなるワクチン組成物。
【請求項１３】
抗原がＥＣＤ−ＰＤである、請求項１２記載のワクチン。
【請求項１４】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含むワクチンにより生起される抗原に対する免疫応答の質を、Ｔｈ１タイプの免疫応答のほうにシフトさせる方法であって、ワクチンを、免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびトコール含有水中油型乳剤を用いて製剤化することを含んでなる方法。
【請求項１５】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコール含有水中油型乳剤の組合せ物がＴｈ１タイプの免疫応答を生起させ、その結果、マウスのワクチン接種後にワクチンにより誘導された抗原特異的ＩｇＧアイソタイプを測定すると、ＩｇＧ１が、アイソタイプ特異的ＥＬＩＳＡにより測定される中点力価で判定して、抗原特異的な総ＩｇＧの５０％未満を占める、請求項１４記載の免疫応答の質をシフトさせる方法。
【請求項１６】
トコールを含む水中油型乳剤を処方し、該トコール乳剤を免疫刺激性オリゴヌクレオチドと混合してアジュバントを調製し、該アジュバントを抗原または抗原組成物と共に製剤化することを含んでなる、ワクチン組成物の製造方法。
【請求項１７】
免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せ物を含むワクチン組成物を個体に投与することを含んでなる、疾患に罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法。
【請求項１８】
医療において使用するための請求項１２記載のワクチン。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ワクチンに使用するための新規アジュバント組成物に関する。特に、本発明のアジュバント組成物は免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せ物を含有する。また、本発明では、本発明のアジュバント組成物と少なくとも１つの抗原を含有するワクチンも提供する。さらに、本発明のアジュバント組成物およびワクチンの製造方法、ならびにそれらの医薬としての使用も提供する。加えて、本発明は、本発明のワクチンを非経口または粘膜投与することによる疾患に罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法を提供する。
【０００２】
非メチル化ＣｐＧジヌクレオチド（「ＣｐＧ」）を含有する免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、全身経路および粘膜経路の両方で投与する場合のアジュバントとして公知である（ＷＯ９６／０２５５５，ＥＰ　４６８５２０，Ｄａｖｉｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９８，１６０（２）：８７０−８７６；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅおよびＤａｖｉｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６１（９）：４４６３−６）。ＣｐＧは、ＤＮＡ中に存在するシトシン−グアノシンジヌクレオチドモチーフの略語である。歴史的には、ＢＣＧのＤＮＡ画分が抗腫瘍効果を奏しうることが観察された。更なる研究において、ＢＣＧ遺伝子配列に由来する合成オリゴヌクレオチドが（ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよびｉｎ　ｖｉｖｏの両方において）免疫刺激効果を誘導しうることが示された。これらの研究の著者らは、中心的ＣＧモチーフを含む特定のパリンドローム配列がこの活性を担うと結論づけた。その後、Ｋｒｉｅｇによる刊行物（Ｎａｔｕｒｅ　３７４，ｐ５４６　１９９５）において、免疫刺激におけるＣＧモチーフの中心的役割が明らかにされた。ＣＧモチーフは特定の配列環境中になければならないこと、およびそのような配列は細菌ＤＮＡにおいては一般的であるが脊椎動物ＤＮＡにおいては稀であることを、詳細な分析が示している。免疫刺激性配列は、しばしば、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジンであるが（ここで、該ジヌクレオチドＣＧモチーフはメチル化されていない）、他の非メチル化ＣｐＧ配列も免疫刺激性であることが公知であり、本発明で使用することが可能である。
【０００３】
それらの６ヌクレオチドのいくつかの組合せには、パリンドローム配列が存在する。これらのモチーフのいくつかは、１つのモチーフの反復または異なるモチーフの組合せのいずれかとして、同じオリゴヌクレオチド中に存在しうる。これらの免疫刺激性配列を含有するオリゴヌクレオチドの１以上の存在は、ナチュラルキラー細胞（これはインターフェロンγを産生し、細胞溶解活性を有する）およびマクロファージを含む種々の免疫サブセットを刺激しうる（Ｗｏｏｌｄｒｉｇｅら　Ｖｏｌ　８９（ｎｏ．８），１９７７）。しかし、現在、このコンセンサス配列を含まない他の非メチル化ＣｐＧ含有配列も免疫調節性であることが示されている。
【０００４】
ＣｐＧは、ワクチン中に製剤化された場合には、一般には、遊離抗原と共に遊離溶解状態で投与されるか（ＷＯ９６／０２５５５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅおよびＤａｖｉｓ，前掲）、または共有結合で抗原にコンジュゲートされるか（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／１６２４７）、または水酸化アルミニウムのような担体と共に製剤化される（（肝炎表面抗原）Ｄａｖｉｓら，前掲；Ｂｒａｚｏｌｏｔ−Ｍｉｌｌａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５（２６），１５５５３−８）。その他のＣｐＧ含有製剤には、ＷＯ９９／６１０５６およびＷＯ００／０９１５９に記載されるものが含まれる。
【０００５】
トコール類（ビタミンＥ）およびそれらを含む乳剤アジュバントはＥＰ　０３８２２７１　Ｂ１および米国特許第５６６７７８４号に記載されている。
【０００６】
油乳剤アジュバントは、例えば、フロイント完全および不完全鉱油乳剤アジュバントに関する研究を含めて、久しく知られている。それ以来、これらの強力ではあるが反応原性（ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃ）であるアジュバント製剤に代わる安定でかつ十分許容される製剤を設計するために多大な研究が行われてきた。トコールを含む油乳剤はＷＯ９５／１７２１０に記載されている。
【０００７】
本発明は、免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せが極めて強力なアジュバント製剤を形成するという驚くべき知見に基づいている。これらのアジュバント製剤の成分は、好ましくは、抗原特異的抗体の誘導において相乗的に相互作用し、通常はＴｈ１タイプの免疫系に関連した免疫応答の誘導において効力がある。したがって、該アジュバント組合せ物は、疾患の免疫予防だけでなく、意外なことに、持続的なウイルス、細菌または寄生虫感染などの疾患や、癌のような慢性疾患の免疫療法にも適している。
【０００８】
免疫刺激性配列は、しばしば、プリン、プリン、Ｃ、Ｇ、ピリミジン、ピリミジンであり、その際、ジヌクレオチドＣＧモチーフはメチル化されていない。本発明のアジュバントまたはワクチンで使用するのに好ましいオリゴヌクレオチドは、好ましくは３個以上、より好ましくは６個以上のヌクレオチドにより分離された２つ以上のジヌクレオチドＣｐＧモチーフを含有する。本発明のオリゴヌクレオチドは、典型的にはデオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態においては、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間は、ホスホロジチオエート、より好ましくはホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルや他のヌクレオチド間結合も本発明の範囲内であり、混合ヌクレオチド間結合を有するオリゴヌクレオチドも含まれる。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドまたはホスホロジチオエートの製造方法は、米国特許第５，６６６，１５３号、米国特許第５，２７８，３０２号およびＷＯ９５／２６２０４に記載されている。
【０００９】
好ましいオリゴヌクレオチドの具体例は以下の配列を有する。これらの配列は、好ましくは、ホスホロチオエート修飾ヌクレオチド間結合を含有する。
オリゴ１（配列番号１）：ＴＣＣ　ＡＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴＣ　ＣＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴ（ＣｐＧ　１８２６）、
オリゴ２（配列番号２）：ＴＣＴ　ＣＣＣ　ＡＧＣ　ＧＴＧ　ＣＧＣ　ＣＡＴ　（ＣｐＧ　１７５８）、
オリゴ３（配列番号３）：ＡＣＣ　ＧＡＴ　ＧＡＣ　ＧＴＣ　ＧＣＣ　ＧＧＴ　ＧＡＣ　ＧＧＣ　ＡＣＣ　ＡＣＧ、
オリゴ４（配列番号４）：ＴＣＧ　ＴＣＧ　ＴＴＴ　ＴＧＴ　ＣＧＴ　ＴＴＴ　ＧＴＣ　ＧＴＴ　（ＣｐＧ　２００６）、
オリゴ５（配列番号５）：　ＴＣＣ　ＡＴＧ　ＡＣＧ　ＴＴＣ　ＣＴＧ　ＡＴＧ　ＣＴ　（ＣｐＧ　１６６８）。
【００１０】
別のＣｐＧオリゴヌクレオチドは上記の好ましい配列を含みうるが、ただし、それらは重要でない欠失または付加を有するものである。本発明で使用するＣｐＧオリゴヌクレオチドは、当技術分野で公知の方法（例えば、ＥＰ　４６８５２０）により合成することができる。簡便には、そのようなオリゴヌクレオチドは、自動シンセサイザーを使用して合成することが可能である。
【００１１】
本発明で使用するオリゴヌクレオチドは、典型的には、デオキシヌクレオチドである。好ましい実施形態においては、該オリゴヌクレオチド中のヌクレオチド間結合はホスホロジチオエート、より好ましくはホスホロチオエート結合であるが、ホスホジエステルも本発明の範囲内である。種々のヌクレオチド間結合（例えば、混合ホスホロチオエート　ホスホジエステル）を含むオリゴヌクレオチドも意図される。該オリゴヌクレオチドを安定化する他のヌクレオチド間結合を使用することが可能である。
【００１２】
本発明のアジュバント組成物において有利に使用できるトコール類はＥＰ　０３８２２７１　Ｂ１に記載されている。そこに開示されたトコールは一般式：
【化２】
2004511529.tif 000002
［式中、ＲはＨであるか、またはアルキル、アルコキシ、アシルオキシ、ヒドロキシ、スルフェート、およびホスフェート基よりなる群から選ばれる１個以上の同一のまたは異なる置換基であり、Ｒ１およびＲ３は互いに独立してＨまたはアルキルであり、Ｒ２はＨまたはアルキルであって、各単位において異なっていてもよく、破線は１単位中の追加の炭素−炭素結合の存在または不在を示し、ｎは１〜１０の値である。Ｒ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３におけるアルキル基は、特に炭素原子数１〜４の直鎖のまたは分岐した炭素鎖から選択され、例えばメチル、エチル、ブチルまたはイソブチルである］
で表される。
【００１３】
ＥＰ　０３８２２７１　Ｂ１に記載された、さらに定義された好適なサブグループは参照により本明細書中に含めるものとする。特に好ましいトコールは、Ｄ，Ｌ，α−トコフェロール（ＣＡＳ番号１０１９１−４１−０；化学名：（２ＲＳ，４’ＲＳ，８’ＲＳ）−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４’，８’，１２’−トリメチル−トリデシル）−６−クロマノール））であり、これはＲＯＣＨＥ（商標）から市販されている。
【００１４】
好ましくは、トコールは油乳剤、より好ましくは水中油型乳剤の形態をしている。トコールはＥＰ　０３８２２７１　Ｂ１に記載されるとおりに製剤化することができ、乳化剤を含んでいてもよいトコール液滴（好ましくは直径が１ミクロン未満）の分散体とすることが可能である。あるいは、トコールを他の油と組み合わせて使用して、油乳剤の油相を形成させてもよい。トコールと組み合わせて使用できる油乳剤の例を以下に記載する。
【００１５】
水中油型乳剤アジュバント自体はアジュバント組成物として有用であると提起されており（ＥＰ　０３９９８４３　Ｂ）、水中油型乳剤と他の活性薬剤との組合せも、ワクチン用のアジュバントとして記載されている（ＷＯ９５／１７２１０；ＷＯ９８／５６４１４；ＷＯ９９／１２５６５；ＷＯ９９／１１２４１）。他の油乳剤アジュバント、例えば、油中水型乳剤（米国特許第５，４２２，１０９号；ＥＰ　０４８０９８２　Ｂ２）および水中油中水型乳剤（米国特許第５，４２４，０６７号；ＥＰ　０４８０９８１　Ｂ）も記載されている。これらは全てトコールを配合し、最終的にはＣｐＧと組み合わせて本発明のアジュバントを形成させるのに好適な油乳剤系となる。
【００１６】
トコールと組み合わせるための油は、天然物を選択しても合成物を選択してもよく、無機物または有機物であってもよい。無機および有機の油の例は当業者には容易に理解されるであろう。
【００１７】
乳剤系の油相は代謝可能な油を含むことが好ましい。代謝可能な油なる用語の定義は当技術分野でよく知られている。代謝可能は、「代謝により変換されうること」と定義することができる（Ｄｏｒｌａｎｄ’ｓ　Ｉｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｎｄｅｒｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ，第２５版（１９７４））。油は、レシピエントにとって毒性でなく代謝により変換されうるどのような植物油、魚油、動物油または合成油であってもよい。堅果（例えば、ラッカセイ油）、種子および穀物が一般的な植物油の供給源である。合成油も本発明の一部であり、それらにはＮＥＯＢＥＥ（登録商標）のような市販の油が含まれうる。スクアレン（２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサエン）は、鮫肝油中に大量に、そしてオリーブ油、小麦胚芽油、米糠油および酵母中により少量で存在する不飽和油であり、本発明で使用するのに特に好ましい油である。スクアレンは、コレステロールの生合成における中間体であるため、代謝可能な油である（Ｍｅｒｃｋインデックス，第１０版、エントリー番号８６１９）。
【００１８】
ＣｐＧと組み合わせて本発明のアジュバントを形成させるのに特に好ましい油乳剤は水中油型乳剤、特にトコールと乳化剤を含む水中スクアレン型乳剤である。
【００１９】
好ましい乳剤系の例はＷＯ９５／１７２１０およびＷＯ９９／１１２４１に記載されており、これらの文献は、所望により免疫刺激剤ＱＳ２１および／または３Ｄ−ＭＰＬにより製剤化されうる、スクアレン、α−トコフェロールおよびＴＷＥＥＮ　８０に基づく乳剤アジュバントを開示している。
【００２０】
安定な水中油型乳剤中に存在する油滴のサイズは、光子相関分光法により測定して、好ましくは１ミクロン未満であり、実質的に直径３０〜６００ｎｍ、好ましくは実質的に直径約３０〜５００ｎｍ、最も好ましくは実質的に直径１５０〜５００ｎｍの範囲内、特に直径約１５０ｎｍでありうる。これに関しては、油滴数の８０％が、それらの好ましい範囲内にあるべきであり、より好ましくは、油滴数の９０％以上、最も好ましくは９５％以上が、その定められたサイズ範囲内にある。本発明の油乳剤中に存在する成分の量は、通常は、２〜１０％の油（例えば、スクアレン）、存在する場合には２〜１０％のα−トコフェロールおよび０．３〜３％の界面活性剤（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）の範囲内である。好ましくは、油（好ましくはスクアレン）：トコール（好ましくはα−トコフェロール）の比は１以下である。なぜなら、これがより安定した乳剤を与えるからである。また、Ｔｗｅｅｎ　８０またはＳｐａｎ　８５のような乳化剤を約１％のレベルで存在させることも可能である。いくつかの場合には、本発明のワクチンは安定化剤を更に含有することが有利でありうる。
【００２１】
水中油型乳剤の製造方法は当業者によく知られている。一般には、該方法は、トコール含有油相をＰＢＳ／ＴＷＥＥＮ８０（商標）溶液のような界面活性剤と混合し、次いでホモジナイザーを使用してホモジナイズすることを含むが、当業者には、該混合物を注射針に２回通過させる方法が小容量の液体をホモジナイズするのに適していることが明らかであろう。同様に、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓｅｒ）（Ｍ１１０Ｓマイクロフルイディクス装置、６バールの最大入力圧（約８５０バールの出力圧）で２分間にわたり最大で５０回の通過）内での乳化方法が、より小さい又はより大きな容積の乳剤を製造するために、当業者により応用されうるであろう。この応用は、必要とされる大きさの油滴の調製物が得られるまで、生じた乳剤の測定を含むルーチンの実験操作を行うことにより達成できる。
【００２２】
本発明の別の実施形態においては、トコールとＣｐＧの組合せ物はさらに免疫刺激剤、例えばＬＰＳもしくはその誘導体、またはサポニンを含むことができる。更なる免疫刺激剤の例は、”Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｄｅｓｉｇｎ−Ｔｈｅ　Ｓｕｂｕｎｉｔ　ａｎｄ　Ａｄｊｕｖａｎｔ　Ａｐｐｒｏａｃｈ”１９９５，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編，Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　ＹｏｒｋおよびＬｏｎｄｏｎ，ＩＳＢＮ　０−３０６−４４８６７−Ｘに記載されている。
【００２３】
したがって、本発明のＣｐＧ／トコールアジュバント組合せ物は、腸内細菌リポ多糖由来のアジュバントを少なくとも１種含むことが有利である。腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）は免疫系の強力な刺激物質であるが、アジュバントにおけるＬＰＳの使用はその毒性作用により制限されることが久しく知られている。コア炭水化物基および還元末端グルコサミンからのホスフェートを除去することにより得られるＬＰＳの無毒性誘導体であるモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）が、Ｒｉｂｉら（１９８６，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓ，Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｕｂｌ．Ｃｏｒｐ．，ＮＹ，ｐ４０７−４１９）により記載されており、それは以下の構造を有する。
【化３】
2004511529.tif 000003
【００２４】
ＭＰＬの更なる解毒形態が、二糖骨格の３位からアシル鎖を除去することにより得られ、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ（３Ｄ−ＭＰＬ）と称される。それは、ＧＢ　２１２２２０４Ｂに教示されている方法により精製し製造することが可能であり、その文献はジホスホリルリピドＡおよびその３−Ｏ−脱アシル化形態の製造も開示している。３Ｄ−ＭＰＬの好ましい形態は、直径０．２μｍ未満の小さな粒径を有する乳剤の形態をしており、その製造方法はＷＯ９４／２１２９２に開示されている。モノホスホリルリピドＡと界面活性剤とを含む水性製剤がＷＯ９８４３６７０Ａ２に記載されている。
【００２５】
本発明のアジュバント組合せ物中に配合される細菌リポ多糖由来のアジュバントは、細菌源から精製し加工することが可能であり、あるいはそれは合成物であってもよい。例えば、精製されたモノホスホリルリピドＡはＲｉｂｉら　１９８６（前掲）に記載されており、サルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　ｓｐ．）由来の３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルまたはジホスホリルリピドＡはＧＢ　２２２０２１１および米国特許第４９１２０９４号に記載されている。他の精製および合成リポ多糖も、ＷＯ９８／０１１３９；米国特許第６，００５，０９９号およびＥＰ　０７２９４７３　Ｂ１；Ｈｉｌｇｅｒｓら，１９８６，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９（４）：３９２−６；Ｈｉｌｇｅｒｓら，１９８７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６０（１）：１４１−６；およびＥＰ　０５４９０７４　Ｂ１に記載されている。特に好ましい細菌リポ多糖アジュバントは、米国特許第６，００５，０９９号およびＥＰ　０７２９４７３　Ｂ１に記載の３Ｄ−ＭＰＬおよびβ（１−６）グルコサミン二糖である。
【００２６】
したがって、本発明で使用しうるＬＰＳ誘導体は、ＬＰＳまたはＭＰＬまたは３Ｄ−ＭＰＬと構造において類似した免疫刺激物質である。本発明のもう１つの態様においては、該ＬＰＳ誘導体は、ＭＰＬの前記構造の副次的部分であるアシル化単糖でありうる。
【００２７】
好ましい二糖アジュバントは、以下の式で表される精製されたまたは合成のリピドＡである。
【化４】
2004511529.tif 000004
上記式中、Ｒ２は、ＨまたはＰＯ３Ｈ２でありうる；Ｒ３はアシル鎖またはβ−ヒドロキシミリストイル、または式：
【化５】
2004511529.tif 000005
を有する３−アシルオキシアシル残基でありうる。
【００２８】
アジュバント組成物はさらにサポニンを含むことができる。３Ｄ−ＭＰＬとバラ科キラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ　Ｓａｐｏｎａｒｉａ　ｍｏｌｉｎａ）の樹皮に由来するサポニンアジュバントとの組合せが、ＥＰ　０７６１２３１Ｂに記載されている。ＷＯ９５／１７２１０は、免疫刺激物質ＱＳ２１と共に、場合により３Ｄ−ＭＰＬと共に、配合されたスクアレン、α−トコフェロールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（ＴＷＥＥＮ８０）に基づくアジュバント乳剤系を開示している。ＷＯ９５／１７２１０に記載されたアジュバント系とＣｐＧとの組合せは本発明の好ましい態様を形成する。ＷＯ９６／３３７３９およびＷＯ９８／１５２８７は、場合により３Ｄ−ＭＰＬおよび／または水中油型乳剤を含んでいてもよい、サポニンと粒状担体構造物を含むアジュバント製剤を記載しており、これをトコールおよびＣｐＧと組み合わせると、本発明の好適なアジュバントが得られる。
【００２９】
サポニンは全身投与用のワクチン中のアジュバントとして公知である。個々のサポニンのアジュバント活性および溶血活性が、当技術分野において詳細に研究されている（Ｌａｃａｉｌｌｅ−ＤｕｂｏｉｓおよびＷａｇｎｅｒ，前掲）。例えば、Ｑｕｉｌ　Ａ（南米産樹木バラ科キラヤの樹皮に由来する）およびその画分が、米国特許第５，０５７，５４０号および「ワクチンアジュバントとしてのサポニン（Ｓａｐｏｎｉｎｓ　ａｓ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｄｊｕｖａｎｔｓ）」，Ｋｅｎｓｉｌ，Ｃ．Ｒ．，Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｔｈｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｓｙｓｔ，１９９６，１２（１−２）；１−５５およびＥＰ　０３６２２７９　Ｂ１に記載されている。
【００３０】
Ｑｕｉｌ　Ａの画分を含む免疫刺激性複合体（Ｉｍｍｕｎｅ　Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ＩＳＣＯＭｓ）と称される粒状構造物は溶血性であり、ワクチンの製造において使用されている（Ｍｏｒｅｉｎ，Ｂ．，ＥＰ　０１０９９４２　Ｂ１）。これらの構造物はアジュバント活性を有することが報告されている（ＥＰ　０１０９９４２　Ｂ１；ＷＯ９６／１１７１１）。
【００３１】
溶血性サポニンＱＳ２１およびＱＳ１７（Ｑｕｉｌ　ＡのＨＰＬＣ精製画分）は強力な全身性アジュバントとして記載されており、それらの製造方法は米国特許第５，０５７，５４０号およびＥＰ　０３６２２７９　Ｂ１に開示されている。また、これらの文献には、全身性ワクチン用の強力なアジュバントとして作用するＱＳ７（Ｑｕｉｌ　Ａの非溶血性画分）の使用が記載されている。さらに、ＱＳ２１の使用がＫｅｎｓｉｌら（１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ｖｏｌ　１４６，４３１−４３７）に記載されている。ＱＳ２１とポリソルベートまたはシクロデキストリンとの組合せも公知である（ＷＯ９９／１０００８）。ＱＳ２１およびＱＳ７のようなＱｕｉｌ　Ａ画分を含む粒状アジュバント系がＷＯ９６／３３７３９およびＷＯ９６／１１７１１に記載されている。全身ワクチン接種の研究において使用されている他のサポニンには、ジプソフィラ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ）およびサポナリア（Ｓａｐｏｎａｒｉａ）のような他の植物種に由来するものが含まれる（Ｂｏｍｆｏｒｄら，Ｖａｃｃｉｎｅ，１０（９）：５７２−５７７，１９９２）。
【００３２】
本発明のアジュバント組合せ物は更に担体を含むことが可能であり、その結果、ＣｐＧは該組合せ物のアジュバント活性を増強するために粒状担体と会合しうる。したがって、本発明のアジュバント組合せ物において使用するＣｐＧは遊離溶解状態にあることが可能であり、また、粒状担体、例えば無機塩（アルミニウムまたはカルシウム塩が挙げられるが、これらに限定されない）、リポソーム、ＩＳＣＯＭｓ、重合体（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリホスファジン、ポリアミノ酸、アルギネート、キトサン）または微粒子と複合体を形成させることが可能である。好ましくは、該担体は陽イオン性である。また、ＣｐＧは、それがトコールまたはトコール含有油乳剤と会合するような方法で製剤化することができる。これは、陽イオンとなるように乳剤を調製することで達成しうる。あるいはまた、ＣｐＧは、乳剤の油相と会合する脂質にコンジュゲートさせることも可能である（ＷＯ００／１５２５６）。
【００３３】
本発明のワクチンは更に、ＣｐＧ−担体複合体（例えば、ＣｐＧ／トコール／油滴またはＣｐＧ／金属塩複合体）と会合しうる又は会合し得ない抗原を含む。抗原は遊離懸濁状態にあっても、また、別の担体と会合していてもよい。本発明の好ましい態様においては、抗原がＣｐＧ−担体複合体と会合している。
【００３４】
本発明の好ましいアジュバント組合せ物は、Ｄ，Ｌα−トコフェロールのようなトコールと共に、２つの隣接ＣＧモチーフ間に少なくとも３個、好ましくは少なくとも６個のヌクレオチドを含有する１以上のＣｐＧオリゴヌクレオチドを含んでなる。この組合せ物は好ましくは、金属塩または水中油型乳剤よりなる群から選ばれる粒状担体およびＬＰＳのアジュバント活性誘導体をさらに含む。最も好ましくは、アジュバント組合せ物は、ＣｐＧ２００６（配列番号４）またはＣｐＧ１７５８（配列番号２）またはＣｐＧ１８２６（配列番号１）およびスクアレン／Ｄ，Ｌα−トコフェロール乳剤を含む。この好適なアジュバントはさらに、３−Ｏ−脱アシル化モノもしくはジホスホリルリピドＡおよび／またはＱＳ２１を含んでいてもよい。好ましいアジュバント系は、ＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬ、およびトコールとＣｐＧの組合せを含むものである。
【００３５】
本発明のアジュバント組合せ物は、全身性アジュバントまたは粘膜アジュバントの両方として使用することができる。患者へのワクチン接種は多くの投与経路により行われているが、そのうち最も一般的なものは、ワクチンを個体の深部筋肉に投与すること（筋肉内注射）である。その他の公知のワクチン接種経路としては、皮下、鼻腔内、経口、直腸、腹腔内および皮内投与が挙げられる。本発明のワクチンはどのような経路でも投与することができるが、上記ワクチンの皮膚への投与が本発明の好ましい実施形態を構成する。
【００３６】
ヒトの皮膚は、表皮を覆っている外側の「角状」クチクラ（角質層と呼ばれる）を含んでいる。この表皮の下に真皮と呼ばれる層があり、これは皮下組織を覆っている。研究者らは、ワクチンの皮膚（特に真皮）への注射が免疫応答を刺激し、さらにいくつかの更なる利点とも関連していることを明らかにした。本明細書に記載のワクチンの真皮内ワクチン接種は本発明の好ましい特徴を形成する。
【００３７】
通常の真皮内注射法である「マントー（ｍａｎｔｏｕｘ）法」は次のステップを含む。すなわち、皮膚を清浄にし、一方の手を使って、また、上のほうに向いている狭小ゲージ針（２６〜３１ケージ）のベベル（斜面）を用いて引き伸ばし、針を１０〜１５度の角度で挿入する。針のベベルが挿入されたら、針のバレルを下げ、わずかに圧力をかけながらさらに進めて、それを皮膚の下に向ける。その後液体をゆっくりと注入することにより皮膚面に水疱または隆起を形成させ、続いて針をゆっくりと引き抜く。
【００３８】
比較的最近になって、液状の薬剤を皮膚の中にまたは皮膚を通して投与するために特別に設計された装置が記載されており、例えば、ＷＯ９９／３４８５０およびＥＰ　１０９２４４４に記載の装置、さらに例えばＷＯ０１／１３９７７；米国特許第５４８０３８１号；同第５５９９３０２号；同第５３３４１４４号；同第５９９３４１２号；同第５６４９９１２号；同第５５６９１８９号；同第５７０４９１１号；同第５３８３８５１号；同第５８９３３９７号；同第５４６６２２０号；同第５３３９１６３号；同第５３１２３３５号；同第５５０３６２７号；同第５０６４４１３号；同第５５２０６３９号；同第４５９６５５６号；同第４７９０８２４号；同第４９４１８８０号；同第４９４０４６０号；ＷＯ９７／３７７０５およびＷＯ９７／１３５３７に記載のジェット式注射装置がある。ワクチン製剤の別の真皮内投与方法として、従来のシリンジと針、または固形ワクチンのバリスティック送達用に設計された装置（ＷＯ９９／２７９６１）、または経真皮パッチ（ＷＯ９７／４８４４０；ＷＯ９８／２８０３７）、または皮膚の表面に適用される（経真皮または経皮送達；ＷＯ９８／２０７３４；ＷＯ９８／２８０３７）が挙げられる。
【００３９】
本発明のワクチンを皮膚、とりわけ真皮に投与しようとする場合は、ワクチンの液量を少なく、特に約０．０５〜０．２ｍｌとする。
【００４０】
本明細書で用いる「経真皮送達」という語は、皮膚の真皮領域へのワクチンの送達を意味する。しかしながら、ワクチンは必ずしも排他的に真皮内に位置するものではない。真皮はヒト皮膚の表面から約１．０〜約２．０ｍｍの位置に存在する皮膚層であるが、個体間でまたは身体の様々な部分で若干変化している。一般には、皮膚面から１．５ｍｍ下がると真皮に到達すると予想される。真皮は表面の角質層および表皮と、下にある皮下層と、の間に位置している。送達様式に応じて、ワクチンは最終的に唯一無二にまたは主として真皮内に存在させたり、最終的に表皮および真皮内に分布させることが可能である。
【００４１】
経口、非経口、静脈内、真皮内、経真皮、鼻腔内、および筋肉内投与および製剤を含めて、様々な治療計画において本明細書に記載の特定の組成物を使用するのに適した投与および治療計画の開発は、当技術分野でよく知られており、そのいくつかを一般的な例示目的のために以下で簡単に説明する。
【００４２】
いくつかの用途において、本明細書に開示した医薬組成物は動物に経口投与で送達することが可能である。こうして、これらの組成物は不活性希釈剤または同化可能な食用担体を用いて製剤化したり、硬質または軟質シェルゼラチンカプセルに封入したり、錠剤に圧縮したりすることができ、また、直接食物に組み入れることもできる。
【００４３】
活性化合物は賦形剤と混合して、摂取可能な錠剤、バッカル錠、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、カシェ剤などの剤形で使用することができる（例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚら、Ｎａｔｕｒｅ　１９９７　Ｍａｒ　２７，３８６（６６２３）：４１０−４；Ｈｗａｎｇら、Ｃｒｉｔ　Ｒｅｖ　Ｔｈｅｒ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｓｙｓｔ　１９９８，１５（３）：２４３−８４；米国特許第５６４１５１５号；同第５５８０５７９号；同第５７９２４５１号を参照されたい）。錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは多種多様な追加の成分を含んでいてもよく、例えば、結合剤（例：トラガントガム、アカシア、コーンスターチ、ゼラチン）、賦形剤（例：リン酸二カルシウム）、崩壊剤（例：コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸など）、滑沢剤（例：ステアリン酸マグネシウム）、甘味剤（例：スクロース、ラクトース、サッカリン）またはフレーバー剤（例：ペパーミント、冬緑由、サクランボのフレーバー）を添加することができる。単位剤形がカプセルである場合は、上記タイプの物質に加えて、液状の担体を保持させることも可能である。コーティングとして、あるいは別のやり方で単位剤形の物理的形態を変更するために、他の各種物質を存在させてもよい。例えば、錠剤、丸剤またはカプセル剤にセラック、糖またはその両方をコーティングすることができる。当然、単位剤形を作る場合には、用いる物質は薬学的に純粋で、使用量において実質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物を持続放出製剤として製剤化することも可能である。典型的には、これらの製剤は少なくとも約０．１％の活性成分を含むが、活性成分のパーセントはもちろん変えることができ、有利には全製剤の重量または容積の約１または２％から約６０％または７０％またはそれ以上でありうる。当然、治療に有効な各組成物中の活性化合物の量は、どのような所与の単位用量の化合物でも適当な投与量が得られるように調製する。そのような医薬製剤を調製する分野の当業者であれば、溶解度、バイオアベイラビリティー、生物学的半減期、投与経路、製品の貯蔵寿命、その他の薬理学的事項を考慮して、様々な投与量および治療計画を手にすることができよう。
【００４４】
経口投与の場合、本発明の組成物はまた、口内洗浄剤、歯磨き、バッカル錠、経口スプレー、舌下経口投与製剤の形で１種以上の賦形剤を用いて製剤化することができる。あるいはまた、活性成分を経口溶液（例えば、ホウ酸ナトリウム、グリセリンおよび炭酸水素カリウムを含むもの）中に配合したり、歯磨き中に分散させたり、または水、結合剤、研磨剤、香料、発泡剤および湿潤剤を含む組成物に治療に有効な量で添加したりすることが可能である。また、本組成物は舌の下に置くか、あるいは口の中で溶解する錠剤または溶液の形にすることもできる。
ある状況下では、本発明の医薬組成物を非経口的、静脈内、筋肉内に、または腹腔内にさえ送達することが望ましいだろう。そのような方法は当業者に周知であり、そのいくつかはさらに、例えば米国特許第５５４３１５８号、米国特許第５６４１５１５号および米国特許第５３９９３６３号に記載されている。特定の実施形態では、水（適当にはヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と混合した水）中に活性化合物を遊離塩基または薬理学的に許容される塩として含む溶液を調製してもよい。グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびこれらの混合液中、またはオイル中に活性化合物を分散させた分散液を調製してもよい。通常の貯蔵および使用条件下では、これらの製剤は一般に微生物の増殖を防ぐための防腐剤を含有する。
【００４５】
注射に適する医薬形態の例としては、無菌の水溶液または水性分散液、および無菌の注射用溶液もしくは分散液を用時調製するための無菌粉末が挙げられる（例えば、米国特許第５４６６４６８号を参照のこと）。どのような場合にも、医薬形態は無菌でなければならず、また、容易に注射できる程度に流動性でなければならない。さらに、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、細菌や真菌のような微生物による汚染から保護されねばならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例：グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物、および／または植物油を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性を保つには、例えば、レシチンのようなコーティングを使用するか、分散液の場合は必要とされる粒子サイズを維持するか、そして／または界面活性剤を使用する。微生物の活動を抑えるには、各種の抗細菌薬および抗真菌薬、例えば、パラベン類、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどを使用することができる。多くの場合には、等張剤、例えば、糖や塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の吸収を長引かせるには、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）をその組成物中に添加する。
【００４６】
一つの実施形態において、水溶液で経口投与する場合は、必要に応じてその溶液を適切に緩衝化し、その液体希釈剤をまず初めに十分な食塩水またはグルコースにより等張とする。こうした特別の水溶液は静脈内、皮下および腹腔内投与に特に適している。これに関連して、使用可能な無菌の水性媒体は、本開示に照らして当業者に周知である。例えば、１回の投与量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、それを１０００ｍｌの皮下注入液に添加するか、あるいは提案された注入部位に注入することができる（例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ‘ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”　１５版，１０３５−１０３８頁および１５７０−１５８０頁を参照のこと）。治療すべき患者の状態に応じて投与量の変更が必ず生じるだろう。さらに、ヒトへの投与の場合には、当然のことながら、製剤は米食品医薬品局（ＦＤＡ）が要求する無菌性、発熱性、ならびに一般的な安全性および純度基準を満たすことが好ましい。担体はさらに、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗細菌薬および抗真菌薬、等張剤および吸収遅延剤、緩衝剤、担体溶液、懸濁液、コロイドなどを含むことができる。そのような媒体および薬剤を医薬活性物質のために使用することは、当技術分野で周知である。慣用の媒体または薬剤が活性成分と適合しない場合を除いて、治療用組成物でのその使用が意図される。補助的な活性成分をその組成物中に加えることもできる。「薬学的に許容される」という語は、ヒトに投与したときアレルギー反応や同様の望ましくない反応を引き起こさない分子種および組成物を意味する。
【００４７】
特定の実施形態において、医薬組成物は鼻腔内スプレー、吸入、および／または他のエーロゾル送達ビヒクルにより送達することができる。遺伝子、核酸、およびペプチド組成物を鼻エーロゾルスプレーによって肺へ直接送達する方法は、例えば、米国特許第５７５６３５３号および米国特許第５８０４２１２号に記載されている。同様に、鼻腔内微小粒子樹脂（Ｔａｋｅｎａｇａら、Ｊ　Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｒｅｌｅａｓｅ　１９９８　Ｍａｒ　２；５２（１−２）：８１−７）およびリゾホスファチジル−グリセロール化合物（米国特許第５７２５８７１号）を用いた薬物の送達も医薬分野でよく知られている。同様に、ポリテトラフルオロエチレン支持体マトリックスの形での経粘膜薬物送達の例は、米国特許第５７８００４５号に記載されている。
【００４８】
ワクチン製剤の全身投与の方法は、通常のシリンジおよび針、または固形ワクチンのバリスティック（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ）送達のために設計された装置（ＷＯ９９／２７９６１）、または無針加圧液噴射装置（米国特許第４，５９６，５５６号；米国特許第５，９９３，４１２号）、または経皮パッチ（ＷＯ９７／４８４４０；ＷＯ９８／２８０３７）を含みうる。また、本発明は、皮膚に適用される抗原（経真皮または経皮送達、ＷＯ９８／２０７３４；ＷＯ９８／２８０３７）の免疫原性を増強するために使用することができる。それゆえに、本発明は、本発明のワクチンまたはアジュバント組成物を予め充填した全身投与用の送達装置を提供する。
【００４９】
したがって、本発明は、本発明のワクチンまたはアジュバント組成物を予め充填した全身投与用の送達装置を提供する。こうして、個体における免疫応答の誘導方法であって、本発明のワクチンを個体に投与することを含んでなり、該ワクチンを非経口または全身経路により投与することを特徴とする方法を提供する。
【００５０】
好ましくは、本発明のワクチン製剤はヒト病原体に対する免疫応答を引き出すことができる抗原または抗原組成物を含有する。こうした抗原または抗原組成物は以下の病原体に由来するものである。すなわち、ＨＩＶ−１（例えば、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｇｐ１２０またはｇｐ１６０）、ヒトヘルペスウイルス（例えば、ｇＤもしくはその誘導体または前初期タンパク質、例えばＨＳＶ１またはＨＳＶ２由来のＩＣＰ２７）、サイトメガロウイルス（特にヒト）（例えば、ｇＢまたはその誘導体）、ロタウイルス（生存弱毒ウイルスを含む）、エプスタイン−バーウイルス（例えば、ｇｐ３５０またはその誘導体）、水痘−帯状疱疹ウイルス（例えば、ｇｐＩ、ＩＩおよびＩＥ６３）、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎表面抗原またはその誘導体のようなＢ型肝炎ウイルス）、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、または、他のウイルス病原体、例えば、パラミクソウイルス科：呼吸器合胞体ウイルス（例えば、ＦおよびＧタンパク質、またはその誘導体）、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス（例えば、ＨＰＶ６、１１、１６、１８など）、フラビウイルス科（例えば、黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス）またはインフルエンザウイルス（生存完全ウイルスまたは不活化ウイルス、スプリット・インフルエンザウイルス、卵またはＭＤＣＫ細胞内で増殖させたもの、または完全なインフルエンザウイロソーム（Ｒ． Ｇｌｕｃｋ， Ｖａｃｃｉｎｅ， １９９２， １０， ９１５−９２０に記載）またはその精製されたもしくは組換えタンパク質、例えば、ＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、もしくはＭタンパク質、あるいはこれらの組合せ）、または、細菌病原体、例えば、淋菌および髄膜炎菌を含むナイセリア属（例えば、莢膜多糖およびそのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、ＰｉｌＣ、アドヘシン類）；Ｓ． ｐｙｏｇｅｎｅｓ（例えば、Ｍタンパク質またはその断片、Ｃ５Ａプロテアーゼ、リポタイコ酸（ｌｉｐｏｔｅｉｃｈｏｉｃ ａｃｉｄ））、Ｓ． ａｇａｌａｃｔｉａｅ、Ｓ． ｍｕｔａｎｓ；Ｈ． ｄｕｃｒｅｙｉ；Ｂｒａｎｈａｍｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓとしても知られるＭ． ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓを含むモラクセラ属（例えば、高分子量および低分子量のアドヘシンならびにインバシン）；百日咳菌を含むボルデテラ属（例えば、パータクチン（ｐｅｒｔａｃｔｉｎ）、百日咳毒素またはその誘導体、糸状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛（ｆｉｍｂｒｉａｅ））、Ｂ． ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓおよびＢ． ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ；マイコバクテリウム属、例えば、ヒト結核菌（例えば、ＥＳＡＴ６、抗原８５Ａ、−Ｂまたは−Ｃ）、ウシ結核菌、らい菌、トリ結核菌、パラ結核菌、スメグマ菌；レジオネラ・ニューモフィラ菌を含むレジオネラ属；エシェリキア属、例えば、腸管毒性大腸菌（例えば、コロニー形成因子、熱不安定性毒素またはその誘導体、熱安定性毒素またはその誘導体）、腸管出血性大腸菌、腸管病原性大腸菌（例えば、志賀毒素様毒素またはその誘導体）；ビブリオ属、例えば、コレラ菌（例え���、コレラ毒素またはその誘導体）；赤痢菌属、例えば、ソンネ赤痢菌、志賀赤痢菌、フレクスナー赤痢菌；エルジニア属、例えば、Ｙ． ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ（例えば、Ｙｏｐタンパク質）、ペスト菌、偽結核エルジニア菌；カンピロバクター属、例えば、Ｃ． ｊｅｊｕｎｉ（例えば、毒素、アドヘシンおよびインバシン）、およびＣ． ｃｏｌｉ；サルモネラ属、例えば、チフス菌、パラチフス菌、ブタコレラ菌、腸炎菌；リステリア属、例えば、リステリア菌；ヘリコバクター属、例えば、ヘリコバクター・ピロリ（例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、空胞形成毒素）；シュードモナス属、例えば、緑膿菌；スタフィロコッカス属、例えば、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌；エンテロコッカス属、例えば、Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ；クロストリジウム属、例えば、破傷風菌（例えば、破傷風毒素およびその誘導体）、ボツリヌス菌（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）、Ｃ． ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ（例えば、クロストリジウム毒素ＡまたはＢおよびその誘導体）；バシラス属、例えば、炭疽菌（例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体）；コリネバクテリウム属、例えば、ジフテリア菌（例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体）；ボレリア属、例えば、Ｂ． ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ． ｇａｒｉｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ． ａｆｚｅｌｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ． ａｎｄｅｒｓｏｎｉｉ（例えば、ＯｓｐＡ、ＯｓｐＣ、ＤｂｐＡ、ＤｂｐＢ）、Ｂ． ｈｅｒｍｓｉｉ；エールリヒア属、例えば、Ｅ． ｅｑｕｉおよびヒト顆粒球性エールリヒア症の病原菌；リケッチア属、例えば、斑点熱リケッチア菌；クラミジア属、例えば、トラコーマクラミジア菌（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、Ｃ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（例えば、ＭＯＭＰ、ヘパリン結合タンパク質）、オウム病クラミジア菌；レプトスピラ属、例えば、Ｌ． ｉｎｔｅｒｒｏｇａｎｓ；トレポネーマ属、例えば、梅毒トレポネーマ（例えば、希外膜タンパク質）、Ｔ． ｄｅｎｔｉｃｏｌａ、Ｔ． ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、または、寄生虫、例えば、熱帯熱マラリア原虫を含むプラスモディウム属；トキソプラスマ科、例えば、Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ（例えば、ＳＡＧ２、ＳＡＧ３、Ｔｇ３４）；エントアメーバ属、例えば、赤痢アメーバ；バベシア属、例えば、Ｂ． ｍｉｃｒｏｔｉ；トリパノソーマ属、例えば、クルーズトリパノソーマ；ジアルジア属、例えば、ランブル鞭毛虫；リーシュマニア属、例えば、森林型熱帯リーシュマニア；ニューモシスティス属、例えば、ニューモシスティス・カリニ；トリコモナス属、例えば、膣トリコモナス；住血吸虫属、例えば、マンソン住血吸虫、または、酵母、例えば、カンジダ・アルビカンスを含むカンジダ属；クリプトコッカス・ネオフォルマンスを含むクリプトコッカス属に由来するものである。
【００５１】
ヒト結核菌のその他の好ましい特異的抗原は、例えば、Ｔｂ　Ｒａ１２、Ｔｂ　Ｈ９、Ｔｂ　Ｒａ３５、Ｔｂ３８−１、Ｅｒｄ１４、ＤＰＶ、ＭＴＩ、ＭＳＬ、ｍＴＴＣ２およびｈＴＣＣ１である（ＷＯ９９／５１７４８）。ヒト結核菌のタンパク質には融合タンパク質およびそれらの変異体も含まれ、この場合はヒト結核菌の少なくとも２つ、好ましくは３つのポリペプチドがより大きいタンパク質に融合される。好ましい融合体として、Ｒａ１２−ＴｂＨ９−Ｒａ３５、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、Ｅｒｄ１４−ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ、ＤＰＶ−ＭＴＩ−ＭＳＬ−ｍＴＣＣ２、ＴｂＨ９−ＤＰＶ−ＭＴＩが挙げられる（ＷＯ９９／５１７４８）。
【００５２】
クラミジアの最も好ましい抗原には、例えば、高分子量タンパク質（ＨＷＭＰ）、（ＷＯ９９／１７７４１）、ＯＲＦ３（ＥＰ３６６４１２）、および推定上の膜タンパク質（Ｐｍｐ）が含まれる。ワクチン製剤の他のクラミジア抗原はＷＯ９９／２８４７５に記載されている抗原群から選択することができる。
【００５３】
好ましい細菌ワクチンは、連鎖球菌属、例えば、肺炎連鎖球菌に由来する抗原（例えば、莢膜多糖類およびそのコンジュゲート、ＰｓａＡ、ＰｓｐＡ、ストレプトリシン、コリン結合タンパク質）およびタンパク質抗原ニューモリシン（Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，１９８９，６７，１００７；Ｒｕｂｉｎｓら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，２５，３３７−３４２）、ならびにそれらの変異型解毒誘導体（ＷＯ９０／０６９５１；ＷＯ９９／０３８８４）を含む。その他の好適な細菌ワクチンは、ヘモフィルス属、例えば、Ｂ型インフルエンザ菌に由来する抗原（例えば、ＰＲＰおよびそのコンジュゲート）、型別不能なインフルエンザ菌に由来するもの、例えば、ＯＭＰ２６、高分子量アドヘシン、Ｐ５、Ｐ６、プロテインＤおよびリポプロテインＤ、フィンブリンおよびフィンブリン由来のペプチド（米国特許第５８４３４６４号）またはそれらの多コピー変異体もしくは融合タンパク質を含む。
【００５４】
Ｂ型肝炎表面抗原の誘導体は当技術分野で周知であり、とりわけ、ヨーロッパ特許出願ＥＰ−Ａ−４１４３７４；ＥＰ−Ａ−０３０４５７８、およびＥＰ１９８−４７４に記載されているＰｒｅＳ１、ＰｒｅＳ２　Ｓ抗原などがある。一つの好ましい態様において、本発明のワクチン製剤はＨＩＶ−１抗原のｇｐ１２０（特にＣＨＯ細胞において発現させた場合）を含む。さらなる実施形態では、本発明のワクチン製剤は上述したようなｇＤ２ｔを含む。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態において、特許請求されたアジュバントを含むワクチンは、性器いぼの原因であると考えられるヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）由来の抗原（ＨＰＶ６またはＨＰＶ１１など）および子宮頸癌の原因であるＨＰＶウイルス由来の抗原（ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８など）を含む。
【００５６】
性器いぼの予防用または治療用ワクチンの特に好ましい形態は、Ｌ１粒子またはキャプソーマー（ｃａｐｓｏｍｅｒ）、ならびにＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、タンパク質Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１およびＬ２から選ばれる１種以上の抗原を含む融合タンパク質を含有する。
【００５７】
融合タンパク質の最も好ましい形態は、ＷＯ９６／２６２７７に記載されるＬ２Ｅ７、およびＧＢ９７１７９５．５（ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５２８５）に開示されるプロテインＤ（１／３）−Ｅ７である。
【００５８】
ＨＰＶ子宮頸部感染症または癌の好ましい予防用または治療用ワクチン組成物は、ＨＰＶ１６または１８抗原を含むことができる。例えば、ウイルス様粒子として一緒に提示されたＬ１もしくはＬ２抗原モノマー、またはＬ１もしくはＬ２抗原、あるいはＶＬＰまたはキャプソマー構造体において単独で提示されたＬ１単独タンパク質。そのような抗原、ウイルス様粒子、およびキャプソマーはそれ自体公知である。例えば、ＷＯ９４／００１５２、ＷＯ９４／２０１３７およびＷＯ９３／０２１８４を参照されたい。
【００５９】
さらなる初期タンパク質には、例えばＥ７、Ｅ２、好ましくはＥ５が単独でまたは融合タンパク質として含まれる。その特に好適な具体例はＬ１Ｅ７融合タンパク質を含むＶＬＰである（ＷＯ９６／１１２７２）。
【００６０】
特に好適なＨＰＶ１６抗原は、ＨＰＶ１６からプロテインＤ−Ｅ６またはＥ７融合体を形成するために、プロテインＤ担体との融合体中に初期タンパク質Ｅ６またはＥ７、またはそれらの組合せ；あるいはＥ６またはＥ７とＬ２との組合せを含む（ＷＯ９６／２６２７７）。
【００６１】
また、ＨＰＶ１６または１８初期タンパク質であるＥ６またはＥ７は、単一の分子で、好ましくはプロテインＤ−Ｅ６／Ｅ７融合体で提示される。そのようなワクチンはＨＰＶ１８由来のＥ６およびＥ７タンパク質のいずれかまたは両方を、好ましくは、プロテインＤ−Ｅ６またはプロテインＤ−Ｅ７融合タンパク質あるいはプロテインＤ−Ｅ６／Ｅ７融合タンパク質の形で含んでいてもよい。
【００６２】
本発明のワクチンは他のＨＰＶ株由来の抗原、好ましくはＨＰＶ３１または３３由来のものをさらに含んでいてもよい。
【００６３】
本発明のワクチンは、さらに、マラリアを引き起こす寄生生物由来の抗原を含む。例えば、熱帯熱マラリア原虫の好ましい抗原としては、ＲＴＳ，ＳおよびＴＲＡＰがある。ＲＴＳは、熱帯熱マラリア原虫のサーカムスポロゾイト（ＣＳ）タンパク質の実質的に全部のＣ末端部分が、Ｂ型肝炎ウイルスの表面（Ｓ）抗原にＢ型肝炎表面抗原のｐｒｅＳ２部分の４アミノ酸を介して結合されているハイブリッドタンパク質である。その完全な構造は、英国特許出願第９１２４３９０．７号の優先権を主張してＷＯ９３／１０１５２として公開された国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９２／０２５９１に開示されている。酵母で発現させると、ＲＴＳはリポタンパク質粒子として産生され、それをＨＢＶ由来のＳ抗原と共発現させると、ＲＴＳ，Ｓとして知られる混合粒子が産生される。ＴＲＡＰ抗原はＷＯ９０／０１４９６として公開された国際特許出願ＰＣＴ／ＧＢ８９／００８９５に開示されている。本発明の好ましい具体例は、抗原調製物がＲＴＳ，Ｓ抗原とＴＲＡＰ抗原の組合せを含むマラリアワクチンである。多段階マラリアワクチンの成分として可能性のある、その他の候補プラスモジウム抗原は、熱帯熱マラリア原虫のＭＳＰ１、ＡＭＡ１、ＭＳＰ３、ＥＢＡ、ＧＬＵＲＰ、ＲＡＰ１、ＲＡＰ２、Ｓｅｑｕｅｓｔｒｉｎ、ＰｆＥＭＰ１、Ｐｆ３３２、ＬＳＡ１、ＬＳＡ３、ＳＴＡＲＰ、ＳＡＬＳＡ、ＰｆＥＸＰ１、Ｐｆｓ２５、Ｐｆｓ２８、ＰＦＳ２７／２５、Ｐｆｓ１６、Ｐｆｓ４８／４５、Ｐｆｓ２３０およびプラスモジウム属のそれらの類似体である。
【００６４】
前記製剤はまた抗腫瘍抗原を含有し、癌の免疫療法的治療に有用である。例えば、該アジュバント製剤は、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎臓癌または悪性黒色腫などに対する腫瘍拒絶抗原とともに使用される。かかる抗原の例として、ＭＡＧＥ１、ＭＡＧＥ３およびＭＡＧＥ４または他のＭＡＧＥ抗原、例えば、ＷＯ９９／４０１８８に開示されているもの、ＰＲＡＭＥ、ＢＡＧＥ、Ｌａｇｅ（ＮＹ　Ｅｏｓ　１としても公知である）ＳＡＧＥおよびＨＡＧＥ（ＷＯ９９／５３０６１）またはＧＡＧＥ（ＲｏｂｂｉｎｓおよびＫａｗａｋａｍｉ，１９９６，Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　８，ｐｐ　６２８−６３６；Ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｅｙｎｄｅら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　＆　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９７年に提出）；Ｃｏｒｒｅａｌｅら（１９９７），Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　８９，ｐ２９３）が挙げられる。実際のところ、これらの抗原は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌のような広範なタイプの腫瘍において発現される。
【００６５】
本発明で使用するＭＡＧＥ抗原は、発現エンハンサーまたは免疫学的融合パートナーとの融合タンパク質として発現されうる。特に、Ｍａｇｅタンパク質はヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ）Ｂ由来のプロテインＤまたはそのリピド化誘導体に融合させることができる。とりわけ、その融合パートナーはプロテインＤの最初の１／３を含みうる。そのような構築物はＷＯ９９／４０１８８に開示されている。
【００６６】
他の腫瘍特異的抗原も、本発明のアジュバントと共に使用するのに適しており、それらには、腫瘍特異的ガングリオシド、例えばＧＭ２およびＧＭ３、または担体タンパク質とのそれらのコンジュゲートが含まれるが、これらに限定されるものではない。あるいは該抗原は、自己ペプチドホルモン、例えば、多数の癌の治療または免疫抑制において有用である短い１０アミノ酸長のペプチドである全長性腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＧｎＲＨ，ＷＯ９５／２０６００）でありうる。
【００６７】
更なる好ましい実施形態においては、前立腺抗原、例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＰＳＣＡ（ＰＮＡＳ　９５（４）　１７３５−１７４０　１９９８）、ＰＳＭＡ、またはプロスターゼ（Ｐｒｏｓｔａｓｅ）として公知の抗原が使用される。
【００６８】
プロスターゼは、保存されたセリンプロテアーゼ触媒三つ組残基Ｈ−Ｄ−Ｓと潜在的な分泌機能を示すアミノ末端のプレプロペプチド配列とを有する、２５４アミノ酸長の前立腺特異的セリンプロテアーゼ（トリプシン様）である（Ｐ．Ｎｅｌｓｏｎ，Ｌｕ　Ｇａｎ，Ｃ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，Ｐ．Ｍｏｓｓ，Ｒ．Ｇｅｌｉｎａｓ，Ｌ．Ｈｏｏｄ　＆　Ｋ．Ｗａｎｄ，「発現が前立腺に限定されているアンドロゲン調節セリンプロテアーゼであるプロスターゼの分子クローニングおよび特性決定（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｓｅ，　ａｎ　ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｓｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」，　Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９９）９６，３１１４−３１１９）。推定グリコシル化部位が記載されている。推定される構造は他の公知のセリンプロテアーゼに酷似しており、このことは、成熟ポリペプチドが単一ドメインにフォールディングされることを示している。成熟タンパク質は２２４アミノ酸長であり、１つのＡ２エピトープが天然でプロセシングされることが示されている。
【００６９】
プロスターゼのヌクレオチド配列および推定ポリペプチド配列およびホモログは、Ｆｅｒｇｕｓｏｎら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　１９９９，９６，３１１４−３１１９）および国際特許出願番号ＷＯ９８／１２３０２（そしてまた、特許が付与された対応する米国特許第５，９５５，３０６号）、ＷＯ９８／２０１１７（そしてまた、特許が付与された対応する米国特許第５，８４０，８７１号および米国特許第５，７８６，１４８号）（前立腺特異的カリクレイン）およびＷＯ００／０４１４９（Ｐ７０３Ｐ）に開示されている。
【００７０】
本発明は、プロスターゼタンパク質ならびにその断片およびホモログに基づくプロスターゼタンパク質融合体（「誘導体」）を含む製剤を提供する。そのような誘導体は、前立腺癌の治療に適した治療用ワクチン製剤中での使用に適している。典型的には、該断片は、前記の特許および特許出願に開示されている少なくとも２０、好ましくは５０、より好ましくは１００個の連続したアミノ酸を含有する。
【００７１】
もう１つの好ましい前立腺抗原は、Ｐ５０１Ｓ（ＷＯ９８／３７８１４の配列番号１１３）として公知である。その免疫原性断片および部分は、前記の特許出願に開示されている少なくとも２０、好ましくは５０、より好ましくは１００個の連続したアミノ酸を含む。例えば、ＰＳ１０８（ＷＯ９８／５０５６７）を参照されたい。
【００７２】
他の前立腺特異的抗原は、ＷＯ９８／３７４１８およびＷＯ／００４１４９から公知である。もう１つは、ＳＴＥＡＰ（ＰＮＡＳ　９６　１４５２３　１４５２８７−１２　１９９９）である。
【００７３】
本発明において有用な他の腫瘍関連抗原には、Ｐｌｕ−１（Ｊ　Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ　２７４（２２）１５６３３−１５６４５，１９９９）、ＨＡＳＨ−１、ＨａｓＨ−２、クリプト（Ｃｒｉｐｔｏ）（Ｓａｌｏｍｏｎら　Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ　１９９，２１　６１−７０，米国特許第５６５４１４０号）、クリプチン（Ｃｒｉｐｔｉｎ）（米国特許第５９８１２１５号）が含まれる。さらに、癌治療用のワクチンに特に適した抗原には、チロシナーゼおよびサービビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）も含まれる。
【００７４】
Ｍｕｃ１のようなムチン由来ペプチドに関しては、例えば、米国特許第５７４４，１４４号、米国特許第５８２７，６６６号、ＷＯ８８０５０５４、米国特許４，９６３，４８４号を参照されたい。特に、ＳＭ３抗体（米国特許第６０５４４３８号）により認識される、Ｍｕｃ１ペプチドの少なくとも１つの反復単位、好ましくは少なくとも２つのそのような反復単位を含むＭｕｃ１由来ペプチドが意図される。他のムチン由来ペプチドには、Ｍｕｃ５由来のペプチドが含まれる。
【００７５】
本発明は、乳癌抗原、例えばＨｅｒ　２／ｎｅｕ、マンマグロビン（ｍａｍｍａｇｌｏｂｉｎ）（米国特許第５６６８２６７号）またはＷＯ００／５２１６５、ＷＯ９９／３３８６９、ＷＯ９９／１９４７９、ＷＯ９８／４５３２８に開示されているものとの組合せにおいても有用である。Ｈｅｒ　２　ｎｅｕ抗原は、とりわけ、米国特許第５，８０１，００５号に開示されている。好ましくは、Ｈｅｒ　２　ｎｅｕは、全細胞外ドメイン（およそアミノ酸１−６４５を含む）またはその断片、および全細胞内ドメイン（Ｃ末端のおよそ５８０アミノ酸）の少なくとも免疫原性部分を含む。特に、該細胞内部分はリン酸化ドメインまたはその断片を含むべきである。そのような構築物はＷＯ００／４４８９９に開示されている。特に好ましい構築物はＥＣＤ　ＰＤとして公知であり、もう１つはＥＣＤ　ΔＰＤとして公知である。ＷＯ００／４４８９９を参照されたい。本発明で用いるＨｅｒ　２　ｎｅｕは、ラット、マウスまたはヒトに由来するものでありうる。
【００７６】
前記製剤は、腫瘍を支持する機構（例えば、血管新生、腫瘍侵襲）に関連した抗原、例えば、ｔｉｅ２、ＶＥＧＦを含有していてもよい。
【００７７】
本発明の組成物を用いてボレリア属細菌由来の抗原を含むワクチンを製剤化しうることは予測がつく。例えば、抗原として、核酸、病原菌由来の抗原または抗原調製物、組換えにより産生されたタンパク質またはペプチド、およびキメラ融合タンパク質が挙げられる。特に、抗原はＯｓｐＡである。ＯｓｐＡは宿主細胞（大腸菌）のためにリピド化された形の完全な成熟タンパク質（Ｌｉｐｏ−ＯｓｐＡ）であっても、リピド化されていない誘導体であってよい。そのような非リピド化誘導体として、インフルエンザウイルスの非構造タンパク質（ＮＳ１）の最初の８１のＮ末端アミノ酸をもつ非リピド化ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質、完全なＯｓｐＡタンパク質が挙げられ、もう一つのＭＤＰ−ＯｓｐＡは３個の追加のＮ末端アミノ酸をもつＯｓｐＡの非リピド化形態である。
【００７８】
本発明のワクチンはアレルギーの予防または治療に使用することができる。そのようなワクチンはアレルゲン特異的抗原（例えば、Ｄｅｒ　ｐ１）およびアレルゲン非特異的抗原（例えば、ｓｔａｎｗｏｒｔｈデカペプチド（ＥＰ０４７７２３１Ｂ１）を含むがこれに限定されない、ヒトＩｇＥ由来のペプチド）を含むだろう。
【００７９】
本発明のワクチンはまた、アレルギー、癌または感染症を除く他の慢性疾患の予防または治療にも使用することができる。かかる慢性疾患はアテローム性動脈硬化症やアルツハイマー病のような疾患である。
【００８０】
本発明のワクチンは、慢性症状や癌のような疾患の免疫療法的治療だけでなく、持続性の感染症の治療にも特に適している。したがって、本発明のワクチンは、結核（ＴＢ）、ＡＩＤＳおよびＢ型肝炎（ＨｅｐＢ）ウイルス感染といった感染症の免疫療法に特に適している。
【００８１】
したがって、ＴＢ、ＡＩＤＳ、ＨｅｐＢなどの感染症の免疫療法のための本発明のワクチンおよびアジュバント、ならびにＴＢ、ＡＩＤＳ、ＨｅｐＢなどの感染症の免疫療法用の医薬の製造における前記アジュバントおよびワクチンの使用を提供する。ＴＢの場合には、ＴＢ感染に罹患した個体に本発明のワクチンを投与して該個体の細菌負荷量を低減させることを含む、前記個体の治療方法を提供する。細菌負荷量の低減は痰中に見出せるＴＢの量の減少であって、ＴＢ疾患の改善または治癒につながる。
【００８２】
また、ＡＩＤＳの場合には、ＡＩＤＳに罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法を提供する。この方法は、個体に本発明のワクチンを投与し、それによってその後のＨＩＶ感染が原因で生じるＣＤ４＋Ｔ細胞の減少を抑えるか、またはすでにＨＩＶに感染した個体におけるＣＤ４＋Ｔ細胞の減少を遅らせたり、停止させたりすることを含む。
【００８３】
さらに、持続性Ｂ型肝炎ウイルス感染の場合には、ＨｅｐＢ感染に罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法を提供する。こうして、個体に本発明のワクチンを投与し、それによって血清中のＨｅｐＢ負荷のレベル（ＤＮＡクリアランスにより測定）を低下させ、かつまた、肝臓損傷の量（酵素アラニントランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の血清レベルの低下または安定化により検出）を軽減することを含む方法が提供される。
【００８４】
それぞれのワクチン用量中に含まれるタンパク質の量は、典型的なワクチンにおいて重大かつ有害な副作用を起こすことなく免疫防御応答を引き出す量として選択される。そのような量は、使用する特定の免疫原およびその免疫原の提示方法に応じて変化するだろう。一般的に、各用量は１〜１０００μｇのタンパク質、好ましくは１〜５００μｇ、より好ましくは１〜１００μｇ、最も好ましくは１〜５０μｇのタンパク質を含む。特定のワクチンの最適量は、ワクチンを接種した被験者における適切な免疫応答を観察することを含む標準的な方法により確かめることができる。
【００８５】
本発明のアジュバントまたはワクチン中のＣｐＧまたは免疫刺激性オリゴヌクレオチドの量は、一般には少量であるが、ワクチン製剤に応じて、１〜１０００μｇ／１回量、好ましくは１〜５００μｇ／１回量、より好ましくは１〜１００μｇ／１回量の範囲内でありうる。
【００８６】
存在する場合に、本発明のアジュバント中で使用するＬＰＳ誘導体の量は、１〜１０００μｇ／１回量、好ましくは１〜５００μｇ／１回量、より好ましくは１〜２５０μｇ／１回量、最も好ましくは１〜１００μｇ／１回量の範囲内でありうる。したがって、ＣｐＧ：ＬＰＳ誘導体（ｗ／ｗ）の比は１：１０００〜１０００：１の範囲内であり、典型的には１：１００〜１００：１の範囲内、好ましくは１：１０〜１：１または１：１〜１０：１の範囲内、最も好ましくは１：１、４：１または１０：１となろう。
【００８７】
本発明の製剤は、予防目的および治療目的の両方に使用することができる。したがって、ウイルス、細菌、寄生虫による感染、アレルギー、癌およびその他の非慢性疾患の予防および治療用のワクチンの製造における、サポニンおよびＣｐＧ分子の組合せ物の使用を提供する。したがって、本発明は、感染症または癌、またはアレルギー、または自己免疫疾患に罹患しやすい又は罹患した哺乳動物の治療方法を提供する。本発明のもう１つの態様においては、医薬として使用するための、本明細書に記載のサポニンおよびＣｐＧを含むワクチンまたはアジュバント組合せ物を提供する。ワクチン製剤は、一般には、Ｎｅｗ　Ｔｒｅｎｄｓ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｖａｃｃｉｎｅｓ，Ｖｏｌｌｅｒら編，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐａｒｋ　Ｐｒｅｓｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，Ｕ．Ｓ．Ａ．１９７８に記載されている。
【００８８】
本発明の組成物は、様々な源に由来する抗原を含むワクチンを製剤化するために使用できると予想される。例えば、抗原には、ヒト、細菌またはウイルスの核酸、病原体由来の抗原もしくは抗原調製物、腫瘍由来の抗原もしくは抗原調製物、宿主由来の抗原、例えばＩｇＥ由来のペプチド、特にＩｇＥのヒスタミン放出デカペプチド（Ｓｔａｎｗｏｒｔｈデカペプチドとして知られる）、組換えにより産生されたタンパク質もしくはペプチド、およびキメラ融合タンパク質が含まれる。
【００８９】
また、本発明では、免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含むワクチンにより生起される抗原に対する免疫応答の質を、Ｔｈ１タイプの免疫応答のほうにシフトさせる方法であって、ワクチンを、免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびトコール含有水中油型乳剤を用いて製剤化することを含んでなる方法を提供する。詳細には、免疫応答の質をシフトさせる前記方法は、マウスモデルでアッセイしてＴｈ１タイプの免疫応答を生起させるものであり、該ワクチンにより引き出される抗原特異的ＩｇＧアイソタイプを測定すると、ＩｇＧ１が、アイソタイプ特異的ＥＬＩＳＡにより測定される中点力価（ｍｉｄ　ｐｏｉｎｔ　ｔｉｔｒｅ）で決定して、抗原特異的な総ＩｇＧの５０％未満を占めることを特徴とする。好ましくは、アイソタイプ特異的ＥＬＩＳＡにより測定される中点力価で決定して、ＩｇＧ１が抗原特異的な総ＩｇＧの４０％未満である。
【００９０】
また、トコールを含む水中油型乳剤を調製し、該トコール乳剤を免疫刺激性オリゴヌクレオチドと混合してアジュバントを調製し、該アジュバントを抗原または抗原組成物と共に製剤化することを含んでなる、ワクチン組成物の製造方法も提供する。
【００９１】
さらに、免疫刺激性オリゴヌクレオチドとトコールの組合せ物を含むワクチン組成物を個体に投与することを含んでなる、疾患に罹患しやすいまたは罹患した個体の治療方法も提供する。本明細書に記載のワクチンの医療における使用も提供する。
【００９２】
さらに、ＬＰＳの誘導体を選択し、ＣｐＧ分子を選択し、それらを抗原と共に医薬上許容される賦形剤中で、サポニンの不在下で、混合することを含む、ワクチンまたはアジュバントの製造方法を提供する。本発明の組合せ物に使用するのに適した医薬上許容される賦形剤の例として、水、リン酸緩衝食塩水、等張緩衝溶液が挙げられる。
【００９３】
好ましくは、本発明のアジュバントはトコールと代謝可能な油乳剤と免疫刺激性オリゴヌクレオチドから成るか、本質的にそれらから成る。より好ましくは、アジュバント組成物はトコールと代謝可能な油乳剤と免疫刺激性オリゴヌクレオチドとサポニンから本質的に成る。上記のこれら２つの実施形態において、トコールは好ましくはα−トコフェロールであり、代謝可能な油は好ましくはスクアレンであり、免疫刺激性オリゴヌクレオチドは好ましくはＣｐＧ２００６（配列番号４）である。これらの実施形態の範囲内の全ての変更および組合せは明らかに本発明により意図される。最も好ましくは、アジュバント組成物はα−トコフェロールおよびスクアレン乳剤、ＣｐＧ２００６（配列番号４）およびＱＳ２１から成るか、本質的にそれらから成る。
【００９４】
最も好適な本発明のワクチンは、Ｈｅｒ２Ｎｅｕ抗原、好ましくはリン酸化ドメインに結合したＨｅｒ２Ｎｅｕの細胞外ドメインの融合体（ＥＣＤ−ＰＤ（ＷＯ００／４４８９９に記載のように生産したもの））を含有する。したがって、本発明では、免疫刺激性オリゴヌクレオチド、トコール、およびＥＣＤ−ＰＤの組合せを含むワクチン組成物を個体に投与することを含んでなる、癌に罹患した個体の治療方法を提供する。先に記載した免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよびトコールの好ましい特徴はすべて、この治療方法においても考慮される。
【００９５】
本発明を以下の実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００９６】
実施例１：　ＥＣＤ−ＰＤ抗原でのマウスの免疫感作
この実験は、リン酸化ドメインに結合したＨｅｒ２Ｎｅｕの細胞外ドメインの融合体（ＥＣＤ−ＰＤ）である抗原（ＷＯ００／４４８９９に記載の方法に従いＣＨＯ細胞において産生させたもの）を用いて、ある範囲のアジュバント製剤を検討するために計画したものである。
【００９７】
【表１】
2004511529.tif 000006
【００９８】
上記グループにおいて使用したトコール含有水中油型乳剤においては、Ｄ，Ｌ，α−トコフェロール（ＣＡＳ番号１０１９１−４１−０；化学名：（２ＲＳ，４’ＲＳ，８’ＲＳ）−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４’，８’，１２’−トリメチル−トリデシル）−６−クロマノール））（これはＲＯＣＨＥ（商標）から市販されている）を使用した。トコールは、存在する場合には、２．５容量％のスクアレンと共にそれを２．５容量％含む水中油型乳剤中に存在した。両方の油を混合し、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））を加えた後、マイクロフルイダイゼーション（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｓａｔｉｏｎ）（Ｍ１１０Ｓマイクロフルイディクス装置、６バールの最大入力圧（約８５０バールの出力圧）で２分間にわたり最大で５０回の通過（ＷＯ９５／１７２１０に記載））を行った。したがって、グループ３、６および９は、水性ＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬまたはＣｐＧを添加した前記トコール乳剤に基づいていた。
【００９９】
ＱＳ２１および３Ｄ−ＭＰＬは、前記ワクチングループのいずれかに存在する場合には、５μｇ／１回量で加え、ＣｐＧ（オリゴ４（配列番号４）：ＴＣＧ　ＴＣＧ　ＴＴＴ　ＴＧＴ　ＣＧＴ　ＴＴＴ　ＧＴＣ　ＧＴＴ）は５０μｇの用量で加えた。
【０１００】
グループ２、５、１０で使用したアジュバントは、ＥＰ　０８２２８３１　Ｂ１（その内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載の技法に従い調製した。グループ１１は、リポソームの膜中に３Ｄ−ＭＰＬを含んでいた。簡単に説明すると、３Ｄ−ＭＰＬ、ジオレオイルホスファチジルコリンおよびコレステロールを一緒に混合し、単ラメラリポソームにマイクロフルイダイズした（ＥＰ　０８２２８３１　Ｂ１に記載のとおり−ＱＳ２１を省いた）。
【０１０１】
グループ４、７および８で使用したアジュバントは、水性懸濁液または溶液の形態であった。
【０１０２】
ワクチン接種方法
Ｂ６Ｆ１マウスの群に、１４日間隔で４回（５０μｌずつの容量）筋肉内にワクチン接種した。４回目のワクチン接種から１４日後、Ｈｅｒ２Ｎｅｕを発現する２×１０６個のＴＣｌ腫瘍細胞で該マウスを皮下チャレンジした。
【０１０３】
腫瘍細胞系ＴＣ１
Ｃ５７ＢＬ．６マウス由来の一次肺上皮細胞をＨＰＶ　１６　Ｅ６およびＥ７で不死化し、その後活性型ｒａｓ癌遺伝子により形質転換して、Ｅ６およびＥ７を発現する腫瘍形成性の細胞系を作製した（Ｌｉｎ　ＫＹ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　１９９６　Ｊａｎ　１；５６（１）：２１−６ｌ）。Ｅ７発現は、マウス抗ＨＰＶ　１６　Ｅ７モノクローナル抗体（Ｔｒｉｔｏｎ　Ｃｏｒｐ．　Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ）を用いて、固定し透過性にしたＴＣ１細胞のＦＡＣＳ分析により証明されている。Ｈｅｒ２Ｎｅｕ−ＴＣｌ腫瘍細胞系は、Ｈｅｒ２ＮｅｕをコードするレトロウイルスベクターによるＴＣｌ細胞のトランスダクションにより作製した。ブラストシジンによる選択期間の後、耐性クローンを単離し、Ｈｅｒ２Ｎｅｕの発現に関してＦＡＣＳによりスクリーニングした。最高のＨｅｒ２Ｎｅｕ発現を示すクローンを選択し、２×１０６個のチャレンジ量が、野生型ＴＣｌ細胞と同様の増殖速度を有し、しかも対照動物に対して１００％の確率で腫瘍を発生させることを確認した。
【０１０４】
個々の腫瘍のサイズを週２回測定し、グループの平均として表した。
【０１０５】
結果
図１は、グループ１、２、４、５および６に関する腫瘍増殖の結果を示す。図２は、グループ１、５、６、７および１１に関する腫瘍増殖の結果を示す。図３は、グループ１、５、６、８、９および１０に関する腫瘍増殖の結果を示す。トコールとＣｐＧを含む製剤が腫瘍の完全な退縮を引き起こした。
【０１０６】
図４および５は、５μｇ／ｍｌの免疫原（ＥＣＤ−ＰＤ）または細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または細胞内ドメイン（ＩＣＤ）またはＨｅｒ２Ｎｅｕと共にインキュベートした後のｉｎ　ｖｉｔｒｏでの脾細胞のリンパ増殖を示す。
【０１０７】
図６および７は、ＥＬＩＳＡで測定した総Ｉｇにより表される免疫原（ＥＣＤ−ＰＤ）に対する体液性免疫応答（図６）、またはこれらの応答におけるＩｇＧアイソタイプ分布（図７）を示す。
【０１０８】
実施例２：　Ｐ７０３Ｐ抗原でのマウスの免疫感作
この実験は、抗原プロスターゼ（Ｆｅｒｇｕｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　１９９９，９６，３１１４−３１１９）とインフルエンザウイルス由来のＮＳ１のＮ末端１−８１断片との融合体（Ｐ７０３Ｐ−ＮＳ１）である抗原を用いて、ある範囲のアジュバント製剤を検討するために計画したものである。
【０１０９】
【表２】
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【０１１０】
上記グループにおいて使用したトコール含有水中油型乳剤においては、Ｄ，Ｌ，α−トコフェロール（ＣＡＳ番号１０１９１−４１−０；化学名：（２ＲＳ，４’ＲＳ，８’ＲＳ）−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４’，８’，１２’−トリメチル−トリデシル）−６−クロマノール））（これはＲＯＣＨＥ（商標）から市販されている）を使用した。トコールは、存在する場合には、２．５容量％のスクアレンと共にそれを２．５容量％含む水中油型乳剤中に存在した。両方の油を混合し、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））を加えた後、マイクロフルイダイゼーション（Ｍ１１０Ｓマイクロフルイディクス、６バールの最大入力圧（約８５０バールの出力圧）で２分間にわたり最大で５０回の通過（ＷＯ９５／１７２１０に記載））を行った。したがって、グループ５および６は、水性ＱＳ２１、３Ｄ−ＭＰＬおよび／またはＣｐＧを添加した前記トコール乳剤に基づいていた。
【０１１１】
ＱＳ２１および３Ｄ−ＭＰＬは、前記ワクチングループのいずれかに存在する場合には５μｇ／１回量で加え、ＣｐＧ（オリゴ４（配列番号４）：ＴＣＧ　ＴＣＧ　ＴＴＴ　ＴＧＴ　ＣＧＴ　ＴＴＴ　ＧＴＣ　ＧＴＴ）は５０μｇの用量で加えた。
【０１１２】
グループ３および４で使用したアジュバントは、ＥＰ　０８２２８３１　Ｂ１（その内容を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載の技法に従い調製した。
【０１１３】
ワクチン接種方法
Ｂ６Ｆ１マウスのグループに、１４日間隔で４回（５０μｌずつの容量）筋肉内にワクチン接種した。
【０１１４】
結果
図８および９は、３μｇ／ｍｌの免疫原（ＮＳ１−Ｐ７０３Ｐ）またはピキア発現Ｐ７０３Ｐ（１５μｇ／ｍｌ）または非特異的ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質と共にｉｎ　ｖｉｔｒｏでインキュベートした後の、２回目のワクチン接種の後および４回目のワクチン接種から１４日後の脾細胞のｉｎ　ｖｉｔｒｏリンパ増殖を示す。
【０１１５】
図１０および１１は、中点力価ＥＬＩＳＡで測定したときの総Ｉｇで表される免疫原（ＮＳ１−Ｐ７０３Ｐ）に対する体液性免疫応答（図１０）、またはこれらの応答におけるＩｇＧアイソタイプ分布（図１１）を示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】
ＥＣＤ−ＰＤ抗原でマウスを免疫したときの、グループ１、２、４、５および６で使用したアジュバントに関する腫瘍増殖の結果を示した図である。
【図２】
ＥＣＤ−ＰＤ抗原でマウスを免疫したときの、グループ１、５、６、７および１１で使用したアジュバントに関する腫瘍増殖の結果を示した図である。
【図３】
ＥＣＤ−ＰＤ抗原でマウスを免疫したときの、グループ１、５、６、８、９および１０で使用したアジュバントに関する腫瘍増殖の結果を示した図である。
【図４】
免疫原（ＥＣＤ−ＰＤ）または細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または細胞内ドメイン（ＩＣＤ）と共にインキュベートした後で腫瘍チャレンジ前のｉｎ　ｖｉｔｒｏでの脾細胞のリンパ増殖を示す。
【図５】
免疫原（ＥＣＤ−ＰＤ）または細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または細胞内ドメイン（ＩＣＤ）と共にインキュベートした後で腫瘍チャレンジ後のｉｎ　ｖｉｔｒｏでの脾細胞のリンパ増殖を示す。
【図６】
ＥＬＩＳＡで測定したときの総Ｉｇで表される免疫原（ＥＣＤ−ＰＤ）に対する体液性免疫応答を示した図である。
【図７】
図６に示す免疫応答におけるＩｇＧアイソタイプ分布を示した図である。
【図８】
免疫原（ＮＳ１−Ｐ７０３Ｐ）またはピキア発現Ｐ７０３Ｐ（１５μｇ／ｍｌ）または非特異的ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質と共にｉｎ　ｖｉｔｒｏでインキュベートした後の、２回目のワクチン接種後の脾細胞のｉｎ　ｖｉｔｒｏリンパ増殖を示す。
【図９】
免疫原（ＮＳ１−Ｐ７０３Ｐ）またはピキア発現Ｐ７０３Ｐ（１５μｇ／ｍｌ）または非特異的ＮＳ１−ＯｓｐＡ融合タンパク質と共にｉｎ　ｖｉｔｒｏでインキュベートした後の、４回目のワクチン接種から１４日後の脾細胞のｉｎ　ｖｉｔｒｏリンパ増殖を示す。
【図１０】
中点力価ＥＬＩＳＡで測定したときの総Ｉｇで表される免疫原（ＮＳ１−Ｐ７０３Ｐ）に対する体液性免疫応答を示した図である。
【図１１】
図１０に示す免疫応答におけるＩｇＧアイソタイプ分布を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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