(57)【要約】【課題】フィトステロール及び／又はフィトスタノール及びアスコルビン酸を含む新規構造体並びに体重調節剤としてのその使用方法を提供する。【解決手段】動物に１種又はそれより多くの、下記式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ）：【化１】2004511573.tif 000015（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体、並びに全てのそれらの塩を投与することからなる、動物における体重増加を抑制する方法。【選択図】図７
2004511573.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物に１種又はそれより多くの、下記式：
【化１】
2004511573.tif 000011
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体、並びにそれらの全ての塩を投与することからなる、動物における体重増加を減少させる方法。
【請求項２】
前記動物がヒトである請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記ステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルヴィステロール（ｎｅｒｖｉｓｔｅｒｏｌ） 、ラトステロール（ｌａｔｈｏｓｔｅｒｏｌ） 、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アヴェナステロール、イソアヴェナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール、コレステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含むその誘導体からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記スタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含するその誘導体からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記スタノールがシトスタノールである請求項１記載の方法。
【請求項６】
式Ｉ中、Ｒ３ がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項７】
動物に１種又はそれより多くの、下記式：
【化２】
2004511573.tif 000012
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体、並びにそれらの全ての塩を投与することからなる、動物における体重減少を増加させる方法。
【請求項８】
前記動物がヒトである請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記ステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルヴィステロール、ラトステロール、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アヴェナステロール、イソアヴェナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール、コレステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含するその誘導体からなる群から選択される請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記スタノールが全ての飽和された又は水素添加されたフィトステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含するその誘導体からなる群から選択される請求項７記載の方法。
【請求項１１】
前記スタノールがシトスタノールである請求項７記載の方法。
【請求項１２】
式Ｉ中、Ｒ３ がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項７記載の方法。
【請求項１３】
１種又はそれより多くの、下記式：
【化３】
2004511573.tif 000013
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされる構造物及びそれらの構造物の全ての塩並びにそれらの食品用又は医薬的に許容され得るキャリヤーを含む、ウェイト・コントロールに使用する組成物。
【請求項１４】
前記ステロールがシトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルヴィステロール、ラトステロール、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アヴェナステロール、イソアヴェナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール、コレステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含するその誘導体からなる群から選択される請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
前記スタノールが全ての飽和された又は水素添加されたステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を包含するその誘導体からなる群から選択される請求項１３記載の組成物。
【請求項１６】
前記スタノールがシトスタノールである請求項１３記載の組成物。
【請求項１７】
式Ｉ中、Ｒ３ がカルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムからなる群から選択される請求項１３記載の組成物。
【請求項１８】
１種又はそれより多くの、下記式：
【化４】
2004511573.tif 000014
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされる物構造及びそれらの構造物の全ての塩を含む、ウェイト・コントロールに使用する食品又は飲料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ステロール誘導体及びスタノール誘導体並びに、ヒトを含む動物における体重増加を減少させる際の、及び体重減少を増加させる際のそれらの使用に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
科学及び技術における最近の発展は、人生の質を向上させ且つ人生に年数を加えることを助けているが、健康全体及び寿命に関する健康体重の維持及び調節及び体重の影響の問題は、最近、医学界から実証的な注意を受けているのみである。
【０００３】
ステロールは、多くの重要な細胞機能を遂行する天然にある化合物である。植物中のカンペステロール、スチグマステロール及びβ−シトステロールのようなフィトステロール類、菌類中のエルゴステロール並びに動物中のコレステロールは各々、それら個別の細胞種における細胞膜及び亜細胞性膜の主成分である。ヒトにおけるフィトステロール類の飲食源は植物原料、例えば野菜油及び植物油に由来する。従来の西欧型食餌における推定される一日当たりのフィトステロール含有量は、毎日約５００ｍｇを供給するベジタリアン・ダイエットに比較して、約６０ないし８０ｍｇである。
【０００４】
フィトステロール類は、ヒトを含む多数の哺乳類の種に供給する時、血清コレステロール濃度を低減するそれらの能力のために、大きな注目を集めている。正確な作用機作は殆ど未知のままであるが、コレステロールとフィトステロール類との間の関係は、個々の化学構造の間の類似性（差は、分子の側鎖内に生じている）に一部明らかに依存する。フィトステロール類はミセル相からコレステロールを追い出し、それにより、コレステロール吸収プロセスにおける吸収を減少させるか又はレセプター及び／又はキャリヤー部位で競合していると考えられている。
【０００５】
心血管疾患（ＣＶＤ）及び高コレステロール血症、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、血栓症のようなその潜在条件の治療においてのみならず、ＩＩ型糖尿病、痴呆、癌及び老化のような他の疾患の治療においても、フィトステロール類の利点は広く報告されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
動物、特にヒトにおける体重の制御及び調節の分野における使用のためにフィトステロール及びはフィトスタノールを変性すること、並びに現時点で入手可能な減量製品の幾つかに伴う問題を未然に防ぎ且つ緩和することが本発明の目的である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記一般式：
【化５】
2004511573.tif 000003
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるステロール及び／又はスタノール及びアスコルビン酸（それらの塩を包含する。）からなる新規誘導体を提供する。
【０００８】
本発明はまた、上記式を有する新規誘導体の製造方法を含んでいる。
【０００９】
本発明は更に、１種又はそれより多くの上記式を有する、１種又はそれより多くのステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体を含む、動物における体重増加を減少させるための及び／又は体重減少を増加させるための組成物を含んでいる。
【００１０】
本発明は更に、１種又はそれより多くの上記式を有する、ステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体を補充された、体重増加を減少させる際に及び／又は体重減少を増加させる際に使用するための食品、飲料及び栄養機能食品を提供する。
【００１１】
本発明は更に、１種又はそれより多くの上記式を有する、ステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体を動物に投与することによる、体重増加を減少させる方法を提供する。
【００１２】
本発明は更に、１種又はそれより多くの上記式を有する、ステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体を動物に投与することによる、体重減少を増加させる方法を提供する。
【００１３】
ウェイト・コントロール及びウェイト・マネージメントの分野におけるステロール誘導体／スタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体並びにそれらの塩の使用は、従来、研究されなかったか又は利点が認められなかった。本発明の範囲内で、本明細書中に記載された誘導体は、体重を変更することに関して驚くべきそして全く予期せぬ効果を有することが見出された。作用機作は不明瞭であるけれども、結果は明確である。
【００１４】
加えて、本発明の誘導体は製造され且つそのまま使用され得るか、又はそれらは食品、飲料、医薬品及び栄養機能食品に、それらの“ビヒクル”が前記誘導体の性質に起因して水性であるかどうかに係わらず、容易に配合され得る。この向上された溶解度は一般的に、望ましい食餌又は治療効果を達成するため、前記誘導体のより低い投与量に言い換えられる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明を、下記の限定されない図面に基づいて説明する。ここで、
図１はフィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図２はフィトスタノール−カルボネート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図３はフィトスタノール−オキサレート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を図式的に示すものであり、
図４は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミ総体重への効果をグラフ的に示すものであり、ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＶＰ４　０．２％（ｎ＝６）、ＶＰ４　０．５％（ｎ＝６）、ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）、ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）又は３Ｐ４　２．０％（ｎ＝６）を夫々含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５であり、
図５は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく日々の水分摂取量をグラフ的に示すものであり、ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＶＰ４　０．２％（ｎ＝６）、ＶＰ４　０．５％（ｎ＝６）、ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）、ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）又は３Ｐ４　２．０％（ｎ＝６）を夫々含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５であり、
図６は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく日々の摂餌量をグラフ的に示すものであり、ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＶＰ４　０．２％（ｎ＝６）、ＶＰ４　０．５％（ｎ＝６）、ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）、ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）又は３Ｐ４　２．０％（ｎ＝６）を夫々含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５であり、
図７は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミ総体重へのＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものであり、ＦＭ−ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．２５％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．５０％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）又はＦＭ−ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）を含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５であり、
図８は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミにおける日々の水分摂取量に対するＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものであり、ＦＭ−ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．２５％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．５０％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）又はＦＭ−ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）を含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５であり、そして
図９は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミにおける日々の餌摂取量に対するＦＭ−ＶＰ４の効果をグラフ的に示すものであり、ＦＭ−ＶＰ４　なし（対照；ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．２５％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　０．５０％（ｎ＝６）、ＦＭ−ＶＰ４　１．０％（ｎ＝６）又はＦＭ−ＶＰ４　２．０％（ｎ＝６）を含む。データは、平均値±標準偏差として示す。 ＊対照に対してｐ＜０．０５である。
【００１６】
下記の詳細な説明は、本発明を実施するにあたり当業者を助けるために提供されている。しかしながら、この詳細な説明は、本発明の範囲を不当に限定するものと解釈されるべきではない。本明細書中で論じられている実施態様の改良及び変形は、本明細書の精神及び範囲を離れることなく当業者により行われてよい。
【００１７】
本発明に基づいて、ヒトを含む動物における体重増加を減少させる際に、及び／又は体重減少を増加させる際にそのまま使用するために適するステロール誘導体及び／又はスタノール誘導体及びアスコルビン酸誘導体が提供される。本発明の誘導体は、下記式Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ ：
【化６】
2004511573.tif 000004
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）の一つで表わされる。前記誘導体の成分は、下記に詳細に記載されている。本発明の開示を通して、用語“誘導体”、“構造体”及び“類似物質”は、ステロール又はスタノールとアスコルビン酸の両方に結合している単一化合物を表わすために互換性にて使用される。前記成分の要素は、下記により詳細に記載されている。
【００１８】
ステロール類／スタノール類
本明細書中で使用されているように、用語“ステロール”は限定することなく全てのステロール類、例えば、シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール、デスモステロール、チャリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルヴィステロール、ラトステロール、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アヴェナステロール、イソアヴェナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール、コレステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含むその誘導体を包含する。用語“スタノール”は、全ての飽和された又は水素添加されたステロール及び全ての天然形態又は合成形態並びに異性体を含むその誘導体を包含する。ステロール類及びスタノール類の変性、即ち側鎖を含みまた、本発明の範疇に含まれると理解されるべきである。本明細書を通読して迷う場合には、用語“ステロール”はステロール及びスタノールの両方を表わす、即ち、特記しない限り互換性にて使用され得ると理解されるべきである。
【００１９】
本発明に従って誘導体を形成する際に使用するステロール類及びスタノール類は、種々の自然源から製造され得る。例えば、それらはトウモロコシ油及び他の植物油、小麦の胚芽油、大豆抽出物、米抽出物、米糠、ナタネ油、ヒマワリ油、ゴマ油のようなプラントオイル（水性植物を包含する。）及び魚（及び他の海産源）油の加工から得られ得る。本発明は、何れか１種のフィトステロール源に限定されない。米国特許第４４２０４２７号明細書は、メタノールのような溶媒を使用する、植物油スラッジからのステロールの製法を教示している。もう一つの方法として、フィトステロール及びフィトスタノールは、本文中に参考文献として取り込まれている米国特許第５７７０７４９号明細書に記載されている林業の副生成物であるタル油又は石鹸、から得られ得る。
【００２０】
好ましい態様の一つにおいて、本発明の誘導体は、天然産又は合成されたβ−シトステロール、カンペスタノール、シトスタノール及びカンペステロールにより形成され、並びに、その後、そのように形成されたこれらの誘導体の各々は種々の比率にて配送前に組成物に混合されても良い。他の好ましい態様において、本発明の誘導体は、天然産又は合成されたシトスタノール又は天然産又は合成されたカンペスタノール或いはこれらの混合物を用いて形成される。
【００２１】
Ｒ２
Ｒ２ はアスコルビン酸又はその何れかの誘導体を含む。本発明の範疇にて達成されるものは、ステロール又はスタノール部分がアスコルビン酸に化学的に結合している新規構造体又は化合物の創成である。この結合はこの新規構造体の両方の部分に利益があり、質を高める。その前には溶解性に乏しいステロール部分は、新規誘導体の一部として、水性媒体或いは油又は脂肪のような非水性媒体に、非常に容易に溶けるようになる。従って、その配送を変化させるための如何なる別の強化剤をも用いることなく、ステロールの投与が可能となる。
【００２２】
多年にわたり、Ｌ−アスコルビン酸（一般的に、ビタミンＣとして知られている。）は、バランスのとれたヒト栄養の不可欠な部分であり、そして生理学的な抗酸化剤として機能することが認識されていた。しかしながら、アスコルビン酸は、大気中の酸素と非常に容易に反応してデヒドロアスコルビン酸を与え、これはビタミンＣ効果の無い化合物へと更に且つ容易に分解するので、使用するのに最も安定性に乏しいビタミンである。本発明の新規構造体は、このような分解からアスコルビン酸を”保護する”と信じられている。更に、本発明の誘導体の減量機能は、本発明にて形成された新規化合物の性質に依存し得ると信じられている。体重調節剤を製造する目的のためのアスコルビン酸とステロール又はスタノールとの結合は、今まで評価されても検討されてもいなかった。
【００２３】
Ｒ３
Ｒ３ は水素原子であってもよく又は親化合物を塩に変換してもよい。適当な塩の選択において慎重に考慮すべきことは、それらは医薬において、栄養機能食品において又は食品、飲料等における使用のために許容され得るということである。このような塩は許容可能なアニオン又はカチオンを含有しなくてはならない。本発明の範疇において、適する酸付加塩は、塩酸、臭化水素酸、燐酸、メタ燐酸、硝酸、スルホン酸又は硫酸のような無機酸、並びに酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコン酸、グリコール酸、イソチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、コハク酸、トルエンスルホン酸及び酒石酸のような有機酸から誘導されるものを包含する。
【００２４】
適する塩基塩は、アンモニウム塩、或いは、金属、アルカリ土類金属又はアルカリ金属のうちの何れかの塩を包含する。好ましくは、Ｒ３ は、カルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛、ナトリウム、カリウム及びリチウムのうちの１種から選択される。最も好ましくは、Ｒ３ はナトリウムである。
【００２５】
本発明の最も好ましい態様において、前記化合物は上記構造Ｉで表わされるものであり、スタノールはシトスタノール又はカンペスタノールであり、そしてＲ３ は水素原子又はナトリウムである。
【００２６】
誘導体形成
ａ）エステル形成
ステロール及び／又はスタノールとアスコルビン酸とを含む新規構造体を形成することができる多くの方法がある。通常、選択されたステロール又はスタノール（又はそれらのハロホスフェート誘導体、ハロカルボネート誘導体若しくはハロ−オキサレート誘導体）及びアスコルビン酸は、”酸”部分と”アルコール”（フィトステロール）との縮合を可能とせしめるために、反応条件下で一緒に混合される。これらの条件は、酸成分とアルコール成分とが直接又は鉱酸、硫酸、燐酸、ｐ−トルエンスルホン酸のような適する酸触媒の存在下で反応することが可能であるフィッシャーエステル化法のような、他の通常のエステル化反応において使用される条件と同一である。このようなエステル化反応において通常用いられる有機溶媒は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランのようなエーテル、又はベンゼン、トルエン又は同様の芳香族溶媒であり、そして温度は、反応を進行させる反応物の反応性に応じて、室温から高められた温度まで変化し得る。
【００２７】
好ましい態様において、エステル誘導体を形成する方法は、アスコルビン酸又はエステル（例えば、アセテートエステル）若しくはエーテル（メチルエーテル）としてのその誘導体のヒドロキシル基を”保護”し、その後、適する反応条件下で、保護されたアスコルビン酸をステロール／フィトスタノールのハロホスフェート、ハロカルボネート若しくはハロ−オキサレートと縮合することを含む。通常、このような縮合反応は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、又はベンゼン、トルエン又は同様の芳香族溶媒のような有機溶媒中で行われる。反応物の性質及び反応性に応じて、反応温度は低い温度（−１５℃）から高められた温度まで変化し得る。
【００２８】
図１は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロホスフェート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び式Ｉに基づく本発明の新規誘導体のうちの１種：フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート（構造体６で示されている。）を与える縮合反応（更に別の段階ｃ又は段階ｄ）を図式的に示している。
【００２９】
より詳細には、図１に示す方法は以下の通りである：アスコルビン酸は初期には、５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸（構造体２）の形成により、分解から保護される。これは、適する反応条件下で、アセトンをアスコルビン酸及び、硫酸又は塩酸のような酸性触媒と混合することにより達成され得る（以下の実施例１を参照）。フィトスタノールクロロホスフェート（構造体４）は、トルエン中のフィトスタノールとピリジン（なお、脂肪族アミン及び芳香族アミンのような他の窒素塩基をもまた、使用してもよい。）とからなる溶液を形成し、そしてこの溶液をオキシ塩化燐のような燐誘導体で処理して製造する。濾過及び母液の濃縮後に生成する残渣は、フィトスタノールクロロホスフェート（構造体４）である。その後、後者を５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸と混合し、そしてエタノールのような適するアルコール及びＨＣｌを添加し（段階ｄ）、濃縮する。もう一つの方法としては、ピリジン／ＴＨＦを添加し（段階ｃ），そして生成物を濃縮してもよい。最終洗浄及び乾燥（段階ｅ）の後、両段階ｃ又は段階ｄから得られる新規生成物は、フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート（構造体６）である。
【００３０】
本発明の方法の他の好ましい態様において、５，６−イソプロピリデン−アスコルビン酸としてではなくて、エステルとして（例えば、アセテート、ホスフェート等として）、アスコルビン酸がヒドロキシル部位にて保護される。後者はその後、最終的に本発明の構造を製造するために、既知のエステル化法を使用して、フィトステロール又はフィトスタノールと縮合されそして上記の様に誘導体化される。アスコルビン酸のモノ及びジホスフェートの形成は、文献中に充分に記載されている。例えば、参考として内容が本明細書中に取り込まれている、加藤らによる米国特許第４９３９１２８号明細書は、アスコルビン酸の燐酸エステルの形成を教示している。同様に、参考として内容がまた本明細書中に充分に取り込まれている、ドブラー（Ｄｏｂｌｅｒ）らによる米国特許第４９９９４３７号明細書は、アスコルビン酸２−ホスフェートの製法を記載している。ドブラー（Ｄｏｂｌｅｒ）らでは、第三アミンの存在下でのアスコルビン酸又はアスコルビン酸誘導体とＰＯＣｌ３ とのホスホリル化のコア反応（ドイツ国特許出願公開第ＤＯＳ２７１９３０３号明細書中に記載されている。）は、反応溶液にマグネシウム化合物、好ましくはマグネシウム化合物の水溶液を添加することにより改良されている。これらの既知のアスコルビン酸誘導体のどれでも、本発明の範疇にて使用することができる。
【００３１】
図２は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロカルボネート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び構造体９（構造体１０も同様）を与える縮合反応（所望により、段階ｃ又は段階ｄ）、式ＩＩに基づく本発明の新規誘導体のうちの１種：フィトスタノール−カルボネート−アスコルベートを図式的に示している。これらのクロロカルボネート誘導体は、図１に関して上で詳細に説明された方法と同一方法にて製造され得る；しかしながら、オキシ塩化燐は（図２の段階ｂに示されるように）ホスゲンにより置き換えられる。
【００３２】
図３は、”保護された”アスコルビン酸の形成（段階ａ）、中間体であるクロロ−オキサレート／スタノール誘導体の形成（段階ｂ）、及び新規構造体１３（構造体１４も同様）を与える縮合反応（所望により、段階ｃ又は段階ｄ）、式ＩＩＩに基づく本発明の新規誘導体のうちの１種：フィトスタノール−オキサレート−アスコルベート（構造体１４として認識。）を図式的に示している。これらのクロロ−オキサレート誘導体は、図１に関して上で詳細に説明された方法と同一方法にて製造され得る；しかしながら、オキシ塩化燐は（図３の段階ｂに示されるように）オキサリルクロリドにより置き換えられる。
【００３３】
ｂ）塩形成
本発明は、ステロール又はフィトスタノールとアスコルビン酸とを含む親構造体（例えば、図１中の構造体５及び構造体６、図２中の構造体９及び構造体１０、並びに図３中の構造体１３及び構造体１４として示される、それらの好ましい構造体）のみならず、その塩にもまた関するものである。これらの塩は、対応する親化合物よりも更に一層水溶解性であり、従って、インビトロ及びインビボの両方におけるそれらの有効性及び評価は非常に改良されている。
【００３４】
本発明の誘導体の塩形成は、親化合物を一連の塩基（例えば、ナトリウムメトキシド又は他の金属アルコキシド）で処理し、対応するアルカリ金属塩を製造することにより、容易に行うことができる。カルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛等の他の金属の塩は、親化合物を適する金属アルコキシドと反応させることにより生成させることができる。式Ｉにおいて、Ｒ３ は水素原子（親化合物）又は何れかの金属、アルカリ土類金属、又はアルカリ金属を表わす（塩）。
【００３５】
ｃ）触媒的（水素添加）及び化学的方法による還元
所望により、本発明のステロール誘導体又は誘導体形成の前又は後のその構造部分（ステロール又はアスコルビン酸の何れか）は、水素添加又は飽和されてよい。ヘテロ環系の部分的又は完全に還元された同族体への水素添加は、周知の方法である。例えば、アスコルビン酸の環の対応するジヒドロ同族体への触媒的及び／又は化学的還元は、水素雰囲気及び白金、パラジウム又はラネーニッケルのような金属触媒下で容易に行われる。通常、この還元は、エタノール、酢酸エチル又は同様な媒体のような有機溶媒中、そして大気圧下又は低圧（３〜５ｐｓｉ；０．０２０７〜０．０３４５ＭＰａ）下、室温又は僅かに高められた温度にて行われる。
【００３６】
このような系の化学的還元は、水素化硼素ナトリウム、水素化アルミニウムリチウム及びそれらの同族体のような”水素化”剤の群を用いる還元を含む。これらの還元は通常、エチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン、又はベンゼン、トルエン若しくは同種の芳香族溶媒を包含する無水不活性媒体中、室温ないし還流温度にて行われる。
【００３７】
同様な触媒的又は化学的方法は、本発明のフィトステロール同族体の全てに適用することができる。従って、本発明はその範疇に、アスコルビン酸の環が部分的に又は完全に還元されているか及び／又はフィトステロール部分が完全に又は部分的に水素添加されている、全ての完全に又は部分的に還元された誘導体を包含する。
【００３８】
誘導体
本発明は、下記一般式：
【化７】
2004511573.tif 000005
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表わし、Ｒ２ はアスコルビン酸から誘導された基を表わし、そしてＲ３ は水素原子又は何れかの金属、アルカリ土類金属若しくはアルカリ金属を表わす。）で表わされるステロール及び／又はスタノールとアスコルビン酸とからなり、それらの塩を包含する全ての誘導体を含む。最も好ましくは、本発明は、構造体５、６、７、９、１０、１１、１３、１４及び１５として図１ないし図３に示されている全てのハロホスフェート、ハロカルボネート及びハロ−オキサレート／フィトスタノール／アスコルベート誘導体を含む。しかしながら、これらの構造体は、式Ｉ，ＩＩ及びＩＩＩの範囲内に含まれる多数の新規誘導体からほんの選択されたのみのものであることを明確に理解すべきである。ナトリウム塩が構造体７、１１及び１５で示されているけれども、上記のように、他の塩類も本発明の範疇に包含されることもまた理解すべきである。
【００３９】
ステロール／スタノール同族体の利点
アスコルビン酸がステロール部分に結合している本発明の誘導体は、多くの食餌上の及び療法上の利点を持つ。本発明の範疇にて見出されたことは、これらの誘導体は、体重調節、より特別には、必要に応じて、体重増加を減少させ且つ体重減少を増加させる際に、特に有用であるということである。
【００４０】
加えて、これらの誘導体は、製造的及び工業的観点から使用することが容易である。これらは、水溶液及び、油及び脂肪のような非水性媒体の両方に容易に溶解する。
【００４１】
配送系
前記誘導体は動物、特にヒトに、直接且つどのような更なる変性もなしで投与し得ることは本発明の範疇で充分に予期されるけれども、配送性を向上させ、そして食品、飲料、医薬、栄養機能食品及びそれらが添加されるものを介しての更なる流通を確実にするために、別の段階を採用することができる。しかしながら、これらの段階は、全く任意であると理解すべきである。このような強化は、例えば、乳化液、溶液及び分散液又は半乳化系を形成するために前記誘導体を可溶化又は分散するような多数の適する手段；凍結乾燥、噴霧乾燥、制御された沈澱、又はこれらの組み合わせ；固体分散物、懸濁物、水和された脂質系の形成；シクロデキストリンとの抱接錯体の形成；並びにヒドロトロープの使用及び胆汁酸とその誘導体を用いる製剤化、により達成され得る。
【００４２】
配送の際に使用され得る各々の技術は、参照として本明細書中に取り込まれているＰＣＴ／ＣＡ９９／００５１２のパンフレット中により詳細に記載されている。
【００４３】
使用方法
本発明の誘導体は、動物、特にヒトに直接又は更なる変性無しで投与し得、又は、詳細に上記載したように、組成物の溶解性及び／又は分散性を更に向上させるために処理し得る。もう一つの方法は、そして所望により、それらの溶解性及び／又は分散性を向上させる何れか一つの方法と組み合わせて、体重を変化又は調節するため、以下に更に記載したように、前記誘導体は種々のビヒクルに配合され得る。例えば、これらの誘導体は、治療における有効量にて、必要に応じて、医薬、栄養機能食品又は機能性食品の分野における慣用のキャリア及び賦形剤に混合され得る。体重関連の疾患又は肥満症に対して”危険性が高い”と考えられる集団において、本発明の前記誘導体は、第一、第二及び第三治療プログラムにおいて使用されることが予想される。
【００４４】
従って、従前の汎用性を制限することなく、食品、飲料、栄養機能食品又は医薬への直接投与を助けるため又は組成物の配合を助けるために、本発明の前記誘導体は、種々のキャリア又は助剤と混合し得る。前記誘導体の配送に使用し得る種々のビヒクルを評価するため、以下の一覧表を提供する。前記誘導体の投与量は、とりわけ、他の因子、配送形態、患者の体格及び状態、達成すべき結果、並びに食品添加物及び薬剤の分野における当業者に知られている他の因子に応じて変化し得る。勿論、所望の治療又は予防結果、すなわち、
ａ）個人における体重増加の阻止、及び／又は
ｂ）個人における体重減少、
の目的を達成するため、一定量の前記化合物（類）を投与すべきである。
【００４５】
１）医薬の投与形態：
本発明の前記誘導体は、経口的、口腔的又は舌的使用のための錠剤（プレイン又は被覆されたもの）、カプセル（ハード及びソフト、ゼラチン、更なる被覆有り又は無し）、粉末、顆粒（発泡性顆粒を包含する。）、ペレット、微粒子、溶液（ミセル、シロップ、エリキシル及びドロップようなもの。）、トローチ剤、香剤、アンプル剤、乳化剤、マイクロエマルジョン、軟膏、クリーム、座薬、ゲル、経皮貼付剤並びに、慣用の賦形剤及び／又は希釈剤及び安定剤と一体化した変形された放出投与形態のような種々の慣用の医薬製剤及び投与形態に配合され得ることが、本発明の範疇で予想される。
【００４６】
上記のような好適な投与形態に作られた本発明の前記誘導体は、ヒトを含む動物に、経口的に、注射（静脈注射、皮下注射、腹腔内注射、真皮内注射又は筋肉内注射）により、局所的に又は他の方法にて、投与し得る。
【００４７】
２）食品／飲料／栄養補助食品：
本発明の他の態様において、本発明の前記誘導体は、限定されることなく、下記のもの：
１）乳製品−チーズ、バター、ミルク及び他の乳製品の飲料、スプレッド及び乳製品の混合物、アイスクリーム及びヨーグルトのようなもの、
２）脂肪をベースとした製品−マーガリン、スプレッド、マヨネーズ、ショートニング、調理用及びフライ用の油並びにドレッシングのようなもの、
３）穀物をベースとした製品−穀類（例えば、パン又はパスタ）を含み、これらの商品は調理され、焼かれ又はその他の加工をされている、
４）菓子類−チョコレート、キャンディー、チューインガム、デザート、非乳製品トッピング〔例えば、クールホイップ（Ｃｏｏｌ　Ｗｈｉｐ（Ｒ））〕、シャーベット、糖衣及び他のフィリングのようなもの、
５）飲料−アルコール飲料又は非アルコール飲料であり、そしてコーラ及び他のソフトドリンク、ジュースドリンク、栄養補助食品並びに、商標名ブースト〔Ｂｏｏｓｔ（Ｒ）〕及びエンシュア〔Ｅｎｓｕｒｅ（Ｒ）〕のような食事代わりの飲料、並びに
６）種々雑多な製品−卵及び卵製品、スープ、予め製造されたパスタソース、あらかじめ製造された食事などの加工食品、
を包含する食品、飲料及び栄養補助食品に配合され得る。
【００４８】
本発明の前記誘導体は、直接及び更に変形することなく、混合、注入、射出、配合、分散、乳化、浸漬、噴霧及び混練のような技術により、食品、栄養機能食品又は飲料に配合し得る。もう一つの方法として、前記誘導体は、摂取前に消費者により、食品上に直接塗るか又は飲料中に直接投入してもよい。これらは単純で経済的な配送法である。
【００４９】
【実施例及び発明の効果】
実施例
下記の限定的でない実施例により、本発明を記載する。
【００５０】
実施例１
アスコルビン酸の保護
油剤（２４％、８．３ｇ）をアセトン（５０ｍＬ）に滴下添加した。アスコルビン酸（１２ｇ）を０℃にてこの混合物に導入し、そして反応混合物を０℃にて６時間撹拌した。得られた結晶を吸引濾過し、濾過したケーキを押圧乾燥し、その後、アセトン（３０ｍＬ）を用いて洗浄した。生成物５，６−イソプロピリデンアスコルビン酸（１４ｇ）を得た。
【００５１】
フィトスタノールへの結合
トルエン（５００ｍＬ）及びピリジン（２５ｍＬ）中のフィトスタノール混合物（２４ｇ）（カンペスタノール：３６．４％；シトスタノール：６２．３％）の溶液を、０℃にて、トルエン（２００ｍＬ）中のオキシ塩化燐（９ｍＬ）の混合物中に滴下して添加した。この混合物を、室温にて３時間撹拌した。ピリジン塩酸塩を濾別し、そして母液を濃縮してトルエンを回収した。残渣を乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解し、そして乾燥ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の上で製造した保護されたアスコルビン酸（１４ｇ）の溶液を、０℃にて、滴下して添加した。室温での撹拌を１時間維持した。この溶液を濃縮して溶媒を除去した。エタノール（４００ｍＬ）及び３ＮＨＣｌ（２００ｍＬ）を添加し、この混合物を５０℃に３０分間加熱し、そして濃縮した。酢酸エチル（６００ｍＬ）を添加し、得られた溶液を水（３×３００ｍＬ）を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、そして生成物（フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート）を、白色粉末２２ｇとして得た。
【００５２】
実施例３
ナトリウム塩への転換
上で製造した酸（１７ｇ）をエタノール（１００ｍＬ）に溶解し、そしてエタノール（５０ｍＬ）中のナトリウムメトキシド（２．７ｇ）の溶液を、撹拌しながら且つ室温にて添加した。撹拌を添加後３０分間維持した。得られた白色ケーキを濾別し、乾燥し、そして秤量して、白色粉末２０ｇ（フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート）を得た。
【００５３】
実施例４
本発明の化合物の一つフィトスタノール−ホスホリル−アスコルベートの効果を本明細書中で、アレチネズミへの長期に渡る経口投与の後の体重に関する”ＦＣＰ−ＶＰ４”又は”ＦＭ−ＶＰ４”（種々の投与量に関して）及びＦＣＰ−３Ｐ４（積極的な管理）として交互に言及した。
【００５４】
アレチネズミは、ＶＰ４無し（対照；ｎ＝６），０．２５質量％ＶＰ４（ｎ＝６）、０．５質量％ＶＰ４（ｎ＝６）、１．０質量％ＶＰ４（ｎ＝６）、２．０質量％ＶＰ４（ｎ＝６）又はアレチネズミの飼料に配合された２．０質量％３Ｐ４（ｎ＝６）からなる標準アレチネズミダイエットを４週間連続して投与された（毎日、水分及び飼料の摂取量を監視し且つ交換した。）。これらの処置の一つを４週間受けた後、心臓穿刺を通じて血液を採取し、そして全ての動物を苦しめることなく殺した。
【００５５】
１％又は２％ＦＣＰ−ＶＰ４を投与した動物は、４週間の処置後、他の群に比較して、充分に減少した体重を有していた。しかしながら、これらの動物において、苦痛の兆候は目視上観察されなかった。
【００５６】
異なる濃度のＦＣＰ−ＶＰ４（０．２５質量％、０．５質量％、１質量％、２質量％）及びＦＣＰ−３Ｐ４（２質量％）を、標準ミル化法（１）により、標準アレチネズミ飼料に配合した。液体クロマトグラフィー−質量スペクトル分析を使用して、前記アレチネズミ飼料に配合されたＦＣＰ−３Ｐ４又はＦＣＰ−ＶＰ４の％を確認した（データは示さず。）。この研究に使用した全てのアレチネズミは、カナディアン　カウンシル　オン　アニマル　ケア（Ｃａｎａｄｉａｎ
Ｃｏｕｎｃｉｌ　ｏｎ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅ）及びユニバーシティー　オブ　ブリティッシュ　コロンビア（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ）により頒布された原則に従って取り扱った。成体の雄のモンゴル産アレチネズミ（７０〜８０ｇ）は、カナダ、ケベック州、モントリオールのチャールス　リバー　ブリーダーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｂｒｅｅｄｅｒｓ）から入手した。全ての処置群は、１２時間明（０７００〜０９００）／暗サイクルの下に置き、そして標準実験室ダイエット（米国、バージニア州、リッチモンドのＰＭＩフィーズ社製）及び自由に水を与えた。
【００５７】
アレチネズミには、ＦＣＰ−ＶＰ４無し（対照；ｎ＝６），０．２５質量％ＦＣＰ−ＶＰ４（ｎ＝６）、０．５質量％ＶＰ４（ｎ＝６）、１．０質量％ＦＣＰ−ＶＰ４（ｎ＝６）、２．０質量％ＦＣＰ−ＶＰ４（ｎ＝６）又は２．０質量％ＦＣＰ−３Ｐ４（ｎ＝６）からなる標準アレチネズミダイエットを４週間連続して与えた（毎日の水分及び飼料の摂取量を監視し且つ交換した。）。これらの処置の一つを４週間受けた後、心臓穿刺を通じて血液を採取し、そして全ての動物を苦しめることなく殺した。
【００５８】
全ての処置群及び対照群の体重、毎日の飼料及び水分の摂取量における相違は、分散分析〔ＰＣＡＮＯＶＡ（Ｒ）；ヒューマン　ダイナミック　システムズ（Ｈｕｍａｎ　Ｄｙｎａｍｉｃ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）社製〕を使用して決定した。有意差は、ポスト−ホックニューマンクールズ試験（ｐｏｓｔ−ｈｏｃ　Ｎｅｗｍａｎ　Ｋｅｕｌｓ　ｔｅｓｔ）により決定した。Ｐ＜０．０５のとき、有意差有りと考えた。全てのデータは、平均±標準偏差として表した。
【００５９】
１％又は２％ＦＣＰ−ＶＰ４を投与した動物は、４週間の処置後、他の群に比較して、充分に減少した体重を有していた（図４）。しかしながら、これらの動物において、苦痛の兆候は目視上観察されなかった。全ての処置群において、対照と比較して、毎日の水分摂取量（図５）又は飼料摂取量（図６）における目立った相違は観察されなかった。
【００６０】
実施例５
ビーグル犬に関する２８日間の研究
２４匹の純血種のビーグル犬（１２匹の雄及び１２匹の雌）を、各々３匹の雄及び３匹の雌からなる４群に分けた。３群には、ＦＭ−ＶＰ４と称する本発明の好ましい化合物を与え、４週間にわたり、５０、２５０又は８００ｍｇ／ｋｇ／日の投与量にてゼラチンカプセルにより投与した。前記投与量は、約６時間間隔で、二つの等しい副投与量として、毎日与えた。残りの群には、毎日２回、カラのゼラチンカプセルを与え、そして対照として機能させた。
【００６１】
下記のパラメーター：臨床的症状、体重、飼料の消費量、眼科的検査（投与開始及び４週間の前）、血液学的検査、血液化学的検査（投与開始の前及び２週間と４週間との間）、尿検査（投与開始及び４週間目）、心電図記録及び血圧測定（投与開始の前及び４週間目）、臓器重量、肉眼による病理検査並びに組織の組織病理学検査、を研究中に評価した。
【００６２】
まとめると、下記の基本的な知見を得た。
致死率
予定外の死は無かった。
体重及び飼料消費量
８００ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた両性及び２５０ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた雌において、体重に関する有意な効果があった。
眼の検査
処置の影響は無かった。
血液学的検査
処置に関する知見は無かった。
アラニンアミノトランスフェラーゼ
８００ｍｇ／ｋｇ／日を与えられた雄の何匹か又は全てで、２週間と４週間との間で、（ＡＬＴ）は増加した。
【００６３】
実施例６：ビーグル犬への１週間の投与の研究
２匹の純血種のビーグル犬（１匹の雄及び１匹の雌）に、本発明の好ましい化合物を、７日間にわたり１日２回、経口カプセルにより投与した。予定された１日当たりの総投与量２０００ｍｇ／ｋｇ／日を、３日間にわたり投与した。
【００６４】
飼料を与える前に、前−投与期間を通じて１週間に一度、２匹の動物の体重を測定した。加えて、それらを１日目、４日目及び８日目に体重測定した。
【００６５】
雄犬及び雌犬共に、前記投与期間の間、各々０．３ｋｇ及び０．８ｋｇの体重減少を示した。
【表１】
2004511573.tif 000006
【００６６】
実施例７：４週間にわたる若年アレチネズミの研究
本発明の好ましい化合物ＦＭ−ＶＰ４（０．２５質量％、０．５質量％、１．２質量％）を標準アレチネズミ飼料に異なる濃度で配合するために、標準ミル化法（１）を使用した。モンゴル産アレチネズミをこの研究のために使用し、そしてカナディアン　カウンシル　オン　アニマル　ケア（Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｃｏｕｎｃｉｌ　ｏｎ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅ）及びユニバーシティー　オブ　ブリティッシュ　コロンビア（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＢｒｉｔｉｓｈＣｏｌｕｍｂｉａ）のガイドラインに従って取り扱った。３０匹の成体の雄のモンゴル産アレチネズミ（７０〜８０ｇ）は、カナダ、モントリオールのチャールス
リバー　ブリーダーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｂｒｅｅｄｅｒｓ）から入手した。アレチネズミは、１２時間明（０７００〜０９００）／暗サイクルの下に置き、そして標準実験室アレチネズミダイエット〔米国、ブリティッシュコロンビア州、デルタのジャマイサンズ　ペット　フード　ディストリビュータ（Ｊａｍｅｉｓｏｎ’ｓ　Ｐｅｔ　Ｆｏｏｄ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｏｒ）社製〕及び適宜水を与えた。２週間の順応期間の後、このアレチネズミを、体重が同じ６匹の動物からなる５群に分け、そしてＦＭ−ＶＰ４を含まないか（対照）又は０．２５質量％、０．５質量％、１質量％、２質量％のＦＭ−ＶＰ４を含む標準アレチネズミダイエットを４週間連続して投与した。飼料及び水を自由に与え、そして毎日の摂取量を監視し且つ変化させた。
【００６７】
統計的分析
全ての処置された及び対照アレチネズミにおける体重の差は、分散分析〔Ｉｎｓｔａｔ２（Ｒ）；グラフパッド（ＧｒａｐｈＰａｄ）社製〕を使用して決定した。有意差は、ニューマンクールズのポスト−ホック試験により決定し、Ｐ＜０．０５のとき、有意差有りと考えた。全てのデータは、平均±標準偏差として表した。
【００６８】
結果及び結論
１質量％又は２質量％の食餌ＦＭ−ＶＰ４を投与された動物は、４週間の処置後、他の群と比較して、有意に体重を減少させた（図７）。苦痛又は疾患の明らかな兆候は、これらの動物において観察されなかった。ＦＭ−ＶＰ４を与えられなかった対照アレチネズミは、３０日目に、基準線と比較して、充分な体重増加（１３％、ｐ＜０．００１）を示した（図７）。１質量％にてＦＭ−ＶＰ４を給餌されたアレチネズミは、極僅かな体重増加を示し、そして３０日後の対照動物よりも有意に軽い体重（−１１％、ｐ＜０．０１）を示した。２％ＦＭ−ＶＰ４を給餌されたアレチネズミもまた、対照動物に比較して有意に軽い体重（−２３％、ｐ＜０．００１）を示し、そして基準線と比較して、僅かであるがしかし統計学上有意差のない体重の減少（−８％）を示した。
【００６９】
大体において、毎日の水分摂取量（図８）及び飼料摂取量（図９）における有意な差は、研究中観察されなかった。しかしながら、２％ＦＭ−ＶＰ４を投与されたアレチネズミにおける毎日の水分摂取量は、２３日目ないし３０日目において、他の処置群よりも有意に多かった。１％ＦＭ−ＶＰ４群及び２％ＦＭ−ＶＰ４群（図７）における体重増加の阻止は、これらの群における飼料又は水分の消費量が減少した傾向がないので、飼料摂取量又は水分摂取量の減少が原因でないように思われた（図８及び図９）。
結論：結果は、ＦＭ−ＶＰ４は体重増加の阻止に有効であることを示している。
【００７０】
実施例７：８週間にわたる成体アレチネズミの研究
本発明の好ましい化合物ＦＭ−ＶＰ４を異なる濃度２質量％及び４質量％にて標準アレチネズミ飼料に配合するために、標準ミル化法（１）を使用した。ＦＭ−ＶＰ４（２容量％及び４容量％）はまた、飲料水にも溶解した。新鮮な飲料水及びアレチネズ飼料は、研究期間を通して毎日取り替えた。
【００７１】
実験プロトコールは、実施例６において使用した手法と同じにした。３０匹の成体の雄のモンゴル種アレチネズミ（７０〜８０ｇ）は、カナダ、モントリオールのチャールス　リバー　ブリーダーズから入手した。アレチネズミは、１２時間明（０７００〜１９００）／暗サイクルの下に置き、そして標準実験室アレチネズミダイエット〔米国、ブリティッシュコロンビア州、デルタのジャマイサンズ　ペット　フード　ディストリビュータ社製〕及び水を自由に与えた。２週間の順応期間の後、このアレチネズミを、体重を同一にした６処置群に分け、そして研究期間を通して下記の処置プロトコールを使用した：アレチネズミに、ＦＭ−ＶＰ４を含まない（対照；ｎ＝６）、又は２．０％ＦＭ−ＶＰ４（ｎ＝６）がアレチネズミダイエットに配合された若しくは飲料水中に溶解された（ｎ＝６）、及び４．０％ＦＭ−ＶＰ４がアレチネズミダイエットに配合された（ｎ＝６）若しくは飲料水中に溶解された（ｎ＝６）、水分及び飼料を毎日自由摂取で８週間連続して与えた（毎日の水分及び飼料の摂取量を監視し且つ交換した。）。
【００７２】
毎日の飼料及び水分摂取量、ＡＳＴ、ＡＬＴ及びクレアチニン濃度並びに全ての処置された及び対照のアレチネズミの体重における差は、分散分析〔Ｉｎｓｔａｔ２（Ｒ）；グラフパッド社製〕を使用して決定した。有意差は、ニューマンクールズのポスト−ホック試験により決定し、Ｐ＜０．０５のとき、有意差有りと考えた。全てのデータは、平均±標準偏差として表した。
【００７３】
４％ＦＭ−ＶＰ４をダイエット又は飲料水中に投与された動物は、他の群に比較して、８週間の処置後、有意に減少した体重を有していた（表２）。対照と比較して、毎日の水分摂取量における有意差は、ダイエット群中の２％ＦＭ−ＶＰ４のもの以外の全ての処置群において観察された（表３）。対照と比較して、毎日の飼料摂取量における有意差は、飲料水中に２％ＦＭ−ＶＰ４を投与された群並びにダイエット及び飲料水中に４％ＦＭ−ＶＰ４を投与された群のアレチネズミにおいて観察された（表４）。血漿ＡＳＴ、ＡＬＴ及びクレアチニン濃度の有意な減少は、対照と比較して、全ての処置群において観察されなかった（表５）。これらの知見を合わせて考えると、アレチネズミの飼料又は飲料水中に配合された２％ＦＭ−ＶＰ４は、対照に比較して、動物の苦痛又は肝臓及び腎臓毒性の明らかな兆候も無く、体重を有意に減少させることを示唆している。
【００７４】
参考文献
１．エス．ギノット（Ｓ．Ｇｕｉｎｏｔ）及びエフ．リヴァイラー（Ｆ．Ｌｅｖｅｉｌｌｅｒ）。「微細化され薬剤物質の非晶相含有率を評価するためのＭＴＤＳＣの使用（Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ＭＴＤＳＣ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ａｍｏｒｐｈｏｕｓ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｍｉｃｒｏｎｉｚｅｄ　ｄｒｕｇ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．１９２：６３−７５（１９９９）。
【００７５】
表２：研究の各週の間の、アレチネズミの体重に関するダイエット及び／又は水中のＦＭ−ＶＰ４を用いる８週間の処置の効果
【表２】
2004511573.tif 000007
データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示す；全ての処理群に対してｎ＝６。 ａ対照に対してｐ＜０．０５； ｂダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５； ｃダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　４％に対してｐ＜０．０５； ｄ飲料水中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５。
【００７６】
表３：研究の各週の間の、アレチネズミ平均水分摂取量（ｍＬ／日／アレチネズミ）に関するダイエット及び／又は水中のＦＭ−ＶＰ４を用いる８週間の処置の効果
【表３】
2004511573.tif 000008
データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示す；全ての処理群に対してｎ＝６。 ａ対照に対してｐ＜０．０５； ｂダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５； ｃダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　４％に対してｐ＜０．０５； ｄ飲料水中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５。
【００７７】
表４：研究の各週の間の、アレチネズミ平均飼料摂取量（ｇ／日／アレチネズミ）に関するダイエット及び／又は水中のＦＭ−ＶＰ４を用いる８週間の処置の効果
【表４】
2004511573.tif 000009
データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示す；全ての処理群に対してｎ＝６。 ａ対照に対してｐ＜０．０５； ｂダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５； ｃダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　４％に対してｐ＜０．０５； ｄ飲料水中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５。
【００７８】
表５：成体の雄のアレチネズミにおける、血漿クレアチン濃度、アスパルテート・アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）濃度及びアラニン・アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）濃度に関するダイエット及び／又は飲料水中のＦＭ−ＶＰ４を用いる８週間の処置の効果
【表５】
2004511573.tif 000010
データは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）として示す；全ての処理群に対してｎ＝６。 ａ対照に対してｐ＜０．０５； ｂダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５； ｃダイエット中のＦＭ−ＶＰ４　４％に対してｐ＜０．０５； ｄ飲料水中のＦＭ−ＶＰ４　２％に対してｐ＜０．０５。
略号：ＡＳＴ、アスパルテート・アミノトランスフェラーゼ；ＡＬＴ、アラニン・アミノトランスフェラーゼ；ＮＤ、この分析における検出限界以下。
＊未処置の対照に比較した血漿クレアチン濃度の高まりは、間接的に腎臓、とりわけ腎臓の濾過機序の障害を示唆している。
＊＊未処置の対照に比較した血漿ＡＳＴ及び／又はＡＬＴ濃度の高まりは、間接的に肝臓障害を示唆している。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、フィトスタノール−ホスフェート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図２】
図２は、フィトスタノール−カルボネート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図３】
図３は、フィトスタノール−オキサレート−アスコルベート及びそのナトリウム塩の製造方法を示す図である。
【図４】
図４は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく全アレチネズミ体重への効果を示す図である。
【図５】
図５は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく日々の水分摂取量を示す図である。
【図６】
図６は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく日々の餌摂取量を示す図である。
【図７】
図７は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づく全アレチネズミ体重へのＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図８】
図８は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミにおける日々の水分摂取量に対するＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図９】
図９は、４連続週間の日々のアレチネズミへの給餌に基づくアレチネズミにおける日々の餌摂取量に対するＦＭ−ＶＰ４の効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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