(57)【要約】ヒトまたは非ヒト哺乳類が異常に高い副腎皮質ホルモンの血清中濃度を有するヒトまたは非ヒト哺乳類の状態の間歇的処置のための医薬の製造における、式（I）：［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なり、それぞれが水素またはＣ１−４アルキルであり；Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルケニルまたはＣ１−４アルキニルであり；Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（II）または（III）：（式中、Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎ（式中、ｎは、０〜４の整数である）であり、Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なり、それぞれが、水素またはＣ１−４アルキルである）の基であり；またはＲ３およびＲ４は一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである］の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。本発明は、副腎ステロイドの異常産生に伴う疾患を有するヒトおよび他の動物の処置に実際的な有益性を有する。本発明は、副腎ホルモンの持続的抑制が、これらの状態における症状の緩和を達成するのに必要ではないことをも示す。
2004529142.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異常に高い副腎ホルモンの血清中濃度を有するヒトまたは非ヒト哺乳類の状態の間歇的処置のための医薬の製造における、式（I）：
【化１】
2004529142.tif 000014
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なり、それぞれが水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルケニルまたはＣ１−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、または式（II）もしくは（III）：
【化２】
2004529142.tif 000015
（式中、
Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎ（式中、ｎは、０〜４の整数である）であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なり、それぞれが、水素またはＣ１−４アルキルである）
で示される基であるか；
あるいはＲ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである］
で示される化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ１が水素もしくはメチルであり、および／またはＲ２が水素もしくはメチルであり、および／またはＲ４がヒドロキシであるか、またはＲ３およびＲ４が、一緒になってオキソであり、および／またはＲ５およびＲ６がメチルである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素であり、Ｒ４がヒドロキシであり、Ｒ５およびＲ６がメチルであるか、またはＲ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６がメチルであり、Ｒ２が水素であり、Ｒ４がヒドロキシであるか、またはＲ１およびＲ２が水素であり、Ｒ３およびＲ４が一緒になってオキソであり、Ｒ５およびＲ６がメチルである、請求項２記載の使用。
【請求項４】
式（Ｉ）で示される前記化合物がトリロスタンである、請求項１記載の使用。
【請求項５】
式（Ｉ）で示される前記化合物がケトトリロスタンまたはエポスタンである、請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記ホルモンが、コルチゾールである、請求項１〜５のいずれか一項記載の使用。
【請求項７】
前記医薬が、コルチゾール産生を阻害する、請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記処置が、前記ホルモンの血清中濃度を低下させる、請求項１〜７のいずれか一項記載の使用。
【請求項９】
前記処置が、血清中濃度を有意に低下させないが、前記状態の症状の緩和を達成する、請求項１〜７いずれか一項記載の使用。
【請求項１０】
医薬が、請求項１〜５いずれか一項定義の化合物を微粒子組成物の形態で含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の使用。
【請求項１１】
粒子が、０〜１２μmの平均粒子径を有し、９５％以上の粒子が、０〜５０μmの粒子径を有する、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
粒子が、５〜１２μm、または５μm未満の平均粒子径を有する、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
前記微粒子組成物において、オーバーサイズ累積パーセント対サイズ特性曲線が、１．５〜２．５μmの標準偏差を示す、請求項１０記載の使用。
【請求項１４】
前記微粒子組成物が、２m2g-1以上または５m2g-1以上の比表面積を有する、請求項９〜１３のいずれか一項記載の使用。
【請求項１５】
前記医薬が、クッシング症候群の処置用である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の使用。
【請求項１６】
前記医薬が、クッシング病の処置用である、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
前記医薬が、偽クッシング症候群の処置用である、請求項１５記載の使用。
【請求項１８】
前記医薬が、インスリン依存性糖尿病に伴う高コルチゾール血症、加齢に伴う高コルチゾール血症、または抑うつ、統合失調症、アルツハイマー病、パーキンソン病、アルコール中毒、拒食症、過食症または中毒症に伴う高コルチゾール血症の処置用である、請求項１〜１４のいずれか一項記載の使用。
【請求項１９】
前記医薬が、獣医学的適用用である、請求項１〜１７のいずれか一項記載の使用。
【請求項２０】
前記医薬が、イヌまたはウマの処置用である、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
前記医薬が、イヌにおける脱毛症Ｘの処置用である、請求項１〜１９のいずれか一項記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬が、ウマにおける蹄葉炎の処置用である、請求項１９記載の使用。
【請求項２３】
前記医薬が、イヌまたはウマにおけるクッシング症候群の処置用である、請求項２０記載の使用。
【請求項２４】
前記医薬が、クッシング病の処置用である、請求項２３記載の使用。
【請求項２５】
医薬が、１日１回、２回、３回もしくは４回、または２日、３日もしくは４日に１回の投与用である、請求項１〜２４のいずれか一項記載の使用。
【請求項２６】
医薬が、コルチゾール濃度を処置前濃度の７０％またはそれ以下にまで、１、２または４時間まで低下させる、請求項１〜８または１０〜２５のいずれか一項記載の使用。
【請求項２７】
異常に高い副腎ホルモンの血清中濃度を有する状態を罹患するヒトまたは非ヒト哺乳類被験体の処置方法であって、前記処置が、間歇的に、請求項１〜５のいずれか一項記載の化合物の有効量を投与することを含む方法。
【請求項２８】
医薬が、請求項６〜２６のいずれか一項に記載されるような、請求項２７の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、副腎ホルモンの血中濃度を間歇的に低下させ、それにより副腎ホルモンの異常濃度に伴う臨床状態の症状を処置するための、一群の化学的に活性な化合物の使用に関する。以前に受け入れられていた医学的および獣医学的処置のプロトコルは、臨床応答を達成するために、これらのホルモンの血清中濃度の持続的低下を必要とした。
【背景技術】
【０００２】
副腎によるホルモン産生の増加は、ヒトおよび動物における様々な臨床状態に関与する。コルチゾールの過剰量に体内の各組織を長期曝露すると、クッシング症候群（ＣＳ）を起こす。クッシング症候群の内因性の原因は、（１）副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）−依存性であり、下垂体アデノーマ、異所性ＡＣＴＨ産生腫瘍によるコルチコトロピン（ＡＣＴＨ）の過剰分泌に起因する高コルチゾール血症であるクッシング病を含む。副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）を産生する腫瘍、および（２）ＡＣＴＨ非依存性クッシング症候群は、コルチゾール産生副腎良性または悪性腫瘍、および稀な副腎過形成を含む。内因性の原因によるＡＣＴＨ依存性クッシング症候群の発生率は、約６０％であり、そのうち自律性下垂体ＡＣＴＨ分泌が、９５％に関与しており、その他は、異所性ＡＣＴＨ産生腫瘍である。コルチゾール分泌腫瘍は、内因性の原因の約４０％に関与しており、そのうち、良性アデノーマが９０％、副腎皮質カルシノーマが約１０％である。
【０００３】
クッシング症候群の古典的症状は、中心部（腹部）体重増加および外観の典型的変化、皮膚の希薄化、筋肉衰弱、無月経、多尿及び多渇症、インスリン抵抗性、高血圧、抑うつ、精神病ならびに不眠症などがあげられる。さらに、クッシング症候群に起因する慢性高コルチゾール血症患者は、アルツハイマー病に見られるものに似たパターンで認知機能障害を示すこともある（Starkman MN et al. Biol Psychiatry 1992 Nov 1; 32 (9): 756-65）。クッシング症候群において見られる変化の多くは、加齢の過程でみられるものに極めてよく似ている。この結果、コルチゾール濃度の上昇又は糖質コルチコイドに対する応答の変化が、少なくとも一部で、高齢者に見られる変化に関与すると仮定する者もいる。加齢の過程でみられる変化の多くが、「偽クッシング病」の一形態であることが示唆されている。
【０００４】
Van Cauter et al（J Clin Endocrinol Metab 1996 Jul; 81 (7): 2468-73）らの研究では、１８〜８３歳の健常人（男性９０名、女性８７名）からの血漿中コルチゾールの合計１７７の一時的なプロフィールを解析した。各個体のプロフィールのために、午前最大及び夜間最低の平均レベル、値、時間、日周期の振幅、ならびに静止期の開始および終了を定量する１２のパラメータを算出した。男性および女性の両者において、平均コルチゾール濃度は、２０歳と８０歳との間で２０〜５０％上昇した。午前の最大値が低いことを主たる原因として、閉経前の女性は、同年齢範囲の男性に比べ、平均濃度が若干低かった。夜間最低値の濃度は、男性および女性の両性において加齢とともに漸次上昇した。年齢に関連する午前中最高相の上昇は、女性に生じたが、男性には生じなかった。コルチゾール分泌の日周期は、高齢において維持されているが、相対的振幅が減衰しており、日内上昇のタイミングが前に進んだ。生涯にわたるストレスへの曝露による「摩滅」の仮説に一致する、ヒト副腎皮質刺激ホルモン活性のレベルおよび日内変化に対する著しい性特異的な加齢効果があると結論された。日内振幅および相における変化が、高齢者における睡眠障害の病因に関与し得ることが示唆された。しかし、コルチゾール濃度の上昇は、ベースとなるコルチゾール濃度の３〜６年にわたる縦断的研究に５１名の健常な高齢志願被験者のグループが参加した、Lupien et al（Neurobiol Aging 1996 Jan-Feb; 17 (1): 95-105）の試験により示されたように、高齢者で普遍的は特徴ではないかもしれない。ひとつのサブグループでは、コルチゾール濃度が年とともに上昇し、別のグループでは低下し、第３グループでは、安定に維持されることが示された。しかし、時間の経過とともにコルチゾール濃度の上昇を示した患者において、強迫観念／衝動強迫質問票に対する応答とコルチゾールの上昇率との間に正の相関が見られた。これらの著者らは、彼らの結果が、視床下部−下垂体−副腎の活性および認知効率において異なる、加齢ラットの部分集団が存在することを示した動物試験と一致したと結論付けた。
【０００５】
年齢とともにコルチゾール濃度が上昇する傾向にあるのみならず、コルチゾール産生の日周期も、年の経過とともに攪乱される。Mileu et al（Endocrinologie 1978 Jan-Mar; 16 (1): 29-39）は、７０〜１００歳の２５名において血漿中コルチゾールの日周期を検査し、１７〜３８歳の５名と比較した。結果は、血漿中コルチゾールの日周期が、年齢とともに変化することを示した。見出された特徴的な現象は、時間単位での量的差異が減少方向に向かう傾向があり、比較すると、９０〜１００歳において、より顕著である；０８．００時のコルチゾール最高濃度が７１〜８０歳のグループでは０４．００時に先行し、８０歳を超える被験者の数名では、００．００時に先行する。正常な日周期は、検査した２５例のうち２例に見られた。コルチゾールの日周期の変化は、制御系が、加齢の過程においても損なわれていることを示した。高齢者における早朝不眠は、コルチゾール分泌のこのような先行によるものである可能性がある。
【０００６】
糖質コルチコイド過剰は、動物において海馬の損傷に伴うものであり、海馬が学習および記憶に関与することから、海馬形成（ＨＦ）容量、記憶機能障害およびコルチゾール濃度の関係を、クッシング症候群患者１２名において検討した。磁気共鳴画像化の後、ＨＦ容量を、歯状回、固有海馬および鉤状回をトラックボールでトレースしたデジタル合計を測定し、総頭蓋内容量で補正した。患者の２５％について、ＨＦ容量は、文献的に得られた健常被験者における９５％信頼区間の範囲外となった。更に、ＨＦ容量と言語対関連学習、言語記憶および全項目ＩＱで補正した言語記憶との間には有意で特異的な相関性が認められた（r=0.57〜0.70、p ＜ 0.05）。ＨＦ容量は、血漿中コルチゾール濃度と負の相関を示した（r=-0.73、p ＜ 0.05）。これらの研究は、ＣＳ患者において、ＨＦ容量の低下、記憶機能障害およびコルチゾールの上昇との間の関連性を示唆する。
【０００７】
したがって、ＣＳ患者で見られる変化は、コルチゾール濃度の上昇の有害な影響によるものと考えられる。ＣＳの処置は、産生増大の源を除去するか、または副腎でのコルチゾールの合成をブロックすることにより、上昇したコルチゾール濃度を低下させることに基づいている。目的は、日中の平均濃度を、健常産生量と同等の300〜400 nmol/Lにまで低下させることである（Internal Medicine 2ndedition, editors J Kumar and M L Clark chapter 16 pg. 815）。
【０００８】
クッシング病は、ヒトと同様、多くの動物種でも起こる。イヌでは、この疾患の特徴は、体重増加、傾眠、糖尿病、体毛の剛毛肥厚化（coarse thickening）、多尿および多渇症である。ヒトの場合よりも、おそらく、特定の血統のイヌで一般的な疾患である。
【０００９】
特定の血統のイヌにおいて、副腎および／または性腺ホルモンの濃度の変化は、成犬発症型脱毛症の一形態である、脱毛症Ｘを起こし得る。この疾患と副腎ホルモン異常との関連、先天性副腎過形成とも呼ばれる状態、クッシング様症候群および成犬発症型高ソマトトロピン分泌との関連は、よく確立されている。罹患したイヌは、体毛および皮膚の変化以外は、健常である。脱毛症Ｘは、ノルディック血統である、ポメラニアン、チャウチャウ、アイリッシュウォータースパニエル、ハスキーおよびプードルなどのイヌで最も一般的に起こる。脱毛症は、通常、１〜２歳の間の若年成犬で発症し、オスでもメスでも起こり得る。体幹部および大腿部にわたる対称的パターンの体毛喪失が典型的であり、強度の色素過剰症を伴うこともある。脱毛症Ｘに伴うホルモン異常は、血統により様々である。すなわち、罹患ミニチュアプードルおよびポメラニアンでは、ステロイド生成の変化がおこり、血液および尿のコルチゾールおよび１７−ヒドロキシプロゲステロン（１７ＯＨＰ）濃度の上昇を伴う。脱毛症キースホンドでは、血中１７ＯＨＰおよびエストラジオール濃度が上昇している。脱毛症チャウおよびアイリッシュウォータースパニエルでは、１７ＯＨＰ濃度が上昇している。
【００１０】
ウマ、特に高齢のウマでは、ウマ変異型ＣＳも発症し得る。この特徴は、多尿、多渇症、傾眠および眼窩周囲の脂肪沈着である。ＣＳのウマの相当の割合が、脚の小骨に影響を及ぼし、治療困難なことで名高い状態である、蹄葉炎をも発症する。動物における処置の目的は、ヒトにおける目的と同じであり、上昇したコルチゾール濃度の永続的抑制の達成を企図するものである。
【００１１】
Nishizawa S, et al（Neurosurgery 1999 Aug; 45 (2): 239-44）によれば、クッシング病に対する外科処置の目的は、「内分泌学的治癒」である。この研究では、術後の内分泌学的分析を、経蝶形骨手術（trans-sphenoidal）を受けたクッシング病患者１８名において評価した。術後第１週の間、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の血清中濃度を、放射免疫アッセイにより測定した。術後１週間で、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）を用いた試験を、各患者に実施し、正常ＡＣＴＨ分泌細胞の貯蔵機能をチェックした。８名の患者において、術後のＡＣＴＨ濃度は、１週間にわたり測定可能濃度を下回り、ＡＣＴＨは、ＣＲＨ試験に対し何ら応答を示さなかった。これらの患者において、ＡＣＴＨおよびコルチゾールの血清中濃度は、長期フォローアップの間、正常の日内変動を伴う正常範囲内に維持された。これらの患者は、内分泌学的に治癒されたものと定義された。７名の患者において、ＡＣＴＨ濃度は、手術の翌日に正常範囲内に回復したが、ＣＲＨ試験によりＡＣＴＨが誘発された。これら７名の患者のうち５名は、その後正常範囲を上回るＡＣＴＨの再上昇を示した。その他の３名の患者においては、ＡＣＴＨ濃度は一度も正常化せず、医学的処置を必要とした。この研究の著者は、クッシング症候群の内分泌学的治癒を、術後早期段階におけるＣＲＨ試験に対するＡＣＴＨ応答の欠如および手術翌週の測定不能な低ＡＣＴＨ濃度として定義している。術後にＡＣＴＨ濃度の正常範囲を得ることは、内分泌学的治癒の定義には不十分である。
【００１２】
したがって、処置に欠かせない要素は、ＡＣＴＨ源の完全な根絶であるか、またはコルチゾール産生の上昇の源の摘出である。これは、今日では通常、手術による副腎の除去、またはＡＣＴＨ産生の上昇に関与する下垂体病変を破壊することにより成し遂げる。ＡＣＴＨの上昇が、異所性部位からのものである場合には、原理は同じである。即ち、ＡＣＴＨ源の除去である。そのような処置のすべてについて、その結果、コルチゾール濃度の低下が持続し、患者は、ホルモン補充を受けることを要することもある。
【発明の開示】
【００１３】
本発明の予期せぬ知見は、本発明の活性化合物が、上昇した血清中ホルモン濃度を短期間低下させるのみで、１日２４時間の期間にわたって持続することはないにもかかわらず、副腎ホルモンの異常な血中濃度に伴う症状を軽減可能であり、効果的に治療可能であることである。この効果は、活性作用物質の間歇的投与、通常は１日１回のみ投与することにより達成することができる。
【００１４】
特に、血清中ホルモン濃度の間歇的低下は、クッシング病および随伴する症状、ならびにイヌの脱毛症Ｘの処置において効果的であった。
【００１５】
したがって、本発明は、
式（Ｉ）：
【００１６】
【化３】
2004529142.tif 000003
【００１７】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なり、それぞれが水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルケニルまたはＣ１−４アルキニルであり；
Ｒ４は、水素、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（II）もしくは（III）：
【００１８】
【化４】
2004529142.tif 000004
【００１９】
（式中、
Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎ（ここで、ｎは０〜４の整数である）、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なり、それぞれが水素またはＣ１−４アルキルである）
で示される基であるか、
あるいはＲ３およびＲ４は、一緒になってオキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである］
で示される化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの、ヒトまたは非ヒト哺乳類が異常に高い副腎ホルモンの血清中濃度を有するヒトまたは非ヒト哺乳類の状態の間歇的処置のための医薬の製造における使用、を提供する。
【００２０】
発明の詳細な説明
本発明において具体化された新規概念は、ＡＣＴＨ依存性であるかＡＣＴＨ非依存性であるかに関わらず、クッシング症候群の症状の軽減を、コルチゾール濃度の間歇的低下により成し遂げることができることである。このアプローチは、コルチゾールおよび他の関連ホルモンの産生を、コルチゾール産生の長期間または永続的なブロックではなく、むしろ１日あたり数時間のみの期間ブロックすることが可能であるとの点において、確立されている治療法とは著しく異なる。これは、副腎過剰分泌の医学的制御の巧妙な方法を提供し、副腎の手術による除去および長期間のホルモン補充の必要性を回避するという点において、患者に対し具体的な効果を有する。
【００２１】
本発明の化合物−トリロスタンおよび関連化合物ならびにその性質
本発明は、主として、一般構造２α−シアノ−４α，５α−エポキシアンドロスタン−１７β−オール−３−オンを有する化合物に関する。上式の化合物は、総称「トリロスタン」を有し、英国特許明細書第1,123,770号および米国特許明細書第3,296,295号に記載されている。本発明に記載されている化合物は、おおよそトリロスタン分子に基づいているが、特許請求の範囲では、トリロスタンの第一代謝物であるケトトリロスタン、およびエポスタンなどの他の類似関連化合物にも言及している。初期明細書は、トリロスタンおよび関連化合物の副腎皮質阻害性を記載している。英国特許明細書第2,130,588号には、トリロスタンおよび関連化合物の改善された製造方法が記載されている。これにより、平均等価球体容量径５〜１２μmを有し、少なくとも９５％の粒子が５０μm未満の粒径を有する粒子に、化合物を微細化することを可能にした。粒径サイズ特異度が上がると、トリロスタンのバイオアベイラビリティが改善され、形成される活性代謝物の量を制御され、それにより臨床応答が改善され、初期製剤の変動が減少された。トリロスタンは、末期乳がんの処置として、広く研究されている。２９％（Williams C. J. et al, Brit. J. Cancer (1993) 68, 1210-1215）〜３８％（Ingle J. N. et al, Am. J. Clin. Oncol., 1990, 13 (2), 93-97）の奏効率を有するトリロスタンの有効性が、発表されたいくつかの研究で確認されている。トリロスタンを用いた以前の研究のいずれにおいても、作用機序は、３β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ酵素系の拮抗阻害によると考えられていた。その作用は、アンドロゲン枯渇によるものと考えられ、あらゆるフィードバックメカニズムを克服するために、ヒドロコルチゾンがトリロスタンとともに与えられた。化合物が、当時公知のエストロゲン、アンドロゲンまたはプロゲステロン受容体には何ら直接作用を及ぼさないことが明らかにされた。
【００２２】
しかし、英国特許出願GB0000984.5（GB-A-2,345,851）によれば、トリロスタンおよび関連化合物が、いくつかのエストロゲン受容体イソフォームに特異的作用を有し、それにより受容体および受容体へのエストロゲンの結合を調節することが示されている。エストロゲン受容体が一種のみ存在するとの考えは、現在では正しくないことが知られているが、これに基づいて以前の特許請求の範囲は記載されたもので、現在では、少なくとも２種の主要な形態のエストロゲン受容体が存在すること、およびトリロスタンおよび関連化合物がこれらの受容体に結合するリガンドを特異的に調節することが確立されている。本発明は、副腎における３βデヒドロゲナーゼ（３βＨＳＤ）活性の阻害におけるトリロスタンおよび関連化合物の作用に関するが、高コルチゾール血症の動物およびヒトにおけるコルチゾールの間歇的低下がそのような状態における症状を軽減するとの知見は、３βＨＳＤ阻害の結果のみではないかもしれないということが理解される。トリロスタンおよび関連化合物は、コルチゾールおよび他の関連ホルモンの糖質コルチコイド受容体への結合を調節するかもしれないし、そしてトリロスタンの間歇的（１日１回）処置で見られる症状の長期の軽減は、血清中で到達するコルチゾールの濃度にほとんど関連しないか、または何ら関連を有しないかもしれないが、適切な受容体に対する持続的な、または延長された効果に、より強く関連するかもしれない。あるいは、副腎摘出術または連続的薬物療法により達成されるコルゾール濃度の持続的低下よりも、むしろ１日あたり限定された時間でのコルチゾール濃度の低下は、糖質コルチコイド受容体でのリガンド親和性を変えることにより有益な効果を有することもある。Huizenga NA et al（European Journal Endocrinology 2000; 142 (5): 472-6）の研究は、糖質コルチコイド（ＧＣ）の作用メカニズムが、細胞内糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）によって介されること、およびリガンド親和性の、対照との比較における有意な低下が、クッシング症候群患者からの細胞において確認されたことを示した。この観点から試験された唯一の患者において、リガンド親和性の完全な正常化が、処置後に観察されたが、受容体数は影響を受けなかった。ＣＳ患者において、コルチゾール濃度とリガンド親和性との間には、統計学的に有意な負の相関性がみとめられたが、これは、対照においては認められなかった。
【００２３】
筆者らは、クッシング症候群患者における連続的に高い濃度のコルチゾールへの曝露に対する応答において、おそらく受容体修飾を反映したリガンド親和性の減弱が見られたとの結論を下した。この仮定は、１名の患者において、疾患の完全寛解の後にリガンド親和性の正常化が見られたとの事実によって立証された。
【００２４】
本発明における使用に適する化合物は、式（Ｉ）：
【００２５】
【化５】
2004529142.tif 000005
【００２６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なり、それぞれ、水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルケニルまたはＣ１−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（II）もしくは（III）：
【００２７】
【化６】
2004529142.tif 000006
【００２８】
（式中、
Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎ（ここで、ｎは、０〜４の整数である）、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なり、それぞれが、水素またはＣ１−４アルキルである）
で示される基であるか；
あるいは
Ｒ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである］
を有するか、またはそれらの３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルである。
【００２９】
好ましくは、Ｒ１は、水素またはメチルであり、および／またはＲ２は、水素またはメチルであり、および／またはＲ４は、ヒドロキシであるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒になってオキソであり、および／またはＲ５およびＲ６は、メチルである。
【００３０】
さらに好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素であり、Ｒ４はヒドロキシであり、Ｒ５およびＲ６はメチルであるか、またはＲ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６は、メチルであり、Ｒ２は水素であり、Ｒ４は、ヒドロキシであるか、またはＲ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ３およびＲ４は、一緒になって、オキソであり、Ｒ５およびＲ６は、メチルである。
【００３１】
本発明における使用に特に好ましい化合物は、トリロスタンそれ自体、その第一代謝物であるケトトリロスタンおよびエポスタンである。トリロスタンそれ自体は、式：
【００３２】
【化７】
2004529142.tif 000007
【００３３】
を有する。
【００３４】
式（Ｉ）については、Ｒ１が、水素またはメチルであり、Ｒ２が水素またはメチルであり、Ｒ５およびＲ６がメチルである、式（Ｉ）の化合物を使用することが好ましい。Ｒ４が、ヒドロキシであるか、またはＲ３およびＲ４が一緒になって、オキソであることが、さらに好ましい。そのような好ましい化合物の例が、
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が水素であり、Ｒ４が、ヒドロキシであり、Ｒ５およびＲ６がメチルであるトリロスタン；Ｒ１およびＲ２が水素であり、Ｒ３およびＲ４が一緒になってオキソであり、Ｒ５およびＲ６がメチルである、ケトトリロスタン；およびＲ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６がメチルであり、Ｒ２が水素であり、そしてＲ４がヒドロキシである、エポスタンである。
【００３５】
本発明の処置
全般的特性：
本発明に記載の特許請求の範囲は、トリロスタンおよび関連化合物の特異的な作用機序に限定されず、持続的コルチゾール低下という一般的に受け入れられている慣用の方法よりも、むしろこれらの化合物を使用して、血清中コルチゾールおよび他の関連ホルモン濃度の間歇的低下を惹起することにも言及する。これは、予期せぬ知見であり、トリロスタンおよび関連化合物を動物および患者に投与する方法を変えるものである。
【００３６】
２種の異なる形態の糖質コルチコイド受容体が、最近報告されていることに留意するのが重要である（Oakley RH et al; Endocrinology. 1997: 138; 5028-5038）。これらのイソフォームは、ｈＧＲαおよびｈＧＲβと命名されており、正の役割を果たすｈＧＲαに比べ、ｈＧＲβが負の活性を有することが示されている（Oakley RH et al; Journal of Biological Chemistry 1999: 274; 27857-27866）。これは、２種のエストロゲン受容体の反対作用に極めてよく似ており、糖質コルチコイド受容体は、ステロイド／サイロイド／レチノイン酸受容体タンパク質のスーパーファミリーに属しているため、トリロスタンおよび関連化合物が糖質コルチコイド受容体に対して、エストロゲン受容体に対するのと似た効果を有することは、想到し得ることである。
【００３７】
同様に、３βＨＳＤの阻害も、副腎におけるのと同様、末梢組織レベルでも起こり得る。ステロイド２１−および１１β−ヒドロキシル化が、ヒトおよびラットの副腎以外の様々な組織で起こり得ることが証拠により示された。アルドステロンの合成およびアルドステロンシンターゼｍＲＮＡの転写が、ラットの大動脈平滑筋細胞において明らかにされている。アルドステロンシンターゼは、コルチコステロンおよび１８−ヒドロキシデオキシコルチコステロンを生じさせる。したがって、トリロスタンおよび関連化合物は、脳、皮膚、骨、動脈などの副腎以外の部位で３βＨＳＤを阻害することにより、その作用を発揮し得る。
【００３８】
トリロスタンおよび関連化合物による間歇的処置によって生じる効果は、コルチゾール前駆体および／または代謝物に対するコルチゾールの比が変化した結果でもあり得る。Yamaguchi Y et al（Clin Endocrinol (Oxf) 1998 Sep; 49 (3): 377-83）は、高インスリン血症を伴う糖尿病患者における血清中デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）濃度の低下を示した。ＤＨＥＡは、コルチゾールの前駆体であり、その血清中濃度が、トリロスタン投与後上昇することが知られている。コルチゾール過剰分泌の患者の９０％までが、グルコース不耐性であり、糖尿病は、クッシング症候群の特徴であることから、コルチゾールのＤＨＥＡおよび他の前駆体に対する比は、極めて関連した事項であり得る。
更に、Kalmijin S, et al（J Clin Endocrinol Metab 1998 Oct; 83 (19): 3487-92）は、前向き研究を実施し、副腎ステロイドホルモンであるコルチゾールおよび硫酸デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡＳ）の末梢濃度と認知の障害および低下との関係を検討した。試験母集団は、母集団に基づくロッテルダム試験からの、５５〜８０歳の健常参加者１８９名の検体から構成された。デキサメタゾン投与前のＤＨＥＡＳおよびコルチゾール、ならびにデキサメタゾン１mgの投与前および投与一晩後のコルチコステロイド結合グロブリンの絶食時血中濃度を測定した。３０点の小精神状態試験（ＭＭＳＥ）を用いて、認知を評価した。この試験は、デキサメタゾン１mg（ＳＤ＝０．６８）投与後にコルチゾールの自然対数で表した１標準偏差（ＳＤ）の上昇が、認知低下のオッズ比（ＯＲ）１．５に関連した（９５％  ＣＩ、１．０〜２．３）。ＤＨＥＡＳの１ＳＤ上昇（ＳＤ＝２．１０μＭ/L）は、認知障害（ＯＲ＝０．５；９５％  ＣＩ，０．２〜１．１）および認知低下（ＯＲ＝０．６；９５％ＣＩ、０．４〜１．１）に逆相関するが、しかし有意ではなかった。遊離コルチゾールのＤＨＥＡＳに対する濃度比は、認知障害に有意に相関した（ＯＲ＝１．８；９５％ＣＩ、１．０〜３．２）。健常高齢被験者によるこの前向き試験は、遊離コルチゾールの基底濃度が認知障害に正に相関し、デキサメタゾン処置後のコルチゾール濃度が認知低下に相関することを示唆した。ＤＨＥＡＳと認知の障害および低下との間には、逆関連が見られたが、有意ではなかった。
【００３９】
処置の目的
一実施態様において（例えば、実施例２参照）、本発明は、１種またはそれ以上の副腎ホルモンの濃度を低下させる手段を提供する。好ましくは、そのホルモン、またはそのホルモンの１種が、コルチゾールである。この実施態様によれば、本発明の処置は、好ましくは、コルチゾールおよび／または他の副腎ホルモンの産生を低下させることにより作用する。
【００４０】
この実施態様によれば、１種またはそれ以上の副腎ホルモンの濃度は、間歇的に低下する。これまでに受け入れられてきた臨床および獣医学的実施は、そうした濃度を連続的に低下させる方向にあり、これは上記検討のように、望ましくない結果をもたらす。
【００４１】
濃度は、問題となる状態からの部分または完全軽減、好ましくは完全軽減をもたらす濃度にまで低下させ得る。本発明は、一種以上の状態および一種以上の種に適用されるので、所望の濃度は様々であり、当業者は、それに従って適切な濃度を確定し、投薬計画を案出することが可能であろう。特に、健常な個人の濃度を検査または測定し、投薬計画を案出し、正常範囲まで、またはそれに向けて低下させることが可能である。これは、計算、実験またはこれら２つの組み合わせによって実施することができる。本明細書の実施例を、手引きとして用いることができる。
【００４２】
例えば、副腎ホルモン濃度、例えばコルチゾール濃度は、処置前の上昇した濃度の９０％未満、８０％未満、７０％未満、６０％未満、５０％未満にまで低下させ得る。
【００４３】
副腎ホルモン濃度は、いかなる適切な手段で測定してもよい。コルチゾールの場合、ＡＣＴＨ刺激試験、ＴＲＨ刺激試験およびデキサメタゾン刺激試験のいずれも可能である。イヌでは、ＡＣＴＨ刺激試験が好ましく、ウマでは、ＴＲＨまたはデキサメタゾン刺激試験が好ましい。
【００４４】
他の実施態様においては、本発明の化合物の間歇的投与は、実際には、副腎ホルモンまたは問題のホルモンの濃度を有意に低下させないかもしれないが、それにもかかわらず、臨床応答を示し、状態の症状を軽減させる。例えば、実施例１参照。
【００４５】
本発明の化合物は、以下のメカニズムの１またはそれ以上により作用すると考えられる：副腎におけるステロイド合成をブロックする、糖質コルチコイド受容体に結合するリガンドの修飾、体内の副腎以外の部位での３−βデヒドロゲナーゼの阻害。これらの目的に焦点を絞って、処置を計画してもよいが、本発明は、いかなる特定の作用機序にも限定されない。
【００４６】
処置される状態
本発明は、ヒトでの医学的適用およびヒトではない哺乳動物における獣医学的適用の両方を有する。好ましいヒトではない被験体として、ウマおよびイヌなどがあげられる。
【００４７】
副腎ホルモン濃度が異常に上昇しているいかなる状態も、本発明の間歇的処置アプローチから有益であると考えられる。コルチゾール濃度が異常に上昇している、高コルチゾール血症の処置が好ましい。例えば、加齢、インスリン依存性糖尿病、抑うつ、統合失調症、アルツハイマー病、パーキンソン病、アルコール中毒、拒食症、過食症および嗜癖に伴う高コルチゾール血症の処置を、本発明に従って行ってもよい。
【００４８】
特に好ましい状態として、自然発症副腎皮質機能亢進（ＨＡＣ）の名でも知られる、クッシング症候群（ＣＳ）、偽クッシング症候群があげられる。ＣＳは、ＡＣＴＨ依存性（クッシング病の名で知られる場合）でも、ＡＣＴＨ非依存性であってもよい。両方のタイプが、本発明による処置に応答し得る。さらに、処置可能な状態として、下垂体依存性ＨＡＣおよび副腎腫瘍に起因する副腎ホルモン濃度の上昇があげられる。
【００４９】
ヒト、イヌおよびウマにおけるＣＳ、特にＡＣＴＨ依存性ＣＳの処置が、特に好ましい。イヌにおける脱毛症Ｘの処置も好ましい。ウマにおける蹄葉炎の処置も好ましい。
【００５０】
投薬計画
適切な期間、所望のレベルにまでホルモン濃度を低下させるため、またはたとえホルモン濃度が有意に変化しない場合でも、間歇的投与が、症状の継続的軽減をもらすように、投薬計画を選択する。当業者は、例えば処置すべき状態、被験体の種、被験体のサイズおよび状態の重症度に応じて、適切な投薬計画を選択することができるであろう。
【００５１】
しかし、指針として、投与は、一般的に、１日に数回、例えば、１日に１回、２回または３回もしくは４回投与である。１日１回の投与が好ましい。
【００５２】
より頻度の低い、例えば２、３または４日に１回、または週に１回などのより低頻度の投与も包含し得る。
【００５３】
指針として、副腎ホルモンの血清中濃度が低下する場合、各投与が、１時間まで、２時間まで、４時間まで、または６もしくは８時間までの時間をかけて、濃度低下に導くことが好ましい。１日１回投与の場合には、例えば４、６または８時間までの期間に１回など、より長い時間をかけて濃度を低下させること（より大用量）が、有益で有り得る。逆に、複数回投与では、例えば２または４時間までを１日２回など、より短時間（小用量）が好ましい。
【００５４】
投与、投薬および製剤
本発明の化合物を、いかなる適切な方法で投与してもよい。例えば、錠剤、カプセル、または懸濁製剤の経口投与が好ましい。注射、特に静脈内投与も、好ましい投与経路である。
【００５５】
経口製剤では、GB-B-2,130,588が、トリロスタンおよび関連化合物の製造の改善方法に関する。この方法は、化合物を、平均等価球体容量径５〜１２μmを有し、少なくとも９５％の粒子が５０μm未満の粒径を有する粒子に、化合物を微細化することを可能にする。粒径特異度がより大きくなると、トリロスタンのバイオアベイラビリティが改善され、形成される活性代謝物の量を制御し、それにより臨床応答を改善し、変動を減少させた。
【００５６】
したがって、本発明の化合物は、微粒子組成物の形態で使用し得る。そのような組成物は、好ましくは、微粒子化された組成物である。
【００５７】
本発明による使用のための微粒子組成物は、望ましくは、約１２μm以下の平均粒径を有する粒子からなり、粒子の８０、８５、９０、９５％以上、好ましくは９８％以上、９９％以上または９９．５％以上が約５０μm未満、好ましくは４０μm未満、３０μm未満または２０μm、例えば、０．１μm〜１０、２０、３０、４０もしくは５０μm、１μmから１０、２０、３０、４０もしくは５０μmまたは１０から２０、３０、４０もしくは５０μmの粒径を有する。粒子は、好ましくは、約５〜約１２μmまたは約５μm、例えば、０．１〜５μmまたは１〜５μmの平均粒径を有する。組成物のオーバーサイズ累積パーセンテージ対特性曲線が、１．５〜２．５μm、好ましくは約１．７５〜２．２５μm、より好ましくは約２μm、例えば１．９〜２．１μmの標準偏差を示すことが更に好ましい。
【００５８】
投薬は、処置の目的、投薬計画および投与様式により、および特に処置すべき被験者のサイズに関して考慮して選択される。
【００５９】
微細化された微粒子組成物の経口投与では、１０〜５０００mgの用量が好ましく、より好ましくは１０〜１０００mg、１０〜２０００mgおよび１０〜５００mgであり、より具体的には、２０〜５００mgおよび３０〜５００mgである。
【００６０】
望ましくは、製剤を非毒性医薬被覆材で被覆するか、または液体医薬賦形剤に懸濁させ、より口当たりを良くし、胃への刺激を低減させる。
【００６１】
注射、特に静脈内注射については、用量は、例えば１０〜５００mg、例えば１０〜２００mgまたは１０〜１００mgであり得る。特に好ましい範囲は、３０〜３６０mgである。
【００６２】
しかし、処置される被験体のサイズも考慮しなければならない。したがって、投薬は、体重kg当たりのmg数で測定し、例えば０．１〜２０mg/kg、例えば０．１〜２、０．１〜１または０．５〜１mg/kg、または２、５、１０または２０mg/kgまでであってもよい。
【００６３】
ウマでは（実施例１参照）、０．４〜１mg/kgの用量が好ましい。
【００６４】
指針として、５kg未満のイヌに、３０mgを１日に１回、経口投与により与えてもよく、５〜１５kgのイヌに、６０mgを１日に１回与えてもよく、１５kgを超えるイヌには、１２０mgを１日に１回与えてもよく、すべて同様の効果を達成する。したがって、５kg未満のイヌには、１０〜５０mg、例えば２０〜４０mgの用量が好ましく、５〜１５kgのイヌには、１５kgを超える用量、４０〜８０mg、例えば５０〜７０mgの用量が好ましく、１５kgを超えるイヌには、１００〜１５０mg、例えば１１０〜１３０mgの用量が好ましい。
【００６５】
いかなる投薬剤形についても、例えば注射用滅菌水または生理的食塩水、ならびに公知のカプセル、錠剤、および懸濁剤用賦形剤などの適切な医薬賦形剤が選択される。
【００６６】
実施例
実施例１−トリロスタン間歇的投与の副腎ステロイド産生ブロック能
トリロスタン間歇的投与の副腎ステロイド産生ブロック能を、ウマクッシング病のウマ２０頭（平均年齢２１、ＳＤ５．７歳）で評価した。組み合わされたデキサメタゾン抑制サイロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）刺激試験（ウマ１７頭）またはＴＲＨ刺激試験（ウマ３頭）を、視床下部−下垂体−副腎軸の機能の標準試験として使用した。コルチゾール分析の血清検体を、試験期間のそれぞれの２４時間にわたり４時間間隔で留置カテーテルにより採取した。これらは、処置前、その後２１０分（ＴＲＨ１mgを静注後３０分）およびデキサメタゾン４０mg/kg筋注後２２時間である。罹患したウマに、餌中０．４〜１mg/kg（平均０．５mg/kg）トリロスタンを１日１回投与し、３０日にわたり処置した。３０日後、内分泌試験を繰り返した。処置の前後の血清中コルチゾールを、対応のあるｔ検定により比較した。
【００６７】
１１頭のウマに見られた多尿および／または多渇は、処置後すべてのウマにおいて軽減された。傾眠が、１９頭のウマである程度見られたが、治療後、すべてのウマにおいて挙動の改善は明らかであった。１７頭のウマにみられた再発性、慢性または持続性蹄葉炎は、改善され、１４症例ではまったく再発が見られなかった。６頭のウマでは、治験中、蹄葉炎に起因する跛行が改善されたため、フェニルブタゾン療法を中止しており、１頭のウマでは、１日２ｇから１ｇにフェニルブタゾン療法を減量させた。３頭のウマが、診察時にＸ線検査において、施回および衰えの徴候（rotation and sinking evident）を伴う重度の急性蹄葉炎を呈した。これは、トリロスタンに応答しなかった。これらのウマの１頭は、治験に入ってから１４日で安楽死させた。１頭のウマは、治験中に蹄葉炎の軽度発作を発症した（Obelグレード１）が、３０日目に再診察した際には、健康であった。
【００６８】
処置前のウマにおける、ベースラインコルチゾール（平均：１４１、ＳＤ５４nmol/L）およびデキサメタゾン後２２時間のコルチゾール（平均；１０９、ＳＤ３４nmol/L）は、処置後［ベースライン（平均；１５９、ＳＤ６４nmol/L）、デキサメタゾン後（平均；１０４、ＳＤ４８nmol/L）］と有意差がないが、トリロスタンの前（平均：１７６、ＳＤ５２nmol/L）および後（平均：１４７、ＳＤ６１nmol/L）のＴＲＨ投与後コルチゾールは有意に低下した（ｐ＝０．０２３）。
【００６９】
結果は、１日１回与えられたトリロスタンが、すべてのウマにおける臨床徴候のほとんどを改善し、最も安定していたのは、挙動の改善であることを示した。ＴＲＨ投与に対するコルチゾール応答が、対応して低下したが、コルチゾール濃度の明らかな変化はなかった。
【００７０】
実施例２−自然発症副腎皮質機能亢進症（ＨＡＣ）の処置のためのトリロスタン：
自然発症副腎皮質機能亢進症（ＨＡＣ）の処置のためのトリロスタンの使用を、１１頭のイヌにおいて評価した。イヌにおける副腎皮質機能亢進症（ＨＡＣ）、即ちクッシング症候群の発生率は、約０．１％と推定されており、したがって、この疾患は、獣医学医薬においても周知のものである（Chastain et al. 1986）。下垂体依存性副腎皮質機能亢進症（ＰＤＨ）は、下垂体の向副腎皮質アデノーマによる過剰な副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）産生によるものであり、ＡＣＴＨ過剰を除去することにより処置されるべきである。ときに下垂体切除術が、ＰＤＨのイヌにおいて実施されるが（Meji et al. 1998）、この手術は、その微妙な性質のため、広く利用可能なものではない。イヌのＰＤＨは、抗副腎皮質薬（adrenoconicolytic drug）である、ｏ，ｐ‘−ＤＤＤ（ミトタン；mitotane）の誘導および維持用量で最もたびたび処置され、ミトタンに対しては、他の種に比較してイヌがはるかに敏感である（Rijinbeck, 1996）。ごく最近になって、大用量ｏ，ｐ’−ＤＤＤによる副腎皮質の完全な破壊およびその後の鉱質および糖質コルチコイド補充を目的とした新しいプロトコルが、提唱されている（Den Hertog et al.）。しかし、殺虫剤ＤＤＴに関連する化合物の一種であるｏ，ｐ’−ＤＤＤには、イヌにおいて、治療中高頻度に再発する副作用がいくつかあり、飼い主にリスクがないわけではない。近年、中枢または末梢作用を有する多数の物質の効力を、ＰＤＨの処置について検討している（Bruyette, 1996; Rijbberk et al, 1988; Peterson and Drucker 1978; Stolp et al, 1984, Feldman et al 1990）。主として17,20−デスモラーゼを、そしてそれよりは低い程度で17α−ヒドロキシラーゼおよび11β−ヒドロキシラーゼを阻害するケトコナゾールを例外として、効力は低かった。さらに、ドパミン濃度を増加させることによりＡＣＴＨを下方制御すると推定されているL-デプレニル（L-Deprenyl）が、最近、米国ＦＤＡによりイヌＰＤＨの処置用に承認された。しかし、前向き研究は、試験をしたイヌ１０頭のうち２頭のみが、臨床徴候の改善を示した（Reusch et al. 1999）。
【００７１】
経口活性なステロイド類似体であるトリロスタンが、動物（Potts et al., 1975）およびヒト（Komanicky et al, 1978）において３β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ酵素系の競合阻害剤であることが示されている。本剤は、クッシング症候群（Dewis et al., 1983）、原発性アルドステロン症（Hollifield et al, 1975）のような状態において副腎皮質ステロイド産生を変化させるため使用されており、またヒトにおける乳がん（Williams et al., 1993 Br. J Cancer:  68; 1210-5）の処置において有用であることも示されている。イヌＨＡＣの処置用トリロスタンの報告は存在しない。本発明では、ＨＡＣのイヌにおけるトリロスタンの効力を、制御された条件下で研究した。患者は、臨床徴候、臨床検査結果、およびＡＣＴＨ刺激試験を用いてモニターした。
【００７２】
動物を、前向き試験に参加させ、すべての動物には、副腎皮質機能亢進症の臨床および臨床検査の徴候、および本疾患の最終診断を課した。各症例から収集したデータは、臨床歴、および身体検査、完全血球算定（ＣＢＣ）、血清生化学プロフィール、尿検査および腹腔超音波を含む。すべてのイヌに、ＡＣＴＨ刺激試験を実施した。不確定な場合には、副腎皮質機能亢進症の臨床的および生化学的示唆とは無関係に、低用量デキサメタゾン抑制試験（ＬＤＤＳＴ）および／または尿コルチゾール／クレアチニン比を実施し、副腎の超音波検査が不確定な場合には、高用量デキサメタゾン抑制試験（ＬＤＤＳＴ）または内因性ＡＣＴＨ濃度などの鑑別試験を実施した。ＨＡＣのため他の投薬による処置を受けていたイヌは、少なくとも１０日間これらの休薬を要した。腎および肝の機能不全のあるイヌ、およびステロイドの投与を受けたイヌは、試験には加えなかった。
【００７３】
イヌは、２〜３．５年にわたる期間、連続して試験に参加しており、飼い主は、処置の実験的性質について説明を受け、同意書に署名した。ＡＣＴＨ刺激試験は、１５kg未満のイヌには０．１２５mg、１５kgを超えるイヌには０．２５mgの用量でＡＣＴＨ（Synacthen, Alliance）の静脈内注射の前および1時間後に血清検体を採取することにより実施した。コルチゾール濃度は、イヌでの有効性が以前に確認されている放射免疫アッセイによって測定した。内因性ＡＣＴＨ用の血液を、氷中冷却ＥＤＴＡチューブに採取して、直ちに遠心し、−２０℃で凍結させた。腹腔超音波は、経験を積んだ、有資格の放射線科医が実施し、副腎の厚さを、長軸に対して直角な単一測定値として評価し、最大背腹寸法（greatest dorsoventral dimension）とした。
【００７４】
以下の結果を、ＨＡＣを示すものとみなした。ＡＣＴＨ刺激後の血清中コルチゾール濃度＞６００nmol/L；ＬＤＤＳＴ後３時間の血清中コルチゾール濃度＞ベースライン値の５０％およびＬＤＤＳＴ後８時間の濃度＞４０nmol/L；尿中コルチゾール；クレアチン比＞１０×１０６；ならびに副腎の両側性肥大＞超音波検査法により測定されたように直径７mm。以下の結果は、副腎依存性ＨＡＣを示すものであった。内因性ＡＣＴＨ＜5.0 pg/ml；ＬＤＤＳＴ後３および８時間の血清中コルチゾール濃度＞ベースラインの５０％および対側萎縮副腎を伴う副腎の一つにおける顕著な片側性肥大および変形。
【００７５】
切除不能または飼い主が手術実施を望まない、それぞれ下垂体依存性副腎皮質機能亢進症または副腎腫瘍を有するイヌを、トリロスタンで処置した。５kgを超えるイヌの初期用量は、３０mgを１日１回であり、５〜１５kgのイヌは、１日１回６０mgを投与され、１５kgを超えるイヌは、１日１回１２０mgを受けた。投薬量は、臨床徴候、血液生化学パラメータおよびＡＣＴＨ刺激試験に基づいて調整した。
【００７６】
１０日後、４週間後、３ヵ月後、６ヵ月後、およびその後６ヶ月ごと、または投薬量調整の４週以内に、フォローアップ再試験を行った。これらの時点で、飼い主に、イヌの一般的な健康状態、臨床徴候の解消、および潜在的副作用を認めたかについて注意深く質問し、身体検査を行った。全項目にわたる生化学プロフィールおよびＡＣＴＨ刺激試験を実施した。尿検査、尿培養、胸部Ｘ線検査などのさらなる検査を、必要と思われるときには行った。副腎皮質機能亢進症の臨床徴候（多尿／多渇、多食、運動不耐性など）が依然存在した場合、およびＡＣＴＨ後のコルチゾール濃度が２２０nmol/L以上にとどまった場合、トリロスタンを、同じ投薬量で、１日２回与えた。イヌが副作用を示し、またはＡＣＴＨ投与前後のコルチゾールが４０nmol/L未満であった場合は、２日間トリロスタンを中止し、その後投薬量を、次に低い用量範囲に下げた。
【００７７】
３０種の異なる血統で構成される、合計６６頭のイヌは、ＨＣＡと診断され、トリロスタン投与が開始された。最も多くの代表的血統は、体重３〜６５kgの、雑種（ｎ＝１３）、ヨークシャーテリア（ｎ＝９）、ならびにボクサーおよびダックスフント（それぞれｎ＝４）であった（平均ＳＤ：１８．９・１３．３kg）。年齢は、３．５〜１５歳の範囲であり、平均は９．６（２．５）歳であった。８頭が雌、２５頭が卵巣を切除された雌、２１頭が雄、および１２頭が去勢された雄であった。試験開始時にすべてのイヌに共通した知見は、多尿／多渇（ｎ＝５６）、脱毛、皮膚薄化、色素過剰症、または皮膚石灰症を含む皮膚病学的問題（ｎ＝３４）、布袋腹様概観（ｎ＝２８）および多食（ｎ＝２６）であり、より低頻度の訴痛は、運動不耐性（ｎ＝１２）、浅速呼吸（ｎ＝１０）および尿失禁（ｎ＝８）であった。２頭のイヌには、初期に環椎十字靱帯断裂があり、１頭には、未治癒角膜潰瘍が見られた。試験登録前に３〜４日間４頭のイヌに与えられたリソドレン（Lysodren）は、臨床効果を示さなかった。
【００７８】
試験開始時、ＡＣＴＨ刺激試験は、４５頭のイヌにおける過剰応答を示した（ＡＣＴＨ後の血清コルチゾール：範囲１７１〜１７０４；平均８３１．８；ＳＤ３５７．４nmol/L）。３１頭のイヌに、試験開始時にＬＤＤＳＴを実施したが、１３頭のイヌにおいて抑制は見られず、２頭のイヌにおいて、少しずつ進行する抑制がみられ、１０頭のイヌにおいて、３時間後抑制がみられたが、これは一過性のものに過ぎず、４頭では、３および８時間後に正常な完全抑制が見られた。試験参加前１５頭に実施されたＨＤＤＳＴは、６頭において抑制が急速に始まり持続するのが見られ、４頭のイヌにおいて軽度抑制がみられ、５頭のイヌではまったく抑制が見られなかった。内因性ＡＣＴＨを２７頭のイヌにおいて測定したところ、＜５〜３５２pg/mlの範囲（平均８２．０；メディアン３７；ＳＤ９５．９）であった。５８頭のイヌにおいて実施した腹腔超音波検査は、６頭において片側性凝塊、２３頭において正常副腎、および１６頭において軽度の片側性または両側性副腎肥大を示した。総合内分泌試験に基づくと、５７頭のイヌがＰＤＨを有し、９頭のイヌが片側性副腎腫瘍を有した。
【００７９】
トリスタンは、一般にイヌでは十分な耐容性を示す。開始用量は、１．８〜２０mg/kg（平均６．０；ＳＤ３．４mg/kg）。３７頭のイヌは、処置期間中、用量調整を要し、２６頭のイヌにおいて、開始用量の１２５〜９００％まで用量を引き上げたが、１１頭のイヌでは、開始用量の２５〜８３％にまで減量され、平均最終用量は８．２mg/kg（ＳＤ；５．９mg/kg）であった。典型的な臨床徴候およびＨＡＣ内分泌試験結果を示した２頭の雑種のイヌは、トリロスタン６．５〜７．５mg/kgから開始した。両方のイヌはともに、初期にはよくコントロールされていたが、ＡＣＴＨ刺激試験に無応答を示した２ヵ月後および３ヶ月後に、中止とされた。そのうちの１頭は、高カリウム血症および低ナトリウム血症（比：２２．３）でもあった。両方のイヌにおいて、その後はトリロスタンは与えられず、これらのイヌでは、２．７年および１．４年後でも、臨床徴候が見られない。副腎腫瘍を有する９頭のイヌでは、ＰＤＨを有するイヌと同じ投与プロトコルで開始したが、２頭が半量にまで減量され、３頭は、もとの用量を維持し、４頭においては、もとの用量の３００％まで増量した。
【００８０】
トリロスタン開始前は、アルカリホスファターゼ値、アラニンアミノトランスフェラーゼ値およびコレステロール値が、それぞれ４１頭、１３頭および１８頭において正常を超えていた。２頭のイヌは、軽度の高窒素血症を有し、４頭のイヌでは血清ビリルビンが軽度に上昇していた。下記に述べる合併症をのぞいて、以下の生化学的異常（すべて臨床的意義はなかった）が治療経過中に認められた；高カリウム血症のエピソード１回、高窒素血症のエピソード２回、高ビリルビン血症のエピソード３回、および高カルシウム血症のエピソード２回。
【００８１】
多尿／多渇および多食の臨床徴候は、２９頭においては処置の最初の１０日以内に、１４頭のイヌにおいては最初の１ヶ月以内に解消された。６頭のイヌでは、臨床徴候は、改善されたが、これらのイヌは常にＨＡＣの何らかの臨床徴候を示した。皮膚異常のあるすべてのイヌにおいて、トリロスタン開始後２〜３ヵ月後に正常な体毛の増殖の著しい改善が見られた。最初の再試験において、ＡＣＴＨ後の血清中コルチゾール値が、すべてのイヌにおいて最初の値の６１％未満にまで低下し、トリロスタン投与を受けている全期間を通して、コルチゾール濃度は、低下したままであった（表３）。ＰＤＨのイヌ５４頭のうち、３２頭が、トリロスタン処置開始後、平均４１７．３日（ＳＤ２８５．２日、範囲１０５〜１１２０日）後にも生存していた。ＰＤＨのイヌ２２頭は、平均２３０．９日（ＳＤ１９５．１；範囲２７〜７３０日）後に、安楽死させられたか（ｎ＝１６）、または自宅で死亡（ｎ＝６）した。副腎腫瘍を有するイヌ３頭は、トリロスタン開始後２００〜４５０日の範囲で生存し、死亡したか、または安楽死させたイヌ６頭のメディアン生存日数は、２６０日（ＳＤ：１７４．９日）であった。
【００８２】
３頭のイヌは、呼吸困難のエピソードの後、または何ら前駆徴候のないまま、急に自宅で死亡した。すべての以前の再試験において、これらのイヌでは、その突然死を説明し得る臨床異常または臨床検査値の異常は明らかになっていない。１頭のイヌは、心房性細動のため、安楽死させた。その時には、電解質値は評価しなかった。最後に、２頭のイヌが臨床的悪化の前に、高カリウム血症および低ナトリウム血症を示した。しかし、いずれのイヌにおいても、トリロスタンを中止としたが、いずれのイヌも、重度不整脈または急性腎不全および尿管感染のため、安楽死させた。
【００８３】
実施例３−脱毛症Ｘの処置におけるトリロスタン
脱毛症Ｘの処置におけるトリロスタンの効果を検討するために、そのような状態のイヌ合計１１頭を、罹患していないイヌ１０頭とともに試験した。ホルモン異常は、コルチゾールおよび１７ＯＨＰ濃度の上昇により確認された。トリロスタンを、１日１回投与で罹患動物に与えた。ポメラニアン６頭のうち５頭（８３％）およびミニチュアプードル４頭すべてが、トリロスタンに応答し、罹患領域において体毛の再増殖を示した。
【００８４】
実施例４−ＡＣＴＨ刺激試験
クッシング病のイヌに、トリロスタン５〜２０mg/kgを1日1回投与する処置の経過中、１２、３５および８１日（平均）にＡＣＴＨ刺激試験を行った。結果を表３に示す。コルチゾール再放出は、無処置対照に比べ、処置群で、著しく低下した。したがって、トリロスタンは、副腎皮質のＡＣＴＨ刺激を弱めている。
【００８５】
実施例５−血清中コルチゾール濃度
クッシング病のイヌにおいて、血清中コルチゾール濃度は、トリロスタンの毎日の投与４時間後に有意に低下し、数頭では、８時間でもかなりの低下がみられたが、その後正常レベルに回復した。こうした濃度低下に伴い、クッシング病の症状の緩和が見られた。結果を表４に示す。
【００８６】
図１に、１〜３時間後にピークとなり、その後急速に排泄される、１日単回投与した後の血清中トリロスタン濃度を示す。
【００８７】
図２に、１〜３時間後にピークとなり、その後急速に排泄される、1日単回投与した後の血清中ケトトリロスタン濃度を示す。これが意味するところは、代謝物であるケトトリロスタンが、長時間体内に留まらないことである。
【００８８】
実施例６−ウマにおけるＴＲＨまたはデキサメタゾン刺激後のコルチゾール濃度
【００８９】
クッシング病のウマについて、表５は、トリロスタンの１日短回投与を伴うＴＲＨ刺激後またはデキサメタゾン刺激後のコルチゾール濃度を示す。結果は、トリロスタン投与中のＴＲＨへの応答の低下を示す。これは、イヌにおけるＡＣＴＨ刺激後に似ている。副腎は、トリロスタン処置前と同様に、下垂体ホルモンによる刺激に応答していない。
【００９０】
実施例６−ウマにおけるＴＲＨまたはデキサメタゾン刺激後のコルチゾール濃度
さらに、クッシング病のウマにおいて、表６は、トリロスタンの１日１回処置前および後の血清中コルチゾール濃度を示す。結果は、コルチゾール濃度のわずかな降下を示すが、臨床応答が観察された。
【００９１】
表
表１：ウマクッシング病のウマにおける間歇的経口投与トリロスタン処置の前後の血清中コルチゾール濃度の平均値。各値は、２４時間にわたり４時間間隔で採取した６検体の平均である。処置後の検体は、トリロスタン治療の３０日後に採取した。
ウマ
２４時間にわたる平均コルチゾール濃度
【００９２】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００９３】
【図１】６頭のイヌの血漿中のトリロスタン濃度：０日、第一相（１日当たり60 mgカプセルを１個）、試験番号GB009/01-001。
【図２】６頭のイヌの血漿中のケトトリロスタン濃度：０日、第一相（１日当たり60 mgカプセルを１個）、試験番号GB009/01-001。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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