(57)【要約】本明細書は、医学的プロテーゼ（血管移植片材料、人工心臓弁、および他の移植される材料を含む）の改善された性能をもたらす材料および方法を記述する。結合されたトロンボモジュリンまたはその機能的に等価な誘導体タンパク質はを含む材料は、炎症、血栓症および新たな内膜の新生物を含む所望でない副作用の減少をもたらす。本発明はまた、合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、医学的デバイスまたは異種移植片組織上に安定な抗血栓性膜模倣表面を生成するための方法、ならびにこれら方法により生成される、少なくとも１つの安定な抗血栓性膜模倣表面を備える、合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、異種移植片組織または医学的デバイスを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、医学的デバイスまたは異種移植片組織上に安定な抗血栓性膜模倣表面を生成するための方法であって、該方法は、以下の工程：
（ａ）合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、異種移植片組織または医学的デバイスの少なくとも１つの表面に水和された表面を提供する工程：
（ｂ）工程（ａ）の水和された表面に少なくとも１つの高分子電解質を複合体化して、高分子電解質−複合体化表面を生成する工程；
（ｃ）両親媒性のポリマ−で工程（ｂ）の高分子電解質−複合体表面をコ−ティングする工程であって、該両親媒性ポリマ−は、アルキル化された水和表面を精製するための約８〜２０の炭素原子のアルキル基を含む、工程；
（ｄ）工程（ｃ）のアルキル化された水和表面に、少なくとも１つの重合可能な官能化されたリン脂質を提供し、そしてさらに工程（ｃ）のアルキル化された水和表面に抗血栓性のリポソ−ムを融合させて、安定化表面を生成する工程；
（ｅ）工程（ｄ）の安定表面における該少なくとも１つの重合可能な官能化されたリン脂質を光重合して、該合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、医学的デバイスまたは異種移植片組織上に、安定な抗血栓性膜模倣表面を生成する工程、を包含する方法であって、
これにより、該合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラントまたは医学的デバイスは、該安定な抗血栓性膜模倣表面を欠いた合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラントまたは医学的デバイスに対して生態適合性が改善される、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記水和された表面が、コラ−ゲン、ゼラチンおよび／またはアルギン酸塩のうちの少なくとも１つを含む、方法。
【請求項３】
請求項１または２に記載の方法であって、前記高分子電解質が、アルギン酸塩およびポリ−Ｌ−リジンからなる群より選択される少なくとも１つの高分子電解質である、方法。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の方法であって、前記抗血栓性タンパク質がトロンボモジュリン、短縮型トロンボモジュリンまたは内因性のプロテインＣである、方法。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の方法であって、工程（ｄ）の重合可能な官能化されたされたリン脂質が、ホスファチジルコリン部分および／またはホスファチジルエタノ−ルアミン部分を含む、方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の方法であって、前記重合可能な官能化されたされたリン脂質が、リン脂質のモノ−アクリレ−ト、ビス−アクリレ−ト、モノ−ジエンまたはビス−ジエン誘導体である、方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法であって、前記重合可能な官能化されたされたリン脂質が、少なくとも一つのモノ−アクリレ−ト官能化ホスファチジルコリンおよびアクリレ−ト官能化ホスファチジルエタノ−ルアミンのうちの少なくとも１つである、方法。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の方法であって、前記両親媒性のポリマ−が、２−ヒドロキシエチルアクリレ−ト（ＨＥＡ）：３−アクリロイル−ｅ−３−（Ｎ，Ｎ−ジオクタデシルカルバモイルプロピオネ−ト）（ＡＯＤ）：スチレンスルホネ−ト（ＳＳ）タ−ポリマ−である、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記ＨＥＡ：ＡＯＤ：ＳＳが、６：３：１である、方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の方法であって、前記血管移植片、合成プロテ−ゼ、異種移植片または医学的デバイスは、外面および管腔面を有する多孔性コンジットであり、該安定な抗血栓性膜模倣表面は、該コンジットの管腔表面に生成される、方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法であって、前記コンジットが、約６ｍｍ以下の内径を有する、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法であって、前記コンジットが、約４〜６ｍｍの内径を有する、方法。
【請求項１３】
請求項１０に記載の方法であって、前記多孔性コンジットが、血管移植片、ステントまたはシャントである、方法。
【請求項１４】
請求項１０に記載の方法であって、前記合成プロテ−ゼが、人工心臓弁、または人工器官である、方法。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれかに記載の方法であって、前記医学的デバイスが、透析チュ−ブ、透析膜、中空ファイバ−透析システム、左心室補助デバイスまたは血液含有表面を備えた診断デバイスである、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれかに記載の方法であって、前記異種移植片が、ブタ心臓弁またはウシ頚動脈異種移植片である、方法。
【請求項１７】
請求項１〜１５のいずれかに記載の方法であって、前記安定な抗血栓性膜模倣表面は、ポリテトラフルオロエチレン（ｅＰＴＦＥ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリエチレンテレフタレ−ト（ＰＥＴ）、ポリ（エ−テルウレタンウレア）（ＰＥＵ）またはＤａｃｒｏｎ上に生成される、方法。
【請求項１８】
請求項１〜１５のいずれかに記載の方法であって、前記安定な抗血栓性膜模倣表面が、珪素、ガラスまたは金属上に生成される、方法。
【請求項１９】
請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって生成される少なくとも１つの安定な抗血栓性膜模倣表面を備える、合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラント、異種移植片組織または医学的デバイス。
【請求項２０】
前記抗血栓性タンパク質がトロンボモジュリン、短縮化トロンボモジュリンまたは内因性プロテインＣである、請求項１８に記載の合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラントまたは医学的デバイス。
【請求項２１】
前記抗血栓性タンパク質が、短縮化トロンボモジュリンまたはネイティブなトロンボモジュリンタンパク質である、請求項１９に記載の合成プロテ−ゼ、合成血管移植片、医学的インプラントまたは医学的デバイス。
【請求項２２】
珪素の基材または金属でコーティングされた珪素の基材を備える診断医学的デバイスである、請求項１９に記載の医学的デバイス。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（連邦研究支持体の肯定応答）
本発明は、作られた、一部の最少で、Ｎａｔｉｏｎａｌからの公債投資を有する学会のＨｅａｌｔｈ。したがって、政府が確かにすることができるアメリカが本発明において、直すＵｎｉｔｅｄ。
【０００２】
（発明の背景）
本発明の技術分野は、医用人工器官の領域である、上記は、人工血管を勘定に入れる、そして、同じコ−テングのためのパフォ−マンスを改正するために材料および手段、特に血栓症を最小にすることによって。
【０００３】
アテロ−ム性動脈硬化は、予防措置および薬理学的治療の進行にもかかわらず羅病率および死亡率の重篤原因である。ほぼ７００、血管の外科の手続きがいくつかの１０万周辺装置によって、Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｓにおいて、年ごとに予め形成される０００および冠状血管血管形成術。補綴のバイパス移植、そして、より最近、動脈のステントおよび他のｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ人工器官は、これらのｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅな手続きに関連して役立たせられた。但し、血管移植（内の少なくとも６ｍｍの直径）がｐｏｌｙｔｅｔｌａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌｅｎｅにうまくポリマ−から発達した（ＰＴＦＥ）大きい直径およびテレフタル酸ポリエチレン、未解決の耐久性があるスモ−ルダイアメ−タ人工器官（内の６ｍｍ未満の直径）遺骨の製作。血栓形成およびｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓに現在スモ−ルダイアメ−タ移植の制限効用、そして、これらの合併症は、患者が不快感に耐えることを必要とする、健康リスクおよび更なる医療。さらに、収賄している補綴の迂回路が、合理的短期成功を有するｉｎｆｒａｉｎｇｕｉｎａｌな分類学的位置において、執行されることができるこれらの移植の３０６０％が失敗する５年以内で。同様に、ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓおよび／または滅却が、６ヵ月のステント配置の範囲内で全ての患者の半分としてのさらに同じだけにおいて、発生する疾患の部位およびエクステントに依存すること。
【０００４】
多数人工血管の失敗に対する有害事象リ−ディングが血液−材料および組織−材料表面でｍａｌａｄａｐｔｉｖｅな生体反応に関連があると認識される。これらの問題に応答して、そして、小さい直径人工器官の特に血栓症、移植およびステントが、アルブミンでおおわれていたヘパリンおよびプロスタサイクリン類似体、そして、それは、凝固することは滝のように落す抑止および血小板反応性、または比較的非活性の材料を有する、ポリエチレンオキシドのような。互生の方法は、耐久性があるｔｈｒｏｍｂｏｒｅｓｉｓｔａｎｔな表面を有する機能上の動脈の代用の原因となるために血管内皮細胞ラインの原位置の回帰を維持する材料を設計することになっていた。しかしｆｒのコ−テングまたはｄｅｒｉｖｉｔｉｚａｔｉｏｎに基づいて戦略、人工装具は血小板を活性化するこれらの同じ基質および凝結カスケ−ドの容量を克服しなかった。このようにして、完全な内皮の回帰より前のピリオドの、血栓形成のための増加する危険でのスモ−ルダイアメ−タ人工器官遺骨の表面。この方法の公認の困難にもかかわらず、上記は、選択的細胞発育および正常な内皮の機能のための追加の制約を勘定に入れる、戦略が天性が必要とするように見える最も少なくいくつかの複合した生理反応で、この生育環境を人工器官に組み込むことのためにポテンシャルに提供するｂｉｏｈｙｂｒｉｄ。
【０００５】
分子的に設計された表面上の血栓形成のコントロ−ルが、強心剤ために、改正されたスモ−ルダイアメ−タ動脈の人工器官の現像において、危険であるプラスチックおよび血管手術、人工臓器および代謝の支持系の成功した卵着床に記載の穴として。臨床的に耐久性がある人工血管が同一のものと見做して、能動的に血液動態の条件の範囲の下で血液−材料表面で行使する抗血せん性機構を取り入れることによって、仕遂げられることが可能であると仮定された。
【０００６】
材料が有する抗血せん性がそれらを勘定に入れることを原因となる前の試みそこにおいて、トロンボモジュリンが、ポリエチレンを勘定に入れている人工物質に接続されたアクリロイル−改質ポリ四フッ化エチレン、ポリ・アクリル酸改質ポリエチレン、そして、セルロ−ス誘導体材料（参照する。ｅ。ｇ．、キシダほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１５の（１９９４の）（１０）：８４８−８５２；キシダほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１５の（１９９４の）（１４）：１１７０−１１７４；キシダほか（１９９４の）ＡＳＡＩＯジャ−ナル４０（３）：Ｍ８４０−８４５；ＶａｓｉｌｅｔｓほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１８の（１９９７の）（１７）：１１３９−１１４５；キシダほか（１９９５の）ＡＳＡＩＯジャ−ナル４１：Ｍ３６９−３７４）。
【０００７】
臨床的に耐久性があるスモ−ルダイアメ−タ人工血管用の移植パフォ−マンスが改正されるために技術のｌｏｎｇｆｅｌｔニ−ズが、ある、特に血栓形成およびスモ−ルダイアメ−タ移植に関連したｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓに関して、患者結果および生命の質の随伴式改良を有する。そして、補綴の血筋および他の補綴の材料のインプラントを巻き込んでいる外科の手続きの経済のコストの。
【０００８】
（発明の要旨）
発明が組成に提供する現今およびコ−テング・スモ−ルダイアメ−タ血筋補綴の材料のための手段、歯科補綴学のパフォ−マンスおよび他装置が血栓症のより傾向がなくて人工器官または装置が備え付けられた患者の炎症性反応を引き起こしそうにないために、材料て他ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅな医療用具および歯科補綴学に接触している血液。医学の人工器官をおおうこと、材料および他装置に接触している血液、ＰＴＦＥの中で形成される特にそれら、ｅＰＴＦＥ、Ｄａｃｒｏｎおよび特定の他の合成の材料、以下の物質に先んじている高分子電解質の順次錯体化による水和する表面上の安定アルキル化された材料を有する；上記の高分子電解質長鎖アルカンを包含している反対の位置に課せられた両親媒性のポリマ−を有する表面被覆が本発明の範囲内であることを先んじる。アルキル化された水和する表面上の安定メンブレン−擬態性会合体は小胞融合によって、果たされることができる、そうすると、以下に先んじることは重要である；上記は、それから光重合に先んじる。脂質の表面会合体の原位置の光重合は、優先である、そして、表層の結合したアルキル連鎖により共同される機能性がまた、本発明において、運用されることができることを計上するために脂質分子の中で光架橋すること。好ましくは、脂質は脂質が運用されることができる他脂質としてはホスファチジルエタノ−ルアミンが挙げられるが、これに限定されるものではないにもかかわらず、ｅｔｈｅｒ−ｂａｓｅｄしたホスファチジルコリンであるリン脂質および脂質共役（ｅ。インタ−ナショナル特許において、記述されるそれらのようなｇ．（ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅまたはグリコリピド共役）が、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＷＯ　００／０００２３９および米国特許番号６、１７１、６１４をＰｕｂｌｉｓｈｅｄした）メンブレンｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙおよび／または生理活性ｏｆｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎを高めるホスファチジルコリン・リン脂質または他の抗血栓性のタンパクとともにまたはの代わりに運用できる。脂質が少なくとも一つのｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな基を包含することは、望ましい（ｅ。ｇ．、ｍｏｎｏ−ｏｒビス−アクリレ−ト、ｍｏｎｏ−ｏｒビス−ジエン、その他。）。しかし本発明は、トロンボモジュリンに関連して非重合するドメインを生成するために更にｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅでｎｏｎｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅなリン脂質の混合液を含む。先端を切ったトロンボモジュリンまたは他の抗血栓性のタンパク。
【０００９】
本発明は、更に安定抗血せん性メンブレンに擬態の表面会合体を提供するどのトロンボモジュリン、切り詰めたトロンボモジュリンおよび／またはリセプタが組み込まれた内皮のプロテインＣ脂質会合体。トロンボモジュリン、先端を切ったトロンボモジュリンまたは内皮のプロテインＣリセプタが、生来または組換え型供与源からあることができるそして、　同じもののためのシ−ケンスが技術にとって公知であることを符号化すること。
【００１０】
本発明は、水和する基質を有するダクトの含浸によって、多孔性のダクトまたは他材料の表面上の安定アルキル化された表面会合体の生成のための手段を規定する、課せられた水和する基質に対する高分子電解質の順次錯体化は、長鎖アルカンを包含している反対の位置に課せられた両親媒性のポリマ−を有する課せられた水和する基質のダクトおよび表面被覆のｌｕｍｅｎａｌな側に起訴する（Ｃ２４にＣ１４、望ましくは、Ｃ２２にＣ１６）。本発明の優先のダクトが、ゼラチンまたはアルギナ−トを注入される多孔性の拡張されたＰＴＦＥ（ｅＰＴＦＥ）またはＤａｃｒｏｎ人工器官を勘定に入れるアルギナ−トおよびポリ−Ｌ−リジンを有する準拠されているそばに順次コ−テング。しかしダクトは、いかなる合成高分子でもできていることがありえる（ＰＴＦＥ，ＰＥＴ、ＰＥＵ）または適切に被処理ネイティブの生体高分子（例えばコラ−ゲンまたは多糖）または組換え型ポリマ−（ｅ。ｇ．、エラスチンまたはコラ−ゲンかタンパク擬態のポリペチド・ポリマ−）。同様に、水和する基質は、いかなる合成高分子でもありえる（ｅ。ｇ．、ｇｌｙｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓまたはヒドロゲル）、少なくとも一つのネイティブの生体高分子（ｅ。ｇ．、コラ−ゲン、ゼラチン、アルギナ−トまたは他多糖またはタンパクおよび／またはそれの橋かけ誘導体）、または、組換え型タンパクまたはタンパク−擬態性）明らかに、そして、否定的に課せられた高分子電解質を有する錯体化を容易にするために選択をする上記は、否定がアルギナ−トまたはポリ−Ｌ−リジンに規制したことを勘定に入れる。反対の位置に課せられたポリマ−の他一対が、技術にとって公知であるそして、一対が向けようとされた医療用によって、互換性がある条件を有する、それは、本発明の実算において、置換されることができる。課せられた高分子電解質のクロス・リンクできる一対は、また、本発明の実算において、運用されることができる。表面に行使される最後の高分子電解質が表面にその後行使される否定的に課せられたリン脂質を有するイオンの錯体生成を容易にするために陽電荷を運ぶことは、求められる。水和する基質は、また、他の生物学上活性化合物を包含できる、上記は、治療薬を勘定に入れる。
【００１１】
アルキル化された表面の好適な実施例は、含浸されたダクトの表面の上へおおわれるときに、それが反対の位置に課せられた高分子電解質の上へ複雑にする長鎖アルカンを有する課せられた両親媒性のオリゴマまたはポリマ−である。アルキル化された表面がまた、イオンの錯体化を勘定に入れることができる形成性の手段が表面の上の脂質共役または脂質の直接の表面移植が活用すると告発した代替。そこの次が、最も少なく一つの抗血せん性タンパクで重合可能な官能化されたされたリン脂質およびリポソ−ムを添加される望ましくは、トロンボモジュリンまたは切り詰めたトロンボモジュリン。
【００１２】
合成の人工器官上の安定抗血栓性のメンブレン擬態性表面を作り出すための本発明の手段、合成の血管の移植、医用インプラント、装置または異種移植組織が段を含む医用：　（ａ）合成の人工器官の少なくとも一つの表面上の水和する表面を規定すること、合成の血管の移植、医用インプラント、異種移植組織または医療機器；　（ｂ）高分子電解質−複合型表面を作り出す段（ａ）の水和する表面に対する最も少なく一つの高分子電解質での錯体生成；　（ｃ）両親媒性のポリマ−を有する段（ｂ）の高分子電解質−複合型表面をおおうこと、そこにおいて、前記両親媒性のポリマ−は、約８〜約２０から、アルキル化された水和する表面を作り出すために炭素原子のアルキル基を含む；　（ｄ）スタビリゼ−ション表面を作り出すために段（ｃ）のアルキル化された水和する表面に段（ｃ）および更なる溶けている抗血栓性のリポソ−ムのアルキル化された表面に少なくとも一つの重合可能な官能化されたされたリン脂質を規定すること；　（ｅ）厩舎を作り出すために段（ｄ）のスタビリゼ−ション表層の少なくとも一つの重合可能な官能化されたされたリン脂質を光重合すること、合成の人工器官上の抗血栓性のメンブレン擬態性表面、合成の血管の移植、医用インプラント、医療機器または異種移植組織、　それによって合成の人工器官、合成の血管の移植、医用インプラントまたは医療機器が、合成の人工器官の上の生体親和性において、改正される合成の血管の移植、前記厩舎を欠いている医学のインプラントまたは医用装置、抗血栓性のメンブレン擬態性表面。
【００１３】
発明が更に材料に接触している血液に提供する現今、人工器官および他のｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅな材料および装置、本発明の手段に従う表面被覆、勘定に入れることができる、限界なしで、血管移植、分路、ステント、スモ−ルダイアメ−タ（４〜約６ｍｍについて内径）、潅流管、メンブレンおよびホロ−ファイバ系、膜酸素加装置、患者への卵着床のための生物物質と同様に人工弁および左室補助装置て医用診断の装置、例えば、豚の心臓弁およびウシの頸動脈の血管の移植を含むがこれに限らず異種移植組織、本発明の手段によって、なされる。
【００１４】
材料に接触している血液、人工器官および他のｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅな材料および装置、ｅｓｅｎｔな発明の手段に従う表面被覆、勘定に入れることができる、限界なしで、血管移植、分路、ステント、スモ−ルダイアメ−タ（４〜約６ｍｍについて内径）、潅流管、メンブレンおよびホロ−ファイバ系、膜酸素加装置、患者への卵着床のための生物物質と同様に人工弁および左室補助装置て医用診断の装置、例えば、豚の心臓弁およびウシの頸動脈の血管の移植を含むがこれに限らず異種移植組織。人工心臓のような器官に接触している血液の表面被覆、肺臓、腎臓または肝臓は、本発明の範囲内である。
【００１５】
（発明の詳細な説明）
現在の告知において、運用される略記号は、以下を勘定に入れる：モノＡｃｒｙｌＰＣ、ＡｃＰＣ、アクリレ−トｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄされたホスファチジルコリン；モノＡｃｒｙｌＰＥ、アクリレ−トｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄされたホスファチジルエタノ−ルアミン；ＤＣＣ、ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＤＧ、２、３−ｄｉｃｈｌｏｒｏ−５、６−ｄｉｃｙａｎｏ−１、４ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ；ＤＭＡＰ、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン；ＥＹ、エオシンＹ；ＦＩＴＣ、ＦＩＴＣ；ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ、Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｏｂｉｏｔｉｎ；ＥＭＣ、−ｓ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ；ＥＭＣＳ、−ｃ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ　スクシンイミド；ＰＭＢ、ｐ−メトキシベンジル；Ｔｒｏｃ−アミド、２、２、２ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｏｘｙａｍｉｄｅ；ＰＥＵ、ポリ（エ−テル・ウレタン尿素）；ＰＦＴＥ、ポリ四フッ化エチレン；ｅＰＦＴＥ、発泡させたポリ四フッ化エチレン；ＰＬＬ、ポリ−Ｌ−リジン；ＨＥＡ、２−ヒドロキシエチルアクリラ−ト；ＡＯＤ、３ａｃｒｙｌｏｙｌ−ｅ　３−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌプロピオナ−ト）；ＡＡＰＤ、２、２’−アゾビス（２ｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｉｏｎａｍｉｄｉｎｅ）二塩化水素化物；ＡＩＢＮ、２、２’−アゾビスイソブチロニトリル；ＳＳ、スチリル・スルホン酸エステル。
細胞および組織表面を模倣するモデル薄膜は、プロ−ブ細胞および分子相互作用に、そして、ｂｉｏａｃｔｉｖｅなコ−テングｆｏｒｓｅｎｓｏｒｏｒｍｅｄｉｃａｌなｉｍｐｌａｎｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓとして道具としてそれらのポテンシャルのためにかなりの耳目を引きつけた（Ｆｕｈｒｈｏｐ，Ｊ．−Ｈ．およびＫｏｎｉｎｇする、Ｊ．（１９９４の）メンブレン、そして、分子集合体：Ｓｙｎｋｉｎｅｔｉｃ方法、王立協会の化学；Ｓａｃｋｍａｎｎ、Ｅ．、そして、タナカ（Ｍ．（２０００の）Ｔｒａｎｓ　ＢｉｏｔｅｃｈｎｏＬ　１８）５８−６４）。特に、被支持脂質メンブレンの製作は、固定化ｏｆｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅタンパクのための実用法を規定する、上記が、リセプタとして執行するものを勘定に入れるチャンネル、または細孔、生来または合成的ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅｓまたはｇｌｙｃｏｐｌｉｐｉｄｓ．の移入と同じ大部分の学習の、化学組成において、異なっているリン脂質、彩度および大きさは、薄膜構造の主細胞構築物として役立たせられた（Ｌａｍｐａｒｓｋｉほか（１９９２の）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３１：６８５−６９４　；植物、Ａ．　Ｌ．（１９９３の）Ｌａｎｇｍｖｉｒ　９：２７６４−２７６７　；植物ほか（１９９５の）Ａｎａｌ。生化学２２６（３４２−３４８）；オブライエンほか（１９９８の）Ａｃｃ。化学Ｒｅｓ．　３１、８６１−８６８）。我々は、以前に手段をアクリレ−トｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄされたホスファチジルコリン、モノＡｃｒｙｌＰＣ、１の原位置の光重合を経た安定、基質−支持リン脂質薄皮に会合体を用意すると報告した（Ｍａｒｒａほか（１９９７の）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３０（６４８３−６４８８）；Ｍａｒｒａほか（１９９７の）ラングミュア１３（５６９７−５７０１）；Ｏｒｂａｎのほか（２０００の）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３３、４２０５−４２１２）。米国特許数字６、１７１、６１４および５はまた、知る　−　０７１、５３２およびインタ−ナショナルはＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ＷＯ　００／０００２３９をＰｕｂｌｉｓｈｅｄした。本願明細書において、我々は、新しいｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質の設計を記述する、アクリレ−トｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ（モノフォニックのＡｃｒｙｌＰＥ、２），そこにおいて、機能が更なる一時変異のためのハンドルとして執行できるアミノ。Ｓｃｈｅｍｅ　２に示すように、末端基、ビオチニルおよびＮ−（ｅ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌに例えば（ＥＭＣ）ホスファチジルエタノ−ルアミンのアミン基のアシル化によって、始めた。これらのリンカ−は、特異的な高親和性（ビオチン）インタラクションを経たタンパクまたは他標的分子の移入を容易にする（植物ほか（１９８９の）Ａｎａｌ．生化学１７６，　４２０−４２６　；キムほか（２０００の）Ｌａｎｇｕｉｒ　１６（２８０８−２８１７）；Ｈｅｒｇｅｎｒｏｔｈｅｒほか（２０００の）Ｒ　Ａｍ。Ｃｈｅ７ｍ。Ｓｏｃ．　１２２、７８４９−７８５０；ウィルバ−ほか（２０００の）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学１１、５６９−５８３）、または、共有結合（ＥＭＣ）付着によって、（Ｖｉｉｔａｌａほか（２０００の）ラングミュア１６（４９５３−４９６１）；エリオット、Ｊ．　Ｔ．、そして、プレストウィッチ（Ｇ．　Ｄ．（２０００の）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学１１）８３２−８４１）。実例は、また、規定される、蛍光染料（ＦＩＴＣ）を包含しているｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質共役を生成するｉｎｔｈｅケ−ス、それは、脂質メンブレンの直接検出のための機構を規定する（キムほか（２０００）以前に；ロイほか（２０００の）Ｒ　Ｏｒｇ。化学６５（３６４４−３６５１）；Ｅｉｎａｇａほか（１９９９の）Ｊ　Ａｍ。化学協会１２１，　３７４５−　３７５０　；ド−アティ−、Ｄ．　Ｌ．およびＧｅｌｌｍａｎ、Ｓ．　Ｈ．（１９９９の）Ｊ；Ａｍ．化学協会１２１、４３２５−４３３３）。ＡｃｒｙｌＰＣおよびＡｃｒｙｌＰＥで構成される重合する薄膜は、非共有インタラクションだけによって、単に安定させられる脂質会合体のそれの上のその本質的により大きい安定度のために、タンパク質結合効率の増加により共同される（Ｍａｒｒａほか（１９９７の）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３０、６４８３６４８８；Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆほか（１９８８の）Ａｎｇｅｗ。化学ｉｎｔ．編集Ｅｎｇｌ．２７，　１１３−１５８　；チャップマン、Ｄ．（１９９３の）Ｌａｎｇｕｉｒ　９、３９−４５）。本願明細書において、我々は、合成を報告する、性格付け、そして、　モノＡｃｒｙｌＰＥ　（２）の終末機能付与。
【００１６】
混合したジアシルホスファチジルコリンとは異なり、混合したジアシル・ホスファチジルエタノ−ルアミンが市販のリゾリン脂質から直接に調製されてはならないこと。−その理由は、次のことにある。回復、そして、エタノ−ルアミンの脱保護追加の段を必要とする（Ｍａｒｒａほか（１９９７の）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３０（６４８３−６４８８）；イワツバメほか（１９９４の）Ｊ　Ｏｒｇ．化学５９、４８０５−４８２０）。したがって、現在の方法において、１次子の順次アシル化および３−被保護ｓｎｇｌｙｃｅｒｏｌの第二ヒドロキシル基は、執行されて、以下の物質に先んじていた；上記、そして、Ｎ保護されたリン酸化剤を有する脱保護およびリン酸化を先んじる。期待されるリン脂質を与えられる次の大域脱保護。３（エベ−ルほか、１９９２の）Ｊ　Ｏｒｇ．化学５　７、１７７７−１７８３のヒドロキシ基が試薬ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を連結して、パルミチン酸により執行された１次子およびＮの選択的アシル化、モノエステル４を贈与するＮ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）および痕跡ジエステル。１２−アクリルオキシ−１−ドデカン酸を有する４の順次アシル化（オブライエンその他（１９９８の）Ａｃｃ．化学Ｒｅｓ．　３１、８６１−８６８）規定した被保護１、２−ジアシル−ｓｎグリセリン（５）。
基がそれを２、３−ｄｉｃｈｌｏｒｏ−５、６−ｄｉｃｙａｎｏ−１、１を贈与する４ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ（ＤＤＧ）、好収率の２−ジアシル−ｓｎグリセリン（６）で処理して取られたｐｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌ（ＰＭＢ）。２、２、純化のない次の反作用のために運用された２−ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｅｔｈｏｘｙａｍｉｄｅ産出された（Ｔｒｏｃ−アミド）（２４の）Ｔｒｏｃ−ＰＥ（Ｍａｒｒａほか（１９９７）以前に）を有する６のリン酸化。Ｔｒｏｃ−保護基は、６２％の収率（計画１）の白い固形物として、求められたｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅなモノラルＡｃｒｙｌＰＥ　（２）を生むために酢酸の亜鉛を有する粗製７を処理することによって、取られた。これらの化合物は、ＮＭＲスペクトルによって、特徴を表された。例えば、５での特徴的な多重線ピ−ク。１０−５．００　ｐｐｍは、１のグリセリン・バックボ−ン上のＣ−２分類学的位置でのプロトンに特有で、２−ｄｉａｃｙｌであるグリセリン（５）（Ｐｏｎｐｉｐｏｍ、Ｍ．　Ｍ．、そして、Ｂｕｇｉａｎｅｓｉ（Ｒ．　Ｌ．（１９８０の）Ｌｉｐｉｄｅｓ．　２１）３３６−３３９）、そして、アクリレ−トのビニル基は、６時に確かめられた。３８（ｄｄ，１つのＨ）、６．１１（ｄｄ，１つのＨ）５．８０（ｄｄ，ＡＭＸスピン系としての１　Ｈ）ｐｐｍ。化合物７の追加のメチレン基が４時に割り当てられた三。７３（２つのＨ）、３．９６（２つのＨ）および３。４７（２Ｈ）多重線ピ−クとしてのｐｐｍ。化合物２のための、Ｎｕ３＊基は、８時に広いピ−クとして有名であった。５１ｐｐｍ（３つのＨ）（２６）、そして、アクリレ−トのビニル基は、６時に確かめられた。３９（ｄｄ，１つのＨ）、６．１４（ｄｄ，１つのＨ）、５．８１（ｄｄ，ＡＭＸスピン系としての１　Ｈ）　ｐｐｍ。
【００１７】
市販のＦＩＴＣ（ＦＩＴＣ）を有するモノＡｃｒｙｌＰＥ　（２）の処理、Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｏｂｉｏｔｉｎ（ＮＨＳ−Ｂｉｏｔｉｎ）、そして、求められた複合脂質−ＡｃｒｙｌＰＥ　ＦＩＴＣ　（８）を提供されるトリエチルアミンがある場合には、Ｎ−（ｅ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ）スクシンイミド（ＥＭＣＳ）、ＡｃｒｙｌＰＥ−Ｂｉｏｔｉｎ　（９）、好収率（計画２）のＡｃｒｙｌＰＥ−ＥＭＣ　（１０）−全部。Ｈ　ＮＭＲスペクトルは、脂質共役の予測された構造を確かめた。脂質バックボ−ン・プロトンを除外すること、９つの芳香族プロトンは、８時に観察された。
２６（ｍ，１つのＨ）、７．４０−７．３０（ｍ，１つのＨ）、７．１６−７．０４（ｍ，３つのＨ）および６．６８−６．５９（ｍ，ＡｃｒｙｌＰＥ−ＦＩＴＣ　（８）のための４　Ｈ）　ｐｐｍ；２つのアミド・プロトンは、７時に有名であった。７９（ｂｒ，１つのＨ）および７．００（ｂｒ，ＡｃｒｙｌＰＥ−Ｂｉｏｔｉｎ　（９）のための１　Ｈ）　ｐｐｍ、そして、　２つのオレフィン・プロトンは、６時に観察された。６７（ｓ，ＡｃｒｙｌＰＥ−ＥＭＣ　（１０）のための２　Ｈ）　ｐｐｍ。
【００１８】
（８）およびモノラルＡｃｒｙｌＰＣ　（１）（Ｍａｒｒａほか（１９９７）以前に）がアルギナ−ト・ビ−ドのアルキル化された表面に執行されたＡｃｒｙｌＰＥ−ＦＩＴＣを包含することは立体感を与える混合した脂質薄皮の製作が維持する予備。簡潔に、ビ−ド（ｄ＝３００ナノメ−トル）が、８および１で構成される脂肪小胞溶液により温置された共同イニシエ−タとしてＥＹ／トリエタノ−ルアミンを運用している光重合によって、続く。合力ビ−ドは、コンフォ−カル鏡検により検討された。少しもこの種の活性がビ−ドの内部において、観察されないと共に、脂質薄皮の成功した発生はビ−ドの表面上の蛍光性活性の存在下で、確かめられた。
【００１９】
このようにして、我々は、うまくアクリレ−ト機能性および頂生のリンカ−を包含している二機能性リン脂質共役を生成するための合成の方法を開発した、ビオチンｏｒｔｈｅ　Ｎ−（ｅ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ）関数群のような。これらの共役は、厩舎を生成する能力を高める、自動アセンブルする、生物学上機能上の、そして、化学的に異種、医用インプラントに用いられるメンブレン−擬態性薄皮、人工器官および医学の診断の装置および材料。人為の表面上の基が内因性のプロテインＣ活性化血液凝固阻止剤経路の活性化を経た血せん形成を最小にして、かなりトロンボモジュリンまたは先端を切ったトロンボモジュリン誘導体の生物学的活性度を改正するホスファチジルエタノ−ルアミンおよびホスファチジルコリンのうちの少なくとも１つの存在、そして、同様に、植設された医学の材料のための生体親和性を改正する。
【００２０】
本発明の発明者は、生物学上活動を開発した、メンブレン−擬態性、医用インプラントおよび人工器官のために十分に強いｓｕｂｓｔｒａｔｅｓｕｐｐｏｒｔｅｄされた表面会合体。本願明細書において、記述されるメンブレン−擬態性会合体への移入ｏｆｔｈｒｏｍｂｏｍｏｄｕｌｉｎまたは先端を切ったトロンボモジュリンが、ｔｌｉｒｏｍｂｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（少なくとも短い項）に結果としてなったそして、　添加の、表面が否定が鋭形のヒヒ前生きている分路モデルの血小板粘着の有意水準を見せた効果があるこの種の被覆。このようにして、本発明の表面会合体が以前に報告されるそれらの上の生体親和性において、改正されることをａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇすること。
【００２１】
内皮の内張りの一部滅失にもかかわらず、ｉｎｔｉｍａｌな回復プロセスは、能率的に凝結カスケ−ドを調整する生理反応のための顕性の導管血栓症および血小板活性化の非存在下でしばしば発生する。一酸化窒素のリリ−スおよび血管壁制限血小板活性化および会合によるプロスタサイクリン。しかし血液凝固の阻害は、主に２つの代替機構によって、仕遂げられる：セリン・プロテイナ−ゼ・インヒビタ−、厩舎１の発生によって、作用するまた、周知のａｓｓｅｒｐｉｎｓ：それらの標的酵素を有する１つのモルの複合体および凝固因子Ｖａおよびヴィヤの失活に主任弁護人となるプロテインＣ経路。抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）および組織因子経路インヒビタ−は、血栓形成を抑制するｓｅｒｐｉｎｓの両方の実例である。調停された抗凝血が処理するＳｅｒｐｉｎが、主に硫酸グリコサミノグリカンにバインドにそれらの機能のために内皮細胞性の表面および平滑筋細胞に限られる特にヘパラン硫酸。さらに、平滑筋細胞表面上のヘパラン硫酸、ＥＣＭのまたは隣接した無傷の内皮上の、能動的に、これらの蛋白分解酵素阻止反応を加速する。現在まで、ヘパラン硫酸によるＡＴＩＩＩ−トロンビン反応の触媒作用は、最も完全に特徴を表された。しかしヘパラン硫酸上のｓｅｒｐｉｎ結合部およびこれらのグリコサミノグリカンのかなり特徴を表された抗凝血性の性状の存在にもかかわらず、血管の細胞表面でヘパラン硫酸に帰される抗凝血性の／抗血栓性の機能の生理学的な有意差は、決定的に置かれなかった。例えば、直接型接触において、あるヘパラン硫酸に、結合部が局所化されなかったＡＴＩＩＩが放血する高親和性。さらに、ラビットＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心臓調合品が確かめられなかったことを再循環させる際のＡＴＩＩＩ−トロンビン反応上のヘパラン硫酸の接触効果。ある、しかし発育が、そのトロンボモジュリン（ＴＭ）を立証する内因性のプロテインＣ経路の危険な定型的として、生体内に生理学的条件の下で正常で害された血筋において、手術であるｍａｊまたは血液凝固阻止剤機構を表示する（Ｂｏｕｒｉｎ，Ｍ．　Ｃ．およびＵ．　Ｌｉｎｄａｈｌ生化学［　１９９３の］　Ｊ　２８９　［　Ｐｔ２　］：３１３−３３０　；Ｋａｌａｆａｔｉｓほか［　１９９７の］　Ｃｒｉｔ．　Ｒｅｖ。Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃなジ−ンＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　７（３）：２４１−２８０）。
トロンボモジュリンは、脈管内皮の、そして、平滑筋細胞上のｌｕｍｅｎａｌな表面で、トロンビンのための高親和性結合部を規定する６０ｋＤ型Ｉ膜内外タンパクである（オ−エンほか［　１９８１の］　Ｊ　ＢｉｏＬ化学２５６　［　１１　］：５５３２−５５３５　；Ｅｓｍｏｎほか［　１９８１の］会報全米科学アカデミ−ＵＳＡ　７８　［　４　］：２２４９−２２５２　；Ｅｓｍｏｎほか［　１９８２の］　Ｊ　Ｂｉｏｌ．化学２５７　［　２　］：８５９−８６４　；Ｅｓｍｏｎほか［　１９９９の］　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ　８４　［　４　］：３６３−３６８　；そして、Ｅｓｍｏｎその他［　１９９７）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　７８　［　１　］：７０−７４）。それが、構成的に細胞表面に存在するその形質発現が、また、トロンビンに照射の後、ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄされるベ−シック線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、そして、　血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）。ＴＭフォ−ム１：トロンビンを有する１つのモルの錯体、そして、　プロセスの、トロンビンの全ての周知のプロコアギュラント／ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ機能を離れたスイッチ、そして、その代わりに、触媒作用のものはｏｆｔｈｅ酵素に電力を供給するチャンネルは、ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａａｚｔ／ａｎｔｉ−扇動的な活性を複雑にする。ＴＭは、３つのはっきりした基質被支配頂血液凝固阻止剤経路のトロンビンの生物学的な機能を改正する。自由なトロンビンがフィブリンに能率的にフィブリノ−ゲンを変換する、ＴＭに対するトロンビン上下限が、フィブリノ−ゲンを切断することがもはやできないそして、それはプロアクセレリンまたは血小板（Ｅｓｍｏｎほか［　１９８３の］　Ｊ　ＢｉｏＬ化学２５８（２０）：１２２３８−１２２４２）を活性化することが可能でない。ＴＭも、ＡＴＩＩＩ（〜８−ひだ）によるトロンビン不活性の速度を高めて、劇的に速まる、−２０、０００−ひだプロテインＣ（ビタミンＫ被支配頂セリンプロテア−ゼ）を活性化するトロンビンの機能。機能させなくされたトロンビンおよび活性プロテインＣ（ＡＰＣ）が、ＴＭからリリ−スされるそれは、それから追加の高分子の基質を調停できる。流体相反応物の移植、プロテインＣのような、トロンビン、そして、　ＡＴＩＩＩ、触媒作用的表面および収奪に形成された産物の速度が、分子吸着および脱着過程（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）のキネティクスに左右される内因性の曲面反応速度定数、流体流動による対流および境界層領域の範囲内の拡散。このようにして、与えられたコファクタおよび酵素活性サイトのための競合基質がある場合には、流動条件が有意にトロンビンがｐｒｏ−ｏｒ血液凝固阻止剤としてふるまうかどうかに、実行させそうである局在部。驚くべきことに、ほとんど情報は、流れがＴＭインビトロの効率に影響するエクステントに関して利用できないか生体内でない。
【００２２】
活性プロテインＣ、そのコファクタ・タンパクＳと共に、２つの凝固因子を機能させない、ｖａおよび別荘、Ｘａおよびトロンビンの生成を遮断するためにそれは、凝結カスケ−ドの増幅のための臨界である。酒田ほか（１９８５の）会報全米科学アカデミ−ＵＳＡ　８２（４）：１１２１−１１２５，活性プロテインＣもフィブリン溶解反応を助成することを示唆した。かつて生成される、ＡＰＣは、機能させなくされるセリンプロテア−ゼが最も遅いもののうちの１つであって、循環から手形を交換した。いくぶん逆説的に、ＴＭは、ＡＴＩＩＩおよびこれによって、トロンビンの失活を助成する、順番に、制限プロテインＣ活性化。考えられるところでは、生成が過度トロンビンが生成されるのと、同程度長く処分するだけであるＡＰＣ。このようにして、ＴＭのアンチトロンビン−被支配頂抗凝血性の機構は、一旦過剰なトロンビン発生が止むならば、プロテインＣ活性化が止められることを確実にする。いかなる特定の理論にもよる上下限であることを望まずに、動脈で静脈の循環のロ−カルな血液動態の条件が局所的に係数Ｖａを機能させないＡＰＣの能力およびヴィヤの重要な調節因子であると考えられる。穴がプロテインＣまたはタンパクＳ欠失をもつその患者を置いたことは、ある、ＡＰＣに対する耐性を有するそれらと同じ、ｔｈｒｏｍｏｅｍｂｏｌｉｃなイベントを開発しやすい。同様に、ＴＭジ−ンの突然変異は、静脈で動脈の血栓症のための危険因子であってもよい、上記は、心筋梗塞を勘定に入れる。
【００２３】
メンブレン、自己編成の非共有会合物として、構成要素構成メンバがあることがありえる分子状工学技術のためのモデルが規制した申し込み、改質、正確に定義、そして、　容易にアセンブルされる。過去の１０位の間、化学組成において、異なっているリン脂質、彩度、そして、　ブロックを錯体ジオメトリの様々な構造の設計に組み込むように、大きさは役立たせられた。脂質に基づくシリンダ、三乗、そして、球は、両方のドラッグデリバリ−の、そして、複合分子的に設計された構造のための鋳型としての適用法を見つけた。適用法がまた、以下の物質に先んじている下にある基質の上へ、密接にパックされた炭化水素鎖の産卵鶏をアセンブルして作り出されたバイオセンサのための表面−被結合二重層；上記の基質は、乳状にされた脂質の希釈液か単ラメラ脂質ベシクルに照射に先んじる（Ｓｐｉｎｌｃｅほか［　１９９２の］　Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ　６３：１６６７−１６７１　；サイフェルトほか［　１９９３の］　Ｂｉｏｐｈｙｓ。Ｊ　６４：３８４−３９３　；そして、Ｆｌｏｒｉｎほか［　１９９３の］　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｊ　６４：３７５−３　８３）．添加の、開設する互生の戦略が器官の両親媒性の単層による基質の管理された浸漬のプロセスを経た二重層を維持したように、ラングミュア−ブロジェット法は運用された（Ｕｌｍａｎ，超薄器質性に対する序文が薄皮でおおわれるＡ．　［　１９９１　］セルフアセンブリに対するＬａｎｇｍｖｉｒ−Ｂｌｏｄｇｅｔｔ、ニュ−ヨ−ク、アカデミック・プレス）。著しく、これらの非共有分子集合体は、高度な安定度を見せる。２６ｋＴのフォ−スは、水に二重層から重複の鎖でつながれたＣ−１６のホスファチジルコリン分子を取ることを必要とする（Ｃｅｃｖ　Ｇ．、そして、マ−シュＤ．［　１９８７の］　ＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄＢｉｌａｙｅｒｓ、ニュ−ヨ−ク、ワイリ−；そして、Ｈｅｌｍほか［　１９９１の］会報全米科学アカデミ−ＵＳＡ　８８：８１６９−８１７３）．これは、ほとんど３５ｋＴのビオチン−ストレプトアビジン結合エネルギ−に近くて、典型的単クロ−ン抗体−テスト・インタラクションの強さより大きいいくつかのオ−ダ−である。このようにして、表面の上の再現性および分子状コントロ−ルの比類がないレベルを有する比較的強い材料が命じるエンジニアに対する機能の本発明位置の方法論および化学の有意差。
【００２４】
膜模倣系は、また、血管壁外傷の、そして、人為の表面上の部位で、血液凝固の機構を弁識することを目的とする努力上の直接の衝撃を有した。プレ−ナ膜モデルを運用している一連の検査の、トンプソン、そして、同僚（Ｐｅａｒｃｅほか［　１９９３の］　Ｊ　ＢｉｏＬ化学２６８：２２９８４−２２９９１　；そして、Ｔｅｎｄｉａｎほか［　１９９１の］　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３０：１０９９１−１０９９９）リン脂質膜に対するｐｒｏｔｈｏｍｂｉｎ束縛のための分子状必要条件を特徴を表す。ホスホリルコリン頭基が合成的表面上の血餅発生の誘起を規制するように見えることは、観察された（Ｊ．がＢｉｏｍｅｄしたイシハラほか［　１９９４　］。Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．　２８：２２５−２３２　；ヘイワ−ドほか［　１９８４の］　Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　５：１３５−１４２　；そして、ホ−ルほか［　１９８９の］　Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１０　［　４　］：２１９−２２４）．この生物学的性質がこの双性イオン性頭基に大きい水量上下限に関連があることを提案されたまたは考えられるところでは、血液凝固を抑制する比血漿タンパク（ｓ）のｐｈｏｓｐｈｏｒｙｃｈｏｌｉｎｅに対する選択吸着は、起訴する（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｄ．　［　１９９３の］　Ｌａｎｇｕｉｒ　９：３９−４５）。我々は、また、限られた血栓形成を観察した、そして、リン脂質上のｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな過形成は、生きているアッセイの短期を運用している表面をｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄした（Ｍａｒｒａほか［　１９９７の］　Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３０：６４８３−６４８７　；そして、チェンその他［　１９９７の］アン。Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１１１１１　：７４−７９），メンブレン−擬態性ベ−スの方法の固有の強さは、規制する様々な生物学上活性成分が放血するこれらの系の範囲内で組み入る能力である凝固および内皮細胞性回帰。複合体が両方のｂｌｏｏｄ−ａｎｄ組織−物質表面で徹底調査して、プロセスを規制するための役立つ系に提供するＳｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒメンブレン。
【００２５】
数人の調査者は、適用法に接触している血液のためのｔｈｒｏｍｂｏｒｅｓｉｓｔａｎｔな材料を生成するために高分子繊維表面の上へトロンボモジュリンの直接の固定化を記述した。キシダほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１５の（１９９４の）（１０）：８４８−８５２　；キシダほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１５の（１９９４の）（１４）：１１７０−１１７４　；そして、キシダほか（１９９４の）ＡＳＡＩＯジャ−ナル４０（３）：Ｍ８４０−８４５が、アミノ化されてカルボキシ化された表面に複合化効果がある上記はポリ（ビニル・アミン）を勘定に入れる。そして、ポリ（アクリル酸）はポリエチレンおよび表面−加水分解されたポリ（エ−テル・ウレタン尿素）をｓｕｒｆａｃｅ−ｇｒａｆｔｅｄした。ＶａｓｉｌｅｔｓほかＢｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１８の（１９９７の）（１７）：１１３９−１１４５，ポリ（アクリル酸）の上のＴＭの固定化がＰＴＦＥをｓｕｒｆａｃｅ−ｇｒａｆｔｅｄしたと報告した。総症例の、共役計画は、ＴＭをタンパク表面上の入手自由なアミノまたはカルボキシル機能性を経た基質にリンクするためにカルボジイミド・ベ−スの共役反応を役立たせた。凝固時間およびプロテインＣ活性化が高められたために、証拠となられる生体外実験、そして、　ＴＭ表面密度に正比例するように見えられるこの活性、ｎｉｎｌｉｙｄｒｉｎアッセイによって、定まる。しかしＴＭ表面濃度が基質被支配頂であったことを規制する能力、０の間で変動している報告されたＴＭ記録密度を有する。１５および０。４５のＬｇ／ｃｎ、そして、　増加したプロテインＣ賦活率だけによって、顕性の様に、ＴＭ生理活性は、表面共役の後、かなり減軽された５〜１０−折り重なる観察された２０、ＴＭがいずれの脂肪小胞もまたは血管内皮細胞曲面の成分として鑑定される０００−ひだ増進。コファクタ活性の減失が、タンパク固定化手続きに起因していると信じられるそれは、ＴＭ表面上のいかなるアクセスできる官能基にも、ランダム位置反作用により駆動される上記は、トロンビン結合部の範囲内でそれらを勘定に入れる。この戦略の効果上の局在部流動条件の衝撃は、報告されなかった。
【００２６】
これらの学習がその基質を確かめるにもかかわらず、上下限ＴＭが、ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃな別である合成的表面上の制限血栓形成に、効果がある生理活性がトロンボモジュリンが生物学的性質が個人的に生体材料表面に直接のコバレント共役に消失できる様々な構造上の特色に結ばれる効果があると強調するＴＭの観察された還元。例えば、ＴＭの機能は、Ｃが三がｔａｎｄｅｍｌｙに、義務を負わせているトロンビンとして役立つＥＧＦのようなドメインが据え付けることを繰り返したことが必要であるタンパク質のトロンビン−被支配頂活性化を加速する；ＥＦＴのようなドメイン間のｓｅｒｉｎｅ／ｔｈｒｅｏｎｉｎｅの豊富な６５のＡスペ−サおよび最適にトロンビンの活性サイトをプロテインＣの危険なｓｃｉｓｓｉｌｅ結合に合わせる膜貫通領域；そして、共有結合では１０−ｔｏ　２０−ひだによるＴＭに対するトロンビン束縛の親和性を増加して、トロンビンのＡＴＩＩＩ失活に触媒作用を及ぼすコンドロイチン硫酸部分と共同した（Ｓａｄｌｅｒ，Ｊ．　Ｅ．　［　１９９７の］　Ｔｈｒｏｍｂ．　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　７８　［　１　］：３９２−３９５　；ａｎｄＥｓｍｏｎ、Ｃ．　Ｔ．　［　１９９５の］　ＦＡＳＥＢジャ−ナル９　［　１０　］：９４６−９５５）。若干の活性が、デタ−ジェントを有するＴＭの可溶化の後、さえ保たれるメンブレン会合は、ＴＭによって、かなりプロテインＣ活性化を加速する。これは、調停される、部分的には、局所的に集中して、ＴＭを有する反応しているコファクタおよび基質の接近させるアランメントをコ−ディネ−トするメンブレンの機能によって、（ガルヴィンほか［　１９８７の］　Ｊ：生物学化学２６２　［　５　］：２１９９　２２０５）．例えば、プロテインＣは、Ｃ末端の４−（Ｇｌａ）おそらく、そして、細胞膜に結合するドメインがｔｈｅｔｗｏ−ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｐｌａｎｅ　ｏｆｔｈｅ　ｌｉｐｉｄｂｉｌａｙｅｒに、それを限ることによって、そのロ−カルな濃縮を増加する効果がある（Ｅｓｍｏｎｅｔア−ル。［　１９８３の］　Ｊ：Ｂｉｏｌ．化学２５８：［　９つの］：５５４８５５５３　；マンほか［　１９８８の］アン。Ｒｅｖ．生化学５７：９１５−９５６　；Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃなジ−ンＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　６　［　１　］：８７−１０１のＫａｌａｆａｔｉｓほか［　１９９６の］　Ｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ）。添加の、形質膜に対するプロテインＣの束縛は、また、プロテインＣ切断部位をトロンビンの蛋白質加水分解で活性ドメインに合わせるのを助ける配座変化を引き起こすことができる。静電気および疎水的相互作用は、細胞膜を有するプロテインＣの会合において、巻き込まれることができる。この事については、最近の学習は、プロテインＣがホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノ−ルアミン脂質を包含するメンブレンを結合して、機能を果たすのを好むことを示唆する。プロテインＣは、また、膜二重層（Ｓｍｉｒｎｏｖほか［　１９９９の］　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３８　［　１２　］：３５９１−３５９８）の範囲内で、直接脂肪酸側鎖と相互に作用できる。
リン脂質頭状基の天性が活性プロテインＣの次の触媒作用的および束縛効率に分担できることは、驚くべきである。例えば、Ｓｍｉｍｏｖその他（１９９９以前に）；そして、Ｓｍｉｒｎｏｖほか（１９９４の）Ｊ：Ｂｉｏｌ．化学２６９（２）：８１６−８１９，ＰＥ頭状基およびリン脂質・ポリ不飽和が活性プロテインＣ錯体によって、係数Ｖａ失活に分担することを証明した。このようにして、二重層がｅｓｓｅｎｔｉａｌ’ｃｏｆａｃｔｏｒ（ＴＭと協力したそれ）として執行する脂質プロテインＣ活性化を加速して、そして、ＡＰＣ抗凝固活性をその後最適化する。本発明の発明者は、ＴＭおよびｔＴＭｃｏｎｔａｉｎｉｎｇしているメンブレン擬態性を開発したそれ、そのとき、人工血管の上の被覆、材料に接触しているインプラントおよび他血液、能動的に抗血せん性材料を規定する。　生身組織のインタラクションに対する生体親和性（または生物学的製剤適合）参照、化合物および流体、上記は、血液を勘定に入れる、その他、いかなる植設されたか接触高分子材料（生体材料）も有する。血液と接触しているそれらの材料は、事項関心の中である特に流れ血液を有する。生物学的適合性の生体材料は、いかなる生医学的適用法もの大きい重要性の中で、勘定に入れている、例えば、血管移植の卵着床および人工臓器のような医療用具の、人工弁、人工関節、カテ−テル、そして、多様な他の補綴の装置に、または、血液に接触するそれらと同様に肉塊上の前の生きている。
【００２７】
本発明は、メンブレン擬態性表面の一部として含んでいる生体材料にｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな単遺伝子性の基を有するリン脂質またはリン脂質誘導体を提供する（ｅ。ｇ．、ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ、メタクリロイル、ジエノイル、ｓｏｒｂｙｌ、スチリル、アクリルアミド、アクリロニトリル、Ｎ−ビニルｐｙｎｏｌｉｄｏｎｅ、その他。）。この種の生体材料リン脂質分子は、アタッチする自動アセンブルされた単層または吸収を形成する（ｅ。ｇ．、疎水的相互作用による、その他）ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな単遺伝子性のグル−プの生体材料リン脂質部分がｓｉｔｕ．において、ｐｈｏｔｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄされる基質に本発明の生体材料が、付着の最少の二準位または交叉反応で含むｉ．　ｅ．、リン脂質分子のプラタナスの範囲内で、ｅ．　ｇ．、リンク一緒に異なるリン脂質・アルキル連鎖の、そして、　平面間、ｅ．　ｇ．、リン脂質単層および素地間の連鎖を互いに嵌合すること。重合条件が以前に運用したより、本願明細書において、規定される小胞融合および光重合条件は、きつくない、生物学上活性分子のこのように調停しているより少ない失活、ｅ．　ｇ。ＴＭ。
【００２８】
従来技術において、教示される生体材料は、しばしば共有結合して基質にリンクされる。本発明で、基質に書き添えられる非共有結合でである生体材料が、規定される他の種類の本発明の生体材料によって、基質からの重合する生体材料または１種類の重合する生体材料の置換の離断を許可すること。本発明も、特異的な目的を果たすかまたは特異的な環境要因を満たすために基質に接続される共有結合でである生体材料を意図する。特異的なモジュ−ル方式表層の設計ユニットとしての本発明サ−ビスの生体材料。モジュラ−設計ユニット申し込み増加する多様性で構成される生体材料のこの概念、可転性、そして、分子状またはマイクロスコピカル・レベル上の官能基の選択肢だけに関して柔軟性でない（ｅ。ｇ．、ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｌｋｙｌａｍｉｎｏ基のようなリン脂質官能基の、その他）また、肉眼上の産卵鶏へのユニットの会合体の曲面が、組み立てる。本発明は生物学的適合性の植設された血液接触表面を提供する。そして、それは勘定に入れる、規制されない、自動アセンブルされた単層の固体のアルキル化された表層上の原位置の重合リン脂質、ｅ．　ｇ．、グラス上のｏｃｔａｄｅｃｙｌｔｒｉｃｈｌｏｒｏｓｉｌａｎｅ（ＯＴＳ）；分子的に移動性のアルキル連鎖のａｐｏｌｙｍｅｒ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄｍｏｎｏｌａｙｅｒ上の原位置の重合リン脂質、ｅ．　ｇ、両親媒性の、金−被覆シリコン・ウェファに対するジアルキルを含有するタ−ポリマ−上下限；そして、高分子電解質によって、更に複雑になる水和する表面の上の原位置の重合リン脂質、両性分子、重合リン脂質および抗血栓性のタンパク。抗血栓性のタンパクは、ＴＭでありえる、先端を切ったＴＭまたは内因性のプロテインＣアクティベ−タ。
【００２９】
本発明の生物学的適合性の表面が、ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな単遺伝子性の基を含んでいるリン脂質部分を含んでいる最も少なく一つの生物学的適合性の生体材料表面モジュラ−型ユニットで含むｅ．　ｇ．、ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ基、メタクリロイル、ジエノイル、ｓｏｒｂｙｌ、スチリル、アクリルアミド、アクリロニトリル、Ｎ−ビニル・ピロリドン、その他、それユニットが、接続されるかまたは吸着されるかまたはアルキル化された基質に書き添えられるそして、　その上にその位置で重合する総計およびそれに対して接続されるｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな単遺伝子性の基を含有するリン脂質部分のない基質と関連して、改正されたｎｏｎｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃな表面を規定するのに効果的な指向の。リン脂質部分は、アルキル・アミノ基を包含する、ｅ．　ｇ．、コリン、エタノ−ルアミン等、そして、　リン酸塩極性基。実施例において、生物学的適合性の生体材料は、構造（Ｉ）を有する：
【００３０】
【化１】
2004511267.tif 000002
そこにおいて、Ｒｌは、（Ｃ１４−Ｃ３ｏ）ａｌｌｃｙｌ基である；Ｒ２は、（Ｃｌ４−Ｃ３０）アルキル基である；
ｍは、１−４である；
ｎは、１−４である；
Ｙ　ｉｓ−ＣＨ２−ＣＨ２−＋Ｎ　３つの（ＣＨ３）ｏｒ−ＣＨ２−ＣＨ２−＋ＮＨ３
【００３１】
【化２】
2004511267.tif 000003
そうすると、Ｚ　＝−Ｈに取り付けられるもしも
Ｒ’ｉｓ、それから、Ｒ２がＺ　＝
【００３２】
【化３】
2004511267.tif 000004
に接続されるまたはその逆。
【００３３】
生物学的適合性の生体材料は、そこにおいて、構造（Ｉ）を含むことができるＲ’は（Ｃｌ２−Ｃ３０）アルキル基；Ｒ２は、（Ｃｌｏ−Ｃ２ｏ）アルキル基である；ｍは１である。そして、ｎは１である。優先の具体例の、生体適合材料は、ｌ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−２　［　１２−（ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）ドデカノイル］　ｓｎ−グリセロ３−ホスホリルコリンである。脂質分子の基が重合させるアクリレ−ト、二次元のプラタナスの表面ネットワ−クを形成すること；望ましく、ポリメリゼ−ションが約２５〜約４２Ｃからで、実行される望ましくは４０Ｃ、ＥＹ／トリエタノ−ルアミンは遮断するポリメリゼ−ションを提案する。生体分子の熱分解は本発明の補綴であるか他の材料の表面に接触している血液に起訴する。
改良されたｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙおよび生体親和性のための被覆である基質（または表面に接触している血液）、勘定に入れることができる、規制されない、不溶解性の合成的または自然型、グラスのような無器官であるか器官の材料、シリコン・ウェファ、ヒドロゲル（ｅ。ｇ．、アルギナ−ト、ゼラチン、コラ−ゲン、ｐｏｌｙｈｅｍａ、ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ、ポリアクリルアミド、それの誘導体、そして、　同類）、Ｄａｃｒｏｎ、ｅＰＴＦＥ、ＰＴＦＥ、ＰＥＵ、その他基質が形成される材料は、多孔性でありえるか固体でありえる。具体例が、ｈアルキル化された基質（例えばｏｃｔａｄｅｃｙｌｔｒｉｃｈｌｏｒｏｓｉｌａｎｅ（ＯＴＳ）被覆グラス）を勘定に入れることができるアシル化されたｏｃｔａｄｅｃｙｌｍｅｒｃａｐｔａｎの自己集合単層（ｅ。ｇ．、ＯＤＴ）　金上の、アルギナ−ト基質の上の両親媒性のコポリマ−円柱のオクタデシル連鎖、その他本発明の優先の基質は、金の被覆シリコン・ウェファにタ−ポリマ−上下限を包含している両親媒性のジアルキルにより公証される。このようにして、本発明の優先の生体材料は、以下を含む：両親媒性のポリマ−表面（基質に結合されるポリマ−から延長している分子的に移動性のアルキル化された表面）に吸着される。そして、その上に重合するａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙを含有するリン脂質。
【００３４】
本発明証拠物高められた安定度の生物学的適合性の生体材料。この実施例の特定の実例の、安定させた、ホスファチジルコリンを含有する多因子の表面は、ｌ−パルミトイル２−の原位置のポリメリゼ−ションによって、作り出された［固体の液体表面での１２−（ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）ドデカノイルｓｎ−グリセロ３−ホスホリルコリン。ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅなリン脂質・モノマ−は、合成された、ユニラメラ・ベシクルとして起草したそして、　両親媒性のタ−ポリマ−の一部としての密集したオクタデシル連鎖の上へ溶ける。本願明細書において、記述されるように、光重合は実行された。接触角計測は、それの証拠となった重合脂質単層両親媒性のタ−ポリマ−見せられた高められた安定度により維持される、オクタデシル・メルカプタン（ＯＤＴ）の自動アセンブルされた単層に維持される、−被覆表面。ａｍｐｈｉｐｉｌｉｃな分子は、水和層の上の関心の表面に、望ましく行使される（ｅ。ｇ．、アルギナ−トまたはゼラチン）、高分子電解質は行使される（アルギナ−トまたはＰＬＬ、そして、　両方ともの好ましくは順次コ−テング）。
【００３５】
表面性状の直列接触角計測の有意増加の非共存により決定されて、液固表面でメンブレン擬態性産卵鶏の安定度に、本願明細書において、参照を運用されて、安定度を改正される項、従来技術において、共通して使い。時間の上の水接触角の増加は、減少された安定度に関連する。
【００３６】
項基質いかなる合成的もの表面または自然物（すなわち生理液の不溶）に本願明細書において、参照を運用した例えば、金属（ｅ。ｇ．、チタン、ステンレス、その他）、グラス（ｅ。ｇ．、ソ−ダガラス、石英ガラス）、無器官の材料または器質性材料（ｅ。ｇ．、ヒドロゲル、ポリアクリルアミド、メタクリル酸エステル、ＰＦＴＥのような他ポリマ−、ｅＰＦＴＥ、ＰＥＡ、ＰＥＵ、ｅｔｃ）。リン脂質・ユニットを、接続できるかまたは基質に吸着されることができる、または、代わりに、基質は、被覆でありえるかまたは適切に改めた（ｅ。ｇ．、ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな基の添加、ｅ．　ｇ．、アクリレ−ト基、表層のアルキル連鎖の頂生の終了に）基質に対するリン脂質・ユニットのおよび／または生体内改正されたパフォ−マンスのためのコバレント付着のためのまたは血液と接触して。
【００３７】
項ホスファチジルコリン構造を有する分子に本願明細書において、参照を運用した：
【００３８】
【化４】
2004511267.tif 000005
そこにおいて、Ｒ’ａｎｄ　Ｒ２は、通常長鎖脂肪アシル・グル−プである。
見せる生体材料を作り出すことをその上に必要とする基質またはコ−テング産卵鶏に関するリン脂質の指向が生体親和性を改正したのと、同程度よく基質につきリン脂質の総計に本願明細書において、参照を運用される項効果的総計および指向。
【００３９】
抗血栓性のタンパク、本願明細書において、運用するトロンボモジュリンを勘定に入れる、先端を切ったトロンボモジュリンおよび内因性のプロテインＣアクティベ−タ・タンパク。ネイティブのトロンボモジュリンの完全長アミノ酸配列を有する生来または組換え型タンパクに対するトロンボモジュリン参照。望ましく、ＴＭは天然タンパク質であって、完全長アミノ酸配列を包含する。そして、共有結合ではコンドロイチン硫酸を結び付けた。望ましく、ＴＭ（または組換え型形質発現のためのその暗号配列）の最後の供与源は、中で生物（人間またはアニマル）と同じものであるそれ装置を包含している抗血栓性のタンパク、人工器官、移植、その他は、運用されることになっている。すなわち、人間ＴＭまたはｔＴＭはメンブレン擬態性表面会合体において、運用されることになっているどこでインプラントまたは人工器官、または、装置は人血と接触してあることになっている。先端を切ったトロンボモジュリンが、組換え型手段によって、作り出される本願明細書において、記述するそして、　発現プラスミドの供給元の推奨に精製されて一致すること、より別であるにもかかわらず、発現プラスミドおよび他の純化計画は従来技術において、当業者によって、直ちに役立たせられる。例えば、ｔＴＭは、強く誘導性の促進因子の制御調節の下で、短いポリ−Ｈ標識により急送される。発現タンパク質は、得られて、ニッケル・アフィニティ−クロマトグラフィを運用することを浄化した。発明がドメインを結合している最少の三上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）で、勘定に入れる現今のｔＴＭ、ＥＧＦドメインおよび膜貫通領域間の約６５Ａの膜貫通領域およびセリン−Ｔ豊かなスペ−サ、そして、　それは、少なくとも約５を保つ−１０天然タンパク質の抗血栓性の活性の％ｉ．　ｅ．、内因性のプロテインＣ抗凝血経路の活性化。ｔＴＭは、トロンビンを結び付けることができる、ａＴＩＩＩおよびそれによるｉｔｅｎｈａｎｃｅｓトロンビン不活性は、トロンビンによって、プロテインＣ活性化を加速する。現在の告知に関して、項ＴＭ−包含しているメンブレン擬態性表面会合体の使用は、完全長か先端を切ったトロンボモジュリンを包含している表面会合体を含む。
【００４０】
平面脂質会合体を安定させるために我々は、フリ−ラジカル・イニシエ−タとしてＡＩＢＮかＡＡＰＤがある場合には、ｍｏｎｏａｃｒｙｌａｔｅなｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄされた脂質モノマ−のポリメリゼ−ションに基づく計画を開発した。参照する、ｅ．　ｇ．、ＷＯ　００／０００２３９、公表２０００年１月６日。この方法の限界は、以下を勘定に入れる：８つの時間を越えている期間のための７０のＣで、この反作用を実行する必要条件；これらの系に効果的にタンパクまたは炭水化物構造を組み入れる能力は、生物学的活性度の重合反応および対応する還元の間、熱劣化により規制される。トロンボモジュリンを有するｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅ脂質薄皮または効果的メンブレンに基づく抗凝血性の系のための他の元素必然的に、我々が、成分の最小化熱変性または減生に室温で実行されることができる見える軽い調停された光重合およびリポソ−ム合着計画を開発した上記は、勘定に入れる。簡潔に、アルキル化された基板を有する脂肪小胞の合着に続くこと、エオシンＹおよびトリエタノ−ルアミンが、フリ−ラジカル・イニシエ−タおよび加速器として添加されるそれぞれ。分子集合体は、石英ハロゲンランプに３０分の照射に続いている室温で重合する。前貸しをしている平均／退却接触角は、５８／４２であって、熱的に提案された方法により獲得される材料のための値に対する比較的である。計測が更に原子の水準面性状を定義するために運ばれたＡｎｇｌｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔなＥＳＣＡ、そして、　垂線および平行の反射率−吸光度ＩＲスペクトルは、取得された。アクリレ−ト−ＰＣ薄皮の炭化水素鎖の分子配向が４６であったために、見せられるこれらの計測。表面垂直線と関連する５。パックしている脂質の特徴を表す振動分光および指向の安定度学習および使用は、ア−ルでＯｒｂａｎにおいて、記述される。（２０００の）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３３：３２０４−４２１２．機構による熱的に提案されたプロセスを観察し運用することは分子状鎖長の増加に関すると考えられるというの上の増加する成膜安定性、ポリメリゼ−ションが脂質生物種の遷移温度の下で、温度で発生するときに、それは仕遂げられる。
【００４１】
アルキル化されたヒドロゲル上のリン脂質の原位置のポリメリゼ−ションは、メンブレン−擬態性薄膜を有するスモ−ルダイアメ−タ血管移植のｌｕｍｅｎａｌな表面をｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅするために用いる。市販の血管の移植、拡張されたＰＴＦＥまたはＤａｃｒｏｎ繊維から偽造する多孔質は、織物構造である。これらの人工器官をおおうことは、次のアルキル化に快く従う基質および脂質薄皮発生を有するそれらの初期の含浸による促進性である。例えば、含浸が勘定に入れることができる移植のための基質、限界なしで、医学的に互換性がある材料（例えばゼラチンおよび／またはアルギナ−ト）。水和する基質上の安定化脂質薄皮の発生を研究するモデル学習の、アルギナ−ト溶液は、ガラススライドの上へ層にされて、塩化カルシウムの添加に続くことをゲル化した［チョンほか（１９９９の）Ｊ．　Ｂｉｏｍａｔｅｒ．科学Ｐｏｌｙｍｅｒ．Ｅｄ．　１０：９５−１０８］．モノマ−２−ヒドロキシエチルアクリラ−ト（ＨＥＡ）および３−アクリロイル−３ｏｘａｐｒｏｐｙｌ−３−からなるコポリマ−（Ｎ，Ｎ−ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ）１の統計学的組成のプロピオナ−ト（ＡＯＤ）：１ＨＥＡ：ＡＯＤは、合成された。アルギナ−トが、コポリマ−に陳列された溶液、乾燥した、そして、　ｒｅｈｙｄｒａｔｅｄ．ゲル表面からの水脱着の間、親水性ＨＥＡ成分が、アルギナ−ト連鎖の範囲内でもつれる
コポリマ−を停泊させること、そして、　固体の空気表面でｓｅｌｆ−ａｓｓｅｍｂｌｅに疎水ｄｉａｌｋｙｌａｔｅｄされたモノマ−を許すこと。ゲルが前貸しをして確認されたｒｅｈｙｄｒａｔｅｄされた多糖上の疎水表面の発生および９４ｉ５および６３ｉ７の退却接触角計測、それぞれ。ｍｏｎａｃｒｙｌａｔｅなリン脂質・モノマ−からなるベシクルが用意されて、コポリマ−被覆表面の上へ溶かしたユニラメラ。ポリメリゼ−ションがＡＡＰＤを運用している水溶液に運び込まれたフリ−ラジカル。前貸しをして表示される被支持脂質単層および４７ｉＳおよび２６の退却水接触角：Ｌ７次数、それぞれ。ＥＳＣＡ結果は、脂質薄皮の存在を確かめた。空電の下の目視観測ピリオドが水において、適当な条件になる個別の１週、計測が不変のままだった接触角、内因性の成膜安定性の高準位を開示すること。デ−タ解析が他の場所（チョンほか１９９９以前に）で見つけられることが可能である包括的。
【００４２】
アルギナ−トをＨＥＡでおおう：結果を約束して生まれるＡＯＤ両親媒性のポリマ−、有機溶媒上の限界勘定に入れられたいくつかの信頼、ＴＨＦ、そして、　ヒドロゲルのａｌｌｃｙｌａｔｉｏｎを調停する真空乾燥；したがって、我々は、ｔｈｓコポリマ−系のモノマ−として、スチレン・スルホン酸エステルを勘定に入れるために選挙した。新規なアルキル化された高分子電解質がＨＥＡで構成された結果になること、ＡＯＤ、そして、　６のモル比のスチレン・スルホン酸エステル：３　：１．明らかに課せられた基質にこのポリマ−を停泊させるのに役立つスルホン酸エステル（Ｓ　０３）基を否定的に請求されるこのタ−ポリマ−・キャリ−、ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）［　Ｌｉｕほか（２０００の）Ｐｏｌｙｍｅｒ　Ｐｒｅｐｒｉｎｔｓ　］のような。有機溶媒または持続性の真空乾燥のための必要条件のないメンブレン−擬態性薄皮がアルギナ−ト／ＰＬＬ多層膜からなる基質を運用して証拠となられたことを形成する能力。簡潔に、アルギナ−トの多層（Ｋｅｌｃｏ，０．１５％ｗ／ＰＢＳのｖ）、そして、ＰＬＬ（４５９ｋＤａ；０．１％のｗ／ＰＢＳのｖ）３０秒のｎＰＬＬ薄皮が高分子電解質タ−ポリマ−の溶液によって、その後温置された各々の溶液（ＰＬＬ−ａｌｇ）の接触時間のための探傷面を水に入れることによるガラススライド上の生成した三１ｍＭの４〜６ｈ．のためのスルホン酸エステルの濃縮で（エチレングリコ−ル）（ＴＥＧ）計画５を参照する。調停された光重合が執行された合着および可視光が記述したベシクル。接触角斜面台検査を勘定に入れている表面解析、ＥＳＣＡ、楕円偏光法、そして、　高解像度走査電子顕微鏡学は、脂質薄皮発生を確かめる。１ヵ月を越えているピリオドのためのＰＢＳのインキュベ−ションが確かめられたことになっているこれらの系の安定度。注の、アルギナ−トおよびポリ−Ｌ−リジンの安定多層膜が、様々な水和する生物学上誘導された基質に作り出されることができる上記が、勘定に入れる、しかし、否定がゼラチンに規制したそれは、生理学的ペーハーでネット陽電荷を運ぶ。
【００４３】
メンブレン−擬態性脂質薄皮をｅＰＴＦＥ血管移植のｌｕｍｅｎａｌな表面の上に形成するために記述される技巧は、重合するｍｏｎｏａｃｒｙｌ　ＰＣメンブレン−擬態性薄膜を有するＰＴＦＥ移植（４ｍｍのエス）のｌｕｍｅｎａｌな表面を塗布するために役立たせられた。簡潔に、ＰＴＦＥ移植が、まず最初にゼラチン（６ｗｔ　％）の水溶液を注入されたそして、それから、ｌｕｍｅｎａｌな表面は、アルギナ−トの一連の５つの互層構造を有する被覆であった（０ＰＢＳの１５重量％）、そして、ポリ−Ｌ−リジン（０ＰＢＳの１０重量％）。コ−テングは、３０の秒のための１ｍＬ／最小値の流速で、人工器官の直列潅流により執行された。各々の潅流の後、人工器官が、１つのｍＬ／分に脱イオン水できれいにされたｌｕｍｅｎａｌな表面は、それからＨＥＡの１ｍＭの溶液によって、注がれた：ＡＯＤ：１つの時間の１つのｍＬ／ｈの流速で、ＴＥＧＦのＳＳタ−ポリマ−、１つのｍＬ／ｈ．でのＴＥＧを有する表面の１つの時間潅流によって、続くＡ　１。６００ナノメ−トルのｍｏｎｏａｃｒｙｌＰＣベシクルの２ｍＭの溶液は、２０のＭｍナトリウム・リン酸緩衝液において、調製された（ペ−ハ−７。４）１５０ｍｍのＮａＣｌを包含する。そして、１０：Ｅｏｓｉｎ　Ｙ．に対するｍｏｎｏａｃｒｙｌ　ＰＣの１つのモル比ベシクル溶液は、３つの時間の１つのｍＬ／ｈの流速で、人工器官で注がれて、それから石英ハロゲンランプを運用している３０のマイニュ−トのために照らされた。ＳＥＭ影像が真空乾燥の後、得た高解像度およびクロムを有するコ−テング。小胞融合、そして、ポリメリゼ−ション移植表面上の安定一様なメンブレン−擬態性コ−テングを生成する。
Ａｔ高量拡大、溶かされたベシクルは、ｌｕｍｅｎａｌな表面に有名である。
【００４４】
気象概況の、ｍｅｍｂｒａｎｅｍｉｍｅｔｉｃな薄膜を有するｇｅｌａｔｉｎ−（ａｌｇｉｎａｔｅ／ＰＬＬ）　ｎコアセルベ−トの一時変異が、ジアルキル側鎖を有する両親媒性のポリマ−を使用して、うまく執行された柔軟スペ−サ基、そして、　カチオンの表面にポリマ−を停泊させるアニオン性置換基。アルキル化されたｈｙｒｏｇｅｌに対する脂質小胞融合の後、会合体がｓｉｔｕ光重合において、安定させられる脂質。薄膜構造および形態は、様々な表層の知覚しうる技巧を運用して特徴を表された。ＰＢＳの最高４週の間の成膜安定性は、確かめられた。
【００４５】
トロンボモジュリンは、メンブレン−擬態性脂質会合体に組み込まれた。ＴＭがｍｏｎｏａｃｒｙｌＰＣにＰＯＰＣのモル比において、変化しているユニラメラ・リン脂質液胞に更改された（ＡｃＰＣ）ラビット。蔗糖勾配によって、定まる９５％、越えられるＴＭの移入効率。ベシクルは、エオシンＹ／トリエタノ−ルアミンがある場合には、期間を変化させるための可視光に陳列された。ト−タルＴＭ濃縮、脂肪小胞のデタ−ジェント可溶化の後、Ｇｌａ　ｄｏｍａｉｎｌｅｓｓなプロテインＣ（ＧＤ−ＰＣ）活性を測定することによって、定まる、１２５ＩラベルをつけられたＴＭを用いて獲得されるそれらの値を有する優れた一致のある［ガルヴィンほか（１９８７の）Ｊ：Ｂｉｏｌ．化学２６２（５）：２１９９−２２０５］．Ｇｌａ−ｄｏｍａｉｎｌｅｓｓなプロテインＣは、残基１−４１　［　Ｅｓｍｏｎほか（１９８３の）Ｊ　ＢｉｏＬ化学２５８（９）：５５４８−５５５３　］に、ドメイン局在性を包含しているｙ−カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）のタンパク分解性開裂により獲得される。このドメインは、細胞膜［　Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃジ−ンＥｘｐｒｅｓｓｉｏ７　６（１）：８７−１０１のＫａｌａｆａｔｉｓほか（１９９６の）Ｃｒｉｔｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　］にプロテインＣ束縛のためのアンカ−を規定することによって、最適のプロテインＣ活性化の原因となる。ガルヴィン（１９８７）が、Ｇｌａ−ｄｏｍａｉｎｌｅｓｓなプロテインＣ活性が機能的に活性ＴＭの表面濃度を鑑定するために運用されることができることを以前に証明した触媒部位が脂肪小胞の外面より上に配置されるように、適切に指向される。ＴＭのベシクル濃縮は、ＧＤ−ＰＣ賦活率の計測に確かめられる。
【００４６】
全ての小胞系、脂質組成（ＰＯＰＣ対ＡｃＰＣ）にかかわりなく、ポリメリゼ−ションより前のプロテインＣ活性化の見せられた類似した速度。以下の光重合、ＰＣ賦活率の適度の還元は、強調された。我々は、この効果が２つの係数に帰されることができると思う。部分的には、ＴＭ活性の還元が、おそらく重合プロセスの間、生成されるフリ−ラジカルによって、一部のＴＭ分子の直接型失活に関連があったそして、　我々は、触媒作用的効率がメンブレン錯体の範囲内で還元したＴＭ移動度の結果として減らされたと思う。ＴＭがベシクルに組み込まれた時がｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質の濃度増大の中で構成することはよりすばらしかった触媒作用的の還元。
【００４７】
動力学的パラメ−タ、ｋｃａ、そして、　Ｋｍ、プロテインＣ濃縮（テ−ブル３）の関数としてのＡＰＣ生産の観察された速度の非線形回帰分析によって、獲得した。先行されるＡｓ、ＴＭがかなりより高いＫｍ値がＰＯＰＣまたは非重合するＡｃＰＣベシクルに組み込まれるＴＭに比較した効果がある自由。しかし
それがポリメリゼ−ションの前に観察したより、重合するＡｃＰＣのＴＭのためのＫｍ値が、非常に高い脂質二重層のＴＭの移動度が錯体を活性化しているプロテインＣの発生に影響することを示すこと。全ての４つのフォ−ムのための自我値は、同様であって、触媒反応メカニズムが不変のままであるために、指示する。
プロテインＣ活性化が高分子繊維ベシクルにおいて、触媒的に効率的であるｋｃａｔ／Ｋｍ値印、Ｋｍの適度の増加にもかかわらず。
【００４８】
Ｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた表面は、表層の誘導されたトロンビン生成の開始期を延期することによって、強い抗凝固活性を行う［メリルほか（１９７０の）ジャ−ナルｏｆＡｐｐｌｉｅｄＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２９（５）：７２３−７３　０　；Ｂａｓｍａｄｊｉａｎのほかジャ−ナルｏｆＢｉｏｍｅｄｉｃａｌな（１９８３の）Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１７（３）：５０９−５１８　；Ｇｏｏｓｅｎほか（１９８０の）Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　２０（５−６）：５４３−５５４　；Ｎｏｊｉｒｉほか（１９９０の）ＡＳＡＩＯ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ　３６（３）：Ｍ１６８−１７２；Ｂｙｕｎほか（１９９６の）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　１２（２）：２１７−２２５　；Ｂｙｕｎほか（１９９６の）Ｊ　Ｂｉｏｍｅｄ．　Ｍａｔｅｒ．　Ｒｅｓ．　３０（４）：４２３−４２７］．この効果のエクステントは、一般にｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた表面に対するＡＴＩＩＩの出産のヘパリンおよび速度の表面密度上の被支配頂である。終了−ポイント接続されたヘパリン被覆冠状血管ステントの効能を鑑定している早い臨床の学習は、結果を約束すると報告した［　Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ　３（３−４）のバンｄｅｒ　Ｇｉｅｓｓｅｎほか（１９９８の）Ｓｅｍｉｎａｒｓ：１７３−１７６　；Ｓｅｒｒｕｙｓほか（１９９８の）Ｌａｎｃｅｔ３５２（９１２９）：６７３−６８１　；Ｂｕｌｌｅｒほか（１９９９の）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　１００（３）：２３６−２４２　］。それでもなお、ヘパリンに基づく戦略のいくつかの限界は、現存する。Ｂｌｅｚｅｒほか（１９９８の）Ｔｈｒｏｍ。Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　７９（２）：２９６−３０１および（１９９７の）Ｊ医用材料研究３７（１）　：１０８−１１３，その係数ＩＸａを観察した、ＸＩａ、そして、　ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた人血しょう接触が静止のヘパリンまたは流動条件を固定するときに、トロンビンは生成される。このようにして、接触活性化経路のイニシエ−ションは、固定されたヘパリンにより共同されるＡＴＩＩＩにより抑制されない。さらに、ＡＴＩＩＩの生理的濃度で、トロンビンがごくわずかである［　Ｌｉｎｄｈｏｕｔほか（１９９５の）Ｊ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｍａｔｅｒ．　Ｒｅｓ．　２９（１０）：１２５５−１２６６　］ことを循環しているト−タルの失活に対するｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた表面の寄与。これは、重要な重要な点である、１が植設された装置に部位上流域で当然の慢性トロンビン生成を有する血管壁外傷の部位で、組織因子の長期の形質発現のためのポテンシャルを酌量する特に時。ヘパリンが、活性血小板からリリ−スされる係数によって、機能させなくされることができる血小板第４因子のような、そして、　それは、血小板豊かな血栓［　Ｅｉｔｚｍａｎのほか（１９９４の）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　８９（４）：１５２３−１５２９　］の発生を規制する際に比較的効果がない。加えて、ヘパリン被覆材料によって、原因となられるヘパリンｉｎｄｕｃｅｄｔｈｒｏｍｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉａのケ−スは、報告された［つりこみ機その他（１２９８８の）Ｊ　Ｖａｓｃ．　Ｓｕｒｇ．　７（５）：６６７６７２　］。ＴＭ、ヘパリンとは対照的に、否定は、ＡＴＩＩＩ調停された機構によって、トロンビンを機能させないだけである、また、著しく、プロテインＣを活性化するトロンビンの能力を高める［　Ｅｓｍｏｎ，Ｃ．　Ｔ．（１９９５の）ＦＡＳＥＢジャ−ナル９（１０）：９４６−９５５　］。そのコファクタ・タンパクＳと活性プロテインＣは、２つの凝固因子を機能させない、ＶＩＩＩａおよびｖａ、このことにより凝結カスケ−ドの増幅のための臨界であるＸａおよびトロンビンの生成を遮断する［　Ｌｕほかブラッド８７の（１９９６の）（１１）：４７０８−４７１７　；ｖａｎ’ｔ　Ｖｅｅｒほか（１９９７の）Ｊ　Ｂｉｏｌ．化学２７２（１２）：７９８３−７９８４　］。このようにして、表層の結合したヘパリンとは異なり、血流量へのＣが表面上の局在性であるかまたはＡＰＣ生成の一般の近傍の範囲内で発生する凝固反応を機能させないための効率的な手段に提供する活性タンパク質のリリ−ス。
【００４９】
適当な膜横断配向のＴＭが分子状セルフアセンブリおよび原位置のポリメリゼ−ションのプロセスによって、作り出されることができることを包含しているメンブレン−擬態性薄皮。多因子の脂質薄皮は、接触活性化を規制して、選択的に組成の脂質成分およびＴＭ表面濃度の適当な選択肢によるトロンビンを機能させない。ＴＭ、多因子の脂質会合体の成分として、選択的にプロテインＣを活性化することができて、そして、トロンビン生成を効果的に規制できる。ＴＭを包含することはインビトロ安定度にしたメンブレン−擬態性薄皮および生理活性。
【００５０】
ＴＭを包含しているモデル膜−擬態性表面が、ポリマ−の上に形成される平らなアルキル化された基質に作り出されるグラス、金、またはシリコン基板。ｍｅｍｂｒａｎｅｍｉｍｅｔｉｃな表面の発生は、ユニラメラ・リン脂質液胞の表面合着を巻き込む、原位置の光重合によって、続いて、そして、詳細に記述された。
最近の学習は、そのプロテインＣにホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノ−ルアミンを包含する脂質メンブレンの上へ、最高が結合することを示唆する［　ＳｍｉｒｎｏｖほかＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３８の（１９９９の）（１２）　３５９１−３５９８；Ｓｍｉｒｎｏｖほか（１９９４の）Ｊ　Ｂｉｏｌ．化学２６９　（２）　：　８１６−８１９］．さらに、頭状基がＡＰＣの触媒作用的効率に分担できるＰＥ、特に係数Ｖａ失活に関して。ＴＭは、基線ＤＰＰＣ表面（１：１０４−１：１０６）に対する共役差積モル濃度で、そして、単一のＴＭ濃縮でホスファチジルコリンおよびホスファチジルエタノ−ルアミン・リン脂質（０−５０のｍｏｌ％）の共役差積モル比で構成される表面に取り入れられる。最後に、局所的に高められた膜動力学を有する安定表面ミクロドメインを生成する能力は、ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質を含んでいる混合した会合体を役立たせることによって、検討した（ｅ。ｇ．　ｍｏｎｏａｃｒｙｌＤＰＰＣ）、そして、ｎｏｎｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質（ｅ。ｇ．，ＤＰＰＣ）。これは、我々がメンブレン血液凝固阻止剤性状上のｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙ−ｍｏｂｉｌｅ　ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓの効果を決定できる。形態学的、構造上の、そして、　基質被支持薄皮の化学的性質が、技巧により研究される上記は、接触角斜面台検査を勘定に入れる、ＥＳＣＡ、外の反射率ＩＲおよびラマンｓｐｅｃｔｒｏｓｏｃｏｐｙ、高解像度ＳＥＭおよびＡＦＭによって、としての穴として。膜動的は、技巧がコンフォ−カル蛍光顕微鏡法に連結した光ブリ−チング（ＦＲＡＰ）の後、蛍光回復を運用して研修される。
我々は、アルキル化された基質型の関数として、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｙなタグを付けられた脂質およびＴＭの分子拡散率を決定する（ＨＥＡ：ＡＯＤ：ＭＴＥＭ対ＨＥＡ：ＡＯＤ：ＳＳ），脂質微小環境（ＰＣ対ＰＥ）、そして、　２次元のポリメリゼ−ション（％　ＡｃＰＣ）のエクステント。表面濃度がＧｌａ　ｄｏｍａｉｎｌｅｓｓなプロテインＣ（ＧＤ−ＰＣ）活性化を測定して決定される効果的ＴＭ。
【００５１】
Ｋｍおよびｋ、プロテインＣの活性化のためのｔ値は、ＴＭおよびプロテインＣのための生物種供与源への被支配頂である（ｅ。ｇ．、ウシ対ラビット対人間）。本願明細書において、記述される全ての学習は、特に明記しない限り人間ＴＭおよびプロテインＣにより管理される。高度な配列相同性は、様々なタンパクのための人間およびヒヒ相補ＤＮＡ生物種エンコ−ディングの間で現存する（＞　９８％）（Ｈａｙｚｅｒほか（１９９３の）ジ−ン１２７：２７１−２７２　；ショウジほか（１９９３の）ジ−ン１３３：３０７−３０８　；ショウジほか（１９９３の）ジ−ン１３３：３０７−３０８　；Ｈａｙｚｅｒほか（１９９９の）Ｔｈｒｏｍ．　Ｒｅｓ．　９８：１９５−２０１　］。ヒヒに噴射されるときに、組換え型人間可溶ＴＭはプロテインＣを活性化して、トロンビン生成を規制できる。鋭形のアレルギ−性反応は、観察されなかった。高解像度ＳＥＭ、そして、検査がＴＭの表面分配に関して位相的なデ−タに提供するＡＦＭ、上記は、同位相分離された領域を群がらせているタンパクのアセスメントを勘定に入れる。金を運用しているＴＭまたは１次子または副振動体抗体と分類される発色団の抗体ラベリングの蛍光顕微鏡法が検出に与えるコンフォ−カルとのＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｙなラベルをつけられたＴＭ。ＴＭが、３８のアミノ酸から成る短い細胞質のドメインを有するまた、２５の二糖ユニットから成るコンドロイチン硫酸連鎖を包含する２３のアミノ酸膜貫通領域および４９６のアミンの酸のｅｘｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃなドメイン。メンブレン−擬態性表面は、アルキル化されたタ−ポリマ−に維持される脂質単層から成る。タ−ポリマ−薄皮は、いずれがＣ　１６のアルキル連鎖の自動アセンブルされたアレ−にうそをつくか固着基およびＨＥＡ親水性クッションからなる多成分構造である。ＨＥＡ親水性クッションのための現在の厚さ推定値は、ほぼ１００Ａ　［　Ｍａｒｒａほか（１９９７の）Ｌａｎｇｎｉｕｉｒ　１３：５６９７−５７０１　］である。
このようにして、立体障害考慮のために単独で、ｅｘｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃメンブレン−擬態性薄皮の外側および支持タ−ポリマ−塩基産卵鶏の親水性クッションの範囲内の否定にＴＭドメイン・オリエント。それにもかかわらず、タ−ポリマ−・クッションおよび生理活性の次元がＴＭ指向を改正するために現存することを更に合わせるポテンシャル。ａｃｒｙｌａｔｅｄされた脂質の原位置のポリメリゼ−ションは、安定メンブレン−擬態性薄皮の生成を容易にする。それにもかかわらず、プロテインＣおよびトロンビンを有するＴＭの最適の会合体は、平面脂質メンブレンの範囲内のそれらの２次元の運動上の被支配頂であってもよい。ｎｏｎｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質分子がまた、運用されることができることを勘定に入れる混合した脂質系。設計戦略が具体的に説明される互生。計画６Ａ−６Ｂを参照する。
【００５２】
但し、伝えるところによるとホスファチジルコリン頭基で構成されるメンブレンが否定新入者接触活性化を正当に扱う脂質、大部分の人為の表面、上記は、ｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた材料を勘定に入れる、凝固系［　Ｂｌｅｚｅｒ（１９９８）以前に］の内因性の経路を活性化する。メンブレン−擬態性薄皮を包含しているＴＭが血液凝固を提案する場合、決定するために２つのテストシステムは、役立たせられる：被支持脂質薄皮および高分子繊維脂肪小胞。被支持脂質薄皮が、円形のガラス製のかぶせガラス（ｄ　２０ｍｍ）に作り出される多重井戸型プレ−トの配置するそして、　露出した、ｃｉｔｒａｔｅｄされた血小板自由な人血しょう。凝固することは、４ｍＭのト−タル濃縮に、カルシウムの添加により提案される。サンプルが、９０のマイニュ−ト・ピリオドの上の反応液からとられて、係数ＸＩａのために分析されるＩＸａ、Ｘａ、ＡＰＣのトロンビン生産および生成。表層の誘導されたプロテインＣ活性化の効果は、プロテインＣを運用しているこれらの検査がプラズマを減少させたことを選択的に繰り返すことにより決定される（ジョ−ジ・キングＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ、オ−ヴァ−ランド・パ−ク、ＫＳ）。第２の実験システムの、高分子繊維脂肪小胞のさまざまな濃縮は、検査曲面積を最大にするために平らなガラス製の被覆表面と置換される。係数ＸＩａ、ＩＸａ、Ｘａ、トロンビン−活性およびＡＰＣレベルは、ｃｉｔｒａｔｅｄされた血小板自由な人血しょうのカルシウム再沈着の後、測定される。準弾性光散乱により決定される与えられたベシクル次元、ト−タル・リン脂質濃縮、そして、　頭基曲面積のための公表ディメンション、ト−タル・ベシクル濃縮および陳列された膜曲面積は、直ちに決定されることができる。
【００５３】
Ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた血小板自由な人血しょう、血液凝固の動態力学を研修するモデルが様々な調査者により証明された、［　Ｂｌｅｚｅｒ（１９９８）以前に；カワモトその他Ｂｌｏｏｄ　Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ及びＦｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ　３（１９９２の）（４）：３７１−３７９　］。精製された凝結タンパクおよびインヒビタ−により調製される合成のプラズマ混合液は、確立した代替である［　ｖａｎ’ｔ　Ｖｅｅｒその他以前に（１９９８）；ランドほかブラッド８８の（１９９６の）（９）：３４３２−３４４５　；Ｂｒｕｍｍｅｌほか（１９９９の）Ｊ：生物学化学２７４　（３２）　：　２２８６２−２２８７０］．活性プロテインＣの周知の生理学的いくつかのインヒビタ−が、ある、上記が、プロテインＣインヒビタ−（ＰＣＩ）を勘定に入れるア−ル−抗トリプシン（ａｌ−ＡＴ）、そして、　ａ２−マクログロブリン。これらのインヒビタ−が、プ−ルされたｃｉｔｒａｔｅｄされた人血しょうにおいて、安定しているタンパク質Ｃ．であるＰＣＩを有するＡＰＣのインタラクションの速度、ａｌ−ＡＴおよびａ２−マクログロブリンは、他のプラズマ成分に影響を受けない。
ＡＰＣ抑制の経路は、人間およびヒヒにおいて、同一である。このようにして、プ−ルされた人血しょうにより生成されるデ−タは、ヒヒ試験に関連する。それでもなお、プロテインＣ経路の全ての成分のプラズマ・レベルを測定するためにＥＬＩＳＡを運用する能力、上記は、阻止因子を勘定に入れる、現存する、そして、　報告する［　Ｅｓｐａｎａほかブラッド７７の（１９９１の）（８）：１７５４−１７６０　］。非組織培養処理されたポリスチレンで構成される検査穴のカスケ−ドが規制される［　Ｂｌｅｚｅｒ（１９９７）以前に］ことを凝結させる内因性の経路の活性化。しかしバックグラウンド・アクティビティは、適当なコントロ−ルにより検討される。表層の機能上の性状は、溶液から表面への反応物の運搬上の被支配頂である。よくかき混ぜられた系が活発に必ずしも動脈であるか静脈の流動条件の下で仕遂げられるタンパク・フラックスを模倣するというわけではない偶；しかし血液凝固の空電アッセイが共役差積測定用試料の潜在的に大きいナンバ−の表面生理活性の初期のアセスメントのための単一の手段に提供するインビトロ。テストシステムのセンシティビティを高める陳列された曲面積の総計が高分子繊維脂肪小胞を運用するはっきりした利点であることを便利に変化させる能力。しかしベシクルは、平面脂質薄皮の構造に近いだけである、それらが真性の重合する二重層から成るという理由およびイオンによって、アルキル化されたタ−ポリマ−に維持される多因子の脂質単層がヒドロゲル基質にリンクした否定。薄皮が役立つ情報に提供するこの種の平面脂質。
【００５４】
血液凝固の生殖位相を規制する際のＴＭを含有する脂質会合体の役割を決定するために探傷面は、２５のｍｏｌ％　ＤＯＰＳで構成される２０のＩ１Ｍユニラメラ・ベシクル／７５のｍｏｌ％　ＤＯＰＣ　［　Ｂｌｅｚｅｒ（１９９７）以前に］によって、スパイクをつけられるｃｉｔｒａｔｅｄされた血小板自由な人血しょうに陳列される。プロコアギュラント血小板リン脂質膜のこれらのベシクル擬態者脂質組成、錯体（ｔｅｎａｓｅ）を活性化している第Ｘ因子の会合体をそれによって、容易にすること。４ｍＭのコンセントレ−ションおよび９０以上のマイニュ−トが分析される反応液からとられるサンプルが因数に分解する最終版に、凝固することはカルシウムの添加により提案されるＸａ、活性プロテインＣ、そして、　トロンビン生産。経路がフィブリノペプチドＡ発生を測定して決定されるプロコアギュラントにアクセスできるトロンビンの接近させる比例。
測定用試料は、高分子繊維脂肪小胞を勘定に入れておよび／または平らな多因子の脂質薄皮を維持した。
【００５５】
接触抑制された全血、係数ＶＩＩａのインヒビタ−としての上記の封じ込めトウモロコシ・トリプシンインヒビタ−、ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた血小板に対する確立した代替は、血液凝固の生殖位相の検査の自由な人血しょうである［　ｖａｎ’ｔ　Ｖｅｅｒ以前に；ランド（１９９６）以前に；Ｂｒｕｎｕｎｅｌほか（１９９９の）Ｊ　ＢｉｏＬ化学２７４（３２）：２２８６２−２２８７０　］。
本願明細書において、記述される薄皮は、生体外実験および生体内の使用のための充分なｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙを有する。非重合するフォ−ムの偶、リポソ−ムは、皮下注射［　Ｍａｕｋほか（１９８０の）サイエンス２０７：３０９−３１１　］の部位で、日または偶週間固執する。他学習は、また、様々な生体高分子によって、改められる表面がガラス管内で、そして、生体内で持続性のピリオドのための分子比生理活性を保つと決定した［　Ｉｍａｎｉｓｈｉ，Ｙ．、（１９９２の）ＣＲＣプレス、ＢｏｃａＲａｔｏｎ、ＦＬ；Ｎｏｊｉｒｉほか（１９９６の）ＡＳＡＩＯジャ−ナル４２（５）：Ｍ４６８−４７５　］。
【００５６】
成膜安定性はまず最初に２３時にＰＢＳおよびｃｉｔｒａｔｅｄされた人血しょうのサンプルのインキュベ−ションにより鑑定される。そして、ＴＭ表面濃度の３７のＣ．　ＣｈａｎｇｅｓはＧＤ−ＰＣ賦活率を測定することにより決定される。薄皮物理的および化学的性質の変更が選択的基準に執行されることを鑑定する追加の表面に敏感な技巧。これらの学習は、ＴＭ活性の有意減失が直接型脱着でまたは血清タンパクか自然に発生している表面活性剤分子を有するインタラクションを結び付ける効果のためにあるかどうか決定できる。最後に、大部分の臨床応用の、表面が２０ダイン／ｃｍ２以下の盤ずり速度に従属することをｂｌｏｏｄ−ｃｏｎｔａｃｔｉｎｇすること。したがって、薄皮は、また、平板列流れ眼房の最高１２０のマイニュ−トのための持続性の剪断応力（２０および２００ダイン／ｃｍ２）に、ＰＢＳ照射の後、分析される。
【００５７】
膜安定性上の生化学係数の効果は、決定される。探傷面は、二相の眼房共生培養系を運用している血管内皮細胞がある場合には、温置される（Ｆａｌｃｏｎ，社）多孔質挿入を付けている２４穴プレ−トからなる（０．４５μｍ細孔径）。血管内皮細胞が、挿入で培養されるそして、検査基質は、下にある穴に置かれる。
新しく洗練された内皮細胞を有する穴挿入の置換は、必要とされることができる、試験の持続時間に従い。さまざまな時間間隔で（０、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、２ｗｋ、１ｗｋそして、　４ｗｌｃ）、基質が取られることを試験する、そして、ＴＭ表面濃度の変更は、ＧＤ−ＰＣ賦活率を測定することにより決定される。ＰＢＳの単独でサンプルまたは１の脂質に対するリパ−ゼのウェイトレ−ショでのホスホリパ−ゼＣをもつＰＢＳのインキュベ−ション：２０，１：１００，そして、１：ネガおよび正の制御としての１０００のサ−ビス、それぞれ。
【００５８】
薄皮物理的および化学的性質の変更が選択的基準に執行されることを鑑定する追加の表層の知覚しうる手技。ｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ検査が有望であった、ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質のための合成的ル−トが利用できることを交替させる、上記は、自然に発生しているエステル基より加水分解に影響されやすくないエ−テル結合を有するリン脂質の生成を勘定に入れる。従来の学習は、共有結合して被結合ＴＭが若干の生物学的活性度を保つことを証明した。我々は、ＴＭ活性上の膜動力学の効果を探検することが価値があると信じる。脂質分子運動性が表層の触媒作用的効率に対する劇的な衝撃を有する時、それが薄皮でおおわれることはあり得る「ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｙ−ｍｏｂｉｌｅ　ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓは、長期の成膜安定性を示談にした。故障モ−ドが非重合脂質ドメインからＤＰＰＣおよびＴＭの減失を勘定に入れることはあり得る一つ。もしそうならば、分子的に移動性のメンブレンの生成のための合成的ル−トが現存することを交替させる、前述のように。しかし第二次オプションは、より長いアルキル連鎖を包含している脂質の使用を勘定に入れる（＞　Ｃ１６、そして、　Ｃ３２について次第の）。増加する分子間バンｄｅ　Ｗａａｌインタラクションは、自由な脂質の安定度を高める、膜流動性の若干の還元を有する。薄皮不安定の可能な原因として、自由であるか多因子の脂質分子の減失を確かめるために脂質減失のエクステントは、いずれのコンフォ−カル鏡検もまたはト−タル内の反射率蛍光（ＴＩＲＦ）ｓｐｅｃｔｒｏｓｏｃｏｐｙに連結するｌ４Ｃのラベルが付いた脂質またはｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｌｙなタグを付けられた脂質共役を用いて決定されることができる。
ロ−カルな血液動態の生育環境は、血液凝固の危険な調節性係数である［ハンソンほか（１９９８の）Ａｍ。ハ−ト・ジャ−ナル１３５（５つのＰｔ　２つのＳｕ）：Ｓ１３２−１４５；ゆるいほか（１９９３の）Ｔｈｒｏｂ。Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　７０（１）：１２９−１３４　；Ｔｕｒｉｔｔｏほか（１９９８の）Ｔｈｒｏｍｂ。Ｒｅｓ．　９２（６つのｓｕｐｐｌ．　２）：Ｓ２５−３１０。凝固反応の発育は、基本的に流れの間のまたは静状態の下の共役差積である。
流れ機構の型、上記は、盤ずり速度の絶対値を勘定に入れる、触媒作用的での凝結タンパクの両方の変換速度が表面をつける影響および形成された産物の取り下ろし率。この効果の実例は、Ｆａｃｔｏｒ　Ｘ活性化錯体の高められた触媒作用的効率である（組織因子：係数ＶＩＩａ）管型流通反応器の盤ずり速度の増加と共に有名な［　Ｇｅｍｍｅｌｌほか（１９９０の）Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．　Ｒｅｓ．　４０（３０）：３２７−３４０　；Ｇｉｒほか（１９９６の）アン。Ｂｉｏｍｅｄ．英２４　（３）　：３９４−３９９　；ホ−ルほか（１９９８の）Ｊ　Ｂｉｏｍｅｃｈ．英１２０（４）：４８４−４９０　］。特に、Ｖｍａｘの三倍の増加は、強調された、ずり速度が２５から３００のｓｅｃまで増加したように。流れにより生成されるフォ−スは、様々な酵素の複合体の構造上のコンフォメ−ションの変更を勘定に入れることができる。そして、結果として、それらの速度論的挙動を改正できる［　Ｇｅｍｍｅｌｌその他ブラッド７６の（１９９０の）（１１）：２２６６−２２７１　；紳士階級ほか（１９９５の）Ｂｉｏｐｈｙｓ。Ｊ：６９　（２）　：３６２−３７１　；Ｎｅｍｅｒｓｏｎほか（１９９１の）Ｔｈｒｏｍｂ．　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　６６（３）：２７２−２７６　；Ｂｊｏｒｑｕｉｓｔほか（１９９７の）Ｔｈｒｏｍｂ。Ｒｅｓ．　８５の（３）：２２５−２３６　］。それでもなお、血流量の相互依存および主に表面への、そして、からの、血漿タンパクの流れ仲介輸送の表層の反応性位置。このように、凝結速度が表面で化学反応力学次第である全体的、また、物質移動条件上の流体接続および分子拡散によって、書き取らせた［　Ｂａｓｍａｄｊｉａｎその他（１９９７の）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　１７（２３）：１５１１−１５２２　］。したがって、係数がｐｒｏ−ｏｒ血液凝固阻止剤が反応の表面に移される速度および収奪の速度を反映する移送が周旋する質量および産物。後者は、凝結過程を監督する正および負のフィ−ドバックル−プの重要な参加者である。いくつかの単行書は、流動条件を変化させることの下で反応の固体の液体境表面で処理されて連結されて、検査のための原理および方法論必然的を要約する［　Ｓｅｅ，ｅ．　ｇ．、小林その他（１９７４）Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．　１６の（１）：７７−９７　；小林ほか（１９７４の）Ｂｉｏｔｅｃｈ．　Ｂｉｏｅｎｇ．　１６（１）：９９−１１８　；ゴ−ルドスミスその他（１９８６の）Ｔｈｒｏｍｂ．　Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　５５（３）：４１５−４３５　；ゆるいｅｔａｌな（１９９４の）Ｔｈｒｏｍｂ。Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ　７２（５）：７７７７８１　；ＡｎｄｒｅｅほかＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３３の（１９９４の）（１４）：４３６８−４３７４］．　血栓症のずり被支配頂実験的モデルは抗血栓性の作因の症状発現前の効能の評価に衝撃を与えて、最適の作用様式の我々の理解を洗練するのを助けた、そして、ずり被支配頂は実行する［ハンソン（１９９８）以前に］。同様に、植設された装置の総合性能が生体材料の起居の基本的理解がロ−カル血液動態の生育環境の押し付けられた制約の範囲内で、表面をつけることを必要とする臨床面を改正すること。例えば、Ａｒｎａｎｄｅｒほか（１９８８の）Ｊ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｍａｔｅｒ。Ｒｅｓ．２２　（１０）　：８５９−８６８は、血流量がｈｅｐａｒａｎｉｚｅｄされた動静脈シャントのパフォ−マンスに影響することを証明した。
低くＡｔ、しかし、否定大流速、フィブリノペプチドＡは、生成された、それを勧告すること、これらの条件の下の最少で、ｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた表面で失活の前にフィブリンに変換フィブリノ−ゲンに時、より有されるトロンビンを循環すること。同様に、Ｌｉｎｄｈｏｕｔほか（１９９５）以前に、ｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄされた表面でのトロンビン阻害の速度が規制される運搬であることに気がついた、表面にＡＴＩＩＩ出産の速度によって、押し付けられる限界のために（主には）。学習が表面が高いずれ流動生育環境に適している最高であることをｈｅｐａｒｉｎｉｚｅｄしたことを意味する両方とも。逆説的に、血小板−被支配頂血栓、それは、動脈のずり速度で通常作り出されるｈｅｐａｒｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔである［ハンソン（１９８８）以前に］。反対の、活性プロテインＣの浸透移行性投与は、著しく静脈で動脈の型血栓症を減軽する。この現象が、様々な実験動物モデルにおいて、特徴を表された上記は、人工血管の表面上の血栓形成の誘起を研修しているそれらを勘定に入れる［グル−バ−その他ブラッド７３の（１９８９の）（３）：６３９−７４２　；グル−バ−ほか（１９９０の）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　８２（２）：５７８−５８５　；Ｅｓｐａｎａ（１９９１）以前に；グル−バ−その他（１９９１の）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　８４（６）：２４５４−２４６２］。
【００５９】
高分子繊維または非多因子の脂質薄皮の範囲内で更改されるかどうか、流動条件の下のＴＭの触媒作用的効率（ｋｃａｔ／Ｋｍ）は同様である。薄皮が動脈で静脈の流動条件の下の抗血せん性であることを包含しているＴＭ。ＡＰＣ生産のためのｋｉｎｅｔｉｃａｌｌｙな限られた養生は、静脈（５０のｓｅｃ）で動脈の移動比（５００のｓｅｃ）で定義された；ＡＰＣ生産のための内因性の動力学的パラメ−タおよびずり速度のこれらのパラメ−タに対する影響、脂質頭基組成、そして、　膜動的は、定義された；そして、我々はプロテインＣ−活性化錯体の発生の速度が拡散であるかどうか識別した、または、反作用はプロセスを規制した。これらの学習の全ての方法論的方法が、毛細管流通反応装置系の使用に基づく以前にＢｌｅｚｅｒ（１９９８）によって、詳述する；ビリ−ほか（１９９５の）Ｊ　Ｂｉｏｌ．化学２７０（３）：１０２９−１０３４　；Ｃｏｎｔｉｎｏほか（１９９４の）Ｂｉｏｐｈｙｓ。Ｊ．　６７（３０：１１１３−１１１６．この技巧は、基礎を形成されるメンブレンが処理する脂質上の移動比の効果を研修する際に広く運用された。簡潔に、ガラス製の毛細管（０．６５ｍｍのエス、そして、１２７ｍｍの長さ）メンブレン−擬態性薄皮を有する被覆にあって、そして、ハミルトン注射器にアタッチした。試験溶液の移動比が、シリンジポンプにより規制されるそして、　時限式のサンプルは、流通反応装置の先端から集金される。学習が３７Ｃ管理される全部。ｐｈｏｔｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄされた脂質薄皮に加えて、ＴＭは、脂質分子を包含している非アクリレ−トの中で含まれるベシクルに組み込まれる（ｅ。ｇ．ＰＯＰＣ、ＤＬ２ＰＥ、その他）グラス毛細管の内壁の上の合着のための。生来リン脂質から成るコ−テングが本願明細書において、記述される学習のための基準点として、執行する脂質へのＴＭの再結合。この基準系が密接に肉塊の細胞膜の真性の微小環境を模倣することを運用して生成されるデ−タ。
【００６０】
ＡＰＣ生産のためのｋｉｎｅｔｉｃａｌｌｙな限られた養生を定義する試験は、活性化緩衝を有する被覆キャピラリの潅流を巻き込む（トリス−ＨＣｌ　２０ｍＭのペ−ハ−５。５）　１００ｍｍのＮａＣｌを包含すること、５つのｍｇの／ｍＬのＢＳＡ、５ｍＭのＣａ２＋、プロテインＣ（０．１　１Ｍ）、そして、　トロンビン（１０ｎＭ）。ＡＰＣ生産は、静脈で動脈のずり速度でＴＭ表面密度の関数として、決定される。限界が有意にこれらの系の起居に衝撃を与えさせるトランスポ−ト。したがって、これらの試験は、定義する、与えられた流れ機構のための、ＡＰＣ生産が物質移動限界のためにＴＭ濃縮から独立しているようになるＴＭ表面密度。
【００６１】
ＡＰＣ生産のための内因性の動力学的パラメ−タは、トロンビン（１０ｎＭ）を包含している活性化緩衝を有する被覆毛細管の潅流によって、ｋｉｎｅｔｉｃａｌｌｙな限られた養生において、鑑定される（プロテインＣの濃縮を変化させることを有する（０．０１−４，ｕＭ）。総症例の、毛細管は、ＡＰＣ生産の１０分のＲａｔｅｓのために一人のトロンビンによって、ｐｒｅｐｅｒｆｕｓｅｄされる流通反応装置の出口で測られるＡＰＣの定常状態量から決定する。動力学的パラメ−タ、ｋｃａｔおよびＫｍは、潅流溶液のプロテインＣ濃縮の関数として、ＡＰＣ生産の観察された速度の非線形回帰分析により獲得される。ずり速度（１つの対５００の５０秒のｓｅｃ　１）および脂質頭基組成のこれらのパラメ−タ上の効果（ｉ．　ｅ。ホスファチジルエタノ−ルアミンに対するホスファチジルコリンのモル比変化させる）決定する。添加の、そこにおいて、脂質が十分に安定しているために見つけられる多因子で非高分子繊維から成る混合したメンブレン−擬態性会合体、動力学的パラメ−タが、これらの系のために定義される穴として。最後に、動力学的パラメ−タは、ＰＯＰＣベシクルに挿入されるＴＭ複合体のために報告されるそれらの値と比較してある［ガルヴィンほか（１９８７の）Ｊ　Ｂｉｏｌ化学２６２（５）：２１９９−２２０５］，完全に構成される脂肪小胞に嵌入されるＴＭ複合体のために誘導されるそれらに関する穴として、または部分的には、高分子繊維脂質の。
【００６２】
プロテインＣ−活性化錯体の発生の速度（ｉ．　ｅ。ＴＭ：ｔｈｒｏｍｂｉｎ）　動脈で静脈の流動条件の下で概算されて、拡散か反作用管理されたプロセスとして定義される。メンブレン被覆毛細管は、プロテインＣを包含している活性化緩衝によって、注がれる（０．１ｕＭ）、そして、トロンビンの総計を変化させる（０．１−１０　ｎＭ）、そして、ＡＰＣ生産は、原子炉出口で測定される。潅流溶液のトロンビンの総計の増加と共にＡＰＣ生産減少のリ−チ定常状態量に対する時間。ＡＰＣ生成曲線の初期の一部、したがって、ｍｅｍｂｒａｎｅｍｉｍｅｔｉｃな表面で活性を生成しているＡＰＣの発生の速度が、考えるそして、潅流混合液のトロンビンの総計の増加と共にこの速度増加。ＡＰＣ生産の実験的速度は、錯体を活性化しているプロテインＣの発生が運搬であるかどうか決定するために触媒作用的表面またはｋｉｎｅｔｉｃａｌｌｙな限られたプロセスにトロンビン物質移動の確かめられた速度と比較してある。
【００６３】
膜模倣系が効率的なプロセスであることを包含しているＴＭによるプロテインＣ活性化、ＡＰＣ生産の半ば最大の速度を獲得することを必要とするプロテインＣの低濃度により証明されたように。それでもなお、膜模倣系の多因子の天性のためにネイティブのメンブレン擬態を包含することは、非アクリレ−トに挿入されるＴＭにはそれと同一の効率が獲得した触媒作用的を仕遂げるためにむずかしくてもよい。これが、ＴＭの表面濃度の適度の増加により迂回されることができるそして、これらの人為分類の範囲内の増加膜動力学に対する策略が記述された二者択一。毛管の流通反応装置のはっきりした利点は、その大きい触媒作用的曲面積である。いずれのプレ−ナもまたは管面に生成される薄皮のための表面性状が同様であると確認するために被覆チュ−ブのための表面濃度がＧｌａ　ｄｏｍａｉｎｌｅｓｓなプロテインＣ活性化を測定して決定される効果的ＴＭ。添加の、１は、発色団複合脂質プロ−ブを運用している表面被覆の一様性を鑑定できる。
リン脂質薄皮が、毛細管の上へおおわれていたそして、　平板列流れ眼房の使用、しかし代替は、オプションである。
【００６４】
メンブレン−擬態性薄皮が動脈（５００のｓｅｃ）で静脈の（５０のｓｅｃ）流動条件の下で検察されることを包含しているＴＭの抗血せん性性状。上記したＡｓ、毛細管流通反応装置系を、運用できる。ｃｉｔｒａｔｅｄされた血小板自由な人血しょうのカルシウム再沈着または凝結カスケ−ドの他イニシエ−タの添加、トロンビンまたは組織因子のような、流通反応装置に入口の前にｐｅｒｆｕｓａｔｅｊ　ｕｓｔにこれらの係数を混和することによって、発生する。
学習が３７Ｃ管理される全部。
【００６５】
内因性の経路を経て提案されるときに、血液凝固の生殖を規制するためにメンブレン−擬態性薄皮の機能を定義する試験は、ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた血小板のない人血しょうを有する被覆キャピラリの潅流を巻き込む。
サンプルが、流通反応装置の出口から集金されて、係数ＸＩａのために分析される
ＩＸａ、Ｘａ、ＡＰＣおよびトロンビン生産。
この系の活性化がＴＭのない膜系がある場合には、凝血因子活性化を測定して決定される表面−起因性プロテインＣの効果。
血液凝固の生殖を強化するために
試験は、ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた血小板自由な人血しょう刺されたＡＭｏｆｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒｖｅｓｉｃｌｅｓ　ｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆ２５　ｍｏｌ％　ＤＯＰＳ／７５のｍｏｌ％　ＤＯＰＣによって、選択的に反覆される。
これらのベシクルは、プロコアギュラント血小板リン脂質膜の脂質組成を模倣して、錯体（緊張している）を活性化している第Ｘ因子の会合体を容易にする。
外因性の経路を経て提案されるときに、血液凝固を規制するメンブレン擬態性薄皮の機能は、検討される。
これらの検査は、２５のｍｏｌ％　ＤＯＰＳで構成されるユニラメラ・ベシクルに更改される組織因子（１２−１００のｐＭ）の濃縮を変化させると共にスパイクをつけられるｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされた血小板自由なプラズマを有する被覆キャピラリ／７５のｍｏｌ％　ＤＯＰＣの潅流を巻き込む。
流通反応装置出口でのサンプルが、集金されて、係数Ｘａのために分析される
ＡＰＣおよびトロンビン生産。
経路がフィブリノペプチドＡ発生を測定して決定されるプロコアギュラントにアクセスできるトロンビンの接近させる比例。
誘導されたプロテインＣ活性化がＴＭのない膜系がある場合には、凝血因子活性化を測定して決定される表面の効果。
直接型トロンビン不活性の発生の速度が複雑にする（ＴＭ：ＡＴＩＩＩ）推定値に、被覆毛細管は、１５ｎＭのトロンビンを包含しているＨｅｐｅｓ緩衝および２０ｎＭのアンチトロンビンによって、注がれる。
時限式の中間で、サンプルは集金されて、残余トロンビン活性およびトロンビン−抗トロンビンＩＩＩ（ＴＡＴ）複合体形成のために分析される。
活性が本願明細書において、記載されて、メンブレンの周知のＡＴＩＩＩ−結合能に比較されるトロンビン不活性。
人血しょうを包含しているトロンビンがある場合には、抗血せん性薄皮性状を検討するために
キャピラリがトロンビン（１０−１００のｎＭ）の濃縮を変化させて、自由なプラズマが刺した血小板をｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄされて注がれる被覆。
流通反応装置出口でのサンプルが、集金されて、係数Ｘａのために分析される
ＡＰＣ、トロンビンおよびフィブリノペプチドＡ発生。
生体内ｂｌｏｏｄ−ａｎｄ組織−材料表面でのＴＭ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄされたメンブレン擬態性表面膜を有するスモ−ルダイアメ−タ血管移植被覆の性状は、次のように特徴を表される。
多くのレポ−トは、表面の実現可能性が血小板粘着および活性化インビトロを遮断する際のＰＣによって、改めた効果がある（イシハラほか（１９９４の）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ　２８：２２５−２３２　；ホ−ルほか１０（１９８９の）（４）：２１９−２２４）。
ハンソン、そして、同僚（チェンその他
（１９９７の）アン。Ｖａｓｃ．　Ｓｕｒｇ．　１１（１）：７４−７９）収賄するイヌの動脈モデルのｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな過形成および細胞増殖がコポリマ−を包含しているＰＣを有する標準のｅＰＴＦＥ人工器官被覆において、減軽されたことを報告する
ＰＣ頭状基が生体内でｂｉｏａｃｔｉｖｅである。そして、メンブレン擬態性戦略が植設された血管の移植のパフォ−マンスを改正するかもしれないことを示唆すること。
我々は、メンブレン擬態性表面へのＴＭの移入が抗血せん性表面の原因となることを本願明細書において、証明する、そして、　本願明細書において、記述される手段は、本発明の材料に接触して、血統の抗血せん性活性の有意改良のために許す。
メンブレン擬態性およびプロテインＣ活性化戦略を結合することは、役立つ。
学習がアンチトロンビンが冠状血管血管形成術の後、ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓを減軽することを決定的に証明するためにまだ有する臨床面。
しかし
この失敗は、アンチトロンビンの浸透移行性投与によって、問題なくトロンビンを抑制することができないことに対するより多くを話すことができるｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ．のトロンビンのための役割の欠如に
トロンビン阻害剤の局在部出産、メンブレン擬態性材料を包含することは卵着床を収賄するために有害で危険なｓｅｑｕｅｌｌａｅを遮断する際の有意便益に提供するＴＭおよび／または合成的医療用具および材料を有する血液の接触と同様に。
血栓形成が局所的に内因性のプロテインＣ血液凝固阻止剤経路を活性化するメンブレン擬態性戦略を必要とすることを規制することによる小さい血管の移植の臨床の耐久性、本願明細書において、教示する。
問題がヒヒ前生きている腿の動静脈シャント・モデルおよび直接の生体内のインプラント学習を運用して関係されることになること：プロテインＣ活性化のキネティクスおよび絶対値、プラズマたん白質吸着、血小板粘着および活性化および移植開存性；本発明の擬生化学材料の短いおよび長期間安定度；そして、ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌなｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃなレスポンスの絶対値。
ヒヒは、人間に対するｈｅｍｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙな同様である。
血管形成術の後、ラビットおよびラットのｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓを減軽するためのヘパリンの周知の効果にもかかわらず、ヒヒ（１７５）のｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓを減軽するために失敗される類似した学習のヘパリン。
同様に、ラットのｉｎｔｉｍａｌな過形成を著しく減軽されるインヒビタ−・シラザプリルがヒヒの損傷範囲を減軽するために失敗するＡＣＥ。
添加の、霊長目動物の学習は、人間の医療用のためのテスト材料にとって重要である。
ＴＭまたはｔＴＭがｍｉｎｉｍａｌ’ｐｌａｔｅｌｅｔおよびフィブリノ−ゲン沈着を引き起こして、スモ−ルダイアメ−タ血管移植の血栓形成を減軽するための本質であることを包含しているメンブレン擬態性表面。
ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな過形成が内因性のプロテインＣ血液凝固阻止剤経路のアクティベ−タを取り入れるメンブレン擬態性に続いて仕遂げられるａｎａｓｔｏｍｏｔｉｃの還元。
薄皮組成、上記は、ＴＭまたはｔＴＭの表面濃度を勘定に入れる、生体外実験によって、書き取る
本願明細書において、記述する。
コンポジット人工器官（または材料に接触している他血液）は、移植盤（６ｍｍのエスｅＰＴＦＥ）に以下の物質に先んじているゼラチンを、第１に注入することにより偽造される；ゼラチンがアルギナ−トおよびＰＬＬの代替高分子電解質産卵鶏を有する材料のｌｕｍｅｎａｌな表面の中でおおうことに先んじる上記。人工器官のｌｕｍｅｎａｌな表面上のアルキル化された産卵鶏の次の発生は、両親媒性のタ−ポリマ−を運用して仕遂げられる。
人工器官または他材料は、それから以下の物質に先んじている脂肪小胞の重合可能な官能化されたされたリン脂質および水性混合溶媒により温置される；上記のベシクル自己アセンブルされた脂質メンブレンのｓｉｔｕポリメリゼ−ションの先んじる
本願明細書において、記述する。
表面性格付けが、ＥＳＣＡを使用して執行される
接触角斜面台検査、ＧＤ−ＰＣ活性化アッセイによって、測られる高解像度ＳＥＭおよび表層のＴＭ濃縮。
皮膜均一性コ−テングは、ｅｐｉｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔな鏡検を有する脂質プロ−ブ混合性とラベルをつけられる発色団を運用して決定される。
ショ−トの表層の誘導された血栓症の危険を予測する際の血液接触学習が公知技術である期間限界。
それでもなお、鋭形の血液−接触アッセイを運用することは表面組成の大きいアレ−のための便利なスクリ−ニング機構に提供する本発明の材料のパフォ−マンスの性格付け。
ヒヒ前生きている腿の動静脈シャント・モデルは、かなり定義流れ機構の鋭形の血小板およびフィブリノ−ゲン沈着を鑑定するために用いる。
測定用試料が、分路に置かれて、…に陳列される
いずれの５０のｓｅｃ−　ｏｒ　５００のｓｅｃ−１もの盤ずり速度での最高１２０のマイニュ−トのためのラベルをつけられた血小板の。
血小板沈着は、シンチレ−ションカメラ画像化により監視される。
注射された１２１１のラベルをつけられたフィブリノ−ゲンの吸着は、価値があっているガンマによって、血液照射ピリオドの終わりに決定される。
プラズマ吸着のマ−カ−が血小板が付着するかどうか明らかにするように、１２５１のラベルをつけられたフィブリノ−ゲンを運用することによって、ために、そして、主表面またはバイアによって、活性化する吸着血漿タンパク／フィブリンフィルム。
血小板および凝結酵素の活性化に上げられるマ−カ−の生体内のいくつかのプラズマ・アッセイは、これらの学習において、役立たせられる。
トロンビンによるフィブリノ−ゲンおよびその開裂の消費量が、プラズマｃｌｏｔｔａｂｌｅなフィブリノ−ゲンおよびフィブリノペプチドの計測により鑑定される
（ＦＰＱ）レベル。
血小板の活性化が、血小板計算数を循環する際の変更から、そして、剥離可能な血小板ａ−ｇｒａｎｕｌｅタンパクのプラズマ・レベルにより鑑定される
Ｐ−トロンボグロブリンおよび血小板第４因子。
フィブリン溶解反応は、フィブリンＤ−ダイマ−・フラグメントの循環レベルを測定することにより概算される。
活性不完全なｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｍｉｎ（ＡＰＴＴ）計測がｃｉｔｒａｔｅｄされたプラズマ・サンプルを運用して執行される時。
かなり、誘導されたトロンビン発生がトロンビン−抗トロンビンＩＩＩ複合体のレベルを測定して決定される表面の次数。
ハンソンほか（１９９３の）Ｊ．臨床を参照する。
Ｉｎｖｅｓｔ．９２　（４）　：手段のための２００３−２０１２。
放射性同位元素を使って識別されて運用する、さもなければ、脂質薄皮の範囲内の発色団ラベルをつけられた共役は生育環境に接触している血液のｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ（短期）の性格付けを許す。
小さい直径移植のｌｕｍｅｎａｌな表面上の血小板およびタンパク沈着は、アルギナ−ト／ＰＬＬと比較されて、アルギナ−ト／ＰＬＬ／タ−ポリマ−・コ−テングにより比較される。
ヒヒおよび人間ＴＭ間の高い相同を原因として生じるので、人間ＴＭおよびｔＴＭは、ヒヒ・モデルにおいて、運用される。
動脈のずり速度条件の下で管理される学習のための、人工器官は、霊長動物モデルの頸動脈および骨動脈において、配備される。
これらの学習のための腸骨で頸動脈の動脈を運用することによって、少なくとも４０の動脈の部位は、運用される。
同じ合成の材料のコ−ティングしてない移植により比較されるように、試験される薄皮はＴＭまたはｔＴＭを包含している単一のＰＣリン脂質膜擬態性会合体およびメンブレン擬態性薄皮である
ｅ．　ｇ．、ｅＰＴＦＥ．以下の移植卵着床、開存性は、関連した動脈の体積流量測定を有するＺｉｅｒｌｅｒその他（１９９２）により記述されるようにＤｕｐｌｅｘ画像化によって、卵着床の後、３０の日または６つの月で屠殺の前に、そして、初めに置かれるＪ．　Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１６　（４）　：５２０−５２６．１ヵ月までに、移植および有意ａｎａｓｔｏｍｏｔｉｃなｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな傷害への内植伸張約１　ｃｍは、ある、移植内腔の約１０％を妨げること。
これらの認定することは、再生可能である。
１および６ヵ月間のＩｎｔｉｍａｌな領域およびパンヌス内植増加の次第にエクステント、更なるほとんど変更を有しない最高１２ヵ月。
移植収穫の前に、アニマルは、エバンスブル−の静脈内注射を受信する、それは、内皮が不在である移植盤および細胞増殖の計測のためのブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を加入する。
説明の時点で、移植が、長手方向に開けられて、血栓自由表面および全体的なパンヌス組織内植の計測のために写真を撮られる
そして、それは、ｅＰＴＦＥ移植平均を有する約１つのｃｍ／ヵ月コントロ−ル学習の。
隣接した動脈のセクションが電子顕微鏡法をスキャンして、吟味のための約５ｍｍの中間で獲得されるシリアルおよび光学顕微鏡法。
このようにして、イベントを癒やす組織の再構成が、全ての移植長さに沿ってある（ハンソンほか（１９９１の）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ　１８（４Ｓｕｐｐｌ）にて説明したように：Ｉ１７０１１７６）。
染色が、内皮細胞性および平滑筋細胞カバレ−ジの吟味のために執行される
細胞の関連した動脈壁およびマトリックス・レスポンスと同じ。
例えば、免疫組織化学の学習が、血管内皮細胞を識別するために内皮細胞性第ＶＩＩＩ因子／フォンビルブラント因子によって、汚れることを勘定に入れる
マクロファ−ジを識別する平滑筋細胞を識別するためにａ−ａｃｔｉｖｅな平滑筋およびＨａｍ５６。
Ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな過形成（移植の内側の莢膜の）は、ある確立した量的コンピュ−タ化されたｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな技巧によって、鑑定する。
人工血管が、イヌのモデルにおいて、鑑定された
霊長類学習は、優先である。
ヒヒは、好まれる事項である。
プロトロンビン時間は、ヒヒにおいて、人類のいくぶん長い、しかし、活性不完全なプロトロンビン時間（ＰＴＴ）、フィブリノ−ゲン・レベル、時間（ＴＴ）が同様である凝固している活性およびトロンビンが人を配置する第ＶＩＩＩ因子およびヒヒ。
加えて、テストが横断するＶＩＩＩが反応を起こさせるヒヒおよび人間Ｆａｃｔｏｒおよび両方の生物種の血小板が、径分布において、等価である
濃密体のナンバ−およびコラ−ゲンに対する応答性、リストセチンおよびａｒａｃｈａｄｏｎｉｃな酸。
反対の、イヌは、非常に活性止血薬および線溶系および血小板を有する、それは、ヘパリンによって、直ちに活性化される。
ＰＴ、ＰＴＴおよびＴＴはかなり還元した全部のフィブリノ−ゲンである。そして、Ｆａｃｔｏｒ　ＶＩＩＩは人類と関連してイヌにおいて、上げられる。
豚の動物モデルが、血管壁外傷を研修するために運用された
交叉性の学習が霊長類細胞と作用する人間において、運用される試薬の多数、しかし、イヌを有する否定、ブタおよび他動物モデル。
加えて、商用の血管の移植が人類または霊長目動物において、ブタ・モデルにおいて、自発的にｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚｅｄされない標準。
アニマルは、獣医によって、職員を置かれるアニマル療養所にしまわれる。
部位は、行使している標準および術後処置空間を備える。
少佐または外科の手続きは、ａｓｅｐｔｉｃａｌｌｙに執行されて、外科の後、適切に監視した。
ケタミンＨＣ１（２００−２５０のｍｇ　ＩＭ）は鎮静のために運用される。そして、ナトリウム・ペントバルビタ−ル（５０−７５のｍｇ点滴ｐｒｎ）は感覚脱出のために運用される。
バルビツレ−トおよび塩化カリウムの静脈内注射が、アメリカのＶｅｔｅｒｉｎａｒｙのＥｕｔｈａｎａｓｉａのＰａｎｅｌの推奨と整合した方法の安楽死のために運用される
医師会。
モノクロ−ナルまたはポリクロ−ナル抗体、好ましくはモノクロ−ナルの、関心のタンパクが公知技術の手段によって、作られることが可能である事項とともに特に化学反応すること。
参照する、ｅ．　ｇ．、ハ−ロ−およびレ−ン（１９８８の）抗体：ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、コ−ルドスプリングハ−バ−実験室；Ｇｏｄｉｎｇしている（１９８６の）単クロ−ン抗体。
原理および実算、２ｄの編集、アカデミック・プレス、ニュ−ヨ−ク、ＮＹ；そして、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ＢｉｏｌｏｇｙのＡｕｓｕｂｅｌほか（１９９３の）Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、ワイリ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ニュ−ヨ−ク、ＮＹ．クロ−ン化のための標準技巧、デオキシリボ核酸単離、増幅および純化、ＤＮＡリガ−ゼを巻き込んでいる酵素反応のための、ＤＮＡポリメラ−ゼ、限定エンドヌクレア−ゼなど、そして、　さまざまな区切り技巧は、公知のそれらであって、当業者によって、共通に雇った。
多くの標準手技が、ＣｌｏｎｉｎｇしているＳａｍｂｒｏｏｋほか（１９８９の）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒにおいて、記述される
再版、コ−ルドスプリングハ−バ−実験室、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ニュ−ヨ−ク；Ｍａｎｉａｔｉｓ　ｅｔａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇしている（１９８２の）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ、コ−ルドスプリングハ−バ−実験室、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、ニュ−ヨ−ク；呉語（編集）（１９９３の）メセドリン。
Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１８，ＰａｒｔＩ；呉語（編集）（１９７９の）メセドリン。
Ｅｎｚｙｍｏｌ．６８　；呉語ほか（編集）（１９８３）メソジスト
Ｅｎｚｙｍｏｌ．１００および１０１；グロスマンおよびＭｏｌｄａｖｅ（編集）メセドリン。
Ｅｎｚｙｍｏｌ．６５　；ミラ−（編集）（１９７２）は、分子遺伝学で実験する、コ−ルドスプリングハ−バ−実験室、コ−ルドスプリングハ−バ−、ニュ−ヨ−ク；遺伝子の操作の古いサクラソウ（１９８１の）原理、カリフォルニア・プレス大学、バ−クレ−；ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙのＳｃｈｌｅｉｆａｎｄ　Ｗｅｎｓｉｎｋ（１９８２の）実用法；グラバ−（編集）（１９８５の）ＤＮＡクロ−ニング第Ｉ巻およびＩＩ、ＩＲＬプレス、オックスフォ−ド、英国；故郷およびヒギンズ（編集）（１９８５の）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄハイブリダイゼ−ション、ＩＲＬプレス、オックスフォ−ド、英国；Ｓｅｔｌｏｗａｎｄ　Ｈｏｌｌａｅｎｄｅｒ（１９７９）
遺伝子操作：原理および手段、Ｖｏｌｓ．１−４，プレナム・プレス、新しいもの
ヨ−ク；そして、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ＢｉｏｌｏｇｙのＡｕｓｕｂｅｌほか（１９９２の）Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、グリ−ン／ワイリ−、ニュ−ヨ−ク、ＮＹ．略記号および名称集、そこにおいて、雇った、場の標準にみなされて、そして、本願明細書において、引証されるそれらのようなプロのジャ−ナルにおいて、共通して使いある。
現在の出願の全ての引用された文献は、現在の告知を有する不整合性がないというほどに、本願明細書において、引用したものとする。
実例が提供された図示する目的であることになること、そして、　本願明細書において、主張されるように、本発明の有効範囲を規制する目的とする。
熟練職人に発生する公証された論文の変異が本発明の範囲内で倒すことを目的とするいずれでも。
実例
実例１。
Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅ　Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ　Ｔｈｉｎ薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）の合成およびＴｅｒｍｉｎａｌ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎは、ワットマン・シリカゲル・アルミニウム焼かれたプレ−ト、Ｆ２５４、２５０ｍｍの厚さに執行されて、蛍光消光、硫酸（メタノ−ルの１０のｍｌ％）またはリンモリブデン酸（エチルアルコ−ルの２０重量部）によって、検出した。
カラムクロマトグラフィは、シリカゲルに執行された（ＦｉｓｈｅｒＣｈｅｍｉｃａｌ，２００−４２５　Ｍｅｓｈ）。
Ｈ　ａｎｄ　Ｃ　ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３の３００および７５ＭＨｚ（Ｖａｒｉａｎ　ＩＮＯＶＡ）で記録された、ＣＤ３０Ｄ（内部Ｍｅ４Ｓｉ、ｄ　＝　０）。
質量スペクトル（ＥＩ，ＦＡＢ）　ＪＥＯＬ　ＪＭ−ＳＸ　１０２／ＳＸ１０２Ａ／Ｅマススペクトロメ−タによって、測られた。
コンフォ−カル鏡検学習は、ツァイスＬＳＭ５１０　Ｌａｓｅｒ　Ｃｏｎｆｏｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅに執行された（カ−ル・ツァイス、社、ドイツ）外部アルゴン（４５８、４８８および５１４ナノメ−トルでの励起のための）、ＨｅＮｅｌ（５４３ナノメ−トルでの励起のための）およびＨｅＮｅ２（６３３ナノメ−トルでの励起のための）を有する備えるレ−ザ−。
（１）が調製されたモノＡｃｒｙｌＰＣは、Ｍａｒｒａその他（１９９７）によって、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　３０、６４８３を記述した−６４８８）。
３−０−（４−メトキシベンジル）−、ｓｎ−グリセリン（３）は、１、エベ−ルにより記述される手続きに従う２−Ｏ−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｉｄｉｅｎｅ−グリセリンその他（１９９２）から調製された（＋）Ｊ　Ｏｒｇ．化学５７、１７７７１７８３。
（４）が次のように用意されたｌ−Ｏ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−３−０−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ。
３−０−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ　（３）の溶液に（２．０ｇ、９．４ｍｍｏｌ）、パルミチン酸（２．７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、そして、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．０６ｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミドの溶液は、ジクロロメタン（６０ｍＬ）に添加された（３．７ｇ、．１８．０ｍｍｏｌ）０のＣ．での４５の最小値のピリオドの上のジクロロメタン（１０ｍＬ）滴状の
共存系がＡｒ気圧の下で室温で１８時間かき混ぜられた抗力。
Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｕｒｅａが、シ−ライトによるフィルタリングによって、取られた
そして、　濾過液が、残基を贈与するために蒸発した
それは、４を産出するために溶出剤としてエチルアセテ−ト−ｎ−ヘキサン（１：３）を運用しているカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２）により浄化された（３．０ｇ、７１％）．Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣＬ）ｄ；７．２４（ｄ，２つのＨ、Ｊ＝　９。０Ｈｚ、Ｐｈ），６．８８（ｄ，２つのＨ、Ｊ＝　９。０Ｈｚ、Ｐｈ），４．４８（ｓ　２ＨＣＨ２−Ｐｈ）、４。１４（ｍ，１Ｈ、ＣＨ），．４．００（ｍ，１つのＨ、ＣＩｌ），．３．８０（ｓ，３つのＨ、ＯＣＨ３）、．３。５１−３．４６（ｍ，２つのＨ、Ｃｈｅｚ），．２。５０（ｄ，１つのＨ、Ｊ＝　５。
１Ｈｚ、ＯＲ），．２．３１（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　７。
５Ｈｚ、ＣＨ２ＣＯ）、．１．６２−１．６０（ｍ，２つのＨ、Ｃｈｅｚ），．１．２５（ｂｒ．　ｓ、２４のＨ、ＣＨ２Ｘ１２）、．０．８７（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　７。
２Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＩ）カルク。
Ｃ２７Ｈ４６ＯＳのための；．４５０．３３４５３　；観察された４５０。
３３３３１のｌｋＭＺ。
（５）が次のように用意された１−Ｏ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−２−Ｏ（１２−ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）ｄｏｄｅｃａｎｏｙｌ−３−Ｏ−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｙｌ）−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏｌ。
４の溶液に（２．５ｇ、．５．５ｍｍｏｌ）、１２−ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ−１−ドデカン酸（１．６７ｇ、．６．７ｍｍｏｌ）、そして、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（０．０６　ｇ、．０．４５ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミドの溶液は、ジクロロメタン（３０ｍＬ）に添加された（３．０ｇ、．１３．４ｍｍｏｌ）２０分の室温で、ピリオドの上のジクロロメタン（１０ｍＬ）滴状の。
共存系がＡｒ気圧の下で室温で１８時間かき混ぜられた抗力。
Ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｕｒｅａが、シ−ライトによるフィルタリングによって、取られた
そして、　濾過液が、残基を贈与するために蒸発した
それは、５を産出するために溶出剤としてエチルアセテ−ト−ｎ−ヘキサン（１：４）を運用しているカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２）により浄化された（３．０ｇ、７１％）．ＮＭＲ　１Ｈの（ＣＤＣｌ３）ｄ；．７．２４（ｄ，２Ｈ、Ｊ＝９。
０Ｈｚ、Ｐｈ），．６．８８（ｄ，２Ｈ、Ｊ＝９。
０Ｈｚ、Ｐｈ），．６．３８（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
０，　１．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．１１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
０，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８０（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１。
５，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．２１（ｍ，１つのＨ、ＣＨ−２）、．４．４８（ｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１１。
７Ｈｚ、ＣＨ２−Ｐｈ）、．４．４２（ｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１１。
７Ｈｚ、ＣＨ２−Ｐｈ）、．４．３１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　３。
９，　１２．０Ｈｚ）、．４．１６（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　６。
０，　９．９Ｈｚ）、．３．７８（ｓ，３つのＨ、ＯＣＨ３）、．３．５４（ｄ，２つのＨ、Ｊ＝　５。
１Ｈｚ）、．２．３３−２．２４（ｍ，４つのＨ、ＣＨ２ＣＯＸ２）、．１．６７−１．５５（ｍ，６つのＨ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘｌ９）、．０．８９（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＮＭＲ　１３Ｃ（ＣＤＣ１３）ｄ；．１７３．９４，　１７３．６０，　１６６．６１，　１３０．６６，　１２８．８１，　７２．２６，　６４．８９，　６２．３５，　６１．５２，　５３．８９，　３４．５５，　３４．４５，　３４．２８，　３２．１１，　２９．８８，　２９．６６，　２９．６０，　２９．５５，　２９．４３，　２９．３１，　２８．７７，　２６．１０，　２５．０７，　２２．３０，　１４．．３０．ＨＲ−ＭＳ（ＥＩ）カルク。
Ｃ４２Ｈ７００８Ｌｉのための；．７０９．５２３１　；観察された７０９。
５２１１Ｍ／Ｚ．ドデカノイル−ｓｎグリセリン（６）が以下により用意された１−Ｏ−パルミトイル２−Ｏ−（１２−ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）。
５の溶液に（２．５ｇ、．４．２ｍｍｏｌ）、ａｄｄｅｄ２、３−ｄｉｃｈｌｏｒｏ−５、６−ｄｉｃｙａｎｏ−１、４−ベンゾキノンは、ジクロロメタン／水（１８：２０ｍＬ、１）において、あった（１．０４　ｇ、．４．６ｍｍｏｌ）。
共存系がＡｒ気圧の下で室温で１６時間かき混ぜられた抗力。
反作用は、ＮａＨＣ０３によって、いやされて、クロロホルム（２０のｍＬＸ３）によって、抜き出された。
結合の器官の一部が、残基を贈与するために蒸発する無水Ｎａ２ＳＯ４および溶剤を通じて乾燥した
それは、６を産出するために溶出剤としてエチルアセテ−ト−ｎ−ヘキサン（１：３）を運用しているカラムクロマトグラフィ（Ｓｉ０２）により浄化された（１．４ｇ、５５％）．ｌＨ　ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）ｄ；．６．３９（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
０，　１．２Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．１１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
０，　１０．８Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８２（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝１。
２，　１０．８Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．０７（ｍ，１
Ｈ、ＣＨ−２）、．４．３１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　４。
２，　１２．０Ｈｚ）、．４．２６（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　４。
２，　１３．２Ｈｚ）、．４．１３（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　６。
９Ｈｚ、ＣＨ２−Ｏ）、．３．７３（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　４。
２ＨｚのＣＨ２ＯＷ）、．２．３７−２．２３（ｍ，４つのＨ、ＣＨ２ＣＯＸ２）、．１．６７−１．６０（ｍ，６つのＨ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘｌ９）、．０．８７（ｔ，３つのＨ、Ｊ　＝　７。
２Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＨＲ−ＭＳ（ＥＩ）カルク。
Ｃ３４Ｈ６２０７Ｌｉのための；．５９０．００３５　；観察された５９０。
００２１　ＡＦＺ。
ｅｔｈｏｘｙｃａｒｂａｍａｔｅな（７）が調製されたドデカノイル−ｓｎ−グリセロ３−ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈｙｌｔｒｉｃｈｌｏｒｏが続く１−Ｏ−パルミトイル２−Ｏ−（１２−ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）。
氷−冷やされた溶液にのジクロロ（Ｎｂ、ｂ、ｂ−トリクロロエトキシカルボニル−２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）リン酸塩（１．５ｇ、．４．４ｍｍｏｌ）、６の溶液は、ジクロロメタン（１５ｍｌ）において、滴下された（１．２ｇ、．２．１ｍｍｏｌ）、そして、トリエチルアミン（１．８ｍＬ、．１３．５ｍｍｏｌ）ジクロロメタン（１０ｍｌ）の。
共存系がＡｒ気圧の下で室温で１６時間かき混ぜられた抗力。
水（１０ｍＬのｘ　３）によって、それから蒸留水に通される。
器官の一部は、ライトブラウン・シロップとして７を贈与するために蒸発する無水Ｎａ２ＳＯ４および溶剤を通じて乾燥した（１．３６ｇ、７１％），それは、高純度ｉｎ　１Ｈ　ＮＭＲ決定を興行して、ＴＬＣ上のモリブデンブル−実在を興行した（Ｒｆ　＝　０。
８つのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２０（６５）：２５　：１）．このように、それは純化のない次の反作用のために直接運用された。ｌ−Ｏ−ｐａｌｍｉｔｏｙｌ−２−０−（１２−ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）ドデカノイル−ｓｎ−グリセロ３−ホスホエタノ−ルアミン（２）は以下のプロトコルによれば調製された。
ｃｒｕｄｅ７の溶液に（１．０ｇ、．１．０ｍｍｏｌ）、Ｚｉｎｃ塵は、酢酸（１０ｍＬ）に添加された（２．０のｇ）。
共存系が室温で、２０時間かき混ぜられた抗力。
反応液は、ジエチルエ−テル（３０ｍＬ）で薄められて、シ−ライトをろ過した。
濾過液が、水および水溶ＮａＨＣ０３によって、蒸留水に通された
そして、　残基を贈与するために蒸発する乾燥した外側の無水のＮａ２ＳＯ４および溶剤、それは、２を産出するために溶出剤としてクロロホルム／メタノ−ル／水（６５：２５：４）を運用しているカラムクロマトグラフィ（ＳＯ２）により浄化された（０．４６２ｇ、６２％）．Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）ｄ；．８．５１（ｂｒ，３つのＨ、Ｎｕ３＋）、．６．３９（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
４，　１．０Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．１１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
４，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８２（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１。
０，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．２１（ｍ，１つのＨ、ＣＨ−２）、．４．３７（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ　＝　３。
０，　１２．３Ｈｚ）、．４．１４（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ２−Ｏ）、．４．１４−４．０５（ｍ，３つのＨ）、．３．９４（ｂｒ，２Ｈ、Ｃｌ２−０）、．３．１６（ｂｒ，２つのＨ、ＣＨ２−Ｎ）、．２．３３−２．２６（ｍ，４つのＨ、ＣＨ２ＣＯＸ２）、．１．６８−１．５７（ｍ，６つのＨ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘｌ９）、．０．８７（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ３）。
「Ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣ１３）ｄ：１７３．　５９，　１７３．２９，　１６６．４８，　１３０．５９，　１２８．８３，　７０．５０，　６４．８６，　６４．６３，　６４．０９，　６２．７５，　６２．４４，　４０．６１，　３４．４４，　３４．２６，　３２．１１，　２９．５０，　２９．４１，　２８．８１，　２７．７９，　２６．１４，　２５．１３，　２５．０７，　２２．８７，　１４．．３０．ＦＡＢＭＳ（ＡｔＺ）；．７２８．６　［　Ｍ＋Ｎａ　］　＋。モノフォニックのＡｃｒｙｌＰＥ　ＦＩＴＣ　（８）は、次のように調製された。
２の溶液に（５０ｍｇ
．０．０７１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミンは線量変更因子（５ｍＬ）に添加された（０．１ｍＬ、．０．７１ｍｍｏｌ）。
溶液が、３０分間かき混ぜられた
蛍光性イソチオシアネ−トの溶液（５５ｍｇ
．０．１４２ｍｍｏｌ）添加された。
共存系が暗闇に室温で１２時間かき混ぜられた抗力、残基を贈与するためにそれから減圧に集中する、それは、８を産出するために溶出剤としてクロロホルム／メタノ−ル（４：１）を運用しているカラムクロマトグラフィ（ＳｉＯ２）により浄化された（２６ｍｇ
６７％）．ＮＭＲ　１Ｈの（ＣＤＣ１３）ｄ；．８．２５（ｂｒ，１つのＨ、Ｐｈ），．７．２５（ｂｒ，１つのＨ、Ｐｈ），．７．１６−７．０８（ｍ，３つのＨ、Ｐｈ），．６．６８（ｍ，４つのＨ、Ｐｈ），．６．５９（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ　＝　１５。
６，　１．５
Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．０９（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ　＝　１５。
６，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８２（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１。
５，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．１７（ｍ，１つのＨ、ＣＨ−２）、．４．３４（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ　＝　３。
０，　１２．３Ｈｚ）、．４．１１（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ２−Ｏ）、．４．１３−４．０２（ｍ，３つのＨ）、．３．９４（ｂｒ，２Ｈ、ＣＨ２−Ｏ）、．３．３６（ｂｒ，２つのＨ、ＣＨ２−Ｎ）、．２．２７−２．２３（ｍ，４つのＨ、ＣＨ２ＣＯＸ２）、．１．６６−１．５４（ｍ，６
Ｈ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘ１９）、．０．８３（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＦＡＢＭＳ（Ｍ／Ｚ）；．１０９６．２　［　Ｍ＋１　］　＋。モノフォニックのＡｃｒｙｌＰＥ　Ｂｉｏｔｉｎ　（９）は、次のように調製された。
２の溶液に（５０ｍｇ
．０．０７１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミンは線量変更因子（５ｍＬ）に添加された（０．１ｍＬ、．０．７１ｍｍｏｌ）。
溶液が、３０分間かき混ぜられた
Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｏｂｉｏｔｉｎの溶液（３６ｍｇ
．０．１１ｍｍｏｌ）添加された。
共存系が室温で、２４時間かき混ぜられた抗力、残基を贈与するためにそれから減圧に集中する、それは、９を産出するために溶出剤としてメタノ−ルを運用しているセファデックスＬＨ−２０のずい柱により浄化された（１７ｍｇ
５３％）．ＮＭＲ　１Ｈの（ＣＤＣ１３　ＣＤ３０Ｄ）ｄ；．７．７９（ｂｒ．１つのＨ、ＮＨ），．７．００（ｂｒ，１つのＨ、ＮＨ），．６．３８（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
１，　１．０Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．１０（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
１，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８０（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１。
０，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．２１（ｍ，１つのＨ、ＣＨ−２）、．４．４８（ｍ，１つのＨ）、．４．３５（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　３。
０，　１２．３Ｈｚ）、．４．３２（ｍ，１つのＨ）、．４．１３（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　６。
６Ｈｚ、ＣＨ２−Ｏ）、．３．９７（ｂｒ，４つのＨ）、．３．２４（ｂｒ，１つのＨ）、．３．１３−３．０４（ｂｒ，３つのＨ）、．２．３１−２．２０（ｍ，５つのＨ、ＣＨ２ＣＯ）、．１．７０−１．５７（ｍ，６つのＨ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘ１９）、．０．８５（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　６。
９Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＦＡＢＭＳ（ＭＺ）：９３２　［　Ｍ＋１　］　＋。（１０）が調製されたモノフォニックのＡｃｒｙｌＰＥ　Ｂｉｏｔｉｎは、記述した：２の溶液に（２５ｍｇ
．０．０３５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミンは線量変更因子（５ｍＬ）に添加された（０．０５　ｍＬ、．０．３５ｍｍｏｌ）。
溶液が、３０分間かき混ぜられた
Ｎ−（ｅ−ｍａｌｅｉｍｉｄｏｃａｐｒｏｙｌ）−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅの溶液（２２ｍｇ
．０．１１ｍｍｏｌ）添加された。
共存系が室温で、２４時間かき混ぜられた抗力、残基を贈与するためにそれから減圧に集中する、それは、１０を産出するために溶出剤としてメタノ−ルを運用しているセファデックスＬＨ−２０のずい柱により浄化された（２３ｍｇ
７１％）．１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）ｄ；．７．１９（ｂｒ、１つのＨ、ＮＨ０、６。
７０（ｓ，２つのＨ、ＣＨ＝ＣＨ）、．６．３９（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
４，　１．２Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．６．１１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１７。
４，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．８１（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ＝　１。
２，　１０．５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）、．５．２１（ｍ，１つのＨ、ＣＨ−２）、．４．３７（ｄｄ，１つのＨ、Ｊ　＝　３。
０，　１２．３Ｈｚ）、．４．２９（ｔ，１つのＨ、Ｊ＝　６。
９Ｈｚ）、．４．１４（ｔ，２つのＨ、Ｊ＝　６。
９Ｈｚ、ＣＨ２−Ｏ）、．４．０７−４．０１（ｍ，３つのＨ）、．３．９５（ｂｒ，４つのＨ）、．３．１５（ｂｒ，５つのＨ）、．２．３３−２．１７（ｍ，４つのＨ、ＣＨ２ＣＯＸ２）、．１．６８−１．５７（ｍ，６つのＨ、ＣＨ２Ｘ３）、．１．２４（ｂｒ．　ｓ、３８のＨ、ＣＨ２Ｘｌ９）、．０．８７（ｔ，３つのＨ、Ｊ＝　６０６Ｈｚ、ＣＨ３）。
ＦＡＢＭＳ（ＡＬＺ）；．９０７．２　［　Ｍ＋１］＋．実例２。
Ｓｕｒｆａｃｅ　ＣｏｎｊｕｇａｔｉｏｎのためのＧｌｙにＧｌｙなＣｙｓ　Ｃ末端のリンカ−を有する先端を切ったＴＭ変異タンパク質
Ｃ末端（ＴＭ）での添加が大腸菌において、急送されたＧ−Ｇ　Ｃを有するＥＧＦのようなドメイン４、５、６だけからなるフラグメントが続く（イチジク１）トロンボモジュリン。
人間のトロンボモジュリン相補ＤＮＡ、ｐｕｃｌ９ＴＭ１５（継承番号６１３４８）、アメリカのＴｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから購入された
Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ．全身のＴＭからのＴＭ（残基１２００−１７０３）のためのデオキシリボ核酸挿入コ−ド付けは、プライマ５’−ＧＡＧＡＴＡＴＡＣＣＡＴＡＴＧＴＡＣＣＣＴＡＡＣＴＡＣＧＡＣＣＴＧＧＴＧＧＡ−３’ａｎｄ　５’ＣＧＣＧＣＣＴＣＧＡＧＴＴＡＡＴＴＡＡＴＴＡＧＣＡＡＣＣＡＣＣＴＡＴＧＡＧＣＡＡＧＣＣＣＧＡ　ＡＴＧＣ−３．ｐｒｉｍｅを運用しているＰＣＲ法により獲得された。（ＳＥＱ
エスＮｏ：１およびＳＥＱエスＮｏ：２，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）。
この５０４−塩基対ＮｄｅＩ、そして、ＴＭのＸｈｏＩフラグメントは、ａｐＥＴ２８ａ（＋）発現ベクトルにクロ−ンをつくられた（Ｎｏｖａｇｅｎ，マディソン、ＷＩ），ａＴ７１　ａｃ促進因子およびＮ末端Ｈｉｓ−ｔａｇ暗号配列の下流側。
結果として生じるプラスミド、ｐＥＴ２８ａＴＭｓ、以下のプライマを運用することを順番付けて確認された：５’−ＧＣＴＡＧＴＴＡＴＴＧＣＴＣＡＧＣＧＧ−３’ａｎｄ　５’−ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ−３’ｐｒｉｍｅ。（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：３およびＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）。
シ−ケンスがＧｅｎＢａｎｋで利用可能であることを符号化しているトロンボモジュリン；参照する、ｅ．　ｇ．、ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．　Ｊ０２９７３．ＰＥＴ２８ａＴＭＳプラスミドは、ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞に変化させられた（Ｎｏｖａｇｅｎ，マディソン、ＷＩ）　そして、３０を包含している２ｍｌのＬｕｒｉａブロ−スにおいて、発達する、０を渡されるＯＤ６００までの３７のＣでのｕｇ／ｍｌカナマイシン。
【００６６】
．６．培養は、４０Ｃオ−バ−ナイトで格納された。
次の朝、細胞は、遠心により集金されて、新しい２ｍｌのＬＢ／カンにおいて、再懸濁された。
この２ｍｌの培養は、ＯＤ６ｏｏ　Ｏｆ　０に再び育てられた５０ｍｌの培養に予防接種をするために用いた。
【００６７】
．６．培養が、１ｍＭの終濃度に対するＩＰＴＧの添加による起因性であって、合計５つの時間孵卵した
１ｍｌのアリクォットに解析のための各々の時間を持っていくこと。
誘導されたＴＭタンパク形質発現は、Ｈｉｓ−Ｔａｇ単クロ−ン抗体を運用しているＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動（１２％のアクリルアミド）および西のブロットによって、確かめられた（Ｎｏｖａｇｅｎ，７０７９６−４）（図２）。
純化学習が生来条件の下でａＮｉ−ＮＴＡ（Ｑｉａｇｅｎ）タンパク・ミニプレップ手続きを運用している５時間の誘起アリクォットに、正当に扱われた予備。簡潔に、細胞は細胞溶解緩衝において、再懸濁された（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのイミダゾ−ル、ペ−ハ−８。
０）　そして、１つのｍｇ／ｍｌ．に対するリソチ−ム
細胞は、ｖｏｒｔｅｘｅｄされた、そして、　セルデブリスは、小球をぶつけられた。
上澄は、４０Ｃで３０の最小値のためのＮｉ−ＮＴＡ樹脂に添加された、洗流緩衝によって、それから蒸留水に通される（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのイミダゾ−ル、ペ−ハ−８。
０）．タンパクは、溶出緩衝によって、溶出させられた（５０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４、３００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾ−ル、ペ−ハ−８。
０）．トロンボモジュリン活性が確かめられた（テ−ブル１）トロンボモジュリン活性アッセイにおいて、溶出させられたＴＭは、運用された。
実例３。
０のトロンボモジュリン・ラビット・トロンボモジュリンを包含しているリポソ−ム。
１％のルブロ−ルＰＸが、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからｏｂａｔｉｎｅｄされた
ポリカ−ボネ−ト濾過器がフィッシャ−から得る会社Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ。アクリルのＰＣ（１−パルミトイル−２−［　１２−（ａｃｒｙｌｏｙｌｏｘｙ）ドデカノイル］　ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ３ホスホコリンは、以前にＭａｒｒａほか（１９９７）にて説明したように、合成された。
＊　ＴＭは、次のように脂肪小胞に更改された：ＴＭが１０ｎＭの最終的なＴＭ濃縮を作るために加えられる前に、ＴＭがｆｒｅｅｚｅ−ｔｈａｗ−ｖｏｒｔｅｘｅｄされた３つの時間でなかったことを包含している１０ｍＭの脂質溶液。
それが連続して２０００および６００ナノメ−トルのポリカ−ボネ−ト濾過器で押し出される前に、溶液は穏やかに混和されて、３０のマイニュ−トのためにｖｏｒｔｅｘｅｄした。
ＡｃＰＣの光重合は、次のように（Ｏｒｂａｎほか（２０００）以前に）実行された。
Ａ　１０：１比率の［　ＡｃＰＣ　］：［エオシンＹ　］　ＴＭを包含しているＡｃＰＣに添加される
そして、　溶液は、ほぼ３ｃｍ離れたところに上記から周囲状況（ほぼ３０ｍＷ／ｃｍ２のランプ仕事率）の下で３０のマイニュ−トのために照らされた。
記録密度遠心がＳＷ　４０Ｔｉロ−タ−（ベックマン）に運び込まれたシュ−クロ−ス。
更改されたＴＭは、ＴＢＳにおいて、調製される６ｍＬの５−３０％非連続的蔗糖勾配の上に層にされて、１３０で１６ｈ遠心分離した、０００　ｘ　ｇ。
０のアリクォット。
６ｍＬはｍｉｃｒｏｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅチュ−ブに変形した、そして、各々の画分のＴＭ活性は決定された。
代替手続きの、２０ｍＭのナトリウム・リン酸緩衝液の１２ｍｍＭ脂質溶液の大単ラメラ小胞（ＬＵＶ）、ペ−ハ−７。
４，液体窒素を運用している４つの連続したｆｒｅｅｚｅ−ｔｈａｗ−ｖｏｒｔｅｘ回路および４５のＣ水浴によって、調製した。
ＴＭは、求められたモルのＴＭを作るために添加されるそれらであった：脂質比率、そして、それは、１からの範囲：１に対する８０００（６０ｎＭ　ＴＭ）；２０００、０００（６０ｎＭ　ＴＭ）。
それが２１回押し出される前に、脂質／ＴＭ溶液が室温で、少なくとも１つの時間間穏やかにｖｏｒｔｅｘｅｄされた
背中合わせの２０００ナノメ−トル２およびそれから６００ｎｉｎポリカ−ボネ−ト濾過器による各々。
実例４。
ＴＭ小胞融合および光重合
上記からの押し出された脂質／ＴＭ溶液は、１まで薄められた。
２０ｍＭのナトリウム・リン酸緩衝液を有する２ｍＭ、ペ−ハ−７。
４，そして、　最終的な塩濃度は、ｗａｔｅｒ．の７５０ｍＭのＮａＣｌを運用して仕遂げられた。
この溶液は、それからあったシンチレ−ション小びんがアルゴン１によって、嫌疑を晴らした１５分のＴｏのためのアルゴンによって、嫌疑を晴らされた。
ベシクル溶液の２ｍｌは、タ−ポリマ−−被覆円脚のグラスかぶせガラス（２０ｍｍの直径）により添加された。
かぶせガラスが、ベシクル溶液において、直ちに浸漬された
塗型上方へ。
小びんは、急速におおわれて、４０のＣオ−バ−ナイトで維持した。
コ−テングが外に運ばれた錯体が続くタ−ポリマ−のアクリルのＰＣの光重合：１０ｍＭのＥＹとしての共同イニシエ−タの原液、水の２２５ｍＭのトリエタノ−ルアミンおよび３７ｍＭのＶＰ、そして、　アンバ−徳利の格納する。
アルゴンによって、嫌疑を晴らされる手袋バッグの、イニシエ−タ原液のｄｉｓｒｅｄされた総計は、そうベシクルによって、溶かされるかぶせガラス基質を包含している小びんに添加されたその１２：モノマ−の１つの糧食：ＥＹは、仕遂げられた。
混合液は、それから約６ｃｍ離れたところに上記から周囲状況（直角定規につき約４０ｍＷのｃｍの光の強さ）の下で３０分間照らされた。
光重合ピリオドに続くこと、サンプルは、ポリメリゼ−ション培地から取られて、水によって、広く蒸留水に通された。
このプロトコルが、管によって、運用するために改められる
そこにおいて、内腔は、不活性雰囲気の関連した溶液によって、注がれる。
ラビットＴＭの活性は、人間のトロンビン−ラビットＴＭ錯体（ガルヴィンほか（１９８７の）下記参照）によって、人間プロテインＣの活性化を経てアクセスされた。
全ての活性化は、０を包含している執行されたｉｎＴＢＳであった。
３７での１％のＢＳＡおよび５ｍＭのＣａ２＋
Ｃ．　Ａ典型的アッセイ封じ込め１つのｎＭ　ＴＭ、５ｎＭ
トロンビン、そして、　タンパク質Ｃ．　Ａｃｔｉｖａｔｅｄされた１００ｎＭプロテインＣ濃縮は、０の方へそれらのアミド分解活性に基づいて決定された。２ｍＭのＳｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ　ＰＣａ基質（アメリカのＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａ、社）。
ラビットＴＭは、押出法を運用しているユニラメラ・リン脂質液胞に更改された。
ＴＭが、ｆｒｅｅｚｅ−ｔｈａｗ−ｖｏｒｔｅｘ回路の後、そして、追放の前にリン脂質溶液に添加された
活性減失から妨げる。
活性が蔗糖勾配の最上位で停止したＰＯＰＣ脂肪小胞と関連するために見つけられたＴＭの９５％以上；一方、蔗糖勾配の底で延期される自由なＴＭ（購入されるように）。
不必要な自由なＴＭから更改されたＴＭの区切りを作られる再結合のこの高準位、それは、押出法の利点のうちの１つである。
この手段の他の効果は追放ピリオド（２ｈ未満）の間のＴＭ活性減失が潅流ピリオド（ほぼ３６ｈ）の間、かなりそれ未満であるということである。そして、そのことは文献（ガルヴィンほか（１９８７の）Ｊ　Ｂｉｏｌ．化学２６２、２１９９）において、以前に報告した。
脂質会合体を包含しているＴＭの光重合。
ＴＭが、ＡｃＰＣにＰＯＰＣのモル比において、変化しているリン脂質液胞に更改された
ベシクルは、エオシンＹ／トリエタノ−ルアミンがある場合には、３つの０のマイニュ−トのための可視光に陳列された。
全ての小胞系、脂質組成（ＰＯＰＣ対ＡｃＰＣ）にかかわりなく、ポリメリゼ−ションより前のプロテインＣ活性化の見せられた類似した速度。
しかし
以下の光重合、プロテインＣ賦活率の適度の還元は、有名であった（図５）。
我々は、この効果が重合プロセスの間、生成されるフリ−ラジカルによって、一部のＴＭ分子の失活に帰されることができる。そして、触媒作用的効率がメンブレン擬態性錯体の範囲内で還元したＴＭ移動度のためにいくぶん減らされることができると思う。
我々は、触媒活性のＴＭがベシクルに組み込まれる時が濃度増大ｏｆｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｂｌｅな脂質の中で構成したことはよりすばらしい点に注意する（図６）。
【００６８】
【表１】
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【００６９】
【表２】
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【００７０】
【表３】
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【００７１】
【化５】
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【００７２】
【化６】
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【００７３】
【化７】
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【００７４】
【化８】
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【００７５】
【化９】
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【００７６】
【化１０】
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【００７７】
【化１１】
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【図面の簡単な説明】
【図１】
直列接触が１０日の水の貯蔵の上のＴＭを含有するｐｈｏｔｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄされた平らなメンブレン擬態性会合体の中で、曲げる図１つのトラック。
【図２】
図２は、４つのＣ．　ＳｔａｂｉｌｉｔｙでのＰＢＳの貯蔵が、プロテインＣを活性化する能力として測定されるの平らなｐｈｏｔｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚｅｄされたｍｅｍｂｒａｎｅｍｉｍｅｔｉｃな表面会合体の表面提携のＴＭが安定少なくとも５つ以上の日であることをである。
【図３】
図３は、トロンボモジュリン・タンパクの概略図である。現在の仕事において、運用される先端を切ったＴＭ分子の形質発現のためにできた一時変異を有する。ｐｏｌｙｈｉｓｔｉｄｉｎｅのＮ末端が、ａＮｄｅＩ部位での遺伝子操作手技および自然のＴＭタンパクの削除している２２３のアミノ酸によって、取り入れられたそして、　Ｃ末端（Ｇｌｙ−ＧｌｙなＣｙｓ）は、原因となられた、再び遺伝子操作でＸｈｏＩ部位で、２３のアミノ酸および３８のアミンの酸の細胞質のテイルのドメインを叩いているメンブレンを削除すること。
【図４】
図４は、ＴＭ表面濃度の増加と共にその表層の依存しているＡＰＣ活性増加である。そこにおいて、ＴＭは、メンブレン−擬態性表面会合体により共同される。
【図５】
図５は、プロテインＣ賦活率上の光重合時間の効果である。ＴＭは、ＰＯＰＣかアクリルのＰＣベシクルに１０ｎＭの表面濃度で取り入れられた。
【図６】
図６は、ＡｃＰＣ速度上の脂質組成の効果である。混合したＰＯＰＣ／ＡｃＰＣベシクルに、１０ｎＭの表面濃度で取り入れられるＴＭ　ｗｓ。光重合ピリオドが、３０分であった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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