(57)【要約】高血圧症、うっ血性心不全、硬変および腹水などの心臓血管障害を含めた循環障害の処置のための、療法有効量のエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬と療法有効量のβ−アドレナリン拮抗薬を含む併用療法を記載する。好ましいβ−アドレナリン拮抗薬は、高い力価および生物学的利用能をもつ化合物である。好ましいエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬は、９α−、１１α−置換エポキシ部分の存在を特徴とする２０−スピロキサンステロイド系化合物である。好ましい併用療法には、β−アドレナリン拮抗薬メトロポール（コハク酸（±）１−（イソプロピルアミノ）−３−［ｐ−（２−メトキシエチル）フェノキシ］−２−プロパノロール）およびアルドステロン受容体拮抗薬エポキシメクスレノンが含まれる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１量のアルドステロン受容体拮抗薬および第２量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬を含み、アルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬が一緒になって療法有効量のアルドステロン受容体拮抗薬およびβ−アドレナリン作動性拮抗薬を構成する組合わせ。
【請求項２】
アルドステロン受容体拮抗薬がエポキシ含有化合物から選択される、請求項１に記載の組合わせ。
【請求項３】
エポキシ含有化合物が２０−スピロキサン化合物のステロイド核の”Ｃ”環に縮合したエポキシ部分を有する、請求項２に記載の組合わせ。
【請求項４】
２０−スピロキサン化合物が９ａ−、１１ａ−置換エポキシ部分の存在を特徴とする、請求項３に記載の組合わせ。
【請求項５】
エポキシ含有化合物が下記のものよりなる群から選択される、請求項２に記載の組合わせ：
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ、ｇ−ラクトン、メチルエステル、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−ジメチルエステル、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸、９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、ｇ−ラクトン、（６ｂ，７ｂ，１１ｂ，１７ｂ）−；
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、７−（１−メチルエチル）エステル、一カリウム塩、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、７−メチルエステル、一カリウム塩、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−１，４，６−トリエン−２１−カルボン酸、９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、ｇ−ラクトン、（６ａ，７ａ，１１．ａ）−；
３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸、９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、メチルエステル、（６ａ，７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸、９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、一カリウム塩、（６ａ，７ａ，１１ａ，１７ａ）−；
３’Ｈ−シクロプロパ［６，７］プレグナ−４，６−ジエン−２１−カルボン酸、９，１１−エポキシ−６，７−ジヒドロ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、ｇ−ラクトン、（６ａ，７ａ，１１ａ．，１７ａ）−；
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、ｇ−ラクトン、エチルエステル、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−；および
プレグン−４−エン−７，２１−ジカルボン酸、９，１１−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−、ｇ−ラクトン、１−メチルエチルエステル、（７ａ，１１ａ，１７ａ）−。
【請求項６】
エポキシ−ステロイド型化合物がエプレレノンである、請求項４に記載の組合わせ。
【請求項７】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ブフノロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブクモロール、ブシンドロール、ブニトロロール、ブトフィロロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、インデノロール、ラベタロール、レボプロロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トプロール、およびビスケニットよりなる群から選択される、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項８】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、Ａｃｃ　９３６９、ＡＭＯ−１４０、ベタキソロール、カプシノロール、カラゾロール、ＣＰ−３３１６８４、ジプラフェノン、エルゼンチリド、エスモロール、エスプロロール、Ｆｒ−１７２５１６、ＩＳＶ−２０８、Ｌ−６５３３２８、ラニオロール、レボブノロール、ＬＭ−２６１６、ニプラジロール、ファーマプロジェクトＮｏ　５２７９、Ｓ−アテノロール、ＳＢ−２２６５５２、ＳＲ−５８８９４Ａ、ＳＲ−５９２３０Ａ、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、ＴＺＣ−５６６５、ＵＫ−１７４５、キサモテロール、およびＹＭ−４３０よりなる群から選択される、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項９】
さらに、β−アドレナリン作動性拮抗薬とエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬が約１：１〜約１：２０のβ−アドレナリン作動性拮抗薬−対−アルドステロン受容体拮抗薬の重量比範囲で組合わせ中に存在することを特徴とする、請求項７に記載の組合わせ。
【請求項１０】
重量比範囲が約１：５〜約１：１５である、請求項９に記載の組合わせ。
【請求項１１】
重量比範囲が約１：１０である、請求項１０に記載の組合わせ。
【請求項１２】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がカルベジロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１３】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がメトプロロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１４】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がビソプロロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１５】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がブシンドロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１６】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がプロプラノロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１７】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がエスモロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１８】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がアセブトロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項１９】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がソタロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項２０】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がラベタロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項６に記載の組合わせ。
【請求項２１】
アルドステロン拮抗薬がスピロノラクトンである、請求項１に記載の組合わせ。
【請求項２２】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ブフノロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブクモロール、ブシンドロール、ブニトロロール、ブトフィロロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、インデノロール、ラベタロール、レボプロロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トプロール、およびビスケニットよりなる群から選択される、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項２３】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、Ａｃｃ　９３６９、ＡＭＯ−１４０、ベタキソロール、カプシノロール、カラゾロール、ＣＰ−３３１６８４、ジプラフェノン、エルゼンチリド、エスモロール、エスプロロール、Ｆｒ−１７２５１６、ＩＳＶ−２０８、Ｌ−６５３３２８、ラニオロール、レボブノロール、ＬＭ−２６１６、ニプラジロール、ファーマプロジェクトＮｏ　５２７９、Ｓ−アテノロール、ＳＢ−２２６５５２、ＳＲ−５８８９４Ａ、ＳＲ−５９２３０Ａ、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、ＴＺＣ−５６６５、ＵＫ−１７４５、キサモテロール、およびＹＭ−４３０よりなる群から選択される、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項２４】
さらに、β−アドレナリン作動性拮抗薬とエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬が約１：１〜約１：２０のβ−アドレナリン作動性拮抗薬−対−アルドステロン受容体拮抗薬の重量比範囲で組合わせ中に存在することを特徴とする、請求項２２に記載の組合わせ。
【請求項２５】
重量比範囲が約１：５〜約１：１５である、請求項２４に記載の組合わせ。
【請求項２６】
重量比範囲が約１：１０である、請求項２５に記載の組合わせ。
【請求項２７】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がカルベジロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項２８】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がメトロポロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項２９】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がビソプロロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３０】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がブシンドロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３１】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がプロプラノロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３２】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がエスモロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３３】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がアセブトロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３４】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がソタロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３５】
β−アドレナリン作動性拮抗薬がラベタロールまたはその医薬的に許容できる塩を含む、請求項２１に記載の組合わせ。
【請求項３６】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ブフノロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブクモロール、ブシンドロール、ブニトロロール、ブトフィロロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、クロラノロール、インデノロール、ラベタロール、レボプロロール、メピンドロール、メチプラノロール、メトプロロール、ナドロール、ネビボロール、ニフェナロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、トプロール、およびビスケニットよりなる群から選択される、請求項１に記載の組合わせ。
【請求項３７】
β−アドレナリン作動性拮抗薬が、Ａｃｃ　９３６９、ＡＭＯ−１４０、ベタキソロール、カプシノロール、カラゾロール、ＣＰ−３３１６８４、ジプラフェノン、エルゼンチリド、エスモロール、エスプロロール、Ｆｒ−１７２５１６、ＩＳＶ−２０８、Ｌ−６５３３２８、ラニオロール、レボブノロール、ＬＭ−２６１６、ニプラジロール、ファーマプロジェクトＮｏ　５２７９、Ｓ−アテノロール、ＳＢ−２２６５５２、ＳＲ−５８８９４Ａ、ＳＲ−５９２３０Ａ、タリノロール、テルタトロール、チリソロール、ＴＺＣ−５６６５、ＵＫ−１７４５、キサモテロール、およびＹＭ−４３０よりなる群から選択される、請求項１に記載の組合わせ。
【請求項３８】
アルドステロン受容体拮抗薬がエプレレノンである、請求項３６に記載の組合わせ。
【請求項３９】
アルドステロン受容体拮抗薬がエプレレノンである、請求項３７に記載の組合わせ。
【請求項４０】
アルドステロン受容体拮抗薬がスピロノラクトンである、請求項３６に記載の組合わせ。
【請求項４１】
アルドステロン受容体拮抗薬がスピロノラクトンである、請求項３７に記載の組合わせ。
【請求項４２】
第１量のアルドステロン受容体拮抗薬および第２量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬を含み、アルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬が一緒になって療法有効量のアルドステロン受容体拮抗薬およびβ−アドレナリン作動性拮抗薬を構成する医薬組成物。
【請求項４３】
アルドステロン受容体拮抗薬がエポキシ含有化合物から選択される、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
エポキシ含有化合物が２０−スピロキサン化合物のステロイド核の”Ｃ”環に縮合したエポキシ部分を有する、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項４５】
２０−スピロキサン化合物が９ａ−、１１ａ−置換エポキシ部分の存在を特徴とする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
エポキシ−ステロイド型化合物がエプレレノンである、請求項４５に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
アルドステロン受容体拮抗薬がスピロノラクトンである、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
心臓血管障害を処置するための療法であって、そのような障害を生じやすいかまたは罹患している対象に、第１量のアルドステロン受容体拮抗薬および第２量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬を投与し、その際アルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬が一緒になって療法有効量のアルドステロン受容体拮抗薬およびβ−アドレナリン作動性拮抗薬を構成する療法。
【請求項４９】
心臓血管障害が、高血圧症、うっ血性心不全、硬変および腹水よりなる群から選択される、請求項４８に記載の療法。
【請求項５０】
心臓血管障害が高血圧症である、請求項４９に記載の療法。
【請求項５１】
心臓血管障害がうっ血性心不全である、請求項４９に記載の療法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
高血圧症、うっ血性心不全、心臓肥大、硬変および腹水などの心臓血管疾患を含めた循環障害の処置に使用するための、エポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬の組合わせを記載する。特に重要なものは、エポキシメクスレノン（ｅｐｏｘｙｍｅｘｒｅｎｏｎｅ）などのエポキシ含有ステロイド型アルドステロン受容体拮抗化合物とβ−アドレナリン作動性拮抗化合物を併用する療法である。
【０００２】
発明の背景
心筋（または心）不全は、過去の心筋梗塞、高血圧症に関連する心臓疾患、または原発性心筋症の結果のいずれであっても、健康上重大な世界的規模の問題である。症候性心不全の発症率はここ数十年にわたって増加し続けている。
【０００３】
臨床用語で非代償性心不全は、うっ血臓器や低潅流組織から生じてうっ血性心不全（ＣＨＦ）症候群を形成する一群の徴候および症状よりなる。うっ血の多くは、静脈圧の上昇、および食物によるナトリウム（Ｎａ＋）摂取と比較して不適正なＮａ＋排出により起き、アルドステロン（ＡＬＤＯ）の循環レベルと重要な関連をもつ。Ｎａ＋の異常貯留は、ＡＬＤＯ受容体部位がある遠位尿細管後部および皮質集合管を含めたネフロン全体の尿細管上皮細胞により行われる。
【０００４】
ＡＬＤＯは身体で最も効力の高いミネラルコルチコイドホルモンである。ミネラルコルチコイドという用語が意味するように、このステロイドホルモンは無機物代謝活性をもつ。それは腎臓だけでなく、下部消化管ならびに唾液腺および汗腺からのＮａ＋再吸収をも促進する。これらはそれぞれ典型的なＡＬＤＯ応答組織である。ＡＬＤＯは、カリウム（Ｋ＋）およびマグネシウム（Ｍｇ＋）の排出と引き換えにＮａ＋および水の再吸収を調節する。
【０００５】
ＡＬＤＯは上皮細胞以外でも応答を引き起こす。これらの応答は食物によるＮａ＋摂取と比較して不適正な血漿ＡＬＤＯレベルの長期的上昇により誘発され、心臓血管系の構造に有害な結果をもたらす可能性がある。このようにＡＬＤＯは多くの理由で進行性心筋障害に関与する可能性をもつ。
【０００６】
多数の因子がＡＬＤＯの合成と代謝を調節し、これらの多くが心筋障害をもつ患者において作動する。これらには、ＡＬＤＯ合成を促進するレニン依存性およびレニン非依存性の因子（たとえばＫ＋、ＡＣＴＨ）が含まれる。肝血流は、循環ＡＬＤＯのクリアランスを調節することによりその血漿濃度の決定を補助する。これは、心拍出量および肝血流の減少を特色とする重要な心不全因子である。
【０００７】
レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）は、血圧／量ホメオスタシスに関与しかつ高血圧症の発症にも関与する、ホルモン機序のひとつである。レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系が活性化されると腎臓の傍糸球体細胞からのレニン分泌が開始し、この系の一次活性種であるアンギオテンシンＩＩの形成が最高に達する。オクタペプチドであるこのアンギオテンシンＩＩは効力の高い血管収縮物質であり、他の生理学的作用、たとえばアルドステロン分泌の刺激、ナトリウムおよび体液の貯留促進、レニン分泌の阻害、交感神経系活性の増大、バソプレッシン分泌の刺激、正の心臓変力作用発生、ならびに他のホルモン系の調節をも生じる。
【０００８】
アルドステロンのほか、β−アドレナリン作動性受容体も心不全に重要な役割をもつ。血管および心臓の両組織において、アドレナリン作動性受容体へのカテコールアミンの結合により細胞が刺激されると筋肉細胞の収縮が起きる。末梢組織ではこれにより全身性高血圧が生じる。β−アドレナリン作動性拮抗薬はこの作用を遮断して血管を弛緩させ、血圧を低下させ（抗高血圧作用）、心臓が血液を送り出すのに要する力を低下させる。しかし、β−アドレナリン作動性拮抗薬は心臓の収縮力をも低下させる（負の変力作用）ので、心不全処置のための好ましい薬物でない場合が多い。
【０００９】
多数のアルドステロン受容体遮断薬が知られている。たとえばスピロノラクトンは、アルドステロンの結合を競合阻害することによりミネラルコルチコイド受容体レベルで作用する薬物である。このステロイド系化合物は、水腫を軽減するために、また本態性高血圧症および原発性高アルドステロン症を治療するために、腎臓の遠位尿細管におけるアルドステロン依存性ナトリウム輸送を遮断するのに用いられている［Ｆ．Ｍａｎｔｅｒｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，４５（Ｓｕｐｐｌ．１），２１９ｓ−２２４ｓ（１９７３）］。スピロノラクトンは他の高アルドステロン関連疾患、たとえば肝硬変およびうっ血性心不全の治療にも一般に用いられている［Ｆ．Ｊ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｌｄａｃｔｏｎｅ；Ｓｐｉｒｏｎｏｌａｃｔｏｎｅ：Ａ　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｒｅｖｉｅｗ，Ｓｅａｒｌｅ，ニューヨーク（１９７８）］。スピロノラクトン不耐性患者には、硬変関連腹水の治療のために１日１ｍｇから４００ｍｇまで漸増する量のスピロノラクトン［すなわち１ｍｇ／日、５ｍｇ／日、２０ｍｇ／日］を投与する［Ｐ．Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒ　ｅｔ　ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｒｅｇ．Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｐｒｏｃ．，７（４），３４３−３４５（１９８６年７−８月）］。心筋線維症の発症はアンギオテンシンＩＩおよびアルドステロン両方の循環レベルに感受性であること、ならびにアルドステロン拮抗薬であるスピロノラクトンは動物モデルにおいて心筋線維症を予防することが認められており、これによりアルドステロンはコラーゲン過剰沈着に関連づけられる［Ｄ．Ｋｌｕｇ　ｅｔ　ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，７１（３），４６Ａ−５４Ａ（１９９３）］。スピロノラクトンは動物モデルにおいて左心室肥大の発症および高血圧症の存在に関係なく心筋線維症を予防することが示された［Ｃ．Ｇ．Ｂｒｉｌｌａ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，２５（５），５６３−５７５（１９９３）］。利尿薬誘発性低カリウム血症の治療には、経口投与カリウム補充または他のカリウム節約療法が不適切と思われる場合、１日２５〜１００ｍｇのスピロノラクトンを用いる［Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’　Ｄｅｓｋ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，第４６版，ｐ．２１５３，Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ　Ｉｎｃ．，ニュージャージー州モントベール（１９９２）］。
【００１０】
他の系列のステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬の例は、エポキシ含有スピロノラクトン誘導体である。たとえばＵＳＰ４，５５９，３３２（Ｇｒｏｂらに交付）には、利尿薬として有用なアルドステロン拮抗薬としての９ａ，１１ａ−エポキシ含有スピロノラクトン誘導体が記載されている。スピロノラクトンと比較したこれらの９ａ，１１ａ−エポキシステロイドの内分泌作用が評価された［Ｍ．ｄｅ　Ｇａｓｐａｒｏ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２４０（２），６５０−６５６（１９８７）］。
【００１１】
発明の概要
療法有効量のエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬および療法有効量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬を含む併用療法は、高血圧症、うっ血性心不全、硬変および腹水などの心臓血管障害を含めた循環障害の処置に有用である。
【００１２】
”β−アドレナリン作動性拮抗薬”という句には、種々の人体組織にあるアドレナリン作動性受容体と相互作用してそれを遮断する能力をもつ１以上の化合物または薬剤が含まれるものとする。この受容体は、１以上の生物学的機能または事象、たとえば血圧レベルまたは心筋収縮の仲介に関連する。
【００１３】
”エポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬”という句には、ステロイド型の核を特徴としかつエポキシ部分がこの核に結合した１以上の薬剤または化合物であって、受容体部位におけるアルドステロン自体の作用の競合阻害薬としてアルドステロン受容体に結合し、これにより受容体仲介によるアルドステロン活性を調節する薬剤または化合物が含まれるものとする。
【００１４】
β−アドレナリン作動性拮抗薬およびエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬の使用において”併用療法”という句には、薬物併用の有益な効果をもたらす方式で各タイプの化合物を逐次投与することが含まれるものとし、かつ拮抗薬を実質的に同時に、たとえば固定比率の有効成分を含む単一カプセル、または各拮抗薬について別個の複数のカプセル中において共投与することが含まれるものとする。
【００１５】
”療法有効”という句は、併用療法に用いる各拮抗薬について、たとえばうっ血性心不全の進行を遅延または阻止することにより心臓充足度を改善して高血圧を降下させるという目標を達成する量を表わすものとする。
【００１６】
β−アドレナリン作動性拮抗薬とＡＬＤＯ拮抗薬の組合わせについて、これらの薬剤は約１：０．５〜約１：２０のβ−アドレナリン作動性拮抗薬−対−アルドステロン受容体拮抗薬の重量比範囲で併用される。これら２薬剤の好ましい範囲（β−アドレナリン作動性拮抗薬−対−ＡＬＤＯ拮抗薬）は約１：１〜約１：１５であり、より好ましい範囲は約１：１〜約１：５であり、最終的にはβ−アドレナリン作動性拮抗薬とＡＬＤＯ拮抗薬の選択に依存する。
【００１７】
発明の詳細な記述
併用療法に用いるのに適したエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗化合物は、エポキシ型の部分で置換されたステロイド核をもつ化合物からなる。”エポキシ型”部分という用語は、２個の炭素原子間の橋として酸素原子をもつことを特色とするいかなる部分をも含むものとし、その例には下記の部分が含まれる：
【００１８】
【化１】
2004511435.tif 000002
【００１９】
”エポキシ−ステロイド型”という句に用いる”ステロイド型”という用語は、一般的な”Ａ”、”Ｂ”、”Ｃ”および”Ｄ”環をもつシクロペンテノフェナントレン部分により与えられる核を表わす。エポキシ型の部分は結合可能または置換可能な任意の位置でシクロペンテノフェナントレン核に結合することができる；すなわちステロイド核の環の１つに縮合することができる；あるいはこの部分が環系の環員子上に置換していてもよい。”エポキシ−ステロイド型”という句には、１個または複数個のエポキシ型の部分が結合したステロイド核が含まれるものとする。
【００２０】
併用療法に用いるのに適したエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬には、エポキシ型の部分がステロイド核の”Ｃ”環に縮合した化合物ファミリーが含まれる。特に好ましいものは、９ａ，１１ａ−置換エポキシ部分の存在を特色とする２０−スピロキサン化合物である。下記の表１に、併用療法に使用できる一連の９ａ，１１ａ−エポキシ−ステロイド化合物を記載する。これらのエポキシステロイドはＵＳＰ４，５５９，３３２（１９８５年１２月１７日にＧｒｏｂらに交付）に記載の方法で製造できる。
【００２１】
【表１】
2004511435.tif 000003
【００２２】
【表２】
2004511435.tif 000004
【００２３】
【表３】
2004511435.tif 000005
【００２４】
【表４】
2004511435.tif 000006
【００２５】
【表５】
2004511435.tif 000007
【００２６】
【表６】
2004511435.tif 000008
【００２７】
他の態様において、アルドステロン受容体拮抗薬はエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬以外のもの、たとえばスピロノラクトンである。エポキシを含まないそのようなスピロノラクトン型アルドステロン受容体拮抗化合物はＷＯ９６／４０２５８に開示されており、これを本明細書に援用する。対応する態様には、アルドステロン受容体拮抗薬がエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬以外のものである医薬組成物、処置方法およびキットが含まれる。
【００２８】
下記の表２に、併用療法に使用できるβ−アドレナリン作動性拮抗化合物を記載する。表２に挙げた公開特許明細書それぞれに、関連のβ−アドレナリン作動性拮抗化合物の化学的製造方法およびそれらの化合物の生物学的特性が記載されている。これらの特許明細書それぞれの内容を本明細書に援用する。
【００２９】
【表７】
2004511435.tif 000009
【００３０】
【表８】
2004511435.tif 000010
【００３１】
【表９】
2004511435.tif 000011
【００３２】
【表１０】
2004511435.tif 000012
【００３３】
１態様においてβ−アドレナリン作動性拮抗薬は、アセブトロール（ａｃｅｂｕｔｏｌｏｌ）、アルプレノロール（ａｌｐｒｅｎｏｌｏｌ）、アモスラロール（ａｍｏｓｕｌａｌｏｌ）、アロチノロール（ａｒｏｔｉｎｏｌｏｌ）、アテノロール（ａｔｅｎｏｌｏｌ）、ブフノロール（ｂｕｆｕｎｏｌｏｌ）、ベバントロール（ｂｅｖａｎｔｏｌｏｌ）、ビソプロロール（ｂｉｓｏｐｒｏｌｏｌ）、ボピンドロール（ｂｏｐｉｎｄｏｌｏｌ）、ブクモロール（ｂｕｃｕｍｏｌｏｌ）、ブシンドロール（ｂｕｃｉｎｄｏｌｏｌ）、ブニトロロール（ｂｕｎｉｔｒｏｌｏｌ）、ブトフィロロール（ｂｕｔｏｆｉｌｏｌｏｌ）、カルテオロール（ｃａｒｔｅｏｌｏｌ）、カルベジロール（ｃａｒｖｅｄｉｌｏｌ）、セリプロロール（ｃｅｌｉｐｒｏｌｏｌ）、クロラノロール（ｃｌｏｒａｎｏｌｏｌ）、インデノロール（ｉｎｄｅｎｏｌｏｌ）、ラベタロール（ｌａｂｅｔａｌｏｌ）、レボプロロール（ｌｅｖｏｐｒｏｌｏｌ）、メピンドロール（ｍｅｐｉｎｄｏｌｏｌ）、メチプラノロール（ｍｅｔｉｐｒａｎｏｌｏｌ）、メトプロロール（ｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ）、ナドロール（ｎａｄｏｌｏｌ）、ネビボロール（ｎｅｂｉｖｏｌｏｌ）、ニフェナロール（ｎｉｆｅｎａｌｏｌ）、オクスプレノロール（ｏｘｐｒｅｎｏｌｏｌ）、ペンブトロール（ｐｅｎｂｕｔｏｌｏｌ）、ピンドロール（ｐｉｎｄｏｌｏｌ）、プロプラノロール（ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ）、ソタロール（ｓｏｔａｌｏｌ）、チモロール（ｔｉｍｏｌｏｌ）、トプロール（ｔｏｐｒｏｌ）、およびビスケニット（ｖｉｓｋｅｎｉｔ）よりなる群から選択される。
【００３４】
他の態様においてβ−アドレナリン作動性拮抗薬は、Ａｃｃ　９３６９、ＡＭＯ−１４０、ベタキソロール（ｂｅｔａｘｏｌｏｌ）、カプシノロール（ｃａｐｓｉｎｏｌｏｌ）、カラゾロール（ｃａｒａｚｏｌｏｌ）、ＣＰ−３３１６８４、ジプラフェノン（ｄｉｐｒａｆｅｎｏｎｅ）、エルゼンチリド（ｅｒｓｅｎｔｉｌｉｄｅ）、エスモロール（ｅｓｍｏｌｏｌ）、エスプロロール（ｅｓｐｒｏｌｏｌ）、Ｆｒ−１７２５１６、ＩＳＶ−２０８、Ｌ−６５３３２８、ラニオロール（ｌａｎｉｏｌｏｌ）、レボブノロール（ｌｅｖｏｂｕｎｏｌｏｌ）、ＬＭ−２６１６、ニプラジロール（ｎｉｐｒａｄｉｌｏｌ）、ファーマプロジェクト（Ｐｈａｒｍａｐｒｏｊｅｃｔ）Ｎｏ　５２７９、Ｓ−アテノロール（Ｓ−ａｔｅｎｏｌｏｌ）、ＳＢ−２２６５５２、ＳＲ−５８８９４Ａ、ＳＲ−５９２３０Ａ、タリノロール（ｔａｌｉｎｏｌｏｌ）、テルタトロール（ｔｅｒｔａｔｏｌｏｌ）、チリソロール（ｔｉｌｉｓｏｌｏｌ）、ＴＺＣ−５６６５、ＵＫ−１７４５、キサモテロール（ｘａｍｏｔｅｒｏｌ）、およびＹＭ−４３０よりなる群から選択される。
【００３５】
本発明の併用療法は、心臓血管障害、たとえば高血圧症、うっ血性心不全、心筋線維症および心臓肥大を含めた多様な循環障害の処置に有用である。この併用療法は補助療法と共に用いることもできる。たとえば高血圧症の処置を補助するために、この併用療法を他の薬物、たとえば利尿薬と組み合わせて使用できる。１種類以上のβ−アドレナリン作動性拮抗薬と１種類以上のアルドステロン受容体拮抗薬から選択される３種類以上の化合物を含む併用療法を、補助療法と共に用いることもできる。
【００３６】
先の研究で、β−アドレナリン作動性拮抗薬は高血圧症の処置に有効に使用できることが示された。心不全の場合、拍動している心臓に対する圧力負荷がこの作用により低下し、循環効率が改善される。ただし心筋に対するこの作用は収縮をも低下させ、これにより心臓が血液を拍出する能力が低下し、こうしてさらに心不全が増悪する。この機序および他の機序の結果、β−アドレナリン作動性拮抗薬は心臓に対して有害な作用をもち、患者の症状を悪化させ、死亡率を高める可能性がある。これは、患者が収縮期機能不全を伴う場合、特に問題となる。さらに、β−アドレナリン作動性拮抗薬の使用により代謝が変化し、種々の神経ホルモン因子が活性化される可能性がある。
【００３７】
心不全患者ではアルドステロンレベルも上昇する。既に述べたアルドステロンの病因性作用のほか、アルドステロンは心筋におけるカテコールアミンの取込みおよび排出を阻害することも認められた。その結果、心臓に対するアドレナリン作動性刺激が高まり、このため心不全がさらに進行する。そのような患者の治療にアルドステロン拮抗薬を用いると、カテコールアミンの取込み速度が上昇し、心臓内濃度が高まる。
【００３８】
したがって、エポキシステロイド型アルドステロン拮抗薬、たとえばエプレレノン（ｅｐｌｅｒｅｎｏｎｅ）（これに限定されない）を併用すると、これら２種類の有効化合物の相互作用によりβ−アドレナリン作動性拮抗薬の病因性結果が軽減される。
【００３９】
定義
”ヒドリド（ｈｙｄｒｉｄｏ）”という用語は、単一水素原子（Ｈ）を表わす。このヒドリド基は、たとえば酸素原子に結合してヒドロキシル基を形成してもよい；あるいは他の例として１個のヒドリド基が炭素原子に結合して下記の基を形成してもよい：
【００４０】
【化２】
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【００４１】
あるいは他の例として２個のヒドリド原子が炭素原子に結合して−ＣＨ２−基を形成してもよい。”アルキル”という用語を単独で、または”ハロアルキル”および”ヒドロキシアルキル”など他の用語中で用いる場合、”アルキル”という用語には１〜約２０個の炭素原子、または好ましくは１〜約１２個の炭素原子をもつ直鎖基または分枝鎖基が含まれる。より好ましいアルキル基は、１〜約１０個の炭素原子をもつ”低級アルキル”基である。最も好ましいものは、１〜約５個の炭素原子をもつ低級アルキル基である。”シクロアルキル”という用語には、３〜約１０個の環炭素原子、好ましくは３〜約６個の炭素原子をもつ環状基、たとえばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが含まれる。”ハロアルキル”という用語には、いずれか１個以上のアルキル炭素原子が１個以上のハロ基、好ましくはブロモ、クロロおよびフルオロから選択されるもので置換された基が含まれる。”ハロアルキル”という用語には特に、モノハロアルキル、ジハロアルキルおよびポリハロアルキル基が含まれる。たとえばモノハロアルキル基は、その基中にブロモ、クロロまたはフルオロ原子をもつ。ジハロアルキルおよびポリハロアルキル基は２個以上の同一ハロ基で置換されていてもよく、あるいは異なるハロ基の組合わせをもつこともできる。たとえばジハロアルキル基は、２個のフルオロ原子（たとえばジフルオロメチルおよびジフルオロブチル基）、または２個のクロロ原子（たとえばジクロロメチル基）、または１個のフルオロ原子と１個のクロロ原子（たとえばフルオロ−クロロメチル基）をもつことができる。ポリハロアルキルの例は、トリフルオロメチル、１，１−ジフルオロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、ペルフルオロエチルおよび２，２，３，３−テトラフルオロプロピル基である。”ジフルオロアルキル”という用語には、いずれか１個以上のアルキル基炭素原子において置換した２個のフルオロ原子をもつアルキル基が含まれる。”アルキロール”および”ヒドロキシアルキル”という用語には、１〜約１０個の炭素原子をもち、そのいずれかが１個以上のヒドロキシル基で置換された直鎖または分枝鎖アルキル基が含まれる。”アルケニル”という用語には、２〜約２０個の炭素原子、好ましくは３〜約１０個の炭素原子をもち、かつ少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む直鎖基または分枝鎖基が含まれ、この炭素−炭素二重結合はそのアルケニル部分内においてシスまたはトランスのいずれの幾何学的構造をもつこともできる。”アルキニル”という用語には、２〜約２０個の炭素原子、好ましくは２〜約１０個の炭素原子をもち、かつ少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む直鎖基または分枝鎖基が含まれる。”シクロアルケニル”という用語には、３〜約１０個の環炭素原子をもち、隣接する環炭素原子を伴う１以上の二重結合を含む環状基が含まれる。”アルコキシ”および”アルコキシアルキル”という用語には、それぞれ炭素原子１〜約１０個のアルキル部分をもつ、オキシを含む直鎖基または分枝鎖基、たとえばメトキシ基が含まれる。”アルコキシアルキル”という用語には、アルキル基に結合した２または３個のアルコキシ基をもち、すなわちモノアルコキシアルキルおよびジアルコキシアルキル基を形成したアルキル基も含まれる。”アルコキシ”および”アルコキシアルキル”基はさらに、１個以上のハロ原子、たとえばフルオロ、クロロまたはブロモで置換されて、ハロアルコキシまたはハロアルコキシアルキル基を形成していてもよい。”アルキルチオ”という用語には、二価硫黄原子に結合した１〜約１０個の炭素原子をもつ直鎖または分枝鎖アルキル基を含む基、たとえばメチルチオ基が含まれる。好ましいアリール基は、１、２または３個のベンゼン環からなるものである。”アリール”という用語には、芳香族基、たとえばフェニル、ナフチルおよびビフェニルが含まれる。”アラルキル”という用語には、アリール置換アルキル基、たとえばベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、フェニルエチル、フェニルブチルおよびジフェニルエチルが含まれる。”ベンジル”と”フェニルメチル”という用語は互換性をもつ。”フェナルキル”と”フェニルアルキル”という用語は互換性をもつ。”フェナルキル”の例は”フェネチル”であり、これは”フェニルエチル”と互換性をもつ。”アルキルアリール”、”アルコキシアリール”および”ハロアリール”という用語はそれぞれ、１個以上の”アルキル”、”アルコキシ”および”ハロ”基がそれぞれ”アリール”核、たとえばフェニル部分上に置換したものを表わす。”アリールオキシ”および”アリールチオ”という用語は、それぞれ酸素または硫黄原子をもち、これを介してその基が核に結合したアリール基により与えられる基を表わし、その例はフェノキシおよびフェニルチオである。”スルフィニル”および”スルホニル”という用語は、単独で用いた場合または他の用語と連結して用いた場合のいずれであっても、それぞれ二価の基ＳＯおよびＳＯ２を表わす。”アラルコキシ”という用語は、単独でも他の用語中にあっても、アリール基がアルコキシ基に結合して、たとえばベンジルオキシを形成したものを表わす。”アシル”という用語は、単独で用いた場合またはアシルオキシなど他の用語中にある場合のいずれであっても、有機酸からヒドロキシルを除いた後の残基により与えられる基を表わし、そのような基の例はアセチルおよびベンゾイルである。”低級アルカノイル”はより好ましいサブグループのアシルの例である。”アミド”という用語は、カルボニル基に結合した窒素原子からなるもの基を表わし、この基はさらに本明細書に記載するように置換されていてもよい。”モノアルキルアミノカルボニル”という用語は”Ｎ−アルキルアミド”と互換性をもつ。”ジアルキルアミノカルボニル”という用語は”Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミド”と互換性をもつ。”アルケニルアルキル”という用語は、２個の炭素原子間に二重結合不飽和部位をもつ基を表わし、この基は２個の炭素原子のみからなっていてもよく、あるいはさらにアルキル基で置換されていてもよく、これがさらに二重結合不飽和を含んでいてもよい。前記に別途定義していない場合、”ヘテロアリール”という用語には、５または６個の環員子をもつ環系中に酸素、窒素および硫黄から選択される１または２個の異種原子を含む芳香族環系が含まれ、その例はチエニル、フラニル、ピリジニル、チアゾリル、ピリミジルおよびイソオキサゾリルである。そのようなヘテロアリールはヘテロアリール環系の炭素原子を介して置換基として結合していてもよく、あるいはヘテロアリール環員子の炭素原子上に置換した部分の炭素原子を介して、たとえばイミダゾールメチル部分のメチレン置換基を介して結合していてもよい。そのようなヘテロアリールは、結合後にヘテロアリール部分の芳香族性が保存される限り、環窒素原子を介して結合していてもよい。以上に定義した基のいずれについても、好ましい基は１〜約１０個の炭素原子を含むものである。
【００４２】
アルキル基の具体例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、メチルブチル、ジメチルブチルおよびネオペンチルである。代表的なアルケニルおよびアルキニル基は、アリル基のように１つの不飽和結合をもっていてもよく、あるいは複数の不飽和結合をもち、それら複数の結合が隣接していてもよく（たとえばアレン型構造）、または共役していてもよく、または数個の飽和炭素で分離されていてもよい。
【００４３】
本発明の組合わせには、前記のβ−アドレナリン作動性拮抗化合物およびエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗化合物の異性体形も含まれ、これにはジアステレオ異性体、レギオ異性体、およびその医薬的に許容できる塩類が含まれる。”医薬的に許容できる塩類”という用語には、アルカリ金属塩の形成および遊離酸または遊離塩基の付加塩の形成に一般に用いられる塩類が含まれる。医薬的に許容できる限り、塩の性質は重要でない。医薬的に許容できる適切な酸付加塩は、無機酸または有機酸から調製できる。そのような無機酸の例は、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、炭酸、硫酸およびリン酸である。適切な有機酸は、脂肪族酸、脂環式酸、芳香族酸、芳香脂肪族酸、複素環式酸、カルボン酸およびスルホン酸群の有機酸から選択され、その例は下記のものである：ギ酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルクロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、安息香酸、アントラニル酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、エンボン（ｅｍｂｏｎｉｃ、ｐａｍｏｉｃ）酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、パントテン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、スルファニル酸、メシル酸、シクロヘキシルアミノスルホン酸、ステアリン酸、アルギン酸、ｂ−ヒドロキシ酪酸、マロン酸、ガラクタル酸およびガラクツロン酸。医薬的に許容できる適切な塩基付加塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムおよび亜鉛から形成される金属塩、またはＮ，Ｎ’−ジベンゾイルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）およびプロカインから形成される有機塩が含まれる。これらの塩類はすべて常法により、対応する化合物からたとえばそれらの化合物と適切な酸または塩基を反応させることにより調製できる。
【００４４】
作用機序
本発明の併用療法について特定の作用機序に固執するわけではないが、これらの選択したアルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬の併用は、組織および／または臓器がこれら別個の２群の薬物に同時にかつ相関して応答するので効果的であると考えられる。すなわちアルドステロン拮抗薬に応答してアルドステロン刺激による遺伝的作用が顕著にダウンレギュレートされ、β−アドレナリン作動性拮抗薬に応答してβ−アドレナリン作動性活性が有効に阻害される。限定ではないが相関機序の例は、β−アドレナリン作動性拮抗により生じる血管平滑筋に対する血管弛緩作用との組合わせで、機械的作用に起因するアルドステロン誘発性血管剛化（たとえば線維症）が低下することである。そのような作用は、アルドステロン受容体拮抗薬を療法に使用する際に、協同効果をもたらす。
【００４５】
併用療法の利点
本発明の選択したアルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬を併用すると、相加効果を上回るものが得られる。たとえば、アルドステロン受容体拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬の併用により、アテローム硬化症に関する多数のリスク因子の病的作用、たとえば高いアルドステロンレベル、高い血圧、内皮機能不全、プラークの形成および破裂などがほぼ同時に減少する。
【００４６】
本発明方法は、当技術分野で既知の一般的方法と比較して少ない副作用で、病的状態の効果的な予防および／または治療方法をも提供する。たとえばβ−アドレナリン作動性拮抗薬を投与すると、血圧低下、疲労感、不眠、めまいまたは失神、呼吸困難、インポテンス、気管支痙攣、徐脈および心臓ブロック（これらに限定されない）などの副作用が起きる。本発明の併用療法によりβ−アドレナリン作動性拮抗薬の用量を一般的な単独療法の用量より少なくすると、たとえばβ−アドレナリン作動性拮抗薬の単独療法投与による副作用プロフィルと比較して、本発明の併用療法による副作用プロフィルは最小限に抑えられ、あるいは除かれる場合すらある。β−アドレナリン作動性拮抗薬による副作用は一般に用量依存性であるので、用量が高いほどそれらの発生率は高まる。したがってβ−アドレナリン作動性拮抗薬の有効用量が低いほど、単独療法における高いβ−アドレナリン作動性拮抗薬用量でみられるより副作用が減少し、あるいはそのような副作用の程度が軽減する。さらに、アルドステロン拮抗薬を用いると、これらの副作用を予防または治療する直接効果が得られる。
【００４７】
本発明の併用療法がもつ他の利点には、選択した一群のアルドステロン受容体拮抗薬の使用による比較的速やかな療法効果の開始および比較的長い作用持続時間が含まれるが、これらに限定されない。たとえば１回量の選択したアルドステロン受容体拮抗薬のひとつがアルドステロン受容体に結合した状態を維持し、これによりミネラルコルチコイド受容体の活性化が持続的に遮断される。本発明の併用療法がもつ他の利点には、ミネラルコルチコイド受容体以外（たとえばアンドロゲン受容体またはプロゲステロン受容体）への非選択的結合を示すアルドステロン拮抗薬が誘発する可能性のある副作用が少ない選択性の高いアルドステロン拮抗薬として作用する特定の一群のアルドステロン受容体拮抗薬、たとえばエプレレノンようなエポキシ−ステロイド型アルドステロン拮抗薬の使用が含まれるが、これらに限定されない。
【００４８】
本発明の併用療法がもつ他の利点には、開示した方式に特に応答性の高い１以上の特定の人種に属する個体の処置に本発明方法を使用することが含まれるが、これらに限定されない。たとえばアフリカ系またはアジア系の個体には、心臓血管障害の治療または予防のためにアルドステロン拮抗薬とβ−アドレナリン作動性拮抗薬の併用療法が特に有益な可能性がある。
【００４９】
生物学的評価
ヒトうっ血性心不全（ＣＨＦ）は、通常は血管性高血圧症または心筋梗塞（ＭＩ）から開始する複雑な症状である。ＣＨＦに対する併用療法の有効可能性を判定するには、数種類のアッセイ法で成分の効力を測定することが重要である。したがってアッセイ法”Ａ”および”Ｂ”においてβ−アドレナリン作動性拮抗薬活性を測定することができる。アッセイ法”Ｃ”および”Ｄ”には、本発明の併用療法、すなわちβ−アドレナリン作動性拮抗薬とエポキシ−ステロイド型アルドステロン受容体拮抗薬の評価について記載する。個々の薬物エプレレノンおよびβ−アドレナリン作動性拮抗薬、ならびにこれらの薬物を種々の用量で一緒に投与した場合の有効性を、高血圧症またはＭＩのいずれかを誘発するための外科的代替法による高血圧症およびＣＨＦのげっ歯類モデルにおいて評価する。そのようなアッセイ法を以下に記載する。
【００５０】
さらに、ヒトにおいてアルドステロン拮抗薬療法を評価するために臨床試験を採用できる。そのような治験法の多数の例が公表されており、これにはＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，７８，９０２−９０７（１９９６）に記載のＲＡＬＥＳ　００３試験、またはＮｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，３４１，７０９−７１７（１９９９）に記載のＲＡＬＥＳ　００４試験が含まれる。
【００５１】
アッセイ法Ａ：インビトロ血管平滑筋応答
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（３５０〜５５０ｇ）から摘出した胸部大動脈を周囲の結合組織から切り離し、それぞれ約２〜３ｍｍ長さの環状切片に切断する。等尺性張力記録のために、１０ｍＬのクレブス・ヘンゼライト（Ｋ−Ｈ）溶液（ｐＨ７．４）を満たした臓器浴中に平滑筋の環を固定する。この浸漬溶液を３７℃に保持し、９５％Ｏ２／５％ＣＯ２を吹き込む。切片を２ｇの張力にまで伸長し、平衡化する。等尺性変換器により等尺性張力の変化をモニターし、電位差記録計に記録する。カテコールアミンの添加により、または溶液を３０ｍＭ　Ｋ＋に変更することにより前収縮を発生させる。収縮を３０分間維持し、標本をクレブス・ヘンゼライト溶液で洗浄する。６０分後、前記と同様にして収縮を誘発する。次いで被験化合物を添加して、濃度−応答曲線を得る。前収縮値を１００％とすると、収縮が５０％に弛緩する薬物濃度がＩＣ５０である。
【００５２】
アッセイ法Ｂ：インビボ胃内昇圧薬アッセイ応答
体重２２５〜３００ｇの雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットをメトヘキシタール（３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）で麻酔し、大腿部の動脈と静脈にカテーテルを挿入する。これらのカテーテルを皮下に潜らせて、頭の後、肩甲骨間で、背側に出す。カテーテルにヘパリン（１０００単位／生理食塩水ｍｌ）を充填する。ラットをケージに戻し、普通のラット用固形飼料と水を自由に摂取させる。外科処置から完全に回復した後（３〜４日）、ラットをＬｕｃｉｔｅホルダーに入れ、動脈ラインを圧力変換器に接続する。動脈血圧をＧｏｕｌｄポリグラフで記録する（ｍｍＨｇ）。エピネフリンまたはノルエピネフリンを３０ｎｇ／ｋｇボーラスとして、体積５０μｌで０．２ｍｌの生理食塩水フラッシにより静脈カテーテルから投与する。昇圧薬応答（ｍｍＨｇ）を注入前動脈圧から到達する最大圧力までの差により測定する。連続３回の注入で互いに４ｍｍＨｇ以内の応答になるまで、このカテコールアミン注入を１０分毎に繰り返す。次いでこれら３回の応答を平均すると、カテコールアミン類に対する対照応答となる。被験化合物を水中０．５％メチルセルロースに懸濁し、胃管投与する。投与体積は２ｍｌ／体重ｋｇである。胃管投与の３０、４５、６０、７５、１２０、１５０および１８０分後にカテコールアミンのボーラス注入を行う。カテコールアミンに対する昇圧応答を各時点で測定する。次いでラットを後続試験のためにケージに戻す。試験間に最低３日間をおく。阻害率％を胃管投与後の各時点について次式により計算する［（対照応答−その時点での応答）／対照応答］×１００。
【００５３】
アッセイ法”Ｃ”：高血圧症ラットモデル
２４０ミクロンの開口をもつ銀クリップを左腎動脈に配置し、反対側の腎臓はそのままにすることにより、雄ラットを高血圧症にする。偽対照にはクリップを取り付けずに同じ操作を施す。この外科処置の１週間前に、高血圧症にする動物を別の各群に分け、薬物処置を開始する。各群の動物にビヒクル、β−アドレナリン作動性拮抗薬のみ、エプレレノンのみ、および種々の用量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬とエプレレノンの組合わせを投与する：
【００５４】
【表１１】
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【００５５】
１２〜２４週間後、収縮期圧および拡張期圧、左心室拡張終末期圧、左心室ｄＰ／ｄｔ、ならびに心拍数を評価する。心臓を摘出して秤量、計測し、ホルマリン中に固定する。ピクロシリウス（ｐｉｃｒｏｓｉｒｉｕｓ）染色切片の電算画像分析により心臓切片のコラーゲン含量を評価する。β−アドレナリン作動性拮抗薬成分とエプレレノン成分の併用療法で処置したラットは、いずれかの成分のみで処置したラットと比較して心臓性能の改善を示すと予想される。
【００５６】
アッセイ法”Ｄ”：心筋梗塞ラットモデル：
雄ラットを麻酔し、左側開胸術により心臓を体外露出させる。左冠動脈前下行枝を縫合糸で結紮する。胸郭を閉じ、動物を回復させる。偽動物には結紮せずに縫合糸を通す。この外科処置の１週間前に、梗塞させる動物を別の各群に分け、薬物処置を開始する。各群の動物にビヒクル、β−アドレナリン作動性拮抗薬のみ、エプレレノンのみ、および種々の用量のβ−アドレナリン作動性拮抗薬とエプレレノンの組合わせを下記のように投与する：
【００５７】
【表１２】
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【００５８】
６週間後、収縮期圧および拡張期圧、左心室拡張終末期圧、左心室ｄＰ／ｄｔ、ならびに心拍数を評価する。心臓を摘出して秤量、計測し、ホルマリン中に固定する。ピクロシリウス染色切片の電算画像分析により心臓切片のコラーゲン含量を評価する。β−アドレナリン作動性拮抗薬成分とエプレレノン成分の併用療法で処置したラットは、いずれかの成分のみで処置したラットと比較して心臓性能の改善を示すと予想される。
【００５９】
β−アドレナリン作動性拮抗薬とアルドステロン受容体拮抗薬の投与は別個の配合物で逐次行ってもよく、あるいは単一配合物または別個の配合物での同時投与により行ってもよい。投与は経口経路により、または静脈内、筋肉内もしくは皮下への注射により実施できる。配合物は塊状、または水性もしくは非水性の等張無菌注射液剤もしくは懸濁液剤の形であってよい。これらの液剤および懸濁液剤は、医薬的に許容できる１種類以上のキャリヤーもしくは希釈剤または結合剤（たとえばゼラチンまたはヒドロキシプロピル−メチルセルロース）および１種類以上の滑沢剤、保存剤、界面活性剤または分散剤を含む無菌の粉末または顆粒から調製できる。
【００６０】
経口投与のためには、医薬組成物はたとえば錠剤、カプセル剤、懸濁液剤または液剤の形であってよい。医薬組成物は、好ましくは個々の量の有効成分を含有する剤形単位で調製される。そのような剤形単位の例は錠剤またはカプセル剤である。これらは有利には約１〜２５０ｍｇ、好ましくは約２５〜１５０ｍｇの量の各有効成分を含有できる。哺乳動物に適切な１日量は患者の状態その他の要因に応じて広範に変動するであろうが、約０．０１〜３０ｍｇ／体重ｋｇ、特に約１〜１５ｍｇ／体重ｋｇの用量が適切であろう。
【００６１】
有効成分を組成物として注射により投与してもよく、その場合たとえば生理食塩水、デキストロースまたは水を適切なキャリヤーとして使用できる。各有効成分の適切な１日量は約０．０１〜１５ｍｇ／体重ｋｇであり、処置される疾患によっては１日多数回で注射される。好ましい１日量は約１〜１０ｍｇ／体重ｋｇであろう。予防療法に処方される化合物は、好ましくは一般に１日約０．１〜約１５ｍｇ／体重ｋｇの１日量で投与されるであろう。より好ましい投与量は約１〜約１５ｍｇ／体重ｋｇであろう。最も好ましいのは１日約１〜約１０ｍｇ／体重ｋｇの投与量であろう。適量を１日当たり多数回の分割量で投与できる。これらの分割量を単位剤形で投与してもよい。一般に１回量または分割量の剤形は、単位剤形当たり約１〜約１００ｍｇの有効成分を含有できる。より好ましい剤形は、単位剤形当たり約２〜約５０ｍｇの有効化合物を含有するであろう。最も好ましいものは、単位剤形当たり約３〜約２５ｍｇの有効化合物を含有する剤形である。
【００６２】
併用療法においてβ−アドレナリン作動性拮抗薬は、用いる個々の拮抗薬、固有の力価、組成物の生物学的利用能および代謝不安定性、ならびに組成物を即時放出または持続放出のいずれで配合するかに応じて、広範な量で存在することができる。限定ではないが、具体的なβ−アドレナリン作動性拮抗薬の剤形範囲を下記に挙げる：
【００６３】
【表１３】
2004511435.tif 000016
【００６４】
併用療法においてアルドステロン受容体拮抗薬は約５〜約４００ｍｇの量で存在することができ、β−アドレナリン作動性拮抗薬は約１〜約２００ｍｇの量で存在することができる。これは、アルドステロン拮抗薬−対−β−カルシウムチャンネル遮断薬の比率約４００：１〜約１：４０となる。
【００６５】
好ましい併用療法においてアルドステロン受容体拮抗薬は約１０〜約２００ｍｇの量で存在することができ、β−アドレナリン作動性拮抗薬は約５〜約１００ｍｇの量で存在することができる。これは、アルドステロン拮抗薬−対−β−アドレナリン作動性拮抗薬の比率約４０：１〜約１：１０となる。
【００６６】
より好ましい併用療法においてアルドステロン受容体拮抗薬は約２０〜約１００ｍｇの量で存在することができ、β−アドレナリン作動性拮抗薬は約１０〜約８０ｍｇの量で存在することができる。これは、アルドステロン拮抗薬−対−カルシウムチャンネル遮断薬の比率約１０：１〜約１：４となる。
【００６７】
疾病状態を本発明の併用療法で処置する投与方式は、患者のタイプ、年齢、体重、性別および医学的状態、疾病の重症度、投与経路、および使用する個々の化合物を含めた多様な要因に従って選択され、したがって広範に変動する可能性がある。
【００６８】
療法用として、通常は本発明の併用療法の有効化合物を指示する投与経路に適した１種類以上の佐剤と組み合わせる。経口投与の場合、化合物を乳糖、ショ糖、デンプン粉末、アルカン酸セルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウム塩およびカルシウム塩、ゼラチン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、および／またはポリビニルアルコールと混合し、次いで投与しやすくするために打錠またはカプセル封入する。そのようなカプセル剤または錠剤は、ヒドロキシプロピルメチルセルロース中の有効化合物分散液として調製された制御放出配合物を含有してもよい。非経口投与用配合物は、水性または非水性の等張無菌注射液剤もしくは懸濁液剤の形であってよい。これらの液剤および懸濁液剤は、経口投与用配合物に用いる前記のキャリヤーまたは希釈剤を１種類以上含む無菌粉末または顆粒から調製できる。本発明化合物を水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、トウモロコシ油、綿実油、ラッカセイ油、ゴマ油、ベンジルアルコール、塩化ナトリウムおよび／または各種緩衝剤に溶解することができる。他の佐剤および投与方式は医薬技術分野で十分にかつ広く知られている。
【００６９】
本発明はさらに、前記の治療方法および／または予防方法を実施するのに適したキットを含む。１態様においてキットには、前記のエポキシ−ステロイド型アルドステロン拮抗薬１種類以上を含む第１剤形、および表２に示したβ−アドレナリン作動性拮抗薬を含む第２剤形が、本発明方法の実施に十分な量で収容される。好ましくは第１剤形と第２剤形が一緒になって療法有効量の阻害薬を構成する。
【００７０】
固体状態の形のエポキシ−ステロイド型アルドステロン拮抗薬
本発明方法は、療法有効量のエプレレノンを任意の固体状態で投与することを含む。これは１以上の固体状態そのものであってもよく、あるいは１以上の固体状態のエプレレノンを含む医薬組成物の形であってもよい。これらの新規な固体状態には、溶媒和結晶質エプレレノン、非溶媒和−結晶質エプレレノン、および非晶質エプレレノンが含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
１態様において、本発明方法により投与されるエプレレノンは、後記の表１Ａに示す粉末Ｘ線回折図をもつ非溶媒和−結晶質エプレレノン（本明細書において”高融点多形”または”Ｈ形”と呼ぶ）である。
【００７２】
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物に含有されるエプレレノンの全量が相純粋な（ｐｈａｓｅ　ｐｕｒｅ）Ｈ形として存在する。
【００７３】
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物に含有されるエプレレノンの全量が相純粋なＬ形として存在する。
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物に含有されるエプレレノンの全量が相純粋な溶媒和結晶質エプレレノンとして存在する。
【００７４】
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物に含有されるエプレレノンの全量が非晶質エプレレノンとして存在する。
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物は第１固体状態のエプレレノンおよび第２固体状態のエプレレノンを含み、第１および第２固体状態のエプレレノンはＨ形、Ｌ形、溶媒和エプレレノンおよび非晶質エプレレノンから選択される。一般に第１固体状態の形と第２固体状態の形の重量比は少なくとも約１：９、好ましくは少なくとも約１：１、より好ましくは少なくとも約２：１、より好ましくは少なくとも約５：１、さらに好ましくは少なくとも約９：１である。
【００７５】
他の態様において、エプレレノンは医薬組成物の形で投与され、組成物はＨ形とＬ形の両方を含む。組成物中のＬ形とＨ形の比率は、一般に約１：２０〜約２０：１である。他の態様において、たとえばこの比率は約１０：１〜約１：１０；約５：１〜約１：５；約２：１〜約１：２；または約１：１である。
【００７６】
前記態様はそれぞれ広範なエプレレノン粒度にわたる固体状態の形のエプレレノンの投与を含むが、固体状態の形のエプレレノンを選択することとエプレレノン粒径を小さくすることを組み合わせると、非配合エプレレノン、および固体状態の形のエプレレノンを含む医薬組成物の生物学的利用能を改善しうることが見いだされた。
【００７７】
そのような１態様において、非配合エプレレノン、または医薬組成物中の出発物質として用いるエプレレノンのＤ９０粒径は、一般に約４００ミクロン未満、好ましくは約２００ミクロン未満、より好ましくは約１５０ミクロン未満、さらに好ましくは約１００ミクロン未満、さらに好ましくは約９０ミクロン未満である。他の態様において、Ｄ９０粒径は約４０〜約１００ミクロンである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約３０〜約５０ミクロンである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約５０〜約１５０ミクロンである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約７５〜約１２５ミクロンである。
【００７８】
そのような他の態様において、非配合エプレレノン、または医薬組成物中の出発物質として用いるエプレレノンのＤ９０粒径は、一般に約１５ミクロン未満、好ましくは約１ミクロン未満、より好ましくは約８００ｎｍ未満、さらに好ましくは約６００ｎｍ未満、さらに好ましくは約４００ｎｍ未満である。他の態様において、Ｄ９０粒径は約１０ｎｍ〜約１ミクロンである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約１００〜約８００ｎｍである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約２００〜約６００ｎｍである。他の態様において、Ｄ９０粒径は約４００〜約８００ｎｍである。
【００７９】
約１５ミクロン未満の粒径をもつ固体状態の形のエプレレノンは、当技術分野で既知の適用できる粒径縮小技術に従って調製できる。そのような技術には、ＵＳＰ５，１４５，６８４、５，３１８，７６７、５，３８４，１２４および５，７４７，００１に記載されるものが含まれるが、これらに限定されない。ＵＳＰ５，１４５，６８４、５，３１８，７６７、５，３８４，１２４および５，７４７，００１の全体を援用する。たとえばＵＳＰ５，１４５，６８４の方法によれば、エプレレノンを液状分散媒質に分散させ、この混合物を粉砕媒体の存在下で湿式粉砕して目的サイズの粒子にすることにより、適切なサイズの粒子を調製する。必要または有利であれば、表面改質剤の存在下で粒子のサイズを縮小することができる。
【００８０】
定義
エプレレノンに適用する”非晶質”という用語は、エプレレノン分子が無秩序配列で存在し、識別可能な結晶格子または単位セルを形成していない固体状態を表わす。粉末Ｘ線回折を行った場合、非晶質エプレレノンは特徴的な結晶ピークを生じない。
【００８１】
本明細書において物質または溶液の”沸点”について述べる場合、この”沸点”という用語は適用可能なプロセス条件下での物質または溶液の沸点を意味する。
【００８２】
エプレレノンに適用する”結晶質形”という用語は、エプレレノン分子が（ｉ）識別可能な単位セルを含み、かつ（ｉｉ）Ｘ線を照射すると回折ピークを生じる、識別可能な結晶格子を形成するように配列した固体状態を表わす。
【００８３】
本明細書全体で用いる”結晶化”という用語は、エプレレノン出発物質の調製に関する適用可能な状況に応じて、結晶化および／または再結晶を表わすことができる。
【００８４】
”蒸解（ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ）”という用語は、溶媒または溶媒混合物中の固体エプレレノンのスラリーを、適用可能なプロセス条件下でその溶媒または溶媒混合物の沸点に加熱するプロセスを意味する。
【００８５】
本明細書中で用いる”直接結晶化”という用語は、中間の溶媒和結晶質固体状態の形のエプレレノンの形成および脱溶媒和を行わずに、エプレレノンを適切な溶媒から直接結晶化することを表わす。
【００８６】
本明細書中で用いる”粒径”という用語は、当技術分野で周知の一般的な粒径測定技術、たとえばレーザー光線散乱法、沈降フィールドフロー分画法、光子相関分光法またはディスク遠心法により測定した粒径を表わす。”Ｄ９０粒径”という用語は、そのような一般的な粒径測定技術により測定した粒子の少なくとも９０％の粒径を意味する。
【００８７】
”純度”という用語は、一般的なＨＰＬＣアッセイ法によるエプレレノンの化学的純度を意味する。本明細書中で用いる”低純度エプレレノン”という用語は、一般に有効量のＨ形成長促進物質および／またはＬ形成長阻害物質を含有するエプレレノンを意味する。本明細書中で用いる”高純度エプレレノン”という用語は、一般にＨ形成長促進物質および／またはＬ形成長阻害物質を含有しないか、あるいは有効量未満で含有するエプレレノンを意味する。
【００８８】
”相純度（ｐｈａｓｅ　ｐｕｒｉｔｙ）”という用語は、個々の結晶質または非晶質形のエプレレノンに関して本明細書に記載する赤外分光分析法により測定した固体状態のエプレレノンの純度を意味する。
【００８９】
”ＸＰＲＤ”という用語は、粉末Ｘ線回折を意味する。
”Ｔｍ”という用語は、融解温度を意味する。
【００９０】
固体状態の形の特性解明
１．分子コンホメーション
単結晶Ｘ線分析は、エプレレノン分子のコンホメーションが、特にステロイド環の７−位にあるエステル基の配向に関してＨ形とＬ形で異なることを示す。エステル基の配向はＣ８−Ｃ７−Ｃ２３−０２ねじれ角により判定できる。
【００９１】
Ｈ形結晶格子の場合、エプレレノン分子はエステルのメトキシ基が７−位のＣ−Ｈ結合とほぼ整列し、カルボニル基がほぼＢ−ステロイド環の中心の上方に位置するコンホメーションをとる。このコンホメーションの場合、Ｃ８−Ｃ７−Ｃ２３−０２ねじれ角は約−７３．０°である。この配向では、エステル基のカルボニル酸素原子（０１）が９，１１−エポキシド環の酸素原子（０４）と近接する。０１−０４の距離は約２．９７Åであり、ファンデルワールス接触距離３．０Åよりわずかに短い（酸素のファンデルワールス半径を１．５Åとする）。
【００９２】
Ｌ形結晶格子の場合、エプレレノン分子はエステル基がＨ形のものに対して約１５０°回転しており、約＋７６．９°のＣ８−Ｃ７−Ｃ２３−０２ねじれ角をもつコンホメーションをとる。この配向では、エステルのメトキシ基がＡ環の４，５−アルケンセグメントの方へ向いている。この配向では、エステル基のいずれかの酸素原子（０１，０２）と９，１１−エポキシド環の酸素原子との距離がＨ形について測定した距離と比較して長い。０２−０４の距離は約３．０４Åであり、ファンデルワールス接触距離よりわずかに長い。０１−０４の距離は約３．４５Åである。
【００９３】
エプレレノン分子は、現在のところ単結晶Ｘ線回折による分析によれば溶媒和形ではＬ形に特徴的なコンホメーションをとると思われる。
２．粉末Ｘ線回折
各種結晶形のエプレレノンをＳｉｅｍｅｎｓ　Ｄ５０００粉末回折計またはＩｎｅｌ多目的回折計により分析した。Ｓｉｅｍｅｎｓ　Ｄ５００粉末回折計では、２〜５０の２ｑ値について０．０２０のステップおよび２秒のステップ期間で粗データを測定した。Ｉｎｅｌ多目的回折計では、試料をアルミニウム製試料ホルダーに入れ、全２θ値において同時に３０分間、粗データを収集した。
【００９４】
表３、４および５に主ピークの有意パラメーターを２ｑ値および強度で示す：それぞれエプレレノンのＨ形結晶（低純度エプレレノンの蒸解により得たエタノール溶媒和物の脱溶媒和によって調製）、Ｌ形結晶（高純度エプレレノンの再結晶により得たメチルエチルケトン溶媒和物の脱溶媒和によって調製）、およびメチルエチルケトン溶媒和物結晶（メチルエチルケトン中での高純度エプレレノンの室温スラリー変換により調製）（波長１．５４０５６ÅのＸ線照射）。
【００９５】
Ｈ形およびＬ形の調製経路（すなわち溶媒和物の脱溶媒和）による結晶回折面間隔の不完全さの結果、Ｈ形およびＬ形にはわずかなピーク位置のシフトがありうる。さらに、Ｈ形は粗製エプレレノンの蒸解により調製した溶媒和物から単離される。この方法ではＨ形の全般的化学純度が低い（約９０％）。最後に、結晶格子の溶媒通路内での溶媒和分子の移動度が増大するため、溶媒和形のエプレレノンは回折ピークの位置が若干のシフトを示すと予想される。
【００９６】
【表１４】
2004511435.tif 000017
【００９７】
【表１５】
2004511435.tif 000018
【００９８】
【表１６】
2004511435.tif 000019
【００９９】
【表１７】
2004511435.tif 000020
【０１００】
Ｈ形、Ｌ形、およびメチルエチルケトン溶媒和結晶形のエプレレノンに関するＸ線回折図のグラフの例を、それぞれ図１−Ａ、１−Ｂおよび１−Ｃに示す。Ｈ形は７．０±０．２、８．３±０．２および１２．０±０．２°の２θに特徴的なピークを示す。Ｌ形は８．０±０．２、１２．４±０．２、１２．８±０．２°および１３．３±０．２°の２θに特徴的なピークを示す。メチルエチルケトン溶媒和結晶形は７．６±０．２、７．８±０．２、および１３．６±０．２°の２θに特徴的なピークを示す。
【０１０１】
３．融解／分解温度
非溶媒和エプレレノン結晶形の融解／分解温度をＴＡ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　２９２０示差走査熱量計により測定した。各試料（１〜２ｍｇ）をシールしたまたはシールしないアルミニウム皿に入れ、１０℃／分で加熱した。融解／分解範囲を融解／分解吸熱の補外開始点から最大点までと定めた。
【０１０２】
非溶媒和エプレレノン結晶形（Ｈ形およびＬ形）の融解に伴って化学分解および結晶格子からの捕獲溶媒の喪失が起きた。融解／分解温度は分析前の固体の取扱いによっても影響を受けた。たとえば適切な溶媒からの直接結晶化または適切な溶媒もしくは溶媒混合物中での高純度エプレレノンの結晶化により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｌ形（おおよそのＤ９０粒径は約１８０〜４５０ミクロン）は、一般に約２３７〜２４２℃の融解範囲をもっていた。粉砕Ｌ形（おおよそのＤ９０粒径は約８０〜１００ミクロン）（適切な溶媒または溶媒混合物中の高純度エプレレノン溶液から溶媒和物の結晶化によりＬ形を調製し、この溶媒和物の脱溶媒和によりＬ形を得て、得られたＬ形を粉砕したもの）は、一般に約２２３〜２３４℃の、より低く、より広い融解／分解範囲をもっていた。低純度エプレレノンの蒸解により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｈ形（おおよそのＤ９０粒径は約１８０〜４５０ミクロン）は、一般に約２４７〜２５１℃の、より高い融解／分解範囲をもっていた。（ａ）メチルエチルケトンから直接結晶化した未粉砕Ｌ形、（ｂ）メチルエチルケトンからの高純度エプレレノンの結晶化により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｌ形、（ｃ）メチルエチルケトンからの高純度エプレレノンの結晶化により得た脱溶媒和した溶媒和物を粉砕することによって調製したＬ形、および（ｄ）メチルエチルケトンからの低純度エプレレノンの蒸解により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｈ形のＤＳＣサーモグラムの例を、それぞれ図２−Ａ、２−Ｂ、２−Ｃおよび２−Ｄに示す。
【０１０３】
溶媒和形エプレレノンのＤＳＣサーモグラムをＰｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　Ｐｙｒｉｓ　１示差走査熱量計により測定した。各試料（１〜１０ｍｇ）をシールしないアルミニウム皿に入れ、１０℃／分で加熱した。低温での１以上の吸熱事象に伴って、溶媒和物結晶格子から溶媒が喪失するのにつれて起きるエンタルピー変化が生じた。最高温度での吸熱（１以上）に伴ってＬ形またはＨ形エプレレノンの融解／分解が起きた。メチルエチルケトン溶媒和結晶形エプレレノンのＤＳＣサーモグラムの例を図２−Ｅに示す。
【０１０４】
４．赤外吸収スペクトル
非溶媒和形エプレレノン（Ｈ形およびＬ形）の赤外吸収スペクトルを、Ｎｉｃｏｌｅｔ　ＤＲＩＦＴ（拡散反射赤外フーリエ変換）Ｍａｇｎａ　Ｓｙｓｔｅｍ　５５０分光光度計により得た。Ｓｐｅｃｔｒａ−Ｔｅｃｈ　Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒシステムおよびミクロ試料カップを用いた。試料（５％）を臭化カリウム中で分析し、４００ｃｍ−１から４０００ｃｍ−１まで走査した。希クロロホルム溶液（３％）中のエプレレノンまたは溶媒和結晶形エプレレノンの赤外吸収スペクトルを、Ｂｉｏ−ｒａｄ　ＦＴＳ−４５分光光度計により得た。クロロホルム溶液試料は、塩化ナトリウム塩プレートを含む０．２ｍｍ光路長さの溶液セルを用いて分析された。溶媒和物ＦＴＩＲスペクトルをＩＢＭミクロＭＩＲ（多重内部反射）アクセサリーにより収集した。試料を４００ｃｍ−１から４０００ｃｍ−１まで走査した。（ａ）Ｈ形、（ｂ）Ｌ形、（ｃ）メチルエチルケトン溶媒和物、および（ｄ）クロロホルム溶液中のエプレレノンの赤外吸収スペクトルの例を、それぞれ図３−Ａ、３−Ｂ、３−Ｃおよび３−Ｄに示す。
【０１０５】
表６にＨ形、Ｌ形、およびメチルエチルケトン溶媒和物結晶形エプレレノンの具体的な吸収バンドを示す。比較のためにクロロホルム溶液中のエプレレノンの具体的な吸収バンドをも示す。Ｈ形と、Ｌ形またはメチルエチルケトン溶媒和物との差が、たとえばスペクトルのカルボニル領域にみられた。Ｈ形は約１７３９ｃｍ−１にエステルカルボニル伸縮をもつが、Ｌ形およびメチルエチルケトン溶媒和物は共に対応する伸縮をそれぞれ約１７２４ｃｍ−１および約１７２２ｃｍ−１にもつ。クロロホルム溶液中のエプレレノンでは、エステルカルボニル伸縮は約１７２７ｃｍ−１で起きる。Ｈ形とＬ形のエステルカルボニル伸縮周波数の変化は、これら２結晶形のエステル基間の配向の変化を反映する。さらに、Ａ−ステロイド環の共役ケトンのエステルの伸縮は、Ｈ形またはメチルエチルケトン溶媒和物の約１６６４〜１６６７ｃｍ−１からＬ形の約１６５５ｃｍ−１へシフトする。希溶液中では、対応するカルボニル伸縮が約１６６５ｃｍ−１で起きる。
【０１０６】
Ｈ形とＬ形の他の差がＣ−Ｈ変角領域にみられた。Ｈ形は約１３９９ｃｍ−１に吸収をもつ。これはＬ形、メチルエチルケトン溶媒和物、またはクロロホルム溶液中のエプレレノンにはみられない。この１３９９ｃｍ−１伸縮は、カルボニル基に隣接するＣ２とＣ２１のメチレン基をはさむＣＨ２領域で起きる。
【０１０７】
【表１８】
2004511435.tif 000021
【０１０８】
５．核磁気共鳴
３１．９４ＭＨｚの磁界で１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルを得た。Ｈ形およびＬ形エプレレノンの１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルの例を、それぞれ図４および５に示す。図４に示したデータを得るために分析したＨ形エプレレノンは相純粋でなく、少量のＬ形エプレレノンを含有していた。Ｈ形は６４．８ｐｐｍ、２４．７ｐｐｍおよび１９．２ｐｐｍ付近の炭素の共鳴により最も明瞭に識別される。Ｌ形は６７．１ｐｐｍおよび１６．０ｐｐｍ付近の炭素の共鳴により最も明瞭に識別される。
【０１０９】
６．熱重量分析
溶媒和物の熱重量分析をＴＡ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ　ＴＧＡ２９５０熱重量分析計により実施した。試料を窒素パージ下で、シールしないアルミニウム皿に入れた。出発温度は２５℃であり、約１０℃／分の速度で温度を高めた。メチルエチルケトン溶媒和物の熱重量分析プロフィールの例を図６−Ａに示す。
【０１１０】
７．単位セルパラメーター
下記の表７、８および９に、Ｈ形、Ｌ形、および数種類の溶媒和結晶質形について測定した単位セルパラメーターをまとめる。
【０１１１】
【表１９】
2004511435.tif 000022
【０１１２】
１　通路内での溶媒分子の無秩序のため、溶媒和物分子は完全には精製されなかった。
【０１１３】
【表２０】
2004511435.tif 000023
【０１１４】
１　通路内での溶媒分子の無秩序のため、溶媒和物分子は完全には精製されなかった。
特定の溶媒和結晶質形エプレレノンに関する他の情報を下記の表１０に報告する。メチルエチルケトン溶媒和物に関して前記の表７に報告した単位セルデータは、これら他のエプレレノン結晶質溶媒和物の多くについての単位セルパラメーターの代表例でもある。試験した大部分のエプレレノン結晶質溶媒和物が実質的に互いにイソ構造である。取り込まれた溶媒分子のサイズによって溶媒和結晶質形間で粉末Ｘ線回折ピークに若干のわずかなシフトがある場合はあるが、全般的な回折図は実質的に同じであり、試験した大部分の溶媒和物について単位セルパラメーターおよび分子の配置は実質的に同一である。
【０１１５】
【表２１】
2004511435.tif 000024
【０１１６】
１　１０℃／分の加熱速度で窒素パージ下での熱重量分析により測定した最終溶媒重量損失段階から補外した脱溶媒和温度として定義。ただし脱溶媒和温度は溶媒和物の調製方法により影響を受ける可能性がある。低温では、方法が異なると溶媒和物の脱溶媒和を開始しうる成核部位の個数が異なる可能性がある。
【０１１７】
溶媒和物の単位セルは４つのエプレレノン分子からなる。多数の溶媒和物について、単位セル中のエプレレノン分子および溶媒分子の化学量論的データも前記の表１０に報告する。Ｈ形の単位セルは４つのエプレレノン分子からなる。Ｌ形の単位セルは２つのエプレレノン分子からなる。エプレレノン分子が併進および回転して溶媒分子が残した空間を充填すると、溶媒和物の単位セルは脱溶媒和中にＨ形および／またはＬ形の単位セルに変換される。表１０には多数の異なる溶媒和物についての脱溶媒和温度も報告する。
【０１１８】
８．不純物分子の結晶特性
エプレレノン中の特定の不純物が溶媒和物の脱溶媒和に際してＨ形の形成を誘発する可能性がある。特に下記の２つの不純物分子の影響について評価した：７−メチル水素４α，５α：９α，１１α−ジエポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナン−７α，２１−ジカルボキシラート、γ−ラクトン３（”ジエポキシド”）；および７−メチル水素１１α，１２α−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグン−４−エン−７α，２１−ジカルボキシラート、γ−ラクトン４（”１１，１２−エポキシド”）。
【０１１９】
【化３】
2004511435.tif 000025
【０１２０】
これらの不純物分子が脱溶媒和により得られるエプレレノンの結晶質形に及ぼす影響について、本明細書の実施例に詳述する。
７−メチル水素１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナ−４，９（１１）−ジエン−７α，２１−ジカルボキシラート、γ−ラクトン５（”９，１１−オレフィン”）とＨ形の単結晶構造の類似性を考慮すると、９，１１−オレフィンも溶媒和物の脱溶媒和に際してＨ形の形成を誘発する可能性があると推定される。
【０１２１】
【化４】
2004511435.tif 000026
【０１２２】
ジエポキシド、１１，１２−エポキシドおよび９，１１−オレフィンは、たとえばそれぞれＮｇらのＷＯ９８／２５９４８の例４７Ｃ、４７Ｂおよび３７Ｈの記載に従って製造できる。
【０１２３】
各不純物化合物の単結晶形を単離した。単離したジエポキシド、１１，１２−エポキシドおよび９，１１−オレフィンの結晶形について、代表的な粉末Ｘ線回折図をそれぞれ図９、１０および１１に示す。各不純物分子の粉末Ｘ線回折図はＨ形の粉末Ｘ線回折図に類似する。これは、Ｈ形とこれら３種類の不純物化合物が類似の単結晶構造をもつことを示唆する。
【０１２４】
これら３種類の化合物がＨ形と類似の単結晶構造をとることを証明するために、同様に不純物化合物それぞれの単結晶を単離し、Ｘ線構造測定を行った。ジエポキシドの単結晶はメチルエチルケトンから単離された。１１，１２−エポキシドの単結晶はイソプロパノールから単離された。９，１１−オレフィンの単結晶はｎ−ブタノールから単離された。不純物化合物それぞれの結晶質形について測定した結晶構造データを表１１に示す。得られた結晶系およびセルパラメーターは、Ｈ形、ジエポキシド、１１，１２−エポキシドおよび９，１１−オレフィン結晶質形について実質的に同じであった。
【０１２５】
【表２２】
2004511435.tif 000027
【０１２６】
表１１に示した４種類の化合物は結晶化すると同じ空間グループになり、類似のセルパラメーターをもつ（すなわちそれらはイソ構造である）。ジエポキシド、１１，１２−エポキシドおよび９，１１−オレフィンはＨ形コンホメーションをとると推定される。不純物化合物それぞれについてＨ形充填体の単離が比較的容易である（溶液から直接）ことは、この系列の構造類似化合物についてはＨ形格子が安定な充填様式であることを示す。
【０１２７】
エプレレノンの製造
本発明の新規な結晶質形の製造に用いるエプレレノン出発物質は、ＮｇらのＷＯ９７／２１７２０；およびＮｇらのＷＯ９８／２５９４８、特にＷＯ９７／２１７２０およびＷＯ９８／２５９４８のスキーム１に記載の方法で製造できる。
【０１２８】
結晶質形の製造
１．溶媒和結晶質形の製造
溶媒和結晶質形エプレレノンは、エプレレノンを適切な溶媒または適切な溶媒の混合物から結晶化することにより調製できる。適切な溶媒または適切な溶媒の混合物は、一般に高められた温度でエプレレノンを不純物と共に溶解するが冷却すると溶媒和物を優先的に結晶化させる、有機溶媒または有機溶媒混合物を含む。そのような溶媒または溶媒混合物中におけるエプレレノンの溶解度は、一般に室温で約５〜約２００ｍｇ／ｍＬである。溶媒または溶媒混合物は、好ましくは先にエプレレノン出発物質の製造プロセスで用いた溶媒、特にそのエプレレノン結晶質形を含む最終的な医薬組成物に含有された場合に医薬的に許容できる溶媒から選択される。たとえば塩化メチレンを含む溶媒系（塩化メチレンを含む溶媒和物を生じる）は一般に望ましくない。
【０１２９】
使用するのに好ましい溶媒はそれぞれ医薬的に許容できる溶媒、特に”Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ　Ｆｏｒ　Ｒｅｓｉｄｕａｌ　Ｓｏｌｖｅｎｔｓ（不純物：残留溶媒に関する指針）”、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　Ｏｎ　Ｈａｒｍｏｎｉｚａｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　Ｆｏｒ　Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ　Ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　Ｆｏｒ　Ｈｕｍａｎ　Ｕｓｅ（ヒト用医薬品の登録に対する技術的要件のハーモナイゼーションに関する国際会議）（１９９７年７月１７日、ＩＣＨプロセスのステップ４における採択のためにＩＣＨ運営委員会が推奨）に定めるクラス２またはクラス３の溶媒である。さらに好ましくは、溶媒または溶媒混合物は下記よりなる群から選択される：メチルエチルケトン、１−プロパノール、２−ペンタノン、酢酸、アセトン、酢酸ブチル、クロロホルム、エタノール、イソブタノール、酢酸イソブチル、酢酸メチル、プロピオン酸エチル、ｎ−ブタノール、ｎ−オクタノール、イソプロパノール、酢酸プロピル、プロピレングリコール、ｔ−ブタノール、テトラヒドロフラン、トルエン、メタノールおよび酢酸ｔ−ブチル。さらに好ましくは、溶媒はメチルエチルケトンおよびエタノールよりなる群から選択される。
【０１３０】
溶媒和結晶質形エプレレノンを調製するためには、ある量のエプレレノン出発物質をある体積の溶媒に溶解し、結晶が生じるまで冷却する。エプレレノンを溶媒に添加する際の溶媒温度は、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に基づいて選択される。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、この溶媒温度は一般に少なくとも約２５℃、好ましくは約３０℃から溶媒の沸点まで、より好ましくは溶媒の沸点より約２５℃低い温度から溶媒の沸点までである。
【０１３１】
あるいは、高温の溶媒をエプレレノンに添加し、混合物を結晶が生じるまで冷却してもよい。エプレレノンに添加する時点での溶媒温度は、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に基づいて選択される。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、この溶媒温度は一般に少なくとも約２５℃、好ましくは約５０℃から溶媒の沸点まで、より好ましくは溶媒の沸点より約１５℃低い温度から溶媒の沸点までである。
【０１３２】
ある体積の溶媒と混合するエプレレノン出発物質の量も、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に依存する。一般に溶媒に添加する量のエプレレノンは、室温ではその体積の溶媒に完全には溶解しないであろう。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、ある体積の溶媒と混合するエプレレノン出発物質の量は、通常は室温でその体積の溶媒に溶解するエプレレノン量の少なくとも約１．５〜約４．０倍、好ましくは少なくとも約２．０〜約３．５倍、より好ましくは少なくとも約２．５倍である。
【０１３３】
エプレレノン出発物質が溶媒に完全に溶解した後、溶液を一般に徐々に冷却すると溶媒和結晶質形エプレレノンが結晶化する。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、溶液を約２０℃／分より遅い速度、好ましくは約１０℃／分以下の速度、より好ましくは約５℃／分以下の速度、さらに好ましくは約１℃／分以下の速度で冷却する。
【０１３４】
溶媒和結晶質形を採集するエンドポイント温度は、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に依存する。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、エンドポイント温度は一般に約２５℃より低く、好ましくは約５℃より低く、より好ましくは約−５℃より低い。溶媒和結晶質形の生成には一般にエンドポイント温度が低いほど好ましい。
【０１３５】
あるいは他の方法で溶媒和物を調製してもよい。そのような方法の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）エプレレノン出発物質をある溶媒に溶解し、補助溶媒を添加して溶媒和結晶質形の結晶化を補助する、（ｉｉ）溶媒和物の蒸気拡散成長、（ｉｉｉ）蒸発、たとえば回転蒸発による溶媒和物の単離、および（ｉｖ）スラリー変換。
【０１３６】
上記により調製した溶媒和結晶質形の結晶を溶媒から任意の適切な常法、たとえば濾過または遠心分離により分離できる。一般に結晶化に際して溶媒系の撹拌を高めるほど、結晶粒径は小さくなる。
【０１３７】
２．溶媒和物からＬ形の調製
Ｌ形エプレレノンは溶媒和結晶質形から脱溶媒和により直接調製できる。脱溶媒和は任意の適切な脱溶媒和手段、たとえば溶媒和物の加熱、溶媒和物の周囲圧力の低下、またはこれらの組合わせにより達成できるが、これらに限定されない。溶媒を除去するために、たとえばオーブン内で溶媒和物を加熱して溶媒を除去する場合、このプロセス中の溶媒和物の温度は一般にＨ形とＬ形のエナンチオトロピー転移温度を超えない。この温度は好ましくは約１５０℃を超えない。
【０１３８】
脱溶媒和圧力および脱溶媒和時間は範囲の狭い厳密なものではない。脱溶媒和圧力は好ましくは約１気圧以下である。ただし脱溶媒和圧力の低下に伴って脱溶媒和を実施できる温度も低下し、および／または脱溶媒和時間も短縮される。特に脱溶媒和温度の高い溶媒和物については、真空乾燥するとより低い乾燥温度を採用できるであろう。脱溶媒和時間は、脱溶媒和が可能であり、したがってＬ形の形成が完了するのに十分でありさえすればよい。
【０１３９】
実質的にすべてＬ形を含む生成物を確実に調製するために、エプレレノン出発物質は一般に高純度エプレレノン、好ましくは実質的に純粋なエプレレノンである。Ｌ形エプレレノンの調製に用いるエプレレノン出発物質は、一般に少なくとも９０％の純度、好ましくは少なくとも９５％の純度、より好ましくは少なくとも９９％の純度である。本明細書の他の箇所で詳述するように、エプレレノン出発物質中の特定の不純物はそのプロセスで得られる生成物の収率およびＬ形含量に有害な影響を及ぼす可能性がある。
【０１４０】
こうして高純度エプレレノン出発物質から調製した結晶化エプレレノン生成物は、一般に少なくとも１０％のＬ形、好ましくは少なくとも５０％のＬ形、より好ましくは少なくとも７５％のＬ形、さらに好ましくは少なくとも９０％のＬ形、さらに好ましくは少なくとも９５％のＬ形、さらに好ましくは実質的に相純粋なＬ形を含む。
【０１４１】
３．溶媒和物からＨ形の調製
Ｈ形を含む生成物は、Ｌ形の調製について前記に述べたものと実質的に同じ方法で、（ｉ）高純度エプレレノン出発物質ではなく低純度エプレレノン出発物質を用い、（ｉｉ）溶媒系に相純粋なＨ形結晶を播種し、または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組合わせにより調製できる。
【０１４２】
Ａ．成長の促進物質および阻害物質としての不純物の使用
エプレレノン出発物質中の特定の不純物の存在および量（エプレレノン出発物質中の全不純物の全量ではなく）は、溶媒和物の脱溶媒和に際してＨ形結晶生成能に影響を及ぼす。特定の不純物は一般にＨ形成長促進物質またはＬ形成長阻害物質である。それはエプレレノン出発物質中に含有されてもよく、エプレレノン出発物質添加前の溶媒もしくは溶媒混合物中に含有されてもよく、および／またはエプレレノン出発物質添加後に溶媒もしくは溶媒混合物に添加されてもよい。Ｂｏｎａｆｅｄｅ　ｅｔ　ａｌ．，”分子結晶サブステート上でのレッジ指向性エピタキシーによる有機多形の選択的成核および成長”，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ．１１７，Ｎｏ．３０（１９９５年８月２日）に、多形系における成長促進物質および成長阻害物質の使用について述べられており、これを本明細書に援用する。本発明に関して、不純物は一般にＨ形の単結晶構造と実質的に同一の単結晶構造をもつ化合物を含む。不純物は好ましくはＨ形の粉末Ｘ線回折図と実質的に同一の粉末Ｘ線回折図をもつ化合物であり、より好ましくは前記のジエポキシド、１１，１２−エポキシド、９，１１−オレフィンおよびその組合わせよりなる群から選択される。
【０１４３】
Ｈ形結晶の調製に必要な不純物の量は、一般に一部は溶媒または溶媒混合物、およびエプレレノンと対比した不純物の溶解度に依存する可能性がある。たとえばＨ形をメチルエチルケトン溶媒から結晶化する場合、ジエポキシドと低純度エプレレノン出発物質の重量比は一般に少なくとも約１：１００、好ましくは少なくとも約３：１００、より好ましくは約３：１００〜約１：５、さらに好ましくは約３：１００〜約１：１０である。１１，１２−エポキシドはメチルエチルケトン中における溶解度がジエポキシドより高く、Ｈ形結晶の調製にはより多量の１１，１２−エポキシドが一般に必要である。不純物が１１，１２−エポキシドを含む場合、ジエポキシドと低純度エプレレノン出発物質の重量比は一般に少なくとも約１：５、より好ましくは少なくとも約３：２５、さらに好ましくは約３：２５〜約１：５である。ジエポキシドと１１，１２−エポキシドの両不純物をＨ形結晶の調製に用いる場合、各不純物とエプレレノン出発物質の重量比は、その不純物を単独でＨ形結晶の調製に用いる場合の対応する比率より低くてよい。
【０１４４】
選択した不純物を含む溶媒和物を脱溶媒和する場合、一般にＨ形とＬ形の混合物が得られる。溶媒和物の最初の脱溶媒和から得られる生成物中におけるＨ形の重量画分は、一般に約５０％未満である。後記に述べるようにこの生成物をさらに結晶化または蒸解により処理すると、一般に生成物中のＬ形の重量画分が増加する。
【０１４５】
Ｂ．播種
Ｈ形結晶は、エプレレノンの結晶化前に溶媒系に相純粋なＨ形結晶（または前記に述べたＨ形成長促進物質および／またはＬ形成長阻害物質）を播種することによっても調製できる。エプレレノン出発物質は低純度エプレレノンまたは高純度エプレレノンのいずれであってもよい。いずれかの出発物質から調製した生成溶媒和物を脱溶媒和する場合、生成物中のＨ形の重量画分は少なくとも約７０％であり、約１００％にも及ぶ場合がある。
【０１４６】
溶媒系に添加するＨ形種結晶と溶媒系に添加するエプレレノン出発物質の重量比は、一般に少なくとも約０．７５：１００、好ましくは約０．７５：１００〜約１：２０、より好ましくは約１：１００〜約１：５０である。Ｈ形種結晶は、Ｈ形結晶の調製に関して本明細書に述べたいずれかの方法、特に後記に述べる蒸解によるＨ形の調製方法で調製できる。
【０１４７】
Ｈ形種結晶を、一度に、多数回で、またはある期間にわたって実質的に連続して、添加することができる。ただしＨ形種結晶の添加は一般にエプレレノンが溶液から結晶化し始める前に完了する。すなわち、曇り点（準安定域の下端）に達する前に播種を完了する。播種は、一般に溶液温度が曇り点より約０．５℃高い温度から約１０℃高い温度まで、好ましくは曇り点より約２〜約３℃高い温度で行われる。種結晶を添加する温度が曇り点より高いほど、Ｈ形結晶の結晶化に必要な種結晶の量は一般に増加する。
【０１４８】
播種は、曇り点より高いだけでなく、準安定域内で行われるのが好ましい。曇り点も準安定域も、溶媒または溶媒混合物中におけるエプレレノンの溶解度および濃度に依存する。たとえばメチルエチルケトンの１２倍体積希釈液については、準安定域の上限は一般に約７０〜約７３℃、準安定域の下限（すなわち曇り点）は一般に約５７〜約６３℃である。メチルエチルケトン８倍体積の濃度については、溶液が過飽和されるので準安定域はさらに狭い。この濃度では、溶液の曇り点は約７５〜約７６℃に生じる。メチルエチルケトンの沸点は周囲条件下では約８０℃であるので、この溶液に対する播種は一般に約７６．５℃と沸点の間で行われる。
【０１４９】
Ｈ形播種の代表例を後記の実施例７に示す。これは限定ではない。
Ｈ形成長促進物質もしくはＬ形成長阻害物質、および／またはＨ形播種を用いて得た結晶化エプレレノン生成物は、一般に少なくとも２％のＨ形、好ましくは少なくとも５％のＨ形、より好ましくは少なくとも７％のＨ形、さらに好ましくは少なくとも約１０％のＨ形を含む。結晶化エプレレノン生成物の残りは一般にＬ形である。
【０１５０】
Ｃ．エプレレノンの粉砕により調製したＨ形
さらに他の別法では、エプレレノンの適切な粉砕によって少量のＨ形を調製しうることが見いだされた。粉砕エプレレノン中約３％というＨ形濃度がみられた。
【０１５１】
４．低純度エプレレノンから調製した溶媒和物からのＬ形の調製
前記に述べたように、低純度エプレレノンを結晶化して溶媒和物を形成させ、続いてこの溶媒和物を脱溶媒和すると、一般にＨ形とＬ形の両方を含む生成物が得られる。Ｌ形含量がより高い生成物は、低純度エプレレノンからＨ形の調製に関して前記に述べたものと実質的に同じ方法で、溶媒系に相純粋なＬ形結晶を播種することにより、あるいはＬ形成長促進物質および／またはＨ形成長阻害物質を用いて調製できる。播種プロトコル、ならびに溶媒系に添加するＬ形種結晶の量と溶媒系に添加するエプレレノン出発物質の量の重量比は、一般に相純粋なＨ形の播種によるＨ形エプレレノンの調製について前記に述べた比率と同様である。
【０１５２】
この方法で調製した結晶化エプレレノン生成物は一般に少なくとも１０％のＬ形、好ましくは少なくとも５０％のＬ形、より好ましくは少なくとも７５％のＬ形、より好ましくは少なくとも９０％のＬ形、さらに好ましくは少なくとも約９５％のＬ形、さらに好ましくは実質的に相純粋なＬ形を含む。
【０１５３】
このセクションおよびＨ形エプレレノンの調製に関する前のセクションに記載した播種プロトコルによれば、結晶化エプレレノンの粒径の制御を改善することもできる。
【０１５４】
５．溶液からの直接Ｌ形結晶化
Ｌ形エプレレノンは中間溶媒和物を形成せずに、したがって脱溶媒和を伴わずに、適切な溶媒または溶媒混合物から直接結晶化により調製することもできる。一般に（ｉ）溶媒は溶媒和結晶格子中に生じる通路空間に適合しない分子サイズをもち、（ｉｉ）エプレレノンおよび不純物は高められた温度でその溶媒に可溶性であり、かつ（ｉｉｉ）冷却すると非溶媒和Ｌ形エプレレノンが結晶化する。溶媒または溶媒混合物中におけるエプレレノンの溶解度は、一般に室温で約５〜約２００ｍｇ／ｍＬである。溶媒または溶媒混合物は、好ましくはメタノール、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、アセトニトリル、ニトロベンゼン、水およびエチルベンゼンよりなる群から選択される１種類以上の溶媒を含む。
【０１５５】
Ｌ形エプレレノンを溶液から直接結晶化するためには、ある量のエプレレノン出発物質をある体積の溶媒に溶解し、結晶が生じるまで冷却する。エプレレノンを溶媒に添加する際の溶媒温度は、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に基づいて選択される。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、この溶媒温度は一般に少なくとも約２５℃、好ましくは約３０℃から溶媒の沸点まで、より好ましくは溶媒の沸点より約２５℃低い温度から溶媒の沸点までである。
【０１５６】
あるいは、高温の溶媒をエプレレノンに添加し、混合物を結晶が生じるまで冷却してもよい。エプレレノンに添加する時点での溶媒温度は、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に基づいて選択される。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、この溶媒温度は一般に少なくとも約２５℃、好ましくは約５０℃から溶媒の沸点まで、より好ましくは溶媒の沸点より約１５℃低い温度から溶媒の沸点までである。
【０１５７】
ある体積の溶媒と混合するエプレレノン出発物質の量も、一般に溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に依存する。一般に溶媒に添加するエプレレノンの量は、室温ではその体積の溶媒に完全には溶解しないであろう。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、ある体積の溶媒と混合するエプレレノン出発物質の量は、通常は室温でその体積の溶媒に溶解するエプレレノン量の少なくとも約１．５〜約４．０倍、好ましくは少なくとも約２．０〜約３．５倍、より好ましくは少なくとも約２．５倍である。
【０１５８】
実質的に相純粋なＬ形を含む生成物を確実に調製するために、エプレレノン出発物質は一般に高純度エプレレノンである。エプレレノン出発物質は、好ましくは少なくとも６５％の純度、より好ましくは少なくとも９０％の純度、さらに好ましくは少なくとも９８％の純度、さらに好ましくは少なくとも９９％の純度である。
【０１５９】
エプレレノン出発物質がその溶媒に完全に溶解した後、溶液を一般に徐々に冷却すると溶媒和結晶質形エプレレノンが結晶化する。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、溶液を約１．０℃／分より遅い速度、好ましくは約０．２℃／分以下の速度、より好ましくは約５〜０．１℃／分の速度で冷却する。
【０１６０】
Ｌ形結晶を採集するエンドポイント温度は、溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に依存する。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、エンドポイント温度は一般に約２５℃より低く、好ましくは約５℃より低く、より好ましくは約−５℃より低い。
【０１６１】
あるいは他の方法を用いてＬ形結晶を調製してもよい。そのような方法の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）エプレレノン出発物質をある溶媒に溶解し、補助溶媒を添加してＬ形エプレレノンの結晶化を補助する、（ｉｉ）Ｌ形エプレレノンの蒸気拡散成長、（ｉｉｉ）蒸発、たとえば回転蒸発によるＬ形エプレレノンの単離、および（ｉｖ）スラリー変換。
【０１６２】
上記により調製した溶媒和結晶質形の結晶を溶媒から任意の適切な常法、たとえば濾過または遠心分離により分離できる。
さらにＬ形種エプレレノンは、メチルエチルケトン中における高純度エプレレノンのスラリーを蒸解し（後記による）、蒸解したエプレレノンをスラリーの沸点で濾過することによっても調製できる。
【０１６３】
６．溶液からのＨ形の直接調製
Ｈ形とＬ形に関するエナンチオトロピー転移温度（Ｔｔ）より高い温度で結晶化を行うと、特にＨ形成長促進物質もしくはＬ形成長阻害物質が存在する場合、または溶媒に相純粋なＨ形結晶を播種した場合、これらの高温ではＨ形の方が安定であるので溶液からＨ形が直接結晶化すると推定される。用いる溶媒系は、好ましくは高沸点溶媒、たとえばニトロベンゼンを含む。適切なＨ形成長促進物質には前記のジエポキシドおよび１１，１２−オレフィンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６４】
７．溶媒によるエプレレノンの蒸解
溶媒和結晶形、Ｈ形およびＬ形エプレレノンは、エプレレノン出発物質を適切な溶媒または溶媒混合物中で蒸解することによっても調製できる。蒸解法では、エプレレノンのスラリーを溶媒または溶媒混合物の沸点に加熱する。たとえばある量のエプレレノン出発物質をある体積の溶媒または溶媒混合物と混和し、加熱還流し、留出物を取り出す。その際、留出物を取り出すと同時に追加量の溶媒を添加する。あるいは、蒸解プロセスで溶媒を追加せずに、留出物を濃縮して再循環することもできる。一般に最初の体積の溶媒を取り出し、または濃縮して再循環し、スラリーを冷却すると、溶媒和結晶が生成する。この溶媒和結晶を溶媒から任意の適切な常法、たとえば濾過または遠心分離により分離できる。溶媒和物を前記に従って脱溶媒和すると、溶媒和結晶中に特定の不純物が存在するか否かに応じてＨ形またはＬ形エプレレノンが得られる。
【０１６５】
適切な溶媒または溶媒混合物は一般に先に本明細書に記載した１種類以上の溶媒を含む。溶媒はたとえばメチルエチルケトンおよびエタノールよりなる群から選択できる。
【０１６６】
蒸解プロセスで用いる溶媒に添加するエプレレノン出発物質の量は、一般に溶媒または溶媒混合物の沸点でスラリーを維持する（すなわちエプレレノンが溶媒または溶媒混合物に完全には溶解しない）のに十分な量である。具体的な数値にはメチルエチルケトン４ｍＬ当たり約１ｇのエプレレノン、エタノール８ｍＬ当たり約１ｇのエプレレノンが含まれるが、これらに限定されない。
【０１６７】
溶媒のターンオーバーが完了すると、一般に溶液を徐々に冷却させて、溶媒和結晶形エプレレノンを結晶化させる。たとえば試験した溶媒について、溶液を約２０℃／分より遅い速度、好ましくは約１０℃／分以下の速度、より好ましくは約５℃／分以下の速度、さらに好ましくは約１℃／分以下の速度で冷却する。
【０１６８】
溶媒和結晶質形を採集するエンドポイント温度は、溶媒または溶媒混合物の溶解度曲線に依存する。たとえば本明細書に記載する大部分の溶媒について、エンドポイント温度は一般に約２５℃より低く、好ましくは約５℃より低く、より好ましくは約−５℃より低い。
【０１６９】
主にまたは専らＬ形を含む生成物を目的とする場合、一般に高純度エプレレノン出発物質を蒸解する。高純度エプレレノン出発物質は、好ましくは少なくとも９８％の純度、より好ましくは少なくとも９９％の純度、さらに好ましくは少なくとも９９．５％の純度である。この方法で調製した蒸解エプレレノン生成物は一般に少なくとも１０％のＬ形、好ましくは少なくとも５０％のＬ形、より好ましくは少なくとも７５％のＬ形、より好ましくは少なくとも９０％のＬ形、さらに好ましくは少なくとも約９５％のＬ形、さらに好ましくは実質的に相純粋なＬ形を含む。
【０１７０】
主にまたは専らＨ形を含む生成物を希望する場合、一般に低純度エプレレノン出発物質を蒸解する。低純度エプレレノン出発物質は、一般にＨ形の生成に必要な量だけのＨ形成長促進物質および／またはＬ形成長阻害物質を含有する。低純度エプレレノン出発物質は、好ましくは少なくとも６５％の純度、より好ましくは少なくとも７５％の純度、さらに好ましくは少なくとも８０％の純度である。この方法で調製した蒸解エプレレノン生成物は一般に少なくとも１０％のＨ形、好ましくは少なくとも５０％のＨ形、より好ましくは少なくとも７５％のＨ形、より好ましくは少なくとも９０％のＨ形、さらに好ましくは少なくとも約９５％のＨ形、さらに好ましくは実質的に相純粋なＨ形を含む。
【０１７１】
８．非晶質エプレレノンの調製
非晶質エプレレノンは固体エプレレノンの適切な粉砕により、たとえば破砕、摩砕および／または微細化により、少量で調製できる。相純粋な非晶質エプレレノンは、たとえばエプレレノン溶液、特にエプレレノン水溶液を凍結乾燥することにより調製できる。これらの方法を後記の実施例１３および１４に示す。
【０１７２】
実施例
以下の実施例には本明細書に記載する種々の固体状態形のエプレレノンの調製方法の詳細な説明が含まれる。これらの詳細な説明は本発明の範囲に含まれ、本発明を例示するためのものである。これらの詳細な説明は具体的な説明のために提示されたにすぎず、本発明の範囲を限定するためのものではない。別途指示しない限り、部はすべて重量部、温度は摂氏である。以下の各実施例で用いるエプレレノン出発物質は、ＮｇらのＷＯ９８／２５９４８に示されたスキーム１に従って製造された。
【０１７３】
実施例１：（ａ）高純度エプレレノン出発物質からのメチルエチルケトン溶媒和物の調製および（ｂ）得られた溶媒和物からのＬ形結晶質エプレレノンの調製
Ａ．メチルエチルケトン溶媒和物の調製：
高純度エプレレノン（４３７ｍｇ；純度９９％を超える；ジエポキシドおよび１１，１２−エポキシドの存在は０．２％未満）を１０ｍＬのメチルエチルケトンに、９００ｒｐｍで磁気撹拌しながらホットプレート上で加熱沸騰させることにより溶解した。得られた溶液を連続磁気撹拌しながら室温にまで放冷した。室温になると溶液を１℃の浴に移し、１時間撹拌し続けた。１時間後、固体メチルエチルケトン溶媒和物を真空濾過により採集した。
【０１７４】
Ｂ．Ｌ形結晶質エプレレノンの調製：
前記工程Ａで調製した固体メチルエチルケトン溶媒和物を１００℃のオーブンで周囲圧力下に４時間乾燥させた。ＤＳＣおよびＸＰＲＤ分析により乾燥固体は純粋なＬ形であると判定された。
【０１７５】
実施例２：高純度エプレレノン出発物質からの他の溶媒和物の調製
メチルエチルケトンの代わりに下記の１種類以上の溶媒を用い、実質的に前記実施例１、工程Ａの記載に従って結晶化を行い、他の溶媒和結晶質形を調製した：ｎ−プロパノール、２−ペンタノン、酢酸、アセトン、酢酸ブチル、クロロホルム、エタノール、イソブタノール、酢酸イソブチル、イソプロパノール、酢酸メチル、プロピオン酸エチル、ｎ−ブタノール、ｎ−オクタノール、酢酸プロピル、プロピレングリコール、ｔ−ブタノール、テトラヒドロフランおよびトルエン。実質的に前記実施例１、工程Ｂの記載に従って、各溶媒和物からＬ形エプレレノンを調製した。
【０１７６】
実施例３：蒸気拡散成長によるメチルエチルケトン溶媒和物の調製
エプレレノン（４００ｍｇ；純度９９．９％を超える）を２０ｍＬのメチルエチルケトンにホットプレート上で加温しながら溶解し、原液を調製した。この原液８ｍＬ量をまず２０ｍＬシンチレーションバイアルに移し、メチルエチルケトンで１０ｍＬに希釈した（８０％）。原液１０ｍＬ量を第２の２０ｍＬシンチレーションバイアルに移し、メチルエチルケトンで１０ｍＬに希釈した（４０％）。最後に原液２ｍＬ量をメチルエチルケトンで１０ｍＬに希釈した（２０％）。希釈液を入れた４本のバイアルを、抗溶媒として少量のヘキサンを入れたデシケータージャーに移した。デシケータージャーをシールし、ヘキサン蒸気をメチルエチルケトン溶液中へ拡散させた。８０％希釈試料中では翌日にメチルエチルケトン結晶が成長した。
【０１７７】
実施例４：回転蒸発によるメチルエチルケトン溶媒和物の調製
約４００ｍｇのエプレレノン（純度９９．９％を超える）を２５０ｍＬの丸底フラスコ中へ秤量する。溶媒（１５０ｍＬ）をフラスコに添加し、必要ならば固体が溶解するまで溶液を穏やかに加熱する。得られた透明な溶液を浴温約８５℃のＢｕｃｈｉ回転蒸発器に乗せ、溶媒を真空下で除去する。約１０ｍＬの溶媒が丸底フラスコ内に残ったとき溶媒の除去を停止する。得られた固体を、形態判定のため適宜な方法（ＸＰＲＤ、ＤＳＣ、ＴＧＡ、顕微鏡検査など）で分析する。
【０１７８】
実施例５：スラリー変換
ほぼ１５０ｍｇのＬ形エプレレノンおよび１５０ｍｇのＨ形エプレレノンを５ｍＬの酢酸エチルに添加した。得られたスラリーを３００ｒｐｍで一夜撹拌した（磁気撹拌）。翌日、固体試料を濾過により採集した。ＸＰＲＤによる試料分析は、この試料が完全にＬ形エプレレノンからなることを示した。
【０１７９】
実施例６：（ａ）低純度エプレレノン出発物質からの溶媒和物の調製および（ｂ）得られた溶媒和物からのＨ形結晶質エプレレノンの調製
目的量の不純物を全試料質量１００ｍｇとなるのに十分な量のエプレレノンと一緒に７ｍＬのシンチレーションバイアルに添加することにより、種々の量の不純物７−メチル水素４α，５α：９α，１１α−ジエポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグナン−７α，２１−ジカルボキシラート、γ−ラクトン（”ジエポキシド”）または不純物７−メチル水素１１α，１２α−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７α−プレグン−４−エン−７α，２１−ジカルボキシラート、γ−ラクトン（”１１，１２−エポキシド”）を含有する試料を調製した。各試料中のジエポキシドまたは１１，１２−エポキシドの重量％をそれぞれ表Ｘ−６ＡおよびＸ−６Ｂに示す。ミクロフレア（ｍｉｃｒｏ−ｆｌｅａ）磁気マグネチックスターラーを１ｍＬのメチルエチルケトンと共に各シンチレーションバイアルに添加した。バイアルにゆるく蓋をし、ホットプレート上で磁気撹拌しながら加熱還流することにより固体を溶解した。固体が溶解すると、溶液をホットプレート上で室温にまで放冷した。冷却期間中、磁気撹拌を続けた。溶液が室温に達した後、固体を真空濾過により採集し、直ちに粉末Ｘ線回折（ＸＰＲＤ）により分析した。次いで固体を１００℃のオーブンに入れ、周囲圧力で１時間乾燥させた。乾燥固体のＨ形含量を、ＸＰＲＤで約１２．１°の２θにおけるＨ形回折ピーク面積のモニターにより分析した。全ＸＰＲＤ回折図をＩｎｅｌ多目的回折計により記録した。
【０１８０】
【表２３】
2004511435.tif 000028
【０１８１】
Ａ．ジエポキシドの結果
図１３に、（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）３％、および（ｄ）５％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトン結晶化により得た湿潤ケーク（メチルエチルケトン溶媒和物）の粉末Ｘ線回折図を示す。比較しやすくするためにピーク強度を正規化した。これらの回折図中にＨ形またはジエポキシドに特徴的なピークは存在しない。これらの図はエプレレノンのメチルエチルケトン溶媒和物に特徴的なものである。
【０１８２】
図１４に、（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）３％、および（ｄ）５％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトン結晶化により得た乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を示す。比較しやすくするためにピーク強度を正規化した。０％および１％のドープレベルで実施したメチルエチルケトン結晶化に対応する乾燥試料中には、Ｈ形は検出されなかった。３％および５％のドープレベルで実施したメチルエチルケトン結晶化に対応する乾燥試料中には、Ｈ形が検出された。各試料について約１２．１°の２θにおけるＨ形回折ピーク面積および推定Ｈ形含量を下記の表Ｘ−６Ｃに示す。
【０１８３】
【表２４】
2004511435.tif 000029
【０１８４】
表Ｘ−６Ｃに報告した結果から、脱溶媒和に際してジエポキシドの存在はＨ形の形成に影響を及ぼすことが確認される。これらの結果は、ジエポキシドがメチルエチルケトン溶媒和物結晶に取込みおよび／または吸着されるとＨ形エプレレノンの形成を誘発するのに有効であることを示す。
【０１８５】
脱溶媒和に際して形成されるＨ形の量に調製経路が及ぼす影響を分析するために、３％ジエポキシドドープ実験を繰り返した。この実験では、ドープ結晶化により得たメチルエチルケトン溶媒和物を２分した。第１部分を未処理のままとし、一方第２部分を乳鉢と乳棒でかるく摩砕して、より高いレベルの結晶欠陥を誘発した。２部分とも１００℃で１時間、周囲圧力において乾燥させた。乾燥固体をＸＰＲＤにより分析した。３％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトン結晶化による乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を図１５に示す：（ａ）溶媒和物を乾燥前に粉砕しないもの、および（ｂ）溶媒和物を乾燥前に粉砕したもの。これらのＸＰＲＤ図は、粉砕した試料中のＨ形の量の方が未粉砕試料と比較して多いことを示した。これらの結果は、メチルエチルケトン溶媒和物の単離および取扱い条件が、脱溶媒和により得られる結晶形に影響を及ぼす可能性があることを示唆する。
【０１８６】
Ｂ．１１，１２−エポキシドの結果
図１６に、（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）５％、および（ｄ）１０％１１，１２−エポキシドドープしたメチルエチルケトン結晶化により得た湿潤ケーク（メチルエチルケトン溶媒和物）の粉末Ｘ線回折図を示す。比較しやすくするためにピーク強度を正規化した。これらの回折図中にＨ形または１１，１２−エポキシドに特徴的なピークは存在しない。これらの図はエプレレノンのメチルエチルケトン溶媒和物に特徴的なものである。
【０１８７】
図１７に、（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）５％、および（ｄ）１０％１１，１２−エポキシドドープしたメチルエチルケトン結晶化により得た乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を示す。比較しやすくするためにピーク強度を正規化した。０％、１％および５％のドープレベルで実施したメチルエチルケトン結晶化に対応する乾燥試料中には、Ｈ形は検出されなかった。１０％のドープレベルで実施したメチルエチルケトン結晶化に対応する乾燥試料中には、Ｈ形が検出された。各試料について約１２．１°の２θにおけるＨ形回折ピーク面積および推定Ｈ形含量を下記の表Ｘ−６Ｄに示す。
【０１８８】
【表２５】
2004511435.tif 000030
【０１８９】
表Ｘ−６Ｄに報告した結果から、脱溶媒和に際して１１，１２−エポキシドの存在はＨ形の形成に影響を及ぼすことが確認される。メチルエチルケトン結晶化に際してＨ形エプレレノンの形成を誘発するのに必要な不純物の％は、ジエポキシドの場合より１１，１２−エポキシドの方が大きいと思われる。
【０１９０】
実施例７：結晶化および乾燥が最終結晶形に及ぼす影響
結晶化および乾燥が最終結晶形に及ぼす影響を分析する下記の４種類の実験を実施した：（ｉ）エプレレノンのメチルエチルケトン結晶化（２３＋３の統計学的に企画した実験）、（ｉｉ）低品質の母液残留物の結晶化、（ｉｉｉ）Ｈ形播種による高純度エプレレノンの結晶化、および（ｉｖ）Ｌ形播種による低純度エプレレノンの結晶化。実験を企画する際の変数には、冷却速度、出発物質の純度、および結晶化のエンドポイント温度を含めた。この実施例の目的に関して、高純度エプレレノンを超純粋な微粉砕エプレレノンと定め（ＨＰＬＣ分析でこの物質は純度１００．８％であることが示された）、低純度エプレレノンを純度８９％のエプレレノンと定めた。低純度エプレレノンを調製するために、エプレレノン調製プロセスから取り出した母液を分析し、ブレンドしてエプレレノン６１．１％、ジエポキシド１２．８％および１１，１２−エポキシド７．６％の物質を得た。次いでこの物質を８９％エプレレノンとなるのに十分な量の高純度エプレレノンとブレンドした。
【０１９１】
Ａ．メチルエチルケトン結晶化
メチルエチルケトン結晶化実験では、６０ｇの高純度エプレレノンを用いてすべての試験を実施した。高いエンドポイントを４５℃と定め、低いエンドポイントを５℃と定めた。高い冷却速度を３℃／分の冷却と定め、低い冷却速度を０．１℃／分の冷却と定めた。中間点は、１．５℃／分の冷却、純度９４．５％のエプレレノン、２５℃のエンドポイントであった。
【０１９２】
ＦＴＩＲでバックグラウンド読みを求めた後、２５０ｍＬのメチルエチルケトンを１ＬのＭｅｔｔｌｅｒ　ＲＣ−１、ＭＰ１０反応器に装入し、１００ｒｐｍで撹拌した。数回の走査後、反応器にエプレレノンを装入し、続いて４７０ｍＬのメチルエチルケトンを追加した。撹拌を５００ｒｐｍに高めて固体を懸濁し、バッチ温度を８０℃に高めた。エプレレノンを確実に溶解するためにバッチ温度を８０℃に維持した。得られた透明な溶液に一般に黒または白の斑点がみられた。次いでバッチ温度を目的のエンドポイントまで目的速度で勾配冷却し、エンドポイントに１時間維持した後、トランスファーフラスコ中へ吸引し、濾過した。真空反応器、トランスファーフラスコおよびケークを１２０ｍＬのメチルエチルケトンで洗浄した。洗浄液がケークを通過すると、停止させた。約１０ｇの湿潤ケークをそれぞれ真空オーブン内で７５℃の公称条件下に、窒素を弱く吹き込みながら乾燥させた。下記の”高、高、高”および”低、低、低”実験については、流動床乾燥を高および低条件下で操作した。高流動床乾燥を１００℃でブロアー設定”４”と定め、低流動床乾燥を４０℃でブロアー設定”１”と定めた。
【０１９３】
Ｂ．低品質母液残留物の結晶化
低品質母液残留物の結晶化実験では、純度６１．１％の物質６０ｇおよび７２０ｍＬのメチルエチルケトンを１ＬのＭｅｔｔｌｅｒ　ＲＣ−１、ＭＰ１０反応器に直接装入した。純度６１．１％の物質を反応器装入前に高純度エプレレノンとブレンドしなかった。得られた混合物を８０℃に加熱した。混合物はこの温度では不透明なスラリーであった。結晶化が持続し、混合物を４５℃で高速冷却条件下に濾過した。
【０１９４】
Ｃ．Ｈ形の播種
Ｈ形播種実験では、純（１００．８％）エプレレノン６０ｇおよび７２０ｍＬのメチルエチルケトンを１ＬのＭｅｔｔｌｅｒ　ＲＣ−１、ＭＰ１０反応器に装入した。混合物を８０℃に加熱し、次いで１．５℃／分の速度で２５℃に冷却した。溶液が６２℃に冷却した時点で３ｇの相純粋なＨ形結晶を播種して結晶化を開始させた。Ｈ形種結晶は後記の実施例９に記載の蒸解法により調製された。
【０１９５】
Ｄ．Ｌ形の播種
Ｌ形播種実験では、６６．６ｇの８９．３％エプレレノン（１００％エプレレノン４８．３ｇと６１．１％エプレレノン１８．３ｇの混合により調製）および７２０ｍＬのメチルエチルケトンを１ＬのＭｅｔｔｌｅｒ　ＲＣ−１、ＭＰ１０反応器に装入した。混合物を８０℃に加熱し、次いで１．５℃／分の速度で２５℃に冷却した。溶液が６３℃に冷却した時点で３ｇの相純粋なＬ形結晶を播種して結晶化を開始させた。Ｌ形種結晶は前記の実施例１に記載の結晶化および脱溶媒和法により調製された。
【０１９６】
実験結果を表Ｘ−７Ａに報告する。ｎ＋１回の結晶化実験でＨ形は低純度エプレレノンを用いた実験でのみ検出され、その生成物はジエポキシドを含有していた。冷却速度を高めるほど最終生成物中のジエポキシドレベルが増大することも認められた。
【０１９７】
低品質母液残留物の結晶化実験では、粉末Ｘ線回折により分析するとジエポキシドとＨ形の混合物と思われる低品質の物質が得られた。
Ｈ形播種実験（高純度エプレレノンにＨ形を播種）では、粉末Ｘ線回折に基づけば７７％Ｈ形、ＤＳＣに基づけば完全Ｈ形の生成物が得られた。ただし粉末Ｘ線回折モデルは約１５％より高いＨ形の直線性については試験されなかった。この実験は、ジエポキシドの不存在下でＨ形を形成した４実験のひとつにすぎなかった。
【０１９８】
Ｌ形播種実験（低純度エプレレノンにＬ形を播種）では、完全Ｌ形の生成物が得られた。
エプレレノンの高流動床乾燥について得たデータは、真空オーブン乾燥について得たデータに対応するように思われた。低流動床乾燥では、真空オーブン乾燥のものと異なる結果が得られた。
【０１９９】
【表２６】
2004511435.tif 000031
【０２００】
１　冷却速度：（＋）＝３℃／分；（０）＝１．５℃／分；（−）＝０．１℃／分；
２　冷却エンドポイント：（＋）＝４５℃；（０）＝２５℃；（−）＝５℃；
３　不純物レベル：（＋）＝純度８９．３％のエプレレノン出発物質；（＋＋）＝純度６１．１％のエプレレノン出発物質；（０）＝純度１００．８％のエプレレノン出発物質；（−）＝純度９４．５％のエプレレノン出発物質；
４　溶媒和物を７５℃の真空オーブンで乾燥させた後の重量％；
５　ＸＰＲＤにより分析すると、ジエポキシドとＨ形の混合物と思われる；
６　ＸＰＲＤにより分析すると７７％Ｈ形、ＤＳＣにより分析すると１００％Ｈ形と思われる。
【０２０１】
Ａ．物質の純度
表Ｘ−７Ａに報告したデータに基づく生成物純度、出発物質純度、冷却速度およびエンドポイント温度の立方プロットを図１８に示す。この立方プロットは、結晶化出発時の物質純度が高いほど高純度の生成物が得られることを示唆する。結晶化のエンドポイント温度は生成物の純度に大きな影響を及ぼさないように思われる。しかし冷却速度は影響を及ぼすように思われ、高い冷却速度ほどわずかに低い純度の生成物が得られる。事実、高い冷却速度ほど一般にジエポキシドレベルが高かった。
【０２０２】
図１９は、生成物純度に対し統計学的に有意の影響をもつ変数を判定するために立方プロットの結果を用いて作成した半標準プロットを示す。出発物質の純度は生成物純度に対して統計学的に最も有意の影響をもっていたが、冷却速度、および冷却速度と出発物質純度の相互作用も統計学的に有意の影響をもつことが認められた。
【０２０３】
図２０は、これらの結果に基づく相互作用グラフであり、生成物純度に対する出発物質純度と冷却速度の相互作用を示す。高純度エプレレノン（１００．８％エプレレノン出発物質）については、冷却速度は最終純度に対してほとんどまたは全く影響を及ぼさないように思われる。しかし低純度エプレレノン（８９．３％エプレレノン出発物質）については、冷却速度の増大に伴って生成物純度が低下する。この結果は、より高い冷却速度で実施したエプレレノン結晶化ほど、より多量の不純物が結晶化することを示唆する。
【０２０４】
Ｂ．Ｈ形含量
表Ｘ−７Ａに報告したデータに基づくＨ形重量画分、生成物純度、出発物質純度、冷却速度およびエンドポイント温度の立方プロットを図２１に示す。この立方プロットは、結晶化出発時に高純度エプレレノンを用いるほどＨ形の量が低くなることを示唆する。結晶化のエンドポイント温度も最終生成物の純度に影響を及ぼすように思われる。冷却速度はＨ形の形成に大幅な影響は及ぼさないように思われるが、不純物の存在下に低いエンドポイントでは冷却速度が低いほど若干量のＨ形が生成する可能性がある。
【０２０５】
図２２は、最終物質中のＨ形の量に対し統計学的に有意の影響をもつ変数を判定するために、この立方プロットの結果を用いて作成した半標準プロットを示す。出発物質純度、結晶化のエンドポイント温度、およびこれら２変数間の相互作用が、統計学的に有意の影響をもつことが認められた。
【０２０６】
図２３は、これらの結果に基づく相互作用グラフであり、最終Ｈ形含量に対する出発物質純度とエンドポイント温度の相互作用を示す。高純度エプレレノン（１００．８％エプレレノン出発物質）については、エンドポイント温度はＨ形含量に対してほとんどまたは全く影響を及ぼさないように思われる。純エプレレノンについては、いずれの場合もＨ形は生成しなかった。しかし低純度エプレレノン（８９．３％エプレレノン出発物質）については両方の場合ともＨ形が存在し、エンドポイント温度が高いほど有意に多いＨ形が生成した。
【０２０７】
表Ｘ−７Ｂに、流動床（ＬＡＢ−ＬＩＮＥ／Ｐ．Ｒ．Ｌ．高速流動床乾燥機、Ｌａｂ−Ｌｉｎｅ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社）または真空オーブン（Ｂａｘｔｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ真空乾燥オーブン、ＤＰ−３２型）のいずれかを用いて乾燥させた物質において測定したＨ形重量画分を報告する。高速流動床または真空オーブンのいずれで乾燥した比較しうる物質についても、類似のＨ形含量がみられた。ただし低速流動床で乾燥した比較しうる物質については、真空オーブンと比較して差がみられた。
【０２０８】
【表２７】
2004511435.tif 000032
【０２０９】
実施例８：メチルエチルケトンからＨ形およびＬ形の混合物を結晶化して溶媒和物を調製、そして（ｂ）溶媒和物を脱溶媒和してＬ形を調製
Ｈ形エプレレノン（１０ｇ）を８０ｍＬのメチルエチルケトンと混和した。混合物を加熱還流し（７９℃）、この温度で約３０分間撹拌した。次いで得られたスラリーを６５℃、５０℃、３５℃および２５℃で各温度に約９０分間保持することによる段階的ホールドポイントプロトコルでスラリーを冷却した。スラリーを濾過し、約２０ｍＬのメチルエチルケトンですすいだ。単離した固体をまずフィルター上で、次いで真空オーブン内、４０〜５０℃で乾燥させた。真空オーブン内、９０〜１００℃で乾燥を完了した。脱溶媒和固体が８２％の回収率で得られた。ＸＰＲＤ、ＭＩＲおよびＤＳＣにより固体がＬ形結晶質構造をもつことが確認された。
【０２１０】
実施例９：低純度エプレレノン出発物質を溶媒で蒸解してＨ形を調製
Ａ．エタノール溶媒による蒸解：
低純度エプレレノン（２４．６ｇ；ＨＰＬＣによるアッセイで６４重量％）を１２６ｍＬのエタノール３Ａと混和した。このスラリーを加熱還流し、留出物を除去した。大気圧蒸留による溶媒１２６ｍＬの除去と同時に、１２６ｍＬのエタノール３Ａを追加した。溶媒のターンオーバーが完了すると、混合物を２５℃に冷却し、１時間撹拌した。固体を濾過し、エタノール３Ａですすいだ。固体を風乾すると、エタノール溶媒和物が得られた。この溶媒和物をさらに真空オーブン内、９０〜１００℃で６時間乾燥させて、１４．９ｇのＨ形エプレレノンを得た。
【０２１１】
Ｂ．メチルエチルケトン溶媒による蒸解
別の蒸解法で、１ｇの低純度エプレレノン（純度約６５％）を４ｍＬのメチルエチルケトン中で２時間蒸解した。２時間後、混合物を室温にまで放冷した。冷却すると、固体を真空濾過により採集し、ＸＰＲＤ分析によりメチルエチルケトン溶媒和物であることを確認した。この固体を１００℃で３０〜６０分間乾燥させた。乾燥固体はＸＰＲＤにより純粋なＨ形であると判定された。
【０２１２】
実施例１０：高純度エプレレノン出発物質を溶媒で蒸解してＬ形を調製
Ａ．エタノール溶媒による蒸解：
高純度エプレレノン（１ｇ）を８ｍＬのエタノール中で約２時間蒸解した。次いで溶液を室温にまで放冷し、固体を真空濾過により採集した。濾過後、直ちに固体をＸＰＲＤにより分析すると、固体は溶媒和物（エタノール溶媒和物と推定）であることが示された。次いでこの固体を１００℃、大気圧で３０分間乾燥させた。乾燥固体はＸＰＲＤにより主にＬ形であると判定された（Ｈ形は検出されなかった）。
【０２１３】
Ｂ．メチルエチルケトン溶媒による蒸解
高純度エプレレノン（１ｇ）を４ｍＬのメチルエチルケトン中で２時間蒸解した。２時間後、溶液を室温にまで放冷し、固体を真空濾過により採集した。直ちに固体をＸＰＲＤにより分析すると、固体はエプレレノン溶媒和物（メチルエチルケトン溶媒和物と推定）であると判定された。次いでこの固体を１００℃、周囲圧力で３０〜６０分間乾燥させた。乾燥固体をＸＰＲＤにより分析して、主にＬ形であると判定され、Ｈ形の存在を示す回折ピークはなかった。
【０２１４】
実施例１１：溶液からのＬ形の直接結晶化
方法Ａ：エプレレノン（２．５ｇ）を、７５℃に加熱することにより酢酸エチルに溶解した。エプレレノンが溶解すると、溶液を７５℃に３０分間保持して確実に完全溶解させた。次いで溶液を１℃／分で１３℃にまで冷却した。１３℃になると、スラリーを７５０ｒｐｍで２時間、オーバーヘッド撹拌機により撹拌した。結晶を真空濾過により採集し、真空オーブン内、４０℃で１時間乾燥させた。この固体のＸＰＲＤ図およびＤＳＣサーモグラムはＬ形エプレレノンに特徴的なものであった。固体の熱重量分析（ＴＧＡ）は２００℃まで固体からの重量損失を示さなかった。
【０２１５】
方法Ｂ：別法で、ホットプレート上で磁気撹拌しながら加熱することにより２ｇのエプレレノンを３５０ｍＬの１５／８５％　アセトニトリル／水に溶解した。エプレレノンが溶解すると、溶液を磁気撹拌しながら一夜、室温にまで放冷した。得られた固体を真空濾過により採集した。結晶は複屈折性であり、三角形の板状晶癖をもっていた。この固体はＬ形エプレレノンに特徴的なＸＰＲＤおよびＤＳＣを示した。ＴＧＡは２００℃まで重量損失を示さなかった。
【０２１６】
方法Ｃ：別法で、６４０ｍｇのエプレレノンを、２０ｍＬのエチルベンゼンを入れた５０ｍＬのフラスコに装入した。得られたスラリーを１１６℃に加熱すると、透明な溶液になった。この透明な溶液を３０分かけて２５℃に冷却した。この冷却期間中、８４℃で成核が開始した。生じた固体を溶液から濾過し、風乾して固体５３０ｍｇ（回収率８３％）を得た。高温載物台顕微鏡検査およびＸＰＲＤにより、この固体はＬ形結晶であると確認された。
【０２１７】
方法Ｄ：別法で、１．５５ｇのエプレレノンを２．０ｍＬのニトロベンゼンに添加し、２００℃に加熱した。得られたスラリーを２００℃で一夜撹拌した。溶液を室温にまで放冷し（自然の空気対流）、翌日固体を単離した。ＸＰＲＤおよび偏光顕微鏡検査により、この固体はＬ形エプレレノンであると判定された。
【０２１８】
方法Ｅ：別法で、５．０ｇのエプレレノン（純度９９％を超える）を８２ｇのメタノール（１０４ｍＬ）に添加した。撹拌作用下で（２１０ｒｐｍ）溶液を６０℃に加熱し、その温度に２０分間保持して確実に完全溶解させた。次いで溶液を撹拌下に０．１６℃／分の速度で−５℃にまで冷却した。結晶を濾過により採集し、真空オーブン内、４０℃で２０時間乾燥させた。ＤＳＣおよびＸＰＲＤ分析により、この乾燥固体は純Ｌ形エプレレノンであると判定された。
【０２１９】
方法Ｆ：別法で、６．０ｇのエプレレノン（９％のエタノールを含有するエタノール溶媒和物；補正純度９５．２％）を８２ｇのメタノール（１０４ｍＬ）に添加した。撹拌作用下で（２１０ｒｐｍ）溶液を６０℃に加熱し、その温度に２０分間保持して確実に完全溶解させた。次いで溶液を撹拌下に０．１４℃／分の速度で５０℃にまで冷却し、次いでその温度に約２．５時間保持した。次いで溶液を撹拌下に０．１３℃／分の速度で−５℃にまで冷却した。結晶を濾過により採集し、真空オーブン内、４０℃で１６時間乾燥させた。ＤＳＣおよびＸＰＲＤ分析により、この乾燥固体は純Ｌ形エプレレノンであると判定された。
【０２２０】
実施例１２：溶液からのＨ形の直接結晶化
１５０．５ｍｇの前記ジエポキシドおよび２．８５ｇのエプレレノンを１．５ｍＬのニトロベンゼンに添加した。混合物を２００℃で数時間磁気撹拌した。次いでスラリーを自然の空気対流により室温にまで放冷した。試料を乾燥させ、偏光顕微鏡検査およびＸＰＲＤにより分析した。ＸＰＲＤは試料がＨ形とＬ形の混合物であることを示した。この結晶は顕微鏡検査によれば半透明であり、脱溶媒和（およびＨ形またはＬ形のいずれかへの変換）が起きなかったことを示した。
【０２２１】
実施例１３：微粉砕による非晶質エプレレノンの調製
鋼製Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ容器のほぼ半分に約６０ｇのエプレレノン（純度９９．９％を超える）を充填した。鋼製のボールとキャップを試料容器に乗せ、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ装置で３０秒間撹拌した。エプレレノンをＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ容器の表面から掻き取り、容器をさらに３０秒間撹拌した。得られた固体をＸＰＲＤおよびＤＳＣにより分析して、非晶質エプレレノンとＬ形結晶質エプレレノンの混合物であると判定された。
【０２２２】
実施例１４：凍結乾燥による非晶質の調製
約１００ｍｇの粗製エプレレノンを、水４００ｍＬを入れたビーカー中へ秤量した。溶液を５分間、わずかに加熱し、次いで撹拌しながらさらに５分間、超音波処理および加熱した。約３５０ｍＬのエプレレノン溶液を、５０ｍＬのＨＰＬＣ水を入れた１０００ｍＬの丸底フラスコ中へ濾過した。溶液をドライアイス／アセトン浴内で１〜２分かけてフラッシュ凍結させた。フラスコをＬａｂｃｏｎｃｏ　Ｆｒｅｅｚｏｎｅ４．５凍結乾燥機に取り付け、一夜乾燥させた。フラスコ内の固体を小型褐色瓶に移した。少量をｃａｒｇｉｌｌｅ油（１．４０４）中、１０倍、１．２５倍ｏｐｔｉｖａｒの偏光顕微鏡により観察し、少なくとも９５％は非晶質エプレレノンであることが認められた。図２４および２５は、非晶質エプレレノンについて得られたＸＰＲＤおよびＤＳＣサーモグラムを示す。図２４の３９°の２θにみられたピークはアルミニウム製試料容器によるものである。
【０２２３】
実施例１５：エプレレノン多形組成物
２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇおよび２００ｍｇ量のＬ形エプレレノンを含有する錠剤を製造する。これらは下記の組成をもつ。
【０２２４】
成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　錠剤中の重量％
Ｌ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　　２９．４１
Ｈ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　検査されない
乳糖１水和物（＃３１０，ＮＦ）　　　　　　　　　４２．００
微晶質セルロース　　　　　　　　　　　　　　　　１８．０９
（ＮＦ，Ａｖｉｃｅｌ　ＰＨ１０１）
クロスカルメロースナトリウム　　　　　　　　　　　５．００
（ＮＦ，Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ）
ヒドロキシプロピルメチルセルロース　　　　　　　　３．００
（＃２９１０，ＵＳＰ，Ｐｈａｒｍａｃｏａｔ　６０３）
ラウリル硫酸ナトリウム（ＮＦ）　　　　　　　　　　１．００
タルク（ＵＳＰ）　　　　　　　　　　　　　　　　　１．００
ステアリン酸マグネシウム（ＮＦ）　　　　　　　　　０．５
合計　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００．００
【０２２５】
実施例１６：エプレレノン多形組成物
１００ｍｇ量のエプレレノンを含有するカプセル剤（硬ゼラチンカプセル、＃０）を製造する。これらは下記の組成をもつ。
【０２２６】
成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量（ｍｇ）
Ｌ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　　９０．０
Ｈ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
乳糖、含水、ＮＦ　　　　　　　　　　　　　　　２３１．４
微晶質セルロース、ＮＦ　　　　　　　　　　　　　４５．４
タルク（ＵＳＰ）　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
クロスカルメロースナトリウム、ＮＦ　　　　　　　　８．０
ラウリル硫酸ナトリウム、ＮＦ　　　　　　　　　　　２．０
コロイド状二酸化ケイ素、ＮＦ　　　　　　　　　　　２．０
ステアリン酸マグネシウム、ＮＦ　　　　　　　　　　１．２
全カプセル充填重量　　　　　　　　　　　　　４００．０
【０２２７】
実施例１７：エプレレノン多形組成物
２００ｍｇ量のエプレレノンを含有するカプセル剤（硬ゼラチンカプセル、サイズ＃０）を製造する。これらは下記の組成をもつ。
【０２２８】
成分　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　量（ｍｇ）
Ｌ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　１９０．０
Ｈ形エプレレノン　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
乳糖、含水、ＮＦ　　　　　　　　　　　　　　　１４７．８
微晶質セルロース、ＮＦ　　　　　　　　　　　　　２９．０
タルク（ＵＳＰ）　　　　　　　　　　　　　　　　１０．０
クロスカルメロースナトリウム、ＮＦ　　　　　　　　８．０
ラウリル硫酸ナトリウム、ＮＦ　　　　　　　　　　　２．０
コロイド状二酸化ケイ素、ＮＦ　　　　　　　　　　　２．０
ステアリン酸マグネシウム、ＮＦ　　　　　　　　　　１．２
全カプセル充填重量　　　　　　　　　　　　　４００．０
【０２２９】
実施例１８：粉砕エプレレノンの調製
乾燥メチルエチルケトン溶媒和物をＦｉｔｚｍｉｌｌ上で２０メッシュのスクリーンに通すことにより、溶媒和物からまず塊を除く。この除塊した固体を、次いで液体窒素冷却下に約２５０ｋｇ／時の供給速度で操作するＡｌｐｉｎｅ　Ｈｏｓａｋａｗａスタッドディスクピンミル（ｓｔｕｄ　ｄｉｓｋ　ｐｉｎ　ｍｉｌｌ）によりピンミリングする。ピンミリングにより約６５〜１００ミクロンのＤ９０粒径をもつ粉砕エプレレノンが得られる。
【０２３０】
実施例１９：
臨床試験：
プラシーボと対比した、カルシウムチャンネル遮断薬と共投与した際のエプレレノンの安全性および抗高血圧作用についての二重盲検、ランダム化、プラシーボ対照付き比較試験
【０２３１】
概要
この試験の目的は、軽度ないし中等度の高血圧症患者においてカルシウムチャンネル遮断薬（ＣＣＢ）と併用した際のエプレレノンの安全性および耐薬性ならびに抗高血圧作用を評価することである。
【０２３２】
最低１２０人のランダム化した高血圧症患者（ＣＣＢ摂取時の座位拡張期血圧［ｓｅＤＢＰ］≧９５ｍｍＨｇおよび＜１１０ｍｍＨｇ、座位収縮期血圧［ｓｅＳＢＰ］＜１８０ｍｍＨｇ）を伴うこの多センター、ランダム化、二重盲検、プラシーボ対照付き、プラシーボランイン（ｒｕｎ−ｉｎ）、並行群試験は、１〜２週間の処置前スクリーニング期間、続いて２〜４週間の一重盲検プラシーボランイン期間、および８週間の二重盲検処置期間からなる。適性患者は、抗高血圧症投薬の一部として現在ＣＣＢを投与されている患者である。一重盲検プラシーボランイン期間の終了後、適性患者をランダム化してエプレレノンまたはプラシーボを投与する。ランダム化患者の比率はエプレレノン対プラシーボ　１：１である。患者に固定量のＣＣＢのほかに、エプレレノン５０ｍｇまたはプラシーボを投与する。２週目に血圧が調節されない場合（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、治験薬投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。血圧調節が適切な患者の投与量は変更しない。４週目に血圧が調節されず、かつ２週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。２週目に治験薬投与量を増加している場合、患者を６週目に再評価する。６週目に血圧が調節されず、かつ２または４週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。６週目に血圧が調節されず、かつ２または４週目に投与量を増加している場合、その患者を試験から除外しなければならない。試験中のいずれかの時点で症候性低血圧（すなわち、めまい、立ちくらみ、または低血圧に伴う失神）が起きた場合、あるいは試験中のいずれかの時点でＤＢＰ≧１１０ｍｍＨｇまたはＳＢＰ≧１８０ｍｍＨｇとなった場合、その患者を除外しなければならない。患者に合計８週間の治験薬投与を行う。
【０２３３】
０（ベースライン）、２、４、６、８および９週目に、評価のために患者を来院させる。心拍数、血圧、有害事象および併用投薬を、来院の都度評価する。安全のために血液学的評価および生化学的評価ならびに尿分析を０、８および９週目に行う。血清カリウム濃度を０（ベースライン）、２、４、６、８および９週目に測定する。血漿レニン、血清アルドステロンおよび血漿コルチゾールを０および８週目に測定する。１２誘導心電図記録および診察をスクリーニング時および９週目に行う。
【０２３４】
一次分析変数は下記のものである：
１．ベースラインからの８週目のトラフカフ（ｔｒｏｕｇｈ　ｃｕｆｆ）ＤＢＰの平均変化：ＣＣＢ単独投与処置群−対−エプレレノンとの併用投与群、すなわちＣＣＢ＋エプレレノン−対−ＣＣＢ＋プラシーボ；
２．報告された重大な有害事象および重大ではない有害事象、生命徴候、身体所見、心電図：ＣＣＢ単独投与処置群−対−エプレレノンとの併用投与群。
【０２３５】
二次分析変数は下記のものである：
１．ベースラインからの８週目のトラフカフＳＢＰの平均変化：ＣＣＢ単独投与処置群−対−エプレレノンとの併用投与群；
２．ベースラインからの臨床安全性分析検査値（血清ナトリウム、カリウム、マグネシウム、ＢＵＮ、クレアチニン、および尿酸）、血漿グルコースおよび脂質（総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、およびトリグリセリド）の平均変化：ＣＣＢ単独投与処置群−対−エプレレノンとの併用投与群；
３．ベースラインからの８週目の血漿レニン、血清アルドステロンおよび血漿コルチゾールの平均変化：ＣＣＢ単独投与処置群−対−エプレレノンとの併用投与群。
【０２３６】
１．０　はじめに
高血圧症については低用量の単一抗高血圧症薬の投与が通常の初期薬理学的治療法である。血圧（ＢＰ）を適切に調節できない場合、その単一薬剤の用量を増加することもできる。しかし高血圧症は多因子疾患であり、心臓、腎臓、内分泌、末梢血管、および中枢神経系を伴う可能性があるので、高血圧症に対する単独療法では適切な血圧調節が得られないことがしばしばある。さらに、単一薬物の用量を増加すると、不耐性副作用、たとえば利尿薬によるカリウム喪失、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬による咳、カルシウムチャンネル遮断薬（ＣＣＢ）による血管拡張の生じる可能性がある。
【０２３７】
この理由で、高血圧症を治療する際、初期の単独療法に適正に応答しない患者には作用機序の異なる第２薬物を追加した２種類の薬物の併用が基本的に重要であろう。機序の異なる低用量の薬物２種類を併用すると、高血圧症の病的状態を２つの異なる機序への対処により攻撃し、高用量の単独療法にみられる副作用を減らすことができる。個々の高血圧症患者に対する初期薬物療法の選択は、共存する要因、たとえば年齢、人種および併存疾患に基づくべきである。レニン−アンギオテンシン−アルドステロン系（ＲＡＡＳ）は、高血圧症の発症および進行に主要な役割をもつ。限定ではないが、臨床試験および前臨床試験の例では、アルドステロンは高い血圧、心臓肥大、心臓線維症および血管線維症、ならびに心室性不整脈に関連があった。心不全患者では、高いアルドステロン濃度がこれらの患者の死亡率増大に対応するように思われた。さらに、ＡＣＥ阻害薬による長期治療を受けていたにもかかわらず、大部分の患者で注目すべき血漿アルドステロン濃度が検出された。この状況では逸脱現象が起き、これが心不全患者の高い死亡率に関与している可能性がある。これらの理由で、血圧を調節でき、一方ではアルドステロンの直接作用から心臓を保護するアルドステロン拮抗薬は、抗高血圧症薬として特に有効となりうる。
【０２３８】
通常、アルドステロンは薬物処置、すなわちたとえばアンギオテンシン−ＩＩ拮抗薬、ＡＣＥ阻害薬、利尿薬、ベータ遮断薬（ＢＢ）、またはカルシウム拮抗薬による処置によって、完全には調節されない。したがってこれらのいずれかの薬物とアルドステロン拮抗薬の併用療法は、単独療法を受けている患者に有効な療法としての利点をもつであろう。
【０２３９】
エプレレノンはステロイド核をベースとする抗ミネラルコルチコイドであり、アルドステロンの競合かつ選択的阻害薬として、全身の種々の組織にあるアルドステロン受容体部位に作用する。エプレレノン中に９，１１−エポキシド基が存在するため、スピロノラクトンと比較してこの分子のプロゲステロン作用および抗アンドロゲン作用は有意に低く、一方ではそのアルドステロン受容体遮断特性は保存される。アルドステロン受容体に対するエプレレノンの選択性が高く、プロゲステロン受容体およびアンドロゲン受容体に対する結合親和性が低い（各受容体におけるスピロノラクトンの親和性の１％未満および０．１％未満）ので、より良好な全般的薬理学的プロフィールを提供すると期待される。
【０２４０】
この試験は、ＣＣＢ投与患者においてＣＣＢとエプレレノンの併用の安全性を判定し、かつエプレレノンの付加効果を判定するために企画された。
【０２４１】
２．０　目的
２．１　一次目的
この試験の一次目的は下記のものである：
１．固定用量のＣＣＢに付加したエプレレノンの抗高血圧症効果を、この薬物の単独投与と対比して判定する：８週目のトラフカフ座位拡張期血圧（ｓｅＤＢＰ）により測定；
２．固定用量のＣＣＢと併用したエプレレノンの安全性および耐薬性を評価する：報告された重大な有害事象および重大ではない有害事象、身体所見、生命徴候、および心電図により評価；
２．２　二次目的
この試験の二次目的は下記のものである：
１．固定用量のＣＣＢに付加したエプレレノンの抗高血圧症効果を、この薬物の単独投与と対比して判定する：８週目のトラフカフ座位収縮期血圧（ｓｅＳＢＰ）により測定；
２．固定用量のＣＣＢと併用したエプレレノンの安全性および耐薬性を評価する：血清ナトリウム、カリウム、マグネシウム、ＢＵＮ、クレアチニン、および尿酸、ならびに血漿グルコースおよび脂質（総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、およびトリグリセリド）の検査室分析により評価；
３．固定用量のＣＣＢにエプレレノンを付加した場合の、血漿レニン、血清アルドステロンおよび血漿コルチゾールに対する作用を、この薬物の単独投与と対比して評価する。
【０２４２】
３．０　材料および方法
３．１　試験の企画および手順
最低１２０人のランダム化した軽度ないし中等度の高血圧症患者を伴うこの多センター、ランダム化、二重盲検、プラシーボ対照付き、プラシーボランイン、並行群試験は、固定用量のＣＣＢと併用したエプレレノンの安全性および耐薬性ならびに抗高血圧症効果をこの薬物の単独投与と比較するために企画された。
【０２４３】
この試験は、１〜２週間の処置前スクリーニング期間、続いて２〜４週間の一重盲検プラシーボランイン処置期間、その後８週間の二重盲検処置期間へのランダム化からなる。
【０２４４】
適性患者は、現在ＣＣＢを単独投与されているか、または抗高血圧症投薬の一部としてＣＣＢを投与されている患者である。一重盲検プラシーボランイン期間の終了後、患者が二重盲検処置期の基準を満たしていればそれらの適性患者をランダム化して、エプレレノンまたはプラシーボを投与する；ランダム化患者の比率はエプレレノン対プラシーボ　１：１である。二重盲検処置中の最初２週間は、患者に固定量のＣＣＢのほかにエプレレノン５０ｍｇまたはプラシーボを投与する。２週目に血圧が調節されない場合（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、治験薬投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。血圧調節が適切な患者の投与量は変更しない。４週目に血圧が調節されず、かつ２週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。２週目に治験薬投与量を増加している場合、患者を６週目に再評価する。血圧調節が適切な患者の治験薬投与量は変更しない。６週目に血圧が調節されず、かつ２または４週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。６週目に血圧が調節されず、かつ２または４週目に投与量を増加している場合、その患者を試験から除外しなければならない。血圧調節が適切な患者の治験薬投与量は変更しない。試験中のいずれかの時点で症候性低血圧（すなわち、めまい、立ちくらみ、または低血圧に伴う失神）が起きた場合、あるいは試験中のいずれかの時点でＤＢＰ≧１１０ｍｍＨｇまたはＳＢＰ≧１８０ｍｍＨｇとなった場合、その患者を除外しなければならない。患者に合計８週間の治験薬投与を行う。
【０２４５】
０、２、４、６、８および９週目に、評価のために患者を来院させる。心拍数、血圧、有害事象および併用投薬を、来院の都度評価する。安全のために血液学的評価および生化学的評価ならびに尿分析を０、８および９週目に行う。血清カリウム濃度を０、２、４、６、８および９週目に測定する。血漿レニン、血清アルドステロンおよび血漿コルチゾールを０および８週目に測定する。１２誘導心電図記録および診察をスクリーニング時および９週目に行う。
【０２４６】
臨床試験プロトコルの模式図については図２３を参照されたい。
【０２４７】
３．２　試験集団
３．２．ａ　患者の登録
標準偏差８．０ｍｍＨｇで５％レベルの両側検定により処置群間の少なくとも４．８ｍｍＨｇのｓｅＤＢＰ差を検出する９０％のパワーを得るには、１群当たり合計６０人のランダム化患者で十分である。
【０２４８】
３．２．ｂ　採用基準
３．２．ｂ．１　スクリーニング期間への採用基準
１．患者は年齢≧１８歳、≦８５歳の男性または非妊娠女性である；
２．患者が女性の場合、閉経期後であるか、あるいは妊娠可能年齢であれば適切な避妊法を用いている（ホルモン法またはバリヤ法、たとえば避妊膜、ＩＵＤなど）か、または外科的不妊処置を受けており、授乳中でない。禁欲は許容できる避妊法ではない；
３．患者は抗高血圧症療法の一部として固定量のＣＣＢを摂取しており、軽度ないし中等度の高血圧症の病歴をもつ；あるいは患者は固定量の１種類のＣＣＢのみを摂取しており、ｓｅＤＢＰ≧９５ｍｍＨｇおよび＜１１０ｍｍＨｇならびにｓｅＳＢＰ＜１８０ｍｍＨｇとして定義される高血圧症をもつ；
４．患者はこの試験に１５週間参加する意志と能力をもつ；
５．患者は試験もしくは処置の実施または投薬変更の前に、この治験に対する書面によるインフォームドコンセントを受けている。
【０２４９】
３．２．ｂ．２　一重盲検プラシーボランイン期間への採用基準
一重盲検プラシーボランイン期間に採用するためには、患者は下記の基準を満たさなければならない：
１．以前に抗高血圧症治療を受けたことがある場合、１種類の固定用量ＣＣＢ以外は取りやめている；
２．患者の心電図は治療を必要とする不整脈を示さない；
３．患者は、治験担当者の見解でその患者をこの試験に参加しても安全であるという条件から除外するような臨床的に有意の異常な検査値を示さない；
４．患者は≧３．０ｍＥｑ／Ｌ、≦５．０ｍＥｑ／Ｌの血清カリウム濃度をもつ。
【０２５０】
３．２．ｂ．３　ランダム化、二重盲検期間への採用基準
２〜４週間のプラシーボランイン処置期間終了後、患者は下記の基準を満たさなければならない：
１．患者は平均トラフカフｓｅＤＢＰ≧９５ｍｍＨｇ、＜１１０ｍｍＨｇとして定義される軽度ないし中等度の高血圧症をもつ：Ａｐｐｅｎｄｉｘ　４の記載に従って評価；
２．患者は１種類の固定用量ＣＣＢを摂取している；
３．患者は平均トラフカフｓｅＳＢＰ＜１８０ｍｍＨｇをもつ：Ａｐｐｅｎｄｉｘ　４の記載に従って評価；
４．一重盲検プラシーボランイン期間の投薬指示に対するコンプライアンスが８０〜１２０％であった：丸薬計数により判定；
５．患者が妊娠可能年齢の女性である場合、治験薬の初回投薬計画の７２時間前に尿妊娠検査（病院で実施）陰性、血清妊娠検査陰性である。
【０２５１】
３．２．ｃ　除外基準
１．患者が続発性高血圧症（たとえば腎臓、腎血管または副腎皮質の疾患、褐色細胞腫、クッシング症候群、原発性アルドステロン症、医原性疾患）、重篤な高血圧症、または悪性高血圧症を伴うことが分かっている；
２．患者が過去６カ月以内に、治療を必要とする心筋梗塞、冠血管再生、不安定狭心症または不整脈の病歴をもつ；
３．患者が、医療処置を必要とする、または著しい血液動態障害を引き起こす、重篤な大動脈弁疾患または僧帽弁疾患を伴う；
４．患者が、医療処置を必要とする、または著しい血液動態障害を引き起こす、ＩＩ〜ＩＶ級うっ血性心不全（ニューヨーク心臓協会）の病歴をもつ；
５．患者が過去６カ月以内に卒中または一過性虚血性発作の病歴をもつか、あるいは脳に潅流する動脈に血液動態的にみて著しい狭窄のあることが分かっている；
６．患者が、ＨｂＡ１Ｃ＞８．５％として定義されるＩ型糖尿病または管理されていないＩＩ型糖尿をもつか、あるいはインスリン治療を必要とする；
７．患者が、正常範囲の上限の２倍を超えるＳＧＰＴ／ＡＬＴおよび／またはＳＧＯＴ／ＡＳＴ、ならびに／あるいは正常範囲の上限の３倍を超えるγ−ＧＴ、ならびに／あるいは＞２．５ｍｇ／ｄＬの血清ビリルビン、ならびに／あるいは＜２．５ｇ／ｄＬの血清アルブミンをもつ；
８．患者が、男性については＞１．５ｍｇ／ｄＬ、女性については＞１．３ｍｇ／ｄＬの血清クレアチニン濃度をもつ；
９．患者が、＞５．０ｍＥｑ／Ｌの血清カリウム濃度をもつ；
１０．患者が、治験担当者の見解でその患者をこの治験に参加しても安全であるという条件から除外するような臨床的に異常な検査値を示す；
１１．患者が、治験担当者の見解でその患者をこの治験から除外するようなアルコールまたは薬物乱用問題の徴候をその時点で示す；
１２．患者が、治験担当者の見解で、その患者の関心が最良の状態でこの試験に参加できる条件ではない；
１３．患者がエプレレノンに対する過敏性をもつことが分かっている；
１４．患者がＣＣＢに対する不耐性またはアレルギー反応の病歴をもつことが分かっている；
１５．患者が、治験担当者の見解で治験薬もしくはＣＣＢの吸収、薬物動態もしくは排出を妨げる可能性のある重篤な器質性障害を伴うか、またはそのような消化管外科処置もしくは消化管疾患の経験がある；
１６．患者が、この治験の要求に応じる能力を制限する慢性精神病または行動状態にある；
１７．患者が、１５週間の治験期間中に死亡すると予想される併存疾患状態（たとえば末期癌、エイズなど）にある；
１８．患者が、初回治験薬投与前３０日以内に何らかの治験薬を投与されたか、あるいはこの治験期間中にエプレレノン以外の治験薬を投与される予定である；
１９．患者が以前にこの治験に参加したことがある。
【０２５２】
３．３　ランダム化手順
患者を層別化した後、各サイトで二重盲検ランダム化の基準を満たすように（セクション３．２．ｂ．３参照）二重盲検処置アームに割り当て、試験開始前にＰｈａｒｍａｃｉａで用意したコンピューター作成によるランダム化スケジュールに従って割り付けした処置を施す。
【０２５３】
３．４　臨床提供業者の記載
Ｐｈａｒｍａｃｉａが下記の経口治験薬を提供：
１．エプレレノン５０ｍｇ錠
２．エプレレノン５０ｍｇ錠に匹敵するプラシーボ
ＣＣＢは治験担当者が処方し、患者が受給する。
【０２５４】
一重盲検期については、プラシーボ薬をそれぞれ２週間の処置分を入れた瓶で提供する（１瓶１８錠）。患者に瓶Ａからの１錠と瓶Ｂからの１錠を毎朝摂取するように指示する。
【０２５５】
二重盲検処置期については、エプレレノンおよび／または匹敵するプラシーボを２週間の処置分を入れた瓶で提供する。瓶内の個数は１瓶１８錠である。患者に瓶Ａからの１錠と瓶Ｂからの１錠を毎朝摂取するように指示する。
【０２５６】
導入処置と二重盲検処置のいずれについても、２本の瓶（ＡとＢ）を紙箱に入れる。この紙箱を適宜な来院時に配布する。来院および投与量を紙箱に記載し、治験担当者の責任で患者のタイトレーション要求に基づいて適切な投与量（５０ｍｇまたは１００ｍｇ）を選択する。
【０２５７】
治験薬すべてを、患者に配布するまで表示の保存条件に従って入手を制限した安全な区域に保存し、患者の家庭では苛酷な環境を避けて保持しなければならない。試験終了時または中断時に、未使用の提供薬物はＰｈａｒｍａｃｉａの監視員またはＰｈａｒｍａｃｉａが指定した監視員の指示に従って返却されなければならない。患者には未使用処方薬をすべてサイトへ返却するように指示しなければならない。
【０２５８】
３．５　薬物投与
治験薬は１日の同時刻に（朝）摂取しなければならず、食事時間と関係なく摂取できる。一重盲検および二重盲検処置期間を通して、患者は固定量のＣＣＢを摂取し続ける。
【０２５９】
薬剤を毎日摂取し、瓶ＡとＢそれぞれから１日１錠を摂取するように、患者に指示する。ただし治験来院の前日には治験薬（すべての薬物：エプレレノンまたはプラシーボとＣＣＢ）を診察予約時刻の２４±１時間前に摂取し、かつ来院当日には治験薬を摂取しないように、患者に指示する。すべての治験来院処置が完了したとき、病院で薬剤を投与する。
【０２６０】
朝の摂取時間を逃したときは、午後の摂取でもよい。予定された来院前日に朝の摂取時間を逃したときは、確実にトラフカフ血圧測定値を求めるのに必要であるから患者は治験サイトへ電話して来院の予定を変更すべきである。治験薬（すべての薬物：エプレレノンまたはプラシーボとＣＣＢ）を診察予約時刻の２４±１時間前に摂取するように患者に指示する。いかなる時点でも、摂取し損ないを補うために２倍量の治験薬を患者が摂取してはならない。
【０２６１】
治験薬を与えると共に投薬日誌を患者に渡して毎日の治験薬摂取時刻を記録させる。
３．６　治験薬タイトレーション
試験中のいずれかの時点で患者に症候性低血圧（すなわち、めまい、立ちくらみ、または低血圧に伴う失神）が起きた場合、その患者を試験から除外しなければならない。試験中のいずれかの時点でＤＢＰ≧１１０ｍｍＨｇまたはＳＢＰ≧１８０ｍｍＨｇとなった場合も、その患者を除外しなければならない。
【０２６２】
二重盲検処置中の最初２週間は、患者にエプレレノン５０ｍｇまたはプラシーボを投与する。
２週目に血圧が調節されない場合（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、治験薬投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。血圧調節が適切な患者の投与量は変更しない。
【０２６３】
４週目に血圧が調節されず、かつ２週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。２週目に治験薬投与量を増加している場合、患者を６週目に再評価する。血圧調節が適切な患者の治験薬投与量は変更しない。６週目に血圧が調節されず、かつ２または４週目に治験薬投与量を増加していない場合、投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。２または４週目に投与量を増加している場合、その患者を試験から除外しなければならない。血圧調節が適切な患者の治験薬投与量は変更しない。
【０２６４】
４．０　試験計画
１．来院１回目の前処置期間（スクリーニング検査）
前処置期間（来院１回目）は、一重盲検プラシーボランイン期間に入る前の１〜２週間と定義される。
【０２６５】
このスクリーニング期間中、患者にＣＣＢを投与する。
すべての治験関連処置の前またはこの治験の目的のために投薬を変更する場合、患者から書面によるインフォームドコンセントを得なければならない。
【０２６６】
４．１．ａ　病歴、診察、心拍数、血圧および心電図測定
病歴を一重盲検処置開始前２週間以内に調べる；
診察もこの前処置期間に実施する；
心拍数および座位血圧（適正に検量された水銀柱血圧計による）を測定する。試験中すべての血圧測定に用いる腕をこの来院時に決定する；
心電図測定（１２誘導）を血圧および心拍数の測定終了後、常に実施する；
採用／除外基準を検討し、この試験に対する各患者の適性を判定するのに用いる。
【０２６７】
４．１．ｂ　臨床検査−血液学的および生化学的検査
空腹時の安全性臨床検査を下記のパラメーターについて実施する：
血液学的検査
血小板分画を含むＷＢＣ（推定は許容できない）
ＲＢＣ
ヘモグロビン
ヘマトクリット
全血（スクリーニング時のみ）
ヘモグロビンＡ１Ｃ
生化学的検査
ナトリウム　　　　尿酸
カリウム　　　　　空腹時血糖
クロリド　　　　　アルカリ性ホスファターゼ
カルシウム　　　　ＳＧＯＴ（ＡＳＴ）
リン（無機）　　　ＳＧＰＴ（ＡＬＴ）
尿素（ＢＵＮ）　　クレアチンキナーゼ
クレアチニン　　　マグネシウム
総タンパク質　　　ＨＣＯ３−
総ビリルビン　　　総コレステロール
アルブミン　　　　ＨＤＬコレステロール
ＬＤＬコレステロール（直接測定）
トリグリセリド
γ−ＧＴ
血清妊娠検査（二重盲検処置の前０週目；妊娠可能年齢の女性のみ）
【０２６８】
４．１．ｃ　臨床検査−尿分析
尿分析を下記のパラメーターについて実施する：
尿分析
ｐＨ　　　　タンパク質
比重　　　　グルコース
ＷＢＣ　　　ケトン類
ＲＢＣ　　　ビリルビン
尿妊娠検査（二重盲検処置の前０週目；妊娠可能年齢の女性のみ）
治験担当者はすべての検査結果および初期の各検査報告を検討する：異常値にはすべて注釈をつけ、臨床的に有意または関連があると考えられるか否か、および臨床措置の必要があるか否かを指示する。臨床措置の必要があるかまたは治験担当者が臨床的に有意であると考える処置前異常値があれば、その患者を試験参加から除外する。すべての検査（尿妊娠検査を除く）を指定された中央検査室で実施する。試料を採集して搬送するための指示および材料を、中央検査室が各治験サイトに提供する。
【０２６９】
４．１．ｄ　併用薬剤
この試験期間中、下記の投薬は許容されない：
１．いかなる経路によるものであっても、１種類のＣＣＢ以外の抗高血圧症薬、たとえば利尿薬、α−遮断薬、ＡＣＥ阻害薬またはＡＩＩ−阻害薬。クエン酸シルデナフィル（Ｖｉａｇｒａ、登録商標）、テオフィリンおよびパパベリンを血圧評価前２４時間以内に摂取してはならない；
２．下記の場合以外のナイトレート：安定狭心症を伴う患者、および過去１２週間以内にナイトレート投与量を変更していない（すなわち安定な維持量を摂取している）患者はこの治験に適性である；
３．２週間を超える抗不整脈薬；
４．局所適用以外のグルココルチコイド；エストロゲン置換療法は許容される；
５．ミネラルコルチコイド；
６．免疫抑制薬または細胞毒；
７．前立腺肥大の処置のために用いるベータ遮断薬およびアルファ遮断薬（たとえば塩酸テラゾシン）は許容されない。
【０２７０】
１種類のＣＣＢが必要である。具体的な抗高血圧症薬は治験担当者が選択できる。
上記セクションに挙げてない薬剤は、治験担当者の見解でそれが必要であれば許容される。予め治験担当者の承諾を得ずに患者が薬剤（一般用医薬品を含めて）を追加するのは避けるべきである。すべての併用薬剤について、用量、開始日と停止日、適応症、および併用薬剤のすべての変更を、適切なＣＲＦに記録する。
【０２７１】
通常のカフェイン（コーヒー、茶、コーラ）摂取および／またはニコチン（シガレット、葉巻タバコ、またはパイプ喫煙、噛みタバコ）の習慣に変化があったときも治験担当者に知らせるように患者に指示する。
【０２７２】
４．１．ｅ　一重盲検プラシーボランインへの患者の参加と抗高血圧症薬投与の中断
初期スクリーニングが首尾よく完了した後、その時点で患者が１種類のＣＣＢ以外の抗高血圧症薬を投与されている場合、治験担当者は患者のその抗高血圧症薬を取りやめるか、または漸減して、来院２Ａ回目（プラシーボランイン期間の開始）時には患者が１種類のＣＣＢ以外の抗高血圧症薬を摂取していない状態にする。治験担当者の責任で離脱作用を避ける必要性と漸減計画を判定する。スピロノラクトン、グアネチジンまたはレセルピンを投与されていた患者は、二重盲検処置期間へのランダム化の少なくとも３０日前にその投薬を中断しなければならない。
【０２７３】
４．２　一重盲検プラシーボランイン期間
一重盲検プラシーボランイン期間は、治験薬投与のためのランダム化の前２〜４週間と定義される。
【０２７４】
４．２．ａ　来院２Ａ回目：一重盲検薬剤（−４〜−２週間）の配布
スクリーニング検査に合格した患者が来院２Ａ回目のために再来するように計画する。来院２Ａ回目に患者の心拍数および水銀柱血圧計による座位血圧を測定し、併用薬剤を記録する。患者を一重盲検プラシーボランイン期間への採用につき採用基準に基づいて適性判定する。適性と判定した患者に治験薬（それぞれ１８個の錠剤を入れた２本の瓶）を一重盲検様式で配布する。すなわち患者はその薬剤がプラシーボであることを知らされない。試験サイトの担当者は患者がこの期間中の治験薬の正体を知ることがないように、手続きを追跡しなければならない。患者に連続した４桁一重盲検プラシーボランイン番号をつけ、この時点ではランダム化しない。各患者をファースト、ミドルおよびラーストのイニシャルで識別する。患者がミドルイニシャルをもたない場合、ダッシュを用いる。
【０２７５】
すべての患者が朝に各瓶からの１錠を自分のＣＣＢと一緒に摂取する同じプラシーボ投与方式をとる。来院当日を除いて、この投与方式を来院３回目まで、すなわち２〜４週間±３日間（１１〜３１日間）続ける。来院当日には、患者は来院前に１日量の治験薬、ＣＣＢを摂取してはならない。この用量はすべての試験処置が完了した後に、病院で投与しなければならない。
【０２７６】
治験薬と自分の処方ＣＣＢを摂取する様式を患者に指示する。患者に投薬日誌カードを与え、残りの薬剤と完了した投薬日誌カードを２週間以内の次回来院時に返却するように依頼する。
【０２７７】
４．２．ｂ　来院２Ｂ回目：一重盲検プラシーボランイン期間（−２〜０週間±３日間）
患者を来院２Ｂ回目のために再来させ、トラフカフ血圧測定（前記に従う）、心拍数、併用薬剤、および有害事象を記録し、治験投薬コンプライアンスを評価する。患者は、すべての試験処置が完了した後に、病院で治験薬を摂取する。この来院は安全性および投薬コンプライアンス評価のためのものである。
【０２７８】
この来院時に患者が採用要件を満たしていれば、この時点で二重盲検処置にランダム化し、この来院を来院３回目と表示する（すなわち来院２Ｂ回目を適用しない）。この時点で、セクション４．２．ｃに記載した処置を実施する。
【０２７９】
この来院時に患者が採用要件を満たしていなければ、治験薬（それぞれ１８個の錠剤を入れた２本の瓶）を一重盲検様式で処方する。すなわち患者は薬剤がプラシーボであることを知らされない。試験サイトの担当者は患者がこの期間中の治験薬の正体を知ることがないように、手続きを追跡しなければならない。患者に治験薬摂取方法を指示し、２週間以内に来院３回目のために再来するように依頼し、今回の来院を来院２Ｂ回目とする。
【０２８０】
４．２．ｃ　来院３回目：ベースライン来院の適性判定およびランダム化（０日目±３日間）
来院３回目（０日目）の患者をランダム化二重盲検期間に対する適性について評価する。来院３回目の評価には下記のものが含まれる：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧；
２．臨床安全性検査のための空腹時採血；
３．臨床安全性検査のための尿分析用尿試料；
４．尿妊娠検査（病院で実施）および血清妊娠検査：妊娠可能年齢の女性のみ；
５．血清アルドステロン、血漿レニン、および血漿コルチゾール用の血液試料。これらのホルモン試料は、朝午前１０時以前かつ投薬前に、患者が仰臥位で３０分間休息した後、採取される；
６．有害事象があればその記録；
７．一重盲検処置期間中に摂取した新たな併用薬剤があればその記録；
８．薬物責務（ａｃｃｏｕｎｔａｂｉｌｉｔｙ）および患者のコンプライアンスの記録；治験担当者は返却された薬剤を計数してコンプライアンス％を確認する。二重盲検ランダム化に適性であるためには、患者の投薬コンプライアンスが８０〜１２０％でなければならない；
９．第１用量の二重盲検治験薬の投与。
【０２８１】
下記の場合、担当者は患者を二重盲検投薬にランダム化する：
１．３〜５分の間隔で得た連続２回の読みによる患者の平均座位ＤＢＰが≧９５ｍｍＨｇ、＜１１０ｍｍＨｇであり、平均座位ＳＢＰが＜１８０ｍｍＨｇである；
２．臨床安全性検査値がすべてプロトコル許容範囲内にあるか、あるいは担当者の見解で臨床的に有意でない；注意事項：ランダム化に適性であるためには、除外基準に記載した検査値が指定範囲内になければならない。
上記の基準を満たさない場合、その患者の試験を取りやめる。
【０２８２】
適性な患者それぞれに次に用いる４桁の二重盲検患者番号を割り当て、試験開始前にＰｈａｒｍａｃｉａで用意したコンピューター作成によるランダム化スケジュールに従ってその番号に割り当てられた処置を施す。
【０２８３】
患者に２週間分の二重盲検治験薬を渡し、すべての丸薬を毎日、朝摂取するように再び指示する。投薬日誌カードを薬剤と一緒に手渡す。患者は１回目の薬剤を病院で摂取する。
【０２８４】
患者に朝の予約で２週間以内に再来するように指示する。来院前には朝の分の治験薬またはＣＣＢを摂取しないように指示する。
【０２８５】
４．３　二重盲検ランダム化処置期間
４．３．ａ　来院４回目（ランダム化後２週間±３日間）
２週間の二重盲検処置後、下記の操作を実施する：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧。カリウム濃度用の採血；
２．有害事象の記録；
３．新たな、または変更した併用薬剤の記録；
４．返却された薬剤の計数とコンプライアンスの記録；
５．すべての試験操作が完了した後、治験薬の投与。この来院時に血圧が調節されていない場合（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、治験薬投与量を増加してエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボにする。血圧調節が適切な患者の投与量は変更しない；
６．患者に２週間分の治験薬を投薬日誌カードと一緒に配布する。
患者に２週間以内に来院５回目のために再来するように依頼し、来院前には朝の分の治験薬またはＣＣＢを摂取しないように指示する。
【０２８６】
４．３．ｂ　来院５回目（ランダム化後４週間±３日間）
４週間の二重盲検処置後、下記の操作を実施する：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧；
２．カリウム濃度用の採血；
３．有害事象の記録；
４．新たな、または変更した併用薬剤の記録；
５．返却された薬剤の計数とコンプライアンスの記録；
６．すべての試験操作が完了した後、治験薬の投与。この来院時に血圧が調節されず（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、かつ２週目に治験薬投与量を増加していない場合、エプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボに増加する。２週目に治験薬投与量を増加しており、血圧が調節されていない場合、患者を６週目に再評価する。血圧調節が適切な患者の治験薬投与量は変更しない；
７．患者に２週間分の治験薬を投薬日誌カードと一緒に配布する。
患者に２週間以内に来院６回目のために再来するように依頼し、来院前には朝の分の治験薬またはＣＣＢを摂取しないように指示する。
【０２８７】
４．３．ｃ　来院６回目（ランダム化後６週間±３日間）
６週間の二重盲検処置後、下記の操作を実施する：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧；
２．カリウム濃度用の採血；
３．有害事象の記録；
４．新たな、または変更した併用薬剤の記録；
５．返却された薬剤の計数とコンプライアンスの記録；
６．すべての試験操作が完了した後、治験薬の投与。この来院時に血圧が調節されず（ＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ）、かつ２または４週目に投与量を増加していない場合、エプレレノンの投与量をエプレレノン１００ｍｇまたはプラシーボに増加する。２または４週目に投与量を増加している場合、その患者を試験から除外しなければならない。試験から除外した患者についてはセクション４．５最終来院に記載した操作、血漿レニン、清アルドステロン、および血漿コルチゾール濃度用の採血、ならびにコンプライアンスの評価を行う；
７．患者に２週間分の治験薬を投薬日誌カードと一緒に配布する。
患者に２週間以内に来院７回目のために再来するように依頼し、来院前には朝の分の治験薬またはＣＣＢを摂取しないように指示する。
【０２８８】
４．３．ｄ　来院７回目（ランダム化後８週間±３日間）
８週間の二重盲検処置後、下記の操作を実施する：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧；
２．臨床安全性検査のための空腹時採血；
３．臨床安全性検査のための尿分析用尿試料；
４．血清アルドステロン、血漿レニン、および血漿コルチゾール用の血液試料。これらのホルモン試料は、朝午前１０時以前に、患者が仰臥位で３０分間休息した後、採取される；
５．有害事象の記録；
６．新たな、または変更した併用薬剤の記録；
７．返却された薬剤の計数とコンプライアンスの記録。
患者に２週間以内に来院８回目（最終来院）のために再来するように依頼する。
【０２８９】
１．処置後期間
４．４．ａ　来院８回目（ランダム化後９週間±３日間）または最終来院
患者は最終来院評価のために再来する。下記の評価を実施する：
１．心拍数、および水銀柱血圧計による座位カフ血圧；
２．診察；
３．１２誘導心電図記録；
４．臨床安全性検査のための空腹時採血；
５．臨床安全性検査のための尿分析用尿試料；
６．有害事象の記録；
７．新たな、または変更した併用薬剤の記録。
最終評価で異常な所見があれば、担当者は満足すべき解決が得られるまで追跡し、これらの追跡所見をＰｈａｒｍａｃｉａに報告しなければならない。
【０２９０】
４．５　中断基準
下記のいずれかについては患者を中断させることができる：
１．治験薬投与に耐えられない；
２．症候性低血圧（すなわち、めまい、立ちくらみ、または低血圧に伴う失神）；前臨床試験ではエプレレノンの作用がＣＣＢの併用により増強されるという証拠はないが、これらの薬剤のうちあるものは共通の代謝シトクロム経路を共有する。患者に起立性低血圧の症状に関して説明し、疑問や症状があれば治験担当者に報告するようにアドバイスする；
３．一重盲検処置期間中またはベースライン（来院２Ａ、２Ｂまたは３回目）での不安定性高血圧；
４．２または４週目に治験薬投与量を増加した場合、６週目でのＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇ；
５．いかなる時点でも≧１１０ｍｍＨｇまたは≧１８０ｍｍＨｇ；
６．いかなる時点でも血清カリウム濃度および反復値＞５．５ｍＥｑ／Ｌ；
７．処置が失敗し、他の抗高血圧症薬を処方する必要がある場合；
８．治験薬投与に無関係な有害事象の介在、または治験参加を不可能にする介入疾患；
９．患者が２週間より長い医療介入を要する不整脈を発症した場合；
１０．いかなる時点でも、妊娠可能年齢の女性について血清または尿妊娠検査陽性。そのような患者は直ちに治験参加を取りやめる；
１１．管理上の理由；
１２．担当者の見解でその患者の最良の利益を保護するための他の何らかの理由；
１３．脱退したいという患者の要望。患者はいかなる時点でもいかなる理由でも脱退する権利をもつ。
【０２９１】
試験からの著しい脱退は試験を解釈不可能にする可能性があることは誰にも分かる；したがって不必要な患者脱退は避けるべきである。不必要な脱退を制限するために、来院１回目に治験手順を明確に説明し、インフォームドコンセント書類を理解させることが必須であるだけでなく、きわめて重要である。
【０２９２】
４．６　試験終了前の患者の脱退
一重盲検処置期間中に試験から脱退した患者には最終診察、心拍数測定および血圧測定、ならびに安全性臨床検査を受けさせる。一重盲検処置期間中に試験から脱退した患者は入れ替える。脱退の理由を”試験終了”ＣＲＦにも記入しなければならない。
【０２９３】
試験から脱退したランダム化患者についてはセクション４．４最終来院に記載した操作、血漿レニン、清アルドステロン、および血漿コルチゾール濃度用の採血、ならびに投薬コンプライアンスの評価を行う。適切なＣＲＦに記入する。さらに、脱退の理由を”試験終了”ＣＲＦにも記入しなければならない。中断以前の患者のデータすべてをＰｈａｒｍａｃｉａが利用できるようにしなければならない。
ランダム化した患者が試験から脱退した場合は入れ替えない。
【０２９４】
５．０　統計
５．１　試料サイズの妥当性判定
有効性に関する一次目的は、固定用量のカルシウムチャンネル遮断薬に追加したエプレレノンの抗高血圧症効果を、この薬物の単独投与と対比して、８週目に測定するトラフカフｓｅＤＢＰにより判定することである。処置の差を、８週目の座位トラフカフＤＢＰのベースラインからの平均変化に基づいて評価する。１群当たり患者６０人の試料サイズにより、有意差レベル５％の両側検定で処置群間の少なくとも４．８ｍｍＨｇのｓｅＤＢＰ差を検出する９０％のパワーが得られる。この場合、８．０ｍｍＨｇの標準偏差を仮定する。
【０２９５】
５．２　統計的手法の説明
少なくとも１回のベースライン後評価でランダム化した患者すべてを有効性分析に含める（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ集団）。各分析で得られなかった数値は、前進法で実施した最終観察（ｌａｓｔ　ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｆｏｒｗａｒｄ；ＬＯＣＦ）により推定する。安全性分析は、少なくとも１回分の治験薬を摂取したランダム化患者すべてに注目する（安全性集団）。
【０２９６】
ベースライン因子および人口統計因子に関する処置群の比較可能性を、連続変数（たとえば年齢、ｓｅＤＢＰ）についての一元分散分析、またはカテゴリー変数（たとえば性別、人種）についてのピアソンカイ二乗検定により調べる。
【０２９７】
各観察時点で、各患者について２回の座位血圧測定値を求める。記述統計分析および推測分析はすべてこれら２測定値の平均に基づく。
５．３　有効性分析
有効性分析の目標は、安定用量のＣＣＢに追加したエプレレノンに対する応答の差を、この薬物の単独投与と対比して、８週間の処置後に判定することである。処置の差を下記に基づいて推定する：
有効性の一次測定値
・８週目の座位トラフカフＤＢＰの、ベースラインからの平均変化；
有効性の二次測定値
・８週目の座位トラフカフＳＢＰの、ベースラインからの平均変化。
【０２９８】
血圧評価は、各来院時に、共変量としてのベースライン測定ならびに因子としての処置およびセンターを含む二元共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）により分析される。応答変数はベースラインからの変化である。最終ＡＮＣＯＶＡモデルを実現する前に、ベースライン、処置、および処置−ベースライン相互作用に対する効果を含むＡＮＣＯＶＡモデルにより、処置共変量勾配の同次性推定を行う。
【０２９９】
センター間の患者数の著しい不均衡による人為的影響を阻止するために、小規模センターを分析前にプールする。プールする際には下記のアルゴリズムを採用する。小規模センターは、総登録者が最大センターの半数未満であるセンターと定義される。この群内のセンターを最大から最小まで、プールしたセンターの患者数が最大センターの患者数の半分より多くなるまでプールする。プールしたセンターを形成するのに十分な患者数がなくてこの措置からはずれたセンターがあれば、最大センターとプールする。
【０３００】
処置の比較は、モデルにおけるベースライン値、処置およびセンターについてのＳＡＳタイプＩＩＩ分析により得られた訂正平均値に基づく。タイプＩＩＩ分析は上記に従って小規模センターをプールした各センターに均等な荷重を割り当てる点に注目されたい。センター交流により処置の予備試験を行って、センター間の処置効果の一貫性を評価する。交流のｐ−値が０．１０以下であれば、センター内での処置間の差を調べて、その原因を判定する。
【０３０１】
前記ＬＯＣＦ分析のほか、早期中断および非来院が有効性結果に及ぼす影響を調べるために、８週目までの計画した時間による分析を実施する。さらに、治験のエンドポイントを、８週間の二重盲検処置期間の患者について得た最終血圧測定値と定義する。一重盲検プラシーボ期間の最終来院時に得た血圧測定値をベースライン値として用いる。
【０３０２】
二重盲検処置期間の来院毎に投与量に従った患者の分布を表示する。治験来院毎に、評価したすべての患者および試験を完了した一部の患者について、適宜、グラフを用いて有効性変数（たとえば応答率および平均値）を提供する。
【０３０３】
５．３．ａ　特殊な検査室評価
下記の検査変数は試験の二次目的に向けたものであり、前記ＡＮＣＯＶＡ法により分析される。下記についてベースラインからの平均変化を調べる：
・血清電解質（血清カリウム、ナトリウム、およびマグネシウム）；
・ＢＵＮ、クレアチニン、および尿酸；
・血漿グルコースおよび脂質（総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＨＤＬコレステロール、およびトリグリセリド）；
・血漿レニン、血清アルドステロンおよび血漿コルチゾール。
【０３０４】
血圧変化と処置前検査値（アルドステロン、カリウム、ナトリウム、およびクレアチニンの濃度）との相関を推定し、８週目の処置群間を標準ｚ−検定により比較する。
【０３０５】
５．４　安全性分析
治験にランダム化され、かつ少なくとも１回分の二重盲検処置を受けた患者すべてを安全性分析に含める。
【０３０６】
５．４．ａ　症状および有害事象
有害事象すべてにコードを付け、処置群毎にまとめる。処置による有害事象の発生を処置群および身体系毎に表に示す。処置による有害事象の発生を程度および性状毎にも表示する。さらに、脱退の原因となる有害事象および重篤な有害事象の発生を表に示す。
【０３０７】
５．４．ｂ　生命徴候
計画した時間および処置毎に生命徴候を一覧表にする。これらのデータについては、トラフカフ血圧の分析以外の正式の処置比較は企画しない。
【０３０８】
５．４．ｃ　臨床検査
臨床検査データをまとめ、処置群を比較する。処置群内での処置前と処置後の変化を対ｔ−検定により分析する。処置前の数値を共変量として、処置群間の差を共分散分析により評価する。シフト表を用いて検査値のシフトをグラフで表わす。これらのシフト表により、処置前または処置後のいずれかにおいて臨床的にみて高いかまたは低い検査値を把握する。臨床的に関連のある検査結果の発生を処置群毎にまとめる。
【０３０９】
６．０　カフ血圧測定方法
カフ血圧測定には下記の方法を用いなければならない。測定者、同一の腕（下記の６．１参照）、カフのサイズ、椅子、場所、温度、ノイズのレベルなど、来院毎の条件を一定に維持する：
１．適正に検量された手動水銀柱血圧計を用いて血圧を測定する；
２．腕囲２４〜３２ｃｍのすべての患者に標準成人サイズのカフを用いなければならない。腕囲３３〜４２ｃｍのすべての患者に１５×３３ｃｍの空気袋付きラージ成人サイズのカフを用いなければならない。ラージ成人サイズカフの腕囲４２ｃｍを超える患者には、大腿カフを用いなければならない；
３．水銀柱の下降速度が２ｍｍ／秒を超えてはならない。収縮期血圧測定については、コロトコフ音の発生（Ｉ期）を記録する。拡張期血圧測定については、コロトコフ音の消失（Ｖ期）を記録する。コロトコフ音が５０ｍｇＨｇ未満の患者においては、コロトコフＩＶ音を用いて拡張期血圧を測定する。測定間ではカフを完全に収縮させなければならない。
【０３１０】
６．１　処置前（スクリーニング検査）血圧測定法
１．１つの腕において３〜５分間隔で３回の血圧測定値を求める。１回目の読みを捨て、２回目と３回目の測定値を平均する（平均値）。反対の腕について３回の測定を繰り返す。１回目の読みを捨て、２回目と３回目の測定値を平均する（平均値）。最大平均ＤＢＰを示した腕が、治験期間中のその後すべての血圧測定に用いる腕となる。２回目と３回目の測定値、これらの測定値の平均、およびその腕（たとえば右または左）をＣＲＦに記録する；
２．心拍数を最低３０秒間、２回測定し、２回の心拍数測定値の平均をＣＲＦに記録する；
３．スクリーニング来院時のみ、患者が少なくとも５分間座り、次いで適宜手で支えて３〜５分間立っていた後に、立位血圧を求める。
【０３１１】
６．２　処置期間（来院２〜９回目）血圧測定法
１．来院２Ａ、２Ｂおよび３回目の座位血圧評価については、腕をアームレストで胸の高さ付近に支えた状態で患者を椅子に座らせ、少なくとも５分間は静かに休むように指示する。５分後、１回目の血圧を測定する。３〜５分後、測定を繰り返す。これら２回の連続測定の拡張期血圧の差が≦５ｍｍＨｇであれば、両方の数値をＣＲＦに記録する。さらに、これら２数値の平均を計算してＣＲＦに記録する（たとえば平均ＤＢＰおよび平均ＳＢＰ）。これら２回の連続測定の拡張期血圧の差が＞５ｍｍＨｇの場合、患者を少なくとも１５分間休ませた後、測定を繰り返す。これら２回の連続測定の拡張期血圧の差が≦５ｍｍＨｇであれば、両方の数値をＣＲＦに記録する。さらに、これら２数値の平均を計算してＣＲＦに記録する（たとえば平均ＤＢＰおよび平均ＳＢＰ）。なお＞５ｍｍＨｇの差がみられる場合、その患者は不安定性高血圧症とみなすべきであり、試験に参加させるべきではない。
【０３１２】
２．来院４〜９回目の座位血圧の評価については、腕をアームレストで胸の高さ付近に支えた状態で患者を椅子に座らせ、少なくとも５分間は静かに休むように指示する。５分後、１回目の血圧を測定する。５分後、測定を繰り返す。両方の測定値をＣＲＦに記録する。さらに、これら２数値の平均を計算してＣＲＦに記録する（たとえば平均ＤＢＰおよび平均ＳＢＰ）。上記の来院２Ａ、２Ｂおよび３回目と異なり、これら２数値の差により３回目の測定が指令されることはない。患者にはこのことを知らせてはならず、事実、来院２Ａ、２Ｂおよび３回目に実施したようにもう１回の測定が必要であろうと伝える。
【０３１３】
３．心拍数を最低３０秒間、２回測定し、２回の心拍数測定値の平均をＣＲＦに記録する。
【０３１４】
結果
以上に記載した試験を図２３に概説したように実施した。ＣＣＢで治療している高血圧症患者を、プラシーボ投与患者６７人、エプレレノン投与患者７０人の２群にランダムに分けた。図２４に示すように、プラシーボ群の平均年齢は６０．２歳であり、一方エプレレノン投与群は５８．０歳の平均年齢であった。性別は両方の処置群にほぼ等しく分けたが、白人が主な人種であった。
【０３１５】
最初、２群にはベースラインパラメーター、たとえば体重、収縮期血圧、拡張期血圧または心拍数について有意差がなかった（図２５参照）。８週間後、エプレレノンとＣＣＢ療法の両方を受けた患者は、ＣＣＢとプラシーボを投与された単独療法群と比較して有意の収縮期血圧低下を示した（図２６および２７参照）。平均拡張期血圧も単独療法群と比較して二重療法群の方が大きかったが、この差は８週間の試験では統計学的有意性には達しなかった（図２６および２７参照）。
【０３１６】
活性レニンおよびアルドステロン濃度は、ＣＣＢとエプレレノンを投与された患者の方がＣＣＢとプラシーボに比較して大きな上昇を示した（図２８参照）。この差は、同様に単独療法群と比較して二重療法にみられた大きな血圧低下（図２６および２７参照）によると思われ、こうしてエプレレノンとＣＣＢの併用の有効性がさらに証明される。有効性の増大のほかには、ＣＣＢ療法にエプレレノンを追加することによる著しい有害事象は報告されなかった（図２９参照）。
【０３１７】
これらの結果から下記が証明される：
・エプレレノンとＣＣＢを併用した際の療法有効性および安全性、ならびに
・単独療法群と比較した併用療法の療法上の利点。
【０３１８】
実施例２０：
臨床試験：急性心筋梗塞後の心不全を伴う患者においてカルシウムチャンネル遮断薬と併用したエプレレノンの安全性と有効性
急性心筋梗塞（ＡＭＩ）後の心不全（ＨＦ）を伴う患者においてエプレレノン＋カルシウムチャンネル遮断薬（ＣＣＢ）療法があらゆる原因の死亡率に及ぼす効果をプラシーボ＋ＣＣＢ療法と比較するために、臨床試験を実施する。二次エンドポイントには心血管疾病率および死亡率が含まれる。この試験は、多センター、ランダム化、二重盲検、プラシーボ対照付き、２アーム、並行群試験であり、１，０１２人の死亡が起きるまで続ける。これには約６，２００人のランダム化患者を平均約２．５年間追跡する必要があると推定される。
【０３１９】
この試験に適性である患者は下記の条件をもつ：（１）下記により表わされるＡＭＩ（指標事象）（ａ）心臓酵素の異常（クレアチンホスホキナーゼ［ＣＰＫ］＞正常範囲上限［ＵＬＮ］の２倍、および／またはＣＰＫ−ＭＢ＞全ＣＰＫの１０％）、および（ｂ）進展性ＭＩの心電図（ＥＣＧ）診断（ＡＭＩと適合するＳＴ部およびＴ波の進行性変化：病的Ｑ波が存在または不存在）；ならびに（２）左心室（ＬＶ）機能不全：ＡＭＩ後およびランダム化前に測定したＬＶ駆出分画（ＬＶＥＦ）＝４０％により証明；ならびに（３）少なくとも下記のいずれかにより表わされるＨＦの臨床証拠：（ａ）肺水腫（有意の慢性肺疾患を伴わずに、肺野の少なくとも１／３に及ぶ両側性咳嗽後湿性ラ音）；または（ｂ）間質性もしくは肺胞性水腫による肺静脈うっ血を示す胸部Ｘ線；または（ｃ）持続的頻脈を伴う第３心音（Ｓ３）の聴診証拠（＞１００回／分）。救急室評価およびＨＦを伴うＡＭＩの推定診断の後、いずれの時点でも、参加適性患者を同定できる。この試験に適性である患者を、臨床状態が安定であれば、たとえば昇圧薬、強心薬、大動脈内バルーンポンプ、低血圧症（収縮期血圧［ＳＢＰ］＜９０ｍｍＨｇ）、または緊急の冠動脈造影を要するような再発性胸痛がなければ、ＡＭＩ後３日（＞４８時間）ないし１０日の間にランダム化する。心臓除細動器を埋め込んだ患者は除外する。
【０３２０】
患者はＣＣＢ療法を受けており、抗凝固薬および抗血小板薬を投与されてもよく、血栓溶解薬または緊急血管形成術を受けていてもよい。患者をランダム化してエプレレノン２５ｍｇＱＤ（１日１回）またはプラシーボを投与する。４週目に血清カリウムが＜５．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与量を５０ｍｇＱＤ（２錠）に増加する。試験中のいかなる時点においても血清カリウムが＞５．５ｍＥｑ／Ｌ、＜６．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与量を次の低レベルに減少する。すなわち５０ｍｇＱＤを２５ｍｇＱＤ（１錠）に、２５ｍｇＱＤを２５ｍｇＱＯＤ（隔日）に、または２５ｍｇＱＯＤを一時保留にする。試験中のいかなる時点においても血清カリウムが＝６．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与を一時保留にし、血清カリウムが＜５．０ｍＥｑ／Ｌとなった時点で２５ｍｇＱＯＤから再開する。試験中のいかなる時点においても血清カリウムが持続的に＝６．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与を永続的に中止する。患者が治験薬に不耐性になれば、治験薬投与量を調節する前に併用薬剤の投与量変更を考慮すべきである。血清カリウムを、処置開始後４８時間目、１および５週目、他のすべての計画した治験来院時、ならびに投与量変更後１週間以内に測定する。
【０３２１】
治験来院を、スクリーニング、ベースライン（ランダム化）、１および４週目、３カ月目、ならびにその後、治験が終了するまで３カ月毎に行う。病歴、心臓酵素、キリップ（Ｋｉｌｌｉｐ）クラス、再潅流時期（あれば）、ＡＭＩおよびＨＦの記載、ＬＶＥＦの測定、ならびに妊娠可能な女性についての血清妊娠検査をスクリーニング時に行う。検診および１２誘導心電図記録をスクリーニング時および最終来院時（治験薬停止）に行う。安全性検査のための血液学的および生化学的評価ならびに尿分析を、スクリーニング、４週目、３および６カ月目、ならびにその後治験が終了するまで６カ月毎に行う。ＤＮＡ分析のための追加血液試料をスクリーニング中に採取する。生命徴候（座位心拍数および血圧）、ニューヨーク心臓協会（ＮＹＨＡ）機能クラス、有害事象、および選択した併用薬剤を、来院毎に記録する。生活の質の評価を、スクリーニング、４週目、３、６および１２カ月目、ならびに最終来院時に記入する。ランダム化した患者すべてを、治験が終了するまで３カ月毎にエンドポイントについて追跡する。
【０３２２】
一次エンドポイントはあらゆる原因による死亡率である。治験はあらゆる原因による死亡率が１８．５％低下するのを検出するように構築され、治験終了までに１，０１２人の死亡を必要とする。二次エンドポイントには下記のものが含まれる：（１）心臓血管疾患による死亡；（２）突然心臓死；（３）進行性心不全による死亡；（４）あらゆる原因による入院；（５）心臓血管疾患による入院；（６）心不全による入院；（７）あらゆる原因による死亡とあらゆる原因による入院；（８）心臓血管疾患による死亡と心臓血管疾患による入院；（９）心臓血管疾患による死亡と心不全による入院；（１０）新たな心房性細動の診断；（１１）再発性非致死的ＡＭＩおよび致死的ＡＭＩによる入院；（１２）卒中による入院；ならびに（１３）生活の質。
【０３２３】
この試験の一次目的は、ＡＭＩ後心不全を伴う患者において、エプレレノン＋ＣＣＢ療法があらゆる原因による死亡率に及ぼす影響をプラシーボ＋ＣＣＢ療法と比較することである。この試験の二次目的は下記について２処置群を比較することである：（１）心臓血管疾患による死亡；（２）突然心臓死；（３）進行性心不全による死亡；（４）あらゆる原因による入院；（５）心臓血管疾患による入院；（６）心不全による入院；（７）あらゆる原因による死亡とあらゆる原因による入院；（８）心臓血管疾患による死亡と心臓血管疾患による入院；（９）心臓血管疾患による死亡と心不全による入院；（１０）新たな心房性細動の診断；（１１）再発性非致死的ＡＭＩおよび致死的ＡＭＩによる入院；（１２）卒中による入院；ならびに（１３）生活の質。
【０３２４】
最初の４週間の処置については、患者にエプレレノン２５ｍｇＱＤまたはプラシーボ（１錠）を投与する。４週目に血清カリウムが＜５．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与量を５０ｍｇＱＤ（２錠）に増加する。４週目に血清カリウムが＝５．０ｍＥｑ／Ｌであるが、５週目に＜５．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与量を５０ｍｇＱＤ（２錠）に増加する。この場合、６週目に血清カリウムを検査しなければならない。処置開始後４８時間目、１および５週目、ならびに投与量変更後１週間以内に血清カリウムを測定する。試験中のいかなる時点においても血清カリウムが＞５．５ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与量を次の低レベルに減少する。すなわち５０ｍｇＱＤを２５ｍｇＱＤに、２５ｍｇＱＤを２５ｍｇＱＯＤに、または２５ｍｇＱＯＤを一時停止にする。血清カリウム濃度が＜５．０ｍＥｑ／Ｌになれば、治験薬投与を２５ｍｇＱＯＤから再開し、増加する。カリウム上昇が偽性（すなわち溶血または最近のカリウム補給による）であると考えられる場合、カリウム濃度を再測定する。
【０３２５】
患者が治験薬投与に不耐性となった場合、治験薬投与量を調節する前に併用薬物（たとえばカリウム補給、ＡＣＥ−Ｉなど）の投与量変更を考慮すべきである。試験中のいかなる時点においても血清カリウム濃度が＝６．０ｍＥｑ／Ｌであれば、治験薬投与を一時保留にする。血清カリウム濃度が持続的に＝６．０ｍＥｑ／Ｌであれば、患者への治験薬投与を中止する。上昇したカリウム濃度が＜６．０ｍＥｑ／Ｌになったことが認められると、カリウム補給を行っていた場合はそれを停止し、患者への治験薬投与を続ける。治験薬投与を中止した場合、併用薬剤を見直して、可能であれば臨床試験実施に関する基準に従って投与量を調節する。
【０３２６】
一次および二次エンドポイントのサブグループ分析を行う。サブグループは、人種（黒人、黒人以外）、性別、年齢、糖尿病の存在、駆出分画、血清カリウム、血清クレアチニン、初期ＡＭＩと後続ＡＭＩの対比、キリップクラス、再潅流状態、高血圧症歴、ＨＦ歴、喫煙歴、アンギナ歴、指標ＡＭＩからランダム化までの時間、ならびに地理的地域のベースライン記録に基づく。年齢、駆出分画、血清カリウム、および血清クレアチニンなどの継続測定に基づくサブグループを中央値で二分する。
【０３２７】
結果
エプレレノンとＣＣＢの併用療法はＣＣＢ単独療法を上回る療法上の利点をもつと期待される。ＡＭＩ後心不全を伴う患者のあらゆる原因による死亡率の一次エンドポイントの改善を、単独療法と対比して観察すべきである。エプレレノン＋ＣＣＢとＣＣＢ単独を比較すると、二次エンドポイントについても有益な効果が期待される。たとえば下記を期待できる：
（１）心臓血管疾患による死亡；
（２）突然心臓死；
（３）進行性心不全による死亡；
（４）あらゆる原因による入院；
（５）心臓血管疾患による入院；
（６）心不全による入院；
（７）あらゆる原因による死亡とあらゆる原因による入院；
（８）心臓血管疾患による死亡と心臓血管疾患による入院；
（９）心臓血管疾患による死亡と心不全による入院；
（１０）新たな心房性細動の診断；
（１１）再発性非致死的ＡＭＩおよび致死的ＡＭＩによる入院；
（１２）卒中による入院
の減少；ならびに
（１３）生活の質の改善。
【０３２８】
本発明を特定の態様に関して記載したが、これらの態様の詳細を限定と解すべきではない。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１−Ａは、Ｈ形エプレレノンの粉末Ｘ線回折図を示す。
図１−Ｂは、Ｌ形エプレレノンの粉末Ｘ線回折図を示す。
図１−Ｃは、エプレレノンメチルエチルケトン溶媒和物の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図２】
図２−Ａは、メチルエチルケトンから直接結晶化した未粉砕Ｌ形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図２−Ｂは、メチルエチルケトンから高純度エプレレノンの結晶化により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｌ形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図２−Ｃは、メチルエチルケトン中の高純度エプレレノン溶液から溶媒和物を結晶化し、この溶媒和物を脱溶媒和してＬ形にし、得られたＬ形を粉砕することにより調製したＬ形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図２−Ｄは、適切な溶媒からの低純度エプレレノンの蒸解により得た溶媒和物の脱溶媒和によって調製した未粉砕Ｈ形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）サーモグラムを示す。
図２−Ｅは、メチルエチルケトン溶媒和物のＤＳＣサーモグラムを示す。
【図３】
図３−Ａは、Ｈ形エプレレノンの赤外スペクトル（拡散反射、ＤＲＩＦＴ）を示す。
図３−Ｂは、Ｌ形エプレレノンの赤外スペクトル（拡散反射、ＤＲＩＦＴ）を示す。エプレレノンのメチルエチルケトン溶媒和物の赤外スペクトル（拡散反射、ＤＲＩＦＴ）を示す。
図３−Ｄは、クロロホルム溶液中のエプレレノンの赤外スペクトル（拡散反射、ＤＲＩＦＴ）を示す。
【図４】
Ｈ形エプレレノンの１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】
Ｌ形エプレレノンの１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルを示す。
【図６】
図６−Ａは、メチルエチルケトン溶媒和物の熱重量分析プロフィールを示す。
【図７】
メチルエチルケトンから単離した結晶質形７−メチル水素４”，５”：９”，１１”−ジエポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７”−プレグナン−７”，２１−ジカルボキシラート、（−ラクトンの粉末Ｘ線回折図を示す。
【図８】
イソプロパノールから単離した結晶形７−メチル水素１１”，１２”−エポキシ−１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７”−プレグン−４−エン−７”，２１−ジカルボキシラート、（−ラクトンの粉末Ｘ線回折図を示す。
【図９】
ｎ−ブタノールから単離した結晶形７−メチル水素１７−ヒドロキシ−３−オキソ−１７”−プレグナ−４，９（１１）−ジエン−７”，２１−ジカルボキシラート、（−ラクトンの粉末Ｘ線回折図を示す。
【図１０】
（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）３％、および（ｄ）５％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトンからの結晶化により得た湿潤ケーク（メチルエチルケトン溶媒和物）の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図１１】
（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）３％、および（ｄ）５％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトンからの結晶化により得た乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図１２】
３％ジエポキシドドープしたメチルエチルケトンからの結晶化による乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を示す：（ａ）溶媒和物を乾燥前に粉砕しないもの、および（ｂ）溶媒和物を乾燥前に粉砕したもの。
【図１３】
（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）５％、および（ｄ）１０％１１，１２−エポキシドドープしたメチルエチルケトンからの結晶化により得た湿潤ケーク（メチルエチルケトン溶媒和物）の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図１４】
（ａ）０％、（ｂ）１％、（ｃ）５％、および（ｄ）１０％１１，１２−エポキシドドープしたメチルエチルケトンからの結晶化により得た乾燥固体の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図１５】
表Ｘ−７Ａに報告したデータに基づく生成物純度、出発物質純度、冷却速度およびエンドポイント温度の立方プロットを示す。
【図１６】
最終物質の純度に対し統計学的に有意の影響をもつ変数を判定するために図１８の立方プロットを用いて作成した半標準プロットを示す。
【図１７】
表Ｘ−７Ａに報告した結果に基づく相互作用グラフであり、最終物質純度に対する出発物質純度と冷却速度の相互作用を示す。
【図１８】
表Ｘ−７Ａに報告した結果に基づくＨ形重量画分、出発物質純度、冷却速度およびエンドポイント温度の立方プロットを示す。
【図１９】
最終物質の純度に対し統計学的に有意の影響をもつ変数を判定するために図２１の立方プロットを用いて作成した半標準プロットを示す。
【図２０】
表Ｘ−７Ａに報告したデータに基づく相互作用グラフであり、最終物質純度に対する出発物質純度とエンドポイント温度の相互作用を示す。
【図２１】
非晶質エプレレノンのＸ線回折図を示す。
【図２２】
非晶質エプレレノンのＤＳＣサーモグラムを示す。
【図２３】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験のための試験模式図を示す。
【図２４】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者のベースライン人数を示す。
【図２５】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者のベースラインパラメーターを示す。
【図２６】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者について８週目の血圧の平均変化を示す。
【図２７】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者について隔週８週間の血圧の平均変化を示す。
【図２８】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者についてレニン濃度およびアルドステロン濃度の変化を示す。
【図２９】
ＢＢ＋エプレレノン療法の臨床試験における患者について有害作用の発生を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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