(57)【要約】本発明はピロリジンスルホンアミド、当該化合物を含有する医薬組成物およびそのウロテシンＩＩアンタゴニストとしての使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2004529134.tif 000011
式（Ｉ）
［式中：
Ｒ１はフェニル、フラニル、チエニル、ピリジル、ベンゾフラニル、ナフチル、ベンゾチオフェニル、ベンズイミダゾリル、インドリルまたはキノリニルであり、それらは１個、２個または３個のハロゲン、Ｃ１−６アルキル、トリフルオロメチル、Ｃ１−６アルコキシまたはメチレンジオキシ基で置換されているかまたは置換されておらず；
Ｘ１およびＸ２は水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、ＣＦ３またはＣＮであり；
ｎは１、２または３であり；
ｍは１、２または３である］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
ｍが１または２であり；ｎが１、２または３であり；Ｒ１が１個または２個のハロゲンで置換されていているかまたは置換されていないフェニルであり；Ｘ１が水素、３−ブロモまたは３−クロロであり；およびＸ２が水素または５−クロロである、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項３】
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｒ）−１−［３−クロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３−クロロ−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３−クロロ−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｓ）−１−［３−クロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミド；
Ｎ−｛（Ｓ）−１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（（Ｓ）−ピロリジン−３−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；および
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３,５−ジクロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−ベンズアミド
からなる群より選択される、請求項１記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項４】
請求項１記載の式（Ｉ）の化合物および医薬上許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項５】
ウロテンシン−ＩＩ受容体に拮抗作用を及ぼすことでウロテンシン−ＩＩ不均衡に伴う症状を治療する方法であって、請求項１の式Ｉの化合物をその治療を必要とする患者に投与することを含む、方法。
【請求項６】
当該疾患が鬱血性心不全、発作、虚血性心疾患、狭心症、心筋虚血、心不整脈、本態性高血圧、肺高血圧、ＣＯＰＤ、再狭窄、喘息、神経原性炎症、代謝血管病、依存症、統合失調症、認識障害／アルツハイマー病、衝動、不安、ストレス、鬱病、神経筋機能または糖尿病である、請求項５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はピロリジンスルホンアミド、該化合物を含有する医薬組成物およびそのウロテシンＩＩアンタゴニストとしての使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
心血管恒常性の総合防御は、ニューロンを直接制御すること、および全身性神経ホルモンを活性化することの両方が組み合わさってなされる。その結果得られる収縮および弛緩因子の放出は、通常、厳重な規制下にあるが、この現状において異常が生じると、病理学的結果を伴う心血流力学的機能不全をもたらし得る。
この神経体液軸を含む哺乳動物の主たる血管作用性因子、すなわち、アンジオテンシン−ＩＩ、エンドセリン−１、ノルエピネフリンは、すべて、特定のＧ−蛋白結合受容体（ＧＰＣＲ）との相互作用を介して機能する。ウロテンシン−ＩＩはこの神経体液軸の新規なメンバーである。
【０００３】
魚類にて、このペプチドは多様な終末器官系および組織にて有意な血流力学的かつ内分泌性作用を有する：
・平滑筋収縮：
胃腸管および尿生殖路から由来の平滑筋調製物を含む、血管および血管以外の組織の両方での平滑筋収縮。外因性ペプチドの全身性投与による昇圧および降圧活性の両方が記載されている。
・浸透調節：
イオン（Ｎａ＋、Ｃｌ−）の経上皮輸送の調節を含む作用。利尿作用が記載されているが、かかる作用は直接的腎血管性作用（高ＧＦＲ）に対して二次的であることを前提とする。
・代謝作用：
ウロテンシン−ＩＩは魚類のプロラクチン分泌に影響を及ぼし、脂質溶解作用を示す（トリアシルグリセロールリパーゼを活性化し、エステル化されていない遊離脂肪酸の動員がもたらされる）。（Pearsonら、Proc. Natl. Acad. Sci. （U.S.A.）１９８０、７７、５０２１；Conlonら、J. Exp. Zool. １９９６、２７５、２２６）
【０００４】
ヒトウロテンシン−ＩＩを用いる実験において、当該物質は、
・極めて強力かつ効果的な血管収縮剤であり；
・ウォッシュアウトに対して極めて耐性的な持続性収縮活性を示し；
・心仕事量（心筋収縮能）に対して有害な作用を有する
ことが判明した。
【０００５】
ヒトウロテンシン−ＩＩをラットから単離した動脈にて収縮活性について評価し、今日まで同定されている中で最も強力な収縮アゴニストであることが明らかにされた。ヒトウロテンシン−ＩＩのインビトロ薬理特性およびインビボ血流力学的特性に基いて、それは、過度の、または異常な血管収縮および心筋機能不全により特徴付けられる心血管疾患にて一の病理学的役割を果たす（Amesら、Nature １９９９、４０１、２８２；Douglas & Ohlstein（２００１）. Trends Cardiovasc. Med.、１０：inpress）。ウロテンシン−ＩＩ受容体に拮抗作用を及ぼす化合物は、鬱血性心不全、発作、虚血性心疾患（狭心症、心筋虚血）、心不整脈、高血圧（本態性および肺性）、ＣＯＰＤ、線維症（例えば、肺線維症）、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、異脂血症（dyslipidemia）、喘息、（Hay DWP、LuttmannMA、Douglas SA：２０００、Br J Pharmacol：１３１；１０−１２）神経原性炎症および代謝性血管病の治療に有用である可能性があり、上記した疾患はすべて異常な血管収縮および／または心筋機能不全により特徴付けられる。Ｕ−ＩＩおよびＧＰＲ１４は共に哺乳動物のＣＮＳ内で発現される（Amesら、Nature １９９９、４０１、２８２）ため、それらはまた依存症、統合失調症、認識障害／アルツハイマー病（Gartlon J.、Psychopharmacology（Berl）２００１ Jun；１５５（４）：４２６−３３）、衝動、不安、ストレス、鬱病、痛み、偏頭痛および神経筋機能の治療に有用である可能性がある。機能的Ｕ−ＩＩ受容体は黄紋筋肉腫細胞系にて発現され、したがって腫瘍学を適用することができる。ウロテンシンはまた、糖尿病などの種々の代謝疾患（Amesら、Nature １９９９、４０１、２８２；Nothackerら、Nature Cell Biology １：３８３−３８５、１９９９）および胃腸障害、骨、軟骨および関節障害（例えば、関節炎および骨粗鬆症）；および尿生殖器障害に関与しているかもしれない。したがって、これらの化合物は胃逆流、胃運動性および潰瘍、関節炎、骨粗鬆症および尿失禁の予防（治療）に有用である可能性がある。
【０００６】
（発明の要約）
一の態様において、本発明はピロリジンスルホンアミドおよび当該化合物を含有する医薬組成物を提供する。
第二の態様において、本発明はピロリジンスルホンアミドのウロテンシンＩＩのアンタゴニストとしての、ウロテンシンＩＩの阻害剤としての使用を提供する。
もう一つ別の態様において、本発明はウロテンシンＩＩ不均衡に付随する症状を治療するためのピロリジンスルホンアミドの使用を提供する。
さらにもう一つ別の態様において、本発明は、鬱血性心不全、発作、 虚血性心疾患（狭心症、心筋虚血）、心不整脈、高血圧（本態性および肺性）、ＣＯＰＤ、再狭窄、喘息、神経原性炎症、偏頭痛、 代謝性血管病、骨／軟骨／関節疾患、関節炎および他の炎症疾患、線維症（例えば、肺線維症）、敗血症、アテローム性動脈硬化症、異脂血症、依存症、統合失調症、認識障害／アルツハイマー病、衝動、不安、ストレス、鬱病、痛み、神経筋機能、糖尿病、胃逆流、胃運動障害、潰瘍および尿生殖器疾患を治療するためのピロリジンスルホンアミドの使用を提供する。
【０００７】
ウロテンシンアンタゴニストは単独であるいは１またはそれ以上の他の治療薬と組み合わせて投与することができ、当該治療薬は、エンドセリン受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、Ａ−ＩＩ受容体アンタゴニスト、バソペプチダーゼ阻害剤、利尿剤、ジゴキシン、および二元的非選択性β−アドレノセプターおよびα１−アドレノセプターアンタゴニストからなる群より選択される。
本発明の他の態様および利点は以下の本発明の好ましい具体例にて詳しく記載されている。
【０００８】
（発明の詳細な記載）
本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
2004529134.tif 000002
式（Ｉ）
【０００９】
［式中：
Ｒ１はフェニル、フラニル、チエニル、ピリジル、ベンゾフラニル、ナフチル、ベンゾチオフェニル、ベンズイミダゾリル、インドリルまたはキノリニルであり、それらは１個、２個または３個のハロゲン、Ｃ１−６アルキル、トリフルオロメチル、Ｃ１−６アルコキシまたはメチレンジオキシ基で置換されているかまたは置換されておらず；
Ｘ１およびＸ２は水素、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ニトロ、ＣＦ３またはＣＮであり；
ｎは１、２または３であり；
ｍは１、２または３である］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。
【００１０】
本明細書においては、「アルキル」なる語は、直鎖または分岐鎖の異性体をすべて包含する。その代表例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、iso−プロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、iso−ブチル、t−ブチル、n−ペンチルおよびn−ヘキシルを包含する。
本明細書においては、「ハロゲン」および「ハロ」なる語は、各々、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素およびフルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを包含する。
本発明の化合物は１またはそれ以上の不斉炭素原子を含有していてもよく、ラセミ形態または光学活性形態にて存在してもよい。これらの化合物およびそのジアステレオマーはすべて本発明の範囲内にある。
【００１１】
好ましい化合物は
ｍが１または２であり；
ｎが１、２または３であり；
Ｒ１が１個または２個のハロゲンで置換されているか、または置換されていないフェニルであり；
Ｘ１が水素、３−ブロモまたは３−クロロであり；
Ｘ２が水素または５−クロロである
ところの化合物である。
【００１２】
好ましい化合物は：
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｒ）−１−［３−クロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３−クロロ−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３−クロロ−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−アゼパン−３−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｓ）−１−［３−クロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミド；
Ｎ−｛（Ｓ）−１−［３−ブロモ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；
Ｎ−｛１−［３−ブロモ−４−（（Ｓ）−ピロリジン−３−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−３,４−ジクロロ−ベンズアミド；および
３,４−クロロ−Ｎ−｛１−［３,５−ジクロロ−４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピペリジン−４−イル｝−ベンズアミド
からなる群より選択される。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に記載されるように調製される。
【化２】
2004529134.tif 000003
【００１４】
条件：ａ）塩化２−ニトロベンゼンスルホニル、ピリジン、ＣＨ２Ｃｌ２、０℃−室温；ｂ）１,４−ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ、メタノール、室温；ｃ）２,６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）、Ｎａ（ＯＡｃ）３ＢＨ、ジイソプロピルエチルアミン、１−メチル−２−ピロリジノン中１％酢酸、室温；ｄ）Ｒ１ＣＯＯＨ、１,３−ジイソプロピルカルボジイミド、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、１−メチル−２−ピロリジノン、室温；ｅ）Ｋ２ＣＯ３、ＰｈＳＨ、１−メチル−２−ピロリジノン、室温；ｆ）（Ｘ１）（Ｘ２）−４−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニルクロリド、１,２−ジクロロエタン、１−メチル−２−ピロリジノン、室温；ｇ）カリウムトリメチルシラノラート、テトラヒドロフラン、室温；ｈ）Ｒ２ＯＨ、ジイソプロピルアゾジカルボキシラート、ＰＰｈ３、テトラヒドロフラン、−７８℃−室温；ｉ）１,２−ジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸、室温
【００１５】
スキーム１に示されるように、樹脂−結合アミン３は、２,６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）と、（Ｓ）−ピロリジン−３−イル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、（Ｒ）−ピロリジン−３−イル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、アゼパン−４−イル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルまたはピペリジン−４−イルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１）から調製した、Ｎ−ノシル化ジアミン塩酸塩２との還元アミノ化により調製した。樹脂−結合アミン３と種々の安息香酸との反応により、対応する樹脂−結合アミド４が得られた。アミド４を炭酸カリウムおよびチオフェノールと反応させ、保護基を除去し、二級アミン５を得た。樹脂−結合アミン５を種々のヒドロキシ−ベンゼンスルホニルクロリドでスルホニル化し、つづいてカリウムトリメチルシラノラートと反応させ、樹脂−結合フェノール６を生成した。ついで、フェノール６をトリフェニルホスフィンおよびジイソプロピルアゾジカルボキシラートの存在下で種々のアルコールと反応させ、対応する樹脂−結合フェノールエーテルを得、それを１,２−ジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸と反応させて標的化合物７を得た。
【００１６】
式（Ｉ）の残りの化合物の合成を、別の窒素保護基（複数）を用いることを含め、適宜工夫して、上記と同様の方法により、実験セクションに記載されている方法に従って行った。
ヒトおよび他の哺乳動物の治療に式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を用いるために、一般に、薬務に従って、医薬組成物として処方した。
式（Ｉ）の化合物およびその医薬上許容される塩は、適応疾患の治療の標準的方法にて、例えば、経口的、非経口的、舌下的、経皮的、経直腸的、吸入により、またはバッカル投与により投与することができる。
【００１７】
経口投与した場合に活性である式（Ｉ）の化合物およびその医薬上許容される塩は、シロップ、錠剤、カプセルおよびロゼンジとして処方することができる。シロップ処方は、一般に、化合物または塩の液体担体、例えば、エタノール、ピーナッツ油、オリーブ油、グリセリンまたは水中、フレーバー剤または着色剤を含む懸濁液または溶液から構成されるであろう。組成物が錠剤の形態である場合、固体処方の調製に慣用的に使用されるいずれの医薬担体も用いることができる。かかる担体の例として、ステアリン酸マグネシウム、白土、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸、ラクトースおよびシュークロースが挙げられる。組成物がカプセルの形態である場合、例えば、上記した担体をハードゼラチンカプセル殻にて用いる、どのような慣用的なカプセル化も適している。組成物がソフトゼラチンカプセルの形態である場合、分散液または懸濁液の調製に慣用的に使用されるいずれの医薬担体を検討することもできる。例えば、水性ガム、セルロース、シリケートまたは油をソフトゼラチンカプセル殻に配合してもよい。
【００１８】
典型的な非経口用組成物は、化合物または塩の、所望により非経口的に許容される油、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、レシチン、落花生油またはゴマ油を含有してもよい、滅菌水性または非水性担体中溶液または懸濁液からなる。
吸入用の典型的な組成物は、溶液、懸濁液またはエマルジョンの形態であり、乾燥粉末として、またはジクロロジフルオロメタンまたはトリクロロフルオロメタンなどの慣用的な噴射剤を用いるエアロゾルの形態にて投与してもよい。
典型的な坐剤処方は、この方法にて投与した場合に活性である、式（１）の化合物またはその医薬上許容される塩と、結合および／または滑沢剤、例えば、ポリマーグリコール、ゼラチン、カカオ脂または他の低融点植物油脂またはその合成代替物とを含む。
【００１９】
典型的な経皮処方は、慣用的な水性または非水性ビヒクル、例えば、クリーム、軟膏、ローションまたはペーストを含むか、または薬用プラスター、パッチまたは膜の形態である。
好ましくは、組成物は、患者が単回用量を一人で服用することができるように、単位投与形、例えば、錠剤、カプセルまたは計量したエアロゾル投与形である。
経口投与用の各投与単位は、適当には、０．１ｍｇないし５００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１ｍｇないし１００ｍｇ／ｋｇの式（Ｉ）の化合物または遊離酸として換算したその医薬上許容される塩を含有し、非経口投与用の各投与単位は、適当には、０．１ｍｇないし１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物または遊離酸として換算したその医薬上許容される塩を含有する。鼻腔内投与用の各投与単位は、適当には、一人当たり１−４００ｍｇ、好ましくは、１０ないし２００ｍｇを含有する。局所処方は、適当には、０．０１ないし１．０％の式（Ｉ）の化合物を含有する。
【００２０】
経口投与する場合の一日の投与量は、式（Ｉ）の化合物または遊離酸として換算したその医薬上許容される塩にて、適当には、約０．０１ｍｇ／ｋｇないし４０ｍｇ／ｋｇである。非経口投与する場合の一日の投与量は、式（Ｉ）の化合物または遊離酸として換算したその医薬上許容される塩にて、適当には、約０．００１ｍｇ／ｋｇないし４０ｍｇ／ｋｇである。鼻腔内投与または経口吸入する場合の一日の投与量は、適当には、一人当たり、約１０ｍｇ／ｋｇないし５００ｍｇである。活性成分は所望の活性を示すのに十分なように一日に１ないし6回投与することができる。
これらのスルホンアミド類似体を、鬱血性心不全、発作、虚血性心疾患 （狭心症、心筋虚血）、心不整脈、高血圧（本態性および肺性）、ＣＯＰＤ、再狭窄、喘息、神経原性炎症および代謝性血管病、依存症、統合失調症、衝動、不安、ストレス、鬱病、神経筋機能、および糖尿病の治療に用いることもできる。
【００２１】
ウロテンシンアンタゴニストは単独であるいは１またはそれ以上の他の治療薬と組み合わせて投与することができ、当該治療薬は、エンドセリン受容体アンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ） 阻害剤、バソペプチダーゼ阻害剤、利尿剤、ジゴキシン、および二元的非選択性β−アドレノセプターおよびα１−アドレノセプターアンタゴニストからなる群より選択される。
本発明の化合物を本明細書の記載に従って投与した場合、許容できない毒性作用は考えられない。
式（Ｉ）の化合物の生物学的活性を以下の試験により測定する。
【００２２】
放射性リガンド結合
安定したヒトおよびラットのクローンＧＰＲ−１４（２０μｇ／アッセイ）を含有するＨＥＫ−２９３細胞膜を２００ｐＭ［１２５Ｉ］ｈ−Ｕ−ＩＩ（２００Ｃｉ／ミリモル−１）と一緒に、２００μｌの最終インキュベーション容量（２０ｍＭトリス塩酸、５ｍＭ塩化マグネシウム）中、増大する濃度（０．１ｎＭから１０μＭ）のＤＭＳＯ中試験化合物の存在下でインキュベートした。インキュベーションを室温で３０分間行い、つづいてＢｒａｎｄｅｌ製セルハーベスターを用い、ＧＦ／Ｂフィルターで濾過した。１２５Ｉ標識Ｕ−ＩＩ結合をガンマ計数により定量した。非特異的結合を１００ｎＭの非標識ヒトＵ−ＩＩの存在下での１２５ＩＵ−ＩＩの結合から特定した。データ分析を非線型最小二乗適合法により行った。
【００２３】
Ｃａ２＋−動員：
マイクロタイタープレートを基礎とするＣａ２＋−動員ＦＬＩＰＲアッセイ（Molecular Devices、Sunnyvale、CA）を用いて（安定した）組換えＧＰＲ−１４を発現するＨＥＫ−２９３を活性化するリガンドの機能を同定した。トランスフェクションした翌日、ポリ−Ｄ−リジン被覆９６ウェルの黒色／透明プレートにて細胞を培養した。１８−２４時間後、培地を吸引し、Fluo３ＡＭ負荷細胞を種々の濃度（１０ｎＭないし３０μＭ）の試験化合物に曝し、つづいてｈ−Ｕ−ＩＩに曝した。当該アッセイを開始した後、１秒毎に１分間、ついでその後の１分間３秒毎に蛍光を読み取った。５０％での阻害濃度（ＩＣ５０）を種々の試験化合物について計算した。
【００２４】
イノシトールホスフェートアッセイ：
Ｔ１５０フラスコ中のＨＥＫ−２９３−ＧＰＲ１４細胞を、１ｍｌのイノシトール不含ダルベッコ修飾イーグル培地中、１μＣｉのｍｙｏ−［３Ｈ］イノシトールを用いて一夜予備標識した。標識した後、当該細胞をダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）で２回洗浄し、ついで１０ｍＭ  ＬｉＣｌを含有するＤＰＢＳ中、３７℃で１０分間インキュベートした。試験化合物の存在しない、または３種類の濃度（０．３、１および１０μＭ）の試験化合物の存在下、増加する濃度（１ｐＭないし１μＭ）のｈ−Ｕ−ＩＩを添加することにより実験を開始し、インキュベーションを３７℃でさらに５分間続け、その後、１０％（最終濃度）のトリクロロ酢酸を添加し、遠心分離に付すことにより反応を終えた。その上澄を１００μｌの１Ｍのトリズマ塩基を用いて中和し、イノシトールホスフェートをＡＧ１−Ｘ８カラム（０．８ｍｌパック、１００−２００メッシュ）のホルメートのフェ−スにて分離した。イノシトールモノホスフェートを８ｍｌの２００ｍＭギ酸アンモニウムで溶出した。合したイノシトールジホスフェートおよびトリスホスフェートを４ｍｌの１Ｍギ酸アンモニウム／０．１Ｍギ酸で溶出した。溶出したフラクションをベータシンチレーションカウンターにて計数した。対照曲線からのシフトに基き、ＫＢを計算した。
本発明の化合物の活性は、（放射性リガンド結合アッセイ）：Ｋｉ＝１０ｎＭ−１００００ｎＭ（実施例５のＫｉ＝１５００ｎＭ）の範囲にある。
【００２５】
以下の実施例は本発明の具体例を説明するものであって、限定するものではない。
実施例１
３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｓ）−１−［４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミドの調製
ａ）（Ｓ）−１−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−ピロリジン−３−イルアミン塩酸塩
０℃での（Ｓ）−ピロリジン−３−イル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２０.００ｇ、１０７ミリモル）の無水塩化メチレン（２４０ｍｌ）中溶液に、無水ピリジン（１３.０３ｍＬ、１６１ミリモル）を加え、つづいて２−ニトロベンゼンスルホニルクロリド（２４.９９ｇ、１１２.７ミリモル）をゆっくりと加えた。当該混合物を１時間にわたって室温に加温し、室温で１９時間攪拌した。混合物を２３０ｍＬの１Ｍ水性ＮａＨＣＯ３溶液中に注いだ。得られた混合物を室温で３０分間攪拌した後、有機相を分離し、１７５ｍＬの１Ｎ水性ＨＣｌ溶液で２回洗浄した。得られた有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をさらに精製することなく次の工程に使用した。
【００２６】
上記した残渣（３３.１９ｇ、８９ミリモル）の無水メタノール（３３ｍＬ）および無水１,４−ジオキサン（３３ｍＬ）中混合物に、１,４−ジオキサン４Ｍ ＨＣｌ溶液（１３３.５ｍＬ （５３４ミリモル））を加えた。当該混合物を室温で１６時間攪拌し、真空下で濃縮させ、再びメタノールに溶かし、真空下で再び濃縮した。残渣を真空乾燥機中３５℃で２４時間さらに乾燥させ、（Ｓ）−１−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−ピロリジン−３−イルアミン塩酸塩を黄色固体として得た（３０.５ｇ、２工程にわたって９２％）：１Ｈ ＮＭＲ （４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）δ ８.５６（ｓ,３Ｈ）、８.０８−７.９８（ｍ,２Ｈ）、７.９４−７.８２（ｍ,２Ｈ）、３.８９−３.７９（ｍ,１Ｈ）、３.６５−３.５２（ｍ,２Ｈ）、３.４３−３.３２（ｍ,２Ｈ）、２.２７−２.１４（ｍ,１Ｈ）、２.０２−１.９１（ｍ,１Ｈ）。
【００２７】
ｂ）塩化４−ヒドロキシベンゼンスルホニル
−３℃に冷却したクロロスルホン酸（２４８ｍＬ、３.３７モル）に、アルゴン下、フェノール（７０ｇ、０.７４４モル）の無水塩化メチレン（２５０ｍＬ）中溶液を１時間にわたって滴下した。その混合物を室温に１時間にわたって加温し、室温で１．５時間攪拌した。その混合物を氷上に注ぎ、３０分間攪拌し、塩化メチレン（４ｘ２Ｌ）で抽出した。得られた有機相をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮させて塩化４−ヒドロキシベンゼンスルホニルを粘性褐色固体（４１.４９ｇ、２９％）として得た：１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）δ７.２９−７.３８（ｄ,２Ｈ）、６.５８−６.６９（ｄ,２Ｈ）。
【００２８】
ｃ）３,４−クロロ−Ｎ−｛（Ｓ）−１−［４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミド
２,６−ジメトキシ−４−ポリスチレンベンジルオキシ−ベンズアルデヒド（ＤＭＨＢ樹脂）（２０.０ｇ、２８.８ミリモル、１.４４ミリモル／ｇ）の無水１−メチル−２−ピロリジノン中１％酢酸（４３７.３ｍＬ）中混合物に、２６.６ｇ（８６.４ミリモル）の（Ｓ）−１−（２−ニトロ−ベンゼンスルホニル）−ピロリジン−３−イルアミン塩酸塩および２５.０８ｍＬ（１４４ミリモル）のジイソプロピルエチルアミンを加え、つづいてトリアセトキシホウ水素化ナトリウム（３０.５２ｇ（１４４ミリモル））を添加した。得られた混合物を、アルゴン下、室温で６５時間振盪した後、樹脂をＣＨ２Ｃｌ２／メタノール（１：１、３ｘ４００ｍＬ）、ＤＭＦ（３ｘ４００ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｘ４００ｍＬ）およびメタノール（２ｘ４００ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を、真空乾燥機中、３５℃で２４時間乾燥させた。元素分析（％）Ｎ：４.５６、Ｓ：３.３２。
【００２９】
上記した樹脂（１０ｇ、１０.６１ミリモル、１.０６１ミリモル／ｇ）の無水１−メチル−２−ピロリジノン（１６５ｍＬ）中混合物に、３,４−ジクロロ安息香酸（１０.１４ｇ、５３.０５ミリモル）および１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（１.４４ｇ、１０.６１ミリモル）を加え、つづいて１,３−ジイソプロピルカルボジイミド（１０.０４ｍＬ、６３.６６ミリモル）を添加した。得られた混合物を室温で４４時間振盪した後、樹脂を１−メチル−２−ピロリジノン（３ｘ１５０ｍＬ）、ジクロロエタン／メタノール（１：１、３ｘ１５０ｍＬ）およびメタノール（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を真空乾燥機中３５℃で２４時間乾燥させた。ジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸を用い室温で２時間処理して分析量の樹脂を切断した。得られた溶液を真空下で濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）４４４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００３０】
上記した乾燥樹脂（２００ｍｇ、０.１７９３ミリモル）の１−メチル−２−ピロリジノン（６ｍＬ）中混合物に、Ｋ２ＣＯ３（２４８ｍｇ、１.７９３ミリモル）およびＰｈＳＨ（０.０９８５ｍＬ、０.８９６５ミリモル）を添加した。得られた混合物を室温で４時間振盪した後、当該樹脂をメタノール（１ｘ１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３ｘ１０ｍＬ）、メタノール（１ｘ１０ｍＬ）、１−メチル−２−ピロリジノン（１ｘ１０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール（１：１、３ｘ１０ｍＬ）およびメタノール（３ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を真空乾燥機中３５℃で２４時間乾燥させた。ジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸を用い室温で２時間処理して分析量の樹脂を切断した。得られた溶液を真空下で濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）５１７［２Ｍ＋Ｈ］＋、２５９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００３１】
上記した乾燥樹脂（２００ｍｇ）の無水ジクロロエタン／１−メチル−２−ピロリジノン溶液（１：１、７.５ｍＬ）中混合物に、ピリジン（０.２２６４ｍＬ、２.７９９ミリモル）を加え、つづいて塩化４−ヒドロキシベンゼンスルホニル（０.５３９３ｇ、２.７９９ミリモル）をゆっくりと添加した。得られた混合物を室温で９６時間振盪した後、当該樹脂を１−メチル−２−ピロリジノン（３ｘ１０ｍＬ）、ジクロロエタン／メタノール（１：１、３ｘ１０ｍＬ）、ジクロロエタン（３ｘ１０ｍＬ）、メタノール（１ｘ１０ｍＬ）およびジクロロエタン（２ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を真空乾燥機中３５℃で２４時間乾燥させた。乾燥樹脂の無水テトラヒドロフラン（９.３８ｍＬ）中混合物に、カリウムトリメチルシラノラート（０.４７１３ｇ、３.６７４ミリモル）を添加した。反応混合物を２３時間振盪した後、当該樹脂をテトラヒドロフラン（３ｘ１０ｍＬ）、１−メチル−２−ピロリジノン（２ｘ１０ｍＬ）、テトラヒドロフラン（３ｘ１０ｍＬ）、ジクロロエタン／メタノール（５ｘ１０ｍＬ）およびジクロロエタン（３ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。ジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸を用い室温で２時間処理して分析量の樹脂を切断した。得られた溶液を真空下で濃縮した：ＭＳ（ＥＳＩ）４１５ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００３２】
上記した乾燥樹脂（２００ｍｇ）の無水テトラヒドロフラン（８.７５ｍＬ）中混合物に、４−ヒドロキシピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４４３ｍｇ、２.１９９ミリモル）およびトリフェニルホスフィン（５７７ｍｇ、２.１９９ミリモル）を加えた。その混合物を−７０℃に冷却し、４３３μＬ（２.１９９ミリモル）のジイソプロピルアゾジカルボキシラートを当該冷却混合物に加えた。得られた混合物を振盪しながら−７０℃で３０分間保持した。ついで、当該混合物を放置して１時間にわたって０℃に加温し、室温で１９時間振盪した。樹脂をテトラヒドロフラン（３ｘ１０ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール（１：１、１０ｘ１０ｍＬ）で洗浄した。得られた樹脂を真空乾燥機中３５℃で２４時間乾燥させた。その乾燥樹脂をジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸（４ｍＬ）と室温で２４時間反応させた。切断溶液を集めた後、当該樹脂を別のジクロロエタン中５０％トリフルオロ酢酸（４ｍＬ）と室温で１０分間反応させた。切断溶液を合し、真空下で濃縮した。２０ｍｍＩＤのＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ（Ｃ−１８）カラム５０ｍｍのＧｉｌｓｏｎ製半分取ＨＰＬＣシステムを用い、２５ｍＬ／分でポンプ吸引し、３．２分の間に１０％Ｂから９０％Ｂで溶出し（Ａ＝Ｈ２Ｏ（０.１％トリフルオロ酢酸）およびＢ＝ＣＨ３ＣＮ（０.１％トリフルオロ酢酸））、１分間保持して残渣を精製し、３,４−ジクロロ−Ｎ−｛（Ｓ）−１−［４−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ベンゼンスルホニル］−ピロリジン−３−イル｝−ベンズアミドをモノ−トリフルオロ酢酸塩（白色粉末、２７.７ｍｇ、９工程にわたって２７％）を得た：ＭＳ（ＥＳＩ） ４９８［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００３３】
【化３】
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【００３４】
スキーム１から誘導される化合物：
【表１】
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【００３５】
【化４】
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【００３６】
【表２】
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【００３７】
【化５】
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【００３８】
【表３】
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【００３９】
実施例２５
本発明の化合物を配合して用いる医薬処方は、種々の形態にて、かつ多くの成分を用いて調製することができる。かかる処方の例は以下のとおりである。
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【００４０】
錠剤の調製
工程１：適当なミキサー／ブレンダー中、成分１、成分２、成分３および成分４をブレンドする。
工程２：各成分の添加後、注意して混合しながら、十分な水を工程１からのブレンドに少しずつ添加する。その塊が粘度にて湿った顆粒に変形するまで、水を添加して混合する。
工程３：湿った塊状物を、第８メッシュ（２．３８ｍｍ）のスクリーンを用い、それを振動式造粒機に通すことで顆粒に変える。
工程４：ついで、その湿った顆粒を乾燥するまで乾燥機中で華氏１４０（摂氏６０）にて乾燥させる。
工程５：その乾燥顆粒を成分５で光沢をもたせる。
工程６：その光沢処理した顆粒を適当な顆粒プレス上で圧縮する。
【００４１】
吸入処方
式（Ｉ）の化合物（１ｍｇないし１００ｍｇ）を計量吸入器を用いてエアロゾル化し、一回使用当たりの所望量の薬物をデリバリする。
【００４２】
非経口処方
非経口投与用の医薬組成物は、適量の式（Ｉ）の化合物を加熱しながらポリエチレングリコールに溶かすことで調製される。ついで、この溶液を欧州薬局方注射用水（１００ｍｌまで）で希釈する。ついで、該溶液を０．２２ミクロンの膜フィルターを介して濾過することで滅菌し、滅菌容器中に密封する。
【００４３】
上記の実施例などの明細書の記載は本発明の化合物の製法および使用法を十分に開示するものである。しかし、本発明は上記した特定の具体例に限定されるものではなく、添付した特許請求の範囲内にあるそのすべての修飾も包含するものである。本明細書にて引用した出版物、特許および他の刊行物に対する種々の言及は現状を構成するものであって、出典を明示することにより本明細書の一部とする。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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