(57)【要約】メチレンブルー色素組成物と癌性または前癌性の上皮組織を同定および／または描写するための方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
前癌段階の上皮の疾患と癌腫瘍のインビボでの検出のための方法において、以下の工程、
癌性および前癌性の組織によって選択的に保持される色素染色組成物で上皮を連続的にリンスする工程であって、ここで染色組成物は実質的にトルイジンブルーＯからなるものであり、および
未保持の染色組成物を除去するために、リンス組成物で上皮をリンスする工程、
を包含し、染色組成物がメチレンブルーを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
前癌段階の上皮の疾患と癌腫瘍のインビボでの検出のための方法において、以下の連続的な工程、
癌性および前癌性の組織によって選択的に保持される色素染色組成物で上皮をリンスする工程であって、ここで染色組成物は実質的にトルイジンブルーＯからなるものであり、および
未保持の染色組成物を除去するために、リンス組成物で上皮をリンスする工程、
を包含し、染色組成物がメチレンブルーを含むことを特徴とする方法。
【請求項３】
癌性および前癌性の組織のインビボでの検出のための生物学的な染色組成物であって、以下
（ａ）メチレンブルー、
（ｂ）薬学的に受容される水性溶媒、および
（ｃ）ロイコメチレンブルーのための薬学的に受容される酸化剤、を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、癌性および前癌性の上皮組織の検出のための新規な診断剤に関する。
【０００２】
別の局面によれば、本発明は、上皮の癌性および／または前癌性の組織を検出するおよび／または描写するための、新規な方法に関する。
もうひとつの点において、本発明は有用な診断手順および薬剤に関し、これは特に、定期的な歯科または医科の検診や歯の洗浄などのような、歯科医や医師の日常的な診断または処置の一部として、口腔癌の可能性のある患者のインビボでのスクリーニングに有用である。
【０００３】
さらに本発明の別の局面は、有用な処置および組成物に関し、本発明では、先行技術の手順で用いられる色素よりも、より容易に利用可能となり、および／またはより高価でなく、ならびに合成および／もしくは精製することが複雑でない、色素染色を使用する。
【０００４】
さらに別の点において、本発明は色素を用いたインビボでの処置および組成物に関し、先行技術ではそうでないにもかかわらず、全口腔をリンスおよび／またはうがいすることによって用いることができ、十分非毒性である。
【０００５】
（背景技術）
口腔内の病変および口腔腫のような前癌状態の上皮の病変を検出するためのインビボ診断手順は、異形成、過形成、腫瘍形成、および他の活性な表面病変によって異常になった組織によって選択的に保持される色素組成物を用いており、当該分野において知られている。例えば、フルオレセインおよびフルオレセイン誘導体を用いる手順が、Ｃｈｅｎｚ、（Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｙ（２７：４４‐４７（１９９２））およびＦｉｌｕｒｉｎ（Ｓｔｏｍａｔｏｌｏｇｉｉａ（Ｒｕｓｓｉａｎ）７２：４４‐４７（１９９３））において開示される。これらの手順は、色素を適用し、続いて選択的に蛍光を発する癌性／前癌性の組織を検出するために、紫外線光のもとで目視による検査を包含する。
【０００６】
別の先行技術の手順は、トルイジンブルーＯを用いてリンスすることによってインビボで適用し、続いて任意の選択的に染色された組織を検出するために通常の目視による検査を包含する。このような手順は、例えば、Ｔｕｃｃｉらの米国特許第５，３７２，８０２号において、およびＭａｓｈｂｅｒｇの米国特許第４，３２１，２５１号において開示される。トルイジンブルーは、インビトロでの使用で組織病理学的な染色液として数十年間使用されてきた。この使用法を通じて、ＤＮＡおよびＲＮＡが豊富である核を紫からピンク色に染色する異染色素として知られるようになった。トルイジンブルー０の生来の深青色は、色素が核酸および他の酸性の細胞内高分子に結合した時、紫またはピンクに変化する。もちろん、このタイプの色素は、核のような内部の亜細胞構造への接近を獲得する色素に依存する。このような接近は、ホルムアルデヒドまたは一般的な細胞構造を破壊することを伴わずに細胞膜を破壊する他の試薬を用いて、組織サンプルを固定することによってのみ容易に得られる。
【０００７】
インビトロでの使用に関与する機構とは対照的に、トルイジンブルーＯによってインビボで口腔組織を染色することは、細胞壁に浸透し、そしてミトコンドリアに付着するその能力に起因し、ミトコンドリアは細胞外マトリクスの成分よりも長く色素を保持する。
【０００８】
Ｍａｓｈｂｅｒｇの手順は、口腔全体のリンスとしてトルイジンブルーＯを適用し、うがいし、続いて癌性または前癌性の組織によって保持されない色素を除去するために水および酢酸を用いてリンスすることを包含する。Ｍａｓｈｂｅｒｇの手順による予備的な診断は、１０〜１４日後の疑わしい部位へのトルイジンブルーＯ組成物の直接的に適用することによって後に確認されている。Ｔｕｃｃｉの’８０１特許は、Ｍａｓｈｂｅｒｇによって教示される一般的な手順に従って使用するために、改善されたトルイジンブルーＯ組成物を開示している。
【０００９】
Ｌｕｇｏｌ溶液（ヨウ素）およびトルイジンブルーＯの使用を包含するインビボにおける手順は、Ｐａｐａｚｉａｎ、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｉｃ　Ｃｌｉｎｉｑｕｅ　ｅｔ　Ｂｉｏｌｏｇｉｑｕｅ　９：１６‐２２（１９８５）において、　ｕｐｐｅｒ　ａｅｒｏｄｉｇｅｓｔｉｖｅ　ｔｒａｃｔ癌と同時期におこる食道癌を検出するために提案された。
【００１０】
より最近では、Ｐｏｍｅｒａｎｔｚの米国特許第５，８８２，６２７号は、Ｍａｓｈｂｅｒｇの診断プロトコルに一般的に基づいて有用なオキサジンおよびチアジン色素の構造的に規定された部類を開示した。しかし、Ｐｏｍｅｒａｎｔｚの’６２７特許は、口腔の洗浄および／またはうがいの手順を適用することについて毒性でありすぎると主張して、この規定された部類からメチレンブルーを排除している。
【００１１】
（発明の開示）
しかし、反対に、Ｐｏｍｅｒａｎｔｚの’６２７特許の開示に対して、メチレンブルーおよびそのイオン性誘導体は、インビボでの組織染色に用いられる濃度および量によって、上皮の癌性および前癌性の組織を検出および／または描写するために、局所的に適用される選択的な染色として安全に用いられる。
【００１２】
上皮組織への色素を適用するためのメチレンブルーの適切な組成物は、色素を、製剤上的に受容される適当な溶媒を用いて混合することによって調製される。好ましくは、メチレンブルー溶液のｐＨは、製剤的に受容される適切な緩衝液系で調節されており、その緩衝液系によって、約２．５〜７．０の、好ましくは４．０〜５．０の範囲のｐＨを有し、実質的に等張である最終溶液を生じることが好ましい。これは、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液系によって達成することができる。他の適切な緩衝液系としては、クエン酸−クエン酸ナトリウム系、またはクエン酸−リン酸ナトリウムなどのような混合された酸塩系を包含する。
【００１３】
本発明の液体メチレンブルー色素組成物を提供するために使用される溶媒は、水性溶媒である。本発明の好ましい実施態様に従うと、溶媒は、薬学的に受容される、すなわち、非毒性で非反応性のアルコール、例えば、エチルアルコールを包含する。このような溶媒は、色素の機構にをほとんど妨害せず、およびそれ自身、色素の有色形態（クロモ形態）から、白色形態（ロイコ形態）へ還元することに寄与しない。
【００１４】
香料は、色素組成物の他の成分に対して安定であり、これが口腔の「洗浄（リンス）」として使用される場合に、組成物の味の良さを改善するために添加されていてもよい。
【００１５】
液体組成物中のメチレンブルー色素の量は、好ましくは最終組成物の約１重量％の濃度を生じるように調節されるが、より高い濃度が用いることができ、またより低い濃度では、少なくとも部分的に有効である。本発明者は、約０．５〜約３．５重量％のメチレンブルー成分を含有する色素組成物を用いることを好む。
【００１６】
本発明はまた、本発明の方法に従う使用のための組成物を意図し、ここでは組成物に存在する色素の任意のロイコ形態は、Ｔｕｃｃｉの’８０１特許において開示される様式に類似の様式において、薬学的に受容される酸化剤の包含によってクロモ形態に酸化される。
【００１７】
（実施例）
以下の実施例は、当業者に本発明の実施形態を説明するために示され、本発明の範囲の制限のためのものではなく、本発明は添付の特許請求の範囲によってのみ規定される。
（実施例１）　診断用組成物の調製
診断用組成物は、以下の割合（重量％）において示される成分のそれぞれを混合することによって調製される：
精製水　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　　　　８３．８５
氷酢酸　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　　　　４．６１
酢酸ナトリウム三水和物　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　２．４５
ＳＤ１８　エチルアルコール　　　　　　　　　　　７．４８
過酸化水素　３０％、Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　０．４１
ＩＦＦ　Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ　ＩＣ５６３４５７　　０．２０
メチレンブルー　　　　　　　　　　　　　　　　　１．００
【００１８】
（実施例２）　リンス溶液の調製
リンス溶液は、示される割合（重量％）において以下の成分を混合することによって調製される：
精製水　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　　９８．７０
氷酢酸　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　　１．００
安息香酸ナトリウム　Ｕ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　０．１０
ＩＦＦ　Ｒａｓｐｂｅｒｒｙ　ＩＣ５６３４５７　０．２０
【００１９】
（実施例３）　臨床的有効性
実施例１および２の組成物の臨床的有効性は、Ｍａｓｈｂｅｒｇの’２５１特許において開示される診断プロトコルを使用して、Ｔｕｃｃｉ’８０１の特許に従って調製されたトルイジンブルーＯ診断用コントロール組成物に比較される。
【００２０】
患者は先ず、ＴＢＯコントロール組成物を用いて口腔の病状についてスクリーニングされる。潜在的な癌状態または前癌状態の病理を同定した後、ＴＢＯの全ての痕跡は、実施例２の水および酢酸リンスで推定部位を反復してリンスすることによって除去される。
【００２１】
次いで、口腔の病状を示すこれらの患者は実施例１のメチレンブルー診断用組成物のための試験被験者とされる。２〜３ｃｃのメチレンブルー組成物は、病状の見られる粘膜表面に塗ることによって適用され、続いてリンス混合液および水でリンスして、過剰のメチレンブルー組成物を除去する。
【００２２】
実施例１のメチレンブルー診断用組成物によって染色された面積からの組織の組織学的検査は、メチレンブルー組成物が癌性および前癌性上皮組織を同定および描写することにおいて、トルイジンブルーと少なくとも同じくらい有効であることを確認する。
【００２３】
（実施例４）
試験およびコントロール組成物が、推定部位の病変への直接的に適用する変わりに、うがいを伴ってリンスすることによって口粘膜に適用すること以外は同様にして、実施例３の手順が反復される。
【００２４】
当業者が本発明を理解し得、および実施し得るような点において、本発明者の発明を開示し、そして現在好ましい実施態様を開示し、本発明者は請求の範囲を請求する。
【国際公開パンフレット】
2004502704.tif 000002
2004502704.tif 000003
2004502704.tif 000004
2004502704.tif 000005
2004502704.tif 000006
2004502704.tif 000007
2004502704.tif 000008
2004502704.tif 000009
2004502704.tif 000010
2004502704.tif 000011
2004502704.tif 000012
2004502704.tif 000013
2004502704.tif 000014
2004502704.tif 000015
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004502704.tif 000016
【国際調査報告】
2004502704.tif 000017