(57)【要約】本発明は、プロゲスチンの追加の使用を伴なわないで、受胎能を調節するための薬剤の精製のためのERSS−選択性リガンドの使用を開示する。ERSS−アゴニストは不妊症の処理のために使用され、そしてERSS−アンタゴニストは避妊のために使用される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵胞性ステロイドの追加の使用を伴なって又は伴なわないで、受胎能を調節するための薬剤の生成のためのERβ−選択性リガンドの使用。
【請求項２】
女性不妊症の処理のための請求項１記載のERβ−選択性アルゴニストの使用。
【請求項３】
インビボ処理に関してIVF（インビトロ受精）を支持するための請求項２記載の使用。
【請求項４】
卵巣不妊症（PCO症候群）を有する女性の処理のための請求項２記載の使用。
【請求項５】
年齢に関連する卵巣不全の処理のための使用。
【請求項６】
卵巣避妊のための請求項１記載のERβ−選択性アンタゴニストの使用。
【請求項７】
卵胞形成を阻害するための請求項６記載の使用。
【請求項８】
排卵を阻害するための請求項６記載の使用。
【請求項９】
排卵された卵母細胞の着床前成長を阻害するための請求項６記載の使用。
【請求項１０】
卵胞性ステロイドの追加の使用を伴なわないで受胎能を調節するための薬剤の生成のための請求項１記載のERβ−選択性リガンドの使用。
【請求項１１】
プロゲスチンの追加の使用を伴なわないで受胎能を調節するための薬剤の生成のための請求項10記載のERβ−選択性リガンドの使用。
【請求項１２】
下記式I：
【化１】
2004529107.tif 000005
[式中、R1は、水素原子、C1-6アルカノイル基又はベンゾイル基を意味し、
R2は、C1-6アルキル基を意味し、
R3は、水素原子、C1-6アルキル基、C1-6アルカノイル基又はベンゾイルイル基を意味し、そして
R4は、水素原子、C1-6アルキル基、CnF2n+1（ここで、ｎ＝１、２又は３である）、又はC≡CR5基（ここでR5は水素原子、C1-6アルキル基、又は置換されていないかもしくは置換されているフェニル基である）を意味する］
で表される17−クロロ−D−ホモステロイド。
【請求項１３】
17−クロロ−17aα−エチニル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−プロピニル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−13β−エチル−17aα−メチル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17aβ−アセトキシ−17−クロロ−17aα−メチル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（ペンタフルオロエチル）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−メチル−17aβ−（メトキシ）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（ペンタフルオロエチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−エチル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−エチニル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール−ジアセトン、
17aβ−アセトキシ−17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17aβ−メトキシ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−メチルスルホニルフェニル）−17a，18ａ−ジホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（フェニル）−13β−メチル−17ａ−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−シアノフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−アセチルアミノフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−ヒドロキシフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオールである請求項12記載の一般式Iの化合物。
【請求項１４】
請求項12記載の下記一般式I：
【化２】
2004529107.tif 000006
で表される17−クロロ−D−ホモステロイドの生成方法であって、
下記一般式II：
【化３】
2004529107.tif 000007
［式中、R1は、水素原子、C1-6アルキル基、C1-6アルカノイル基又はベンゾイル基を意味し、
R2は、C1-6アルキル基を意味する］
で表される17−クロロ−１，３，５（10）−テトラエン−17−オンを、一般式BrMgアルキル、BrMgアルケニル又はBrMgアルキニルのマグネシウム−有機試薬により、又は塩基、例えばtert−BuOKの存在下で、アセチレン又はアルキル−もしくはアリール−置換されたアセチレンにより、又はリチウム−有機化合物、例えばLiC2F6により、又は珪素−有機化合物、例えばトリフルオロメチルトリメチルシランにより、
下記一般式III：
【化４】
2004529107.tif 000008
［式中、R1は、水素原子、C1-6アルキル基、C1-6アルカノイル基又はベンゾイル基であり、そしてR2はC1-6アルキル基であり、R3は、水素原子、金属原子又はシリル基であり、そしてR4は、水素原子、C1-6アルキル基、CnF2n+1基（ここで、ｎ＝１，２又は３である）、又はC≡CR5基（ここでR5は水素原子、C1-6アルキル基、又は置換されていないかもしくは置換されているフェニル基である）である］
で表される17aα−置換された化合物に転換し、それにより、R5が水素である場合、一般式IIIの遊離17aα−エチニル化合物を、さらにSONAGASHIRA反応により変性し、R5＝C6H4R6（ここでR6は、遊離又は置換されたヒドロキシル基、アミノ基、チオール基、スルファメート基、スルホニル基又はC1-6アルキル基又はC6-12アリール基を表す）を有する化合物を形成することを特徴とする方法。
【請求項１５】
R1がC1-6アルキル基である式IIIの化合物が、エーテル分解により、その遊離ヒドロキシル基に転換される請求項14記載の方法。
【請求項１６】
R1がアシル基である式IIIの化合物が、エーテル分解により、その遊離ヒドロキシル基に転換される請求項14記載の方法。
【請求項１７】
R3が水素原子である式IIIの化合物が、当業者において知られている手段により、エーテル又はエステルに転換される請求項14記載の方法。
【請求項１８】
女性における避妊のための医薬剤の生成のための請求項12記載の一般式Iの化合物の使用。
【請求項１９】
男性における避妊のための医薬剤の生成のための請求項12記載の一般式Iの化合物の使用。
【請求項２０】
卵巣の良性又は悪性増殖疾患を処理するための医薬剤の生成のための請求項12記載の一般式Iの化合物の使用。
【請求項２１】
卵巣癌を処理するための請求項19記載の使用。
【請求項２２】
顆粒層細胞腫瘍を処理するための請求項19記載の使用。
【請求項２３】
少なくとも１つの請求項12又は13記載の化合物、及び医薬的に適合できるビークルを含む医薬組成物。
【請求項２４】
少なくとも１つの請求項１記載の一般式Iの化合物の他に、GnRHアンタゴニスト、プロゲステロン受容体アンタゴニスト、メソプロゲスチン、ゲスタゲン又は組織−選択ゲスタゲンから成る群から選択される少なくとも１つの化合物を含む請求項12記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、
（ａ）インビボ処理に関して、及びインビトロ受精（IVF）及び胚移行処理に関してERβ−アゴニストにより妊娠可能性を改良し、そして
（ｂ）ERβ−アンタゴニストにより妊娠可能性を阻害するための新規原理の使用に関する。
【０００２】
より特定には、本出願は、
（ａ）卵巣卵胞生成（ovarian folliculogenesis）の改良及び刺激による卵母細胞及び着床前胚の妊娠可能性の改良、及び
（ｂ）卵胞形成（folliculogenesis）、排卵、及び排卵された卵母細胞の着床前成長の阻害による妊娠可能性の阻害に関する。
【０００３】
本発明は、ラット子宮のエストロゲン受容体調製物に対してよりも、ラット前立腺のエストロゲン受容体調製物に対して高い親和性をインビトロで有し、そして卵巣に対するそれらの選択的作用により妊娠作用をインビボで発揮する、医薬活性成分としての新規化合物類、それらの生成、それらの治療的適用、及び新規化合物を含む、投薬のための医薬形に関する。前記化合物は、新規ステロイド性組織−選択性抗エストロゲンである。
【背景技術】
【０００４】
卵胞成長は、原始卵胞から卵胞腔への卵巣卵胞の成長を言及する。卵巣不妊症を有する患者、例えば多嚢胞性卵巣症候群患者は、障害のある卵胞形成を有し、そして一次及び二次卵胞の数は、正常卵巣において観察される数の約２倍である（Hughesden (1982), Obstet Gynecal Survey 37:59-77）。従って、卵胞成長がしばしば、不妊症患者において損なわれていることが結論づけられ得る。
【０００５】
原始卵胞から卵胞腔への段階の、すべてではないが、ほとんどは、ゴナドトロピン−依存性である証拠が存在するが、しかし卵胞腔前において同定されるパラクライン及びオートクライン因子間の多くの候補体が初期卵胞成長のために最も重要であることはまだ明確ではない（Elvinなど. (1999)、Mol Cell Endocrinol 13:1035-1048; McNattyなど. (1999), J. Reprod Fertil Suppl 54:3-16）。ゴナドトロピンは、卵胞形成の後期段階、例えば初期卵胞腔から排卵性卵胞への遷移に主に関与している。
【０００６】
不妊症処理を求めている二人は，異なったインビボ及びインビトロ処理法をしばしば受けるであろう。インビトロ及びインビ不妊症（IVF）処理法はしばしば、外因性ゴナドトロピン、主に卵胞刺激ホルモン（FSH）及び抗エストロゲンによる前処理による排卵誘発から成る（Whiteなど. (1996), J clin Endocrinol Metab 81: 3821-3824）。次に、インビトロ処理プロトコールは、インビトロで成熟され、そして/又は受精されるために、卵巣の排卵前卵胞腔からの卵母細胞の回収を包含する。受精及び着床前胚成長の後、１〜２個の胚が、成功した妊娠を得るために、女性の子宮に再移行される。20年以上もの間、大規模に行われて来たIVFは、現在、確立された処置である。
【０００７】
外因性ゴナドトロピンの投与のために使用されるプロトコールは、多くあり、そして危険性及び欠点を有さないわけではない。主要欠点は、重度の場合、生命の危険性、交接への経済的費用、ゴナドトロピン調製物からの副作用、例えば体重の増加、鼓脹、吐き気、嘔吐、及び未知の長期の癌危険性を有する卵巣過刺激症候群（OHSS）の危険性を包含する。
【０００８】
制御された卵巣刺激生成物の危険性、副作用及び経済的欠点を緩和するための１つの手段は、外因性ゴナドトロピン処理が開始する前、適切な剤によりインビボで、卵巣不妊症患者の卵胞を適切に成熟せしめ、そしてその卵胞成長を刺激することである。このアプローチは、女性がゴナドトロピン刺激を有さないか、又は最小の外因性ゴナドトロピン刺激を受けることを包含する。
【０００９】
他方では、化学物質の投与を包含する避妊方法は、妊娠の制限を所望する女性間では広く行われている。受胎能制御の現在使用される化学的方法間では、次の手段により作動するそれらの方法が最も重要である：
（ａ）ゴナドトロピン放出の阻害を通しての排卵の抑制（内分泌原理の阻害）、
（ｂ）受精の部位への精子の移動を妨げるために雌性生殖管の変更、
（ｃ）接合体の移植（着床）の阻止、
（ｄ）殺精子作用、又は
（ｅ）流産。
【００１０】
プロゲスチンと組合されたエストロゲン、又はプロゲスチンのみから成る経口避妊薬は、最も著名な化学的避妊剤である。組合された型の避妊剤は、下垂体によるゴナドトロピン放出を妨げるために負のフィードバックにより排卵を制御することによって主に作用する。経口避妊薬は非常に効果的であるが、それらの使用は、不快な副作用、例えば嘔吐、うつ病、体重の増加及び頭痛、及び高められた長期の危険性の重度の疾病、例えば血栓塞栓症、発作、肝腺腫、胆嚢疾患、高血圧及び出血性不規則に関連し、このことは、副作用なしでの効果的避妊原理は現在、入手できないことを示す。従って、新規妊娠方法のための薬剤の必要性が存在する。
【００１１】
卵巣細胞に対して作用する理想的な避妊化合物は、内分泌下垂体−卵巣伝達システムを変性しないが、しかし細胞形成、例えば顆粒層細胞と卵母細胞との間のパラクライン相互作用を選択的に中断し、
（ａ）卵胞プログラムの障害、及び受精できない排卵された卵母細胞、又は
（ｂ）卵胞プログラムの障害及び排卵の阻害を導く剤である。
【００１２】
卵胞の成長は、原始段階から、容易に破裂する大きな卵胞腔への卵巣卵胞の成長である。最適に構築された卵胞腔のみみが、成熟された卵細胞を排卵する可能性を有する。卵巣不妊症を有する患者、例えばPCOS（多嚢胞性卵巣症候群）患者は、ホルモンに関連する破壊された卵胞形成、及び排卵阻害、並びに不十分に成熟された卵細胞を有する（Frankなど. (2000) Mol Cell Endocrinol 163: 49-52）。
【００１３】
卵胞形成の初期段階、すなわち原始卵胞から初期卵胞腔への進行段階はゴナドトロピンに無関係であるが、しかし同定されたオートクライン又はパラクライン因子（Elvinなど. (1999)、Mol Cell Endocrinol 13: 1035-1048; McNatty など. (1999), J Reprod Fertil Suppl 54: 3-16）が初期卵胞生成において最も重要であることは、まだ結論的に説明されていない多くの指摘が常に存在する。しかしながら、ゴナドトロピン、例えばFSH（卵胞刺激ホルモン）が、卵胞形成の初期段階、すなわち初期原始卵胞から大きな排卵性卵胞への進行に主に関与している。卵胞形成の追加のモジュレーターがまた、後期卵胞形成において議論されている（Eivinなど. (1999), Mol Cell Endocrinol 13: 1035-1048）。
【００１４】
最近まで、単一型のエストロゲン受容体（ER）のみが存在し、そして哺乳類組織における17β−エストラジオールのゲノム効果を仲介すると思われて来た。しかしながら、ERβと称する第２型のERをコードする遺伝子のクローニングが、エストロゲン作用の再評価を促して来た（Kuiperなど. (1996), Proc Hatl Acad Sci 93: 5925-5930）。従来のER（現在、ERαとして言及される）をコードする転写体は、動物モデルにおける両性別のモデルからアッセイされたほぼすべての組織において検出されるが、ERβ −RNAの最高発現が卵巣において観察され得る（Couseなど. (1997), Endocrinology 138: 4613-4612）。
【００１５】
ERα及びERβは、特に卵巣に関して、異なった組織分布を有するので、２種のERとのリガンド相互作用又は活性における差異は、組織レベルでのそれらの生物学的作用における重要な差異に翻訳され得る。ERα及びERβノックアウトマウスの成功した生殖の後（Couseなど. (1999), Endocrine Reviews 20: 358-418）, ERα及びERβは、雌生殖管において異なった作用を仲介、そしてERαが成長した子宮、乳腺の機能において、ゴナドトロピン作用の負の調節において重要な役割を演じるが、ところがERβは卵巣生理学に主に関与されることが現在知られている。
【００１６】
ERα及びERβは、それらのリガンド結合及びトランス活性化ドメインにおいて有意に異なった主要配列を有する。これは、それらのERサブタイプが、異なった親和性を伴なっていくつかのリガンドを結合し、そしてそれらのリガンドがまた、２種の受容体により介在される異なったアゴニスト又はアンタゴニスト特徴を有することを示唆する。
【００１７】
最近の特許出願（WO00/47603号、WO00/63228号、PCT/EP00/10804号、DE10019167.3号及びUS60/207,370号）及び出版物（Sunなど., (1999), Endocrinology 140: 800-804; Staufferなど. (2000), J Camb Chem 2:318-329）は、ERα及びERβのための高親和性ステロイド及び非ステロイドリガンドが見出されてたことを示した。いくつかの化合物はERα−に対するアゴニスト/アンタゴニストとして相当により効果的であり、他はERβに対するアゴニスト/アンタゴニストとして相当により効果的であった。
【００１８】
WO0031112号においては、エストラジオールに基づき、そして５〜９個の炭素原子の長さの１つの直鎖を有する11β−置換として炭化水素を担持する新規ステロイド化合物が見出された。この化合物は、ERα−アゴニスト/ERβ−アンタゴニストプロフィールを有する。混合されたエストロゲン−受容体プロフィールは、エストロゲン関連の障害の処理のために及びプロゲストゲンと共に避妊への使用において、改良されたエストロゲンとしてそれらの化合物を適切にする。
【００１９】
上記で言及されたすべての出願及び出版物は、引用により本明細書に組込まれる。
しかしながら、インビボでのERサブタイプ特異的相互作用の選択的作用は、これまでは示されていない。
本発明は、定義された動物モデルにおけるERβアゴニスト/アンタゴニストの効果を同時に示す。得られるデータは、ERβサブタイプ特異的化合物が卵巣における生物学的活性の定義において有用であることを最初に示している。それらのデータから、ERβは、
（ａ）初期卵胞形成、及び
（ｂ）不妊症の処理及び新規避妊薬の企画のための新規原理として取られ得る排卵において重要な役割を演じることが明らかに成った。
【００２０】
次の例は、本発明を例示するものであって、本発明を制限するものではない。
【実施例１】
【００２１】
例１．下垂体切除されたラットにおける卵胞形成に対するERβ−選択性リガンドの効果
損なわれていない未成熟Wistarラットを、生後24日（０日）で下垂体切除した（hypex）。次のホルモン処理を、手術後６日で開始した：（ａ）ビークルにより処理されたhypex ラット（対照グループ）（エタノール/アラキソイル：１＋９（v/v））のみ；（ｂ）0.01、01及び1ｍｇの17β−エストラジオール/日（化合物A）により処理されたhypex ラット；（ｃ）0.01、0.1及び1mgのERα−選択性３，17β−ジヒドロキシ−19−ノル−17α−プレグナ−１，３，５（10）−トリエン−21、16α−ラクトン（化合物B：DE10046634.7号）により処理されたhypex ラット；（ｄ）0.01、0.1及び1mgのERβ−選択性化合物＃１、８β−ビニル−１、３、５（10）−エストラトリエン−３，17β−ジオール（化合物C; DE10019167.3号/US60/207,370号）により処理されたhypexラット；（ｅ）0.01，0.1及び1mgのERβ−選択性化合物＃２（16ａ−ヒドロキシ−9ａ−メチル−エストラ−１，３，５（10）−トリエン；化合物D）により処理されたhypexラット。
【００２２】
動物を、それぞれの化合物又はビークルにより、１日当たり１度、４日間連続して、皮下処理した（６，７，８，９日目）。グループ当たりの動物の数は５〜６匹であった。動物を、処理及びビークル（対照）グループにランダムに割り当てた。
最後の注入の１日後（10日目）、動物を、計量し、そして二酸化炭素窒素により殺害した。卵巣を切除し、そして計量した。相対的卵巣湿量として定義される相対的卵巣重量（ｍｇ）を、個々の動物に関して体重100ｇ当たり計算した。個々の処理グループ及び対照グループに関しては、平均相対的湿量を決定した。処理グループ値とそれぞれの対照グループとを比較するために、ANOVAをデータに適用した。
【００２３】
組織学的評価に関しては、卵巣を、中性緩衝化された3.7％ホルムアルデヒド溶液に配置した。次に、卵巣をパラフィンに埋封し、４μmの横断切片に切断し、そしてヘマトキシリン及びエオシンにより染色した。次に、卵巣断片を、卵胞形成について定性的に評価した。
図１に提供される結果は、ERα及びERβに対するリガンドである17β−エストラジオール、及びERβ−特異的リガンドが卵巣湿量を、用量依存的に有意に高めることができることを示す。対照的に、ERα−特異的リガンドは、卵巣成長を刺激することができなかった。
【００２４】
図２に提供される組織学的データは、対照動物に比較して、17β−エストラジオール及びERβ−特異的リガンドによる処理の後の卵巣重量の上昇が卵胞サイズの拡大によることを明白に示す。わずかに少数の小さな卵胞が見出される。ERα−特異的リガンドによる処理の後、卵巣は、ビークル対照グループに相当できる多くの小さな閉鎖性卵胞を示す。
【００２５】
例２．末成熟ラットにおける排卵速度に対するERβ−選択性アンタゴニストの効果
過排卵実験を、生後23日目の損なわれていない雌Wistarラットの３種のグループにおいて行った。グループ当たりの動物の数は５匹であった。動物を、３種のグループにランダムに割り当てた。
【００２６】
個々の動物は、０日で、20I.U.の成熟した妊娠雌の血清ゴナドトロピン（PMSG）の１回の皮下（S.C.）注射を受けた。同時に（０日）、及び24及び48時間後、動物を、下記のものによりS.C.注射した：
（ａ）ビークル配合物（対照グループ：エタノール/アラキゾイル：１＋９（v/v）（グループ１）、又は
（ｂ）1mg/kg（グループ２）及び10mg/kg（グループ３）の用量でのERβ−選択性アンタゴニスト、17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10）16−テトラエン−３，17aβ−ジオール（化合物E）。実験の開始後54時間で、動物は、10I.U.のヒト繊毛膜ゴナドトロピン（hCG）の１回の腹腔内（i.p.）注射を受けた。次に、動物を、hCG注射の16時間後に殺害した。
【００２７】
卵巣及び卵管を取り出した。排卵された卵母細胞/丘塊状物を、M−２媒体により卵管をフラッシュすることにより卵管から取り出し、そして動物当たりの卵母細胞を、0.3％のヒアルロニダーゼにより補充されたM−２媒体による周囲の丘からの酵素的分離の後、計測した。
表１に提供される結果は、ERβ−特異的アンタゴニストが、グループ１（対照）における13.2をグループ３における8.0に排卵速度を、用量依存的に低めることができたことを示す。
【００２８】
【表１】
2004529107.tif 000002
例３．下垂体切除されたラットにおける後期卵胞形成及び排卵に対するERβ−選択性リガンドの効果
損なわれていない未成熟Wistarラットを、生後24日（０日）で下垂体切除した（hypex）。次のホルモン処理を、手術後６日で開始した：（ａ）ビークルにより処理されたhypex ラット（対照グループ）（エタノール/アラキソイル：１＋９（v/v））のみ；（ｂ）0.01、01及び1ｍｇの17β−エストラジオール/日（化合物A）により処理されたhypex ラット；（ｃ）0.01、0.1及び1mgのERα−選択性化合物Bにより処理されたhypex ラット；（ｄ）0.01、0.1及び1mgのERβ−選択性化合物Cにより処理されたhypexラット。
【００２９】
動物を、それぞれの化合物又はビークルにより、１日当たり１度、４日間連続して、皮下処理した（６，７，８，９日目）。グループ当たりの動物の数は57匹であった。動物を、処理及びビークル（対照）グループにランダムに割り当てた。
最後の注射の次の日（10日目）、動物を、20IUの妊娠した成熟雌ゴナドトロピン（PMSG）により皮下注射した。２日後、13日目、10IUのヒト絨毛ゴナドトロピン（hCG）を、腹腔内注射し、排卵を誘発した。14日目、動物を計量し、そして二酸化炭素窒息により殺害した。卵管及び卵巣を、次のようにして取り出した：
【００３０】
−卵管を、M−２媒体によりフラッシュし、そして動物当たりの卵母細胞を、0.3％ヒアルロニダーゼにより補充されたM−２媒体による周囲の丘からの酵素的分離の後、計数した。個々の処理グループ及び対照グループに関しては、排卵された細胞の平均数を計算した。
−卵巣を切除し、そして重量を計測した。相対的卵巣湿量として定義される、相対的卵巣重量（mg）を、個々の動物に関して、100gの体重あたり計算した。個々の処理グループ及び対照グループに関しては、平均相対湿量を決定した。処理グループ値とそれぞれの対照グループとを比較するために、ANOVAをデータに適用した。
【００３１】
図３に提供される結果は、ERα及びERβに対するリガンドである17β−エストラジオール、及びERβ−特異的リガンドが排卵された卵母細胞の数及び卵巣湿量を、用量依存的に有意に高めることができることを示す。対照的に、ERα−特異的リガンドは、排卵された卵母細胞の数及び卵巣成長及びを刺激することができなかった。
本発明によれば、ERβ−選択性リガンドは、受胎能を調節するための薬剤の生成のために使用され得る。ERβ−選択性リガンドは、本発明のためには、追加の性ステロイドの投与を伴なって及びそれを伴なわないで使用され得る。ブロゲスチンの添加を伴なわないでの使用が好ましい。
【００３２】
本発明の１つの観点によれば、ERβ−選択性アゴニストは、インビボ処理に関してIVFを支持するための雌不妊症の処理のために、卵巣不妊症（PCO症候群）を有する女性の処理のために、及び年齢に関する卵巣不全（“後期受胎能“）の処理のために使用され得る。
本発明の第２の観点によれば、ERβ−選択性アンタゴニストは、卵胞形成、排卵、及び排卵された卵母細胞の着床前成長を阻害することによって、卵巣避妊のために使用され得る。従って、ERβ−選択性アンタゴニストは、プロゲスチンのさらなる添加を伴なって又はそれを伴なわないで経口避妊薬を生成するために使用され得る。
【００３３】
本発明のさらなる観点によれば、ERβ−選択性アンタゴニストは、避妊を所望する女性に、前記ERβ−選択性アンタゴニストを投与することによって、卵胞形成、排卵、及び排卵された卵母細胞の着床前成長を阻害することによる卵巣避妊方法のために使用され得る。ERβ−選択性アンタゴニストは、いずれかの追加のプロゲスチンと共に又はそれを伴なわないで投与され得る。
ERβ−アンタゴニストによる処理下での卵胞形成の阻害により、卵胞の寿命は延長され、従って卵胞のプールの維持が導かれる。
本発明の化合物は、経口及び非経口投与の後、言及された症状のために使用され得る。
【００３４】
投与される予定である、ERβ−アゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する化合物の量は、広範囲内で変化し、そしていずれかの有効量を包含することができる。処理されるべき状態、又は達成されるべき効果、及び投与の型に基づいて、投与される化合物の量は、0.01μg〜100mg/kg体重/日、好ましくは0.1μg〜10mg/kg/日であり得る。ヒトにおいては、これは、0.8μg〜8,000mg/日、好ましくは８μg〜800mg/日の用量に対応する。
本発明によれば、投与量単位は、ERβ−アゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する、１又は複数の化合物1.6μg〜2000mgを含む。
【００３５】
本発明のERβ−アゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する化合物は、医薬組成物及び製剤の生成のために適切である。医薬組成物又は医薬剤は、活性成分として、１又は複数の本発明の化合物類又はそれらの酸付加塩を含み、任意には、他の薬理学的又は医薬的活性物質と共に混合される。医薬剤の生成は、既知の手段で行われ、それにより既知の及び通常使用される医薬アジュバント及び他の通常使用されるビークル及び希釈剤が使用され得る。
【００３６】
ビークル及びアジュバンド、例えば医薬、化粧品及び関連する分野のためのアジュバントとして、次の引用文献に推薦されるか又は示されるそれらが適切である：Ullman’s Encyclopedia of Technical Chemistry, Volume4 (1953), pages 1 to 39; Journal of Pharmaceutical Sciences, Volume 52 (1963), page 918, Czetsch-Lindenwald により発行される、Adjurants for Pharmaceutics and Related Fields; Pharm. Ind., Issue 2, 1961, p.72 and ff.: Dr.H.P. Fiedler, Dictionary of Adjuvants for Pharmaceutics, Cosmetics and Related Fields, Cantor KG, Aulendorf in Wurttemberg 1971。
【００３７】
本発明の化合物は、経口又は非経口的に、例えば腹腔内、筋肉内、皮下又は経皮的に投与され得る。化合物はまた、組織に移植され得る。
経口投与に関しては、カプセル、ピル、錠剤、被覆された錠剤、等が適切である。活性成分の他に、投与量単位は、医薬的に適合できるビークル、例えば澱粉、糖、ソルビトール、ゼラチン、滑剤、珪酸、タルク、等を含むことができる。
【００３８】
非経口投与に関しては、活性成分は、生理学的に適合できる希釈剤に溶解されるか又は懸濁され得る。希釈剤として、非常にしばしばではあるが、溶解剤、界面活性剤、沈殿防止剤又は乳化剤を伴なって又はそれらを伴なわないで、油が使用さえる。使用される油の例は、オリーブ油、ピーナツ油、綿実油、大豆油、ヒマシ油及びゴマ油である。
化合物はまた、活性成分の遅延された放出が可能にされるように配合され得る、貯蔵体（depot）注入又は移植片調製物の形で使用され得る。
不活性材料として、移植片は例えば、生分解性ポリマー、又は合成シリコーン、例えばシリコーンゴムを含むことができる。さらに、経皮投与に関しては、活性成分は例えば、バッチに添加され得る。
【００３９】
局部投与のためにERβ−アゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する化合物により充填される、膣内システム（例えば、膣内リング）又は子宮内システム（例えば、ペッサリー、コイル、IUD、Merena（商標））の生成に関しては、種々のポリマー、例えばシリコーンポリマー、エチレン酢酸ビニル、ポリエチレン又はポリプロピレンが適切である。
活性成分のより良好な生物利用性を達成するためには、化合物はまた、シクロデキストリン包接化合物として配合され得る。このためには、化合物は、α−、β−又はγ−シクロデキストリン又はその誘導体と反応せしめられる（PCT/EP95/02656号）。
【００４０】
本発明によれば、ERβ−アゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する化合物がまた、リポソームにより封入され得る。
本発明のさらなる目的は、ラット前立腺及びラット子宮からのエストロゲン受容体調製物への結合に関してインビトロ解離を有し、そして他のエストロゲン−感受性器官、例えば子宮又は肝臓に影響を及ぼさないで、卵巣に関するそれらの選択的作用によるインビボでの避妊作用を発揮する化合物を提供することである。それらの化合物はまた、ヒトにおける避妊のために、及び卵巣の良性又は悪性増殖疾患の処理のために使用される。
【００４１】
この目的は、下記一般式I：
【化１】
2004529107.tif 000003
【００４２】
[式中、R1は、水素原子、C1-6アルカノイル基又はベンゾイル基を意味し、
R2は、C1-6アルキル基を意味し、
R3は、水素原子、C1-6アルキル基、C1-6アルカノイル基又はベンゾイルイル基を意味し、そして
R4は、水素原子、C1-6アルキル基、CnF2n+1（ここで、ｎ＝１、２又は３である）、又はC≡CR5基（ここでR5は水素原子、C1-6アルキル基、又は置換されていないかもしくは置換されているフェニル基である）を意味する］
で表される17−クロロ−D−ホモステロイドの供給により達成される。
【００４３】
下記化合物が特に好ましい：
17−クロロ−17aα−エチニル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−プロピニル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−13β−エチル−17aα−メチル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17aβ−アセトキシ−17−クロロ−17aα−メチル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
【００４４】
17−クロロ−17aα−（ペンタフルオロエチル）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−メチル−17aβ−（メトキシ）−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（ペンタフルオロエチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
【００４５】
17−クロロ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−エチル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−エチニル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール、
17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３，17aβ−ジオール−ジアセトン、
【００４６】
17aβ−アセトキシ−17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−17aβ−メトキシ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−３−オール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−メチルスルホニルフェニル）−17a，18ａ−ジホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（フェニル）−13β−メチル−17ａ−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−シアノフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
【００４７】
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−アセチルアミノフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール、
17−クロロ−（17aα）−21−（4’−ヒドロキシフェニル）−13β−メチル−17a−ホモゴナ−１，３，５（10），16−テトラエン−20−イン−３，17ａβ−ジオール。
R1及びR3内のC1-6アルカノイル基は、例えばアセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル又はピバロイル基である。
R1, R2, R3, R4及びR5内のC1-6アルキル基の代表は、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル及びヘキシルである。
【００４８】
過弗素化されたアルキル基CnF2n+1（ｎ＝１，２，３）はトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル及びヘプタフルオロプロピルである。
フェニル基R5のための置換基として、例えばメチル−、エチル−、トリフルオロメチル−、ペンタフルオロエチル−、トリフルオロメチルチオ−、メトキシ−、エトキシ−、ニトロ−、シアノ−、ハロゲン−（弗素、塩素、臭素、ヨウ素）、ヒドロキシ−、アミノ−、モノ（C1-6アルキル）又はジ（C1-6アルキル）（両アルキル基は同一であるか又は異なっている）、ジ（アラルキル）アミノ（両アラルキル基は同一であるか、又は異なっている）が言及され得る。
【００４９】
新規化合物は、卵胞形成及び排卵の阻害のために、男性避妊のために、及び卵巣の良性及び悪性増殖疾患の処理のために適切である。新規化合物は、エストロゲン受容体βに対して選択的アンタゴニストである。
ホルモン性避妊のために通常使用されるエストロゲンエチルエストラジオール、又はWO00/31112号に従って避妊のために使用される化合物におけるのとは異なって、本発明の一般式Iの化合物は、単独で、すなわち避妊のためのゲスタゲンの追加の投与を伴なわないで、使用され得る。
【００５０】
プロドラッグとして、本発明の一般式Iの化合物のエステルは、エステル化されていない活性成分に比較して、それらの投与方法、それらの作用型、作用の強度及び持続期間に関して、利点を有する。
本特許出願においては、ラット前立腺の及びラット子宮からのエストロゲン受容体調製物への結合に関してインビトロ解離を有し、そして好ましくは、卵胞形成及び排卵のインビボ阻害を有する、避妊のための17−クロロ−D−ホモステロイドが記載されている：それらの物質は、他のエストロゲン−感受性器官、例えば子宮又は肝臓に影響を及ぼさないで、広範囲の用量範囲にわたって避妊作用を有する。
【００５１】
さらに、それらの化合物は、男性用避妊のために、及び卵巣の良性又は悪性増殖疾患の処理のために使用され得る。
本発明のまた、特に下記徴候のために医薬剤の生成のために少なくとも１つの一般式Iの化合物を含む医薬調製物にも関する。
前記化合物は、経口及び非経口投与の後、次の徴候のために使用され得る。
この特許に記載される新規選択性エストロゲンは、医薬調製物において個々の成分として、又は特にGnRH−アンタゴニスト、プロゲステロン受容体アンタゴニスト、メソプロゲスチン又はゲスタゲン、又は組織選択性ゲスタゲンと組合して使用され得る。
【００５２】
前記物質及びそれを含む医薬剤は、特に、卵巣避妊のために、及び卵巣の良性又は悪性増殖性疾患、例えば卵巣癌及び顆粒層細胞腫瘍の処理のために適切である。
さらに、前記化合物は、男性受胎能障害及び前立腺疾患の処理のために使用され得る。
投与されるべき一般式Iの化合物の量は、広範囲内で変化し、そしていずれかの有効量を包含することができる。処理されるべき状態及び投与型に基づいて、投与される化合物の量は、0.01μg〜100mg/kg体重/日、好ましくは0.04μ〜1mg/kg体重/日であり得る。ヒトにおいては、これは、１日当たり0.8μg〜８g、好ましくは3.2μg〜80mgの用量に対応する。
【００５３】
本発明によれば、投与量単位は、1.6μg〜2000mgの１又は複数の一般式Iの化合物を含む。
一般式Iの化合物は、医薬組成物及び調製物の生成のために適切である。医薬組成物又は、活性成分として、１又は複数の本発明の化合物を含み、任意には、他の薬理学的又は医薬的活性物質と共に混合される。医薬剤の生成は、既知の手段で行われ、それによれば、既知であり且つ通常に使用される医薬アジュバント、及び他の通常使用されるビークル及び希釈剤が使用され得る。
一般式Iの化合物の配合は、ERβ−アンタゴニスト又はERβ−アンタゴニスト活性を有する化合物について前に記載された同じ手段で行われ得る。
【００５４】
方法
エストロゲン受容体結合研究：
新規選択性エストロゲンの結合親和性を、ラット前立腺及びラット子宮からのエストロゲン受容体調製物に対するリガンドとそしての３H−エストラジオールの使用による競争実験において試験した。前立腺サイトゾルの調製、及び前立腺サイトゾルによるエストロゲン受容体試験を、Testasなど. (1981) (Testas, J. など., 1981, Endocrinology 109: 1287-1289) により記載のようにして行った。
【００５５】
ラット子宮サイトゾルの調製、及びER−含有サイトゾルによる受容体試験を、Fuhrmannなど. (1995) (Fuhrmann, U. など. 1995, Contraception 51: 45-52) に記載のようないくらかの変性を伴なって、Stack and Gorski, 1985 (Stack, Gorski 1985, Endocrinology 117, 2024-2032) により記載のようにして基本的に行った。
【００５６】
この特許に記載される物質は、ラット子宮からのエストロゲン受容体に対するよりも、ラット前立腺からのエストロゲン受容体に対してより高い結合親和性を有する。この場合、ERβは、ラット前立腺において、ERαよりも卓越し、そしてERαは、ラット子宮において、ERβよりも卓越することが仮定される。表２は、前立腺及び子宮受容体に対する結合の比率が、ヒトERβ及びラットERαに対する相対的結合親和性（RBA）の比率と定性的に一致することを示す（Kuiperなど。（1996）、Endocrinology 138: 863-870による）（表２）。
【００５７】
【表２】
2004529107.tif 000004
【００５８】
避妊作用のサンプル研究：
初期卵胞形成の研究：
未成熟雌ラットを下垂体切除した。この日を、０日として定義する。１日目〜４日目、皮下及び/又は経口処理を、17β−エストラジオールと組合して活性物質により行った。動物を５日目に検死した。卵巣を取り出し、そして例えば器官重量を肉眼的に分析しそして例えば卵巣形成、すなわち卵胞段階の組織学的評価を顕微鏡的に分析した。
【００５９】
後期卵胞形成/排卵の研究：
未成熟雌ラットを下垂体切除した。この日を、０日として定義する。１日目〜４日目、皮下及び/又は経口処理を、17β−エストラジオールと組合して活性物質により行った。５日目、PMSG（妊娠成熟血清ゴナドトロピン）による皮下注射を行う。７日目、hCGを、腹腔内投与し、排卵を誘発する。８日目、卵巣を取り出し、そして肉眼的に分析し（例えば、卵巣重量）、そして/又は顕微鏡的に分析する（例えば、卵胞、すなわち卵胞段階の組織学的評価）。管をフラッシュし、そして卵細胞の存在について調べる。
【００６０】
排卵の研究：
未成熟雌ラットを、生後23日で、PMSG（妊娠成熟血清ゴナドトロピン）により皮下処理する（１日目）。同じ日、24及び48時間後、動物は活性物質を、皮下又は経口投与される。PMSG注射の54時間後、動物はhCGの腹腔内注射を受け、排卵を誘発する。検死を、hCGの投与の18時間後に行う。管をフラッシュし、そして卵細胞の存在について調べる。
【００６１】
本発明の物質の解離されたエストロゲン作用をインビボ検出するためのもう１つの可能性は、ラットにおける物質の１回の投与の後、５HT2a−受容体及びセロトニン輸送体タンパク質の発現に対する効果、及びERβに富んでいる脳領域におけるmRNAを測定できる事実から成る。セロトニン受容体及び輸送体発現に対する効果に比較して、LH−分泌に対する効果を測定する。
【００６２】
ラット子宮エストロゲン受容体に比較して、ラット前立腺に対してより高い結合性を有する物質は、LH放出に対するそれらの陽性効果に比較して、セロトニン受容体及び輸送体の発現の上昇性に関して、より効果的である。セロトニン受容体及び輸送体の密度を、放射性リガンドを用いて、脳分泌において決定し、そしてその対応するmRNAを、現場ハイブリダイゼーションを用いて決定する。前記方法は、次の文献に記載される：G. Fink & B.E.H. Sumner 1996, Nature 383: 306; B. E. H. Sumnerなど. 1999, Molecular Brain Research。
【００６３】
本発明の一般式Iの化合物を、例及び請求項14〜16に記載のようにして生成する。一般式Iの追加の化合物を、試薬に対して相同であり、そして例に記載される試薬を用いて、類似する方法により得る。
【実施例２】
【００６４】
下記例は、本発明の説明のために使用される。
例１．17−クロロ−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５ (10), 16−テトラエン−20−イン−３，17aβ−ジオール
742mgの17−クロロ−３−メトキシ−17a,18a−ジホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−17aβ−オールを、16mlの無水ジクロロメタンに溶解し、そしてアルゴン下で−78℃に冷却した。2.2gのテトラブチルアンモニウムヨウ化物及びジクロロメタン中、１Mの三塩化硼素の溶液6mlを添加した後、それを冷浴において、さらに30分間、撹拌した。次に、浴を室温にし、そしてさらに１時間、撹拌する。分解のために、それを０℃に冷却し、その溶液を水中で撹拌し、そしてジクロロメタンにより抽出する。
【００６５】
相分離の後、有機相を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液及び水により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして真空下での蒸発により濃縮する。粗生成物を、トルエン/アセトン（20：１）の移動溶媒混合物による分離用層クロマトグラフィーにより精製する。264mgの17−クロロ−17ａα−エチニル−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５ (10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオールを得る。
融点：81〜88℃（tert−ブチルメチルエーテル/ｎ−ヘキサン）；
αD：−144°（CHCl3）；
1H−NMR：
GC/MS：356（M+＋１）99.8％F。
【００６６】
出発化合物の生成：
段階A．３−メトキシ−18a−ホモエストラ−１，３，５(10)−トリエン−17−オン
25.4gの３−メトキシ−18a−ホモエストラ−１，３，５(10)−トリエン−17β−オールを、500mlのアセトンに溶解し、そして10℃に冷却する。明白な黄色の着色が消えるまで、Junes試薬を10℃で滴下する。氷により冷却しながら、15mlのイソプロパノールを添加し、過剰の試薬を分解し、そして1.5Lの水において撹拌し、それにより、ステロイドを沈殿せしめる。結晶を吸引し、水により洗浄し、そして乾燥する。粗生成物（22.7g）を、酢酸エチルからの再結晶化により精製する。17gの３−メトキシ−18a−ホモエストラ−１，３，５(10)−トリエン−17−オンを得る。
【００６７】
段階Ｂ．17−クロロ−３−メトキシ−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オン
20.3gの３−メトキシ−18a−ホモエストラ−１，３，５(10)−トリエン−17オンを、400mlのテトラヒドロフランに溶解し、そしてアルゴン下で−78℃に冷却する。30分以内に、THF/ヘプタン/エチルベンゼン中、リチウムジイソプロピルアミドの２M溶液55mlを滴下し、そしてさらに1.5時間、撹拌する。15.5mlのクロロトリメチルシランを滴下し、そして−78℃でのさらなる30分間の撹拌の後、バッチを室温にする。２時間後、300mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液及び酢酸エチルを添加する。相分離の後、有機相を、塩化ナトリウム溶液により洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下での蒸発により濃縮する。
【００６８】
この手段で得られる17β−トリメチルシリルオキシ−18a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−メチルエーテルに基づく黄色の樹脂（22.7g）を、追加の反応のための粗生成物として使用する。その粗生成物を、350mlのクロロホルムに溶解し、そしてアルゴン下で、60gのナトリウムトリクロロアセテート及び1.5gのベンジルトリエチルアンモニウム塩化物と共に混合し、そして４時間、還流する。反応溶液を冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム溶液、飽和塩化アンモニウム溶液、及び飽和塩化ナトリウム溶液により、それぞれ２度連続して洗浄する。それを、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして溶媒を真空下で蒸発する。フラッシュクロマトグラフィー処理及びアセトン/ｎ−ヘキサンからの再結晶化により精製される30.3gの暗褐色樹脂を得る。
【００６９】
収量：7.8gの17−クロロ−３−メトキシ−17a, 18a−ジホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オン。
融点：156〜160℃（アセトン/ｎ−ヘキサン）、
αD：−44°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz、CDCl3、TMS）：0.71（t, 3H, H-20）, 2.86 (m, 2H, CH2); 3.77 (s, 3H, OCH3), 6.6, 6.71, 7.0 (3H, 芳香族−CH)，7.20（d, 8.4Hz, H-16）、
LC/MS：345（M+＋１）99.7％F、
文献：W. Schwedeなど., Steroids 59, 176-180 (1994)。
【００７０】
段階C．17−クロロ−13β−エチル−３−メトキシ−18, 19−ジノル−17a−ホモ−プレグナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−17aβ−オール
1.38gの17−クロロ−13β−エチル−３−メトキシ−17ａ−ホモ−ゴナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オンを、40mlのTHFに溶解し、そしてアルゴン下で−40℃に冷却する。30分以内に、THF中、エチニルマグネシウム臭化物の0.5M溶液60mlを滴下する。次に、反応溶液を室温にし、そしてさらに5.5時間、撹拌する。それを−５℃に冷却し、そしてNaCl水溶液60mlをゆっくりと滴下し、そして次に、ジクロロメタン30mlを添加する。相分離の後、それを水により洗浄し、中性にし、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして真空下での蒸発により濃縮する。トルエンによるフラッシュクロマトグラフィー処理により精製し、そしてアセトンから再結晶化される褐色発泡体1.64gを得る。
【００７１】
収量：968mgの17−クロロ−13β−エチル−３−メトキシ−18, 19−ジノル−17a−ホモ−プレグナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−17aβ−オール。
融点：91〜93℃（アセトン）、
1H−NMR (300MHz, CDCl3, TMS): 1.02 (t, 3H, CH2CH3), 2.85 (m, 2H, CH2CH3), 3.77 (s, 3H, OCH3), 5.91, 6.62, 7.72 (3H, C-H芳香族)，7.23（d, 1H, H-16）、
LC/MS: 345 (M+＋１)100％F。
【００７２】
例２．17−クロロ−13β−エチル−18, 19−ジノル−21−メチル−17a−ホモ−プレグナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−３，17aβ−ジオール
17−クロロ−13β−エチル−３−メトキシ−18, 19−ジノル−21−メチル−17a−ホモ−プレグナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−17aβ−オールからの例１に類似する生成。
融点：99〜104℃（アセトン/ｎ−ヘキサン）、
αD：−140°（CHCl3）、
1H−NMR（400MHz, CDCl3, TMS）: 1.01 (t, 3H, H-20), 1.90 (s, 3H, C/CCH3), 2.52 (s, 1H, OH), 2.81 (m, 2H, CH2), 4.97 (br. S, 1H, OH), 5.85, 6.55, 6.64 (3H, CH-芳香族)、7.17 (d, 8.4Hz, H-16)。
LC/MS：371（M+＋１）99.2％F。
【００７３】
出発化合物の生成：
1.38gの17−クロロ−３−メトキシ−17a, 18a−ジホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オン及びTHF中、１−プロピルマグネシウム臭化物の0.5M溶液40mlからの生成を、例１、段階Cに類似して行った。粗生成物として蓄積する淡黄色発泡体を、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、そしてtert−ブチルメチルエーテル/ｎ−ヘキサンから再結晶化する。収量：次の段階（エーテル分解）に直接的に使用される、1.07gの17−クロロ−13β−エチル−３−メトキシ−18, 19−ジノル−21−メチル−17a−ホモ−プレグナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−17aβ−オール。
1H−NMR（400MHｚ，CDCl3，TMS）：1.01（t, 3H, H-20）, 1.90 (s, 3H, プロピニル)、2.51 (s, 1H, OH), 2.84 (m, 2H, CH2), 3.77 (s, 3H, OCH3), 5.85, 6.62, 6.72 (3H, 芳香族−CH), 7.23 (d, 8.8Hz, H-16)。
【００７４】
例３．17aα−ペンタフルオロエチル−17−クロロ−17a−ホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオール
2gの３−メトキシ−17−クロロ−17a−ホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オンを、60mlのジエチルエーテルに溶解し、そして撹拌しながら、−78℃に冷却する。4.8gのペンタフルオロエチルヨウ化物を添加し、次に、ジエチルエーテル中、メチルリチウム−臭化リチウム複合体の1.5M溶液7.6mlをゆっくりと滴下する。それを−78℃で２時間、撹拌し、そして次に、飽和炭酸水素ナトリウム溶液200ml上に注ぐ。それを、酢酸エチルにより抽出し、乾燥し、そして蒸発により濃縮する。
【００７５】
−70℃で50mlのジクロロメタンにおいて、4gのテトラブチルアンモニウムヨウ化物及びジクロロメタン中、1Mの三塩化硼素溶液12mlと反応せしめられる３−メトキシ−17aα−ペンタフルオロエチル−17−クロロ−17a−ホモ−エストラ−13，5（10），16−テトラエン−17aβ−オールを得る。−70℃での１時間後、それを20℃に加熱し、そして水40mlを添加する。抽出作業の後、それを精製のためにシリカゲル上でクロマトグラフィー処理し、そしてアセトンから結晶化する。
【００７６】
17aα−ペンタフルオロエチル−17−クロロ−17a−ホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオールを得る。
1H−NMR（CDCl3）：1.02 (s, 3H, H-18), 6.24 (m, 1H, H-16), 6.56 (d, 1H, J=2.7Hz, H-4), 6.64 (dd, 1H, J=8.2, 2.7Hz, H-2), 7.14 (d, 1H, J=8.6Hz, H-1)。
19F−NMR：-78.4 (3F, CF3), -113 (2F, CF2)。
【００７７】
例４．17aα−ペンタフルオロエチル−17−クロロ−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオール
前記化合物は、３−メトキシ−17−クロロ−17a, 18a−ジホモ−エストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オンから、上記に類似して生成される。
1H−NMR（CDCl3）：1.04（ｔ, 3H, J=7Hz, CH2-CH3）, 6.27 (m, 1H, H-16), 6.56 (d, 1H, J=2.7Hz, H-4), 6.64 (dd, 1H, J=8.2, 2.7Hz, H-2), 7.15 (d, 1H, J=8.6Hz, H-1)。
19F−NMR：−78.3（3F, CF3）、−112.9 (2F, CF2)
【００７８】
例５．17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10）, 16−テトラエン−3，17aβ−ジオール
1.9gの17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17aβ−（トリメチルシロキシ）−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−オールを、テフロンフラスコにおいて、15mlのテトラヒドロフランに溶解する。4mlの弗素水素（48％）を添加した後、フラスコを強く密封する。それを、50℃に25時間、加熱する。
【００７９】
前記反応混合物を、10％塩化アンモニウム溶液800ml及び5gのグルコン酸カルシウム−一水和物から成る溶液に添加し、そしてそれを室温で30分間、撹拌する。酢酸エチルによる抽出及び標準の作業（例１を参照のこと）により、1.74gの粗生成物を単離し、これを、ジクロロメチレン/ｎ−ヘキサングラジエントを伴って、MERCKシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、そしてアセトン/ｎ−ヘキサンから再結晶化する。収量：1.36gの17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17a−ホモエストラ−１，３，５（10），16−テトラエン−3，17aβ−ジオール。
【００８０】
融点：187〜192℃（アセトン/ｎ−ヘキサン）、
αD：−15°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 1.03 (s, 3H, H-18), 2.81 (m, 2H, CH2), 3.04 (s, 1H, OH), 4.97 (s, 1H, OH), 6.23 (t, 1H, H-16), 6.55 (d, 1H, C-4原子，CH), 6.63 (dd, 1H, C−２原子、CH)、7.14 (d, 8.2Hz, C-1原子、CH)、
HPLC：280nmで98.9％F、
GC/MS：387（M+＋１）100％F。
【００８１】
出発化合物の生成：
段階A．17−クロロ−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17−オン
30gの３−メトキシ−エストラ−１，３，５(10)−トリエン−17−オンを、リチウムジイソプロピルアミド及びトリメチルクロロシランにより、例１、段階Bにおけるようにして、17β−トリメチルシリルオキシ−エストラ−１，３，５(19), 16−テトラエン−３−メチルエーテルに転換する。この場合において得られる粗生成物（44.6g）を、次の段階に直接的に使用する。
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 0.21 (s, 9H, Si(CH3)3), 0.86 (s, 3H, H-18), 2.84 (m, 2H, CH2), 3.78 (s, 3H, OCH3), 4.52 (t, 1H, H-16), 6.23 (t, 1H, H-16), 6.64 (d, 1H, C-4 芳香族、CH), 6.70 (dd, 1H, C-2 芳香族、CH), 7.20 (d, 8.2Hz, C-1 芳香族、CH)。
【００８２】
125gのトリクロロ酢酸ナトリウム及び2.9gのベンジルトリエチルアンモニウム塩化物を、540mlのクロロホルム中、37.6gの17β−トリメチルシリルオキシ−エストラ−１，３，５(19)，16−テトラエン−３−メチルエーテルに、アルゴン下で添加し、そしてその混合物を６時間、還流する。そのバッチを、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加することにより分解し、そして通常のようにして作業する。52.3gの暗褐色樹脂を単離して、トルエン/ジクロロメタングラジエントによるフラッシュクロマトグラフィー及びアセトン/ｎ−ヘキサンからの再結晶化により精製する。収量：14.2gの17−クロロ−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10)，16−テトラエン−17−オン。
【００８３】
融点：166〜169℃（アセトン）、
αD：−18℃（CHCl3)。
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 1.07 (s, 3H, H-18), 2.84 (m, 2H, CH2), 3.76 (s, 3H, OCH3), 6.61 (d, 1H, H-16), 6.72 (d, 1H, C-4芳香族、CH), 7.05 (dd, 1H, C-2芳香族、CH), 7.20 (d, 6.6Hz, C-1芳香族、CH)。
HPLC：220nmで98.4％F。
【００８４】
段階B．17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17aβ−（トリメチルシロキシ）−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−メチルエーテル
1gの17−クロロ−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17−オンを、30mlの無水THFに溶解し、1gの分子篩３Aと共に混合し、そしたアルゴン下で30分間、撹拌する。それを0℃に冷却し、1.5mlのトリフルオロメチルトリメチルシランを滴下し、そしてそれをさらに10分間、撹拌する。反応溶液を、10mlの１NのHCｌの添加により分解する。作業の後、1.05gの17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17aβ−（トリメチルシロキシ）−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−メチルエーテルを得る。
【００８５】
融点：118〜120℃（MeOH）、
αD：−4°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz，CDCl3, TMS）: 0.24 [s, 9H, Si (CH3)3], 0.96 (s, 3H, H-18), 2.86 (m, 2H, CH2), 3.78 (s, 3H, OCH3), 6.19 (t, 1H, H-16), 6.63 (d, 1H, C-4芳香族CH), 6.74 (dd, 1H, C-2芳香族CH)，7.21 (d, 6.6Hz, C-1芳香族CH),
HPLC: 278nmで98.7％F、LC/MS：471 (M+＋１) 99.7％F、
文献：Krishnamurti Bellew Prakash J. Org. Chem. 56, 984 (1991)。
【００８６】
段階C．17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17aβ−（トリメチルシロキシ）−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−オール
3gの17−クロロ−17aα−（トリフルオロメチル）−17aβ−（トリメチルシロキシ）−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３−メチルエーテルを、80mlの無水トルエンに溶解し、−5℃に冷却し、そして9mlのジイソブチルアルミニウム水素化物（1Mのトルエン溶液）と共に混合する。それを室温にし、そして次に、12時間、煮沸温度に加熱する。次に、それを−20℃に冷却し、14mlのエタノール（95％）、次に14mlのHCl（濃）及び32mlの水を滴下し、酢酸エチルにより抽出し、有機相を洗浄し、中性にし、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして濾過された溶液を真空下での蒸発により濃縮する。フラッシュクロマトグラフィーにより精製され、そしてメタノールから再結晶化される薄く着色された発泡体3.1gを得る。
【００８７】
融点：158〜161℃（MeOH）、
αD：−1°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 0.24[s, 9H, Si (CH3)3], 0.96 (s, 3H, H-18), 2.82 (m, 2H, CH2), 4.63 (s, 1H, OH), 6.19 (t, 1H, J=3.3Hz, H-18), 6.56 (d, 1H, J=2.7Hz, C-4芳香族CH)、6.64 (dd, 1H, J=2.7及び8.4Hz, C-2芳香族CH)、7.16 (d, 1H, J=8.4Hz, C-1 CH-芳香族)。
HPLC：278nmで99.9％F、GC/MS：459（M+＋１）99.7％F。
【００８８】
例６．17−クロロ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオール
464mgの17−クロロ−３−メトキシ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オールを、ジイソブチルアルミニウム水素化合物により、例４、段階Cに従って、20mlのトルエンにおいて分解する。520mgの粗生成物を、薄く着色された結晶として得、これを、トルエン/メタノール（５：１）の移動溶媒混合物による分離用層クロマトグラフィーにより精製する。アセトン/ｎ−ヘキサン及びメタノールからの再結晶化の後、192mgの17−クロロ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオールを得る。
【００８９】
融点：207〜221℃（MeOH）、
αD：−33°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）：1.01 (s, 3H, H-18), 1.40 (s, 3H, H-20), 2.80 (m, 2H, CH2), 5.37 (s, 1H, OH), 5.80 (m, 1H, H-16), 6.57 (d, 1H, J=2.7Hz, C-4 芳香族CH)、6.64（dd，1H, J=2.7及び8.4Hz, C-2芳香族CH）、7.17（D，1H，J＝8.4Hz，C-1芳香族CH）。
HPLC：281nmで98.4％F、GC/MS：333（M+＋１）99.1％F。
【００９０】
出発化合物の生成：
段階A．17−クロロ−３−メトキシ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オール
660mgの17−クロロ−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オンを、20mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、そしてアルゴン下で−40℃に冷却する。次に、ジエチルエーテル中、メチルマグネシウム臭化物の３M溶液5mlを滴下する。冷浴においての５分間の撹拌の後、バッチを室温にする。さらなる1.5時間の反応時間の後、完全な反応を達成する。バッチを０℃に冷却し、20mlの飽和塩化ナトリウム水溶液をゆっくり滴下し、そして15分間、撹拌する。
【００９１】
ジクロロメタンを添加した後、相を分離し、そして続いて水性相を再抽出する。有機相を洗浄し、中性にし、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして真空蒸発する。705mgの17−クロロ−３−メトキシ−17aα−メチル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オールを、薄く着色された発泡体として得、これを、分離用層クロマトグラフィーにより精製する。収量：380mgの薄く着色された結晶。
【００９２】
融点：136〜138℃（ｎ−ヘキサン）、
αD：−37°（CHCl3）、
1H−NMR：1.01（s, 3H, H-18）, 1.40 (s, 3H, H-19), 1.91 (s, 1H, OH)、3.78（s, 3H, OCH3）, 5.8 (m, 1H, H-16), 6.63, 6.73 7.22 (3H、芳香族H)。
HPLC：280nmで92.8％F、LC/MS：M+＋１＝347（98.9％F）。
【００９３】
例７．17−クロロ−17aα−エチニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオール
1.35gの17−クロロ−17aα−エチニル−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オールを、15mlのジクロロメタンにおいて、例１に従って、テトラブチルアンモニウムヨウ化物及び12mlの三塩化硼素（ジクロロメタン中、１M）と反応せしめる。4.4gの粗生成物を、褐色の樹脂として得、これを、トルエン/アセトングラジエント上でのフラッシュクロマトグラフィーから精製し、そしてエーテル/ｎ−ヘキサンから再結晶化する。1.23gを精製する。
【００９４】
594mgの17−クロロ−17aα−エチニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオールを得る。
融点：172〜177℃（ジエチルエーテル/ｎ−ヘキサン）、
αD：−131°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz，DMSO，TMS）：0.84 (s, 3H, H-18), 2.50 (m, 2H, CH2), 2.69 (s, 1H, C/CH), 5.82 (d, 1H, H-16), 6.43 (d, 1H, C-4芳香族CH), 6.51 (dd, 1H, C-2 芳香族CH), 7.07 (d, 6.6Hz, C-1芳香族CH), 9.00 (s, 1H, OH)。
HPLC：280nmで99.3％F, GC/MS: M+＝343（M+＋１）98.9％F。
【００９５】
例８．17−クロロ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオール
835mgの17−クロロ−３−メトキシ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−オールを、例１、段階Cに従って、アルゴン下で20mlのトルエンにおいて、４mlのジイソブチルアルミニウム水素化物（トルエン中、95％のDIBAH溶液）により分解する。標準の作業の後、800mgの17−クロロ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−３，17aβ−ジオールの薄く着色された発泡体を、トルエン/ジクロロメタン混合物による分離用層クロマトグラフィーにより精製し、そしてケトンから再結晶化する。収量：137mg。
【００９６】
融点：101〜104℃（アセトン）、
αD：−144°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz, DMSO, TMS）: 0.97 (s, 3H, H-18), 2.56 (s, 1H, C/CCH3), 5.15 (s, 1H, OH), 5.84 (d, 1H, H-16), 6.56 (d, 1H, C-4芳香族CH)、6.65（dd, 1H, C-2芳香族CH）、7.17 (d, 6.6Hz, C-1芳香族CH)。
HPLC：278nmで97.5％F、GC/MS：M+＝357（M+＋１）99.0％F。
【００９７】
出発化合物の生成：
段階A．17−クロロ−３−メトキシ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オール
660mgの17−クロロ−３−メトキシ−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17a−オンを、例７に従って、−40℃で20mlの無水テトラヒドロフランにおいて、テトラヒドロフラン中、プロピニルマグネシウム臭化物の0.5M溶液30mlと反応せしめ、そしてそれを通常のようにして作業せしめる。835mgの17−クロロ−３−メトキシ−17aα−プロピニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−オールを、淡褐色発泡体として得、これを、クロマトグラフィーにより精製する。
【００９８】
融点：157〜162℃（tert−ブチルメチルエーテル）、
αD：−153°（CHCl3）、
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 0.97 (s, 3H, H-18), 1.91 (s, 1H, C/CCH3), 3.78 (s, 3H, OCH3), 5.84 (d, 1H, H-16), 6.62 (d, 1H, C-4芳香族CH), 6.73 (dd, 1H, C-2芳香族CH), 7.23 (d, 6.6Hz, C-1芳香族CH)。
【００９９】
例９．17−クロロ−（17aα)，21−（4’−メチルスルホニルフェニル）−17a−ホモゴナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−３，17aβ−ジオール
14mlのテトラヒドロフラン及び7mlのトリエチルアミン中、346mgの４−ブロモフェニルメチルスルホン、5mgの塩化パラジウム（II）、7.3mgのトリフェニルホスフィン及び2.7mgのヨウ化第I銅を、室温で撹拌し、そして沸点に達するまで、加熱する。14mlのテトラヒドロフラン中、480mgの17−クロロ−17aα−エチニル−17a−ホモエストラ−１，３，５(10), 16−テトラエン−17aβ−ジオールを添加する。
【０１００】
12時間後、その溶液を氷水中に注ぎ、ジクロロメタンにより抽出し、２NのHClにより処理し、そして次に、水により中性に洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過しそして蒸発により濃縮する。分離用量クロマトグラフィーにより精製される粗生成物830mgを得る。154mgの17−クロロ−（17aα)，21−（4’−メチルスルホニルフェニル）−17a−ホモゴナ−１，３，５(10), 16−テトラエン−20−イン−３，17aβ−ジオールを、発泡体として得る。
【０１０１】
1H−NMR（300MHz, CDCl3, TMS）: 0.92 (s, 3H, H-18), 3,22, 3.34 (s, 3H, CH3), 5.92 (d, 1H, H-16), 6.11 (s, 1H, OH), 6.44 (d, 1H, C-4芳香族CH)，6.52 (dd, 1H, C-2芳香族CH), 7.08 (d, 6.6Hz, C-1芳香族CH), 7.69及び7.90（それぞれ、d, 2H, HC−芳香族）、9.00（s, 1H, OH）。
HPLC：280nmでの94.3％F、LC/MS：497（M+＋１）98.9％F。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】図１はhypex未成熟Wistarにおける卵巣湿量に対するERα−及びERβ−選択性リガンドの影響を示すグラフである。
【図２】図２はhypex未成熟Wistarラットにおける卵胞形成に対するERα−及びERβ−選択性リガンドの影響を示す図である。
【図３】図３はHYPEX未成熟Wistarラットにおける卵胞形成及び排卵に対するERα−及びERβ−リガンドの影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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