(57)【要約】本発明は、ホスフォテトラヒドロピラン化合物およびＴリンパ球遊走による疾患または症状の処置におけるその使用、並びに該化合物を含有する組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
描写した配置（２ＲＳ、３Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ）の、式（Ｉ）：
【化１】
2004501985.tif 000015
式中、Ｒは軸結合または赤道結合であって、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シアノ、ヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラニルオキシアルキルおよび（ＣＨ２）ｎＣＯＸからなる群から選択され、但し、ｎは両端を含めて０ないし２０の整数を表し、Ｘは、Ｙ、ＯＹ’およびＮＹ’’Ｙ’’’から独立して選択され、但し、Ｙは、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、炭水化物から独立して選択され、Ｙ’はＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルおよび炭水化物から独立して選択され、、Ｙ’’およびＹ’’’は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはアシルから独立して選択され、
但し、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルおよびアシルの各々は、場合により置換されてもよい、の化合物、またはそれらの塩、誘導体もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
場合によりフェニルにより置換されているか、または場合によりアルキルにより置換されている、Ｈ、シアノからなる群からＲが選択される、式Ｉの化合物。
【請求項３】
Ｒがシアノ、または−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、−（ＣＨ２）ｎＣＨＯ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＯＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＮＨＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＲ’’Ｒ’’’もしくは−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＲ’’Ｒ’’’であり、但し、ｎは０ないし２０から選択され、Ｒ’がＨ、アルキルまたはアリールであり、Ｒ’’がＨ、アルキル、アリールまたはアシルであり、そしてＲ’’’がＨ、アルキル、アリール、またはアシルである；またはＲがＯＣ（Ｏ）アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）アルキル、ＯＰＯ３Ｈ２、アルコキシにより置換されているアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが０ないし１２、好ましくは１ないし６である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒがシアノ、ヒドロキシアルキル基（例えばヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチル、およびヒドロキシヘキシル）、アルコキシアルキル（例えばメトキシ−またはエトキシ−メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルなど）；アリールオキシアルキル（例えばメトキシ−またはエトキシフェニル）、ヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラニルオキシアルキル（例えば−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル，テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ−メチル、エチルまたはプロピル）、アミノアルキル（例えばアミノメチル、アミノエチル、アミノプロピルなど）、ベンジル、フェニルエチル、フェニル、２、３または４−メトキシフェニル、２、３または４−メチルフェニル、２、３または４ピリジル、２、４または５−ピリミジニル、２または３−チオフェニル、２、４、または５−（１，３）オキサゾリル、２、４または５（１，３）チアゾリル、２または４−イミダゾリル、３または５−ｓｙｍトリアゾリル、（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−６アルキルが例えば、エタノイル（アセチル）、プロパノイル、ブタノイル、ペンタノイル、またはヘキサノイルである）、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）アリール（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−Ｃ（Ｏ）アリールが例えばベンゾイル、２、３または４−クロロベンゾイル、２、３または４メトキシベンゾイルまたは２、３または４−メチルベンゾイル）、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｃ１−１０アルキル（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯ２Ｃ１−６アルキルが例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、またはヘキシルエステルである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２アリール（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯ２アリールが例えばフェニルである）、２、３または４クロロフェニル、２、３または４−メトキシフェニル、または２、３または４−メチルフェニルエステル）、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＣ１−１０アルキル（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮＨＣ１−１０アルキルが例えばメチル、エチル、プロピル ブチル、ペンチルまたはヘキシルアミドである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨアリール（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮＨアリールが、例えばフェニル、２、３または４−クロロフェニル、２、３または４メトキシフェニルまたは２、３または４−メチルフェニルアミド）、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮ（Ｃ１−１０アルキル）２（例えば、ｎが０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮ（Ｃ１−１０−アルキル）２が例えばジメチル、ジエチル、ジプロピル、ジブチル、ジペンチルまたはジヘキシアミドである）、式１の化合物。
【請求項６】
請求項１ないし請求項５のいずれか１つに記載の化合物の処置有効量を、それを必要としている対象に投与することを含む、Ｔリンパ球遊走が関連する疾患または症状の処置方法。
【請求項７】
疾患または症状が、細胞介在性炎症疾患である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
疾患または症状が、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、急性散在性脳脊髄炎、乾癬、クローン病、Ｔ細胞介在性皮膚炎、間質性角膜炎、ブドウ膜炎、甲状腺炎、唾液腺炎またはＩ型糖尿病である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｔリンパ球遊走が関連する疾患または症状の処置用の医薬の製造における、請求項１ないし請求項５のいずれか１つに記載の化合物の使用。
【請求項１０】
疾患または症状が、細胞介在性炎症疾患である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
疾患または症状が、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、急性散在性脳脊髄炎、乾癬、クローン病、Ｔ細胞介在性皮膚炎、間質性角膜炎、ブドウ膜炎、甲状腺炎、唾液腺炎またはＩ型糖尿病である、請求項１０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、一般に、新規ホスフォテトラヒドロピラン化合物、およびＴリンパ球の遊走に依存する疾患の処置におけるその使用に関連する。特に、本発明は、動物およびヒトにおけるＴリンパ球介在性炎症疾患の処置におけるこれらの化合物の使用および該化合物を含有する組成物に関連する。
【０００２】
発明の背景
便宜上、感染に対する哺乳動物の獲得免疫反応は、しばしば抗体（または体液性）反応および細胞介在性反応に分類される。免疫反応のこれらの２つの武器は、異なる細胞タイプによって開始される。従って、抗体免疫反応はＢリンパ球またはＢ細胞と呼ばれる抗体産生リンパ性細胞によって生じ、一方獲得的細胞介在性免疫反応は、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）抗原の文脈における、Ｔリンパ球またはＴ細胞による抗原認識の直接的結果である。これらの反応に関わるプロセスおよび感染においてこれらのリンパ性細胞が演じる役割は、今や十分に理解され、そしてこれらの細胞の性質と機能を概説している公開された研究は、容易に入手可能であり、なかでも、出典明示により本明細書の一部とする、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ；　Ｉ．Ｍ． Ｒｏｉｔｔ Ｅｄ， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｏｓｔｏｎ， １９９８ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ： ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ， Ｐ． Ｔｒａｖｅｒｓ， Ｍ． Ｗａｌｐｏｒｔ ａｎｄ Ｊ．Ｄ． Ｃａｐｒａ Ｅｄｓ，　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９９； が含まれる。
【０００３】
Ｔ細胞は、絶えず身体中を再循環することにより、免疫学的探査の役割を演じる。ほとんどの再循環は、リンパ節から血流へのリンパ管を介する移動、およびその後の結節性後毛細管静脈（ｎｏｄａｌ ｐｏｓｔ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｖｅｎｕｌｅ）を介する節への再入場の中で起こる。残りの再循環は、身体の様々な組織の毛細管を介してＴ細胞が血流から離れ、これらの組織を通って流出（ｄｒａｉｎｉｎｇ）リンパ系に、従って局所的流出リンパ節に、遊走するときに起こる。組織を通って再循環する時に、Ｔ細胞がそれに対して反応する能力のある特異的抗原に出会うと、それは細胞介在性免疫反応を開始させる。従って、感染性物質の場合、Ｔ細胞は、ほとんどの場合、最終的に病原体の除去に至る様式で反応する。しかしながら、いくつかの場合では、この反応は過剰であり得、そして感染性物質近傍の正常宿主組織に損傷を与える結果となる。Ｔ細胞が不適切な免疫反応を開始させ得る場合もある。このことは、例えば、Ｔ細胞が身体の自己組織成分の１つに反応するときに起こり得る。臨床的に明らかな様式でこのことが起こると、生じる障害は自己免疫疾患と呼ばれる。このプロセスの説明は、出典明示により本明細書の一部とする Ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｃ．Ａ． Ｍｉｍｓ Ｅｄ； Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８２ を含む多数の科学および医学出版物に見出し得る。
【０００４】
自己反応性Ｔ細胞介在性炎症の直接的結果である、多数のヒトの病理的障害があり、これらの免疫病理的疾病には、多発性硬化症（ＭＳ）、リウマチ性関節炎、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥ）およびＩ型糖尿病などの自己免疫疾患が含まれる （Ｋｌｅｉｎ， Ｊ． ａｎｄ Ｈｏｒｅｊｓｉ， Ｖａｃｌａｖ １９９７． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ｐｐ ６５６−６５７． Ｉｎ： Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ）。乾癬は、以前はケラチン生成細胞の障害と考えられていたが、現在では皮膚のＴ細胞介在性免疫疾患であると知られている；乾癬の免疫学的基礎は、Ｂｏｓ および Ｄｅ Ｒｉｅ によって概説されている（Ｂｏｓ， Ｊ．Ｄ． ａｎｄ Ｄｅ Ｒｉｅ Ｍ．Ａ．， （１９９９）． Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ： ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｆａｃｔｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ， ｖｏｌ． ２０， ４０−４６； 出典明示により本明細書の一部とする）。
【０００５】
今回、式（Ｉ）のホスフォテトラヒドロピランである本発明の化合物が、Ｔリンパ球の血流から組織への遊走を阻害するのに効果的であり得、従ってＴリンパ球遊走が介在する疾患または症状の処置に効用を有し得ることが判明した。
【０００６】
発明の概要
本明細書および続く請求の範囲を通して、文脈が別に要求しない限り、語「含む」および「含む」および「含んでいる」などの変化は、述べられる要素または段階または要素もしくは段階の群を包含することを意図するが、他のいかなる要素または段階または要素もしくは段階の群を排除することを意図しないことが理解される。
【０００７】
従って、第１の態様では、本発明は、描写する配置（２ＲＳ、３Ｓ、４Ｓ、５Ｓ、６Ｒ）の、式（Ｉ）：
【化２】
2004501985.tif 000002
【０００８】
式中、Ｒは軸結合または赤道結合であって、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シアノ、ヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラニルオキシアルキル、および（ＣＨ２）ｎＣＯＸからなる群から選択され、
但し、ｎは両端を含めて０ないし２０の整数を表し、そしてＸは、Ｙ、ＯＹ’およびＮＹ’’Ｙ’’’から選択され、但し、Ｙは、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、炭水化物から独立して選択され、そしてＹ’はＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルおよび炭水化物から独立して選択され、Ｙ’’およびＹ’’’は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルまたはアシルから独立して選択され、
但し、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルおよびアシルの各々は、場合により置換されてもよい、のホスフォテトラヒドロピランまたはそれらの塩、誘導体もしくはプロドラッグを提供する。
【０００９】
好ましい実施態様では、ｎは０−６または１−６などの０−１２である。
【００１０】
本発明のなおさらなる態様は、それを必要としている対象における免疫疾患または症状の処置方法を提供する。その方法は、式（Ｉ）のホスフォピランまたは医薬的に許容し得るそれらの塩、誘導体もしくはプロドラッグの処置有効量を、該対象に投与することを含む。
【００１１】
本発明のさらになお別の態様では、医薬的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤と共に、式（Ｉ）のホスフォピランを含む組成物が提供される。
【００１２】
本発明はまた、炎症疾患または症状の処置用の医薬の製造における、式（Ｉ）のホスフォピランの使用を提供する。
【００１３】
図面の簡単な説明
図１は、受動的に移されたアジュバントで誘導された関節炎に対する、２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達されたリン酸モノ−（６−プロピル３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロピラン−２−イルメチル）エステルの効果を図示する。
【００１４】
図２は、受動的に移され、誘導された関節炎に対する、３７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達されたエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロピラン２−イル酢酸エステルの効果を図示する。
【００１５】
発明の詳細な説明
本明細書で使用される用語「アルキル」は、直鎖、分枝または環状の完全飽和炭化水素残基を示す。炭素原子の数が特定されない限り、この用語は、好ましくはＣ１−２０アルキルを表す。例えば「プロピル」、「ブチル」、「ペンチル」および「ヘキシル」など、「アルキル」基が総称的な意味で使用される場合、各用語がその全異性体形態（直鎖、分枝または環状）を包含し得ることが理解される。好ましいアルキルはＣ１−１８アルキルであり、さらに好ましくは、Ｃ１−６アルキルである。直鎖および分枝Ｃ１−６アルキルの例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソ−ペンチル、１，２−ジメチルプロピル、１，１−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、４−メチルペンチル、１−メチルペンチル、２−メチルペンチル、３−メチルペンチル、１，１−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、３，３−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、１，２，２，−トリメチルプロピル、１，１，２−トリメチルプロピルが含まれる。他のアルキル基には、ヘプタニル、オクタニル、ノナニル、デカニル、アンデカニル、ドデカニル、トリデカニル、テトラデカニル、ペンタデカニル、ヘキサデカニル、ヘプタデカニル、オクタデカニル、ノナデカニルおよびアイコサニルが含まれる。環状アルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルが含まれる。
【００１６】
場合により、アルキル基は１個またはそれ以上の置換基によりさらに置換され得る。従って、本明細書で使用される「アルキル」は、場合により置換されたアルキル基を表すことを企図している。適する置換基には：（分枝鎖のさらに延長されたものを形成するように）アルキル自体、ハロ（フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード）；ハロアルキル、例えばトリフルオロメチル、トリクロロメチル；ヒドロキシ；メルカプト；フェニル；ベンジル；アミノ；アルキルアミノ；ジアルキルアミノ；アリールアミノ；ヘテロアリールアミノ；アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、ブトキシ、プロポキシ フェノキシ；ベンジルオキシ；チオ；アルキルチオ、例えば、メチルチオ、エチルチオ；アシル、例えばアセチル；アシルオキシ、例えば、アセトキシ；カルボキシ（ＣＯ２Ｈ）；ＣＯ２アルキル；カルボキシアミド、例えばＣＯＮＨアルキル、ＣＯＮ（アルキル）２、ＣＯＮＨアリール、ＣＯＮ（アリール）２；シアノ、ＯＰＯ３Ｈ２、ＯＣ（Ｏ）アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）アルキル、Ｏ−炭水化物またはケト（但し、アルキル鎖または環のＣＨ２基は、Ｃ＝Ｏで置換される）が含まれ得る。例えばＣＯ２アルキルのように、置換基の用語の部分として使用される場合の「アルキル」は、本明細書に記載のように、アリール、アラルキル、フェニルおよびベンジルのようにさらに置換されてもよい。
【００１７】
用語「アルコキシ」および「アシルオキシ」は、酸素で連結された場合のアルキルおよびアシル基をそれぞれ表す。
【００１８】
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する直鎖、分枝または環状炭化水素残基から形成される基を示し、エチレン的にモノ−、ジ−または多不飽和である、先に定義したようなアルキルまたはシクロアルキル基を含む。炭素原子の数が特定されない限り、この用語は好ましくはＣ２−２０アルケニルを表す。アルケニルの例には、エテニル、プロペニル、１−メチルビニル、ブテニル、イソ−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、シクロペンテニル、１−メチル−シクロペンテニル、１−ヘキセニル、３−ヘキセニル、シクロヘキセニル、１−ヘプテニル、３−ヘプテニル、１−オクテニル、シクロオクテニル、１−ノネニル、２−ノネニル、３−ノネニル、１−デセニル、３−デセニル、１，３−ブタジエニル、１−４，ペンタジエニル、１，３−シクロペンタジエニル、１，３−ヘキサジエニル、１，４−ヘキサジエニル、１，３−シクロヘキサジエニル、１，４−シクロヘキサジエニル、１，３−シクロヘプタジエニル、１，３，５−シクロヘプタトリエニルおよび１，３，５，７−シクロオクタテトラエニルが含まれる。特に好ましいアルケニルは、Ｃ２−１０アルケニル、より好ましくはＣ２−６アルケニルである。好ましいアルケニルは、直鎖または分枝アルケニルである。アルケニルは、場合によりアルキルについて上記した任意の置換基で置換されてもよく、従って、「アルケニル」は、場合により置換されたアルケニルを表すことも企図している。
【００１９】
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を含む、直鎖、分枝または環状炭化水素残基から形成される基を示し、エチン的にモノ−、ジ−または多不飽和である、先に定義したようなアルキルまたはシクロアルキル基を含む。炭素原子の数が特定されない限り、用語は好ましくはＣ２−２０アルキニルを表す。例には、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、およびブチニル異性体、およびペンチニル異性体が含まれる。特に好ましいアルキニルはＣ−２−１０アルキニル、より好ましくはＣ２−６アルキニルである。好ましいアルキニルは、直鎖または分枝アルキニルである。アルキニルは、場合によりアルキルについて上記した任意の置換基で置換されてもよい。アルキニルは、場合によりアルキルについて上記した任意の置換基で置換されてもよく、従って、「アルキニル」は、場合により置換されたアルケニルを表すことも企図している。
【００２０】
用語「アシル」は、直鎖または分枝アルカノイル（Ｃ（Ｏ）アルキル）、アルケノイル（Ｃ（Ｏ）アルケニル）、アルキノイル（Ｃ（Ｏ）アルキニル）またはアロイル（Ｃ（Ｏ）アリール）を示し、エタノイル（アセチル）、プロパノイル、ｎ−ブタノイル、２−メチルプロパノイル、ペンタノイル、２，２−ジメチルプロパノイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、アンデカノイル、ドデカノイル、トリデカノイル、テトラデカノイル、ペンタデカノイル、ヘキサデカノイル、ヘプタデカノイル、オクタデカノイル、ノナデカノイル、アイコサノイル、プロペノイル、ブテノイル、ペンテイル、パルミトイル、オレオイル、リネオイル、およびベンゾイルなどの基を含み得る。アシルの炭化水素鎖は、場合により１個またはそれ以上の上記のような置換基でさらに置換されてもよく、従って、「アシル」は、場合により置換されたアシルを表すことも企図している。
【００２１】
本明細書で使用される炭水化物の用語は、単純な糖類を示し、還元末端を介する、即ちグリコシド結合を介する付着点を有する、単−、二−および三−糖類を含む。そのような炭水化物の例には、１−グルコシル、１−マンノシル、１−ガラクトシル、１−マルトシル、１−ラクトシル、１−イソマルトシル、１−セロビオシル、１−マルトトリゾイル、１−イソマルトトリオシルおよび１−セロトリオシルが含まれる。
【００２２】
用語「アラルキル」は、（好ましくは末端で）アリール基、例えば（ＣＨ２）ｎフェニル（但し、ｎは１、２、３、４、５または６である）で置換されたアルキル鎖を示す。
【００２３】
用語「ヘテロアラルキル」は、（好ましくは末端で）ヘテロアリール基、例えば（ＣＨ２）ｎ＝ヘテロアリール（但し、ｎは１、２、３、４、５または６である）で置換されたアルキル鎖を示す。
【００２４】
本発明は、式（Ｉ）（式中、ＲはＣＮ、ＨまたはＣ−結合有機残基である）に示すホスフォテトラヒドロピラン部分を有する化合物を提供し、有機残基で結合された２個の式（Ｉ）に示すホスフォテトラヒドロピラン部分を含有する化合物を含み得る。Ｃ−結合有機残基は、少なくともＣ、Ｈ、そして場合により１個またはそれ以上のハロゲン、Ｎ、Ｏ、ＰまたはＳを含有する部分が含まれる。
【００２５】
本発明のある実施態様では、Ｒは、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シアノまたは（ＣＨ２）ｎＣＯＸであり、但しｎは両端を含めて０ないし２０の整数を表し、ＸはＹ、ＯＹ’およびＮＹ’’Ｙ’’’から独立して選択され、但しＹはＨ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールから独立して選択され、Ｙ’は、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールおよび炭水化物から独立して選択され、Ｙ’’およびＹ’’’は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリールまたはアシルから独立して選択され、但し、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルおよびアシルの各々は、場合により置換され得る。
【００２６】
ある好ましい実施態様では、Ｒはシアノまたは、カルボキシ、オキシ、アミドまたはアミノ基で置換された−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ’、例えば−（ＣＨ２）ｎＣＨＯ、−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＯＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＨ２ＮＨＲ’’、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＲ’’Ｒ’’’または−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＲ’’Ｒ’’’から選択され、但しｎは０−２０から選択され、Ｒ’はＨ、アルキルまたはアリールであり、Ｒ’’はＨ、アルキル、アリールまたはアシルであり、そしてＲ’’’はＨ、アルキル、アリールまたはアシルである。好ましくは、ｎは０−２０、例えば０−１２であり、より好ましくは１−６である。他の実施態様では、ＲはＯＣ（Ｏ）アルキル、ＮＨＣ（Ｏ）アルキル、ＯＰＯ３Ｈ２、アルコキシまたはＯ−炭水化物で置換されたアルキル鎖（例えば（ＣＨ２）ｎ、但しｎは上記の通りである）であり、但し、「アルキル」は本明細書に記載のように置換され得る。
【００２７】
好ましいＲ基には：シアノ、ヒドロキシアルキル基（例えばヒドロキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、ヒドロキシブチル、ヒドロキシペンチルおよびヒドロキシヘキシル）、アルコキシアルキル（例えばメトキシ−またはエトキシ−メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシルなど）；アリールオキシアルキル（例えばメトキシ−またはエトキシフェニル）、ヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラニルオキシアルキル（例えば（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−２−イルオキシ）−３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ−メチル、エチルまたはプロピル）、アミノアルキル（例えばアミノメチル、アミノエチル、アミノプロピルなど）、ベンジル、フェニルエチル、フェニル、２、３または４−メトキシフェニル、２、３または４−メチルフェニル、２、３または４−ピリジル、２、４または５−ピリミジニル、２または３−チオフェニル、２、４または５−（１，３）オキサゾリル、２、４または５−（１，３）チアゾリル、２または４−イミダゾリル、３−または５−ｓｙｍトリアゾリル、（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｃ１−６アルキル（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−Ｃ（Ｏ）Ｃ１−６アルキルは例えばエタノイル（アセチル）、プロパノイル、ブタノイル、ペンタノイルまたはヘキサノイルである）、−（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）アリール（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−Ｃ（Ｏ）アリールは、例えばベンゾイル、２、３または４−クロロベンゾイル、２、３または４−メトキシベンゾイルまたは２、３または４−メチルベンゾイルである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｃ１−１０アルキル（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯ２Ｃ１−６アルキルは、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルエステルである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２アリール（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯ２アリールは例えばフェニル、２、３または４−クロロフェニル、２、３または４−メトキシフェニルまたは２、３または４−メチルフェニルエステルである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＣ１−１０アルキル（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮＨＣ１−１０アルキルは例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルまたはヘキシルアミドである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨアリール（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮＨアリールは例えばフェニル、２、３または４−クロロフェニル、２、３または４−メトキシフェニルまたは２、３または４−メチルフェニルアミドである）、−（ＣＨ２）ｎＣＯＮ（Ｃ１−１０アルキル）２（例えば、ｎは０、１、２、３、４、５または６であり；そして−ＣＯＮ（Ｃ１−１０アルキル）２は、例えばジメチル、ジエチル、ジプロピル、ジブチル、ジペンチルまたはジヘキシルアミドである）が含まれる。
【００２８】
当業者は、ニトリル基はカルボン酸またはアミド基と同じ酸化レベルにあること、そして例えば水性強酸または塩基の処理によるなどの既知方法によって、これらの基に変換できることを認識する。カルボン酸基は、例えば酸性条件下での適切なアルコールによる処理、または適切なアルキルハロゲン化物による処理などの既知方法により、エステル化できる。カルボン酸はまた、酸化レベル１まで還元されてアルデヒドを形成し、続いてさらなる酸化レベルに還元され、アルコールを提供することもできる。適切な還元方法は当分野で既知であり、ＬｉＡｌＨ４、ＤＩＢＡＬまたはボランなどのヒドリド試薬による処理を含み得る。対応するアルコールは、標準的な方法を使用してアルキル化またはアシル化できる。適切なアルキル化剤には、例えばメチル、エチルおよびプロピル塩化物、臭化物およびヨウ化物などのアルキルハロゲン化物、および例えば硫酸ジメチルおよび硫酸ジエチルなどのジアルキル硫酸塩が含まれ得る。適切なアシル化剤には、カルボン酸塩化物および無水物が含まれる。カルボン酸は、触媒またはＤＣＣなどのカップリング剤の存在下で適切なアミンで処理することにより、アミドに変換し得る。アミドはまた、酸塩化物を適切なアミンで処理することによっても調製し得る。続いて、アミド（またはニトリル）を、例えばＬｉＡｌＨ４などの適切な還元剤で還元して、アミンを提供できる。アミンのアシル化またはアルキル化は、上記のように実行できる。これらの基の相互変換のためのさらなる方法は、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ， Ｒ． Ｌａｒｏｃｋ， ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， １９８９， および Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｊ． Ｍａｒｃｈ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ などの参照文献に記載されている。
【００２９】
Ｒがメチレン基を介してピラン環に結合している化合物は、適切なトリフェニルホスフォランを使用して、ヴィティヒ型の方法論によりマンノースで調製できる。例えば、古典的なヴィティヒ方法論は、アルキル、アルケニル、アルキニルなどの基を組み込める。実施例１は、この方法論を使用する、様々なＣＨ２ＣＯ２アルキル基の６位での組込みを例示説明する。当分野で既知の標準的な方法論を使用して、メチレン鎖の長さを増加させて、エチレン、プロピレンなどを提供できる。
【００３０】
アルキレン鎖は、当分野で既知の方法、例えば Ａｒｎｄｔ−Ｅｉｓｔｅｒｔ 合成により、伸長できる。この手段により、ＣＨ２の挿入を伴って酸塩化物をカルボン酸に変換できる。従って、カルボン酸基は、例えばＳＯ２Ｃｌ２の処理により、その酸塩化物誘導体に変換できる。酸塩化物誘導体は、ジアゾメタンと反応してジアゾケトンを形成でき、次いでそれをＡｇ２／Ｈ２Ｏまたは安息香酸銀およびトリエチルアミンで処理できる。プロセスを繰返し、アルキレン鎖の長さをさらに増大させられる。あるいは、アルデヒド（またはケト）基をヴィティヒ型方法論に処し（例えばＰｈ３Ｐ＝ＣＨＣＯ２Ｍｅを使用して）、α，β−不飽和エステルを産生できる。この場合、二重結合の水素化により、２個の炭素原子が増加したアルキレン鎖が提供される。同様の様式で、他のホスフォランをより長い（そして場合により置換、分枝または不飽和である）炭素鎖の生成に使用できる。
【００３１】
当業者は、２位での置換基の化学操作は、ヒドロキシ基などの、分子内の他の潜在的に反応性である基の保護を要し得ることも認識する。適切な条件下で使用するための適切な保護基並びにその取付けおよび除去の方法は、当分野で既知であり、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ． Ｗｕｔｚ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎ， （１９９１） に記載されている。これらの保護された誘導体は、本発明のさらなる態様を提供する。
【００３２】
用語「塩、誘導体またはプロドラッグ」は、レシピエント（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）に投与すると、本明細書に記載の化合物を（直接または間接に）与える能力のある、任意の医薬的に許容し得る塩、エステル、溶媒和物、水和物または任意の他の化合物を含む。しかしながら、医薬的に許容し得る塩の調製に有用であり得るので、医薬的に許容されない塩も本発明の範囲内であることが理解される。
【００３３】
適する医薬的に許容し得る塩には、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸、ホウ酸、スルファミン酸および臭化水素酸などの医薬的に許容し得る無機酸の塩、または酢酸、プロピオン酸、酪酸、酒石酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、乳酸、粘液酸、グルコン酸、安息香酸、コハク酸、シュウ酸、フェニル酢酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、サリチル酸、スルファニル酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、エデト酸、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、ラウリル酸、パントテイン酸、タンニン酸、アスコルビン酸および吉草酸などの医薬的に許容し得る有機酸の塩が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
【００３４】
塩基の塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウムおよびアルキルアンモニウムなどの医薬的に許容し得る陽イオンと形成されたものが含まれるが、これらに限定されるわけではない。特に、本発明は、その範囲に例えばリン酸基のナトリウムまたはカリウム塩、またはアルキルエステル（例えばメチル、エチル）などの陽イオン塩を含む。
【００３５】
塩基性窒素含有基は、メチル、エチル、プロピルおよびブチルの塩化物、臭化物およびヨウ化物などの低級アルキルハロゲン化物；硫酸ジメチルおよびジエチルなどの硫酸ジアルキル；などの物質で四級化し得る。
【００３６】
本発明の化合物は、遊離化合物として、または溶媒和物（例えば、水和物）としてのいずれかの結晶形態であり得、両形態は本発明の範囲内にあると企図している。溶媒和の方法は、当分野で一般的に知られている。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物のプロドラッグであるいかなる化合物も、本発明の範囲および精神の内にある。用語「プロドラッグ」はその最も広い意味で使用され、インビボで本発明の化合物に変換される誘導体を包含する。そのような誘導体は当業者に容易に想起され、例えば、酢酸塩などの、遊離ヒドロキシ基がエステルに変換される化合物、または遊離アミノ基がアミドに変換される化合物が含まれる。本発明の化合物のアシル化の方法は当分野で周知であり、適切な触媒または塩基の存在下で、適切なカルボン酸、無水物または塩化物で処理することを含む。
【００３８】
Ｔリンパ球は、血流から組織（それらが反応できる抗原を含有する組織を含む）へ遊走することが知られている。Ｔリンパ球遊走のインビボの例には、その組織の１つまたはそれ以上に存在する抗原を有する哺乳動物への、放射性同位元素または蛍光標識された抗原特異的Ｔ細胞の静脈注射が含まれる。注射されたＴ細胞が抗原含有組織に蓄積した程度の評価は、組織に存在する放射能の量を測定すること、または組織学的に組織を分析して浸透した蛍光標識細胞の数を判定することによって成し得る。これを実行に移すためには、動物を強力な免疫学的アジュバントの存在下で「自己」タンパク質または外来タンパク質のいずれかで免疫し、７ないし１０日後にそれらの脾臓および／または流出リンパ節を取出し、そしてこれらの器官からＴ細胞を単離する。次いでこれらの細胞を放射性または蛍光標識し、そして静脈注射によりナイーブの同系動物に移す。「自己」タンパク質の場合、いくつかの抗原特異的Ｔ細胞は遊走し、抗原が局在する組織に蓄積する。例えば、ＣＮＳ抗原の場合、細胞は脳および脊髄に局在し、次いでそこに蓄積した標識細胞の数を判定できる。外来抗原の場合、レシピエントに外来抗原貯蔵所（ｄｅｐｏｔ）を与え（例えば、不溶性抗原を皮膚などの組織に注射できる）、細胞は外来抗原を含有する部位に蓄積する。
【００３９】
実際にこの実験を行う最も簡単な方法は、細胞介在性ＩＶ型過敏反応を使用することである。この方法は、当業者に認識され、かつよく理解されており、そしてこの原理は、例えば Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ； Ｉｖａｎ Ｍ． Ｒｏｉｔｔ Ｅｄ， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｏｓｔｏｎ， １９９８ などの多くの免疫学の教科書に見出される。ここで、組織のタンパク質（類）を化学的に修飾し、かくして免疫系にとって「外来」組織に「見える」ようにすることによって、ドナー動物は自己タンパク質（実際には、皮膚が使用に最も簡単な組織である）に対して敏感にされる。このことは、共有結合的に反応する、通常アルキル化剤またはアリール化剤である「ハプテン」と皮膚を反応させることによって成され、かくして皮膚のタンパク質（類）を修飾する。敏感化の７ないし１０日後に、脾臓をドナー動物から採取する。Ｔリンパ球を単離し、放射性または蛍光標識し、静脈注射によってナイーブレシピエント動物に移す。細胞を移すのに先立ち、レシピエント動物の皮膚の一部、通常は簡易化のために耳、を同じハプテンで処理しておく。細胞を移してから短時間の内に、敏感化されたＴ細胞がハプテン化された組織に蓄積し始め、８ないし２４時間後に組織を取出し、細胞蓄積を評価できる。蛍光標識細胞の場合、その蓄積は組織学的に評価され、放射性標識細胞の場合、蓄積は適切な装置で放射能の減衰を計測することにより評価される。典型的に、本発明の物質は、このモデルにおけるＴ細胞蓄積を２０ないし８５％阻害できる。このモデルでは、相対的に純粋なＴリンパ球集団を移すことが重要である。本発明の物質は、Ｂリンパ球遊走を妨害するとは考えられない。同様の実験を、Ｔ細胞株を使用して実施できる。
【００４０】
血管内皮細胞（ＶＥＣ）は、培養で成長させると、コンフルエントに成長し、内皮細胞下マトリックスを沈着させる。細胞とマトリックスは、血管に見出される同一の成分に類似している（Ｊａｆｆｅ， Ｅ．Ａ．， Ｎａｃｈｍａｎ， Ｒ．Ｌ．， Ｂｅｃｋｅｒ， Ｃ．Ｇ． ａｎｄ Ｍｉｎｉｃｋ， Ｃ．Ｒ．， １９７３， Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎｓ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ， ｖｏｌ ５２（１１）， ２７４５−２７５６； 出典明示により本明細書の一部とする）。活性化したＴ細胞は、身体の組織を通るときと同じように、このマトリックスを通って遊走する。この遊走を、２つのチャンバーの間にそれを通って細胞が移動できる窓のある境界を含む特別な装置上で、血管内皮細胞を成長させることによって、研究でき、実行に移すことができる。従って、ＶＥＣをそのような装置の上部チャンバーで培養すると、それらはコンフルエントに成長し、細胞下マトリックスを窓のある境界の上に沈着させる。活性化したＴ細胞をこのチャンバー内で内皮細胞層の上に浮遊させると、それらはＶＥＣ層を通って遊走する。一旦それらがＶＥＣ層の下になると、それらは細胞下マトリックスを分解し、蓄積した細胞の数を測定できる下部チャンバーへ、窓を通って遊走する。従って、このインビトロ血管系を通るＴ細胞の遊走能力を阻害できる物質の効力を、Ｔ細胞が存在する培養期間中に一方または両方のチャンバーに物質を置くことにより測定できる。物質の効力は、対照実験装置の下部チャンバー内のＴ細胞の数に対する、物質処理した下部チャンバー内のＴ細胞（即ち、遊走した細胞）の数を比較することにより、定量される。
【００４１】
この方法は、血管内皮を通る細胞遊走を研究するために一般的に使用され、出典明示により本明細書の一部とする次の出版物を含む、科学および医学文献に詳細に記録されている；Ｐｏｇｇｉ， Ａ．， Ｃｏｓｔａ， Ｐ．， Ｓｏｃｃｈｉ， Ｍ．Ｒ． ａｎｄ Ｍｏｒｅｔｔａ， Ｌ．， １９９７， Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣＤ４＋ ＮＫＲＰ１Ａ＋ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｄｉｒｅｃｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＮＫＲＰ１Ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ ２７， ２３４５−２３５０； Ｈａｕｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｅ．，　Ｈａｕｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｄ．， Ｈｕｌｔｅｎｂｙ， Ｋ． ａｎｄ Ｈｏｌｇｅｒｓｓｏｎ， Ｊ．， ２０００， Ｐｏｒｃｉｎｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ： ａｎｔｉ−ｐｏｒｃｉｎｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｖｏｌ ６９（９）：１８３７−１８４９； Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ， Ｎ．Ｊ．， Ａｋｂａｒ， Ａ．Ｎ．， ＭａｃＣｏｒｍａｃ， Ｌ．Ｐ．， Ｌｏｗｄｅｌｌ， Ｍ．， Ｃｒａｉｇｅｎ， Ｊ．Ｌ．， Ｈａｓｓａｎ， Ｉ．， Ｇｒｕｎｄｙ， Ｊ．Ｅ．， Ｓａｌｍｏｎ， Ｍ． ａｎｄ Ｙｏｎｇ Ｋ．Ｌ．， １９９７， Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｒｉｍｅｄ Ｔ ｃｅｌｌ， ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｌｏｗ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４５ＲＢ， ａｃｒｏｓｓ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ ９０（２）， ２７２−２８０； Ｍｏｈｌｅ， Ｒ．， Ｍｏｏｒｅ， Ｍ．Ａ．， Ｎａｃｈｍａｎ， Ｒ．Ｌ． ａｎｄ Ｒａｆｉｉ， Ｓ．， １９９７， Ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ３４＋ ａｎｄ ｍａｔｕｒｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌ： ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ． Ｂｌｏｏｄ． Ｖｏｌ ８９（１）， ７２−８０）； Ｌｏｕ， Ｊ．， Ｇａｓｃｈｅ， Ｙ．， Ｚｈｅｎｇ， Ｌ．， Ｇｉｒｏｕｄ， Ｃ．， Ｍｏｒｅｌ， Ｐ．， Ｃｌｅｍｅｎｔｓ， Ｊ．， Ｙｔｈｉｅｒ， Ａ． ａｎｄ Ｇｒａｕ， Ｇ．Ｅ．， １９９９， Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ． Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｖｏｌ ７９（８）：１０１５−１０２５．
【００４２】
本発明の化合物は、血管内から周辺の組織へのＴリンパ球遊走を阻害し（但し、用語「阻害」は、その一般的意味、即ち停止、防止、抑止、最小化または減速を包含する）、従って細胞介在性炎症疾患および症状の治療処置に有用であり得る。本発明の化合物で処置され得るそのような炎症疾患または症状の例には、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、急性散在性脳脊髄炎、乾癬、クローン病、Ｔ細胞介在性皮膚炎、間質性角膜炎、ブドウ膜炎、甲状腺炎、唾液腺炎（ｓｉａｌｉｔｉｓ）およびＩ型糖尿病が含まれる。従って、阻害の用語は、そのような疾患の症状の進行または重篤度を後退させることを意味するとも理解できる。このように、本方法は、医学治療的および／または予防的投与の両者を、適切なものとして包含する。
【００４３】
本発明の化合物を、ヒトまたは他の哺乳動物対象を処置するために使用し得る。本発明の化合物は、ヒト対象の処置に特に適すると考えられる。非ヒト対象には、霊長類、家畜動物（例えば、ヒツジ、ウシ、ウマ、ヤギ、ブタ）、家内随伴動物（例えば、ネコ、イヌ）、実験室用試験動物（例えば、マウス、ラット、モルモット、ウサギ）、または捕獲した野生動物が含まれる。
【００４４】
本発明の化合物は、対象に処置有効量で投与される。本明細書で使用される処置有効量とは、所望の効果を少なくとも部分的に達成すること、または処置される特定の疾患または症状の、発病を遅らせること、進行を阻害すること、発病または進行を全部一緒に停止または後退させることを含むと企図している。
【００４５】
本明細書で使用される用語「処置有効量」は、所望の投薬法に従って投与されると、所望の治療活性を与える化合物の量に関連する。投与は数分、数時間、数日、数週、数月または数年の間隔でなされてもよく、またはこれらの期間の任意の１つに渡って継続的であってもよい。適切な用量は、投与毎に、体重１ｋｇ毎約０．１ｎｇないし投与毎に体重１ｋｇ毎約１ｇの範囲内にある。好ましくは、用量は投与毎に体重１ｋｇ毎１ｎｇないし１ｇの範囲にあり、例えば投与毎に体重１ｋｇ毎１ｍｇないし１ｇの範囲にある。適切には、用量は投与毎に体重１ｋｇ毎１ｍｇないし５００ｍｇの範囲にあり、例えば投与毎に体重１ｋｇ毎１ｍｇないし２００ｍｇ、または投与毎に体重１ｋｇ毎１ｍｇないし１００ｍｇの範囲にある。他の適切な用量は、体重１ｋｇ毎１ｍｇないし２５０ｍｇの範囲にあり得、投与毎に体重１ｋｇ毎１ｍｇないし１０、２０、５０または１００ｍｇ、または投与毎に体重１ｋｇ毎１０ｍｇないし１００ｍｇを含む。
【００４６】
適切な用量および投薬法は、看護する医師によって決定され、処置される特定の症状、症状の重篤度、並びに対象の一般的健康、年齢および体重によって決まり得る。
【００４７】
有効成分は、単回投与または一連の投与で投与される。有効成分を単独で投与することは可能であるが、それを対象に組成物として、好ましくは医薬組成物として与えるのが好ましい。そのような組成物の製剤は、当業者に周知である。組成物は、適する担体、希釈剤または賦形剤を含有し得る。これらには、あらゆる従来の溶媒、分散媒、充填剤、固体担体、被覆剤、抗真菌および抗菌剤、皮膚浸透剤、界面活性剤、等張および吸収剤などが含まれる。本発明の組成物は、適切な場合に補充の抗炎症剤または他の生理学的に活性な物質も含み得ることが理解される。
【００４８】
担体、希釈剤または賦形剤は、組成物の他の成分と適合し、かつ対象に有害でないという意味で、医薬的に「許容し得る」ものでなければならない。組成物には、経口、直腸、鼻腔、局所（口内および舌下を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、脈管内および皮内を含む）投与に適するものが含まれる。組成物は、利便上、単位投与形態で与えられてもよく、薬学の分野で周知のいかなる方法によっても調製し得る。そのような方法には、１種またはそれ以上の補助成分で構成される担体と有効成分を一緒にする段階が含まれる。一般に、活性成分を液体担体もしくはよく分割された固体担体または両者と均一かつ完全に一緒にし、その後必要なら生成物を成形することにより、組成物は調製される。
【００４９】
経口投与に適する本発明の組成物は、予め決定した量の有効成分を各々含有するカプセル剤、袋剤（ｓａｃｈｅｔ）または錠剤などの別個の単位として；粉末剤または顆粒剤として；水性または非水性液体中の液剤または懸濁剤として；または水中油液体乳剤もしくは油中水液体乳剤として与えられ得る。有効成分は、巨丸剤、舐剤またはペーストとして与えられてもよい。
【００５０】
錠剤は、場合により１種またはそれ以上の補助成分と共に、圧縮または鋳造により作成し得る。圧縮錠剤は、粉末または顆粒などの自由に流動する形態の有効成分を、場合により結合剤（例えば不活性な希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えばナトリウム澱粉グリコール酸塩、クロスリンクしたポリビニルピロリドン、クロスリンクしたナトリウムカルボキシメチルセルロース）、表面活性剤または分散剤と混合して、適切な機械の中で圧縮することにより調製し得る。鋳造錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物を、適切な機械の中で鋳造することにより作成し得る。錠剤は、場合により被覆されるか、または切れ目を入れられてもよく、そして例えば所望の放出プロフィールを得るために様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、中の有効成分の遅延または制御放出をもたらすように製剤し得る。錠剤は、胃以外の腸の部分での放出をもたらすために、場合により腸溶性被覆で提供されてもよい。
【００５１】
口内の局所投与に適する組成物には、味付のベース、通常はショ糖およびアカシアまたはトラガカント・ゴム、の中に有効成分を含むトローチ剤（ｌｏｚｅｎｇｅ）；ゼラチンとグリセリン、またはショ糖とアカシア・ゴムなどの不活性なベースの中に有効成分を含む香錠（ｐａｓｔｉｌｌｅ）；および適する液体担体の中に有効成分を含む口内洗浄剤が含まれる。
【００５２】
例えば皮膚用の局所投与用組成物は、ローション、クリーム、ゲル、軟膏などの形態であり得る。
【００５３】
直腸投与用組成物は、例えばココアバター、グリセリン、ゼラチンまたはポリエチレングリコールなどの適するベースを用いて、坐剤として与えられ得る。
【００５４】
膣投与に適する組成物は、有効成分に加えて当分野で適切であると知られているような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として与えられ得る。
【００５５】
非経口投与に適する組成物には、抗酸化剤、緩衝液、殺菌剤および組成物を企図するレシピエントの血液と等張にするための溶質を含有する、水性および非水性等張滅菌注射液剤；および懸濁化剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁剤が含まれる。組成物は、例えばアンプルおよびバイアルなどの単位用量または複数用量の封止容器中に与えられてもよく、例えば注射用の水などの滅菌液体担体の添加のみを使用の直前に要する凍結乾燥（凍結乾燥）状態で保存されてもよい。即席の注射液剤および懸濁剤は、前述の種類の滅菌粉末剤、顆粒剤および錠剤から調製してもよい。
【００５６】
好ましい単位投与組成物は、本明細書で前述したように、有効成分の日用量または単位、半日用量、またはそれらの適する小部分を含有するものである。
【００５７】
特に前述した有効成分に加えて、本発明の組成物は当該組成物のタイプに関連して当分野で伝統的な他の物質も含み得ることを理解すべきである。例えば、経口投与に適するものは、結合剤、甘味料、増粘剤、香料、崩壊剤、被覆剤、防腐剤、潤滑剤および／または遅延剤などのさらなる物質を含み得る。適する甘味料には、ショ糖、乳糖、ブドウ糖、アスパルテームまたはサッカリンが含まれる。適する崩壊剤には、コーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンゴム、ベントナイト、アルギン酸または寒天が含まれる。適する香料には、はっか油、冬緑油、サクランボ、オレンジまたはキイチゴ香料が含まれる。適する被覆剤には、アクリル酸および／またはメタクリル酸のポリマーまたはコポリマー、および／またはそれらのエステル、ワックス、脂肪族アルコール、ゼイン、セラックまたはグルテンが含まれる。適する防腐剤には、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、アルファ−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、または重亜硫酸ナトリウムが含まれる。適する潤滑剤には、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムまたはタルクが含まれる。適する遅延剤には、グリセリルモノステアリン酸塩またはグリセリルジステアリン酸塩が含まれる。
【００５８】
本発明の化合物は、獣医学的組成物における使用のために与えられてもよい。これらは、当分野で既知の任意の適する手段で調製され得る。そのような組成物の例には、
（ａ）経口投与、外用適用（例えば、水性および非水性液剤または懸濁剤を含む液剤投与）、錠剤、巨丸剤、粉末剤、顆粒剤、試料と混合するための小丸剤、舌に適用するためのペースト；
（ｂ）非経口投与、例えば滅菌液剤または懸濁剤としての皮下、筋肉内または脈管内注射
（ｃ）局所適用、例えばクリーム、軟膏、ゲル、ローションなど
に適合されたものが含まれる。
【００５９】
当業者は、本明細書に記載された発明は、特に記載したもの以外の変化や修正を許容することを理解する。本発明は精神と範囲の内にあるそのような変化や修正をすべて含むことを理解すべきである。本発明はまた、この明細書で言及または指定されたすべての段階、特徴、組成物および化合物を個別的または集合的に含み、そして該段階または特徴の任意の２つまたはそれ以上の、任意かつ全ての組合せを含む。
【００６０】
ここで、発明の例示説明の目的で含まれ、かつ前述の一般性を限定することを企図しない、以下の非限定的実施例を参照して本発明を説明する。
【００６１】
実施例
以下の実施例では、温度は摂氏で測定され、薄層クロマトグラム（ｔｌｃ）は、シリカゲルプレート上で判定され、そして別に特定しない限り、化学試薬は Ａｌｄｒｉｃｈ から購入された。
【００６２】
実施例１
メチル、エチル、ペンチルおよびフェニルエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（式Ｉ；Ｒ＝ＣＨ２ＣＯＯＹ；各々、Ｙ＝−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＣＨ３および−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ）の調製
Ｄ−マンノース（３．６ｇ、２０ｍｍｏｌ）と、ｖｏｎ Ｉｓｌｅｒ らの方法 （ｖｏｎ Ｉｓｌｅｒ， Ｏ．， Ｇｕｔｍａｎｎ， Ｈ．， Ｍｏｎｔａｖｏｎ， Ｍ．， Ｒｕｅｇｇ， Ｒ．， Ｒｙｓｅｒ， Ｇ． ａｎｄ Ｚｅｌｌｅｒ， Ｐ．， （１９５７）． Ｓｙｎｔｈｅｓｅｎ ｉｎ ｄｅｒ ｃａｒｏｔｉｎｏｉｄ−Ｒｅｉｈｅ． Ａｎｗｅｎｄｕｎｇ ｄｅｒ Ｗｉｔｔｉｇ−ｒｅａｋｔｉｏｎ ｚｕｒ ｓｙｎｔｈｅｓｅ ｖｏｎ ｅｓｔｅｒｎ ｄｅｓ ｂｉｘｉｎｓ ａｎｄ ｃｒｏｃｅｔｉｎｓ． Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ｖｏｌ １５， １２４２−１２４９， 出典明示により本明細書の一部とする）で調製したカルボキシメチレントリフェニルホスフォラン（６．６８ｇ、２０ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（７５ｍｌ）中で３時間還流した。その後、ジオキサンを減圧下で除去し、ジエチルエーテル（２５０ｍｌ）を油性の残渣に添加し、その上でそれを凝固させた。これを２０分間激しく撹拌し、澄ませ、エーテルをデカンタした（ｄｅｃａｎｔ）。洗浄手順をさらに２５０ｍｌのエーテルで繰返した。次いで固体をジクロロメタン（１００ｍｌ）と１５分間激しく撹拌し、固体を濾去し、乾燥させ、メチル４，５，６，７，８−ペンタヒドロキシオクト−２−エネオ酸塩（３．８ｇ、８０％）を得た。
【００６３】
この物質（１６．０ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）を、メタノール（１６０ｍｌ）に溶解し、この溶液に乾燥 Ｄｏｗｅｘ １ イオン交換樹脂（ＯＨ−形態；４８ｇ）を添加し、混合物を４時間室温で撹拌した。Ｄｏｗｅｘ を焼結ガラス漏斗を通して濾過して樹脂を除去し、メタノール（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、合わせた濾過物と洗浄物を減圧下で蒸発させて、メチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６’−ヒドロキシメチル）ピラン−２−イル）酢酸塩を淡黄色シロップとして得た。この物質（４１７ｍｇ、１．７７ｍｍｏｌ）、塩化トリチル（７４０ｍｇ、２．６６ｍｍｏｌ）およびピリジン（５ｍｌ）の混合物を、６０°で８時間撹拌した。室温に冷却後、酢酸無水物（１ｍｌ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を一夜撹拌し、その上でそれを氷冷水（２５ｍｌ）に添加し、クロロホルム（３ｘ５０ｍｌ）で抽出した。有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０６３−０．２ｍｍ）カラム（２ｘ３０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｓｐｉｒｉｔ）（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（２：１）で抽出し、メチル（３，４，５−トリアセトキシ−６−トリチルオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（７８６ｍｇ）を得た。
【００６４】
この化合物（７８６ｍｇ）を室温でジクロロメタン（１０ｍｌ）中で、無水塩化鉄（２５７ｍｇ）と２時間撹拌し、その上で水（１０ｍｌ）を添加し、混合物をクロロホルム（３ｘ２５ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾過物を減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０６３−０．２ｍｍ）カラム（２ｘ３０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（１：２）で抽出し、メチル（３，４，５−トリアセトキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（４６３ｍｇ）を得た。
【００６５】
この化合物（３４４ｍｇ、０．９５ｍｍｏｌ）をトルエン（１５ｍｌ）およびピリジン（８６．７ｍｇ）に溶解し、混合物を０°に冷却し、その上で乾燥窒素空気下で撹拌しながら酸塩化リン（１６７．８ｍｇ、１．０９４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を室温にさせ、２時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。残渣をアセトンと水の１：１混合物（１０ｍｌ）に溶解し、４５−５０°で２時間維持した。乾燥するまで蒸発させた後、残渣を各１５ｍｌのエタノール、メタノールおよび最後にアセトンから１度蒸発させ、メチル（３，４，５−トリアセトキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（３５４ｍｇ、８１％）を得た。
【００６６】
この化合物（３５４ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を、ナトリウムメトキシド（８６．４ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）を含有するメタノール（５ｍｌ）中で、室温で一夜撹拌した。減圧下で乾燥させた後、残渣を水（５ｍｌ）に溶解し、強い陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ ５０ Ｈ＋ 形態）で処理し、ナトリウムイオンを除去した。生じた溶液を濾過し、減圧下で乾燥させ、残渣を２回エタノールから、そして２回メタノールから蒸発させ、メチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（２０３ｍｇ、８０％）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３１５（Ｍ−Ｈ）を得た。
【００６７】
類似方法で、以下ものを作成した：
エチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（８０％）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３２９（Ｍ−Ｈ）
フェニルエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（６４％）
ペンチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステル（６５％）、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３７１（Ｍ−Ｈ）
【００６８】
これらのエステルのモノナトリウム塩は、リン酸塩の濃縮エタノール溶液を１．２等量の無水酢酸ナトリウムで処理することにより容易に調製され、その上で所望の塩を沈殿させ、少量のエタノールで洗浄し、そして乾燥させ、以下のものを得た：
メチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルナトリウム塩（９２％）
エチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルナトリウム塩（８０％）、１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５Ｈｚ， ３Ｈ） ２．７１−２．８１ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４８−３．５４ （ｍ， １Ｈ）， ３．６３−３．６９ （ｍ， １Ｈ）， ３．７９−３．９３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９５−３．９９ （ｍ， １Ｈ）， ４．０２ （ｑ， Ｊ ＝ ７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１１−４．１６ （ｍ， １Ｈ）， ４．２０−４．２６ （ｍ， １Ｈ）。
フェニルエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルナトリウム塩（９３％）
ペンチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルナトリウム塩（７０％）１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．０８−１．１５ （ｍ， ３Ｈ） ２．３９−２．６７ （ｍ， ８Ｈ）， ３．５１−４．０８ （ｍ， ９Ｈ）。
【００６９】
実施例２
（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（式Ｉ；Ｒ＝−ＣＨ２ＣＯＯＨ）ジナトリウム塩の調製
エチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルナトリウム塩（実施例１で調製された）（３５２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を水（５ｍｌ）に溶解し、水（１ｍｌ）に溶解した水酸化ナトリウム（８０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）で処理した。室温で一夜撹拌した後、混合物を Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲ １２０ 陽イオン交換樹脂（Ｈ＋形態）で処理してナトリウムイオンを除去し、溶液を濾過し、減圧下で乾燥するまで蒸発させて（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（２２０ｍｇ、７３％）を得た。これを水（１ｍｌ）に溶解し、メタノール（１ｍｌ）中のナトリウムメトキシド（７９ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を短時間撹拌し、撹拌しながらエタノール（５０ｍｌ）に滴下添加した。生じた懸濁物を遠心分離し、上部の液体をデカンタした。遠心管の底のペレット物質を新しいエタノール２５ｍｌに再懸濁し、遠心分離した。上部の液体をデカンタした後、ペレットを真空下で乾燥させ、（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸ジナトリウム塩（２００ｍｇ、７９％）を得た。
【００７０】
この化合物はまた、以下の方法でも調製できた。（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（実施例１０から）（８．０２ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）を乾燥（ｄｒｙ）メタノール（６０ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（１．６ｇ）を添加した。反応に続いて薄層クロマトグラフィーを行い、２．５時間後、Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ Ｘ８ Ｈ＋ 形態イオン交換樹脂を添加し、さらに３０分後、反応混合物を濾過し、溶媒を除去した。ピリジン（７０ｍｌ）中のこの純粋でない物質（４．９５ｍｇ、１２．５ｍｍｏｌ）に塩化トリチル（〜２．５ｅｑ、１７．８ｇ）を添加し、混合物を５０°で一夜撹拌した。室温に冷却した後、無水酢酸（〜１０ｅｑ、２４ｍｌ）を添加し、混合物を２．５時間撹拌し、その上でそれを氷冷水（２００ｍｌ）に添加し、ジクロロメタン（３ｘ２００ｍｌ）で抽出した。有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を〜３０ｇのシリカゲルに吸収させ、シリカゲル（５０ｇ）のカラム（７０ｘ１４０ｍｍ）上に置き、真空下で５％酢酸エチル／軽油（ｌｉｇｈｔ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ）（８００ｍｌ、ｆ１）、２５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ２［４００ｍｌ］、ｆ３［４００ｍｌ］）、１００％酢酸エチル（４００ｍｌ、ｆ４）および２５％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ５）で抽出した。生成物の酢酸７−アセトキシ−２−オキソ−５−トリチルオキシメチル−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピラン−６−イルエステルは、ｆ４中に見出された（５．８７ｇ、５４％）。
【００７１】
この物質（５．８７ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）を室温でジクロロメタン（１００ｍｌ）中で無水塩化鉄（３．６７ｇ）と１．５時間撹拌し、その上で水（１００ｍｌ）を添加し、混合物をジクロロメタン（２ｘ１００ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を〜１５ｇのシリカゲルに吸収させ、シリカゲル（２０ｇ）のカラム（４０ｘ９０ｍｍ）上に置き、真空下で５０％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ１）、１０％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ２）および１００％メタノール（２００ｍｌ、ｆ３）で抽出した。生成物の酢酸７−アセトキシ−５−ヒドロキシメチル−２−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピラン−６−イルエステルは、ｆ２に見出された（２．２９ｇ、７２％）。
【００７２】
この化合物（２．１１ｇ、７．３３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（４０ｍｌ）およびピリジン（０．７０ｇ）に溶解し、混合物を０°に冷却し、その上で酸塩化リン（１．１ｅｑ、１．４ｇ）を乾燥窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、６時間撹拌した。混合物を濾過し、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。残渣をアセトンと水の１：１混合物（５０ｍｌ）に溶解し、４５−５０°で２時間維持した。乾燥するまで蒸発させた後、残渣を５０ｍｌのエタノールから蒸発させた。この物質を、ナトリウムメトキシド（〜５ｅｑ、２．０ｇ）を含有する水（５０ｍｌ）の中で室温で一夜撹拌し、その後、強い陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ ５０ Ｈ＋ 形態）で処理してナトリウムイオンを除去した。イオン交換樹脂を濾去し、濾過物を減圧下で乾燥させ、残渣をエタノール（５０ｍｌ）から蒸発させた。次いでこの物質を最小限の水に溶解し、エタノール（３００ｍｌ）中の酢酸ナトリウム（０．９ｇ）溶液に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離によってペレットにし、エタノールをデカンタで除き、固体をジエチルエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸モノナトリウム塩（２．２６ｇ、９５％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）：δ２．４８−２．６２ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， １７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４１−３．４６ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０−３．６０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９５−４．０４ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３０１ （Ｍ−Ｈ）。
【００７３】
実施例３
リン酸モノ−（６−アリル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（式Ｉ；Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）およびリン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）２ＣＨ３）の調製
Ｇｉａｎｎｉｓ と Ｓａｎｄｈｏｆｆ （Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９８５， ２６， １４７９−１４８２；出展明示により本明細書の一部とする）の方法で調製した２−アリル−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオール（９６２ｍｇ、４．７２ｍｍｏｌ）を、ピリジン（１０ｍｌ）に溶解した。この溶液に塩化トリチル（２．６ｇ、９．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２４時間４０°で撹拌した。無水酢酸（２．０ｍｌ、２１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をさらに１８時間撹拌し、その上で氷冷水（５０ｍｌ）に注ぎ、これをクロロホルム（３ｘ５０ｍｌ）で抽出した。合わせたクロロホルム抽出物を水（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で乾燥させた。残渣をシリカゲル（０．０６３−０．２ｍｍ）カラム（２ｘ４０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（４：１）で抽出し、酢酸４，５−ジアセトキシ−６−アリル−２−トリチルオキシメチル−テトラヒドロピラン−３−イルエステル（１．９ｇ、７０％）を得た。
【００７４】
この化合物（１．９ｇ、３．３２ｍｍｏｌ）と乾燥塩化鉄（１．２ｇ）を室温でジクロロメタン（２５ｍｌ）中で２時間撹拌した。反応混合物に水を添加し、これをクロロホルム（３ｘ５０ｍｌ）で抽出した。合わせたクロロホルム抽出物を水（５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で乾燥するまで蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０６３−０．２ｍｍ）カラム（２ｘ３０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（１：１）で抽出し、酢酸４，５−ジアセトキシ−６−アリル−２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−３−イルエステル（９００ｍｇ、８２％）を得た。この化合物（９００ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）とピリジン（２３７ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）をトルエン（１５ｍｌ）に溶解し、窒素空気下、０℃で、この溶液に酸塩化リン（４６０ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）を撹拌しながら滴下添加した。添加後、混合物を室温にし、２時間撹拌した。反応物を濾過し、乾燥するまで減圧下で蒸発させた。残渣をアセトン（１０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）の１：１混合物に溶解し、５０ないし６０°に２時間加熱した。混合物を減圧下で乾燥させ、エタノール、メタノールおよびアセトン（２５ｍｌ）から各々１度残渣を蒸発させ、酢酸４，５−ジアセトキシ−６−アリル−２−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イルエステル（８５１ｍｇ、７６％）を得た。
【００７５】
この化合物（８５１ｍｇ、２．０８ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍｌ）に溶解し、これにメタノール（５ｍｌ）中のナトリウムメトキシド（２４７ｍｇ、４．５７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２時間室温で撹拌した。混合物を減圧下で乾燥させ、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ ５０ Ｈ＋ 形態）で処理してナトリウムイオンを除去した。濾過後、混合物を乾燥させ、リン酸モノ−（６−アリル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（５８０ｍｇ、９８．５％）を得た。この化合物（５８０ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）を水（１．０ｍｌ）に溶解し、メタノール（５ｍｌ）中の酢酸ナトリウム（１６８ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を添加した。さらなる量の水（１．０ｍｌ）を添加し、生じた混合物をエタノール（５０ｍｌ）に撹拌しながら滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離により単離し、リン酸モノ−（６−アリル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩（４８０ｍｇ、７６．３％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ２．１６−２．３０ （ｍ， １Ｈ）， ２．３４−２．４８ （ｍ， １Ｈ）， ３．４６−３．５４ （ｍ， １Ｈ） ３．６２−３．９４ （ｍ， ６Ｈ）， ４．９５−５．０８ （ｍ， ２Ｈ）， ５．６２−５．７６ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ２８３ （Ｍ−Ｈ）。
【００７６】
この化合物（２８４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）をメタノール（２５ｍｌ）に溶解し、炭上の１０％パラジウムの存在下、水素空気下で水素の取り込みが止まるまで撹拌した。触媒を濾過により除去し、濾過物を減圧下で乾燥させ、リン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（定量的（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ））を得た。この化合物から、上記アリル化合物と類似の方法で、リン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩（７９％）、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）２８５（Ｍ−Ｈ）を調製した。
【００７７】
実施例４
リン酸モノ−（３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（式Ｉ；Ｒ＝Ｈ）モノナトリウム塩
無水トルエン（７５ｍｌ）中の２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−マンノピラノシル臭化物（３．９６ｇ、９．６４ｍｍｏｌ； Ｌｅｖｅｎｅ と Ｔｉｐｓｏｎ の方法（Ｌｅｖｅｎｅ， Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｔｉｐｓｏｎ， Ｒ．Ｓ．， （１９３１）　Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｖｏｌ ９０， ｐ ８９−９８．；出典明示により本明細書の一部とする）で調製した）、トリブチルスズ水素化物（４．３２ｇ、１．３ｅｑ）およびＡＩＢＮ（２８０ｍｇ、０．２ｅｑ）の撹拌溶液を、８０℃に２．５時間加熱した。冷却の上、シリカ栓を通して反応混合物を濾過し、次いでそれをジクロロメタン（２００ｍｌ）中の２０％メタノールで洗浄した。合わせた濾過物から溶媒を除去し、洗浄して粗生成物を得、それをフラッシュ（ｆｌａｓｈ）シリカカラム（５０ｇ、３．５ｘ６０ｃｍ）上で精製し、１００％軽油（５００ｍｌ）ｆ１−軽油中の５％酢酸エチル（５００ｍｌ）ｆ２−軽油中の１０％酢酸エチル（５００ｍｌ）ｆ３、４−軽油中の２５％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ５−軽油中の５０％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ６−１００％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ７−ジクロロメタン中の１０％メタノール（４００ｍｌ）ｆ８で抽出した。４，５−ジアセトキシ−２−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イル酢酸エステルをｆ６から単離した（３．１６ｇ、９９％）。無水メタノール（４０ｍｌ）中のこの化合物（３．１６ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ナトリウムメトキシド（１０１ｍｇ）を添加した。反応をｔｌｃでモニターし、完了したら溶媒を除去し、２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３，４，５−トリオール（１．７６ｇ）を得た。
【００７８】
この化合物（１．７６ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）を、上記実施例３の２−アリル−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオールと類似の方法でトリチル化およびアセチル化し、４，５−ジアセトキシ−２−トリチルオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イル酢酸エステル（２．０ｇ、３５％）を得た。この化合物を急速真空（ｒａｐｉｄ ｖａｃｕｕｍ）シリカカラム（４０ｇ、７ｘ１３ｃｍ）上で精製し、１００％軽油（７００ｍｌ）ｆ１−軽油中の５％酢酸エチル（１０００ｍｌ）ｆ２、３−軽油中の２５％酢酸エチル（７００ｍｌ）ｆ４−１００％酢酸エチル（５００ｍｌ）ｆ５−ジクロロメタン中の１０％メタノール（５００ｍｌ）ｆ６で抽出した。生成物をｆ４から単離した。この化合物を前記のように脱トリチル化し、４，５−ジアセトキシ−２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イル酢酸エステル（８１％）を得た。前記のようにリン酸化し、４，５−ジアセトキシ−２−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イル酢酸エステル（９６％）を得た。
【００７９】
この化合物（９８０ｍｇ、２．６５ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（３６４ｍｇ、２．５ｅｑ．）と室温で１時間撹拌した。混合物を乾燥するまで減圧下で蒸発させ、残渣を水（２０ｍｌ）に溶解し、陽イオン交換カラムを通してこれを洗浄してナトリウムイオンを除去した。樹脂をさらなる水（２ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、合わせた水の洗浄物を減圧下で乾燥させた。残渣を最小限の水に溶解し、酢酸ナトリウム（２３９ｍｇ、１．１ｅｑ）のエタノール溶液（１００ｍｌ）にゆっくりと添加した。生じた沈殿を遠心分離で集め、乾燥させてモノ−（３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）リン酸エステルモノナトリウム塩（５００ｍｇ、７１％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ３．２５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ５．５， ９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．４７−３．５４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， １２．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８１−３．８５ （ｍ， １Ｈ）， ３．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．５， １１．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．９５ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， ５．５， １２．０Ｈｚ， １Ｈ）；　ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ２４３ （Ｍ−Ｈ）。
【００８０】
実施例５　６−シアノ−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）リン酸エステル（式Ｉ；Ｒ＝ＣＮ）およびそのジナトリウム塩の調製
ニトロメタン（５０ｍｌ）中の２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−マンノピラノシル臭化物（９．２８ｇ、２２．６ｍｍｏｌ）（上記実施例４に記載の通りに調製した）撹拌溶液に、シアン化水銀（５．８１ｇ、１．０ｅｑ）を添加した。反応混合物をｔｌｃでモニターし、２日後にセライト（ｃｅｌｉｔｅ）を通して濾過し、セライトをニトロメタン（２ｘ３０ｍｌ）で洗浄し、溶媒を除去した。残渣をクロロホルム（６０ｍｌ）に取り、臭化ナトリウム溶液（１Ｍ、３ｘ２０ｍｌ）、水（３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、溶媒を減圧下で除去した。残渣をフラッシュシリカカラム（５０ｇ、３．５Ｘ６０ｃｍ）で精製し、１００％軽油（３００ｍｌ）−軽油中の１０％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ１−軽油中の２５％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ２、３−軽油中の５０％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ４−１００％酢酸エチル（４００ｍｌ）ｆ５−ジクロロメタン中の２０％メタノール（４００ｍｌ）ｆ６で抽出した。４，５−ジアセトキシ−２−アセトキシメチル−６−シアノ−テトラヒドロ−ピラン−３−イル酢酸エステルをｆ３（２．５３ｇ、３１％）から単離した。
【００８１】
無水メタノール（３５ｍｌ）中のこの化合物（２．１７ｇ、６．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ナトリウムメトキシド（４６ｍｇ）を添加した。反応をｔｌｃでモニターし、完了したら溶媒を除去し、３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−カルボニトリル（１．３８ｇ、７９％）を得た。この化合物（１．３８ｇ、６．７７ｍｍｏｌ）を上記実施例３に記載のようにトリチル化、アセチル化、脱トリチル化、リン酸化および脱アセチル化し、６−シアノ−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルを得、これをジナトリウム塩に変換し、６−シアノ−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルジナトリウム塩（７２％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ３．５６−３．６５ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０−３．９６ （ｍ， ３Ｈ）， ４．００−４．１６ （ｍ， ２Ｈ）， ４．２１−４．３０ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ２６８ （Ｍ−Ｈ）。
【００８２】
実施例６　６−フェニル−（式Ｉ；Ｒ＝−Ｃ６Ｈ５）、６−（４’−メトキシフェニル）−（式Ｉ；Ｒ＝−Ｃ６Ｈ４ＯＣＨ３）、６−（２’−ピリジル）−（式Ｉ；Ｒ＝２−ピリジル）、６−ペンチル−（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）４ＣＨ３）および６−フェニエチル−（式Ｉ；Ｒ＝−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ）３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルおよびそれらのナトリウム塩の調製
６−フェニル−２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３，４，５−トリオールを、出典明示により本明細書の一部とする Ｈｕｒｄ と Ｈｏｌｙｓｚの方法 （Ｈｕｒｄ， Ｃ．Ｄ． ａｎｄ Ｈｏｌｙｓｚ， Ｒ．Ｐ．， （１９５０）． Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙａｃｙｌｇｌｙｃｏｓｙｌ ｈａｌｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｇｒｉｇｎａｒｄ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ．， １９５０， ｖｏｌ ７２， １７３２−１７３８）に従って、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｄ−マンノピラノシル臭化物から調製した。この化合物（２．４ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、実施例３で２−アリル−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−３，４，５−トリオールについて記載したのと同じ方法で、トリチル化、アセチル化し、酢酸４，５−ジアセトキシ−６−フェニル−２−トリチルオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イルエステル（３．１ｇ、６４％）を得た。この化合物を、上記実施例３で酢酸４，５−ジアセトキシ−６−アリル−２−トリチルオキシメチル−テトラヒドロピラン−３−イルエステルについて記載したように脱トリチル化、リン酸化および脱アセチル化し、６−フェニル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステル（２２％全収率）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３１９（Ｍ−Ｈ）を得た。
【００８３】
類似の方法で以下のものが作成された：
６−（４’−メトキシフェニル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステル（１８％全収率）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３４９（Ｍ−Ｈ）
６−（２’−ピリジル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステル（１１％全収率）
６−（２’−フェネチル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２イルメチルリン酸エステル（１９％全収率）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３４７（Ｍ−Ｈ）
６−ペンチル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２イルメチルリン酸エステル（４０％全収率）ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３１３（Ｍ−Ｈ）。
【００８４】
これらのエステルのモノナトリウム塩は、リン酸塩の濃縮エタノール溶液を１．２当量の無水酢酸ナトリウムで処理することにより容易に調製され、その上で所望の塩を沈殿させ、少量のエタノールで洗浄し、乾燥させて以下のものを得た：
６−フェニル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルナトリウム塩（８９％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ３．４２−３．５０ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８−３．６１ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７−３．８０ （ｍ， １Ｈ） ３．８９−３．９４ （ｍ， １Ｈ）， ３．９７−４．０１ （ｍ， １Ｈ）， ４．４３−４．４４ （ｍ， １Ｈ）， ４．９１−４．９２ （ｍ， １Ｈ）， ７．２３−７．３０ （ｍ， ５Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３１９ （Ｍ−Ｈ）。
６−（４’−メトキシフェニル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルナトリウム塩（６７％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ３．４２−３．４８ （ｍ， １Ｈ）， ３．６０−３．６５ （ｍ， １Ｈ）， ３．６７ （ｓ， ＣＨ３）， ３．７７−３．８０ （ｍ， １Ｈ）， ３．８５−３．８８ （ｍ， １Ｈ）， ３．９７−４．０５ （ｍ， １Ｈ）， ４．３８−４．４２ （ｍ， １Ｈ）， ４．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ３．０Ｈｚ， １Ｈ）， ６．８４−６．９０， （ｍ， ２Ｈ）， ７．２２−７．２７ （ｍ， ２Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３４９ （Ｍ−Ｈ）。
【００８５】
６−（２’−ピリジル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルリン酸エステルナトリウム塩（９１％）
６−（２’−フェネチル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２イルメチルリン酸エステルナトリウム塩（９４％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ１．５８−１．６７ （ｍ， １Ｈ）， １．７７−１．８５ （ｍ， １Ｈ）， ２．４５−２．６０ （ｍ， ２Ｈ） ３．１６−３．２６ （ｍ， ２Ｈ）， ３．３４−３．３８， （ｍ， １Ｈ）， ３．５２−３．５５ （ｍ， １Ｈ）， ３．６４−３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．９０−３．９４， （ｍ， １Ｈ）， ４．０２−４．０６ （ｍ， １Ｈ）， ７．０７−７．２０ （ｍ， ５Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３４７ （Ｍ−Ｈ）。６−ペンチル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２イルメチルリン酸エステルナトリウム塩（５８％）、１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ０．７１−０．７３ （ｍ， ３Ｈ）， １．１０−１．２５ （ｍ， ６Ｈ）， １．２６−１．５０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４０−３．６１ （ｍ， ３Ｈ）， ３．６６−３．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８４−３．９２ （ｍ， １Ｈ） ３．９３−３．９８ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３１３ （Ｍ−Ｈ）。
【００８６】
実施例７　リン酸モノ−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロピラン−２−イル）−プロピル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＰＯ３Ｈ２）ジナトリウム塩の調製
Ｇｕｏ らによって記載された方法（Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ．， １９９７； 出典明示により本明細書の一部とする）の変法を使用して、ＤＭＦ（１２００ｍｌ）中のメチルマンノシド（５２．４ｇ、２７０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ナトリウム水素化物（５８ｇ、〜６ｅｑ．）をゆっくりと添加した。撹拌を継続し、〜１時間後にテトラブチルアンモニウムヨウ化物（〜０．１ｅｑ．、１０．６ｇ）を添加し、続いて塩化ベンジル（１２ｅｑ．、３７３ｇ、４１０ｍｌ）を添加した。６０時間室温で撹拌した後、反応混合物をエタノール中の２５％濃縮アンモニア溶液（１：３、３００ｍｌ）に注ぎ、〜２時間撹拌し、その後溶媒を減圧下で除去した。残渣をジエチルエーテル（３ｘ７００ｍｌ）で抽出し、合わせた抽出物を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を軽油（８００ｍｌ）に取り、約１２０ｇのシリカゲルをこの溶液に添加し、このスラリーをシリカゲル（２５０ｇ）カラム（９０ｘ２００ｍｍ）の上部に添加し、真空下で次のように抽出した：１００％軽油（２４００ｍｌ、ｆ１［８００ｍｌ］、ｆ２［１６００ｍｌ］）、１０％酢酸エチル／軽油（１６００ｍｌ、ｆ３［８００ｍｌ］、ｆ４［８００ｍｌ］）、２５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ５）および１００％酢酸エチル（８００ｍｌ、ｆ６）。メチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジルマンノシドは、ｆ３、４に見出された（８２．７６ｇ）。ｆ２／５からの純粋でない物質を類似の方法で再度クロマトグラフィーし、さらなる物質を得（５１．２２ｇ）、合わせた収量は１３３．９８ｇ、９０％であった。
【００８７】
Ｗｏｎｇ らによって記載された方法（Ｗｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９７； 出典明示により本明細書の一部とする）を使用して、アセトニトリル（２５０ｍｌ）中のメチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジルマンノシド（６１．７３ｇ、１１１ｍｍｏｌ）溶液に、０℃で、窒素下でアリルトリメチルシラン（２ｅｑ．、２６．４ｇ、３７．０ｍｌ）を添加し、続いてトリメチルシリルトリフラート（０．５ｅｑ．、１２．４ｇ、１０．１ｍｌ）を添加した。反応混合物を一夜４℃に置き、その上で無水酢酸（４ｅｑ．、４５．７ｇ、４２ｍｌ）を添加し、２時間撹拌した後、混合物を飽和重炭酸ナトリウム／ジエチルエーテル（１：１、８００ｍｌ）に注いだ。有機層を除去し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（４００ｍｌ）で抽出した。合わせた水性層をジエチルエーテル（４００ｍｌ）で再度抽出した。有機層を合わせ、水（４００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を軽油（４００ｍｌ）に取り、これに約８０ｇのシリカゲルを添加し、スラリーをシリカゲル（２００ｇ）のカラム（９０ｘ２００ｍｍ）の最上部に注いだ。次いでカラムを１００％軽油（８００ｍｌ、ｆ１）、１０％酢酸エチル／軽油（１６００ｍｌ、ｆ２［８００ｍｌ］、ｆ３［８００ｍｌ］）、２５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ４）、１００％酢酸エチル（８００ｍｌ、ｆ５）および１０％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ６）で真空抽出した。生成物の酢酸６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロピラン−２−イルメチルエステルは、ｆ２、３、４に見出された（５２．１０ｇ、８２％）。
【００８８】
メタノール（５００ｍｌ）中のこの化合物（８３．３６ｇ、１６２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、窒素空気下でナトリウムメトキシド（４．４６ｇ）を添加した。反応混合物を３時間撹拌し、その後溶媒を除去した。残渣を水：ジクロロメタン（３００：５００ｍｌ）に取り、酸性化した（１Ｍ ＨＣｌ）。有機層を除去し、水性層をさらにジクロロメタン（３００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、溶媒を除去し、（６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−メタノール（７３．８ｇ、９６％）を得た。この化合物（５．０２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を乾燥テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）に窒素下で０℃で溶解し、ボランのテトラヒドロフラン溶液（〜１．０Ｍ、〜４ｅｑ、４２ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温に温め、続いて薄層クロマトグラフィーを行った。完了したら、反応混合物を水性水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ、５０ｍｌ）に注ぎ、それに過炭酸ナトリウム（２．９９ｇ、〜４ｅｑ）を添加した。反応混合物を一夜撹拌し、ジエチルエーテル（３ｘ１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（〜４０ｇ）に吸収させ、シリカゲル（５０ｇ）のカラム（７０ｘ１４０ｍｍ）の最上部に添加した。次いでカラムを真空下で、１００％ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ１［４００ｍｌ］、ｆ２［４００ｍｌ］）、２％メタノール／ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ３［４００ｍｌ］、ｆ４［４００ｍｌ］）、１０％メタノール／ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ５［４００ｍｌ］、ｆ６［４００ｍｌ］）および１００％メタノール（４００ｍｌ、ｆ７）で抽出した。生成物の３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロピラン−２−イル）−プロパン−１−オルは、ｆ４と５に見出された（４．２１ｇ、８１％）。
【００８９】
この物質（４．１６ｇ、８．４６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７０ｍｌ）に溶解し、窒素下で撹拌し、−１０℃に冷却した。トリエチルアミン（〜２０ｅｑ、１７．１ｇ、２３．４ｍｌ）を添加し、続いて酸塩化リン（〜２．２ｅｑ、２．８５ｇ、１．７０ｍｌ）を添加した。５時間撹拌し、室温に温めた後、水／アセトン（１：１、１２０ｍｌ）を添加し、さらに２時間撹拌を継続した。水性層を分離し、ナトリウムメトキシドで塩基性化し（ｐＨ〜１２）、ジクロロメタン（２ｘ２００ｍｌ）で抽出し、次いで濃縮ＨＣｌ（ｐＨ〜２）で酸性化し、再度ジクロロメタン（２ｘ２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させ、純粋なリン酸モノ−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］エステル（３．７５ｇ、６８％）を得た。
【００９０】
この物質（３．７５ｇ、５．７５ｍｍｏｌ）のメタノール（１５０ｍｌ）と蟻酸（１．５ｍｌ）の溶液に、炭上の１０％パラジウム（〜１００ｍｇ）を添加した。次いで、この溶液を水素（５５ｐｓｉ）空気下に置き、一夜震盪した。次いでセライトを通して反応混合物を濾過し、乾燥するまで減圧下で蒸発させ、最小限の量の水に溶解した残渣を、酢酸ナトリウム（１．０２ｇ、２．２ｅｑ）のエタノール溶液（１５０ｍｌ）に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離し、エタノールをデカンタで除き、残渣をジエチルエーテル（２ｘ８０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させて、リン酸モノ−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］エステルジナトリウム塩（１．２４ｇ、５１％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ１．１０−１．２０ （ｍ， ２Ｈ）， １．４４−１．８２ （ｍ， ２Ｈ）， ３．０２−３．１２ （ｍ， １Ｈ） ３．１７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １３．０， ２５．０Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．５２−３．６４ （ｍ， １Ｈ）， ３．７０−３．９０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．９１−４．００ （ｍ， １Ｈ）， ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３８１ （Ｍ−Ｈ）， ３０１ （Ｍ−ＰＯ３Ｈ２）。
【００９１】
実施例８　ヘキサン酸３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステルモノナトリウム塩および（式Ｉ；Ｒ＝ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＯ（ＣＨ２）５ＣＨ３の調製
６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−メタノール（実施例７で概説したように調製した）（５１．１ｇ、１０８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（３００ｍｌ）に溶解し、イミダゾール（〜１．２ｅｑ．、９．３６ｇ）を添加し、続いてｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリル塩化物（１８．３ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を一夜撹拌し、次いで固体を濾去した。濾過物を水（２ｘ２５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を４０−６０軽油（２００ｍｌ）に取り、これを〜５０ｇのシリカゲルに添加し、スラリーをシリカゲルカラム（９０ｘ２００ｍｍ；１５０ｇ）の最上部に添加した。次いでカラムを１００％軽油（１２００ｍｌ、ｆ１［４００ｍｌ］、ｆ２［８００ｍｌ］）、５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ３）、１０％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ４）、および１００％酢酸エチル（４００ｍｌ、ｆ５）で真空抽出した。生成物の（６−アリル−３，４，５−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメトキシ）−ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シランは、ｆ２、３、４に見出された（５２．１０ｇ、８２％）。
【００９２】
この物質（５２．０１ｇ、８８．５ｍｍｏｌ）を窒素下で０℃に置いた乾燥テトラヒドロフラン（〜５００ｍｌ）に溶解し、それにボランのテトラヒドロフラン溶液（１．５Ｍ、〜１．２ｅｑ、９２ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温に温め、続いて薄層クロマトグラフィーを行った。完了したら、反応混合物を水酸化ナトリウムの水性溶液（１Ｍ、４００ｍｌ）に注ぎ、それに過炭酸ナトリウム（５５．１ｇ、〜４ｅｑ）を添加した。反応混合物を７時間撹拌し、ジエチルエーテル（５００ｍｌおよび３００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（４００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をｂｐ４０−６０°の軽油（２００ｍｌ）に取り、〜５０ｇのシリカゲルに添加し、このスラリーをシリカゲルカラム（９０ｘ２００ｍｍ；１５０ｇ）の最上部に添加した。次いでカラムを１００％軽油（１６００ｍｌ、ｆ１）、５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ２）、１０％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ３）、２５％酢酸エチル／軽油（８００ｍｌ、ｆ４）、１００％酢酸エチル（８００ｍｌ、ｆ５）および１０％メタノール／ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ６）で真空抽出した。生成物の３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロパン−１−オルをｆ５と６から単離した（４１．５８ｇ、７８％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ０．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ０．０４ （ｓ， ３Ｈ）， ０．８８ （ｓ， ９Ｈ）， １．５８−１．７０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．５６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．５， ５．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５９−３．６７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７１ （ｄｔ， Ｊ ＝ ５．０， ５．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７７−３．８４ （ｍ， ３Ｈ）， ３．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．５， １０．０， １Ｈ）， ３．９４−３．９８ （ｍ， １Ｈ）， ４．５５−４．７０ （ｍ， ６Ｈ）， ７．２５−７．３６ （ｍ， １５Ｈ）；　ＥＳＭＳ （＋ｖｅ） ６０７ （Ｍ＋Ｈ）， ６２９ （Ｍ＋Ｎａ）。
【００９３】
この化合物（９．３ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）を窒素下に置いたジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。これに、トリエチルアミン（１．５ｅｑ、２．３ｇ、３．２ｍｌ）、ＤＭＡＰ（触媒量）および塩化ヘキサノイル（１．１ｅｑ、２．２８ｇ、２．４ｍｌ）を添加した。反応混合物を室温に温め、薄層クロマトグラフィーでモニターした。完了したら、反応混合物を水に注ぎ、抽出した。次いで有機層を飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍｌ）および水（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄した。次いで有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を４０−６０軽油（１００ｍｌ）に取り、〜１０ｇのシリカゲルに添加し、生じたスラリーをシリカゲル（５０ｇ）のカラム（７０ｘ１４０ｍｍ）の最上部に添加した。次いでカラムを１００％軽油（４００ｍｌ、ｆ１）、５％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ２）、１０％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ３）、２５％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ４）、１００％酢酸エチル（４００ｍｌ、ｆ５）および１０％メタノール／ジクロロメタン（２００ｍｌ、ｆ６）で真空抽出した。生成物のヘキサン酸３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロピルエステルは、ｆ２と３に見出された（９．７９ｇ、９１％）。
【００９４】
この物質（９．７９ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１５０ｍｌ）に溶解し、窒素下で室温に置き、テトラブチルアンモニウムフッ化物（２．１ｅｑ、７．７５ｇ）を添加した。反応を薄層クロマトグラフィーでモニターし、２時間後に溶媒を除去した。残渣をジエチルエーテル（２００ｍｌ）に溶解し、水（２ｘ１００ｍｌ）で抽出し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を４０−６０軽油（１００ｍｌ）に取り、〜１５ｇのシリカゲルに添加し、生じたスラリーをシリカゲル（５０ｇ）のカラム（７ｘ１４０ｍｍ）の最上部に添加した。次いでカラムを１００％軽油（４００ｍｌ、ｆ１）、１０％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ２）、２５％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ３）、５０％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ４）、１００％酢酸エチル（４００ｍｌ、ｆ５）および１０％メタノール／ジクロロメタン（２００ｍｌ、ｆ６）で真空抽出した。生成物のヘキサン酸３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステルは、ｆ３と４に見出された（７．７０ｇ、９４％）。
【００９５】
この物質（７．７０ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）を窒素下に置いたジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、その上でトリエチルアミン（〜２．２ｅｑ、２．６６ｇ、３．７０ｍｌ）を添加し、続いて酸塩化リン（１．３ｅｑ、２．６０ｇ、１．５５ｍｌ）を添加した。反応混合物を一夜撹拌しながら室温に温め、その後固体を濾去した。濾過した物質をジクロロメタン（５ｘ１０ｍｌ）で洗浄し、濾過物と洗浄物を合わせ、乾燥させ、残渣を水：アセトン（１：１、１００ｍｌ）に溶解し、３時間４５℃で撹拌した。大部分のアセトンを減圧下で混合物から除去し、ジクロロメタン（１５０ｍｌ）を添加した。水性層をさらにジクロロメタン（１５０ｍｌ）で抽出し、有機抽出物を合わせ、水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させ、所望の生成物であるヘキサン酸３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステル（８．６１ｇ、９８％）を得た。この物質（３．７５ｍｍｏｌ）のメタノール（１３５ｍｌ）、水（１５ｍｌ）および蟻酸（１．５ｍｌ）の溶液に、炭上の１０％パラジウム（〜１．３ｍｇ）を添加した。次いでこの溶液を水素（５５ｐｓｉ）空気下に置き、一夜震盪した。次いでセライトを通して反応混合物を濾過し、溶媒を除去し、最小限の量の水に溶解した残渣を、酢酸ナトリウム（１．２ｅｑ、１．２７ｇ）のエタノール溶液（１５０ｍｌ）に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離し、エタノールをデカンタで除き、残渣をジエチルエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、ヘキサン酸３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステルモノナトリウム塩（４．７６ｇ、８７％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ ０．６６−０．７８ （ｍ， ２Ｈ）， ０．９８−１．０８ （ｍ， ２Ｈ）， １．０８−１．２２ （ｍ， ３Ｈ）， １．３６−１．６１ （ｍ， ２Ｈ） ２．１８−２．３０ （ｍ， １Ｈ）， ３．４０−３．５５ （ｍ， ３Ｈ）， ３．５７−３．９５ （ｍ， ５Ｈ）， ３．９５−４．０６ （ｍ， １Ｈ）；　ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３９９ （Ｍ−Ｈ）， ３０１ （Ｍ−Ｃ６Ｈ１０Ｏ）。
【００９６】
実施例９　リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステルモノナトリウム塩の調製
ヘキサン酸３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステル（２．１ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）（実施例８で調製した）を、水（５０ｍｌ）に溶解し、水性水酸化ナトリウム（１Ｍ、４ｅｑ、１２ｍｌ）を添加し、４０分間室温で撹拌し、その後溶液を Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ Ｘ８ Ｈ＋ 形態で酸性化した（ｐＨ〜２）。溶液をジクロロメタン（２ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、溶媒を除去した。次いで残渣を最小限の水に溶解し、エタノール（１５０ｍｌ）およびジエチルエーテル（５０ｍｌ）中の酢酸ナトリウム（１．２ｅｑ、０．３４ｇ）の溶液に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離し、エタノールをデカンタで除き、残渣をジエチルエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（３−ヒドロキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステルモノナトリウム塩（１．０１ｇ、６３％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．３５−１．４６ （ｍ， ２Ｈ）， １．４６−１．５８ （ｍ， １Ｈ）， １．６２−１．７２ （ｍ， １Ｈ）， ３．４１−３．５０ （ｍ， ３Ｈ） ３．５６ （ｔ， Ｊ ＝ ９．０Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６５−３．７０ （ｍ， １Ｈ）， ３．７１−３．７９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８３−３．９６ （ｍ， ２Ｈ）；　ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ３０１ （Ｍ−Ｈ）。
【００９７】
実施例１０　３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸モノナトリウム塩（式Ｉ；Ｒ＝−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２Ｐｈ）の調製
Ｋｈａｎ らによって記載された方法 （Ｋｈａｎ， ｅｔ ａｌ．， １９９６；出典明示により本明細書の一部とする）と類似の方法で、アセトニトリル（３００ｍｌ）中のペンタ−Ｏ−アセチルマンノース（３０．１３ｇ、７７．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、４℃でヒドラジン一水和物（１．２ｅｑ、４．６５ｇ、４．５１ｍｌ）を添加した。反応混合物を冷蔵庫で〜１６時間４℃で維持し、その上で、フラッシュシリカゲル（２０ｇ）の上にセライト（２５ｇ）のあるカラム（４０ｘ９０ｍｍ）を通して濾過し、次いでそれをジクロロメタン（３００ｍｌ）で洗浄した。濾過物を合わせ、溶媒を減圧下で除去し、残渣をフラッシュシリカ（〜３０ｇ）に吸収させた。これをフラッシュシリカ（５０ｇ）のカラム（７０ｘ１４０）の上に置き、１０％酢酸エチル／軽油（４００ｍｌ、ｆ１）、５０％酢酸エチル／軽油（２ｘ６００ｍｌ、ｆ２と３）、１００％酢酸エチル（４００ｍｌ、ｆ４）および２５％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ５）で抽出した。ほとんどの所望の生成物、酢酸３，５−ジアセトキシ−２−アセトキシメチル−６−ヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−４−イルエステル（２６．８９ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）は、ｆ２に見出された。
【００９８】
この化合物（２６．８３ｇ、７７．１ｍｍｏｌ）を、Ｍａｔａ らによって記載された方法 （Ｍａｔａ ｅｔ ａｌ．， １９９２； 出典明示により本明細書の一部とする）に従って、アセトニトリル（２００ｍｌ）中でメルドラム（Ｍｅｌｄｒｕｍ）の酸（２．１ｅｑ、２３．９ｇ）およびトリエチルアミン（２ｅｑ、１５．６ｇ、２２．０ｍｌ）と、４０−５０℃で〜６０時間撹拌した。次いで、溶媒を除去し、酢酸／水（９：１、３００ｍｌ）を残渣に添加し、次いで１００℃で〜３時間加熱した。溶媒を除去した後、残渣をジクロロメタン（３００ｍｌ）に溶解し、水（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（２ｘ２００ｍｌ）で抽出した。合わせた重炭酸層を注意深くＨＣｌ（５Ｍ、〜ｐＨ＝３）で酸性化し、静置すると固体が形成され、濾去して所望の化合物（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（１０．７３、３６％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ１．９９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０５ （ｓ， ３Ｈ）， ２．０９ （ｓ， ３Ｈ）， ２．２０ （ｓ， ３Ｈ）， ２．５１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．０， １６．０Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６９ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．０， １６．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７０ （ｄｄｄ， Ｊ ＝ ２．０， ５．５， ９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１１， （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．５， １２．５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．５， ７．５Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．５， １２．０Ｈｚ， １Ｈ）， ５．１１ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．５， １０．０Ｈｚ， １Ｈ）， ５．２３ （ｔ， Ｊ ＝ １０．０Ｈｚ， １Ｈ）， ５．４０ （ｄ， Ｊ ＝ ３．５Ｈｚ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （＋ｖｅ） ４１３ （Ｍ＋Ｎａ）。
【００９９】
この化合物（５．１５ｇ、１３．３ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２００ｍｌ）に溶解し、これにフェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（１．１ｅｑ、３．１５ｇ）、トリエチルアミン（２．３ｅｑ、３．２ｇ、４．３ｍｌ）、ヒドロキシスクシンイミド（１．１ｅｑ、１．６９ｇ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（１．６ｅｑ、４．７２ｇ）を添加した。反応物を一夜撹拌し、濾過し、次いで水（２ｘ２００ｍｌ）、塩酸（１Ｍ、２ｘ２００ｍｌ）および水（２ｘ２００ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣を〜１０ｇのシリカゲルで吸収させ、シリカゲル（５０ｇ）のカラム（７０ １４０ｍｍ）に置き、２５％軽油／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ１）、５０％軽油／ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ２［４００ｍｌ］＆ｆ３［４００ｍｌ］）、１００％ジクロロメタン（８００ｍｌ、ｆ４［４００ｍｌ］、ｆ５［４００ｍｌ］）、５％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ６）、１０％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ７）および１００％メタノール（４００ｍｌ、ｆ８）で抽出した。生成物はｆ６に見出され、ジエチルエーテル（２ｘ２００ｍｌ）に溶解し、不溶の反応副産物を濾去し、溶媒を除去し、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸メチルエステル（７．０９ｇ、９７％）を得た。
【０１００】
この化合物（７．８７ｇ、１４．３ｍｍｏｌ）を、無水メタノール（５０ｍｌ）に溶解し、ナトリウムメトキシド（５５０ｍｇ）を添加した。反応に続いて薄層クロマトグラフィーを行い、１時間後、Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ Ｘ８ Ｈ＋ 形態イオン交換樹脂を添加し、さらに３０分後、反応混合物を濾過し、溶媒を除去し、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸メチルエステル（４．８０ｇ、８８％）を得た。ピリジン（５０ｍｌ）中のこの物質（４．８０ｍｇ、１２．５ｍｍｏｌ）に、塩化トリチル（２．５ｅｑ、８．６３ｇ）を添加し、混合物を５０℃で一夜撹拌した。室温に冷却後、無水酢酸（８ｅｑ、１０．５ｇ）を添加し、混合物を３時間撹拌し、その上でそれを氷冷水（２００ｍｌ）に添加し、ジクロロメタン（３ｘ２００ｍｌ）で抽出した。有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させ、純粋でない３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリアセトキシ−６−トリチルオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸を得た。
【０１０１】
この物質の全量を、ジクロロメタン（１００ｍｌ）中で無水塩化鉄（８．８９ｇ）と室温で１．５時間撹拌し、その上で水（１００ｍｌ）を添加し、混合物をクロロホルム（３ｘ２００ｍｌ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾過物を減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０６３−０．２ｍｍ）カラム（２ｘ３０ｃｍ）上で真空クロマトグラフィーし、１０％酢酸エチル／軽油（３００ｍｌ、ｆ１）、１００％ジクロロメタン（３５０ｍｌ、ｆ２）、１０％メタノール／ジクロロメタン（３５０ｍｌ、ｆ３）および１００％メタノール（１５０ｍｌ、ｆ４）で抽出し、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリアセトキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸メチルエステル（５．２４ｇ、８２％）を得た。
【０１０２】
この化合物（５．０２ｇ、９．８６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（７５ｍｌ）およびピリジン（０．８６ｇ）に溶解し、混合物を０°に冷却し、その上で乾燥窒素空気下で撹拌しながら酸塩化リン（２．２ｅｑ、３．２ｇ）を滴下添加した。混合物を室温に温め、一夜撹拌した。混合物を濾過し、乾燥するまで減圧下で蒸発させた。残渣をアセトンと水の１：１混合物（８０ｍｌ）に溶解し、４５−５０°で２時間維持した。乾燥するまで蒸発させた後、残渣を５０ｍｌのエタノールから蒸発させた。ナトリウムメトキシド（４ｅｑ、２．１８ｇ）および水（２ｍｌ）を含有するメタノール（１００ｍｌ）中で、この物質を室温で一夜撹拌し、その後それを強い陽イオン交換樹脂 （Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗ Ｈ＋ 形態）で処理してナトリウムイオンを除去した。イオン交換樹脂を濾去し、濾過物を減圧下で乾燥させ、残渣をエタノール（５０ｍｌ）から蒸発させ、メチル３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸を得た。
【０１０３】
次いでこの物質を最小限の水に溶解し、酢酸ナトリウム（７．４ｇ）のエタノール溶液（５００ｍｌ）に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離でペレットにし、エタノールをデカンタで除き、固体をジエチルエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸モノナトリウム塩（２．１９ｇ、４７％）を得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ ２．４４−２．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．８６ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， １８．０Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０６−３．１５ （ｍ， １Ｈ）， ３．４０−３．４６ （ｍ， １Ｈ） ３．４８−３．５５ （ｍ， １Ｈ）， ３．８０−３．９２ （ｍ， ３Ｈ）， ３．９４−４．０２ （ｍ， １Ｈ）， ４．４７ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ４．０Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１１−７．３１ （ｍ， ５Ｈ）；　ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ４４８ （Ｍ−Ｈ）。
【０１０４】
実施例１１　リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）３−Ｏ−（ＣＨ２）５ＣＨ３ナトリウム塩の調製
０℃、窒素空気下、ＤＭＦ（１０ｍｌ）中の６０％ナトリウム水素化物（３２０ｍｇ、８ｍｍｏｌ）の懸濁液に、３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロパン−１−オル（実施例８）（４ｇ、６．６ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、ヨードヘキサン（１．２ｍｌ、８ｍｍｏｌ）を添加し、生じた溶液を２時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、油性の残渣に酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（ｂｒｉｎｅ）（１００ｍｌ） で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（４ｘ２００ｍｌ）および軽油中の５０％酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出して精製し、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメトキシ］−シラン（シリカｔｌｃ、２５％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．６８、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）７１３（Ｍ＋Ｎａ））を油として得た（３．５ｇ、７７％収率）。
【０１０５】
この物質（３．１ｇ、４．５ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２０ｍｌ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフッ化物（２．３ｇ、９ｍｍｏｌ）を添加した。生じた溶液を一夜撹拌し、減圧下で溶媒を除去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を油性の残渣に添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）および１００％酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出して精製し、［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−メタノール（ｔｌｃシリカゲル、２５％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．３１、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）５７７（Ｍ＋Ｈ）、５９９（Ｍ＋Ｎａ））を油として得た（２．２ｇ、８５％）。
【０１０６】
この物質（２．１ｇ、３．６５ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）およびトリエチルアミン（１ｍｌ、７．２９ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（０．４２４ｍｌ、４．５６ｍｍｏｌ）を窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで希釈し、遠心分離し、不溶の塩を除去した。上清を蒸発させ、アセトンと水の１：１混合物（２０ｍｌ）に再溶解し、４５−５０℃で２時間維持した。溶媒を減圧下で除去し、リン酸モノ−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）６７９（Ｍ＋Ｎａ）、（−ｖｅ）６５５（Ｍ−Ｈ）、６９１（Ｍ＋Ｃｌ）を得た。
【０１０７】
この化合物をメタノール（１００ｍｌ）中の１％蟻酸に溶解し、炭素上の１０％パラジウム（１００ｍｇ）を添加し、４０ｐｓｉで一夜水素化した。セライトを通して混合物を濾過し、濾過物を乾燥するまで蒸発させ、リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）３８７（Ｍ＋Ｈ）、４０９（Ｍ＋Ｎａ）、（−ｖｅ）３８５（Ｍ−Ｈ））を得た。これから、水とエタノールの１：１溶液（２ｍｌ）にこの化合物を溶解し、この溶液をエタノールに溶解した酢酸ナトリウム（２６３ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）（５０ｍｌ）に滴下添加することにより、モノナトリウム塩を調製した。生じた沈殿を遠心分離により単離し、リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、モノナトリウム塩を白色固体として（９９７ｍｇ、７１％）得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）：δ０．７２ （ｔ， Ｊ ＝ ６．５Ｈｚ， ３Ｈ）， １．１１−１．２０ （ｍ， ６Ｈ）， １．３８−１．４８ （ｍ， ４Ｈ）， １．５７ （ｍ， １Ｈ）， １．６９ （ｍ， １Ｈ）， ３．３５−３．４２ （ｍ， ４Ｈ）， ３．４９ （ｍ， １Ｈ）， ３．５９ （ｔ， Ｊ ＝ ９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．６８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ３．５， ９．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．７４ （ｍ， １Ｈ）， ３．７８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ４．０， １０．５Ｈｚ， １Ｈ）， ３．８９−３．９３ （ｍ， ２Ｈ）。
【０１０８】
実施例１２　リン酸モノ−［６−（３−ブチリルアミノ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）３−ＮＨ−ＣＯ（ＣＨ２）２ＣＨ３モノナトリウム塩の調製
３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロパン−１−オル（実施例８から）（２．２ｇ、３．６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．５６ｍｌ、４ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶解し、窒素空気下で０℃に冷却した。この溶液に、メタンスルホン酸塩化物（０．２９ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）を添加し、エーテル（４０ｍｌ）で希釈する前に、生じた混合物を２時間撹拌した。沈殿を遠心分離により除去し、上清を減圧下で蒸発させた。粗製のメシラート（ｍｅｓｙｌａｔｅ）をジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）に溶解し、アジ化ナトリウム（１．１７ｇ、１８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を７０℃で一夜加熱した。混合物を冷却し、酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）および１００％酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出して精製し、３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロピルアジド（ｔｌｃシリカゲル、２５％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．８０）を油として得た（２．０５ｇ、９０％）。
【０１０９】
乾燥エーテル（１０ｍｌ）に溶解したこの化合物（３．４ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を、リチウムアルミニウム水素化物（６１４ｍｇ、１６．１ｍｍｏｌ）のエーテル懸濁液（５０ｍｌ）に、０℃で窒素空気下で添加した。生じた溶液を室温に温め、２時間撹拌した。この反応の間に、シリル保護基も除去した。反応を２Ｍ水酸化ナトリウム（５ｍｌ）でクエンチし、水（５０ｍｌ）で希釈し、エーテル（４ｘ５０ｍｌ）で抽出した。合わせたエーテル状抽出物をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させ、粗製の［６−（３−アミノ−プロピル）−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−メタノール、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）６０６（Ｍ＋Ｈ）を得た。
【０１１０】
この粗製の化合物を、テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中で、ＢＯＰ試薬（２．４ｇ、５．４ｍｍｏｌ）で活性化した酪酸（４８６ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．７ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）と反応させた。２時間後、減圧下で溶媒を除去し、油性の残渣に酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２００ｍｌ）および１００％酢酸エチル（３ｘ２００ｍｌ）で抽出して精製し、Ｎ−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］−ブチルアミド（ｔｌｃシリカゲル、１００％ＥｔＯＡｃ中でＲｆ０．３８、ＥＳＭＳ（＋）５６２（Ｍ＋Ｈ）、５８４（Ｍ＋Ｎａ））を油として得た（１．９ｇ、６２％）。
【０１１１】
この化合物（１．８５ｇ、３．３ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）およびトリエチルアミン（５８５μｌ、４．２ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（５８５μｌ、３．９ｍｍｏｌ）を窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで希釈し、遠心分離し、不溶の塩を除去した。次いで上清を蒸発させ、アセトンと水の１：１混合物（２０ｍｌ）に再溶解し、４５−５０℃で２時間維持した。溶媒を減圧下で除去し、リン酸モノ−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ブチリルアミノ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）６４２（Ｍ＋Ｈ）、（−ｖｅ）６４０（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１１２】
この化合物をメタノール（１００ｍｌ）中の１％蟻酸に溶解し、炭素上の１０％パラジウム（１００ｍｇ）を添加し、４０ｐｓｉで一夜水素化した。セライトを通して混合物を濾過し、濾過物を乾燥するまで蒸発させ、リン酸モノ−［６−（３−ブチリルアミノ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）３７０（Ｍ−Ｈ）を得た。これから、水とエタノールの１：１溶液（２ｍｌ）にこの化合物を溶解し、この溶液をエタノール（５０ｍｌ）に溶解した酢酸ナトリウム（２７０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）に滴下添加することにより、モノナトリウム塩を調製した。生じた沈殿を遠心分離により単離し、リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、モノナトリウム塩を白色固体として（８５０ｍｇ、６９％）得た。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ ０．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５Ｈｚ， ３Ｈ）， １．３２−１．５４ （ｍ， ４Ｈ）， １．６６ （ｍ， ２Ｈ）， ２．０６ （ｔ， Ｊ ＝ ７．５Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．０８ （ｔ， Ｊ ＝ ５．８Ｈｚ， ２Ｈ）， ３．３２−３．９２ （ｍ， ７Ｈ）。
【０１１３】
実施例１３　２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−ペンタン二酸（式Ｉ；Ｒ＝ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈ）の調製
酢酸６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステル（実施例７から）（５ｇ、９．７ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、酢酸（５ｍｌ）および ａｌｉｑｕａｔ３３６（１ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に、過マンガン酸カリウム（６．１ｇ、３８．７ｍｍｏｌ）を激しく撹拌しながら分注（ｐｏｒｔｉｏｎｗｉｓｅ）添加し、生じた混合物を室温に温め、撹拌を一夜継続した。反応混合物を０℃に冷却し、亜硫酸ナトリウム（１０ｇ）でクエンチし、５Ｍ塩酸（５０ｍｌ）を添加し、混合物をジクロロメタン（４ｘ５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物をブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、ジクロロメタン（２００ｍｌ）、ジクロロメタン（中の２．５％メタノール２ｘ２００ｍｌ）、ジクロロメタン中の５％メタノール（２ｘ２００ｍｌ）、ジクロロメタン中の１０％メタノール（２ｘ２００ｍｌ）、ジクロロメタン中の２０％メタノール（２ｘ２００ｍｌ）で抽出して精製し、（６−アセトキシメチル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（ｔｌｃシリカゲル、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ中でＲｆ０．６、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）５３３（Ｍ−Ｈ）、５６９（Ｍ＋Ｃｌ）を得た。
【０１１４】
この化合物をメタノール（１０ｍｌ）中のナトリウムメトキシド（１．３ｇ、２４ｍｍｏｌ）と反応させ、（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（ｔｌｃシリカゲル、１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ中でＲｆ０．５、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）４９１（Ｍ−Ｈ）、５２７（Ｍ＋Ｃｌ））を、油として得た（３．１ｇ、６５％）。
【０１１５】
この化合物（３ｇ、６ｍｍｏｌ）、ＢＯＰ試薬（２．８７ｇ、６．５ｍｍｏｌ）およびグルタミン酸のトシル塩、ジベンジルエステル（４ｇ、８ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中で合わせ、ジイソプロピルエチルアミン（３．５ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を添加した。４時間後、減圧下で溶媒を除去し、油性の残渣に酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、続いてこの混合物を１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の３０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の４０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（４ｘ２００ｍｌ）および１００％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）で抽出して精製し、２−［２−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−ペンタン二酸ジベンジルエステル（ｔｌｃシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．３４、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）８０２（Ｍ＋Ｈ）、８２４（Ｍ＋Ｎａ））を、油として得た（１．４ｇ、２９％）。
【０１１６】
この化合物（２．４ｇ、３．０ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）およびトリエチルアミン（５５７μｌ、４ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（３０７μｌ、３．３ｍｍｏｌ）を窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで希釈し、遠心分離して不溶の塩を除去した。次いで上清を蒸発させ、アセトンと水の１：１混合物（２０ｍｌ）に再溶解し、４５−５０℃で２時間維持した。減圧下で溶媒を除去し、２−［２−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−ペンタン二酸ジベンジルエステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）８８２（Ｍ＋Ｈ）を得た。この化合物を１％蟻酸で１：１メタノールおよび水（１００ｍｌ）に溶解し、炭素上の１０％パラジウム（１００ｍｇ）を添加し、４０ｐｓｉで一夜水素化した。セライトを通して混合物を濾過し、濾過物を乾燥するまで蒸発させ、２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−ペンタン二酸、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）４３０（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１１７】
これから、この化合物を水とエタノールの１：１溶液（２ｍｌ）に溶解し、この溶液をエタノール（５０ｍｌ）に溶解した酢酸ナトリウム（５４１ｍｇ、６．６ｍｍｏｌ）に滴下添加することにより、ジナトリウム塩を調製した。生じた沈殿を遠心分離により単離し、２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−ペンタン二酸、ジナトリウム塩を白色固体として得た（７３２ｍｇ、５１％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．７５ （ｍ， １Ｈ）， １．９４ （ｍ， １Ｈ）， ２．１３ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， ２Ｈ）， ２．５２ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．５， １５．０Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， １５．０Ｈｚ， １Ｈ）， ３．５４ （ｍ， １Ｈ）， ３．６４−３．７３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．７６ （ｍ， １Ｈ）， ３．８５−３．９７ （ｍ， ２Ｈ）， ４．０３ （ｍ， １Ｈ）， ４．２１ （ｍ， １Ｈ）。
【０１１８】
類似の方法で以下のものを作成した：
（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸（２ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）からの全収率で３００ｍｇ（１８％）のリン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（フェネチルカルバモイル−メチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２Ｐｈ）。 ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ４０４ （Ｍ−Ｈ）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ２．２８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．５， １４．５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．５３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １０．０， １４．５Ｈｚ， １Ｈ）， ２．６８ （ｔ， Ｊ ＝ ７．０Ｈｚ）， ３．３３ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４２ （ｍ， １Ｈ）， ３．５８−３．６７ （ｍ， ３Ｈ）， ３．７７ （ｍ， １Ｈ）， ３．８６ （ｍ， １Ｈ）， ４．１１ （ｍ， １Ｈ）， ７．１３−７．１６ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２１−７．２５ （ｍ， ２Ｈ）。
【０１１９】
実施例１４　リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（３−｛３−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロポキシ］−フェノキシ｝−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）３−Ｏ−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−（ＣＨ２）３−Ｘ、式中、Ｘは式Ｉのピラン部分である）の調製
３−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−プロパン−１−オル（実施例８で調製した）（５ｇ、８．２５ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（３．４ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタンに溶解し、窒素空気下で０℃に冷却した。この溶液に、トリフェニルホスフィン（３．２５ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）をほぼ等しい配分で１０分間かけて添加した。反応混合物を室温に温め、溶媒を減圧下で除去する前に撹拌を１時間継続した。粗製の残渣をエーテル（５０ｍｌ）で希釈し、続いてそれをデカンタして沈殿したトリフェニルホスフィン酸化物を残した。これを２回繰返し、合わせたエーテル状の洗浄物を合わせ、蒸発させ、残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の２．５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（３ｘ２００ｍｌ）および軽油中の２０％酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出して精製し、ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ブロモ−プロピル）−テトラヒドロピラン−２−イルメトキシ］−シラン（ｔｌｃシリカゲル、１０％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．４２）を油として得た（４．３ｇ、７８％）。
【０１２０】
この化合物（１ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５ｍｌ）中でレゾルシノール（７８ｍｇ、０．７１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（８２３ｍｇ、６ｍｍｏｌ）と合わせ、７０℃に３６時間加熱した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）で希釈し、１Ｍ塩酸（３ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２００ｍｌ）および軽油中の１００％酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出して精製し、所望の二付加生成物（ｔｌｃシリカゲル、２５％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．７８、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）１３０９（Ｍ＋Ｎａ））を、油として得た（８３０ｍｇ、９１％）。
【０１２１】
この化合物をテトラヒドロフラン（５ｍｌ）に溶解し、テトラブチルアンモニウムフッ化物（６６６ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）を添加した。生じた混合物を一夜室温で撹拌し、減圧下で溶媒を除去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を油性の残渣に添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）、およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の１０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の２０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の３０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の４０％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（４ｘ２００ｍｌ）および１００％酢酸エチル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出して精製し、［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−｛３−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロポキシ］−フェノキシ｝−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−メタノール（ｔｌｃシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．４４、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）１０８１（Ｍ＋Ｎａ））を、油として得た（６３４ｍｇ、９４％）。
【０１２２】
この化合物（１．６ｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（２５ｍｌ）およびトリエチルアミン（５８９μｌ、４．２３ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（３５１μｌ、３．７８ｍｍｏｌ）を窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで希釈し、遠心分離し、不溶の塩を除去した。次いで上清を蒸発させ、アセトンと水の１：１混合物（２０ｍｌ）に再溶解し、４５−５０℃で２時間維持した。溶媒を減圧下で除去し、リン酸モノ−［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−｛３−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロポキシ］−フェノキシ｝−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）１２１９（Ｍ＋Ｈ）、１２４１（Ｍ＋Ｎａ）を得た。
【０１２３】
この化合物を１％蟻酸で１：１のテトラヒドロフランと水（１００ｍｌ）に溶解し、炭素上の１０％パラジウム（１００ｍｇ）を添加し、４０ｐｓｉで一夜水素化した。セライトを通して混合物を濾過し、濾過物を乾燥するまで蒸発させ、リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（３−｛３−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロポキシ］−フェノキシ｝−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）６７７（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１２４】
これから、この化合物を水とエタノールの１：１溶液（２ｍｌ）に溶解し、エタノール（５０ｍｌ）に溶解した酢酸ナトリウム（２６９ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）にこの溶液を滴下添加することにより、ジナトリウム塩を調製した。生じた沈殿を遠心分離により単離し、リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（３−｛３−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロポキシ］−フェノキシ｝−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ジナトリウム塩を、白色固体として得た（８５０ｍｇ、８３％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ １．３５−１．９０ （ｍ， ８Ｈ）， ３．４２−４．１２ （ｍ， １８Ｈ）， ６．４８ （ｓ， １Ｈ）， ６．５２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， ２Ｈ）， ７．１５ （ｔ， Ｊ ＝ ８．０Ｈｚ， １Ｈ）。
【０１２５】
実施例１５　リン酸モノ−（６−｛３−［３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−５−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）３−Ｏ−（１’−マルトシル）の調製
０℃で乾燥ピリジン（４００ｍｌ）中の（６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−メタノールの撹拌溶液（実施例７で調製した）（２２．７ｇ、４７．９０ｍｍｏｌ）に、ジフェニルホスフォリル塩化物（２０ｍｌ、９５．７８ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で１時間撹拌を継続した。混合物を徐々に室温に温め、撹拌をさらに１時間継続した。次いで水（１５０ｍｌ）を添加し、混合物を減圧下で蒸発させた。残渣をクロロホルム（２５０ｍｌ）に溶解し、溶液を水（１００ｍｌ）、５％塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）で連続的に洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ３０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（３：２）で抽出し、リン酸６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステルジフェニルエステル（１９．５ｇ、６０％）、ｔｌｃシリカゲルＲｆ＝０．７５（酢酸エチル／ヘキサン＝２：３）を得た；１Ｈｎｍｒ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ ２．２９ （ｍ， ３Ｈ）， ３．６２ （ｍ， １Ｈ）， ３．７７ （ｍ， ２Ｈ）， ３．８８ （ｍ， １Ｈ）， ４．０４ （ｍ， １Ｈ）， ４．４１−４．６３ （ｍ， ８Ｈ）， ５．００ （ｍ， ２Ｈ）， ５．７２ （ｍ，１Ｈ）， ７．１２−７．１５ （ｍ， ２５Ｈ）。
【０１２６】
この化合物（１０．０２ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）を０℃で窒素下に置いた乾燥テトラヒドロフラン（〜１００ｍｌ）に溶解し、これをボランのテトラヒドロフラン溶液（１．０Ｍ、〜１．５ｅｑ、３３ｍｌ）に添加した。反応混合物を室温に温め、続いて薄層クロマトグラフィーを行った。完了したら、反応混合物を水酸化ナトリウムの水性溶液（１Ｍ、５０ｍｌ）に注ぎ、それに過炭酸ナトリウム（１２．４ｇ、〜４ｅｑ）を添加した。反応混合物を一夜撹拌し、ジエチルエーテル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（１５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ３０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、酢酸エチルで抽出し、リン酸ジフェニルエステル３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（３−ヒドロキシ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステル（５．８ｇ、５６％）を得た。
【０１２７】
この化合物（４．５５ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）、テトラメチル尿素（７３３ｍｇ、６．３１ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸銀（１．６２ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０ｍｌ）中、窒素下、分子篩（４Å、５ｇ）上、１時間、室温で撹拌し、次いで−２０℃に冷却した。ヘプタ−Ｏ−アセチルマルトシル臭化物（４．０１ｇ、５．７３ｍｍｏｌ） （Ｍａｌｅｔ ｅｔ ａｌ．， １９９５（出典明示により本明細書の一部とする）の一般的方法に類似の方法で調製した）のジクロロメタン溶液（１５０ｍｌ）を滴下添加した。混合物を−２０℃で４時間撹拌し、次いで一夜放置して室温に到達させ、セライトを通して濾過した。濾過物を氷冷水に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、塩酸（１００ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）および水（５０ｍｌ）で連続的に洗浄した。有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させ、粗製のリン酸ジフェニルエステル３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−｛２−［３，４−ジアセトキシ−６−アセトキシメチル−５−（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステルを得た。
【０１２８】
この物質をメタノール（１５０ｍｌ）、水（５ｍｌ）および蟻酸（５ｍｌ）に溶解し、それに炭上の１０％パラジウムを添加した。生じた溶液を水素下（５５ｐｓｉ）で４８時間震盪した。触媒を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ２０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、酢酸エチル中の１０％メタノールで抽出し、リン酸ジフェニルエステルモノ−（６−｛２−［３，４−ジアセトキシ−６−アセトキシメチル−５−（３，４，５−トリアセトキシルオキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（１．６ｇ、２６％全収率）を得た。Ｒｆ＝０．５（酢酸エチル中の１０％メタノール）；ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）１０９５（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１２９】
トリフルオロ酢酸と酢酸の１：１混合物（３０ｍｌ）中のこの物質（１．６ｇ、１．４９ｍｍｏｌ）の溶液を水素空気下（４０ｐｓｉ）、活性化アダムス触媒（ＰｔＯ２（８３％）；７５０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）の存在下で３時間震盪した。触媒を濾去し、溶媒を乾燥するまで減圧下で蒸発させ、リン酸モノ−（６−｛２−［３，４−ジアセトキシ−６−アセトキシメチル−５−（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステル（１．２４ｇ、９０．５％）、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）９１９（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１３０】
この物質をメタノール（５０ｍｌ）および水（５ｍｌ）の中でナトリウムメトキシド（９ｅｑ）と８時間撹拌した。Ｄｏｗｅｘ ５０ Ｘ８ Ｈ＋ 形態イオン交換樹脂でナトリウムイオンを除去した。イオン交換樹脂を濾去し、濾過物を減圧下で乾燥させた。残渣を水（３ｍｌ）に溶解し、これを酢酸ナトリウム（１．１ｅｑ）のエタノール溶液（５０ｍｌ）に撹拌しながら滴下添加した。沈殿を濾去し、リン酸モノ−（６−｛３−［３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−５−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩（６７５ｍｇ、８０％）、１Ｈｎｍｒ （３００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）δ １．４０−１．８０ （ｍ， ４Ｈ）， ３．１０ （ｍ，１Ｈ）， ３．２３ （ｍ，１Ｈ）， ３．３７−４．１０ （ｍ， １９Ｈ）， ４．２９ （ｍ， １Ｈ）， ５．２０ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ６２５ （Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１３１】
実施例１６　リン酸モノ−（６−｛２−［３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−５−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−エチル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩（式Ｉ；Ｒ＝−（ＣＨ２）２−Ｏ−（１’−マルトシル）の調製
【０１３２】
ジクロロメタン（７５ｍｌ）、水（７５ｍｌ）および酢酸（１５．６ｍｌ）中のリン酸６−アリル−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステルジフェニルエステル（実施例１５で調製した）（１０ｇ、１４．１６ｍｍｏｌ）に、Ａｌｉｑｕａｔ ３３６（０．９３ｇ）を添加し、反応容器を０℃に冷却し、過マンガン酸カリウム（８．３ｇ、５２．７ｍｍｏｌ）を２回に分けて添加した。氷槽を除去し、反応を２４時間室温で撹拌した。亜硫酸ナトリウム（９．３１ｇ、５７．４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を水（１５０ｍｌ）とジクロロメタン（２００ｍｌ）との間に分配した。水性層をジクロロメタン（１５０ｍｌ）で抽出し、合わせた有機抽出物をブライン（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ２０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、酢酸エチル：メタノール（１９：１）で抽出し、［３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（ビス−フェノキシ−ホスフォリルオキシメチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−酢酸（９．６ｇ、９３．８％）を得た。
【０１３３】
この化合物（９．０ｇ、１２．４５ｍｍｏｌ）とＢＯＰ試薬の（５．８４ｇ、１３．１６ｍｍｏｌ）テトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中の撹拌溶液に、室温でジイソプロピルエチルアミン（２．６２ｍｌ、１５．０３ｍｍｏｌ）を添加した。生じた溶液を５分間撹拌し、次いでナトリウムボロ水素化物（４９０ｍｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を添加した。２０分間撹拌した後、溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル（３００ｍｌ）に取り、５％塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ２０ｃｍ）でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（１：１）で抽出し、リン酸ジフェニルエステル３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−（２−ヒドロキシ−エチル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステル（４．９ｇ、５６％）、ｔｌｃシリカゲル、Ｒｆ０．４２（酢酸エチル／石油スピリットｂｐ６０−８０、１：１）を得た。１Ｈｎｍｒ （３００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３）： δ １．６５ （ｍ， １Ｈ）， １．９８ （ｍ， １Ｈ）， ３．５０−３．８０ （ｍ， ５Ｈ）， ４．００−４．３０ （ｍ， ３Ｈ）， ４．４５−４．６８ （ｍ， ６Ｈ）， ４．８５ （ｍ，１Ｈ）， ７．００−７．７０ （ｍ，２５Ｈ）； ＥＳＭＳ （＋ｖｅ） ７１１ （Ｍ ＋ Ｈ）， ７３３ （Ｍ ＋ Ｎａ）。
【０１３４】
この化合物（３．６４ｇ、５．１３ｍｍｏｌ）、テトラメチル尿素（６００ｍｇ、５．１７ｍｍｏｌ）およびトリフルオロメタンスルホン酸銀（１．３２ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍｌ）に溶解し、窒素下、分子篩（４Å、５ｇ）上、１時間、室温で撹拌し、次いで−２０℃に冷却した。この溶液にジクロロメタン（１００ｍｌ）中のヘプタ−Ｏ−アセチルマルトシル臭化物（実施例１５で調製した）（５．８２ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を−２０℃で４時間撹拌し、次いで一夜放置して室温に到達させ、セライトを通して濾過した。濾過物を氷冷水に注ぎ、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、塩酸（１００ｍｌ）、水（５０ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（１００ｍｌ）、および水（５０ｍｌ）で連続的に洗浄した。生じた溶液を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で蒸発させた。残渣をシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ）カラム（４ｘ５０ｃｍ）上でクロマトグラフィーし、石油スピリット（ｂｐ６０−８０°）：酢酸エチル（３：２）で抽出し、リン酸ジフェニルエステル３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−｛２−［３，４−ジアセトキシ−６−バセトキシメチル−５−（３，４，５−トリアセトキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−エチル｝−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチルエステル（３．０７ｇ、３４％）を得た。
【０１３５】
この化合物を、実施例１５のリン酸ジフェニルエステルモノ−（６−｛２−［３，４−ジアセトキシ−６−アセトキシメチル−５−（３，４，５−トリアセトキシルオキシ−６−アセトキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−プロピル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルと類似の方法で処理して、リン酸モノ−（６−｛２−［３，４−ジヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−５−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ］−エチル｝−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩を得た（７２％全収率）。１Ｈｎｍｒ （３００ ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ） δ １．６４−２．１０ （ｍ， ２Ｈ）， ３．１４ （ｍ， １Ｈ）， ３．２３ （ｍ， １Ｈ）， ３．４０−４．２０ （ｍ，１９Ｈ）， ４．３０ （ｍ， １Ｈ）， ５．２５ （ｍ， １Ｈ）； ＥＳＭＳ （−ｖｅ） ６１１ （Ｍ−Ｈ）。
【０１３６】
実施例１７　３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタノイルアミノ）−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸、モノナトリウム塩の調製
［６−（３−アミノ−プロピル）−３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−メタノール（実施例１２から）（３．８ｇ、６．３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（１０ｍｌ）中で、ＢＯＰ試薬（２．８ｇ、６．３ｍｍｏｌ）で活性化したＢｏｃ−バリン（１．３７ｇ、６．３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．７ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）と反応させた。２時間後、溶媒を減圧下で除去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を油性の残渣に添加し、続いて１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、軽油中の７５％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、および１００％酢酸エチル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出して精製し、｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ｔｌｃシリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／軽油中でＲｆ０．１３、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）７１３（Ｍ＋Ｎａ））を油として得た（２．４ｇ、５４％）。
【０１３７】
この化合物（１．２ｇ、１．７ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸およびジクロロメタン（１０ｍｌ）の１：１混合物と１時間反応させ、Ｂｏｃ保護基を除去した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、蒸発させてトリフルオロ酢酸のすべてのトレース（ｔｒａｃｅ）を除去した。粗生成物を、ＢＯＰ試薬（７９６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）で活性化したＢｏｃ−アスパラギン酸、ガンマ−ベンジルエステル（５８１ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．８６９ｍｌ、５ｍｍｏｌ）と、テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中で反応させた。２時間後、溶媒を減圧下で除去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を油性の残渣に添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させ、３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸ベンジルエステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）８９６（Ｍ＋Ｈ）を得た。
【０１３８】
この化合物（約１．７ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸およびジクロロメタン（１０ｍｌ）の１：１混合物と１時間反応させ、Ｂｏｃ保護基を除去した。反応混合物を乾燥するまで蒸発させ、ジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、蒸発させてトリフルオロ酢酸のすべてのトレースを除去した。粗生成物を、ＢＯＰ試薬（７９６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）で活性化したＢｏｃ−ロイシン（４４８ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．８６９ｍｌ、５ｍｍｏｌ）と、テトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中で反応させた。２時間後、溶媒を減圧下で除去し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を油性の残渣に添加し、続いてそれを１Ｍ塩酸（２ｘ１００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２ｘ１００ｍｌ）およびブライン（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、乾燥するまで蒸発させた。残渣を急速真空シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）上で、軽油（２００ｍｌ）、軽油中の２５％酢酸エチル（２００ｍｌ）、軽油中の５０％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、軽油中の７５％酢酸エチル（２ｘ２００ｍｌ）、および１００％酢酸エチル（２ｘ１００ｍｌ）で抽出し、３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタノイルアミノ）−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸ベンジルエステル（ｔｌｃシリカゲル、ＥｔＯＡｃ中でＲｆ０．４２、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）１００９（Ｍ＋Ｈ）、１０３１（Ｍ＋Ｎａ））を、白色固体として得た（８５０ｍｇ、２つの脱保護およびカップリングの段階を合わせて４８％）。
【０１３９】
この化合物（８５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．５５７ｍｌ、４ｍｍｏｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（０．１０２ｍｌ、１．１ｍｍｏｌ）を窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエーテルで希釈し、遠心分離して不溶の塩を除去した。次いで上清を蒸発させ、アセトンと水の１：１混合物（２０ｍｌ）に再溶解し、４５−５０℃で２時間維持した。溶媒を減圧下で除去し、３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタノイルアミノ）−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリス−ベンジルオキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸ベンジルエステル、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）１０８８（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１４０】
この化合物を１％蟻酸でテトラヒドロフランと水の１：１混合物（１００ｍｌ）に溶解し、炭素上の１０％パラジウム（１００ｍｇ）を添加し、４０ｐｓｉで一夜水素化した。セライトを通して混合物を濾過し、濾過物を乾燥するまで蒸発させ、３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタノイルアミノ）−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）７２８（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１４１】
これから、この化合物を水とエタノールの１：１溶液（２ｍｌ）に溶解し、エタノール（５０ｍｌ）に溶解した酢酸ナトリウム（２７０ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）にこの溶液を滴下添加することにより、モノナトリウム塩を調製した。生じた溶液を乾燥するまで蒸発させ、３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタノイルアミノ）−Ｎ−｛２−メチル−１−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルカルバモイル］−プロピル｝−スクシンアミン酸、モノナトリウム塩を、白色固体として得た（４９０ｍｇ、８０％）。１Ｈｎｍｒ （５００ＭＨｚ， Ｄ２Ｏ）： δ０．７３−０．８４ （ｍ， １２Ｈ）， １．２８ （ｓ， ９Ｈ）， １．３５−１．７０ （ｍ， ７Ｈ）， １．９７ （ｍ， １Ｈ）， ２．４５−２．６９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．００−３．１９ （ｍ， ２Ｈ）， ３．４５−３．９８ （ｍ， ９Ｈ）， ４．５３ （ｍ， １Ｈ）。
【０１４２】
実施例１８　リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（２−オキソ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル（式Ｉ；Ｒ＝ＣＨ２ＣＯＣＨ３）の調製
（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ， ２０００）により記載された方法の変法を使用して、蒸留水（４００ｍｌ）に溶解したＤ−マンノース（１８ｇ、１００ｍｍｏｌ）の溶液に、重炭酸ナトリウム（１２．６ｇ；１５０ｍｍｏｌ）を添加した。２，４−ペンタンジオン（１２．３２ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）を溶液に添加し、混合物を９０℃で１２時間撹拌した。その後、溶液をジクロロメタン（２ｘ２５０ｍｌ）で洗浄し、水性相を Ｄｏｗｅｘ イオン交換樹脂 （５０Ｗ−Ｘ８， Ｈ＋ 形態）でｐＨが〜４で安定するまで処理した。焼結ガラス漏斗を通して樹脂を濾去し、蒸留水（２ｘ５００ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾過物および洗浄物を減圧下で蒸発させ、粗製の１−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロパン−２−オン、ＥＳＭＳ（−ｖｅ）２１９（Ｍ−Ｈ）を得た。
【０１４３】
この物質（１０．９ｇ、４９．５ｍｍｏｌ）をピリジン（２００ｍｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、撹拌しながら、乾燥窒素下で、トリフェニルメチル塩化物（２．５ｅｑ．、３４．４ｇ）をゆっくりと添加した。反応混合物を５０℃に温め、１６時間撹拌した。冷却後、無水酢酸（４７ｍｌ）を添加し、溶液をさらに６０分間５０℃で撹拌した。次いで混合物を氷水（２００ｍｌ）に注ぎ、溶液をジクロロメタン（３ｘ２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（２００ｍｌ）、飽和重炭酸ナトリウム（２００ｍｌ）および水（２００ｍｌ）で連続的に洗浄した。有機相を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾過物を減圧下で蒸発させ、酢酸−４，５−ジアセトキシ−６−（２−オキソ−プロピル）−２−トリチルオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−３−イルエステル、ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）６１１（Ｍ＋Ｎａ）を得た。
【０１４４】
残渣をジクロロメタン（３００ｍｌ）に溶解し、無水塩化鉄（７．８ｇ）を添加した。室温で２時間撹拌した後、有機溶液を水（３ｘ２００ｍｌ）で洗浄した。有機層を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、濾過し、濾過物減圧下で蒸発させた。残渣を４０−６０石油スピリット（ｘｘｍｌ）に取り、シリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；２０ｇ）を添加した。スラリーをシリカゲル（０．０４０−０．０６３ｍｍ；１００ｇ）カラム（７０ｘ２００ｍｍ）の最上部に添加し、真空により以下のように抽出した：石油スピリット（ｂｐ４０−６０℃）（４００ｍｌ、ｆ１）、５％酢酸エチル／石油スピリット（４００ｍｌ、ｆ２）、１０％酢酸エチル／石油スピリット（４００ｍｌ、ｆ３）、２５％酢酸エチル／石油スピリット（４００ｍｌ、ｆ４）、５０％酢酸エチル／石油スピリット（８００ｍｌ、ｆ５［４００ｍｌ］、ｆ６［４００ｍｌ］）、１００％酢酸エチル（８００ｍｌ、ｆ７［４００ｍｌ］、ｆ８［４００ｍｌ］）、５％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ９）、および１０％メタノール／ジクロロメタン（４００ｍｌ、ｆ１０）。酢酸−４，５−ジアセトキシ−２−ヒドロキシメチル−６−（２−オキソ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−３−イルエステルは、ｆ６−ｆ８に見出された（３．１ｇ、１８％全収率）。ＥＳＭＳ（＋ｖｅ）３６９（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１４５】
この化合物（６３０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン（２０ｍｌ）およびトリエチルアミン（２ｅｑ、０．５ｍｌ）に溶解し、混合物を０℃に冷却し、その上で酸塩化リン（０．７ｍｌ）を乾燥窒素空気下で撹拌しながら滴下添加した。混合物を室温に温め、一夜撹拌した。混合物を濾過し、乾燥するまで減圧下で蒸発させた。残渣をアセトンと水の１：１混合物（１０ｍｌ）に溶解し、４５−５０°で２時間維持した。乾燥するまで蒸発させた後、残渣を４０ｍｌのエタノールから蒸発させた。残渣を室温で１時間、ナトリウムメトキシド（約５ｅｑ、０．５ｇ）を含有する水の中で撹拌し、その後 Ｄｏｗｅｘ イオン交換 （５０Ｗ−Ｘ８， Ｈ＋ 形態） で処理してナトリウムイオンを除去した。焼結ガラス漏斗を通して樹脂を濾去し、蒸留水（２ｘ５ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾過物および洗浄物を減圧下で蒸発させ、残渣をエタノール（５０ｍｌ）から蒸発させた。次いでこの物質を最小限の水に溶解し、酢酸ナトリウム（１．１ｅｑ、１６４ｍｇ）のエタノール溶液（４０ｍｌ）に滴下添加した。生じた沈殿を遠心分離でペレットにし、エタノールをデカンタで除き、固体をジエチルエーテル（２ｘ５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥させ、リン酸モノ−［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（２−オキソ−プロピル）−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステルモノナトリウム塩（２９１ｍｇ、５０％）を得た。
【０１４６】
実施例１９　ラット脳内皮細胞層を通過するＴ−リンパ球遊走の阻害
６ないし８週齢の Ｌｅｗｉｓ ラットから取ったラット脳毛細血管から、Ｒｉｓａｕ らの方法（Ｒｉｓａｕ， Ｗ．， Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｅｋｅｒｌｅ， Ｈ．， （１９９０）． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ １１０， ｐ １７５７−１７６６， 出典明示により本明細書の一部とする）に従って血管内皮細胞を単離した。内皮細胞のコロニーを、星状膠細胞および周皮細胞から、Ｔｈｙ１．１介在性補体溶解により、Ｒｉｓａｕ らの方法（前出参照）の後にまた精製した。当分野で既知の方法に従い、２０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）、グルタミン、ピルビン酸塩、非必須アミノ酸、４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸バッファー（ＨＥＰＥＳ）、カナマイシン、アンフォテリシン、ヘパリン（すべて Ｇｉｂｃｏ から）および１５０マイクログラム／ｍｌの内皮成長添加物（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を含む、高グルコース添加ダルベッコ最小必須培地（ＤＭＥＭ）中で、内皮コロニーを成長させた。
【０１４７】
コンフルエントに到達したら、内皮培養物をリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中の０．２％ＥＤＴＡで洗浄し、トリプシン処理し（トリプシン−ＥＤＴＡ、０．１％終濃度、Ｇｉｂｃｏ）、洗浄し、再び抗Ｔｈｙ１．１抗体と共に４０分間インキュベートし、洗浄し、全部のＴｈｙ１．１＋細胞を溶解するに足る補体（Ｂｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅ， ＡＧ， Ｍａｒｂｕｒｇ， Ｇｅｒｍａｎｙ）と共に室温でインキュベートし、洗浄し、マトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）−被覆６．５ｍｍトランスウェル（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌｓ）、５ｍｍ孔サイズ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＭＡ）上に播種した。内皮細胞の特性と単層のコンフルエンスを、電気抵抗の測定（Ｗｏｒｌｄ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ， Ｎｅｗ Ｈａｖｅｎ， Ｕ．Ｓ．Ａ．， ｍｏｄｅｌ ＥＶＯＭ−Ｇ）およびＦＩＴＣ標識ファロイジンでの染色（Ｓｉｇｍａ）により検査した。
【０１４８】
本発明の物質のＴリンパ球遊走に対する効果を調べるために、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）特異的Ｔリンパ球細胞株を、Ｂｅｎ−Ｎｕｎ らの方法 （Ｂｅｎ−Ｎｕｎ， Ａ．， Ｗｅｋｅｒｌｅ， Ｈ． ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ， Ｉ．Ｒ．， （１９８１） Ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎａｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｌｉｎｅｓ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １９８１， １１（３）， １９５−１９９； 出典明示により本明細書の一部とする） に従って、フロイントの完全アジュバント中のＭＢＰで免疫した Ｌｅｗｉｓ ラットのリンパ節から生成させた。こららの細胞を、正常 Ｌｅｗｉｓ ラットから取った照射脾臓細胞または胸腺細胞に由来する抗原提示細胞の存在下での抗原（ＭＢＰ）再刺激に続いて、ＩＬ−２含有培地中でのその増殖の最初の４日間に、遊走研究に使用した。
【０１４９】
抗原活性化Ｔリンパ球をクロム酸ナトリウム（５１Ｃｒ、３７ＭＢｑ／ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ， ＵＫ）で、３０分間、３７℃で、時折揺らしながら放射線標識し、次いでそれらを３回ＤＭＥＭ培養培地で洗浄し、トランスウェルの上部チャンバーに、５ｘ１０５個の細胞で、１００マイクロリットルの遊走培地中に播種した。試験および対照物質を、上部ウェルに終濃度０．１、１および１０ｍＭで含めた。実験の進行を正確に測定するために、細胞遊走を光学顕微鏡でモニターした。実験を培養６時間後に停止させ、その上でメンブレンフィルターの下表面を１００マイクロリットルの氷冷ＰＢＳ中の０．２％ＥＤＴＡで２回リンスし、ウェルの下部チャンバーの内容物に加えた。合わせた物質をシンチレーションバイアルに移し、各チューブの放射能を Ｐａｃｋａｒｄ Ａｕｔｏ−Ｇａｍｍａ ５６５０ （ＩＬ， ＵＳＡ） ガンマカウンターで１分間計数することにより測定した。各試験および対照物質（グルコース６−リン酸）および非処置を、３重に評価した。
【０１５０】
典型的な実験からの結果を、表１に示す。負の対照（グルコース６−リン酸）の値は、非処置と統計的に異ならなかった。阻害値は、負の対照との比較である。
【表１】
2004501985.tif 000003
【０１５１】
実施例２０　リンパ組織へのリンパ球遊走の阻害
本実施例では、特定病原体不含の６−８週齢雌 Ｂａｌｂ／Ｃ マウス［１９−２１ｇ］由来の脾臓を使用して、ステンレススチール篩を通して押すことにより、混合リンパ球培養培地（ＤＭＥＭプラスグルコース、葉酸、Ｌ−アスパラギン、重炭酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、２−メルカプトエタノール、ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、および２％ウシ胎児血清）中で、通常の方法で、単一細胞浮遊液を調製した。細胞収集に続き、塩化アンモニウム、ＥＤＴＡおよび炭酸水素ナトリウムの溶液（ｐＨ７．３）で処理することにより、赤血球細胞を通常の方法で溶解し、調製物を染色した（Ｆａｌｃｏｎ ２３５０ 細胞染色器）。細胞調製の全段階は、氷上で実施した。
【０１５２】
調製物からＢリンパ球を無くすために、精製したラット抗マウスＣＤ４５／Ｂ２２０抗体（ＲＡ３−６Ｂ２ ｃｌｏｎｅ； ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ， ＵＳＡ）に、細胞を１ｍｌにつき細胞４ｘ１０７個の濃度で懸濁し、氷上で２０分間インキュベートした。次いで等量の混合リンパ球培養培地（上記）を添加し、細胞を遠心分離し（２００ｘｇ）、１ｍｌにつき細胞１ｘ１０７個の濃度で、磁気ビーズに連結した ＢｉｏＭａｇ ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ） （Ｂｉｏ Ｍａｇ； Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ， ＵＳＡ）中に再懸濁した。氷上２０分間のインキュベーションに続き、５分ごとに揺すりながら、磁気分離（Ｄｙｎａｌ ＭＰＣ−６， Ｄｙｎａｌ， ＵＳＡ）を使用してヤギ抗ラット−ＩｇＧ／抗体複合体を除去した。磁気分離手順を４回繰返し、約８０−９０％のＴリンパ球（ＦＡＣＳ分析で測定した）を含有する細胞集団を得た。
【０１５３】
次いで細胞をハンクス培地中で洗浄し、５ｍｌのハンクスに再懸濁し、３０分間、３７℃で、クロム酸ナトリウム溶液（５１Ｃｒ、３４ＭＢｑ／ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ， ＵＫ）で放射線標識した。標識細胞をＰＢＳ中で洗浄し、遠心分離し（２００ｘｇ）、一部を３ｘ１０７個の細胞／ｍｌの濃度で、ＰＢＳ（負の対照）または試験化合物を含有するＰＢＳ（２５ｍｇ／ｍｌ）のいずれかに再懸濁し、氷上で保存した。負の対照および処置群の Ｂａｌｂ／Ｃ マウスに０．２ｍｌの容量の標識細胞調製物を側尾部静脈（ｌａｔｅｒａｌ ｔａｉｌ ｖｅｉｎ）注射により受容させた。負の対照のマウスには６ｘ１０６個の５１クロム−標識リンパ球と共に０．２％のＰＢＳを受容させ、処置群のマウスには、６百万個の５１クロム−標識リンパ球と共に５ｍｇの試験化合物の脈管用量を受容させた。手順の間ずっと、トリパンブルー排除アッセイにより細胞生存率を確認した。全群のマウスの体重を合わせた（±０．５ｇ）。
【０１５４】
レシピエントのマウスの脾臓を注射の１．５時間後に除去し、細胞に伴う放射活性（ＣＰＭ）をガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ａｕｔｏ−Ｇａｍｍａ ５６５０． ＩＬ， ＵＳＡ）により測定した。結果（脾臓へのリンパ球遊走の阻害）を、負の対照と比較した、処置動物からの脾臓のＣＰＭにおける減少として表した。
【０１５５】
試験した化合物および脾臓へのリンパ球遊走の阻害の程度を、表２に示す。
【表２】
2004501985.tif 000004
【０１５６】
実施例２１　インビボでのリンパ外組織へのＴリンパ球遊走の阻害
本実施例では、１週間前に塩化ピクリル（エタノール中１％、腹部除毛領域の１ｃｍ２に適用）で過敏化させた特定病原体不含の６−８週齢雌 Ｂａｌｂ／Ｃ マウス［１９−２１ｇ］由来の脾臓を使用して、ステンレススチール篩を通して押すことにより、混合リンパ球培養培地（ＤＭＥＭプラスグルコース、葉酸、Ｌ−アスパラギン、重炭酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、２−メルカプトエタノール、ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、および２％ウシ胎児血清）中で、通常の方法で、単一細胞懸濁液を調製した。細胞収集に続き、塩化アンモニウム、ＥＤＴＡおよび炭酸水素ナトリウムの溶液（ｐＨ７．３）で、４℃で２分間処理することにより、赤血球細胞を溶解し、調製物を染色した（Ｆａｌｃｏｎ ２３５０ 細胞染色器）。細胞調製の全段階は、氷上で実施した。
【０１５７】
調製物からＢリンパ球を無くすために、精製したラット抗マウスＣＤ４５／Ｂ２２０抗体（ＲＡ３−６Ｂ２ ｃｌｏｎｅ； ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ， ＵＳＡ）に、１ｍｌにつき細胞４ｘ１０７個の濃度で細胞を懸濁し、氷上で２０分間インキュベートした。次いで等量の混合リンパ球培養培地（上記）を添加し、細胞を遠心分離し（２００ｘｇ）、磁気ビーズに連結した ＢｉｏＭａｇ ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＆Ｌ）（Ｂｉｏ Ｍａｇ； Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ， ＵＳＡ）中で、１ｍｌにつき細胞１ｘ１０７個の濃度で再懸濁した。氷上２０分間のインキュベーションに続き、５分ごとに揺すりながら、磁気分離（Ｄｙｎａｌ ＭＰＣ−６， Ｄｙｎａｌ， ＵＳＡ）を使用してヤギ抗ラット−ＩｇＧ／抗体複合体を除去した。磁気分離手順を４回繰返し、約８５−９０％のＴリンパ球および１％以下のＢリンパ球（ＦＡＣＳ分析で測定した）を含有する細胞集団を得た。
【０１５８】
次いで細胞をハンクス培地中で洗浄し、５ｍｌのハンクスに再懸濁し、３０分間、３７℃で、クロム酸ナトリウム溶液（５１Ｃｒ、３４ＭＢｑ／ｍｌ、Ａｍｅｒｓｈａｍ， ＵＫ）で放射線標識した。標識細胞をＰＢＳ中で洗浄し、遠心分離し（２００ｘｇ）、３ｘ１０７個の細胞／ｍｌの濃度で、ＰＢＳに再懸濁した。レシピエントマウス（特定病原体不含の６−８週齢雌 Ｂａｌｂ／Ｃ マウス［１９−２１ｇ］）を各々４匹のマウスからなる２群に分け、体重を合わせた（±０．５ｇ）。静脈内に０．２％のＰＢＳに懸濁した６ｘ１０６個のクロム−標識Ｔリンパ球懸濁液を受容させる直前に、静脈注射により、１つの群に０．２ｍｌの正常塩水に溶解した試験化合物を注射し、１つの群に０．２ｍｌの正常塩水を注射した。手順の間ずっと、トリパンブルー排除アッセイにより注射した細胞の生存率を確認した。注射された細胞がそこへ遊走するのを誘導するために、この手順の１時間前に、各群のマウスの右耳を塩化ピクリル（０．１％、エタノール中）で処理した。実験期間に依存して、試験化合物を注射すればする程、正の対照および塩水は遅い時点で与えることができると理解される。
【０１５９】
標識Ｔ細胞の移動から９ないし１０時間後、致死的二酸化炭素吸入によりレシピエントのマウスを安楽死させ、それらの右耳と左耳を取り、耳の各々の細胞に伴う放射能（ＣＰＭ）を、ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ａｕｔｏ−Ｇａｍｍａ ５６５０． ＩＬ， ＵＳＡ）を使用して測定した。結果（右耳へのリンパ球遊走の阻害）を、負の対照の右耳と比較した、処置動物からの右耳のＣＰＭにおける減少として表した。細胞の非特異的遊走の対照をとるために、各群の平均の決定に先立ち、左耳からの放射能値を同じ動物の右耳で得られたカウントから差し引いた。
【０１６０】
典型的な実験からの結果を表３に示す。
【表３】
2004501985.tif 000005
【０１６１】
実施例２２　インビボでのリンパ外組織へのＴリンパ球遊走の臨床効果の妨害
実施例１９で証明されたような、リンパ外組織へのＴリンパ球遊走の阻害は、そのような細胞遊走を伴う臨床的徴候を改変し得る。そのような細胞遊走を伴う臨床的サインには、組織の膨張が含まれる。従って、炎症細胞がリンパ外組織に遊走すると、これらの組織は膨張および硬化をこうむる。そのような変化は、大体において、冒された組織における新しく到着した細胞の急速な蓄積に、直接的に起因する。
【０１６２】
本実施例では、本発明の化合物の抗炎症効果を測定するためのモデルとして、化学ハプテン２，４−ジニトロフルオロベンゼン（ＤＮＦＢ）（Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ， ＵＳＡ）との皮膚接触に対するＩＶ型過敏または遅延型過敏（ＤＴＨ）反応のマウスモデルを使用した。特定病原体不含の８−１２週齢雌 Ｂａｌｂ／Ｃ マウス、体重１９−２１ｇを、ＤＮＦＢ溶液（アセトン：オリーブ油（４：１、ｖ／ｖ）中０．５％、３０マイクロリットル）を腹部除毛領域の２ｃｍ２に適用することにより、Ｋｌｉｍｕｋ らによって記載されたもの（Ｋｌｉｍｕｋ ｅｔ ａｌ．， １９９９）と類似の方法で過敏化させた。７日後、動物をジエチルエーテルで麻酔し、８マイクロリットルのＤＮＦＢ（アセトン：オリーブ油（４：１、ｖ／ｖ）中０．３５％）を、右耳介の背側および腹側表面に適用した。意識を回復するのに先立ち、正常塩水中にリン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ナトリウム塩を含有する Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプ （Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ， ＵＳＡ） をマウスに腹膜内移植した。送達される用量は、５０ｍｇ／ｋｇ／日であった。この群の対照動物には、同一の小型浸透性ポンプ内で送達される塩水を受容させた。
【０１６３】
２番目のマウス実験群に、腹膜内に移植された１週間の送達の Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプを介して、リン酸モノ−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］エステルジナトリウム塩を受容させた。この化合物は、４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この群の対照動物には、同一の小型浸透性ポンプ内で送達される塩水を受容させた。３番目の実験では、別のマウス群に、腹膜内に置かれた１週間の送達の Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプを介して、（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸ジナトリウム塩を受容させた。この化合物は、４５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この実験の対照群には、正常塩水を含有する同一の小型浸透性ポンプを受容させた。
【０１６４】
４番目の実験では、マウス群に、皮下に置かれた１週間の送達の Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプを介して、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸モノナトリウム塩を受容させた。この化合物は、６２ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この実験の対照群には、正常塩水を含有する同一の小型浸透性ポンプを受容させた。５番目の実験では、マウス群に、皮下に置かれた１週間の送達の Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプを介して、ヘキサン酸３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステルナトリウム塩を受容させた。この化合物は、４０ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この実験の対照群には、正常塩水を含有する同一の小型浸透性ポンプを受容させた。
【０１６５】
抗原投与の２４時間後、マウスをジエチルエーテルで軽く麻酔し、ダイアルゲージマイクロメーター（Ｉｎｔｅｒａｐｉｄ， Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して、左右の耳介の厚さを（ミリメーターで）測定した。耳の外側３分の２のみを測定するように注意を払った。ＤＴＨ反応により開始された耳の厚さの増加を、右耳（抗原投与）の測定から左耳（非処置）の測定を差し引いて判定した。
【０１６６】
この実験から得られた結果を、表４に概説した。表４では、左および右と標識された列の値は、各々、対照および抗原投与の耳の厚さのミリメートルでの測定である。
表４
リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステルナトリウム塩処置のＤＴＨに対する効果
【表４】
2004501985.tif 000006
【０１６７】
リン酸モノ−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］エステルジナトリウム塩処置のＤＴＨに対する効果
【表５】
2004501985.tif 000007
【０１６８】
（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸ジナトリウム塩処置のＤＴＨに対する効果
【表６】
2004501985.tif 000008
【０１６９】
３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸モノナトリウム塩処置のＤＴＨに対する効果
【表７】
2004501985.tif 000009
【０１７０】
ヘキサン酸３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピルエステルナトリウム塩処置のＤＴＨに対する効果
【表８】
2004501985.tif 000010
【０１７１】
実施例２３　中枢神経系の細胞介在性疾患の阻害
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、多発性硬化症（ＭＳ）への類似性を有する中枢神経系の炎症疾患である。それ故に、ＥＡＥはこの疾患の動物モデルとしてしばしば使用され、これに対する多数の参照文献が医学および科学文献に見出され、なかんずく、Ｐａｔｅｒｓｏｎ， １９７６； Ａｌｖｏｒｄ １９８４ ａｎｄ Ｓｔｅｉｎｍａｎ， １９８３；出典明示により本明細書の一部とする、が含まれる。ＥＡＥの病理は、中枢神経系ニューロンの脱髄を伴う、脳と脊髄へのリンパ球と単球の流入に特徴付けられ（Ｒａｉｎｅ ｅｔ ａｌ．， １９８０ ａｎｄ Ｐａｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８１； 出典明示により本明細書の一部とする）、部分的または完全な麻痺、重篤な場合には死に至る。インビボでＣＤ４＋Ｔリンパ球を除去するとＥＡＥの誘導を阻害し（Ｗａｌｄｏｒ ｅｔ ａｌ， １９８５； 出典明示により本明細書の一部とする）、そしてＣＤ４＋Ｔ細胞株またはコロニーのみが疾患を受動的に移せるので（Ｈｏｌｄａ ａｎｄ Ｓｗａｎｂｏｒｇ， １９８２ ａｎｄ Ｂｅｎ−Ｎｕｎ ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ， １９８２； 出典明示により本明細書の一部とする）、神経の抗原に特異的なＣＤ４＋Ｔリンパ球は反応の開始因子であることが知られている。従って、疾患はそのＴリンパ球介在性と組織特異的性質により特徴付けられる。本発明の化合物はＥＡＥアッセイで活性を示し、そして従って、本発明の１種またはそれ以上の化合物は、多発性硬化症または他の中枢神経系の細胞介在性疾患の処置に有用であり得る。
【０１７２】
特定の組織へのＴリンパ球遊走に起因する疾患に対する本発明の物質のインビボでの効果を研究するために、受動的にＥＡＥを移された Ｌｅｗｉｓ ラットモデルで実験を実施した。ここで、実施例８に記載のように、Ｂｅｎ−Ｎｕｎ ｅｔ ａｌ． （１９８１）の方法に本質的に従って、フロイントの完全アジュバント中のＭＢＰで免疫した Ｌｅｗｉｓ ラットの流出リンパ節から、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）特異的Ｔリンパ球細胞株を生成させた。従って、この方法では、ドナーＴリンパ球は、体重１５０ないし２００ｇの雌１０ないし１２週齢 Ｌｅｗｉｓ ラットから生成された。これらのラットに、フロイントの完全アジュバント中のモルモットのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ； Ｄｅｉｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９７２； 出典明示により本明細書の一部とする、の方法に従って調製した） の乳液（０．０５ｍｌ）を各後足の肉球（ｆｏｏｔｐａｄ）で皮内注射した。アジュバント乳液は、等量の軽鉱物油（ｌｉｇｈｔ ｍｉｎｅｒａｌ ｏｉｌ）（Ｓｉｇｍａ）と、モルモットのミエリン塩基性タンパク質（０．５ｍｇ／ｍｌ）および Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（４ｍｇ／ｍｌ； Ｄｉｆｃｏ）を含有する正常塩水との混合物を乳化して調製した。従って、ラット当りの総用量は、５０マイクログラムのＭＢＰおよび４００マイクログラムの Ｍ． ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ であった。
【０１７３】
注射に続く約１１日間、ラットを安楽死させ、鈍的（ｂｌｕｎｔ）切開により流出リンパ節（膝窩部および鼠蹊部）を無菌的に取出し、混合リンパ球培養培地に置いた。この培地は、グルコース、蟻酸、Ｌ−アスパラギン、重炭酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、２−メルカプトエタノール（５ｘ１０−５Ｍ）、ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、および２％ウシ胎児血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ； ＧＩＢＣＯ， Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ， ＮＹ）から、通常の方法で調製した。ステンレススチール篩を通して節を穏かに押すことにより、通常の方法でリンパ節から単一細胞懸濁液を調製した。細胞を２回培養培地で洗浄し、この手順に続いて、塩化アンモニウム、ＥＤＴＡおよび炭酸水素ナトリウムの溶液（ｐＨ７．３）で処理することにより、いかなる赤血球細胞も通常の方法で溶解させ、調製物を染色した（Ｆａｌｃｏｎ ２３５０ 細胞染色器）。細胞を再びリンパ球培養培地中で洗浄した。細胞調製の全段階は、氷上で実施した。
【０１７４】
これらの細胞は、７２時間３７℃で、７．５％の二酸化炭素を含有する加湿した空気中で、１ミリリットルにつき細胞５百万個の濃度で、ＭＢＰ（０．０６ｍｇ／ｍｌ）の存在下で無菌的に培養した。細胞を収集し、Ｆｉｃｏｌｌ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ） 勾配上で遠心分離することにより、Ｂｅｎ Ｎｕｎ ｅｔ ａｌ． （１９８１）に記載のものと同一の方法でリンパ芽球を単離した。≧９０％のリンパ芽球を含有する画分を、成長因子を与えるためのコンカナバリンＡで刺激したリンパ球の上清１５％、１０％ウシ胎児血清、非必須アミノ酸 （Ｂｉｏ−Ｌａｂ， Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ， Ｉｓｒａｅｌ）； ピルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエタノールおよび抗生物質を添加し、抗原添加のないイーグル培地中で培養し増殖させた。細胞を細胞２０万個／ｍｌの濃度で１００ｍｍのぺトリ皿に播種し、３または４日ごとに再播種した。Ｌｅｗｉｓ レシピエントに移すのに先立ち、細胞をＭＢＰ（０．０１ｍｇ／ｍｌ）および放射した同系の胸腺細胞の存在下で４日間再刺激した。
【０１７５】
これらの細胞は、ナイーブ Ｌｅｗｉｓ ラットに注射すると、５００，０００個ほどの少ない細胞でも疾患を誘導する能力を有したので、非常に脳炎誘発性であった。従って、典型的な実験では、約９週齢、体重１１０±１５グラムの、５匹の雌 Ｌｅｗｉｓ ラットの群をジエチルエーテルで麻酔し、４５ｍｇ／ｋｇ／ラット／日の速度で薬物を送達する濃度で正常塩水に溶解したリン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルモノナトリウム塩を含有する小型浸透性ポンプ（Ａｌｚｅｔ ２００２， Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ， ＵＳＡ）を移植した。２番目の５匹の動物群、対照群には、エーテル麻酔下で、正常塩水を含有する Ａｌｚｅｔ ２００２ ポンプを移植した。麻酔から回復する直前に、０．２ｍｌの正常塩水容量で側尾部静脈注射により、各動物に脳炎誘発性Ｔ細胞株の５００，０００個の細胞を受容させた。
【０１７６】
この実験の結果を表５に概説する。このように、対照群の全動物（５／５）が臨床的疾患を発現したが、一方薬物処置した動物の３／５のみが疾患を発現し、これらでは重篤度が対照群で見られるよりも低く、疾患の発病が遅れた。このように、対照群の全ラットは疾患の臨床症状を４日目に発現し、この時には薬物処置ラットのいずれにも症状がない。疾患の重篤度を、以下のように０ないし５の範囲の任意重篤度スケールでスコア付けした：０、兆候なし；１、弛緩した尾の末端部半分；２、尾全体が弛緩；３、失調症、立直り反射（ｒｉｇｈｔｉｎｇ ｒｅｆｌｅｘ）の困難；４、後足の弱さ；５、後足の麻痺。塩水処置対照群の全動物が２日間続けて最大の臨床スコアを有したが、一方症状を発現した３匹の薬物処置動物のいずれも、最大の臨床スコアを１日以上有さなかった。各群のラットのＥＡＥの重篤度を、疾患指数（ＤＩ）として計算した。それは、群の全ラットに関する日々の臨床スコアの平均を、疾患を発現した動物に関する平均発病日で割り、１００を掛けたものである。この計算により、発病日並びに臨床的重篤度および疾患の長さを組込んで、疾患のより完全な評価が可能になる。この計算を使用すると、対照群は疾患指数１６０を有したが、一方処置群は疾患指数４０を有した。対照群についての平均最大臨床スコアは２．０であったが、一方処置群についてのそれは１．０であった。
【０１７７】
表５　Ｌｅｗｉｓ ラットにおける、受動的に移されたＥＡＥに対するリン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルによる処置の効果
【表９】
2004501985.tif 000011
【０１７８】
同一の実験において、ラットをリンパ球移行後６日目に犠牲にし、組織学的評価のために脊髄を取った。この方法では、ラットを深く麻酔し（ネンブタール）、３０ｍｌの塩水、続いて６０ｍｌの１０％の中性緩衝ホルマリンで潅流した。脊髄を取出し、１０％ホルマリン中で７日間固定し、切片作成のために包埋した。腰椎−仙椎の脊髄を横に切り、縦に切片を作成するために、半分を隣合わせに包埋した。６枚の５ミクロンの切片を、脊髄を通して、各レベルの間が５０ミクロンである様々なレベルで切った。切片をヘマトキシリンとエオシンで染色し、病変数を定量するために、様々なレベルで最小限３０枚の切片を計数した。
【０１７９】
対照群は、平均で約１５病変／切片の、非常に重い病変負荷を示した。一方薬物処置群からの動物は平均３．５個の病変を有し、最も冒された動物において１切片につきわずか８病変にすぎなかった。
【０１８０】
実施例２４　中枢神経系の細胞介在性疾患の阻害
実施齢２０で概説したものと類似のタイプの実験において、特定の組織へのＴリンパ球遊走に起因する疾患に対する本発明の物質のインビボでの効果を研究するために、受動的にＥＡＥを移された Ｌｅｗｉｓ ラットモデルでさらなる実験を実施した。ここで、フロイントの完全アジュバント中のモルモットＭＢＰで免疫した Ｌｅｗｉｓ ラットの脾臓から、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）特異的Ｔリンパ球を生成させた。従って、この方法では、ドナーＴリンパ球は、体重２００ないし２５０ｇの雄１２ないし２０週齢 Ｌｅｗｉｓ ラットから生成された。これらのラットに、フロイントの完全アジュバント中のモルモットのミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ； Ｄｅｉｂｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９７２； 出典明示により本明細書の一部とする、の方法に従って調製した） の乳液（０．１ｍｌ）を各後足の肉球で皮内注射した。アジュバント乳液は、８５％軽鉱物油 （０．８４１７ｇ／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ））プラス、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ（４ｍｇ／ｍｌ； Ｄｉｆｃｏ）を含有する１５％のモノオレイン酸マンニトール（ｍａｎｎｉｄｅ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）（Ｓｉｇｍａ）、およびモルモットのミエリン塩基性タンパク質を含有する正常塩水（０．２５ｍｇ／ｍｌ）の等量の混合物を乳化して調製した。従って、ラット当りの総用量は、２５マイクログラムのＭＢＰおよび４００マイクログラムの Ｍ． ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ であった。
【０１８１】
注射に続く１０日間、ラットを安楽死させ、鈍的切開により脾臓を無菌的に取出し、混合リンパ球培養培地に置いた。この培地は、グルコース（４ｇ／Ｌ）、蟻酸（６ｍｇ／Ｌ）、Ｌ−アスパラギン（３６ｍｇ／Ｌ）、重炭酸ナトリウム（２ｇ／Ｌ）、Ｌ−アルギニン（１１６ｍｇ／Ｌ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ）、２−メルカプトエタノール（５ｘ１０−５Ｍ）、ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、および１０％ウシ胎児血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ； ＧＩＢＣＯ， Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ， ＮＹ）から、通常の方法で調製した。ステンレススチール篩を通してそれを穏かに押すことにより、通常の方法で脾臓から単一細胞懸濁液を調製した。細胞を２回洗浄し、７２時間、３７℃で、５％の二酸化炭素を含有する加湿した空気中で、１ミリリットルにつき細胞２百万個の濃度で、コンカナバリンＡ（２マイクログラム／ｍＬ）の存在下で無菌的に培養した。細胞を収集し、ハンクス均衡塩（Ｈａｎｋｓ ｂａｌａｎｃｅｄ ｓａｌｔ）溶液で２回洗浄した。細胞をハンクス均衡塩で再懸濁し、各レシピエント動物 （１０−１２週齢の雌 Ｌｅｗｉｓ ラット； １６０−１８０ｇ）に、０．５ｍｌの容量の側尾部静脈注射により４０−４２．５百万個のリンパ芽球を受容させた。
【０１８２】
典型的な実験では、４−５匹のレシピエントラットをジエチルエーテルで麻酔し、試験化合物を含有する小型浸透性ポンプ（Ａｌｚｅｔ ２００１， Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ， ＵＳＡ）を移植した。２番目の４匹の動物群、対照群には、エーテル麻酔下で、正常塩水を含有する Ａｌｚｅｔ ２００１ ポンプを移植した。小型浸透性ポンプは、細胞移行の３日後に移植した。疾患の重篤度（臨床スコア）を、以下のように０ないし５の範囲の任意の重篤度スケールでスコア付けした：０、兆候なし；１、弛緩した尾の末端部半分；２、尾全体が弛緩；３、失調症、立直り反射が困難；４、後足の弱さ；５、後足の麻痺。平均最大臨床スコアを計算し、実施齢２０に記載したように、各群について疾患指数（ＤＩ）を計算した。これらの実験の結果を表６、７および８に概説する。
【０１８３】
表６　Ｌｅｗｉｓ ラットにおける、受動的に移されたＥＡＥに対する、リン酸モノ−［６−（３−ヘキシルオキシ−プロピル）−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル］エステル、ナトリウム塩、用量５０ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、による処置の効果
【表１０】
2004501985.tif 000012
【０１８４】
表７　Ｌｅｗｉｓ ラットにおける、受動的に移されたＥＡＥに対する、３−フェニル−２−［２−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−アセチルアミノ］−プロピオン酸モノナトリウム塩、用量６２ｍｇ／ｋｇ／日、皮下、による処置の効果
【表１１】
2004501985.tif 000013
【０１８５】
表８　Ｌｅｗｉｓ ラットにおける、受動的に移されたＥＡＥに対する、リン酸モノ−［３−（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−プロピル］エステルジナトリウム塩、用量４０ｍｇ／ｋｇ／日、腹膜内、による処置の効果
【表１２】
2004501985.tif 000014
【０１８６】
実施例２５　滑液組織の細胞介在性疾患、受動的に移されたアジュバント誘導炎症の阻害
受動的に移されたアジュバント炎症は、活発な炎症を有する動物に由来するＴ細胞がナイーブ同系レシピエントに移されるＴリンパ球介在性疾患である。続いて、ナイーブレシピエントは、続く罹患関節の膨張を伴う滑膜へのリンパ球遊走を含む、疾患の臨床兆候を発現する。この疾患の免疫学的性質およびＴリンパ球への依存性は、長年にわたって医学および科学文献で十分に確立されており、これらを叙述している次の刊行物は、出典明示により本明細書の一部とする：Ｋａｙａｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．， １９７８； Ｗａｋｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｅｎｎｅｒｓｔｅｎ， １９６３； Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｗｏｏｄ， １９６４ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ， １９６９。
【０１８７】
この実施例における実験は、特定の組織（滑膜）へのＴリンパ球遊走によって直接的に引き起こされる疾患に対する、本発明の物質の効果を研究するために設定した。８ないし１０週齢の雄ＤＡラットを、１００マイクロリットルの完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を尾の基部の皮内に３回注射することにより免疫した。ＣＦＡは、乳鉢と乳棒を使用して細かい粉末に挽いた８ｍｇ／ｍｌの Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ （Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， ＵＳＡ）を８５％の軽鉱物油 （Ｓｉｇｍａ， ＵＳＡ） および１５％のモノオレイン酸マンニトール（Ｓｉｇｍａ） 中で混合し、この懸濁液を、塩水１中で１の割合で乳化することにより調製した。従って、最終の乳液は、４ｍｇ／ｍｌ の Ｍ． ｂｕｔｙｒｉｃｕｍ を含有した。
【０１８８】
免疫から１０日後、ラットを安楽死させ、脾臓を無菌的に取出した。混合リンパ球培養培地（ＭＬＣ）（ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）プラスグルコース、蟻酸、Ｌ−アスパラギン、ピルビン酸ナトリウム、ＨＥＰＥＳ、２−メルカプトエタノール、ペニシリン、ストレプトマイシン、ネオマイシン、および１０％ウシ胎児血清）中で、ステンレススチール篩を通して脾臓を押すことにより、通常の方法で単一細胞懸濁液を調製した。１ミリリットルにつき細胞２百万個のリンパ球濃度になるように、２マイクログラム／ｍｌのコンカナバリンＡを含むＭＬＣ培地中の培養に細胞を播種した。これらの細胞を、３７℃で、５％の二酸化炭素を含有する空気中で、７２時間無菌的に培養した。
【０１８９】
６ないし８週齢の４または５匹のＤＡラットの群を、ジエチルエーテルで麻酔し、わき腹の皮下に Ａｌｚｅｔ ２００２ （２週間送達） または ２００１ （１週間送達） の小型浸透性ポンプ （Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．， Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ， ＵＳＡ） を移植した。１つの処置群に、１週間送達の Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプ中のリン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルを受容させた。薬物は、２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この実験の対照群には、正常塩水を含有する同一の小型浸透性ポンプを受容させた。２番目の実験では、別のＤＡラット群に、２週間送達の Ａｌｚｅｔ ２００２ 小型浸透性ポンプ中のエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルを受容させた。この薬物は、３７ｍｇ／ｋｇ／日の用量で送達された。この群の対照動物には、同一の小型浸透性ポンプ中で送達される塩水を受容させた。各々の場合のポンプは、各動物のわき腹で皮下に移植した。麻酔から回復する期間中に、回収し、ハンクスの均衡塩溶液で２回洗浄した上記のリンパ球を、正常塩水に再懸濁し、側尾部静脈に０．５ｍｌの容量で７千５百万−９千万個の細胞を注射することにより、レシピエントに移した。
【０１９０】
５ないし８日後、後足の末端関節の特徴的な肥厚化および皮膚の充血が、塩水対照動物において臨床的に明らかになった。両くるぶしの関節の内外（ｍｅｄｉｏｌａｔｅｒａｌ）幅を日々測定したものをとって、疾患の重篤度を評価し、各群において等級付けした。データをミリメートルで表した内外くるぶし幅の（細胞注射前の幅と比較した）変化の平均（±平均の標準誤差）として表した。
【０１９１】
図１は、１週間送達 Ａｌｚｅｔ ２００１ 小型浸透性ポンプにより２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量でリン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルが送達された典型的な実験から得られた結果を示す。１週間の処置期間の終わりに、処置と対照動物の疾患状態に、統計的に非常に重大な差異があった。対照動物は罹患関節に重篤な膨張があったが、一方処置動物は処置期間の終わりにほとんど膨張を示さなかった。
【０１９２】
図２は、２週間送達 Ａｌｚｅｔ ２００２ 小型浸透性ポンプにより３７ｍｇ／ｋｇ／日の用量でエチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルが送達された典型的な実験から得られた結果を示す。２週間の処置期間の終わりに、処置と対照動物の疾患状態に、統計的に非常に重大な差異があった。対照動物は罹患関節に重篤な膨張があったが、一方処置動物は処置期間の終わりにほとんど膨張を示さなかった。
【０１９３】
参照文献
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ １９９８； Ｉｖａｎ Ｍ． Ｒｏｉｔｔ Ｅｄ， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ， Ｂｏｓｔｏｎ．
Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ： ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ １９９９， Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ Ｐ． Ｔｒａｖｅｒｓ， Ｍ． Ｗａｌｐｏｒｔ ａｎｄ Ｊ．Ｄ． Ｃａｐｒａ， Ｅｄｓ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．
Ｔｈｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ １９８２， Ｃ．Ａ． Ｍｉｍｓ Ｅｄ； Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８２
Ｋｌｅｉｎ， Ｊ． ａｎｄ Ｈｏｒｅｊｓｉ， Ｖａｃｌａｖ １９９７． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ， ｐｐ ６５６−６５７． Ｉｎ： Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）， Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ．
Ｂｏｓ， Ｊ．Ｄ． ａｎｄ Ｄｅ Ｒｉｅ Ｍ．Ａ．， （１９９９）． Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ： ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｆａｃｔｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｕｌａｔｉｏｎｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ， １９９９， ｖｏｌ． ２０： ４０−４６．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ＯｒｇａｎｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ， Ｒ． Ｌａｒｏｃｋ， ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， １９８９．
Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｊ． Ｍａｒｃｈ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｗｉｌｅｙ ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ．
【０１９４】
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｔ．Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ． Ｗｕｔｚ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎ， （１９９１）．
Ｐａｔｅｒｓｏｎ， Ｐ．Ｙ． （１９７６）． Ｉｎ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ （ｅｄｓ Ｍｉｅｓｃｈｅｒ， Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｅｂｅｒｈａｒｄ， Ｈ．Ｊ．） １７９−２１３ （Ｇｒｕｎｅ ＆ Ｓｔｒａｔｔｏｎ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９７６）．
Ａｌｖｏｒｄ， Ｅ．Ｃ． Ｊｒ． （１９８４）． Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ： Ａ Ｕｓｅｆｕｌ Ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ （ｅｄ Ａｌｖｏｒｄ， Ｅ．Ｃ．）， １−５１１ （Ｌｉｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８４）．
Ｓｔｅｉｎｍａｎ， Ｌ． （１９９３）． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ． Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ， ｖｏｌ ２６９： １０６−１１４．
Ｒａｉｎｅ， Ｃ．Ｓ．， Ｂａｒｎｅｔｔ， Ｌ．Ｂ．， Ｂｒｏｗｎ， Ａ． ａｎｄ ＭｃＦａｒｌｉｎ， Ｄ．Ｅ． （１９８０）． Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ ｉｎｂｒｅｄ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｍｉｃｅ． Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ．， ｖｏｌ ４３： １５０−１５７．
Ｐａｔｅｒｓｏｎ， Ｐ．Ｙ．， Ｄａｙ， Ｅ．Ｄ． ａｎｄ Ｗｈｉｔａｃｒｅ， Ｃ．Ｃ． （１９８１）． Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ： Ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｒｅｖ．， ｖｏｌ ５５： ８９−１２０．
【０１９５】
Ｗａｌｄｏｒ， Ｍ．Ｋ．， Ｓｒｉｒａｍ， Ｓ．， Ｈａｒｄｙ， Ｒ．， Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ， Ｌ．Ａ．， Ｈｅｒｚｅｎｂｅｒｇ， Ｌ．Ａ．， Ｌａｎｉｅｒ， Ｌ．， Ｌｉｍ， Ｍ． ａｎｄ Ｓｔｅｉｎｍａｎ， Ｌ． （１９８５）． Ｒｅｖｅｒｓａｌ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｏ ａ Ｔ−ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔ ｍａｒｋｅｒ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， ｖｏｌ ２２７： ４１５−４１７．
Ｈｏｌｄａ， Ｊ．Ａ． ａｎｄ Ｓｗａｎｂｏｒｇ， Ｒ．Ｈ． Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｃｅｌｌｓ． （１９８２）． ＩＩ．Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｗｉｔｈ ａ ｓｕｂｓｅｔ ｏｆ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ １２： ４５３−４５５．
Ｂｅｎ−Ｎｕｎ， Ａ． ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ， Ｉ．Ｒ． （１９８２）． Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ （ＥＡＥ） ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ｔ−ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ：　Ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ １２９： ３０３−３０８．Ｄｅｉｂｌｅｒ， Ｇ．Ｅ．， Ｍａｒｔｅｎｓｏｎ， Ｂ．Ｌ． ａｎｄ Ｋｉｅｓ， Ｍ．Ｗ．， （１９７２）． Ｌａｒｇｅ ｓｃａｌｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｅｌｉｎ ｂａｓｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒｏｍ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ ｓｅｖｅｒａｌ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｖｏｌ ２： １３９−１６５．
【０１９６】
ｖｏｎ Ｉｓｌｅｒ， Ｏ．， Ｇｕｔｍａｎｎ， Ｈ．， Ｍｏｎｔａｖｏｎ， Ｍ．， Ｒｕｅｇｇ， Ｒ．， Ｒｙｓｅｒ， Ｇ． ａｎｄ Ｚｅｌｌｅｒ， Ｐ．， （１９５７）． Ｓｙｎｔｈｅｓｅｎ ｉｎ ｄｅｒ ｃａｒｏｔｉｎｏｉｄ−Ｒｅｉｈｅ． Ａｎｗｅｎｄｕｎｇ ｄｅｒ Ｗｉｔｔｉｇ−ｒｅａｋｔｉｏｎ ｚｕｒ ｓｙｎｔｈｅｓｅ ｖｏｎ ｅｓｔｅｒｎ ｄｅｓ ｂｉｘｉｎｓ ａｎｄ ｃｒｏｃｅｔｉｎｓ． Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ， ｖｏｌ １５： １２４２−１２４９
Ｇｉａｎｎｉｓ， Ａ． ａｎｄ Ｓａｎｄｈｏｆｆ， Ｋ．， （１９８５）．　Ｓｔｅｒｅｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ α−Ｃ−ａｌｌｙｌｇｌｙｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅｓ．　　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，　ｖｏｌ ２６（１２）：　１４７９−１４８２．Ｌｅｖｅｎｅ， Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｔｉｐｓｏｎ， Ｒ．Ｓ．， （１９３１）． Ｔｈｅ ｒｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｎｎｏｓｅ ｐｅｎｔａａｃｅｔａｔｅｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｖｏｌ ９０： ｐ ８９−９８．
Ｈｕｒｄ， Ｃ．Ｄ． ａｎｄ Ｈｏｌｙｓｚ， Ｒ．Ｐ． （１９５０）． Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｏｌｙａｃｙｌｇｌｙｃｏｓｙｌ ｈａｌｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｇｒｉｇｎａｒｄ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ， １９５０， ｖｏｌ ７２： １７３２−１７３８．
Ｆｉｎａｎ， Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｗａｒｒｅｎ Ｃ．Ｄ．， （１９６２）， Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅｓ．　Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ， ２８２３−２８２４．
【０１９７】
Ｐｏｇｇｉ， Ａ．， Ｃｏｓｔａ， Ｐ．， Ｓｏｃｃｈｉ， Ｍ．Ｒ． ａｎｄ Ｍｏｒｅｔｔａ， Ｌ．， （１９９７）． Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣＤ４＋ ＮＫＲＰ１Ａ＋ ｈｕｍａｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｄｉｒｅｃｔ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＮＫＲＰ１Ａ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ ２７： ２３４５−２３５０．
Ｈａｕｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｅ．，　Ｈａｕｚｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｄ．， Ｈｕｌｔｅｎｂｙ， Ｋ． ａｎｄ Ｈｏｌｇｅｒｓｓｏｎ， Ｊ．， （２０００）． Ｐｏｒｃｉｎｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｓｕｐｐｏｒｔｓ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ： ａｎｔｉ−ｐｏｒｃｉｎｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｓｐｅｃｉｅｓ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｖｏｌ ６９（９）： １８３７−１８４９．
Ｂｏｒｔｈｗｉｃｋ， Ｎ．Ｊ．， Ａｋｂａｒ， Ａ．Ｎ．， ＭａｃＣｏｒｍａｃ， Ｌ．Ｐ．， Ｌｏｗｄｅｌｌ， Ｍ．， Ｃｒａｉｇｅｎ， Ｊ．Ｌ．， Ｈａｓｓａｎ， Ｉ．， Ｇｒｕｎｄｙ， Ｊ．Ｅ．， Ｓａｌｍｏｎ， Ｍ． ａｎｄ Ｙｏｎｇ Ｋ．Ｌ．， （１９９７）． Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｒｉｍｅｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ， ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ｌｏｗ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４５ＲＢ， ａｃｒｏｓｓ ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ： ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｖｉｒａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． Ｖｏｌ ９０（２）： ２７２−２８０．
【０１９８】
Ｍｏｈｌｅ， Ｒ．， Ｍｏｏｒｅ， Ｍ．Ａ．， Ｎａｃｈｍａｎ， Ｒ．Ｌ． ａｎｄ Ｒａｆｉｉ， Ｓ．， （１９９７）． Ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ３４＋ ａｎｄ ｍａｔｕｒｅ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ： ａｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｔｕｄｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｈｕｍａｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ． Ｂｌｏｏｄ． Ｖｏｌ ８９（１）： ７２−８０．
Ｌｏｕ， Ｊ．， Ｇａｓｃｈｅ， Ｙ．， Ｚｈｅｎｇ， Ｌ．， Ｇｉｒｏｕｄ， Ｃ．， Ｍｏｒｅｌ， Ｐ．， Ｃｌｅｍｅｎｔｓ， Ｊ．， Ｙｔｈｉｅｒ， Ａ． ａｎｄ Ｇｒａｕ， Ｇ．Ｅ．， （１９９９）． Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｂｅｔａ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｈｕｍａｎ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ． Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｖｏｌ ７９（８）： １０１５−１０２５．
Ｊａｆｆｅ， Ｅ．Ａ．， Ｎａｃｈｍａｎ， Ｒ．Ｌ．， Ｂｅｃｋｅｒ， Ｃ．Ｇ． ａｎｄ Ｍｉｎｉｃｋ， Ｃ．Ｒ．， （１９７３）． Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎｓ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｃｒｉｔｅｒｉａ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ， ｖｏｌ ５２（１１）： ２７４５−２７５６．
Ｒｉｓａｕ， Ｗ．， Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ， Ｂ．， ａｎｄ Ｗｅｋｅｒｌｅ， Ｈ．， （１９９０）． Ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ： Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ （ａｕｔｏ−）ａｎｔｉｇｅｎｓ ｂｙ ｒａｔ ｂｒａｉｎ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ １１０： ｐ １７５７−１７６６
【０１９９】
Ｂｅｎ−Ｎｕｎ， Ａ．， Ｗｅｋｅｒｌｅ， Ｈ． ａｎｄ Ｃｏｈｅｎ， Ｉ．Ｒ．， （１９８１）． Ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎａｂｌｅ ａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｌｉｎｅｓ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． １９８１， １１（３）： １９５−１９９．
Ｋａｙａｓｈｉｍａ， Ｋ．， Ｋｏｇａ， Ｔ． ａｎｄ Ｏｎｏｕｅ， Ｋ．， １９７８． Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＩＩ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｕｂｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ １２０： １１２７−１１３１．
Ｗａｋｓｍａｎ， Ｂ．Ｈ． ａｎｄ Ｗｅｎｎｅｒｓｔｅｎ， Ｃ．， １９６３． Ｐａｓｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｌｉｖｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ ｄｏｎｏｒｓ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ， ｖｏｌ ２３： １２９−１３９．
Ｐｅａｒｓｏｎ， Ｃ．Ｍ． ａｎｄ Ｗｏｏｄ， Ｆ．Ｄ．， １９６４． Ｐａｓｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ｂｙ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｏｒ ｓｐｌｅｅｎ ｃｅｌｌｓ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， ｖｏｌ １２０： ５４７−５６０．
【０２００】
Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ， Ｄ．Ｊ．， Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ， Ｍ．Ｗ． ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏｎ， Ｃ．Ｍ．， １９６９． Ｐａｓｓｉｖｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ａｄｊｕｖａｎｔ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｄｕｃｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ． Ｎａｔｕｒｅ， ｖｏｌ ２２４： １３２２．
Ｍａｌｅｔ， Ｃ．， Ｖｉｌａｄｏｔ， Ｊ．Ｌ， Ｏｃｈｏａ， Ａ．， Ｇａｌｌｅｇｏ， Ｂ．， Ｂｒｏｓａ， Ｃ． ａｎｄ Ｐｌａｎａｓ， Ａ．， １９９５． Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ４−ｍｅｔｈｙｌｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙｌ−ｂ−Ｄ−ｇｌｕｃａｎ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｒｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｏｆ （１−３）， （１−４）−ｂ−Ｄ−ｇｌｕｃａｎ ４−ｇｌｕｃａｎｏｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ． Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， ２７４： ２８５−３０１．
Ｇｕｏ， Ｚ．， Ｚｈａｎｇ， Ｇ． ａｎｄ Ｈｕｉ， Ｙ．， １９９７． Ａ ｆａｃｉｌｅ ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ １，６−Ｏ−ｄｉａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌ−ｇｙｌｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ， Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｃａｔｉｏｎｓ， ｖｏｌ ２７， １９０７−１９１７．
Ｗｏｎｇ， Ｃ．Ｈ．， Ｈｕｎｇ， Ｓ．Ｃ． ａｎｄ Ｌｉｎ， Ｃ．Ｃ．， １９９７． Ｏｎｅ−ｐｏｔ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ １−ａｌｌｙｌ ａｎｄ １−ａｌｌｅｎｙｌ−６−Ｏ−ａｃｅｔｙｌ−２，３，４−ｔｒｉ−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−α−Ｄ−ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｍｅｔｈｙｌ ｔｅｔｒａ−Ｏ−ｂｅｎｚｙｌ−α−Ｄ−ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ｖｏｌ ３８， ５４１９−５４２２．Ｋｈａｎ， Ｒ．， Ｋｏｎｏｗｉｃｚ， Ｐ．Ａ．， Ｇａｒｄｏｓｓｉ． Ｌ．， Ｍａｔｕｌｏｖａ， Ｍ． ａｎｄ Ｇｅｎｎａｒｏ， Ｓ．， １９９６． Ｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｕｌｌｙ ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｍｏｎｏ− ａｎｄ ｄｉ−ｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｈｙｄｒａｚｉｎｅ ｈｙｄｒａｔｅ， Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ｖｏｌ ４９， ２９３−２９８．
【０２０１】
Ｍａｔａ， Ｆ．Ｚ．， Ｍａｒｔｉｎｅｚ， Ｍ．Ｂ． ａｎｄ Ｐｅｒｅｚ， Ｊ．Ａ．Ｇ．， １９９２． Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｌｄｒｕｍ’ｓ ａｃｉｄ ｗｉｔｈ Ｄ−ｍａｎｎｏｓｅ ａｎｄ Ｌ−ａｒａｂｉｎｏｓｅ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｖｏｌ ２２５， １５９−１６１．
Ｋｌｉｍｕｋ， Ｓ．Ｋ．， Ｓｅｍｐｌｅ， Ｓ．Ｃ．， Ｓｃｈｅｒｒｅｒ， Ｐ． ａｎｄ Ｈｏｐｅ， Ｍ．Ｊ．， １９９９． ｃｏｎｔａｃｔ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ： ａ ｓｉｍｐｌｅ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅ−ｓｉｔｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｂｙ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ， ｖｏｌ １４１７， １９１−２０１．
Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ， Ｆ．， Ｃａｎａｃ， Ｙ．， ａｎｄ Ｌｕｂｉｎｅａｕ， Ａ．， ２０００． Ａ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ， ｏｎｅ−ｓｔｅｐ， ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ β−Ｃ−ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃ ｋｅｔｏｎｅｓ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｍｅｄｉａ． Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ， ２０４９−２０５０．
【図面の簡単な説明】
【図１】リン酸モノ−（６−プロピル−３，４，５−トリヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イルメチル）エステルが送達された典型的な実験から得られた結果を示す。
【図２】エチル（３，４，５−トリヒドロキシ−６−ホスフォノオキシメチル−テトラヒドロ−ピラン−２−イル）−酢酸エステルが送達された典型的な実験から得られた結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004501985.tif 000097
2004501985.tif 000098
2004501985.tif 000099