(57)【要約】本発明は、インドロカルバゾール化合物の糖誘導体と、該誘導体のトポイソメラーゼ−Ｉ活性を示し、かつ腫瘍細胞の増殖を抑制するのに有用な医薬製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トポイソメラーゼＩおよび腫瘍細胞の増殖を抑制するのに用いる、式（Ｉ）：
【化１】
2004518633.tif 000023
［式中、Ｘ１，Ｘ１’，Ｘ２およびＸ２’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、ＯＲ６、−ＣＦ３、アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルキル、ニトロ、ＮＲ６Ｒ７、ＳＲ６およびＣ（Ｏ）ＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
ＺはＮＨ、ＯおよびＳからなる群から選ばれ；
Ｒは水素、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２またはＣ１−７アルキル、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ６、Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、ＳＲ６およびＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ５はＣ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ６、Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、ＳＲ６およびＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；および
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキルおよびＣ３−７シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯＣ１−３アルキル、ＮＨ２およびＮ（Ｃ１−３アルキル）２からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、あるいは
Ｒ６とＲ７はそれらが結合する窒素原子と共に合して、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選ばれる同一もしくは異なるヘテロ原子の１個または２個を含有する非芳香族５〜８員複素環を形成する］
で示される化合物、またはその医薬的に許容しうる塩もしくは溶媒化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、トポイソメラーゼ（ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ）−Ｉ活性を示しかつ腫瘍細胞の増殖を抑制するのに有用な、インドロピロロカルバゾール化合物（ｉｎｄｏｌｏｐｙｒｒｏｌｏｃａｒｂａｚｏｌｅｓ）の置換糖誘導体に関する。
【０００２】
（背景技術）
トポイソメラーゼは、生体核酵素であって、ＤＮＡにおけるトポロジーのジレンマ、たとえば、標準的に複製、転写およびことによると他のＤＮＡプロセス中に起こる、オーバーウィンディング（ｏｖｅｒｗｉｎｄｉｎｇ）、アンダーウィンディング（ｕｎｄｅｒｗｉｎｄｉｎｇ）および連鎖を解決するよう機能する。これらの酵素は、ＤＮＡを弛緩させるが、これは、他のＤＮＡストランドの通過用の一時的ゲートまたはピボットポイントとして作用する、酵素−ブリッジド・ストランド破断の形成による。トポイソメラーゼ−標的薬物は、このＤＮＡトポイソメラーゼの破損−再結合反応を干渉すると思われる。
【０００３】
トポイソメラーゼ−活性作用物質の存在下、“開裂性錯体”と呼ばれる頓挫反応中間体が蓄積して複製／転写を阻止し、これは結局、細胞死に導く。従って、トポイソメラーゼＩ−活性作用物質の開発は、癌処置のためクリニックで一般に用いられる多様な統制的療法に対し、新しいアプローチを付与する。「Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ」（３４（増刊）、Ｓ４１−Ｓ４５、１９９４年）に、臨床実験中のトポイソメラーゼＩ−活性化合物が論じられ、これらの化合物は有効な臨床的抗腫瘍剤であることが認められている。これらの臨床的候補化合物は構造上、アルカロイド・カンプトセシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ）と関係がある。
【０００４】
インドロ［２，３−ａ］カルバゾール・アルカロイド化合物、たとえばレベッカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４４８７９２５および４５５２８４２）およびその水溶性の臨床的活性類縁体の、６−（２−ジエチルアミノエチル）レベッカマイシン（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．４７８５０８５）は、ＤＮＡを標的にする有用な抗腫瘍剤である。さらに、フルオロインドロカルバゾール化合物（ＷＯ９８／０７４３３）は、トポイソメラーゼＩ抑制活性を持つ抗腫瘍性作用物質として開示されている。レベッカマイシン種に関係するインドロ［２，３−ａ］カルバゾール誘導体が開示され［ＥＰ出願Ｎｏ．０５４５１９５Ｂ１および０６０２５９７Ａ２；「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ」（５３、４９０−４９４、１９９３年）；「ｉｂｉｄ」（５５、１３１０−１３１５、１９９５年）］、かつクレームで抗腫瘍活性を示すことが記載されているが、これら誘導体の作用の主なメカニズムは、トポイソメラーゼＩ毒薬として作用するカンプトセシンと同じとは思われない。
【０００５】
また関連インドロカルバゾール化合物も開示され（ＷＯ９５／３０６８２）、かつクレームで抗腫瘍活性を示すことが記載されている。Ｈｕｄｋｉｎｓらは、一連の縮合ピロロカルバゾール化合物を開示し（ＷＯ９６／１１９３３およびＵ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４７５１１０）、幾つかの化合物に対して、インビトロ生物学的活性、たとえばニューロン・コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）の抑制およびたん白キナーゼＣ（ＰＫＣ）抑制を報告している。Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４６８８４９に、有用な抗腫瘍剤としての特定フルオロベッカマイシン類縁体、並びにサッカロスリックス・アエロコロニジーンズ（Ｓａｃｃｈａｒｏｔｈｒｉｘ  ａｅｒｏｃｏｌｏｎｉｇｅｎｅｓ）、好ましくはサッカロスリックス・アエロコロニジーンズＣ３８３８３−ＲＫ２（ＡＴＣＣ３９２４３）のリベッカマイシン（ｒｅｂｅｃｃａｍｙｃｉｎ）−産生菌株のフルオロトリプトファン類縁体栄養補給による、上記類縁体の製造法が開示されている。
【０００６】
Ｇｌｉｃｋｓｍａｎらは、インドロカルバゾール・アルカロイド化合物を開示し（Ｕ．Ｓ．特許Ｎｏ．５４６８８７２）、一方、Ｋｏｊｉｒｉらは、ジサッカライド置換基を有するインドロピロロカルバゾール化合物を開示する（ＷＯ９６／０４２９３）。ＭａｚｕｒおよびＨｉｌｌｅｒは、単純５−ヒドロキシメチルグリコシド化合物の合成を報告し［「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」（６２、４４７１、１９９７年）］、一方、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらは、５−メトキシ置換糖誘導体の合成を記載する［「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」（１１８、２８２５、１９９６年）］。これらの報告にも拘らず、トポイソメラーゼＩ活性の抑制に有用な、新規で効力ある細胞毒化合物の必要性が残る。
【０００７】
（発明の概要）
すなわち、本発明の第１側面の最初の具体例によれば、トポイソメラーゼＩおよび腫瘍細胞の増殖の抑制に有用な、下記式（Ｉ）で示される化合物およびそれらの医薬的に許容しうる塩および溶媒化合物が提供される。
【化２】
2004518633.tif 000002
【０００８】
上記式中、Ｘ１，Ｘ１’，Ｘ２およびＸ２’はそれぞれ独立して、水素、ハロゲン、シアノ、ＯＲ６、−ＣＦ３、アルキルカルボニル、Ｃ１−７アルキル、ニトロ、ＮＲ６Ｒ７、ＳＲ６およびＣ（Ｏ）ＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
ＺはＮＨ、ＯおよびＳからなる群から選ばれ；
Ｒは水素、ＯＨ、ＯＣ１−７アルキル、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２またはＣ１−７アルキル、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
【０００９】
Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ６、Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、ＳＲ６およびＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；
Ｒ５はＣ１−７アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、ハロゲン、アジド、ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ６、Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、ＳＲ６およびＯＲ６からなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＳＲ６、ＯＲ６およびＮＲ６Ｒ７からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく；および
【００１０】
Ｒ６およびＲ７はそれぞれ独立して、水素、Ｃ１−７アルキルおよびＣ３−７シクロアルキルからなる群から選ばれ、ここで、上記Ｃ１−７アルキルは必要に応じて、ハロゲン、ＣＮ、ＯＨ、ＯＣ１−３アルキル、ＮＨ２およびＮ（Ｃ１−３アルキル）２からなる群から選ばれる置換基の１つ以上で置換されてよく、あるいは
Ｒ６とＲ７はそれらが結合する窒素原子と共に合して、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選ばれる同一もしくは異なるヘテロ原子の１個または２個を含有する非芳香族５〜８員複素環を形成する。
【００１１】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒが水素である式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、ＺがＮＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ１，Ｘ１’，Ｘ２およびＸ２’が共にＦである式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１２】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’およびＸ２が共にＦ、Ｘ１およびＸ１’が共にＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２がＦ、Ｘ２’，Ｘ１およびＸ１’が共にＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｘ２’がＦ、Ｘ２，Ｘ１およびＸ１’が共にＨである式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１３】
本発明の第１側面の他の具体例によれば、Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｆ、アジドおよびアミノからなる群から選ばれる式（Ｉ）の化合物が提供される。
本発明の第１側面の他の具体例は、上記第１側面の具体例の２つ以上を適当に組合せてなる式（Ｉ）の化合物を提供する。
【００１４】
本発明の第２側面の具体例は、哺乳動物宿主の腫瘍成長を抑制する方法を提供し、該抑制法は、本発明の第１側面の具体例で規定される本発明化合物の、腫瘍成長抑制量を上記宿主に投与することから成る。
【００１５】
本発明の第３側面の具体例は、哺乳動物宿主の腫瘍成長を抑制する方法を提供し、該抑制法は、本発明の第１側面の具体例で規定される本発明化合物の医薬配合物（製剤）の、腫瘍成長抑制量を上記宿主に投与することから成る。
本発明の他の具体例および側面については、以下に記載の説明に従って明らかであろう。
【００１６】
発明の詳細
ここで、本発明の説明については、化学結合の法則や原理と一致させて解釈すべきである。別の具体例または側面から従属する１つの具体例または側面には、それが従属する具体例または側面とは異なる数値および条件を持つ変記号（ｖａｒｉａｂｌｅ）のみを記載するだろう。
【００１７】
すなわち、たとえば、“ＷがＣである、本発明の第ｎ側面による式（Ｉ）の化合物”と解される具体例は、第ｎ側面に規定の数値を持つ残りの全ての変記号を含むと解釈すべきであり、さらに他に特別な指示がない限り、第ｎ側面における変記号のどれもこれもに関係する全ての条件を含むと解釈すべきである。記号“Ｃ”の後の下付きの数字は、個々の基が含有できる炭素原子の数を規定する。
【００１８】
たとえば、“Ｃ１−７アルキル”は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖飽和炭素鎖を意味し、たとえば、これらに制限されるものでなく、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−ヘプチルが挙げられる。語句“ハロゲン”としては、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが挙げられる。
なお、本発明は、他に特別な記載が明記されていない限り、可能性のある立体異性体、幾何異性体、ジアステレオマー、エナンチオマー、配座異性体およびアノマーのいずれかおよび全てを包含することを理解すべきである。
【００１９】
記号“Ｃ”の後の下付きの数字は、個々の基が含有できる炭素原子の数を規定する。たとえば、“Ｃ１−６アルキル”は、１〜７個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖飽和炭素鎖を意味し、たとえば、これらに限定されるものでなく、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｓｅｃ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ−ヘプチルが挙げられる。“アリール”とは、６〜１０個の炭素原子を有する芳香族炭化水素を意味し、たとえば、フェニルおよびナフチルが挙げられる。
【００２０】
“置換アリール”または“アラルキル”とは、Ｃ１−６アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ１−６アルキル、トリフルオロメチル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ１−６アルカノイル、ニトロ、アミノ、シアノ、アジド、Ｃ１−６アルキルアミノおよびアミドからなる群から選ばれる１〜５個（特に１〜３個）の基で置換されたアリールまたはアラルキル基を意味する。語句“ハロゲン”としては、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードが挙げられる。
【００２１】
本発明の化合物は、医薬的に許容しうる塩の形状で存在しうる。かかる塩としては、たとえば、塩酸および硫酸などの無機酸や、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、酒石酸およびマレイン酸などの有機酸との付加塩が挙げられる。
【００２２】
さらに、本発明化合物が酸性の基を含有する場合、該酸性基はたとえば、カリウム塩およびナトリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩およびカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；およびトリエチルアンモニウム塩およびアルギニン塩などの有機塩基との塩の形状で存在しうる。本発明化合物は、水和されてあるいはそうでなくてもよい。
【００２３】
本発明化合物は、錠剤、カプセル剤（これらは、それぞれ持続放出性（徐放性）もしくは時限放出性の配合を含む）、丸剤、粉剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁液、シロップおよびエマルジョンといった経口投与剤形で投与することができる。また本発明化合物は、医薬分野の当業者にとって周知の投与剤形を用い、静脈内、腹腔内、皮下または筋肉内に投与されてもよい。
【００２４】
本発明化合物は単独投与できるが、一般には、選択投与方法や標準医薬実務に基づいて選ばれる医薬用担体といっしょに投与される。また本発明化合物は、適当な鼻腔内ビヒクルの局所使用による鼻腔内剤形で、または経皮パッチを用いる経皮ルートで投与することもできる。本発明化合物を経皮投与すると、投与生活規則を通じて投与量が連続するだろう。
【００２５】
本発明の１つの側面は、腫瘍を移植したあるいは癌形成を受けやすい哺乳動物に対する、本発明化合物またはその医薬的に許容しうる塩もしくは溶媒化合物の投与を必然的に伴なう。一般にかかる化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜ＭＴＤ（最大許容量）の用量範囲で投与される。本発明化合物の投与量並びに投与生活規制およびスケジュールについては、各ケースにおいて、信頼できる専門医師の判断を利用し、かつ受容者の年令、体重および状態、投与方法並びに癌疾患状態の種類および程度を考慮して、注意深く調整しなければならない。
【００２６】
本明細書で用いる語句“全身投与”とは、口腔舌下、バッカル、経鼻腔、経皮、直腸、筋肉内、静脈内、心室内、鞘内、および皮下経路を指称する。適正な臨床実務に従って、有害もしくは厄介な副作用のいずれも起こさずに、有効で有益な効きめをもたらす濃度レベルで本化合物を投与することが好ましい。
【００２７】
特定具体例の説明
式（Ｉ）の化合物の製造手順を、下記反応式１〜５に例示し、基本中間体／出発物質の製法を下記反応式６に例示する。
【００２８】
反応式１：
【化３】
2004518633.tif 000003
【００２９】
反応式２：
【化４】
2004518633.tif 000004
【００３０】
反応式３：
【化５】
2004518633.tif 000005
【００３１】
反応式４：
【化６】
2004518633.tif 000006
【００３２】
反応式５：
【化７】
2004518633.tif 000007
【００３３】
反応式６：
【化８】
2004518633.tif 000008
【００３４】
反応式１において、適当な塩基、たとえばヘキサメチルジシラジド・ナトリウムを用いて化合物１のモノまたはジアニオンを生成し、次いでこれをクロロ糖誘導体２でグリコシル化して、保護グリコシド３を得る。イミド成分の脱保護を、塩基−誘発加水分解、次いで酸性化によって行い、中間体無水物を得る。この無水物を適当なアミンを用いてイミドに便宜的に変換し、たとえば、ジメチルホルムアミド中ヘキサメチルジシラザンおよびメタノールの混合物と反応させることによってイミドが得られる［Ｐ．Ｄ．Ｄａｖｉｓ、Ｒ．Ａ．Ｂｉｔの「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．」（３１、５２０１、１９９０年）参照］。
【００３５】
次いで、５や１２などの選択的に脱保護したグリコシドについては、対応する過ベンジル化グリコシドを、酢酸−無水酢酸中の塩化亜鉛［Ｆ．Ｋｏｎｇらの「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．」（３８、６７２５、１９９７年）参照］または無水酢酸中のヨウ素［Ｋ．Ｐ．Ｒ．Ｋａｒｔｈａ、Ｒ．Ａ．Ｆｉｅｌｄの「Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ」（５３、１１７５３、１９９７年）参照］で処理した後、中間体アセテートの加水分解によって製造することができる。得られる第一アルコールを緩和な条件下、たとえばデス−マーチン・パーヨージナン（ｐｅｒｉｏｄｉｎａｎｅ）等を用いて酸化することにより、対応するアルデヒドを得ることができる。
【００３６】
これらのアルデヒドにα−ヒドロキシメチル化を容易に行った後、水性ホルムアルデヒドおよび水性水酸化ナトリウムの存在下で、自然カニツアロ還元を行って［Ａ．Ｗ．Ｍａｚｕｒ、Ｇ．Ｄ．Ｈｉｌｅｒの「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」（６２、４４７１、１９９７年）参照］、７などの５’−Ｃ−ヒドロキシメチルグリコシドを得る。この反応の過程中にイミド成分が加水分解して対応無水物になると、該無水物は適当なアンモニア源、たとえば酢酸アンモニウムの処理によって、元のイミドに容易に変換する。
【００３７】
最後に、パールマン（Ｐｅａｒｌｍａｎ）の触媒（２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／活性炭）上の水添分解を必要とする通常の手順で、ベンジル保護基の脱離を行って、脱保護グリコシド８を得る。
【００３８】
反応式２で示されるように、化合物５の６’−ヒドロキシル基を、たとえばそのメシレートに、続いて対応ヨウ化物９に活性化することができ、次いで適当なアミン塩基、たとえば１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）を用い、ＨＩ成分の除去を行って、ビニルエーテル１０を得ることができる。その後、三臭化ホウ素を用いてベンジル保護基の脱離を行った後、反応混合物にメタノールを加えて反応を抑え、５’−Ｃ−メトキシグリコシド１１を得る。
【００３９】
別法として、たとえば反応式３で示されるように、最終脱保護工程に先立ち、５’−Ｃ−メトキシ基の導入を行なうことができる。すなわち、ビニルエーテル１３を緩和条件下、ジメチルジオキシラン／アセトンを用いてエポキシ化することができ［Ｓ．Ｊ．Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙらの「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」（１１８、２８２５、１９９６年）参照］、次いで得られるエポキシド１４に塩化亜鉛の存在下、メタノールによる加溶媒分解に付し、前記最終脱保護を行って、５’−Ｃ−メトキシグルコシド１５を得ることができる。
【００４０】
また５’−Ｃ−メトキシグリコシドの選択具体例も、反応式４で示されるようにして製造することができる。すなわち、選択的に脱保護したガラクトシド１６を周知のフッ素化剤，ＤＡＳＴ［（ジエチルアミノ）硫黄トリフルオライド］で処理した後、前記の脱ベンジル化により、予想外の過程を採用して、５’−Ｃ−メトキシグリコシド１７を優位に得る。
【００４１】
別法として、反応式５で示されるように、ビニルエーテル１８を少量の酸触媒、たとえばｐ−トルエンスルホン酸の存在下、アルコール、たとえばメタノールで処理して、保護５’−Ｃ−アルコキシグリコシドを得ることができる。この保護５’−Ｃ−アルコキシグリコシドを前記の如く脱保護して、５’−Ｃ−アルコキシグリコシド（たとえば１９）を得る。
【００４２】
基本中間体の糖は、反応式６で示されるようにして製造する。商業上入手しうるメチル−α−Ｄ−グルコピラノシド２０の４−デオキシグリコシド２２への変換は、ＢａｒｒｅｔｔｅおよびＧｏｏｄｍａｎの報告に準じて（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、４９、１７６、１９８４年）行なう。アノマー位の脱保護は、２工程で行なうことができ、すなわち最初、ベンゼンチオールおよびルイス酸、たとえば三フッ化ホウ素エーテレートで処理した後［Ｌ．Ａ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ、Ｊ．Ａ．Ｏｐｌｉｎｇｅｒの「Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．」（５３、２９５３、１９８８年）参照］、得られるフェニルチオ糖誘導体２３を水の存在下、適当な溶媒、たとえばアセトンまたはアセトニトリル中、Ｎ−ブロモスクシンイミドで加水分解する［Ｂ．Ｆｒａｓｅｒ−Ｒｅｉｄらの「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」（１１０、２６６２、１９８８年）参照］。
【００４３】
別法として、アノマー位の脱保護は、適当な酸、たとえば９０％ギ酸による処理の１工程で行なうことができ、これによって直接グルコピラノシド２４を得る。２４などのグリコピラノシドのグリコピラノシルクロリド２への変換は、ＩｖｅｒｓｅｎおよびＢｕｎｄｌｅが報告した手順に従って（Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ．１０３、２９、１９８２年）、行なうことができる。
【００４４】
本発明を構成する化合物およびその製造法については、以下に示す実施例の考慮からより十分に明らかとなるだろう。なお、これらの実施例は単に例示を目的とし、いかなる場合も本発明の技術的範囲を制限すると解釈すべきではない。
【００４５】
中間体の合成
式（Ｉ）の化合物の製造に用いる、幾つかの中間体化合物、並びに他の通常の出発物質（たとえば２０）は一般に、商業上入手可能である。それにも拘らず、これら幾つかの化合物の代表的な合成法を以下に記載する。
【００４６】
無水反応の全ては、商業上入手しうる乾燥溶媒または新たに蒸留した溶媒を用い、窒素またはアルゴンの雰囲気下で行なう。融点は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点測定装置を用い、開毛管中で測定し、修正せず。カラムクロマトグラフィーは、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅシリカゲル６０（２３０〜４００メッシュ）を用い、溶離剤として指定の溶媒系を用いて行なう。
【００４７】
薄層クロマトグラフィーは、Ｅ．Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０Ｆ２５４プレート（０．５ｍｍ）にて行なう。ＨＰＬＣ純度測定は、ＳＰＤ−１０ＡＶ  ＵＶ−Ｖｉｓ検出器と、ＹＭＣ  Ｃｏｍｂｉｓｃｒｅｅｎ  ＯＤＳ−Ａ（４．６×５０ｍｍ）またはＨＰ  Ｚｏｒｂａｘ  ＳＢ−Ｃ１８（４．６×７５０ｍｍ）カラムの１つを持つＳｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＳ；またはダイオード・アレイ検出器とＷａｔｅｒｓ  Ｎｏｖａ−Ｐａｋ  Ｃ１８カラム（３．９×１５０ｍｍ）を持つＨＰ１０９０ＤＲ５を用いて行なう。赤外スペクトルは、薄手フィルムまたはＫＢｒペレットとしてＮｉｃｏｌｅｔ  Ｐｒｏｔｅｇｅ  ４００ＦＴＩＲに記録する。
【００４８】
１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＭＸ−４００またはＢｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ−５００ＮＭＲ分光計で記録し、化学シフトは内部標準として溶剤を用い、ｐｐｍ（またはδ）で表示する。カップリング定数はヘルツで示し、多重線は以下の通りである：一重線（ｓ）、二重線（ｄ）、三重線（ｔ）、四重線（ｑ）、多重線（ｍ）、およびブロード（ｂｒ）。低分解（ｌｏｗ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ）質量スペクトルは、陰イオンモードで作動するＦｉｎｎｉｇａｎ  Ｍａｔｔ  ＴＳＱ−７０００トリプル・ステージ四極子分光計（陽／陰ＥＳＩ）で測定する。
【００４９】
実施例１：２，３，９，１０−テトラヒドロ−１２−［５−Ｃ−（ヒドロキシメチル）−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル］−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化９】
2004518633.tif 000009
【００５０】
５ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中のデス−マーチン試薬（０．１４７ｇ、０．３４ミリモル）の溶液に、５ｍＬの乾燥ＣＨ２Ｃｌ２中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．１２５ｇ、０．１７ミリモル）の溶液を加え、混合物を室温で２ｈ撹拌する。得られる混合物を酢酸エチルで希釈し、これを洗浄し（飽和ＮａＨＣＯ３、３０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３、塩水）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発する。
【００５１】
粗アルデヒドを直ちに、ジオキサン（６ｍＬ）に溶解し、３７％水性ホルムアルデヒド（１ｍＬ）および１Ｍ−ＮａＯＨ（１ｍＬ）を加え、混合物を室温で１８ｈ撹拌する。次いで溶液を１Ｎ−ＨＣｌで酸性化し、４ｈ撹拌する。得られる混合物を酢酸エチルで希釈し、水洗し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発して２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−［２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−５−Ｃ−（ヒドロキシメチル）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−インドロ［２，３−ａ］フラノ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオンを黄色ゴム状物で得る。
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ７５３（Ｍ−Ｈ）−
【００５２】
この粗ゴム状物に、酢酸アンモニウム（１．０ｇ、１３ミリモル）を加え、混合物を３ｈ加熱（油浴）還流する。冷却した混合物を酢酸エチル／水間に分配し、有機相を分離し、洗浄し（塩水）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、蒸発して粗２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−［２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−５−Ｃ−（ヒドロキシメチル）−β−Ｄ−グルコピラノシル］−インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０２５ｇ）を得る。
【００５３】
この物質を直ちに８ｍＬのメタノール／クロロホルム（１：１）に溶かし、１０％パラジウム／活性炭（０．０２５ｇ）を加え、混合物を１ａｔｍで２０ｈ水素添加する。得られる混合物をセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）で濾過し、濾液を減圧濃縮し、残渣をクロマトグラフィー（ヘキサン／ＴＨＦ＝１：１）に付して、標記化合物（０．００７ｇ、全体で７％）を黄色固体で得る。
【００５４】
ＩＲ（ＫＢｒ）：３２８０、１７１６、１７００、１４７６、１３２０ｃｍ−
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１２．０５（ｓ、１Ｈ）、１０．０８（ｓ、１Ｈ）、９．１４（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、９．０３（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．７６（ｄｄ、Ｊ＝１１．２、６．６Ｈｚ、１Ｈ）、７．５１（ｄｄ、Ｊ＝１０．９、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．２０（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、５．６８（ｍ、１Ｈ）、４．４８−４．３９（ｍ、２Ｈ）、４．２１−４．０５（ｍ、２Ｈ）、４．００（ｄｄ、Ｊ＝１０．９、４．３Ｈｚ、１Ｈ）、３．９０（ｄｄ、Ｊ＝１１．９、５．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．８２−３．７６（ｍ、１Ｈ）、３．６７−３．６０（ｍ、２Ｈ）、２．１４（ｄｄ、Ｊ＝１３．７、５．３Ｈｚ、１Ｈ）、１．７９−１．７５（ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５７２（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９５．２％（３２０ｎｍ）
【００５５】
実施例２：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−６−ヨード−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１０】
2004518633.tif 000010
【００５６】
１００ｍＬのジクロロメタン中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（２．００ｇ、２．７６ミリモル）および新たに賦活した微粉状の４Åモレキュラーシーブス（０．６０ｇ）の混合物を、Ａｒ下５℃で冷却し、トリエチルアミン（０．７７ｍＬ、５．５２ミリモル）、ＤＭＡＰ（０．２０ｇ、１．６４ミリモル）およびメタンスルホニルクロリド（０．３２ｍＬ、４．１４ミリモル）を連続して加える。混合物を同温度で２ｈ撹拌し、次いでこれを濾過し、濾過ケーキを酢酸エチルで洗う。
【００５７】
濾液を酢酸エチル（２００ｍＬ）およびエーテル（５０ｍＬ）で希釈し、次いで洗浄し（Ｈ２Ｏ２回、塩水）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発して黄色ガラス状物を得る。この物質を１００ｍＬのアセトンに溶かし、ＮａＩを加え、混合物をＡｒ下、１８ｈ加熱還流する。次いで冷却した混合物を蒸発乾固し、残渣を１０ｍＬの酢酸エチルに溶かし、洗浄し（Ｈ２Ｏ２回、塩水）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発する。得られる固体をクロマトグラフィー（ＳｉＯ２／２〜３２％酢酸エチル−ヘキサン）に付して、標記化合物（０．９０ｇ、３９％）を非晶質黄色固体で得る。
【００５８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ１０．１７（ｓ、１Ｈ）、９．１０（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、９．０２（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．５５（ｍ、２Ｈ）、７．３５（ｍ、６Ｈ）、６．９２（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．７６（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．２０（ｄ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、５．７５（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、１Ｈ）、４．７７および４．７１（ａｂ  ｑ、Ｊ＝１１．５Ｈｚ、２Ｈ）、４．１３（ｍ、２Ｈ）、３．９９（ｔ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．８０（ｍ、２Ｈ）、３．６３（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、３．４８（ｄ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、１Ｈ）、２．４２（ｍ、１Ｈ）、２．３２（ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ８３２（Ｍ−Ｈ）−
【００５９】
実施例３：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６−ヨード−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１１】
2004518633.tif 000011
【００６０】
本例化合物は、実施例２の記載に準じ、収率６９％の黄色固体で製造した。
１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６、４００ＭＨｚ）：δ１０．１３（ｓ、１Ｈ）、９．０３（ｄｄ、Ｊ＝１０．６、８．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．８５（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄｄ、Ｊ＝１０．２、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．４８−７．２９（ｍ、１Ｈ）、６．９５（ｔ、Ｊ＝７．４Ｈｚ、１Ｈ）、６．８０（ｔ、Ｊ＝７．６Ｈｚ、２Ｈ）、６．１６（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、２Ｈ）、５．８４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、５．６２（ｄｄ、Ｊ＝５．９、１．９Ｈｚ、２Ｈ）、５．１６および５．０５（ａｂ  ｑ、Ｊ＝１０．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９０（ｓ、２Ｈ）、４．１５−３．６７（ｍ、５Ｈ）、３．２４（ｄ、Ｊ＝１０．６Ｈｚ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ９３８（Ｍ−Ｈ）−
【００６１】
実施例４：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−ジデオキシ−５，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１２】
2004518633.tif 000012
【００６２】
２０ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−デオキシ−６−ヨード−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．５００ｇ、０．６０ミリモル）の氷冷溶液に、ＤＢＵ（０．２７ｍＬ、１．８０ミリモル）を加え、溶液を５℃で２ｈ保持する。次いで冷却浴を取除き、撹拌を室温で１６ｈ続ける。次いで別途ＤＢＵ（０．２７ｍＬ、１．８０ミリモル）を加え、さらに反応を２４ｈ続ける。
【００６３】
さらにＤＢＵ（０．２７ｍＬ、１．８０ミリモル）を加え、撹拌を２４ｈ続ける。得られる混合物を酢酸エチルで希釈し、次いでこれを洗浄し（１Ｎ−ＨＣｌ２回、Ｈ２Ｏ２回、１Ｍ−ＮａＨＣＯ３２回、Ｈ２Ｏ、塩水）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、蒸発してゴム状物を得る。フラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２／２〜１６％酢酸エチル−ヘキサン）を行い、標記化合物（０．２９７ｇ、７０％）を黄色固体で得る。
【００６４】
１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６、４００ＭＨｚ）：δ９．１１（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．９５（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．９４（ｍ、１Ｈ）、７．４６（ｍ、２Ｈ）、７．３７（ｍ、４Ｈ）、６．８４（ｔ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ）、６．６９（ｍ、２Ｈ）、６．５７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｂｒ  ｓ、２Ｈ）、４．９２（ｄ、Ｊ＝１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．７４（ｄ、Ｊ＝１１．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｓ、１Ｈ）、４．５８（ｓ、１Ｈ）、４．４０（ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．２６（ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、２Ｈ）、３．９９（ｄ、Ｊ＝１１．８Ｈｚ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ７０４（Ｍ−Ｈ）−
【００６５】
実施例５：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６−デオキシ−５，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１３】
2004518633.tif 000013
【００６６】
本例化合物は、実施例４の記載に準じ、収率７８％の黄色固体で製造した。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ９．３８（ｓ、１Ｈ）、９．１３（ｔ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）、８．９９（ｔ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）、７．５６−７．４１（ｍ、６Ｈ）、７．２９（ｍ、２Ｈ）、６．９０（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．７４（ｔ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、２Ｈ）、６．６８（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、１Ｈ）、６．４３（ｄ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、３Ｈ）、５．０６（ｍ、２Ｈ）、４．８４（ｄ、Ｊ＝１１．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．７４（ｄ、Ｊ＝１．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．６８（ｄ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．５８−４．５４（ｍ、２Ｈ）、４．１９（ｍ、１Ｈ）、３．９４（ｄ、Ｊ＝１１．４Ｈｚ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ８１０（Ｍ−Ｈ）−
【００６７】
実施例６：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（４，６−ジデオキシ−５−メトキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１４】
2004518633.tif 000014
【００６８】
１０ｍＬのジクロロメタン中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−ジデオキシ−５，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．１００ｇ、０．１４ミリモル）の溶液を、Ａｒ下−７８℃で冷却し、ＢＢｒ３溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中１Ｍ、１．１２ｍＬ、１．１２ミリモル）を加える。反応混合物を−７８℃で１ｈ保持し、次いでメタノール（１ｍＬ）で反応を抑えた後、蒸発乾固する。
【００６９】
得られる残渣を分取ｔｌｃ（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．５ｍｍＳｉＯ２プレート、ＴＨＦ／ヘキサン＝１：１、三重発現）で精製して、標記化合物（０．０６４ｇ、８７％）を黄色固体で得る。
ＩＲ（ＫＢｒ）：１７５２、１７１７、１４７６ｃｍ−１
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．４２（ｓ、１Ｈ）、１０．１５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、９．１６（ｍ、１Ｈ）、９．０５（ｍ、１Ｈ）、７．８３−７．５５（ｍ、２Ｈ）、６．２３（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、０．３Ｈ）、６．０３（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、０．７Ｈ）、４．７４−４．２６（ｍ、２Ｈ）、４．１２（ｍ、１Ｈ）、３．７７（ｍ、１Ｈ）、３．４５（ｓ、３Ｈ）、２．３５−２．００（ｍ、２Ｈ）、１．８８（ｓ、３Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５５６（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９９．１％（３２０ｎｍ）
【００７０】
実施例７：２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（５−メトキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１５】
2004518633.tif 000015
【００７１】
５ｍＬのジクロロメタン中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−６−デキオシ−５，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．１６０ｇ、０．２０ミリモル）の溶液にＡｒ下０℃にて、ジメチルジオキシランの氷冷溶液（アセトン中約０．１Ｍ、６．０ｍＬ、０．６０ミリモル）を加える。得られる混合物を０℃で１．５ｈ保持し、次いでこれを減圧蒸発して、黄色ゴム状物を得る。
【００７２】
このゴム状物の一部（０．０２０ｇ、０．０２４ミリモル）をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶かし、次いで塩化亜鉛（ジエチルエーテル中１Ｍ、０．０５０ｍＬ、０．０５０ミリモル）を加えた後、メタノール（０．１０ｍＬ）を加える。得られる混合物を室温で１８ｈ撹拌し、次いでこれを蒸発乾固して、黄色ゴム状物を得る。
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ８５８（Ｍ−Ｈ）−
【００７３】
上記粗ゴム状物をメタノール（５ｍＬ）に溶かし、パールマン触媒（０．０１０ｇ）を加え、混合物を１ａｔｍで２ｈ水素添加する。次いで混合物を濾過し、濾過ケーキをＴＨＦで洗う。次いで濾液を蒸発し、残渣を分取ｔｌｃ（２０ｃｍ×２０ｃｍ×０．５ｍｍＳｉＯ２プレート、ＴＨＦ／ヘキサン＝４：１）で精製して、標記化合物（０．０００５８ｇ、全体収率４％）を黄色固体で得る。
【００７４】
１Ｈ−ＮＭＲ（アセトン−ｄ６、４００ＭＨｚ）：δ９．１３（ｔ、Ｊ＝１１．３Ｈｚ、１Ｈ）、９．００（ｔ、Ｊ＝１１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．９６（ｍ、１Ｈ）、７．６１（ｄｄ、Ｊ＝６．８、６．５Ｈｚ、１Ｈ）、６．１９（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、１Ｈ）、４．３０（ｄ、Ｊ＝９．４Ｈｚ、１Ｈ）、４．２１（ｄ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．１３（ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．０３（ｔ、Ｊ＝８．９Ｈｚ、１Ｈ）、３．８３（ｔ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．２９（ｓ、３Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５８８（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９５．８％（３２０ｎｍ）
【００７５】
実施例８：２，３，９，１０−テトラヒドロ−１２−（４−デキオシ−５−メトキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１６】
2004518633.tif 000016
【００７６】
２０ｍＬの乾燥ジクロロメタン中の２，３，９，１０−テトラフルオロ−１２−（２，３，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．６０６ｇ、０．７３ミリモル）の溶液に、（ジエチルアミノ）硫黄トリフルオライド（ＤＡＳＴ）（０．５０ｍＬ、３．６６ミリモル）をＡｒ下−４５℃で滴下する。次いで反応混合物を室温で１ｈ撹拌してから、−４５℃で再冷却し、ＭｅＯＨ（２ｍＬ）で反応を抑える。
【００７７】
混合物を蒸発し、残渣をシリカゲルのプラグで濾過する（ヘキサン／酢酸エチル＝１：１で溶離）。濾液を蒸発し、残渣を２０ｍＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（１：１）に溶かし、これに無水ＨＣｌ溶液（ジオキサン中４Ｍ、２．０ｍＬ、８．０ミリモル）および２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．６０ｇ）を加える。得られる混合物を室温で４日間水素添加し（バルーン圧）、次いでこれをシリカゲルのプラグで濾過する（ＴＨＦで溶離）。濾液を蒸発し、残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン／ＴＨＦ＝１：１）に付して、標記化合物（０．０８０ｇ、２０％）を黄色固体で得る。
【００７８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６、４００ＭＨｚ）：δ１１．７７（ｓ、１Ｈ）、１１．２９（ｓ、１Ｈ）、９．０１（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．９３（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、８．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．１７（ｄｄ、Ｊ＝１１．９、６．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．６４（ｄｄ、Ｊ＝１１．０、７．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．６３（ｍ、１Ｈ）、５．９７（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、１Ｈ）、５．４６（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．９７（ｄ、Ｊ＝５．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．０１（ｍ、２Ｈ）、３．５８（ｍ、２Ｈ）、３．４６（ｓ、３Ｈ）、２．４３（ｍ、１Ｈ）、２．０８（ｍ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５７２（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：８８．１％（３２０ｎｍ）
【００７９】
実施例９：３，９−ジフルオロ−１２−（４，６−ジデオキシ−５−メトキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１７】
2004518633.tif 000017
【００８０】
１０ｍＬのメタノール中の３，９−ジフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−ジデオキシ−５，６−アンヒドロ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０９１ｇ、０．１３６ミリモル）の溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸モノ水和物（０．００２ｇ、０．０１ミリモル）を加え、混合物を室温で１７ｈ撹拌する。
【００８１】
次いでトリエチルアミン（２滴）を加え、混合物を蒸発乾固する。残渣をジクロロメタンに溶かし、溶液をショート・シリカゲルカラムに加える。ジクロロメタン／アセトニトリル（９５：５）で溶離して、純粋な３，９−ジフルオロ−１２−（２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−ジデオキシ−５−メトキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン（０．０７５ｇ、７９％）を黄色固体で得る。
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ７００（Ｍ−Ｈ）−
【００８２】
この化合物と２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（０．１１４ｇ）の２０ｍＬのメタノール中の混合物を、１ａｔｍ圧で１８ｈ水素添加する。次いで混合物を濾過し（セライト）、濾過ケーキをメタノール、次いでＴＨＦで洗う。濾液を蒸発し、得られる黄色ガラス状物をＬＨ−２０カラムにて、メタノールで溶離して精製する。これによって残渣を得、これを最小容量のメタノールと共にトリチュレートして、標記化合物（０．０３５ｇ、６７％）をオレンジ−黄色粉末で得る。
【００８３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．８２（ｓ、０．３５Ｈ）、１０．４２（ｓ、０．６５Ｈ）、１０．１４（ｓ、０．６５Ｈ）、１０．０９（ｓ、０．３５Ｈ）、９．０７（ｄｄ、Ｊ＝２．５、９．６Ｈｚ、０．３５Ｈ）、９．０３（ｄｄ、Ｊ＝２．９、９．６Ｈｚ、０．６５Ｈ）、８．９７（ｄｄ、Ｊ＝２．５、９．６Ｈｚ、０．６５Ｈ）、８．９３（ｄｄ、Ｊ＝２．５、９．６Ｈｚ、０．３５Ｈ）、７．９４（ｄｄ、Ｊ＝４．３、８．６Ｈｚ、０．３５Ｈ）、７．７８（ｄｄ、Ｊ＝４．１、９．１Ｈｚ、０．６５Ｈ）、７．７２（ｄｄ、Ｊ＝４．３、９．０Ｈｚ、０．６５Ｈ）、７．６７（ｄｄ、Ｊ＝４．１、８．９Ｈｚ、０．３５Ｈ）、７．３７−７．２４（ｍ、２Ｈ）、６．２８（ｄｄ、Ｊ＝２．０、９．１Ｈｚ、０．３５Ｈ）、６．１３（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、０．６５Ｈ）、５．５３（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、０．３５Ｈ）、４．７６（ｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、０．６５Ｈ）、４．６１（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、０．６５Ｈ）、４．５１（ｄ、Ｊ＝３．９Ｈｚ、０．３５Ｈ）、４．３３−３．６８（ｍ、２Ｈ）、３．４４（ｓ、３Ｈ）、２．５０−１．８２（ｍ、２Ｈ）、１．７９（ｓ、３Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５２０（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：１００％（３２０ｎｍ）
【００８４】
実施例１０：３，９−ジフルオロ−１２−（４，６−ジデオキシ−５−エトキシ−δ−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１８】
2004518633.tif 000018
【００８５】
本例化合物は、反応溶媒としてエタノールを用いる以外は、実施例９の記載と同様にして製造した。最終単離物は、全収率３７％の黄色凍結乾燥物である。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．５３（ｓ、０．３Ｈ）、１０．４６（ｓ、０．７Ｈ）、１０．１２（ｓ、０．７Ｈ）、１０．０７（ｓ、０．３Ｈ）、９．０３（ｄｄ、Ｊ＝２．５、９．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｄｄ、Ｊ＝２．６、９．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．９２（ｄｄ、Ｊ＝４．４、９．０Ｈｚ、０．３Ｈ）、７．６８（ｍ、１．７Ｈ）、７．５４（ｄｄ、Ｊ＝３．２、５．８Ｈｚ、０．３Ｈ）、７．３７−７．２６（ｍ、１．７Ｈ）、６．３３（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、０．３Ｈ）、６．１５（ｄ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、０．７Ｈ）、４．７５（ｄ、Ｊ＝４．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．６１（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．２３−３．６４（ｍ、４Ｈ）、２．４６−１．８８（ｍ、２Ｈ）、１．８０（ｓ、３Ｈ）、１．３３（ｔ、Ｊ＝７．１Ｈｚ、３Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５３４（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９７．９％（３２０ｎｍ）
【００８６】
実施例１１：３，９−ジフルオロ−１２−（４，６−ジデオキシ−５−イソプロポキシ−δ−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）インドロ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化１９】
2004518633.tif 000019
本例化合物は、反応溶媒としてイソプロパノールを用いる以外は、実施例９の記載と同様にして製造した。最終単離物は、全収率４３％の黄色凍結乾燥物である。
【００８７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．６６（ｓ、０．７５Ｈ）、１０．６３（ｓ、０．２５Ｈ）、１０．１２（ｓ、０．７５Ｈ）、１０．０８（ｓ、０．２５Ｈ）、９．０３（ｄｄ、Ｊ＝２．７、９．６Ｈｚ、１Ｈ）、８．９１（ｄｄ、Ｊ＝２．６、９．７Ｈｚ、１Ｈ）、７．７１（ｄｄ、Ｊ＝３．９、９．０Ｈｚ、０．７５Ｈ）、７．６７（ｍ、１．２５Ｈ）、７．５３（ｄｄ、Ｊ＝３．０、５．６Ｈｚ、０．７５Ｈ）、７．３３（ｍ、１．２５Ｈ）、６．４８（ｄ、Ｊ＝９．３Ｈｚ、０．２５Ｈ）、６．２８（ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ、０．７５Ｈ）、４．８９（ｄ、Ｊ＝４．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．６９（ｄ、Ｊ＝５．０Ｈｚ、１Ｈ）、４．２４−３．８６（ｍ、３Ｈ）、２．４３−２．１６（ｍ、２Ｈ）、１．８５（ｓ、３Ｈ）、１．２５（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２．２５Ｈ）、１．２１（ｄ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２．２５Ｈ）、１．０７（ｄ、Ｊ＝６．１Ｈｚ、０．７５Ｈ）、０．９７（ｄ、Ｊ＝０．７５Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５４８（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９４．９％（３２０ｎｍ）
【００８８】
実施例１２：２，３，９，１０−テトラヒドロ−１２−（４，６−ジデオキシ−５−メトキシ−δ−Ｄ−グルコピラノシル）−６，７，１２，１３−テトラヒドロ（５Ｈ）ベンゾ［ｂ］チエノ［２，３−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５，７−ジオン
【化２０】
2004518633.tif 000020
本例化合物は、実施例９の記載と同様にして製造し、全収率７０％の黄色凍結乾燥物で単離した。
【００８９】
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３３、１７０９、１４７５ｃｍ−１
１Ｈ−ＮＭＲ（ＴＨＦ−ｄ８、４００ＭＨｚ）：δ１０．５２（ｓ、１Ｈ）、１０．０６（ｄｄ、Ｊ＝８．１、１３．１Ｈｚ、１Ｈ）、９．２８（ｄｄ、Ｊ＝８．６、１１．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．１１（ｄｄ、Ｊ＝７．６、１０．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９０（ｄｄ、Ｊ＝７．１、１１．１Ｈｚ、１Ｈ）、６．５５（ｄ、Ｊ＝８．６Ｈｚ、１Ｈ）、４．７８（ｄ、Ｊ＝４．５Ｈｚ、１Ｈ）、４．５５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ）、４．２０−４．０２（ｍ、２Ｈ）、３．４１（ｓ、３Ｈ）、２．３３−１．９８（ｍ、２Ｈ）、１．５５（ｓ、３Ｈ）
ＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｅ５７３（Ｍ−Ｈ）−
ＨＰＬＣ：９９．５％（３２０ｎｍ）
【００９０】
生物学的活性
本発明化合物は、抗腫瘍特性を持つ有用な薬理学的作用物質である。トポイソメラーゼＩ活性特性を持つ化合物は、抗腫瘍剤として使用することができる。近年、多数の報告が文献に見かけられ、トポイソメラーゼＩ標的薬物の役割は、共有結合ＤＮＡ−トポイソメラーゼＩ複合体を安定させて、酵素−連鎖ＤＮＡ単一ストランド破断を生成することが示唆されている。
【００９１】
薬理学的見地から、トポイソメラーゼＩを標的にする利点が存在し；第１に、増殖する細胞および静態の細胞両方における比較的高レベルのその出現は、その機能が細胞の成長速度と無関係であることを示唆し、そして第２に、トポイソメラーゼＩ活性作用物質は、ゆっくり増殖する腫瘍並びに急速に増殖する腫瘍に有効となりうる。結腸腫瘍からの細胞は、正常な粘膜細胞より高い細胞内レベルのトポイソメラーゼＩを含有することが認められており、このことは、選択的な細胞毒利点の可能性を示唆する。
【００９２】
すなわち、本発明化合物による腫瘍細胞の増殖抑制は最初に、ヒト・トポイソメラーゼＩの有効な抑制によって証明した。また本発明の特定化合物、通常トポイソメラーゼＩアッセイで１０μＭ以下のＥＣ５０値を有する化合物について、ヒト／マウス腫瘍細胞増殖アッセイの抑制を試験した。
【００９３】
トポイソメラーゼＩ活性（インビトロ）
トポイソメラーゼＩ活性を、下記の手順で測定する。ＤＮＡにおいて化合物−誘発の、トポイソメラーゼＩ−仲介単一ストランド破断を検定する手順は、本質的にＨｓｉａｎｇらの「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」（２６０、１４８７３−１４８７８、１９８５年）に記載されている。１００％ＤＭＳＯに１０μＭまたは１０ｍｇ／ｍｌ溶液で溶解したサンプルは、他に特別な記載がない限り、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝剤で希釈する。
【００９４】
またマリン（ｍａｒｉｎｅ）バクテリオファージＰＭ２ＤＮＡ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｍａｎｎｈｅｉｍ）は、Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ緩衝剤で０．０２μｇ／μｌ濃度に希釈する。希釈の異なる被評価化合物を、希釈ＤＮＡと混合し、該混合物を、２倍の反応緩衝剤中の精製したヒト・トポイソメラーゼＩ（Ｔｏｐｏｇｅｎ）の１０００ユニット（１ユニットの酵素活性は、１００ｎｇのスーパーコイル化ＤＮＡを３７℃で約３０分内で弛緩しうる量として規定する）のアリコートに加え、反応を開始する。
【００９５】
化合物−ＤＮＡ−酵素混合物を、３７℃で３０分間培養してから、ドデシル硫酸ナトリウムおよびプロティナーゼＫ（Ｓｉｇｍａ）を含有する温ストップ緩衝剤で反応を停止する。これらの混合物をさらに３７℃で１０分間培養させ、この時、混合物をウオーターバスから取出し、クロロホルム／イソアミルアルコール（２４：１）混合物で抽出する。
【００９６】
遠心分離を行ってから、水性相のアリコートを、０．５μｇ／ｍｌのエチジウムブロマイド含有のＴｒｉｓ−ボレート緩衝剤中の０．９％アガロース（ＳｅａＫｅｍ）ゲルのウェルに入れ、１５時間電気泳動に付して、異なるトポロジ−異性体とニックおよび破断したＤＮＡｓを分離する。水中でゲルのよごれを除いた後、ゲルをＵＶ照射にさらすことによって、エチジウムブロマイド染色ＤＮＡ反応産物を可視化する。
【００９７】
照射したゲルの写真のネガを、濃度計でスキャンし、各サンプルの単一ストランドＤＮＡ破断形成のパーセントを得るために、ピーク下の面積を計算する。得られる用量−効果曲線のポイント間の補間によって、各化合物の中間有効濃度（ＥＣ５０）を得るが、これは、ＤＮＡにおいてトポイソメラーゼＩ−仲介単一ストランド破断を誘発する、化合物の効果の潜在力を規定する。
【００９８】
本発明の選択化合物のトポイソメラーゼＩ活性を、下記表Ｉに示す。
表Ｉ：
【表１】
2004518633.tif 000021
【００９９】
表Ｉにおける置換糖誘導体で例示する、本発明の新規化合物は、重要なトポイソメラーゼＩ活性を示す。
【０１００】
細胞に基づく細胞毒活性（インビトロ）
ネズミＰ３８８細胞系に対する増殖抑制活性を、以下の手順で測定する。ヒトおよび他の腫瘍細胞系を用い、「Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．」（４８、４８２７−４８３３、１９８８年）に記載の手順に従って、細胞成長および培養中の薬物感受性の可溶性テトラゾリウム／ホルマザン・アッセイの評価を行なう。
【０１０１】
細胞を９６ウェル・マイクロタイター平板にて、４０００細胞／ウェルで培養し、２４ｈ後に薬物を加え、連続して希釈する。細胞を３７℃で７２ｈ培養し、この時、メト硫酸フェナジン含有のテトラゾリウム染料，ＸＴＴを加える。生きている細胞中のデヒドロゲナーゼ酵素でＸＴＴを還元して、４５０ｎｍで光を吸収する形状とし、これを分光光度計で定量分析することができる。吸光度が増大すればするほど、生存細胞の数が増大する。
【０１０２】
結果をＩＣ５０で表示するが、これは、細胞増殖（すなわち、４５０ｎｍでの吸光度）を、未処置対照細胞のそれの５０％に抑制するのに必要な薬物濃度である。本発明の選択化合物の結果を下記表ＩＩに示す。
【０１０３】
表ＩＩ：
【表２】
2004518633.tif 000022
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
2004518633.tif 000057
2004518633.tif 000058