(57)【要約】【課題】冬眠心筋又は糖尿病性心筋症を治療する方法を提供する。【解決手段】冬眠心筋は局所的な血液供給減少により、生きた心筋の機能障害により特徴付けられるものである。冬眠筋細胞は細胞の完全性は保持されているが、収縮に必要な高エネルギーを維持することができない。ノルエピネフリンのようなカテコラミンの高い血漿レベルは、冬眠心筋による死亡を予測させるものと信じられている。同様に高いレベルのカテコラミンは糖尿病患者における心筋症を生じさせる。ＧＬＰ−１は血漿ノルエピネフリンレベルを減少させ、従って、冬眠心筋又は糖尿病性心筋症を治療するのに有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与することからなることを特徴とする冬眠心筋および糖尿病性心筋症の治療方法。
【請求項２】
ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与し、該患者は更に冬眠心筋症を有していることを特徴とするうっ血性心不全の患者の治療方法。
【請求項３】
ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与し、該患者は更に冬眠心筋症を有していることを特徴とする虚血性心筋症の患者の治療方法。
【請求項４】
糖尿病性心筋症の患者の治療方法であって、ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与することからなることを特徴とする方法。
【請求項５】
該投与を連続的に行う請求項１ないし４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
該投与を非経口的に行う請求項１ないし４のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
該ＧＬＰ−１分子の治療有効量が、血漿又は心臓ノルエピネフリンレベルを減少させるのに有効なものである請求項１ないし４のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
患者への必要とする血漿又は心臓ノルエピネフリンレベルの減少を生じさせる方法であって、ＧＬＰ−１分子の治療有効量を該患者に投与することを特徴とする方法。
【請求項９】
該ＧＬＰ−１分子がＧＬＰ−１（７−３６）アミドである請求項１ないし４又は８のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願は、アメリカ特許仮出願第６０／２４１，８３４号（２０００年１０月２０日出願）、同第６０／２４２，１３９号（２０００年１０月２３日出願）及び同第６０／２４５，２３４号（２０００年１１月３日出願）の優先権を主張し、これらを組み込むものである。
（発明の背景）
心不全は、依然として主たる健康上の問題となっている。米国の人口において約四百万人もの人が心不全を有している。着実な高齢化と共に、毎年、４０万人もの人が心不全の始まりを経験しており、５年死亡率は５０％に近づいている。
この心不全は単一の病的存在と言うよりは、心臓の効果的機械的作動の根本的異常を反映する多数の異なる病因を伴った臨床上の症候群であり、従って心臓が人体の要求を満足させることができないものと定義することができる。心不全には種々の形態のものがある。例えば、「前方」および「後方」心不全である。後方心不全はうっ血性心不全と同じであり、これは脈圧の増加（すなわち、血液を心臓に戻す静脈内の圧力増加）によるもので、これは心臓がその内容物を正常に排出することができないことからもたらされ、肺うっ血および全身性うっ血につながる。これと対照的に、前方心不全は心臓が正常な組織灌流を維持できないことからもたらされ、疲労、虚弱、体重減少、脳機能障害などにつながる。
【０００２】
冬眠心筋：
「冬眠心筋」は前方心不全の可なりの部分を構成するもので、肺うっ血又は全身性うっ血を伴うこともあり、伴わないこともある。この病状は、慢性的非重度の虚血（血液供給減少から生じる低酸素症）の結果として、局所的心筋機能低下を反映するものである。虚血の程度は壊死（梗塞）を生じさせるのに十分ではないが、心筋への酸素添加、燃料供給を局所的に制限し、心筋の一部が活動低下又は休止する。冬眠筋細胞は生き続けるが、心臓のポンプ作用には寄与しない。心筋損傷の重度は冬眠の期間に依存する。最終的には、その損傷は不可逆的となり、心筋機能不全の程度が心臓能力を妥協させ、心拍出量を減少させるのに十分なものとなったとき、心不全を発病させる。すなわち、虚血性心筋症は、冬眠心筋が適当に治療されない限り、冬眠心筋の究極的結果として現れる。
【０００３】
伝統的に、冬眠心筋は冠状動脈バイパス手術又は血管形成術による外科的血管再生術により治療されてきた。しかし、手術の煩わしさおよびこれら技術と関係する死亡発生又は再狭窄などにより、補足的又は他の薬理学的介入に対する必要性が強く望まれている［例えば、Ｆａｔｈ−Ｏｒｄｏｕｂａｄｉ等、Ｈｅａｒｔ　８２：２１０−２１６（１９９９）および、Ｐａｇａｎｏ等、Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃａｒｄｉｏｌ．　１４：５０６−５０９（１９９９）］。効果的な薬理学的介入は、外科手術が禁忌の場合、例えば冬眠心筋が軽度の場合、患者の病状が外科手術に耐えられない程度に重症と思われる場合などには特に有用である。
【０００４】
うっ血性心不全は最初に、心筋収縮性を増大させる血管拡張神経薬および筋変力剤を用いて薬理学的に治療された（ＷＯ　９９／４０７８８参照）。これらの薬剤は短期間では血行動態を改善させるが、最近の研究では改善された血行動態と臨床結果との間に相違があることが見出された。事実、うっ血性心不全に関連する死亡の唯一の危険要因はカテコラミン・ノルエピネフリンの血漿レベルである［Ｃｏｈｎ等、“慢性うっ血性心不全の患者を経過予測するためのガイドとしての血漿ノルエピネフリン”、Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．　３１１：８１９−８２３（１９８４）；　Ｌａｈｉｒｉ等、Ｊ． Ｃａｒｄｉｏ． Ｐｈａｒｍ． ３３ （Ｓｕｐｐｌ． ３）： Ｓ９−Ｓ１６（１９９９）参照］。従って、うっ血性心不全の場合、筋変力剤の長期間の投与は禁忌である。うっ血性心不全を治療するのに最も有用な化合物は、血管拡張作用があるＡＣＥ抑制剤と、抗アドレナリン作用を示すカルベディロールのような多機能性β−ブロッカーであることが証明された［Ｌａｈｉｒｉ等、（１９９９）参照］。
【０００５】
うっ血性心不全と同様に、筋変力剤の投与は冬眠心筋に関連する虚血症を悪化させるという証明がある。或る研究では、筋変力性ドブタミンを用い、低レベルで治療した場合、冬眠心筋において心筋機能が増大したが、ドブタミンを高レベルで使用した場合、心筋要求が、虚血閾値を超える点まで増大することを示している［Ｓｅｎｉｏｅｒ等、“低および高投与量のドブタミン輸液の間における、心臓壁厚増大の「二期」応答を利用したドブタミン応力超音波心臓造影による心筋虚血症の検出強化”、 Ｊ． Ａｍ． Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．　２６：２６−３２（１９９５）参照］。この研究ならびに類似した研究により、ドブタミンの短期の血行動態についての利益にも拘らず、筋変力剤の死亡率に対する長期の利益については疑問が投げかけられている。特に、心筋要求の更なる増加は冬眠心筋に関係する虚血を高め、壊死およびアポトーシスを悪化させることが提案されている［Ｌａｈｉｒｉ等、（１９９９）参照］。
【０００６】
従って、冬眠心筋については筋変力剤も禁忌されること、および冬眠心筋はうっ血性心不全の治療に使用されているものと同様の非変力剤又は抗アドレナリン製剤を用いて治療されるべきことが示唆されている。このうっ血性心不全から類推して、ノルエピネフリンと同様に、カテコラミンの高血漿レベルは冬眠心筋の臨床結果についても、その変力特性のために有害であることが示唆されている［Ｌａｈｉｒｉ等、（１９９９）参照］。
冬眠心筋の長期治療について限られた効能を有する薬剤はほんの僅かしか知られていないことから、冬眠細胞を活性化させる能力を有する新規な治療薬についての必要性が強く求められている。特に、カテコラミンの血漿レベルを減少させることができる薬剤の必要性が強く求められている。
【０００７】
糖尿病性心筋症：
糖尿病の患者は糖尿病性心筋症（ＤＣＭ）を発達させる危険性が大きい。この病気の正確な病因については、糖尿病に関係する多数の心筋異常があるためなどからして、依然として議論の余地がある。しかし、ＤＣＭは冠状アテローム性動脈硬化の欠乏の際に発生する可逆的心筋症として明確に定義されている［Ｂｅｌｌ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８： ７０８−７１４（１９９５）参照］。ＤＣＭは虚血症に一部起因する心筋繊維症により特徴づけられる［同上］。糖尿病の特徴である高血圧も繊維症を悪化させ、ＤＣＭが重症になり、致命的になることもある。
【０００８】
この高血圧は少なくとも一部は交感神経系の異常な活性化によるものである［Ｐａｌｌａｂ等、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２５２：　Ｅ７３４−７３９］。この異常活性化の兆候として心臓におけるノルエピネフリンレベルの増加と、心臓による代謝異常を挙げることができる。ノルエピネフリンのようなカテコラミンの心臓又は循環系における高レベルはＤＣＭの発展をもたらす。これに伴う心筋損傷は一部、ノルエピネフリンの酸化分解生成物によりもたらされると信じられている［同上］。従って、糖尿病患者のための理想的抗高血圧剤は、高血糖症又は低血糖症を悪化させることなく交感神経系の活性化を減少させるものであると言うことができる。しかし、現時点では、そのような特徴を与える化合物は殆ど見当たらない。
【０００９】
（発明の概要）
ＧＬＰ−１の投与がノルエピネフリンの血漿レベルを抑制することが意外にも見出された。このうっ血性心不全から類推して、ノルエピネフリンの血漿レベルの減少は冬眠心筋の虚血性ストレスを和らげ、それにより臨床結果を改善することが予測される。従って、ＧＬＰ−１の投与は、それ単独、若しくは現存の治療養生法と関連させた形で、冬眠心筋の治療方法として有用である。同様に、ＧＬＰ−１は、糖尿病性心筋症の発展に関係する心臓および／又は血漿におけるノルエピネフリンレベルを減少させるのに有用である。
ＧＬＰ−１は、冬眠心筋又は糖尿病性心筋症の治療方法において、ノルエピネフリンレベルを減少させる。従って、冬眠心筋又は糖尿病性心筋症の治療方法は、ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与することからなる。ＧＬＰ−１分子はうっ血性心不全又は虚血性心筋症を患っている患者、特に更に冬眠心筋を有する患者に対しその治療有効量を投与してもよい。ＧＬＰ−１分子の治療有効量は、血漿および／又は心臓におけるノルエピネフリンレベルを減少させる。ＧＬＰ−１分子は静脈注射又は皮下注射により投与することが好ましい。前者の方法はＧＬＰ−１分子による急性治療に適し、後者の方法は慢性治療法として好ましい。
本発明において、ＧＬＰ−１分子の好ましい例はＧＬＰ−１（７−３６）アミド、ＧＬＰ−１（７−３７）アミドおよびエクセンジン（ｅｘｅｎｄｉｎ）−４である。ＧＬＰ−１分子にはＧＬＰ−１レセプターと特異的に結合し、活性化させる分子が含まれる。
【００１０】
（発明の具体的説明）
本発明は冬眠心筋（ＨＭ）の治療のための新規な方法および組成物を提供するものである。特に、本発明は、ＧＬＰ−１分子の治療有効量を患者に投与することからなるＨＭを患っている患者の治療方法を提供することを含む。本発明者は、ＨＭを患っている哺乳動物において、ＧＬＰ−１分子を投与することにより、非投与動物と比較して心臓機能の急速な回復がもたらされることを意外にも見出したものである。この発見は、治療哺乳動物におけるノルエピネフリンの血漿レベルの意外な減少にも関係する。
【００１１】
本明細書で、「うっ血性心不全（ＣＨＦ）」とは、心臓がその内容物を正常に排出することができないことからもたらされる脈圧の増加により特徴づけられる病状を表すものであって、これは肺うっ血および全身性うっ血につながる。ＣＨＦの患者の心筋はポンプとしての作用が減少している。ＣＨＦは循環系および神経液の変化を伴い、その結果、十分な血液および酸素供給を末梢組織および生命維持器官に対し行うことができない。
「冬眠心筋」とは、灌流減少により機能が損傷した生活能力のある心筋を意味する。ＨＭ は細胞の完全性を維持しているが、収縮のための高エネルギー要求を維持することができない。ＨＭは傷形成による不可逆的心筋損傷である梗塞心筋とは区別され、更に、灌流の正常化にも拘らず収縮性機能不全を示す気絶（ｓｔｕｎｎｅｄ）心筋とは区別される［Ｊａｄｖａｒ等、Ｒａｄｉｏ Ｇｒａｐｈｉｃｓ， １９： ９１５−９２６（１９９９）参照］。
【００１２】
臨床上、ＨＭはドブタミン応力超音波心臓造影法を使用することにより検出することができる［Ｓｈａｎ等、Ｉｎ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｃｌｉｎｉｃｓ、Ｇ． Ａｕｒｉｇｅｍｍａ． ｅｄ．， Ｗ．Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，フィラデルフィア． Ｖｏｌ． １７、 Ｎｏ．３，　５３９−５５３（１９９９）参照］。ＨＭは更に、心臓の陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）により検出することができ、これは単一光子放射断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）よりも正確である。２−（フッ素−１８）フルオロ−２−デオキシ−Ｄ−グルコースを用いたＰＥＴは、血管再生後に生活力のある冬眠心筋を識別するための地域的又は左心室の機能を判定する評価の基準と考えられている。応力磁気共鳴映像法は冬眠心筋症を更に診断し、その病気を他の心筋病状を区別するのに使用されてきた。ＨＭは左心室（ＬＶ）機能の低下により特徴づけられ、不可逆的機能不全又は傷跡と関係する顕著な機能低下と比較して穏やかである。心室の収縮期の壁厚（ＳＷＴ）の程度も心筋冬眠の特徴である。ＳＷＴは、正常、不可逆的損傷又は傷付いた心筋と比較して、休息時には著しく減少し、ＳＷＴ機能不全はストレス下では顕著に改善する［Ｓｅｎｓｋｙ等、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ， ２１５： ６０８−６１４参照］。
【００１３】
「糖尿病性心筋症（ＤＣＭ）」は、冠状アテローム性動脈硬化の欠乏の際に発生する糖尿病における可逆的心筋症として定義されている［Ｂｅｌｌ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １８： ７０８−７１４（１９９５）； Ｆｅｉｎ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ， １３： １１６９−１１７９（１９９０）参照］。ＤＣＭは心筋肥大および繊維症により特徴づけられる。微小血管疾患も存在し、或る場合には、うっ血性および制限的心筋症の双方が存在することもある。
【００１４】
以下の実施例で使用された「ペーストドッグ」モデルは、ＨＭを研究するためのシステムを提供する。なぜならば、心臓の応答能力を超えて心臓が働き、それによりエネルギーが制限される状況が生じるからである。他の適当な動物モデルも、例えばイヌおよびブタにおいて慢性的機能不全生活性心筋を研究するために利用することができ、これらは治療法について実験室での研究を可能にする。例えば、ブタにおける固定ＬＡＤ（左前方降下動脈）狭窄モデルでは、心筋灌流減少による心不全が実証され、これは梗塞のないＨＭ症のヒトに類推させることができる［Ｃａｎｔｙ等、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ２７７： Ｈ４１７−Ｈ４２２（１９９９）参照］。糖尿病のイヌ、マウス、ラットなどの類似した動物モデルがＤＣＭの研究に利用することができる［Ｂｅｌｌ（１９９５）；Ｆｅｉｎ（１９９０）参照］。
【００１５】
「ＧＬＰ−１分子」には以下のものが含まれる。哺乳類ＧＬＰペプチドおよびグルカゴンは同一の遺伝子で符号化される。回腸において、表現型はＧＬＰペプチドホルモンの２つの主たる類、すなわち、ＧＬＰ−１およびＧＬＰ−２に処理される。ＧＬＰ−１（１−３７）は配列、Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　（配列ＩＤ Ｎｏ．１）を有する。　ＧＬＰ−１（１−３７）は翻訳後処理によりアミド化されＧＬＰ−１（１−３６）ＮＨ２を生じ、これは配列、Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（ＮＨ２）（配列ＩＤ Ｎｏ．２）を有する。或いは、ＧＬＰ−１（１−３７）は酵素的に処理されてＧＬＰ−１（７−３７）を生じ、これは配列、Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ（配列ＩＤ Ｎｏ．３）を有する。ＧＬＰ−１（７−３７）もアミド化されＧＬＰ−１（７−３６）アミドを生じ、これはＧＬＰ−１分子の自然型であり、配列、Ｈｉｓ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（ＮＨ２）（配列ＩＤ Ｎｏ．４）を有する。同様に、ＧＬＰ−１（１−３６）（ＮＨ２）も処理することによりＧＬＰ−１（７−３６）（ＮＨ２）とすることができる。
【００１６】
腸管Ｌ細胞はＧＬＰ−１（７−３７）（配列ＩＤ Ｎｏ．３）およびＧＬＰ−１（７−３６）（ＮＨ２）（配列ＩＤ Ｎｏ．４）をそれぞれ１対５の割合で分泌する。これらのＧＬＰ−１の切頭型は自然位での半減期は短く、すなわち、１０分未満であり、アミノジペプチダーゼＩＶにより不活性化されＧｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ（配列ＩＤ Ｎｏ．５）およびＧｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（ＮＨ２）（配列ＩＤ Ｎｏ．６）をそれぞれ生じさせる。これらペプチドＧｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ（配列ＩＤ Ｎｏ．５）およびＧｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｇｌｎ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ（ＮＨ２）（配列ＩＤ Ｎｏ．６）は肝臓グルコース生産に影響を及ぼすことが推測されているが、すい臓からのインシュリンの生産又は放出を刺激することはない。
【００１７】
本明細書において、「ＧＬＰ−１分子」の用語は、ＧＬＰ−１（１−３７）、ＧＬＰ−１（１−３６）ＮＨ２、ＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ２、（ＧＬＰ−１（７−３６）アミド）（これらを「ＧＬＰ−１ペプチド」と総称する）。本発明は組換えヒトＧＬＰ−１ペプチドおよび他の種から得られるＧＬＰ−１ペプチド（組換え又は合成）の使用を含む。
「ＧＬＰ−１分子」は、更にＧＬＰ−１ペプチドの生物学的に活性の変異体、類似体および誘導体を表示するものである。この場合の「生物学的に活性」とは、ＧＬＰ−１（７−３６）生物学的活性を有することを意味するが、この変異体の活性が天然のＧＬＰ−１（７−３６）アミドよりも小さい場合および大きい場合でもよいと理解されるべきである。ＧＬＰ−１（７−３６）アミドはＧＬＰ−１の天然の生物学的活性型である［Ｇｏｋｅ等、Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， １３： ８５４−８６０（１９９６）参照］。本発明のＧＬＰ−１分子は、ＧＬＰ−１の作動物質を発現するポリヌクレオチドを含む。すなわち、ＧＬＰ−１レセプター分子の活性体および、とりわけインシュリン生産β−細胞に見られる二次メッセンジャー活性を発現するものを含む。同じく、β−細胞におけるＧＬＰ−１レセプターの作動物質であるＧＬＰ−１擬似体は、ＧＬＰ−１レセプターを活性化させるべく特に設計された化合物を例えば含む。
【００１８】
ＧＬＰ−１分子の生物学的活性は、当業者に公知のように、ｉｎ ｖｉｔｒｏにより、更にｉｎ ｖｉｖｏで動物モデルおよびヒトを用いた試験により判定することができる。ＧＬＰ−１分子としては、ペプチド、ペプチド擬似体、あるいは他の分子であっても、それがＧＬＰ−１レセプター（例えばＧＬＰ−１（７−３６）アミドレセプターおよびその二次メッセンジャーカスケード）に結合する、あるいはこれを活性化する任意の分子が含まれる。ＧＬＰ−１レセプターは細胞表面たんぱく質であって、例えば、インシュリン生産すい臓β−細胞に見られるものである。ＧＬＰ−１（７−３６）レセプターの特徴は公知である。薬品又はペプチドが、ＧＬＰ−１レセプターに対し結合ないし活性化するか否かの判定方法は当業者に公知のものであり、これは結合化学ライブラリーおよび高スループット・スクリーニング法の助けを借りて行うことが好ましい。ＧＬＰ−１分子には、向インシュリン活性を有する種（ｓｐｅｃｉｅｓ）が含まれ、これら種はＧＬＰ−１レセプター分子の作動物質であり、とりわけ、インシュリン生産β−細胞に対し二次メッセンジャー活性を有する種が含まれる。
【００１９】
ＧＬＰ−１の生物学的活性は標準的方法で判定することができる。つまり、一般に、レセプター結合活性スクリーニング手法により行われ、これには表面にＧＬＰ−１レセプターを発現する適当な細胞、例えば、ＲＩＮｍＳＦ細胞又はＩＮＳ−１細胞のようなインスリノーマ細胞ラインが使用される［Ｍｏｓｊｏｒ、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓ．， ４０： ３３３−３４３（１９９２）およびＥＰ ７０８１７０参照］。ＧＬＰ−１レセプターを発現するよう作成された細胞も使用することができる。放射免疫定量法を用いて膜に対するトレーサーの特異的結合を測定することに加えて、ｃＡＭＰ活性又はグルコース依存インシュリン生産も測定することができる。１つの方法として、本発明のレセプターを符号化するポリヌクレオチドを用い、細胞を感染させ、それによりＧＬＰ−１レセプターたんぱく質を発現させる。従って、例えば、これらの方法を用い、このような細胞を選別されるべき化合物と接触させることによりレセプター作動物質について選別を行い、その化合物がレセプターを活性化させ、信号を発生させるか否かを判定する。
【００２０】
多クローン性および単クローン性抗体を利用して、本明細書に記載の方法に使用するため、ＧＬＰ−１様ペプチドを検出し、精製し、識別することができる。ＡＢＧＡ１１７８のような抗体は、完全な、継ぎ合わせていないＧＬＰ−１（１−３７）、又はＮ−末端切頭ＧＬＰ−１（７−３７）又は（７−３６）アミドを検出することができる。他の抗体は、先駆体分子のＣ−末端の先端を検出し、それにより減法によって生物学的に活性の切頭ペプチド、例えばＧＬＰ−１（（７−３７）アミドの量を計算することができる［Ｏｒｓｋｏｖ等、Ｄｉａｂｅｔｅｓ， ４２： ６５８−６６１（１９９３）； Ｏｒｓｋｏｖ等、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， ８７： ４１５−４２３（１９９１）参照］。
他の選別法として、ＧＬＰ−１レセプターを発現する細胞、例えば感染ＣＨＯ細胞を使用する方法があり、これは細胞外ｐＨ又はレセプター活性化によるイオン変化を測定するシステムに使用することができる。例えば、潜在的作動物質をＧＬＰ−１たんぱく質レセプターを発現する細胞と接触させ、二次メッセンジャー応答、例えば信号変換、イオン又はｐＨ変化を測定し、潜在的作動物質が有効か否かを判定する。
【００２１】
ＧＬＰ−１（（７−３６）アミドレセプターを介して活性を示すグルカゴン様ペプチドの作動物質については、以下の文献に示されている。すなわち、ＥＰ ０７０８１７９；　Ｈｊｏｒｔｈ等、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２６９（４８）： ３０１２１−３０１２４（１９９４）； Ｓｉｅｇｅｌ等、Ａｍｅｒ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃ．， ５７ｔｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｅｓｓｉｏｎｓ， Ｂｏｓｔｏｎ （１９９７）； Ｈａｒｅｔｅｒ等、Ａｍｅｒ． Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃ．， ５７ｔｈ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｓｅｓｓｉｏｎｓ， Ｂｏｓｔｏｎ （１９９７）； Ａｄｅｌｈｏｒｓｔ等、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２６９（９）： ６２７５−６２７８（１９９４）； Ｄｅａｃｏｎ等、１６ｔｈＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ， Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ （１９９６）；　Ｉｒｗｉｎ等、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ．， ９４： ７９１５−７９２０（１９９７）；　Ｍｏｓｊｏｖ、Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ． Ｒｅｓ． ４０： ３３３−３４３（１９９２）。更に、Ｇｏｋｅ等、Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， １３： ８５４−８６０（１９９６）参照のこと。最近の文献には、Ｂｌａｃｋ　Ｗｉｄｏｗ　ＧＬＰ−１およびＳｅｒ２ＧＬＰ−１が開示されている［Ｈｏｌｚ等、Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ， Ｐａｒｔ Ｂ， １２１： １７７−１８４（１９９８）およびＲｉｔｚｅｌ等、Ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｌｕｃａｇｏｎｓ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ−１ ａｎａｌｏｇ ｗｉｔｈ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｐｌａｓｍａ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ， Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．， １５９（１）： ９３−１０２（１９９８）参照］。
【００２２】
「ＧＬＰ−１分子」には、本明細書に定義する生物学的活性ＧＬＰ−１変異体を発現するポリヌクレオチドにより符号化されるペプチドが含まれる。更に、本発明で含まれるものは、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドと比較して、１又はそれ以上のアミノ酸置換、付加又は削除を含むペプチドであるところのＧＬＰ−１分子である。１例として、アミノ酸置換、付加又は削除の数は、３０アミノ酸又はそれ以下、２５アミノ酸又はそれ以下、２０アミノ酸又はそれ以下、１５アミノ酸又はそれ以下、１０アミノ酸又はそれ以下、５アミノ酸又はそれ以下、或いは、これらの数の中間の任意の整数である。本発明の１つの態様において、上記置換には１以上の保守的置換が含まれる。この「保守的」置換とは、アミノ酸残基が他の生物学的に活性の同様の残基により置換されていることを示すものである。この保守的置換の例として、疎水性残基、例えばイソロイシン、バリン、ロイシン又はメチオニンを他のものと置換するもの、１つの極性残基を他のものと置換するもの、例えばアルギニンをリシンと置換するもの、グルタミン酸をアスパラギン酸と置換するもの、グルタミンをアスパラギンと置換するものなどである。以下の表は保守的アミノ酸置換を説明するものであるが、これに制限されるものでない。
【００２３】
当初の残基　　　　　　　置換基の例
ＡＬＡ　　　　　　　　　ＳＥＲ，ＴＨＲ
ＡＲＧ　　　　　　　　　ＬＹＳ
ＡＳＮ　　　　　　　　　ＨＩＳ，ＳＥＲ
ＡＳＰ　　　　　　　　　ＧＬＵ，ＡＳＮ
ＣＹＳ　　　　　　　　　ＳＥＲ
ＧＬＮ　　　　　　　　　ＡＳＮ，ＨＩＳ
ＧＬＵ　　　　　　　　　ＡＳＰ，ＧＬＵ
ＧＬＹ　　　　　　　　　ＡＬＡ，ＳＥＲ
ＨＩＳ　　　　　　　　　ＡＳＮ，ＧＬＮ
ＩＬＥ　　　　　　　　　ＬＥＵ，ＶＡＬ，ＴＨＲ
ＬＥＵ　　　　　　　　　ＩＬＥ，ＶＡＬ
ＬＹＳ　　　　　　　　　ＡＲＧ，ＧＬＮ，ＧＬＵ，ＴＨＲ
ＭＥＴ　　　　　　　　　ＬＥＵ，ＩＬＥ，ＶＡＬ
ＰＨＥ　　　　　　　　　ＬＥＵ，ＴＹＲ
ＳＥＲ　　　　　　　　　ＴＨＲ，ＡＬＡ，ＡＳＮ
ＴＨＲ　　　　　　　　　ＳＥＲ，ＡＬＡ
ＴＲＰ　　　　　　　　　ＡＲＧ，ＳＥＲ
ＴＹＲ　　　　　　　　　ＰＨＥ
ＶＡＬ　　　　　　　　　ＩＬＥ，ＬＥＵ，ＡＬＡ
ＰＲＯ　　　　　　　　　ＡＬＡ
【００２４】
ＧＬＰ−１ペプチド変異体には、上記ペプチドの化学的誘導体、変異体が含まれると理解されるべきである。例えば、非天然のアミノ酸残基を有するペプチド（例えば、タウリン残基、ベータおよびガンマアミノ酸残基、Ｄ−アミノ酸残基）、Ｃ−末端官能基変性体、例えばアミド、エステルおよびＣ−末端ケトン変性体およびＮ−末端官能基変性体、例えば、アシル化アミン、シッフ塩基、環化体、例えばアミノ酸ピログルタミン酸などが挙げられる。
【００２５】
更に、本発明に含まれるものとして、（１）上記配列ＩＤ Ｎｏ． １， ２， ３， ４および（２）これらの切頭配列に対し、５０％以上の配列同一性を有するペプチド配列、より好ましくは９０％以上の配列同一性を有するペプチド配列を挙げることができる。なお、ここで配列同一性とは、周知の標準アルゴリズムを用いて２つの分子間の比較を指すものである。本発明において配列同一性を計算するための好ましいアルゴリズムはスミス−ウォーターマンアルゴリズムであり、その場合、上記配列ＩＤ Ｎｏ． １が参照配列として用いられ、ポリヌクレオチド相同物の百分率同一性をその全長に亘って明確にする。適合、不適合、挿入又は削除についてのパラメータ値の選択は、或るパラメータ値が他のものよりも生物学的により現実的結果を生じさせるものであったとしても、それは任意である。スミス−ウォーターマンアルゴリズムについてのパラメータ値の好ましいセットは「最大類似区分（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｓｅｇｍｅｎｔｓ）」アプローチに示されており、この場合、適合した残基については、１の値が、非適合の残基については、１／３の値が用いられる［この残基は単一のヌクレオチド又は単一のアミノ酸であってもよい（Ｗａｔｅｒｍａｎ， Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ４６：４７３−５００（１９８４））］。挿入および削除（ｉｎｄｅｌｓ）、ｘは以下のように重みが付けられている。
ｘｋ　＝　１＋ｋ／３
ここで、ｋは与えられた挿入又は削除（Ｉｄ）における残基の数である。
例えば、１８個のアミノ酸置換と、３個のアミノ酸挿入を除いて、上記配列ＩＤ Ｎｏ． １の４２個のアミノ酸残基配列に対し同一性がある場合、百分率同一性は以下の式により与えられる。
［（１ｘ４２適合）　（１／３ｘ１８不適合）−（１＋３／３ｉｎｄｅｌｓ）］／４２ ＝ ８１％同一性
【００２６】
本発明の「ＧＬＰ−１分子」には、アメリカドクトカゲの毒液中の６個のペプチドが含まれ、これらはＧＬＰ−１に対し同族体である。これらの配列が表１にＧＬＰ−１の配列と比較して示されている。
【００２７】
【表１】
位置１
2004512311.tif 000002
【００２８】
ペプチド（ａ， ｂ， ｄ， ｅ， ｆ およびｇ）は、位置１，７，１１および１８において一致する。ＧＬＰ−１およびイクセンジン（Ｅｘｅｎｄｉｎ）は更に、位置４，５，６，８，９，１５，２２，２３，２５，２６および２９において一致する。位置２において、Ａ，Ｓ およびＧは構造的に類似する。位置３において、残基Ｄ およびＥ（ＡｓｐおよびＧｌｕ）は構造的に類似する。位置２２および２３において、Ｆ（Ｐｈｅ） およびＩ（Ｉｌｅ）は構造的にＹ（Ｔｙｒ） およびＬ（Ｌｅｕ）に類似する。同様に、位置２６において、Ｌ およびＩは構造的に同一である。
従って、ＧＬＰ−１の残基３０のうち、イクセンジン３および４は１５個の位置で同一であり、別の５個の位置で等価である。根本的に構造の明らかに異なる唯一の位置は、残基１６，１７，１９，２１，２４，２７，２８および３０である。イクセンジンは更に９個の余分の残基をカルボキシル末端に有している。
【００２９】
ペプチドからなる本発明のＧＬＰ−１分子は、固相ペプチド化学合成により作ることができる。これらのペプチドは、標準的手法を用い従来の組換え技術を用いて作成することもできる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ”， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ．（１９８９））。ここで「組換え」とは、遺伝子が組換え（例えば微生物又は哺乳類の）発現システム（本明細書に記載のようにＧＬＰ−１分子を符号化するポリヌクレオチドを含むように遺伝子的に変性されたもの）から得られるということを意味する。
【００３０】
ＧＬＰ−１様ペプチドは、組換え細胞培養から回収、精製することができ、その場合の方法としては、特に制限はないが、硫酸アンモニウム又はエタノール析出、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、フォスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、レクチンクロマトグラフィーなどを用いることができる。高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は最終精製工程で用いることができる。
【００３１】
本発明のＧＬＰ−１分子ペプチドは、自然に精製された生成物であっても、化学的に合成された製品であっても、あるいは原核生物又は真核生物（例えば、バクテリア，酵母、高級植物、昆虫、培養した又はｉｎ ｖｉｖｏの哺乳類細胞）から組換え技術により製造されたものであってもよい。組換え技術において使用された宿主の種類によっては、本発明のポリペプチドは一般に非グリコシル化されているが、グリコシル化されていてもよい。本発明で特に好ましいＧＬＰ−１分子はＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−１（７−３７）アミド、更にイクセンジン−４である。
【００３２】
治療方法：
本発明の治療方法はＨＭを患っている患者の治療に有用である。このような患者はうっ血性心不全も患っていることがある。その他、その患者はＤＣＭを患っているか、あるいはその危険性がある。一般に、本発明のＧＬＰ−１分子は非経口用調剤として投与される。ＨＭを患っている患者に対し、本発明のＧＬＰ−１分子はその他の公知の任意の手段により投与することができる。その投与の方法の例としては、皮下注射、微小圧注射、外部又はインプラントポンプによる方法、デポット注射、その他の長期分配投与装置による方法などを挙げることができるが、これらに限定されない。その他の投与方法、例えば経皮、経膜投与、パッチ又は頬を利用する方法も用いることができる。口からの投与も適当なこともある。肺を介しての投与、例えば吸入などを用いることもできる。
【００３３】
投与のルートも特定の治療法について最適化することができる。もし、慢性のＨＭの治療が必要なときは、投与を外部輸液装置を用い連続的な皮下灌流を介して行うことができる。これと対照的に、急性のＨＭの治療が必要なときは、関係する心不全の場合と同様に、静脈内輸液が好ましい。
ＧＬＰ−１分子の投与の時期は治療されるべき病状に応じて選択することができる。ＧＬＰ−１分子の投与はＨＭ又はＤＣＭが診断されたとき、直ちにおこなってもよい。その投与の方式は、必要に応じ連続的でも、間歇的でもよい。心不全は急速に悪化する急性疾患の場合、数時間又は数日の連続的投与が好ましい。慢性治療の場合、ＧＬＰ−１分子を数週間ないし数ヶ月に亘って連続的輸液により投与してもよい。
投与量は病気の重度、患者の状態に応じて選択される。ＧＬＰ−１（７−３６）アミドを使用する利点は、後の高血糖症の恐れなく高投与量を使用することができることである。なぜならば、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドの作用はグルコースレベルに依存するからである。従って、悪影響の恐れなく、１０．０ｎｍｏｌ／ｋｇを使用することができる。静脈投与の場合は、ＧＬＰ−１分子の典型的投与量は１．５ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎである。この投与の範囲は、約０．１ないし１０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎの間で選択することができる。皮下投与の場合、最適投与量は５ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎであり、同じく約０．５ないし５０ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎの間で選択することができる。
【００３４】
ＧＬＰ−１は、ＨＭ又はＤＣＭの治療に用いられている公知の他の治療薬と同時に投与することもできる。ＨＭについて言うと、そのような治療薬にカルベヂオール、ＡＣＥ抑制剤、その他の抗ＨＭ剤、例えばニトレート（ｎｉｔｒａｔｅｓ）、ヒドラジン、ビソプロロール、メトプロロールが含まれる（Ｌａｈｉｒｉら）。ＧＬＰ−１はＨＭの外科的治療、例えば心臓バイパス手術、血管形成手術における付属物として投与することもできる。ＧＬＰ−１の投与は、外科手術の前後又はその間において行うことができる。外科手術が行われない場合又は好ましくない場合、ＧＬＰ−１を他の治療手段として投与してもよい。ＧＬＰ−１を用いた治療は、冬眠心筋が軽度の場合など外科手術が禁忌の場合のみならず、患者の状態が手術を行えないような重症の場合にも有用である。ＡＣＥ抑制剤もＤＣＭの治療に好ましい化合物の１つである（Ｂｅｌｌ（１９９５））。
【００３５】
なお、「治療」とは、存在している病状の改善を意味するものである。また、治療が病状の完全な排除、除去に必ずしもつながらないことも理解されるであろう。また、治療は緩和作用も意味するものである。つまり、病状の悪化を減少させることである。より重大な状態を生じさせる病状の軽減もこの用語に包含される。従って、糖尿病性心筋症の治療方法は、糖尿病患者におけるノルエピネフリンレベルを減少させる方法からなるものである。なぜならば、これが心筋症につながり又はそれを悪化させることになるからである。
【００３６】
実施例１
ビーグル犬に、有知覚動物における歩行データを長期に亘って収集できるよう、遠隔装置を装着させた。この装置は、ＬＶ圧、心筋酸素消費量（ＭＶＯ２、心筋の能率を表す）、冠動脈流（ＣＢＦ）および心拍出量（ＣＯ）を測定するものである。このイヌにペースを強制し、３−４週間に亘り、心拍速度が約２４０ビート／分に上昇するようにした。それにより、予測どおり軽度のＨＭを誘起させた。このＨＭイヌモデルはＨＭの治療効果を評価するための承認されたモデルである［Ｋｉｕｃｈｉ等、“Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｂｅｔａ−ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐａｃｉｎｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ．”， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９１：９０７−９１４（１９９３）］。
【００３７】
ＨＦを誘起させた後、５匹のイヌにＧＬＰ−１（７−３６）アミドの静脈注射（１．５ｐｍｏｌ／ｋｇ／ｍｉｎ）を４８時間行い、４匹のイヌは対照として用いた。この治療の間、“ペーシイング”は中断した。この輸液の前後において血漿カテコラミンを測定すると共に、ＬＶ圧、冠動脈および全身血行動態、およびＭＶＯ２について測定した。その結果を表１に示す。ＧＬＰ−１治療により血漿ノルエピネフリンレベル（ＮＥ）レベルが、２．３０±０．１５ｎｍｏｌ／ｍｌから１．６２±０．１１ｎｍｏｌ／ｍｌに減少した（＊ｐ＜０．０５）。更に、左心室圧（ＬＶＰ）、左心室収縮性（ＬＶ ｄＰ／ｄｔ）、心拍出量（ＣＯ）、冠動脈流（ＣＢＦ）および心筋酸素消費（ＭＶＯ２）がそれぞれ可なり増加した（＊ｐ＜０．０５）。他方、ＬＶ最終心拡張圧（ＬＶＥＤＰ）が可なり減少した。これらのデータから、ＧＬＰ−１治療のイヌはＧＬＰ−１治療後４８時間以内に心臓機能の顕著な回復が判明した。これはＭＶＯ２の測定による酸化性ホスホリル化の増加と関連づけることができ、心筋活力の改善を示唆するものである。すなわち、ＧＬＰ−１輸液は、血漿ＮＥの減少と関係し、心筋活力を著しく改善させる。プラシーボ処置の対照イヌはこの実験では、治療前においてはＧＬＰ−１治療群と同程度の心不全を示さなかったが、これら対照イヌは血行動態が明らかに悪化し、４８時間のプラシーボ処置の後も改善は見られなかった。
【００３８】
図１−４は２つの代表的動物、イヌＡ（治療）　およびイヌＢ （プラシーボ）から得られた結果を要約したものである。図１は左心室（ＬＶ）収縮性の変化を示したグラフ図であって、ＬＶ圧の変化の割合（ｄＰ／ｄｔ）により測定したものである。治療動物（イヌＡ）では、ＨＭモデルで予測したように、ペーシングにより収縮性が６０％減少した。しかし、意外にもＧＬＰ−１治療の２４時間後には基線の８０％まで収縮性が回復し、ＧＬＰ−１治療の４８時間後には基線の９０％まで収縮性が回復した。これと対照的に、対照動物（イヌＢ）ではペーシングにより収縮性が４０％減少した。しかし、プラシーボ輸液の４８時間後でも改善は認められなかった。すなわち、ＧＬＰ−１は、ペーシング誘起心不全（又は冬眠心筋症）後の心筋収縮性を著しく改善させることができる。
【００３９】
図２は、ＬＶ駆出画分（ＥＦ）の変化を示したグラフ図であって、心収縮期のおけるＬＶの空化率により測定したもの。治療動物（イヌＡ）では、ペーシングによりＬＶＥＦが４０％減少した。しかし、ＧＬＰ−１治療の２４時間および４８時間後には基線の８８％および９５％まで収縮性がそれぞれ回復した。これと対照的に、対照動物（イヌＢ）ではペーシングによりＬＶＥＦが約３０％減少した。しかし、４８時間後でも改善は僅かしか認められなかった。すなわち、ＧＬＰ−１は、ペーシング誘起心不全後のＬＶＥＦを改善させることができる。
【００４０】
図３は、壁厚の程度により反映されるＬＶ収縮を示したグラフ図である。治療動物（イヌＡ）では、ペーシングにより壁厚が２０％減少した。しかし、ＧＬＰ−１治療の２４時間には回復し、ＧＬＰ−１治療の４８時間には基線の１４７％まで増加した。これと対照的に、対照動物（イヌＢ）ではペーシングにより壁厚が約２５％減少した。しかも、プラシーボ輸液の４８時間後には、この減少が基線の６２％まで下がってしまった。すなわち、ＧＬＰ−１は、ペーシング誘起心不全後のＬＶ収縮を改善させることができる。
【００４１】
図４は、毎分、汲み出される血液の量（ｍＬ）を示す心拍出量（ＣＯ）により測定された全体的心臓機能の変化を示した図である。ＣＯは脈拍出量（１回の心収縮期で排出される血液の量（ｍＬ））と、心臓速度（１分間の鼓動数）との積である。すなわち、ＣＯは心筋の収縮性（すなわち、収縮の内部応力）および全身的血行動態を反映するものであり、これには前負荷（すなわち、血管の充填圧）および後負荷（すなわち、平均動脈圧および全身的管脈抵抗）が含まれる。治療動物（イヌＡ）では、ペーシングによりＣＯが３０％減少した。しかし、ＧＬＰ−１治療の２４時間後には基線まで回復し、ＧＬＰ−１治療の４８時間後には基線の１１６％まで増加した。これと対照的に、対照動物（イヌＢ）ではペーシングによりＣＯが僅か７％しか減少しなかった。これは、この特定の動物においては、減少した心筋収縮性（図１）およびＬＶＥＦ（図２）を補償する血行動態があることを示唆している。しかし、それにも拘らず、プラシーボ輸液の４８時間後では、ＣＯが更に基線の８９％まで減少してしまった。すなわち、ＧＬＰ−１は、ペーシング誘起心不全（又は冬眠心筋症）後の心拍出量を著しく改善させることができる。
【表２】
2004512311.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【図１】
左心室（ＬＶ）収縮性の変化を示したグラフ図であって、ＬＶ圧の変化の割合（ｄＰ／ｄｔ）により測定したもの。
【図２】
ＬＶ駆出画分（ＥＦ）の変化を示したグラフ図であって、心収縮期のおけるＬＶの空化率により測定したもの。
【図３】
壁厚の程度により反映されるＬＶ収縮を示したグラフ図。
【図４】
毎分、汲み出される血液の量（ｍＬ）を示す心拍出量（ＣＯ）により測定された全体的心臓機能の変化を示したグラフ図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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2004512311.tif 000036
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