(57)【要約】本発明は、炎症性疾患、心血管疾患、および癌を含めた疾患および状態の処置に際して薬剤として有用な式（Ｉ）のベンゾ［ｂ］チオフェン（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＬは、それらについて明細書中に定めたいずれかの意味をもつ）、およびその医薬的に許容できる塩類を提供する。１種類以上の式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物も提供される。2006526610.tif 000036
2006526610.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2006526610.tif 000035
またはその医薬的に許容できる塩
［式中：
Ｒ２およびＲ３は、下記よりなる群から選択され：
（i）Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はＨ、メチル、メトキシ、ベンジルオキシメチル、ＣＨ３ＣＨ２ＯＣＨ２−、およびＣＨ３ＯＣＨ２−よりなる群から選択される；
（ii）Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメトキシである；
（iii）Ｒ２はエトキシであり、Ｒ３はＨである；
Ｌは存在しないか、または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルである］。
【請求項２】
Ｒ２がメトキシであり、Ｒ３がメチルまたはＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
化合物が
３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；
３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；
３−シクロペンチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；または
３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド
である、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がメトキシであり、Ｒ３がメトキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
化合物が
３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；
３−シクロペンチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；または
３−シクロヘキシルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド
である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がメチルであり、Ｒ３がメトキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
化合物が
３−シクロペンチルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；または
３−シクロヘキシルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド
である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２がメトキシであり、Ｒ３がＣＨ３ＯＣＨ２−、ＣＨ３ＣＨ２ＯＣＨ２−、またはベンジルオキシメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
化合物が
３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；
３−シクロヘキシルスルファニル−６−エトキシメチル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；または
６−ベンジルオキシメチル−３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド
である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態を伴う対象を処置する方法であって、
ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害を伴う対象に、療法有効量の請求項１に記載の化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬組成物を投与する
ことを含む方法。
【請求項１１】
ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害が、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患
よりなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害が、
癌、乳癌、神経膠芽細胞腫、子宮内膜癌、肝細胞癌、結腸癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、小細胞性肺癌、扁平上皮性肺癌、神経膠腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、白血病、細胞性リンパ腫、およびリンパ球増殖性障害（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）
よりなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
化合物が請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
療法有効量の請求項１に記載の化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含む、医薬組成物。
【請求項１５】
療法有効量の請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
ホスホイノシチド−３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、ホスホイノシトール類を３’−ＯＨにおいてリン酸化してＰＩ−３−Ｐ（ホスファチジルイノシトール−３−リン酸）、ＰＩ−３，４−Ｐ２およびＰＩ−３，４，５−Ｐ３を生成する脂質キナーゼファミリーである。あるクラスのＰＩ３Ｋは、増殖因子により刺激される。他のクラスのＰＩ３ＫはＧタンパク質結合受容体により活性化され、これにはＰＩ３Ｋγが含まれる。増殖因子により刺激されるＰＩ３Ｋ（たとえばＰＩ３Ｋα）は、細胞増殖および癌に関係することが示唆されている。ＰＩ３Ｋγは、シグナル伝達カスケードに関与することが証明された。たとえば、ＰＩ３ＫγはＣ５ａ、ｆＭＬＰ、ＡＤＰ、およびＩＬ−８などのリガンドに応答して活性化される。さらに、ＰＩ３Ｋγは免疫病に関係することが示唆されている（Hirsch et al., Science 2000; 287: 1049-1053）。ＰＩ３Ｋγヌル−マクロファージは走化性応答の低下および炎症対抗能の低下を示す（Hirsch et al., 2000；前掲）。さらにＰＩ３Ｋγは血栓溶解性疾患（たとえば血栓塞栓症、虚血性疾患、心臓発作、および発作）に関係することも示唆されている（Hirsch et al., FASEB J. 2000; 15(11): 2019-2021；およびHirsch et al., FASEB J. 2001年7月9日; 10.1096/fj.00-0810fje（Hirsch et al., 2001として本明細書に援用する））。
【０００２】
ヒト疾患の治療のためにＰＩ３Ｋメンバーの阻害薬が開発された（たとえばＷＯ  ０１／８１３４６；ＷＯ  ０１／５３２６６；およびＷＯ  ０１／８３４５６を参照）。医薬として使用するためにＰＩ３Ｋを阻害しうるさらに他の化合物が求められている。
【０００３】
発明の概要
１態様において、本発明は式Ｉの化合物：
【０００４】
【化１】
2006526610.tif 000003
【０００５】
またはその医薬的に許容できる塩を提供する；
式中：
Ｒ２およびＲ３は、下記よりなる群から選択され：
（i）Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はＨ、メトキシ、ベンジルオキシメチル、ＣＨ３ＣＨ２ＯＣＨ２−、およびＣＨ３ＯＣＨ２−よりなる群から選択される；
（ii）Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメトキシである；
（iii）Ｒ２はエトキシであり、Ｒ３はＨである；
Ｌは存在しないか、または−ＣＨ２−であり；
Ｒ１は、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルである。
【０００６】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はメチルである―式ＩＩの化合物：
【０００７】
【化２】
2006526610.tif 000004
【０００８】
式ＩＩの化合物の例には下記のものが含まれるが、これに限定されない：３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０００９】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はメトキシである―式ＩＩＩの化合物：
【００１０】
【化３】
2006526610.tif 000005
【００１１】
式ＩＩＩの化合物の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；３−シクロペンチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；および３−シクロヘキシルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【００１２】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメチルであり、Ｒ３はメトキシである―式ＩＶの化合物：
【００１３】
【化４】
2006526610.tif 000006
【００１４】
式ＩＶの化合物の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３−シクロペンチルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；および３−シクロヘキシルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【００１５】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はＣＨ３ＣＨ２Ｏ−であり、Ｒ３はメチルである―式Ｖの化合物：
【００１６】
【化５】
2006526610.tif 000007
【００１７】
式Ｖの化合物の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３−シクロペンチルスルファニル−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；および３−シクロヘキシルスルファニル−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【００１８】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はＨである―式ＶＩの化合物：
【００１９】
【化６】
2006526610.tif 000008
【００２０】
式ＶＩの化合物の例には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；３−シクロペンチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド；および３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【００２１】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はＣＨ３ＯＣＨ２−である―式ＶＩＩの化合物：
【００２２】
【化７】
2006526610.tif 000009
【００２３】
式ＶＩＩの化合物の例は３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
【００２４】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はＣＨ３ＣＨ２ＯＣＨ２−である―式ＶＩＩＩの化合物：
【００２５】
【化８】
2006526610.tif 000010
【００２６】
式ＶＩＩＩの化合物の例は３−シクロヘキシルスルファニル−６−エトキシメチル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
【００２７】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ２はメトキシであり、Ｒ３はベンジルオキシメチルである―式ＩＸの化合物：
【００２８】
【化９】
2006526610.tif 000011
【００２９】
式ＩＸの化合物の例は６−ベンジルオキシメチル−３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
【００３０】
式Ｉの化合物のある態様において、Ｒ１はシクロヘキシルである―式Ｘの化合物：
【００３１】
【化１０】
2006526610.tif 000012
【００３２】
式Ｘの化合物の例は３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
ある態様において、Ｒ１はシクロペンチルである―式ＸＩの化合物：
【００３３】
【化１１】
2006526610.tif 000013
【００３４】
式ＸＩの化合物の例は３−シクロペンチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
ある態様において、Ｒ１はシクロプロピルである―式ＸＩＩの化合物：
【００３５】
【化１２】
2006526610.tif 000014
【００３６】
式ＸＩＩの化合物の例は３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミドである。
【００３７】
他の態様において本発明は、療法有効量の式Ｉ〜ＸＩＩの化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含む、医薬組成物を提供する。ある態様において、これらの組成物はＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態の処置に有用である。本発明化合物は、癌、血栓溶解性疾患、心疾患、発作、炎症性疾患、たとえば慢性関節リウマチ、または他のＰＩ３Ｋ仲介障害の処置に有用な化合物をも含む医薬組成物中に組み合わせることもできる。
【００３８】
他の態様において本発明は、ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態を伴う対象を処置する方法であって、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害を伴う対象に、療法有効量の式Ｉ〜ＸＩＩの化合物および医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。ある態様において、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害は、慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、および自己免疫疾患よりなる群から選択される。他の態様において、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害は、心血管疾患、アテローム性硬化症、高血圧症、深在静脈血栓症、発作、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓溶解性疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、および冠動脈疾患よりなる群から選択される。さらに他の態様において、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害は、癌、結腸癌、神経膠芽細胞腫、子宮内膜癌、肝細胞癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、細胞性リンパ腫、リンパ球増殖性障害（ｌｙｍｐｈｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）、小細胞性肺癌、扁平上皮性肺癌、神経膠腫、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、および白血病よりなる群から選択される。さらに他の態様において、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害は、ＩＩ型糖尿病よりなる群から選択される。さらに他の態様において、ＰＩ３Ｋ仲介による状態または障害は、呼吸器疾患、気管支炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患よりなる群から選択される。ある態様において、対象はヒトである。
【００３９】
定義
本明細書中で使用する下記の用語は、別途明記しない限りそれらに属する意味をもつ。
”ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態”は、その障害または状態の発症、１以上の症状もしくは疾患マーカーの発現、重症度、または進行において、１種類以上のＰＩ３ＫまたはＰＩ３Ｐホスファターゼ（たとえばＰＴＥＮなど）の関与を特色とする。ＰＩ３Ｋ仲介による障害および状態には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：慢性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、乾癬、炎症性疾患、肺線維症、自己免疫疾患、心血管疾患、アテローム性硬化症、高血圧症、深在静脈血栓症、発作、心筋梗塞、不安定狭心症、血栓塞栓症、肺塞栓症、血栓溶解性疾患、急性動脈虚血、末梢血栓性閉塞、冠動脈疾患、癌、乳癌、神経膠芽細胞腫、子宮内膜癌、肝細胞癌、結腸癌、肺癌、黒色腫、腎細胞癌、甲状腺癌、小細胞性肺癌、扁平上皮性肺癌、神経膠腫、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、白血病、細胞性リンパ腫、リンパ球増殖性障害、ＩＩ型糖尿病、呼吸器疾患、気管支炎、喘息、および慢性閉塞性肺疾患。
【００４０】
ＰＩ３Ｋは、ホスホイノシトール類の３’−ＯＨをリン酸化してＰＩ３Ｐを生成することができる酵素である。ＰＩ３ＫにはＰＩ３Ｋα、ＰＩ３Ｋβ、ＰＩ３Ｋγ、およびＰＩ３Ｋδが含まれるが、これらに限定されない。ＰＩ３Ｋは一般に少なくとも１つの触媒サブユニット（たとえばｐ１１０γ）を含み、さらに調節サブユニット（たとえばｐ１０１など）を含む場合がある。
【００４１】
用語”アルキル基”または”アルキル”には、直鎖および分枝鎖炭素鎖基が含まれる。用語”アルキレン”は、非置換または置換アルカンの二価の基を表わす。たとえば”Ｃ１−６アルキル”は、１〜６個の炭素原子をもつアルキル基である。直鎖アルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、ｎ−デシルなどが含まれるが、これらに限定されない。分枝鎖アルキル基の例には、イソプロピル、ｔ−ブチル、イソブチルなどが含まれるが、これらに限定されない。アルキレン基の例には、−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−、および−（ＣＨ２）１−６が含まれるが、これらに限定されない。アルキレン基は、アルキルについて下記に示す基で置換されていてもよい。
【００４２】
さらに、用語アルキルには、”非置換アルキル基”および”置換アルキル”の両方が含まれ、これらのうち後者は１個以上の炭素上の水素を置換する（たとえば１、２、３、４、５、または６個の炭素上の水素を置換する）置換基をもつアルキル部分を表わす。そのような置換基には下記のものを含めることができるが、これらに限定されない：Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、ハロ、Ｉ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、スルフヒドリル、（Ｃ１−Ｃ６アルキル）Ｓ−、Ｃ１−Ｃ６アルキルスルフィニル、ニトロ、シアノ、トリフルオロメチル、−ＮＨ２、＝Ｏ、＝Ｓ、＝Ｎ−ＣＮ、＝Ｎ−ＯＨ、−ＯＣＨ２Ｆ、−ＯＣＨＦ２、−ＯＣＦ３、−ＳＣＦ３、−ＳＯ２−ＮＨ２、Ｃ１−Ｃ６アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｃ１−Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｃ１−Ｃ６アルキル）２、−ＯＣ（Ｏ）−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−Ｃ（Ｓ）−（Ｃ１−Ｃ６アルキル）、−ＮＲ７０Ｒ７２；ここでＲ７０およびＲ７２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ２−Ｃ６アルケニル、Ｃ２−Ｃ６アルキニル、およびＣ（Ｏ）−Ｃ１−Ｃ６アルキルから選択される。
【００４３】
したがって代表的な置換アルキル基は、アミノメチル、２−ニトロエチル、４−シアノブチル、２，３−ジクロロペンチル、および３−ヒドロキシ−５−カルボキシヘキシル、２−アミノエチル、ペンタクロロエチル、トリフルオロメチル、２−ジエチルアミノエチル、２−ジメチルアミノプロピル、エトキシカルボニルメチル、メタニルスルファニルメチル、メトキシメチル、３−ヒドロキシペンチル、２−カルボキシブチル、４−クロロブチル、およびペンタフルオロエチルである。
【００４４】
”ハロ”には、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれる。
”アルケニル”は、２個以上の炭素原子をもち、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む、直鎖および分枝鎖炭化水素基を意味し、これにはエテニル、３−ブテン−１−イル、２−エテニルブチル、３−ヘキセン−１−イルなどが含まれる。用語”アルケニル”には、置換および非置換両方のアルケニル基が含まれるものとする。”Ｃ２−Ｃ６アルケニル”は、２〜６個の炭素原子をもつアルケニル基である。アルケニル基は、アルキルについて前記に示した基で置換されていてもよい。用語”アルケニレン”は、非置換または置換アルケンの二価の基を表わす。アルケニレン基の例には−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−、および−（ＣＨ２）１−６−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ２−が含まれるが、これらに限定されない。
【００４５】
”アルキニル”は、２個以上の炭素原子をもち、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む、直鎖および分枝鎖炭化水素基を意味し、これにはエチニル、３−ブチン−１−イル、プロピニル、２−ブチン−１−イル、３−ペンチン−１−イルなどが含まれる。用語”アルキニル”には、置換および非置換両方のアルキニル基が含まれるものとする。アルキニル基は、アルキルについて前記に示した基で置換されていてもよい。ある態様において、直鎖または分枝鎖アルキニル基はその主鎖中に６個以下の炭素原子をもつ（たとえば直鎖についてはＣ２−Ｃ６、分枝鎖についてはＣ３−Ｃ６）。用語Ｃ２−Ｃ６には、２〜６個の炭素原子を含むアルキニル基が含まれる。用語”アルキニレン”は、非置換または置換アルキンの二価の基を表わす。アルキニレン基の例には−ＣＨ≡ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−、および−（ＣＨ２）１−６−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ２−が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
”シクロアルキル”は炭素単環式官能基を意味し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルを含むが、これらに限定されない；シクロアルキル基は所望により１または２つの二重結合を含むことができ（すなわちシクロアルキレニル）、これにはシクロペンテニルおよびシクロヘキセニルが含まれるが、これらに限定されない。別途指示しない限り、用語”（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル”は、３〜６個の炭素原子を含むシクロアルキル基を表わす。したがって用語”（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル”には、３〜６個の炭素原子を含む単環式シクロアルキル基が含まれる。
【００４７】
本発明のある種の化合物は、鏡像異性体、ジアステレオマー、および幾何異性体を含めた、立体異性体として存在する場合がある。幾何異性体にはアルケニル基をもつ本発明化合物が含まれ、それらはＥまたはＺ立体配座として存在することができ、その場合ＥとＺ、シスとトランスの両方、およびその混合物など、そのすべての幾何異性体形が本発明の範囲に含まれる。本発明のある種の化合物は、１個以上の炭素原子において置換されていてもよいシクロアルキル基をもち、その場合、シスとトランスの両方、およびその混合物など、そのすべての幾何異性体形が本発明の範囲に含まれる。（Ｒ）、（Ｓ）、エピマー、ジアステレオマー、シス、トランス、シン、アンチ、（Ｅ）、（Ｚ）、互変異性体、およびその混合物など、そのすべての形が本発明化合物に含まれるものとする。
【００４８】
発明の詳細な記述
Ｉ．序言
本発明は、炎症性疾患、心血管疾患、および癌を含めた疾患および状態の処置に際して薬剤として有用な式Ｉ〜ＸＩＩのベンゾ［ｂ］チオフェン（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＬは、それらについて本明細書中に定めたいずれかの意味をもつ）、およびその医薬的に許容できる塩類に関する。１種類以上の式Ｉ〜ＸＩＩの化合物を含む医薬組成物も提供される。
【００４９】
ＩＩ．化合物の製造
本発明化合物（たとえば式Ｉ〜ＸＩＩの化合物）は、当技術分野で既知の合成法および下記の反応経路に概説する合成法を適用することにより製造できる。
【００５０】
【化１３】
2006526610.tif 000015
【００５１】
反応経路１においては、塩基、たとえばトリエチルアミンの存在下に、適切な溶媒、たとえばアセトニトリル中で、酸塩化物２０をアミノテトラゾールに結合させて２２を得る。次いで、第三級アミン、たとえば１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）または１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）で処理することにより、２２をチオール２３、すなわちＨＳ−Ｌ−Ｒ１の３−位に結合させて、２４を得る。式２３の化合物の例にはベンゼンチオール、４−メルカプト−フェノール、２−メチル−ベンゼンチオール、２−フェニル−エタンチオール、および３−（４−メルカプト−フェニル）−プロピオン酸メチルエステルが含まれるが、これらに限定されない。ある態様においては、適切な塩基、たとえば水酸化ナトリウムを、適切な溶媒、たとえばテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中で用いて、２４上のＲ１のエステル置換基を加水分解し、対応する酸にすることができる。
【００５２】
【化１４】
2006526610.tif 000016
【００５３】
反応経路２においては、ベンゾチオフェン３０（たとえば３−メルカプト−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸ベンジルエステル）と、塩基、たとえばトリエチルアミン、および式３１の化合物（Ｘ−Ｌ−Ｒ１）（たとえばブロモメチル−シクロプロパン）［Ｘはハロ基である］を、溶媒、たとえばアセトニトリル中で反応させて、３２（たとえば３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸ベンジルエステル）を得る。Ｒａは、カルボン酸基を保護し、かつ後に塩基加水分解により除去することができる、適切ないずれかの基（たとえばＣ１−Ｃ４アルキル、イソプロピル、フェニル、ベンジル、メチルなど）であってよい。
【００５４】
次いで、塩基、たとえばＬｉＯＨ、ＫＯＨ、またはＮａＯＨにより、溶媒、たとえばＴＨＦとメタノールの混合物中で、エステル３２を加水分解して３４にする。無水ＣＨ２Ｃｌ２中のカルボン酸３４（たとえば３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸）を、触媒量のＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、続いて塩化オキサリルで処理することができる。次いでアセトニトリルをこの混合物に添加し、続いて５−アミノテトラゾールおよびトリエチルアミンを添加して、３６（たとえば３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド）を得る。３４と塩化オキサリルおよびＤＭＦの反応は、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中で実施できる。
【００５５】
あるいは、非プロトン溶媒、たとえばＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中で、酸３４をカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）と反応させ、続いて５−アミノテトラゾールを添加して、カルボキサミド３６を得ることができる。
【００５６】
ＩＩＩ．化合物の評価
本発明化合物（たとえば式Ｉ〜ＸＩＩの化合物およびその医薬的に許容できる塩類）がＰＩ３Ｋを阻害する能力をアッセイすることができる。これらのアッセイ法の例は下記に示され、ＰＩ３Ｋ活性のインビトロおよびインビボアッセイ法を含む。
【００５７】
ある態様において本発明は、サイクリックヌクレオチド依存性プロテインキナーゼ、ＰＤＧＦ、チロシンキナーゼ、ＭＡＰキナーゼ、ＭＡＰキナーゼキナーゼ、ＭＥＫＫ、サイクリン依存性プロテインキナーゼを含めた（これらに限定されない）１種類以上の酵素と比較して、１種類以上のＰＩ３Ｋを選択的に阻害する化合物である。他の態様において本発明は、他のＰＩ３Ｋと比較して、１種類のＰＩ３Ｋを選択的に阻害する化合物である。たとえばある態様において本発明化合物は、ＰＩ３ＫαまたはＰＩ３Ｋβと比較して、ＰＩ３Ｋγを選択的に阻害する能力を示す。化合物は、第１酵素に対するその化合物のＩＣ５０が第２化合物に対するその化合物のＩＣ５０より小さい場合、第２酵素と比較して第１酵素を選択的に阻害する。ＩＣ５０は、たとえばインビトロＰＩ３Ｋアッセイ法において測定できる。
【００５８】
現在好ましい態様においては、本発明化合物がＰＩ３Ｋ活性を阻害する能力をインビトロまたはインビボアッセイ法（後記を参照）で評価することができる。
ＰＩ３Ｋ阻害化合物の阻害活性を測定するために、ＰＩ３Ｋ阻害化合物の存在下または不存在下でＰＩ３Ｋアッセイを実施し、酵素活性量を比較する。
【００５９】
ＰＩ３Ｋ阻害化合物を含有しない試料に、相対ＰＩ３Ｋ活性値１００を帰属させる。ＰＩ３Ｋ阻害化合物の存在下でのＰＩ３Ｋ活性が対照（すなわち阻害化合物なし）より低い場合、ＰＩ３Ｋ活性の阻害が達成されている。化合物のＩＣ５０は、対照試料活性の５０％を示す化合物濃度である。ある態様において本発明化合物は、約１００μＭ未満のＩＣ５０をもつ。他の態様において本発明化合物は、約１μＭ以下のＩＣ５０をもつ。さらに他の態様において本発明化合物は、約２００ｎＭ以下のＩＣ５０をもつ。
【００６０】
ＰＩ３Ｋγアッセイ法は当技術分野で記載されている（たとえばLeopoldt et al., J. Biol. Chem., 1998; 273: 7024-7029を参照）。一般に、ｐ１０１およびｐ１１０γタンパク質の複合体を含有する試料を、ＧβおよびＧγタンパク質（たとえばＧタンパク質β１／γ２サブユニット）と混和する。次いで放射性標識ＡＴＰ（たとえばγ−３２Ｐ−ＡＴＰ）をこの混合物に添加する。脂質基質は、ＰＩＰ２を含有する脂質ミセルを構築することにより形成される。次いで脂質および酵素混合物の添加により反応を開始し、Ｈ３ＰＯ４の添加により停止させる。次いで脂質生成物をガラス繊維濾板に移し、Ｈ３ＰＯ４で数回洗浄する。放射性脂質生成物（ＰＩＰ３）の存在を、当技術分野で周知の放射分析法により測定することができる。
【００６１】
増殖因子により調節されるＰＩ３Ｋの活性は、脂質キナーゼアッセイ法により測定することもできる。たとえばＰＩ３Ｋαは、調節サブユニットおよび触媒サブユニットを含有する試料を用いてアッセイすることができる。放射性標識ＡＴＰを含む試料に活性化ペプチド（たとえばｐＹペプチド、SynPep Corp.）を添加する。次いでＰＩＰ２を含有する脂質ミセルを試料に添加して、反応を開始する。ＰＩ３Ｋγアッセイについて記載したように反応物を仕上げ処理および分析する。細胞抽出物を用いてアッセイを行うこともできる（Susa et al., J. Biol. Chem., 1992; 267: 22951-22956）。
【００６２】
ＩＶ．医薬的に許容できる塩類および溶媒和物
本発明に使用する化合物は、非溶媒和形でも溶媒和形（水和形を含む）でも存在することができる。一般に、溶媒和形（水和形を含む）は非溶媒和形と均等であり、本発明の範囲に含まれるものとする。
【００６３】
本発明化合物（たとえば式Ｉ〜ＸＩＩの化合物）は、さらに医薬的に許容できる塩類を形成することができ、これには酸付加塩および／または塩基塩が共に含まれるが、これらに限定されない。式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容できる塩類には、その酸付加塩および／または塩基塩（二塩を含む）が含まれる。適切な塩類の例は、たとえばStahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, Wiley-VCH, ドイツ国バインハイム（2002）；およびBerge et al.,”医薬塩類”,J. of Pharmaceutical Science, 1977; 66:1-19中にある。
【００６４】
式Ｉ〜ＸＩＩの化合物の医薬的に許容できる酸付加塩には、無機酸、たとえば塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ）などから誘導される無毒性塩、ならびに有機酸、たとえば脂肪族モノ−およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカンジ酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などから誘導される塩類が含まれる。そのような塩類には、たとえば下記のものが含まれる：式Ｉ〜ＸＩＩの化合物の酢酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベシル酸塩（ベンゼンスルホン酸塩）、炭酸水素塩／炭酸塩、硫酸水素塩、カプリル酸塩、カムシル酸塩（ショウノウスルホン酸塩）、クロロ安息香酸塩、クエン酸塩、エジシル酸塩（１，２−エタンジスルホン酸塩）、リン酸二水素塩、ジニトロ安息香酸塩、エシル酸塩（エタンスルホン酸塩）、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ヒベンズ酸塩、塩酸塩／クロリド、臭化水素酸塩／ブロミド、ヨウ化水素酸塩／ヨージド、イソ酪酸塩、リン酸一水素塩、イセチオン酸塩、Ｄ−乳酸塩、Ｌ−乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩（メタンスルホン酸塩）、メタリン酸塩、メチル安息香酸塩、メチル硫酸塩、２−ナプシル酸塩（２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、オロット酸塩、シュウ酸塩、パルモエート、フェニル酢酸塩、リン酸塩、フタル酸塩、プロピオン酸塩、ピロリン酸塩、ピロ硫酸塩、サッカリン酸塩、セバシン酸塩、ステアリン酸塩、スベリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、Ｄ−酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トシル酸塩（トルエンスルホン酸塩）、およびキシナホ酸塩（xynafoate）。アミノ酸塩、たとえばアルギン酸塩、グルコン酸塩、ガラクツロン酸塩なども考慮される。
【００６５】
塩基性化合物の酸付加塩は、常法により遊離塩基形を十分量の目的酸と接触させて塩を調製することにより製造される。遊離塩基形は、常法により塩形を塩基と接触させて遊離塩基を単離することにより再生できる。遊離塩基形は、ある物理的特性、たとえば極性溶媒中での溶解度においてそれらの各塩形と若干異なるが、他の点では塩類は本発明の目的に関してそれらの各遊離塩基と同等である。
【００６６】
金属またはアミン、たとえばアルカリ金属およびアルカリ土類金属の水酸化物、または有機アミンと、医薬的に許容できる塩基付加塩が形成される。カチオンとして使用する金属の例は、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウムなどである。適切なアミンの例には、アルギニン、コリン、クロロプロカイン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジオラミン（diolamine）、エチレンジアミン（エタン−１，２−ジアミン）、グリシン、リシン、メグルミン、Ｎ−メチルグルカミン、オーラミン（olamine）、プロカイン（ベンザチン）、およびトロメタミンが含まれる。
【００６７】
酸性化合物の塩基付加塩は、常法により遊離酸形を十分量の目的塩基と接触させて塩を調製することにより製造される。遊離酸形は、常法により塩形を酸と接触させて遊離酸を単離することにより再生できる。遊離酸形は、ある物理的特性、たとえば極性溶媒中での溶解度においてそれらの各塩形と若干異なるが、他の点では塩類は本発明の目的に関してそれらの各遊離酸と同等である。
【００６８】
Ｖ．医薬組成物および投与方法
本発明は、療法有効量の式Ｉ〜ＸＩＩの化合物またはその医薬的に許容できる塩を、医薬的に許容できるキャリヤー、希釈剤または賦形剤と共に含む、医薬組成物をも提供する。”医薬組成物”という句は、ヒトまたは動物の医療用として投与するのに適した組成物を表わす。”療法有効量”という句は、単独で、または他の医薬もしくは処置と組み合わせて投与した場合に、特定の対象または対象集団において、処置される障害または状態を抑制し、停止させ、または改善できるのに十分な、化合物またはその医薬的に許容できる塩の量を意味する。たとえばヒトまたは他の哺乳類において、療法有効量は、処置される特定の疾患および対象について、実験室または臨床設定で実験的に決定でき、あるいは米国食品医薬品庁またはそれに相当する外国省庁の指針により要求される量であってもよい。
【００６９】
適切な剤形、投与量、および投与経路は、医薬および医療の分野の専門家が容易に決定でき、以下に記載されるものであることを認識すべきである。
本発明化合物は、医薬組成物として、シロップ剤、エリキシル剤、懸濁液剤、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ、トローチ剤、水性液剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、ゲル剤、乳剤などの形で配合できる。好ましくは本発明化合物は、定量的または定性的に測定したＰＩ３Ｋ仲介障害関連の症状または疾患指標を低下させるであろう。
【００７０】
本発明化合物から医薬組成物を調製するには、医薬的に許容できるキャリヤーは固体または液体であってよい。固形製剤には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤、および分散性顆粒剤が含まれる。固体キャリヤーは、希釈剤、着香剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤、または封入材料としても作用しうる１種類以上の物質であってよい。
【００７１】
散剤の場合、キャリヤーは微細に分割された固体であり、これが微細に分割された有効成分と混合されている。錠剤の場合、必要な結合性をもつキャリヤーと有効成分を適切な割合で混合し、目的の形状およびサイズに圧縮する。
【００７２】
散剤および錠剤は１〜９５％（ｗ／ｗ）の有効化合物を含有する。ある態様において、有効化合物は５〜７０％（ｗ／ｗ）である。適切なキャリヤーは、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ショ類、乳糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などである。用語”製剤”は、カプセルを提供するキャリヤーとしての封入材料を含む有効化合物の配合物（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）であって、有効成分が（他のキャリヤーと共に、または他のキャリヤーなしに）キャリヤーで取り囲まれ、したがってそれと一緒になったものを含むものとする。カシェ剤およびロゼンジも含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤およびロゼンジは、経口投与に適した固体剤形として使用できる。
【００７３】
坐剤の調製のためには、低融点ろう、たとえば脂肪酸グリセリド混合物またはカカオ脂をまず融解し、それに有効成分を撹拌などによって均一に分散させる。融解した均質な混合物を、次いで好都合なサイズの型に注入し、放冷し、これにより凝固させる。
【００７４】
液状製剤には、液剤、懸濁液剤、および乳剤、たとえば水溶液または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口注射のためには、液体製剤をプロピレングリコール水溶液中の液剤として配合することができる。
【００７５】
経口用として適した水性液剤は、有効成分を水に溶解し、適切な着色剤、着香剤、安定剤、および増粘剤を目的に応じて添加することにより調製できる。経口用として適した水性懸濁液剤は、粘稠な物質、たとえば天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の沈殿防止剤を含む水に、微細に分割した有効成分を分散させることにより調製できる。
【００７６】
使用直前に経口投与用の液状製剤に変換するための固形製剤も含まれる。そのような液体剤形には、液剤、懸濁液剤、および乳剤が含まれる。これらの製剤は、有効成分のほかに着色剤、着香剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味剤、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有できる。
【００７７】
医薬製剤は、好ましくは単位剤形である。そのような剤形の場合、製剤は適量の有効成分を含有する単位量に小分割される。単位剤形は、パッケージ製剤、すなわち個別量の製剤を収容したパッケージ、たとえばバイアルまたはアンプルに充填した錠剤、カプセル剤、および散剤であってもよい。単位剤形は、カプセル剤、錠剤、カシェ剤、またはロゼンジそのものであってもよく、あるいは適切な個数のこれらのいずれかをパッケージしたものであってもよい。
【００７８】
単位量製剤中の有効成分の量は、個々の用途および有効成分の力価に応じて、０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１．０〜１００ｍｇ、または１〜９５％（ｗ／ｗ）の単位量で変更または調節できる。本発明組成物は、所望により他の適合する療法薬をも含有できる。
【００７９】
医薬的に許容できるキャリヤーは、投与する個々の組成物、および組成物を投与するために用いる個々の方法により、ある程度は決まる。したがって、多様な適切な本発明の医薬組成物の配合物がある（たとえば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, Gennaro et al.編, Lippincott Williams and Wilkins, 2000を参照）。
【００８０】
本発明化合物は、単独で、または他の適切な成分と組み合わせて、吸入により投与するためのエアゾル配合物にすることができる（すなわち、それらを”噴霧”することができる）。エアゾル配合物は、加圧した許容できる噴射剤、たとえばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などに装入することができる。
【００８１】
非経口投与、たとえば静脈内、筋肉内、皮内、および皮下経路による投与に適した配合物には、水性および非水性の等張無菌注射液剤が含まれ、これらは酸化防止剤、緩衝剤、殺菌剤、および配合物を予定したレシピエントの血液と等張にするための溶質を含有することができる；ならびに水性および非水性の無菌懸濁液剤が含まれ、これらは沈殿防止剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤、および保存剤を含有することができる。本発明の実施に際しては、組成物をたとえば静脈内注入、経口、局所、腹腔内、膀胱内またはクモ膜下に投与することができる。本発明化合物の配合物は、１回量または多数回量の密閉容器、たとえばアンプルおよびバイアルに入れて提供することができる。注射用の液剤および懸濁液剤は、前記に述べた種類の無菌の散剤、顆粒剤、および錠剤から調製できる。
【００８２】
本発明に関して対象に投与する量は、ある期間、有益な療法応答を生じるのに十分なものでなければならない。用語”対象”は、哺乳類綱のメンバーを表わす。哺乳類の例にはヒト、霊長類、チンパンジー、げっ歯類、マウス、ラット、ウサギ、ウマ、家畜、イヌ、ネコ、ヒツジ、およびウシが含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
投与量は、使用する個々の化合物の有効性および処置される対象の状態、ならびに対象の体重または体表面積により決まるであろう。投与量は、個々の対象において個々の化合物の投与に伴う有害な副作用の有無、性質、および程度によっても決まるであろう。処置される障害の治療または予防に際して投与する化合物の有効量を決定する場合、医師は循環血漿中の化合物濃度、化合物の毒性、および／または疾患の進行度などの要因を評価することができる。一般に化合物の投与相当量は、一般的な対象について約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。多様な投与方法が当業者に知られている。
【００８４】
投与のためには、化合物のＬＤ５０、化合物の薬物動態プロフィール、配合禁忌薬物、および種々の濃度における化合物の副作用を含めた要因（これらに限定されない）を対象の全般的な健康状態に当てはめることにより決定される割合で、本発明化合物を投与することができる。投与は１回量または分割量で行うことができる。
【００８５】
代表的な錠剤、非経口およびパッチ配合物の例には、下記のものが含まれる：
錠剤配合例１
【００８６】
【表１】
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【００８７】
本発明化合物（たとえば式Ｉ〜ＸＩＩの化合物、またはその医薬的に許容できる塩）を乳糖およびトウモロコシデンプン（混合用）と混合し、均質になるまでブレンドして粉末にすることができる。トウモロコシデンプン（ペースト用）を６ｍＬの水に懸濁し、加熱撹拌してペーストを調製する。このペーストを前記の混合粉末に添加し、混合物を造粒する。湿潤顆粒をＮｏ．８硬質スクリーンに通し、５０℃で乾燥させる。混合物を１％ステアリン酸マグネシウムで滑沢処理し、圧縮して錠剤にする。この錠剤を、ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態の処置のために１日１〜４個の割合で患者に投与する。
【００８８】
非経口液剤配合例１
７００ｍＬのプロピレングリコールおよび２００ｍＬの注射用水の溶液に、２０．０ｇの本発明化合物を添加することができる。混合物を撹拌し、塩酸でｐＨを５．５に調整する。体積を注射用水で１０００ｍＬに調整する。この溶液を殺菌し、５．０ｍＬアンプルにそれぞれ２．０ｍＬ（４０ｍｇの本発明化合物）を収容するように充填し、窒素下でシールする。ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態を伴い、その処置を必要とする対象に、この液剤を注射により投与する。
【００８９】
パッチ配合例１
１０ｍｇの本発明化合物を、プロピレングリコール１ｍＬ、および樹脂架橋剤を含有するアクリル系ポリマー接着剤２ｍｇと混合する。この混合物を不透過性裏層（３０ｃｍ２）に付与し、ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態の持続放出処置のために患者の上背に貼付する。
【００９０】
Ｖ．ＰＩ３Ｋ仲介による障害および状態の処置方法
本発明化合物、および本発明化合物を含む医薬組成物は、ＰＩ３Ｋ仲介による障害または状態を伴う対象に投与することができる。ＰＩ３Ｋ仲介による障害および状態を、障害または状態の性質に応じて本発明化合物により予防的、短期的、および長期的に処置することができる。一般にこれらの各方法のホストまたは対象はヒトであるが、他の哺乳類も本発明化合物の投与が有益である。
【００９１】
治療用途において、本発明化合物を広範な経口および非経口剤形で調製し、投与することができる。用語”投与”は、化合物を対象と接触させる方法を表わす。たとえば本発明化合物を注射により、すなわち静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内、腸管外、または腹腔内に投与できる。本明細書に記載する化合物は、吸入により、たとえば鼻腔内投与することもできる。さらに、本発明化合物を経皮、局所、埋込み、経皮、局所、および埋込みにより投与できる。ある態様においては、本発明化合物を経口送達する。本発明化合物を直腸、口腔、膣内、眼内、andially、または吹入により投与することもできる。
【００９２】
本発明の医療に用いられる化合物は、１日約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇの初期量で投与することができる。ある態様において、１日量は約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇである。ただし投与量は、対象の要件、状態の重症度、および使用する化合物に応じて変更できる。個々の状況に適切な投与量は当業者が容易に決定できる。一般に、その化合物の最適量より少ない投与量から処置を開始する。その後、その状況で最適効果に達するまで投与量を少量ずつ増加する。便宜上、所望により全１日量を分割して、その日全体で少量ずつ投与してもよい。用語”処置”には、処置される障害に関連または起因する少なくとも１つの症状または特性の短期的、長期的、または予防的な減弱または軽減が含まれる。たとえば処置には、障害の幾つかの症状の減弱、障害の病理進行の抑制、または障害の完全な根絶を含めることができる。本発明化合物は、対象に共投与することができる。用語”共投与”は、２種類以上の異なる医薬または処置（たとえば放射線処置）を施すことを意味し、これらを同一の医薬組成物または個別の医薬組成物中において対象に投与する。したがって共投与は、２種類以上の医薬を含む単一の医薬組成物を同時投与すること、または２以上の異なる組成物を同一対象に同時に、もしくは異なる時点で投与することを伴う。たとえば、本発明化合物を含む第１薬剤を午前８時に投与され、次いでセレブレックス（CELEBREX、登録商標）を１〜１２時間後、たとえば同日午後６時に投与される対象は、本発明化合物とセレブレックス（登録商標）を共投与されたことになる。あるいは、たとえば本発明化合物とセレブレックス（登録商標）を含む単一剤形を午前８時に投与された対象は、本発明化合物とセレブレックス（登録商標）を共投与されたことになる。
【００９３】
たとえば本発明化合物は、癌の処置に有用なたとえば下記の化合物と共投与することもできる：細胞毒性薬物、たとえばタキソール（TAXOL、登録商標）、タキソテール（taxotere）、グリベック（GLEEVEC、登録商標）（イマチニブメシラート（Imatinib Mesylate））、アドリアマイシン、ダウノマイシン、シスプラチン、エトポシド（etoposide）、ツルニチニチソウアルカロイド、ビンブラスチン、ビンクリスチン、メトトレキセート（methotrexate）、またはアドリアマイシン、ダウノマイシン、シスプラチン、エトポシド、およびアルカロイド、たとえばビンクリスチン、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬、エンドスタチン（endostatin）およびアンギオスタチン（angiostatin）、ＶＥＧＦ阻害薬、ならびに代謝拮抗薬、たとえばメトトレキセート。本発明化合物は、タキサン誘導体、白金配位錯体、ヌクレオチド類似体、アントラサイクリン、トポイソメラーゼ阻害薬、またはアロマターゼ阻害薬とも併用できる。癌処置のために、放射線処置も本発明化合物と併用できる。
【００９４】
本発明化合物は、血栓溶解性疾患、心疾患、発作などの処置に有用な、たとえば下記の化合物とも共投与できる：アスピリン、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゼンアクチベーター、ウロキナーゼ、抗凝固薬、抗血小板薬（たとえばプラビックス（PLAVIX、登録商標）；二硫酸クロピドグレル（clopidogrel bisulfate））、スタチン類（たとえばリピトール（LIPITOR、登録商標）（アトルバスタチンカルシウム（Atorvastatin calcium））、ゾコル（ZOCOR、登録商標）（シンバスタチン（Simvastatin））、クレストール（CRESTOR、登録商標）（ロスバスタチン（Rosuvastatin））など）、β遮断薬（たとえばアテノロール（Atenolol））、ノルバスク（NORVASC、登録商標）（ベシル酸アムロジピン（amlodipine besylate））、およびＡＣＥ阻害薬（たとえばアキュプリル（Accupril、登録商標）（塩酸キナプリル（Quinapril Hydrochloride））、リシノプリル（Licinopril）など）。
【００９５】
本発明化合物は、高血圧症の処置のために、たとえばＡＣＥ阻害薬、脂質低下薬、たとえばスタチン類、リピトール（登録商標）（アトルバスタチンカルシウム）、カルシウムチャンネル遮断薬、たとえばノルバスク（登録商標）（ベシル酸アムロジピン）とも共投与できる。本発明化合物は、フィブラート類、β遮断薬、ＮＥＰＩ阻害薬、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニストおよび血小板凝集阻害薬とも併用できる。
【００９６】
本発明化合物は、慢性関節リウマチを含めた炎症性疾患の処置のために、たとえば下記の化合物とも共投与できる：ＴＮＦ−α阻害薬、たとえば抗ＴＮＦαモノクローナル抗体（たとえばレミケード（REMICADE、登録商標）、ＣＤＰ−８７０およびヒューミラ（HUMIRA、商標）（アダリムマブ（adalimumab）））およびＴＮＦ受容体−免疫グロブリン融合分子（たとえばエンブレル（ENBREL、登録商標））、ＩＬ−１阻害薬、受容体アンタゴニストまたは可溶性ＩＬ−１Ｒα（たとえばキネレット（KINERET、商標）またはＩＣＥ阻害薬）、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、ピロキシカム（piroxicam）、ジクロフェナク（diclofenac）、ナプロキセン（naproxen）、フルルビプロフェン（flurbiprofen）、フェノプロフェン（fenoprofen）、ケトプロフェン（ketoprofen）、イブプロフェン（ibuprofen）、フェナメート類、メフェナム酸、インドメタシン（indomethacin）、スリンダク（sulindac）、アパゾン（apazone）、ピラゾロン類、フェニルブタゾン（phenylbutazone）、アスピリン、ＣＯＸ−２阻害薬（たとえばセレブレックス（CELEBREX、登録商標）（セレコキシブ（celecoxib））、ビオックス（VIOXX、登録商標）（ロフェコキシブ（rofecoxib））、ベクストラ（BEXTRA、登録商標）（バルデコキシブ（valdecoxib））およびエトリコキシブ（etoricoxib））、メタロプロテアーゼ阻害薬（好ましくはＭＭＰ−１３選択的阻害薬）、ニューロチン（NEUROTIN、登録商標）、プレガバリン（pregabalin）、低用量メトトレキセート、レフルノミド（leflunomide）、ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィン（auranofin）または非経口用もしくは経口用の金。
【００９７】
本発明化合物は、変形性関節症の処置のための既存の療法薬とも共投与できる。併用に適した薬剤には、下記のものが含まれる：標準的な非ステロイド系抗炎症薬（以下、ＮＳＡＩＤ）、たとえばピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸類、たとえばナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン、フェナメート類、たとえばメフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アパゾン、ピラゾロン類、たとえばフェニルブタゾン、サリチル酸類、たとえばアスピリン、ＣＯＸ−２阻害薬、たとえばセレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブおよびエトリコキシブ、鎮痛薬および関節内療法薬、たとえばコルチコステロイドおよびヒアルロン酸類、たとえばヒアルガン（hyalgan）およびシンビスク（synvisc）。
【００９８】
本発明化合物は、抗ウイルス薬、たとえばビラセプト（Viracept）、ＡＺＴ、アシクロビル（aciclovir）およびファムシクロビル（famciclovir）、ならびに消毒薬、たとえばバラント（Valant）とも共投与できる。
【００９９】
本発明化合物は、さらに下記の化合物とも共投与できる：ＣＮＳ薬、たとえば抗うつ薬（たとえばセルトラリン（sertraline））、抗パーキンソン病薬（たとえばデプレニル（deprenyl）、レボドパ(L-Dopa)、レキップ（Requip）、ミラペックス（Mirapex）、ＭＡＯＢ阻害薬、たとえばセレギン（selegine）およびラサギリン（rasagilline）、ｃｏｍＰ阻害薬、たとえばタスマル（Tasmar）、Ａ−２阻害薬、ドーパミン再取込み阻害薬、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニスト、および神経性一酸化窒素シンターゼ阻害薬）、および抗アルツハイマー病薬、たとえばドネペジル（donepezil）、タクリン（tacrine）、ニューロチン（登録商標）、プレガバリン、ＣＯＸ−２阻害薬、プロペントフィリン（propentofylline）またはメトリフォネート（metryfonate）。
【０１００】
本発明化合物は、さらに骨粗鬆症薬、たとえばエビスタ（EVISTA、登録商標）（塩酸ラロキシフェン（raloxifene hydrochloride））、ドロロキシフェン（droloxifene）、ラゾフォキシフェン（lasofoxifene）またはフォソマックス（fosomax）、および免疫抑制薬、たとえばＦＫ−５０６およびラパマイシン（rapamycin）とも共投与できる。
【０１０１】
実施例
【０１０２】
【化１５】
2006526610.tif 000018
【０１０３】
【表２−１】
2006526610.tif 000019
【０１０４】
【表２−２】
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【０１０５】
中間体１．  ３−クロロ−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル．  ３−（３−エトキシ−フェニル）−アクリル酸（５．３ｇ，２８ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．２１ｍＬ，２．６５ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（２．０５ｍＬ，２６ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１０．４ｍＬ）およびクロロベンゼン（４０ｍＬ）のスラリーを、２１時間、加熱還流した。反応物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をジクロロメタン（１５ｍＬ）に溶解し、メタノール（１５ｍＬ）で処理した。生成した固体を濾過により分離し、メタノールで洗浄して、表題化合物（６．７ｇ，８８％）を得た。
【０１０６】
【数１】
2006526610.tif 000021
【０１０７】
中間体２．  ３−クロロ−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体１（２．０ｇ，７．３９ｍｍｏｌ）の、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中における溶液に、１Ｎ  ＮａＯＨ（２０ｍＬ）を添加した。混合物を６５〜７５℃に２時間、加熱撹拌し、次いで室温に放冷した。反応混合物をＥｔＯＡｃで２回洗浄し、次いで酸性にすると、灰白色固体沈殿が生成した。この沈殿をＥｔＯＡｃで数回抽出した。有機層をブラインで洗浄し、濃縮すると３−クロロ−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸が得られた。３−クロロ−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１．８ｇ，７．０１ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２中における室温溶液に、塩化オキサリル（１．３５ｍＬ，１５．５ｍｍｏｌ）、続いて２〜３滴のＤＭＦを添加した。反応物を室温で２時間撹拌し、次いで濃縮した。残留物をＣＨ３ＣＮ（６０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１．０８ｍＬ，７．７５ｍｍｏｌ）、続いて５−アミノテトラゾール（０．７２５ｇ，９．５２ｍｍｏｌ）を反応物に添加した。反応物を６０℃で１６時間撹拌し、次いで室温に冷却した。混合物をＨ２Ｏ（約３０ｍＬ）で希釈すると、固体沈殿が生成した。この固体を濾過し、Ｈ２ＯおよびＣＨ３ＣＮで洗浄して、表題化合物（１．２ｇ，５０％）を得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３２４。
【０１０８】
中間体３．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−ブロモメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（２．５ｇ，９．２ｍｍｏｌ）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（１．７１ｇ，９．９９ｍｍｏｌ）、触媒量のＡＩＢＮ（２，２−アゾビスイソブチロニトリル）および四塩化炭素（８０ｍＬ）の混合物を、２４時間、加熱還流した。溶液を冷却し、減圧濃縮した。移動相としてヘキサン−ジクロロメタン（１−２）を用いて、粗生成物を小さなシリカゲル床に通した。減圧濃縮して、表題化合物（２．１ｇ，６５％）を得た。
【０１０９】
【数２】
2006526610.tif 000022
【０１１０】
中間体４．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−（メチルカルボニルオキシ）メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル．  中間体３（２．１ｇ，６．０ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム（１．４８ｇ，１８ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（２０ｍＬ）およびＴＨＦ（１０ｍＬ）中における混合物を、８０℃に１８時間加熱した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチル／水に溶解した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧濃縮して、表題化合物（２．１ｇ，９５％）を得た。
【０１１１】
【数３】
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【０１１２】
中間体５．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−ヒドロキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル．  中間体４（１．８６ｇ，５．７ｍｍｏｌ）の、メタノール（８０ｍＬ）中における溶液を、炭酸カリウム（２ｇ）と共に１８時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を水で数回、摩砕処理し、乾燥させた。残留物を酢酸エチル／メタノールから再結晶して、表題化合物（０．８９ｇ，５４％）を得た。
【０１１３】
【数４】
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【０１１４】
中間体６．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−メトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸．  中間体５（０．２５ｇ，０．８７ｍｍｏｌ）の、ＤＭＦ（５ｍｌ）中における溶液を、ＮａＨ（０．０３８ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）で処理し、１５分間撹拌した。ヨードメタン（０．２７ｍＬ，４．３５ｍｍｏｌ）を添加し、１８時間撹拌し続けた。溶媒を減圧下で除去し、残留物を酢酸エチルに溶解した。溶液を１Ｎ  ＮａＯＨ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧濃縮すると、０．２２０ｇ（８９％）の粗製化合物が得られた。このエステルをＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、１Ｎ  ＮａＯＨ（２ｍｌ）と共に１８時間撹拌した。ＴＨＦを減圧下で除去し、酢酸エチルで抽出した。水層を酸性になるまでＨＣｌで処理し、生成物を濾過により回収して、表題化合物（０．１１ｇ，４４％）を得た。
【０１１５】
【数５】
2006526610.tif 000025
【０１１６】
中間体７．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−メトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体６（０．１１ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２ｍｌ）およびジクロロメタン（５ｍｌ）の溶液を、５０℃に２時間加熱した。反応物を周囲温度に冷却し、溶媒を減圧下で除去すると、中間体６の酸塩化物が得られた。この酸塩化物、トリエチルアミン（０．１０ｍｌ，０．７７ｍｍｏｌ）、および５−アミノ−１Ｈ−テトラゾール（０．０６５ｇ，０．７７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍｌ）に溶解し、７０℃に１８時間加熱した。溶媒の半分を減圧下で除去し、得られた溶液を水（１ｍｌ）で処理すると、生成物が沈殿した。生成物を濾過により分離し、アセトニトリル／水で洗浄し、乾燥させて、表題化合物（０．１ｇ，７４％）を得た。
【０１１７】
【数６】
2006526610.tif 000026
【０１１８】
中間体８．  ３−クロロ−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボニルクロリド．  ３−（４−メトキシ−３−メチル−フェニル）−アクリル酸（Kulkarni et al., (1967) Indian J. Chem. 5: 471-474）（５．３ｇ，２８ｍｍｏｌ）、ピリジン（０．２１ｍＬ，２．６５ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（２．０５ｍＬ，２６ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（１０．４ｍＬ）およびクロロベンゼン（４０ｍＬ）を、２１時間、加熱還流した。反応物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。残留物をトルエンに再溶解し、減圧濃縮した。表題化合物をトルエン／ヘキサンから再結晶して、表題化合物（４．１ｇ，２８％）を得た。
【０１１９】
【数７】
2006526610.tif 000027
【０１２０】
中間体９．  ３−クロロ−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体８（２．０ｇ，７．２ｍｍｏｌ）、５−アミノテトラゾール（０．６４９ｇ，７．６ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１．３２ｍＬ，９．４ｍｍｏｌ）の、アセトニトリル（６０ｍＬ）中における溶液を、１８時間、加熱還流した。反応物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。水を残留物に添加し、生成した固体を濾過により採集した。乾燥した固体をジクロロメタン／メタノールから再結晶して、表題化合物（１．７ｇ，７２％）を得た。
【０１２１】
【数８】
2006526610.tif 000028
【０１２２】
中間体１０．  ３−クロロ−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体９の合成について記載したものと同様な方法で、アセトニトリル（２００ｍＬ）中の３−クロロ−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボニルクロリド（Connor et al., J. Med. Chem., 35: 958-965）（５．８２ｇ，２０ｍｍｏｌ）、５−アミノテトラゾール（１．７ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（５．５８ｍＬ，４０．０ｍｍｏｌ）から表題化合物（５．０ｇ，７６％）を得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３４０。
【０１２３】
中間体１１．  ３−クロロ−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体９の合成について記載したものと同様な方法で、アセトニトリル中の３−クロロ−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボニルクロリド（Connor et al., J. Med. Chem., 38: 4597-4614）、５−アミノテトラゾール、およびトリエチルアミンから表題化合物を得た。ＭＳ：Ｍ＋１＝３１０。微量分析：計算値：Ｃ＝42.66；Ｈ＝2.60；Ｎ＝22.61；実測値：Ｃ＝43.01；Ｎ＝2.70；Ｈ＝22.0。
【０１２４】
中間体１２．  ３−メトキシ−４−メチルケイ皮酸．  出発物質３−（３−メトキシ−４−メチル−フェニル）−アクリル酸を下記の反応に従って製造した：３−メトキシ−４−メチルベンズアルデヒド（２０．０ｍＬ，１３７ｍｍｏｌ）をマロン酸（２７．２ｇ，２０６ｍｍｏｌ）と共に、ピペリジン（６ｍＬ）およびピリジン（２００ｍＬ）の混合物中で２．５時間還流した。混合物を半分の体積に濃縮した。Ｈ２Ｏ（約２０ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ（約６ｍＬ）を添加すると、固体沈殿が生成した。この固体を濾過し、１Ｎ  ＨＣｌ、次いでＨ２Ｏですすぎ、次いで真空乾燥して、表題生成物を定量的収率で得た。
【０１２５】
【数９】
2006526610.tif 000029
【０１２６】
中間体１３．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボニルクロリド．  中間体１２（９．１８ｇ，４７．８ｍｍｏｌ）を、ピリジン（０．３９ｍＬ）、ＤＭＦ（３．５１ｍＬ）、およびクロロベンゼン（６０ｍＬ）の混合物に、アルゴンパージした還流冷却器付き丸底フラスコ内で溶解した。塩化チオニル（１７．８ｍＬ，２４４ｍｍｏｌ）を注射器で混合物に添加した。反応物を１８時間、激しい還流下で加熱撹拌した。反応物を室温に放冷し、次いで真空濃縮した。残留物をＣＨ２Ｃｌ２（約４０ｍＬ）に溶解し、次いで過剰のヘキサンで希釈した。希釈液を約半分の体積に濃縮すると、沈殿が生成した。この固体沈殿を濾過して採集し、真空乾燥させて、表題生成物（８．４９ｇ，３２．９ｍｍｏｌ，６９％）を灰褐色の綿毛状固体として得た。
【０１２７】
中間体１４．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体７の合成について記載したものと同様な方法で、中間体１３を表題化合物（０．４４２ｇ，５８％）に変換した。ＭＳ：Ｍ＋１＝３２４。
【０１２８】
中間体１５．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−エトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸．  中間体６の合成について記載したものと同様な方法で、中間体５を表題化合物（０．１ｇ，３４％）に変換した。
【０１２９】
【数１０】
2006526610.tif 000030
【０１３０】
中間体１６．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−エトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体７の合成について記載したものと同様な方法で、中間体１５を表題化合物（０．０７５ｇ，５３％）に変換した。
【０１３１】
【数１１】
2006526610.tif 000031
【０１３２】
中間体１７．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−ベンジルオキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸．  中間体６の合成について記載したものと同様な方法で、中間体５を表題化合物（０．０４ｇ，２７％）に変換した。
【０１３３】
【数１２】
2006526610.tif 000032
【０１３４】
中間体１８．  ３−クロロ−５−メトキシ−６−ベンジルオキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体７の合成について記載したものと同様な方法で、中間体１７を表題化合物（０．０４８ｇ，定量的）に変換した。
【０１３５】
【数１３】
2006526610.tif 000033
【０１３６】
目的チオール（Ｒ１−Ｌ−ＳＨ）の溶液を、溶液（ＤＭＦ）の最終モル濃度が０．６６Ｍの目的チオール（１当量）および０．６６ＭのＤＢＵとなるように調製した。適宜なバイアル（２ドラム）、中間体２、７、９、１０、１１、１４、１６または１８（１．５ｍｌ，０．１１ｍｍｏｌ）および目的チオール溶液（０．５ｍＬ，０．３３ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルに蓋をし、振とうしながら８０℃に１０時間加熱した。反応物を冷却し、Bohdan Mini Blockの個別容器に移した。バイアルをＤＭＦ（０．５ｍｌ）で洗浄し、洗液をMini Blockの適宜な容器に移した。ArgoPore（登録商標）−イソシアネート捕獲樹脂（０．２０ｇ）（Argonaut Technologies, Inc., カリフォルニア州フォスター・シティー）を各容器に添加し、２時間混合した。得られた溶液を濾過して樹脂を除去した。次いで樹脂をＤＭＦ（０．５ｍＬ）で洗浄した。次いで反応物を酢酸（０．２Ｍメタノール，０．５ｍｌ）で処理し、次いで溶媒を減圧下で除去した。残留物をメタノール（２ｍＬ）に溶解し、Bohdan Mini Blockの新たな容器に移した。Argonaut ＭＰ−ＴｓＯＨ捕獲樹脂（０．２０ｇ）（Argonaut Technologies, Inc., カリフォルニア州フォスター・シティー）を各容器に添加し、１８時間混合した。樹脂を濾過により分離し、樹脂をメタノール（０．４ｍＬ）およびＤＭＦ（０．５ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧下で除去し、実施例１〜１４の表題化合物を逆相クロマトグラフィーにより精製した。
【０１３７】
実施例１．  ３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例２．  ３−シクロヘキシルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１３８】
実施例３．  ３−シクロペンチルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例４．  ３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１３９】
実施例５．  ３−シクロペンチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例６．  ３−シクロヘキシルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１４０】
実施例７．  ３−シクロペンチルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例８．  ３−シクロヘキシルスルファニル−６−メトキシ−５−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１４１】
実施例９．  ３−シクロペンチルスルファニル−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例１０．  ３−シクロヘキシルスルファニル−５−エトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１４２】
実施例１１．  ３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例１２．  ３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−６−メトキシメチル−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１４３】
実施例１３．  ３−シクロヘキシルスルファニル−６−エトキシメチル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
実施例１４．  ６−ベンジルオキシメチル−３−シクロヘキシルスルファニル−５−メトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド。
【０１４４】
中間体１９．  ３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸．  ３−メルカプト−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸ベンジルエステル（１．４ｇ，４．０ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル（ＡＣＮ）１０ｍＬ中の（ブロモメチル）シクロプロパン（０．３９ｇ，４．０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（０．６１ｍＬ，４．４ｍｍｏｌ）と混和した。反応物を６時間還流し、次いで室温に冷却した。溶媒を真空下で除去した。残留物を１：１  ＥｔＯＡｃ／Ｅｔ２Ｏに溶解し、水およびブラインで洗浄した。有機層を濃縮乾固し、ＴＨＦ（３０ｍＬ）および１Ｎ  ＮａＯＨ（１５ｍＬ）に溶解し、１０時間還流した。反応物を室温に冷却し、ＥｔＯＡｃで希釈した。この２相物質を濾過して、目的生成物を得た。収量：１．０ｇ，７７％。
【０１４５】
実施例１５．  ３−シクロプロピルメチルスルファニル−５，６−ジメトキシ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（１Ｈ−テトラゾル−５−イル）−アミド．  中間体１９（０．９６ｇ，２．９ｍｍｏｌ）を触媒量のＤＭＦ滴、続いて塩化オキサリル（５．０ｍＬ）と混和した。反応物を室温で３０分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。残留物をアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、５−アミノテトラゾール（０．３０ｇ，３．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．４９ｍＬ，３．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を周囲温度で２．５時間撹拌した。反応物をＨ２Ｏで希釈した。固体を濾過により採集し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、真空乾燥した。収量：０．７０，６０％。ＨＰＬＣ：９７．８７％、保持時間：７．３０３分。融点＝＞２５０℃。
【０１４６】
生物学的実施例１
ＰＩ３Ｋγタンパク質の発現および精製のプロトコル
ＥＳＦ９２１培地で増殖させたヨトウガ（Spodtera frugiperda）細胞に、ｇｌｕ−タグ付きｐ１０１発現バキュロウイルスおよびＨＡ−タグ付きｐ１１０γ発現バキュロウイルスを、ｐ１０１バキュロウイルス対ｐ１１０γバキュロウイルスの比率３：１で同時感染させた。Ｓｆ９細胞を１０Ｌのバイオリアクター内で総細胞数１×１０７／ｍＬになるまで増殖させ、感染の４８〜７２時間後に収穫した。次いで感染細胞の試料を、免疫沈降およびウェスタンブロット分析法（後記を参照）によりｐ１０１／ｐ１１０γ  ＰＩ３キナーゼ発現について検査した。
【０１４７】
ＰＩ３Ｋγを精製するために、細胞ペーストのグラム当たり４体積の室温の溶解用低張緩衝液（１ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、５ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  Pefabloc、０．５μＭアプロチニン、５μＭロイペプチン、２μＭペプスタチン、５μＭ  Ｅ６４、ｐＨ８）を凍結細胞ペレットに撹拌下で注ぎ、次いで４００ｐｓｉの窒素”ボンベ”（599HC T316、Parr Instrument Co.、イリノイ州モーリン）内で細胞溶解した。ＮａＣｌを１５０ｍＭになるように添加し、コール酸ナトリウムを１％になるように添加し、さらに４５分間混合した。溶解物を１４，０００ｒｐｍで２５分間の遠心分離により澄明にした。次いで、溶解物を抗−ｇｌｕ結合プロテインＧセファロース（Sepharose）ビーズ（Covance Research Products、カリフォルニア州リッチモンド）に、樹脂２０ｍＬ／細胞ペースト５０ｇで負荷した。カラムを１５体積の洗浄用緩衝液（１ｍＭ  ＤＴＴ、０．２ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  Pefabloc、０．５μＭアプロチニン、５μＭロイペプチン、２μＭペプスタチン、５μＭ  Ｅ６４、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１％コール酸ナトリウム、ｐＨ８）で洗浄した。ｇｌｕタグの結合に対して競合するペプチド１００μｇ／ｍＬを含有する洗浄用緩衝液６カラム体積で、ＰＩ３Ｋγを溶離した。溶離タンパク質を含むカラム画分（ＯＤ２８０の読みを求めることにより判定）を採集し、０．２ｍＭ  ＥＧＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  Pefabloc、５μＭロイペプチン、０．５％コール酸ナトリウム、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、および５０％グリセロール、ｐＨ８中で透析した。これらの画分を後に使用するまで−８０℃に保存した。
【０１４８】
生物学的実施例２
Ｇタンパク質サブユニットの発現
ヨトウガ（Spodtera frugiperda）細胞に、ｇｌｕ−タグ付きＧタンパク質β１発現バキュロウイルスおよびＧタンパク質β２発現バキュロウイルスを、ｇｌｕ−タグ付きＧタンパク質β１バキュロウイルス対Ｇタンパク質β２バキュロウイルスの比率１：１で同時感染させた。Ｓｆ９細胞を１０Ｌのバイオリアクター内で増殖させ、感染の４８〜７２時間後に収穫した。感染細胞の試料を、後記に従ってウェスタンブロット分析によりＧタンパク質β１／β２発現について検査した。細胞溶解物をホモジナイズし、生物学的実施例１と同様なｇｌｕ−タグ付きビーズのカラムに負荷し、生物学的実施例１に記載したようにカラムからｇｌｕペプチドと競合溶離し、処理した。
【０１４９】
生物学的実施例３
ウェスタンブロット分析
タンパク質試料を８％トリス−グリシンゲルに流し、４５μＭニトロセルロース膜へ移した。次いでブロットを、ＴＢＳＴ（５０ｍＭトリス、２００ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％トゥイーン（Tween）２０、ｐｈ７．４）中の５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および５％卵白アルブミンにより、室温で１時間遮断し、０．５％のＢＳＡを含むＴＢＳＴ中に１：１０００希釈した一次抗体と共に４℃で一夜インキュベートした。ｐ１１０γ、ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ８５α、Ｇタンパク質β１、およびＧタンパク質γ２サブユニットに対する抗体は、Santa Cruz Biotechnology, Inc.（カリフォルニア州サンタクルーズ）から購入された。ｐ１０１サブユニットの抗体はResearch Genetics, Inc.（アラバマ州ハンツビル）でｐ１０１ペプチド抗原に基づいて作成された。
【０１５０】
一次抗体と共にインキュベートした後、ブロットをＴＢＳＴ中で洗浄し、０．５％のＢＳＡを含むＴＢＳＴ中に１：１０，０００希釈したヤギ抗ウサギ抗体ＨＲＰコンジュゲート（Bio-Rad Laboratories, Inc.、カリフォルニア州ハーキュレス、製品番号170-6515）と共に室温で２時間インキュベートした。抗体をＥＣＬ（商標）検出試薬（Amersham Bioscience Corp.、ニュージャージー州ピスカッタウェイ）で検出し、Kodak ISO400Fスキャナーで定量した。
【０１５１】
生物学的実施例４
免疫沈降
生物学的実施例１または２からの細胞ペースト１００μＬを融解し、氷上で４００μＬの溶解用低張緩衝液（２５ｍＭトリス、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  Pefabloc、５μＭロイペプチン、５μＭ  Ｅ−６４（Roche）、１％Nonidet P40、ｐＨ７．５〜８）により細胞溶解した。溶解物をｇｌｕ−タグ付きビーズ（Covance Research Products、英国ケンブリッジ、製品番号AFC-115P）と共に室温で２時間インキュベートした。洗浄用緩衝液（２０ｍＭトリス、ｐＨ７．８〜８、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ２、０．５％ＮＰ４０）中でビーズを３回洗浄し、２倍の試料用緩衝液（Invitrogen Corporation、カリフォルニア州カールズバッド、製品番号LC1676）中で加熱することによりタンパク質をビーズから溶離した。
【０１５２】
生物学的実施例５
ＰＩ３Ｋγインビトロキナーゼアッセイ
表１の化合物の阻害特性をインビトロＰＩ３Ｋアッセイ法でアッセイした。９６ウェルポリプロピレンプレートの各ウェルに、ＤＭＳＯ中における目的最終濃度の５０倍の化合物２μＬを滴下した。各反応につき、精製した組換えｐ１０１／ｐ１１０γタンパク質（０．０３μｇ；約２．７ｎＭ）およびＧタンパク質β１／γ２サブユニット（０．０９μｇ；約５７．７ｎＭ）を、アッセイ用緩衝液（３０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、および１ｍＭ  ＤＴＴ）中で混和した。ＡＴＰおよび［γ−３２Ｐ−ＡＴＰ］（０．０９μＣｉ）を、反応物中の最終ＡＴＰ濃度が２０μＭになるように、この混合物に添加した。ホスファチジルイノシトール−４，５−二リン酸（ＰＩＰ２）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、およびコール酸ナトリウムをアッセイ用緩衝液中で１０分間、超音波処理し、ＭｇＣｌ２を添加し、氷上で２０分間インキュベートすることにより、脂質ミセルを形成した；最終濃度：反応物中２５μＭのＰＩＰ２、３００μＭのＰＥ、０．０２％のコール酸ナトリウム、および１０ｍＭのＭｇＣｌ２。等体積の脂質および酵素混合物（合計体積５０μＬ）を添加することにより反応を開始し、室温で２０分間進行させ、１００μＬの７５ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４で停止した。脂質生成物をガラス繊維濾板に移し、７５ｍＭ  Ｈ３ＰＯ４で数回洗浄した。各ウェルにWallac Optiphaseミックスを添加し、Wallac 1450 Triluxプレートリーダー（PerkinElmer Life Sciences Inc.、02118マサチュセッツ州ボストン）で計数することにより、放射性脂質生成物（ＰＩＰ３）の存在を測定した。各被験化合物のＩＣ５０をμＭで表１に報告する。
【０１５３】
【表３】
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【０１５４】
本明細書に記載した実施例および態様は説明のためのものにすぎず、それを考慮して当業者に多様な修飾および変更が示唆され、それらが本発明の精神および範囲ならびに特許請求の範囲に含まれることは理解される。本明細書に引用したすべての刊行物、特許および特許出願の全体を、あらゆる目的で本明細書に援用する。
【国際調査報告】
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