(57)【要約】望ましくない血管新生を特徴とする哺乳類疾患を、一般式（Ｉ）の２−メトキシエストラジオールの誘導体を投与することにより治療するための組成物および方法であって、当該変数が明細書中で定義される組成物および方法
2004537499.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式で表される化合物：
【化１】
2004537499.tif 000035
（式中、ａ）ＲｂおよびＲｏは独立して、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｆ、−ＣＮ、低級アルキル、−ＯＨ、−ＯＲ６、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＮＨ２またはＮ（Ｒ６）（Ｒ７）（当該Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、または炭素数１０までのアルキルまたは分枝鎖アルキルである）であると別記されない限り、−Ｈであり、
ｂ）Ｒａは、−Ｎ３、−Ｃ≡Ｎ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｒ、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ、−Ｃ＝ＣＨ−Ｒ、−Ｒ−Ｃ＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｎ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ３、−Ｏ−Ｒ、−Ｒ−Ｒ１、−Ｏ−Ｒ−Ｒ１、ＯＲ（Ｏ）Ｒ、ＯＲ（Ｏ）Ｒ１、ＲＯＲ、ＲＯＲ１、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＨ２もしくはＮ（Ｒ６）（Ｒ７）（当該Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、または炭素数１０までのアルキルもしくは分枝鎖アルキルである）、またはヘテロ基（当該ヘテロ基は複数のヘテロ原子を有し、置換されていてもよい）であって、当該ＲはＨまたは炭素数１０までの直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたはアラルキルであり、任意の位置において、Ｆが炭素鎖中または上で置換されていてもよく、Ｒ１が末端にある場合にＲ１は、−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＦまたはＣＦ３であり、
ｃ）Ｚ’は、＞Ｃ−ＯＡｃであると別記されない限り、＞ＣＯＨであり、
ｄ）＞Ｃ−Ｒｇは、＞ＣＨ２、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＨ、＞Ｃ（Ｒ３）ＯＨ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＲ３、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＨ２、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＨＲ３、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＲ３Ｒ４または＞Ｃ（Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３（当該Ｒ３およびＲ４は各々独立して、炭素数１０までのアルキルもしくは分枝鎖アルキル、またはアラルキルである）であり、あるいは
Ｒｇは、ｉ）直鎖または分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルキル、ｉｉ）Ｃ〜Ｚｏのいずれかの位置に１つまたは複数の二重結合を有する直鎖または分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルケニル、ｉｉｉ）化学的に可能である任意の位置に１つまたは複数の三重結合を有する直鎖または分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルケニル基、ｉｖ）各アルキル鎖が炭素原子数１〜１０の直鎖または分枝鎖であるモノアルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基、ｖ）（ＣＨ２）ｎ−ＣＦ２−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１または（ＣＨ２）ｎ−ＣＦ３（当該ｎは０〜１０である）、またはｖｉ）Ｈであり、ｉ）〜ｉｖ）のいずれの場合にも、芳香族基もしくはヘテロ芳香族基で任意に置換されるか、またはヘテロ基で任意に置換され、Ｒｇはα位またはβ位のいずれにあってもよく、あるいは
Ｒｇは、Ｒｇ１およびＲｇ２であって、当該Ｒｇ１は存在する場合も存在しない場合もあり、Ｒｇ１が存在する場合は、−Ｈまたは任意に置換されている直鎖もしくは分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルであり、Ｒｇ２はヘテロ基であり（ここで、Ｒｇ１が存在しない場合は、Ｒｇ２であるヘテロ基は二重結合で１７位に結合している）、Ｒｇ１またはＲｇ２はβ位に存在し、α位には他の基を有し、Ｒ１は末端である場合には−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＦまたはＣＦ３であり、
ｅ）Ｒｈ１およびＲｈ２は独立して、炭素数１０までのアルキル、アルケニルまたはアルキニル鎖で一置換もしくは多置換されているかまたは無置換のヘテロ官能基から選択される１または複数の基により置換されている炭素数１０までの直鎖もしくは分岐鎖アルキル、アルケニルもしくはアルキニル；ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）；または、少なくとも１つのヘテロ、ハロまたはアルキルで任意に置換されている芳香族基であると別記されない限りは、Ｈであり、あるいは
Ｒｈ１およびＲｈ２は独立して、少なくとも１つのヘテロ、ハロまたはアルキルで任意に置換されている少なくとも１つの脂肪族基または芳香族基を含む基であり、
ｆ）Ｚ’’は＞ＣＨ２であり、
任意の環における飽和結合は脱水素化されていてもよく、
一置換基はすべてαまたはβ立体配置のいずれかを有し、かつ
低級アルキルは、分枝鎖または非分枝鎖である炭素原子数１〜１０の炭素鎖であると定義される）。
【請求項２】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇは＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項４】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＮＯＨである
請求項１記載の化合物
【請求項５】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はβ−Ｈ１であり、
前記Ｒｇ２はα−ＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項６】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＮＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項７】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｚ’は＞Ｃ−ＯＡｃであり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＯＡｃである
請求項１記載の化合物。
【請求項８】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項９】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇは＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇは＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は−Ｈであり、
前記Ｒｇ２は−ＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇは＝Ｎ−ＮＨ−（ＳＯ２）−Ｃ６Ｈ４−ｐ−ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２は−ＣＯＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項１６】
代謝中に脱メチル化、酸化および別の分子との抱合を防止または阻害するためにエストラジオール類縁体を修飾する方法。
【請求項１７】
代謝の不活性化を遅延または防止するために立体バルクを、または化学特性もしくは静電特性の修飾を、あるいはそれらの組合せをエストラジオール類縁体に付加することを含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立して−ＨおよびＥｔである
請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよびｎ−Ｐｒである
請求項１記載の化合物。
【請求項２０】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよびｉ−Ｂｕである
請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよびＣＨ２ＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項２２】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよびｎ−Ｂｕである
請求項１記載の化合物。
【請求項２３】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｚ’’は＞ＣＨ２であり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよびＭｅである
請求項１記載の化合物。
【請求項２４】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
前記Ｒｈ１およびＲｈ２は独立してＨおよび−ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）２である
請求項１記載の化合物。
【請求項２５】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項２６】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項２７】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項２８】
前記Ｒａは−ＮＯ２であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項２９】
前記Ｒａは−Ｎ（ＣＨ３）２であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項３０】
前記Ｒａは−ＮＨ２であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項３１】
前記Ｒａは−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項３２】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項３３】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項３４】
前記Ｒａは−ＮＨ２であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３５】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３６】
前記Ｒａは−ＮＨ２＋ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３７】
前記Ｒａは−Ｎ（ＣＨ３）２であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３８】
前記Ｒａは−ＮＨ＋（ＣＨ３）２（またはＮ（ＣＨ３）２ＨＣｌ）であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項３９】
前記Ｒａは−ＮＨ＋（ＣＨ３）２（またはＮ（ＣＨ３）２ＨＣｌ）であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項４０】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
Ｃ９−Ｃ１１がオレフィンになっている
請求項１記載の化合物。
【請求項４１】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４２】
前記Ｒａは−Ｃ≡Ｃ−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４３】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４４】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈまたは−ＮＮＣ（Ｏ）Ｎであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４５】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４６】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４７】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４８】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項４９】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５０】
前記Ｒａは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５１】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５２】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５３】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５４】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５５】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５６】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨ２である
請求項１記載の化合物。
【請求項５７】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項５８】
前記Ｒａは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項５９】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６０】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６１】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６２】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６３】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６４】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１およびＲｇ２は各々Ｈである
請求項１記載の化合物。
【請求項６５】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項６６】
前記Ｒａは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項６７】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項６８】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項６９】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７０】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７１】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７２】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７３】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７４】
Ｒａは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
Ｒｇ１はＨであり、
Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７５】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７６】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７７】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７８】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項７９】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８０】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２はＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８１】
前記Ｒａは−ＯＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８２】
前記Ｒａは−Ｃ≡ＣＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８３】
前記Ｒａは−Ｃ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８４】
前記Ｒａは−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８５】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＯＨであり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８６】
前記Ｒａは−ＣＨ２ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８７】
前記Ｒａは−ＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８８】
前記Ｒａは−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１は存在せず、
前記Ｒｇ２は＝ＣＨＣＨ２ＣＨ３である
請求項１記載の化合物。
【請求項８９】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記Ｒｇ１はＨであり、
前記Ｒｇ２は−ＣＨ２ＯＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項９０】
前記Ｒａは−ＯＣＨ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ１は＞ＣＨであり、
前記＞Ｃ−Ｒｇ２は＞ＣＯＨであり、
Ｃ６−Ｃ７がオレフィンになっている
請求項１記載の化合物。
【請求項９１】
前記Ｒａは−Ｎ３であり、
前記＞Ｃ−Ｒｇは＞ＣＨである
請求項１記載の化合物。
【請求項９０】
前記Ｒａは−Ｈであり、
前記  ＞Ｃ−Ｒｇは＞ＣＨである
請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［発明の分野］
本発明は、異常細胞有糸分裂を特徴とする疾患状態の治療、および異常血管新生を特徴とする疾患の治療、ならびにこれらの事象の組合せを特徴とする疾患状態の治療に関する。より詳細には、本発明は、２−メトキシエストラジオール（２ＭＥ２）の類縁体、および異常細胞有糸分裂および／または異常血管新生を特徴とする疾患に対するそれらの効果に関する。
【０００２】
［発明の背景］
血管新生とは、組織または器官中における新しい血管の生成である。正常な生理学的条件下では、ヒトおよび動物は非常に特定の制限された状況においてのみ血管新生を受ける。例えば血管新生は通常、創傷治癒、胎児および胚発生、ならびに黄体、子宮内膜および胎盤の形成において観察される。
【０００３】
血管新生は、血管新生刺激剤および阻害剤により高度に調節された系により制御される。血管新生の制御が、ある種の疾患状態によって変更されることが判明しており、多くの場合、疾患に関連した病理学的損傷は、制御されていない血管新生に関連する。制御されている血管新生および制御されていない血管新生のいずれも、同じように発生すると考えられている。基底膜に取り囲まれた内皮細胞および血管周囲細胞が、毛細血管を形成する。血管新生は、内皮細胞および白血球により放出される酵素によって基底膜が侵食されることにより開始する。次に、血管の内腔を覆う内皮細胞が、基底膜を貫通して突き出る。血管新生刺激剤は、内皮細胞が侵食基底膜を通って移動するように誘導する。移動細胞は、内皮細胞が有糸分裂を経て増殖する親血管の「肉芽（ｓｐｒｏｕｔ）」を形成する。内皮肉芽は互いに合流して、毛細血管ループを形成して、新規の血管を生じる。
【０００４】
持続的非制御性血管新生は、多数の疾患状態において、つまり腫瘍転移および内皮細胞による異常成長において起こる。非制御性血管新生が存在する多様な病理学的疾患状態は、血管新生依存性疾患または血管新生関連疾患として分類されている。
【０００５】
血管新生が介在する疾患の一例は、眼血管新生疾患である。この疾患は、眼の構造、例えば網膜または角膜中に新血管が侵襲することを特徴とする。それは失明の最も一般的な原因であり、約２０の眼病に関与する。
加齢性黄斑変性では、関連視覚問題は、網膜色素上皮下の線維血管組織の増殖を伴うブルーフ膜の欠損による脈絡膜毛管の内方成長により引き起こされる。血管新生性損傷は、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障および水晶体後繊維増殖症にも関連する。角膜新生血管形成に関連したその他の疾患としては、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠損症、コンタクトレンズ過剰装着、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎および乾性翼状角膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。望ましくない血管新生に関連したその他の疾患としては、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡、フリクテン症、梅毒、マイコバクテリア感染、脂質変性、化学的熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原生動物感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁角質溶解、慢性関節リウマチ、全身性狼瘡、多発性関節炎、外傷、ヴェーゲナー類肉芽腫症、強膜炎、スティーブン−ジョンソン病、類天疱瘡および放射状角膜切開が挙げられる。
【０００６】
網膜／脈絡膜新生血管形成に関連した疾患としては、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、類肉腫症、梅毒、弾性繊維仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頚動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／絨毛組織炎、マイコバクテリア感染、ライム病、全身性エリテマトーデス、未熟児網膜症、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎または脈絡膜炎を引き起こす感染、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、近視、視神経乳頭先天性構造的欠陥、シュタルガルト病、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘稠度症候群、トキソプラスマ症、外傷およびレーザー後合併症が挙げられるが、これらに限定されない。その他の眼関連疾患としては、皮膚潮紅に関連した疾患（角の新生血管形成）、ならびに線維血管または線維組織の異常増殖により引き起こされる疾患、例えば全形態の増殖性硝子体網膜症が挙げられるが、これらに限定されない。
【０００７】
血管新生に関連する別の疾患は、慢性関節リウマチである。関節の滑膜の内側を覆う血管は、血管新生を蒙る。内皮細胞は、新規の血管網状構造を形成するほかに、パンヌス成長および軟骨崩壊をもたらす因子および反応性酸素種を放出する。血管新生は、骨関節炎にも関与している。血管新生関連因子による軟骨細胞の活性化は、関節の崩壊の一因になる。後期段階で、血管新生因子は新しい骨成長を促す。骨崩壊を防止するために治療的介入することは、疾患の進行を停止し、関節炎に罹患しているヒトの苦痛を和らげる。
【０００８】
慢性炎症は、病理学的血管新生とも関係がありうる。潰瘍性結腸炎およびクローン病のような疾患は、新規血管および炎症組織の内方成長を伴う組織学的変化を示す。南米で見出された細菌感染症であるバルトネラ症は、血管内皮細胞の増殖を特徴とする慢性期を生じ得る。血管新生に関連した別の病理学的機能は、アテローム硬化症に見出すことができる。血管の管腔内に形成されるプラークは、血管新生刺激活性を有することが示されている。
【０００９】
腫瘍成長が血管新生依存性であるという仮説は、１９７１年に始めて提唱された（Ｆｏｌｋｍａｎ， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ２８５：１１８２−８６（１９７１））。簡潔に言うと、この仮説は、以下のように明記する：「いったん腫瘍の「生着（ｔａｋｅ）」が発生した場合に、腫瘍細胞集団が増大するには、腫瘍に集中する新規の毛管の増大が先行する必要がある」。腫瘍の「生着」とは、現在では、２〜３立方ミリメートルの容積を占め、２百〜３百万細胞を超えない腫瘍細胞の集団が、既存の宿主微小血管上に生存している状態であり、腫瘍成長の前血管段階を意味すると理解されている。この段階を超えて腫瘍容積が拡張するには、新規の毛細血管の誘導が必要である。例えば、マウスにおける早期前血管段階での肺微小転移を検出することは、組織切片に関して高性能顕微鏡による検出以外では不可能である。
【００１０】
この概念を裏付ける間接的証拠の例を以下に挙げる：
（１）マウスにおいて皮下透明小室中に移植された腫瘍の成長速度は、新生血管形成前は遅くかつ一定であるが、新生血管形成後は急速でかつほぼ指数関数的に速くなる（Ａｌｇｉｒｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．， ６：７３−８５（１９４５））。
（２）血管が増殖しない単離灌流器官における腫瘍成長は１〜２ｍｍ３に制限されるが、それらがマウスに移植され、新生血管が形成されるようになると、この容積は急激に拡張し、１０００倍を超える（Ｆｏｌｋｍａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ， １６４：４９１−５０２（１９６６））。
（３）無血管角膜中の腫瘍成長は徐々に一定速度で進行するが、新生血管形成後は指数関数的に成長するようになる（Ｇｉｍｂｒｏｎｅ， Ｊｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．， ５２：４２１−２７（１９７４））。
（４）ウサギ眼の前眼房の水性流体中に懸濁された腫瘍は、生存が可能であり、無血管であり、かつサイズは１ｍｍ３未満に限定される。それらがいったん虹彩血管床に移植されると、それらは新生血管が形成されるようになり、急速に成長して、２週間以内に元の容積の１６，０００倍に達する（Ｇｉｍｂｒｏｎｅ， Ｊｒ．， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．， １３６：２６１−７６）。
（５）腫瘍が鶏胚漿尿膜上に移植された場合、それらは７２時間未満の無血管期中は徐々に成長し、平均直径は０．９３＋０．２９ｍｍを超えない。新生血管形成が開始された後の２４時間以内に急速な腫瘍拡張が起こり、７日目までにこれらの血管形成腫瘍は８．０＋２．５の平均直径に達する（Ｋｎｉｇｈｔｏｎ， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ３５：３４７−５６（１９７７））。
（６）ウサギ肝臓における転移の血球円柱は、転移のサイズの不均一性を明示するが、血管形成が存在する比較的均一なサイズに関する切離点（ｃｕｔ−ｏｆｆ ｐｏｉｎｔ）を示す。腫瘍は一般に直径１ｍｍまでは無血管であるが、その直径を超えると新生血管が形成される（Ｌｉｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｕｒｇｅｒｙ， ６８：３３４−４０（１９７０））。
（７）膵島のβ細胞中に癌腫を発症するトランスジェニックマウスでは、前血管過形成島は１ｍｍ未満のサイズに限定される。６〜７週齢では、島の４〜１０％において新生血管が形成されるようになり、これらの島から、前血管島の容積の１０００倍より大きい血管形成腫瘍を生じる（Ｆｏｌｋｍａｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３９： ５８−６１ （１９８９））。
（８）ＶＥＧＦ（血管内皮細胞成長因子）に対する特異的抗体は微小血管密度を低減し、（ヌードマウスにおける）血管新生の唯一の媒介物質であるＶＥＧＦに依存している３つのヒト腫瘍の成長の「有意のまたは劇的な」抑制を引き起こす。その抗体は、インビトロでは腫瘍細胞の成長を抑制しない（Ｋｉｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３６２：８４１−４４（１９９３））。
（９）抗ｂＦＧＦモノクローナル抗体は、血管新生の唯一の媒介物質であるｂＦＧＦの分泌に依存しているマウス腫瘍の成長の７０％を抑制する（Ｈｏｒｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５１：６１８０−８４（１９９１））。
（１０）ｂＦＧＦの腹腔内注入により、腫瘍中の毛管内皮細胞の成長を刺激することにより、原発腫瘍の増殖およびその転移を促進する。腫瘍細胞それ自体はｂＦＧＦに対する受容体を有しておらず、ｂＦＧＦはインビトロでは、腫瘍細胞に対する有糸分裂促進因子でない（Ｇｒｏｓｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ａｍ． Ａｓｓｏｃ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ３１：７９（１９９０））。
（１１）特定の血管新生阻害剤（ＡＧＭ−１４７０）は、インビボでの腫瘍成長および転移を抑制するが、インビトロでの腫瘍細胞増殖の抑制に関してはずっと低活性である。その阻害剤は、腫瘍細胞増殖を抑制する濃度よりも、４ｌｏｇ低い濃度で、血管内皮細胞増殖を最大半減に抑制する（Ｉｎｇｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４８： ５５５−５７（１９９０））。腫瘍成長が血管新生に依存性であるという間接的臨床的証拠も存在する。
（１２）硝子体に転移するヒト網膜芽細胞腫は、それらが生育可能であり、３Ｈ−チミジンを取り込むという事実にもかかわらず、無血管球状体の発達は１ｍｍ３未満に制限される（摘出眼から除去し、インビトロで分析した場合）。
（１３）卵巣の癌腫はごく小さな無血管白色種（１〜３ｍｍ３）として腹膜に転移する。これらの移植片は、それらのうちの１つまたは複数が新生血管を形成するようになるまで、それより大きく成長することはめったにない。
（１４）乳癌における（Ｗｅｉｄｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２４： １−８ （１９９１）； Ｗｅｉｄｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．， ８４：１８７５−８７（１９９２））、および前立腺癌における（Ｗｅｉｄｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．， １４３（２）： ４０１−０９ （１９９３））新生血管形成の度合は、将来の転移の危険と密接に相関する。
（１５）ヒト皮膚黒色腫からの転移が、新生血管が形成される前に起こることはまれである。新生血管の形成が開始されると、病状の悪化および転移の危険性が増大する（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｐａｔｈｏｌ．， １３３：４１９−２３（１９８８））。
（１６）膀胱癌では、血管形成タンパク質ｂＦＧＦの尿中レベルは、細胞学的レベルよりも、疾患の状態および程度の指標として高感度である（Ｎｇｕｙｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．， ８５：２４１−４２（１９９３））。
【００１１】
したがって、血管新生が癌の転移に重大な機能を果たしていることは明らかである。この血管新生の活性を抑制または排除することができれば、腫瘍は存在しつつも成長しない。疾患状態において、血管新生を防止することにより、新規の微小血管系の侵襲により引き起こされる損傷を回避することができる。血管新生過程を制御する療法は、これらの疾患の廃絶または緩和をもたらすことができる。
【００１２】
血管新生は、多数の異なる種類の癌、例えば固形腫瘍および血行性腫瘍に関連している。血管新生が関連している固形腫瘍としては、横紋筋肉腫、網膜芽細胞腫、ユーイング肉腫、神経芽細胞腫および骨肉種が挙げられるが、これらに限定されない。血管新生は、血液性腫瘍、例えば白血病、通常は貧血、血液凝固障害、ならびにリンパ節、肝臓および脾臓の膨大を伴う白血球の非拘束性増殖が起こる骨髄の種々の急性または慢性腫瘍性疾患のいずれにも関連する。血管新生は、白血病腫瘍および多発性骨髄腫疾患を生じる骨髄中の異常に関連していると考えられる。
【００１３】
小児期において最も頻繁に起こる血管形成性疾患の１つが、血管腫である。血管腫は、新規形成血管からなる腫瘍である。ほとんどの場合、腫瘍は良性で、介入しなくても治癒する。より重症の場合には、腫瘍は大型空洞性および浸潤性形態に進行して、臨床的合併症を生じる。全身性形態の血管腫である血管腫症は、高い死亡率を示す。現在行われている療法で治療することができない治療耐性血管腫も存在する。
【００１４】
血管新生は、遺伝性疾患、例えばオースラー−ウェーバー−ランデュ病または遺伝性出血性毛細管拡張症において見出される損傷にも関与する。これは、血管またはリンパ管の腫瘍である多発性小血管腫を特徴とする遺伝性疾患である。血管腫は皮膚および粘膜に見出され、しばしばエピタクシー（鼻出血）または胃腸出血を、場合によっては肺または肝臓動静脈瘻を伴う。
【００１５】
したがって、血管新生を抑制することができる組成物および方法が必要とされている。さらに、特に腫瘍中の血管の望ましくない成長を抑制することができる組成物および方法が必要とされている。
【００１６】
血管新生は、正常生理学的過程、例えば生殖および創傷治癒にも関与する。血管新生は、排卵において、また受精後の胞胚の着床においても重要な段階である。血管新生を防止することにより、無月経を誘導し、排卵を遮断し、あるいは胞胚による着床を防止する。
【００１７】
創傷治癒において、外科的手法における有害な副作用である過剰修復または繊維増殖症は、血管新生により引き起こされるかまたは悪化される可能性がある。癒着は手術における高頻度合併症であり、小腸閉塞といった問題を引き起こす。
【００１８】
いくつかの化合物が、血管新生を抑制するために用いられてきた。Ｔａｙｌｏｒ等（Ｎａｔｕｒｅ， ２９７：３０７（１９８２））は、血管新生を抑制するためにプロタミンを用いた。プロタミンは毒性があるため、治療薬としての実務上の使用が限定される。Ｆｏｌｋｍａｎ等（Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２１：７１９（１９８３）ならびに米国特許第５，００１，１１６号および第４，９９４，４４３号）は、血管新生を制御するためにヘパリンおよびステロイドを使用することを開示している。糖質コルチコイドおよび鉱質コルチコイド活性を欠くステロイド、例えばテトラヒドロコルチゾールは、血管新生阻害剤であることが明らかになっている。
【００１９】
動物において内因的に見出されたその他の因子、例えばウシ硝子体液からの４ｋＤａ糖タンパク質および軟骨由来因子が、血管新生を抑制するために用いられてきた。細胞性因子、例えばインターフェロンは、血管新生を抑制する。例えば、インターフェロンαまたはヒトインターフェロンβは、ヒト腫瘍細胞により刺激されたマウス真皮における腫瘍誘導性血管新生を抑制することが示されている。インターフェロンβも、同種異系脾臓細胞により誘導された血管新生の強力な阻害剤である（Ｓｉｄｋｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ４７：５１５５−６１（１９８７））。ヒト組換えインターフェロン（α／Ａ）は、血管新生誘導性疾患である肺血管腫症の治療に首尾よく用いられることが報告された（Ｗｈｉｔｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｗ Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２０：１１９７−１２００（１９８９））。
【００２０】
血管新生を抑制するために用いられてきたその他の作用物質としては、アスコルビン酸エーテルおよびその関連化合物が挙げられる（日本国公開特許公報第５８−１３号（１９７８））。硫酸化多糖ＤＳ４１５２も血管新生を抑制する（日本国公開特許公報第６３−１１９５００号）。さらに、抗血管新生化合物として、アンギオスタチン（登録商標）（米国特許第５，６３９，７２５号、第５，７９２，８４５号、第５，８８５，７９５号、第５，７３３，８７６号、第５，７７６，７０４号、第５，８３７，６８２号、第５，８６１，３７２号および第５，８５４，２２１号）およびエンドスタチン（商標）（米国特許第５，８５４，２０５号）が挙げられる。
【００２１】
血管新生を抑制することが示されている別の化合物は、サリドマイドである（Ｄ’Ａｍａｔｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ９０：４０８２−８５（１９９４））。サリドマイドは、血管新生に関連する多数の疾患、例えば慢性関節リウマチ（Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．， ２７（１０）：１１１８−２１（１９８４）； Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．， １６（２）：１５８−６３（１９８９））、ベーチェット病（Ｈａｎｄｌｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， １２７ Ｓｕｐｐｌ， ４０：６７−８（１９９２）； Ｇｕｎｚｌｅｒ， Ｍｅｄ． Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ， ３０（２）：１０５−９（１９８９））、移植片対宿主拒絶（Ｆｉｅｌｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ２１１（５５）：１３０８−１０（１９６６）； Ｈｅｎｅｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｈａｅｍａｔｏｌ．， ７８（１）：２３−７（１９９１））、マイコバクテリア疾患（Ｖｉｃｅｎｔｅ， ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｉｎｔｅｒｎ． Ｍｅｄ．， １５３（４）：５３４（１９９３））、単純ヘルペスおよび帯状ヘルペス感染（Ｎａａｆｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， ２４（２）：１３１−４（１９８５））、慢性炎症、潰瘍性結腸炎（Ｍｅｚａ， ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｔｈｅｒ， ２３（１１）：７４−８０， ８３（１９９３）； Ｐｏｗｅｌｌ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ． Ｊ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．， １１３ Ｓｕｐｐｌ ２８：１４１−４（１９８５））、ハンセン病（Ｂａｒｎｅｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｆｅｃｔ． Ｉｍｍｕｎ．， ６０（４）：１４４１−４６（１９９２））ならびに狼瘡（Ｂｕｒｒｏｗｓ， ＢＭＪ， ３０７：９３９−４０（１９９３））を治療するために首尾よく用いられてきた催眠鎮静剤である。
【００２２】
サリドマイドは成人においては、副作用は最小限であるが、それは強力な催奇物質である。したがって、出産年齢の女性におけるその使用に関しては懸念がある。最小限ではあるが、治療としてサリドマイドを使用することの適切性を限定する多数の副作用がある。このような副作用の１つが嗜眠状態である。多数の治療的研究において、サリドマイドの初期投与量は、患者が嗜眠状態になり、正常に機能することが困難であるため、低減する必要があった。サリドマイドの使用を制限する別の副作用は末梢性ニューロパシーであって、この副作用により、個体は四肢の麻痺および機能不全に陥る。したがって、容易に投与することができ、かつ血管新生を抑制し得る方法および組成物の改良が必要とされる。
【００２３】
必要なのは、望ましくない副作用を生じない安全かつ有効な治療方法である。
【００２４】
２−メトキシエストラジオールは、強力な抗増殖活性を有し、広範な種々の腫瘍および非腫瘍細胞系においてアポトーシスを誘導するエストラジオール（Ｅ２）の内因性代謝産物である。経口投与される場合、それは抗腫瘍および抗増殖活性を示し、毒性をほとんど伴わない。２−メトキシエストラジオールはその抗増殖活性のためのエストロゲン受容体を必要とせず、エストロゲン依存性ＭＣＦ−７細胞増殖によりアッセイした場合に、広範囲の濃度全体にわたってエストロゲン様でないことをインビトロデータは示唆する。しかしながらインビボおよびインビトロでデメチラーゼが存在すると、この化合物は２−ヒドロキシエストラジオールに代謝され、これは、いくつかのアプローチによりエストロゲン様であることが示されている。エストラジオールまたは２−メトキシエストラジオールの生物学的利用能を改良するための手段、およびエストロゲン様２−メトキシエストラジオール代謝産物の生成を低減するための手段が必要である。さらに、エストロゲン様誘導体への変換、代謝的抱合およびエストロンへの変換を防止することができるように、エストラジオールまたは２−メトキシエストラジオールを修飾するための手段が必要である。
【００２５】
［発明の概要］
本発明は、異常有糸分裂および／または異常血管新生を特徴とする疾患を治療するのに有効である２−メトキシエストラジオールの類縁体を提供する。特に本発明は、２、１６または１７位あるいはそれらの組合せで修飾された２−メトキシエストラジオールの類縁体に関する。細胞増殖を抑制する一般式で表される化合物が好ましい。血管新生を抑制する一般式で表される化合物も好ましい。好ましい組成物は、エストロゲン受容体結合、吸収改良、輸送（例えば血液脳関門および細胞膜を通しての）、生物学的安定性または毒性低減の変化（増大または低減）も示し得る。本発明は、特許請求の範囲の一般式により記載されたような、本方法に有用な化合物も提供する。
【００２６】
本明細書中に記載されたような望ましくない細胞有糸分裂を特徴とする哺乳類疾患としては、内皮細胞の過剰または異常刺激（例えばアテローム硬化症）、固形腫瘍および腫瘍転移、良性腫瘍、例えば血管腫、聴神経腫、神経繊維腫、トラコーマ、ならびに化膿性肉芽腫、血管機能不全、異常創傷治癒、炎症性および免疫障害、ベーチェット病、痛風または痛風性関節炎、以下を伴う異常血管新生：慢性関節リウマチ、皮膚疾患、例えば乾癬、糖尿病性網膜症およびその他の眼血管新生疾患、例えば未熟児網膜症（水晶体後繊維増殖）、黄斑変性、角膜移植拒絶、新生血管性緑内障およびオースラー−ウェーバー症候群（オースラー−ウェーバー−ランデュ病）が挙げられるが、これらに限定されない。その他の望ましくない血管新生としては、正常過程、例えば排卵および胞胚の着床を含む。したがって、上記の組成物は、排卵および胞胚の着床を遮断するために、または月経を遮断する（無月経を誘導する）ために用いることができる。
【００２７】
固有のエストロゲン活性を有しないエストラジオールの内因性代謝産物である２−メトキシエストラジオール（２ＭＥ２）は、広範な種々の腫瘍および非腫瘍細胞系においてアポトーシスを誘導する強力な抗増殖剤であることは既知である。経口投与される場合、それは抗腫瘍および抗血管新生活性を示し、毒性をほとんどまたはまったく伴わない。現在、２ＭＥ２は、ＰＡＮＺＥＭ（商標）の名称で、いくつかの第Ｉ相およびＩＩ相臨床試験段階にある。
【００２８】
２ＭＥ２の生物学的活性を保持しつつ、代謝が低減されると予測される新規の一連の化合物が合成されている。いくつかの類縁体は、１７位のヒドロキシ部分が無いため、２−メトキシエストロンに代謝されない、またはその位置で抱合されない。別の組の化合物は、２−メトキシ基が脱メチル化されて潜在的にエストロゲン様の２−ヒドロキシ誘導体を生じさせないように、メトキシ基を別の位置に置換した化合物である。２ＭＥ２における観察とは逆に、これらの新規類縁体のうちのいくつかは、評価された腫瘍細胞系全体で内皮細胞に関する選択的インビトロ抗増殖活性を有する。これらの考え得る抗腫瘍および抗血管新生性化合物の合成およびＳＡＲ特性を考察する。
【００２９】
２ＭＥ２の生物学的活性を保持しつつ、１７位および２位での代謝が低減されると予測される一連の新規化合物が合成された。１７位がアルキル化された類縁体はヒドロキシル部分を欠き、その位置で２−メトキシエストロンに代謝されることはないか、または抱合されることはないが、ＨＵＶＥＣおよびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中で抗増殖活性を保持する。
【００３０】
他の基、例えば２−Ｎ−ホルムアミドまたは２−ホルミルおよび２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノにより２−メトキシ基を置換した場合は抗増殖活性を保持したが、これらの基は脱メチル化してエストロゲン様である２−ヒドロキシル誘導体を生じさせることはない。これらの類縁体は、評価された腫瘍細胞系全体で内皮細胞に関する選択的インビトロ抗増殖活性を有する。
【００３１】
それがデメチラーゼのための基質および脱メチル化の結果生じる化合物のための基質であり得ないように、２−メトキシエストラジオールのメチルエーテル部位を修飾した化合物およびその方法も開示される。
【００３２】
２−メトキシエストロンへの変換および／または２−メトキシエストラジオールまたは代謝産物の他の分子との抱合ならびに排出中のその後のその損失を防止するための、２−メトキシエストラジオールの１６位および１７位の化学的性質、およびその結果生じる化合物の化学的性質を変えた化合物およびその方法も開示される。
【００３３】
本発明のその他の特徴および利点は、その好ましい実施形態の以下の説明から明らかである。
【００３４】
［発明の詳細な説明］
下記のように、本発明に従って有用である化合物としては、抗有糸分裂、抗血管新生および抗腫瘍特性を示す、新規の２−メトキシエストラジオール誘導体が挙げられる。本発明による特定の化合物は、以下に記載される。本発明の好ましい化合物は、２、１６または１７位あるいはそれらの組合せにおいて修飾される２−メトキシエストラジオール誘導体である。本発明は、本明細書に記載される特性を有する限り、併記の特許請求の範囲に示された式に含まれるその他の化合物に及ぶ、と当業者は理解する。これらの特性は、以下においておよび他の文献中で詳述されるアッセイを用いて各試験化合物に関して確定することができる。
【００３５】
２−メトキシエストラジオールは、強力な抗増殖活性を有し、広範な種々の腫瘍および非腫瘍細胞系においてアポトーシスを誘導するエストラジオールの内因性代謝産物である。経口的に投与される場合、それは抗腫瘍および抗増殖活性を示し、毒性はほとんどまたはまったくない。２−メトキシエストラジオールは、インビトロおよびインビボの結果により示されるように、低活性代謝産物である２−メトキシエストロン（２ＭＥ１）に代謝される。理論により限定されたくはないが、この代謝産物は、エストロンがエストラジオールから生成されるのと同一の酵素的経路を経て生成されると考えられる。理論により限定されたくはないが、エストラジオールに関するこの反応に関与する酵素は、補因子としてＮＡＤＰ＋を利用する１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１７β−ＨＳＤ）である（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２７５：２， １１０５−１１１１（２０００年１月１２日）および先に引用されたその他の参考文献）と考えられる。この酵素ファミリーの４つの成員、すなわちタイプ１、２、３および４は、それぞれ別個の活性を有する。１７β−ＨＳＤタイプ１は還元反応（エストロン→エストラジオール）を触媒し、一方、１７β−ＨＳＤタイプ２は酸化反応（エストラジオール→エストロン）を触媒し、タイプ３は４−アンドロステンジオンをテストステロンに変換する反応を触媒すると考えられる。付加的な代謝不活性化経路は、２−メトキシエストラジオールまたは２−メトキシエストロンと、硫酸塩またはグルクロン酸などの分子との抱合ならびに排出によるその後の損失を生じることも考えられる。本発明において、このような代謝経路が生じるのを防止するために、２−メトキシエストラジオールの１６位および／または１７位が修飾され得る。
【００３６】
２−メトキシエストラジオールはかなり低活性の代謝産物に代謝されるため、本発明は、この基質上での１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼのファミリーと補因子ＮＡＤＰ＋の相互作用を遅延または防止するために２−メトキシエストラジオールの１６位および１７位に、立体バルクおよび／または化学的または静電気的特性の修飾を付加する。２−メトキシエストラジオールの１６位および１７位に立体バルクを付加することおよび／または化学的または静電気的特性の修飾を付加することにより、抱合、例えばグルクロニル化を遅延または防止することもできる可能性がある。これら２つの代謝非活性経路の遅延または防止により、所望の抗血管新生活性および抗腫瘍活性を保持しながら、２−メトキシエストラジオールおよびその他のエストラジオール誘導体の血清寿命を延ばすことができると考えられる。グルクロニル化および抱合を測定するために用いられるアッセイは、基質酵素ウリジン５’−ジホスホグルクロン酸（ＵＤＧＰＡ）を用いる。
【００３７】
これらのステロイドを１７β−ＨＳＤにとって不十分な基質にする（立体的および／または電気的作用により）ことにより起こり得る２ＭＥ２から２ＭＥ１への考え得る代謝の防止は別にして、２位で修飾された類縁体は、２位にメチルエーテル基が存在しないため、２ＭＥ２において起きることが既知である脱メチル化を受けることは考えられない。このような類縁体は、２−ヒドロキシエストラジオール（２ＭＥ２の脱メチル化産物）がエストロゲン様活性を有することが実証されているため、望ましい。
【００３８】
経口送達ステロイド、例えばエストラジオール（Ｅ２）およびエチニル−Ｅ２は、胃腸器官を通過中に、および肝臓における一次通過代謝により、広範に代謝されることが知られている。急速な不活性化および排出をもたらす２つの主要代謝経路が、十分に研究されている（Ｆｏｔｓｉｓ， Ｔ．； Ｚｈａｎｇ， Ｙ．； Ｐｅｐｐｅｒ， Ｍ．Ｓ．； Ａｄｌｅｒｃｒｃｕｔｚ， Ｈ．； Ｍｏｎｔｅｓａｎｏ， Ｒ．； Ｎａｗｒｅｔｈ． Ｐ．Ｐ．； Ｓｃｈｗｅｉｇｅｒｅｒ， Ｌ．， Ｔｈｅ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｅｓｔｒｏｇｅｎ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｓｕｐｒｅｓｓｅｓ Ｔｕｍｏｒ． Ｎａｔｕｒｅ， １９９４， ３６８， ２３７−２３９； Ｗａｎｇ， Ｚ．； Ｙａｎｇ， Ｄ．； Ｍｏｈａｎａｋｒｉｓｈｎａｎ， Ａ．Ｋ．； Ｆａｎｗｉｃｋ， Ｐ．Ｅ．； Ｎａｍｐｏｏｔｈｉｒｉ， Ｐ．； Ｈａｍｅｌ， Ｅ．； Ｃｕｓｈｍａｎ， Ｍ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｂ−Ｒｉｎｇ Ｈｏｍｏｌｏｇａｔｅｄ Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ Ａｎａｌｏｇｓ ｔｈａｔ Ｍｏｄｕｌａｔｅ Ｔｕｂｕｌｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ．」Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２０００， ４３， ２４１９−２４２９）（例えばエストロンを生成するためのＥ２のＤ−環の１７−ヒドロキシ基での酸化ならびにＡ−環上の３位およびＤ−環上の１７位のヒドロキシル基での硫酸塩および／またはグルクロン酸塩との抱合）。
【００３９】
２ＭＥ２類縁体のＳＡＲを確定するためにいくつかの研究がなされた（Ｄ’Ａｍａｔｏ， Ｒ．Ｊ．； Ｌｉｎ， Ｃ．Ｍ．； Ｆｌｙｎｎ， Ｅ．； Ｆｏｌｋｍａｎ， Ｊ．； Ｈａｍｅｌ， Ｅ．「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ｉｎ Ｍｉｃｅ ｂｙ ｔｈｅ Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ Ｔａｘｏｌ」Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， １９９７， ５７， ８１−８６； Ｃｕｓｈｍａｎ， Ｍ．； Ｈｅ， Ｍ．−Ｈ．； Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ， Ｊ．Ａ．； Ｌｉｎ， Ｃ．Ｍ．； Ｈａｍｅｌ， Ｅ．「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ａｎｔｉｔｕｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ Ａｎａｌｏｇｓ ｏｆ ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｎ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｏｆ Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｔｈａｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｔｕｂｕｌｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ．」 Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３８， ２０４１−２０４９）が、その代謝経路を低減または停止するための研究はされていなかった。エストロン生成またはグルクロニド化を遮断するために、２ＭＥ２のＤ環の１７位のヒドロキシル基を置換することにより、鎖を有さないかまたは一連のメチレン鎖長（１〜４）を有する化合物が合成された。同様に、２位で修飾されている１７−デオキシエストロン類縁体のいくつかが、グルクロニド化およびメトキシ基のヒドロキシル基への加水分解を遮断するために合成された。これらの類縁体に関して、合成についてのデータ、ならびに抗増殖活性に関してはヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）および乳癌腫瘍ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞における、およびエストロゲン様活性に関してはＭＣＦ−７腫瘍癌細胞における予備的インビトロスクリーニングについてのデータが示されている。
【００４０】
２−メトキシ−１７−デオキシエストロン、１７−エチル−２−メトキシエストロンおよび１７−メチル−２−メトキシエストロン類縁体は、２ＭＥ２と同等またはそれより良好な抗増殖活性を示したが、２−メトキシエストロンに変化するまたは１７位で抱合する能力は減少した。
【００４１】
２−メトキシエストロンの１７位で炭素鎖を増大させると、抗増殖活性が低減する。
【００４２】
２位を修飾したいくつかの１７−デオキシエストロン類縁体はＨＵＶＥＣ細胞中でのみ良好な抗増殖活性を保持したが、このことは、これらの類縁体がインビボで強力な抗血管新生薬であり得ることを示唆する。
【００４３】
２−Ｎ−メチルアミノ−１７−デオキシエストロンが２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ−１７−デオキシエストロンに変化した場合、ＨＵＶＥＣ細胞中での抗増殖活性はわずかに低減がした。
【００４４】
光活性化後の２ＭＥ２結合タンパク質を同定するために、かなりの抗増殖活性を保持する２−アジド−エストラジオールが合成された。
【００４５】
デメチラーゼの基質およびその結果生じる化合物でないようにするため、２−メトキシエストラジオールのメチルエーテル部位を修飾した化合物およびその方法も開示される。
【００４６】
本発明の別の実施形態では、誘導体は２、１６または１７位の組合せで修飾される。
【００４７】
インサイチュでの抗増殖活性
抗増殖活性は、改良型エストラジオール誘導体が新血管細胞の増殖（血管新生）を抑制する能力を試験することにより、インサイチュで評価される。適切なアッセイは、Ｃｒｕｍ ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３７５（１９８５）に記載されたヒヨコ胚漿尿膜（ＣＡＭ）アッセイである。ＣＡＭアッセイを記載する米国特許第５，００１，１１６号（この記載内容は、参照により本明細書中に含まれる）も参照されたい。要するに、受精ヒヨコ胚を３または４日目にそれらの殻から取り出して、薬剤を含有するメチルセルロース盤を漿尿膜上に移植する。４８時間後に胚を検査して、明らかな無血管帯域がメチルセルロース盤の周囲に現れたら、帯域の直径を測定する。このアッセイを用いて、エストラジオール誘導体である２−メトキシエストラジオールの１００μｇ盤は、４８時間後に細胞有糸分裂および新血管成長を抑制することが判明した。この結果は、２−メトキシエストラジオールの抗有糸分裂作用が細胞有糸分裂および血管新生を抑制し得ることを示す。
【００４８】
インビトロでの抗増殖活性
２ＭＥ２が細胞増殖に影響を及ぼす過程は依然として明らかでないが、多数の研究が種々の作用メカニズムおよび細胞標的を示唆する。２ＭＥ２は、細胞周期の進行に関与する種々のタンパク質のレベルおよび活性における変化を誘導した。これらの例としては、ＤＮＡ複製および修復のコファクター、例えば増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）（Ｋｌａｕｂｅｒ， Ｎ．， Ｐａｒａｎｇｉ， Ｓ．， Ｆｌｙｎｎ， Ｅ．， Ｈａｍｅｌ， Ｅ． ａｎｄ Ｄ’Ａｍａｔｏ， Ｒ．Ｊ．（１９９７）， Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｍｉｃｅ ｂｙ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ２−ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｎｄ Ｔａｘｏｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５７， ８１−８６； Ｌｏｔｔｅｒｉｎｇ， Ｍ−Ｌ．， ｄｅ Ｋｏｃｋ， Ｍ．， Ｖｉｌｊｏｅｎ， Ｔ．Ｃ．， Ｇｒｏｂｌｅｒ， Ｃ．Ｊ．Ｓ． ａｎｄ Ｓｅｅｇｅｒｓ， Ｊ．Ｃ．（１９９６） １７β−Ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ａｆｆｅｃｔ ｓｏｍｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＭＣＦ−７ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ． Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ １１０， １８１−１８６）；細胞分裂周期キナーゼおよび調節剤、例えばｐ３４ｃｄｃ２およびサイクリンＢ（Ｌｏｔｔｅｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９６）； Ａｔｔａｌｌａ， Ｈ．， Ｍａｋｅｌａ， Ｔ．Ｐ．， Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ， Ｈ． ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ， Ｌ．Ｃ．（１９９６） ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ ａｒｒｅｓｔｓ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｍｉｔｏｓｉｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｄｅｐｏｌｙｍｅｒｉｚｉｎｇ ｔｕｂｕｌｉｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２２８， ４６７−４７３； Ｚｏｕｂｉｎｅ， Ｍ．Ｎ．， Ｗｅｓｔｏｎ， Ａ．Ｐ．， Ｊｏｈｎｓｏｎ， Ｄ．Ｃ．， Ｃａｍｐｂｅｌｌ， Ｄ．Ｒ． ａｎｄ Ｂａｎｅｒｊｅｅ， Ｓ．Ｋ．（１９９９） ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｌｅｔｈａｌｉｔｙ ｉｎ ｅｓｔｒｏｇｅｎ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ＭＣＦ−７ ｃｅｌｌ ｍａｙ ｂｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ３４ｃｄｃ２ ａｎｄ ｃｙｃｌｉｎ Ｂ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ １５， ６３９−６４６）；転写因子調整剤、例えばＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｙｕｅ， Ｔ−Ｌ．， Ｗａｎｇ， Ｘ．， Ｌｏｕｄｅｎ， Ｃ．Ｓ．， Ｇｕｐｔａ， Ｌ．Ｓ．， Ｐｉｌｌａｒｉｓｅｔｔｉ， Ｋ．， Ｇｕ， Ｊ−Ｌ．， Ｈａｒｔ， Ｔ．Ｋ．， Ｌｙｓｋｏ， Ｐ．Ｇ． ａｎｄ Ｆｅｕｅｒｓｔｅｉｎ， Ｇ．Ｚ．（１９９７） ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ： Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｓｔｒｅｓｓ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｆａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃ���ｌｏｇｙ ５１， ９５１−９６２； Ａｔｔａｌｌａ， Ｈ．， Ｗｅｓｔｂｅｒｇ， Ｊ．Ａ．， Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ， Ｌ．Ｃ．， Ａｌｄｅｒｃｒｅｕｔｚ， Ｈ． ａｎｄ Ｍａｋｅｌａ， Ｔ．Ｐ．（１９９８） ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｃｌ−２： ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ ｆｒｏｍ ＪＮＫ／ＳＡＰＫ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ． Ｂｉｏｃｈｅｍ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２４７， ６１６−６１９）；ならびに細胞分裂停止およびアポトーシスの調節剤、例えばチューブリン（Ｄ’Ａｍａｔｏ， Ｒ．Ｊ．； Ｌｉｎ， Ｃ．Ｍ．； Ｆｌｙｎｎ， Ｅ．； Ｆｏｌｋｍａｎ， Ｊ．； Ｈａｍｅｌ， Ｅ． （１９９４） ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｎｄ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ， ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｕｂｕｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ ａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ｓｉｔｅ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９１， ３９６４−３９６８； Ｈａｍｅｌ， Ｅ．， Ｌｉｎ， Ｃ．Ｍ．； Ｆｌｙｎｎ， Ｅ． ａｎｄ Ｄ’Ａｍａｔｏ， Ｒ．Ｊ．（１９９６） Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ２−ｍｅｔｈｙｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｎｄ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ， ｗｉｔｈ ｕｎｐｌｏｙｍｅｒｉｚｅｄ ｔｕｂｕｌｉｎ ａｎｄ ｗｉｔｈ ｔｕｂｕｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｓ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３５， １３０４−１３１０）、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１（Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｔ． ａｎｄ Ｒｏｔｈ， Ｊ．Ａ．（１９９７） Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ ｐ５３ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４， ３７９−３８４）、ｂｃ１−２およびＦＡＳ（Ｙｕｅ ｅｔ ａｌ．（１９９７）； Ａｔｔａｌｌａ ｅｔ ａｌ．（１９９８））、ならびにｐ５３（Ｋａｔａｏｋａ， Ｍ．， Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒ， Ｇ．， Ｃｒｉｓｔｉａｎｏ， Ｒ．Ｊ．， Ａｔｋｉｎｓｏｎ， Ｅ．Ｎ．， Ｒｏｔｈ， Ｊ．Ａ． ａｎｄ Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ， Ｔ．（１９９８） Ａｎ ａｇｅｎｔ ｔｈａｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｔｒａｎｓｇｅｎｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｖｉｖｏ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５８， ４７６１−４７６５； Ｍｕｋｈｏｐａｄｈｙａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９７）； Ｓｅｅｇｅｒｓ， Ｊ．Ｃ．， Ｌｏｔｔｅｒｉｎｇ， Ｍ−Ｌ．， Ｇｒｏｂｌｅｒ Ｃ．Ｊ．Ｓ．， ｖａｎ Ｐａｐｅｎｄｏｒｐ， Ｄ．Ｈ．， Ｈａｂｂｅｒｓｅｔｔ， Ｒ．Ｃ．， Ｓｈｏｕ， Ｙ． ａｎｄ Ｌｅｈｎｅｒｔ Ｂ．Ｅ．（１９９７） Ｔｈｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ， ２−ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｆｆｅｃｔ ｐ５３ ｌｅｖｅｌｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｃｅｌｌ��� ｂｕｔ ｎｏｔ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｅｌｌｓ． Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ． ６２， ２５３−２６７）が挙げられる。ｃＡＭＰ、カルモジュリン活性およびタンパク質リン酸化のレベルに及ぼす作用も互いに関連する可能性がある。さらに近年、２ＭＥ２は、ヒト内皮細胞系および腫瘍細胞系におけるデス受容体５およびカスパーゼ８をアップレギュレート（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅ）することが示された（ＬａＶａｌｌｅｅ， Ｔ．Ｍ．， Ｚｈａｎ， Ｘ．Ｈ．， Ｈｅｒｂｓｔｒｉｔｔ， Ｃ．Ｊ．， Ｗｉｌｌｉａｍｓ， Ｍ．Ｓ．， Ｈｅｍｂｒｏｕｇｈ， Ｗ．Ａ．， Ｇｒｅｅｎ， Ｓ．Ｊ．， ａｎｄ Ｐｒｉｂｌｕｄａ， Ｖ．Ｓ． ２００１． ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ ｐａｔｈｗａｙ． （Ｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ ｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ））。さらに２ＭＥ２は、スーパーオキシドジムスターゼ（ＳＯＤ）１およびＳＯＤ２と相互作用し、それらの酵素活性を抑制することが示されている（Ｈｕａｎｇ， Ｐ．， Ｆｅｎｇ， Ｌ．， Ｏｌｄｈａｍ， Ｅ．Ａ．， Ｋｅａｔｉｎｇ， Ｍ．Ｊ．， ａｎｄ Ｐｌｕｎｋｅｔｔ， Ｗ． ２０００． Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ａｓ ａ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ， Ｎａｔｕｒｅ． ４０７：３９０−５）。上記の細胞標的はすべて、必ずしも能動的分裂している細胞における２ＭＥ２の阻害作用に対して相互に排他的ではない。
【００４９】
ＳＨＢＧとの高親和性結合は、エストラジオールおよび５α−アンドロスタン−３α，１７β−ジオールによるシグナリングが、２ＭＥ２により抑制された前立腺癌のイヌモデルにおけるその効力に機械論的に関連していた（Ｄｉｎｇ， Ｖ．Ｄ．， Ｍｏｌｌｅｒ， Ｄ．Ｅ．， Ｆｅｅｎｅｙ， Ｗ．Ｐ．， Ｄｉｄｏｌｋａｒ， Ｖ．， Ｎａｋｈｌａ， Ａ．Ｍ．， Ｒｈｏｄｅｓ， Ｌ．， Ｒｏｓｎｅｒ， Ｗ． ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ， Ｒ．Ｇ． （１９９８） Ｓｅｘ ｈｏｒｍｏｎｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｇｌｏｂｕｌｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｐｒｏｓｔａｔｅ ａｎｄｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｏｎ ｖｉａ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３９， ２１３−２１８）。
【００５０】
上記の、より関連のあるメカニズムについて、Ｖｉｃｔｏｒ Ｓ． Ｐｒｉｂｌｕｄａ， Ｔｈｅｒｅｓａ Ｍ． ＬａＶａｌｌｅｅ ａｎｄ Ｓｈａｗｎ Ｊ． Ｇｒｅｅｎ， ２−Ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ： Ａ ｎｏｖｅｌ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｉｎ Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ａｎｇｉｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｔａｉ−Ｐｉｎｇ Ｆａｎ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔ Ａｕｅｒｂａｃｈ ｅｄｓ．， Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒにおいて広範に考察されている。
【００５１】
作用メカニズムおよび細胞増殖に関連したアッセイは、当該技術分野で既知である。例えば、チューブリン重合活性に及ぼす作用により媒介される抗有糸分裂活性は、インビトロでエストラジオール誘導体がチューブリン重合および微小管アセンブリーを抑制する能力を試験することにより評価され得る。微小管アセンブリーは、電子温度制御器を装備したギルフォード記録分光光度計（モデル２５０または２４００Ｓ）で追跡調査される。反応混合物は、通常、１．０Ｍグルタミン酸モノナトリウム（ｐＨ６．６）、１．０ｍｇ／ｍｌ（１０μＭ）チューブリン、１．０ｍＭのＭｇＣｌ２、４％（ｖ／ｖ）ジメチルスルホキシドおよび試験される２０〜７５μＭの組成物を含む。反応混合物を３７℃で１５分間インキュベートし、次に氷上で冷却する。２．５ｍＭのＧＴＰ１０μｌの添加後、反応混合物を０℃でキュベットに移して、基線を確立する。ゼロ点で、分光光度計の温度制御器を３７℃に設定する。３５０ｎｍでの濁り度の増大を測定することにより、微小管アセンブリーを評価する。あるいは微小管アセンブリーの抑制は、米国特許第５，５０４，０７４号、第５，６６１，１４３号および第５，８９２，０６９号の実施例２に記載されたように透過型電子顕微鏡により追跡調査され得る。
【００５２】
その他のこのようなアッセイとしては、組織培養プレート中の細胞の計数、あるいは代謝アッセイによる、または標識化した（放射線化学的、例えば３Ｈ−チミジンまたは蛍光的標識化）もしくは免疫反応性（ＢｒｄＵ）ヌクレオチドをＤＮＡ中に組み込むことによる細胞数の評価が挙げられる。さらに、抗血管新生活性は、ラット大動脈環のような半ビボモデルにおける内皮細胞の移動、内皮細胞細管形成または血管外方成長により評価され得る。
【００５３】
適応症
本発明は、異常細胞有糸分裂を特徴とする任意の疾患を治療するために用いられ得る。このような疾患としては、内皮細胞の異常刺激（例えばアテローム硬化症）、固形腫瘍および腫瘍転移、良性腫瘍、例えば血管腫、聴神経腫、神経繊維腫、トラコーマ、ならびに化膿性肉芽腫、血管機能不全、異常創傷治癒、炎症性および免疫障害、ベーチェット病、痛風または痛風性関節炎、以下を伴う異常血管新生：慢性関節リウマチ、皮膚疾患、例えば乾癬、糖尿病性網膜症およびその他の眼血管新生疾患、例えば未熟児網膜症（水晶体後繊維増殖）、黄斑変性、角膜移植拒絶、血管新生緑内障、肝臓疾患およびオースラーウェーバー症候群（オースラーウェーバーランデュ病）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
本発明により治療され得る角膜新生血管形成に関連した疾患としては、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、角膜移植片拒絶、血管新生緑内障および水晶体後繊維増殖症、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠損症、コンタクトレンズ過剰装着、アトピー性角膜炎、上縁角膜炎、乾性翼状角膜炎、シェーグレン症候群、挫瘡、酒さ、フリクテン症、梅毒、マイコバクテリア感染、脂質変性、化学的熱傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染、帯状ヘルペス感染、原生動物感染、カポジ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁角質溶解、外傷、慢性関節リウマチ、全身性ループス、多発性関節炎、ヴェーゲナー類肉芽腫症、強膜炎、スティーブン−ジョンソン病、類天疱瘡放射状角膜切開、および角膜移植拒絶が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
本発明により治療され得る網膜／脈絡膜新生血管形成に関連した疾患としては、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、類肉腫症、梅毒、弾性繊維仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頚動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／絨毛組織炎、マイコバクテリア感染、ライム病、全身性ループス、未熟児網膜症、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎または脈絡膜炎を引き起こす感染、推定眼ヒストプラスマ症、ベスト病、近視、視神経乳頭先天性構造的欠陥、シュタルガルト病、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘稠度症候群、トキソプラスマ症、外傷およびレーザー後合併症が挙げられるが、これらに限定されない。その他の疾患としては、皮膚潮紅に関連した疾患（角の新生血管形成）、ならびに繊維性血管または繊維性組織の異常増殖により引き起こされる疾患、例えば全形態の増殖性硝子体網膜症（糖尿病に関連する場合もしない場合も）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
本発明により治療され得る別の疾患は、慢性関節リウマチである。関節の滑膜の内側を覆う血管は、血管新生を受けると考えられる。新規の血管網状構造を形成するほかに、内皮細胞は、パンヌス増殖および軟骨崩壊をもたらす因子および反応性酸素種を放出する。血管新生に関与する因子は、慢性関節リウマチの慢性炎症状態に積極的にに寄与し、炎症状態の保持を補助し得る。
【００５７】
本発明により治療され得る別の疾患は、血管腫症、オースラーウェーバーランデュ病または遺伝性血行性毛細管拡張症、固形または血行性腫瘍ならびに後天性免疫不全症候群である。
【００５８】
さらに本発明は、種々の閉経後症候群、骨粗鬆症、心臓血管性疾患、アルツハイマー病を治療するために、発作の出現を低減するために、そして従来のエストロゲン置換療法の代替物として用いられ得る。本発明の化合物は、エストロゲン様および非エストロゲン様生化学的経路により作用し得る。
【００５９】
プロドラッグ
本発明は、抱合型プロドラッグ、およびその使用にも関する。特に本発明は、エストラジオール化合物の抱合体、例えば２−メトキシエストラジオールならびにその機能的活性類縁体および誘導体と、血管新生の増進または細胞分裂の加速に関連した症状（例えば癌）、および炎症性症状（例えば喘息、慢性関節リウマチ、ならびに過増殖性皮膚障害、例えば乾癬）の予防または治療においてこのような抱合体を使用することに関する。本発明は、本発明のプロドラッグを含む組成物、ならびにプロドラッグの合成方法にも関する。
【００６０】
本発明の一態様において、生物学的活性修飾剤と抱合されるエストラジオール化合物の、好ましくは２−メトキシエストラジオールあるいはその機能的活性類縁体または誘導体の抱合型プロドラッグを提供する。
【００６１】
「機能的活性」とは、２−メトキシエストラジオールの類縁体または誘導体が２−メトキシエストラジオールの１つまたはそれ以上の生物学的活性を有することを意味する。２−メトキシエストラジオールの生物学的活性としては、内皮細胞増殖の抑制、平滑筋細胞増殖の抑制、腫瘍細胞増殖の抑制、微小管機能の抑制、白血球活性化の抑制が挙げられるが、これらに限定されない。このような機能的活性類縁体または誘導体の例としては、２−エトキシエストラジオール、２−ヒドロキシエストラジオール、および２位で修飾されたその他の類縁体、２−メトキシエストラジオール−３−メチルエーテル、４−メトキシエストラジオール、ならびにＢ環が７員環に拡張されたその他の類縁体が挙げられる。国際公開第９５／０４５３５号および国際公開第０１／２７１３２号（これらの記載内容は、参照により本明細書中に含まれる）を参照されたい。
【００６２】
あるいは本発明による抱合型プロドラッグとしては、ペプチド部分に抱合された２−メトキシエストラジオールあるいはその機能的活性類縁体または誘導体が挙げられる。
【００６３】
疾患依存的活性化プロドラッグ中への２−メトキシエストラジオールのようなエストラジオール化合物の組み込みは、効力の有意の改善ならびにこの抗癌薬および抗炎症薬の選択を可能にする。
【００６４】
本発明の化合物のほかに、本発明の医薬製剤組成物は、本明細書中に上記したような１つまたは複数の疾患状態を治療するのに有効な１つまたは複数の薬理学的作用物質をも含んでいてよく、あるいは共投与（同時的にまたは逐次的に）することができる。
【００６５】
さらにプロドラッグは、生分解性ポリマー中に組み込まれることによって、持続性放出を可能にし、ポリマーは、送達したい場所、例えば腫瘍の部位の付近に移植される。生分解性ポリマーおよびそれらの使用は、Ｂｒｅｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ ７４： ４４１−４４６ （１９９１）に詳細に記載されている。
【００６６】
標準的教科書、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎを参照することにより、当業者は、配合物の製造方法ならびにこれらの投与方法を確定し得る。
【００６７】
本発明のさらに別の態様では、血管新生あるいは細胞分裂または炎症の加速に関連した症状を予防または治療するための薬剤を調製するための、本発明による抱合型プロドラッグの使用が提供される。
【００６８】
本発明のさらに別の態様では、本発明による抱合型プロドラッグとともに、薬学的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤を含む製剤組成物が提供される。
【００６９】
製剤組成物は、血管新生あるいは細胞分裂または炎症の加速に関連した症状を予防または治療するために用いられ得る。
【００７０】
本発明のさらに別の態様では、血管新生あるいは細胞分裂過形成性成長または炎症の加速または量の増大に関連した症状の予防または治療方法であって、上記のような本発明による、有効量の抱合型プロドラッグをこのような予防または治療を必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
【００７１】
上記の症状の予防または治療は、上記の症状の改善を含むと理解されるべきである。
【００７２】
「有効量」とは、治療的または予防的有効量を意味する。このような量は、治療される症状、投与経路およびその他の関連因子を考慮しながら、適切な当業者により容易に確定され得る。このような当業者は、適切な投与用量、投与様式および投与頻度を容易に確定することができる。
【００７３】
当該式の化合物の薬学的に許容可能な塩は、例えば遊離塩基および酸から、任意の慣用的方法で調製され得る。インビボ加水分解性エステル、アミドおよびカルバメートは、任意の慣用的方法で調製され得る。
【００７４】
改良型エストラジオール誘導体の合成
本発明に従って用いられる既知の化合物および本発明による新規の化合物の前駆体は、例えばＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、ＳｔｅｒａｌｏｉｄｓおよびＲｅｓｅａｒｃｈ Ｐｌｕｓから購入することができる。本発明によるその他の化合物は、既知の方法により、公的に入手可能な前駆体から合成され得る。
【００７５】
エストラジオールの化学合成が公知文献に記載されている（Ｅｄｅｒ， Ｖ． ｅｔ ａｌ．， Ｂｅｒ １０９， ２９４８（１９７６）； Ｏｐｐｏｌｚｅｒ， Ｄ．Ａ． ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ， ＤＡ． Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ． ６３， １７０３， （１９８０））。本発明の誘導体のいくつかを調製するために用いられる合成経路は、エストラジオール誘導体およびジメチルヒドラゾンに関する出版文献に記載の手順の変法（Ｔｒｅｍｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３， ５０５−５２３； Ｆｅｖｉｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， １９８７， ５２， ２４７−２５１； Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８２， ４０， １７１−１８７； Ｔｒｅｍｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １９９５， ２５， ２４８３−２４９５； Ｎｅｗｋｏｍｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９６６， ３１， ６７７−６８１； Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ １９７６， ３−６； Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ １９７６， ３６６７−３６６８）ならびに独国特許第２７５７１５７号（１９７７）に基づいている。例えば、第３表中の化合物２、３、４、６を参照されたい。該変法は、以下の実施例１５に提示されている。エピマー１６−エチル−２−メトキシエストラジオールおよび類縁体の初期スクリーニングにより、それがインビトロでのＨＵＶＥＣ細胞増殖の抑制に関して２−メトキシエストラジオールとほぼ同程度の効力であることを示した。
【００７６】
投与
上記の組成物は、既知の技法を用いて生理学的に許容可能な配合物として提供され、これらの配合物は標準経路により投与され得る。概して、該配合物は、局所、経口、直腸または非経口的（例えば静脈内、皮下または筋肉内）経路で投与され得る。さらに配合物は、生分解性ポリマー中に組み込まれることにより持続性放出を可能にし、ポリマーは、送達したい場所付近、例えば腫瘍の部位、あるいは眼の中または近くに移植される。生分解性ポリマーおよびそれらの使用は、Ｂｒｅｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ ７４： ４４１−４４６ （１９９１）に詳細に記載されている。組成物の投与量は、治療される症状、用いられる特定の誘導体、ならびにその他の臨床的因子、例えば患者の体重および症状、ならびに化合物の投与経路に依存する。しかしながらヒトへ経口投与するためには、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で一般的には十分である。
【００７７】
配合物としては、経口、直腸、鼻、局所（例えば頬および舌下）、膣あるいは非経口（例えば皮下、筋肉内、静脈内、皮内、眼内、気管内および硬膜上）投与に適したものが挙げられる。配合物は、単位投与量形態で提供されると便利であり、慣用的製薬技法により調製され得る。このような技法は、活性成分および薬学的担体（単数または複数）または賦形剤（単数または複数）を会合させる工程を含む。概して、配合物は、均一にかつ密接に調製されて、活性成分を液体担体または微粉砕固体担体またはその両方と会合させて、さらに、必要な場合には、生成物を造形する。
【００７８】
経口投与に適した本発明の配合物は、各々予定量の活性成分を含むカプセル剤、カシェ剤もしくは錠剤のような個別の単位として、粉末もしくは顆粒として、水性液体もしくは非水性液体中の溶液または懸濁液として、または水中油型エマルションもしくは油中水型エマルションとして、およびボーラス剤等として提供され得る。
【００７９】
錠剤は、任意に１つまたは複数の補助成分とともに、圧縮または成形することにより製造され得る。圧縮錠剤は、任意に結合剤、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混合された、易流動性形態の、例えば粉末または顆粒の形態の活性成分を、適切な機械で圧縮することにより調製され得る。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤させた粉末化合物の混合物を、適切な機械で成形することにより製造され得る。錠剤は、任意にコーティングされまたは刻み目をつけられて、その中の活性成分がゆっくりとまたは制御されて放出されるように成形され得る。
【００８０】
口の中に局所投与するのに適した配合物としては、風味基剤、通常はスクロースおよびアラビアゴムもしくはトラガカントゴム中に成分を含むロゼンジ、不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴム中に活性成分を含む香錠、ならびに適切な液体担体中に投与される成分を含むマウスウォッシュが挙げられる。
【００８１】
皮膚への局所投与に適した配合物は、薬学的に許容可能な担体中に投与される成分を含む軟膏、クリーム、ジェルおよびペーストとして提供され得る。好ましい局所送達系は、投与される成分を含む経皮パッチである。
【００８２】
直腸投与のための配合物は、例えばココアバターまたはサリチレートを含む適切な基剤を有する座薬として提供され得る。
【００８３】
鼻投与に適した配合物（この場合、担体は固体である）としては、鼻から吸う方法で、すなわち鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻道を通して迅速に吸入することにより投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒子径を有する、目の粗い粉末が挙げられる。担体が液体である場合の、例えば鼻腔スプレーまたは点鼻液として投与するのに適切な配合物としては、活性成分の水性または油性溶液が挙げられる。
【００８４】
膣投与に適した配合物は、活性成分のほかに、当該技術分野で適切であると知られている、例えば担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォームまたはスプレー配合物として提供される。
【００８５】
非経口投与に適した配合物としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤および意図されたレシピエントの血液と配合物を等張にさせる溶質を含有し得る水性および非水性滅菌注射溶液、ならびに懸濁剤および増粘剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液が挙げられる。配合物は、単位用量または多数回用量容器中で（例えば密封アンプルおよびバイアル中で）提供され、また注射液として使用する直前に滅菌液体担体（例えば水）の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で貯蔵され得る。即席の注射溶液および懸濁液は、上記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製してもよい。
【００８６】
好ましい単位投与量配合物は、本明細書中に上記で列挙したような、１日分の用量または単位、１日分の亜用量の投与成分を含む配合物、あるいはそれらの適切な分画を含む配合物である。
【００８７】
特に上記された成分のほかに、本発明の配合物は、当該配合物の種類に関する技術分野で慣用的であるその他の作用物質を含み得る（例えば経口投与に適したものは風味剤を含み得る）ことが理解されるべきである。
【００８８】
２−メトキシエストラジオールは、強力な抗増殖活性を有し、広範な種々の腫瘍細胞系および非腫瘍細胞系においてアポトーシスを誘導するエストラジオール（Ｅ２）の内因性代謝産物である。経口的に投与される場合、それは抗腫瘍および抗増殖活性を示し、毒性をほとんど伴わない。２−メトキシエストラジオールはその抗増殖活性のためのエストロゲン受容体を必要としないことをインビトロデータは示唆する。しかしながらインビボでデメチラーゼが存在すると、この化合物は２−ヒドロキシエストラジオールに代謝され、この化合物は、エストロゲン様であることがいくつかのアプローチにより示されている。本発明は、エストラジオールまたは２−メトキシエストラジオールの生物学的利用可能性を改良し、エストロゲン様である２−メトキシエストラジオール代謝産物の産生を低減する。理論により限定されたくはないが、本発明は、デメチル化、酸化および代謝中の別の分子との抱合を防止または阻害するような方法でエストラジオール類縁体を修飾することが考えられる。
【００８９】
本発明は、２−メトキシエストラジオールの誘導体を投与することによる、病原性血管新生を特徴とする哺乳類疾患を治療するための組成物および方法を含む。誘導体は、２、１６または１７位またはそれらの組合せで修飾されるが、その修飾は当業者にとって化学的に可能である。物理的に不可能である組合せ、例えば５つの結合を有する炭素原子は、本発明により意図されない。２、６、１６および１７位は、以下の基を用いて修飾され得る：
ａ）アルキル（αまたはβ立体化学構造を有し、飽和または不飽和であり、置換または無置換であり、直鎖および分枝鎖でもよい、炭素数１０までの炭素鎖）、
ｂ）アルケニル、例えばオレフィン位置異性体および／または立体異性体（オレフィンのＥ−およびＺ−立体配置。炭化水素鎖は、炭素数１０までの直鎖または分枝鎖であり、飽和または不飽和であり、置換または無置換であり得る）が挙げられ、任意の位置にＣ＝Ｃを有するが、これらに限定されない。
ｃ）炭素数１０までの直鎖または分枝鎖アルキル鎖を有するアルキニル。飽和または不飽和であり、置換または無置換であり、任意の位置にＣ≡Ｃを有し得る。
ｄ）上記のアルキルのいずれかに、芳香族基またはヘテロ基が組み込まれ得る場合、アルケニルおよびアルキニル鎖は単一またはそれらの組合せであり、芳香族基の例としては、フェニル、フェノール、アニリン、アニソール、トルエン（オルト、メタまたはパラ誘導体）、ザイレンが挙げられるが、これらに限定されず、ヘテロ基としては、エーテル、アミン、官能基を含有するカルボニル、アルコール、ホスフェート、トリフルオロおよびチオール基、酸、エステル、スルフェート、スルフォネート、スルホン、スルファメートおよびアミドが挙げられるが、これらに限定されない。
ｅ）αまたはβ立体化学構造を有するモノ、ジアルキルまたはトリアルキルアミン置換基（アルキルは、炭素数１０までの直鎖または分枝鎖であり得る）。
ｆ）−ＣＦ２、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３および炭素数１０までのより長い炭素鎖、例えばトリフルオロエタン、ペンタフルオロエタン、炭素数１０までのフッ素化アルキルまたはアルケン鎖。これらの炭素鎖上におけるフッ素の位置は、当業者にとって化学的に可能である限り可変である。
ｇ）無置換、一置換または多重置換のｄ）およびｅ）以外のヘテロ基。
ｈ）無置換、一置換または多重置換のｄ）以外の芳香族基。
ｉ）同じ位置に同時に組み込まれるアルキル基、およびヘテロ基または芳香族基の両方。ならびに
ｊ）同時に組み込まれているジェミナルアルキル基、ヘテロ基または芳香族基（ジェミナルとは、同一の炭素での２つの置換基と定義される）。
【００９０】
ヘテロ基とは、ＣまたはＨ以外の原子を少なくとも１つ含む任意の基と本明細書中では定義される。ヘテロ基は、その他の置換基、例えば芳香族環およびその他の官能基を含んでいてもよい。ヘテロ基は、環上にまたは基の置換基上に直接結合されていてもよい。特に考慮されるのは、Ｏ、Ｎ、ＳおよびＰである。
【００９１】
１００％純粋である異性体が本発明により意図されるが、αまたはβとして区別される立体化学的異性体は、当業者により化学的に考え得る任意の比率でのそれらの混合物であってもよい。
【００９２】
特に２位、１６位および１７位で考慮されるのは、ＣＨ２の代わりにカルボニル、−ＣＯ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、および／または−Ｏ−などの（これらに限定されない）ヘテロ原子で置換されている、またＨの代わりにヒドロキシル、アミノ、スルフィドリル、アジド、ハロゲン化合物、ニトロ、アジド、ニトリル、スルファメート、カルバメート、ホスフェート、アジドおよびアゾ、エステル、エーテル、ハロゲン化合物、ホルムアミド、ニトロ、ニトリル、スルフィド、スルホキシド、スルフェート、スルファメート、ホスフェートおよびホスホネートで任意に置換されている酸、アミド、アミン、直鎖および分枝鎖アルカン、アルケンおよびアルキンによる修飾；２、１６または１７位に直接結合されるか、あるいは−Ｓ−、−ＮＨ−および／または−Ｏ−などの（これらに限定されない）ヘテロ原子で置換されている直鎖または分枝鎖アルカン、アルケンまたはアルキンを介して連結される、飽和または不飽和の３、４、５、６、７または８員の単一もしくは多重同素式環または複素環式環（環の水素および側鎖の水素は、ヒドロキシル、アミノ、スルフヒドリル等の（これらに限定されない）当業者にとって化学的に可能である上記に開示した基（これらに限定されない）基によって任意にさらに置換される）による修飾である。
【００９３】
さらに、ステロイド環上の任意の位置で、以下の基が組み込まれ得るが、これは当業者により化学的に可能である：
ｉ）Ｒが水素である、
ｉｉ）Ｒが、立体異性体を有する炭素数１０までの直鎖および分枝鎖のアルキル鎖である、
ｉｉｉ）Ｒが、任意の位置にオレフィンまたはアルキン部分を有し、鎖上に任意の立体配置を有する上記のアルキル鎖のアルケンまたはアルキン誘導体である。炭素数１０までの任意の立体配置の多重不飽和アルキル鎖も含まれる。アルキル鎖はフェニル置換基および置換フェニル置換基で置換されていてもよい（置換フェニル基の例としては例えばアニリン、アニソール、トルエン、フェノールが挙げられるが、これらに限定されない）。
ｉｖ）独立して、１つまたは複数のエステル（エステルのＲは上記の段落ｉｉおよびｉｉｉに定義される）、カルボン酸、ケトン（ケトンのＲは上記の段落ｉ、ｉｉおよびｉｉｉに定義される）、アルデヒド、アルコール、アミン（第一、第二、第三および第四級アミン、アミンのＲは独立して上記の段落ｉ、ｉｉおよびｉｉｉに定義される）、ニトリル、アジド、尿素（尿素のＲは上記の段落ｉ、ｉｉおよびｉｉｉに定義される）、オキシム（およびアルキルオキシム）およびハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を含む炭素数１０までのアルキル、アルケンまたはアルキン鎖（直鎖または分枝鎖）、ならびに上記のものの薬学的に許容可能な塩。
ｖ）アミン（第一、第二、第三および第四級）（アミンはステロイドに直接結合され、アミンのＲ基は独立して、上記の段落ｉ、ｉｉおよびｉｉｉに定義される）および薬学的に許容可能な塩、
ｖｉ）ステロイドに直接結合されるエーテルおよびポリエーテル（ここでＣ＝１〜１０）、
ｖｉｉ）ステロイドに直接結合されるポリアミンおよびポリオール（ここでＣ＝１〜１０）、
ｖｉｉｉ）以下で示されるような環（エポキシド、アジリジンおよびエピスルフィドも含む）：
【００９４】
【化２】
2004537499.tif 000003
【００９５】
上記の環は、環上の任意の位置で置換されているＲ基（ｉ〜ｖｉｉおよびｉｘ〜ｘｖで定義されている）を有していてもよく、任意の不飽和結合を有していてもよく、直接（例えばスピロ環のジャンクションまたはヘテロ原子で）、あるいはアルキル鎖またはヘテロもしくはアルキルへテロ鎖を介して、ステロイド上の任意の位置に結合されていてよいが、この場合、これらは当業者にとって化学的に可能である。
ｉｘ）スルフェート、スルホキシド、スルファメート、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、
ｘ）ホスフェート、ホスホネート、
ｘｉ）ニトロ、
ｘｉｉ）上記の段落ｉ、ｉｉおよびｉｉｉで定義された任意のＲ基で置換されているアミドであって、カルボニル炭素またはアミド窒素によりステロイドに結合されているアミド、あるいは上記の段落ｉｉおよびｉｉｉで定義されたようなＲ基を介してステロイドと連結されているアミド、
ｘｉｉｉ）アルキル、アルケンおよびアルキン部分（例えばＣＸ、ＣＸ２、ＣＸ３（ここで、Ｘ＝Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ））を有する任意のハロゲン、
ｘｉｖ）−ＣＯ（ＣＨ２）ｎＯＲ（ｎ＝０〜１０）、ここでアルキル鎖は上記のｉ、ｉｉおよびｉｉｉで定義されたようなアルケンまたはアルキン部位も含み得る。
ｘｖ）２０個のアミノ酸長までの、天然に存在するまたは人工的なアミノ酸またはペプチド。
【００９６】
概して、化合物はすべて、類似のエストラジオール類縁体のために開発された化学手順を用いて合成された。これらの手順の変法は一般に、ベンジルエーテルによる２−メトキシエストラジオールの３−ヒドロキシ基の保護、ならびにスキーム１〜１５に示されたような合成経路中の適切な時点でのこのエーテル結合の切断を含む。
【００９７】
第１表に列挙した化合物は、３位が保護された２−メトキシエストラジオールまたはエストロンまたは２−メトキシエストロンから、種々の合成方法により合成された。第１表において、エントリー２は、スキーム２に示すようなＭｉｔｓｕｎｏｂｕ反転反応を用いて合成された（Ｃｌｉｖｅ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， １９９１， ５６， ３８０１）。エントリー４および１１は、スキーム１、ルートＡおよびスキーム３に示すような還元的アミノ化により合成された。エントリー３は、スキーム４に示すように合成された（Ｓｈａｐｉｒｏ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， １９６４， ８６， ２８２５）が、その他の方法、例えばバートン脱酸素化（Ｒｏｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９８３， １０５， ４０５９）、その他の標準的方法、例えばクレメンソン還元またはシャピロ反応も同様に利用することができる。化合物５および１４は、スキーム１ルートＢおよびスキーム４に従って合成された。エントリー７、８、９、１０、１２、１３、ブチルおよびブテンは、スキーム１ルートＢおよびスキーム５に従って合成された（Ｓｃｈｏｗ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ． １９７９， ２２， ３７６０）。
【００９８】
無塩条件下において不安定なイリドであることから予測されるように、１７（２０）Ｚオレフィンがメジャー異性体であった。これは、ＮＯＥＳＹ  ＮＭＲ分光分析により確証された。弱いＮＯＥが、ビニルのＨ２０およびメチルのＨ１８間に観察されたが、一方、有意のＮＯＥが、メチルのＨ１８およびアリルのＨ２１間に観察された。強いＮＯＥもビニルのＨ２０およびアリルのＨ２１間に認められた。このデータは、メジャーの異性体はＺ−アルケン立体配置であり、マイナーの異性体はＥ−オレフィン立体配置であることを示す（相対比は、実施例に示されている）。
【００９９】
オレフィン生成物を合成するためのその他のアプローチは、チタンベースの試薬（ＭｃＭｕｒｒａｙ Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． １９８９， ８９， １５１３またはＰｉｎｅ ｅｔ ａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， １９９１， １６５）またはピーターソンオレフィン化反応（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９６８， ３３， ７８０）を利用し得る。エントリー６はＤｅａｎ ｅｔ ａｌ Ｓｔｅｒｏｉｄ， １９７１， １８， １３０の場合と同様に、２−メトキシエストラジオールから合成された。
【０１００】
第２表に関しては、化合物２、３および４はスキーム６に従って合成された（Ｐｅｒｔ ｅｔ ａｌ Ａｕｓｔ． Ｊ． Ｃｈｅｍ． １９８９， ４２， ４０５； Ｌｏｖｅｌｙ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， １９９４， ３５， ８７３５およびＮａｍｂａｒａ ｅｔ ａｌ Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ １９７０， １８， ４７４（代替的方法））。化合物７、８、１４および１７は、スキーム７に従って合成された（Ｃｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ １９９５， ３８， ２０４１；ニトロ化合物の代替的還元−Ｓｔｕｂｅｎｒａｕｃｈ ｅｔ ａｌ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９７６， ２８， ７３３； Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９８８， ５３， １７７５）。スキーム８に従って、エントリー１０、１１、１２、１３および１９を合成した。化合物１５はスキーム９により合成され、化合物１６および１８は、Ｃｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３８， ２０４１の場合と同様に合成された。
【０１０１】
第３表中の全ての類縁体に関する出発物質は、スキーム１Ａに従って調製された３−ベンジルエーテル−２−メトキシ−１７−エストロンであった。第３表に関しては、エントリー２および１３はスキーム１０および１１に従って合成され、専ら１６−α立体異性体が得られた（独国特許第２７５７１５７号（１９７７）；Ｎｅｗｋｏｍｅ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９６６， ３１， ６７７； Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９７６， ３； Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９７６， ３６６７）。エントリー３、５、６、８および９は、スキーム１２および１１に従って合成され（Ｔｒｅｍｂｌａｙ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５， ３， ５０５）、メジャー生成物として１６−β立体異性体が得られた。化合物５および６は、カラムクロマトグラフィーにより分離された（Ｔｒｅｍｂｌａｙ ｅｔ ａｌ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍ． １９９５， ２５， ２４８３）。エントリー４、７、１０および１１は、スキーム１３および１１に従って合成され（Ｔｒｅｍｂｌａｙ ｅｔ ａｌ Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５， ３， ５０５）、ほとんどの場合にメジャー生成物として１６−α立体異性体が得られた。スキーム１４は、エントリー１２を合成するために用いられた（Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８２， ４０， １７１）。
【０１０２】
【化３】
2004537499.tif 000004
【０１０３】
【化４】
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【０１０４】
【化５】
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【０１０５】
【化６】
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【０１０６】
【化７】
2004537499.tif 000008
【０１０７】
【化８】
2004537499.tif 000009
【０１０８】
【化９】
2004537499.tif 000010
【０１０９】
【化１０】
2004537499.tif 000011
【０１１０】
【化１１】
2004537499.tif 000012
【０１１１】
【化１２】
2004537499.tif 000013
【０１１２】
【化１３】
2004537499.tif 000014
【０１１３】
【化１４】
2004537499.tif 000015
【０１１４】
【化１５】
2004537499.tif 000016
【０１１５】
【化１６】
2004537499.tif 000017
【０１１６】
【化１７】
2004537499.tif 000018
【０１１７】
【表１】
2004537499.tif 000019
2004537499.tif 000020
【０１１８】
これらの類縁体は、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＣＦ−７胸部腫瘍細胞およびＨＵＶＥＣ内皮細胞を用いてインビトロで評価された。構造と活性の関係は、Ｃ−１７位の立体中心の反転により、抗増殖活性が約１／１０に低下することを含む。デヒドロキシ誘導体を生成するために１７−ヒドロキシ基を除去しても、２−メトキシエストラジオールと類似のインビトロプロフィールを生じる。１７−ヒドロキシ基を窒素官能基へ変換しても、インビトロ活性はいくらか保持された。１７位にメチレン基の組み込むと、２−メトキシエストラジオールと比較してインビトロ活性は増大した。
【０１１９】
これらの化合物のさらなる評価は、以下を包含し得る：以下のようなアッセイを用いた抗腫瘍活性、抗増殖活性または抗血管新生活性に関するインビトロ評価：直接細胞計数により分析されるインビトロ腫瘍細胞系アッセイまたは内皮細胞増殖アッセイ、細胞代謝機能（例えばＭＴＴおよびＸＴＴ）を測定する市販キット、あるいは標識化（３Ｈ−チミジン）または免疫反応性ヌクレオチド（ＢｒｄＵ）をＤＮＡへ代謝的に組み込むことを用いた細胞の計数；運動性または移動（例えば膜貫通移動あるいは内皮細胞層創傷）のインビトロアッセイ；２ＭＥ２類縁体の特定の機能、例えばチューブリン重合またはＳＯＤに関する代理インビトロアッセイ、あるいはその他の酵素結合または酵素阻害アッセイ；アポトーシスの誘導または細胞機能のその他の変化に関するインビトロアッセイ、例えばＴＵＮＥＬおよびヒストン分析、酸素ラジカルレベル、ｐ５３レベルまたはｐ５３リン酸化、あるいはアポトーシス経路における酵素（例えばカスパーゼまたはその他のアポトーシス分子、例えばデス受容体またはカスパーゼ活性化に関連したその他の受容体）のレベルまたは活性化状態の分析；骨または大動脈環からの内皮外方成長を含めた半ビボアッセイ、管形成アッセイ、有糸分裂誘発あるいは運動性または形態形成アッセイ；あるいはヒヨコ胚漿尿膜アッセイ（ＣＡＭ）、マトリゲルプラグアッセイ、ウサギまたはマウス角膜眼ポケット血管新生アッセイ、肝臓スポンジアッセイ、あるいは血管新生依存性腫瘍成長、例えばＢ１６ＢＬ６黒色腫転移またはルイス肺原発性および転移性ラットまたはマウスモデル、あるいは感受性株、例えばＡＪマウスまたは突然変異体マウス株、例えばアグーチまたはｒａｓ−過剰発現株、あるいはｍｉｎマウスまたはその他のトランスジェニックまたは突然変異マウスモデル系における腫瘍異種移植または腫瘍発症のインビボアッセイを含めたインビボアッセイ。特定の疾患および病状に対するこれらの類縁体の適合性を確定するために用いられ得る分析の例としては、さらに以下のものが挙げられる：エストロゲン依存性ＭＣＦ−７増殖アッセイを用いてインビトロで、または子宮重量増分あるいは子宮または膣細胞学または発情間期時間変動のような動物アッセイにおいて、評価され得るエストロゲン様活性；インビトロで肝臓ミクロソームを用いて、あるいは動物またはヒト被験者に投与して、および分析技法（例えばＨＰＬＣ、ＬＣＭＳ、ＧＣＭＳまたはＬＣＭＳＭＳ）を用いて化合物の代謝または特定の代謝産物（例えば酸化または脱メチル化生成物または抱合体）の形成を測定して、分析され得る代謝安定性；炎症関連血管新生のモデル、例えば乾癬、肉芽腫およびコラーゲン誘導性関節炎モデル；アテローム硬化症性血管新生のＡｐｏＥ−／−ノックアウトマウスモデル；再狭窄損傷のブタモデル；低酸素症作動性網膜症の新生児マウスモデル；コレステロールレベルの測定；受精能または生殖または子宮内膜症に及ぼす抗脈管形成作用（例えば濾胞発生中の血管新生の阻害）に関するアッセイ；皮膚パンチ生検測定を含めた創傷治癒に及ぼす抗脈管形成剤の作用に関するアッセイ；ならびに骨粗鬆症モデル、例えば破骨細胞および骨芽細胞分化、増殖および機能のインビトロ測定、骨吸収（点食）の半ビボ評価、あるいは骨密度のインビボ測定。
【０１２０】
例えば本発明の一実施形態は１７位での上記の修飾を含み、デメチラーゼに対する基質となり得ないように、２−メトキシエストラジオールのメチルエーテルを修飾することを含む。さらに、エストラジオールの２位を他の電子リッチな基（プロピン、プロペン、エトキシ）で修飾した誘導体が良好な抗増殖活性をインビトロで有することが主張されており（米国特許第５，５０４，０７４号）、また実証されている（Ｃｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３８， ２０４１−２０４９）。エストラジオールのＣ−２位での修飾、例えばホルミル、アセチル、メタノール、１−エタノール、２−エタノール、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、メチレンアミノ、メチレンアルキルアミンおよびメチレンジアルキルアミン、ならびにアルキルアミドにより修飾すると、エストロゲン活性が低減または除去されて、デメチラーゼにより２−ヒドロキシ−Ｅ２に代謝されることのない、抗増殖剤および抗血管新生剤であることが開示されている。アルキルは、炭素数１０までの分枝鎖または直鎖である任意の炭素鎖と定義される。以下の第２表に列挙されているのは、ＨＵＶＥＣ、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１およびＭＣＦ７増殖データに関する２位が修飾されたエストラジオール誘導体のデータである。これらの類縁体の調製のための合成経路は、Ｐｅｒｔ ｅｔ ａｌ Ａｕｓｔ． Ｊ． Ｃｈｅｍ． １９８９， ４２， ４０５−４１９； Ｌｏｖｅｌｙ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９４， ３５， ８７３５−８７３８； Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８２， ４０， １７１−１８７； Ｎａｍｂａｒａ ｅｔ ａｌ Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ． １９７０， １８， ４７４−４８０； Ｃｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３８， ２０４１−２０４９に、ならびに本明細書中で先に論じられた企業内で開発された方法において見出され得る。
【０１２１】
【表２】
2004537499.tif 000021
2004537499.tif 000022
【０１２２】
第２表に提示された２位が修飾された類縁体はすべて、エストロゲン依存性ＭＣＦ−７細胞におけるそれらの増殖指数により示した場合、有意に低いエストロゲン様活性（エストラジオールと比較して）を有する。２−ヒドロキシメチル（エントリー４）誘導体および２−ホルミル（エントリー３）誘導体はともに、ＨＵＶＥＣ細胞において良好な抗増殖活性を有した（ＩＣ５０＜１０μＭ）が、一方、２−アセチル（エントリー２）誘導体は同一アッセイにおいて不十分な活性であった。対照的に、２−ヒドロキシメチル誘導体および２−ホルミル誘導体は乳癌ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞において不十分な活性を有したが、２−アセチル−Ｅ２はこの細胞系中では良好な活性を有した。
【０１２３】
理論により限定されたくはないが、分子モデリングは、２−メトキシエストラジオールの３−ヒドロキシ基とメトキシ基との間に形成される水素結合が存在する可能性を示唆する。この相互作用は、２−メトキシエストラジオールの抗増殖性および抗血管新生作用の両方に、ならびにその非エストロゲン様活性に関して重要である可能性がある。エストラジオールの２位に、３−ヒドロキシ基と水素結合を形成する能力を有する任意の基がある誘導体は、エストロゲン様活性を欠く抗増殖剤および抗血管新生剤である、ということが開示されている（Ｂｒｚｏｚｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ａｇｏｎｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ ｔｈｅ ｏｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ， Ｎａｔｕｒｅ ３８９：７５３−７５８（Ｏｃｔ． １６， １９９７））。理論に限定されたくはないが、２位を修飾することにより、２−メトキシエストロンは生成されないとも考えられる。２位を修飾することにより、エストロンへの抱合および酸化は起こらないという可能性がある。
【０１２４】
抗増殖活性を有し、および低エストロジェン性である、２位で修飾された２−メトキシエストラジオールの非水素結合類縁体が存在することも開示されている。これらの化合物も、本発明により意図される。
【０１２５】
別の例では、本発明の一実施形態は、１７位での上記の修飾を含み、２−メトキシエストラジオールの１６位も修飾する。１６位で修飾される類縁体の例は、第３表に示される。
【０１２６】
【表３】
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【０１２７】
エピマー１６−エチル−２−メトキシエストラジオールおよび類縁体の初期スクリーニングは、それがインビトロでのＨＵＶＥＣ細胞増殖の抑制において、２−メトキシエストラジオールとほぼ同等の効力を有することを示した。
【０１２８】
２−メトキシエストラジオールが２−メトキシエストロンに代謝されると、生物学的活性は大きく低減される。理論により限定されたくはないが、本発明は、この基質上での１７β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼと補因子ＮＡＤＰ＋の作用を遅延または防止するために、２−メトキシエストラジオールの１６位および１７位に、立体バルクおよび／または化学的または静電気的特性の修飾を付加すると考えられている。２−メトキシエストラジオールの１６位および１７位に、立体バルクおよび／または化学的または静電気的特性の修飾を付加することは、抱合、例えばグルクロニル    化を遅延または防止する可能性がある。これら２つの手段による代謝の非活性化経路の遅延または防止により、所望の抗血管新生性および抗腫瘍活性を保持しながら、２−メトキシエストラジオールおよびその他のステロイド化合物の血清寿命を延長することができると考えられる。１６位および１７位での修飾は、２位での脱メチル化を防止する。２ＭＥ２の２ＭＥ１への代謝の可能性の防止は、これらのステロイドを１７Ｂ−ＨＳＤにとって反応性の低い基質にする（立体および／または電子作用により）ことにより達成することができる。
【０１２９】
特に上記した成分のほかに、本発明の配合物は、当該配合物の種類を考慮して当該技術分野で慣用的であるその他の作用物質を含み得るし、例えば経口投与に適したものは風味剤を含み得る、と理解されるべきである。
【０１３０】
実験データ
以下の実施例は、以下の一般式で表される化合物である：
【０１３１】
【化１８】
2004537499.tif 000024
【０１３２】
（式中、ａ）ＲｂおよびＲｏは独立して、−Ｈ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−Ｆ、−ＣＮ、低級アルキル、−ＯＨ、−ＯＲ６、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＮＨ２、またはＮ（Ｒ６）（Ｒ７）（当該Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、または炭素数１０までのアルキルまたは分枝鎖アルキル）であり、
【０１３３】
ｂ）Ｒａは、−Ｎ３、−Ｃ≡Ｎ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｒ、−Ｃ≡Ｃ−Ｒ、−Ｃ＝ＣＨ−Ｒ、−Ｒ−Ｃ＝ＣＨ２、−Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２−Ｃ≡Ｎ、＞Ｃ（Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−ＯＲ３、−Ｏ−Ｒ、−Ｒ−Ｒ１、−Ｏ−Ｒ−Ｒ１、ＯＲ（Ｏ）Ｒ、ＯＲ（Ｏ）Ｒ１、ＲＯＲ、ＲＯＲ１、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＨ２、またはＮ（Ｒ６）（Ｒ７）（当該Ｒ６およびＲ７は独立して、水素、あるいは炭素数１０までのアルキルまたは分枝鎖アルキルである）、あるいはヘテロ基（当該ヘテロ基は１以上のヘテロ原子を有し得るし、置換され得る）であって、この場合、ＲはＨまたは炭素数１０までの直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたはアラルキルであり、炭素鎖中または上の任意の位置において、Ｆが置換され得るし、Ｒ１は、Ｒ１が末端にある場合には−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＦまたはＣＦ３であり、
【０１３４】
ｃ）Ｚ’は、＞ＣＨ、＞ＣＯＨ、ＣＲ２、＞Ｃ−Ｒ２−ＯＨ、＞Ｃ−Ｃ（Ｎ、＞ＣＲ１であって、ここで、Ｒ２はＨあるいは炭素数１０までの直鎖または分枝鎖アルキル、あるいはアラルキルであり、上記のように任意の位置において炭素鎖中または上でヘテロ基によるヘテロ置換を有し得るか、またはＲ２は、炭素数１０までのアルキルまたは分枝鎖アルキル、あるいはアラルキル（本明細書中ではアリールアルキルとも称する）あるいはヘテロ基（ここで、ヘテロ基は１以上のヘテロ原子を有し、置換され得る）であり、Ｒ１は、Ｒ１が末端にある場合には−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＦまたはＣＦ３であり、
【０１３５】
ｄ）＞Ｃ−Ｒｇは、＞ＣＨ２、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＨ、＞Ｃ（Ｒ３）ＯＨ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＲ３、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＨ２、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＨＲ３、＞Ｃ（Ｈ）−ＮＲ３Ｒ４または＞Ｃ（Ｈ）−Ｃ（Ｏ）−Ｒ３（Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、炭素数１０までのアルキルまたは分枝鎖アルキル、あるいはアラルキルである）であり、あるいは
Ｒｇは、ｉ）直鎖または分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルキル、ｉｉ）Ｃ〜Ｚｏのいずれかの位置に１つまたは複数の二重結合を有する直鎖または分枝鎖である炭素数１〜１０のアルケニル、ｉｉｉ）化学的に可能である任意の位置に１つまたは複数の三重結合を有する直鎖または分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルケニル基、ｉｖ）各アルキル鎖が炭素原子数１〜１０の直鎖または分枝鎖であるモノアルキルアミノ基またはジアルキルアミノ基、ｖ）（ＣＨ２）ｎ−ＣＦ２−、（ＣＨ２）ｎ−ＣＲ１または（ＣＨ２）ｎ−ＣＦ３（当該ｎは０〜１０である）、あるいはｖｉ）Ｈであり、ｉ）〜ｉｖ）のいずれの場合にも、芳香族基またはヘテロ芳香族基で任意に置換され、あるいはヘテロ基で任意に置換され、Ｒｇはαまたはβ位のいずれにあってもよく、あるいは
Ｒｇは、Ｒｇ１およびＲｇ２であって、当該Ｒｇ１は存在する場合も存在しない場合もあり、存在する場合、−Ｈ、または直鎖もしくは分枝鎖である炭素原子数１〜１０のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであって、任意に置換され、Ｒｇ２はヘテロ基であり（ここで、Ｒｇ１が存在しない場合、ヘテロ基は二重結合で１７位に結合されている）、Ｒｇ１またはＲｇ２はβ位に存在し、α位には他の基を有し、Ｒ１は末端にある場合には−ＯＨ、−ＮＨ２、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＦまたはＣＦ３で、
【０１３６】
ｅ）Ｒｈ１およびＲｈ２は独立して、Ｈであるか、無置換の炭素数１０までの直鎖もしくは分岐鎖のアルキル、アルケニル、もしくはアルキニルであるか、ヘテロ基（該ヘテロ基は、無置換であるか、または炭素数１０までのアルキル、アルケニルもしくはアルキニルで一置換もしくは多置換されている）から選択される１または複数の基により置換されている炭素数１０までの直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニルまたはアルキニルであるか；ハロゲンであるか（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ）；または、少なくとも１つのヘテロ、ハロまたはアルキルで任意に置換される芳香族基であり、
あるいはＲｈ１およびＲｈ２は独立して、少なくとも１つのヘテロ、ハロまたはアルキルで任意に置換されている少なくとも１つの脂肪族または芳香族基を含有する基であるが、但し、Ｒｈ１およびＲｈ２はともにＨではなく、
【０１３７】
ｆ）Ｚ”は、＞ＣＨ２、＞Ｃ＝Ｏ、＞Ｃ−ＯＡｃ、＞Ｃ（Ｈ）−ＯＨ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＨ、＞Ｃ＝Ｎ−ＯＲ５、＞Ｃ（Ｈ）−Ｃ≡Ｎ、または＞Ｃ（Ｈ）−ＮＲ５Ｒ５（ここで、Ｒ５は各々独立して、水素、炭素数１０までのアルキルもしくは分枝鎖アルキル、またはアラルキルである）であり、
当業者にとって化学的に可能である場合、任意の環中の飽和結合は脱水素化され得るし、
当業者にとって化学的に可能である場合、立体化学的異性体はすべて、αまたはβ立体配置（ＲおよびＳ；あるいはＤ−およびＬ−）を有し、かつ
低級アルキルは、分枝鎖または非分枝鎖であり得る炭素原子数１〜１０の炭素鎖であると定義され、この場合、当業者にとって化学的に可能である）。
【０１３８】
本発明のいくつかの実施形態においては、好ましくはＺ”は＞ＣＯＨまたは＞Ｃ−ＯＡｃである。本発明のいくつかの実施形態では、好ましくはＺ”は＞ＣＨ２である。本発明のいくつかの実施形態では、好ましくはＲｂおよびＲＯはＨである。
【０１３９】
本明細書中で用いる場合、「末端」とは、「鎖の末端」と定義される。
【０１４０】
本発明の化合物は、薬学的に許容可能な塩としても提供され得る。
【０１４１】
Ｒｇ２であるへテロ基の例としては、エーテル基、アミノ基、カルボニル基、ハロアルキル、ジハロアルキル、またはトリハロアルキル基、ヒドロキシ基、エステル基、ジアルキルアミノ、またはモノアルキルアミノ基、チオール、チオエーテル、またはチオエステル（ホスフェート）基およびオキシムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４２】
Ｃ９〜Ｃ１１がオレフィンである
２−メトキシエストラジオール誘導体を含む本発明の化合物の例は、第４表に示されている。この化合物は、Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｒｏｉｄｓ （１９９９）６４， ４６０におけるシュワルツの方法論の変法により調製された（スキーム１５）。
【０１４３】
【表４】
2004537499.tif 000025
【０１４４】
さらに別の第５表の化合物も、本発明により意図される。
【０１４５】
【表５】
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【０１４６】
第５表中の２−アルキル、１７−オレフィンまたは１７アルキルエストラジオール類縁体の多くは、スキーム１６に示すように調製することができる。スキーム１６は、２−アルキル、１７−デオキシエストラトリエン類縁体への合成経路も示す。この経路は、適切な２−アルキル−エストラジオール前駆体を用いて開始する（Ｃｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ １９９５， ３８， ２０４１およびＣｕｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ １９９７， ４０， ２３２３）。オッペンナウアー条件を用いた酸化により、２−アルキル−１７−エストロンを得る。ヒドラジンおよびＫＯＨによる１７ケトンの脱酸素化により、２−アルキル−１７−デオキシエストラトリエン類縁体を得る。あるいは、２−アルキル−１７−エストロン類縁体をウィッティヒ反応させると、２−アルキル−１７−アルケンエストラトリエン類縁体が得られる。触媒的水素添加により、１７−アルケンを還元して、１７−アルキル類縁体を得る。
【０１４７】
２位の置換基がプロペンおよびプロピニルである場合、これら２位の官能基も還元されるため、触媒的還元工程をすることはできない。その結果として、２位の置換基がアルケンまたはアルキニル官能基であって、かつ１７位の置換基がアルカンである化合物は、スキーム１７にしたがって一連の類縁体が調製された。市販の１７−エストロンが、この経路のための出発物質として用いられた。上記のウィティッヒ条件を用いて、さらに、触媒的水素添加を用いて、１７−アルキルエストラトリエン類縁体を得る。２位がアルキニルで置換された類縁体を調製するために、プロピニル基が導入され、カストロの条件（Ｃａｓｔｒｏ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９６６， ３１， ４０７１）を用いて３−アルコールがｔＢＤＭＳエーテルとして保護された。その後、ＴＢＡＦを用いて脱保護することにより、２−プロピニル−１７−アルキル−エストラトリエン類縁体を得た。２−アルケン置換類縁体は、３−アルコールをメトキシメチルエーテルとして保護し、その後の２−ホルミル化（Ｌｏｖｅｌｙ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， １９９４， ８７３５； Ｐｅｒｔ ｅｔ ａｌ Ａｕｓｔ． Ｊ． Ｃｈｅｍ． １９８９， ４２， ４０５）により、スキーム１７における２−ホルミル−３−メトキシメチルエーテル−１７−アルキルエストラトリエン類縁体を得た。さらに、ウィティッヒオレフィン化およびＨＣｌを用いた脱保護により、２−プロペン−１７−アルキルエストラトリエン類縁体の一連の化合物を得た。スキーム１７における２−ホルミルもアルコールに還元され、かつ脱保護されて、一連の２−メチレンヒドロキシ−１７−アルキルエストラトリエン類縁体を得た。
【０１４８】
２−ホルミル−１７−アルケニルエストラトリエン類縁体は、スキーム１８に従って調製された。スキーム１７の場合と同様に、エストロンは、ウィッティヒ条件を用いて１７−アルケニルエストラトリエン類縁体に変換することができる。３−ヒドロキシをメトキシメチルエーテルとして保護し、その後スキーム１７の場合と同様にホルミル化することにより、２−ホルミル−３−メトキシメチルエーテル−１７−アルケンエストラトリエン類縁体を得る。ＨＣｌによる脱保護により、最終生成物として２−ホルミル−１７−アルケンエストラトリエンを生じる。
【０１４９】
２位が窒素で置換され、かつ１７位がアルカンまたはアルケンで置換されている類縁体は、スキーム１９に示されたように合成された。エストロンが、硝酸および酢酸を用いて２−ニトロエストロンに変換された。ニトロ基のアミンへの還元は、触媒的水素添加により行った。２−アミノエストロンを上記と同様、ウィティッヒ反応させることにより、２−アミノ−１７−アルケンエストラトリエン類縁体を合成した。トルエン中で蟻酸を用いてホルミル化することにより、２−ホルムアミド−１７−アルケンエストラトリエン類縁体を得た。あるいは２−アミノ−１７−アルケンエストラトリエンから、上記と同様の触媒的水素添加およびその後のホルミル化により、２−ホルミル−１７−アルキルエストラトリエン類縁体を得た。
【０１５０】
スキーム２０は、１７位がメチレンヒドロキシまたは１７位がカルボン酸である２−メトキシエストラジオールの合成経路を示す。２−メトキシ−１７（２０）−メチレンエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールを出発物質として用いて、ヒドロキシ基をメトキシメチルエーテルとして保護した。ヒドロホウ素化（一般条件：Ｍａｙｏ ｅｔ ａｌ Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， １９８６， ｐｐ１３２， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ， ＮＹ）により、１７−メチレンヒドロキシエストラトリエン誘導体を得る。脱保護により、２−メトキシ−１７−メチレンヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールを得る。相間移動条件を用いた過マンガン酸カリウムによって、１７−メチレンヒドロキシＭＯＭ保護中間体を酸化（Ｌｉｆｓｈｉｔｚ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， １９８７， １０９， ７２８０およびＨｅｒｒｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９７４， １５１１）することにより、カルボン酸を得る。脱保護により、２−メトキシ−１７−メチレンヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールを得る。上記のような脱保護により、スキーム２０に示した１７−カルボキシ類縁体を得る。
【０１５１】
【化１９】
2004537499.tif 000030
【０１５２】
【化２０】
2004537499.tif 000031
【０１５３】
【化２１】
2004537499.tif 000032
【０１５４】
【化２２】
2004537499.tif 000033
【０１５５】
【化２３】
2004537499.tif 000034
【０１５６】
実施例１
２ＭＥ２誘導体の合成および１７位での修飾
本明細書に記載した２ＭＥ２誘導体の合成は、当業者の能力の範囲内である。本発明に係る１７位で修飾されるエストラジオールの誘導体の調製のために用いられる合成経路は、前に引用されたエストラジオール誘導体に関する既知文献の手順の変法に基づいている。１７位での修飾の例は、以下の実施例２〜１３で提供される。
【０１５７】
実施例２
１７−α−ヒドロキシ−２−メトキシエストラジオール（第１表、エントリー２）のスペクトルデータ
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８３（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），２．８４−２．７５（ｍ，２Ｈ），２．４１−２．１６（ｍ，３Ｈ），１．９７−１．２１（ｍ，１０Ｈ），０．７３（ｓ，３Ｈ）．分析（Ｃ１９Ｈ２６Ｏ３）計算値Ｃ＝７５．４６、Ｈ＝９８．６７、実測値Ｃ＝７５．１８、Ｈ＝８．７０。
【０１５８】
実施例３
１７−デヒドロキシ−２−メトキシエストラジオール（第１表、エントリー３）のスペクトルデータ
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ），６．８５（１Ｈ，ｓ，芳香族），６．７０（１Ｈ，ｓ，芳香族），５．４５（１Ｈ，ｓ，フェノール），３．８５（３Ｈ，ｓ，メトキシ），２．８５（ｄｄ，Ｊ＝７．０，３．５，ベンジル），２．２５（２Ｈ，ｍ），１．９０（２Ｈ，ｍ），１．７５−１．０５（１０Ｈ，ｍ），０．７５（３Ｈ，ｓ）．分析（Ｃ１９Ｈ２６Ｏ２），計算値Ｃ＝７９．６８、Ｈ＝９．０９、実測値Ｃ＝７９．６５、Ｈ＝９．０６。
【０１５９】
実施例４
１７−アミノ−２−メトキシエストラジオール（第１表、エントリー４）のスペクトルデータ
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ），６．６９（ｓ，１Ｈ），６．３９（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），２．７４−２．６２（ｍ，３Ｈ），２．３４−２．２０（ｍ，１Ｈ），２．１９−１．５７（ｍ，５Ｈ），１．５０−１．１４（ｍ，８Ｈ），０．７２（ｓ，３Ｈ）．分析（Ｃ１９Ｈ２７ＮＯ２）計算値Ｃ＝７９．８４、Ｈ＝９．２９、実測値Ｃ＝８０．２８、Ｈ＝９．１７。
【０１６０】
実施例５
１７−オキシム（２−メトキシエストロン）（第１表、エントリー５）のスペクトルデータ
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ｐｐｍ）δ６．８０（１Ｈ，ｓ，芳香族），６．７０（１Ｈ，ｓ，芳香族），５．６０（１Ｈ，ブロード），３．９０（３Ｈ，ｓ，メトキシ），２．８５（ｍ，ベンジル），２．５５（２Ｈ，ｍ），２．３５（２Ｈ，ｍ），２．１５−１．４０（８Ｈ，ｍ），０．９５（３Ｈ，ｓ）。
【０１６１】
実施例６
３，１７−ジアセテート−２−メトキシエストラジオール（第１表、エントリー６）のスペクトルデータ
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ６．９０（ｓ，１Ｈ），６．７５（ｓ，１Ｈ），４．７１（ｄｄ，Ｊ＝７．８，８．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．８４−２．７７（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．３２−２．１５（ｍ，２Ｈ），２．０８（ｓ，３Ｈ），１．９５−１．２２（ｍ，７Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ）．分析（Ｃ２３Ｈ３０Ｏ５）計算値Ｃ＝７１．４８、Ｈ＝７．８２、実測値Ｃ＝７１．２４、Ｈ＝７．８２。
【０１６２】
実施例７
エストラジオール（Ｅ２）誘導体の合成および２位での修飾
本明細書に記載したＥ２誘導体の合成は、当業者の能力の範囲内である。２位で修飾されたＥ２誘導体および本明細書中で考察された類縁体の合成の特定の説明は、Ｍ． Ｃｕｓｈｍａｎ， Ｈ−Ｍ． Ｈｅ， Ｊ．Ａ． Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ， Ｃ．Ｍ． Ｌｉｎ ａｎｄ Ｅ． Ｈａｍｅｌ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ａｎｔｉｔｕｂｕｌｉｎ ａｎｄ ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ２−ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ａｎｄ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｏｆ ｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｔｈａｔ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｕｂｕｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｂｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ３８（１２）： ２０４２（１９９５）およびＭ． Ｃｕｓｈｍａｎ， Ｈ−Ｍ． Ｈｅ， Ｊ． Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ， Ｒ． Ｖａｒｍａ， Ｅ． Ｈａｍｅｌ， Ｃ． Ｌｉｎ， Ｓ． Ｒａｍ ａｎｄ Ｙ．Ｐ． Ｓａｃｈｄｅｖａ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ａｎａｌｏｇｓ ｏｆ ２−ｍｅｔｈｏｘｙｅｓｔｒａｄｉｏｌ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｕｂｕｌｉｎ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４０（１５）： ２３２３ （１９９７）に見出され得る。
【０１６３】
実施例８
２ＭＥ２誘導体の合成および１６位での修飾
本明細書の１６位で修飾されたエストラジオール誘導体の調製のために用いられる合成経路は、エストラジオール誘導体に関する既知文献の手順の変法に基づいている（Ｔｒｅｍｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５ ３， ５０５−５２３； Ｆｅｖｉｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， １９８７ ５２， ２４７−２５１； Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．， Ｓｔｅｒｏｉｄｓ １９８２， ４０， １７１−１８７； Ｔｒｅｍｂｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ １９９５， ２５， ２４８３−２４９５； Ｎｅｗｋｏｍｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９６６， ３１， ６７７−６８１； Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ １９７６， ３−６； ａｎｄ Ｃｏｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ， １９７６， ３６６７−３６６８）。選択的修飾の例は、以下の実施例１６〜３８で提供される。
【０１６４】
実施例９
３−ベンジル−２−メトキシエストラジオールの合成（スキーム１Ａ）
２−メトキシエストラジオール（１０．０９ｇ、３３．４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２２ｇ、２７８ｍｍｏｌ）を無水エタノール中に懸濁して、０℃に冷却した。ベンジルブロミド（１１．４ｍＬ、９５．８ｍｍｏｌ）を滴下して、添加後、混合物を８時間灌流させた。溶液を室温に冷却し、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去した。その結果得られた残渣を約２００ｍｌの水で希釈して、酢酸エチル（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物を水（２００ｍＬ）、重炭酸ナトリウム水溶液（飽和、２００ｍＬ）および食塩水（２００ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過してロータリーエバポレートした。生成物を、ヒートガンを用いて時々静かに加熱しながら真空下で乾燥して、黄色味がかったガラス（１３．５４ｇ、定量的収量）を得て、これをさらに精製せずに用いた。
【０１６５】
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２９−７．５３（ｍ，５Ｈ），６．８８（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，３Ｈ），５．１１（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），０．８０（ｓ，３Ｈ）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３３４１，２９２０，２８６４，１６０５，１５１３，１４５３，１２５４，１２１１，１１１７，１０２２ｃｍ−１．
【０１６６】
３−ベンジル−２−メトキシエストロンの合成（スキーム１Ａ）
塩化オキサリル（３８ｍｍｏｌ、１９ｍＬ、２Ｍ、塩化メチレン）を無水塩化メチレン（２５ｍＬ）に添加し、−４６℃に冷却した。メチルスルホキシド（５．４０ｍＬ、７６ｍｍｏｌ）を滴下し、混合物を２分間撹拌した。塩化メチレン／メチルスルホキシド（１０ｍＬ／１５ｍＬ）中の３−ベンジル−２−メトキシエストラジオールを５分以内に添加し、その結果生じた混合物を１時間撹拌した。トリエチルアミン（１７０ｍｍｏｌ、２３．５ｍＬ）を１滴ずつ添加し、５分間撹拌して、室温に戻した。水（およそ２００ｍＬ）を添加し、混合物を塩化メチル（３×２００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物を水（２００ｍＬ）、希ＨＣｌ（１％水溶液、２００ｍＬ）、炭酸ナトリウム水溶液（飽和、２００ｍＬ）および食塩水（２００ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過およびロータリーエバポレートして、白色固体を得た。固体を熱エタノールで結晶化して、白色結晶を得た（９．９４ｇ、２５．５ｍｍｏｌ、２−メトキシエストラジオールからのトータル収率７６％）。
【０１６７】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４（ｍ，５Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｓ，３Ｈ）．ＩＲ（ｎｅａｔ）２９２０，１７３１，１５１９，１２０２，１０１２ｃｍ−１．
【０１６８】
実施例１１
１６α−アルキル−３−ベンジル−２−メトキシエストロンの代表的合成（スキーム１３）
リチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ、Ａｌｄｒｉｃｈ、ヘプタン／ＴＨＦ／エチルベンゼン）をＴＨＦ中に溶解し、−７８℃に冷却して、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３−ベンジル−２−メトキシエストロンを滴下した。添加後、混合物を０℃に温めて、１時間撹拌した。次に混合物を−７８℃に冷却して、ＤＭＰＵ（１ｍＬ）を、その後臭化クロチル（２０５μＬ、２．０ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を４時間かけて室温に温めた。水（１００ｍＬ）を慎重に添加することにより反応を停止させて、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物を水（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過してロータリーエバポレートした。粗生成物を、ヘキサン／酢酸エチル（９：１）ＳｉＯ２Ｂｉｏｔａｇｅ  ＦＬＡＳＨ装置を用いて精製した。６８０ｍｇ（１．５３ｍｍｏｌ）の生成物を得て、約１２１ｍｇ（０．３１ｍｍｏｌ）の出発物質を回収した（回収出発物質に基づいて、収率９０％）。１６α／βのジアステレオマー比は約２：１であった（０．８８、０．７９ｐｐｍでのシングレットのＨ１８シグナル）。
【０１６９】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．３４−５．５９（ｍ，２Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），０．８７＆０．９７（ｓ，総３Ｈ，１：２比）．
【０１７０】
実施例１２
１６−アルキル−１６−メトキシカルボニル−３−ベンジル−２−メトキシエストロンの代表的合成（スキーム１２）
３−ベンジル−１６−カルボメトキシ−２−メトキシエストロン（０．８４０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ、実施例１５と同様に合成）、水素化カリウム（１．５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ、３０％鉱油分散液、ヘキサン中で洗浄）および１８−クラウン−６（１２０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（４０ｍＬ）中で混合し、１時間灌流した。混合物を室温に冷却し、臭化アリル（５３７μＬ、６．２ｍｍｏｌ）を添加して、混合物を１８時間灌流した。室温に冷却後、撹拌しながら約２ｍｌの水を慎重に添加し、次にさらに１００ｍＬの水を添加することにより反応を停止させた。この混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過およびロータリーエバポレートした。８５：５のヘキサン：酢酸エチルでＳｉＯ２Ｂｉｏｔａｇｅ  ＦＬＡＳＨ装置を用いて精製し、６９７ｍｇの生成物を得た（１．４２ｍｍｏｌ、収率７６％）。
【０１７１】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．６６−５．７９（ｍ，１Ｈ），５．１５−５．２０（ｍ，２Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），０．９９（ｓ，３Ｈ）．
【０１７２】
実施例１３
１６−アルキル−１６−メトキシカルボニル−３−ベンジル−２−メトキシエストロンの代表的脱カルボキシル化（スキーム１２）
１６−アリル−１６−カルボメトキシ−３−ベンジル−２−メトキシエストロン（６９７ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（１．１５ｇ、２７ｍｍｏｌ）、水（４８５μＬ、２７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６３ｍＬ）中に溶解し、２０時間灌流した。室温に冷却し、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）を添加し、エーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機物を水（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄して、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過してロータリーエバポレートした。８５：５のヘキサン：酢酸エチルでＳｉＯ２Ｂｉｏｔａｇｅ  ＦＬＡＳＨ装置を用いて精製し、２７１ｍｇの生成物および１８９ｍｇの回収出発物質を得た。回収した出発物質は再び上記のように反応（ＬｉＣｌ３０８ｍｇ、水１３２μＬ、ＤＭＦ１７ｍＬ、２８時間）させ、処理して、１３０ｍｇの生成物を得た。反応に関する全収率は６６％であった（４０１ｍｇ、０．９３ｍｍｏｌ）。
【０１７３】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），５．６９−５．８８（ｍ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），５．００−５．０８（ｍ，２Ｈ），５．８８（ｓ，３Ｈ），０．９８および０．８８（ｓ，総３Ｈ，１：１．４比）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）２９２５，２８５５，１７２６，１５１４，１１０３ｃｍ−１．
【０１７４】
実施例１４
１６−メタン−ジメチレンアミン−３−ベンジル−２−メトキシエストロンの合成（スキーム１４）
３−ベンジル−２−メトキシエストロン（１．５１ｇ、３．８７ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン（１．６４ｍＬ、８．１３ｍｍｏｌ）中に懸濁し、オイルバス（１５５℃）中で１．５時間加熱すると、この間にステロイドが溶解した。反応混合物を室温に冷却し、氷水（１００ｍＬ）中に注ぎ入れて、塩化メチレン（２×１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過およびロータリーエバポレートして、生成物を得て、これをさらに精製せずに用いた（１．８２ｇ、定量的収量）。
【０１７５】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２３−７．４７（ｍ，５Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．０（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｓ，３Ｈ）．
【０１７６】
実施例１５
１６−メトキシカルボニル−３−ベンジル−２−メトキシエストロンの合成（スキーム１２）
３−ベンジル−２−メトキシエストロン（１．６１１３ｇ、２．９７８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却して、リチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ、Ａｌｄｒｉｃｈ、ヘプタン／ＴＨＦ／エチルベンゼン）を滴下して、１時間撹拌した。ＤＭＰＵ（１ｍＬ）中のメチルシアノホルメート（２３７μＬ、３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１８時間かけて室温に温めた。水（１００ｍＬ）を慎重に添加して、混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機物を塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して回転蒸発した。ヘキサン／酢酸エチル（８５：１５）からヘキサン：酢酸エチル（７５：２５）に切り換えてＳｉＯ２フラッシュカラムにより、生成物を最終精製し、８０６ｍｇの生成物を得た（１．８ｍｍｏｌ、６０％）。
【０１７７】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８５（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．１３（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝９，１０Ｈｚ，１Ｈ），１．０（ｓ，３Ｈ）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）２９２９，２８６０，１７５０，１７２３，１６０４，１５０８，１２１１，１０１４ｃｍ−１．
【０１７８】
実施例１６
１６−アルキル−３−ベンジル−２−メトキシエストラ−１７β−ジオールの合成のための代表的手順（スキーム１１）
１６α−クロチル−３−ベンジル−２−メトキシエストロン（６８０ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に溶解し、−７８℃に冷却した。水素化リチウムアルミニウム（３．０６ｍｍｏｌ、１１６ｍｇ）を添加し、溶液を２時間撹拌した。水（２ｍＬ）を慎重に添加し反応を停止させ、室温に温め、次にさらに５０ｍＬ部分の水を添加した。混合物を酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機物を水（５０ｍＬ）、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過してロータリーエバポレートした。混合物を、３：１のヘキサン：酢酸エチルを用いてＳｉＯ２Ｂｉｏｔａｇｅ  ＦＬＡＳＨ装置で精製し、５００ｍｇの精製生成物を得た（１．１２ｍｍｏｌ、収率７３％）。
【０１７９】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），５．４７−５．５６（ｍ，２Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）および３．３３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）（総１Ｈ，１：１．７比），０．８４および０．８１（ｓ，３Ｈ全体）．
【０１８０】
実施例１７
１６−メタノール−３−ベンジル−２−メトキシエストラジオールの合成（スキーム１２）
上記と同様の反応手順及び処理を用いて実験を実施した（８０６ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）の１６−カルボメトキシ−３−ベンジル−２−メトキシエストロンを使用）が、但し、反応停止前にて室温に２時間撹拌した。３：２のヘキサン：酢酸エチルによりＳｉＯ２フラッシュカラムを用いて、最終生成物を精製した。３０４ｍｇのβ異性体、５１ｍｇのα異性体を得たが、これらはクロマトグラフィーにより分離した。
【０１８１】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ（主要異性体）７．２８−７．４８（ｍ，５Ｈ），６．８７（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ），３．９７（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ），３．８８（ｓまたはｏｂｓｃｕｒｅｄｄ，４Ｈ），３．６７（ｄｄ，Ｊ＝４，７Ｈｚ，１Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ）．（マイナーの異性体）７．２８−７．４７（ｍ，５Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝１４Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ）．
【０１８２】
実施例１８
１６−アルキル−１３−ベンジル−２−メトキシエストラジオールの代表的脱ベンジル化（スキーム１１）
１６α−クロチル−３−ベンジル−２−メトキシエストラジオール（５００ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）をパル（Ｐａｒｒ）反応容器中の酢酸エチル（２５ｍＬ）中に溶解した。瓶をアルゴンで充填させ、Ｐｄ／Ｃ（１０％、２．５ｇ）を添加した。瓶をパル水素発生器に取り付けて水素を５回充填およびパージして、５０ｐｓｉに加圧し、２４時間振り動かした。混合物をセライトパッドを通して濾過して、ロータリーエバポレートさせて、３：１のヘキサン：酢酸エチルによりＳｉＯ２フラッシュカラムで精製した。３５８ｍｇの生成物を得た（１．０ｍｍｏｌ、８９％）。
【０１８３】
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）及び３．２９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）（総１Ｈ，１：２比），０．８２および０．７９（ｓ，３Ｈ）ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３２４５，２９１４，１６０６，１５２３，１４１４，１２５８，１０２８ｃｍ−１．分析（Ｃ２０Ｈ３４Ｏ３）計算値Ｃ＝７７．４４、Ｈ＝９．５６、実測値Ｃ＝７６．６４、Ｈ＝９．５１．
【０１８４】
実施例１９
１６β−メチル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー３）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）および３．２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）（総１Ｈ、２：１），０．８３および０．８１（ｓ，３Ｈ全体）．分析（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ３，１／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７４．８５、Ｈ＝８．９５、実測値Ｃ＝７４．９３、Ｈ＝８．９４。
【０１８５】
実施例２０
１６α−メチル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー２）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）（ｓ，１Ｈ），０．８１（ｓ，３Ｈ）．分析（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ３，１／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７４．８５、Ｈ＝８．９５、実測値Ｃ＝７４．９８、Ｈ＝８．６５。
【０１８６】
実施例２１
ラセミ１６−エチル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー４）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）および３．３０（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）（１Ｈ全体、１：１比），０．８３および０．７９（ｓ，３Ｈ全体）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３２１４，２９１８，１６０５，１５２２，１２２９，１２０１，１０２４ｃｍ−１．分析（Ｃ２１Ｈ３０Ｏ３）計算値Ｃ＝７６．３３、Ｈ＝９．１５、実測値Ｃ＝７６．１８、Ｈ＝９．１６。
【０１８７】
実施例２２
１６α−ｎ−プロピル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー７）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），０．８３および０．８０（ｓ，総３Ｈ，７．３：１比）．分析（Ｃ２２Ｈ３２Ｏ３）計算値Ｃ＝７６．６９、Ｈ＝９．３７、実測値Ｃ＝７６．５５、Ｈ＝９．４４。
【０１８８】
実施例２３
１６β−ｎ−プロピル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー８）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）および３．２９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）（総１Ｈ、２：１比），０．９５（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），０．８３および０．８０（ｓ，総３Ｈ）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３４１１，２９２３，１５０４，１４４６，１２６７，１２０２，１１１８，１０２４ｃｍ−１．分析（Ｃ２２Ｈ３２Ｏ３・１／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７５．７１、Ｈ＝９．３９、実測値Ｃ＝７５．６１、Ｈ＝９．３３。
【０１８９】
実施例２４
１６β−ｎ−ブチル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー９）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ）および３．２９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）（総１Ｈ，２．６：１比），０．８３および０．８０（ｓ，総３Ｈ）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３２２１，２９２１，１５９４，１５０４，１４１６，１２６５，１２００，１０２１ｃｍ−１．分析（Ｃ２３Ｈ３４Ｏ３）計算値Ｃ＝７７．０４、Ｈ＝９．５６、実測値Ｃ＝７７．０６、Ｈ＝９．６５。
【０１９０】
実施例２５
１６β−イソブチル−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー１１）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，３Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．７７（ｄｄ，Ｊ＝９，１０Ｈｚ）および３．２６（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）（総１Ｈ，２：１比），０．８４および０．８０（ｓ，総３Ｈ）．ＩＲ（ｎｅａｔ）３５２５，２９１３，１５０６，１２５８，１２０２，１０２６ｃｍ−１．分析（Ｃ２２Ｈ３０Ｏ３）計算値Ｃ＝７６．６９、Ｈ＝９．３７、実測値Ｃ＝７６．８２、Ｈ＝９．４７。
【０１９１】
実施例２６
１６β−メチル（ジメチルアミン）−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー１２）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６５（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ）および３．８５（ｏｂｓｃｕｒｅｄｄ）（総４Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ），０．８７（ｓ，３Ｈ）．分析（Ｃ２２Ｈ３３Ｏ３Ｎ・１／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７２．５９、Ｈ＝９．２８、Ｎ＝３．８５、実測値Ｃ＝７２．８０、Ｈ＝９．１７、Ｎ＝３．６６。
【０１９２】
実施例２７
１６β−メチレンヒドロキシ−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー６）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．７８（ｓ，１Ｈ），６．６１（ｓ，１Ｈ），３．９２（ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ）３．８０（ｄ，Ｊ＝１０Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｄ，Ｊ＝８，１１Ｈｚ，１Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ）．ＦＴ−ＩＲ（ｎｅａｔ）３２８３，３０９１，２９１９，１６０２，１５１３，１４４５，１２０４，１１１９，１０１３ｃｍ−１．分析（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ４）計算値Ｃ＝７２．２５、Ｈ＝８．４９、実測値Ｃ＝７２．２４、Ｈ＝８．４８。
【０１９３】
実施例２８
１６α−メチレンヒドロキシ−２−メトキシエストラジオール（第３表、エントリー５）
選択スペクトルデータ：１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．７７（ｓ，１Ｈ），６．６１（ｓ，１Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．８４（ｄｄ，Ｊ＝７，８Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｄ，Ｊ＝９，１１Ｈｚ，１Ｈ），３．４５（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）０．８３（ｓ，３Ｈ）。
【０１９４】
実施例２９
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞増殖抑制
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞および培養条件
第３表は、細胞および腫瘍における、１６位で修飾された本発明に係る２−メトキシエストラジオール類縁体の抗増殖活性試験の結果を示す。
【０１９５】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１ヒト乳癌細胞を、１０％ＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｌｏｇａｎ ＵＴ）を含み、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｓａｎｔａ Ａｎｎａ， ＣＡ）を補充したＤＭＥＭ中で成長させた。
【０１９６】
増殖アッセイ
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞を、９６ウエルプレート中で５０００細胞／ｍｌで平板培養した。細胞を一夜付着させた後、下記のように、異なる濃度の２−ＭＥ２またはその誘導体を含有する適切な新鮮培地を適用した。薬剤をＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）中に溶解し、２００μｌの容量でウエルに添加した。細胞を３７℃で２日間インキュベートし、３２時間目に、ＢｒｄＵを添加した。ＢｒｄＵ細胞増殖アッセイ（ＤＮＡ中に組み込まれるヌクレオチド類縁体）を、メーカー（Ｒｏｃｈｅ）の記載どおりに実施した。各条件を３反復実験で最適化し、実験を最低２回実行した。示された結果は、平均＋／−ＳＥである。
【０１９７】
実施例３０
ＨＵＶＥＣ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞増殖抑制
ＨＵＶＥＣ細胞および培養条件
ＨＵＶＥＣ細胞を、ＥＧＭ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）中で成長させた。
【０１９８】
ＨＵＶＥＣ細胞を、９６ウエルプレート中で５０００細胞／ｍｌで平板培養した。細胞を一夜付着させた後、細胞をＰＢＳで洗浄し、成長因子の非存在下で２４時間インキュベートした（ＥＢＭ、２％ＦＣＳ、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ）。２％ＦＣＳおよび１０ｎｇ／ｍｌのｂＦＧＦを含有するＥＢＭ中の漸増濃度の薬剤で、３７℃で４８時間、細胞を処理した。薬剤調製、添加容量およびＢｒｄＵ増殖アッセイは、上記と同様に実施した。
【０１９９】
２−メトキシエストラジオールは、強力な抗血管新生剤および抗腫瘍剤である。１６位での修飾類縁体の生物学的活性を評価するために、これらの類縁体の抗増殖活性を、それぞれ抗血管新生活性および抗腫瘍活性のモデルとして、ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）および乳癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１で評価した。抗増殖活性は、立体バルクが増大するにつれて（Ｒ＝ＥｔからＲ＝Ｂｕへの傾向に留意）低減する（約１８分の１）ことが判明した。このシリーズのほとんどの活性化合物が１６α−メチルであり、これは２−メトキシエストラジオールと同様の活性を有する。
【０２００】
ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍細胞系は、ＨＵＶＥＣ細胞と比較して、１６位での置換に対して感受性が非常に大きい。１６位での置換基がエチルより大きい場合に、抗増殖活性は有意に低減する（ＩＣ５０＞２２μＭ）。１６α−メチル類縁体は２−メトキシエストラジオールより良好な活性を有するが、１６β−メチル類縁体（α：βの１：２混合物である）は２−メトキシエストラジオールの約５分の１の活性を有し、ラセミ１６−エチルは２−メトキシエストラジオールと比較して約３分の１の活性を有した。
【０２０１】
エストロゲン依存性乳癌細胞系であるＭＣＦ７細胞を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｌｏｇａｎ， ＵＴ）および１Ｘ抗生物質−抗有糸分裂剤を含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）中に保持した。ＭＣＦ７細胞を継代６０〜継代９０で用いた。ＭＣＦ７エストロゲン依存性増殖アッセイのために、２４ウエルプレート中に２０〜３０，０００細胞／ウエルで細胞を完全培地中に植えつけた。細胞を一夜付着させた後、細胞計数により播種密度を測定した。細胞をＰＢＳ（３７℃）で洗浄し、それらを、２％木炭−デキストランウシ胎仔裸血清（Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）および１Ｘ抗生物質−抗有糸分裂剤を含む培地（ＩＭＥＭ−フェノールレッドを含まない）中に入れることにより飢餓状態にする。飢餓３日目に細胞を、漸増濃度の化合物を用いて、または用いずに処理して、培地を２〜３日毎に取り替えて、処理の８日後または１０日後に細胞数を計数した。ＣｏｕｌｔｅｒＺ１細胞計数器（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｈｉａｌｅａｈ， ＦＬ）を用いて細胞数を計数することにより、増殖を測定した。それぞれの条件において３回反復して行った。
【０２０２】
これらのデータは、選択的抗血管新生剤である２ＭＥ２類縁体を設計することが可能であることを示す。例えば、１６α−プロピルは、腫瘍成長を抑制する活性は１０分の１未満であるが、内皮細胞増殖を抑制する活性は良好である。その他の例としては、１６β−プロピル（４倍差）、１６β−ｉ−ブチル（５倍差）、１６β−ｎ−ブチル（４倍差）および１６β−メタノール（１０倍差）が挙げられる。さらに、１６位の小さいアルキル基は、分子の抗増殖活性を有意に変化させることなく付加することができる。
【０２０３】
実施例３１
１７（２０）−メチレンエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表、エントリー１０）
１７−オレフィン−２−メトキシエストロン類縁体の合成のための代表的手順：カリウム−ｔｅｒｔ−アミレート（１，５４Ｍ、トルエン、４．３５ｍＬ、６．６９ｍｍｏｌ、Ｓｃｈｏｗ ｅｔ ａｌ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９７９， ４４， ３７６０におけるものと同様に調製される）を無水ベンゼン中のメチルトリフェニルホスホニウムブロミド（２．３９ｇ、６．６９ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、３０分間灌流した。温ベンゼン（５ｍＬ）中の２−メトキシエストロン（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３時間灌流した。反応物を室温に冷却し、１００ｍＬの水に注ぎ入れて、エーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機物を６ＭのＨＣｌ水溶液（１×１００ｍＬ）、ＮａＨＣＯ３水溶液（飽和、１×１００ｍＬ）、水（１×１００ｍＬ）および食塩水（１×１００ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、ロータリーエバポレートさせて、半固体状の黄色がかかったオイルを得た。溶離液として９５：５のクロロホルム：メタノールを用いてシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。２２０ｍｇの１７（２０）−メチレンエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールを得た（０．７３８ｍｍｏｌ、収率７３％）。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８３（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７０（ｔ，Ｊ＝２．２６Ｈｚ，２Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２．８６−２．７４（ｍ，２Ｈ），２．６４−２．４９（ｍ，１Ｈ），２．３９−２．１７（ｍ，３Ｈ），２．０２−１．７８（ｍ，３Ｈ），１．６５−１．１９（ｍ，４Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１６２．２，１４４．９，１４３．８，１３２．３，１３０．０，１１５．０，１０８．５，１０１．２，７７．６，５６．５，５３．９，４４．７，３９．２，３６．２，２９．９，２９．５，２８．１，２７．３，２４．３，１９．０．分析（Ｃ２０Ｈ２６Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．４８、Ｈ＝８．７９、実測値Ｃ＝８０．６０、Ｈ＝８．７７。
【０２０４】
実施例３２
２−メトキシ−１９−ノルプレグナ−１，３，５（１０）１７（２０）−テトラエン−３−オール（第１表、エントリー１２）
反応条件は上記と同様としたが、但し、反応規模は２倍で、エチルトリフェニルホスホニウムブロミドを用い、２−メトキシエストロン（６１３ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）から５４０ｍｇ（１．７３ｍｍｏｌ、収率８４％）の最終産物を得た。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．２３−５．０７（ｍ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．８６−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．５１−２．３８（ｍ，２Ｈ），２．３８−２．１７（ｍ，３Ｈ），１．９９−１．８８（ｍ，１Ｈ），１．８３−１．６８（ｍ，４Ｈ），１．４９−１．２０（ｍ，５Ｈ），０．９４（ｓ，Ｚ異性体）および０．８０（ｓ，Ｅ異性体、全３Ｈ、それぞれ５：１比）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．０（Ｅ異性体）および１５０．７（Ｚ異性体），１４５．０，１４３．８，１３２．４，１３０．０，１１５．０，１１３．８，１１０．６（Ｚ異性体）および１０８．４（Ｅ異性体），５６．５，５５．６，５４．１，４５．０（Ｚ異性体）および４４．５（Ｅ異性体），３９．０（Ｅ異性体）および３８．７（Ｚ異性体），３７．７（Ｚ異性体）および３６．６（Ｅ異性体），３１．９，２９．５，２８．１（Ｅ異性体）および２８．０（Ｚ異性体），２７．７（Ｚ異性体）および２７．４（Ｅ異性体），２４．５（Ｚ異性体）および２４．４（Ｅ異性体），１９．５（Ｅ異性体）および１７．４（Ｚ異性体），１４．０（Ｅ異性体）および１３．６（Ｚ異性体）．分析（Ｃ２１Ｈ２８Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．７３、Ｈ＝８．７９、実測値Ｃ＝８０．６０、Ｈ＝８．７７。
【０２０５】
実施例３３
２−メトキシ−１７（２０）−Ｚ−プロピリデンエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
反応条件は上記と同様としたが、但し、反応規模は２倍で、プロピルトリフェニルホスホニウムブロミドを用い、２−メトキシエストロン（６１４．２ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）から３５８．９ｍｇ（１．１０ｍｍｏｌ、収率５４％）の最終産物を得た。選択スペクトルデータ：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８１（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．０７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．８８−２．７１（ｍ，２Ｈ），２．５３−２．０４（ｍ，６Ｈ），２．００−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．７６（ｔ，Ｊ＝９．９，１２Ｈｚ，２Ｈ），１．４９−１．１８（ｍ，６Ｈ），０．９９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｓ，Ｚ異性体）および０．８１（ｓ，Ｅ異性体、全３Ｈ、それぞれＺ／Ｅ  ５：１比）。１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５１．５（Ｅ異性体）および１４９．２（Ｚ異性体），１４５．０，１４３．８，１３２．４，１３０．０，１２２．３（Ｚ異性体）および１１８．６（Ｅ異性体），１１５．０，１０８．４，５６．５，５５．７（Ｚ異性体）および５４．０（Ｅ異性体），４５．０（Ｚ異性体）および４４．９（Ｅ異性体），４４．５（Ｚ異性体）および４４．２（Ｅ異性体），３９．１（Ｅ異性体）および３８．８（Ｚ異性体），３７．７（Ｚ異性体）および３６．６（Ｅ異性体），３１．９，２９．５，２８．２（Ｅ異性体）および２８．０（Ｚ異性体），２７．７（Ｚ異性体）および２７．４（Ｚ異性体），２６．７（Ｅ異性体）および２４．５（Ｚ異性体），２２．２（Ｅ異性体）および２１．３（Ｚ異性体），１９．５（Ｅ異性体）および１７．９（Ｚ異性体），１５．８（Ｚ異性体）および１４．７（Ｅ異性体）．分析（Ｃ２２Ｈ３０Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．９４、Ｈ＝９．２６、実測値Ｃ＝８０．７１、Ｈ＝９．３０。
【０２０６】
実施例３４
２−メトキシ−１７（２０）−Ｚ−ブチリデンエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表，エントリー１５）の合成
反応条件は上記と同様としたが、但し、反応規模は２倍で、ブチルトリフェニルホスホニウムブロミドを用い、２−メトキシエストロン（５９３．６ｍｇ、１．９７ｍｍｏｌ）から５３２．１ｍｇ（１．５６ｍｍｏｌ、収率７９％）の最終産物を得た。選択スペクトルデータ：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），５．０８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．８１−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．５４−２．０１（ｍ，７Ｈ），１．９９−１．８７（ｍ，１Ｈ），１．７６（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝９．６，１２．６Ｈｚ，２Ｈ），１．４９−１．２６（ｍ，６Ｈ），０．９７−０．８９（ｍ，Ｚ異性体のＨ１８および末端のブチルメチル）および０．８０（ｓ，Ｅ異性体のＨ１８，全６Ｈ，Ｚ／Ｅ  ９：１比  それぞれ積分値においてブチル鎖の末端メチルを差し引くことで確定した）１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１５２．２（Ｅ異性体）および１４９．８（Ｚ異性体），１４５．０，１４３．８，１３２．４，１３０．０，１２０．５（Ｚ異性体）および１１６．７（Ｅ異性体），１１５．０，１０８．４，５６．５，５５．７（Ｚ異性体）および５４．１（Ｅ異性体），４４．９，４４．５（Ｚ異性体）および４４．３（Ｅ異性体），３９．１（Ｅ異性体）および３８．８（Ｚ異性体），３７．８（Ｚ異性体）および３６．６（Ｅ異性体），３２．０，３１．０（Ｅ異性体）および３０．１（Ｚ異性体），２９．５，２８．２（Ｅ異性体）および２８．０（Ｚ異性体），２７．７（Ｚ異性体）および２７．４（Ｅ異性体），２４．５，２４．３（Ｚ異性体）および２３．３（Ｅ異性体），１９．６（Ｅ異性体）および１７．９（Ｚ異性体），１４．４．分析（Ｃ２３Ｈ３２Ｏ２）計算値Ｃ＝８１．１３、Ｈ＝９．４７、実測値Ｃ＝８１．３２、Ｈ＝９．５５。
【０２０７】
実施例３５
１７−アルキル−２−メトキシエストラジオール類縁体２−メトキシ−１７β−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表エントリー８）の合成のための代表的手順
１７−メチレン類縁体（４７１．９ｍｇ、１．５８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（２０ｍＬ）中に溶解した。Ｐｄ／Ｃ１０％（４７．５ｍｇ）を添加し、次に反応混合物を、パル水素発生器中で、３０ｐｓｉの水素下で１時間、水素添加反応させた。次に反応混合物をセライトに通して濾過して、ロータリーエバポレートにより溶媒を除去して、最終生成物２−メトキシ−１７β−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールを白色結晶として４７２．５ｍｇ（１．５７ｍｍｏｌ、収率９９％）を得た。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．８５−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．３２−２．１５（ｍ，２Ｈ），１．９４−１．６８（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．１２（ｍ，８Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．６１（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４４．９０，１４３．７５，１３２．６５，１３０．１１，１１４．９９，１０８．５１，５６．４６，５５．２１，４５．５８，４４．８５，４２．７４，３９．３９，３７．９７，３０．６５，２９．５２，２８．３８，２７．２１，２４．８３，１４．３４，１２．４４．分析（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ２）計算値Ｃ＝７９．９６、Ｈ＝９．３９、実測値Ｃ＝７９．９８、Ｈ＝９．４９。
【０２０８】
２−メトキシ−１７β−エチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表、エントリー１３）
反応条件は上記と同様として、オレフィン（４３５．７ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）から最終産物３９５．８ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ、収率９１％）を得た。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，１Ｈ），２．７８（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝１０．２，４．５Ｈｚ，３Ｈ），２．３０−２．１５（ｍ，２Ｈ），２．００−１．８２（ｍ，３Ｈ），１．７９−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．６２−１．０８（ｍ，１１Ｈ），０．９２（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝７．５，６．６Ｈｚ，３Ｈ），０．６３（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４４．９０，１４３．７４，１３２．６６，１３０．１０，１１４．９８，１０８．４９，５６．４５，５５．３６，５３．５８，４４．９１，４２．８５，３９．１９，３８．４７，２９．５１，２８．６５，２８．３５，２７．２４，２４．６７，２３．５７，１３．７８，１２．９５．分析（Ｃ２１Ｈ３０Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．２１、Ｈ＝９．６２、実測値Ｃ＝７９．９５、Ｈ＝９．７１。
【０２０９】
実施例３７
２−メトキシ−１７β−プロピルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表、エントリー７）
反応条件は上記と同様として、オレフィン（２６９．５ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）から最終産物２５８．４ｍｇ（０．７９ｍｍｏｌ、収率９５％）を得た。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），２．８４−２．７０（ｍ，２Ｈ），２．３１−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９７−１．６７（ｍ，４Ｈ），１．５２−１．０６（ｍ，１２Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，３Ｈ），０．６３（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４４．９１，１４３．７５，１３２．６６，１３０．１０，１１５．００，１０８．５０，５６．４６，５５．３１，５１．３４，４４．９２，４２．８３，３９．２１，３８．４１，３３．１５，２９．５２，２８．９８，２８．３７，２７．２４，２４．７７，２２．３９，１５．０６，１２．９７．分析（Ｃ２２Ｈ３２Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．４４、Ｈ＝９．８２、実測値Ｃ＝８０．２０、Ｈ＝９．８６。
【０２１０】
実施例３８
２−メトキシ−１７β−ブチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表、エントリー１６）
反応条件は上記と同様として、オレフィン（４７８．８ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）から最終産物４３０．５ｍｇ（１．２６ｍｍｏｌ、収率９０％）を得た。選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８２（ｓ，１Ｈ），６．６６（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），２，７８（ａｐｐ  ｔ，Ｊ＝１０．８，４．５Ｈｚ，２Ｈ），２．３０−２．１６（ｍ，２Ｈ），１．９６−１．８３（ｍ，３Ｈ），１．７９−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．５１−１．０７（ｍ，１５Ｈ），０．９２（ｔ，Ｊ＝９，６．９Ｈｚ，４Ｈ），０．６３（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４４．９０，１４３．７４，１３２．６６，１３０．０９，１１４．９９，１０８．４８，５６．４６，５５．３１，５１．５２，４４．９２，４２．８４，３９．２０，３８．４２，３１．５６，３０．４９，２９．５２，２９．０２，２８．３６，２７．２３，２４．７５，２３．６３，１４．６０，１２．９６。．分析（Ｃ２３Ｈ３４Ｏ２）計算値Ｃ＝８０．６５、Ｈ＝１０．０１、実測値Ｃ＝８０．９０、Ｈ＝１０．１０。
【０２１１】
実施例３９
２−アセチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオール（第１表、エントリー６）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．６２（ｓ，１Ｈ），６．７１（ｓ，１Ｈ），４．７８（ｓ，１Ｈ），３．７３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），２．９４（ｍ，２Ｈ），２．６２（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ２０４．４，１６０．４，１４７．７，１３２．０，１２７．６，１１８．２，１１８．０，８６．２，５０．４，４３．９，４３．４，３８．８，３７．８，３０．３，２８．５，２７．２，２６．９，２６．７，２３．５，１２．２．分析（Ｃ２０Ｈ２６Ｏ３）計算値Ｃ＝７６．３９、Ｈ＝８．３４、実測値Ｃ＝７６．３１、Ｈ＝８．２０。
【０２１２】
実施例４０
２−ホルミルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７β−ジオール（第２表、エントリー３）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、滴下ＣＤ３ＯＤ）δ９．７９（ｓ，１Ｈ），７．４２（ｓ，１Ｈ），６．６８（ｓ，１Ｈ），３．７５−３．６３（ｍ，１Ｈ），２．９１−２．８２（ｍ，２Ｈ），０．７７（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１９６．６，１５９．３，１４８．６，１３３．２，１３１．０，１１９．３，１１７．２，５８．４，４３．７，４３．５，３８．８，３６．８，３０．６，３０．５，２７．１，２６．６，２３．４，１８．５，１１．４．分析（Ｃ１９Ｈ２４Ｏ３）計算値Ｃ＝７５．９６、Ｈ＝８．０６、実測値Ｃ＝７５．７０、Ｈ＝８．２６。
【０２１３】
実施例４１
２−ニトロエストラ−１，３，５（１０）−エストラトリエン−３，１７β−ジオール（第２表、エントリー７）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１０．４３（ｓ，１Ｈ），８．００（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｓ，１Ｈ），３．７５（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．００−２．８０（ｍ，２Ｈ）０．８０（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１５３．２，１４９．６，１３４．２，１３２．１，１２１．９，１１９．３，８２．１，５０．４，４３．８，４３．６，３８．６，３６．７，３０．９，３０．２，２７．０，２６．５，２３．５，１１．４．分析（Ｃ１８Ｈ２３ＮＯ４）計算値Ｃ＝６８．１２、Ｈ＝７．３０、Ｎ＝４．４１実測値Ｃ＝６７．８５、Ｈ＝７．２９、Ｎ＝４．４０。
【０２１４】
実施例４２
２−アミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第２表、エントリー９）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ６．６８（ｓ，１Ｈ），６．４５（ｓ，１Ｈ），３．６８（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），０．７５（ｓ，１Ｈ）。１ＨＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ１４３．７，１３２．１，１３１．７，１２７．６，１１４．７，１１４．０，８１．５，５０．３，４３．４，３９．６，３７．１，２９．７，２９．１，２７．８，２６．７，２３．０，２１．９，１０．７．分析（Ｃ１８Ｈ２５ＮＯ２１／３Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７３．６８、Ｈ＝８．８４、Ｎ＝４．７８、実測値Ｃ＝７３．７７、Ｈ＝８．７３、Ｎ＝４．３９。
【０２１５】
実施例４３
２−エトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第２表、エントリー１８）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、滴下ＣＤ３ＯＤ）δ６．７７（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｍ，２Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），２．８６−２．６３（ｍ，２Ｈ），１．４１（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，３Ｈ），０．７６（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４４．３，１４４．０，１３２．１，１２９．９，１１５．０，１０９．９，６５．１５０．４，４４．６，４３．６，３９．２，３７．１，３０．７，２９．３，２７．７，２７．０，２３．４，１５．３，１１．４．分析（Ｃ２０Ｈ２８Ｏ３３／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７２．８０、Ｈ＝９．０１、実測値Ｃ＝７２．５１、Ｈ＝８．６０。
【０２１６】
実施例４４
２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）９（１１）−テトラエン−３，１７β−ジオール（第４表）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３、滴下ＣＤ３ＯＤ）δ７．０８（ｓ，１Ｈ），６．６３（ｓ，１Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ）３．９０（ｓ，３Ｈ），３．８２（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），２．８８−２．６５（ｍ，２Ｈ），０．８１（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４５．７，１４５．２，１３５．９，１３０．０，１２６．９，１１７．６，１１５．０，１０６．５，８２．２，５６．３，４７．８，４１．９，３９．３，３９．１，３０．９，２９．５，２８．８，２４．３，１１．４．分析（Ｃ１９Ｈ２４Ｏ３１／４Ｈ２Ｏ）計算値Ｃ＝７４．８５、Ｈ＝８．１０、実測値Ｃ＝７４．７０、Ｈ＝７．８９。
【０２１７】
実施例４５
１７β−アミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（第１表、エントリー４）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）δ６．８（ｓ，１Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），３．８６（ｓ，３Ｈ），２．８３−２．６９（ｍ，２Ｈ），０．６９（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４５．０，１４３．８，１３２．２，１３０．０，１１５．０，１０８．６，６３．０，５６．５，５２．４，４４．７，４３．３，３９．４，３７．１，３１．６，２９．４，２７．９，２７．０，２３．７，１１．５．分析（Ｃ１９Ｈ２７ＮＯ２）計算値Ｃ＝７５．７０、Ｈ＝９．０５、Ｎ＝４．６５、実測値Ｃ＝７５．６６、Ｈ＝９．０２、Ｎ＝４．６４。
【０２１８】
実施例４６
１７−α−ヒドロキシ−２−メトキシエストラジオール（第２表、エントリー２）
選択スペクトルデータ：１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ６．８３（ｓ，１Ｈ），６．６７（ｓ，１Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ），２．８４−２．７５（ｍ，２Ｈ），２．４１−２．１６（ｍ，３Ｈ），１．９７−１．２１（ｍ，１０Ｈ），０．７３（ｓ，３Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１４５．０，１４３．８，１３２．３，１３０．０，１１５．０，１０８．５，８０．５，５６．５，４８．１，４６．０，４４．３，３９．５，３２．９，３１．９，２９．５，２８．６，２７．０，２４．７，１７．５．分析（Ｃ１９Ｈ２６Ｏ３）計算値Ｃ＝７５．４６、Ｈ＝９８．６７、実測値Ｃ＝７５．１８、Ｈ＝８．７０。
【０２１９】
実施例４７
２−アルキルアミノ−１７−デオキシエストロン類縁体の合成
スキーム８に示したように、２−アルキルアミノ−１７−デオキシエストロン類縁体を合成した。
【０２２０】
実施例４８
エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
６０ｍＬのジエチレングリコール中のエストロン（８．１ｇ、３０ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液中に、２０ｍＬの１−ブタノールおよび２ｍＬの無水ヒドラジン（６０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を灌流下で１時間加熱して、透明溶液を得た。反応混合物を５０℃に冷却後、５．０４ｇのＫＯＨペレット（９０ｍｍｏｌ）を添加し、ブタノールを蒸留した。反応混合物を５０℃で２時間加熱した後、室温に冷却した。氷（５０ｇ）中に注ぎ入れ、２０ｍＬの６ＮＨＣｌ水溶液を添加し、反応混合物を撹拌して、白色固体生成物を得た。生成物を濾過により分離して、冷水で洗浄し、真空乾燥して、７．５ｇ（９０％）の生成物を得た。生成物を、ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９９：１）で溶離するシリカゲルカラムで精製した。ＣＤＣｌ３中で１Ｈ  ＮＭＲを測定し、生成物がエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２１】
実施例４９
２−ニトロエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
２０ｍＬの氷酢酸中のエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（７６０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）の溶液中に、０．１９ｍＬ（３ｍｍｏｌ）の濃ＨＮＯ３を２０℃で添加した。反応混合物の温度を室温に上げて、１８時間撹拌した。反応混合物を水で希釈し、生成物をエチルエーテルで抽出した。エーテル層を水および食塩水で洗浄して、無水ＣａＳＯ４上で乾燥し、濾過して、エバポレートさせて、黄色固体を得た。生成物をＨｅｘ／ＣＨ２Ｃｌ２（４：１）混合液で溶離するフラッシュシリカゲルカラムで精製して、黄色結晶生成物を得た（４００ｍｇ、５５％）。ＣＤＣｌ３中で１Ｈ  ＮＭＲを測定し、生成物が２−ニトロエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２２】
実施例５０
２−アミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
２−ニトロエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（３０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのジオキサン／メタノール（１：３）混合溶媒中に溶解し、パル水素発生器中で、４０ｐｓｉの水素雰囲気下で、Ｐｄ／Ｃ１０％（２００ｍｇ）の存在下で４時間、水素添加を施した。反応混合物をセライト濾過剤に通して濾過後、真空下で溶媒をエバポレートして、白色結晶（２４０ｍｇ、９５％）を得た。ＣＤＣｌ３中で１Ｈ  ＮＭＲを測定することにより、生成物が２−アミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２３】
実施例５１
２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
２−ニトロエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（１７０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を、３０ｍＬのジオキサン／メタノール１：５混合物中に溶解し、０．４ｍＬのホルムアルデヒド（３７％）を添加後、パル水素発生器中で、４０ｐｓｉの水素雰囲気下で、Ｐｄ／Ｃ１０％（２００ｍｇ）の存在下で４時間、水素添加を施した。反応混合物をセライト濾過剤に通して濾過後、真空下で溶媒をエバポレートして、白色粉末を得た。生成物をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（９５：５）混合液で溶離するフラッシュシリカゲルカラムで精製して、白色固体生成物を得た（１４０ｍｇ、９５％）。ＣＤＣｌ３中で１ＨＮＭＲを測定し、生成物が２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２４】
実施例５２
２−Ｎ−ホルムアミドエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
５ｍＬのトルエン中の２−アミノ−１７−デオキシエストロン（１３５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の熱溶液中に、０．２ｍＬの蟻酸を添加した。反応混合物の温度を上げて沸騰させて、トルエン／水の共沸混合物を収集し、次にトルエンを１時間かけて徐々に蒸留した。トルエンの１／３を蒸留したら、反応混合物を室温に冷却して、２−Ｎ−ホルムアミド−１７−デオキシエストロン（１００ｍｇ、７５％）の白色結晶を得た。ＣＤＣｌ３中での１Ｈ  ＮＭＲは、生成物を２−Ｎ−ホルムアミドエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールと確証した。
【０２２５】
実施例５３
２−Ｎ−メチルアミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
１５ｍＬの無水ＴＨＦ中のＡｌＨ３（５ｍｍｏｌ）（系中で生成）の溶液中に、５ｍＬのＴＨＦ中の２−Ｎ−ホルムアミドエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オール（１５０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を室温で添加し、２時間撹拌した。０．４ｍＬのＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１）混合液を１滴ずつ添加後、１．５ｍＬの１５％ＮａＯＨ水溶液を添加して、懸濁液を２０分間撹拌した。２０ｍＬのエチルエーテルで希釈後、ＡｌＯＨ３ＰＰＴを濾過により分離した。溶媒を留去後、生成物をＨｅｘ／エーテル（１：１）で溶離するフラッシュシリカゲルカラムで精製して、白色固体生成物（１２０ｍｇ、７０％）を得た。ＣＤＣｌ３中で１Ｈ  ＮＭＲを測定し、生成物が２−Ｎ−メチルアミノエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２６】
実施例５４
３−アジドエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールの合成
３ｍＬの氷酢酸中の２−アミノ−エストラジオール（１４４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液中に、１ｍＬの水中の硝酸ナトリウム（４８ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の溶液を０℃で添加した。反応混合物の色が橙色−黄色に変わった。０℃で３０分間撹拌後、水中のアジ化ナトリウム（４５ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物の色が橙色−赤色に変化した。温度を０℃に３０分間維持して、次に室温に上げた。１時間撹拌後、溶媒を真空下でエバポレートさせて、残さをクロロホルム中に溶解した。クロロホルム層を水および食塩水で洗浄して、無水ＣａＳＯ４で乾燥し、濾過して、エバポレートさせて、明褐色発泡性固体を得た。生成物をＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ９９：１で溶離するフラッシュシリカゲルカラムで精製して、１００ｍｇの明黄色発泡性固体（７０％）を得た。ＩＲおよびＣＤＣｌ３中での１ＨＮＭＲの測定により、生成物が３−アジドエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールであると確証した。
【０２２７】
実施例３１〜５４に関する参考文献としては、Ｏｒｇ． Ｓｙｎｔ． Ｃｏｌｌ． Ｖｏｌ． ５， ５５２； Ｏｒｇ． Ｓｙｎｔ． Ｃｏｌｌ． Ｖｏｌ． ３， ５９０およびＳｈａｈ， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． １９９５， ３８， ４２８４が挙げられる。
【０２２８】
本明細書中に記載した文献はすべて、それらの記載内容が、参照により本明細書中に援用される。上記の実施例は本発明の単なる実証であって、併記の特許請求の範囲を限定するよう意図されない。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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