(57)【要約】【課題】  ステロール及び／又はスタノール及び抗炎症剤の特定の種類を含有する誘導体及びそれを用いる心血管疾患の治療又は予防する方法の提供。【解決手段】  本発明は、１つの観点として、ステロール及び／又はスタノール並びにサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤを含む新規誘導体であって、それらの誘導体の塩を含み、及び次式ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲｂ）Ｒ2−Ｒｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲｄ）式（１）【化１】2006503840.tif 000052（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアルカン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する新規誘導体を提供する。これらの新規誘導体の１種又はそれ以上を含有する医薬組成物、並びに、動物、特にヒトに一種又はそれ以上の化合物又はそれらの生物学的に許容される塩の無毒性量、且つ、治療的有効量を投与することを含む、心血管疾患及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気の治療又は予防のための、及び、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療及び減軽減のための方法もまた提供する。
2006503840.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化１】
2006503840.tif 000027
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する、ステロール又はスタノールを含有する化合物であり、それらの生物学的に許容される塩を含む化合物。
【請求項２】
ステロールがシトステロール、カムペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール（ジヒドロブカシカステロールを含む）、デスモステロール、カリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルビステロール、ラトステロール、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アベナステロール、イソアベナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール及びコレステロールからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
スタノールがシトスタノール、カムペスタノール、スチグマスタノール、ブラシカスタノール（ジヒドロブカシカスタノールを含む）、デスモスタノール、カリノスタノール、ポリフェラスタノール、クリオナスタノール、エルゴスタノール、コプロスタノール、コディスタノール、イソフコスタノール、フコスタノール、クレロスタノール、ネルビスタノール、ラトスタノール、ステラスタノール、スピナスタノール、コンドリラスタノール、ペポスタノール、アベナスタノール、イソアベナスタノール、フェコスタノール、ポリナスタスタノール及びコレスタノールからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ステロール及びスタノールが天然型又は合成型のどちらかである請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ステロール及びスタノールがそれらの異性体の何れか一つの形態にある請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
アリールアルカン酸がアリールメタン（アリール蟻）酸、アリールエタン（アリール酢）酸、アリールプロパン（アリールプロピオン）酸、アリールブタン（アリール酪）酸及びアリールペンタン（アリール吉草）酸からなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
アリールアルカン酸がアセメタシン、アンフェナクナトリウム、ベンダザック、グルカメタシン、オキサメタシン、アミノプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フルル
ビプロフェン、フェノプロフェン、オキサプロジン、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、及びキセンブシンからなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
サリチル酸がアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）、アルミニウムＡＳＡ、ナトリウムＡＳＡ、ＡＳＡグリコレート、サリチル酸、サリチル酸グリコレート、サリシン、サリコルチン、トレムラシン、コリンマグネシウムトリサリチレート、ジフルニサル、エテルサレート、フォスフォサル、ザロール、サルサレート、サラセタミド、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、及びオルサラゾンからなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
次式：
【化２】
2006503840.tif 000028
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
次式：
【化３】
2006503840.tif 000029
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
次式：
【化４】
2006503840.tif 000030
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
次式：
【化５】
2006503840.tif 000031
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
フィトスタニルアセチルサリチレート、フィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレート、アセトキシフィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセテート、コレスタニルサリチレート、アセトキシコレスタニルサリチレート及びアセトキシフィトスタニルアミノサリチレートからなる群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
次式：
【化６】
2006503840.tif 000032
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
次式：
【化７】
2006503840.tif 000033
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
次式：
【化８】
2006503840.tif 000034
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
次式：
【化９】
2006503840.tif 000035
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１８】
次式：
【化１０】
2006503840.tif 000036
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択される。）を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項１９】
次式：
【化１１】
2006503840.tif 000037
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
次式：
【化１２】
2006503840.tif 000038
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
次式：
【化１３】
2006503840.tif 000039
を有する請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
心血管疾患及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気の治療又は予防のための、及び、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療のための医薬組成物であって、次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化１４】
2006503840.tif 000040
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する、少なくとも一種の化合物（それらの全ての生物学的に許容される塩を含む。）、及びそれらのための医薬的に許容されるキャリアを含有する医薬組成物。
【請求項２３】
アリールアルカン酸がアリールメタン（アリール蟻）酸、アリールエタン（アリール酢）酸、アリールプロパン（アリールプロピオン）酸、アリールブタン（アリール酪）酸及びアリールペンタン（アリール吉草）酸からなる群より選択される請求項２２に記載の組成
物。
【請求項２４】
アリールアルカン酸がアセメタシン、アンフェナクナトリウム、ベンダザック、グルカメタシン、オキサメタシン、アルミノプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、オキサプロジン、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、及びキセンブシンからなる群より選択される請求項２２に記載の組成物。
【請求項２５】
サリチル酸がアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）、アルミニウムＡＳＡ、ナトリウムＡＳＡ、ＡＳＡグリコレート、サリチル酸、サリチル酸グリコレート、サリシン、サリコルチン、トレムラシン、コリンマグネシウムトリサリチレート、ジフルニサル、エテルサレート、フォスフォサル、ザロール、サルサレート、サラセタミド、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、及びオルサラゾンからなる群より選択される請求項２２に記載の組成物。
【請求項２６】
化合物が次式：
【化１５】
2006503840.tif 000041
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項２２に記載の組成物。
【請求項２７】
化合物が次式：
【化１６】
2006503840.tif 000042
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項２２に記載の組成物。
【請求項２８】
化合物が次式：
【化１７】
2006503840.tif 000043
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項２２に記載の組成物。
【請求項２９】
化合物が次式：
【化１８】
2006503840.tif 000044
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項２２に記載の組成物。
【請求項３０】
化合物が、フィトスタニルアセチルサリチレート、フィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレート、アセトキシフィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセテート、コレスタニルサリチレート、アセトキシコレスタニルサリチレート及びアセトキシフィトスタニルアミノサリチレートからなる群より選択される請求項２２に記載の組成物。
【請求項３１】
心血管疾患及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気の治療又は予防のための、及び、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療の及び軽減のための方法であって、次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化１９】
2006503840.tif 000045
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上の化合物（それらの全ての生物学的に許容される塩を含む。）の無毒且つ治療的に有効な量を動物に投与することを含む方法。
【請求項３２】
アリールアルカン酸がアリールメタン（アリール蟻）酸、アリールエタン（アリール酢）酸、アリールプロパン（アリールプロピオン）酸、アリールブタン（アリール酪）酸及びアリールペンタン（アリール吉草）酸からなる群より選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
アリールアルカン酸がアセメタシン、アンフェナクナトリウム、ベンダザック、グルカメタシン、オキサメタシン、アミノプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、オキサプロジン、ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、及びキセンブシンからなる群より選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
サリチル酸がアセチルサリチル酸（ＡＳＡ）、アルミニウムＡＳＡ、ナトリウムＡＳＡ、ＡＳＡグリコレート、サリチル酸、サリチル酸グリコレート、サリシン、サリコルチン、トレムラシン、コリンマグネシウムトリサリチレート、ジフルニサル、エテルサレート、フォスフォサル、ザロール、サルサレート、サラセタミド、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、及びオルサラゾンからなる群より選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
化合物が次式：
【化２０】
2006503840.tif 000046
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
化合物が次式：
【化２１】
2006503840.tif 000047
（式中、ＲはＨ及びＣＨ3より選択され、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
化合物が次式：
【化２２】
2006503840.tif 000048
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
化合物が次式：
【化２３】
2006503840.tif 000049
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ
，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。）を有する請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化２４】
2006503840.tif 000050
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する、ステロール又はスタノールを含有する化合物（それらの生物学的に許容される塩を含む）であり、
ｉ）該化合物を選択された溶解促進剤と混合し；
ｉｉ）これに少なくとも１種の有機溶媒を加え；
ｉｉｉ）該化合物と溶解促進剤を有機溶媒に溶解し；及び
ｉｖ）それから有機溶媒をエバポレートする
手段により、脂質ベースの溶液又は水溶液に実質的に完全に溶解された化合物。
【請求項４０】
溶解促進剤が１２以上の親水性／親油性バランス（“ＨＬＢ”）を有する化合物より選択される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
溶解促進剤が８未満の親水性／親油性バランス（“ＨＬＢ”）を有する化合物より選択される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４２】
溶解促進剤がポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−８０及びポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−６０のような界面活性剤、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｐ−８５、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１２７及びプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１０８のようなポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）トリ−ブロックコポリマー界面活性化剤並びにゲルシア（Ｇｅｌｃｉｒｅ：登録商標）のようなマクロゴールグリセロール（炭素原子数８ないし１８のグリセリド；炭素原子数８ないし１８のエトキシ化された脂肪酸）からなる群より選択される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４３】
有機溶媒が全てのハロゲン化された脂肪族炭化水素類並びに全ての分岐鎖及び直鎖の炭素原子数３ないし５の脂肪族アルコール類からなる群より選択される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４４】
有機溶媒がプロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ペンタノール、イソペンタノール、クロロホルム、ジクロロメタン（メチレンクロリド）及びジメチルスルホキシド（“ＤＭＳＯ”）からなる群より選択される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４５】
工程ｉｉｉ）において、化合物が熱又は超音波を用いて溶媒に溶解される請求項３９に記載の化合物。
【請求項４６】
工程ｉｖ）において、有機溶媒が窒素エバポレーション又はロータリーエバポレーションの何れかを用いてエバポレートされる請求項３９に記載の化合物。
【請求項４７】
次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化２５】
2006503840.tif 000051
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する、ステロール又はスタノールを含有する化合物（それらの生物学的に許容される塩を含む）の一種又はそれ以上を脂質ベースの溶液又は水溶液中で溶解させる方法であって、
ｉ）該化合物を選択された溶解促進剤と混合し；
ｉｉ）これに少なくとも１種の有機溶媒を加え；
ｉｉｉ）該化合物と溶解促進剤を有機溶媒に溶解し；及び
ｉｖ）それから有機溶媒をエバポレートする
を含む方法。
【請求項４８】
溶解促進剤が１２以上の親水性／親油性バランス（“ＨＬＢ”）を有する化合物より選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
溶解促進剤が８未満の親水性／親油性バランス（“ＨＬＢ”）を有する化合物より選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
溶解促進剤がポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−８０及びポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−６０のような界面活性剤、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｐ−８５、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１２７及びプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１０８のようなポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）トリ−ブロックコポリマー界面活性化剤並びにゲルシア（Ｇｅｌｃｉｒｅ：登録商標）のようなマクロゴールグリセロール（炭素原子数８ないし１８のグリセリド；炭素原子数８ないし１８のエトキシ化された脂肪酸）からなる群より選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
有機溶媒が全てのハロゲン化された脂肪族炭化水素類並びに全ての枝分れ鎖及び直鎖の炭素原子数３ないし５の脂肪族アルコール類からなる群より選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項５２】
有機溶媒がプロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ペンタノール、イソペンタノール、クロロホルム、ジクロロメタン（メチレンクロリド）及びジメチルスルホキシドからなる群より選択される請求項４７に記載の方法。
【請求項５３】
工程ｉｉｉ）において、化合物が熱又は超音波を用いて溶媒に溶解される請求項４７に記載の方法。
【請求項５４】
工程ｉｖ）において、有機溶媒が窒素エバポレーション又はロータリーエバポレーションの何れかを用いてエバポレートされる請求項４７に記載の方法。
【請求項５５】
溶解促進剤がポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０であり、有機溶媒がイソプロパノールである請求項４７に記載の方法。
【請求項５６】
工程ｉｉｉ）において、化合物が６５℃までの温度の加熱下で溶解される請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
工程ｉｖ）において、窒素エバポレーションを用いる請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
溶解促進剤がポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０であり、有機溶媒がクロロホルムである請求項４７に記載の方法。
【請求項５９】
工程ｉｉｉ）において、化合物が室温又はほぼ室温で溶解される請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
工程ｉｖ）において、ロータリーエバポレーションを用いる請求項５８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステロール及びスタノール及びそれらの新規な誘導体及び心血管疾患及び他の障害の治療及び予防におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
科学及び技術の最近の進歩は質を改善しそして寿命を延ばすことを助けているが、アテローム性動脈硬化症、即ち心血管疾患（“ＣＶＤ”）の根底にある原因の予防は、十分に対処されてきていない。アテローム性動脈硬化症は、遺伝された（遺伝子的な）要因及び食事及び生活様式にような環境的な要因から生じる変性プロセスである。現在までの研究は、コレステロールが血管中でアテローム性動脈硬化性プラークを形成し、動脈系図におけるプラークの位置に依存して、心筋又はさもなくば脳もしくは肢への血液供給を最終的に断ち切ることにより、アテローム性動脈硬化症において役割を果たし得ることを示唆している（非特許文献１、２）。全体的検討は、ヒトの総血清コレステロールにおける１％減少が冠状動脈事象の危険性における２％減少を生じることを示している（非特許文献３）。統計的に、平均血清コレステロールにおける１０％減少（例えば、６．０ｍｍｏｌ／Ｌから５．３ｍｍｏｌ／Ｌへ）が米国における毎年１００，０００人の死亡の予防を生じ得るであろうことを示している（非特許文献４）。
【０００３】
ステロールは多くの重要な細胞機能を演じる天然由来の化合物である。植物におけるカムペステロール、スチグマステロール及びベータ−シトステロールのようなフィトステロール、カビにおけるエルゴステロール並びに動物におけるコレステロールはそれぞれ、それらの各細胞のタイプにおいて、細胞膜及びオルガネラ膜の主成分である。ヒトにおける食事由来のフィトステロールは、例えば、野菜及び植物油のような植物材料によってもたらされる。慣習的な西洋の食事における、おおよその一日のフィトステロールの含有量は、一日当たり約５００ミリグラムを供給する菜食主義者の食事とは対照的に６０−８０ミリグラム前後である。
【０００４】
フィトステロールは、ヒトを含む多くの哺乳類の種に食べさせたとき、血清コレステロールレベルを減少させる能力のため、多大の注目を受けている。正確な作用機構は殆ど不明のままであるが、コレステロールとフィトステロールの関係は、明らかにある程度、それぞれの化学構造の類似性のせいである（分子の側鎖に起因する差異）。コレステロールの吸収過程において、フィトステロールはミセル相からのコレステロールに置き換わり、それによりその吸収を減少させるか又はもしかしたら受容体及び／又はキャリア位置において競合することが推測される。
【０００５】
４０年以上前、イーライリリー（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は、トール油及びＣｙｔｅｌｌｉｎ（登録商標）というその後、大豆油からのステロール配合物を上市したが、それは一つの報告において血清コレステロールを約９％低下させることが観察された（非特許文献５）。数々のその後の研究者らは、血漿脂質及びリポタンパク質濃度におけるシトステロール配合物の効果（非特許文献６）及び血清コレステロールにおける大豆及びトール油供給源からのシトステロール及びカムペステロールの効果（非特許文献７）を探求してきた。血清コレステロールの低下において高い効果が見出されてきたフィトステロールの組成物は、カトネイら（Ｋｕｔｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．）により特許文献１に開示されたが、それは７０質量％より少ないベータ−シトステロール、少なくとも１０質量％のカムペステロール及びシグマスタノール（ベータ−シトスタノール）を含有する。フィトステロール
の成分間である種の相乗効果が存在し、以前に達成されたものよりも更に優れたコレステロール低下結果を与えることが、この特許において注目されている。
【０００６】
最近、心血管疾患における炎症の役割がより理解されつつある。リッカーら（Ｒｉｄｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．）は、非特許文献８においてＣＶＤにおける炎症の役割の可能性を記載している。ボイル（Ｊ．Ｂｏｙｌｅ）は、非特許文献９においてプラーク破裂と動脈硬化性炎症の関連性について記載している。
【０００７】
プロスタグランジン類は炎症過程において主な役割を演じており、プロスタグランジン類の生合成、特に、ＰＧＧ2、ＰＧＨ2及びＰＧＥ2の生合成、の抑制は、抗炎症薬発見の
一般的な目標とされてきた。しかし、炎症過程に関連するプロスタグランジンに起因する痛み及び腫れの減少に活性がある一般的な非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ´ｓ）はまた、炎症過程に関連しない他のプロスタグランジンの調節過程への影響に活性がある。そのため、殆どの一般的なＮＳＡＩＤ´ｓの高薬量の使用は、それらの治療能力を制限する生死にかかわる潰瘍を含む重篤な副作用を生じうる。ＮＳＡＩＤ´ｓに対するもう一つの選択肢は、特に長期間の治療が必要とされた場合、激しい悪影響を生じる副腎皮質ステロイドの使用である。
【０００８】
ＮＳＡＩＤｓは、酵素シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）を含む、ヒトのアラキドン酸／プロスタグランジン経路における酵素の阻害により、プロスタグランジン類の生成を阻止することが見出されてきた（非特許文献１０）。現在、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）及びシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）又はプロスタグランジンＧ／ＨシンターゼｌｌｔのＣＯＸの二つのアイソフォームが存在すると理解されている。ＣＯＸ−１は、血管、胃及び腎臓でみられる本質的なアイソフォームであるが、一方、ＣＯＸ−２は、サイトカイン及び炎症性メディエーターによる炎症の発生において誘導される。ＰＧＧ2／ＰＨＧ2シクロオキシゲナーゼの生成物の運命は、存在する特定のＰＧＧ2／ＰＨＧ2代謝酵素活性に依存して組織ごとで異なる。アラキドン酸もまた、１２−リポキシゲナーゼを経て１２−ＨＰＥＴＥ及び１２−ＨＥＴＥへ、又は、５−リポキシゲナーゼ経路を経て種々のロイコトリエン類へ変換されうる。アスピリン及び他のＮＳＡＩＤＳはシクロオキシゲナーゼ酵素及びプロスタグランジン生合成を阻害する；それらはリポキシゲナーゼ経路を阻害せず、故に、ロイコトリエン生合成は妨げられない。
【特許文献１】米国特許第５７７０７４９号明細書
【非特許文献１】Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．１９９４；３０８：３６３−３６６，  Ｌａｗ  ＭＲ，  Ｗａｌｄ  ＮＪ，  Ｗｕ，  Ｈａｃｋｓａｗ  ＺＡ，  Ｂａｉｌｅｙ  Ａ：Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｕｎｄｅｒｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｓｅｒｕｍ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｉｎ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ：Ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  ＢＵＰＡ  Ｓｔｕｄｙ；
【非特許文献２】Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．１９９４；３０８：３６７−３７３，  Ｌａｗ  ＭＲ，  Ｗａｌｄ  ＮＪ，  Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ＳＧ：Ｂｙ  ｈｏｗ  ｍｕｃｈ  ａｎｄ  ｈｏｗ  ｑｕｉｃｋｌｙ  ｄｏｅｓ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｌｏｗｅｒ  ｒｉｓｋ  ｏｆ  ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ？
【非特許文献３】Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９０；８１：１７２１−１７３３，  Ｌａ  Ｒｏｓａ  Ｊ．Ｃ．，Ｈｕｎｎｉｎｇｈａｋｅ  Ｄ．，Ｂｕｓｈ  Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．；Ｔｈｅ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｆａｃｔｓ：Ａ  ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｒｅｌａｔｉｎｇ  ｔｏ  ｄｉｅｔａｒｙ  ｆａｔｓ，  ｓｅｒｕｍ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｈｅａｒｔ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｊｏｉｎｔ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，  Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ．
【非特許文献４】Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９５；３３２：１４９１−１４９８，  Ｈａｖｅｌ  Ｒ．Ｊ．，  Ｒａｐａｐｏｒｔ  Ｅ．，  Ｄｒｕｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ｈｙｐｅｒｌｉｐｉｄｅｍｉａ．
【非特許文献５】Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，１９７６；２３：ｐ．２３９−２４８  Ｋｕｃｃｏｄｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｌａｎｔ  ｓｔｅｒｏｌｓ  ｏｎ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．
【非特許文献６】Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ベルリン、ハイデルベルグ、ニューヨーク、１９７６：１１９−１２４，  Ｌｅｅｓ  Ｒ．Ｓ．，Ｌｅｅｓ  Ａ．Ｍ．  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｎ  ｐｌａｓｍａ  ｌｉｐｉｄ  ａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．  Ｉｎ：Ｇｒｅｔｅｎ  Ｈ（編集）
【非特許文献７】Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １９７７；２８：ｐ．３２５−３３８  Ｌｅｅｓ  Ａ．Ｍ．，Ｍｏｋ  Ｈ．Ｙ．Ｉ．，Ｌｅｅｓ  Ｒ．Ｓ．，ＭｃＣｌｕｓｋｅｙ  Ｍ．Ａ．，Ｇｒｕｎｄｙ  Ｓ．Ｍ．  Ｐｌａｎｔ  ｓｔｅｒｏｌｓ  ａｓ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ  ａｇｅｎｔｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌｅｍｉａ  ａｎｄ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｌ  ｂａｌａｎｃｅ．
【非特許文献８】Ｎｅｗ  Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．  １９９９；３３６：ｐ．９７３−９
【非特許文献９】Ｊ．Ｐａｔｈ．１９９７；１８１：ｐ．９３−９９
【非特許文献１０】Ｇｏｏｄｍａｎ  ＆  Ｇｉｌｍａｎ‘ｓ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第９版（１９９６）、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，６２０頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、ＣＶＤ及びその根底にある、原因又は症状の一部として炎症を有する障害及び病気を含む障害、を治療するために用いられている既知の化合物の欠点を取り除くか又は軽減することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、１つの観点として、ステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤを含む新規誘導体であって、それらの誘導体の塩を含み、及び次式
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化１】
2006503840.tif 000003
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）の一種又はそれ以上を有する新規誘導体を提供する。
【００１１】
本発明は、もう一つの観点として、少なくとも一種のステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択される少なくとも一種のＮＳＡＩＤを含む組成物を提供する。
【００１２】
本発明はまた、上述の式を有する新規な誘導体の製造方法を含む。
【００１３】
本発明は更に、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療又は予防のための医薬組成物を含むが、それは、上記の式の一種又はそれ以上を有するステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤの、一種又はそれ以上の誘導体、及び、それらの医薬的に許容されるキャリアを含有する。
【００１４】
本発明は更に、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気の治療及び予防のための、及び、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療及び軽減のための医薬組成物を含むが、それは、一種又はそれ以上のステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択される一種又はそれ以上のＮＳＡＩＤ、及び、それらの医薬的に許容されるキャリアを含有する。
【００１５】
本発明は更に、ステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤの誘導体、又は、上記の式の一種又はそれ以上を有するそれらの組成物が補充された食品、飲料及び栄養補助食品を提供する。
【００１６】
本発明は更に、一種又はそれ以上のステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択される一種又はそれ以上のＮＳＡＩＤを含有する組成物が補充された食品、飲料及び栄養補助食品を提供する。
【００１７】
本発明は更に、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気の治療又は予防のための、及び、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療及び軽減のための方法を提供するが、該方法は、上記の式の一種又はそれ以上を有する、ステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤの、一種又はそれ以上の誘導体の無毒且つ治療的に有効な量を動物に投与することを含む。
【００１８】
本発明は更に、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療又は予防のための方法を提供するが、該方法は、一種又はそれ以上のステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択される一種又はそれ以上のＮＳＡＩＤを含む組成物の無毒且つ治療的に有効な量を動物に投与することを含む。
【００１９】
本発明の誘導体及び組成物がＣＶＤ及びその根底にある病気、特に高脂血症の治療及び予防のため、及び原因又は症状の一部として炎症を有する状態の治療のための両方において優れた活性を呈することが見出された。これらの観点の両方において、相加的又は相乗
的な治療効果が存在し得る。同様に重要なことは、サリチル酸及び／又はアリールアルカン酸がここに記載された様にステロール／スタノールと共に誘導体化されるか又は単に組成物中のステロール／スタノールと共に投与されたとき、要望される治療効果を達成するために、選択されたＮＳＡＩＤの、より少ない薬量が必要となると考えられることである。これは、サリチル酸及びアリールアルカン酸が一部を形成するＮＳＡＩＤｓのような多くの抗炎症剤の投与における、報告されている長期にわたる悪影響のため重要である。これらの効果及び他の明白な利点は、以下の記載によって明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
本発明は、以下の限定されない図によって示されるが、それらは：
【図１】図１は、フィトスタノール部分の水酸基と酸クロリドの反応による本発明の一つの誘導体、フィトスタニル−アセチルサリチレートの生成を示す図であり；
【図２】図２は、サリチル酸部分のカルボキシ基と活性化されたフィトスタニルクロリドの反応による本発明の他の誘導体、アセトキシフィトスタニルサリチレートの生成を示す図であり；
【図３】図３は、本発明の一つの誘導体によるコレステロール吸収の阻害を示す棒グラフであり；
【図４】図４は、本発明の一つの誘導体“ＦＤＣ−２−４”の存在下におけるＣＯＸ−１の阻害パーセントを示す棒グラフである。ＳＣ−５６０は、ＩＣ５０が１０ｎＭであるＣＯＸ−１の阻害剤である。ＦＤＣ−２−４は、ＰＬ／Ｃ（ＰＬ＋）で処理され、ＰＬ／Ｃ（ＰＬ−）で処理されない。“ＰＬのみ”の群は、ＰＬ／Ｃのみ（薬剤なし）で処理される。データは１００％活性±標準エラー、ｎ＝３に対する平均吸収の阻害パーセントとして表す。*は０．４５ｍＭ  ＡＳＡに対してｐ＜０．０５を示す。；
【図５】図５は、本発明の一つの誘導体“ＦＤＣ−２−４”の存在下におけるＣＯＸ−２の阻害パーセントを示す棒グラフである。ＤｕＰ−６９７は、ＩＣ５０が５０ｎＭであるＣＯＸ−２の阻害剤である。ＦＤＣ−２−４は、ＰＬ／Ｃ（ＰＬ＋）で処理され、ＰＬ／Ｃ（ＰＬ−）で処理されない。“ＰＬのみ”の群は、ＰＬ／Ｃのみ（薬剤なし）で処理される。データは１００％活性±標準エラー、ｎ＝３に対する平均吸収の阻害パーセントとして表す。*は０．４５ｍＭ  ＡＳＡに対してｐ＜０．０５を示す。；
【図６】図６は、ＦＤＣ２−４と呼ばれる本発明の一つの化合物の４ｍｇ及びポリソルベート８０の１２０ｍｇを含む１ｍＬの水溶液の黒色背景に対するデジタル画像であり；
【図７】図７は、ＦＤＣ−２−４（４ｍｇ／ｍＬ）及びポリソルベート８０（１２０ｍｇ／ｍＬ）を含む水溶液の、ミセルを示すかもしれない、透過電子顕微鏡像であり；
【図８】図８は、１２０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０を伴う４ｍｇ／ｍＬのＦＤＣ−２−４水溶液の粒度分布を示すグラフであり；
【図９】図９は、１２０ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０溶液（コントロール）の粒度分布を示すグラフであり；及び
【図１０】図１０は、本発明の一つの好ましい化合物“ＦＤＣ２−４”の構造である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
下記の詳細な説明は、本発明を実施するにあたり当業者を助けるために提供されている。しかしながら、この詳細な説明は、本発明の範囲を不当に限定するものと解釈されるべきではない。本明細書中で論じられている実施態様の改良及び変形は、本発明の精神及び範囲を離れることなく当業者により行われ得る。
【００２２】
本発明の一つの観点に従って、ステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤの新規な誘導体が提供されるが、それらは自体が、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂
血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療又は予防における使用に適している。本発明の誘導体は一種又はそれ以上の次式：
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化２】
2006503840.tif 000004
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸又はアリールアル
カン酸から誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）により示される。
【００２３】
本発明の開示を通して、用語“誘導体”、“構造体”及び“類似体”及び“化合物”は、新規な単一の化合物群を記述するために同義的に使用される。
【００２４】
本発明のもう一つの観点に従って、ステロール及び／又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤを含む新規な組成物が提供されるが、それらは自体が、ＣＶＤ及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患を含むがそれらに限定されない病気、冠動脈プラーク炎症、細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む炎症の治療又は予防における使用に適している。
【００２５】
ステロール／スタノール
ここで使用される用語“ステロール”は限定することなく全てのステロール、例えば、シトステロール、カムペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール（ジヒドロブカシカステロールを含む）、デスモステロール、カリノステロール、ポリフェラステロール、クリオナステロール、エルゴステロール、コプロステロール、コディステロール、イソフコステロール、フコステロール、クレロステロール、ネルビステロール、ラトステロール、ステラステロール、スピナステロール、コンドリラステロール、ペポステロール、アベナステロール、イソアベナステロール、フェコステロール、ポリナスタステロール、コレステロール及び全ての天然又は合成物及びそれらの誘導体並びに異性体を含む。用語“スタノール”は、全ての天然又は合成物及びそれらの誘導体並びに異性体を含む、飽和した又は水素化されたステロールを称する。ステロール及びスタノールの修飾、例えば側鎖を含む修飾もまた本発明の範囲内に収まると理解される。例えば、本発明の範囲は、明らかに２４ベータ−エチルクロスタノール、２４−アルファ−エチル−２２−デヒドロコルスタノールを含む。明細書を通して不確かで、他に特定されない場合、用語“ステロール”はステロール及びスタノールの両方を包含することもまた理解される。
【００２６】
本発明に従う誘導体形成に使用するステロール及びスタノールは種々の天然の供給源から入手されうる。例えば、それらはコーン油及び他の野菜油の様な植物油（水性植物を含む）、小麦の胚芽油、大豆抽出物、米抽出物、米ぬか、菜種油、ひまわり油、ゴマ油及び魚（及び他の海洋供給源）油の加工から得られうる。それらはまた、例えばエルゴステロールのように菌類から、又は例えばコレステロールのように動物から誘導されうる。従って、本発明は如何なるステロールの供給源にも限定されない。米国特許第４４２０４２７
号明細書は、メタノールのような溶媒を用いる野菜油スラッジからのステロールの調製を教示する。もう一つの方法として、フィトステロール及びフィトスタノールは、トール油のピッチ又は石鹸から得られうるが、それは、本願に参照として組み込む米国特許第５７７０７４９号明細書に記載されているように、林業の副産物である。
【００２７】
好ましい形態において、本発明の誘導体は、天然由来の又は合成された、ベータ−シトステロール、カムペスタノール、シトスタノール、コレステロール又はカムペステロールから形成され、これらのそのようにして形成された誘導体各々は、種々の割合で配送される前に組成物中に混合されうる。他の好ましい形態において、本発明の誘導体は、天然由来の若しくは合成されたシトスタノール又は天然由来の若しくは合成されたカムペスタノール又はこれらの混合物から形成される。本発明の誘導体の最も好ましい形態は、ここで更に述べられている様に、シトスタニルエステル及びカムペスタニルエステル又はコレスタニルエステルの何れかを含む。
【００２８】
サリチル酸／アリールアルカン酸
本発明の範疇で使用される好適な抗炎症剤は以下に列挙したＮＳＡＩＤｓの特定の種類、即ち、動物、特にヒトにおいて抗炎症活性を示すが、如何なるステロイドの構造要素をも有さない剤より選択される。より具体的には、用語“アリールアルカン酸”は、
・アセメタシン、アンフェナクナトリウム、ベンダザック、グルカメタシン、オキサメタシンのようなアリールエタン（アリール酢）酸化合物；
・アルミノプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、オキサプロジンのようなアリールプロパン（アリールプロピオン）酸化合物；
・ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、及びキセンブシンのようなアリールブタン（アリール酪）酸化合物；及び
・アリールペンタン（アリール吉草）酸化合物、
並びにそれらの全ての塩を包含することを意図する。
【００２９】
ここで使用する用語“サリチル酸”は、
・以下の化合物の全ての、合成の及び天然由来の形態の双方を含む、アセチルサリチル酸（ＡＳＡ）、アルミニウムＡＳＡ、ナトリウムＡＳＡ、ＡＳＡグリコレート、サリチル酸、サリチル酸グリコレート、サリシン、サリコルチン、トレムラシン、アセトアミノザロール；バルサラジド、ベノリレート、ゲンチシン酸、イミダゾールサリチレート、リジンサリチレート、メサラミン、モルホリンサリチレート、ナフチルサリチレート、オルサラジン、パルサリミド、フェニルサリチレート、サリチル硫酸、コリンマグネシウムトリサリチレート、及び他の塩、ジフルニサル、エテルサレート、フォスフォサル、ザロール、サルサレート、サラセタミド、サリチルサリチル酸、スルファサラジン、及びオルサラゾンのようなサリチル酸化合物、
並びにそれらの全ての塩を包含することを意図する。
【００３０】
天然由来のサリチレートは、例えば、該技術分野において公知で入手可能な技術により、サリックス  アルバ，Ｄ．プルプレアＬ．，Ｓ．フラギリスＬ．（Ｓａｌｉｘ  ａｌｂａ，Ｓ．ｐｒｕｐｕｒｅａ  Ｌ．，Ｓ．ｆｒａｇｉｌｉｓ  Ｌ．）（落葉性の低木の柳としても知られている）の皮から抽出されうる。
【００３１】
本発明の最も好ましい形態において、ＮＳＡＩＤは、サリチル酸誘導体、より好ましくは、ＡＳＡ又はその誘導体の一つである。
【００３２】
本発明の観点において、誘導体はサリチル酸化合物及びステロール／スタノール部分で形成され、以下に示す構造の一つを有する：
ｉ）
【化３】
2006503840.tif 000005
式中、ＲはＨ又はＣＨ3であり、及びＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択され；
ｉｉ）
【化４】
2006503840.tif 000006
式中、ＲはＨ又はＣＨ3であり、及びＲＲ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択され；
ｉｉｉ）
【化５】
2006503840.tif 000007
式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，
Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択され；及び
ｉｖ）
【化６】
2006503840.tif 000008
式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3，Ｒ4，Ｒ5は独立して、ＯＨ、アセチル基、ハロゲン原子（Ｃｌ，
Ｂｒ，Ｉ，又はＦ）及び１ないし５個の炭素原子を有するアルキル部分からなる群より選択される。
【００３３】
最も好ましい形態において、本発明の誘導体は、次式により示される、フィトスタニルアセチルサリチレート、フィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレート、アセトキシフィトスタニルサリチレート、アセトキシフィトスタニルアセテート、コレスタニルサリチレート、アセトキシコレスタニルサリチレート及びアセトキシフィトスタニルアミノサリチレートからなる群より選択される：
【化７】
2006503840.tif 000009
フィトスタニルアセチルサリチレート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【化８】
2006503840.tif 000010
フィトスタニルサリチレート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【化９】
2006503840.tif 000011
アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【化１０】
2006503840.tif 000012
アセトキシフィトスタニルサリチレート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【化１１】
2006503840.tif 000013
アセトキシフィトスタニルアセテート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【化１２】
2006503840.tif 000014
コレスタニルサリチレート
【化１３】
2006503840.tif 000015
アセトキシコレスタニルサリチレート
【化１４】
2006503840.tif 000016
アセトキシフィトスタニルアミノサリチレート（式中、ＲはＨ又はＣＨ3）
【００３４】
誘導体の生成
ａ）エステルの生成
ステロール及び／又はスタノール及び選択された抗炎症剤からなる新規構造体が形成され得る方法は多い。一つの方法において、選択されたステロール又はスタノール（又はそれらのハロホスフェート、ハロカルボネート又はハロオキサレート誘導体）及び抗炎症剤は、“酸”部分と“アルコール”（フィトステロール）との縮合を許容する反応条件下において一緒に混合される。これらの条件は、酸成分から生成される酸クロリドとアルコール成分が、直接又は鉱酸、硫酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸のような適切な酸触媒の存在下で反応される他の一般的なエステル化反応において使用される条件と同様である。そのようなエステル化反応で一般的に使用される有機溶媒は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランのようなエーテル類、又はベンゼン、トルエン又は類似の芳香族溶媒であり、及び温度は反応を受ける反応物の反応性に依存して室温から上昇された温度まで変化し得る。
【００３５】
好ましい態様において、エステル誘導体の形成方法は、エステル類（例えば酢酸エステル類として）又はエーテル類（例えばメチルエーテル類）として抗炎症剤又はその誘導体の水酸基を“保護”し、その後適切な反応条件の下で、前記保護された抗炎症剤と反応活性なステロール／スタノール（又はそのハロホスフェート、ハロカルボネート又はハロオキサレート）とを縮合させることを含む。一般に、そのような縮合反応は、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、又はベンゼン、トルエン又は類似の芳香族溶媒の様な有機溶媒中で行なわれる。反応成分の性質及び反応性に依存して反応温度は低温（−１５℃）から上昇された温度まで変化し得る。
【００３６】
例として、図１は、本発明の新規誘導体の一つを生産する縮合反応における、“保護された”抗炎症剤（アセチルサリチル酸クロリド）及びフィトスタノールの合成を示す概略図である。
【００３７】
図２の概略図に例示された、別の方法において、目的のエステルの全合成は、スタニル又はステリル成分における活性クロリドを構築し、該クロリドをそれに続いて抗炎症剤のカルボン酸又はカルボキシレート単位と反応させることにより達成されうる。この手段によって、抗炎症剤とステリル／スタニル成分間にカルボキシ“リンカー”が構築される。このリンカーは、好ましくは１ないし５個の炭素原子を含みうる。下記の実施例２において、モノクロロ酢酸は、スタニルモノクロロ酢酸エステルを得るために、スタノール混合物と反応される。同様に、モノクロロプロピオン酸、モノクロロ酪酸、及びモノクロロ吉草酸、又は類似の酸は、要望どおりにリンカーを伸ばすために使用することができる。作用機構は不明であるが、実際、これらのカルボキシリンカーを含む誘導体は、脂質調節（コレステロール低下）において及び有害な炎症の影響の減少において最も有効であることが見出された。
【００３８】
これらの誘導体の生成に対して、選ばれた合成方法が記載されているが、他の多くの手段によって、開示及びクレームされた誘導体を製造することができることは、評価される。一旦特定の化合物が選択されると、通常得られる慣用の技術を用いて合成を行うことは、充分化学分野における当業者の活動範囲内にある。このため、それぞれの及び全てのクレームされた誘導体の完全な合成は記載されない。
【００３９】
可能であれば（即ち、親化合物が遊離水酸基を含むならば）、本発明は開示された誘導体の生物学的に許容される金属、アルカリ土類金属、又はアルカリ金属の塩を包含する。これらの塩は一般に、対応する親化合物よりも、より水溶性であり、そのためインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）及びインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の双方の効率及び評価を増大させる。
【００４０】
本発明の誘導体の塩形成は、フェノール性ＯＨ基を含む何れかの親化合物を一連の塩基（例えば、ナトリウムメトキシド又は他の金属アルコキシド）で処理して、対応するアルカリ金属塩を製造することにより容易に達成することができる。カルシウム、マグネシウム、マンガン、銅、亜鉛等の他の金属塩は、親化合物と適当な金属アルコキシドを反応させることにより生成することができる。それは本発明における好ましい化合物である。
【００４１】
ここで用いる、用語“ＦＤＣ  ２−４”は、図１０に示される構造体であり、スタノール誘導体（ＡＳＡに結合したシトスタノール及びカムペステロールの混合物）である。
【００４２】
使用方法
本発明は：
１）心血管疾患及びその根底にある、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、高血圧症、血栓症、冠動脈疾患及び冠動脈プラーク炎症を含むがそれらに限定されない病気の治療又は予防のための；
２）細菌誘発性炎症、ウィルス誘発性炎症及び急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む一般的な炎症の治療又は軽減ための方法を提供するが、
該方法は、一種又はそれ以上の次式：
ａ）Ｒ2−（ＣＨ2）n−ＣＯ−ＯＲ
ｂ）Ｒ2−Ｒ
ｃ）Ｒ2−ＣＯ−ＣＯ−ＯＲ
ｄ）
【化１５】
2006503840.tif 000017
（式中、Ｒはステロール又はスタノール部分を表し、Ｒ2はサリチル酸及びアリールアル
カン酸より選択されるＮＳＡＩＤから誘導され、及びｎは１ないし５を表す。）を有する、一種又はそれ以上のステロール又はスタノールとサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択される少なくとも一種のＮＳＡＩＤを含有する組成物、或いは、ステロール及び／又はスタノールの一種又はそれ以上の誘導体とサリチル酸及びアリールアルカン酸より選択されるＮＳＡＩＤの無毒且つ治療的に有効な量を動物に投与することを含む方法である。
【００４３】
本発明は更に、これらの適応症のためのいずれの開示化合物の使用をも含む。
【００４４】
“治療的に有効”という用語は、以下に示すゴールの一種又はそれ以上を達成するために投与される化合物の量を特定することを意図する：
ａ）ＣＶＤに一般的に関連する病気の治療；
ｂ）アテローム性動脈硬化症の治療；
ｃ）高コレステロール血症の治療；
ｄ）高脂血症の治療；
ｅ）高血圧症の治療；
ｆ）血栓症の治療；
ｇ）冠動脈疾患の治療；
ｈ）冠動脈プラーク炎症の治療；
ｉ）細菌誘発性の又はウィルス誘発性炎症又は急性疼痛及び外科的処置に伴う炎症を含む全ての炎症の治療；及び／又は
ｊ）ＣＯＸ−１及び／又はＣＯＸ−２活性の阻害。
【００４５】
特に、本発明の化合物は、心血管疾患：高いコレステロールレベル及び炎症の多因子の提示症状に寄与する少なくとも二つの明白な要因に対処することにおいて特に有用であることが見出された。血漿コレステロールレベルと共に、内皮の炎症応答は、どちらもアテローム性動脈硬化症において重要な役割を演じることが現在報告されている。（Ｓｃｉｅｎｃｅ．２９６（５５６６）：２４２−２４５  Ｔａｕｂｅｓ，Ｇ．２００２．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｏｅｓ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ｃｕｔ
ｔｏ  ｔｈｅ  ｈｅａｒｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｔｔｅｒ？）従って、同時にコレステロール吸収を低下させ、その結果血清コレステロールの低下させ及び同時に疾患の進行の一端として付随し及び認められている炎症を減少させる化合物を投与することは非常に有利である。今までに、この有益な二重の効果を達成した化合物は無かった。
【００４６】
ここに記載された望ましい効果は、多くの異なった手段において達成しうる。本発明の化合物及び組成物は、薬剤、栄養補助食品、食品、飲料等との併用のために利用できる如何なる慣用の手段によっても投与しえる。
【００４７】
望まれる効果を達成するに必要な化合物又は組成物の用量は、当然、選択された特定の化合物又は組成物、投与形態及び患者の状態のような多くの要因に依存する。
【００４８】
本発明の化合物及び組成物は、それ自体、または適当なキャリア又は賦形剤を混合した
医薬組成物により患者に投与することができる。
【００４９】
本発明の実施のためにここで開示されている化合物及び組成物を全身投与のための好適な投与量に配合するための医薬的に許容されるキャリアの使用は、本発明の範囲内である。適当なキャリアの選択及び好適な製造実施により、本発明の化合物及び組成物、特に、それらの溶液として配合されたものは、静脈注射のように非経口で投与される。該化合物及び組成物は、該技術分野においてよく知られた医薬的に許容されるキャリアを用いて経口投与のための好適な投与量に容易に配合することが出来る。そのようなキャリアは、治療される患者による経口摂取のために、本発明の化合物及び組成物が、錠剤、丸薬、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として配合されることを可能とする。
【００５０】
本発明の化合物の一種又はそれ以上を含有する医薬組成物には、有効成分が意図した目的を達成するための有効な量を含む組成物が包含される。有効な量の決定は、特にここに提供された詳細な開示に照らして、十分当業者の能力内にある。
【００５１】
有効成分に加えて、これらの医薬組成物は、医薬的に使用することができる製剤への有効化合物の処理を促進する賦形剤及び助剤を含む、好適な医薬的に許容されるキャリアーを含んでいてもよい。経口投与のために配合された製剤は、錠剤、糖衣錠、カプセル、又は溶液の形態であってよい。
【００５２】
本発明の医薬組成物は、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣製造、粉末化、乳化、カプセル化、取り込み又は凍結乾燥の工程の方法のようなそれ自身知られた方法で製造してもよい。
【００５３】
非経口投与のための医薬処方は、水溶解型の有効化合物の水溶液を含む。加えて、該有効化合物の懸濁液は、適当な油状の注射懸濁液として調製してもよい。好適な親油性溶媒またはビヒクルは、ゴマ油のような脂肪油、又はオレイン酸エチル又はトリグリセリドのような合成脂肪酸エステル、又はリポソームを含む。水性の注射懸濁液は、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトール、又はデキストランのような懸濁液の粘性を増加させる物質を含んでいてもよい。所望により、該懸濁液は、また、高濃度溶液の製剤を可能とする好適な安定剤又は該化合物の溶解性を増強する添加剤を含んでいてもよい。
【００５４】
経口使用のための医薬製剤は、該有効化合物と固体賦形剤を混合し、所望により、得られた混合物を粉砕し、もし望むならば好適な助剤を加えた後、顆粒の混合物を処理して錠剤又は糖衣核を得ることにより、得ることが出来る。好適な賦形剤は、ラクトース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を含む。もし望むならば、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸若しくはアルギン酸ナトリウムのようなその塩、のような崩壊剤を加えてもよい。
【００５５】
糖衣核は、好適な被覆剤を与えられる。この目的のために、濃縮された糖溶液を用いてもよいが、それは所望によりアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー溶液及び好適な有機溶媒又は溶媒混合物を含んでいてよい。染料又は顔料は、有効化合物量の識別又は異なった組み合わせを特徴付けるために、錠剤又は糖衣被覆剤に加えてもよい。
【００５６】
経口的に用いることができる医薬製剤は、ゼラチンでできた押し込み型のカプセルを含み、同様に、ゼラチンとグリセロール又はソルビトールのような可塑剤でできたソフトな
密閉カプセルを含む。押し込み型のカプセルは、乳糖のような充てん剤、デンプンのような結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウムのような滑剤及び所望により安定剤と混合して、有効成分を含むことができる。ソフトカプセルにおいて、該活有効合物は、脂肪油、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコールのような好適な液体中に、溶解又は懸濁されてよい。加えて、安定剤を付加してもよい。
【００５７】
経口液状製剤は、例えば、エマルジョン、シロップ、又はエリキシルの形態であってよく、或いは、使用前の、水又は他の好適なビヒクルを用いた再構築のための乾燥生成物として提供されてもよい。そのような液状製剤は、例えば、ソルビトール、糖蜜、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、水素化食用脂のような懸濁剤；例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタン、又はアカシアのような乳化剤；アーモンド油、精留化されたヤシ油、グリセリン、プロピレングリコール、又はエチルアルコールのエステルのような油状エステル類のような非水性ビヒクル（食用脂を含む）；例えば、メチル若しくはプロピルのｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル又はソルビン酸のような防腐剤；及び所望ならば、慣用の香料又は着色剤；のような慣用の添加剤を含んでもよい。
【００５８】
ステロール／スタノール部分の乏しい水溶性のゆえに、本発明の化合物は、化合物に水溶性又は更なる脂溶性を与える賦形剤に配合されて、実質的に完全に溶解されうる。
【００５９】
好ましくは、本発明の化合物は、選択された溶解促進剤に添加され、無毒性の有機溶媒と混合され、化合物を溶解し溶媒を除去するために、過熱、超音波処理、及びエバポレーションの一つ又はそれ以上の工程に付される。
【００６０】
本発明の化合物（実質的に親油性である）を水溶液中に溶解することが望まれる場合、選択された溶解促進剤が１２又はそれ以上の親水性／親油性バランス（“ＨＬＢ”）を有することが好ましい。本発明の化合物を脂肪又は油を基礎とする媒体のような脂質に溶解することが望まれる場合、選択された溶解促進剤が８又はそれ以下のＨＬＢを有することが好ましい。ＨＬＢ値は、その親油性傾向、即ち、分子における極性及び非極性基の相対比における分子の相対的な溶解力を示す。
【００６１】
好ましい水溶性及び脂溶性促進のための溶解促進剤としては、ポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−８０及びポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）−６０（それぞれ登録商標ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）−８０（登録商標）及びツイーン（Ｔｗｅｅｎ）−６０で販売されている）のような界面活性剤、ポリ（エチレンオキシド）−ポリ（プロピレンオキシド）トリ−ブロックコポリマー界面活性化剤（プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（登録商標）例えば：プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｐ−８５、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１２７及びプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ−１０８、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）含有非イオン性界面活性剤）並びに一般的にはゲルシア（Ｇｅｌｃｉｒｅ：登録商標）で、具体的にはゲルシア（Ｇｅｌｃｉｒｅ）４４／１４のようなマクロゴールグリセロール（炭素原子数８ないし１８のグリセリド；炭素原子数８ないし１８のエトキシ化された脂肪酸）を含む。Ｇｅｌｃｉｒｅ４４／１４において、４４は摂氏における融点を、及び１４はＨＬＢ値を示す。
【００６２】
有機溶媒は、全てのハロゲン化された炭化水素類及び分岐鎖又は直鎖の炭素原子数３ないし５の脂肪族アルコール類を含むが、これらに限定されない通常使用される何れかの非毒性薬剤より選択されうる。最も好ましくは、有機溶媒はプロパノール、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、ペンタノール、イソペンタノール、クロロホルム、ジクロロメタン（メチレンクロリド）及びジメチルスルホキシド（“ＤＭＳＯ”）からなる群より選択される。
【００６３】
選択された特定の溶解促進剤及び有機溶媒に依存して、ここで示される本発明の化合物を溶解するために溶液を加熱することが必要となりうる。そのような状況下において、該溶液は約２５ないし７５℃、より好ましくは約５０ないし７０℃、最も好ましくは６５℃周辺、の温度に加熱されうる。加熱、及び潜在的に有害な高温への暴露の代替案として、超音波が本発明の化合物を選択された有機溶媒中へ加えるために使用されうる。
【００６４】
有機溶媒は、窒素エバポレーション又はロータリーエバポレーションを含むがこれらに限定しない如何なる好適な様式のエバポレーションによっても除去されうる。
【００６５】
操作において、本発明化合物を水性の又は脂質を基礎とするビヒクル中へ溶解させる好ましい二つの様式は以下の通りである。：
好ましい様式Ａ：
１）１種又はそれ以上の本発明の化合物は、選択された溶解促進剤、好ましくはポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０と混合され；
２）有機溶媒、好ましくはイソプロパノールが加えられ；
３）該化合物と溶解促進剤は加熱（好ましくは約６５℃迄）、超音波又は他の溶解方法により溶媒中へ溶解され；
４）該有機溶媒はエバポレートされ；及び
５）水が加えられ、溶液は何れかの好適な手法により十分に渦流化又は混合される。
【００６６】
好ましい様式Ｂ：
１）１種又はそれ以上の本発明の化合物は、選択された溶解促進剤、好ましくはポリソルベート（ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０と混合され；
２）有機溶媒、好ましくはクロロホルムがほぼ室温下で加えられ及び混合され；
３）該有機溶媒は、好ましくはロータリーエバポレーションでエバポレートされ；及び
６）水が加えられ、溶液は何れかの好適な手法により十分に渦流化又は混合される。
【００６７】
本発明の他の形態において、本発明の化合物及び組成物は、限定なしに、以下のものを含む食品、飲料及び栄養補助食品から摂取され得る。
１）酪農製品−例えば、チーズ、バター、ミルク及び他の酪農飲料、スプレッド及び酪農混合物、アイスクリーム及びヨーグルト、２）脂肪をベースとする製品−例えば、マーガリン、スプレッド、マヨネーズ、ショートニング、料理及び揚げ油、及びドレッシング、３）シリアルをベースとする製品−穀類からなる（例えば、パン及びパスタ）もの、これらの物品は、調理、焼き、又は他の加工がされているにかかわらない、４）菓子類−例えば、チョコレート、キャンディ、チューインガム、デザート、非酪農トッピング（例えば、クール・フィップ，登録商標：Ｃｏｏｌ・Ｗｈｉｐ）、シャーベット、糖衣及び他の詰め物、５）飲料−アルコール又は非アルコール飲料であり、そしてコーラ及び他のソフト飲料、ジュース、ダイエット補助食品並びに商標名ブースト（Ｂｏｏｓｔ）及び商標名エンシュア（Ｅｎｓｕｒｅ）の下で販売されるもののような食事代替飲料を含む、及び６）種々雑多な製品−卵及び卵製品、加工食品、例えば、スープ、調理済パスタソース、調理済食事等を含む。
【００６８】
本発明の誘導体は、混合、浸出、注入、配合、分散、乳化、浸漬、噴霧及び混練のような技術により、直接かつさらなる変性なしに、食品、栄養補助食品又は飲料に混入され得る。さもなくば、該誘導体は、摂取前に消費者により食品上に又は飲料中に直接適用され得る。これらは、配送の単純かつ経済的な様式である。
【実施例】
【００６９】
本発明を以下の非限定的実施例によって説明する。
【００７０】
実施例１  フィトスタニルアセチルサリチレートの合成
【化１６】
2006503840.tif 000018
Ｒ＝Ｍｅ，Ｈ
（ｉ）アセチルサリチル酸クロリドの合成
アセチルサリチル酸（１ｇ）をオキザリルクロリド（５ｍＬ）中に懸濁し、該混合物を１時間還流した。過剰のオキザリルクロリドを蒸留により除去し、残渣を一晩真空下で乾燥し、黄色のワックス（１．１ｇ）を得た。
（ｉｉ）フィトスタニルアセチルサリチレートの合成
上記で合成したクロリドに、スタノール混合物（２ｇ、カムペスタノール：３６．４％ｗ／ｗ；シトスタノール：６２．３％ｗ／ｗ）及びピリジン（１０ｍＬ）を加え、混合物はそれから室温で一晩撹拌した。赤色溶液を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、濾過し、固体（２．１ｇ）を回収した。粗生成物をシリカゲルカラムに装填し、石油（３０−５０℃）：ＥｔＯＡｃ（１００：３）で溶離し、白色粉末（１．５ｇ、収率５５％）を得た。
【００７１】
実施例２  アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレートの合成
【化１７】
2006503840.tif 000019
Ｒ＝Ｍｅ，Ｈ
（ｉ）フィトスタニルモノクロロアセテートの合成
モノクロロ酢酸（１０ｍＬ）中のスタノール混合物（４ｇ、カムペスタノール：３６．
４％ｗ／ｗ；シトスタノール：６２．３％ｗ／ｗ）を撹拌下、１２０℃で３時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物に水（５０ｍＬ）を加え、沈殿物を回収し、水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、真空下で乾燥することによりフィトスタニルモノクロロアセテートを白色固体（４．５ｇ、収率９５％）として得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：４．７５（１Ｈ，ｍ）、４．００（２Ｈ，ｓ）
ＭＳ（ＥＩ）：４９２（Ｍ+シトスタノールエステル）、４７８（Ｍ+カムペスタノールエステル）
（ｉｉ）アセトキシフィトスタニルアセチルサリチレートの合成
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＯ−アセチルサリチル酸ナトリウム（０．５ｇ）を上記で合成したフィトスタニルモノクロロアセテート（１．５ｇ）に加え、混合物を撹拌下、１４０℃で１時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、灰色がかった白色の固体を回収し、乾燥し秤量した（１．８ｇ、収率９３．４％）。粗物を酢酸エチル  ヘキサン＝１００：５の溶離液を用いてシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し、白色粉末（１．２ｇ）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：８．１２（１Ｈ，ｄ）、７．５５（１Ｈ，ｔ）、７．３０（１Ｈ，ｔ）、７．１０（１Ｈ，ｄ）、４．８０（１Ｈ，ｍ）、４．７５（２Ｈ，ｓ）
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１６９．５８、１６７．０２、１６３．７１、１５０．８
５、１３４．１９、１３１．９６、１２６．０２、１２３．８３、１２２．５６、７５．２９、６１．３９
ＭＳ（ＥＩ）：６３６（Ｍ+シトスタノールエステル）、６２２（Ｍ+カムペスタノールエステル）、５９４（Ｍ+ｓ−１５）、５８０（Ｍ+ｃ−１５）
ＩＲ（ｃｍ-1）：２９３４．５（Ｃ−Ｈ）、１７６４．０３（Ｃ＝Ｏ）、１７３１．０８（Ｃ＝Ｏ）
【００７２】
実施例３  アセトキシコレスタニルサリチレートの合成
【化１８】
2006503840.tif 000020
（ｉｉｉ）コレスタニルモノクロロアセテートの合成
モノクロロ酢酸（１０ｍＬ）中のコレスタノール（４ｇ）を撹拌下、１２０℃で３時間加熱した。室温まで冷却した後、反応混合物に水（５０ｍＬ）を加え、沈殿物を回収し、水（１０ｍＬ×２）で洗浄し、真空下で乾燥することによりコレスタニルモノクロロアセテートを白色固体（４．５ｇ、収率９６％）として得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：４．７５（１Ｈ，ｍ）、４．００（２Ｈ，ｓ）
（ｉｖ）アセトキシコレスタニルアセチルサリチレートの合成
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のＯ−アセチルサリチル酸ナトリウム（０．５ｇ）を上記で
合成したコレスタニルモノクロロアセテート（１．５ｇ）に加え、混合物を撹拌下、１４０℃で１時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、ヘキサン（１５０ｍＬ）で抽出し、硫酸ナトリウム（２０ｇ）で乾燥し、濃縮して溶媒を除去し、ワックス様の固体を回収した。乾燥後、粗生成物（２．８ｇ）をＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ溶媒中で再結晶し、白色粉末（２．２ｇ）を得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１０．４（１Ｈ，ｓ）、７．９０（１Ｈ，ｄ）、７．５０（１Ｈ，ｔ）、７．００（１Ｈ，ｄ）、６．９０（１Ｈ，ｔ）、４．８０（１Ｈ，ｍ）、４．８０（２Ｈ，ｓ）
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１６９．３、１６６．８、１６１．７１、１３６．１、１
３０．２、１１９．３、１２６．０２、１１７．６、１１１．８、７５．５、６１．４
ＭＳ（ＥＩ）：５６６（Ｍ+）
ＩＲ（ｃｍ-1）：２９３０．５（Ｃ−Ｈ）、１７５９（Ｃ＝Ｏ）、１６８７．４（Ｃ＝Ｏ）
【００７３】
実施例４  アセトキシフィトスタニルサリチレートの合成
【化１９】
2006503840.tif 000021
Ｒ＝Ｈ，Ｍｅ
（ｖ）アセトキシフィトスタニルサリチレートの合成
乾燥ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のサリチル酸ナトリウム（０．５ｇ）を上記で合成したフィトスタニルモノクロロアセテート（１．５ｇ）に加え、混合物を撹拌下、１４０℃で１時間加熱した。室温まで冷却した後、混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、灰色がかった白色の固体を回収し、乾燥し秤量した（１．８ｇ、収率９３．４％）。メタノール中から再結晶した後、白色粉末を得た（１．５ｇ）。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１０．４（１Ｈ，ｓ）、７．９０（１Ｈ，ｄ）、７．４６（１Ｈ，ｔ）、７．００（１Ｈ，ｄ）、６．９０（１Ｈ，ｔ）、４．８０（１Ｈ，ｍ）、４．８０（２Ｈ，ｓ）
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１６９．３、１６６．８、１６１．７、１３６．１、１３
０．３、１３１．９６、１１９．３、１１７．６、１１１．７、７５．５、６１．４
ＭＳ（ＥＩ）：５９４（Ｍ+シトスタノールエステル）、５８０（Ｍ+カムペスタノールエステル）
ＩＲ（ｃｍ-1）：２９３４．０（Ｃ−Ｈ）、１７５５．９（Ｃ＝Ｏ）、１６８０．６（Ｃ＝Ｏ）
【００７４】
実施例５  アセトキシフィトスタニルアセテートの合成
【化２０】
2006503840.tif 000022
Ｒ＝Ｍｅ，Ｈ
該製法は、サリチル酸ナトリウムの代わりに酢酸ナトリウムを用いた以外は、実施例４に示したのと同様だった。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：４．９０（１Ｈ，ｍ）、４．５２（２Ｈ，ｓ）、２．１５（３Ｈ，ｓ）
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１７０．３、１６７．３、７５．１、６０．９、５６．４
、５６．１、５４．１
ＭＳ（ＥＩ）：５１６（Ｍ+シトスタノールエステル）、５０２（Ｍ+カムペスタノールエステル）
ＩＲ（ｃｍ-1）：２９３３．０（Ｃ−Ｈ）、１７６５．９（Ｃ＝Ｏ）、１７４１．８（Ｃ＝Ｏ）
【００７５】
実施例６  アセトキシフィトスタニルアミノサリチレートの合成
【化２１】
2006503840.tif 000023
Ｒ＝Ｈ，Ｍｅ
該製法は、サリチル酸ナトリウムの代わりに４−アミノサリチル酸ナトリウムを用いた以外は、実施例４に示したのと同様だった。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１０．６（１Ｈ，ｓ）、７．６８（１Ｈ，ｄ）、６．３０（２Ｈ，ｓ）、４．７８（１Ｈ，ｍ）、４．７２（２Ｈ，ｓ）、４．１０（２Ｈ，ｂｒ）
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：１６９．０、１６７．３、１６３．７、１５３．４、１３
２．０、１０７．２、１０２．４、１００．９、７５．３、６０．９、５６．４、５６．１、５４．１
ＭＳ（ＥＩ）：６０９（Ｍ+シトスタノールエステル）、５９５（Ｍ+カムペスタノールエステル）
ＩＲ（ｃｍ-1）：３３７７．２（Ｎ−Ｈ）、２９３３．１（Ｃ−Ｈ）、１７４２（Ｃ＝Ｏ）、１６６０（Ｃ＝Ｏ）
【００７６】
実施例７  ラットにおけるコレステロール低下試験
成熟した雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（〜３５０ｇ）を１２時間の明（０７：００−１９：００）／暗周期を維持し、実験開始前に実験用標準食餌及び水を適宜与えた。
一晩絶食（１２−１６ｈ）後、ラットを２群に分けた：
コントロール（ｎ＝３）及び新規化合物（“ＦＤＣ−２−４”として指定されるアセトキシフィトスタニルサリチレート）群（ｎ＝３）。両群に、０７：００に単回投与の経口強制飼養を施した。血液採取は、強制飼養の１０時間後に心臓穿刺により行った。動物は強制飼養後絶食された。実験中、水の摂取は無制限に許された。心臓穿刺により得られた血液はＥＤＴＡで被覆されたチューブで集められ、遠心分離機にかけられた。血漿試料は、放射活性により［３Ｈ］コレステロールを分析した。
成熟した雄のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットは、
−  ２０ｍｇ／ｋｇ  ステロール／スタノール類似体
―  １ｍｇ  非標識コレステロール
−  イントラリピッド１０％を伴う乳剤における２５μＣｉ［３Ｈ］コレステロール
を含む経口配合剤における本発明の１種の誘導体が与えられた。
動物は経口強制飼養が行われた１２−１６時間前及び１０時間後に絶食された。血液試料は、経口強制飼養の１０時間後に心臓穿刺により集められた。遠心分離により得られた血漿試料は［３Ｈ］コレステロールを分析され、結果は腸におけるコレステロール吸収の阻害パーセンテージとして表した。
フィトステロール−［３Ｈ］コレステロール経口強制飼養配合物の成果
外因性の放射性標識コレステロール［２５μＣｉ（おおよそ２２７ｍｇ）を溶解させるために１０％イントラリピッド懸濁液（カビファルマシア（Ｋａｂｉ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ））を用いた。
イントラリピッドは熱量及び必須脂肪酸の供給源として投与のために調製された無菌の非発熱性脂肪乳剤である。それは１０％大豆油（中性のトリグリセリド及び不飽和脂肪酸の混合物よりなる精製された天然物）、１．２％卵黄のリン脂質、２．２５％のグリセリン及び水から作られる。更に、水酸化ナトリウムが、最終生成物のｐＨが８．０；ｐＨ範囲が６．０ないし８．９となるようｐＨを調整するために加えられる。主成分脂肪酸は、リノール酸（５０％）、オレイン酸（２６％）、パルミチン酸（１０％）、リノレン酸（９％）及びステアリン酸（３．５％）である。各動物は水又は他の適当な溶媒に溶解された２０ｍｇ／ｋｇ体重の試験物質を受けた。同最終体積のビヒクルがコントロール群におけるラットに投与された。
心臓穿刺
血液試料は心臓穿刺により経口強制飼養の１０時間後に集められ、血漿は４０℃及び４，０００ｒｐｍでの１５分間の遠心分離により調製された。血漿試料は放射活性により［３Ｈ］コレステロールを分析され、新規なステロール／スタノール化合物の効力は、コン
トロールと比較したコレステロール吸収の阻害パーセントとして報告した。
図３は、ＶＰ４と呼ばれる別の効果のあるコレステロール吸収阻害剤（アスコルビン酸エステル）と比べたＦＣＤ−２−４及びコントロール群間の比較を示す。該結果は、ＦＤＣ−２−４が明らかにコントロール及びＶＰ４の両方よりも優れていることを明確に示す。ＦＣＤ−２−４が減少させたコレステロールの吸収の程度は驚くべきものであり、予想外であった。
【００７７】
実施例８  ＦＤＣ−２−４によるシクロオキシゲナーゼ阻害
本試験の目的は、膵リパーゼ／コリパーゼで処理されたアセトキシフィトスタニルサリチレート誘導体（“ＦＣＤ−２−４”として指定される）がシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）活性を阻害することができるか否かを決定することである。
要約すると、ＦＣＤ−２−４は１：１の比率の豚の膵リパーゼ及びコリパーゼ（ＰＬ／Ｃ）で処理された。シクロオキシゲナーゼ阻害は比色（羊）ＣＯＸ阻害スクリーニング試験を用いて決定した。アラキドン酸からプロスタグランジンＨ2への変換は比色反応によ
り観察した。ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、ｐＨ８の１μＭヘマチン／０．１Ｍトリス塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）緩衝液中に０、０．４５、４．５−μＭ濃度で構成された。反応は１００−μＭのアラキドン酸及び１００−μＭのテトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン（ＴＭＰＤ−比色分析の基質）の添加により開始された。着色生成物の光学濃度は６２０ｎｍにおいて決定した。アセチルサリチレートをすべての実験の実薬対照として使用した。
膵リパーゼ／コリパーゼ処理：
該酵素反応は、ＦＤＣ−２−４の非存在又は存在下で、最終の体積５０ｍＬの試験緩衝液（３０ｍＭトリス塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）、ｐＨ８、１．０ｍＭ  ＣａＣｌ２、４ｍＭタウロデオキシコレート）、０．３１２ｍＭトリオレイン中において行った。２．５ｍｇの豚の膵リパーゼ及び２．５ｍｇの豚のコリパーゼを添加する前に、溶液を２分間渦流処理し、５分間超音波処理した。該反応は室温で２時間熟成した。
シクロオキシゲナーゼの阻害：
阻害は比色（羊）ＣＯＸ阻害スクリーニング試験（カイマンケミカルズ（Ｃａｙｍａｎ
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ））を用いて決定した。アラキドン酸からプロスタグランジンＨ２への変換は比色反応により観察した。ＣＯＸは５分間阻害剤に暴露した。反応は１００−μＭのアラキドン酸及び１００−μＭのテトラメチル−ｐ−フェニレンジアミン（ＴＭＰＤ−比色分析の基質）の添加により開始された。着色生成物の光学濃度は開始の５分後に、６２０ｎｍにおいて決定した。ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、ｐＨ８の１μＭヘマチン／０．１Ｍトリス塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）緩衝液中に０、０．４５、４．５−μＭ濃度で構成された。ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、ＣＯＸ阻害の決定において、非ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４及びコントロール（ＦＤＣ−２−４未添加）と比較された。アセチルサリチレート（ＡＳＡ）をすべての実験の実薬対照として使用した。全ての処理群における統計分析は分散分析（ＡＮＯＶＡ）及びテューキー多重比較（Ｔｕｋｅｙ  Ｐｏｓｔｈｏｃ  ｔｅｓｔｓ）を用いて行った。
ＣＯＸ阻害の決定において、ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、非ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４及びコントロール（ＦＤＣ−２−４未添加）と比較された。ｎ＝３において、０．４５μＭのＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、非ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４（２０％）及びコントロール（５％）に比較してＣＯＸ−１活性を６９％阻害した。ｎ＝３において、０．４５μＭのＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、非ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４（６４％）及びコントロール（５％）に比較してＣＯＸ−２活性を８８％阻害した。
図４及び５は、ＦＤＣ−２−４が、シクロオキシゲナーゼの両イソフォーム（ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２）の阻害において効果的であることが観察されたことを示している。ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４は、非ＰＬ／Ｃ処理ＦＤＣ−２−４よりも強力なシクロオキシゲナーゼ阻害を示した。これらの発見は、ＦＤＣ−２−４が膵リパーゼ／コリパーゼにより活性化される効果的な抗炎症剤であることを示唆する。
更なる詳述無しに、前述は充分に本発明を説明したので、他者は、現在の又は未来の知識を適用することにより、ここで述べられた及びクレームされた種々の条件下での使用のために本発明を適合させうる。
【００７８】
実施例９  溶解促進剤を用いる、４ｍｇ／ｍＬないし８ｍｇ／ｍＬ水溶液への水に不溶のＦＣＤ−２−４（フィトスタニル−Ｏ−アセチルサリチロキシアセテートの化学表記及び６３１．６６ｇ／ｍｏｌの分子量を有するフィトスタニル類似体）の配合
一般法：試験されるＦＣＤ−２−４及び溶解促進剤は好適な溶媒を用いて；もし必要なら熱を加えて溶解した。該有機溶媒は窒素エバポレーションにより除去し、試験管へ水を加えた。該混合物は混濁又は粒子を視覚的に検査された。作製された配合物は、光学顕微鏡、粒子径測定、ゼータ電位測定及び透過型電子顕微鏡を用いて特徴付けられた。
・具体的方法
種々の有機溶媒におけるＦＣＤ  ２−４の溶解性評価
１．窒素エバポレーターを作動させ、温度を６５℃に設定した（窒素外気未使用−該窒素エバポレーターは、始めに温水浴として使用した。）。
２．４ｍｇのＦＤＣ  ２−４を１６×１００ｍｍ試験管に秤り取った。同じ試験管内にガラスピペットを用いて１２０ｍｇのツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０を秤り取った。
３．コントロール調製のために１２０ｍｇのツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０を１６×１００ｍｍ試験管内へ秤り取った。−（コントロールにはＦＤＣ  ２−４は無い）
４．５ｍＬのピペットを用いて、７ｍＬのイソプロパノールをそれぞれの試験管へ添加した。該試験管はパラフィルムでカバーし、充分に渦流化した。
５．該試料を窒素エバポレーターに設置し、フタを閉めた。−該窒素エバポレーターは、始めに６５℃で温水浴として使用した。
６．約４５分−６０分後、ＦＤＣ  ２−４が、時間は様々だったが（この時間枠以内に試験管を１回又は２回、渦流化すると、溶解工程が加速する傾向がある）イソプロパノールに溶解した。
７．一度、視覚的な観察によりＦＤＣ  ２−４が溶解していることを確認し、試験管からパラフィルムを取り除き、窒素エバポレーターの温度を６０℃に下げ、窒素外気を開けた。窒素外気の圧力は、溶液が飛び出さないように最初約３０分間は約７ｐｓｉであった。約３０分後、該ｐｓｉを１５−２０に増加した。該試料は総合して約２．５時間窒素エバポレーターに放置した。
８．２．５時間後、窒素外気バルブを閉じたが、窒素エバポレーターは、６０℃に維持した。該試料を窒素エバポレーターに放置した。一つの試料を取り、直ちに１ｍＬの水を加えた。該試料を直ちに溶解するまで渦流化した。
・混濁又は粒子を裸眼により観察した
・光学顕微鏡、粒子径及びゼータ電位測定（ゼータサイザー（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ）３０００ＨＳ使用）及び透過型電子顕微鏡の遂行
表１：種々の溶媒におけるＦＤＣ  ２−４の溶解性の概括
【表１】
2006503840.tif 000024
表２：ＦＤＣ  ２−４を水性配合剤へ溶解するために使用した種々の溶解促進剤の概括
【表２】
2006503840.tif 000025
結果：多種の界面活性剤及び有機キャリア溶媒の試験の後、最も成功した配合剤をポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０を用いて作製した。ＦＤＣ−２−４の４ｍｇ及び８ｍｇを含む溶液は、各々、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の１２０ｍｇ及び２４０ｍｇ（配合剤のｍＬ毎）を用いて配合された。
溶液濃度：
ＦＤＣ  ２−４の４ｍｇ及びポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の１２０ｍｇかＦＤＣ  ２−４の８ｍｇ及びポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の２４０ｍｇのどちらかを含む１ｍＬ配合剤を調製した。そのため、該配合物はＦＤＣ  ２−４とポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の１：３０の質量比を有した。
裸眼による観察：
該溶液は淡黄色を伴う透明に見えた。沈殿物又は粒子は存在していなかった。コントロール試料及びＦＤＣ  ２−４配合剤は同じに見えた。図６は、黒色背景に対して透明溶液を示す、ＦＤＣ  ２−４の４ｍｇ及びポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の１２０ｍｇを含む１ｍＬ水溶液のデジタル画像を示す。
４０ｘ及び１００ｘ解像度の光学顕微鏡：
４０ｘ及び１００ｘ倍率の顕微鏡は選択されたＦＤＣ  ２−４配合剤とコントロール試料の間の粒状物の量又は形式において何も違わないことを明らかにした。
粒子径の測定：
配合剤における粒子径はゼータサイザー（Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ）３０００ＨＳにおいて測定された。４ｍｇ／ｍＬ配合剤における体積による平均ピーク分析（平均粒子径）は４．３ｎｍだった。このことは、図７に示されたように、本発明の化合物及び選択された溶解促進剤、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０がミセルを形成することを示しえる。１２０ｍｇ／ｍＬポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０コントロールの平均粒子径は５．７ｎｍだった。図８及び図９において、ＦＤＣ  ２−４配合剤とコントロール試料間の粒度分布の類似性に気が付く。
結論：本発明の化合物は水溶液へ十二分に溶解させうる。
【００７９】
実施例１０  実施例９の配合物の特徴付け及びラットを用いたｉｎ  ｖｉｖｏコレステロール摂取試験の遂行
配合物は、ＦＤＣ  ２−４存在下におけるコレステロール摂取を測定するためにラットに投与された。
ラット絶食追跡モデル法の概要：
１．ＦＤＣ  ２−４の４ｍｇ、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０の１２０ｍｇ、及び水１ｍＬを含む三つの配合剤を調製した。
２．ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０（ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）（登録商標）８０）の１２０ｍｇ及び水１ｍＬのみを含む三つのコントロール試料を調製した。
３．該試料は放射標識及び非標識コレステロールが混ぜられ、雄の絶食したＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットに経口強制飼養により与えられた。
４．該ラットは、１０時間後に心臓穿刺により解剖され、その血液を採取した。
５．［3Ｈ］コレステロール（放射標識コレステロール）の血漿中濃度を測定した。
結果：
表３：雄の絶食したＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラットへのツイーン（Ｔｗｅｅｎ）８０中の［3Ｈ］コレステロール、非標識コレステロール、及びＦＤＣ  ２−４の共−投与
の経口単回強制飼養の１０時間後における［3Ｈ］コレステロールの血漿中濃度
【表３】
2006503840.tif 000026
**ツイーン８０コントロール（ツイーンコントロールは１２０及び２４０ｍｇ量の混合物）に対してｐ＜０．０５。ラットの体重は３６０−４００ｇの間。
ラットへの４ｍｇ／ｍＬ配合剤の投与の結果、コントロールに比較してコレステロール摂取の４５．６％が阻害された。
４ｍｇ／ｍＬ−８ｍｇ／ｍＬの濃度数値は、本発明者らの知る類似の水溶性フィトスタノールが１０ｍｇ／ｋｇ−２０ｍｇ／ｋｇにおいて最適のコレステロール阻害を示す（“ＦＭ−ＶＰ４”）ので選択された。ラットの体重がおおよそ４００ｇであるため、このことが４ｍｇ−８ｍｇの薬量に関係している。ラット絶食追跡モデルにおいて、薬剤の１ｍＬがラットに投与された；そのため、４ｍｇ／ｍＬ−８ｍｇ／ｍＬＦＤＣ  ２−４水性配合剤が作製された。
【図１】
2006503840.tif 000053
【図２】
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【図３】
2006503840.tif 000055
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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