(57)【要約】本発明は、アルツハイマー病のための治療的または予知的なアッセイ方法を提供する。本発明の方法は、体液サンプルまたはそれに由来する試験用サンプルをホロトランスコバラミンＩＩについて分析することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病のための診断的（ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）または予知的（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ）アッセイ方法であり、体液サンプルまたはそれに由来する試験用サンプルをホロトランスコバラミンＩＩについて分析する（ａｓｓａｙｉｎｇ）ことを含む方法。
【請求項２】
前記体液サンプルが血液サンプルである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記試験用サンプルが血清サンプルである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記体液または試験用サンプルを、全ビタミンＢ１２についても分析する請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記体液または試験用サンプルを、全ホモシステインについても分析する請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記体液または試験用サンプルを、葉酸（ｆｏｌａｔｅ）についても分析する請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
血清中のホロトランスコバラミンＩＩ濃度７０ｐＭ以下がアルツハイマー病を示すと分類する請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の方法を行なうために使用するアッセイ用キット（ａｓｓａｙ ｋｉｔ）であり、前記キットが、
トランスコバラミンＩＩまたはホロトランスコバラミンＩＩの固定化された（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）または固定化可能な（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｂｌｅ）特異的結合リガンド（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ）と、
任意に、濃度が分かっているホロトランスコバラミンＩＩ溶液と、
任意に、ビタミンＢ１２をホロトランスコバラミンＩＩから放出（ｒｅｌｅａｓｅ）させるための放出剤（ｒｅｌｅａｓｅ ａｇｅｎｔ）と、
任意に、標識されたリガンドと、そして、
アルツハイマー病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ）またはアルツハイマー病の程度（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ｓｅｖｅｒｉｔｙ）を年齢の関数として示すホロトランスコバラミンＩＩ濃度の閾値（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）のカリブレーター（ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ）を含むキット。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の診断（ｄｉａｇｎｏｓｉｓ）または予知（ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ）のためのアッセイ方法に関し、より詳しくは、体液中のホロトランスコバラミンＩＩ（ホロＴＣＩＩ）の定量（ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）に関係するアッセイと、そのようなアッセイ方法に使用するためのアッセイ用キット（ａｓｓａｙ ｋｉｔｓ）とに関する。
【０００２】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、老人の認識力欠如（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｌｏｓｓ）の最も一般的な原因であり、二番目に一般的な原因は、複合性痴呆症（ｍｉｘｅｄ ｄｅｍｅｎｔｉａ）すなわちＡＤ病理と脳梗塞との組み合わせである。ＡＤは、神経変性疾患であり、ニューロンの消失（ｎｅｕｒｏｎａｌ ｌｏｓｓ）、神経原線維濃縮体（ｎｅｕｒｏｆｉｂｒｉｌｌａｒｙ ｔａｎｇｌｅｓ）およびアミロイド堆積物（老人斑）の形成を含む神経病理学的特徴により特徴付けられる。ＡＤは、複合性疾患であり、完全に進行するまでに、個々の段階的な変化（ｃａｓｃａｄｅ ｏｆ ｇｒａｄｕａｌ ｃｈａｎｇｅｓ）をしばしば１０以上必要とするため、それが診断を困難にしている。脳組織を顕微鏡で検査できるような解剖によってのみ、確実な診断をすることが可能である。通常、生きている患者におけるＡＤの診断は、身体歴（ｍｅｄｉｃａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ）、身体検査（ｐｈｙｓｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）および認識力試験（ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｔｅｓｔｓ）に基づいている。
【０００３】
ＡＤは、通常、６５歳を超える年齢の人々を冒す（ａｆｆｅｃｔｓ）が、４０歳より若い年齢の人々を冒すこともできる。その罹患率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）は、６５歳では約２％であるが、年齢とともに着実に増大し、８０歳では約２０％となる。
【０００４】
ＡＤのリスクファクター（ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ）として証明されているのは年齢と遺伝のみであるが、いくつかの疫学的研究は、高血圧および糖尿病を含む血管の因子がＡＤ発展のリスクに影響する可能性があることを支持している（Ｈａｃｈｉｎｓｋｉ ａｎｄ Ｍｕｎｏｚ， Ａｎｎ． Ｎ．Ｙ． Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８２６： １−６， （１９９７）を参照）。ＡＤにおいて発見される毛細血管異常は、増大したレベルの血漿中ホモシステインに対する慢性被ばく（ｃｈｒｏｎｉｃ ｅｘｐｏｓｕｒｅ）により引き起こされる可能性があり、さらに、血漿中ホモシステインのレベル増大は、葉酸（ｆｏｌａｔｅ）およびコバラミンまたはビタミンＢ１２（ＶＢ１２）の軽度の欠乏（ｍｏｄｅｒａｔｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｉｅｓ）に起因することが支持されている（Ｒｅｇｌａｎｄ ｅｔ ａｌ Ｄｅｍｅｎｔｉａ， １： ２７２−２７７ （１９９０） および ＭｃＣａｄｄｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ Ｊ Ｇｅｒｉａｔｒ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ， １３： ２３５−２３９ （１９９８）を参照）。
【０００５】
ＶＢ１２は、水溶性ビタミンであり、食物中に見られるビタミンＢ複合体の一部を形成し、そして、細胞の増殖および代謝に不可欠な必須ビタミンである。その核となる分子は、中心のコバルト原子を包囲する四つのピロールユニットのコリン環からなる。ＶＢ１２は、動物または植物により合成できない唯一のビタミンであり、腸内で食物から吸収されなければならない。それは、しかしながら、肝臓に貯蔵することができる。それは、微生物、特に嫌気性菌および酵母により合成される。
【０００６】
ＶＢ１２は、ｉｎ ｖｉｖｏでは、（ｉ）分子内転移、例えば、Ｌ−メチルマロニルＣｏＡからスクシニルＣｏＡの形成、（ｉｉ）メチル化、例えば、ホモシステインのメチル化によるメチオニンの形成、および（ｉｉｉ）ある種の微生物におけるリボヌクレオチドからデオキシリボヌクレオチドへの還元、の三つの型の反応を触媒する補酵素（コエンザイム）およびＶＢ１２酵素として機能する。哺乳類では、上記（ｉ）および（ｉｉ）として特に述べた二つの酵素反応のみが、ＶＢ１２を補酵素として要求することが知られている。
【０００７】
消化のプロセスでは、ハプトコリン（ｈａｐｔｏｃｏｒｒｉｎ）と呼ばれる唾液中のタンパク質が、消化管上部（ｕｐｐｅｒ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ）内でＶＢ１２に結合して複合体を形成し、それは胃を通過する。ハプトコリンは、以後ＨＣと呼ぶ（この技術分野では、Ｒ−バインダーとして、または、集合名詞的にトランスコバラミンＩおよびＩＩＩとして呼ぶこともある）。膵酵素（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ）は、ＶＢ１２−ハプトコリン（ホロＨＣ）複合体を回腸内で消化し、ＶＢ１２を解放し、それは次に胃粘膜（ｇａｓｔｒｉｃ ｍｕｃｏｓａ）から分泌される内因子（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｆａｃｔｏｒ）と呼ばれるタンパク質と結合し、さらにまた複合体を形成する。
【０００８】
ＶＢ１２−内因子複合体は、末端回腸の中で特異的レセプターと結合し、その後、放出因子（ｒｅｌｅａｓｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）により分離され、そして、ＶＢ１２は、回腸の膜を通過し、血流（ｂｌｏｏｄ ｓｔｒｅａｍ）内に活性状態で（ａｃｔｉｖｅｌｙ）輸送される。
【０００９】
ＶＢ１２は、フリーの形態では、感知できるほどの量は体内を循環しない。おそらく、９９％程度のＶＢ１２は、トランスコバラミンタンパク質（ＴＣＩ、ＩＩおよびＩＩＩ）またはアルブミンのうちの一種と結合している。
【００１０】
ＶＢ１２を標的組織に輸送する原因であると信じられているタンパク質は、トランスコバラミンＩＩ（ＴＣ ＩＩ）という重要な少量のタンパク質（ｃｒｉｔｉｃａｌ ｔｒａｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）であり、それなしではＶＢ１２は細胞膜を通過できない。この重要な代謝機能にも関わらず、血清中のＶＢ１２のうち約６〜２５％のみがＴＣ ＩＩに結合し、そして、大部分はＨＣにより運び去られてしまう。ＴＣ ＩＩは、４５ｋＤａの１本鎖ポリペプチド（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）であり、最初に血清、精液（ｓｅｍｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）および脳脊髄液（ｃｅｒｅｂｒｏ−ｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ）の中に発見された。ＶＢ１２に結合したＴＣＩＩ（すなわちホロＴＣＩＩ）は、細胞膜上で特異的レセプターに結合し、そして、いったん結合すると、前記ホロＴＣＩＩ錯体は、飲作用（ｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓ）により細胞内に取り込まれる。
【００１１】
ＴＣＩＩは、肝臓、脈管内皮（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）、腸細胞（ｅｎｔｅｒｏｃｙｔｅｓ）、大食細胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）、および繊維芽細胞（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ）で合成され、そして、大部分は、アポＴＣＩＩとして、すなわちＶＢ１２との結合を欠いたまま循環する。それは、およそ９０分間の短い半減期を有する。
【００１２】
ＶＢ１２は食物から吸収する必要があるが、胃機能の障害（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）を引き起こすあらゆる症状、例えば、胃腸炎（ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）、または胃萎縮（ｇａｓｔｒｉｃ ａｔｒｏｐｈｙ）を引き起こす症状、または、機能性ハプトコリン、内因子、放出因子、ＴＣＩＩもしくはＴＣＩＩレセプターの生産不能は、ＶＢ１２の摂取障害およびその結果としての欠乏を引き起こす可能性がある。
【００１３】
人口における一定のサブグループ、例えば、老人、妊婦、慢性または急性の胃腸疾患を持つ患者、特定の自己免疫性疾患を病んでいる患者、悪性貧血の家族歴を持つ患者、およびエイズの罹患者は、特にＶＢ１２が欠乏する傾向にある。
【００１４】
ＶＢ１２欠乏の臨床的発現（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ）は、多様でありかつ多数であるが、主として（ｐｒｉｍａｒｉｌｙ）、貧血、巨赤芽球における造血（ｍｅｇａｌｏｂｌａｓｔｉｃ ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ）、ならびに、神経系統（ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ）の機能的および構造的疾患に関係する。
【００１５】
分子レベルでは、ＶＢ１２欠乏は、テトラヒドロ葉酸（ｔｅｔｒａ−ｈｙｄｒｏｆｏｌａｔｅ）およびＳ−アデノシルメチオニンのレベル減少と、メチルマロン酸、メチルテトラヒドロ葉酸およびホモシステインのレベル増加とにつながる。生理学的レベルでは、それは、潜在的に不可逆な神経損傷および／または激しい貧血につながる。ＶＢ１２欠乏に起因するニューロパシー（ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）は、アルツハイマー型老年痴呆（ｓｅｎｉｌｅ ｄｅｍｅｎｔｉａ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ−ｔｙｐｅ）を持つ患者に観測されると同様の診療的徴候（ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｙｍｐｔｏｍｓ）を与える。それゆえに、痴呆病（ｄｅｍｅｎｔｉｎｇ ｉｌｌｎｅｓｓｅｓ）を持つ患者の全血清中ＶＢ１２レベルを測定することが一般的である。
【００１６】
いくつかの研究により、ＡＤを持つ患者では全血清中ＶＢ１２レベルが低いことが発見され（Ｃｏｌｅ ａｎｄ Ｐｒｃｈａｌ， Ａｇｅ Ａｇｅｉｎｇ １３： １０１−１０５ （１９８４） および Ｃｌａｒｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｎｅｕｒｏｌ ５５： １４４９−１４５５ （１９９８）参照）、その他の研究においては顕著な違いは見られなかった（Ｃｒｙｓｔａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｇｅｒｉａｔｒ Ｓｏｃ． ４２： ９３３−９３６ （１９９４）， Ｂａｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ Ｇｅｒｉａｔｒ Ｓｏｃ． ４２： １３２−１３６ （１９９４） および Ｊｏｏｓｔｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｒｏｎｔｏｌ ５２： Ｍ７６−Ｍ７９ （１９９７）参照）。ＡＤとＶＢ１２欠乏との関連の問題については多くの議論が存在する。
【００１７】
ホロＴＣＩＩ欠乏は、ＶＢ１２欠乏を示すものとして認識され（例えば、老人および同様にＡＤ罹患者に対して）、そして、このゆえに、ＶＢ１２欠乏を打ち消す栄養療法（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｔｈｅｒａｐｙ）が信頼できることの指標として認識されてきたが、ホロＴＣＩＩ欠乏がそのようにＡＤの指標であることの示唆はこれまでなかった。
【００１８】
我々は、ＡＤであると確認された患者のホロＴＣＩＩの合計（ｃｏｕｎｔ）が、同年齢の健康なボランティア、すなわち一致対照群（ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）と比較して顕著に低く、そして、ＡＤとホロＴＣＩＩ減少との間の相関は、ＡＤと全血清中ＶＢ１２または全ホモシステイン減少との間のどのような相関よりもさらに顕著であることを発見した。
【００１９】
それゆえ、一つの側面から見ると、本発明は、アルツハイマー病のための診断的（ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）または予知的（ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ）アッセイ方法であり、体液サンプルまたはそれに由来する試験用サンプルを、ホロトランスコバラミンＩＩについて、予備定量した閾値（ｐｒｅ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｖａｌｕｅ）により定量したホロトランスコバラミンＩＩレベルとの比較により分析する（ａｓｓａｙｉｎｇ）ことと、前記分析の結果がアルツハイマー病を示すか示さないか決めることとを含む方法を提供する。
【００２０】
ホロＴＣＩＩを分析する（ａｓｓａｙｉｎｇ）方法は公知であり、そして、例えば、ＷＯ ００／１７６５９、米国特許第４６８０２７３号明細書、Ｈｅｒｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ． Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ３４： １３２−１３９ （１９９０）、Ｗｉｃｋｒａｍａｓｉｎｇｈｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐａｔｈｏｌ． ４６： ５３７−５３９ （１９９３）、Ｃａｒｍｅｌ Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｐａｔｈｏｌ． ６２： ３６７−３７２ （１９７４）、Ｈｅｒｚｌｉｃｈ ｅｔ ａｌ． Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ． ５８： ３３２−３３７ （１９８８）、Ｖｕ ｅｔ ａｌ． Ａｍ． Ｊ． Ｈｅｍａｔｏｌ． ４２： ２０２−２１１ （１９９３）、Ｌｉｎｄｅｍａｎｓ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ １３２： ５３−６１ （１９８３）、Ｋａｐｅｌ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ １７２： ２９７−３１０ （１９８８）、Ｂｅｎｈａｙｏｕｎ ｅｔ ａｌ． Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ． ８９： １９５−１９９ （１９９３）、Ｔｏｆｔ ｅｔ ａｌ． Ｓｃａｎ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｌａｂ． Ｉｎｖｅｓｔ． ５４： ６２ （１９９４） および Ｋｕｅｍｍｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ． Ｃｌｉｎ． Ｃｈｉｍ． ３８： ２０７３−２０７７ （１９９２）に記述されており、それらの内容は、参照することにより本明細書内に組み込まれる。これらの技術の中で、好ましくは、Ｋｕｅｍｍｅｒｌｅらの技術（上記）を、そして、より好ましくは、ＷＯ ００／１７６５９の技術を、本発明のアッセイ方法に使用することができる。
【００２１】
本発明の方法に使用する体液サンプルは、ホロＴＣＩＩを標準的に含む任意のヒト体液が可能であるが、例えば精液または脳脊髄液であり、しかしながら、好ましくは血液である。より好ましくは、本発明の方法で分析する（ａｓｓａｙｅｄ）サンプルは、血液由来サンプルであり、例えば血漿、または、特に一層好ましくは、血清サンプルである。そのようなサンプルは、ＡＤを有する疑いがある患者から、もしくはＡＤを有すると確認された患者から採取しても良いし、または、一般の高齢患者から、日常の検査（ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）またはヘルスチェック（ｈｅａｌｔｈ ｃｈｅｃｋ）の一環として採取しても良い。
【００２２】
本発明の方法を用いてホロＴＣＩＩを分析することは、試験したサンプル中またはそれの由来する体液、例えば血液、血漿もしくは最適には血清中のホロＴＣＩＩの、定性的、半定量的または定量的表示（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）の生成（ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）に関係していても良い。前記サンプルは、本発明のアッセイ方法に使用するに先立ち処理しても良く、例えば、緩衝液（ｂｕｆｆｅｒ）またはその他の水性媒体を加えて希釈しても良いし、そして、解析（ａｎａｌｙｓｉｓ）に先立ち、例えば冷蔵（ｃｈｉｌｌｉｎｇ）または冷凍（ｆｒｅｅｚｉｎｇ）することにより貯蔵するか（ｓｔｏｒｅｄ）または保存しても（ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ）良い。
【００２３】
ホロＴＣＩＩ濃度（例えばｐＭ濃度）の絶対値（ａｂｓｏｌｕｔｅ ｖａｌｕｅ）の定量（ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ）は、ＡＤの存在またはその程度を示すに足る一またはそれ以上の予備定量した（ｐｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ）閾値よりも前記ホロＴＣＩＩが上か下かを単に示すのみで充分なことが望ましいが、そのことが必須でなくても良い。前記方法は、しかしながら、一般的には、対照グループについて定量したホロＴＣＩＩ値に対する検量（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ）を必要とする。前記対照グループとは、特に、同年代の健康な人々の対照グループであり、そして、好ましくは、さらに、ＡＤ罹患者と確認された同年代の者たちである。そのように、前記方法は、さらに、分析した（ａｓｓａｙｅｄ）ホロＴＣＩＩ値を、そのように予備定量した検量値（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｖａｌｕｅｓ）と比較し、前記試料の源である人を、おそらく（ｐｒｏｂａｂｌｙ）ＡＤを有するかまたは有しないものとして、またはＡＤを進行の特定段階で有するものとして、分類する（ｃａｔｅｇｏｒｉｓｅ）かまたは段階付ける（ｓｔａｇｅ）ステップに関係する。典型的には、高齢患者（例えば、６０歳、特に７０歳を超える年齢）の血清中ホロＴＣＩＩ濃度は、７０ｐＭ以下、特に６０ｐＭ以下であればＡＤを示すに足る。
【００２４】
本発明の方法では、前記サンプルは、さらに全ＶＢ１２についても、任意にホモシステインについても、そして任意に葉酸（ｆｏｌａｔｅ）についても分析する（ａｓｓａｙｅｄ）ことが好ましい。
【００２５】
さらなる側面から見ると、本発明は、さらに、前記本発明による方法を行なうために使用するアッセイ用キット（ａｓｓａｙ ｋｉｔ）であり、前記キットが、
ＴＣＩＩまたはホロＴＣＩＩの固定化された（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ）または固定化可能な（ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｂｌｅ）特異的結合リガンド（ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ｌｉｇａｎｄ）と、
好ましくは、濃度が分かっているホロＴＣＩＩ溶液、そしてより好ましくは、一定範囲の（ａ ｒａｎｇｅ ｏｆ）ホロＴＣＩＩ濃度を有するそのような溶液のセットと、
任意に、ＶＢ１２をホロＴＣＩＩから放出（ｒｅｌｅａｓｅ）させるための放出剤（ｒｅｌｅａｓｅ ａｇｅｎｔ）と、
任意に、標識されたリガンドと、そして、
ＡＤまたはＡＤの程度（ＡＤ ｓｅｖｅｒｉｔｙ）を年齢の関数として示すホロＴＣＩＩ濃度の閾値（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）のカリブレーター（ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ）を含むキットを提供する。
【００２６】
典型的には、０〜２００ｐｍｏｌ／ｌ のホロＴＣＩＩ含有量を有する検量サンプル（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｓａｍｐｌｅｓ）を使用すれば良い。その中での参考範囲（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｒａｎｇｅ）としては、ホロＴＣＩＩ値は一般的には３０〜１６０ ｐｍｏｌ／ｌであろうことが分かっている。
【００２７】
前記カリブレーターのみを除いたそのようなアッセイ用キットが、ＷＯ ００／１７６５９に記述されている。
【００２８】
ここで、下記の非限定的な実施例を参照しながら本発明をさらに記述する。
【００２９】
【実施例】
ホロＴＣＩＩ、全血清中ビタミンＢ１２ （ｔＶＢ１２）、および全ホモシステイン（Ｈｃｙ）レベルは、（ｉ）アルツハイマー型痴呆と確認された２０人の人々、および（ｉｉ）同年代の２０人の健康なボランティア（一致対照）から採取した血清サンプルを用いて測定した。
【００３０】
ホロＴＣＩＩ濃度はＨｏｌｏＴＣ−ＲＩＡにより定量した。ＨｏｌｏＴＣ−ＲＩＡは、ノルウェー国オスローのアクシス−シールド・エーエスエー（Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ ＡＳＡ， Ｏｓｌｏ， Ｎｏｒｗａｙ）から入手可能であり、そしてＷＯ ００／１７６５９中に記述されているホロＴＣＩＩ測定システムである。
【００３１】
結果は、平均値および確率比（ｏｄｄｓ−ｒａｔｉｏｓ）の両方について解析した。確率比は、以下のようにして計算した。すなわち、前記アルツハイマーグループにおける「正常から外れた」値の患者数（ｃａｓｅｓ）／全患者数を、前記対照グループにおける同様の比率で割った。１よりも大きい値は、リスク（ｒｉｓｋ）が存在し得ることを示す。ホロＴＣＩＩについては３５ ｐＭを切り捨て値（ｃｕｔ−ｏｆｆ）として用い、そして、ｔＶＢ１２については１５０ ｐＭを用いた。それぞれ３５および１５０ ｐＭよりも上の値は、正常範囲内であるとみなした。ｔＨＣｙについては、１５μＭよりも下の値は正常範囲内と判断した。
【００３２】
その結果を、下記の表中で述べる。
【００３３】
【表１】
2004502940.tif 000002
【００３４】
血清中ホロＴＣＩＩレベルは、アルツハイマー型痴呆と確認された患者では顕著に低く、平均値は顕著に低く、そして、確率比は疾患グループでは５倍に増加していた。
【００３５】
血清中ｔＨＣｙレベルは患者グループ（ｐａｔｉｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）においてより高く、アルバイト（ａｌｂｅｉｔ）では顕著ではなく、そして、さらに、確率比は１．５であった。ｔＨＣｙにおいて有意性が得られなかった理由は、ホロＴＣＩＩ以外に葉酸およびビタミンＢ６レベルならびに腎臓の状態（ｋｉｄｎｅｙ ｓｔａｔｕｓ）等もまたｔＨＣｙ濃度に影響するという要因に基づくと見て間違いないと思われる。
【００３６】
ｔＶＢ１２は、疾患グループでは幾分高かったが、アルバイトでは顕著ではなく、その所見は確率比においても見られ、確率比は１．０よりも小さかった。
【国際公開パンフレット】
2004502940.tif 000003
2004502940.tif 000004
2004502940.tif 000005
2004502940.tif 000006
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2004502940.tif 000010
2004502940.tif 000011
2004502940.tif 000012
2004502940.tif 000013
【国際調査報告】
2004502940.tif 000014
2004502940.tif 000015
2004502940.tif 000016