(57)【要約】本発明は、好中球優性非感染性炎症性疾患の治療のための9-デオキソ-9ジヒドロ-9a-メチル-9a-アザ-9a-ホモエリスロマイシンA（一般名アジスロマイシン）の使用、アジスロマイシンを含有する経腸投与または非経口投与用の医薬組成物、およびこれらの医薬組成物の製造方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
人間および動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物を製造するための、アジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩からなる群より選択される活性成分の使用。
【請求項２】
前記好中球優性非感染性炎症性疾患が、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、気管支炎、気管支拡張症、嚢胞性繊維症、および気腫を含む呼吸器系統の疾患である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記好中球優性非感染性炎症性疾患が、皮膚病、特に乾癬およびライター症候群のような乾癬性皮膚病変、自己免疫水胞性皮膚病変、白血球破砕性血管炎、スイート症候群、膿疱性血管炎、結節性紅斑、および家族性地中海熱のような血管型好中球性皮膚病、ならびに壊疽性膿皮症を含む好中球性皮膚病変である、請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記好中球優性非感染性炎症性疾患が、好中球の浸潤が活性化補体因子により激化する自己免疫疾患、特に糸球体腎炎を含む腎臓病である、請求項１記載の使用。
【請求項５】
前記好中球優性非感染性炎症性疾患が、炎症性腸疾患を含む腸疾患である、請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記好中球優性非感染性炎症性疾患が、関節リウマチのような激しい好中球優性段階を特徴とする自己免疫疾患である、請求項１記載の使用。
【請求項７】
前記活性成分がアジスロマイシンのO-メチル誘導体である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記活性成分がアジスロマイシンのエステルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
前記活性成分がアジスロマイシンの１水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記活性成分がアジスロマイシンの２水和物である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記活性成分がアジスロマイシンと金属イオンとの複合体またはキレートである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
アジスロマイシンと金属との比率が１：１〜１：４である、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
前記金属イオンが二価金属イオンである、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１４】
前記金属イオンが三価金属イオンである、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１５】
前記活性成分がアジスロマイシンのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記活性成分がアジスロマイシンの酸付加塩である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記酸付加塩が無機酸を用いて生成される、請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
前記無機酸が臭化水素酸、硝酸、リン酸または硫酸である、請求項１６または１７記載の使用。
【請求項１９】
前記酸付加塩が有機酸を用いて生成される、請求項１６記載の使用。
【請求項２０】
前記有機酸が、酢酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、または酒石酸である、請求項１９記載の使用使用。
【請求項２１】
前記医薬組成物が前記疾患を根絶もしくは低減させるかまたはその進行を食い止めるのに十分な量の前記活性成分を含有する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
前記医薬組成物が前記活性成分量にして10mg〜2000mgの投与量で１日１〜３回投与される、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
前記医薬組成物が前記活性成分量にして30mg〜1500mgの投与量で１日１〜３回投与される、請求項２２記載の使用。
【請求項２４】
前記医薬組成物が固形または液状剤形で経口投与される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記の経口投与用固形医薬組成物がカプセル剤、舌下錠、錠剤、丸薬、粉剤、リポソーム、パッチ、遅溶性被覆剤、および顆粒剤である、請求項２４記載の使用。
【請求項２６】
前記の経口投与用固形医薬組成物が少なくとも１種の不活性で製薬上許容しうる担体を含有する、請求項２４または２５記載の使用。
【請求項２７】
前記の不活性で製薬上許容しうる担体がラクトース、スクロース、またはデンプンである、請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
前記の経口投与用固形医薬組成物が、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、充填および／または緩衝剤、ならびに香味料からなる群より選択される物質をさらに含む、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２９】
前記の経口投与用固形医薬組成物が、腸溶コーティングを用いて調製される、請求項２４〜２８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３０】
前記の経口投与用液状医薬組成物が、製薬上許容しうる乳液、溶液、懸濁液、またはシロップである、請求項２４記載の使用。
【請求項３１】
前記の経口投与用液状医薬組成物が少なくとも１種の不活性で製薬上許容しうる担体を含有する、請求項３０記載の使用。
【請求項３２】
前記の不活性で製薬上許容しうる担体が水または生理食塩水である、請求項３１記載の使用。
【請求項３３】
前記の経口投与用液状医薬組成物が、アジュバント、浸透圧を変えるための塩、pH調整用化合物、皮膚浸透剤、湿潤剤、および乳化懸濁剤からなる群より選択される物質をさらに含む、請求項３０〜３２のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３４】
前記医薬組成物が非経口的に投与される、請求項１〜２３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３５】
前記の非経口投与用医薬組成物が注入用剤形または注射用剤形である、請求項３４記載の使用。
【請求項３６】
前記の非経口投与用医薬組成物が無菌の水性もしくは非水性溶液、懸濁液、または乳液である、請求項３４または３５記載の使用。
【請求項３７】
前記の非経口投与用医薬組成物が非水性溶媒またはビヒクルを含む、請求項３４〜３６のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３８】
前記非水性溶媒またはビヒクルがプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油のような植物油、ゼラチン、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである、請求項３７記載の使用。
【請求項３９】
前記の非経口投与用医薬組成物が保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤のようなアジュバントを含む、請求項３４〜３８のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４０】
前記医薬組成物が直腸内または膣内投与される、請求項１〜２３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項４１】
前記の直腸内または膣内投与用医薬組成物が坐剤、浣腸剤、またはフォーム剤である、請求項４０記載の使用。
【請求項４２】
前記の直腸内または膣内投与用医薬組成物がカカオバターや坐薬用ワックスのような賦形剤を含有する、請求項４０または４１記載の使用。
【請求項４３】
請求項１〜４２のいずれか1項に記載の使用であって、好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための前記医薬組成物が、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、該疾患の治療に有用な追加活性成分を１つ以上含有する、前記使用。
【請求項４４】
前記追加活性成分の投与量が医薬組成物と比較して少なく、また前記追加活性成分を１つだけ含有する、請求項４３記載の使用。
【請求項４５】
人間または動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物であって、活性成分としてアジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩を含む、前記医薬組成物。
【請求項４６】
前記活性成分がアジスロマイシンのO-メチル誘導体またはエステルである、請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記活性成分がアジスロマイシンの１水和物または２水和物である、請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項４８】
前記活性成分がアジスロマイシンと二価もしくは三価金属イオンとの複合体またはキレートである、請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項４９】
アジスロマイシンと金属イオンとの比率が１：１〜１：４である、請求項４８記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記活性成分がアジスロマイシンのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩である、請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記活性成分がアジスロマイシンの酸付加塩である、請求項４５記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記酸付加塩が、臭化水素酸、硝酸、リン酸、または硫酸のような無機酸を用いて生成される、請求項５１記載の医薬組成物。
【請求項５３】
請求項５１記載の医薬組成物であって、前記酸付加塩が、酢酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸または酒石酸のような有機酸を用いて生成される、前記医薬組成物。
【請求項５４】
前記活性成分が前記疾患を根絶もしくは低減させるかまたはその進行を食い止めるのに十分な量で含有されている、請求項４５〜５３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
請求項４５〜５４のいずれか1項に記載の医薬組成物であって、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、前記疾患の治療に有用な追加活性成分を１つ以上含む前記医薬組成物。
【請求項５６】
前記追加活性成分の投与量が医薬組成物と比較して少なく、また前記追加活性成分を１つだけ含有する、請求項５５記載の医薬組成物。
【請求項５７】
人間または動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物の製造方法であって、活性成分としてアジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩を含み、該活性成分と添加剤、および任意で該疾患の治療に有用な追加活性成分とを混合すること、得られた混合物を無菌の水性もしくは水性／アルコール性溶液中に溶解または懸濁すること、pH調整剤を用いて該溶液のpHを約４〜７とすること、および該溶液をバイアルまたはアンプルに充填すること、を含む前記製造方法。
【請求項５８】
請求項５７記載の製造方法であって、前記追加活性成分が、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、前記製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための9-デオキソ-9ジヒドロ-9a-メチル-9a-アザ-9a-ホモエリスロマイシンA（一般名アジスロマイシン）の使用、アジスロマイシンを含有する経腸投与用または非経口投与用医薬組成物、およびこれらの医薬組成物の製造方法、に関する。
【背景技術】
【０００２】
殆どの炎症性疾患は、単球／マクロファージ、顆粒球、形質細胞、リンパ球および血小板を含む炎症性細胞の異常な集積を特徴とする。これらの炎症性細胞は、組織内皮細胞および繊維芽細胞と協力しあって、複雑に関連し合う数多くの脂質、増殖因子、サイトカインおよび局所的な組織の損傷を引き起こす破壊的酵素を放出する。
【０００３】
炎症反応の１形態として、生体防御の主要構成要素である好中球性多形核白血球（PMN）の炎症組織への浸潤を特徴とする好中球性炎症がある。細胞外細菌による組織感染は、この炎症反応の典型的な例である。これに対し、種々の非感染性疾患は好中球を血管外から動員することを特徴とする。この群の炎症性疾患には、慢性閉塞性肺疾患、成人呼吸窮迫症候群、幾つかのタイプの免疫複合性肺胞炎、嚢胞性繊維症、気管支炎、気管支拡張症、気腫、糸球体腎炎、活動期の関節リウマチ、通風性関節炎、潰瘍性大腸炎、乾癬や脈管炎など特定の皮膚病変が含まれる。これらの症状では好中球が組織障害の進行に重大な役割を果たしていると考えられており、かかる組織障害が続いた場合、正常な組織構造の回復不能な破壊とそれに伴う臓器機能不全が生じうる。従って、組織損傷は主に、好中球の活性化とその後の該好中球からのプロテイナーゼ放出および酸素種産生の亢進により生じる。
【０００４】
一般的に、慢性閉塞性肺疾患（COPD）とは、完全に可逆性とは言えない気流制限の漸進的発達によって説明される症状を指す（ATC，1995）。大部分のCOPD患者は次の３種の病理学的症状を示す。すなわち気管支炎、気腫および粘液栓（mucus plugging）である。該疾病は最初の１秒間における努力性肺活量（FEV1）の緩徐進行的かつ不可逆的減少と、比較的維持された努力性肺活量（FVC）とを特徴とする（Barnes, N.Engl.J.Med.(2000),343(4):269-280）。喘息およびCOPDのいずれにおいても、顕著で独特な気道の変形がみられる。大部分の気道閉塞は、次の２つの主な要素により生じる。すなわち、肺胞の破壊（気腫）および末梢気道の閉塞（慢性閉塞性気管支炎）である。COPDでは、粘膜細胞の著しい異常増殖を主な特徴とする。
【０００５】
タバコの喫煙、大気汚染および他の環境因子が前記疾患の主な原因である。その発病メカニズムは未だ不明であるが、酸化物質−酸化防止物質間の障害が前記疾患の進行に強く関わっている。COPDは、喘息にみられる慢性炎症過程とは著しく異なる過程、異なる炎症性細胞、伝達物質、炎症作用および治療への応答を有する（Keatingsら、Am.J.Respir.Crit.Care Med(1996), 153:530-534）。主として、患者の肺への好中球浸潤がこの疾患の特徴である。
【０００６】
高濃度の炎症誘発性（proinflammatory）サイトカイン、例えばTNF-α、および特にIL-8やGRO-αなどのケモカインは、前記疾患の病理において非常に重要な役割を果たしていると思われる。血小板トロンボキサン合成もまた、COPD患者では増強されている（Keatingsら、Am. J. Respir. Crit. Care Med.(1996), 153 : 530-534 ; Stockley およびHill, Thorax (2000), 55 (7) : 629-630）。大部分の組織損傷は、好中球の活性化とその後の該好中球からの（メタロ）プロテイナーゼの放出、および酸素種産生の亢進によって生じる（Repine ら、Am. J. Respir. Crit. Care Med. (1997), 156 : 341-357 ; Barnes, Chest (2000), 117 (2 Suppl) : 1OS- 14S）。
【０００７】
大部分の治療努力は、症状を制御することに向けられている（Barnes, Trends Pharm. Sci.(1998), 19 (10) : 415-423 ; Barnes, Am. J. Respir.Crit. Care Med. (1999) 160 : S72-S79 ; Hanselら、Expert Opin. Investig. Drugs (2000) 9 (1) : 3-23）。通常、かかる症状は気流の制限と同一視され、気管支拡張剤が治療時に選択される。
【０００８】
合併症の予防と治療、症状悪化の予防および改善された生活の質と寿命もまた、COPDのthree key international guidelines of management（CulpittおよびRogers, Exp. Opin.Pharmacother. (2000) 1 (5) : 1007-1020 ; Hay, Curr.Opin. Chem. Biol. (2000), 4: 412419）に記載された主な目的である。基本的に、現在の治療法研究の大部分は、好中球の動員と活性化に関与する伝達物質、またはそれらの望ましくない活性化による影響を弱めることに集中している（Stockleyら、 Chest (2000), 117 (2 Suppl) : 58S- 62S）。
【０００９】
マクロライド系抗生物質のin vitro免疫調節作用については数多くの報告がある（Labro, J.Antimicrob. Chemother. (1998), 41 (Suppl B) : 37-46 ; Labro, Clin. Microb. Rev. (2000), 13 (4) : 615-650 ;WalesおよびWoodhead, Thorax (1999), 54 (Suppl 2) :S58-S62）。マクロライド系抗生物質は、例えば12、14、16もしくは17員のラクトン環および１〜３個の糖残基を含有する大環状化合物であり、これらの環と糖残基はグリコシド結合によって互いに、またはアグルコンに結合している。公知のマクロライド系抗生物質メンバーとしては、例えばカルボマイシン、エリスロマイシン、ロイコマイシンおよびスピラマイシンがある。
【００１０】
マクロライドと食作用性炎症細胞とのin vitro相互作用に関する最も重要な知見は、刺激された細胞による酸化物質産生を阻害する効果（Labroら、 J. Antimicrob. Chemother. (1989), 24 (4) : 561-572 ; Umeki, Chest (1993), 104 : 1191-1193 ; Wenisch at al., Antimicrob. Agents Chemother. (1996), 40 (9) : 2039-2042）ならびにこれらの細胞による炎症誘発性および抗炎症性サイトカイン放出の調節（Labroら、 J. Antimicrob.  Chemother. (1989), 24 (4) : 561-572 ; Khanら、Internat. J. Antimicrob. Agents. (1999), 11 : 121-132 ; Morikawaら、 Antimicrob. Agents and  Chemother. (1996), 40 (6) : 1366-1370 ; Sugiyamaら、 Eur. Respir. J. (1999), 14: 1113-1116）に関する。さらに、幾つかのマクロライドは、ヒト好中球によるエキソサイトーシス（脱顆粒）をin vitroで直接刺激する（Abdelghaffaeら、 Antimicrob. Agents  Chemother. (1994), 38 (7) : 1548-1554 ; Vazifehら、 Antimicrob. Agents Chemother. (1998), 42 (8) : 1944-1951）。ラットのカラゲニン胸膜炎実験炎症モデルでは、数種のマクロライド系抗生物質、例えばロキスロマイシン、クラリスロマイシンおよびエリスロマイシン（ただしアジスロマイシンは除く）が抗炎症活性を示すことが見出されたが、この活性は恐らく、炎症誘発性媒介物質およびサイトカイン産生を阻害するそれらの抗生物質の能力に依存している。この急性炎症モデルでは、NO産生、TNF-α濃度またはPGE2は抗生物質を用いた前処理によって有意に減少する（Ianarioら、 J.  Pharmacol. Exp. Ther. (2000), 292 : 156-163）。
【００１１】
エリスロマイシンを投与した場合にも、ラットのザイモサン誘導性腹膜炎に対する抗炎症効果が得られる（Agenら、 Agents Actions (1993), 38 (1- 2) : 85-90）。ロキスロマイシンは、インドメタシンなどの従来の抗炎症剤とは異なるメカニズムを介して急性炎症反応を緩和する活性を有することが報告された。別の研究では、カラゲニンで誘導した四肢の浮腫に抗炎症剤が及ぼす効果を評価するために使用した標準動物モデルにおいてロキスロマイシンが有効であることが示されたが、クラリスロマイシンとアジスロマイシンはささやかな活性しか示さなかった（ScaglioneおよびRossini, J. Antimicrob.  Chemother. (1998), 41, Suppl B: 47-50）。
【００１２】
幾つかのマクロライド系抗生物質、例えばエリスロマイシン、クラリスロマイシンおよびロキシスロマイシンは既に抗炎症剤として使用されており、とりわけびまん性汎細気管支炎の治療に用いられている。関節リウマチや嚢胞性繊維症などの疾患のためのマクロライド使用に関する報告が入手可能である（Arayssiら、 Programm and Abstracts of the 4th International conference on macrolides, azalides, streptogramins and ketolides, 21-23 January 1998,  Barcelona, Spain, Abstract 6 ; Singh, J. Assoc.  Phys. India (1989), 37 : 547 ; Jaffeら、 Lancet (1998), 351 : 420）。これに関係したマクロライドの薬理効果としては、エリスロマイシンが上皮細胞からの粘膜分泌および水分泌を阻害することによって分泌過多を抑制することが報告されている。エリスロマイシンはまた、好中球の毛細血管への接着を阻害することにより炎症領域における該好中球の集積を阻止し、上皮細胞からのIL-8分泌ならびに該好中球からのIL-8およびLTB4分泌それ自体も阻害する。びまん性汎細気管支炎におけるその有益な薬効にはさらに、スーパーオキシド産生の低減、および肺におけるタンパク質分解酵素濃度の低減も含まれる。
【００１３】
アジスロマイシンが肺機能を有意に改善することは示されていたが、その根本的なメカニズムは不明であった（Jaffeら、 Lancet (1998), 351 : 420）。一方、ロキシスロマイシンが鼻ポリープ繊維芽細胞の増殖を抑制することが報告された（Nonakaら、 Am. J. Rhinol. (1999), 13 : 267-272, Yamadaら、Am. J. Rhinol. (2000), 14 : 143-148）。
【００１４】
14員環を有するマクロライド、例えばエリスロマイシン、クラリスロマイシンおよびロキシスロマイシンがin vitroでIL-8産生および好中球走化性を阻害することについての有力な証拠が公開文献中に存在するものの、15員環を有するマクロライド、例えばアジスロマイシンが同様の抗炎症作用を示すという証拠はin vitroのものでさえごく僅かしかない（Criquiら、 Eur. Respir. J. (2000), 15 : 856-862）。
【００１５】
米国特許第4,886,792号には、15員環マクロラクトンが好中球脱顆粒に及ぼす阻害効果について記載されていたが、該マクロラクトン中にアジスロマイシンの糖置換体は含まれていなかった。アジスロマイシンがヒト好中球のアポトーシスをin vitroで誘導することは報告されていたものの、酸化的代謝またはIL-8産生に及ぼす効果についての記載はなかった（Kochら、 J. Antimicrob. Chemother. (2000), 46 : 19-26）。アジスロマイシンが好中球走化性と活性酸素生成をin vitroで阻害することを示した研究が１つだけある（Sugihara, Kansenshogaku Zasshi J. Jpn. Assoc. Infec. Dis. (1997), 71: 329-336）。また、アジスロマイシンが肺胞マクロファージまたは血中のTNFα、IL-1、IL-6濃度を変化させないことが示されている（Aubertら、Pul. Pharmacol. Ther. (1998), 11 : 263-269）。
【００１６】
アジスロマイシンがその15員環構造を持つために上記14員環マクロライドに抗炎症作用を付与する必須構造を欠いている可能性は以前から示唆されており、ジョサマイシンなどの16員環マクロライドがIL-8産生を低減しないという観察結果（Takizawaら、 Am. J. Resp. Crit. Care Med. (1997), 156 : 266-271 ; Criquiら、 Eur. Respir. J. (2000), 15 : 856-862）からよりその信憑性が高まっている。
【００１７】
14員環を有するマクロライド系抗生物質と比較すると、15員環を有するマクロライド化合物に幾つかの利点がある。例えば、14員アグルコン環を特徴とする構造を有するエリスロマイシンは酸性媒体中で容易に無水エリマイシンに転換されるが、該無水エリスロマイシンはスピロケタール構造の不活性なC6／C12代謝産物である（Kurathら、 Experienta (1971), 27 : 362）。その親抗生物質であるエリスロマイシンとは対照的に、アジスロマイシンは酸性媒体中で改善された安定性を示す。さらに、アジスロマイシンは有意に高い濃度で組織内に維持される。グラム陰性菌に対するその改善されたin vitro活性のため、１日限りの投与（one-day dose）の実現性についてすら試験された（Ratshemaら、 Antimicrob. Agents Chemother. (1987), 31 : 1939）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
従って、本発明の根本的な技術的課題は、好中球優性非感染性炎症性疾患の治療に有用である改善された手段、特に改善された方法および用途を提供することであり、その活性成分は、14員ラクトン環を有するマクロライド化合物の有用な抗炎症活性だけでなく、15員環を有するマクロライド化合物の改善された安定性および高い組織内濃度をも呈するものとする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、人間および動物の好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物を製造する際に、アジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレートおよび製薬上許容しうるその塩からなる群より選択される活性成分を使用することにより、上記課題を解決する。
【００２０】
驚くことに、当分野で信じられてきたアジスロマイシンのin vitroでの好中球機能に及ぼすその限定された効果とは対照的に、ヒトにin vivo投与したアジスロマイシンが広範囲の抗炎症活性を有し、そのため好中球浸潤および好中球関連組織損傷を特徴とする炎症性疾患の治療に非常に有用であることが本発明により見出された。
【００２１】
健康な被験者に対して行った試験では、選択した炎症関連パラメータにアジスロマイシンが及ぼす影響をさらに詳しく調べた。その結果、ミエロペルオキシダーゼ（MPO）、N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（NAGA）およびβ-グルクロニダーゼなどの１次アズール顆粒酵素の激しい濃度変化によって示されるように、アジスロマイシンの投与によりヒト好中球の脱顆粒が刺激されることが見出された。
【００２２】
顆粒球におけるMPO活性の生物学的意味は、特に免疫複合体による食作用刺激の後の、炎症過程にある炎症性顆粒球中の全顆粒の可動化にかかわる強力な酸素依存性抗菌作用にある。アジスロマイシン適用後、血中好中球塗沫標本中のMPO活性は激しく減少し、28日後にようやくベースラインまで回復した。このことから、細胞化学を用いて測定された低MPO好中球濃度で示される脱顆粒は、好中球溶解物中の低MPO ELISA濃度と関連があることが見出された。
【００２３】
N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（NAGA）およびβ-グルクロニダーゼはリソソーム酵素であり、共に好中球のアズール（一次またはペルオキシダーゼ陽性）顆粒中に存在する。炎症時に好中球の脱顆粒が生じることから、これら両酵素は脱顆粒マーカーであり、好中球の反応性を評価する際に使用できる。アジスロマイシンの研究により、アジスロマイシン適用後に血清中のNAGA活性がかなり上昇することが示された。アジスロマイシン最終投与から28日後でも、血清NAGA値は依然として初期値を70％も上回っていた。血清NAGA値の上昇に伴い、PMN中の酵素活性が低下した。血清β-グルクロニダーゼ活性は、アジスロマイシン最終投与の翌日は何の変化も示さなかったが、その後増大した。アジスロマイシン最終投与から28日後には、β-グルクロニダーゼの活性は初期値を40％上回っていた。PMN中のβ-グルクロニダーゼの活性は、アジスロマイシン最終投与後数時間で上昇するよりも減少した。アジスロマイシン最終投与から28日後には、PMN中のβ-グルクロニダーゼ活性は初期値を大分上回っていた。
【００２４】
さらに本発明により、アジスロマイシンが刺激好中球からの反応性酸素種の生成を阻害することが示された。このことは、刺激後の好中球から生成する化学発光が阻害されたことで実証された。さらに、アジスロマイシンが好中球の酸化的バースト（oxidative burst）の阻害物質であることが、シトクロムCアッセイ系を用いて実証された。この研究により、多くの疾患の病因に関わるフリーラジカルの生物学的作用を制御する２つの酵素、すなわち細胞グルタチオンペルオキシダーゼ（GSHPx）とグルタチオンレダクターゼの濃度にアジスロマイシンが長期影響を及ぼすことも明らかとなった。フリーラジカルの産生および酸化還元状態における異常は、種々の炎症性分子の発現を調節し、特定の細胞過程に影響を及ぼすことにより炎症過程を引き起こす可能性がある。従ってアジスロマイシンは、好中球によるラジカル産生が過剰となっているCOPDなどの種々の疾患を治療するための基盤を提供する。
【００２５】
本研究では、アジスロマイシンが特定の細胞型のアポトーシス、すなわちプログラム細胞死を誘発することも確認した。アポトーシスは免疫応答を完成させるための重要なメカニズムである。アジスロマイシンの３日投与により、血液塗抹標本の形態学で示されるような遅効型アポトーシス促進作用（delayed pro-apoptotic effect）が見られた。アポトーシス細胞の数はアジスロマイシン最終投与から28日後に最大値に達し、このことは活性で潜在的に有害な好中球が減少したことを示唆している。
【００２６】
本研究では、アジスロマイシンのその他の抗炎症作用も発見した。以前の研究（Kochら、 J. Antimicrob. Chemother. (2000), 46: 19-26）とは対照的に、アジスロマイシンがIL-8およびGRO-αの放出に対して著しい阻害効果を持つことが本発明により見出された。インターロイキン８（IL-8）は好中球特異的なケモカインCXCサブファミリーのメンバーである。IL-8は強力な好中球走化性因子であり、かつ活性化因子である（(Oppenheim, Ann. Rev. Immunol. (1999), 9 : 617)。IL-8は炎症性刺激に応じて発現される。IL-8はヒト好中球の自発的TNF-α媒介型アポトーシスを遅延させる。IL-8に及ぼす作用とは対照的に、アジスロマイシンは徐々にサイトカインIL-1の血清中濃度を上昇させるため、アジスロマイシン最終投与から24時間後にはIL-1濃度が最高値に達する。しかし、もう１つサイトカインであるIL-6の血清中濃度は減少し続けた。
【００２７】
アジスロマイシン処理は可溶性VCAMの血漿濃度に有意な影響を及ぼさなかったという先の報告（Semaanら、 J.Cardiovasc. Pharmacol. (2000), 36 : 533-537）とは対照的に、本発明に従って実施した研究では、アジスロマイシン処理の24時間後には既にsVCAMの血漿濃度は明らかに著しく減少していた。
【００２８】
本発明に従って得られた結果から、健康なヒト被験者をアジスロマイシンの標準的な投薬計画に従って３日で処理すると、好中球顆粒酵素、酸化的バースト、酸化的保護メカニズム、好中球ケモカインおよび循環IL-1、IL-6、IL-8に対して急性作用を引き起こすだけでなく、好中球アポトーシスと可溶性接着分子に対して遅効型作用を引き起こすことが示される。
【００２９】
従って、本発明によれば、アジスロマイシンを好中球優性非感染性炎症性疾患用の有用な予防薬および／または治療薬として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
後述の定義を、本発明を説明する際に使用する種々の用語の意味および範囲を例示し、明確にするために記す。
【００３１】
前記用語「好中球優性非感染性炎症性疾患（neutrophil-dominated non-infective inflammatory disease）」とは、組織損傷、化学物質照射または免疫プロセスの結果生じる炎症性の疾患、障害または症状を意味し、ウイルス、細菌、真菌、原生動物等の微生物の浸潤により生じるものは含まない。また該疾患、障害または症状は、炎症組織に入り込んで炎症反応を増幅する最初の細胞である好中球の該組織への浸潤を特徴とする。幾つかの非感染性炎症性疾患では、好中球の浸潤および活性化のための刺激が持続して存在するために炎症反応が延長された場合でさえ、好中球が依然としてその炎症領域における優性な細胞型である。このような例としては慢性閉塞性肺疾患（COPD）、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）および好中球性皮膚病変が挙げられる。他の好中球優性非感染性炎症性疾患としては、好中球には依存せずにその病状の慢性化をもたらす潜在的な刺激を有する疾患がある。例えば、自己免疫疾患は身体の正常な構造成分に対する免疫応答の発達を主な原因とし、Tリンパ球の活性化と、可能であればBリンパ球による自己抗体の産生とを伴う。例えば関節リウマチ（RA）では、関節間の構造成分に対して免疫反応が起きる。しかし、RAおよび他の自己免疫疾患では好中球の激しい浸潤と活性化とを特徴とする急性再発症状がみられる。これらの慢性自己免疫炎症の活動期は好中球優性であり、例えばRA患者の滑液中には好中球の顕著な蓄積がみられる。幾つかの自己免疫疾患では、自己抗体の生成が顕著であり、それにより抗原と自己抗体との免疫複合体の組織内沈積と補体系の活性化が起こる。好中球は組織に侵入して該免疫複合体を飲み込み、該好中球の浸潤と活性化は活性化補体因子により激化する。このタイプの疾患例としては、腎臓病、特に重篤な腎臓損傷を引き起こす糸球体腎炎がある。
【００３２】
従って、前記用語「好中球優性非感染性炎症性疾患」には、これに限定されるものではないが、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、気管支炎、気管支拡張症、気腫、嚢胞性繊維症、炎症性腸疾患、痛風性関節炎、激しい好中球優性段階を特徴とする自己免疫疾患（例えば関節リウマチ）、好中球の浸潤が活性化補体因子により激化する自己免疫疾患（例えば糸球体腎炎）、ならびに皮膚病、特に乾癬性皮膚病変（例えば乾癬およびライター症候群）、自己免疫水胞性皮膚病変、血管型好中球性皮膚病変（例えば白血球破砕性血管炎、スイート症候群、膿疱性血管炎、結節性紅斑および家族性地中海熱）、および壊疽性膿皮症を含む全種類の好中球性皮膚病変が含まれる。
【００３３】
また、前記用語「好中球優性非感染性炎症性疾患」には、好中球優性非感染性炎症性疾患の結果生じ、かつ該炎症性疾患それ自体により影響を受ける身体の組織または器官以外のかかる部位に影響を及ぼしうる全ての随伴疾患、障害または症状が含まれる。従って、例として、炎症性腸疾患の結果生じうる腸外疾患、例えばブドウ膜炎や慢性肝炎が挙げられる。
【００３４】
前記用語「活性成分」または「活性物質」とは、生物学的細胞もしくはその部分、特に細胞小器官もしくは細胞成分に影響を及ぼすかまたはそれらを認識することのできる、全ての物質を意味する。かかる活性成分または活性物質は化学的性質を有する。具体的に言うと、かかる活性成分または活性物質は診断薬および治療薬である。本発明においては、該用語「活性成分」または「活性物質」は特に治療薬、すなわち疾患、障害もしくは症状の予防手段として、または特に好中球優性非感染性炎症性疾患における疾患、障害もしくは症状を予防もしくは低減するかまたは根絶させるために、そのような治療を必要とする生物に、疾患、障害もしくは症状の経過中投与するための、物質を意味する。
【００３５】
本発明によれば、前記用語「治療」とは、製薬上もしくは診断上有効な化合物を少なくとも１つの添加剤、例えば担体と共に含む医薬組成物としても定義される薬物または薬剤の予防効果および／または治療効果を意味する。
【００３６】
「アジスロマイシン」とは、米国特許第4,517,359号、米国特許第4,328,334号およびベルギー特許第892,357号に本質的に記載されたようにしてエリスロマイシンA-オキシムのベックマン転位およびその後のEschweiler-Clarke還元的N-メチル化により得られる15員アザラクトン環を有するマクロライド化合物N-メチル-11-アザ-10-デオキソ-10-ジヒドロエリスロマイシンA（9-デオキソ-9-ジヒドロ-9a-メチル-9a-アザ-9a-ホモエリスロマイシンA）を意味する。従って、アジスロマイシンの製造方法に関してこれらの文書に開示された内容は、本出願の開示内容に完全に組み込まれるものとする。
【００３７】
前記用語「製薬上許容しうるその誘導体」とは、アジスロマイシン分子の原子もしくは分子群または結合の置換により得られるアジスロマイシンの無毒性機能的等価物または誘導体を意味し、このためアジスロマイシンの基本構造は変更されないが、アジスロマイシンの構造とは少なくとも１箇所異なっている。前記用語「製薬上許容しうる誘導体」は、例えば米国特許第5,250,518号に本質的に記載されたようにして得られるアジスロマイシンのO-メチル誘導体を含む。従って、O-メチル誘導体の製造方法に関してこの文書に開示された内容は、本出願の開示内容に完全に組み込まれるものとする。
【００３８】
前記用語「製薬上許容しうる誘導体」はまた、アジスロマイシンのエステルをも意味するが、該エステルはエステル結合の加水分解の際にアジスロマイシンの生物学的有効性および特性を保持するものであって、生物学的にまたは別の意味で望ましくないエステルではない。製薬上許容しうるエステルの調製技術は、例えばMarch Advanced Organic Chemistry, 3rd Ed., John Wiley およびSons, New York (1985) p. 1152に開示されている。プロドラッグとして有用な製薬上許容しうるエステルは、Bundgaard, H., ed., (1985) Design of Prodrugs, Elsevier Science Publishers, Amsterdam に開示されている。
【００３９】
前記用語「製薬上許容しうるその水和物」とは、アジスロマイシンの生物学的活性を保持するアジスロマイシンの無毒性の固形または液状化合物であって、水和プロセスにより生成されるために１以上の水分子が双極子力によりアジスロマイシン分子と結びついているものを意味する。
【００４０】
前記用語「製薬上許容しうる塩」とは、一般的に使用される無毒性のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、およびアンモニウム塩を意味し、当業者に公知の方法で調製されるアンモニウム塩、バリウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、プロタミン亜鉛の塩およびナトリウム塩が含まれる。該用語はまた無毒性、すなわち通常アジスロマイシンを適当な有機酸または無機酸と反応させて調製される製薬上許容しうる酸付加塩、例えば酢酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、マレイン酸塩、ナプシル酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、トシル酸塩（tosylate）、吉草酸塩を含む。
【００４１】
前記用語「製薬上許容しうる酸付加塩」とは、遊離塩基の生物学的有効性および特性を保持するが生物学的または他の意味で望ましくないものではない塩を意味し、無機酸、例えば臭化水素酸、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、および有機酸、例えば酢酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、オキサロプロピオン酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸などを用いて生成される。
【００４２】
本発明の塩は、アジスロマイシンを適切な塩基と共に水性もしくは水性／アルコール性溶媒または他の適当な溶媒中に溶かし、次いで該溶液を蒸発乾固させることにより、凍結および凍結乾燥させることにより、または不溶性粗塩の分離を含めて前記のアジスロマイシン塩の水性および／またはアルコール性溶液にジエチルエーテルなどの別の溶媒を加えることにより、生成した本発明の塩を単離することで得られる。アジスロマイシンのアルカリ塩を調製する際には、炭酸アルカリ金属塩または炭酸水素塩が好んで使用される。調製された塩は水に非常に良く溶ける。
【００４３】
前記用語「製薬上許容される複合体またはそのキレート」とは、アジスロマイシンと二価および／または三価の金属との無毒性複合体およびキレートを意味し、これらは米国特許第5,498,699号に本質的に記載されたようにして得ることができる。従って、アジスロマイシンの複合体およびキレートの製造方法に関してこの文書に開示された内容は、本出願の開示内容に完全に組み込まれるものとする。複合体形成およびキレート形成金属として、生理学的に耐性のある化合物を形成しうる第IIおよびIII群の金属、特にMg２＋、Al３＋、Fe３＋、Rh３＋、La３＋およびBi３＋が使用できる。アジスロマイシンと金属との比率は１：１〜１：４の範囲内であることが好ましい。アジスロマイシンの複合体およびキレートをうるためには、周囲温度で水溶液中または水／アルコール混合物中、ｐH8.0〜11.0にて水酸化金属および／または炭酸金属、次サリチル酸金属またはそのゲルと共に、該抗生物質を遊離塩基または遊離塩、特に塩酸塩の形で二価および／または三価の金属と２：１の比率で反応させる。好ましい例としては、アジスロマイシンとAl、MgおよびBiの塩の群より選択される制酸剤とのキレート、アジスロマイシンとスクラルフェートとのキレートならびにアジスロマイシンと次サリチル酸ビスマスとのゲル状キレートが挙げられる。
【００４４】
前記用語「製薬上および治療上許容しうる担体」とは、前記活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、かつ宿主または患者に対して無毒な運搬媒体を意味する。
【００４５】
アジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレートおよび製薬上許容しうる塩からなる群より選択される前期活性成分をげっ歯類やヒトを含む霊長類などの哺乳動物を含む動物に投与して、好中球優性非感染性炎症性疾患を予防、低減または根絶させることもできる。従って本発明は、本発明の活性成分をアジスロマイシンがin vivoで所望の効果を達成するのに十分な量で投与することを含む、かかる障害または疾病の治療的処理方法を包含する。例えば、本発明の活性物質または活性成分を治療上または製薬上有効な量で投与して、COPD、ARDSおよび好中球性皮膚病変を含むがこれらに限定されない種々の非感染性炎症性疾患を治療することができる。
【００４６】
「治療上または製薬上有効な量」とは、本発明のアジスロマイシンまたはアジスロマイシン含有化合物および組成物に対して用いる場合、所望の生物学的効果を引き出すのに十分な化合物量または組成物量を意味する。その結果は疾病の兆候、症状もしくは要因の軽減、または生体系の他の所望の改変でありうる。本発明において、特に好ましい実施形態で得られる結果は、例えば好中球顆粒酵素、酸化的バースト、酸化的保護メカニズムおよび好中球ケモカインおよび循環型IL-1、IL-6、IL-8に対する急性作用、ならびに好中球アポトーシスおよび可溶性接着分子に対する遅効型作用により、好中球優性非感染性炎症性疾患を予防、根絶および／またはその症状もしくは要因を低減することに関する。好ましい実施形態では、本発明の活性成分を好中球優性非感染性炎症性疾患の発症前に予防的に投与しうる。
【００４７】
従って、本発明はまた、活性成分としてアジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレートおよび製薬上許容しうる塩を医薬担体または希釈物と併せて含む医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、全身的または局所的に、特に血管内、経口、肺内、非経口、例えば筋肉内、腹腔内、静脈内（IV）もしくは皮下注射または例えば粉末剤形を用いた吸入、経皮的、鼻腔内、膣内、直腸内、または舌下での投与経路により投与することができ、各投与経路に適した剤形に剤形することができる。前記活性物質および成分は、好ましくは製薬上有効な量で投与する。
【００４８】
経口投与用の固形剤形には、カプセル剤、舌下錠、錠剤、丸薬、粉剤、リポソーム、パッチ、遅溶性被覆剤（time delayed coatings）および顆粒剤が含まれる。かかる固形剤形では、前記の活性化合物は少なくとも１種の不活性で製薬上許容しうる担体、例えばラクトース、スクロース、またはデンプンと混合されている。また、このような剤形には、不活性な希釈剤以外の物質、例えばステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤をさらに含有させることができる。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、該剤形は充填および／または緩衝剤ならびに香味料をさらに含んでいてもよい。さらに錠剤および丸薬は、腸溶コーティングを用いて調製することができる。
【００４９】
経口投与用の液状剤形には、製薬上許容しうる乳液、溶液、懸濁液、シロップと共に、当分野で一般に使用される水などの不活性希釈剤を含有するエリキシル剤が含まれる。かかる不活性希釈剤に加えて、この組成物はさらにアジュバント、例えば浸透圧を変えるための塩、pH調整用化合物、皮膚浸透剤、湿潤剤、乳化懸濁剤、甘味料、香味料、および芳香剤を含みうる。
【００５０】
本発明の非経口投与用医薬組成物は、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、または乳液を含む。非水性溶媒またはビヒクルの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油などの植物油、ゼラチン、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。このような剤形はアジュバント、例えば保存剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤をさらに含有していてもよい。該組成物は、例えば細菌保持フィルターを介した濾過により、該組成物に殺菌剤を組み込むことにより、該組成物に放射線照射することにより、または該組成物を加熱することにより殺菌することができる。該組成物を無菌水、または幾つかの他の無菌で注入可能な媒体を用いて使用直前に調製することもできる。
【００５１】
注射用剤形は生理学的に許容しうる媒体、例えば水、生理食塩水、PBS、水溶性エタノール、水溶性エチレングリコールなどを含みうる。使用しうる水溶性防腐剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アスコルビン酸塩、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメローサル、ホウ酸フェニル水銀、パラベン、ベンジルアルコールおよびフェニルエタノールが含まれる。これらの物質は、各個別量にして約0.001〜約5重量％、および好ましくは約0.01〜約2重量％の量で存在していてもよい。使用しうる適当な水溶性緩衝剤としては、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩、酢酸塩、コハク酸塩など、例えばリン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウムおよび炭酸ナトリウムがある。カルボメチルセルロースなどの添加剤は担体として約0.01〜約5重量％の量で使用しうる。この製剤は、該製剤の使用目的、疾病を治療するために使用する特定の様式、意図する治療等に応じて改変しうる。
【００５２】
直腸内または膣内投与用の組成物は、好ましくは前記活性物質の他にカカオバターや坐薬用ワックスなどの賦形剤を含有しうる坐剤である。鼻腔内投与および舌下投与用組成物もまた、当分野で公知の標準的な賦形剤を用いて調製することができる。
【００５３】
本発明の活性物質または活性成分を含有する前記組成物は、予防的および／または治療的処理のために投与することができる。治療用途の場合、既にある疾患に罹っている患者に、上記したように組成物を該疾患の症状およびその合併症を治癒するかまたは少なくとも部分的に抑止するのに十分な量、すなわち治療上有効な量で投与する。
【００５４】
予防用途の場合、本発明の活性物質または活性成分を含有する組成物を、特定の疾患に罹っている疑いがあるかまたは特にその危険性が高い患者に投与する。この場合の量を、「予防上有効な投与量」と定義する。この用途においても、正確な投与量はやはり前記患者の健康状態および体重によって左右される。
【００５５】
本発明の医薬組成物は、デポー製剤、例えば徐放性組成物の形で投与することもできる。かかる徐放性組成物は、前記活性物質または活性成分の粒子を、コラーゲンなどから作製したマトリクス中に含んでいてもよい。
【００５６】
効果的な治療に必要な前記活性物質または活性成分の量は、投与手段、標的部位、患者の生理状態、および他に投与した薬剤を含む多くの異なる因子に依存するだろう。
【００５７】
アジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレートおよび製薬上許容しうるその塩からなる群より選択される本発明の活性物質または活性成分は、１日約10mg〜約2000mg、特に約30mg〜約1500mgの範囲内で投与された場合に、好中球優性非感染性炎症性疾患の治療に有効である。使用する具体的な投与量は、治療する特定の症状、投与経路、ならびに症状の重篤度および患者の年齢と一般的な症状などの要因に応じて担当臨床医の判断により調節される。
【００５８】
本発明の活性物質または活性成分を単独で、または現在好中球優性非感染性炎症性疾患の治療に使用されている他の薬剤、例えばメチルキサンチン非ステロイド系抗炎症剤などの非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、コリン作働性アンタゴニストなどと共に投与してもよく、その際には本発明の活性物質または活性成分の抗炎症作用により後者薬剤の投与量を50％または25％減らすことができるだろう。
【００５９】
本発明の組成物、好ましくは水溶性の組成物は、本発明の１単位投与剤形で使用する濃度では実質的な薬理活性を一切示すことなく体液中に注射可能な水溶性タンパク質（以後、「水溶性タンパク質」と称する）をさらに含有していてもよい。このような水溶性タンパク質としては、血清アルブミン、グロブリン、コラーゲンおよび／またはゼラチンが好ましい。このタンパク質を、通常使用される量で、注射可能な医薬組成物中に添加することができる。従って、該水溶性タンパク質と本発明の活性物質または活性成分との重量比は、例えば約0.0001：1〜100：1、好ましくは約0.001：1〜10：1、より好ましくは約0.01：1〜1：1である。
【００６０】
続いて本発明は、前述の活性物質または活性成分それ自体、およびそれらを特に乾燥形態および／もしくは純粋な形態で、または水性もしくは水性／アルコール性溶液中に含有する組成物、に関する。前記水溶性組成物または本発明の活性物質もしくは活性成分から調製される溶液のpHは、該pHが薬理的活性ペプチドの活性に何ら負の影響を及ぼさず、かつ一般的な注射で許容しうる範囲内であり、さらに言えば該pHが該溶液の粘性を大きく変えたり沈殿物などを形成させたりしない範囲内とすべきである。従って、該溶液のpHは好ましくは約４〜７、好ましくは５〜６、特に5.3〜5.5とすべきである。
【００６１】
本発明の水溶性組成物を投与用水溶液に変換して使用する場合、該溶液における本発明の薬理的活性物質もしくは活性成分またはその塩の濃度は，好ましくは約0.0000001〜10％（w/v）、より好ましくは約0.000001〜5％（w/v）または最も好ましくは約0.00001〜1％（w/v）とすべきである。
【００６２】
本発明の組成物は、好ましくは本発明の薬理的活性物質または活性成分と、必要に応じて上記水溶性タンパク質などのさらなる添加剤とを共に含有する単位剤形とすべきである。従って、例えば上記の２つまたは３つの成分を滅菌水または滅菌生理食塩水に溶かすかまたは懸濁することにより、アンプルまたはバイアルに詰める。この場合、その調製方法は、前記薬理的活性物質または活性成分の溶液と、さらに必要に応じて前記添加剤とを混合すること、または前記添加剤を粉末形態で前記薬理的活性物質もしくは活性成分の溶液に加えること、または他のいずれの適切な手順の組み合わせを含んでいてもよい。該剤形は、滅菌水または滅菌生理食塩水を、前記薬理的活性物質と必要に応じて前記添加剤とを共に含む凍結乾燥物または真空乾燥した粉末に加えることで調製してもよい。この単位剤形は従来の添加剤を１つ以上含んでいてもよく、かかる添加剤としてはpH調整剤（例えばグリシン、塩酸、水酸化ナトリウム）、局所麻酔薬（例えば塩酸キシロカイン、クロロブタノール）、等張化剤（例えば塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール）、乳化剤、吸着阻害剤（例えばTween（登録商標）60または80）、滑石粉、デンプン、ラクトースおよびトラガカント、ステアリン酸マグネシウム、グリセロール、プロピレングリコール、保存剤、ベンジルアルコール、メチルヒドロキシ安息香酸および／またはアラキン水素油（oleum arachid hydrogen）が挙げられる。この単位剤形は、ポリエチレングリコール400やデキストランなどの製薬上許容しうる賦形剤をさらに含んでいてもよい。
【００６３】
本発明の組成物を、これらの成分を従来の方法に従って混合することにより作製する。該組成物の成分を混合する際の目標は、前記薬理的活性物質の活性が維持され、かつ作業中の気泡の形成が最小限となるようにすることである。それらの成分を同時に、または何らかの順に容器（例えば瓶や乾燥容器）に入れる。該容器中の空気は例えば、無菌で清浄な空気または無菌で清浄な窒素ガスでありうる。得られた溶液を小さなバイアルまたはアンプルに移し、さらに凍結乾燥することができる。
【００６４】
液状または凍結乾燥粉末形態の本発明の組成物を、ポリ（乳酸−グリコール酸）共重合体、ポリ（ヒドロキシ酪酸）、ポリ（ヒドロキシ酪酸−グリコール酸）共重合体、またはこれらの混合物などの生分解性高分子溶液中に溶解または分散させて、次いで、例えばフィルム、特に軟カプセルもしくは硬カプセル形態のマイクロカプセル（微小球）またはナノカプセル（ナノ小球）に製剤化することができる。
【００６５】
その上、リン脂質、コレステロールまたはそれらの誘導体を含むリポソーム中に封入された本発明の組成物を、さらに生理食塩水または生理食塩水中に溶解させたヒアルロン酸溶液中に分散させることができる。
【００６６】
前記軟カプセルには本発明の液状形態の組成物を充填してもよい。前記硬カプセルには本発明の凍結乾燥粉末状組成物を充填してもよく、または本発明の凍結乾燥粉末状組成物を圧縮して錠剤とし、それぞれ直腸内投与または経口投与に使用してもよい。
【００６７】
勿論、本発明の組成物を自己投与用の充填済みシリンジとして提供することができる。
【００６８】
本発明の好ましい実施形態だけをこれまで具体的に記載してきたが、本発明の趣旨および対象範囲を逸脱することなく、本発明を改変および変更することが可能であることが理解されよう。本発明のさらに好ましい実施形態については、特許請求の範囲に記載されている。
【実施例】
【００６９】
健康な被験者に対して試験を実施し、選択した炎症関連パラメータに投与量3×500mgのアジスロマイシンが及ぼす影響を詳しく調べた。
【００７０】
薬物投与、血液採取および血漿
各被験者にアジスロマイシンの標準的な250mgカプセル（Sumamed（登録商標）, PLIVA Zagreb）２錠を３日間連続で与えた。処理直前および3回目すなわち最後のアジスロマイシン投与から2時間30分後、24時間後および28日後に肘脈から血液を採取してEDTA含有チューブに入れた。細胞数計測、塗抹標本調製、多形核細胞および血清単離の為のアリコートを得た。
【００７１】
一次アズール顆粒酵素の分析
白血球顆粒は一連の抗菌性タンパク質を含有する膜結合型細胞小器官である。好中球から細胞外へ分泌されるかまたは食胞内に放出される分解系酵素を含有する以外にも、これらの顆粒および小胞の多くのタイプの膜が、特定のレセプター（例えばfMLPレセプター）やNADPHオキシダーゼのシトクロムｂなどの重要な分子を含有している。
【００７２】
（ａ）ミエロペルオキシダーゼの分析
該酵素ミエロペルオキシダーゼ（MPO）は、55,000ダルトンの重鎖２つおよび15,000ダルトンの軽鎖２つを持つ135,000ダルトンのタンパク質である。MPOは顆粒性細胞の一次またはアズール顆粒中に位置する。MPOの機能は、好中球の殺菌作用に必須の反応性酸素代謝産物を提供することである。酸素代謝産物の生成はMPO陰性顆粒（該顆粒は前記NADPHオキシダーゼの必須成分であるフラボシトクロムｂ558を担持する）の成分およびMPO陽性アズール顆粒の成分に依存している。MPOは前記NADPHオキシダーゼの比較的無害な生成物であるH2O2を変換して次亜塩素酸とする。顆粒球におけるMPO活性の生物学的意味とは、特に免疫複合体による食作用刺激後の、炎症過程にある炎症性顆粒球中の全顆粒の可動化に関連した強力な酸素依存性殺菌作用である。
【００７３】
MPO活性は、血液塗抹標本中の好中球の染色強度から、またELISAにより細胞溶解物中で、評価した。エタノール−ホルムアルデヒドで固定した後、過酸化水素およびベンジジン（SIGMA）含有基質溶液中で塗抹標本をインキュベートした。インキュベーション後、塗抹標本をギムザ溶液で対比染色した。顆粒球100個のMPO陽性値を評価し、細胞質中の沈降色素の強度を基準として0〜4＋のスコアを付けた。従って、スコアは0〜400の値をとりうる。正常なスコアの範囲（290〜390）は、アジスロマイシンを投与する前に本研究で得たものである。高倍率（×1000）光化学顕微鏡下でデジタルカメラにて撮影した塗抹標本のデジタル画像についてもMPO活性を評価した。血液塗抹標本中の好中球のMPO活性は、アジスロマイシン最終投与2時間30分後から24時間後まで減少し、28日後にベースラインまで回復した（表１）。ELISAにより測定した好中球溶解物中のMPO酵素タンパク質濃度を表１に示す。好中球酵素タンパク質における変化は細胞内酵素活性と同じパターンを示し、アジスロマイシン最終投与2時間30分後から24時間後まで減少して28日後にベースラインまで回復した。MPO測定についてのいずれの方法論的アプローチも正しいことが、互いに確認された。細胞化学を用いて測定した低MPO好中球濃度によって示される脱顆粒は、好中球溶解物における低MPO ELISA濃度と関連していた。
【００７４】
（ｂ）N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（NAGA）およびβグルクロニダーゼの分析
グリコシダーゼはオリゴ糖と他の配糖体とのグリコシド結合の加水分解を触媒する酵素である。該酵素は基質分子のグリコシド部分に特異的であり、N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（NAGA）およびβグルクロニダーゼはそのような酵素である。これらの酵素はいずれも、好中球のアズール（一次；ペルオキシダーゼ陽性）顆粒中に存在するリソソーム酵素である。好中球の脱顆粒は炎症中に生じているため、多くの著者がこれらの酵素を脱顆粒マーカーとして、また好中球の反応性を評価するために選んだ。血清および好中球溶解物における両酵素の触媒濃度を、NAGAについてはO'Brienら (New Engl. J. Med. (1970) 283 : 15-20)に、またβグルクロニダーゼについてはGlaser およびSly (J. Lab. Clin. Med. (1973) 82: 969)に記載された蛍光分析法を用いて測定した。
【００７５】
その結果（表１）から、血清中のNAGA活性が最終投与から2時間30分後に約３０％増大したことが示された。最終投与から24時間後には初期値をおよそ５０％上回っていた。28日後でも、血清NAGA値は依然として初期値を７０％上回っていた。血清NAGAの増大に伴い、PMN中の酵素活性が減少した。最終投与から2時間30分後、顆粒球中のNAGAにおいて約７０％の減少が測定された。24時間後にはPMN中のNAGA活性が約３０％増大したが、この値は依然として初期値を約４０％下回っていた。28日後のNAGA活性は初期値を４０％上回るまでに増大した（表１）。
【００７６】
血清中のβグルクロニダーゼ活性については、最終投与後24時間は何の変化も見られなかった。28日後の血清値は初期値を約４０％上回っていた。PMN中のβグルクロニダーゼ活性は、初期値と比較して、2時間30分後に約２０％、および24時間後に約５０％減少した。しかし28日後には、PMN中のβグルクロニダーゼ活性は初期値と比べてかなり高く（約３００％）なっていた（表１）。
【００７７】
グリコシダーゼ活性を分析すると、健康な被験者においてアジスロマイシンは最終投与後24時間以内にアズール顆粒から４０〜５０％の酵素の放出を誘導したことが明らかである。PMN中のNAGA活性の減少に伴い、血清中では該活性が上昇した。これら２つの酵素の血清における活性は、前記薬剤の最終投与から2時間30分後および24時間後にベースライン（アジスロマイシン投与前）をわずかに上回り、28日後にはさらに増大した（表１）。
【００７８】
これに対し、好中球溶解物中での前記２酵素の活性はアジスロマイシン最終投与後数時間で減少し、NAGA活性の落ち込みは2時間30分後に最大となり、28日後にベースラインまで回復した。細胞のβグルクロニダーゼ活性はアジスロマイシン最終投与24時間後には依然として減少し、28日後ベースラインより十分上に増加した（表１）。
【００７９】
要約すると、好中球一次アズール顆粒から放出された酵素は、アジスロマイシン投与2時間30分後から24時間後までは血清中に存在してわずかに高い活性を示す傾向があったが、これと同時期の末梢血好中球におけるその活性は低かった。このことは、それらの酵素が脱顆粒により放出されていたことを示唆している。NAGAはアジスロマイシン投与後早い時期に放出され、一方MPOおよびβグルクロニダーゼが遅れて放出された。また、これらの酵素活性の回復率も異なっていた。
【００８０】
好中球の酸化的バーストについての研究
全ての好気性生物はエネルギーを産生するために酸素を利用する。しかし、酸素を使うことの利点は同時にその酸化過程が損傷をも引き起こしうる危険を伴うということを示す多くの示唆がある。食細胞活動中に好中球が刺激された場合、好中球は酸化的バーストを起こし、反応性酸素代謝産物を生成および放出する。これらの反応性酸素種は、食細胞が媒介するその殺菌作用の主な機構として働く。その反応は、急速な酸素の取り込みとその後の酸素のスーパーオキシド（O2-）への還元を特徴とする。該反応はNADPHオキシダーゼにより電子供与体としてNADPHまたはNADHを用いて触媒される。これらの防御メカニズムが不適切な方向に働くと、組織に損傷を与える。
【００８１】
（ａ）化学発光生成の測定
活性化細胞による反応性酸素種の生成は、しばしば化学発光（CL）の測定により確認される。形成されたラジカル種は光子発生性化学物質（例えばルミノール）と反応し、得られた光の放射は光電セルで測定される。化学発光は白血球刺激（例えばfMLP）の結果として検出可能であり、その酸化的細胞障害活性の尺度である（Allenら、 Biochem. Biophys. Res. Commun.(1972), 47 : 679）。
【００８２】
表１に示す本研究の結果から、アジスロマイシンが、アジスロマイシン処理したヒト血液から単離された刺激好中球より生成する化学発光を阻害するということが示される。
【００８３】
（ｂ）シトクロムＣアッセイ系
好中球をシトクロムＣと共にインキュベートし、fMLPで刺激した（Cohen および Chovaniec, 1978, J.Clin. Invest. 61 : 1081-1087）。550nmおよび540nmでの吸光度を記録し、その結果をΔAとして表した。
【００８４】
細菌ペプチドfMLPに応答して生じる好中球の酸化的バーストは、アジスロマイシンの３日投与により阻害された（表１）。シトクロムCおよびルミノールの両方をアッセイ系として使用すると、アジスロマイシン最終投与から2時間30分後には既に阻害が検出可能であり、この時点での阻害は24時間後のものより大きく、28日後も正常値まで回復しなかった。
【００８５】
よって、アジスロマイシンは酸化的バーストの阻害物質であると考えられる。従ってアジスロマイシンは好中球のラジカル産生（酸化的バースト）が過剰となる種々の疾患、例えばCOPDの発症原理を提供するものである。
【００８６】
グルタチオンペルオキシダーゼおよびグルタチオンレダクターゼの分析
酸素フリーラジカルおよび過酸化脂質は多くの疾病の病因に関わっている。フリーラジカルの生物学的作用は、in vivoで広範囲にわたる坑酸化物質、例えばα−トコフェロール（ビタミンE）、アスコルビン酸（ビタミンC）、β−カロチン、還元グルタチオン（GSH）および坑酸化酵素（スーパーオキシドジスムターゼすなわちSOD、グルタチオンペルオキシダーゼすなわちGSHPx、カタラーゼすなわちCAT）により制御されている（Benabdeslamら、 Clin. Chem. Lab. Med. (1999), 37 : 511-516; Matesら、 Blood Cells Mol. (1999), 25 : 103-109）。最近になって、坑酸化機能と抗炎症特性および／または免疫抑制特性とが、決定的に関連付けられた（Matesら、 Blood Cells Mol. (1999), 25 : 103-109）。フリーラジカルの産生および酸化還元状態における異常により種々の炎症性分子の発現を調節し（Sundaresanら、 Science (1995), 270 : 296-299 ; Kaouassら、 Endocrine (1997), 6: 187-194）、それにより炎症性過程を引き起こす特定の細胞過程に影響を及ぼして炎症を激化させたり組織損傷をもたらしたりすることができる（Tsaiら、 FEBS Lett. (1997), 436 : 411-414）。
【００８７】
細胞性グルタチオンペルオキシダーゼ（GSHPx）は、４つの同一サブユニット各々がその活性部位にセレン原子（Se）１個をセレノシステインの形で含有する４量体タンパク質である（Missoら、 J. Leukoc. Biol. (1998), 63: 124-130）。GSHPxはH2O2の解毒に関して何らかの役割を担っており、過酸化脂質を無毒性アルコールに転換する（Akkusら、 Clin. Chim. Acta (1996), 244 : 221-227） ; Urbanら、 Biomed & Pharmacother. (1997), 51 : 388-390）。本研究では、アジスロマイシン処理した健康な被験者のPMN細胞内GSHPx活性の変化を市販のキットRANSEL（Randox Laboratories）を使用して測定した。GSHPxはクメンヒドロペルオキシドによるグルタチオン酸化を触媒する。グルタチオンレダクターゼとNADPHの存在下では、酸化グルタチオンは直ちに還元型へと転換され、これと同時にNADPHからNADP+への酸化が起こる。340nmにおける吸光度の減少が観測される。
【００８８】
グルタチオンレダクターゼは酸化グルタチオンからグルタチオン（GSH）への還元を触媒する偏在酵素である。グルタチオンレダクターゼは、細胞の還元GSHを十分な濃度で維持するグルタチオン酸化還元サイクルに必須である。GSHは、アミノ酸輸送時にはフリーラジカルおよび有機酸化物と反応する抗酸化物質として働き、また有機酸化物の解毒および生体異物の代謝時にはGSHPxおよびグルタチオンS-トランスフェラーゼの基質として働く。グルタチオンレダクターゼを、グルタチオンレダクターゼ用BIOXYTECH（登録商標）GR-340（商標）比色アッセイ（OXIS International, Inc.）を用いて測定した。簡潔に言えば、NADPHからNADP+への酸化は限定的な濃度のグルタチオンレダクターゼにより触媒される。
【００８９】
好中球溶解物中のGSHPx活性（一定細胞数当たりで示す）については、アジスロマイシン最終投与から2時間30分後には変化が見られなかったが、最終投与から24時間後には有意に減少した（表１）。該活性は28日後にベースラインまで回復した。細胞溶解物中のグルタチオンレダクターゼ活性（一定細胞数当たりで示す）についても似たような傾向が見られ、アジスロマイシン最終投与から2時間30分後および24時間後には有意に減少し、正常値まで回復した後、処理28日後には正常値を上回った（表１）。
【００９０】
アポトーシスの分析
血液塗抹標本の形態学で示されたように、アジスロマイシンの３日投与は顆粒球に遅効型アポトーシス誘発作用を及ぼした。結果を表１に示す。計測されるアポトーシス細胞の数はアジスロマイシンの３日投与後増え続け、最終投与から28日後には統計的に有意な水準に達した。アポトーシス細胞数の増大は、活性で潜在的に有害な好中球の数が減少したことを示唆している。
【００９１】
サイトカインおよびケモカインの分析
他の急性ではあるがアジスロマイシンの抗炎症作用と思われる作用もまた、本研究により見出された。
【００９２】
好中球特異的なケモカインCXCサブファミリーのメンバーであるインターロイキン８は、強力な好中球化学走化性因子であり、かつ活性化因子である（Oppenheim, J. J. Ann. Rev. Immunol. (1999), 9 : 617）。インターロイキン８は少なくとも２つのGタンパク質共役受容体に結合する（IL-8R1およびIL-8R2）。これらの受容体は機能的に異なる。細胞質の遊離Ca2+変化や顆粒酵素の放出などの応答はこれら両受容体により媒介されるが、一方で呼吸の促進（respiratory burst）やホスホリパーゼDの活性化はIL-8R1を介した刺激のみに依存している（Johnesら、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1996), 93 : 6682-6686）。IL-8は循環型好中球を動員する際の主要な媒介物質である。このケモカインは炎症刺激に応答して発現され、リンパ球、上皮細胞、角化細胞、繊維芽細胞、内皮細胞、平滑筋細胞および好中球を含む種々のタイプの細胞により分泌される。後者の例では、IL-8は、最も多く分泌される（また最も広範囲にわたって研究されている）、好中球により産生されるサイトカインの１種である。大変興味深いことに、好中球はIL-8のための一次細胞標的を示し、このIL-8に対して好中球が走化性、顆粒内容物の放出、呼吸の促進、細胞表面受容体のアップレギュレーション、非刺激内皮細胞への増大された接着、および内皮を横断する移動によって応答する。ヒト好中球によるIL-8産生を刺激しうる物質としては、TNF-α、IL-1β、GM-CSF、ロイコトリエンB4、PAF、fMLP、ラクトフェリン、LPおよびその他多くのものが挙げられる（Cassatella, M. A., Adv. Immunol. (1999), 73 : 369-509）。IL-8はヒト好中球の自発的なTNF-α媒介型アポトーシスを遅らせる（Kettritzら、 Kidney Int. (1998), 53 : 84-91）。IL-8は有力なCXCケモカインであり、またLPSで刺激したヒト肺胞性マクロファージの上清に蓄積する優れた好中球誘引物質である（Goodmannら、 Am. J. Physio. (1998), 275 : L87-L95）。
【００９３】
エリスロマイシンがヒト上皮細胞におけるIL-8発現に対する阻害作用を有すること、およびこの作用形態が恐らくその臨床効果と関係していることが報告された（Takizawaら、 Am. J. Respir. Crit. Care Med. (1997), 156 : 266271）。
【００９４】
ロキスロマイシンもまた、鼻ポリープ繊維芽細胞におけるIL-8産生を低減させることができる（Nonakaら、 Acta Otolaryngol. (1998) Suppl. 539 : 71-75）。関節リウマチ由来の関節滑膜細胞（synoviocyte）では、IL-1α、IL-6、IL-8、GM-CSFの産生をクラリスロマイシンで阻害することができた（Matsuokaら、 Clin. Exp. Immunol. (1996), 104 (3) : 501-8）。全血中でのIL-8産生のex vivo評価においても、エリスロマイシンがIL-8産生を阻害する可能性が確認された（Schultzら、 J. Antimicrob. Chemother. (2000), 46 : 235-240）。ヒト気管支上皮細胞について、同様の知見が最近になって報告された（Desaki M.ら、 Biochim. Biophys Res. Commun. (2000) 267 : 124-128）。しかし、近年の研究では、in vitroではPMNのIL-8産生に対するアジスロマイシンの調節効果が見られないことが報告されている（Kochら、 J. Antimicrob. Chemother. (2000), 46 : 19-26）。
【００９５】
サイトカインおよびケモカインの濃度はELISAキットを用いて測定した。アジスロマイシンを３日投与した後、血清サイトカインおよびケモカイン濃度に幾つかの異なるパターンが見られた。好中球刺激ケモカインであるIL-8およびGRO-αの血漿濃度における急速で顕著な減少が、アジスロマイシン最終投与から2時間30分後および24時間後に観察された（表１）。IL-8の濃度は28日後に本質的にベースラインまで回復したものの、GRO-αの濃度はこの時点でも減少していた。
【００９６】
これらのデータは明らかに、アジスロマイシンがex vivoでIL-8の放出に及ぼすその急性阻害作用を示しており、この特性は前記ケモカインGRO-αの放出阻害にも関与している。しかし、血清ケモカイン濃度を測定したことを述べておくべきである。従って、前記ケモカインの細胞供給源について結論を出すことはできない。
【００９７】
IL-1の低いベースライン血清濃度は、アジスロマイシン最終投与後徐々に上昇し、24時間後に統計的に有意な水準に達した（表１）。該濃度はアジスロマイシン最終投与から28日後にベースラインまで戻った。対照的に、IL-6の血清濃度は減少し続け、アジスロマイシン最終投与から28日後に統計的に有意な水準に達した（表１）。
【００９８】
接着分子の分析
アジスロマイシン処理は可溶性VCAMの血漿濃度に有意な影響を及ぼさないとする初期の報告データ（Semaanら、 J. Cardiovasc. Pharmacol. (2000), 36: 533-537）とは対照的に、本研究では、アジスロマイシン最終投与から24時間後に血清sVCAMの減少が観察され、28日後も有意に減少していた。このことは、アジスロマイシンが好中球化学走化性ペプチドの生成と活性化白血球に対する接着分子の発現および放出との両方を阻害する可能性があることを示している（表１）。ヒトsVCAM血清濃度を定量的に測定するために、ELISAキットを使用した（R & D systems, UK）。
【００９９】
PMNサンプル中のタンパク質を、Bradfordの方法（Anal. Biochem. (1976) 72: 248-254）に従い、標準としてウシ血清アルブミンを使用して測定した。
【表１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004531539.tif 000055
【手続補正書】
【提出日】平成15年8月7日(2003.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
人間および動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物を製造するための、アジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩からなる群より選択される活性成分の使用であって、
該好中球優性非感染性炎症性疾患が、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、気腫、乾癬およびライター症候群のような乾癬性皮膚病変、自己免疫水胞性皮膚病変、白血球破砕性血管炎、スイート症候群、膿疱性血管炎、結節性紅斑、および家族性地中海熱のような血管型好中球性皮膚病、ならびに壊疽性膿皮症を含む好中球性皮膚病変、好中球の浸潤が活性化補体因子により激化する自己免疫疾患、特に糸球体腎炎を含む腎臓病、ならびに関節リウマチのような激しい好中球優性段階を特徴とする自己免疫疾患からなる群より選ばれる、前記使用。
【請求項２】
前記活性成分がアジスロマイシンのO-メチル誘導体である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
前記活性成分がアジスロマイシンのエステルである、請求項１記載の使用。
【請求項４】
前記活性成分がアジスロマイシンの１水和物である、請求項１記載の使用。
【請求項５】
前記活性成分がアジスロマイシンの２水和物である、請求項１記載の使用。
【請求項６】
前記活性成分がアジスロマイシンと金属イオンとの複合体またはキレートである、請求項１記載の使用。
【請求項７】
アジスロマイシンと金属との比率が１：１〜１：４である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
前記金属イオンが二価金属イオンである、請求項６または７記載の使用。
【請求項９】
前記金属イオンが三価金属イオンである、請求項６または７記載の使用。
【請求項１０】
前記活性成分がアジスロマイシンのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩である、請求項１記載の使用。
【請求項１１】
前記活性成分がアジスロマイシンの酸付加塩である、請求項１記載の使用。
【請求項１２】
前記酸付加塩が無機酸を用いて生成される、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
前記無機酸が臭化水素酸、硝酸、リン酸または硫酸である、請求項１１または１２記載の使用。
【請求項１４】
前記酸付加塩が有機酸を用いて生成される、請求項１１記載の使用。
【請求項１５】
前記有機酸が、酢酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、または酒石酸である、請求項１４記載の使用使用。
【請求項１６】
前記医薬組成物が前記疾患を根絶もしくは低減させるかまたはその進行を食い止めるのに十分な量の前記活性成分を含有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記医薬組成物が前記活性成分量にして10mg〜2000mgの投与量で１日１〜３回投与される、請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
前記医薬組成物が前記活性成分量にして30mg〜1500mgの投与量で１日１〜３回投与される、請求項１７記載の使用。
【請求項１９】
前記医薬組成物が固形または液状剤形で経口投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２０】
前記の経口投与用固形医薬組成物がカプセル剤、舌下錠、錠剤、丸薬、粉剤、リポソーム、パッチ、遅溶性被覆剤、および顆粒剤である、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
前記の経口投与用固形医薬組成物が少なくとも１種の不活性で製薬上許容しうる担体を含有する、請求項１９または２０記載の使用。
【請求項２２】
前記の不活性で製薬上許容しうる担体がラクトース、スクロース、またはデンプンである、請求項２１記載の使用。
【請求項２３】
前記の経口投与用固形医薬組成物が、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、充填および／または緩衝剤、ならびに香味料からなる群より選択される物質をさらに含む、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
前記の経口投与用固形医薬組成物が、腸溶コーティングを用いて調製される、請求項１９〜２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記の経口投与用液状医薬組成物が、製薬上許容しうる乳液、溶液、懸濁液、またはシロップである、請求項１９記載の使用。
【請求項２６】
前記の経口投与用液状医薬組成物が少なくとも１種の不活性で製薬上許容しうる担体を含有する、請求項２５記載の使用。
【請求項２７】
前記の不活性で製薬上許容しうる担体が水または生理食塩水である、請求項２６記載の使用。
【請求項２８】
前記の経口投与用液状医薬組成物が、アジュバント、浸透圧を変えるための塩、pH調整用化合物、皮膚浸透剤、湿潤剤、および乳化懸濁剤からなる群より選択される物質をさらに含む、請求項２５〜２７のいずれか1項に記載の使用。
【請求項２９】
前記医薬組成物が非経口的に投与される、請求項１〜１８のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３０】
前記の非経口投与用医薬組成物が注入用剤形または注射用剤形である、請求項２９記載の使用。
【請求項３１】
前記の非経口投与用医薬組成物が無菌の水性もしくは非水性溶液、懸濁液、または乳液である、請求項２９または３０記載の使用。
【請求項３２】
前記の非経口投与用医薬組成物が非水性溶媒またはビヒクルを含む、請求項２９〜３１のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３３】
前記非水性溶媒またはビヒクルがプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油やトウモロコシ油のような植物油、ゼラチン、およびオレイン酸エチルのような注射可能な有機エステルである、請求項３２記載の使用。
【請求項３４】
前記の非経口投与用医薬組成物が保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤のようなアジュバントを含む、請求項２９〜３３のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３５】
前記医薬組成物が直腸内または膣内投与される、請求項１〜１８のいずれか1項に記載の使用。
【請求項３６】
前記の直腸内または膣内投与用医薬組成物が坐剤、浣腸剤、またはフォーム剤である、請求項３５記載の使用。
【請求項３７】
前記の直腸内または膣内投与用医薬組成物がカカオバターや坐薬用ワックスのような賦形剤を含有する、請求項３５または３６記載の使用。
【請求項３８】
請求項１〜３７のいずれか1項に記載の使用であって、好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための前記医薬組成物が、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、該疾患の治療に有用な追加活性成分を１つ以上含有する、前記使用。
【請求項３９】
前記追加活性成分の投与量が医薬組成物と比較して少なく、また前記追加活性成分を１つだけ含有する、請求項３８記載の使用。
【請求項４０】
人間または動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物であって、活性成分としてアジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩を含み、
該好中球優性非感染性炎症性疾患が、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、気腫、乾癬およびライター症候群のような乾癬性皮膚病変、自己免疫水胞性皮膚病変、白血球破砕性血管炎、スイート症候群、膿疱性血管炎、結節性紅斑、および家族性地中海熱のような血管型好中球性皮膚病、ならびに壊疽性膿皮症を含む好中球性皮膚病変、好中球の浸潤が活性化補体因子により激化する自己免疫疾患、特に糸球体腎炎を含む腎臓病、ならびに関節リウマチのような激しい好中球優性段階を特徴とする自己免疫疾患からなる群より選ばれる、前記医薬組成物。
【請求項４１】
前記活性成分がアジスロマイシンのO-メチル誘導体またはエステルである、請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４２】
前記活性成分がアジスロマイシンの１水和物または２水和物である、請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記活性成分がアジスロマイシンと二価もしくは三価金属イオンとの複合体またはキレートである、請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４４】
アジスロマイシンと金属イオンとの比率が１：１〜１：４である、請求項４３記載の医薬組成物。
【請求項４５】
前記活性成分がアジスロマイシンのアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、またはアンモニウム塩である、請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４６】
前記活性成分がアジスロマイシンの酸付加塩である、請求項４０記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記酸付加塩が、臭化水素酸、硝酸、リン酸、または硫酸のような無機酸を用いて生成される、請求項４６記載の医薬組成物。
【請求項４８】
請求項４６記載の医薬組成物であって、前記酸付加塩が、酢酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グリコール酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、p-トルエンスルホン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸または酒石酸のような有機酸を用いて生成される、前記医薬組成物。
【請求項４９】
前記活性成分が前記疾患を根絶もしくは低減させるかまたはその進行を食い止めるのに十分な量で含有されている、請求項４０〜４８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
請求項４０〜４９のいずれか1項に記載の医薬組成物であって、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、前記疾患の治療に有用な追加活性成分を１つ以上含む前記医薬組成物。
【請求項５１】
前記追加活性成分の投与量が医薬組成物と比較して少なく、また前記追加活性成分を１つだけ含有する、請求項５０記載の医薬組成物。
【請求項５２】
人間または動物において好中球優性非感染性炎症性疾患を治療するための医薬組成物の製造方法であって、活性成分としてアジスロマイシン、製薬上許容しうるその誘導体、製薬上許容しうるその水和物、製薬上許容しうるその複合体またはキレート、および製薬上許容しうるその塩を含み、該活性成分と添加剤、および任意で該疾患の治療に有用な追加活性成分とを混合すること、得られた混合物を無菌の水性もしくは水性／アルコール性溶液中に溶解または懸濁すること、pH調整剤を用いて該溶液のpHを約４〜７とすること、および該溶液をバイアルまたはアンプルに充填することを含み、
該好中球優性非感染性炎症性疾患が、成人呼吸窮迫症候群（ARDS）、気腫、乾癬およびライター症候群のような乾癬性皮膚病変、自己免疫水胞性皮膚病変、白血球破砕性血管炎、スイート症候群、膿疱性血管炎、結節性紅斑、および家族性地中海熱のような血管型好中球性皮膚病、ならびに壊疽性膿皮症を含む好中球性皮膚病変、好中球の浸潤が活性化補体因子により激化する自己免疫疾患、特に糸球体腎炎を含む腎臓病、ならびに関節リウマチのような激しい好中球優性段階を特徴とする自己免疫疾患からなる群より選ばれる、前記製造方法。
【請求項５３】
請求項５２記載の製造方法であって、前記追加活性成分が、非ステロイド系抗炎症剤、ステロイド系抗炎症剤、気管支拡張剤、抗リウマチ剤、免疫調節剤、免疫抑制剤、副腎皮質ステロイド、β2アゴニスト、およびコリン作働性アンタゴニストからなる群より選択される、前記製造方法。
【国際調査報告】
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