(57)【要約】本発明は、（ｉ）スルファメート基（「スルファメート化合物」）を含む化合物；および（ｉｉ）アポトーシス誘導因子、を含む組成物を提供する。本発明はさらに、腫瘍増殖を予防するためおよび／または阻害するための医薬を製造する際の、本発明の組成物の使用を提供する。本発明はさらに、アポトーシスを誘導するための医薬を製造する際の、本発明の組成物の使用を提供する。本発明はまた、本発明の組成物を、処置の必要のある被験体に投与する工程を包含する処置方法を提供する。
2004537523.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
ｉ）スルファメート基（「スルファメート化合物」）を含む、化合物；および
ｉｉ）アポトーシス誘導因子、
を含む、組成物。
【請求項２】
前記アポトーシス誘導因子が、アポトーシスを誘導するリガンドである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記アポトーシス誘導因子が、アポトーシスを誘導するサイトカインである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記アポトーシス誘導因子が、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＴＲＡＩＬがＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌである、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記アポトーシス誘導因子が、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターと相互作用し得る、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記レセプターがＤＲ４および／またはＤＲ５である、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記スルファメート化合物が環状化合物である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記スルファメート化合物が多環式化合物である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記スルファメート化合物が、以下の式
【化１】
2004537523.tif 000016
を有する化合物であって、
ここで、Ｒ１およびＲ２の各々は、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記スルファメート化合物がステロイド性構造を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記スルファメート化合物が、以下の式
【化２】
2004537523.tif 000017
を有する化合物であって、
ここで、Ｒ１およびＲ２の各々は、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記スルファメート化合物が、ステロイド性核のＡ環の３位に結合した少なくとも１つのスルファメート基を有する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記スルファメート化合物が、ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基で置換されている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基および前記スルファメート基が、互いにオルソの位置で各々同一環上に結合している、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記スルファメート化合物がステロイド性構造を有し、そして前記ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基および前記スルファメート基が、各々該ステロイド性構造のＡ環に結合している、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基が、前記ステロイド性構造のＡ環の２位に結合している、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記スルファメート基が、前記ステロイド性構造のＡ環の３位に結合している、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記オキシヒドロカルビル基が式Ｃ１〜６Ｏの基である、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記基Ｃ１〜６Ｏがメトキシ基である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記スルファメート化合物が、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ヒドロカルビル基が式Ｃ１〜６の基である、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記基Ｃ１〜６がエチル基である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記スルファメート化合物が、２−エチルエストロン−３−Ｏ−スルファメートである、請求項１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記スルファメート化合物の前記スルファメート基が、以下の式
【化３】
2004537523.tif 000018
を有し、
ここで、Ｒ１およびＲ２の各々は、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
前記スルファメート化合物が、エストロンスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）のインヒビターとしての使用に適切である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
前記スルファメート化合物上の前記スルファメート基が硫酸基で置換されて硫酸化合物を形成された場合、次いで、該硫酸化合物がステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）によって加水分解される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記スルファメート化合物上の前記スルファメート基が硫酸基で置換されて硫酸化合物を形成し、ステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）とともに、ｐＨ７．４および３７℃でインキュベートされた場合、５０ｍＭ未満のＫｍ値を提供する請求項１〜２７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
前記スルファメート化合物上の前記スルファメート基が硫酸基で置換されて硫酸化合物を形成し、ステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）とともに、ｐＨ７．４および３７℃でインキュベートされた場合、５０μＭ未満のＫｍ値を提供する請求項１〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記化合物が、少なくとも２つのスルファメート基を含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記化合物が、ステロイド性であり、かつ少なくとも２つのスルファメート基を含む、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３２】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤をさらに含む、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３３】
医薬に使用するための、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
腫瘍増殖を予防および／または阻害するための医薬を製造する際の、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の組成物の、使用。
【請求項３５】
アポトーシスを誘導するための医薬を製造する際の、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の組成物の、使用。
【請求項３６】
カスパーゼを活性化させるための医薬を製造する際の、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の組成物の、使用。
【請求項３７】
前記カスパーゼがカスパーゼ３である、請求項３６に記載の使用。
【請求項３８】
腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターのレセプター機能をアップレギュレートするための医薬を製造する際の、スルファメート化合物の、使用。
【請求項３９】
前記レセプターがＤＲ４および／またはＤＲ５である、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記スルファメート化合物が請求項１〜３１のいずれか１項に規定される化合物である、請求項３８または３９に記載の使用。
【請求項４１】
カスパーゼを活性化させるための医薬を製造する際の、スルファメート化合物の、使用。
【請求項４２】
前記カスパーゼがカスパーゼ３である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記スルファメート化合物が請求項１〜３１のいずれか１項に規定される化合物である、請求項４１または４２に記載の使用。
【請求項４４】
請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物を、処置の必要のある被験体に投与する工程を包含する、処置方法。
【請求項４５】
アポトーシスを誘導するために、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の組成物またはスルファメート化合物を、処置の必要のある被験体に投与する工程を包含する、処置方法。
【請求項４６】
実施例のいずれか１つに参照されて本明細書中に実質的に記載されるような、組成物。
【請求項４７】
実施例のいずれか１つに参照されて本明細書中に実質的に記載されるような、使用。
【請求項４８】
実施例のいずれか１つに参照されて本明細書中に実質的に記載されるような、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組成物に関する。具体的には、本発明は、薬学的組成物およびその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
大部分の西側諸国では、癌は現在も主な死因のままである。これまで、エストロゲンが、乳房および子宮内膜のような内分泌依存性組織中の腫瘍の増殖を促進することに関与する主要なマイトジェンであることが証拠とされている。血漿エストロゲン濃度は、乳癌を有する女性または乳癌を有さない女性において同様であるが、乳房腫瘍エストロンおよびエストラジオールレベルは、正常な乳房組織または血液中よりも有意に高い。エストロゲンのインサイチュにおける合成は、腫瘍中のエストロゲンが高レベルであることに重要な寄与をすると考えられ、それゆえ、エストロゲン生合成の特異的インヒビターは、内分泌依存性腫瘍の処置のために潜在的な価値がある。
【０００３】
過去二十年間にわたって、アンドロゲン前駆体であるアンドロステンジオンをエストロンに変換するアロマターゼ経路のインヒビターの開発に、かなりの興味が持たれていた。しかし、現在、エストロンスルファターゼ（Ｅ１−ＳＴＳ）経路（すなわち、アロマターゼ経路とは逆の、エストロンスルフェート（Ｅ１Ｓ）からエストロン（Ｅ１）への加水分解）が、乳房腫瘍中のエストロゲンの主要な供給源である証拠がある。この理論は、アロマターゼインヒビター（例えば、アミノグルテチミドおよび４−ヒドロキシアンドロステンジオン）で処置された乳癌を有する閉経後の女性の血漿エストロゲン濃度の緩やかな減少により、そしてまたこれらのアロマターゼインヒビターで処置された患者の血漿Ｅ１Ｓ濃度が、比較的高いままであるという事実により支持される。結合されていないエストロゲン（２０分）と比較して長い血中Ｅ１Ｓの半減期（１０〜１２時間）、そして、肝臓ならびに正常および悪性の乳房組織における高レベルのステロイドスルファターゼ活性もまたこの理論を支持する。
【０００４】
Ｓｉｎｇｈら（１９９７  Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ６１：１８５〜１９２）は、乳房腫瘍内のＴＮＦ−αおよびＩＬ−６のような、プロ炎症性サイトカインの主要な供給源は、十分理解されていないが、腫瘍浸潤マクロファージおよびリンパ球は、役割を果たし得ると考えられていることを報告する。
【０００５】
Ｓｉｎｇｈら（前述）はまた、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６の両方が、インビトロで、ＭＣＦ−７乳癌細胞の増殖を阻害することを報告する。さらに、ＴＮＦ−αは、培養されたＭＣＦ−７乳癌細胞中で測定されたアロマターゼ活性に対して阻害効果を有する。明らかに、これらの結果は、ＴＮＦ−αが、正常および悪性乳房組織由来の線維芽細胞に対して有する顕著な刺激効果（Ｍａｃｄｉａｒｍａｉｄら、１９９４  Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃ．１０６：１７〜２１）と対照的である。さらに、ＴＮＦ−αをＩＬ−６と組み合わせたとき、アロマターゼ活性に対する阻害効果は増大する。ＭＣＦ−７細胞におけるアロマターゼ活性に対するＩＬ−６とＴＮＦ−αとの相乗阻害効果はまた、これらサイトカインが、これら細胞におけるエストロンスルファターゼおよびエストラジオールデヒドロゲナーゼ活性に対して有する相乗的刺激効果と対照的である。
【０００６】
リガンド（ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ）を誘導する腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）関連アポトーシスは、レセプターであるＴＲＡＩＬ−Ｒ１（ＤＲ４）およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２（ＤＲ５）への結合によって、広範囲の腫瘍細胞においてアポトーシスを誘導する。これらは、細胞内「デスドメイン」の保持によって特徴付けられるデスレセプターのＴＮＦαスーパーファミリーのメンバーであり、このデスドメインは、デスシグナルの変換に応答し得る（ＡｓｈｋｅｎａｚｉおよびＤｉｘｉｔ  １９９８）。
【０００７】
ドキソルビシンのようなＤＮＡ損傷因子、エトポシドおよび電離放射線と組み合わせてのＴＲＡＩＬによる処置は、乳癌細胞中のＴＲＡＩＬの抗腫瘍作用を優位に増強させることを示している（Ｋｅａｎｅら、１９９９、Ｇｉｂｓｏｎら、２０００、Ｃｈｉｎｎａｌｙａｎら、２０００）。この共同作用のための機構は、腫瘍サプレッサーｐ５３または転写因子ＮＦκＢのアップレギュレートによっておそらく媒介される、ＤＲ５および／またはＤＲ４レセプターのレベルを増加するためのＤＮＡ損傷因子の能力に起因すると考えられる（Ｗｕら、１９９７、Ｇｉｂｓｏｎら、２０００）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、癌、そして特に乳癌の処置における使用に適切な組成物を提供することを求める。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第１の局面によれば、ｉ）スルファメート基を含む化合物（「スルファメート化合物」）；およびｉｉ）アポトーシス誘導因子を含む組成物が提供される。
【００１０】
本発明の第２の局面によれば、医薬における使用のために本発明の組成物が提供される。
【００１１】
本発明の第３の局面によれば、腫瘍増殖を予防および／または阻害するための医薬の製造における本発明の組成物の使用が提供される。
【００１２】
本発明の第４の局面によれば、アポトーシスを誘導するための医薬の製造における本発明の組成物の使用が提供される。
【００１３】
本発明の第５の局面によれば、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターのレセプター機能をアップレギュレートするための医薬の製造におけるスルファメート化合物の使用が提供される。
【００１４】
本発明の第６の局面によれば、本発明の組成物を、処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する処置方法が提供される。
【００１５】
本発明の第７の局面によれば、アポトーシスを誘導するために、本発明の組成物またはスルファメート化合物を、処置を必要とする被験体に投与する工程を包含する処置方法が提供される。
【００１６】
本発明の第８の局面によると、以下を含むキットが提供される：スルファメート基（「スルファメート化合物」）を含有する化合物を含む部分ｉ）；および、アポトーシス誘導因子含む部分ｉｉ）。このキットのこれらの部分は、１個以上の容器（例えば、ビン、シリンジ、プレート、ウェル、ブリスターパックなど）に独立して収容され得る。
【００１７】
本発明の第９の局面によると、カスパーゼを活性化するための医薬の製造における本発明の組成物の使用が提供される。
【００１８】
本発明の第１０の局面によると、カスパーゼを活性化するための医薬の製造におけるスルファメート化合物の使用が提供される。
【００１９】
本発明は、癌（特に、乳癌）の処置における使用に適切な組成物を提供するという利点がある。
【００２０】
さらに、本発明は、例えば、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌などの癌（特に、乳癌）の処置の使用に適切な化合物を提供するという利点がある。
【００２１】
本発明の組成物の別の利点は、それらが、スルファメート化合物単独またはアポトーシス誘導因子単独よりもインビボでより強力であり得ることである。さらに、いくつかの局面において、スルファメート化合物およびアポトーシス誘導因子の組み合わせが、この化合物単独から、当業者が予測する効果よりも強力である（すなわち、これは、それらの間で相乗的な関係である）。
【００２２】
スルファメート化合物とアポトーシス誘導因子の相乗的な組み合わせは、スルファメート化合物およびアポトーシス誘導因子のいずれかまたは両方の低用量での使用を可能にする。これは特に、非相乗的な系において必要とされる治療量が回避されるべきである場合（例えば、その化合物のうちの１つの毒性の理由で）に、有利である。
【００２３】
本発明者らは、驚くべきことに、本発明のスルファメート化合物が、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターのレセプター機能をアップレギュレートすることを見出した。１つの局面において、用語「レセプター機能をアップレギュレートする」は、そのレセプターを介したシグナル伝達の増加が提供されることが意味する。学説に束縛されずに、本発明の化合物は、そうでなければレセプターを減少させるかまたはそれ自体がレセプターを阻害する因子を除去または阻害し得ると考えられる。本発明の化合物は、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リンガンド（ＴＲＡＩＬ）に対してＴＲＡＩＬレセプターを感作すると考えられ得る。
【００２４】
本発明に従って、本発明の組成物は、１つより多いアポトーシス誘導因子を含み得る。
【００２５】
好ましくは、アポトーシス誘導因子は、アポトーシス誘導リガンドである。
【００２６】
好ましくは、アポトーシス誘導因子は、アポトーシス誘導サイトカインである。
【００２７】
サイトカインは、免疫細胞を互いに連通させる分子（しばしば、可溶性タンパク質）である。これらの分子は、標的細胞の表面に発現される特異的なレセプターを通してそれらの生物学的機能を発揮する。レセプター結合は、生化学的シグナルのカスケードの開始を誘導し、そのレセプターを保有する細胞の挙動に大きく影響する（Ｐｏｏｌｅ，Ｓ  １９９５  ＴｉｂＴｅｃｈ  １３：８１−８２）。多くのサイトカインおよびそれらのレセプターが、分子レベル同定されており（ＰａｕｌおよびＳｅｄａｒ、１９９４、Ｃｅｌｌ  ７６：２４１−２５１）、そしてこれらは個々に、治療的価値を有する適切な分子および治療標的である。
【００２８】
サイトカインに関するさらなる詳細は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｐｕｂ．ＶＣＨ、Ｍｅｙｅｒｓ編、１９９５、２０２、２０３、３９４、３９０、４７５、７９０頁）に見出され得る。
【００２９】
より好ましくは、サイトカインは、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）である。さらにより好ましくは、ＴＲＡＩＬは、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌである。
【００３０】
本発明のこの局面において、本発明の組成物は、スルファメート化合物単独またはＴＲＡＩＬ単独よりもインビボでより強力である。さらに、いくつかの局面において、スルファメート化合物およびＴＲＡＩＬの組み合わせは、この化合物単独から当業者が予測する効果よりも強力である（すなわち、これは、それらの間で相乗的な関係である）。
【００３１】
ＴＲＡＩＬは、化学的に調製され得るか、または供給源から抽出され得る。好ましくは、ＴＲＡＩＬは、組換えＤＮＡ技術の使用により調製される。
【００３２】
好ましい局面において、アポトーシス誘導因子は、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターと相互作用し得る。好ましくは、このレセプターは、ＤＲ４および／またはＤＲ５である。
【００３３】
１つの局面において、本発明は、カスパーゼの活性化のために使用され得る。
【００３４】
用語カスパーゼは、代表的に、カスパーゼファミリープロテアーゼを意味する。用語「カスパーゼファミリープロテアーゼ」は、Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｅ．ら（１９９６）Ｃｅｌｌ  ８７：１７１に記載されるようなカスパーゼプロテアーゼのメンバーを含むことが意図され、これらとして、カスパーゼ−１（ＩＣＥ）、カスパーゼ−２（ＩＣＨ−１）、カスパーゼ−３（ＣＰＰ３２、Ｙａｍａ、ａｐｏｐａｉｎ）、カスパーゼ−４（ＴＸ、ＩＣＨ−２、ＩＣＥ．ｓｕｂ．ｒｅｌ．−ＩＩ）、カスパーゼ−５（ＩＣＥ．ｓｕｂ．ｒｅｌ．−ＩＩＩ、ＴＹ）、カスパーゼ−６（Ｍｃｈ２）、カスパーゼ−７（Ｍｃｈ３、ＩＣＥ−ＬＡＰ３、ＣＭＨ−１）、カスパーゼ−８（ＭＡＣＨ、ＦＬＩＣＥ、Ｍｃｈ５）、カスパーゼ−９（ＩＣＥ−ＬＡＰ６、Ｍｃｈ６）、およびカスパーゼ−１０（Ｍｃｈ４）が挙げられる。さらに、「カスパーゼファミリープロテアーゼ」は、ＩＣＥのプロテアーゼの活性ドメイン（すなわち、ＩＣＥのｐ１０サブユニットおよびｐ２０サブユニットの活性ドメイン）において、このＩＣＥと２０％より高いアミノ酸配列同一性を共有し、ペプチド配列グルタミン−アラニン−システイン−Ｘ−グリシン（ＱＡＣＸＧ）（システイン（Ｃ）は、触媒活性システイン残基であり、Ｘは任意のタンパク質を示す）を含み、そしてＱＡＣＸＧモチーフのＮ末端に位置する配列セリン−ヒスチジン−グリシン（ＳＨＧ）（ヒスチジン（Ｈ）は触媒作用に必須のヒスチジン残基である）を含む任意のタンパク質を含むことが意図される。カスパーゼファミリープロテアーゼは、代表的に、酸性アミノ酸（すなわち、アスパラギン酸またはグルタミン酸）の直後のペプチド結合の加水分解に対する強力な優先性を実証する。
【００３５】
カスパーゼファミリープロテアーゼは、ヒトおよび他の生物（マウスおよびＣｅａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓを含む）において知られている。カスパーゼファミリープロテアーゼの例としては、例えば、Ｉｃｈ−１（Ｗａｎｇ，Ｌ．ら（１９９４）Ｃｅｌｌ  ７８：７３９−７５０）；ＩＣＨ−２（Ｋａｍｅｎｓ，Ｊ．ら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１５２５０−１５２５６）；Ｍｃｈ２（Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ−Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｔ．ら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５５：２７３７−２７４２）；ＣＰＰ３２（Ｆｅｍａｎｄｅｓ−Ａｌｎｅｍｒｉ，Ｔ．ら（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３０７６１−３０７６４）；Ｙａｍａ／ＣＰＰ３２．ｂｅｔａ．（Ｔｅｗａｒｉ，Ｍ．ら（１９９５）Ｃｅｌｌ  ８１：８０１−８０９）；マウス遺伝子Ｎｅｄｄ２産物（Ｋｕｍａｒ，Ｓ．ら（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８５：１１５５−１１６１；Ｋｕｍａｒ，Ｓ．ら（１９９４）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．８：１６１３−１６２６）；Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ遺伝子ｃｅｄ−３の産物（Ｙｕａｎ，Ｊ．ら（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７５：６４１−６５２）；ヒトタンパク質ＴＸ（Ｆａｕｃｈｅｕ，Ｃ．ら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．１４：１９１４−１９２２）；ＩＣＥ．ｓｕｂ．ｒｅｌ  ＩＩおよびＩＣＥ．ｓｕｂ．ｒｅｌ．ＩＩＩ（Ｍｕｎｄａｙ，Ｎ．Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１５８７０−１５８７６）が挙げられる。
【００３６】
好ましくは、カスパーゼは、エフェクターカスパーゼである。
【００３７】
好ましくは、カスパーゼは、カスパーゼ３である。
【００３８】
本発明に従って、本発明の組成物は、１つより多いスルファメート化合物を含み得る。
【００３９】
用語「スルファメート化合物」は、少なくとも１つのスルファメート基を含む化合物を意味する。
【００４０】
用語「スルファメート」は、スルファミン酸のエステル、もしくはスルファミン酸のＮ置換誘導体のエステル、またはそれらの塩を含む。
【００４１】
好ましくは、スルファメート化合物のスルファメート基は、以下の式：
【００４２】
【化４】
2004537523.tif 000003
を有する。ここで、Ｒ１およびＲ２は各々、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、用語「ヒドロカルビル基」とは、少なくともＣおよびＨを含む基を意味し、そして必要に応じて１つ以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例としては、ハロ−炭化水素基、アルコキシ−炭化水素基、ニトロ−炭化水素基、Ｎ−アシル基、環式基等が挙げられ得る。これらの置換基が環式基である可能性に加えて、置換基の組合せが、環式基を形成し得る。ヒドロカルビル基が１つ以上のＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも互いに結合している必要はない。例えば、これらの炭素のうち少なくとも２つが、適切な元素または基を介して結合し得る。従って、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子が、当業者に明らかであり、そしてこれには、例えば、硫黄、窒素および酸素が挙げられる。
【００４４】
本発明の１つの好ましい実施形態において、ヒドロカルビル基は、炭化水素基である。
【００４５】
ここで用語「炭化水素」は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基（これらの基は直鎖状、分岐状もしくは環状であり得る）またはアリール基のいずれか１つを意味する。用語、炭化水素はまた、これらの基を含むが、ここでこれらは必要に応じて置換されている。炭化水素が、その上に置換基を有する分岐状構造である場合、置換は炭化水素主鎖上または側鎖上のいずれかにあり得る；あるいは、置換は炭化水素主鎖上および側鎖上にあり得る。
【００４６】
好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、Ｈもしくはアルキル、シクロアルキル、アルケニル、およびアリールから独立して選択されるか、または共にアルキレンを表し、ここで上記もしくは各アルキルもしくはシクロアルキルもしくはアルケニルは、１個以上のヘテロ原子もしくは基を必要に応じて含む。
【００４７】
置換される場合、本発明のＮ置換化合物は、１または２個のＮ−アルキル、Ｎ−アルケニル、Ｎ−シクロアルキル、Ｎ−アシルまたはＮ−アリール置換基を含み得、これらの置換基は、好ましくは最大１０個の炭素原子を含むか、またはそれぞれがそれを含む。Ｒ１および／またはＲ２がアルキルである場合、好ましい基（ｖａｌｕｅ）は、Ｒ１およびＲ２が１〜５個の炭素原子を含む低級アルキル基（言い換えれば、メチル、エチル、プロピルなど）からそれぞれ独立して選択されたものである。好ましくは、Ｒ１およびＲ２の両方がメチルである。Ｒ１および／またはＲ２がアリールである場合、代表的な基は、フェニルおよびトリル（−ＰｈＣＨ３；ｏ−、ｍ−またはｐ−）である。Ｒ１およびＲ２がシクロアルキルを表す場合、代表的な基は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。共に結合したＲ１およびＲ２が、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を代表的に表す場合、１個以上のヘテロ原子または基（例えば、−Ｏ−または−ＮＨ−）によって必要に応じて中断され、５員、６員または７員のヘテロ環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【００４８】
本発明者らは、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アシル基およびアリール基の中に、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性に干渉しない１つ以上の基をそこでの置換基として含む置換された基を包含する。例示的な非干渉置換基は、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールを包含する。ヒドロカルビル基の限定しない例は、アシル基である。
【００４９】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つがＨである。
【００５０】
好ましくは、スルファメート化合物は環式化合物である。この点に関して、スルファメート化合物は、単環化合物または多環式化合物であり得る。ここで、用語「多環式」は、縮合環構造および非縮合環構造（その組み合わせを含む）を含む。
【００５１】
従って、好ましくは、スルファメート化合物は以下の式である。
【００５２】
Ｅ−Ｇ
ここで、Ｅはスルファメート基であり、そしてここで、Ｇは環式基である。
【００５３】
この環式基は単環であり得るか、または多環式環構造である。
【００５４】
１つの局面では、環式基は、Ｃ、Ｈ、Ｏ、Ｎ、Ｐ、ハロゲン（Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含む）、ＳおよびＰのうちの任意の１つ以上を含み得る。
【００５５】
これらの環式基のうちの少なくとも１つは、複素環式基（複素環）または非複素環式基であり得る。
【００５６】
これらの環式基のうちの少なくとも１つは、飽和環構造または不飽和環構造（例えば、アリール基）であり得る。
【００５７】
好ましくは、これらの環式基のうちの少なくとも１つは、アリール環である。
【００５８】
好ましくは、スルファメート基はこのアリール環に連結される。
【００５９】
環式基が多環式である場合、スルファメート化合物の環成分のいくらかまたは全部が共に縮合され得るか、または１つ以上の適切なスペーサー基を介して結合され得る。
【００６０】
従って、本発明の１つの局面によれば、好ましくは、スルファメート化合物は多環式化合物である。この局面において、このスルファメート化合物は、以下の式を有する化合物であり得る：
【００６１】
【化５】
2004537523.tif 000004
ここで、Ｒ１およびＲ２の各々は、Ｈまたはヒドロカルビル基から独立して選択される。
【００６２】
好ましくは、この多環式化合物は、全てを含めて、約５０個以下の炭素原子、より通常は約３０〜４０個以下の炭素原子の置換基を含む。
【００６３】
この多環式化合物は、少なくとも２個の環成分、または少なくとも３個の環成分、または少なくとも４個の環成分を含有し得る。
【００６４】
好ましくは、この多環式化合物は、４個の環成分を含む。
【００６５】
好ましい多環式化合物は、ステロイド性環成分（これは、いわゆるシクロペンタノフェナントレン骨格である）またはその生物学的等価物（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒ）を有する。
【００６６】
当該分野で周知のように、古典的なステロイド性環構造は、以下の一般式を有する：
【００６７】
【化６】
2004537523.tif 000005
上記の式において、環は従来の様式で表示されている。
【００６８】
スルファメート化合物がステロイド環成分を有する場合、この化合物は、以下の式：
【００６９】
【化７】
2004537523.tif 000006
を有する化合物であり得る。ここで、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立して、Ｈまたはヒドロカルビル基から選択される。
【００７０】
生物学的等価物（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅ）の例は、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上が複素環式環である場合、ならびに／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上が置換される場合、ならびに／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤの任意の１つ以上が修飾されている場合のものであるが、ここで、スルファメート基が存在しない生物学的等価物はステロイド特性を有する。
【００７１】
この点において、好ましい多環化合物の構造は、以下のように表され得る：
【００７２】
【化８】
2004537523.tif 000007
ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、独立して、複素環式環または非複素環式環を表し、これらの環は、独立して、置換または非置換、飽和または不飽和であり得る。
【００７３】
例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’  の任意の１つ以上は、独立して、適切な基（例えば、アルキル基、アリル基、ヒドロキシ基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など）で置換され得る。
【００７４】
Ｄ’の例は、少なくとも１つの置換基を有する、５員または６員の非複素環式環である。
【００７５】
１つの好ましい実施形態において、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【００７６】
環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’の任意の１つが複素環式環である場合、好ましくは、この複素環式環は、Ｃ原子、および少なくとも１つのＮ原子、および／または少なくとも１つのＯ原子の組み合わせを含有する。他の複素環式原子が、環内に存在し得る。
【００７７】
本発明の化合物の、適切で好ましいステロイド核の環Ａ’〜Ｄ’の例には、エストロンおよびデヒドロエピアンドロステロンの環Ａ〜Ｄが挙げられる。
【００７８】
本発明の化合物の、好ましいステロイド核の環Ａ’〜Ｄ’には、以下の環Ａ〜Ｄが挙げられる：
エストロンおよび置換エストロン、すなわち：
エストロン
２−ＯＨ−エストロン
２−アルコキシ−エストロン（例えば、２−メトキシ−エストロンのようなＣ１−６アルコキシ−エストロン）
２−アルキル−エストロン（例えば、２−エチル−エストロンのようなＣ１−６アルキル−エストロン）
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン。
【００７９】
エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：
２−ＯＨ−１７β−エストラジオール
２−アルコキシ−１７β−エストラジオール（例えば、２−メトキシ−１７β−エストラジオールのようなＣ１−６アルコキシ−１７β−エストラジオール）
２−アルキル−１７β−エストラジオール（例えば、２−エチル−１７β−エストラジオールのようなＣ１−６アルキル−１７β−エストラジオール）
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
２−ＯＨ−１７α−エストラジオール
２−アルコキシ−１７α−エストラジオール（例えば、２−メトキシ−１７α−エストラジオールのようなＣ１−６アルコキシ−１７α−エストラジオール）
２−アルキル−１７α−エストラジオール（例えば、２−エチル−１７α−エストラジオールのようなＣ１−６アルキル−１７α−エストラジオール）
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール。
【００８０】
エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：
エストリオール
２−ＯＨ−エストリオール
２−アルコキシ−エストリオール（例えば、２−メトキシ−エストリオールのようなＣ１−６アルコキシ−エストリオール）
２−アルキル−エストリオール（例えば、２−エチル−エストリオールのようなＣ１−６アルキル−エストリオール）
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール。
【００８１】
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン。
【００８２】
大まかに言えば、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非干渉置換基を含み得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’はとしては、１以上のヒドロキシ、アルキル（特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、および他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体））、アルコキシ（特に低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど））、アルキニル（例えば、エチニル）、またはハロゲン（例えば、フルオロ）置換基が挙げられ得る。
【００８３】
代替の実施形態において、多環式化合物は、ステロイド核を含まなくても、ステロイド核に基づかなくても良い。これに関して、多環式化合物は、非ステロイド環系（例えば、ジエチルスチルベストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、スチルベストロール（ｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、クマリン、および他の環系）を含み得るかまたはこの非ステロイド環系に基づき得る。本発明の組成物における使用のための、または本発明の組成物としての、他の適切な非ステロイド化合物は、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１に見出され得る。
【００８４】
好ましい局面において、少なくとも１つのスルファメート基は、環式化合物の環成分の任意の１つ以上に結合される。
【００８５】
好ましくは、多環式化合物は、ステロイド構造を有し、そしてこのスルファメート基は、Ａ環に結合する。
【００８６】
好ましくは、スルファメート基は、Ａ環の３位に結合する。
【００８７】
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、１つより多くのスルファメート基（例えば、少なくとも２つのスルファメート基）を含み得る。例として、２つのスルファメート（すなわちビス−スルファメート化合物）があり得る。これらの化合物がステロイド核に基づく場合、好ましくは、第２のスルファメート基（またはさらなるスルファメート基の少なくとも１つ）は、ステロイド核の１７位に位置付けられる。１つより多くのスルファメート基が同じである必要はない。
【００８８】
好ましくは、スルファメート化合物は、少なくとも１つのヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基を含む。ヒドロカルビル基またはオキシヒドロカルビル基は、本明細書中において、（オキシ）ヒドロカルビル基と呼ばれる。
【００８９】
好ましい実施形態において、（オキシ）ヒドロカルビル基およびスルファメート基は、それぞれ、互いに関して、同じ環のオルトの位置に結合される。
【００９０】
好ましいスルファメート化合物は、（オキシ）ヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物（すなわち、ステロイド成分および（オキシ）ヒドロカルビル基を含むスルファメート化合物）である。好ましくは、この局面において、（オキシ）ヒドロカルビル基およびスルファメート基は、それぞれ、ステロイド構造／成分のＡ環に結合される。
【００９１】
本発明のステロイド実施形態に関して、好ましくは、（オキシ）ヒドロカルビル基は、ステロイド構造のＡ環の２位に結合され、そして／またはスルファメート基は、ステロイド構造のＡ環の３位に結合される。１つの実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、（オキシ）ヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物であり、ここで、このスルファメート基は、ステロイド成分の３位にあり、そして／または（オキシ）ヒドロカルビル基は、ステロイド成分の２位にある。
【００９２】
１つの実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロンスルファメートのオキシヒドロカルビル誘導体である。
【００９３】
１つの実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのオキシヒドロカルビル誘導体である。
【００９４】
１つの実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのＣ１−６（例えば、Ｃ１−３）アルコキシまたはアルキル誘導体である。
【００９５】
１つの実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートの２−Ｃ１−６（例えば、Ｃ１−３）アルコキシまたはアルキル誘導体である。
【００９６】
用語「オキシヒドロカルビル基」とは、本明細書中で使用される場合、少なくとも、Ｃ、Ｈ、およびＯを含む基を意味し、そして必要に応じて、１つ以上の他の適切な置換基を含み得る。このような置換基の例としては、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、環式基などが挙げられ得る。環式基である置換基の可能性に加えて、置換基の組合せが、環式基を形成し得る。オキシヒドロカルビル基が１つより多くのＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも、互いに連結され得る必要はない。例えば、少なくとも２つの炭素が、適切な元素または基によって連結され得る。従って、オキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、硫黄および窒素が挙げられる。
【００９７】
本発明の１つの好ましい実施形態において、オキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【００９８】
ここで、用語「オキシ炭化水素」とは、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基のうちの任意の１つを意味し、これらの基は、直鎖、分枝鎖、または環式、あるいはオキシアリール基であり得る。用語オキシ炭化水素はまた、これらの基を含むが、必要に応じて置換された基を含まない。オキシ炭化水素が置換基を有する分枝構造である場合、この置換基は、炭化水素骨格上であり得るかまたは分枝上のいずれかであり得るか；あるいは、この置換基は、炭化水素骨格および分枝上にあり得る。
【００９９】
好ましくは、（オキシ）ヒドロカルビル基は、アルコキシ／アルキルである。（アルコキシ置換基の）アルキル基は、好ましくは、１〜５個の炭素原子を含む低級アルキル基であり、すなわち、メチル、エチル、プロピルなどである。好ましくは、アルキル基は、メチルまたはエチルである。
【０１００】
１つの実施形態において、好ましくは、オキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１−６Ｏ（例えば、Ｃ１−３Ｏ）の基、より好ましくは、メトキシ基である。
【０１０１】
より好ましくは、基Ｃ１−６Ｏは、ステロイド核のＡ環の２位に結合される。
【０１０２】
非常に好ましい実施形態において、このスルファメート化合物は、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートである。
【０１０３】
１つの実施形態において、好ましくは、ヒドロキシカルビル基は、式Ｃ１−６の基、より好ましくは、エチル基である。
【０１０４】
非常に好ましい実施形態において、このスルファメート化合物は、２−エチルエストロン−３−Ｏ−スルファメートである。
【０１０５】
スルファメート化合物がステロイド核を含む場合、好ましくは、Ａ環は、２位に（オキシ）ヒドロカルビル基を有する。
【０１０６】
好ましくは、スルファメート化合物は、少なくとも１つのスルファニルヒドロカルビル基を含む。用語スルファニルヒドロカルビルによって、式−Ｌ−Ｓ−Ｒの基を意味し、ここで、Ｌは任意のリンカー基であり、Ｓは硫黄を表し、そしてＲはヒドロカルビル基（本明細書中で規定されるとおり）である。
【０１０７】
好ましい実施形態において、スルファニルヒドロカルビル基およびスルファメート基は、それぞれ、互いに関して、同じ環のオルト位に結合される。
【０１０８】
好ましいスルファメート化合物は、スルファニルヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物（すなわち、ステロイド成分およびスルファニルヒドロカルビル基を含むスルファメート化合物）である。この局面において、好ましくは、スルファニルヒドロカルビル基およびスルファメート基は、それぞれ、ステロイド構造／成分のＡ環に結合される。
【０１０９】
本発明のステロイドの実施形態の局面において、好ましくは、スルファニルヒドロカルビル基は、ステロイド構造のＡ環の２位に結合し、そして／またはスルファメート基は、ステロイド構造のＡ環の３位に結合する。一実施形態において、好ましくは、このスルファメート化合物は、スルファメート基がステロイド成分の３位にあり、そして／またはスルファニルヒドロカルビル基がステロイド成分の２位にある、スルファニルヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物である。
【０１１０】
一実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロンスルファメートのスルファニルヒドロカルビル誘導体である。
【０１１１】
一実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのスルファニルヒドロカルビル誘導体である。
【０１１２】
一実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートのＣ１−６（例えば、Ｃ１−３）アルキルスルファニル誘導体である。
【０１１３】
一実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、エストロン−３−Ｏ−スルファメートの２−Ｃ１−６（例えば、Ｃ１−３）アルキルスルファニル誘導体である。
【０１１４】
本発明の１つの好ましい実施形態において、スルファニルヒドロカルビル基は、スルファニル炭化水素基である。
【０１１５】
用語「スルファニル炭化水素」とは、式−Ｌ−Ｓ−Ｒの基を意味し、ここで、Ｌは、任意のリンカー基であり、Ｓは、硫黄を表し、そしてＲは、炭化水素基（本明細書中で定義されるような）である。
【０１１６】
一実施形態において、好ましくは、スルファニルヒドロカルビル基は、式Ｃ１−６Ｓ（例えば、Ｃ１−３Ｓ）の基、より好ましくは、ＣＨ３ＳまたはＣＨ３ＣＨ２Ｓ基である。
【０１１７】
より好ましくは、基Ｃ１−６Ｓは、ステロイド核のＡ環の２位に結合する。
【０１１８】
非常に好ましい実施形態において、スルファメート化合物は、２−メチルスルファニルエストロン−３−Ｏ−スルファメートまたは２−エチルスルファニルエストロン−３−Ｏ−スルファメートである。
【０１１９】
好ましくは、スルファメート化合物上のスルファメート基が、スルフェート基で置換されて、スルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）で加水分解可能である。
【０１２０】
好ましくは、スルファメート化合物上のスルファメート基が、スルフェート基で置換されてスルフェート化合物を形成し、そしてこのスルフェート化合物が、ステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）と共に、ｐＨ７．４および３７℃でインキュベートされる場合、これは、５０ｍＭ未満のＫｍ値を提供する。
【０１２１】
好ましくは、スルファメート化合物上のスルファメート基が、スルフェート基で置換されてスルフェート化合物を形成し、そしてこのスルフェート化合物が、ステロイドスルファターゼ酵素（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）と共に、ｐＨ７．４および３７℃でインキュベートされる場合、これは、５０μＭ未満のＫｍ値を提供する。
【０１２２】
好ましくは、スルファメート化合物は、エストロンスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）のインヒビターとして使用するのに適切である。
【０１２３】
本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は非エストロゲン性である。用語「非エストロゲン性」とは、エストロンゲン活性を示さないかまたは実質的に示さないことを意味する。
【０１２４】
本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、スルファメート化合物は、ホルモン活性を示すかまたはこれを誘発する化合物に代謝され得ない。
【０１２５】
本発明の１つの好ましい実施形態において、好ましくは、本発明の組成物は、経口活性である。
【０１２６】
本発明は、スルファメート化合物とアポトーシス誘発因子との組み合わせは、癌の効果的な処置を提供するという、非常に驚くべき所見に基づく。
【０１２７】
より詳細には、本発明者らは、驚くべきことに、本発明の組成物が、アポトーシスを誘発し得ることを見出した。
【０１２８】
本発明者らは、いくつかの局面において、この化合物がスルファメート化合物である必要がなくてもよいことを確認した。従って、さらなる局面において、本発明は、（ｉ）ステロイド成分；および（ｉｉ）アポトーシス誘発因子を含む組成物を提供する。この局面において、アポトーシス誘発因子および上記のスルファメート化合物のステロイド核の好ましい特徴は、ステロイド化合物およびアポトーシス誘発因子を含む組成物に等しく当てはまる。（ｉ）ステロイド化合物；および（ｉｉ）アポトーシス誘発因子を含む組成物は、本明細書中に記載される使用および方法の各々において使用され得る。
【０１２９】
アポトーシスは、微小管−ターゲッティング薬物、アポトーシス調節因子（ｂｃｌ−２タンパク質）のリン酸化（および不活性化）を包含し得るプロセスによって誘発される（Ｈａｌｄｅｒ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：２２９，１９９７）。
【０１３０】
好ましくは本発明の組成物は、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤をさらに含む。
【０１３１】
薬剤の投与のために、本発明の組成物は、従来の薬剤処方技術および薬学的キャリア、アジュバント、賦形剤、希釈剤などを利用する任意の適切な様式（例えば、非経口の投与用の様式）で、処方され得る。おおよその効果的な投与率は、問題の化合物の個々の活性に依存し、平均（７０Ｋｇ）体重の患者に対して、１００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日の範囲である。公的でありかつより活性な組成物のためのより通常の投薬率は、２００ｍｇ／日〜８００ｍｇ／日、より好ましくは２００ｍｇ／日〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは２００ｍｇ／日〜２５０ｍｇ／日の範囲である。それらは、単回用量レジメ、分割用量レジメ、および／または数日にわたって続ける複数回用量レジメで与えられ得る。経口投与において、それらは、単位用量あたり１００ｍｇ〜５００ｍｇの組成物を含有する、錠剤、カプセル剤、溶液または懸濁液において処方され得る。あるいは、そして好ましくは、その組成物は、適切な非経口的投与可能なキャリア中で非経口投与のために処方され、１０ｍｇ〜８００ｍｇ、１０ｍｇ〜５００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ好ましくは２００ｍｇ〜５００ｍｇ、さらに好ましくは２００〜２５０ｍｇの範囲の単一１日投薬率を提供する。しかし、そのような効果的な一日用量は、活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変化する。そのような変化は、医師の技術および判断内にある。
【０１３２】
本発明の組成物または化合物は、任意の適切な様式（例えば、経口投与、局所投与（例えば、パッチによる）、非経口投与、直腸投与、または吸入スプレイのうちの任意の一つ以上）で投与され得る。
【０１３３】
処置の方法において、被験体は、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。いくつかの適用において、好ましくは、そのヒトは、女性である。
【０１３４】
特定の適用に関して、本発明の組成物は、別のスルファターゼ（ｓｕｌｐｈａｔａｓｅ）インヒビターを用いるか、または、例えば、アロマターゼインヒビター（例えば、４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））との組み合わせのいずれかの組み合わせ療法で用いられ得ると考えられる。
【０１３５】
本発明によると、組成物の成分は、混合して同時にまたは連続的に添加され得る。さらに、本発明によると、この成分の１つの発現を誘導するか、またはこの発現を増加させることによって、インサイチュ（例えば、インビボ）で、組成物の少なくとも一部を形成することが可能となり得る。例えば、生物学的応答調節因子（例えば、ＴＮＦ）の発現を誘導するか、またはこの発現を増加させることが、可能であり得る。例として、ＴＮＦの発現を誘導するか、またはこの発現を増加させるかは、細菌性のリポ多糖類（ＬＰＳ）および細菌性のムラミールジペプチド（ＭＤＰ）を添加することにより、可能となり得る。これに関して、細菌性のＬＰＳおよびＭＤＰの組み合わせは、インビトロでネズミの脾臓細胞からのＴＮＦ産生を刺激し、そしてインビボで腫瘍後退を刺激し得る（Ｆｕｋｓら、Ｂｉｕｌｌ  Ｅｋｓｐ  Ｂｉｏｌ  Ｍｅｄ  １９８７  １０４：４９７−４９９）。
【０１３６】
本発明の組成物中で、または組成物として使用するための適切なスルファメート化合物の例、あるいは、本発明の組成物中で、または組成物として使用するための適切なスルファメート化合物に変換され得る適切な化合物の例は、当該技術分野において、例えば、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７、ＰＣＴ／ＧＢ９７／０３３５２、ＰＣＴ／ＧＢ９７／００４４４、ＧＢ  ９７２５７４９．７、ＧＢ  ９７２５７５０．５、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１、ＵＳ−Ａ−５６７７２９２、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１、ＷＯ−Ａ−９６／０５２１６、およびＷＯ−Ａ−９６／０５２１７に見出され得る。
【０１３７】
例として、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、エストロン依存性腫瘍、特に乳ガンの処置に使用するための、新規なステロイドスルファターゼインヒビターおよびそれらを含む薬学的組成物を教示する。これらのステロイドスルファターゼインヒビターは、スルファメートエステルである。このようなインヒビターの例は、ステロイドのスルファメートエステル誘導体である。
【０１３８】
本発明での使用のために適した化合物（これはまた、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７の好ましい化合物である）は、エストロン−３−スルファメート（その他に、「ＥＭＡＴＥ」として公知）であり、この化合物は、以下の構造を有する。
【０１３９】
【化９】
2004537523.tif 000008
ＥＭＡＴＥは、インタクトなＭＣＦ−７細胞（０．１μＭ）中において、９９％より大きなＥ１−ＳＴＳ活性の阻害を示すので、強力なＥ１−ＳＴＳインヒビターであることが公知である。ＥＭＡＴＥはまた、時間および濃度に依存した様式で、Ｅ１−ＳＴＳ酵素を阻害し、これは、活性部位指向性失活剤として作用することを示す。
【０１４０】
好ましくは、Ａ環は、（オキシ）ヒドロカルビル基である置換基を有する。
【０１４１】
本発明での使用に適した別の化合物は、少なくとも以下の骨格構造を有する：
【０１４２】
【化１０】
2004537523.tif 000009
ここでＲは、上記のようなスルファメート基を示す。
【０１４３】
好ましくは、Ｒは、スルファメート基についての上記の好ましい式である。これに関して、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つが、Ｈであることが好ましい。
【０１４４】
好ましくは、Ａ環は、（オキシ）ヒドロカルビル基である置換基を有する。
【０１４５】
本発明での使用に適した別の化合物は、少なくとも以下の骨格構造を有する：
【０１４６】
【化１１】
2004537523.tif 000010
ここでＲは、上記のようなスルファメート基を示す。
【０１４７】
好ましくは、Ｒは、スルファメート基についての上記の好ましい式である。これに関して、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つが、Ｈであることが好ましい。
【０１４８】
好ましくは、Ａ環は、（オキシ）ヒドロカルビル基である置換基を有する。
【０１４９】
本発明の好ましい局面に従って、化合物のスルファメート基が、スルフェート（ｓｕｌｐｈａｔｅ）基で置換されてスルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能である（すなわちｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２とともにインキュベートした場合）。
【０１５０】
１つの好ましい実施形態では、この化合物のスルファメート基が、スルフェート基で置換されてスルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能であり、そしてｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥＣ３．１．６．２とともにインキュベートした場合に、５０ｍＭ未満のＫｍ値を生じる。
【０１５１】
別の好ましい実施形態において、この化合物のスルファメート基が、スルフェート基で置換されてスルフェート化合物を形成する場合、このスルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素によって加水分解可能であり、そしてｐＨ７．４および３７℃でステロイドスルファターゼＥＣ３．１．６．２とともにインキュベートした場合に、５０μＭ未満のＫｍ値を生じる。
【０１５２】
さらなる局面では、本発明は、腫瘍増殖を予防および／または阻害するための薬の製造のためのスルファメート化合物の使用を提供する；ここで、このスルファメート化合物は、エストロンスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）のインヒビターとしての使用に適切であり；ここで、この化合物は、ステロイド構造を有する多環式化合物、またはその生物学的等価物（ｂｉｏ−ｉｓｏｓｔｅｒｅ）であり；ここで、この多環式化合物は、Ａ環に結合した少なくとも１つのスルファメート基を含み；そしてここで、この多環式化合物は、Ａ環に結合した少なくとも１つのオキシヒドロカルビル基を含む。
【０１５３】
本発明者らは、スルファメート化合物が、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターのレセプター機能をアップレギュレートすることを見出した。
【０１５４】
従って、さらなる局面では、本発明は、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターのレセプター機能をアップレギュレートするための薬の製造におけるスルファメート化合物の使用を提供する。
【０１５５】
本発明の好ましいスルファメート化合物は、以下の式を有する：
【０１５６】
【化１２】
2004537523.tif 000011
ここで、Ｘは、（オキシ）ヒドロカルビル基であり；そしてＹは、スルファメート基であり；そしてここで、環Ａ、環Ｂ、環Ｃおよび環Ｄは、独立して必要に応じて置換される。
【０１５７】
好ましくは、Ｙは３位にある。
【０１５８】
好ましくは、Ｘは２位にある。
【０１５９】
本発明に関して、好ましくは、スルファメート化合物は、オキシヒドロカルビルステロイドスルファメート化合物（特に、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメート、２−エチルエストロン−３−Ｏ−スルファメート、または２−メトキシエストロン−３−Ｏ，１７−ビススルファメートまたはそれらの薬学的に活性な塩（それらのアナログを含む）である。
【０１６０】
２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートは、ＥＭＡＴＥのアナログであり、２−メトキシＥＭＡＴＥ（２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ）と呼ばれ得る。２−エチルエストロン−３−Ｏ−スルファメートは、ＥＭＡＴＥのアナログであり、そして２−エチルＥＭＡＴＥ（２−ＥｔＥＭＡＴＥ）と呼ばれ得る。２−メトキシエストロン−３−Ｏ，１７ビススルファメートは、ＥＭＡＴＥのアナログであり、そしてＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥと呼ばれ得る。２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥは、それぞれ、ＷＯ  ９９／６４０１３およびＷＯ  ００／６６０９５に詳細に記載される。２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥは、ＷＯ  ０２／１６３９２（ＰＣＴ／ＧＢ０１／０３６８８）に詳細に記載される。
【０１６１】
２−メトキシＥＭＡＴＥは、以下の式で表される式を有する：
【０１６２】
【化１３】
2004537523.tif 000012
２−エチルＥＭＡＴＥは、以下の式で表される式を有する：
【０１６３】
【化１４】
2004537523.tif 000013
２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥは、以下の式で表される式を有する：
【０１６４】
【化１５】
2004537523.tif 000014
本発明のスルファメート化合物は、適切なアルコールを適切なスルファモイルクロリドＲ１Ｒ２ＮＳＯ２Ｃｌと反応させることによって調製され得る。反応を実施するために好ましい条件は、以下の通りである。水素化ナトリウムおよびスルファモイルクロリドを、０℃で無水ジメチルホルムアミド中のこのアルコールの攪拌溶液に添加する。続いて、この反応物を室温まで温め、その後、攪拌をさらに２４時間にわたって続ける。反応混合物を重炭酸ナトリウムの冷たい飽和溶液に注ぎ、そして得られる水相を、ジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥させる。濾過、続いて減圧下での溶媒エバポレーションおよびトルエンとの共エバポレーション（ｃｏ−ｅｖａｐｏｒａｔｅ）によって、粗製の残渣を得、この残渣をフラッシュクロマトグラフィーによってさらに精製する。好ましくは、スルファモイルクロリドとの反応の前に、このアルコールを適切に誘導体化する。必要な場合、アルコール中の官能基を、既知の様式で保護し得、そして保護基を反応の終わりに除去し得る。
【０１６５】
本発明のさらなる局面では、腫瘍壊死因子アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）レセプターをアップレギュレートするための薬の製造におけるスルファメート化合物の使用が提供される。
【０１６６】
まとめると、本発明は、腫瘍の処置において使用するための組成物およびこれらを含む薬学的組成物を提供する。
【０１６７】
図１Ａ〜図１Ｃは、ＣＡＬ５１細胞およびＭＣＦ−７細胞におけるＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響を示す。ＣＡＬ５１細胞またはＭＣＦ７細胞を９６ウエルプレート内で５，０００の密度でプレートし、０、５０または２５０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＴＲＡＩＬの存在下で、０、０．０５、０．５または５μＭ  ＭｅｏＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥを用いて処理した細胞増殖アッセイ。結果は、３連の＋／−  Ｓ．Ｄ．の平均であり、未処理細胞についての結果のパーセンテージとして表される。
【０１６８】
図２は、Ｃａｌ５１細胞におけるＤＲ４およびＤＲ５  ｍＲＮＡレベルに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響を示す。Ｃａｌ５１細胞における０．５  μＭ  ２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥを用いた処置から０、８、１６、２４および４８時間後におけるＤＲ５、ＤＲ４およびＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡレベルを示すＲＮＡｓｅ保護アッセイ。グラフは、ＤＲ５／ＧＡＰＤＨの比としての式によって標準化したＤＲ５バンドのホスホイメージャ（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）分析からのデータの定量化を示す。
【実施例】
【０１６９】
（実施例）
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥを、それぞれ、ＷＯ９９／６４０１３号およびＷＯ００／６６０９５号の教示に従って合成した。
【０１７０】
（実施例１）
本発明者らは、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥを、乳癌細胞においてアポトーシスを誘導するためにＴＲＡＩＬと同時に作用するかどうかを調査した。得られたデータを、図１Ａ〜１Ｃに示す。
【０１７１】
（手順）
細胞増殖を、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｒｅ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｃｅｌｌ増殖アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定した。これは、比色低量法であり、細胞生存性を決定し、従って、細胞死を引き起こす薬物の能力を測定するために使用され得る。このアッセイを、細胞増殖試薬を、細胞に直接添加することによって実施する。代謝的に活性な細胞は、試薬を、有色のホルマザン生成物に転換し、４９０ｎｍでの吸光度を、３７℃で１〜４時間インキュベーションした後に測定する。
【０１７２】
ＴＲＡＩＬ同時作用実験について、ＭＣＦ−７細胞のＣＡＬ−５１を、９６ウェルプレートに、１ウェル当たり５，０００細胞でプレートした。ＣＡＬ−５１細胞を、０ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌまたは２５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＴＲＡＩＬの存在下で、０μＭ、０．０５μＭ、０．５μＭまたは５μＭの２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥで処理した。ＭＣＦ７細胞を、２５０ｎｇ／ｍｌの組換えヒトＴＲＡＩＬの存在下または非存在下で、５μｌの２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥで処理した。細胞増殖を、薬物の添加２日後（ＣＡＬ−５１）または１日後（ＭＣＦ７）に測定した。試験を、３連で実施した。そして、データは、三連の結果の平均±Ｓ．Ｄ．であり、データを、非処理細胞に対して得られた結果のパーセンテージで表す。ＣＡＬ−５１細胞での実験を、各化合物について４回実施し、ＭＣＦ−７細胞では、各化合物について１回実施した。
【０１７３】
（結果）
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ単独または２−ＥｔＥＭＡＴＥ単独での処理は、２日間でＣＡＬ５１細胞の６０％までの細胞死を誘導した。ＴＲＡＩＬ単独で処置された場合、ＣＡＬ５１細胞は、ＴＲＡＩＬ誘導性細胞死に耐性であった。しかし、ＣＡＬ５１細胞における、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥのＴＲＡＩＬと組み合わせての処理は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ単独または２−ＥｔＥＭＡＴＥ単独での処理と比較して、細胞死の数を増加した。ＭＣＦ−７細胞の２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ単独または２−ＥｔＥＭＡＴＥ単独での２４時間の処理は、１３％および１６％の細胞死を誘導した。ＴＲＡＩＬ単独での処理は、１２％の細胞死を誘導した。しかし、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥのＴＲＡＩＬと組み合わせての処理は、この化合物単独での処理に比べて細胞死の数を増加した（３５％および３６％）。従って、スルファモイル化誘導体は、ＣＡＬ５１細胞およびＭＣＦ−７細胞をＴＲＡＩＬ誘導性アポトーシスに対して感受性にした。
【０１７４】
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥは、ＣＡｌ５１細胞およびＭＣＦ−７細胞におけるＴＲＡＩＬ誘導性アポトーシスを増強する。
【０１７５】
（実施例２）
本発明者らは、ＴＲＡＩＬと２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥとの間で観察される、ＣＡＬ５１細胞で細胞死を誘導する同時作用は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥによるＤＲ４レセプターおよび／またはＤＲ５レセプターのアップレギュレーションに起因するかどうかを調査した。本発明者らは、ＣＡＬ５１細胞を２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥで４８時間にわたって処理した後の、ＤＲ４およびＤＲ５のｍＲＮＡレベルを試験するためにＲＮＡｓｅ防護アッセイ（ＲＮＡｓｅ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）を使用した。この得られたデータを、図２に示す。
【０１７６】
（手順）
この実験を、１回実施した。放射標識ＲＮＡマルチプローブを、［α３２Ｐ］ＵＴＰおよびＴ７ＲＮＡポリメラーゼを使用して合成した（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ  ＲｉｂｏＱｕａｎｔヒトアポトーシスマルチプローブテンプレートセットｈＡＰＯ−３ｃ）。このマルチプローブテンプレートセットは、アポトーシス関連遺伝子の検出および測定のための、いくつかのプローブの同時生成を可能にする。このセットはまた、ハウスキーピング遺伝子（Ｌ３２およびＧＡＰＤＨ）に対するプローブを含み、このセットは、サンプリング誤差および技術的誤差の規格化を可能にし、サンプル間のｍＲＮＡレベルの比較を可能にする。
【０１７７】
全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を使用して、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥで０時間、８時間、１６時間、２４時間および４８時間処理されたＣＡＬ−５１細胞から調製した。放射標識マルチプローブを、一晩ＲＮＡにハイブリダイズした。ハイブリダイズされないＲＮＡを、ＲＮＡｓｅで消化し、ハイブリダイズされた（保護された）フラグメントを、６％アクリルアミドゲル状で分離した。このゲルを乾燥し、Ｐｅｒｓｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍａｇｅｒ  Ｆｘ（Ｂｉｏｒａｄ）上でホスホイメージング（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｉｎｇ）によって分析した。ＤＲ５およびＧＡＰＤＨに対応する保護されたフラグメントのバンドを、定量し、そしてＤＲ５／ＧＡＰＤＨと規格化された結果の比として表した。
【０１７８】
（結果）
ＤＲ５  ｍＲＮＡレベルは、両方の薬物での処理の２４〜４８時間後の間に、非処理コントロールに比べて有意に増加した。対照的に、ＤＲ４のＲＮＡレベルは、ＤＲ５レベルに比較して低く、この時間の間は、有意には変化しなかった。
【０１７９】
２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥは、ＣＡＬ−５１細胞において、ＤＲ５レセプターのｍＲＮＡレベルをアップレギュレートする。
【０１８０】
（実施例３）
２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥを、ＷＯ０２／１６３９２号（ＰＣＴ／ＧＢ０１／０３６８８号）の教示に従って合成した。
【０１８１】
上記実施例は、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥが、ＴＲＡＩＬによって誘導されるアポトーシスに対する耐性を打ち負かしたことを示す。ＴＲＡＩＬの治療的可能性にはかなりの興味が存在し、本発明者らは、これらの化合物が乳癌治療において、ＴＲＡＩＬ誘導性アポトーシスの増強に対する有効な薬剤であり得ると結論した。本発明者らは、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥによって誘導される細胞殺傷の分子機構の分析を継続し、研究する化合物の範囲を２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥを含むように拡張した。本発明者らは、カスパーゼ（アポトーシスにおいて重要な機能を果たす配列特異的プロテアーゼ）およびデスレセプター（ｄｅａｔｈ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）経路との相互作用の役割に重点を置いた。本発明者らは、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥを使用して得られた結果に重点を置いたが、類似の結果を、他のスルファモイル化エストロゲンを用いて得た。
【０１８２】
（実施例３．１  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥは、カスパーゼ８およびカスパーゼ３を活性化し、ＰＡＲＡ切断を誘導する）
カスパーゼは、細胞タンパク質（例えば、ＰＡＲＡ）を切断し、細胞がアポトーシスを起こしている場合に生じる多くの特徴的な変化を生じることによって、アポトーシスの実施における中心的な役割を果たす。１２を超えるカスパーゼが存在し、そのいくつかは、特定の細胞死の経路に関連する。例えば、カスパーゼ８の活性化は、デスレセプター（例えば、ＴＲＡＩＬおよびＦａｓに対するレセプター）を介して誘導される細胞死に関連する一方、カスパーゼ３は、多くの経路に共通する細胞死の中心伝達物質である。
【０１８３】
カスパーゼが、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥおよび他のスルファモイル化エストロゲン誘導体によって誘導される細胞死において役割を果たすかどうかを決定するために、本発明者らは、免疫ブロッティングによって、カスパーゼ３、カスパーゼ８およびＰＡＲＰの発現を試験した（図３）。カスパーゼは、不活性なプロ形態として発現され、これらの活性化を、その活性な酵素への転換によって測定し得る。Ｃａｌ５１乳癌細胞の２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥを用いた処理は、用量依存性のカスパーゼ８およびカスパーゼ３の活性化を誘導した。ＰＡＲＰの切断により、これらの細胞におけるカスパーゼの活性化を確認した。従って、Ｃａｌ５１細胞における２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥによって誘導される細胞死は、カスパーゼ活性化に関連する。
【０１８４】
（実施例３．２  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥによって誘導されるアポトーシスを、カスパーゼ阻害によって減少する）
カスパーゼの活性化が細胞殺傷に重要であったかどうかを決定するために、本発明者らは、広い範囲の化学的カスパーゼインヒビターがアポトーシスに干渉するかどうかを試験した。細胞を、カスパーゼインヒビター（ＺＶＡＤ−ｆｍｋ）の存在下および非存在下で２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥで処理し、細胞死を、アポトーシスに関連するＤＮＡ切断を測定するＴＵＮＥＬアッセイを使用して分析した。ｚＶＡＤ−ｆｍｋの存在下で、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥによるＴＵＮＥＬポジティブな細胞の誘導を、６０％減少した（図４）。従って、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥは、最適なアポトーシスの誘導のためのカスパーゼの活性化を必要とする。
【０１８５】
（実施例３．３  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥ誘導性カスパーゼ３活性化／ＰＡＲＰ切断は、カスパーゼ８活性化の前に生じる）
２つの主要なアポトーシスの経路が存在する；細胞表面デスレセプターは、カスパーゼ８の活性化を介して直接カスパーゼを活性化する一方、他のアポトーシス刺激物質は、ミトコンドリア由来のシトクロムｃの放出をトリガーすることによって作用し、続いて、このシトクロムｃは、カスパーゼを活性化する。両方の経路は、最終的にカスパーゼ３の活性化およびＰＡＲＰ切断を生じる。カスパーゼ８の活性化が、デスレセプターの直接の関与の指標であるので、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥによるカスパーゼ８の活性化が、カスパーゼ３の活性化に先行するかまたは後に生じるかを決定することは重要である。従って、本発明者らは、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥで処理されたＣａｌ５１細胞における経時変化実験を実施し、活性化事象の順序付けをした。カスパーゼ３の活性化を、１６時間において最初に検出し、期待されるように、その後２４時間において、ＰＡＲＰ切断を検出した（図５）。カスパーゼ８の活性化は、比較的遅い事象であり、４８時間において最初に検出される。従って、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥによって誘導されるカスパーゼ３の活性化は、カスパーゼ８の活性化に先行する。
【０１８６】
（実施例３．４  ２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ、２−ＥｔＥＭＡＴＥおよび２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥは、Ｃａｌ５１細胞において、ウェスタンブロットによるＤＲ５タンパク質レベルをアップレギュレートしない）
本発明者らは、スルファモイル化されたエストロン誘導体が、Ｃａｌ５１細胞において、ＤＲ５  ｍＲＮＡをアップレギュレートし、これらの協同作用の潜在的な機構を提供したことを以前に示した。しかし、このＲＮＡの変化はまた、ＤＲ５タンパク質の増加に関連したかどうかを決定することが重要であった。タンパク質溶解物を、種々の化合物で処理したＣＡＬ５１細胞から調製し、ＤＲ５の発現について免疫ブロッティングによって分析した（図６）。ＲＮＡの分析から得られた結果と対照的に、本発明者らは、漸増濃度の２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥで４８時間Ｃａｌ５１細胞を処理をした後に、ウェスタンブロットによってＤＲ５タンパク質レベルの有意な増加を検出しなかった。本発明者らはまた、４８時間、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥで処理した後、ＤＲ５タンパク質レベルの優位な変化を観察しなかった（示さず）。
【０１８７】
（実施例３．５  ２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥによって誘導されたカスパーゼ３の活性化は、ＴＲＡＩＬでの同時処理によってさらに増強される）
スルファモイル化エストロンとＴＲＡＩＬとの間の同時作用の機構をさらに調査するために、本発明者らは、カスパーゼ３の活性化を分析した（図７）。Ｃａｌ５１細胞の、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥでの４８時間の処理は、プロセスされないカスパーゼ３のウェスタンブロッティングによるレベルの減少によって検出されるカスパーゼ３の活性化と同様のカスパーゼ３の活性化を誘導した。Ｃａｌ５１細胞は、ＴＲＡＩＬ誘導性アポトーシス処理に対して耐性であり、細胞をＴＲＡＩＬのみで処理した場合、カスパーゼ３の活性化は検出可能ではなかった。しかし、細胞を２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥと組み合わせてＴＲＡＩＬで処理した場合、カスパーゼ３の活性化をいずれかの化合物単独での処理と比べてさらに増強した。従って、スルファモイル化エストロンとＴＲＡＩＬとは、協同してカスパーゼ３を活性化する。
【０１８８】
（要約）
本発明者らは、ＴＲＡＩＬのようなアポトーシス誘導因子と組み合わせて使用される場合、２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥのようなスルファメート（ｓｕｌｐｈａｍａｔｅ）化合物が、乳癌細胞のアポトーシス誘導因子に対する感受性を増加させることを実証する。この増加した感受性についての機構は、そのスルファモイル化（ｓｕｌｆａｍｏｙｌａｔｅ）誘導体によって誘導される、レセプター機能（例えば、ＤＲ５  ｍＲＮＡレセプター機能）のアップレギュレートを含み得る。
【０１８９】
本発明者らは、本発明の化合物によって誘導される細胞殺傷の分子機構を理解することにかなりの進展をなした。これらの研究は、２−ＭｅＯＥ２ビスＥＭＡＴＥのような化合物が、どのように細胞に対するそれら化合物の作用するか、耐性の潜在的機構、および将来的なスクリーニングについての有益な情報を提供する。本発明者らのデータは、ミトコンドリアの事象が細胞殺傷において重要な役割を果たすモデルを支持する。本発明者らは、カスパーゼ８より前にカスパーゼ３が活性化されること、およびカスパーゼの阻害が細胞死を阻害することを示した。本発明者らは、カスパーゼ３の活性化を導くミトコンドリアで起こる事象の性質については言及していないが、これはスルファモイル化誘導体の作用と関連することが既に実証されている事象、例えば、ミコトンドリア膜上に局在されるＢＣＬ−２ファミリーメンバーの活性化の変化（例えば、ＢＣＬ−２およびＢＣＬ−ＸＬのリン酸化）（ＭａｃＣａｒｔｈｙ−Ｍｏｒｒｏｇｈら、２０００）、またはミトコンドリアの損傷およびシトクロムｃの放出を導き得る活性酸素種（ＲＯＳ）の生成（Ｗｏｏｄら、２００２）に影響を及ぼす。カスパーゼ８の「遅延した」活性化は、おそらくカスパーゼ３の下流であり、そしておそらくこれら経路間のクロストークの結果としてアポトーシスシグナルの増幅を示し、そしてカスパーゼ３により活性化されることがまた公知であり、そしてカスパーゼ８を切断することが報告されているカスパーゼ６によって媒介され得る（Ｓｌｅｅら、１９９９）。
【０１９０】
ＴＲＡＩＬおよびＦａｓデスレセプターを阻害することは２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥで誘導されるアポトーシスを妨害しないが、デスレセプター刺激因子と組み合わせて細胞殺傷を増強することが可能である。２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥおよびＴＲＡＩＬの相乗効果は、カスパーゼ３の活性化の増加と関連する。この分子機構は、レセプターシグナル伝達への増感を影響を及ぼすようであり、レセプターの発現の増加よりもむしろ、例えば、シグナル伝達阻害分子の阻害よる。
【０１９１】
２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥで誘導されるアポトーシスは、デスレセプターよりもむしろ、主に、損傷した微小管により活性化されたミトコンドリア媒介性経路に依存するようである。しかし、これらの経路がカスパーゼ３の活性化を介して細胞殺傷を増強するように協同し得る。
【０１９２】
従って、要約すると、本発明は、癌および特に乳癌の処置における使用に適切な組成物および化合物を提供する。
【０１９３】
特に、１つの局面では、本発明は、内分泌依存性組織（例えば、乳、子宮内膜、前立腺）における腫瘍の増殖をブロックする問題に取り組む。にもかかわらず、他の腫瘍（例えば、肉腫、黒色腫）もまた、本発明の組成物および化合物を用いる処置に適しているはずである。
【０１９４】
本発明は、エストロゲンと関連した状態に加えて、ホルモン性状態の処置にも関わりがあると考えられる。従って、本発明はまた、ホルモン活性に影響し得、そして免疫応答に影響し得る組成物を提供する。ここで、この組成物は、本発明の組成物である。
【０１９５】
本発明の組成物は、他の重要な医学的意味を有し得ることもまた理解されるべきである。
【０１９６】
例えば、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５に列挙された障害の処置において有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部をここに提供する：癌、炎症もしくは炎症性疾患、皮膚障害、熱、心血管効果（ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｆｆｅｃｔ）、出血、凝固および急性期応答、悪液質、食欲不振、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、対宿主性移植片応答、自己免疫疾患、再灌流傷害、髄膜炎、片頭痛およびアスピリン依存性抗血栓症；腫瘍増殖、浸潤および蔓延、新脈管形成、転移、悪性疾患、腹水および悪性胸水；大脳虚血、虚血性心臓疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム硬化、発作、脈管炎、クローン病、および潰瘍性大腸炎；歯周炎、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜症および外科的創傷治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、過敏症；再狭窄、鬱血性心不全、子宮内膜症、アテローム硬化、またはエンド硬化症（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）。
【０１９７】
さらに、もしくは代替として、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９に列挙された障害の処置において有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部をここに提供する：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制もしくは免疫刺激活性（例えば、免疫不全（ヒト免疫不全ウイルスでの感染を含む）の処置；リンパ急増殖の調節；癌および多くの自己免疫疾患の処置；および、移植拒絶の防止または腫瘍免疫の誘導のため）；造血の調節、例えば、骨髄性疾患もしくはリンパ系疾患の処置；骨、軟骨、腱、靱帯、および神経組織の成長の促進、例えば、創傷治癒、火傷、潰瘍、および歯周疾患および神経変性の処置；卵胞刺激ホルモンの阻害もしくは活性化（受胎能の調整）；走化性／ケモキネシス活性（例えば、傷害または感染の部位に特定の細胞型を動員するため）；恒常性および血栓崩壊活性（例えば、血友病および発作の処置のため）；抗炎症活性（例えば、敗血症性ショックもしくはクローン病の処置のため）；抗微生物剤として；例えば、代謝もしくは挙動の調整因子；鎮痛薬として；特異的欠損障害（ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）の処置；ヒトもしくは獣医学における、例えば、乾癬の処置において。
【０１９８】
さらに、または代替として、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５に列挙される疾患の処置に有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部をここに列挙する：マクロファージ阻害活性および／またはＴ細胞阻害活性ならびにそれによる、抗炎症性活性；抗免疫活性（すなわち、細胞免疫応答および／または体液免疫応答（炎症に関連しない応答も含む）に対する阻害効果は、天然または人工の細胞、組織および器官（例えば、角膜、骨髄、器官、レンズ、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織）を移植する場合、移植拒絶の予防および／または処置のために、単球またはリンパ球の量を減少させることにより、マクロファージおよびＴ細胞が細胞外マトリクス成分およびフィブロネクチンに接着する能力、ならびにＴ細胞におけるアップレギュレートされたｆａｓレセプター発現を阻害し；以下の望まれない免疫反応および炎症：関節炎（慢性関節リウマチを含む）、過敏症に関連する炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病ならびに他の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症に関連する炎症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症性心臓疾患、再灌流傷害、心停止、心筋梗塞、脈管炎症性障害、呼吸窮迫症候群または他の心肺の疾患、消化性潰瘍に関連する炎症、潰瘍性結腸炎ならびに胃腸管の他の疾患、肝性線維症（ｈｅｐａｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ）、肝硬変または他の肝臓疾患、甲状腺炎または他の腺疾患、糸球体腎炎または他の腎臓ならびに泌尿器科学的疾患、耳炎または他の耳鼻咽喉科学的疾患、皮膚炎または他の皮膚疾患、歯周の疾患または他の歯科的疾患、精巣炎ならびに精巣精巣上体炎、不妊症、咬合性外傷または他の免疫関連精巣疾患、胎盤機能障害、胎盤機能不全、習慣性流産、子かん癇、前子かん癇（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）ならびに他の免疫関連婦人科学的（ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ）疾患および炎症関連婦人科学的（ｇｙｎａｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ）障害、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎（ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）、視神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎または類嚢胞黄斑水腫浮腫、交感性眼炎、強膜炎、色素性網膜炎、変性眼底（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  ｆｏｎｄｕｓ）疾患の免疫および炎症性の構成要素、眼の外傷の炎症性の構成要素、感染により引き起こされる眼の炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血症性（ｉｓｃｈａｅｍｉｃ）眼性ニューロパシー、（例えば、緑内障のフィルトレーション手術（ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ  ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）後の）過剰な瘢痕、眼の移植物に対する免疫反応ならびに炎症反応ならびに他の免疫性眼性疾患および炎症性眼性疾患、中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の器官の両方において免疫抑制および炎症抑制が有用である自己免疫の疾患または状態または障害に関連する炎症、パーキンソン病、パーキンソン病の処置由来の合併症ならびに／または副作用、ＡＩＤＳ−関連痴呆複合症、ＨＩＶ−関連エンセファロパシー、ドヴィック病、シドナム舞踏病、アルツハイマー病ならびに他のＣＮＳの変性性の疾患、状態または障害、発作（ｓｔｏｋｅｓ）の炎症性構成要素、ポリオ後症候群（ｐｏｓｔ−ｐｏｌｉｏ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、神経医学的障害の免疫性構成要素ならびに炎症性構成要素、脊髄炎、脳炎、亜急性の硬化性汎脳炎、脳脊髄炎、急性ニューローパシー、亜急性ニューロパシー、慢性ニューロパシー、ギヤン‐バレー症候群、シドナム舞踏病（ｃｈｏｒａ）、重症筋無力症、大脳偽腫瘍、ダウン症候群、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧縮またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳの感染の炎症性構成要素、筋萎縮ならびに筋ジストロフィーの炎症性構成要素、ならびに中枢神経系および末梢神経系の免疫および炎症に関連する疾患、状態、または障害、外傷後の炎症、敗血症性ショック、感染症、外科手術の炎症性合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症ならびに／または副作用、（例えば、ウイルスキャリアでの感染に起因する）遺伝子治療の炎症性ならびに／または免疫性の合併症ならびに副作用、ＡＩＤＳに関連する炎症、を阻害して、全身性免疫応答および／または細胞免疫応答を抑制または阻害し、単球または白血球の増殖性疾患（例えば、白血病）を処置または軽減する。
【０１９９】
上記明細書において言及される全ての刊行物は、本明細書中に参考として援用される。記載される本発明の方法および系の種々の改変および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記載されたが、特許請求の範囲に記載されるとおりの本発明が、そのような特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。実際に本発明を実施するための、記載の様式の種々の改変は、化学または関連する分野における当業者に明らかであり、特許請求の範囲内であることが意図される。
【０２００】
【表１】
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本発明は、ここで、例示の目的によってのみ記載され、ここで以下の図が参照される。
【図面の簡単な説明】
【０２０１】
【図１Ａ】図１Ａは、ＣＡＬ５１細胞におけるＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥの影響のグラフを示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ＣＡＬ５１細胞におけるＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに及ぼす２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響のグラフを示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、２４時間目のＭＣＦ−７細胞におけるＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響のグラフを示す。
【図２】図２は、Ｃａｌ５１細胞におけるＤＲ４およびＤＲ５  ｍＲＮＡレベルに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響のグラフを示す。
【図３】図３は、Ｃａｌ５１細胞におけるカスパーゼ８およびカスパーゼ３活性化ならびにＰＡＲＰ切断に及ぼす２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥの影響。４８時間にわたる溶媒（０．０５、０．５または５μＭ  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥ）を用いたＣａｌ５１細胞の処置後の、カスパーゼ８およびカスパーゼ３の未処理フラグメントおよび活性フラグメントならびにＰＡＲＰ非切断および切断産物を示すウエスタンブロット。
【図４】図４は、Ｃａ１５１細胞における２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥ誘発アポトーシスに及ぼすカスパーゼインヒビターＺＶＡＤ−ｆｍｋの影響。処置していないかまたは５０μＭ  ＺＶＡＤ−ｆｍｋ、５μＭ  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥまたは５μＭ  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥおよび５０μＭ  ｚＶＡＤ−ｆｍｋで３日間処置後の細胞の％アポトーシスを示すＴＵＮＥＬアッセイ。ヒストグラムは、ＴｄＴ酵素の非存在下で染色したコントロール細胞（太字）またはＴＵＮＥＬ反応混合物で染色した細胞（オープン）についてのオーバーレイである。
【図５】図５は、Ｃａｌ５１細胞におけるカスパーゼ３およびカスパーゼ８活性化ならびにＰＡＲＰ切断のタイミングにおける２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥの影響。４８時間、５μＭ  ２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥでＣａｌ５１細胞を処置した後または４８時間未処理（４８ＮＴ）後の０、８、１６、２４および４８時間におけるカスパーゼ３、カスパーゼ８およびＰＡＲＰ未処理および切断した産物を示すウエスタンブロット。
【図６】図６は、Ｃａｌ５１細胞におけるＤＲ５タンパク質レベルに及ぼす２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよび２−ＥｔＥＭＡＴＥの影響。０、０．０５、０．５および５μＭの２−ＭｅＯＥＭＡＴＥまたは２−ＥｔＥＭＡＴＥを用いて４８時間Ｃａｌ５１細胞を処置した後のＤＲ５タンパク質レベルを示すウエスタンブロット。ＰＣＮＡレベルは、対応するローディングコントロールを表す。
【図７】図７は、Ｃａｌ５１細胞におけるカスパーゼ３活性化に及ぼす２−ＥｔＥＭＡＴＥまたは２−ＭｅＯＥＭＡＴＥおよびＴＲＡＩＬの組み合わせた処置の影響。２５０ｎｇ／ｍｌ  ＴＲＡＩＬの存在下または非存在下で、溶媒、２５０ｎｇ／ｍｌ  ＴＲＡＩＬおよび５μＭ  ２−ＥｔＥＭＡＴＥまたは２−ＭｅＯＥＭＡＴＥを用いて４８時間Ｃａｌ５１細胞を処置した後のカスパーゼ３活性化を示すウエスタンブロット。ＰＣＮＡレベルは、対応するローディングコントロールを表す。１、コントロール；２、ＴＨＦ溶媒；３、ＴＲＡＩＬ；４、２−ＥｔＥＭＡＴＥ；５、２−ＥｔＥＭＡＴＥ＋ＴＲＡＩＬ；６，コントロール；７，ＴＨＦ溶媒；８，ＴＲＡＩＬ；９，２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ；１０，２−ＭｅＯＥＭＡＴＥ＋ＴＲＡＩＬ。
【図８】図８は、２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥ誘発細胞殺傷についてのモデルを示す。２−ＭｅＯＥ２ビスＭＡＴＥ誘発アポトーシスは、死レセプターというよりむしろ、損傷したマイクロチューブによって活性化されたミトコンドリア媒介経路に主に依存するようである。しかし、これらの経路は協同して、カスパーゼ３の活性化を介する細胞殺傷を増強し得る。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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