(57)【要約】式ＩａまたはＩｂ：（Ｉａ）、（Ｉｂ）（式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である）の両イオンであるかまたはそれを生成し得るオキサペネム化合物。本化合物は、高生物学的利用能β−ラクタマーゼ阻害剤としての特定の用途を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式ＩａまたはＩｂ：
【化１】
2004511519.tif 000014
｛式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である｝により表される両イオンであるかまたはそれを生成し得るオキサペネム化合物。
【請求項２】
陽子化塩基性置換基が陽子化窒素塩基である、請求項１記載のオキサペネム化合物。
【請求項３】
陽子化塩基性置換基が陽子化アミンまたは陽子化アミノメチレンアミノ基である、請求項１または２記載のオキサペネム化合物。
【請求項４】
式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋であるか、またはＲは−ＣＨ２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋である）を有する、請求項１、２または３記載のオキサペネム化合物。
【請求項５】
式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋である）を有する、請求項１〜４のいずれかに記載のオキサペネム化合物。
【請求項６】
式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋である）を有する、請求項１、２または３記載のオキサペネム化合物。
【請求項７】
薬理学的有効量の請求項１〜６のいずれか１項に記載のオキサペネム化合物を含む製剤組成物。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか１項に記載のオキサペネム化合物を含むβ−ラクタマーゼ阻害剤。
【請求項９】
製薬的有効量の抗生物質をさらに含む、請求項７記載の製剤組成物。
【請求項１０】
薬理学的有効量の以下の式ＩａまたはＩｂ：
【化２】
2004511519.tif 000015
｛式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である｝により表される両イオンをそれを必要とする患者に投与するステップを包含する感染の治療方法。
【請求項１１】
前記両イオンが式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋または−ＣＨ２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋である）を有するか、あるいは両イオンが式Ｉｂ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋である）を有する、請求項１０記載の治療方法。
【請求項１２】
薬理学的有効量の抗生物質を患者に投与するステップをさらに包含する、請求項１０または請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
感染の治療のための薬剤の製造における、以下の式ＩａまたはＩｂ：
【化３】
2004511519.tif 000016
｛式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である｝により表される両イオンの使用。
【請求項１４】
前記両イオンが式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨ３＋、−（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋または−ＣＨ２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋である）を有するか、あるいは両イオンが式Ｉｂ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋である）を有する、請求項１３記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、オキサペネム化合物に、それらを含有する製剤組成物に、そしてそれらの医学的使用に関する。
【０００２】
β−ラクタム抗体（例えばペニシリン、セファロスポリンおよびカルバペネム）は細菌感染の治療に関して周知であるが、しかしそれらの長期使用は細菌耐性増大を伴う。
【０００３】
細菌耐性の主なメカニズムは、β−ラクタマーゼによるものである。クラスＡ〜Ｄとして既知の４種類のβ−ラクタマーゼが存在する。臨床的には、クラスＡおよびクラスＣのβ−ラクタマーゼがもっとも重要である。β−ラクタム抗生物質およびβ−ラクタマーゼ阻害剤を利用する組合せ療法は、いくつかの形態の耐性を中和するのに成功したことを立証した。既知の組合せ製品は、例えばピペラシリン抗生物質とタゾバクタム阻害剤の組合せであるタゾシムＴａｚｏｃｉｍ（ＲＴＭ）、およびアモキシシリン抗生物質とクラブラン酸素阻害剤の組合せであるアウグメンチンＡｕｇｍｅｎｔｉｎ（ＲＴＭ）である。しかしながらタゾバクタムとクラブラン酸はクラスＡのβ−ラクタマーゼに対してのみ有効であり、それらの抗生物質相手をクラスＢ、Ｄに対して、もっとも重要であるのは、クラスＣのβ−ラクタマーゼに対して非保護化状態にしたままにする。
【０００４】
クラスＣのβ−ラクタマーゼに対する活性を有するβ−ラクタマーゼ阻害剤が既知であるが、しかし今日まで、クラスＡおよびＣの両方のβラクタマーゼに対して活性である市販の「広スペクトルの」阻害剤はない。
【０００５】
欧州特許第０３０１３９４号は、抗細菌剤である広範な種々のオキサペネム化合物を開示する。欧州特許第０３６２６２２号は、クラスＡ、クラスＣおよびクラスＤのβ−ラクタマーゼに対して非常に活性である広スペクトルβ−ラクタマーゼ阻害剤であるオキサペネム化合物を開示する。欧州特許第０５４８７９０号は、オキサペネム構造の６−炭素上のキラル側鎖の立体化学がｉｎ ｖｉｔｒｏβ−ラクタマーゼ阻害活性に顕著な影響を及ぼすことを開示する。チエナマイシンンの場合と反対立体配置を有する（１’Ｓ）−１−ヒドロキシルアルキル側鎖は、一般的クラスＡのβ−ラクタマーゼである大腸菌からのＴＥＭ１β−ラクタマーゼに対するｉｎ ｖｉｔｒｏ活性増大を示す。前記の文書で、特定のｉｎ ｖｉｖｏ活性の証拠を示すものはない。
【０００６】
細菌感染を治療するためには、β−ラクタムの十分に高い血中レベルおよび長期生物学的半減期を達成することも重要である。伝統的β−ラクタム抗生物質を用いた場合、例えばセファロスポリン領域では、この問題は、セフタジジメおよびセフトリアキソン（ヒト血清中のｉｎ ｖｉｖｏ生物学的半減期がそれぞれ１．７〜２．１時間および５．８〜８．７時間）のような化合物を用いて解決された。これと対照して、非伝統的β−ラクタム、例えばカルバペネムおよびイミペネムの対応するｉｎ ｖｉｖｏ生物学的半減期は非常に短い（０．９および１．０時間）。クラブラネートのｉｎ ｖｉｖｏ半減期は、０．７〜１．４時間である。相対的に長い生物学的半減期は、抗生物質およびβ−ラクタマーゼ阻害剤の実際的適用可能性にとって非常に重要である。
【０００７】
欧州特許第０３６２６２２号のもっとも広い一般的開示内のいくつかの化合物が、意外にも、高生物学的利用能、ならびにクラスＡおよびクラスＣのβ−ラクタマーゼに対する優れた活性を示す、ということを本発明の出願人等は見出した。さらに、それらが血清中で予期せぬそして優れた安定性を示し、これが血中レベル増大および生物学的半減期増大をもたらし得る、ということを彼等は見出した。
【０００８】
本発明によれば、第一の局面において、以下の式ＩａまたはＩｂ：
【化４】
2004511519.tif 000002
｛式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である｝により表される両イオンであるかまたはそれを生成し得るオキサペネム化合物が提供される。
【０００９】
好ましくは、陽子化塩基性置換基は陽子化窒素塩基である。さらに好ましくは、陽子化塩基性置換基は陽子化アミンまたは陽子化アミノメチレンアミノ基である。
【００１０】
好ましい化合物は、式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）４ＮＨ３＋であり（以後、化合物Ｅと呼ぶ）；Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋であり（以後、化合物ＰＦＯＢと呼ぶ）；Ｒは−（ＣＨ２）２ＮＨ３＋であり（以後、化合物Ａと呼ぶ）；Ｒは−（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋である（以後、化合物Ｂと呼ぶ）か、またはＲは−ＣＨ２ＮＨＣＨ：ＮＨ２＋である（以後、化合物Ｄと呼ぶ））を有するものである。
【００１１】
上に示したＢおよびＤのＲ基における窒素の陽子化は、いずれかの窒素で起こり得ると理解される。したがってＢおよびＤは、式Ｉａ（式中、Ｒは−（ＣＨ２）２ＮＨ２＋および−ＣＨ２ＮＨ２＋ＣＨ：ＮＨである）によっても表わされ得る。
【００１２】
式Ｉｂ（Ｒは−（ＣＨ２）３ＮＨ３＋である）（以後、ＹＯＢと呼ぶ）の化合物も好ましい。
【００１３】
それらの両イオン性形態（例えば、塩基性（例えばアミン）基が陽子化されると、カルボン酸基は脱陽子化される）、そしてそれらの「非イオン性」形態（塩基（例えばアミン）およびカルボン酸基が中性である場合）での本発明の化合物間には平衡が認められる、と理解される。「非イオン性」形態の組成物、ならびに両イオン性および「非イオン性」形態の平衡混合物は、すべて本発明の範囲内である。したがって、「両イオンを生成し得るオキサペネム化合物」としては、「非イオン性」形態のオキサペネム化合物、すなわち式Ｉａまたは式Ｉｂ（式中、ＣＯ２−はＣＯ２Ｈに陽子化され、そしてＲ基上の「陽子化塩基性基」または「陽子化窒素塩基」）は脱保護化されている。両イオンを生成し得るオキサペネム化合物の例は、式Ｉａ（式中、ＣＯ２−はＣＯ２Ｈに陽子化され、そしてＲ基は−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ：ＮＨまたは−ＣＨ２ＮＨＣＨ：ＮＨである）の化合物、ならびに式Ｉｂ（式中、ＣＯ２−はＣＯ２Ｈに陽子化され、そしてＲ基は−（ＣＨ２）３ＮＨ２である）の化合物である。
【００１４】
さらに、「両イオンであるかまたはそれを生成し得るオキサペネム化合物」としては、両イオン性および「非イオン性」形態の両方のオキサペネム化合物の混合物も挙げられる。
【００１５】
（ａ）オキサペネム二重環構造の位置５および６での特定の立体化学、ならびに（ｂ）特定の両イオン性構造（またはこのような両イオン性構造を形成し得る能力）の組合せは、顕著な生物学的利用能および広スペクトル活性を有する化合物を生じる、ということを本出願人等は見出した。
【００１６】
特許請求化合物は、既知の化合物に比して、顕著に高い生物学的利用能を示す。本化合物は、クラスＡおよびＣのβ−ラクタマーゼに対する顕著な活性を示す。化合物ＹＯＢは特に、クラスＡのβ−ラクタマーゼに対して顕著に高い活性および選択性を示す。
【００１７】
本発明に記載された化合物およびβ−ラクタム抗生物質は、尿路、気道、創傷および腹腔内敗血症の感染に関与するに広スペクトルのグラム陽性細菌（ブドウ球菌、連鎖球菌）およびグラム陰性細菌（腸内細菌、非発酵性菌）に対して活性である。オキサペネム化合物および抗生物質は、同時に（例えば混合物として）、または例えば別個の薬剤として投与され得る。オキサペネムおよび抗生物質は、異なる時間に投与され得る。
【００１８】
本発明によれば、さらなる局面において、薬理学的有効量の本発明の第一の局面のオキサペネム化合物を含む製剤組成物が提供される。好ましい製剤組成物は、薬理学的有効量の抗生物質をさらに含む。抗生物質は、β−ラクタム抗生物質（例えばセフタジジメ）であり得る。
【００１９】
本発明によれば、さらなる局面において、感染の治療方法であって、
薬理学的有効量の以下の式ＩａまたはＩｂ：
【化５】
2004511519.tif 000003
｛式中、Ｒは、陽子化塩基性置換基を含むＣ１〜Ｃ８の分枝鎖または直鎖アルキル基である｝により表される両イオンを、それを必要とする患者に投与するステップを包含する方法が提供される。好ましくは、陽子化塩基性置換基は陽子化窒素塩基である。好ましくは陽子化塩基性置換基は、陽子化アミンまたは陽子化アミノメチレンアミノ置換基である。本方法はさらに、薬理学的有効量の抗生物質を患者に投与するステップを包含し得る。オキサペネム化合物および抗生物質は、同時に、または異なる時機に投与され得る。
【００２０】
治療はβ−ラクタマーゼ阻害によるものであり得る。
好ましくは、本方法は、尿路、気道、創傷および腹腔内敗血症の感染の治療のためである。患者は、ヒトまたは動物患者であり得る。
【００２１】
本発明の詳細な説明
４０を上回るオキサペネム類似体が合成され、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試験されてきた。構造活性関係（ＳＡＲ）試験は、化学的安定性、標的結合親和性、抗細菌活性、ならびにβ−ラクタマーゼ阻害の範囲および程度に関して、オキサペネム分子の種々の部分に関する機能を同定した。構造試験から生物学的利用能を予測することはできなかった。
【００２２】
ＰＦＯＢ、ＹＯＢ、Ａ、Ｅ、Ｂ、Ｄ、ＵおよびＸＯＢとして既知のいくつかのオキサペネム化合物をわれわれは合成し、そして試験した。それらの構造を表１に示す。ＰＦＯＢ、ＹＯＢ、Ｅ、Ｂ、ＤおよびＡは本発明の実施態様であると理解され得る。
【００２３】
合成を以下で考察する。
【００２４】
【表１】
2004511519.tif 000004
【００２５】
Ａ．　薬物動態試験
組成物ＸＯＢ、ＹＯＢ、ＰＦＯＢおよびＹＯＢのマウスにおける血漿レベル（時点当たりの３つの平均）を、５０ ｍｇ／ｋｇの用量で皮下（ＳＣ）投与後５、１０、２０および３０分の時点で測定した。結果を表２に示し、図１で例証する。
【００２６】
【表２】
2004511519.tif 000005
【００２７】
全時点での血漿レベルから、皮下投与後、本発明の化合物（両イオン性化合物ＰＦＯＢおよびＹＯＢ）は、塩ＸＯＢおよびＵと比較した場合、顕著に上回る生物学的利用能を有する、ということが明らかに認められ得る。さらに、ＰＦＯＢおよびＵ、そしてＹＯＢおよびＸＯＢ間の唯一の差は、化合物ＰＦＯＢおよびＹＯＢ中のアミン置換鎖（メチル基の代わりに）である、ということに留意すべきである。アミン置換鎖は、両イオン性構造を可能にする。したがって組成物は、腹腔内および皮下投与レジメンでの病院における使用に非常に適している。
【００２８】
Ｂ．　セフタジジメとの組合せにおけるｉｎ ｖｉｔｒｏ活性
ＮＣＣＬＳガイドライン（２０００）にしたがって寒天希釈により、最小阻害濃度（ＭＩＣ）を確定するための検定を実施した。以下のデータにおいて、最低ＭＩＣは最強活性を示す。
【００２９】
クラスＡのβ−ラクタマーゼ
セフタジジメ単独（ＣＡＺ）、ならびに２：１比のセフタジジメとＰＦＯＢ、ＹＯＢ、ＵおよびＸＯＢの各々（ＣＡＺ＋ＰＦＯＢ、ＣＡＺ＋ＹＯＢ、ＣＡＺ＋ＵおよびＣＡＺ＋ＸＯＢ）を、各々、種々のクラスＡのβラクタマーゼに対して試験した。結果を表３に示す。
【００３０】
【表３】
2004511519.tif 000006
【００３１】
大腸菌ＴＥＭ−３、ＴＥＭ−６、ＴＥＭ−９およびＴＥＭ−１０に対して、オキサペネムはすべて、ＣＡＺと組合せて用いた場合、ＣＡＺ単独と比較して顕著に上回る活性を示す、ということが認められ得る。
【００３２】
本発明の組成物であるＹＯＢは、ＸＯＢ（両イオン性でない、構造的および立体化学的に近い組成物）と比較した場合、顕著な活性を示す。これは、ＸＯＢ（０．２５および０．２５）に関するものと比較して、ＹＯＢ（０．０３および０．０６）に関して、大腸菌ＡＴＣＣ２５９２２およびＴＥＭ−１に対するＭＩＣ値により特に良好に実証される、ということが注目される。ＴＥＭ−９およびＴＥＭ−１０に対するＭＩＣ値も優越を示すことも留意される。
【００３３】
クラスＣのβ−ラクタマーゼ
セフタジジメ単独（ＣＡＺ）、ならびに１：１比のセフタジジメとＰＦＯＢ、ＹＯＢ、ＵおよびＸＯＢの各々（ＣＡＺ＋ＰＦＯＢ、ＣＡＺ＋ＹＯＢ、ＣＡＺ＋ＵおよびＣＡＺ＋ＸＯＢ）を、各々、種々のクラスＣのβラクタマーゼに対して試験した。結果を表４．１に示す。
【００３４】
【表４】
2004511519.tif 000007
【００３５】
すべての生物体に対して、オキサペネムはすべて、ＣＡＺと組合せて用いた場合、ＣＡＺ単独と比較して上回る活性を示す、ということが認められ得る。
【００３６】
本発明の組成物であるＰＦＯＢは、Ｕ（両イオン性でない、構造的および立体化学的に近い組成物）と比較した場合、顕著な活性を示す。これは、Ｕ（８、２および０．２５）に関するものと比較して、ＰＦＯＢ（それぞれ４、０．０３および０．０３）に関して、Ｅ． ｃｌｏａｃａｅ ８４−ｃｏｎ、Ｃ． Ｆｒｅｕｎｄｉｉ Ｃ２−ｃｏｎおよびＳ． ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ Ｓ２−ｃｏｎに対するＭＩＣ値により実証される。Ｓ． ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ Ｓ２−ｃｏｎに対するＹＯＢに関するＭＩＣ値は、ＸＯＢの値より顕著に上回る、ということも留意される。
【００３７】
セフタジジメ単独（ＣＡＺ）、ならびに２：１比のセフタジジメとＰＦＯＢ、ＹＯＢ、ＵおよびＸＯＢの各々（ＣＡＺ＋ＰＦＯＢ、ＣＡＺ＋ＹＯＢ、ＣＡＺ＋ＵおよびＣＡＺ＋ＸＯＢ）を、各々、種々のクラスＣのβラクタマーゼに対して試験した。結果を表４．２に示す。
【００３８】
【表５】
2004511519.tif 000008
【００３９】
これまた本発明の具体化であるＰＦＯＢは、Ｕ（両イオン性でない、構造的および立体化学的に近い組成物）と比較した場合、顕著な活性を示す。これは、ＰＦＯＢ（それぞれ４、４および２）に関して、Ｅ． ｃｌｏａｃａｅ ８４−ｃｏｎおよびＣ． Ｆｒｅｕｎｄｉｉ Ｃ２−ｃｏｎに対するＭＩＣ値を、Ｕ（８、１６および４）に関するものと比較することにより実証される。Ｃ． Ｆｒｅｕｎｄｉｉ Ｃ２−ｃｏｎに対するＹＯＢに関するＭＩＣ値は、ＸＯＢの値より上回る、ということも留意される。
【００４０】
要約
本発明を具体化する組成物は、クラスＡおよびＣのβ−ラクタマーゼの両方に対する「広スペクトルの」活性を併有する優れた生物学的利用能の顕著な組合せを有する、ということも認められる。
【００４１】
化合物の活性とＣ−６での置換基の立体化学との間の依存性または関係の単なる予測は存在しない。ＵおよびＰＦＯＢは（１’Ｒ）−１−ヒドロキシエチル側鎖を有し、一方、ＸＯＢおよびＹＯＢは（１’Ｓ）−１−ヒドロキシエチル側鎖を有する。ＰＦＯＢおよびＹＯＢの優勢な活性は予測されなかった。
【００４２】
Ｃ．１　ＸＯＢおよびＹＯＢの化学的安定性
１０−４ Ｍ濃度のオキサペネムで、２６５ ｎｍでのＵＶ分光分析により、生理学的リン酸塩緩衝液、ｐＨ７．４中で３７℃で、加水分解の半減期を確定した。
【００４３】
【表６】
2004511519.tif 000009
【００４４】
Ｃ．２　血清中のＸＯＢおよびＹＯＢの安定性
大腸菌ＴＥＭ１（ペニシリン耐性）による寒天拡散試験を用いて、血清安定性を微生物学的に確定した。０．０３３％濃度で、３７℃で滅菌ウシ血清（ＯＸＯＩＤ）とともにオキサペネムをインキュベートした。０時間、１．５時間、３時間、４．５時間および６時間間隔で、ピペラシリン（７５ ｍｌ）を含有する市販のフィルター円板（ＯＸＯＩＤ）上にアリコート試料（３０ ｍｌ）をスポッティングし、種々の量（１０ ｍｇ、５ ｍｇ、２．５ ｍｇ、１．２５ ｍｇ、０ ｍｇ）のβ−ラクタマーゼ阻害剤をスポッティングするピペラシリン（７５ ｍｌ）円板を用いて得られた物と比較した場合の、観察された阻害直径低減（２７−１２ ｍｍ）から、活性β−ラクタマーゼ阻害剤（オキサペネム）の残留量を算定した。
【００４５】
【表７】
2004511519.tif 000010
【００４６】
したがって、両イオン性化合物ＹＯＢは血清中ではＸＯＢよりはるかに安定しているが、一方、これと対照して、２つの化合物の化学的安定性は実際上等しい。両イオン性オキサペネムＹＯＢの血清中の安定性のこの意外な増大（両イオン性でない、構造的および立体化学的に近い組成物であるＸＯＢと比較した場合）は、もっとも有意でありそして重要である。この安定性は、高血中レベルおよび長い生物学的半減期を生じ、それゆえ、ヒトおよび獣医学的療法における細菌感染を治療するための優れた能力をもたらす。
【００４７】
Ｄ．　化合物ＰＦＯＢ、Ａ、ＥおよびＹＯＢの合成
Ｄ．１　（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２ハイフンカルボン酸［ＰＦＯＢ］の合成
下記の合成は、添付の図面の図２に模式的に示されている。
３５ ＬのＰｆａｕｄｌｅｒ容器（ＧＬＭＳ）に、アセトニトリル（１６．７ ｋｇ）および（３Ｒ，４Ｒ）−４−（アセトキシ）−３−［（１Ｒ）−１−［［（１，１−ジメチルエチル）ジメチルシリル］オキシ］エチル］−２−アゼチジノン（３．３４ ｋｇ， １１．６ ｍｏｌｅ）を投入した。ヘッダーフラスコに、２１％ナトリウムメチルメルカプタン（５．８ Ｌ， １７．４ ｍｏｌｅ， １．５当量）を投入した。これを２時間に亘って、１５〜２０℃（発熱を制御するために必要な冷却）でバッチに付加した。次にバッチを１時間攪拌後、ＴＬＣ分析は、完了を示した。下部水性層を放出し、生成物（アセトニトリル）相を６．７ Ｌの２０％ブラインで洗浄後、抜き取って、回転蒸発器（２０ Ｌ）で乾燥させた。次に粗製生成物をヘキサン（１３．３ Ｌ）から結晶化し、還流により０℃に冷却した。結晶生成物を濾過し、ヘキサン（１ Ｌ）で洗浄した。真空乾燥により、融点９３℃、白色針状結晶として図２の化合物ＩＩＩを得た（２．４９ ｋｇ， ７８％）。
【００４８】
２０ Ｌ容器（ガラス）に、ＴＨＦ（８．２５ Ｌ）を、その後化合物（ＩＩＩ）（１．６５ ｋｇ， ６．０ ｍｏｌｅ）を投入した。バッチを−４０℃に冷却し、２．５ Ｍブチルリチウム（２．４ Ｌ）を＜−２５℃で（典型的には−４５〜−３５℃）で１時間に亘って投入した。これにより−２５℃になった。第二容器に、ＴＨＦ（４．１ Ｌ）およびパラ−ニトロベンジルヨードアセテート（１．９２ ｋｇ， ６．０２ ｍｏｌｅ）を投入し、これを次に−１０℃に冷却した。次に化合物（ＩＩＩ）の溶液を、真空下でカニューレを用いて３０分間に亘って、＜０℃（典型的には＜−８℃）の温度を維持しながら、第二溶液に移した。攪拌完了（＜−５℃で２時間）後、バッチを−１０℃に冷却し、２０％ブライン（１６ Ｌ）を含入する５０ Ｌ容器に付加した。下部水性相をジクロロメタン（１３ Ｌ）で逆抽出した。次に２つの有機相を併合し、抜き取って、乾燥して、図２の粗製化合物（ＩＶ）を得た（約３ ｋｇ）。ＴＨＦを投入して（約２ Ｌ）、約４０％溶液として生成物を貯蔵させた。
【００４９】
約４０％化合物ＩＶ（１２９２ Ｇ， ２．７６　ｍｏｌｅ）を含有するＴＨＦ溶液（３．５４ Ｌ）をＫＦ＜０．１％に抜き取って、次に新たなＴＨＦ（ＫＦ＜０．０５％）７．５ Ｌ中に再溶解する。これに、塩化５−アジド−２，２−ジメチルペンタン酸（１．２３ ｋｇ， ６．５ ｍｏｌｅ， ２．３５当量）を＜−５０℃で付加する。リチウムビス（トリメチルシリル）アミドの２０％（１．０４ Ｍ）溶液を、＜−６５℃で滴下する（６０００ ｍｌ， ６．２４ ｍｏｌｅ， ２．２５当量）。混合物がかなり暗化したら、−７０℃で１時間、放置、攪拌した。トルエン（１２．５ Ｌ）および１０％ＨＣｌ（１２．５ Ｌ）上に投入することにより、反応を抑えた。次に有機相を２５％ＫＨＣＯ３（１２．５ Ｌ）、水（１２．５ Ｌ）および飽和ブライン（６ Ｌ）で引き続いて洗浄した。次に有機相を濃縮し、蒸発させて、暗色濃縮溶液（約３０％生成物）を得た。
【００５０】
約５０ Ｌのトルエンを用いて製造された２５ ｋｇのフラッシュシリカに、トルエン（２０ Ｌ）中の２０％ヘキサンに溶解した物質（前記の反応の３バッチから）を投入した。これを０．５ ｂａｒ圧下で溶離して、カラム上にその物質を負荷し、前部が現れ始める（分画１）まで再循環させた。少量の前部をこの分画中で分離し、廃棄した。次に以下の分画を溶離した：
【００５１】
分画２〜４　　トルエン（各々２５ Ｌ）
分画５〜６　　トルエン（各々２５ Ｌ）中の６％酢酸エチル
分画７〜８　　トルエン（各々２５ Ｌ）中の８％酢酸エチル
分画９〜１０　トルエン（各々２５ Ｌ）中の１０％酢酸エチル
【００５２】
次に、図２の化合物Ｖの１３．５％溶液２５ Ｌの容積に、生成物を含有する分画を抜き取った（３．５１ ｋｇ， ６８％）。
【００５３】
油（４．４４ ｋｇ、３．２ ｋｇの化合物Ｖを含有、多少のＴＨＦを含む）化合物Ｖのテトラヒドロフラン溶液を回転蒸発器上に抜き取った。この油をＴＨＦ（１０．７５ Ｌ）中に再溶解して、最終溶液（ＫＦ０．０３２６％）を生成した。これを１００ Ｌ容器に入れて、その後、酢酸（２．９８ Ｌ）およびフッ化テトラ−ｎ−ブチル−アンモニウム（５．３６ ｋｇ， １７．１３ ｍｏｌ）およびさらなるＴＨＦ（２１．５ Ｌ）を入れた。これは、投入中の多少の発泡により成し遂げられた。バッチを還流時まで加熱し（６５℃）、次に１６時間、還流近くに保持した。ＴＬＣ分析のための試料採取は、極微量の出発物質のみを示した。トルエン（３２ Ｌ）を付加し、容器内容物を２０℃に冷却した後、１ Ｍ重炭酸カリウム溶液（２７ Ｌ）で、再び泡立てながら、１５分間に亘ってクエンチした。
【００５４】
有機相を１ Ｍ重炭酸カリウム溶液（２ ｘ ２７ Ｌ）、１０％ブライン（４ ｘ １１ Ｌ）および２０％ブライン溶液（３ Ｌ）で洗浄した。この洗浄レジメンは、酢酸の徹底的除去を保証するためであった。
【００５５】
トルエン溶液を約５ Ｌの容積に抜き取って、冷凍庫に保存する一方で、第二バッチを調製して、さらなる４．２ ｋｇの粗製生成物を得た。窒素圧（０．５ ｂａｒ）を用いたドライフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、粗製物質を精製した。
【００５６】
直径３０ ｃｍカラムに、トルエン（５０ Ｌ）中のフラッシュシリカ（クロゲルシリカＩ２４５、２５ ｋｇ）のスラリーを投入して、沈殿後、８０ ｃｍの床深度を生じた。シリカが部分的に乾燥するまで、トルエンを溶離した。前記からの粗製生成物（８．５ ｋｇ）をトルエン（２０ Ｌ）中に溶解し、シリカに投入して、窒素圧を用いてカラムに負荷した。次に生成物を以下の溶媒混合物で溶離した。
【００５７】
１００％トルエン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ５０ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（９８：２）　　　　　　　　　　　　　　７５ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（９５：５）　　　　　　　　　　　　　　２５ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（８０：２０）　　　　　　　　　　　　　 １００ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（７０：３０）　　　　　　　　　　　　　 ５０ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（６０：４０）　　　　　　　　　　　　　 ５０ Ｌ
トルエン：酢酸エチル（６０：４０）＋０．５％イソプロパノール　　５０ Ｌ
【００５８】
以下の分画サイズを収集した−
2004511519.tif 000011
【００５９】
２０ Ｌ回転蒸発器での真空濃縮により、図２の化合物ＶＩを薄赤橙色油として得た（ＴＬＣによる単一スポット、４．００４ ｋｇ、７６．５％）。
【００６０】
２ Ｌフラスコに、ジクロロメタン（１．０２ Ｌ）およびメチルジスルフィド（３９８ ｇ， ４．２３ ｍｏｌ）を投入した。次にラジカルスカベンジャー（３−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシ−５−メチルフェニルスルフィド、１．８５ ｇ， ０．００５ ｍｏｌ）を投入し、バッチを−３５℃に冷却した。塩素ガス（２９６ ｇ， ８．３５ ｍｏｌ）を２時間に亘って溶液中に散布して、メチルスルフェニルクロリドの橙色溶液を生じた。
【００６１】
この溶液を、ジクロロメタン（１１．４ Ｌ）および化合物ＶＩ（ジクロロメタン中の３８．２％溶液４．９７ ｋｇ、１．９ ｋｇ活性、３．７４ ｍｏｌ）を含入する２０ Ｌフラスコ中に−２５℃〜−１５℃で２５分間に亘って付加した。次にバッチを−２５℃で２０分間攪拌した。ＴＬＣにより示されるように（出発物質の不存在）反応が完了したら、水（２３ Ｌ）中の硫化水素ナトリウム（１．１９６ ｋｇ）および炭酸水素ナトリウム（０．９７５ ｋｇ）の溶液を含入する５０ Ｌフラスコ中でバッチをクエンチした。相を分離し、水性相をジクロロメタン（１．５ ｋｇ， ２ Ｌ）で逆抽出した。併合有機相を飽和ブライン溶液（６ Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム（１ ｋｇ）上で乾燥した後、２０ Ｌ回転蒸発器で油に真空濃縮して、図２の化合物ＶＩＩを粗製赤色油（１．７４ ｋｇ， ３．５１ ｍｏｌ， ９３．７％粗製物収率）として得て、これをテトラヒドロフラン（２．７１ ｋｇ）に溶解し、次の段階での使用のために−３０℃で保存した。
【００６２】
化合物ＶＩＩ（１．０２８ ｋｇ）を真空濃縮すると粗製油が後に残り、これをテトラヒドロフラン中に溶解して（９．５ ｋｇ， １０．６ Ｌ，ＫＦ値＝０．０２％）、２０ Ｌフラスコに投入した。次にフラスコを＜−５０℃に冷却し戻して、トリエチルアミン（８４８ ｇ， １．１６８ Ｌ）を５分間に亘って付加した。バッチを−５０℃で１時間攪拌し、２時間かけて２０℃に暖めて、次にさらに２時間、２０〜２５℃で攪拌した。反応はＴＬＣにより完了していることが示された（出発物質の消失）。トルエン（１７．７ Ｌ）を５０ Ｌフラスコに投入し、反応混合物をこれに付加した後、トルエン（３．５５ Ｌ）ですすいだ。沈殿および分割後、有機相を１０％ブライン溶液（３ ｘ １２ Ｌ）で、その後飽和ブライン溶液（３ Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム（１ ｋｇ）上で乾燥した後、トルエン中の図２の化合物ＶＩＩＩの溶液の２ Ｌ容積が得られるまで真空濃縮し、これをトルエンで４．５ ｋｇまでにした。
【００６３】
ジエチルエーテル：ｎ−ペンタン（１．５：１）中のシリカゲル６０のスラリー（１５００ ｇ）を調合して、被覆カラム（８０ ｍｍｉ．ｄ．）に投入し、グリコール循環により−１５℃に冷却した。粗製化合物ＶＩＩＩ（２２．５〜２５．０％ｗ／ｗ、４５０ ｇ溶液、１０１．３〜１１２．５ ｇ活性粗製混合物）をシリカに投入して、マイナス２０℃に予冷したジエチルエーテル：ｎ−ペンタン（１．５：１）で溶離した。生成物を２５ Ｌの混合溶媒および２ Ｌのジエチルエーテルで溶離し、１ Ｌ分画を収集して、−２０℃で真空濃縮し、図２のトランス化合物ＶＩＩＩ（典型的には４６ ｇ）を得て、これを−２０℃で貯蔵した。
【００６４】
１０ Ｌフラスコに、脱イオン水（７５０ ｍｌ）、１０％パラジウム（炭素上）（Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｍａｔｔｈｅｙ， Ｔｙｐｅ ８７Ｌ， ６０％水、５５ ｇ多湿固体、２．２ ｇパラジウム、０．０２０７ ｍｏｌ、０．０２１１当量）および酢酸エチル（１７５０ ｍｌ）を投入した。フラスコを窒素で１５分間、その後水素でパージして、バッチを＜０℃に冷却した。十分に激しく攪拌した（４５０〜５００ ｒｐｍ）。
【００６５】
トランス化合物ＶＩＩＩ（４５ ｇ， ０．０９８ ｍｏｌ）を−３０℃で酢酸エチル（３００ ｍｌ）に溶解して、最終温度を−５℃とした。これを、反応およびヘッダー温度を＜０℃に維持しながら、バッチに付加した。
【００６６】
バッチを、一貫して一定水素流を維持しながら、９０分までの間水素化した。有機層のＨＰＬＣ分析が出発物質の不存在を示したら、反応は完了したとみなされた。
【００６７】
０℃未満の温度を維持しながら、できるだけ迅速に、セライト５２１を通した濾過により触媒を除去した（５０ ｇ、脱イオン水および酢酸エチルで予洗）。使用済み触媒を予冷酢酸エチル（１００ ｍｌ）および脱イオン水（２ ｘ １００ ｍｌ）で０℃で洗浄した。沈殿後、水性相を単離し、０℃に保持して、−２０℃に冷却しておいたｎ−ペンタン：トルエン（３：１）で洗浄した。
【００６８】
生成物を含有する水性相を引き続き１．６ ｍｍガラス繊維紙（ＧＦ／Ａ等級）およびガラス繊維前フィルターカートリッジ（ＧＦＰ等級）を備えたポリエーテルスルホン膜（孔サイズ０．２ ｍｍ、ＰＥＳ等級）を通して濾過して、完全透明薄黄色−琥珀色溶液を生じた。これを−７８℃で５００ ｍｌフラスコの壁上で２００ ｍｌアリコートで凍結させた。７２時間凍結乾燥後、（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−カルボン酸（典型的には〜５０％補正収率）を大量のオフホワイト〜薄黄色固体として単離した。
【００６９】
Ｄ．２　Ａ、Ｅの合成
前記のＰＦＯＢの合成の単なる適合により、化合物ＡおよびＥを製造する。
【００７０】
Ｄ．３　（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−カルボン酸［ＹＯＢ］の合成
磁気攪拌機ならびに窒素を充填したバルーンに連結された還流冷却器を装備した５００ ｍｌシュレンクフラスコ中に、ドライテトラヒドロフラン中で、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテート（１４．１３ ｇ， ３０．１５ ｍｍｏｌ）［ＰＦＯＢの合成における化合物ＩＶ］、酢酸（１７．３ ｍｌ， ３０２ ｍｍｏｌ）および臭化テトラブチルアンモニウム（２３．２ ｇ， ８８．６ ｍｍｏｌ）の溶液を１２時間還流した。シリカゲル上でのＴｌｃは、ほぼ完全な転化を示した。混合物をトルエン（２５００ ｍｌ）で希釈し、その後、５００ ｍｌ部分ずつの１０％ＫＨＣＯ３、１０％ＮａＣｌ（２回）および飽和ＮａＣｌで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、濾液を真空蒸発すると、非結晶残渣（１２ ｇ）が残った。４４０ ｍｌ分画で、トルエン−酢酸エチル（２：１、３：２および１：１）を用いたシリカゲル（４４０ ｇ， ４０〜６３ ｍｍ）上でのカラムクロマトグラフィーによる精製により、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテートを、純粋結晶生成物（６．３８ ｇ， ６０％）として分画１０〜１６から得た。融点７７〜７９℃。
【００７１】
磁気攪拌機、ゴム隔壁ならびに窒素を充填したバルーンを装備した５００ ｍｌシュレンクフラスコ中に、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテート（６．３５ ｇ， １７．９３ ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（９．４ ｇ， ３５．８６ ｍｍｏｌ）およびドライテトラヒドロフラン（１３４ ｍｌ）を付加した。この混合物に、ドライ蟻酸（２．０３ ｍｌ， ５３．７９ ｍｍｏｌ）を付加し、−１０℃でこの攪拌溶液にジイソプロピルアゾジカルボキシレート（７．０３ ｍｌ， ３５．８６ ｍｍｏｌ）を３０分掛けて徐々に付加した。１０分後に沈殿を生じた。懸濁液を０℃でさらに３０分間、そして室温でさらに９０分間攪拌すると、沈殿が再溶解した。暗黄色溶液をこのようにして得た。反応混合物をトルエン（１５００ ｍｌ）で希釈し、その後、１２００ ｍｌずつの水、１０％ＫＨＣＯ３および１０％ＮａＣｌで洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、溶媒を真空除去すると、油が残った。それを、トルエン−酢酸エチル（９：１）の２００ ｍｌ分画を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２０５ ｇ， ６３〜２００ ｍｍ）により精製した。シリカゲルｔｌｃ（クロロホルム−酢酸エチル４：１）により分画を調べた。分画６〜１５から、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｒ）−ホルミルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテートを、不純半結晶固体（１０．０１ ｇ）として収集した（６．８５％＝１００％）。
【００７２】
磁気攪拌機を装備した５００ ｍｌ丸底フラスコに、粗製ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｓ）−ホルミルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテート（１０．０１ ｇ。１７．９３ ｍｍｏｌの前駆体から調製）およびメタノール（１８０ ｍｌ）を付加した。この混合物に、水性１ ＮＨＣＬ（１７．９ ｍｌ， １７．９ ｍｍｏｌ）を付加し、室温で一夜、溶液を攪拌した。シリカゲル上でのＴｌｃは、完全反応を示した。反応混合物をトルエン（１６００ ｍｌ）で希釈し、溶液を、その後、冷水（１１００ ｍｌ）、１０％ＫＨＣＯ３（５００ ｍｌ）および１０％ＮａＣｌ（５００ ｍｌ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、その結果生じた溶媒を真空蒸発すると、油が残った。それを、２００ ｍｌ分画およびトルエン−酢酸エチル（２：１および１：１）を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製した。分画９〜１９から、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｓ）−ヒドロキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテートを、非結晶固体（３．７７ ｇ， ５９％）として得た。
【００７３】
磁気攪拌機ならびに窒素を充填したバルーンを装備した１００ ｍｌシュレンクフラスコ中に、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｓ）−ヒドロキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテート（３．７２ ｇ， １０．５０ ｍｍｏｌ）およびドライ（エタノール無含有）塩化メチレン（２３ ｍｌ）を付加した。塩化メチレン中のｐ−ニトロベンジルクロロホルメート（３．０８ ｇ， １４．２８ ｍｍｏｌ）の溶液を、−１８℃で徐々に付加した。この混合物に、固体Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピドリジン（１．７４ ｇ， １４．２８ ｍｍｏｌ）を２０分間に亘って少量ずつ、攪拌しながら付加した。−１８℃で４時間攪拌後、シリカゲルｔｌｃは、完全反応を示した。反応混合物を塩化メチレン（２３０ ｍｌ）で希釈し、その結果生じた溶液を、その後、一部（１２０ ｍｌ）ずつの１ ＮＨＣｌ、飽和ＮａＨＣ３および１０％ＮａＣｌで洗浄した。ＨＣｌ相を塩化メチレン（４０ ｍｌ）で再抽出し、抽出溶液をＮａＨＣＯ３で洗浄した。併合抽出溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、溶媒を真空除去すると、粗製生成物（５．２４ ｇ）が残った。トルエン−酢酸エチル（６：１）の１７０ ｍｌ分画を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１７０ ｇ， ６３〜２００ ｍｍ）による精製により、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｓ）−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテートを、非結晶固体（４．８０ ｇ，８６％）として得た。
【００７４】
磁気攪拌機、ゴム隔壁ならびに窒素を充填したバルーンを装備した２５０ ｍｌシュレンクフラスコに、ｐ−ニトロベンジル（３Ｓ，４Ｒ）−（３−（１’（Ｓ）−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−４−メチルチオ−２−オキソアゼチジニル）アセテート（１．００ ｇ， １．８７ ｍｍｏｌ）およびドライテトラヒドロフラン（４６ ｍｌ）を付加した。この混合物に、５−アジド−２，２−ジメチル−ペンタノイルクロリド（０．３７ ｇ， １．９６ ｍｍｏｌ）を−７８℃で付加し、その後、−７８℃で、テトラヒドロフラン中のリチウムビス−トリメチルシリルアミド（３．７４ ｍｌ， ３．７４ ｍｍｏｌ）の１ Ｍ溶液を１５分以内に付加した。最初に生じた橙色溶液は薄黄色に変わった。さらに１５分間攪拌後、シリカ上のｔｌｃは完全反応を示した。反応混合物をトルエン（２４０ ｍｌ）で希釈し、一部ずつ（２２０ ｍｌ）の２ ＮＨＣｌで、そして飽和ＮａＣｌで２回、洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過して、濾液を真空蒸発して、高真空で短時間乾燥後、非結晶粗製物質（１．３８ ｇ）を得た。９０ ｍｌ分画を用いたトルエン−酢酸エチル（９：１）でのシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（９２ ｇ， ６３〜２００ ｍｍ）による精製により、ｐ−ニトロベンジル７−アジド−４，４−ジメチル−２−［（３Ｓ，４Ｒ）−４−メチルチオ−３−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−２−オキソ−１−アゼチジニル］−３−オキソ−ヘプタノエートを、塩化メチレンによる二重蒸発および高真空での乾燥後に、薄黄色非結晶固体（１．０１ ｇ， ７９％）として得た。
【００７５】
磁気攪拌機、ゴム隔壁ならびに窒素を充填したバルーンを装備した２５０ ｍｌシュレンクフラスコに、ｐ−ニトロベンジル７−アジド−４，４−ジメチル−２−［（３Ｓ，４Ｒ）−４−メチルチオ−３−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−２−オキソ−１−アゼチジニル］−３−オキソヘプタノエート（０．９７ ｇ， １．４１ ｍｍｏｌ）およびドライエタノール無含有塩化メチレン（５６ ｍｌ）を付加した。この混合物に、−６０℃で、ドライ塩素ガスを、表面から流入口を通して注射器により導入した。−５０℃で１０分後、シリカ上のｔｌｃは完全反応を示した。冷溶液を、ＮａＨＳＯ３（２．８２ ｇ、無水物）および炭酸ナトリウム（２．２３ ｇ、無水物）を含有する水性溶液上に注ぎいれた。混合物を４分間振盪し、有機相を収集して、水性相を小部分の塩化メチレンで抽出した。有機溶液をその後一部ずつ（３７ ｍｌ）の１０％ＮａＣｌで２回洗浄し、有機溶液を併合して、硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空蒸発後、非結晶固体（０．９５ ｇ）が生じた。それを、５ ｍｌ分画を用いたトルエン−酢酸エチル（１９：１および４：１）でのシリカゲル上の迅速カラムクロマトグラフィー（２．３ ｇ， ６３〜２００ ｍｍ）により精製した。分画２〜１４から、ｐ−ニトロベンジル７−アジド−２−［（３Ｓ，４Ｒ）−クロロ−３−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−２−オキソ−１−アゼチジニル］−４，４−ジメチル−３−オキソ−ヘプタノエートを、溶媒の真空蒸発および高真空での残渣の乾燥後に、薄黄色非結晶固体（９３０ ｍｇ， ９７％）として得た。
【００７６】
磁気攪拌機、ゴム隔壁ならびに窒素を充填したバルーンを装備した１００ ｍｌシュレンクフラスコに、ｐ−ニトロベンジル７−アジド−［（３Ｓ，４Ｒ）−４−クロロ−３−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル）−２−オキソ−１−アゼチジニル］−４，４−ジメチル−３−オキソヘプタノエート（９１０ ｍｇ， １．３５ ｍｍｏｌ）およびドライテトラヒドロフラン（２７ ｍｌ）を付加した。この混合物に、ドライｔｅｒｔ−ブタノール中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．５４ ｍｌ， １．４２ ｍｍｏｌ）の０．９２ Ｍ溶液を、−３０℃で徐々に付加した。反応混合物を−３０℃で１５０分間攪拌させた。ｔｌｃは完全転化を示した。暗黄色溶液を酢酸エチル（１５０ ｍｌ）で希釈して、５分間放置し、その後、１０％ＮａＣｌ（１３０ ｍｌ）、１０％ＮａＣｌ（６５ ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ（６５ ｍｌ）で洗浄した。有機相を収集して、硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空下での溶媒の濾過および蒸発後、９０分間の高真空乾燥後に黄色油（８６０ ｍｇ）を生じた。それを、各々３０ ｍｌのトルエン−酢酸ブチル（１９：１）収集分画でのシリカゲル（６０ ｇ， ５〜２０ ｍｍ）上での低温（−１３℃）での媒質圧カラムクロマトグラフィーにより精製した。分画を−２０℃に保持した。分画１１〜１３から、純粋トランスｐ−ニトロベンジル（５Ｒ，６Ｒ）−３−［４−アジド−１，１−ジメチルブチル］−６−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル］−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２カルボキシレート（３０６ ｍｇ， ３５％）を、溶媒の真空蒸発後に、無色非結晶固体として得た。分画１４〜２１から、シス−トランス異性体混合物（２７７ ｍｇ， ３２％）を同様にして得た。
【００７７】
磁気攪拌機、ゴム隔壁を装備し、水素転化装置に連結された１００ ｍｌ二首フラスコ中で、酢酸エチル（１３ ｍｌ）中のパラジウムオンカーボン触媒（１０％， ３００ ｍｇ）および水（１３ ｍｌ）を０℃で２０分間、予備水素転化した。次に酢酸エチル（１０ ｍｌ）中のｐ−ニトロベンジル（５Ｒ，６Ｒ）−３−［４−アジド−１，１−ジメチルブチル］−６−［（Ｓ）−１−ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルオキシエチル］−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２カルボキシレート（２８０ ｍｇ， ０．４４ ｍｍｏｌ）の溶液を、攪拌しながら０℃で注射器により付加した。０℃で５０分間攪拌後、水素取込みが終わりになった（９０ ｍｌの水素が消費された）。濾過により触媒を除去し、小部分ずつの酢酸エチルおよび水で洗浄し、冷却二相混合物を分離させた。水性相を一部ずつ（３ ｍｌ）の冷酢酸エチルおよび水で２回洗浄し、酢酸エチル相を一部ずつ（３ ｍｌ）の水で２回、再抽出した。残留酢酸エチルを併合水相から真空除去し、次に高真空で０℃で除去して、容積を高真空中で１３ ｍｌに低減した。溶液を−２５℃で３日間凍結乾燥して、（５Ｒ，６Ｒ）−３−［４−アミノ−１，１−ジメチルブチル］−６−［（Ｓ）−１−ヒドロキシエチル］−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（ＹＯＢ）を無色大容積粉末（９８ ｍｇ， ７５％）として得た。
【００７８】
Ｅ．　製剤として用いるための調製物
製剤調製物は、以下のように調製し得る。
実施例１（方法Ａ）
ラクトース中の（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（ＰＦＯＢ）の高安定性製剤調製物
【化６】
2004511519.tif 000012
【００７９】
３０ ｍｌの酢酸エチル中の３．７９ ｇ（８．２５ ｍｍｏｌ）のｐ−ニトロベンジル（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アジド−１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボキシレートの溶液を、ゴム隔壁を通して注射器により０℃で、１２０ ｍｌの酢酸エチルおよび６０ ｍｌの水中の３．１ ｇのパラジウムオンチャコール（１０％）の予備水素化混合物に付加した。０℃で７０分間の反応時間後、８４０ ｍｌの水素を得た（理論量７４０ ｍｌ）。反応混合物を、直径１０ ｃｍのＧ５ガラスフィルターを通して濾過し、残渣を３０ ｍｌの冷水および３０ ｍｏｌの冷酢酸エチルで洗浄して、酢酸エチル層を併合濾液から除去した。水性層を０℃で５０ ｍｌの冷酢酸エチルおよび５０ ｍｌの冷トルエンで洗浄して、その結果生じた水性コロイド溶液を、注射器を用いて膜フィルターを推し進めると、この時点で層が分離した。残留有機溶媒を除去するために、水性層を高真空中で蒸発させた。水性溶液（８９．８ ｍｌ）に、１８０ ｍｌの水中に７．２ ｇのラクトース一水和物を含有する冷溶液を付加し、その結果生じた溶液の３ ｍｌ部分をガラスアンプルに充填した。内容物をドライアイス−アセトン浴中で凍結させて、０．０１ ｍｂａｒで４日間に、−２５℃で凍結乾燥機中で水を除去した。その結果生じた白色粉末を、０．００１ ｍｂａｒおよび室温で一夜、デシケーター中で五酸化リン上で乾燥すると、９８．３ ｍｇの白色粉末が各アンプル中に残った。２６２ ｎｍでの水中でのＵＶ分光分析は、各アンプル中の１８．２ ｍｇの表題化合物および８０．１ ｍｇのラクトースという内容物を明示した。アンプルにドライ窒素を充填し、密封するか、あるいは乾燥剤上で貯蔵した。
製剤組成物は、以下のようにしても調製し得る：
【００８０】
実施例２
（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（ＰＦＯＢ）
【化７】
2004511519.tif 000013
Ｃ１節に示した手法にしたがって、マイナス２５℃での簡単な冷凍乾燥（ラクトースなし）後、ならびに０．００１ ｂａｒおよび室温で五酸化リン上での乾燥後、正味表題化合物を白色粉末として得た。このようにして得た化合物は、既知の方法または以下で考察する方法により製剤として投与するのに適している。
【００８１】
実施例３
製剤調製物の製造
新規のオキサペネム化合物は、製剤組成物中に用い得る。例えば欧州特許第０３０１３９４号に開示されているもののような慣用的方法により、オキサペネム化合物を製剤組成物／薬剤に製造し得る。他の薬剤製造方法としては以下のものが挙げられる：
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒドロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（ＰＦＯＢ、実施例１）の（４：１）同時凍結乾燥物３００ ｍｇを、１２０ ｍｇのセファクロールおよび５ ｍｇのステアリン酸マグネシウムと混合することにより、単位用量形態を調製し、４２５ ｇｍの混合物をゼラチンＮｏ．３カプセルに付加した。同様に、より高含量のオキサペネム−３−カルボン酸の同時凍結乾燥物を用いる場合には、他の用量形態を同様に調製して、Ｎｏ．３ゼラチンカプセル中に充填し得るが、４２５ ｍｇより多い構成成分を一緒に混合する必要があり、より大きいカプセルを、そして圧縮錠剤およびピルも製造し得る。以下の実施例は、製剤調製物の製造を例証する。
【００８２】
表５
────────────────────────────────────
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−
（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒド
ロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ
［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸の（４：１）同
時凍結乾燥物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６２５ ｍｇ
セファクロール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ ｍｇ
トウモロコシデンプンＶ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　　　　２００ ｍｇ
リン酸二カルシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ６０ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　 ６０ ｍｇ
【００８３】
同時凍結乾燥物およびその他の活性構成成分（セファクロール）をリン酸二カルシウムおよび半量のトウモロコシデンプンと混合する。次に混合物を造粒して、粗めに篩に掛ける。それを４５℃で乾燥し、メッシュ幅１．０ ｍｍの篩（Ｎｏ．１６スクリーン）を通して再び篩い分けする。残りのトウモロコシデンプンおよびステアリン酸マグネシウムを付加し、混合物を圧縮して、各々１１９５ ｍｇで、直径１．２７ ｃｍ（０．５ ｉｎ．）の錠剤を生成する。
【００８４】
母液
────────────────────────────────────
アンプル
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−
（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒド
ロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ
［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸の（４：１）同
時凍結乾燥物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６２５ ｍｇ
セフタジジメ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５００ ｍｇ
滅菌水（使用直前に注射器を用いて別のアンプルから添加する）
５ ｍｇ
【００８５】
眼用溶液
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−
（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒド
ロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ
［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸の（４：１）同
時凍結乾燥物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６２５ ｍｇ
セフタジジメ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ ｍｇ
滅菌水（使用直前に注射器を用いて別のアンプルから添加する）
２ ｍｇ
【００８６】
眼用溶液
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−
（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒド
ロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ
［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸の（４：１）同
時凍結乾燥物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ ｍｇ
セフタジジメ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ ｍｇ
塩化ベンズアルコニウム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１ ｍｇ
滅菌水（使用直前に注射器を用いて別のアンプルから添加する）
２ ｍｇ
【００８７】
局所クリームまたは軟膏
ラクトース一水和物および（５Ｒ，６Ｒ，１’Ｒ）−３−
（４−アミノ−１，１−ジメチルブチル）−６−（１’−ヒド
ロキシエチル）−７−オキソ−４−オキサ−１−アザビシクロ
［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸の（４：１）同
時凍結乾燥物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ ｍｇ
セフタジジメ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１００ ｍｇ
ポリエチレングリコール４０００Ｖ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　８００ ｍｇ
ポリエチレングリコール ４００Ｖ．Ｓ．Ｐ．　　　　　　　　　　　２００ ｍｇ
────────────────────────────────────
【００８８】
前記の処方物中のＰＦＯＢの代わりに単に置換することにより、同様の実施例において、ＹＯＢ、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥを製薬敵活性作用物質として用い得る。
【００８９】
同時凍結乾燥は安定性を強化するにちがいないが、しかし他の試薬と混合する前に、活性オキサペネム（ＰＦＯＢ、ＹＯＢ等）は担体（例えばラクトース）と同時凍結乾燥する必要がある、ということに留意すべきである。
【００９０】
前記の調製物中の活性構成成分は、単独で、または他の生物学的活性構成成分、例えばリンコマイシン，ペニシリン，ストレプトマイシン、ノボビオシン、ゲンタマイシン、ネオマイシン、コリスチンおよびカナマイシンと一緒に、あるいはその他の治療薬、例えばプロベネシドと一緒に混合され得る。
【００９１】
明細書および実施例は本発明の例証であって、本発明を限定するものではなく、本発明の範囲における本質を逸脱しない他の実施態様はそれ自体を当業者に示唆する、と理解される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、マウスに５０ ｍｇ／ｋｇで皮下投与後のオキサペネム類似体の血漿レベルを示す。
【図２】
図２は、市販化合物からの本発明を具体化する化合物（ＰＦＯＢ）の合成の模式図を示す。
【国際公開パンフレット】
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2004511519.tif 000018
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【国際調査報告】
2004511519.tif 000053
2004511519.tif 000054
2004511519.tif 000055
2004511519.tif 000056