(57)【要約】抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキサン（登録商標）および放射標識抗ＣＤ２２抗体、好ましくは９０Ｙ標識ヒト化抗ＣＤ２２抗体の組合せを用いる、白血病、リンパ腫などの自己免疫およびＢ細胞悪性疾患を含むＢ細胞関連疾患の治療について記載する。これらの治療法は、Ｂ細胞のより一層の枯渇を提供し、それによってリツキサン（登録商標）によるＢ細胞悪性疾患治療に伴う再発の危険性を軽減し、さらに、Ｂ細胞免疫反応、特に自己免疫疾患および移植において長期の免疫抑制を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｂ細胞の機能を抑制および／または枯渇および／または阻止することが治療上有益である疾患または状態を治療する方法であって、
（ｉ）治療上有効な量の実質的にリツキサン（登録商標）に相当するＢ細胞枯渇活性を有する非放射性（非放射標識）抗ＣＤ２０モノクローナル抗体を投与するステップと、
（ｉｉ）治療上有効な量の放射性（放射標識）抗ＣＤ２２抗体またはそのフラグメントを投与するステップとを含み、
前記抗ＣＤ２０抗体および前記放射標識抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントを、別々または組み合わせて、いずれかの順序で投与する方法。
【請求項２】
Ｂ細胞悪性疾患、白血病またはリンパ腫を治療するために使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
自己免疫疾患を治療するために使用される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記疾患が非ホジキンリンパ腫である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記Ｂ細胞悪性疾患、白血病またはリンパ腫が、軽度悪性型／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度悪性型／濾胞性ＮＨＬ、中等度悪性型びまん性ＮＨＬ、慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）、高度悪性型免疫芽細胞性ＮＨＬ、高度悪性型リンパ芽球性ＮＨＬ、高度悪性型小切れ込み核細胞ＮＨＬ、バルキー疾患ＮＨＬ、外套細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびワルデンストレーム・マクログロブリン血症からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記非放射性抗ＣＤ２０抗体の量が、１週間当たり０．１ｍｇ〜５００ｍｇ／ｍ２に及ぶ、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記非放射性抗ＣＤ２０抗体の量が、１週間当たり少なくとも約５００ｍｇ／ｍ２である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記用量が、４週の間、１週間当たり約３７５ｍｇ／ｍ２である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記放射標識抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントが、イットリウム標識抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記放射標識抗ＣＤ２２抗体フラグメントが、Ｆａｂ２、Ｆａｂ、Ｆｖまたはドメイン欠落（ｄｅｌｅｔｅｄ）抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗ＣＤ２２抗体が、９０Ｙ標識ヒト化ＬＬ２抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記放射標識抗体の用量が１０〜３０ｍＣｉに及ぶ、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記放射標識抗ＣＤ２２抗体を、リツキサン（登録商標）抗体治療法が終了してから約１週間後に投与する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
化学療法剤の投与がさらに含まれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
サイトカインの投与がさらに含まれる、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
抗ＣＤ２０抗体がリツキサン（登録商標）である、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
治療される状態が、Ｂ細胞悪性疾患、白血病またはリンパ腫である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
抗ＣＤ２０抗体がリツキサン（登録商標）である、請求項５に記載の方法。
【請求項１９】
疾患が移植である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
状態が細胞療法である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
疾患が自己免疫疾患である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
自己免疫疾患がＢ細胞関連自己免疫疾患である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
状態が細胞療法である、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
状態がアレルギーである、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
状態が抗原部分の投与を含む治療である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
抗原部分が治療用タンパク質である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
疾患が、Ｂ細胞が腫瘍成長を促進するが、Ｂ細胞それ自体は腫瘍の源ではない固形癌である、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２０００年６月２０日出願の米国仮出願番号６０／２１２，６６８による優先権を主張し、その全体を参照により本明細書に組み込む。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、非放射性抗ＣＤ２０抗体、好ましくはリツキサン（ＲＩＴＵＸＡＮ）（登録商標）、またはリツキサン（登録商標）と同一のＢ細胞枯渇活性を実質的に有する別の抗ＣＤ２０抗体、および放射標識抗ＣＤ２２抗体、好ましくはイットリウム標識ヒト化抗ＣＤ２２抗体の投与を含む免疫療法／放射線治療の併用に関する。腫瘍治療の場合には、非放射性抗ＣＤ２３抗体の初期投与が循環からＢ細胞を除去することに役立ち、それによって放射標識抗ＣＤ２２抗体のターゲティングおよび有効性を改善する。
【０００３】
また、本治療は、非放射性ＣＤ２０および放射標識抗ＣＤ２２療法単独に比べて強化された免疫抑制を提供する。この併用治療法は、ＣＤ２０およびＣＤ２２発現細胞の機能を枯渇させることおよび／または選択的に死滅させること、および／または阻止することが治療上有益である疾患、特にＢ細胞悪性疾患、リンパ腫、白血病、ならびにＢ細胞免疫機能の抑制が治療上有益である状態または疾患、例えば自己免疫疾患、アレルギー性疾患の治療、移植、ならびに抗原性成分、例えばタンパク質の投与を含むその他の治療法、細胞もしくは遺伝子療法に有用である。治療法は、リツキサン（登録商標）の初期投与と、続く放射標識抗ＣＤ２２抗体の投与を含むことが好ましい。
【０００４】
（発明の背景）
Ｉ．抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０は９０％を超えるＢ細胞リンパ腫で発現する細胞表面抗体であり、腫瘍細胞中では減少も調節もされない（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５−２８３３（１９９８））。研究と治療の双方で使用するために抗ＣＤ２０抗体が調製されている。報告された抗ＣＤ２０抗体の１つはモノクローナルＢ１抗体である（米国特許第５，８４３，３９８号）。また、抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ細胞リンパ腫を治療するための放射性核種の形態（例えば、１３１Ｉ標識抗ＣＤ２０抗体）、ならびに前立腺癌および乳癌の転移によって引き起こされる骨の痛みを軽減するための８９Ｓｒ標識型（Ｅｎｄｏ、Ｇａｎ　Ｔｏ　Ｋａｇａｋｕ　Ｒｙｏｈｏ　２６：７４４−７４８（１９９９）でも調製されている。
【０００５】
報告によれば、マウス・モノクローナル抗体、１Ｆ５、（抗ＣＤ２０抗体）がＢ細胞リンパ腫患者に連続静脈内注射によって投与された。しかしながら、報告によれば、循環する腫瘍細胞を減少させるには極めて高レベル（＞２グラム）の１Ｆ５が必要であり、結果は「一過性である」と記載された（Ｐｒｅｓｓ他、Ｂｌｏｏｄ　６９：５８４−５９１（１９８７））。治療剤としてモノクローナル抗体を用いることに伴う潜在的な問題は、ヒト以外のモノクローナル抗体（例えば、マウス・モノクローナル抗体）は通常ヒトのエフェクター機能性を欠き、とりわけ、例えば補体依存性溶解を媒介し、または抗体依存性細胞毒性もしくはＦｃ受容体媒介性食作用を介してヒトの標的細胞を溶解することができないことである。さらに、ヒト以外のモノクローナル抗体がヒト宿主により異種タンパク質として認識されることがあるため、このような異種抗体の反復注射は、有害な超過敏反応をもたらす免疫反応の誘発につながることがある。マウスをベースとするモノクローナル抗体の場合には、これがヒト抗マウス抗体反応、または「ＨＡＭＡ」反応と呼ばれることが多い。さらに、これらの「異種」抗体は、宿主の免疫系によって攻撃を受け、抗体がそれらの標的部位に到達する前に事実上中和されてしまうことがある。
【０００６】
Ａ．リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＩＭＡＢ）（登録商標）
リツキシマブ（登録商標）（リツキサン（登録商標）、マブセラ（ＭａｂＴｈｅｒａ）（登録商標）およびＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８の別名でも知られる）は、初めてＦＤＡ承認を受けたモノクローナル抗体であり、ＩＤＥＣ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓで開発された（米国特許第５，８４３，４３９号；第５，７７６，４５６号および第５，７３６，１３７号を参照）。リツキシマブ（登録商標）は、軽度悪性型または濾胞性Ｂ細胞非ホジキン・リンパ腫患者の治療に推奨されるキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル（ＭＡｂ）である（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ他、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ）１２：１７６３−１７７７（１９９８）；Ｌｅｇｅｔ他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：５４８−５５１（１９９８））。欧州では、リツキシマブ（登録商標）は、再発段階ＩＩＩ／ＩＶの濾胞性リンパ腫の療法として承認されている（Ｗｈｉｔｅ他、Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ　２：９５−１０１（１９９９））。リツキシマブ（登録商標）で治療可能なその他の障害には、濾胞性中心細胞リンパ腫（ＦＣＣ）、外套細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞性リンパ腫（ＤＬＣＬ）、および小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ／ＣＬＬ）が含まれる（Ｎｇｕｙｅｎ他、１９９９））。リツキシマブ（登録商標）は、第Ｉおよび第ＩＩ相臨床試験において軽度悪性型非ホジキン・リンパ腫で最小限の毒性と著しい治療活性を示した（Ｂｅｒｉｎｓｔｅｉｎ他、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．９：９９５−１００１（１９９８））。
【０００７】
現在、リツキシマブ（登録商標）は、通常３７５ｍｇ／Ｍ２の週用量で４週間、再発性または難治性の軽度悪性型または濾胞性ＮＨＬのＢ細胞ＮＨＬを治療するのに単独で使用されている。この抗体は忍容性が良好であり、著しい臨床活性を有していた（Ｐｉｒｏ他、Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：６５５−６１（１９９９）；Ｎｇｕｙｅｎ他、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．６２：７６−８２（１９９９）；およびＣｏｉｆｆｉｅｒ他、Ｂｌｏｏｄ　９２：１９２７−１９３２（１９９８））。また、抗体を用いる治験中に、５００ｍｇ／Ｍ２までの週用量が４回投与されている（Ｍａｌｏｎｅｙ他、Ｂｌｏｏｄ　９０：２１８８−２１９５（１９９７））。また、リツキシマブ（登録商標）は、軽度悪性型または濾胞性Ｂ細胞非ホジキン・リンパ腫を治療するためにＣＨＯＰ（例えば、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾン）などの化学療法剤と併用されている（Ｃｚｕｃｚｍａｎ他、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２６８−７６（１９９９）；およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ他、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ）１２：１７６３−１７７７（１９９８））。しかしながら、これまで他の治療用抗体と組み合わせて利用されたことはない。
【０００８】
ＣＤ２２に対するモノクローナル抗体の合成および治療法におけるそれらの使用法も報告されている。ＣＤ２２はＢ細胞接着に関与するＢ細胞特異的分子であり、ホモタイプまたはヘテロタイプの相互作用において機能することができる（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４４：７４（１９９０）；Ｗｉｌｓｏｎ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７（１９９１）；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ他、Ｃｅｌｌ　６６：１１３３（１９９１））。ＣＤ２２タンパク質は、前駆Ｂ細胞および前Ｂ細胞の細胞質中で発現するが（Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０（１９８６）；Ｄｏｒｋｅｎ他、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ＣＤ２２　ｉｎ　Ｂ−ｃｅｌｌ　ｏｎｔｏｇｅｎｙ．Ｉｎ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　ＩＩＩ、Ｗｈｉｔｅ　Ｃｅｌｌ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ．ＭｃＭｉｃｈａｅｌ他編、Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、ｐ．４７４（１９８７）；Ｓｃｈｗａｒｔｉｎｇ他、Ｂｌｏｏｄ　６５：９７４（１９８５）；Ｍａｓｏｎ他、Ｂｌｏｏｄ　６９：８３６（１９８７）」）、成熟Ｂ細胞の表面上にのみ見いだされ、表面ＩｇＤと同時に存在する（Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０（１９８６））。ＣＤ２２発現は活性化後に増加し、さらに分化しながら消失する（Ｗｉｌｓｏｎ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７（１９９１）；Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０（１９８６））。リンパ系組織では、ＣＤ２２は濾胞性外套帯および辺縁帯Ｂ細胞によって発現されるが、胚中心Ｂ細胞による発現はわずかに過ぎない（Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０（１９８６）；Ｌｉｎｇ他、「Ｂ−ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｔｉｇｅｎｓ：ｎｅｗ　ａｎｄ　ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙ　ｄｅｆｉｎｅｄ　ｃｌｕｓｔｅｒｓ」Ｉｎ　Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　Ｔｙｐｉｎｇ　ＩＩＩ．Ｗｈｉｔｅ　Ｃｅｌｌ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　Ａｎｔｉｇｅｎｓ、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ他編、Ｏｘｆｏｒｄ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、ｐ．３０２（１９８７））。しかしながら、ｉｎ　ｓｉｔｕのハイブリッド形成は、胚中心内におけるＣＤ２２ｍＲＮＡの発現が最も強く、外套帯における発現は少なめであることを示している（Ｗｉｌｓｏｎ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７（１９９１））。ＣＤ２２がＢ細胞活性化の調節に関与していると考えられているのは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおけるＣＤ２２ｍＡｂのＢ細胞との結合が、細胞内遊離カルシウムおよび表面Ｉｇの架橋後に誘発される増殖の増加を増強することが判明しているためである（Ｐｅｚｚｕｔｔｏ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：９８（１９８７）；Ｐｅｚｚｕｔｔｏ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１７９１（１９８８））。しかしながら、他の研究は、抗Ｉｇ誘発性増殖の増加は軽度であると判定している（Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６：４４７０（１９８６））。ＣＤ２２は構成的にリン酸化されるが、リン酸化のレベルは、ＰＭＡによる細胞の処理後に増加する（Ｂｏｕｅ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１９２（１９８８））。さらに、可溶性形態のＣＤ２２は、ヒトＴ細胞のＣＤ３媒介性活性化を阻害し、ＣＤ２２がＴ細胞−Ｂ細胞相互作用に重要であることを示唆している（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ他、Ｃｅｌｌ　６６：１１３３（１９９１））。
【０００９】
ＣＤ２２受容体と特異的に結合するリガンドは、様々な疾患、特にＢ細胞リンパ腫および自己免疫疾患の治療に潜在的用途を有していることが報告されている。特に、このような疾患を治療するための標識および非標識抗ＣＤ２２抗体の使用法が報告されている。
【００１０】
例えば、Ｔｅｄｄｅｒ他、米国特許第５，４８４，８９２号が称するには、これらの抗体は、高い親和性でＣＤ２２と結合し、ＣＤ２２の他のリガンドとの相互作用を阻止する。これらのモノクローナル抗体は、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、壊死性血管炎、リンパ節炎、結節性動脈周囲炎、全身性エリテマトーデス、関節炎、血小板減少性紫斑病、無顆粒球症、自己免疫性溶血性貧血などの自己免疫疾患の治療、ならびに妊娠中の胎児抗原などの異種抗原に対する免疫反応、重症筋無力症、インスリン抵抗性糖尿病、グレイヴス病およびアレルギー反応を阻害するのに有用であることが開示されている。
【００１１】
また、Ｌｅｕｎｇ他、米国特許第５，７８９，５５７号は、ＣＤＲグラフティングによって製造したキメラおよびヒト化抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、ならびにＢ細胞リンパ腫および白血病を治療および診断するための複合および非複合形態によるそれらの使用法を開示している。この参考文献は、特に化学療法剤、毒素、重金属および放射性核種などの細胞障害性薬剤と複合したこのような抗体を開示している（１９９８年８月４日に出願され、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓに譲渡された米国特許第５，７８９，５５４号を参照）。
【００１２】
さらに、ＰＣＴ出願ＷＯ９８／４２３７８、ＷＯ００／２０８６４、およびＷＯ９８／４１６４１は、ＣＤ２２に特異的なモノクローナル抗体、複合体およびフラグメントならびにその治療的使用法、特にＢ細胞関連疾患を治療するための使用法について記載している。
【００１３】
また、自己免疫疾患および癌を治療するための抗ＣＤ２２抗体の使用法も示唆されている。例えば、１９９５年８月２２日、Ｈａｎｓｅｎ他に発行されてＩｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ　Ｉｎｃ．に譲渡された、診断および治療、特にウイルスおよび細菌感染症、心血管疾患、自己免疫疾患、および癌の治療をするための抗ＣＤ２２免疫複合体について記載すると主張している米国特許第５，４４３，９５３号、ならびに１９９８年１月１６日、Ｔｅｄｄｅｒ他に発行されてＤａｎａ−Ｆａｒｂｅｒ　Ｃａｎｃｅｒ　ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｉｎｃ．に譲渡された、ＣＤ２２接着機能の遅延または阻止が治療上有益である疾患、特に自己免疫疾患を治療するための、ＣＤ２２を対象とする様々なモノクローナル抗体について記載すると主張している米国特許第５，４８４，８９２号を参照されたい。これらの参考文献は、抗ＣＤ２２抗体のフラグメントを所望のエフェクター成分、例えばｉｎ　ｖｉｔｒｏのイムノアッセイもしくはｉｎ　ｖｉｖｏの画像診断中に検出できる酵素、フルオロフォア、放射性核種、電子伝達剤などの標識、または治療的エフェクター成分、例えば毒素、薬物または放射性同位体と直接的または間接的に複合させることができることを示唆している。
【００１４】
さらに、ＩｇＧ１アイソタイプの抗ヒトＣＤ２２モノクローナル抗体は、Ｌｅｉｎｃｏ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販されており、報告によればＢ細胞リンパ腫およびヘアリー細胞白血病を含む白血病の治療に有用である（Ｃａｍｐａｎａ，Ｄ．他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：１５２４（１９８５））。さらに、Ｄｏｒｋｅｎ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４７１９（１９９３）とＥｎｇｅｌ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４５１９（１９９３）は共に、ＣＤ２２に特異的なモノクローナル抗体について記載している。
【００１５】
また、癌および自己免疫疾患を含む疾患を治療するための抗ＣＤ２２免疫毒素および抗ＣＤ１９免疫毒素の複合投与が報告されている（１９９７年１１月１１日、Ｕｈｒ他に発行されてＴｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｘａｓに譲渡された米国特許第５，６８６，０７２号を参照）。
【００１６】
したがって、上記に基づき、Ｂ細胞リンパ腫の治療のためにリツキサン（登録商標）および他の療法が報告されているが、このような治療は再発しやすいことが多い。したがって、治療法において抗ＣＤ２０抗体および抗ＣＤ２２抗体の使用法に関して何が報告されているかはともかくとして、新規な治療法が開発され、特に増強された治療効果を提供する併用療法が開発されるならば好都合と思われる。特に、リツキサン（登録商標）または他の抗ＣＤ２０抗体の治療法で治療された患者において疾患の再発を予防し、または軽減する新規な療法が開発されるならば有利であろう。
【００１７】
（発明の好ましい実施形態）
本発明の一実施形態は、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体またはそのフラグメントの投与、および放射標識抗ＣＤ２２モノクローナル抗体またはフラグメントの投与を含む新規な治療法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、リツキサン（登録商標）の初期投与と、続く放射標識抗ＣＤ２２モノクローナル抗体、またはそのフラグメントの投与を含む新規な治療法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、Ｂ細胞悪性疾患および癌、特にＢ細胞白血病またはリンパ腫を治療するための新規な治療法であって、リツキサン（登録商標）の投与と、続く放射標識抗ＣＤ２２抗体の投与を含む治療法を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、自己免疫疾患の治療および移植のための新規な方法であって、リツキサン（登録商標）と、続く放射標識抗ＣＤ２２抗体の投与を含む方法を提供することである。
【００２１】
本発明の別の目的は、Ｂ細胞免疫反応を、特にタンパク質、遺伝子もしくは細胞療法において、またはアレルギー性障害の治療において、抗ＣＤ２０抗体および放射標識抗ＣＤ２２抗体の複合投与によって阻害する新規な方法を提供することである。
【００２２】
（発明の概要）
本発明は、Ｂ細胞の生成を阻害することおよび／または枯渇させることおよび／または死滅させることおよび／または阻止することが治療上望ましい疾患、特にＢ細胞悪性疾患および白血病、ならびに自己免疫疾患、移植、アレルギー性障害、炎症性障害、および遺伝子または細胞療法、ならびにＢ細胞免疫を抑制することが望ましい他の状態を有する患者を治療する方法に関する。好ましい実施形態では、本発明は、Ｂ細胞リンパ腫および白血病、特に非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療に関する。
【００２３】
本質的に、本治療法は、非放射性抗ＣＤ２０抗体またはフラグメント、および放射性（放射標識）抗ＣＤ２２抗体またはフラグメントの投与を含む。抗ＣＤ２０抗体および放射標識抗ＣＤ２２抗体は、組み合わせてまたは別々に、およびいずれの順序でも投与することができる。まずＢ細胞枯渇を達成するのに十分な量で抗ＣＤ２０抗体を投与し、続いて放射標識ＣＤ２２抗体を投与することが好ましい。
【００２４】
この組合せは、非標識抗ＣＤ２０もしくは放射標識ＣＤ２２抗体またはフラグメント単独の使用法に比べて相乗的結果を及ぼすことが好ましい。特に好ましい実施形態においてこの組合せが腫瘍化Ｂ細胞の死滅または枯渇の増大を提供するのは、初めに非放射性ＣＤ２０抗体が大部分のＣＤ２０発現細胞を除去し、放射標識ＣＤ２２抗体が残ったすべての腫瘍化Ｂ細胞を実質的に除去するからである。場合によって、併用療法には、放射標識ＣＤ２０抗体、例えば放射標識２Ｂ８（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））の使用法が含まれる。
【００２５】
別の好ましい実施形態では、この組合せは、現在のリツキサン（登録商標）ベースの治療法に比べ、Ｂ細胞悪性疾患、例えば非ホジキンリンパ腫患者における再発を予防または抑制する。
【００２６】
（発明の詳細な説明）
本発明を明確に記載するため、以下の定義を示す。
【００２７】
定義
単位、接頭辞、および記号は、それらのＳｉ公認型で示す。数値範囲には、範囲を規定する数値が含まれる。特別に示さない限り、核酸は５’から３’方向へ左から右へ書き、アミノ酸配列はアミノからカルボキシへ左から右へ書く。本明細書に示す見出しは、本明細書全体を参照することにより得ることできる本発明の様々な態様または実施形態の制限ではない。したがって、以下に定義する用語は、本明細書全体を参照することにより、さらに十分定義される。
【００２８】
本明細書で使用する用語「抗体」には、指定されたタンパク質またはそのペプチドと特異的に反応する免疫グロブリンおよびそのフラグメントが含まれることを意図している。抗体には、ヒト抗体、霊長類化抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体、他のタンパク質または放射標識と融合した抗体、および抗体フラグメントが含まれる。
【００２９】
本明細書の用語「抗体」は最も幅広い意味で使用され、具体的には原型のモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２種類の原型抗体から生成した多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および所望の生物活性を示す限りは抗体フラグメントを網羅する。
【００３０】
「抗体フラグメント」は、原型抗体の一部を含み、その抗原結合領域または可変領域を含むことが好ましい。抗体フラグメントの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）；リニア（ｌｉｎｅａｒ）抗体；単鎖抗体分子；および抗体フラグメントから生成した多重特異性抗体が含まれる。抗体フラグメントは、従来の技法を用いて単離することができる。例えば、Ｆ（ａｂ１）２フラグメントは、抗体をペプシンで処理することにより生成することができる。得られたＦ（ａｂ１）２フラグメントを処理してジスルフィド架橋を還元し、Ｆａｂ１フラグメントを生成することができる。
【００３１】
「天然抗体」は、通常約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり、２本の同一軽（Ｌ）鎖および２本の同一重（Ｈ）鎖からなる。各軽鎖は１個の共有ジスルフィド結合によって重鎖と連結するが、ジスルフィド連鎖数は、異なる免疫グロブリン・アイソタイプの重鎖間で異なる。また、各重鎖および軽鎖は、規則正しい間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＨ）と、続いて多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一方の端に可変ドメイン（ＶＬ）を、他方の端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメインと並び、軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの間の境界面を形成していると考えられている。
【００３２】
用語「可変」は、可変ドメインの特定部分は、抗体間で配列が大きく異なり、特定の各抗体の特定のその抗原に対する結合および特異性に用いられるということを指す。しかしながら、その可変性は、抗体の可変ドメイン全体に一様には分布していない。可変性は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメイン双方の超可変領域と呼ばれる３個のセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。自然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは、各々４個のＦＲを含み、主に１３シート構成（１３−ｓｈｅｅｔ　ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）を取り、３個の超可変領域によって連結され、ループ接続を形成し、場合によってはＢシート構造の一部を形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲによって極めて接近してまとめられ、他の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ．（１９９１））。定常ドメインは、抗体が抗原と結合する際に直接関与しないが、抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）における抗体の関与などの様々なエフェクター機能を示す。
【００３３】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれ、各々が単一の抗原結合部位を有する２種類の同一の抗原結合フラグメント、および容易に結晶化する能力を表す名前である残りの「Ｆｃ」フラグメントを生成する。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原と架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られる。
【００３４】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識部位および抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインが堅固であるが非共有結合で会合した二量体からなる。この配置で、各可変ドメインの３個の超可変領域が相互作用し、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を規定する。まとめると、６個の超可変領域が抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（すなわち抗原に特異的な３個の超可変領域のみを含む半分のＦｖ）であっても、全体の結合部位に比べて親和性は低いが、抗原を認識し結合する能力を有している。
【００３５】
また、Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨＩ）を含む。Ｆａｂ’フラグメントはＦａｂフラグメントと異なり、抗体ヒンジ領域からの１個または複数のシステインを含む数個の残基が重鎖ＣＨＩドメインに付加されている。本明細書では、Ｆａｂ’―ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基が少なくとも１個の遊離チオール基を有するＦａｂ’という意味である。Ｆ（ａｂ’）Ｚ抗体フラグメントは、間にヒンジ・システインを有するＦａｂ’フラグメントの対として生成した。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。
【００３６】
いかなる脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」も、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパおよびラムダと呼ばれる２つの明確に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００３７】
それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、様々な種類に抗体を割り当てることができる。原型の抗体には５つの主な種類：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧＩ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２に分類することができる。異なる種類の抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。重鎖定常ドメインがガンマ−１、ガンマ−２、ガンマ−３およびガンマ−４定常領域をすべて揃えていることが好ましい。また、これらの定常ドメインは、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第６，０１１，１３８号に開示されているＰおよびＥ修飾などの、抗体安定性を増強するための修飾を含むことが好ましい。様々な種類の免疫グロブリンについてのサブユニット構造および三次元立体配置はよく知られている。
【００３８】
「単鎖Ｆｖ」すなわち「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖として存在する。Ｆｖポリペプチドは、ＶＨとＶＬドメインの間に、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチド・リンカーを含むことが好ましい。ｓｃＦｖの総説については、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎのＴｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００３９】
用語「ダイアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗原フラグメントを指し、そのフラグメントは、同一のポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同一鎖上の２個のドメイン間では対になることができない長さのリンカーを用いることにより、ドメインを別の鎖の相補的ドメインと一組にし、２個の抗原結合部位を作製する。ダイアボディは、例えば、ＥＰ　４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳しく記載されている。
【００４０】
本明細書で用いる用語「モノクローナル抗体」は、実質的に同種の抗体の母集団から得られる抗体、すなわち母集団を含む個々の抗体が、少量存在する可能性のある天然に存在する突然変異を除いては同一であることを指す。モノクローナル抗体は極めて特異的であり、単一の抗原部位を対象とする。さらに、通常は様々な決定基（エピトープ）を対象とする様々な抗体が含まれる従来の（ポリクローナル）抗体調製とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基を対象とする。それらの特異性に加え、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されない点で有利である。修飾語の「モノクローナル」は、実質的に同種の抗体母集団から得られる抗体の性質を示し、特定の方法により抗体の製造が必要であるとは見なされない。例えば、本発明に従って用いられるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ法によって製造でき、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって製造することができる。また、「モノクローナル抗体」は、例えばＣｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９７）に記載の技法を用い、ファージ抗体ライブラリーから単離することができる。
【００４１】
「ヒト化抗体」は、ヒト以外の抗体、通常はマウス抗体に由来する抗体であって、もとの抗体の抗原結合性を保持または実質的に保持しているが、ヒトにおいて免疫原性の低い抗体を意味する。このようなことは、（ａ）ヒト定常領域上にヒト以外の全可変ドメインをグラフティング（ｇｒａｆｔｉｎｇ）してキメラ抗体を作製すること（ｂ）重要なフレームワーク残基の保持の有無にかかわらず、ヒトのフレームワーク領域および定常領域中にヒト以外の相補性決定領域（ＣＤＲ）のみをグラフティングすること、または（ｃ）ヒト以外の全可変ドメインを移植するが、表面残基の置換によりヒト様部分でそれらを「覆い隠す（ｃｌｏａｋｉｎｇ）」ことを含む様々な方法によって達成することができる。このような方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１−５（１９８４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ他、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：６５−９２（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３９：１５３４−１５３６（１９８８）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２８：４８９−４９８（１９９１）；およびＰａｄｌａｎ、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．３１：１６９−２１７（１９９４）に開示されており、それらすべてを参照により本明細書に組み込む。ヒト化抗ＣＤ４０Ｌ抗体は、その全体を参照により本明細書に組み込む、１９９５年１１月７日出願の米国特許第０８／５５４，８４０号に記載のように調製することができる。
【００４２】
「ヒト抗体」は、知られている標準法のいずれかによって製造されるヒト軽鎖および重鎖ならびに定常領域をすべて含む抗体を意味する。
【００４３】
「霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体」は、サル（または他の霊長類）抗体、特にカニクイザル抗体の可変重鎖ドメインおよび軽鎖ドメインを含むように設計され、ヒト定常ドメイン配列、好ましくはヒト免疫グロブリン・ガンマ１またはガンマ４定常ドメイン（またはＰＥ変異体）を含む組換え抗体を意味する。このような抗体の調製は、Ｎｅｗｍａｎ他、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４５８−１４６０（１９９２）；また同一出願人による０８／３７９，０７２、０８／４８７，５５０、もしくは０８／７４６，３６１に記載されており、それらの全体を参照により本明細書に組み込む。これらの抗体は、ヒト抗体と高度な、すなわち８５〜９８％の相同性を示し、ヒト・エフェクター機能を示し、低い免疫原性を有し、ヒト抗原に対して高い親和性を示すことができると報告されている。
【００４４】
「抗体フラグメント」は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’およびｓｃＦｖなどの抗体のフラグメントを意味する。
【００４５】
「キメラ抗体」は、通常は異なる種である２種類の異なる抗体に由来する配列を含む抗体を意味する。最も一般的には、キメラ抗体は、ヒトおよびマウスの抗体フラグメント、一般的にはヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００４６】
本明細書の「Ｂ細胞枯渇抗体」は、投与により明白なＢ細胞枯渇をもたらす抗体またはフラグメントである。通常、このような抗体は、Ｂ細胞抗原またはＢ細胞表面上に発現するＢ細胞マーカーと結合する。投与後、通常は約数日以内に約５０％以上のＢ細胞の枯渇をもたらすことが好ましい。好ましい実施形態では、Ｂ細胞枯渇抗体は、リツキサン（登録商標）（キメラ抗ＣＤ２０抗体）またはリツキサン（登録商標）の細胞枯渇活性と実質的に同一または２０〜５０％、同期間に好ましくは少なくともその９０％を有する抗体である。
【００４７】
「Ｂ細胞表面マーカー」または「Ｂ細胞標的」または「Ｂ細胞抗原」は、抗原と結合するアンタゴニストが標的とすることができるＢ細胞の表面上に発現した抗原である。典型的なＢ細胞表面マーカーには、ＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５およびＣＤ８６白血球表面マーカーが含まれる。好ましいＢ細胞表面マーカーは、哺乳動物の他の非Ｂ細胞組織に比べて優先的にＢ細胞上で発現し、前駆Ｂ細胞と成熟Ｂ細胞上で共に発現することができる。
【００４８】
「ＣＤ２０」抗原は、末梢血またはリンパ器官の９０％を超えるＢ細胞の表面上に見いだされる約３５ｋＤａの非グリコシル化リンタンパク質である。ＣＤ２０は初期の前Ｂ細胞発生中に発現し、形質細胞分化まで残存する。ＣＤ２０は、正常Ｂ細胞ならびに悪性Ｂ細胞上の双方に存在する。文献におけるＣＤ２０の別名には、「Ｂリンパ球制限抗原」および「Ｂｐ３５」が含まれる。ＣＤ２０抗原はＣｌａｒｋ他、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８２：１７６６（１９８５）に記載されている。
【００４９】
「ＣＤ２２」抗原は、Ｂ細胞上で発現する抗原を指し、「ＢＬ−ＣＡＭ」および「ＬｙｂＢ」の別名でも知られ、Ｂ細胞シグナル伝達および接着に関与する（Ｎｉｔｓｃｈｋｅ他、Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．７：１３３（１９９７）；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４５：７４（１９９０）を参照）。この抗原は、膜Ｉｇが連結した場合にチロシンがリン酸化される膜免疫グロブリン関連抗原である（Ｅｎｇｅｌ他、Ｊ．Ｅｔｙｐ．Ｍｅｄ．１８１（４）：１５２１　１５８６（１９９５））。この抗原をコードする遺伝子がクローニングされ、そのＩｇドメインの特徴が明らかにされている。
【００５０】
Ｂ細胞「アンタゴニスト」は、Ｂ細胞表面マーカーと結合して哺乳動物のＢ細胞を破壊もしくは枯渇させ、かつ／または１種または複数のＢ細胞機能を、例えばＢ細胞によって誘発される体液性反応を低下または妨げることにより妨害する分子である。アンタゴニストは、それで治療される哺乳動物においてＢ細胞を枯渇させる（すなわち循環するＢ細胞レベルを低下させる）ことができるのが好ましい。このような枯渇は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害および／またはＢ細胞死の誘発（例えばアポトーシスを介する）などの様々な機序を介して達成することができる。本発明の範囲内で、アンタゴニストには、抗体、合成または天然配列のペプチドおよびＢ細胞マーカーと結合する、場合によっては細胞傷害性薬剤と複合または融合した分子アンタゴニストが含まれる。
【００５１】
「Ｂ細胞枯渇抗体」は、ｉｎ　ｖｉｖｏの投与により循環するＢ細胞数を減少させる抗体である。枯渇は、投与から約２４時間以内に少なくとも５０％以上枯渇するレベルまで生じることが好ましい。非放射性抗ＣＤ２０抗体は、リツキサン（登録商標）と実質的に同じ効率（同時間内にＢ細胞枯渇のレベルが約８０〜９０％の範囲内）でＢ細胞を枯渇することが最も好ましい。
【００５２】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介するための一次細胞はＦｃｙＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩおよびＦｃｙＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ　９：４５７−９２（１９９１）の４６４ページにある表３に要約されている。当該分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されているようなｉｎ　ｖｉｔｒｏのＡＤＣＣアッセイを行うことができる。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、またさらに、当該分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ　ｖｉｖｏにおいて、例えばＣｌｙｎｅｓ他、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に記載されているような動物モデルで評価することができる。
【００５３】
「ヒト・エフェクター細胞」は、１種または複数のＦｃＲを発現しエフェクター機能を行う白血球である。この細胞は少なくともＦｃｙＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を行うことが好ましい。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞および好中球が含まれ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然源から、例えば、本明細書に記載するように血液またはＰＢＭＣから単離することができる。
【００５４】
用語「Ｆｃ受容体」すなわち「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域と結合する受容体を記載するために用いられる。好ましいＦｃＲは天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合する受容体（ガンマ受容体）であり、ＦｃｙＲＩ、ＦｃｙＲＩＩ、およびＦｃｙＲＩＩＩサブクラスの受容体が含まれ、これらの受容体の対立遺伝子変異体および選択的スプライシング型が含まれる。ＦｃｙＲＩＩ受容体には、ＦｃｙＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃｙＲＵＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは類似したアミノ酸配列を有し、主にそれらの細胞質ドメインが異なっている。活性化受容体ＦｃｙＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンをベースとする活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃｙＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容体チロシンをベースとする阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（Ｄａｅｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４（１９９７）中の総説Ｍを参照）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌ他、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ　４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ　Ｈａａｓ他、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１（１９９５）に概説されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。また、この用語には、母性ＩｇＧの胎児への移動を担う新生児受容体ＦｃＲｎも含まれる（Ｇｕｙｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）およびＫｉｍほか、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【００５５】
「補体依存性細胞傷害」すなわち「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解する分子の能力を指す。補体活性化経路は、同系抗原と複合体を形成した分子（例えば抗体）と補体系の第一の成分（Ｃｌｑ）が結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　２０２：１６３（１９９６）に記載のＣＤＣアッセイを行うことができる。
【００５６】
「成長阻害性」アンタゴニストは、アンタゴニストが結合する抗原を発現する細胞の増殖を妨げるか減少させるアンタゴニストである。例えば、アンタゴニストは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ　ｖｉｖｏにおいてＢ細胞の増殖を妨げるか減少させることができる。
【００５７】
「アポトーシスを誘発する」アンタゴニストは、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の膨張、細胞断片化、および／または膜小胞（アポトーシス小体（ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｂｏｄｉｅｓ）と呼ばれる）の形成によって判断されるプログラム細胞死、例えばＢ細胞の死を誘発するアンタゴニストである。
【００５８】
本明細書で用いる用語「超可変領域」は、抗体の抗原結合を担うアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」（例えば、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔ他、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、（１９９１））からのアミノ酸配列、および／または「超可変ループ」（軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ．１．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
【００５９】
当該抗原、例えばＢ細胞表面マーカーと「結合する」アンタゴニストは、十分な親和性でその抗原と結合することができるアンタゴニストであり、そのようなアンタゴニストは、抗原を発現する細胞、すなわちＢ細胞を標的とする治療剤として有用である。
【００６０】
本明細書の「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０、好ましくはヒトＣＤ２０と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有する、好ましくはリツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％を有する抗体である。
【００６１】
本明細書の「抗ＣＤ２２抗体」は、ＣＤ２２、好ましくはヒトＣＤ２２と特異的に結合し、測定可能なＢ細胞枯渇活性を有する、リツキサン（登録商標）（その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号を参照）のＢ細胞枯渇活性の少なくとも約１０％を有することが好ましい抗体である。
【００６２】
ＣＤ２０抗原と結合する抗体の具体的な例には、「リツキシマブ」（「リツキサン（登録商標）」）（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号）；イットリウム−［９０］標識２Ｂ８マウス抗体「Ｙ２Ｂ８」（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号）；マウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」場合によって１３１Ｉで標識されている標識Ｂ１抗体（ＢＥＸＸＡＲＴＭ）（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，５９５，７２１号）；マウス・モノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓ他　Ｂｌｏｏｄ　６９（２）：５８４−５９１（１９８７）；および「キメラ２Ｈ７」抗体（参照により本明細書に組み込む米国特許第５，６７７，１８０号）が含まれる。
【００６３】
ＣＤ２２と結合する抗体の具体的な例には、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓによって報告され、現在非ホジキンリンパ腫の臨床試験中であるＬｙｍｐｈｏｃｉｄｅ（商標）が含まれる。
【００６４】
本明細書の用語「リツキシマブ」すなわち「リツキサン（登録商標）」は、遺伝学的に設計され、ＣＤ２０抗原を対象とするキメラ・マウス／ヒト・モノクローナル抗体を指し、参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，Ｂ７号では「Ｃ２Ｂ８」と呼ばれている。この抗体は、マウス軽鎖および重鎖可変領域配列およびヒト定常領域配列を含むＩｇＧＩカッパ免疫グロブリンである。リツキシマブは、ＣＤ２０抗原に対し約８．０ｎＭの結合親和性を有する。
【００６５】
「単離された」アンタゴニストは、特定され、その自然環境の成分から分離かつ／または回収されたアンタゴニストである。その自然環境の混入物成分は、アンタゴニストを診断または治療上で使用するのを妨害すると思われる材料であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれる。好ましい実施形態では、アンタゴニストは、（１）Ｌｏｗｒｙ法による測定で９５重量％を超え、最も好ましくは９９重量％を超えるまで、（２）スピニング・カップ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ　ｃｕｐ）配列決定装置を使用することによりＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシー・ブルーまたは、好ましくは銀染色を用いる還元または非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離されたアンタゴニストに組換え細胞中のｉｎ　ｓｉｔｕのアンタゴニストが含まれるのは、アンタゴニストの自然環境のうち少なくとも１成分が存在しないからである。しかしながら、通常は単離されたアンタゴニストは少なくとも１つの精製ステップにより調製する。
【００６６】
治療を目的とする「哺乳動物」は、哺乳動物として分類されるいかなる動物も指し、ヒト、家畜（ｄｏｍｅｓｔｉｃ　ａｎｉｍａｌ）および家畜（ｆａｒｍ　ａｎｉｍａｌ）、ならびにイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの動物園、スポーツまたはペットの動物が含まれる。哺乳動物はヒトであることが好ましい。
【００６７】
「治療」は、治療上の処置と予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置を共に指す。治療を必要とするヒトには、すでに疾患または障害を有するヒトならびに疾患または障害が予防されなければならないヒトが含まれる。したがって、哺乳動物は、疾患もしくは障害があると診断されていても、疾患に罹患しやすいもしくは感受性が強くてもよい。
【００６８】
Ｂ細胞悪性疾患
本発明によれば、これには、いずれのＢ細胞悪性疾患も含まれ、例えばＢ細胞リンパ腫および白血病が含まれる。好ましい例には、ホジキン病（すべての型、例えば再発ホジキン病、耐性ホジキン病）非ホジキン・リンパ腫（軽度悪性型、中等度悪性型、高度悪性型、およびその他のタイプ）が含まれる。例には、小リンパ球性／Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病（ＳＬＬ／Ｂ−ＣＬＬ）、リンパ形質細胞様リンパ腫（ＬＰＬ）、外套細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞性リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキット・リンパ腫（ＢＬ）、エイズ関連リンパ腫、単球性Ｂ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性リンパ節症、小リンパ球性、濾胞性、びまん性大細胞、びまん性小切れ込み核細胞、大細胞免疫芽細胞性リンパ芽球腫、小、非切れ込み核型、バーキットおよび非バーキット、濾胞性、大細胞優勢型；濾胞性小切れ込み核細胞優勢型；および濾胞性小切れ込み核細胞大細胞混合性リンパ腫が含まれる。Ｇａｉｄｏｎｏ他、「Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ」、ＩＮ　ＣＡＮＣＥＲ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ　＆　ＰＲＡＣＴＩＣＥ　ＯＦ　ＯＮＣＯＬＯＧＹ、Ｖｏｌ．２：２１３１−２１４５（ＤｅＶｉｔａ他、編、第５版、１９９７）を参照されたい。
【００６９】
リンパ腫分類の他のタイプには、イムノサイトマル（ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｍａｌ）ワルデンストレームＭＡＬＴ型／単球様Ｂ細胞、外套細胞リンパ腫Ｂ−ＣＬＬ／ＳＬＬ、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、および前駆Ｂ−ＬＢＬが含まれる。
【００７０】
前述のように、Ｂ細胞悪性疾患には、さらにＡＬＬ−Ｌ３（バーキット型白血病）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性白血球性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、単球性白血病、骨髄性白血病、ならびに前骨髄球性白血病および単球性細胞白血病が含まれる。
【００７１】
本明細書の「自己免疫疾患」には、Ｂ細胞の活性または増殖の除去または枯渇または阻害が治療上有益であるいずれの自己免疫疾患も含まれる。このような自己免疫疾患には、特にＴおよびＢ細胞媒介性自己免疫疾患が含まれる。その例には、自己免疫性、炎症性、増殖性および過増殖性疾患、ならびに免疫学的に治療される疾患の皮膚症状（例えば、慢性関節リウマチ、エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、１型糖尿病、ブドウ膜炎、ネフローゼ症候群、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎およびさらに湿疹様皮膚炎（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｅｓ）、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡（Ｐｅｍｐｌｕｇｕｓ）、水疱性天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症など）の治療または予防；可逆性閉塞性気道疾患、腸炎症およびアレルギー（例えば、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病および潰瘍性大腸炎）ならびに食物アレルギー（例えば、片頭痛、鼻炎および湿疹）、および他のタイプのアレルギーの治療が含まれる。
【００７２】
また、本併用療法は、悪性疾患、特にＢ細胞が腫瘍成長、保持および／または転移を促進するが、Ｂ細胞それ自体は悪性疾患の源ではない（非ホジキンリンパ腫などのＢ細胞悪性疾患ではない）固形癌または末期悪性疾患の治療に有用である。
【００７３】
細胞療法には、テトロロガス（ｔｅｔｒｏｌｏｇｕｓ）遺伝子、例えば治療的ポリペプチドをコードする遺伝子を潜在的に含むことができる潜在的な免疫原性細胞を、対象、例えば同系、同種異系または異種の対象に導入するいずれの療法も含まれる。
【００７４】
遺伝子療法には、正常に発現した遺伝子または正常でなく発現した遺伝子、例えば疾患に関与する遺伝子の発現を調節（阻害または亢進）または提供するＤＮＡまたはＲＮＡ配列を導入するいずれの療法も含まれる。通常、ＤＮＡまたはＲＮＡは、ベクター中、例えばプラスミド、ウイルスまたは細胞、例えば哺乳動物細胞のゲノム中に含まれる。あるいは、ＤＮＡまたはＲＮＡは、「裸で（ｎａｋｅｄ）」あっても、安定化または標的材料、例えばリポソーム中に含まれていてもよい。例には、アデノウイルス、ポックスウイルス、および他のウイルス性ベクター、リポソームＤＮＡ製剤などが含まれる。
【００７５】
表現「治療上有効な量」は、当該疾患、例えばＢ細胞悪性疾患の予防、寛解または治療に有効な裸の抗体または放射標識抗体の量を指す。
【００７６】
補助療法として本明細書で用いる用語「免疫抑制剤」は、本明細書で治療される哺乳動物の免疫系を抑制またはマスクする働きをする物質を指す。これには、サイトカイン産生を抑制し、自己抗原をダウンレギュレートまたは抑制し、またはＭＨＣ抗原をマスクする物質が含まれる。このような薬剤の例には、２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（その開示を参照により本明細書に組み込む米国特許第４，６６５，０７７号を参照）、アザチオプリン；シクロホスファミド；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；グルタルアルデヒド（米国特許第４，１２０，６４９号に記載のようにＭＨＣ抗原をマスクする）；ＭＨＣ抗原およびＭＨＣフラグメントの抗イディオタイプの抗体；シクロスポリンＡ；グルココルチコステロイドなどのステロイド、例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、およびデキサメタゾン；抗インターフェロンα、βまたはδ抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン２抗体および抗ＩＬ−２受容体抗体を含むサイトカインまたはサイトカイン受容体アンタゴニスト；抗ＣＤ１　１ａおよび抗ＣＤ１８抗体を含む抗ＬＦＡ−１抗体；抗Ｌ３Ｔ４抗体；異種抗リンパ球グロブリン；汎Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３または抗ＣＤ４／ＣＤ４ａ抗体；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（７／２６／９０公開のＷＯ９０／０８１８７）、ストレプトラナーゼ（ｓｔｒｅｐｔｏｌａｎａｓｅ）；ＴＧＦ−β；ストレプトドルナーゼ；宿主由来のＲＮＡまたはＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルガリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎ他、米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ９０／１１２９４；Ｌａｎｅｗａｙ、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：４８２（１９８９）；およびＷＯ９１／０１１３３）；およびＴ１０Ｂ９などのＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）が含まれる。
【００７７】
本明細書で用いる用語「細胞傷害性薬剤」は、細胞の機能を阻害または妨げかつ／または細胞の破壊を引き起こす物質を指す。この用語には、放射性同位体（例えば、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、１３１Ｉｎ、５２Ｐ、６４Ｃ、６７Ｃｕ、２１１Ａｔ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、２１２Ｐｂ、２１２Ｂｉ、４７Ｓｃ、１０５Ｒｈ、１０４Ｐｄ、１５３Ｓｍ、１８８Ｒｅ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔおよび２１３Ｂｉ）、化学療法剤、および細菌、真菌、植物もしくは動物起源の小分子の毒素もしくは酵素的に活性な毒素、またはその断片が含まれる。
【００７８】
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化合物である。化学療法剤の例には、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポサルファンなどのアルキル・スルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）キロラムブシル（ｃｈｉｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン・オキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビキン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシル・マスタードなどのナイトロジェン・マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチンなどのニトロソ尿素；アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎｓ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリチェアミシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルチノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニベクス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキセートおよび５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類縁体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類縁体；アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５−ＦＵなどのピリミヂン類縁体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの副腎皮質抑制剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）；フロリン（ｆｒｏｌｉｎｉｃ）酸などの葉酸補充物；アセグラトン；アルドホスファミド・グリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジクォン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトガゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン（ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ）酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトル；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ　Ｓｑｕｉｂｂ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）およびドキセタキセル（タキソテール、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ　Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類縁体；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＧＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；および上記のいずれかの薬剤として許容される塩、酸または誘導体が含まれる。また、この定義には、例えばタモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼを阻害する４（５）−イミダゾール、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、およびトレミフェンを含む抗エストロゲン；フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；および上記のいずれかの薬剤として許容される塩、酸または誘導体も含まれる。
【００７９】
用語「サイトカイン」は、一細胞母集団によって放出され、細胞間メディエータとして他の細胞に作用するタンパク質の総称である。このようなサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカイン、および従来のポリペプチド・ホルモンである。サイトカインには、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニル・ヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；肝成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子αおよびβ；ミューラー阻害物質；マウス・ゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮細胞成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−１３などの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなどのトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）；インスリン様成長因子ＩおよびＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα、β、およびγなどのインターフェロン；マクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−ｇ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５などのインターロイキン（ＩＬ）；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；およびＬＩＦおよびキット・リガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子である。本明細書で用いる用語サイトカインには、自然源由来または組換え細胞培養液由来のタンパク質および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価体が含まれる。
【００８０】
本出願で用いる用語「プロドラッグ」は、もとの薬物に比べて腫瘍細胞に対する細胞傷害性が低く、酵素的に活性化されるか、より活性なもとの形態に変換されることが可能である、薬剤として活性な物質の前駆体または誘導体を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ　ｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ、１４、ｐｐ．３７５−３８２、６１５ｔｈ　Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａ他、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　Ｔａｒｇｅｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ他、（編）、ｐｐ．２４７−２６７、Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。本発明のプロドラッグには、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、１３−ラクタム含有プロドラッグ；場合によって置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは場合によって置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンおよびより活性な細胞傷害性遊離薬物に変換することができる他の５フルオロウリジン・プロドラッグが含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明で用いるためにプロドラッグ体に誘導体化することができる細胞傷害性薬物の例には、前述の化学療法剤が含まれるが、それらに限定されるものではない。
【００８１】
「リポソーム」は、薬物（本明細書に開示されたアンタゴニストおよび、場合によっては化学療法剤）を哺乳動物に送達するのに有用な、様々なタイプの脂質、リン脂質および／または界面活性剤からなる小胞である。リポソームの成分は、一般に生体膜の脂質配列と同様に二重層を形成するように配置する。
【００８２】
用語「添付文書」は、習慣的に治療薬の商業包装に含められる指示書を指すために用いられ、このような治療薬の使用法に関する適応、用法、用量、投与、禁忌および／または警告についての情報を含む。
【００８３】
抗体の製造
本発明は、ＣＤ２０およびＣＤ２２に対する抗体を用いる。これらの抗体は知られている方法によって提供される。前述のように、これらの両抗原に対する抗体はよく知られている。
【００８４】
本明細書に従って用いられる抗体を製造するための典型的な技法を記載する。
【００８５】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、複数回の関連抗原およびアジュバントの皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射により動物で作製することが好ましい。免疫すべき動物種において免疫原性であるタンパク質、例えばキーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシ・サイログロブリン、または大豆トリプシンインヒビターに、二官能性または誘導化剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基による結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基により）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は異なるアルキル基）を用いて関連抗原を結合させることが有用である。
【００８６】
例えば、タンパク質または複合体１００μｇまたは５μｇ（それぞれ、ウサギまたはマウスの場合）を３倍量のフロイント完全アジュバントと混合し、複数の部位に溶液を皮内注射することにより、動物を抗原、免疫原性複合体、または誘導体に対して免疫にする。１ヶ月後、フロイント完全アジュバントに溶かした当初の１／５から１／１０量のペプチドまたは複合体で、複数部位に皮下注射して、動物を追加免疫する。７から１４日後、動物から採血し、抗体力価について血清をアッセイする。力価が頭打ちになるまで動物を追加免疫する。同一抗原の複合体であるが、異なるタンパク質および／または異なる架橋剤によって結合した複合体で動物を追加免疫することが好ましい。複合体はまた、タンパク質融合として組換え細胞培養で製造することができる。また、ミョウバンなどの凝集剤を適当に用い、免疫反応を亢進させる。
【００８７】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の母集団から得られ、すなわち母集団を含む個々の抗体は、少量存在する可能性のある天然に存在する突然変異を除いては同一である。したがって、修飾語の「モノクローナル」は、抗体の性質が個々の抗体の混合物ではないことを示す。
【００８８】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）によって初めて記載されたハイブリドーマ法によって製造でき、または組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号を参照）によって製造することができる。
【００８９】
ハイブリドーマ法では、マウスまたはハムスターなどの他の適当な宿主動物を前述のように免疫化し、免疫化に用いられるタンパク質と特異的に結合する抗体を産生するか、産生することができるリンパ球を誘導する。あるいは、リンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏで免疫化してもよい。次いで、ポリエチレングリコールなどの適当な融合剤を用い、リンパ球を骨髄腫細胞と融合させ、ハイブリドーマ細胞を生成する（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８６））。
【００９０】
このようにして得られたハイブリドーマ細胞を、融合していない親の骨髄腫細胞の成長または生存を阻害する１種または複数の物質を含むことが好ましい適当な培地中に播種し、培養する。例えば、親の骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠いている場合には、ハイブリドーマ用の培地は通常、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン（ＨＡＴ培地）を含み、これらの物質はＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。
【００９１】
好ましい骨髄腫細胞は、効率よく融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルな抗体の産生を支え、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である細胞である。これらの細胞のうち、好ましい骨髄腫細胞株は、Ｓａｌｋ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　Ｃｅｌｌ　Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　Ｃｅｎｔｅｒ、Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍、ならびにＡｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ、ＵＳＡから入手できるＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞に由来するようなマウス骨髄腫系である。ヒト・モノクローナル抗体の産生については、ヒト骨髄腫およびマウス−ヒト・ヘテロ骨髄腫も記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００　１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、１９８７））。
【００９２】
抗原を対象とするモノクローナル抗体の産生について、ハイブリドーマ細胞が培養されている培地をアッセイする。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）もしくは酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける結合アッセイによって測定する。
【００９３】
モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ他、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７：２２０（１９８０）の３０回のスキャッチャード解析によって測定することができる。
【００９４】
所望の特異性、親和性および／または反応性の抗体を産生するハイブリドーマを特定した後、クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準法によって培養することができる（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ、ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８６）。この目的に適した培地には、例えばＤ−ＭＥＭまたはＲＰＭＬ−１６４０培地が含まれる。さらに、動物における腹水腫瘍として、ハイブリドーマ細胞をｉｎ　ｖｉｖｏで増殖させることができる。
【００９５】
サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、タンパク質Ａ−セファロース、ヒドロキシアパタイト・クロマトグラフィ、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティ・クロマトグラフィなどの従来の免疫グロブリン精製手順により、培地、腹水、または血清から適当に分離する。
【００９６】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは容易に単離され、従来の手順を用いて配列決定される（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合することができるオリゴヌクレオチド・プローブを用いることにより）。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましいソースとして働く。単離したら、発現ベクター中にＤＮＡをセットし、次いで大腸菌細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズ・ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などの、別な方法では免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞中に形質移入し、組換え宿主細胞中でモノクローナル抗体を合成させる。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する総論には、Ｓｋｅｒｒａ他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．、５：２５６−２６２（１９９３）およびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．、１３０：１５１−１８８（１９９２）が含まれる。
【００９７】
ＣＤ２０またはＣＤ２２に対して反応性の特異的抗体、または抗体フラグメントを作製する別の方法は、ＣＤ２０またはＣＤ２２タンパク質またはペプチドにより細菌中で発現した、免疫グロブリン遺伝子、またはその一部をコードする発現ライブラリーをスクリーニングすることである。例えば、ファージ発現ライブラリーを用い、完全なＦａｂフラグメント、ＶＨ領域およびＦｖ領域を細菌中で発現することができる。例えば、Ｗａｒｄ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４１：５４４−５４６（１９８９）；Ｈｕｓｅ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２４６：１２７５−１２８１（１９８９）；およびＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５４（１９９０）を参照されたい。このようなライブラリーを、例えばＣＤ２２またはＣＤ２０ペプチドを用いてスクリーニングすると、ＣＤ２２またはＣＤ２０と反応性の免疫グロブリンフラグメントを特定することができる。あるいは、ＳＣＩＤ−ｈｕマウス（Ｇｅｎｐｈａｒｍから入手できる）を用い、抗体またはそのフラグメントを産生させることができる。
【００９８】
他の実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技法を用いて作製した抗体ファージライブラリーから抗体または抗体フラグメントを単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）は、それぞれファージライブラリーを用いるマウスおよびヒト抗体の単離について記載している。次の公表文献は、チェーン・シャッフリング（ｃｈａｉｎ　ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｍａｒｋｓ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９−７８３（１９９２））、ならびに極めて大きなファージライブラリーを構築するための戦略としての組合せ感染およびｉｎ　ｖｉｖｏにおける組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ他、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．、２１：２２６５−２２６６（１９９３））による高親和性（ｎＭ範囲）のヒト抗体の産生について記載している。したがって、これらの技法は、モノクローナル抗体を単離するための従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技法の実行可能な代替法である。
【００９９】
また、例えば、相同的なマウス配列をヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することにより（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ．ＳｃＬ　ＵＳＡ、８１：６８５１（１９８４））、または免疫グロブリン・コード配列すべてもしくは非免疫グロブリン・ポリペプチドのコード配列の一部に共有結合させることによりＤＮＡを修飾することができる。
【０１００】
通常、このような非免疫グロブリンポリペプチドで抗体の定常ドメインを置換するか、抗体の一抗原結合部位の可変ドメインを置換し、抗原に対して特異性を有する１種の抗原結合部位および異なる抗原に対して特異性を有する別の抗原結合部位を含むキメラ二価抗体を作製する。
【０１０１】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
ヒト以外の抗体をヒト化する方法は、当技術分野で記載されてきた。ヒト化抗体は、ヒト以外であるソースからヒト化抗体に導入された１種または複数のアミノ酸残基を有することが好ましい。これらのヒト以外のアミノ酸残基は、しばしば「輸入（ｉｍｐｏｒｔ）」残基と呼ばれ、通常は「輸入」可変ドメインから選ばれる。ヒト化は、基本的にＷｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従い、超可変領域配列で対応するヒト抗体の配列を置き換えることによって行うことができる。したがって、このような「ヒト化抗体」はキメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、実質的に原型とは言えないヒト可変ドメインは、対応するヒト以外の種に由来する配列によって置換されている。実際、ヒト化抗体は、通常一部の超可変領域配列およびおそらく一部のＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似の部位に由来する残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１０２】
ヒト化抗体を作製するのに用いられる軽鎖および重鎖のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を減らすのに極めて重要である。いわゆる「最良適合（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法に従い、齧歯類抗体の可変領域の配列を、知られているヒト可変ドメイン配列の全ライブラリーについてスクリーニングする。次いで、齧歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体用のヒト・フレームワーク領域（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｕｎｓ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ、１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのすべてのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を用いる。いくつかの異なるヒト化抗体に対して同一のフレームワークを用いることができる（Ｃａｒｔｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３））。
【０１０３】
さらに重要なのは、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しつつ抗体をヒト化することである。この目標を達成するためには、好ましい方法に従い、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いる親配列および様々な概念的ヒト化生成物の解析プロセスにより、ヒト化抗体を調製する。三次元免疫グロブリンモデルは一般に利用でき、当業者にはよく知られている。選択された免疫グロブリン配列候補の予想される三次元コンホメーション構造を図示および表示するコンピュータ・プログラムが利用できる。これらの表示を検討することにより、免疫グロブリン配列候補が機能する際に考え得る残基の役割の解析、すなわち免疫グロブリン候補がその抗原と結合する能力に影響を及ぼす残基の解析が可能になる。このようにして、標的抗原に対する親和性の増加などの望ましい抗体特性が達成されるように、レシピエントおよび輸入配列からＦＲ残基を選択および組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基が、抗原結合に影響を及ぼすことに直接かつ最も実質的に関与する。
【０１０４】
（ｉｖ）霊長類化抗体
組換え抗体を作製するための極めて効率的な別の手段が、Ｎｅｗｍａｎ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：１４５５−１４６０（１９９２）によって開示されている。より具体的には、この技法により、サル可変ドメインおよびヒト定常配列を含む霊長類化抗体が作製される。この参考文献の全体を参照により本明細書に組み込む。さらに、この技法は、１９９５年１月２５日出願の同一出願人による米国出願番号０８／３７９，０７２にも記載されており、この出願は１９９２年７月１０日出願の米国出願番号０７／９１２，２９２の継続であり、この出願は１９９２年３月２３日出願の米国出願番号０７／８５６，２８１の一部継続であり、この出願は１９９１年７月２５日出願の米国出願番号０７／７３５，０６４の一部継続である。０８／３７９，０７２およびその親出願のすべてを参照により本明細書に組み込む。
【０１０５】
この技法は、ヒトに投与することによって抗原として拒絶されないように抗体を修飾する。この技法は、ヒト抗原または受容体によるカニクイザルの免疫化に基づく。この技法は、ヒト細胞表面抗原を対象とする高い親和性のモノクローナル抗体を作製するために開発された。
【０１０６】
ファージディスプレイライブラリーまたはＣＤ２０もしくはＣＤ２２で免疫化したサルからのＢリンパ球を用いて得られるサル・ヘテロハイブリドーマをスクリーニングすることによるヒトＣＤ２０またはＣＤ２２に対するマカク抗体の同定は、その全体を参照により本明細書に組み込む、１９９５年６月７日出願の同一出願人による米国出願番号０８／４８７，５５０に記載の方法によって行うことができる。
【０１０７】
これらの出願に記載の方法を用いて作製した抗体は、ヒト・エフェクター機能を示し、低い免疫原性、および長い血清半減期を有すると報告されている。この技術は、カニクイザルが系統的にはヒトに類似しているという事実にもかかわらず、カニクイザルは依然としてヒト抗体を異物と認識して免疫反応を示すという事実に基づいている。さらに、カニクイザルは系統的にはヒトに近いため、これらのサルで作製された抗体は、ヒトで産生される抗体と高度なアミノ酸相同性を有することが見出されている。実際に、マカク免疫グロブリンの軽鎖および重鎖可変領域遺伝子の配列決定後に、各遺伝子ファミリーの配列がそのヒト対応物と８５〜９８％相同であることが見出された（Ｎｅｗｍａｎ他、１９９２）。このようにして作製された最初の抗体である抗ＣＤ４抗体は、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域のコンセンサス配列と９１〜９２％相同であった（Ｎｅｗｍａｎ他、１９９２）。
【０１０８】
（ｖ）ヒト抗体
ヒト化の代替法として、ヒト抗体を作製することできる。例えば、免疫化により、内因性の免疫グロブリン産生がない状態でヒト抗体のすべてのレパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えばマウス）を生み出すことが今や可能である。例えば、キメラおよび構造遺伝子変異マウスにおける抗体重鎖結合領域ＰＨ）遺伝子の同型接合的な欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。このような構造遺伝子変異マウスにおけるヒト生殖細胞免疫グロブリン遺伝子配列の移動は、抗原チャレンジによるヒト抗体の産生をもたらすはずである。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ他、Ｐｒｏｃ．Ｍａｄ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５　１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎ他、Ｙｅａｒ　ｉｎ　ｉｍｍｕｎｏ．、７：３３（１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号、第５，５８９，３６９号および第５，５４５，８０７号を参照されたい。
【０１０９】
あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ他、Ｎａｔｕｒｅ　３４８：５５２−５５３（１９９０））を用い、非免疫化ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーから、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでヒト抗体および抗体フラグメントを製造することができる。この技法によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージの主要または副次コート・タンパク質遺伝子中にフレーム単位でクローニングし、ファージ粒子の表面上の機能性抗体フラグメントとして発現させる。糸状粒子はファージ・ゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能性に基づく選択は、それらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択にもつながる。すなわち、ファージは、Ｂ細胞の特性の一部を模倣する。ファージディスプレイは、様々なフォーマットで行うことができる。それらの総説に関しては、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｋｅｖｉｎ　Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ、Ｄａｖｉｄ　Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｏｐｉｎｉｏｎ　ｉｎ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　３：５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。ファージディスプレイにはいくつかのＶ遺伝子セグメント源を用いることができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化マウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さなランダム組合せライブラリーから様々な抗オキサゾロン抗体を単離した。非免疫化ヒト・ドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築し、様々な抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を、基本的にＭａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ他、ＥＭＢＯ　Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載された技法に従って単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号および第５，５７３，９０５号も参照されたい。
【０１１０】
また、ヒト抗体は、ｉｎ　ｖｉｔｒｏの活性化Ｂ細胞によって作製することができる（米国特許第２０　５，５６７，６１０号および第５，２２９，２７５号を参照）。ＳＣＩＤマウスを用いてヒト抗体を作製する好ましい手段は、同一所有の同時係属出願に開示されている。
【０１１１】
（ｖｉ）抗体フラグメント
抗体フラグメントの製造には様々な技法が開発されている。伝統的に、これらのフラグメントは、原型抗体のタンパク質分解性消化により得られていた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ他、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照）。しかしながら、現在これらのフラグメントは組換え宿主細胞により直接製造することができる。例えば、前述の抗体ファージ・ファイブラリーから抗体フラグメントを単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングさせてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成することができる（Ｃａｒｔｅｒ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　１０：１６３−１６７（１９９２））。別の手法に従い、組換え宿主細胞培養液からＦ（ａｂ’）２フラグメントを直接単離することができる。抗体フラグメントを製造するための他の技法は当業者に明らかである。他の実施形態では、最適な抗体は単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号を参照されたい。また、抗体フラグメントは、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載の「リニア抗体」であってもよい。このようなリニア抗体フラグメントは単一特異性または二重特異性であってもよい。
【０１１２】
（ｖｉｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種類の異なるエピトープに対して結合特異性を有する抗体である。典型的な二重特異性抗体は、Ｂ細胞表面マーカーの２種類の異なるエピトープと結合することができる。他のこのような抗体は、第一のＢ細胞マーカーと結合し、さらに第二のＢ細胞表面マーカーと結合することができる。あるいは、Ｂ細胞に対する細胞性防御機構に集中するように、抗Ｂ細胞マーカー結合アームを、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ２またはＣＤ３）、またはＦｃｙＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃｙＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃｙＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などのＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃｙＲ）などの、白血球上のトリガ分子と結合するアームと組み合わせることができる。二重特異性抗体を用い、Ｂ細胞に細胞傷害性薬剤を局在化させることもできる。これらの抗体は、Ｂ細胞マーカー結合アームおよび細胞傷害性薬剤（例えば、サポニン、抗インターフェロンα、ビンカ・アルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキセートまたは放射性同位体ハプテン）と結合するアームを有している。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメントとして調製することができる（例えば、Ｆ（ａｂ）２二重特異性抗体）。
【０１１３】
二重特異性抗体を製造する方法は当技術分野で知られている。従来の完全長二重特異性抗体の製造は、２本の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、この場合、２本の鎖は異なる特異性を有している（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組合せのため、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は１０種類の異なる抗体分子の混合物を産生し、このうち１種類のみが正しい二重特異性構造を有している。正しい分子の精製は通常アフィニティ・クロマトグラフィ・ステップによって行われるが、どちらかと言えば面倒で、生成物収量も低い。同様の手順は、ＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ他、ＥＭＢＯ　Ｊ．、１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１１４】
異なる手法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合する。この融合は、ヒンジの少なくとも一部、ＣＨ２およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインによることが好ましい。少なくとも１種類の融合物中に存在する、軽鎖結合に必要な部位を含む最初の重鎖定常領域（ＣＨＩ）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物および望ましい場合には免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、別の発現ベクターに挿入し、適当な宿主生物体中に同時形質移入する。このことは、構築に用いる３種類のポリペプチド鎖の比が一様でないことが最適収量をもたらす実施形態において３種類のポリペプチド・フラグメントの相互の割合を調整する際に大きな柔軟性を提供する。しかしながら、少なくとも２種類のポリペプチド鎖が等しい比で発現すると高収量が得られるか比が特別の意味を持たない場合には、２種類または３種類すべてのポリペプチド鎖のコード配列を１種類の発現ベクター中に挿入することが可能である。
【０１１５】
この手法の好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームにある第一の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアームにあるハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第二の結合特異性を提供する）からなる。この非対称の構造が望ましくない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を容易にするのは、二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリン軽鎖が存在することが容易な分離様式を提供するためであることが分かった。この手法はＷＯ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体を作製するための詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈ他、Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１：２１０（１９８６）を参照されたい。
【０１１６】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別の手法によれば、一対の抗体分子間の境界面を設計して、組換え細胞培養液から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にすることができる。好ましい境界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第一の抗体分子の境界面からの１種または複数の小さなアミノ酸側鎖をより大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換える。大きなアミノ酸側鎖をより小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることにより、大きな側鎖と同一または類似したサイズの代償的「空洞」を第二の抗体分子上に作製する。このことは、ホモ二量体などの他の望ましくない最終生成物上回ってヘテロ二量体の収量を増加するための機序を提供する。
【０１１７】
二重特異性抗体には、架橋または「ヘテロ複合体」抗体が含まれる。例えば、ヘテロ複合体における一方の抗体はアビジンと連結させ、他方はビオチンと連結させることができる。例えば、このような抗体は、望ましくない細胞に対して免疫系細胞を標的とし（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染の治療用（ＷＯ９１／００３６０、ＷＯ９２／２００３７３、およびＥＰ０３０８９）に提案されている。ヘテロ複合体抗体は、便利などのような架橋法を用いても製造することができる。適当な架橋剤は当技術分野ではよく知られており、多くの架橋技法と共に米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０１１８】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製する技法も文献中に記載されている。例えば、化学結合を用いて二重特異性抗体を調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）は、原型抗体をタンパク質分解的に切断してＦ（ａｂ’）２フラグメントを作製する手順について記載している。これらのフラグメントは、隣接ジチオールを安定化し分子間ジスルフィド形成を防ぐためのジチオール錯化剤砒酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで、生成したＦａｂ’フラグメントをチオニトロベンゼン（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の一方をメルカプトエチルアミンで還元することによりＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混ぜて二重特異性抗体を生成する。製造した二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化用薬剤として使用することができる。
【０１１９】
最近の進歩は、大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接回収を容易にし、これを化学的にカップリングして二重特異性抗体を生成することができる。Ｓｈａｌａｂｙ他、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の製造について記載している。各Ｆａｂ’フラグメントは大腸菌から別々に分泌され、ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおける有向化学カップリングを受けて二重特異性抗体を生成した。このように生成した二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過発現する細胞および正常なヒトＴ細胞と結合するばかりでなく、ヒト乳癌標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
【０１２０】
組換え細胞培養液から直接二重特異性抗体を製造および単離する様々な技法も記載されている。例えば、ロイシン・ジッパーを用いて二重特異性抗体が製造されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。ヒンジ領域で抗体ホモ二量体を還元して単量体を生成させ、次いで再酸化して抗体ヘテロ二量体を生成させた。この方法は抗体ホモ二量体の製造にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異性抗体フラグメントを製造するためのもう１つの機序を提供した。これらのフラグメントは、同一の鎖上の２個のドメイン間で対になることができない長さのリンカーを用いることにより軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、一方のフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、他方のフラグメントの相補的ＶＨおよびＶＬドメインと対にならざるを得ないことにより、２種類の抗原結合部位が形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を用いることによる二重特異性抗体を製造する別の戦略も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
【０１２１】
３個以上の結合価を有する抗体も企図されている。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０１２２】
抗体複合体および他の修飾
本療法には、まず、放射標識ＣＤ２２抗体以外の、抗体が、例えば、細胞毒素または治療成分複合体と結合した抗体の投与が含まれる。
【０１２３】
このような抗体−化学療法剤複合体の作製に有用な化学療法剤は上記に記載した。
【０１２４】
抗体ならびにカリチェアミシン、メイタンシン（米国特許第５，２０８，０２０号）、トリコテン（ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｎｅ）、およびＣＣ１０６５などの１種または複数の小さな分子毒素の複合体も本明細書では企図されている。本発明の好ましい一実施形態では、アンタゴニストを１個または複数のメイタンシン分子と結合させる（例えば、アンタゴニスト分子１個当たり約１から約１０個のメイタンシン分子）。例えば、メイタンシンをＭａｙＳＳ−Ｍｅに変換し、それを還元してＭａｙ−ＳＨ３とし、修飾アンタゴニストと反応させて（Ｃｈａｒｍ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））メイタンシノイド−アンタゴニスト複合体を生成することができる。
【０１２５】
あるいは、抗体を１個または複数のカリチェアミシン分子と結合させることができる。カリチェアミシン・ファミリーの抗生物質は、ピコモル以下の濃度で二本鎖ＤＮＡの切断を引き起こすことができる。用いることができるカリチェアミシンの構造類縁体には、γ１Ｉ、α２Ｉ、α３Ｉ、Ｎ−アセチルγ１Ｉ、ＰＳＡＧおよびＯ１Ｉが含まれるが、これらに限定されるものではない（Ｈｉｎｍａｎ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５３：３３３６−３３４２（１９９３）およびＬｏｄｅ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５８：２９２５−２９２８（１９９８））。
【０１２６】
用いることができる酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントには、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ・サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ　ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ　ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ゴーヤー（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ　ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテシンが含まれる。例えば、１９９３年１０月２８日公開のＷＯ９３／２１２３２を参照されたい。
【０１２７】
さらに、本発明は核酸分解（ｎｕｃｌｅｏｌｙｔｉｃ）活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはデオキシリボヌクレアーゼなどのＤＮＡエンドヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）と結合した抗体を企図している。
【０１２８】
前述のように、放射性結合（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）アンタゴニストの製造には、様々な放射性同位体が利用できる。例には、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、ＲＥ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位体が含まれる。
【０１２９】
抗体と細胞傷害性薬剤の複合体は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリイルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルなどの二官能性誘導体（ジメチル・アジピミデート（ａｄｉｐｉｍｉｄａｔｅ）ＨＣＬなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミヂルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トリエン（ｔｏｌｙｅｎｅ）２，６−ジイソシアネートなど）、およびビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を用いて製造することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２３８：１０９８（１９８７）に記載のように調製することができる。炭素−１４−標識１イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレン・トリアミン５酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種とアンタゴニストを結合させる典型的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内の細胞傷害性薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、ジメチル・リンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｍ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５２：１２７−１３１（１９９２））を使用することができる。
【０１３０】
あるいは、抗体および細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え体技法またはペプチド合成によって製造することができる。
【０１３１】
さらに別の実施形態では、アンタゴニスト−受容体複合体を患者に投与し、続いて除去剤（ｃｌｅａｒｉｎｇ　ａｇｅｎｔ）を用いて未結合の複合体を循環から除去し、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、放射性ヌクレオチド）と結合した「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する腫瘍のプレターゲティング（ｐｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）に利用するために、抗体を「受容体」（ストレプトアビジン）と結合させることができる。
【０１３２】
また、本発明の抗体は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照）を活性な抗癌剤に変換するプロドラッグ活性化酵素と結合させることができる。例えば、ＷＯ８８／０７３７８および米国特許第４，９７５，２７８号を参照されたい。
【０１３３】
このような複合体の酵素成分には、プロドラッグをより活性な細胞傷害性の形態に変換するような方法でプロドラッグに作用することができるいずれの酵素も含まれる。
【０１３４】
本発明の方法で有用な酵素には、ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリ・ホスファターゼ；サルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性の５−フルオロシトシンを抗癌剤フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用である、セラチア・プロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（カテプシンＢおよびＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、１３−ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；１３−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用な１３−ラクタマーゼ；ならびにペニシリンＶアミダーゼまたはペニシリンＧアミダーゼなどの、それぞれフェノキシアセチルまたはフェニルアセチル基によりアミン窒素で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリン・アミダーゼが含まれるが、これらに限定されるものではない。あるいは、当技術分野では「アブザイム」という別名でも知られる酵素活性を有する抗体を用い、本発明のプロドラッグを遊離の活性薬物に変換することができる（例えば、Ｍａｓｓｅｙ、Ｎａｔｕｒｅ　３２８：４５７−４５８（１９８７））。アブザイムを腫瘍細胞母集団へ送達するために、本明細書に記載のようにしてアンタゴニスト−アブザイム複合体を調製することができる。
【０１３５】
本発明の酵素は、前述のヘテロ二官能性架橋剤の使用などの当技術分野でよく知られている技法により、アンタゴニストと共有結合させることができる。あるいは、当技術分野でよく知られている組換えＤＮＡ技法を用い、少なくとも本発明の酵素の機能的に活性な部分と連結した、少なくとも本発明のアンタゴニストの抗原結合領域を含む融合タンパク質を構築することができる（例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ他、Ｎａｔｕｒｅ、３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照）。
【０１３６】
抗体の他の修飾も本明細書では企図されている。例えば、抗体を、様々な非タンパク質ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーの１つの連結させることができる。
【０１３７】
また、本明細書に開示された抗体をリポソームとして製剤化することができる。アンタゴニストを含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号および第４，５４４，５４５号；ならびに１９９７年１０月２３日公開のＷＯ９７／３８７３１に記載のような当技術分野で知られている方法によって調製される。循環時間が増加したリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
【０１３８】
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用い、逆相気化法によって作製することができる。規定の孔径のフィルターによりリポソームを押し出すと、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントを、ジスルフィド交換反応により、Ｍａｒｔｉｎ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載のようにリポソームと結合させることができる。場合により、化学療法剤がリポソーム中に入れられる。Ｇａｂｉｚｏｎ他、Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）を参照されたい。
【０１３９】
本明細書に記載のタンパク質またはペプチドアンタゴニストのアミノ酸配列修飾が企図されている。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改良することが望ましい。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードする核酸に適当なヌクレオチド変化を導入することにより、またはペプチド合成によって調製される。このような修飾には、例えば、アンタゴニストのアミノ酸配列内の残基からの削除、および／または残基への挿入および／または残基の置換が含まれる。最終構築物に達するには削除、挿入、および置換のいかなる組合せも行われるが、ただし最終構築物は所望の特性を有する。また、アミノ酸変化は、グリコシル化部位の数または位置を変化することなどのアンタゴニストの翻訳後プロセスを変化させることがある。
【０１４０】
変異誘発に好ましい位置である抗体の特定の残基または領域を同定するための有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５（１９８９）によって記載されたように「アラニン・スキャニング変異誘発」と呼ばれている。ここで、残基または標的残基の群は特定されており（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）、中性または負に荷電したアミノ酸（アラニンまたはポリアラニンが最も好ましい）によって置き換えてアミノ酸と抗原との相互作用に影響を及ぼす。次いで、置換部位に、または置換部位用にさらにまたは他の変異体を導入することにより、置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置を精製する。したがって、アミノ酸配列変化を導入する場所は予め決まられていても、変異自体の性質が予め決められる必要はない。例えば、所与の部位における変異の能力を分析するためには、標的コドンまたは領域でａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発を行い、発現したアンタゴニスト変異体を所望の活性についてスクリーニングする。
【０１４１】
アミノ酸配列挿入には、長さが１個の残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまで及ぶアミノおよび／またはカルボキシ末端融合物、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ−末端メチオニル残基を有するアンタゴニストまたは細胞傷害性ポリペプチドに融合したアンタゴニストが含まれる。アンタゴニスト分子の他の挿入変異体には、酵素のアンタゴニストのＮもしくはＣ末端、またはアンタゴニストの血清中半減期を増加するポリペプチドとの融合物が含まれる。
【０１４２】
別のタイプの変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、アンタゴニスト分子中に異なる残基によって置き換えられた少なくとも１個のアミノ酸残基を有する。抗体アンタゴニストの置換変異誘発にとって最も興味のある部位には超可変領域が含まれるが、ＦＲ変化も企図されている。表１には、「好ましい置換」という見出しの下に保存的置換を示す。このような置換が生物活性の変化をもたらす場合には、表１において「典型的置換」と呼ばれる、またはアミノ酸の種類に関して後述するようなより実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングすることができる。
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【０１４３】
抗体の生物学的特性における実質的な変化は、（ａ）置換の領域におけるポリペプチド主鎖の構造、例えばシートもしくはラセン立体配座、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖の大きさを維持することに対する作用が著しく異なる置換を選択することによって行われる。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいていくつかの群に分けられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性ハイドロフィウイック（ｈｙｄｒｏｐｈｉｕｉｃ）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
【０１４４】
非保存的置換には、これらの種類のうち１つを別の種類で交換することが必要である。
【０１４５】
アンタゴニストの適切な立体配置を維持することに関与しないシステイン残基を、一般的にはセリンで置換し、分子の酸化的安定性を改善し異常な架橋を防ぐことができる。逆に、アンタゴニストにシステイン残基を付加し、アンタゴニストの安定性（特に、アンタゴニストがＦｖフラグメントなどの抗体フラグメントである場合）を改善することができる。
【０１４６】
特に好ましいタイプの置換型変異体は、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）の１個または複数の超可変領域を置換するものである。一般的に、さらなる開発のために選択される得られた変異体は、それらが作製された親抗体に比べて改善された生物学的特性を有する。このような置換型変異体を作製するための便利な方法は、ファージディスプレイを用いる親和性変異である。手短に言えば、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させ、各部位にすべての可能なアミノ置換を作製する。このようにして作製された抗体変異体は、糸状ファージ粒子から一価の様式で、各粒子内に詰め込まれたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合物として呈示される。次いで、ファージディスプレイされた変異体を、本明細書に開示する生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。修飾のための超可変領域部位候補を特定するために、アラニン・スキャニング変異誘発を行い、抗体結合に大きく寄与する超可変領域残基を特定することができる。あるいは、またはさらに、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析し、抗体と抗原の接点を特定することが有益であることがある。このような接触残基および隣接残基は、本明細書に記載の技法による置換の候補である。このような変異体が作製されたら変異体の一団を本明細書に記載のようにスクリーニングし、１種または複数の関連アッセイで優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０１４７】
抗体の別のタイプのアミノ酸変異体は、アンタゴニストの原グリコシル化パターンを変更する。変更とは、アンタゴニスト中に見いだされる１個または複数の炭水化物成分を除去すること、および／またはアンタゴニスト中に存在しない１個または複数のグリコシル化部位を付加することを意味する。
【０１４８】
ポリペプチドのグリコシル化は、通常Ｎ−結合型あるいはＯ−結合型である。Ｎ−結合型は、炭水化物成分のアスパラギン残基の側鎖との結合を指す。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｘはプロリンを除くすべてのアミノ酸である）は、炭水化物成分のアスパラギン側鎖との酵素的結合にとっての認識配列である。したがって、ポリペプチドにおけるこれらのいずれかのトリペプチド配列の存在は、潜在的なグリコシル化部位を生み出す。Ｏ−結合型グリコシル化は、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうち１つと、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセイン（ｓｅｉｎｅ）またはスレオニンとの結合を指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンも使用することができる。
【０１４９】
抗体へのグリコシル化部位の付加は、１個または複数の前述のトリペプチド配列（Ｎ−結合型グリコシル化部位のための）を含むようにアミノ酸配列を変更することによって都合よく行われる。また、この変更は、原アンタゴニストの配列に１個または複数のセインまたはスレオニン残基を付加することにより、または１個または複数のセインまたはスレオニン残基によって置換することにより行うことができる（Ｎ−結合型グリコシル化部位のための）。
【０１５０】
抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は、当技術分野で知られている様々な方法によって調製される。これらの方法には、天然ソースからの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、またはオリゴヌクレオチド媒介性（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発、および前に調製した変異体またはアンタゴニストの非変異体バージョンのカセット式変異誘発が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０１５１】
本発明で用いる抗体を修飾してエフェクター機能を改善する、例えば、アンタゴニストの抗原依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を増強することが望ましいことがある。これは、抗体アゴニストのＦｃ領域に１個または複数のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。あるいは、またはさらに、１個または複数のシステイン残基をＦｃ領域に導入することにより、この領域中で鎖間のジスルフィド結合形成を可能にすることができる。このようにして作製されたホモ二量体抗体は、改良された内在化能力、および／または増加した補体媒介性細胞死滅および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有することがある。Ｃａｒｏｎ他、Ｊ．Ｅｘｐ　Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ、Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照されたい。また、Ｗｏｌｆｆ他、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載のヘテロ二官能性架橋剤を用い、抗腫瘍活性が増強されたホモ二量体抗体を調製することができる。あるいは、二重のＦｃ領域を有し、それによって増強された補体溶解能およびＡＤＣＣ能力を有する可能性がある抗体を設計することができる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ他、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　３：２１９−２３０（１９８９）。
【０１５２】
抗体の血清中半減期を増加させるために、米国特許第５，７３９，２７７号に記載のように、抗体（特に抗体フラグメント）中にサルベージ受容体結合エピトープを組み入れることができる。本明細書で用いる用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ　ｖｉｖｏにおける血清中半減期の増加を引き起こすＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧＩ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０１５３】
医薬製剤
本発明に従って使用される非放射性抗ＣＤ２０および放射標識抗ＣＤ２２抗体を含む治療用製剤は、所望の純度を有するアンタゴニストを、任意の薬剤として許容される坦体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編（１９８０））と混ぜることにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で保存のために調製される。許容される坦体、賦形剤、または安定剤は、用いる用量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルまたはベンジル・アルコール；メチルまたはプロピル・パラベンなどのアルキル・パラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン界面活性剤が含まれる。
【０１５４】
これらの抗体は同一製剤中にあってもよく、異なる製剤で投与してもよい。投与は同時または連続して行うことができ、どちらの順序でも有効である。
【０１５５】
典型的な抗ＣＤ２０抗体の製剤は、参照により本明細書に組み込むＷＯ９８／５６４１８に記載されている。この刊行物は、ｐＨ５．０にて４０ｍｇ／ｍＬ　リツキシマブ、２５ｍＭアセテート、１５０ｍＭトレハロース、０．９％ベンジル・アルコール、０．０２％ポリソルベート２０を含み、２〜８℃で最少２年の保存期間を有する液体マルチドーズ製剤について記載している。別の抗ＣＤ２０製剤は、９．０ｍｇ／ｍＬ塩化ナトリウムに溶かした１０ｍｇ／ｍＬ　リツキシマブ、７．３５ｍｇ／ｍＬクエン酸ナトリウム２水和物、０．７ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０、およびｐＨ６．５の注射用滅菌水を含む。
【０１５６】
皮下投与に適した凍結乾燥製剤は、ＷＯ９７／０４８０１に記載されている。このような凍結乾燥製剤は、適当な希釈剤で再構成して高いタンパク質濃度とし、再構成された製剤を本明細書で治療すべき哺乳動物に皮下投与することができる。
【０１５７】
また、本明細書の製剤は、治療される特定の適応症に必要な２種類以上の活性化合物、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的活性を有する化合物を含むことができる。例えば、化学療法剤、サイトカインまたは免疫抑制剤（例えば、サイクロスポリンなどのＴ細胞に作用する薬物、またはＴ細胞と結合する抗体、例えば、ＬＦＡ−１と結合する抗体）をさらに提供することが望ましいことがある。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在するアンタゴニストの量、疾患または障害または治療のタイプ、および前述の他の要素によって異なる。これらの薬剤は前に使用したのと同一の用量および投与経路で用いるか、あるいは使用した用量の約１〜９９％が用いられる。
【０１５８】
また、活性成分は、例えば、３０コアセルベーション技法、または界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタシレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミン・ミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）、またはマイクロエマルジョン中に取り込むことができる。このような技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ、第１６版、Ｏｓｏｌ、Ａ．編（１９８０）に開示されている。
【０１５９】
徐放性製剤を調製することができる。徐放性製剤の好適な例には、アンタゴニストを含む固形の疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、マトリックスは成形加工した部材、例えばフィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（メタクリル酸２−ヒドロキシエチル）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、ノアール（ｎｏｉｒ）分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ　ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドからなる注射用マイクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。ｉｎ　ｖｉｖｏの投与に用いられる製剤は無菌でなければならない。これは、無菌濾過膜を通す濾過によって容易に行われる。
【０１６０】
非放射性抗ＣＤ２０および放射性（放射標識）抗ＣＤ２２抗体または抗体フラグメントによる治療
非放射性ＣＤ２０抗体、例えばリツキサン（登録商標）、放射標識抗ＣＤ２２抗体として、好ましくは９０Ｙ（ＭＸＤＴＰＡをキレートとして用いることにより放射標識された）を含む組成物を製剤化し、適量に分け、優良投薬規範（ｇｏｏｄ　ｍｅｄｉｃａｌ　ｐｒａｃｔｉｃｅ）に合致する方法で投与する。これに関連して考慮する要素には、特定のＢ細胞悪性疾患、または他の状態、例えば、自己免疫、アレルギー、炎症性障害、細胞療法もしくは遺伝子療法、治療される特定の哺乳動物、各患者の臨床症状、疾患もしくは障害の原因、薬剤の送達部位、投与の方法、投与の計画、および医者に知られている他の要素が含まれる。投与されるアンタゴニストの治療上有効な量は、このような考慮によって左右される。
【０１６１】
ＣＤ２０抗体および放射標識ＣＤ２２抗体は、同一製剤中または異なる製剤中のどちらにあってもよい。これらの製剤を別々に、または同時に、かついずれの順序で投与してもよい。非放射性ＣＤ２０抗体を放射標識ＣＤ２２とは別々に投与することが好ましい。
【０１６２】
一般的事柄として、投与１回につき非経口投与される抗体の治療上有効な量は、通常１日に患者の体重１ｋｇ当たり約０．１〜５００ｍｇの範囲であり、用いられるアンタゴニストの典型的初期範囲は約２〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０１６３】
好ましい抗ＣＤ２０抗体はリツキサン（登録商標）である。このような抗体に適した用量は、例えば、約２０ｍｇ／ｍ２から１０００ｍｇ／ｍ２までの範囲である。抗体の用量は、現在非ホジキンリンパ腫の治療に推奨されているリツキサン（登録商標）と同一または異なっていてもよい。例えば、実質的に３７５ｍｇ／ｍ２未満の抗体、例えば投与量が約２０ｍｇ／ｍ２から約２５０ｍｇ／ｍ２まで、例えば約５０ｍｇ／ｍ２から約２００ｍｇ／ｍ２までの範囲で１回または複数回患者に投与することができる。放射標識抗ＣＤ２２抗体の量は、特定の治療用放射標識、例えばそれがα、βあるいはδ放出体であるか否かなどの要素によって左右される。放射線の適切な用量を決定する方法はよく知られている。骨髄細胞または幹細胞移植を必要とするほど重度な骨髄抑制をもたらさない用量が選択されることが好ましい。
【０１６４】
抗ＣＤ２０抗体は、リツキサン（登録商標）に匹敵して、実質的なＢ細胞枯渇活性を有し、Ｂ細胞のアポトーシスを誘発することが好ましい。
【０１６５】
さらに、ＣＤ２０または放射標識抗ＣＤ２２抗体の１回または複数回の初期投与と、続く１回または複数回のその後の投与を、その後の投与における抗体のｍｇ／ｍ２投与量が初期投与における抗体のｍｇ／ｍ２投与量を上回って投与することができる。例えば、初期投与が約２０ｍｇ／ｍ２から約２５０ｍｇ／ｍ２まで（例えば、約５０ｍｇ／ｍ２から約２００ｍｇ／ｍ２まで）の範囲であり、その後の投与が約２５０ｍｇ／ｍ２から約１０００ｍｇ／ｍ２までの範囲であってもよい。
【０１６６】
しかしながら、前述のように、これらのＣＤ２０とＣＤ２２抗体の推奨量は共に、多くの治療的裁量を受けやすい。前述のように、適切な投与量および計画を選択する際の重要な要素は得られる結果である。例えば、進行中および急性の疾患を治療するには比較的高用量が初期には必要なことがある。最も有効な結果を得るため、特定のＢ細胞悪性疾患に応じ、疾患もしくは障害の最初の徴候、診断、外観もしくは出現とできる限り近く、または疾患もしくは障害の寛解中にアンタゴニストを投与する。
【０１６７】
抗体は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内を含む任意の好適な手段、ならびに局所免疫抑制治療が望ましい場合には病変内投与によって投与される。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。さらに、パルス注入により、例えば抗体の投与量を減らしながら抗体を好適に投与することができる。投与は注射によるのが好ましく、静脈内または皮下注射が最も好ましく、投与が短時間であるか長時間にわたるかに一部左右される。
【０１６８】
さらに、化学療法剤、免疫抑制剤および／またはサイトカインを本明細書の抗体と一緒に投与することができる。併用投与には、別々の製剤または単一の薬剤製剤を用いる同時投与、およびいずれかの順序による連続投与が含まれ、この場合、両者（またはすべての）活性薬剤がそれらの生物活性を同時に発揮する時期のあることが好ましい。
【０１６９】
抗体を患者に投与する他に、本出願は、遺伝子療法による抗体の投与を企図している。抗体をコードする核酸のこのような投与は、表現「治療上有効な量のアンタゴニストを投与すること」に包含される。例えば、細胞内抗体を生成するための遺伝子療法の使用法に関する１９９６年３月１４日公開のＷＯ９６／０７３２１を参照されたい。
【０１７０】
患者の細胞内に核酸（場合によりベクター中に含まれる）を入れるにはｉｎ　ｖｉｖｏおよびｅｘ　ｖｉｖｏという２種類の主要な手法がある。ｉｎ　ｖｉｖｏ送達の場合には、通常はアンタゴニストが必要な部位で核酸を直接患者に注射する。ｅｘ　ｖｉｖｏ治療の場合には、患者の細胞を取り出し、こられの単離細胞中に核酸を導入し、修飾細胞を直接、または例えば、患者に埋め込まれた多孔質膜内に封入して投与する（例えば、米国特許第４，８９２，５３８号および第５，２８３，１８７号を参照されたい）。核酸を生細胞中に導入するために利用できる様々な技法がある。これらの技法は、核酸がｉｎ　ｖｉｔｒｏで培養細胞中に運ばれるか、ｉｎ　ｖｉｖｏで対象宿主の細胞中に運ばれるかによって異なる。ｉｎ　ｖｉｔｒｏで哺乳動物細胞中に核酸を運ぶのに適した技法には、リポソームの使用、電気穿孔法、微量注入法、細胞融合、ＤＥＡＦ−デキストラン、リン酸カルシウム沈降法などが含まれる。遺伝子のｅｘ　ｖｉｖｏ送達で一般的に使用されるベクターはレトロウイルスである。
【０１７１】
現在のところ好ましいｉｎ　ｖｉｖｏの核酸運搬技法には、ウイルス・ベクター（アデノウイルス、Ｉ型単純疱疹ウイルス、またはアデノ随伴ウイルス）によるトランスフェクションおよび脂質をベースとする系（遺伝子の脂質媒介性運搬に有用な脂質は、例えば、ＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥおよびＤＣ−Ｃｈｏｌである）が含まれる。ある状況では、細胞表面膜タンパク質または標的細胞に特異的な抗体、標的細胞上の受容体のリガンドなどの、標的細胞を標的とする薬剤と共に核酸源を提供することが望ましい。リポソームを用いる場合、エンドサイトーシスに関係する細胞表面膜タンパク質と結合するタンパク質、例えば、特定の細胞タイプ、循環中に内在化を受けるタンパク質、および細胞内局在化を標的とし細胞内半減期を増加させるタンパク質の抗体を刺激するカプシドタンパク質またはそのフラグメントを、標的化および／または取り込みを容易にするのに使用することができる。受容体媒介性エンドサイトーシスの技法は、例えば、Ｗｕ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ　２６２：４４２９−４４３２（１９８７）；およびＷａｇｎｅｒ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ　８７：３４１０−３４１４（１９９０）により記載されている。現在のところ知られている遺伝子マーキングおよび遺伝子療法のプロトコルについての総説は、Ａｎｄｅｒｓｏｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ　２５６：８０８−８１３（１９９２）を参照されたい。ＷＯ９３／２５６７３も参照されたい。これらの参考文献を本明細書に引用する。
【０１７２】
製品
本発明の別の実施形態では、前述の疾患または障害の治療に有用な材料を含む製品を提供する。
【０１７３】
製品は、容器および容器上または容器に付属するラベルまたは添付文書を含む。好適な容器には、例えば、瓶、バイアル、注射器などが含まれる。これらの容器はガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から作製することができる。これらの容器は、疾患および障害を治療するのに有効な組成物を保持または含み、無菌の出入り口を有することができる（例えば、容器は、静脈注射用溶液袋または皮下注射針によって穴を開けることができる栓を有するバイアルであってもよい）。全体としては、１つまたはいくつかの組成物であってもよい。これらの組成物のうち１つにおける少なくとも１種の活性薬剤は、非放射性ＣＤ２０抗体、好ましくは実質的Ｂ細胞枯渇活性を有する抗体であり、少なくとも１種の抗体は、治療的に放射標識された抗ＣＤ２２抗体またはフラグメント、好ましくは９０Ｙ放射標識抗体である。ラベルまたは添付文書は、この組成物が、前に列挙したようなＢ細胞悪性疾患もしくは他の状態またはＢ細胞の阻害が望ましい治療、例えば、自己免疫疾患、移植、遺伝子療法、細胞療法または炎症性状態を有するか、それらにかかりやすい患者を治療するために用いられることを示す。さらに、製品は、静菌性の注射用の水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液などの薬剤として許容される緩衝液を含む第二の容器を含むことができる。さらに、製品は、商業的立場および使用者の立場から所望され、他の緩衝液、希釈液、フィルター、針、および注射器を含む他の材料を含むことができる。
【０１７４】
本発明の詳細を、以下の非限定的な実施例によりさらに説明する。明細書におけるすべての引用の開示を参照により本明細書に組み込む。
【０１７５】
本発明の抗体は、治療の度合いまたは予防の度合いに対して効果を生み出すのに十分な量で前述の治療方法に従ってヒトまたは他の動物に投与することができる。このような本発明の抗体は、知られている技法に従い本発明の抗体を従来の薬剤として許容される坦体または希釈剤と混ぜることにより調製される従来の剤形で、このようなヒトまたは他の動物に投与することができる。当業者に知られているように、薬剤として許容される坦体または希釈剤の形態および性質は、それらと混合される活性成分の量、投与の経路および他のよく知られた変数によって決定される。
【０１７６】
本発明の抗体（またはそのフラグメント）の投与手順は、経口、非経口、吸入によるまたは局所のいずれでもよい。本明細書で用いる用語、非経口には、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸または膣投与が含まれる。皮下および筋肉内形態の非経口投与が一般に好ましい。
【０１７７】
予防的または治療的に免疫抑制を誘発するため、または発癌性腫瘍を治療的に処置するために本発明の化合物を用いるための毎日の非経口および経口投与法は、一般に１日につき体重１ｋｇ当たり約０．０５〜１００ミリグラムの範囲であるが、約０．５〜１０ミリグラムが好ましい。
【０１７８】
また、本発明の抗体を吸入によって投与することができる。「吸入」は、鼻腔内および経口吸入投与を意味する。エアゾール製剤または計量式吸入器などの、このような投与に適した剤形は、従来の技法で調製することができる。用いられる本発明の化合物の好ましい用量は、一般に約１０〜１００ミリグラムの範囲内である。
【０１７９】
また、本発明の抗体を局所投与することができる。局所投与は、非全身的投与を意味し、本発明の抗体（またはそのフラグメント）化合物を外部から表皮、口腔に塗布すること、ならびに耳、眼、および鼻にこのような抗体を点滴注入することが含まれ、この場合、抗体は血流に多くは入らない。全身性投与は、経口、静脈内、腹腔内および筋肉内投与を意味する。治療効果または予防効果に必要な抗体の量は、選ばれた抗体、治療される状態の性質および重症度ならびに動物によって異なることは言うまでもない。
【０１８０】
本発明の併用療法
本発明は、ＣＤ２０およびＣＤ２２の細胞外抗原決定基を標的とする非放射性抗ＣＤ２０抗体および放射標識抗ＣＤ２２抗体の併用に関する。ＣＤ２０とＣＤ２２は共に、Ｂ細胞上に存在する抗原である。これらの抗体は、免疫学的条件下でＢ細胞の表面上に示され、細胞外環境からの抗体に接近可能なＣＤ２０およびＣＤ２２の抗原決定基と選択的に反応する。
【０１８１】
用語「選択的に反応する」または「対して特異的」には、抗体のすべてまたは一部が、ＣＤ２２またはＣＤ２２標的分子を有する細胞または組織と優先的に会合し、その標的分子を欠く細胞または組織とは会合しないことへの言及が含まれる。言うまでもなく、分子と非標的細胞または組織との間にある程度の非特異的相互作用が起こりうることが知られている。しかしながら、標的ＣＤ２２またはＣＤ２０分子の特異的認識によって媒介される特異的結合を見分けることができる。通常、特異的結合は、結合分子とＣＤ２２またはＣＤ２０を欠く細胞との間に比べ、送達された分子とＣＤ２２またはＣＤ２０を有する細胞との間にかなり強い会合をもたらす。通常、特異的結合は、結合分子とＣＤ２２またはＣＤ２０を欠く細胞に比べ、ＣＤ２２またはＣＤ２０を有する細胞または組織と結合する量（単位時間当たり）において２倍を超える、好ましくは５倍を超える、より好ましくは１０倍を超える、最も好ましくは１００倍を超える増加をもたらす。このような条件下でのタンパク質との特異的結合には、特定のタンパク質に対する特異性について選択された抗体が必要である。特定のタンパク質と特異的に免疫反応性である抗体を選択するには、様々なイムノアッセイ・フォーマットが適している。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、タンパク質と特異的に免疫反応性であるモノクローナル抗体を選択するのに日常的に使用される。特異的免疫反応性を測定するのに使用できるイムノアッセイ・フォーマットおよび条件の説明については、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋを参照されたい。
【０１８２】
抗ＣＤ２０抗体
抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２０またはそのフラグメントと特異的に結合するキメラ、ヒト化またはヒト・モノクローナル抗体を含むことが好ましい。抗ＣＤ２０抗体は、その全体を参照により本明細書に組み込む米国特許第５，７３６，１３７号に報告されているリツキサン（登録商標）、核酸配列およびアミノ酸配列を含むことが最も好ましい。このキメラ抗ＣＤ２０抗体は極めて効果的にＢ細胞を枯渇させ、非ホジキンリンパ腫の治療のために使用することがＦＤＡによって承認されている。しかしながら、ヒト化およびヒト・モノクローナル抗体も使用することができる。
【０１８３】
放射標識抗ＣＤ２２抗体は、ＣＤ２２に対して特異的なキメラ、ヒト化もしくはヒト・モノクローナル抗体またはその結合フラグメントを含むことが好ましい。好ましい実施形態では、Ｌｅｕｎｇによる１９９８年８月４日発行の米国特許第５，７８９，５５４号に配列が開示されている９０Ｙ放射標識ヒト化モノクローナル抗体を利用する。この参考文献も、その全体を参照により本明細書に組み込む。しかしながら、それを他のモノクローナル抗体および結合フラグメントで置き換えることができる。
【０１８４】
さらに、９０Ｙ以外の、例えば１３１Ｉ、６７Ｃｕ、３２Ｐ、１２５Ｉ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１１Ａｔなどの放射性核種の使用法が企図されている。好適な放射性同位体には、α、β、およびγ放出体、オージェ電子放出体、およびα粒子または電子捕獲により崩壊するラジオアイソタイプ（ｒａｄｉｏｉｓｏｔｙｐｅ）を放出する中性子捕獲剤が含まれる。
【０１８５】
放射標識は、例えばキレート剤を使用することにより、抗体またはフラグメントに直接または間接的に取り付けることができる。好適なキレート剤には、例えばＤＴＰＡおよびＤＥＴＡが含まれる。
【０１８６】
好適なフラグメントには、実質的に天然抗体のＦｃ領域すべてを欠くいかなる抗体も含まれる。これらには、特にｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ１）２、Ｆ（ａｂ）２、Ｆａｂなどが含まれる。
【０１８７】
前述のように、抗ＣＤ２０抗体および放射標識抗ＣＤ２２抗体は、別々にまたは組み合わせて、およびいずれの順序でも投与することができる。抗ＣＤ２０抗体を治療上有効な量で最初に投与し、続いて放射標識抗ＣＤ２２抗体を投与することが好ましい。
【０１８８】
抗体の結合親和性
本発明で使用する抗体は、ＣＤ２２またはＣＤ２０の細胞外エピトープと特異的に結合することができる。例えば、競合アッセイ、飽和アッセイ、またはＥＬＩＳＡもしくはＲＩＡなどの標準的イムノアッセイにより測定または判定し、抗体がＣＤ２２またはＣＤ２０と結合するか結合する能力を持つ場合には、抗ＣＤ２２または抗ＣＤ２０抗体は、ＣＤ２２またはＣＤ２０に対する結合親和性を有する。この特異性の定義は、単一の重鎖および／または軽鎖、ＣＤＲＳ、融合タンパク質またはＣＤ２２単独もしくは組合せと結合する場合にＣＤ２２またはＣＤ２０に特異的な重鎖および／または軽鎖のフラグメントに適用する。
【０１８９】
競合アッセイでは、リガンドと結合する抗体の能力は、リガンドと結合することが知られている化合物の結合と競合する抗体の能力を検出することによって測定する。多くのタイプの競合アッセイが知られており、本明細書で検討される。あるいは、阻害剤の非存在下で試験化合物の結合を測定するアッセイを用いることもできる。例えば、ある分子または他の化合物がＣＤ２２と結合する能力は、当該分子を標識することによって直接検出したり、分子が非標識の場合には様々なサンドイッチ・アッセイ・フォーマットを用いて間接的に検出することができる。競合結合アッセイなどの多くのタイプの結合アッセイが知られている（例えば、参照により本明細書に組み込む米国特許第３，３７６，１１０号および第４，０１６，０４３号、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８８）を参照）。競合アッセイを用いるのではなく、試験化合物と１成分のみとの結合を測定するためのアッセイも利用できる。例えば、抗体を用いてリガンドの存在を識別することができる。ＥＬＩＳＡなどの、モノクローナル抗体アッセイの標準的手順を使用することができる（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、上記参照）。使用できる様々なシグナル産生系の総説については、参照により本明細書に組み込む米国特許第４，３９１，９０４号を参照されたい。
【０１９０】
本発明で用いる抗ＣＤ２０の用量は、患者および用いる抗体によって異なる。リツキシマブ（登録商標）などのキメラ抗ＣＤ２０抗体は、少なくとも４週間、１週当たり少なくとも約５０ｍｇ／ｍ２の投与量で投与することができる。特に好ましい投与計画は、４週間にわたり１週当たり約３７５ｍｇ／ｍ２である。
【０１９１】
前述のように、抗ＣＤ２０抗体の投与後に放射標識抗ＣＤ２２抗体、すなわち治療用放射標識に取り付けた抗体を投与することが好ましい。好ましい放射標識は９０Ｙまたは１３１Ｉなどのベータ放出同位体であるが、抗体と効果的に結合し、比較的短い崩壊範囲を有し、直ぐ近くの細胞、すなわち標的とされた細胞を首尾よく死滅させる限りは、いかなる放射性同位体を使用してもよい。通常、放射標識はキレート剤、例えばＤＴＰＡを用いることによって取り付ける。
【０１９２】
重症な血球減少、例えば血小板が１５０，０００未満とならない限り、枯渇性の抗ＣＤ２０抗体の投与後１週間以内に患者を治療することが好ましい。枯渇性抗体の治療により患者が血球減少である場合には、放射免疫療法の前に、例えば最低（ｎａｄｉｒ）ＡＧＣが１０００を超えるか血小板が１５０，０００を超えるまで回復させる。末梢血および／または骨髄の細胞回復が見られる場合には、免疫療法の直前に追加の枯渇性抗体を投与することができる。このような二次的用量は、例えば放射免疫療法の直前または重ねて約２週間、約２５０ｍｇ／ｍ２で投与することができる。
【０１９３】
放射標識抗体の用量もまた、患者、抗体の特異性、半減期、放射性同位体安定性など、および言うまでもなく疾患の程度によって異なる。放射標識抗ＣＤ２２抗体は、通常約０．００１〜１５０ｍＣｉ／ｋｇの用量で投与され、０．１〜５０ｍＣｉ／ｋｇがより好ましく、さらに０．１〜３０ｍＣｉ／ｋｇがより好ましい。別の好適な用量は１０から３０ｍＣｉ／ｋｇに及ぶ。放射線の用量は当業者が決定できる。
【０１９４】
本明細書に開示の治療方法は、化学療法または放射線療法などの他の知られている治療方法と併用できることは明らかであろう。抗ＣＤ２０抗体による治療後および前記放射標識抗体による治療前に骨髄または末梢血幹細胞を前記患者から採取し、放射線療法後に自家骨髄移植または幹細胞移植を行うことができる。
【０１９５】
枯渇性抗体または放射標識抗体を投与する前に、癌性Ｂ細胞の表面上でＣＤ２０または他の標的タンパク質が発現するのをアップレギュレートするためにサイトカインで患者を治療することも有用である。ＣＤ２０のアップレギュレーションについては、この目的に有用なサイトカインは、ＩＬ−４、ＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦ−アルファである。枯渇性抗体または放射標識抗体の投与と同時または前または後に、免疫エフェクター機能を刺激するためにサイトカインを投与することができる。この目的に有用なサイトカインには、インターフェロン・アルファ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦが含まれる。
【０１９６】
化学療法を用い、本明細書に開示した療法を補完し、前記放射標識抗体の投与と同時または任意の順序で連続して投与することができる。化学療法は、ＣＨＯＰ、ＩＣＥ、ミトザントロン（Ｍｉｔｏｚａｎｔｒｏｎｅ）、シタラビン、ＤＶＰ、ＡＴＲＡ、イダルビシン、ヘルツァー（ｈｏｅｌｚｅｒ）化学療法、ラ・ラ（Ｌａ　Ｌａ）化学療法、ＡＢＶＤ、ＣＥＯＰ、２−ＣｄＡ、ＦＬＡＧ　＆　ＩＤＡ（その後のＧ−ＣＳＦ治療あり、またはなし）、ＶＡＤ、Ｍ　＆　Ｐ、Ｃ−Ｗｅｅｋｌｙ、ＡＢＣＭ、ＭＯＰＰおよびＤＨＡＰからなる群から選択することができる。好ましい化学療法はＣＨＯＰである。
【０１９７】
本発明の方法を用いて様々なＢ細胞リンパ腫を治療できるが、前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である場合には特に有用である。リツキシマブ（登録商標）は軽度悪性型濾胞性ＮＨＬの治療についてすでに承認されているが、本発明者他は、驚いたことにはリツキシマブ（登録商標）がバルキー疾患（ｂｕｌｋｙ　ｄｉｓｅａｓｅ）を含む中等度悪性型および高度悪性型ＮＨＬの治療にも有益であることを見いだした。したがって、本発明の方法によって治療できるリンパ腫には、軽度悪性型／濾胞性非ホジキン・リンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中等度悪性型／濾胞性ＮＨＬ、中等度悪性型びまん性ＮＨＬ、慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）、高度悪性型免疫芽細胞性ＮＨＬ、高度悪性型リンパ芽球性ＮＨＬ、高度悪性型小切れ込み核細胞ＮＨＬ、バルキー疾患ＮＨＬ、外套細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫およびワルデンストレーム・マクログロブリン血症が含まれ、このようなリンパ腫は、放射免疫療法の可用度を悪化させる骨髄関与を伴う。
【０１９８】
また、本発明を用いて自己免疫疾患を治療することができる。それらの例には、糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、壊死性血管炎、リンパ節炎、結節性動脈周囲炎、全身性エリテマトーデス、関節炎、血小板減少性紫斑病、無顆粒球症、自己免疫性溶血性貧血、異種抗原に対する免疫反応、重症筋無力症、インスリン抵抗性糖尿病、狼瘡（ＳＬＥおよび薬物性狼瘡）が含まれる。さらに、本発明を用いて移植細胞、組織または器官に対する体液性免疫反応を治療または予防することができる。
【０１９９】
次に、典型的な治療条件を以下によって説明する。
【０２００】
実施例１
非ホジキン患者をまずリツキサン（登録商標）で治療する。この初期治療は、４週間にわたる毎週３７５ｍｇ／ｍ２のリツキサン（登録商標）投与を含む。
【０２０１】
このリツキサン（登録商標）抗体療法の終了から１週間後、９０Ｙ放射標識ヒト化抗ＣＤ２２抗体（Ｌｅｕｎｇ他により、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓに譲渡され、参照によりその全体を本明細書に組み込む米国特許第５，７８９，５５４号に開示されたヒト化ＬＬ２抗体）で患者を治療する。１０から３０ｍＣｉに及ぶ９０Ｙ標識ヒト化抗ＣＤ２２抗体で患者を治療する。
【０２０２】
実施例２
腎臓を移植する予定の患者を、移植前に４週間にわたって毎週３７５ｍｇ／ｍ２の用量でリツキサン（登録商標）で処置して移植前にＢ細胞を枯渇させ、移植器官に対する体液性免疫反応の可能性を低下させる。
【０２０３】
リツキサン（登録商標）処置と同時、またはその後１週間以内に、低用量、すなわち１０〜３０ｍＣｉの用量で９０Ｙ放射標識ヒト化抗ＣＤ２２抗体により対象を処置する。次いで、従来の外科的方法により処置対象に腎臓を移植する。対象は、抗ＣＤ４０Ｌ、抗Ｂ７または他の免疫抑制剤、例えばサイクロスポリンで処理することも好ましい。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004512262.tif 000062
【国際調査報告】
2004512262.tif 000063
2004512262.tif 000064
2004512262.tif 000065