(57)【要約】ヒト繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）由来の新規なペプチドを確認する。前記分子は、一次ラット平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）および一次ウシ内皮細胞（ＢＡＥＣ）における血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）および塩基性繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）のインビトロの作用を阻害可能である。前記分子はＣＤ１マウスのインビボ脈官形成をも阻害可能である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一次構造を有するペプチド。
Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ
【請求項２】
請求項１記載の配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有するペプチド。
【請求項３】
請求項１記載の配列に対して少なくとも６０％の、電荷相同性または親水性または疎水性または溶媒暴露割合または三次元コンフォメーションを有するペプチド。
【請求項４】
請求項１記載の配列に対して少なくとも６０％の、コンフォメーション類維持性または官能基配置類似性を示す、ペプチドまたは非ペプチド分子。
【請求項５】
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）および繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）の阻害剤としての、請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【請求項６】
細胞増殖に影響可能な薬理的化合物の調製のための、請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【請求項７】
細胞移動および潜在的な転移部位へ向かう腫瘍細胞移動に影響可能な薬理的化合物の調製のための、請求項１または２または３または４記載のペプチドに使用法。
【請求項８】
一次腫瘍成長および転移の阻害剤としての、請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【請求項９】
腫瘍性および血管性疾患の治療のための補助剤として使用される薬理的化合物の調製のための請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【請求項１０】
血管性疾患の治療のために使用される薬理的化合物の調製のための、請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【請求項１１】
血栓現象および関連症状の治療のために使用される薬理化合物の調製のための、請求項１または２または３または４記載のペプチドの使用法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ（以降ＰＥＰ１という）の一次構造を有するヒト塩基性繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）由来のペプチドの同定および合成に関する。
前記分子は、ｂＦＧＦ配列に類似性を示す。すなわち、インビトロのみならずインビボのＰＤＧＦ−ＢＢおよびｂＦＧＦ効果を阻害する。
【０００２】
特に、一次ラット平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）および一次ウシ内皮細胞（ＢＡＥＣ）におけるインビトロ実験では、前記分子が、細胞に対して毒性ではない所定の投与量で細胞増殖および移動の有効な阻害剤であることを示した。
さらに、ＣＤ１マウスに皮下注射した、再構築基底膜プラグにおいて実施されたインビボ実験では、前記分子がｂＦＧＦ誘導脈管形成を強く阻害することを示した。
【０００３】
報告結果によると、ＰＥＰ１が、脈管形成、アテローム性動脈硬化、腫瘍成長および転移汎発後の再狭窄等の血管細胞の異常な増殖および移動を伴う疾患の治療に対して使用されうることを示唆する。
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）および塩基性繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）等の成長因子は、多くの細胞型の増殖および分化に重大な役割を果たす。実際、これらの因子の高レベルおよび／または活性は、腫瘍成長およびアテローム性動脈硬化等の血管疾患を含む、幾つかの症状において生じる。
【０００４】
血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）および塩基性繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は脈管形成関連疾患の病因について共に重要である。その理由は、これらは血管壁内で細胞増殖および移動を直接調節するからである（Ｒｏｓｓ，Ｒ．等、１９９０年、サイエンス、２４８巻、１００９〜１０１２頁；Ｒｏｓｓ，Ｒ．１９９３年、ネイチャー、３６２巻、８０１〜８０９頁）。
脈管形成は組織開発ならびに腫瘍成長および汎発に対する重要な工程である。細胞分化、増殖および移動を調節する幾つかの因子により制御される（Ｈｏｌａｓｈ，Ｊ．１９９８年、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．４９巻、４０７〜４２４頁）。
【０００５】
ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦ中和抗体（Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ等、アテローム性動脈硬化、１９９７年、４５〜５１頁）およびＰＤＧＦレセプター発現阻害オリゴヌクレオチド（Ｓｉｒｏｉｓ，Ｍ．Ｇ．等、１９９７年、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９５巻，６６９〜６７６頁）等の幾つかの異なる分子を、再狭窄等の血管細胞の異常な増殖および移動を伴う疾患を阻害するためにインビボで首尾よく使用した。さらに、現在使用可能な特異的阻害剤はレセプター結合またはレセプター二量化または情報伝達に干渉できる（Ｈｅｌｄｉｎ，Ｃ．Ｈ．等、１９９８年、ＢＢＡ、Ｆ７９〜Ｆ１１３）。
【０００６】
ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦは、インビトロにおける腫瘍細胞成長、インビボにおける固体腫瘍成長、ならびに転移汎発に対して要求される（Ｓｈａｗｖｅｒ，Ｌ．Ｋ．等、１９９７年、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３、１１６７〜１１７７、Ｖｉｇｎａｕｄ，Ｊ．Ｍ．等、１９９４年、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５４、５４５５〜５４６３；Ｃｈａｎｄｌｅｒ，Ｌ．Ａ．等、１９９９年、Ｉｎｔ，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８１，４５１〜４５８；Ｗｅｓｔｐｈａｌ、Ｊ．Ｒ．等、２０００年、Ｉｎｔ，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，１５，８６（６）、７６８−７７６）。
【０００７】
ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦの活性化および／または情報伝達の阻害により、腫瘍成長および転移汎発は効果的に減少する（Ａｂｒａｍｏｖｉｃｈ，Ｒ．等、１９９９年、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７９、（９−１０）、１３９２−８；Ｂａｇｈｅｒｉ−Ｙａｒｍａｎｄ，Ｒ．等、１９９８年、Ｂｒ．Ｊ．ｃａｎｃｅｒ、７８（１）、１１１８；Ｓｏｌａ、Ｆ等、１９９５年、Ｉｎｖａｓｉｏｎ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１５（５−６）、２２２−２３１；Ｗａｎｇ，Ｙ．等、１９９７年、ｎａｔｕｒｅ  ｍｅｄ．３，８８７−８９３）。
【０００８】
したがって、ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦの特異的拮抗薬は増殖性疾患および脈管形成関連症の治療に対する潜在的な候補である。
同じ発明者により収集された最近のデータによると、ＰＤＧＦおよびｂＦＧＦはプロ血管原性機能の調節において疑いのない役割を果している。特に、プロ血管原性効果に加えて細胞増殖および移動におけるｂＦＧＦの阻害的な役割が示された（Ｆａｃｃｈｉａｎｏ、Ａ．等、２０００年、Ｊ．Ｃｅｌｌ、Ｓｃｉ．１１３、２８５５−２８６３）。
【０００９】
さらに、蛋白質の折り畳みおよび構造生物学的機能関連を規制する因子が研究された（Ｒａｇｏｎｅ，Ｒ．等、１９８７年、ＩｔａｌｉａｎＪ．ｏｆＢｉｏｃｈｅｍ．、３６、３０６−３０９；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ｆ．等、１９８８年、ＣＡＢＩＯＳ、４、２、３０３−３０５；Ｒａｇｏｎｅ，Ｒ．等、１９８９年、蛋白質工学、２、７、４９７−５０４；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．Ｍ．等、１９８９年、ＣＡＢＩＯＳ，５，４，２９９−３０３；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．Ｍ．等、１９９１年、ＣＡＢＩＯＳ，７，３，３９５−３９６；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．等、１９９３年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．３６（５），４４８−４５７；Ｂｅｎｖｅｎｇａ．Ｓ．等、１９９３年、ＥＯＳ−Ｊ．ｏｆＩｍｍｕｎｏｌ．ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍ．，１３（１）、１８−１９；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．，１９９５年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ．，４０、５７０−５７７；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．，１９９６年、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１２（５），１６８−１６９；Ｓｃａｅｓｅｌｌｉ，Ｍ．等、１９９７年、Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｃｉ．，３，１−９；Ｂｅｎｖｅｎｇａ，Ｓ．等、１９９９年、Ａｍｙｌｏｉｄ，６（４），２５０−２５５；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．Ｍ．，１９９９年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．，１２（１０）、８９３；Ｐｏｚｚｅｔｔｏ、Ｕ．等、２０００年、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔ，，Ｓｕｐｐｌ．ｎ．１、１３、Ｓ３０６−Ｓ３１０；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ．Ａ．Ｍ．，２０００年、Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１６（３）、２９２−２９３）。
【００１０】
本発明では、蛋白質構造を調査することにより、生物学的活性に潜在的な原因となるｂＦＧＦ配列領域が確認された。これらの領域では、ヒトｂＦＧＦ由来の、以下の一次構造を有するペプチド：
Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｕ（ＰＥＰ１という）が、一次ラット平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）および一次ウシ内皮細胞（ＢＡＥＣ）において観察された細胞増殖および移動等のｂＦＧＦ，ＰＤＧＦ−ＢＢおよびウシ胎児血清（ＦＣＳ）効果のインビトロにおける強い阻害剤であることが判明した。前記活性は、１０ナノグラム／ミリリットルにて観察され、ＰＥＰ１はインビトロでこの投与量では毒性はない。ＰＥＰ１の熱変性およびスクランブルドバージョン（ランダムアミノ酸配列）をコントロールとして使用した。両方共、活性を示さない。
【００１１】
さらに、ＰＥＰ１はインビトロにおける阻害的活性を示し、ＣＤ１マウスに皮下注射して、再構築基底膜プラグにおける脈管形成を阻害可能である。
したがって、先の検出結果を伴って、ＰＥＰ１合成は標準法であるｆ−ｍｏｃを使用して、自動合成器により達成された。
その後、ＰＥＰ１の３つの異なるバッチを試験した。これらは生物学的アッセイにおいて類似の結果を示した。さらに、ペプチド（ＰＥＰ１ｓｃｒ）のスクランブルドバージョンを調製し、その後、全実験においてネガティブコントロールとして使用した。
【００１２】
幾つかのインビトロおよびインビボ試験を前記分子について行い、前記ペプチドの機能的特徴を明らかにした。
得られた結果を添付の図面で明らかにする。
【００１３】
インビトロＰＥＰ１活性アッセイ
この試験を、生後６カ月の雄のウィスターラットから得た一次ラット大動脈平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）について、周知の方法にしたがって行った（Ｓｔｅｒｐｅｔｔｉ、Ａ．Ｖ．等、１９９２年、Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．，６，１６−２０。一次ウシ大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ）を前記プロトコルにしたがって得た（Ｄ’Ａｒｃａｎｇｅｌｏ，Ｄ．等、２０００年、Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．８６、３１２−３１８）。
【００１４】
移動アッセイ
細胞移動は新規な血管の開発に対する重要な工程である。したがって、幾つかの異なる化学誘引物質因子により誘導された細胞移動におけるＰＥＰ１効果を内皮細胞（ＢＡＥＣ）について主に評価した。移動アッセイを，下記の既知の標準法（Ａｌｂｉｎｉ，Ａ．等、１９９５年、Ｉｎｔ．，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６１，１２１−１２９；Ｆａｃｃｈｉａｎｏ，Ａ．等、２０００年、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｓｃｉ．，１１３、２８５５−２８６３）にしたがって、変法ボイデンチャンバー（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ  Ｉｎｃ．）において実施した。細胞を前記ボイデンチャンバーの上方部分に分配した。化学誘引物質因子はウシ胎児血清（ＦＣＳ）１０％または以下のヒト組換え因子：すなわちＰＤＧＦ−ＢＢ，ｂＦＧＦおよび血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）であった。水で希釈したＰＥＰ１，ＰＥＰｓｃｒ（スクランブルドコントロール）を成長因子溶液に報告した最終濃度で添加した。ｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）、またはＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）、またはＦＣＳ（２％）により誘導された走化性を、１０ｎｇ／ｍｌのＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒの存在下または非存在下で評価した。
【００１５】
全移動アッセイを３７℃、５％ＣＯ２中で、合計時間５時間行い、その後、フィルタを除去し、無水エタノールで固定し、トルイジンブルーで染色した。移動した細胞を４００×の倍率で、各フィルタにつき１５フィールドで、計数した。細胞／フィールドの平均数を報告した。全実験を少なくとも３回、二重で行った。
【００１６】
実験によると、毎条件下で、ＰＥＰ１は、５０％より多い割合で、ＢＡＥＣ移動を非常に阻害するが、ＰＥＰ１ｓｃｒはいかなる効果をも示さない（図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ）。ｂＦＧＦまたはＰＤＧＦ−ＢＢを試験した際、ＰＥＰ１をボイデンチャンバーの下方部分あるいは上方部分に分配した。ボイデンチャンバーの下方部分に分配した際に僅かに良好な阻害活性を観察した。
対照的に、ＰＥＰ１ｓｃｒコントロールは、ボイデンチャンバーの両方部分における分配時に、いかなる活性をも示さない。前記阻害効果の特異性を評価するために、他の化学誘引物質におけるＰＥＰ１効果を試験した。ＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒはａＦＧＦまたはＶＥＧＦまたはＥＧＦまたはフィブロネクチンにより誘導された皮内細胞移動に影響せず（図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ、５Ｄ）、前記分子はｂＦＧＦおよびＰＤＧＦ−ＢＢに特異的に影響することを示す。
類似の結果を、ＰＤＧＦ−ＢＢおよびＦＣＳにより誘導されたＲＡＳＭＣにおいて行われた走化性アッセイにおいて得た。ＰＥＰ１はＲＡＳＭＣ移動を阻害するが（すなわち、約６０％）、ＰＥＰ１ｓｃｒは不活性である（図６）。
【００１７】
増殖アッセイを一次ラット大動脈ＳＭＣおよび一次ウシ大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ）について実行した。細胞を６ウェルプレート（１×１０５細胞／プレート）にまき、３７℃、５％ＣＯ２下、１０％ＦＢＳで補助したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で２４時間成長させた。その後、培地を２４時間０．１％ＢＳＡ含有ＤＭＥＭ培地で置き換えた。次に、培地を、ＰＥＰ１またはコントロールペプチドの存在下または非存在下で、０．１％ＢＳＡ単独または０．１％ＢＳＡおよび最終濃度１０ｎｇ／ｍｌの成長因子あるいはウシ胎児血清（ＦＣＳ）１０％を含有する新鮮な培地で置き換えた。各アッセイを、最大３日間までの固定期間（mounting period）の間行い、細胞をハーベストし、血球計で計数した。
【００１８】
最初に、ＰＥＰ１を、投与量依存性実験において試験した：ＦＣＳ１０％により誘導したＲＡＳＭＣ増殖を、１μｇ／ｍｌ〜１ｐｇ／ｍｌの範囲で異なるＰＥＰ１投与量の存在または非存在下に、４８時間で評価した（図１）。熱変性ＰＥＰ１（ＰＥＰ１ｄｅｎ．）およびＰＥＰ１のスクランブルドバージョン（ＰＥＰ１ｓｃｒ）をコントロールとして使用した。ＰＥＰ１は投与量依存性阻害活性を示し、１０ｎｇ／ｍｌで６０％の阻害効果に達したが、コントロールペプチドはいかなる活性も示さなかった。したがって、１０ｎｇ／ｍｌの投与量を以下のインビトロ実験について選択した。図２Ａは、ＰＤＧＦ−ＢＢにより誘導された増殖の著しい阻害を示す。経時実験において、ＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導された増殖を全時間点でＰＥＰ１の存在下で有意に阻害した。ＰＥＰ１は殆ど完全に細胞増殖をブロックしたが、コントロールスクランブルドペプチド（ＰＥＰ１ｓｃｒ）はいずれの時間でも有効ではない（図２Ａ）。
【００１９】
自然増殖（ウシ血清アルブミン、ＢＳＡの存在下）はいずれの時間でもＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒにより有意に影響されず、両方の分子がＲＡＳＭＣ（図２Ｂ）およびＢＡＥＣ（図３Ｂ）に対して試験した投与量でそれ自体毒性がないことを示す。さらに、ＰＥＰ１はｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）により刺激されたＢＡＥＣについて類似の阻害効果を示す（図３Ａ）。
その後、以下のインビボ実験を行った。
【００２０】
再構築基底膜プラグにおける脈管形成
再構築基底膜プラグ（Ｂｅｃｋｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓにより製造された、「マトリゲル（Matrigel）」）における脈管形成を前記（ｍｕｈｌｈａｕｓｅｒ，Ｊ．１９９５年、Ｊ．Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７７，１０７７−１０８６）のように行った。要するに、ｂＦＧＦ（１５０ｎｇ／ｍｌ）単独を添加した、またはＰＥＰ１（１０マイクログラム／ｍｌ）の存在下において、再構築基底膜プラグをＣＤ１マウス（雌、生後１９週）に皮下注射にした。ｂＦＧＦは７日以内に毛細血管網の形成を誘導する。したがって、プラグを注射後７日で切除し、パラフィン中に包埋した。得られたスライドをマッソントリクローム染色法で染色し、光学画像アナライザーで分析し、プラグ内でｍｍ２当たり血管数を定量した。
【００２１】
図７は、ＰＥＰ１がｂＦＧＦにより誘導された血管形成の強い阻害剤として作用することを示す（即ち、ｂＦＧＦ単独で４６％の阻害）。１０匹の動物をコントロール（ｂＦＧＦで処理）として使用し、１４匹の動物をＰＥＰ１の存在下でｂＦＧＦで処理した。この実験は、ＰＥＰ１が、ｂＦＧＦにより誘導される新規な血管形成を著しく阻害することが可能であること、およびさらに別のインビボでの研究に対する良好な候補としてＰＥＰ１を指摘することを示す。
【００２２】
結論：
１）ＰＥＰ１はインビトロで血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ−ＢＢ）および繊維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）の分裂促進的および化学誘引特性における強くかつ特異的な阻害活性を示した。
２）インビボにおける抗脈管形成活性が、再構築基底膜プラグについて実施したアッセイにおいて示された。
これらの結果は、腫瘍成長および転移ならびに他の血管に基づく疾患の動物モデルにおけるさらに別の研究に対する良好な候補としてＰＥＰ１を示す。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】図１はＲＡＳＭＣについて実施された投与量依存性実験の結果を示す。１０％ＦＣＳにより誘導されたＲＡＳＭＣ増殖を、１ｇ／ｍｌ〜１ｐｇ／ｍｌの範囲の異なるＰＥＰ１投与量の存在下および非存在下で４８時間後に評価した。
【図２】図２ＡはＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＲＡＳＭＣ増殖におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ効果を示す。  図２ＢはＢＳＡの存在下でＲＡＳＭＣ自然増殖におけるＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒ効果を示す。
【図３】図３ＡはＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ増殖におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ効果を示す。  図３ＢはＢＳＡの存在下でＢＡＥＣ自然増殖におけるＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒ効果を示す。
【図４】図４ＡはＦＣＳ（１％）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。  図４ＢはＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。  図４ＣはｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。
【図５】図５ＡはＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。  図５ＢはａＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。  図５Ｃはフィブロネクチン（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。  図５ＤはＶＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＢＡＥＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰｓｃｒ（１０ｎｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下における効果を示す。
【図６】図６はＰＤＧＦ−ＢＢ（１０ｎｇ／ｍｌ）により誘導されたＲＡＳＭＣ移動におけるＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒ効果を示す。
【図７】図７はＣＤ１マウスに皮下的に注射した、再構築基底膜プラグにおいてｂＦＧＦにより誘導された脈管形成におけるＰＥＰ１およびＰＥＰ１ｓｃｒ効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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2004529103.tif 000032
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