(57)【要約】【化１】2004529887.tif 000051一般式（Ｉ）または（ＩＡ）の化合物（ここで、ＸはＨであり、Ｙは脱離基であり、Ｒ１および必要に応じてＲ３も好ましくは芳香族ＤＮＡ結合サブユニットである）は、デュオカルマイシンというプロドラッグアナログである。この化合物は、腫瘍において高レベルに発現されるＰ４５０によって（特にＣＹＰ１Ｂ１によって）、Ｘが結合する炭素原子においてヒドロキシル化されることが予測される。このプロドラッグは、腫瘍細胞（ここで、これは、細胞分裂を防ぐＤＮＡアルキル化剤として機能するであろう）において優先的に活性化されることが予測される。
2004529887.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物の治療による処置方法において使用するための組成物の製造における一般式ＩまたはＩＡの化合物あるいはその塩の使用：
【化１】
2004529887.tif 000025
（ここで、ＸはＨであり；
Ｙは、脱離基であり；
Ｒ1は、−Ａｒ、−ＮＨ2、Ｒ8または−ＯＲ8であり；
Ｒ2およびＲ4は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＲ9、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ9、−ＮＨＣＯＯＲ9、−ＣＯＯＲ9およびＣＯＡｒ10から選択され；
Ｒ3は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＲ9、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ9、−ＮＨＣＯＯＲ9および−ＣＯＯＲ9から選択され；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル並びに必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ａｒは、
【化２】
2004529887.tif 000026
から選択され（ここで、Ｂは、ＮまたはＣＲ14であり；
ＺはＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＨであり；
各Ｒ11は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−ＮＲ102、−Ｎ+Ｒ103、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、ＮＨＣＯＯＲ16およびＣＯＯＲ16から選択され；
ｎは０〜４の範囲の整数であり；
各Ｒ10は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；
Ｒ12は、Ｈ、−ＣＯＡｒ1、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ16または−ＣＯＯＲ16であり；
各Ｒ13は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−ＮＲ102、−Ｎ+Ｒ103、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、−ＮＨＣＯＯＲ16および−ＣＯＯＲ16から選択され；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ14は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、Ｃｌ、  Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、−ＮＨＣＯＯＲ16、−ＣＯＯＲ16およびＨから選択され；
Ｒ15は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、Ｃ7-12−アラルキル  Ａｒ1およびリガンドから選択され；
Ｒ16は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；そして
Ａｒ10は、
【化３】
2004529887.tif 000027
である（ここでｘは０、１または２であり）；
Ａｒ1は、Ａｒと同じ基から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ11またはＲ13が基Ａｒ1を含む））。
【請求項２】
動物がヒトである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
処置が腫瘍の処置である、請求項１または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
Ｙが、−ＯＣＯＯＲ5、−ＯＣＯＮＨＲ6、Ｃｌ、Ｂｒ、および−ＯＳＯＯＲ7（ここで、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリール；好ましくはＣｌから選択される）から選択される、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
Ａｒ1が
【化４】
2004529887.tif 000028
である、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
Ｒ1がＡｒである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項７】
Ａｒが基
【化５】
2004529887.tif 000029
である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
ｎが少なくとも１であり且つＡｒ基の基Ｒ11の１つが−ＮＨＣＯＡｒ1である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
Ａｒ1が基
【化６】
2004529887.tif 000030
である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
Ａｒ1において、ｎが少なくとも２であり且つＲ11が−ＮＨＣＯＡｒ1以外であるか、またはｎが０である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
Ａｒが基
【化７】
2004529887.tif 000031
である、請求項６に記載の使用。
【請求項１２】
Ｒ12が−ＣＯＡｒ1である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
Ａｒ1が基
【化８】
2004529887.tif 000032
である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
Ａｒ1において、Ｒ12が−ＣＯＡｒ1以外である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
Ｒ2がＨである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
Ｒ3がＨまたはＣＯＯＭｅである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
Ｒ4がＨである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
治療による動物の処置における使用のための請求項１および４〜１７のいずれかにおいて定義されるような一般式Ｉの化合物。
【請求項１９】
請求項１および４〜１７のいずれかに定義されるような一般式Ｉの化合物ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項２０】
一般式ＩＩまたはＩＩＡの化合物あるいはその塩
【化９】
2004529887.tif 000033
（ここで、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、請求項１に定義されるとおりであり；
Ｘ1は、Ｈであり；
Ｙ1は、脱離基であり；
Ｒ18は、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｒ17は、Ｒ8、−ＯＲ8、ＮＨ2またはＡｒ2であり；
Ｒ8は、請求項１において定義されるとおりであり；
Ａｒ2は、
【化１０】
2004529887.tif 000034
から選択され（ここで、Ｂ1は、ＮまたはＣＲ40であり；
Ｒ40は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23、−ＮＨＣＯＯＲ23および  −ＣＯＯＲ23から選択され；
Ｚ1は、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＲ18であり；
各Ｒ19は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ  Ｃ1-4アルキル、ＮＯ2、−ＮＨＲ18、−ＮＨＲ23、−ＮＲ232、−Ｎ+Ｒ233、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23および−ＣＯＯＲ23から選択され；
ｐは、０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ20は、Ｈ、ＣＯＡｒ3、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ23  または−ＣＯＯＲ23であり；
各Ｒ21は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ  Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨＲ18、−ＮＨＲ23、−ＮＲ232、−Ｎ+Ｒ233、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23、および−ＣＯＯＲ23から選択され；
ｑは０、１または２であり；
Ｒ22は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアルキル、Ｃ7-12−アラルキル、Ａｒ3およびリガンドから選択され；
Ｒ23は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；そして
Ａｒ3は、Ａｒ2と同じ基から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ19またはＲ21が基Ａｒ3を含む））。
【請求項２１】
各Ｒ18がＨである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｙ1が、−ＯＣＯＯＲ5、−ＯＣＯＮＨＲ6、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＴｏｓ、または−ＯＳＯＯＲ7（ここで、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、請求項４に定義されるとおりであり、好ましくはＣｌである）から選択される、請求項２０または請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ａｒ3が
【化１１】
2004529887.tif 000035
である、請求項２０〜２２のいずれかに記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ17がＡｒ2である、請求項２０〜２３のいずれかに記載の化合物。
【請求項２５】
Ａｒ2が基
【化１２】
2004529887.tif 000036
である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
ｐが少なくとも１であり且つ基Ｒ17の基Ｒ19の１つが基−ＮＨＣＯＡｒ3である、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ａｒ3が
【化１３】
2004529887.tif 000037
である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
Ａｒ3において、ｐが少なくとも１であり且つＲ19が−ＮＨＣＯＡｒ3以外であるか、またはｐが０である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
Ａｒ2が基
【化１４】
2004529887.tif 000038
である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ20がＣＯＡｒ3である、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
Ａｒ3が
【化１５】
2004529887.tif 000039
である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ａｒ3において、Ｒ20が−ＣＯＡｒ3以外である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ2がＨである、請求項２０〜３２のいずれかに記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ3がＨＣＯＯＭｅである、請求項２０〜３３のいずれかに記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ4がＨである、請求項２０〜３４のいずれかに記載の化合物。
【請求項３６】
以下から選択される、請求項２０に記載の化合物：
１−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール；
１−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール；
１−（クロロメチル−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール；
４−クロロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイル）ピロロキノリン；
４−クロロ−１−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルカルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイル）ピロロキノリン；
４−クロロ−１−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルカルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６）ピロロキノリン；
エチル６−ベンゾイル−１−（クロロメチル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート；
エチル６−ベンゾイル−１−（クロロメチル）−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート；
エチル１−（クロロメチル）−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート；
５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン；
５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルカルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン；および
５，６（８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルカルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン。
【請求項３７】
治療による動物の処置における使用のための請求項２０〜３６のいずれかに記載の化合物。
【請求項３８】
請求項２０〜３６のいずれかに記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。
【請求項３９】
一般式ＩＩＩまたはＩＩＩＡの化合物
【化１６】
2004529887.tif 000040
【化１７】
2004529887.tif 000041
（ここで、Ｒ2およびＲ4は、請求項１に定義されるとおりであり；
Ｒ38は、請求項１に定義されるＲ3と同じ基から選択され；
Ｘ2は、Ｈであり；
Ｙ2は、脱離基あるいはヒドロキシルまたは保護ヒドロキシル基であり、そして
Ｒ24およびＲ25は、それぞれＨまたはアミン保護基である）。
【請求項４０】
Ｒ24およびＲ25が互いに異なる、請求項３９に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｒ4がＢＯＣであり且つＲ25が−ＣＯＰｈである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｙ2が、−ＯＣＯＯＲ5、−ＯＣＯＮＨＲ6、Ｃｌ、Ｂｒおよび−ＯＳＯＯＲ7（ここで、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリール；好ましくはＣｌから選択される）から選択される、請求項３９〜４１のいずれかに記載の化合物。
【請求項４３】
式ＩＶまたはＩＶＡの化合物
【化１８】
2004529887.tif 000042
【化１９】
2004529887.tif 000043
（ここで、Ｒ2およびＲ4は請求項１に定義されるとおりであり；
Ｒ37は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＲ9、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ9、−ＮＨＣＯＯＲ9および−ＣＯＯＲ9から選択され；
Ｒ9は請求項１に定義されるとおりであり；
Ｘ2およびＹ2は、請求項３８に定義されるとおりであり；そして
Ｒ26は、アミン保護基である）
が、一般式Ｖ
Ｒ27ＣＯＹ3            Ｖ
（ここで、Ｒ27は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＡｒ4から選択され；
Ａｒ4は
【化２０】
2004529887.tif 000044
から選択され（ここで、Ｂ2は、ＮまたはＣＲ32であり；
Ｚ2はＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−またはＮＲ33であり；
各Ｒ28は、Ｃ1-4−アルコキシ、Ｃ1-4−アルキル、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、−ＮＨＲ33、−ＮＲ362、−Ｎ+Ｒ363−、−ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ35および−ＣＯＯＲ35から選択され；
ｒは０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ29は、アミン保護基であり；
Ｒ30は、アミン保護基、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ35または−ＣＯＡｒ5であり；
各Ｒ31は、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、−ＮＨＲ33、−ＮＲ362、−Ｎ+Ｒ363−、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ35、および−ＣＯＯＲ35から選択され；
ｓは０、１または２であり；
Ｒ32は、Ｈ、Ｃ1-4−アルコキシ、Ｃ1-4−アルキル、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ34、−ＮＨＣＯＯＲ35および−ＣＯＯＲ34から選択され；
各Ｒ33は、アミン保護基であり；
Ｒ34は、Ａｒ5、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、およびリガンドから選択され；
Ｒ35は、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ36は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；
Ａｒ5は、Ａｒ4と同じ基から選択され）、そしてＹ3は脱離基である（但し、任意の１つの環における多くとも１つのＲ28またはＲ31が基Ａｒ5を含む））
の化合物と反応される合成方法。
【請求項４４】
アミドカップリング試薬の存在下において行われる請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
生成物が、引き続き、Ｒ26、任意または全ての基Ｒ29（もしあるならば）および／または任意または全てのＲ33（もしあるならば）がＨにより置換されたアミン脱保護工程にかけられる、請求項４２または４３に記載の方法。
【請求項４６】
Ｙ2が、−ＯＣＯＯＲ5、−ＯＣＯＮＨＲ6、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉおよび−ＯＳＯＯＲ7（ここで、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリール；好ましくはＣｌから選択される）から選択される、請求項４３〜４５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
Ａｒ5が
【化２１】
2004529887.tif 000045
である、請求項４３〜４６のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
Ｒ27がＡｒ4である、請求項４３〜４７のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
Ａｒ4が基
【化２２】
2004529887.tif 000046
である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
Ｒ27において、ｒが少なくとも１であり且つ基Ｒ28の１つが−ＮＨＣＯＡｒ5である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
Ａｒ5が
【化２３】
2004529887.tif 000047
である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
Ａｒ4が基
【化２４】
2004529887.tif 000048
である、請求項４８に記載の方法。
【請求項５３】
Ｒ30が−ＣＯＡｒ5である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
Ｒ27において、Ａｒ5が基
【化２５】
2004529887.tif 000049
である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
一般式ＶＩの化合物
【化２６】
2004529887.tif 000050
（ここで、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ26およびＸ2は、式ＩＶの化合物における場合と同じであり；
Ｒ39は、Ｒ37と同じであるか、またはその前駆体であり；
Ｒ40は、Ｒ26と異なるアミン保護基であり；
Ｚ1およびＺ2のうち一方がＹ5であり且つ他方がＨであり；
Ｙ5は、水素、またはＹ2と同じまたは異なる脱離基であり；そして
Ｙ4がラジカル脱離基である）
が触媒の存在下においてアリールラジカル−アルケン環化工程を経て環化される環化工程を含む予備工程において、一般式ＩＶまたはＩＶＡの化合物が生産される、請求項４３〜５４のいずれかに記載の方法。
【請求項５６】
Ｚ1がＹ2であり、且つ環化工程がフリーラジカルの存在下において行われ、ジヒドロピロール環が形成される、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
フリーラジカルがアゾイソブチロニトリルから生成されるか、または２，２，６，６−テトラメチルピペリジニルオキシフリーラジカルである、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
触媒がトリブチルスズハイドライドである、請求項５６または５７に記載の方法。
【請求項５９】
Ｚ2がＹ5であり、Ｙ5がトリアルキルスズラジカルであり、且つ環化工程がパラジウム複合体の存在下において行われ、テトラハイドロキノリン（これが酸化され、エポキシドを形成し、次いでこのエポキシドが還元され、アルコール化合物を形成する）を形成し、式ＩＶＡの生成物においてＹ2がヒドロキシル以外であるならば、そのアルコール化合物のヒドロキシル基が引き続きＹ2へ転換される、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
Ｙ4がハロゲン原子であり、好ましくはＢｒまたはＩである、請求項５５〜５８のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、芳香族酸化／ヒドロキシル化活性化プロドラッグに関し、特に、抗−腫瘍プロドラッグ、および酵素であるシトクロムＰ４５０ファミリーの酸化／ヒドロキシル化活性によって特異的に活性化されるものに関する。
【背景技術】
【０００２】
治療目的のために使用され得る多くの従来の細胞障害薬（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ｄｒｕｇｓ）が知られている。しかしながら、それらは典型的に、一般的に細胞毒性であり、それゆえ破壊されることが要求される細胞以外の細胞に影響を及ぼすかもしれないという問題を抱えている。これは、標的化された（ｔａｒｇｅｔｅｄ）ドラッグデリバリーシステム（例えば、腫瘍組織の部位への直接注入、または例えば、ガン細胞表面上にのみ提示される抗原を特異的に認識する抗体へ細胞障害剤を結合させること）の使用によって幾分か解消され得る。あるいは、電磁照射を使用し、所望される部位において薬剤に細胞毒性になるよう化学変化を引き起こさせることができる。しかしながら、これらの技術は全て、多かれ少なかれ、いくらかの限界および欠点を有する。
【０００３】
化合物（＋）−ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシン類（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）は、ＤＮＡアルキル化剤のクラスの天然に存在する代表的なものである。この天然に存在する化合物は、ＤＮＡ結合能を付与するピロロ［３，２−ｅ］インドールコア（１つまたは２つのサブユニットを有する）に基づくＤＮＡアルキル化ユニットからなる。ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンＡは、ＤＮＡアルキル化特性の原因となるスピロ環状シクロプロパン基を含む。デュオカルマイシンＢ2、Ｃ2およびＤ2は、シクロプロパン活性体（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ  ａｃｔｉｖｅｓ）に対する前駆体であり、またジヒドロピロール環上の８位において（脱離基により）置換されたメチル基を含んでいると考えられている。ＣＣ−１０６５は、様々な経路によって合成されてきた（Ｂｏｇｅｒらにより、Ｃｈｅｍ．  Ｒｅｖ．  １９９７，９７，７８７−８２８中で要約される）。
【０００４】
ＵＳ−Ａ−４４１３１３２において、ＣＣ−１０６５の左手サブユニットの最初の合成が記載される。その合成は、シクロプロパン環が導入されるＷｉｎｓｔｅｉｎ  Ａｒ−３’アルキル化に基づく。以前の工程において、Ｇａｓｓｍａｎ’ｓ  Ｏｘｉｎｄｏｌ合成に基づく化学を使用して、α−チオメチルエステルとアニリンの反応によって、（インドールコアの）Ａ環が、導入される。アニリンは、最終生成物におけるＤＮＡアルキル化のために重要であると考えられているＮＨ2基に対してオルト位にある保護フェノール性水酸基を有する。ＣＣ−１０６５は、広い抗腫瘍活性を有するが、正常細胞に対する毒性が強すぎて、臨床的に有用でない。ＤＮＡ結合サブユニットを介して薬物をポリマー、または特異的結合剤（ＵＳ  ５，８４３，９３７に記載されるビオチンまたは抗体のような）へ複合体化させることによりＣＣ−１０６５およびアナログの送達を標的化するための試みがなされてきた。Ｂｏｇｅｒらは、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  １９９９  ＳＩ，  １５０５−１５０９中において、１，２，９，９ａ−テトラヒドロシクロプロパ（ｃ）  ベンズ  ［ｅ］  インドール−４−オンのプロドラッグを記載し、ここで、該化合物のシクロプロパン開環型（ｒｉｎｇ−ｏｐｅｎｅｄ  ｖｅｒｓｉｏｎ）がフェノール基の反応によって誘導体化され、エステルおよびカルバメート（ｃａｒｂａｍａｔｅｓ）を形成する。
【０００５】
Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  （１９９１），  １１３，３９８０−‘８３  Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌは、ＤＮＡアルキル化の選択性に寄与するＣＣ−１０６５アナログの特徴を同定するための研究を記載する。ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて試験された化合物は、２，３−ジヒドロインドールに基づくアルキル化サブユニットを有し、また６−デスヒドロキシアナログを含んでいた。これらは、６−ヒドロキシ化合物のものよりも１０4倍高い濃度であるが、いくらかのＤＮＡアルキル化特性を有することが示された。
【０００６】
Ｔｅｒｃｅｌらは、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）  ６４，５９４６−５９５３において、ＣＣ−１０６５のアミノアナログを記載する（すなわち、ここで、Ｂ−環のフェノール性ヒドロキシ（ｐｈｅｎｏｌｉｃ  ｈｙｄｒｏｘｙ）がアミノによって置換される）。これらは、ジヒドロピロール環へ結合する（ａｔｔａｃｈｅｄ）メチロール基を有する後期中間体においてベンゼン環をニトロ化することによって、合成される。
【０００７】
本発明は、ＣＣ−１０６５およびそのアナログの前駆体（これは、アルキル化サブユニットのＢ環中にヒドロキシル基を有さず、それゆえそれら自体ではＤＮＡアルキル化剤として不活性である）、ならびに本明細書中で使用されるそれらの合成物および中間体に関する。
【０００８】
酵素ＣＹＰ１Ｂ１（生体異物代謝酵素であるシトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）ファミリーのメンバー）が広範囲なヒトガン（乳房、結腸、肺、食道、皮膚、リンパ節、脳および精巣のガンを含む）において非常に頻繁に発現したこと、そしてそれらが正常組織においては検出できなかったことが報告された（Ｍｕｒｒａｙ，  Ｇ．  Ｉ．  ｅｔ  ａｌ．，  １５  Ｊｕｌｙ  １９９７，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ５７ｍ  ３０２６−３０３１およびＷＯ−Ａ−９７１２２４６）。これは、腫瘍細胞におけるシトクロムＰ４５０アイソフォームの発現が、腫瘍細胞におけるＣＹＰ酵素によって選択的に活性化され得る新規の抗腫瘍剤の開発のための分子標的を提供するという結論を導いたものの、薬物の例は与えられなかった。多くの他のＣＹＰアイソフォームは、種々の腫瘍において発現することが示された。腫瘍において発現するＣＰＹの多くは、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，  ＬＨ  ｅｔ  ａｌ，  （１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．  １４  （６），  ４７３−４８６において言及される。
【０００９】
ＷＯ−Ａ−９９／４００５６において、スチレン−およびカルコン−誘導体のプロドラッグが記載される。このプロドラッグのｉｎ  ｓｉｔｕにおいて形成される各々のヒドロキシル化型は、強力なチロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤である。ＴＫ活性の阻害は、腫瘍阻害および細胞破壊に寄与する。このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素を発現するミクロソーム調製物によって活性化され、また同酵素を発現する細胞系に対して細胞毒性活性を有する一方、この酵素を発現しない細胞系に対して非常に低い細胞毒性活性を有することが示された。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ＣＹＰ酵素（特に、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ  ＬＨ，  ｅｔ  ａｌ，  ｏｐ．  ｃｉｔ．に記載されるような、腫瘍において高レベルで発現する酵素）により、ｉｎ  ｓｉｔｕにおいてヒドロキシル化されることが予測されるプロドラッグの新規なクラスに関する。特に、このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素によって代謝可能であると考えられている。特に、その化合物のいくつかは新規である。本発明は、広範囲な化合物の第１の治療的使用に関する。
【００１１】
本発明の最初の局面に従って、動物の治療（ｔｈｅｒａｐｙ）による処置の方法において使用するための組成物の製造における一般式Ｉの化合物またはその塩の新規な使用が提供される：
【００１２】
【化１】
2004529887.tif 000003
【００１３】
（ここで、ＸはＨであり；
Ｙは、脱離基であり；
Ｒ1は、−Ａｒ、−ＮＨ2、Ｒ8またはＯＲ8であり；
Ｒ2およびＲ4は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＲ9、−ＮＨＣＯＯＲ9、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ9および−ＣＯＯＲ9から選択され；
Ｒ3は、Ｈ、Ｃ1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＣＯＲ9、−ＮＨＣＯＯＲ9、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ9、−ＣＯＯＲ9およびＣＯＡｒ10から選択され；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ａｒは、
【００１４】
【化２】
2004529887.tif 000004
【００１５】
から選択され（ここで、Ｂは、ＮまたはＣＲ14であり；
ＺはＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＨであり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ11は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−ＮＲ102、−Ｎ+Ｒ103、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、ＮＨＣＯＯＲ16およびＣＯＯＲ16から選択され；
ｎは０〜４の範囲の整数であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ10は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ｒ12は、Ｈ、−ＣＯＡｒ1、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ16または−ＣＯＯＲ16であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ13は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−ＮＲ102、−Ｎ+Ｒ103、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、−ＮＨＣＯＯＲ16および−ＣＯＯＲ16から選択され；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ14は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、Ｃｌ、  Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ16、−ＮＨＣＯＯＲ16、−ＣＯＯＲ16およびＨから選択され；
Ｒ15は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、Ｃ7-12アラルキル  Ａｒ1およびリガンドから選択され；
Ｒ16は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され）；
Ａｒ10は、
【００１６】
【化３】
2004529887.tif 000005
【００１７】
である（ここでｘは０、１または２であり；
Ａｒ1は、Ａｒと同じ基（ｇｒｏｕｐｓ）から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ11またはＲ13が基Ａｒ1を含む））。
【００１８】
この化合物は獣医学的（ｖｅｔｅｒｎａｒｙ）用途も有するかも知れないが、処置される動物は、概して、ヒトである。処置される適応症（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）は、概して、ガン（腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌、および特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚部（ｃｅｒｖｉｘ）、胆嚢、ガングリア（ｇａｎｇｌｉａ）、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ）、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺（ｔｈｙｒｏｉｄ）および子宮のガンを含む）である。腫瘍は、例えば、高レベルのＣＹＰ１Ｂ１を発現する腫瘍として定義され得る。
【００１９】
本発明においてＡｒ1は、好ましくは、
【００２０】
【化４】
2004529887.tif 000006
【００２１】
である。
【００２２】
本発明において、脱離基Ｙは、例えば、求核置換反応において脱離基としての有用性を有する基である。これらの基の好適な例は、−ＯＣＯＯＲ5、−ＯＣＯＮＨＲ6、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、または−ＯＳＯＯＲ7である（ここで、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は、独立して、Ｃ1-4  アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択される）。最も好ましくは、脱離基は、ハロゲン原子、好ましくは塩素である。
【００２３】
フェニル、アラルキルおよびヘテロアリール基において必要に応じてなされる置換は、例えば、Ｃ1-4アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ1-4−アルコキシ、−ＮＨ2、−ＮＨＲ10、−ＮＲ102、−Ｎ+Ｒ103、−ＮＯ2、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＲ15、−ＣＯＯＲ16、−ＮＨＣＯＯＲ16、−ＣＯＮＨＲ16などである。
【００２４】
本発明において、用語リガンドは、特異的標的化の性質（例えば、酵素または遺伝子−指向型（ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｇｅｎｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）酵素プロドラッグ型環境において有用である）を有する基を含む。リガンドは、オリゴペプチド、ビオチン、アビジン、またはストレプトアビジン、ポリマー基、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質であり得る。好ましくは、それは、抗体またはフラグメント、抗原、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはアビジン、ストレプトアビジンおよびビオチンのうちの１つのように特異的結合特性を有する（すなわち、それは、特異的結合対の１つの構成成分である）。あるいは、それは、受動標的化のためにデザインされた基（ポリマー基のような）、または安定性を持続するまたは免疫原性を減少させるようデザインされる基（親水性基のような）であり得る。ＵＳ−Ａ−５８４３９３７は、これらの型の反応性基（ａｃｔｉｖｅｓ）へ複合体化させる好適なリガンドおよびその複合体化を実行するための方法を開示する。
【００２５】
薬学的に活性な化合物において、Ｒ1はＯＲ8以外である。一般的に、最適化されたＤＮＡ結合能のために、一般式ＩおよびＩＡの化合物において、基Ｒ1は基Ａｒおよび／または基Ｒ3は基Ａｒ10である。しばしば、基Ｒ1は互いに連結する２つの芳香族基を含み得る。このような化合物において、Ａｒ基の基Ｒ11の１つ、または基Ｒ12は、場合により、基Ａｒ1である。いくつかの化合物について、３つ以上のこのような芳香族基が連結されることが所望される一方、１つの基Ａｒおよび１つの基Ａｒ10、あるいはさらに好ましくは、１つのＡｒ1が存在することが好ましい。従って、ピロロジヒドロインドール型の基である基Ａｒ1において、基Ｒ12は基−ＣＯＡｒ1以外であるべきである。他の型の基の１つである基Ａｒ1において、置換基Ｒ11またはＲ13が存在しないべきであるか、あるいは、場合により何らかの置換基が存在する場合、このような置換基は基Ａｒ1を含むべきではない。
【００２６】
本発明の１つの実施形態に従って、置換基Ａｒは、基
【００２７】
【化５】
2004529887.tif 000007
【００２８】
である。
【００２９】
このような基Ａｒにおいて、Ｂは、好ましくはＣＲ14である。Ｒ14は、好ましくはＨである。フラン（ＺはＯである）およびチオフェン（Ｚは５である）（Ｚ  ｉｓ  ５）アナログは、ＤＮＡアルキル化ユニットへの複合体化のために生成され、且つ有用なＤＮＡ結合特性を有し得るけれども、Ｚの定義は、好ましくはＮＨである。同様に基Ａｒ1において、基ＢおよびＺは、同じ好ましい基の中から選択される。好ましくは、ｎが少なくとも１であり且つ基Ｒ11の１つが−ＮＨＣＯＡｒ1である。この実施形態においてＡｒ1は、好ましくは、基
【００３０】
【化６】
2004529887.tif 000008
【００３１】
（ここで、ＢおよびＺはＡｒにおける場合と同じである）である。
【００３２】
別の実施形態において、置換基Ａｒは、基
【００３３】
【化７】
2004529887.tif 000009
【００３４】
である。
【００３５】
好ましくは、このような基ＡｒにおけるＲ12は、基−ＣＯＡｒ1（ここで−Ａｒ1は、好ましくは、同じ型の基である）である。あるいは、このような基におけるＲ12は、−ＣＯＡｒ1以外であり、またＲ3は−ＣＯＡｒ10である。
【００３６】
基ＡｒおよびＡｒ1の両方の基において、インドール型基におけるｍは、好ましくはゼロである。
【００３７】
ＡｒおよびＡｒ1において、いくつかの置換基Ｒ11が存在してもよい。最も好ましくは、このような置換基は、Ｃ1-4−アルコキシ基の中から選択される。
【００３８】
式Ｉの化合物において、ＤＮＡアルキル化サブユニットのコアインドール環は、好ましくはベンゼン環において非置換であり（Ｒ2は水素である）、一方、ピロール環は、非置換であってもよい（Ｒ3およびＲ4は、両方とも水素原子であるか、あるいはそれらの一方又は両方が、基−ＣＯＯＲ10、またはＣ1-4−アルキル、好ましくはメチルを表す）。
【００３９】
式Ｉの化合物において、ＸはＨである。化合物のヒドロキシル化は、Ｘが結合する（ａｔｔａｃｈｅｄ）炭素原子でｉｎ  ｓｉｔｕにおいて起こり、それによりＤＮＡアルキル化剤として作用することを可能にする化合物を活性化すると信じられている。
【００４０】
一般式ＩおよびＩＡの化合物の多く、ならびにそのアミン保護前駆体は、新規の化合物であると考えられる。本発明のさらなる局面に従って、一般式ＩＩまたはＩＩＡの新規化合物またはその塩が提供され、
【００４１】
【化８】
2004529887.tif 000010
【００４２】
（ここで、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、上記式ＩおよびＩＡについて定義されるとおりであり；
Ｘ1は、Ｈであり；
Ｙ1は、脱離基であり；
Ｒ18は、Ｈまたはアミン保護基であり；
Ｒ17は、Ｒ8、−ＯＲ8、ＮＨ2またはＡｒ2であり；
Ｒ8は、式ＩおよびＩＡについて上記に定義されるとおりであり；
Ａｒ2は、
【００４３】
【化９】
2004529887.tif 000011
【００４４】
から選択され（ここで、Ｂ1は、ＮまたはＣＲ40であり；
Ｒ40は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ、Ｃ1-4アルキル、−ＮＯ2、−ＮＨ2、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23、−ＮＨＣＯＯＲ23および−ＣＯＯＲ23から選択され；
Ｚ1は、Ｏ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＲ18であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ19は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ  Ｃ1-4アルキル、ＮＯ2、−ＮＨＲ18、−ＮＨＲ23、−ＮＲ232、−Ｎ+Ｒ233、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、  −ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23および−ＣＯＯＲ23から選択され；
ｐは、０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ20は、Ｈ、ＣＯＡｒ3、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ23または−ＣＯＯＲ23であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ21は、ＯＨ、Ｃ1-4アルコキシ  Ｃ1-4アルキル、ＮＯ2、−ＮＨＲ18、−ＮＨＲ23、−ＮＲ232、−Ｎ+Ｒ233、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ22、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ23、および−ＣＯＯＲ23から選択され；
ｑは０、１または２であり；
Ｒ22は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアルキル、Ｃ7-12−アラルキル、リガンドおよびＡｒ3から選択され；
Ｒ23は、Ｃ1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；そして
Ａｒ3は、Ａｒ2と同じ基（ｇｒｏｕｐｓ）から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つのＲ19またはＲ21が基Ａｒ3を含む））。
【００４５】
Ａｒ3は、好ましくは、
【００４６】
【化１０】
2004529887.tif 000012
【００４７】
である。
【００４８】
式ＩＩまたはＩＩＡの化合物（ここで、第一級または第二級アミン窒素原子は保護される）は、一般的に、薬学的組成物において使用される前に脱保護される。アミン保護基の例は、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、第３級ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニル−Ｎ−メトキシ−カルボニル（ＦＭＯＣ）および２−［ビフェニリル−（４）］−プロピル−２−オキシカルボニルである。一般式ＩＩおよびＩＩＡの化合物の特に有用なサービス（ｓｅｒｖｉｃｅｓ）において、Ｒ17は−ＯＲ8であり、そしてＲ8は、Ｒ8ＯＣＯ−に対して異なるアミン保護基である。別の好ましいサービス（ｓｅｒｖｉｃｅｓ）のＲ17は、ＤＲ8以外である。１を超えるこのようなアミン基が分子中で保護される場合、この保護基は同一であってもよいし、異なってもよい。
【００４９】
本発明は、さらに、式ＩまたはＩＡの化合物または塩および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、筋肉内、腹腔内、肺内、経口または、もっとも好ましくは、静脈内投与に適しているかも知れない。この組成物は、例えば放出の制御または遅延のために、好適なマトリックスを含む。この組成物は、溶液、固体（例えば、粉末）、タブレットまたはインプラントの形態をとってもよいし、固体または溶解される形態で式Ｉの化合物を含んでもよい。この化合物は、例えば液体処方物において、微粒子のドラッグデリバリーシステムに組み込まれ得る。好適な賦形剤の具体例としては、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびソルビトール；トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモ、または他の植物に由来するスターチ；セルロース（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、またはナトリウムカルボキシメチルセルロースのような）；ゴム（アラビアおよびトラガントを含む）；およびタンパク質（ゼラチンおよびコラーゲンのような）が挙げられる。所望されるならば、崩壊剤または可溶化剤（架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、およびアルギン酸またはその塩（アルギン酸ナトリウムのような）のような）が添加されてもよい。固体組成物は、粉末およびゲルの形態をとってもよいが、より便利に、例えばタブレット、カシェ剤またはカプセル（スパンスルを含む）のような形成型（ｆｏｒｍｅｄ  ｔｙｐｅ）をとる。あるいは、リポソーム、ナノソーム、およびナノ粒子を含むより特殊化された型の処方物である。
【００５０】
式ＩおよびＩＡの化合物は、Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ  １９９７，  ｏｐ．  ｃｉｔによって要約されるものに類似する技術を用いて、合成され得る。一連の工程においてＤＮＡアルキル化サブユニットを形成し、そしてジヒドロ−ピロールまたはテトラハイドロキノリン、場合によっては、（Ｃ）環の窒素原子を介して、分子の残りにこれに結合させるのが便利である。ＤＮＡアルキル化サブユニットは、Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  １９９７  ｏｐ．  ｃｉｔ．に記載のように合成されるＤＮＡ結合サブユニット（例えば、その文献に記載されるＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩサブユニット）へ複合体化され得る。ＤＮＡ結合サブユニットは、Ａｒ、Ａｒ1およびＡｒ10を含む基である。
【００５１】
本発明のさらなる局面に従って、式ＩＶまたはＩＶＡの化合物
【００５２】
【化１１】
2004529887.tif 000013
【００５３】
（ここで、Ｘ2、Ｒ2およびＲ4は上記に定義されるとおりであり；
Ｒ37は、Ｒ3と同じ基から選択され；
Ｙ2は、脱離基あるいはヒドロキシルまたは保護ヒドロキシル基であり；そして
Ｒ26は、アミン保護基である）；
が一般式Ｖ
Ｒ27ＣＯＹ3            Ｖ
（ここで、Ｒ27は、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＡｒ4から選択され；
Ａｒ4は
【００５４】
【化１２】
2004529887.tif 000014
【００５５】
から選択され、ここでＢ2はＮまたはＣＲ32であり；
Ｚ2はＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＲ33であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ28は、Ｃ1-4−アルコキシ、Ｃ1-4−アルキル、−ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ33、−ＮＲ362、−Ｎ+Ｒ353−、−ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ35および−ＣＯＯＲ35から選択され；
ｒは０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ29は、アミン保護基であり；
Ｒ30は、アミン保護基、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ35または−ＣＯＡｒ5であり；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ31は、Ｃ1-4−アルコキシ、Ｃ1-4−アルキル、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ33、−ＮＲ362、−Ｎ+Ｒ363−、ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ35および−ＣＯＯＲ35から選択され；
ｓは０、１または２であり；
Ｒ32は、Ｈ、Ｃ1-4−アルコキシ、Ｃ1-4−アルキル、ＮＯ2、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ34、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ35、−ＮＨＣＯＯＲ35および−ＣＯＯＲ35から選択され；
各（ｔｈｅ  ｏｒ  ｅａｃｈ）Ｒ33は、アミン保護基であり；
Ｒ34は、Ａｒ5、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ｒ35は、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ36は、Ｃ1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＨから選択され、
Ａｒ5は、Ａｒ4と同じ基から選択され；そして
Ｙ3は脱離基である（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ28またはＲ31が基Ａｒ5を含む））、
の化合物と反応する新規な合成方法が提供される。
【００５６】
Ａｒ5は、好ましくは、
【００５７】
【化１３】
2004529887.tif 000015
【００５８】
である。
【００５９】
Ｙ3は、例えば、Ｙについて上記に列挙したような好ましい脱離基の中から選択される。最も好適には、Ｙ3の定義はＣｌである。あるいは、基Ｙ3はＯＨであってもよい。この場合、カップリング反応において補助するカップリング剤を含む必要があるかもしれない。
【００６０】
一般式ＩＶまたはＩＶＡの化合物とカルボン酸または一般式Ｖの誘導体との間の反応は、このようなカップリングを起こさせる条件下において、行われる。このような条件は、ペプチド結合の形成のために一般的に使用される（例えば、ペプチド合成方法において使用されるような）条件に似ている。
【００６１】
Ｙ2は、ヒドロキシ基または脱離基（これは、Ｙと同じであり得るか、または続く工程においてＹへ転換され得る）である。
【００６２】
この生成物において、Ｒ3がＲ37に対して異なる基である場合、Ｒ37基は引き続き誘導体化され、所望の基Ｒ3が生成される。これは、しばしば、例えばＲ3が基Ａｒ10または−ＣＯＮＨＲ9である場合に、当てはまる。この型の化合物を生産するために、基Ｒ37は、例えば、−ＣＯＯＨまたは−ＣＯＯＲ10であり、そして、必要に応じて基−ＣＯＯＲ10の加水分解／脱保護の後に、適切なアミン化合物（Ｒ9ＮＨ2またはＡｒ10Ｈ）と共に、必要に応じてカップリング剤の存在下において、反応され、アミン連結化合物を生産する。
【００６３】
カップリングプロセスの後、１つ以上の保護アミン基を脱保護することが所望され得る。任意のこのようなアミン基を介して、例えば他の誘導体化剤（ｄｅｒｉｖａｔｉｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）（グリコシル化合物、ペプチド、ポリマーなど）を用いて、更なる反応が所望される場合、続く反応が起こるもののみを脱保護し、一方他のアミン基を保護される形態に維持することが所望される。適切なアミン保護基の選択ならびに保護および脱保護のプロトコルの選択は、ペプチド化学において一般的に利用される技術を用いてなされる。
【００６４】
一般式ＩＶまたはＩＶＡの中間体のいくつかが新規の化合物であるかもしれないと考えられる。本発明の更なる局面に従って、一般式ＩＩＩまたはＩＩＩＡの新規化合物が提供される
【００６５】
【化１４】
2004529887.tif 000016
【００６６】
（ここで、Ｒ2およびＲ4は、上記式ＩおよびＩＡについて定義されるとおりであり、
Ｒ38は、Ｒ3と同じ基から選択され；
Ｘ2は、Ｈであり；
Ｙ2は、脱離基あるいはヒドロキシルまたは保護ヒドロキシル基であり；そして
Ｒ24およびＲ25は、それぞれＨまたはアミン保護基である）。
【００６７】
一般式ＩＩＩおよびＩＩＩＡの化合物において、カルボン酸誘導体と反応する準備のできた化合物（例えば一般式Ｖ）において、Ｒ24はＨであり、一方Ｒ25はアミン保護基であるべきである。このような化合物についての前駆体は、保護形態において両環窒素原子を有し得、すなわちここで、Ｒ25およびＲ24は保護基を表す。このような化合物において、化合物が窒素原子のただ１つにおいて誘導体化し得ることが所望され、好ましくは、Ｒ24およびＲ25は異なる保護基を表す。
【００６８】
式ＩＩＩおよびＩＩＩＡの化合物において、基Ｙ2は、脱離基Ｙについて上記に定義されたものの中から選択され得る。基Ｙ2の性質は、式ＩＶまたはＩＶＡの化合物が、場合によって、次の工程において反応するはずである試薬の性質を考慮して、選択されるべきである。脱離基Ｙ2の好適な例は、Ｙについて上記に列挙したようなものから選択される。
【００６９】
式ＩＩＩの化合物は、アミン基の置換基に対してオルト位の炭素原子において脱離基置換基Ｙ4、およびトランス２−プロペン−１−イル基−ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨＹ5（ここで、Ｙ5は水素またはＹ2と同じであるか、またはアニリン誘導体が環化条件下において反応する次の工程においてＹ2へ転換される基である）であるＮ−置換基を有するアニリン化合物を出発物質として使用する予備工程において調製され、ジヒドロピロール環を形成し得る。好ましくは、環化反応において、ハロゲンＹ5（＝Ｙ2）置換基が保持される。基Ｙ4は、ラジカル脱離基（ハロゲン（好ましくは、ＩまたはＢｒ）のような）であるべきである。Ｙ5が水素である環化反応を実行するのに適するラジカルは、２，２，６，６−テトラメチルピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）のようなニトロキシ化合物である。Ｙ5がラジカル脱離基（ｇＹ2）である場合、反応は、アゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）から誘導されるラジカルの存在下において行われ得る。この工程においてＹ5は脱離しない。ラジカル環化工程に好適な触媒は、トリブチルスズハイドライドのようなスズハイドライド化合物である。この合成経路は、実施例１および３において示される。
【００７０】
一般式ＩＩＩＡの化合物は、環化条件下において、アミン基に対してオルト位であるラジカル脱離基Ｙ4置換基および２−プロペン−１−イル基であるＮ−置換基（好ましくは、トリアルキルスズラジカル）を有するアニリン化合物の環化によって形成され、中間体ジヒドロキノノン（ｄｉｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｏｎｅ）を形成し得る。環化反応は、適切な触媒（例えば、パラジウム複合体（テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロライドまたはパラジウム（ＩＩ）アセテートのような）である）の存在下において行われる。このジヒドロキノニン中間体は、例えば過酸化試薬を用いて、酸化され、エポキシドであるさらなる中間体を形成する。このエポキシド中間体は、適切な選択的還元剤（ジアルキルアルミニウムハイドライドのような）を用いて還元され、対応するアルコール（これは、例えば、四塩化炭素／トリフェニルホスフィンを用いて、引き続きハロゲン化される）を生産する。この反応は、実施例２および４において示される。
【００７１】
このような反応のための出発化合物は、一般式ＶＩによって表され得る、
【００７２】
【化１５】
2004529887.tif 000017
【００７３】
（ここで、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ26およびＸ2は、式ＩＶの化合物における場合と同じであり；
Ｒ39は、Ｒ3と同じ基から選択され；
Ｒ40は、Ｒ26と異なるアミン保護基であり；
Ｚ1およびＺ2のうち一方がＹ5であり且つ他方がＨであり；
Ｙ5は、水素であるか、またはＹ2と同じまたは異なる脱離基であり；そして
Ｙ4がラジカル脱離基である）。
【００７４】
Ｙ4は、好ましくは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩから選択される。
【００７５】
一般式ＶＩの化合物は、ｃｉｓまたはｔｒａｎｓ−１，３−ジハロプロプ−２−エン化合物を用いて、対応するアミリン（ａｍｉｌｉｎｅ）誘導体のナトリウム塩のアルキル化によって生産され得る。このｃｉｓ出発物質は、Ｚ2がＹ5である一般式ＩＶの化合物を生産し、ｔｒａｎｓ出発物質は、Ｚ1がＹ5である生成物ＶＩを生産する。アリル試薬は、Ｙ5が水素である化合物ＶＩを生産する。
【００７６】
一般式Ｖのカルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  １９９７  ｏｐ．  ｃｉｔにおいて一般的に記載される方法を用いて合成され得、例えば、ＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩは、Ｕｍｅｚａｗａ合成、Ｒｅｅｓ−Ｍｏｏｄｙ合成、Ｍａｇｎｕｓ合成、Ｃａｖａ−Ｒａｗａｌ合成、Ｂｏｇｅｒ−Ｃｏｌｅｍａｎ合成、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ合成、Ｍａｒｔｉｎ合成、Ｔｏｊｏ合成を用いて合成され得る。インドール−２−カルボン酸は、市販されている。デュオカルマイシンのＤＮＡ結合サブユニットの他のアナログ、およびその反応性カルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ，  ｏｐ．  ｃｉｔ．およびＵＳ−Ａ−５８４３９３７によって記載される。
【００７７】
一般式ＩおよびＩＩの化合物の２つの具体例は、
【００７８】
【化１６】
2004529887.tif 000018
【００７９】
である。
【００８０】
一般式ＩＡおよびＩＩＡの化合物の２つの具体例は：
【００８１】
【化１７】
2004529887.tif 000019
【００８２】
である。
【００８３】
他の例は、化合物ＶＩＩおよびＸのメチルエステルよりもむしろ、エチルエステルである。
【００８４】
本発明は、正常な状態の場合に細胞毒性効果をほとんどまたは全く有さないけれども、ＣＹＰ酵素による酸化またはヒドロキシル化によって活性化されるときに高い細胞毒性を示す（すなわち、かなり増強された細胞毒性を有する）ある範囲のプロドラッグの創作に関する。これは、自己標的化ドラッグデリバリーシステム（ｓｅｌｆ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ）（ここで、非毒性（または無視してもよい毒性）化合物が患者へ投与（例えば、全身的な方法において）され得、その後その化合物は、腫瘍細胞の部位において活性化され（腫瘍内活性化）、腫瘍細胞を殺すよう働く高度に細胞毒性を示す化合物を形成する）を提供する。ＣＹＰアイソフォームが正常な細胞によって発現されないという事実は、この化合物の活性化が腫瘍細胞の部位においてのみ起こり、それにより腫瘍細胞のみが影響を受け、それゆえ自己標的化システムが提供されることを意味する。
【００８５】
本発明のプロドラッグは、体内のどの部位においても腫瘍の処置において有用であるという明らかな利点を有し、このことは、転移を受けた腫瘍（これは、普通、部位特異的な治療に影響されにくい）でさえも処置され得ることを意味している。
【００８６】
このプロドラッグは、抗腫瘍プロドラッグであり得る。腫瘍の例としては、ガン（悪性新生物）および他の新生物（例えば、良性腫瘍）が挙げられる。このプロドラッグは、シトクロムＰ４５０のアイソフォームによるヒドロキシル化によって活性化され得る。
【００８７】
プロドラッグの選択的ヒドロキシル化およびそれによる活性化をもたらすための腫瘍細胞内のＣＹＰ発現に頼る様々な通常の手順において、腫瘍組織と正常組織との間の選択性は、２つの部分手順において高められる。従って、（ａ）シトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子を有するウイルスベクターで腫瘍細胞を感染させること（ここで、腫瘍細胞によるシトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子の発現は、腫瘍内において、化学療法剤のその細胞毒性型への酵素的変換を可能にし、これによって、腫瘍細胞は、プロドラッグ化学療法剤に対して選択的に感受性を示す（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）ようになる）（ｂ）腫瘍細胞をプロドラッグ化学療法剤と接触させること、それにより腫瘍細胞を選択的に殺す。
【００８８】
これらのプロドラッグは、ピロロジヒドロインドール（一般式Ｉ）またはピロロテトラヒドロキノリン（一般式ＩＡ）誘導体である。それらの抗腫瘍プロドラッグとしての具体的な使用は、今までに、示唆も開示もされておらず、それらが活性化されヒドロキシル化された形態を有するプロドラッグであるという示唆も全くなされていない。式（Ｉ）の化合物が既に同定および製造されていた場合でも、それらは、その低い（または無視してもよい）細胞毒性ゆえに、抗腫瘍剤として認められていなかった。従って、本発明のプロドラッグの腫瘍内ヒドロキシル化は、驚くべき予測不可能な有効性をそれらに与える。
【００８９】
ヒドロキシル化された型のプロドラッグはＤＮＡの副溝（ｍｉｎｏｒ  ｇｒｏｏｖｅ）において結合し且つＮ３位でプリン塩基をアルキル化する強力なＤＮＡアルキル化剤である。それ自体では、それらは、正確な生物学的作用メカニズムが知られていないが、ＤＮＡのテンプレートおよび他の機能の崩壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）を伴う強力な細胞毒性薬剤である。ＤＮＡのテンプレート機能の全体的な阻害は、体内の全ての分裂する細胞に対して作用し、一般的に細胞毒性を示し、そして治療セッティング（ｓｅｔｔｉｎｇ）において受け入れ難い副作用を導くであろう。しかしながら、特定のアイソフォームのＰ４５０を過剰発現する腫瘍細胞におけるヒドロキシル化型の標的化された生産は、それらの細胞においてのみ特異的な細胞毒性効果を導くであろう。非−ヒドロキシル化形態は、実質的に、全ての細胞に対して非−毒性である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００９０】
以下の実施例は、本発明を説明する：
実施例１
一般式Ｉの１つの化合物の合成は、以下の反応スキームに従って行われる。
【００９１】
【化１８】
2004529887.tif 000020
【００９２】
１．１    １−ベンゾイル−５−ニトロインドール
ＣＨ2Ｃｌ2（１ｍＬ）中の５−ニトロインドール（１００ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）をベンゾイルクロライド（８６ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、１当量）および４−ジメチルアミノピリジン（７４ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、１当量を用いて処理する。この混合物を室温において１時間攪拌し、ＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍＬ）を用いて希釈し、ＨＣｌ（１Ｍ、２×１０ｍＬ）および水（１×１０ｍＬ）を用いて洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、次いで濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％  酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物を得る。
【００９３】
１．２    ２−アミノ−１−ベンゾイルインドール
酢酸エチル（２ｍＬ）中の１−ベンゾイル−５−ニトロインドール１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を１０％  Ｐｄ／Ｃ（１０ｍｇ）で処理し、水素の雰囲気下において、室温にて、４時間攪拌する。生じる溶液をセライトを通して濾過し、次いで濃縮する。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物を得る。
【００９４】
１．３    ５−アミノ−１−ベンゾイル−４−ヨードインドール
テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１ｍＬ）中における５−アミノ−１−ベンゾイルインドール（１００ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）をＮ−ヨードスクシンイミド（１０３ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ、１．１当量）および４−トルエンスルホン酸（１６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ、０．２当量）で処理し、室温（ＲＴ）にて、１６時間攪拌する。この溶液を濃縮し、酢酸エチル（１０ｍＬ）中で再溶解する。有機層を、水（１×１０ｍＬ）、１Ｍ  ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、および水（１×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに濃縮する。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物を得る。
【００９５】
１．４    １−ベンゾイル−５−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−４−ヨードインドール
５−アミノ−１−ベンゾイル−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）をＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中で攪拌し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボネート（８９ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ、１．５当量）、トリエチルアミン（５７μＬ、０．４１ｍｍｏｌ、１．５当量）および４−ジメチルアミノピリジン（４ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ、０．１当量）で処理する。ＲＴにて１６時間後、減圧下において溶媒を取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物を得る。
【００９６】
１．５    １−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール
１−ベンゾイル−５−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で攪拌し、次いで水素化ナトリウム（２６ｍｇ、０．６６  ｍｍｏｌ、オイル中６０％ディスパージョン、３当量）を添加する。１５ｍｉｎ後、懸濁液をＥ／Ｚ−１，３−ジクロロプロペン（６１μＬ、０．６６ｍｍｏｌ、３当量）で処理し、生じる溶液をＲＴにおいて１６ｈ攪拌した。この溶液を濃縮し、そして水（１０ｍＬ）を添加する。水溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、そして濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）の後、生成物を得た。
【００９７】
１．６    １−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール
１−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ポリ（メチルヒドロシロキサン）（２００μＬ）、ビス（トリブチルスズ）オキサイド（１９μＬ、０．０４ｍｍｏｌ、０．２当量）およびアゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、８０℃にて、Ｎ2下において、４ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物を得る。
【００９８】
１．７    ５−メトキシインドール拡張剤（ｅｘｔｅｎｄｅｄ  ａｇｅｎｔ）。１−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール
１−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール（１００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を塩酸の酢酸エチル溶液（４Ｍ、５００μＬ）で処理する。３０ｍｉｎ後、溶媒を濃縮し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１ｍＬ）を添加する。この溶液を１−［（３−ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジミド（ＥＤＣ）（１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）および５−メトキシインドール−２−カルボン酸（１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）で処理する。１６ｈ後、溶媒を減圧下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。６−ベンゾイル保護基をメタノール中のナトリウムメトキシドによって取り除き、次いで溶媒の除去を行ってもよい。
【００９９】
実施例２
以下の実施例は、Ｒ1がＯＲ8であり且つＲ8がｔＢｕである一般式１Ａの化合物の合成を説明する。上記の工程１．７に類似する工程による拡張（ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ）が、式ＩＡ（ここで、Ｒ１がＡｒであり、必要に応じてそのインドール環の窒素原子において引き続き脱保護される）のさらなる化合物を形成するのに適している。
【０１００】
【化１９】
2004529887.tif 000021
【０１０１】
２．１    １−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール
１−ベンゾイル−５−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で攪拌し、水素化ナトリウム（２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、オイル中６０％ディスパージョン、３当量）を添加する。１５ｍｉｎ後、懸濁液をＥ／Ｚ−１−トリブチルスタンニル−３−ブロモプロペン（２７０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、３当量）で処理し（Ｂｏｇｅｒ，Ｄ．Ｌ．；ＭｃＫｉｅ，Ｊ．Ａ．；Ｂｏｙｃｅ，Ｃ．Ｗ．Ｓｙｎｌｅｔｔ  １９９７，５１５−５１６）、そして生じる溶液をＲＴにおいて、１６ｈ攪拌する。この溶液を濃縮し、そして水（１０ｍＬ）を添加する。この水溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を併せ、乾燥し、次いで濃縮する。クロマトグラフィー（シリカゲル、２    １５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）の後、生成物を得た。
【０１０２】
２．２    １，２−ジヒドロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−５，６−（９−ベンゾイルピロロ）キノリン
１−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３２ｍｇ、０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、５０℃にて、Ｎ2下において、２ｈ攪拌する。次いで、この溶媒を真空下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。
【０１０３】
２．３    ３，４−エポキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイルピロロ）キノリン
１，２−ジヒドロ−ｌ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−５，６−（９−ベンゾイルピロロ）キノリン（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）および３−クロロペルオキシ安息香酸（６８ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ、１．５当量）をＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中において、−７８℃〜−３０℃にて、Ｎ2下において、２ｈ攪拌する。次いで、この溶媒を真空下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。
【０１０４】
２．４    ４−ヒドロキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイル）ピロロキノリン
３，４−エポキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイルピロロ）キノリン（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をジイソブチルアルミニウムハイドライド（Ｄｉｂａｌ−Ｈ）（５５ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ、１．５当量）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液で、−７８℃〜−３０℃にて、Ｎ2下において、処理した。１ｈ後、水（２ｍＬ）の添加によって反応液をクエンチし、次いで生じる溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、そして濃縮する。この溶媒を真空下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。
【０１０５】
２．５    ４−クロロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイル）ピロロキノリン
ＲＴにて、ＰＰｈ3（１３７ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、２当量）およびＣＣｌ4（２００ｍＬ）のＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）調製溶液を用いて、ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−（９−ベンゾイル）ピロロキノリン（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を処理する。４ｈ後、この溶媒を真空下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。
【０１０６】
実施例３
【０１０７】
【化２０】
2004529887.tif 000022
【０１０８】
３．１    エチル  １−ベンゾイル−５−ニトロインドール−２−カルボキシレート（３．２）
ＣＨ2Ｃｌ2（３０ｍｌ）中のエチル５−ニトロインドール−２−カルボキシレート（３．１）（１．５ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）をベンゾイルクロライド（１．１９ｍｌ、１０．２６ｍｍｏｌ）、Ｅｔ3Ｎ（８９１μｌ、６．４１ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（７８３ｍｇ、６．４１ｍｍｏｌ）で処理した。この混合物を１６ｈ攪拌した。１０％ＮａＨＣＯ3（１０ｍｌ）およびＣＨ2Ｃｌ2（１０ｍｌ）を添加し、次いで有機層を分離した。水層をＣＨ2Ｃｌ2（３×５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ2Ｏ（１０ｍｌ）、５％ＨＣｌ（１０ｍｌ）およびＨ2Ｏ（１０ｍｌ）で洗浄した。この溶液を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、次いで濃縮した。この残渣をＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ  １：９から結晶化し、１．８５ｇ（８７％）の３．２を黄色粉末として得た：1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ  ８．６６（ｄ，１Ｈ），８．２５（ｄ，１Ｈ），７．８０（ｄ，１Ｈ），７．６−７．７２（ｍ，３Ｈ），７．４８（ｍ，３Ｈ），４．００（ｑ，２Ｈ），１．１０（ｔ，３Ｈ）。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ３３９（Ｍ＋Ｈ+予測（ｅｘｐｅｃｔｅｄ）３３９）。
【０１０９】
３．２  エチル  ５−アミノ−１−ベンゾイルインドール−２−カルボキシレート（３．３）
３．２（１．８６ｇ、５．５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（４４０ｍｇ）の乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液を、Ｈ2下において、１６ｈｒ攪拌した。生じた混合物を、ＥｔＯＡｃ（４０ｍｌ）で洗浄したセライトを通して濾過し、そしてその濾液を濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、ヘキサン中の０〜４０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、３．３（１．６３ｇ、９６％）を明黄色オイルとして得た。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ  ７．４０−７．７２（ｍ，６Ｈ），７．１８（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ），６．８２（ｄｄ，１Ｈ），３．９２（ｑ，２Ｈ），３．６８（ｂｒ  ｓ，２Ｈ），１．０６（ｔ，３Ｈ）；ＦＡＢＭＳ：（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ３０８（Ｍ＋Ｈ+予測３０８）。
【０１１０】
３．３  エチル  ５−アミノ−１−ベンゾイル−４−ヨードインドール−２−カルボキシレート（３．４）
ＴＨＦ（７５ｍＬ）中の５−アミノ−１−ベンゾイルインドール（１．６３ｇ、５．２９ｍｍｏｌ）をＮ−ヨードスクシンイミド（１．８９ｇ、８．４６ｍｍｏｌ）および４−トルエンスルホン酸（３６４ｍｇ、２．１２ｍｍｏｌ）で処理し、ＲＴにて、１６時間攪拌した。この溶液を濃縮し、酢酸エチル（１００ｍＬ）中に再溶解した。有機層を水（１×１００ｍＬ）、１Ｍ  ＨＣｌ（２×１００ｍＬ）、および水（１×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、次いで濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（１．１７ｇ、５１％）を明黄色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δｐｐｍ  ７．３０−７．７０（ｍ，６Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），６．８０（ｄ，１Ｈ），４．０５（ｓ，２Ｈ），３．８５（ｑ，２Ｈ），１．０（ｔ，３Ｈ）ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ４３４（Ｍ＋Ｈ+予測４３４），４５７（Ｍ＋Ｎａ+予測４５７）。
【０１１１】
３．４    エチル  １−ベンゾイル−５−（Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−４−ヨードインドール−２−カルボキシレート（３．５）
ジオキサン（１００ｍＬ）中の３．４（１．１７ｇ、２．７０ｍｍｏｌ）、（Ｂｏｃ）2Ｏ（９．４０ｇ、４３ｍｍｏｌ）およびＥｔ3Ｎ（３７５μＬ、２．７０ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃にて、Ｎ2下において、４８ｈ加熱した。完了時に、この溶液を冷却し、濃縮し、次いでフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、ヘキサン中の０−２０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、３．５（１．３ｇ、９０％）を黄色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ．Ｎａｌ）５３５（Ｍ＋Ｈ+予測５３５）。
【０１１２】
３．５  エチル  １−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール（３．６）
１−ベンゾイル−５−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−４−ヨードインドール（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で攪拌し、水素化ナトリウム（２６ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ、オイル中６０％ディスパージョン、３当量）を添加した。１５ｍｉｎ後、懸濁液をＥ／Ｚ−１，３−ジクロロプロペン（６１μＬ、０．６６ｍｍｏｌ、３当量）で処理し、生じた溶液をＲＴにて、１６ｈ攪拌した。この溶液を濃縮し、水（１０ｍＬ）を添加した。この水溶液を酢酸エチル（３’１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、次いで濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）の後に、（３．６）生成物を黄色オイル（１２５ｍｇ、９４％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ６０９（Ｍ＋Ｈ+予測６０９）。
【０１１３】
３．６    エチル  ６−ベンゾイル−１−（クロロメチル）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（３．７）
化合物３．６（１００ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、およびＡＩＢＮ（６ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、８０℃にて、Ｎ2下において攪拌した。Ｂｕ3ＳｎＨ（５１μＬ、０．１９ｍｍｏｌ）を、４分割で、１ｈかけて添加した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2  １０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（３．９）（７２ｍｇ、７８％）をオイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（Ｎａｌ／ＮＢＡ）ｍ／ｚ４８３（Ｍ＋Ｈ+予測４８３）。
【０１１４】
３．７    エチル  １−（クロロメチル）−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール−７−カルボキシレート（３．８）
化合物３．７（１００ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を塩酸の酢酸エチル（４Ｍ、５００μＬ）溶液で処理した。３０ｍｉｎ後、溶媒を濃縮し、ＤＭＦ（１ｍＬ）を添加した。この溶液をＥＤＣ（１２０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）および５−メトキシインドール−２−カルボン酸（１２０ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、溶媒を減圧下において取り除き、残渣（化合物３．８の６Ｎ−ベンゾイル保護された前駆体）をＣＨ3ＯＨ（１ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＮａＯＣＨ3のＣＨ3ＯＨ（２Ｍ、１００μＬ）溶液を添加し、さらにこの溶液を１０分間攪拌した。溶媒を取り除き、クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって生成物（３．８）（１００ｍｇ、８６％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）  ｍ／ｚ５５７（Ｍ＋Ｈ+予測５５７）。
実施例４
【０１１５】
【化２１】
2004529887.tif 000023
【０１１６】
４．１    エチル  １−ベンゾイル−５−［Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）］アミノ−４−ヨードインドール−７−カルボキシレート（４．１）
エチル  １−ベンゾイル−５−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）アミノ−４−ヨードインドール（３．５、実施例３．１−３．４に記載されるように合成した）（１００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍＬ）中で攪拌し、水素化ナトリウム（２１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、オイル中６０％ディスパージョン、３当量）を添加した。１５ｍｉｎ後、この懸濁液をＥ／Ｚ−１−トリブチルスタンニル−３−ブロモプロペン（２２１ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ、３当量）で処理し、次いで生じた溶液をＲＴにて１６ｈ攪拌した。この溶液を濃縮し、水（１０ｍＬ）を添加した、水溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、次いで濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）の後に、生成物を無色固体（１３２ｍｇ、９２％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ７９２（Ｍ＋Ｈ+予測７９２）。
【０１１７】
４．２    ５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−２，４−ジヒドロキノリン（４．２）
化合物４．１（１００ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３２ｍｇ、０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、５０℃にて、Ｎ2下において、２ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（５０ｍｇ、９４％）を黄色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ４４７（Ｍ＋Ｈ+予測４４７）。
【０１１８】
４．３    ５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−３，４−エポキシ−−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン（４．３）
化合物４．２（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびＭＣＰＢＡ（５７ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ，１．５当量）を、ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中で−３０℃にて、Ｎ2下において、２ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2，１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（７０ｍｇ、６９％）をオイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ４６３（Ｍ＋Ｈ+予測４６３）。
【０１１９】
４．４    ５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン（４．４）
化合物４．３（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ｍＬ）中のＤｉｂａｌ−Ｈ（４６ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ，１．５当量）で、−３０℃にて、Ｎ2下において処理した。１ｈ後、水（２ｍＬ）の添加によって、反応をクエンチし、生じた溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、次いで濃縮した。溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、アルコール（８５ｍｇ、８３％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ４６５（Ｍ＋Ｈ+予測４６５）。
【０１２０】
４．５    ５，６−（９−ベンゾイル−８−（エチルオキシ）カルボニルピロロ）−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン（４．５）
ＲＴにて、ＰＰｈ3（１１６ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、２当量）およびＣＣｌ4（２００μＬ）のＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中の調製溶液を用いて、ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）中の化合物４．４（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を処理した。２４ｈ後、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、標的化合物をオイル（９５ｍｇ、９０％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）ｍ／ｚ４８４（Ｍ＋Ｈ+予測４８４）。この化合物をｔＢＯＣ基の除去によって脱保護し、ＤＮＡ結合サブユニットをｔＣｔｒａヒドロキノリン環の窒素原子へ複合体化させ、そしてインドール窒素を実施例３．７の工程に類似する工程によって引き続き脱保護してもよい。
【０１２１】
実施例５  エチル  １−（クロロメチル）−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２ｅ］インドール−７−カルボキシレート（３．８）の生物学的試験
物質および方法
５．１  化合物とミクロソームのインキュベーション混合物
ＮＡＤＰＨ補充したラット肝ミクロソームを用いて、ＣＹＰ酵素による試験化合物（実施例３において合成された）活性化を行った。インキュベーション混合物は、ミクロソームタンパク質（１ｍｇ／ｍｌ）、還元−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰＨ、１０ｍＭ）およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１００ｍＭ）を含んでいた。ＤＭＳＯ（２０μｌ）中の試験化合物（０．０１−１００μＭ  最終濃度）を、ミクロソームインキュベーション混合物（０．５ｍｌ）へ添加し、そして６０分間、３７Ｃにてインキュベートした。コントロールのインキュベート物は、０時間にて終了させた試験化合物およびミクロソームインキュベーション混合物を含んでいた。全てのインキュベーションは、等量の氷冷アセトニトリルの添加により終了され、次いで３分間微量遠心された（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅｄ）。この上清のアリコートを培養中の細胞へ添加した。
【０１２２】
５．２  細胞培養に基づく細胞毒性測定
１０％透析ＦＢＳおよびＧ４１８（４００μｇ／ｍｌ）を補充したＭＥＭ中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を増殖させた。全ての細胞を、９６ウェルプレート中において、１０００細胞／ウェルの開始密度にて播種し、３７℃にて、２４時間インキュベートした。次いで、試験化合物／ミクロソーム／アセトニトリル上清のアリコート（０．１ｍｌ）をＣＨＯ細胞へ添加した。次いで、細胞を２４時間、３７℃、５％ＣＯ2にてインキュベートした。この時間の後に、ＭＴＴ（５０μｌ；  ２ｍｇ／ｍｌ  ストック溶液）を各ウェルへ添加し、細胞をさらに４時間インキュベートした。この間、生存能のある細胞（ｖｉａｂｌｅ  ｃｅｌｌｓ）のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによって、ＭＴＴ（水素アクセプターテトラゾリウム塩）をホルマザン色素（ｈｏｒｍａｚａｎ  ｄｙｅ）まで還元した。培地を細胞から吸引し、ＤＭＳＯ（１００μｌ／ウェル）を添加し、着色したホルマザン色素を可溶化した。次いで、９６−ウェルプレート中のホルマザン色素の吸光度を５５０ｎｍにて測定した。ＣＨＯ細胞増殖の休止（ａｒｒｅｓｔ）に及ぼす試験化合物によるミクロソーム活性化の影響は、ミクロソームインキュベーションを伴うまたは伴わないＩＣ50（細胞増殖を５０％だけ阻害する濃度）を比較することによって測定され得た。
【０１２３】
【表１】
2004529887.tif 000024
【０１２４】
培養中のチャイニーズハムスター卵巣細胞の生存に及ぼす化合物３．８およびその代謝（活性化）産物の影響。細胞は、化合物３．８とＮＡＤＰＨ補強されたラット肝ミクロソームとの反応混合物からの上清と共に、２４時間インキュベートされた。ＩＣ50は、細胞増殖を５０％だけ阻害するために必要とされる薬物の濃度を表す。値は、３回の実験についての平均±ｓｄとして表される。代謝の全詳細についての方法を参照のこと。
ＡＦ＝活性ファクター（すなわち、±化合物３．８活性化について得られるＩＣ50細胞毒性値の比）
＊は、ｐ＞０．０５における有意性（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）を表す。
【国際公開パンフレット】
2004529887.tif 000052
2004529887.tif 000053
2004529887.tif 000054
2004529887.tif 000055
2004529887.tif 000056
2004529887.tif 000057
2004529887.tif 000058
2004529887.tif 000059
2004529887.tif 000060
2004529887.tif 000061
2004529887.tif 000062
2004529887.tif 000063
2004529887.tif 000064
2004529887.tif 000065
2004529887.tif 000066
2004529887.tif 000067
2004529887.tif 000068
2004529887.tif 000069
2004529887.tif 000070
2004529887.tif 000071
2004529887.tif 000072
2004529887.tif 000073
2004529887.tif 000074
2004529887.tif 000075
2004529887.tif 000076
2004529887.tif 000077
2004529887.tif 000078
2004529887.tif 000079
2004529887.tif 000080
2004529887.tif 000081
2004529887.tif 000082
2004529887.tif 000083
2004529887.tif 000084
2004529887.tif 000085
2004529887.tif 000086
2004529887.tif 000087
2004529887.tif 000088
2004529887.tif 000089
2004529887.tif 000090
2004529887.tif 000091
2004529887.tif 000092
2004529887.tif 000093
2004529887.tif 000094
2004529887.tif 000095
2004529887.tif 000096
2004529887.tif 000097
2004529887.tif 000098
2004529887.tif 000099
【国際調査報告】
2004529887.tif 000100
2004529887.tif 000101
2004529887.tif 000102
2004529887.tif 000103