(57)【要約】本発明は、次式Ｉ：【化１】2004511472.tif 000012の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類、それらの製造、それらの医薬品としての用途並びにそれ含む製薬組成物に関する。式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類は、例えば、ビトロネクチン受容体を阻害させることにより影響され得る疾病、例えば骨粗鬆症のような骨の疾病の治療又は予防に使用できる有効な薬理学的に活性な化合物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式Ｉ：
【化１】
2004511472.tif 000010
の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類。
【請求項２】
次式ＩＩｃ：
【化２】
2004511472.tif 000011
の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの塩酸塩。
【請求項３】
請求項１に記載の式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩と製薬上許容できるキャリアーを含む製薬組成物。
【請求項４】
請求項２に記載の式ＩＩｃの化合物と製薬上許容できるキャリアーを含む製薬組成物。
【請求項５】
（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸又はその塩をイソプロピルアルコールでエステル化することからなる、請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物又はその生理学的に許容できる塩の製造方法。
【請求項６】
式Ｉの化合物と酸から塩を形成し又は式Ｉの化合物のその他の塩における陰イオンを交換することからなる、請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物の生理学的に許容できる塩の製造方法。
【請求項７】
ビトロネクチン受容体の拮抗薬として使用するための請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物又はその生理学的に許容できる塩。
【請求項８】
骨吸収の阻害剤として使用するため又は骨粗鬆症の治療若しくは予防のための請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物又はその生理学的に許容できる塩。
【請求項９】
腫瘍の成長又は腫瘍の転移の阻害剤として使用するための請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物又はその生理学的に許容できる塩。
【請求項１０】
抗炎症剤として使用するため又は心臓血管障害、再狭窄、動脈硬化、腎症、網膜症又は年齢と関係した黄斑変性の治療若しくは予防のための請求項１及び（又は）２に記載の式Ｉの化合物又はその生理学的に許容できる塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、次式Ｉ：
【化３】
2004511472.tif 000002
の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類、それらの製造、それらの医薬品としての用途並びにそれ含む製薬組成物に関する。式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類は、例えば、ビトロネクチン受容体を阻害することにより影響され得るしっぺい、例えば骨粗鬆症のような骨の疾病の治療又は予防に使用できる有効な薬理学的に活性な化合物である。
【０００２】
骨は、骨吸収と骨形成とを含む動的な修復の過程を終始受ける。骨粗鬆症のようなある種の骨の疾病においては、骨吸収が骨形成を上回り、骨質量の低下と脆さの上昇とをもたらす。骨吸収と骨吸収は、これらの目的のために専門化された細胞のタイプによって制御される。骨吸収は、破骨細胞による骨基質の破壊に基づいている。活性化された破骨細胞は骨基質の表面に付着するようになり、骨の破壊の原因となる蛋白分解酵素と酸を分泌する。骨に対する破骨細胞の付着、従って骨吸収は、破骨細胞の細胞表面上のビトロネクチン受容体αｖβ３によって制御される。この場合に、αｖβ３は、オステオポンチン、ボーンシアロプロテイン及びトロンボスポンチンのような骨基質蛋白に結合する。例えば、フィッシャー他により「Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ」１３２ （１９９３）１４１１；山本他により「Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ」１３９ （１９９８）１４１１又はミラー他により「Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ」９ （１９９９） １８０７に記載されたインビボでの実験で示されたように、αｖβ３拮抗薬は骨に対する破骨細胞の付着、従って骨吸収を阻害する。
【０００３】
ビトロネクチン受容体αｖβ３は、インテグリン受容体のスーパーファミリーに属する膜糖たん白であり、破骨細胞上の他にも、他の細胞、例えば内皮細胞、血管平滑筋系の細胞又は腫瘍細胞の細胞表面上に発現し、そのような細胞が関係する相互作用の過程を制御する。従って、αｖβ３拮抗薬は、骨吸収を阻害することに加えて、腫瘍の成長及び転移、動脈硬化、脈管形成又は炎症のようなその他の過程に影響を与えることができ、一般的には、αｖβ３拮抗薬は、細胞−細胞又は細胞−基質の相互作用の過程におけるビトロネクチン受容体とそれらのリガンドとの間の相互作用に基づいており或いはこの相互作用に影響を及ぼすことによって予防、緩和又は治癒させることができる疾病の治療及び予防にとって好適である。治療の標的としてのαｖβ３及びαｖβ３拮抗薬のための指標が、例えば、ミラー他により「Ｄｒｕｇ Ｄｉｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ」５ （２０００） ３９７ において論評された。
【０００４】
例えば、ユー他により「Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｒｅｖ． Ｃｏｍｍｕｎ．」１０ （１９９８） ９ 又はコールマン他により「Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．」８４ （１９９９） １２６８ において、αｖβ３拮抗薬が血管平滑筋細胞の移動を阻害し且つ血管形成後の動脈硬化及び再狭窄を導く新内部（ｎｅｏｉｎｔｉｍａ）形成を減少させることが示された。
【０００５】
また、ビトロネクチン受容体αｖβ３が種々のタイプの癌の進行に関係すること及びαｖβ３拮抗薬が脈管形成の間に血管細胞のアポプトシスを誘発させることによって腫瘍の収縮を生じさせ且つ腫瘍の成長及び腫瘍の転移を阻害し得ることが示された（例えば、ブルックス他、「Ｃｅｌｌ」７９ （１９９４） １１５７；カロン他、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」５８ （１９９８） １９３０；ユン他、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」５６ （１９９６） １２６８ ；又は上記の参考文献を参照されたい）。αｖβ３拮抗薬とその他の既知の抗腫瘍処置との併用が、腫瘍及び転移に非常に有効に作用することが示された（ロード他、「Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ」９６ （１９９９） １５９１）。
【０００６】
フリードランダー他は、「Ｓｃｉｅｎｃｅ」２７０ （１９９５） １５００ で、網膜症及び乾癬の治療に治療学的に使用できる性質である、ラットの眼におけるｂＦＧＦ−誘発脈管形成の過程を阻害するαｖβ３拮抗薬を記載した。ストーガード他は、「Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．」１０３ （１９９９） ４７ で、関節炎の疾病の治療にαｖβ３拮抗薬を使用することを記載した。
【０００７】
従って、ビトロネクチン受容体αｖβ３又はこれが関係する相互作用に影響を及ぼすことは、種々の疾病状態であってその治療及び予防のために好適な製薬活性成分に対するニーズが存在し続けている状態に影響を与える可能性を表わしている。
【０００８】
αｖβ３拮抗薬を含めて種々のインテグリン拮抗薬が、例えば、ＥＰ−Ａ−８２０９９１、ＷＯ−Ａ−００／４７５６４、ＷＯ−Ａ−９３／１９０４６、ＷＯ−Ａ−９４／１２１８１、ＷＯ−Ａ−９５／３２７１０、ＷＯ−Ａ−９８／００３９５、ＷＯ−Ａ−９８／２３４５１又はＷＯ−Ａ−９９／３２４５７において既に記載された。ＥＰ−Ａ−８２０９９１及びその対応する出願、例えばＣＡ−Ａ−２２１１２７０（参照することによりここに含めるものとする）に記載されたアシルグアニジン誘導体は、特に強いαｖβ３拮抗薬及び骨吸収の阻害剤である。このアシルグアニジン誘導体には、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸が包含される。ここに、インビボにおいてαｖβ３拮抗薬の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸に実際に転化される（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルが、特に都合の良い薬理学的プロフィル、特に好適な薬理動力学的特徴を示すことが見出された。
【０００９】
従って、本発明の主題は、次式Ｉ：
【化４】
2004511472.tif 000003
の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類である。
【００１０】
酸付加塩である式Ｉの化合物の生理学的に許容できる塩類は、次式ＩＩ：
【化５】
2004511472.tif 000004
又は同等に、例えば、次式ＩＩａ：
【化６】
2004511472.tif 000005
により表わすことができる。
【００１１】
式ＩＩ及びＩＩａにおいて、酸ＨＸは生理学的に許容できる酸であり、Ｘは生理学的に許容できる陰イオン、特に非毒性の製薬上許容できる陰イオンである。ＨＸは一塩基酸、二塩基酸又は三塩基酸であってよく、例えばカルボン酸若しくはスルホン酸のような有機酸又は無機酸であってよい。特定の塩及びその製造の詳細によるが、式Ｉの化合物１モル当たりの酸のモル量は、本発明に従う塩類において変動し得る。二塩基酸の場合には、例えば、式Ｉの化合物１モル当たり１（又は約１）の酸当量が、従って式Ｉの化合物１モル当たり酸のモル数の半分（又は約半分）が存在できるが、式Ｉの化合物１モル当たり２（又は約２）の酸当量、従って式Ｉの化合物１モル当たりの１（又は約１）モルの二塩基酸が存在できる。一塩基酸の場合には、例えば、式Ｉの化合物１モル当たり１（又は約１）の酸当量、従って式Ｉの化合物１モル当たり１モルの酸が存在できるが、一塩基酸並びにその他の酸に関しては、整数でないモル比を含めて、上記した以外の酸と式Ｉの化合物のモル比も存在できる。
【００１２】
本発明に従う式Ｉの化合物の塩類を形成することができ及びその陰イオンが式ＩＩａにおいてＸ−を表わすことができる酸ＨＸの例は、酢酸、アジピン酸、くえん酸、フマル酸、グルコン酸、グルタル酸、グリセロ燐酸、塩化水素（塩酸）、乳酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、パモ酸（１，１’−メチレンビス（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸））、燐酸、硝酸、酒石酸又はトルエン−４−スルホン酸である。
【００１３】
式Ｉ、ＩＩ及びＩＩａにおいては、特定の互変異性体の形態が与えられる。従って、本発明は、例えば、次式Ｉａ及びＩＩｂ：
【化７】
2004511472.tif 000006
を含めて、任意の互変異性体の形態にある（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類を包含する。
【００１４】
また、本発明は、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその生理学的に許容できる塩類の溶媒和物、例えば水和物又はアルコールとの付加物も包含する。
【００１５】
好ましい具体例では、本発明は、式Ｉの化合物と塩化水素を１：１（又は約１：１）のモル比で含有する式Ｉの化合物と塩酸との酸付加塩、即ち、ＨＸが
ＨＣｌである式ＩＩの化合物である（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの塩酸塩並びにＸが塩化物イオンである式ＩＩａの化合物にそれぞれ関する。本発明のこの好ましい主題は、次式ＩＩｃ：
【化８】
2004511472.tif 000007
又は同等に、例えば、次式ＩＩｄ：
【化９】
2004511472.tif 000008
により表わすことができる。
【００１６】
この（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの塩酸塩は、予見することができなかった非吸湿性、安定性及び結晶性のような特に有益な物理化学的性質によって識別される。これらの物理化学的性質は、特別の用心のいる測定及び高価な特別の装置を使用することなく容易に取り扱うことを可能にし、薬物の大規模の工業的生産並びにその貯蔵及び製薬組成物への加工処理に当たって特に有益である。特に重要ことは、式Ｉの化合物の塩酸塩は、その良好な結晶挙動の点から見て、結晶化により容易に単離することができ、従って精製を望むならば、それは明確にされた条件下で、例えばエタノールから容易に再結晶することができることである。薬理学的活性の薬物を医薬品に使用するためには、法律制定者は正確に定義された純度を規定するから、薬物を製造し、単離し及び精製する方法においては、同様に、その条件及び操作手順も法的ガイドラインにより正確に定義されたものに忠実でなければならない。式Ｉの化合物の塩酸塩は、要求される純度に容易に忠実に合致させ且つ法的な要求並びに工業的合成と関連した技術的要求及び生薬上の要求を満たすことを可能にさせる。
【００１７】
（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル及びその塩は、例えば、当業者に知られた慣用的なエステル化方法によって（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸又はその塩から製造することができる。（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸又はその塩をイソプロパノールでエステル化することからなる、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステル又はその生理学的に許容できる塩の製造方法は、本発明の更なる主題をなす。エステル化に使用できる（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸の塩には、例えば、上記した酸ＨＸのような酸との付加塩、カルボン酸基の金属塩、例えばアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩、並びにカルボン酸陰イオンとプロトン化されたグアニジノ部分が存在する分子内塩（又はベタイン）が包含される。
【００１８】
エステル化は、例えば、カルボン酸基を反応性カルボン酸誘導体に転化し、次いでイソプロパノールと反応させることによって実施することができる。好ましくは、イソプロピルエステルは、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸又はその塩とイソプロパノールとの酸性エステル化によって、例えば、イソプロパノールと酸、例えば塩化水素若しくは硫酸との処理により、又はイソプロパノールと塩化チオニルとの処理により製造される。式Ｉの化合物の遊離のイソプロピルエステルを製造するためには、反応混合物の仕上げは、好適な塩基、例えば炭酸水素ナトリウムによる中和を包含しよう。エステル化反応の詳細は、ホーベン−ウエイルの「Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ」（ジョージ・チエミ・フェルラーグ社、シュタットガルト）又はＪ．マーチの「Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｔｈｉｒｄ Ｅｄ．」（ジョン・ウイリー＆ソンズ社、１９８５）のような標準的な参考書並びにその中で引用された文献に見出すことができる。例えば、硫酸の存在下でのイソプロパノールによるエステル化は、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸と硫酸を過剰のイソプロパノール中で、例えば約７０〜約９０℃の温度に加熱することによって、好ましくは大気圧下に還流温度に加熱することによって有利に実施される。
【００１９】
出発物質の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸は、特許ＥＰ−Ａ８２０９９１及び対応する特許公報に記載された方法により製造することができる。
【００２０】
（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの生理学的に許容できる塩類は、慣用の操作手順に従って、例えば、式Ｉの遊離の（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルをそれぞれの酸ＨＸと溶媒又は希釈剤中で結合させることによって製造することができる。好適な溶媒又は希釈剤は、水、メタノール、エタノール又はイソプロパノールのようなアルコール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル又はジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル、或いはアセトン又はブタノンのようなケトン並びにこれらの２種以上の混合物である。塩形成は、通常約−１０〜約１００℃、好ましくは約−１０〜約８０℃、更に好ましくは約−５〜約３０℃、特に好ましくは約０〜約２５℃の温度で実施される。個々の場合によるが、酸ＨＸを所望の化学量論的な量で又はほぼ所望の化学量論的な量で、或い小過剰の又は大過剰の量で使用するのが好ましい、式Ｉの遊離の化合物と酸とからの製造の他に、塩類は、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸又はその塩とイソプロパノールとの上記したエステル化において直接得ることができる。このエステル化を酸の存在下に実施するならば、その酸との付加塩が形成され、所望により単離することができる。
【００２１】
特に、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの塩酸塩、即ち式ＩＩｃの化合物は、例えば、式Ｉの遊離の化合物を約等モル量の塩化水素又は過剰モル量の塩化水素、例えば式Ｉの化合物１モル当たり約１〜約１．５モルの塩化水素と溶媒又は希釈剤中で、例えば水又はメタノール若しくはエタノールのようなアルコール中で結合させることによって得ることができる。好ましくは、式ＩＩｃの塩酸塩は、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸とイソプロパノール及び塩化チオニルとのエステル化により直接得ることもできる。
【００２２】
また、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの生理学的に許容できる塩は、その他の塩から陰イオン交換によって得ることもできる。このような他の塩は、上記のエステル化方法において又は式Ｉの化合物の塩を導くその他の方法において得られた合成中間体であってよい。また、陰イオン交換法における出発物質として、医薬品として使用するのに直接には好適でない生理学的許容性が低い塩類も使用することができる。また、本発明の更なる主題は、式Ｉの化合物の生理学的に許容できる塩類の他に、低い生理学的許容性を示すが、生理学的に許容できる塩類の製造のための出発物質として又は式Ｉの化合物の何らかの化学的変性のための合成中間体として好適である式Ｉの化合物の塩類でもある。
【００２３】
式Ｉの化合物の塩をその他の塩に転化するのに好適な陰イオン交換方法には、陰イオン交換クロマトグラフィー及び溶液又は懸濁液での陰イオン交換が含まれる。これらの技術についての光輝の詳述は式ＩＩｃの塩酸塩の製造について例示的に言及するが、それらは陰イオン交換によるその他の塩類の製造にも同様に適用される。式ＩＩｃの塩酸塩の製造のためには、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルのその他の塩の溶液を塩化物形の陰イオン交換材料を介してクロマトグラフィーすることができる。いつもそうであるように、使用前に塩酸若しくは塩化物塩による処理によって塩化物イオンを負荷してあるか又は反復された使用の場合には塩化物の形で再生してある商業的に入手できる陰イオン交換材料を使用することができる。このような陰イオン交換クロマトグラフィーに好適な溶媒の例は、水及びアルコール、例えばメタノール、エタノール、ｎ−ブタノール又はイソプロパノール、これらの溶媒の混合物、例えば水とメタノール及び（又は）エタノールとの混合物である。陰イオン交換クロマトグラフィーは、通常、約−１０〜約４０℃、好ましくは約−５〜約３０℃、更に好ましくは約０〜約２５℃の温度で実施される。
【００２４】
また、陰イオン交換のために、（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルのその他の塩を溶媒又は希釈剤に溶解又は加えてなる溶液又は懸濁液を塩化水素（塩酸）及び（又は）塩化物と通常撹拌しながら接触させることができる。（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルのその他の塩を最初に導入し、次いで塩酸又は１種以上の塩化物、例えばアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属塩化物のような金属塩化物又は塩化アンモニウム（塩化第四アンモニウムも含めて）を添加することができ、或いは塩酸と１種以上の塩化物の混合物を添加することができる。これとは逆に、まず、塩酸及び（又は）塩化物を導入し、次いで式Ｉの化合物のその他の塩を導入することができ、或いは両成分を反応容器に同時に計量して導入することができる。これらの成分は溶液の形で接触させることができるが、特定の塩類及び陰イオン交換を達成する態様に応じて、最初に懸濁液を導入し及び（又は）懸濁液若しくは固体を添加することが有益である。
【００２５】
溶液又は懸濁液での陰イオン交換に好適な溶媒又は希釈剤の例は、水、アルコール、例えば１〜６個の炭素原子を有するアルコール、好ましくは１〜４個の炭素原子を有するアルコール、ジオキサン、テトラヒドロフラン、エチレングリコールモノメチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル又はジエチレングリコールジメチルエーテルのようなエーテル、アセトン又はブタノンのようなケトン、アセトニトリルのようなニトリル、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドである。使用できるアルコールの例は、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、ｔ−ブタノール、ｎ−ペンタノール、イソペンタノール、ｔ−ペンタノール、ｎ−ヘキサノール、２−ブチルブタノール、２−エチルヘキサノール、イソオクタノール、シクロペンタノール、メチルシクロヘキサノール（混合物）又はベンジルアルコールである。２相混合物も含めて２種以上の溶媒（又は希釈剤）の混合物、例えば、水とメタノール又は水とエタノールのような水とアルコールとの混合物も使用することができる。溶液又は懸濁液での陰イオン交換は、通常、約−１０〜約４０℃、好ましくは約−５〜約３０℃、更に好ましくは約０〜約２５℃の温度で実施される。
【００２６】
酸による式Ｉの化合物の塩形成の後に或いは溶液又は懸濁液での陰イオン交換クロマトグラフィー又は陰イオン交換の後に得られた混合物からの生じた生成物塩を単離するためには、標準的な操作手順を使用することができる。所望ならば、混合物又は溶出液を濃縮し及び（又は）冷却し及び（又は）他の溶媒と混合して結晶化又は沈殿を起こさせることができる。次いで、生成物塩はろ過又は濃縮により分離することができる。また、生成物塩の単離は、凍結乾燥により行なうこともできる。単離された塩は、要求に応じて、更に洗浄し、また所望ならば、例えば再結晶によりさらに精製に付することができる。
【００２７】
式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、例えば、骨の障害、腫瘍による疾病、心臓血管障害、炎症性状態又は眼病の治療又は予防のために好適である価値のある薬理学的に活性な化合物である。それらは、治療又は予防のために医薬品として動物、好ましくは哺乳動物、特にヒトに投与することができる。それらは、それ自体で又はその他の薬理学的に活性な化合物と混合して、或いは経口又は非経口投与を可能にさせ且つ活性成分として有効な薬量の式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩を含有する製薬組成物の形で投与することができる。
【００２８】
従って、本発明は、また、医薬品として使用するための式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩に関し、また上記の又は後記の疾病の治療又は予防のための、例えば、骨の障害、腫瘍による疾病、心臓血管障害、炎症性状態又は眼病の治療又は予防のための医薬品の製造にそれらを使用することに関し、更には式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩をこれらの疾病の治療及び予防に使用すること並びにこのような治療及び予防の方法にも関する。更に、本発明は、有効な薬量の式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩と製薬上許容できるキャリアー、即ち１種以上の製薬上許容できるキャリアー物質及び（又は）添加剤を含有する製薬組成物（又は製薬製剤）に関する。
【００２９】
この医薬品は、経口的に、例えば、ピル、錠剤、ラッカー仕上げ錠剤、被覆錠剤、顆粒、硬質及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、シロップ、エマルジョン、懸濁液又はエーロゾル混合物の形で投与することができる。しかし、直腸経路で、例えば座薬の形で、或いは非経口的に、例えば静脈内、筋肉内又は皮下経路で注射用溶液又は注入用溶液、マイクロカプセル、インプラント又はロッドの形で、或いは経皮的又は局所的に、例えば軟膏、溶液、エマルジョン又はチンキの形で、或いはその他の方法で、例えばエーロゾル又は鼻用スプレーの形で投与することができる。
【００３０】
本発明に従う製薬組成物は、それ自体知られており且つ当業者になじみのある態様で製造することができ、しかして式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩が１種以上の製薬上許容できる不活性な無機及び（又は）有機キャリアー物質（又は賦形剤）及び（又は）添加剤、そして、所望ならば１種以上のその他の薬理学的に活性な化合物と混合され、ヒト又は獣医用の医薬品に使用できる好適な投与形態及び投薬量形態にもたらされる。ピル、錠剤、被覆錠剤及び硬質ゼラチンカプセルを製造するためには、例えば、ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩類などを使用することが可能である。軟質ゼラチンカプセル及び座薬のためのキャリアー物質は、例えば、脂肪、ワックス、半個体状及び液状ポリオール、天然油又は硬化油などである。溶液、例えば注射用溶液、或いはエマルジョン又はシロップの製造に好適なキャリアー物質は、例えば、水、アルコール、グリセリン、ポリオール、蔗糖、転化糖、グルコース、植物油などである。マイクロカプセル、インプラント又はロッドのために好適なキャリアー物質は、例えば、グリコール酸と乳酸との共重合体である。製薬組成物は、通常、約０．５〜約９０重量％の式Ｉの化合物を含有する。製薬組成物中の式Ｉの活性成分及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩の量は、通常、投薬単位当たり約０．２ｍｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇであるが、製薬組成物のタイプによりこれよりも多くてもよい。
【００３１】
製薬組成物は、式Ｉの活性成分及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩及びキャリアー物質に加えて、添加剤（又は補助物質）、例えば、充填剤、崩壊剤、結合材、滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、保存剤、甘味料、着色剤、香料、芳香剤、増粘剤、希釈剤、緩衝物質、溶剤、可溶化剤、デポット効果達成剤、浸透圧を変化させるための塩類、被覆材又は酸化防止剤を含有することができる。更に、それらは、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩に加えて、１種以上のその他の治療上又は予防上活性な成分を含有することができる。
【００３２】
式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、インビボでビトロネクチン受容体の拮抗薬であり、細胞の付着を抑止する。例えば、それらは、破骨細胞が骨表面に結合するのを阻害する能力を有し、これにより破骨細胞による骨吸収を阻害する。この作用は、例えば後記の試験で証明することができる。式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類は、そのビトロネクチン受容体拮抗活性のために、一般に、細胞−細胞相互作用の過程又は細胞−基質相互作用の過程におけるビトロネクチン受容体とそれらのリガンドとの間の相互作用に基づいており或いはこのタイプの相互作用の阻害により影響され得る疾病の治療及び予防のために、或いはこのタイプの相互作用の阻害を望むその疾病の防止、緩和又は治癒のために好適である。最初に説明したように、このような相互作用は、例えば、骨吸収に、脈管形成に又は脈管平滑筋系の細胞の増殖において役割を果たしている。従って、式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、例えば、望まれない程度の骨吸収、脈管形成又は脈管平滑筋系の細胞の増殖に少なくとも一部原因がある疾病の予防、緩和又は治癒のために好適である。
【００３３】
治療及び予防のために式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩を使用できる骨の疾病は、特に、骨粗鬆症、高カルシウム血症、例えば転移に原因があるオステオペニア、歯の障害、上皮小体機能亢進症、リューマチ関節炎における関節周囲の浸食及びパジェット病である。更に、式Ｉの化合物及びその生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、グルココルチコイド、ステロイド又はコルチコステロイド療法に或いは性ホルモンの欠乏に原因がある骨の疾病の緩和、回避又は治療に使用することができる。これらの疾病の全ては、骨形成と骨破壊との間の不均衡に基づいており且つ破骨細胞による骨吸収の阻害によって有利に影響され得る骨の損失により特徴づけられる。また、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、例えば、骨粗鬆症の治療又は予防に、慣用の骨粗鬆症の治療、例えばビスホスホン酸塩、エストロゲン、エストロゲン／プロゲステロン（ホルモン補充療法又はＨＲＴ）、エストロゲン作用薬／拮抗薬（選択的エストロゲン受容体調節剤又はＳＥＲＭ）、カルシトニン、ビタミンＤ類似体、甲状腺ホルモン、成長ホルモン分泌促進薬又は弗化ナトリウムによる治療と組み合わせて、骨吸収の阻害剤として有利に使用することができる（ジャルダン他、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１（１９９６）２１１）。式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩と上でリストしたような骨粗鬆症の治療又は予防に有効なその他の活性成分との投与は、同時に又は続発的に、任意の順序で、一体として又は別個に実施することができる。このような併用による治療又は予防に使用するために、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩と上でリストしたような１種以上のその他の活性成分は、一緒に単一の製薬組成物、例えば錠剤、カプセル又は顆粒で提供でき、或いは単一の包装に又は２個以上の別個の包装に収容できる２個以上の別個の製薬組成物で提供できる。このような併用の治療又は予防に式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩を使用すること、並びにそれらをこのような併用の治療又は予防のための医薬品の製造に使用することも本発明の主題である。更に、本発明は、有効な量の式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩を、骨粗鬆症の治療又は予防に或いは上でリストしたような骨吸収の阻害に有効な少なくとも１種のその他の活性成分と、また慣用の製薬上許容できるキャリアーと共に含有する製薬組成物に関する。上記の製薬組成物についての説明はこのような併用製薬組成物にそのまま当てはまる。
【００３４】
破骨細胞による骨吸収の阻害剤としての使用から離れて、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、例えば、腫瘍の成長及び腫瘍の転移の阻害剤として、抗炎症剤として、リュウマチ様関節炎の治療又は予防のため、乾癬の治療のため、動脈硬化症又は再狭窄のような心臓血管障害の治療又は予防のため、腎症又は網膜症、例えば糖尿性網膜症の治療又は予防のため、或いは年齢と関連した黄変変性の治療又は予防のために使用することができる。腫瘍の成長又は腫瘍の転移の阻害剤として、式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、慣用の癌療法と有利に併用することができる。慣用の癌療法の例は、ベルチーノ編「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ」（アカデミックプレス社、１９９７）（これは参照することによりここに含める）に示されている。従って、式Ｉの化合物と慣用の骨粗鬆症療法との併用に関する上記の説明の全てが、例えば可能な投与の態様及び併用製薬組成物などの説明が、式Ｉの化合物とこの慣用の癌療法との併用にそのまま当てはまる。
【００３５】
式Ｉの化合物及び（又は）その生理学的に許容できる塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩を使用するときは、その投薬量は、広い範囲内で変動でき、通常そうであるように、それぞれの場合における個々の条件に合致するようにされるべきである。それは、例えば、疾病の性状と重さ、治療すべき個体の一般的な状態、或いは急性又は慢性の状態を治療するかどうか、或いは予防を行なうかどうかに依存する。経口投与の場合には、１日の投薬量は、体重が約７５ｋｇの成人において有効な結果を達成するためには、一般に約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇ、特に約０．１〜約５ｍｇ／ｋｇ（それぞれの場合に体重１ｋｇ当たりのｍｇ数である）である。また、静脈内投与のためには、１日当たりの投薬量は、一般に約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０５〜約１０ｍｇ／ｋｇ（それぞれの場合に体重１ｋｇ当たりのｍｇ数である）である。１日当たりの投薬量は、特に、比較的多量の場合には、数回、例えば２、３又は４回の投与に分けることができる。通常そうであるように、個々の挙動に応じて、示した１日当たりの投薬量を上方に又は下方にずらすことが必要であろう。
【００３６】
更に、式Ｉの化合物及びその塩類、特に式ＩＩｃの塩酸塩は、診断の目的に、例えばインビトロでの診断に、又はビトロネクチン受容体の遮断又は細胞−細胞若しくは細胞−基質の相互作用の影響が望まれるような薬理学的又は生化学的研究における補助として使用することができる。
【００３７】
実施例
１）（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの酢酸塩
１７．５ｇの（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸を６７０ｍＬのイソプロパノールに溶解した。１．８ｍＬの濃硫酸を添加し、反応混合物を２４時間還流した。溶媒を真空下に留去し、残留物を塩化ナトリウム水溶液と固体重炭酸ナトリウムによりｐＨ７にもたらし、この混合物を酢酸エチルで４回抽出した。一緒にした有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、酢酸エチルを留去し、残留物を２０ｍＬの氷酢酸で処理し、凍結乾燥した。収量：１１．３ｇ。
ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ＝５９６．４（Ｍ＋Ｈ＋、１００％）
１Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ（ｐｐｍ）＝１．０３−１．２９（ｍ，６Ｈ）；１．３９−２．００（ｍ，１９Ｈ）；１．９１（ｓ，３Ｈ）；２．４５（ｔ，２Ｈ）；２．８３（ｔ，２Ｈ）；３．１６−３．６４（ｍ，５Ｈ）；３．２２（ｄｄ，４Ｈ）；４．２１（ｄｔ，１Ｈ）；４．８４（ｈｅｐ，１Ｈ）；７．２９（ｄ，２Ｈ）；７．４６（ｄ，１Ｈ）；７．７０（ｄ，２Ｈ；８．４０（ｔ，１Ｈ）
【００３８】
２）（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの塩酸塩
１３．０ｇの（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸を５００ｍＬのイソプロパノールに溶解した。１．３ｍＬの濃硫酸を添加し、反応混合物を１８時間還流した。溶媒を真空下に留去し、残留物を酢酸エチルに懸濁させ、塩化ナトリウム水溶液と固体重炭酸ナトリウムによりｐＨ７にもたらした。相を分離させ、有機相を炭酸マグネシウムで乾燥し、酢酸エチルを留去し、残留物を２５ｍｌの２Ｍ塩酸で処理し、２時間激しく撹拌した。生成物をろ過し、水洗し、乾燥した。化合物をエタノールから再結晶した。収量：９．６ｇ。
融点：２０８〜２１０℃。
ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｅ＝５９６．５（Ｍ＋Ｈ＋、１００％）
【００３９】
３）出発化合物（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸の製造
例１及び２で使用した出発化合物は、ＥＰ−Ａ−８２０９９１に開示された方法で得ることができ、以下のように記載することができる。
【００４０】
ａ）４−（２−メトキシカルボニルビニル）安息香酸
１８．７４ｇ（０．１２モル）のマロン酸モノメチルカリウムを１８ｍＬのピリジンに懸濁させた。１５．０１ｇ（０．１モル）の４−カルボキシベンズアルデヒド及び０．８５ｇ（０．０１モル）のピペリジンを室温で撹拌しながら添加し、この混合物を二酸化炭素の発生が止むまで（約２時間）真空下に沸騰させた。更に６０ｍＬのピリジンを添加し、この混合物を更に１時間攪拌還流した。反応混合物を５００ｍＬの氷と１１０ｍＬの濃塩酸で撹拌しながら処理した。添加が完了した後、この混合物を更に２０分間攪拌し、生成物を吸引ろ過し、水洗し、イソプロパノールから再結晶した。収量：１２．８５ｇ（６２％）。
【００４１】
ｂ）４−（２−メトキシカルボニルエチル）安息香酸
８ｇ（３８．８ミリモル）の４−（２−メトキシカルボニルビニル）安息香酸（工程ａ）を２５０ｍＬのジオキサンに懸濁させ、パラジウム／炭（１０％）上で１バールの水素雰囲気下に室温で７時間水素化した。この混合物をろ過し、溶媒を真空下に蒸発させた。収量：８．０５ｇ（１００％）。
【００４２】
ｃ）（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−メトキシカルボニルエチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸ｔ−ブチル
３５４ｍｇ（１．７ミリモル）の４−（２−メトキシカルボニルエチル）安息香酸（工程ｂ）と５００ｍｇ（１．７ミリモル）の（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−アミノプロピオン酸ｔ−ブチルを３ｍＬのジメチルホルムアミドに溶解し、５５７ｍｇ（１．７ミリモル）のテトラフルオロ硼酸Ｏ−（（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（ＴＯＴＵ）及び２０４ｍｇ（１．７ミリモル）のジイソプロピルエチルアミンで処理し、この溶液を室温で７時間撹拌した。溶媒を真空下に蒸発させ、残留物を酢酸エチルに溶解し、硫酸水素カリウム溶液及び重炭酸ナトリウム溶液により中性となるまでそれぞれ３回洗浄した。有機相を分離し、乾燥し、溶媒を真空下に留去した。収量：７７０ｍｇ（９３％）。
【００４３】
ｄ）（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸ｔ−ブチル
１．２５ｇ（９．２ミリモル）の２−アミノ−１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン塩酸塩と１．０３ｇ（９．２ミリモル）のカリウムｔ−ブトキシドを３ｍｌの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、この混合物を室温で３０分間攪拌した。次いで、７４０ｍｇ（１．５３ミリモル）の（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−メトキシカルボニルエチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸ｔ−ブチル（工程ｃ）を１ｍＬのジメチルホルムアミドに溶解してなる溶液を添加し、この混合物を室温で４時間撹拌した。次いで、これを氷酢酸を使用してｐＨ４までに調節し、溶媒を真空下にストリッピングし、残留物をシリカゲルでクロマトグラフィーした（ジクロルメタン／メタノール／氷酢酸／水（９／１／０．１／０．１））。収量：１９０ｍｇ（３８％）。
【００４４】
ｅ）（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸
１９０ｍｇ（０．３４ミリモル）の（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸ｔ−ブチル（工程ｄ）を５ｍＬの９５％トリフルオル酢酸に溶解し、この混合物を室温で１時間撹拌した。トリフルオル酢酸を真空下に留去し、この混合物をトルエンと共に蒸発させた。残留物を氷酢酸に溶解し、その溶液を水洗し、凍結乾燥した。収量：１７０ｍｇ（１００％）。
【００４５】
ｆ）（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸
１００ｍｇ（０．２ミリモル）の（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸（工程ｅ）を１５ｍＬのジオキサンに溶解し、０．０１２ｍｌの氷酢酸で処理し、パラジウム／炭（５％）上で１バールの水素圧下に室温で水素化した。２時間後に、１５ｍＬのメタノールを添加し、この混合物を１バールの水素圧下に室温で更に５時間水素化した。次いで、それをろ過し、溶媒を真空下に蒸発させた。収量：６７．４ｍｇ（９３％）。
【００４６】
ｇ）（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸
６７．４ｍｇ（０．１８６ミリモル）の（２Ｓ）−２−アミノ−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸（工程ｆ）を４ｍＬのジオキサンに溶解した。撹拌しながら、まず４ｍＬの重炭酸ナトリウム飽和溶液、次いで５７ｍｇの２，５−ジオキソピロリジン−１−イルカルボン酸アダマンタン−１−イルメチルを室温で添加した。この混合物を室温で２４時間撹拌し、氷酢酸を使用してｐＨ４に調節し、溶媒を真空下にストリッピングし、残留物をＲＰ１８リクロスフェーＣ−１８でクロマトグラフィー（水中２０％（ｖ／ｖ）アセトニトリル、０．１％トリフルオル酢酸、４０％（ｖ／ｖ）までのアセトニトリル）した。収量：３０ｍｇ（３０％）。
【００４７】
４）薬理学的試験：骨吸収のＴＰＴＸラットモデルでのＰＴＨ−誘発高カルシウム血症
このインビボのモデル試験では、骨吸収の刺激を副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の注入により甲状腺上皮小体切除術（ＴＰＴＸ）を施したラットに誘発させる。骨吸収の変化を、骨吸収の程度と正比例する血清カルシウム濃度を測定することによりモニターする。体重が１５０〜２００ｇの雄のスプラグダウレイラット（ＯＦＡ−ＩＦＦＡ　ＣＲＥＯ、フランス）は、供給者により甲状腺上皮小体切除術を受けていた。ラットは、７ｇのＣａ／ｋｇ（ＵＡＲ）とボルビック水を入れた標準的な市販のペレット状ダイエット食に自由に近づけるようにさせた。甲状腺上皮小体切除術の成功は、終夜断食させた動物に施術して８日後に血清カルシウム濃度を測定することにより試験した。血清カルシウムレベルが＜８０ｍｇ／ＬであったときにラットはＴＰＴＸされたと見なした。
ＰＴＨで処理するために、ラットのＰＴＨ（１〜３４）（バケム社）を２％のＣｙｓ−ＨＣｌを含有する０．１５Ｍ塩化ナトリウム溶液に溶解し、浸透ミニポンプ（ＡＬＺＥＴ２００１Ｄ）により２００ｐモル／ｋｇ／ｈで送出した。ミニポンプを、終夜断食させたＴＰＴＸラットにケタミン（７５ｍｇ／ｋｇ）及びアセプロマジン（２．５ｍｇ／ｋｇ）による麻酔も下で腹腔内に挿入した。対照例グループでは、ＴＰＴＸラットはＰＴＨのビヒクルで満たされたミニポンプを受け入れた。
【００４８】
（２Ｓ）−２−（アダマンタン−１−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（４−（２−（１，４，５，６−テトラヒドロピリミジン−２−イルカルバモイル）エチル）ベンゾイルアミノ）プロピオン酸イソプロピルエステルの薬理学的効果を決定するために、ＰＴＨ処理したＴＰＴＸラットには、３０ｍｇ／ｋｇの式ＩＩｃの塩酸塩を、ＰＴＨの注入をしてから０時間及び３時間後に、２回皮下投与した（化合物グループ）。同じ態様で、ＰＴＨ処理したＴＰＴＸラットにはビヒクルを投与し（ＰＴＨグループ）、またＰＴＨ処理をしなかったＴＰＴＸラットにはビヒクルを投与した（対照例グループ）。実験は合わせて６時間行なった。処理操作の終わりに、断頭した後に全血を集めた。血液試料を３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離（ＣＲ４２２、ジュアン）して血清を得た。
血清の総カルシウム濃度（カルシウム血）を、ＩＥＭＳラブシステムのマイクロプレートリーダーを５４０ｎｍで使用して比色法（チバ−コーニング社）で測定した。各グループにおけるカルシウム血の平均値の間の差を分散についてダンネット試験により分析した。被検化合物の活性を次式：
【数１】
2004511472.tif 000009
により％効果として計算した。
３０ｍｇ／ｋｇで２回皮下投与された式ＩＩｃの化合物で観察された％効果は−９７％であった。このインビボでの試験は、この化合物が骨吸収の非常に有効な阻害剤であることを示す。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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