(57)【要約】本発明は、一般的な意味では、標的リガンドに結合したＮ２Ｓ２キレートである化合物を用いる新規標識戦略を提供する。標的リガンドは、疾患細胞周期標的化合物、腫瘍起因性血管新生標的リガンド、素用アポトーシス標的リガンド、疾患レセプター標的リガンド、およびアミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５．モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリンまたはトリメチル・リシンである。本発明はまた、目的とする化合物を用いるキットと、本発明の化合物を用いて、目的とする薬剤の薬理を評価する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的リガンドに結合体化したＮ２Ｓ２キレートを含む化合物であって、該標的リガンドは、疾患細胞周期標的化合物、腫瘍起因性血管新生標的リガンド、腫瘍アポトーシス標的リガンド、疾患レセプター標的リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジンである、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、該化合物は、以下：
【化１】
2006515835.tif 000020
としてさらに定義され、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立してＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、腫瘍起因性血管新生標的リガンド、腫瘍アポトーシス標的リガンド、疾患レセプター標的リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジンであり；
Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、腫瘍起因性血管新生標的リガンド、腫瘍アポトーシス標的リガンド、疾患レセプター標的リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジンであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０または１であり；
Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；
Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンであり、ｍが０の場合、結合であり；そして
Ｍが、９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、
化合物。
【請求項３】
前記標的リガンドが、腫瘍起因性血管新生標的リガンドを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
前記標的リガンドがＣＯＸ−２、抗ＥＧＦ、ヘルセプチン、アンギオスタチン、またはサリドマイドを含む、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
前記標的リガンドが、疾患細胞周期標的リガンドである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
前記標的リガンドが、アデノシン、ペンシクロビル、ＦＩＡＵ、ＦＩＲＵ、ＩＶＦＲＵ、ＧＣＶ、ＰＣＶ、ＦＧＣＶ、ＦＰＣＶ、ＦＨＰＧ、ＦＨＢＧ、またはグアニンを含む、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
前記標的リガンドが、腫瘍アポトーシス標的リガンドを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
前記標的リガンドが、ＴＲＡＩＬまたはカスパーゼ３標的リガンドを含む、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
前記標的リガンドが、疾患レセプター標的リガンドを含む、請求項２記載の化合物。
【請求項１０】
前記標的リガンドが、エストロゲン、アンドロゲン、黄体形成ホルモン、トランスフェリン、またはプロゲスチンを含む、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
前記標的リガンドがカルニチンまたはドキソルビシンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
前記標的リガンドがペンシクロビルまたはアデノシンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
前記標的リガンドがアミホスチンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
前記標的リガンドが抗ＥＧＦレセプターを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
前記標的リガンドがモノクローナル抗体ＣＤ３１を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１６】
前記標的リガンドがモノクローナル抗体ＣＤ４０を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
前記標的リガンドがカペシタビンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
前記標的リガンドがデオキシシチジンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
前記標的リガンドがフラーレンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２０】
前記標的リガンドがヒト血清アルブミンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
前記標的リガンドがラクトースを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２２】
前記標的リガンドがピリドキサールを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２３】
前記標的リガンドがキナゾリンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２４】
前記標的リガンドがトリメチルリジンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２５】
前記標的リガンドが疾患細胞周期標的化合物を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２６】
前記疾患細胞周期標的化合物がアデノシン、ペンシクロビル、ＦＩＡＵ、ＦＩＲＵ、ＩＶＦＲＵ、ＧＣＶ、ＰＣＶ、ＦＧＣＶ、ＦＨＰＧ、ＦＨＢＧ、またはグアニンを含む、請求項２５記載の化合物。
【請求項２７】
前記Ｎ２Ｓ２キレートがエチレンジステインとしてさらに定義される、請求項１記載の化合物。
【請求項２８】
放射性核種をさらに含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２９】
前記放射性核種が、９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕを含む、請求項２８記載の化合物。
【請求項３０】
前記標的リガンドと前記キレートとの間に位置する水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンをさらに含む、請求項１記載の化合物。
【請求項３１】
標的リガンドに結合した放射性標識Ｎ２Ｓ２キレートを合成する方法であって、
ａ）請求項１に記載の化合物を得る工程、
ｂ）前記化合物を、放射性核種および還元剤と混合して放射性核種標識誘導体を得る工程を含み、前記Ｎ２Ｓ２が前記放射性核種を持つキレートを形成する、方法。
【請求項３２】
前記還元剤が亜ジチオン酸塩イオン、第一スズ・イオン、または第一鉄イオンである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記放射性核種が９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
哺乳類体内の一部位をイメージングする方法であって、
ａ）請求項２８にしたがった診断上有効な量の化合物を前記部位に投与する工程、および
ｂ）一部位に局在した前記化合物からの放射性シグナルを検出する工程
を包含する、方法。
【請求項３５】
前記部位が腫瘍である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記部位が感染である、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
前記部位が乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜、心臓癌、肺癌、脳癌、肝癌、葉酸（＋）癌、ＥＲ（＋）癌、脾臓癌、膵臓癌、または腸癌である、請求項３４記載の方法。
【請求項３８】
放射性医薬製剤を調製するためのキットであって、
ａ）請求項１にしたがった、放射性各種標識Ｎ２Ｓ２キレート−標的リガンド結合体である化合物である所定量の化合物を含む密閉容器と、
ｂ）十分な量の還元剤とを備える、キット。
【請求項３９】
放射性各種をさらに含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４０】
前記放射性各種が９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、請求項３９記載のキット。
【請求項４１】
抗酸化剤をさらに含む、請求項３７記載のキット。
【請求項４２】
前記抗酸化剤がビタミンＣ、トコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチンである、請求項４１記載のキット。
【請求項４３】
前記抗酸化剤がビタミンＣである、請求項４２記載のキット。
【請求項４４】
転移キレーターをさらに含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４５】
前記転移キレーターがグルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩、クエン酸塩、または酒石酸塩である、請求項４４記載のキット。
【請求項４６】
前記転移キレーターが、グルコン酸塩またはグルカル酸塩である、請求項４５記載のキット。
【請求項４７】
前記還元剤が塩化スズ（ＩＩ）またはトリフェニルホスフィンである、請求項３８記載のキット。
【請求項４８】
目的とする薬剤の薬理を評価する方法であっって、
ａ）Ｎ２Ｓ２キレートに対する薬剤の結合体を調製する工程、
ｂ）前記結合したキレートに対して放射性核種を添加し、放射性結合体を作る工程、
ｃ）前記放射性結合体を被験体に投与する工程、
ｄ）前記薬剤の薬理を評価する工程を包含する、方法。
【請求項４９】
前記目的とする薬剤が医薬製剤である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｎ２Ｓ２キレートがエチレンジステインである、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記被験体が実験動物である、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記被験体がヒトである、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
前記薬剤の薬理を評価する工程が、前記薬剤の生体内分布を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
前記薬剤の薬理を評価する工程が前記薬剤の生体安定性を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５５】
前記薬剤の薬理を評価する工程が前記薬剤の生体排出を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概ね、標識、放射性画像形成法、放射免疫療法、および化学合成の分野に関する。より詳しくは、標的リガンドを放射性標識するための戦略に関する。また、本発明は該放射性標識リガンドを用いて、腫瘍起因性血管新生、低酸素症、アポトーシス、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的にする方法と、これらの生化学的プロセスに対する薬効の評価とに関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
血管新生は、内皮細胞および平滑筋細胞の増殖が増殖して複数の新しい血管を形成することであり、転移経路の必須構成要素である。これらの血管は、特定の細胞が一次組織部位を出て血液循環に入るための主要なルートを提供する。多くの疾患組織では、血管密度は、血管新生が不十分な組織よりも転移率が高いかなり血管新生された組織による転移可能性または生存の予後指標となる（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｃａｏ，  １９９９；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。
【０００３】
抗血管新生剤を用いて、血管新生および腫瘍発達を阻止することが可能と思われる。現時点では、臨床試験中の抗血管新生剤として、血管新生に対する天然の阻害物質（例えば、アンギオスタチン、エンドスタチン、血小板因子４）（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｄｈａｎａｂａｌ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｍｏｕｌｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｊｏｕａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）  、内皮細胞成長の特異的阻害物質（例えば、ＴＮＰ−４７０、サリドマイド、インターロイキン−１２）（Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｍｏｒｅｉｒａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｄｕｄａ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）  、血管新生ペプチドの効力を無くす薬剤（例えば、線維芽細胞成長因子または血管内皮増殖因子に対する抗体、スラミンおよび類似体、テコガラン）（Ｂｏｃｃｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｓａｋａｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）  またはそれらのレセプター  （Ｐｅｄｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）、血管基底膜および細胞外基質を妨害する薬剤（例えば、メタロプロテアーゼ阻害物質、血管新生阻害ステロイド）  （Ｌｏｚｏｎｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｍａｅｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｂａｎｅｒｊｅｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）、抗接着分子（Ｌｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）、抗インテグリンαｖβ３抗体（Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）  、および作用の多様なメカニズムによって血管新生を調節する種々の薬物（Ｇａｓｐａｒｉｎｉ  １９９９）が挙げられる。
【０００４】
例えば、多くの悪性腫瘍は、血管新生に依存する。いくつかの実験的な研究によれば、原発腫瘍の増殖、侵襲性、および転移が新血管新生を必要とすることが示唆される  （Ｓｉｏｎ−Ｖａｒｄｙ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１；  Ｇｕａｎｇ−Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；  Ｘｉａｎｇｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。例えば、多くの悪性腫瘍は、血管新生に依存する。いくつかの実験的な研究によれば、原発腫瘍の増殖、侵襲性、および転移が新血管新生を必要とすることが示唆される。腫瘍関連血管新生は、正および負の可溶性因子の制御下にある複雑な多段階プロセスである。血管新生表現型の獲得は、腫瘍発達にとって一般的な経路である（Ｕｇｕｒｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は血管内皮細胞の分裂促進因子、モルフォゲン、および化学誘引物質であって、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）では、血管透過性の強力なメディエイターである（Ｓｚｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。インターロイキン８（ＩＬ−８）は、好中球の化学誘引物質であって、強力な血管新生因子である（Ｐｅｔｚｅｌｂａｕｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）  。塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は、いくつかのヒト癌で、腫瘍化および転移を伴っていた（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。血管新生因子発現（例えば、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、微小血管密度、ＩＬ−８、ＭＭＰ−２、およびＭＭＰ−９）の予後的価値は、化学療法で処置される癌患者に対して決定された（Ｉｎｏｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；  Ｂｕｒｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。これらの因子は、転移と血管新生とを調節して、個々の癌患者における転移可能性を予測することが可能である（Ｓｌａｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。
【０００５】
プログラム細胞死でのアポトーシス異常は、腫瘍原因において重要な役割を果たす。このような欠陥によって、腫瘍細胞が該細胞の通常予定されていた寿命を超えて生存し、外来性の生存因子の必要性が覆される。腫瘍の塊が広がることから、アポトーシス異常によっても低酸素症および酸化ストレスに対する防御が得られる。アポトーシス異常はまた、細胞増殖を脱制御して蓄積させることで、腫瘍発達過程での分化、血管新生、ならびに細胞運動性および侵襲性の増大が生ずる（Ｒｅｅｄ、１９９９）。実際に、細胞分裂を駆動する多くの脱制御腫瘍性タンパク質もまた、アポトーシスを引き起こすことから、アポトーシス異常は、プロトオンコジーン活性化に重要なコンプリメントと認められる（Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｎ，  ２００２）。同様に、ＤＮＡ修復および染色体分離での欠陥は、遺伝的に不安定な細胞を根絶させるための防衛機制として、通常、細胞自殺を誘発する。このように、アポトーシス異常は遺伝的に不安定な細胞の残存を可能とさせることから、進行性悪性クローンを選別する機会が与えられる  （Ｉｏｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。アポトーシス異常は、細胞外マトリックスへの付着なしに、上皮細胞が浮遊状態で生存するのを可能とすることで、転移を促進する（Ｆｒｉｓｃｈ  ａｎｄ  Ｓｃｒｅａｔｏｎ，  ２００１）。アポトーシス異常は、腫瘍を攻撃するために用いられる武器（細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびナチュラル・キラー（ＮＫ）細胞を含む）の多くが、アポトーシス機構の完全性に依存していることから、免疫系に対する耐性を促進させる（Ｔｓｃｈｏｐｐ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。最後に、癌関連アポトーシス異常は、化学療法抵抗性および放射線抵抗性で役割を果たすことで、細胞死をもたらす閾値を高めることから腫瘍致死をもたらすためには、よりいっそう高い用量および線量が必要となる（Ｍａｋｉｎ  ａｎｄ  Ｈｉｃｋｍａｎ，  ２０００）。したがって、不完全なアポトーシス調節は、癌の生物学の基本的局面である。
【０００６】
非外科的手段によってガン細胞の根絶に成功することは、全ての道が最終的に血管新生とアポトーシスとに導かれる。基本的に、現在臨床で使用されている全ての細胞毒性のある抗癌薬が、血管新生を阻止して悪性腫瘍細胞のアポトーシスを誘発する。微小管結合剤、ＤＮＡ傷害物質、およびヌクレオシドが癌の治療の重要な武器である一方で、目標とされた新たな種類の治療薬が公表されようとしている。目標とされた治療薬のこれらの新しい種類は、血管新生およびアポトーシス現象の基礎をなす分子機序をより深く理解することで出現した戦略に基づいて、公表されようとしている（Ｒｅｅｄ、２００３）。  
【０００７】
血管新生およびアポトーシス因子が血管新生およびアポトーシス状態を反映するにもかかわらず、これらの因子は腫瘍の治療反応を適切に反映することができない。現在、血管新生およびアポトーシスを評価する方法は、新血管新生の領域における微小血管密度のカウントと、ＦＡＣＳ技術によるアネキシンＶの観察とに依存している。組織生検後、組織標本の免疫組織化学がおこなわれる。両技術とも侵襲性であり、繰り返して実行することはできない。
【０００８】
より多くの腫瘍特異的な放射性医薬品の開発が、シンチグラフィーによる腫瘍の画像形成の改善を、大きく左右する。腫瘍特性がより大きいことで、放射性標識リガンドおよび放射性標識抗体は、シンチグラフィーによる腫瘍の検出にる新たな時代を開き、広範囲な開発および評価を受けた（Ｍａｔｈｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６，  １９９７ａ，  １９９７ｂ）。核医学画像形成モダリティー（ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ））は、放射性核種で標識された放射性トレーサーの位置および濃度をマッピングする診断用断面画像形成技術である。腫瘍の位置および広がりに関する多くの解剖学的情報がＣＴおよびＭＲＩによって得られるにもかかわらず、これらの画像形成モダリティーは、水腫、放射線壊死、グレーディング、またはグリオーシスから浸潤病巣を適切に区別することができない。ＰＥＴおよびＳＰＥＬＴは、測定代謝活性によって腫瘍を局所化して特徴づけるのに用いられることができる。
【０００９】
［１８Ｆ］ＦＭＩＳＯは、頭部および．  頸部腫瘍、心筋梗塞、炎症、および脳虚血である（Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２；  Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；  Ｙｅｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４）。腫瘍対正常組織取込み率をベースラインとして用いて、腫瘍低酸素症を評価する（Ｙｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。［１８Ｆ］ＦＤＧを用いた腫瘍代謝画像形成が明らかに示されたにもかかわらず、分子造影剤を臨床診療に導入することは、入手容易性および同位体コスト等のいくつかの他の要素に依存する。［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）は、腫瘍、心筋梗塞、および神経疾患を診断するために用いられた。ＰＥＴ直接標識法は、ポジトロン同位元素の短い半減期のため、急速でなければならない。［１８Ｆ］化学的物質は複雑であり、異なる分子で再現性はない。
【００１０】
窒素および硫黄キレートを用いて、いくつかの化合物を９９ｍＴｃで標識した（Ｂｌｏｎｄｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９６７；  Ｄａｖｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８０）。２−アミノエタンチオール四座配位子（ジアミノジトール化合物とも呼ばれている）は、２つのチオール硫黄原子と２つのアミン窒素原子とにオキソテクネチウム基が効率的に結合することに基づいて、非常に安定なＴｃ（Ｖ）Ｏ化合物を形成することが知られている。９９ｍＴｃ−２−ピロールチオン複合体によって標識された２−ピロールチオンの放射性金属複合体が、画像形成および治療のための放射性医薬品として用いるために開発された（ＷＯ  ０１８０９０６Ａ２）。９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−エチレンジステイン（９９ｍＴｃ−ＥＣ）は、Ｎ２Ｓ２キレートの最近かつ成功した例である。ＥＣは、高放射化学的純度および安定性をもって容易かつ効率的に９９ｍＴｃで標識することができ、活性尿細管輸送によって、腎臓を通して排出される（Ｓｕｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；  Ｖａｎ  Ｎｅｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  １９９３；  Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  １９９２）。さらに、エチレンジステイン（ＥＣ）によってキレートされ、かつ種々のリガンドと結合した９９ｍＴＣを、組織得的疾患の造影剤、予後ツール、または哺乳類の体内にある特定の部位へ治療薬を送達するための手ツールとして用いるために、開発されたＷＯ  ０１９１８０７Ａ２、ＡＵ  ０１７５２１０Ａ５）。９９ｍＴＣ−ＥＣ−キレートは、腎臓画像化および腎臓機能の試験のために開発された（米国特許第５９８６０７４号および米国特許第５９５５０５３号）。９９ｍＴＣ−ＥＣ複合体を調製する方法および該方法を実行するためのキットもまた、開発された（米国特許第５２６８１６３号およびＷＯ  ９１１６０７６Ａ１）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、標的腫瘍起因性血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的とする新規の薬剤の開発、同様にこれらの生化学的プロセスの薬効の評価に対する必要性が、未だ存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明のいくつかの実施形態は、一般に、標的リガンドに結合したＮ２Ｓ２キレートを含む化合物に関するもので、該標的リガンドは、疾患細胞周期標的化合物、腫瘍起因性血管新生標的リガンド、腫瘍アポトーシス標的リガンド、疾患レセプター標的リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  またはトリメチル・リジンである。
【００１３】
本発明の具体的な局面は、Ｎ２Ｓ２キレート化合物を含み、該化合物の式は、
【００１４】
【化２】
2006515835.tif 000002
【００１５】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジン；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  またはトリメチル・リジン；ｎは０または１；ｎが０の場合、結合；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合；およびＭが９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである。
【００１６】
好ましい実施形態では、化合物は前述のとおりであり、Ｒ９およびＲ１０は独立してＨ、ＣＨ３、ＣＯＸ−２、抗ＥＧＦレセプター、ヘルセプチン、アンギオスタチン、またはサリドマイド、さらにＭは９０ｍＴｃである。
【００１７】
別の好ましい実施形態では、上記化合物は前述のとおりであり、疾患細胞周期標的化合物がアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００１８】
血管新生標的化とは、薬剤を用いて新血管新生（例えば腫瘍細胞の新血管新生）と結合することをいう。このことは、下記の明細書中でより詳細に述べられる。この目的のために用いられる薬剤は、種々の腫瘍測定、例えば腫瘍血管床の大きさの測定および腫瘍容積の測定を実行する当業者に知られている。それらの薬剤のいくつかは、血管壁に結合する。当業者は、この目的のための使用に利用可能な薬剤に精通している。
【００１９】
腫瘍アポトーシス標的化とは、薬剤を用いてアポトーシスになっている細胞またはアポトーシスにかかる危険性がある細胞に結合することをいう。これらの薬剤は、細胞集団（例えば腫瘍）内でのアポトーシスまたはプログラム細胞死の範囲または危険度の指標を提供するために、一般に用いられる。当業者は、この目的のために使われる薬剤に精通している。腫瘍アポトーシス標的化は下記の明細書中により詳細に述べられている。
【００２０】
疾患レセプター標的化では、症状（例えば癌）で過剰発現される特定の細胞レセプターに結合する能力があることから、特定のリガンドが使用される。標的化されるそのようなレセプターの例として、エステロンレセプター、アンドロゲンレセプター、下垂体レセプター、トランスフェリンレセプター、およびプロスタグランジンレセプターが挙げられる。疾患レセプター標的化に適用できる薬剤の例を表１に示す。
【００２１】
疾患レセプター標的化は、下記の明細書中でより詳しく述べられる。疾患細胞周期標的化とは、増殖細胞で上方制御される薬剤の標的化をいう。この目的に使用される化合物は、細胞での種々のパラメーター、例えば腫瘍細胞ＤＮＡ含有量を測定するために用いることができる。それらの薬剤の多くは、ヌクレオシド類似体である。疾患細胞周期標的化に関連するさらなる考察は、下記の明細書中で与えられる。
【００２２】
本発明の特定の薬物をベースとしたリガンドを、薬物に対する被験体の薬理学的反応の測定に適用することができる。広範囲にわたるパラメータを測定して薬物投与に対する被験体の反応を決定することができる。当業者は、測定可能な反応の種類に精通している。これらの反応は、種々の因子（評価される特定の薬物、被験体が処置を受ける特定の疾患または症状、および被験体の特徴）を含む。放射性標識された薬剤を薬物に適用することができる。薬物評価に関連するさらなる考察は、この明細書の他部分で提供される。
【００２３】
現在の発明の別の局面は、画像形成のための放射性標識エチレンジステインを合成するための方法から構成されるもので、該方法は、（ａ）化合物アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  トリメチル・リシン、または疾患細胞周期標的化合物を得る工程、（ｂ）前記化合物をエチレンジステイン（ＥＣ）と混合してＥＣ化合物誘導体を得る工程、（ｃ）前記ＥＣ化合物誘導体を放射性核種および還元剤と混合して、放射性核種標識ＥＣ化合物誘導体を得る工程を有し、前記ＥＣは放射性核種とのＮ２Ｓ２キレートを形成する。                                                                              
【００２４】
一実施形態では、上記還元剤は亜ジチオン酸塩イオン、スズ・イオン、または第一鉄イオンであってもよい。放射性核種は、好ましくは９９ｍＴｃである。
【００２５】
別の実施形態では、疾患細胞周期標的化合物がアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００２６】
本発明の別の局面は、哺乳類体内の一部位を画像形成する方法から構成され、該方法は、（ａ）式：
【００２７】
【化３】
2006515835.tif 000003
【００２８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジン；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  またはトリメチル・リジン；ｎは０または１；ｍは０または１；ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合；およびＭが９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである］
からなる診断上有効な量のＮ２Ｓ２キレート化合物を投与する工程、（ｂ）一部位に局在した上記化合物からの放射性シグナルを検出する工程を含む。好ましくは、Ｍは９９ｍＴｃである。上記疾患細胞周期標的化合物は、アデノシン、またはペンシクロビルであってもよい。上記部位は、腫瘍、感染部、乳癌、卵巣癌，  前立腺癌，  子宮内膜，  心臓癌，  肺癌，  脳癌、肝癌、  葉酸（＋）癌  、ＥＲ（＋）癌、脾臓癌、膵臓癌、または腸癌であってもよい。
【００２９】
本発明のさらに別の局面は、（ａ）式：
【００３０】
【化４】
2006515835.tif 000004
【００３１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジン；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  またはトリメチル・リジン；ｎは０または１；ｍは０または１；ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合；およびＹは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合である］
からなる所定量の化合物と、（ｂ）Ｍが９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕと結合した十分な量の還元型標識とを含む密閉容器とを含む、放射性医薬製剤を調製するためのキットから構成される。還元標識は、９９ｍＴｃと結合してもよい。上記疾患細胞周期標的化合物は、アデノシンまたはペンシクロビルであってもよい。
【００３２】
本発明の一局面は、式：
【００３３】
【化５】
2006515835.tif 000005
【００３４】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチル・リジン；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、  またはトリメチル・リジン；ｎは０または１；ｍは０または１；ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合；およびＭが９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである］
からなるＭ２Ｓキレート化合物を含むシンチグラム造影剤を調製するための試薬から構成される。Ｍは、好ましくは９９ｍＴｃ、また上記疾患細胞周期標的化合物は、好ましくはアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００３５】
本発明は、目的とする薬剤の薬理を評価する方法にも関し、該方法は、（１）Ｍ２Ｓ２キレートに対する薬剤の結合体を調製する工程、（２）上記結合したキレートに対して放射性核種を添加し、放射性結合体を作る工程、（３）前記放射性結合体を被験体に投与する工程、（４）上記薬剤の薬理を評価する工程、を有する。対象とする上記薬剤は、医薬製剤であってもよい。いくつかの実施形態では、上記Ｍ２Ｓ２キレートがエチレンジステインである。上記被験体は任意の被験体であってよく、例えば実験動物またはヒトである。いくつかの実施形態では、上記薬剤の薬理を評価することは、薬剤の生体内分布（ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を評価し、薬剤の生体安定性（ｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を評価し、あるいは薬剤の生体排出（ｂｉｏｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を評価することが含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
（具体的な実施形態の説明）
Ｉ．本発明
本発明は、腫瘍起因性血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路と疾患細胞周期を標的とするように設計された新規の放射性標識ＥＣ結合体を提供することによって、従来技術の欠点を解決する。放射性標識ＥＣ結合体は、上述の生化学的プロセスで医薬製剤の効果を評価するのに用いられることもできる。より詳しくは、本発明は、腫瘍起因性血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的とするために、またこれらの生化学的プロセスに対する薬効評価を目的として、放射性標識９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体を提供する。
ＩＩ．放射性医薬品
核医学の分野では、少量の内部的に投与された放射能のように標識トレーサー化合物（放射性トレーサーまたは放射性医薬品を呼ばれる）の分布を検出することによって、特定の病的状態が局所化され、またはそれらの範囲が評価される。これらの放射性医薬品を検出する方法は、一般に画像形成または放射性画像形成法方法として知られている。
ＩＩＩ．放射性画像形成法方法
放射性画像形成法では、放射標識は、放射性核種を発しているγ線放射であり、放射性トレーサーはカメラ（このプロセスでは、しばしばガンマシンチグラフィーと呼ばれる）を検出するγ線放射を用いて局在化される。画像化部位は、放射性トレーサーが病理学的部位で局在化するために選択（ポジティブ・コントラストと呼ばれる）されるか、あるいはその代わりに、放射性トレーサーは特にそのような病理学的部位では局在化しないように選択（ネガティブコントラストと称される）されるので、検出可能である。
ＩＶ．放射性核種
種々の放射性核種が放射性画像形成法および放射免疫療法にとって有用であることが知られており、該核種として６７Ｇａ／６８Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１６９Ｙｂ、または１８６Ｒｅ／１８８Ｒｅである。より良好な画像形成特性と低価格とにより、１２３Ｉ、１３１Ｉ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ標識化合物に対する代替物を、可能な場合、対応の９９ｍＴｃ標識化合物で置換するか、または提供を行う試みがなされた。非常に低下価格（＄０．２１／ｍＣｉ）であるのと同様に、好適な物理的特性により、放射性医薬品の標識に９９ｍＴｃが好ましい。ＤＴＰＡ薬物結合体を効果的に９９ｍＴｃによって標識しうるという報告（Ｍａｔｈｉａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）にもかかわらず、ＤＴＰＡ部分が１１１Ｉｎほど安定には９９ｍＴｃによってキレートしない（Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ、１９９７）。
【００３７】
ヒトの最適放射性画像形成法のために考慮しなければならない要因が数多くある。検出の効率を最大にするために、１００〜２００ｋｅＶの範囲でγエネルギーを発する放射性核種が、好ましい。患者に吸収された線量を最小化するために、放射性核種の物理的半減期は、画像形成の手順が可能とするものと同程度短くなければならない。検査がいかなる日のいかなる時間でも実行可能とするために、臨床現場に常に利用できる放射性核種源を常備しておくと好都合である。９９ｍＴｃは、１４０ｋｅＶでγ線放射を発し、６時間の半減期を持ち、さらにモリブデン−９９／テクネチウム９９ｍジェネレーターを用いて容易に現場で利用できるから、好ましい放射性核種である。
【００３８】
Ｖ．  エチレンジステイン  
本発明は、９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体を、腫瘍起因性血管新生，  低酸素症、アポトーシス異常，  疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的にする標識剤として用いるとともに、それらの生化学的プロセスに対する医薬製剤の効果を評価するために用いる。
【００３９】
組織標的リガンドをＥＣに結合させることの利点は、組織標的リガンドの特異的結合特性が対象領域上に放射性シグナルを集中させるということである。標識戦略として９９ｍＴｃ−ＥＣを用いることは、疾患レセプター、低酸素症、アポトーシス経路、疾患細胞周期、疾患機能経路、放射免疫療法を標的にするリガンド、およびそれらの生化学的プロセスに対する医薬製剤の効果の評価で有効であると、考えられる。本発明のいくつかの実施形態の例を表１に示す。
【００４０】
【表１】
2006515835.tif 000006
【００４１】
ＶＩ．９９ｍテクネチウム−ＥＣ複合体
９９ｍＴｃは、９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩（ＴｃＯ４−；＋７酸化状態にあるテクネチウム）として、通常、モリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍジェネレーターから作られる。しかし過テクネチウム酸塩は他の化合物と十分には結合しない。したがって、化合物を放射標識するために、９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩を他の形態に変換する必要がある。テクネチウムは水溶性溶液で安定な形をとらないことから、配位複合体の形でそのような溶液に保持されならない。この配位複合体は、十分な動力学的および熱力学的安定性を持ち、分解を防ぎ、９９ｍＴｃを不溶性の二酸化テクネチウムに変換するか、または過テクネチウム酸塩に戻す。
【００４２】
放射性標識を目的として、９９ｍＴｃ複合体を、テクネチウム・イオンを取り囲んでいるドナー基の全てが単一のキレート化リガンド（この場合、エチレンジステイン）によって提供されるキレートとして、形成することが特に有利である。このことは、キレート化９９ｍＴｃが、直接またはエチレンジステインとリガンドとの間の一つのリンカーを通して、組織特異的リガンドに共有結合することを可能とする。
【００４３】
テクネチウムは、酸化状態の数：＋１、＋２、＋４、＋５、＋６、および＋７を有する。酸化状態が＋１の場合、ＴｃＭＩＢＩと呼ぶ。ＴｃＭＩＢＩは、熱反応で必然的に生ずる（Ｓｅａｂｏｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）。Ｍ２Ｓ２キレートを用いる場合、本発明の目的にとって、Ｔｃが＋４酸化状態にあることが重要である。この酸化状態は、ＥＣでＮ２Ｓ２キレートを形成する上で理想的である。したがって、本発明の薬物結合体による放射性テクネチウムの複合体を形成する際に、好ましくは９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩が還元剤の存在下で本発明の薬物結合体と反応することが好ましい。
【００４４】
本発明での使用にとって好ましい還元剤は、塩化スズ（ＳｎＣｌ２）の形になっているスズ・イオンであり、Ｔｃをその＋４酸化状態に還元する。しかし、他の還元剤、例えばジチオン酸塩イオンまたは第一鉄イオンが本発明と関連して有用であることが考えられる。還元剤が固相還元剤であることも考えられる。コロイドの形成を回避する必要があることから、還元剤の量は重要である。好ましくは、例えば、約１００ないし約３００ｍＣｉのＴｃ過テクネチウム酸塩あたり約１０ないし約１００μｇのＳｎＣｌ２を用いる。最も好ましい量は、約２ｍｌの生理食塩水および約２００ｍＣｉのＴｃ過テクネチウム酸塩あたり、約０．１ｍｇのＳｎＣ１２である。これは、概して、５人の患者で使用するのに十分なＴｃ−Ｅｃ−組織特異的リガンド結合体を生産する。
【００４５】
エチレンジステインの酸化を予防するために、抗酸化剤とトランジッション・キレーターとを組成物に含ませることが、しばしば重要である。本発明と併用して用いるための好ましい抗酸化剤は、ビタミンＣ（アスコルビン酸）である。しかし、他の抗酸化剤（例えばトコフェロール、ピリドキシン、チアミンまたはルチン）が有用であることも考えられる。トランジッション・キレーターの例として、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルカレート、シトラート、およびタルタレイトがあげられる。いくつかの実施形態において、トランジッション・キレーターはグルコン酸またはグルカレイトであり、それのどちらもエチレンジステインの安定性を損なわない。
【００４６】
ＶＩＩ．ＥＣリガンド
一般に、本発明に関連して使用するリガンドは、アミノ基またはヒドロキシ基のいずれかを持ち、これらの基は一方の酸の腕または両方の酸の腕上のＥＣと結合する。もし、アミノ基またはヒドロキシ基が利用不可能（例えば、酸性官能基）であるならば、未だ、所望のリガンドを、リンカー（例えば、エチレンジアミン、アミノプロパノール、ジエチレントリアミン、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、またはリジン）を添加することによって、本発明の方法を用いて、ＥＣと結合して９９ｍＴｃによって標識することが可能である。本発明での使用を考えたリガンドとして、限定されるものではないが、血管新生／抗血管新生リガンド、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害物質、解糖マーカー、抗代謝産物リガンド、アポトーシス／低酸素症リガンド、ＤＮＡインターカレータ、細胞レセプターマーカー、ペプチド、ヌクレオチド、抗微生物剤（例えば、抗生物質または抗菌剤）、器官特異的リガンド、糖類、およびグルコースを模倣した薬剤が挙げられる。
【００４７】
ＥＣ自体は、水溶性である。発明のＥＣ−薬物結合体も水溶性であることが、必要である。本発明に関連して用いられるリガンドの多くは、水溶性であるか、ＥＣに結合した場合に水溶性化合物を形成する。しかし、組織特異的リガンドが水溶性でない場合、リガンドの溶解性を増加させるリンカーを用いることもできる。本発明との結合で使用するリガンドの多くは水溶性、またはＥＣと結合した場合に水溶性化合物を形成する。しかし、組織特異的リガンドが水溶性でなければ、リガンドの溶解性を高めるリンカーが使用される。リンカーは脂肪族、芳香族アルコール、アミン、ペプチド、カルボキシル、ペプチド、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。リンカーは、ポリ・アミノ酸（ペプチド）、アミノ酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、セリン、チロシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。より好ましくは、リンカーは、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
【００４８】
また、本発明のＥＣ組織得的リガンド薬物結合体が、他の放射核種をキレートし、放射核種療法に用いられることも考えられる。通常、実質的に、α、β−エミッター、γ−エミッター、またはβ、γ−エミッターのいずれかを、本発明と関連して用いることができる。好ましいα−エミッターとして、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、およびラジウム−２２３が挙げられる。好ましいβ、γ−エミッターとして、１６６Ｈｏ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、および８９Ｓｒが挙げられる。好ましいβエミッターとして、９０Ｙおよび２２５Ａｃが挙げられる。好ましいγ−エミッターとして、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、および１１１Ｉｎが挙げられる。好ましいα−エミッターとして、２１１Ａｔおよび２１２Ｂｉが挙げられる。また、正磁性体、例えばＧｄ、Ｍｎ、Ｃｕ、またはＦｅも、本発明に関連して使用するためにＥＣとキレートしうると考えられる。
【００４９】
ＶＩＩＩ．ＥＣ複合体を調製するためのキット
そのような複合体を調製するための複合体および手段は、キットの形で簡便に提供され、該キットは密閉されたバイアル瓶を有し、該バイアル瓶には標識されるべき本発明の所定量のＥＣ−組織特異的リガンド結合体と、９９ｍＴｃとの結合体を標識するための十分な量の還元剤とが含まれる。本発明にもとづく９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤の調製は、適当な量の９９ｍＴｃまたは９９ｍＴｃ複合体を、ＥＣ−組織特異的リガンド結合体と還元剤とを含み、以下の実施例１に記載された条件下で反応するバイアル瓶に加えることで、おこなうことができる。上記キットは、従来の医薬品添加物材料（例えば、浸透圧を調整する医薬的に許容可能な塩類、緩衝液、防腐剤、抗酸化剤）を含むこともできる。
【００５０】
いくつかの実施形態において、抗酸化剤およびトランジッション・キレーターは、エチレンジステインの酸化を予防するために、組成物に含まれる。いくつかの実施形態において、抗酸化剤はアスコルビン酸（アスコルビン酸）である。しかし、当業者に知られている他の抗酸化剤のいずれか（例えばトコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチン）を使用することも可能であると考えられる。本発明で用いるトランジッション・キレーターの例として、限定されるものではないが、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルカレイト、シトラート、およびタルタレートが挙げられる。本発明のいくつかの実施形態において、これらがエチレンジステインの安定性を妨げないことから、トランジッション・キレーターはグルコン酸またはグルカレイトである。キットの構成要素は、液体、凍結、または乾燥した形態であってもよい。好ましい実施形態において、キット構成要素は、凍結乾燥された形で提供される。
【００５１】
ＩＸ．  放射性標識試薬  
本発明によって提供される放射性標識試薬または結合体は、適当量の放射能を持って提供される。９９ｍＴｃ放射性複合体を形成する際に、それは通常、１ｍｌあたり約０．０１ミリキューリー（ｍＣｉ）ないし約３００ｍＣｉの濃度で放射能を含む放射性複合体含有溶液を作ることが好ましい。  
【００５２】
本発明によって提供される９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤を、哺乳類体内の一部位の視覚化に用いることができる。この発明によれば、９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤は、一単位注射用量で投与される。当業者に知られている一般的な担体のいずれか、例えば滅菌食塩水または血漿を、注射可能な溶液を調製するために放射性標識の後に用いることで、この発明に基づいて診断的に種々の器官、腫瘍等を視覚化する。一般に、投与すべき単位用量は、約０．０１ｍＣｉないし約３００ｍＣｉ、好ましくは１０ｍＣｉないし約２００ｍＣｉの放射能を持つ。単位用量で注射される溶液は、約０．０１ｍｌないし約１０ｍｌである。静脈内投与後、放射性標識試薬が患者に導入された後、必要に応じて、数時間以上経ってから、器官または腫瘍の生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）画像形成をおこなうことができる。ほとんどの場合、ガンマ・シンチグラムを撮ることを可能とする１時間の約０．１以内で、十分な量の投与された用量が画像形成される領域に集積する。診断または予後目的のための任意のシンチグラム画像形成従来法を、この発明にもとづいて利用することができる。
【００５３】
Ｘ．  ９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体の用途
本発明の９９ｍＴｃ−ＥＣ標識戦略もまた、予後目的のために用いることが可能である。ＥＣ−結合体（表１に列挙）を、腫瘍を持つ患者に投与することが可能であると考えられる。９９ｍＴｃ−ＥＣを標識戦略として用いることは、疾患レセプター、低酸素症標識、アポトーシス異常、疾患細胞周期、および疾患機能経路を標的化するために、またこれらの生化学的プロセスでの医薬製剤の効果を評価するために設計されたリガンドで有効である。画像形成は、疾患レセプター、低酸素症マーカー、アポトーシス異常、疾患細胞周期、疾患機能経路に関連した具体的な患者の問題と、これらの生化学的プロセスに対する医薬製剤の効果の評価とに対して、９９ｍＴｃ−ＥＣ−結合体の効果を測定するために実行してもよい。この方法論を用いて、医師は、どの９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体が患者にとって最も効果的であり、対応する治療または処置のモードを設計するのに最も効果的であることを素早く決定することができる。この新規方法論は、癌の化学療法剤の効果が決定される前に、実質的なコストで数ヶ月に及ぶ患者の時間を伴う薬物の選択および化学療法のラウンドの投与をおこなう現行の方法に対して、顕著な改善を示す。
【００５４】
本発明は、癌が寛解期にあるか、または転移したかどうかを判断するために、化学療法または放射線治療を継続的に受けていた元患者の経過をモニターすることにも、用いられた。家族の中に癌の既往歴があったり、癌に関連した遺伝子を持つと診断された人々は、本発明の方法論を用いて医療専門家によってモニタリングを受けることができる。発癌物質に対する環境暴露による癌リスク係数を持つヒトで人で癌が進行し始めたかどうかをモニターするために、本発明の方法および医薬製剤を医療専門家が使用することができる。
【００５５】
ＸＩ．  腫瘍起因性血管新生標的化
この出願の全体を通じて、「腫瘍起因性血管新生標的化」とは、腫瘍新血管新生と腫瘍細胞とを結合するために、薬剤を使用することをいう。このために使われる薬剤は、腫瘍血管床の大きさ測定および腫瘍の容積測定を含む種々の腫瘍測定を実行するために使用されることが当業者に知られている。これらの薬剤の一部は、血管壁と結合する。当業者は、この目的のための用途に利用可能な薬剤に精通している。腫瘍起因性血管新生標的リガンドは、上で定義されるように、腫瘍起因性血管新生標的化に用いられるリガンドである。これらの薬剤の例として、９９ｍＴｃ−ＥＣ−セレブレックス（ＥＣ−ＣＯＸ−２）、９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ヘルセプチン、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンが挙げられ、さらに、９９ｍＴｃ−ＥＣ−サリドマイドは血管新生での生化学的プロセスの評価のために開発された。
【００５６】
ＸＩＩ．  腫瘍アポトーシス標的化
「腫瘍アポトーシス標的化」とは、アポトーシスを受けるかアポトーシスを受けることの危険にさらされている細胞と結合するために、薬剤を使用することをいう。細胞（例えば腫瘍）の集団で、これらの薬剤は、通常、アポトーシスまたはプログラム細胞死の範囲または危険度の指標を提供するのに用いられる。当業者は、このために使われる薬剤に精通している。アポトーシス標的化薬剤の例は、表１に示されている。「腫瘍アポトーシス標的リガンド」は、このパラグラフで定義されるように、「腫瘍アポトーシス標的化」を実行することができるリガンドである。本発明の標的リガンドはＴＲＡＩＬを含むものであってもよく、それはリガンド（種々の形質転換細胞系で急速にアポトーシスを誘発する腫瘍壊死因子リガンド・ファミリーのメンバー）を誘発しているＴＮＦ関連のアポトーシスである。本発明の標的リガンドは、カスパーゼ３標的リガンドを含むものであってもよい。
【００５７】
それらの細胞保護的な機能を廃止して、腫瘍細胞に対するアポトーシス感度を修復するという考えで、アポトーシス・サプレッサーが薬物送達の標的となる（Ｒｅａｄ，  ２００３）。
【００５８】
ＸＩＩＩ．疾患レセプター標的化
「疾患レセプター標的化」では、ある種の薬剤は、癌等の疾患状態で過剰発現する特定の細胞レセプターに結合する能力を活用する。標的になるそのようなレセプターの例として、エストロゲンレセプター、アンドロゲンレセプター、下垂体性レセプター、トランスフェリンレセプター、およびプロゲステロンレセプターが挙げられる。疾患レセプター標的化に適用することができる薬剤の例を表１に示す。
【００５９】
放射性標識リガンド（例えば、ペンテトレオチド、オクトレオチド、トランスフェリン、および下垂体性ペプチド）は細胞レセプターと結合し、そのいくつかは特定の細胞上で過剰発現される。これらのリガンドが免疫原性ではなく、血漿から急速にクリアされるので、レセプター画像は抗体画像化と比較してより有望なようである。
【００６０】
この発明では、発明者は一連の新しいレセプターリガンドを開発した。これらのリガンドは、９９ｍＴｃ−ＥＣ−黄体形成ホルモン（９９ｍＴｃ−ＥＣ）と９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンとである。
【００６１】
ＸＩＶ．  疾患細胞周期標的化
細胞増殖の生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）測定のための遺伝子をベースとする類似体は、ＰＥＴによって示された（（Ａｌａｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。
【００６２】
疾患細胞周期標的化とは、増殖性細胞で上方制御される薬剤の標的化をいう。このために使用される化合物は、細胞（例えば腫瘍細胞ＤＮＡ含有量）で種々のパラメータを測定するのに用いることができる。
【００６３】
これらの薬剤の多くが、ヌクレオシド類似体である。例えば、ピリミジン・ヌクレオシド  （例えば、２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨード−ｌ−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル  ［ＦＩＡＵ］］、  ２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨード−１−１３−Ｄ−リボフラノシル−ウラシル  ［ＦＩＲＵ］、  ２’−フルオロ−２’−５−メチル−ｌ−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル  ［ＦＭＡＵ］、  ２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨードビニル−ｌ−Ｂ−Ｄ−リボフラノシルウラシル  ［ＩＶＦＲＵ］）およびアシログアノシン：  ９−［（２−ヒドロキシ−ｌ−（ヒドロキシメチル）エトキシ）メチル］  グアニン  （ＧＣＶ）および  ９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシ−メチル）ブチル］グアニン  （ＰＣＶ）  （Ｔｊｕｖａｊｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２；  Ｇａｍｂｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，’  １９９８；  Ｇａｍｂｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）  、ならびに他の１８Ｆ−標識アシログアノシン  類似体，  ｓｕｃｈ  ａｓ  ８−フルオロ−９−［（２−ヒドロキシ−ｌ−（ヒドロキシメチル）エトキシ）メチル］グアニン  （ＦＧＣＶ）  （Ｇａｍｂｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９；  Ｎａｍａｖａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００），  ８−フルオロ−９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン  （ＦＰＣＶ）  （Ｇａｍｂｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００；  ｌｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）、  ９−［３−フルオロ−ｌ−ヒドロキシ−２−プロポキシメチルグアニン  （ＦＨＰＧ）  （Ａｌａｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ａｌａｕｄｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）、ならびに  ９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン  （ＦＨＢＧ）  （Ａｌａｕｄｄｉｎ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｉ，  １９９８；  Ｙａｇｈｏｕｂｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）を野生型および突然変異ＨＳＶＩ−ｔｋ発現を画像化する上で、レセプターサブストレートが野生型および突然変態を画像化するためのレポーター基質として開発せれてきた（Ｇａｍｂｈｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）  。当業者は、疾患細胞周期標的化に用いられるこれらおよび他の薬剤に精通している。
【００６４】
当業者は、疾患細胞周期標的化に用いられるこれらおよび他の薬剤に精通している。この発明では、発明者が一連の疾患細胞周期標的リガンドを開発した。これらのリガンドは、例えば、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンと９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）とを含む。
【００６５】
ＸＶ．  薬物評価
本発明の特定の薬物に拠点を置くリガンドは、被験体の薬理学的反応を薬物に調整する際に適用されることができる。広範囲にわたるパラメータを、薬物の投与に対する被験体の応答を判断する際に測定することができる。当業者は、測定できる反応のタイプに精通している。これらの反応は、種々の因子に一つには依存するもので、該因子として、評価されている特定の薬物、被験体が処置されている特定の疾患または状態、および被験体の特徴を含む。放射性標識剤を、薬物評価の測定で適用できる。
【００６６】
この発明では、発明者は新薬ベースのリガンド（９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチン（Ｔａｇｇａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）を開発した。これらの薬剤の他の例を表１に示した。
【００６７】
ＸＶＩ．  医薬製剤  
本発明の医薬組成物は、有効量の放射性標識エチレンジステイン誘導体、またはより好ましくは９９ｍＴｃ−ＥＣ誘導体、または医薬的に許容される担体に溶解または分散された追加の薬剤を含む。「医薬的または薬理学的に許容される」という慣用句は、分子の実体および組成物に言及するものであり、該組成物は、動物（例えば、適当なものとしてヒト）に投与する場合、フレーズ分子疾患単位と、例えば、動物に投与される場合、副作用、アレルギーまたは他の有害な反応を生じない組成物（例えばヒト適当であるように）である。少なくとも１つの放射性標識エチレンジステイン誘導体または添加された活性成分を含む医薬品組成物の調製は、本開示を考慮して当業者に知られており、例えば、本明細書で援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎのＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．  Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９０によって例示されている。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与に関して、製剤は、ＦＤＡ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓによって求められるような無菌性、発熱原性、一般的安全性、および純度の基準に合致しなければならないと理解される。
【００６８】
本明細書で用いられるように、「医薬的に許容される担体」として、当業者に知られているように、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、サーファクタント、抗酸化剤、防腐剤（例えば抗菌剤、抗真菌因子）、等張剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬物、薬物安定剤、ゲル類、バインダー、賦形剤、崩壊薬剤、滑沢剤、甘味料、香料、染料、そのような材料、およびそれらの組合せが挙げられる（例えば、本明細書で援用するＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．  Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９０，  ｐｐ．  １２８９−１３２９を参照せよ）。いかなる従来の担体でも活性成分と適合しないこと以外は、治療または医薬組成物でのその使用が意図される。
【００６９】
放射性標識エチレンジステイン誘導体は、固体、液体、またはエアゾール形状で投与するかどうか、またまたそのような投与経路（例えば注射）のために無菌にする必要があるかどうかに依存して、異なるタイプの担体を含むことができる。本発明は、静脈内、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、脳内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、腟内、内直腸、局所的、内腫瘤、筋肉内、腹腔内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、内臍帯、眼球内、経口的、局所的、局在的、注射、注入、持続注入法、直接標的細胞を浸している局所化された灌流適用（洗浄液を経て、脂質組成（例えばリポソーム）のカテーテルによる）または当業者に知られているように、他の方法または前述の任意の組み合わせよって、投与される（例えば、本明細書で援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．  Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  １９９０を参照せよ）。
【００７０】
患者に投与される本発明の組成物の実際の投与量は、物理的および生理的因子（例えば体重、症状重症度、処置されている疾患の種類、先または同時の治療的な介入、患者の特発性疾患、および投与経路）で測定される。投与に対して責任がある開業医は、いずれにしても、個々の被験体のために組成物中の適当な活性成分の濃度と、適当な用量とを決定する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、少なくとも約０．１％の放射性標識エチレンジステイン誘導体を含む。別の実施形態では、活性化合物は約２％ないし約７５％の単位重量、または約２５％ないし約６０％、例えば、そのなかに誘導される任意の範囲であってもよい。他の非限定的な例として、用量は、１回の投与あたり、約０．１  ｍｇ／ｋｇ／体重，  ０．５  ｍｇ／ｋｇ／誘導体、１  ｍｇ／ｋｇ／体重、約５  ｍｇ／ｋｇ／体重、約１０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約２０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約  ３０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約４０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約５０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約７５  ｍｇ／ｋｇ／体重、約１００  ｍｇ／ｋｇ／体重、約２００ｍｇ／ｋｇ／体重、約３５０  ｍｇ／ｋｇ／体重、約５００  ｍｇ／ｋｇ／体重、７５０  ｍｇ／ｋｇ／体重から、約１０００  ｍｇ／ｋｇ／体重以上であり、そこから誘導される任意の範囲である。本明細書中にリストされた数の誘導可能な範囲の非限定的な例では、約１０ｍｇ／ｋｇ／誘導体ないし約１００ｍｇ／ｋｇ／誘導体、その他の範囲内で、上記した数にもとづいて、投与することができる。
【００７２】
いずれにせよ、組成物は１種類以上の構成要素の酸化を遅延させるために、種々の抗酸化剤を含むことができる。その上、微生物作用の予防は、防腐剤（例えば種々の抗細菌性と抗真菌因子）によってもたらすことができ、限定されるものではないが、パラベン（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸  、チメロサール、またはそれらの組み合わせである。
【００７３】
放射性標識エチレンジステイン誘導体は、遊離塩基、中性または塩の形状で、組成物に処方される。医薬的に許容可能な塩類として、無機塩基（例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄）に由来する遊離カルボキシル基で形成される塩類が挙げられ、またはイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ヒスチジンまたはプロカインのような有機塩基が挙げられる。  
【００７４】
実施形態では、組成物が液体状態である場合は、限定されるものではないが、担体は水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレン・グリコール、液体ポリエチレン・グリコール等）、脂質（例えばトリグリセライド、植物油、リポソーム）、およびそれの組合せである。適当な流動性は、例えば、コーティング（例えばレシチン）を用いて維持される。すなわち、液体ポリオールまたは脂質による担体内での分散により、所望の粒径を保つことで、例えば、ヒドロキシ・プロピルセルロース等の構造またはそれらの方法の組み合わせによって、担体（例えば液体ポリオールまたは脂質）の分散による必須の粒度の維持によって；サーファクタント（例えばヒドロキシプロピルセルロース）を用いて；または、そのような方法の組み合わせによって、維持される。多くの場合、等張剤（例えば糖、塩化ナトリウム、または組合せ）を含むことが、好ましい。
【００７５】
無菌の注射可能溶液は、必要に応じて、上で列挙される他の成分の種々の量で放射性標識エチレンジステイン誘導体を適当な溶媒の必須の量に取り入れることによって調製された後、フィルターによる殺菌がおこなわれる。通常、分散は種々の殺菌された活性成分を基本的な分散媒および／または他の成分を含む無菌のビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌の注射可能溶液、サスペンションまたはエマルジョンの調製のための無菌の粉体の場合、好ましい調製法は、事前に無菌濾過液体培地から、活性成分プラス任意かつ所望の追加成分によって粉体を産生する真空乾燥または凍結乾燥技術である。液体培地は必要に応じて十分に緩衝されなければならなず、液体希釈剤が充分な生理食塩水またはブドウ糖で注射前に、最初に等張力性となる。直接噴射式のための非常に濃縮組成物の調製も考えられ、溶媒としてのＤＭＳＯの使用は、非常に急速な浸透をもたらして、小さい領域に活性成分を高濃度にする。
【００７６】
組成物は製造および保存の条件下で安定でなければならない。微生物（例えば細菌と菌類）による汚染にたいして保護される。エンドトキシン汚染を安全なレベル、例えば０．５ｎｇ／ｍｇタンパク質未満で、最小限に保たなければならないことは、いうまでもない。
【００７７】
特定の実施形態において、注射可能組成物の遷延性吸収は、吸収（例えばモノステアリン酸アルミニウム、ゼラチンまたはそれらの組み合わせ）を延ばしている薬剤の組成物で、使用によってもたらされることができる。
【００７８】
ＸＶＩＩ．  併用療法
本発明の一局面は、放射性標識エチレンジステイン誘導体ともう一つの薬剤または治療方法（望ましくはもう一つの癌治療）とを併用して用いることができる。放射性標識エチレンジステイン誘導体は、分から週に至るまでの変動する間隔まで、他の薬剤処置よりも先行または後続することが可能である。他の薬剤と発現コンストラクトとが別々に細胞に適用される実施形態では、薬剤と発現コンストラクトとが、細胞に対して有利に複合効果を及ぼすことが未だ可能であるように、重要な期間は、各々の送達の時間の間で期限切れにならなかったことが一般に確実である。例えば、このような場合には、放射性標識エチレンジステイン誘導体で実質的に同時に（すなわち、２分未満の範囲で）、２、３、４、およびそれ以上のモダリティーを持つ細胞、組織、または器官に接触してもよいと考えられる。他の局面では、１種類以上の薬剤を約１分間以内に投与してもよい。以上２、３、４モダリティー（すなわち、約１分より少ないものの範囲内で）で細胞、組織または生体に連絡することができることは、考察される。他の局面において、１種類以上の薬剤を、放射性標識エチレンジステイン誘導体の投与前および／または投与後の約１分、約５分、約１０分、約２０分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２５時間、約２６時間、約２７時間、約２８時間、約２９時間、約３０時間、約３１時間、約３２時間、約３３時間、約３４時間、約３５時間、約３６時間、約３７時間、約３８時間、約３９時間、約４０時間、約４１時間、約４２時間、約４３時間、約４４時間、約４５時間、約４６時間、約４７時間から、  約４８時間またはそれ以上までの範囲内で、投与してもよい。いくつかの他の実施形態では、薬剤は、放射性標識エチレンジステイン誘導体の投与前および／または投与後の約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日から、約２１日までに、投与することが可能である。いくつかの状況では、処置のために著しく時間を拡張することが望ましいと考えられるが、その場合、それぞれの投与の間で数週間（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、または約８週以上）経過する。
【００７９】
種々の組合せを用いることができ、放射性標識エチレンジステイン誘導体は”Ａ”であり、他の任意の治療薬である第２の薬剤は、”Ｂ”である。
Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ  
Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ  ＡＢ／Ａ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ
患者に対する本発明の治療的な発現コンストラクトの投与は、毒性を考慮して、あるとしても、ベクターの化学療法剤の投与のために、一般のプロトコルに従う。処置サイクルが必要に応じて繰り返されることが期待される。また、種々の標準的治療（外科的処置と同様に）が記載されたヒ素薬剤と結合して適用されることができると考えられる。これらの治療として、限定されるものではないが、化学療法、放射線療法、免疫療法、遺伝子治療、および手術が挙げられる。
【００８０】
ａ．  化学療法
多剤併用化学療法として、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、二とロスレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ピリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲンレセプター結合剤、タキソール、ゲムシタビエン、ナベルビエン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害物質、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびメトトレキセートが挙げられ、あるいは前述のいかなる類似体または誘導体変異体が挙げられる。        
【００８１】
ｂ．  放射線療法
ＤＮＡ損傷を生じて、広範囲に使われた他の要素として、一般にｙ−線、Ｘ線として知られているもの、および／または腫瘍細胞に対する放射性同位元素の直接送達が挙げられる。他の形態のＤＮＡ損傷因子として、例えばマイクロ波とＵＶ照射とが考えられる。これらの因子は、ＤＮＡ前駆体上で、ＤＮＡの複製および修復上で、さらに染色体の集合および維持の際に、ＤＮＡの損傷の幅広い範囲にわたって、影響を及ぼす可能性が最もある。２０００〜６０００のレントゲンの単一用量に、Ｘ線のための投薬量範囲は、長期にわたる期間（３〜４週）の間、５０〜２００のレントゲンの１日量から変動する。放射性同位元素の投与量範囲は、幅広く変動し、同位体元素の半減期、照射された放射線の強さおよび種類、さらに腫瘍細胞による取り込み次第である。「接触（ｃｏｎｔａｃｔｅｄ）」および「露出（ｅｘｐｏｓｅ）」という用語は、細胞に液用された場合、細胞に適用されるとき、「接触し」て、「露出する」条件が治療的なコンストラクトと化学療法剤またはラジオ治療薬が標的細胞に送達されるか、標的細胞で直接の並置に置かれるプロセスを記載するために本明細書中に使われる。細胞殺害または鬱血を成し遂げるために、両方の薬剤は、細胞を殺すかまたは細胞が分裂するのを防ぐのに効果的な総量で、細胞に送達される。
【００８２】
ｃ．  免疫療法
免疫療法剤、通常、標的に免疫エフェクター細胞と分子の使用に依存して、癌細胞を破壊する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面の若干のマーカーに特有の抗体であると考えられる。抗体単独は治療のエフェクターとして用いられることができる、または、実際に細胞殺害をもたらすことは他の細胞を補充することができる。抗体も薬物または毒素（化学療法剤、放射性ヌクレオチド、リシンＡ鎖、コレラトキシン、百日咳毒素、その他）に結合することができて、単にターゲティング薬剤のみとして用いられる。あるいは、エフェクターは、直接または間接的に、腫瘍細胞標的と妨害する表面分子を運んでいるリンパ球であることができる。種々のエフェクター細胞は、細胞障害性Ｔ細胞とＮＫ細胞とを含む。
【００８３】
遺伝子治療と同時に、免疫療法が、このように、併用療法の一部として使われることができた。併用療法のための一般のアプローチは、後述する。通常、腫瘍細胞は標的化の影響を受けやすい（すなわち他の細胞の大部分には存在しない）いくつかのマーカーを持たなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれも本発明の文脈では標的化に適当である。共通腫瘍マーカーとして、癌胎児性抗原、前立腺特異抗原、尿腫瘍関連する抗原、胎児性抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ−７２、Ｉ１ＭＦＧ、ＳｉａｌｙｌルイスＡｎｔｉｇｅｎ、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、エストロゲンレセプター、ラミニンレセプタ、ｅｒｂ  Ｂ、およびｐ１５５が挙げられる。                
【００８４】
ｄ．  遺伝子  
さらに別の実施形態では、二次処理は二次遺伝子治療であり、治療用ポリヌクレオチドが、一次治療薬よりも前に、後に、または同時に、投与される。遺伝子産物をコードしているベクターと同時の治療薬の送達は、標的組織に対して複合抗高増殖性効果（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ）をもたらす。
【００８５】
ｅ．手術
癌患者の約６０％は、なんらかのタイプの手術を受け、該手術として予防的、診断的または病気分類的、治癒的、および待機的な手術である。治癒手術は、他の治療（例えば本発明、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子治療、免疫療法および／または代替療法の処置）と同時に用いることが可能な癌治療である。治癒手術は、ガン組織の全部または一部が物理的にまたは部分的に除去されて、切除されて、および／または破壊される摘除を含む。腫瘍摘除は、少なくとも腫瘍の一部の実際の撤去に言及する。腫瘍摘除に加えて、手術による処置として、レーザ外科、冷凍外科学、電気外科、ミスコピカリー（ｍｉｓｃｏｐｉｃａｌｌｙ）に制御された手術（Ｍｏｂｓ’  ｓｕｒｇｅｒｙ）が挙げられる。本発明が表在性癌、前癌状態または正常組織の付帯的な量の除去と同時に使うことができることをさらに考察する。
【００８６】
ＸＶＩＩＩ．  ＥＣの合成
ＥＣは、前述した方法によって二段階の合成で調製された（Ｒａｔｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｌａｒｋｅ，  １９３７；  Ｂｌｏｎｄｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９６７；  それぞれ本明細書で援用する）。前駆体、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸（ｍ．ｐ．  １９５°、報告１９６−１９７°）を合成した。つぎに、ＥＣ（ｍ．ｐ．  ２３７°、報告２５１−２５３°）を調製した。構造は、Ｈ−ＮＭＲ（ＦＡＢ−ＭＳ）と高速原子衝撃質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）によって確認された。
【００８７】
ＸＩＸ．  シンチグラム・イメージングおよびオートラジオグラフィー検査
低エネルギー平行孔コリメーターを備えたガンマ・カメラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｅｓｔａｔｅｓ，  ＩＬ，  またはＰｈｉｌｉｐｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，  Ｓｋｙｌｉｇｈｔ，  Ｍｉｌｐｉｔａｓ，  ＣＡ）  を用い、１８．５ＭＢｑの９９ｍＴｃ標識放射性トレーサーを静脈注射して０．５、２、および４時間後に得てシンチグラム像を得た。全身オートラジオグラムは、定量的イメージアナライザ（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｐａｃｋａｒｄ，  Ｍｅｒｉｄｉａｎ，  ＣＩ．）によって得られた。９９ｍＴｃ−ＥＣ−葉酸の３７ＭＢｑの静脈内注射後、１時間目に動物を殺し、その体をカルボキシルメチルセルロース（４％）で固定した。凍結した本体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上にマウントして１００μｍ冠状切片を切り出した。各々の切片を解凍してスライドに載せた。つぎに、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ００１４８０）と接触して配置して、１５時間にわたって９９ｍＴｃ標識で露光した。ラベルをつけられる１５のｈ  ９９ｍＴｃ−のために露出した）。蛍光スクリーンは赤色レーザーで励起し、事前に吸収されたエネルギーで比例している結果として生じる青色光を記録した。
【００８８】
ＸＸ．  定義
本明細書で用いられるように、「放射性核種」という用語は、具体的な実施形態で粒子または電磁放射線放出で崩壊する放射性核種（測定可能な寿命にわたって核の電荷、質量、数、および量子状態によって特徴づけられる原子の一種）として定義される。上記用語が、用語「放射性同位元素」で同義的に使われる。
【００８９】
用語「治療薬」本明細書で用いられるようには、処置を疾患または医学状態に提供する薬剤として定義される。特異的な実施形態の薬剤は、疾患または医学的状態の少なくとも１つの症状またはパラメータを改善する。例えば、腫瘍療法では、治療薬は腫瘍のサイズを減らすか、腫瘍の成長または転移を阻害するか、予防するか、腫瘍を除去する。実施例は、薬物（例えば抗癌薬、遺伝子治療組成物、放射性核種、ホルモン、栄養補助剤、またはそれらの組み合わせ）を含む。
【００９０】
本明細書で用いられるように用語「腫瘍」は、組織の細胞が抑制されない漸進的成長として定義される。当業者は、新生物または悪性のような、他の同義の条件が存在することに気づいている。具体的な実施形態において、腫瘍は充実性腫瘍である。他の具体的な実施形態において、腫瘍は、主にまたは転移の形態として、肝臓、前立腺、膵臓、頭頸部、胸部、脳、大腸、アデノイド、口頭試問、皮膚、肺、精巣、卵巣、頸部、子宮内膜、膀胱、胃、および上皮（例えば疣）の癌を誘導する。
【００９１】
本明細書で用いられるように用語「薬物」は、疾患または医学状態の処置を助ける、または疾患または医学状態と関連する生理的または病理学的状態のいずれかを制御または改善する化合物として定義される。具体的な実施形態において、本剤は９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬物結合体である。
【００９２】
本明細書で用いられるように用語「抗癌薬」は、癌（例えば、充実性腫瘍）の処置のための薬物として定義される。抗癌薬は、望ましくは腫瘍のサイズを減らして、腫瘍の成長または転移を阻害、予防、および／または腫瘍を除去する。
【００９３】
本明細書で用いられるように、「ａ」または「ａｎ」は１以上を意味する。特許請求の範囲で用いられるように、「ａ」または「ａｎ」は１または２以上を意味する。本明細書で用いられるように、「別の（ａｎｏｔｈｅｒ）」は少なくとも第２以上を意味する。  
【００９４】
ＸＸＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために包含される。当業者であれば、以下の実施例で開示される技術が、本発明を実施する上で十分に機能する本発明者が発見した技術を表しているため、その実施のための好ましい形態を構成するとみなされうることを認識するであろう。しかし、当業者は、本開示を鑑みて、開示される特定の実施形態で多くの変化がなされうることを認識し、それでもなお、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様または類似の結果を得る。
【００９５】
実施例１
ＥＣ−アンギオスタチンを用いたインテグリン（αｖβ３）のターゲティング
ａ．エチレンジステイン（ＥＣ）の合成
インテグリン（αｖβ３）は、本発明の化合物であるＥＣ−アンギオスタチンに標的とされうる疾患血管新生標的である。ＥＣを、前述した方法にしたがって二段階合成で調製した（Ｒａｔｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｌａｒｋｅ，  １９３７；  Ｂｌｏｎｄｅａｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９６７（各々を本明細書に援用する））。前駆体Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸を合成した。（ｍ．ｐ．１９５o、既報告１９６〜１９７o）。その後、ＥＣを調製した（ｍ．ｐ．２３７o、既報告２５１〜２５３o）。その構造を、１Ｈ−ＮＭＲおよび高速原子衝撃質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）によって確認した。
ｂ．  ９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの直接標識法
重炭酸ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、ＥＣ（３．２７ｍｇ、１２．２μｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｒａｄｆｏｒｄ，  ＩＬ）（３．０ｍｇ、１３．８μｍｏｌ）および１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ、２．０ｍｇ、１０．５μｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，  Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，  ＷＩ）を添加した。その後、アンギオスタチン（３２．７ｍｇ、０．９３μｍｏｌ）を添加した。混合物を、１８時間室温で撹拌した。混合物を４８時間透析した（Ｍ．Ｗ．カットオフ１０，０００）。凍結乾燥後のＥＣ−アンギオスタチンの重量は１７ｍｇであった（収率：１００％）。９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（５．５ｍＣｉ）（Ｓｙｎｃｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を、水０．２ｍｌ中にＥＣ−アンギオスタチン（１０μｇ、０．５ｎｍｏｌ）および塩化スズ（ＩＩ）（ＳｎＣｌ２、１００ｇ、０．５３μｍｏｌ）の凍結乾燥残留物を含有するバイアルに添加した。産物を、セファデックスＧ−２５カラム（総容積１０ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）を用いて精製し、ＰＢＳ（５ｍｌ）で溶出した。溶出物１ｍｌを、各試験管中で回収した。産物を、試験管３および４中で単離し、３．９ｍＣｉ（７０％）を得た。放射化学的純度を、１Ｍ酢酸アンモニウム：メタノール（４：１）を溶離剤として用いてＲａｄｉｏ−ＴＬＣスキャナ（Ｂｉｏｓｃａｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ）で評価した。ＧＰＣカラム（Ｂｉｏｓｅｐ  ＳＥＣ−Ｓ３０００、７．８ｘ３００ｍｍ，  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，  Ｔｏｒｒａｎｃｅ，  ＣＡ）および２つの検出装置（ＮａＩおよびＵＶ）を備えた高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を用いて、産物の純度を分析した。溶離剤はＰＢＳ（１０ｍＭ）中０．１％ＬｉＢｒであり、流速は１．０ｍｌ／分であった。
ｃ．インビトロ細胞取り込みアッセイおよび組織分布研究
種々の濃度のアンギオスタチン（０〜２００μＭ）のインビトロ細胞カルチャーを、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴＣ−ＥＣ−アンギオスタチン（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。癌細胞中の非標識アンギオスタチンを添加した後、９９ＭＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの取り込みが有意に減少したことから、該取り込みのレセプター機構が示唆された（図１〜２）。アンギオスタチンのＩＣ−５０は、１７６μＭ（Ｒ２＝０．９９８）であった（図３）。
【００９６】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、０．５ないし４時間目にラットを犠牲にした。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，  ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの生体内分布は、時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加を示した（図４−５）。
ｄ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラット中で実行した（０．３ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。コンピュータが描き出した対象領域を用いて、腫瘍取り込み（カウント／ピクセル）および腫瘍／非腫瘍カウント密度比を決定した。平面イメージから、腫瘍が放射性標識アンギオスタチンで明確に視覚化されうることが確認された（図６）。
【００９７】
多数の他のタンパク質およびペプチドは、実施例１で記載されるこの技術を用いて適用されうる。これらには、ＥＣ−ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）、ＥＣ−エンドスタチン（抗血管内皮細胞）、ＥＣ−インターフェロンα（抗ＦＧＦ）が含まれる。
【００９８】
実施例２
ＥＣ−Ｃ２２５モノクローナル抗体を用いたＥＧＦＲのターゲティング
ａ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の直接標識法
ＥＧＦＲは、本発明の化合物である９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５モノクローナル抗体に標的とされうる疾患血管新生標的である。臨床等級抗ＥＧＦレセプターＲ  ＭＡｂ  Ｃ２２５（ＩＭＣ−Ｃ２２５）を、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ（Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，  ＮＪ）から得た。Ｃ２２５（２０ｍｇ）を、ＥＣ（２８．８ｍｇ、１Ｎ  ＮａＨＣｏ３１．４ｍｌ中０．１１ｍｍｏｌ）、スルホ−ＮＨＳ（２３．３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（１６．６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）とともに撹拌した。透析後、ＥＣ−Ｃ２２５を１７ｍｇ得た。１００ｍＣｉのＮａ９９ｍＴｃ０４を、ＥＣ−Ｃ２２５  １ｍｇおよびＳｎＣｌ２１００μｇを含有するバイアルに添加し、産物をＧ−２５カラムで精製し、ＰＢＳで溶出して、８０ｍＣｉの９９ｍＴｃ−ＥＣ−０２２５を得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−０２２５に対する放射化学的純度は、１００％であった（ＨＰＬＣ、ゲル浸透カラム、１０ｍＭ  ＰＢＳ中０．１％ＬｉＢｒ、ｐＨ７．４）。比活性は、２Ｃｉ／μｍｏｌであった（図７）。
【００９９】
例えば、イムノアッセイ（ウエスタン・ブロットおよび免疫沈降）ならびに細胞増殖アッセイを用いて、ＥＣ−Ｃ２２５の完全性を検討した。手短に言うと、ＤｉＦｉ細胞が細胞培養でＣ２２５にさらされるとき、該ＤｉＦｉ細胞はアポトーシスを受けることが知られている。細胞を、２４穴培養皿上へ接種した。細胞生存度を、培地０．５ｍｌ中に１０ｍｇ／ｍｌ  ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニル・テトラゾリウム臭化物）（Ｓｉｇｍａ）５０ｕｌを添加することによってアッセイし、細胞を、ＣＯ２インキュベータ中３７℃で３時間インキュベートした後、ジメチル・ホルムアミド／Ｈ２Ｏ（ｐＨ４．７）中２０％ＳＤＳを含有する緩衝液を用いて、６時間以上の間３７℃で細胞溶解した。その後、細胞生存度を、５９５ｎｍの波長で細胞可溶化物の光学吸光度を測定して、対応する未処置の細胞により値を正常化することによって決定した。その結果から、ＥＣ−Ｃ２２５がＤｉＦｉ細胞中で細胞死を誘発する上で生物活性であることが示される。対照的に、未処置の対照細胞と比較して、ＥＣ−Ｎａは細胞増殖に対するいかなる効果も示さなかった（図８）。
ｂ．組織分布研究
生体内分布を、ヌード・マウスで増殖するＡ４３１（異種移植を過剰発現するＥＧＦＲ）で評価した（１μＣｉ／マウス、１０μｇ／マウス、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、マウスを０．５ないし４時間目に犠牲にした。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンターを用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。生体内分布研究から、腫瘍対筋肉カウント密度比が時間の関数として増加することが示された（図９）。腫瘍取り込み（％ＩＤ／ｇ）は、１±０．２％であった。全腫瘍取り込みは、注入用量の６％であった（図１０）。
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
ＳＰＥＣＴイメージング（２５〜３０ｍＣｉ／患者）を、０．５ないし２４時間目に５人のＨＮＳＣＣ患者で実行した。各患者は、放射線療法と組み合わせたＣ２２５抗体療法の前にスキャンを受けた。コンピュータが描き出した対象領域を用いて、腫瘍取り込み（カウント／ピクセル）および腫瘍／非腫瘍カウント密度比を決定した。臨床ＳＰＥＣＴ画像から、腫瘍が０．５ないし４時間目に視覚化されうることが示された。画像および知見を図１１ないし１２に示した。
【０１００】
ＥＣ−ヘルセプチン（抗ＨＥＲ２）、ＥＣ−ＣＤ３１、ＥＣ−ＣＤ４０（免疫修飾物質）、ＥＣ−ヒト血清アルブミン（ヒト血清アルブミン）を含む他の抗体は、ＥＣ技術を用いて適用されうる。
【０１０１】
実施例３
ＥＣ−ＣＯＸ−２を用いたＣＯＸ−２酵素のターゲティング
ａ．エチルアミノＣＯＸ−２（ＥＡ−ＣＯＸ−２）の合成
ＣＯＸ−２酵素は、本発明の化合物であるＥＣ−ＣＯＸ−２に標的とされうる疾患血管新生標的である。Ｎ−４−（５−ｐ−トリル−３−トリフロロメチル−ピラゾル−１−イル）ベンゼンスルホニルアミド（ＣＯＸ−２阻害物質）（１１４．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（２ｍｌ）に溶解した。この溶液に、ＤＢＵ４４．９μｌ（クロロホルム０．５ｍｌ中０．３ｍｍｏｌ）およびイソシアナト酢酸エチル３３．７μｌ（クロロホルム０．５ｍｌ中０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、室温で６時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。産物を、クロロホルム／メタノールを溶離剤として用いて、シリカゲル充填カラムから単離した。ＣＯＸ−２のエステル形態（化合物Ｉ）の収率は、１３５ｍｇ（８８．１％）であった。合成スキームを図１３に示す。ＮＭＲスペクトル・データを図１４に記録した。
【０１０２】
化合物Ｉ（１０２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をメタノール２ｍｌ溶解し、エチレンジアミン（７２．９μｌ）を添加した。反応物を、室温で２４時間撹拌した。産物を、クロロホルム／メタノールを溶離剤として用いて、シリカゲル充填カラムから単離した。所望のエチルアミノＣＯＸ−２（ＥＡ−ＣＯＸ−２）（化合物ＩＩ）を単離した（９１ｍｇ、８６．７％収率）。化合物ＩＩのＮＭＲスペクトル・データを図１５に記録した。
ｂ．ＥＣ−エチルアミノＣＯＸ−２（ＥＣ−ＣＯＸ−２）の合成
ＥＣを溶解するために、ＮａＯＨ（１Ｎ、０．６ｍｌ）を、水（３ｍｌ）中で、ＥＣ（４２．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−ＮＨＳ（６５．１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（５７．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、ＥＡ−ＣＯＸ−２（７８．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌し、その後、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、８７．５ｍｇであった（収率７５％）。
ｃ．９９ｍＴｃによるＥＣ−ＣＯＸ−２の放射性標識
９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の直接標識法を、ＥＣ−ＣＯＸ−２（５ｍｇ）の凍結乾燥残留物、ＳｎＣｌ２（１００μｇ）、Ｎａ２ＨＰＯ４（１３．５ｍｇ）、アスコルビン酸（０．５ｍｇ）、グルタミン酸（２ｍｇ）、およびＥＣ（０．５ｍｇ）を含有するホーム・メード・キットに必要量の９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸を添加することによって実行した。調製物の最終ｐＨは、７．４であった。放射化学的純度を、酢酸アンモニア（水中１Ｍ）：メタノール（４：１）を用いてそれぞれ溶出したＴＬＣ（ＩＴＬＣ  ＳＧ，  Ｇｅｌｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，  ＭＩ）によって測定した。放射性ＴＬＣ（Ｂｉｏｓｃａｎ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ）分析から、放射化学的純度は＞９５％であった。
ｄ．インビトロ細胞取り込みアッセイおよび組織分布研究
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図１および１６）。
【０１０３】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、ラットを０．５ないし４時間目に犠牲にした。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，  ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の生体内分布から、９９ｍＴｃ−ＥＣと比較した時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加が示された（表２および３）。
【０１０４】
【表２−１】
2006515835.tif 000007
【０１０５】
【表２−２】
2006515835.tif 000008
【０１０６】
【表３−１】
2006515835.tif 000009
【０１０７】
【表３−２】
2006515835.tif 000010
【０１０８】
ｅ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．３ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２で明確に視覚化されうることが確認された（図１７）。
【０１０９】
ＥＣ−サリドマイド（抗ＶＥＧＦ）、ＥＣ−キナゾリン類似体（抗ＥＧＦレセプターＲ））を含む他の小分子は、ＥＣ技術を用いて適用されうる。その構造を図１８ないし１９に示す。
【０１１０】
実施例４
ＥＣ−ペンシクロビルを用いたクロマチンのターゲティング
ａ．ＥＣ−ペンシクロビルの合成
ペンシクロビルは、グアニン類似体であり、疾患細胞周期標的をターゲティングするために用いられる。ＥＣ−ペンシクロビルの合成を、３段階方法（図２０〜２１に示す）で実行した。出発原料３−Ｎ−トリチル−９（４−トシル−３−Ｏ−トリチルメチルブチル）グアニン（ペンシクロビル類似体））を、公開されている方法（Ａｌｌａｕｄｉｎ  ２００１）にしたがって調製した。ペンシクロビル類似体（５００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、アジ化ナトリウム（１６０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、一晩１００℃で加熱した。溶媒を水と混合し、酢酸エチルで抽出した。溶媒を、真空下で蒸発し乾燥させた。アジド産物の重量は、４００ｍｇであった（収率９３％）。更なる精製はせずに、アジド・ペンシクロビル類似体（４００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１５ｍｌ）中、トリフェニルホスフィン（６５５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）で還元した。反応物を一晩撹拌した。塩化水素（５Ｎ、０．５ｍｌ））を添加し、反応物を５時間還流した。その後、溶媒を蒸発させた。反応混合物を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。水層を回収し、ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）を用いてｐＨを７ないし８に調整した。凍結乾燥後のアミノ・ペンシクロビル類似体の重量は、１２０ｍｇ（９０％）であった。
【０１１１】
ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（２ｍｌ）中のＥＣ（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（９５．５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（８４．５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。その後、生理食塩水（３５０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を含有するアミノ・ペンシクロビル類似体を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、１００ｍｇであった（収率６７％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ヒト卵巣および子宮癌細胞中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル（４〜６ＲＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２２）。
ｃ．  シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、ヒト子宮腫瘍を持つマウスで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルで視覚化されうることが確認された（図２３）。全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｐａｃｋａｒｄ，  Ｍｅｒｉｄｉａｎ，  ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図２４）。
【０１１２】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−デオキシシチジン、ＥＣ−カペシタビン（シチジン類似体）が挙げられる。その構造を図２５ないし２６に示す。
【０１１３】
実施例５
ＥＣ−アデノシンを用いたクロマチンのターゲティング
ａ．ＥＣ−アデノシンの合成
クロマチンは、本発明の化合物であるＥＣ−アデノシンに標的とされうる疾患細胞周期標的である。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．７ｍｌ）中のＥＣ（４５．６ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（８０．３ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（７１．０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料Ｎ，Ｎ−ジメチル−３′−アミノアデノシン（アミノアデノシン類似体）（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ｈｉｅ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、６５．２ｍｇであった（収率６９．４％）。ＥＣ−アデノシン（ＥＣ−ＡＤＮ）の合成を図２７に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ヒト卵巣癌細胞中で０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシン（４〜６μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２２）。
ｃ．オートラジオグラム研究
全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｐａｃｋａｒｄ，  Ｍｅｒｉｄｉａｎ，  ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシン０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図２８）。
【０１１４】
実施例６
ＥＣ−ＬＨＲＨを用いたＧｎＲＨレセプターのターゲティング
ａ．ＥＣ−ＬＨＲＨの合成
ＧｎＲＨレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−ＬＨＲＨに標的とされうる疾患組織レセプターである。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．５ｍｌ）中のＥＣ（４．６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（３．７２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３．３ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料である黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ、ヒト、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）（５０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが１，０００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ｈｉｅ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、５１ｍｇであった（収率９３．４％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ヒト前立腺癌細胞中で０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨ（４〜６μＣｉ／１００，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。２種類の細胞系を用いた。該細胞系は、アンドロゲン（ＬＮＣａｐ）に感受性であるか、またはアンドロゲン（ＰＣ−３）療法に応答しないかのいずれかである。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２９）。
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨで視覚化されうることが確認された（図３０）。
【０１１５】
実施例７
ＥＣ−ＬＨ抗体を用いた黄体形成ホルモンレセプターのターゲティング
ａ．ＥＣ−ＬＨ抗体の合成
黄体形成ホルモンレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−ＬＨ抗体に標的とされうる疾患組織レセプターである。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．１ｍｌ）中のＥＣ（０．５１ｍｇ、１．９０μｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（０．４１ｍｇ、１．９μｍｏｌ）およびＥＤＣ（０．３６ｍｇ、１．９μｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料である黄体形成ホルモン抗体（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ，  ＭＯ）（５．１ｍｇ）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが１０，０００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ｈｉｅ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、５．１ｍｇであった（収率９７％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイと組織分布研究
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７（乳がん細胞）中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨ抗体（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図３１）。
【０１１６】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、ラットを０．５ないし４時間目に犠牲にした。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，  Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，  ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨ抗体の生体内分布から、９９ｍＴｃ−ＥＣと比較した時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加が示された（表２および３）。
【０１１７】
【表４−１】
2006515835.tif 000011
【０１１８】
【表４−２】
2006515835.tif 000012
【０１１９】
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルで視覚化されうることが確認された（図３２）。
【０１２０】
実施例８
ＥＣ−トランスフェリンを用いたトランスフェリンレセプターのターゲティング
ａ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンの直接標識法
トランスフェリンレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−トランスフェリンに標的化されうる疾患組織レセプターである。トランスフェリン（１００ｍｇ）を、ＥＣ（１５ｍｇ、１Ｎ  ＮａＨＣｏ３１．０ｍｌ中０．０５６ｍｍｏｌ）、スルホ−ＮＨＳ（１１．６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（１０．７ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）とともに撹拌した。透析（ＭＷでのカットオフ１０，０００）後、ＥＣ−トランスフェリンを１１０ｍｇ（９６％）得た。１００ｍＣｉのＮａ９９ｍＴｃＯ４を、ＥＣ−Ｃ２２５  ５ｍｇおよびＳｎＣｌ２１００μｇを含有するバイアルに添加し、産物をＧ−２５カラムで精製し、ＰＢＳで溶出して、８０ｍＣｉの９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンを得た。
ｂ．シンチグラフィー・イメージング研究およびオートラジオグラム研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５ないし４時間目に、ヒト子宮腫瘍を持つマウスで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンで視覚化されうることが確認された（図２３）。全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，  Ｐａｃｋａｒｄ，  Ｍｅｒｉｄｉａｎ，  ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリン０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図３３）。
【０１２１】
ＥＣ−ソマトスタチン、ＥＣ−カスパーゼ、ＥＣ−エンドルフィン、ＥＣ−ＰＳＡ、ＥＣ−Ｐ５３、ＥＣ−オクトレオチド（構造を図３４に示す）を含む他のタンパク質およびペプチドは、ＥＣ技術を用いて適用されうる。
【０１２２】
実施例９
ＥＣ−ドキソルビシンを用いた腫瘍トポイソメラーゼのターゲティング
ａ．ＥＣ−ドキソルビシンの合成
治療薬剤に対する組織の応答は、本発明の化合物に標的とされうる。腫瘍トポイソメラーゼは、本発明の化合物であるＥＣ−ドキソルビシンに標的とされる。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（２ｍｌ）中のＥＣ（５５．１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（４４．６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３９．４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料であるドキソルビシン（１１９．２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ｈｉｅ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、１３５ｍｇであった（収率７８％）。ＥＣ−ドキソルビシン（ＥＣ−Ｄｏｘｏ）の合成を図３５に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、ドキソルビシンに感受性があるヒト乳癌細胞（ＭＤＡ２３１、低ＨＥＲ２）およびドキソルビシンに耐性があるヒト乳癌細胞（ＭＤＡ４５３、高ＨＥＲ２）中で０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ドキソルビシン（４〜６μＣｉ／１００，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。ドキソルビシン耐性細胞よりもドキソルビシン感受性細胞で取り込みが多かった（図３６）。
【０１２３】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−パクリタキセル、ＥＣ−トポテカン、ＥＣ−フルタミド、ＥＣ−アンチセンス、ＥＣ−タモキシフェン、ＥＣ−ミトキサントロン、ＥＣ−マイトマイシン、ＥＣ−バンコマイシン、ＥＣ−ブレオマイシンが挙げられる。
【０１２４】
実施例１０
ＥＣ−カルニチンを用いた脂質代謝のターゲティング
ａ．ＥＣ−カルニチン（ＥＣ−ＴＭＬ）の合成
カルニチン、すなわち２−ハイドロキシ３−トリメチルアンモニウムブチラートは、脂肪酸の酸化にとって重要であり、疾患シグナル伝達経路のターゲティングの例である。６−トリメチルアンモニウムリジン（ＴＭＬ）は、カルニチンの類似体である。ＥＣは、ＴＭＬのアミノ基に結合した。ＮａＯＨ（１Ｎ）（０．５ｍｌ）中のＥＣ（３４．９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（６２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（５４．８ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料であるＴＭＬ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  ｈｉｅ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、７４．２ｍｇであった（収率９３．８％）。ＥＣ−カルニチン（ＥＣ−ＴＭＬ）の合成を図３７に示す。ＥＣ−ＴＭＬの質量スペクトルを図３８に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞カルチャーを、乳癌細胞中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチン（４〜６μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣより９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチンで取り込みが多かった（図１６）。
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．１ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。高カウント密度比が、腫瘍／筋肉および心臓／筋肉で観察された（図３９）。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬで視覚化されうることが確認された（図４０）。
【０１２５】
実施例１１
ＥＣ−デオキシグルコースを用いたグルコサミンおよびグルコース代謝のターゲティング
ａ．ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＧ）の合成
シグナル伝達経路、すなわちグルコサミン代謝を、本発明の化合物であるＥＣ−デオキシグルコースを用いて標的とした。水酸化ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、水（５ｍｌ）中で、ＥＣ（１１０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−ＮＨＳ（２４１．６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（２１８．８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を添加した。その後、Ｄ−グルコサミンハイドロクロライド塩（３５６．８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌し、ｐＨを６．４ないし７．０に調整した。混合物を、カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，  Ｈｏｕｓｔｏｎ，  ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後に、凍結乾燥器（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，  Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ，  ＭＯ）を用いて産物凍結乾燥した。産物の重量は、２９１ｍｇであった（収率６０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ２．６０ないし２．９０（ＥＣのｍ、４Ｈ、および−ＣＨ２−ＳＨ）、２．９５（ｔ、２Ｈ、グルコサミン５−ＣＨ−ＣＨ２ＯＨ）、３．２０（ｄ、４Ｈ、グルコサミン６−ＣＨ２ＯＨ）、３．３０ないし３．９５（ＥＣのｍ、６Ｈ、グルコサミン１，３，４−ＣＨ、および４Ｈ  ＣＨ２−ＳＨ）、３．３０ないし３．６６（ＥＣのｍ、４Ｈ、ＣＨ２−ＣＨ２−）、４．１５ないし４．３０（ＥＣのｔ、２Ｈ、ＮＨ−ＣＨ−ＣＯ）、４．６０（ｄ、２Ｈ、グルコサミン２−ＣＨ  -ＮＨ２）。ＦＡＢ  ＭＡ  ｍ／ｚ５９１（Ｍ＋、２０）。構造は図４１に示す。
ｂ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの組織分布研究
雌の胸腺欠損ヌード・マウス（ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕ，  ＮＣＩ，  Ｂｅｔｈａｓｄａ，  ＭＤ）の中背部領域に、１人の原記載者（ａｕｔｈｏｒ）によって、ヒト肺癌細胞を接種した（Ａ５４９腫瘍細胞系、３ｘ１０６細胞／マウス、筋肉内）。腫瘍が６ｍｍに達したあと、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧおよび１８Ｆ−ＦＤＧを用いた別々の生体内分布研究をおこなった。各マウスは、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧまたは１８Ｆ−ＦＤＧを静脈内で受けた（ｎ＝３／時間点）。注射活性は、１ないし３μＣｉ／マウスであった。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの注入質量は、０．２ｍｇ／齧歯動物。放射性トレーサーの投与後に、齧歯動物を屠殺し、選択された組織は切除し、計量して、放射能をカウントした。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧは、時間の関数として、腫瘍／筋肉および腫瘍／脳比がより高く、一方で、１８Ｆ−ＦＤＧは、腫瘍／血液比がより高かった（表４および５）。
【０１２６】
【表５−１】
2006515835.tif 000013
【０１２７】
【表５−２】
2006515835.tif 000014
【０１２８】
【表６−１】
2006515835.tif 000015
【０１２９】
【表６−２】
2006515835.tif 000016
【０１３０】
ｃ．ガンマ・シンチグラフィー・イメージング研究
雌のＦｉｓｃｈｅｒ３４４ラット（それぞれ２５０〜２７５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ，  Ｉｎｃ．，  Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，  ＩＮ）に、１人の原記載者によって、１３７６２腫瘍細胞系由来の乳房腫瘍細胞を接種した（ｓ．ｃ．１０６細胞／ラット、Ｆｉｓｃｈｅｒラットに特異的な腫瘍細胞系）。８ないし１０日後に、腫瘍量０．３ないし０．６ｃｍを測定した。シンチグラフィー画像を、９９ｍＴｃ−ＥＣまたは９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧ（ｎ＝３／薬剤、全６匹のラット）３００μＣｉのｉ．ｖ．注射後０．５、２、および４時間に得た。腫瘍組織と筋肉との間のＲＯＩ（対側部位で）を用いて、腫瘍／非腫瘍比を測定した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧによって検出されうる最小の腫瘍量は、３ｍｍであった。中型の腫瘍（６ｍｍ）は、各時間点でより高い取り込みを示した。心臓、腎臓、肝臓、および膀胱を可視化した（図４２）。
【０１３１】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−アミホスチン、ＥＣ−ラクトース、ＥＣ−ピリドキサール（構造を図４３に示す）、ＥＣ−フラーレン（ＥＣ−カーボン６０、構造を図４４に示す）が挙げられる。
【０１３２】
本明細書中で請求および開示される組成物および／または方法の全ては、本開示を鑑みて、必要以上の実験をすることなしに、作製および実施されうる。本発明の組成物および発明について好ましい実施形態の観点から記載してきたが、種々の変更を、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱せずに、本明細書に記載される組成物および／または組成物に、かつ本発明の工程または一連の工程で適用することができることは当業者に自明である。より詳しくは、化学的かつ生理学的に関連する特定の因子を、本明細書に記載される因子と置換することが可能であると同時に、同じまたは類似の結果がなされることは自明である。当業者に自明であるそのような類似の置換および修飾の全ては、添付の特許請求の範囲に定義されるように、本発明の精神、範囲、および概念内にあるとみなされる。
ｄ．１８８Ｒｅ−ＥＣ−ＤＧの合成および配合
ＥＣ−ＤＧをキットの形態で開発するために、水０．２ｍｌに溶解したＥＣ−ＤＧ（１０ｍｇ）を、１０ｍｌ中間バイアル中で、塩化スズ（水０．２ｍｌ中２ｍｇ）およびグルコン酸塩（３ｍｇ）とともに凍結乾燥し、標識前に室温で保存した。標識の間、凍結乾燥した粉末を生理食塩水（０．５ｍｌ）で再構築し、過テクネチウム酸（１０ｍＣｉ）を添加した。キットを、３０分間５５℃（または１５分間７５℃）で加熱した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの放射化学的純度は、放射性ＴＬＣ（生理食塩水、Ｒｆ：０．８）で測定した際、９５％を超えていた（図３９）。類似の方法を、ＥＣ−メトロニダゾール（ＥＣ−ＭＮ）（図４０）およびＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−Ｇｕａｎとしても知られる）等の他のＥＣ薬剤に適用することができた。Ｒｅ−１８８とＴｃ−９９ｍとの化学の類似性を示すために、Ｒｅ−１８８およびＴｃ−９９ｍ標識ＥＣ−ＧｕａｎならびにＥＣ−メトロニダゾールの細胞培養を実行した。取り込み間に著しい相違はなかった（図４１および図４２）。
【０１３３】
エチレンジステインの酸化を予防するために抗酸化剤および転移キレーターを組成物に含むことも重要であるだろう。例えば、抗酸化剤はビタミンＣ（アスコルビン酸）でもよい。しかし、当業者に既知の他の抗酸化剤（例えば、トコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチン）を用いてもよい。当業者に既知の任意の転移キレーターも、本発明と組み合わせて用いることが可能である。転移キレーターの例としては、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩、クエン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。特定の実施形態では、転移キレーターは、グルコン酸塩またはグルカル酸塩であり、エチレンジステインの安定性に干渉しない。転移キレーター（グルコン酸塩およびグルカル酸塩）用いるか、または用いない９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＧ）のインビトロ細胞培養は、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの安定性に干渉しない（図４３Ａ〜４３Ｃ）。
【０１３４】
参照文献
以下の参照文献を、本明細書で述べたものを補足する典型的な手順または他の詳細を提供する範囲で、具体的に本明細書に援用する。
【０１３５】
【数１−１】
2006515835.tif 000017
【０１３６】
【数１−２】
2006515835.tif 000018
【０１３７】
【数１−３】
2006515835.tif 000019
【０１３８】
以下の図面は、本明細書の一部をなすものであり、さらに本発明の特定の局面を例証するために含まれる。本発明は、本明細書中に示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の一つ以上を参照することで、よりよく理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのインビトロ細胞取り込み。
【図２】非標識アンギオスタチンによる乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのインビトロ阻害研究。
【図３】非標識アンギオスタチン添加後の９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの阻害率。
【図４】乳癌担持ラットでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−抗血管新生剤の腫瘍取り込み。
【図５】９９ｍＴｃ−ＥＣ−抗血管新生剤の腫瘍対筋肉カウント密度比。
【図６】９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのシンチグラム像。
【図７】９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５のＨＰＬＣクロマトグラム。
【図８】ＥＣ−Ｃ２２５とＣ２２５とのインビトロ比較。
【図９】Ａ４３１陰門癌担持ヌードマウスでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の生体内分布。
【図１０】Ａ４３１陰門癌担持ヌードマウスでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の腫瘍対組織カウント密度比。
【図１１】ケース・スタディ１：  頭部および頚部癌の９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５走査：  左頚静脈二腹筋リンパ節。
【図１２】ケース・スタディ２：  頭部および頚部癌の９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５走査：  左側舌根および口腔底。
【図１３】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の合成。
【図１４】ＥＣ−ＣＯＸ−２−エステルのＮＭＲスペクトル・データ。
【図１５】ＥＣ−ＣＯＸ−２のＮＭＲスペクトル・データ
【図１６】乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬剤のインビトロ細胞取り込み。
【図１７】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２のシンチグラム像。
【図１８】ＥＣ−サリドマイドの化学構造。
【図１９】ＥＣ−キナゾリンの化学構造。
【図２０】アミノペンシクロビルの合成。
【図２１】ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）の合成。
【図２２】ヒトガン細胞系統での９９ｍＴＣ−ＥＣ−ペンシクロビル（９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）の生体内（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）細胞取り込み。
【図２３】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル  （９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）のシンチグラム像。
【図２４】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル  （９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）のオートラジオグラム。
【図２５】ＥＣ−デオキシシチジンの化学構造。
【図２６】カペシタビンの化学構造。
【図２７】ＥＣ−アデノシンの合成。
【図２８】９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンのオートラジオグラム。
【図２９】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨのシンチグラム像。
【図３０】ヒト卵巣癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬剤のインビトロ細胞取り込み。
【図３１】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨのシンチグラム像。
【図３２】９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンのオートラジオグラム。
【図３３】ＥＣ−ＴＭＬの合成。
【図３４】ＥＣ−ＴＭＬの質量スペクトル。
【図３５】乳癌担持ラットでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬの生体内分布。
【図３６】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬのシンチグラム像。
【図３７】ＥＣ−ピリドキサールの合成。
【図３８】９９ｍＴｃ−ＥＣ−フラーレン−ＥＣ−薬物結合体の合成。
【図３９】１８８Ｒｅ−ＥＣデオキシグルコースの合成。
【図４０】１８８Ｒｅ−ＥＣ−メトロニダゾールの合成。
【図４１】１８８Ｒｅ−および９９ｍＴｃ−標識ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）のインビトロ細胞培養。
【図４２】１８８Ｒｅ−ＥＣ−メトロニダゾールのインビトロ細胞培養。
【図４３Ａ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方）のインビトロ細胞培養。
【図４３Ｂ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方）のインビトロ細胞培養。
【図４３Ｃ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方）のインビトロ細胞培養。
【図１】
2006515835.tif 000021
【図２】
2006515835.tif 000022
【図３】
2006515835.tif 000023
【図４】
2006515835.tif 000024
【図５】
2006515835.tif 000025
【図７】
2006515835.tif 000026
【図１３】
2006515835.tif 000027
【図１４】
2006515835.tif 000028
【図１５】
2006515835.tif 000029
【図１８】
2006515835.tif 000030
【図１９】
2006515835.tif 000031
【図２０】
2006515835.tif 000032
【図２１】
2006515835.tif 000033
【図２２】
2006515835.tif 000034
【図２５】
2006515835.tif 000035
【図２６】
2006515835.tif 000036
【図２７】
2006515835.tif 000037
【図３３】
2006515835.tif 000038
【図３４】
2006515835.tif 000039
【図３７】
2006515835.tif 000040
【図３８】
2006515835.tif 000041
【図４３Ａ】
2006515835.tif 000042
【図４３Ｂ】
2006515835.tif 000043
【図４３Ｃ】
2006515835.tif 000044
【図６】
2006515835.tif 000045
【図８】
2006515835.tif 000046
【図９】
2006515835.tif 000047
【図１０】
2006515835.tif 000048
【図１１】
2006515835.tif 000049
【図１２】
2006515835.tif 000050
【図１６】
2006515835.tif 000051
【図１７】
2006515835.tif 000052
【図２３】
2006515835.tif 000053
【図２４】
2006515835.tif 000054
【図２８】
2006515835.tif 000055
【図２９】
2006515835.tif 000056
【図３０】
2006515835.tif 000057
【図３１】
2006515835.tif 000058
【図３２】
2006515835.tif 000059
【図３５】
2006515835.tif 000060
【図３６】
2006515835.tif 000061
【図３９】
2006515835.tif 000062
【図４０】
2006515835.tif 000063
【図４１】
2006515835.tif 000064
【図４２】
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【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年10月21日(2005.10.21)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的化リガンドに結合体化したＮ２Ｓ２キレートを含む化合物であって、該標的化リガンドは、疾患細胞周期標的化化合物、腫瘍血管新生標的化リガンド、腫瘍アポトーシス標的化リガンド、疾患レセプター標的化リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンである、化合物。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、該化合物は、以下：
【化１】
2006515835.tif 000066
としてさらに定義され、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は、独立してＨまたはＣＨ３であり；
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、腫瘍血管新生標的化リガンド、腫瘍アポトーシス標的化リガンド、疾患レセプター標的化リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；
Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、腫瘍血管新生標的化リガンド、腫瘍アポトーシス標的化リガンド、疾患レセプター標的化リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；
ｎは０または１であり；
ｍは０または１であり；
Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；
Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンであり、ｍが０の場合、結合であり；そして
Ｍは、９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、
化合物。
【請求項３】
前記標的化リガンドが、腫瘍血管新生標的化リガンドを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
前記標的化リガンドがＣＯＸ−２、抗ＥＧＦ、ヘルセプチン、アンギオスタチン、またはサリドマイドを含む、請求項３記載の化合物。
【請求項５】
前記標的化リガンドが、疾患細胞周期標的化リガンドである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
前記標的化リガンドが、アデノシン、ペンシクロビル、ＦＩＡＵ、ＦＩＲＵ、ＩＶＦＲＵ、ＧＣＶ、ＰＣＶ、ＦＧＣＶ、ＦＰＣＶ、ＦＨＰＧ、ＦＨＢＧ、またはグアニンを含む、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
前記標的化リガンドが、腫瘍アポトーシス標的化リガンドを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
前記標的化リガンドが、ＴＲＡＩＬまたはカスパーゼ３標的化リガンドを含む、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
前記標的化リガンドが、疾患レセプター標的化リガンドを含む、請求項２記載の化合物。
【請求項１０】
前記標的化リガンドが、エストロゲン、アンドロゲン、黄体形成ホルモン、トランスフェリン、またはプロゲスチンを含む、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
前記標的化リガンドがカルニチンまたはドキソルビシンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
前記標的化リガンドがペンシクロビルまたはアデノシンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
前記標的化リガンドがアミホスチンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
前記標的化リガンドが抗ＥＧＦレセプターを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
前記標的化リガンドがモノクローナル抗体ＣＤ３１を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１６】
前記標的化リガンドがモノクローナル抗体ＣＤ４０を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１７】
前記標的化リガンドがカペシタビンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１８】
前記標的化リガンドがデオキシシチジンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項１９】
前記標的化リガンドがフラーレンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２０】
前記標的化リガンドがヒト血清アルブミンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２１】
前記標的化リガンドがラクトースを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２２】
前記標的化リガンドがピリドキサールを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２３】
前記標的化リガンドがキナゾリンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２４】
前記標的化リガンドがトリメチルリジンを含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２５】
前記標的化リガンドが疾患細胞周期標的化化合物を含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２６】
前記疾患細胞周期標的化化合物がアデノシン、ペンシクロビル、ＦＩＡＵ、ＦＩＲＵ、ＩＶＦＲＵ、ＧＣＶ、ＰＣＶ、ＦＧＣＶ、ＦＨＰＧ、ＦＨＢＧ、またはグアニンを含む、請求項２５記載の化合物。
【請求項２７】
前記Ｎ２Ｓ２キレートがエチレンジシステインとしてさらに定義される、請求項１記載の化合物。
【請求項２８】
放射性核種をさらに含む、請求項１記載の化合物。
【請求項２９】
前記放射性核種が、９９ｍＴＣ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕを含む、請求項２８記載の化合物。
【請求項３０】
前記標的化リガンドと前記キレートとの間に位置する、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンをさらに含む、請求項１記載の化合物。
【請求項３１】
標的化リガンドに結合した放射性標識Ｎ２Ｓ２キレートを合成する方法であって、
ａ）請求項１に記載の化合物を得る工程、
ｂ）該化合物を、放射性核種および還元剤と混合して放射性核種標識誘導体を得る工程を含み、該Ｎ２Ｓ２キレートが該放射性核種とキレートを形成する、方法。
【請求項３２】
前記還元剤が亜ジチオン酸イオン、第一スズイオン、または第一鉄イオンである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
前記放射性核種が９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
哺乳類体内の一部位をイメージングする方法であって、
ａ）請求項２８に記載の診断上有効な量の化合物を該部位に投与する工程、および
ｂ）一部位に局在した該化合物からの放射性シグナルを検出する工程
を包含する、方法。
【請求項３５】
前記部位が腫瘍である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記部位が感染である、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
前記部位が乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜、心臓癌、肺癌、脳癌、肝癌、葉酸（＋）癌、ＥＲ（＋）癌、脾臓癌、膵臓癌、または腸癌である、請求項３４記載の方法。
【請求項３８】
放射性医薬製剤を調製するためのキットであって、
ａ）請求項１に記載の放射性核種標識Ｎ２Ｓ２キレート−標的化リガンド結合体である化合物である所定量の化合物を含む密閉容器と、
ｂ）十分な量の還元剤とを備える、キット。
【請求項３９】
放射性核種をさらに含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４０】
前記放射性核種が９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである、請求項３９記載のキット。
【請求項４１】
抗酸化剤をさらに含む、請求項３７記載のキット。
【請求項４２】
前記抗酸化剤がビタミンＣ、トコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチンである、請求項４１記載のキット。
【請求項４３】
前記抗酸化剤がビタミンＣである、請求項４２記載のキット。
【請求項４４】
遷移キレーターをさらに含む、請求項３８記載のキット。
【請求項４５】
前記遷移キレーターがグルコヘプトネート、グルコネート、グルカレート、シトレート、またはタータレートである、請求項４４記載のキット。
【請求項４６】
前記遷移キレーターが、グルコネートまたはグルカレートである、請求項４５記載のキット。
【請求項４７】
前記還元剤が塩化スズ（ＩＩ）またはトリフェニルホスフィンである、請求項３８記載のキット。
【請求項４８】
目的とする薬剤の薬理を評価する方法であっって、
ａ）Ｎ２Ｓ２キレートに対する該薬剤の結合体を調製する工程、
ｂ）該結合したキレートに対して放射性核種を添加し、放射性結合体を作る工程、
ｃ）該放射性結合体を被験体に投与する工程、および
ｄ）該薬剤の薬理を評価する工程を包含する、方法。
【請求項４９】
前記目的とする薬剤が医薬である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記Ｎ２Ｓ２キレートがエチレンジシステインである、請求項４８記載の方法。
【請求項５１】
前記被験体が実験動物である、請求項４８記載の方法。
【請求項５２】
前記被験体がヒトである、請求項４８記載の方法。
【請求項５３】
前記薬剤の薬理を評価する工程が、前記薬剤の生体内分布を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５４】
前記薬剤の薬理を評価する工程が前記薬剤の生体安定性を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【請求項５５】
前記薬剤の薬理を評価する工程が前記薬剤の生体排出を評価することを含む、請求項４８記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（Ｉ．発明の分野）
本発明は、概ね、標識、放射性イメージング法、放射免疫療法、および化学合成の分野に関する。より詳しくは、標的化リガンドを放射性標識するための戦略に関する。また、本発明は該放射性標識リガンドを用いて、腫瘍血管新生、低酸素症、アポトーシス、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的にする方法と、これらの生化学的プロセスに対する薬効の評価とに関する。
【背景技術】
【０００２】
（ＩＩ．関連技術の説明）
血管新生は、内皮細胞および平滑筋細胞が増殖して新しい血管を形成することであり、転移経路の必須構成要素である。これらの血管は、特定の細胞が最初の組織部位を出て血液循環に入るための主要なルートを提供する。多くの疾患組織では、血管密度は、転移可能性または生存の予後指標を提供し得、高度に血管新生された腫瘍は、血管新生の少ない組織よりも、高い転移頻度を有する（Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉら，１９９９；Ｃａｏ，１９９９；Ｓｍｉｔｈら，２０００）。
【０００３】
抗血管新生剤を用いて、血管新生および腫瘍発達を阻止することが可能と思われる。現時点では、臨床試験中の抗血管新生剤として、血管新生に対する天然のインヒビター（例えば、アンギオスタチン、エンドスタチン、血小板第４因子）（Ｊｉａｎｇら，２００１；Ｄｈａｎａｂａｌら，１９９９；Ｍｏｕｌｔｏｎら，１９９９；Ｊｏｕａｎら，１９９９）、内皮細胞成長の特異的インヒビター（例えば、ＴＮＰ−４７０、サリドマイド、インターロイキン−１２）（Ｌｏｇｏｔｈｅｔｉｓら，２００１；Ｍｏｒｅｉｒａら，１９９９；Ｄｕｄａら，２０００）、血管新生ペプチドの効力を無くす薬剤（例えば、線維芽細胞成長因子または血管内皮増殖因子に対する抗体、スラミンおよび類似体、テコガラン）（Ｂｏｃｃｉら，１９９９；Ｓａｋａｍｏｔｏら，１９９５）  またはそれらのレセプター  （Ｐｅｄｒａｍら，２００１）、血管基底膜および細胞外マトリックスを妨害する薬剤（例えば、メタロプロテアーゼインヒビター、血管新生阻害ステロイド）  （Ｌｏｚｏｎｓｃｈｉら，１９９９；Ｍａｅｋａｗａら，１９９９；Ｂａｎｅｒｊｅｅｉら，２０００）、抗接着分子（Ｌｉａｏら，２０００）、抗体（例えば、抗インテグリンαｖβ３）（Ｙｅｈら，２００１）、および種々の作用メカニズムによって血管新生を調節する種々の薬物（Ｇａｓｐａｒｉｎｉ  １９９９）が挙げられる。
【０００４】
例えば、多くの悪性腫瘍は、血管新生に依存する。いくつかの実験的な研究によれば、原発腫瘍の増殖、侵襲性、および転移が新血管新生を必要とすることが示唆される  （Ｓｉｏｎ−Ｖａｒｄｙら，２００１；Ｇｕａｎｇ−Ｗｕら，
２０００；Ｘｉａｎｇｍｉｎｇら，１９９８）。腫瘍関連血管新生は、正および負の可溶性因子の制御下にある複雑な多段階プロセスである。血管新生表現型の獲得は、腫瘍発達にとって一般的な経路であり、そして活性な血管新生は、腫瘍発達を導く分子メカニズムと関連してる（Ｕｇｕｒｅｌら，２００１）。例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は内皮細胞の分裂促進因子、モルフォゲン、および化学誘引物質であって、インビボでは、血管透過性の強力なメディエイターである（Ｓｚｕｓら，２０００）。インターロイキン８（ＩＬ−８）は、好中球の化学誘引物質であって、強力な血管新生因子である（Ｐｅｔｚｅｌｂａｕｅｒら，１９９５）。塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）は、いくつかのヒト癌で、腫瘍化および転移に関連していた（Ｓｍｉｔｈら，１９９９）。血管新生因子発現（例えば、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、微小血管密度、ＩＬ−８、ＭＭＰ−２、およびＭＭＰ−９）の予後判定値は、化学療法で処置される癌患者に対して決定された（Ｉｎｏｕｅら，２０００；Ｂｕｒｉａｎら，１９９９）。これらの因子は、転移と血管新生とを調節して、個々の癌患者における転移可能性を予測することが可能である（Ｓｌａｔｏｎら，２００１）。
【０００５】
プログラム細胞死でのアポトーシス異常は、腫瘍原因において重要な役割を果たす。このような欠陥によって、腫瘍細胞は、通常予定されていた寿命を超えて生存し、外来性の生存因子の必要性が覆される。腫瘍の塊が広がることから、アポトーシス異常によっても低酸素症および酸化ストレスに対する防御が得られる。アポトーシス異常はまた、細胞増殖を脱制御して蓄積させることで、腫瘍発達過程での分化、血管新生、ならびに細胞運動性および侵襲性の増大の妨害をもたらす（Ｒｅｅｄ、１９９９）。実際に、細胞分裂を駆動する多くの脱制御腫瘍性タンパク質もまた、アポトーシスを引き起こすことから、アポトーシス異常は、プロトオンコジーン活性化に重要なコンプリメントと認められる（Ｇｒｅｅｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｎ，２００２）。同様に、ＤＮＡ修復および染色体分離での欠陥は、遺伝的に不安定な細胞を根絶させるための防衛機制として、通常、細胞自殺を誘発する。このように、アポトーシス異常は遺伝的に不安定な細胞の残存を可能とさせることから、進行性悪性クローンを選別する機会が与えられる  （Ｉｏｎｏｖら，２０００）。アポトーシス異常はまた、細胞外マトリックスへの付着なしに、上皮細胞が浮遊状態で生存するのを可能とすることで、転移を促進する（Ｆｒｉｓｃｈ  ａｎｄ  Ｓｃｒｅａｔｏｎ，２００１）。アポトーシス異常はまた、腫瘍を攻撃するために用いられる武器（細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む）の多くが、アポトーシス機構の完全性に依存していることから、免疫系に対する耐性を促進させる（Ｔｓｃｈｏｐｐら，１９９９）。最後に、癌関連アポトーシス異常は、化学療法抵抗性および放射線抵抗性で役割を果たすことで、細胞死をもたらす閾値を高めることから腫瘍致死をもたらすためには、よりいっそう高い用量および線量が必要となる（Ｍａｋｉｎ  ａｎｄ  Ｈｉｃｋｍａｎ，２０００）。したがって、不完全なアポトーシス調節は、癌の生物学の基本的局面である。
【０００６】
非外科的手段によって癌細胞の根絶に成功することに関しては、全ての道が最終的に血管新生とアポトーシスとに導かれる。本質的に、現在臨床で使用されている全ての細胞傷害性のある抗癌薬が、血管新生を阻止して悪性細胞のアポトーシスを誘発する。微小管結合剤、ＤＮＡ傷害物質、およびヌクレオシドが癌の処置の重要な武器である一方で、目標とされた新たな種類の治療薬が公表されようとしている。目標とされた治療薬のこれらの新しい種類は、血管新生現象およびアポトーシス現象の基礎をなす分子機序をより深く理解することで出現した戦略に基づいて、公表されようとしている（Ｒｅｅｄ、２００３）。
【０００７】
血管新生因子およびアポトーシス因子が血管新生状態およびアポトーシス状態を反映するにもかかわらず、これらの因子は腫瘍の治療反応を適切に反映することができない。現在、腫瘍において血管新生およびアポトーシスを評価する方法は、新血管新生の領域における微小血管密度のカウントと、ＦＡＣＳ技術によるアネキシンＶの観察とに依存している。組織生検後、組織標本の免疫組織化学がおこなわれる。両技術とも侵襲性であり、繰り返して実行することはできない。
【０００８】
より多くの腫瘍特異的な放射性医薬品の開発が、シンチグラフィーによる腫瘍のイメージングの改善を、大きく左右する。腫瘍特性がより大きいことで、放射性標識リガンドおよび放射性標識抗体は、シンチグラフィーによる腫瘍の検出において新たな時代を開き、広範囲な前臨床的な開発および評価を受けた（Ｍａｔｈｉａｓら，１９９６，１９９７ａ，１９９７ｂ）。放射性核種イメージングモダリティー（ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、単光子放射型コンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ））は、放射性核種で標識された放射性トレーサーの位置および濃度をマッピングする診断用断面イメージング技術である。腫瘍の位置および広がりに関する多くの解剖学的情報がＣＴおよびＭＲＩによって得られるにもかかわらず、これらのイメージングモダリティーは、水腫、放射線壊死、グレーディング、またはグリオーシスから浸潤病巣を適切に区別することができない。ＰＥＴおよびＳＰＥＬＴは、代謝活性を測定することによって腫瘍を局所化して特徴づけるのに用いられることができる。
【０００９】
［１８Ｆ］ＦＭＩＳＯは、頭頸部腫瘍、心筋梗塞、炎症、および脳虚血を診断するために使用されている（Ｍａｒｔｉｎら，１９９２；Ｙｅｈら，１９９４；Ｙｅｈら，１９９６；Ｌｉｕら，１９９４）。腫瘍対正常組織取込み率をベースラインとして用いて、腫瘍低酸素症を評価した（Ｙｅｔら，１９９６）。［１８Ｆ］ＦＤＧを用いた腫瘍代謝イメージングが明らかに示されたにもかかわらず、分子造影剤を臨床診療に導入することは、入手容易性および同位体コスト等のいくつかの他の因子に依存する。［１８Ｆ］フルオロデオキシグルコース（ＦＤＧ）は、腫瘍、心筋梗塞、および神経疾患を診断するために用いられている。さらに、ＰＥＴ放射性合成は、ポジトロン同位元素の短い半減期のため、急速でなければならない。１８Ｆ化学は複雑であり、異なる分子で再現性はない。
【００１０】
窒素および硫黄キレートを用いて、いくつかの化合物を９９ｍＴｃで標識した（Ｂｌｏｎｄｅａｕら，１９６７；Ｄａｖｉｓｏｎら，１９８０）。ビス−アミノエタンチオール四座配位子（ジアミノジトール化合物とも呼ばれている）は、２つのチオール硫黄原子と２つのアミン窒素原子とにオキソテクネチウム基が効率的に結合することに基づいて、非常に安定なＴｃ（Ｖ）Ｏ錯体を形成することが知られている。９９ｍＴｃ−２−ピロールチオン複合体によって標識された２−ピロールチオンの放射性金属複合体が、イメージングおよび治療のための放射性医薬品として用いるために開発された（ＷＯ  ０１８０９０６Ａ２）。９９ｍＴｃ−Ｌ，Ｌ−エチレンジシステイン（９９ｍＴｃ−ＥＣ）は、Ｎ２Ｓ２キレートの最近かつ成功した例である。ＥＣは、高い放射化学的純度および高い安定性をもって容易かつ効率的に９９ｍＴｃで標識することができ、活性尿細管輸送によって、腎臓を通して排出される（Ｓｕｒｍａら，１９９４；Ｖａｎ  Ｎｅｒｏｍら，１９９０，１９９３；Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅｎら，１９９０，１９９２）。さらに、エチレンジシステイン（ＥＣ）によってキレートされ、かつ種々のリガンドと結合した９９ｍＴｃを、組織得的疾患の造影剤、予後ツール、または哺乳類の体内にある特定の部位へ治療薬を送達するための手ツールとして用いるために、開発されたＷＯ  ０１９１８０７Ａ２、ＡＵ  ０１７５２１０Ａ５）。９９ｍＴｃ−ＥＣ−キレートは、腎臓イメージングおよび腎臓機能の試験のために開発された（米国特許第５９８６０７４号および米国特許第５９５５０５３号）。９９ｍＴｃ−ＥＣ複合体を調製する方法および該方法を実行するためのキットもまた、開発された（米国特許第５２６８１６３号およびＷＯ  ９１１６０７６Ａ１）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
しかし、腫瘍血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的とする新規の薬剤の開発、同様にこれらの生化学的プロセスの薬効の評価に対する必要性が、未だ存在する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明の特定の実施形態は、一般に、標的化リガンドに結合したＮ２Ｓ２キレートを含む化合物に関するものであり、該標的化リガンドは、疾患細胞周期標的化化合物、腫瘍血管新生標的化リガンド、腫瘍アポトーシス標的化リガンド、疾患レセプター標的化リガンド、アミホスチン、アンギオスタチン、モノクローナル抗体Ｃ２２５、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンである。
【００１３】
本発明の具体的な局面は、以下の式のＮ２Ｓ２キレート化合物を含み、
【００１４】
【化２】
2006515835.tif 000067
【００１５】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３であり；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；ｎは０または１であり；ｍは０または１であり；Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミン、またはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；ｎが０の場合、結合であり；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合であり；そしてＭが９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである。
【００１６】
好ましい実施形態では、化合物は前述のとおりであり、Ｒ９およびＲ１０は独立してＨ、ＣＨ３、ＣＯＸ−２、抗ＥＧＦレセプター、ヘルセプチン、アンギオスタチン、またはサリドマイド、さらにＭは９０ｍＴｃである。
【００１７】
別の好ましい実施形態では、上記化合物は前述のとおりであり、疾患細胞周期標的化化合物がアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００１８】
血管新生標的化とは、薬剤を用いて新血管新生（例えば腫瘍細胞の新血管新生）と結合させることをいう。このことは、下記の明細書中でより詳細に述べられる。この目的のために用いられる薬剤は、種々の腫瘍測定（腫瘍血管床の大きさの測定および腫瘍容積の測定を含む）を実行する際の詳細について当業者に知られている。それらの薬剤のいくつかは、血管壁に結合する。当業者は、この目的のための使用に利用可能な薬剤に精通している。
【００１９】
腫瘍アポトーシス標的化とは、薬剤を用いてアポトーシスになっている細胞またはアポトーシスにかかる危険性がある細胞に結合させることをいう。これらの薬剤は、細胞集団（例えば腫瘍）内でのアポトーシスまたはプログラム細胞死の範囲または危険度の指標を提供するために、一般に用いられる。当業者は、この目的のために使われる薬剤に精通している。腫瘍アポトーシス標的化は下記の明細書中により詳細に述べられている。
【００２０】
疾患レセプター標的化では、症状（例えば癌）で過剰発現される特定の細胞レセプターに結合する能力があることから、特定のリガンドが利用される。標的化されるそのようなレセプターの例として、エストロゲンレセプター、アンドロゲンレセプター、下垂体レセプター、トランスフェリンレセプター、およびプロゲステロンレセプターが挙げられる。疾患レセプター標的化に適用できる薬剤の例を表１に示す。疾患レセプター標的化は、下記の明細書中でより詳しく述べられる。
【００２１】
疾患細胞周期標的化とは、増殖細胞で上方制御される薬剤の標的化をいう。この目的に使用される化合物は、細胞での種々のパラメーター、例えば腫瘍細胞ＤＮＡ含有量を測定するために用いることができる。それらの薬剤の多くは、ヌクレオシド類似体である。疾患細胞周期標的化に関連するさらなる考察は、下記の明細書中で与えられる。
【００２２】
本発明の特定の薬物をベースとしたリガンドを、薬物に対する被験体の薬理学的反応の測定に適用することができる。広範囲にわたるパラメータを測定して薬物投与に対する被験体の反応を決定することができる。当業者は、測定可能な反応の種類に精通している。これらの反応は、種々の因子（評価される特定の薬物、被験体が処置を受ける特定の疾患または症状、および被験体の特徴を含む）に一部依存する。放射性標識された薬剤を薬物評価に適用することができる。薬物評価に関連するさらなる考察は、この明細書の他部分で提供される。
【００２３】
本発明の別の局面は、イメージングのための放射性標識エチレンジシステイン誘導体を合成する方法を含み、該方法は、（ａ）化合物アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、トリメチルリジン、または疾患細胞周期標的化化合物を得る工程、（ｂ）この化合物をエチレンジシステイン（ＥＣ）と混合してＥＣ−化合物誘導体を得る工程、（ｃ）このＥＣ−化合物誘導体を放射性核種および還元剤と混合して、放射性核種標識ＥＣ−化合物誘導体を得る工程を有し、このＥＣは放射性核種とのＮ２Ｓ２キレートを形成する。
【００２４】
一実施形態では、上記還元剤は亜ジチオン酸イオン、スズイオン、または第一鉄イオンであってもよい。放射性核種は、好ましくは９９ｍＴｃである。
【００２５】
なお別の実施形態では、疾患細胞周期標的化化合物がアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００２６】
本発明の別の局面は、哺乳類体内の一部位をイメージングする方法を含み、該方法は、（ａ）式：
【００２７】
【化３】
2006515835.tif 000068
【００２８】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３であり；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；ｎは０または１であり；ｍは０または１であり；Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合であり；そしてＭが９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである］の診断上有効な量のＮ２Ｓ２キレート化合物を投与する工程、（ｂ）一部位に局在した上記化合物からの放射性シグナルを検出する工程を含む。好ましくは、Ｍは９９ｍＴｃである。上記疾患細胞周期標的化化合物は、アデノシン、またはペンシクロビルであってもよい。上記部位は、腫瘍、感染部、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮内膜、心臓癌、肺癌、脳癌、肝癌、葉酸（＋）癌、ＥＲ（＋）癌、脾臓癌、膵臓癌、または腸癌であってもよい。
【００２９】
本発明のさらに別の局面は、（ａ）式：
【００３０】
【化４】
2006515835.tif 000069
【００３１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３であり；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジン；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；ｎは０または１であり；ｍは０または１であり；Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合である］の所定量の化合物と、（ｂ）Ｍが９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕと結合した十分な量の還元型標識とを含む密閉容器とを含む、放射性医薬製剤を調製するためのキットを含む。還元標識は、９９ｍＴｃと結合してもよい。上記疾患細胞周期標的化化合物は、アデノシンまたはペンシクロビルであってもよい。
【００３２】
本発明の一局面は、式：
【００３３】
【化５】
2006515835.tif 000070
【００３４】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８は独立してＨまたはＣＨ３であり；Ｒ９はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、疾患細胞周期標的化化合物、アミホスチン、アンギオスタチン、抗ＥＧＦレセプター、モノクローナル抗体ＣＤ３１、モノクローナル抗体ＣＤ４０、カペシタビン、ＣＯＸ−２、デオキシシチジン、フラーレン、ヘルセプチン、ヒト血清アルブミン、ラクトース、黄体形成ホルモン、ピリドキサール、キナゾリン、サリドマイド、トランスフェリン、またはトリメチルリジンであり；ｎは０または１であり；ｍは０または１であり；Ｘは、ｎが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｎが０の場合、結合であり；Ｙは、ｍが１の場合、水溶性ペプチド、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、ブロモエチルアセテート、エチレンジアミンまたはリジンであり、ｍが０の場合、結合であり；そしてＭが９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１８３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１８３Ｇｄ、５９Ｆｅ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１１Ａｔ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、または６２Ｃｕである］のＮ２Ｓキレート化合物を含むシンチグラム造影剤を調製するための試薬を含む。Ｍは、好ましくは９９ｍＴｃであり、上記疾患細胞周期標的化化合物は、好ましくはアデノシンまたはペンシクロビルである。
【００３５】
本発明は、目的とする薬剤の薬理を評価する方法にも関し、該方法は、（１）Ｎ２Ｓ２キレートに対する薬剤の結合体を調製する工程、（２）上記結合したキレートに対して放射性核種を添加し、放射性結合体を作る工程、（３）前記放射性結合体を被験体に投与する工程、（４）上記薬剤の薬理を評価する工程、を包含する。上記目的とする薬剤は、医薬であってもよい。特定の実施形態では、上記Ｎ２Ｓ２キレートがエチレンジシステインである。上記被験体は任意の被験体であってよく、例えば実験動物またはヒトである。いくつかの実施形態では、上記薬剤の薬理を評価することは、薬剤の生体内分布（ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ）を評価し、薬剤の生体安定性（ｂｉｏｓｔａｂｉｌｉｔｙ）を評価し、あるいは薬剤の生体排出（ｂｉｏｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を評価することが含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
（具体的な実施形態の説明）
Ｉ．本発明
本発明は、腫瘍血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路と疾患細胞周期を標的とするように設計された新規の放射性標識ＥＣ結合体を提供することによって、従来技術の欠点を解決する。放射性標識ＥＣ結合体は、上述の生化学的プロセスで医薬の効果を評価するのに用いられることもできる。より詳しくは、本発明は、腫瘍血管新生、低酸素症、アポトーシス異常、疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的とするために、またこれらの生化学的プロセスに対する薬効評価を目的として、放射性標識９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体を提供する。
ＩＩ．放射性医薬品
核医学の分野では、少量の内部的に投与された放射性標識トレーサー化合物（放射性トレーサーまたは放射性医薬品を呼ばれる）の分布を検出することによって、特定の病的状態が局所化され、またはそれらの範囲が評価される。これらの放射性医薬品を検出する方法は、一般にイメージング法または放射性イメージング法として知られている。
ＩＩＩ．放射性イメージング法
放射性イメージング法では、放射標識は、γ線を放射する放射性核種であり、放射性トレーサーはγ線放射を検出するカメラを用いて局在化される（このプロセスでは、しばしばガンマシンチグラフィーと呼ばれる）。イメージング部位は、放射性トレーサーが病理学的部位で局在化するために選択（ポジティブ・コントラストと呼ばれる）されるか、あるいはその代わりに、放射性トレーサーは特にそのような病理学的部位では局在化しないように選択（ネガティブコントラストと称される）されるので、検出可能である。
ＩＶ．放射性核種
種々の放射性核種が放射性イメージング法および放射免疫療法にとって有用であることが知られており、該核種として６７Ｇａ／６８Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１６９Ｙｂ、または１８６Ｒｅ／１８８Ｒｅが挙げられる。より良好なイメージング特性と低価格とにより、１２３Ｉ、１３１Ｉ、６７Ｇａ、１１１Ｉｎ標識化合物に対する代替物に対して、可能な場合、対応する９９ｍＴｃ標識化合物で置換するか、または対応する９９ｍＴｃ標識化合物の提供を行う試みがなされた。非常に低下価格（＄０．２１／ｍＣｉ）であるのと同様に、好適な物理的特性により、放射性医薬品の標識に９９ｍＴｃが好ましい。ＤＴＰＡ薬物結合体を効果的に９９ｍＴｃによって標識しうるという報告（Ｍａｔｈｉａｓら，１９９７）にもかかわらず、ＤＴＰＡ部分が１１１Ｉｎほど安定には９９ｍＴｃによってキレートしない（Ｇｏｌｄｓｍｉｔｈ、１９９７）。
【００３７】
ヒトの最適放射性イメージング法のために考慮しなければならない要因が数多くある。検出の効率を最大にするために、１００〜２００ｋｅＶの範囲でγエネルギーを発する放射性核種が、好ましい。患者に吸収された線量を最小化するために、放射性核種の物理的半減期は、イメージングの手順が許容する限りできるだけ短くなければならない。検査がいかなる日のいかなる時間でも実行可能とするために、臨床現場に常に利用できる放射性核種源を常備しておくと好都合である。９９ｍＴｃは、１４０ｋｅＶでγ線放射を発し、６時間の半減期を持ち、さらにモリブデン−９９／テクネチウム９９ｍジェネレーターを用いて容易に現場で利用できるから、好ましい放射性核種である。
【００３８】
Ｖ．  エチレンジシステイン
本発明は、９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体を、腫瘍血管新生，低酸素症、アポトーシス異常，疾患レセプター、疾患機能経路、および疾患細胞周期を標的にする標識剤として用いるとともに、それらの生化学的プロセスに対する医薬の効果を評価するために用いる。
【００３９】
組織標的化リガンドをＥＣに結合させることの利点は、組織標的化リガンドの特異的結合特性が対象領域上に放射性シグナルを集中させるということである。標識戦略として９９ｍＴｃ−ＥＣを用いることは、疾患レセプター、低酸素症、アポトーシス経路、疾患細胞周期、疾患機能経路、放射免疫療法を標的化するリガンド、およびそれらの生化学的プロセスに対する医薬の効果の評価で有効であり得ると、考えられる。本発明のいくつかの実施形態の例を表１に見出すことができる。
【００４０】
【表１】
2006515835.tif 000071
【００４１】
ＶＩ．９９ｍテクネチウム−ＥＣ錯体
９９ｍＴｃは、９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩（ＴｃＯ４−；＋７酸化状態にあるテクネチウム）として、通常、モリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍジェネレーターから作られる。しかし過テクネチウム酸塩は他の化合物と十分には結合しない。したがって、化合物を放射標識するために、９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩を他の形態に変換する必要がある。テクネチウムは水溶液で安定イオンの形をとらないことから、配位錯体の形でそのような溶液に保持されならない。この配位錯体は、分解を防ぐのに十分な動力学的および熱力学的安定性を持ち、９９ｍＴｃを不溶性の二酸化テクネチウムに変換するか、または過テクネチウム酸塩に戻す。
【００４２】
放射性標識を目的として、９９ｍＴｃ錯体を、テクネチウムイオンを取り囲んでいるドナー基の全てが単一のキレート化リガンド（この場合、エチレンジシステイン）によって提供されるキレートとして、形成することが特に有利である。このことは、キレート化９９ｍＴｃが、直接またはエチレンジシステインとリガンドとの間の一つのリンカーを通して、組織特異的リガンドに共有結合することを可能とする。
【００４３】
テクネチウムは、複数の酸化状態：＋１、＋２、＋４、＋５、＋６、および＋７を有する。酸化状態が＋１の場合、Ｔｃ  ＭＩＢＩと呼ぶ。Ｔｃ  ＭＩＢＩは、熱反応で生成されなければならない（Ｓｅａｂｏｌｄら，１９９９）。Ｎ２Ｓ２キレートを用いる場合、本発明の目的にとって、Ｔｃが＋４酸化状態にあることが重要である。この酸化状態は、ＥＣでＮ２Ｓ２キレートを形成する上で理想的である。したがって、本発明の薬物結合体による放射性テクネチウムの錯体を形成する際に、テクネチウム錯体、好ましくは９９ｍＴｃ過テクネチウム酸塩が還元剤の存在下で本発明の薬物結合体と反応することが好ましい。
【００４４】
本発明での使用にとって好ましい還元剤は、塩化スズ（ＳｎＣｌ２）の形になっているスズイオンであり、Ｔｃをその＋４酸化状態に還元する。しかし、他の還元剤、例えばジチオネートイオンまたは第一鉄イオンが本発明と関連して有用であることが考えられる。還元剤が固相還元剤であり得ることも考えられる。コロイドの形成を回避する必要があることから、還元剤の量は重要であり得る。好ましくは、例えば、約１００ないし約３００ｍＣｉのＴｃ過テクネチウム酸塩あたり約１０ないし約１００μｇのＳｎＣｌ２を用いる。最も好ましい量は、約２ｍｌの生理食塩水および約２００ｍＣｉのＴｃ過テクネチウム酸塩あたり、約０．１ｍｇのＳｎＣ１２である。これは、概して、５人の患者で使用するのに十分なＴｃ−Ｅｃ−組織特異的リガンド結合体を生産する。
【００４５】
エチレンジシステインの酸化を予防するために、抗酸化剤と遷移キレーターとを組成物に含ませることが、しばしば重要である。本発明と併用して用いるための好ましい抗酸化剤は、ビタミンＣ（アスコルビン酸）である。しかし、他の抗酸化剤（例えばトコフェロール、ピリドキシン、チアミンまたはルチン）もまた有用であり得ることが考えられる。遷移キレーターの例として、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルカレート、シトレート、およびタルタレートがあげられる。いくつかの実施形態において、遷移キレーターはグルコン酸またはグルカレートであり、それのどちらもエチレンジシステインの安定性を損なわない。
【００４６】
ＶＩＩ．ＥＣリガンド
一般に、本発明に関連して使用するリガンドは、アミノ基またはヒドロキシ基のいずれかを持ち、これらの基は一方の酸の腕または両方の酸の腕上のＥＣと結合し得る。もし、アミノ基またはヒドロキシ基が利用不可能（例えば、酸性官能基）であるとしてもまだ、所望のリガンドを、リンカー（例えば、エチレンジアミン、アミノプロパノール、ジエチレントリアミン、アスパラギン酸、ポリアスパラギン酸、グルタミン酸、ポリグルタミン酸、またはリジン）を添加することによって、本発明の方法を用いて、ＥＣと結合して９９ｍＴｃによって標識することが可能である。本発明での使用を考えたリガンドとして、限定されるものではないが、血管新生／抗血管新生リガンド、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害物質、解糖マーカー、抗代謝産物リガンド、アポトーシス／低酸素症リガンド、ＤＮＡインターカレータ、細胞レセプターマーカー、ペプチド、ヌクレオチド、抗微生物剤（例えば、抗生物質または抗菌剤）、器官特異的リガンド、糖類、およびグルコースを模倣した薬剤が挙げられる。
【００４７】
ＥＣ自体は、水溶性である。発明のＥＣ−薬物結合体も水溶性であることが、必要である。本発明に関連して用いられるリガンドの多くは、水溶性であるか、ＥＣに結合した場合に水溶性化合物を形成する。しかし、組織特異的リガンドが水溶性でない場合、リガンドの溶解性を増加させるリンカーを用いることもできる。リンカーは脂肪族、芳香族アルコール、アミン、ペプチド、カルボキシル、ペプチド、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。リンカーは、ポリ・アミノ酸（ペプチド）、アミノ酸、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸塩、グルタミン、グリシン、プロリン、セリン、チロシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。より好ましくは、リンカーは、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
【００４８】
また、本発明のＥＣ組織特異的リガンド薬物結合体が、他の放射性核種をキレートし得、放射性核種療法に用いられ得ることも考えられる。通常、実質的に、α、β−エミッター、γ−エミッター、またはβ、γ−エミッターを、本発明と関連して用いることができると考えられる。好ましいα−エミッターとして、ビスマス−２１３、アスタチン−２１１、およびラジウム−２２３が挙げられる。好ましいβ、γ−エミッターとして、１６６Ｈｏ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、および８９Ｓｒが挙げられる。好ましいβエミッターとして、９０Ｙおよび２２５Ａｃが挙げられる。好ましいγ−エミッターとして、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、および１１１Ｉｎが挙げられる。好ましいα−エミッターとして、２１１Ａｔおよび２１２Ｂｉが挙げられる。また、常磁性体、例えばＧｄ、Ｍｎ、Ｃｕ、またはＦｅも、本発明に関連して使用するためにＥＣとキレートしうると考えられる。
【００４９】
ＶＩＩＩ．ＥＣ錯体を調製するためのキット
錯体およびそのような錯体を調製するための手段は、キットの形で簡便に提供され、該キットは密閉されたバイアル瓶を有し、該バイアル瓶には標識されるべき本発明の所定量のＥＣ−組織特異的リガンド結合体と、９９ｍＴｃで結合体を標識するための十分な量の還元剤とが含まれる。本発明にもとづく９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤の調製は、適当な量の９９ｍＴｃまたは９９ｍＴｃ錯体を、ＥＣ−組織特異的リガンド結合体と還元剤とを含み、以下の実施例１に記載された条件下で反応するバイアル瓶に加えることで、おこなうことができる。上記キットは、従来の医薬品添加物材料（例えば、浸透圧を調整する医薬的に許容可能な塩類、緩衝液、防腐剤、抗酸化剤）を含むこともできる。
【００５０】
いくつかの実施形態において、抗酸化剤および遷移キレーターは、エチレンジシステインの酸化を予防するために、組成物に含まれる。いくつかの実施形態において、抗酸化剤はビタミンＣ（アスコルビン酸）である。しかし、当業者に知られている他の抗酸化剤のいずれか（例えばトコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチン）を使用することも可能であると考えられる。本発明で用いる遷移キレーターの例として、限定されるものではないが、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルカレート、シトレート、およびタルタレートが挙げられる。本発明のいくつかの実施形態において、これらがエチレンジシステインの安定性を妨げないことから、遷移キレーターはグルコン酸またはグルカレイトである。キットの構成要素は、液体、凍結、または乾燥した形態であってもよい。好ましい実施形態において、キット構成要素は、凍結乾燥された形で提供される。
【００５１】
ＩＸ．  放射性標識試薬
本発明によって提供される放射性標識試薬または結合体は、適当量の放射能を持って提供される。９９ｍＴｃ放射性錯体を形成する際に、それは通常、１ｍｌあたり約０．０１ミリキューリー（ｍＣｉ）ないし約３００ｍＣｉの濃度で放射能を含む放射性錯体含有溶液を作ることが好ましい。
【００５２】
本発明によって提供される９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤を、哺乳類体内の部位の視覚化に用いることができる。この発明によれば、９９ｍＴｃ標識シンチグラム造影剤は、一単位注射用量で投与される。当業者に知られている一般的な担体のいずれか、例えば滅菌食塩水または血漿を、注射可能な溶液を調製するために放射性標識の後に用いることで、この発明に基づいて診断的に種々の器官、腫瘍等を視覚化する。一般に、投与すべき単位用量は、約０．０１ｍＣｉないし約３００ｍＣｉ、好ましくは１０ｍＣｉないし約２００ｍＣｉの放射能を持つ。単位用量で注射される溶液は、約０．０１ｍｌないし約１０ｍｌである。静脈内投与後、放射性標識試薬が患者に導入された後、必要に応じて、数時間以上経ってから、器官または腫瘍の生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）イメージングをおこなうことができる。ほとんどの場合、ガンマ・シンチグラムを撮ることを可能とする１時間の約０．１以内で、十分な量の投与された用量がイメージングされる領域に蓄積する。診断または予後判定目的のための任意のシンチグラムイメージングの従来法を、この発明にもとづいて利用することができる。
【００５３】
Ｘ．  ９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体の用途
本発明の９９ｍＴｃ−ＥＣ標識戦略もまた、予後判定目的のために用いることが可能である。ＥＣ−結合体（表１に列挙）を、腫瘍を持つ患者に投与することが可能であると考えられる。９９ｍＴｃ−ＥＣを標識戦略として用いることは、疾患レセプター、低酸素症標識、アポトーシス異常、疾患細胞周期、および疾患機能経路を標的化するために、またこれらの生化学的プロセスでの医薬の効果を評価するために設計されたリガンドで有効である。イメージングは、疾患レセプター、低酸素症マーカー、アポトーシス異常、疾患細胞周期、疾患機能経路に関連した具体的な患者の問題と、これらの生化学的プロセスに対する医薬の効果の評価とに対して、９９ｍＴｃ−ＥＣ−結合体の効果を測定するために実行してもよい。この方法論を用いて、医師は、どの９９ｍＴｃ−ＥＣ結合体が患者にとって最も効果的であり、対応する治療または処置のモードを設計するのに最も効果的であるかを素早く決定することができる。この新規方法論は、癌の化学療法剤の効果が決定され得る前に、かなりのコストで数ヶ月に及ぶ患者の時間を伴う薬物の選択および化学療法のラウンドの投与をおこなう現行の方法に対して、顕著な改善を示す。
【００５４】
本発明は、癌が寛解期にあるか、または転移したかどうかを決定するために、化学療法または放射線治療を首尾よく受けていた元患者の経過をモニタリングすることにも、用いられ得る。家族の中に癌の既往歴があったり、癌に関連した遺伝子を持つと診断された人々は、本発明の方法論を用いて保健専門家によってモニタリングを受けることができる。発癌物質に対する環境暴露による癌危険因子を持つヒトで人で癌が進行し始めたかどうかをモニタリングするために、本発明の方法および医薬品がまた保健専門家により使用され得る。
【００５５】
ＸＩ．腫瘍血管新生標的化
この出願の全体を通じて、「腫瘍血管新生標的化」とは、薬剤を使用して腫瘍血管新生および腫瘍細胞に結合させることをいう。この目的のために使われる薬剤は、腫瘍血管床の大きさ測定および腫瘍の容積測定を含む種々の腫瘍測定を実行するために使用されることが当業者に知られている。これらの薬剤のいくつかは、血管壁と結合する。当業者は、この目的のための用途に利用可能な薬剤に精通している。腫瘍血管新生標的化リガンドは、上で定義されるように、腫瘍血管新生標的化の目的に用いられるリガンドである。これらの薬剤の例として、９９ｍＴｃ−ＥＣ−セレブレックス（ＥＣ−ＣＯＸ−２）、９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ヘルセプチン、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンが挙げられ、さらに、９９ｍＴｃ−ＥＣ−サリドマイドは脈間形成での生化学的プロセスの評価のために開発された。
【００５６】
ＸＩＩ．腫瘍アポトーシス標的化
「腫瘍アポトーシス標的化」とは、アポトーシスを受けるかアポトーシスを受けることの危険にさらされている細胞と結合するための薬剤を使用することをいう。細胞（例えば腫瘍）の集団で、これらの薬剤は、通常、アポトーシスまたはプログラム細胞死の範囲または危険度の指標を提供するのに用いられる。当業者は、この目的のために使われる薬剤に精通している。アポトーシス標的化薬剤の例は、表１に示されている。「腫瘍アポトーシス標的化リガンド」は、この段落で定義されるように、「腫瘍アポトーシス標的化」を実行することができるリガンドである。本発明の標的化リガンドはＴＲＡＩＬを含むものであってもよく、それはリガンド（種々の形質転換細胞系で急速にアポトーシスを誘発する腫瘍壊死因子リガンドファミリーのメンバー）を誘発しているＴＮＦ関連のアポトーシスである。本発明の標的化リガンドは、カスパーゼ３標的化リガンドを含むものであってもよい。
【００５７】
それらの細胞保護的な機能を無効にして、腫瘍細胞に対するアポトーシス感受性を修復するという考えで、アポトーシスサプレッサーは、薬物送達の標的となる（Ｒｅａｄ，２００３）。
【００５８】
ＸＩＩＩ．疾患レセプター標的化
「疾患レセプター標的化」では、ある種の薬剤は、癌等の疾患状態で過剰発現する特定の細胞レセプターに結合する能力を活用する。標的になるそのようなレセプターの例として、エストロゲンレセプター、アンドロゲンレセプター、下垂体性レセプター、トランスフェリンレセプター、およびプロゲステロンレセプターが挙げられる。疾患レセプター標的化に適用することができる薬剤の例を表１に示す。
【００５９】
放射性標識リガンド（例えば、ペンテトレオチド、オクトレオチド、トランスフェリン、および下垂体性ペプチド）は細胞レセプターと結合し、そのいくつかは特定の細胞上で過剰発現される。これらのリガンドは、免疫原性ではなく、血漿から急速に除去されるので、レセプター画像は抗体イメージングと比較してより有望なようである。
【００６０】
この発明では、発明者らは一連の新しいレセプターリガンドを開発した。これらのリガンドは、９９ｍＴｃ−ＥＣ−黄体形成ホルモン（９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨ）および９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンである。
【００６１】
ＸＩＶ．疾患細胞周期標的化
細胞増殖のインビボ測定のための遺伝子をベースとするアナログは、ＰＥＴによって示された（（Ａｌａｕｄｄｉｎら、２００１）。
【００６２】
疾患細胞周期標的化とは、増殖性細胞で上方制御される薬剤の標的化をいう。この目的のために使用される化合物は、細胞で種々のパラメータ（例えば腫瘍細胞ＤＮＡ含有量）を測定するのに用いることができる。
【００６３】
これらの薬剤の多くが、ヌクレオシドアナログである。例えば、ピリミジン・ヌクレオシド（例えば、２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨード−ｌ−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル［ＦＩＡＵ］、２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨード−１−β−Ｄ−リボフラノシル−ウラシル［ＦＩＲＵ］、２’−フルオロ−２’−５−メチル−ｌ−β−Ｄ−アラビノフラノシルウラシル［ＦＭＡＵ］、２’−フルオロ−２’−デオキシ−５−ヨードビニル−ｌ−β−Ｄ−リボフラノシルウラシル［ＩＶＦＲＵ］）およびアシクログアノシン：９−［（２−ヒドロキシ−ｌ−（ヒドロキシメチル）エトキシ）メチル］グアニン（ＧＣＶ）および９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシ−メチル）ブチル］グアニン（ＰＣＶ）（Ｔｊｕｖａｊｅｖら、２００２；Ｇａｍｂｈｉｒら、１９９８；Ｇａｍｂｈｉｒら、１９９９）ならびに他の１８Ｆ−標識アシクログアノシンアナログ（例えば、８−フルオロ−９−［（２−ヒドロキシ−ｌ−（ヒドロキシメチル）エトキシ）メチル］グアニン（ＦＧＣＶ）（Ｇａｍｂｈｉｒら、１９９９；Ｎａｍａｖａｒｉら、２０００），８−フルオロ−９−［４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン（ＦＰＣＶ）（Ｇａｍｂｈｉｒら、２０００；Ｉｙｅｒら、２００１）、９−［３−フルオロ−１−ヒドロキシ−２−プロポキシメチル］グアニン（ＦＨＰＧ）（Ａｌａｕｄｄｉｎら、１９９６；Ａｌａｕｄｄｉｎら、１９９９）、ならびに９−［４−フルオロ−３−（ヒドロキシメチル）ブチル］グアニン（ＦＨＢＧ）（ＡｌａｕｄｄｉｎおよびＣｏｎｔｉ、１９９８；Ｙａｇｈｏｕｂｉら、２００１）が、野生型および突然変異ＨＳＶＩ−ｔｋ発現をイメージングするためのレポーター基質として開発されてきた（Ｇａｍｂｈｉｒら、２０００）。当業者は、疾患細胞周期標的化に用いられるこれらおよび他の薬剤に精通している。
【００６４】
この発明では、発明者らが一連の疾患細胞周期標的化リガンドを開発した。これらのリガンドとしては、例えば、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンおよび９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）が挙げられる。
【００６５】
ＸＶ．薬物評価
本発明の特定の薬物に基づくリガンドは、被験体の薬物に対する薬理学的反応を測定する際に適用され得る。広範囲にわたるパラメータは、薬物の投与に対する被験体の応答を決定する際に測定され得る。当業者は、測定できる反応の様式に精通している。これらの反応は、種々の因子に一部は依存するものであり、この因子として、評価されている特定の薬物、被験体が処置されている特定の疾患または状態、および被験体の特徴を含む。放射性標識剤を、薬物評価の測定に適用できる。
【００６６】
この発明では、発明者らは新薬ベースのリガンド（９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチン（Ｔａｇｇａｒｔら、１９９９）を開発した。これらの薬剤の他の例を表１に示す。
【００６７】
ＸＶＩ．医薬製剤
本発明の医薬組成物は、有効量の放射性標識エチレンジシステイン誘導体、またはより好ましくは９９ｍＴｃ−ＥＣ誘導体、または医薬的に受容可能なキャリアに溶解または分散されたさらなる薬剤を含む。「医薬的または薬理学的に受容可能である」という句は、動物（例えば、適当なものとしてヒト）に投与される場合、副作用、アレルギーまたは他の有害な反応を生じない分子の実体および組成物をいう。少なくとも１つの放射性標識エチレンジシステイン誘導体またはさらなる活性成分を含む医薬組成物の調製は、本開示を考慮して当業者に公知であり、例えば、本明細書中で参考として援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０によって例示されている。さらに、動物（例えば、ヒト）への投与に関して、処方物は、ＦＤＡ  Ｏｆｆｉｃｅ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓによって求められるような無菌性、発熱原性、一般的安全性、および純度の基準に合致しなければならないと理解される。
【００６８】
本明細書で用いられるように、「医薬的に受容可能なキャリア」として、任意の全ての溶媒、分散媒、コーティング、界面活性剤、抗酸化剤、防腐剤（例えば抗菌剤、抗真菌剤）、等張剤、吸収遅延剤、塩類、防腐剤、薬物、薬物安定剤、ゲル類、バインダー、賦形剤、崩壊薬剤、滑沢剤、甘味料、香料、色素、当業者に知られているような材料、およびそれらの組合せが挙げられる（例えば、本明細書で参考として援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０，ｐｐ．１２８９−１３２９を参照せよ）。いかなる従来のキャリアでも活性成分と適合しないこと以外は、治療組成物または医薬組成物におけるその使用が企図される。
【００６９】
放射性標識エチレンジシステイン誘導体は、固体、液体、またはエアゾール形状で投与されるか否か、そして、そのような投与経路（例えば注射）のために滅菌される必要があるか否かに依存して、異なる型のキャリアを含み得る。本発明は、静脈内、皮内、動脈内、腹腔内、病巣内、脳内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、鼻腔内、硝子体内、腟内、直腸内、局所的、腫瘤内、筋肉内、腹腔内、皮下、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、経口的、局所的、局在的、注射、注入、持続注入法、直接標的細胞を浸している局在化された灌流により、カテーテルにより、洗浄液により、脂質組成物（例えば、リポソーム）により、または当業者に知られているように、他の方法または前述の任意の組み合わせよって、投与され得る（例えば、本明細書で参考として援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ｍａｃｋ  Ｐｒｉｎｔｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０を参照せよ）。
【００７０】
患者に投与される本発明の組成物の実際の投与量は、物理的および生理的因子（例えば体重、状態の重篤度、処置されている疾患の種類、先または同時の治療的な介入、患者の特発性疾患、および投与経路）により決定され得る。投与に対して責任がある開業医は、いずれにしても、個々の被験体のために組成物中の活性成分の濃度と、適切な用量とを決定する。
【００７１】
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、例えば、少なくとも約０．１％の放射性標識エチレンジシステイン誘導体を含有し得る。他の実施形態では、活性化合物は、例えば、約２％〜約７５％の間の単位重量、または約２５％〜約６０％、およびそのなかに誘導される任意の範囲で含まれ得る。他の非限定的な例として、用量は、１回の投与あたり、約０．１ｍｇ／ｋｇ／体重，０．５ｍｇ／ｋｇ／体重、１ｍｇ／ｋｇ／体重、約５ｍｇ／ｋｇ／体重、約１０ｍｇ／ｋｇ／体重、約２０ｍｇ／ｋｇ／体重、約３０ｍｇ／ｋｇ／体重、約４０ｍｇ／ｋｇ／体重、約５０ｍｇ／ｋｇ／体重、約７５ｍｇ／ｋｇ／体重、約１００ｍｇ／ｋｇ／体重、約２００ｍｇ／ｋｇ／体重、約３５０ｍｇ／ｋｇ／体重、約５００ｍｇ／ｋｇ／体重、約７５０ｍｇ／ｋｇ／体重から、約１０００ｍｇ／ｋｇ／体重以上であり、そこから誘導される任意の範囲を含む。本明細書中に列挙された数の誘導可能な範囲の非限定的な例では、約１０ｍｇ／ｋｇ／体重〜約１００ｍｇ／ｋｇ／体重などの範囲内で、上記した数にもとづいて、投与され得る。
【００７２】
いずれにせよ、組成物は１種類以上の成分の酸化を遅延させるために、種々の抗酸化剤を含むことができる。その上、微生物作用の予防は、防腐剤（例えば種々の抗細菌剤および抗真菌剤）によってもたらすことができ、その防腐剤としては、限定されるものではないが、パラベン（例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン）、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール、またはそれらの組み合わせが挙げられる。
【００７３】
放射性標識エチレンジシステイン誘導体は、遊離塩基、中性または塩の形態で、組成物に処方され得る。医薬的に受容可能な塩類として、無機塩基（例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄）に由来する遊離カルボキシル基、または有機塩基（例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジンまたはプロカイン）に由来する遊離カルボキシル基で形成される塩類が挙げられる。
【００７４】
組成物が液体形態である実施形態において、キャリアは、限定されるものではないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、脂質（例えば、トリグリセリド、植物油、リポソーム）、およびそれらの組合せを含む溶媒または分散媒であり得る。適当な流動性は、例えば、コーティング（例えばレシチン）を用いて維持され得る。すなわち、例えば、液体ポリオールまたは脂質のようなキャリア内での分散により、所望の粒径を保つことで、例えば、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤の使用によって、またはそれらの方法の組み合わせによって、維持され得る。多くの場合、等張剤（例えば糖、塩化ナトリウム、またはこれらの組合せ）を含むことが、好ましい。
【００７５】
無菌の注射可能溶液は、必要に応じて、上で列挙される他の成分の種々の量で放射性標識エチレンジシステイン誘導体を適当な溶媒の必要な量に取り入れることによって調製された後、フィルターによる殺菌がおこなわれる。通常、分散は種々の殺菌された活性成分を基本的な分散媒および／または他の成分を含む無菌のビヒクルに組み込むことによって調製される。無菌の注射可能溶液、懸濁液またはエマルジョンの調製のための無菌の粉体の場合、好ましい調製法は、事前に無菌濾過液体培地から、任意かつ所望の追加成分を加えた活性成分の粉体を産生する真空乾燥または凍結乾燥技術である。液体培地は必要に応じて適切に緩衝されなければならなず、液体希釈剤は、充分な生理食塩水またはグルコースで、注射前に、最初に等張性にされる。直接注入のための高度に濃縮した組成物の調製も企図され、溶媒としてのＤＭＳＯの使用は、非常に急速な浸透をもたらして、小さい領域に活性成分を高濃度に送達すると考えられる。
【００７６】
組成物は製造および保存の条件下で安定でなければならない。微生物（例えば細菌と菌類）による汚染作用にたいして保護される。エンドトキシン汚染を安全なレベル、例えば０．５ｎｇ／ｍｇタンパク質未満で、最小限に保たなければならないことが理解される。
【００７７】
特定の実施形態において、注射可能組成物の遷延性吸収は、組成物中の吸収を延ばしている薬剤（例えばモノステアリン酸アルミニウム、ゼラチンまたはそれらの組み合わせ）の使用によってもたらされ得る。
【００７８】
ＸＶＩＩ．  併用療法
本発明の一局面は、放射性標識エチレンジシステイン誘導体ともう一つの薬剤または治療方法（望ましくはもう一つの癌処置）とを併用して用いることができることである。放射性標識エチレンジシステイン誘導体は、分から週に至るまでの変動する間隔で、他の薬剤処置よりも先行または後続することが可能である。他の薬剤と発現コンストラクトとが別々に細胞に適用される実施形態では、薬剤と発現コンストラクトとが、細胞に対して有利に複合効果を及ぼすことが未だ可能であるように、重要な期間は、各々の送達の時間の間で期限切れにならなかったことが一般に確実である。例えば、このような場合には、放射性標識エチレンジシステイン誘導体で実質的に同時に（すなわち、１分未満の範囲で）、２、３、４、またはそれ以上のモダリティーを持つ細胞、組織、または器官に接触してもよいと考えられる。他の局面では、１種類以上の薬剤を約１分間以内に投与してもよい。以上２、３、４モダリティー（すなわち、約１分より少ないものの範囲内で）で細胞、組織または生体に連絡することができることは、考察される。他の局面において、１種類以上の薬剤を、放射性標識エチレンジシステイン誘導体の投与前および／または投与後の約１分、約５分、約１０分、約２０分、約３０分、約４５分、約６０分、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１１時間、約１２時間、約１３時間、約１４時間、約１５時間、約１６時間、約１７時間、約１８時間、約１９時間、約２０時間、約２１時間、約２２時間、約２３時間、約２４時間、約２５時間、約２６時間、約２７時間、約２８時間、約２９時間、約３０時間、約３１時間、約３２時間、約３３時間、約３４時間、約３５時間、約３６時間、約３７時間、約３８時間、約３９時間、約４０時間、約４１時間、約４２時間、約４３時間、約４４時間、約４５時間、約４６時間、約４７時間から、約４８時間またはそれ以上までの範囲内で、投与してもよい。いくつかの他の実施形態では、薬剤は、放射性標識エチレンジシステイン誘導体の投与前および／または投与後の約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１６日、約１７日、約１８日、約１９日、約２０日から、約２１日までに、投与することが可能である。いくつかの状況では、処置のための時間を著しく拡張することが望ましいと考えられるが、その場合、それぞれの投与の間で数週間（例えば、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、または約８週以上）経過する。
【００７９】
種々の組合せを用いることができ、放射性標識エチレンジシステイン誘導体は”Ａ”であり、他の任意の治療薬であり得る第２の薬剤は、”Ｂ”である。
Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ  Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ  Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ  Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ。
患者に対する本発明の治療的な発現コンストラクトの投与は、もしあれば、ベクターの毒性を考慮して、化学療法剤の投与のための一般のプロトコルに従う。処置サイクルが必要に応じて繰り返されることが期待される。また、種々の標準的治療および外科的介入が、記載されたヒ素薬剤と組み合わせて適用されることができると考えられる。これらの治療として、限定されるものではないが、化学療法、放射線療法、免疫療法、遺伝子治療、および手術が挙げられる。
【００８０】
ａ．  化学療法
癌治療はまた、化学物質ベースの処置と放射線ベースの処置との両方を用いる、種々の併用療法を包含する。併用化学療法として、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロレタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ニトロソウレア、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ピリコマイシン、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、ラロキシフェン、エストロゲンレセプター結合因子、タキソール、ゲムシタビエン、ナベルビン、ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害物質、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、およびメトトレキセートが挙げられ、あるいは前述の任意の類似体または誘導体変異体が挙げられる。
【００８１】
ｂ．  放射線療法
ＤＮＡ損傷を生じて、広範囲に使われた他の要因として、一般にγ線、Ｘ線として知られているもの、および／または腫瘍細胞に方向付けられた放射性同位元素の送達が挙げられる。他の形態のＤＮＡ損傷因子として、例えばマイクロ波とＵＶ照射とが考えられる。これらの因子の全ては、ＤＮＡ前駆体上で、ＤＮＡの複製および修復上で、さらに染色体の集合および維持の際に、ＤＮＡの損傷の幅広い範囲にわたって、影響を及ぼす可能性が最もある。Ｘ線のための線量範囲は、長期にわたる期間（３〜４週）の間の５０〜２００レントゲンの１日量から、２０００〜６０００レントゲンの単一用量まで変動する。放射性同位元素の投与量範囲は、幅広く変動し、同位体元素の半減期、照射された放射線の強さおよび種類、さらに腫瘍細胞による取り込み次第である。「接触（ｃｏｎｔａｃｔｅｄ）」および「露出（ｅｘｐｏｓｅ）」という用語は、細胞に適用されるとき、治療的なコンストラクトと化学療法剤または放射線療法薬が標的細胞に送達されるか、標的細胞にすぐ並置して置かれるプロセスを記載するために本明細書中に使われる。細胞殺害または鬱血を成し遂げるために、両方の薬剤は、細胞を殺すかまたは細胞が分裂するのを防ぐのに効果的な総量で、細胞に送達される。
【００８２】
ｃ．  免疫療法
免疫療法剤は、通常、免疫エフェクター細胞と分子の使用に依存して、癌細胞を標的化し、そして破壊する。免疫エフェクターは、例えば、腫瘍細胞の表面の若干のマーカーに特異的な抗体であると考えられる。抗体単独は治療のエフェクターとして用いられることができるか、または他の細胞を補充して、実際に細胞殺害をもたらすことができる。抗体も薬物または毒素（化学療法剤、放射性ヌクレオチド、リシンＡ鎖、コレラトキシン、百日咳毒素、その他）に結合することができて、単に標的化薬剤のみとして用いられる。あるいは、エフェクターは、直接または間接的に、腫瘍細胞標的と相互作用する表面分子を運んでいるリンパ球であることができる。種々のエフェクター細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞とＮＫ細胞とを含む。
【００８３】
遺伝子治療と同時に、免疫療法が、このように、併用療法の一部として使われることができた。併用療法のための一般のアプローチは、後述する。通常、腫瘍細胞は標的化の影響を受けやすい（すなわち他の細胞の大部分には存在しない）何らかのマーカーを持たなければならない。多くの腫瘍マーカーが存在し、これらのいずれも本発明の文脈では標的化に適当であり得る。一般的な腫瘍マーカーとして、癌胎児性抗原、前立腺特異抗原、尿腫瘍関連する抗原、胎児性抗原、チロシナーゼ（ｐ９７）、ｇｐ６８、ＴＡＧ−７２、ＨＭＦＧ、シアリルルイス抗原、ＭｕｃＡ、ＭｕｃＢ、ＰＬＡＰ、エストロゲンレセプター、ラミニンレセプタ、ｅｒｂ  Ｂ、およびｐ１５５が挙げられる。
【００８４】
ｄ．  遺伝子
さらに別の実施形態では、二次処理は二次遺伝子治療であり、治療用ポリヌクレオチドが、一次治療薬よりも前に、後に、または同時に、投与される。遺伝子産物をコードしているベクターと同時の治療薬の送達は、標的組織に対して複合抗高増殖性効果（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ）をもたらす。
【００８５】
ｅ．手術
癌患者の約６０％は、なんらかのタイプの手術を受け、該手術として予防的、診断的または病気分類的、治癒的、および待機的な手術が挙げられる。治癒手術は、他の治療（例えば本発明の処置、化学療法、放射線療法、ホルモン療法、遺伝子治療、免疫療法および／または代替療法）と同時に用いることが可能な癌治療である。治癒手術は、癌組織の全部または一部が物理的にまたは部分的に除去されて、切除されて、そして／または破壊される摘除を含む。腫瘍摘除は、少なくとも腫瘍の一部の実際の撤去に言及する。腫瘍摘除に加えて、手術による処置として、レーザ外科、冷凍外科学、電気外科、顕微鏡下で制御された手術（モース氏手術）が挙げられる。本発明が表在性癌、前癌状態または付帯的な量の正常組織の除去と同時に使うことができることをさらに考察する。
【００８６】
ＸＶＩＩＩ．  ＥＣの合成
ＥＣは、以前に記載された方法によって二段階の合成で調製された（Ｒａｔｎｅｒ  ａｎｄ  Ｃｌａｒｋｅ，１９３７；Ｂｌｏｎｄｅａｕら，１９６７；それぞれ本明細書で援用する）。前駆体、Ｌ−チアゾリジン−４−カルボン酸（ｍ．ｐ．  １９５°、報告１９６−１９７°）を合成した。つぎに、ＥＣ（ｍ．ｐ．  ２３７°、報告２５１−２５３°）を調製した。構造は、１Ｈ−ＮＭＲと高速原子衝撃質量分析法（ＦＡＢ−ＭＳ）によって確認された。
【００８７】
ＸＩＸ．  シンチグラム・イメージングおよびオートラジオグラフィー検査
低エネルギー平行孔コリメーターを備えたガンマ・カメラ（Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｏｆｆｍａｎ  Ｅｓｔａｔｅｓ，ＩＬ，またはＰｈｉｌｉｐｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓｋｙｌｉｇｈｔ，Ｍｉｌｐｉｔａｓ，ＣＡ）  を用い、１８．５ＭＢｑの９９ｍＴｃ標識放射性トレーサーを静脈注射して０．５時間後、２時間後、および４時間後に得てシンチグラム像を得た。全身オートラジオグラムは、定量的イメージアナライザ（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａｎ，ＣＩ．）によって得られた。９９ｍＴｃ−ＥＣ−葉酸の３７ＭＢｑの静脈内注射後、１時間目に動物を殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）で固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上にマウントして１００μｍ冠状切片を切り出した。各々の切片を解凍してスライドに載せた。つぎに、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ，７００１４８０）と接触して配置して、１５時間にわたって９９ｍＴｃ標識で露光した。蛍光スクリーンは赤色レーザーで励起し、事前に吸収されたエネルギーと比例している結果として生じる青色光を記録した。
【００８８】
ＸＸ．  定義
本明細書で用いられるように、「放射性核種」という用語は、具体的な実施形態で粒子または電磁放射線の放出で崩壊する放射性核種（測定可能な寿命にわたって存在し得、そして核の電荷、質量、数、および量子状態によって特徴づけられる原子の一種）として定義される。上記用語が、用語「放射性同位元素」と同義的に使われる。
【００８９】
用語「治療薬」は、本明細書で用いられるようには、疾患または医学状態に対する処置を提供する薬剤として定義される。特定の実施形態の薬剤は、疾患または医学的状態の少なくとも１つの症状またはパラメータを改善する。例えば、腫瘍療法では、治療薬は腫瘍のサイズを減らすか、腫瘍の成長または転移を阻害するか、予防するか、腫瘍を除去する。例としては、薬物（例えば抗癌薬、遺伝子治療組成物、放射性核種、ホルモン、栄養補助剤、またはそれらの組み合わせ）が挙げられる。
【００９０】
本明細書で用いられるように用語「腫瘍」は、組織における細胞の、抑制されない漸進的成長として定義される。当業者は、新生物または悪性のような、他の同義の用語が存在することに気づいている。具体的な実施形態において、腫瘍は充実性腫瘍である。他の具体的な実施形態において、腫瘍は、原発性または転移の形態として、肝臓、前立腺、膵臓、頭頸部、胸部、脳、直腸、アデノイド、口腔、皮膚、肺、精巣、卵巣、頸部、子宮内膜、膀胱、胃、および上皮（例えば疣）の癌に由来する。
【００９１】
本明細書で用いられるように用語「薬物」は、疾患または医学状態の処置を助けるか、あるいは疾患または医学状態と関連する生理的または病理学的状態のいずれかを制御または改善する化合物として定義される。具体的な実施形態において、薬物は９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬物結合体である。
【００９２】
本明細書で用いられるように用語「抗癌薬」は、癌（例えば、充実性腫瘍）の処置のための薬物として定義される。抗癌薬は、望ましくは腫瘍のサイズを減らして、腫瘍の成長または転移を阻害もしくは予防し、そして／または腫瘍を除去する。
【００９３】
本明細書で用いられるように、「ａ」または「ａｎ」は１以上を意味し得る。特許請求の範囲で用いられるように、語句「含む」と組み合わせて使用される場合、「ａ」または「ａｎ」は１または２以上を意味し得る。本明細書で用いられるように、「別の（ａｎｏｔｈｅｒ）」は少なくとも第２以上を意味する。
【００９４】
ＸＸＩ．実施例
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために包含される。当業者であれば、以下の実施例で開示される技術が、本発明を実施する上で十分に機能することを本発明者が発見した技術を表しているため、その実施のための好ましい形態を構成するとみなされうることを認識するであろう。しかし、当業者は、本開示を鑑みて、開示される特定の実施形態で多くの変化がなされうることを認識し、それでもなお、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様または類似の結果を得る。
【００９５】
実施例１
ＥＣ−アンギオスタチンを用いたインテグリン（αｖβ３）の標的化
ａ．エチレンジシステイン（ＥＣ）の合成
インテグリン（αｖβ３）は、本発明の化合物であるＥＣ−アンギオスタチンに標的とされうる疾患血管新生標的である。ＥＣを、前述した方法にしたがって二段階合成で調製した（ＲａｔｎｅｒおよびＣｌａｒｋｅ，１９３７；Ｂｌｏｎｄｅａｕら，１９６７（各々を本明細書に参考として援用する））。前駆体であるＬ−チアゾリジン−４−カルボン酸を合成した。（ｍ．ｐ．１９５°、既報告値１９６〜１９７°）。その後、ＥＣを調製した（ｍ．ｐ．２３７°、既報告値２５１〜２５３°）。その構造を、１Ｈ−ＮＭＲおよび高速原子衝撃質量分析（ＦＡＢ−ＭＳ）によって確認した。
ｂ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの放射性合成（ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）
重炭酸ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、ＥＣ（３．２７ｍｇ、１２．２μｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨＳ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｒａｄｆｏｒｄ，ＩＬ）（３．０ｍｇ、１３．８μｍｏｌ）および１−エチル−３（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ、２．０ｍｇ、１０．５μｍｏｌ）（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）を添加した。その後、アンギオスタチン（３２．７ｍｇ、０．９３μｍｏｌ）を添加した。混合物を、１８時間室温で撹拌した。混合物を４８時間透析した（Ｍ．Ｗ．カットオフ１０，０００）。凍結乾燥後のＥＣ−アンギオスタチンの重量は１７ｍｇであった（収率：１００％）。９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸（５．５ｍＣｉ）（Ｓｙｎｃｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を、水０．２ｍｌ中にＥＣ−アンギオスタチン（１０μｇ、０．５ｎｍｏｌ）および塩化スズ（ＩＩ）（ＳｎＣｌ２、１００ｇ、０．５３μｍｏｌ）の凍結乾燥残留物を含有するバイアルに添加した。産物を、セファデックスＧ−２５カラム（総容積１０ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて精製し、ＰＢＳ（５ｍｌ）で溶出した。溶出物１ｍｌを、各試験管中で回収した。産物を、試験管３および４中で単離し、３．９ｍＣｉ（７０％）を得た。放射化学的純度を、１Ｍ酢酸アンモニウム：メタノール（４：１）を溶離剤として用いてＲａｄｉｏ−ＴＬＣスキャナ（Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）で評価した。ＧＰＣカラム（Ｂｉｏｓｅｐ  ＳＥＣ−Ｓ３０００、７．８ｘ３００ｍｍ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）および２つの検出装置（ＮａＩおよびＵＶ）を備えた高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を用いて、産物の純度を分析した。溶離剤はＰＢＳ（１０ｍＭ）中０．１％ＬｉＢｒであり、流速は１．０ｍｌ／分であった。
ｃ．インビトロ細胞取り込みアッセイおよび組織分布研究
種々の濃度のアンギオスタチン（０〜２００μＭ）のインビトロ細胞培養物を、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチン（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。癌細胞中の非標識アンギオスタチンを添加した後、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの取り込みが有意に減少したことから、該取り込みのレセプター機構が示唆された（図１〜２）。アンギオスタチンのＩＣ−５０は、１７６μＭ（Ｒ２＝０．９９８）であった（図３）。
【００９６】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、０．５ないし４時間目にラットを屠殺した。選択された組織を取り出し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの生体内分布は、時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加を示した（図４−５）。
ｄ．シンチグラフィーイメージング研究
シンチグラフィーイメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラット中で実行した（０．３ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。コンピュータが描き出した対象領域を用いて、腫瘍取り込み（カウント／ピクセル）および腫瘍／非腫瘍カウント密度比を決定した。平面イメージから、腫瘍が放射性標識アンギオスタチンで明確に視覚化されうることが確認された（図６）。
【００９７】
多数の他のタンパク質およびペプチドは、実施例１で記載されるこの技術を用いて適用されうる。これらには、ＥＣ−ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）、ＥＣ−エンドスタチン（抗血管内皮細胞）、ＥＣ−インターフェロンα（抗ＦＧＦ）が含まれる。
【００９８】
実施例２
ＥＣ−Ｃ２２５モノクローナル抗体を用いたＥＧＦＲの標的化
ａ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の放射性合成
ＥＧＦＲは、本発明の化合物である９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５モノクローナル抗体に標的とされうる疾患血管新生標的である。臨床等級抗ＥＧＦレセプターＲ  ＭＡｂ  Ｃ２２５（ＩＭＣ−Ｃ２２５）を、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ（Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪ）から得た。Ｃ２２５（２０ｍｇ）を、ＥＣ（２８．８ｍｇ、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３１．４ｍｌ中０．１１ｍｍｏｌ）、スルホ−ＮＨＳ（２３．３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（１６．６ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）とともに撹拌した。透析後、ＥＣ−Ｃ２２５を１７ｍｇ得た。１００ｍＣｉのＮａ９９ｍＴｃＯ４を、ＥＣ−Ｃ２２５  １ｍｇおよびＳｎＣｌ２１００μｇを含有するバイアルに添加し、産物をＧ−２５カラムで精製し、ＰＢＳで溶出して、８０ｍＣｉの９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５を得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５に対する放射化学的純度は、１００％であった（ＨＰＬＣ、ゲル浸透カラム、１０ｍＭ  ＰＢＳ中０．１％ＬｉＢｒ、ｐＨ７．４）。比活性は、２Ｃｉ／μｍｏｌであった（図７）。
【００９９】
例えば、イムノアッセイ（ウエスタン・ブロットおよび免疫沈降）ならびに細胞増殖アッセイを用いて、ＥＣ−Ｃ２２５の完全性を検討した。手短に言うと、ＤｉＦｉ細胞が細胞培養でＣ２２５にさらされるとき、該ＤｉＦｉ細胞はアポトーシスを受けることが知られている。細胞を、２４ウェルの培養プレート上へ播種した。細胞生存度を、培養培地０．５ｍｌ中に１０ｍｇ／ｍｌ  ＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニル・テトラゾリウム臭化物）（Ｓｉｇｍａ）５０ｕｌを添加することによってアッセイし、細胞を、ＣＯ２インキュベータ中３７℃で３時間インキュベートした後、ジメチル・ホルムアミド／Ｈ２Ｏ（ｐＨ４．７）中２０％ＳＤＳを含有する緩衝液を用いて、６時間以上の間３７℃で細胞溶解した。その後、細胞生存度を、５９５ｎｍの波長で細胞可溶化物の光学吸光度を測定して、対応する未処置の細胞により値を正規化することによって決定した。その結果から、ＥＣ−Ｃ２２５がＤｉＦｉ細胞中で細胞死を誘発する上で生物学的に活性であることが示される。対照的に、未処置の対照細胞と比較して、ＥＣ−Ｎａは細胞増殖に対するいかなる効果も示さなかった（図８）。
ｂ．組織分布研究
生体内分布を、ヌードマウスで増殖するＡ４３１（異種移植を過剰発現するＥＧＦＲ）で評価した（１μＣｉ／マウス、１０μｇ／マウス、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、マウスを０．５ないし４時間目に屠殺した。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンターを用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。生体内分布研究から、腫瘍対筋肉カウント密度比が時間の関数として増加することが示された（図９）。腫瘍取り込み（％ＩＤ／ｇ）は、１±０．２％であった。全腫瘍取り込みは、注入用量の６％であった（図１０）。
ｃ．シンチグラフィーイメージング研究
ＳＰＥＣＴイメージング（２５〜３０ｍＣｉ／患者）を、０．５ないし２４時間目に５人のＨＮＳＣＣ患者で実行した。各患者は、放射線療法と組み合わせたＣ２２５抗体療法の前にスキャンを受けた。コンピュータが描き出した対象領域を用いて、腫瘍取り込み（カウント／ピクセル）および腫瘍／非腫瘍カウント密度比を決定した。臨床ＳＰＥＣＴ画像から、腫瘍が０．５ないし４時間目に視覚化されうることが示された。画像および知見を図１１ないし１２に示した。
【０１００】
ＥＣ−ヘルセプチン（抗ＨＥＲ２）、ＥＣ−ＣＤ３１、ＥＣ−ＣＤ４０（免疫修飾物質）、ＥＣ−ＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を含む他の抗体は、ＥＣ技術を用いて適用されうる。
【０１０１】
実施例３
ＥＣ−ＣＯＸ−２を用いたＣＯＸ−２酵素の標的化
ａ．エチルアミノＣＯＸ−２（ＥＡ−ＣＯＸ−２）の合成
ＣＯＸ−２酵素は、本発明の化合物であるＥＣ−ＣＯＸ−２に標的とされうる疾患血管新生標的である。Ｎ−４−（５−ｐ−トリル−３−トリフルオロメチル−ピラゾル−１−イル）ベンゼンスルホニルアミド（ＣＯＸ−２阻害物質）（１１４．４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（２ｍｌ）に溶解した。この溶液に、ＤＢＵ４４．９μｌ（クロロホルム０．５ｍｌ中０．３ｍｍｏｌ）およびイソシアン酸エチルアセテート３３．７μｌ（クロロホルム０．５ｍｌ中０．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、室温で６時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させた。生成物を、クロロホルム／メタノールを溶離剤として用いて、シリカゲル充填カラムから単離した。ＣＯＸ−２のエステル形態（化合物Ｉ）の収率は、１３５ｍｇ（８８．１％）であった。合成スキームを図１３に示す。ＮＭＲスペクトルデータを図１４に記録した。
【０１０２】
化合物Ｉ（１０２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）をメタノール２ｍｌ溶解し、エチレンジアミン（７２．９μｌ）を添加した。反応物を、室温で２４時間撹拌した。生成物を、クロロホルム／メタノールを溶離剤として用いて、シリカゲル充填カラムから単離した。所望のエチルアミノＣＯＸ−２（ＥＡ−ＣＯＸ−２）（化合物ＩＩ）を単離した（９１ｍｇ、８６．７％収率）。化合物ＩＩのＮＭＲスペクトルデータを図１５に記録した。
ｂ．ＥＣ−エチルアミノＣＯＸ−２（ＥＣ−ＣＯＸ−２）の合成
ＥＣを溶解するために、ＮａＯＨ（１Ｎ、０．６ｍｌ）を、水（３ｍｌ）中で、ＥＣ（４２．３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−ＮＨＳ（６５．１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（５７．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。その後、ＥＡ−ＣＯＸ−２（７８．６ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌し、その後、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後、生成物を凍結乾燥した。生成物の重量は、８７．５ｍｇであった（収率７５％）。
ｃ．９９ｍＴｃによるＥＣ−ＣＯＸ−２の放射性標識
９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の放射性合成を、ＥＣ−ＣＯＸ−２（５ｍｇ）の凍結乾燥残留物、ＳｎＣｌ２（１００μｇ）、Ｎａ２ＨＰＯ４（１３．５ｍｇ）、アスコルビン酸（０．５ｍｇ）、グルタミン酸（２ｍｇ）、およびＥＣ（０．５ｍｇ）を含有するホームメードキットに必要量の９９ｍＴｃ−過テクネチウム酸を添加することによって実行した。調製物の最終ｐＨは、７．４であった。放射化学的純度を、酢酸アンモニア（水中１Ｍ）：メタノール（４：１）を用いてそれぞれ溶出したＴＬＣ（ＩＴＬＣ  ＳＧ，Ｇｅｌｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）によって測定した。放射性ＴＬＣ（Ｂｉｏｓｃａｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ）分析から、放射化学的純度は＞９５％であった。
ｄ．インビトロ細胞取り込みアッセイおよび組織分布研究
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図１および１６）。
【０１０３】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４ないし１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、ラットを０．５ないし４時間目に屠殺した。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の生体内分布から、９９ｍＴｃ−ＥＣと比較した時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加が示された（表２および３）。
【０１０４】
【表２−１】
2006515835.tif 000072
【０１０５】
【表２−２】
2006515835.tif 000073
【０１０６】
【表３−１】
2006515835.tif 000074
【０１０７】
【表３−２】
2006515835.tif 000075
【０１０８】
ｅ．シンチグラフィーイメージング研究
シンチグラフィーイメージング研究を、０．５ないし４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．３ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２で明確に視覚化されうることが確認された（図１７）。
【０１０９】
ＥＣ−サリドマイド（抗ＶＥＧＦ）、ＥＣ−キナゾリン類似体（抗ＥＧＦレセプターＲ））を含む他の小分子は、ＥＣ技術を用いて適用されうる。その構造を図１８ないし１９に示す。
【０１１０】
実施例４
ＥＣ−ペンシクロビルを用いたクロマチンの標的化
ａ．ＥＣ−ペンシクロビルの合成
ペンシクロビルは、グアニン類似体であり、疾患細胞周期標的を標的化するために用いられる。ＥＣ−ペンシクロビルの合成を、３段階方法（図２０〜２１に示す）で実行した。出発原料３−Ｎ−トリチル−９（４−トシル−３−Ｏ−トリチルメチルブチル）グアニン（ペンシクロビル類似体））を、公開されている方法（Ａｌｌａｕｄｉｎ  ２００１）にしたがって調製した。ペンシクロビル類似体（５００ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、１５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、アジ化ナトリウム（１６０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、一晩１００℃で加熱した。溶媒を水と混合し、酢酸エチルで抽出した。溶媒を、真空下で蒸発し乾燥させた。アジド生成物の重量は、４００ｍｇであった（収率９３％）。更なる精製はせずに、アジド・ペンシクロビル類似体（４００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１５ｍｌ）中、トリフェニルホスフィン（６５５ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）で還元した。反応物を一晩撹拌した。塩化水素（５Ｎ、０．５ｍｌ））を添加し、反応物を５時間還流した。その後、溶媒を蒸発させた。反応混合物を水で洗浄し、酢酸エチルで抽出した。水層を回収し、ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）を用いてｐＨを７ないし８に調整した。凍結乾燥後のアミノ・ペンシクロビル類似体の重量は、１２０ｍｇ（９０％）であった。
【０１１１】
ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（２ｍｌ）中のＥＣ（５０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（９５．５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（８４．５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を添加した。その後、生理食塩水（３５０ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）を含有するアミノ・ペンシクロビル類似体を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。生成物の重量は、１００ｍｇであった（収率６７％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ヒト卵巣および子宮癌細胞中０．５ないし２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル（４〜６μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２２）。
ｃ．  シンチグラフィーイメージング研究
シンチグラフィーイメージング研究を、０．５ないし４時間目に、ヒト子宮腫瘍を持つマウスで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルで視覚化されうることが確認された（図２３）。全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａｎ，ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図２４）。
【０１１２】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−デオキシシチジン、ＥＣ−カペシタビン（シチジン類似体）が挙げられる。その構造を図２５ないし２６に示す。
【０１１３】
実施例５
ＥＣ−アデノシンを用いたクロマチンの標的化
ａ．ＥＣ−アデノシンの合成
クロマチンは、本発明の化合物であるＥＣ−アデノシンに標的とされうる疾患細胞周期標的である。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．７ｍｌ）中のＥＣ（４５．６ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（８０．３ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（７１．０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料Ｎ，Ｎ−ジメチル−３’−アミノアデノシン（アミノアデノシン類似体）（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、６５．２ｍｇであった（収率６９．４％）。ＥＣ−アデノシン（ＥＣ−ＡＤＮ）の合成を図２７に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ヒト卵巣癌細胞中で０．５〜２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシン（４〜６μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２２）。
ｃ．オートラジオグラム研究
全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａｎ，ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシン０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図２８）。
【０１１４】
実施例６
ＥＣ−ＬＨＲＨを用いたＧｎＲＨレセプターの標的化
ａ．ＥＣ−ＬＨＲＨの合成
ＧｎＲＨレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−ＬＨＲＨに標的とされうる疾患組織レセプターである。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．５ｍｌ）中のＥＣ（４．６ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（３．７２ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３．３ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料である黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ、ヒト、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（５０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが１，０００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、５１ｍｇであった（収率９３．４％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ヒト前立腺癌細胞中で０．５〜２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨ（４〜６μＣｉ／１００，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。２種類の細胞系を用いた。該細胞系は、アンドロゲン（ＬＮＣａｐ）に感受性であるか、またはアンドロゲン（ＰＣ−３）療法に応答しないかのいずれかである。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図２９）。
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５〜４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨで視覚化されうることが確認された（図３０）。
【０１１５】
実施例７
ＥＣ−ＬＨ抗体を用いた黄体形成ホルモンレセプターの標的化
ａ．ＥＣ−ＬＨ抗体の合成
黄体形成ホルモンレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−ＬＨ抗体に標的とされうる疾患組織レセプターである。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（０．１ｍｌ）中のＥＣ（０．５１ｍｇ、１．９０μｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（０．４１ｍｇ、１．９μｍｏｌ）およびＥＤＣ（０．３６ｍｇ、１．９μｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料である黄体形成ホルモン抗体（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）（５．１ｍｇ）を添加した。混合物を室温で１８時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが１０，０００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、５．１ｍｇであった（収率９７％）。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイと組織分布研究
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７（乳癌細胞）中０．５〜２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨ抗体（４μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣと比較して、取り込みが有意に増加した（図３１）。
【０１１６】
生体内分布を、乳房腫瘍を持つラットで評価した（ＲＢＡ  ＣＲＬ−１７４７、ｎ＝３／時間間隔、ｉｖ）。研究を、移植後１４〜１７日に腫瘍が直径ほぼ１ｃｍに達した際に実行した。放射性トレーサーの投与後に、ラットを０．５〜４時間目に犠牲にした。選択された組織を切除し、計量して、ガンマ・カウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）を用いて放射能をカウントした。各試料中のトレーサーの生体内分布を、組織湿重量の１グラム当たりの注入用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として算出した。腫瘍を持つラット中の９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨ抗体の生体内分布から、９９ｍＴｃ−ＥＣと比較した時間の関数としての腫瘍対組織カウント密度比の増加が示された（表２および３）。
【０１１７】
【表４−１】
2006515835.tif 000076
【０１１８】
【表４−２】
2006515835.tif 000077
【０１１９】
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５〜４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビルで視覚化されうることが確認された（図３２）。
【０１２０】
実施例８
ＥＣ−トランスフェリンを用いたトランスフェリンレセプターの標的化
ａ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンの放射合成法
トランスフェリンレセプターは、本発明の化合物であるＥＣ−トランスフェリンに標的化されうる疾患組織レセプターである。トランスフェリン（１００ｍｇ）を、ＥＣ（１５ｍｇ、１Ｎ  ＮａＨＣＯ３１．０ｍｌ中０．０５６ｍｍｏｌ）、スルホ−ＮＨＳ（１１．６ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣ（１０．７ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）とともに撹拌した。透析（ＭＷでのカットオフ１０，０００）後、ＥＣ−トランスフェリンを１１０ｍｇ（９６％）得た。１００ｍＣｉのＮａ９９ｍＴｃＯ４を、ＥＣ−Ｃ２２５  ５ｍｇおよびＳｎＣｌ２１００μｇを含有するバイアルに添加し、産物をＧ−２５カラムで精製し、ＰＢＳで溶出して、８０ｍＣｉの９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンを得た。
ｂ．シンチグラフィー・イメージング研究およびオートラジオグラム研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．５〜４時間目に、ヒト子宮腫瘍を持つマウスで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンで視覚化されうることが確認された（図２３）。全身オートラジオグラムを、定量的画像分析装置（Ｃｙｃｌｏｎｅ  Ｓｔｏｒａｇｅ  Ｐｈｏｓｐｈｏｒ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐａｃｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｉａｎ，ＣＴ）によって得た。９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリン０．１ｍＣｉのｉ．ｖ．注射後に、動物を１時間目に屠殺し、その体をカルボキシメチルセルロース（４％）に固定した。凍結した体をクリオスタット（ＬＫＢ  ２２５０寒冷ミクロトーム）上に載せ、１００μｍ冠状切片に切断した。各切片を解凍して、スライド上に載せた。その後、スライドを多目的リン光体記憶スクリーン（ＭＰ、７００１４８０）と接触させ、１５時間露出した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンの注射後１時間目に実行したオートラジオグラムから、腫瘍活性が示された（図３３）。
【０１２１】
ＥＣ−ソマトスタチン、ＥＣ−カスパーゼ、ＥＣ−エンドルフィン、ＥＣ−ＰＳＡ、ＥＣ−ｐ５３、ＥＣ−オクトレオチド（構造を図３４に示す）を含む他のタンパク質およびペプチドは、ＥＣ技術を用いて適用されうる。
【０１２２】
実施例９
ＥＣ−ドキソルビシンを用いた腫瘍トポイソメラーゼの標的化
ａ．ＥＣ−ドキソルビシンの合成
治療薬剤に対する組織の応答は、本発明の化合物に標的とされうる。腫瘍トポイソメラーゼは、本発明の化合物であるＥＣ−ドキソルビシンに標的とされる。ＮａＨＣＯ３（１Ｎ）（２ｍｌ）中のＥＣ（５５．１ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（４４．６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（３９．４ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料であるドキソルビシン（１１９．２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、１３５ｍｇであった（収率７８％）。ＥＣ−ドキソルビシン（ＥＣ−Ｄｏｘｏ）の合成を図３５に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、ドキソルビシンに感受性があるヒト乳癌細胞（ＭＤＡ２３１、低ＨＥＲ２）およびドキソルビシンに耐性があるヒト乳癌細胞（ＭＤＡ４５３、高ＨＥＲ２）中で０．５〜２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ドキソルビシン（４〜６μＣｉ／５００，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。ドキソルビシン耐性細胞よりもドキソルビシン感受性細胞で取り込みが多かった（図３６）。
【０１２３】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−パクリタキセル、ＥＣ−トポテカン、ＥＣ−フルタミド、ＥＣ−アンチセンス、ＥＣ−タモキシフェン、ＥＣ−ミトキサントロン、ＥＣ−マイトマイシン、ＥＣ−バンコマイシン、ＥＣ−ブレオマイシンが挙げられる。
【０１２４】
実施例１０
ＥＣ−カルニチンを用いた脂質代謝の標的化
ａ．ＥＣ−カルニチン（ＥＣ−ＴＭＬ）の合成
カルニチン、すなわち２−ヒドロキシ−３−トリメチルアンモニウムブチラートは、脂肪酸の酸化にとって重要であり、疾患シグナル伝達経路の標的化の例である。６−トリメチルアンモニウムリジン（ＴＭＬ）は、カルニチンの類似体である。ＥＣは、ＴＭＬのアミノ基に結合した。ＮａＯＨ（１Ｎ）（０．５ｍｌ）中のＥＣ（３４．９ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、スルホ−ＮＨＳ（６２ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（５４．８ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を添加した。その後、出発原料であるＴＭＬ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温で２４時間撹拌した。混合物を、分子カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、４８時間透析した。透析後に、産物を凍結乾燥した。産物の重量は、７４．２ｍｇであった（収率９３．８％）。ＥＣ−カルニチン（ＥＣ−ＴＭＬ）の合成を図３７に示す。ＥＣ−ＴＭＬの質量スペクトルを図３８に示す。
ｂ．インビトロ細胞取り込みアッセイ
腫瘍細胞を用いたインビトロ細胞培養物を、乳癌細胞中０．５〜２時間目に、９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチン（４〜６μＣｉ／５０，０００細胞／ウェル）とともにインキュベートした。９９ｍＴｃ−ＥＣより９９ｍＴｃ−ＥＣ−カルニチンで取り込みが多かった（図１６）。
ｃ．シンチグラフィー・イメージング研究
シンチグラフィー・イメージング研究を、０．１〜４時間目に、乳房腫瘍を持つラットで実行した（０．１ｍＣｉ／ラット、ｎ＝３、ｉｖ）。対照群には、９９ｍＴｃ−ＥＣを投与した。高カウント密度比が、腫瘍／筋肉および心臓／筋肉で観察された（図３９）。平面イメージから、腫瘍が９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬで視覚化されうることが確認された（図４０）。
【０１２５】
実施例１１
ＥＣ−デオキシグルコースを用いたグルコサミンおよびグルコース代謝の標的化
ａ．ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＧ）の合成
シグナル伝達経路、すなわちグルコサミン代謝を、本発明の化合物であるＥＣ−デオキシグルコースを用いて標的とした。水酸化ナトリウム（１Ｎ、１ｍｌ）を、水（５ｍｌ）中で、ＥＣ（１１０ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。この無色の溶液に、スルホ−ＮＨＳ（２４１．６ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（２１８．８ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を添加した。その後、Ｄ−グルコサミンハイドロクロライド塩（３５６．８ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２４時間室温で撹拌し、ｐＨを６．４〜７．０に調整した。混合物を、カットオフが５００のＳｐｅｃｔｒａ／ＰＯＲ分子多孔性膜（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて４８時間透析した。透析後に、凍結乾燥器（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ，ＭＯ）を用いて産物凍結乾燥した。産物の重量は、２９１ｍｇであった（収率６０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）δ２．６０〜２．９０（ｍ、４Ｈ、およびＥＣの−ＣＨ２−ＳＨ）、２．９５（ｔ、２Ｈ、グルコサミン５−ＣＨ−ＣＨ２ＯＨ）、３．２０（ｄ、４Ｈ、グルコサミン６−ＣＨ２ＯＨ）、３．３０〜３．９５（ｍ、６Ｈ、グルコサミン１，３，４−ＣＨ、および４Ｈ  ＥＣのＣＨ２−ＳＨ）、３．３０〜３．６６（ｍ、４Ｈ、ＥＣのＣＨ２−ＣＨ２−）、４．１５〜４．３０（ｔ、２Ｈ、ＥＣのＮＨ−ＣＨ−ＣＯ）、４．６０（ｄ、２Ｈ、グルコサミン２−ＣＨ−ＮＨ２）。ＦＡＢ  ＭＳ  ｍ／ｚ５９１（Ｍ＋、２０）。構造は図４１に示す。
ｂ．９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの組織分布研究
雌の胸腺欠損ヌード・マウス（ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕ，ＮＣＩ，Ｂｅｔｈａｓｄａ，
ＭＤ）の中背部領域に、１人の原記載者（ａｕｔｈｏｒ）によって、ヒト肺癌細胞を接種した（Ａ５４９腫瘍細胞系、３ｘ１０６細胞／マウス、筋肉内）。腫瘍が６ｍｍに達したあと、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧおよび１８Ｆ−ＦＤＧを用いた別々の生体内分布研究をおこなった。各マウスは、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧまたは１８Ｆ−ＦＤＧを静脈内で受けた（ｎ＝３／時間点）。注射活性は、１〜３μＣｉ／マウスであった。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの注入質量は、０．２ｍｇ／齧歯動物。放射性トレーサーの投与後に、齧歯動物を屠殺し、選択された組織は切除し、計量して、放射能をカウントした。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧは、時間の関数として、腫瘍／筋肉および腫瘍／脳比がより高く、一方で、１８Ｆ−ＦＤＧは、腫瘍／血液比がより高かった（表４および５）。
【０１２６】
【表５−１】
2006515835.tif 000078
【０１２７】
【表５−２】
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【０１２８】
【表６−１】
2006515835.tif 000080
【０１２９】
【表６−２】
2006515835.tif 000081
【０１３０】
ｃ．ガンマ・シンチグラフィー・イメージング研究
雌のＦｉｓｃｈｅｒ３４４ラット（それぞれ２５０〜２７５ｇ）（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｃ．，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）に、１人の原記載者によって、１３７６２腫瘍細胞系由来の乳房腫瘍細胞を接種した（ｓ．ｃ．１０６細胞／ラット、Ｆｉｓｃｈｅｒラットに特異的な腫瘍細胞系）。８〜１０日後に、腫瘍量０．３〜０．６ｃｍを測定した。シンチグラフィー画像を、９９ｍＴｃ−ＥＣまたは９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧ（ｎ＝３／薬剤、全６匹のラット）３００μＣｉのｉ．ｖ．注射後０．５時間、２時間、および４時間に得た。腫瘍組織と筋肉との間のＲＯＩ（対側部位で）を用いて、腫瘍／非腫瘍比を測定した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧによって検出されうる最小の腫瘍量は、３ｍｍであった。中型の腫瘍（６ｍｍ）は、各時間点でより高い取り込みを示した。心臓、腎臓、肝臓、および膀胱を可視化した（図４２）。
【０１３１】
この実施例下でＥＣ技術を用いて適用可能な他の小分子としては、ＥＣ−アミホスチン、ＥＣ−ラクトース、ＥＣ−ピリドキサール（構造を図４３に示す）、ＥＣ−フラーレン（ＥＣ−カーボン６０、構造を図４４に示す）が挙げられる。
【０１３２】
本明細書中で請求および開示される組成物および／または方法の全ては、本開示を鑑みて、過度の実験をすることなしに、作製および実施されうる。本発明の組成物および方法をについて好ましい実施形態の観点から記載してきたが、種々の変更を、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱せずに、本明細書に記載される組成物および／または組成物に、かつ本明細書中に記載される方法の工程または一連の工程で適用することができることは当業者に自明である。より詳しくは、化学的かつ生理学的に関連する特定の因子を、本明細書に記載される因子と置換することが可能であると同時に、同じまたは類似の結果がなされることは自明である。当業者に自明であるそのような類似の置換および改変の全ては、添付の特許請求の範囲に定義されるように、本発明の精神、範囲、および概念内にあるとみなされる。
ｄ．１８８Ｒｅ−ＥＣ−ＤＧの合成および配合
ＥＣ−ＤＧをキットの形態で開発するために、水０．２ｍｌに溶解したＥＣ−ＤＧ（１０ｍｇ）を、１０ｍｌ中間バイアル中で、塩化スズ（水０．２ｍｌ中２ｍｇ）およびグルコン酸塩（３ｍｇ）とともに凍結乾燥し、標識前に室温で保存した。標識の間、凍結乾燥した粉末を生理食塩水（０．５ｍｌ）で再構築し、過テクネチウム酸塩（１０ｍＣｉ）を添加した。キットを、３０分間５５℃（または１５分間７５℃）で加熱した。９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの放射化学的純度は、放射性ＴＬＣ（生理食塩水、Ｒｆ：０．８）で測定した際、９５％を超えていた（図３９）。類似の方法を、ＥＣ−メトロニダゾール（ＥＣ−ＭＮ）（図４０）およびＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−Ｇｕａｎとしても知られる）等の他のＥＣ薬剤に適用することができた。Ｒｅ−１８８とＴｃ−９９ｍとの化学の類似性を示すために、Ｒｅ−１８８およびＴｃ−９９ｍ標識ＥＣ−ＧｕａｎならびにＥＣ−メトロニダゾールの細胞培養を実行した。取り込み間に著しい相違はなかった（図４１および図４２）。
【０１３３】
エチレンジシステインの酸化を予防するために抗酸化剤および遷移キレーターを組成物に含むことも重要であり得る。例えば、抗酸化剤はビタミンＣ（アスコルビン酸）でもよい。しかし、当業者に既知の他の抗酸化剤（例えば、トコフェロール、ピリドキシン、チアミン、またはルチン）を用いてもよい。当業者に公知の任意の遷移キレーターも、本発明と組み合わせて用いることが可能である。遷移キレーターの例としては、グルコヘプトン酸塩、グルコン酸塩、グルカル酸塩、クエン酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。特定の実施形態では、遷移キレーターは、グルコン酸塩またはグルカル酸塩であり、エチレンジシステインの安定性に干渉しない。遷移キレーター（グルコン酸塩およびグルカル酸塩）用いるか、または用いない９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（ＥＣ−ＤＧ）のインビトロ細胞培養は、９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＤＧの安定性に干渉しない（図４３Ａ〜４３Ｃ）。
【０１３４】
参照文献
以下の参照文献を、本明細書で述べたものを補足する典型的な手順または他の詳細を提供する範囲で、具体的に本明細書に援用する。
【０１３５】
【数１−１】
2006515835.tif 000082
【０１３６】
【数１−２】
2006515835.tif 000083
【０１３７】
【数１−３】
2006515835.tif 000084
【０１３８】
以下の図面は、本明細書の一部をなすものであり、さらに本発明の特定の局面を例証するために含まれる。本発明は、本明細書中に示される具体的な実施形態の詳細な説明と組み合わせてこれらの図面の一つ以上を参照することで、よりよく理解される。
【図面の簡単な説明】
【０１３９】
【図１】乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのインビトロ細胞取り込み。
【図２】非標識アンギオスタチンによる乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのインビトロ阻害研究。
【図３】非標識アンギオスタチン添加後の９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンの阻害率。
【図４】乳癌担持ラットでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−抗血管新生剤の腫瘍取り込み。
【図５】９９ｍＴｃ−ＥＣ−抗血管新生剤の腫瘍対筋肉カウント密度比。
【図６】９９ｍＴｃ−ＥＣ−アンギオスタチンのシンチグラム像。
【図７】９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５のＨＰＬＣクロマトグラム。
【図８】ＥＣ−Ｃ２２５とＣ２２５とのインビトロ比較。
【図９】Ａ４３１陰門癌担持ヌードマウスでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の生体内分布。
【図１０】Ａ４３１陰門癌担持ヌードマウスでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５の腫瘍対組織カウント密度比。
【図１１】ケース・スタディ１：  頭頚部癌の９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５スキャン：  左頚静脈二腹筋リンパ節。
【図１２】ケース・スタディ２：  頭部および頚部癌の９９ｍＴｃ−ＥＣ−Ｃ２２５スキャン：  左側舌根および口腔底。
【図１３】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２の合成。
【図１４】ＥＣ−ＣＯＸ−２−エステルのＮＭＲスペクトル・データ。
【図１５】ＥＣ−ＣＯＸ−２のＮＭＲスペクトル・データ。
【図１６】乳癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬剤のインビトロ細胞取り込み。
【図１７】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＣＯＸ−２のシンチグラム像。
【図１８】ＥＣ−サリドマイドの化学構造。
【図１９】ＥＣ−キナゾリンの化学構造。
【図２０】アミノペンシクロビルの合成。
【図２１】ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）の合成。
【図２２】ヒト癌細胞系統での９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル（９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）のインビトロ細胞取り込み。
【図２３】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル  （９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）のシンチグラム像。
【図２４】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ペンシクロビル  （９９ｍＴｃ−ＥＣ−グアニン）のオートラジオグラム。
【図２５】ＥＣ−デオキシシチジンの化学構造。
【図２６】カペシタビンの化学構造。
【図２７】ＥＣ−アデノシンの合成。
【図２８】９９ｍＴｃ−ＥＣ−アデノシンのオートラジオグラム。
【図２９】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨＲＨのシンチグラム像。
【図３０】ヒト卵巣癌細胞での９９ｍＴｃ−ＥＣ−薬剤のインビトロ細胞取り込み。
【図３１】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＬＨのシンチグラム像。
【図３２】９９ｍＴｃ−ＥＣ−トランスフェリンのオートラジオグラム。
【図３３】ＥＣ−ＴＭＬの合成。
【図３４】ＥＣ−ＴＭＬの質量スペクトル。
【図３５】乳癌担持ラットでの９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬの生体内分布。
【図３６】９９ｍＴｃ−ＥＣ−ＴＭＬのシンチグラム像。
【図３７】ＥＣ−ピリドキサールの合成。
【図３８】９９ｍＴｃ−フラーレン−ＥＣ−薬物結合体の合成。
【図３９】１８８Ｒｅ−ＥＣデオキシグルコースの合成。
【図４０】１８８Ｒｅ−ＥＣ−メトロニダゾールの合成。
【図４１】１８８Ｒｅ−および９９ｍＴｃ−標識ＥＣ−ペンシクロビル（ＥＣ−グアニン）のインビトロ細胞培養。
【図４２】１８８Ｒｅ−ＥＣ−メトロニダゾールのインビトロ細胞培養。
【図４３Ａ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方物）のインビトロ細胞培養。
【図４３Ｂ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方物）のインビトロ細胞培養。
【図４３Ｃ】９９ｍＴｃ−ＥＣ−デオキシグルコース（キット処方物）のインビトロ細胞培養。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2006515835.tif 000085
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２】
2006515835.tif 000086
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４】
2006515835.tif 000087
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図５】
2006515835.tif 000088
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図６】
2006515835.tif 000089
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図７】
2006515835.tif 000090
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図８】
2006515835.tif 000091
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図９】
2006515835.tif 000092
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１０】
2006515835.tif 000093
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１１】
2006515835.tif 000094
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１２】
2006515835.tif 000095
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１４】
2006515835.tif 000096
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１５】
2006515835.tif 000097
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１６】
2006515835.tif 000098
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１７】
2006515835.tif 000099
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２２】
2006515835.tif 000100
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２３】
2006515835.tif 000101
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２４】
2006515835.tif 000102
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２８】
2006515835.tif 000103
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図２９】
2006515835.tif 000104
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３０】
2006515835.tif 000105
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３１】
2006515835.tif 000106
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３２】
2006515835.tif 000107
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図３５】
2006515835.tif 000108
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４３Ａ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４３Ａ】
2006515835.tif 000109
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４３Ｂ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４３Ｂ】
2006515835.tif 000110
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図４３Ｃ
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図４３Ｃ】
2006515835.tif 000111
【国際調査報告】
2006515835.tif 000112
2006515835.tif 000113