(57)【要約】Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌に関連して、組成物および方法が提供される。その組成物および方法は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染に関連する医学的状態の診断および治療のために使用され得る。そのような伝染病としては、嚢胞性線維症の患者の肺中のＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａが挙げられる。本方法において有用な化合物は、治療薬剤に結合され得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌は、コロニー形成をブロックすることにより、この細菌の増殖を阻止することにより、またはその細菌を殺すことにより阻害され得る。
2006515306.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
温血動物においてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法であって、図１または図２に記載の化合物を含む化合物を、該細菌を阻害するための有効な量で、該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記化合物が、治療薬剤と結合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
図１または図２に記載の化合物と結合された治療薬剤を含む、結合体。
【請求項６】
前記結合体が、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされている、請求項５に記載の結合体。
【請求項７】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を検出する方法であって、該方法は、図１または図２に記載の化合物を含む化合物に結合された診断薬剤とサンプルを、該サンプル中に存在する場合、該化合物が該細菌と結合するための十分な条件下で、接触させる工程；および該サンプル中に存在する該薬剤を検出する工程であって、ここで、該サンプル中の該薬剤の存在は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の存在を示す工程を包含する、方法。
【請求項８】
前記細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
固体支持体上にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固定する方法であって、該方法は、結合するための十分な条件下で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌含有サンプルと、固体支持体上に固定された図１または図２に記載の化合物を含む化合物とを接触させる工程；および該固体支持体から該サンプルを分離する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法における使用のための、図１または図２に記載の化合物を含む、化合物。
【請求項１１】
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされた、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１０または１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法における使用のための、請求項５または６に記載の結合体。
【請求項１４】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１３に記載の結合体。
【請求項１５】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための薬の調製における、図１または図２に記載の化合物を含む化合物の使用。
【請求項１６】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための薬の調製における、請求項５による結合体の使用。
【請求項１７】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１５または１６に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般的に、嚢胞性線維症を有する患者の肺の中でのＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａを含む、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による感染およびコロニー形成に関与する、温血動物（例えば、ヒト）における疾患の診断および治療のための化合物、組成物、および方法に関する。本発明は、より具体的には、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌に選択的に結合するための１つ以上の化合物の使用に関する。これらの化合物は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌のコロニー形成の診断および／または治療的介入に対して有用であるか、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を標的とし、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を有効に阻止もしくは殺傷するために薬剤へ結合され得る。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染は、種々の医学的状態において発生し、そして生命を脅かし得る。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓは、日和見性細菌である。危険状態にある個体の例としては、嚢胞性線維症患者および熱傷患者が挙げられる。嚢胞性線維症は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の感染を含み得る医学的状態の代表的な例として以下に記載される。
【０００３】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、白人集団の間で最も一般的な致死の遺伝疾患である。ＣＦは、嚢胞性線維症膜貫通調節タンパク質（ｃｙｓｔｉｃ  ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ；ＣＦＴＲ）をコードする遺伝子中の変異によって引き起こされ、塩化物チャネルとして作用する。イオン移動を変化させるＣＦＴＲの遺伝的変異もまた、ＣＦＴＲのＮ−グルコシル化、および他の細胞表面分子に影響を及ぼす。患者の全ての外分泌腺は、影響を受ける；しかし、肺は、病的状態および死亡の主要な部分である。グルコシル化における一般的な変化は、ルイスのフコシル化における増加およびシアル化における減少を生じる。ＣＦ患者由来の唾液のおよび呼吸器のムチン（ｍｕｓｉｎ）はまた、シアル化および硫酸化されたルイスｘ／ａ構造を含む、より高レベルのルイス型オリゴ糖を含む。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＣＦ患者における病的状態および死亡の主な原因は、この細菌、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによる慢性の肺コロニー形成であり、この細菌は、肺の破壊および死につながる強い好中球性炎症応答の著しい肺感染を生じる。Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａによるコロニー形成は、この細菌上の線毛レクチンおよび鞭毛レクチンの、肺細胞表面上のルイス型糖鎖構造への結合によって開始される。ＰＡ−ＩＬおよびＰＡ−ＩＩＬとして知られるこれらのレクチンは、これらのオリゴ糖構造と高い親和性で結合し、そして細菌のコロニー形成の最初の工程を妨げる潜在的分子標的を表す。この細菌によって十分にはコロニー形成されない患者は、良好な長期間の予後を維持する。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌による個体中でのコロニー形成の予防についての、当該分野での現在のアプローチにおける難しさのために、化合物、組成物および方法を改良する必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の簡単な要旨）
簡単に述べると、本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の検出のためにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌上に発現するレクチンを利用するための化合物、組成物および方法、ならびにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌に関与する疾患（ヒトの疾患を含む）の診断および治療を提供する。例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ上のレクチンに対して高い親和性の結合性を有するルイス構造の糖模倣物は、ＣＦ患者に対して有益な治療効果を有する。さらに、これらの糖模倣物は、例えば、効力を増大させ、そして投与量を低下させるために強い抗生物質と結合体化され得、それによってこれらの強力な抗生物質の周知の有害な副作用が回避され得る。これらの結合部分が、この細菌のコロニー形成および病原性に対して重大であることを考慮すると、この結合体治療に対して抵抗性となる、この標的における変異は、この細菌の非病原性形態を生じるに違いない。
【０００６】
本発明の１つの実施形態は、温血動物におけるＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法を提供し、この方法は、図１または図２に記載の化合物を含む化合物を、この細菌を阻害するための有効な量で、この動物へ投与する工程を包含する。
【０００７】
別の実施形態では、本発明は、図１または図２に記載の化合物と結合した治療薬剤を含む結合体を提供する。
【０００８】
別の実施形態では、本発明は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を検出する方法を提供し、この方法は、図１または図２に記載の化合物を含む化合物に結合された診断薬剤とサンプルを、このサンプル中に存在する場合、この化合物がこの細菌と結合するための十分な条件下で、接触させる工程；およびこのサンプル中に存在するこの薬剤を検出する工程であって、ここで、このサンプル中のこの薬剤の存在は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の存在を示す、工程を包含する。
【０００９】
別の実施形態では、本発明は、固体支持体上にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固定する方法を提供し、この方法は、結合するための十分な条件下で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌含有サンプルと、固体支持体上に固定された図１または図２に記載の化合物を含む化合物とを接触させる工程；およびこの固体支持体からこのサンプルを分離する工程を包含する。
【００１０】
他の実施形態では、本明細書に記載の化合物および結合体は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための薬の調製において使用され得る。
【００１１】
本発明のこれらの局面および他の局面は、以下の詳細な説明および添付された図面を参照すれば明白になる。本明細書で開示された全ての参考文献は、あたかもそれぞれが個々に援用されたかのように、その全体が参考として援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
上述で記載のように、本発明は、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと結合して、疾患の診断および治療において使用され得る、化合物および組成物を提供する。
【００１３】
（糖模倣化合物）
本明細書で使用される場合、用語「糖模倣化合物」とは、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａと特異的に結合する分子をいう。本発明によって包含される糖模倣化合物の構造は、図１および図２において示され、そしてまた、この化合物が、末端のシクロヘキシル乳酸部分として示されるシアル酸についての模倣物を含まないことを除いては、本明細書で開示された化合物を包含する。これは、例えば、ある反応スキームにおいて中間体Ｅの添加を含む工程を除去することによって達成される。本発明において有用な全ての化合物（またはその結合体）は、生理学的に受容可能な、それらの塩を含む。
【００１４】
ある実施形態については、薬物のような診断薬剤もしくは治療薬剤を糖模倣化合物と結合させて結合体（その結合は共有結合である）を形成させることもまた、あるいは、有益であり得る。本明細書で使用される場合、用語「治療薬剤」とは、疾患または他の非所望状態を予防または処置するか、あるいは治療の成功を促進させるための温血動物（例えば、ヒトのような哺乳動物）への投与が意図される、任意の生物活性薬剤をいう。治療薬剤としては、抗生物質、ホルモン、成長因子、タンパク質、ペプチド、遺伝子、非ウイルスベクターおよび他の化合物が挙げられる。
【００１５】
（糖模倣化合物の処方物）
本明細書で記載の糖模倣化合物は、薬学的組成物内に存在し得る。薬学的組成物は、１つ以上の薬学的または生理学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤と組み合わされた１つ以上の糖模倣化合物を含む。そのような組成物は、緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水またはリン酸緩衝生理食塩水）、糖質（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、またはデキストラン）、マンニトール、タンパク質、ポリペプチド、またはグリシンのようなアミノ酸、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン）、アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）および／または保存剤を含み得る。なおさらなる他の実施形態では、本発明の組成物は、凍結乾燥物（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｅ）として処方され得る。本発明の組成物は、例えば、エアロゾル投与、局所投与、経口投与、鼻腔投与、静脈内投与、頭蓋内投与、腹腔内投与、皮下投与、または筋肉投与を含む、任意の適切な投与様式について処方され得る。
【００１６】
薬学的組成物はまた、あるいは、糖模倣化合物と結合され得るか、またはこの組成物内で遊離であり得る薬物のような、１つ以上の活性薬剤を含み得る。糖模倣化合物への薬剤の結合は、共有結合または非共有結合であり得る。
【００１７】
本明細書で記載の組成物は、持続放出処方物（すなわち、投与後の調節薬剤の、ゆっくりとした放出をもたらすカプセルまたはスポンジのような処方物）の一部として投与され得る。そのような処方物は、一般的に、周知の技術を用いて調製され得、そして例えば、経口移植、直腸移植、または皮下移植、または所望の標的部位での移植によって投与され得る。そのような処方物内での使用のためのキャリアは、生体適合性であり、そしてまた生物分解性であり得；好ましくは、この処方物は、比較的一定のレベルでの調節薬剤の放出を提供する。維持放出処方物内に含まれる糖模倣化合物の量は、移植部位、放出速度、および放出の期待された持続時間、ならびに治療または予防される状態の性質に依存する。
【００１８】
糖模倣化合物は、一般的に、治療的有効量で、薬学的組成物内に存在する。治療的有効量は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ感染に関連した状態の測定または観察された応答のような、患者の認識可能な利益をもたらす量である。
【００１９】
（糖模倣化合物の使用方法）
一般的に、本明細書に記載の糖模倣化合物は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）細菌による感染に関与する疾患（例えばヒトの疾患）をもたらす診断結果および／または治療結果を達成するために使用され得る。そのような診断結果および／または治療結果は、動物、好ましくは、ヒトのような哺乳動物のインビトロおよび／またはインビボにおいて達成され得る。ただし、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は、最終的に、認識可能な診断結果または治療結果を達成するために十分な量および時間において、糖模倣化合物と接触される。本発明の背景では、治療結果は、例えば、肺感染の予防と関連する。いくつかの状態では、治療結果は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの阻害（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）（例えば、このような細菌の増殖を阻止するかもしくはこの細菌を殺傷する、またはこの細菌によるコロニー形成を防ぐことを包含する）と関連する。本明細書で使用される場合、治療または治療学的結果は、処置または予防を含む。
【００２０】
本発明の糖模倣化合物は、処置または予防されるべき疾患に対する適切な様式において投与され得る。適切な投与量ならびに投与の適切な持続時間および頻度は、患者の状態、患者の疾患の型および重症度ならびに投与方法のような要因によって決定され得る。一般的に、適切な投与量および処置レジメンは、処置および／または予防の利益を提供するために十分な量で、この調節薬剤を提供する。本発明の特に好ましい実施形態では、糖模倣化合物は、０．００１ｍｇ／ｋｇ体重〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重（より代表的には０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／ｋｇ）の範囲の投与量で、毎日１回または複数回の投与レジメンで投与され得る。適切な投与量は、一般的に、実験モデルおよび／または臨床試験を用いて決定され得る。一般的に、効果的な治療を提供するために十分である最小の投与量の使用が好ましい。患者は、一般的に、当業者が精通している、治療または予防される状態に対して適切なアッセイを用いて、治療的有効性についてモニターされ得る。
【００２１】
糖模倣化合物はまた、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）へ、物質を標的化するために使用され得る。そのような物質としては、治療薬剤および診断薬剤が挙げられる。治療薬剤は、分子、ウイルス、ウイルス成分、細胞、細胞成分、あるいは、標的細胞の性質を変更することが立証され得、その結果障害を治療もしくは予防するため、または患者の生理機能を制御するための利益を提供し得る、任意の他の物質であり得る。治療薬剤はまた、インビボで生物学的活性を有する薬剤を生じるプロドラッグであり得る。治療薬剤であり得る分子は、例えば、ポリペプチド、アミノ酸、核酸、ポリヌクレオチド、ステロイド、多糖または無機化合物であり得る。そのような分子は、任意の種々の方法において機能し得、それらとしては、例えば、酵素、酵素インヒビター、ホルモン、レセプター、アンチセンスオリゴヌクレオチド、触媒性ポリヌクレオチド、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、抗細菌剤、免疫調節剤、および細胞障害性薬剤（例えば、ヨウ素、臭素、鉛、レニウム、ホミウム（ｈｏｍｉｕｍ）、パラジウムまたは銅のような放射性核種）が挙げられる。診断薬剤としては、金属および放射性薬剤のような画像化剤（例えば、ガリウム、テクネチウム、インジウム、ストロンチウム、ヨウ素、バリウム、臭素およびリン含有化合物）、造影剤、色素（例えば、蛍光色素または発蛍光団）ならびに比色定量的反応または蛍光定量的反応を触媒する酵素が挙げられる。一般的に、治療薬剤および診断薬剤は、上述で記載の技術のような種々の技術を用いて、糖模倣化合物に結合され得る。標的化の目的のためには、糖模倣化合物は、本明細書で記載の通りに患者に投与され得る。
【００２２】
糖模倣化合物はまた、（例えば、種々の周知の細胞培養方法および細胞分離方法で）インビトロで使用され得る。例えば、糖模倣化合物は、培養中でのスクリーニング、アッセイまたは増殖のためにＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固定する際に使用するために固体支持体上に固定され得る。（例えば、組織培養プレートまたは他の細胞培養支持体の内部表面と連結される）。そのような連結は、上述に記載の方法のような任意の適切な技術、および他の標準的技術によって行われ得る。また、糖模倣化合物の使用は、細胞の同定およびインビトロでの選別を容易にし、そのような細菌細胞の選択を許容し得る。好ましくは、そのような方法における使用のための糖模倣化合物は、検出可能なマーカーである診断薬剤に連結される。適切なマーカーは、当該分野で周知であり、それらとして、放射性核種、発光基、蛍光基、酵素、色素、免疫グロブリンの定常ドメイン、およびビオチンが挙げられる。１つの好ましい実施形態では、フルオレセインのような蛍光マーカーに連結された糖模倣化合物は、細胞と接触され、次いで、蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）によって分析される。
【００２３】
そのようなインビトロでの方法は、一般的に、サンプル（例えば、生物学的調製物）と、糖模倣化合物の任意の１個とを接触させる工程、およびこのサンプル中のこの化合物を検出する工程を包含する。所望される場合、１回以上の洗浄工程が方法に加えられ得る。例えば、この化合物の検出より先にサンプルと糖模倣化合物とを接触させ、その後、このサンプルは、洗浄され得る（すなわち、流体と接触させ、次いでこの流体を除去し、結合しない糖模倣化合物を除去する）。あるいは、または加えて、洗浄工程は、この検出プロセスの間にさらに加えられ得る。例えば、糖模倣化合物が、検出可能である物質と結合し得るマーカー（診断薬剤）を所有する場合、この検出の前に、このサンプルと検出可能な物質とを接触させた後に、このサンプルを洗浄することが所望され得る。本明細書で使用される場合、語句「このサンプル中の化合物（または薬剤）の検出」は、この化合物（もしくは薬剤）がこのサンプルと結合したままであるこの化合物（もしくは薬剤）を検出すること、またはこの化合物（もしくは薬剤）がこのサンプルから分離された後に、このサンプルと結合した化合物（もしくは薬剤）を検出することを包含する。
【００２４】
以下の実施例は、例証の目的で提示されるのであり、限定の目的で提示されるのではない。
【実施例】
【００２５】
（実施例１）
（３の合成（図３））
（中間体Ｃの形成：）
化合物Ａ（５．００ｇ、１２．７４ｍｍｏｌ）およびＢ（４．５０ｇ、１９．１１ｍｍｏｌ）ならびにＮＩＳ（３．５８ｇ、１５．９３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却する。トリフルオロメタンスルホン酸の溶液（ＣＨ２Ｃｌ２中の０．１５Ｍ）を、攪拌しながら滴下する。その溶液が橙色から暗褐色に色を変えたら、ＴＭＳ−ＯＨの添加を止める。この溶液を次いで飽和ＮａＨＣＯ３（３０ｍｌ）で洗浄し、そしてその有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。得られるシロップをシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／エーテル、１：１）により精製し、次の工程に使用する。
【００２６】
上記で得られる化合物をＴＨＦ（４０ｍｌ）中に溶解し、炭素担持Ｐｄ（１０％）（質量で１／１０）を添加する。この溶液を脱気し、Ｈ２の雰囲気を発生させる。この反応を、出発物質の消失がＴＬＣで確認されるまで、室温で進行させる。この溶液をセライト床を通して濾過し、そしてその濾液を真空中で濃縮し、４位および６位がＯＨの化合物を与える。この化合物を、次いでピリジン（２５ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却する。Ｐｈ３ＣＣｌ（１．２当量）を滴下し、この反応を室温で６時間進行させる。酢酸エチル（５０ｍｌ）を次いで添加し、この溶液を０．１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍｌで２回）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌで１回）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで１回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、乾燥状態までエバポレートする。中間体Ｃを、シリカゲルクロマトグラフィーにより得る。
【００２７】
（２０の形成：）
化合物Ｃ（８００ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）およびＥｔ４ＮＢｒ（３５３ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ、１：１、モレキュラーシーブスを含む）中に溶解し、０℃に冷却する。Ｂｒ２（２９８ｍｇ、１．８６ｍｍｏｌ、ＣＨ２Ｃｌ２中）を、０℃で、ＣＨ２Ｃｌ２中の化合物Ｄ（８０８ｍｇ、１．６９ｍｍｏｌ）の別の溶液に滴下する。３０分後、そのＢｒ２／Ｄ溶液をシクロヘキセン（０．２ｍｌ）でクエンチし、そして直ちに（１０分以内に）上記Ｃの溶液に添加する。この混合物を、室温で６５時間反応させる。酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、この溶液を濾過し、そしてこの濾液を、飽和ＮａＳ２Ｏ３（５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで２回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。得られるシロップを、次いでエーテル（５０ｍｌ）に溶解し、そして攪拌しながらギ酸（１０ｍｌ）を添加する。その反応の完了後（ＴＬＣにより確認されるように）、この溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで１回）で洗浄する。次いで、この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次いで乾燥状態までエバポレートする。化合物２０を、次いでシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。
【００２８】
（中間体Ｆの形成：）
化合物２０（１ｇ、１．０２ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ／ジオキサン（１０ｍｌ、２０：１）中に溶解し、ＮａＯＭｅ（０．１０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら添加する。この反応を、５０℃で２０時間進行させ、次いで２滴の酢酸を添加する。この溶液を乾燥状態までエバポレートし、エチルエーテル（２５ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで１回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、乾燥状態までエバポレートする。最終生成物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。この生成物（０．９８０ｍｍｏｌ）およびＢｕ２Ｓｎ（１．０８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中に懸濁し、加熱して２時間還流させる。その結果得られる清澄な溶液を、次いで乾燥状態までエバポレートし、ペンタン（１０ｍｌ）中に溶解し、エバポレートし無色の泡状物を与える。その泡状物を１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ、１５ｍｌ）に溶解し、化合物Ｅ（１．９６ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（１．１８ｍｍｏｌ）を添加し、その反応物を室温で２時間攪拌する。２時間後、１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（５０ｍｌ）およびＫＦ（１ｇ）を攪拌しながら添加し、続いて酢酸エチルで抽出する（２５ｍｌで２回）。その有機層を１０％ＫＦ（５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで２回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で乾燥状態までエバポレートする。化合物Ｆをシリカゲルクロマトグラフィーを経由して得る。
【００２９】
（３の形成：）
化合物ＦをＣＨ３ＯＨ（５０ｍｌ）に溶解し、炭素担持Ｐｄ（１０％）（質量で１／１０）を添加する。この溶液を脱気し、Ｈ２の雰囲気を発生させる。この反応を、出発物質の消失がＴＬＣで確認されるまで、室温で進行させる。この溶液をセライト床を通して濾過し、そしてその濾液を真空中で濃縮し、化合物３を与える。
【００３０】
（実施例２）
（２１の合成（図４））
（中間体Ｈの形成：）
Ｇ（１５．０ｇ、６６．９ｍｍｏｌ）およびＢｕ２ＳｎＯ（２０．０ｇ、８０．３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（４５０ｍｌ）中に懸濁し、加熱して２時間還流させる。その結果得られる清澄な溶液を、次いで乾燥状態までエバポレートし、ペンタン中に溶解し、再度エバポレートし無色の泡状物を与える。その泡状物を１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ、１２０ｍｌ）に溶解し、Ｅ（３９．６ｇ、１００．３ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（１２．２ｇ、８０．３ｍｍｏｌ）を添加し、その反応物を室温で２時間攪拌する。２時間後、１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（７００ｍｌ）およびＫＦ（２５ｇ）を攪拌しながら添加し、続いて酢酸エチルで抽出する（２５０ｍｌで３回）。その有機層を１０％ＫＦ（２５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（２５０ｍｌで１回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で乾燥状態までエバポレートする。その化合物（１９．３ｇ、４１．２ｍｍｏｌ）をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、直ちに結晶のＤＭＡＰとともにピリジン（２１０ｍｌ）に溶解する。この溶液を０℃に冷却し、塩化ベンゾイル（５２．１ｇ、３７０．７ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら滴下する。この溶液を、室温までゆっくり温め、この反応を室温で２０分間進行させる。この溶液を乾燥状態までエバポレートし、酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、０．１Ｍ  ＨＣｌ溶液（２５０ｍｌで２回）、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ溶液（２５０ｍｌで１回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。Ｈを、シリカゲルクロマトグラフィーによって得る。
【００３１】
（中間体Ｉの形成：）
Ｈ（１０．０ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ）およびＢ（６．０５ｇ、２５．６４ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍｌ）に溶解し、−１０℃で、攪拌しながら、０．１５Ｍ  ＣＦ３ＳＯ３Ｈ（ＣＨ２Ｃｌ２中）を滴下する。その橙色溶液が褐色に変わると、添加を停止する。酢酸エチル（５００ｍｌ）を添加し、この溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（２５０ｍｌで４回）および飽和ＮａＣｌ（２５０ｍｌ）で洗浄する。次いで、この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下でエバポレートする。その化合物（７．９６ｇ、９．１９ｍｍｏｌ）を、次いでシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、そして次いでＤＭＦ（５５ｍｌ）中に溶解する。ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（１．５２ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（０．９４ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を次いで添加し、そしてその反応を室温で１時間進行させる。酢酸エチル（２５０ｍｌ）を添加し、この溶液を飽和ＮａＨＣＯ３（２５０ｍｌで５回）および飽和ＮａＣｌ（２５０ｍｌで１回）で洗浄する。この有機層を次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、化合物Ｉを与える。
【００３２】
（中間体Ｊの形成：）
化合物Ｉ（７．７１ｇ、７．８７ｍｍｏｌ）およびＥｔ４ＮＢｒ（２．００ｇ、９．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ／ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍｌ、１：１、１２ｇのモレキュラーシーブスを含む）中に溶解し、０℃に冷却する。ＣＨ２Ｃｌ２（１１ｍｌ）中のＢｒ２（１．９０ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）を、０℃で、ＣＨ２Ｃｌ２中の化合物Ｄ（４．５ｇ、９．４５ｍｍｏｌ）の別の溶液に滴下する。３０分後、そのＢｒ２／Ｄ溶液をシクロヘキセン（２．５ｍｌ）でクエンチし、そして直ちに（１０分以内に）上記Ｉの溶液に添加する。この混合物を、室温で６５時間反応させる。ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍｌ）を添加し、この溶液を濾過し、そしてこの濾液を、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌで２回）、０．５Ｍ  ＨＣｌ（２５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（２５０ｍｌで２回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。この混合物を、室温でＭｅＣＮ（８５ｍｌ）に溶解し、そしてＭｅＣＮ（１７ｍｌ）中のＥｔ３Ｎ（０．２１ｍｌ）およびＨ２ＳｉＦ６（１．３ｍｌ、３５％）を添加し、２時間攪拌する。ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍｌ）を添加し、この溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３（２５０ｍｌで３回）および飽和ＮａＣｌ（２５０ｍｌで１回）で洗浄する。次いで、この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、次いで乾燥状態までエバポレートし、Ｊをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。
【００３３】
（中間体Ｋの形成：）
Ｊ（１２．５ｇ、９．７５ｍｍｏｌ）をピリジン（８０ｍｌ）中に溶解し、塩化メタンスルホニル（３．３５ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）を攪拌しながら５分にわたって滴下する。その反応を３０分間進行させ、次いで酢酸エチル（５００ｍｌ）を添加する。この溶液を１Ｎ  ＨＣｌ（２５０ｍｌ）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、エバポレートする。その得られるシロップ（１２．９５ｇ、９．５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍｌ）中に溶解しＮａＮ３（４．６４ｇ、７４．４ｍｍｏｌ）を添加する。この反応を、アルゴン雰囲気下、６５℃で３５時間進行させる。この溶液を酢酸エチル（５００ｍｌ）で希釈し、Ｈ２Ｏ（３００ｍｌ）および飽和ＮａＣｌ（１５０ｍｌ）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ３で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。その化合物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。その精製した生成物（１２．２ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）を次いでＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（２００ｍｌ／２０ｍｌ）溶液中に懸濁し、そしてＬｉＯＨ−Ｈ２Ｏ（５．１ｇ、１２１．３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応を、６５℃で２０時間進行させる。酢酸エチル（５００ｍｌ）を添加した。そして、この溶液を飽和ＮａＣｌ（２００ｍｌ）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。化合物Ｋを、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。
【００３４】
（２１の形成：）
化合物Ｋ（８．４５ｇ、９．３３ｍｍｏｌ）をジオキサン／Ｈ２Ｏ（２５０ｍｌ／５０ｍｌ）に溶解し、炭素担持Ｐｄ（１０％）（３．４ｇ）を添加する。この溶液を脱気し、Ｈ２の雰囲気を発生させる。この反応を、出発物質の消失がＴＬＣで確認されるまで、室温で進行させる。この溶液をセライト床を通して濾過し、そしてその濾液を真空中で濃縮し、化合物２１を与える。
【００３５】
（実施例３）
（１５の合成（図５））
（中間体Ｌの形成：）
化合物２０（１０ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）中に溶解し、ＤＭＳＯ（２０ｍｍｏｌ）を添加し、そしてこの溶液を−６０℃に冷却する。塩化オキサリル（１１ｍｍｏｌ）を２０の攪拌された溶液にゆっくり添加する。その反応をＮ２雰囲気下で３０分間進行させる。その溶液を０．１Ｍ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３および飽和ＮａＣｌで洗浄する。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で乾燥状態までエバポレートする。その得られるシロップをｔＢｕＯＨ（２０ｍｌ）中に入れ、２−メチル−２−ブテン（１０ｍｌ）およびＮａＨ２ＰＯ４（２０ｍｍｏｌ）を、攪拌しながら添加する。この反応を３時間進行させ、次いでエバポレートし、ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、そして０．１Ｍ  ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３および飽和ＮａＣｌで洗浄する。その得られる化合物を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、化合物Ｌを与える。
【００３６】
（中間体Ｎの形成：）
化合物Ｌ（１０ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１５ｍｌ）に溶解し、化合物Ｍ（１０ｍｍｏｌ）、ＨＢＴＵ（１２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２０ｍｍｏｌ）を攪拌しながら添加する。この反応を、室温で２４時間進行させる。酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加し、そしてこの溶液を０．１Ｍ  ＨＣｌ（１００ｍｌで１回）、飽和ＮａＨＣＯ３（１００ｍｌで１回）および飽和ＮａＣｌ（１００ｍｌで１回）で洗浄する。その有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、乾燥状態までエバポレートする。化合物Ｎを、シリカゲルクロマトグラフィーによって単離する。
【００３７】
（中間体Ｏの形成：）
化合物Ｎ（１０ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（３５ｍｌ）中に溶解し、攪拌しながらＮａＯＭｅ（１ｍｍｏｌ）を添加する。その反応を室温で２０時間進行させる。その溶液を乾燥状態までエバポレートし、エチルエーテル（５０ｍｌ）に溶解し、飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで１回）で洗浄する。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、そして乾燥状態までエバポレートする。その最終生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。その生成物（０．９８０ｍｍｏｌ）およびＢｕ２Ｓｎ（１．０８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１５ｍｌ）中に懸濁し、加熱して２時間還流させる。その結果得られる清澄な溶液を、次いで乾燥状態までエバポレートし、ペンタン（１０ｍｌ）中に溶解し、エバポレートし無色の泡状物を与える。その泡状物を１，２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ、１５ｍｌ）に溶解し、化合物Ｅ（１．９６ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（１．１８ｍｍｏｌ）を添加し、その反応を室温で２時間攪拌する。２時間後、１Ｍ  ＫＨ２ＰＯ４（５０ｍｌ）およびＫＦ（１ｇ）を攪拌しながら添加し、続いて酢酸エチルで抽出する（２５ｍｌで２回）。その有機層を１０％ＫＦ（５０ｍｌで２回）および飽和ＮａＣｌ（５０ｍｌで２回）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、そして減圧下で乾燥状態までエバポレートする。化合物Ｏをシリカゲルクロマトグラフィーによって得る。
【００３８】
（１５の形成：）
化合物Ｏ（９ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２００ｍｌ）に溶解し、炭素担持Ｐｄ（１０％）（３ｇ）を添加する。この溶液を脱気し、Ｈ２の雰囲気を発生させる。この反応を、出発物質の消失がＴＬＣで確認されるまで、室温で進行させる。この溶液をセライト床を通して濾過し、そしてその濾液を真空中で濃縮し、化合物１５を与える。
【００３９】
（実施例４）
（２１のアシル化（図６））
（２１の酸塩化物との反応：）
化合物２１（２０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を、１Ｎ  ＮａＯＨを含むＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（２ｍｌ、１：１）溶液中（ｐＨは８〜１０の間に調整される）に溶解し、０℃に冷却する。塩化シクロヘキシルカルボニル（０．０４９ｍｍｏｌ）を、次いで攪拌しながら滴下する。この反応を０℃で３時間継続させる。この溶液を氷でクエンチし、その溶液を乾燥状態までエバポレートする。化合物１を逆相クロマトグラフィーにより精製する。
【００４０】
（２１のイソシアネートとの反応：）
化合物２１（３０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）を、０．５Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１ｍｌ）中に溶解し、０℃に冷却する。エチルイソシアネート（１．２当量）を次いで攪拌しながら滴下する。この反応を室温で３時間継続させる。この溶液を氷でクエンチし、その溶液を乾燥状態までエバポレートする。化合物２を逆相クロマトグラフィーにより精製する。
【００４１】
（２１のクロロオルトホルメートとの反応：）
化合物２１（２０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を、ＮａＯＨを含むＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（２ｍｌ、１：１）溶液中（ｐＨは８〜１０の間に調整される）に溶解し、０℃に冷却する。ベンジルクロロオルトホルメート（０．０４９ｍｍｏｌ）を次いで攪拌しながら滴下する。この反応を０℃で３時間継続させる。この溶液を氷でクエンチし、その溶液を乾燥状態までエバポレートする。化合物１１を逆相クロマトグラフィーにより精製する。
【００４２】
（２１の塩化スルホニルとの反応：）
化合物２１（２０ｍｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を、飽和ＮａＨＣＯ３／トルエン（２ｍｌ、１：１）水溶液中に溶解し、０℃に冷却する。塩化ｐ−トルエンスルホニル（０．０４９ｍｍｏｌ）を次いで攪拌しながら滴下する。この反応を０℃で３時間継続させる。この溶液を氷でクエンチし、その溶液を乾燥状態までエバポレートする。化合物９を逆相クロマトグラフィーにより精製する。
【００４３】
（実施例５）
（化合物２２の合成（図７））
化合物１（２．７７ｍｍｏｌ）を、化合物２（５．５５ｍｍｏｌ）を含むジエチルエーテル／ジクロロメタン（１ｍｌ、１：１混合物）の溶液に溶解する。０．１Ｍ  ＴＭＳＯＴｆ（２．８ｍｌ）溶液を、次いで攪拌しながら添加する。３０分後、この溶液を、炭酸水素ナトリウム（０．５ｇ）の添加により中和し、濾過し、そして乾燥状態まで濃縮する。化合物３を、カラムクロマトグラフィー（トルエン／アセトン、４：１混合物）によって精製する。
【００４４】
化合物３（１．９６ｍｍｏｌ）を、４Ａ  モレキュラーシーブス、ＴＢＡＢｒ（９６８ｍｍｏｌ）およびＣｕＢｒ２（５２９ｍｍｏｌ）とともに、ＤＭＦ／ジクロロメタン（５０ｍｌ、１：５混合物）中で１時間攪拌する。化合物４（２．９４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）中に溶解し、上記溶液に滴下する。この溶液を２４時間反応させ、濾過し、そして飽和炭酸水素ナトリウムおよび水（各々５０ｍｌ）で洗浄する。その有機層を単離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥状態までエバポレートする。化合物５を、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、４：１混合物）によって精製する。
【００４５】
化合物２２を、化合物５のメタノール中への溶解および続く１Ｍ  ナトリウムメトキシド溶液の添加により得る。その溶液を３〜５時間反応させ、そして次いでＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＩＲ−１２０樹脂で中和し、濾過し、そして真空中で濃縮する。化合物２２を、カラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール、２０：１混合物）により精製する。
【００４６】
（実施例６）
（化合物４、６、７、８、１０、１２、１３、１４、１６、１７、１８、１９および２０の合成）
化合物２１（実施例２；図４）から出発して、これらの化合物を文献（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ  Ｖｏｌ．８３，ｐｐ．２８９３〜２９０７，２０００；Ａｎｇｅｗ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｖｏｌ．４０，Ｎｏ．１９，ｐｐ．３６４４〜３６４７、２００１）に記載される手順に従って合成する。
【００４７】
（実施例７）
（化合物２３、２４、２５、２６、２７および２８の合成）
２３という中間体の合成：化合物ｉ（２．７７ｍｍｏｌ）を、化合物２（５．５５ｍｍｏｌ）を含むジエチルエーテル／ジクロロメタン（１ｍｌ、１：１混合物）の溶液に溶解する。０．１Ｍ  ＴＭＳＯＴｆ（２．８ｍｌ）溶液を、次いで攪拌しながら滴下する。３０分後、この溶液を、炭酸水素ナトリウム（０．５ｇ）の添加により中和し、濾過し、そして乾燥状態まで濃縮する。３を、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、化合物ｉｉｉを与える。
【００４８】
化合物ｉｉｉ（１．９６ｍｍｏｌ）を、４Ａ  モレキュラーシーブス、ＴＢＡＢｒ（９６８ｍｍｏｌ）およびＣｕＢｒ２（５２９ｍｍｏｌ）とともに、ＤＭＦ／ジクロロメタン（５０ｍｌ、１：５混合物）中で１時間攪拌する。化合物ｘｖ（２．９４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍｌ）中に溶解し、上記溶液に滴下する。この溶液を２４時間反応させ、濾過し、そして飽和炭酸水素ナトリウムおよび水（各々５０ｍｌ）で洗浄する。その有機層を単離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥状態までエバポレートする。ｉｖを、次いでシリカゲルクロマトグラフィーにより精製する。
【００４９】
化合物ｉｖを、ＭｅＯＨ中の０．１Ｎ  ＮａＯＭｅを用いて、脱Ｏ−アセチル化しｖを与え、そして次いで還流条件下でＭｅＯＨ中のジブチルスズオキシドで処理し、（上記溶媒のエバポレート後）ｖｉを与え、そのｖｉをさらなる精製なしで次の工程に使用する。
【００５０】
化合物ｖｉ（１ｍｍｏｌ）を、ＤＭＥ（２０ｍｌ）中に溶解し、次いで化合物ｖｉｉ（２．５ｍｍｏｌ）およびＣｓＦ（１．４ｍｍｏｌ）を添加する。その得られる反応混合物を室温で８時間攪拌し、酢酸エチルで希釈し、その有機層を水で洗浄する。この有機層を乾燥状態まで濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、化合物ｖｉｉｉを与える。
【００５１】
化合物２３の合成：化合物ｖｉｉｉを炭素中のパラジウムの存在下で水素化し、化合物２３を与える。
【００５２】
中間体ｘｘの合成：Ｎ−アセチルグルコサミン（５，５０ｇ）から出発して、化合物ｘｘ（５０％の全工程収率）を、刊行された手順（Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１１、ｐｐ．９２３〜９２５，２００１；Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．１９７，７５、１９９０）に従って合成する。
【００５３】
中間体ｘｖの合成：化合物ｘｖ（１５ｇ）を、文献（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２０１，１５〜３０、１９９０）に記載される手順に従って、Ｌ−フコースから合成する。
【００５４】
中間体ｘｉｘの合成：化合物ｘｉｘを、記載されるように（ＷＯ９７０１５６９；Ｃｈｅｍ．Ａｓｔｒ．，１２６  １８６３１２，１９９７）、商業的に入手可能なβ−Ｄ−ガラクトースペンタアセテートから調製する。
【００５５】
中間体ｘｘｘｉｖの合成：商業的に入手可能なＮ−アセチルノイラミン酸（ｘｘｘ、１０ｇ）を、ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ（６０ｍｌ；９：１）中に懸濁し、そして、炭酸セシウムの水溶液を添加することにより、そのｐＨを８．１に調整する。その溶媒を除去し、そしてその残渣をエタノールを用い、次いでヘキサンを用いて繰返しエバポレートする。その物質をＤＭＦ（６５ｍｌ）中に溶解させ、２０分以内に臭化ベンジル（３．５ｍｌ）を添加する。その混合物を１６時間攪拌し、その後ジクロロメタン（１００ｍｌ）を添加し、水（５０ｍｌ）で洗浄する。その溶媒を留去し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、ｘｘｘｉを６８％の収率で与える。
【００５６】
ピリジン（５０ｍｌ）中の化合物ｘｘｘｉ（７ｇ）の溶液に、無水酢酸（４８ｍｌ）を添加し、その反応混合物を室温で１６時間攪拌する。溶媒を留去し、そしてその残渣（ｘｘｘｉｉ）を乾燥ＤＭＦ（２５ｍｌ）中に溶解する。その混合物に粉砕された炭酸アンモニウム（２ｇ）を添加し、その混合物をセ氏２８度で１２時間攪拌する。この混合物を水（５０ｍｌ）中の１Ｎ  ＨＣｌの氷冷溶液に添加し、そしてジクロロメタン（１００ｍｌ）を添加する。溶媒抽出の後で、有機層を留去し、次いで真空下で２４時間乾燥状態する。その残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、ｘｘｘｉｉｉを７１％の収率で与える。
【００５７】
化合物ｘｘｘｉｉｉを乾燥ジクロロメタン中に溶解し、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（５ｇ）を添加する。その溶液をセ氏−２０度に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸無水物（７ｇ）を、１０分間のうちに少しずつ添加する。その混合物を４時間攪拌し、ジクロロメタン（１００ｍｌ）で希釈し、そしてリン酸水素カリウムの溶液（５００ｍｌ）に添加する。その層を分離し、その有機層を乾燥し（硫酸ナトリウム）、溶媒を留去しｘｘｘｉｖを与え、このｘｘｘｉｖをさらなる精製なしで次の工程に使用する。
【００５８】
中間体ｘｘｘｖの合成：ジクロロメタン（１００ｍｌ）中の化合物ｘｘ（１０ｇ）および化合物ｘｖ（１５ｇ）の混合物へ、モレキュラーシーブス（４Ａ、８ｇ）を添加する。室温で１時間攪拌し、その後臭化テトラエチルアンモニウム（５ｇ）を添加する。ジクロロメタン（２５ｍｌ）中の臭素（１ｇ）の溶液を、１時間の間、滴下する。その反応混合物を３時間攪拌し続け、セライト床を通して濾過し、そして冷水、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液および水で逐次洗浄する。溶媒を留去し、シリカゲルクロマトグラフィーに供する。
【００５９】
その生成物を、ＴＨＦ中のシアノ水素化ホウ素ナトリウムおよびエーテル中のＨＣｌで処理し、シリカゲルクロマトグラフィーの後、７０％の全工程収率で化合物ｘｘｘｖを与えた。
【００６０】
中間体ｘｘｘｖｉの合成：ジクロロメタン（８０ｍｌ）中のｘｘｘｖ（１０ｇ）およびｘｉｘ（７ｇ）の混合物へ、Ｎ−ヨードスクシンイミド（１５ｇ）およびモレキュラーシーブス（４Ａ、８ｇ）を添加する。その反応混合物を氷浴中に置く。その溶液を０〜５度で３０分間攪拌し、そしてジクロロメタン（２５ｍｌ）中のトリフルオロメタンスルホン酸（０．２ｍｌ）の溶液を、１時間の間、攪拌しながら滴下する。攪拌を２時間継続し、セライト床を通して濾過し、そして冷水、炭酸水素ナトリウムの冷たい飽和溶液および水で逐次洗浄する。溶媒を留去し、シリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６８％の収率で化合物ｘｘｘｖｉを与える。
【００６１】
中間体ｘｘｘｖｉｉの合成：化合物ｘｘｘｖｉ（８ｇ）をＭｅＯＨ（１００ｍｌ）中の０．０５Ｎ  ＮａＯＥｔで４時間処理し、ＩＲ１２０（水素型）樹脂での中和後、その反応混合物を濾別する。溶媒を留去し、９６％収率で化合物ｘｘｘｖｉｉを与える。
【００６２】
中間体ｘｘｘｖｉｉｉの合成：化合物ｘｘｘｖｉｉ（５ｇ）をＭｅＯＨ中のジブチルスズオキシド（１ｇ）を用いて、還流下で４時間処理する。その溶媒を留去し、そしてトルエンとともに、数回、共エバポレートし（ｃｏ−ｅｖａｐｏｒａｔｅｄ）、そして最終的にその残渣を高真空下で２４時間乾燥する。
【００６３】
その粗反応混合物をジメトキシエタン（ＤＭＥ、１００ｍｌ）中に溶解し、そしてＣｓＦ（１．７ｇ）および化合物ｘｘｘｉｖ（２．５ｇ）を添加する。その反応混合物を室温で８時間攪拌し、酢酸エチル（１００ｍｌ）を添加する。有機層を水で洗浄し、有機溶媒を留去する。その生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、６４％の収率でｘｘｘｖｉｉｉを与える。
【００６４】
中間体ｘｘｘｉｘの合成：化合物ｘｘｘｖｉｉｉ（２ｇ）を、ＭｅＯＨ中の０．０１Ｎ  ＮａＯＭｅ（１００ｍｌ、１時間）を用いて、脱Ｏ−アセチル化し、粗反応混合物をＩＲ１２０（水素型）樹脂で中和し、溶媒を留去する。
【００６５】
上記反応からの生成物をジオキサン−水（１：１、５０ｍｌ）中に溶解し、そして１０％ＰＤ−Ｃを添加する。その反応混合物を、水素雰囲気下で２２時間激しく攪拌し、セライト床を通して濾過し、その溶媒を留去する。得られるシロップのシリカゲルクロマトグラフィーは、７７％の収率でｘｘｘｉｘを与える。
【００６６】
化合物２４の合成：ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ中の化合物ｘｘｘｉｘの溶液に、ＭｅＯＨ中のＮａＯＭｅの溶液を添加し、その反応混合物を室温で２時間攪拌する。ＩＲ１２０樹脂による中和および乾燥状態までのエバポレーションは化合物２４を与える。
【００６７】
ｘｘｘｘの合成：化合物ｘｘｘｉｘを、セ氏７０度で４時間、エチレンジアミンで処理する（５００ｍｇ）。溶媒を留去し、そのシロップ状残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、化合物ｘｘｘｘを７７％の収率で与える。
【００６８】
化合物ｘｘｘｘｖの合成：ヨウ化３−ニトロベンジルを商業的に入手可能な８−アミノナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸（ｘｘｘｘｘｉ）の水溶液（ｐＨ１１）に、室温で攪拌しながら添加する。その溶液のｐＨを１に調整し、その溶媒のエバポレーション後に、生成物ｘｘｘｘｉｉｉをエタノールから沈殿させる。
【００６９】
化合物ｘｘｘｘｉｉｉの白金触媒水素化は、化合物ｘｘｘｘｉｖを９６％の収率で与える。
【００７０】
リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．１）中の化合物ｘｘｘｘｉｖの溶液に、商業的に入手可能なスクエア酸を添加し、その反応混合物を室温で４時間攪拌する。次いでそれを逆相ＨＰＬＣにより精製しｘｘｘｘｖを与える。
【００７１】
化合物２５の合成：化合物ｘｘｘｘ（０．２ｇ）を炭酸塩緩衝液（２ｍｌ、ｐＨ８．８）に溶解し、化合物ｘｘｘｘｖ（０．４ｇ）を添加する。その反応混合物を室温で２４時間攪拌する。別のバッチ（０．２ｇ）の化合物ｘｘｘｘｖを添加し、攪拌を２０時間室温で継続する。溶媒を留去し、その混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製し、２５を与える。
【００７２】
化合物２６の合成：化合物ｘｘｘｉｘ（０．１ｇ）を化合物ｘｘｘｘｉｖと反応させ、ＨＰＬＣによる精製後、化合物２６を与える。
【００７３】
中間体ｘｘｘｘｘｉｉの合成：商業的に入手可能な化合物ｘｘｘｘｖｉ（４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）安息香酸、１当量）およびＫＯＡｃ（３当量）をＴＨＦ（２５ｍｌ）中に入れる。その生成するスラリーにＰｄＣｌ２および商業的に入手可能なｐ−ブロモニトロベンゼン（ｘｘｘｘｖｉｉ、１．２当量）を攪拌しながら添加し、そしてその混合物をセ氏８０度までゆるやかに加熱する。６時間後、その反応混合物を乾燥状態までエバポレートし、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶解し、蒸留水および炭酸水素ナトリウムの飽和溶液で洗浄する。その得られるビフェニル化合物ｘｘｘｘｖｉｉｉを直接次の工程に供する。
【００７４】
化合物ｘｘｘｘｖｉｉｉ（１当量）、ジメチルアミノピリジン（触媒量、１個の結晶）およびＥＤＣｌ（１．０５当量）をＤＭＦまたはＴＨＦ（２０ｍｌ）中に溶解し、室温で１０分間反応させる。商業的に入手可能な化合物ｘｘｘｘｉｘ（８−アミノナフタレン−１，３，５−トリスルホン酸）をその反応混合物に攪拌しながら添加し、そしてその反応を、４８時間、窒素下、室温で進行させる。その反応混合物を、次いで乾燥状態までエバポレートし、そして逆相クロマトグラフィーにより精製し、化合物ｘｘｘｘｘを与える。
【００７５】
ＥｔＯＡｃ中の化合物ｘｘｘｘｘの溶液に、ＰＤ−Ｃを添加し、そしてその反応混合物を水素雰囲気下で２時間攪拌する。その反応混合物をセライト床を通して濾過し、そして乾燥状態までエバポレートし、化合物ｘｘｘｘｘｉを与える。
【００７６】
リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．１）中の化合物ｘｘｘｘｘｉの溶液に、商業的に入手可能なスクエア酸を添加し、その反応混合物を室温で４時間攪拌する。次いで、それを逆相ＨＰＬＣにより精製しｘｘｘｘｘｉｉを与える。
【００７７】
化合物２７の合成：化合物ｘｘｘｘ（０．２ｇ）を炭酸塩緩衝液（２ｍｌ、ｐＨ８．８）中に溶解し、化合物ｘｘｘｘｘｉｉ（０．４ｇ）を添加する。その反応混合物を室温で２４時間攪拌する。別のバッチ（０．２ｇ）の化合物ｘｘｘｘｘｉｉを添加し、そして攪拌を２０時間室温で継続する。溶媒を留去し、そしてその混合物を逆相ＨＰＬＣにより精製し２７を与える。
【００７８】
化合物２８の合成：化合物ｘｘｘｉｘを化合物ｘｘｘｘｘｉと反応させ、化合物２８を与え、その化合物２８をＨＰＬＣにより精製する。
【００７９】
（合成に関する参考文献）
本出願内に含まれる特定の化合物の調製についての合成プロトコルは、以下の参考文献に例示される：Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｅｍｉｃａ  Ａｃｔａ  Ｖｏｌ．８３，ｐｐ．２８９３〜２９０７（２０００）およびＡｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｖｏｌ．４０，Ｎｏ．１９，ｐｐ．３６４４〜３６４７（２００１）。
【００８０】
（実施例８）
（アッセイ）
アルブミンに化学的に結合させた精製オリゴ糖（新しい糖タンパク質）を、プラスチック製マイクロタイターウェル中にコーティングする。ＢＳＡでブロックした後、そのウェルを次いで精製ＰＡ−ＩＩＬレクチンとともにインキュベートし、精製ＰＡ−ＩＩＬレクチンに結合させる。結合されたＰＡ−ＩＩＬレクチンを、１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４による発色を用いて、抗ＰＡ−ＩＩＬウサギ抗血清、続いてＨＲＰ標識化抗ウサギＩｇおよびＴＭＢ試薬で検出する（図１８）。構造および活性を表１に提示する。
【００８１】
（表１．ＰＡ−ＩＩＬレクチンへの結合についてスクリーニングされた固定化中性オリゴ糖の構造）
固定化中性オリゴ糖のスクリーニングの結果を図１８に記載し、以下にまとめる。１型ラクト系列鎖（例えば、Ｌｅａ構造体）は、ラクト系列２型鎖（例えば、Ｌｅｘ構造体）よりもより良好にＰＡ−ＩＩＬレクチンに結合する。Ｌｅａ／Ｌｅｘにおけるように、その１型構造体の伸長は、この系列において最も活性な化合物をもたらす。
【００８２】
【表１】
2006515306.tif 000003
（表２．ＰＡ−ＩＩＬレクチンへの結合についてスクリーニングされた固定化酸性オリゴ糖の構造）
固定化酸性オリゴ糖のスクリーニングの結果を、図１９に記載し、以下にまとめる。フコースを含むシアリル化オリゴ糖のみが、ＰＡ−ＩＩＬレクチンに結合する。ジシアリルＬｅａ上の第２のシアリル基は、結合を阻害するように見える。
【００８３】
【表２】
2006515306.tif 000004
アルブミンに化学的に結合させた精製オリゴ糖（新しい糖タンパク質）を、プラスチック製マイクロタイターウェル中にコーティングする。ＢＳＡでブロックした後、そのウェルを次いで精製ＰＡ−ＩＩＬレクチンとともにインキュベートし、精製ＰＡ−ＩＩＬレクチンに結合させる。結合されたＰＡ−ＩＩＬレクチンを、１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４による発色を用いて、抗ＰＡ−ＩＩＬウサギ抗血清、続いてＨＲＰ標識化抗ウサギＩｇおよびＴＭＢ試薬で検出する（図１９）。構造および活性を表２に提示する。
【００８４】
フコースのビオチン化ポリマー（Ｆｕｃ−ＰＡＡ−ビオチン、ＧｌｙｃｏＴｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．）を、ＨＲＰ標識化ストレプトアビジン（ＫＰＬ  ｌａｂｓ）と、４℃で終夜結合させる。ＰＡ−ＩＩＬレクチンを、プラスチック製マイクロタイターウェル中に固定化し、ＨＲＰ標識化フコシル化ポリマーと反応させる。結合をＴＭＢ基質で検出し、続いて１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４を用いる発色により検出する（図２０）。そのアッセイのために選ばれた条件は、１ｍｌあたり３μｇのＰＡ−ＩＩＬのコーティングおよび１ｍｌあたり２μｇのフコシル化ポリマーを用いるインヒビターのインキュベーションである。
【００８５】
化合物２３は、４２０ｎＭのＩＣ５０でＰＡ−ＩＩＬを阻害したが（図２２）、一方で天然の糖類インヒビターであるマンノースは、９５μＭのＩＣ５０でＰＡ−ＩＩＬレクチンを阻害し、負の対照糖類であるガラクトースは、阻害を示さなかった（データは示されていない）。
【００８６】
本発明の特定の実施形態が、例示の目的のために本明細書中で記載されてきたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な改変がなされ得ることは、上記のことから理解される。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１Ａ】図１Ａは、糖模倣化合物の構造を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、糖模倣化合物の構造を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、糖模倣化合物の構造を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、糖模倣化合物の構造を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、糖模倣化合物の構造を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、さらなる糖模倣化合物の構造を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、さらなる糖模倣化合物の構造を示す。
【図３】図３は、代表的な糖模倣化合物３の合成を図示する。
【図４】図４は、糖模倣化合物２１の合成を図示する。
【図５】図５は、代表的な糖模倣化合物１５の合成を図示する。
【図６】図６は、種々の代表的な糖模倣化合物を与える中間体２１のアシル化を図示する。
【図７】図７は、化合物２２の合成を図示する。
【図８Ａ】図８Ａは、化合物４、６、７、８、１０および１２の合成を図示する。
【図８Ｂ】図８Ｂは、化合物１３、１４、１６、１７、１８および１９の合成を図示する。
【図９】図９は、化合物２２および２３の合成を図示する。
【図１０】図１０は、中間体の合成を図示する。
【図１１】図１１は、中間体および化合物２４の合成を図示する。
【図１２】図１２は、中間体ｘｘｘｘｉｖおよびｘｘｘｘｖの合成を図示する。
【図１３】図１３は、化合物２５の合成を図示する。
【図１４】図１４は、化合物２６の合成を図示する。
【図１５】図１５は、中間体ｘｘｘｘｘｉおよびｘｘｘｘｘｉｉの合成を図示する。
【図１６】図１６は、化合物２７の合成を図示する。
【図１７】図１７は、化合物２８の合成を図示する。
【図１８】図１８は、ＰＡ−ＩＩＬレクチンの、固定された中性糖鎖構造体への結合を図示する。
【図１９】図１９は、ＰＡ−ＩＩＬレクチンの、固定された酸性糖鎖構造体への結合を図示する。
【図２０】図２０は、ＰＡ−ＩＩＬレクチン阻害のＩＣ５０値についてのアッセイ条件の決定を図示する。
【図２１】図２１は、ＰＡ−ＩＩＬレクチンの糖模倣インヒビターのＩＣ５０値を決定するために開発したアッセイの図式的表示を示す。
【図２２】図２２は、糖模倣化合物２３による、ＰＡ−ＩＩＬレクチンの阻害を図示する。
【図１Ａ】
2006515306.tif 000005
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年6月21日(2005.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
温血動物においてＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法であって
、図１または図２に記載の化合物を含む化合物を、該細菌を阻害するための有効な量で、該動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記化合物が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を処置するための治療薬剤と結合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
図１または図２に記載の化合物と結合された、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を処置するための治療薬剤を含む、結合体。
【請求項６】
前記結合体が、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされている、請求項５に記載の結合体。
【請求項７】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を検出する方法であって、該方法は、図１または図２に記載の化合物を含む化合物に結合された検出可能なマーカーとサンプルを、該サンプル中に存在する場合、該化合物が該細菌と結合するための十分な条件下で、接触させる工程；および該サンプル中に存在する該マーカーを検出する工程であって、ここで、該サンプル中の該マーカーの存在は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の存在を示す工程を包含する、方法。
【請求項８】
前記細菌は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
固体支持体上にＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を固定する方法であって、該方法は、結合するための十分な条件下で、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌含有サンプルと、固体支持体上に固定された図１または図２に記載の化合物を含む化合物とを接触させる工程；および該固体支持体から該サンプルを分離する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法における使用のための、図１または図２に記載の化合物を含む、化合物。
【請求項１１】
薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤と組み合わされた、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１０または１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌を阻害する方法における使用のための、請求項５または６に記載の結合体。
【請求項１４】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１３に記載の結合体。
【請求項１５】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための薬の調製における、図１または図２に記載の化合物を含む化合物の使用。
【請求項１６】
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ細菌の阻害のための薬の調製における、請求項５による結合体の使用。
【請求項１７】
前記細菌が、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである、請求項１５または１６に記載の使用。
【国際調査報告】
2006515306.tif 000033
2006515306.tif 000034
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2006515306.tif 000036
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