(57)【要約】本発明は、Liangtoujian抽出物の製造方法、その抽出物を含有する医薬組成物及びその用途を提供する。Liangtoujian及びその茎、葉、花、果実を粉砕してLiangtoujianの粗粉を得る工程ａと、前記粗粉をアルコールで抽出し、抽出液を濾過し、アルコールを回収してエキスを得る工程ｂと、前記エキスをマクロポーラス樹脂を充填したカラムに通し、色素及び糖類を除去してから、カラムに吸着されるのがサポニン部分のみになるように更に水又は塩基性溶液で溶出液の色が無くなるまで溶出する工程ｃと、そして、５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、ゼラチンを加え、沈殿を濾過し、脱色のために、得られた濾液をマクロポーラス樹脂を充填したカラムにかけ、更に５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、溶出液を濃縮し、乾燥してLiangtoujianの総サポニン抽出物を得る工程ｄとを備える。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Liangtoujian及びその茎、葉、花、果実を粉砕してLiangtoujianの粗粉を得る工程ａと、
前記粗粉をアルコールで抽出し、抽出液を濾過し、アルコールを回収してエキスを得る工程ｂと、
前記エキスをマクロポーラス樹脂を充填したカラムに通し、色素及び糖類を除去してから、カラムに吸着されるのがサポニン部分のみになるように更に水又は塩基性溶液で溶出液の色が無くなるまで溶出する工程ｃと、
そして、５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、ゼラチンを加え、沈殿を濾過し、脱色のために、得られた濾液を脱色マクロポーラス樹脂を充填したカラムにかけ、更に５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、溶出液を濃縮し、乾燥してLiangtoujianの総サポニン抽出物を得る工程ｄと
を備えることを特徴とするLiangtoujian抽出物の製造方法。
【請求項２】
前記工程ｂにおいて、前記粗粉を５〜９倍量の５０％〜７０％のアルコールで抽出することを特徴とする請求項１に記載のLiangtoujian抽出物の製造方法。
【請求項３】
前記工程ｂにおいて、前記粗粉を水煮沸アルコール沈殿法により抽出することを特徴とする請求項１に記載のLiangtoujian抽出物の製造方法。
【請求項４】
更に、Liangtoujian総サポニンの抽出物をメタノールに溶解し、乾法でシリカゲルを充填したカラムにより、溶出液がクロロホルム：メタノール：水＝７５〜５５：４５〜２５：２０〜１でカラムの底部まで溶出する工程ｅとカラムの中におけるシリカゲルを集め、サポニンによる反応が無くなるまでメタノールで溶出し、メタノールを回収し、乾燥し、再結晶によりRaddeanin Aを得る工程ｆを備えることを特徴とする請求項１に記載のLiangtoujian抽出物の製造方法。
【請求項５】
前記工程ｆにおいて、アルコールで再結晶することを特徴とする請求項１に記載のLiangtoujian抽出物の製造方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法により製造した治療に有効量のLiangtoujian抽出物と薬理学上許容される担体とを含む腫瘍を治療するための医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法により製造したLiangtoujian抽出物が、肝臓癌、胃腺癌、肺腺癌、乳線癌を治療するための薬物の製造における用途。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれかに記載の製造方法により製造したLiangtoujian抽出物の何れの受入可能な薬物製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生薬の有効成分を抽出する工程に関し、詳しくは、Liangtoujian抽出物の製造方法に関する。本発明は、更にLiangtoujian抽出物を含有する医薬組成物及びLiangtoujian抽出物の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
Liangtoujianは、キンボウゲ科植物アズマイチゲ（Anemone raddeana Regel.）の根茎を乾燥したもので、中医臨床では、漢方薬として去風除湿、癰腫を消す作用があり、風と寒と湿との三種類の邪気による痺、四肢拘急、骨折疼痛、癰腫潰瘍等に用いる。現代薬学研究の結果から、Liangtoujian及びその茎、葉、花、果実に含まれまれている総サポニンは、消炎、鎮痛、鎮静、抑菌等の生物活性を示し、特に、Raddeanin Aは、比較的強い前記生物活性を示すことが分かる。然しながら、前記物質の抽出分離は、実験室での研究段階だけに限られ、産業化と新薬用途の開発に用いられない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、Liangtoujian抽出物の製造方法を提供することにある。
本発明に係る製造方法によると、工程簡単且つ産業化に適用するようにLiangtoujianから薬用価値を有する総サポニン及び単量体Raddeanin Aを抽出することができる。
本発明のもう一つの目的は、Liangtoujian抽出物を含有する医薬組成物を提供することにある。
本発明のまた一つの目的は、Liangtoujian抽出物の用途を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
上述の目的を達成するために、本発明のLiangtoujian抽出物の製造方法は、
Liangtoujian及びその茎、葉、花、果実を粉砕してLiangtoujianの粗粉を得る工程ａと、
前記粗粉をアルコールで抽出し、抽出液を濾過し、アルコールを回収してエキスを得る工程ｂと、
前記エキスをマクロポーラス樹脂を充填したカラムに通し、色素及び糖類を除去してから、カラムに吸着されるのはサポニン部分のみになるように更に水又は塩基性溶液で溶出液の色が無くなるまで溶出する工程ｃと、
そして、５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、ゼラチンを加え、沈殿を濾過し、脱色のために、得られた濾液を脱色マクロポーラス樹脂を充填したカラムにかけ、更に５０％〜７０％のアルコールで溶出し、アルコールを回収し、溶出液を濃縮し、乾燥してLiangtoujianの総サポニン抽出物を得る工程ｄと
を備える。
【０００５】
本発明の前記工程ａにおいて、Liangtoujian及びその茎、葉、花、果実が約２０メッシュの粗粉になるように粉砕される。前記工程ｂにおいて、５〜９倍量の５０％〜７０％のアルコールで抽出しても良いし、水煮沸アルコール沈殿法（即ち、水で煮沸してからアルコールで沈殿する方法）により抽出しても良い。前記工程ｃにおいて、前記塩基性溶液として、例えば、水酸化ナトリウム水溶液が挙げられる。
【０００６】
更に、以下の工程ｅと工程ｆにより前記Liangtoujian総サポニンから単体量のRaddeanin Aを製造することができる。
【０００７】
即ち、Liangtoujian総サポニンの抽出物をメタノールに溶解し、乾法でシリカゲルを充填したカラムにより、溶出液がクロロホルム：メタノール：水＝７５〜５５：４５〜２５：２０〜１でカラムの底部まで溶出する工程ｅとカラムの中におけるシリカゲルを集め、サポニンによる反応が無くなるまでメタノールで溶出し、メタノールを回収し、乾燥し、再結晶によりRaddeanin Aを得る工程ｆである。
本発明の前記工程ｆにおいて、一般的にアルコールで再結晶を行う。
【０００８】
本発明は、更に癌の治療に有用する医薬組成物を提供する。それは、前記製造方法により得られた治療に有効量のLiangtoujian抽出物と薬理学上許容される担体とを含む。
本発明は、また、前記製造方法により得られたLiangtoujian抽出物が肝臓癌、胃腺癌、肺癌、乳癌を治療するための薬物の製造における用途を提供する。
【０００９】
本発明の前記方法により製造したLiangtoujian抽出物は、何れの受入可能な薬物製剤として製剤化できる。
本発明の製造方法は、工程簡単で、且つコストが低く、大規模産業化に適用する。本発明の製造方法によれば、比較的高い純度を有するLiangtoujian総サポニンとRaddeanin Aとを製造することができる。
【００１０】
本発明の前記方法により製造したLiangtoujian抽出物は、活性成分として、一種又は多種の薬理学上許容される担体と配合して何れの受入可能な製剤化する医薬組成物を製造することができる。
例えば、本発明の前記方法により製造したLiangtoujian総サポニンの乾燥粉末に適量の澱粉を加え、７０％のアルコールで造粒し、乾燥し、缶詰めすることにより、経口投与用カプセルとする。
【００１１】
例えば、本発明の前記方法により製造したRaddeanin Aを１０重量部、塩化ナトリウムを７５重量部取り、適量の蒸留水を添加し、１〜５％の水酸化ナトリウム溶液でｐＨ７.５〜８.５になるように調整し、更に１００００ｍｌの蒸留水を添加し、濾過し、無菌の下でタンク積みし、凍結乾燥することにより、Raddeanin Aの注射用粉末注射剤とする。
【００１２】
本発明の抽出物は、癌、特に肝臓癌、胃腺癌、肺線癌、乳線癌を治療するための薬物の製造に適用できる。
前記担体とは、薬学分野での普通の薬物担体を言う。それは、希釈剤、賦形剤、充填剤、粘着剤、湿潤剤、崩壊剤、吸収促進剤、界面活性剤、吸収担体などを含む。
【００１３】
本発明の前記方法により製造したLiangtoujian抽出物は、組成物で、経口、直腸、静脈、筋肉注射又は外用投与経路により投与を実施する。薬物製剤としては、薬学分野での普通の方法により製剤化でき、例えば、錠剤、顆粒剤、エキス剤、カプセル、座剤、噴霧剤、緩効剤、及び注射剤等が挙げられる。それの活性成分を一種又は多種の薬理学上許容される担体又は薬物と配合することにより、必要な製剤としても良い。
【００１４】
本発明の医薬組成物は、重量比が０.１％〜９９.５％の活性成分を含有するのが好ましい。
本発明の薬物投与量は、投与経路、患者の年齢、体重、疾病種類又は病状等によって違い、一日の投与量は、０.０１〜２０ｍｇ/ｋｇとする。
【００１５】
Liangtoujianの活性成分の抽出分離と鑑定により、薬理活性を示すLiangtoujianに含まれる成分が分かるようになった。本発明者は、Liangtoujian総サポニンが有意な抗癌活性を示し、in vivoでマウスHep-A-22肝臓癌に対する抑制率が７９％、Ｃ５７マウスLewis肺癌に対する抑制率が７１％で、in vitroで、マウスＳ１８０と腹水型肝臓細胞とのＤＮＡ、ＲＮＡ及び蛋白質の合成を有意に抑制し、その抑制率が投与量の増加と時間の経過につれて増加することを見出した。その癌抑制のメカニズムは、主として癌細胞におけるＤＮＡの合成を抑制するためであると考えられる。
以下、実施例を通じて本発明を更に説明する。本発明は、以下の実施例に限定されるものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
（第１実施例）
Liangtoujian総サポニンの製造
茎、葉、花、果実を含むLiangtoujianを１０Ｋｇ取り、２０メッシュの粗粉になるように粉砕し、５０ｋｇの７０％のアルコールを加え、２時間還流抽出を３回行った。得た抽出溶液を濾過した後に、併合した濾液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮し、更にゼラチンを加え、沈殿物を濾過した。得た濾液を、Ｄ１０１マクロポーラス樹脂を充填したカラムにかけ、溶出液の色が無くなるまで水で溶出した後、サポニンによる徴反応が無くなるまで７０％のアルコールで溶出した。得た溶出液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮した。得たエキスを、細粉になるように噴霧乾燥してカーキー粉末を０.５Ｋｇ得た。
【００１７】
（第２実施例）
Liangtoujian総サポニンの製造
茎、葉、花、果実を含むLiangtoujianを１０Ｋｇ取り、２０メッシュの粗粉になるように粉砕し、５０ｋｇの７０％のアルコールで２時間還流抽出を３回行った。得た抽出溶液を濾過した後に、併合した濾液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮した。得たエキスを、乾粉になるように噴霧乾燥して更に７０％のアルコールを加え、溶解した。得た溶解した溶液を、Ｄ１０１マクロポーラス樹脂を充填したカラムにかけ、溶出液の色が無くなるまで水で溶出した後、サポニンによる徴反応が無くなるまで７０％のアルコールで溶出した。得た溶出液を、１％の活性炭で３０分の脱色処理を行い、熱いうちに濾過した。得た濾液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮した。得たエキスを、細粉になるように噴霧乾燥してカーキー粉末を０.５Ｋｇ得た。
【００１８】
（第３実施例）
Liangtoujian総サポニンの製造
Liangtoujianを１０ｋｇ取り、２０メッシュの粗粉になるように粉砕し、１００ｋｇの水を加え、２時間煮出を３回行った。得た抽出溶液を濾過した後に、併合した濾液を、相対密度が１.１８〜１.２０（８０℃〜８５℃で測定）になるように減圧で濃縮した。得たエキスにアルコールの含有量が７０％になるようにアルコールを加え、２４時間の放置を行い、濾過した。アルコールを回収し、小体積まで濃縮した。得たエキスにアルコールの含有量が９０％になるようにアルコールを加え、２４時間の放置を行い、濾過した。得た濾液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮した。得たエキスを噴霧乾燥してカーキー粉末を得た。
【００１９】
（第４実施例）
Raddeanin Aの製造
第一実施例で製造した粗粉を１００ｇ取り、７０％のアルコールを５００ｍｌ添加し、サポニンによる反応が無くなるまで表抜けをし、表抜け液を、アルコールの匂いが無くなるまで減圧濃縮した。得たエキスを減圧乾燥し、糊状粉末に粉砕し、メタノールを加え、溶解した。溶出液として、その溶解した溶液に５倍量のシリカゲルを配合した後、シリカゲルを充填したカラムにかけ、クロロホルム：メタノール：水＝７５：２５：５でカラムの底部まで溶出した。カラムに含まれたシリカゲルを数多くの部分に分離し、それぞれにメタノールで溶出し、ＴＬＣクロマトグラフィーにより、Raddeanin Aの部分を集めて、続いて、サポニンによる反応が無くなるまでメタノールで溶出した。得た溶出液を減圧濃縮した。得た乾燥した粉末を、アルコールで再結晶して無色結晶性粉末を得た。
【００２０】
（第５実施例）
カプセルの製造
処方：Liangtoujian総サポニン      ２５００ｇ
トウモロコシ澱粉              ５００ｇ
製造方法：Liangtoujian総サポニンとトウモロコシ澱粉とを混合し、均一になるようにかき混ぜ、適量の７０％のアルコールを加え、湿潤してから造粒し、乾燥した。得た顆粒をカプセルに充填し、カプセルあたり０.３ｇを１０００個とした。
【００２１】
（第６実施例）
注射用粉末注射剤の製造
処方：Raddeanin A                   １５ｇ
塩化ナトリウム                ７５ｇ
注射用蒸留水                  １００００ｍｌ
製造方法：Raddeanin Aと塩化ナトリウムとを適量の注射用蒸留水に溶解し、１〜５％の水酸化ナトリウム溶液でｐＨ８.０とした後、１００００ｍｌまで注射用蒸留水を加え、０．２μｍのミリポーフィルターを通し、濾過した溶液を、無菌の下でアンプルに缶詰めし、凍結乾燥した。
【００２２】
（第１実験例）
第１実施例で製造した抽出物の癌の抑制作用：薬効学研究により、総サポニンで製造したカプセルは、肉瘤Ｓ１８０、肝臓癌、子宮頚癌に対して、有意な抑制活性を示し、それらの抑制率は、それぞれ４９％、５４％、８４％である。また、摘出した細胞株の増殖に対する実験結果から、肝臓癌細胞株、肺腺癌細胞株、胃腺癌細胞株、及び乳腺癌細胞株の増殖に対して、薬物を直接接触させると、いずれも抑制活性を示し、抑制率として、それぞれ７５％、７６％、７３％、８４％以上であることが分かる。
【００２３】
（第２実験例）
本実験では、対照薬として、５−フルオロウラシルを使用した。Raddeanin Aで製造した注射用粉末注射剤は、in vivoでマウスHep-A-22肝臓癌に対する抑制率が７４％、Ｃ５７マウスLewis肺癌に対する抑制率が７１％である。また、それは、ヒトBre−04乳腺癌、ヒトC01−06腸癌に対する抑制率が５４〜４１％の範囲にある。in vitroで、ヒトの肝臓癌細胞、肺腺癌細胞、乳腺癌細胞及び腸癌細胞に対する細胞毒実験の結果により、何れもＩＣ５０が１００μｇ／ｍｌで、乳腺癌細胞に対してもっと感度がある。in vitroで、ヒトの肝臓癌、胃腺癌、肺腺癌、乳腺癌に対する抑制率は、それぞれ７５％、７６％、５３％、５８％である。本発明の注射用粉末注射剤は、摘出したＤＮＡを取り込んだＡＨ細胞に対して、抑制活性を示し、特に、ＤＮＡを取り込んだＳ１８０細胞３Ｈ−ＴｄＲの合成に対して有意な抑制活性を示した。
【国際公開パンフレット】
2004518751.tif 000002
2004518751.tif 000003
2004518751.tif 000004
2004518751.tif 000005
2004518751.tif 000006
2004518751.tif 000007
2004518751.tif 000008
【国際調査報告】
2004518751.tif 000009
2004518751.tif 000010