(57)【要約】本発明の目的は、一般式Iの化合物、それらの薬学上許容される塩ならびにそれらの鏡像異性体、ジアスレオマーおよびラセミ体; 前述の化合物の製造、それらを含有する薬剤およびそれらの製造、ならびにヒストンデアセチラーゼ (HDAC) のインヒビターとしての、したがって前述の病気および障害の抑制または予防における、または対応する薬剤の製造における前述の化合物の使用である。2006515345.tif 000020
2006515345.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式I：
【化１】
2006515345.tif 000017
（式中、
R1は水素またはC1-C4アルキルであり、
R2はアリール、ヘテロアリールまたは複素環であり、それらのすべてはアルキル、ハロゲン、-O-アルキル、-NH(アルキル) または-N(アルキル)2で1回または数回置換されていてもよく、あるいは
R1およびR2は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、環状炭化水素を形成する）
により表される化合物およびそれらの薬学上許容される塩。
【請求項２】
R1が水素であり、
R2がピリジル、2,3-ジヒドロ-ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イル、ベンゾ[1,3]ジオキソル-5-イルまたはフェニルであり、それらがハロゲン、-O-アルキル、-NH(アルキル) または-N(アルキル)2で1回または数回置換されていてもよい、
請求項1に記載の化合物およびそれらの薬学上許容される塩。
【請求項３】
下記の化合物である、請求項1又は2に記載の化合物:
5-(3,4-ジクロロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-ベンジリデンアミノオキシメチル-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ベンゾ[1,3]ジオキソル-5-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-クロロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(3,4-ジメトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-フルオロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(2-フルオロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(3-メトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-トリフルオロメトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-トリフルオロメチル-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-ジエチルアミノ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-ジブチルアミノ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ピリジン-3-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ピリジン-4-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド; または
5-(ピリジン-2-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【請求項４】
R1がC1-C4アルキルであり、
R2がフェニルまたは2,3‐ジヒドロ‐ベンゾフラン-4-イルであり、それらの両方がハロゲン、アルキルまたは-O-アルキルで1回または数回置換されていてもよい、
請求項1に記載の化合物およびそれらの薬学上許容される塩。
【請求項５】
下記の化合物である、請求項1または4に記載の化合物:
5-[1-(4-プロピル-フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(2-メチル-2,3‐ジヒドロ‐ベンゾフラン-4-イル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(2,4‐ジクロロ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(3,4‐ジクロロ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(3,4‐ジメトキシ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(1-フェニル-エチリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド; または
5-[1-(4-フルオロ-フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【請求項６】
R1およびR2は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、環状炭化水素を形成する、
請求項1に記載の化合物およびそれらの薬学上許容される塩。
【請求項７】
下記の化合物である、請求項1または6に記載の化合物:
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド塩酸塩;
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミドメタンスルホネート; または
5-(インダン-1-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【請求項８】
請求項1に記載の化合物の製造方法において、
(a)  式II：
【化２】
2006515345.tif 000018
（式中、R1およびR2は請求項1に記載の意味を有する）
の化合物を、式III：
【化３】
2006515345.tif 000019
（式中Yは水素または適当なアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、
(b)  Y中のアミノ保護基は、存在する場合、切り離して式Iの化合物を生成し、そして
(c)  前記式Iの化合物を反応混合物から単離し、そして、必要に応じて、薬学上許容される塩に転化する、
ことを含んで成る方法。
【請求項９】
請求項1〜7のいずれかに記載の1種または2種以上の化合物と、薬学上許容される賦形剤とを含有する薬剤。
【請求項１０】
腫瘍増殖を抑制するための請求項9に記載の薬剤。
【請求項１１】
癌を治療するための請求項1〜7のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
腫瘍増殖を抑制する対応する薬剤を製造するための請求項1〜7のいずれかに記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の目的は、新規なオキシム誘導体およびそれらの薬学上許容される塩である。本発明は、また、式Iのこれらの化合物を製造する方法、前記化合物を含有する医薬組成物、および疾患、例えば、癌を治療する薬剤の製造におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は心臓および脳血管の疾患を超える死亡の主要な原因の1つであり、それゆえ癌を克服すために莫大な費用および時間を用いて多くの研究が実施されてきている。しかしながら、種々の療法、例えば、外科手術、放射線療法および化学療法にかかわらず、改良された抗癌療法が非常に要求されている。それらの療法の中で、化学療法は癌治療の主要な領域である。大部分の薬剤は、主としてDNAに影響を与える細胞障害性を発現し、次いで結局腫瘍細胞を障害することによって、それらの作用を示す。しかしながら、選択性を欠如するので、薬剤は腫瘍細胞と正常細胞とを十分に識別せず、したがって、正常細胞において発現された悪い反応は療法における薬剤の使用を制限している。現在まで、満足すべき薬剤は発見されてきていず、こうして毒性が低く、許容可能性に優れ、治療効果が高い、抗癌薬剤は非常に必要とされている。
【０００３】
本発明による化合物は、ヒストンデアセチラーゼ (HDAC) のインヒビターであり、したがって、抗増殖および分化誘導活性を示し、これにより腫瘍細胞の増殖を阻害し、アポトーシスを誘導し、浸潤を抑制する。
【０００４】
転写調節は、細胞の分化、増殖、およびアポトーシスにおいて主要な事象である。１組の遺伝子の転写活性化は細胞の運命を決定し、この理由で、転写は種々の因子により緊密に調節されている。このプロセスに関係する調節機構の1つはDNAの三次構造の変更であり、これはターゲットDNAセグメントへの転写因子のアクセス可能性をモジューレートすることによって転写に影響を与える。ヌクレオソームの完全性はコアヒストンのアシル化状態により調節される。低アシル化状態において、ヌクレオソームは緊密に圧縮されており、こうして転写に対して非許容性である。
【０００５】
他方において、ヌクレオソームはコアヒストンのアシル化により緩和され、その結果転写に対して許容性である。ヒストンのアシル化状態は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ (HAT) およびヒストンデアセチラーゼ (HDAC) の活性の釣合いにより支配される。最近、HDACインヒビターが癌細胞のいくつかの型において増殖を阻止し、アポトーシスを誘導することが発見された。このような細胞の型は結腸癌細胞、T細胞リンパ腫細胞、および赤白血病細胞を包含する。アポトーシスが癌進行のためのきわめて重要な因子であることがわかると、HDACインヒビターは、アポトーシスの効果的インデューサーとして、癌治療のための有望な試薬である (Koyama Y. 他、Blood 96 (2000) 1490-1495)。
【０００６】
EP-A 0 847 992には、細胞分化インデューサーとしてモノアシル化o-フェニレンジアミンが記載されている。また、同一型の化合物はEP-A 0 242 851の主題である。これらの出願に記載されている化合物は、ほとんどもっぱら安息香酸の誘導体でモノアシル化されたo-フェニレン誘導体である。WO 03/013484には、N-モノアシル化炭素環式であるが、非芳香族または複素芳香族のo-フェニレンジアミンが抗増殖剤および分化誘導剤として記載されている。しかしながら、改良された療法的性質、例えば、なかでも改良された活性、許容可能性、選択性、安定性、低い毒性および/または低い副作用を有する化合物を提供することがなお必要とされている。
【０００７】
モノアシル化o-フェニレンジアミンは、対応するベンズイミダゾールの製造のための前駆体としてこの分野において知られており、このような方法は、例えば、下記の文献に記載されている: DE-A 2 062 265; FR 2 167 954; Rastogi R. およびSharma S.、Indian J. Chem.、Sect. B、21B (5) (1982) 485-487; Moll R. 他、Z. Chem. 17 (1977) 133-134; およびHassan H. 他、Indian J. Chem. 39B (2000) 764-768。
【０００８】
式Iの化合物は、抗増殖および分化誘導活性を有し、その結果腫瘍細胞の増殖を阻害し、アポトーシスを誘導し、浸潤を抑制する、HDACインヒビターであることが発見された。したがって、これらの化合物はヒトまたは動物における疾患、例えば、癌の治療に有効である。治療できる腫瘍の例は下記のものを包含するが、これらに限定されない：結腸癌、乳房癌腫 (進行した乳癌を包む)、肺癌 (例えば、腺癌、そして小細胞肺癌を含む)、前立腺癌 (進行した疾患を包む)、膵臓癌、リンパ系の造血性腫瘍 (例えば、急性リンパ性白血病、B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫)、骨髄性白血病 (例えば、急性骨髄性白血病 (AML))、甲状腺濾胞癌、脊髄形成異常症候群 (MSD)、間葉由来の腫瘍、骨髄腫、奇形癌腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、皮膚の良性腫瘍 (例えば、角化棘細胞腫)、腎臓癌腫、卵巣癌腫、膀胱癌腫および表皮癌腫。
【０００９】
こうして、本発明は、一般式I：
【化１】
2006515345.tif 000003
【００１０】
（式中、
R1は水素またはC1-C4アルキルであり、
R2はアリール、ヘテロアリールまたは複素環であり、それらのすべてはアルキル、ハロゲン、-O-アルキル、-NH(アルキル) または-N(アルキル)2で1回または数回置換されていてもよく、あるいは
R1およびR2は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、環状炭化水素を形成する）
により表される新規な化合物およびそれらの薬学上許容される塩に関する。
【００１１】
本発明の目的は、一般式Iの化合物、それらの薬学上許容される塩ならびにそれらの鏡像異性体、ジアスレオマーおよびラセミ体; 前述の化合物の製造、それらを含有する薬剤およびそれらの製造、ならびにヒストンデアセチラーゼ (HDAC) のインヒビターとしての、したがって前述の病気および障害の抑制または予防における、または対応する薬剤の製造における前述の化合物の使用である。
本発明の説明において使用する一般的用語の下記の定義は、問題の用語が単独または組み合わせで出現するかどうかにかかわらず、適用される。
【００１２】
用語 「ハロゲン」 は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する。
用語 「C1-C4アルキル」 は、1〜4個の炭素原子を含有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、i-ブチル、2-ブチル、t-ブチルを意味する。
【００１３】
用語 「アルキル」 は、1〜12個の炭素原子を含有する飽和直鎖状または分枝鎖状の炭化水素、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、n-ブチル、i-ブチル、2-ブチル、t-ブチル、ペンチル、ヘキシルおよびその他を意味する。アルキル基は必要に応じてハロゲン、好ましくはフッ素で1回または多数回置換されていてもよく、例えば、トリフルオロメチルまたはペンタフルオロエチルおよびその他である。
【００１４】
用語 「アリール」 は、芳香族6〜10員の一環式または二環式炭化水素、例えば、フェニルまたはナフチル環、およびその他を意味する。
用語 「ヘテロアリール」 は5または6員の一環式芳香族炭化水素を意味し、ここで1つまたは2個の炭素原子は酸素、窒素または硫黄で置換されている。例はインダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、およびその他である。
用語 「複素環」 は6〜10員の一環式または二環式非芳香族または部分的芳香族炭化水素を意味し、ここで1つまたは2個の炭素原子は酸素または窒素で置換されている。例はモルホリニル、ピペリジニル、2,3‐ジヒドロ‐ベンゾフラニル、ベンゾ「1、3」ジオキソリル、2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシニルまたは2,3‐ジヒドロ‐1H-インドリル、およびその他である。
【００１５】
本明細書において使用するとき、用語 「環状炭化水素」 は、R1およびR2がそれらが結合する炭素原子と一緒になって形成する、9〜10員の二環式非芳香族または部分的芳香族炭化水素を意味する。例は1,2,3,4-テトラヒドロ-ナフチリデン、インダニリデン、およびその他である。
【００１６】
用語 「薬学上許容される塩」 は、式Iの化合物の生物学的有効性および性質を保持する普通の酸付加塩または塩基付加塩を意味し、そして適当な非毒性の有機酸または無機酸または有機塩基または無機塩基から形成される。酸付加塩の例は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸および硝酸から誘導されるもの、および有機酸、例えば、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、およびその他から誘導されるものを包含する。
【００１７】
塩基付加塩の例は、アンモニウム、カリウム、ナトリウムおよび第四級アンモニウムの水酸化物、例えば、水酸化テトラメチルアンモニウムから誘導されるものを包含する。化合物の物理的および化学的安定性、吸湿性、流動性および溶解性を改良するために、薬学上の化合物 (すなわち、薬剤) を塩に化学的に変更することは、薬学の化学者によく知られている技術である。例えば、下記の文献を参照のこと: Ansel H. 他、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第6版 (1955)、pp. 196および1456-1457。
【００１８】
本発明の1態様は、式中、
R1が水素であり、
R2がピリジル、2,3-ジヒドロ-ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イル、ベンゾ[1,3]ジオキソル-5-イルまたはフェニルであり、それらがハロゲン、-O-アルキル、-NH(アルキル) または-N(アルキル)2で1回または数回置換されていてもよい、
式Iの化合物およびそれらの薬学上許容される塩である。
【００１９】
このような化合物の例は次の通りである: 
5-(3,4-ジヒドロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-ベンジリデンアミノオキシメチル-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ベンゾ[1,3]ジオキソル-5-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-クロロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(3,4-ジメトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-フルオロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(2-フルオロ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(3-メトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
【００２０】
5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-トリフルオロメトキシ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-トリフルオロメチル-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-ジエチルアミノ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(4-ジブチルアミノ-ベンジリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ピリジン-3-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(ピリジン-4-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド; または
5-(ピリジン-2-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【００２１】
本発明の他の態様は、式中、
R1がC1-C4アルキルであり、
R2がフェニルまたは2,3‐ジヒドロ‐ベンゾフラン-4-イルであり、それらの両方がハロゲン、アルキルまたは-O-アルキルで1回または数回置換されていてもよい、
式Iの化合物およびそれらの薬学上許容される塩である。
【００２２】
このような化合物の例は次の通りである: 
5-[1-(4-プロピル-フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(2-メチル-2,3‐ジヒドロ‐ベンゾフラン-4-イル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(2,4‐ジクロロ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(3,4‐ジクロロ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-[1-(3,4‐ジメトキシ‐フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(1-フェニル-エチリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド; または
5-[1-(4-フルオロ-フェニル)-エチリデンアミノオキシメチル]-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【００２３】
本発明のなお他の態様は、式中、
R1およびR2は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、環状炭化水素を形成する、
式Iの化合物およびそれらの薬学上許容される塩である。
このような化合物の例は次の通りである: 
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド;
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド塩酸塩;
5-(インダン-2-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミドメタンスルホネート; または
5-(インダン-1-イリデンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド。
【００２４】
式Iのオキシム誘導体、または薬学上許容される塩は、当業者により化学的に関係する化合物の製造に適用可能であることが知られている任意の方法により製造することができる。このような方法は、式Iのオキシム誘導体、または薬学上許容される塩を製造するために使用するとき、本発明のそれ以上の特徴として提供され、そして下記の代表的実施例により例示され、ここで特記しない限り、R1およびR2は前述の意味を有する。出発物質は、有機化学の標準的方法により得ることができる。このような出発物質の製造は、付随する実施例内に記載されている。選択的に、必要な出発物質は、有機化学者の通常の技量の範囲内である例示された手順に類似する手順により得ることができる。
【００２５】
本発明の好ましい方法、およびなお他の態様は、下記の工程を含んでなる、式Iの化合物の製造方法である:
(b)  式II：
【化２】
2006515345.tif 000004
【００２６】
（式中R1およびR2は上に定義した通りである）
の化合物を、式III：
【化３】
2006515345.tif 000005
【００２７】
（式中Yは水素または適当なアミノ保護基である）
の化合物と反応させ、
(b)  Y中のアミノ保護基は、存在する場合、切り離して式Iの化合物を生成し、そして
(c)  前記式Iの化合物を反応混合物から単離し、そして、必要に応じて、薬学上許容される塩に転化する。
【００２８】
本明細書において使用する「アミノ保護基」は、ペプチド化学から知られている。このような保護基は、例えば、ベンジルオキシカルボニル (水素化または酢酸中の臭化水素酸による切り離し)、t-ブトキシカルボニル (強酸、例えば、トリフルオロ酢酸 (純粋またはジクロロメタン中) またはジオキサン中の塩酸 (HCl) による切り離し)、9-フルオロメトキシカルボニル (第二級アミン、例えば、ピペリジンによる切り離し) である。
【００２９】
この反応は典型的には2工程ワンポット手順を含む。第1工程において、不活性溶媒または希釈剤、例えば、ジクロロメタン、ジオキサン、またはテトラヒドロフラン中で、活性化剤の存在下に化合物を反応させることによって、式IIのカルボキシレートを活性化する。
【００３０】
酸の適当な反応性誘導体の例は次の通りである: ハロゲン化アシル、例えば、酸と無機酸塩化物、例えば、塩化チオニルまたはシュウ酸ジクロライドとの反応により生成した塩化アシル; 混合無水物、例えば、酸とクロロホルメート、例えば、イソブチルクロロホルメートとの反応により生成した無水物; 活性エステル、例えば、酸とフェノール、例えば、ペンタフルオロフェノールとの反応により生成したエステル; 酸とN-ヒドロキシベンゾチアゾールとの反応により生成した活性エステル; アシルアジド、例えば、酸とアジド、例えば、ジフェニルホスホリルアジドとの反応により生成したアジド; アシルシアン化物、例えば、酸とシアン化物、例えば、シアン化ジエチルホスホリルとの反応により生成したシアン化物; または酸とカーボジイミド、例えば、N-3-ジメチルアミノプロピル-N-エチルカーボジイミドまたはジシクロヘキシルカーボジイミドとの反応生成物; または酸とN,N’-カルボニルジイミダゾールとの反応生成物; または酸とウロニウム塩、例えば、O-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N’,N’-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応生成物; または酸とリンに基づく試薬、例えば、ビス-(2-オキソ-3-オキサゾリジニル)-ホスホリルクロライドとの反応生成物。この反応は-30℃〜60℃、好都合には0℃以下において実施する。
【００３１】
第2工程において、活性化された酸を含有する溶液に化合物IIIを添加する。Yが保護基である場合、それを最後に切り離して (上記方法を参照) 化合物Iを生成しなくてはならない。
これらの方法は当業者によく知られている。原理的に、下記の文献に記載されているペプチド化学において使用されているようなすべてのアミドの合成方法がまた適用される: Houben-Weyl 、Methoden der organishen Chemie 、Vol. XV/1およびXV/2。非保護フェニレンジアミンのモノアシル化はEP 0 974 576に記載されている。
【００３２】
式IIの化合物は、式IV：
【化４】
2006515345.tif 000006
【００３３】
（式中、R3はアルキルであり、そして前記アルキルは前述の意味を有する）
の化合物のR3基を切り離すことによって製造することができる。R3についての例はメチルおよびエチルである。この反応は塩基、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、または水酸化カリウムの存在下に不活性溶媒または希釈剤、例えば、メタノール、エタノール、ジオキシン、THF、水中で実施する。
【００３４】
一般式IVの化合物は、例えば、一般式V：
【化５】
2006515345.tif 000007
【００３５】
のオキシムと、一般式VI：
【化６】
2006515345.tif 000008
【００３６】
（式中LGはこの置換に適当な脱離基であり、LGの例はBr、Cl、I、トシレート、メシレートである）
の化合物との置換反応により、製造することができる。
【００３７】
この反応は不活性溶媒、例えば、ジクロロメタン、アセトン、ジメチルホルムアミド (DMF)、THF、アセトニトリル、酢酸エチル、ジメチルスルホキシド (DMSO) 中で、好ましくは塩基、例えば、炭酸カリウム (K2CO3)、水酸化ナトリウム (NaOH)、水素化ナトリウム (NaH) の存在下に実施する。ある場合において、反応混合物にヨウ化カリウムまたは硫酸水素テトラブチルアンモニウムを添加すると、好適な効果が得られる。必要に応じて、反応混合物を加熱する。
【００３８】
多数の一般式Vの化合物は商業的に入手可能である。他の場合において、一般式Vの化合物は、既知の方法により、例えば、式VII：
【化７】
2006515345.tif 000009
【００３９】
の対応するアルデヒドまたはケトンをヒドロキシルアミンまたはヒドロキシルアミン塩酸塩と不活性溶媒、例えば、エタノール、メタノール、水、ジオキサン中で、好ましくは塩基、例えば、ピリジン、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウムの存在下に、縮合させることによって製造することができる。
【００４０】
式VIのいくつかの化合物は文献に記載されている。例えば、5-ブロモメチル-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステルは、例えば、下記の文献に記載されている: Curtin M. L. 他、J. Mol. Chem. 41 (1998) 74-95。
【００４１】
本発明の化合物は1つまたはいくつかのキラル中心を含有し、そしてラセミ体または光学的に活性な形態で存在することができる。既知の方法に従い、ラセミ体は鏡像異性体に分割することができる。好ましくは、結晶化により分離することができるジアスレオマーは、光学的に活性な酸、例えば、D-またはL-酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸またはショウノウスルホン酸との反応により、ラセミ体混合物から形成される。さらに、ラセミ化合物は、分析用、半調製用または調製用規模のクロマトグラフィーにより、適当な光学的に活性な静止相を適当な溶離液とともに使用して、鏡像異性体に分割することができる。適当な光学的に活性な静止相は下記のものを包含するが、これらに限定されない: シリカ (例えば、ChiraSper、Merck; Chiralpak OT/OP、Baker)、セルロースエステルまたはカルバメート (例えば、Chiracel OB/OY、Baker) またはその他 (例えば、Crownpak、DaicelまたはChiracel OJ-R、Baker) 。
【００４２】
式Iの化合物ならびにそれらの薬学上使用可能な付加塩は、有益な薬理学的性質を有する。それらは抗増殖および分化誘導活性を有し、これにより腫瘍細胞の増殖を抑制し、アポトーシスを誘導し、そして浸潤を抑制することが発見された。したがって、これらの化合物はヒトまたは動物における疾患、例えば、癌の治療に有効である。結局、本発明のそれ以上の態様は、癌を治療するための式Iの化合物の使用である。なお他の態様は、腫瘍増殖を抑制する対応する薬剤を製造するための式Iの化合物の使用である。
【００４３】
本発明による化合物のHDACインヒビターとしての活性は、細胞のアセチル化アッセイにより証明される。このアッセイにおいて、PC3細胞におけるヒストンのアセチル化をモニターする。高いアセチル化は、化合物によるヒストンデアセチラーゼの阻害と相関する。細胞の生活能力を平行にモニターして、化合物の細胞障害性を推定する。
PC3細胞、すなわち、ヒト前立腺癌腫細胞系をRPMI 1640 (5% FCS、2 mM グルタミンおよびpen/strepを含む) 中で384ウェルのマイクロタイタープレートのウェル当たり1800細胞として播種する。
【００４４】
37℃において48時間後、前もって希釈した化合物を1 μMの最終濃度に添加する。化合物をジメチルスルホキシド (DMSO) 中で前もって希釈して、0.5%/ウェルのDMSOの最終濃度にする。
24時間のインキュベーション後、細胞増殖試薬WST-1 (Roche Molecular Biochemicals) の添加により、細胞生活能力を決定する。さらに60分後、光学密度(OD) を測定する (450 nm/690 nm) 。
【００４５】
測定後、細胞層をELISA反応のために調製する。培地を吸引し、細胞をエタノール中で-20℃において60分間固定する。PBS/ツイーンで洗浄した後、ブロッキング溶液 (PBS/5% FCS/ツイーン) を添加し、そして細胞層を再び洗浄する。アセチル化されたヒストンに対する抗体H3またはH4 (ウサギポリクローナルIgG、Upstate Biotechnologies) を1:200の希釈で37℃において60分間添加する。第2抗体として、ヤギ抗ウサギIgG (H+L) ヒトIgG吸着HRP複合体 (Dako) を使用する (希釈1:2000) 。細胞を3回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質ABTSを37℃において30〜60分間反応させる。ODを405 nmにおいて測定する。
【００４６】
ブランクのODを減じた後、アセチル化の百分率を計算する:
【数１】
2006515345.tif 000010
【００４７】
【表１】
2006515345.tif 000011
【００４８】
本発明による化合物の作用を下記の試験によりさらに評価することができる:
雄のNMRI nu/nuマウス (n = 15/群)、週齢8〜10に、5×106 PC-3前立腺癌腫細胞を皮下注射した。第10日に、約150 mm3の腫瘍体積をもつ動物を治療群に無作為に割り当てた。被験化合物を7.5% ゼラチン-0.22% NaCl-懸濁液中の微小懸濁物として、実際の体重に基づいて10 ml/kgの適用体積で投与した。5〜7回/週の治療スケジュールでほぼ第10日から第27日に、毎日1回の経口的治療を実施した。
【００４９】
腫瘍体積は下記の方程式から決定する:
腫瘍体積 = 1/2ab2
ここで「a」および「b」は、それぞれ、腫瘍の長い直径および短い直径である。
【００５０】
本発明のなお他の態様は、活性成分として前述の式Iの化合物を、必要に応じて薬学上許容されるアジュバントと一緒に、含有する薬剤である。前記薬剤は、例えば、医薬製剤の形態で、経口的に、例えば、錠剤、被覆錠剤、糖剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル剤、溶液、乳濁液または懸濁液の形態で投与することができる。しかしながら、また、投与は、経直腸的に、例えば、坐剤の形態で、または非経口的に、例えば、注射溶液の形態で実施することができる。
【００５１】
前述の医薬製剤は、本発明による化合物を薬学的に不活性である無機または有機の担体で処理することによって調製することができる。ラクトース、コーンスターチまたは澱粉またはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸またはその塩およびその他を、例えば、錠剤、被覆錠剤、糖剤、硬質および軟質ゼラチンカプセル剤の担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセル剤に適当な担体は、例えば、植物油、蝋、脂肪、半固体および液体のポリオールおよびその他である。しかしながら、活性物質の特質に依存して、軟質ゼラチンカプセル剤の場合において、担体は通常不必要である。溶液およびシロップ剤の調製に適当な担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油およびその他である。坐剤に適当な担体は、例えば、天然および硬化油、蝋、脂肪、半液状または液状のポリオールおよびその他である。
【００５２】
その上、医薬製剤は、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色剤、香味剤、浸透圧変更用塩、緩衝剤、マスキング剤または酸化防止剤を含有することができる。医薬製剤は、また、他の療法的に有益な物質を含有することができる。
好ましい医薬製剤は下記のものを包含する。
【００５３】
a)  錠剤処方物 (湿式粒状化):
【表２】
2006515345.tif 000012
【００５４】
製造手順
1.     項目1、2、3および4を混合し、精製した水を使用して粒状化する。
2.     粒体を50℃において乾燥させる。
3.     粒体を適当な微粉砕装置に通す。
4.     項目5を添加し、3分間混合する; 適当なプレスで圧縮する。
【００５５】
b)  カプセル剤処方物:
【表３】
2006515345.tif 000013
【００５６】
製造手順
1.     項目1、2および3を適当なミキサー中で30分間混合する。
2.     項目4および5を添加し、3分間混合する。
3.     適当なカプセル中に充填する。
【００５７】
投与量は種々の因子、例えば、投与方法、種、年齢および/または個々の健康状態に依存する。
【実施例】
【００５８】
下記の実施例および参考文献は本発明の理解を助けるために提供される。本発明の真の範囲は添付された特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神および範囲から逸脱しないで、手順の変更が可能であることが理解される。
【００５９】
下記の実施例において、特記しない限り、
(i)  蒸発は回転蒸発器により真空中で実施し、そして仕上げ手順は残留固体、例えば、乾燥剤の除去後、濾過により実施した; 
(ii) 操作は周囲温度、すなわち、範囲18〜25℃においておよび不活性ガス、例えば、アルゴンまたは窒素の雰囲気下に実施した;
(iii)カラムクロマトグラフィー (フラッシュ手順による) および高圧液体クロマトグラフィー (HPLC) は、Merck Kieselgel シリカまたはMerck Lichroprep RP-18逆相シリカ (E. Merck、ドイツ国ダーマシュタットから入手可能である) 上で実施した;
【００６０】
(iv) 収量は例示を目的としてのみ記載し、そして必ずしも達成可能な最大ではない;
(v)  融点はMettler SP62自動化融点装置、油浴装置またはKoflerホットプレート装置を使用して測定した;
(vi) 式Iの化合物の構造は、核 (一般にプロトン) 磁気共鳴 (NMR) および質量分析技術 (APCIを使用するMicromass Platform II機またはエレクトロスプレーを使用するMicromass Platform ZMD) により実施した;
(vii)中間体は一般に完全に特性決定せず、そして純度は薄層クロマトグラフィーにより評価した;
【００６１】
(viii)       下記の略号を使用した:
DMF       N,N-ジメチルホルムアミド;
DMSO      ジメチルスルホキシド;
THF       テトラヒドロフラン;
MeOH      メタノール;
HCl       塩酸;
NaH       水素化ナトリウム;
CH2Cl2    ジクロロメタン;
H2SO4     硫酸;
sat.      飽和;
sol.      溶液;
h         時間;
d         日;
rt        温室;
eq        当量;
mp        融点 [℃];
MW計算値      分子量、計算値 [g/mol];
MW実測値      分子量、質量分析により決定した [g/mol]。
【００６２】
実施例１．5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステル
2 mlのジクロロメタン中の500 mg (2.13 mmol) の5-ブロモメチル-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステルおよび381 mg (2.13 mmol) の2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-カルバルデヒドオキシムの溶液に、激しく攪拌しながら、2.0 mlの2.2 M水酸化ナトリウム水溶液および902 mg (2.55 mmol) の硫酸水素テトラブチルアンモニウムを添加した。10分後、他の2.0 mlの2.2 M水酸化ナトリウム水溶液および902 mg (2.55 mmol) の硫酸水素テトラブチルアンモニウムを添加した。
【００６３】
この手順をさらに1回反復した。20分後、8 mlの飽和重炭酸塩水溶液を添加した。水性相を酢酸エチルで3回抽出し、一緒にした有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を蒸発させ、残留物をシリカゲルのクロマトグラフィー (ヘキサン/酢酸エチル 4:1、次いで3:1) にかけると、214 mg (0.64 mmol) の5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステルが得られた; 正確な分子量［M+H］計算値: 334.07;分子量［M+H］実測値: 334.2。
【００６４】
実施例２．5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸
2.4 mlのTHF中の200 mg (0.60 mmol) の5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステルの溶液に、1.2 mlの1 M LiOH水溶液を添加し、反応混合物を70℃に5時間加熱した。水を添加し、この混合物を酸性にし、酢酸エチルで抽出した。一緒にした有機相をブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、溶媒を蒸発させると、190 mg (0.59 mmol) の5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸が得られた; 正確な分子量［M+H］計算値: 320.06;分子量［M+H］実測値: 320.2。
【００６５】
実施例３．5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミド
3 mlのジクロロメタン中の100 mg (0.31 mmol) の5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸、65 mg (0.47 mmol) の1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、92 mg (0.47 mmol) のN’-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-エチルカーボジイミドおよび65 μl (0.47 mmol) のトリエチルアミンの溶液を15分間攪拌した。68 mg (0.63 mmol) のフェニレンジアミンを添加した後、反応混合物を一夜攪拌した。
【００６６】
溶媒を蒸発させ、残留物を調製用HPLCにかけると、88 mg (0.21 mmol) の5-(2,3‐ジヒドロ‐ベンゾ[1,4]ジオキシン-6-イルメチレンアミノオキシメチル)-チオフェン-2-カルボン酸 (2-アミノ-フェニル)-アミドが得られた (17); 正確な分子量［M+H］計算値: 410.12;分子量［M+H］実測値: 410.2。
1H NMR (400 MHz、(CH3)2SO)：δ = 9.67 (s、1H)、8.18 (s、1H)、7.85 (m、1H)、7.20 (m、1H)、7.14-7.09 (m、3H)、6.97 (m、1H)、6.91 (m、1H)、6.77 (m、1H)、6.58 (m、1H)、5.29 (s、2H)、4.90 (s、2H)、4.26 (m、4H)。
【００６７】
実施例４．
実施例3に記載されている方法に類似する方法において、かつ文献 (例えば、標準的研究、例えば、Houben-Weyl、Methoden der organishen Chemie、Georg Thieme Verlag、Stuttgart; Organic Reactions、John Wiley & Sons, Inc.、New York) に記載されている既知の方法を使用して、下記の化合物を製造する:
【００６８】
【表４】
2006515345.tif 000014
【００６９】
【表５】
2006515345.tif 000015
【００７０】
【表６】
2006515345.tif 000016
【００７１】
参考文献のリスト
Ansel H. 他、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第6版 (1955)、pp. 196および1456-1457。
Curtin M. L. 他、J. Mol. Chem. 41 (1998) 74-95。
DE-A 2 062 265。
EP 0 974 576。
EP-A 0 242 851。
EP-A 0 847 992。
FR 2 167 954。
Hassan H. 他、Indian J. Chem. 39B (2000) 764-768。
Houben-Weyl 、Methoden der organishen Chemie 、Vol. XV/1およびXV/2、Georg Thieme Verlag、Stuttgart。
Koyama Y. 他、Blood 96 (2000) 1490-1495。
Moll R. 他、Z. Chem. 17 (1977) 133-134。
Organic Reactions、John Wiley & Sons, Inc.、New York。
Rastogi R. およびSharma S.、Indian J. Chem.、Sect. B、21B (5) (1982) 485-487。
WO 03/013484。
【国際調査報告】
2006515345.tif 000021
2006515345.tif 000022
2006515345.tif 000023