(57)【要約】本発明は、改良された洗浄性能を提供するエンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。本発明は、また、エンド-グルカナーゼと他の酵素との組み合わせを含んでなる洗剤組成物に関する。本発明の1つの面は、エンド-グルカナーゼ洗剤で布帛または硬質表面を洗浄する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i)  配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列を有するエンド-グルカナーゼ;
(ii) 3.0のGAPクリエイションペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティーを使用してGCGプログラムパッケージの中に提供されたGAPにより同一性を決定したとき、配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性の配列を有するエンド-グルカナーゼまたはグルカナーゼ活性を有するそのフラグメント;
の1つから選択される、エンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項２】
エンド-グルカナーゼ活性についての試験および再付着防止作用についての試験により決定して、エンド-グルカナーゼが再付着防止性エンド-グルカナーゼである、エンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項３】
アニオンテンシド、および請求項1または2に記載のエンド-グルカナーゼと真菌セルラーゼとの組み合わせを含んでなり、前記組み合わせの両方の酵素がアニオンテンシドの存在下に安定である、アニオンテンシドおよび洗剤組成物。
【請求項４】
(a) エンド-グルカナーゼが、
(i)    配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列を有するエンド-グルカナーゼ;
(ii)   3.0のGAPクリエイションペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティーを使用してGCGプログラムパッケージの中に提供されたGAPにより同一性を決定したとき、配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性の配列を有するエンド-グルカナーゼまたはグルカナーゼ活性を有するそのフラグメント;
の1つから選択され、そして
(b) セルラーゼが
(i)  配列番号4の位置1〜位置299のアミノ酸配列を有するセルラーゼ; または
(ii) 3.0のGAPクリエイションペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティーを使用してGCGプログラムパッケージの中に提供されたGAPにより同一性を決定したとき、配列番号4の位置1〜位置299のアミノ酸配列に対して少なくとも70%の同一性の配列を有するセルラーゼまたはセルラーゼ活性を有するそのフラグメント;
の1つから選択される、請求項3に記載の洗剤組成物。
【請求項５】
エンド-グルカナーゼが少なくとも4〜11、好ましくは5.5〜10.5の範囲のpHにおいて活性である、請求項1〜4のいずれかに記載の洗剤組成物。
【請求項６】
セルラーゼが属チエラビア (Thielavia) の株、好ましくはチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) の株、特にチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) NRRL 8126に由来し、そして配列番号4に示されている、請求項3〜5のいずれかに記載の洗剤組成物。
【請求項７】
1種または2種以上の酵素をさらに含んでなり、前記酵素はプロテアーゼ、セルラーゼ、ベータ-グルカナーゼ、ヘミセルラーゼ、リパーゼ、ペルオキシダーゼ、ラッカーゼ、α‐アミラーゼ、グルコアミラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼ、レダクターゼ、オキシダーゼ、フェノールオキシダーゼ、リグニナーゼ、プルラナーゼ、ペクチン酸リアーゼ、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、ペクチンアセチルエステラーゼ、ポリガラクトウロナーゼ、ラムノガラクトウロナーセ、ペクチンリアーゼ、他のマンナナーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ、セロブロヒドロラーゼ、トランスグルタミナーゼ、またはそれらの混合物から成る群から選択される、請求項1〜6のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記プロテアーゼがバシラス (Bacillus) の株に由来し、好ましくはプロテアーゼがスブチリシンNovo、スブチリシンCarisberg、スブチリシン309、スブチリシン147およびスブチリシン168から成る群から選択される、請求項7に記載の組成物。
【請求項９】
前記リパーゼが属フミコラ (Humicola) の株、好ましくはフミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) の株、特にフミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) DSM 4109に由来する、請求項8に記載の組成物。
【請求項１０】
前記α‐アミラーゼが属バシラス (Bacillus) の株、好ましくはバシラス (Bacillus) 種の株、特にバシラス (Bacillus) 種DSM 12649、NCIB 12512またはNCIB 12513に由来する、請求項9に記載の組成物。
【請求項１１】
前記マンナナーゼが属バシラス (Bacillus) の株、好ましくはバシラス・リヘニフォルミス (B. licheniformis) 、特にバシラス・リヘニフォルミス (B. licheniformis) 種1633に由来する、請求項10に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ペクチン酸リアーゼが属バシラス (Bacillus) の株、好ましくはバシラス・サブチリス (Bacillus subtilis) 、特にバシラス・サブチリス (Bacillus subtilis) DSM 14218に由来する、請求項11に記載の組成物。
【請求項１３】
前記セルラーゼが属フミコラ (Humicola) の株、好ましくはフミコラ・インソレンス (Humicola insolens) 、特にフミコラ・インソレンス (Humicola insolens) DSM 1800に由来する、請求項12に記載の組成物。
【請求項１４】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素洗浄性の有益性は実施例6の洗浄試験法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびセルラーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項１５】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素の洗浄性は実施例7の洗浄試験法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびアミラーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項１６】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素の洗浄性は実施例8の洗浄試験方法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびプロテアーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項１７】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素の洗浄性は実施例9の洗浄試験方法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびヘミセルラーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項１８】
前記ヘミセルラーゼがマンナナーゼである、請求項17に記載の洗剤組成物。
【請求項１９】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素の洗浄性は実施例11の洗浄試験方法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびリパーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項２０】
酵素の組み合わせからの酵素洗浄性の有益性が、抗再付着性グルカナーゼを含まない同一洗剤組成物の酵素洗浄性の有益性よりも高く、好ましくは少なくとも5単位高い (酵素の洗浄性は実施例10の洗浄試験方法により決定される) ことを特徴とする、再付着防止性エンド-グルカナーゼおよびペクチナーゼを含んでなる洗剤組成物。
【請求項２１】
前記エンド-グルカナーゼが配列番号2のアミノ酸配列を含んでなるか、あるいは前記エンド-グルカナーゼが、3.0のGAPクリエイションペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティーを使用してGCGプログラムパッケージの中に提供されたGAPにより同一性を決定したとき、配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性の配列を有するエンド-グルカナーゼまたはグルカナーゼ活性を有するそのフラグメントを含んでなる、請求項14〜20のいずれかに記載の洗剤組成物。
【請求項２２】
布帛を請求項1〜21のいずれかに記載の組成物の水溶液と、必要に応じて攪拌しながら、有効な時間の間接触させることを含んでなる、布帛を洗浄する方法。
【請求項２３】
前記時間が2分〜24時間、好ましくは10分〜60分である、請求項22に記載の方法。
【請求項２４】
エンド-グルカナーゼタンパク質成分/全酵素タンパク質の比が1:2より小さい、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
硬質表面を請求項1〜21のいずれかに記載の組成物の水溶液と有効な時間の間接触させることを含んでなる、硬質表面を洗浄する方法。
【請求項２６】
前記時間が1分〜1時間、好ましくは5分〜30分である、請求項22に記載の方法。
【請求項２７】
エンド-グルカナーゼタンパク質成分/全酵素タンパク質の比が1:2より小さい、請求項22または25に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改良された洗浄性能を提供するエンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。本発明は、また、エンド-グルカナーゼと他の酵素との組み合わせを含んでなる洗剤組成物に関する。本発明の1つの面は、エンド-グルカナーゼを含有する洗剤で布帛または硬質表面を洗浄する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
洗浄プロセスの重要な目的は、汚れを洗浄する物体から洗浄溶液の中に、できるだけ完全に、移して、次いで汚れを洗浄溶液とともに廃棄できるようにすることである。洗浄される物体上に汚れを単に再分布させる洗浄プロセスは明らかに不満足である。こうして、洗浄性能、すなわち、洗浄プロセスの性能の評価は、洗浄される物体からの汚れ除去、および洗浄される物体上へのまたは洗浄プロセスに使用している装置上への汚れの再付着の両方を考慮することを含まなくてはならない。
【０００３】
いくつかの汚れおよびいくつかの表面を使用して、満足すべき洗浄性能を達成することは非常に困難である。問題の汚れは粒状汚れ、例えば、粘土および炭素を包含する。可視の汚れは、微量の非可視の粘着性物質に結合しまたは取り付けられているので、完全に洗浄除去することがしばしば困難である。問題の表面は綿繊維の表面を包含する。
このような問題の汚れの克服を促進するために、洗剤配合物は再付着防止剤を含むことがある。再付着防止剤を添加して、前述の問題の汚れが、いったん布帛から分離されたなら、それらが清浄された布帛上に再付着しないように、洗浄液の中に溶解または懸濁されたままでいることができることを保証する。
【０００４】
再付着防止効果およびクリーニング効果の両方を得るために、1つのセルラーゼが再付着防止作用を有し、そして1つがセルロース分解作用を有する、セルラーゼの混合物を洗剤に添加することが示唆された。EP 822 973は、セルラーゼの混合物を含んでなり、また、必要に応じて追加の酵素を含有する洗剤組成物に関する。しかしながら、再付着防止作用を有する酵素と他の酵素、例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、ヘミセルラーゼ、リパーゼおよびペクチナーゼとの改良された組み合わせが必要とされている。
酵素は汚れの結合を増加させる粘着性物質を除去するために使用される。汚れ除去および/または汚れ再付着防止に関して、改良された酵素の性能が必要とされている。
【発明の開示】
【０００５】
発明の要約
本発明は、再付着防止性エンド-グルカナーゼ、すなわち、再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。このようなエンド-グルカナーゼを含有する洗剤は、布帛の洗浄 (特に洗濯) または硬質表面の洗浄 (特に自動皿洗浄) に使用するとき、利点を与えることを本発明者らは発見した。
本発明の関係において、再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼは、洗浄試験において再付着を防止する能力により特徴づけられる。
【０００６】
また、再付着防止作用を有するある種の1種または2種以上のエンド-グルカナーゼと、アニオンテンシド、例えば、線状 (直鎖状) アルキルベンゼンスルホネート (しばしば「LAS」と呼ばれる) に対して増加した安定性を有するある種の1または2以上のセルラーゼとの組み合わせを含んでなる洗剤組成物は、EP 822 973に記載されている先行技術の洗剤組成物に比較して、利点を有することを本発明者らは発見した。これにより、改良された生成物の経済性が得られる。
【０００７】
また、他の酵素をも含有する洗剤に再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼを含めることは、驚くほど有利であることを本発明者らは発見した。これらの他の酵素は、例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、ベータ-グルカナーゼ、リパーゼ、ヘミセルラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼおよびペクチン酸リアーゼとして分類される酵素を包含する。
【０００８】
こうして、第1の面において、本発明は、エンド-グルカナーゼが、
(i)  配列番号2の位置1〜位置733のアミノ酸配列を有するエンド-グルカナーゼ;
(ii) 配列番号2の位置1〜位置733のアミノ酸配列に対して少なくとも90% の同一性を有する配列を有するエンド-グルカナーゼまたはエンド-グルカナーゼ活性を有するそのフラグメント;
(iii)本明細書に開示する洗浄試験により特徴づけられるエンド-グルカナーゼ;
の1つから選択される、エンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。
【０００９】
第2の面において、本発明は、アニオンテンシド、および上に定義したエンド-グルカナーゼと真菌セルラーゼとの組み合わせを含んでなり、前記組み合わせの両方の酵素がアニオンテンシドの存在下に安定である、洗剤組成物に関する。
第3の面において、本発明は、上に定義したエンド-グルカナーゼと、クラス、例えば、プロテアーゼ、アミラーゼ、ベータ-グルカナーゼ、リパーゼ、ヘミセルラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼおよびペクチン酸リアーゼからの、しかしこれらに限定されない、1種または2種以上の他の酵素との両方を含有する洗剤組成物に関する。
【００１０】
1つの面において、本発明は、布帛、硬質表面またはクリーニングを必要とする他の物体を洗浄またはクリーニングするために、本発明の洗剤組成物を使用する方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明は、再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼを含んでなる洗剤組成物に関する。
再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼ
再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼは、本発明によれば、
(i)  配列番号2の位置1〜位置733のアミノ酸配列を有するエンド-グルカナーゼ;
(ii) 配列番号2の位置1〜位置733のアミノ酸配列に対して少なくとも90% の同一性を有する配列を有するエンド-グルカナーゼまたはエンド-グルカナーゼ活性を有するそのフラグメント;
(iii)後述する洗浄試験により特徴づけられるエンド-グルカナーゼ;
の1つから選択される。
【００１２】
好ましい態様において、エンド-グルカナーゼはバシラス (Bacillus) 種AA349、DSM 12648に由来し、また、本明細書において配列番号2またはそれに対して少なくとも90% 同一性を有する配列で示される。
株バシラス (Bacillus) 種AA349は、ギリシャにおいて生じる土壌の試料から単離され、特許手続きの目的のための微生物の寄託の国際的承認についてのブタベスト条約の規定に従い1999年1月25日に受け入れ番号DSM 12648で本発明者らにより寄託された (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellulturen GmbH、Mascheroder Weg 1b、D-38124 Braunschwelg、Germany) 。
寄託はNovo Nordisk A/Sによりなされ、後にNovozymes A/Sに帰属された。
【００１３】
アニオンテンシドを含んでなる洗剤組成物
好ましい態様において、本発明は、アニオンテンシドを含んでなる洗剤組成物に関し、そして上に定義したエンド-グルカナーゼと真菌セルラーゼとの組み合わせに関し、ここで両方の酵素はアニオンテンシド、例えば、LASの存在下に安定である。
本発明の目的に対して、LAS中で安定である酵素はLAS安定性試験により規定される。少なくとも50%のLAS安定性結果を与える酵素は、LAS安定であると見なされる。
洗剤は普通に2種以上の界面活性剤、例えば、アニオン界面活性剤と非イオン界面活性剤との組み合わせを含有する。好ましい態様において、本発明は、アニオン界面活性剤と非イオン界面活性剤との間の比 (重量に基づく) が>1:1、好ましくは>1.5:1である、洗剤配合物に関する。
【００１４】
こうして、好ましい態様において、本発明は、
(a)  エンド-グルカナーゼが、
(i)      配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列を有するエンド-グルカナーゼ;
(ii)     配列番号2の位置1〜位置773のアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性の配列を有するエンド-グルカナーゼまたはグルカナーゼ活性を有するそのフラグメント;
の1つから選択され、そして
(b) セルラーゼが
(i)    配列番号4の位置1〜位置299のアミノ酸配列を有するセルラーゼ;
(ii)   配列番号4の位置1〜位置299のアミノ酸配列に対して少なくとも70%の同一性の配列を有するセルラーゼまたはセルラーゼ活性を有するそのフラグメント;
の1つから選択される、洗剤組成物に関する。
【００１５】
あるいは、上記 (a) (i) のエンド-グルカナーゼは、FERM P-16067として寄託され (the Patent Microorganism Depository,  National Institute of Bioscience and Human-Technology、 Agency of Science & Industry、日本国茨城県つくば市) そしてJP 2000210081 (引用することによって本明細書の一部とされる) の配列番号1の位置1〜824に示されている、バシラス (Bacillus) 種KSMS237に由来する。
他の代替セルラーゼは、WO 98/12307の実施例8に開示されているLAS耐性変異型である。本発明の好ましい態様は、上記 (a) のエンド-グルカナーゼと組み合わせて、これらの代替セルラーゼを含んでなる。
【００１６】
好ましい態様において、セルラーゼはチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) セルラーゼ、好ましくはWO 96/29397中の配列番号9および本明細書において配列番号4に開示されているセルラーゼ、またはそれに対して少なくとも70% の同一性を有する酵素である。好ましい態様において、セルラーゼはWO 98/12307の実施例1に開示されているチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) 変異型である。
【００１７】
同一性
本発明の関係において、同一性の程度は2つの配列間で決定され、第1配列の第2配列からの偏差を示す。この同一性は、GCGプログラムパッケージの中に提供されるコンピュータープログラムGAPにより決定される。こうして、Gap GCGv8を下記のデフォルトパラメーターとともに使用する: 3.0のGAPクリエイションペナルティーおよび0.1のGAPエクステンションペナルティー、タンパク質配列のための、デフォルトスコアリングマトリックス。GAPはアラインメントを作るためにNeedleman/Wunsh/Sellersの方法を使用する。
【００１８】
他の酵素を含んでなる洗剤組成物
種々の型の酵素は、産業的クリーニングおよび硬質表面クリーニングのための洗剤配合物において非常に普通に添加される。これらの酵素の1つの目的は、汚れ結合性物質を分解することである。これらの汚れ結合性物質は、汚れおよびしみを布帛または硬質表面に結合させかつ誘引する。分解された物質、および会合した汚れおよびしみは、次いで洗浄プロセス間に容易に除去される。汚れ結合性物質により増加することがある汚れの再付着は、防止される。
【００１９】
酵素が作用する物質は基質と呼ばれる。酵素は「基質特異的」である、すなわち、各クラスの酵素は1クラスのみの基質を分解できることが知られている。例えば、プロテアーゼはタンパク質を分解できるが、澱粉を分解することができない。
洗剤配合物にとって重要である汚れおよびしみは多数の種類の汚れ結合性物質を含有することができるので、すべてが異なる基質特異性をもつ、ある範囲の異なる酵素が、洗剤において使用するために開発されてきている。これらは、プロテアーゼ、アミラーゼ、ベータ-グルカナーゼ、リパーゼ、ヘミセルラーゼ、クチナーゼ、ペクチナーゼおよびペクチン酸リアーゼのような酵素を包含する。
【００２０】
驚くべきことには、本発明のエンド-グルカナーゼは基質特異性ではなく、それらは他の酵素と組み合わせて使用するとき、広い範囲の汚れおよびしみに対して洗浄性の利益を提供することができることが発見された。
本発明のエンド-グルカナーゼは、配列番号2を参照することによって特定される酵素に加えて、驚くべきほどに高い再付着防止作用をもつ他のエンド-グルカナーゼを包含する。これらの酵素を記載しかつ同定するために、2つの試験が提供される: 1) エンド-グルカナーゼ活性についての試験、および2) 再付着防止作用についての試験。両方のこれらの試験に対して特定した最小の性能より大きい性能を提供する酵素は、本発明の目的に対して、再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼと見なされる。
【００２１】
こうして、好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは、澱粉を含有する汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、アミラーゼと組み合わせて使用される。このようなアミラーゼは、例えば、細菌または真菌由来のα‐またはβ-アミラーゼを含んでなる。この関係において、このような酵素の化学的または遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。関係するα‐アミラーゼは、例えば、バシラス (Bacillus) 種、特にGB 1296839にいっそう詳細に記載されている、バシラス・リヘニフォルミス (B. licheniformis) の特別の株から得ることができるα‐アミラーゼを包含する。関係する商業的に入手可能なアミラーゼは、NatalaseTM、Stainzyme(商標)、Duramly(商標)、Termamyl(商標)、Termamyl(商標) Ultra、FungamylTMおよびBANTM (Novozymes A/S、デンマーク国バグスバード、から入手可能である) およびRapidaseTMおよびMaxamylTM (Genencor、オランダ国、から入手可能である) を包含する。
【００２２】
好ましい態様において、α‐アミラーゼはバシラス (Bacillus) 種の株NCIB 12289、NCIB 12512、NCIB 12513およびDSM 9375に由来する。WO 95/26397の配列番号1および2に示すα‐アミラーゼは特に好ましい。
他の好ましい態様において、α‐アミラーゼはWO 00/60060 (引用することによって本明細書の一部とされる) 中に配列番号2として開示されているバシラス (Bacillus) 種DSM 12649に由来するAA560 α‐アミラーゼである。実施例7および8 (引用することによって本明細書の一部とされる) に開示されているAA560変異型を包含する、AA560 α‐アミラーゼの変異型は特に好ましい。
【００２３】
他の有効なアミロースはCGTアーゼ (シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ、EC 2.4.1.19) 、例えば、バシラス (Bacillus) 種、テルモアネロバクター (Thermoanaerobactor) またはテルモアネロバクテリウム (Thermoanaerobacterium) から得られるものである。
【００２４】
他の好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは、タンパク質を含有する汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、プロテアーゼと一緒に使用される。このようなプロテアーゼは、動物、植物または微生物由来のプロテアーゼを包含する。微生物由来のプロテアーゼは好ましい。この関係において、このようなプロテアーゼの化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。プロテアーゼはセリンプロテアーゼ、好ましくはアルカリ性微生物プロテアーゼまたはトリプシン様プロテアーゼであることができる。アルカリ性プロテアーゼの例は、スブチリシン、特にバシラス (Bacillus) に由来するもの、例えば、スブチリシンNovo、スブチリシンCarisberg、スブチリシン309、スブチリシン147およびスブチリシン168 (WO 89/06279に記載されている) である。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン (例えば、ブタまたはウシ由来) およびWO 89/06270に記載されているフザリウム (Fusarium) プロテアーゼである。
【００２５】
関係する商業的に入手可能なプロテアーゼ酵素は下記のものを包含する: Primase(商標)、Durazym(商標)、Everlase(商標)、Kannase(商標)、Alcalase(商標)、Savinase(商標)およびEsperase(商標)(Novozymes A/S、デンマーク国バグスバード、から入手可能である)、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTMおよびProperaseTM (DSM、オランダ国、から入手可能である) 、PurafectTMおよびPurafectTM OXP (Genencor International、米国、から入手可能である) 、およびOpticleanTMおよびOptimaseTM (Solvay Enzymesから入手可能である) 。
他の好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼ、脂肪または油を含有する汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、リパーゼと一緒に使用される。このようなリパーゼは、細菌または真菌由来のリパーゼを含んでなる。この関係において、このようなリパーゼの化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
【００２６】
有効なリパーゼの例は下記のものを包含する：フミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) リパーゼ、例えば、EP 258 068およびEP 305 216に記載されている; リゾムコル・ミエヘイ (Rhizomucor miehei) リパーゼ、例えば、EP 238 023に記載されている; カンジダ (Candida) リパーゼ、例えば、カンジダ・アンタルクチカ (C. Antarctica) リパーゼ、例えば、EP 214 761に記載されているカンジダ・アンタルクチカ (C. Antarctica) リパーゼAまたはB; シュードモナス (Pseudomonas) リパーゼ、例えば、下記の文献に記載されているものの1つ: EP 721 981 (例えば、寄託受け入れ番号PERM BP-4772を有するシュードモナス (Pseudomonas) 種SD705株から得られるリパーゼ) 、PCT/JP 96/00426、PCT/JP 96/00454 (例えば、シュードモナス・ソラナセアルム (P. solanacearum) リパーゼ) 、EP 571 982またはWO 95/14783 (例えば、シュードモナス・メンドシナ (P. mendocina) リパーゼ) 、
【００２７】
シュードモナス・アルカリゲネス (P. alcaligenes) またはシュードモナス・シュードアルカリゲネス (P. pseudoalcaligenes) リパーゼ、例えば、EP 218 272に記載されている、シュードモナス・セパシア (P. cepacia) リパーゼ、例えば、EP 331 376に記載されている、シュードモナス・スタッツエリ (P. stutzeri) リパーゼ、例えば、GB 1,372,034に開示されている、またはシュードモナス・フルオレセンス (P. fluorescens) リパーゼ; バシラス (Bacillus) リパーゼ、例えば、バシラス・サチリス (B. subtilis) (Dartois 他 (1993) 、Biochimica et Biophysica Acta 1131、253-360) 、バシラス・ステアロサーモフィラス (B. stearothermophilus) リパーゼ (JP 64/744992) またはバシラス・ピュミルス (B. pumilus) リパーゼ (WO 91/16422) 。
【００２８】
脂肪分解酵素の他の潜在的に有効な型は、例えば、WO 88/09367に記載されているシュードモナス・メンドシナ (Pseudomonas mendocina) に由来するクチナーゼ、またはフザリウム・ソラニ   f. ピシ (Fusarium solani f. pisi) に由来するクチナーゼ (例えば、WO 90/09446に記載されている) を包含する。
適当な商業的に入手可能なリパーゼは、Lipex(商標)、Lipolase(商標)およびLipolase Ultra(商標)(Novozymes A/Sから入手可能である)、およびM1 LipaseTMおよびLipomaxTM (Genencor Inc. から入手可能である) およびLipase P“Amano”(Amano Pharmaceutical Co. Ltd. から入手可能である) である。商業的に入手可能なクチナーゼはLumafastTM (Genencor Inc.) を包含する。
【００２９】
他の好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは、ヘミセルロースおよび同様な多糖を含有する汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、ヘミセルラーゼと一緒に使用される。このようなヘミセルラーゼは、キシラナーゼ、キシログルカナーゼ、アラビノフラノシダーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、グルクロニダーゼ、フェルラ酸エステラーゼ、クマル酸エステラーゼ、エンド-ガラクタナーゼ、マンナナーゼ、エンド-またはエキソ-アラビナーゼ、エキソ-ガラクタナーゼを包含する。適当なマンナナーゼは細菌または真菌由来のものを包含する。化学的または遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
【００３０】
好ましい態様において、マンナナーゼは属バシラス (Bacillus) の株、特に配列番号2の位置31-330にまたはWO 99/64619の配列番号5に開示されているバシラス (Bacillus) 種1633またはバシラス・アガラドヘレンス (Bacillus agaradhaerens) に由来し、例えば、基準株DSM 8721に由来する。適当なマンナナーゼはMannaway(商標)(Novozymes A/S製) である。
こうして、好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは、β-グルカンを含有する汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、β-グルカナーゼ (EC 3.2.1.6) と一緒に使用される。さらに好ましいβ-グルカナーゼは、リケナーゼおよびラミナリナーゼを包含する。
【００３１】
こうして、好ましい態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは、ペクチン質の汚れに対して改良された洗浄性能を提供するために、ペクチン分解酵素、例えば、プロトペクチナーゼ、ペクチナーゼ、ポリガラクトウロナーゼまたはペクチン酸リアーゼと一緒に使用される。適当なペクチン分解酵素は、WO 99/27083、WO 99/27084、WO 00/55309およびWO 02/09741に記載されているものを包含する。適当なペクチン酸リアーゼは細菌または真菌由来のものを包含する。化学的または遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
好ましい態様において、ペクチン酸リアーゼは属バシラス (Bacillus) の株、特にバシラス・サチリス (Bacillus subtilis) の株、特に配列番号2に開示されているバシラス・サチリス (Bacillus subtilis) DSM 14218またはWO 02/092741の実施例6に開示されているその変異型に由来する。
【００３２】
さらに、本発明の特定の態様において、本発明のエンド-グルカナーゼは下記クラスの他の酵素と一緒に使用される: ペクチン酸リアーゼ (EC 4.2.2.2) 、ペクチンリアーゼ (EC 4.2.2.10) 、ラムノガラクツロナンリアーゼ (EC 規定されていない) 、エンド-1,4-ガラクタナーゼ (EC 3.2.89) 、キシログルカナーゼ (EC 規定されていない) 、キシラナーゼ (EC 3.2.1.8) 、アラビナナーゼ (EC 3.2.1.99) 、α‐L-アラビノフラノシダーゼ (EC 3.2.1.55) 、マンナンエンド-1,4-マンノシダーゼ (EC 3.2.1.78) 、β-マンノシダーゼ (EC 3.2.1.25) 、β-1,3-1,4-グルカナーゼ (EC 3.2.1.73) 、ラムノガラクツロナンヒドロラーゼ、エキソ-ポリガラクトウロナーゼ (EC 3.2.1.67) 、ラムノガラクトウロナーゼ (EC規定されていない) 、
【００３３】
グルカン1,3-β-グリコシダーゼ (EC 3.2.1.58) 、グルカンエンド-1,6-β-グリコシダーゼ (EC 3.2.1.75) 、マンナンエンド-1,4-β-マンノシダーゼ (EC 3.2.1.78) 、エンド-1,4-β-キシラナーゼ (EC 3.2.1.8) 、セルロース1,4-セルロビオシダーゼ (EC 3.2.1.91) 、セルロビオヒドロラーゼ (EC 3.2.1.91) 、ポリガラクトウロナーゼ (EC 3.2.1.15) 。対応する汚れに対する洗浄性能を改良するための、アセチルおよびメチルエステラーゼ酵素の例は次の通りである: ラムノガラクトウロナンメチルエステラーゼ、ラムノガラクツロナンアセチルエステラーゼ、ペクチンメチルエステラーゼ (EC 3.1.1.11) 、ペクチンアセチルエステラーゼ (EC規定されていない) 、キシランメチルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ (EC 3.1.1.72) 、フェルロイルエステラーゼ (EC 3.1.1.73) 、シンナモイルエステラーゼ (EC 3.1.1.73) 。
【００３４】
本発明の洗剤組成物
本発明による洗剤組成物は界面活性剤系を含んでなり、ここで界面活性剤は非イオンおよび/またはアニオンおよび/またはカチオンおよび/または両性イオンおよび/または双生イオンおよび/または半極性の界面活性剤から選択することができる。
界面活性剤は典型的には0.1〜60重量%のレベルで存在する。
【００３５】
界面活性剤は、組成物中に存在する酵素成分と適合性であるように配合することが好ましい。液状またはゲル状組成物において、界面活性剤は、これらの組成物中に存在する酵素の安定性を促進するか、あるいは少なくともそれを劣化させないような方法において配合することが最も好ましい。
本発明に従い使用すべき好ましい系は、界面活性剤として、本明細書に記載する1種または2種以上の非イオンおよび/またはアニオン界面活性剤を含んでなる。
【００３６】
アルキルフェノールのポリエチレン、ポリプロピレン、およびポリブチレンオキシド縮合物は本発明の界面活性剤系の非イオン界面活性剤として使用するために適当であり、ポリエチレンオキシド縮合物は好ましい。これらの化合物は、直鎖状または分枝鎖の立体配置の約6〜約14個の炭素原子、好ましくは約8〜約14個の炭素原子を含有するアルキル基を有するアルキルフェノールとアルキレンオキシドとの縮合生成物を包含する。好ましい態様において、エチレンオキシドは約2〜約25モル、より好ましくは約3〜約15モルのエチレンオキシド/モルのアルキルフェノールに等しい量で存在する。この型の商業的に入手可能な非イオン界面活性剤は、IgepalTM CO-630 (GAF Corporationから入手可能である); およびTritonTM X-45、X-114、X-100およびX-102 (すべてはRohm ＆ Haas Companyから入手可能である) を包含する。普通に、これらの界面活性剤はアルキルフェノールアルコキシレート (例えば、アルキルフェノールエトキシレート) と呼ばれる。
【００３７】
第一級および第二級脂肪族アルコールと約1〜約25モルのエチレンオキシドとの縮合生成物は、本発明の非イオン界面活性剤系の非イオン界面活性剤として使用するために適当である。脂肪族アルコールのアルキル鎖は直鎖状または分枝鎖状、第一級または第二級であることができ、一般に約8〜約22個の炭素原子を含有する。約8〜約20個の炭素原子、より好ましくは約10〜約18個の炭素原子を含有するアルキル基を有するアルコールと約2〜約10モルのアルキレンオキシド/モルのアルコールとの縮合生成物は好ましい。約2〜約7モルのアルキレンオキシド、最も好ましくは約2〜約5モルのアルキレンオキシド/モルのアルコールは前記縮合生成物の中に存在する。
【００３８】
この型の商業的に入手可能な非イオン界面活性剤の例は次の通りである: TergitolTM 15-S-9 (C11-C15直鎖状アルコールと9モルのエチレンオキシドとの縮合生成物) 、TergitolTM 24-L-6 NMW (C12-C14第一級アルコールと6モルのエチレンオキシドとの狭い分子量分布を有する縮合生成物) (両方はUnion Carbide Corporationから入手可能である); NeodolTM 45-9 (C14-C15直鎖状アルコールと9モルのエチレンオキシドとの縮合生成物)、NeodolTM 23-3 (C12-C13直鎖状アルコールと3.0モルのエチレンオキシドとの縮合生成物)、NeodolTM 45-7 (C14-C15直鎖状アルコールと7モルのエチレンオキシドとの縮合生成物)、NeodolTM 45-5 (C14-C15直鎖状アルコールと5モルのエチレンオキシドとの縮合生成物) (Shell Chemical Companyから入手可能である); KyroTM EOB (C13-C15アルコールと9モルのエチレンオキシドとの縮合生成物) (Procter & Gamble Companyから入手可能である); およびGenapol LA 050 (C12-C14アルコールと5モルのエチレンオキシドとの縮合生成物) (Hoechstから入手可能である) 。これらの生成物におけるHLBの好ましい範囲は8〜11、最も好ましくは8〜10である。
【００３９】
また、本発明の界面活性剤系の非イオン界面活性剤として、約6〜約30個の炭素原子、好ましくは約10〜約16個の炭素原子を有する疎水性基、および約1.3〜約10、好ましくは約1.3〜約3、最も好ましくは約1.3〜約2.7サッカリド単位を含有する多糖、例えば、ポリグリコシドの親水性基を有する、米国特許第4,565,647号に開示されているアルキル多糖は有用である。5または6個の炭素原子を含有する任意の還元性多糖を使用することができ、例えば、グルコース、ガラクトースおよびガラクトシル部分をグリコシル部分の代わりに使用することができる (必要に応じて疎水性基は2-、3-、4-、およびその他の位置に結合し、こうしてグルコシドまたはガラクトシドと反対にグルコースおよびガラクトースを形成する)。サッカリド内の結合は、例えば、追加のサッカリド単位の1つの位置と先行するサッカリド単位上の2-、3-、4-、および/または6-位との間に存在することができる。
【００４０】
好ましいアルキルポリグルコシドは下記式を有する: 
R2O(CnH2nO)t(グリコシル)x
【００４１】
式中R2はアルキル、アルキルフェニル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシアルキルフェニル、およびそれらの組み合わせから成る群から選択され、ここでアルキル基は約10〜約18、好ましくは約12〜約14個の炭素原子を含有し、nは2または3、好ましくは2であり、tは0〜約10、好ましくは0であり、そしてxは約1.3〜約10、好ましくは約1.3〜約3、最も好ましくは約1.3〜約2.7である。グリコシルは好ましくはグルコースから誘導される。これらの化合物を製造するために、まずアルコールまたはアルキルポリエトキシアルコールを生成し、次いでグルコース、またはグルコース源と反応させて、グルコシドを生成する (1位における結合)。次いで追加のグリコシル単位をそれらの1位と先行するグリコシル単位2-、3-、4-、および/または6-位、好ましくは主として2-位との間に結合させることができる。
【００４２】
プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合反応により生成した疎水性ベースを有するエチレンオキシドの縮合生成物は、また、本発明の追加の非イオン界面活性剤系として使用するために適当である。これらの化合物の疎水性部分は好ましくは約1500〜約1800の分子量を有し、水不溶性を示すであろう。この疎水性部分に対するポリオキシエチレン部分の付加は全体としてこの分子の水溶性を増加させる傾向があり、そしてポリオキシエチレン含有率が縮合生成物の全重量の約50%である点まで、生成物の液状特性は保持され、これは約40モルまでのエチレンオキシドとの縮合に対応する。この型の化合物の例は、商業的に入手可能なPluronicTM界面活性剤 (BASFから入手可能である) のあるものを包含する。
【００４３】
また、エチレンオキシドとポリプロピレンオキシドおよびエチレンジアミンの反応から生ずる生成物との縮合生成物は、本発明の非イオン界面活性剤系の非イオン界面活性剤として使用するために適当である。これらの生成物の疎水性部分は、エチレンジアミンと過剰のポリプロピレンオキシドとの反応生成物から成り、一般に約2500〜約3000の分子量を有する。この疎水性部分を、縮合生成物が約40〜約80重量%のポリオキシエチレンを含有しかつ約5,000〜約11,000の分子量を有する程度に、エチレンオキシドと縮合させる。この型の非イオン界面活性剤の例は、商業的に入手可能なTetronicTM化合物 (BASFから入手可能である) のあるものを包含する。
【００４４】
アルキルフェノールのポリエチレンオキシド縮合生成物、第一級および第二級脂肪族アルコールと約1〜約25モルのエチレンオキシドとの縮合生成物、アルキルポリサッカリド、およびそれらの組み合わせは、本発明の界面活性剤系の非イオン界面活性剤として使用するために好ましい。3〜15のエトキシ基を有するC8-C14アルキルフェノールエトキシレートおよび2〜10のエトキシ基を有するC8-C18アルコールエトキシレート (好ましくは平均C10) 、およびそれらの組み合わせは最も好ましい。
【００４５】
高度に好ましい非イオン界面活性剤は下記式のポリヒドロキシ脂肪酸アミド界面活性剤である: 
【化１】
2006509850.tif 000002
【００４６】
式中R1はHであるか、あるいはR1はC1-4ヒドロカルビル、2-ヒドロキシエチル、2-ヒドロキシプロピルまたはそれらの組み合わせであり、R2はC5-31ヒドロカルビルであり、そしてZは少なくとも3つのヒドロキシルが鎖に直接結合している直鎖状ヒドロカルビル鎖を有するポリヒドロキシヒドロカルビル、またはそれらのアルコキシ誘導体である。好ましくは、R1はメチルであり、R2は直鎖状C11-15アルキルまたはC16-18アルキルまたはアルケニル鎖、例えば、ココナツアルキルまたはそれらの組み合わせであり、そしてZは還元性アミン化反応において還元砂糖、例えば、グルコース、フルクトース、マルトースまたはラクトースから誘導される。
【００４７】
高度に好ましいアニオン界面活性剤は、アルキルアルコキシ化サルフェート界面活性剤を包含する。それらの例は次の通りである: 式RO(A)mSO3Mの水溶性塩または酸、式中Rは非置換C10-C24アルキルまたはC10-C24アルキル成分を有するヒドロキシアルキル、好ましくはC12-C20アルキルまたはヒドロキシアルキル、より好ましくはC12-C18アルキルまたはヒドロキシアルキルであり、Aはエトキシまたはプロポキシ単位であり、mはゼロより大きく、典型的には約0.5〜約6、より好ましくは約0.5〜約3であり、そしてMはHまたはカチオンであり、ここでカチオンは金属カチオン (例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、およびその他) 、アンモニウムまたは置換アンモニウムのカチオンであることができる。
【００４８】
アルキルエトキシル化サルフェートならびにアルキルプロポキシル化サルフェートがここにおいて考えられる。置換アンモニウムカチオンの特定の例は次の通りである: メチル-、ジメチル-、トリメチル-アンモニウムのカチオンおよび第四級アンモニウムのカチオン、例えば、テトラメチル-アンモニウムおよびジメチルピペリジニウムのカチオンおよびアルキルアミン、例えば、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、およびそれらの組み合わせから誘導された第四級アンモニウムのカチオン、およびその他。
【００４９】
典型的な界面活性剤は、C12-C18アルキルポリエトキシレート (1.0) サルフェート (C12-C18 E(1.0)M) 、C12-C18アルキルポリエトキシレート (2.25) サルフェート (C12-C18 E(2.25)M)、およびC12-C18アルキルポリエトキシレート (3.0) サルフェート (C12-C18 E(3.0)M)、およびC12-C18アルキルポリエトキシレート (4.0) サルフェート (C12-C18 E(4.0)M) であり、ここでMはナトリウムおよびカリウムから好都合に選択される。
【００５０】
使用すべき適当なアニオン界面活性剤は下記の文献に従う、SO3ガスでスルホン化されたC8-C20カルボン酸 (すなわち、脂肪酸) の直鎖状エステルを包含するアルキルエステルスルホネート界面活性剤である:“The Journal of the American Oil Chemical Society”、52 (1975)、pp. 323-329。適当な出発物質は、獣脂、ヤシ油、およびその他に由来する天然の脂肪族物質を包含するであろう。
特に洗濯用途のための、好ましいアルキルエステルスルホネート界面活性剤は、下記構造式のアルキルエステルスルホネート界面活性剤を含んでなる: 
【００５１】
【化２】
2006509850.tif 000003
【００５２】
式中R3はC8-C20ヒドロカルビル、好ましくはアルキル、またはそれらの組み合わせであり、R4はC1-C6ヒドロカルビル、好ましくはアルキル、またはそれらの組み合わせであり、そしてMはカチオンであり、これはアルキルエステルスルホネートと水溶性塩を形成する。適当な塩形成カチオンは、金属、例えば、ナトリウム、カリウム、およびリチウム、および置換または非置換のアンモニウムカチオン、例えば、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、およびトリエタノールアミンを包含する。好ましくは、R3はC10-C16アルキルであり、そしてR4はメチル、エチルまたはイソプロピルである。R3がC10-C16アルキルである、メチルエステルスルホネートは特に好ましい。
【００５３】
他の適当なアニオン界面活性剤は、式ROSO3Mの水溶性塩または酸であるアルキルスルホネート界面活性剤であり、式中Rは好ましくはC10-C24ヒドロカルビル、好ましくはアルキルまたはC10-C20アルキル成分を有するヒドロキシアルキル、より好ましくはC12-C18アルキルまたはヒドロキシアルキルであり、そしてMはHまたはカチオン、例えば、アルカリ金属カチオン (例えば、ナトリウム、カリウム、およびリチウム)、および置換または非置換のアンモニウム (例えば、メチル-、ジメチル-、およびトリメチルアンモニウムのカチオンおよび第四級アンモニウムのカチオン、例えば、テトラメチルアンモニウムおよびジメチルピペリジニウムのカチオンおよびアルキルアミン、例えば、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、およびそれらの組み合わせから誘導される第四級アンモニウムのカチオン、およびその他) である。典型的には、C12-C16のアルキル鎖はより低い洗浄温度 (例えば、約50 ℃以下) について好ましく、そしてC16-C18はより高い洗浄温度 (例えば、約50 ℃以上) について好ましい。
【００５４】
また、洗浄性の目的に有効な他のアニオン界面活性剤を本発明の洗濯洗剤組成物の中に添加することができる。これらのアニオン界面活性剤は下記のものを包含する: 石鹸、C8-C22第一級または第二級アルカンスルホネート、C8-C24オレフィンスルホネート、例えば、英国特許明細書第1,082,179号に記載されているように、アルカリ土類金属クエン酸塩の熱分解生成物を熱分解することによって製造されたスルホン化ポリカルボン酸、C8-C24アルキルポリグリコエーテルスルホネート (10モルまでのエチレンオキシドを含有する) の塩 (例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、および置換アンモニウムの塩、例えば、モノ-、ジ-およびトリエタノールアミン塩を包含する); アルキルグリセロールスルホネート、脂肪族アシルグリセロールスルホネート、脂肪族オレイルグリセロールスルホネート、アルキルフェノールエチレンオキシドエーテルスルホネート、パラフィンスルホネート、アルキルホスホネート、
【００５５】
イセチオネート、例えば、アシルイセチオネート、N-アシルタウレート、アルキルスクシナメートおよびスルホスクシネート、スルホスクシネートのモノエステル (特に飽和および不飽和C12-C18モノエステル) およびスルホスクシネートのジエステル (特に飽和および不飽和C6-C12ジエステル)、アシルサルコシネート、アルキル多糖のサルフェート、例えば、アルキルポリグルコシド(非イオン非硫酸化化合物が後述されている) のサルフェート、分枝鎖状第一級アルキルサルフェート、およびアルキルポリエトキシカルボキシレート、例えば、RO(CH2CH2O)k-CH2COO-M+のもの、式中RはC8-C22アルキルであり、kは1〜10であり、そしてMは可溶性塩形成カチオンである。また、樹脂酸および水素化樹脂酸、例えば、タル油の中に存在するか、あるいはそれから誘導されたロジン、水素化ロジン、および樹脂酸および水素化樹脂酸。
【００５６】
アルキルベンゼンスルホネートは高度に好ましい。アルキル基が好ましくは10〜18個の炭素原子を含有する、直鎖状 (直線の鎖) アルキルベンゼンスルホネート (LAS) は特に好ましい。
それ以上の例は“Surface Active Agents and Detergents”(Vol. IおよびII、編者Schwartz、PerryおよびBerch) に記載されている。また、種々のこのような界面活性剤は一般に米国特許第3,929,678号 (第23欄、第58行〜第29欄、第23行、引用することによって本明細書の一部とされる) に記載されている。
【００５７】
その中に添加するとき、本発明の洗剤組成物は典型的には約1〜約40重量%、好ましくは約3〜約25重量%のこのようなアニオン界面活性剤を含んでなる。
本発明の洗濯洗剤組成物は、また、カチオン、両性、双性、および半極性界面活性剤、ならびに既に本明細書に記載したもの以外の非イオンおよび/またはアニオン界面活性剤を含有することができる。
本発明の洗濯洗剤組成物において使用するために適当なカチオン洗浄性界面活性剤は、1つの長鎖ヒドロカルビル基を有するものである。このようなカチオン界面活性剤の例は、アンモニウム界面活性剤、例えば、アルキルトリメチルアンモニウムハロゲン化物、および下記式を有する界面活性剤を包含する: 
【００５８】
[R2(OR3)y][R4(OR3)y]2R5N+X-
式中R2はアルキル鎖中に約8〜約18個の炭素原子を有するアルキルまたはアルキルベンジル基であり、各R3は-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)-、-CH2CH(CH2OH)-、-CH2CH2CH2-、およびそれらの組み合わせから成る群から選択され、各R4はC1-C4アルキル、C1-C4ヒドロキシアルキル、2つのR4基の結合により形成されたベンジル環構造、-CH2CHOHCHOHCOR6CHOHCH2OH-から成る群から選択され、ここでR6は約1000より小さい分子量を有する任意のヘキソースまたはヘキソースポリマーであり、そしてyが0ではないとき、水素であり、R5はR4と同一であるか、あるいはアルキル鎖であり、ここでR2 + R5の炭素原子の総数は約18以下であり、各yは0〜約10であり、そしてy値の合計は0〜約15であり、そしてXは任意の適合性アニオンである。
【００５９】
高度に好ましいカチオン界面活性剤は下記式を有する本発明の組成物において有用な水溶性第四級アンモニウム化合物である:
R1R2R3R4N+X-  (i)
式中R1はC8-C16アルキルであり、R2、R3およびR4の各々は独立してC1-C4アルキル、C1-C4ヒドロキシアルキル、ベンジル、および-(C2H400)xHであり、ここでxは2〜5の値であり、そしてXはアニオンである。R2、R3およびR4の1以下はベンジルであるべきである。
【００６０】
R1について好ましいアルキル鎖長はC12-C15であり、特にここでアルキル基はココナツまたはヤシ仁脂肪に由来する鎖長の組み合わせであるか、あるいはオレフィン増成またはOXOアルコール合成により合成的に誘導される。
R2、R3およびR4について好ましい基はメチルおよびヒドロキシエチル基であり、そしてアニオンXはハライド、メトサルフェート、アセテートおよびホスフェートのイオンから選択することができる。
【００６１】
本発明における使用に適当な式 (i) の第四級アンモニウム化合物の例は次の通りである: 
ココナツトリメチルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
ココナツメチルジヒドロキシエチルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
デシルトリエチルアンモニウムクロライド; 
デシルジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
C12-15ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
ココナツジメチルヒドロキシエチルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
ミリスチルトリメチルアンモニウムメチルサルフェート; 
ラウリルジメチルベンジルアンモニウムクロライドまたはブロミド; 
ラウリルジメチル (エテノキシ)4 アンモニウムクロライドまたはブロミド; 
コリンエステル (R1が
【００６２】
【化３】
2006509850.tif 000004
【００６３】
であり、そしてR2R3R4がメチルである、式 (i) の化合物); 
ジアルキルイミダゾリン［式 (i) の化合物］。
また、本発明において有用な他のカチオン界面活性剤は、米国特許第4,228,044号およびEP 000 224に記載されている。
その中に添加するとき、本発明の洗剤組成物は典型的には0.2〜約25重量%、好ましくは約1〜約8重量%のこのようなカチオン界面活性剤を含有する。
【００６４】
また、両性界面活性剤は、本発明の洗濯洗剤組成物において使用するために適当である。これらの界面活性剤は、脂肪族基が直鎖状または分枝鎖状であることができる、第二級または第三級アミンの脂肪族誘導体、または複素環式第二級および第三級アミンの脂肪族誘導体として広く記載することができる。脂肪族置換基の1つは少なくとも約8個の炭素原子、典型的には約8〜約18個の炭素原子を有し、そして少なくとも1つはアニオン水可溶化基、例えば、カルボキシ、スルホネート、サルフェートを含有する。両性界面活性剤の例については、米国特許第3,929,678号 (第19欄、第18〜35行) 参照。
【００６５】
その中に添加するとき、本発明の洗剤組成物は典型的には0.2〜約15重量%、好ましくは約1〜約10重量%のこのような両性界面活性剤を含有する。
双性界面活性剤は、また、洗濯洗剤組成物において使用するために適当である。これらの界面活性剤は、第二級および第三級アミンの誘導体、複素環式第二級および第三級アミンの誘導体、または第四級アンモニウム、第四級ホスホニウムまたは第三級スルホニウム化合物の誘導体として広く記載することができる。双性界面活性剤の例については、米国特許第3,929,678号 (第19欄、第38行〜第22欄、第48行) 参照。
【００６６】
その中に添加するとき、本発明の洗剤組成物は典型的には0.2〜約15重量%、好ましくは約1〜約10重量%のこのような双性界面活性剤を含有する。
半極性界面活性剤は下記を包含する非イオン界面活性剤の特別のカテゴリーである: 約10〜約18個の炭素原子の1つのアルキル部分および約1〜約3個の炭素原子を有するアルキル基およびヒドロキシアルキル基から成る群から選択される2つの部分を含有する水溶性アミンオキシド; 約10〜約18個の炭素原子を有する1つのアルキル部分および約1〜約3個の炭素原子を有するアルキル基およびヒドロキシアルキル基から成る群から選択される2つの部分を含有する水溶性ホスフィンキシド; および約10〜約18個の炭素原子を有する1つのアルキル部分および約1〜約3個の炭素原子を有するアルキル基およびヒドロキシアルキル基から成る群から選択される1つの部分を含有する水溶性スルホキシド。
【００６７】
半極性非イオン洗浄剤界面活性剤は、下記式を有するアミンオキシド界面活性剤を包含する: 
【化４】
2006509850.tif 000005
【００６８】
式中R3は約8〜約22個の炭素原子を有するアルキル、ヒドロキシアルキル、またはアルキルフェニル基であり、R4は約2〜約3個の炭素原子を有するアルキレンまたはヒドロキシアルキレン基またはそれらの組み合わせであり、xは0〜約3であり、そして各R5は約1〜約3個の炭素原子を有するアルキルまたはヒドロキシアルキル基または約1〜約3個のエチレンオキシド基を含有するポリエチレンオキシド基である。R5基は、例えば、酸素または窒素原子を通して、互いに結合して環構造を形成することができる。
【００６９】
これらのアミンオキシド界面活性剤は、特にC10-C18アルキルジメチルアミンオキシドおよびC8-C12アルコキシエチルジヒドロキシエチルアミンオキシドを包含する。
その中に添加するとき、本発明の洗剤組成物は典型的には0.2〜約15重量%、好ましくは約1〜約10重量%のこのような半極性界面活性剤を含有する。
【００７０】
ビルダー系
本発明による組成物は、ビルダー系をさらに含んでなることができる。任意の慣用ビルダー系は本発明における使用に適当であり、アルミノケイ酸塩物質、ケイ酸塩、ポリカルボン酸塩および脂肪酸、エチレンジアミン四酢酸のような物質、金属イオン封鎖剤、例えば、アミノプロピルホスホン酸塩、特にエチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸およびジエチレントリアミンペンタメチレンホスホン酸を包含する。明らかな環境的理由で好ましさに劣るが、リン酸塩ビルダーを本発明において使用することもできる。
【００７１】
適当なビルダーは、無機イオン交換物質、普通に無機水和アルミノケイ酸塩物質、さらに詳しくは水和合成ゼオライト、例えば、水和ゼオライトA、X、B、HSまたはMAPであることができる。
他の適当な無機ビルダー物質は層状ケイ酸塩、例えば、SKS-6 (Hoechst) である。SKS-6はケイ酸ナトリウム (Na2Si2O5) から成る結晶質ケイ酸塩である。
【００７２】
1つのカルボキシ基を含有する適当なポリカルボン酸塩は、乳酸、グリコール酸およびそれらのエーテル誘導体 (ベルギー国特許第831,368号、第821,369号および第821,370号に開示されている) を包含する。2つのカルボキシ基を含有するポリカルボン酸塩は、コハク酸、マロン酸、 (エチレンジオキシ) 二酢酸、マレイン酸、ジグリコール酸、酒石酸、タルツロン酸およびフマル酸の水溶性塩、ならびにDE 2,446,686およびDE 2,446,487、米国特許第3,935,257号に記載されているエーテルカルボキシレートおよびベルギー国特許第840,623号に記載されているスルフィニルカルボキシレートを包含する。3つのカルボキシ基を含有するポリカルボン酸塩は、特に、水溶性クエン酸塩、アコニット酸塩およびシトラコン酸塩ならびに英国特許第1,379,241号に記載されているコハク酸塩誘導体、例えば、カルボキシメチルオキシコハク酸塩、オランダ国出願第7205873号に記載されているラクトキシコハク酸塩、および英国特許第1,387,447号に記載されているオキシポリカルボン酸塩物質、例えば、2-オキサ-1,1,3-プロパントリカルボン酸塩を包含する。
【００７３】
4つのカルボキシ基を含有するポリカルボン酸塩は、英国特許第1,261,829号に記載されているオキシジコハク酸塩を包含する。スルホ置換基を含有する1,1,2,2-エタンテトラカルボン酸塩、1,1,3,3-プロパンテトラカルボン酸塩は、英国特許第1,398,421号、英国特許第1,398,422号および米国特許第3,936,448号に記載されているスルホコハク酸塩誘導体、および英国特許第1,082,179号に記載されているスルホン化熱分解クエン酸塩を包含するが、ホスホン置換基を含有するポリカルボン酸塩は英国特許第1,439,000号に記載されている。
【００７４】
脂環式および複素環式ポリカルボン酸塩は、シクロペンタン-シス,シス,シス-テトラカルボン酸塩、シクロペンタジエニドペンタカルボン酸塩、2,3,4,5-テトラヒドロ-フラン-シス,シス,シス-テトラカルボン酸塩、2,5-テトラヒドロフラン-シス,ジスカルボン酸塩、2,2,5,5-テトラヒドロフラン-テトラカルボン酸塩、1,2,3,4,5,6-ヘキサン-ヘキサカルボン酸塩および多価アルコール、例えば、ソルビトール、マンニトールおよびキシリトールのカルボキシメチル誘導体を包含する。芳香族ポリカルボン酸塩は、英国特許第1,425,343号に開示されているメリト酸、ピロメリト酸およびフタル酸誘導体を包含する。
【００７５】
前述のうちで、好ましいポリカルボン酸塩は3つまでのカルボキシ基/分子を含有するヒドロキシ-カルボン酸塩、特にクエン酸塩である。
本発明の組成物における使用に好ましいビルダー系は、水不溶性アルミノケイ酸塩ビルダー、例えば、ゼオライトAまたは層状ケイ酸塩 (SKS-6) と、水溶性カルボン酸塩キレート化剤、例えば、クエン酸との混合物を包含する。
【００７６】
本発明による洗浄剤組成物中に添加するために適当なキレート化剤は、エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸 (EDDS) またはそれらのアルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、または置換アンモニウムの塩、またはそれらの混合物である。好ましいEDDS化合物は、遊離酸形態およびそれらのナトリウムまたはマグネシウム塩である。EDDSのこのような好ましいナトリウム塩の例は、Na2EDTAおよびNa4EDTAである。EDDSのこのような好ましいマグネシウム塩の例は、MgEDDSおよびMg2EDDSである。マグネシウム塩は、本発明による組成物の中への添加に最も好ましい。
【００７７】
粒状組成物において使用するためのビルダー系の部分を形成できる他のビルダー物質は、無機物質、例えば、アルカリ金属の炭酸塩、重炭酸塩、ケイ酸塩、および有機物質、例えば、有機ホスホン酸塩、アミノポリアルキレンホスホン酸塩およびアミノポリカルボン酸塩を包含する。
他の適当な水溶性有機塩は、ポリカルボン酸が2個以下の炭素原子により互いに分離されている少なくとも2つカルボキシル基を含んでなる、それらのホモ-またはコ-ポリマーの酸またはそれらの塩である。
【００７８】
この型のポリマーは、GB-A-1,596,756に開示されている。このような塩の例は、分子量2000〜5000のポリアクリレートおよび無水マレイン酸とのそれらのコポリマー、分子量20,000〜70,000、特に約40,000を有するこのようなコポリマーである。
洗浄性ビルダー塩は、通常組成物の5〜80重量%の量で添加される。液状洗浄剤についてビルダーの好ましいレベルは5%〜30%である。
【００７９】
漂白剤
本発明の洗剤組成物の中に添加できる追加の任意の洗浄成分は、漂白剤を包含する。これらの漂白剤は1種または2種以上の酸素漂白剤および、選択した漂白剤に依存して、1種または2種以上の漂白アクチベーターを包含することができる。存在するとき、酸素漂白化合物は典型的には約1%〜約25%のレベルで存在するであろう。一般に、漂白化合物は必要に応じて非液状配合物、例えば、粒状洗剤に添加される成分である。
本発明において使用する漂白剤成分は、酸素漂白剤を含む洗剤組成物に有用な任意の漂白剤、ならびにこの分野において知られている他の漂白剤であることができる。
本発明に適当な漂白剤は、活性化漂白剤または非活性化漂白剤であることができる。
【００８０】
使用できる酸素漂白剤の1つのカテゴリーは、過カルボン酸漂白剤およびそれらの塩を包含する。このクラスの漂白剤の適当な例は、マグネシウムモノペルオキシフタレート六水和物、メタ-クロロ過臭素酸のマグネシウム塩、4-ノニルアミノ-４-オキソペルオキシ酪酸およびジペルオキシドデカジオン酸を包含する。このような漂白剤は、米国特許第4,483,781号、EP 0 133 354および米国特許第4,412,934号に開示されている。また、高度に好ましい漂白剤は、米国特許第4,634,551号に記載されている6-ノニルアミノ-6-オキソペルオキシカプロン酸を包含する。
【００８１】
使用できる漂白剤の他のカテゴリーは、ハロゲン漂白剤を包含する。例えば、次亜ハロゲン酸塩の例は、トリクロロイソシアヌル酸およびナトリウムおよびカリウムのジクロロイソシアヌル酸塩およびN-クロロおよびN-ブロモアルカンスルホンアミドを包含する。このような物質は通常仕上げられた生成物の0.5〜10重量%、好ましくは1〜5重量%である。このようなハロゲン漂白剤は一般に酵素洗剤において使用するために好ましさに劣る。
【００８２】
過酸化水素放出剤は、漂白アクチベーター、例えば、テトラ-アセチルエチレンジアミン (TAED)、ノナノイルオキシベンゼンスルホネート (MOBS、米国特許第4,412,934号に記載されている) 、3,5-トリメチル-ヘキサノールオキシベンゼンスルホネート (ISONOBS、EP 120 591に記載されている) またはペンタアセチルグルコース (PAG) (これらは過加水分解して活性漂白種として過酸を生成し、漂白作用を改良する) と組み合わせて使用することができる。さらに、漂白アクチベーターC8 (6-オクタアミド-カプロイル) オキシベンゼンスルホネート、C9 (6-ノナアミド-カプロイル) オキシベンゼンスルホネートおよびC10 (6-デカンアミド-カプロイル) オキシベンゼンスルホネートまたはそれらの混合物は非常に適当である。また、適当なアクチベーターは、アシル化シトレートエステル、例えば、EP-A No. 91870207.7に記載されているものである。
【００８３】
本発明によるクリーニング組成物において使用するペルオキシ酸および漂白アクチベーターと過酸素漂白化合物とを含んでなる漂白系を包含する、有効な漂白剤は、USSN 08/136,626に記載されている。
また、洗浄および/またはすすぎプロセスの開始時または間に過酸化水素を発生することができる酵素系 (すなわち、酵素およびその基質) を添加することによって、過酸化水素を存在させることができる。このような酵素系は、欧州特許出願EP 0 537 381に開示されている。
【００８４】
また、酸素漂白剤以外の漂白剤はこの分野において知られており、そして本発明において利用することができる。特に重要な非酸素漂白剤の1つの型は、光活性化漂白剤、例えば、スルホン化亜鉛および/またはアルミニウムフタロシアニンを包含する。これらの物質は洗浄プロセス間に支持体上に付着することができる。例えば、日光中で布を吊下げ乾燥することによって、酸素の存在下に光で照射すると、スルホン化亜鉛フタロシアニンは活性化され、結局、支持体は漂白される。好ましい亜鉛フタロシアニンおよび光活性化漂白プロセスは、米国特許第4,033,718号に記載されている。典型的には、洗剤組成物は約0.025〜約1.25重量%のスルホン化亜鉛フタロシアニンを含有するであろう。
【００８５】
また、漂白剤はマンガン触媒を含んでなることができる。マンガン触媒は、例えば、下記の文献に記載されている化合物の1つであることができる: “Efficient manganese catalyst for low-temperature bleaching”、Nature (369) 1994、pp. 637-639。
【００８６】
泡抑制剤
他の任意の成分は、泡抑制剤、例えば、シリコーン、およびシリカ-シリコーン混合物である。一般に、シリコーンはアルキル化ポリシロキサン物質により代表されるが、シリカは通常微細な形態であり、例えば、シリカエーロゲルおよびキセロゲルおよび種々の形態の疎水性シリカである。これらの物質は粒子として混入することができ、ここで泡抑制剤は水溶性または水分散性、実質的に非表面活性洗剤不透過性担体の中に好都合に解放可能に混入される。選択的に、泡抑制剤は液状担体中に溶解または分散させることができ、そして1または2以上の他の成分上に噴霧することによって適用することができる。
【００８７】
好ましいシリコーン泡抑制剤は、米国特許第3,933,672号に記載されている。他の特に有用な泡抑制剤は、ドイツ国特許出願DTOS 2,64,126に記載されているシリコーン自己乳化性泡抑制剤である。このような化合物の例はDC-544 (Dow Corningから商業的に入手可能である) であり、これはシロキサン-グリコールコポリマーである。特に好ましい泡抑制剤は、シリコーン油と2-アルキル-アルカノールとの混合物を含んでなる泡抑制剤である。適当な2-アルキル-アルカノールは、商品名Isofol 12Rで商業的に入手可能である2-ブチル-オクタノールである。
【００８８】
このような泡抑制剤系は、欧州特許出願EP 0 593 841に記載されている。
特に好ましいシリコーン泡抑制剤は、欧州特許出願No. 92201649.8に記載されている。前記組成物は、ヒュームド非多孔質シリカ、例えば、AerosilRと組み合わせたシリコーン/シリカ混合物を含んでなることができる。
前述の泡抑制剤は、通常、組成物の0.001〜2重量%、好ましくは0.01〜1重量%のレベルで存在する。
【００８９】
他の成分
洗剤組成物において使用される他の成分、例えば、汚れ懸濁剤または再付着防止剤、汚れ解放剤、蛍光増白剤、研磨剤、殺菌剤、曇り抑制剤、着色剤、および/またはカプセル封入または非カプセル封入香料を使用することができる。
特に適当なカプセル封入物質は、GB 1,464,616に記載されているような、多糖のマトリックスおよびポリヒドロキシ化合物から成る水溶性カプセルである。
【００９０】
他の適当な水溶性カプセル封入物質は、米国特許第3,455,838号に記載されているような、置換ジカルボン酸の非ゲル化澱粉に由来するデキストリンを含んでなる。これらの酸-エステルデキストリンは、好ましくは、蝋質トウモロコシ、蝋質モロコシ、サゴヤシ、タピオカおよびジャガイモのような澱粉から製造される。前記カプセル封入物質の適当な例はN-Lok (National Starch製) を包含する。N-Lokカプセル封入物質は、改質されたトウモロコシ澱粉およびグルコースから成る。澱粉は一官能価置換グループ、例えば、オクテニルコハク酸無水物を添加することによって変性される。
【００９１】
洗剤中に使用される典型的な再付着防止剤は、水溶性の、一般に、有機コロイドであり、例えば、ポリマーのカルボン酸、例えばポリアクリル酸またはポリマレイン酸またはそれらのコポリマーの塩、にかわ、ゼラチン、澱粉またはセルロースのエーテルカルボン酸またはエーテルスルホン酸の塩、またはセルロースまたは澱粉のスルホン酸エステルの塩を包含する。また、酸性基を含有する水溶性ポリアミドは再付着防止剤として使用される。また、前述したもの以外の適当な澱粉調製物および他の澱粉生成物、例えば、部分的に加水分解された澱粉を使用できる。ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシエチルセルロースおよびそれらの混合物を使用することが好ましい。これらの物質は、通常、組成物の0.5〜10重量%、より好ましくは0.2〜8重量%、最も好ましくは0.5〜6重量%のレベルで使用される。
【００９２】
好ましい蛍光増白剤はアニオン性であり、それらの例は次の通りである: 4,4’-ビス-(2-ジエタノールアミノ-4-アニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)-スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、 4,4’-ビス-(2-モルホリノ-4-アニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)-スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、4,4’-ビス-(2,4-ジアニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)-スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、4’,4”-ビス-(2,4-ジアニリノ-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2-スルホン酸ナトリウム、4,4’-ビス-(2-アニリノ-4-(N-メチル-N-2-ヒドロキシエチルアミノ)-s-トリアジン-6-イルアミノ)スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、4,4’-ビス-(4-フェニル-2,1,3-トリアゾル-2-イル)スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、4,4’-ビス-(2-アニリノ-４-(1-メチル-2-ヒドロキシエチルアミノ)-s-トリアジン-6-イルアミノ)-スチルベン-2,2’-ジスルホン酸二ナトリウム、2-(2-スチビル-4”-(ナフト-1’,2’,4,5)-1,2,3-トリアゾル-2”-スルホン酸ナトリウムおよび4,4’-ビス(2-スルホスチリル)ビフェニル。
【００９３】
他の有用なポリマー物質は、ポリエチレングリコール、特に分子量1000〜10000、より好ましくは2000〜8000、最も好ましくは約4000のポリエチレングリコールである。これらは0.20〜5重量%、より好ましくは0.25〜2.5重量%のレベルで使用される。これらのポリマーおよび前述のホモポリマーまたはコポリマーのポリカルボン酸塩は、白色度の維持、布帛の灰付着、および遷移金属の存在下の粘土、タンパク質および酸化可能な汚れに対するクリーニング性能を改良するために有効である。
【００９４】
本発明の組成物において有用な汚れ解放剤は、通常、種々の配置でエチレングリコールおよび/またはポリプロピレングリコール単位を有するテレフタル酸のコポリマーおよびターポリマーである。このようなポリマーの例は、米国特許第4,116,885号および第4,711,730号およびEP 0 272 033に開示されている。EP 0 272 033に従う特に好ましいポリマーは下記式を有する: 
(CH3(PEG)43)0.75(POH)0.25[(T-PO)28(T-PEG)0.4]T(POH)0.25((PEG)43CH3)0.75
式中PEGは-(OC2H4)O-であり、POは(OC3H6O)であり、そしてTは(pOOC6H4CO)である。
【００９５】
また、ジメチルテレフタレート、ジメチルスルホイソフタレート、エチレングリコールおよび1,2-プロパンジオールのランダムコポリマーとして変性されたポリエステルは非常に有用であり、末端基は大部分がスルホベンゾエートおよび二次的にエチレングリコールおよび/または1,2-プロパンジオールのモノエステルから成る。ターゲットは両端がスルホベンゾエート基でキャップされたポリマーを得ることであり、本発明における前記コポリマーの「大部分」は、本発明の関係において、スルホベンゾエート基により末端キャップされているであろう。しかしながら、いくつかのコポリマーは完全より少なくキャップされ、したがってそれらの末端基はエチレングリコールおよび/または1,2-プロパンジオールのモノエステルから成り、したがって「二次的に」このような種から成る。
【００９６】
本発明において選択されるポリエステルは、約46重量%のジメチルテレフタレート、約16重量%の1,2-プロパンジオール、約10重量%のエチレングリコール、約13重量%のジメチルスルホ安息香酸および約15重量%のスルホイソフタル酸を含有し、約3,000の分子量を有する。ポリエステルおよびそれらの製造方法は、EP 311 342に詳述されている。
【００９７】
柔軟剤
また、布帛柔軟剤を本発明に従う洗濯洗剤組成物の中に混入することができる。これらの柔軟剤は、無機または有機の型であることができる。無機柔軟剤は、GB-A-1 400898および米国特許第5,019,292号に開示されているスメクタイト粘土により例示される。有機布帛柔軟剤は、GB-A-1 514 276およびEP 0 011 340に開示されている水不溶性第三級アミン、それらとEP-B-0 026 528に開示されているC12-C14第四級アンモニウム塩との組み合わせ、およびEP 0 242 919に開示されているジ長鎖アミドを包含する。布帛柔軟剤系の他の有用な有機成分は、EP 0 299 575およびEP 0 313 146に開示されている高分子量ポリエチレンオキシド物質を包含する。
【００９８】
スメクタイト粘土のレベルは通常5〜15重量%、より好ましくは8〜12重量%の範囲であり、この物質は乾式混合成分として配合物の残部に添加される。有機布帛柔軟剤、例えば、水不溶性第三級アミンまたはジ長鎖アミド物質は0.5〜5重量%、通常1〜3重量%のレベルで混入されるが、高分子量ポリエチレンオキシド物質および水溶性カチオン性物質は0.1〜2重量%、通常0.15〜1.5重量%のレベルで添加される。これらの物質は通常組成物の噴霧乾燥した部分に添加されるが、いくつかの場合において、これらの物質を乾式混合した粒子に添加するか、あるいは組成物の他の固体状成分に溶融液体として添加することはいっそう好都合であることがある。
【００９９】
ポリマーの染料転移抑制剤
本発明による洗剤組成物は、また、0.001〜10重量%、好ましくは0.01〜2重量%、より好ましくは0.05〜1重量%のポリマーの染料転移抑制剤を含んでなることができる。前記ポリマーの染料転移抑制剤は、染料が着色された布帛から洗剤組成物で洗浄される布帛上に転移するのを防止するために、通常洗剤組成物の中に混入される。これらのポリマーは、染料が洗浄液中の他の物品に結合する機会を有する前に、染色された布帛から洗浄除去された不安定染料と錯化しまたはそれを吸着する能力を有する。
【０１００】
特に適当なポリマーの染料転移抑制剤は、ポリアミンN-オキシドポリマー、N-ビニル-ピロリドンおよびN-ビニルイミダゾールのコポリマー、ポリビニルピロリドンポリマー、ポリビニルオキサゾリドンおよびポリビニルイミダゾールまたはそれらの混合物である。
また、このようなポリマーの添加は本発明による酵素の性能を増強する。
【０１０１】
酵素
本発明の洗剤組成物は、本発明の態様において、上に定義した再付着防止作用を有するエンドグルカナーゼのほかに、クリーニング性能および/または布帛管理利益を提供する1種または2種以上の酵素を含んでなることができる。
このような酵素は、ある種のプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、ペルオキシダーゼ、オキシダーゼ (例えば、ラッカーゼ) 、およびヘミセルラーゼ、例えば、マンナナーゼおよびペクチン酸リアーゼを包含する。
【０１０２】
プロテアーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のプロテアーゼを使用することができる。適当なプロテアーゼは、動物、植物または微生物由来のプロテアーゼを包含する。微生物由来は好ましい。化学的または遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。プロテアーゼはセリンプロテアーゼ、好ましくはアルカリ性微生物プロテアーゼまたはトリプシン様プロテアーゼであることができる。アルカリ性プロテアーゼの例は、スブチリシン、特にバシラス (Bacillus) に由来するもの、例えば、スブチリシンNovo、スブチリシンCarlsberg、スブチリシン309、スブチリシン147およびスブチリシン168 (WO 89/06279に記載されている) である。トリプシン様プロテアーゼの例はトリプシン (例えば、ブタまたはウシ由来) およびWO 89/06270に記載されているフザリウム (Fusarium) プロテアーゼである。
【０１０３】
好ましい商業的に入手可能なプロテアーゼ酵素は、商品名EverlaseTM、KannaseTM、AlcalaseTM、SavinaseTM、PrimaseTM、DurazymTM、およびEsperaseTMで販売されているもの (Novozymes A/S、デンマーク国) 、商品名Maxatase、Maxacal、Maxapem、Properase、PurafectおよびPurafect OXPで販売されているもの (Genencor International) 、および商品名OpticleanおよびOptimaseで販売されているもの (Solvay Enzymes) を包含する。プロテアーゼ酵素は本発明による組成物中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.0001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
【０１０４】
リパーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のリパーゼを使用することができる。適当なリパーゼは、細菌または真菌由来のリパーゼを包含する。化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。 
【０１０５】
有用なリパーゼの例は次の通りである: フミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) リパーゼ、例えば、EP 258 068およびEP 305 216に記載されているもの、リゾムコル・ミエヘイ (Rhizomucor miehei) リパーゼ、例えば、EP 238 023に記載されているもの、カンジダ (Candida) リパーゼ、例えば、カンジダ・アンタルクチカ (C. antarctica) リパーゼ、例えば、EP 214 761に記載されているカンジダ・アンタルクチカ (C. Antarctica) リパーゼAまたはB、シュードモナス (Pseudomonas) リパーゼ、例えば、EP 218 272に記載されているシュードモナス・アルカリゲネス (P. alcaligenes) およびシュードモナス・シュードアルカリゲネス  (P. pseudoalcaligenes) リパーゼ、例えば、EP 331 376に記載されているシュードモナス・セパシア (P. cepacia) リパーゼ、例えば、GB 1,372,034に開示されているシュードモナス・スツゼリ (P. stutzeri) リパーゼ、シュードモナス・フルオレッセンス (P. fluorescens) リパーゼ、バシラス (Bacillus) リパーゼ、例えば、バシラス・サチリス (B. subtilis) リパーゼ (Dartosis他、(1993)、Biochimica et Biophysica Acta 1131: 253-260)、バシラス・ステアロサーモフィラス (B. stearothermophilus) リパーゼ (JP 64/744992) およびバシラス・プミラス (B. pumillus) リパーゼ (WO 91/16422)。
【０１０６】
さらに、多数のクローニングされたリパーゼは有用であり、下記のものを包含する: Yamaguchi他、(1991)、Gene 103、61-67) に記載されているペニシリウム・カメンベルチイ (Penicillium camembertii) リパーゼ、ゲトリカム・カンジヅム (Geotricum candidum) リパーゼ (Schimada Y. 他、J. Biochem. 106: 383-388) 、および種々のリゾプス (Rhizopus) リパーゼ、例えば、リゾプス・デレマル (R. delemar) リパーゼ (Hass M. J. 他、(1991)、Gene 109: 117-113)、リゾプス・ニベウス (R. niveus) リパーゼ (Kugimiya他、(1992)、Biosci. Biotech. Biochem. 56: 716-719) およびリゾプス・オリゼ (R. oryzae) リパーゼ。
【０１０７】
また、他の型の脂肪分解酵素、例えば、クチナーゼ、例えば、WO 88/09367に記載されているシュードモナス・メンドナ (Pseudomonas mendocina) に由来するクチナーゼ、またはフザリウム・ソラニ・ピシ (Fusarium solani pisi) (WO 90/09446に記載されている) に由来するクチナーゼは有用である。
【０１０８】
好ましい態様において、リパーゼはWO 00/60063に記載されているフミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) DSM 4109の変異型である。改良された第1洗浄性能をもつWO 00/60063中の実施例に開示されている変異型、すなわち、下記のものは特に好ましい: T231R + N233R; G91A + D96W + E99K + G263Q + L264A + I265T + G266D + T267A + L269N + 270AGGFSWRRYRSAESVDKRATMTDAELEKKLNSYVQMDKEYVKNNQARS; R209P  + T231R + N233R; N33Q + D96S + T231R + N233R + Q249R; E99N + N101S + T231R + N233R + Q249R; E99N + N101S + T231R + N233R + Q249R。
【０１０９】
特に適当なリパーゼは、リパーゼ、例えば、M1 LipaseTMおよびLipomaxTM (Genencor)、LipolaseTMおよびLipolase UltraTM (Novozymes A/S)、およびLipase P “Amano” (Amano Pharmaceutical Co. Ltd.) である。適当なクチナーゼは、LumafastTM (Genencor Inc. から入手可能である) である。
リパーゼは通常本発明による洗浄剤組成物中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
【０１１０】
アミラーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のアミラーゼ (αおよび/またはβ) を使用することができる。適当なアミラーゼは、細菌または真菌由来のリパーゼを包含する。化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。アミラーゼは、例えば、GB 1,296,839にいっそう詳細に記載されているバシラス・リヘニフォルミス (B. licheniformis) の特別の株から得られるα-アミラーゼを包含する。商業的に入手可能なアミラーゼは、NatalaseTM、TermamylTM Ultra、DuramlyTM、TermamylTM、FungamylTMおよびBANTM (Novozymes A/Sから入手可能である) およびRapidaseTMおよびMaxamylTM (Genencorから入手可能である) を包含する。
【０１１１】
好ましい態様において、α‐アミラーゼはバシラス (Bacillus) 種NCIB 12289、NCIB 12512、NCIB 12513およびDSM 9375に由来する。WO 95/26397の配列番号1および2に示されるα‐アミラーゼは特に好ましい。
他の好ましい態様において、α‐アミラーゼはWO 00/60060 (引用することによって本明細書の一部とされる) 中の配列番号1として開示されているバシラス (Bacillus) 種DSM 12649に由来するAA560 α‐アミラーゼである。実施例7および8 (引用することによって本明細書の一部とされる) 中に開示されているAA560変異型を包含する、AA560 α‐アミラーゼの変異型は特に好ましい。
【０１１２】
アミラーゼは通常洗浄剤組成物中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.0001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
【０１１３】
セルラーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のセルラーゼを使用することができる。適当なセルラーゼは、細菌または真菌由来のリパーゼを包含する。化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。適当なセルラーゼは、米国特許第4,435,307号に開示されており、これにはフミコラ・インソレンス (Humicola insolens) から産生される真菌セルラーゼが開示されている。特に適当なセルラーゼは色管理利益を有するセルラーゼである。このようなセルラーゼの例は、欧州特許出願第0 495 257号に開示されているセルラーゼである。
【０１１４】
好ましい態様において、セルラーゼはチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) セルラーゼ、好ましくはWO 96/29397中の配列番号9および本明細書において配列番号9に開示されているセルラーゼまたはそれに対して少なくとも70%の同一性をもつ酵素である。好ましい態様において、セルラーゼはWO 98/12307の実施例1に記載されているチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) 変異型である。
【０１１５】
商業的に入手可能なセルラーゼは、フミコラ・インソレンス (Humicola insolens) 株により産生されるCelluzyme(商標) およびCarezyme(商標) およびRenozyme(商標)(Novozymes A/S)、およびKAC-500 (B)TM (Kao Corporation) である。
セルラーゼは通常洗浄剤組成物中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.0001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
【０１１６】
マンナナーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のマンナナーゼを使用できる。適当なマンナナーゼは細菌または真菌由来のものを包含する。化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
好ましい態様において、マンナナーゼは、属バシラス (Bacillus) の株、特に配列番号2の位置31-330にまたはWO 99/64619の配列番号5に開示されているバシラス (Bacillus) 種1633またはバシラス・アガラドヘレンス (Bacillus agaradhaerens) 、例えば、基準株DSM 8721に由来する。さらに、適当なマンナナーゼはPurabrite (Genencor Inc.から入手可能である) およびMannaway(商標)(Novozymes A/S製) である。
【０１１７】
ペクチン酸リアーゼ: アルカリ性溶液中で使用するために適当な任意のペクチン酸リアーゼを使用できる。適当なペクチン酸リアーゼは細菌または真菌由来のものを包含する。化学的にまたは遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
好ましい態様において、ペクチン酸リアーゼは、属バシラス (Bacillus) の株、バシラス・サチリス (Bacillus subtilis) の株、特に配列番号2に開示されているバシラス・サチリス (Bacillus subtilis) DSM 14218またはWO 02/092741の実施例6に開示されているその変異型である。
【０１１８】
ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ: ペルオキシダーゼ酵素は過酸化水素またはその源 (例えば、過炭酸塩、過臭素酸塩または過硫酸塩) と組み合わせて使用される。オキシダーゼ酵素は酸素と組み合わせて使用される。両方の型の酵素は、「溶液漂白」に使用される、すなわち、染色された布帛を洗浄液中で、好ましくは、例えば、WO 94/12621およびWO 95/01426に記載されている増強剤と一緒に、洗浄するとき、繊維材料の染料が染色された布帛から他の布帛へ転移するのを防止ために使用される。適当なペルオキシダーゼ/オキシダーゼは、植物、細菌または真菌由来のものを包含する。化学的または遺伝的に修飾された突然変異体が包含される。
【０１１９】
ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ酵素は通常洗浄剤組成物の中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.0001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
前述の酵素の混合物、特にプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼおよびセルラーゼの2、3、4、5、6またはそれ以上の異なる酵素の混合物がここにおいて考えられる。
【０１２０】
本発明の酵素、または洗浄剤組成物中に混入される任意の他の酵素は、通常洗浄剤組成物中に組成物の0.000001〜2重量%の酵素タンパク質、好ましくは0.00001〜1重量%の酵素タンパク質、より好ましくは0.0001〜0.5重量%の酵素タンパク質、なおより好ましくは0.001〜0.2重量%の酵素タンパク質のレベルで混入される。
【０１２１】
酵素は液状溶液または粒体の形態で混入することができる。非ダスチング粒体は、例えば、米国特許第4,106,991号および米国特許第4,661,452号 (両方はNovo Industri A/S、現在Novozymes A/S) に開示されているように製造することができ、そしてこの分野において知られている方法により必要に応じて被覆することができる。蝋状被覆物質の例は次の通りである: 分子量1000〜20000を有するポリ (エチレンオキシド) 生成物 (ポリエチレングリコール、PEG); 16〜50エチレンオキシド単位を有するエトキシル化ノニルフェノール; アルコールが12〜20個の炭素原子を有しかつ15〜80エチレンオキシド単位が存在する、エトキシル化脂肪族アルコール; 脂肪族アルコール; 脂肪酸; および脂肪酸のモノ-またはジ-およびトリグリセリド。流動床技術による適用に適当な皮膜形成被覆物質の例は、GB 1483591に記載されている。
【０１２２】
洗剤組成物の実施例: 本発明による洗剤組成物は、液体、ペースト、ゲル、バー、タブレットまたは粒体の形態であることができる。
本発明による粒状組成物は、また、「圧縮形態」であることができる、すなわち、それらは普通の粒状洗浄剤よりも比較的高い密度、すなわち、550〜950 g/lを有することができる; このような場合において、本発明による粒状洗剤組成物は、普通の粒状洗浄剤に比較して、少量の「無機充填剤塩」を含有するであろう; 典型的な充填剤塩はアルカリ土類金属の硫酸塩および塩化物、典型的には硫酸ナトリウムである;「圧縮」洗浄剤は典型的には10%以下の塩を含んでなる。また、本発明による液状組成物は「濃縮された形態」であることができ、このような場合において、本発明による液状洗剤組成物は、普通の液状洗浄剤に比較して、少量の水を含有するであろう。典型的には、濃縮された液状洗浄剤の水分は、組成物の30重量%より少なく、より好ましくは20重量%より少なく、最も好ましくは10重量%より少ない。
【０１２３】
本発明の組成物は、例えば、洗濯添加剤組成物、および汚染した布帛の前処理において使用するために適当な組成物、リンス添加布帛柔軟剤組成物、および一般に家庭の硬質表面クリーニング作業および機械または手による皿洗浄作業において使用する組成物を包含する、手および機械による洗濯洗剤組成物として配合することができる。
下記の実施例により、本発明の組成物を説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定しないか、あるいは他の方法でその範囲を規定しない。
【０１２４】
洗剤組成物において、略した成分識別は下記の意味を有する: 
LAS:               直鎖状C12アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム
TAS:               獣脂アルキル硫酸ナトリウム
XYAS:              C1X-C1Yアルキル硫酸ナトリウム
SS:                式2-ブチルオクタン酸の第二級石鹸界面活性剤
25EY:              平均Yモルのエチレンオキシドと縮合した主として直鎖状のC12-C15第一級アルコール
45EY:              平均Yモルのエチレンオキシドと縮合した主として直鎖状のC14-C15第一級アルコール
XYEZS:             平均Zモルのエチレンオキシド/モルと縮合したC1X-C1Yアルキル硫酸ナトリウム
非イオン:          商品名Plurafax LF404 (BASF GmbHから入手可能である) の3.8の平均エトキシル化度および4.5の平均プロポキシル化度を有するC13-C15混合エトキシル化/プロポキシル化脂肪族アルコール
【０１２５】
CFAA:              C12-C14アルキルN-メチルグルカミド
TFAA:              C16-C18アルキルN-メチルグルカミド
ケイ酸塩:          非晶質ケイ酸ナトリウム (SiO2:Na2O比= 2.0) 
NaSKS-6:           式δ-Na2Si2O5の結晶質層状ケイ酸塩
炭酸塩:            無水炭酸ナトリウム
リン酸塩:          トリポリリン酸ナトリウム
MA/AA:             1: 4マレイン酸/アクリル酸のコポリマー、平均分子量約80,000
ポリアクリレート:  商品名Sokalan PA30 (BASF Gmbhから入手可能である) の平均分子量約8,000のポリアクリレートホモポリマー
ゼオライトA:       1〜10マイクロメーターの範囲の一次粒度を有する式Na12(AlO2SiO2)12・27H2Oの水和アルミノケイ酸ナトリウム
【０１２６】
クエン酸塩:        クエン酸三ナトリウム二水和物
Citric:            クエン酸
過ホウ素酸塩:      実験式NaBO2・H2O2の無水過臭素酸ナトリウム一水和物
PB4:               無水過臭素酸ナトリウム四水和物
過炭酸塩:          実験式2Na2CO3・3H2O2の無水過炭酸ナトリウム
TAED:              テトラアセチルエチレンジアミン
CMC:               ナトリウムカルボキシメチルセルロース
DETPMP:            ジエチレントリアミンペンタ (メチレンホスホン酸)、商品名Dequest 2060 (Monsantoから入手可能である) 
【０１２７】
PVP:               ポリビニルピロリドンポリマー
EDDS:              エチレンジアミン-N,N’-ジコハク酸、ナトリウム塩の形態の[S,S]異性体
泡抑制剤:          25%パラフィン蝋、融点50 ℃、17%疎水性シリカ、58%パラフィン油
粒状泡抑制剤:      12%シリコーン/シリカ、18%ステアリルアルコール、70%粒体の形態の澱粉
硫酸塩:            無水硫酸ナトリウム
HMWPEO:            高分子量ポリエチレンオキシド
TAE 25:            獣脂アルコールエトキシレート (25) 
【実施例】
【０１２８】
洗剤実施例1.
本発明に従う粒状布帛クリーニング組成物を次のように調製することができる:
直鎖状C12アルキルベンゼン            6.5
スルホン酸ナトリウム
硫酸ナトリウム                      15.0
ゼオライトA                         26.0
ニトリロ三酢酸ナトリウム             5.0
酵素 (エンド-グルカナーゼを含む)     0.1
PVP                                  0.5
TAED                                 3.0
ホウ酸                               4.0
過ホウ素酸塩                        18.0
フェノールスルホネート               0.1
少量成分                             100まで
【０１２９】
洗剤実施例2.
本発明に従う圧縮粒状布帛クリーニング組成物(密度800 g/l) を次のように調製することができる:
45AS                                 8.0
25E3S                                2.0
25E5                                 3.0
25E3                                 3.0
TFAA                                 2.5
ゼオライトA                         17.0
NaSKS-6                             12.0
クエン酸                             3.0
炭酸塩                               7.0
MA/AA                                5.0
CMC                                  0.4
酵素 (エンド-グルカナーゼを含む)     0.1
TAED                                 6.0
過炭酸塩                            22.0
EDDS                                 0.3
粒状泡抑制剤                         3.5
水/少量成分                          100まで
【０１３０】
洗剤実施例3.
着色した布帛の洗濯において特に有効である、本発明に従う粒状布帛クリーニング組成物は、次のように調製することができる:
LAS                                 10.7             -
TAS                                  2.4             -
TFAA                                  -             4.0
45AS                                 3.1           10.0
45E7                                 4.0             -
25E3S                                 -             3.0
68E11                                1.8             -
25E5                                  -             8.0
クエン酸塩                          15.0            7.0
炭酸塩                                -            10
クエン酸                             2.5            3.0
ゼオライトA                         32.1           25.0
NaSKS-6                               -             9.0
MA/AA                                5.0            5.0
DETPMP                               0.2            0.8
酵素 (エンド-グルカナーゼを含む)     0.10           0.05
ケイ酸塩                             2.5             -
硫酸塩                               5.2            3.0
PVP                                  0.5             -
ポリ(4-ビニルピリジン)-N-             -             0.2
オキシド/ビニルイミダゾールと
ビニルピリドンとのコポリマー
過ホウ素酸塩                         1.0             -
フェノールスルホネート               0.2             -
水/少量成分                                100まで
【０１３１】
洗剤実施例4.
「洗浄に通して柔軟化」能力を提供する、本発明に従う粒状布帛クリーニング組成物は、次のように調製することができる:
45AS                                  -            10.0
LAS                                  7.6             -
68AS                                 1.3             -
45E7                                 4.0             -
25E3                                  -             5.0
ココ-アルキル-ジメチルヒドロキ       1.4            1.0
シ-エチルアンモニウムクロライド
クエン酸塩                           5.0            3.0
NaSKS-6                               -            11.0
ゼオライトA                         15.0           15.0
MA/AA                                4.0            4.0
DETPMP                               0.4            0.4
過ホウ素酸塩                        15.0             -
過炭酸塩                              -            15.0
TAED                                 5.0            5.0
スメクタイト粘土                    10.0           10.0
HMWPEO                                -             0.1
酵素 (エンド-グルカナーゼを含む)     0.10           0.05
ケイ酸塩                             3.0            5.0
炭酸塩                              10.0           10.0
粒状泡抑制剤                         1.0            4.0
CMC                                  0.2            0.1
水/少量成分                                100まで
【０１３２】
洗剤実施例5.
本発明に従う強力粒状布帛クリーニング組成物は、次のように調製することができる:
I             II
LAS酸型                               -            25.0
クエン酸                             5.0            2.0
25AS酸型                             8.0             -
25AE2S酸型                           3.0             -
25AE7                                8.0             -
CFAA                                 5               -
DETPMP                               1.0            1.0
脂肪酸                               8               -
オレイン酸                            -             1.0
エタノール                           4.0            6.0
プロパンジオール                     2.0            6.0
酵素 (エンド-グルカナーゼを含む)     0.10           0.05
ココ-アルキル-ジメチルヒドロキ-       -             3.0
シ-エチルアンモニウムクロライド
スメクタイト粘土                      -             5.0
PVP                                  2.0             -
水/少量成分                                100まで
【０１３３】
洗剤組成物の使用: 本発明の酵素組成物は、繊維材料および被服の家庭用または産業的洗濯用洗剤組成物において有効であり、そして本発明の酵素または酵素調製物を含有する洗浄溶液を使用する機械洗浄プロセスの1または2以上の洗浄サイクル間に、布帛を処理することを含んでなる布帛の機械洗浄処理プロセスにおいて有効である。
また、本発明の酵素組成物は、家庭用または産業的皿または食卓用金物類または他の硬質表面の洗浄用洗剤組成物において有効であり、そして本発明の酵素または酵素調製物を含有する洗浄溶液を使用する処理を含んでなる皿または食卓用金物類およびその他の処理プロセスにおいて有効である。
【０１３４】
典型的には、洗浄プロセスにおいて使用する洗剤組成物は、慣用の成分、例えば、界面活性剤 (アニオン、非イオン、双生イオン、両性イオン) および他の成分、例えば、WO 97/01629 (これは引用することによって本明細書の一部とされる) に記載されている成分を含んでなる。
本発明のエンド-グルカナーゼは、汚れ除去の改良および汚れ再付着の減少のような利点を提供する。ある種の汚れ、例えば、ある種の食物の汚れは、汚れの完全な除去を困難とするβ-グルカンを含有する。また、布帛のセルロース繊維は、特に「非結晶質」および表面領域において、この酵素により分解されるグルカンポリマーを有することがある。このようなグルカンの加水分解は、汚れ中または布帛上において、洗浄プロセス間に、布帛への汚れの結合を減少させる。
【０１３５】
家庭の洗濯プロセスは、ある範囲の条件下に実施される。普通に、洗浄時間は5〜60分であり、そして洗浄温度は10〜60℃、最も普通には20〜40℃である。延長したソーキングが普通に使用される。洗浄溶液は通常中性またはアルカリ性、最も普通にはpH 5〜11.5である。漂白剤は普通に、特に白色布帛の洗濯に、そして硬質表面の洗浄において使用される。これらの漂白剤は  普通にペルオキシド漂白剤、例えば、過ホウ素酸ナトリウム、過炭酸ナトリウムまたは過酸化水素である。
【０１３６】
材料および方法
菌株およびドナー生物
前述のバシラス (Bacillus) 種DSM 12648は、配列番号1に示すエンド-グルカナーゼをコードするDNA配列を含んでなる。
バシラス・サチリス (B. subtilis) PL 2306: この菌株は、既知のバシラス・サチリス (Bacillus subtilis) セルラーゼ遺伝子の転写単位において崩壊し、セルラーゼ陰性細胞を生ずる、崩壊したaprおよびnpr遺伝子 (Diderichsen B.、Wedsted U.、Hedegaard L.、Jensen B. R.、Sjφholm C. (1990) Cloning of aldB、これはアルファ-アセトラクテートデカルボキシラーゼ、バシラス・ブレビス (Bacillus brevis) からのエキソ酵素をコードする、J. Bacteriol. 172: 4315-4321) を有するバシラス・サチリス (B. subtilis) DN 1885である。この崩壊は本質的に下記の文献に記載されているようにして実施した: 編者A. L. Sonenshein、J. A. HochおよびRichard Losick (1993) Bacillus subtilis and other Gram-Positive Bacteria、American Society for microbiology、p. 618。
コンピテント細胞を下記の文献に記載されているように調製し、形質転換した: Yasbin R. E.、Wilson G. A. およびYoung F. E. (1975) Transformation and transfection in lysogenic strains of Bacillus subtilis: evidence for selective induction of prophage in complete cells. J. Bacteriol. 121: 296-304。
【０１３７】
一般的分子生物学的方法
特記しない限り、すべてのDNAの操作および形質転換は分子生物学の標準的方法を使用して実施した (Sambrook他 (1989) Molecular Cloning : A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor、NY; Ausubel F. M. 他 (編者) “Current protocol in Molecular Biology”、John Wiley and Sons、1944; Harwood C. R. およびCutting S. M. (編者)“Molecular Biological Methods for Bacillus”、John Wiley and Sons、1990)。
DNA操作のための酵素は、製造業者の使用説明書に従い使用した (例えば、制限エンドヌクレアーゼ、リガーゼおよびその他はNew England Biolabs, Inc. から入手可能である) 。
【０１３８】
プラスミド
pMOL944。このプラスミドはpUB110誘導体であり、このプラスミドをバシラス・サチリス (Bacillus subtilis) において増殖可能とする因子、カナマイシン耐性遺伝子を本質的に含有し、バシラス・リヘニフォルミス (B. licheniformis) ATCC 14580のamyL遺伝子からクローニングされた強いプロモーターおよびシグナルペプチドを有する。このシグナルペプチドはSacII部位を含有し、この部位はシグナルペプチドと融合したタンパク質の成熟部分をコードするDNAをクローニングするためにシグナルペプチドを好適とする。これは細胞の外部に向けられたプレタンパク質を発現させる。
このプラスミドは通常の遺伝子操作により構築され、そしてこれを簡単に後述する。
【０１３９】
プラスミドpMOL944の構築
pUB110プラスミド (McKenzie T. 他、1986、Plasmid 15: 93-103) をユニーク制限酵素NciIで消化した。プラスミドpDN1981上にコードされたamyLプロモーターから増幅されたPCRフラグメント (P. L. Jφrgensen他、1990、Gene 96: 37-41) をNciIで消化し、NciI消化pUB110の中に挿入してプラスミドpSJ2624を形成した。
【０１４０】
使用した2つのPCRプライマーは下記の配列を有する: 
#LWN5494 (配列番号5) 
5’-GTCGCCGGGGCGGCCGCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3’
#LWN5495 (配列番号6) 
5’-GTCGCCCGGGAGCTCTGATCAGGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATGAGGCAGCAAGAAGAT-3’ 
#LWN5494はNotI部位をプラスミドの中に挿入する。
【０１４１】
次いでプラスミドpSJ2624をSacIおよびNotIで消化し、そしてpDN1981上にコードされたamyLプロモーター上で増幅された新しいPCRフラグメントをSacIおよびNotIで消化し、このDNAフラグメントをSacI-NotI消化pSJ2624の中に挿入してプラスミドpSJ2670を形成した。
このクローニングは、同一であるが、反対方向のプロモーターを使用する第1 amyLプロモーターのクローニングと置換する。PCR増幅に使用した2つのプライマーは下記の配列を有する: 
#LWN5938 (配列番号7) 
5’-GTCGGCGGCCGCTGATCACGTACCAAGCTTGTCGACCTGCAGAATGAGGCAGCAAGAAGAT-3’ 
#LWN5939 (配列番号8) 
5’-GTCGGAGCTCTATCAATTGGTAACTGTATCTCAGC-3’ 
【０１４２】
プラスミドpSJ2670を制限酵素PatIおよびBclIで消化し、アルカリ性アミラーゼSP722 (特許# WO9526397-A1) をコードするクローニングされたDNA配列から増幅したPCRフラグメントをPatIおよびBclIで消化し、挿入してプラスミドpMOL944を形成した。PCR増幅に使用した2つのプライマーは下記の配列を有する: 
#LWN7864 (配列番号9) 
5’-AACAGCTGATCACGACTGATCTTTTAGCTTGGCAC-3’ 
#LWN7901 (配列番号10) 
5’-AACTGCAGCCGCGGCACATCATAATGGGACAAATGGG-3’ 
このプライマー#LWN7901はSaclI部位をプラスミドの中に挿入する。
【０１４３】
ゲノムDNAの調製
株DSM 12648を1%のカルボキシメチルセルロース-セルロース + を含有する液体培地2×TY (0.1 M Na2CO3 + 0.1 M NaHCO3を別々にオートクレーブ処理し、室温に冷却した後、無菌的に添加した) 中で増殖させた。30 ℃および300 rpmにおいて16時間後、細胞を収集し、そして下記の文献に記載されている方法により、ゲノムDNAを単離した: Pitcher D. G.、Saunders N. A.、Owen R. J.; Rapid extraction of bacterial genomic DNA with guanidium thiocyanate; Lett. Appl. Microbiol. 1989、8: 151-156。
【０１４４】
培地
TY (下記の文献に記載されている: Ausubel F. M. 他 (編者) “Current Protocols in Molecular Biology”、John Wiley and Sons、1945)。
2×TY (下記の文献に記載されている: Ausubel F. M. 他 (編者) “Current Protocols in Molecular Biology”、John Wiley and Sons、1945)。
LB寒天 (下記の文献に記載されている: Ausubel F. M. 他 (編者) “Current Protocols in Molecular Biology”、John Wiley and Sons、1945)。
LBPGは、0.5%グルコースおよび0.05Mリン酸カリウムを補充したLB寒天pH 7.0である。
AZCL-HE-セルロースをLBPG-寒天に0.5%に添加する。AZCL-HE-セルロースは、Megazyme (オーストラリア) から入手可能である。
BPX培地は、EP 0 506 780 (WO 91/09129) に記載されている。
Gal 18-2は特許出願WO 00/75344 A1に記載されている。
【０１４５】
エンド-グルカナーゼ活性の試験
後述する「再付着防止作用についての試験」と組み合わせて使用する、この試験の目的は、酵素が再付着防止作用をもつ、本発明によるエンド-グルカナーゼであるかどうかを決定することである。
この試験は、40℃の温度において30分間の反応時間にわたって、不溶性の、着色した、グルカン基質から放出される色を測定する。
酵素試料: 試験のための酵素試料は0.1 mg/mlの濃度の酵素タンパク質溶液である。標準的生化学的技術を使用して、試料の純度を確認し、試料のタンパク質濃度を測定する。
緩衝液: Na2HPO4・2H2OおよびNaOHを使用して、0.05 Mのリン酸塩緩衝液を調製し、1 g/lの界面活性剤 (例えば、Berol 537、Akzo Nobelから入手可能である) を添加する。
【０１４６】
試験法: 6 mlの緩衝液を2本の試験管に移す。一方の試験管に50 μlの酵素試料を添加する。第2の試験管に、酵素を添加しない。1個のベータ-グルカナーゼ錠剤 (Megazyme、アイルランド、カタログNo. T-BGZ) を各試験管に添加する。試験管の内容物を渦ミキサーで10秒間混合し、次いで試験管を40℃の水浴の中に入れる。10分後および20分後、試験管を倒立させることによって試験管の内容物を混合する。30分後、試験管を倒立させることによって試験管の内容物を混合し、次いでWhatman GF/Cの9 cmのフィルターに通して試験管の内容物を濾過し、濾液をきれいな試験管の中に収集する。分光光度計を使用して590 nmにおけるODとして、色の放出を測定する。酵素を含む結果から酵素を含まない結果を減ずることによって、δODを計算する。
δOD > 0.2である場合、酵素はエンド-グルカナーゼである。
【０１４７】
再付着防止作用についての試験
後述する「エンド-グルカナーゼ活性についての試験」と組み合わせて使用する、この試験の目的は、酵素が再付着防止作用をもつ、本発明によるエンド-グルカナーゼであるかどうかを決定することである。
洗浄試験により、再付着防止作用を測定する。小規模洗浄試験装置において、汚れた綿布帛の試料およびきれいな綿布帛の試料の両方を一緒に洗浄することによって、再付着防止洗浄試験を実施する。洗浄後、本来きれいな綿布帛上の汚れを光反射により評価する。
【０１４８】
酵素試料: 試験のための酵素試料は0.1 mg/mlの濃度の酵素タンパク質溶液である。標準的生化学的技術を使用して、試料の純度を確認し、試料のタンパク質濃度を測定する。
綿布帛: #2003白色織製100%綿 (供給会社: Tanigashima、〒533-0004 大阪府大阪市東淀川区小松4-11-15) 。洗浄試験における使用前に、新しい綿布帛を3回前洗浄する。前洗浄はヨーロッパ家庭用前装入型洗濯機を使用し、そして標準的40℃の洗浄プロセスを使用して実施する。LAS (Surfac(商標) SDBS80アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、80%) を0.5 g/lの濃度で洗浄溶液に添加し、炭酸ナトリウムの添加によりpH 10に調節する。前洗浄後、布帛をタンブル乾燥器中で乾燥する。各々が大きさ5×5 cm、重量ほぼ0.3 gである、前洗浄綿布帛のスワッチを切出し、これらのスワッチを洗浄試験に使用する。
【０１４９】
汚れた綿スワッチ: 前述したように準備した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚す。75 mlのテトラクロロエチレン (Fluka、カタログNo. 86972) 中で、210 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒148-8620東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) の懸濁液を強い攪拌により調製する。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置する。300 μlのカーボンブラック懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給する。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させる。
【０１５０】
洗剤溶液: 洗剤溶液を次のようにして調製する。1リットルの溶液を調製するために、脱イオン水中に0.5 gの炭酸ナトリウムおよび1.0 gの炭酸水素ナトリウムを溶解し、2 mlの117.8 g/lのCaCl2・2H2Oおよび54.3 g/lのMgCl2・6H2Oを含有する溶液を添加する。このカルシウム/マグネシウムの添加は12 °dHの水硬度を与える。0.5 gのLAS (Surfac  SDBS80アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、80%、供給会社  Surfachem、英国または同等の物質) を添加し、最終体積を1リットルに調節する。pHを9.5に調節する (例えば、炭酸ナトリウムの添加による) 。
【０１５１】
洗浄試験: 3つの汚れたスワッチ (説明したように調製した) および3つのきれいなスワッチ (同一の前洗浄した#2003綿) をMini-Terg-O-Tometer機中で洗浄する。Mini-Terg-O-TometerはTerg-O-Tometer試験洗浄機の小規模バージョンであり、下記の文献に記載されている: Jay C. Harris、”Detergency Evaluation and Testing”、Interscience Publishers Ltd. (1954) pp. 60-61。下記の条件を使用する:
ビーカー大きさ                     250 ml
洗浄溶液の体積                     100 ml
洗浄温度                            40℃
洗浄時間                            30分
攪拌                               150 rpm
【０１５２】
試験開始前に、洗剤溶液を40℃に前加温する。綿スワッチおよび100 μlの酵素試料を30分の洗浄期間の開始に添加する。酵素を添加しない、参照試験を同一時間に開始する。
洗浄後、布帛スワッチを流れる水道水下に5分間すすぎ、次いで平らに広げ、室温において一夜空気乾燥する。
計器による評価: 反射分光光度計 (Macbeth Color Eye 7000) を使用して、本来きれいな布帛のスワッチの光反射評価を実施する。測定を500 nmにおいて実施する。UVフィルターを含めない。各スワッチの前後で測定を実施する。次いで、3つの本来きれいなスワッチについての反射の平均結果 (R、500 nm) を6回の測定から計算する。
【０１５３】
所定の酵素試料の再付着防止作用を次のように計算する:
(酵素を添加したR、500 nm) - (酵素を添加しないR、500 nm) 
得られた再付着防止作用が > 7.5でありかつ上記エンド-グルカナーゼ活性についての試験における結果が > 0.2である場合、酵素は本発明による再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。
【０１５４】
LAS安定性試験
溶液が緩衝剤を含有するが、界面活性剤を含有しないとき、および溶液が緩衝剤およびLASを含有するとき、40℃の温度において60分の反応時間にわたる不溶性着色セルラーゼ基質から放出された色を比較することによって、試験を実施する。酵素が60分の反応時間の間に安定である場合、放出された色は酵素が安定でない場合よりも大きい。なぜなら、安定な酵素は基質を分解しつづけるが、不安定な酵素は基質を分解しつづけないからである。本発明の関係において、LASの結果がLASを含まない結果の > 50%である場合、酵素はLAS安定性である。
【０１５５】
試験方法の詳細は次の通りである。
緩衝剤 (LASなし):
Na2HPO4・2H2OおよびNaOHを使用して、0.05 Mのリン酸塩緩衝液pH 7.0を調製する。
緩衝剤 (LASあり):
上記緩衝液の1リットル中に1.0 gのLASを溶解する。LASはSurfac(商標) SDBS80アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、80% (供給会社  Surfachem、英国) または同等の物質である。
【０１５６】
試験方法:
脱イオン水中の試験すべき酵素の希釈物を調製する。後述するように計算したδOD (LASなし) についての結果が0.2〜0.5の範囲であるように、酵素濃度を調節する。
6 mlの緩衝液 (LASなし) を2本の試験管に移す。150 μlの酵素希釈物を一方の試験管に添加する。酵素を他方の試験管に添加しない。1個のCellazyme(商標) C錠剤 (Megazyme、アイルランド、カタログNo. T-CCZ) を両方の試験管に添加する。渦ミキサーで10秒間強く混合する。
【０１５７】
両方の試験管を40℃の水浴の中に入れる。15、30および45分後、試験管を倒立させることによって試験管の内容物を混合する。60分後、試験管を倒立させることによって試験管の内容物を混合し、次いで直径9 cmのWhatman(商標) GF/Cのフィルターに通して試験管の内容物を濾過し、濾液をきれいな試験管の中に収集する。分光光度計を使用して590 nmにおけるODを測定する。酵素を含む結果から酵素を含まない結果を減ずることによって、δOD (LASなし) を計算する。
【０１５８】
次いで、同一濃度の酵素を使用しかつ6 mlの緩衝液 (LASなし) の代わりに6 mlの緩衝液 (LASあり) を使用して、この試験を反復する。酵素を含む結果から酵素を含まない結果を減ずることによって、δOD (LASあり) を計算する。
LAS安定性%を計算する:
(δOD (LASあり) /δOD (LASなし)) × 100
【０１５９】
エンド-グルカナーゼを他の酵素と組み合わせて使用する洗浄試験
この手法を使用して酵素の洗浄性を決定する、下記の実施例6〜11参照。
小規模洗浄試験装置において、汚れた綿布帛の試料およびきれいな綿布帛の試料の両方を一緒に洗浄することによって、洗浄試験を実施する。洗浄後、綿布帛上の汚れを光反射により評価する。本来汚れた綿布帛および本来きれいな綿布帛の両方の試料を評価する。
【０１６０】
綿布帛: #2003白色織製100%綿 (供給会社: Tanigashima、〒533-0004 大阪府大阪市東淀川区小松4-11-15) 。洗浄試験における使用前に、新しい綿布帛を3回前洗浄する。前洗浄はヨーロッパ家庭用前装入型洗濯機を使用し、そして標準的40℃の洗浄プロセスを使用して実施する。LAS (Surfac(商標) SDBS80アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、80%) を0.5 g/lの濃度で洗浄溶液に添加し、炭酸ナトリウムの添加によりpH 10に調節する。前洗浄後、布帛をタンブル乾燥器中で乾燥する。各々が大きさ5×5 cm、重量ほぼ0.3 gである、前洗浄綿布帛のスワッチを切出し、これらのスワッチを洗浄試験に使用する。
汚れた綿スワッチ: これらは前述の5×5 cmのスワッチから調製する。
【０１６１】
洗浄試験: 3つの汚れたスワッチおよび3つのきれいなスワッチをMini-Terg-O-Tometer機中で洗浄する。Mini-Terg-O-TometerはTerg-O-Tometer試験洗浄機の小規模バージョンであり、下記の文献に記載されている: Jay C. Harris、”Detergency Evaluation and Testing”、Interscience Publishers Ltd. (1954) pp. 60-61。下記の条件を使用する:
ビーカー大きさ               250 ml
洗浄溶液の体積               100 ml
洗浄温度                      40℃
洗浄時間                      30分
攪拌                         150 rpm
【０１６２】
試験開始前に、洗剤溶液を40℃に予熱する。布帛および酵素を30分の洗浄期間の開始に添加する。洗浄後、布帛スワッチを流れる水道水下に5分間すすぎ、次いで平らに広げ、室温において一夜空気乾燥する。
計器による評価: 反射分光光度計 (Macbeth Color Eye 7000) を使用して、布帛のスワッチの光反射評価を実施する。測定を500 nmにおいて実施する。UVフィルターを含めない。各スワッチの前後で測定を実施する。汚れたスワッチを汚れた領域の中心で測定する。次いで、汚れたスワッチおよびきれいなスワッチについての反射の平均結果 (R、500 nm) を各型についての6回の測定から計算する。
【０１６３】
洗剤溶液: 洗剤溶液を次のようにして調製する。1リットルの溶液を調製するために、脱イオン水中に0.5 gの炭酸ナトリウムおよび1.0 gの炭酸水素ナトリウムを溶解し、2 mlの117.8 g/lのCaCl2・2H2Oおよび54.3 g/lのMgCl2・6H2Oを含有する溶液を添加する。このカルシウム/マグネシウムの添加は12 °dHの水硬度を与える。非イオン界面活性剤 (Berol(商標) 537、Akzo Nobel) および/またはLAS (Surfacxr(商標) SDBS80アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム、80%) を添加し、最終体積を1リットルに調節する。pHをpH 9.5 (例えば、炭酸ナトリウムの添加による) またはpH 7.5 (10%のクエン酸溶液の添加による) に調節する。
【０１６４】
LASおよび非イオン界面活性剤の濃度および洗剤溶液のpHを、各洗浄試験のために下記において特定した。
酵素の添加: 試験すべき酵素を水中に既知濃度で前もって溶解し、そして必要量の酵素を洗浄プロセスの開始時に洗剤溶液に添加する。
【０１６５】
酵素洗浄性の有益性の計算: 酵素洗浄性の有益性は、本来汚れたおよび本来きれいな両方のスワッチをどれだけ多く清浄するかの測度であり、洗浄試験に酵素を含めた結果となる。酵素洗浄性の有益性は次のように計算される:
洗浄試験後、汚れたスワッチについての平均R、500 nm値は、汚れたRである。
洗浄試験後、きれいなスワッチについての平均R、500 nm値は、きれいなRである。
酵素を使用する洗浄試験からの酵素洗浄性の有益性は次の通りである: 酵素を使用した、汚れたR + きれいなRの合計 - 酵素を使用しない、汚れたR + きれいなRの合計。
【０１６６】
このようにして決定された酵素洗浄性の有益性は、布帛からの汚れ除去および布帛上への汚れの再付着の両方の組み合わされた測度である。こうして、酵素洗浄性の有益性値は消極的または積極的である値を有する。酵素洗浄性の有益性値を使用して、異なる酵素の性能を比較することができる。
【０１６７】
実施例１．バシラス (Bacillus) 種からのエンド-グルカナーゼ遺伝子のクローニングおよび発現
バシラス・サチリス (B. subtilis) における成熟エンド-グルカナーゼのサブクローニング
これらの2つのオリゴヌクレオチドから成るPCRプライマー組を使用して、本発明のエンド-グルカナーゼをコードするDNA配列をPCR増幅した。
#168684 (配列番号11) 
5’-CAT TCT GCA GCC GCG GCA GCA GAA GGA AAC ACT CGT GAA GAC-3’ 
#168685 (配列番号12) 
5’-GCG TTG AGA CGC GCG GCC GCT TAC TCT TCT TTC TCT TCT TTC TC-3’ 
制限部位SacIIおよびNclIに下線が引かれている。
【０１６８】
200 μMの各dNTP、2.6単位のHiFidelityTM Expand酵素混合物および200 pmolの各プライマーを補充した、HiFidelityTM PCR緩衝液 (Boehringer Mannheim、ドイツ国) 中のPCR反応において、オリゴヌクレオチドを使用した。PCR反応の鋳型として、前述のバシラス (Bacillus) 種DSM 12648から単離した染色体DNAを使用した。
【０１６９】
DNAサーマルサイクラー (Landgraf(商標)、ドイツ国) を使用して、PCR反応を実施した。94 ℃において1分間の1回のインキュベーション、次いで94 ℃において15秒間の変性、60 ℃において60秒間のアニリーング、および72 ℃において120秒間のエクステンションのサイクルプロファイルを使用して実施した10サイクルのPCR、次いで20サイクルの94 ℃において15秒間、60 ℃において60秒間および72 ℃において120秒間の変性 (この伸長工程において、20秒をサイクル毎に加える)。0.7%アガロースゲル (NuSieve、FMC) 中の電気泳動により、増幅生成物の5 μlのアリコートを分析した。DNAフラグメント大きさ2.4 kbの出現は、遺伝子セグメントの適切な増幅を示した。
【０１７０】
PCRフラグメントのサブクローニング: 
製造業者の使用説明書に従いQIAquick(商標) PCR精製キット (Qiagen、米国) を使用して、前述したように発生させたPCR生成物の45 μlのアリコートを精製した。精製したDNAを50 μlの10 mM Tris-HCl、pH 8.5中で溶離した。
5 μgのpMOL994および25 μlの精製したPCRフラグメントをSacIIおよびNotIで消化し、0.7%アガロースゲル (NuSieve(商標)、FMC) 中で電気泳動させ、関係するフラグメントをゲルから切り取り、製造業者の使用説明書に従いQIAquick(商標) Gel抽出キット (Qiagen、米国) を使用して精製した。次いで単離したPCR DNAフラグメントを、SacII-NotI消化しかつ精製したpMOL994に結合させた。0.5 μgの各DNAフラグメント、1単位のT4 DNAリガーゼおよびT4リガーゼ緩衝液 (Boehringer Mannheim、ドイツ国) を使用して、結合を16 ℃において一夜実施した。
【０１７１】
結合混合物を使用して、コンピテントバシラス・サチリス (B. subtilis) PL2306を形質転換した。形質転換した細胞をLBPG-10 μg/mlのカナマイシン-寒天平板上にプレートした。37℃において18時間インキュベートした後、コロニーが平板上に見られた。一夜の培養ブロスからプラスミドDNAを単離することによって、いくつかのクローンを分析した。
【０１７２】
1つのこのような陽性クローンを上で使用した寒天平板上で数回再ストリークし、このクローンをMB1181-7と呼んだ。クローンMB1181-7をTY-10 μg/mlのカナマイシン中で37℃において一夜増殖させ、次の日にバシラス・サチリス (B. subtilis) プラスミド調製物について製造業者の推奨に従いQiaprep Spin Plasmid Miniprep Kit ＃27106を使用して、1 mlの細胞を使用して細胞からプラスミドを単離した。このDNA配列を配列決定し、DNA配列は成熟エンド-グルカナーゼをコードする配列番号1 のbp 1-2322中のエンド-グルカナーゼ遺伝子と同一DNA配列であることが明らかになった。誘導されたタンパク質配列を配列番号2に表す。
【０１７３】
実施例２．バシラス(Bacillus) 種DSM 12648からのエンド-グルカナーゼの発現および回収
500 mlの2バッフルド震蘯フラスコ内で10 μg/mlのカナマイシンを含む15×200 mlのCal-18-2培地中で37 ℃、300 rpmにおいて4日間、上記実施例1に記載するようにして得られたMB1181-7を増殖させ、これにより約2500 mlの培養ブロスを得た。50% CaCl2 (10 ml/lの培養ブロス) を11% アルミン酸ナトリウム (10 ml/lの培養ブロス) と一緒に添加することによって、培養流体を凝集させ、20% ギ酸を添加してpHを7.0〜7.5に維持した。カチオン剤Superfloc(商標) C521 (25 mlの0.1% w/v 希釈/lの培養ブロス) およびアニオン剤Superfloc(商標) A130 (75 mlの水中の0.1% w/v 希釈/lの培養ブロス) を攪拌間に添加して、凝集を完結させた。Sorval(商標) RC 3B遠心機を使用して10000 rpm、6 ℃において30分間遠心することによって、凝集した物質を分離した。生ずる上清はエンド-グルカナーゼ活性を含有した。
【０１７４】
上清をWhatmanガラスフィルターGF/DおよびCにより清澄化した。次いで限外濾過を使用して溶液を濃縮し、イオン強度を減少させた。限外濾過膜は10 kDaのカットオフのFiltron(商標) UFであった。限外濾過後、溶液は導電率 < 3 ms/cmを有した。pHをpH 8.0に調節した。
次いで、Q-Sepharose(商標) 上のアニオン交換クロマトグラフィーを追加の精製のために使用した。25 mmolのTris pH 8.0の緩衝液と平衡化したQ-Sepharose(商標)(Parmacia) を含有する300 mlのカラムに、限外濾過からの溶液を適用した。エンド-グルカナーゼはQ-Sepharose(商標) に結合し、次いで0.5 M NaCl勾配を使用して溶離した。エンド-グルカナーゼ活性を有する画分をプールした。最後のプールしたエンド-グルカナーゼ溶液のエンド-グルカナーゼ活性は、ほぼ1000 ECU/mlであった。
【０１７５】
活性単位ECUは、方法SM-0302 (これは要求に応じてNovozymes A/Sから入手可能である) により測定される。ECU法において、カルボキシメチルセルロースの溶液中の粘度を減少させる酵素試料の能力を測定し、結果をECUで記載する。条件: CMC 型7LFD (Hecules) 、0.1 M リン酸塩緩衝液中pH 7.5; CMC濃度31.1 g/l; 反応、40℃、30分。振動粘度計、例えば、MIVI 3000、Sofraser(商標)(France) を使用して、粘度を測定する。
【０１７６】
実施例３．汚れ除去および再付着防止作用
この試験において、実施例2において得られたエンド-グルカナーゼの汚れ除去および再付着防止作用を証明する。さらに、この試験において、過ホウ素酸ナトリウム漂白剤を添加するとき、酵素の性能は本質的に変化しない。
綿スワッチをβ-グルカン (オオムギから) + カーボンブラックで汚す。汚れたスワッチをきれいなスワッチと一緒に洗浄する。洗浄後、スワッチをすすぎ、乾燥する。反射の測定により、汚れたスワッチからの汚れ除去およびきれいなスワッチ上への汚れの再付着を決定する。エンド-グルカナーゼを添加したまたは添加しないで洗浄後、汚れ除去および汚れの再付着を比較する。
【０１７７】
スワッチ: 100% 綿布帛、型#2003 (Tanigashira、大阪) からカットし、水溶性汚染物質を除去するようにして、40℃において前洗浄した、大きさ5×5 cm、重量、ほぼ0.3 g。
洗浄装置: 攪拌ビーカー、ビーカー容積250 ml、水浴加熱による温度制御を有する。この装置は、材料および方法の節に記載されているような、Mini-Terg-O-Tometer、多ビーカー小型攪拌洗浄装置である。
【０１７８】
洗剤溶液: 下記の成分を脱イオン水中に添加することによって調製する。
炭酸ナトリウム、0.5 g/l
重炭酸ナトリウム、0.7 g/l
12 °dHの水硬度を与えるCa2+/Mg2+
アニオン界面活性剤、Surfac(商標) SDBS80 (アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム) 、0.5 g/l
非イオン界面活性剤、Berol(商標) 537（Akzo Nobel） 、1.0 g/l
過ホウ素酸ナトリウム、SPB型 (wfk Testgewebe) 、0または1.0 g/l
溶液のpHはほぼ9.5である。
【０１７９】
洗浄手順: 100 mlの洗剤溶液を各ビーカーに添加する。水浴温度は40℃である。機械攪拌器をほぼ125 rpmで作動させる。洗剤溶液を10分間予熱し、そしてエンド-グルカナーゼおよびスワッチを添加する。各場合において、3つの汚れたスワッチ (後述するように調製した) および3つのきれいなスワッチを各ビーカーに添加する。30分間洗浄した後、スワッチを洗剤溶液から取出し、流れる水道水下に5分間すすぎ、次いで吸取紙上に平らに広げ、乾燥させる。
【０１８０】
反射の測定: 反射分光光度計 (Macbeth(商標) Color Eye 7000) を使用して、反射を測定する。汚れたスワッチの場合において、各スワッチを汚れた中心において1回測定し、次いで平均値を計算する。きれいなスワッチの場合において、各スワッチを各側で1回測定し、次いで平均値を計算する。反射の測定のすべては500 nmにおいて実施する。
【０１８１】
汚れたスワッチ: β-グルカン (オオムギから) およびカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、東京都) を使用して、汚れたスワッチを作る。攪拌しかつ>50℃に加温することによって、約0.67 gのβ-グルカンを100 mlの水道水中に溶解する。0.33 gのカーボンブラックを添加する。Ultra Turrax(商標) ブレンダー、速度4000 rpm、で2分間ブレンドする。250 μlのβ-グルカン/カーボンブラックを各スワッチの中心上に適用する。室温において一夜乾燥させる。
【０１８２】
この実施例において使用するスワッチは、汚れ適用前に93.5および汚した後17.5の平均反射値を有した。
エンド-グルカナーゼの添加: 実施例2からのエンド-グルカナーゼを添加して、活性濃度を0、20または100 ECU/lの洗剤溶液とした。活性単位ECUは、前述したように、SM-0302法により測定する。
【０１８３】
【表１】
2006509850.tif 000006
【０１８４】
【表２】
2006509850.tif 000007
【０１８５】
エンド-グルカナーゼを含まない洗浄後の結果に比較して、エンド-グルカナーゼを使用して洗浄後における反射値の増加により示されるように、エンド-グルカナーゼは布帛からの汚れ除去を増加させた。また、エンド-グルカナーゼを使用して洗浄後における反射値の増加により示されるように、エンド-グルカナーゼは汚れの再付着を減少させる。エンド-グルカナーゼにより提供された汚れ除去および再付着防止の改良は、漂白剤の添加により本質的にに変化しない。
【０１８６】
実施例４．再付着防止作用
家庭用洗剤溶液中で、きれいな綿布帛を汚れた綿布帛と一緒に洗浄する。洗浄をTerg-O-Tometer中で実施する。洗浄間に、汚れは汚れた布帛から洗剤液の中に解放される。次いで、この汚れはきれいな綿上に再付着することがある。洗浄後、綿布帛をすすぎ、乾燥させ、反射分光光度計で測定して、汚れ再付着の程度を検出する。
【０１８７】
洗剤: 粉末状家庭用洗剤、アジア。
洗剤濃度: 硬度4 °dHの水中で0.67 g/l。
1000 mlの洗剤溶液/T-O-Tビーカー。
綿布帛: 合計33 gの布帛/T-O-Tビーカー、下記の適当に寸法規制した片を含んでなる:
白色織製綿 、#2003 (Tanigashima、大阪) 、合計重量11 g
白色綿インターロック、合計重量13 g
【０１８８】
汚れた綿布帛、型EMPA101 (EMPA、スイス) 、合計重量9 g
洗浄: 温度25℃、洗浄時間40分、125 rpm。洗浄後、#2003綿を流れる水道水下に10分間すすぎ、次いで乾燥させる。
反射の測定: 反射分光光度計 (Macbeth(商標) 7000) を500 nmにおいて使用して、#2003織製綿片の両側を測定する。各T-O-Tビーカーからの測定結果の平均を計算する。
酵素の添加: 実施例2に記載されているように調製したグルカナーゼを、洗浄工程開始前に、洗剤液に添加した。
【０１８９】
【表３】
2006509850.tif 000008
【０１９０】
活性単位ECUは、前述したように、SM-0302法により測定する。結果から、エンド-グルカナーゼの添加は汚れ再付着を減少させることを結論することができる。
【０１９１】
実施例５．酵素試料のLAS安定性
前述の手順により、LAS安定性%を決定した。下記の酵素を試験した:
CarezymeはNovozymes A/Sからの製品の商品名であり、これはWO 91/17243 (配列番号2、引用することによって本明細書の一部とされる) に開示されているフミコラ・インソレンス (Humicola insolens) DSM 1800に由来する43 kDのセルラーゼ (酵素成分としてのみ) を含有する。この酵素を含有する洗剤組成物はEP 822 973に開示されている。
Renozyme はNovozymes A/Sからの製品の商品名であり、これはWO 98/12307の実施例1に開示されているチエラビア・テレストリス (Thielavia terrestris) セルラーゼ変異型 (酵素成分としてのみ) を含有する。
エンド-グルカナーゼ。これは上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
【０１９２】
【表４】
2006509850.tif 000009
これらの結果が示すように、使用した定義によれば、CarezymeはLAS安定性ではなく、そしてRenozymeおよびエンド-グルカナーゼの両方はLAS安定性である。
【０１９３】
実施例６．洗浄試験: Renozyme(商標) およびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、Renozyme(商標) 単独およびRenozyme(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。75 mlのテトラクロロエチレン (Fluka(商標)、カタログNo. 86972) 中で、210 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620 東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) の懸濁液を強い攪拌により調製した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。300 μlのカーボンブラックの懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０１９４】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.5 g/l
非イオン性: なし
pH: 9.5
【０１９５】
【表５】
2006509850.tif 000010
【０１９６】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素タンパク質によって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なセルラーゼは、商品Renozyme(商標) (Novozymes A/S) の試料から得るか、あるいはWO 98/12307の実施例1に記載されているように誘導することができる。
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この結果が示すように、LASを含有するが、他の酵素を含有しない洗剤溶液中で、Renozyme(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせはRenozyme(商標) 単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０１９７】
実施例７．
洗浄試験: Stainzyme(商標) およびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、澱粉を含有する汚れに対する、Stainzyme(商標) 単独およびStainzyme(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
Stainzyme(商標) は、商業的に入手可能なα‐アミラーゼ製品 (Novozymes A/S製) の商品名である。Stainzyme(商標) は、洗濯および硬質表面のクリーニングのための洗剤において使用するために意図される。
【０１９８】
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。4.5 gのジャガイモ澱粉 (「kartoffeimel」、製造会社: KMC kartoffeimel-centralen, DK-7400 Herning, Denmark、澱粉含有率、ほぼ80%) の懸濁液を500 mlの水道水中で攪拌しながら調製し、次いで加熱沸騰させ、次いで冷却した。この溶液の100 mlに、332 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620 東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) を添加し、この懸濁液をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。250 μlのカーボンブラック/澱粉の懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０１９９】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.4 g/l
非イオン性: 0.2 g/l
pH: 9.5
【０２００】
【表６】
2006509850.tif 000011
【０２０１】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素タンパク質によって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なアミラーゼは、商品Stainzyme(商標) (Novozymes A/S) の試料から得るか、あるいはWO 01/66712およびWO 01/64852に記載されているように誘導することができる。
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この試験において、汚れは澱粉を含有する。この結果が示すように、Stainzyme(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせはStainzyme(商標) 単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０２０２】
実施例８．
洗浄試験: Savinase(商標) およびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、タンパク質を含有する汚れに対する、Savinase(商標) 単独およびSavinase(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
Savinase(商標) はスブチリシン309の商品名である。それは商業的に入手可能なプロテアーゼ製品 (Novozymes A/S製) の商品名である。Savinase(商標) は、洗濯および硬質表面のクリーニングのための洗剤において使用するために意図される。
【０２０３】
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。7.2 gのゼラチン (ブタ皮からのゼラチン、Fluka(商標) 、カタログNo. 04055) の溶液を100 mlの水道水中で加温および攪拌しながら調製した。この溶液の10 mlを水で50 mlに希釈し、そして165 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620 東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) を添加し、この懸濁液をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。250 μlのカーボンブラック/ゼラチンの懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０２０４】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.4 g/l
非イオン性: 0.2 g/l
pH: 9.5
【０２０５】
【表７】
2006509850.tif 000012
【０２０６】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素タンパク質によって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なプロテアーゼは、商品Savinase(商標)(Novozymes A/S) の試料から得るか、あるいは米国特許第3,723,250号に記載されているようにバシラス・レンツス (Bacillus lentus) NCIB 10309誘導することができる。
【０２０７】
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この試験において、汚れはタンパク質を含有する。この結果が示すように、Savinase(商標) とエンド-グルカナーゼとの組み合わせはSavinase(商標) 単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０２０８】
実施例９．
洗浄試験: マンナナーゼおよびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、ガラクトマンナンを含有する汚れに対する、マンナナーゼ単独およびマンナナーゼとエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
【０２０９】
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。667 mgのグアーゴム (Sigma(商標)、G 4129) の溶液を200 mlの水道水中で加温および攪拌しながら調製し、332 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620 東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) を添加し、この懸濁液をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。500 μlのカーボンブラック/グアーゴムの懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０２１０】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.4 g/l
非イオン性: 0.2 g/l
pH: 9.5
【０２１１】
【表８】
2006509850.tif 000013
【０２１２】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素タンパク質によって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なマンナナーゼは、WO 99/64619に開示されているように、バシラス (Bacillus) 種1633から得ることができる。WO 99/64619の配列番号2のマンナナーゼは好ましい。
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この試験において、汚れはガラクトマンナンを含有する。この結果が示すように、マンナナーゼとエンド-グルカナーゼとの組み合わせはマンナナーゼ単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０２１３】
実施例１０．
洗浄試験: ペクチン酸リアーゼおよびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、ペクチンを含有する汚れに対する、ペクチン酸リアーゼ (BioPrep(商標) L) 単独およびペクチン酸リアーゼとエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
BioPrep(商標) Lは商業的に入手可能なペクチン酸リアーゼの商品名 (Novozymes A/S製) である。BioPrep(商標) Lは、綿繊維のクリーニングのための洗剤において使用するために意図される。
【０２１４】
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。150 mgのペクチン (Sigma(商標)、P 9311) の溶液を50 mlの水道水中で加温および攪拌しながら調製し、83 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620 東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) を添加し、この懸濁液をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。500 μlのカーボンブラック/ペクチンの懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０２１５】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.4 g/l
非イオン性: 0.2 g/l
pH: 9.5
【０２１６】
【表９】
2006509850.tif 000014
【０２１７】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素ペクチンによって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なペクチン酸リアーゼは、米国特許第6,124,127号に記載されているようにバシラス・リヘニフォルミス (Bacillus licheniformis) から得ることができる。
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この試験において、汚れはペクチンを含有する。この結果が示すように、ペクチン酸リアーゼとエンド-グルカナーゼとの組み合わせはペクチン酸リアーゼ単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０２１８】
実施例１１．
洗浄試験: Lipex(商標) およびエンド-グルカナーゼ
この試験の目的は、トリグリセリド油を含有する汚れに対する、リパーゼ (Lipex(商標)) 単独およびリパーゼ とエンド-グルカナーゼとの組み合わせの酵素洗浄性の有益性を測定することである。
Lipex(商標) は商業的に入手可能なリパーゼ製品 (Novozymes A/S製) の商品名である。Lipex(商標) は、洗濯および硬質表面のクリーニングのための洗剤において使用するために意図される。
【０２１９】
この試験のために、汚れたスワッチを次のようにして調製した: 前述したように調製した、前洗浄#2003布帛のスワッチを次のようにして汚した。1.5 gのカラスムギフレーク (圧延し、トーストしたカラスムギ、ほぼ7重量%の脂肪を含有する、入手先：例えば、Fellesindkob I/S、2605、Brondy、デンマーク) 懸濁液を500 mlの水道水中で攪拌しかつ加熱沸騰させ、UltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化することによって調製し、次いで冷却した。
【０２２０】
この懸濁液の100 mlに、166 mgのカーボンブラック (「洗浄性試験用炭素」、洗濯化学協会、〒146-8620東京都大田区下丸子2-11-1、により供給される) を添加し、この懸濁液をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。25 mlのトウモロコシ油 (精製トウモロコシ油、家庭用、100重量%の油) を添加し、この混合物をUltrTurrax(商標) ブレンダーで均質化した。綿スワッチを水平な金属表面上に平らに配置した。100 μlのカーボンブラック/油の懸濁液をピペットにより各綿スワッチの中心に供給した。汚れた綿スワッチを室温において一夜乾燥させた。
【０２２１】
この試験のために、洗剤組成物は上に記載した通りであり、そして下記の界面活性剤およびpHを使用した:
LAS: 0.4 g/l
非イオン性: 0.2 g/l
pH: 9.5
【０２２２】
【表１０】
2006509850.tif 000015
【０２２３】
活性アッセイ手順から生ずる不明確さを回避するために、純粋な触媒的に活性な酵素ペクチンによって、酵素濃度をここで特定した。標準的生化学的技術を使用して、酵素を精製し、特性決定することができる。
適当なリパーゼ は、商品Lipex(商標) (Novozymes A/S) の試料から得るか、あるいはWO 00/60063に記載されているように適当なフミコラ・ラヌギノサ (Humicola lanuginosa) に由来することができる。
【０２２４】
エンド-グルカナーゼは、上に定義した再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼである。この酵素をを製造する方法は実施例2に記載されている。
この試験において、汚れはトリグリセリド油を含有する。この結果が示すように、エンド-グルカナーゼとLipex(商標) との組み合わせはLipex(商標) 単独よりも高い酵素洗浄性の有益性を与える。
【０２２５】
実施例１２．再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼについての試験
2つの酵素を「再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼ」についての試験により評価した。それらは次の通りでった: 
上記実施例2に記載されているように製造できる酵素 (「実施例2の酵素」) 、および
Carezyme、すなわち、フミコラ・インソレンス (Humicola insolens) に由来する43 kDのセルラーゼ。
【０２２６】
【表１１】
2006509850.tif 000016
【０２２７】
この結果が示すように、実施例2の酵素は再付着防止性エンド-グルカナーゼ、すなわち、本発明による再付着防止作用を有するエンド-グルカナーゼであり、そしてCarezymeはそうではない。
【配列表】
2006509850000001.app
【国際調査報告】
2006509850.tif 000017
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