(57)【要約】本発明は一般に、免疫学および神経免疫学の分野に関する。詳細には、本発明は、Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法を提供し、この方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、Ｔ細胞活性化の低下または阻害が好適であり、これにより、この哺乳動物におけるＴ細胞活性化を低下または阻害する。本発明はまた、Ｔ細胞活性化を増強するための方法を提供し、この方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいはＬ１をコードする核酸分子またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいはＬ１の産生および／または同時刺激機能を強化する因子の有効量を哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、Ｔ細胞活性化が好適であり、これにより、哺乳動物におけるＴ細胞活性化を増強する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔ細胞活性化を増強するための方法であって、該方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメントの有効量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体もしくはフラグメントは、Ｔ細胞活性化に関与するインテグリンとの相互作用を直接的または間接的に促進する、方法。
【請求項２】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体またはフラグメントが、インテグリンα５β１またはαｖβ３とのトランス相互作用またはシス相互作用を直接的または間接的に促進する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｔ細胞活性化を増強するための方法であって、該方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメントの有効量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体もしくはフラグメントは、同時刺激に関与するリガンドとの相互作用を直接的または間接的に促進する、方法。
【請求項４】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体またはフラグメントが、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのシス型相互作用を直接的または間接的に促進する、請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】
Ｔ細胞活性化を増強するための方法であって、該方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１の産生および／または同時刺激機能を強化する因子の有効量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該因子が、２つのＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくはフラグメントの間のＬ１−Ｌ１同種親和性相互作用、あるいはＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくはフラグメントと、Ｔ細胞活性化に関与するインテグリンとの間の相互作用、あるいはＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくはフラグメントと、同時刺激に関与するリガンドとの間の相互作用を強化する、方法。
【請求項６】
前記哺乳動物がヒトであり、そしてＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体もしくはフラグメントがヒト起源である、請求項１、３、または５に記載の方法。
【請求項７】
前記活性化されるＴ細胞が、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞または両方である、請求項１、３、または５に記載の方法。
【請求項８】
前記哺乳動物が腫瘍、癌または感染を有する、請求項１、３、または５に記載の方法。
【請求項９】
Ｔ細胞活性化を増強するための方法であって、該方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメントの有効量を、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該ＮＣＡＭ  Ｌ１をコードする核酸、またはその機能的誘導体もしくはフラグメントが、抗原提示細胞に送達され、次いで該ＮＣＡＭ  Ｌ１または該核酸を含む該抗原提示細胞が、該哺乳動物に投与されるか、または因子が、該Ｌ１の産生および／もしくは同時刺激機能を強化する、方法。
【請求項１０】
Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法であって、該方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストは、低分子アンタゴニストである、方法。
【請求項１１】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、タンパク質アンタゴニスト、ポリペプチドアンタゴニストまたはペプチドアンタゴニストである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１０に記載の方法であって、ここで、前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、ＮＣＡＭ  Ｌ１アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ＮＣＡＭ  Ｌ１抗体、可溶性ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその誘導体もしくはフラグメントからなる群より選択され、そして因子が、ＮＣＡＭ  Ｌ１の産生および／または同時刺激機能を低下または阻害する、方法。
【請求項１３】
前記抗ＮＣＡＭ  Ｌ１抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記抗ＮＣＡＭ  Ｌ１モノクローナル抗体が、ｍＡｂ  ５Ｇ３である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、Ｌ１−Ｌ１同種親和性相互作用を低下または阻害する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、抗原提示細胞とＴ細胞との間のＬ１−Ｌ１連結を低下または阻害する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、ＮＣＡＭ  Ｌ１クラスター形成およびシグナル伝達を同時に引き起こすことなく、Ｌ１−Ｌ１連結を低下または阻害する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法であって、該方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストは、Ｔ細胞活性化に関与するインテグリンとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用を低下または阻害する低分子アンタゴニストである、方法。
【請求項１９】
Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法であって、該方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストは、インテグリンα５β１またはインテグリンαｖβ３とのＮＣＡＭ  Ｌ１のトランス相互作用またはシストランス作用を低下または阻害する低分子アンタゴニストである、方法。
【請求項２０】
前記ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストが、同時刺激に関与するリガンドとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用を低下または阻害する、請求項１０、
１８、または１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法であって、該方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを、それが必要な哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストは、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用を低下または阻害する低分子アンタゴニストである、方法。
【請求項２２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１０、１８、１９、または２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞または両方の活性化が低下または阻害される、請求項１０、１８、１９、または２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物が、自己免疫、移植片拒絶および神経免疫学的障害からなる群より選択される疾患または障害を有する、請求項１０、１８、１９、または２１に記載の方法。
【請求項２５】
配合物であって、該配合物は、以下：
ａ）多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１の産生および／もしくは同時刺激機能を強化する因子の有効量；ならびに
ｂ）別の同時刺激分子、またはそのアゴニストの有効量、
を含む、配合物。
【請求項２６】
薬学的組成物の形態である、請求項２５に記載の配合物。
【請求項２７】
前記同時刺激分子が、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢおよびＩＣＯＳからなる群より選択される、請求項２５に記載の配合物。
【請求項２８】
前記同時刺激分子が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に由来する、請求項２５に記載の配合物。
【請求項２９】
前記ＡＰＣ由来同時刺激分子が、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４０およびＢ７からなる群より選択される、請求項２８に記載の配合物。
【請求項３０】
Ｔ細胞活性化を増強するための方法であって、該方法は、多量体化神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１をコードする核酸またはその機能的誘導体もしくはフラグメント、あるいは該Ｌ１の産生および／もしくは同時刺激機能を強化する因子の有効量、ならびに別の同時刺激分子の有効量を、哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、Ｔ細胞活性化が好適であり、これにより、該哺乳動物におけるＴ細胞活性化を増強する、方法。
【請求項３１】
配合物であって、該配合物が、以下：
ａ）ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの有効量；および
ｂ）別の同時刺激分子の有効量、
を含む、配合物。
【請求項３２】
薬学的組成物の形態である、請求項３１に記載の配合物。
【請求項３３】
前記同時刺激阻害分子が、Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）またはエタノールである、請求項３２に記載の配合物。
【請求項３４】
Ｔ細胞活性化を低下または阻害するための方法であって、該方法は、ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの有効量および別の同時刺激分子の有効量を、哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、Ｔ細胞の低下または阻害が好適であり、これにより、該哺乳動物中におけるＴ細胞活性化を低下または阻害する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、一般的に、免疫学または神経免疫学の分野に関する。特に、本発明は、Ｔ細胞の活性化を減少または阻害するための方法を提供する。この方法は、ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの有効量を、Ｔ細胞の活性化の減少または阻害が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を減少または阻害する工程を包含する。Ｔ細胞の活性化を調節するための配合物（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）およびコンビナトリアル方法がさらに提供される。本発明はまた、Ｔ細胞の活性化を増強するための方法を提供する。この方法は、有効量の多量体化された神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメント、あるいはこのＬ１またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいはこのＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子を、Ｔ細胞の活性化が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を増強する工程を包含する。
【０００２】
（背景技術）
Ｔ細胞の活性化に関する現在のパラダイムは、最適な活性化が２つのシグナル（１つめは、ＭＨＣ／抗原複合体によるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）の占拠によって提供され、２つめは、ＡＰＣ表面上における１つ以上の同時刺激リガンドによって提供される）を必要とするという前提に基づいている（１）。ＡＰＣ表面上における一連の分子は、同時刺激リガンドとして機能し得、これには、Ｂ７−１、Ｂ７−２およびＩＣＡＭ−１のような免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）のメンバーが挙げられる（１）。
【０００３】
以前の研究により、ニューロンのＣＡＭとして、Ｌ１が同定された。これはまた、ＩｇＳＦに属する（２）。現在までＬ１の機能は、ほぼ排他的に、軸索誘導を含む神経学的プロセスに関連付けられている（３、４）。このようなＬ１媒介性のプロセスは主に、同種親和性（ｈｏｍｏｐｈｉｌｉｃ）のＬ１−Ｌ１結合に寄与されたが（５）、このＣＡＭはまた、アキソニン（ａｘｏｎｉｎ）１／ＴＡＧ  １、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン、ラミニンおよび特定のインテグリンを含む複数の異種親和性（ｈｅｔｅｒｏｐｈｉｌｉｃ）リガンドと、相互作用し得る（６、７）。Ｌ１はまた、熱安定性抗原ＣＤ２４（８）およびテトラスパン分子ＣＤ９（９）とのシス相互作用を支持することが示された。
【０００４】
そのニューロンでの明示にも関わらず、Ｌ１発現は、リンパ系起源および骨髄単球起源の両方の細胞において近年記載された（１０、１１）。詳細には、Ｌ１は、新たに単離された末梢血単核細胞において、および機能的に成熟した単核細胞由来の樹状細胞（ＤＣ）において、およびインサイチュで小胞ＤＣにおいて、検出され得る（１１）。さらなる構成的発現は、Ｂ細胞のサブセットにおいて明らかであり、そしてＣＤ４＋Ｔ細胞に関して記載された（１０、１１）。これらの知見にも関わらず、免疫系におけるＬ１の機能に関しては、ほとんど知られていない。近年の１つの研究によって、Ｌ１は、リンパ節構築の維持に重要であることが示された（１２）。一方向ＭＬＲおよびマイトジェン活性化アッセイを含む種々の実験アプローチを使用して、本発明者らは本明細書中において、Ｌ１が、Ｔ細胞の活性化における同時刺激分子として起用し得ることを実証する。この能力において、Ｌ１は、正常なプロセスおよび疾患プロセス（神経系の関与するプロセスを含む）におけるヒト免疫応答の開始に寄与する。
【０００５】
従って、ＮＣＡＭ  Ｌ１を調節標的として使用して、Ｔ細胞の活性化を調節する方法を提供することが、本発明の目的である。Ｔ細胞の活性化を調節するための配合物およびコンビナトリアル方法を提供することが、本発明の別の目的である。
【０００６】
（発明の開示）
本発明は、一般的に、免疫学または神経免疫学の分野に関する。１つの局面では、本発明は、Ｔ細胞の活性化を増強するための方法を提供する。この方法は、有効量の多量体化された神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメント、あるいはこのＬ１またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいはこのＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子を、Ｔ細胞の活性化が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を増強する工程を包含する。
【０００７】
Ｔ細胞の活性化において刺激分子として機能し得る任意の多量体化された（例えば、二量体化された）ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメント、およびこのようなＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントをコードする任意の核酸が、本発明の方法において使用され得る。好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントは、Ｌ１−Ｌ１同種親和性相互作用を行い得る（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）とＴ細胞との間のＬ１−Ｌ１結合を媒介し得る）。また好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントは、Ｔ細胞の活性化に関与するインテグリンとの相互作用を支持する（例えば、インテグリンα５β１またはαｖβ３とのトランス相互作用またはシス相互作用を支持する）。さらに好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントは、同時刺激に関与するリガンドとの相互作用を支持する（例えば、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのシス型相互作用を支持する）。
【０００８】
ＮＣＡＭ  Ｌ１の産生および／または同時刺激機能を増強する任意の因子が、本発明の方法において使用され得る。好ましくは、ここにおいて使用される因子は、２つのＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントの間のＬ１−Ｌ１同種親和性相互作用、あるいは１つのＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントとＴ細胞活性化に関与するインテグリンとの間の相互作用、あるいは、１つのＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントと同時刺激に関与するリガンドとの間の相互作用を増強する。１つの例示的な因子は、抗ＮＣＡＭ  Ｌ１モノクローナル抗体５５７．Ｂ６である（Ａｐｐｅｌら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２８（３）：２９７−３１２（１９９５））。
【０００９】
任意の哺乳動物起源由来のＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントが使用され得る。好ましくは、処置される哺乳動物がヒトである場合には、ヒト起源のＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントが使用される。
【００１０】
本発明の方法を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞または両方を活性化し得る。本発明の方法を使用して、予防的または治療的のいずれかで、Ｔ細胞活性化の欠損に関連した疾患または障害を有する哺乳動物を処置し得る。このような疾患または障害の例としては、腫瘍、癌および感染が挙げられるが、これらに限定されない。腫瘍、癌または感染を有する哺乳動物（好ましくは、ヒト）が、本発明の方法で処置される。
【００１１】
別の局面では、本発明は配合物に関する。この配合物は、以下を含む：ａ）有効量の多量体化されたＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメント、あるいは、このＬ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいは、このＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子；および、ｂ）有効量の別の同時刺激分子。好ましくは、この配合物は、薬学的組成物の形態である。さらに、本発明は、Ｔ細胞の活性化を増強するための方法に関する。この方法は、有効量の多量体化されたＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能的な誘導体もしくはフラグメント、あるいはこのＬ１またはその機能的な誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいはこのＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子と、有効量の別の同時刺激分子とを、Ｔ細胞の活性化が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を増強する工程を包含する。任意の同時刺激分子が、上記の配合物および方法において使用され得る。好ましくは、使用される同時刺激分子は、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢまたはＩＣＯＳである。また好ましくは、同時刺激分子は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）由来である（例えば、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４０またはＢ７）。
【００１２】
さらに別の局面では、本発明は、Ｔ細胞の活性化を減少または阻害するための方法を提供する。この方法は、ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの有効量を、Ｔ細胞の活性化の減少または阻害が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を減少または阻害する工程を包含する。
【００１３】
ＮＣＡＭ  Ｌ１の産生および／または同時刺激機能を減少または阻害する任意のアンタゴニストが、本発明の方法において使用され得る。このアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ＮＣＡＭ  Ｌ１抗体、特に、モノクローナル抗体（例えば、ｍＡｂ  ５Ｇ３）、可溶性ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはそれらの誘導体もしくはフラグメントであり得る。このアンタゴニストは、Ｌ１−Ｌ１同種親和性相互作用（例えば、抗原提示細胞とＴ細胞との間のＬ１−Ｌ１結合）を減少または阻害し得る。このアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１のクラスター形成およびシグナル伝達を同時に引き起こすことなく、Ｌ１−Ｌ１結合を減少または阻害し得る。このアンタゴニストは、Ｔ細胞の活性化に関与するインテグリンとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用（例えば、インテグリンα５β１またはαｖβ３とのＮＣＡＭ  Ｌ１のトランス相互作用またはシス相互作用）を減少または阻害し得るか、あるいは、同時刺激に関与するリガンドとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用（例えば、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用）を減少または阻害し得る。好ましくは、この方法または配合物において使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、タンパク質アンタゴニスト、ポリペプチドアンタゴニストまたはペプチドアンタゴニストである。また好ましくは、この方法または配合物において使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、低分子アンタゴニスト（例えば、エタノール）である（Ｂｅａｒｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４（１９）：１３２６４−１３２７０（１９９９））。
【００１４】
本発明の方法を使用して、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞または両方の活性化を減少または阻害し得る。
【００１５】
本発明の方法を使用して、予防的または治療的のいずれかで、望ましくないＴ細胞活性化に関連した疾患または障害を有する哺乳動物を処置し得る。このような疾患または障害の例としては、自己免疫、移植片拒絶、および神経免疫学的障害が挙げられるが、これらに限定されない。自己免疫、移植片拒絶、および神経免疫学的障害を有する哺乳動物（好ましくは、ヒト）が、本発明の方法で処置される。
【００１６】
なお別の局面では、本発明は配合物に関する。この配合物は、以下を含む：ａ）有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニスト；および、ｂ）有効量の別の同時刺激阻害分子。好ましくは、この配合物は、薬学的組成物の形態である。さらに、本発明は、Ｔ細胞の活性化を減少または阻害するための方法に関する。この方法は、ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの有効量と、別の同時刺激阻害分子の有効量とを、Ｔ細胞の減少または阻害が所望される哺乳動物に投与し、それによりこの哺乳動物におけるＴ細胞の活性化を減少または阻害する工程を包含する。任意の同時刺激阻害分子が、上記の配合物および方法において使用され得る。好ましくは、使用される同時刺激阻害分子は、Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）である。
【００１７】
（本発明の実行様式）
（Ａ．定義）
本明細書にて使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、別途規定のない限り、本発明が帰属する分野の当業者により通常理解されるのと同じ意味を有す。本明細書にて引用されるすべての特許、出願、公開された出願およびその他の刊行物、ならびにＧｅｎ  Ｂａｎｋおよびその他のデータベースからの配列は、その全体が参考として援用される。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「Ｔ細胞活性化」とは、Ｔ細胞増殖、サイトカイン分泌および／またはエフェクター機能を含む様々な応答を示す、休止Ｔ細胞の細胞活性化を指す。Ｔ細胞活性化は、抗原／ＭＨＣ複合体によるＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）の刺激によって誘導され得る。あるいは、Ｔ細胞活性化は、特定のレクチン（例えば、フィトヘマグルチニンまたは抗ＴＣＲモノクローナル抗体）により誘導され得る。
【００１９】
本明細書で使用される場合、「同時刺激分子（ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」は、ＴＣＲの事前結合の結果を調節してＴ細胞増殖およびエフェクター機能を含むＴ細胞活性化現象を強める、分子を指す。同時刺激分子によるシグナルは、抗原特異的でなく、ＭＨＣに拘束されてもいない。そして、そのシグナルは、単独では、すなわちＴＣＲ結合の不在下では、Ｔ細胞における有意な応答を誘導不能である。同時刺激分子の非存在下では、ＴＣＲの結合は、非免疫応答を生じないか、または反応性低下を生じる。
【００２０】
本明細書にて使用される場合、「神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）」は、ＩｇＳＦスーパーファミリーに属し、かつＴ細胞活性化において同時刺激分子として機能し得る、神経細胞接着分子を指す。（例えば、ＡＰＣとＴ細胞との間のＬ１−Ｌ１結合を媒介する）Ｌ１−Ｌ１同種親和性相互作用を介して、または、Ｔ細胞活性化に関係するインテグリン（例えば、インテグリンα５β１またはインテグリンαｖβ３）との相互作用を介して、または同時刺激に関係するリガンド（例えば、ＣＤ９および／またはＣＤ２４）との相互作用を介して、ＮＣＡＭ  Ｌ１は、同時刺激分子機能を発揮し得る。好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１は、６つの免疫グロブリン様領域を有し、そして５つのＩＩＩ型フィブロネクチンドメインを有し、そして側鎖が小さいアミノ酸（例えばグリシン）で始まる十分な数（例えば２３個）疎水性アミノ酸残基を有する領域で細胞膜を貫通すると予測される膜貫通型糖タンパク質である（ＥＰ  ０，５７２，６６４  Ａ１；およびＭｏｏｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：７０１−７０３（１９８８））。ＮＣＡＭ  Ｌ１は、その同時刺激活性を実質的には変化しない、保存的アミノ酸置換を含む改変体を含むことが、意図される。アミノ酸の適切な保存的置換は、当業者には周知であり、一般的には、生じる分子の生物学的活性を変化させずになされ得る。一般的に、ポリペプチドの非重要領域における単一のアミノ酸置換は、生物活性を実質的には変化させないことを、当業者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，第４版，１９８７年，Ｔｈｅ  Ｂｅｊａｃｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．ｃｏ．，ｐ．２２４参照のこと）。
【００２１】
本明細書にて使用される場合、ミスマッチの割合を決定する際のハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは次の通りである
１）高ストリンジェンシー：０．１×ＳＳＰＥ、０．１％  ＳＤＳ、６５℃
２）中ストリンジェンシー：０．２×ＳＳＰＥ、０．１％  ＳＤＳ、５０℃
３）低ストリンジェンシー：１．０×ＳＳＰＥ、０．１％  ＳＤＳ、５０℃
等価のストリンジェンシーは、別の緩衝液、塩および温度により達成され得ることが、理解される。
【００２２】
本明細書にて使用される場合、「ＮＣＡＭ  Ｌ１の機能的誘導体または機能的フラグメント」は、同時刺激分子としての機能をなお実質的に保持する、ＮＣＡＭ  Ｌ１の機能的誘導体または機能的フラグメントを指す。通常は、機能的誘導体または機能的フラグメントは、ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激活性の少なくとも１％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％を保持する。好ましくは、機能的誘導体または機能的フラグメントは、ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激活性の少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％および１００％を保持する。ＮＣＡＭ  Ｌ１の機能的誘導体または機能的フラグメントもまた、同時刺激分子としての機能を実質的に保持する、ＮＣＡＭ  Ｌ１のペプチド誘導体もしくはポリペプチド誘導体またはペプチドフラグメントもしくはポリペプチドフラグメントを含む。
【００２３】
本明細書にて使用される場合、「ＮＣＡＭ  Ｌ１の生成を増強する因子」は、ＮＣＡＭ  Ｌ１遺伝子の転写および／または翻訳を増加させる物質、またはＮＣＡＭ  Ｌ１前駆体の翻訳後修飾および／または細胞内輸送を増加させる物質、またはＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質の半減期を延長する物質を指す。
【００２４】
本明細書にて使用される場合、「ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激機能を増強する因子」は、ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激活性の効力を増加させる物質、または同時刺激シグナル伝達経路にてＮＣＡＭ  Ｌ１の天然のリガンドの感受性を増加させる物質、またはＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストの効力を減少させる物質を指す。
【００２５】
本明細書にて使用される場合、「インテグリン」は、α鎖サブユニットおよびβ鎖サブユニットから構成されるヘテロダイマーである、細胞膜糖タンパク質の１ファミリーを指す。インテグリンは、細胞―細胞間または細胞−基材間の接着（例えば、内皮細胞への好中球の接着の媒介、またはコラーゲンなどの細胞外マトリックスへの好中球の接着の媒介）に関与する糖タンパク質レセプターとして役立つ。
【００２６】
本明細書にて使用される場合、「新生物（新形成）」は、異常な新規増殖を指し、従って、腫瘍と同意であり、良性であっても悪性であってもよい。過形成とは異なり、新生増殖は、元来の刺激の非存在下であっても増殖を堅持する。
【００２７】
本明細書にて使用される場合、「癌」は、あらゆるタイプの悪性腫瘍により起こされる疾患に関する一般的な語句を指す。
【００２８】
本明細書にて使用される場合、「ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニスト（または、ＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニスト）」は、ＮＣＡＭ  Ｌ１の生成および／または同時刺激機能を減少させる物質を指す。そのようなアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１遺伝子の転写および／または翻訳を低下させること、またはＮＣＡＭ  Ｌ１前駆体の翻訳後修飾および／または細胞内輸送を低下させること、またはＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質の半減期を短縮することにより、ＮＣＡＭ  Ｌ１の生成を減少し得る。そのようなアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激活性の効力を低下させることにより、または同時刺激シグナル伝達経路においてＮＣＡＭ  Ｌ１の天然リガンドの感度を低下させることにより、またはＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストの効力を増加させることにより、ＮＣＡＭ  Ｌ１の同時刺激機能を低下させ得る。ＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、タンパク質アンタゴニスト、ポリペプチドアンタゴニスト、ペプチドアンタゴニスト、または低分子アンタゴニストを含む、様々の型の物質であり得る。
【００２９】
本明細書にて使用される場合、「抗体」は、抗体フラグメント（例えば、軽鎖および多様な重鎖可変領域から構成される、Ｆａｂ領域）を包含する。
【００３０】
本明細書にて使用される場合、「配合物」は、２つ以上の項目間の任意の結合を指す。
【００３１】
本明細書にて使用される場合、「組成物」は、２つ以上の生成物または２つ以上の化合物の任意の混合物を指す。組成物は、溶液、懸濁液、液体、粉末、糊状物、水性物質、非水性物質またはそれらの配合物であり得る。
【００３２】
本明細書にて使用される場合、「アンチセンスポリヌクレオチド」は、ｍＲＮＡまたは二本鎖ＤＮＡのセンス鎖に相補的な、ヌクレオチド塩基の合成配列を指す。適切な条件下でセンスポリヌクレオチドとアンチセンスポリヌクレオチドとの混合が、その二つの分子の結合、すなわちハイブリダイゼーションを生じる。これらのポリヌクレオチドがｍＲＮＡと結合（ハイブリダイズ）する場合、タンパク質合成（翻訳）の阻害が生じる。これらのポリヌクレオチドが二本鎖ＤＮＡと結合する場合、ＲＮＡ合成（転写）の阻害が生じる。結果として生じる翻訳および／または転写の阻害により、センス鎖にコードされるタンパク質の合成阻害がもたらされる。
【００３３】
本明細書にて使用される場合、「ＮＣＡＭ  Ｌ１アンチセンスポリヌクレオチド」は、ＮＣＡＭ  Ｌ１ポリペプチドの生成または発現を妨げる任意のオリゴマーを指す。そのようなオリゴマーの大きさは、この目的に有効な任意の長さであり得る。一般的に、このアンチセンスオリゴマーは、翻訳開始コドンを含むＮＣＡＭ  Ｌ１の転写部分のヌクレオチド配列に合致して調製され、そして翻訳の阻害のために十分な数の相補ヌクレオチドを含む。
【００３４】
本明細書にて使用される場合、「自己免疫」とは、身体自体の組織に対する特定の体液性免疫応答または細胞性免疫応答を指す。
【００３５】
開示を明確にするためであり、限定のためではないが、本発明の詳細な説明を、以下の小区分に分割する。
【００３６】
（Ｂ．Ｔ細胞活性化を増強するための方法）
一つの局面では、本発明は、Ｔ細胞活性化を増強するための方法を提供し、その方法は、有効量の、多量体化した神経細胞接着分子Ｌ１（ＮＣＡＭ  Ｌ１）またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメント、あるいはそのＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントをコードする核酸、あるいはそのＮＣＡＭ  Ｌ１の生成および／または同時刺激機能を増強する因子を、Ｔ細胞の活性化が望ましい哺乳動物に投与することを包含し、それによりこの哺乳動物においてＴ細胞活性化を増強する。
【００３７】
Ｔ細胞活性化において刺激分子として機能し得る、任意の多量体化（例えば二量体）ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメント、およびそのようなＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくはその機能的フラグメントをコードする任意の核酸が、本方法で使用され得る。
【００３８】
例えば、次のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質が、使用され得る：Ｔ３０５３２（Ｆｕｇｕ  ｒｕｂｒｉｐｅｓ）；Ｔ３０５８１（ゼブラダニオ）；Ｓ３６１２６（ラット）；Ａ４３４２５（ニワトリ）；Ｓ０５４７９（マウス）；Ａ４１０６０（ヒト）；ＮＰ＿０３２５０４（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＮＰ＿００６６０５（現人類のＬｌに近いホモログ）；ＮＰ＿０００４１６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＦ２２１５３（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＣＡＢ５７３０１（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；Ｐ３２００４（ヒト）；Ｑ０５６９５（ラット）；Ｐ１１６２７（マウス）；ＡＡＤ２８６１０（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｕｓ  ａｅｔｈｉｏｐｓ）；ＣＡＢ３７８３１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＣ５１７４６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＣ１５５８０（Ｆｕｇｕ  ｒｕｂｒｉｐｅｓ）；ＡＡＣ１４３５２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＣＡＡ９６４６９（Ｆｕｇｕ  ｒｕｂｒｉｐｅｓ）；ＣＡＡ８２５６４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＣＡＡ４１５７６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；１４１１３０１Ａ；ＣＡＡ４２５０８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＣＡＡ４１８６０（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡＡ９９１５９（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ａｕｒａｔｕｓ）；ＣＡＡ６１４９１（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ）；ＣＡＡ６１４９０（Ｄａｎｉｏ  ｒｅｒｉｏ）；ＡＡＡ５９４７６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＡ３６３５３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）。さらに、同時刺激活性をなお実質的に保持する、上記ＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質に由来する任意のタンパク質またはそのような上記ＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質の一部分が使用され得る。好ましくは、そのようなＮＣＡＭ  Ｌ１誘導体またはＮＣＡＭ  Ｌ１フラグメントは、その誘導体またはフラグメントが起源とするＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質を特異的に認識する抗体によって、認識され得る。
【００３９】
同様に、次のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質をコードする核酸が使用され得る：ＡＣ００５７７５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＣ  ００４６９０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｍ２８２３１（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ神経膠前駆細胞）；ＡＨ００６３２６（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ神経膠（ｎｒｇ），選択的スプライシング産物）；ＡＦ０５００８５（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ  ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ神経膠（ｎｒｇ）遺伝子）；ＡＦ１７２２７７（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＦ１３３０９３（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＪ２３９３２５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＬ０２１９４０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＦ１２９１６７（Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ  ａｅｔｈｉｏｐｓ）；ＡＪ０１１９３０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｕ５２１１２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｍ９７１６１（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＣ００５６２６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＦ０２６１９８（Ｆｕｇｕ  ｒｕｂｒｉｐｅｓ）；Ｍ７７６４０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｕ５５２１１（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ  ａｕｒａｔｕｓ）；Ｍ７４３８７（ヒト）。さらに、同時刺激活性をなお実質的に保持する、ＮＣＡＭ  Ｌ１タンパク質をコードする上記核酸に由来する、任意の核酸またはその核酸の一部が、使用され得る。好ましくは、そのようなＮＣＡＭ  Ｌ１核酸誘導体またはＮＣＡＭ  Ｌ１フラグメントは、低ストリンジェンシー、中ストリンジェンシーまたは高ストリンジェンシーの条件下で、その誘導体またはフラグメントが起源とするＮＣＡＭ  Ｌ１核酸に、ハイブリダイズし得る。
【００４０】
好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントは、Ｌ１−Ｌ１同種親和性の相互作用（例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）とＴ細胞との間のＬ１−Ｌ１結合）を媒介し得る。また好ましくは、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントは、Ｔ細胞活性化に関係するインテグリンとの相互作用を支持する。（例えば、インテグリンα５β１（Ｒｕｐｐｅｒｔら、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，１３１：１８８１−１８９１（１９９５））、またはインテグリンα５β３、（Ｓｔｕｒｍｈｏｆｅｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（５）：２１０４−１１（１９９５）；およびＰｏｕｌら、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３２（２）１０１−１６（１９９５））、またはＣＤ１１ｃ、β２インテグリン（Ｍｅｕｎｉｅｒら、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１０３（６）：７７５−９（１９９４））、またはＶＬＡインテグリンファミリー（Ｄａｎｇら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７２（２）：６４９−５２（１９９０））との、トランス相互作用またはシス相互作用を支持する。さらに好ましくは、このＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントは、同時刺激に関係するリガンドとの相互作用を支持し、例えば、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのシス型相互作用を支持する（Ｌｉｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７５：：４３７−４４５（１９９２）；およびＬａｇａｕｄｒｉｅｒｅ−Ｇｅｓｂｅｒｔら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１８２：１０５−１１２（１９９７））。
【００４１】
ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメント、または、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントをコードする核酸は、当業者に公知の任意の方法により、哺乳動物に投与され得る。例えば、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメント、または、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントをコードする核酸は、哺乳動物に直接投与され得る。あるいは、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメント、または、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントをコードする核酸は、抗原提示細胞（例えばマクロファージおよび樹状細胞）に送達され得、そしてその後、そのＮＣＡＭ  Ｌ１または核酸を含む抗原提示細胞が、哺乳動物に投与される。
【００４２】
ＮＣＡＭ  Ｌ１の生成および／または同時刺激機能を増強する任意の因子が、本方法で使用され得る。好ましくは、本方法で使用される因子は、２つのＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントの間のＬ１−Ｌ１同種親和性相互作用、または、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントと、Ｔ細胞活性化に関係するインテグリンとの間の相互作用、または、ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントと、同時刺激に関係するリガンドとの間の相互作用を、増強する。
【００４３】
ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその機能的誘導体もしくは機能的フラグメントは、あらゆる哺乳動物に由来するものが使用され得る。好ましくは、処置される哺乳動物がヒトである場合、ヒト起源のＮＣＡＭ  Ｌ１またはＮＣＡＭ  Ｌ１の機能性の誘導体もしくはそのフラグメントが使用される。
【００４４】
本発明の方法は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両者を活性化するために使用され得る。本発明の方法は、予防的にまたは治療的に、欠損性のＴ細胞活性化に関連する疾患または障害を有する哺乳動物を処置し得る。そのような疾患あるいは障害の例としては、腫瘍、癌または感染が挙げられるが、その限りではない。本発明を用いて処置され得る腫瘍または癌の例としては、乳癌、バーキットリンパ腫、結腸癌、小細胞肺癌、黒色腫、多発性内分泌腺腫（ＭＥＮ）、神経繊維芽細胞種、ｐ５３関連腫瘍、膵臓癌、前立腺癌、Ｒａｓ関連腫瘍、網膜芽細胞腫およびフォン・ヒッペル−リンダウ病（ＶＨＬ）が挙げられる。好ましくは、免疫系および／または神経系から発生する腫瘍または癌が、処置され得る。
【００４５】
腫瘍、癌または感染症を有する、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、イヌ、ブタ、雌ウシ、雄ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、サルおよび他のヒト以外の霊長類などのあらゆる哺乳動物は、本方法にて処置され得る。好ましくは、腫瘍または癌を有するヒトが、本方法にて処置される。
【００４６】
（Ｃ．Ｔ細胞活性化を阻害するための方法）
別の局面では、本発明は、Ｔ細胞活性化を減少させるか、または阻害する方法に関する。この方法は、Ｔ細胞の減少または阻害が所望される哺乳動物にＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストを有効量を投与する工程を包含し、それによって、その哺乳動物におけるＴ細胞活性化を減少または阻害する。
【００４７】
ＮＣＡＭ  Ｌ１の産生および／または同時刺激機能を減少または阻害するあらゆるアンタゴニストが、本方法に使用され得る。好ましくは、ここで使用されるアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１のアンチセンスオリゴヌクレオチド、抗ＮＣＡＭ  Ｌ１抗体（特に、ｍＡｂ  ５Ｇ３（Ｂａｌａｉａｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３０（３）：９３８−４３（２０００））のようなモノクローナル抗体、可溶性ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその誘導体もしくはフラグメントである。また好ましくは、使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、例えば、抗原提示細胞とＴ細胞との間とのＬ１−Ｌ１連結のようなＬ１−Ｌ１同種親和性相互作用を、減少または阻害する。より好ましくは、これらのアンタゴニストは、ＮＣＡＭ  Ｌ１のクラスター化およびシグナル伝達を同時に引き起こすこと無く、Ｌ１−Ｌ１連結を減少または阻害する。なお好ましくは、使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストは、Ｔ細胞活性化に関係するインテグリンとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用（例えば、インテグリンα５β１、αｖβ３、ＣＤ１１ｃ、β２インテグリン、またはＶＬＡインテグリンファミリーとの、ＮＣＡＭ  Ｌ１のトランス相互作用またはシス相互作用）を減少もしくは阻害するか、または、同時刺激に関係するリガンドとのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用（例えば、ＣＤ９および／またはＣＤ２４とのＮＣＡＭ  Ｌ１の相互作用を減少もしくは阻害する。
【００４８】
好ましい実施形態では、本方法または配合物で使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドアンタゴニストである。別の好ましい実施形態では、本方法または配合物で使用されるＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニストは、小分子アンタゴニスト（例えば、エタノール）である（Ｂｅａｒｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４（１９）：１３２６４−１３２７０（１９９９））。
【００４９】
本方法は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはその両者の活性化を減少または阻害するために使用され得る。
【００５０】
本方法は、所望されないＴ細胞活性化に関連する疾患または障害を有する哺乳動物を、予防的にまたは治療的に処置するために使用される。そのような疾患または障害の例としては、自己免疫、移植片拒絶および神経性免疫障害が挙げられるが、その限りではない。自己免疫、移植片拒絶および神経性免疫障害を有する哺乳動物（好ましくは、ヒト）は、本方法にて処置される。
【００５１】
（Ｄ．配合物およびコンビナトリアル処置）
なお別の局面では、本発明は、配合物に関する。その配合物は、以下を含む：ａ）有効量の多量体化ＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能性の誘導体もしくはフラグメント、またはＬ１またはその機能性の誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいはそのＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子；あるいはｂ）有効量の別の同時刺激分子、または免疫刺激物質（例えば、同時刺激分子のアゴニスト）、または特定のサイトカイン（例えばＩＬ−２）。好ましくは、この配合物は、薬学的組成物の形態である。さらに、本発明は、Ｔ細胞活性化を増強するための方法に関する。この方法は、有効量の多量体化ＮＣＡＭ  Ｌ１またはその誘導体もしくはフラグメント、あるいはＮＣＡＭ  Ｌ１、またはその機能性の誘導体もしくはフラグメントをコードする核酸、あるいはそのＬ１の産生および／または同時刺激機能を増強する因子、および別の同時刺激分子または免疫刺激物質の有効量を、Ｔ細胞活性化が所望される哺乳動物に投与する工程を含み、それによって、上記哺乳動物にてＴ細胞活性化が増強される。あらゆる同時刺激分子が、上記の配合物および方法にて使用され得る。好ましくは、同時刺激分子はＣＤ２８、ＯＸ４０、Ａ−１ＢＢまたはＩＣＯＳである。
【００５２】
ＣＤ２８は、主要な陽性Ｔ細胞同時刺激分子であり、Ｔ細胞増殖に不十分なＴＣＲ刺激の存在下で、Ｔ細胞活性化を増強する能力によって定義される（一般的に、ＣｈａｍｂｅｒｓおよびＡｌｌｉｓｏｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１（２）：２０３−１０（１９９９）を参照のこと）。ＣＤ２８は、Ｔ細胞にホモ二量体で発現される免疫グロブリンスーパーファミリー糖タンパク質である。ＣＤ２８は、リガンドＢ７．１およびＢ７．２に対して、免疫グロブリン領域のＭＹＰＰＰＹ（１文字標記アミノ酸）モチーフを介して結合する。ＣＤ２８の細胞質内テールは、シグナル伝達およびタンパク質輸送に関係すると推定される、チロシンを含むモチーフを有する。特定の実施形態では、以下のＧｅｎｂａｎｋ登録番号を有するＣＤ２８タンパク質が、配合物およびコンビナトリアル処置において使用され得る：ＮＰ＿００６１３０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｂ４５８９５（ヒト）；Ｉ４９５８４（マウス）；Ｉ４６６８９（ウサギ）；Ｓ２４４１３（ラット）；Ａ４３５２３（マウス）；ＲＷＨＵ２８（ヒト）；ＡＡＦ４５１５０（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＢＡＡ９２３４９（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＡＡＦ３６５０１（Ｍａｒｍｏｔａ  ｍｏｎａｘ）；ＮＰ＿０３７２５３（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡＦ３３７９４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＦ３３７９３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＦ３３７９２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＢＡＡ０８６４１（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；ＮＰ＿０３１６６８（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＮＰ＿００８８２０（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＮＰ＿００５１８２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｑ２８０７１（Ｂｏｖｉｎ）；Ｐ４２０６９（ウサギ）；Ｐ３１０４２（ラット）；Ｐ３１０４１（マウス）；Ｐ３１０４３（ニワトリ）；Ｐ１０７４７（ヒト）ＡＤ０４３７９（Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅ  ｇｉ）；ＡＡＢ５３５７４（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＣＡＡ６３７０７（Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ）；ＣＡＡ３９００３（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＡＡ５１９４５（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＡ５１９４４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＡ３７３９５（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＡＡ３７３９６（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。同様に、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＣＤ２８タンパク質をコードする核酸が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：ＡＢ０２５３１６（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＡＦ１３０４２７（Ｍａｒｍｏｔａ  ｍｏｎａｘ）；ＡＦ２２２３４３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＦ２２２３４２（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＦ２２２３４１（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｄ４９８４１（ウサギ）；ＡＦ０９２７３９（ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓ）；Ａｌ５２８６９０（マウス）；ＡＩ３８６０９６（ヒト）；ＡＩ３２７３６７（マウス）；ＡＩ３２４３８２（マウス）；ＡＩＩ５２２０５（マウス）；ＡＡ９４０５５９（マウス）；Ｕ５７７５４（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＡＡ１７４１８（ヒト）；ＡＡ１６３８２５（マウス）；Ｊ０２９８８（ヒト）；Ｍ３４５６３（マウス）。
【００５３】
別の実施形態では、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＯＸ４０タンパク質が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：１３７５５２（ＯＸ４０  ヒト  ホモログ）；ＪＥ０３５１（ラット）；１４８７００（マウス）；Ｓ４８２９０（マウス）；Ｓ１２７８３（ラット）；１Ｄ０ＡＬ  １Ｄ０ＡＫ（Ｌ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＪ（Ｊ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＩ（Ｉ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＨ（Ｈ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＧ（Ｇ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＦ（Ｆ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＥ（Ｅ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＤ（Ｄ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＣ（Ｃ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＢ（Ｂ鎖，ヒト）；１Ｄ０ＡＡ（Ａ鎖，ヒト）；ＮＰ  ００３３１８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＣＡＡ１８４３８（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；００２７６５（ウサギ）；Ｐ４７７４１（マウス）；Ｐ４３４８８（マウス）；Ｐ１５７２５（ラット）；Ｐ２３５１０（ヒト）；ＡＡＣ６７２３６（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＢＡＡ２００６０（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；ＢＡＡ  ２００５９（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；ＡＡＢ３３９４４（ヒト）；ＣＡＡ５３５７６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＣＡＡ７９７７２（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＣＡＡ５９４７６（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＡＡ２１８７１（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。同様に、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＯＸ４０タンパク質をコードする核酸が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：ＡＬ０２２３１０（ヒト）；ＡＦ０３７０６７（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＢ００３９１２（ウサギ）；Ｕ１２７６３（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。
【００５４】
なお別の特定の実施形態では、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有する４−１ＢＢタンパク質が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：１３８４２７（ヒト）；１３８４２６（ヒト）；１５３３８４（マウス）；Ｂ３２３９３（マウス）；Ｐ４１２７３（ヒト）；Ｐ４１２７４（マウス）；Ｑ０７０１１（ヒト）；Ｐ２０３３４（マウス）；ＡＡＡ９３１１３（ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＡＡ５３１３４（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＡ５３１３３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；ＡＡＡ４０１６７（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＡＡ３９４３５（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。同様に、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有する４−１ＢＢタンパク質をコードする核酸が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：ＡＩ６６４２８６  ；ＡＩＩ５７８７２  ；ＡＡ１０９７２６；ＡＡ３８９０４５；ＡＡ１５５１４７；ＡＡ０８７１０７；Ｗ６２９０６；Ｕ０２５６７（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；Ｕ０３３９８（ヒト）；Ｕ０３３９７（ヒト）；Ｊ０４４９２（マウス）；Ｌ１５４３５（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。
【００５５】
最近、ＩＣＯＳとよばれるＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４ホモログが、活性化ヒトＴ細胞より単離された。ＩＣＯＳは、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４に類似の構造を持つが、保存されたＭＹＰＰＹモチーフは持たず、これは、ＩＣＯＳが独自のリガンドに結合することを示唆する。ＩＣＯＳにクロスリンクする抗体は、抗ＣＤ３媒介Ｔ細胞の増殖およびサイトカイン産生を増強するが、しかしＣＤ２８とは異なり、ＩＬ−２の産生は増強しない。以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＩＣＯＳタンパク質およびＩＣＯＳタンパク質をコードする核酸が、配合物およびコンビナトリアル処理に使用され得る：Ｓ７８５４０（ヒト）およびＡＪ２５０５５９（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）。
【００５６】
また好ましくは、例えば、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４０またはＢ７などの同時刺激分子は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に由来する。
【００５７】
なお別の局面では、本発明は、配合物に関する。この配合物は、以下を含む：ａ）有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１アンタゴニスト；およびｂ）有効量の別の同時刺激阻害分子。好ましくは、その配合物は、薬学的組成物の形態である。さらに、本発明は、Ｔ細胞活性化を減少または阻害する方法に関する。この方法は、有効量のＮＣＡＭ  Ｌ１のアンタゴニストおよび有効量の別の同時刺激阻害分子を、Ｔ細胞の減少または阻害が望まれる哺乳動物に投与する工程を含み、それによって、その哺乳動物においてＴ細胞活性化を減少または阻害する。
【００５８】
あらゆる同時刺激阻害分子が上記配合物および方法で使用され得る。例えば、同時刺激阻害分子は、上記の同時刺激分子（例えば、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４−１ＢＢまたはＩＣＯＳ）を含む同時刺激分子のアンタゴニストであり得、そしてその同時刺激分子は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えば、ＬＦＡ−１、ＬＦＡ−３、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−２、ＩＣＡＭ−３、ＣＤ４０またはＢ７）に由来する。
【００５９】
別の例において、使用される同時刺激阻害分子は、Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）である（ＣｈａｍｂｅｒｓおよびＡｌｌｉｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１（２）：２０３−１０（１９９９））。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞にホモ二量体で発現される免疫グロブリンスーパーファミリー糖タンパク質である。ＣＴＬＡ−４は、リガンドＢ７．１およびＢ７．２に対して、免疫グロブリンドメインのＭＹＰＰＰＹ（１文字標記アミノ酸）モチーフを介して結合する。ＣＴＬＡ−４は、ＣＤ２８と比較してＢ７リガンドに対して１０倍高い親和性および１００倍高いアビディティを有し、別の結合動態を示す。ＣＴＬＡ−４の細胞質内テールは、シグナル伝達およびタンパク質輸送に関係すると推定される、チロシンを含むモチーフを有する。別の特定の実施形態では、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＣＴＬＡ−４タンパク質が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：Ｉ４６６９６（ウサギ）；ＢＡＡ０８６４４（ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ  ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）；Ｐ４２０８１（ヒト）；Ｐ４２０７２；Ｐ１６４１０；Ｐ０９７９３；Ｐ３３６８１；ＡＡＤ５０９８８（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＡＡＤ００６９８；ＡＡＤ００６９７；（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；ＡＤ００６９６；（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；１ＡＨ１；２２０７２５７Ａ；１３０９３０２Ａ；ＣＡＡ６３７０８（Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ）；ＣＡＡ２９１９１（Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓ）；ＡＡＡ８６４７３（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）。同様に、以下のＧｅｎＢａｎｋ登録番号を有するＣＴＬＡ−４をコードする核酸が、配合物およびコンビナトリアル処置方法に使用され得る：ＡＦ１３０４２８（Ｍａｒｍｏｔａ  ｍｏｎａｘ）；Ｄ４９８４４（ウサギ）；ＡＦ１４３２０４（イヌ科繁殖ビーグル（ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ  ｂｒｅｅｄ  ｂｅａｇｌｅ））；ＡＦ１７０１７２５（Ｆｅｌｉｓ  ｃａｔｕｓ）；ＡＦ０９２７４０（Ｏｖｉｓ  ａｒｉｅｓ）；ＡＦ１５３２０２（Ｆｅｌｉｘ  ｃａｔｕｓ）；Ｕ９０２７１（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｕ３７１２１（Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ）；Ｌ１５００６（Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ）；Ｕ１７７２２（ヒト）。
【００６０】
上記の組成物、配合物（好ましくは薬学的組成物の形態で）の投与の処方、投薬量、経路は、当業者に公知の方法により決定される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｌｆｏｎｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ａｐｒｉｌ  １９９７；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，ａｎｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂａｎｇａ，１９９９；およびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＨｏｖｇａａｒｄおよびＦｒｋｊｒ編，Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ，Ｉｎｃ．，２０００；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＬａｓｉｃおよびＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８；Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｊａｉｎ，Ｈｏｇｒｅｆｅ  ＆  Ｈｕｂｅｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９８；Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ：Ｂａｓｉｃ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｔｏ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．１５，Ｓｅｔｈ，Ｌａｎｄｅｓ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９；Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｗｕ−ＰｏｎｇおよびＲｏｊａｎａｓａｋｕｌ編，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９；Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂａｓｉｃ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｖｏｌ．２８，Ｄｏｌｅら編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９を参照のこと）。組成物、配合物または薬学的組成物は、経口投与、直腸投与、局所投与、吸引投与、頬投与（例、舌下投与）、非経口投与（例えば、皮下投与、筋肉内投与、皮内投与または静脈内投与）、経皮投与、または他の任意の適切な投与経路の方法に対して処方され得る。任意の所定の場合での最も適切な経路は、処置される状態の性質および重篤度、および使用される特定の組成物、配合物または薬学的組成物の性質に依存する。
【００６１】
以下の実施例は、例示目的のためのみで含まれ、本発明の範囲を限定することを意図しない。
【００６２】
（Ｅ．実施例）
（Ｌ１連結は最適なアロ刺激に必要とされる）
ＤＣは、免疫系において最も秀でたＡＰＣとして特徴付けられ、そして初代ＭＬＲ細胞の主な刺激物質と認識される。「刺激物質である」ＤＣの集団は、ＣＤ３４＋に富んだ幹細胞から、ＧＭ−ＣＳＦ、ＳＣＦ、ＩＬ−３、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−４の配合物を使用して生成される（＞７６％の純度）。１４日〜２１日後、これらの細胞は予想されるＤＣの形態および表現型（ＣＤ１ａ＋、ＣＤ８０＋、ＣＤ８６＋、ＣＤ３−、ＣＤ１４−、ＣＤ１９−、ＣＤ５６−）を獲得する（データ未掲載）。重要なことに、このＤＣ表現型の獲得は、Ｌ１発現の誘導によっても記録される（図１Ａ）。これらＤＣにおけるＬ１発現は、ＤＣ前駆体および単球由来ＤＣ細胞におけるＬ１発現を記載した本発明者らの以前の報告に合致している（文献１１）。同種異系ＭＬＲを確立するために、Ｌ１＋ＤＣを異なるドナー由来のＰＢＭＣと共培養した。Ｌ１のこの同種異系ＭＬＲへの寄与を、Ｌ１特異的なｍＡｂ（ｍＡｂ  ５Ｇ３；文献１１）を含有させることによって決定した。重要なことに、アイソタイプ適合性のコントロール抗体（ＵＰＣ１０）が有意な効果を持たないにもかかわらず、このｍＡｂ  ５Ｇ３抗体は有意に同種異系ＰＢＬ応答を低下させた（図１Ｂ）。多くの異なるドナー由来のＰＢＭＣを使用して、本発明者らは２５％〜４０％間の阻害レベルを観察した（未掲載）。
【００６３】
（Ｌ１連結はＰＨＡおよびＣＤ３に対するＴ細胞応答を強化する）
自己反応システムでの同時刺激機能をさらに確認するために、本発明者らは抗Ｌ１抗体５Ｇ３が、Ｔ細胞マイトジェンＰＨＡに対する増殖応答も低下させるか否かを決定した。重要なことに、このｍＡｂによるＬ１抑制は、ＰＢＭＣ画分内で有意にＴ細胞増殖を低下させ（図２ＡおよびＢ）、そしてＴ細胞に富んだ部分集団、特にＣＤ４＋細胞、の増殖を低下させた（図２Ｃ）。ＰＨＡ濃度の範囲にわたって抗体５Ｇ３による阻害が観察され、そしてＰＨＡ刺激後約１８時間の早さであった（図２Ｂ挿入図）。
【００６４】
本発明者らは以前にｍＡｂ  ５Ｇ３が新しく単離されたＰＢＭＣ中で単球を認識することを実証した（文献１１）ので、このｍＡｂ  ５Ｇ３抗体はおそらく、これらアクセサリー細胞によって発現されるＬ１をブロックすることで、マイトジェン誘導性のＴ細胞増殖を阻害可能であると見られる。これに関して、アクセサリー細胞の除去、またはこれら細胞によって発現される同時刺激分子の遮断のいずれかが、ＰＨＡに対するＴ細胞応答を無効化または低下させることが知られている。アクセサリー細胞の機能の重要性は、純度約９５％に富化された単離されたＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の部分集団のマイトジェン応答がより低下することによって、本研究にて確認された（図２）。最終的に、精製された組換えＬ１（Ｌ１−ＥＣＤ）が可溶性インヒビターとして提供される場合にＴ細胞の増殖を低下させることも見出されたことに留意することが重要である（ｓＬ１：図２Ａ）。
【００６５】
同時刺激機能をさらに実証するため、精製された固定化Ｌ１がＣＤ３レセプターとの連結（ｍＡｂ  ＯＫＴ３）に応答して多クローンのＴ細胞の増殖を強化し得るか否かを決定した。ｍＡｂ  ＯＫＴ３単独で、または精製されたＬ１細胞外ドメイン（Ｌ１−ＥＣＤ）と一緒に予め覆われたウェルに、ＰＢＭＣを添加した。Ｌ１単独で覆われたウェルは有意な応答を誘導しなかったが、Ｌ１は抗ＣＤ３  ｍＡｂに対する応答を実際に大いに増強した（図３）。この協調応答の特異性はｍＡｂ  ５Ｇ３で阻害することにより確認された（図３）。ｍＡｂ  ５Ｇ３は、同種親和性Ｌ１媒介性の、精製されたＬ１  ＥＣＤへの接着をブロックするが、インテグリン依存的な、同様のＬ１−ＥＣＤ調製物への接着は遮断しないこと（未掲載）に留意することが重要である。このデータはＬ１が強力な同時刺激分子として機能し得ることを確認し、そして直接のＬ１−インテグリン結合よりもむしろ同種親和性Ｌ１−Ｌ１結合が刺激機構であることを示す。
【００６６】
（骨髄腫細胞へのＬ１トランスフェクションは同種親和性機構を介して接着を促進し、そしてＭＬＲを強化する）
同時刺激機能の直接的な実証は、Ｌ１のトランスフェクションおよび新規発現が、トランスフェクトされた細胞のＴ細胞活性化を促進する能力を増強することを示すことで、可能となる。従って本発明者らは、ワンウェイ法（ｏｎｅ−ｗａｙ）の異種ＭＬＲにおいて、野生型またはＬ１をトランスフェクトしたマウス骨髄腫細胞（Ｊ５５８Ｌ）のいずれかに対して、ヒトＰＢＭＣまたは富化されたＴ細胞の応答を比較した。重要なことに、高レベルのヒトＬ１を発現するよう操作された照射骨髄腫細胞は（文献１３）、野生型対応物よりＰＢＭＣの増殖誘導に有意により効果的であることが見い出された（図４Ａ）。この富化されたＭＬＲに対する特異的なＬ１の寄与は、ｍＡｂ  ５Ｇ３を用いた阻害により確認された（図４Ａ）。ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両々は、Ｌ１がトランスフェクトされた骨髄腫細胞に対して差次的に応答することが見出されたが、ＣＤ４＋細胞の応答の方が上回ることが見い出された（図４Ｂ）。Ｌ１トランスフェクトされた骨髄腫細胞のＴ細胞増殖を誘導する能力は、これらの骨髄腫細胞をＢＡＬＢ／ｃマウス由来の単核細胞と共培養した場合に、喪失した（未掲載）。Ｊ５５８Ｌ骨髄腫株は元々ＢＡＬＢ／ｃマウス由来なので、このことはＬ１のヒトＴ細胞増殖を刺激する能力が、マウス異種抗原の同時識別および応答に依存していることが示唆される。これに関して、本発明者らは、野生型Ｌ１ネガティブのＪ５５８Ｌ細胞に応答したＴ細胞増殖をいくらか観察した（図４Ｂ）。
【００６７】
骨髄腫細胞表面上へのＬ１導入は、同種親和性機構を通して、精製された組換えＬ１（Ｌ１−ＥＣＤ）への接着を促進することも見出された（図５）。これらのデータは、Ｌ１トランスフェクト体で観察される増強されたＭＬＲが、Ｌ１−Ｌ１相互作用および接着に関する新規の能力に起因するものであることを示唆する。観察されるＬ１媒介接着がｍＡｂ  ５Ｇ３によって完全に排除されること（図５）は、この抗体がＬ１−Ｌ１同種親和性相互作用を阻害する能力によりＴ細胞活性化を阻害し得ることを示唆することに留意することが重要である。
【００６８】
Ｔ細胞活性化の阻害は、同時に起こるＬ１クラスター化およびシグナル伝達を起こさずにＬ１連結をブロックし得るアンタゴニストの使用に依存し得ることに留意するべきである。この概念を支持することとして、本発明者らは抗Ｌ１ポリクローナル抗体を使用しても、Ｔ細胞活性化の有意な阻害を全く観察しなかった（未掲載）。このことに関して、Ｌ１に対するポリクローナル抗体は（大部分のｍＡｂおよび単離された可溶性Ｌ１とは異なり）Ｌ１依存的シグナル伝達の経路の活性化をもたらし得、細胞内ｃＡＭＰレベルを有意に増加させることが記述されている（文献１４）。最終的に、５Ｇ３抗体調製物が、超遠心による抗体凝集体除去に決定的に依存すること、および５Ｇ３抗体調製物の阻害活性が凍結および濃縮の両方で失活することも観察された。
【００６９】
（意見総括）
神経ＣＡＭとして記述されたが、Ｂ細胞、活性化単球、単球由来ＤＣ、および濾胞性ＤＣ細胞を含む、骨髄単球起源およびリンパ球起源の両方のうち「プロフェッショナル（ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）」ＡＰＣによるＬ１発現を本発明者らは最近報告した（文献１１）。単球由来ＤＣ上のＬ１発現はＬＰＳ処理後に誘導された（文献１１）。このＬＰＳ処理は機能成熟または最適な同時刺激能力の獲得を促進することが知られている。これらの発見によって、およびこの研究で元されるものについて基づいて、本発明者らはこのような「プロフェッショナル」ＡＰＣによって発現されるＬ１は、Ｔ細胞活性化における同時刺激分子として機能し得ることを提案する。単離された末梢血Ｔ細胞によるＬ１の発現について報告する最近の報告（文献１０）は、ＡＰＣとＴ細胞との間の同種親和性Ｌ１−Ｌ１連結に基づいた可能性のある同時刺激機構を示唆する。この機構のさらなるの支持を挙げると、本発明者らは、抗Ｌ１  ｍＡｂ（これもまた、Ｌ１−Ｌ１連結を効果的に妨げる）によって、Ｔ細胞活性化は阻害されることを示す。
【００７０】
Ｌ１媒介性シグナル伝達がＴ細胞同時刺激を強化する方法を規定し、そして他の同時刺激分子と並べてＬ１のランク付けをする方法を決定するさらに詳細な研究が、必要である。従来の研究との比較より、Ｌ１はＴ細胞同時刺激に関して、例えばＢ７ファミリーのメンバーよりも大して重要でないことが示唆される。例えば、Ｂ７．１／Ｂ７．２の阻害は、ＰＨＡおよび同種異系ＤＣに対するＴ細胞増殖をそれぞれ７５％および９５％まで減少させることが示されている（文献１５、１６、１７）。しかしながら、Ｌ１媒介性同時刺激は、ＣＤ５８のような十分に報告された他の同時刺激分子と比較され得る。例えば、ＣＤ２：ＣＤ５８の結合遮断は、ＰＨＡおよび同種異系ＤＣに対するＴ細胞増殖をそれぞれ３０％〜３５％まで、および４５％〜５０％まで阻害することが示されている（文献１６、１７）。
【００７１】
本発明者らの発見は、同種親和性Ｌ１−Ｌ１連結がＴ細胞の同時刺激に必要であることを示すが、Ｌ１が他の異種親和性リガンドと多数のシス相互作用およびトランス相互作用を受け得ることに留意することが重要である（文献６）。例えば、最近Ｌ１は、インテグリンａ５ｂ１とのトランス相互作用を支持すること（文献１８）；Ｔ細胞活性化にも関係しているインテグリンを支持すること（文献１９）が示された。Ｌ１−インテグリンの結合が、その後のインテグリンの活性化および結合に必要とされる初期Ｔ細胞活性化事象の後、同時刺激に寄与し得ることが考えられる。さらに、同時刺激に重要な機能を持つと公知のＣＤ９およびＣＤ２４の両者と、Ｌ１がシス形式の相互作用を受け得ることは注目するべきである（文献２０、２１）。
【００７２】
ここに挙げられた発見よりいくつかの重要な分岐点が起こる。他の同時刺激分子と同様、Ｌ１は自己免疫、移植拒絶および抗腫瘍応答の発達に寄与し得るし、そしてこの状況において、免疫療法介入の有益かつ新規の標的であることを証明し得る。可溶性Ｌ１がＴ細胞活性化を阻害し得るという発見は、活発な神経外胚葉性腫瘍がＬ１を大量に分泌し得るという重要な既存の報告を証明し得る（文献１３、２２）。最後に、有糸分裂後のニューロンおよびシュワン細胞での高レベルのＬ１発現（文献２、６）は、このＣＡＭが神経系と免疫系との間の（とりわけ神経免疫学的障害の発生において）、重要な中間因子として機能し得ることを示唆する。
【００７３】
（材料および方法）
（試薬および細胞株）
抗ヒトＬ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３は本発明者らの研究室で製作した（文献１９）。ヒトＬ１の細胞外領域の全てからなる、精製された組換えＬ１（Ｌ１−ＥＣＤ）をＷｉｌｌｉａｍ  Ｓｔａｌｌｃｕｐ博士（Ｔｈｅ  Ｂｕｒｎｈａｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から厚意により供与された。ヒトＬ１をコードする完全長ヒトｃＤＮＡで安定トランスフェクションされたＪ５５８Ｌ骨髄腫細胞（Ｊ５５８Ｌ−Ｌ１；文献２１）を、Ｖａｎｃｅ  Ｌｅｍｍｏｎ博士（Ｃａｓｅ−Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＯＨ）から厚意により供与された。
【００７４】
（ＤＣの作製、ならびにＣＤ４Ｔリンパ球、ＣＤ８Ｔリンパ球の富化）
製造業者の手順書に従い抗ＣＤ３４  ｍＡｂでコートしたＭ−４５０  Ｄｙｎａｂｅａｄｓを使用し、ＣＤ３４＋細胞を正常の臍帯血より精製した。それからＣＤ３４＋に富んだ（＞７６％）細胞集団またはＣＤ３４陰性細胞集団を、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（１０ｎｇ／ｍｌ）、ヒト幹細胞因子（４０ｎｇ／ｍｌ）、ヒトインターロイキン−３（１０ｎｇ／ｍｌ）、ヒト腫瘍壊死因子−ａ（１００Ｕ／ｍＬ）およびヒトインターロイキンー４（４００Ｕ／ｍＬ）の存在下で培養した。７日〜２１日の展開後に、細胞上のＬ１発現のレベルを、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）が直接結合した抗Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３を使用して決定した。
【００７５】
ＣＤ４＋細胞およびＣＤ８＋細胞を、抗ＣＤ４  ｍＡｂまたは抗ＣＤ８  ｍＡｂでコートしたＭ−４５０  Ｄｙｎａｂｅａｄｓを使用し、ＰＢＭＣより単離した。単離を製造業者の推奨に従った（Ｄｙｎａｌ，Ｆｏｒｔ  Ｌｅｅ，Ｎ．Ｊ．）。この方法はＴ細胞活性化を誘導せず、およそ９５％以上の純度となった。
【００７６】
（ＭＬＲおよびマイトジェンアッセイ）
マイトジェンアッセイに関して、ＰＢＭＣまたは富化ＣＤ４＋細胞もしくは富化ＣＤ８＋細胞を、９６ウェル丸底プレートにて１×１０５細胞／ウェルで、ＰＨＡ（Ｓｉｇｍａ社；２０ｍｇ／ｍｌ）を添加または無添加で培養した。ＭＬＲアッセイに関して、照射された野生型Ｊ５５８Ｌ細胞またはＬ１トランスフェクトされたＪ５５８Ｌ細胞（１×１０４細胞／ウェル）と共に、あるいは照射された臍帯血由来の樹状細胞（１×１０４細胞／ウェル）と共に、ＰＢＭＣ（１×１０５細胞／ウェル）または富化ＣＤ４＋細胞、または富化ＣＤ８＋細胞を共培養した。マイトジェン処理された細胞および共培養を３日間維持し、その３日間の培養の最後の１８時間の間、その培養物に［３Ｈ］チミジン（１ｍＣｉ／ウエル）を適用した。マイトジェンアッセイおよびＭＬＲアッセイの両方に対するＬ１の寄与を、抗Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３（８０ｍｇ／ｍｌ）の取り込みで評価した。適切である場合、ＩｇＧ２ａアイソタイプに合うコントロール抗体（ＵＰＣ１０；８０ｍｇ／ｍｌ）も添加した。
【００７７】
（ＣＤ３媒介性のＴ細胞活性化の同時刺激）
９６ウェルプレートのウェルを、抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３（２５Ｕ／ｍｌ）にて、または精製Ｌ１細胞外ドメイン（４０ｍｇ／ｍｌ）にて、またはＬ１およびＬ１の抗体の両方の配合物にて、予めコーティングした。ウェルを洗浄後、予めコーティングしたウェルまたは未処理のウェルにＰＢＭＣを７２時間添加した。ｍＡｂ  ５Ｇ３の非存在下または存在下で、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０の存在下で、１×１０５細胞／ウェルでＰＢＭＣを添加した。３日間の共培養のうち最後の１８時間、培養物に［３Ｈ］チミジンを適用した。処置は３重で実施した。エラーバーは±１ＳＥである。
【００７８】
（接着アッセイ）
ＰＢＳ中の精製されたＬ１−ＥＣＤ融合タンパク質（３０ｍｇ／ｍｌ）を、本質的に記載されるように（文献１３）９６ウェルタイターテック（Ｔｉｔｅｒｔｅｋ）プレートの底の上にコートした。次いで、ウェルを５％ＢＳＡでブロッキングし、そして野生型またはＬ１でトランスフェクトされたＪ５５８Ｌ骨髄腫細胞（１×１０５細胞／ウェル）を添加し、そして６０分間３７℃で接着させた。１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ＢＳＡ（０．５％）およびＣａＣｌ２（０．５ｍＭ）（ｐＨ７．４）を補充したＨＢＳＳに細胞を添加した。阻害の研究について、細胞を、抗Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３またはそのアイソタイプに合うコントロールｍＡｂ  ＵＰＣ１０を８０ｍｇ／ｍｌで細胞を予め処置し、それから細胞およびインヒビターの両方を予備処理したウェルに添加した。記載されるように（文献１３）、付着しない細胞を一定の減圧下で除去し、残留した接着細胞を４０倍の対物レンズを使用して計数した。
【００７９】
（引用文献）
【００８０】
【数１】
2004531457.tif 000002
2004531457.tif 000003
2004531457.tif 000004
改変は当業者には明らかなので、本発明が添付の特許請求の範囲の範囲によってのみ限定されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】
Ｌ１は、臍帯血由来のＤＣによって発現され、そして同種異系ＭＬＲに寄与する。（Ａ）、ＣＤ３４＋細胞を、正常な臍帯血から富化し、そしてＬ１発現について染色する前に２１日間にわたって拡張した。富化したＣＤ３４＋細胞をまた、培養前（０日目）にＬ１について染色した。これらの細胞を、ＦＩＴＣに直接結合体化されたｍＡｂ  ５Ｇ３で染色した。（Ｂ）、臍帯血由来のＤＣ（ＤＣ＋）を、一方向ＭＬＲにおいて、異なるドナー由来のＰＢＭＣと共存培養した。細胞を、抗Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３の存在下もしくは非存在下においてか、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０と共に、培養した。ＣＤ３４＋富化画分と同じ条件下で培養されたＣＤ３４陰性臍帯血細胞をまた、刺激物質として試験した（非ＤＣ）。培養物を、３日間の共存培養中の最後の１８時間の間に、［３Ｈ］−チミジンでパルス（ｐｕｌｓｅ）した。処理を、三連で実施した。エラーバーは、±１ＳＥである。
【図２】
抗Ｌ１抗体５Ｇ３および可溶性Ｌ１は、マイトジェンに対する自己Ｔ細胞応答を阻害する。（Ａ）ＰＢＭＣを、ｍＡｂ  ５Ｇ３の非存在下もしくは存在下、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０の存在下において、ＰＨＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）で処理した。さらなるＰＢＭＣを、可溶性組換えＬ１−ＥＣＤ（ｓＬ１；１００ｍｇ／ｍｌ）の存在下において培養した。（Ｂ）ＰＢＭＣを、ｍＡｂ  ５Ｇ３の非存在下もしくは存在下、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０の存在下において、一定範囲のＰＨＡ濃度で処理した。培養物を、３日間の共存培養のなかの最後の１８時間の間に、［３Ｈ］−チミジンでパルス（ｐｕｌｓｅ）した。（Ｂ、挿入図）いくつかの細胞をＰＨＡで処理し、そして１８時間のみ、［３Ｈ］−チミジンでパルスした。（Ｃ）富化したＣＤ４＋またはＣＤ８＋Ｔ細胞サブセットを、ｍＡｂ  ５Ｇ３の非存在下もしくは存在下、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０の存在下において、ＰＨＡで処理した。培養物を、３日間の共存培養のなかの最後の１８時間の間に、［３Ｈ］−チミジンでパルスした。処理を三連で実施した。エラーバーは、±１ＳＥである。
【図３】
精製された固定化Ｌ１は、ＣＤ３連結に応答してＴ細胞増殖を増強する。９６ウェルプレートのウェルを、抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３：２５Ｕ／ｍｌ）、精製されたＬ１−エクトドメイン（ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎ）（４０ｍｇ／ｍｌ）、またはＬ１およびこの抗体の両方の配合物を用いて、前処理した。このウェルを洗浄した後、ＰＢＭＣを７２時間にわたり、プレコーティングされたウェルまたは処理されていないウェルに添加した。ＰＢＭＣを、ｍＡｂ  ５Ｇ３の非存在下もしくは存在下、またはコントロール抗体ＵＰＣ１０の存在下において培養した。培養物を、３日間の共存培養のなかの最後の１８時間の間に、［３Ｈ］−チミジンでパルスした。処理を三連で実施した。エラーバーは、±１ＳＥである。
【図４】
Ｌ１のトランスフェクションおよびデノボ発現は、ＭＬＲを増強する。（ＡおよびＢ）照射された野生型（ＷＴ細胞）またはＬ１でトランスフェクトされたＪ５５８Ｌ骨髄腫細胞（Ｌ１＋細胞）を、一方向ＭＬＲにおいて、ＰＢＭＣ（Ａ）または富化されたＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞サブセット（Ｂ）と共に共存培養した。Ｌ１＋Ｊ５５８Ｌ骨髄腫細胞を、抗Ｌ１  ｍＡｂ  ５Ｇ３（８０ｍｇ／ｍｌ）の存在下もしくは非存在下、またはコントロールｍＡｂ  ＵＰＣ１０（８０ｍｇ／ｍｌ）の存在下において共存培養した。（Ａ、挿入図）Ｌ１＋Ｊ５５８Ｌ骨髄腫細胞およびＰＢＭＣのさらなる共存培養を、２０〜１６０ｍｇ／ｍｌまで変動する濃度で、ｍＡｂ  ５Ｇ３と共にインキュベートした（挿入図）。培養物を、３日間の共存培養のなかの最後の１８時間の間に、［３Ｈ］−チミジンでパルスした。処理を三連で実施した。エラーバーは、±１ＳＥである。
【図５】
阻害抗体５Ｇ３は、Ｌ１でトランスフェクトされた骨髄腫細胞によるＬ１−Ｌ１媒介性接着をブロックする。野生型（ＷＴ）またはＬ１でトランスフェクトされた（Ｌ１＋）骨髄腫細胞は、コントロールｍＡｂ（ＵＰＣ１０）または抗Ｌ１  ｍＡｂ（５Ｇ３）の存在下または非存在下において、固定化された組換えＬ１に接着される。接着細胞を、４０×高倍率の対物レンズを用いて、単位面積あたりで計数した。実験処理を三連で実施し、１ウェルあたり４つの領域を計数した。エラーバーは、±１ＳＥを表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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