(57)【要約】本発明は、抗ウイルス剤として、特に、ヘルペス科のウイルスに対する剤として有用な式Ｉ：【化１】2004502758.tif 000011の化合物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2004502758.tif 000009
［式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＨまたはＮＯ２であり；
Ｇは、（ａ）部分的に不飽和であって、ヒドロキシによって置換されたＣ３−７アルキル、または
（ｂ）ＮＲ１Ｒ２または４−テトラヒドロピランによって置換されたＣ１−７アルキルであり；
Ｒ１はヒドロキシ、Ｃ１−４アルコキシ、アリールまたはヘテロアリールによって置換されたＣ２−７アルキルであり；
Ｒ２は水素またはＣ１−７アルキルであり；
あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、所望によりアリールまたはＣ１−７アルキルによって置換されていてもよいモルホリンを形成し；
Ｗは
【化２】
2004502758.tif 000010
であり；
ＢはＣＲ５または窒素であり；
ＣはＣＲ６または窒素であり；
但し、ＢおよびＣは共には窒素とはなり得ず；
Ｒ４はＨ、ハロゲン、または所望により１ないし３個のハロゲンによって置換されていてもよいＣ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）ハロ、
（ｃ）ＯＲ１２、
（ｄ）ＳＲ１２、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１またはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｆ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ１２、ＳＲ１２またはＮＲ１０Ｒ１１から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、
（ｇ）（Ｃ＝Ｏ）Ｒ９、
（ｈ）Ｓ（Ｏ）ｍＲ９、
（ｉ）（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、
（ｊ）ＮＨＳＯ２Ｒ９
（ｋ）ニトロ、または
（ｌ）シアノであり；
Ｒ６は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）ハロ、
（ｃ）アリール、
（ｆ）ｈｅｔ、または
（ｇ）Ｒ７であり；
Ｒ７は、（ａ）ＯＲ１２、
（ｂ）ＳＲ１２、
（ｄ）部分的に不飽和であって、ＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１、アリール、ハロ、所望によりＯＲ１２によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、または炭素原子を介して結合したｈｅｔから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｄ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ１２、ＳＲ１２、またはＮＲ１０Ｒ１１から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、
（ｆ）（Ｃ＝Ｏ）Ｒ９、
（ｇ）Ｓ（Ｏ）ｍＲ９、
（ｈ）（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、
（ｉ）ＮＨＳＯ２Ｒ９、
（ｊ）ニトロ、または
（ｋ）シアノであり；
Ｒ８は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）部分的に不飽和であって、所望により、ＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１、またはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｃ）ＯＲ１２、または
（ｄ）ＳＲ１２であり；
Ｒ９は、（ａ）Ｃ１−７アルキル、
（ｂ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｃ）アリール、または
（ｄ）ｈｅｔ、ここに、該ｈｅｔは炭素原子を介して結合している；であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、
（ａ）Ｈ、
（ｂ）アリール、
（ｃ）部分的に不飽和であって、所望により、ＣＯＮＲ２Ｒ２、ＣＯ２Ｒ２、ｈｅｔ、アリール、シアノまたはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｄ）部分的に不飽和であって、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＳＲ２から選択された１以上の置換基によって置換されたＣ２−７アルキル、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、または
（ｆ）Ｒ１０およびＲ１１は、それらが結合した窒素と一緒になってｈｅｔを形成し；
Ｒ１２は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）アリール、
（ｃ）ｈｅｔ、
（ｄ）所望により、アリール、ｈｅｔまたはハロゲンによって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｅ）ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２によって置換されたＣ２−７アルキル、または
（ｆ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキルであり；
各ｍは、独立して、１または２であり；
アリールは少なくとも１つの環が芳香族であるフェニル基またはオルト−縮合二環炭素環基であり、アリールは所望によりハロ、ＯＨ、シアノ、ＮＲ２Ｒ２、ＣＯ２Ｒ２、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、およびさらに１ないし３個のＳＲ２、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＣＯ２Ｒ２基によって置換されていてもよいＣ１−６アルキルから選択された１以上の置換基で置換されていてもよく；
ｈｅｔは酸素、硫黄または窒素から選択された１、２または３個のヘテロ原子を有する４−、５−、６−、または７−員の飽和または不飽和複素環であり、これは所望によりベンゼン環、またはいずれかの二環複素環基に縮合していてもよく、ｈｅｔは、所望により、ハロ、ＯＨ、シアノ、フェニル、ＣＯ２Ｒ２、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、オキソ、オキシム、およびさらに１ないし３個のＳＲ２、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＣＯ２Ｒ２基によって置換されていてもよいＣ１−６アルキルから選択された１以上の置換基で置換されていてもよく；
ハロまたはハロゲンはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；
１はＷおよびＧの間の結合点を表し；
２はＷおよび式（Ｉ）のカルボニル基の間の結合点を表す］
の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｗが式Ｗ２．１のものである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｗが式Ｗ２．２のものである請求項１記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＣｌである請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｇが４−モルホニリルメチルである請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｇが３−ヒドロキシ−１−プロピニルである請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｇがテトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチルである請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（４−モルホリニルメチル）−６−イソキノリンカルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）−６−イソキノリン−カルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（３−ヒドロキシ−１−プロピニル）―６−イソキノリンカルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（４−モルホリニルメチル）−６−キノリンカルボキシアミドである請求項１記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項９】
請求項１ないし８いずれか１記載の化合物および医薬上許容される担体を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項１０】
哺乳動物においてウイルス感染を治療または予防するための医薬を調製するための請求項１ないし８いずれか１記載の化合物の使用。
【請求項１１】
該ウイルス感染がヘルペスウイルス感染である請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
該哺乳動物がヒトである請求項１０記載の使用。
【請求項１３】
該哺乳動物が食用動物または付き添い動物である請求項１０記載の使用。
【請求項１４】
該感染が単純疱疹ウイルス１または２型、ヒト・ヘルペスウイルス６、７または８型、水痘−帯状疱疹ウイルス、ヒト・サイトメガロウイルス、またはエプスタイン−バールウイルスである請求項１０記載の使用。
【請求項１５】
該感染が単純疱疹ウイルス１または２型、ヒト・ヘルペスウイルス８型、水痘−帯状疱疹ウイルス、ヒト・サイトメガロウイルスまたはエプスタイン−バールウイルスである請求項１０記載の使用。
【請求項１６】
投与される量が約０．１ないし３００ｍｇ／ｋｇ体重である請求項１０記載の使用。
【請求項１７】
投与される量が約１ないし３０ｍｇ／ｋｇ体重である請求項１０記載の使用。
【請求項１８】
該化合物が非経口局所、膣内、経口または経口直腸投与される請求項１０記載の使用。
【請求項１９】
ウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害有効量の式（Ｉ）の化合物と接触させることを特徴とするウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害するための使用。
【請求項２０】
該ポリメラーゼおよび該化合物がイン・ビトロで接触させる請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
該ポリメラーゼおよび該化合物がイン・ビボで接触させる請求項１９記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
１．発明の分野
本発明は、複素環カルボキシアミド誘導体を提供する。これらの化合物は抗ウイルス剤、特に、ヘルペス科のウイルスに対する剤として有用である。
【０００２】
２．技術的記載
ヘルペスウイルスは二本鎖ＤＮＡウイルスの大きな科を含む。それはヒトにおいて最も普通のウイルス病の源でもある。ヘルペスウイルス類のうち８つ、単純疱疹ウイルス１および２型（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、ヒト・サイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）、エプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）、およびヒト・ヘルペスウイルス６、７および８（ＨＨＶ−６、ＨＨＶ―７、ＨＨＶ−８）は、ヒトに感染することが示されている。
【０００３】
ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２は、各々、唇および性器の病巣を引き起こす。それは、場合によっては、目の感染および脳炎を引き起こす。ＨＣＭＶは幼児における誕生欠陥および鼻炎、肺炎および胃腸病のごとき免疫無防備状態患者において種々の病気を引き起こす。ＶＺＶは鶏痘および帯状疱疹の病原体である。ＥＢＶは感染性単核細胞症を引き起こす。また、それは免疫無防備状態患者においてリンパ腫を引き起こし、バーキットリンパ腫、鼻咽頭癌腫およびホジキン病と関連付けられてきた。ＨＨＶ−６はバラ疹の病原体であって、多発性硬化症および慢性疲労症候群と関連付けることガでおいる。ＨＨＶ−７の病気関連は明確でないが、それはバラ疹のいくつかの場合に関与し得る。ＨＨＶ−８はカポシ肉腫、体腔ベースのリンパ腫、および多発性骨髄腫と関連付けられてきた。
【０００４】
米国特許第５，７５３，６６６号および第５，８９１，８７８号およびＷＯ９７／０４７７５は、ホスホジエルテラーゼＩＶエステラーゼおよび／または腫瘍壊死因子の活性の阻害を介して治療的有用性を有すると主張された特異的１−アルキル−置換−キノロン−３−カルボキシアミドを開示する。
共通に譲渡されたＷＯ００／４０５６１は抗ウイルス剤としてのキノリンカルボキシアミドを開示する。
【０００５】
共通に譲渡されたＷＯ００／４０５６３は抗ウイルス剤としての特異的キノリンカルボキシアミドを開示する。
共通に譲渡されたＷＯ００／５３６１０は抗ウイルス剤としての４−オキソ−４，７−ジヒドロチエン［２，３−ｂ］ピリジン−５−カルボキシアミドを開示する。
共通に譲渡されたＷＯ９９／３２４５０は抗ウイルス剤としての特異的４−ヒドロキシキノリン−３−カルボキシアミドおよびヒドラジドを開示する。
【０００６】
米国特許第５，９４５，４３１号は、哺乳動物におけるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）感染の治療および予防で有用な抗ウイルス活性を有する特異的ナフチリジン複素環化合物を開示する。
ＷＯ９９／１０３４７は、中枢神経系の病気および／または障害の治療で潜在的有用性を有する脳受容体リガンドとしての特異的な置換された４−オキソ−ナフチリジン−３−カルボキシアミドを開示する。
ＷＯ９８／１９６７３はウイルスによって引き起こされた病気の治療のための特異的複素環剤を開示する。
【０００７】
ＪＰ０８３０１８４９は、タキキニン受容体アンタゴニストとして有用な特異的複素環剤を開示する。それは、以下の病気：炎症、アレルギー疾患、ＣＮＳ障害、消化系障害、尿道管障害、心血管病免疫病理の治療における用途が提案されている。該文献は、本発明の化合物をヘルペスを治療するのに用いることができるが、炎症またはアレルギー反応病いずれかとしてのヘルペスを分類することを示唆する。該文献は、該化合物を用いて感染性疾患を治療することができるのを示唆しない。
【０００８】
ＪＰ０７０３３７２９は、Ｋ＋チャネル開口効果を呈しかつ血圧降下作用および冠拡張作用を有する特異的Ｎ−シアノ−Ｎ’−置換−アリールカルボキシイミダミド化合物を開示する。
ＷＯ００／４０５６２は、選択的末梢カンナビノイド受容体モジュレーターとしての新規な２−オキソキノリンを開示する。
ＷＯ９７／３４８９４はナフチリジン誘導体およびサイトメガロウイルスを抑制するアナログを開示する。
【０００９】
前記した教示にかかわらず、望まれる抗ウイルス活性を示す新規な化合物に対する要望が依然として当該分野に存在する。
【００１０】
発明の簡単な概要
本発明により、抗ウイルス活性を示す新規な化合物が提供される。さらに詳しくは、該化合物は、特にヘルペスウイルスに対する抗ウイルス剤として有用な特異的複素環カルボキシアミド誘導体である。
さらに具体的には、本発明は、式Ｉ：
【００１１】
【化３】
2004502758.tif 000002
【００１２】
［式中、ＸはＣｌ、Ｂｒ、Ｆ、ＣＨまたはＮＯ２であり；
Ｇは、（ａ）部分的に不飽和であって、ヒドロキシによって置換されたＣ３−７アルキル、または
（ｂ）ＮＲ１Ｒ２または４−テトラヒドロピランによって置換されたＣ１−７アルキルであり；
【００１３】
Ｒ１はヒドロキシ、Ｃ１−４アルコキシ、アリールまたはヘテロアリールによって置換されたＣ２−７アルキルであり；
【００１４】
Ｒ２は水素またはＣ１−７アルキルであり；
あるいは、Ｒ１およびＲ２は、それらが結合している窒素と一緒になって、所望によりアリールまたはＣ１−７アルキルによって置換されていてもよいモルホリンを形成し；
Ｗは
【００１５】
【化４】
2004502758.tif 000003
【００１６】
であり；
ＢはＣＲ５または窒素であり；
ＣはＣＲ６または窒素であり；
但し、ＢおよびＣは共には窒素とはなり得ず；
【００１７】
Ｒ４はＨ、ハロゲン、または所望により１ないし３個のハロゲンによって置換されていてもよいＣ１−４アルキルであり；
【００１８】
Ｒ５は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）ハロ、
（ｃ）ＯＲ１２、
（ｄ）ＳＲ１２、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１またはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｆ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ１２、ＳＲ１２またはＮＲ１０Ｒ１１から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、
（ｇ）（Ｃ＝Ｏ）Ｒ９、
（ｈ）Ｓ（Ｏ）ｍＲ９、
（ｉ）（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、
（ｊ）ＮＨＳＯ２Ｒ９
（ｋ）ニトロ、または
（ｌ）シアノであり；
【００１９】
Ｒ６は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）ハロ、
（ｃ）アリール、
（ｆ）ｈｅｔ、または
（ｇ）Ｒ７であり；
【００２０】
Ｒ７は、（ａ）ＯＲ１２、
（ｂ）ＳＲ１２、
（ｃ）部分的に不飽和であって、ＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１、アリール、ハロ、所望によりＯＲ１２によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、または炭素原子を介して結合したｈｅｔから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｄ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ１２、ＳＲ１２、またはＮＲ１０Ｒ１１から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、
（ｆ）（Ｃ＝Ｏ）Ｒ９、
（ｇ）Ｓ（Ｏ）ｍＲ９、
（ｈ）（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ２、
（ｉ）ＮＨＳＯ２Ｒ９、
（ｊ）ニトロ、または
（ｋ）シアノであり；
【００２１】
Ｒ８は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）部分的に不飽和であって、所望によりＯＲ１２、ＳＲ１２、ＮＲ１０Ｒ１１、またはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｃ）ＯＲ１２、または
（ｄ）ＳＲ１２であり；
【００２２】
Ｒ９は、（ａ）Ｃ１−７アルキル、
（ｂ）ＮＲ１０Ｒ１１、
（ｃ）アリール、または
（ｄ）ｈｅｔ、ここに、該ｈｅｔは炭素原子を介して結合している；であり；
【００２３】
Ｒ１０およびＲ１１は、独立して、
（ａ）Ｈ、
（ｂ）アリール、
（ｃ）部分的に不飽和であって、所望により、ＣＯＮＲ２Ｒ２、ＣＯ２Ｒ２、ｈｅｔ、アリール、シアノまたはハロから選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｄ）部分的に不飽和であって、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＳＲ２から選択された１以上の置換基によって置換されたＣ２−７アルキル、
（ｅ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキル、または
（ｆ）Ｒ１０およびＲ１１は、それらが結合した窒素と一緒になってｈｅｔを形成し；
【００２４】
Ｒ１２は、（ａ）Ｈ、
（ｂ）アリール、
（ｃ）ｈｅｔ、
（ｄ）所望により、アリール、ｈｅｔまたはハロゲンによって置換されていてもよいＣ１−７アルキル、
（ｅ）ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２によって置換されたＣ２−７アルキル、または
（ｆ）部分的に不飽和であって、所望により、ハロゲン、ＯＲ２、ＳＲ２またはＮＲ２Ｒ２から選択された１以上の置換基によって置換されていてもよいＣ３−８シクロアルキルであり；
各ｍは、独立して、１または２であり；
【００２５】
アリールは少なくとも１つの環が芳香族であるフェニル基またはオルト−縮合二環炭素環基であり、アリールは所望によりハロ、ＯＨ、シアノ、ＮＲ２Ｒ２、ＣＯ２Ｒ２、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、およびさらに１ないし３個のＳＲ２、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＣＯ２Ｒ２基によって置換されていてもよいＣ１−６アルキルから選択された１以上の置換基で置換されていてもよく；
【００２６】
ｈｅｔは酸素、硫黄または窒素から選択された１、２または３個のヘテロ原子を有する４−、５−、６−、または７−員の飽和または不飽和複素環であり、これは所望によりベンゼン環、またはいずれかの二環複素環基に縮合していてもよく、ｈｅｔは、所望により、ハロ、ＯＨ、シアノ、フェニル、ＣＯ２Ｒ２、ＣＦ３、Ｃ１−６アルコキシ、オキソ、オキシム、およびさらに１ないし３個のＳＲ２、ＮＲ２Ｒ２、ＯＲ２またはＣＯ２Ｒ２基によって置換されていてもよいＣ１−６アルキルから選択された１以上の置換基で置換されていてもよく；
【００２７】
ハロまたはハロゲンはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉであり；
１はＷおよびＧの間の結合点を表し；
２はＷおよび式（Ｉ）のカルボニル基の間の結合点を表す］
の化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。
特別に好ましい具体例において、ＸはＣｌであって、Ｇは４−モルホリニルメチルである。
【００２８】
本発明のもう１つの具体例は、前記定義の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を提供する。好ましい具体例において、該組成物は、好ましくは、治療上有効量の該化合物または塩を含む。
【００２９】
本発明のさらにもう１つの具体例は、治療上有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩を混合物に投与することを特徴とする、ウイルス感染、特にヘルペスウイルス感染によって引き起こされた哺乳動物における病気または疾患を治療する方法を提供する。この具体例では、式（Ｉ）に含まれる化合物に加えて、Ｇは、十分に飽和され、ヒドロキシによって置換されたＣ１−７アルキルを表すこともできる。
【００３０】
本発明のさらなる具体例は、ウイルス感染、特にヘルペスウイルス感染によって引き起こされた病気または障害の治療または予防用医薬を調製するための式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩の使用を含む。
【００３１】
本発明の最後の具体例は、ウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される塩と接触させる（イン・ビトロまたはイン・ビボ）を特徴とするウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害する方法を含む。
【００３２】
本発明の目的は、生物学的活性を有する新規化合物を提供することにある。
本発明のさらなる目的は、新規な医薬組成物を提供することにある。
本発明のさらにもう１つの目的は、ウイルス感染、特にヘルペスウイルス感染によって引き起こされた哺乳動物における病気または疾患を治療する方法を提供することにある。
【００３３】
本発明のもう１つの目的は、ウイルスＤＮＡポリメラーゼを阻害する方法を提供することにある。
これらおよび他の目的は、好ましい具体例の詳細な記載を参照して当業者に明らかである。
【００３４】
好ましい具体例の詳細な記載
好ましい具体例を記載するにおいて、明瞭性のためにある用語を利用する。そのような用語は引用された具体例、ならびに同様の結果を達成するために同様の目的で同様に作用する技術的同等物を含むことを意図する。
【００３５】
１．用語の定義
特記しない限り、以下の定義を用いる：ハロは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードである。アルキルは直鎖および分岐鎖基を共に示す；しかしながら、「プロピル」のごとき個々の基への言及は、直鎖基のみを含み、「イソプロピル」のごとき分岐鎖異性体は具体的に言及する。アルキルが部分的に不飽和であり得る場合、該アルキル鎖は該鎖中に１以上（例えば、１、２、３または４）の二重結合および三重結合を含むことができる。
【００３６】
アリールは、フェニル基、または少なくとも１つの環が芳香族であるオルト−縮合二環炭素環基を示す。ｈｅｔは非−ペルオキシド酸素、硫黄および窒素よりなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子を含む４−、５−、６−、または７−員の飽和または不飽和環であり、これは、所望によりベンゼン環またはいずれかの二環複素環基に縮合していてもよい。ｈｅｔは、炭素、ならびに非−ペルオキシド酸素、硫黄、およびＸが存在しないか、またはＨ、Ｏ、Ｃ１−４アルキル、フェニルまたはベンジルであるＮ（Ｘ）よりなる群から各々が選択される１、２、３または４個のヘテロ原子よりなる５または６個の環原子を含む単環芳香族環の環原子を介して結合した基を含む「ヘテロアリール」を含む。
【００３７】
キラル中心を有する本発明の化合物は、光学活性およびラセミ形態で存在できるか、または該形態で単離することができるのは当業者に認識されよう。いくつかの化合物は多形を呈することができる。本発明は、本明細書中に記載した有用な特性を保有する本発明の化合物のいずれのラセミ、光学活性、多形、互変異性または立体異性形態、またはその混合物を含むことが理解されるべきであり、（例えば、再結晶技術によるラセミ形態の分割によって、光学活性出発物質からの合成によって、キラル合成によって、またはキラル固定相を用いるクロマトグラフィー分離によって）光学活性形態を調製する方法、および本明細書中に記載した標準的テストを用いて、または当該分野でよく知られた他の同様のテストを用いて抗ウイルス活性を測定する方法は当該分野でよく知られている。
【００３８】
種々の炭化水素−含有基の炭素原子含量は、当該基中の炭素原子の下方および上方の数字を示す接頭辞によって示され、すなわち、接頭辞Ｃｉ−ｊは、整数「ｉ」ないし整数「ｊ」個の炭素原子の基を示す。かくして、例えば、Ｃ１−７アルキルは、包括的に、１ないし７個の炭素原子のアルキルをいう。
【００３９】
本発明の化合物は、一般に、ＩＵＰＡＣまたはＣＡＳ命名システムに従って命名される。当業者によく知られた略語を用いることができる（例えば、フェニルの代わりに「Ｐｈ」、メチルの代わりに「Ｍｅ」、エチルの代わりに「Ｅｔ」、時間の代わりに「ｈ」および室温の代わりに「ｒｔ」）。
【００４０】
基、置換基および範囲について後にリストする具体的かつ好ましい値は単に説明のためのものであり；それらは、基および置換基についての定義された範囲内の他の定義された値または他の値を排除するものではない。本発明の化合物は、本明細書中に記載した値、具体的値、より具体的値、より好ましい値のいずれかの組合せを有する式（Ｉ）の化合物を含む。
【００４１】
哺乳動物は、具体的には食用動物および付き添い動物を含めたヒトおよび動物を示す。
【００４２】
２．発明
本発明は、前記定義の式（Ｉ）の化合物、その医薬上許容される塩を含む。
式（Ｉ）の化合物では、アルキルはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｉｓｏ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ペンチル、３−ペンチル、ヘキシル、へプチル等であり得る；Ｃ３−８シクロアルキルはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチルまたはシクロオクチルであり得る；アルコキシはメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｉｓｏ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ペントキシ、３−ペントキシ、ヘキシルオキシ、１−メチルへキシルオキシまたはヘプチルオキシであり得る；ｈｅｔはアゼチジニル、３，３−ジヒドロキシ−１−アゼチニル、ピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノまたはヘテロアリールであり得る；およびヘテロアリールはフリル、イミダゾリル、トリアゾリル、トリアジニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾル、ピロリル、ピラジニル、テトラゾリル、ピリジル（またはそのＮ−オキシド）、チエニル、ピリミジニル（またはそのＮ−オキシド）、インドリル、イソキノリル（またはそのＮ−オキシド）またはキノリル（またはそのＮ−オキシド）であり得る。
【００４３】
アルキルが部分的に不飽和である場合、それはビニル、アリル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１，３−ブタジエニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、５−ヘキセン−１−イニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、または５−ヘキシニルであり得る。
【００４４】
Ｗの具体的例は：
【００４５】
【化５】
2004502758.tif 000004
【００４６】
を含む。
特に好ましい化合物はＸがＣｌであって、Ｇが４−モルホリニルメチルであるものである。
【００４７】
本発明の例は、限定されるものではないが、以下の：
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（４−モルホリニルメチル）−６−イソキノリンカルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−４−イルメチル）−６−イソキノリン−カルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（３−ヒドロキシ−１−プロピニル）―６−イソキノリンカルボキシアミド；
Ｎ−（４−クロロベンジル）−５−ヒドロキシ−３−（４−モルホリニルメチル）−６−キノリンカルボキシアミドまたはその医薬上許容される塩を含む。
【００４８】
式Ｗの範囲内にある化合物の合成の代表的な例は以下の通りである。
以下のチャートＡ−Ｄは、本発明の化合物の調製を記載する。全ての出発物質はこれらのチャートに記載した手法によって、あるいは有機化学における当業者によく知られているであろうそれに類似の手法によって調製される。本発明の最終化合物の全ては、これらのチャートに記載した手法によって、あるいは有機科学における当業者によく知られているであろうそれに類似の方法によって調製される。チャートで用いる変数の全ては後に定義するか、または特許請求の範囲における通りである。
【００４９】
Ｗ２．１　　５−ヒドロキシ−６−イソキノリンカルボキシアミド。複素環Ｗ２．１の具体例の調製はＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９７３， ２９， ８５７に記載された確立された文献の先行例に従い、以下のチャートＡおよびＢに示される。ベンズアルデヒドＡ．１を２−アミノ−３，３−ジメトキシ−１−プロパノール（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ． １９６９， １０， ３５−４８．）と縮合させて、対応するイミンＡ．２が得られる。ポリリン酸（ＰＰＡ）の混合物中でのイミンを加熱することによるＡ．２の環化により、イソキノリンＡ．３が得られる。ベンジルアミン（例えば、４−クロロベンジルアミン、４−クロロベンジルアミンまたは４−フルオロベンジルアミン）の存在下で、化合物Ａ．３を加熱して、一般式Ａ．４のアミドが得られる。ベンジルアルコールの酸化マンガン（ＩＶ）または他の適当な酸化剤での酸化により、式Ａ．５の対応するアルデヒドが得られ、これが、アミン（例えば、モルホリン）、酢酸およびトリアセトキシホウ水素化ナトリウムでの還元的アミノ化を受けて、Ａ．６のごとき化合物が得られ得る。
【００５０】
【化６】
2004502758.tif 000005
【００５１】
別法として、Ｇ＝４−テトラヒドロピラニルメチルである構造式Ｗ２．１の化合物を調製するには、中間体Ａ．５をメトキシメチルルエーテルまたは他の適当なフェノール保護基（Ｇｒｅｅｎ， Ｔ． Ｗ； Ｗｕｔｓ， Ｐ． Ｇ． Ｍ． Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ． Ｗｉｌｅｙ， １９９９）として保護して、Ｂ．１が得られる（チャートＢ）。塩基としてナトリウムヘキサメチルジシラジドを使用するＢ．１および臭化４−テトラヒドロピラニルホスホニウムの間のウティッヒオレフィン化（Ｂｅｓｔｍａｎｎ， Ｈ． Ｊ．； Ｓｔｒａｎｓｋｙ， Ｗ．； Ｖｏｓｔｒｏｗｓｋｙ， Ｏ． Ｃｈｅｍ． Ｂｅｒ． １９７９， １０９， １６９４−１７００．）により、オレフィンＢ．２が得られる。炭素上のパラジウムによって触媒されたＢ．２の水素化によりＢ．３が得られ、それにより、フェノール保護基の脱保護によりＢ．４が得られる。同様に、Ｇ＝３−ヒドロキシプロピルまたは３−ヒドロキシ−１−プロピニルである構造式Ｗ２．１の化合物を調製するには、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのごとき適当な塩基の存在下で、中間体Ｂ．１をジメトキシジアゾメチルフォソニウムオキシドと反応させて（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． １９９２， ３３， ３７１５）、式Ｃ．１の対応するアセチレンが得られる（チャートＣ）。リチウムジイソプロピルアミドまたは他の適当な塩基を用いて調製したアセチレンＣ．１のリチウムアニオンをホルムアルデヒドまたはホルムアルデヒド同等物に添加して、Ｃ．２が得られ、これは、フェノールの脱保護により式Ｃ．３の誘導体を与える。アルコール溶媒中の炭素上のパラジウムによって触媒された水素化による該アルキンの飽和により、式Ｃ．４のアルキル誘導体が得られる。
【００５２】
【化７】
2004502758.tif 000006
【００５３】
【化８】
2004502758.tif 000007
【００５４】
Ｗ２．２　５−ヒドロキシ−６−キノリンカルボキシアミド。Ｇが４−モルホリニルメチルである複素環Ｗ２．２の具体的例の調製はチャートＤに記載されている。キノリンＤ．１のベンジル性ブロモ化（Ｊ． Ｍ． Ｍｕｃｈｏｗｓｋｉ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９１， ５６， ７２８８−７２９１）により、臭化アルキルＤ．２が得られる。Ｄ．２をモルホリンで置換してキノリンＤ．３が得られる。低温でのｎ−ブチルリチウムでのＤ．３の金属化および二酸化炭素での得られたアニオンのトラッピングにより、カルボン酸Ｄ．４が得られる。次いで、得られたカルボン酸Ｄ．４を、１，１’−カルボニルジイミダゾール（または他の適当なカルボン酸活性化剤）によって媒介されたベンジルアミン（例えば、４−クロロベンジルアミン、４−ブロモベンジルアミン、または４−フルオロベンジルアミン）とカップリングさせて、一般式Ｄ．５のアミドが得られる。三臭化ホウ素との反応による該メチルエーテルの脱保護により、式Ｄ．６のヒドロキシキノリンが得られる。
【００５５】
【化９】
2004502758.tif 000008
【００５６】
本発明の化合物はその天然の形態で、または塩として用いることができる。化合物が安定な非毒性の酸または塩基の塩を形成するのに十分に塩基性または酸性である場合、塩としての当該化合物の投与が適切であろう。医薬上許容される塩の例は、医薬上許容されるアニオン、例えば、トシレート、メタンスルホネート、アセテート、ストレート、マロネート、タルタレート、スクシネート、ベンゾエート、アスコルベート、エトグリタエートおよびグリセルホスフェートを形成する酸とで形成された有機酸付加塩である。塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、二炭酸塩および炭酸塩を含めた適当な無機塩基を形成することもできる。
【００５７】
医薬上許容される塩は、例えば、アミンのごとき十分に塩基性の化合物を、生理学的に許容されるアニオンを与える適当な酸と反応させることによって、当該分野でよく知られた標準的な手法を用いて得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウムまたはリチウム）またはアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩を作成することもできる。
【００５８】
本発明の化合物は、便宜には、適当な賦形剤と組合せて当該化合物を含有する医薬組成物にて投与することができ、該組成物はウイルス感染と戦うのに有用である。抗ウイルス用途に適した化合物を含有する医薬組成物は、当該分野でよく知られた方法によって調製され、当該分野でよく知られた賦形剤を含む。そのような方法および成分の一般的に認められている大要はＥ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｒｋ Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，第１５版，１９７５）によるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓである。本発明の化合物および組成物は、製剤を用いで内部または外部ウイルス感染を治療するかに応じて、非経口（例えば、静脈内、腹腔内または筋肉内注射による）、（限定されるものではないが表面処理、経皮適用および鼻腔適用を含めた）局所、膣内、経口または経直腸投与することができる。
【００５９】
経口治療投与では、活性化合物を１以上の賦形剤と組み合せ、消化性錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁剤、シロップ、ウエハー等の形態で用いることができる。そのような組成物および製剤は少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。組成物および製剤のパーセンテージは、もちろん、変化させることができ、便宜には、与えられた単位投与形態の重量の約２ないし約６０％の間とすることができる。そのように治療的に有用な組成物での活性化合物の量は、有効投与レベルが得られるようなものである。
【００６０】
錠剤、トローチ、丸剤、カプセルなどは、以下の：トララカンドガム、アカシア、コーンスターチまたはゼラチンのごとき結合剤；リン酸二カルシウムのごとき賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸等のごとき崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのごとき滑沢剤；およびスクロース、フルクトース、ラクト−ス、またはアスファルテームのごとき甘味剤またはペパーミント、冬緑油またはチェリーフレーバー剤のごときフレーバー剤を添加することができる。単位投与形態がカプセルである場合、それは、前記タイプの物質に加えて、植物油またはポリエチレングリコールのごとき液体担体を含むことができる。種々の他の物質をコーティングとして存在させ、または固体単位投与形態の物理的形態を修飾することができる。例えば、錠剤、丸剤、またはカプセルをゼラチン、ワックス、シェラックまたは糖等でコーティングすることができる。シロップまたはエリキシルは、活性化合物、甘味剤としてのスクロースまたはフルクトース、防腐剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素、およびチェリーまたはオレンジフレーバーのごときフレーバー剤を含有することができる。もちろん、いずれの単位投与形態を調製するのに用いる物質も医薬上許容されるべきものであり、使用される量にて実質的に非毒性であるべきである。加えて、活性化合物を、商標ＯＲＯＳ下でＡｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって開発された浸透圧放出タイプのデバイスのごとき徐放製剤およびデバイスに配合することができる。
【００６１】
化合物または組成物は注入または注射によって静脈内または腹腔内投与することもできる。活性化合物またはその塩の溶液は、所望により、非毒性界面活性剤と混合した水中で調製することができる。また、分散剤はグリセロール、液状ポリエチレングリコール、トリアセチン、およびその混合物中にて、および油中にて調製することもできる。貯蔵および使用の通常の条件下では、これらの製剤は微生物の増殖を妨げるために防腐剤を含有する。
【００６２】
注射または注入に適した医薬投与形態は、所望によりリポソーム中にカプセル化された、滅菌注射または注入溶液もしくは分散物の即席調製に適した有効成分を含む滅菌水性溶液もしくは分散液または滅菌粉末を含むことができる。全ての場合、最終的な投与形態は滅菌され、流動性であって、製造および貯蔵の条件下で安定な物であるべきである。液体担体ビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコール等）、植物油、非毒性グリセリルエステル、およびその適当な混合物を含む溶媒または液状分散媒体であり得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗菌類剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等によって行うことができる。注射組成物の持続吸収は、吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物の使用によって行うことができる。
【００６３】
滅菌注射溶液は、必要な前記した種々の他の成分を含む必要な量の適当な溶媒に活性化合物を配合し、続いて、濾過滅菌を行うことによって調製することができる。滅菌注射溶液の製造のための滅菌粉末の場合には、調製の好ましい方法は真空乾燥および凍結乾燥技術であり、これにより、既に滅菌濾過した溶液に存在する有効成分＋いずれかのさらなる所望の成分の粉末が得られる。
【００６４】
局所投与では、本発明の化合物は、それが液状である場合、純粋な形態で適用することができる。しかしながら、それは、一般に、固体または液体であり得る皮膚科学的に許容される担体と組み合わせて、組成物または処方として皮膚に投与するのが望ましいであろう。
【００６５】
有用な固体担体は、タルク、クレイ、マイクロクリスタリンセルロース、シリカ、アルミナ等のごとき微粉砕固体を含む。有用な液体担体は水、アルコールまたはグリコールまたは水−アルコール／グリコールブレンドを含み、そこでは、所望により、非毒性界面活性剤の助けを借りて本発明の化合物を有効レベルにて溶解または分散させることができる。フラグランスおよびさらなる抗微生物剤のごときアジュバント添加して、与えられた用途での特性を最適化することができる。得られた液体組成物を、包帯および他のドレッシングに含浸させるのに用いられる吸収性パッドから適用し、ポンプ−タイプまたはエアロゾルスプレイヤーを用いて患部領域にスプレイすることができる。合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸塩およびエステル、脂肪アルコール、変性セルロースまたは変性ミネラル物質のごとき増粘剤を液状担体と共に使用して、使用者の皮膚に直接適用するために、展延性ペースト、ゲル、軟膏、ソープ等を形成することもできる。
【００６６】
式Ｉの化合物を皮膚に送達するのに使用することができる有用な皮膚科学組成物の例は当該分野で知られている；例えば、Ｊａｃｑｕｅｔら（米国特許第４，６０８，３９２号）、Ｇｅｒｉａ（米国特許第４，９９２，４７８号）、Ｓｍｉｔｈら（米国特許第４，５５９，１５７号）およびＷｏｒｔｚｍａｎ（米国特許第４，８２０，５０８号）を参照されたし。
【００６７】
式Ｉの化合物の有用な用量は、動物モデルにおいてそれらのイン・ビトロ活性、イン・ビボ活性を比較することによって決定することができる。マウス、および他の動物およびヒトにおける有効な用量を外挿するための手段は当該分野で知られている。例えば、米国特許第４，９３８，９４９号参照。
【００６８】
当該化合物は、便宜には、例えば、単位投与形態当たり５ないし１０００ｍｇ、便宜には１０ないし７５０ｍｇ、最も便宜には５０ないし５００ｍｇの有効成分を含有する単位投与形態にて投与される。所望の用量は、便宜には、単回用量または分割用量にて表すことができ、適当な間隔にて、例えば、１日当たり２、３、４以上のサブ−用量として投与される。サブ−用量自体はさらに、例えば、インサフレーターからの複数回吸入、または複数の目への点眼剤の適用のごとく、多数の区別される緩く間隔を設けた投与に分割することができる。
【００６９】
内部感染では、組成物は、約０．１ないし３００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１．０ないし３０ｍｇ／ｋｇの哺乳動物体重の、遊離塩基として計算した、容量レベルにて経口または非経口投与することができ、単位投与形態にてヒトで用いることができ、用量当たり１ないし１０００ｍｇ量で毎日１ないし４回投与される。
【００７０】
目感染に関しては、非経口投与または点眼剤としての投与では、当該化合物は約０．１ないし約１０％、より好ましくは約０．１ないし約７％の濃度にて水性溶液中にて提供される。該溶液は乳化剤、抗酸化剤または緩衝液のごとき他の成分を含有することができる。
【００７１】
一般に、ローションのごとき液体組成物中の式Ｉの化合物の濃度は約０．１ないし２５重量％、好ましくは０．５ないし１０重量％であろう。ゲルまたは粉末のごとき半固体または固体組成物中の濃度は約０．１ないし５重量％、好ましくは約０．５ないし２．５重量％であろう。
【００７２】
本明細書中に開示した化合物および組成物の投与のための正確な方法は、治療すべき個々の対象の必要性、主治医の治療およびもちろん判断のタイプに必ず依存するであろう。本発明の化合物は治療を必要とする動物に投与することができる。ほとんどの場合、これはヒトであろうが、家畜および付き添い動物の治療は、本発明の範囲内にあると具体的には考えられる。
【００７３】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬上許容される塩は、抗ウイルス剤として有用である。かくして、それらはヒトを含めた動物においてウイルス感染と戦うのに有用である。該化合物は、一般には、ヘルペスウイルスに対して活性であって、特に、水痘−帯状疱疹ウイルスエプスタイン−バールウイルス、単純疱疹ウイルス１および２型（ＨＳＶ−１および２）、ヒト・ヘルペスウイルス６、７および８型（ＨＨＶ−６、７および８）およびヒト・サイトメガルウイルス（ＨＣＭＶ）に対して特に有用である。
【００７４】
以下の非限定的な実施例によって本発明をさらに記載する。
本発明の化合物のテスト
当該分野でよく知られた薬理学的モデルを用いるか、または以下に記載したテストを用いて、本発明の化合物の抗ウイルス活性を測定することができる。
【００７５】
本発明の化合物の多くはＣＭＶポリメラーゼに対する活性を示すことができるが、これらの化合物は、このまたは他の作用メカニズムによってサイトメガロウイルスに対して活性であり得る。かくして、ＣＭＶポリメラーゼに対するこれらの化合物の活性の以下の記載は、具体的な作用メカニズムに本発明を限定する意図ではない。
【００７６】
ここに引用して本明細書の一部とみなすＮ．Ｄ． Ｃｏｏｋら，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， ４９−５３頁（１９９２）； Ｋ． Ｔａｋｅｕｃｈｉ， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，９月号（１９９２）；　米国特許第４，５６８，６４９号（１９８６）のごときいくつかの刊行物に記載されたシンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）を用いてＨＣＭＶポリメラーゼアッセイを行う。該アッセイは５．４ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１１．７ｍＭ　ＫＣｌ、４．５ｍＭ　ＭｇＣｌ２、０．３６ｍｇ／ｍｌＢＳＡおよび９０ｎＭ３Ｈ−ｄＴＴＰを含む１００μｌ容量中で行われる。アッセイは、２ｍＭの最終濃度にて、ＣＨＡＰＳ、（３−［（３−コラミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−１−プロパン−スルホネート）を用いてまたは用いずしてして行う。５０％グリセロール、２５０ｍＭ　ＮａＣｌ、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）１００μｇ／ｍｌＢＳＡおよび０．０１％アジ化ナトリウムを含有する酵素希釈緩衝液にＨＣＭＶポリメラーゼを希釈する。組換えバクロウイルス−感染ＳＦ９細胞で発現され、刊行物手法に従って精製したＨＣＭＶポリメラーゼを、最終反応容量、すなわち、１００μｌの１０％（または１０μｌ）で添加する。化合物を５０％ＤＭＳＯに希釈し、１０μｌを各ウエルに添加する。対照ウエルは同等濃度のＤＭＳＯを含有する。特に断らない限り、反応は、６ｎＭビオチン化ポリ（ｄＡ）−オリゴ（ｄＴ）鋳型／プライマーを、酵素、基質および注目する化合物を含有する反応混合物に添加することを介して開始させる。プレートを２５℃または３７℃の水浴中でインキュベートし、ウエル当たり０．５Ｍ　ＥＤＴＡ（ｐＨ８）の４０μｌ／反応の添加を介して停止させる。その間は基質取り込みが直線的であって、酵素および用いた条件、すなわち、ＨＣＭＶポリメラーゼにつき３０分間に依存して変化した時間−フレーム内で反応を停止させる。反応の停止に続き、１０μｌのストレプトアビジン−ＳＰＡビーズ（ＰＢＳ／１０％グリセロール中の２０ｍｇ／ｍｌ）を添加する。プレートを３７℃にて１０分間インキュベートし、次いで、室温まで平衡化させ、Ｐａｃｋａｒｄ　Ｔｏｐｃｏｕｎｔでカウントする。直線回帰を行い、コンピュータソフトウエアを用いてＩＣ５０を計算する。
【００７７】
前記ＨＣＭＶポリメラーゼアッセイの修飾されたバージョンは、以下の変形以外は前記したごとく行う：活性緩衝液への最終希釈まで化合物を１００％ＤＭＳＯに希釈する。以前のアッセイでは、化合物は５０％ＤＭＳＯに希釈する。４．５ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）をポリメラーゼ緩衝液に添加する。また、異なるロットのＣＭＶポリメラーゼを用い、これがより迅速なポリメラーゼ反応をもたらし、より活性なようである。
【００７８】
その好ましい具体例を引用することにより本発明を詳細に記載してきたが、添付の請求の範囲を逸脱することなく修飾および変形が可能であることは明らかであろう。
【国際公開パンフレット】
2004502758.tif 000012
2004502758.tif 000013
2004502758.tif 000014
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2004502758.tif 000016
2004502758.tif 000017
2004502758.tif 000018
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2004502758.tif 000023
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2004502758.tif 000031
2004502758.tif 000032
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2004502758.tif 000036
2004502758.tif 000037
2004502758.tif 000038
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004502758.tif 000039
【国際調査報告】
2004502758.tif 000040
2004502758.tif 000041
2004502758.tif 000042