(57)【要約】生物学的流体のような流体中で、ウイルスのような微生物を不活性化するための方法を開示する。方法は、ＵＶ反応器を提供する工程を含み、この場合、これは、少なくとも一つの細長いＵＶランプを包囲する細長い一般的に環状の反応チャンバーの形でおこなわれ、反応チャンバー中の流体を第１フローで直接的にＵＶランプの長さに沿って移動させ、かつ流体中で循環する第２フローを引き起こし、その際、第２フローは、第１フロー上に重ねられる。流体が、反応チャンバー中を第１フローで移動すると同時に、循環する第２フロー中でＵＶランプに近づいたり離れたりして反復的に循環し、流体の全量の一定かつ制御可能なＵＶ放射への暴露を提供する。このようにして、ウイルスのような微生物は、不活性化され、その一方で、流体中の好ましい成分、たとえばタンパク質は、フリーラジカル捕捉剤を使用することなく保持される。
2004512905.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＵＶ源からの紫外線放射を用いて、流体を照射する方法において、前記方法が：
（ａ）流体をＵＶ源に沿って第１フローで移動させ、かつ、
（ｂ）第１フロー上に重ねられた循環する第２フローを流体中に引き起こし、その際、循環する第２フローは、流体をＵＶ源に近づけたり遠ざけたりして移動させる特徴とする、ＵＶ源からの紫外線放射を用いて、流体を照射する方法。
【請求項２】
流体が生物学的流体であり、その際、照射によって生物学的流体中の微生物を不活性化する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
微生物がウイルスである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
流体が食料流体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ＵＶ源が少なくとも一つの長形のＵＶランプであり、かつ工程（ａ）が、ＵＶランプを取り囲む反応チャンバーを定義し、かつ反応チャンバーに沿って流体を第１フローで移動させることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｂ）が反応チャンバー内の撹拌機を動かすことを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
工程（ｂ）が反応チャンバー内に不規則性を生じさせることを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ＵＶランプ周囲に反応チャンバーを定義する工程が、壁を有するハウジングでＵＶランプを取り囲むことを含み、その際、反応チャンバーはＵＶランプとハウジング壁との間に定義されており、かつ、反応チャンバー内部に不規則性を生じさせる工程が、ハウジング壁中の不規則性を形成することを含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
ＵＶ源が長形のＵＶランプであり、かつ工程（ａ）がＵＶランプ周囲に一般的にらせん状の管形コンジットを配置させ、かつ、管形コンジットを通して流体を第１フローの方向で移動させ、コンジットでの流体の干渉によって工程（ｂ）の循環する第２フローを引き起こすことを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
流体中の微生物を不活性化させる方法において、前記方法が、
（ａ）紫外線を流体に照射するための反応器を提供し、その際、反応器は、流体のための少なくとも一つの入口および一つの出口と連結している反応チャンバー、および紫外線放射源を有しており、
（ｂ）反応チャンバーを通して、一般的に紫外線放射源に沿って流体を第１フローで移動させ、かつ、
（ｃ）第１フロー上に重ねられた循環する第２フローを生じさせ、その際、第２フローは、紫外線放射源に対して横行に配向している、
工程を含むことを特徴とする、流体中の微生物を不活性化させるための方法。
【請求項１１】
反応チャンバーが紫外線放射源の周囲に配置される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
紫外線放射源が反応チャンバーの周囲に配置される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
反応器の照射空間が、ハウジングとインナーチューブによって定義されるリング形状の管形空間であり、かつその中に軸線を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
反応チャンバーが、管形コンジットによって形成され、かつ、管形コンジットが、紫外線放射源周囲でらせん形を描く、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
反応チャンバーが、外側の円筒壁とＵＶ透過性内側の円筒壁との間に定義されており、その際、紫外線源は、内側の円筒壁によって包囲されている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
不活性化されるべき微生物がウイルスである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
紫外線がＵＶＣ線である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
紫外線放射の波長が約２５４ｎｍである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
ウイルスの不活性化のために、流体を、約３０ジュール／ｃｍ２未満に暴露する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
ウイルスの不活性化のために流体を、約０．０１ジュール／ｃｍ２〜約１０ジュール／ｃｍ２のフルエンスに暴露する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
ウイルスの不活性化のために流体を、約０．０２ジュール／ｃｍ２〜約５ジュール／ｃｍ２のフルエンスに暴露する、請求項１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
属する技術分野
本発明は、流体中の望ましくない微生物、たとえばウイルスを不活性化するための、一般に流体、たとえば生物学的流体の滅菌化に関する。特に、本発明は、調整された紫外線照射によって、流体を滅菌化することに関する。
【０００２】
背景技術
流体の滅菌は、多くの医薬品および食品の製造における必須の工程である。その目的は、製品の好ましい成分をできるかぎり傷つけることなく保存しながら、ウイルスを含む微生物の確実な排除を達成することである。滅菌は、生物学的流体、たとえば、発酵のための栄養媒体、種々の血液生成物、および製薬学的に活性のタンパク質を有する流体に関して必要とされる。食品工業においては、流体、たとえば乳製品の滅菌は一般的である。
【０００３】
食品の滅菌に関して、特に滅菌技術の選択は、工程が食品の包装寿命または嗜好性に影響を与えるかどうかによって調整される。食品工業において最も考えられるのは、細菌またはカビのコンタミネーションであるけれども、日用品に関しては、ウイルス性かまたはプリオン性のコンタミネーションの付加的なリスクを有しうる。このような微生物の排除または不活性化は、これら製品の商業的流通に関する前提条件である。
【０００４】
食品工業とは対照的に、製薬工業における滅菌技術の選択および使用は、直接的に動物またはヒトに投与すべきすべての薬剤に対して加えられる厳密な要求および調整が課される。特に、生物学的流体、たとえば薬剤のウイルスによるコンタミネーションが特に考えられ、この場合、これらは天然源から同時に単離されたものであるかまたは生物工学的工程中において導入されたものである。薬剤の滅菌に関して、多段階工程は、歴史的にウイルスのコンタミネーションを不活性化するか、除去するか、または減少させるために使用されている。方法のそれぞれの工程は、異なる操作原理に基づき、流体中のウイルス量を少なくとも４オーダーの大きさで減少させることを確実にし、その一方でタンパク質および流体の他の好ましい成分のバイアビリティーを維持する。
【０００５】
生物学的流体および他の流体の紫外線（ＵＶ）での照射は、望ましくない微生物を不活性化するための方法として使用されている。たとえば、ウイルスを不活性化するために、ＵＶ−光を用いて血漿および血液生成物を照射することは、ＷＷ　ＩＩ中で公知であった。血液誘導体のＵＶ処理は、特に、被膜のない熱安定性のウイルスを処理するのに特に有用である。したがって、Ｃｈｉｎら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．　＆　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．６５、４３２−４３５（１９９７）は、ＵＶ−光での血漿生成物の照射が、Ａ型肝炎ウイルスおよびパルボウイルスの不活性化を導くことを教示している。
【０００６】
ＵＶ−光は、これらの遺伝的材料の突然変異を生じさせることによって微生物および／またはウイルスを不活性化することができる。照射の最小限の線量を超えた場合には、微生物はその繁殖能力を失う。ＵＶ−照射は、鎖内のニックを形成し、かつヌクレオチドの光二重化を誘発することによって核酸にダメージを与え、この場合、これら双方は、核酸の複製を中断させるものである。このような機序によって、ＵＶ照射は生物学的流体および他の流体中の望ましくない微生物を不活性化させる効果的な方法であってもよい。残念なことに、短波長のＵＶ光線のエネルギーは、硫黄含有システイン架橋およびメチオニンペプチド結合にダメージを与えてしまい、かつ芳香族アミノ酸副次的反応を誘発し、これによって、しばしば照射された流体の好ましい最終生成物である、種々のタンパク質の構造的および機能的結合性を破壊する。したがって、ＵＶ−照射技術を適用させるための固有の問題は、流体中で望ましくない微生物を不活性化するために十分な照射暴露を確実なものとする程度に、流体への照射を調整し、その一方で同時に、流体中において望ましくない、タンパク質および他の成分に対するＵＶ照射ダメージを最小限にするかまたは排除することである。
【０００７】
従来的には、ＵＶ反応器は、生物学的流体のＵＶ滅菌のために使用されている。一般に、ＵＶ反応器は、ＵＶ照射源、たとえば、一つまたはそれ以上の長形の管形バルブまたはランプを含む。一つの形状において、予め定められた幅を有する環状（ａｎｎｕｌａｒ）反応チャンバーを、ランプの周囲を取り囲むように形成し、かつ、照射すべき流体を、ポンプによって供給するかまたはチャンバーを介して移動させ、その際、ランプからのＵＶ光に暴露する。もう一つの形状において、１個または複数個のＵＶ源が取り囲み、中央の管形反応チャンバーへ、内部に照射することができる。それぞれの場合において、流量、光強度、チャンバー幅または直径、および反応器の長さは、特定の流体に対して、可能な限り、望ましくない微生物を不活性化すると同時に、流体の望ましい成分のバイアビリティーを維持するのに最も効果的なＵＶ照射量を確実にするよう選択される。
【０００８】
紫外線で流体を照射するために、ＵＶ反応器を使用することについての問題は、反応チャンバーの制限された幅およびチャンバーに沿っての流体流の層状の性質によるものである。特に、流体がチャンバーに沿って流れる場合に、処理される流体中のＵＶ照射強度は、放射源からの距離の関数として、かなり急速に減少する。これは、源からの距離を関数としての照射強度の自然な逆二乗則、および流体の吸収特性および感染性粒子を支持するタンパク様材料を含む、多くのファクターによる。任意の場合において、照射源から離れて反応チャンバーの外則に沿って流れる流体層中の微生物およびウイルスは、照射を全く受けないかまたは減少した線量でした受けない。したがって、これらの微生物は、ゆっくり不活性化されるかまたはまったく不活性化されない。他方において、照射源にごく近い反応チャンバーの内側に沿って流れる流体層中の微生物は、増加した線量を受け、多くの場合において照射が過剰量になり、この線量は、いくつかの場合において、流体のこれらの層中の望ましいタンパク質および他の成分に対して著しいダメージを与えるのに十分に高いものである。結果は、予測不可能な効果のない滅菌法であって、かつ、望ましい成分に対して高いレベルのダメージを与えるものであった。
【０００９】
これらの制限に関する試みによって、薄層または薄膜ＵＶ反応器が開発され、この場合、これは、反応チャンバーの幅およびこのようなＵＶ源に隣接する流体層の厚さをかなり薄くすることによって、流体中での放射強度勾配の悪影響を減少させるものである（たとえば、Ｋａｌｌｅｎｂａｃｈら、Ｃｕｒ．Ｓｔｕｄ．Ｈｅｒｍａｔｏｌ． Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓ． Ｂａｓｅｌ ５６， ７０−８２， （１９８９） ； Ｈａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ５６， ２７３−２７９ （１９４７）； Ｍｉｌｚｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ ５０， ３３１−３４０ （１９４５）． Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ．， Ｊ． Ｐｕｂ． Ｈｅａｌｔｈ． ４９， ９０３−９２３， （１９５９））。目的は、流体のすべてが、放射源に沿って移動することによってかなり小さい放射強度変化の範囲にすることである。したがって、流体流中の種々の層での強度の変化は、理論的に制御される。
【００１０】
薄膜反応器が、少量のスケールであっても多少は有効であるが問題があり、それは、困難を伴ってのみ工業的生産の流量にスケールアップすることができるためである。それというのも、膜の厚さを薄くかつ一定に維持するのは、反応器の直径を増加させることによってのみ実現することができ、そのために、望ましい高い流量を提供するために薄膜の断面積が増加するためである。工業的規模におけるこの必須の条件は、取り扱いが困難な大きい反応器を必要とする。この問題を回避するための一つの試みは、ＵＳ特許第５１３３９３２号明細書に示唆されており、この場合、これは、円筒状の薄膜ＵＶ放射反応器を開示し、その際、ＵＶ光に暴露される薄膜の範囲は、反応チャンバーの表面を波形をつけることによって増加する。しかしながら、このような装置を用いて流量において実現された増加は、最良状態において限界があり、依然として大きいスケールの工業的生産に提供するには十分ではない。
【００１１】
従来のＵＶ放射型反応器の他の制限および問題は、放射源に沿って層状に流れる場合の望ましくないフロープロフィールおよび流体薄膜の動的状態である。特に、層流においては、流の方向に対して正常な流体の交換がないかまたはわずかである。したがって、前記に示したように、源から離れた流体層は、源に近い流体層よりも少ない線量を受ける。さらに、制限された層流中の流速プロフィールは、流速が、反応チャンバーの壁に近い場合にはかなり低く、かつ壁の中間部では本質的に高い。したがって、光源に近接した反応チャンバーの壁に最も近い流体は、よりゆっくりと流れ、かつ、本質的に、反応チャンバーの壁間の流体よりも長くＵＶ放射に対して暴露される。したがって、最も急速に流れる流体層中で微生物性の異物を不活性化するための必要な最小限の線量を生じるために、反応器中での流体の平均滞在時間を増加させなければならない。しかしながら、これは、流体流のゆっくりと移動する境界層中での線量を増加させ、引き続いて、これらの層中の望ましい成分に対して、増加した確率での好ましくない増加したダメージを導く。したがって、過剰暴露による境界層中の好ましい成分の破壊は、実際には避けられない。
【００１２】
流体の幾つかの層中での過剰暴露の一つの悪影響は、フリーラジカルの生成であり、この場合、これは流中に生じ、かつ流体の好ましくい成分上への悪影響を有するものである。過剰暴露の結果として起こるフリーラジカル生成によって生じるダメージを最小限にするために、典型的には、流体中でフリーラジカル捕捉剤の使用が試みられている。以前の研究において、フリーラジカル捕捉剤がタンパク質に対するダメージを間接的に減少しうることが示唆された（Ｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ． Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ． ６５， ４３２ （１９９７）． ）Ｃｈａｍｐｍａｎらは、米国特許第５９２２２７８号明細書中において、生物学的流体のＵＶ放射による滅菌法を開示しており、その際、フリーラジカルは、捕捉剤によって除去される。Ｃｌａｒｋらによる米国特許第５７８６５９８号明細書において、微生物を不活性化させる短波長光線の高い強度のパルスが開示されている。Ｍｏｒｇａｌｉｓ−Ｎｕｎｎｏら、米国特許第６０８７１４１号明細書において、約２８０ｎｍまたはそれ未満の短波長よりもむしろ、３４０〜４００ｎｍ（ＵＶＡ）の範囲の波長における光線の使用が開示されている。流体の好ましい機能の保護は、ソラレンの形でのフリーラジカル捕捉剤を添加することによって付与される。Ｍｏｒｏｗｉｔｚら、米国特許第５９８１１６３号明細書において、照射によるウイルスの不活性化中でのクエンチング保護剤の添加が教示されている。このような技術は、流体中に生成されたフリーラジカルを取り扱うことを試みているけれども、過剰暴露のような問題は全く示されておらず、結果として、最初の領域でのこのようなフリーラジカルの形成を生じる。
【００１３】
ＵＶ反応器中での層状流体流の崩壊は、前記問題のいくつかを解決する手段として提案されている。たとえば、タンジャンシャルフローリングスロット反応器は、ＵＶ反応器の層流層を崩壊させ、かつ混合を誘導する手段として提案されている。ＥＰ８０３４７２Ａ１は、ＵＶ放射源を取り巻く環状反応チャンバーまたはリング−スロット反応チャンバーを有する流体のＵＶ放射のための反応器を開示している。反応器チャンバー中の流体の入口は、流体のクロスミキシングを生じさせる目的で、流体をチャンバー中に接線に沿って装入されるように配置される。米国特許第５４３３７３８号明細書では、流体のクロスミキシングを生じさせる目的で、円形断面を有するヘリカルガイドを含む、水の照射のためのＵＶ照射型反応器が開示されている。
【００１４】
接線に沿った流入の解決法は、流体が、壁での摩擦およびチャンバーの軸線に沿って示された十分な軸的および層状プロフィールに関しての他の流体力学的ファクターによって、反応チャンバー中を急速に戻って流れるといった問題点を証明している。少なくとも接線に沿った流入範囲に対して理論的に仮定され、かつ、反応チャンバー中での反応媒体のクロス−エクスチェンジを促進するであろうディーン渦（ｄｅａｎ ｖｏｒｔｉｃｅｓ）は、驚くべきことに、視覚的試験およびＣＦＤ試験（フローシュミレーション）においては存在しない。したがって、接線に沿って装入されるリング−スロット反応器は、前記に示した問題に対しての制限された解決法のみを提供する。
【００１５】
したがって、生物学的流体のような流体をＵＶ放射によって滅菌する方法に必要であるのは、望ましくない微生物を不活性化させるための適切な暴露を確立することであり、それと同時に、流体中の望ましい成分に対するダメージを最小限にするかまたは排除することである。
【００１６】
さらに必要とされるのは、フリーラジカル捕捉剤またはクエンチング剤の使用の必要なしに、ＵＶ放射によって、流体反応媒体中の微生物を不活性化するための改善された方法である。
【００１７】
さらに、望ましくない微生物を不活性化するのに効果的であると同時に、捕捉剤を使用することなく望ましい成分のバイアビリティーを維持し、さらに商業的に実現可能な生産流量にスケールアップ可能な、生物学的流体を滅菌化するための方法が必要とされる。
【００１８】
したがって、本発明によって最初に示されたこれらの必要性および付加的な必要性を示唆する方法を提供する。
【００１９】
発明の開示
本発明は、ＵＶ光を用いて流体を照射することによって、流体中に懸濁された微生物、たとえばウイルスを不活性化する方法である。方法は、生物学的生成物および食品の滅菌化に適用することが可能であり、この場合、これらは、制限されないが、血液成分、組み換え技術のための培養液、乳および乳製品、飲料水、フルーツジュースおよび他のソフトドリンクのような飲料、化学製品および薬品、ウイルスワクチン、遺伝的に製造された薬剤およびタンパク質、トランスジェニック動物およびトランスジェニック植物からの薬剤およびタンパク質、ならびに血漿および血漿からの生成物を含む。本発明を実施するための最良の形態において、ＵＶ暴露は、一般的には管形反応器中で達成され、その際、流体は、長形管形ＵＶ光源を取り囲む反応チャンバー中を流れる。
【００２０】
一般に、方法は、ＵＶ光源の放射表面に沿っての第１の方向で、流体の第１フローを確立し、かつ、第１フロー上に、流体の循環する第２フローを重ねる工程を含む。第２フローは、本質的にＵＶ源の放射表面に対して横方向に循環するため、流体の全量は、第１フローが源の長さにのって流体を移動させると同時に、ＵＶ源に反復して近づいたり離れたりして循環する。その結果、すべての流体は、一定の平均的なＵＶ照射線量を受け、かつ従来のような、ＵＶ反応器中の層流に関連する問題、すなわち放射表面近くでの過剰暴露および放射表面から離れての過小暴露の問題は回避される。
【００２１】
さらに、薄膜反応器とは全く対照的に、本発明の方法を実施するための反応器中での反応チャンバーは、照射強度が通常の不活性化限界値を上廻る、ＵＶ光源の放射表面に直に接する効果的な“死滅化領域（ｋｉｌｌ ｚｏｎｅ）”よりもより広幅であってもよい。それというのは、流体が循環する第２フロー中で源に近づいたり離れたりして循環するように、すべての流体は源表面に接する死滅化領域に効果的に出入りするように移動するためである。死滅化領域中の流体の平均滞留時間およびこれによって受ける照射線量は、処理される特定の流体中の死滅化領域の厚さ、ＵＶ光源の強度および第１フローおよび第２フローの特性のようなその他のパラメーターにおける関数である。
【００２２】
重要であるのは、これらのパラメーターは、本発明によれば、予め必要とされるＵＶ照射線量に応じて、流体の全量のための平均死滅化領域滞留時間を確立かつ維持するために、必要に応じて制御することができることである。
【００２３】
さらに、反応チャンバーは、薄膜反応器中よりもより広幅であってもよいが、商業的生産流量にスケール可能な適度な大きさの高容量反応器が考えられうる。最終的に、すべての流体が受ける平均照射線量は一定であり、すなわち、流体の部分または層が過剰暴露および過小暴露されることなく、従来のＵＶ反応器において一般的なフリーラジカルの形成は実際に回避される。したがって、本発明による方法は、フリーラジカル捕捉剤の使用を必要とすることなく、生物学的流体または他の流体を滅菌するために使用することができる。
【００２４】
本発明の方法は、第１フロー上に重ねられた循環する第２フローを確立しかつ維持することを含み、種々の反応器および反応チャンバーの形状中で実施することができる。このようないくつかの形状は、前記に詳細に示したいくつかの点で明らかにされたものである。しかしながら、本発明の方法は、他の反応器デザインおよび形状によっても良好に実施することができると解されるが、本発明の方法論の本質は、実際には同じである。本発明の条件を確立しかつ維持するための装置デザインに関して、方法は、フリーラジカル捕捉剤を使用することなく、望ましい成分への最小限のダメージで、かつ、商業的に実施可能な流量に関する可能性を有し、制御可能でありかつ期待される不活性化を提供することについて試験された。本発明の付加的な目的、特徴および利点は、前記の詳細な記載ならびに以下に簡単に説明した付属の図面によって明らかになると解される。
【００２５】
図面の簡単な説明
図１は、流体の層状の流れの特徴を示す典型的なリング−スロットＵＶ反応器の略図である。
【００２６】
図２は、本発明の基本的原理を示すＵＶ反応器の一部分の簡略化された断面図である。
【００２７】
図３〜図７は、本発明の方法を実施するのに有用な回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの実施態様を示す断面図である。
【００２８】
図８および図９は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を示す断面図である。
【００２９】
図１０および図１１は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を示す断面図である。
【００３０】
図１２および図１３は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を示す断面図である。
【００３１】
図１４および図１５は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を示す断面図である。
【００３２】
図１６および図１７は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を示す断面図である。
【００３３】
図１８は、種々の∀１ＰＩ濃度でフルエンスの関数として、∀１ＰＩ効力およびブタパルボウイルス（ＰＰＶ）減少を示す２個のグラフ図であり、かつ、ＵＶ滅菌法の評価における限界パラメーターの測定を示す。
【００３４】
図１９は、時間の関数として、５ｍｇ／ｍｌの∀１ＰＩプロテアーゼインヒビター溶液中でのＰＰＶ減少を示すグラフ図であり、かつ、本発明の方法に適用させたＩＶＩＧ試験のＵＶＣ不活性化の結果を示す。
【００３５】
図２０は、フルエンスの関数として、５ｍｇ／ｍｌの∀１ＰＩプロテアーゼインヒビター溶液中でのＰＰＶ減少および∀１ＰＩ活性の百分率を示すグラフであり、かつ、本発明の方法に適用させた他のＵＶＣ不活性化試験の結果を示す。
【００３６】
図２１は、フルエンスの関数として、５ｍｇ／ｍｌの∀１ＰＩプロテアーゼインヒビター溶液中でのＰＰＶ減少および∀１ＰＩ活性の百分率を示すグラフであり、かつ、本発明の方法に適用させた他のＵＶＣ不活性化試験の結果を示す。
【００３７】
本発明の好ましい実施態様に関する詳細な説明
図面に関してより詳細に説明するが、この場合、任意の数字は、いくつかの図面中を通しての任意の部分に適切に引用されているものであり、図１は、従来の管形ＵＶ反応器またはリング−スロット型ＵＶ反応器中での流体の流れの一般的な原理、ならびにこれに関連する問題および欠点を例証する。明瞭性のために簡略化された図で示された反応器１１は、中心に配置された長形の管形ＵＶランプ１２の形での紫外線放射源を含む。ＵＶランプ１２は、外壁１４おび内壁１６を有する円筒型ハウジング１３によって取り囲まれており、この場合、これらは結合し、ランプ１２を取り囲む環状またはリング状の反応チャンバー１７を定義している。ハウジングの内壁１６は、ランプ１２からのＵＶ光が反応チャンバー１７に照射される程度に、紫外線に対して透過性である。反応チャンバー１７は、それぞれその外壁１４と内壁１６との間の距離によって定められた予定された幅を有する。流体入口１８は、一つの末端で、図１の下部で、反応チャンバー１７と連結しており、かつ、流体出口は、反対側の末端で、図１の上部で、反応チャンバー１７と連結している。
【００３８】
滅菌すべき流体は、ポンプによって供給されるかまたは流体入口１８に供給され、反応チャンバー１７中を、矢印２１によって示されたようにＵＶランプの長さに沿って、流体出口１９を介して反応チャンバーから搬出されるまで、上向きに流れる。反応チャンバー中を流体が流れる際に、ＵＶランプ１２からのＵＶ放射に暴露され、この場合、これは、流体中の望ましくない成分を不活性化することによって流体を滅菌する。生物学的流体、たとえば血液生成物中のウイルスを不活性化する場合には、たとえばＵＶ照射は、理論的には、流体が反応チャンバー中を流れる場合に、流体中のウイルス粒子を不活性化するかまたは“死滅させる”。
【００３９】
図１の拡大された装入口は、より詳細に、反応チャンバー１７中の流体のフローパターンおよびチャンバー中のＵＶ照射強度のプロフィールとのその関連性を示し、さらには、従来の反応器およびＵＶ不活性化技術で基本的に生じる問題を明らかにする。特に流体は、反応チャンバー中およびＵＶランプ１２の長さに沿って本質的に層流で移動し、この場合、これは、任意の流体の移動がランプに対して横方向であることはほとんどないことを意味する。いいかえれば、反応チャンバー中の流体層は、流体がチャンバーの全長に沿って移動する場合に、ＵＶランプからのその相対距離を維持しうる。したがって、外壁１４に近い流体層は、外壁の近くに留まる傾向にあり、かつ、内壁１６の近くの流体層は内壁の近くに留まる傾向にある。さらに、一般に、制限された層流は、チャンバーの内壁および外壁の近くの流体の境界層は、壁の中間部の流体層よりもよりゆっくりと移動するといった事実が、速度プロフィールの矢印２１によって図１中で例証されている。したがって、境界層中の流体の反応チャンバー中での滞留時間は、フローの中間層中の流体の滞留時間よりも大きい。
【００４０】
曲線２２は、ＵＶランプ１２からの距離の関数としての、反応チャンバー１７中の照射強度または光強度を示す。ＵＶランプに直に接する初期強度は極めて高く、かつ本質的にはランプ自身の表面の強度である。しかしながら、前記に示したように、光強度は、ランプからの距離の関数として、放射強度の自然な逆二乗則および流体の光吸収特性を含む種々のファクターによって急速に低下する。図１の２３として示された、ランプからのいくつかの限界距離において、光の強度は“限界”強度と等しく、それを下廻る場合には、ＵＶ放射レベルは流体中のウイルスを不活性化するには十分ではない。この限界距離は、ウイルスの不活性化が生じ、かつこの外側においては流体のウイルス以外のものは本質的にＵＶ照射よる影響を受けない、“死滅化領域”２４の外側の境界線を定める。このように、反応チャンバー１７中を流れる従来の層流流体では、死滅化領域の範囲内の流体層は滅菌されるが、死滅化領域の外側の流体層は、滅菌されることなく反応器中を通過することがわかる。その結果、このような反応器中でのウイルス量の減少は、流体の一部分のみがＵＶ照射によって影響を受けるといった事実によって制限される。
【００４１】
この問題に関する試みにおいて、薄膜反応器は、反応チャンバー自体の幅が死滅化領域の幅と同じであるかまたはそれ未満であるよう改善された。このような反応器に関して、理論的には、流体のすべてが、反応器中を移動すると同時に必然的に死滅化領域中に存在し、したがって滅菌作用のための十分な照射線量を受けられる。しかしながら、前記に示したように、このような薄膜反応器は、適切な大きさの反応器で、商業的実施可能な流体流量に適合させるためのスケールアップが不可能である。さらに、実際にアップスケールが可能であったとしても、依然として薄膜反応器においては問題が存在し、その問題というのは、流体の流れの本質的な層流特性および反応チャンバーの幅を横切る流速プロフィールの性質である。特に、薄膜反応器中では、ＵＶ源に近接する流体層は、反応チャンバーの外側の境界での流体層よりも、本質的に高い照射線量に暴露される。さらに、制限された層流の流速プロフィールのために、ＵＶ源に近接する流体層は、さらにチャンバーの壁の中間の流体層よりも反応チャンバー中での長い滞在時間を示す。これら条件の結果として、ＵＶ源に近接する流体層は、過剰暴露する傾向にあり、この場合、これは、結果として、タンパク質のような好ましい成分に対する相当高いダメージの程度を生じる。過剰暴露は、流体中に存在するフリーラジカルの推定量（ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ）を増加させ、この場合、これ自体は、結果として流体の好ましい成分のさらなる破壊を生じる。フリーラジカル捕捉剤の使用は、これらの問題に対する解決法として通常教示されるものであるが、これは、解決法よりもむしろ事後の処理（ａｆｔｅｒ−ｔｈｅ−ｆａｃｔ ｐａｔｃｈ）であり、かつ滅菌法の効率を減少させる。
【００４２】
前記背景を考慮して、図２は簡略化された図面の形で、薄膜反応器を含む従来のＵＶ反応器の厄介な問題を取り扱いかつ排除するための本発明の独自の方法を例証している。本発明は、図２において、予め定められた周波数帯域で紫外線を放射するように適合させた軸方向に長いＵＶランプを有する簡略化されたＵＶ反応器３１において例証される。好ましい実施態様において、ランプ３２はＵＶＣ放射を照射し、この場合、これは、約１８０〜３２０ｎｍ、より好ましくは約２２５〜２９０ｎｍ、さらに好ましくは約２５４ｎｍの波長を有する放射である。ＵＶＣ放射は、処理すべき流体中のタンパク質のような好ましい成分に対する有害な作用が少ない傾向にあり、その一方で流体中のウイルスおよび他の標的微生物を不活性化するための十分なエネルギーを維持することから好ましい。しかしながら、ＵＶ放射の他の型、たとえばＵＶＡおよびＵＶＢも可能であり、かつ、これらも本発明の範囲内である。
【００４３】
ＵＶランプ３２は、外壁３４および内壁３６を有する一般的な管形ハウジング３３の中心軸に沿って配置され、この場合、外壁３４と内壁３６は連結しており、かつ、長形の環状反応チャンバー３７を定義している。ハウジングの内壁３６は、ランプ３２からのＵＶ光がチャンバー３７に照射される程度に、ＵＶ放射に対して透過性であることが明らかである。たとえば生物学的流体のような処理すべき流体は、ポンプによって供給されるか、あるいは適切なポンプ（示されていない）によって環状反応チャンバー３７中を移動し、したがって、流体は反応チャンバーの底部から反応チャンバーの頭部に移動し、そこで、出口（示されていない）を介してチャンバーから搬出される。一般的に、流体が反応チャンバー３７中およびＵＶランプ３２の長さに沿って移動する際に、ＵＶ源からのＵＶ放射で照射され、流体中に含まれる微生物、たとえばウイルスを不活性化する。
【００４４】
前記に示したように、不活性化領域または死滅化領域３８は、反応チャンバーの内壁３６に沿って定義される。死滅化領域の幅は、ランプの強度、流体の組成物および光学的特性等を含む多くのファクターによって定められるが、しかしながら、一般には、ＵＶ照射が、流体中の微生物を不活性化させる作用に要求される限界値を上廻る範囲の領域を示す。死滅化領域３８の外側においては、一般に、放射強度は不活性化作用のためには低すぎ、かつこれは、過去において前記に示したような薄膜反応器を改善させるに導いた。
【００４５】
本発明の方法において、処理すべき流体は、反応チャンバー３７の長さに沿って第１フロー３９で移動し、これによって、ＵＶランプ３２の表面に沿って移動する。しかしながら、従来の方法とは異なって、循環する第２フロー４１が流体中で確立され、かつ第１の流３９上に重ねられる。好ましくは、循環する第２フロー４１は、一般にはＵＶランプの表面に対して放射線状であるかまたは横行である。したがって、流体が、第１フロー３９の一般的な方向でＵＶランプに沿って移動する際に、さらに反応チャンバー外壁３４から内壁３６へ反復的に循環し、かつ再度、循環する第２フロー４１に戻される。結果として、流体は、死滅化領域３８外側の反応チャンバー中の領域から反復的に、死滅化領域３８を介して反応チャンバーの内壁３６に移動し、その後に内壁から離れて、死滅化領域中に戻り、かつ死滅化領域外側の領域に戻し入れられる。
【００４６】
ここで流体中で運ばれる流体の液滴または粒子が、反応チャンバー中を流れると仮定する。液滴は好ましくない微生物、たとえばウイルスならびに好ましい成分、たとえばタンパク質を含有していてもよい。液滴が、一般的に、反応チャンバーの長さに沿って、第１フロー３９の方向に移動すると同時に、さらに、反復的に、限界放射強度を受ける死滅化領域の境界を最初に横切る、重ねられた第２フローと一緒に循環し、その後に、反応チャンバーの内壁３７に達するまで著しく増加した放射強度を受ける死滅化領域３８を通り、その際、最大の放射強度を受ける。内壁から、仮定される液滴は、内壁３６から離れて第２フローで移動しつづけ、かつ死滅化領域３８に戻り、その際、死滅化領域からでて死滅化領域外側の反応チャンバーの不活性化領域の移動するまでは、順次弱い放射強度を受けている。
【００４７】
以上のことから、死滅化領域中のそれぞれのサイクルにおいて、仮定された流体の液滴は、ＵＶ放射の平均的な強度または線量を受けており、この場合、これは、死滅化領域３８の境界での限界強度よりも大きく、かつ死滅化領域の内壁３６での最大強度よりも小さい。したがって、反応チャンバー中でそれが滞留する間の、液滴によって“推測される”全放射は、循環する第２フロー４１中のそれぞれのサイクル数のそれぞれのサイクルにおいて受ける平均放射におおよそ等しい。有利な結果は、流体のそれぞれの液滴、またはいいかえれば、流体の全量が、一定の平均的なＵＶ照射線量を、それが反応チャンバー中を移動する間に受けることによって生じる。さらに、その線量自体は、ＵＶランプ３２の強度を制御することによって極めて簡単に調整することができ、この場合、これは、死滅化領域の幅、および第１フロー３９および重ねられた循環する第２フロー４１の性質に影響する。したがって、全流体が一定の平均照射線量に暴露されるばかりでなく、線量が制御可能であり、かつ好ましくない微生物の最適な不活性化を達成するために調整することができ、その一方で、流体中の好ましい成分を可能な限り完全に維持することができる。
【００４８】
図２に例証したように本発明の方法は、従来の層流ＵＶ反応器による方法、この場合、これは、前記に示したように、反応チャンバーの内壁に近接する流体層が過剰放射される傾向にあり、結果として望ましい成分に対する望ましくないダメージおよびフリーラジカルの形成が生じ、その一方で内壁と最も離れた層は、過小放射の傾向があり、結果として低い微生物不活性化の割合が生じる方法とは全く異なるものである。したがって、本発明の方法によれば、４オーダーまたはそれ以上の大きさでの生物学的流体のウイルスの不活性化のような、高い不活性化レベルが得られてもよく、かつ一貫して維持される。さらに、不活性化のこのレベルは、フリーラジカル捕捉剤を流体中に導入する必要なく達成される。これは、本発明の方法を実施する際にほとんどフリーラジカルの形成がおこらないためであるが、それというのは、従来のＵＶ反応器のように、流体の一部分が過剰放射されることはないからである。最終的に重要であるのは、本発明の方法による循環する第２フローが、反応チャンバーの全幅に関係なく、死滅化領域を反復的に出入りするが、薄膜反応器に改善を与えるために従来与えられたような制約は存在しない。したがって、本発明を実施するための反応器中の反応チャンバーは、死滅化領域自体の厚さよりも著しく幅広く、このような反応器は、簡単に商業的生産流量にスケールアップすることが可能であり、その一方で、リーズナブルな大きさの反応器を維持することも可能である。したがって、本発明は、従来のＵＶによる不活性化方法およびＵＶによる不活性化装置よりもかなり有利であることが見出された。
【００４９】
本発明の方法論は、前記に示したように、本発明を実施するのに有用ないくつかの例証される反応器の形状に関して記載している。しかしながら、本発明は、例証した反応器の形状によって制限されるかまたは強制されることはないと解されるが、しかしながら、このような例は、本発明のよりより理解のために提供され、かつその実施における開示を可能にする。これに関して、ドイツ特許出願＿＿＿号明細書の開示は、前記において十分示したように参考のためにここで記載されている。
【００５０】
図３〜図５は、本発明による方法を実施するのに有用な回転式撹拌反応器を例証している。反応器は、ガラスマントルまたは内部ハウジング４７中に配置された軸的に配置された長形ＵＶランプ４６を含む。管形ハウジング４８は、ガラスマントル４７を包囲しており、かつ、その中を流体が流れていてもよい反応チャンバー４９は、管形ハウジング内壁とガラスマントルとの間に定義される。ハウジングはキャップされ、かつその頭部末端でヘッドカバー６４によって密閉され、かつＯ−リング６２と連結しており、かつその底部末端でベースカバー５２を有し、Ｏ−リング６２と連結している。入口５９は、流体を反応チャンバーに装入するために反応チャンバー４９の下部と連結しており、かつ出口６１は、反応チャンバーから流体を搬出するために、反応チャンバーの頭部と連結している。
【００５１】
回転式アンカー撹拌機５１は、ガラスマントル４７を包囲している反応チャンバー中に配置され、かつ、約４〜約１０個、好ましくは約８個の、ガラスマントル４７を囲む羽根で形成されている。アンカー撹拌機５１は、摺動ベアリング６５中のその頭部末端で、回転可能なようにジャーナルされており、かつ、テーパーされた位置決めチップ５３中で終わる撹拌機シャフト５４のその底部末端で回転可能なように支持されており、かつ位置決めされている。位置決めチップ５３は、ベースカバー５２の下部において、適切な形状にされたくぼみ（ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）に位置し、かつのせることによって、アンカー撹拌機は、おおよそガラスマントル４７を、反応チャンバー４９中でその羽根を反復的にガラスマントルを回転するように回転可能である。
【００５２】
直径方向に細長いマグネット式カプラーアーム５７は、撹拌機シャフトに接合され、マグネット式装置５８のマグネット式カプラーと、磁気的に結合するように適応された。マグネット式装置５８のアクティブにすることによって、反応チャンバー４９中でアンカー撹拌機５１の回転が生じる。位置決めピン５６は、ガラスマントル４７の下部に存在し、かつ、アンカー撹拌機に対してマントルを中心に維持し、かつ、撹拌機の羽根とガラスマントルの表面との間のかなり小さい間隔を保つために、アンカー撹拌機５１の底部５５中の相当する位置に配置された。好ましくは、必ずしも必要ではないが、内部に突起したフローブレーカー６３の配列を、ハウジング４８の内壁の周囲に配置させる。
【００５３】
図４は、本発明による方法を実施するための反応器４４の使用を例証している。照射されるべき流体は、入口５９を介してポンプによって供給され、ＵＶランプ４６の長さに沿って第１フロー６６を確立する出口６１から搬出される。したがって、流体は、反応チャンバー４９の長さに沿って上方に流れると同時に、ガラスマントル４７を介してＵＶ放射に暴露される。同時に、アンカー撹拌機５１は、その羽根をガラスマントル４７の周囲で動かすことによって回転させた。撹拌機の運動は、ＵＶランプ４７に対して横方向に配置された主要な成分を有する流体の循環する第２フロー６７を確立する。フローブレーカー６３は、より横行のフロー方向かまたは放射線状のフロー方向のために、接線成分を確立するために第２フローを弱める傾向を示している。したがって、流体は、反応チャンバーの長さに沿って第１フローで移動する際に、循環する第２フロー６７中で、ＵＶ源に近づくまたは離れて反復的に移動し、前記に示したような本発明の利点を実現する。撹拌機の回転速度、ランプ強度、および流速は、反応器中で処理されるべき流体を生じるための最適化された照射を得るためにすべて調整することが可能である。
【００５４】
図６および図７は、図３〜図５のアンカー撹拌機のための他の装置機序を例証している。密閉されていない装置機序７１は、内部の円筒状インペラーチャンバー７５および外部の環状チャネル７８を定義するドライブハウジング７０を含む。接線的に配置されたスロット７７の配列は、外部チャネル７８とインペラーチャンバー７５との間に連結される。入口７３は、外部チャネル７８と連結し、かつ示したように外部チャネルに接線的に流体を直接配置させる。この形状に関して、流体は、外部チャネル周囲に移動し、かつ、図７中の矢印によって示されたように一般的に接線方向で、インペラーチャンバーに装入する。
【００５５】
アンカー撹拌機５１の撹拌シャフト５４は、ドライブハウジング７０の底部での相当するくぼみ中のそのテーパーした末端上で、アンカー撹拌機が前記に示したように反応器中で回転可能であるように位置する。弓状の羽根７２の配列は、撹拌機シャフト５４からインペラーチャンバー７５に外向きに突出させ、かつ一緒になってインペラーを形成する。
【００５６】
処理すべき流体が、外部チャンネル７８に接線的に移動し、かつスロット７７を介してインペラーチャンバー７５中に接線的に移動し、流体が羽根７２に衝突し、この場合、これはシャフト５４に対して回転運動を付与し、このようにして、アンカー撹拌機５１に回転を生じさせる。流体の運動自体が、アンカー撹拌機の回転を生じるけれども、補助的駆動機序、たとえば図３の撹拌装置は必要とされない。流体がインペラーチャンバーから、反応器の反応チャンバーに移動する場合には、回転式アンカー撹拌機は、前記の図３および４に相当する第１のフロー上に重ねられた循環する第２のフローを生じる。
【００５７】
図８および図９は、本発明の方法を実施するのに有用なＵＶ反応器の他の実施態様を例証する。長形ＵＶランプ８１は、ＵＶ透過性らせん状巻線形フローチューブ８２（好ましくは石英）によって包囲されており、この場合、これは、複数個の独立した巻線８６を定義している。らせん状巻線形チューブ８２は、チューブ８２の底部末端で連結している入口８３中のその底部末端、ならびにチューブ８２の頭部末端で連結している出口８４のその頭部末端で終わっている。図８中の矢印によって示されているように、処理すべき流体は、入口８３中にポンプによって供給され、さらにＵＶランプ８１を取り囲むらせん状巻線形チューブ８２によって移動させ、その際、これは、ランプからのＵＶ放射に暴露される。
【００５８】
図９中で最良の形態が例証されているように、チューブ８２の巻線８６は、一般的にＵＶランプと近接する直線的または平らな表面を有する一般的なＤ−形状断面およびカーブした外表面で形成されている。第１フロー８７の一般的方向で、流体がチューブ中を流れる場合には、表面張力、壁の摩擦、および流体がチューブの外部周囲を横行しなければならない大きい距離の組合せは、結果として、チューブ中で、循環する第２フロー８８の形成を生じ、これはディーン渦として知られている。循環する第２フロー８８は、一般には、第１フローに対して横行に、かつ重ねられて配置されているので、一般的にはＵＶランプ８１に対して横行に配置されている。
【００５９】
したがって、流体が、ＵＶランプの表面に沿って、第１フロー方向に移動する場合には、循環する第２フローは、前記に示した多くの利点を有する本発明の方法にしたがって、ＵＶ源に近づいたり離れたりして流体を運搬する。図８および図９の反応器の形状に関する利点は、運動部分または駆動機序を含まないことであるのは明らかである。第１フロー８７および第２フロー８８のそれぞれの性質、および流体によって試みられたＵＶ照射線量は、調整によって制御されてもよく、その際、流体の粘度、らせん状巻線形チューブ８２、およびチューブ中の流体の流速を調整することが可能である。
【００６０】
図１０および１１は、図８および９と同様のＵＶ反応器の形状を例証しているが、しかしながら、Ｄ−形状断面よりもむしろ一般的な直線形状断面を有する反応器のらせん状巻線形フローチューブを有する反応器を例証している。長形ＵＶランプ９１が配置され、かつ、複数個の別個の巻線９３を定めるらせん状巻線形石英チューブ９２によって包囲されている。入口９４は、フロ−チューブ９２とその底部末端で連結しており、かつ、出口９６はその頭部末端でフローチューブ９２と連結している。処理すべき流体は、入口にポンプによって供給され、かつ、らせん状巻線形チューブ９２を介して、第１フロー９７の方向で、ＵＶランプの表面に沿って、らせん状パターンで移動し（図１１）、かつＵＶ放射に対して暴露される。
【００６１】
図８および図９の実施態様に示すように、チューブ９２中の表面張力、摩擦、および巻き路の長さの勾配が組合わさって、第１フロー９７上に重ねられた循環する第２フロー９８として、それ自体を明らかにするディーン渦を生じる。循環する第２フロー９８は、ＵＶランプに対して本質的に横行に配置され、これによって、流体は、本発明の方法にしたがって、かつ、前記に示したこれらの利点を伴い、ランプに近づいたり離れたりして流体を運搬する。再度、照射線量を、流体の性質、ランプ強度、および反応器中の流速を調整することによって制御する。
【００６２】
さらに、図１２および図１３は、本発明の方法を実施するのに有用な他のＵＶ反応器の形状を例証する。反応器１００は、管形石英（または他のＵＶ透過性材料）のインナーチューブ１０２中に配置された長形ＵＶランプ１０１を含む。外部ハウジング１０３は、石英チューブ１０２を包囲しており、これと連結して、ＵＶランプ１０１の長さに沿って細長い反応チャンバー１０２を定義している。ハウジング１０３は、その頭部でヘッドキャップ１０６によってキャップされており、かつ、その底部１０３でそのベースキャップ１０８によってキャップされており、この場合、それぞれは、ハウジング１０３および石英チューブ１０２に対して、適切なＯ−リングシール１０７を用いて密閉されている。ハウジング１０３の内部表面は、反応器底部から頭部に、石英チューブ１０２の周囲を連続的にらせん状に描く一般的なヘリカルチャネル１０９を定義するように加工されている。ヘリカルチャネルは、石英チューブ１０２と接近しているものの連結されることなく、したがって、ヘリカルチャネルのそれぞれの回転と石英チューブ１０２との間の一連のかなり狭い流路１１１を定義している。入口１１２は、反応器底部で反応チャンバー１０４と連結されており、かつ出口１１３は反応チャンバー１０４と反応器頭部で連結されている。
【００６３】
本発明の方法を実施するための使用において、処理されるべき流体は、入口を介して反応器中にポンプによって供給され、かつ一般的にはヘリカルチャネル周囲を、かつＵＶランプの表面に沿って、第１のフロー１１４で流れる。この第１フローの動きは、Ｄ−形状チャネル中の流体の動的干渉の結果としてディーン渦の形で循環する第２フローを生じる。循環する第２フロー１１６は、第１フロー１１４上に重ねられ、かつ、本発明の方法にしたがって、ＵＶ源に近づいたり離れたりして運搬される。
【００６４】
同時に、空間１１１は、少量の流体を、フリージェットフロー１１６中で反応器の長さに沿って接線的に流れることを可能にする（図１３）。フリージェットフロー１１６中の流体は、らせんを描く第１フロー１１４上にほぼ垂直に方向付けられる。２つのフロー間の干渉は、干渉フローによって生じる流体の動力の結果として、第２フロー１１６の循環運動を増強させる。これは、順に、流体が反応器中を移動する場合の、改善されたより一定の流体への照射を導く。ＵＶ照射線量は調整することができ、かつ、ヘリカルチャネルの直径、空間１１１の大きさ、流体の粘度、ランプ１０１の強度および反応器中の流体の流速によって制御することができる。
【００６５】
さらに、図１４および図１５は、本発明の方法を実施するための有用なＵＶ反応器の他の実施態様を例証している。反応器１１９は、図１２および図１３の反応器と幾つかの点で類似しており、かつ、石英チューブ１２２によって包囲された長形のＵＶランプ１２１を含む。外部ハウジング１２３は、石英チューブ１２２を包囲しており、かつこれと連結して、ＵＶランプ１２１の長さに沿って延びる反応チャンバー１２４を定義している。ハウジングは、その頭部末端で、ヘッドチャップ１２６によってキャップされており、かつ底部末端でベースキャップ１２７によってキャップされており、この場合、これらはそれぞれ、適切なＯ−リング１２８でハウジングおよび石英チューブに対して封止されている。入口１２９は、これらの底部で反応チャンバーと連結し、かつ出口はその頭部末端で反応チャンバーと連結する。
【００６６】
ハウジング１２３の内壁は加工されるか、あるいは、内方突起１３５によって分離されている、一連の一般に環状のチャネル１３２を用いて形成されている。内部突起１３５は、石英チューブ近くに存在するが接触しておらず、これによって、チャネル１３２間のかなり狭い流路１３４を定義している。一般的にリング形状のバッフル１３３の配列は、石英チューブ１２２から外部に突き出し、その際、それぞれのバッフルは、環状のチャネル１３２の一つに相当する範囲内に配置されている。
【００６７】
本発明を実施するための使用において、処理すべき流体は、入口１２９中にポンプで供給され、かつ、反応器１１９に沿って移動し、出口１３１で搬出される。図１５中に例証された最良の形態において、流体は、一般的に、ＵＶランプの長さに沿って、かつ空間１３４を介して、第１フロー１３６で移動し、この場合、これらは、流れをＵＶ源に近接した範囲に制限する。しかしながら、第１フローがバッフル１３３に衝突する場合に、反応チャンバーの外側に向かって、ＵＶ源から離れた方向に流れを変える。バッフル１３３の他の側において、第１フローは再度、ＵＶ源の方向に流れを変え、その後に、次の空間１３４を介して、後続のチャネルおよびバッフルの組合せに流れる。
【００６８】
したがって、第１フロー１３６それ自体が、反復的にＵＶ源に近づいたり離れたりして移動することによって、本発明の利点が得られることが見出された。さらに、それぞれのチャンバー中の第１フロー１３６の移動および置換によって、循環する第２フロー１３７を生じ、この場合、このフローは、ＵＶランプに対して一般的に横行に配置されており、これによって、本発明の原理によれば、流体をＵＶ源に近づいたり離れたりして流体を運搬する。したがって、循環する第２フローは、本発明の特徴点であるクロスミキシングを増強させ、結果としてこれによって本発明による利点を得る。
【００６９】
さらに、図１６および１７は、本発明の方法を実施することができるＵＶ反応器の他の実施態様を例証している。反応器１４０は、図１４および図１５の反応器１１９と幾つかの点で類似しており、かつ、石英チューブ１４２中に配置された長形ＵＶランプ１４１を含む。ハウジング１４３は、石英チューブ１４２を包囲しており、かつ、これと連結して、反応チャンバー１４８を定める。ハウジングはその頭部末端でヘッドキャップ１４４によってキャップされ、かつその底部末端でベースキャップ１４６によってキャップされ、これらはそれぞれの場合において、ハウジングおよび石英チューブに対して適切なＯ−リング１４７によって密閉されている。流体入口１５３は、反応チャンバー１４８の底部と連結し、かつ出口１５４は反応チャンバー頭部と連結されており、この場合、これらは、それぞれ処理すべき流体を装入しかつ搬出させるためのものである。
【００７０】
ハウジング１４３の内壁は加工されているか、あるいは、それぞれ突起１５１によって分離された一般的に環状のチャンバー１４９の配列で形成されている。石英チューブ１４２方向に伸びているが連結していない突起は、突起と石英との間でかなり狭い流路１５２を定めている。使用において、処理すべき流体は、入口１５３を介してポンプで供給され、かつ、ＵＶランプの長さに沿って上向きに移動し、出口１５４を介して抽出される。図１７中で例証されているように、流体は、管路１５２を介して、ランプ１４２の長さに沿って、第１フロー１５６で移動する。第１フロー中の流体の動きは、環状のチャネル１４９のこれまでの逐次的なものが渦を生じ、この場合、これは結果として、それぞれの環状のチャンバー中の第１フロー上に重ねられた、循環する第２フロー１５７を生じる。循環する第２フローは、ＵＶランプに対して本質的に横行に配置され、したがって、本発明による方法によれば、第２フローは、ＵＶランプに反復的に近づいたり離れたりして移動する。再度、結果として、流体の全量の均等かつ一定の放射が得られ、詳細には前記に示したようにこれに付随するすべての利点が得られた。
【００７１】
本発明は、発明者によっておこなわれた実験および臨床試験を示す種々の実施例の範囲内で記載され、かつさらに特徴付けられる。実施例と一緒に組み合わせて示された技術およびデータは、本発明による方法のよりより理解およびより完全な開示のためであって、これに制限されるものではない。ここで示されている実施例に対して多くの改変がなされてもよく、かつ、以下に示されていない他の試験も、本発明の範囲内で実施されてもよい。
【００７２】
実施例
例１
ＵＶ照射によってウイルス粒子を不活性化するための方法における限界パラメータ
ＵＶＣ照射によるウイルス不活性化の目的は、タンパク質または重要な機能にダメージを与えることなく、ウイルスの高いレベルでの不活性化を達成することである。２個のパラメーターは、この目的を達成するのに決定的であることが見出され、すなわちこれらのパラメーターは、流体中のタンパク質濃度およびＵＶフルエンスである。フルエンスは、ＵＶ照射器の物理的形状に依存するが、それというのもし、インターナルフローパターンは、懸濁液中の任意のタンパク質分子またはウイルス粒子が受けるＵＶ光の線量にかなり影響するためである。
【００７３】
タンパク質は、ＵＶの範囲で吸収されるが、高いタンパク質濃度は、ＵＶＣダメージからの大量の標的タンパク質を保護するのに役立つ。しかしながら、高いタンパク質濃度は、ウイルスをも保護する。したがって、タンパク質結合性およびウイルス不活性化の双方を、種々のタンパク質濃度で別個に評価することが必要であり、その後に、標的タンパク質の結合性を最大限に保護し、さらにウイルスを減少させるであろう、不活性化方法のためのタンパク質濃度を選択する。
【００７４】
したがって、ＵＶＣによって誘発された効力損失を、タンパク質濃度の関数として、図１８、チャートＡに示したように測定した。ＵＶＣ−誘発による効力損失は、１２．５ｍｇ／ｍｌ濃度のα１プロテアーゼインヒビターでは最も少ないが、しかしながら、７．０、５．０および４．０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度で増加する。効力上での最良の効果は、最も低いタンパク質濃度、２．５ｍｇ／ｌでみられた。それとは対照的に、図９Ｂに示したように、ウイルス感染性における最も低い減少は、最も高いα１プロテアーゼインヒビター濃度　１２．５ｍｇ／ｍｌで観察され、かつ最も高い不活性化濃度は、最も低い濃度で、すなわち２．５ｍｇ／ｍｌで観察された。これらのデーターに基づいて、α１プロテアーゼインヒビター　５ｍｇ／ｍｌは、許容可能なタンパク質効力と良好なウイルスの不活性化との間の歩み寄りの結果として、ＵＶＣ不活性化のために使用された。
【００７５】
モデルウイルス試験
ウイルスストック。ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）、テネシー菌株（ｓｔｒａｉｎ Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ）、エンベロープをもたない一本鎖ＤＮＡウイルスを、ヒトパルボウイルスＢ１９のためのモデルとして、これらの試験に使用した。このウイルスは、低温殺菌および乾熱殺菌を含む種々の方法による不活性化に対しての耐性を示した。
【００７６】
ウイルスストックは、ブタ精巣（ＰＴ）細胞のインフェクションによって製造された。ウイルスは、インフェクションの低い多重性で、ＰＴ細胞のサブコンスフルエントな単層を感染させることによって増殖させ、増殖媒体を添加し、その後に、５％ＣＯ２中で、３７℃で、有利な細胞病理学が観察されるまで細胞をインキュベートした。ウイルスの増殖媒体は、本質的な最小培地から成り、イーグルＳ塩を、７．５％のウシ胎児血清およびＮＨＧと一緒に添加した。ＮＨＧは、コンタミネーションを防ぎ、かつ、この細胞系の要求する付加的な培地を供給するために添加し、かつ、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ（Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］）ピペラジン−Ｎ−［２−エタンスルホン酸］、０．０５ｍｇ／ｍｌゲンタマイシンおよびフンギソン（２．５ｍｇ／ｍｌ　アンホテリシンＢ）から成る。感染細胞を、凍結乾燥によって粉砕し、かつ細胞溶解物を使用時まで約−７０℃で保存した。それぞれの実験のためのウイルススパイクは、ウイルス感染細胞溶解物を融解し、低速で遠心分離し（４０００ｘｇ）、細胞崩壊物を除去し、かつ透明な上清を捕集することによって製造された。
【００７７】
ウイルスアッセイ
ＵＶＣによるウイルスの不活性化は、ＰＴ細胞が播種された９６−穴マイクロタイタープレート中で、７．５％ＦＢＳおよびＮＨＧを含有するＭＥＭを用いて、エンドポインド希釈することによって測定された。ウイルスは、ハンクス液（ＨＢＳＳ）中での試験試料またはポジティブコントロール一連の半対数的希釈を用いて希釈した。ポジティブコントロールは、ウイルススパイクとして使用したウイルスと同ロットから構成される。スパイクのないＨＢＳＳをネガティブコントロールとして使用した。それぞれの希釈は、９６−穴マイクロタイタープレートの８穴を播種するのに使用した。３７℃で、５％ＣＯ２中で７日間に亘ってインキュベーションの後に、細胞病理学的に評価した。結果を、ＳｐｅａｒｍａｎおよびＫａｒｂｅｒの方法によってタイター（ｌｏｇ 平均　組織培養感染量／ｍｌ；ＴＣＩＤ５０／ｍｌ）に変換した（Ｃａｖａｌｌｉ−Ｓｆｐｒａｚａ， Ｌ． Ｂｉｏｍｅｔｒｉｅ Ｇｒｕｎｄｚｕｇｅ ｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈ−ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｋ［Ｂｉｏｍｅｔｒｙ， ｔｈｅ ｂａｓｉｃｓ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ］， Ｇｕｓｔａｖ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ， １９７４， ｐ． １７１−１７３．）。
【００７８】
種々のウイルス種は、これらの相対的な不活性化感受性に関して試験した。
【００７９】
【表１】
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【００８０】
第１表に示したように、本発明の方法は、他のウイルスよりも小さいフルエンスでＰＰＶを不活性化するが、０．０１４〜９．０ジュール／ｃｍ２の範囲でのフルエンスに暴露する場合には、少なくとも４オーダーの大きさですべてウイルスが不活性化された。さらに、ウイルスのゲノムが小さくなればなるほど、典型的には効果的なフルエンスの値は小さくなる。
【００８１】
例２
タンパク質結合性
ＵＶＣ暴露に引き続いて、免疫グロブリン結合性の維持について、分子のアグリゲーションおよびフラグメンテーションの程度を評価することによって評価した。これは、ＴＳＫ−Ｇ３０００（Ｔｏｓｏ−Ｈａａｓ）カラムおよび０．９１Ｍ　Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ５．２−０．２Ｍ　ＮａＣｌバッファーを用いてのゲル濾過クロマトグラフィーによっておこなわれた。免疫グロブリン結合性は、単量体タンパク質の面積％として示された。
【００８２】
α１ＰＩに関して、タンパク質結合性は、ブタエラスターゼを抑制する酵素の能力を測定することによって評価した。タンパク質結合性は、ＵＶＣ暴露前の活性の百分率として示された。
【００８３】
ＩＧＩＶ中のＰＰＶの不活性化
予め調製されたＩＧＩＶを、水で０．８％に希釈し、ｐＨ４．２に調整し、かつ１０％のＰＰＶでスパイクした。タンパク質結合上でのＵＶＣ暴露の効果を評価するために、スパイクのないＩＧＩＶ溶液を使用した。ＩＧＩＶ溶液を、管形ＵＶ反応器中に、蠕動ポンプで供給し、運転を１００ｍｌ／分に調整した。タンパク質溶液を装置を介してポンプで供給し、試料を含有する撹拌型受け器中に再度循環させた。タンパク質溶液を、５、１０、１５、３０および６０分に亘っての完全な組み立て（ａｓｓｅｍｂｌｙ）中に再循環し、この場合、これは、それぞれ、２．８、５．６、８．４、１６．９および３３．８ジュール／ｃｍ２に相当する。この場合において、フルエンスは、ＵＶ源に最も近い反応チャンバー表面（この場合、これらは、ＵＶランプ周囲の石英スリーブの表面であってもよい）でＵＶ光強度によって多重化された平均滞在時間（かさ流量によって分配された反応器容量）として定められる。これらの計算のために、理想的なプラグフローが仮定された。図１９に示されているように、再循環の５分後に、４ｌｏｇのＰＰＶ減少が観察され、かつ３０分後には、７ｌｏｇを超えての不活性化が観察された。ＵＶＣ暴露の６０分後に、９５％の単量体ＩｇＧが維持されていた。
【００８４】
例３
α１プロテアーゼインヒビター中でのＰＰＶの不活性化
α１プロテアーゼインヒビター（∀１ＰＩ）を、２０ｍＭ　リン酸ナトリウムｐＨ７．０および１００ｍＭ　ＮａＣｌ中　５ｍｇ／ｍｌに希釈し、かつ、例１で使用したように同じ装置中でＵＶＣに暴露した。しかしながら、この試験において、溶液を装置を介して単一の経路で、２５〜１２００ｍｌ／分の流量でポンプで供給し、結果として、０．１９〜１８ジュール／ｃｍ２のフルエンスが生じた。
【００８５】
ウイルスの減少を評価するために、タンパク質溶液を、ＰＰＶで１０％スパイクし、かつタンパク質結合性を評価し、スパイクされていない溶液をＵＶＣに対して暴露した。図２０から、約０．６ジュール／ｃｍ２で、少なくとも４ｌｏｇｓのＰＰＶが不活性化されることが見出される。さらに、第２表に示されているように、高いフルエンスでＰＰＶは、検出を下廻るレベルに減少され；ｌｏｇ減少の多様性は、スパイクされたウイルスの出発タイター中の多様性によって観察された。少なくとも９５％の∀１ＰＩ活性が、２．３ジュール／ｃｍ２以下のフルエンスに暴露した後に維持された。
【００８６】
【表２】
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【００８７】
例４
α１プロテアーゼインヒビター中のＰＰＶの不活性化
２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０　１００ｍＭ　ＮａＣｌ中　５ｍｇ／ｍｌに希釈された∀１ＰＩ溶液は、管形反応器の第２の型中でＵＶＣに対して暴露され、その際、入口および出口は相殺される。これは、主に接線的であるが、しかしながら反応器中の環状のフローに対して放射線状の成分を含むフローパターンを生じる（タンジェンシャルフロー反応器）。ウイルス減少の評価のために、タンパク質溶液は、ＰＰＶで１０％スパイクされる。図２１中に示されたデータは、この反応器中で、４ｌｏｇのＰＰＶ不活性化が、例１０および例１１中で使用された管形反応器よりも低いフルエンスで不活性化させることが可能であると示している。最初の∀１ＰＩ活性の少なくとも９５％が、２ジュール／ｃｍ２以下のフルエンスで観察された。同様のＵＶランプおよび同様の光強度が、すべての試験において使用されているが、これは、特に、第１フロー中の循環する第２フローを含む、改善された流体力学的条件（混合）が、適切なウイルスの不活性化を得るために必要な反応器中でのタンパク質溶液の全滞在時間を減少させることを示した。
【００８８】
例５
【００８９】
【表３】
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【００９０】
グラフ図Ａは、３種の異なる反応器の形状において、５ｍｇ／ｍｌのα１−プロテアーゼインヒビターの溶液中で、ブタパルボウイルス（ＰＰＶ）の不活性化を評価する試験結果を示す。これは、４−ｌｏｇのウイルス減少の限界値は、図１で示すような従来の反応器に類似する、簡単な管形反応器中で、約０．７Ｊ／ｃｍ２のフルエンスで達成されてもよい。改善された流体力学的条件、特に、タンジャンシャルフロー特性を有する反応器およびらせん状巻線形反応チャンバーを有する反応器（図８参照）中のラジカルフロー成分の増加は、血漿溶液を滅菌するために必要なＵＶ光エネルギーの著しい減少を導く。これらのデーターは、ＰＰＶ不活性化の４−ｌｏｇが接線の入口および出口ａを有する管形反応器中で約０．１５Ｊ／ｃｍ２で達成することができる。らせん状巻線形反応チャンバーを有する反応器中において、０．１Ｊ／ｃｍ２未満は、４−ｌｏｇのＰＰＶの不活性化するのに十分である。４．５〜５のｌｏｇ減少値が、ウイルスアッセイの検出限界にほぼ等しく、かつ、正確なウイルスの減少はさらに高いこともありえると解される。
【００９１】
これらの結果は、ウイルスの代わりにＵＶ光感受性物質を用いて得られるデータから構成される。この場合において、ＵＶによって誘発されたヨウ化物イオンからの３ヨウ化物イオンの形成が使用され、引き続いて、Ｒａｈｍによって記載された試みを行う（Ｒａｈｍ， Ｒ． Ｏ．； Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ ５８（１９９３）６， ８７４−８８０， ｉｂｉｄ ６６（１９９７）４， ４５０−４５５）。ここで、ヨウ化カリウムを、ＵＶ光感受性成分として、２５４ｎｍでのＵＶ光強度を測定するために使用され、グラフＡ図で使用されたのと同様の３種の反応器中での反応媒体に対して提供した。測定された光強度と、ＵＶバルブによって放射された光強度との比較によって、ＵＶ光収量が得られる。ヨウ化カリウム中のＵＶ光透過度は、与えられた条件下で特に小さいが（１ｍｍ未満）、ヨウ化物の変換は、ＵＶバルブを包囲する石英スリーブの表面でのみ直接的に生じるように近づけることができる。したがって、このような流体力学的条件、特に、循環する第２フローパターンの結果としてのラジカル混合が、光収量を定めることは明らかである。グラフＢ中で示されたデータは、明らかにこれを確認している。優れた流体力学的条件によって、最も高い光収量は、他の２個の反応器と比較して、らせん状巻線形反応チャンバーを有する反応器中で見出された。グラフＢ中のデータは、ラジカル混合、特に、循環する第２フローの増加が、流量の増加によって増加することを示す。らせん状巻線形チャンバーを有する反応器中において、
【００９２】
【表４】
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【００９３】
しかしながら、混合の程度は、１０００ｍｌ／分よりも高い流量において低下するとみられる。それというのも、ラジカル混合は、接線の入口および出口を有する反応器中でより良好であるが、光収率は、簡単な管形反応器と比較して高くなる。
【００９４】
例６
グラフ図Ｃは、らせん状巻線形反応チャンバーを有するＵＶ反応器中で、α１プロテアーゼインヒビター　５ｍｇ／ｍｌの溶液中のＲｅｏ−ウイルス３の不活性化を評価する試験結果を示す。これによれば、Ｒｅｏ不活性化が、フルエンスの増加と一緒に増加し、約０．１５Ｊ／ｃｍ２での４−ｌｏｇ減少を達成することが見出されている。同時に、タンパク質活性はダメージを受けないが、０．１５Ｊ／ｃｍ２を上廻るフルエンスで減退する。０．１５Ｊ／ｃｍ２のフルエンス値は、１０００ｍｌ／分の流量に相当する。図に示されているように、ＹＹＹ混合は、明らかにこの装置において１０００ｍｌ／分を上廻る流量での限界およびプラトーに近づいている。したがって、さらなる流量の増加（フルエンス減少）は、反応器の死滅化領域でのウイルスの全滞留時間を減少させ、したがって、ウイルスの不活性化の減少を導く。同時に、タンパク質活性は、減少した流量で減退する（フルエンス増加）。この試験は、流体力学的条件が、適切な混合を保証するように適応される最適化された流量を示唆するが、しかしながら、同時に、全滞留時間はさらにウイルスを効果的に死滅させるのに十分であり、かつ十分に高いタンパク質活性を留めている。この流量は、試験したような反応器のデザインおよび形状のみならず、前記に示したようにウイルスおよびタンパク質の特性およびそれぞれの濃度に依存する。したがって、最適な流量は、それぞれ示された系のために実験的に測定するのに必要である。
【００９５】
【表５】
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【００９６】
本発明は、好ましい実施態様、形状、方法および実施例によって記載されている。しかしながら、種々の付加、削除および変更が、前記請求項に示したような本発明の精神および範囲から逸脱することなく、例証された実施態様に関しておこなわれてもようことは当業者の当然とするところである。
【図面の簡単な説明】
【図１】
流体の層状流の特徴を示す、先行技術によるリングスロットＵＶ反応器を示す略図
【図２】
本発明によるＵＶ反応器の一部分を簡略化した断面図
【図３】
本発明による回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図４】
本発明による回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図５】
本発明による回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図６】
本発明による回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図７】
本発明による回転式撹拌機を有するＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図８】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図９】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１０】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１１】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１２】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１３】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１４】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１５】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１６】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１７】
本発明によるＵＶ反応器の一つの態様を示す断面図
【図１８】
種々の∀１ＰＩ濃度でのフルエンスの関数として∀１ＰＩ効力およびＰＰＶ減少を示すグラフ図
【図１９】
時間の関数として、∀１ＰＩ溶液中でのＰＰＶ減少を示すグラフ図
【図２０】
フルエンスの関数として、∀１ＰＩ溶液中でのＰＰＶ減少を示すグラフ図
【図２１】
フルエンスの関数として、∀１ＰＩ溶液中でのＰＰＶ減少および∀１ＰＩ活性の百分率を示すグラフ図
【符号の説明】
１１　反応器、　１２　管形ＵＶランプ、　１３　円筒型ハウジング、　１４　外壁、　１６　内壁、　１７　反応チャンバー、　１８　入口、　１９　出口、　２１　矢印、　２２　曲線、　２３　ランプからの距離限界、　２４　死滅化領域の外側境界線、　３１　ＵＶ反応器、　３２　ランプ、　３３　管形ハウジング、　３４　外壁、　３６　内壁、　３７　反応チャンバー、　３８　死滅化領域、　３９　第１フロー、　４１　第２フロー、　４６　ＵＶランプ、　４７　ガラスマントル、　４８　管形ハウジング、　４９　反応チャンバー、　５１　回転式アンカー撹拌機、　５２　ベースカバー、　５３　位置決めチップ、　５４　撹拌機シャフト、　５５　アンカー撹拌機底部、　５６　位置決めピン、　５７　マグネット式カプラーアーム、　５８　マグネット式装置、　５９　入口、　６１　出口、　６２　Ｏ−リング、　６３　フローブレーカー、　６４　ヘッドカバー、　６５　摺動ベアリング、　６６　第１フロー、　６７　第２フロー、　７０　ドライブハウジング、　７１　シールされていない装置機序、　７２　羽根、　７３　入口、　７５　円筒状インペラーチャンバー、　７７　スロット、　７８　外部チャネル、　８１　長形ＵＶランプ、　８２　らせん状巻線形チューブ、　８３　入口、　８４　出口、　８６　巻線、　８７　第１フロー、　８８　第２フロー、　９１　長形ランプ、　９２　らせん状巻線形石英チューブ、　９３　巻線、　９４　入口、　９６　出口、　９７　第１フロー、　９８　第２フロー、　１００　反応器、　１０１　インナーチューブ、　１０２　石英チューブ、　１０３　外部ハウジング、　１０６　ヘッドキャップ、　１０７　Ｏ−リングシール、　１０８　ベースキャップ、　１０９　ヘリカルチャネル、　１１１　スペース、　１１２　入口、　１１３　出口、　１１４　第１フロー、　１１６　第２フロー、　１１９　反応器、　１２１　ＵＶランプ、　１２２　石英チューブ、　１２３　ハウジング、　１２４　反応チャンバー、　１２６　ヘッドキャップ、　１２７　ベースキャップ、　１２８　Ｏ−リング、　１２９　入口、　１３１　出口、　１３２　チャネル、　１３３　バッフル、　１３４　流路、　１３６　第１フロー、　１３７　第２フロー、　１４０　反応器、　１４２　石英チューブ、　１４３　ハウジング、　１４４　ヘッドキャップ、　１４６　ベースキャップ、　１４７　Ｏ−リング、　１４８　反応チャンバー、　１４９　チャンバー、　１５１　突起、　１５２　流路、　１５３　入口、　１５４　出口、　１５６　第１フロー、　１５７　第２フロー
【図１】
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【図１８】
2004512905.tif 000009
【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際公開パンフレット】
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2004512905.tif 000090
2004512905.tif 000091
【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004512905.tif 000092
2004512905.tif 000093
【国際調査報告】
2004512905.tif 000094
2004512905.tif 000095
2004512905.tif 000096
2004512905.tif 000097