(57)【要約】ヒト免疫不全ウイルス１型（「HIV-1」）によるヘルパーT細胞及び他の標的細胞の感染を予防するための方法、並びに、少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤の相乗的な併用に標的細胞を曝露することにより、後天性免疫不全症候群（「AIDS」）を予防又は治療するための方法。該吸着阻害剤は、標的細胞上のCD4受容体に結合又はHIV-1上のgp120に結合する、例えば抗体のような化合物であり、該融合阻害剤は、gp41と相互作用しそれの標的細胞との相互作用を阻害又は防止する、例えばペンタフシド（pentafuside）のような化合物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤の感染を防止する量での相乗的併用に標的細胞を曝露することを包含する、ヒト免疫不全ウイルス１型（「HIV-1」）による標的細胞の感染を防止する方法。
【請求項２】
前記吸着阻害剤が、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチド、HIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びHIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれるポリペプチドであり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用し標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用しHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記吸着阻害剤が、抗体、抗体断片、CD4リガンド断片を含むCD4アンタゴニスト、及びCD4断片を含むgp120アンタゴニストから成る群より選ばれ、前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記吸着阻害剤が、抗CD4抗体及び抗gp120抗体から成る群より選ばれ、前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド（pentafuside）、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記吸着阻害剤が、gp120のCD4受容体への結合は許すが標的細胞のHIV-1による感染を阻害する抗CD4抗体であり、前記融合阻害剤が、ペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項２記載の方法。
【請求項６】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤と併用した前記吸着阻害剤及び融合阻害剤に標的細胞を曝露することをさらに包含する、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記吸着阻害剤が、CCR5及びCXCR4から成る群より選ばれるケモカイン補助受容体と結合し、該補助受容体のgp120への吸着を阻害又は防止する抗HIV-1補助受容体抗体であり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用して標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用してHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項７記載の方法。
【請求項１０】
前記融合阻害剤がペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項７記載の方法。
【請求項１１】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤と併用した前記吸着阻害剤及び融合阻害剤に標的細胞を曝露することをさらに包含する、請求項７記載の方法。
【請求項１２】
後天性免疫不全症候群（「AIDS」）になる又は苦しむ危険性のある患者に対し、少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤を、疾患を予防又は治療する量で相乗的併用して投与することを包含する、AIDSの予防又は治療のための方法。
【請求項１３】
前記吸着阻害剤が、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチド、HIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びHIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれるポリペプチドであり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用し標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用しHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
前記吸着阻害剤が、抗体、抗体断片、CD4リガンド断片を含むCD4アンタゴニスト、及びCD4断片を含むgp120アンタゴニストから成る群より選ばれ、前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記吸着阻害剤が、抗CD4抗体及び抗gp120抗体から成る群より選ばれ、前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記吸着阻害剤が、gp120のCD4受容体への結合は許すが標的細胞のHIV-1による感染を阻害する抗CD4抗体であり、前記融合阻害剤が、ペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤と併用した前記吸着阻害剤及び融合阻害剤に標的細胞を曝露することをさらに包含する、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】
前記吸着阻害剤が、CCR5及びCXCR4から成る群より選ばれるケモカイン補助受容体と結合し、該補助受容体のgp120への吸着を阻害又は防止する抗HIV-1補助受容体抗体であり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用して標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用してHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１２記載の方法。
【請求項１９】
前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
前記融合阻害剤がペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤と併用した前記吸着阻害剤及び融合阻害剤に標的細胞を曝露することをさらに包含する、請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
前記吸着阻害剤を、体重1キログラム当り約1から50ミリグラムの量で患者に投与し、前記融合阻害剤を、体重1キログラム当り約0.1から10ミリグラムの量で患者に投与する、請求項１２記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤を包含する、HIV-1による標的細胞の感染を防止するための及びAIDSを予防又は治療するための組成物。
【請求項２５】
前記吸着阻害剤が、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、標的細胞上のCD4受容体と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチド、HIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びHIV-1上のgp120と結合し標的細胞へのHIV-1の吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれるポリペプチドであり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用し標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用しHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項２４記載の構成物。
【請求項２６】
前記吸着阻害剤が、抗体、抗体断片、CD4リガンド断片を含むCD4アンタゴニスト、及びCD4断片を含むgp120アンタゴニストから成る群より選ばれ、前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項２５記載の構成物。
【請求項２７】
前記吸着阻害剤が、抗CD4抗体及び抗gp120抗体から成る群より選ばれ、前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記吸着阻害剤が、gp120のCD4受容体への結合は許すが標的細胞のHIV-1による感染を阻害する抗CD4抗体であり、前記融合阻害剤が、ペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項２５記載の構成物。
【請求項２９】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤をさらに包含する、請求項２４記載の構成物。
【請求項３０】
前記吸着阻害剤が、CCR5及びCXCR4から成る群より選ばれるケモカイン補助受容体と結合し、該補助受容体のgp120への吸着を阻害又は防止する抗HIV-1補助受容体抗体であり、前記融合阻害剤が、gp41と相互作用して標的細胞への銛のような吸着を阻害又は防止するポリペプチド、及びgp41と相互作用してHIV-1を標的細胞と密着させる反跳のような作用を阻害又は防止するポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項２４記載の構成物。
【請求項３１】
前記融合阻害剤が、抗gp41抗体、及び３０〜５０アミノ酸を有しgp41と相互作用してその銛のような作用又は反跳のような作用を防止することができるポリペプチドから成る群より選ばれる、請求項３０記載の構成物。
【請求項３２】
前記融合阻害剤がT-1249、T-649、5-Helix、ペンタフシド、及びそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項３０記載の構成物。
【請求項３３】
前記融合阻害剤がペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項３０記載の構成物。
【請求項３４】
インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる少なくとも１つの他の薬剤をさらに包含する、請求項３０記載の構成物。
【請求項３５】
単一包装内の別々の容器中に、２以上の吸着阻害剤及び融合阻害剤の組み合わせを含んだ、キット形式の製品。
【請求項３６】
標的細胞のHIV-1感染の阻害若しくは防止のために又はAIDSの予防若しくは治療のために有用な他の薬剤をさらに包含する、請求項３５記載の製品。
【請求項３７】
前記薬剤がインテグラーゼ、転写酵素及びプロテアーゼ阻害剤から成る群より選ばれる、請求項３６記載の製品。
【請求項３８】
前記吸着阻害剤が、抗CD4抗体及び抗gp120抗体から成る群より選ばれ、前記融合阻害剤がペンタフシド及びそれと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれる、請求項３５記載の製品。
【請求項３９】
該情報又は指導を含んだ書類又は視覚表示を包含する、HIV-1による標的細胞の感染を防止する及びAIDSを予防又は治療する目的で、吸着阻害剤及び融合阻害剤を相乗的に使用することについての情報又は指導を伝達するための手段。
【請求項４０】
視覚モニターに表示されたウェブサイト、パンフレット及び又は添付文書から成る群より選ばれる、請求項３９記載の手段。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、広くは後天性免疫不全症候群の予防及び治療のための方法及び組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
後天性免疫不全症候群（「AIDS」）は、日和見感染と戦うことが困難な衰弱した免疫系によって特徴付けられる疾患である。深刻な疾患を引き起こすこれらの日和見感染は、AIDSの者にとっては生死に関わるが、通常は健常な免疫系を持った非感染者により制御されている。不運にも、AIDS罹患者の免疫系はしばしば非常に弱く、該疾患を制御し又は死を回避するために、医療の介入が必要である。
【０００３】
AIDSは主として、ヒト免疫不全ウイルス１型（「HIV-1」）として知られるレトロウイルスによって引き起こされる。HIV-1は、身体に侵入し、次いでヘルパーT細胞に感染して枯渇させることにより免疫系を弱める。ヘルパーT細胞は、B細胞による抗体の生産、細胞傷害性Tリンパ球（キラーT細胞）の成熟、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞の成熟及び活性、並びに免疫系の多数の他のレギュレーター及びエフェクター機能を制御しているので、健常な免疫系に不可欠である。
【０００４】
感染及びヘルパーT細胞の欠乏は、ヘルパーT細胞のCD4受容体へのウイルスの吸着、補助受容体CXCR4又はCCR5へのウイルスの吸着、細胞へのウイルスの融合、ウイルスの脱外被、DNA形成のためのウイルスRNAの逆転写、DNAの第二鎖の合成、ヘルパーT細胞核への該DNAの移行、ヘルパーT細胞ゲノムへのウイルスDNAの組み込み、DNAの転写によるRNAの合成、ウイルスRNAの翻訳によるウイルスポリタンパク質の生産、ウイルスプロテアーゼによるポリタンパク質の切断によるウイルスタンパク質の生産、並びにウイルスタンパク質の組立て及び出芽による新しいウイルスの形成及び宿主細胞の破壊を必要とする、多段階の過程を経て起こる。これらの過程の１又は２以上に干渉するために種々の薬剤及び治療法が設計されてきた。該疾患を予防又は治療するために用いられる典型的な方法は、ヘルパーT細胞又はマクロファージのような他の標的細胞へのウイルスの吸着を阻害（吸着阻害剤）、標的細胞へのウイルスの融合を阻害（融合阻害剤）、ヘルパーT細胞DNAへのウイルスDNAの組み込みを妨害（インテグラーゼ阻害剤）、ウイルスRNAからのDNAの合成を妨害（逆転写酵素阻害剤）、及びプロテアーゼによるウイルスポリタンパク質のウイルスタンパク質への切断を妨害（プロテアーゼ阻害剤）する化合物の使用を包含する。
【０００５】
これらの化合物のいくつかは相乗的に機能する。例えば、Beale, K.K. and Robinson, W.E., Jr. Combinations of reverse transcriptase, protease, and integrase inhibitors can be synergistic in vitro against drug-sensitive and RT inhibitor-resistant molecular clones of HIV-1. Antiviral Res. 46:223-232 (2000)及び Essey, R.J., McDougall, B.R., and Robinson, W.E., Jr. Mismatched double-stranded RNA (poly I-poly C12U) is synergistic with different classes of anti-HIV drugs and against drug-sensitive and drugresistant HIV-1 in vitro. Antiviral Res., 51:189-202 (2001)。
【０００６】
しかしながら、AIDSは効果的に予防又は治療するのが困難だということがわかってきた。ウイルスは変異して、相加的又は相乗的な薬剤の併用を含め、該疾患の治療に用いられた薬剤に対する抵抗性を発達させる能力を持つ。この難しさの故に、該疾患を治療するための新しい薬剤及び方法を発見する必要性が引き続き存在している。
【０００７】
近年では、逆転写酵素又はプロテアーゼの阻害剤のような感染後に機能する薬剤の利用よりもむしろ、HIV-1感染を妨害する吸着阻害剤及び融合阻害剤の利用に関心が集まっている。すなわち、Program and Abstracts of the XIV International AIDS Conference. July 7-12, 2002. Barcelona, Spain. "Greenberg. Fusion Inhibitors. Abstract MoOrA139" 及び "W. Olson and others. The Attachment and CCR5 Inhibitors PRO 542 and PRO 140. Abstract MoOrA140."。 実際、吸着及び融合阻害剤は、HIV-1のヘルパーT細胞への感染を妨害するのに効果的であることがわかってきた。
【０００８】
ヘルパーT細胞又はマクロファージへのHIV-1の侵入は別個の行程で、すなわち、吸着及び融合で起こる。吸着及び融合は別個の段階におけるいくつかのウイルス及び細胞のタンパク質の相互作用を必要とする：（1）第一の受容体CD4へのウイルスエンベロープタンパク質の吸着、（2）ウイルスタンパク質の高次構造変化による補助受容体への結合、及び（3）ウイルスタンパク質の露出によるウイルスと標的細胞膜の融合。吸着及び融合は主にウイルスタンパク質gp120及びgp41を介する。gp120及びgp41は、ウイルス粒子表面で三量体として存在する複合体を形成する。gp120は、標的細胞表面の第一の受容体CD4に吸着するウイルスタンパク質である。gp120の吸着は、ウイルスと細胞を接触させるが、融合を開始するに足る接触とはならない。CD4の細胞外領域は４つのドメインから成る（D1、D2、D3及びD4）。CD4におけるHIV-1のgp120結合部位は、免疫グロブリン（Ig）VドメインのCDR2と相同な、CD4のドメイン1（D1）中のアミノ酸４０〜６０（C'、C萩yびD鎖）から成る。gp120のCD4への吸着の後、gp120は高次構造変化を起こし、ケモカイン補助受容体（CCR5又はCXCR4）に結合する。CCR5は、マクロファージ指向性及びあるT細胞指向性の一次HIV-1分離株が用いるケモカイン受容体であり、一方で大部分のT細胞指向性一次HIV-1分離株及びT細胞ライン順応型HIV-1系統はCXCR4を用いる。T細胞指向性分離株には二重指向性のものがあり、CCR5又はCXCR4のいずれかを補助受容体として用いることができる。HIV-1のgp120と補助受容体間の相互作用の後、HIV-1のgp41が露出する。次いでgp41は、銛のような高次構造変化を起こして標的細胞膜へ吸着し、次いでばねのような機構を用いて、ヘアピン三量体として知られる三重らせんのu字型タンパク質構造を形成する。ヘアピン構造を形成することによりウイルスは細胞に引き寄せられ、膜融合が開始する。この融合により標的細胞中にウイルスが入り、続いて細胞感染が起こる。
【０００９】
吸着を阻害することによりHIV-1の感染を予防する試みが好結果であることがわかってきた。2001年10月30日にChangらに発行された、米国特許第6,309,880号(譲受人Tanox, Inc. (テキサス州Houston))、発明の名称 "Antibodies specific for CD4-binding domain of HIV-1"は、HIV-1のgp120のCD4結合領域中にある特殊なエピトープ、並びに、種々のウイルス系統及び分離株によるヒト細胞へのHIV-1感染を阻害できる、エピトープに特異的な抗体を開示している。1999年2月16日にBurklyらに発行された、米国特許第5,871,732号(譲受人Biogen, Inc. (マサチューセッツ州Cambridge))、発明の名称"Anti-CD4 antibody homologs useful in prophylaxis and treatment of AIDS, ARC and HIV infection"は、AIDSを含めた哺乳動物における疾患の予防又は治療のために有用な抗CD4抗体ホモログを開示している。1998年10月6日にAllawayらに発行された、米国特許第5,817,767号(譲受人Progenies Pharmaceuticals, Inc. (ニューヨーク州Tarrytown))、発明の名称"Synergistic composition of CD4-based protein and anti-HIV-1 antibody, and methods of using same"は、CD4に基づいた免疫結合体及びHIV-1のエンベロープ糖タンパク質に特異的な抗体を包含する組成物を開示している。該発明の組成物は相乗的に作用してHIV-1を無力化する。1999年7月13日にTilleyらに発行された、米国特許第5,922,325号(譲受人Public Health Research Institute of the City of New York, Inc. (ニューヨーク州New York))、発明の名称"Synergistic neutralization of HIV-1 by human monoclonal antibodies and other antibodies directed against the V3 loop and the CD-4 binding site of GP-120, and the use for immunotherapy of HIV-1 infection"は、HIV-1エンベロープ糖タンパク質gp120に特異的な抗体の相乗的な併用を開示している。抗体の1つはV3ループに特異的であり、その他はgp120のCD-4結合部位に特異的である。2001年6月5日にZolla-Paznerらに発行された、米国特許第6,241,986号(譲受人New York University (ニューヨーク州New York))、発明の名称"Human monoclonal antibodies to the CD4-binding domain of HIV, uses thereof and synergistic neutralization of HIV"は、HIV-1の無力化及びHIV感染の予防に役立つ、HIVのgp120のCD4結合ドメインに特異的なモノクローナル抗体、並びにHIV感染での問題の治療を開示している。2000年10月24日にHannaらに発行された、米国特許第6,136,310号(譲受人IDEC Pharmaceuticals Corporation (カリフォルニア州San Diego))、発明の名称"Recombinant anti-CD4 antibodies for human therapy"は、ヒトCD4抗原に特異的なキメラ抗体を開示している。
【００１０】
融合を阻害することによりHIV-1の感染を予防する試みもまた好結果であることがわかってきた。2000年1月18日及び2001年8月28日にFangらに発行された、米国特許第6,015,881号及び第6,281,331号(譲受人Trimeris, Inc.)、発明の名称"Methods and compositions for peptide synthesis"は、HIV-1感染の治療に有用なペプチドT-20及び関連ペプチドを開示している。ペンタフシド（pentafuside）としても知られているT-20は、HIV-1と標的細胞の融合をインビトロ及びインビボで防止する、３６アミノ酸のペプチドである。T-20及びその類似体は、HIV-1のgp41のC末端ペプチドセグメントに由来する。該ペプチドセグメントは、HIV-1のgp41のN末端ペプチド対応物との相互作用に関与する。これらのC末端及びN末端ペプチドの結合により、標的細胞の膜とHIV-1ウイルス外被との融合に不可欠なヘアピン三量体が形成される(Sodroski, Cell 1999; 99: 243-6)。ペンタフシドはヘアピン三量体の形成に干渉する。ペンタフシドは、Trimeris及びHoffmann-La Rocheにより、Fuzeon（登録商標）ブランドのenfuvirtide（T-20）として開発されつつある。T-1249として知られる３９アミノ酸のペプチドは、同様の機能の融合阻害剤である。
【００１１】
5-Helixとして知られるタンパク質は、HIV-1のgp41のN末端ペプチドセグメントを用いてHIV-1のgp41のC末端ペプチドセグメントをブロックすることにより、ヘアピン三量体の形成を阻害する。5-Helixタンパク質は、交互に連結したgp41のN及びC末端ペプチドセグメント（N-C-N-C-N）でできている。この構造は、タンパク質分子の凝集が起こらないように構成されている(Root et al., Sci. 2001; 291: 884-8)。
【００１２】
他の抗ウイルス薬剤と同様に、吸着及び融合阻害剤を用いたAIDSの治療が効果的である。近年のHIV-1感染に対する臨床治療は、Highly Active Antiretroviral Therapy (「HAART」)と呼ばれる3種の薬剤の併用を包含する。HAARTは典型的に、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、及びHIV-1プロテアーゼ阻害剤の、種々の併用を包含する。協力的な患者の場合には、HAARTは死亡率及びHIV-1感染のAIDSへの進展を減少させるのに効果的である。しかしながら、これらの多剤併用療法ではHIV-1は除去されず、長期間の治療でしばしば多剤耐性が起こる。また、これらの薬剤の多くは毒性が高く、且つ／又は服薬遵守を減少し効力を制限する、複雑な投与計画が必要となる。そのため、HIV-1感染及びAIDSの予防及び治療のための薬剤をさらに開発する必要性が引続き存在している。理想的には、これらの薬剤は、HIV-1感染のライフサイクルにおける初期段階を標的とする、すなわち、吸着及び融合を阻害又は防止する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
従って、本発明の目的は、ヘルパーT細胞及びマクロファージのような標的細胞へのHIV-1感染を予防又は治療するための方法及び組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の他の目的は、AIDSを予防又は治療するための方法又は組成物を提供することである。
【００１５】
これら及び他の目的は、CD4に結合する抗体のような吸着阻害剤の少なくとも１つ、及びペンタフシドのような融合阻害剤の少なくとも１つの相乗的な併用に標的細胞を曝露することによって達成される。併用は有用である。なぜなら、共に用いた場合には、その相乗的な作用により、より少量の薬剤の使用が可能になり、又は単独で用いた場合と同じ量で薬剤の効能を増大させることができるからである。
【００１６】
本発明の他のさらなる目的、特徴および利点が、当業者にとって明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
定義
「患者」という語は、HIV-1感染及びAIDS発達に感受性である霊長類を意味する。好ましくは、本発明に従って治療される霊長類はヒトである。
【００１８】
「組み合わせて（in conjunction）」という語は、本発明の吸着阻害剤及び融合阻害剤を患者に対し（1）同じ又は異なる投与経路を用いて同じ又は異なる頻度で別々に、又は（2）薬剤的に許容可能な組成物に含めて一緒に投与することを意味する。
【００１９】
「非経口的に」という語は、静脈内、皮下、筋肉内若しくは腹腔内注射による投与、又は皮下埋込みによる投与を意味する。
【００２０】
「相乗作用」という語は、総体的な効果が、独立して投与された場合の化合物の効果の総和よりも高くなるような、個々の該化合物間の協力的な効果を意味する。
【００２１】
「機能的に均等なペプチド」という語は、ポリペプチドとして同じ生物学的活性を有するポリペプチドの断片を意味する。
【００２２】
「標的細胞」という語は、例えばヘルパーT細胞及びマクロファージのような、細胞膜上にCD4及び／又はケモカイン補助受容体CCR5若しくはCXCR4を発現し、HIV-1が吸着及び感染できる細胞、あるいは細胞膜上にHIV-1のgp120及びgp41を発現するHIV-1感染細胞と非感染細胞との間での融合によって感染が可能な細胞を意味する。
【００２３】
ここに記載した特定の方法論、プロトコール及び試薬は、変わることがあるので、本発明は、これらに限定されるものではない。さらに、ここに記載した用語は、特定の具体例を記述するためにのみ用いており、本発明の範囲を限定することを意図しない。ここ及び添付の請求の範囲において用いる単数形の冠詞は、文脈から明らかにそうではない場合を除き、複数をも意味する。例えば、「１つの宿主細胞」は、複数のこのような宿主細胞をも包含する。
【００２４】
他に定義されている場合を除き、ここで用いる全ての技術及び科学用語並びに頭文字語は、当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本発明の実施において、ここに記載したのと類似する又は均等なあらゆる方法及び材料を用いることができるが、ここでは好ましい方法、装置及び材料を記載する。
【００２５】
ここに記載する全ての特許及び文献は、本発明に用いることができるかもしれない、そこに報告された抗体、ポリペプチド、ペプチド及び方法論を記載し及び開示する目的で、法により許される範囲内でここに組み入れられたものとする。もっとも、これらの記述は、本発明が先行発明よりも前に発明されたものではないとの自認であると解釈されるものではない。
【００２６】
本発明
１つの局面において、本発明は、ヒト免疫不全ウイルス１型（「HIV-1」）による標的細胞の感染を防止するための方法を提供する。該方法は、少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤の、感染を防止する量での相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。該方法は、疾患を獲得する危険性が高い患者又はHIV-1に曝露後疾患を獲得した患者のAIDSを予防又は治療するために有用である。
【００２７】
本発明における吸着阻害剤は、標的細胞上のCD4受容体と結合して若しくはHIV-1上のgp120と結合してHIV-1の標的細胞への吸着を阻害若しくは防止する、又はHIV-1の標的細胞への吸着は許すがHIV-1と標的細胞間の細胞融合を阻害若しくは防止する、ポリペプチド又は他の化合物である。一般的に、該吸着阻害剤は抗体、抗体断片、gp120のようなCD4リガンド断片を含むCD4アンタゴニスト、又はCD4とヒトIgG2の融合タンパク質のようなCD4断片を含むgp120アンタゴニストである。好ましくは、該吸着阻害剤は、gp120と結合してgp120のCD4への吸着を防止する又はgp120のCD4への吸着は許すがウイルスと標的細胞の融合を阻害若しくは防止するポリクローナル又はモノクローナル抗体、並びに、CD4に結合してgp120のCD4への吸着を防止する又はgp120のCD4への吸着は許すがウイルスと標的細胞の融合を阻害若しくは防止するポリクローナル又はモノクローナル抗体である。最も好ましくは、該吸着阻害剤は、CD4に結合しgp120の吸着は許すがHIV-1と標的細胞の融合を阻害又は防止するモノクローナル抗体であり、米国特許第5,871,732号で開示されている抗体を包含するが、これに限定されるものではない。
【００２８】
本発明における融合阻害剤は、gp41と相互作用し、標的細胞への銛のような結合を阻害若しくは防止する、又はHIV-1を標的細胞に密着させる反跳のような作用を阻害若しくは防止する、ポリペプチド又は他の化合物である。好ましくは、該融合阻害剤は、gp41と相互作用し、gp41を標的細胞へと導く銛のような作用又はHIV-1を標的細胞に密着させる反跳のような作用を防止するポリペプチドである。最も好ましくは、該融合阻害剤は、抗gp41抗体、又は３０〜５０アミノ酸を有し、gp41と相互作用して銛のような作用若しくは反跳のような作用を防止することができる、より小さいポリペプチドである。１つの具体例では、該融合阻害剤は、T-1249として知られる３９アミノ酸のポリペプチド、T-649として知られる３６アミノ酸のポリペプチド、5-Helixタンパク質、又はそれらと機能的に均等なペプチドから成る群より選ばれるポリペプチドである。最も好ましくは、該融合阻害剤はペンタフシド（T-20）及びそれと機能的に均等なペプチドである。
【００２９】
１つの具体例では、該方法は、CD4に結合しgp120のCD4への吸着を阻害若しくは防止する抗CD4抗体及びペンタフシド若しくはそれと機能的に均等なペプチドの相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。これらの抗体のいくつかはこの分野において公知であり、又はこのような抗体は、例えば米国特許第5,961,576号及び第5,912,176号で開示されている抗体のように、この分野において公知の技術を用いて生産することができる。
【００３０】
他の具体例では、該方法は、gp120のCD4受容体への結合は許すが標的細胞のHIV-1による感染を阻害する抗CD4抗体、及びペンタフシド若しくはそれと機能的に均等なペプチドの相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。これらの抗体のいくつかはこの分野において公知であり、又はこのような抗体は、例えば米国特許第5,871,732号で開示されている抗体のように、この分野において公知の技術を用いて生産することができる。
【００３１】
他の具体例では、該方法は、gp120に結合しgp120のCD4への吸着を阻害若しくは防止する抗HIV-1 gp120抗体、及びペンタフシド若しくはそれと機能的に均等なペプチドの相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。この具体例において、該吸着阻害剤は好ましくは、gp120上のCD4結合部位に結合するモノクローナル抗体である。これらの抗体のいくつかはこの分野において公知であり、又はこのような抗体は、例えば米国特許第6,309,880号及び米国特許第6,241,986号で開示されている抗体のように、この分野において公知の技術を用いて生産することができる。
【００３２】
他の具体例では、該方法は、gp120のCD4受容体への結合は許すが標的細胞のHIV-1による感染を阻害する抗HIV-1 gp120抗体、及びペンタフシド若しくはそれと機能的に均等なペプチドの相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。該抗HIV-1 gp120抗体は、ケモカイン補助受容体CCR5又はCXCR4のための結合部位を包含する、gp120上のいかなるエピトープにも結合し得る。これらの抗体のいくつかはこの分野において公知であり、又はこのような抗体は、例えば米国特許第5,922,325号で開示されている抗体のように、この分野において公知の技術を用いて生産することができる。
【００３３】
他の具体例では、該方法は、ケモカイン補助受容体CCR5若しくはCXCR4に結合し補助受容体のgp120への吸着を阻害若しくは防止する抗HIV-1補助受容体抗体、及びペンタフシド若しくはそれと機能的に均等なペプチドの相乗的な併用に標的細胞を曝露することを包含する。これらの抗体のいくつかはこの分野において公知であり、又はこのような抗体はこの分野において公知の技術を用いて生産することができる。
【００３４】
本発明のポリペプチドは、この分野において公知のタンパク質モデリング法（protein modeling method）を用いて設計及び生産することができる。例えばWO 98/47089のように、タンパク質高次構造の設計及び／又は型作りのための多くのコンピューターアルゴリズムがこの分野において記述されている。
【００３５】
該吸着阻害剤及び融合阻害剤は、HAART様の治療における使用も含め、インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤及びHIVプロテアーゼ阻害剤のような他の薬剤と併用して投与することができる。
【００３６】
他の具体例では、該方法はさらに、インテグラーゼ阻害剤、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、及びHIVプロテアーゼ阻害剤のような他の薬剤の少なくとも１つと併用した本発明の吸着阻害剤及び融合阻害剤に標的細胞を曝露することを包含する。好ましくは該薬剤は、少なくとも１つのインテグラーゼ阻害剤、及び／又は少なくとも１つの転写酵素阻害剤、及び／又は少なくとも１つのプロテアーゼ阻害剤である。このような方法はHAARTレジメントにおいて有用である。最も好ましくは、該方法は少なくとも１つの抗CD4若しくは抗gp120抗体及びペンタフシド並びに１若しくは２以上のインテグラーゼ、転写酵素若しくはプロテアーゼ阻害剤に標的細胞を曝露することを包含する。該抗gp120抗体は、好ましくは米国特許第6,309,880号で開示された抗体である。該抗CD4抗体は、好ましくは米国特許第5,871,732号で開示された抗体である。
【００３７】
他の局面において、本発明は後天性免疫不全症候群（「AIDS」）の予防又は治療のための方法を提供する。該方法は、AIDSになる又は苦しむ危険性のある患者に対し、少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤を、疾患を予防又は治療する量で相乗併用して投与することを包含する。
【００３８】
さらなる局面において、本発明は、少なくとも１つの吸着阻害剤及び少なくとも１つの融合阻害剤を包含する、標的細胞のHIV-1による感染の予防のため及びAIDSの予防若しくは治療のために有用な組成物を提供する。該組成物は、阻害剤単独又は種々の賦形剤、アジュバント、添加物及び希釈剤のような薬剤的に許容可能な担体との組み合わせを含む。該組成物はAIDSの予防又は治療に有用である。
【００３９】
本発明の吸着阻害剤及び融合阻害剤は、特にペプチド又はポリペプチドを投与するためにこの分野において公知の、いかなる適切な方法によっても患者に対し投与又は同時投与できる。このような方法は、注射、インプラント及びそれに類する方法を包含するが、これに限定されるものではない。投与のタイミングと用量のレベルを正確に制御することができるので、注射が好ましい。該阻害剤は、非経口的、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮的、舌下、筋肉内、皮下、関節内又はくも膜下腔内に投与できる。該阻害剤は好ましくは非経口的に投与される。
【００４０】
好ましくは、該吸着阻害剤及び融合阻害剤はほぼ同時に投与される。しかし、投与が困難であれば、該阻害剤は「組み合わせて（in conjunction）」投与しても効果的である。例えば、患者に対し、妥当な時間内に、一般的には8時間以内、好ましくは2時間以内、最も好ましくは0.1〜0.5時間以内に、該吸着阻害剤を静脈注射により投与でき、及び該融合阻害剤を筋肉内注射により投与することができる。多くのこのような投与様式が当業者にとって明らかになるだろう。
【００４１】
本発明は、１つの吸着阻害剤及び１つの融合阻害剤の使用、１つの吸着阻害剤及び２以上の融合阻害剤の使用、２以上の吸着阻害剤及び１つの融合阻害剤の使用、並びに２以上の吸着阻害剤及び２以上の融合阻害剤の使用を包含し、これらの全てはAIDSの治療のための併用療法において用いられる種々の他の薬剤と併用する場合を包含する。
【００４２】
該吸着阻害剤及び融合阻害剤は、単一用量で投与でき、又は決められた期間にわたって複数用量で投与できる。例えば、吸着阻害剤を静脈注射により単一用量で投与し、融合阻害剤を数日間にわたって毎日注射することにより投与できる。多くのこのような投与様式が当業者にとって明らかになるだろう。
【００４３】
投与する吸着阻害剤及び融合阻害剤の量又は投与量は、患者の年齢、大きさ及び健康状態、投与様式、疾患の重症度、並びに該用量が治療的又は予防的に作用するか否かに応じて異なる。一般的に、吸着阻害剤は体重1キログラム当り約1〜50ミリグラム（単位mg/kg）、好ましくは5〜30mg/kgの投与量で患者に投与し、融合阻害剤は典型的には体重1キログラム当り約0.1〜10ミリグラム（単位mg/kg）、好ましくは約0.5〜5mg/kgの投与量で患者に投与する。吸着阻害剤は典型的には週一回の計画で投与されるが、日一回の計画で投与してもよい。融合阻害剤は典型的には日一回の計画で投与されるが、日に複数回投与してもよい。状況により、数日間、数週間、又はそれ以上の期間にわたって繰り返し投与する場合、HIV-1ウイルス量及び／若しくは病徴の望ましい抑制が起きるまで、又は患者の状態の望ましい改善が達成されるまで、治療が繰り返し行なわれる。該投与量は、週一回から6ヶ月に一回の範囲で間を置いて再投与してもよい。理想的な投与量並びに理想的な投与経路及び頻度の決定は、当業者に周知である。同様に、本発明の範囲内である他の薬剤の投与量も、過度の実験無しで決定することができる。
【００４４】
本発明の組成物は、本質的に無毒で非治療的な、医薬的に許容可能な担体を含む。このような担体の例として、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンのような血清タンパク質、リン酸塩のような緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩若しくは硫酸プロタミンのような電解質、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、及びポリエチレングリコールが挙げられる。このような医薬組成物は、この分野において公知の方法による剤形に調製及び処方される。
【００４５】
他の局面において、該吸着阻害剤及び融合阻害剤は別々に又は他の薬剤と共に投与することができるため、本発明は、（1）吸着阻害剤、（2）融合阻害剤、及び任意で（3）標的細胞のHIV-1感染を阻害若しくは防止するために又はAIDSの予防若しくは治療のために有用な他の薬剤、の２以上の組み合わせを単一包装内の別々の容器中に含んだ、キット形式の製品を提供する。該キットは、体重1キログラム当り約1〜50ミリグラム（単位mg/kg）、好ましくは約5〜30mg/kgを与えるのに十分な量の該吸着阻害剤を含み、該融合阻害剤は、典型的には体重1キログラム当り約0.1〜10ミリグラム（単位mg/kg）の投与量で患者に投与し、患者に投与する場合は好ましくは約0.5〜5mg/kgである。キットに加える他の薬剤の量は、特定の薬剤に関して承認又は推奨される薬用量を参照して決定する。典型的には、該キットは1つの吸着阻害剤及び1つの融合阻害剤を含む。好ましくは、該キットは抗CD4抗体、抗HIV-1 gp120抗体若しくは抗HIV-1 gp41抗体、及びペンタフシドを含む。最も好ましくは、該キットは抗CD4抗体及びペンタフシドを含む。好ましくは、任意の薬剤はインテグラーゼ、転写酵素又はプロテアーゼ阻害剤である。
【００４６】
他の局面において、本発明は、標的細胞のHIV-1による感染を防止する及びAIDSを予防又は治療する目的で吸着阻害剤及び融合阻害剤を相乗的に使用することについての、情報又は指導を伝達するための手段を提供する。該伝達手段は、情報又は指導が掲載された書類又は視覚表示を包含する。好ましくは、該伝達は、そのような情報又は指導が掲載された、視覚モニターに表示されたウェブサイト、パンフレット又は添付文書である。
【００４７】
有用な情報は、該阻害剤が相乗的であるという事実、もしあるとすれば該阻害剤の併用及び他の薬剤との併用により起こる副作用に関する詳細、並びに患者が阻害剤又はそれらの使用に関して疑問を持った場合に利用する交信情報を包含する。有用な指導は、阻害剤の薬用量、投与量及び頻度、並びに投与経路を包含する。該伝達手段は、本発明の相乗的阻害剤を使用することの利益がある患者を指導するために、及び該阻害剤を患者に投与するための承認された方法を伝達するために役立つ。
【００４８】
実施例
本発明を、以下の好ましい具体例によりさらに例示する。もっとも、これらの実施例は、単に例示のために記載するものであり、他に断りがない限り本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００４９】
材料及び方法
ウイルス：6種のウイルスの力価を測定した。各ウイルス分離株のTCID50/mlは以下の通り：
HIV-1 302076（小児）: 39810;    HIV-1 302077（小児）: 39810;
HIV-1 302143（小児）: 158489;    HIV-1 2054（大人）: 19952;
HIV-1 301714（大人）: 10000;    NIH. HTLV-IIIB（実験室）: 5011
ウイルスストックは2,000 TCID50/mlに希釈した。
【００５０】
512.2μLのHIV-1 302076を9487.8μLのR-3培地に加えた。512.2μLのHIV-1 302077を9487.8μLのR-3培地に加えた。126.3μLのHIV-1 302143を9873.7μLのR-3培地に加えた。1002.4μLのHIV-1 301714を8997.6μLのR-3培地に加えた。2000μLのHIV-1m 2054を8000.0μLのR-3培地に加えた。4000μLのHTLV-IIIBを6000μLのR-3培地に加えた。ウイルスは100 TCID50ウイルスストックとして希釈した：2.5mlの2000 TCID50/mlを2.5mlのR-3培地に加え、これを100 TCID50（100μL中）ストックとした。PBMC：末梢血単核球（PBMC）をフィコール―ハイパック密度勾配遠心によりHIV-1非感染ドナーから分離した。PBMCは20％ウシ胎児血清、5％IL-2及び5μg/ml PHA（R-3培地）を添加したRPMI 1640中で培養した。
【００５１】
5A8（CD4に対するヒト化モノクローナル抗体）：試料はPH7.0の滅菌PBS中で11.55 mg/mlとした。該抗体は無菌条件下にて4〜8℃で保存した。HPLC分析の結果、該抗体はモノメトリックで純度99％超であった。5A8は希釈してストック溶液とした（500μg/ml）。
【００５２】
60μLの5A8（11.55 mg/ml）を1326μLのPBSに加え、これを5A8ストック溶液とした（500μg/ml）。5A8ストック溶液は実験に用いる濃度に希釈した：192μLの5A8ストック溶液を1008μLのPBSに加え、これを80μg/ml溶液とした（1:6.25希釈）。200μＬの80μg/ml 5A8を800μLのPBSに加えた（1:31.25希釈）。上記の行程を繰返し、1:156.25、781.25、3906.25及び19531.25希釈を調製した。最終的に、実験で用いた濃度は2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064μg/mlであった。
【００５３】
T-20：試料は96.55％超の純度を有し、−20℃で保存して遮光した。T-20は希釈してストック溶液とした：5mgのT-20を5mlのPBSに溶解し、これをT-20ストック希釈物とした（1mg/ml）。
【００５４】
T-20は実験に用いる濃度に希釈した：48μLのT-20ストック溶液を1152μLのPBSに加え、これを40μg/ml溶液（1:25希釈）とした。200μＬの40μg/ml T-20を800μLのPBSに加えた（1:125希釈）。上記の行程を繰返し、1:625、1:3125、1:15625、1:78125及び390625希釈を調製した。最終的に、実験で用いた濃度は1、0.2、0.04、0.008、0.0016、0.00032μg/mlであった。
【実施例１】
【００５５】
感染時及び感染後12時間の薬剤曝露
ウイルス、細胞及び試薬を、以下の通り37℃で一晩インキュベートした：5A8希釈液6種のために合計18チューブ、ウイルスコントロールのために3チューブ；T-20希釈液6種のために合計18チューブ、ウイルスコントロールのために3チューブ；及び5A8/T-20希釈液6種のために合計18チューブ、ウイルスコントロールのために3チューブ。
【００５６】
50μLの5A8各希釈液及び50μLのT-20各希釈液を、最高濃度から開始して1番目の18チューブに加えた。最後の3チューブには100μLのPBSを加えた。50μLのT-20各希釈液及び50μLのPBSを、最高濃度から開始して2番目の18チューブに加えた。最後の3チューブには100μLのPBSを加えた。50μLの5A8及び50μLのPBSを、最高濃度から開始して3番目の18チューブに加えた。最後の3チューブには100μLのPBSを加えた。100μLの100 TCID50ウイルスストックを63チューブ全てに分注した。2 X 106 PBMCを1.8mlのR-3培地に加えた（チューブ1本当り合計2.0ml）。該チューブを37℃で一晩インキュベートした。
【００５７】
該細胞をPBSで3回洗浄した。該細胞を、新たに5A8又はT-20を加えずに、24穴プレート中で2mlのR-3培地に再懸濁した。処理4日目及び7日目に、各々の共培養穴の上清中で、HIV-1 P24抗原測定を行った。0.5mlのR-3培地懸濁細胞（106/ml）を4日目に加えた。「Chou Dose Effect」を用いてIC50及び組み合わせ指数（Combination Index）を算出した。結果を表1に示す。
【００５８】
【表１】
2006503849.tif 000002
【実施例２】
【００５９】
継続的な薬剤曝露
T-20及び5A8の濃度を以下の通りに変えた場合を除き、実施例１を反復した：T-20：0.1、0.02、0.004、0.0008、0.00016、0.000032μg/ml；5A8：1.0、0.2、0.04、0.008、0.0016、0.00032μg/ml。結果を表２に示す。
【００６０】
【表２】
2006503849.tif 000003
* CI：組み合わせ指数：CI＜0.9は相乗作用；0.9＜CI＜1.1は相加的な相互作用；CI＞1.1は拮抗作用を示す。
【００６１】
表１及び２を参照すると、5A8及びT-20間ではインビトロのHIV-1複製に対し全ての試験条件下で相乗的作用が認められた。算出CI値は全て0.9以下であり、両薬剤の存在下ではIC50は1〜10倍減少した。一般に、逆の場合よりも、5A8がT-20の作用を高める。5A8及びT-20の濃度を７日間維持した場合には、5A8及びT-20のIC50は、感染性ウイルスを標的細胞に加えてから12時間後に薬剤を除去した場合と比べて数倍減少した。
【００６２】
明細書において、本発明の典型的な好ましい具体例を開示し、また、特定の用語を用いたが、それらは一般的かつ記述的な意味のみに用いており、限定の目的のために用いているものではなく、本発明の範囲は請求の範囲に記載されている。明らかなように、上記の教示に照らし、本発明の多くの修飾及び変形が可能である。従って、請求の範囲内において、本発明は、特に記述したものと異なるように実施することができることが理解される。
【国際調査報告】
2006503849.tif 000004