(57)【要約】加水分解可能な結合によって、ポリエチレングリコール部分を含む１つ以上のオリゴマーに結合された、タキサンを含むタキサンプロドラッグ。オリゴマーは、塩形成部分をさらに含むことが好ましい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
加水分解可能な結合によって、以下の構造：
【化１】
2004529116.tif 000046
（式中、ｎは１〜１２であり、ｍは２〜２５であり、ｐは２〜１２であり、Ｘ+は陽イオンであり、Ｚ-は陰イオンである）
を有するオリゴマーに結合されたタキサンを含むタキサンプロドラッグ。
【請求項２】
前記タキサンがパクリタキセルである、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項３】
前記オリゴマーがパクリタキセルの２′位に結合されている、請求項２に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項４】
前記タキサンがドセタキセルである、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項５】
前記タキサンが、パクリタキセルの治療活性の一部又は全部を保持するパクリタキセル類縁体である、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項６】
前記タキサンが、式１２のオリゴマーの２個、３個又は４個によって誘導体化される、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項７】
前期陽イオンが、ＮＨ3+及び三置換イオウからなる群より選択され、上記陰イオンが、クロロ陰イオン、ブロモ陰イオン、ヨード陰イオン、リン酸陰イオン、酢酸陰イオン、トリフルオロアセテート陰イオン、炭酸陰イオン、硫酸陰イオン、及びメシル酸陰イオンからなる群より選択される、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項８】
ｎが２〜４である、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項９】
ｍが２〜１０であり、ｐが２〜４である、請求項８に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項１０】
前記タキサンプロドラッグが、３０ｍｇ／ｍｌより大きい水溶解度を有する、請求項１に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項１１】
請求項１に記載のタキサンプロドラッグと、
薬学的に許容し得る担体と、
を含む、医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載のタキサンプロドラッグの、有効な疾患治療量を対象に投与することを含む、タキサン応答性の病状を有する哺乳動物対象を治療する方法。
【請求項１３】
前記タキサンプロドラッグの投与が、タキサンプロドラッグを経口投与することを含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記病状が癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記病状が卵巣癌又は乳癌である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
タキサンプロドラッグとともにシスプラチン又はドキソルビシンを同時投与することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記シスプラチン又はドキソルビシンとタキサンプロドラッグとの同時投与が、タキサンプロドラッグとともにシスプラチンを同時に同時投与することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記シスプラチン又はドキソルビシンとタキサンプロドラッグとの同時投与が、タキサンプロドラッグとともにシスプラチンを逐次的に同時投与することを含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
加水分解可能な結合によって、以下の構造：
【化２】
2004529116.tif 000047
を有するオリゴマーに結合されたタキサンを含むタキサンプロドラッグ。
【請求項２０】
前記タキサンがパクリタキセルである、請求項１９に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項２１】
前記オリゴマーがパクリタキセルの２′位に結合されている、請求項２０に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項２２】
前記タキサンがドセタキセルである、請求項１９に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項２３】
前記タキサンが、治療活性の一部又は全部を保持するパクリタキセル類縁体である、請求項１９に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項２４】
前記タキサンが、前記オリゴマーの２、３又は４によって誘導体化される、請求項１９に記載のタキサンプロドラッグ。
【請求項２５】
請求項１９に記載のタキサンプロドラッグと、
薬学的に許容し得る担体と、
を含む、医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１９に記載のタキサンプロドラッグの、有効な疾患治療量を対象に投与することを含む、タキサン応答性の病状を有する哺乳動物対象を治療する方法。
【請求項２７】
前記タキサンプロドラッグの投与が、タキサンプロドラッグを経口投与することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記病状が癌である、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願］
本出願は、１９９９年１２月３１日提出の、Ｅｋｗｕｒｉｂｅらの、共有の同時係属出願番号第０９／４７６，９７４号（その開示内容を、参照により悉く本明細書に援用する）の一部継続である。
【０００２】
１．発明の背景
１．１  発明の分野
本発明は、一般に、タキサン−オリゴマー複合体、及びこのような複合体の製造方法及び使用方法に関する。本発明のタキサン−オリゴマー複合体は、正常な生理的条件で加水分解して、パクリタキセル又はドセタキセル等の治療的に有効なタキサン類を提供する、プロドラッグとして作用する。タキサン−オリゴマー複合体は、改良された溶解特性、改良された経口バイオアベイラビリティ、及び改良された薬物動態学的特性を示す。本発明は、これらのタキサン−オリゴマー複合体を含む医薬組成物、及びこのようなタキサン−オリゴマー複合体及び医薬組成物の製造方法及び使用方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
１．２  先行技術に関する記述
パクリタキセル（タキソール）は、西洋イチイの木（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から単離される天然のジテルペン生成物である。１９７１年に、Ｗａｎｉらが、初めて、パクリタキセルを化学的方法及びＸ線結晶法で単離した。パクリタキセルは、４員オキセタン環及びＣ−１３位にエステル側鎖を含むタキサン環を有する、複雑なジテルペンである。パクリタキセルの複雑な構造は以下の通りである：
【化１】
2004529116.tif 000002
【０００４】
米国では、パクリタキセルは、難治性卵巣癌の処置において臨床使用が承認されている（Ｍａｒｋｍａｎ  １９９１；ＭｃＧｕｉｒｅら、１９８９）。パクリタキセルは、乳癌の処置用にも承認されている（Ｈｏｌｍｅｓら、１９９１）。さらに、パクリタキセルは、皮膚の新生物（Ｅｉｎｚｉｇら）及び頭頚部癌腫（Ｆｏｒａｓｔｉｒｅら、１９９０年）を処置するための候補である。パクリタキセルは、多嚢胞腎疾患（Ｗｏｏら、１９９４年）、肺癌及びマラリアの処置にも有用である。
【０００５】
パクリタキセルは、微小管形成に必要なチューブリンの臨界濃度を低下させることにより、その抗癌作用を仲介する。微小管は、α及びβタンパク質サブユニットを含むチューブリンヘテロダイマーと動的平衡にある、チューブリンのポリマーである。パクリタキセルは、平衡を微小管構築に向かって移動させる。パクリタキセル誘導性微小管は、過度に安定しており、その結果、微小管ネットワークの動的再構成を阻害し、細胞周期の全期の間に形成する微小管束、及び中心小体と関連がない多数の異常な有糸分裂星状体が生じる結果となる。
【０００６】
パクリタキセルは、１９８３年にフェーズＩ臨床治験に入ったが、水不溶性であるため、直ちに製剤の難しさに出会った。この困難は、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（登録商標）を用いて、パクリタキセルをエマルジョンとして製剤することにより、ある程度克服された。しかし、パクリタキセルは、比較的高用量で投与しなければならないため、多量のクレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（登録商標）が必要である。静脈内に投与するとき、このような製剤は、イヌでは、血管拡張、苦しそうな呼吸、昏睡、高血圧及び死亡を引き起こすことがあり、ヒトでは、パクリタキセル投与中に認められたアレルギー型反応の原因であるとも考えられる。従って、当該技術分野で、水溶解度を上昇させ、それによって潜在的にアレルゲン性のエマルジョン試薬を用いてパクリタキセルを製剤する必要性を逃れる、パクリタキセルを投与する手段の必要がある。
【０００７】
これまで、製剤されたパクリタキセルのアレルギー問題を克服しようとする努力は、これまで、注入時間を延長すること、及び患者にグルココルチコイド等の免疫抑制剤、及び抗ヒスタミン薬も、前投薬することに向けられてきた。これらの薬剤は、独特の副作用を有し、また、既に高価な癌治療費に付加される費用である。さらに、このような薬剤は、過敏性反応の発生率及び重症度を低下させることが証明されているが、十分に防止するものではない。（Ｒｏｗｉｎｓｋｙら、１９９２）。従って、長い注入時間、及びエマルジョン試薬関連のアレルギー反応を回避し、それによってこのような補助治療の必要性を回避する、パクリタキセルを投与する方法が、当該技術分野で必要である。
【０００８】
幾つかのグループが、パクリタキセルのプロドラッグ形の合成を研究してきた。（Ｔａｙｌｏｒ、１９９４年）；（Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｇ．、１９９１年）。プロドラッグは、代謝を受けて薬理学的に活性な薬剤を生じる薬剤の、不活性な又は部分的に不活性な、化学誘導体である。研究は、２′位及び／又は７位が、水溶解度を高める基で誘導体化されている、パクリタキセル類縁体の合成に向けられてきた。こうした努力により、親化合物より水溶性であるが、活性化したとき、パクリタキセルの細胞障害性特性を示す、プロドラッグ化合物が得られた。たとえば、水溶解度の上昇は、パクリタキセルを、高分子量ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーで誘導体化することによって達成される。（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら、１９９６年；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら、１９９５年を参照）。しかし、これらの誘導体化されたパクリタキセル化合物は、高い溶解性を有するが、十分な溶解性を達成するのに必要な高分子量ＰＥＧのため、相応して、薬物負荷が低下する。従って、パクリタキセル化合物の分子量を大幅に増大せずに、パクリタキセル溶解性を改良するタキサンプロドラッグが、当該技術分野で必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
プロドラッグ、特にタキサンプロドラッグを効率よく利用するためには、プロドラッグの特性を適切につり合わせて、有用な薬物動態学的特性を達成することが必要である。１つの態様では、プロドラッグの製剤力を高めるために、プロドラッグが親水性であることが望ましい。その反面、プロドラッグと生体膜との間の相互作用を可能にするために、プロドラッグは、適当に疎水性でなければならない。従って、前述の本質的に異なる、有用な治療薬の必要条件を調整するタキサンプロドラッグが、当該技術分野で必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
２．発明の概要
本発明者は、意外にも、タキサン薬剤の分子量を大幅に増大せずに、水溶解度を顕著に上昇させる、タキサン−オリゴマー化合物及びこのような化合物の塩類（本明細書では、「タキサンプロドラッグ」と総称する）を、予期せず発見した。本明細書で説明するタキサンプロドラッグは、クレモフォール（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（登録商標）を使用したマイクロエマルジョン製剤の必要性をなくす。
【００１１】
本発明による実施形態は、加水分解可能な結合によって、以下の式を有するオリゴマーに結合されたタキサンを含むタキサンプロドラッグを提供する：
【化２】
2004529116.tif 000003
（式中、ｎは１〜１２であり、ｍは１〜２５であり、ｐは２〜１２であり、Ｘ+は陽イオンであり、Ｚ-は陰イオンである）。
【００１２】
本発明の他の実施形態において、タキサンは、パクリタキセルであるか、又はパクリタキセルの治療活性の一部又は全部を保持するパクリタキセル類縁体である。タキサンは、ドセタキセルであってもよい。
【００１３】
タキサンプロドラッグは、タキサン上に存在する、このようなオリゴマーが付着するための部位と同じだけのオリゴマーによって誘導体化することが可能である。たとえば、パクリタキセルは、３つの付着部位（ヒドロキシル基）を有し、従って、１個、２個又は３個のオリゴマーで誘導体化することができる。同様に、ドセタキセルパクリタキセルは４つの付着部位（ヒドロキシル基）を有し、従って、１個、２個、３個又は４個のオリゴマーで誘導体化することができる。
【００１４】
もう１つの態様では、タキサンプロドラッグは、治療有効量のタキサンを血流に提供するために、経口投与で送達することができる。さらに、経口的に送達されたプロドラッグは、治療有効量のタキサンを標的器官又は組織に送達することができる。
【００１５】
本発明の実施形態は、薬学的に許容し得る担体と共同して、本発明のタキサンプロドラッグを含む医薬組成物も提供する。このような医薬組成物は、経口投与に適するように製剤してもよく、また、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ジェルキャップ剤、ピル剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、散剤、トローチ剤、微細粒子剤、及び浸透圧性送達システムからなる群より選択される剤形であってもよい。パクリタキセル応答性の病状を有する哺乳動物対象を治療する方法も提供する。哺乳動物対象は、好ましくは、ヒトである。
【００１６】
治療方法の１つの態様では、タキサンプロドラッグを経口投与経路で送達して、治療有効量のタキサンを血流中に提供する。もう１つの態様では、タキサンプロドラッグを非経口的投与経路で送達して、治療有効量のタキサンを標的器官及び／又は組織に提供する。また別の態様では、タキサンプロドラッグを経口投与経路で送達して、治療有効量のタキサンを標的器官及び／又は組織に提供する。さらに、タキサンプロドラッグは、薬学的に許容し得る担体と共同して投与することが可能である。
【００１７】
さらなる態様では、本発明の治療方法に従って処置されるタキサン応答性の病状は、良性及び悪性の新生物からなる群より選択され、また、肝細胞癌、尿生殖器癌、肝転移、胃腸癌、リンパ腫、白血病、黒色腫、カポジ肉腫、及び膵臓、腎臓、子宮頚部、乳房、卵巣、脳及び前立腺の癌も含まれる。１つの態様では、病状は卵巣癌を含み、タキサンプロドラッグは、任意に、同時又は逐次的のいずれかで、シスプラチンと一緒に投与される。もう１つの態様では、病状は乳癌を含み、タキサンプロドラッグは、任意に、同時又は逐次的のいずれかで、ドキソルビシンと一緒に投与される。
【００１８】
２．１定義
本明細書で使用される用語「ＰＥＧ」は、直鎖又は分枝鎖のポリエチレングリコールオリゴマー及びモノマーを指し、また、このようなオリゴマーの両親媒特性をなくさない基、たとえば無制限に、アルキル、低級アルキル、アリール、アミノ−アルキル及びアミノ−アリールを含むように修飾されたポリエチレングリコールオリゴマーも含む。用語「ＰＥＧサブユニット」は、１つのポリエチレングリコール単位、すなわち、（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）−を指す。
【００１９】
本明細書で使用される用語「低級アルキル」は、１〜８個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖の炭化水素を指す。
【００２０】
本明細書で使用される、「非加水分解可能な」等の用語及び「加水分解できない」等の句は、正常な生理的条件で分解され得ない結合、ならびに正常な生理的条件で迅速に加水分解されない結合、たとえば、カルバメート結合及びアミド結合を指すのに使用される。用語「加水分解可能な」は、生理的条件で加水分解される結合を指す。本発明の好ましい態様では、静脈内投与後４時間以内に、正規母集団で、タキサンプロドラッグの５０％が加水分解される。
【００２１】
「治療有効量」は、疾患の発症を防止する、遅らせる又は疾患の発症の重症度を低下させるために必要な量、あるいは、進行中の疾患を阻止するか又は進行中の疾患の重症度を低下させるために必要な量であり、また、正常な生理的機能を増強させるために必要な量も含む。
【００２２】
本明細書で使用される、本発明による製剤の「薬学的に許容し得る」成分（たとえば、塩、担体、賦形剤又は希釈剤）は、（１）タキサンプロドラッグの生物学的活性をなくさずに、本発明のタキサンプロドラッグと配合できる点で、本製剤の他成分と相容性であり、（２）過度の有害作用、たとえば、毒性、刺激、及びアレルギー性反応を伴わずに、動物（たとえば、ヒト）とともに使用するのに適当な、成分である。副作用は、それらのリスクが、医薬組成物によって提供される利益を上回るとき、「過度」である。薬学的に許容し得る成分の例としては、無制限に、標準的な製薬用担体、たとえば、リン酸緩衝食塩水溶液、水、油／水エマルジョン等のエマルジョン、マイクロエマルジョン、及び様々なタイプの湿潤剤などがある。
【００２３】
本明細書で使用される用語「タキサン」は、パクリタキセルのＡ環、Ｂ環及びＣ環を含む基本的な３環構造：
【化３】
2004529116.tif 000004
を有する一群の化合物を指すために使用され、無制限に、パクリタキセル及びパクリタキセルの抗癌活性の一部又は全部を保持するパクリタキセル類縁体を含む。
【００２４】
発明の詳細な説明
次の詳細な説明は、参照しやすくするためにセクションに分けてあるに過ぎない。事項の見出しは、本発明の範囲を制限するためではない。
【００２５】
４．１タキサン−オリゴマープロドラッグ
本発明は、タキサン−オリゴマープロドラッグ（本明細書では、「タキサンプロドラッグ」とも呼ばれる）を提供する。本発明のタキサンプロドラッグは、一般に、タキサン成分及びオリゴマー成分を含む。タキサンプロドラッグは、一般に、タキサン類の親水性製剤での製剤、タキサン類の経口送達、及びタキサン類の標的器官及び組織への送達を容易にするのに有用である。
【００２６】
４．１．１  タキサン類
好ましいタキサン類は、微小管形成の増進に必要な技術分野で周知の成分、たとえば、パクリタキセル及びドセタキセルを有するものである。パクリタキセル及びドセタキセルの構造は、当該技術分野で周知であるが、参照しやすくするために、パクリタキセルの構造式を、上記セクション１．２の図に記載するとともに、ドセタキセルの構造式を以下に記載する：
【化４】
2004529116.tif 000005
【００２７】
好ましい態様では、タキサンプロドラッグのタキサンはパクリタキセル類縁体である。パクリタキセルそれ自身より高い又は低い抗癌活性を示すパクリタキセルの多くの類縁体が、当該技術分野で周知である。本発明は、抗癌活性が完全に減弱していないパクリタキセル類縁体の使用を意図する。
【００２８】
１つの類縁体群では、側鎖Ｎ−ベンゾイル基が他のアシル基と置換されている。１つのこのような類縁体、ドセタキセル（タキソテレ（Ｔａｘｏｔｅｒｅ）（登録商標））は、パクリタキセルのＮ−ベンゾイル基の代わりにＮ−ｔ−ブトキシカルボニル基を有し、１０−酢酸基がない。ドセタキセルは、パクリタキセル耐性細胞に対して、パクリタキセルの約５倍の活性であることが知られており、現在、フランス及びアメリカ合衆国の両国で、臨床使用されている。
【００２９】
Ｃ−９カルボニル基をα−ＯＨ基に還元することにより、チューブリン構築活性がわずかに上昇することも知られている。さらに、７位と８位を架橋するシクロプロパン環を有する再編成生成物は、パクリタキセルの場合とほぼ同じ細胞障害性であることも知られている。
【００３０】
本発明のタキサンプロドラッグで使用するのに適したさらなるタキサン類は、パクリタキセル分子の「北周界（ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｐｅｒｉｍｅｔｅｒ）」部分に沿って構造変化を有するパクリタキセル誘導体である。「北周界（ｎｏｒｔｈｅｒｎ  ｐｅｒｉｍｅｔｅｒ）」は、炭素６〜１２を含み、Ｃ−７，Ｃ−９及びＣ−１０に酸素官能を有する。多くのこのような誘導体は、当該技術分野で周知であり、また、このような誘導体は、パクリタキセルの生物活性に匹敵する生物学的活性を示すことも知られている。このように、たとえば、Ｃ−７ヒドロキシル基のアシル化、又はＣ−７ヒドロキシル基の水素置換によって、パクリタキセルの活性が顕著に低下しないことが知られている。さらに、１０−アセトキシ基を水素で置換することにより、活性が僅かに低下するに過ぎない。
【００３１】
ｍ−置換ベンゾイル誘導体は、それらのｐ−置換類縁体より活性であり、また多くの場合、パクリタキセルそれ自身より活性であることが記されている。
【００３２】
本発明のタキサンプロドラッグで使用するのに適したもう１つのパクリタキセル類縁体は、Ａ−ｎｏｒ−パクリタキセルである。この類縁体は、パクリタキセルより３倍低いに過ぎないチューブリン構築活性を有する。Ａ−ｎｏｒ−パクリタキセル及びパクリタキセルは非常に類似した分子の形を有しており、これによって、類似したチューブリン構築活性が説明される。
【００３３】
４．１．２ポリマー／オリゴマー
本発明のタキサンプロドラッグのＰＥＧポリマー／オリゴマーは、直鎖であってもよく、分枝鎖であってもよい。好ましいオリゴマーは、２〜２５個のＰＥＧユニットを有し、より好ましくは２〜２０個のＰＥＧユニット、さらにより好ましくは２〜１５個のＰＥＧユニットを有する。理想的には、オリゴマーは、２〜１０個のＰＥＧユニット、すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個のＰＥＧユニットを有する。もう１つの態様では、オリゴマーは、１０００以下の分子量を有する。
【００３４】
好ましい態様では、ＰＥＧポリマー／オリゴマーは、式：
【化５】
2004529116.tif 000006
（式中、Ｘ＝２〜２５である）
を有する。
【００３５】
より好ましい態様では、Ｘは２〜２０であり、さらにより好ましくは２〜１５、最も好ましくは２〜１０である。理想的には、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。
【００３６】
好ましいオリゴマーは、
【化６】
2004529116.tif 000007
（式中、ｎは１〜７であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化７】
2004529116.tif 000008
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化８】
2004529116.tif 000009
（式中、ｎは１〜６であり、ｍ及びｒは、それぞれ独立して２〜２５であり、Ｒは、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化９】
2004529116.tif 000010
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化１０】
2004529116.tif 000011
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ-は、好ましくは、クロロ、ブロモ、ヨード、リン酸、酢酸、炭酸、硫酸、トシル酸及びメシル酸からなる群より選択される陰イオンであり、Ｒは、好ましくは水素、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化１１】
2004529116.tif 000012
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒ1及びＲ2はそれぞれ独立して、好ましくはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、及びｔ−ブチルからなる群より選択される低級アルキルである）、
【化１２】
2004529116.tif 000013
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５である）、
【化１３】
2004529116.tif 000014
（式中、ｎ及びｐは、それぞれ独立して１〜６であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ+は、好ましくは水素、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、リチウム塩及びアンモニウム塩からなる群より選択される陽イオンである）、
【化１４】
2004529116.tif 000015
（式中、ｎは１〜５であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ-は、好ましくはクロロ、ブロモ、ヨード、リン酸、酢酸、炭酸、硫酸及びメシル酸からなる群より選択される陰イオンであり、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立して低級アルキルであって、好ましくは水素、メチル、エチルプロピル、イソプロピル及びｔ−ブチルからなる群より独立に選択される）、
【化１５】
2004529116.tif 000016
（式中、ｎは１〜６であり、ｍは２  〜２５であり、Ｘ-は、好ましくはクロロ、ブロモ、ヨード、リン酸、酢酸、炭酸、硫酸及びメシル酸からなる群より選択される陰イオンである）、
【化１６】
2004529116.tif 000017
（式中、ｎは１〜１２であり、ｍは１〜２５であり、ｐは２〜１２であり、Ｘ+は陽イオンであり、Ｚ-は陰イオンである。好ましくは、ｎは２〜８であり、より好ましくは、ｎは２〜４である。好ましくは、ｐは２〜８であり、より好ましくは、ｐは２〜４である。Ｘ+は、好ましくは、ＮＨ3+及び３置換イオウ、すなわち１つ以上のＲ′及びＲ″（ここで、Ｒ′及びＲ″は、それぞれメチル、エチル、プロピル及びブチルから選択される）で置換されたイオウからなる群より選択される。たとえば、Ｘ+Ｚ-は、
【化１７】
2004529116.tif 000018
（Ｚ-は、好ましくは、クロロ陰イオン、ブロモ陰イオン、ヨード陰イオン、リン酸陰イオン、酢酸陰イオン、トリフルオロアセテート陰イオン、炭酸陰イオン、硫酸陰イオン、及びメシル酸陰イオンからなる群より選択される）である）
からなる群より選択される。
【００３７】
前述の式１〜１２のいずれでも、ＰＥＧユニットの総数は、好ましくは２〜２５であり、より好ましくは２〜２０、さらにより好ましくは２〜１５、最も好ましくは２〜１０である。理想的には、ＰＥＧユニットの総数は、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である。２つのＰＥＧポリマーセグメントを含む、式４等の式では、このパラグラフに記載のＰＥＧユニットの好ましい数が、２つのＰＥＧポリマーセグメントのいずれかに完全に含まれてもよく、２つのＰＥＧポリマーセグメント間で分配されてもよい。
【００３８】
オリゴマー／ポリマーは、１つ以上の塩形成部分も含んでもよい。好ましい塩形成部分は、アンモニウム及びカルボキシレートである。適当な塩類は、塩基性アミノ基を有するオリゴマー／ポリマーの薬学的に許容し得る酸付加塩類、及び、たとえば、遊離カルボキシ基を有するオリゴマー／ポリマーの薬学的に許容し得る塩基から誘導される薬学的に許容し得る塩類も含む。酸の薬学的に許容できる塩類は、遊離酸を適切な塩基で処理することによって調製することが可能である。薬学的に許容できる塩基塩類としては、たとえば、ナトリウム又はカリウム等のアルカリ金属塩、ナトリウム又はカリウム等のアルカリ土類金属塩、カルシウム又はマグネシウム等のアルカリ土類金属塩、及びアンモニウム塩又はアルキルアンモニウム塩などがある。
【００３９】
４．２パクリタキセル−ＰＥＧ複合体の製造方法
パクリタキセルは市販されており、当該技術分野で周知の方法により、西洋イチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の樹皮から単離することができる。パクリタキセルは、西洋イチイの樹皮からの収量に匹敵する収量で、様々なイチイ種（Ｔａｘｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）の葉（又は針状葉）から単離することもできる。米国特許第５，０１９，５０４号には、パクリタキセルを製造するための組織培養方法が記載されている。パクリタキセルは、真菌タキソミセス・アンドレアナエ（Ｔａｘｏｍｙｃｅｓ  ａｎｄｒｅａｎａｅ）により産生されることも知られている。
【００４０】
さらに、パクリタキセルは、たとえば、Ｈｏｌｔｏｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：１５９７−１５９８（１９９４）；Ｈｏｌｔｏｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６：１５９９−１６００（１９９４）；及びＮｉｃｏｌａｏｕら、Ｎａｔｕｒｅ３６７：６３０−６３４（１９９４）により報告されている、既知の合成方法で調製することができる。
【００４１】
次の例では、記号ｎ、ｐ、ｍ、Ｒ、Ｒ1及びＲ2は、一般式１〜１２に上述した通りである。
【００４２】
４．２．１  式１
式１のポリマーは市販されており、かつ／又は過度の実験なしで当業者により容易に合成される。
【００４３】
４．２．２  式２
式２のオリゴマー：
【化１８】
2004529116.tif 000019
（式中、ｎは１〜７であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは低級アルキルである）の合成では、一級アミノ部分を有する末端炭素を有する脂肪酸のエステルで出発することが望ましい。このような化合物は市販されている。不活性溶媒中のアミノエステルに、アルデヒド末端炭素を有する適切な分子量のモノメトキシポリエチレングリコールの溶液を加え、続いて水素化ホウ素ナトリウム溶液を加える。この生成物を、カラムクロマトグラフィで溶媒抽出した後、精製する。
【化１９】
2004529116.tif 000020
ｎとｍは先に定義したとおりである。
【００４４】
二級アミン部分をアルキル化して、三級アミンを有する所望のオリゴマーを形成することが好ましい場合もある。不活性溶媒中のオリゴマーの溶液に、１当量のハロゲン化アルキルを加える。この生成物を、カラムクロマトグラフィで溶媒抽出した後、精製する。
【化２０】
2004529116.tif 000021
【００４５】
室温で、不活性溶媒中のエステルに、希水酸化ナトリウム溶液を加えることにより、エステルを酸に転換する。この遊離酸を、カラムクロマトグラフィで溶媒抽出した後、精製する。ｉｎ  ｓｉｔｕ活性化後、酸を薬剤に結合させる。
【化２１】
2004529116.tif 000022
【００４６】
これらの例は、たとえば、パクリタキセル又はドセタキセルであってもよい。
【００４７】
ハロゲン化物を有する末端炭素を有する脂肪酸のエステルとして誘導体化された治療用化合物及び一級アミノ部分を有する末端炭素を有する適切なモノメトキシ−ポリエチレングリコールで出発して、薬剤−オリゴマーを合成することが望ましい場合もある。ポリエチレングリコール試薬を、室温で、不活性溶媒に溶解する。等量の薬剤ハロゲン化物を不活性溶媒に溶解し、ポリエチレングリコールの溶液に徐々に加える。この生成物を、カラムクロマトグラフィを使用して溶媒抽出した後、精製する。
【化２２】
2004529116.tif 000023
【００４８】
このエステルを、先の手順と同様に、希水酸化ナトリウム溶液で加水分解し、先の例と同様に、ｉｎ  ｓｉｔｕ活性後、薬剤（たとえば、パクリタキセル又はドセタキセル）に結合させる。
【００４９】
４．２．３  式３
式３のオリゴマー：
【化２３】
2004529116.tif 000024
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは低級アルキルである）の合成では、脂肪族化合物のジカルボン酸のハーフエステル及びアミノ含有ポリエチレンで出発することが望ましい。アミノ含有ポリエチレンの合成では、不活性溶媒中で、末端にアルデヒド部分を有する適切な分子量のモノメチルポリエチレングリコールに、２個の末端炭素にアミノ部分を有する脂肪族化合物を加える。１つのアミノ部分は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルで保護するが、遊離アミンは、アルデヒド部分と反応する。この生成物を、カラムクロマトグラフィで溶媒抽出した後、精製する。この生成物を、不活性溶媒中でトリフルオロ酢酸を加え、酸を中和し、カラムクロマトグラフィで溶媒抽出した後、精製することにより脱保護する。
【化２４】
2004529116.tif 000025
【００５０】
酸をｉｎ  ｓｉｔｕ活性化した後、室温で、不活性溶媒中のハーフエステルに、アミノ誘導体化したポリエチレングリコールの溶液を加える。この生成物を、溶媒抽出後、カラムクロマトグラフィで精製する。水素化ホウ素ナトリウム溶液を加えることによりイミノ部分を還元し、先の手順と同様に精製する。
【００５１】
二級アミンをアルキル化することが望ましい場合もある。この目的を達成するためには、オリゴマーを不活性溶媒に溶解し、不活性溶媒中にハロゲン化アルキルを含む溶液を加える。
【００５２】
エステルを加水分解し、ｉｎ  ｓｉｔｕ活性化し、治療用化合物（たとえば、パクリタキセル又はドセタキセル）に結合させる。
【化２５】
2004529116.tif 000026
式中、Ｄは薬剤−両親媒性物質複合体の薬剤成分を示す。薬学的に許容し得る酸を使用して、必要に応じて両親媒性薬剤複合体を塩形に転換し、水溶解度を改良する。
【００５３】
４．２．４  式４
式４のオリゴマーの合成手順：
【化２６】
2004529116.tif 000027
（式中、ｎは１〜６であり、ｍ及びｒはそれぞれ独立に２〜２５であり、Ｒは低級アルキルである）は、脂肪族ジアミノ部分がポリエチレングリコールジアミンで置換されていること以外は、式３のオリゴマーの手順と同じである。
【００５４】
４．２．５  式５
式５のオリゴマーを含むプロドラッグの合成：
【化２７】
2004529116.tif 000028
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒは低級アルキルである）では、不活性溶媒中で、ヒドロキシル部分を有する薬剤に、脂肪族酸無水物を加え、ハーフエステルを形成する。このハーフエステルを不活性溶媒に溶解し、活性化し、末端ヒドロキシル部分がアミノ部分で置換されている適切な分子量のポリエチレングリコール１当量を加える。
【化２８】
2004529116.tif 000029
（式中、全ての置換基群（たとえば、ｎ、ｍ及びｐ）は、先に定義した通りである。
【００５５】
４．２．６  式６
式６のオリゴマー：
【化２９】
2004529116.tif 000030
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ-は陰イオンである）は、式５で示される化合物に、薬学的に許容し得る酸を加えて、適切な塩を得ることによって調製される。この塩は、両親媒性薬複合体の水溶解度を高める。
【００５６】
４．２．７  式７
式７のオリゴマーの合成：
【化３０】
2004529116.tif 000031
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５であり、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立に低級アルキルである）は、薬物のハーフエステルに反応させる前に、末端アミノ部分が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル又はｔ−ブチル等の短鎖アルキル基のハロゲン化物でアルキル化されていること以外は、式５の合成に類似している。
【化３１】
2004529116.tif 000032
（式中、ｎ、ｍ及びＲは、先に定義した通りである）。
【００５７】
４．２．８  式８
式８のオリゴマーの合成：
【化３２】
2004529116.tif 000033
（式中、ｎは１〜６であり、ｐは２〜８であり、ｍは２〜２５である）において、ｉｎ  ｓｉｔｕ活性化後、不活性溶媒中で、脂肪族ジカルボン酸のハーフエステルに、アミノ部分で既に誘導体化されているポリエチレングリコールを加える。
【化３３】
2004529116.tif 000034
【００５８】
アミノ誘導体化ポリエチレングリコールは、Ｎ−保護ポリエチレングリコールアミノ酸から調製される。
【化３４】
2004529116.tif 000035
【００５９】
一級アミノ部分をトリフルオロ酢酸で脱保護し、塩基性化してから、ハーフエステルを加える。
【００６０】
４．２．９  式９
式９のオリゴマーの合成：
【化３５】
2004529116.tif 000036
（式中、ｎ及びｐは、それぞれ独立に、１〜６であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ+は陽イオンである）において、出発する酸は市販されている。二酸を調製することが望ましい場合もある。この目的を達成するためには、不活性溶媒中で、適切な修飾ポリエチレングリコールオリゴマーに、水素化ナトリウム及び末端炭素にハロゲン化物部分を有する脂肪酸のエステルを加える。希水酸化ナトリウム溶液中で、カルボン酸ジエステルを加水分解し、ｉｎ  ｓｉｔｕ活性化後、薬剤部分に結合させる。所望の生成物を分離し、カラムクロマトグラフィで精製する。
【化３６】
2004529116.tif 000037
（式中、ｍ及びｐは先に定義した通りである）。
【００６１】
４．２．１０  式１０
式１０のオリゴマーの合成：
【化３７】
2004529116.tif 000038
（式中、ｎは１〜５であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ-は陰イオンであり、Ｒ1及びＲ2は、それぞれ独立に、低級アルキルである）は、アミノ部分が短鎖脂肪族部分で四級化されていること以外は、式２のオリゴマーの合成に類似している。メトキシ部分は、他の短鎖（１〜６個の炭素）脂肪族部分を含んでもよいことが知られている。
【００６２】
４．２．１１  式１１
式１１のオリゴマーの合成：
【化３８】
2004529116.tif 000039
（式中、ｎは１〜６であり、ｍは２〜２５であり、Ｘ-は陰イオンである）において、不活性溶媒中で、２−フルオロ−又は４−フルオロ−ピリジンに、ハロゲン化物イオン、トシル酸イオン又はメシル酸イオンを有する末端炭素を有するモノメトキシポリエチレングリコールを加える。ピリジニウム誘導体を沈殿させ、適切な溶媒で練和して乾燥させる。四級塩化合物形成塩基の存在下、不活性溶媒中で、塩に、パクリタキセル又はドセタキセル等の薬剤を加えて、ポリエチレングリコールピリジニウム誘導体を生成する。
【化３９】
2004529116.tif 000040
【００６３】
４．２．１２  式１２
式１２のオリゴマーの調製手順は、以下のセクション５の実施例で説明する。
【００６４】
４．２．１３  ＰＥＧポリマー／オリゴマーのタキサン親化合物への付着
オリゴマーを、タキサン親化合物のヒドロキシル置換基のいずれかにて、タキサン親化合物に適切に付着させる。タキサン親化合物がパクリタキセル、ドセタキセル、又はこれらの類縁体である場合、以下の位置の１つ以上にて、オリゴマーを付着させることが好ましい：Ｃ−２′ヒドロキシル基；Ｃ−７ヒドロキシル基；及びＣ−１ヒドロキシル基。好ましい態様では、オリゴマー１個だけが存在し、オリゴマーは、Ｃ−２′ヒドロキシル基に付着させる。タキサンがパクリタキセル、ドセタキセル等である本発明によるタキサンプロドラッグ溶液は、一置換、二置換、及び／又は三置換タキサンプロドラッグの混合物を含んでもよいことを、当業者は正しく理解するであろう。
【００６５】
以下の一般合成手順に従って、本発明のオリゴマー／ポリマーをタキサン化合物に付着させ、本発明のタキサンプロドラッグを提供することができる。タキサン化合物を、実質的に乾燥した有機溶媒、たとえば、クロロホルムに溶解する。ピリジン又は別の四級化合物形成剤を、前述の混合物に加える。活性化したオリゴマー／ポリマーを滴加し、この混合物を３〜５時間撹拌する。次いで、反応混合物を１％Ｈ2ＳＯ4及び脱イオン水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濃縮する。シリカゲルカラムを用いたクロマトグラフで、たとえば、クロロホルム−メタノール（９０％−１０％）を展開剤として使用して、残留物を分離する。所望のプロドラッグを含有する分画を回収し、濃縮し、乾燥させる。この生成物を、ＴＬＣ、ＨＰＬＣ、ＮＭＲ、及び／又はＭＳで特性決定する。
【００６６】
４．３医薬組成物及び使用方法
有効成分として新規なプロドラッグを含有する医薬組成物は、タキサンプロドラッグの活性を完全に消失しない、当該技術分野で周知の任意の薬学的に許容し得る剤形であってもよい。例としては、経口用剤形、注入可能剤形又は静脈内剤形などが挙げられる。各剤形は、本発明のプロドラッグの有効量、及び薬学的に不活性な成分、たとえば、従来の賦形剤、媒体、増量剤、結合剤、崩壊剤、溶媒、可溶化剤、甘味料、着色剤、及び医薬剤形に通例含まれる任意の他の活性成分又は不活性成分を含む。適当な経口剤形としては、錠剤、カプセル剤、カプレット剤、ジェルキャップ剤、ピル剤、液剤、懸濁剤、エリキシル剤、散剤、トローチ剤、微細粒子剤及び浸透圧性送達システムなどがある。適当な注入可能剤形及びＩＶ剤形としては、適当な緩衝剤及び保存料を含有する等張食塩溶液又はデキストロース溶液などがある。多くのこのような剤形及び媒体、及び不活性な成分のリストは、当該技術分野で周知であり、公定医薬品集（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｄｅｘ）：医薬品の原理及び実践（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ）、１２版（１９９４）等の、標準テキストに記載されている。
【００６７】
本発明のタキサンプロドラッグは、錠剤、カプセル剤（それぞれ、持続放出製剤及び徐放製剤を含む）、ピル剤、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、懸濁剤、シロップ剤及び乳剤等の、経口（バッカル及び舌下を含む）剤形で投与することができる。同様に、本発明のタキサンプロドラッグは、全て薬学の技術分野で通常の技術を有する者に周知の剤形を使用して、鼻、眼、耳、直腸、局所、静脈内（ボーラス及び注入）、腹腔内、関節内、皮下又は筋内吸入又は吸入で、投与することが可能である。
【００６８】
本発明のタキサンプロドラッグを使用した投与計画は、患者のタイプ、種属、年齢、体重、性別及び医学的状態；治療すべき病気の重症度；投与経路；患者の腎機能及び肝機能；及び使用する個々の化合物又はその塩を含む様々な因子に従って選択される。通常の技術を有する内科医又は獣医は、病気の進行を防止する、対抗する又は阻止するのに必要な薬剤の有効量を容易に決定して処方することができる。
【００６９】
ヒトに投与する場合、経口投与が一般に好ましい。比較的低用量で十分な場合もあり、比較的高用量又は投与回数を増やすことが必要な場合もある。同様に、局所適用は、通常の医学的考察に応じて、１日に１回であってもよく、１回より多くてもよい。都合のよいことに、本発明のタキサンプロドラッグは、日用量を単回投与してもよく、総日用量を１日に２、３又は４回に分割投与してもよい。
【００７０】
本発明の方法では、タキサンプロドラッグは、有効成分を作ることができ、一般に、所期の投与形態に関して適切に選択された、適当な製薬用の希釈剤、賦形剤又は担体（本明細書では、「担体」材料と総称する）との混合物で、すなわち、経口錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤等々で投与され、従来の薬務と一致する。
【００７１】
たとえば、錠剤又はカプセル剤の形態で経口投与する場合、有効な薬成分を、薬学的に許容し得る経口用の非毒性不活性担体、たとえば、エタノール、グリセロール、水等々と配合することができる。散剤は、化合物を適当な細かいサイズに粉砕し、同様に粉砕した製薬用担体、たとえば、食用炭水化物、たとえば、デンプン又はマンニトールと混合することによって、調製することができる。香味料、保存料、分散剤及び着色剤も存在してもよい。
【００７２】
カプセル剤は、上述の粉末混合物を調製し、形成されたゼラチン包皮に充填することによって製造することができる。充填操作の前に、コロイド状シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム又は固体ポリエチレングリコール等の流動促進剤及び滑沢剤を、粉末混合物に加えてもよい。カプセル剤を服用するとき、寒天、炭酸カルシウム又は炭酸ナトリウム等の崩壊剤又は可溶化剤を加えて、医薬の利用性を改良することもできる。
【００７３】
さらに、望ましいとき又は必要なとき、適当な結合剤、滑沢剤、崩壊剤及び着色剤も、混合物に組み入れることができる。適当な結合剤としては、デンプン、ゼラチン、ルコース又はβ−ラクトース等の天然の糖類、コーン甘味料、アカシアゴム、トラガガントゴム又はアルギン酸ナトリウム等の天然及び合成のゴム類、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス類等々がある。これらの剤形で使用される滑沢剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等々がある。崩壊剤としては、無制限に、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等々がある。錠剤は、たとえば、粉末混合物を調製し、粒状化又は小塊化し、滑沢剤及び崩壊剤を加え、錠剤に圧縮成形することによって製剤される。粉末混合物は、適切に粉砕したタキサンプロドラッグを、上述の希釈剤又は塩基と、及び任意に、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、又はポリビニルピロリドン等の結合剤、パラフィン等の溶解遅延剤、四級塩等の再吸収促進剤及び／又はベントナイト、カオリン又はリン酸二ナトリウム等の吸収剤と混合することによって調製される。粉末混合物は、シロップ、デンプンペースト、アラビアゴム（ａｃａｄｉａ  ｍｕｃｉｌａｇｅ）又はセルロース誘導体又はポリマー材料の溶液等の結合剤で湿潤化し、スクリーンを強制的に通過させることにより、粒状化させることができる。粒状化に代わるものとして、粉末混合物を、錠剤機を通過させてもよく、結果として得られるものは、顆粒状に壊された、不完全に形成された小塊である。ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク又は鉱油を加えることにより、顆粒を滑らかにして、錠剤形成ダイにくっつくのを防止することができる。次いで、滑らかにした混合物を、錠剤に圧縮する。本発明のタキサンプロドラッグは、流動性の不活性担体と配合し、粒状化又は小塊化する工程を通過せずに、錠剤に直接圧縮してもよい。セラックのシーリングコート、糖又はポリマー材料のコーティング及びワックスの光沢コーティングからなる透き通った又は不透明のコーティングを施してもよい。異なる単位の製剤を区別するために、これらのコーティングに染料を添加してもよい。
【００７４】
液剤、シロップ剤及びエリキシル剤等の経口用流体は、所与の量が、所定の量の化合物を含むように、投与量単位剤形で調製することができる。シロップ剤は、適切に香味をつけた水溶液に化合物を溶解することによって調製することができ、エリキシル剤は、非毒性のアルコール性媒体を使用することによって調製される。懸濁剤は、化合物を非毒性媒体中に分散させることによって製剤することができる。エトキシル化イソステアリルアルコール及びポリオキシエチレンソルビトールエーテル等の可溶化剤及び乳化剤、保存料、ペパーミント油又はサッカリン等の香味添加物等々も添加することができる。
【００７５】
適切な場合、経口投与用の投与量単位製剤をマイクロカプセルの中に包んでもよい。たとえば、微粒子材料をコーティングするか、またはポリマー、ワックス等々に包埋することによって、放出を延長又は持続するように、製剤を調製することもできる。
【００７６】
本発明のタキサンプロドラッグは、小さい単層小胞、大きい単層小胞及び多層小胞等のリポソーム送達システムの形態で投与することができる。リポソームは、様々なリン脂質、たとえば、コレステロール、ステアリルアミン又はホスファチジルコリンから作ることができる。
【００７７】
本発明のタキサンプロドラッグは、化合物分子が結合される個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって、送達することも可能である。本発明のタキサンプロドラッグは、ターゲタブル薬物担体等の、可溶性ポリマーと結合させることも可能である。このようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、又はパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリジンを包含することができる。さらに、本発明のタキサンプロドラッグは、薬物の制御放出を達成するのに有用な生分解性ポリマー群、たとえば、ポリ乳酸、ポレプシロンカプロラクトン（ｐｏｌｅｐｓｉｌｏｎ  ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロピラン類、ポリシアノアクリレート類、ヒドロゲルの架橋した又は両親媒性のブロックコポリマー、ポリアスパラギン酸又はポリグルタミン酸と結合させることも可能である。
【００７８】
本発明は、薬学的に許容し得る担体と組み合わせて、約０.０１〜約９９．５％、より詳細には約０．５〜約９０％のタキサンプロドラッグを含有する、医薬組成物を包含する。
【００７９】
非経口的投与は、皮下注射、筋内注射又は静脈内注射向けの、滅菌液剤及び懸濁剤等の、液体投与量単位剤形を利用することによって達成される。これらは、一定量のタキサンプロドラッグを、注射に適した非毒性の液体媒体、たとえば、水性含油媒体中に懸濁又は溶解し、懸濁液又は溶液を滅菌することによって調製される。
【００８０】
あるいは、一定量のタキサンプロドラッグをバイアルに入れ、バイアル及びその内容物を滅菌して密封する。投与前に混合するための添付バイアル又は媒体を提供してもよい。非毒性の塩類及び塩溶液を加えて、注射剤を等張にすることができる。安定剤、保存料及び乳化剤も加えてもよい。
【００８１】
直腸投与は、タキサンプロドラッグが、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級エステル、たとえば香味付け水溶液等の低融点水溶性固体又は不溶性固体と混合されている坐剤を使用することによって達成されるが、エリキシル剤は、パルミチン酸ミリスチル又はその混合物を介して調製される。
【００８２】
本発明の局所用製剤は、たとえば、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、眼軟膏剤、点眼剤、点耳剤、含浸包帯及びエアゾールとして存在してもよく、適切な従来の添加物、たとえば、保存料、薬剤浸透を助けるための溶媒、及び軟膏剤及びクリーム剤中の皮膚軟化剤も含有してもよい。この製剤は、従来の相容性担体、たとえば、クリーム基剤、軟膏基剤及びローション用のエタノール又はオレイルアルコールも含有してもよい。このような担体は、製剤の約１％〜約９８％までとして存在してもよい。より一般的には、このような担体は、製剤の約８０％までである。
【００８３】
吸入により投与する場合、本発明によるタキサンプロドラッグは、適当な推進剤、たとえばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、テトラフルオロエタン、ヘプタフルオロプロパン、二酸化炭素又はその他の適当な気体を使用して、加圧パック又はネブライザーから、エアゾールスプレー現出の形態で便利に送達される。加圧エアゾール剤の場合、一定量を送達するための弁を設けることによって投与量単位を決定することが可能である。たとえば、吸入器用又は通気器用の、本発明の化合物及び適当な粉末基剤、たとえばラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有する、ゼラチンのカプセル及びカートリッジが調合される。
【００８４】
好ましい医薬組成物は、錠剤及び液剤等々の経口投与に適した剤形、及び局所製剤である。
【００８５】
本発明は、腫瘍、癌、又はタキサン（たとえば、パクリタキセル又はドセタキセル）に応答する他の病状を有する哺乳動物対象を治療する方法も提供する。この治療方法は、本発明によるタキサン−オリゴマープロドラッグの薬学的有効量を含有する医薬組成物を該対象に投与することを含む。本発明で治療することが可能なタキサン応答性疾患としては、癌、腫瘍、悪性腫瘍、組織損傷に続発する抑制できない組織又は細胞の増殖、多嚢胞腎疾患及びマラリアなどがある。治療可能な癌の中でも、特に肝細胞癌、肝転移、胃腸癌、リンパ腫、白血病、黒色腫、カポジ肉腫、及び膵臓、腎臓、子宮頚部、乳房、卵巣、脳及び前立腺の癌及び尿生殖器癌腫が挙げられる。
【００８６】
本発明のタキサンプロドラッグは、静脈内投与、注入、腹腔内非静脈内注射、及びボーラス注射で投与することが可能である。タキサンプロドラッグは、適当な剤形のみで、又は経口バイオアベイラビリティ増強剤とともに、経口的に患者に投与することも可能である。このようなバイオアベイラビリティ増強剤は、シクロスポリンＡ〜Ｚ（Ｍｅ−Ｉｌｅ−４）−シクロスポリン、ジヒドロシクロスポリンＡ、ジヒドロシクロスポリンＣ、アセチルシクロスポリンＡ、ゲニステイン及び関連イソフラボノイド類、ケルセチン、カルフォスチン、セラミド類、モルフィン及びモルフィンコンジナーからなる群より選択することが可能である。好ましい増強剤は、シクロスポリンＡ、シクロスポリンＣ、シクロスポリンＤ、シクロスポリンＦ、ジヒドロシクロスポリンＡ、ジヒドロシクロスポリンＣ、アセチルシクロスポリンＡ、及びＢシクロデキストリンである。
【００８７】
さらに、本発明のタキサンプロドラッグは、単独で投与してもよく、他の化学療法剤（たとえば、抗癌剤）とともに投与してもよい。本発明のパクリタキセル−ＰＥＧプロドラッグを他の化学療法剤とともに投与する場合、パクリタキセル−ＰＥＧプロドラッグと他の化学療法剤を同時に投与してもよく、逐次的に投与してもよい。さらに、本発明のパクリタキセル−ＰＥＧプロドラッグは、放射線療法より前、後、又は放射線療法と同時に、投与してもよい。
【００８８】
１つの態様において、本発明は、本発明のタキサンプロドラッグ及びシスプラチンの組み合わせを対象に投与することを含む、癌の治療法を提供する。好ましくは、癌は卵巣癌であり、タキサンプロドラッグはパクリタキセスを含み、シスプラチンより前に投与されることが好ましい。パクリタキセルは、シスプラチンとともに効果的に投与されることが明らかにされている。好中球減少症が、パクリタキセル及びシスプラチンの同時投与の用量制限作用であることが明らかにされている。シスプラチンより前にパクリタキセルを投与したとき、好中球減少症の発生が少ないことが、臨床治験で証明されている。たとえば、パクリタキセル−ＰＥＧプロドラッグの好ましい用量は３５０ｍｇ／ｍ2に続いてシスプラチン（７５ｍｇ／ｍ2）であるが、より好ましい用量は、パクリタキセル−ＰＥＧプロドラッグ（２５ｍｇ／ｍｌ）に続いてシスプラチン（７５ｍｇ／ｍｌ）及び標準用量（５μｇ／ｋｇ／日、皮下）のＧ−ＣＳＦである。
【実施例１】
【００８９】
５．実施例
５．１  ２′−スクシニルパクリタキセル
【化４０】
2004529116.tif 000041
以下のプロトコールは、Ｄｅｕｔｓｃｈらの手順の改良版である。パクリタキセル５．００ｇ（５．８６ｍｍｏｌ）及び無水コハク酸５．８６ｇ（５８．６ｍｍｏｌ）の混合物に、無水ピリジン１１０ｍｌを加えた。結果として生じた溶液を室温で５時間撹拌した後、薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）分析は、パクリタキセルが完全に消費されていることを示した。回転蒸発を用いて減圧下で溶媒を除去し、残留物を真空内で２時間乾燥させた。結果として生じた蝋状の半固体を、水２００ｍｌとともに効率よく撹拌して綿状の白色固体を生じ、これを、ブフナー漏斗を用いた吸引濾過で回収した。この固体を水で洗浄し、次いで３０分間吸尽させ、次いで、デシケーター内の真空で、室温にて、Ｐ2Ｏ5上で１５時間乾燥させた。この白色固体をアセトン３０ｍｌに溶解し、次いで効率よく撹拌し、水３０ｍｌを徐々に加えた。結果として生じた高粘度の白色ペーストを１５分間十分に混合し、ブフナー漏斗を通して吸引濾過し、過剰の水ですすぎ、１時間吸尽させた。このようにして得られた湿った白色固体を、デシケーター内の真空で、室温にて、Ｐ2Ｏ5上で注意深く１８時間乾燥させた。この乾燥期間中に、固体がより乾燥し、凝固が少なくなったとき、Ｐ2Ｏ5を補充し、適度に細かい粉末が得られるまで、定期的に、固体をより小片に壊した。（５．２９ｇ、収率９５％）。分析用ＨＰＬＣ分析は、この材料が純度９７％であることを示した。ＭＳ（ＦＡＢ＋）ｍ／ｚ（ｒｅｆ．ｉｎｔｅｎ．）９５４（Ｍ+，１００），５７０（１５），５０９（６４）。
【実施例２】
【００９０】
５．２  ２′−スクシンアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルトリフルオロアセテート
【化４１】
2004529116.tif 000042
窒素雰囲気で、２′−スクシニルパクリタキセル（化合物２）２００ｍｇ（０．２１０ｍｍｏｌ）及び１，１′−カルボニルジイミダゾール４７ｍｇ（０．２７３ｍｍｏｌ、純度９５％）の混合物を、無水アセトニトリル２．９ｍｌに溶解した。適度の窒素の流れを維持して二酸化炭素ガスを追い出すように、反応フラスコ隔壁を貫通して、気体流出針を挿入した４８℃に予熱した油浴内に反応容器を降ろし、ガスを発生させた。効率よく１５分間撹拌した後、反応容器を油浴から取り出し、室温まで冷却させておいた。蒸発させて失ったアセトニトリルの量を補充した。静的窒素雰囲気が維持されるように、窒素流出針を除去した。アセトニトリル１．４ｍｌ中に、２，２′−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）３７μｌ（０．２５２ｍｍｏｌ）を含む溶液を滴加した。４５分後、アセトニトリル０．７ｍｌ中に、トリフルオロ酢酸８１μｌ（１．０５ｍｍｏｌ）を含む溶液を滴加した。このようにして得られる粗反応溶液は、分析用ＨＰＬＣ分析で決定するとき、一般に収率７０〜７４％の、所望のトリフルオロアセテート（化合物３）を含む。
【実施例３】
【００９１】
５．３  トリフルオロアセテート（化合物３）の分離用ＨＰＬＣ精製
生成物は、一般に、生成物含有分画を合併することにより、分離用ＨＰＬＣで精製される。
【００９２】
５．３．１  ＨＰＬＣ  分離度の改良
中規模反応。中規模ＨＰＬＣ分離度を改良するために、沈殿を生じさせずに水を加えることにより、粗反応溶液を希釈した。従って、効率よく撹拌しながら、上記反応溶液のアリコート３．３０ｍｌに、水４．０３ｍｌを徐々に加え、結果として水５５％からなる溶液を生じた。このようにして得られたわずかに濁った混合物を、０．４５μｍのゲルマン（Ｇｅｌｍａｎ）アクロディスク１３シリンジフィルターを通して濾過し、次いで、逆相ヴィダック（Ｖｙｄａｃ）カラム（２２ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃ１８、３００Å、１０〜１５μ）を使用したウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）６００Ｅ  ＨＰＬＣシステムで、クロマトグラフ分離した。移動相は、０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水溶液であった。純度＞９７％の所望の生成物を含有する主要分画は、３０分にわたって、５ｍｌ／分の流量で、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む４０：６０〜４５：５５  アセトニトリル：水の勾配溶離を使用して得た。後続のクロマトグラフ実施に備えて、次の、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含有する９０：１０のアセトニトリル：水によるアイソクラティック溶離で、未確認の副生成物を除去した。
【００９３】
分析のために、上述のアミド化反応プロトコールから生じる精製した分画［２００ｍｇ（０．２１０ｍｍｏｌ）規模の２′−スクシニルパクリタキセル（２）］を、回転式蒸発と５５℃までの漸進的浴温を用いて減圧下で濃縮し、次いで室温にて真空内で乾燥させ、トリフルオロアセテート（化合物３）１７０ｍｇ（収率６８％）を非晶質白色固体として得た。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ  ８．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．９９−７．８１（２Ｈ，ｍ），７．６６−７．２０（１１Ｈ，ｍ），６．９２（１Ｈ，ｂｒｓ），６．２８（１Ｈ，ｓ），６．０７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ），５．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．９，５．０Ｈｚ），５．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），４．３６（１Ｈ，ｍ），４．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），４．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），３．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），３．６６−３．０４（１６Ｈ，ｍ），２．８０−２．６０（２Ｈ，ｉｎ），２．３８（３Ｈ，ｓ），２．２０（３Ｈ，ｓ），１．８４（３Ｈ，ｓ），１．６６（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＦＡＢ＋）  ｍ／ｚ  １０８４（Ｍ+）．
【００９４】
大規模反応。２′−スクシニルパクリタキセル（化合物２）１，０００ｍｇ（１．０５ｍｍｏｌ）、総体積２７ｍｌからなる大規模アミド化反応溶液は、所望のトリフルオロアセテート生成物（化合物３）４４％を含有することが分析用ＨＰＬＣ分析で証明された。アリコート１０．０ｍｌを、わずかに粘性がある黄色油を生じるところまで、回転式蒸発を用いて減圧下で濃縮した。この油を溶解した。アセトニトリル１．０ｍｌを加え、０．４５μｍのゲルマン（Ｇｅｌｍａｎ）アクロディスク１３シリンジフィルターを通して濾過し、次いで逆相ヴィダック（Ｖｙｄａｃ）カラム（５０ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃ１８、３００Å、１０〜１５μ）を使用したウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）６００Ｅ  ＨＰＬＣシステムで、クロマトグラフ分離した。移動相は、０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水溶液であった。純度＞９７％の所望の生成物を含有する主要分画は、３０分にわたって、２６ｍｌ／分の流量で、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含む４０：６０〜４５：５５  アセトニトリル：水の勾配溶離を使用して得た。後続のクロマトグラフ実施に備えて、次の、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含有する９０：１０のアセトニトリル：水によるアイソクラティック溶離で、未確認の副生成物を除去した。
【００９５】
分析用ＨＰＬＣ分析で、高純度であると決定された分画を、類似した分離用ＨＰＬＣ実施と組み合わせて、純度＞９７％のトリフルオロアセテート（化合物３）を含有する、総体積８７０ｍｌの合併した溶液を得た。この溶液を直接（濃縮せずに）イオン交換クロマトグラフィ工程で使用した。
【実施例４】
【００９６】
５．４  トリフルオロアセテート（化合物３）の安定性
分析用ＨＰＬＣ分析で決定したとき、最初は平均純度９８．８％であった、分離用ＨＰＬＣ実施で得られた幾つかのトリフルオロアセテート生成物分画溶液は、８℃で１６日間保存した後、平均純度９７．４％に変化した。
【００９７】
５．４．１  トリフルオロアセテート（化合物３）の水溶解度の決定
小さいバイアル内のトリフルオロアセテート（化合物３）のサンプル２．５ｍｇに、脱イオン水２００μｌを加えた。このバイアルに蓋をかぶせ、結果として生じた混合物を１５分間、超音波処理した。このようにして得られた濁った混合物を、０．４５μのゲルマン（Ｇｅｌｍａｎ）アクロディスク１３シリンジフィルターを通して濾過した。濾液の重量を測定し（１４０ｍｇ）、凍結乾燥して綿状の白色固体１．４ｍｇを得た。従って、この水溶液は密度１．００であると仮定すると、トリフルオロアセテート（化合物３）の水溶解度は７．４ｍｇ／ｍｌ（すなわち１．４ｍｇ／０．１９０ｍｌ）である。
【実施例５】
【００９８】
５．５  トリフルオロアセテート陰イオン：アセテートプロドラッグ（化合物４）のイオン交換クロマトグラフィ
【化４２】
2004529116.tif 000043
調製のために、上述の分離用ＨＰＬＣ精製プロトコールで得られた純度＞９７％のトリフルオロアセテート（化合物３）の分画溶液を合併し、濃縮せずに、イオンクロマトグラフィに直接使用した。たとえば、理論的に、基質０．４６２ｍｍｏｌ及びＴＦＡ（０．１％（ｖ／ｖ））１１．３ｍｍｏｌを含有する、総体積８７０ｍｌの合併した分離用ＨＰＬＣ分画を、以下のイオン交換プロトコールに使用した。
【００９９】
ダウエックス（ＤＯＷＥＸ（登録商標））１×８-４００（強塩基性、塩化物形）イオン交換樹脂９２ｇを、脱イオン水各２７０ｍｌで３回洗浄し、各回、黄色の浮遊物質及びすすぎ水の大部分を傾瀉除去した。樹脂をアセテート形で得るために、結果として生じたスラリーを、脱イオン水４．００リットル中にＮａＯＡｃ３Ｈ2Ｏ  １，８８２ｇを含む溶液とともに、１．０時間撹拌した。この樹脂を、ブフナー漏斗を用いた吸引濾過で回収し、合計１．８４リットルの脱イオン水で数回洗浄した。樹脂を、各回７５０ｍｌの０．０１３Ｍ  ＨＯＡｃ（水溶液）［すなわち、分離用ＨＰＬＣプロトコールで使用される０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡから類推して０．１％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ］で２回洗浄し、ブフナー漏斗で吸引濾過し、次いで１０分間吸尽させた。この樹脂を、０．０１３Ｍ  ＨＯＡｃ（水溶液）中に懸濁させ、ガラス製フラッシュクロマトグラフィカラムに注ぎ入れ、次いで、穏やかな空気圧とともに０．０１３Ｍ  ＨＯＡｃ（水溶液）２００ｍｌを使用して溶離し、このようにして高さ１０ｃｍ×直径３．８ｃｍの樹脂カラムを提供し、次いで約４ｃｍの砂で満たした。次いで、このカラムを、アセトニトリル２５０ｍｌ、次に０．０１３Ｍ  ＨＯＡｃ（水溶液）２５０ｍｌで溶離した。効率よく撹拌しながら、アセトニトリル１０ｍｌ中に氷酢酸０．６３ｍｌを含有する溶液を加えることにより、体積８７０ｍｌのトリフルオロアセテート（３）溶液を、ＨＯＡｃ中０．０１３Ｍにした。この溶液をカラムに適用し、穏やかな空気圧を使用して、カラムから溶離した。５０ｍｌ試験管を使用して、直ちに分画収集を開始した。いったん、溶液全８７０ｍｌが樹脂を完全に通過したら、カラムを０．０１３Ｍ  ＨＯＡｃ（水溶液）でさらに溶離する。純度＞９７％（分析用ＨＰＬＣ分析で、２１０ｎｍで決定するとき）の生成物を含有する分画を合併し、回転式蒸発とともに５５℃までの漸進的浴温を用いて、減圧下で濃縮し、真空内で室温にて１６時間乾燥させ、オフホワイト色の非晶質残留物を得た。この残留物を、スパーテルでフラスコから擦り取り、非晶質粉末にした。フラスコから擦り取られなかった残りは、必要最低限量の０．０１３  ＭＨＯＡｃ（水溶液）を溶媒として使用して、より小さいフラスコに移し、上述の通りに濃縮し、次いでスパーテルで擦り取ってさらなる生成物を得て、これを合併してデシケーター内の真空で、室温にて、Ｐ2Ｏ5上で２４時間乾燥させ、アセテートプロドラッグ（化合物４）（２９３ｍｇ、純度＞９７％の材料の総体的非最適化収率２４％）を黄色粉末として得ることにより、生成物の純度を変えずに、さらに獲得することも可能である。上述の方法に似た方式で純度＜９７％の分画を合併することにより、さらなるアセテート（化合物４）１４６ｍｇ（非最適化収率１２％）が生じた。分析用イオンクロマトグラフィ［クォンタテイティブ・テクノロジーズ・インク（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，（ＱＴＩ））］による生成物の分析は、トリフルオロ酢酸の存在を示さなかった（ＴＦＡ分析分析：１００ｐｐｍの検出限界未満）。融点１１４−１１７℃；1Ｈ  ＮＭＲ（３００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）  δ  ８．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６２−７．３６（１１Ｈ，ｍ），６．２９（１Ｈ，ｓ），６．１１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１０．０  Ｈｚ），５．８７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．９，４．４Ｈｚ），５．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），５．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），４．９５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），４．３８（１Ｈ，ｍ），４．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），４．１８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），３．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），３．６３−３．３４（１６Ｈ，ｍ），３．０４（２Ｈ，ｂｒｓ），２．７５（２Ｈ，ｉｎ），２．５３（２Ｈ，ｍ），２．４０（３Ｈ，ｓ），２．２０（３Ｈ，ｓ），２．０１（３Ｈ，ｓ），１．８７（３Ｈ，ｓ），１．６７（３Ｈ，ｓ），１．２０（３Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｓ）；ＭＳ（ＦＡＢ＋）ｍ／ｚ（ｒｅｆ．ｉｎｔｅｎ．）  １０８４（Ｍ+）。
【実施例６】
【０１００】
５．６  アセテート（化合物４）の一般的溶解性
アセテート（化合物４）は、ＣＤＣｌ3に極めてよく溶け、ジエチルエーテル及びヘキサン類にやや溶けにくい。アセテート（化合物４）各３．０ｍｇの３つの別個のサンプルは、１００％無水エタノール８１μｌ中、アセトン８１μｌ中、及び０．５Ｍ酢酸水溶液８１μｌ中の均質な溶液を与えた。従って、これら３溶媒のそれぞれにおける溶解度は、３７ｍｇ／ｍｌ（すなわち３．０ｍｇ／０．０８１ｍｌ）とほぼ同じか又はそれより大きくなければならない。
【実施例７】
【０１０１】
５．７  質量によるアセテート（化合物４）の水溶解度の決定
小さいバイアル内のアセテート（化合物４）１０．０ｍｇのサンプルに、脱イオン水１７６μｌを加えた。このバイアルに蓋をかぶせ、結果として生じた混合物を１５分間、超音波処理した。２１０ｎｍにおける分析用ＨＰＬＣ分析で、このようにして得られた液体は純度９８．７％のアセテート（化合物４）を含有することを示した。この液体を、０．４５μの酢酸セルロースシリンジフィルターを通して濾過した。濾液の既知の体積（７５μｌ）の質量（７６ｍｇ）を測定し、溶液の密度が１．０１ｇ／ｍｌであることを決定した。２１０ｎｍにおける分析用ＨＰＬＣ分析で、濾液は純度９８．８％のアセテート（化合物４）を含有することを示した。濾液１１８ｍｇを凍結乾燥して、綿状のオフホワイト色の固体６．４ｍｇを得た。従って、この方法により、アセテート（化合物４）の水溶解度は、５５ｍｇ／ｍｌ（すなわち６．４ｍｇ／０．１１７ｍｌ）であることが決定された。
【実施例８】
【０１０２】
５．８  分析用ＨＰＬＣによるアセテート（化合物４）の水溶解度の決定
小さいバイアル内のアセテート（化合物４）１０．０ｍｇのサンプルに、脱イオン水１５０μｌを加えた。このバイアルに蓋をかぶせ、３分間渦巻撹拌し、１５分間、超音波処理した。結果として生じた粘性の淡黄色／橙色の混合物を、徐々にかつ注意深く、１ｍｌシリンジに取り、次いで０．４５μ酢酸セルロースシリンジフィルターを通して濾過し、粘性の均質な黄色／橙色溶液を得た。濾液の一部７５μｌをアセトニトリルで８８倍に希釈し、次いで、２２９ｎｍ及び２７０ｎｍにて分析用ＨＰＬＣで分析した。２２９ｎｍ及び２７０ｎｍで確認された曲線下面積を、それぞれ、２２９ｎｍで得られた３点較正曲線（ｒ2＝０．９９９９９）及び２７０ｎｍで得られた５点較正曲線（ｒ2＝０．９９９９６）の両者と比較した。従って、この方法により、アセテート（化合物４）の水溶解度は、４０．１ｍｇ／ｍｌ（２２９ｎｍ）及び３９．７ｍｇ／ｍｌ（２７０ｎｍ）であると決定された。
【実施例９】
【０１０３】
５．９  アセテート（化合物４）の化学的加水分解挙動
固体アセテート（化合物４）のサンプルを、湿ったアセトニトリル（湿った空気に暴露されるため、無水ではない）に溶解した（約１ｍｇ／ｍｌ）。分析用ＨＰＬＣ分析で確認された通り、室温にて２６日の間に、アセテート（化合物４）は、顕著な副生成物形成なしに、順調に定量的にパクリタキセル（１）へと転換した（図１参照）。
【０１０４】
５．９．１  様々なｐＨにおけるアセテート（化合物４）の化学的加水分解挙動
多くの１３ｍｍ×１００ｍｍのガラス製試験管に、アセテートプロドラッグ（化合物４）の８．７４１×１０-4Ｍ水溶液、各５．１５μｌを加えた。次いで、各試験管に、ｐＨ８．００、７．４０、７．００及び５．８０のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）及びｐＨ２．００の酢酸／ギ酸緩衝液の水溶液２９５μｌを加えた。試験管に蓋をかぶせ、往復水槽振盪器内で、３７℃にてインキュベートした。様々な適切な時間間隔でインキュベートした後、試験管を振盪器から取り出し、アセトニトリル９００μｌを加え、サンプルを３分間、勢いよく渦巻撹拌した。このようにして得られた溶液を分析用ＨＰＬＣで分析し、加水分解速度データを作成した（以下の表及びグラフを参照）。
【実施例１０】
【０１０５】
５．１０  アセテート（化合物４）のｉｎ  ｖｉｔｒｏプロドラッグ加水分解
９本の１３ｍｍ×１００ｍｍ試験管に、アセテートプロドラッグ（化合物４）の８．７４１×１０-4Ｍ水溶液、各５．１５μｌを加えた。次いで、各試験管に、オス成体のスプレーグ・ドーリー（Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ）ラット（ＣＤ）から新たに得たヘパリン化ラット血漿２９５μｌを加えた。（起源、ノースカロライナ州ローリーの、チャールズリバー（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ；Ｒａｌｅｉｇｈ，ＮＣ））。試験管に蓋をかぶせ、往復水槽振盪器内で、３７℃にてインキュベートした。様々な適切な時間間隔でインキュベートした後、試験管を振盪器から取り出し、アセトニトリル９００μｌを加え、サンプルを３分間、勢いよく渦巻撹拌し、次いで３０〜９０分間、−１２℃に冷却した。サンプルを、２５℃で１０分間、１，６００ｇで遠心分離し、結果として生じた無色透明の上澄液を分析用ＨＰＬＣで分析した（図２参照）。
【実施例１１】
【０１０６】
５．１１  ２′−スクシンアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテート
窒素雰囲気で、２′−スクシニルパクリタキセル（化合物２）２００ｍｇ（０．２１０ｍｍｏｌ）及び１，１′−カルボニルジイミダゾール４７ｍｇ（０．２７３ｍｍｏｌ）の混合物を、無水アセトニトリル５ｍｌに溶解した。４８℃に予熱した油浴内に反応容器を降ろし、ガスを発生させた。１５分間撹拌した後、反応容器を室温まで冷却させておいた。アセトニトリル２ｍｌ中に、２，２′−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）３７μｌ（０．２５２ｍｍｏｌ）を含む溶液を滴加し、１時間後、アセトニトリル１ｍｌ中に酢酸（１．０５ｍｍｏｌ）を含有する溶液を加えた。分析用ＨＰＬＣ分析で決定するとき、この方法で得られた粗反応溶液は、一般に収率７５％の、所望のアセテート生成物を含む。
【実施例１２】
【０１０７】
５．１２  ２′−スクシンアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテートの分離用ＨＰＬＣ精製
実施例５．１１からの粗化合物を、逆相ヴィダック（Ｖｙｄａｃ）カラム（２２０ｍｍ×２５０ｍｍ、Ｃ１８、３００Å、１０〜１５μ）を使用したウォーターズ・プレプ（Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｒｅｐ）ＬＣ  ４０００システムで、クロマトグラフ分離した。分離用ＨＰＬＣから得られる生成物含有分画を合併することにより、生成物を精製した。所望の生成物（純度＞９７％）を含有する主要分画は、３５分にわたって、０．１％（ｖ／ｖ）酢酸を含む３０：７０〜９５：５  アセトニトリル：水の勾配溶離を使用して得た。精製した分画を、回転式蒸発を用いて減圧下で濃縮し、次いで凍結乾燥して白色固体を得た。ＭＳ（ＦＡＢ＋）  ｍ／ｚ  １０８４（Ｍ+）。
【実施例１３】
【０１０８】
５．１３  ２′−グルタルアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテート
無水コハク酸の代わりに無水グルタル酸を使用することにより、実施例５．１に上述した手順を使用して、２′−グルタリルクリタキセルを合成する。次いで、２′−スクシニルパクリタキセルの代わりに２′−グルタリルパクリタキセルを出発材料として使用することにより、実施例５．１１に上述した手順を使用して、２′−グルタルアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテート（化合物５）を合成する。化合物５の化学構造を以下に示す。
【化４３】
2004529116.tif 000044
【実施例１４】
【０１０９】
５．１４  ２′−グルタルアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテートの分離用ＨＰＬＣ精製
実施例５．１２に上述した手順を使用して、２′−グルタルアミジル−ＰＥＧ２−アミン−パクリタキセルアセテートの分離用ＨＰＬＣ精製を実施する。
【実施例１５】
【０１１０】
５．１５  ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞株に対する本発明の化合物の作用
この実験の目的は、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞株に対する、パクリタキセル（比較のためだけに試験した、本発明の化合物ではない）、ＴＸ−００１（実施例５．５に上述した、化合物４）、及びＴＸ−００２（化合物５、実施例５．１３に上述した、化合物５）の総用量応答の結果を調査研究することであった。ヒト卵巣癌細胞株であるＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞株を、ヴェルセンでＴ７５フラスコから取り出し、血球計で計数した。次いで、遠心分離（１０００ｒｐｍ、１０分）で、細胞をペレット化した。上澄を除去し、新鮮培地（ＲＰＭＩ  １６４０ｗ／１０％ＦＣＳ及び１％Ｌ−グルタミン）を加えて、細胞濃度を１０，０００細胞／ｍｌとした。次いで、１０，０００細胞／ｍｌ溶液の０．１ｍｌ（１０００細胞）を、９６ウェル平底プレートの個々のウェルに加えた。次いで、このプレートを、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベーターに一晩入れ、細胞がウェルの底に接着する時間を与えた。翌日、パクリタキセル、ＴＸ−００１、及びＴＸ−００２を、新鮮培地で下記の濃度に希釈した：１０００、５００、２００、５０、１０、５、１及び０．５ｎＭ。次に、０．１ｍｌの適切な薬物濃度を、９６ウェルプレート（ｎ＝８）の適切な行に加え、５００、２５０、５０、２５、５、２．５、０．５、及び０．２５ｎＭという最終濃度にした。各プレートの１行には、新鮮培地０．１ｍｌを入れ、未処理対照の役割をした。次いで、これらのプレートを、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベーターに６日間入れた。６日間インキュベートした後、全てのウェルを吸引し、プレートを−７０℃のフリ−ザーに２時間入れた。また、今回は、遠心分離後、上澄を除去し、試験管を−７０℃のフリーザーに２時間入れたこと以外は上述と同じ様式で、別のＴ７５フラスコから適切な数の細胞を取り出した。プレート及び試験管を室温で解凍し、次いでサイクォント（ＣｙＱｕａｎｔ）アッセイ（モレキュラー・プローブズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ））を実施した。適量のサイクォント（ＣｙＱｕａｎｔ）ＧＲ色素／細胞融解緩衝液で試験管内容物を再懸濁し、標準曲線を作成するために、しかるべく希釈した。次に、各標準濃度の０．２ｍｌを、新しい９６ウェルプレートに二重に入れた。次いで、このプレートを暗所に３分間置いた。最後に、先に凍結して解凍した９６ウェルプレートの全てのウェルに、サイクォント（ＣｙＱｕａｎｔ）ＧＲ色素／細胞融解緩衝液０．２ｍｌを入れ、暗所に３分間置いた。次いで、４８５ｎｍ励起及び５３８ｎｍ発光にて、蛍光を測定した。次いで、各ウェル当たりの細胞数を標準曲線から算出した。各薬物濃度毎に平均値を算出し、次いで個々のプレートの未処理ウェルの平均値で割った。結果を、図３に示し、未処理細胞に対する％成長で表す。
【実施例１６】
【０１１１】
５．１６  本発明の化合物がＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞株により活性化されたカスパーゼ−３の産生に及ぼす作用
この実験の目的は、５０ｎＭパクリタキセル、ＴＸ−００１、及びＴＸ−００２が、ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞株により活性化されたカスパーゼ−３の産生に及ぼす作用を調査研究することであった。およそ７０〜８０％のＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞密集が入った７個のＴ７５フラスコを、この実験に使用した。各フラスコを、ＰＢＳ  ５ｍｌで洗浄し、次いで当該薬剤１５．０ｍｌを各フラスコに加えた。次いで、所望の時点に達するまで、これらのフラスコを、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベーターに入れた。次いで、各Ｔ７５フラスコを、０．０５％トリプシン処理し、血球計で細胞を計数した。次いで、遠心分離（１０００ｒｐｍ、１０分）で細胞をペレット化した。次いで活性カスパーゼ−３の量を、カスパーゼ−３  フルオロメトリック・アッセイ（Ｃａｓｐａｓｅ-３  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ）（アール・アンド・ディ・システムズ（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））で決定した。ペレット化細胞から上澄を除去し、１，０００，０００細胞／ｍｌ毎に、冷たい細胞融解緩衝液（Ｃｅｌｌ  Ｌｙｓｉｓ  Ｂｕｆｆｅｒ）２５μｌを加える。この細胞融解物を氷上で１０分間インキュベートし、次いで各条件からの５０μｌを、９６ウェル平底プレートに二重に加える。次に、２Ｘ反応緩衝液５０μｌ及びカスパーゼ−３発蛍光団基質（ＤＥＶＤ−ＡＦＣ）５μｌを各ウェルに加えた。次いで、プレートを、５％ＣＯ2を含む３７℃のインキュベーターに１．５時間入れた。最後に、４００ｎｍ励起及び５０５ｎｍ発光にて、蛍光を測定した。次いで、図４に示す通り、活性カスパーゼ−３蛍光として、データをプロットした。
【実施例１７】
【０１１２】
５．１７  ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける、一連のヒト腫瘍細胞株に対する、化合物４及び５の抗腫瘍活性の評価
ＨＴ−１０８０及びＨＴ−１０８０／ＤＲ４（ＭＲＰ／ＬＲＰ陽性）線維肉腫細胞株（１、２）は、ニューヨーク州バッファローの、ロズウェル・パーク癌研究所（Ｒｏｓｗｅｌ  Ｐａｒｋ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｂｕｆｆａｌｏ，ＮＹ．）のＹ．Ｒｕｓｔｕｍ博士から入手した。Ａ１２１卵巣細胞株（３）は、ニューヨーク州バッファローの、バッファロー総合病院（Ｂｕｆｆａｌｏ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｕｆｆａｌｏ，ＮＹ）のＫｅｎｔ  Ｃｒｉｃｋａｒｄ博士から提供された。ＭＤＡ４３５／ＬＣＣ６−ＷＴ及びＭＤＲ１トランスフェクト細胞株（４）は、ジョージタウン大学医学校のロンバルディ癌センター（Ｌｏｍｂａｒｄｉ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）のＲ．Ｃｌａｒｋｅ博士から提供された。５％ＣＯ2を含む加湿雰囲気で、５％ＦＣＳ、５％ＮｕＳｅｒｕｍ  ＩＶ、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを含有するＲＰＭＩ−１６４０中、３７℃にて、細胞株を単層として増殖させた。
【０１１３】
比較のために使用した、本発明の化合物ではないパクリタキセルは、ストニーブロックのＳＵＮＹ（ＳＵＮＹ  ａｔ  Ｓｔｏｎｙｂｒｏｏｋ）の、Ｉ．Ｏｊｉｍａ博士から提供された。ＴＸ−００１（化合物４）及びＴＸ−００２（化合物５）（それぞれ、ＣＤ#２００２７及び２００２８）は、ＮＯＢＥＸにより提供された。
【０１１４】
パクリタキセルを１００％ＤＭＳＯに可溶化した。ＴＸ−００１及び００２は、１０％１Ｎ  ＨＣＩで酸性化した滅菌水に可溶化した。第１の実験用に、ＴＸ−００１及び００２の４．０ｍＭ  ストックを調製した。ＴＸ−００１及びＴＸ−００２の溶液は、透き通った針様及び円柱様沈殿を含んでおり、かなり粘性があった（実験１）。第２の実験（実験２）用に、濃度が低い各化合物のストック溶液（０．４ｍＭ）を、１０％１Ｎ  ＨＣｌで酸性化した滅菌水で調製した。同じタイプの沈殿が確認されたが、いずれの溶液も粘性がなかった。１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０で、全ての化合物をさらに希釈した。
【０１１５】
Ｓｋｅｈａｎら、「抗癌薬スクリーニングのための新しい比色細胞毒性アッセイ、論説（Ｎｅｗ  Ｃｏｌｏｒｉｍｔｒｉｃ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ−Ｄｒｕｇ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ａｒｔｉｃｌｅｓ）８２（１３）：１１０７−１１１２（１９９０）」の方法に従って、９６ウェル微量滴定プレートで、細胞増殖阻害を評価した。簡単に記載すると、４００〜１８００細胞／ウェルの細胞を、９６ウェルプレートにプレーティングし、薬剤を加える前に、３７℃で１５〜１８時間インキュベートして、細胞を接着させた。各細胞株を、１２種類の濃度の化合物（６種類の対数範囲）に暴露し、化合物濃度毎にデータポイントを５回繰り返した。パクリタキセルの場合は、細胞を０．００３〜１０００ｎＭの範囲の化合物濃度に暴露し、ＴＸ−００１及びＴＸ−００２の場合は、０．０３〜１００００ｎＭの範囲の化合物濃度に暴露した。合計で、３〜４細胞倍増時間（７２〜９６時間）、細胞を培養した。氷冷５０％ＴＣＡ１００μｌでアッセイを終了させた。４℃で１時間後、プレートを水道水で５回洗浄してＴＣＡ、低分子量代謝物及び血清タンパク質を除去した。０．４％スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）５０μｌを各ウェルに加えた。室温で５分間インキュベートした後、プレートを０．１％酢酸で５回すすぎ、風乾した。結合した色素を、旋回シェーカー上で、１０ｍＭトリス塩基（ｐＨ１０．５）で５分間可溶化した。光学濃度を５７０ｎｍで測定した。
【０１１６】
予想される応答の二乗の逆数で重みを付けた非線形回帰を用いて、データを、シグモイド−Ｅｍａｘ（Ｓｉｇｍｏｉｄ−Ｅｍａｘ）濃度作用モデル（Ｎ．Ｈ．Ｇ．Ｈｏｌｆｏｒｄ  ａｎｄ  Ｌ．Ｂ．Ｓｃｈｅｉｎｅｒ，「用量作用関係の理解：薬物動態学−薬力学モデルの臨床応用」，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎ．６：４２９−４５（１９８１））に当てはめた。フィッティングソフトウエアは、マイクロソフト（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）  ＦＯＲＴＲＡＮを用いてＲＰＣＩで開発され、Ｎａｓｈ（Ｊ．Ｃ．Ｎａｓｈ，コンピューターのためのコンパクトな数値法（Ｃｏｍｐａｃｔ  Ｎｕｍｅｒｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒＣｏｍｐｕｔｅｒｓ）：線形代数学及び関数最小化（ＬｉｎｅａｒＡｌｇｅｂｒａ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎ  Ｍｉｎｉｍｉｚａｔｉｏｎ、ニューヨーク：Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，１９７９）によって非線形回帰用に改変された、マルクワルト（Ｍａｒｑｕａｒｄｔ）アルゴリズム（Ｄ．Ｗ．Ｍａｒｑｕａｒｄｔ，「非線形パラメーターの最小二乗推定のためのアルゴリズム（Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ  ｆｏｒ  ｌｅａｓｔ  ｓｑｕａｒｅｓ  ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｏｎｌｉｎｅａｒ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ）」、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｉｎｄ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．１１：４３１−４４１）を使用する。５０％増殖阻害を来たす薬物濃度（ＩＣ50）を算出し、下表Ｉに示す。
【０１１７】
【表１】
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【０１１８】
Ａ１２１卵巣、乳癌細胞株ＬＣＣ６、及びＭＤＲｌ遺伝子がトランスフェクトされ、Ｐ−糖タンパク質を過剰発現する、ＬＣＣ６−ＭＤＲ１変異株を包含するヒト腫瘍細胞株の一団を使用して、ＴＸ−００１、ＴＸ−００２及びパクリタキセルを、腫瘍細胞増殖阻害について評価した。ＭＲＰ／ＬＲＰ発現性の、多剤耐性ＨＴ１０８０／ＤＲ４ヒト肉腫細胞株に対しても、これらの化合物を評価した。
【０１１９】
ＴＸ−００１及びＴＸ−００２は、多数のヒト腫瘍細胞型に対して有効な薬剤であり、２．７〜１７９８ｎＭの範囲のＩＣ５０値を有する（表Ｉ）。ＴＸ−００１は、ＴＸ−００２より強力なようであり、パクリタキセルとほぼ同じ増殖阻害特性を有する。
【０１２０】
Ｐｇｐを過剰発現するＬＣＣ６−ＭＤＲ１変異株における耐性比（ＩＣ５０耐性細胞株／ＩＣ５０親系）は、試験した３化合物で類似していた。その範囲は、パクリタキセルでは６５〜９２倍であり、ＴＸ−００１では３０〜１００倍であり、ＴＸ−００２では４７〜６０倍であった。多剤耐性ＨＴ１０８０／ＤＲ４細胞株を発現するＭＲＰ／ＬＲＰにおける耐性比も、パクリタキセルでは１．１〜１．４倍、ＴＸ−００１では１．９〜２．０倍、ＴＸ−００２では１．１〜１．５倍という、類似した範囲であった。
【０１２１】
４℃で７日間保存しておいたストック溶液からのＴＸ−００１及びＴＸ−００２の再試験は、ＬＣＣ６及びＬＣＣ６−ＭＤＲ１細胞で活性のわずかな上昇を示した。ＴＸ−００１及びＴＸ−００２の非粘性ストック溶液（０．４ｍＭ）の試験は、試験した細胞株全てで、最初の結果及び４．０ｍＭストック溶液の反復試験結果と比較して、わずかに低い効力を示した。
【０１２２】
ＴＸ−００１もＴＸ−００２も有効な薬剤であり、ＴＸ−００１はより強力である。
【０１２３】
前述の実施形態及び実施例は、本発明を説明するものであって、本発明を限定するものと考えるべきではない。本発明は、上記特許請求の範囲によって明確に規定され、特許請求の範囲の同等物は中に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１２４】
【図１】アセテート（化合物４）が湿ったアセトニトリルに溶解された場合の、アセテート（化合物４）（実施例を参照）が、室温で、２６日の間に、パクリタキセルに転換するのを示す図である。図１は、分析用ＨＰＬＣ分析で確認される通り、顕著な副生成物が形成されずに、アセテート（化合物４）が順調に、定量的にパクリタキセルに転換されることを示す。
【図２】ヘパリン処理したラット血漿中のアセテート（化合物４）のｉｎ  ｖｉｔｒｏ加水分解を示す図であり、タキサンプロドラッグの大部分は２時間以内に急速に加水分解されて、遊離のパクリタキセルを提供することを示す。
【図３】本発明の化合物で処理したＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞の％増殖を、パクリタキセルと比較して示す図である。
【図４】本発明の化合物で刺激されたＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ−３細胞によるカスパーゼ−３活性化を、パクリタキセルと比較して示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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