(57)【要約】本発明は、抗酸化剤および肝保護剤として有用な２種の化合物、すなわち（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの単離、および治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と会合して含んでなる医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを、添加剤とともにまたは添加剤と会合して含んでなる、抗酸化剤またはフリーラジカル消去剤として有用な医薬組成物。
【請求項２】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択されるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールの量が、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇである、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
有効量の（−）−ウィクストロモルを、添加剤とともにまたは添加剤と会合して含んでなる、肝保護剤として有用な医薬組成物。
【請求項７】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルの効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択されるものである、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
（−）−ウィクストロモルと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
（−）−ウィクストロモルの量が、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇである、請求項２に記載の組成物。
【請求項１１】
ヒマラヤスギ植物から（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールを単離する方法であって、
ａ）ヒマラヤスギ植物の部分を微粉砕したものを溶媒で抽出してエッセンシャルオイルを除去する工程、
ｂ）抽出物を減圧下で濃縮して残渣を得る工程、
ｃ）工程（ｂ）で得られた残渣に酢酸エチルを添加する工程、
ｄ）常法により溶媒を分離する工程、
ｅ）残渣に対してクロロホルム中約３％のメタノールによる第一の溶出を行うことにより（−）−マタイレジノールを得る工程、および
ｆ）工程（ｅ）の残渣に対して約５％のメタノールによる第二の溶出を行うことにより（−）−ウィクストロモルを得る工程
を含んでなる、方法。
【請求項１２】
溶媒がヘキサンおよびクロロホルムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ヒマラヤスギ植物の部分が、エッセンシャルオイルを抽出した後に残るヒマラヤスギの廃材から選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
（−）−ウィクストロモルの収量が植物乾燥材料の約４％である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
（−）−マタイレジノールの収量が植物乾燥材料の約０．０３％である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
化合物（−）−マタイレジノールが以下の分光化学的特性および物理特性を有するものである、請求項１１に記載の方法：
ａ）分子式Ｃ２０Ｈ２２Ｏ６；
ｂ）１Ｈ−ＮＭＲ： δ ２．５３（４Ｈ， ｍ）， ２．９５（２Ｈ， ｂｒ ｓ）， ３．８６（６Ｈ， ｓ）， ４．２０−４．４０（２Ｈ， ｍ）， ５．５０（２Ｈ，−ＯＨ）， ６．４０−６．８０（６Ｈ，ｍ）；
ｃ）１３Ｃ−ＮＭＲ： δ ３４．４８（Ｃ−８）， ３８．１０（Ｃ−８’）， ４０．９０（Ｃ−７）， ４６．６０（Ｃ−７’）， ４６．６０（Ｃ−７）， ５５．７０（２ Ｘ −ＯＭｅ）． ７１．３（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ）， １１１．０１， １１１．５３， １１４．１１， １１４．４０， １２１．２１， １２１．９５， １２８．３２， １２９．４５， １２９．７０， １４４，３０， １４６．３８（１２ Ｘ Ａｒ−Ｃ）， １７８，６４（−Ｃ＝Ｏ）；
ｄ）ＭＳ： ３５８（Ｍ＋）；
ｅ）ＩＲ： Ｃｍ−１ ３５６０（−ＯＨ）， １７６５ （γ−ラクトン）；
ｆ）［α］Ｄ： −３７．０９ （２８℃）。
【請求項１７】
化合物（−）−ウィクストロモルが以下の分光化学的特性および物理特性を有するものである、請求項１１に記載の方法：
ａ）分子式Ｃ２０Ｈ２２Ｏ７；
ｂ）１Ｈ−ＮＭＲ： ２．４０−２．５５（２Ｈ， ｍ）， ２．６５−２．８０ （２Ｈ， ｍ）， ３．１０−３．２０（１Ｈ， ｄ）， ３．８５（６Ｈ， ｄ）， ３．９５（２Ｈ，ｂｒ ｄ）， ５．６０（２Ｈ， ｄ）， ６．５０−６．８０（６Ｈ， ｍ）；
ｃ）１３Ｃ−ＮＭＲ： δ ３１．５０（Ｃ−７）， ４１．９０（Ｃ−８）， ４３．７４（Ｃ−７’）， ５５．９４（２ Ｘ −ＯＭｅ）， ７０．２６（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ）， ７６．３３（−Ｃ−ＯＨ）， １１１．５５， １１２．８１， １１４．３５， １１４．５６， １１６．８２， １２１．４２， １２３．１２， １２６．２０， １３０．３５， １４４．２７， １４４．９５， １４６．５９（１２ Ｘ Ａｒ−Ｃ）；
ｄ）ＭＳ： ３７４（Ｍ＋）；
ｅ）［α］Ｄ： −３０．９０ （２８℃）。
【請求項１８】
アテローム性動脈硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療を目的とする組成物の製造のための、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの使用。
【請求項１９】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールが、治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と組み合わせて投与されるものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択されるものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２１】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２２】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項１８に記載の使用。
【請求項２３】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与されるものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２４】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが経口投与されるものである、請求項１８に記載の使用。
【請求項２５】
抗酸化剤およびフリーラジカル消去剤としての（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの使用方法であって、
有効量の（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを、それを必要とする被験者に投与する工程を含んでなる、方法。
【請求項２６】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールが、治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と組み合わせて投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択されるものである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが経口投与される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
肝保護剤として有用な組成物の製造のための、（−）−ウィクストロモルの使用。
【請求項３３】
（−）−ウィクストロモルが、治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と組み合わせて投与されるものである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルの効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択されるものである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３５】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３６】
（−）−ウィクストロモルと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３７】
（−）−ウィクストロモルが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与されるものである、請求項３２に記載の使用。
【請求項３８】
（−）−ウィクストロモルが経口投与されるものである、請求項３２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、ヒマラヤスギ（Ｃｅｄｒｕｓ ｄｅｏｄａｒａ）植物からの有意な量の２種の化合物、すなわち（−）−マタイレジノール（４，４’−ジヒドロキシ−３，３’−ジメトキシリグナン−９，９’−オリド）および（−）−ウィクストロモル（４，４’，８−トリヒドロキシ−３，３’−ジメトキシリグナン−９，９’−オリド）の単離に関する。本発明はまた、肝保護剤として、また、抗酸化剤またはフリーラジカル消去剤としての前記化合物の使用に関する。
【０００２】
【背景技術】
化合物（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルそのものについては、それほど商業的価値は見出されていない。（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの構造式は図１に示されている。リグナンは被子植物および裸子植物に広く分布している。それらの構造および生物学的活性は広範囲にわたる。文献によれば、（−）−マタイレジノールがＣＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害活性を示すことが示されている［Ｗ． Ｄｏｎａｌｄ Ｍａｃｒａｅ ａｎｄ Ｇ．Ｈ． Ｎｅｉｌ Ｔｏｗｅｒｓ， Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｌｉｇｎａｎｓ， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２３ （６）， １２０７−２０ （１９８４）］。（−）−ウィクストロモルは、ｐ−３８８リンパ球白血病に対する活性および抗ＨＩＶ活性が認められている［Ｍ．Ｋ． Ｋｈａｍｌａｃｈ， Ｒ． Ｄｈａｌ ａｎｄ Ｅ． Ｂｒｏｗｎ； Ｐｒｅｍｉｅｒｅｓ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ ｔｏｔａｌｅｓ ｄｕ （＋）−ｗｉｋｓｔｒｏｍｏｌ， ｄｅ ｌａ （−）−Ｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎｅ， ｄｅ ｌａ （−）−Ｎｏｒｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎｅ ｅｔ ｄｅｓ ｌｉｇｎｏｉｄｅｓ ａｐｐａｒｅｎｔｅｓ − Ｔｅｔｒａｈｅｄｒａｎ ４８， １０１１５−１０１２６ （１９９２）］。
【０００３】
ヒマラヤスギの木部は、発汗性、利尿性および駆風性を有し、発熱、痔ならびに肺および尿道の疾患の治療に有用である。樹皮抽出物は収れん性であり、発熱、下痢および赤痢に有用である。ヒマラヤスギのオレオレジンおよび木部から得られる暗色のオイルは、潰瘍や皮膚疾患への適用に有用である［Ｗｅａｌｔｈ ｏｆ Ｉｎｄｉａ， Ｖｏｌ． ＩＩ， Ｐ．１０８−１０ （ＣＳＩＲにより１９５０年に発行）］。
【０００４】
文献を詳しく調べると、リグナン、すなわちセコ−イソラリシレジナールジグリコシド（ＳＤＧ）は多様な活性を有することが報告されており、亜麻仁から単離される（米国特許第５，８４６，９４４号明細書）。天然リグナンである（−）−マタイレジノールは、Ｈ標識５α−ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の、ヒト性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）への結合を低下させる［Ｍａｔｔｈｉａｓ Ｓｃｈｏｔｔｎｅｒａｎｄ Ｇｅｒｈａｒｄ Ｓｐｉｔｅｌｌｅｒ （Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ． １９９８， ６１， １１９−１２１）］。
【０００５】
Ｐ．Ｋ． Ａｇａｒｗａｌ ａｎｄ Ｒ．Ｐ． Ｒａｓｔｏｇｉ （Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｖｏｌ ２１， Ｎｏ ６， ｐｐ １４５９−１４６１， １９８２）は、ヒマラヤスギからの２種のリグナン、メソ−セコイソラリシレジノールおよびセドルシニンの単離について報告している。
【０００６】
ウィクストロエミア・ビリジフローラ（Ｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ ｖｉｒｉｄｉｆｌｏｒａ）から（−）−マタイレジノールが０．１０％の収率で、また（−）−ウィクストロモルが０．１２４％の収率で単離されたことが報告されている（Ｗｉｋｓｔｒｏｍｏｌ， ａ ｎｅｗ ｌｉｇｎａｎ ｆｒｏｍ Ｗｉｋｓｔｒｏｅｍｉａ ｖｉｒｉｄｉｆｌｏｒａ − Ｓｈｅｅｌａ Ｔａｎｄｏｎ ａｎｄ Ｒ．Ｐ． Ｒａｓｔｏｇｉ； Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９７６， ｖｏｌ １５， ｐｐ １７８９−１７９１）。
【０００７】
カリッサ・エヅリス（Ｃａｒｉｓｓａ ｅｄｕｌｉｓ）から、リグナンおよびその他の成分、すなわち（−）−ノルトラチェロゲニン、カリノールおよびカリッサノールが抽出されたことが報告されている（Ｈａｎｓ Ａｃｈｅｎｂａｃｈ， Ｒｅｉｎｅｒ Ｗａｉｂｅｌ ａｎｄ Ｉｖａｎ Ａｄｄａｅ−Ｍｅｎｓａｈ， Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， Ｖｏｌ． ２２， Ｎｏ． ３， ｐｐ． ７４９−７５３， １９８３）。
【０００８】
果物や野菜の豊富な食事と循環器疾患およびある種の癌のリスクの軽減との間の関連を示す多くの疫学的証拠がある。一般に、これらの保護作用に寄与する有効成分は抗酸化性の植物化学物質以外の何ものでもないと考えられる。
【０００９】
最近の研究は、抗酸化剤、抗変異剤、抗炎症剤、抗アテローム性動脈硬化剤（ａｎｔｉａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃ）、抗糖尿病剤、抗肝毒性剤、および抗微生物剤としての植物材料のポリフェノール化合物の役割に着目して植物源から植物化学物質を見つけ出すことに向けられている［Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｆｌａｘ ｌｉｇｎａｎｓ ｂｙ Ｎｅｉｌ Ｄ． Ｗｅｓｔｃｏｔｔ ａｎｄ Ａｌｉｓｔｅｒ Ｄ． Ｍｕｉｒ， Ｃｒｏｐ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ Ｓｅｃｔｉｏｎ， Ｓａｓｋａｔｏｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ， Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ａｇｒｉ−Ｆｏｏｄ Ｃａｎａｄａ， １０７， Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｌａｃｅ， Ｓａｓｋａｔｏｏｎ， ＳＫ Ｓ７Ｎ ０Ｘ２， Ｃａｎａｄａ ｉｎ Ｖｏｌｕｍｅｎ ＩＩ − Ｊａｎｕａｒｙ ２０００ − ｉｎｆｏｒｍ］。ヒマラヤスギ幹のアルコール抽出物は抗癌活性を有することが見出されている［Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｉｎｄｉａ （ＩＣＭＲ） Ｖｏｌ． Ｉ， １９７６， ｐｐ．２１４−２１５］。
【００１０】
抗酸化性の有効成分の医学的意義は、加齢性疾患にフリーラジカルを媒介とする酸化ストレスが関わっていることから、重要なものとなっている。
【００１１】
フリーラジカルは、不対電子を含む高いエネルギーを持った分子である。これらは、酸素が関与する通常の生物プロセスや環境プロセスによって発生し、さらに多くのフリーラジカルを作り出す連鎖反応の引き金となりうる。通常、体内で生じるフリーラジカルとそれらから保護する抗酸化性物質との間では、量的なバランスが保たれている。しかし、体内に存在する天然の抗酸化剤はフリーラジカルの適度な生成にしか対処できず、フリーラジカルの負荷がさらにかかったり、抗酸化剤による保護が不足したりすると、このバランスが傾いて酸化ストレスが生じる。
【００１２】
疾患の緩和に有用な製剤の製造のため、天然源から単離されたフリーラジカル消去剤または抗酸化性の有効成分が必要とされている。このことから、関連する重要な生物学的特性を有する他のリグナンを探索することが必要となる。
【００１３】
従って、本発明者らはヒマラヤスギ由来の成分に関して詳細な研究を行い、この検討から２種の有効成分、すなわちマタイレジノールとウィクストロモルの単離に至った。これらの化合物はこれまでにウィクストロミア種から単離されているが、収量は低いものである。よって、ヒマラヤスギはこれらリグナンの新たな供給源であり、それらがこの分類群に著しく高い量で存在することから、本発明はより重要なものとなる。
【００１４】
【発明の開示】
本発明の第一の目的は、フリーラジカル消去剤または抗酸化剤としての、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの使用に関する。
【００１５】
本発明の他の目的は、肝保護剤として有用な（−）−ウィクストロモルの使用に関する。
【００１６】
本発明の他の目的は、ヒマラヤスギからの（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの単離方法を提供することにある。
【００１７】
本発明の他の目的は、アテローム性動脈硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療方法を提供することにある。
【００１８】
【発明の概要】
従って、本発明によれば、フリーラジカル消去剤および抗酸化剤として有用な、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを含有する新規な組成物が提供される。また、本発明によれば、肝保護剤として有用な、（−）−ウィクストロモルを含有する新規な組成物が提供される。さらに、本発明によれば、ヒマラヤスギからの（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの単離方法、ならびにアテローム性動脈硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療のためのこれら化合物の使用が提供される。
【００１９】
【発明の具体的説明】
従って、本発明によれば、有効量の（−）−ウィクストロモルを、添加剤とともにまたは添加剤と会合して含んでなる、抗酸化剤として有用な組成物が提供される。
【００２０】
一つの実施態様によれば、本発明による組成物は有効量の（−）−マタイレジノールを添加剤とともに含有し、これは抗酸化剤として有用なものである。
【００２１】
他の実施態様によれば、本発明による組成物は有効量の（−）−ウィクストロモルを、添加剤とともにまたは添加剤と会合して含有し、これは肝保護剤として有用なものである。
【００２２】
一つの実施態様によれば、前記添加剤は、本発明による組成物の有効成分の効力に影響しない、またはこれを妨害しないように選択される。前記添加剤は、有効成分、すなわち（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの活性を増進するものであってもよいが、これを妨げるものではない。
【００２３】
他の実施態様によれば、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率は、０．１：１０〜２：１０の範囲である。
【００２４】
他の実施態様によれば、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールは、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの量で存在する。
【００２５】
さらに、本発明によれば、ヒマラヤスギから（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを単離する方法が提供され、該方法は以下の工程を含んでなるものである：
ａ）ヒマラヤスギ植物の部分を微粉砕したものを溶媒で抽出してエッセンシャルオイルを除去する工程；
ｂ）抽出物を減圧下で濃縮して残渣を得る工程；
ｃ）工程（ｂ）で得られた残渣に酢酸エチルを添加する工程；
ｄ）常法により溶媒を分離する工程；
ｅ）残渣に対してクロロホルム中約３％のメタノールによる第一の溶出を行うことにより（−）−マタイレジノールを得る工程；および
ｆ）工程（ｅ）の残渣に対して約５％のメタノールによる第二の溶出を行うことにより（−）−ウィクストロモルを得る工程。
【００２６】
工程（ａ）において用いられる溶媒は、ヘキサンおよびクロロホルムである。
【００２７】
他の実施態様によれば、樹皮および葉などのヒマラヤスギ植物の部分が抽出に用いられる。
【００２８】
他の実施態様によれば、ヒマラヤスギ植物の廃棄される部分が前記化合物の単離に用いられる。好ましくは、植物部分からエッセンシャルオイルを抽出した後に残る廃材が前記方法に用いられる。
【００２９】
例えば、Ｉｎｆｏｒｍ Ｖｏｌ．１１， ｐｇ．１１８−１２１の論文など、酸素フリーラジカルが動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の発症の一因であること、さらには、抗酸化剤が高コレステロール血症性動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の防止に有用であることを示唆する十分な文献がある。
【００３０】
従って、本発明によれば、動脈硬化症（ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療が提供され、この治療においては、有効量の（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを含有する組成物がそれを必要とする被験者に投与される。
【００３１】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールは、治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と組み合わせて投与してもよい。被験者に投与する（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールの有効量は、当業者であれば容易に決定することができるが、投与する（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールの用量は、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲が奨励される。本発明による組成物は、経口投与および全身投与することができるが、経口投与により望ましい最良の結果がもたらされる。
【００３２】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールを用いた組成物は当技術分野で公知の常法によって製造することができる。この組成物は、錠剤、カプセル剤またはシロップ剤などの形態をとってもよい。これらの組成物の製造のためには、当技術分野で公知の適切な添加剤を選択すればよい。
【００３３】
本質的には、本発明は、フリーラジカル消去剤および抗酸化剤として有用な（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノール組成物の使用方法、および肝保護剤としての（−）−ウィクストロモルの使用方法を提供するものである。
【００３４】
ヒマラヤスギの芯材は、エッセンシャルオイル産業において幅広い用途が見出されている。このオイルは、「シーダー材」オイルとして、フレーバー（食品香料）およびフレグランス（香水・化粧品香料）としての用途が見出されている。エッセンシャルオイル抽出後のこの芯材粉末は副産物であり、廃材である。本発明は、ヒマラヤスギからの化合物（−）−ウィクストロモルおよび（−）−マタイレジノールの単離および精製、ならびに抗酸化剤および肝保護剤としてのそれらの使用に関する。
【００３５】
本発明は、新たな供給源であるヒマラヤスギからの２種の化合物、すなわち（−）−マタイレジノール（４，４’−ジヒドロキシ−３，３’−ジメトキシリグナン−９，９’−オリド）および（−）−ウィクストロモル（４，４’，８−トリヒドロキシ−３，３’−ジメトキシリグナン−９，９’−オリド）の単離に関する。本発明はまた、抗酸化剤および肝保護剤としての、またアテローム性動脈硬化症（ａｔｈｅｒｅｓｃｌｏｒｏｓｉｓ）の治療のための前記化合物の新たな使用に関する。
【００３６】
本発明は、全く新しい供給源からの２種の抗酸化剤成分、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの単離、および生物学的に証明されている公知の抗フリーラジカル剤、抗異常脂血症（ａｎｔｉ ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉｃ）作用および抗肝毒性作用に対し、それらのフリーラジカル消去特性を具体化するものである。
【００３７】
以下、本発明の具体例のいくつかを例として示すが、これは本発明の範囲を限定するものではない。
【００３８】
実施例１
マタイレジノールおよびウィクストロモルの単離方法の実験プロトコール
ヒマラヤスギの乾燥木材粉末２００ｇをソックスレー装置に充填した。この粉末をまずヘキサンで抽出して、エッセンシャルオイル組成物を除去した。ヘキサン抽出による残渣をクロロホルムでさらに抽出した。このクロロホルム抽出物を減圧下で濃縮した。濃厚なシロップ状の残渣を、残渣約５０ｇにつき酢酸エチル６０ｍｌ前後として、酢酸エチルに溶解した。残渣の酢酸エチル溶液を約５Ｌのヘキサン中に滴下した。分離した固体３５ｇを濾別した。
【００３９】
この固体をシリカゲルカラム（６０　１２０メッシュ、３．５ｃｍ径）に充填した。カラムは高さ６０ｃｍまで装填した。カラムをまずクロロホルムで、次にクロロホルム中３％のメタノールで溶出してマタイレジノールを得た。
【００４０】
このカラムをさらにクロロホルム中５％のメタノールで溶出し、（−）−ウィクストロモルを得た。
【００４１】
（−）−マタイレジノールの収量は約０．０６ｇである。
【００４２】
（−）−ウィクストロモルの収量は約８．０ｇである。
【００４３】
化合物（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルは９０％の純度で得られた。
【００４４】
（−）−マタイレジノールおよびウィクストロモルの分光化学的特性および物理特性は以下の通りである。
【００４５】
（−）−マタイレジノール：
１．分子式：Ｃ２０Ｈ２２Ｏ６；
２．１Ｈ−ＮＭＲ： δ ２．５３（４Ｈ， ｍ）， ２．９５（２Ｈ， ｂｒ ｓ）， ３．８６（６Ｈ， ｓ）， ４．２０−４．４０（２Ｈ， ｍ）， ５．５０（２Ｈ，−ＯＨ）， ６．４０−６．８０（６Ｈ，ｍ）；
３．１３Ｃ−ＮＭＲ： δ ３４．４８（Ｃ−８）， ３８．１０（Ｃ−８’）， ４０．９０（Ｃ−７）， ４６．６０（Ｃ−７’）， ４６．６０（Ｃ−７）， ５５．７０（２ Ｘ −ＯＭｅ）， ７１．３（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ）， １１１．０１， １１１．５３， １１４．１１， １１４．４０， １２１．２１， １２１．９５， １２８．３２， １２９．４５， １２９．７０， １４４，３０， １４６．３８（１２ Ｘ Ａｒ−Ｃ）， １７８．６４（−Ｃ＝Ｏ）；
４．ＭＳ： ３５８（Ｍ＋）；
５．ＩＲ： Ｃｍ−１ ３５６０（−ＯＨ）， １７６５ （γ−ラクトン）；
６．［α］Ｄ： −３７．０９ （２８℃）。
【００４６】
（−）−ウィクストロモル：
１．分子式Ｃ２０Ｈ２２Ｏ７；
２．１Ｈ−ＮＭＲ： ２．４０−２．５５（２Ｈ， ｍ）， ２．６５−２．８０ （２Ｈ， ｍ）， ３．１０−３．２０（１Ｈ， ｄ）， ３．８５（６Ｈ， ｄ）， ３．９５（２Ｈ，ｂｒ ｄ）， ５．６０（２Ｈ， ｄ）， ６．５０−６．８０（６Ｈ， ｍ）；
３．１３Ｃ−ＮＭＲ： δ ３１．５０（Ｃ−７）， ４１．９０（Ｃ−８）， ４３．７４（Ｃ−７’）， ５５．９４（２ Ｘ −ＯＭｅ）， ７０．２６（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ）， ７６．３３（−Ｃ−ＯＨ）， １１１．５５， １１２．８１， １１４．３５， １１４．５６， １１６．８２， １２１．４２， １２３．１２， １２６．２０， １３０．３５， １４４．２７， １４４．９５， １４６．５９（１２ Ｘ Ａｒ−Ｃ）；
４．ＭＳ： ３７４（Ｍ＋）；
５．［α］Ｄ： −３０．９０ （２８℃）。
【００４７】
実施例２
フリーラジカル消去抗酸化力のｉｎ ｖｉｔｒｏ評価
化合物（（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモル）の抗酸化活性を、最も広く用いられているフリーラジカルである２，２−ジフェニル−１−ピクリルヒドロキシルラジカル（ＤＰＰＨ）を消去するそれらの能力／効力として試験した。十分に認知され、試験されているプロブコールおよびα−トコフェロールを参照化合物とした。１ｍｇ／ｍｌＤＭＳＯの濃度の化合物［（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモル］を調製し、ＤＭＳＯでより低い濃度に連続希釈し、試験化合物１００ｍｌをトリス塩酸バッファー（ｐＨ７．４）中１ｍｌに再構成し、エタノールに溶解した５００μｍの等容量のＤＰＰＨラジカルをこれと反応させた。暗所で４５分間インキュベートした後、５１７ｎｍでの吸光度を測定した。化合物を含まないラジカルを対照とし、ラジカル消去活性（％）を算出した。読み取り値は総て３回測定した。その結果（図２（ａ）および（ｂ）ならびに図３）により、検討した化合物が参照標準より高い抗酸化／ラジカル消去力を有することが示される。図２（ａ）および（ｂ）は、一般に用いられているプロブコールおよびビタミンＥとの比較における（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの抗酸化活性のデータを示す。試験化合物は一貫して参照化合物よりもずっと低い濃度でより高い抗酸化活性を示すということが十分認められる。
【００４８】
実施例３
四塩化炭素はフリーラジカルを媒介とする肝毒性を誘導するための常法である。フリーラジカル媒介性肝毒性および化合物（−）−ウィクストロモルの肝保護特性を評価するため、この方法を用いた。実験用に雄ウイスターラットを選んだ。この化合物を少量のＤＭＳＯに溶解し、アラビアガム／水で再構成した。一晩絶食させたラットに、ＣＣｌ４を投与する１時間前にこの化合物を２５０ｍｇ／体重ｋｇの量で経口投与した。１時間後、ＣＣｌ４と液体パラフィンの混合物（１：１，ｖ／ｖ）を２．５ｍｌ／ｋｇの量で経口投与した。絶食は継続させたが、水は自由に与えた。ＣＣｌ４投与の５時間後、眼窩後方叢から採血した。肝毒性のマーカーとして、血清アスパラギン酸トランスアミナーゼおよび血清アラニントランスアミナーゼを測定した。表１および図３は、化合物（−）−ウィクストロモルによって有意な保護がもたらされることを示す。図３は、ラットにおいて（−）−ウィクストロモルがＣＣｌ４によって誘発される毒性を有意に保護することを示す。
【００４９】
【表１】
2004512308.tif 000002
【００５０】
本発明を実施することにより、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルが新たな供給源、すなわちヒマラヤスギ植物から多量に単離されることが分かった。また、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルは抗酸化特性および肝保護特性を示すことが分かった。
【００５１】
【発明の効果】
最近、抗酸化化合物は、多様な起源の疾患、すなわち疾病の原因／増長にフリーラジカルが重要な役割を果たす冠動脈性心疾患、癌、糖尿病、リウマチ性疾患および炎症症状におけるそれらの広域な活性により注目を寄せられている。今では、天然源からの抗酸化化合物の活用および獲得が大いに注目されている。
【００５２】
化合物（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルは純粋な形態で用いられる。
【００５３】
このことから、現在用いられている同様の特性を有する化合物の混合物よりも有利に使用できる。（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの単離方法は、広く用いられている抗酸化剤であるトコフェロールの単離に比べて極めて経済的であることに着目することも重要である。
【００５４】
（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルは９０％を超える高い純度で用いられる。それらは動物において２５０ｍｇ／体重ｋｇの用量で投与すれば極めて効果的であることが分かっている。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルの構造式を示す。
【図２（ａ）】
図２（ａ）は、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルのフリーラジカル活性を示すグラフである。
【図２（ｂ）】
図２（ｂ）は、（−）−マタイレジノールおよび（−）−ウィクストロモルのフリーラジカル活性を示すグラフである。
【図３】
図３は、（−）−ウィクストロモルの肝保護活性を示すグラフである。
【図１】
2004512308.tif 000003
【図２（ａ）】
2004512308.tif 000004
【図２（ｂ）】
2004512308.tif 000005
【図３】
2004512308.tif 000006
【国際公開パンフレット】
2004512308.tif 000007
2004512308.tif 000008
2004512308.tif 000009
2004512308.tif 000010
2004512308.tif 000011
2004512308.tif 000012
2004512308.tif 000013
2004512308.tif 000014
2004512308.tif 000015
2004512308.tif 000016
2004512308.tif 000017
2004512308.tif 000018
2004512308.tif 000019
2004512308.tif 000020
2004512308.tif 000021
2004512308.tif 000022
2004512308.tif 000023
2004512308.tif 000024
【手続補正書】
【提出日】平成15年2月18日(2003.2.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを、添加剤とともに含んでなる、抗酸化剤またはフリーラジカル消去剤として有用な医薬組成物。
【請求項２】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に変化をもたらさないように選択されるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールの量が、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
有効量の（−）−ウィクストロモルを添加剤とともに含んでなる、肝保護剤として有用な医薬組成物。
【請求項７】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルの効力に変化をもたらさないように選択されるものである、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項２に記載の組成物。
【請求項９】
（−）−ウィクストロモルと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１０】
（−）−ウィクストロモルの量が、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲である、請求項２に記載の組成物。
【請求項１１】
ヒマラヤスギ植物から（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールを単離する方法であって、
ａ）ヒマラヤスギ植物の部分を微粉砕したものを炭化水素溶媒で抽出してエッセンシャルオイルを除去する工程、
ｂ）抽出の後に残された工程（ａ）の植物残渣を炭化水素溶媒で抽出し、ハロゲン化溶媒で抽出して、ハロゲン化溶媒中の抽出物を得る工程、
ｃ）工程（ｂ）の抽出物を減圧下で濃縮して濃厚なシロップ状の残渣を得る工程、
ｄ）工程（ｃ）の濃厚なシロップ状の残渣を酢酸エチル中に溶解させて溶液を得る工程、
ｅ）工程（ｄ）の酢酸エチル溶液を攪拌下のヘキサン溶液中に滴下して固体を得る工程、
ｆ）工程（ｅ）の固体を濾過して粗生成物を得る工程、および
ｇ）工程（ｆ）の粗生成物を、シリカゲルカラム上、クロロホルムで溶出することによって精製し、その後、クロロホルム中３％のメタノールによる溶出により（−）−マタイレジノールを回収し、さらに、クロロホルム中５％のメタノールによる溶出により（−）−ウィクストロモルを回収する工程
を含んでなる、方法。
【請求項１２】
前記工程（ａ）において用いられる炭化水素溶媒がヘキサンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記工程（ａ）において用いられるハロゲン化溶媒がクロロホルムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ヒマラヤスギ植物の部分が、樹皮または葉から選択されるものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
（−）−ウィクストロモルの収量が植物乾燥材料の約４％である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
（−）−マタイレジノールの収量が植物乾燥材料の約０．０３％である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
アテローム性動脈硬化症（ａｒｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）の治療を目的とする組成物の製造のための、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの使用。
【請求項１８】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールが、治療上許容される添加剤とともに投与されるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に変化をもたらさないように選択されるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２０】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２１】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項１７に記載の使用。
【請求項２２】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与されるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２３】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが経口投与されるものである、請求項１７に記載の使用。
【請求項２４】
抗酸化剤およびフリーラジカル消去剤としての（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの使用方法であって、
有効量の（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールを含有する組成物を、それを必要とする被験者に投与する工程を含んでなる、方法。
【請求項２５】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールが、治療上許容される添加剤とともに、または治療上許容される添加剤と組み合わせて投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールの効力に変化をもたらさないように選択されるものである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
（−）−ウィクストロモルおよび／または（−）−マタイレジノールと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３０】
（−）−ウィクストロモルまたは（−）−マタイレジノールが経口投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３１】
肝保護剤として有用な組成物の製造のための、（−）−ウィクストロモルの使用。
【請求項３２】
（−）−ウィクストロモルが、治療上許容される添加剤とともに投与されるものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
添加剤が、（−）−ウィクストロモルの効力に変化をもたらさないように選択されるものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
添加剤が、炭水化物、タンパク質、糖および医薬上許容される担体などの栄養成分から選択されるものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３５】
（−）−ウィクストロモルと添加剤との比率が０．４：１０〜２：１０の範囲である、請求項３１に記載の使用。
【請求項３６】
（−）−ウィクストロモルが、一日二回、一回用量当たり２５０〜３００ｍｇの範囲で投与されるものである、請求項３１に記載の使用。
【請求項３７】
（−）−ウィクストロモルが経口投与されるものである、請求項３１に記載の使用。
【国際調査報告】
2004512308.tif 000025
2004512308.tif 000026
2004512308.tif 000027