(57)【要約】ステロイド環系およびＲ１基を含有する化合物が提供され、該Ｒ１基は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種から選択され、ここで、該ステロイド環系のＤ環は、式−Ｌ−Ｒ３のＲ２基で置換され、ここで、Ｌは、任意のリンカー基であり、そしてＲ３は、芳香族ヒドロカルビル基である。本発明は、ある種の化合物が、有効なステロイドスルファターゼ阻害剤として、および／または細胞周期に影響を与えることができる試薬として、および／またはアポトーシスに影響を与えることができる試薬として使用できるという驚くべき発見に基づいている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ステロイド環系およびＲ１基を含有する化合物であって、該Ｒ１基は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種から選択され、ここで、該ステロイド環系のＤ環は、式−Ｌ−Ｒ３のＲ２基で置換され、ここで、Ｌは、任意のリンカー基であり、そしてＲ３は、芳香族ヒドロカルビル基である、
化合物。
【請求項２】
前記化合物が、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、そして／あるいは細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞成長のモジュレーターとして作用できる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉである、請求項１または２に記載の化合物：
【化１】
2004511441.tif 000051
【請求項４】
式ＩＩである、請求項１または２に記載の化合物：
【化２】
2004511441.tif 000052
【請求項５】
式ＩＩＩである、請求項１または２に記載の化合物：
【化３】
2004511441.tif 000053
【請求項６】
式ＩＶである、請求項１または２に記載の化合物：
【化４】
2004511441.tif 000054
【請求項７】
前記ステロイド環系のＡ環が、Ｒ４基で置換されており、ここで、Ｒ４が、ヒドロカルビル基である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４が、オキシヒドロカルビル基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４が、アルコキシ基である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４が、メトキシである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ４が、炭化水素基である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ４が、アルキル基である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ４が、エチルである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
前記Ａ環が、Ｒ１で置換され、そしてＲ４が、Ｒ１に関してオルトで置換されている、請求項７〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ４が、前記Ａ環の２位置にある、請求項７〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、少なくとも２個またはそれ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含有する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、少なくとも２個のスルファメート基を含有する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
前記化合物が、少なくとも２個のスルファメート基を含有し、ここで、該スルファメート基が、同じ環上にはない、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
前記Ａ環が、少なくとも１個のスルファメート基を含有し、そして、前記Ｄ環が、少なくとも１個のスルファメート基を含有する、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ１が、スルファメート基である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ３が、芳香環であるかまたは芳香環を含有する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ３が、６員環芳香環であるかまたは６員環芳香環を含有する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ３が、炭素および必要に応じて窒素を含有する６員環芳香環であるか、または炭素および必要に応じて窒素を含有する６員環芳香環を含有する、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
前記芳香環が、Ｒ５基で置換されている、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ５が、ヒドロカルビルおよびハロゲンから選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ５が、炭化水素およびハロゲンから選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ５が、アルキルおよびハロゲンから選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ５が、Ｃ１〜１０アルキル、好ましくは、Ｃ１〜５アルキル、およびハロゲンから選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｌが、ヒドロカルビル基である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｌが、炭化水素基である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３１】
Ｌが、アルキル基である、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｌが、Ｃ１〜１０アルキル、好ましくは、Ｃ１〜５アルキル、好ましくは、Ｃ１アルキルまたはＣ２アルキルから選択される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ２基が、以下から選択される、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の化合物：
【化５】
2004511441.tif 000055
【請求項３４】
Ｒ２基が、α立体配座である、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ２基が、前記Ｄ環の１７位上でα立体配座である、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３６】
以下の工程を包含する、方法：
（ａ）請求項１〜３５のいずれか１項で規定した式を有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；
（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できるか否かを決定する工程；および
（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【請求項３７】
以下の工程を包含する、方法：
（ａ）請求項１〜３５のいずれか１項で規定した式を有する１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；
（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性を阻害できるか否かを決定する工程；および
（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【請求項３８】
請求項３６または請求項３７に記載の方法により同定された、化合物。
【請求項３９】
薬剤で使用する、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４０】
必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと混合した、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の化合物を含有する、薬学的組成物。
【請求項４１】
ＳＴＳおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患の治療に使用するための医薬品の製造における、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項４２】
有害ＳＴＳレベルおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患の治療に使用するための医薬品の製造における、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、化合物に関する。
【０００２】
特に、本発明は、化合物およびその化合物を含有する薬学的組成物に関する。本発明はまた、この化合物または組成物を治療用途で使用することに関する。
【０００３】
（発明の背景）
エストロゲンは内分泌依存性組織（例えば、胸部または子宮内膜）での腫瘍の成長を促進する際に関与している主要な有糸分裂促進因子であるということを、証拠が示唆している。血漿エストロゲン濃度は、乳癌がある女性と乳癌がない女性とで類似しているものの、乳房腫瘍エストロンおよびエストラジオールのレベルは、正常な乳房組織または血液中よりも著しく高い。エストロゲンのインサイチュでの合成は、腫瘍内の高いレベルのエストロゲンに大きく寄与していると考えられており、従って、エストロゲン生合成の阻害剤（特に、特異的阻害剤）は、内分泌依存性腫瘍の治療に対して、潜在的に重要となる。
【０００４】
過去２０年間にわたって、アンドロゲン前駆体であるアンドロステンジオンをエストロンに転化するアロマターゼ経路の阻害剤を開発することに、相当な関心が集まっている。しかしながら、現在、エストロンスルファターゼ（Ｅ１−ＳＴＳ）経路（すなわち、エストロンサルフェートのエストロン（Ｅ１ＳからＥ１）への加水分解）は、このアロマターゼ経路とは対照的に、乳房腫瘍での主要なエストロゲン源であるという証拠がある。この理論は、乳癌をアロマターゼ阻害剤（例えば、アミノグルテチミドおよび４−ヒドロキシアンドロステンジオン）で治療した閉経後の女性での血漿エストロゲン濃度の緩やかな減少により、また、これらのアロマターゼ阻害剤治療を受けた患者での血漿Ｅ１Ｓ濃度が比較的高いままであるという事実により、支持されている。非共役エストロゲンの半減期（２０分間）と比較した血液中のＥ１Ｓの長い半減期（１０〜１２時間）、ならびに肝臓、および正常な乳房組織および悪性の乳房組織における高いレベルのステロイドスルファターゼ活性もまた、この理論を支持している。
【０００５】
ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８７は、エストロン依存性の腫瘍（特に、乳癌）の治療で使用する新規なステロイドスルファターゼ阻害剤およびそれらを含有する薬学的組成物を教示している。これらのステロイドスルファターゼ阻害剤は、スルファミン酸エステル（例えば、エストロン−３−スルファミン酸Ｎ，Ｎ−ジメチル、および好ましくは、エストロン−３−スルファメート；これは、別に、「ＥＭＡＴＥ」として知られている）である。ＥＭＡＴＥは、以下の構造を有する：
【０００６】
【化６】
2004511441.tif 000002
ＥＭＡＴＥは、０．１ｍＭで無傷ＭＣＦ−７細胞においてＥ１−ＳＴＳ活性を９９％より高く阻害するので、強力なＥ１−ＳＴＳ阻害剤であることが知られている。ＥＭＡＴＥはまた、時間および濃度に依存した様式で、Ｅ１−ＳＴＳ酵素を阻害し、このことは、それが活性部位指向失活剤として作用することを意味している。ＥＭＡＴＥは、最初は、Ｅ１−ＳＴＳを阻害するために設計されたものの、これらはまた、デヒドロエピアンドロステロンスルファターゼ（ＤＨＡ−ＳＴＳ）（これは、エストロゲン性ステロイドアンドロステンジオールの生合成を制御する際に中心的な役割を果たすと考えられている酵素である）も阻害する。また、現在では、アンドロステンジオールが、乳房腫瘍の成長の促進剤として、さらに重要であり得ることを示唆する証拠がある。ＥＭＡＴＥはまた、経口投与または皮下投与のいずれかで投与したときに生じるラット肝臓のＥ１−ＳＴＳ活性（９９％）およびＤＨＡ−ＳＴＳ活性（９９％）の殆ど完全な阻害として、インビボで活性である。さらに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて、記憶増強効果を有することが示された。マウスでの研究により、ＤＨＡ−ＳＴＳ活性と免疫応答の一部の制御との間の関係が示唆された。これはまた、ヒトでも起こり得ると考えられている。ＥＭＡＴＥでのスルファメート部分の架橋Ｏ原子は、阻害活性に重要である。それゆえ、エストロゲン−３−Ｎ−スルファメートおよびエストロゲン−３−Ｓ−スルファメートのように、この３−Ｏ原子が他のヘテロ原子で置換されるとき、これらの類似物は、より弱い時間非依存性失活剤である。
【０００７】
Ｅ１−ＳＴＳの阻害に最適な効力は、ＥＭＡＴＥで達成され得るものの、スルファターゼ阻害中にてエストロンが放出され得る可能性があり、また、ＥＭＡＴＥおよびそのエストロゲン性コンジナーがエストロゲン性活性を有し得る可能性がある。
【０００８】
Ａｈｍｅｄら（Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ　１９９９年１月２７日；２５４（３）：８１１−５）は、ＳＴＳのステロイド性阻害剤および非ステロイド性阻害剤の構造−活性関係研究について報告している。
【０００９】
本発明は、Ｅ１−ＳＴＳの阻害だけでなく他の治療用途に適切な新規化合物を提供しようと試みる。
【００１０】
（発明の要旨）
本発明は、ある種の化合物が、有効なステロイドスルファターゼ阻害剤として、および／または細胞周期に影響を与えることができる試薬として、および／またはアポトーシスに影響を与えることができる試薬として使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１１】
１局面では、本発明は、ある種のＤ環置換ステロイド性化合物が、有効なステロイドスルファターゼ阻害剤として、および／または細胞周期のモジュレーターとして、および／またはアポトーシスのモジュレーターとして使用できるという驚くべき発見に基づいている。
【００１２】
このステロイド環系化合物はまた、その環系上のさらに別の置換基として、１個またはそれ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含有する。このスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基の少なくとも１個は、その環成分上の置換基である。
【００１３】
本発明の化合物は、他の置換基を含有し得る。これらの他の置換基は、例えば、本発明の化合物の活性をさらに高め得、および／または（エキソビボおよび／またはインビボでの）安定性を高め得る。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明の１局面によれば、ステロイド環系およびＲ１基を含有する化合物が提供され、該Ｒ１基は、スルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基のいずれか１種から選択され、ここで、該ステロイド環系のＤ環は、式−Ｌ−Ｒ３のＲ２基で置換され、ここで、Ｌは、任意のリンカー基であり、そしてＲ３は、芳香族ヒドロカルビル基である。
【００１５】
本発明のある化合物については、前記ステロイド環の前記Ｄ環の１７位が、Ｒ２基で置換されていることは、非常に好ましい。
【００１６】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）本発明の１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを調節できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００１７】
本発明の１局面によれば、以下の工程を包含する方法が提供される：（ａ）本発明の１種またはそれ以上の候補化合物を使って、ステロイドスルファターゼアッセイを実行する工程；（ｂ）該候補化合物の１種またはそれ以上がＳＴＳ活性を阻害できるかどうかを決定する工程；ならびに（ｃ）ＳＴＳ活性および／または細胞周期および／または細胞成長および／またはアポトーシスを阻害できる該候補化合物の１種またはそれ以上を選択する工程。
【００１８】
本発明の方法のいずれか１方法では、１個またはそれ以上の追加工程が存在し得る。例えば、前記方法はまた、（例えば、化学技術および／または酵素技術により）同定した候補化合物を変性する工程および変性した化合物をＳＴＳ阻害効果について試験する任意の追加工程（これは、その効果が大きいか異なるかを調べるためにあり得る）を包含し得る。さらに別の例として、該方法はまた、（例えば、結晶学的技術を使用することにより）同定した候補化合物の構造を決定する工程、次いで、例えば、そのＳＴＳ阻害活性をさらに高めるために、コンピューターモデル化研究を実行する工程を包含し得る。それゆえ、本発明はまた、該同定した候補化合物についてのデータセット（例えば、結晶座標）を有するコンピューターを包含する。本発明はまた、分析（例えば、タンパク質結合研究）のためにコンピュータースクリーンに提示されているときの同定した候補化合物を包含する。
【００１９】
本発明の１局面によれば、本発明の方法により同定された化合物が提供される。
【００２０】
本発明の１局面によれば、薬剤で使用する本発明の化合物が提供される。
【００２１】
本発明の１局面によれば、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと混合した本発明の化合物を含有する薬学的組成物が提供される。
【００２２】
本発明の１局面によれば、ＳＴＳおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２３】
本発明の１局面によれば、有害なＳＴＳレベルおよび／または細胞周期および／またはアポトーシスおよび／または細胞成長に関連した状態または疾患を治療する際に使用する医薬品の製造における本発明の化合物の使用が提供される。
【００２４】
本発明はまた、本発明の新規化合物（例えば、本明細書中で提示したもの）だけでなく、それらを製造する方法（例えば、本明細書中で提示した方法）およびこれらの方法で使用する新規中間体（例えば、本明細書中で提示したもの）を包含する。
【００２５】
参照し易くするために、本発明のこれらの局面およびさらに別の局面は、現在、適切な節の表題で、論述する。しかしながら、各節での教示は、必ずしも、各特定の節には限定されない。
【００２６】
（好ましい局面）
好ましくは、本発明の化合物は、ステロイドスルファターゼ（ＳＴＳ）活性を阻害できるか、および／または細胞周期のモジュレーターおよび／またはアポトーシスのモジュレーターおよび／または細胞成長のモジュレーターとして作用できる。
【００２７】
好ましくは、本発明の化合物は、式Ｉである：
【００２８】
【化７】
2004511441.tif 000003
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩである：
【００２９】
【化８】
2004511441.tif 000004
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩａである：
【００３０】
【化９】
2004511441.tif 000005
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＩＩである：
【００３１】
【化１０】
2004511441.tif 000006
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＶである：
【００３２】
【化１１】
2004511441.tif 000007
好ましくは、本発明の化合物は、式ＩＶａである：
【００３３】
【化１２】
2004511441.tif 000008
好ましくは、前記ステロイド環系のＡ環は、Ｒ４基で置換されており、ここで、Ｒ４は、ヒドロカルビル基である。
【００３４】
好ましい１局面では、Ｒ４は、オキシヒドロカルビル基である。
【００３５】
好ましくは、Ｒ４は、アルコキシ基（例えば、Ｃ１〜１０アルコキシ、Ｃ１〜５アルコキシ、Ｃ１、Ｃ２またはＣ３アルコキシ）である。さらに好ましくは、該アルコキシ基は、メトキシである。
【００３６】
好ましい１局面では、Ｒ４は、炭化水素基である。
【００３７】
好ましくは、Ｒ４は、アルキル基（例えば、Ｃ１〜１０アルキル、Ｃ１〜５アルキル、Ｃ１、Ｃ２またはＣ３アルキル）である。さらに好ましくは、該アルキル基は、エチルである。
【００３８】
好ましい１局面では、Ｒ４は、式−Ｌ４−Ｓ−Ｒ４’の基であり、ここで、Ｌ４は、任意のヒドロカルビルリンカー基であり、Ｓは、イオウであり、そしてＲ４’は、ヒドロカルビル基である。
【００３９】
好ましくは、Ｌ４およびＲ４’は、別個に、Ｃ１〜Ｃ１０ヒドロカルビル、Ｃ１〜Ｃ５ヒドロカルビルまたはＣ１〜Ｃ３ヒドロカルビルから選択される。好ましくは、Ｌ４およびＲ４’は、別個に、炭化水素基、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ１０炭化水素、Ｃ１〜Ｃ５炭化水素またはＣ１〜Ｃ３炭化水素から選択される。好ましくは、Ｌ４およびＲ４’は、別個に、アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキルまたはＣ１〜Ｃ３アルキルから選択される。該ヒドロカルビル／炭化水素／アルキルは、直鎖または分枝鎖であり得、および／または飽和または不飽和であり得る。非常に好ましい局面では、Ｒ４’は、メチル（−ＣＨ３）およびエチル（−ＣＨ２ＣＨ３）から選択される。
【００４０】
好ましい１局面では、前記Ａ環は、Ｒ１で置換され、そしてＲ４は、Ｒ１に関してオルトで置換されている。
【００４１】
好ましい１局面では、Ｒ４は、前記Ａ環の２位置にある。
【００４２】
好ましい１局面では、本発明の化合物は、少なくとも２個またはそれ以上のスルファメート基、ホスホネート基、チオホスホネート基、スルホネート基またはスルホンアミド基を含有する。
【００４３】
好ましくは、Ｒ１は、スルファメート基である。
【００４４】
好ましい１局面では、前記化合物は、少なくとも２個のスルファメート基を含有する。この局面では、該スルファメート基は、同じ環上にはない。
【００４５】
好ましい局面では、本発明のステロイド環系のＡ環は、少なくとも１個のスルファメート基を含有し、ここで、本発明のステロイド環系のＤ環は、少なくとも１個のスルファメート基を含有する。
【００４６】
Ｒ３は、芳香族ヒドロカルビル基である。本明細書中で使用する「芳香族ヒドロカルビル基」との用語は、非局在化π電子を含有する環系の一部を含有するかまたはそれを形成する任意のヒドロカルビル基を意味する。
【００４７】
好ましくは、Ｒ３は、芳香環であるかまたはそれを含有する。好ましくは、Ｒ３は、必要に応じて置換した芳香環である。
【００４８】
好ましくは、Ｒ３は、炭素および必要に応じて窒素を含有する芳香環であるかまたはそれを含有する。好ましくは、Ｒ３は、炭素および必要に応じて窒素を含有する置換芳香環である。
【００４９】
好ましくは、Ｒ３は、６員環芳香環であるかまたはそれを含有する。好ましくは、Ｒ３は、必要に応じて置換した６員環芳香環である。
【００５０】
好ましくは、Ｒ３が、炭素および必要に応じて窒素を含有する６員環芳香環であるかまたはそれを含有する。好ましくは、Ｒ３が、炭素および必要に応じて窒素を含有する必要に応じて置換した６員環芳香環である。
【００５１】
好ましくは、前記芳香環は、ヒドロカルビルおよびハロゲンから選択されるＲ５基で置換されている。好ましくは、Ｒ５は、炭化水素およびハロゲンから選択される。さらに好ましくは、Ｒ５は、アルキルおよびハロゲンから選択される。さらに好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１〜１０アルキル（好ましくは、Ｃ１〜５アルキル）およびハロゲンから選択される。
【００５２】
前記リンカー基Ｌは、好ましい局面では、ヒドロカルビル基、さらに好ましくは、炭化水素基である。
【００５３】
好ましくは、リンカー基Ｌは、アルキル基、例えば、Ｃ１〜１０アルキル、好ましくは、Ｃ１〜５アルキル、好ましくは、Ｃ１またはＣ２アルキルである。
【００５４】
ＬおよびＲ３の好ましい組合せが提供され、ここで、Ｒ２基は、以下から選択される：
【００５５】
【化１３】
2004511441.tif 000009
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００５６】
【化１４】
2004511441.tif 000010
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００５７】
【化１５】
2004511441.tif 000011
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００５８】
【化１６】
2004511441.tif 000012
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００５９】
【化１７】
2004511441.tif 000013
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６０】
【化１８】
2004511441.tif 000014
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６１】
【化１９】
2004511441.tif 000015
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６２】
【化２０】
2004511441.tif 000016
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６３】
【化２１】
2004511441.tif 000017
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６４】
【化２２】
2004511441.tif 000018
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６５】
【化２３】
2004511441.tif 000019
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６６】
【化２４】
2004511441.tif 000020
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６７】
【化２５】
2004511441.tif 000021
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６８】
【化２６】
2004511441.tif 000022
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００６９】
【化２７】
2004511441.tif 000023
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７０】
【化２８】
2004511441.tif 000024
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７１】
【化２９】
2004511441.tif 000025
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７２】
【化３０】
2004511441.tif 000026
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７３】
【化３１】
2004511441.tif 000027
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７４】
【化３２】
2004511441.tif 000028
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７５】
【化３３】
2004511441.tif 000029
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７６】
【化３４】
2004511441.tif 000030
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７７】
【化３５】
2004511441.tif 000031
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７８】
【化３６】
2004511441.tif 000032
好ましくは、本発明の化合物は、次式である：
【００７９】
【化３７】
2004511441.tif 000033
好ましくは、Ｒ２基は、α立体配座である。
【００８０】
好ましくは、Ｒ２基は、前記Ｄ環の１７位置上でα立体配座である。
【００８１】
好ましくは、前記Ｋ基およびＸ環は、一緒になって、全ての置換基を含めて、最大で、約５０個の炭素原子、さらに普通には、約３０〜４０個以下の炭素原子を含有する。
【００８２】
ある用途には、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果が全くないか、最小限のエストロゲン効果しか有しない。
【００８３】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、エストロゲン効果を有する。
【００８４】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、可逆作用を有する。
【００８５】
ある用途では、好ましくは、前記化合物は、非可逆作用を有する。
【００８６】
１実施形態では、本発明の化合物は、乳癌の治療に有用である。
【００８７】
本発明はまた、本発明の化合物を調製するのに有用な新規中間体を包含する。例えば、本発明は、該化合物用の新規アルコール前駆体を包含する。別の例として、本発明は、該化合物用のビス保護前駆体を包含する。該前駆体の各々の例は、本明細書中で提示する。本発明はまた、本発明の化合物を合成するために該前駆体の各々または両方を含む方法を包含する。
【００８８】
（利点）
本発明の１つの重要な利点は、本発明のスルファメート化合物がＳＴＳ阻害剤として作用できることにある。
【００８９】
本発明の化合物の他の利点は、それらがインビボで効能があり得ることにある。
【００９０】
本発明の化合物の一部は、非エストロゲン性化合物であり得る。ここで、「非エストロゲン性」との用語は、エストロゲン活性を全く示さないか、実質的に全く示さないことを意味する。
【００９１】
他の利点は、これらの化合物の一部がホルモン活性を示すか誘発する化合物に代謝でき得ないことにある。
【００９２】
本発明の化合物の一部はまた、経口活性であり得る点で、有利である。
【００９３】
本発明の化合物の一部は、特に、医薬品を最初から投与する必要があり得るとき、癌（例えば、乳癌）の治療だけでなく（またはその代わりに）、非悪性状態（例えば、自己免疫疾患）の防止にも有用であり得る。
【００９４】
それゆえ、本発明の化合物の一部はまた、内分泌依存性癌の治療（例えば、自己免疫疾患の治療）以外の治療用途を有すると考えられている。
【００９５】
本発明の化合物はまた、アポトーシスの誘発剤としても有用であり得る。
【００９６】
本発明の化合物はまた、細胞成長阻害剤としても有用であり得る。
【００９７】
（ステロイドスルファターゼ）
ステロイドスルファターゼは、時には、数種のスルファターゼステロイド（例えば、エストロンサルフェート、デヒドロエピアンドロステロンサルフェートおよびコレステロールサルフェート）を短時間で加水分解するためのステリルスルファターゼまたは「ＳＴＳ」と呼ばれる。ＳＴＳは、酵素番号ＥＣ　３．１．６．２を割り当てられている。
【００９８】
ＳＴＳは、クローン化され発現される。例えば、Ｓｔｅｉｎら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１３８６５〜１３８７２（１９８９））およびＹｅｎら（Ｃｅｌｌ　４９：４４３〜４５４（１９８７））を参照せよ。
【００９９】
ＳＴＳは、多数の疾患状態に関係している酵素である。
【０１００】
例として、研究者は、ＳＴＳが全く欠乏すると魚鱗癬が起こることを発見した。一部の研究者によれば、ＳＴＳの欠乏は、日本で、かなり蔓延している。同じ研究者（Ｓａｋｕｒａら、Ｊ　Ｉｎｈｅｒｉｔ　Ｍｅｔａｂ　Ｄｉｓ　１９９７年１１月；２０（６）：８０７−１０）はまた、アレルギー性疾患（例えば、気管支喘息、アレルギー性鼻炎またはアトピー性皮膚炎）がステロイドスルファターゼの欠乏に関連し得ることを報告している。
【０１０１】
ＳＴＳ活性が全く欠けていることにより起こる疾患状態に加えて、高いレベルのＳＴＳ活性もまた、疾患状態を誘発し得る。例として、上で述べたように、乳癌の成長および転移におけるＳＴＳの役割を支持する強力な証拠がある。
【０１０２】
ＳＴＳはまた、他の疾患状態にも関係している。例として、Ｌｅ　Ｒｏｙら（Ｂｅｈａｖ　Ｇｅｎｅｔ　１９９９年３月；２９（２）：１３１−６）は、ステロイドスルファターゼ濃度とマウスでの攻撃挙動の開始との間で遺伝的な相関があり得ると決定した。著者は、ステロイドのスルファターゼ付加が複雑なネットワーク（突然変異誘発による攻撃性に関係していることが分かった遺伝子を含めて）の原動力であり得ると結論づけている。
【０１０３】
（ＳＴＳ阻害）
ＳＴＳ活性に関連した一部の疾患状態は、非活性スルファターゼエストロンが活性非硫酸化エストロンに変換することによると考えられている。ＳＴＳ活性に関連した疾患状態では、ＳＴＳ活性を阻害することが望まれている。
【０１０４】
ここで、「阻害」との用語は、ＳＴＳの有害な作用を少なくするか、および／またはなくすか、および／または遮蔽するか、および／または防止することを含む。
【０１０５】
（ＳＴＳ阻害剤）
本発明によれば、本発明の化合物は、ＳＴＳ阻害剤として作用できる。
【０１０６】
ここで、本発明の化合物に関して本明細書中で使用する「阻害剤」との用語は、ＳＴＳ活性を阻害できる（例えば、ＳＴＳの有害な作用を少なくできるか、および／またはなくすことができるか、および／または遮蔽できるか、および／または防止できる）化合物を意味する。このＳＴＳ阻害剤は、アンタゴニストとして作用し得る。
【０１０７】
化合物がエストロンサルフェート活性を阻害する性能は、無傷ＭＣＦ−７乳癌細胞または胎盤ミクロソームのいずれかを使用して、評価できる。それに加えて、動物モデルが使用され得る。適切なＡｓｓａｙ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓに関する詳細は、以下の節で提示される。ＳＴＳ活性（それゆえ、ＳＴＳ阻害）を測定するために、他のアッセイが使用できることに注目すべきである。例えば、ＷＯ−Ａ−９９／５０４５３の教示が参照され得る。
【０１０８】
好ましくは、いくつかの用途について、この化合物は、そのスルファメート基がスルフェート基で置換されてスルフェート誘導体を形成する場合、このスルフェート誘導体は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能である（すなわち、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートしたとき）という特徴により、さらに特徴付けられる。
【０１０９】
好ましい１実施形態では、この化合物のスルファメート基がサルフェート基で置換されてサルフェート化合物を形成する場合、そのサルフェート化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により加水分解可能であり、ステロイドスルファターゼＥ．Ｃ．３．１．６．２を３７℃でｐＨ７．４でインキュベートしたとき、２００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１５０ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、１００ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、７５ｍｍｏｌａｒ未満、好ましくは、５０ｍｍｏｌａｒ未満のＫｍ値を生じる。
【０１１０】
好ましい実施形態では、本発明の化合物は、ステロイドスルファターゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．６．２）活性を有する酵素により、加水分解可能ではない。
【０１１１】
いくつかの用途について、好ましくは、本発明の化合物は、望ましい標的（例えば、ＳＴＳ）に対する少なくとも約１００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約１５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約２５０倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３００倍の選択性、好ましくは、望ましい標的に対する少なくとも約３５０倍の選択性を有する。
【０１１２】
本発明の化合物は、それがＳＴＳ活性を阻害する能力に加えてまたはその代わりに、他の有益な特性を有し得ることに注目すべきである。
【０１１３】
（ヒドロカルビル）
本明細書中で使用する場合、用語「ヒドロカルビル基」とは、少なくともＣおよびＨを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の別の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環式基などが挙げられ得る。この置換基が環式基である可能性に加えて、置換基を組み合わせて環式基が形成され得る。このヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有する場合、これらの炭素は、必ずしも、互いに連結される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、連結され得る。それゆえ、このヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、イオウ、窒素および酸素が挙げられる。ヒドロカルビル基の非限定的な例には、アシル基がある。
【０１１４】
典型的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。ここで、「炭化水素」との用語は、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基（この基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはアリール基のいずれか１個を意味する。炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が挙げられる。この炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造である場合、その置換基は、炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得るか；あるいは、これらの置換基は、この炭化水素骨格上および分枝上にあり得る。
【０１１５】
（スルファメート基）
１実施形態では、環Ｘは、置換基として、スルファメート基を有する。本明細書中で使用する場合、用語「スルファメート」は、スルファミン酸のエステル、またはスルファミン酸のＮ−置換誘導体のエステル、またはそれらの塩を含む。
【０１１６】
Ｒ３がスルファメート基である場合、本発明の化合物は、スルファメート化合物と呼ばれる。
【０１１７】
典型的には、このスルファメート基は、次式を有する：
（Ｒ４）（Ｒ５）Ｎ−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ４およびＲ５は、独立して、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール、またはそれらの組合せから選択されるか、または一緒になって、アルキレンを表わし、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１１８】
本発明のＮ−置換化合物は、置換された場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ４および／またはＲ５がアルキルである場合、好ましい値は、Ｒ４およびＲ５が、それぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）から選択される値である。Ｒ４およびＲ５は、共にメチルであり得る。Ｒ４および／またはＲ５がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ４およびＲ５がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ４およびＲ５は、一緒になる場合、典型的には、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を表わし、これらは、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１１９】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、当該化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１２０】
いくつかの実施形態では、このスルフェート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、１個より多いスルファメート基が存在し得る。例として、２個のスルファメート基（すなわち、ビス−スルファメート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、好ましくは、このステロイド核の１７位置に、第二（または少なくとも１個の追加）のスルファメート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１２２】
いくつかの好ましい実施形態では、Ｒ４およびＲ５の少なくとも１個は、Ｈである。
【０１２３】
さらに好ましいいくつかの実施形態では、Ｒ４およびＲ５の各々は、Ｈである。
【０１２４】
（ホスホネート基）
Ｒ３が、ホスホネート基である場合、本発明の化合物は、ホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１２５】
典型的には、このホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ６）−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ６は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルまたはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで、このまたは各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１２６】
本発明のＮ−置換化合物は、置換される場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ６がアルキルである場合、Ｒ６は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ６は、メチルであり得る。Ｒ６がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ６がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ６は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１２７】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、このホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１２９】
ある実施形態では、１個より多いホスホネート基が存在し得る。例として、２個のホスホネート基（すなわち、ビス−ホスホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）のホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１３０】
（チオホスホネート基）
Ｒ３が、チオホスホネート基である場合、本発明の化合物は、チオホスホネート化合物と呼ばれる。
【０１３１】
典型的には、このチオホスホネート基は、次式を有する：
（Ｒ７）−Ｐ（Ｓ）（ＯＨ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルもしくはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１３２】
本発明のＮ−置換化合物は、置換された場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ７がアルキルである場合、Ｒ７は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ７は、メチルであり得る。Ｒ７がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ７がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ７は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基を含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１３３】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１３４】
いくつかの実施形態では、このチオホスホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１３５】
いくつかの実施形態では、１個より多いチオホスホネート基が存在し得る。例として、２個のチオホスホネート基（すなわち、ビス−チオホスホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）のチオホスホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１３６】
（スルホネート基）
Ｒ３が、スルホネート基である場合、本発明の化合物は、スルホネート化合物と呼ばれる。
【０１３７】
典型的には、このスルホネート基は、次式を有する：
（Ｒ８）−Ｓ（Ｏ）（Ｏ）−Ｏ−
ここで、好ましくは、Ｒ８は、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニルもしくはアリール、またはそれらの組合せであり、ここで各アルキルまたはシクロアルキルまたはアルケニルは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基を含有する。
【０１３８】
本発明のＮ−置換化合物は、置換された場合、１個または２個のＮ−アルキル置換基、Ｎ−アルケニル置換基、Ｎ−シクロアルキル置換基またはＮ−アリール置換基を含有し得、これらは、好ましくは、最大で１０個の炭素原子を含有するか、それぞれ、含有する。Ｒ８がアルキルである場合、Ｒ８は、１〜６個の炭素原子を含有する低級アルキル基（すなわち、メチル、エチル、プロピルなど）であり得る。例として、Ｒ８は、メチルであり得る。Ｒ８がアリールである場合、典型的な値は、フェニルおよびトリル（ＰｈＣＨ３；ｏ）である。Ｒ８がシクロアルキルを表わす場合、典型的な値は、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどである。Ｒ８は、４〜６個の炭素原子の鎖を提供するアルキレン基をさらに含有し得、これらは、必要に応じて、１個またはそれ以上のヘテロ原子または基で中断されており、例えば、５員複素環（例えば、モルホリノ、ピロリジノまたはピペリジノ）を提供する。
【０１３９】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアリール置換基の値には、問題の化合物のスルファターゼ阻害活性を妨害しない１個またはそれ以上の基を置換基として含有することが含まれる。代表的な非妨害置換基には、ヒドロキシ、アミノ、ハロ、アルコキシ、アルキルおよびアリールが挙げられる。
【０１４０】
いくつかの実施形態では、このスルホネート基は、Ｘ基内またはその上にある１個またはそれ以上の原子と縮合（または結合）することにより、環構造を形成し得る。
【０１４１】
いくつかの実施形態では、１個より多いスルホネート基が存在し得る。例として、２個のスルホネート基（すなわち、ビス−スルホネート化合物）が存在し得る。これらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、このステロイド核の１７位置に、好ましくは、第二（または少なくとも１個の追加）のスルホネート基が位置している。これらの基は、同じである必要はない。
【０１４２】
（スルホネート／ホスホネート／チオホスホネート／スルファメートの組合せ）
本発明のある化合物に対して、本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの１種が存在し得、そして本明細書中で定義したスルホネートまたは本明細書中で定義したホスホネートまたは本明細書中で定義したチオホスホネートまたは本明細書中で定義したスルファメートのうちの他種が存在し得る。例として、本発明の化合物は、１個のスルファメート基および１個のホスホネート基を含有し得る。
【０１４３】
本発明のこれらの化合物が、ステロイド核に基づいている場合、好ましくは、この基の他方は、このステロイド核の１７位置に位置している。
【０１４４】
（擬似）
１局面では、「ステロイド環系」は、擬似ステロイド環構造であり得る。
【０１４５】
本明細書中で使用する「擬似」との用語は、類似または異なる構造を有するが類似の機能効果を有することを意味する。言い換えれば、ステロイド環系は、ステロイドの環のバイオアイソスターまたはその活性部分であり得る。
【０１４６】
好ましい局面では、このステロイド環系は、エストロンの環のバイオアイソスターまたはその一部であり得る。
【０１４７】
（ステロイド環構造）
当該技術分野で周知であるように、古典的なステロイド環構造は、以下の一般式を有する：
【０１４８】
【化３８】
2004511441.tif 000034
上式では、それらの環は、通常の様式で標識されている。
【０１４９】
バイオアイソスターの例には、環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が複素環である場合、および／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が置換されている場合、および／または環Ａ、Ｂ、ＣおよびＤのいずれか１個またはそれ以上が変性されている場合である；しかし、ここで、このバイオアイソスターは、スルファメート基なしでも、ステロイド特性を有する。
【０１５０】
このことに関して、好ましい多環式構造の構造は、以下として提示できる：
【０１５１】
【化３９】
2004511441.tif 000035
ここで、各環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’は、別個に、複素環または非複素環を表わすが、これらの環は、別個に、置換または非置換で飽和または不飽和であり得る。
【０１５２】
例として、環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個またはそれ以上は、別個に、適切な基（例えば、アルキル基、アリール基、水酸基、ハロ基、ヒドロカルビル基、オキシヒドロカルビル基など）で置換され得る。
【０１５３】
Ｄ’の例には、少なくとも１個の置換基を有する５員または６員の非複素環がある。
【０１５４】
好ましい１実施形態では、環Ｄ’は、エチニル基で置換される。
【０１５５】
環Ａ’、Ｂ’、Ｃ’およびＤ’のいずれか１個が複素環である場合、好ましくは、その複素環は、Ｃ原子と少なくとも１個のＮ原子および／または少なくとも１個のＯ原子との組合せを含有する。他の複素環原子は、その環内に存在し得る。
【０１５６】
本発明の化合物の適切な好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’の例には、デヒドロエピアンドロステロンおよびエストロゲン（エストロンを含めて）の環Ａ〜Ｄが挙げられる。
【０１５７】
本発明の化合物の好ましいステロイド核環Ａ’〜Ｄ’には、以下の環Ａ〜Ｄが挙げられる：
エストロンおよび置換エストロン、すなわち：
エストロン
２−ＯＨ−エストロン
４−ＯＨ−エストロン
６α−ＯＨ−エストロン
７α−ＯＨ−エストロン
１６α−ＯＨ−エストロン
１６β−ＯＨ−エストロン
２−ＭｅＯ−エストロン
１７−デオキシエストロン。
【０１５８】
エストラジオールおよび置換エストラジオール、すなわち：
４−ＯＨ−１７β−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
４−ＯＨ−１７α−エストラジオール
６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
７α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６α−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７α−エストラジオール
１６β−ＯＨ−１７β−エストラジオール
１７α−エストラジオール
１７β−エストラジオール
１７α−エチニル−１７β−エストラジオール
１７β−エチニル−１７α−エストラジオール
１７−デオキシエストラジオール。
【０１５９】
エストリオールおよび置換エストリオール、すなわち：
エストリオール
４−ＯＨ−エストリオール
６α−ＯＨ−エストリオール
７α−ＯＨ−エストリオール
１７−デオキシエストリオール。
【０１６０】
デヒドロエピアンドロステロンおよび置換デヒドロエピアンドロステロン、すなわち：
デヒドロエピアンドロステロン
６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
７α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６α−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
１６β−ＯＨ−デヒドロエピアンドロステロン
アンドロステンジオール。
【０１６１】
大まかに言えば、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、種々の非妨害置換基を含有し得る。特に、環系Ａ’Ｂ’Ｃ’Ｄ’は、１個またはそれ以上のヒドロキシ、アルキル（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、第二級ブチル、第三級ブチル、ｎ−ペンチルおよび他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）またはハロゲン（例えば、フルオロ置換基）を含有し得る。
【０１６２】
（非ステロイド構造）
代替実施形態では、本発明の化合物は、ステロイド核を含有またはベースにし得ない。このことに関して、この多環式化合物は、非ステロイド環系（例えば、ジエチルスチルボエストロール（ｄｉｅｔｈｙｌｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、スチルボエストロール（ｓｔｉｌｂｏｅｓｔｒｏｌ）、クマリン、フラボノイド、コンブレスタチン（ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）および他の環系）を含有またはベースにし得る。本発明の組成物中でまたは本発明の組成物として使用する他の適切な非ステロイド化合物は、ＵＳ−Ａ−５５６７８３１で見られ得る。
【０１６３】
（他の置換基）
本発明の化合物は、Ｒ１およびＲ２以外の置換基を有し得る。例として、これらの他の置換基は、以下の１種またはそれ以上であり得る：１個またはそれ以上のスルファメート基、１個またはそれ以上のホスホネート基、１個またはそれ以上のチオホスホネート基、１個またはそれ以上のスルホネート基、１個またはそれ以上のスルホンアミド基、１個またはそれ以上のハロ基、１個またはそれ以上のＯ基、１個またはそれ以上の水酸基、１個またはそれ以上のアミノ基、１個またはそれ以上のイオウ含有基、１個またはそれ以上のヒドロカルビル基（例えば、オキシヒドロカルビル基）。
【０１６４】
（オキシヒドロカルビル）
本明細書中で使用する場合、「オキシヒドロカルビル」との用語は、少なくとも、Ｃ、ＨおよびＯを含有する基を意味し、必要に応じて、１個またはそれ以上の他の適切な置換基を含有し得る。このような置換基の例には、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。これらの置換基が環状基である可能性に加えて、置換基の組合せは、環状基を形成し得る。このオキシヒドロカルビル基が、１個より多いＣを含有する場合、これらの炭素は、必ずしも、互いに結合される必要はない。例えば、これらの炭素の少なくとも２個は、適切な元素または基を介して、結合され得る。それゆえ、このオキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有し得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、これには、例えば、イオウおよび窒素が挙げられる。
【０１６５】
本発明の１実施形態では、このオキシヒドロカルビル基は、オキシ炭化水素基である。
【０１６６】
ここで、「オキシ炭化水素」との用語は、アルコキシ基、オキシアルケニル基、オキシアルキニル基（これらの基は、直鎖、分枝または環状であり得る）またはオキシアリール基のいずれか１種を意味する。オキシ炭化水素との用語には、また、必要に応じて置換されたこれらの基が挙げられる。このオキシ炭化水素が、その上に置換基を有する分枝構造である場合、この置換基は、その炭化水素骨格上または分枝上のいずれかにあり得るか；あるいは、これらの置換基は、この炭化水素骨格上および分枝上にあり得る。
【０１６７】
典型的には、このオキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１〜６Ｏ（例えば、Ｃ１〜３Ｏ）である。
【０１６８】
（癌細胞を使用してＳＴＳ活性を決定するためのアッセイ（プロトコル１））
（ＭＣＦ−７細胞でのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
インビトロで、インタクトなＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞を使用して、ステロイドスルファターゼ活性を測定する。このホルモン依存性細胞系は、ヒト乳癌細胞の増殖の制御を研究するのに、広く使用されている。それは、著しいステロイドスルファターゼ活性を有し（Ｍａｃｌｎｄｏｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２３，１２８１〜１２８７（１９８８）；Ｐｕｒｏｈｉｔ　＆　Ｒｅｅｄ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５０，９０１〜９０５（１９９２））、米国において、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から、また、英国において、例えば、Ｔｈｅ　Ｉｍｐｅｒｉａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｆｕｎｄから入手できる。
【０１６９】
細胞を、Ｍｉｎｉｍａｌ　Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，Ｓｃｏｔｌａｎｄ）（これは、２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、５％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、非必須アミノ酸および０．０７５％重炭酸ナトリウムを含有する）で維持する。３０連までの２５ｃｍ２組織培養フラスコを、上記培地を使用して、約１×１０５個の細胞／フラスコで播種する。細胞は、８０％のコンフルーエンシーまで増殖し、その培地は、３日ごとに交換する。
【０１７０】
３連の２５ｃｍ２組織培養フラスコ中のＭＣＦ−７細胞のインタクトな単層を、Ｅａｒｌｅ’ｓ　Ｂａｌａｎｃｅｄ　Ｓａｌｔ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＢＳＳ；ＩＣＮ　Ｆｌｏｗ，Ｈｉｇｈ　Ｗｙｃｏｍｂｅ，Ｕ．Ｋ．）で洗浄し、そして３７℃で、３〜４時間にわたって、無血清ＭＥＭ（２．５ｍｌ）中にて、エストロン−３−スルファメート（１１種の濃度；０；１ｆＭ；０．０１ｐＭ；０．１ｐＭ；１ｐＭ；０．０１ｎＭ；０．１ｎＭ；１ｎＭ；０．０１ｍＭ；０．１ｍＭ；１ｍＭ）と共に、５ｐｍｏｌ（７×１０５ｄｐｍ）の［６，７−３Ｈ］エストロン−３−スルフェート（特異的活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）でインキュベートする。インキュベーション後、各フラスコを冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（特異的活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．）を含む）にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−スルフェートが除去されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を除去し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により、決定する。加水分解されたエストロン−３−スルフェートの質量は、３Ｈカウント（これは、使用した培地および有機相の容量および添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の特異的活性から計算した。実験の各バッチは、スルファターゼ陽性ヒト胎盤（ポジティブコントロール）および細胞なしフラスコ（この基質の見かけ非酵素加水分解を評価するために）から調製したミクロソームのインキュベーションを含む。１フラスコあたりの細胞核の数を、その細胞単層をＺａｐｏｎｉｎで処理した後、Ｃｏｕｌｔｅｒ　Ｃｏｕｎｔｅｒを使用して決定する。Ｔｒｙｐａｎ　Ｂｌｕｅ除去術を使って、各バッチあたり１個のフラスコを使用して、細胞膜の状態および生存度を評価する（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｈ．Ｊ．（１９７３）：Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，［著者：Ｋｒｕｓｅ，Ｄ．Ｆ．　＆　Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｋ．］；４０６〜４０８ページ；Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）。
【０１７１】
ステロイドスルファターゼ活性の結果は、このインキュベーション期間（２０時間）中に形成された全生成物（エストロン＋エストラジオール）の中間値±標準偏差として表わされ、これは、１０６個の細胞について、エストロン−３−スルファメートを含有しないインキュベーションに対する低下割合（阻害）として、統計的に有意性を示す値について、計算される。スチューデントｔ−検定を使用して、結果の統計的な有意性を試験した。
【０１７２】
（胎盤ミクロソームを使用してＳＴＳ活性を決定するためのアッセイ（プロトコル２））
（胎盤ミクロソームでのステロイドスルファターゼ活性の阻害）
正常な満期妊娠から得たスルファターゼ陽性ヒト胎盤をハサミで十分に細かく刻み、そして冷リン酸緩衝液（ｐＨ　７．４，５０ｍＭ）で１回洗浄し、次いで、冷リン酸緩衝液（５ｍｌ／組織１ｇ）に再懸濁した。Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザーを使って、氷中での２分間の冷却期間で切り離した３回の１０秒間バースト（ｂｕｒｓｔｓ）を使用して、均質化を達成する。２０００ｇで３０分間遠心分離（４℃）することにより、核および細胞の細片を除去し、その上澄み液の一部（２ｍｌ）を２０℃で保存する。これらの上澄み液のタンパク質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，７２，２４８〜２５４（１９７６））の方法により、決定する。
【０１７３】
１００ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度、２０ｍＭ［６，７−３Ｈ］エストロン−３−スルフェートの濃度（特異的活性６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．）および３７℃で２０分間のインキュベーション時間を使用して、インキュベーション（１ｍｌ）を実行する。必要なら、以下の８種の化合物濃度を使用する；０（すなわち、コントロール）；０．０５ｍＭ；０．１ｍＭ；０．２ｍＭ；０．４ｍＭ；０．６ｍＭ；０．８ｍＭ；１．０ｍＭ。インキュベーション後、各試料を冷却し、その培地（１ｍｌ）を、別のチューブ（これは、［１４Ｃ］エストロン（７×１０３ｄｐｍ）（特異的活性９７Ｃｉ／ｍｍｏｌ；Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｅｎｔｒｅ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｕ．Ｋ．））にピペットで採取する。この混合物を、トルエン（５ｍｌ）と共に、３０秒間にわたって、十分に振盪する。実験により、この処理によって、その水相から、９０％を超える［１４Ｃ］エストロンおよび０．１％未満の［３Ｈ］エストロン−３−スルフェートが除去されることが明らかとなった。その有機相の一部（２ｍｌ）を除去し、蒸発させ、その残留物の３Ｈおよび１４Ｃ含量を、シンチレーション分光測定により決定する。加水分解されたエストロン−３−スルフェートの質量は、３Ｈカウント（これは、使用した培地および有機相の容量および添加した［１４Ｃ］エストロンの回収について、補正した）および基質の特異的活性から計算する。
【０１７４】
（ＳＴＳ活性を決定するための動物アッセイモデル（プロトコル３））
（インビボでのエストロンスルファターゼ活性の阻害）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除したラット）を使用して研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の増殖を刺激する。
【０１７５】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／Ｋｇ／日）を、ビヒクル（プロピレングリコール）だけを与えた他の群の動物と共に、経口投与する。この研究の終了時点で、肝臓組織の試料を得、以前に記述されているように（ＰＣＴ／ＧＢ９５／０２６３８を参照）、この基質として３Ｈエストロンスルフェートを使用して、エストロンスルファターゼ活性をアッセイする。
【０１７６】
（エストロゲン活性を決定する動物アッセイモデル（プロトコル４））
（インビボエストロゲン性の欠如）
本発明の化合物は、動物モデル（特に、卵巣切除ラット）で研究され得る。このモデルでは、エストロゲン性の化合物は、子宮の成長を刺激する。
【０１７７】
この化合物（５日間にわたって、０．１ｍｇ／ｋｇ／日）をラットに経口投与し、他の群の動物に、ビヒクル（プロピレングリコール）だけを与えた。この研究の終了時に子宮を得、秤量して、その結果を、（子宮重量／全体重）×１００として表した。
【０１７８】
子宮の成長に対して著しい効果がない化合物は、エストロゲン性ではない。
【０１７９】
（ＳＴＳ活性を決定する生物工学アッセイ（プロトコル５））
化合物がエストロンスルファターゼ活性を阻害する性能もまた、例えば、ハイスループットスクリーニングにおいて、ＳＴＳをコードするアミノ酸配列またはヌクレオチド配列、または活性フラグメント、それらの誘導体、ホモログまたは改変体を使用して、評価できる。
【０１８０】
適切な標的（例えば、アミノ酸配列および／またはヌクレオチド配列）のいずれか１個またはそれ以上は、種々の薬剤スクリーニング技術のいずれかにおいて、ＳＴＳを調節することができる試薬を同定するのに使用され得る。このような試験で使用される標的は、溶液中で遊離状態であっても、固体支持体に固着さていても、細胞表面に保有されていても、細胞内に位置してもよい。標的活性の消滅および標的と試験する試薬との間で結合する複合体の形成が、測定され得る。
【０１８１】
本発明のアッセイは、スクリーニングであり得、それにより、多数の試薬が試験される。１局面では、本発明のアッセイ方法は、ハイスループットスクリーニングである。
【０１８２】
薬剤スクリーニング技術は、１９８４年９月１３日に公開されたＧｅｙｓｅｎのヨーロッパ特許出願第８４／０３５６４号で記述された方法に基づき得る。要約すると、多数の異なるペプチド試験化合物を、固体基質（例えば、プラスチックピンまたはある種の他の表面）上で合成する。これらのペプチド試験化合物を、適切な標的またはそのフラグメントと反応させ、そして洗浄する。結合した要素を、次いで、例えば、当該技術分野で周知の方法を適切に適合した方法により検出する。精製した標的はまた、薬剤スクリーニング技術で使用するプレート上に、直接コーティングされ得る。あるいは、このペプチドを捕捉して固体支持体上で固定化するために、非中和抗体が使用できる。
【０１８３】
本発明はまた、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も考慮しており、このアッセイでは、標的を結合できる中和抗体は、標的を結合する試験化合物と特異的に競合する。
【０１８４】
他のスクリーニング技術は、これらの基質に対する適切な結合親和性を有する試薬のハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）を提供し、ＷＯ８４／０３５６４で詳細に記述された方法に基づいている。
【０１８５】
本発明のアッセイ方法は、試験化合物の大規模スクリーニングおよび小規模スクリーニングの両方だけでなく、定量アッセイで適切であると考えられる。
【０１８６】
好ましい１局面では、本発明は、ＳＴＳを選択的に調節する試薬を同定する方法に関し、これらの化合物は、式（１ａ）を有する。
【０１８７】
（レポーター）
本発明のアッセイ方法（およびスクリーン）では、広範囲のレポーターが使用され得、好ましいレポーターは、（例えば、分光法により）便利に検出可能なシグナルを提供する。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変える反応を触媒する酵素をコードし得る。
【０１８８】
他のプロトコルには、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。２個の非妨害エピトープと反応性のモノクローナル抗体を利用する２部位モノクローナルベースの免疫測定もまた、使用され得る。これらのアッセイおよび他のアッセイは、特に、Ｈａｍｐｔｏｎ　Ｒら（１９９０，Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ　Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ　Ｐａｕｌ　ＭＮ）およびＭａｄｄｏｘ　ＤＥら（１９８３，Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ　１５　８：　１２１　１）で記述される。
【０１８９】
レポーター分子の例には、β−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼおよびグルコアミラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、放射標識または蛍光タグ標識ヌクレオチドは、初期の転写物に組込まれ得、これは、次いで、オリゴヌクレオチドプローブに結合したとき、同定される。
【０１９０】
さらに別の例として、多数の企業（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ），Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＵＳ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ））は、アッセイ手順用の市販のキットおよびプロトコルを供給している。適切なレポーター分子または標識には、それらの放射性核種、酵素、蛍光試薬、化学発光試薬または色素生成試薬だけでなく、基質、補因子、阻害剤、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示している特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ４３６６２４１が挙げられる。
【０１９１】
（宿主細胞）
本発明に関連した「宿主細胞」との用語は、本発明の試薬に対する標的を含み得る任意の細胞を含む。
【０１９２】
従って、本発明のさらに他の実施形態は、本発明の標的であるかそれを発現するポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を提供する。好ましくは、該ポリヌクレオチドは、この標的であるかそれを発現するポリヌクレオチドの複製および発現用のベクターで運ばれる。これらの細胞は、該ベクターと適合するように選択され、例えば、原核（例えば、細菌）細胞、真菌細胞、酵母菌細胞または植物細胞であり得る。
【０１９３】
グラム陰性菌Ｅ．ｃｏｌｉは、異種遺伝子発現用の宿主として、広く使用されている。しかしながら、大量の異種タンパク質をその内部に蓄積する傾向がある。時には、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内タンパク質のバルクからの所望のタンパク質その後の精製が困難であり得る。
【０１９４】
Ｅ．ｃｏｌｉとは対照的に、バシラス属に由来の細菌は、それらが培地にタンパク質を分泌する能力があるために、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切な他の細菌には、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属由来の宿主がある。
【０１９５】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの性質、および／または発現したタンパク質のさらなる処理に対する好適性に依存して、真核生物宿主（例えば、酵母または他の真菌）が好まれ得る。一般に、酵母細胞は、操作し易いので、真菌細胞よりも好ましい。しかしながら、ある種のタンパク質は、酵母細胞からの分泌が少ないか、ある場合には、適切に処理されない（例えば、酵母における過剰グリコシル化（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ））かいずれかである。これらの場合には、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０１９６】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例には、真菌（例えば、アスペルギルス属）（例えば、ＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ０２８４６０３）およびトリコデルマ属；バシラス属のような細菌（例えば、ＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５で記述されたもの）、ストレプトマイセス属およびシュードモナス属；および酵母（例えば、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ属（例えば、ＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０で記述されたもの））およびサッカロミセス属がある。例として、典型的な発現宿主は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｌａｃｔｉｓ　ａｎｄ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅから選択され得る。
【０１９７】
適切な宿主細胞（例えば、酵母、真菌および植物宿主細胞）の使用は、本発明の組換え発現産物に最適な生物学的活性を与えるのに必要であり得る翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、トランケーション、ラピデーション、およびチロシン、セリンまたはスレオニンリン酸化）を提供し得る。
【０１９８】
（生物）
「生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含み得る任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母菌または植物が挙げられ得る。
【０１９９】
「トランスジェニック生物」との用語は、本発明に関連して、本発明による標的および／またはそれから得た産物を含有する任意の生物を含む。
【０２００】
（宿主細胞／宿主生物の形質転換）
先に示したように、この宿主生物は、原核生物または真核生物であり得る。適切な原核宿主の例には、Ｅ．ｃｏｌｉおよび枯草菌が挙げられる。原核宿主の形質転換に関する教示は、当該技術分野でよく引証されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，第２版、１９８９，Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５），Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０２０１】
原核宿主を使用する場合、そのヌクレオチド配列は、形質転換前に、例えば、イントロンの除去により、適切に修飾される必要があり得る。
【０２０２】
他の実施形態では、この遺伝子組換え生物は、酵母であり得る。このことに関して、酵母はまた、異種遺伝子発現用のビヒクルとして、広く使用されている。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、歴史上、長く産業的に使用（異種遺伝子発現のための使用を含む）されている。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子の発現は、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７，Ｙｅａｓｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｄ　Ｒ　Ｂｅｒｒｙら著、４０１〜４２９頁、Ａｌｌｅｎ　ａｎｄ　Ｕｎｗｉｎ，Ｌｏｎｄｏｎ）およびＫｉｎｇら（１９８９，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｙｅａｓｔｓ，Ｅ　Ｆ　Ｗａｌｔｏｎ　ａｎｄ　Ｇ　Ｔ　Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ著、１０７〜１３３ページ、Ｂｌａｃｋｉｅ，Ｇｌａｓｇｏｗ）により概説されている。
【０２０３】
いくつかの理由で、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、異種遺伝子発現に適している。第一に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、ヒトに病原性でなく、特定の内毒素を産生できない。第二に、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、種々の目的のために何世紀にもわたり商業的に開発され、その後、安全に使用されている長い歴史がある。これにより、大衆に広く受け入れられている。第三に、その生物に向けられた広範な商業的使用および研究の結果、その遺伝子および病原性についてだけでなく、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの大規模な発酵特性についての豊富な知識が獲得されている。
【０２０４】
Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子発現および遺伝子産物の分泌の原理は、Ｅ　Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ　Ｅ　Ｋｅｎｎｙ（１９９３，「Ｙｅａｓｔ　ａｓ　ａ　ｖｅｈｉｃｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　ｇｅｎｅｓ」、Ｙｅａｓｔｓ，第５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ　Ｈ　Ｒｏｓｅ　ａｎｄ　Ｊ　Ｓｔｕａｒｔ　Ｈａｒｒｉｓｏｎ著、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｌｔｄ．）により概説されている。
【０２０５】
種々のタイプの酵母ベクターが入手可能であり、これには、組込み型（ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ）ベクター（これは、それらの維持のために、宿主ゲノムとの組換えを必要とする）および自己複製プラスミドベクターが挙げられる。
【０２０６】
トランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓを調製するために、酵母での発現用に設計された構築物にヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築物が調製される。異種発現に使用されるいくつかのタイプの構築物が開発されている。これらの構築物は、このヌクレオチド配列と融合された酵母で活性なプロモーターを含有し、通常、酵母起源のプロモーター（例えば、ＧＡＬ１プロモーター）が使用される。通常、酵母起源のシグナル配列（例えば、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列）が使用される。酵母で活性なターミネーターは、この発現系を終了する。
【０２０７】
酵母の形質転換のために、いくつかの形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＵＳＡ　７５，１９２９）；Ｂｅｇｇｓ，Ｊ　Ｄ（１９７８，Ｎａｔｕｒｅ，Ｌｏｎｄｏｎ，２７５，１０４）；およびＩｔｏ，Ｈら（１９８３，Ｊ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　１５３，１６３〜１６８）の教示に従い、調製できる。
【０２０８】
形質転換した酵母細胞は、種々の選択マーカーを使用して選択される。形質転換に使用されるマーカーには、多数の栄養要求マーカー（例えば、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４およびＴＲＰ１）および優勢抗生物質耐性マーカー（例えば、アミノグリコシド抗生物質マーカー（例えば、Ｇ４１８））がある。
【０２０９】
別の宿主生物は、植物である。遺伝的に改変された植物の構築における基本原理は、挿入した遺伝物質を安定に維持するために、その植物ゲノムに遺伝情報を挿入することにある。この遺伝情報を挿入するいくつかの技術が存在しており、その２つの主要な原理は、遺伝情報の直接的な導入およびベクター系を使用することによる遺伝情報の導入がある。一般的な技術の概説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ　Ｒｅｖ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ［１９９１］４２：２０５〜２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｈｉ−Ｔｅｃｈ　Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ　１９９４　１７〜２７）による文献で見られ得る。植物形質転換に関するさらに詳しい教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５で見られ得る。
【０２１０】
それゆえ、本発明はまた、標的であるか標的を発現するヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチド配列で形質転換される宿主細胞は、そのコードしたタンパク質の発現に適切な条件下にて、培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、その細胞の表面で提示され得る。もし望ましいなら、当業者が理解しているように、コード配列を含有する発現ベクターは、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通って、これらのコード配列の分泌を指向するシグナル配列を用いて設計できる。他の組換え構築物は、このコード配列を、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列に連結され得る（Ｋｒｏｌｌ　ＤＪら（１９９３）　ＤＮＡ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌ　１２：４４１〜５３）。
【０２１１】
（改変体／ホモログ／誘導体）
本明細書中で言及した特定のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列に加えて、本発明はまた、それらの改変体、ホモログおよび誘導体の使用を包含する。ここで、「相同性」との用語は、「同一性」と同等とみなすことができる。
【０２１２】
本発明の文脈では、相同配列は、少なくとも７５％、８５％または９０％同一、好ましくは、少なくとも９５％または９８％同一であり得るアミノ酸配列を含むと見なされる。相同性はまた、類似性（すなわち、類似した化学的特性／機能を有するアミノ酸残基）としてみなされ得るが、本発明の文脈では、配列同一性の形で相同性を表現することが好ましい。
【０２１３】
相同性の比較は、目で見て行うことができるか、さらに普通には、容易に入手できる配列比較プログラムの助けを借りて行うことができる。これらの市販のコンピュータープログラムは、２個以上の配列間の相同性％を計算できる。
【０２１４】
相同性％は、連続配列にわたって計算され得、すなわち、１つの配列は、他の配列と整列され、１つの配列中の各アミノ酸は、１個の残基ごとに、他の配列中の対応しているアミノ酸と直接比較される。これは、「アンギャップド（ｕｎｇａｐｐｅｄ）」整列と呼ばれている。典型的には、このようなアンギャップド整列は、比較的短い数の残基にわたってのみ、実行される。
【０２１５】
これは、非常に簡単で一貫した方法ではあるものの、例えば、他の点では同一の対の配列において、１個の挿入または欠失が次のアミノ酸残基を整列から外し、従って、全体的な整列を実行する場合に、相同性％の大きな減少を生じる可能性があることを考慮していない。結果的に、殆どの配列比較方法は、全体的な相同性スコアにペナルティーを過度に科することなく、可能な挿入および欠失を考慮する、最適な整列を生じるように設計されている。これは、局所相同性を最大にするように、その配列整列に「ギャップ」を挿入することにより、達成される。
【０２１６】
しかしながら、これらのさらに複雑な方法は、その整列において起こる各ギャップに対して、「ギャップペナルティー」を割り当て、その結果、同数の同一アミノ酸に対して、できるだけ少数のギャップを有する配列整列（これは、２個の比較した配列間での高い関連性を反映している）は、多くのギャップを有するものよりも高いスコアを達成する。典型的には、「Ａｆｆｉｎｅギャップスコア」が使用され、これは、ギャップの存在に対して、比較的高いコストを課し、また、ギャップにある引き続く残基の各々に対して、より小さいペナルティーを課する。これは、最も一般的に使用されるギャプスコアリングシステムである。高いギャップペナルティーは、もちろん、より少ないギャップを有する最適化した整列を生じる。殆どの整列プログラムによれば、これらのギャップペナルティーを修正できる。しかしながら、配列を比較するためにこのようなソフトウェアを使用するとき、そのデフォルト値を使用するのが好ましい。例えば、ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（以下を参照）を使用するとき、アミノ酸配列に対するデフォルトギャップペナルティーは、１ギャップに対して−１２であり、また、各伸長部に対して、−４である。
【０２１７】
従って、最大相同性％の計算には、第一に、ギャップペナルティーを考慮して、最適な整列を生じる必要がある。このような整列を実行するのに適切なコンピュータープログラムは、ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ　Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｕ．Ｓ．Ａ．；Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１２：３８７）である。配列比較が実行できる他のソフトウェアの例には、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、１８章を参照）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４０３〜４１０を参照）およびＧＥＮＥＷＯＲＫＳスートの比較ツールが挙げられるが、これらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡの両方は、オフラインおよびオンラインの検索に利用できる（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９（上記）、７−５８〜７−６０ページを参照）。しかしながら、このＧＣＧ　Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを使用するのが好ましい。
【０２１８】
さらに有用な参考文献には、ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ　１９９９年５月１５日；１７４（２）：２４７−５０で見出される参考文献である（そして公開された正誤表は、ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｌｅｔｔ　１９９９年８月１日；１７７（１）：１８７−８にある）。
【０２１９】
最終相同性％は、同一性の形で測定できるものの、その整列過程自体は、典型的には、全か無かの対比較には基づいていない。その代わりに、目盛りを付けた類似性スコアマトリックスが一般に使用され、これは、化学的類似性または進化距離に基づいて、ペアを成す比較の各々にスコアを割り当てる。通例使用されるこのようなマトリックスの例には、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリックスがあり、これは、プログラムのＢＬＡＳＴスートに対するデフォルトマトリックスである。ＧＣＧ　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、一般に、一般デフォルト値またはカスタムシンボル比較表（もし、提供されたなら）のいずれかを使用する（さらなる詳細は、ユーザーマニュアルを参照）。ＧＣＧパッケージについては、一般デフォルト値を使用するのが好ましく、または他のソフトウェアの場合、このデフォルトマトリックス（例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２）を使用するのが好ましい。
【０２２０】
一旦、このソフトウェアが最適な整列を生じると、相同性％、好ましくは、配列同一性％を計算することが可能となる。このソフトウェアは、典型的には、この配列比較の一部としてこれを行い、数値結果を作成する。
【０２２１】
これらの配列はまた、サイレント変化を生じる、アミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有し得、機能的に等価な物質を生じる。意図的なアミノ酸の置換は、この物質の二次的な結合活性が保持されている限り、それらの残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性の性質の類似性に基づいて行われ得る。例えば、負に荷電したアミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる；正に荷電したアミノ酸としては、リシンおよびアルギニンが挙げられる；そして類似の親水性値を有する非荷電極性ヘッド基を備えたアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニンおよびチロシンが挙げられる。
【０２２２】
保存的な置換は、例えば、以下の表に従って、行われ得る。第二列の同じ枠、好ましくは、第三列の同じ行にあるアミノ酸は、互いに代用され得る。
【０２２３】
【化４０】
2004511441.tif 000036
（発現ベクター）
標的として使用されるか標的を発現するヌクレオチド配列は、組換え複製可能ベクターに組み込むことができる。このベクターは、適合性宿主細胞において、および／または適合性宿主細胞から、ヌクレオチド配列を複製および発現するのに使用され得る。発現は、制御配列（これは、プロモーター／エンハンサーおよび他の発現調節シグナルを含む）を使用して、制御され得る。原核生物プロモーター、および真核生物細胞内で機能的なプロモーターが使用され得る。組織特異的プロモーターまたは刺激特異的プロモーターが使用され得る。キメラプロモーターもまた使用され得、これは、上記２種以上の異なるプロモーターに由来の配列エレメントを含む。
【０２２４】
このヌクレオチド配列の発現によって宿主組換え細胞により産生されるタンパク質は、使用する配列および／またはベクターに依存して、分泌され得るか、または細胞内に含まれ得る。このコード配列は、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通って物質コード配列の分泌を指向するシグナル配列を使って、設計できる。
【０２２５】
（融合タンパク質）
この標的アミノ酸配列は、例えば、抽出および精製を助けるために、融合タンパク質として産生され得る。融合タンパク質パートナーの例には、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６ｘＨｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写活性化ドメイン）およびβ−ガラクトシダーゼが挙げられる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、融合タンパク質パートナーと目的のタンパク質配列との間に、タンパク質分解開裂部位を含ませることもまた、好都合であり得る。好ましくは、この融合タンパク質は、標的の活性を妨げない。
【０２２６】
この融合タンパク質は、抗原、または本発明の物質に融合した抗原決定基を含み得る。この実施形態では、この融合タンパク質は、天然には存在しない融合タンパク質であり得、その免疫系の一般的刺激を提供するという意味でアジュバントとして作用し得る物質を含む。この抗原または抗原決定基は、この物質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに結合され得る。
【０２２７】
本発明の別の実施形態では、このアミノ酸配列は、融合タンパク質をコードする異種配列に連結され得る。例えば、この物質の活性に影響を与えることができる薬剤についてペプチドライブラリーをスクリーニングするために、異種エピトープ（これは、市販の抗体により認識される）を発現するキメラ物質をコードするために有用であり得る。
【０２２８】
（治療）
本発明の化合物は、治療剤として（すなわち、治療適用で）使用され得る。
【０２２９】
「治療」との用語は、治癒効果、軽減効果および予防効果を含む。
【０２３０】
この治療は、ヒトまたは動物（好ましくは、メスの動物）に行われ得る。
【０２３１】
（薬学的組成物）
１局面では、本発明は、薬学的組成物を提供し、これは、本発明の化合物および必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（それらの組合せを含めて）を含有する。
【０２３２】
この薬学的組成物は、ヒトの医学および獣医学においてヒトまたは動物に使用され得、典型的には、薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤のいずれか１種以上を含有する。治療用途に受容可能なキャリアまたは希釈剤は、薬学的分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編　１９８５）で記述されている。薬学的キャリア、賦形剤または希釈剤の選択は、意図される投与経路および標準的な薬学的実務に関して、選択できる。これらの薬学的組成物は、このキャリア、賦形剤または希釈剤として、またはそれに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含有し得る。
【０２３３】
この薬学的組成物中に、防腐剤、安定剤、染料および香料でさえ、供給され得る。防腐剤の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸エステルが挙げられる。酸化防止剤および懸濁剤もまた、使用され得る。
【０２３４】
異なる送達システムに依存して、異なる組成物／処方要件が存在し得る。例として、本発明の薬学的組成物は、ミニポンプを使用して、または粘膜経路により（例えば、鼻スプレーまたはエアロゾル（吸入溶液または経口摂取溶液用）として）、または非経口的に（ここで、この組成物は、例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路による送達のために、注射可能形態により処方される）送達されるように処方され得る。あるいは、この処方は、両方の経路により送達されるように、設計され得る。
【０２３５】
この試薬は、胃腸粘膜を通って粘膜送達される場合、胃腸管を通過中に安定なままであるべきである；例えば、この試薬は、タンパク質分解に抵抗し、酸性ｐＨで安定であり、そして胆汁の洗浄効果に抵抗すべきである。
【０２３６】
適切な場合、これらの薬学的組成物は、吸入により、座剤またはペッサリーの形状で、ローション、溶液、クリーム、軟膏または粉剤の形状で局所的に、皮膚パッチを使用することにより、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含有する錠剤の形状で、またはカプセルもしくは卵剤（ｏｖｕｌｅ）をいずれか単独でまたは賦形剤と混合して、またはエリキシル剤、溶液もしくは懸濁液（これらは、香料または着色剤を含有する）の形状で経口投与で、あるいはこれらの薬学的組成物は、例えば、静脈内、筋肉内または皮下で、非経口的に注射できる。非経口投与には、これらの組成物は、無菌水溶液の形状で最もよく使用され得、これは、他の物質（例えば、その溶液を血液と等張性にするのに十分な塩または単糖類）を含有し得る。頬側投与または舌下投与には、これらの組成物は、錠剤または舐剤（これは、通常の様式で処方できる）の形状で投与され得る。
【０２３７】
（組合せ調合薬）
本発明の化合物は、１種またはそれ以上の活性剤（例えば、１種またはそれ以上の他の薬学的活性剤）と併用され得る。
【０２３８】
例として、本発明の化合物は、他のＳＴＳ阻害剤および／または他の阻害剤（例えば、アロマターゼ阻害剤（例えば、４−ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））および／またはステロイド（例えば、天然に生じるステルニューロステロイドデヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ｓｔｅｒｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄｓ　ｄｅｈｙｄｒｏｅｐｉａｎｄｒｏｓｔｅｒｏｎｅ　ｓｕｌｆａｔｅ）（ＤＨＥＡＳ））およびプレグネノロンサルフェート（ＰＳ）および／または他の構造上類似した有機化合物）と併用され得る。他のＳＴＳ阻害剤の例は、上記参考文献で見られ得る。例として、本発明で使用されるＳＴＳ阻害剤には、ＥＭＡＴＥ、およびその２−エチルおよび２−メトキシ１７−デオキシ化合物（これらは、本明細書中に示される化合物５のアナログである）のいずれかまたは両方が挙げられる。
【０２３９】
それに加えて、またはその代わりに、本発明の化合物は、生体応答調整物質と併用され得る。
【０２４０】
生体応答調整物質（「ＢＲＭ」）との用語は、サイトカイン、免疫調節剤、成長因子、造血調節因子、コロニー刺激因子、走化因子、溶血因子および血栓崩壊因子、細胞表面レセプタ、リガンド、白血球接着分子、モノクローナル抗体、予防ワクチンおよび治療ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどが挙げられる。ある用途には、好ましくは、この生体応答調節剤は、サイトカインである。サイトカインの例には、以下が挙げられる：インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、例えば、ＴＮＦ−α；インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ；ＴＧＦ−β。ある用途には、好ましくは、このサイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。ある用途には、このＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ（例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（それらの誘導体または混合物を含めて））であり得る。さらに好ましくは、このサイトカインは、ＴＮＦ−αである。ＴＮＦに関する教示は、当該技術分野（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）で見られ得る。
【０２４１】
（投与）
典型的には、医師は、個々の被験体に最も適切な実際の投薬量を決定し、それは、特定の患者の年齢、体重および応答と共に変わる。以下の投薬量は、平均的な場合の例である。もちろん、それより高いまたは低い投薬量範囲が有益な場合が個々に存在し得る。
【０２４２】
本発明の組成物は、直接的な注射により、投与され得る。この組成物は、非経口投与、粘膜投与、筋内投与、静脈内投与、皮下投与、眼内投与または経皮投与用に処方され得る。試薬は、要求に応じて、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、投与され得る。
【０２４３】
さらに別の例として、本発明の試薬は、１日１〜４回、好ましくは、１日１回または２回のレジメンに従って、投与され得る。任意の特定の患者に対する具体的な用量レベルおよび投薬頻度は、変わり得、種々の要因に依存しており、これらの要因としては、使用する特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用期間、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食生活、投与様式および投与時間、排泄の速度、薬剤組合せ、特定の状態の重症度および治療を受けるホストが挙げられる。
【０２４４】
上で示した典型的な送達様式は別として、「投与する」との用語はまた、脂質媒介トランスフェクション、リポソーム、イムノリポソーム、リポフェクチン、カチオン性表面両親媒性物質（ＣＦＡ）およびそれらの組合せのような技術による送達を含む。このような送達機構の経路には、粘膜経路、鼻腔内経路、経口経路、非経口経路、胃腸経路、局所経路または舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４５】
「投与する」との用語には、粘膜経路による（例えば、スプレー式点鼻薬またはエアロゾル（吸入用または経口摂取液用）としての）；非経口的経路（ここで、送達は、注射可能形状（例えば、静脈内経路、筋肉内経路または皮下経路）による）による送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２４６】
それゆえ、調合薬投与には、本発明のＳＴＳ阻害剤は、任意の適切な様式（これは、従来の薬学的処方技術および薬学的キャリア、アジュバント、賦形剤、希釈剤などを使用する）で、通常、非経口投与用に処方できる。大体の有効投薬割合は、当該化合物の個々の活性に依存して、平均体重（７０ｋｇ）の患者に対して、１〜１０００ｍｇ／日、例えば、１０〜９００ｍｇ／日、さらに、１００〜８００ｍｇ／日の範囲であり得る。好ましいさらに活性が高い化合物のさらに通例の投薬量速度は、２００〜８００ｍｇ／日、さらに好ましくは、２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは、２００〜２５０ｍｇ／日の範囲である。それらは、単一用量レジメン、分割用量レジメンおよび／または複数用量レジメン（これは、数日にわたって持続する）で与えられ得る。経口投与には、それらは、錠剤、カプセル、溶液または懸濁液（これらは、単位用量あたり、１００〜５００ｍｇの化合物を含有する）で処方され得る。あるいは、そして好ましくは、これらの化合物は、適切な非経口投与可能なキャリアで非経口投与のために処方され、これは、２００〜８００ｍｇ、好ましくは、２００〜５００ｍｇ、さらに好ましくは、２００〜２５０ｍｇの範囲の単位日投薬量割合で供給される。このような有効日用量は、しかしながら、その活性成分の固有の活性および患者の体重に依存して変わり、このようなバリエーションは、医師の技術および判断の範囲内である。
【０２４７】
（細胞周期）
本発明の化合物は、細胞周期障害の治療方法で、有用であり得る。
【０２４８】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｅｌｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ」、３版、Ｌｏｄｉｓｈら、１７７〜１８１ページで述べられているように、異なる真核細胞は、極めて異なる速度で成長し分裂できる。例えば、酵母菌細胞は、１２０分ごとに分裂でき、ウニおよび昆虫の真核細胞にある受精卵の第一分裂は、１個の大きな既存細胞が細分されるので、１５３０分間しかかからない。しかしながら、最もよく成長する植物および動物の細胞は、数が２倍になるのに１０〜２０時間かかり、一部のものは、ずっと遅い速度で２つに分裂する。成体中の多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、全く分裂しない；創傷の治癒を助ける線維芽細胞のような他のものは、要求に応じて成長するが、そうでなければ、静止している。
【０２４９】
さらに、分裂する各真核細胞は、２個の娘細胞に同じ遺伝物質を供与する準備ができていなければならない。真核生物でのＤＮＡ合成は、この細胞分裂周期の初めから終わりまで起こるのではなく、細胞分裂前、その一部に制限される。
【０２５０】
真核ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関係は、成長および分裂が全て可能であった哺乳動物細胞の培養物中で、十分に分析された。細菌とは対照的に、真核細胞は、ＤＮＡ合成にその時間の一部だけを費やすことが分かり、それは、細胞分裂の何時間も前に完了する（有糸分裂）。それゆえ、ＤＮＡ合成後および細胞分裂前に、時間のギャップが生じる；他のギャップは、分裂後と次の回のＤＮＡ合成前とで起こることが分かった。この分析により、真核細胞周期は、Ｍ（有糸分裂）期、Ｇｌ期（第一ギャップ）、Ｓ（ＤＮＡ合成）期、Ｇ２期（第二ギャップ）からなり、そしてＭに戻るという結論が導かれた。有糸分裂間（Ｇ１、ＳおよびＧ２）の期は、総称して、間期として知られている。
【０２５１】
組織内での多くの非分裂細胞（例えば、全ての静止線維芽細胞）は、有糸分裂後およびＤＮＡ合成の直前に、この周期を一時停止する；このような「休止」細胞は、その細胞周期から出ていったと言われ、Ｇ０状態にあると言われている。
【０２５２】
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）を使用することにより、その細胞周期の３つの間期段階のうちの１つにある細胞を同定してそれらの相対的なＤＮＡ含量を測定することが可能である；Ｇ１（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定量ｘのＤＮＡを有する；Ｓ（ＤＮＡ複製）中にて、それは、ｘと２ｘとの間にある；Ｇ２（またはＭ）のとき、それは、２ｘのＤＮＡを有する。
【０２５３】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は、以下のとおりである：　（ａ）間期。間期のＧ２段階は、有糸分裂の開始のすぐ前に先行する。染色体ＤＮＡは、このＳ局面中に、複製され、そしてタンパク質に結合されるが、染色体は、別の構造としてはまだ見えない。その核小体は、唯一の核の下部構造であり、これは、光学顕微鏡下にて、見える。ＤＮＡ複製前の２倍体細胞では、各型の２個の形態染色体が存在しており、その細胞は、２ｎと言われている。ＤＮＡ複製後、Ｇ２では、この細胞は、４ｎである。４部の各染色体ＤＮＡが存在している。その姉妹染色体は、互いからまだ分離されていないので、姉妹染色分体と呼ばれている。
【０２５４】
（ｂ）初期の前期。中心小体は、各々、新たに形成された娘中心小体を備え、その細胞の反対側の極に向かって移動し始める；これらの染色体は、長い糸と見ることができる。その核膜は、小胞に解離し始める。
【０２５５】
（ｃ）中期および後期の前期。染色体の凝縮が完結する；各々の可視染色体構造は、それらのセントロメアで一緒に保持された２個の染色分体から構成される。各染色分体は、２個の新たに複製された娘ＤＮＡ分子のうちの１個を含有する。その微小管紡錘体は、それらの中心小体にすぐ隣接した領域から放射し始め、これらは、それらの極に近づいて移動する。一部の紡錘体繊維は、極から極に及ぶ；殆どは、染色分体に進み、動原体で付着する。
【０２５６】
（ｄ）中期。染色体は、その細胞の赤道に向かって移動し、その場所で、それらは、その赤道面で整列される。その姉妹染色分体は、まだ分かれていない。
【０２５７】
（ｅ）後期。２個の姉妹染色分体は、別個の染色体に分かれる。各々は、紡錘体繊維によって１極に連結された動原体を含有し、それは、この極に移動する。それゆえ、各染色体の１コピーは、各娘細胞に供与される。同時に、この細胞は、極−極紡錘体に関して、伸長する。その開裂溝が形成し始めるにつれて、細胞質分裂が始まる。
【０２５８】
（ｆ）終期。その娘核の周りで、新たな膜が形成される；これらの染色体は、解かれ、区別しにくくなり、その核小体が再度見えるようになり、その核膜は、各娘核の周りで、形成される。細胞質分裂がほぼ完結し、この紡錘体は、それらの微小管および他の繊維が分解するにつれて、見えなくなる。有糸分裂全体にわたって、各極にある「娘」中心小体は、普通の長さになるまで、成長する。終期では、最初の中心小体の各々の複製が完結し、新たな娘中心小体は、次の間期の間に、発生する。
【０２５９】
（ｇ）間期。細胞質分裂が完結すると、この細胞は、その細胞周期のＧ１期に入り、再度、その周期を進む。
【０２６０】
細胞周期が非常に重要な細胞プロセスであることが認識されている。正常な細胞周期から逸脱すると、多くの医学的な障害が生じ得る。細胞周期が高まったり、および／またはその制限がなくなると、癌が起こり得る。細胞周期が低下すると、変性疾患が起こり得る。本発明の化合物を使用すると、このような障害および状態を治療する手段が獲得され得る。
【０２６１】
それゆえ、本発明の化合物は、細胞周期障害（例えば、癌（ホルモン依存性癌およびホルモン非依存性癌を含めて））の治療で使用するのに適切であり得る。
【０２６２】
それに加えて、本発明の化合物は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌などのような癌、および他の固形腫瘍を治療するのに適切であり得る。
【０２６３】
ある用途には、細胞周期は、阻止および／または防止および／または制止され、好ましくは、ここで、細胞周期は、防止および／または制止される。１局面では、細胞周期は、Ｇ２／Ｍ段階で、阻止および／または防止および／または制止され得る。１局面では、細胞周期は、非可逆的に防止および／または阻止および／または制止され得、好ましくは、ここで、細胞周期は、非可逆的に防止および／または制止される。
【０２６４】
「非可逆的に防止および／または阻止および／または制止される」との用語は、本発明の化合物を適用した後、その化合物を除去しても、この化合物の効果、すなわち、細胞周期の防止および／または阻止および／または制止が依然として観察できることを意味する。さらに詳しく言えば、「非可逆的に防止および／または阻止および／または制止される」との用語は、本明細書中で提示した細胞周期アッセイプロトコルに従ってアッセイしたとき、対象化合物で処理した細胞は、プロトコルＩの段階２の後、対照細胞よりも成長が少ないことを意味する。このプロトコルの詳細は、以下で提示する。
【０２６５】
それゆえ、本発明は、以下を引き起こす化合物を提供する：細胞周期を防止および／または阻止および／または制止することにより、インビトロで、エストロゲンレセプタ陽性（ＥＲ＋）およびＥＲ陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の成長の阻止；および／または無傷動物（すなわち、卵巣切除していない動物）において、ニトロソメチル尿素（ＮＭＵ）で誘発した乳房腫瘍の退行、および／または癌細胞での細胞周期を防止および／または阻止および／または制止する；および／または細胞周期を防止および／または阻止および／または制止することにより、インビボで作用する、および／または細胞周期アゴニストとして作用する。
【０２６６】
（細胞周期アッセイ）
（プロトコル６）
手順
段階１
マルチウェル培養皿に、１０５個の細胞／ウェルの密度で、ＭＣＦ−７乳癌細胞を播種する。細胞は、以下のように処理したときに約３０％が集密するまで、付着させ成長させた：
対照−未処理
対象化合物（ＣＯＩ）２０μＭ
細胞は、このＣＯＩを含有する成長培地において、６日間成長させ、培地／ＣＯＩを３日ごとに変える。この期間の終了時点で、コールター細胞カウンタを使用して、細胞数を数えた。
【０２６７】
段階２
ＣＯＩで６日間処理した後、細胞を、１０４個の細胞／ウェルの密度で、再播種する。それ以上の処理は、追加しない。細胞を、成長培地の存在下にて、さらに６日間成長させる。この期間の終了時点で、細胞数を再度数える。
【０２６８】
（癌）
上で述べたように、本発明の化合物は、細胞周期障害の治療で有用であり得る。特定の細胞周期障害には、癌がある。
【０２６９】
癌は、依然として、ほとんどの西洋諸国において、主な死亡原因である。今までに開発された癌の治療法には、ホルモンの作用または合成を阻止してホルモン依存性腫瘍の成長を阻止することが挙げられていた。しかしながら、現在では、ホルモン非依存性の腫瘍を治療するために、さらに積極的な化学療法が使用されている。
【０２７０】
それゆえ、化学療法に付随した副作用の一部または全部をなくしたホルモン依存性および／またはホルモン非依存性腫瘍の抗癌治療用の医薬品が開発されると、大きな治療上の進歩になる。
【０２７１】
エストロゲンが、それらの合成後、多数のヒドロキシル化反応および共役反応を受けることは、知られている。最近まで、このような反応は、最終的にエストロゲンを水溶性にして体内からの排出を高める代謝過程の一部であると考えられていた。現在では、一部のヒドロキシ代謝物（例えば、２−ヒドロキシおよび１６−α−ヒドロキシ）および共役物（例えば、エストロゲンサルフェート、Ｅ１Ｓ）は、体内でエストロゲンが有する錯体作用の一部を決定する際に重要であることが明らかである。
【０２７２】
研究者は、乳癌のリスクを変える条件に関連した２−および１６−ヒドロキシル化エストロゲンの形成を研究した。現在、１６−α−ヒドロキシル化が乳癌のリストを高め得るのに対して、２−ヒドロキシラーゼ活性を高める因子が、癌のリスクを低くすることに関連しているという証拠がある。エストロゲン代謝物の生物学的な役割の点で、２−メトキシエストラジオールが抗有糸分裂特性を備えた内生代謝物である一連の証拠により、さらに興味が刺激されている。２−ＭｅＯＥ２は、カテコールエストロゲンメチルトランスフェラーゼ（これは、体内全体にわたって広く分布している酵素である）により、２−ヒドロキシエストラジオール（２−ＯＨＥ２）から形成される。
【０２７３】
研究者は、インビボで、２−ＭｅＯＥ２が、Ｍｅｔｈ　Ａ肉腫、Ｂ１６黒色腫またはＭＤＡ−ＭＢ−４３５エストロゲンレセプタ陰性（ＥＲ−）乳癌細胞の皮下注射から生じる腫瘍の成長を阻止することを明らかにした。それはまた、内皮細胞の増殖および移動、およびインビトロ血管形成を阻止する。２−ＭｅＯＥ２がインビボでの腫瘍の成長を阻止する性能は、腫瘍細胞の増殖を直接阻止するよりもむしろ、腫瘍誘発血管形成を阻止する性能が原因であり得ることが示唆された。
【０２７４】
２−ＭｅＯＥ２がその強力な抗分裂促進効果および抗血管形成効果に加える機構は、依然として、解明中である。それは、高濃度では、微小管重合を阻止し、チューブリンに結合するコルヒチンの弱い阻害剤として作用するという証拠がある。しかしながら、最近では、有糸分裂を阻止する濃度で、細胞内のチューブリンフィラメントは、解重合されず、タキソール処理後に見られるものと同じ形態を有することが分かった。従って、乳癌および卵巣癌の治療に使用される薬剤である２−ＭｅＯＥ２は、タキソールのように、微小管の動態を安定化することにより作用する可能性がある。
【０２７５】
癌のための新たな治療法として２−ＭｅＯＥ２を確認したことは、重要な進歩ではあるものの、経口投与エストロゲンの生体利用能は、乏しい。さらに、それらは、最初に肝臓を通っている間に、広範囲にわたる代謝を受ける。乳癌治療用のステロイドスルファターゼ阻害剤を開発するための研究プログラムの一部として、エストロン−３−Ｏ−スルファメート（ＥＭＡＴＥ）は、強力な活性部位指向阻害剤として同定された。予想外なことに、ＥＭＡＴＥは、ラットにおいて、エストラジオールよりも１００倍も高い経口ウテロトロピック（ｕｔｅｒｏｔｒｏｐｈｉｃ）活性を備えた強力なエストロゲン特性を有することが判明した。その高いエストロゲン性は、それが赤血球（ｒｂｃｓ）（これは、それが肝臓を通る間に不活性化することから保護し、また、長期間にわたる遅延放出用のレザバとして作用する）に吸収されることから生じると考えられている。多数のＡリング変性類似物が合成され、試験されているが、これらには、２−メトキシエストロン−３−Ｏ−スルファメートが挙げられる。この化合物は、ステロイドスルファターゼ阻害剤として、ＥＭＡＴＥと等しい効力を有するものの、エストロゲン性が欠けていた。
【０２７６】
本発明者は、本発明の化合物が癌（特に、乳癌）を治療する手段を提供すると考えている。
【０２７７】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、白血病を含めた癌および固形腫瘍（例えば、乳房腫瘍、子宮内膜腫瘍、前立腺腫瘍、卵巣腫瘍および膵臓腫瘍）の成長を阻止する際に有用であり得る。
【０２７８】
（エストロゲンに関係した治療）
本発明者は、本発明の化合物の一部は、体内（特に、女性の体内）のエストロゲンレベルを制御する際に有用であり得ると考えている。それゆえ、これらの化合物の一部は、受精能を制御する手段（例えば、経口避妊錠剤、丸薬、溶液または薬用ドロップ）を提供するものとして、有用であり得る。あるいは、この化合物は、移植片またはパッチの形状にできる。
【０２７９】
それゆえ、本発明の化合物は、エストロゲンに関連したホルモン状態を治療する際に有用であり得る。
【０２８０】
それに加えてまたはその代わりに、本発明の化合物は、エストロゲンに関連した疾患以外のホルモン状態を治療する際に有用であり得る。それゆえ、本発明の化合物はまた、ホルモン活性に影響を与えることができ得、また、免疫応答に影響を与えることができる。
【０２８１】
（神経変性疾患）
本発明者は、本発明の化合物の一部が神経変性疾患および類似の疾患の治療で有用であり得ると考えている。
【０２８２】
例として、ＳＴＳ阻害剤は、記憶喪失、頭部外傷、アルツハイマー病、癲癇性痴呆、初老期痴呆、外傷後痴呆、老人性痴呆、血管性痴呆および卒中後痴呆のような病気に罹っている患者、または記憶向上を求めている個人に有用であると考えられている。
【０２８３】
（ＴＨ１）
本発明者は、本発明の化合物の一部がＴＨ１に関連して有用であり得ると考えている。
【０２８４】
例として、マクロファージまたは他の抗原提示細胞内にＳＴＳ阻害剤が存在していると、感作Ｔ細胞がＴＨ１（高ＩＬ−２、ＩＦＮγ低ＩＬ−４）応答を組み込む性能を低くし得ると考えられている。従って、他のステロイド（例えば、グルココルチコイド）の正常な制御影響力が優勢となる。
【０２８５】
（炎症性疾患）
本発明者は、本発明の化合物の一部が炎症性疾患（例えば、以下のいずれか１種またはそれ以上に関連した疾患）を治療する際に有用であり得ると考えている：自己免疫（例えば、関節リウマチ、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、重症筋無力症、甲状腺炎、血管炎、潰瘍性大腸炎およびクローン病）、皮膚疾患（例えば、乾癬および接触性皮膚炎）；移植片対宿主病；湿疹；喘息および移植後の臓器拒絶。
【０２８６】
例として、ＳＴＳ阻害剤は、ＤＨＥＡまたは関連したステロイドの免疫応答および／または炎症応答に対する通常の生理学的効果を防止し得ると考えられている。
【０２８７】
本発明の化合物は、内生グルココルチコイド様効果を現す医薬品の製造で有用であり得る。
【０２８８】
（他の治療法）
本発明の化合物／組成物が他の重要な医学的関連性を有し得ることまた、理解できるはずである。
【０２８９】
例えば、本発明の化合物または組成物は、すなわち、ＷＯ−Ａ−９９／５２８９０で列挙された疾患の治療で有用であり得る。
【０２９０】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５で列挙された疾患の治療で有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：癌、炎症疾患または炎症性疾患、皮膚障害、発熱、心血管効果、出血、凝血および急性期応答、悪液質、拒食症、急性伝染病、ＨＩＶ感染、ショック状態、移植片対宿主反応、自己免疫疾患、再灌流傷害、髄膜炎、偏頭痛およびアスピリン依存性抗血栓；腫瘍の成長、侵入および展開、血管形成、転移、悪性、腹水および悪性胸水；脳虚血、虚血性心臓病、骨関節炎、関節リウマチ、骨粗鬆症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、卒中、血管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周病、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性胃潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜症および手術による創傷の治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、過敏症；再狭窄、鬱血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症またはエンド硬化症（ｅｎｄｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）。
【０２９１】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９で列挙された疾患の治療で有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制または免疫刺激活性（例えば、免疫不全症（ヒト免疫不全ウイルスへの感染を含めて）の治療；リンパ球成長の調節；癌および多くの自己免疫疾患の治療、および移植拒絶の防止または腫瘍免疫の誘発）；造血の調節（例えば、骨髄疾患またはリンパ球疾患の治療）のため）；骨、軟骨、腱、靱帯および神経組織の成長の促進（例えば、創傷の治癒、火傷、潰瘍および歯周病および神経変性を治療するため）；卵胞刺激ホルモンの阻害または活性化（受精能の調節）；走化性／化学動態ホルモン（例えば、特定の細胞型を傷害部位または感染部位に移動するため）；出血活性および血栓活性（例えば、血友病および卒中の治療のため）；抗炎症活性（例えば、敗血症性ショックまたはクローン病を治療するため）；抗菌剤として；例えば、代謝または挙動の調節剤；鎮痛剤として；特定の欠乏症を治療する；例えば、ヒトおよび動物の薬剤における乾癬の治療。
【０２９２】
それに加えてまたはそれに代えて、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５で列挙された障害の治療において有用であり得る。言及し易くするために、そのリストの一部を今ここで提示する：マクロファージ阻害および／またはＴ細胞阻害活性、それゆえ、抗炎症活性；抗免疫活性、すなわち、細胞および／または体液免疫応答（炎症と関連していない応答を含めて）に対する阻害効果；マクロファージおよびＴ細胞が細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンに付着する性能、ならびにＴ細胞でのアップギュレートファス（ｆａｓ）レセプター発現を阻止する；不要な免疫反応および炎症を阻止することであって、これには、関節炎（関節リウマチを含めて）、過敏症に関連した炎症、アレルギー反応、喘息、全身性エリテマトーデス、膠原病および他の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化症に関連した炎症、動脈硬化症、アテローム硬化型心臓病、再灌流傷害、心不全、心筋梗塞、血管炎症障害、呼吸窮迫症候群または他の心肺疾患、消化性潰瘍に関連した炎症、潰瘍性大腸炎および胃腸管の他の疾患、肝臓線維症、肝硬変または他の肝臓病、甲状腺炎または他の腺疾患、糸球体腎炎または他の腎臓病および泌尿器病、耳炎または他の耳鼻咽喉病、皮膚炎または他の皮膚病、歯周病または他の歯の病気、精巣炎または副睾丸精巣炎、不妊症、睾丸外傷または他の免疫関連精巣病、胎盤不全、胎盤機能不全症、習慣性流産、子癇、子癇前症および他の免疫関連および／または炎症関連婦人病、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内炎症（例えば、網膜炎または類嚢胞黄斑浮腫）、交感性眼炎、強膜炎、網膜色素変性症、変性フォンダス（ｆｏｎｄｕｓ）疾患の免疫成分および炎症成分、眼球外傷の炎症成分、感染により引き起こされる眼球炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血性視神経障害、過剰傷瘢痕（例えば、緑内障濾過手術に続くもの）、眼球移植物に対する免疫および／または炎症反応および他の免疫および炎症関連眼病、自己免疫疾患または状態または障害に関連した炎症であって、この障害の場合、中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の臓器の両方において、免疫および／または炎症抑制が有益である；パーキンソン病、パーキンソン病の治療の合併症および／または副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆に複合したＨＩＶ関連脳症、デビック病、シデナム舞踏病、アルツハイマー病および他の変性疾患、ＣＮＳの状態または障害、卒中の炎症成分、小児麻痺後症候群、精神障害の免疫および炎症成分、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性汎脳炎、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギラン・バレー症候群、シデナム舞踏症、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン舞踏症、筋萎縮性側索硬化症、ＣＮＳ圧縮またはＣＮＳ外傷またはＣＮＳの感染の炎症成分、筋萎縮および筋ジストロフィーの炎症成分、ならびに中枢および末梢神経系の免疫および炎症関連疾患、状態または障害、外傷後炎症、敗血症性ショック、感染症、手術の炎症性合併症または副作用、骨髄移植または他の移植の合併症および／または副作用、遺伝子治療の炎症および／または免疫合併症および副作用（例えば、ウイルスキャリアでの感染が原因のもの）、またはＡＩＤＳに関連した炎症、ホルモンおよび／または細胞免疫応答を抑制または阻害する、単球または白血球の量を少なくすることにより単球または白血球増殖疾患（例えば、白血病）を治療または改善する、天然または人工の細胞、組織および臓器（例えば、角膜、骨髄、臓器、水晶体、ペースメーカー、天然または人工の皮膚組織）の移植の場合での移植片拒絶の防止および／または治療。
【０２９３】
（化合物の調製）
本発明の化合物は、適切なアルコールと適切な塩化物とを反応させることにより、調製され得る。例として、本発明のスルファメート化合物は、適切なアルコールと、式Ｒ４Ｒ５ＮＳＯ２Ｃｌの適切な塩化スルファモイルとを反応させることにより、調製され得る。
【０２９４】
この反応を実行する典型的な条件は、以下のとおりである。
【０２９５】
塩化ナトリウムおよび塩化スルファモイルを、０℃で、このアルコールの無水ジメチルホルムアミド攪拌溶液に添加する。引き続いて、この反応物を室温まで暖め、それから、さらに２４時間にわたって、攪拌を継続する。その反応混合物を重炭酸ナトリウムの冷飽和溶液に注ぎ、得られた水相をジクロロメタンで抽出する。合わせた有機抽出物を無水ＭｇＳＯ４で乾燥する。濾過に続いて真空中で溶媒蒸発し、トルエンと共に蒸発させると、粗残留物が得られ、これを、フラッシュクロマトグラフィーでさらに精製する。
【０２９６】
好ましくは、このアルコールは、適切なら、この塩化スルファモイルとの反応前に、誘導体化される。必要な場合、このアルコール中の官能基は、公知様式で保護され得、その保護基は、その反応の最後に除去される。
【０２９７】
好ましくは、このスルファメート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示に従って調製される。
【０２９８】
このホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適切に組み合わせることにより、調製され得る。
【０２９９】
このスルホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９２／０１５８６の教示を適切に適応させることにより、調製され得る。
【０３００】
このチオホスホネート化合物は、Ｐａｇｅら（１９９０　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　４６；２０５９〜２０６８）の教示およびＰＣＴ／ＧＢ９１／００２７０の教示を適切に適応させることにより、調製され得る。
【０３０１】
好ましい調製はまた、以下の本文で提示される。
【０３０２】
（要約）
要約すると、本発明は、ステロイドスルファターゼ阻害剤および／またはアポトーシス調節剤および／または細胞周期調節剤および／または細胞成長調節剤として使用する新規化合物、ならびにそれらを含有する薬学的組成物を提供する。
【０３０３】
（実施例）
ここで、本発明を、例としてのみ、説明する。しかしながら、これらの実施例はまた、本発明の好ましい化合物ならびに、それらを製造するための好ましい経路およびそれらの調製において有用な中間体を提示することが理解されるべきである。
【０３０４】
（２−メトキシエストラジオール誘導体および３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（２−ピコリル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０２２）
（背景）
３−Ｏ−スルファメート１７α−ベンジル（または４’−ｔｅｒｔ−ブチルベンジル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン）によるステロイドスルファターゼ活性の強力な阻害は、Ｄ．Ｐｏｉｒｉｅｒら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４２，２２８０〜２２８６，１９９９）により観察されている。化合物２は、その酵素活性を不活性化することにより、インタクトな形質移入（２９３）細胞培養アッセイにおいてステロイドスルファターゼ活性を阻害した。化合物２はまた、形質移入（２９３）細胞のミクロソーム中のＥＭＡＴＥよりも低い濃度で、このステロイドスルファターゼ活性を不活性化する。このアッセイでは、過剰の天然基質Ｅ１Ｓは、２またはＥＭＡＴＥによる不活性化に対して、酵素を保護する。さらに、２の非スルファモイル化アナログである化合物１は、このステロイドスルファターゼを不活性化しなかった。
【０３０５】
【化４１】
2004511441.tif 000037
２−メトキシエストロンＧＳＳ３３から出発して、そのＣ１７カルボニルへのグリニヤール試薬の立体選択的付加により、第三級アルコールＢＬＥ０１００８、ＢＬＥ０１０１０およびＢＬＥ０１０１４を得た（また、Ｄ．ＰｏｉｒｉｅｒおよびＲ．Ｐ．Ｂｏｉｖｉｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，８，１８９１〜１８９６，１９９８を参照）。ステロイドのβ面上の１８−メチルは、立体障害の少ないα面での求核攻撃を誘導して、１７α−アルキル化化合物が得られる。過剰なグリニヤールを使用し、保護基を使用しなかった。出発物質である２−メトキシエストロン（これらの第三級アルコールに非常に近い極性）からの第三級アルコールのクロマトグラフィー分離を促進するために、ＮａＢＨ４（ＭｅＯＨ、３０分間、０℃）を使って、定量的なカルボニル還元を実行し、２−メトキシエストラジオールを得た。エストロンのＴＨＦ溶液を２−ピコリルリチウム（１．８Ｍ）のシクロヘキサン／Ｅｔ２Ｏ溶液と反応させることにより、収率３０％で、１７−α−（２−ピコリル）−１７−β−エストラジオールＢＬＥ０１０２２を得た。１７−α−（２−ピコリル）−１７−β−エストラジオールＢＬＥ０１０２２のＨＣｌ塩ＢＬＥ０１０２４は、調製中である。
【０３０６】
【化４２】
2004511441.tif 000038
このスルファモイル化は、塩化スルファモイル（約０．７Ｍ）のトルエン溶液を３−ヒドロキシステロイドＢＬＥ０１００８およびＢＬＥ０１０１４のＤＭＦおよびジクロロメタン溶液に添加することにより、そして塩基としてＤＢＭＰを使用することにより、Ｃ３位置で位置選択的に進行し、そのスルファメートＢＬＥ０１０１６ＢおよびＢＬＥ０１０１８が得られる。このスルファメートＢＬＥ０１０１６ＢおよびＢＬＥ０１０１８の収率が低いのは、その１７−α−水酸基の影響およびそのメトキシ基の立体障害が原因であり得る。ＢＬＥ０１０１０のスルファモイル化は、進行中である。
【０３０７】
【化４３】
2004511441.tif 000039
（実験部分）
（３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１００８）
ａ）４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルマグネシウムブロマイドの調製
窒素雰囲気下にて、乾燥三つ口フラスコに、マグネシウム（１．４９ｇ、６１．２ｍｍｏｌ）を添加した。このマグネシウム上に、無水Ｅｔ２Ｏ（２ｍｌ）を直接添加し、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロマイド（３．６７ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）の無水Ｅｔ２Ｏ（１８ｍｌ）溶液を滴下すると（約３０分間）、温度は、３３〜３５℃に達した（Ｅｔ２Ｏ還流）。この反応物を、４５分間攪拌した。ｂ）次いで、室温で、窒素雰囲気下にて、注射器を経由して、２−メトキシエストロンＧＳＳ３３（３００ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２７ｍｌ）溶液に、インサイチュで発生したグリニヤール試薬（１０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加し（温度は、約２８℃に達した）、その反応物を一晩攪拌させた。ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍｌ）の飽和溶液を添加し、その溶液をＡｃＯＥｔ（３×５０ｍｌ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして減圧下にて蒸発させた。得られた粗製混合物をＭｅＯＨ（２７ｍｌ）に溶解し、そして０℃で、３０分間にわたって、過剰の（７５ｍｇ）ＮａＢＨ４で処理した。その反応物を水（５０ｍｌ）でクエンチし、真空下にて、ＭｅＯＨを蒸発させ、その混合物をＡｃＯＥｔ（３×５０ｍｌ）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして減圧下にて蒸発させた。溶離液としてヘキサン１５０ｍｌに次いでＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝２：８を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、白色固形物として、３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１００８を得た（３４２ｍｇ、収率６５％）。
【０３０８】
【化４４】
2004511441.tif 000040
（３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−ベンジル−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１４）
市販の臭化フェニルマグネシウム（Ａｌｄｒｉｃｈ、２．０Ｍ）のＴＨＦ（５ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）溶液を使用したこと以外は、ＢＬＥ０１００８と同様にした。同じワークアップを行った。溶離液としてヘキサン１５０ｍｌに次いでＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：９に次いで２：８を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、真空ポンプで乾燥した後、白色固形物として、３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−ベンジル−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１４を得た（１９４ｍｇ、収率４９％）。
【０３０９】
【化４５】
2004511441.tif 000041
（３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（３−ブロモベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１０）
ａ）４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルマグネシウムブロマイドの調製
窒素雰囲気下にて、乾燥三つ口フラスコに、マグネシウム（１．４９ｇ、６１．２ｍｍｏｌ）を添加した。このマグネシウム上に、無水Ｅｔ２Ｏ（２ｍｌ）を直接添加し、３−ブロモベンジルブロマイド（５．００ｇ、２０ｍｍｏｌ）の無水Ｅｔ２Ｏ（１８ｍｌ）溶液を滴下すると（約３０分間）、温度は、３３〜３５℃に達した（Ｅｔ２Ｏ還流）。この反応物を、４５分間攪拌した。
【０３１０】
ｂ）３−ブロモベンジルマグネシウムブロマイド（１０．０ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）のＥｔ２Ｏ溶液を使用し、ＢＬＥ０１００８と同様にした。同じワークアップを行った。溶離液としてヘキサン１５０ｍｌに次いでＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝１：９（５００ｍｌ）に次いで２：８（５００ｍｌ）を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、真空ポンプで乾燥した後、白色固形物（９８ｍｇ、収率１８％）として、３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（３−ブロモベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１０を得た。
【０３１１】
【化４６】
2004511441.tif 000042
（３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（２−ピコリル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０２２）
ａ）２−ピコリルリチウムの調製
窒素雰囲気下にて、１００ｍｌの乾燥三つ口丸底フラスコ（これは、還流冷却器、温度計を備えている）に、注射器を経由して、フェニルリチウム（１．８Ｍ）（２０．５ｍｌ，３６．９８ｍｍｏｌ）のシクロヘキサン／Ｅｔ２Ｏ＝７０／３０溶液を導入した。５分間にわたって、新たに蒸留した２−ピコリン（３．６５ｍｌ、３６．９８ｍｍｏｌ）を滴下し（温度は、４５℃に達した）、その暗赤色溶液を、４０℃（水浴）で、３０分間保持した。
【０３１２】
ｂ）この混合物を−６℃（氷塩水浴）で冷却し、エストロン（ｏｅｓｔｒｏｎ）（１．０ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２７ｍｌ）溶液を添加した。この暗赤色溶液を、室温で、１時間３０分間攪拌した。その混合物を氷水（３００ｍｌ）に注ぎ、そしてＡｃＯＥｔ（３×１５０ｍｌ）で抽出し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、そして減圧下にて蒸発させた。溶離液としてＡｃＯＥｔ：ヘキサン＝３０：７０〜４０：６０（９００ｍｌ）を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、真空ポンプで乾燥した後、白色固形物（４０５ｍｇ、収率３０％）として、３，１７β−ジヒドロキシ−１７α−（２−ピコリル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０２２を得た。
【０３１３】
【化４７】
2004511441.tif 000043
（３−Ｏ−スルファメート１７β−ヒドロキシ−１７α−（４−第三級ブチルベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１６）
１７α−α−（４−第三級ブチルベンジル）−２−メトキシエストラジオールＢＬＥ０１００８（１８２ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）攪拌溶液に、２，６−ジ−第三級ブチル−４−メチルピリジン（ＤＢＭＰ）（２５０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を、窒素雰囲気下にて、室温で、１５分間攪拌した。注射器を経由して、塩化スルファモイル（約０．７Ｍ）のトルエン溶液（３．４８ｍｌ、２．４３ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で、１６時間攪拌した。ＡｃＯＥｔ（５０ｍｌ）を添加し、その溶液をブライン（３×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、その溶媒を真空下にて蒸発させた。その粗混合物を、溶離液としてヘキサン（１５０ｍｌ）に次いでアセトン：ヘキサン＝２５：７５を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、真空ポンプで乾燥した後、白色固形物（７０ｍｇ、収率３３％）として、未反応フェノールＢＬＥ１００８および３−Ｏ−スルファメート１７β−ヒドロキシ−１７α−（４−第三級ブチルベンジル）−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１６を得た。
【０３１４】
【化４８】
2004511441.tif 000044
（３−Ｏ−スルファメート１７β−ヒドロキシ−１７α−ベンジル−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１８）
１７α−ベンジル−２−メトキシエストラジオールＢＬＥ０１０１４（１７１ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１２ｍｌ）攪拌溶液に、ＤＢＭＰ（２６８ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を、窒素雰囲気下にて、室温で、１５分間攪拌した。注射器を経由して、塩化スルファモイル（約０．７Ｍ）のトルエン溶液（３．８４ｍｌ、２．６１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、室温で、５時間攪拌した。ＡｃＯＥｔ（５０ｍｌ）を添加し、その溶液をブラインで洗浄し（３×５０ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、濾過し、その溶媒を真空下にて蒸発させた。その粗混合物を、溶離液としてアセトン：ヘキサン＝２０：８０を使用するフラッシュクロマトグラフィー（カラムφ＝２．５ｃｍ、ｈ＝２０ｃｍ）により精製して、真空ポンプで乾燥した後、白色固形物（３０ｍｇ、収率１５％）として、未反応フェノールＢＬＥ０１０１４（７３ｍｇ、４３％）および３−Ｏ−スルファメート１７β−ヒドロキシ−１７α−ベンジル−２−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエンＢＬＥ０１０１８を得た。
【０３１５】
【化４９】
2004511441.tif 000045
【０３１６】
【化５０】
2004511441.tif 000046
（生物学的データ）
以下の表で識別した多数の化合物を試験した。
【０３１７】
【化５１】
2004511441.tif 000047
これらの化合物により得られたＳＴＳ阻害を、本明細書中で設定したプレートアッセイおよびプロトコルに従って決定した。
【０３１８】
【化５２】
2004511441.tif 000048
【０３１９】
【化５３】
2004511441.tif 000049
【０３２０】
【化５４】
2004511441.tif 000050
上記明細書で言及した全ての文献および特許および特許出願の内容は、本明細書中で参考として援用されている。
【０３２１】
本発明の種々の改良および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかとなる。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記述されているものの、請求された発明がこのような特定の実施形態には過度に限定されないことが理解できるはずである。実際、本発明を実行するために記述した様式の種々の改良は、化学、生物学または関連した分野の当業者に明らかであるが、上記請求の範囲の範囲内であることが意図される。
【国際公開パンフレット】
2004511441.tif 000056
2004511441.tif 000057
2004511441.tif 000058
2004511441.tif 000059
2004511441.tif 000060
2004511441.tif 000061
2004511441.tif 000062
2004511441.tif 000063
2004511441.tif 000064
2004511441.tif 000065
2004511441.tif 000066
2004511441.tif 000067
2004511441.tif 000068
2004511441.tif 000069
2004511441.tif 000070
2004511441.tif 000071
2004511441.tif 000072
2004511441.tif 000073
2004511441.tif 000074
2004511441.tif 000075
2004511441.tif 000076
2004511441.tif 000077
2004511441.tif 000078
2004511441.tif 000079
2004511441.tif 000080
2004511441.tif 000081
2004511441.tif 000082
2004511441.tif 000083
2004511441.tif 000084
2004511441.tif 000085
2004511441.tif 000086
2004511441.tif 000087
2004511441.tif 000088
2004511441.tif 000089
2004511441.tif 000090
2004511441.tif 000091
2004511441.tif 000092
2004511441.tif 000093
2004511441.tif 000094
2004511441.tif 000095
2004511441.tif 000096
2004511441.tif 000097
2004511441.tif 000098
2004511441.tif 000099
2004511441.tif 000100
2004511441.tif 000101
2004511441.tif 000102
2004511441.tif 000103
2004511441.tif 000104
2004511441.tif 000105
2004511441.tif 000106
2004511441.tif 000107
2004511441.tif 000108
2004511441.tif 000109
2004511441.tif 000110
2004511441.tif 000111
2004511441.tif 000112
2004511441.tif 000113
2004511441.tif 000114
2004511441.tif 000115
2004511441.tif 000116
2004511441.tif 000117
2004511441.tif 000118
2004511441.tif 000119
2004511441.tif 000120
2004511441.tif 000121
2004511441.tif 000122
2004511441.tif 000123
2004511441.tif 000124
2004511441.tif 000125
2004511441.tif 000126
2004511441.tif 000127
2004511441.tif 000128
2004511441.tif 000129
【国際調査報告】
2004511441.tif 000130
2004511441.tif 000131
2004511441.tif 000132
2004511441.tif 000133
2004511441.tif 000134
2004511441.tif 000135