(57)【要約】腫瘍および他の病変の光線療法および／または光線診断のための、新規アゾ化合物およびそのバイオコンジュゲート。本発明のアゾ誘導体は、電磁スペクトルの低エネルギー紫外、可視、近赤外（ＮＩＲ）領域で吸光するように設計される。光線療法効果は、アゾ化合物の光励起に際して産生される反応性中間体であるフリーラジカルと、対象組織との直接的相互作用に起因する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
2006503096.tif 000007
式中、Ｑは、単結合または−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル；Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ３およびＲ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｘは、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙは、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚは、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ５−Ｒ６、Ｒ６−Ｒ７、Ｒ８−Ｒ１０またはＲ１０−Ｒ１２は、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅは水素原子であるか、または抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、糖模倣物、薬剤、ホルモンまたは核酸を含む群から選択され；Ｌは、−（ＣＨ２）ｃ−のリンカーユニットであり、ａおよびｂは、独立して０ないし１０の範囲で変動し、ｃは、１ないし１０の範囲で変動する、
の化合物。
【請求項２】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−Ｃ＝Ｏであり；Ｙが−ＣＲ１０Ｒ１１であり；Ｚが−ＣＲ１２Ｒ１３であり；Ｒ１０ないしＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、熱感受性バクテリオエンドトキシン（ＳＴ）受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、コレシストキニン（ＣＣＫ）受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが−Ｃ＝Ｏであり；Ｚが、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−および−ＮＲ３からなる群から選択され；Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１２およびＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−および−ＮＲ３からなる群から選択され；Ｚが−Ｃ＝Ｏであり；Ｒ８ないしＲ１１が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが−ＣＲ１０Ｒ１１であり；Ｚが−ＣＲ１２Ｒ１３であり；Ｒ８およびＲ１０が、一緒になってベンゼン環を形成し；Ｒ９およびＲ１１が、炭素−炭素結合を形成する基であり；Ｒ１２およびＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが−ＣＲ１０Ｒ１１であり；Ｚが−Ｏ−であり；Ｒ８およびＲ１０が、一緒になってベンゼン環を形成し；Ｒ９およびＲ１１が、炭素−炭素結合を形成する基であり；Ｒ１２およびＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが−ＣＲ１０Ｒ１１であり；Ｚが−ＮＲ３であり；Ｒ８およびＲ１０が、一緒になってベンゼン環を形成し；Ｒ９およびＲ１１が、炭素−炭素結合を形成する基であり；Ｒ１２およびＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが−ＣＲ８Ｒ９であり；Ｙが−ＣＲ１０Ｒ１１であり；Ｚが−Ｃ＝Ｏであり；Ｒ８およびＲ１０が、一緒になってベンゼン環を形成し；Ｒ９およびＲ１１が、炭素−炭素結合を形成する基であり；Ｒ１２およびＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；ａが、独立して０ないし６の範囲で変動する、請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本願は、２００１年５月４日に出願された米国特許出願番号０９／８４９,１６３の一部継続出願である。これは現在係属しており、出典明示によりその全体を本明細書の一部とする。
【０００２】
技術分野
本発明は、一般的に光線療法（phototherapy）で使用するための新規アゾバイオコンジュゲート（bioconjugate）に関する。
【０００３】
背景技術
臨床実務における可視および近赤外（ＮＩＲ）光の使用は、急速に成長している。電磁スペクトルの可視、ＮＩＲまたは長波長（ＵＶ−Ａ、＞３５０ｎｍ）領域で吸光または発光する化合物は、光学的断層撮影、内視鏡的可視化および光線療法に潜在的に有用である。しかしながら、生物医学光学の主要な利点は、その治療的潜在能力にある。光線療法は、内外両側の各種表面病変の処置に安全かつ効果的な手法であると立証されてきた。その有効性は、放射線療法のそれに匹敵するが、重要な非標的器官に対する有害な放射性毒性がない。
【０００４】
光線療法は多世紀に渡り存在し、様々な皮膚表面の病気の処置に使用されてきた。インドでは早くも紀元前１４００年に、植物抽出物（ソラレン）が太陽光と組合せて白斑の処置に使用された。１９０３年、Von Tappeiner と Jesionek は、皮膚癌、皮膚の狼瘡および女性性器の湿疣を処置するために、光増感剤としてエオシンを使用した。長年に渡ってソラレンと紫外線Ａ（低エネルギー）照射は、乾癬、類乾癬、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、湿疹、白斑、円形脱毛症（areata）および新生児ビリルビン血症を含む幅広い皮膚科学的疾患の処置に使用されてきた。癌の光線療法の可能性は１９００年代初期から認識されてきたが、安全性と有効性を立証する系統的な研究は、乳癌腫の処置で１９６７年にようやく始まった。Dougherty らは、その後、光力学的療法（ＰＤＴ）による長期治癒が可能であることを決定的に確立した。現在、光線療法の方法は、アテローム性動脈硬化症や血管再狭窄などの心血管障害の処置、リウマチ性関節炎の処置、およびクローン病などの炎症性疾患の処置のためにも研究されている。
【０００５】
光線療法の手法は、高い吸光性を有する光増感剤（即ち、発色団）を必要とする。これらの化合物は、好ましくは化学的に不活性であり、適切な波長の光による照射の際にのみ活性化されるべきである。これらの光増感剤が、直接的に、または生体活性担体への付着を介して標的組織に結合すると、光で開始される選択的組織傷害を誘導できる。さらに、光増感剤が化学療法剤でもあるならば（例えば、アントラサイクリン系抗腫瘍剤）、増強された治療効果を達成できる。
【０００６】
効果的な光線療法剤は、以下の特性を有するべきである：（ａ）高モル濃度の吸光係数；（ｂ）長い三重項寿命；（ｃ）高収率の一重項酸素および／または他の反応性中間体、即ち、フリーラジカル、ナイトレン（nitrene）、カルベン、カボニウム（cabonium）イオンなどの開殻（open-shell）イオン種など；（ｄ）細胞成分への効率的なエネルギーまたは電子伝達；（ｅ）水性環境で凝集を形成する傾向が低いこと；（ｆ）効率的かつ選択的な病変標的化；（ｇ）血液および非標的組織からの迅速なクリアランス；（ｈ）低い全身的毒性；および（ｉ）変異原性の欠如。
【０００７】
光増感剤は、１型および２型と称する２つの別個の経路を介して作用する。１型のメカニズムは、次のスキームで示される。
【化１】
2006503096.tif 000002
光励起の後、１型メカニズムは、光増感剤から細胞成分への直接的なエネルギーまたは電子の伝達を伴い、それにより細胞死を引き起こす。光励起の後、２型メカニズムは、次のスキームで示される通りの別個の段階を伴う：
【化２】
2006503096.tif 000003
第１段階で、三重項励起状態の光増感剤から組織周辺の酸素分子へのエネルギー伝達により、一重項酸素が生成される。第２段階で、一重項酸素と組織との衝突が組織損傷を進める。１型と２型の両メカニズムにおいて、最も低い三重項状態の増感剤を介して光反応が進行する。故に、効果的な光線療法には、比較的長い三重項寿命が必要とされる。対照的に、光増感剤に起因する組織への光損傷を避けるには、比較的短い三重項寿命が必要とされる。
【０００８】
腫瘍光線療法剤によりもたらされる組織傷害の生物学的根拠は、集約的研究の対象であった。これらの研究で採用された光増感剤のタイプと数は比較的少ないとはいえ、組織損傷についての各種の妥当な生化学的メカニズムが仮定されてきた。これらの生化学的メカニズムは、以下の通りである：ａ）癌細胞は低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体の発現を上方調節し、ＰＤＴ剤はＬＤＬおよびアルブミンに選択的に結合する；（ｂ）ポルフィリン様物質は、増殖する新生血管構造に選択的に取込まれる；（ｃ）腫瘍はしばしば数が増えた脂質体を含有し、従って疎水性光増感剤に結合できる；（ｄ）「漏れ易い」腫瘍血管構造とリンパ排出の減少の組合せは、ポルフィリン蓄積をもたらす；（ｅ）腫瘍細胞は、ポルフィリン凝集体の食作用または飲作用について、増大した能力を有し得る；（ｆ）腫瘍関連マクロファージは、腫瘍における光増感剤濃縮の大部分を担い得る；そして（ｇ）癌細胞は光増感剤に誘導されるアポトーシスを受け得る。これらのメカニズムの中で、（ｆ）と（ｇ）が最も一般的であり、これら２つの選択肢の中で、（ｆ）がポルフィリン様化合物の光線療法効果が誘導される最も起こり得るメカニズムであるという一般的同意がある。
【０００９】
現在知られている光増感剤の殆どは、一般にＰＤＴ剤と呼ばれ、２型メカニズムを介して作用する。例えば、ヘマトポルフィリン誘導体である Photofrin II は、米国食品医薬品局により膀胱、食道および後期肺癌の処置に承認された。しかしながら、Photofrin II は、いくつかの欠点を有すると示されてきた：低モル濃度の吸光度（＝３０００Ｍ−１）、低い一重項酸素収量（Ｎ＝０.１）、化学的不均一性、凝集および長時間の皮膚感光性。故に、Photofrin II と比較して改善された吸光特性、より良好なクリアランスおよび低減された皮膚感光性を示す、より安全かつ効果的なＰＤＴ用光増感剤の開発には、相当な努力がなされてきた。これらの光増感剤には、単量体ポルフィリン誘導体、コリン類、シアニン類、フタロシアニン類、フェノチアジン類、ローダミン類、ヒポクレリン（hypocrellin）類などが含まれる。しかしながら、これらの光線療法剤も、主に２型メカニズムを介して作用する。
【００１０】
驚くべきことに、本来１型メカニズムは２型メカニズムよりも効率的であると思われるにも関わらず、１型光増感剤の開発にはあまり注意が向けられてこなかった。第一に、２型と異なり、１型光増感剤は、細胞傷害を引き起こすのに酸素を必要としない。第二に、１型メカニズムは２段階（光励起と直接的エネルギー伝達）を伴い、一方２型メカニズムは３段階（光励起、一重項酸素生成およびエネルギー伝達）を伴う。さらに、いくつかの腫瘍は、２型メカニズムを無効する低酸素領域を有する。しかしながら、２型メカニズムに付随する欠点にも関わらず、１型メカニズムを通して作用する化合物は、少数しか開発されてこなかった（例えば、アントラサイクリン抗腫瘍剤）。
【００１１】
従って、１型メカニズムを通して作用する効果的な光増感剤を開発する必要がある。励起状態の光増感剤が、フリーラジカル、ナイトレン、カルベンなどの反応性中間体を生成できれば、光線療法の有効性はさらに増強できる。これらは、励起した発色団より長い寿命を有し、相当な細胞傷害を引き起こすと示されてきた。
【００１２】
発明の概要
本発明は、この要望に取り組み、電磁スペクトルの低エネルギー、紫外、可視、近赤外（ＮＩＲ）領域で吸光し、腫瘍および他の病変の光線療法に使用される新規アゾ誘導体およびそれらのバイオコンジュゲートを開示する。より具体的には、本発明は、式１
【化３】
2006503096.tif 000004
式中、Ｑは単結合または−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル；Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ３およびＲ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｘは、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙは、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚは、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ５−Ｒ６、Ｒ６−Ｒ７、Ｒ８−Ｒ１０またはＲ１０−Ｒ１２は、場合により一緒になって６員の脂環式環または芳香環を形成し；Ｅは水素原子であるか、または抗体、ペプチド、ペプチド模倣物（peptidomimetic）、炭水化物、糖模倣物（glycomimetic）、薬剤、ホルモンまたは核酸からなる群から選択され；Ｌは、−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ｄＣＯＮＲ３−、−Ｎ（Ｒ３）ＣＯ（ＣＨ２）ｄ−、−ＯＣＯ（ＣＨ２）ｅ−、−（ＣＨ２）ｆＣＯ２−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ２−、−ＨＮＣＯＮＨ−、−ＨＮＣＳＮＨ−、−ＨＮＮＨＣＯ−、−ＯＳＯ２−、−ＮＲ３（ＣＨ２）ｇＣＯＮＲ４−、−ＣＯＮＲ３（ＣＨ２）ｈＮＲ４ＣＯ−および−ＮＲ３ＣＯ（ＣＨ２）ｉＣＯＮＲ４からなる群から選択されるリンカーユニットであり；ａ、ｂ、ｄないしｉは、独立して０ないし１０の範囲で変動し、そして、ｃは、１ないし１０の範囲で変動する、
を有するアゾ化合物を開示する。
【００１３】
本発明はまた、本発明のアゾ化合物およびその誘導体を使用して光線療法または光線診断手法を実施する方法も開示する。本方法では、式１を有するアゾ光増感剤の有効量を対象に投与する；
【化４】
2006503096.tif 000005
式中、Ｑは単結合または−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル；Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ３およびＲ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｘは、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙは、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚは、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ５−Ｒ６、Ｒ６−Ｒ７、Ｒ８−Ｒ１０またはＲ１０−Ｒ１２は、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅは水素原子であるか、または抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、糖模倣物、薬剤、ホルモンまたは核酸からなる群から選択され；Ｌは、−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ｄＣＯＮＲ３−、−Ｎ（Ｒ３）ＣＯ（ＣＨ２）ｄ−、−ＯＣＯ（ＣＨ２）ｅ−、−（ＣＨ２）ｆＣＯ２−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ２−、−ＨＮＣＯＮＨ−、−ＨＮＣＳＮＨ−、−ＨＮＮＨＣＯ−、−ＯＳＯ２−、−ＮＲ３（ＣＨ２）ｇＣＯＮＲ４−、−ＣＯＮＲ３（ＣＨ２）ｈＮＲ４ＣＯ−および−ＮＲ３ＣＯ（ＣＨ２）ｉＣＯＮＲ４からなる群から選択されるリンカーユニットであり；ａ、ｂ、ｄないしｉは、独立して０ないし１０の範囲で変動し、そして、ｃは、１ないし１０の範囲で変動する。化合物は光活性化され、腫瘍、障害された血管構造または他の病変の光線療法または光線診断手法が続いて実施される。
【００１４】
アゾ化合物自体が標的組織に選択的に蓄積しない限り、標的化のためにエピトープの外部付着が使用される。例えば、光増感発色団がアントラサイクリン部分であるなら、癌細胞に直接結合でき、標的化のためのエピトープを必要としなくてよい。
【００１５】
本発明の化合物および方法のこれらおよび他の利点および実施態様は、以下の図面、説明および実施例に照らして明らかとなるであろう。
【００１６】
図面の簡単な説明
図１は、本発明の化合物の活性化の図解経路である。
図２は、環状アゾキサンテン誘導体合成の図解経路である。
図３は、アゾアクリジン誘導体合成の図解経路である。
図４は、アゾクマリン誘導体合成の図解経路である。
【００１７】
発明の詳細な説明
本発明は、腫瘍および他の病変の光線療法のための新規アゾ誘導体およびそのバイオコンジュゲートを開示する。
【００１８】
従って、本発明は、一般式１の有機アゾ化合物を含む、新しい、構造的に多様な組成物を提供する；
【化５】
2006503096.tif 000006
式中、Ｑは、単結合または−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル；Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ３およびＲ４は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｘは、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙは、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚは、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３は、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ５−Ｒ６、Ｒ６−Ｒ７、Ｒ８−Ｒ１０またはＲ１０−Ｒ１２は、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅは水素原子であるか、または抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、糖模倣物、薬剤、ホルモンまたは核酸を含む群から選択され；Ｌは、−（ＣＨ２）ｃ−、−（ＣＨ２）ｄＣＯＮＲ３−、−Ｎ（Ｒ３）ＣＯ（ＣＨ２）ｄ−、−ＯＣＯ（ＣＨ２）ｅ−、−（ＣＨ２）ｆＣＯ２−、−ＯＣＯＮＨ−、−ＯＣＯ２−、−ＨＮＣＯＮＨ−、−ＨＮＣＳＮＨ−、−ＨＮＮＨＣＯ−、−ＯＳＯ２−、−ＮＲ３（ＣＨ２）ｇＣＯＮＲ４−、−ＣＯＮＲ３（ＣＨ２）ｈＮＲ４ＣＯ−および−ＮＲ３ＣＯ（ＣＨ２）ｉＣＯＮＲ４を含む群から選択されるリンカーユニットであり；ａ、ｂ、ｄないしｉは、独立して０ないし１０の範囲で変動し、そして、ｃは、１ないし１０の範囲で変動する。
【００１９】
ある実施態様では、本発明のアゾ化合物は、式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙが、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚが、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ８およびＲ１０が、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、熱感受性バクテリオエンドトキシン（ＳＴ）受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、コレシストキニン（ＣＣＫ）受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；Ｌが、−（ＣＨ２）ｄＣＯＮＲ３−、−Ｎ（Ｒ３）ＣＯ（ＣＨ２）ｄ−、−ＨＮＣＯＮＨ−、−ＨＮＣＳＮＨ−および−ＮＲ３ＣＯ（ＣＨ２）ｉＣＯＮＲ４からなる群から選択されるリンカーユニットであり；そしてａないしｉが、独立して０ないし６の範囲で変動する、一般式１を有する。
【００２０】
別の実施態様では、本発明によるアゾ化合物は、式中、Ｑが−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素およびＣ１−Ｃ１０アルキルからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｘが、−ＣＲ８Ｒ９および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙが、−ＣＲ１０Ｒ１１、−ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚが、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ８およびＲ１０が、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅが、ソマトスタチン受容体結合分子、ＳＴ受容体結合分子、ニューロテンシン受容体結合分子、ボンベシン受容体結合分子、ＣＣＫ受容体結合分子、ステロイド受容体結合分子および炭水化物受容体結合分子からなる群から選択され；Ｌが、−Ｎ（Ｒ３）ＣＯ（ＣＨ２）ｄ−、−（ＣＨ２）ｄＣＯＮＲ３−およびＮＲ３ＣＯ（ＣＨ２）ｉＣＯＮＲ４からなる群から選択されるリンカーユニットであり；そして、ａ、ｂ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈおよびｉが、独立して０ないし６の範囲で変動する、上記一般式１を有する。
【００２１】
さらなる実施態様では、本発明によるアゾ化合物は、式中、Ｑが、単結合または−ＣＲ１Ｒ２であり；Ｒ１およびＲ２が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ３およびＲ４が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキルおよび−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈからなる群から独立して選択され；Ｒ５、Ｒ６およびＲ７が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、ヒドロキシル、−ＳＯ３Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリアルコキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｘが、−ＣＲ８Ｒ９、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｙが、−ＣＲ１０Ｒ１１、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｚが、−ＣＲ１２Ｒ１３、−Ｏ−、−ＮＲ３、−Ｓ−および−Ｃ＝Ｏからなる群から選択され；Ｒ８ないしＲ１３が、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリール、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、Ｃ１−Ｃ１０ポリヒドロキシアルキル、−（ＣＨ２）ａＣＯ２Ｈおよび−（ＣＨ２）ｂＮＲ３Ｒ４からなる群から独立して選択され；Ｒ５−Ｒ６、Ｒ６−Ｒ７、Ｒ８−Ｒ１０またはＲ１０−Ｒ１２が、場合により一緒になって６員環を形成し；Ｅが水素原子であるか、または抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、炭水化物、糖模倣物、薬剤、ホルモンまたは核酸を含む群から選択され；Ｌが、−（ＣＨ２）ｃ−のリンカーユニットであり、ａおよびｂが、独立して０ないし１０の範囲で変動し、ｃが、１ないし１０の範囲で変動する、一般式１を有する。
【００２２】
本発明の化合物は、図１に示す通り、１型メカニズムを通して作用する。図中、−Ｎ＝Ｎは、光活性化に際して窒素放出を行うアゾ部分であり、それによりフリーラジカルを産生する。Ａｒは、光増感を行う芳香族発色団である。脂肪族アゾ化合物も光線療法に使用できるが、活性化に高エネルギーの光を必要とすることがある。Ｌは、発色団とエピトープとの間のリンカーである。エピトープ（Ｅ）は、標的表面により認識され、そしてそれに結合する、分子の特定領域である。エピトープは通常、常にとは限らないが、生体分子を伴う。生体分子には、ホルモン、アミノ酸、ペプチド、ペプチド模倣物、タンパク質、ヌクレオシド、ヌクレオチド、核酸、酵素、炭水化物、糖模倣物、脂質、アルブミン、モノおよびポリクローナル抗体、受容体、シクロデキストリンなどの封入化合物および受容体結合分子が含まれる。生体分子の特定の例には、乳房および前立腺病変の処置用のステロイドホルモン；神経内分泌腫瘍の処置用のソマトスタチン、ボンベシン、ＣＣＫおよびニューロテンシン受容体結合分子；肺癌の処置用のＣＣＫ受容体結合分子；結腸直腸癌の処置用のＳＴ受容体および癌胎児性抗原（ＣＥＡ）結合分子；黒色腫の処置用のジヒドロキシインドールカルボン酸および他のメラニン産生生合成中間体；血管疾患の処置用のインテグリン受容体およびアテローム性動脈硬化症斑結合分子；および脳病変の処置用のアミロイド斑結合分子が含まれる。合成ポリマーの例には、ポリアミノ酸類、ポリオール類、ポリアミン類、ポリ酸類、オリゴヌクレオチド類、アボロール（aborol）類、デンドリマー（dendrimer）類およびアプタマー（aptamer）類が含まれる。
【００２３】
光線診断および／または光線療法剤の生体分子への結合は、Hnatowich et al., Radiolabeling of Antibody: A simple and efficient method, Science, 1983, 220, p. 613; Pelegrin et al., Photoimmunodiagnostics with antibody-fluorescein conjugates: in vitro and in vivo preclinical studies, Journal of Cellular Pharmacology, 1992, 3, pp. 141-145; および米国特許第５,７１４,３４２号（これらは各々全体を出典明示により本明細書の一部とする）に開示されるような、当分野で周知の方法により達成できる。抗体およびペプチドを使用して、腫瘍の診断イメージングのために蛍光染料を腫瘍へ成功裡に特異的に標的化したことは、Achilefu et al., Novel receptor-targeted fluorescent contrast agents for in vivo imaging of tumors, Investigative Radiology, 2000, 35, pp. 479-485; Ballou et al., Tumor labeling in vivo using cyanine conjugated monoclonol antibodies, Cancer Immunology and Immunotherapy, 1995, 41, pp. 257-263; and Licha et al., New contrast agent for optical imaging: acid cleavable conjugates of cyanine dyes with biomolecules, in Biomedical Imaging:  Reporters, Dyes and Instrumentation, Proceedings of SPIE, 1999, 3600, pp. 29-35（これらは各々全体を出典明示により本明細書の一部とする）に記載のように、我々および他の人々により立証されてきた。従って、本発明の受容体標的化光線療法剤は、様々な病変の処置に有効である。
【００２４】
図１で概説する過程において、芳香族発色団の光励起は、アゾ基への迅速な分子内エネルギー伝達をもたらし、分子窒素の放出およびジラジカルの形成を伴うＮ−Ｃ結合破断に至る。ジラジカルはまた、その空間的配向が好適であるならば、相互に化合して中性分子を形成できる。放出された窒素は、振動的励起状態にあり得、さらなる細胞傷害を引き起こし得る。この過程は、アジドで観察される過程と非常によく似ている。アゾ化合物自体が選択的に標的組織に蓄積して付加的結合基の必要性を回避しない限り、標的化のためにエピトープの外部付着が通常必要とされる。例えば、Ａｒ部分がアントラサイクリン部分であるならば、それは癌細胞に直接結合でき、標的化のためにエピトープを必要としなくてよい。
【００２５】
アゾ化合物の合成は、Sandler and Karo, Azo Compounds, Organic Functional Group Preparations, 1986, Academic Press: New York, pp. 353-409（その全体を出典明示により本明細書の一部とする）に開示されるように、当分野で周知の各種の方法で達成される。本発明のアゾ誘導体は、対象の様々な器官または組織へ選択的に送達されるように、様々なタイプの生体分子、合成ポリマーおよび有機的凝集体を付着するのに使用できる付加的な官能性を含有する。実施態様からの代表的化合物の製造を、図２−４に示す。
【００２６】
図２は、環状アゾキサンテン誘導体５の典型的な製造を示す。メチル２−クロロ−５−ニトロベンゾエート１を３−ヒドロキシベンジルアルコール２と反応させ、その後鹸化し、ニトロキサントン３へ環化する。次いでキサントン３を標準的な４工程でアゾ前駆体４に変換する。ヒドラジノ誘導体４を次いで酸化水銀または四酢酸鉛で酸化し、次いでホスゲン、チオホスゲン、カルボニルジイミダゾール、ジスクシンイミジルカルボネートなどの二官能性結合剤を使用して、対象となる任意の所望の生体分子に結合させる。特に、本発明の生体分子は、結腸直腸、子宮頸、卵巣、肺および神経内分泌系の腫瘍に結合するものに適する。これらには、ソマトスタチン、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ボンベシン、ニューロエンドクリンおよび熱感受性バクテリオエンドトキシン（ＳＴ）受容体結合化合物が含まれる。
【００２７】
図３を参照して、アゾアクリジン誘導体９は、合成スキームを図２に示す環状アゾキサンテン誘導体と同様に製造できる。メチル２−クロロ−５−ニトロベンゾエート１を３−ヒドロキシベンジルアミン６と反応させ、その後鹸化し、ニトロアクリドン７へ環化する。次いでアクリドン７を標準的な４工程でアゾ前駆体８に変換する。ヒドラジノ誘導体８を次いで酸化水銀または四酢酸鉛で酸化し、次いで先に記載したように、ジスクシンイミジルカルボネート、ジスクシニミジルオキサレート、ホスゲン、チオホスゲン、カルボニルジイミダゾールなどの二官能性結合剤を使用して生体分子に結合させる。
【００２８】
図４を参照して、典型的なアゾクマリン誘導体１２の製造を示す。フェノール１０を最初にメチルブロモアセテートでアルキル化し、次いで標準的な方法でアゾ化合物１１に変える。エステル１１を鹸化し、先に記載した既知の二官能性結合試薬を使用して生体分子に結合させるか、あるいは当業者に知られているように自動化ペプチド合成法を使用して直接結合させることができる。
【００２９】
本発明の新規組成物は、企図する適用に応じて幅広く変化し得る。腫瘍には、生体分子は、ソマトスタチン、ボンベシン、ニューロテンシン、ＣＣＫ、ＳＴ、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体結合化合物を含むがこれらに限定されるわけではない腫瘍マーカーのクラスから選択される。血管の病変には、生体分子は、インテグリン、セレクチン、血管内皮増殖因子、フィブリン、組織プラスミノゲン活性化因子、トロンビン、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、シアリルルイス（Sialyl Lewis）Ｘおよびその模倣物並びにアテローム性動脈硬化症斑結合化合物のクラスから選択され得る。
【００３０】
先に記載したように、いくつかの化合物は、生体活性担体の補助なしで腫瘍または他の病変に蓄積する。ポルフィリン生合成の中間体であるデルタ−アミノレブリン酸の投与は、正常組織と比較して腫瘍において２倍のポリフィン取込みをもたらす。同様に、メラニン生合成の中間体であるジヒドロキシインドール−２−カルボン酸の投与は、正常細胞と比較して黒色腫細胞においてメラニンレベルの実質的な増強をもたらす。従って、光増感剤は、これらのタイプの生合成中間体への付着により病変部位へ送達され得る。
【００３１】
本発明の組成物による治療手法の実施方法も開示される。本方法は、医薬的に許容し得る製剤に含有される本発明の組成物の有効量を患者に投与することを包含する。その後、光増感剤を対象の領域に蓄積させ、続いて３００ないし１２００ｎｍ、好ましくは３５０ないし８５０ｎｍの波長の光を病変部位に照射する。病変が皮膚表面にあるならば、それは直接照射できる；そうでなければ、光源を備えた内視鏡カテーテルを用いて光線療法効果を達成してもよい。照射の強度、電力、期間および光の波長は、病変の位置および部位に応じて幅広く変化し得る。フルエンス率は、常にとは限らないが、好ましくは、熱的効果を最小限にするために２００ｍＷ／ｃｍ２より低く維持される。適する電力は、病変のサイズ、深度および病理に依存する。本発明の組成物は、腫瘍、炎症過程および障害された血管構造の光線療法を含むが、これらに限定されるわけではない、広範な臨床有用性を有する。
【００３２】
本発明の組成物は、経腸（経口または経直腸）、非経口、局所または皮膚投与のための光線診断または光線療法用組成物に製剤できる。光増感剤の局所または皮膚送達はまた、エアゾル剤、クリーム剤、ゲル剤、液剤なども含み得る。組成物は所望の診断または治療目的を達するのに効果的な用量で投与される。かかる用量は、用いられる特定の錯体、検査される器官または組織、臨床手法で用いられる設備、達成される処置の効力などに応じて幅広く変化し得る。これらの組成物は、企図する投与タイプに適する従来の医薬担体および賦形剤と共に、有効量の光線療法剤を含有する。これらの組成物は、安定剤および皮膚浸透促進剤も含んでもよく、また医薬的に許容し得る緩衝剤、乳化剤、界面活性剤および場合により塩化ナトリウムなどの電解質も含んでもよい。
【００３３】
経腸投与用製剤は、当分野で周知のように幅広く変化し得る。一般に、かかる製剤は、組成物の有効量を水性溶液または懸濁液中に含む液体である。かかる経腸組成物は、場合により緩衝剤、界面活性剤、乳化剤、チキソトロープ剤などを含んでもよい。経口投与用組成物は、官能的な品質を高めるために、着香料および他の成分も含有し得る。局所適用は、物質の特定の性質および標的となる組織のタイプに応じて、液体の液剤、水／油乳剤、粒子の懸濁剤として製剤し得る。例えば、アゾ化合物が水溶性であるならば、標的組織に、またはその中に、水溶液を適用し得る。皮膚中への、および皮膚を通ってのアゾ化合物の送達は、周知方法および、例えば「エイゾン（azone）」、Ｎ−アルキル環状アミド、ジメチルスルホキシド、長鎖脂肪酸（Ｃ１０）といった経皮浸透増強剤などの物質を使用することにより増強され得る。アゾ化合物が水溶性ではないならば、それを生体適合性の油（大豆油、魚油、ビタミンＥ、亜麻仁油、植物油、グリセリドエステル、長鎖脂肪エステルなど）に溶解し、表面活性化合物（植物または動物のリン脂質；レシチン；長鎖脂肪酸塩およびアルコール；プルロニック：ポリエチレングリコールエステルおよびエーテルなど）を用いて水中で乳化して、標的領域に送達または適用される局所用クリーム、懸濁剤、水／油乳剤、水／油ミクロエマルジョン、またはリポソーム懸濁剤を作成する。リポソームの場合は、アゾ化合物を層状物質に付着させるか、または含有させ得る。
【００３４】
光増感剤の用量は、約０.１ｍｇ／ｋｇ体重ないし約５００ｍｇ／ｋｇ体重で変動し得る。ある実施態様では、用量は約０.５ないし２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にある。一例として、非経腸投与される組成物には、光増感剤の滅菌水性溶液または懸濁液は、約１ｎＭないし約０.５Ｍの範囲の濃度、典型的には約１：Ｍないし約１０ｍＭの濃度で存在し得る。
【００３５】
一般に、製剤化されたアゾ化合物は、光に曝された際に、生物学的媒体内で部分的または完全に標的組織を不活性化するのに有効な用量または濃度で投与する。生物学的媒体は、標的組織中で１型破壊を奏する染料を活性化するのに有効な波長の光に、ある期間曝される。標的組織におけるアゾ化合物の濃度は、組織における受動的または能動的な取込みの結果である。受動的取込みの例は、アゾ化合物が特定の担体に付着しているか、含有される場合である。担体が適切なサイズ、即ち約１００ｎｍないし約１０００ｎｍの範囲、のものであるならば、それは血管腫瘍の灌流境界中に「漏れる」。能動的取込みの例は、受容体ベースの付着物が、標的組織上に発現されている特定の受容体に結合する場合である。従って、アゾ化合物の有効濃度は、製剤の性質、送達方法、標的組織、活性化方法および周囲の正常組織に対するアゾの毒性に依存する。
【００３６】
以下の実施例は、図４に示すように、生体活性ペプチドであるボンベシン、および光線療法的分子であるアゾクマリン誘導体１１ｂに由来する典型的なバイオコンジュゲートの製造および特性に関係する、本発明の特定の実施態様を例示説明する。
【００３７】
実施例
アゾクマリン−ボンベシン（７−１４）コンジュゲートの合成
Applied Biosystems 販売のペプチド合成機（Model 432A SYNERGY Peptide Synthesizer）を用いて、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）固相ペプチド合成戦略によりペプチドを製造した。第一のペプチドカートリッジは、２５−：モルスケールのアミド樹脂を予め載せた Wang 樹脂を含有した。アミノ酸カートリッジをペプチド合成機に設置し、ＣからＮ末端位置へ生成物を合成した。
【００３８】
Ｆｍｏｃ保護アミノ酸（７５：モル）のレジン結合遊離末端アミン（２５：モル）へのカップリングは、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、７５：ｍｏｌ）／Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ、７５：ｍｏｌ）で実行した。固体支持体上の各Ｆｍｏｃ保護基は、次のアミノ酸がそれに結合する前に、ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで除去した。最後のカートリッジは、図４に示すようにアゾ化合物１１ｂを含有し、それは自動的にペプチドに結合され、従って合成後の操作の必要性が回避された。
【００３９】
合成完了後、トリフルオロ酢酸（８５％）：水（５％）：フェノール（５％）：チオアニソール（５％）を含有する切断混合物を６時間用いて、生成物を固体支持体から切断した。ペプチド−アジドコンジュゲートをｔ−ブチルメチルエーテルで沈殿させ、水／アセトニトリル（２：３）混合物中で凍結乾燥した。コンジュゲートを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製し、液体クロマトグラフィー／質量分析（ＬＣ／ＭＳ）で分析した。
【００４０】
明細書中に示し、記載した本発明の実施態様は、当業者である発明者の特定の実施態様にすぎず、どのようにも限定的ではない。従って、これらの実施態様に対する様々な改変、修正または変更を為し得、あるいは発明の精神および以下の特許請求の範囲から逸脱することなく再分類し得る。例えば、ポリ環状芳香族発色団を含有する化合物も、好適な診断イメージング目的に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１は、本発明化合物の活性化の図解経路である。
【図２】図２は、環状アゾキサンテン誘導体合成の図解経路である。
【図３】図３は、アゾアクリジン誘導体合成の図解経路である。
【図４】図４は、アゾクマリン誘導体合成の図解経路である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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