(57)【要約】炎症性腸疾患の治療方法、特にヒトおよび他の動物における炎症性腸疾患の予防および治療について記載する。これらの方法は、炎症性腸疾患の症状が軽減または緩和されるように、生物学的活性ビタミンＤ化合物およびその治療用組成物を投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）ｉ）炎症性腸疾患の症状を有する対象、および
ｉｉ）生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物
を提供する段階；ならびに
ｂ）該症状が軽減されるような条件下で該治療用組成物を該対象に投与する段階
を含む治療方法。
【請求項２】
対象が哺乳動物である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
対象がヒト、非ヒト霊長類、ウマ、イヌおよびネコより選択される、請求項１記載の方法。
【請求項４】
治療用組成物が経皮パッチをさらに含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】
生物学的活性ビタミンＤ化合物が、ビタミンＤ、１α，２５−（ＯＨ）２−１６−エン−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−オキソ−１６−エン−Ｄ３、１α，２４Ｒ（ＯＨ）２−Ｄ３、１α，２５（ＯＨ）２−２２−オキサ−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２４ｂ，−ジホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ，−トリホモ−１ａ，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、１，２５−（ＯＨ）２−１６，２３Ｅ−ジエン−２６−トリフルオロ−１９−ノル−Ｄ３からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項６】
生物学的活性ビタミンＤ化合物が以下の式によって表される類似体より選択される、請求項１記載の方法：
【化１】
2004502638.tif 000018
式中、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素およびアシルからなる群より選択される；
Ｙ１およびＹ２はＨでもよく、または一方がＯ−アリールもしくはＯ−アルキルであって他方が水素であり、β配置もしくはα配置をとってもよい：Ｚ１およびＺ２はいずれもＨである、またはＺ１およびＺ２はまとめてＣＨ２である；ならびに
Ｒはアルキル基、ヒドロキシアルキル基もしくはフルオロアルキル基である、またはＲは以下の側鎖であってもよい：
【化２】
2004502638.tif 000019
式中、（ａ）はＳ配置またはＲ配置をとることができ、Ｒ１は水素、ヒドロキシまたはＯ−アシルであり、Ｒ２およびＲ３はそれぞれアルキル基、ヒドロキシアルキル基およびフルオロアルキル基からなる群より選択される、またはまとめると−−（ＣＨ２）ｍ−−基であり、式中、ｍは２〜５の値を有する整数である。Ｒ４は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ−アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択され、Ｒ５は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択される、またはＲ４およびＲ５はまとめて二重結合性の酸素である。Ｒ６およびＲ７はまとめて炭素−−炭素二重結合を形成し、Ｒ８はＨまたはＣＨ３であってよい。式中、ｎは１〜５の値をとる整数であり、側鎖の２０位、２２位または２３位のいずれか１つの炭素をＯ、ＳまたはＮ原子によって置換してもよい。
【請求項７】
投与が対象１６０ポンド当たり１日につき０．１μｇ〜２０μｇである、請求項１記載の方法。
【請求項８】
投与が重篤な高カルシウム血症を引き起こさない、請求項１記載の方法。
【請求項９】
投与が高カルシウム血症の症状を引き起こさない、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
投与経路が静脈内、経口、非経口、局所的および直腸内より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
生物学的活性ビタミンＤ化合物が治療的有効量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
治療的有効量が、重篤な高カルシウム血症を発症せずに、患者が耐えられる最大量である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ａ）ｉ）炎症性腸疾患に対するリスクのある対象、および
ｉｉ）生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物
を提供する段階；ならびに
ｂ）該治療用組成物を該対象に予防的に投与する段階
を含む治療方法。
【請求項１４】
生物学的活性ビタミンＤ化合物が、ビタミンＤ、１α，２５−（ＯＨ）２−１６−エン−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−オキソ−１６−エン−Ｄ３、１α，２４Ｒ（ＯＨ）２−Ｄ３、１α，２５（ＯＨ）２−２２−オキサ−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２４ｂ，−ジホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ，−トリホモ−１ａ，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、１，２５−（ＯＨ）２−１６，２３Ｅ−ジエン−２６−トリフルオロ−１９−ノル−Ｄ３からなる群より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
生物学的活性ビタミンＤ化合物が以下の式によって表される類似体より選択される、請求項１３記載の方法：
【化３】
2004502638.tif 000020
式中、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素およびアシルからなる群より選択される；
Ｙ１およびＹ２はＨでもよく、または一方がＯ−アリールもしくはＯ−アルキルであって他方が水素であり、β配置もしくはα配置をとってもよい：Ｚ１およびＺ２はいずれもＨである、またはＺ１およびＺ２はまとめてＣＨ２である；ならびに
Ｒはアルキル基、ヒドロキシアルキル基もしくはフルオロアルキル基である、またはＲは以下の側鎖であってもよい：
【化４】
2004502638.tif 000021
式中、（ａ）はＳ配置またはＲ配置をとることができ、Ｒ１は水素、ヒドロキシまたはＯ−アシルであり、Ｒ２およびＲ３はそれぞれアルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択される、またはまとめると−−（ＣＨ２）ｍ−−基であり、式中、ｍは２〜５の値を有する整数である。Ｒ４は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ−アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択され、Ｒ５は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択される、またはＲ４およびＲ５はまとめて二重結合性の酸素である。Ｒ６およびＲ７はまとめて炭素−−炭素二重結合を形成し、Ｒ８はＨまたはＣＨ３であってよい。式中、ｎは１〜５の値をとる整数であり、側鎖の２０位、２２位または２３位のいずれか１つの炭素をＯ原子、Ｓ原子またはＮ原子で置換してもよい。
【請求項１６】
投与によって炎症性腸疾患の症状の発現が遅れる、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
炎症性腸疾患のリスクのある対象がヒトである、請求項１３記載の方法。
【請求項１８】
ヒトが、青少年、米国に住んでいる人、英国に住んでいる人、北欧に住んでいる人、ユダヤ系の人、開発途上国に住んでいる人、家族が炎症性腸疾患に罹患した人、またはＩＢＤのリスク遺伝子を有すると判定された人より選択される、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
投与経路が静脈内、経口、非経口、局所的および直腸内より選択される、請求項１３記載の方法。
【請求項２０】
治療用組成物が経皮パッチをさらに含む、請求項１３記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、炎症性腸疾患の予防および治療のための治療薬に関し、特に生物学的活性（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ）ビタミンＤ化合物の使用によるヒトならびに他の動物における炎症性腸疾患の予防および治療に関する。
【０００２】
発明のバックグラウンド
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は、原因が明確でない腸の慢性再発性炎症である。ＩＢＤはクローン病および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）という２つの別個の疾患のことを指す。いずれの疾患にも消化管抗原に対する調節不全性の免疫応答、粘膜バリアーの破綻、および／または持続性腸感染に対する有害な炎症反応が関与しているように思われる。消化管内腔の内容物および細菌は粘膜免疫系を常に刺激しており、炎症誘発性および炎症抑制性の細胞および分子の微妙なバランスが、障害をもたらす重大な炎症を誘発させずに消化管の健全性を保っている［ＭａｃＤｅｒｍｏｔｔ， Ｒ．Ｐ．、Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、３１：９０７〜９１６（１９９６）］。ＩＢＤの炎症カスケードがどのように始まるかは不明であるが、粘膜および全身の免疫系がＧＩ抗原依存的に常に刺激されることにより、炎症カスケードが持続し、病変の形成がもたらされる。
ＩＢＤの治療法はまだなく、米国での患者数は２００万人に上る。ＩＢＤの症状を管理する現在の方法では、米国だけでも年間に推定１２億ドルのコストがかかる。
【０００３】
ＩＢＤの患者では、腸内壁の潰瘍および炎症のために腹痛、下痢および直腸出血という症状が生じる。潰瘍性大腸炎は大腸で起こるが、クローン病は小腸および大腸に加えて消化管全体に及ぶことがある。ほとんどの患者の場合、ＩＢＤは症状が数カ月から数年にわたる慢性的な状態である。本症が最も多いのは若齢成人であるが、どの年代層にも起こる。これは世界中でみられるが、米国、英国および北欧などの先進国で最も多い。ユダヤ系の人々で特に頻度が高く、罹患率にも人種差がみられる。ＩＢＤの臨床症状は、間欠性直腸出血、痙攣性腹痛、体重減少および下痢である。ＩＢＤの診断は臨床症状、バリウム浣腸に基づいてなされるが、直接観察（Ｓ状結腸鏡検査または大腸内視鏡検査）が最も正確な検査である。遷延性ＩＢＤは結腸癌の危険因子である。癌のリスクはＩＢＤ発症から８〜１０年後に著しく高くなりはじめる。
【０００４】
ＵＣの患者の一部では直腸のみに罹患部がある（直腸炎）。また別のＵＣ患者では直腸および隣接した左結腸に罹患部が限局している（直腸Ｓ状結腸炎）。さらに別の患者では結腸全体にＵＣがある（汎発性ＩＢＤ）。ＵＣの症状は一般に、疾患の範囲が広いほど（罹患した結腸の割合が大きいほど）重症である。
【０００５】
直腸に限局した疾患（直腸炎）または左結腸の終末部に限局したＵＣ（直腸Ｓ状結腸炎）の患者の予後は、ＵＣが結腸全体に及ぶ患者よりも良い。経口薬または浣腸を用いた簡単な定期的治療で十分と思われる。さらに広範囲にわたる疾患の患者では、炎症のある腸からの失血が貧血を招くおそれがあり、鉄分の補給、または場合によっては輸血による治療が必要なことがある。稀には、炎症が極めて重症化した際に結腸が急に大きく拡張することがある。この状態は中毒性巨大結腸と呼ばれる。中毒性巨大結腸の患者は極めて重篤で、発熱、腹痛および腹部膨満、脱水ならびに栄養失調を伴う。薬物療法によって患者が急速に改善しない場合は、結腸破裂を防ぐために通常は手術が必要である。
【０００６】
クローン病は消化管のすべての領域で起こる可能性がある。本症では多数の患者で炎症および線維化に起因する腸閉塞が起こる。クローン病の頻度の高い合併症には肉芽腫および瘻孔形成がある。疾患の進行に伴う転帰には、静脈内栄養補給、手術および結腸瘻造設術が含まれる。
【０００７】
ＩＢＤの治療に最もよく用いられる薬剤は、サリチル酸などの抗炎症薬である。サリチル酸製剤は軽症から中等症までの疾患の治療に有効である。また、薬剤の長期的な服用によって疾患の再燃頻度を低下させることもできる。サリチル酸製剤の例にはスルファサラジン、オルサラジンおよびメサラミンが含まれる。これらの薬剤はすべて最大の治療効果を得るために高用量で経口投与される。これらの薬剤に副作用がないわけではない。アザルフィジンを高用量で用いた場合には胃の不調が起こることがあり、いくつかのサリチル酸製剤については軽症腎炎が稀に発生することが報告されている。
副腎皮質ステロイドはＩＢＤの治療においてサリチル酸よりも薬効が強く即効性があるが、重大な副作用のおそれがあるために副腎皮質ステロイドの使用は重症な患者に限定されている。通常、副腎皮質ステロイドの副作用は長期使用時に起こる。これには骨および皮膚の菲薄化、感染症、糖尿病、筋萎縮、顔面腫脹、精神障害が含まれ、稀には股関節破壊も起こる。
【０００８】
サリチル酸にも副腎皮質ステロイドにも反応しないＩＢＤ患者には、免疫系を抑制する薬物療法が用いられる。免疫抑制剤の例には、アザチオプリンおよび６−メルカプトプリンが含まれる。この状況で用いられる免疫抑制剤は、ＩＢＤを管理し、副腎皮質ステロイドを徐々に減量または中止することが可能になる点で有用である。しかし、免疫抑制剤は感染リスクの増加および腎不全を引き起こすほか、入院が必要である。
【０００９】
ＩＢＤの予防および治療を行える薬剤に対しては明らかに大きな需要がある。このような薬剤を、有害な副作用を最小限にとどめながら、費用対効果に優れた時宜を得た様式で投与することができれば、望ましいと考えられる。
【００１０】
定義
「ビタミンＤ化合物」という語句には、以下の特徴のうち少なくとも１つを有する化合物が非制限的に含まれる：ビタミンＤのＣ環、Ｄ環および３β−ヒドロキシシクロヘキサンＡ環がビタミンＤの５，７ジエン二重結合系によって互いに結合し、Ｄ環に任意の側鎖が結合したもの（すなわち、「ビタミンＤの核」、ならびにビタミンＤに典型的な５，７ジエン二重結合系によって互いに結合した置換型または非置換型のＡ環、Ｃ環およびＤ環を有し、Ｄ環に側鎖が結合している化合物）。
【００１１】
「非セコステロイド性ビタミンＤ模倣物」という語句は、セコステロイドであるカルシトリオールのさまざまな活性を模倣しうる非セコステロイド性化合物と定義される。このような化合物の例には、ＬＧ１９００９０、ＬＧ１９０１１９、ＬＧ１９０１５５、ＬＧ１９０１７６およびＬＧ１９００１７８が非制限的に含まれる［Ｂｏｅｈｍら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：２６５〜２７５（１９９９）を参照］。
【００１２】
「生物学的活性ビタミンＤ化合物」という語句は、インビボで生理活性のある、またはインビボで化合物が活性型となるように対象（すなわち宿主）の体内で活性化されるような、ビタミンＤ化合物および非セコステロイド性ビタミンＤ模倣物を含むものとして定義される。このような化合物の例には、以下のものが非制限的に含まれる：ビタミンＤ、１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３（１，２５（ＯＨ）２Ｄ３）［別名カルシトリオール］およびその類似体［例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ３（１α−ＯＨ−Ｄ３）、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２（１，２５−（ＯＨ）２Ｄ２）、１α−ヒドロキシビタミンＤ２（１α−ＯＨ−Ｄ２）、１α，２５−（ＯＨ）２−１６−エン−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−オキソ−１６−エン−Ｄ３、１α，２４Ｒ（ＯＨ）２−Ｄ３、１α，２５（ＯＨ）２−２２−オキサ−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２４ｂ，−ジホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ，−トリホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、１，２５−（ＯＨ）２−１６，２３Ｅ−ジエン−２６−トリフルオロ−１９−ノル−Ｄ３、および非セコステロイド性ビタミンＤ模倣物。そのほかの例は、種々の構造式を含め、第ＩＩＩ部に詳細に提示している。
【００１３】
「ＩＢＤの症状」という語句は、本明細書では、腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、発熱、食欲不振を非制限的に含む症状、ならびに脱水、貧血および栄養失調などの他のさらに重篤な合併症を含むものと定義される。このような症状の多くは定量分析の対象となる（例えば、体重減少、発熱、貧血など）。一部の症状は、血液検査（例えば、貧血）または血液の存在を検出する検査（例えば、直腸出血）によって容易に判定しうる。
【００１４】
「カルシウム代謝反応（ｃａｌｃｅｍｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）」という語句は、本明細書では、多くの生物学的活性ビタミンＤ化合物（例えば、カルシトリオール）を対象に投与した場合に引き起こされる生物反応として定義される。この反応には、血清中カルシウム濃度の上昇、食物カルシウムの腸管吸収の増加、尿中カルシウム排泄の増加、および骨カルシウム動員の増加が非制限的に含まれる。
【００１５】
「高カルシウム血症の症状」という語句は、本明細書では、腎臓内カルシウム沈着（腎石灰化症）、腎臓結石（腎結石症）、尿毒症、筋力低下の発現、傾眠、昏睡、便秘、食欲不振、悪心、嘔吐、ＱＴ時間の短縮、低血圧および不整脈を非制限的に含む、発見された症状と定義される。
【００１６】
「重篤な高カルシウム血症」という語句は、本明細書では、対象が、致死的な病状または死を防ぐために直ちに治療を必要とする高カルシウム血症の症状に冒されている状態として定義される。その例には、腎石灰化症、腎結石症、尿毒症、昏睡および食欲不振が非制限的に含まれる。
【００１７】
「軽度の高カルシウム血症」という語句は、本明細書では、対象が、致死的な病状または死を防ぐための治療を直ちに必要とはしない高カルシウム血症の症状に冒されている状態として定義される。その例には、筋力低下の発現、傾眠、便秘、悪心、嘔吐、ＱＴ時間の短縮、低血圧および不整脈が非制限的に含まれる。
【００１８】
生物学的活性ビタミンＤ化合物の「治療的有効量」という語句は、本明細書では、ＩＢＤの症状を軽減するために患者に必要な用量レベルとして定義される。
【００１９】
「症状が軽減されるような条件下」という語句は、疾患の回復率（例えば、体重増加率）に対する検出可能な影響、または以下の症状：腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、発熱、食欲不振、脱水、貧血、膨満、線維症、腸の炎症および栄養失調の少なくとも１つの軽減を非制限的に含む、ＩＢＤの発見可能な症状の何らかの程度の質的または量的な軽減のことを指す。
【００２０】
「ＩＢＤに対するリスクがある」という語句は、本明細書では、世界人口のうちＩＢＤに対するリスクが高い（すなわち、平均的な人を上回る）区分を含むものとして定義される。ＩＢＤが最も多いのは若齢成人であるが、どの年代層にも起こる。これは世界中でみられるが、米国、英国および北欧などの先進国で最も多い。特にユダヤ系の人々で特に頻度が高い。開発途上国では最近、本症の頻度の上昇が観察されている。家族が炎症性腸疾患に罹患した人もリスクが高い。
【００２１】
「生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物」という語句は、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む組成物、または本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物が、他の生物学的活性ビタミンＤ化合物、生理的に許容される液体、ゲル、単体、希釈剤、補助剤、賦形剤、サリチル酸、ステロイド、免疫抑制剤、抗体、サイトカイン、抗生物質、結合剤、充填剤、保存料、安定化剤、乳化剤および緩衝液を非制限的に含む１つまたは複数の他の化合物または物質とともに提供されるものを含む組成物のことを指す。
【００２２】
「連続的な様式」という語句は、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物の送達方法に言及して用いられる場合には、本発明の化合物が、治療量が一定期間にわたって継続され、他の投与様式でよくみられる投与量の「スパイク」が回避されるように、実質的に中断されずに投与されることを意味するものと定義される。連続的な様式の送達を用いる投与様式の例には、経皮パッチ、坐薬、または徐放型の経口製剤がが非制限的に含まれる。
【００２３】
「対象」という用語は、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物が投与される患者のことを指す。対象の例には、ヒト、ならびに非ヒト霊長類、ウマ、イヌおよびネコなどの他の動物が非制限的に含まれる。
【００２４】
「ＩＬ−１０欠乏性の対象」という用語は、ＩＬ−１０（インターロイキン−１０）の発現が野生型対象よりも少ないことが知られている（または判定された）患者のことを指す。その例には、ＩＬ−１０の発現レベルが野生型の９０％、５０％もしくは１０％である対象、またはＩＬ−１０を全く発現しない対象が含まれる。
【００２５】
発明の概要
本発明は、ＩＢＤの予防および治療のための治療薬に関する。特に、本発明は生物学的活性ビタミンＤ化合物の使用によるヒトならびに他の動物におけるＩＢＤの予防および治療を考えている。
【００２６】
本発明は、対象および生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物を提供すること；ならびに治療用組成物を対象に投与することを含む治療方法を提供する。本発明は何らかの特定の対象には限定されないものとする。実際にはさまざまな対象を考えている。１つの態様において、対象は哺乳動物である。もう１つの態様において、対象はヒト、ウマ、非ヒト霊長類、イヌおよびネコからなる群より選択される哺乳動物である。１つの好ましい態様において、対象はヒトである。さらに別の態様において、対象は低カルシウム食を与えられている。いくつかの態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む組成物の投与の前に、対象をインターロイキン−１０の存在に関してスクリーニングする。他の態様において、対象はＩＬ−１０欠乏性であり、対象に投与する治療用組成物は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む。特定の態様において、対象はＩＬ−１０欠乏性ではなく、対象に投与する治療用組成物は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む。
【００２７】
１つの態様において、対象は炎症性腸疾患の症状に罹患している。もう１つの態様において、対象は潰瘍性大腸炎に罹患している。異なる態様において、対象はクローン病に罹患している。１つの好ましい態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物の投与によって疾患の症状が軽減される（すなわち、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎またはクローン病の症状が軽減される）。もう１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物はＩＢＤの症状が軽減されるような条件下で投与される。異なる態様においては、対象に炎症性腸疾患に対するリスクがあり、治療用組成物が予防的に投与される。さらにもう１つの態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療的有効量を対象に投与する。
【００２８】
本発明は特定の生物学的活性ビタミンＤ化合物には限定されないものとする。さまざまな生物学的活性ビタミンＤ化合物を考えている。１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物は、ビタミンＤ、１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、１α−ヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２、１α−ヒドロキシビタミンＤ２、１α，２５−（ＯＨ）２−１６−エン−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−オキソ−１６−エン−Ｄ３、１α，２４Ｒ（ＯＨ）２−Ｄ３、１α，２５（ＯＨ）２−２２−オキサ−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２４ｂ，−ジホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ，−トリホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、２０−エピ−２２−オキサ−２４ホモ−１α，２５（ＯＨ）２−Ｄ３、および１，２５−（ＯＨ）２−１６，２３Ｅ−ジエン−２６−トリフルオロ−１９−ノル−Ｄ３より選択される。１つの好ましい態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物は、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２、１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシ−２１−エピ−ビタミンＤ３、１，２５−ジヒドロキシ−２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−ビタミンＤ３、および１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシ−２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−ビタミンＤ３、および非セコステロイド性ビタミンＤ模倣物より選択される。別の態様において、生物学的活性化合物は１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３である。さらに別の態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物は以下の式によって表される類似体より選択される：
【化５】
2004502638.tif 000002
式中、Ｘ１およびＸ２はそれぞれ水素およびアシルからなる群より選択される；
Ｙ１およびＹ２はＨでもよく、または一方がＯ−アリールもしくはＯ−アルキルであって他方が水素であり、β配置もしくはα配置をとってもよい：Ｚ１およびＺ２はいずれもＨである、またはＺ１およびＺ２はまとめてＣＨ２である；ならびに
Ｒはアルキル基、ヒドロキシアルキル基もしくはフルオロアルキル基である、またはＲは以下の側鎖であってもよい：
【化６】
2004502638.tif 000003
式中、（ａ）はＳ配置またはＲ配置をとることができ、Ｒ１は水素、ヒドロキシまたはＯ−アシルであり、Ｒ２およびＲ３はそれぞれアルキル基、ヒドロキシアルキル基およびフルオロアルキル基からなる群より選択される、またはまとめて−−（ＣＨ２）ｍ−−であり（式中、ｍは２〜５の値を有する整数である）、Ｒ４は水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ−アシル、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択され、Ｒ５は水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキルおよびフルオロアルキルからなる群より選択される、またはＲ４およびＲ５はまとめて二重結合性の酸素であり、Ｒ６およびＲ７はまとめて炭素−炭素二重結合であり、Ｒ８はＨまたはＣＨ３であってよく、式中でｎは１〜５の値をとる整数であり、側鎖の２０位、２２位または２３位のいずれか１つの炭素をＯ、ＳまたはＮ原子によって置換してもよい。
【００２９】
１つの態様において、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物は、対象に投与した場合に高カルシウム血症の症状を引き起こさない。本発明のもう１つの好ましい態様において、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物は、対象に投与した場合にカルシトリオールと比べて同程度のカルシウム代謝反応を引き起こさない（すなわち、その程度はもっと低い）。１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物は、カルシトリオールに比べてカルシウム代謝反応特性が低く、細胞増殖を抑制し、細胞分化を促進する。もう１つの態様において、これらの化合物は、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−エピ−Ｄ２、１α，２５−（ＯＨ）２−２４ａ−ホモ−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４ａ−ジホモ−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−１９−ノル−Ｄ３および２０−エピ−２４−ホモ−１α，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３より選択される。
【００３０】
本発明は、本発明の生物学的活性化合物を複数含む治療用組成物の投与も考えている。他の態様において、本発明の生物学的活性化合物は治療的有効量として投与される。１つの態様において、本発明のための生物学的活性ビタミンＤ化合物の好ましい投与量は、重篤な高カルシウム血症を発症せずに、患者が耐えられる最大量である。もう１つの態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物が１α−ヒドロキシ化合物でない場合には、体重１６０ポンドの患者当たり１日につき１．０〜１００μｇの１日量を投与し、特に有益な１日量は体重１６０ポンドの患者当たり１日につき５．０〜５０μｇである。異なる態様においては、生物学的活性ビタミンＤ化合物が１α−ヒドロキシ化合物である場合には、体重１６０ポンドの患者当たり１日につき０．１μｇ〜２０μｇの１日量を投与し、好ましい１日量は体重１６０ポンドの患者当たり１日につき０．５〜１０μｇである。１つの特に好ましい態様において、投与量は１日につき３〜１０μｇの範囲である。別の態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療的投与は重篤な高カルシウム血症を引き起こさない。もう１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療的投与は軽度の高カルシウム血症しか引き起こさない。もう１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物は高カルシウム血症の症状を引き起こさない。
【００３１】
本発明は特定の投与様式には限定されないものとする。静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、胸腔内、髄腔内、経口、直腸内および局所的を含む、さまざまな投与様式を考えている。特定の態様では、治療用組成物を坐薬として、または経口送達用の錠剤もしくはカプセル剤として投与する。１つの態様において、治療用組成物の投与は夜間に行う。もう１つの態様では、多数回の投与（例えば、３回または４回）を２４時間内に行う。さらにもう１つの態様において、治療用組成物の投与は静脈内パルス療法によって行われる。１つの特に好ましい態様において、治療用組成物は経皮パッチ（皮膚パッチ）を介して投与される。
【００３２】
本発明は、炎症性腸疾患の症状を有する対象、および生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物を提供すること、ならびに治療用化合物を対象に投与することを含む治療方法も提供する。１つの態様では、障害組織の外科的除去後に患者に生物学的活性ビタミンＤ化合物を投与する。１つの好ましい態様において、本発明は、炎症性腸疾患の症状を有するヒト患者、および生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物を提供すること、ならびに前記症状が軽減されるような条件下で治療用組成物を患者に投与することを含む治療方法を提供する。いくつかの態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む組成物の投与の前に、対象をインターロイキン−１０の存在に関してスクリーニングする。特定の態様において、対象には生物学的活性ビタミンＤ化合物に加えてＩＬ−１０も投与する。いくつかの態様において、対象はＩＬ−１０欠乏性の対象である。
【００３３】
本発明は、炎症性腸疾患に対するリスクのある対象、および生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物を提供すること、ならびに治療用化合物を対象に予防的に投与することを含む治療方法も提供する。１つの好ましい態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物の予防的投与によって炎症性腸疾患の症状の発現が遅れる。１つの特に好ましい態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物の予防的投与によって炎症性腸疾患の１つまたは複数の症状が予防される（例えば、腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、発熱、食欲不振、脱水、貧血もしくは栄養失調、またはそれらの任意の組み合わせが予防される）。いくつかの態様では、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む組成物の投与の前に、対象をインターロイキン−１０の存在に関してスクリーニングする。特定の態様においては、対象に生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０の両方を投与する。いくつかの態様において、対象はＩＬ−１０欠乏性の対象であり、ＩＬ−１０および生物学的活性ビタミンＤ化合物の両方が投与される。
【００３４】
本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物を含む経皮パッチを含む、組成物も提供する。１つの態様において、経皮パッチは生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療的有効量を含む。特定の態様において、経皮パッチはさらにＩＬ−１０を含む。もう１つの態様において、経皮パッチはさらに単一のポリマーを含む。別の態様において、経皮パッチはさらに多数のポリマーを含む。もう１つの態様において、経皮パッチはさらにポリウレタンアクリルコポリマーを含む。もう１つの態様において、経皮パッチはシリコンもしくはポリイソブチレンまたはその両方をさらに含む。１つの好ましい態様において、経皮パッチは炎症性腸疾患に対するリスクのある対象に適用される。もう１つの好ましい態様において、経皮パッチは炎症性腸疾患の症状のある対象に適用される。もう１つの態様において、経皮パッチは、ＩＢＤの症状が軽減されるような条件下で連続的な様式で生物学的活性ビタミンＤ化合物を対象に送達する。
【００３５】
本発明は、炎症性腸疾患の症状を有するＩＬ−１０欠乏性の対象ならびに生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む治療用組成物を提供すること、ならびに治療用化合物を対象に投与することを含む治療方法も提供する。
【００３６】
本発明は、炎症性腸疾患に対するリスクのあるＩＬ−１０欠乏性の対象ならびに生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む治療用組成物を提供すること、ならびに治療用化合物を対象に予防的に投与することを含む治療方法も提供する。
【００３７】
いくつかの態様において、本発明は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０（例えば、生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療量およびＩＬ−１０の治療量）を含む治療用組成物を提供する。他の態様において、本発明は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む経皮パッチを提供する。いくつかの態様において、本発明は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を含む坐薬を提供する。さらに他の態様において、本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を（例えば、別々の容器もしくは別々の丸剤として、または別々の装置の部分として）含むキットを提供する。いくつかの態様において、本キットはさらに、生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０を疾患の治療または予防のために用いるための指示（例えば、これらの化合物の用法を説明した印刷挿入物）を含む。好ましい態様において、本指示は生物学的活性ビタミンＤ化合物およびＩＬ−１０によるＩＢＤの治療を説明したものである。
【００３８】
発明の説明
本発明は、ＩＢＤの予防および治療のための治療用組成物および方法に関し、特に生物学的活性ビタミンＤ化合物の使用によるヒトならびに他の動物におけるＩＢＤの予防および治療に関する。
【００３９】
Ｉ．炎症性腸疾患の危険因子およびビタミンＤ
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）にはクローン病（ＣＤ）および潰瘍性大腸炎（ＵＣ）の両方が含まれる。ＣＤおよびＵＣは異なるものの、関連性のある多遺伝子性疾患である。ＩＢＤに家族性集積がみられることは、ＩＢＤの感受性遺伝子が疾患の発症の要因であることを強く示唆する。一般集団と比較してＩＢＤの相対リスクはＣＤ患者の同胞では３６．５であり、ＵＣ患者の同胞では１６．６である。ＩＢＤの感受性遺伝子と考えられるものは染色体２、３、６、７、１２および１６にマッピングされている。これらの感受性遺伝子の実体および機能は不明である［Ｓａｔａｎｇｉら、Ｃｌｉｎ． Ｓｃｉ．（Ｃｏｌｃｈ）、Ｍａｙ；９４（５）：４７３〜８（１９９８）を参照］。
【００４０】
ビタミンＤは骨石灰化を刺激するが、ＩＢＤ患者では骨石灰化が乏しいという証拠が得られている［Ａｎｄｒｅａｓｓｅｎら、Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、３２：１２４７〜１２５５（１９９７）］。多くの報告から、成人のＣＤ患者の４０％より多くが骨粗鬆症であり、小児のＣＤ患者は対照例に比べて骨長および骨塩量が有意に低いことが明らかになっている［Ｂｏｏｔら、Ｇｕｔ、４２：１８８〜９４（１９９８）］。吸収不良およびステロイド使用のいずれによっても骨石灰化の乏しさは説明されない。最近、ＩＢＤ感受性遺伝子座が第１２番染色体にマッピングされた［Ｓａｔａｎｇｉら、Ｃｌｉｎ． Ｓｃｉ．（Ｃｏｌｃｈ）、Ｍａｙ；９４（５）：４７３〜８（１９９８）およびＤｕｅｒｒら、Ａｍ． Ｊ． Ｈｕ． Ｇｅｎ．、６３：９５〜１００（１９９８）］。このＩＢＤ感受性遺伝子座は、ビタミンＤ受容体および２５−ヒドロキシビタミンＤ３−１−α−ヒドロキシラーゼの遺伝子と同じ領域にある［Ｌａｂｕｄａら、Ｊ． Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ． Ｒｅｓ． ７：１４４７〜５３（１９９２）］。
【００４１】
本発明は特定の作用機序には限定されないものとする。実際に、本発明の実施および利用のためには機序の理解は必要ではない。しかし、一部の個体ではカルシトリオールの合成、輸送または利用に関する遺伝的欠陥が骨石灰化の低下およびＩＢＤに対する感受性という二相性表現型の基礎をなすと考えられている。このため、患者に対する生物学的活性ビタミンＤ化合物の投与による治療的作用は（少なくとも一部には）これらの遺伝的欠陥を代償することによって得られると思われる。
【００４２】
しかし、ＩＢＤ感受性遺伝子を遺伝によって受け継ぐだけでは、疾患の発症に十分ではない。ＩＢＤの決定には環境的危険因子の重要性も同程度またはそれ以上であると考えられる。ＩＢＤの有病率調査により、緯度に伴う著しい勾配が米国［Ｓｏｎｎｅｎｂｅｒら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． １０２：１８２７（１９９２）］および欧州［Ｓｈｉｖａｎａｎｄａら、Ｇｕｔ、３９：６９０〜７（１９９６）］で示されている。ＩＢＤの罹患率は北方の緯度では高く、南方の緯度では低い。例えば、ノルウエーでは２５〜３４歳の人口１００，０００人当たりのＵＣ患者数は２１人であるが［Ｍｏｕｍら、Ｓｃａｎｄ． Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、３１：３６２〜６（１９９６）］、オマーンでは人口１００，０００人当たりのＵＣ患者数は１人である［Ｒａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎら、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ、５８：２６６〜７０（１９９７）］。このように、ＩＢＤを決定する環境的危険因子はまだ特定されていないが、これは緯度と強く相関するように思われる。
【００４３】
ヒトを含む脊椎動物は、ビタミンＤの１日必要量の大半を日光を日常的に浴びることによって得ている［Ｈｏｌｉｃｋ， Ｍ．Ｆ．、Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ．、Ｍａｒ；６１（３ Ｓｕｐｐｌ．）：６３８Ｓ〜６４５Ｓ（１９９５）］。太陽からのＵＶ光（２８２〜３１０ｎｍ）は皮膚における化学的光分解反応を触媒し、７−デヒドロコレステロールをプレビタミンＤ３に変換し、これはビタミンＤ３へと自然に異性化する［Ｈｏｌｉｃｋ， Ｍ．Ｆ．、Ｂｏｎｅ、７：６６〜６９（１９９０）］。ビタミンＤ３は生物的に不活性であり、肝内での２５−ヒドロキシル化および腎臓内での１α−ヒドロキシル化によって活性化されて、ビタミンＤホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（カルシトリオール）となる必要がある［Ｈａｕｓｓｌｅｒら、Ｊ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． １５４：５５７〜５７３（１９９７）］。５２゜Ｎよりも北の緯度では１０月から４月まではビタミンＤ生合成を触媒するには日光の強度が不十分であるが、３４゜Ｎよりも南ではビタミンＤ生合成が年中起こる［Ｈｏｌｉｃｋ， Ｍ．Ｆ．、Ａｍ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｎｕｔｒ．、Ｍａｒ；６１（３ Ｓｕｐｐｌ．）：６３８Ｓ〜６４５Ｓ（１９９５）］。ビタミンＤ欠乏症は北方の緯度ではよくみられる。１件の研究によれば、４２゜Ｎでは無作為標本集団のうち５７％がビタミンＤ欠乏症に罹患していた［Ｔｈｏｍａｓら、Ｎ． Ｅｎｇ． Ｊ． Ｍｅｄ．、３３８：７７７〜７８３（１９９８）］。
【００４４】
本発明は特定の作用機序には限定されないものとする。実際に、本発明の実施および利用のためには機序の理解は必要ではない。しかし、ビタミンＤ３生合成のためには日光が不十分であることがＩＢＤの発症を決定する環境的危険因子であると考えられている。このため、患者に対する生物学的活性ビタミンＤ化合物の投与による治療的作用は、ある種の患者では不十分なビタミンＤ生合成を代償することによって得られると思われる。
【００４５】
消化管微生物に対する免疫応答がＩＢＤの病態にかかわるという証拠はあるが、特定の微生物または微生物抗原はＩＢＤの原因として示されていない［Ｆｉｏｃｃｈｉ， Ｃ．、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１１５：１８２−２０５（１９９８）］。自己抗原に反応する抗体および細胞は発見されているが、本症の原因における意義については議論がある。Ｔリンパ球の粘膜浸潤はＩＢＤの特徴であり、これらの浸潤細胞は活性化マーカー［Ｐａｌｌｏｎｅら、Ｇｕｔ、２８：７４５〜７５３（１９８７）］および幅広い特異性［Ｋａｕｌｆｅｒｓｃｈら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、９５：３６４〜３７０（１９８８）］を示す。ＣＤでは粘膜Ｔ細胞にＩＬ−２受容体のアップレギュレートがみられ、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γを自発的に産生する［Ｂｒｅｅｓｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、７８：１２７〜３１（１９９３）］。さらに、ＣＤの粘膜細胞はＩＬ−１２を自発的に分泌する［Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、１１２：１１６９〜７８（１９９７）］。これらの観察所見をＩＢＤの粘膜では炎症誘発性サイトカインがアップレギュレートされているという一貫した所見と総合することにより［Ｆｉｏｃｃｈｉ， Ｃ．、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ、１１５：１８２〜２０５（１９９８）］、ＩＢＤは胃腸における恒常的な抗原刺激に対する調節不全性の１型Ｔヘルパー細胞（Ｔｈ１）駆動性免疫応答であって、組織障害が炎症メディエーターの原因となるという可能性が示唆されている［Ｐｏｗｒｉｅ， Ｆ．、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：１７１〜７４（１９９５）］。これに相反して腸内抗原に対する寛容性を維持する抗炎症反応がＩＢＤでは機能不全となっているように思われる。
【００４６】
ＩＬ−２［Ｓａｄｌａｃｋら、Ｃｅｌｌ、７５：２５３〜６１（１９９３）］、ＩＬ−１０［Ｋｕｈｎら、Ｃｅｌｌ、７５：６３〜７４（１９９３）］およびＴＧＦ−β１［Ｓｈｕｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ、３５９：６９３（１９９２）］というサイトカイン遺伝子のノックアウト動物モデルはすべて、ヒトＩＢＤと共通の組織病理学的特徴がみられる慢性ＩＢＤを自然発症する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）α変異型、ＴＣＲβ変異型およびクラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）変異型のマウスもＩＢＤを自然発症する［Ｍｏｍｂａｅｒｔｓら、Ｃｅｌｌ． Ｏｃｔ ２２；７５（２）：２７４〜８２（１９９３）］。ＩＢＤの上記および他のモデルではＴｈ１細胞が疾患の病態に関与することが指摘されており［Ｂｅｒｇら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ９８：１０１０〜２０（１９９６）］、ＴＧＦ−β１産生細胞は抑制されていないＴｈ１駆動性炎症性大腸炎の抑制因子として特に重要な調節的役割を果たす［Ｐｏｗｒｉｅら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８３：２６６９〜７４（１９９６）］。
【００４７】
カルシトリオールはマウスにおける自己免疫疾患の強力かつ選択的な抑制物質である。例えば、カルシトリオールをマウスに投与することにより、ＥＡＥ［Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、９３：７８６１〜７８６４（１９９６）］、ライム関節炎およびコラーゲン誘発性関節炎［Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｊ． Ｎｕｔｒ． １２８：６８〜７２（１９９８）］に対する疾患誘導が阻止されている。さらに、ＥＡＥ誘導前の動物、またはステージ１のＥＡＥの動物にカルシトリオールを投与することにより、中枢神経系およびリンパ節で、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αを産生するＴｈ１細胞のクローン増殖が停止し、炎症抑制性サイトカインであるＴＧＦ−β１およびＩＬ−４の転写物の蓄積の増加が刺激された［Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６０：５３１４〜５３１９（１９９８）］。また、ＴＧＦ−β１を産生する細胞は抑制されていないＴｈ１駆動性免疫応答の拮抗因子として重要な調節的役割を果たすことも示されている［Ｓｈｕｌｌら、Ｎａｔｕｒｅ ３５９：６９３（１９９２）およびＰｏｗｒｉｅら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８３：２６６９〜７４（１９９６）］。
【００４８】
本発明は特定の作用機序には限定されないものとする。実際に、本発明の実施および利用のためには機序の理解は必要ではない。しかし、カルシトリオールの投与はＴＧＦ−β１の発現を高め、それによって炎症性腸疾患の対象において治療的な炎症抑制反応を刺激すると考えられている。
【００４９】
ＩＩ．生物学的活性ビタミンＤ化合物によるＩＢＤの治療
本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物の使用による、対象における炎症性腸疾患の予防および治療を考えている。さまざまな形態の治療および投与量、さらには高カルシウム血症の症状の発生の回避を考慮している。
【００５０】
Ａ．治療および投与量
本発明は、治療量の生物学的活性ビタミンＤ化合物による、ヒトならびに他の動物（例えば、哺乳動物）におけるＩＢＤの治療および予防の両方を考えている。本発明は特定の投与量には限定されないものとする。生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療的投与に関して広範囲の投与量を考えている。１つの態様において、本発明のための生物学的活性ビタミンＤ化合物の好ましい投与量は、重篤な高カルシウム血症を発症せずに、患者が耐えられる最大量である。生物学的活性ビタミンＤ化合物が１α−ヒドロキシ化合物でない場合には、体重１６０ポンドの患者当たり１日につき１．０〜１００μｇの１日量を投与し、特に有益な１日量は体重１６０ポンドの患者当たり１日につき５．０〜５０μｇである。生物学的活性ビタミンＤ化合物が１α−ヒドロキシ化合物である場合には、体重１６０ポンドの患者当たり１日につき０．１μｇ〜２０μｇの１日量を投与し、好ましい１日量は体重１６０ポンドの患者当たり１日につき０．５〜１０μｇである。１つの特に好ましい態様において、投与量は１日につき３〜１０μｇの範囲である。一般に、１つの好ましい投与量は、患者に忍容性のある生物学的活性ビタミンＤ化合物の最大量である。投薬は好ましくは２４間以内に２回、３回、４回または５回の投与に分けて行う。
【００５１】
米国では、カルシウム摂取が正常な患者における１，２５（ＯＨ２）Ｄ３および１９−ノル−２１−エピ−１，２５（ＯＨ２）Ｄ３の承認安全量は、１，２５（ＯＨ２）Ｄ３については１日０．５〜１５μｇであり、１９−ノル−１，２５−（ＯＨ）２Ｄ２については１０〜２０μｇ／日である。このため、カルシウム摂取が正常な患者に対する好ましい投与量は、投与する化合物に応じて、１６０ポンドの患者当たり１日につき０．５〜０．７５μｇである。低カルシウム食を摂取している患者、および／または化合物を夜間に投与している場合は、１日量をさらに増やしても忍容性があると思われる（例えば、１日当たりさらに３μｇ）。したがって、本発明の１つの態様において、生物学的活性ビタミンＤ化合物による治療は、患者が高カルシウム血症を引き起こさずに忍容性のある最大の用量として投与される。これに関しては、高用量（例えば、１日当たり３〜１０μｇ）を投与する。しかし、１９−ノル−１，２５（ＯＨ２）Ｄ２および２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−１α，２５（ＯＨ２）Ｄ３に関する安全量の範囲は、１６０ポンドの患者当たり１日につき１０〜２０μｇである。
【００５２】
患者が治療によって利益を受ける（すなわち、症状が軽減される）か否かの判定は、ＩＢＤの症状を質的および量的にモニタリングすることによって行う。モニタリングしうる質的な症状には、腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、発熱、食欲減退、脱水、貧血および栄養失調が非制限的に含まれる。モニタリングしうる量的な症状には、体重減少、発熱および貧血（血液検査を用いる）が非制限的に含まれる。治療の成功はＩＢＤの症状が軽減されることによって示される。好ましくは、治療は、ＩＢＤの症状が疑われる限り、または観察される限り、続ける必要がある。
【００５３】
対象がＩＢＤの予防的治療によって利益を受けるか否かの判定は、危険因子を評価することによって行う。言い換えれば、対象にＩＢＤに対するリスクがあるか否かを判定する。本発明は特定の危険因子には限定されないものとする。実際には、遺伝的素因、患者が通常受ける日光の量、患者の年齢（若齢に多い）、国籍（米国、英国および北欧に多い）および祖先／人種（ユダヤ系のヒトに多い）を含む、さまざまな危険因子をモニタリングしうる。リスクのある患者には、ＩＢＤの症状の発現の遅延または予防のために本発明の治療用組成物を予防的に投与する。
【００５４】
Ｂ．高カルシウム血症
上記の通り、本発明のビタミンＤ化合物の好ましい投与量は、重篤な高カルシウム血症を発症せずに、患者が耐えられる最大量である。ビタミンＤの主な生理的機能は正常な細胞プロセスおよび代謝プロセス（神経筋機能および骨石灰化を含む）のために細胞外カルシウム濃度を極めて限定された正常範囲内に維持することであるため、高カルシウム血症は生物学的活性ビタミンＤ化合物（例えば、カルシトリオール）の投与に際してリスクとなる。血清中カルシウム濃度を維持するために、カルシトリオールは主として食物カルシウムおよびリンの腸管吸収を高め、必要に応じて骨カルシウムを動員する。したがって、カルシトリオールには強力なカルシウム代謝作用がある（すなわち、対象におけるカルシウム代謝反応を引き起こす）。このため、カルシトリオールまたはその類似体を対象（例えば、ヒトまたは他の哺乳動物）に投与する際に最も懸念されるのは血清中カルシウム濃度（高カルシウム血症）およびリン濃度の上昇であり、この状態にはこれに対応する尿中カルシウム排泄の増加（高カルシウム尿症）が随伴する。
【００５５】
ビタミンＤ化合物の毒性は腎機能に重大な転帰をもたらすおそれがあり、すなわち持続性高カルシウム血症は腎臓のカルシウム沈着（腎石灰化症）、腎臓結石（腎結石症）を引き起こし、最終的には腎機能障害を引き起こして尿毒症に至る。ビタミンＤ中毒は神経機能にも重大な転帰をもたらす。重症高カルシウム血症では、神経および筋肉が興奮するための閾値が高くなり、筋力低下、嗜眠、場合によっては昏睡といった臨床症状が生じる。ビタミンＤ中毒の胃腸症状には便秘、食欲不振、悪心および嘔吐が含まれ、引き続いて起こる体液喪失のために高カルシウム血性クリーゼが増悪する。高カルシウム血症は、ＱＴ時間の短縮、低血圧および不整脈を含め、心血管系機能にも影響を及ぼす。このため、生物学的活性ビタミンＤ化合物を投与している患者では高カルシウム血症の発症をモニタリングすることが重要である。高カルシウム血症は患者の末梢部の血清中カルシウム濃度を測定することによってモニタリングしうる。
【００５６】
生物学的活性ビタミンＤ化合物による対象の治療に当たって高カルシウム血症のリスクを最小限に抑える手法の一つは、選択した生物学的活性ビタミンＤ化合物を用いて、ＩＢＤの動物モデルで用量反応試験を行うことである（例えば、ＤＳ誘発マウス、カラギーナン誘発モルモット、またはＩＬ−２、ＴＧＦ−Ｂ１、ＴＣＲ、ＭＨＣもしくはＩＬ−１０ノックアウトマウス）。特定の態様において、これらの試験には、最小有効量を決定するために、生物学的活性ビタミンＤ化合物の血清中濃度をアッセイすること、ならびにこの化合物の食物摂取量と生物的有効性および高カルシウム血症の症状との相関を調べることが含まれる。高カルシウム血症のリスクを最小限に抑えるもう一つの方法は、生物学的活性ビタミンＤ化合物を、定時的薬剤放出法（例えば、坐薬または経皮パッチ）または「徐放性」生物学的活性ビタミンＤ誘導体（本明細書に参照として組み入れられる米国特許第５，９５２，３１７号を参照のこと）を用いて投与することを含む。
【００５７】
本発明は、特定の作用機序には限定されないものとし、実際に本発明の実践および利用のためには作用機序の理解は必要ではないが、経皮パッチの利用は、生物学的活性ビタミンＤ化合物の送達「スパイク」を防止することにより、高カルシウム血症（腸壁を介したカルシウム動員によって生じる）のリスクを軽減すると考えられている。経皮パッチは、腸壁を介したカルシウム動員の重大な増加を引き起こすおそれのあるスパイク（全投与量が一度に投与されること）が回避されるように、生物学的活性ビタミンＤ化合物を連続的な低用量の流れとして送達すると考えられている。
【００５８】
ＩＩＩ．生物学的活性ビタミンＤ化合物
上記で定義したように、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物は、インビボで生物学的に活性であるか又は対象（すなわち宿主）内で作用を受けてインビボで活性となるビタミンＤ化合物を包含する。このような化合物の例としては、ビタミンＤ、１，２５（ＯＨ２）Ｄ３及びその類似体（例えば１α−ヒドロキシビタミンＤ３（１α−ＯＨ−Ｄ３）、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２（１，２５−（ＯＨ）２Ｄ２）、１α−ヒドロキシビタミンＤ２（１α−ＯＨ−Ｄ２）、２６，２７−ヘキサフルオロ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２（Ｆ６−１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３）、１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ２（１９−ノル−１，２５−（ＯＨ）２Ｄ２）、１，２５−ジヒドロキシ−２４（Ｅ）−デヒドロ−２４−ホモ−ビタミンＤ３（１，２５−（ＯＨ）２−２４−ホモＤ３）、１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシ−２１−エピ−ビタミンＤ３（１９−ノル−１，２５−（ＯＨ）２−２１−エピ−Ｄ３）、１α，２５ジヒドロキシビタミンＤ３トリアセテート及び２５−アセチル−１α，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、１，２５−ジヒロキシ−２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−ビタミンＤ３、１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシ−２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−ビタミンＤ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４−エピ−Ｄ２、１α，２５−（ＯＨ）２−２４ａ−ホモ−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−２４ａ−ジホモ−Ｄ３、１α，２５−（ＯＨ）２−１９−ノル−Ｄ３、及び２０−エピ−２４−ホモ−１α，２５−（ＯＨ）２−Ｄ３）［すべて参照として本明細書に組み入れられている、米国特許第５，７１６，９４６号及び５，８９１，８６５号、及びＢｏｕｉｌｌｏｎら、Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ． Ａｐｒ；１６（２）：２００−５７（１９９５）参照］が含まれている。
【００５９】
本発明は、様々な機能的クラスによって代表され得るその他の生物学的活性ビタミンＤ化合物も考慮している。第１の機能クラスは、自己免疫（例えば、多発性硬化症又は実験的自己免疫性脳脊髄炎、Ｉ型糖尿病、関節炎又はライム関節炎又はコラーゲン誘発性関節炎、糸球体腎炎、甲状腺炎、全身性紅斑性狼瘡）阻害物質としてインビボで著しい活性を示すビタミンＤ化合物、及びカルシトリオール（１，２５−（ＯＨ）２Ｄ３）と等しいか又はそれより低いカルセミック活性をインビボで示すビタミンＤ化合物である。このクラスの例としては、１α，２５−ジヒドロキシ−１６エン−ビタミンＤ３及び１α，２５−ジヒドロキシ−２４−オキソ−１６エン−ビタミンＤ３［Ｌｅｍｉｒｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１３５：２８１８−２８２１，（１９９４）参照］；１α，２４Ｒ−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３［Ｋｏｉｚｕｍｉら、Ｉｎｔ． Ａｒｃｈ． Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７７；３９６−４０４（１９８５）参照］；１α，２５−ジヒドロキシ−２２−オキサ−ビタミンＤ３［Ａｂｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１２４：２６４５−２６４７（１９８９）参照］；２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ−トリホモ−１α，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３［Ｌｉｌｌｅｒａｎｇら、Ｃｌｉｎ． Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８８：３０１−３０６（１９９２）参照］及び１９−ノル−１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３［米国特許第５，７１６，９４６号参照］が含まれるが、これらに限定されない。
【００６０】
第２の機能クラスは、移植細胞、組織又は器官の拒絶（例えば、皮膚移植片、心臓移植片、膵島移植片など）の阻害物質としてインビボで著しい活性を示し、かつカルシトリオールと等しいか又はそれより低いインビボカルセミック活性を示すビタミンＤ化合物である。このクラスの例としては、１，２５−ジヒドロキシ−１６エン−ビタミンＤ３［Ｌｅｍｉｒｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、５４：７６２−７６３（１９９２）参照］及び２０−エピ−２２−オキサ−２４ａ，２６ａ，２７ａ−トリホモ−１，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３［Ｖｅｙｒｏｎら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１：７２−７６（１９９３）参照］が含まれるが、それらに限定されない。
【００６１】
第３の機能クラスは、インビトロ細胞分化検定（例えば、ＨＬ−６０、Ｕ−９３７、ＮＢ４など）において著しい活性を示し、かつカルシトリオールと等しいか又はそれより低いインビボカルセミック活性を示すビタミンＤ化合物である。このクラスの例としては、１，２５−ジヒドロキシ−１６，２３Ｅ−ジエン−２６−トリフルオロ−１９−ノル−コレカルシフェロール［Ａｓｏｕら、Ｂｌｏｏｄ、９２：２４４１−２４４９（１９９８）参照］；１１α−ビニル−１α，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３［Ｂｏｕｉｌｌｏｎら、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６７：３０４４−３０５１（１９９２）参照］；１α，２５−ジヒドロキシ−１６エン−２３イン−ビタミンＤ３［Ｎｏｒｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５０：６８５７−６８６４（１９９０）参照］；２４−ホモ−２２−デヒドロ−２２Ｅ−１α，２５−ジヒドロキシ−ビタミンＤ３及び１，２５−ジヒドロキシ−２２エン−２４−ホモ−ビタミンＤ３［Ｐｅｒｌｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９：１９０−１９６参照］が含まれるが、これらに限定されない。
【００６２】
第４の機能クラスは、インビトロ転写活性化検定において核ビタミンＤ受容体の活性化剤として著しい活性を示し、一方でカルシトリオールと等しいか又はそれより低い血清ビタミンＤ結合タンパク質に対する結合親和力も同様に示すビタミンＤ化合物（模倣物）である。このクラスの例としては、ＬＧ１９００９０、ＬＧ１９０１１９、ＬＧ１９０１５５、ＬＧ１９０１７６及びＬＧ１９００１７８が含まれるが、それらに限定されない［Ｂｏｅｈｍら、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６：２６５−２７５（１９９９）参照］。
【００６３】
（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，９３６，１０５号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，９３２，５６５号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，９２９，０５６号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，９０５，０７４号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，９０２，８０６号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８８３，２７１号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８７７，１６８号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８７２，１４０号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８１１，５６２号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，７８６，３４７号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，７５６，７３３号、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，７１６，９４５号、及び（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，７１０，１４２号に記述されている化合物を含むが、それらに限定されず、その他の生物学的活性ビタミンＤ化合物も本発明で使用するために考慮されている。本発明の実施において有用なその他の生物学的に活性な化合物は、以下の式によって表わされる：
【化７】
2004502638.tif 000004
式中Ｘ１及びＸ２は各々、水素及びアシルからなる群より選択される；
Ｙ１及びＹ２はＨであってよく、一方が水素であるのにもう一方がＯ−アリール又はＯ−アルキルであってよく、β又はαの立体配置をもち得る；Ｚ１及びＺ２は両方ともＨであるか、あるいはＺ１及びＺ２は一緒になってＣＨ２である；ならびに
Ｒはアルキル、ヒドロキシアルキル又はフルオロアルキル基であり、あるいはＲは以下の側鎖であってよい：
【化８】
2004502638.tif 000005
式中（ａ）はＳ又はＲの立体配置を有していてよく、Ｒ１は水素、ヒドロキシ又はＯ−アシルを表わし、Ｒ２及びＲ３は各々アルキル、ヒドロキシアルキル及びフルオロアルキルからなる群より選択され、あるいは一緒になって−−（ＣＨ２）ｍ−−基を表わし（ここでｍは２〜５の値の整数である）、Ｒ４は、水素、ヒドロキシ、フッ素、Ｏ−アシル、アルキル、ヒドロキシアルキル及びフルオロアルキルからなる群より選択され、Ｒ５は、水素、ヒドロキシ、フッ素、アルキル、ヒドロキシアルキル及びフルオロアルキルからなる群より選択され、あるいはＲ４及びＲ５は、一緒になって二重結合酸素を表わし、Ｒ６及びＲ７は一緒になって炭素−炭素二重結合を形成し、Ｒ８はＨ又はＣＨ３であってよく、さらにここでｎは１〜５の値の整数であり、側鎖内の位置２０、２２又は２３のいずれか１つにある炭素は、Ｏ、Ｓ又はＮ原子により置換され得る。
【００６４】
本明細書で使用されているように「アルキル」という語は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチルなどといったすべての異性体形態にある１〜５個の炭素のアルキルラジカルを意味し、「ヒドロキシルアルキル」及び「フルオロアルキル」という語は、それぞれ１つ以上のヒドロキシ又はフルオロ基により置換されたアルキルラジカルを意味する。「アシル」という語は、ホルミル、アセチル、プロピオニルなどのような１〜５個の炭素の脂肪族アシル基又はベンゾイル、ニトロベンゾイル又はハロベンゾイルのような芳香族アシル基を意味する。「アリール」という語は、フェニル又はアルキル、ニトロ又はハロ置換フェニル基を意味する。
【００６５】
本発明は、本発明の生物学的に活性なビタミンＤ化合物の「徐放性」誘導体をも考慮している（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，９５２，３１７号参照）。以下の構造式は、これらのさまざまな誘導体を記述している：
【化９】
2004502638.tif 000006
式中、Ｒ５及びＲ６は各々水素を表わし、あるいは、Ｒ５及びＲ６は一緒になってメチレン基を表わす。
【００６６】
以上に示した構造における側鎖基Ｒは、以下の構造のステロイド側鎖を表わす：
【化１０】
2004502638.tif 000007
式中、（ステロイド番号でＣ−２０に対応する）立体化学中心は、Ｒ又はＳの立体配置（すなわち、炭素２０のまわりの天然立体配置又は反対の非天然立体配置のいずれか）、を有していてよく、Ｚは、Ｙ、−−ＯＹ、−−ＣＨ２ＯＹ、−−Ｃ≡ＣＹ及び−−ＣＨ＝ＣＨＹの中から選択され、ここで二重結合は、シス又はトランス幾何形状をもち得、Ｙは以下の構造のラジカルから選択される：
【化１１】
2004502638.tif 000008
式中、ｍ及びｎは独立して０〜５の整数を表わし、Ｒ１は、水素、ＯＸ４，フルオロ、トリフルオロメチル及び直鎖でも分岐鎖であってもよいＣ１−５アルキルの中から選択され、場合によっては、ヒドロキシ置換基を支持し、Ｒ２は、水素、フルオロ、トリフルオロメチル及び直鎖でも分岐鎖であってもよいＣ１−５アルキルの中から選ばれ、場合によってはヒドロキシ置換基を支持し、Ｒ３及びＲ４は独立して、トリフルオロメチル又は直鎖でも分岐鎖であってもよいＣ１−５アルキルを表し、場合によってはヒドロキシ置換基を支持し、ここでＲ１及びＲ２は、一緒になって、オキソ基又はアルキリデン基、＝ＣＲ２Ｒ２又は＝ＣＲ２Ｒ３又は−−（ＣＨ２）ｐ−−基（ｐは２〜５の整数である）を表わし、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって−−（ＣＨ２）ｑ−−基（ｑは２〜５の整数である）を表わす。以上で示された構造においては、Ｘ１、Ｘ２及びＸ４は独立して水素、アシル基又はヒドロカルビルオキシカルボニル基を表わし、Ｘ３は、本明細書ですでに定義したとおりアシル基又はヒドロカルビルオキシカルボニル基を表わす。
【００６７】
一定の与えられたビタミンＤ類似体又は徐放性誘導体がＩＢＤの治療のために有用な生物学的活性ビタミンＤ化合物として適しているか否かを評価するために、ＩＢＤの動物モデル（例えば、ＤＳ誘発されたマウス、カラゲナン誘発されたモルモット又はＩＬ−２、ＴＧＦ−β１、ＴＣＲ、ＭＨＣ、ＩＬ−１０ノックアウトマウス、ＨＬＡ−Ｂ２７／β２ｍトランスジェニックラット、ゲッ歯類においてトリニトロベンゼンスルホン酸により誘発された結腸炎又は穏やかな気候に保持されたワタボウシタマリンコロニー内の自発性ＩＢＤ）を利用することができる〔Ｂｏｕｉｌｌｏｎら、Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ． Ａｐｒ．１６（２）；２００−５７（１９９５）も参照〕。誘発及び確立されたＩＢＤの両方の阻害ならびに高カルシウム血症の危険性が評価される。有用な生物学的活性ビタミンＤ化合物は、ＩＢＤの症候を低減させる。特に有用な生物学的活性ビタミンＤ化合物は、ＩＢＤの症候を低減させ、治療的用量で実質的高カルシウム血症をひき起こさない。
【００６８】
ＩＶ．治療用製剤及び組合せ
いくつかの態様において、本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物の治療用組成物の使用について考慮している。治療用組成物の特定の性質によって本発明を制限することは意図されていない。例えば、このような組成物は、生理学的に、耐容性ある液体、ゲル、固体担体、希釈剤、アジュバント及び賦形剤（及びそれらの組合せ）とともに提供され得る。
【００６９】
さらに、生物学的活性ビタミンＤ化合物は、サルチル酸塩、ステロイド、免疫抑制剤、抗体又は抗生物質を含むがこれらに限定されない、その他の治療用作用物質と共に使用可能である。いくつかの態様においては、生物学的活性ビタミンＤ化合物はＩＬ−１０と共に使用される。本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物と共に使用できる特定の治療用作用物質としては以下のものが含まれるが、これらに限定されない：アゾベンゼン化合物（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第４，３１２，８０６号）、ベンジル置換されたローダミン誘導体（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，２１６，００２号）、亜鉛Ｌ−カルノシン塩（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，２３８，９３１号）、３−フェニル−５−カルボキシピラゾール及びイソチアゾール（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，２９４，６３０号）、ＩＬ−１０（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，３６８，８５４号）、キノリンロイコトリエン合成阻害物質（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，３９１，５５５号）、２’−ハロ−２’デオキシアデノシン（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，５０６，２１３号）、フェノール及びベンズアミド化合物（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，５５２，４３９号）、トリブチリン（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，５６９，６８０号）、ある種のペプチド（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，７５６，４４９号）、ω−３ポリ不飽和酸（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，７９２，７９５号）、ＶＬＡ−４遮断薬（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，９３２，２１４号）、プレドニソロンメタスルホベンゾエート（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，８３４，０２１号）、サイトカイン抑制用作用物質（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，８８８，９６９号）、及びニコチン（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，８８９，０２８号）。
【００７０】
本発明の治療用組成物は、家畜及び非ヒト霊長類の場合のような獣医学的用途及びヒトにおける臨床用途のために、その他の治療用作用物質と類似の方法で、哺乳動物に投与され得る。一般に、治療的効能のために必要とされる用量は、用途の種類及び投与形態ならびに個別の宿主の特殊化された必要条件に応じて変動する。本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物の好ましい用量は、患者が耐容でき、かつ重症の高カルシウム血症を発生させない最大用量である。立会う医療専門家は、対象の特性（例えば性別、年令、体重、食事中のカルシウム量など）に基づいて治療上有効な用量を決定しうる。
【００７１】
投与形態に関しては、いくつかの態様において生物学的活性ビタミンＤ化合物（及びその治療用組成物）は、静脈内、筋肉、皮下、皮内、腹腔内、胸膜腔内、鞘内、経口、直腸内投与又は局所投与される。いくつかの態様においては、このような投与のための製剤は、滅菌水又は生理食塩水中に生物学的活性ビタミンＤ化合物を有効量含むことができる。その他の態様では、このような投与のための製剤は、有機溶剤（例えばエタノール、植物油又はグリセロール）中に有効量の生物学的活性ビタミンＤ化合物を含むことができる。
【００７２】
他方では、治療用組成物は、例えば医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの結合剤、充てん剤、担体、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝液及び賦形剤といった通常利用される添加剤を含有することができる。これらの組成物は標準的には、１％〜９５％、好ましくは２％〜７０％の有効成分を含有している。
【００７３】
本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物は、適合性があり生理学的に耐容性のある希釈剤又は賦形剤とも混合されうる。適切な希釈剤及び賦形剤は、例えば、水、食塩水、デキストロース、グリセロールなど及びそれらの組合せである。さらに、望ましい場合、組成物は、湿潤剤又は乳化剤、安定化剤又はｐＨ緩衝剤のような補助物質をわずかな量含有していてよい。
【００７４】
いくつかの態様においては、本発明の治療用組成物は、液体溶液又は懸濁液として、スプレーとして又は固体形態のいずれかで調製される。経口製剤には通常、例えば医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどの結合剤、充てん剤、担体、保存剤、安定化剤、乳化剤、緩衝液及び賦形剤のような通常利用される添加剤を含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性製剤又は粉末の形をとり、標準的には１％〜９５％、好ましくは２％〜７０％の有効成分を含有する。本発明の治療用組成物を送達するのに有用な経口組成物の一例は、参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，６４３，６０２号の中で記述されている。
【００７５】
局所投与のようなその他の投与形態にとって適切である付加的な製剤形態としては、軟膏、チンキ剤、クリーム、ローション、経皮パッチ及び坐薬がある。軟膏及びクリームの場合、従来の結合剤、担体及び賦形剤は、例えばポリアルキレングリコール又はトリグリセリドのようなものを含むことができる。局所投与による送達方法の一例は、（参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８３４，０１６号に記述されている。その他のリポソーム送達方法も利用可能である。本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物のこの種の送達の例としては、（共に参照として本明細書に組み入れられている）米国特許第５，８５１，５４８号及び５，７１１，９６４号がある。
【００７６】
いくつかの特に好ましい態様においては、生物学的活性ビタミンＤ化合物を含む治療用組成物は、経皮パッチを介して投与される。経皮パッチは、最適には、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物を治療上有効な量で含む。いずれかのメカニズムに限定するわけではないが、経皮送達は、所望の生物学的効果を達成するべく安定した最適レベルにビタミンＤ受容体占有度を維持する、ビタミンＤ化合物の連続的供給を提供することになると考えられている。これは、送達の直後にピークホルモン濃度（スパイク）を提供し、その後減衰する（これにより、カルシウムの吸収、骨吸収又は柔軟組織の石灰化を刺激する周期的なホルモン占有度及びピーク濃度を導く）ことになるその他の送達様式（例えば経口又は静脈内投与）とは対照的である。経皮送達も、腸管へのビタミンＤ化合物の送達をバイパスし、腸管上皮細胞内のビタミンＤ受容体への結合を減少させることができる。こうして今度は、腸管カルシウム吸収の刺激が減少し、ビタミンＤ化合物のカルセミック効果が減少する可能性がある。また、ＩＢＤ患者においては腸管に生理学的な障害があり、そのため患者特異的で予測不能な形でビタミンＤ化合物の摂取が改変され（経口送達のようなその他の投与形態については用量決定が困難となり）得ることから、経皮送達も好ましいかもしれない。経皮送達は、その他の送達様式に比べて（特に小児については）便利であり、患者のコンプライアンスを増大させることができる。
【００７７】
治療薬を送達するための経皮パッチの１つの例では、ポリウレタンアクリル共重合体（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第４，６３８，０４３号）が利用される。経皮パッチのもう１つの例では、重合体及びビタミンＥが利用される（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，８３０，５０５号）。経皮パッチの第３の例では、シリコン又はポリイソブチレン又はその両方の接着性基質が利用される（参照として本明細書に組み入れられている米国特許第５，８７６，７４６号）。その他の経皮パッチが当該技術分野において知られており、本発明の生物学的活性ビタミンＤ化合物を送達するための様式として考慮されている。
【００７８】
その他の好ましい態様においては、腸溶性製剤が利用される。被覆としては、腸溶性コーティング又はカプセルが含まれると考えられる。「腸溶性コーティング」又は「腸溶性フィルム」という語は互換的に使用され、胃の中で見られるような酸性ｐＨに対する耐性をもつ材料又は化合物（すなわち耐酸性化合物）を意味する。固体に適用された場合、腸溶性コーティングは、胃内で固体の溶解を阻害する。
【００７９】
固体組成物の封入のための標準的技術は、当該技術分野において既知である。これらの技術には、腸溶性コーティングを固体組成物に適用する固体組成物のマイクロ封入が含まれる。コーティングされた材料は、当該技術分野において既知の薬学懸濁溶液中にマイクロ封入された粒子を懸濁させることによって、対象に対し経口で送達される。カプセルは好ましくは、胃内での溶解に対する耐性をもち腸管内で溶解する能力をもつという特性を有することになる。当該技術分野では、適切な数多くのカプセル製剤が利用可能である。さらにカプセルに、治療用組成物を固体形態で充てんする上で充分なバルクを提供するための不活性充てん材料の使用を含め、カプセル充てんのための標準的な技術が利用可能である。封入された組成物の使用に加えて、生物学的活性ビタミンＤ化合物を錠剤又は丸薬の形で経口送達することが可能である。生物学的活性ビタミンＤ化合物は、錠剤又は丸薬を圧縮するために充分なバルクを提供するため、不活性材料と組合わせることができる。ひとたび形成されたならば、次に、胃の中での溶解を防ぎ腸管内での溶解を増強させるため、腸溶性フィルムで錠剤又は丸薬をコーティングすることができる。
【００８０】
Ｖ．ＩＬ−１０及び生物学的活性ビタミンＤ化合物
本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物及びＩＬ−１０で対象を治療する方法を提供する。本発明のいくつかの態様においては、ＩＬ−１０が欠損していることがわかっている（又は見極められた）対象は、生物学的活性ビタミンＤ化合物及びＩＬ−１０を含む治療用組成物でＩＢＤに対する治療を受ける。その他の態様では、ＩＬ−１０欠損対象は、ＩＬ−１０及び生物学的活性ビタミンＤ化合物の組合せ療法（例えばＩＬ−１０及び生物学的活性ビタミンＤの個別投与療法）での治療を受ける。いくつかの態様では、ＩＬ−１０は、タンパク質の形で対象に投与（例えば静脈内注射）される。その他の態様では、対象の体内でＩＬ−１０が発現されるように、対象に対し、ＩＬ−１０を発現する遺伝子が投与される（例えば、直腸ＩＢＤの患者の直腸及び肛門周辺領域内で皮下及び粘膜下に投与されるカチオン脂質に対し複合体形成されたＩＬ−１０遺伝子が関与する臨床的プロトコルについて記述する、Ｒｏｇｙら、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１１：１７３１−１７４１，２０００年８月）。ＩＬ−１０調製、産生及び対象用量のさらなる例は、共に参照として本明細書に組み入れられているＣｕｔｌｅｒに対する米国特許第５，９４５，０９７号及びＨｓｕらに対する米国特許第５，７７６，４５１号中で提供されている。対象に対する１日当たりのＩＬ−１０の用量の例としては、１〜１００マイクログラム／ｋｇ／日、１〜１５マイクログラム／ｋｇ／日、又はおよそ８マイクログラム／ｋｇ／日が含まれる。
【００８１】
いくつかの態様においては、本発明は、生物学的活性ビタミンＤ化合物の投与に先立って（例えば、ＩＢＤもしくは治療のために生物学的活性ビタミンＤ化合物が投与されるその他のあらゆる疾病を患うか、又はそのリスクがある対象に対して生物学的活性ビタミンＤ化合物を投与するに先立って）ＩＬ−１０の存在について対象をスクリーニングすることを考慮している。ＩＬ−１０の存在についての対象のスクリーニングは、例えば、対象から生物学的標本（例えば血液標本、組織標本又はその他の体液）を得、そしてその標本をＩＬ−１０結合リガンドと接触させることによって実施できる。結合リガンドの例としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、核酸配列及びＩＬ−１０受容体（例えば組換え発現されるもの）が含まれるが、これらに限定されるわけではない。（参照として本明細書に組み入れられている）Ｔａｓｓｅｔらに対する米国特許第６，０２８，１８６号は、ＩＬ−１０を結合する能力をもつ（ＳＥＬＥＸ手順により分離される）核酸分子を提供している。また、（参照として本明細書に組み入れられている）Ｍｏｓｍａｎｎらに対する米国特許第５，２３１，０１２号は、ＩＬ−１０に対する抗体（例えばポリクローナル及びモノクローナル抗体）について記述している。ＩＬ−１０検出キットは、市販されている（例えば、ヒトＩＬ−１０ ＥＬＩＳＡキットを供給するＰｒｏｍｏＣｅｌｌ， ｗｗｗ．ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）。本発明において、対象のＩＬ−１０状態を決定するあらゆる方法が有用である。この点において、いくつかの態様では、ＩＬ−１０欠損者として同定された対象には、ＩＢＤを治療（又は予防）するためにＩＬ−１０及び生物学的活性ビタミンＤ化合物の両方が投与され得る。
【００８２】
実施例
以下の実施例は、本発明のいくつかの好ましい態様および局面を示しさらに説明するために提供されるが、その範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
【００８３】
以下の実験的開示において、次の略語が適用される：Ｎ（規定の）； Ｍ（モル濃度の）； ｍＭ（ミリモル濃度）； μＭ（マイクロモル濃度）； ｍｏｌ（モル）； ｍｍｏｌ（ミリモル）； μｍｏｌ（マイクロモル）； ｎｍｏｌ（ナノモル）； ｐｍｏｌ（ピコモル）； ｇ（グラム）； ｍｇ（ミリグラム）； μｇ（マイクログラム）； ｎｇ（ナノグラム）； ｌまたはＬ（リットル）； ｍｌ（ミリリットル）； μｌ（マイクロリットル）； ｃｍ（センチメートル）； ｍｍ（ミリメートル）； μｍ（マイクロメートル）； ｎｍ（ナノメートル）； ＤＳ（デキストラン硫酸）； ℃（摂氏温度）； およびＳｉｇｍａ（シグマ化学会社、セントルイス、ミズーリ州（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ、 ＭＯ））。
【００８４】
実施例１
ＩＢＤ誘導のカルシトリオール阻害
本実施例は、マウスにおける、カルシトリオールを用いたＩＢＤ誘導の阻害を記載する。２種類のマウスモデルを利用する。第一群は、広く使用されるＤＳ誘導性マウスモデルであり、ＩＢＤへの、腸内細菌、先天性免疫、および非特異的疾患の関与を反映する。マウスの系統はＤＳ誘導性ＩＢＤに対する感受性が多様であるため（Ｍａｈｌｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．− Ｇａｓｔｒｏ． ＆ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ．、３７Ｇ： ５４４−Ｇ ５５１、（１９９８））、高感受性のＣ３Ｈ／ＨｅＪ系統およびＣ５７ＢＬ／６Ｊ系統が使用される。第二群のＩＢＤモデルは、免疫学的に関連のある遺伝子中に、標的とされた破損をもつマウスを含む。特に、広く使用される、Ｃ５７ＢＬ／６ＪバックグラウンドをもつＩＬ−１０ノックアウトを使用する（即ちＣ５７ＢＬ／６Ｊ−ＩＬ−１０ ｋｏ）。これらのＣ５７ＢＬ／６Ｊ−ＩＬ−１０ ｋｏマウスの代替物は（本実験には記載してないが）、混合１２９／Ｏｌａ×Ｃ５７／ＢＬ／６ 遺伝的バックグラウンドをもつ同型接合型ＩＬ−１０ ｋｏ変異を有するマウスである。これらの二群のマウスを以下に記載するように用いて、ＩＢＤ誘導の阻害に対するカルシトリオールの影響を示す（表１、実験群の概略を参照されたい）。
【００８５】
【表１】実験群
2004502638.tif 000009
【００８６】
Ａ． マウスの処理
ＤＳ誘導性ＩＢＤ実験（１群−８群； 表１）では以下のように処理した。０日目から始め、その後ずっと１０匹のマウス群にカルシトリオール（雌５０ ｎｇ／日；雄２００ｎｇ／日）を含むまたは含まない精製された食餌を与える；この用量は、ＥＡＥにおける用量応答実験に基づく（Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６０： ５３１４−５３１９（１９９８））。プレドニソロンで処理した群に、プレドニソロン（２０ ｎｇ／日）と共に、精製された食餌を与える。これらの実験的食餌は公開されており（Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． ＵＳＡ、９７： ７８６１−７８６４（１９９６））、２日−３日ごとに補充される。２日目にマウスの体重を量り、ＤＳ（３．５％ ｗｔ／ｖｏｌ）を２日目−６日目に飲み水で与える（Ｏｋａｙａｓｕら、Ｇａｓｔｒｏ．、９８： ６９４−７０２（１９９０））。ＤＳを含まない酸性化された飲み水を７日目−２２日目の間与える。７日目、１１日目、１５日目、および１９日目にマウスの体重を量り、便の試料を回収する。血液の試料を１１日目に回収する。２２日目にはマウスの体重を量り、安楽死させ、便、血液、および大腸の試料を回収する。以下に記載するように試料を解析する。
【００８７】
本実施例において偽の処理がされた（ｍｏｃｋ−ｔｒｅａｔｅｄ）対照マウスは、激しい体重の減少、血性の下痢（糞便のヘモグロビンから明らかなように）、大腸の短縮化および大腸壁の厚化、粘膜の潰瘍形成、杯状細胞の喪失、および、陰窩の伸長および喪失（組織病理学的スコアから明らかなように）、ならびに、リンパ球、マクロファージ、好中球、および顆粒球による炎症性浸潤（糞便のラクトフェリンおよび大腸のミエロペルオキシダーゼ活性から明らかなように）を、ＩＢＤ誘導および進行中に示すことが予想される。カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照と比較して、病気の発症率または重篤度が有意に減少したことを示す。重篤度に関しては、カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照と比較して、体重減少、血性の下痢、大腸の短縮化および厚化、組織病理学的スコア、および炎症性浸潤が有意に緩和されたことを示す。
【００８８】
自発性のＩＢＤ実験（９群−１１群； 表１）では、ＩＬ−１０−ｋｏマウスを乳離れさせる３週齢に、精製した食餌の供給を始め、ＤＳを投与しないことを除き、ＤＳ誘導マウスと同様に処理する。４週間にわたって週２回マウスの体重を量り糞便の試料を回収する。５週齢で血液の試料を回収する。４週間後、マウスの体重を量り、安楽死させて、糞便、血液、および大腸の試料を回収する。これらの試料は、以下の実施例２において記載されるように解析される。
【００８９】
本実施例において記載されたＩＬ−１０遺伝子のヌル変異（ｎｕｌｌ−ｍｕｔａｔｉｏｎ）を持つ偽の処理がされた対照マウスは、４週齢までに成長遅延（低血液ヘモグロビン濃度から明らかなように）を、および１０週齢までに有意な死亡率を示すことが予想される。またこれらのマウスは、ＩＢＤの臨床的症状、特に血性の糞便のラクトフェリンおよび大腸のミエロペルオキシダーゼ活性、肛門周辺の潰瘍形成、および偶発的直腸脱出症を示すことが予想される。最後に、これらのマウスは、ＩＢＤの組織病理学的症状、リンパ球、形質細胞、マクロファージ、および好中球による特異的な炎症性浸潤、潰瘍形成、拡張しかつ枝分かれした異常な陰窩、枝分かれしかつ融合した絨毛構造、ならびに腸管壁の厚化をもたらす粘膜の著しい過形成を示すことが予想される。カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照に比べて、成長遅延、貧血、死亡率、血性の下痢、腸管の炎症、肛門周辺の潰瘍形成、および、直腸の脱腸、および組織病理学的スコアが有意に緩和されたことを示す。
【００９０】
実施例２
処理されたマウスからの試料分析
本実施例は、実施例１において記載した両群のマウスからの糞便、血清および大腸の試料の解析を記載する。糞便抽出物は個体ごとにタンパク質、ヘモグロビン、およびラクトフェリンについて分析される。血清の試料は、Ｃａ、ＩＮＦ−γおよびＴＧＦ−β１について分析される。大腸の試料は、個体ごとにミエロペルオキシダーゼ（５／群）、ＩＮＦ−γおよびＴＧＦ−β１の免疫組織化学、および組織病理学（５／群）について解析される。糞便の抽出物および腸管組織抽出物は、マイクロ−ブラッドフォード（ｍｉｃｒｏ−Ｂｒａｄｆｏｒｄ）アッセイ法によって、タンパク質内容物が分析される（Ｂｒａｄｆｏｒｄ、Ｍ．Ｍ．、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７２： ２４８−２５４（１９７６））。次にヘモグロビン、ラクトフェリン、およびミエロペルオキシダーゼアッセイ法の結果が、試料中のタンパク質１ｍｇ当たりで決定される。糞便のヘモグロビンおよび糞便のラクトフェリン（ならびに体重）を時間の関数としてプロットする。病気発症率および重篤度に関する組織病理学的スコア、ミエロペルオキシダーゼ活性、ならびにＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−β１値を表にして、ノンパラメトリリックウィルコソン試験（ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｔｅｓｔ）により群間の違いを比較する（Ｓｃｈｅｆｌｅｒ、Ｗ．Ｃ．、「生物科学に関する統計学（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、第２編、Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｙ Ｐｕｂ． Ｃｏ．、Ｒｅａｄｉｎｇ、ＭＡ、ＵＳＡ、１９７９）
【００９１】
Ａ． 糞便の試料アッセイ法
破れた腸壁（ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｂａｒｒｉｅｒ）における腸管出血は、生きた動物において、糞便のヘモグロビン濃度を測定することにより測定され、ヘモグロビン濃度はＵＣ患者において上昇することが示されている（Ｓａｉｔｏｈら、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ５６： ６７−７５（１９９５））。２４時間の間回収した糞便の試料を計量し、少量の水で均質化し、遠心分離し、それぞれの試料の相対的なヘモグロビン濃度（ｎｇ／ｍｇタンパク質）を検出する。
【００９２】
記載された（Ｓａｉｔｏｈら、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ５６： ６７−７５（１９９５））ものに変更を加え、これらの試料に対して糞便のヘモグロビンの２部位（ｔｗｏ−ｓｉｔｅ）ＥＬＩＳＡを行う。全てのＥＬＩＳＡ段階を４回洗浄（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＲＩＳ緩衝生理食塩水）することにより分割した。ＥＬＩＳＡプレート（Ｉｍｍｕｌｏｎ、Ｄｙｎａｔｅｃｈ； ９６穴）を、一晩低温でマウスヘモグロビンに対するウサギポリクローナル抗体（ｐＡｂ）（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；０．１Ｍ 炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ ８．２中に５μｇ／ｍｌ）でコートし、１％ ウシ血清アルブミンを含んでいる０．１Ｍ ＴＲＩＳ緩衝生理食塩水（ｐＨ８）でブロックする。試料およびヘモグロビン標準（Ｓｉｇｍａ）を順番に緩衝液（０．１％ウシ血清アルブミンを含む、０．１Ｍ ＴＲＩＳ緩衝生理食塩水、ｐＨ７．５）に希釈して、アリコートを１時間３７℃で二通りのアッセイ穴中でインキュベートする；アッセイブランク穴には緩衝液のみを入れる。マウスヘモグロビンに対するビオチン化されたウサギｐＡｂ（ＩＣＮ）を適量、それぞれの穴に加えて１時間３７℃でインキュベートする。このアッセイ法は、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）に過酸化水素基質溶液（ＩＣＮ）を加えることで進行し、反応は１００μｌの１Ｍリン酸を加えることによって停止される。ＥＬＩＳＡプレートリーダー上で色を判定する。各試料におけるヘモグロビンは、ヘモグロビン標準濃度に対するＡ−４５０ｎｍの対数−線形プロットの線形部分から測定され、結果がｎｇ／ｍｇタンパク質で表現される。カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照マウスより、糞便抽出物においてヘモグロビンタンパク質が少ないことを示す。
【００９３】
生きた動物におけるＧＩ消化管の炎症が、糞便のラクトフェリン濃度を測定することによって示される。結腸直腸の病気をもつ患者において、糞便の高濃度ラクトフェリンが示されてきた（Ｓｕｇｉら、Ａｍ． Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ９１：９２７（１９９６））。ヒトラクトフェリンに対するウサギｐＡｐ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を、コーティング抗体としてマウスヘモグロビンに対するウサギｐＡｂと置換し、かつヒトラクトフェリンに対するビオチン化されたウサギｐＡｂを、検出抗体としてマウスヘモグロビンに対するウサギｐＡｂと置換する点を除き、糞便のラクトフェリンの２部位ＥＬＩＳＡを上記のヘモグロビンアッセイ法と同様のやり方で行った。各試料におけるラクトフェリンは、ラクトフェリン標準濃度に対するＡ−４５０ｎｍの対数−線形プロットの線形部分から測定される。結果は、ラクトフェリンｎｇ／ｍｇタンパク質として表現される。カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照マウスより、糞便抽出物においてラクトフェリンタンパク質が少ないことを示す。
【００９４】
Ｂ． 大腸組織アッセイ法
安楽死させたマウスの大腸を回収し、盲腸を大腸から分離する。腸の標本にフェケテ（Ｆｅｋｅｔｅ’ｓ）酸アルコールホルマリン固定液を穏やかに流す。直腸を含めて全大腸を腸管の一巻きとして調製する（ＭｏｏｌｅｎｂｅｅｋおよびＲｕｉｔｅｎｂｅｒ、Ｌａｂ Ａｎｉｍ． １５： ５７−５９（１９８１））。それを指標カード（ｉｎｄｅｘ ｃａｒｄ）の上において、中心の爪楊枝の回りに同心円で遠心性の輪（ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ ｃｉｒｃｌｅ）へと巻いた（カードの場所で）。腸管巻き（ｒｏｌｌ）をフェケテ溶液で一晩固定して、その後７０％のエタノールへ移す。固定した腸管巻きをパラフィンで包埋して、５μｍで切り、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。
【００９５】
１動物あたり腸管巻き切片２つをコード化し、獣医の病理学者および研究者によりコードにアクセスすることなく評価させる。公表された評価方法を使用する（Ｍａｈｌｅｒら、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．− Ｇａｓｔｒｏ． ＆ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ．、３７Ｇ： ５４４−Ｇ５５１、（１９９８））。評価は、病変の重篤度（０から３に格付けされる）に基づき、（０から４の格付けで）関与する領域が評価される。重篤度、潰瘍形成、過形成、および影響を受けた領域を合計して表にすると、カルシトリオール処理されたマウスは偽の処理がされたマウスよりも低い組織病理学のスコアを示す。
【００９６】
ミエロペルオキシダーゼアッセイ法は、ＩＢＤを用いた、ヒト（例えばＤｗａｒａｋａｎａｔｈら、Ｃｌｉｎ． Ｓｃｉ． ９２： ３０７−１３（１９９７））および動物（例えばＨｏｇａｂｏａｍら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、１００： ２７６６−７６（１９９７））における炎症の客観的かつ定量的な測定法として使用されてきた。従って、ミエロペルオキシダーゼ活性レベルを測定することによりマウス腸組織試料における腸の炎症が評価される。ミエロペルオキシダーゼアッセイ法は、クラヴィッツ（Ｋｒａｗｉｓｚ）ら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ． ８７： １３４４−５０（１９８４）におけるように、シュナイダー（Ｓｈｎｅｉｄｅｒ）およびイセクッツ（Ｉｓｓｅｋｕｔｚ）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９８：１−１４（１９９６）により改良されたように行われる。概略すると、洗浄した腸の組織試料（３／マウス； 各２００ｍｇ）を切り刻んで、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロマイド（ＨＴＡＢ）緩衝液（１ｍｌ； ０．５％ＨＴＡＢ、５０ｍＭホスフェート中、ｐＨ ６）中で均質化して、酵素を放出させる。そのホモジネートを４回冷凍して解凍し、遠心する。上清（１０μｌ）を、０．２９ｍｌのアッセイ混合液（ＴＭＢ＋過酸化水素基質溶液； ＩＣＮ）の入った９６穴プレートの穴に加え、そしてＡ−４５０ｎｍをＥＬＩＳＡプレートリーダー上で時間の関数として測定する。アッセイブランクが熱非活性の上清で調製され、引き算される。酵素活性１ユニットは、これらの条件下で１μｍｏｌ基質／分の酸化を触媒する量として定義される。結果は、ミエロペルオキシダーゼＵ／ｍｇ タンパク質として表される。カルシトリオール処理されたマウスは、偽の処理がされた対照マウスよりも腸の組織抽出物においてミエロペルオキシダーゼタンパク質がすくないことを示す。
【００９７】
腸の組織はまた、ＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−β１（粘膜の炎症を制御すると考えられているサイトカイン、以下を参照されたい）の存在をも解析される。腸の組織切片をＯＣＴ包埋化合物（Ｍｉｌｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）中でさっと冷凍する。長軸方向の１０μｍ切片をコーティングされたスライドグラスに付けて、空気乾燥させ、アセトンで素早く固定する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ中で切片を再び水和して、続くそれぞれの反応段階の間に、この緩衝液中で洗浄する。全ての反応物をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ緩衝液で溶解する。３０分間３％過酸化水素と、次に１０分間３％ヤギ血清と、その後一晩冷却下でＩＦＬ−γおよびＴＧＦ−β１に対するポリクローナルウサギ抗体または対照のウサギ血清と、ならびに最後にウサギＩｇＧに対するビオチン化されたヤギ抗体と、切片を反応させる。Ｖｅｃｔｏｒ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ ｋｉｔを用いて色を発生させる。カルシトリオール処理されたマウスからの腸の組織切片は、偽の処理がされた対照マウスからの腸の組織切片よりも、ＴＧＦ−β１に対するポリクローナルウサギ抗体では、定量的により大きな免疫組織化学的染色を示し、ＩＦＮ−γに対するポリクローナルウサギ抗体では、定量的により小さい免疫組織化学的染色を示す。
【００９８】
Ｃ． 血液および血清の試料アッセイ法
貧血は、糞便中の血液減少によるＩＢＤの徴候となりえる。貧血が存在するかどうかを決定するために０．５ｍｌの血液を１１日目および２２日目に（ＤＳ誘導性マウスＩＢＤモデルの予防）ならびに５週齢および７週齢において（自発性マウスＩＢＤモデルの予防）得た。血液ヘモグロビンの決定を行う。小さな血液アリコートを溶解緩衝液 ［３ｍＭ Ｋ３（ＦｅＣＮ）６、１．５ｍＭ ＫＣＮ、５ｍＭ Ｎａ２ＢＯ４、０．１％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０］ へ分配して、ブランクとして溶解緩衝液を用いて、５４６ｎｍにおける吸光度を測定する。この吸光度を溶解緩衝液に溶解した精製されたマウスのヘモグロビンを用いて作製した参照曲線と比較される。残存する血液を一晩低温中で凝縮させ、遠心されて、血清がさらに分析のために回収される。
【００９９】
高カルシウム血症は、カルシトリオール投与の潜在的な重大な副作用であるので（Ｃｈａｎら、Ｃｕｒ． Ｐｒｏｂ． Ｓｕｒｇｅｒｙ、３４： ４４５−５２３（１９９７））、カルシトリオール処理されたマウスおよび対照のマウスは、末端血清カルシウムについてモニターされる。血清カルシウムは、色彩測定（ｃｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃ）反応によって測定される（Ｓｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｉｔｉｃｓ）。カルシウムイオンは、アルカリｐＨ（０．５Ｍ ２−アミノ−２−メチル−１，３−プロパンジオール緩衝液）でｏ−クレゾールフタレインコンプレクソンと紫色の複合体を形成する；マグネシウムイオンの干渉を防ぐために８−ヒドロキシキノリン（０．２５％）が含まれている。試料、標準、またはブランク緩衝液（１０μｌ）を、Ｃａ結合試薬およびＣａ緩衝液を等量含む作用溶液（１ｍｌ）の２通りのチューブに加える。５分後、０．３ｍｌのそれぞれの反応液を９６穴プレートへ移して、５７５ｎｍでの吸光度をＥＬＩＳＡプレートリーダー上で測定する。このアッセイ法の結果は、ＩＢＤのためにカルシトリオールで処理された被験者が高カルシウム血症を避けるため、カルシトリオール投与の適切な濃度と時間経過を決定するのに役立つ。
【０１００】
前回の研究において、ＥＡＥとともにカルシトリオールをマウスへの投与すると、ＩＮＦ−γを生産するＴｈ１細胞のクローン拡大が止まり、中枢神経系におけるＴＧＦ−β１転写産物合成およびリンパ節排出が刺激された（Ｃａｎｔｏｒｎａら、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６０： ５３１４−５３１９（１９９８））。相互のＩＮＦ−γおよびＴＧＦ−β１反応は、粘膜の炎症を制御していると考えられ（Ｓｔｒｏｂｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｔｏｄａｙ、Ｆｅｂ；１８（２）：６１−４（１９９７）、かつＴＧＦ−β１応答は、炎症性大腸炎を抑制するのに重要である（Ｐｏｗｒｉｅ ら、Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ．、１８３： ２６６９−７４（１９９６））。そのため、偽の処理がされたマウスと比較して、カルシトリオール処理されたマウスの血清における免疫応答マーカーとしてＩＮＦ−γ（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）およびＴＧＦ−β１（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．）を解析するために２段階ＥＬＩＳＡを行う。
【０１０１】
実施例３
マウスにおいて確立されたＩＢＤの治療
本実施例は、カルシトリオールを用いてマウス中で確立されたＩＢＤの治療を記載する。方法は、マウスがＩＢＤの徴候を示すまで処理を始めないことを除いて、上記実施例１と同様である。これは表１の１群−４群で列挙されたマウスの飲み水中にＤＳを投与し、その後ＤＳなしの酸性にした水で続けることにより達成される。この方法の始めにも体重を量る。２日の間隔をおいて、実施例１のようにヘモグロビンおよびラクトフェリンについて糞便試料を検査する。マウスがＩＢＤ罹患しているのをこれらの検査が示唆したとき、カルシトリオールを用いた処理を始める。
【０１０２】
その後、体重および糞便の試料を４日の間隔をおいて採取する。２２日目に、マウスの体重を量って、安楽死させ、糞便、血液、および大腸の試料を回収する。糞便の抽出物、血液、血清、および大腸の試料を、実施例２のように分析する。体重、糞便および血液のヘモグロビン、ならびに糞便のラクトフェリンを時間の関数としてプロットする。病気の発症率、重篤度（組織病理学のスコアで明らかなように）、ミエロペルオキシダーゼ活性、およびＩＦＮ−γおよびＴＧＦ−β１の数値が表にされる。ＩＢＤの症状を示すマウスのカルシトリオール処理により、対照と比較して病気の症状の緩和を示すことを、この実験結果は示唆する。
【０１０３】
実施例４
ＩＢＤを治療および予防するためのカルシトリオールの治療的および予防的な使用法
カルシトリオール治療製剤を予防のためおよび治療のために使用してヒトにおけるＩＢＤを治療する。ＩＢＤ罹患の危険がある個人、特に青少年、または彼らのもしくはユダヤ人の家系に、有効量のカルシトリオールを含む治療製剤を投与して、病気の重篤度を予防または緩和する。ＩＢＤの症状のある患者に、有効量のカルシトリオールを、ＩＢＤの症状が緩和するまで毎日投与する。
【０１０４】
実施例５
ＩＢＤを治療および予防するためのビタミンＤの治療的および予防的な使用法
ビタミンＤの治療製剤を、予防のためおよび治療のために使用してヒトにおけるＩＢＤを治す。ＩＢＤ罹患の危険がある個人、特に青少年、または彼らのもしくはユダヤ人の家系に、有効量のビタミンＤを含む治療製剤を投与して、病気の重篤度を予防または緩和する。ＩＢＤの症状のある患者に、有効量のビタミンＤを、ＩＢＤの症状が緩和するまで毎日投与する。
【０１０５】
実施例６
潰瘍性大腸炎のＤＳ誘導性動物モデル
本実施例は、デキストラン硫酸（ＤＳ）誘導性大腸炎のためのマウスモデルの作製を記載する。このＤＳ誘導性大腸炎モデルを、オカヤス（Ｏｋａｙａｓｕ）ら（１９９０）から、合成食餌との併用に適合させた。本実施例においては、ＤＳ誘導性大腸炎に対して高感受性である雄Ｃ３Ｈ／ＨｅＪマウスを使用した。最初に、マウスに３．５％ＤＳ ｗ／ｖを含む酸性化された水を５日間与え、次にＤＳを含まない酸性化された水を与え、かつ合成食餌（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｄｉｅｔ）（ＳｍｉｔｈおよびＨａｙｅｓ、ＰＮＡＳ、ＵＳＡ、８４：５８７８−５８８２、１９８７に記載されている合成食餌） を継続的に与えた。これらのマウスは、大腸炎の症状を示さなかった（例えば、下痢、糞便における血液、体重減少）。これらのマウスはＤＳを含んでいる水を避けて、合成食餌（重量の約６０％が水である）を取ることによって水の必要性を満たした。第二群のマウスには、３．５％ＤＳ ｗ／ｖを含む酸性化された水を５日間与え、次にＤＳを含まない酸性化された水を与え、かつ研究室の食物（Ｐｕｒｉｎａ ｍｏｕｓｅ ｃｈｏｗ ＃５００８）をマーラー（Ｍａｈｌｅｒ）ら、Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ、Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ．、３７：Ｇ５４４−Ｇ５５１（１９９６）に記載されたように継続的に与えた。これらのマウスはマウス一匹あたり平均０．５７ｇのＤＳを摂取し、体重が減少し（対照 ２６．１±０．７ｇ； ＤＳ群２２．８±０．３ｇ）、糞便中にヘモグロビン（Ｈｇ）があった（対照０±０ ｍｇ Ｈｇ／ｇ 糞便； ＤＳ群 １１．４ ｍｇ Ｈｇ／ｇ 糞便）。これらの結果は、予想されたようにこの群において大腸炎が誘導されたことを示す。
【０１０６】
ＤＳ誘導性モデルを合成食餌（ＳｍｉｔｈおよびＨａｙｅｓ、１９８７を参照されたい）の使用に適合させるために、第三群のマウスに段階的（ｇｒａｄｅｄ）ＤＳを含む酸性化された水および合成食餌を５日間与え、続いてＤＳを含まない酸性化された水および合成食餌を与えた。これらのマウスを週２回体重測定して、糞便のヘモグロビン分析、および組織病理学の解析を含む様々な他のアッセイに供した。結果を以下の表２および表３に示す。
【０１０７】
Ａ． 糞便のヘモグロビン分析
裂けた腸壁からの出血を判定するため、マウスにおいて糞便のヘモグロビンを解析した。新鮮な糞便試料をそれぞれのマウスから回収し、一晩乾燥させ、計量し、０．５ｍＬのＴＲＩＳ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ； ２５ｍＭ ＴＲＩＳ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ ７．６）に懸濁した。糞便試料をマイクロマックス（Ｍｉｃｒｏｍａｘ）遠心機（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｑｕｉｐ． Ｃｏ．、Ｎｅｅｄｈａｍ Ｈｅｉｇｈｔｓ、ＭＡ）で室温で遠心分離（１０，０００×ｇで１０分間）して、上清を新しい管へ移して−２０℃で冷凍保存した。上清中のヘモグロビンを、サイトウ（Ｓａｉｔｏ）ら、Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ、５６：６７−７５、１９９５、およびリーエン（Ｌｉｅｍ）ら、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、９８： ３８８−３９３、１９７９から適合化した方法により、標準としてのラットヘモグロビン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とともに解析した。上清をＴＢＳで１：２５に希釈した。丸底ポリスチレン９６穴マイクロタイタープレート（＃３５５５、ＤＹＮＥＸ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃｈａｎｔｉｌｙ、ＶＡ）中でアッセイ法を行った。試料、標準、およびブランク緩衝液（各２０μＬ）を１０分間、９倍量の３，３’５，５’−テトラメチルベンジジンデヒドロクロライドペルオキシド溶液（Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）および１倍量の過酸化水素溶液（安定なペルオキシド基質緩衝液、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）１００μＬの基質溶液で二通りインキュベートした。反応を１００μＬの２Ｍリン酸で止めて、ＭＲＸ Ｒｅｖｅｌａｔｉｏｎ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（ＤＹＮＥＸ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて４５０ｎｍでの吸光度を測定した。糞便のヘモグロビンアッセイ法の作用範囲は、１−１００μｇ／ｍＬ試料であった。ヘモグロビンｍｇ／ｇ糞便を計算して表３で報告した。
【０１０８】
Ｂ． 組織病理学的分析
マウスをペントバルビタールの腹腔内注入で安楽死させた。盲腸のおよび直腸のＧ１管切片を回収し、長軸方向に切って、１０％の中性緩衝化したホルマリンで洗浄して、螺旋状パターンでカセットの中に並べ、かつホルマリン中に固定した。固定した組織をパラフィン中に包埋して、６μｍで切り、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色して、光学顕微鏡で観察した。獣医の病理学者により、目隠し方式でスコアをつけた。それぞれの大腸の切片（近位、中位、および遠位の結腸および直腸）に、バーグ（Ｂｅｒｇ）ら、Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、９８： １０１０−１０２０、１９９６により記載された基準を基礎として、０から４のスコアを与えた。スコアを合計して、それぞれのマウスに合計の大腸炎スコアを与える。全大腸炎スコアは、０（どの切片にも病理学的疾患がない）から１６（全ての大腸切片に等級４の病変がある）の範囲になりえる。
【０１０９】
【表２】ＤＳ誘導性マウスにおける体重変化および死亡率
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ａ０日目から５日目にＤＳを与えた。Ｅを除いて全ての群に合成食餌を与えた。 Ｂ、Ｃ、およびＤ群に関しては、ＤＳは酸性化させた飲み水および合成食餌に入れた。Ｅ群に関しては、ＤＳは飲み水中に入れ、マウスには実験用固形試料を与えた。
ｂ０日目から、死亡率が１００％に達した６日目までの体重変化。
【０１１０】
【表３】ＤＳ誘導性マウスにおける糞便のＨｇおよび大腸炎の重症性
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ａ表２の脚注に記載したようにこの実験を行った。
【０１１１】
この第３群のマウスにおいて、体重減少（表２）および糞便のＨｇ値（表３）は摂取されたＤＳの量に比例しており、糞便のＨｇは ＤＳ投与の５日がピークだった。さらに、全大腸炎のスコアは、摂取されたＤＳの量に比例していた（表３）。食物および水中での１％ＤＳの濃度は、死亡率（より高いＤＳ群においては重大だった、表２参照）を最小限にし、かつオカヤス（Ｏｋａｙａｓｕ）ら（１９９０）の方法で達成されたものとそれほど変わらない大腸の組織病理学のスコアを与えたため、さらなる分析のために選択された。
【０１１２】
実施例７
ＤＳ誘導性大腸炎のカルシトリオール予防
本実施例は、カルシトリオールによって大腸炎のＤＳ誘導性マウスモデルにおける大腸炎を予防できることを示す。特に、齢を合わせたＣ３Ｈ／ＨｅＪ雄マウスに合成食餌（実施例６参照）を、カルシトリオールまたはプレドニソロンの存在下または非存在下で１週間与えた。薬物処理を続けて、実施例６に記載したように、１％ＤＳの食餌および水を５日間投与することにより、ＩＢＤを誘導した。その後これらのマウスを３〜４日ごとに体重測定した。糞便のＨｇを３日から７日まで毎日解析した。血清および大腸組織を２８日に回収した。ほとんどの試験を実施例６において記載したように行い、かつ末端血清カルシウムアッセイ法を下記のように行った。結果を表４および５に報告する。
【０１１３】
血清カルシウムを測定するために、血液を回収し、凝縮を可能にし、６℃で遠心分離した（５，０００×ｇで１０分間）。血清を注いで−２０℃に冷凍保存した。試料、標準、そして盲検の緩衝液（それぞれ２μＬ）を、９６穴プレートの穴に二箇所ずつ入れた。カルシウム試薬の作業溶液（０．２５ｍＬ）を製造者の指示（Ｓｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）に従って調製し、それぞれの穴に加え、そして５７０ｎｍにおける吸光を測定した。Ｃａ＋＋ｍｇ／ｄＬ血清を計算して表４に報告した。
【０１１４】
【表４】マウスにおけるＩＢＤのカルシトリオール予防−糞便のＨｇ、血清カルシウム、および体重
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ａ全群（Ａ、Ｂ、およびＣ、ｎ＝１２； Ｄ、ｎ＝７）は、ＤＳ処理の１週間前から合成食餌を与えた（〜７日）。０日目から５日目は酸性化させた飲み水および食餌中のＤＳを与えた。実験は２７日に終わった。
ｂＤＳ処理（〜７日）１週間前から食餌中にホルモンを継続的に与えた。
【０１１５】
【表５】マウスにおけるＩＢＤのカルシトリオール予防−大腸の組織病理学
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ａ実験を表４の説明に記載されたように行った。
ｂ実施例６で記載したように、大腸を回収し、固定し、包埋し、染色し、獣医学の病理学者によってスコアを与えた。
【０１１６】
この結果（表４および表５に示した）は、カルシトリオールの前処理がＤＳ誘導性ＩＢＤの重篤度を緩和したことを示す。ＤＳ処理した動物は未処理の対照よりやや体重が少なく（表４）、かつ大腸の組織病理学により判断されるように、処理の方法にかかわらず、これらの動物におけるＩＢＤの発症率は１００％だった。重要なことだが、カルシトリオール処理された群の糞便におけるＨｇのピークは、処理されていない群よりも３７％低く、そしてプレドニソロンで処理された郡よりも６５％低かった。さらに、カルシトリオール処理されたＣ群の、全大腸の組織病理学のスコアは、処理されていないＢ群のスコアよりも６１％低く、かつプレドニソロン処理されたＤ群のスコアよりも５１％低かった（表５）。これらの結果は、カルシトリオール前処理が、ＤＳ誘導性ＩＢＤ重篤度の緩和において、プレドニソロンよりも有効だったことを示す。
【０１１７】
実施例８
慢性的なＤＳ誘導性大腸炎のカルシトリオール治療
本実施例は、カルシトリオールによって、大腸炎のＤＳ誘導性マウスモデルにおける慢性的な大腸炎を治療できることを示す。特に、齢を合わせた成体のＣ３／ＨｅＪ雄マウスを、６〜８週で分けられた３つのＤＳ処理のサイクル処理に供した。それぞれのＤＳ処理は、酸性化された水および合成食餌中の１％ＤＳを５日投与することであった。処理の間、マウスに実験用マウスの固形試料を与えた。これらの処理は、慢性的なＩＢＤを誘導した。最後のＤＳ処理が完了した１０日後から始め、マウスは二群に分けられた。糞便のＨｇおよび体重の観点から、これらの群の釣り合いをとった（表６）。Ａ群に合成食餌を与え、Ｂ群に合成食餌でカルシトリオールを与えた。実験は２１日後に終了した。大腸の組織病理学の結果は、カルシトリオール処理が慢性的なＤＳ誘導性ＩＢＤの重篤度を緩和したことを示す。特に、２１日間カルシトリオールで処理されたマウスは、大腸の組織病理学において約４５％緩和された。
【０１１８】
【表６】マウスにおける慢性的なＤＳ誘導性ＩＢＤのカルシトリオール処理
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【０１１９】
【表７】マウスにおける慢性的なＤＳ誘導性ＩＢＤのカルシトリオール処理−大腸の組織病理学
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実施例６に記載したように、大腸を回収し、固定し、包埋し、染色し、そして獣医学の病理学者によりスコアを与えた。
【０１２０】
実施例９
系統１２９−ＩＬ−１０−欠損マウスにおける自発性の大腸炎
本実施例は、系統１２９−ＩＬ−１０−／−マウスにおいて、カルシトリオールの投与により、および投与によらずに自然に発生する自発性大腸炎を記載する。常在性の腸内バクテリアが存在するとき（Ｓｅｌｌｏｎら、Ｉｎｆｅｃｔ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、６６：５２２４−５２３１、１９９８）、遺伝的にＩＬ−１０が欠損したマウスは自発的に慢性的な全腸炎を発症する（Ｋｕｈｎら、Ｃｅｌｌ、７５：２６３−２７４、１９９３）ことが報告されている。１２９−ＩＬ−１０−／−マウスにおける自発性の大腸炎に対するにカルシトリオールの影響を検査する。純粋隔離条件においたマウスを通常飼育条件に移して、勾配量のカルシトリオールの存在下および非存在下で、合成食餌を与えた。これらのマウスを７週齢で、通常の飼育条件下に入れられたマウスが汚した床敷きに曝した。これは、常駐性のバクテリアを提供して大腸炎を発生させるために行われた。
【０１２１】
この結果（表８および表９に示した）は、カルシトリオールが１２９−ＩＬ−１０−／−マウスにおいて自発性の大腸炎を予防しないことを示す。カルシトリオール処理したマウスは、模擬処理されたマウスよりも最終体重が少なかった（表８）。カルシトリオール処理されたマウスは高カルシウム血症を発症し（表８）、カルシウム吸収に関してはカルシトリオール処理に反応できることを示した。しかしながら、カルシトリオール処理されたマウスは、模擬処理されたマウスと等しい、大腸炎の組織病理学のスコアを有し（表９）、カルシトリオール処理が系統１２９−ＩＬ−１０−／−マウスにおいて自発性の大腸炎に何ら影響を与えないことを示した。
【０１２２】
【表８】１２９−ＩＬ−１０−／−マウスのカルシトリオール処理
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【０１２３】
【表９】１２９−ＩＬ−１０−／−のカルシトリオール処理−大腸の組織病理学
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【０１２４】
実施例１０
ＩＬ−１０欠損被験者におけるＩＢＤの治療
本実施例は、ＩＬ−１０を欠損しＩＢＤを患っている被験者の治療を記載する。ＩＢＤの症状があるヒトの被験者は、ＩＬ−１０の存在をスクリーニングされ、ＩＬ−１０欠損であると判定される。次に、被験者は、ＩＢＤ症状の予防または重篤度の緩和のため、約７μｇのカルシトリオールおよび約８μｇ／ｋｇのＩＬ−１０を含む、治療製剤を（毎日）投与される。ＩＢＤの症状が緩和されるか、または除去されるまで、この治療製剤が毎日投与される。
【０１２５】
上述の明細書で言及した全ての刊行物および特許は、参照として本明細書に組み入れられる。記載した本発明の方法および系の様々な変更および変化は、発明の範囲および趣旨から逸脱することなく、当業者にとって明白であると考えられる。特定の好ましい態様と関連して本発明を記載してきたが、主張した本発明は、そのような態様に不当に限定されるべきではないことが理解されるべきである。実際に、生物化学、免疫学、化学、分子生物学、医学または関連分野における当業者に自明である、本発明を実施するために記載した態様の様々な変更が、以下の特許請求の範囲内にあると意図される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明において有用な６つの生物学的活性ビタミンＤ化合物を示す。
【図２】本発明において有用な５つの非セコステロイド性ビタミンＤ化合物（模倣物）を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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