(57)【要約】栄養を供給するための及び早期産児の神経学的発達を増強するための方法を開示する。所定量のＤＨＡおよびＡＡならびにそれらの前駆体必須脂肪酸であるα−リノレン酸およびリノール酸を含有する改良された栄養組成物も開示する。該方法は、長期にわたる（典型的には、少なくとも３ヶ月補正齢（ＣＡ）まで、好ましくは６または更には１２ヶ月ＣＡまでの）供給計画のためのＬＣＰ補足栄養強化製剤を供給することを含む。身体的成長障害または抑制が見出されることなく、神経学的発達、例えば視覚発達、運動発達および言語発達が増強された。【特許請求の範囲】
【請求項１】
全脂肪酸に対する重量／重量％としてＤＨＡは約０．３６％まで、ＡＡは約０．７％まで、ＡＬＡは少なくとも約２％まで及びＬＡは少なくとも約１５％の量でＤＨＡ、ＡＡ、ＡＬＡおよびＬＡを含む脂肪酸源を含む栄養強化マトリックスを含んでなる栄養組成物。
【請求項２】
全脂肪酸に対する重量／重量％としてＤＨＡは約０．３％まで、ＡＡは約０．５％まで、ＡＬＡは少なくとも約２．２％まで及びＬＡは少なくとも約１５％の量で脂肪酸を含む、請求項１記載の栄養組成物。
【請求項３】
ＡＬＡ／ＤＨＡの比率が約４〜４０の範囲であり、ＬＡ／ＡＡの比率が約２０〜６５の範囲である、請求項１記載の栄養組成物。
【請求項４】
ＡＬＡ／ＤＨＡの比率が約６〜２５の範囲であり、ＬＡ／ＡＡの比率が約３０〜６０の範囲である、請求項１または請求項２記載の栄養組成物。
【請求項５】
ＤＨＡ、ＡＡ、ＡＬＡおよびＬＡを含む脂肪酸源を含む栄養強化マトリックスを含んでなる栄養組成物であって、全脂肪酸に対する重量／重量％として、ＤＨＡが約０．３６％まで存在し、ＡＡが約０．７％まで存在し、ＡＬＡ／ＤＨＡの比率が約４〜４０の範囲であり、ＬＡ／ＡＡの比率が約２０〜６５の範囲であることを特徴とする栄養組成物。
【請求項６】
全脂肪酸に対する重量／重量％として、ＤＨＡが約０．１９〜０．３％で存在し、ＡＡが約０．３５〜０．７％で存在する、請求項５記載の栄養組成物。
【請求項７】
ＡＬＡ／ＤＨＡの比率が約６〜２５の範囲であり、ＬＡ／ＡＡの比率が約３０〜６０の範囲である、請求項６記載の栄養組成物。
【請求項８】
早期産児が約６ヶ月の補正齢に達するまで該早期産児に栄養を供給するための乳児用製剤の製造における請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項９】
早期産児が約９ヶ月の補正齢に達するまで該早期産児に栄養を供給するための乳児用製剤の製造における請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項１０】
早期産児が約１２ヶ月の補正齢に達するまで該早期産児に栄養を供給するための乳児用製剤の製造における請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項１１】
身体的成長抑制を回避しつつ早期産児に栄養を供給するための乳児用製剤の製造における請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項１２】
人乳と組合せて早期産児に栄養を供給するための乳児用製剤の製造における請求項１〜７のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項１３】
早期産児の神経学的発達を増強するための、該早期産児が約６ヶ月の補正齢に達するまで継続する供給計画における、栄養強化製剤が唯一のカロリー摂取源である場合に約２〜６５ｍｇ  ＤＨＡおよび約２〜６５ｍｇ  ＡＡの平均１日摂取量／ｋｇ体重を運搬する量のＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤の使用。
【請求項１４】
該栄養強化製剤が唯一のカロリー摂取源である場合に約３〜３５ｍｇ  ＤＨＡおよび約５〜５０ｍｇ  ＡＡの平均１日摂取量／ｋｇ体重を運搬する量のＤＨＡおよびＡＡを、該栄養強化製剤が含有する、請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
該栄養強化製剤が唯一のカロリー摂取源である場合に約７〜２６ｍｇ  ＤＨＡおよび約２０〜４０ｍｇ  ＡＡの平均１日摂取量／ｋｇ体重を運搬する量のＤＨＡおよびＡＡを、該栄養強化製剤が含有する、請求項１３記載の使用。
【請求項１６】
早期産児の神経学的発達を増強するための、該早期産児が約６ヶ月の補正齢に達するまで継続し該早期産児のカロリー摂取の１００％〜約５０％をもたらす供給計画における、全脂肪酸に対する重量／重量％に基づき約０．１５〜１．０％  ＤＨＡおよび約０．２〜１．０％  ＡＡの濃度でＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤の使用。
【請求項１７】
該栄養強化製剤が、全脂肪酸に対する重量／重量％に基づき約０．１９〜０．３６％  ＤＨＡおよび約０．３５〜０．７％  ＡＡの濃度でＤＨＡおよびＡＡを含有する、請求項１６記載の使用。
【請求項１８】
該栄養強化製剤が、全脂肪酸に対する重量／重量％に基づき約０．２２〜０．３％  ＤＨＡおよび約０．４〜０．５％  ＡＡの濃度でＤＨＡおよびＡＡを含有する、請求項１６記載の使用。
【請求項１９】
神経学的発達の増強が視覚発達の増強を含む、請求項１３〜１８のいずれか１項記載の使用。
【請求項２０】
神経学的発達の増強が運動発達の増強を含む、請求項１３〜１８のいずれか１項記載の使用。
【請求項２１】
神経学的発達の増強が言語発達の増強を含む、請求項１３〜１８のいずれか１項記載の使用。
【請求項２２】
人乳と組合せる供給計画において該栄養強化製剤を使用する、請求項１３〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰまたはＬＣ−ＰＵＦＡ）を含有する栄養製剤、特に、強化された乳児用製剤、および乳児、特に早産児（「早期産」児）における神経学的発達の増強をもたらすためのそのような製剤の使用方法に関する。
【０００２】
本出願は、２０００年４月１３日付けで出願され現在は放棄されている米国仮特許出願第６０／１９６９７０号に関連している。
【０００３】
（背景）
早期産児用に設計された製剤が、アラキドン酸（「ＡＡ」、２０：４ｎ−６）および／またはドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」、２２：６ｎ−３）を含むＬＣＰで補足されるべきか否かは、今日の乳児栄養において最も議論の的となる問題の１つとなっている。ＡＡおよびＤＨＡを伴わない乳児用製剤が与えられた早期産児では、満期（正期）産児の場合と比較して、これらの脂肪酸が最善未満の血中および組織レベルとなるリスクが増大しうることを、いくつかの根拠が示唆している。まず第１に、脳および網膜内のＤＨＡの蓄積は、子宮内の最後のトリメスターの期間、すなわち月経期後２５〜４０週齢（Ｃｌａｎｄｉｎｉｎら、１９８０；Ｍａｒｔｉｎｅｚ，１９９１）および生後の初期の数ヶ月間（Ｍａｒｔｉｎｅｚ，１９９１）において最も急速である。したがって、ＤＨＡに対する生理的要求性は周産期において最も高い。第２に、早期産児へのＡＡおよびＤＨＡの供給は、それらの脂肪酸の母体から胎児への移行が早期に終結するため、制限されてしまう可能性がある。Ｃｌａｎｄｉｎｉｎら（１９８０）は、子宮内ＡＡおよびＤＨＡ蓄積の約８０％が子宮内の最終トリメスターの間に生じると報告している。第３に、ＡＡおよびＤＨＡがそれらの食事必須前駆体脂肪酸であるそれぞれリノール酸（１８：２ｎ−６）およびα−リノレン酸（１８：３ｎ−３）から十分にはデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）合成されないことによっても、供給が制限されうる。早期産児はＡＡおよびＤＨＡをデノボ（ｄｅ  ｎｏｖｏ）合成しうることが示されているが（Ｃａｒｎｉｅｌｌｉら  １９９６；Ｓａｌｅｍら  １９９６；Ｓａｕｅｒｗａｌｄら  １９９６）、これらの酵素的経路が早期産児においてＡＡおよびＤＨＡの要求性を満たすのに十分であるか否かは明らかではない（Ｃａｒｌｓｏｎ  １９９７）。実際のところ、ＤＨＡを含有するがＡＡは含有しない製剤が与えられた早期産児での無作為コントロール試験の結果は、網膜生理学（Ｂｉｒｃｈら  １９９３）、視機能（Ｂｉｒｃｈら  １９９３；Ｃａｒｌｓｏｎら  １９９３ａ，１９９６ａ）および／または神経発生の、より迅速な成熟を示唆している、と解釈する研究者もいる。一方、ＤＨＡを含有するがＡＡは含有しない製剤が与えられた早期産児の成長の不全または遅延の報告もある。例えば、Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９２）は、ＤＨＡを含有する早期産児用製剤が退院まで与えられ次いでＤＨＡを補充した満期産児用製剤が９ヶ月ＣＡまで与えられた産児において、４ヶ月ＣＡから１２ヶ月ＣＡまでの成長の遅延および１２ヶ月ＣＡにおける運動発達の抑制を見出した（Ｃａｒｌｓｏｎ  １９９３ｃ）。Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９６ｂ）による第２の研究も、より遅い成長を示した。この研究においては、早期産児には、ＤＨＡを含有する早期産児用製剤が２ヶ月ＣＡまで与えられ、６、９および１２ヶ月ＣＡにおいて成長不全が見出された。第３の研究（Ｒｙａｎら，１９９８）は、ＤＨＡを含有する早期産児用製剤が退院後の２ヶ月間与えられ次いでＤＨＡを含有する満期産児用製剤が更に４ヶ月間与えられた早期産児において、より遅い成長を示した。約３および５ヶ月ＣＡの時点で、男児における成長障害が観察された。
【０００４】
初期栄養および成長は後の発達の有意な予測因子となりうるが（Ｈａｃｋら，１９９１；Ｍｏｒｌｅｙ＆Ｌｕｃａｓ  １９９４）、成長遅延の犠牲を伴うＤＨＡの供給を視覚発達および神経発達の改善が正当化するという見解の一致は得られていない。したがって、先行技術の供給プロトコールに関連した付随的な成長速度の低下を伴わうことなく発達（視覚発達、神経学的発達およびその他）の改善をもたらす解決策が依然として必要とされている。
【０００５】
Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９３ｂ）は、ＤＨＡ含有製剤中にＡＡを含有させると負の成長の観察が矯正されると仮定した。本出願人の知る限りにおいては、従来の研究は、この仮定を試験していない。それを効果的に行うためには、研究において、２ヶ月の補正齢（ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  ａｇｅ）（ＣＡ）を十分に超える期間にわたり成長を調べなければならない。なぜなら、従来の研究において負の成長が観察されているのは、この後の期間（例えば、３、５、６、９および１２ヶ月ＣＡ）においてであるからである（Ｃａｒｌｓｏｎら  １９９２；１９９６ｂ；Ｒｙａｎら  １９９９）。ＳｃｈａｄｅらがＷＯ  ９８／４４９１７（１９９７年３月２７日付けの米国特許出願第６０／０４２，３６６に基づいて優先権が主張されており、１９９８年１０月に公開されている）に記載している研究においては、ＤＨＡおよびＡＡを含有する強化製剤が２８日間または退院までのどちらか長いほうの期間にわたり早期産児に与えられたが、その後は、ＡＡおよびＤＨＡを含有しない通常の満期産児用製剤に切り替えられ、乳児は僅か４ヶ月ＣＡまで追跡されたにすぎなかった。この研究は、この短い供給期間の後の４ヶ月のＣＡ中またはそれに至るまでの視力の相違も不都合な成長問題も何ら報告していない。Ｖａｎｄｅｒｈｏｏｆら（１９９９；２０００）が報告している研究においては、ＤＨＡおよびＡＡで補足された強化製剤が満期ＣＡまで早期産児に与えられ、ついで２ヶ月ＣＡまでは、ＤＨＡおよびＡＡで補足された標準的な製剤に切り替えられた。その１９９９年の論文は、２ヶ月ＣＡの観察からのデータを報告しており、その２０００年（８月）の論文は、１２ヶ月ＣＡまでの或る種のデータを記載している。成長は対照の場合と異ならないことが判明したが、報告されている結果には、発達の増強は何ら含まれていなかった。
【０００６】
重要なことは、従来の研究が、ＨＭの不存在下の満期産児における製剤供給の中止のための推奨齢である例えば６、９または１２ヶ月ＣＡ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，１９９８）のような長期間にわたる早期産児に対するＡＡおよびＤＨＡ含有製剤の影響を調べていないことである。同様に、６ヶ月ＣＡを超える早期産児のために特別に計画された栄養強化給食計画の一部としてのＡＡおよびＤＨＡの供給が成熟に及ぼす影響を調べた研究を、出願人らは知らない。Ｌｕｃａｓら（１９９２）は、９ヶ月ＣＡまで栄養強化製剤が与えられた早期産児において、満期産児用に設計された製剤が与えられた早期産児より大きな直線的な成長および体重の増加を示しているが、どちらの製剤も、ＤＨＡもＡＡも含有していなかった。
【０００７】
さらに、従来の研究はいずれも、考えられうる交絡変数、すなわち家庭環境および母親の知能に関する制御を試みていない。どちらの変数も、乳児の発達に有意な影響を及ぼしうる。
【０００８】
参考文献
以下の参考文献に関心が持たれる。それぞれの簡潔な説明は、前記の背景的な考察および本出願のその他の箇所に記載されている。
【表１】
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【０００９】
したがって、本発明者らは、早期産児用に設計された栄養強化製剤をＬＣＰ  ＡＡおよびＤＨＡ含有油（後記に定義する魚／真菌または卵−ＤＴＧ／魚）で補充することに関する適合性および可能な利点の評価を適切に与える包括的無作為コントロール試験を行った。これらの栄養強化ＬＣＰ含有製剤を、６ヶ月の補正齢を超える長期間にわたり（実際には１２ヶ月の補正齢まで）供給した。
【００１０】
（発明の概要）
本発明には幾つかの態様があり、それらのそれぞれを以下の小節に記載する。いずれかの態様は他のいずれかの態様と組合されて存在しうる。この概要において用いる用語は、本出願のその他の箇所において定義されている。
【００１１】
長期供給計画：成長発達
本発明の第１の態様は、早期産児に栄養を供給する改良された方法であって、長期にわたり（すなわち、少なくとも６ヶ月ＣＡ、好ましくは９または更には１２ヶ月ＣＡまで）栄養強化製剤を該乳児に与えることを含む方法に関する。好ましくは、該栄養強化製剤は、本明細書に記載のレベルのＬＣＰ、特にＡＡおよびＤＨＡで補足される。そのような供給（栄養補給、給食）計画は、乳児にとっての唯一のカロリー摂取源でありうる。あるいは、それらを、初めに人乳で補完し、および／または、後の段階（例えば、約２〜４ヶ月ＣＡ）で固形食で補完することが可能である。好ましい変法においては、該方法は、段階的計画に従い乳児に供給することを含み、この場合、該乳児が退院または満期補正齢（「ＣＡ」）に達するまでは、ＤＨＡおよびＡＡを含有するＩ型栄養強化製剤を使用し、ついで、該乳児が少なくとも６、好ましくは９または１２ヶ月ＣＡに達するまでは、ＤＨＡおよびＡＡを含有するＩＩ型栄養強化製剤を使用する。前記段落に記載のような供給計画は、後記の栄養学的発達の増強に関して、「追いかけ（ｃａｔｃｈ−ｕｐ；キャッチ・アップ）」供給計画と称されうる。先行技術に対するそのような供給計画の主要な利点は、それらが、従来観察された成長抑制（これはＡＡの不存在下でＤＨＡを供給した場合に観察された）を示さないことである。
【００１２】
神経学的発達
本発明の第２の態様は、早期産児の栄養学的発達の改善または増強をもたらす。これは、該乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡに達するまで、ＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤を該乳児に与えることによるものである。本発明においては、神経学的発達の増強は、乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡに達するまではＤＨＡおよびＡＡを含有する比較しうる栄養強化製剤が与えられていない乳児と比較した、それぞれ後記で考察する視覚発達、運動発達および／または言語発達として評価される。乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡに達するまでの供給は、製剤のみ、製剤＋人乳よりなることが可能であり、あるいは約２〜４ヶ月ＣＡ後、それは補足固形食を含みうる。
【００１３】
視覚発達
本発明の１つの態様は、早期産児の視覚発達を改善するための方法であって、該乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡに達するまで、ＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤を該乳児に与えることを含んでなる方法である。視覚発達は、本明細書に記載のテラー（Ｔｅｌｌｅｒ）視力カード、視覚誘発電位（ＶＥＰ：Ｖｉｓｕａｌ  Ｅｖｏｋｅｄ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）視力およびＶＥＰ対比感度を含むいくつかの技術のいずれかにより測定することができる。先行技術においては、ＤＨＡを与え、視覚発達の増強を見出している研究者もいるが、この利点は早期産児の成長速度の低下を伴っており、乳児用製剤へのＤＨＡの添加の正当化に関して懸念を抱いている研究者もいる。実際のところ、製剤へのＬＣＰの添加を許容している国はあるものの、米国およびカナダの統制機関は、恐らく安全性に対する懸念のため、それを禁止している。本発明は、成長を損なうことなく視覚発達の改善を示すことにより、この問題を克服するものである。
【００１４】
好ましくは、本発明では、ＤＨＡおよびＡＡは本明細書に記載の量および比率で存在し、それらは、長期間の治療計画にわたり栄養強化製剤中で供給される。
【００１５】
運動発達
本発明のもう１つの態様は、早期産児の運動神経発達を増強または促進するための方法であって、該乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡ、好ましくは９または更には１２ヶ月ＣＡまで、ＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤を該乳児に供給することを含んでなる方法にある。この方法は、約１４００ｇ未満、好ましくは約１２５０ｇ未満の出生時体重を有する小さな早期産児において最も顕著であるようである。前記のとおりの段階的長期治療計画に従い早期産児に供給するのが好ましいかもしれない。本発明は、成長を損なうことなく運動発達の改善を示すことにより、先行技術の課題を克服するものである。
【００１６】
言語発達
本発明のもう１つの態様は、早期産児の言語発達を増強または促進するための方法であって、該乳児が少なくとも６ヶ月ＣＡ、好ましくは９または更には１２ヶ月ＣＡに達するまで、ＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤を該乳児に供給することを含んでなる方法にある。前記のとおりの段階的長期治療計画に従い早期産児に供給するのが好ましいかもしれない。本発明は、成長を損なうことなく言語発達の改善を示すことにより、先行技術の課題を克服するものである。
【００１７】
ＬＣＰ／ＬＣＰ前駆体のバランス
本発明のもう１つの態様は、乳児用製剤のような栄養組成物であり、これは、ＤＨＡおよびＡＡならびにそれらのそれぞれの前駆体必須脂肪酸であるα−リノレン酸（ＡＬＡ）およびリノール酸（ＬＡ）を、本製剤から認められる有利な効果をもたらす量で含有する。驚くべきことに、はるかに低いレベルのＤＨＡおよびＡＡを乳児用製剤中で使用して、身体的成長を損なうことなく有利な効果を達成しうることが、本発明の基礎をなす包括的な研究により見出された。より低いレベルの利点としては、少なくとも２つが挙げられる。第１に、文献記載のＤＨＡおよびＡＡに関する成長および安全性に対する懸念を考慮すると、所望の利点を達成するのに必要なだけのこれらのＬＣＰを加える慎重さが要求される。第２に、これらのＬＣＰ油は比較的高価であり、乳児用製剤の経費の有意な割合を占めるため、同様に、必要なだけを加えるべきである。早期産児に栄養を供給するためのこの組成物およびその用途の特定の変形が、本明細書中に記載されている。
【００１８】
（図面の説明）
図１Ａ〜１Ｃは、研究第１日（中央値、５日齢）から１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の体重（図１Ａ）、身長（図１Ｂ）および頭囲（図１Ｃ）を示す。値は、ＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）集団（主グラフ）および研究供給プロトコール厳守者（差込グラフ）に関する平均±ＳＤとして示されている。三角形の記号を伴う点線は、満期ＣＡまで人乳のみが供給された乳児に関するデータを示す。製剤群：１）対照［丸］、２）ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）［正方形］、および３）ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）［実線を伴う三角形］。
【００１９】
図２は、１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の２、４および６ヶ月ＣＡ（±７日）の時点でテラー（Ｔｅｌｌｅｒ）視力カードにより測定した視覚発達を示す（右側の軸）。ＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）集団に関するデータを、平均（サイクル／度、ｃｙ／ｄｅｇ）±ＳＤ（オクターブ（ｏｃｔａｖｅ））として左側の軸に示す。三角形の記号を伴う点線は、満期ＣＡまで人乳のみが供給された乳児に関するデータを示す。製剤群：１）対照［丸］、２）ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）［正方形］、および３）ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）［実線を伴う三角形］。
【００２０】
図３は、１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給されたカンザスシティー、ニューヨークおよびポートランドの研究現場の早期産児の４および６ヶ月ＣＡ（±７日）における視覚誘発電位（「ＶＥＰ」）視力を示す（右側の軸）。ＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）集団に関するデータを、平均（サイクル／度、ｃｙ／ｄｅｇ）±ＳＤ（オクターブ（ｏｃｔａｖｅ））として左側の軸に示す。三角形の記号を伴う点線は、満期ＣＡまで人乳のみが供給された乳児に関するデータを示す。製剤群：１）対照［丸］、２）ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）［正方形］、および３）ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）［実線を伴う三角形］。６ヶ月ＣＡの時点では、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）製剤またはＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）製剤が供給された乳児の平均ＶＥＰ視力（それぞれ、ＬＳ平均±ＳＥ、１１．４±０．１、または１２．５±０１）は、対照製剤が供給された乳児の場合（８．４±０．１）より高かった。
【００２１】
（詳細な説明）
用語
本出願の全体にわたり、以下の用語および略語が用いられうる。
【００２２】
脂肪酸は重要な栄養成分である。脂肪酸はカルボン酸であり、その炭素鎖の長さおよび飽和特性に基づき分類される。短鎖脂肪酸は２〜約６個の炭素を有し、典型的には飽和性である。中鎖脂肪酸は約６〜約１４個の炭素を有し、同様に典型的には飽和性である。長鎖脂肪酸は１６〜２４個またはそれ以上の炭素を有し、同様に飽和性であるか又は不飽和性でありうる。より長い脂肪酸においては、１以上の不飽和点が存在して、それぞれ「一価不飽和」および「多価不飽和」なる語が用いられうる。本発明において特に、２０個以上の炭素を有する長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰまたはＬＣ−ＰＵＦＡ）に関心が持たれる。
【００２３】
ＬＣ−ＰＵＦＡは、生化学者により良く理解されている命名法に基づき脂肪酸中の二重結合の数および位置に従い分類される。ＬＣ−ＰＵＦＡには、該脂肪酸のメチル末端に最も近い二重結合の位置により２つの群またはファミリーが存在する。すなわち、ｎ−３群は第３炭素に二重結合を含有し、ｎ−６群は第６炭素までは二重結合を有さない。したがって、アラキドン酸（「ＡＡ」または「ＡＲＡ」）は２０炭素の鎖長と、第６炭素から始まる４個の二重結合とを有する。したがって、それは「２０：４  ｎ−６」と称される。同様に、ドコサヘキサエン酸（「ＤＨＡ」）は、メチル末端からの第３炭素から始まる６個の二重結合を伴う２２炭素の鎖長を有し、したがって「２２：６  ｎ−３」と称される。ＡＡおよびＤＨＡは、本発明において特に重要である。もう１つの重要なＬＣＰは、（２０：５  ｎ−３）と称されるエイコサペンタエン酸（「ＥＰＡ」）である。ＡＡ（ｎ−６群）およびＤＨＡ（ｎ−３群）の、それらのそれぞれのＣ１８前駆体からの生合成経路は異なるが、伸長および不飽和化工程は共有し、良く理解されている。したがって、他の重要なＬＣＰは、これらの生合成経路の前駆体であるＣ１８脂肪酸、例えば、ｎ−６経路内のリノール酸（１８：２  ｎ−６）およびγ−リノレン酸（１８：３  ｎ−６）、ならびにｎ−３経路内のα−リノレン酸（１８：３  ｎ−３）およびステアリドン酸（１８：４  ｎ−３）である。
【００２４】
脂肪酸は、天然では、アルコールにエステル化したアシル基として見出されることが多い。グリセリドは、グリセロール（１，２，３−プロパントリオール）と１以上の脂肪酸とのそのようなエステルである。該グリセロールバックボーン分子の位置の１つだけが脂肪酸でエステル化されると、「モノグリセリド」が生じ、２つの位置がエステル化されると、「ジグリセリド」が生じ、該グリセロールの３つ全ての位置が脂肪酸でエステル化されると、「トリグリセリド」または「トリアシルグリセロール」が生じる。すべてのエステル化位置が同一脂肪酸を含有する場合には、グリセリドは「単純」と称され、異なる脂肪酸が関与している場合には、「混合」と称される。リン脂質は特別なタイプのジグリセリドであり、該グリセロールバックボーン上の第３の位置が、コリン、セリン、エタノールアミン、イノシトールなどのような窒素含有化合物にリン酸エステルを介して結合している。トリグリセリドおよびリン脂質は、それに結合している脂肪酸に応じて、長鎖または中鎖として分類されることが多い。人乳では、該脂肪酸の約９８％がトリグリセリド中に存在する。脂肪酸「源」は、天然またはその他に由来するグリセリドのこれらの形態のいずれかを含みうる。
【００２５】
脂質は、脂肪成分または油成分を表す一般名称である。栄養においては、脂質はエネルギーおよび必須脂肪酸を提供し、脂溶性ビタミンの吸収を促す。消費脂質の種類は、多数の生理的パラメーター、例えば、血漿脂質プロフィール、細胞膜脂質組成、および免疫応答のメディエーター（例えば、プロスタグランジンおよびトロンボキサン）の合成に影響を及ぼす。
【００２６】
本発明において有用な短鎖脂肪酸源には、植物、例えばルリチシャ、クロフサスグリ種子、トウモロコシ、ココナッツ、カノラ、ダイズ、サフラワー、高オレイン酸サフラワー、ヒマワリ、高オレイン酸ヒマワリ、オリーブ、月見草、綿実、米糠、ブドウ種子、アマニ、ニンニク、ピーナッツ、アーモンド、クルミ、小麦胚芽および黒ゴマに由来する油が含まれる。そのような植物源は、約１８炭素までの脂肪酸を天然で産生するに過ぎない。より長いＬＣＰの起源には、卵およびバター脂のような乳製品；水産油脂、例えばタラ、ニシン、イワシ、マグロおよび他の多数の魚類；ある種の動物性脂肪、豚脂、獣脂、および微生物油、例えば米国特許第５，３７４，６５７号、第５，５５０，１５６号および第５，６５８，７６７号に詳しく記載されているような真菌類および藻類油が含まれる。注目すべきは、魚油が、良好なＤＨＡ源であることであり、それは「高ＥＰＡ」および「低ＥＰＡ」の形態として商業的に入手可能であり、後者は、高いＤＨＡ：ＥＰＡ比（好ましくは少なくとも３：１）を有する。米国特許第５，３９７，５９１号、第５，４０７，９５７号、第５，４９２，９３８号および第５，７１１，９８３号に教示されているとおり、藻類油、例えば、渦鞭藻（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）綱の渦鞭藻類、特にクリプテコジニウム・コーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ  ｃｏｈｎｉｉ）からの藻類油もＤＨＡ源（ＤＨＡＳＣＯ（商標）を含む）である。米国特許第５，６５８，７６７号に教示されているとおり、ならびにＹａｍａｄａら  Ｊ．Ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０（４＆５）、ｐｐ５６１−５７９（１９８９）およびＳｈｉｎｍｅｎら  Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１：１１−１６（１９８９）に教示されているとおり、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、特にモルティエレラ・アルピナ（Ｍ．ａｌｐｉｎａ）およびフィチウム・インシジオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍ  ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）は、良好なＡＡ源（例えば、ＡＲＡＳＣＯ（商標））である。
【００２７】
もちろん、他の生物、特に植物および／または産油植物の遺伝子操作により、新規ＬＣＰ源が開発されうる。デサチュラーゼおよびエロンガーゼの遺伝子が多数の生物から同定されており、これらを植物または他の宿主細胞内に操作して、それらに多量のＬＣＰ含有油を低コストで産生させることが可能であろう。そのような組換え油の使用も本発明において意図される。
【００２８】
乳児用製剤は、Ｉｎｆａｎｔ  Ｆｏｒｍｕｌａ  Ａｃｔ（２１  ＵＳＣ  §３５０（ａ）以下参照）の規範および基準を満たす栄養製剤を意味し、人乳の代わりに使用され又はそれを補足すると意図される。そのような製剤は少なくとも３つの異なる形態（粉末、液体濃縮物およびそのまま供給可能な形態（「ＲＴＦ」））として入手可能であるが、該栄養濃度は「供給されるとおり（ａｓ  ｆｅｄ）」の様態で表されるのが普通であり、したがってしばしば該ＲＴＦが表示され、製造業者の指示に従い、その他の形態が、実質的に同じ組成に再構成（還元）または希釈されると理解され、当業者は濃縮形態または粉末形態に関する関連組成を計算しうると理解される。
【００２９】
「標準」または「満期（Ｔｅｒｍ）」産児（乳児）用製剤は、満期で生まれた乳児用に意図された最初に供給される乳児用製剤を意味する。後記表Ａは、満期製剤および後記の他の型の製剤の関連特性のいくつかを示す。タンパク質、脂肪および炭水化物成分は、それぞれ、カロリーの約８〜１０、４６〜５０および４１〜４４％を与え、カロリー密度は、約６６０〜約７００ｋｃａｌ／Ｌ（または１９〜２１Ｃａｌ／ｆｌ．ｏｚ．）、通常、約６７５〜６８０（２０Ｃａｌ／ｆｌ．ｏｚ．）の狭い範囲に含まれる。該脂肪、タンパク質および炭水化物成分のカロリーの分布は、満期産児用製剤の製造業者によって若干異なることがある。同様に、他の栄養、例えばビタミン、無機物、微量無機質およびタウリン、カルニチンおよびヌクレオチドは、より様々となり、したがって、特性の定義には用いられない。ＳＩＭＩＬＡＣ（商標）（Ｒｏｓｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ＥＮＦＡＭＩＬ（商標）（Ｍｅａｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｓ）およびＧＯＯＤ  ＳＴＡＲＴ（商標）（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ）は、満期産児用製剤の具体例である。
【００３０】
一方、「栄養強化」製剤は、「標準」または「満期（産児用）」製剤と比較して強化された乳児用製剤を意味する。栄養強化製剤を識別する主要な特徴的性質はカロリー密度であり、もう１つの因子はタンパク質濃度である（表Ａを参照されたい）。例えば、約７００Ｋｃａｌ／Ｌ以上のカロリー密度または約１８ｇ／Ｌ以上のタンパク質濃度を有する製剤は「栄養強化」製剤とみなされるであろう。また、栄養強化製剤は、典型的には、より高レベルのカルシウム（例えば、約６５０ｍｇ／Ｌ以上）および／またはリン（例えば、約４５０ｍｇ／Ｌ以上）を含有する。
【００３１】
本発明で用いる栄養強化製剤には２つのタイプ（型）が存在する。Ｉ型は、「早期産児」、「未熟児」または「入院用製剤」としても公知であり、代謝恒常性を損なうことなく子宮内の速度で早期産児の成長を促すように設計された製剤である。Ｉ型製剤は、最高のカロリー密度、典型的には約７９０〜約８２０ｋｃａｌ／Ｌ（または２３〜２５Ｃａｌ／ｆｌ．ｏｚ．）、好ましくは約８００〜８１０（２４Ｃａｌ／ｆｌ．ｏｚ．）により特徴づけられる。Ｉ型は更に、より高い濃度のカルシウム（約１２００ｍｇ／Ｌ以上、好ましくは約１３００〜１８００ｍｇ／Ｌ）およびリン（約６００ｍｇ／Ｌ以上、好ましくは約７００〜１０００ｍｇ／Ｌ）により特徴づけられる。Ｉ型栄養強化製剤の具体例には、Ｉｒｏｎ２４（Ｒｏｓｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）を伴うＳＩＭＩＬＡＣ  ＳＰＥＣＩＡＬ  ＣＡＲＥ（商標）、およびＩｒｏｎ  ２４（Ｍｅａｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ）を伴うＥＮＦＡＭＩＬ  ＰＲＥＭＡＴＵＲＥ  Ｆｏｒｍｕｌａ（商標）が含まれる。
【００３２】
ＩＩ型栄養強化製剤は、「退院後」製剤としても公知であり、強化においては中間的である。例えば、ＩＩ型製剤は、７００以上〜８００近く、好ましくは約７４０〜７５５Ｋｃａｌ／Ｌの範囲のカロリー密度、６５０〜１２００、好ましくは約７００〜１０００ｍｇ／Ｌのカルシウム濃度、および４４０〜５５０、好ましくは約４４０〜５２０ｍｇ／Ｌのリン濃度を有しうる。低体重出生児、およびＩ型製剤から断たれつつあるより年長の早期産児は尚も、エネルギーおよび栄養において標準満期産児用製剤より高密度な製剤を要する可能性がある。これは、入院中、退院後またはより典型的には退院直後に認められうる。ＩＩ型栄養強化製剤の具体例には、ＳＩＭＩＬＡＣ  ＮＥＯＳＵＲＥ（商標）（Ｒｏｓｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）およびＥＮＦＡＭＩＬ  ２２（商標）（Ｍｅａｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ）（これは最近、ＥＮＦＡＭＩＬ  ＥＮＦＡＣＡＲＥ（商標）に改名された）が含まれる。
【００３３】
【表２】
2004518609.tif 000008
【００３４】
栄養強化製剤は、好ましくは、ＬＣＰを含有する。健康な満期産児は、食事必須前駆体脂肪酸であるリノール酸およびαリノレン酸からそれぞれＡＡおよびＤＨＡを産生しうることが示されている。したがって、十分な前駆体必須脂肪酸が供給されているならば、満期製剤をＬＣＰで補足することに関する医学的根拠は無いようである。本研究の結果、早期産児、特に、非常に小さな早期産児（１２５０ｇ未満）の場合に、これまで知られていなかった統計的に有意な臨床的利益が本発明で示された。ＬＣＰでの栄養強化製剤の補足は、好ましくは、少なくともＡＡおよびＤＨＡを含むべきであり、好ましくは、高レベルのＥＰＡを含むべきではない。このため、ＤＨＡの魚油源を用いる場合には、低ＥＰＡ魚油が好ましい。
【００３５】
ＬＣＰ補足の厳密なレベルは依然として、ある程度の検討を要する問題である。食事、授乳期および他の要因に応じて、人乳中で見出されるレベルには広範囲のばらつきがある。Ｊｅｎｓｏｎ（１９９６，１９９９）は、西部の女性が、典型的には、非西部の女性より低い乳ＬＣＰレベルを有すると報告している。典型的にはより低い平均レベルしか食事からもたらされない西部の女性に対しては特に、人乳に関して報告されている平均の最高末端近くのレベルのＤＨＡおよびＡＡで乳児用製剤を補足することを主張する者もいる。一方、本出願人らは、適当なレベルの必須前駆体脂肪酸および適当な供給計画を用いれば、従来考えられていたより低いレベルのＡＡおよびＤＨＡを使用しても尚、有益な効果が示されうることを見出した。ＬＣＰの合成につながる伸長および不飽和化の生合成経路は概ね理解されており、米国特許第５，２２３，２８５号に記載されている。例えば、リノール酸（１８：２ｎ−６、「ＬＡ」）ならびに中間体γ−リノレン酸（１８：３ｎ−６、「ＧＬＡ」）およびジホモ−γ−リノレン酸（２０：３ｎ−６、「ＤＨＧＬＡ」）はＡＡ（２０：４ｎ−６）の重要な前駆体であることが公知である。同様に、α−リノレン酸（１８：３ｎ−３、「ＡＬＡ」）ならびに中間体ステアロドン酸（１８：４ｎ−３）およびＥＰＡ（２０：５ｎ−３）はＤＨＡ（２２：６ｎ−３）の重要な前駆体である。
【００３６】
したがって、本発明の１つの態様においては、ＤＨＡおよびＡＡのレベルとそれぞれの前駆体であるＡＬＡおよびＬＡのレベルとは、複数の様態で表されうる多少の逆関係で相関している。このことは、より低い（したがって潜在的に、より安全な）レベルのＤＨＡおよびＡＡが与えられても有益な効果が失われないという本知見につながった。例えば、最低限度に有効なレベルのＤＨＡおよびＡＡが存在すれば、ＡＬＡ／ＤＨＡの比率およびＬＡ／ＡＡの比率を用いて本発明を表すことができる。したがって、ＡＬＡ／ＤＨＡの比率が約４〜２０、好ましくは６〜１５の範囲であり、ＬＡ／ＡＡの比率が約５〜４０、好ましくは約１０〜２５の範囲であれば、乳児用製剤のような栄養強化組成物中の全脂肪酸に対する割合（％）としてのＤＨＡおよびＡＡのレベルは、それぞれ約０．３６％および０．７％未満、好ましくはそれぞれ０．３％および０．５％未満となりうる。もう１つの変形においては、この逆関係は、該ＬＣＰに関しては最大レベルを、そしてそれぞれの前駆体に関しては最小レベルを特定することにより表されうる。このように、本発明は、全脂肪酸に対する割合（％）（重量／重量）として、約０．３％のＤＨＡおよび０．５％のＡＡを含有する一方で少なくとも約２％のＡＬＡおよび１５％のＬＡを含有する栄養強化組成物により表される。
【００３７】
本発明のそのような組成物は、その用途とは無関係に発明であるが、理想的には、本明細書に記載の有利な発達効果を達成するために本明細書に記載の供給計画と組合せて用いられうる。より好ましくは、該組成物は、本明細書に記載の有利な効果を達成する供給計画において使用し、この場合、早期産児にＤＨＡを供給する場合に第３月ＣＡと第１２月ＣＡとの間で典型的に生じる通常は付随する成長阻害を被らない。
【００３８】
本発明の組成物は、１日カロリー摂取量の１００％〜約５０を供給しうる。製剤を新生児に供給する場合には、それをいくらかの人乳で補完することができる。乳児が約２〜４ヶ月ＣＡに達するにつれて、しばしば、固形食がカロリーのいくらかを供給し始め、製剤の量は全カロリー摂取に対する割合（％）としては減少しうる。
【００３９】
製剤中の個々の脂肪酸のレベルは、典型的には、全脂肪酸に対する割合（％）として表される。この割合（％）に該製剤中の全脂肪酸の絶対濃度（ｇ／Ｌまたはｇ／１００ｋｃａｌとして表される）を掛けたものは、関心のある脂肪酸の絶対濃度（単位はそれぞれｇ／Ｌまたはｇ／１００ｋｃａｌ）を与える。全脂肪酸は、該グリセロールバックボーンの重量を考慮すると全脂肪の約９５％と見積もられる。当業者に公知のとおり、ｍｇ／１００ｋｃａｌからｍｇ／Ｌへの変換は、カロリー密度に基づく簡単な計算である。したがって、種々の好ましい及びより好ましい実施形態においては、該栄養強化製剤中のＬＣＰのレベルは、ほぼ表Ｂに記載のレベルである。
【００４０】
【表３】
2004518609.tif 000009
【００４１】
より一層好ましいのは、実施例１の表１ｂに記載のレベルにほぼ達するＬＣＰレベルを有する製剤である。表Ｂに記載のレベルは、表Ａに示す約３４〜４５ｇ／Ｌの典型的な脂肪酸含量を有する製剤を前提としている。全製品脂肪酸含量がこの範囲から逸脱する場合には、当業者は、同等なＬＣＰを乳児に供給するためにこれらの範囲に合うようどのような補正を施すかを決定することが可能である。
【００４２】
あるいは、体重１ｋｇ当たりの関連ＬＣＰの所望の１日摂取量に基づき、適当なレベルのこれらのＬＣＰを決定することができる（表Ｃを参照されたい）。１つの推定によれば、早期産児は、ほぼ退院（典型的にはほぼ満期ＣＡ）までは約１２０ｋｃａｌ／ｋｇ体重／日、その後は約１００ｋｃａｌ／ｋｇ体重／日を消費するはずである。約２〜４ヶ月ＣＡまでは、これらのカロリーの唯一の源は、典型的には人乳、製剤、好ましくはＩ型またはＩＩ型栄養強化製剤、またはそれらの両方である。約２〜４ヶ月ＣＡで、乳児は、そのカロリー摂取の一部として穀物または他の固形食を摂取し始めうる。約１２ヶ月までは、該カロリー摂取の約６０％は乳または製剤由来であり、残りの４０％は他の食物由来であると見積もられている。このように時間の経過と共に製剤摂取が減少する傾向は、表Ｃに示すとおり、時間経過に伴うＤＨＡおよびＡＡの摂取の漸減を説明するものである。乳児が、ＤＨＡおよびＡＡをほとんど又は全く含有しない固形食を益々多く消費するにつれて、それらの１日摂取量は減少する。この効果は、ＩＩ型製剤において、より顕著である。なぜなら、ＩＩ型は、固形食がカロリー摂取を補充し始める時期に供給される製剤となる可能性がＩ型の場合より高いからである。また、それは、ＡＡの強化がＩ型およびＩＩ型で同じとなるのが好ましい場合であっても、ＡＡおよびＤＨＡの両方の摂取レベルが平均してＩＩ型製剤でより低くなると認められうる理由を説明するものである（表Ｂを比較されたい）。
【００４３】
【表４】
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【００４４】
同様に、新生児は、生後の最初の数週間にわたり消費を徐々に増加させる。したがって、最高１日摂取量がほぼ退院時またはそれより若干後に認められることは驚くべきことではない。したがって、時間に対してプロットした１日ＬＣＰ摂取量は、最大値を有する幅広い弧状曲線を与える。表Ｃの下部に記載されている構成成分ＡＡ、ＤＨＡ、ＬＡおよびＡＬＡ摂取値は、ほぼ退院時または満期ＣＡから約２〜４ヶ月ＣＡに典型的なものである。その後は、本発明では、約４０％もの、より低い摂取値が予想されることとなる。
【００４５】
別の見方をすると、所望のＤＨＡ摂取量（単位はｍｇ／ｋｇ体重／日）は、約２〜６５、好ましくは約３〜３５、より好ましくは約７〜２６の範囲であり、所望のＡＡ摂取量（単位はｍｇ／ｋｇ体重／日）は、約２〜６５、好ましくは約５〜５０、より好ましくは約２０〜４０の範囲である。これらの、より広い範囲は、表Ｃおよび後記に示すＩ型およびＩＩ型製剤に特異的な範囲に細分されうる。Ｉ型製剤からのＤＨＡ摂取量（単位はｍｇ／ｋｇ／日）は、典型的には約５〜４０、好ましくは約１０〜３０、より好ましくは約１０〜２０の範囲である。ＩＩ型製剤からのＤＨＡの量（単位はｍｇ／ｋｇ／日）は、典型的には約２〜２０、好ましくは約４〜１２または１５、より好ましくは約６〜１０の範囲である。Ｉ型またはＩＩ型製剤からのＡＡの好ましい量（単位はｍｇ／ｋｇ／日）は、約５〜９０、好ましくは約１０〜４０、より好ましくは約１５〜３０の範囲である。前記の用量範囲は、表Ｃに示すものに代わるものである。
【００４６】
本出願の全体において、範囲が「約ｘ〜ｙ」と示されている場合、「約」は値ｘおよび値ｙの両方を修飾し、ｘとｙとの間の全ての値はそのような範囲により暗示的かつ明白に開示されていると理解されるべきである。
【００４７】
本出願において用いる「満期」および「早期」は、ヒトの通常の妊娠期間に関するものである。したがって、正常な「満期」産児は受胎後３７〜４２週に誕生し、「早期」産児は、受胎後３７週より前に誕生した乳児である。実際の受胎は、厳密には決定できないかもしれないが、最後の月経周期に基づき及び／又は他の客観的推定因子、例えば初期超音波評価または臨床的新生児評価（例えばＢａｌｌａｒｄのもの）に基づき推定することができる。矛盾した場合にどの方法を用いるかの選択は、しばしば、医師または施設の好みの問題である。
【００４８】
早期産児は、母体の生命維持系の利益を妊娠期間の満了まで受け続けないため、多数の発育不良器官および系を有する。早期産児は、それに対応する満期産児に対して成長および発達の「追いかけ（ｃａｔｃｈ−ｕｐ）」をする。「補正齢（ＣＡ；ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  ａｇｅ）」の概念は、早期産児の成長および発達を比較することを目的として、早期産児をその対応満期産児に対して標準化するために用いられている。例えば、８週未熟で生まれた早期産児は、約２ヶ月の暦年齢で「満期補正齢」に達し、６ヶ月の暦年齢で、４月齢の満期産児と発達的に同等となりうる。「追いかけ」の目標は、対応暦年齢児と同様の発達状態を達成することにある。
【００４９】
早期産児は、しばしば、最初は非経口的に栄養を供給され、多数の早期産児は、少なくとも或る程度の初期期間にわたり人乳を供給される。本発明で用いる「初回経腸供給」は、乳児の腸が人乳などの栄養組成物に初めてさらされることを意味し、腸を予備刺激（ｐｒｉｍｅ）し馴らすために使用される栄養供給および他の供給を含みうる。乳児が、その１日カロリー摂取量の５０％または１００％を製剤として供給された後（すなわち、乳児が該製剤に対する耐性を確立した後）でのみ「登録」されることは、先行技術においては珍しいことではない。これは、何らかの理由により製剤に不耐性である乳児を研究から排除するという効果を有する。本発明で用いる初回経腸供給は、この耐性が確立されていることに基づくものではない。「初回製剤供給」は、人乳ではなく人工乳児用製剤を使用する最初の供給である。それは初回経腸供給であってもそうでなくてもよい。
【００５０】
本発明のいくつかの態様への鍵は、長期間にわたり栄養強化製剤を使用する「追いかけ（ｃａｔｃｈ−ｕｐ）」供給計画である。その長期間は乳児の誕生初期に始まり、より長く継続する。長期間にわたり栄養強化製剤を供給すると、早期産児の発達が改善する。
【００５１】
最も広義には、本発明のこの態様は、可能な限り初期に、潜在的には初回経腸供給と同じくらい初期に栄養強化製剤を供給し始め（ＳＤＡＹ１）、それを退院を経て少なくとも６ヶ月ＣＡ、好ましくは少なくとも９ヶ月ＣＡ、最も望ましくは少なくとも１２ヶ月ＣＡ、更にはそれを超えるまで継続することを含む。ＬＣＰ  ＤＨＡおよびＡＡを含有するＩ型またはＩＩ型栄養強化製剤を使用することが可能である。変形実施形態では、Ｉ型栄養強化製剤を、初回製剤供給から、好ましくは初回経腸供給から、退院またはほぼ満期ＣＡまで供給し、ついで、少なくとも６ヶ月ＣＡ、好ましくはより一層長く、例えば９または１２ヶ月ＣＡまでＩＩ型栄養強化製剤を使用する第２段階が続く。これらの供給計画では、乳児が、誕生後の初期段階で該栄養強化製剤のほかに人乳を消費し、後の段階で、該栄養強化製剤と共に穀物および他の半固形食を消費することは珍しくない。
【００５２】
１つの驚くべき知見においては、本明細書中に考察している神経学的発達の増強は、対照群および実験群の両方において許容された人乳を介したＤＨＡおよびＡＡのいくらかの摂取を対照群に対して行った場合にも見出された。このことは、群間の相違を最小限に抑えることにより、認められる効果を最小限に抑える傾向があるであろう。
【００５３】
乳児の成熟、すなわち成長および発達は、多数の様態により評価される。本発明で用いる「身体的成長」または単に「成長」は、一般には、乳児の身体的サイズの増加を意味し、体重、身長および頭囲のような身体的計測値により測定される。これらのパラメーターについては第１．３．１節で更に詳しく説明する。本発明の基礎を構成する臨床的研究が、一般に従来の研究より小さな早期産児を登録したことに注目することは重要である。さらに、その「小さな」早期産児においてのみ、ある有益な効果が認められた。「小さな」は、特に早期産児を指す場合には相対的な語であるが、本発明では、１４００ｇ未満、好ましくは１２５０ｇ未満の出生時体重を有する乳児を指すものとして用いられている。
【００５４】
身体的「成長」に加えて、乳児において評価されうる他の成熟パラメーター、すなわち、神経学的「発達」もある。この神経学的発達は、１つには、生理的成熟に基づきうるが、それは身体計測とは区別して扱われる。乳児において研究される主要な神経学的発達は、視覚発達、精神発達、運動発達および言語発達であり、それぞれ後記で説明される。観察された神経学的発達の増強は、従来の研究で認められた身体的成長抑制も阻害も伴うことなく得られたことに注目すべきである。
【００５５】
「視覚発達」は、一般には、網膜、視神経および脳の視覚中枢に関するものである。網膜光受容体膜は身体の最高ＤＨＡ濃度を含有し、脳および網膜内のＤＨＡの蓄積は子宮内の最後の３ヶ月間において最も迅速であることが公知である。したがって、子宮内の最終トリメスターがそれより短くなることから生じる欠損を埋め合わせるためには、早期産児をＬＣＰで栄養補充する必要があると仮定される。視覚発達を評価するためには、視覚誘発電位視力、すなわち「ＶＥＰ視力」およびテラー（Ｔｅｌｌｅｒ）視力試験を含む幾つかの尺度が有用である。これらは、後記第１．３．３節および第１．３．４節に更に詳しく説明されている。第３の方法は、第１．３．５節に更に詳しく説明されるＶＥＰ対比感度である。
【００５６】
「精神発達」は、一般には、脳および神経系の成長、ならびに乳児が情報を吸収し処理する能力を指す。それは、精神的または認知的な側面ならびに運動的な側面を有する。精神発達を評価するために用いる方法には、ベーリー（Ｂａｙｌｅｙ）精神発達指数、すなわち「ＭＤＩ」が含まれる。ファーガン（Ｆａｇａｎ）「眺め（ｌｏｏｋ）」試験は、情報処理を評価するものであり、精神発達のもう１つの尺度である。「運動発達」は、乳児が所望の運動を行うために自分の筋肉を制御し協同させる能力に関するものであり、神経学的発達のもう１つの尺度である。ベーリー（Ｂａｙｌｅｙ）精神運動発達指数、すなわち「ＰＤＩ」は、運動能力を評価するために用いることができる。これらの試験のそれぞれは、後記第１．３．６節および第１．３．７節に更に詳しく説明されている。
【００５７】
「言語発達」は、語、特に語彙の獲得および利用を意味し、神経学的発達の更にもう１つの尺度とみなされる。言語発達は、後記第１．３．８節に更に詳しく説明するＭａｃＡｒｔｈｕｒ言語／語彙試験を含む幾つかの方法により評価することができる。
【００５８】
製造方法
本発明の液体および粉末栄養産物は、当業者に公知の概ねは通常の技術により製造することができる。簡単に説明すると、３つのスラリーを調製し、混合し、加熱処理し、標準化し、噴霧乾燥し（適用可能な場合）、パッケージングし、滅菌する（適用可能な場合）。
【００５９】
液体製品
まず、攪拌しながら水を上昇温度まで加熱することにより、炭水化物／無機質スラリーを調製する。ついで無機質を加える。無機質には、クエン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸カリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、リン酸三カルシウム、炭酸カルシウム、ヨウ化カリウムおよび微量無機質プレミックスが含まれうるが、これらに限定されるものではない。ラクトース、コーンシロップソリッド、スクロースおよび／またはマルトデキストリンの１以上のような炭水化物源を該水に溶解して、炭水化物溶液を得る。ダイズ多糖類のような食物繊維源も加えることができる。得られた炭水化物／無機質スラリーを、それをその他のスラリーと混合するまで、好ましくは約１２時間以下にわたり、攪拌下、上昇温度で維持する。
【００６０】
該塩基性油混合物を合わせ加熱することにより、油スラリーを調製する。該塩基性油混合物は、典型的には、ダイズ、ココナッツ、パームオレイン、高オレイン酸サフラワーまたはサフラワー油および中鎖トリグリセリドを含有する。乳化剤、例えば、モノ、ジグリセリド、ダイズモノ、ジグリセリドおよびダイズレシチンのジアセチル酒石酸エステルを使用することができる。油溶性ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ（天然Ｒ、Ｒ、Ｒ形態または合成形態）およびＫのいずれか又は全てを、個々に又はプレミックスの一部として加えることができる。また、インビボ抗酸化剤として機能しうるβカロテンを加えることが可能であり、同様に、カラゲナンのような安定剤を加えることが可能である。本発明に重要な特定のＬＣＰ（例えば、ＤＨＡおよびＡＡ）を含有する油を該油スラリーに加えることができる。これらのＬＣＰに関して注意が必要である。なぜなら、それらは容易に分解し、酸敗するからである。得られた油スラリーを、それをその他のスラリーと混合するまで、好ましくは約１２時間以下にわたり、攪拌下で維持する。
【００６１】
まず、攪拌しながら適当な上昇温度に水を加熱することにより、水スラリー中のタンパク質を調製する。ついで該タンパク質源を、攪拌しながら該水に加える。典型的には、このタンパク質源は、無傷または水解乳タンパク質（例えば、ホエー、カゼイン）、無傷または水解植物性タンパク質（例えば、ダイズ）、遊離アミノ酸、およびそれらの混合物である。一般に、本発明においては、任意の公知アミノ酸窒素源を用いることができる。得られたタンパク質スラリーを、それをその他のスラリーと混合するまで、好ましくは約２時間以下にわたり、攪拌下、上昇温度で維持する。別法として、いくつかのタンパク質を、水中タンパク質ではなく脂肪中タンパク質エマルション中に混合することができる。
【００６２】
その水中のタンパク質と炭水化物／無機質スラリーとを、攪拌しながら混合し、得られた混合スラリーを上昇温度で維持する。短時間（例えば数分間）の遅れで、該油スラリーを、攪拌しながら、前工程からの混合スラリーに加える。該油混合物への添加の代わりに、該タンパク質の混合から生じた混合物へ該ＬＣＰ油を直接加えることができる。
【００６３】
すべての構成成分を完全に一緒にするのに十分な攪拌の後、得られた混合物のｐＨを所望の範囲に調節する。ついで、混合したスラリーを脱気、超高温熱処理、乳化およびホモジナイゼーションに付し、ついで冷凍温度に冷却する。好ましくは、前記工程を完了した後、品質管理に関する適当な分析試験を行う。該品質管理試験の分析結果に基づき、攪拌しながら、希釈のために適量の水を該バッチに加える。
【００６４】
水溶性ビタミンと微量無機質（セレン酸ナトリウム）とを含有するビタミン溶液を調製し、攪拌しながら該加工スラリー混合物に加える。ヌクレオチドを含有する別の溶液を調製し、同様に、攪拌しながら該加工混合物スラリーに加える。
【００６５】
最適な産物安定性が得られるよう、最終産物のｐＨを再度調節してもよい。ついで、得られた産物を適当な金属、ガラスまたはプラスチック容器内に充填し、通常の技術を用いて最終的な滅菌に付す。あるいは、該液体産物を無菌的に滅菌し、プラスチック容器内に充填することができる。
【００６６】
粉末製品
液体産物の製造に関して前記のとおりに、炭水化物／無機物スラリーを調製する。
【００６７】
以下の点を除き液体産物の製造に関して前記したとおりに、油スラリーを調製する：１）典型的には、乳化剤（モノ、ジグリセリド、レシチン）および安定剤（カラゲナン）は、粉末に加えない、２）βカロテンに加えて、他の抗酸化剤、例えば混合トコフェロールおよびアスコルビルパルミタートを加えて、後続のいずれかの噴霧乾燥法における該産物の酸化的性質の維持を助けることができる、および３）本発明に重要な特定のＬＣＰを、該油スラリーに対してではなく、該スラリーを混合した後で加える。
【００６８】
液体産物の製造に関して前記したとおりに、水スラリー中のタンパク質を調製する。
【００６９】
水スラリーおよび油スラリー中の炭水化物／無機質スラリー、タンパク質を、液体産物の製造に関して記載したのと同様にして混合する。ついで、得られた混合物のｐＨを調節した後、攪拌しながらＬＣＰを該混合スラリーに加える。望ましくは、ホモジナイゼーションの直前に一定速度で該混合物を導管に通過させながら、該ＬＣＰを該産物内にゆっくりと計量供給する（インライン混合）。
【００７０】
脱気、超高温熱処理、乳化およびホモジナイゼーションの後、該加工混合物を蒸発させて該混合物の固体レベルを増加させて、より効率的な噴霧乾燥を促すことができる。ついで該混合物を予熱器および高圧ポンプに通過させ、通常の噴霧乾燥技術を用いて噴霧乾燥する。該噴霧乾燥粉末は凝集しうる。ついで、真空、窒素または他の不活性環境下、それを金属またはプラスチック缶またはホイル／ラミネートパウチ内にパッケージングする。
【００７１】
これらの製造方法のいずれかにおける変形は当業者に公知であるか、当業者に容易に理解されるであろう。本発明は個々のいずれの製造方法にも限定されるものではない。本明細書に記載の全ての米国特許の全文を参照により本明細書に組み入れることとする。
【００７２】
実施例１：臨床研究
１．１  研究サンプルの選択
７５０〜１８０５ｇの出生時体重を有する４７０人の早期産児（３３週未満の妊娠期）を、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ、Ｋａｎｓａｓ  Ｃｉｔｙ，ＭＯ、Ｌｉｔｔｌｅ  Ｒｏｃｋ，ＡＲ、Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ、Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ、Ｐｏｒｔｌａｎｄ，ＯＲ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹおよびＳａｎｔｉａｇｏ，Ｃｈｉｌｅに居所を有する研究者と共同研究することに合意したＮｅｏｎａｔａｌ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｕｎｉｔｓ（ＮＩＣＵｓ）から、１９９６年１０月〜１９９８年１月に登録した。初期供給耐性に対する研究供給の影響を評価するために、乳児を初回経腸供給（栄養供給または水を含む）の７２時間以内に登録し、経腸供給を誕生後２８日以内に開始することが必要であった。単生児および双生児ならびに妊娠期の割には小さな乳児が参加を許可された。成長および発達に影響を及ぼしうる重篤な先天性異常を有する乳児および無作為化の前に大手術を受けた乳児は、参加資格を有さなかった。他の排除基準には、登録の時点における、段階ＩＩを超える室周囲／脳室内出血、母体の不能、例えば妊娠中の母体のコカインまたはアルコール乱用、または付随する体外膜式酸素付加、液体換気、重篤かつ永久的な神経学的損傷を引き起こす仮死、または制御不能な全身的感染が含まれる。初回経腸供給の７２時間以内の登録の基準（この場合、被験者の８％はこの規定ウィンドウの範囲外で登録された）を除き、研究被験者の９９％は、示されている全ての参加および排除基準を満たした。
【００７３】
１．２  実験計画
１．２．１  研究製剤
ＤＨＡおよびＡＡを含有する栄養強化製剤を、前記の一般的方法に従い調製した。本研究で使用するＳＩＭＩＬＡＣ  ＳＰＥＣＩＡＬ  ＣＡＲＥ（Ｉ型）およびＳＩＭＩＬＡＣ  ＮＥＯＳＵＲＥ（ＩＩ型）の修飾形態は、それらがヌクレオチドを含有する点、修飾されたホエー：カゼイン比（〜５０：５０）を有する点、ならびに合成品ではなく天然ビタミンＥ（ＲＲＲ  α−トコフェロール）およびβ−カロテンを含有する点で、これらの製品の市販形態とは異なっていた。また、ＮｅｏＳｕｒｅ製品では、炭水化物としてのラクトースの比率が高かった。これらの修飾は表１ａに記載されている。
【００７４】
【表５】
2004518609.tif 000011
【００７５】
ＳＳＣ中の脂肪混合物は、３０％  ダイズ、２０％  ココナッツおよび５０％  中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）油の混合物よりなるものであった。ＮｅｏＳｕｒｅ粉末中の脂肪混合物は、２８％  ダイズ、２０％  ココナッツ、２５％  ＭＣＴおよび２７％  高オレイン酸サフラワー油よりなるものであった。ＬＣＰ補足製剤においては、全脂肪含量を一定に保つために、ココナッツ油のレベルを減少させた。ＬＣＰ補足群においては、ＡＡ源およびＤＨＡ源を加えて、ＳＳＣ製剤については０．４２％および０．２６％、ならびにＮｅｏＳｕｒｅ製剤については０．４２％および０．１６％の平均レベルを得た。ＳＳＣ−ＮｅｏＳｕｒｅ製剤の供給計画の１つにおいては、真菌油（ＳＵＮ−ＴＧＡ２５，エム・アルピナ（Ｍ  ａｌｐｉｎａ）由来；Ｓｕｎｔｏｒｙ  ＬＴＤ；Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）と、ＤＨＡに富むマグロ油（Ｍｏｃｈｉｄａ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ．；Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）に由来する低ＥＰＡ魚油（ＤＨＡ：エイコサペンタエン酸［ＥＰＡ］の比  ５：１）とを加えて、それぞれＡＡおよびＤＨＡを供給した。その他のＬＣＰ補足ＳＳＣ−ＮｅｏＳｕｒｅ製剤の供給計画においては、卵由来トリグリセリド（「卵−ＤＴＧ」−Ｅａｓｔｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ；Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ，ＴＮ，ＵＳＡ）を使用して両方の製剤にＡＡおよびＤＨＡを供給し、低ＥＰＡ魚油を使用して追加的なＤＨＡを該ＳＳＣ−製剤に供給した。該対照および研究製剤は、表１ｂに示すとおりの関連組成を有していた。
【００７６】
【表６】
2004518609.tif 000012
【００７７】
１．２．２  研究群
少なくとも１名の親または保護者からの書面によるインフォームドコンセントに従い、添加長鎖多価不飽和脂肪酸ＡＡおよびＤＨＡを含有する又は含有しない以下の３つの研究製剤群の１つに乳児を無作為化した：１）対照、２）ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）および３）ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）。この研究に基づく初回経腸供給の日を研究日（ＳＤＡＹ）１とみなした。コンピューターにより作成された無作為化スケジュールは、置換ブロックアルゴリズムを使用して場所、性別および出生時体重層（７５０〜１２５０ｇおよび１２５１〜１８００ｇ）に関してブロック化された。無作為化の後、ＡＡおよびＤＨＡを含有するトリグリセリド油を含有する又は含有しない割り当てられた入院中用Ｉ型早期産児用製剤（Ｓｉｍｉｌａｃ  Ｓｐｅｃｉａｌ  Ｃａｒｅ（登録商標）即時供給型［２４ｋｃａｌ／ｆｌ  ｏｚ］；ＳＳＣの修飾形態）および／またはＨＭを、被験者に、その満期ＣＡまで供給した。
【００７８】
満期ＣＡの時点で、乳児を段階２の進め、同じ起源のＡＡおよびＤＨＡおよび／またはＨＭを含有する及び含有しない退院後用ＩＩ型栄養強化製剤（ＮｅｏＳｕｒｅ（登録商標）粉末［２２ｋｃａｌ／ｆｌ  ｏｚ］の修飾形態）を１２ヶ月ＣＡまで割り当てた。これらの製剤は、食事必須脂肪酸、リノール酸およびα−リノレン酸（全脂肪酸のそれぞれ１６〜２０％および２．５％）を供給した。
【００７９】
この研究の計画段階においては、参加しているＮＩＣＵにおけるほとんどの乳児には製剤やＨＭを単独で供給するのではなく、製剤とＨＭとの組合せを供給することが明らかであった。したがって、該研究は、ＨＭ供給に適合するよう計画し、初回製剤供給の時点（ＳＤＡＹ１）では、乳児に、１）ＥＨＭを供給するか、２）製剤のみを供給するか、または３）ＨＭと製剤との組合せを供給することが可能であったであろう。経腸供給の時機および進行、ＨＭ供給の持続時間、および経腸供給の補足に関する決定は、最終的な経腸供給が＞１２０ｋｃａｌ／ｋｃａｌ／日となること以外は全て医学スタッフの判断に委ねられた。ＨＭを供給する場合には、それが２２〜２４ｋｃａｌ／ｆｌ  ｏｚに強化され２．８ｇ／ｋｇ／日の最小タンパク質摂取量を与えることが勧められた。これについての１つの含意は、該対照群の乳児は、それに人乳が与えられる場合には、いくらかのＤＨＡおよびＡＡが与えられることが可能であったということである。このことは、実験群における向上した発達の知見を、より一層説得力あるものとする。
【００８０】
１．３  測定パラメーター
１．３．１  身体的成長
標準化された方法に従い（Ｋｏｃｈｅｒ  １９９１）ＳＤＡＹ１（±７ｄ）に、および満期（±７ｄ）、２−（±７ｄ）、４−（±７ｄ）、６−（±７ｄ）、９−（±７ｄ）および１２−（±１０ｄ）月ＣＡ出生日に、体重、身長および頭囲を測定した。±１０ｇ（入院中）または±２０ｇ（退院後）までの精度の電子式または複光束方式体重計を使用して、入院中に少なくとも１回および退院後に２回、乳児を秤量した。固定された頭板と移動可能な足板とを有する物差し（Ｅｌｌａｒｄ  Ｌｅｎｇｔｈ  Ｂｏａｒｄ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡ）および非伸長性巻尺（ＩｎｓｅｒＴａｐｅ（登録商標），Ｒｏｓｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を使用して、それぞれ横臥長および頭囲を精度０．１ｃｍまで測定した。身長および頭囲を、入院中の各測定時に少なくとも１回および退院後に２回測定した。
【００８１】
１．３．２  入院中の供給耐性および臨床的問題
経腸供給を少なくとも１日間見合わせた乳児の割合（％）、胃残留物により経腸供給を見合わせた乳児の割合（％）、および完全な経腸供給（１００ｋｃａｌ／ｋｇ／日）に達するまでの日数を、初期入院の毎日の各乳児に関する医療記録を調べることにより測定した。同様に、疑わしい壊死性全腸炎（ＮＥＣ）、確認されたＮＥＣ（気腫症、門管内の腸内自由空気もしくはガスまたは穿孔のＸ線、外科的または死後証拠）、疑わしい全身感染、確認された全身感染（陽性血液培養）および慢性肺疾患（生後１ヶ月または３６週ＣＡを越える補足酸素）の頻度を、医療記録から抜き出した。
【００８２】
１．３．３  行動視力
テラー視力カード（Ｔｅｌｌｅｒ  Ａｃｕｉｔｙ  Ｃａｒｄ）法（Ｖｉｓｔｅｃｈ  Ｉｎｃ，Ｄａｙｔｏｎ，Ｔｅｌｌｅｒら  １９８６）を用いて、２、４および６ヶ月ＣＡ（±７日）で行動（ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ）視力を評価した。空間周波数（縞幅）が半オクターブステップで３８．０〜０．３２サイクル／ｃｍ（１サイクルは１個の黒および白の縞である）と様々である黒および白の縞を有する一連の２５．５×５１ｃｍのカードを、乳児に見せた。１オクターブは、空間周波数の半分または２倍である。該乳児が一貫した固視応答を示した最も細かい格子（縞幅）は、オクターブの分散（ＳＤ）を伴うサイクル／度単位の視力閾値である。信頼性を判定するために、被検乳児４名につき１名、および最初の被検乳児が２、４および６ヶ月ＣＡに達する前の非被検乳児の小さなコホートが、それぞれの現場で、２名の熟練した検査担当者により試験された。試験の９５％に関して＜０．５９オクターブの一致が見出され、該試験の７８％に関して＜０．５オクターブの一致が見出された。
【００８３】
１．３．４  視覚誘発電位（ＶＥＰ）視力
カンザス・シティー、ニューヨークおよびポートランドの現場においてのみ、ＶＥＰ法（Ｈａｒｔｍａｎｎら，１９９８；Ｚｅｍｏｎら，１９９７）を用いて、視力（アキュイティ）を推定した。乳児［４５名には対照、５０名にはＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）、３９名にはＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）、および２３名には人乳のみ（ＥＨＭ）］を、４および６ヶ月ＣＡ（±７日）で試験した。乳児の頭皮の表面に水溶性のりで付着された３つの金皿状（ｇｏｌｄ−ｃｕｐ）ＥＥＧ電極を使用して、脳波（ＥＥＧ）を記録した。該電極は、Ｏｚの活性部位で頭の中線に沿って配置し、頭頂（Ｃｚ）を基準として用い、これらの２つの位置の中間点（Ｐｚ）にアースした。該ＥＥＧを増幅し、デジタル化し、ＰＣコンピューター内に保存した（ゲイン＝２０Ｋ、帯域通過０．５〜１００Ｈｚ）。各研究現場においては、刺激を生成し電機生理学的シグナルを記録し該データを保存するために、ＥＮＦＡＮＴ記録系を使用した（Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃｏｒｐ，Ｆａｒｍｉｎｇｄａｌｅ，ＮＹ）。このＰＣコンピューターに基づく系は、光学的に分離された差動増幅器と、アナログ・デジタル変換器と、刺激生成のためのハードウェアと、表示装置における歪みに関して補正するための参照用テーブルを含む線形化機構とを含む。同等の応答を与えるよう３組の装置を校正した。該刺激モニターは、１００ｃｄ／ｍ２の平均空間平均（ｍｅａｎ  ｓｐａｃｅ−ａｖｅｒａｇｅ）輝度を有するＮｏｋｉａ  ＲＧＢモニター（非インターレースフレーム（ｎｏｎ−ｉｎｔｅｒｌａｃｅｄ  ｆｒａｍｅ）率＝５９．９８Ｈｚ）であった。黒および白（１００％のコントラスト）の水平方形波格子（すなわち、黒および白の縞）が該スクリーン上に示され、対抗相（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｐｈａｓｅ）は７．５Ｈｚで反転した。掃引パラメーター技術を用いて、一連の格子パターンを表示させた。特に、単一の掃引パラメーターの実行（掃引、スイープ）中に、該格子の空間周波数を６つの異なる段階で変化させた。各段階の持続時間は約１秒であり、該実行の全体にわたり、空間周波数を低から高へ（大きい縞から小さい縞へ：０．８、１．５、３．０、６．０、１２．０、２４．０ｃｙｃ／ｄ）オクターブ間隔で増加させた。乳児を、暗室中、該刺激ディスプレイから１１４ｃｍ離れた位置で、親の膝の上に座らせた。実験担当者は該乳児を観察することが可能であり、該乳児が該刺激から目を離したら該試験を中断し、該乳児が再び該スクリーンを注視したら記録を再開した。
【００８４】
離散フーリエ変換を、該ＥＥＧの１秒事象（ｅｐｏｃｈ）ごとに行った。各対応事象（５または１０掃引）に関する第２周波数応答のサインおよびコサイン成分をベクトル平均して、平均応答を得た。振幅および相値をこれらの平均から導き出した。Ｔｃｉｒｃ２統計を適用して、該平均ベクトルの周囲の９５％信頼範囲を評価し、シグナル対ノイズ比（Ｓ：Ｎ；Ｚｅｍｏｎら  １９９７）を得た。Ｓ：Ｎ＞１の場合に真の応答が存在するとみなされた。Ｓ：Ｎ＝１への２つの隣接点（Ｓ：Ｎ＞１を有する一方の点およびＳ：Ｎ＜１を有する他方の点）間の線形補間により、格子視力を評価した。Ｓ：Ｎ＝１である空間周波数を、該視力推定値と特定した。
【００８５】
１．３．５  ＶＥＰコントラスト感度
カンザス・シティー、ニューヨークおよびポートランドの現場においてのみ、４および６ヶ月ＣＡ（±７日）に、ＶＥＰ法を用いて、コントラスト感度を推定した。コントラストは以下の等式により定義された：Ｃ＝（Ｌｍａｘ−Ｌｍｉｎ）÷（Ｌｍａｘ＋Ｌｍｉｎ）（式中、Ｃ＝コントラスト、Ｌｍａｘ＝該パターンの最大輝度、およびＬｍｉｎ＝該パターンの最小輝度）。この方法は、前記の電極の配置およびハードウェアを用いて、ＶＥＰ視力法と同じ「状態（ｓｉｔｔｉｎｇ）」で行った。７．５Ｈｚの方形波側頭シグナルを用いて、以下の空間周波数のそれぞれをコントラスト反転させた：１１４ｃｍの観察距離での１．５、３．０および６．０ｃｙｃ／ｄに対応する１５、３０および６０サイクル／スクリーン。８秒掃引のコントラスト中、空間周波数を一定に保った。該掃引中に、以下の８コントラストレベルにわたり毎秒１コントラストレベルで、コントラストを増加させた：０％（廃棄（ｔｈｒｏｗ−ａｗａｙ）条件）、０．５％、１％、２％、４％、８％、１６％、３２％および６４％。コントラスト閾値は、前記と同様の補間法を用いて定義された。Ｓ：Ｎ＝１を得るのに要したコントラストの逆数を、コントラスト感度測定値として定義した。この電気生理学的に測定された尺度は、乳児が黒および白の縞の存在を検出するのに要するコントラストの最小量の逆数である挙動尺度を模擬するように意図された。
【００８６】
１．３．６  全般的神経学的発達
乳児発達用ベーリー尺度（Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ｅｄ２．，Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ，ＴＸ）を１２ヶ月ＣＡ（±１０日）で施して、認識および運動の発達（それぞれ精神発達指数（Ｍｅｎｔａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｎｄｅｘ）［ＭＤＩ］；精神運動発達指数（Ｐｓｙｃｈｏｍｏｔｏｒ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  Ｉｎｄｅｘ）［ＰＤＩ］）を評価した。約１０名の被検乳児（ｎ＝４１）ごとに１名をベーリーの実施中にビデオ撮影し、これらのビデオテープを、該現場試験担当者からは独立して中央（Ｒ  Ａｒｅｎｄｔ博士，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ）で評価した。該現場の試験担当者の間の評価の平均一致率および中央で判定された平均一致率は、該ＭＤＩおよびＰＤＩに関してそれぞれ９１％（範囲、７１〜１００％）および９３％（範囲７３〜１００％）であった。
【００８７】
１．３．７  情報処理
外来時に研究供給を続けている乳児に対して、６および９ヶ月ＣＡ（±７日）の時点で、ファーガン乳児知能試験（Ｆａｇａｎ  Ｔｅｓｔ  ｏｆ  Ｉｎｆａｎｔ  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ）（Ｉｎｆａｎｔｅｓｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，ＯＨ；Ｆａｇａｎ  ＆  Ｓｉｎｇｅｒ  １９８３）を実施した。慣れのための期間中、乳児が所定量の見る（眺め）時間を累積するまで、顔面刺激が示された。該試験期間中、新たな顔面刺激と共に、見慣れた顔面刺激が示された。各刺激に対して費やされた見る時間の量を記録し（ＩＢＭ  Ｔｈｉｎｋｐａｄ）、視覚認識記憶の尺度である「目新しさ嗜好（ｎｏｖｅｌｔｙ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ）」（該試験段階中に新たな刺激を見ることに費やされた全ての見る時間の割合（％）；１０回の試験の平均）を計算した。また、合計の見た時間を、１０回の試験に関して平均した見た回数で割ることにより、情報処理の効率の尺度とみなされる平均持続眺め時間を、前記の慣れのための期間に関して計算した（Ｃｏｌｏｍｂｏら  １９８８；Ｊａｃｏｂｓｏｎら  １９９３）。
【００８８】
１．３．８  言語発達
親が報告するための標準化された手段であるマックアーサー意思伝達発達調査表（ＭａｃＡｒｔｈｕｒ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｖｅ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  Ｉｎｖｅｎｔｏｒｉｅｓ）（Ｆｅｎｓｏｎら  １９９３）の乳児版からの語彙チェックリストを、９ヶ月ＣＡ（±７日）および１４ヶ月（±１０日）ＣＡで記入させた。９および１４ヶ月ＣＡにおける各乳児の語彙理解（その子供が理解している語）ならびに１４ヶ月ＣＡにおける語彙生成（その子供が発する語）に関する情報を得るために、この語チェックリストを使用した。パーセンタイル得点を性別特異的標準から計算し、常法により標準得点に変換した。
【００８９】
１．３．９  血中脂肪酸の分析
退院時の研究第１日（ＳＤＡＹ１）に通常の臨床的診療の一部として血液を採取した場合には、血漿の脂肪酸組成ならびに赤血球（ＲＢＣ）のホスファチジル−コリン（ＰＣ）およびホスファチジル−エタノールアミン（ＰＥ）膜画分の脂肪酸組成の決定のために追加的な血液を採取した。さらに、血中脂肪酸レベルを測定するために、４および１２ヶ月ＣＡの時点で、ＨＭおよび／または研究製剤を継続している全ての被検乳児から血液を得るための試みを行った。血液サンプルを加工し、−７０℃で凍結し、分析のためにドライアイス上で中央研究所（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｒｏｓｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ）に提出した。
【００９０】
１．３．１０  重篤および／または予想外の有害な事象（ＳＡＥ）
ＳＡＥは、死亡を招いたか又は生命を脅かしたか障害を招いたか入院を必要としたか永久的な障害を予防するための介入を必要とした臨床試験中に生じたいずれかの実験と、該研究プロトコールにおいて定義された。この定義には、生命を脅かさない救急室来訪は含まれなかった。初期入院期間中、その現場の研究チームは、早期産児の自然発達歴において予想されたＳＡＥ（乳児の死亡以外）を含めないよう、および該研究産物の使用に伴いうる又はそれに伴うと研究者が考えるＳＡＥを含めるよう指示された。
【００９１】
各ＳＡＥは、研究供給群が知らされていない新生児医学者（Ｐ  Ｐｏｌｌａｃｋ，ＭＤ）により検討され、文字数字式の組織系および重症度得点が割り当てられた。主要範疇は以下のものを含んでいた：１）死亡、２）肺性中枢性、自律性（例えば無呼吸、急性チアノーゼ）、３）肺性実質性（例えば肺炎、ＲＳＶ、喘息、喘鳴）、４）他の重篤な非肺疾患（例えば下痢、脱水、嘔吐、発熱、敗血症）、および５）研究供給に全く無関係なもの（例えば網膜症に対するレーザー治療、ヘルニア修復）。
【００９２】
１．４  統計的方法
これは、すべての登録乳児を含むＩＴＴ（ｉｎｔｅｎｔ−ｔｏ−ｔｒｅａｔ）研究であった。〜１６ヶ月の研究期間にわたるこの高リスク集団におけるプロトコールの逸脱が予想されたため、乳児が該供給プロトコールを厳守した最後のデータ収集時点までのデータを含むように部分集団解析を計画した。乳児のこの部分集団は、満期ＣＡの時点で供給プロトコールを継続しており乳供給（研究製剤、ＨＭ、非研究製剤、牛乳）の＞８０％を研究製剤および／またはＨＭとして消費している乳児と定義された。例えば、予定された４ヶ月ＣＡでの来院と６ヶ月ＣＡでの来院との間に乳児が研究供給を中断した場合には、４ヶ月ＣＡでの来院の研究データはこの部分集団解析に含めるが、６ヶ月ＣＡでの来院時に集めたデータはそれに含めなかった。
【００９３】
サンプル（標本）の大きさ（ｎ＝４２０）は、該ＩＴＴ解析における研究製剤群の中で１２ヶ月ＣＡにＢＳＩＤにおいてα＝０．０５および８０％の検出力を伴う０．５の標準偏差（ＳＤ）の違いの検出に関して推定された。この推定は、予想された乳児の減少（２０％）、結果（ｏｕｔｃｏｍｅ）変数に対するＨＭ摂取の考えられうる減弱効果（２５％）、および初期新生児期間参照中のＥＨＭ摂取の成立を説明するサンプルの大きさの増加を含むものであった。
【００９４】
カイ二乗またはＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ検定を用いてカテゴリ変数を解析し、分散分析（ＡＮＯＶＡ）および／または共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）により連続変数を解析した。２以上の時点で得られたデータを繰返し測定解析により解析した。先験的に定義されるとおり、３つの研究製剤群における統計的比較は、場所に関するランダムブロック（ｒａｎｄｏｍ  ｂｌｏｃｋ）を含むものであった（すなわち、場所を補助変量として用いた）。また、連続的な結果変数での全ての解析は、計画層（ｄｅｓｉｇｎ  ｓｔｒａｔａ）補助変量（性別および出生時体重［７５０〜１２５０ｇまたは１２５１または１８００ｇ］）およびＨＭ摂取に関する補助変量を含むものであった。人乳摂取は、満期ＣＡでの来院時の乳児の分類に基づくカテゴリ変数として、人乳のみの供給（統計解析からは除かれた）、製剤のみの供給、製剤からの入院中経腸エネルギー摂取の＜５０％、および製剤からの入院中経腸エネルギー摂取の＞５０％として定義された。追加的な予め予定されていた補助変量は、成長妊娠期に関する妊娠のサイズ、妊娠に関するサイズ、家庭環境において子供に利用可能な認識的、社会的および情緒的サポートの質および量の尺度（ＨＯＭＥ調査表；Ｃａｌｄｗｅｌｌ  ＆  Ｂｒａｄｌｅｙ  １９８４）、および発達結果に関する母体知能（ＷＡＩＳ−Ｒの語彙成分；Ｗｅｓｃｈｌｅｒ  １９８１）の代用尺度、および出生前喫煙、退院時の家庭内喫煙、妊娠期、妊娠に関するサイズ、ＨＯＭＥ調査表、および視覚結果に関するＷＡＩＳ−Ｒの語彙成分を含んでいた。すべての統計的検定は両側検定であり、有意水準は０．０５および０．１０（交互作用に関して）と定められた。来院、出生時体重層および性別により行った多重比較を考慮して、適宜、有意水準としてボンフェロニ補正ｐ値を用いた。
【００９５】
１．５  結果
１．５．１  研究サンプル
登録された４７０名の乳児のうちの３７６名（８０％）が、１２ヶ月ＣＡまでの研究を完了した。４３名の乳児が、満期ＣＡまでのＨＭ摂取に基づく初期新生児期中のＥＨＭ供給者として分類された。対照群中の１４４名の乳児のうち、１２６名（８８％）および９１名（６３％）が、それぞれ満期および１２ヶ月ＣＡの時点で研究供給を受け続けた。同様に、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）群の１４０名の乳児のうち、１２０名（８６％）および８９名（６４％）は満期および１２ヶ月ＣＡの時点で研究供給を受け続け、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群に登録された１４３名の乳児のうち、１２６名（８８％）および９１名（６４％）は満期および１２ヶ月ＣＡの時点で研究供給を受け続けた。満期ＣＡの時点で、対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）およびＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群の乳児のそれぞれ３５％、２８％および３３％は、１日に少なくとも１回はＨＭを消費した。４ヶ月ＣＡまでは、対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）およびＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群の乳児のそれぞれ１４％、１２％および１２％はＨＭを消費した。対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）およびＥＨＭ群の乳児のそれぞれ１９名（１３％）、２０名（１４％）、１１名（８％）および１名（２％）は、供給耐性に関連した典型的な症状（現場研究者により提供された中断の主要原因）のため、研究供給を中断した。該研究の進行中に、対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）およびＥＨＭ群の６、３、６および０名の乳児が死亡した。各現場の研究者の判断によると、研究における死亡は研究供給には無関係であった。
【００９６】
１．５．２  乳児および家族デモグラフィックス
乳児および家族ベースラインデモグラフィックスは、ＨＯＭＥ調査表に関するスコアを除き、研究製剤群間で異ならなかった（表２および３）。対照群（ＬＳ±ＳＥ，３６．０＋０．７）に無作為化された＜１２５０ｇの乳児は、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）群（３３．７＋０．７，ｐ＝０．０３）の乳児より高い平均ＨＯＭＥ調査表スコアを有していた。対照群（ＬＳ平均ＳＥ，３６．２±０．６；ｐ＝０．００６）およびＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）（３６．３±０．６，ｐ＝０．０．００４）群に無作為化された＞１２５０ｇの出生時体重層の乳児は、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群（３３．６±０．７）の乳児より高い平均ＨＯＭＥ調査表スコアを有していた。それらの３つの研究製剤群における多重的出生状態（双生児出生と単生児出生との比較）の限界的に統計的に有意な差が認められた（ｐ＝０．０５４）。対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）およびＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群における被験者のそれぞれ約１７％、２０％および２８％が双生児であった。
【００９７】
【表７】
2004518609.tif 000013
【００９８】
【表８】
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【００９９】
１．５．３  成長
該ＩＴＴ集団では、ＳＤＡＹ１から満期、４および１２ヶ月ＣＡまでの体重、身長または頭囲の増加においては、あるいはＳＤＡＹ１、満期、２、４、６、９および１２ヶ月ＣＡでの絶対的な体重、身長および頭囲の測定の繰返し測定解析においては、非常に僅かな及び一貫しない相違が見出された（表４ａおよび４ｂ＆図１を参照されたい）。ＳＤＡＹ１から１２ヶ月ＣＡまでの平均身長増加は、＜１２５０ｇのＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）（５．６７±０．０７ｍｍ／ｗｋ）の乳児と比較して、対照（ＬＳ平均±ＳＥ，５．９５±０．０７ｍｍ／ｗｋ）の方が大きかった（ｐ＝０．００８）。ＳＤＡＹ１から満期ＣＡまでの平均頭囲増加は、女対照においては、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）の乳児の場合より大きく（９．１±０．２対８．４±０．２ｍｍ／ｗｋ，ｐ＝０．００５）、＞１２５０ｇのＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）の乳児においては、ＳＤＡＹ１から満期ＣＡまででは、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）の乳児の場合より大きかった（それぞれ９．０対８．４ｍｍ／ｗｋ；ｐ＝０．００４）。これに対して、すべての研究来院にわたる身体計測の繰返し測定解析は、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）の乳児の体重および身長が、満期ＣＡにおいて対照乳児の場合より大きいことを示した（それぞれ２９０６±４８ｇ対２７５７±５０ｇ，ｐ＝０．０３；４７．１±０．２ｃｍ対４６．５±０．０２ｃｍ，ｐ＝０．０１）。これらの相違は、初期入院エネルギーの＞５０％をＨＭから消費する乳児を該ＩＴＴ集団の解析から除いた場合には消失した。
【０１００】
同様に、身体計測値の増加においては、あるいは該部分集団解析（供給プロトコールの厳守者）における研究来院にわたる身体計測測定値の繰返し測定解析においては、非常に僅かな及び一貫しない相違が見出された。ＳＤＡＹ１から４ヶ月ＣＡまでの平均身長増加は、対照（ＬＳ  平均＋ＳＥ，８．６８±０．１４ｍｍ／ｗｋ）においては、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）（８．３３±０．１４ｍｍ／ｗｋ，ｐ＝０．０４）より大きかった。ＳＤＡＹ１から満期ＣＡまでの平均頭囲増加は、女対照においては、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）の乳児の場合より大きかった（９．２４±０．２ｍｍ／ｗｋ対８．４±０．２ｍｍ／ｗｋ，ｐ＝０．００３）。
【０１０１】
表４ｂは、どの時点で及びどの群においてパラメーターが統計的に異なっていたかがより明瞭に示された要約されたデータを示す。表４ｂは、該成長パラメーターで有意なものがいかに少ないかを示している。該ＩＴＴ解析における最も初期の測定時点（満期ＣＡ）の身長および体重を除いて、該絶対的測定値のうちのいずれも、統計的に異ならなかった。少数の場合においては、該対照製剤は該研究製剤より大きな増加を与えたが、これは、該対照群が、無作為化されているものの、平均して、満期において、より小さな体重を偶然有していたことにより説明されうる。一般に、より小さな乳児は、より大きな乳児より速い速度で成長した。
【０１０２】
【表９】
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【０１０３】
【表１０】
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【０１０４】
１．５．４  入院中供給耐性および臨床的問題
該ＩＴＴおよび部分集団解析のどちらにおいても、経腸供給を少なくとも１日間見合わせた乳児の割合（％）、胃残留物のため供給を見合わせた乳児の割合（％）および完全経腸供給に達するまでの日数に関しては、研究製剤群間で相違はなかった（表５）。同様に、慢性肺疾患の頻度においては又は全身感染もしくは壊死性全腸炎の疑わしい若しくは確認された症例においては、研究製剤群間で相違はなかった。
【０１０５】
【表１１】
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【０１０６】
１．５．５  行動およびＶＥＰ視力
行動およびＶＥＰ視力の結果（ｃｙ／ｄ）を、解析の前に常法（Ｗｅｉｓｔｈｅｉｍｅｒ  １９８７）により対数変換し、相乗平均値（ｃｙ／ｄ）をオクターブ単位のＳＤと共に表した（図２及び３）。該解析を該ＩＴＴ集団に対して行ったか供給プロトコール厳守者に対して行ったかにかかわらず、行動視力（ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ａｃｕｉｔｙ）に対する研究供給の有意な効果は見出されなかった。一方、６ヶ月ＣＡの時点で、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）（ＬＳ平均＋ＳＥ，１１．４±０．１ｃｙ／ｄ）またはＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）（１２．５±０．１ｃｙ／ｄ）に無作為化された乳児の平均ＶＥＰ視力は、該対照製剤に無作為化された乳児のもの（８．４±０．１ｃｙ／ｄ，ｐ＝０．０１）より高かった。さらに、ＡＡ＋ＤＨＡ補足製剤に無作為化された乳児の平均ＶＥＰ視力は４ヶ月ＣＡと６ヶ月ＣＡとの間に増加したが、該対照群に無作為化された乳児の平均ＶＥＰ視力はそうではなかった。該部分集団解析においては、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）が供給された乳児の平均ＶＥＰ視力（ＬＳ平均±ＳＥ，１２．９±０．１ｃｙ／ｄ）は、６ヶ月ＣＡにおいて、該対照供給（８．５±０．１ｃｙ／ｄ）乳児の場合より高かった（ｐ＝０．００２）。６ヶ月ＣＡの対照乳児より高い視力をＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）供給乳児（１０．６±０．１ｃｙ／ｄ）で示す限界的に有意な差が認められた（ｐ＝０．０８）。
【０１０７】
統計的比較は行わなかったが、初期新生児期に研究製剤が与えられた乳児の６ヶ月ＣＡでのＶＥＰ視力は、ＥＨＭ供給乳児のものより低かった。この相違は、非補足対照製剤が供給された乳児において最も顕著であった。
【０１０８】
この試験からの結果は、ＶＥＰ視力により評価では、ＬＣＰ補足が６ヶ月ＣＡにおける早期産児の視覚発達の改善をもたらすことを示唆している。６ヶ月ＣＡでは、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）またはＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）に無作為化された乳児の平均ＶＥＰ視力は、該対照製剤に無作為化された乳児の場合より約０．３４および０．４２オクターブ高かった。ＶＥＰと認識視力（ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｃｕｉｔｙ）との間で相違が認められたが（Ｍａｙｅｒ  ＆  Ｄｏｂｓｏｎ  １９９７）、この相違の大きさは、スネレン視力表上の約１視標に対応する（すなわち、２０／７０対２０／５０）。ＶＥＰ視力が４ヶ月ＣＡと６ヶ月ＣＡとの間で改善したＡＡ＋ＤＨＡ補足乳児の場合とは異なり、該対照製剤に無作為化された乳児のＶＥＰ視力では相違が認められず、このことは、この後者の乳児群における視覚系の発達の減速を示唆している。
【０１０９】
これらの結果は、Ｂｉｒｃｈら（１９９２）およびＦａｌｄｅｌｌａら（１９９６）により報告されているとおり、ＤＨＡのみで補足された早期産児乳児における、より高いＶＥＰ視力（１および４ヶ月ＣＡ）およびより成熟したＶＥＰ波状潜伏形態学（ｗａｖｅ  ｌａｔｅｎｃｙ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ）（３ヶ月ＣＡ）と一致している。同様に、Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９３ａ，１９９６ａ）は、高ＥＰＡ魚油由来のＤＨＡのみが補足された早期産児の２および４ヶ月ＣＡにおける、ならびに低ＥＰＡ魚油由来のＤＨＡのみが供給された健康な早期産児の２ヶ月ＣＡにおける、テラー（Ｔｅｌｌｅｒ）カード法による視力の改善を示した。本研究においては、予め計画された比較を用いる研究群では、視力（テラー法によるもの）における統計的に有意な差は認められなかった。しかし、各測定時点（２、４および６ヶ月ＣＡ）におけるテラー視力の結果の事後分析は、卵−ＤＴＧ／魚由来のＡＡ＋ＤＨＡが供給された４ヶ月ＣＡの乳児（ＬＳ平均±ＳＥ，１．８±０．１ｃｙ／ｄ）が、該対照製剤が供給された４ヶ月ＣＡの乳児（１．７±０．１ｃｙ／ｄ，ｐ＝０．０３２３）より統計的に高い平均視力スコアを有することを示した。しかし、絶対的な相違は顕著ではない。前記研究結果の全般的一致から強く示唆される視覚発達の利点に加えて、先の視覚評価の結果と後の運動および認識阻害との相関性を、益々多くの文献が示唆している（Ｈａｋｋｉｎｅｎら，１９８７；Ｉｉｎｕｍａら，１９９７；ｖａｎ  Ｈｏｆ−ｖａｎ  Ｄｕｉｎら，１９９８；Ｖｏｈｒら，１９９２）。これらの相関性は、ＬＣＰ補足により視覚系にもたらされた先の利点が、長期にわたる結果をもたらしうることを示唆しているが、この仮定は確かめられていない。
【０１１０】
また、ＤＨＡ（ＡＡ無し）補足に二次的な視覚発達の改善を示す既に公開され査読されている前記の４つの臨床試験は、早期産児における、より遅い成長を報告しているか、または成長の結果における有意な相違を検出するほど十分には支持されていなかった（Ｂｉｒｃｈら，１９９２；Ｃａｒｌｓｏｎら，１９９３ａ；Ｃａｒｌｓｏｎら，１９９６ｂ；Ｆａｌｄｅｌｌａら，１９９６；Ｕａｕｙら，１９９４）。Ｃａｒｌｓｏｎら（１９９３ｂ）は、必須脂肪酸であるリノール酸の適当な摂取にもかかわらず、早期産児は最適な成長のためには食事ＡＡ源を要しうると仮定した。一方、Ｗｏｌｔｉｌら（１９９８）は、早期産児における血中ＡＡレベルが、１０日齢においては身体計測値に関連しているが、４２日齢までに失われると報告しており、このことから、このグループは、ＡＡの状態が生後の成長ではなく子宮内の成長に関連していたと結論するに至った。ＡＡ＋ＤＨＡ補足と組合せた栄養強化製剤の供給を少なくとも６ヶ月ＣＡまで、好ましくは１２ヶ月ＣＡまで延長させることが、負の成長の望ましくない結果を伴うことなく視覚発達の増強を実現しうるメカニズムをもたらすことを、ここに記載されている研究からの結果は示唆している。本研究においては、非常に僅かな及び一貫しない相違が、ＳＤＡＹ１から満期ＣＡ、４ヶ月ＣＡおよび１２ヶ月ＣＡまでの体重、身長または頭囲の増加における又はＳＤＡＹ１、満期、２、４、６、９および１２ヶ月ＣＡの絶対的な体重、身長および頭囲の測定値の繰返し測定解析における＞２００の統計的比較において見出された（図１、表４ａおよび４ｂ）。
【０１１１】
１．５．６  ＶＥＰコントラスト感度
表６および７に要約されているとおり、乳児の平均ＶＥＰコントラスト感度の測定値は、予め計画された統計的比較を用いた場合には、研究製剤群によっては異ならなかった。しかし、６ヶ月ＣＡにおける１．５ｃｙｃ／ｄのコントラスト感度の事後分析は、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）（ＬＳ平均±ＳＥ，１２．０±０．１，ｐ＝０．００８４）およびＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）（１０．０±０．１０，ｐ＝０．０３９６）研究製剤群に無作為化された乳児が、該対照群（５．９±０．１）に無作為化された乳児よりより高い平均コントラスト感度測定値を有することを示した。０．０１６７のボンフェロニ補正αレベルを用いた場合、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）と対照との相違のみが、依然として統計的に有意であった。
【０１１２】
【表１２】
2004518609.tif 000018
【０１１３】
【表１３】
2004518609.tif 000019
【０１１４】
１．５．７  全般的発達レベル
該データの統計解析が、該研究に無作為化された全ての乳児を含むのか、該供給プロトコールを厳守した乳児のみを含むのかにかかわらず、研究製剤間でＭＤＩスコアにおける相違は見出されなかった（表８）。一方、ＰＤＩスコアに関しては、統計的に有意な供給＊出生時体重交互作用が認められた（Ｐ＝０．００５）。該供給プロトコールを厳守した＜１２５０ｇの乳児の平均ＰＤＩスコアは、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）（ＬＳ平均＋ＳＥ，９０．６＋４．４）が供給された乳児においては、対照の場合（８１．８＋４．３；ｐ＝０．００７）より大きかった。ベーリーのＰＤＩは、総体的な運動能力、例えば座る、歩く、立つ、階段上り、ならびに頭および指の細かい運動技量を測定する。本発明者が知る限りにおいては、これは、ＡＡ＋ＤＨＡ補足による運動発達スコアの改善を示す最初の前向き無作為化試験である。
【０１１５】
有意に遅れた精神的または運動能力を有する該ＩＴＴまたは部分集団内の被験者の割合（％）は、研究製剤群によっては統計的に異ならなかった。例えば、該ＩＴＴ集団においては、乳児の約４および１２％は、それぞれ、有意に遅れた能力を示すと記載されるレベルである＜７０のＭＤＩおよびＰＤＩスコアを有していた。
【０１１６】
１．５．８  言語
該ＩＴＴまたは部分集団解析においては、言語理解は９または１４ヶ月ＣＡの時点では前記の３つの研究製剤群間で異ならなかった（表８）。同様に、１４ヶ月ＣＡでの語彙生成における研究供給による相違は認められなかった。これらの解析においては、スペイン語を話す乳児および双生児が、パーセンタイルおよび性別特異的基準の計算に加えられ、英語を話す乳児を用いて標準スコアの変換が確認された（Ｆｅｎｓｏｎら  １９９３）。Ｊａｃｋｓｏｎ−Ｍａｌｄｏｎａｄｏ（１９９３）は、言語獲得の経過が、スペイン語を話す子供と英語を話す子供とで類似していることを報告しており、これはこのアプローチを正当化するものである。もっとも、スペイン語を話す乳児および双生児を該ＩＴＴ解析から除いた場合には、該対照群（ＬＳ平均±ＳＥ，９４．１±２．９）に無作為化された乳児は、一般には、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）（１０２．２±２．８，ｐ＝０．０１４５）またはＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）群（１００．６±２．９，ｐ＝０．０４２２）に無作為化された乳児より低い語彙理解力を有していた。同様に、その評価可能な解析においては、対照が供給された乳児（ＬＳ平均±ＳＥ，９５．３±３．３）は、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）が供給された乳児（１０５．４±３．４，ｐ＝０．０１１８）より低い語彙理解力を有していた。
【０１１７】
【表１４】
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【０１１８】
１．５．９  情報処理
目新しさ嗜好（ｐ＝０．１０）および慣れのための期間中の平均眺め持続時間（ｐ＝０．０７）の両方に関して、統計的に有意な供給＊来院交互作用が認められたが、各時点の研究供給群の対比比較は、目新しさ嗜好に関する相違のみを示した（表９）。ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）が供給された乳児の平均目新しさ嗜好（ＬＳ平均±ＳＥ，６０．０±０．８）は、６ヶ月ＣＡにおける対照（５７．５±０．８；ｐ＝０．０２）およびＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）供給（５６．６±０．８，ｐ＝０．００３）乳児より有意に高かった。ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）とＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）との間の相違は、０．００８３のボンフェロニ補正アルファレベルを用いた場合にも統計的に有意なままであった。
【０１１９】
【表１５】
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【０１２０】
１．５．１０  血中脂肪酸分析
予想どおり、ＳＤＡＹ１では、血漿中またはＲＢＣのＰＥもしくはＰＣ画分中のＡＡおよびＤＨＡの濃度（ｇ／１００ｇ）関しては、該研究製剤群間で有意な相違は無かった（示していない）。これに対して、魚／真菌または卵−ＤＴＧ／魚製剤を消費した乳児は、一般に、退院時に対照研究群の乳児より高い血中ＡＡおよびＤＨＡ濃度を有していた。該対照、魚／真菌、卵−ＤＴＧ／魚およびＥＨＭ群の乳児は、退院時に、それぞれ９．９±１．８、１２．０±１．７、１２．５±２．２および１４．１±２．３の血漿リン脂質ＡＡ（ｗｔ％）の平均（±ＳＤ）レベル、ならびにそれぞれ２．６±０．７、３．４±０．７、３．３±０．６および３．５±０．８の平均（±ＳＤ）ＤＨＡレベルを有していた。
【０１２１】
ＲＢＣ  ＰＥ中のＡＡレベルを除き、２および４ヶ月ＣＡにおける血中脂肪酸データの統計解析は、ＡＡ＋ＤＨＡ補足製剤が供給された乳児が、該対照製剤が供給された乳児より高い血中（血漿およびＲＢＣリン脂質中）ＡＡおよびＤＨＡレベルを有することを示した（ｐ＜０．０００１；表１０）。ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）ではなくＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）が供給された乳児は、対照製剤が供給された乳児より高いＲＢＣ  ＰＥ中のＡＡレベルを有していた（ｐ＝０．０２）。
【０１２２】
【表１６】
2004518609.tif 000022
【０１２３】
１．５．１１  重篤および／または予想外な悪影響（ＳＡＥ）
少なくとも１つのＳＡＥを有する乳児の割合（％）は研究製剤群間で異ならず、該対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）、ＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群に無作為化された乳児のそれぞれ４４％、４６％、４７％が少なくとも１つのＳＡＥを有する。該対照、ＡＡ＋ＤＨＡ（魚／真菌）およびＡＡ＋ＤＨＡ（卵−ＤＴＧ／魚）群に無作為化された乳児のそれぞれ３８％、３９％および４３％は、少なくとも１回の再入院を経験した。供給群間の比較を各出生体重層（７５０〜１２５０ｇまたは１２５１〜１８００ｇ）内で行った場合には、ＳＡＥまたは再入院の数の比較は相違を示さなかった。最後に、統計的に有意な供給の相違は、それぞれのＳＡＥの数的およびアルファベット系ならびに重症度評価では見出されなかった。
【図面の簡単な説明】
【図１Ａ】
研究第１日（中央値、５日齢）から１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の体重を示す。
【図１Ｂ】
研究第１日（中央値、５日齢）から１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の身長を示す。
【図１Ｃ】
研究第１日（中央値、５日齢）から１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の頭囲を示す。
【図２】
１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給された早期産児の２、４および６ヶ月ＣＡ（±７日）の時点でテラー（Ｔｅｌｌｅｒ）視力カードにより測定した視覚発達を示す（右側の軸）。
【図３】
１２ヶ月ＣＡまで人乳および／または栄養強化製剤（ＡＡおよびＤＨＡの存在下または不存在下）が供給されたカンザスシティー、ニューヨークおよびポートランドの研究現場の早期産児の４および６ヶ月ＣＡ（±７日）における視覚誘発電位（「ＶＥＰ」）視力を示す（右側の軸）。
【図１Ａ】
2004518609.tif 000023
【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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