(57)【要約】シアリル・ルイスＸ （ＳＬｅＸ ）およびその類似物のアミノフェニルグリコシドを含む一群の結合可能な四糖化合物が開示される。これらの化合物は、接合可能な求核基を有するため、多重結合のＳＬｅＸ 化合物を生成するために有用である。特に、開示されたＳＬｅＸ 化合物は、これらをリポーター部分に結合することにより、セレクチン結合リガンド接合体を生成するのに用いることができ、これらの接合体は、放射線診断用剤、または、細胞障害剤または化学療法剤に用いることができる。本発明のＳＬｅＸ 化合物および接合体は、天然のシアリルＬｅＸ と同様なセレクチン結合能を示し、そのために、セレクチンを介在とする異常や関連する症状の診断や治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造式（１）のシアリル・ルイスＸ類似物を含む化合物；
【化１】
2004518704.tif 000024
式中、
Ｚは、水素、Ｃ１ −Ｃ６ アシル、または
【化２】
2004518704.tif 000025
であり、
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２ 、ＨＮＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）、またはＳＣ（Ｏ）であり、
Ｇ１ およびＧ２ は、それぞれ独立して、Ｃ（Ｒ９ ）２ 、ＮＲ１０ 、Ｏ、またはＳであり、
Ｌは、アルキリデン、シクロアルキリデン、アリリデン、またはビニリデンであり、
Ｒ２ は、水素、Ｃ（Ｏ）Ｒ８ 、ＳＯ２ Ｒ８ 、Ｃ（Ｓ）Ｒ８ 、ＣＯＣＨ３ 、または １４ＣＯＣＨ３ であり、
Ｒ４ は、水素、Ｃ１ −Ｃ６ アルキル、アリール、アリールアルキル、置換アリール、または置換アリールアルキルであり、
Ｒ３ およびＲ５ は、それぞれ独立して、水素、ベンジル、メトキシベンジル、ジメトキシベンジル、またはＣ１ −Ｃ６ アシルであり、
Ｒ１ 、Ｒ７ 、Ｒ８ 、Ｒ９ およびＲ１０ は、それぞれ独立して、水素、Ｃ１ −Ｃ６ アルキル、アリール、置換アリール、またはフェニルＣ１ −Ｃ３ アルケニル基、または、製薬において許容される塩である。
【請求項２】
Ｙはカルボニルであり、Ｒ１ は水素またはメチルであり、かつ、Ｚは、遊離しているか、または、ベンジルまたはＣ１ −Ｃ６ アシルの保護基により遮断されているヒドロキシ基を有するα−Ｌ−フコシルである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
類似物が次の構造式（２）を有する請求項１に記載の化合物；
【化３】
2004518704.tif 000026
式中、
Ｒは、水素、ＣＯＣＨ３ または １４ＣＯＣＨ３ であり、
Ｒ’は、水素またはアシルであり、
Ｒ”は、水素またはメチルである。
【請求項４】
Ｒは水素であり、Ｒ’はアシルであり、Ｒ”はメチルである請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
ＲはＣＯＣＨ３ であり、Ｒ’およびＲ”は、水素である請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒは、１４ＣＯＣＨ３ であり、Ｒ’およびＲ”は水素である請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
（ａ）シアリル・ルイスＸ類似物（ＳルイスＸ ）部分、（ｂ）リポーター部分、（ｃ）該ＳルイスＸ 部分をリポーター部分と接合するリンカー、からなるセレクチン結合リガンド接合体。
【請求項８】
前記リポーター部分が、細胞障害剤または治療剤である請求項７に記載の接合体。
【請求項９】
前記リポーター部分が、リポソームの一部として組み込まれた細胞障害剤または治療剤である請求項８に記載の接合体。
【請求項１０】
前記細胞障害剤または治療剤が抗生物質からなる請求項８に記載の接合体。
【請求項１１】
前記抗生物質が、セフロキシム、リネゾリドおよびバンコマイシンからなる群から選択される請求項１０に記載の接合体。
【請求項１２】
前記治療剤が抗癌剤である請求項８に記載の接合体。
【請求項１３】
前記抗癌剤が、パクリタキセル（タキソール）、ドセタクセル、ビンカアルカロイド、ドラスタチン、ダウノマイシン、ドキソルビシン、ブレオマイシンおよびハリコンドリンからなる群から選択される請求項１２に記載の接合体。
【請求項１４】
前記抗癌剤がパクリタキセル（タキソール）からなる請求項１３に記載の接合体。
【請求項１５】
前記治療剤が抗炎症剤である請求項８に記載の接合体。
【請求項１６】
前記抗炎症剤が、ナプロキセンまたはインドメタシンである請求項１５に記載の接合体。
【請求項１７】
前記治療剤が抗酸化剤である請求項８に記載の接合体。
【請求項１８】
前記リポーター部分が診断用造影剤からなる請求項７に記載の接合体。
【請求項１９】
前記リポーター部分が、１以上の大環状または非大環状の金属キレート化リガンドのラジカル基である請求項７に記載の接合体。
【請求項２０】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、常磁性金属、超常磁性金属または放射性金属にキレート化されている請求項１９に記載の接合体。
【請求項２１】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、放射線療法に有用な放射性金属にキレート化されている請求項２０に記載の接合体。
【請求項２２】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、６４Ｃｕ、９０Ｙ、１０５Ｒｈ、１１１Ｉｎ、１１７ｍＳｎ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６／１８８Ｒｅおよび １９９Ａｕからなる群から選択される治療用放射性金属にキレート化されている請求項２１に記載の接合体。
【請求項２３】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、画像診断または診断に有用な放射性金属にキレート化されている請求項２０に記載の接合体。
【請求項２４】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃおよび １１１Ｉｎからなる群から選択される診断用放射性金属にキレート化されている請求項２３に記載の接合体。
【請求項２５】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、次の構造式（Ｂ）、（Ｃ）または（Ｄ）からなり、
【化４】
2004518704.tif 000027
かつ、常磁性または放射性ランタニドにキレート化されている請求項１９に記載の接合体。
【請求項２６】
前記金属キレート化リガンドのラジカル基が、次の構造式（Ｅ）、（Ｆ）または（Ｇ）からなり、
【化５】
2004518704.tif 000028
式中、
Ｘは、ＣＨ２ またはＯであり、
Ｙは、分岐性または非分岐性のＣ１ −Ｃ１０ アルキル基、分岐性または非分岐性のＣ１ −Ｃ１０ ヒドロキシまたはポリヒドロキシアルキル基、または、ポリアルコキシアルキルまたはポリヒドロキシ−ポリアルコキシアルキル基を有する、分岐性または非分岐性のアルキル、アリール、アリロキシ、アリールアミノ、アリールアミノアシルであり、
Ｊは、Ｃ（＝Ｏ）−、ＯＣ（＝Ｏ）−、ＳＯ２ −、ＮＣ（＝Ｏ）−、ＮＣ（＝Ｓ）−、Ｎ（Ｙ）−、ＮＣ（＝ＮＣＨ３ ）−、ＮＣ（＝ＮＨ）−、Ｎ＝Ｎ−、合成または天然のアミノ酸由来のホモポリアミドまたはヘテロポリアミンであり、
ｎは、１〜１００であり、
かつ、前記金属キレート化リガンドのラジカル基が９９ｍＴｃにキレート化されている請求項１９に記載の接合体。
【請求項２７】
前記診断用造影剤が超音波コントラスト剤である請求項１８に記載の接合体。
【請求項２８】
前記リポーター部分が、ミクロ胞またはガス充填リポソームの形態にあるリン脂質部分からなる請求項１８に記載の接合体。
【請求項２９】
前記リン脂質部分が次の構造式（Ｈ）のリン脂質からなる請求項２８に記載の接合体。
【化６】
2004518704.tif 000029
【請求項３０】
前記リン脂質部分が次の構造式（Ｉ）のリン脂質からなる請求項２８に記載の接合体。
【化７】
2004518704.tif 000030
【請求項３１】
ＳルイスＸ 部分が、１以上の請求項１に記載した結合可能なシアリル・ルイスＸ化合物
からなる請求項７に記載の接合体。
【請求項３２】
ＳルイスＸ 部分が、１以上のシアリル・ルイスＸ残基からなる請求項７に記載の接合体。
【請求項３３】
ＳルイスＸ 部分が、４つのシアリル・ルイスＸ残基からなる請求項７に記載の接合体。
【請求項３４】
次の構造（Ｐ）からなる請求項３３に記載の接合体。
【化８】
2004518704.tif 000031
【請求項３５】
さらに１以上のリポーター部分を含む請求項３２に記載の接合体。
【請求項３６】
次の構造（Ｑ）からなる請求項３５に記載の接合体。
【化９】
2004518704.tif 000032
【請求項３７】
前記接合体が次の構造式からなる請求項７に記載の接合体；
【化１０】
2004518704.tif 000033
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、または［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６）］ｗ −であって、
このうち、ｚは、０，２，３，４，５，６，７，８，９または１０であり、
Ｙは、アルキリデン、シクロアルキリデン、アリリデンまたはビニリデンであり、
Ａは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｔ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −であって、
このうち、ｔは０〜１０であり、
Ｂは、Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−の場合には、Ｏ、ＳまたはＮ（Ｒ’）であり、Ａが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｔ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −の場合には、−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−であり、
このうち、ｔは０〜１０であり、
Ｄは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６）］ｗ −であって、
このうち、ｚは、０，２，３，４，５，６，７，８，９または１０であり、
Ｅは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｕ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −であって、
このうち、ｕは０〜１０であり、
ｑは、Ｄが−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−の場合には、０〜１０、Ｄが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −で、ｚが０の場合には、２〜１０、Ｄが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −で、ｚが２〜１０の場合には、０〜１０であり、
それぞれのｗは独立して０または１であり、
ｍ、ｎ、ｏおよびｐはそれぞれ独立して１〜３であり、
Ｒ１ 、Ｒ２ 、Ｒ３ 、Ｒ４ 、Ｒ５ 、Ｒ６ は、それぞれ独立して、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルコキシ、アリールまたはアリロキシである。
【請求項３８】
薬剤として許容されるキャリアー中に溶解または分散された請求項７に記載の接合体を含む薬剤用化合物。
【請求項３９】
薬剤として許容されるキャリアー中に溶解または分散された請求項１に記載の化合物または薬剤として許容されるその化合物の塩を含む薬剤用化合物。
【請求項４０】
請求項７に記載された接合体を有効な量だけ患者に投与することからなる、セレクチンが介在する異常を治療または診断する方法。
【請求項４１】
請求項２１に記載された接合体を治療に有効な量だけ患者に投与することからなる、患者の患部に放射線治療法。
【請求項４２】
請求項２３に記載された接合体を有効な量だけ患者に投与することからなる、患者の患部の造影するための方法。
【請求項４３】
請求項１に記載の化合物または薬剤として許容されるその化合物の塩を、細胞接着を阻害しうる量だけ患者に投与することからなるセレクチンが介在する異常を治療または診断する方法。
【請求項４４】
前記異常が、急性または慢性の炎症、癌、糖尿病、肥満症、関節炎、乾せん症、皮膚炎、再かん流障害、リウマチ、血液凝固、アテローム性動脈硬化症、血栓異常、拒絶反応、白血球が介在する肺障害、心臓障害、凍傷、外傷性ショック、敗血症ショック、腎炎からなる群から選択される請求項４０〜４３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
本発明は、結合能を有するシアリル・ルイスＸ（ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ；シアリルＬｅＸ またはＳＬｅＸ とも記す。）類似物、および、炎症および関連疾患の治療のためのこれらの化合物の使用方法に関する。
【０００２】
【発明の背景】
細胞接着は、炎症および癌転移といった複雑なプロセスにおいて重要な役割を果たす。外傷および感染を受けると、損傷組織はサイトカインとして知られる活性化因子を放出する。放出されたサイトカインは、血管内皮細胞に信号を送り、血管内皮細胞は、形状を変え、細胞接着タンパク質であるセレクチンを細胞表面に発現させる。セレクチンは、血液中の白血球の表面に存在するシアリルＬｅＸ などの炭水化物抗原に結合することによって、白血球の内皮細胞への接着を促進する。次に、白血球は血管内皮細胞を通過して移動し、血管壁を通って、外傷および感染部位に到達して、炎症主患部を形成する。
【０００３】
特定の状況で、内皮細胞への白血球の接着が異常または過剰となり、その結果、組織を修復する代わりに損傷させることがある。アテローム性動脈硬化症、血液凝固、リウマチ、関節炎、乾せん症、皮膚炎、癌、再かん流障害および感染症をはじめとする多数の炎症性疾患および関連疾患では、異常な細胞接着によることが特徴とされる。このため、こうした疾患に伴う症状を緩和することのできる接着過程の阻害因子が求められている。
【０００４】
セレクチンへの高い結合能を示すシアリルＬｅＸ 類似物は、白血球の接着過程を阻害し、障害部位への白血球の侵入を防ぎ、それにより炎症に伴う症状を抑えるか、消失させると考えられている。近年、改善された結合能を示すＳＬｅＸ 類似物を開発するための努力がなされてきた。モノマーのＳＬｅＸ 類似物のＥ−セレクチンおよびＬ−セレクチンへの結合は一般に弱く（すなわち、わずか１〜２ｍＭの範囲）、ターゲティングをはじめとする多くの応用に適さないことが多い。これに対し、架橋した二量体のシアリルＬｅＸ 類似物は、２個のモノマーを結合させている架橋の性質によって、モノマーの約５倍の結合能を示すことが報告されている。多価リポソームを用いたシアリルＬｅＸ 模倣物は、セレクチンを介する細胞接着阻害測定では、照査標準の１００倍の結合能を示している。さらに、ＰＥＧ修飾リポソームに封入したシアリルＬｅＸ −ＰＥＧ−ＤＳＰＥ誘導体は、ＥＬＩＳＡ測定でＥ−セレクチンを介する細胞接着の阻害因子として、モノマー類似物の５０００倍の効力を有することが明らかになっている。
【０００５】
【発明の概要】
多価シアリルＬｅＸ 化合物が示す結合能が、モノマー類似物と比較して非常に高いことは、オリゴ糖の多価性が、これらの化合物のセレクチンを介する細胞接着への阻害能力を高めることを示している。結合能を高いレベルとすることにより、これらの多価化合物を、治療薬としてさらに有効なものとし、ターゲティングへの応用にも有用なものとしうる。
【０００６】
本発明は、シアリル・ルイスＸおよび関連類似物のアミノフェニルグリコシドをはじめとする、一群の結合能を有する四糖化合物を提供する。これらの化合物は、接合可能な求核性のアミノ基を有するため、多重結合のＳＬｅＸ 化合物を生成するのに有用である。また、本発明の化合物は、天然のシアリルＬｅＸ を超えるセレクチンへの結合能を示し、セレクチンを介する細胞接着を阻害することにより炎症および関連疾患を治療する手段として用いることができる。
【０００７】
また、本発明は、（１）ＳＬｅＸ 類似物の部分、（２）リンカー、および（３）リポーター部分を含むセレクチン結合リガンド接合体であることに特徴がある。リポーター部分は、一般に、診断用の造影剤、細胞障害物質または治療物質を含む。好ましい実施形態において、リポーターは、（ａ）常磁性、超常磁性の放射性または非放射性金属に選択的にキレート化される１以上の大環状または非大環状金属キレート化リガンド、（ｂ）リン脂質部分、または（ｃ）細胞障害物質または化学療法物質を含む。リポーター部分の性質によっては、該接合体は、ＭＲＩ、超音波または放射線診断法を用いた細胞を視覚化する造影剤として用いることができる。また、該接合体は、放射線療法用物質、化学療法用物質または細胞障害物質として使用でき、さらには、細胞接着過程を阻害することにより、炎症性疾患、感染症および関連疾患の治療手段として用いることもできる。
【０００８】
さらに、本発明は、製薬において許容されるキャリアと組み合わせた、治療に効果的な量のＳＬｅＸ 類似物または接合体を含む製剤を提供する。好ましいキャリアには、食塩水、緩衝食塩水、ブドウ糖、水、グリセロール、エタノールおよびこれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。該製剤は投与法に合わせることができ、また、丸剤、錠剤、カプセル剤、スプレー剤、粉末剤または液剤の形状をとることができる。
【０００９】
本発明のその他の特徴および利点は、次の詳細な説明および請求項により明らかにされる。
【００１０】
【詳細な説明】
多量体シアリルＬｅＸ 化合物の製造には、接合可能な末端基を有するＳＬｅＸ 類似物が有用であるとの知見を得た。このため、シアリル・ルイスＸ および関連類似物のアミノフェニルグリコシドの合成のための計画を企図した。これらの化合物は、天然のシアリルＬｅＸ よりも高い結合能を有し、幅広い応用が可能である。
【００１１】
シアリル・ルイスＸ 類似物
シアリル・ルイスＸ の構造を式（Ａ）に示す。本発明は、構造式（１）の結合能を有する一群のシアリル・ルイスＸ 類似物を提供する。これらの類似物は、接合可能な求核性アミノ基を有し、高い結合能を有する多量体ＳＬｅＸ 化合物を製造しやすくする。
【００１２】
【化１１】
2004518704.tif 000002
【００１３】
【化１２】
2004518704.tif 000003
上の構造式（１）において、
Ｚは、水素、Ｃ１ −Ｃ６ アシル、または、
【化１３】
2004518704.tif 000004
Ｙは、Ｃ（Ｏ）、ＳＯ２ 、ＨＮＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）、またはＳＣ（Ｏ）であり、
Ｇ１ およびＧ２ は、それぞれ別個にＣ（Ｒ９ ）２ 、ＮＲ１０ 、Ｏ、またはＳであり、
Ｌは、アルキリデン、シクロアルキリデン、アリリデン、またはビニリデンであり、
Ｒ２ は、水素、Ｃ（Ｏ）Ｒ８ 、ＳＯ２ Ｒ８ 、Ｃ（Ｓ）Ｒ８ 、ＣＯＣＨ３ 、または １４ＣＯＣＨ３ であり、
Ｒ４ は、水素、Ｃ１ −Ｃ６ アルキル、アリール、アリールアルキル、置換アリール、または置換アリールアルキルであり、
Ｒ３ およびＲ５ は、それぞれ別個に水素、ベンジル、メトキシベンジル、ジメトキシベンジル、またはＣ１ −Ｃ６ アシルであり、
Ｒ１ 、Ｒ７ 、Ｒ８ 、Ｒ９ およびＲ１０ は、それぞれ別個に水素、Ｃ１ −Ｃ６ アルキル、アリール、置換アリール、またはフェニルＣ１ −Ｃ３ アルケニル基である。アリール基は、１個の芳香族性五員環または六員環、融合した芳香族性五員環／六員環、または２個の融合した芳香族性六員環を有し、この環はヒドロカルビル、モノオキサヒドロカルビル、モノチアヒドロカルビル、モノアザヒドロカルビル、またはジアザヒドロカルビル環である。置換アリール基は、ハロ、トリフルオロメチル、ニトロ、Ｃ１ −Ｃ１８ アルキル、Ｃ１ −Ｃ１８ アルコキシ、アミノ、モノ−Ｃ１ −Ｃ１８ アルキルアミノ、ジ−Ｃ１ −Ｃ１８ アルキルアミノ、ベンジルアミノ、Ｃ１ −Ｃ１８ アルキルベンジルアミノ、Ｃ１ −Ｃ１８ チオアルキル、またはＣ１−Ｃ１８アルキルカルボキサミド基をもつ置換基を有するアリール基であるか、Ｒ１ Ｙがアリロキシカルボニルまたはクロロアセチルである。
【００１４】
好ましい実施形態において、Ｙはカルボニル［Ｃ（Ｏ）］、Ｒ１ は水素またはメチルであり、Ｚはヒドロキシル基が遊離しているか保護基（ベンジルまたはＣ１ −Ｃ６ アシル）で遮断されているα−Ｌ−フコシルである。
【００１５】
本発明の特に好ましい実施形態において、化合物は構造式（２）の四糖であり、
【化１４】
2004518704.tif 000005
式中、
Ｒは、水素、ＣＯＣＨ３ または １４ＣＯＣＨ３ であり、
Ｒ’は、水素またはアシルであり、
Ｒ”は、水素またはメチルである。
【００１６】
本明細書で化合物２ａと記載する一つの実施形態において、Ｒは水素、Ｒ’はアシル、Ｒ”はメチルである。別の実施形態において、ＲはＣＯＣＨ３ 、Ｒ’およびＲ”は水素である（化合物３ａ）。また、別の実施形態において、Ｒは １４ＣＯＣＨ３ 、Ｒ’およびＲ”は水素である（化合物３ｂ）。
【００１７】
本発明のＳＬｅＸ 類似物は、製薬業界で一般に用いられる毒性のない酸添加塩または金属錯体をはじめとして、製薬において許容できる塩の形状をとることができる。酸添加塩の例としては、酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、またはトリフルオロ酢酸などの有機酸、タンニン酸、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸が挙げられる。金属錯体としては、亜鉛、鉄などが挙げられる。
【００１８】
多量体のシアリル・ルイスＸ 接合体
本発明のＳＬｅＸ 類似物化合物は、従来の抗炎症薬または抗感染薬または抗癌薬をはじめとする診断用薬または治療薬を、組織障害のある特定部位に到達させるために用いることができる。これらの化合物を用いて、薬剤または診断用薬を生体内のセレクチン受容体に到達させることによって、低用量であっても障害部位に高濃度の薬剤または診断用薬をもたらすことができる。こうしたターゲティングにより、その薬剤または診断用薬の有効性は高まり、副作用は抑えられる。
【００１９】
ターゲティングは、送達される薬剤にセレクチン結合リガンドを共有結合させることによってなされる。このため、本発明は、（１）ＳＬｅＸ 類似物部分、（２）リンカー、および（３）リポーター部分からなるセレクチン結合リガンド接合体により特徴づけられる。シアリルＬｅＸ 類似物部分は、上記の構造式（１）が示す化合物をはじめとして、１個またはそれ以上の結合能を有するシアリルＬｅＸ 残基からなる。好ましい実施形態において、シアリルＬｅＸ 部分は、下記の構造式（２ａ）の残基からなる。
【００２０】
【化１５】
2004518704.tif 000006
【００２１】
リポーター部分は、一般に診断用造影剤または治療薬を含む。本発明の一つの実施形態において、リポーター部分は、１個またはそれ以上の大環状または非大環状の金属キレート化リガンドラジカルを含有し、そのため選択的に常磁性、超常磁性の放射性または非放射性金属にキレート化され、これにより診断用造影手段により体の外側から検出することができるか、治療効果または放射線治療効果を提供することができる。これらのリガンドおよびリガンドにキレート化される金属の構造は、使用目的によって異なってよい。放射性核種に結合するリガンドの多くは四座配位であり、４個の窒素および／またはイオウ金属配位原子（すなわち、Ｎ４ 、Ｎ３ Ｓ、Ｎ２ Ｓ２ など）の組合せを含有する。たとえば、Ｎ４ キレート剤に関しては、米国特許第６，１４３，２７４号、第６，０９３，３８２号、第５，６０８，１１０号、第５，６６５，３２９号、第５，６５６，２５４号、および第５，６８８，４８７号に記載がある。いくつかのＮ３ Ｓキレート剤に関しては、ＰＣＴ／ＣＡ９４／００３９５号、ＰＣＴ／ＣＡ９４／００４７９号、ＰＣＴ／ＣＡ９５／００２４９号および米国特許第５，６６２，８８５号、第５，９７６，４９５号および第５，７８０，００６号に記載がある。また、リポーター部分は、ＭＡＭＡ（モノアミドモノアミンジチオール）、ＤＡＤＳ（Ｎ２ Ｓジアミンジチオール）ＣＯＤＡＤＳなどのＮ３ ＳおよびＮ２ Ｓ２ 系を含むキレート化リガンドメルカプト−アセチル−アセチル−グリシル−グリシン（ＭＡＧ３）の誘導体も含みうる。これらのリガンド系およびその他の亜型に関しては、Ｌｉｕ ａｎｄ Ｅｄｗａｒｄｓ， Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ． １９９９， ９９， ２２３５−２２６８、および本明細書の参照文献に記載がある。これまでの特許、特許出願および参照文献の開示内容はすべて参照として本明細書に組み込まれる。
【００２２】
また、リポーター部分は、四座配位の配列にある金属へは供与されないリガンド原子を含む錯体からもなる。これらには、テクネチウムおよびレニウムジオキシムのボロン酸付加物が含まれ、その例は、米国特許第５，１８３，６５３号、第５，３８７，４０９号および第５，１１８，７９７号に記載があり、この開示内容はすべて参照として本明細書に組み込まれる。
【００２３】
好ましい金属キレート化リガンドラジカルには、下記の式（Ｂ）、（Ｃ）および（Ｄ）（常磁性Ｇｄ３＋ などのランタニド類および １７７Ｌｕなどの放射性ランタニド類）のもの、および式（Ｅ）、（Ｆ）および（Ｇ）（放射性９９ｍＴｃ）が含まれる。これらの金属キレート化リガンドラジカルおよびその他の金属キレート化物質に関しては、米国特許第６，０９３，３８２号および第５，６０８，１１０号に記載があり、これらの開示内容はすべて参照として本明細書に組み込まれる。また、式（Ｄ）のキレート化リガンドラジカルに関しては、たとえば米国特許第６，１４３，２７４号に記載があり、式（Ｆ）のキレート化リガンドラジカルに関しては、たとえば米国特許第５，６２７，２８６号および第６，０９３，３８２号に記載があり、式（Ｇ）のキレート化リガンドラジカルに関しては、たとえば米国特許第５，６６２，８８５号、第５，７８０，００６号および第５，９７６，４９５号に記載がある。
【００２４】
【化１６】
2004518704.tif 000007
【００２５】
上記の式（Ｆ）において、ＸはＣＨ２ またはＯのいずれかであり、Ｙは分岐性または非分岐性のいずれかのＣ１ −Ｃ１０ アルキルである。Ｙは、アリール、アリロキシ、アリールアミノ、アリールアミノアシルである。Ｙはアラルキルである。上記において、アリール基に結合する１個または複数のアルキル基は、分岐性または非分岐性のアルキル基、分岐性または非分岐性のＣ１ −Ｃ１０ ヒドロキシまたはポリヒドロキシアルキル基、またはポリアルコキシアルキルまたはポリヒドロキシ−ポリアルコキシアルキル基である。Ｊは、Ｃ（＝Ｏ）−、ＯＣ（＝Ｏ）−、ＳＯ２ −、ＮＣ（＝Ｏ）−、ＮＣ（＝Ｓ）−、Ｎ（Ｙ）、ＮＣ（＝ＮＣＨ３ ）−、ＮＣ（＝ＮＨ）−、Ｎ＝Ｎ−、合成または天然のアミノ酸由来のホモポリアミドまたはヘテロポリアミンであり、いずれもｎは１〜１００である。これらの構造のその他の亜型は、たとえば米国特許第６，０９３，３８２号に記載がある。
【００２６】
本発明の金属錯体は、診断用および／または治療用の薬剤として有用である。常磁性または超常磁性金属からなる接合体は、ＭＲＩに用いる診断用薬剤として有用である。この接合体に用いることのできる常磁性金属の例として、クロミウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、プラセオジム（ＩＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）およびイッテルビウム（ＩＩＩ）が挙げられるが、これに限定されない。クロミウム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）およびガドリニウム（ＩＩＩ）。
【００２７】
放射性金属からなる接合体は、放射線による造影または放射線療法に有用である。好ましい放射性同位元素として、９９ｍＴｃ、５１Ｃｒ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、１６８Ｙｂ、１７５Ｙｂ、１４０Ｌａ、９０Ｙ、８８Ｙ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、１６５Ｄｙ、１６６Ｄｙ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、９７Ｒｕ、１０３Ｒｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ，２０３Ｐｂ、２１１Ｂｉ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１４Ｂｉ、１０５Ｒｈ、１０９Ｐｄ、１１７ｍＳｎ、１４９Ｐｍ、１６１Ｔｂ、１７７Ｌｕ、１９８Ａｕおよび １９９Ａｕが挙げられる。金属の選択は、治療または診断のいずれを目的とするかによって決定する。たとえば、診断目的において好ましい放射性核種としては、６４Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、９９ｍＴｃおよび １１１Ｉｎが挙げられる。治療目的において好ましい放射性核種としては、６４Ｃｕ、９０Ｙ、１０５Ｒｈ、１１１Ｉｎ、１１７ｍＳｎ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６６Ｈｏ、１７５Ｙｂ、１７７Ｌｕ、１８６／１８８Ｒｅおよび １９９Ａｕが挙げられる。
【００２８】
これに代わる実施形態において、リポーター部分は微小気泡の形態またはガス充填リポソームと記載される形態を取りうるリン脂質部分であってもよい。好適なリン脂質構造の種類は当分野では既知である。好ましい実施形態において、リン脂質部分は下記の構造（Ｈ）または（Ｉ）を有する。これに関しては、本明細書に参照として組み込まれる米国特許第５，６８６，０６０号に記載がある。
【００２９】
【化１７】
2004518704.tif 000008
【００３０】
これらのリン脂質は、ジステロイルフォスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジパルミトイルフォスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、ＰＥＧ−４０００、パルミチン酸およびＳＦ６ 、またはＣＦ４ およびＣ４ Ｆ１０ などのフッ化炭素といった不活性ガスの存在下でガス充填気泡に封入される。こうしたガス充填微小気泡は、超音波画像検査の診断用薬剤として有用である。
【００３１】
本発明のもう一つの実施形態において、リポーター部分は、細胞障害物質または化学療法剤である。多岐にわたる化学療法剤をＳＬｅＸ 部分と結合させてターゲティングに用いることができる。たとえば、結合可能な抗炎症薬としては、免疫調節剤、血小板活性化因子（ＰＡＦ）拮抗剤、シクロオキシゲナーゼ阻害薬、リポキシゲナーゼ阻害薬およびロイコトリエン拮抗薬が挙げられる。好ましいリポーター部分は、シクロスポリンＡ、ナプロキセン（Ｊ）、インドメタシン（Ｋ）、ＦＫ−５０６、ミコフェノール酸などを含む。
【００３２】
【化１８】
2004518704.tif 000009
【００３３】
同様に、スーパーオキシドジスムターゼなどの抗酸化剤は、意図された糖化合物によってターゲティングを行うことによって、再かん流障害の治療に有用である。また、ＳＬｅＸ 部分は、誘導体化されたパクリタキセル（タキソール（Ｌ））、ドセタクセルおよびビンクリスチン、ビンブラスチン、ドラスタチン、ダウノマイシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ハリコンドリンなどのビンカアルカロイドといった抗癌薬と結合させることもできる。
【００３４】
【化１９】
2004518704.tif 000010
【００３５】
同様に、感染症のデュアルモードの治療を目的として、ＳＬｅＸ 部分をキノロン、抗生物質、ペニシリンなどの抗生剤、セフロキシム（Ｍ）などのセファロスポリン系剤、リネゾリド（Ｎ）、シクロスポリン、バンコマイシンなどのオキサゾリジノン系剤、または、より一般的にはグラム陽性菌またはグラム陰性菌または広域スペクトルを有する抗生物質と、好適な官能性によって結合させ、抗生物質を直接感染部位に放出させ、病原体の細胞接着を阻害することもできる。その他の好適な化学療法剤に関しては、米国特許第６，０９３，３８２号に記載がある。
【００３６】
【化２０】
2004518704.tif 000011
【００３７】
薬剤またはその他の生物活性分子の接合に関する一般的な原則は、接合部位に生体内で内因性アミダーゼ、プロテアーゼ、エステラーゼ、またはたとえばエンドヌクレアーゼおよびフォスファターゼなどのその他の酵素によって開裂できる箇所を作ることである。より高活性のカルボキシエステル、リン酸エステル、またはより容易に開裂できるカルボキサミドまたはスルフォンアミドを用いる戦略は、この種の代謝活性化または放出を利用する前駆薬の使用において知られている。酵素を介する酸化または還元作用の生体内活性化／放出を利用する放出システムも同様に有用である。
【００３８】
セレクチン受容体ターゲティングは、水様液に擬集物として存在する両親媒性物質または二重性（極性：非極性）の分子によっても実現しうる。両親媒性物質として、非極性脂質、極性脂質、モノおよびジグリセリド、スルファチド、リソレシチン、リン脂質、サプチン、胆汁酸および塩が挙げられる。これらの分子は、エマルジョンおよび発泡体、ミセル、不溶性単分子層、液晶形、リン脂質分散コロイドおよびラメラ構造（本明細書では正しくはリポソームと呼ぶ）として存在し、治療薬または診断用薬を送達するのに用いる。こうした薬剤において、送達される治療薬または診断用薬は、セレクチン受容体に結合するＳＬｅＸ 類似物化合物とともに、液体充填リポソームの一部として組み込まれる。こうして、目的の薬剤を充填したリポソームは、セレクチンとＳＬｅＸ 類似物化合物の相互作用によって、組織障害のある部位に直接送達される。リポソームが損傷を受けた細胞の近くに達すると、受動拡散、能動拡散または目的の作用部位への送達を容易にしうるあらゆる内因性または外因性の過程によって、リポソームは、選択された治療薬または診断用薬を送達させうる。これには、リポソームをターゲットで崩壊させるために用いられる、酵素による分解、熱刺激、物理的処置または振動、または、ターゲット領域においてリポソームの崩壊を誘発するあらゆる形態の超音波などの、あらゆる過程または照射技術が含まれる。好適なリポソームの調製およびリポソームをターゲット物質と結合させる方法は、当該分野では既知であり、たとえば米国特許第４，９５７，７７３号、第４，６０３，０４４号、第４，５０１，７２８号、第４，０３７，０２８号および第４，２３５，８７１号に記載があり、これらはすべて本明細書に参照として組み込まれる。
【００３９】
セレクチン結合部分（すなわちＳＬｅＸ 残基）は、直接または間接的にリポーター部分に結合する。この結合は、種々の公知の方法によって実現されるが、セレクチン結合リガンドの受容体への結合能を阻害してはならず、また、リポーター部分の活性または機能を実質的に低下させてはならない。これは、従来から知られている種々のリンカーを用いることにより実現しうる。このリンカーは、リポーターをＳＬｅＸ 部分に共有結合させうる化学的な部分であればよい。このリンカーは、リポーター部分をセレクチン結合部分から物理的に遊離させるか、または隔離するものでなければならない。好ましい実施形態において、シアリルＬｅＸ 部分とリポーター部分とを結合しているリンカー残基は、式（Ｏ）に示す構造を有している。
【００４０】
【化２１】
2004518704.tif 000012
式中、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、または［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６）］ｗ −であって、
ｚは、１ではなく、０または２〜１０であり、ｗは０〜１であり、
Ｙは、アルキリデン、シクロアルキリデン、アリリデンまたはビニリデンであり、
Ａは−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｔ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −であって、
ｔは０〜１０、ｗは０〜１であり、
Ｂは、Ａが−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−の場合には、Ｏ、ＳまたはＮ（Ｒ’）であるか、Ａが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｔ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −の場合には、−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−であって、
ｔは０〜１０、ｗは０〜１であり、
Ｄは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６）］ｗ −であって、
ｚは、１ではなく０または２〜１０であり、ｗは０〜１であり、
Ｅは、−Ｃ（＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｓ）−、または−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｕ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −であって、
ｕは０〜１０、ｗは０〜１であり、
ｑは、Ｄが−Ｃ（＝Ｏ）−または−（Ｃ＝Ｓ）−の場合には、０〜１０、Ｄが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −で、ｚが０、ｗが０〜１の場合には、２〜１０、Ｄが−［ＣＨ（Ｒ１ ）］ｚ −［Ｎ（Ｒ６ ）］ｗ −で、ｚが２〜１０、ｗが０〜１の場合には、０〜１０であり、
ｍ、ｎ、ｏおよびｐはそれぞれ別個に１〜３であり、
Ｒ１ 、Ｒ２ 、Ｒ３ 、Ｒ４ 、Ｒ５ 、Ｒ６ は、それぞれ別個に、アルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、シクロアルキル、シクロアルコキシ、アリールまたはアリロキシである。
【００４１】
こうしたリンカー部分の構成、リポーターおよびターゲティングを行うベクターへのリンカーの接合に関しては周知であり、米国特許第６，０９３，３８２号に記載があり、これはすべて本明細書に参照として組み込まれる。複数のターゲティングおよび／またはリポーター部分を有し、ターゲティング機能とリポーター機能、複数のターゲティング機能間、および／または複数のリポーター機能間の距離をコントロールすることのできる望ましい多量体アセンブリのその他の構成方法は、当該分野では公知である。
【００４２】
多量体ペプチドのコアを多量体構造の構成の足場として使用する方法（Ｖｅｐｒｅｋ， Ｐ． ａｎｄ Ｊｅｚｅｋ， Ｊ（１９９９） Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ． ５，５）は、直交またはほぼ直交する保護基を用いる戦略を使用する、溶液または固相における合成法のいずれによっても容易に実現される。同様に、こうした保護基を用いる戦略によって、リポーターおよびターゲティングするリガンドの導入を調節することができる。ターゲティング機能およびリポーターを有する多量体構造のコア末端間の距離を、オリゴマーのアミドからなるリンカーの化学作用を用いて調節する方法は、当該分野では公知であり（Ｒｏｓｅ， Ｋ．ａｎｄ Ｖｉｚｚａｖｏｎａ， Ｊ． （１９９９）Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １２１， ７０３４， Ｒｏｙ Ｒ， Ｚａｎｉｎｉ， Ｄ． Ｍｅｕｎｉｅｒ， Ｓ．Ｊ ａｎｄ Ｒｏｍａｎｏｗｓｋａ， Ａ． （１９９３） Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ． １８６９）、その結果、ターゲットに対する系の親和性を調節しうる（Ｇｌｉｃｋ， Ｇ．Ｄ． ａｎｄ Ｋｎｏｗｌｅｓ， Ｊ．Ｒ． （１９９１） Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １１３， ４７０１）。本明細書で言及するこれらの参照文献は、すべて本明細書に参照として組み込まれる。
【００４３】
【化２２】
2004518704.tif 000013
【００４４】
構造（Ｐ）は、３個のリジンが分岐したペプチドのコア、グリコール酸スペーサー、および４個のシアリルＬｅＸ 誘導体を含むシアリルＬｅＸ 類似物部分と接合したリポーターリガンドラジカルＧ（放射線による造影のため放射性同位元素 ９９ｍＴｃをキレート化するために用いる）からなり、上述の方法および系を用いて生成することができる。この物質は、９９ｍＴｃを用いてキレート化されると、炎症部位および感染部位の造影に有用となる。その他のリポーター基も、構造Ｐの基部であるリジン（矢印で示す）のε−アミノ基と反応することのできる混合カルバメート（リポーターが利用可能なアミノ基を有する場合）または混合した炭酸エステル（リポーターが利用可能なヒドロキシル基を有する場合）などの適切な活性化誘導体を調製することにより、シアリルＬｅＸ 類似物部分と接合させることができる。同様に、上記のリポーター機能、化学療法剤、抗炎症薬中に存在する場合に、リジンのε−アミノ基と直接反応するか、好適な活性化後に反応することのできるあらゆる基は、構造Ｐに示すシアリルＬｅＸ 類似物部分を生じる誘導体を調製するのに用いることができる。あるいは、シアリルＬｅＸ 類似物部分のコアとなるリジンのε−アミノ基は、ビス−ｐ−ニトロフェニルカルボネート、ホスゲンまたは当該分野で公知の同等物、または塩化チオカルボニルを用いた処理により、それぞれターゲティング機能とリポーター機能、複数のターゲティング機能間、および／または複数のリポーター機能間の距離をコントロールすることのできる反応性カルバメート、またはイソシアネート、またはイソチオシアネートに転換することができる。これらの反応性求電子体は、アミノ基を生ずるリポーターの官能化反応に用いることができ、これは該求電子体と反応しうるアミノ基を生ずるスペーサーまたはリンカーにより官能化されたリポーターも含むことができる。
【００４５】
上述の方法を適用することにより、同分子内に複数のリポーターおよび複数のＳＬｅＸ 残基を生ずる物質を調製することもできる。こうした系の例として、この大環状高分子を １１１Ｉｎなどの放射性金属のキレート化に用いる場合には放射線造影に、この大環状高分子をたとえばガドリニウムといった非放射性同位元素のキレート化に用いる場合にはＭＲＩ造影に有用である化合物（Ｑ）が挙げられる。
【００４６】
【化２３】
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【００４７】
ターゲティング構造に結合しつづけることが期待できる化学療法剤の接合位置の特徴
細胞障害物質または化学療法剤がターゲティング構造に結合しつづけ、その機能を果たすことが予測される場合、一般原則は、その部位において置換基が薬剤の活性に対する有害な影響をできるだけもたらなさいことを示すＱＳＡＲ（量的構造−活性関係）に予め基づいて、薬剤の結合部位を決定すべきであるということである。こうした原則は、たとえば薬剤の乱用に対する蛍光偏光測定法に用いられる薬剤の接合体の合成において十分に確立されている。
【００４８】
細胞接着阻害測定法
リガンド−受容体相互作用の阻害を生体内でスクリーニングするための多くの直接および間接的な方法は、すでに利用可能であり当業者に知られている。これらの方法は、特定の化合物がＳＬｅＸ を生ずる細胞が特定のセレクチンを発現する細胞に対して接着することを阻害する能力を有するかどうかの測定に用いることができる。
【００４９】
いくつかのセレクチン受容体遺伝子はクローン化されており、そのため、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、アデノウイルスで変形させたヒト腎細胞など、多岐にわたる細胞に挿入および発現させることができ、その結果、ｒＥＬＡＭ（組換え型ＥＬＡＭ−１）などの組換え型セレクチン受容体を測定において用いることができる。また、ＳＬｅＸ を通常は発現しない細胞は、変形された細胞にリガンドを合成する能力を付与する１個またはそれ以上のグリコシルトランスフェラーゼ遺伝子で変形されうる（たとえばＬｏｗｅら、Ｃｅｌｌ， ６３： ４７５−４８４ （１９９０） 参照）。いくつかの測定法においては、標識ＳＬｅＸ を生ずる細胞および固体面に固定化される細胞表面セレクチンまたは組換えセレクチンを発現する活性化細胞とともに、阻害化合物または阻害剤を培養する。次に、適切な洗浄後にその表面に結合した標識を検出することによって、細胞接着の阻害を測定することができる。
【００５０】
典型的には、意図されたＳＬｅＸ 類似物化合物の生体外測定は、意図された化合物のＳＬｅＸ を含む細胞へのセレクチンの結合を競争的に阻害する能力を検出するという競争測定である。セレクチンを含む細胞は、典型的には活性化した血小板または活性化した内皮細胞に、有用とされる組換えセレクチンを加えたものである。ＳＬｅＸ を有する細胞は、一般的には白血球またはＨＬ−６０細胞である。
【００５１】
その他の測定法には、相互作用の結果、ＳＬｅＸ リガンドを生ずる細胞またはセレクチンを生ずる細胞のいずれに種々の生理学的変化の有無があったかを検出するものがある。好適な測定法の例としては、結合によって誘発される転写活性の変化の測定（たとえばＰＣＴ公報第３７１２８２０号参照）、特別な細胞効果を介された種々の細胞の検出（たとえばＰＣＴ公報第９０／００５０３号参照）、および個々の細胞の膜電位の変化の検出（たとえば米国特許第４，３４３，７８２号参照）が挙げられ、これらはすべて参照として本明細書に組み込まれる。あるいは、単離された受容体またはリガンドの構造上の変化を検出することもでき（たとえば米国特許第４，８５９，６０９号参照）、これも本明細書に参照として組み込まれる。さらに、ＳＬｅＸ を発現する細胞を堅固な支持体と結合したセレクチンと結合させ、結合した細胞を溶解して、結合細胞のみに存在しえたタンパク質を測定することもできる。
【００５２】
リガンド、セレクチン受容体またはＳＬｅＸ 化合物をはじめとするあらゆる測定成分は、膜（たとえばニトロセルロース）、マイクロタイタ用シャーレ（たとえばＰＶＣまたはポリスチレン）、またはガラス玉などの固体表面に結合させることができる。生体分子を固体表面に固定する方法の多くは、従来から知られている。目的の成分をその表面に共有結合または非共有結合させることができる。種々の化合物を種々の表面に結合させる方法は周知であり、公知資料に詳細な説明がある。たとえば、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ， Ｉｎｃｈｉｒｏ Ｃｈｉｂａｔａ， Ｈａｌｓｔｅｄ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９７８）、Ｃｕａｔｒｅｃａｓａｓ， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２４５：３０５９ （１９７０） 、および米国特許第４，４４７，５７６号および第４，２５４，０８２号を参照にすることができ、これらは本明細書に参照として組み込まれる。
【００５３】
天然および合成のいずれをも含む種々の有機および無機ポリマーを、固体表面用の材料として用いることができる。ポリマーの例として、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（４−メチルブテン）、ポリスチレン、ポリメタクリレート、ポリ（エチレンテレフタレート）、レーヨン、ナイロン、ポリ（ビニルブチレート）、シリコーン、ポリフォルムアルデヒド、セルロース、酢酸セルロース、ニトロセルロースなどが挙げられる。その他、使用できる材料として、紙、ガラス、セラミックス、金属、メタロイド、半導体材料、サーメットなどが挙げられる。また、タンパク質などゲルを形成するような物質、すなわちゼラチン、リポポリサッカリド、ケイ酸塩、アガロースおよびポリアクリルアミド、またはいくつかの水相を形成するデキストラン、ポリアルキレングリコール（２〜３個の炭素原子のアルキレン）などのポリマー、または界面活性剤、すなわちリン脂質、長鎖（１２〜２４個の炭素原子）のアルキルアンモニウム塩など両親媒性化合物といった物質も挙げられる。固体表面が多孔性である場合、系の性状によって様々な孔径を用いることができる。
【００５４】
この測定に用いる標識は、この分野で周知の方法を用いて、目的の測定成分に直接または間接的に結合させることができ、結合細胞に内在するタンパク質であってもよい。種々の標識を用いることができ、測定成分はいくつかの方法のいずれかにより標識化される。標識の選択は、要求される感度、化合物との接合のしやすさ、安定性に関する要件および利用可能な器具によって異なる。最も一般的な検出方法は、 ３Ｈ、 １２５Ｉ、 ３５Ｓ、 １４Ｃまたは ３２Ｐで標識化された成分などを用いたオートラジオグラフィーの使用である。放射性同位元素の選択は、合成のしやすさ、安定性の変動および選択した同位元素の半減期を原因とする調査優先性によって異なる。その他の非放射性の標識には、標識化した抗体、フルオロホア、化学ルミネセンス剤、酵素に結合するリガンド、および標識化したリガンドと特異的に結合する抗体が含まれる。
【００５５】
好適な蛍光標識として、フルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなどが挙げられる。化学ルミネセンス成分として、ルシフェリン（発光酵素）および２，３−ジヒドロフタラジネジオン、すなわちルミノールが挙げられる。標識として用いることのできる酵素は、主としてヒドロラーゼ（加水分解酵素）、特にフォスファターゼ（リン酸酵素）、エステラーゼ（エステル分解酵素）およびグリコシダーゼ、またはオキシドレダクターゼ（酸化還元酵素）、特にペルオキシダーゼ（過酸化酵素）である。また、標識として、接着を阻害しなければならない細胞に存在する酵素またはその他のタンパク質を使用できる。その結果、その酵素の量が結合量を測定するための標識として用いられる。ミエロペルオキシダーゼは、ＨＬ−６０中に存在するこうしたタンパク質の１つであり、後述する結合阻害試験で用いる標識として有用である。使用されうる種々の信号生成系の検討に関しては、米国特許第４，３９１，９０４号に記載があり、これは本明細書に参照として組み込まれる。
【００５６】
薬剤用化合物
本発明はまた、治療に有効な量の意図されたＳＬｅＸ 類似物または接合体化合物または製剤に使える塩を、製剤に使えるキャリアまたは投与経路に適した希釈液に溶解または分散させた薬剤用化合物を提供する。次の記載から理解されるように、治療に有効な量はきわめて幅広い。炎症関連疾患の治療に用いる場合、シアリルＬｅＸ がセレクチンを生成する細胞表面に結合することを阻害しうる量で十分であり、好ましくは１／２以上阻害しうる量である。基本的な細胞接着を阻害するための量は、約５〜約６０ｍｇ／ｋｇである。
【００５７】
本発明の成分は、経口的または非経口的（すなわち、筋肉注射、腹腔注射、静脈注射または皮下注射またはインプラント）、経鼻的、経膣的、経直腸的、経舌下的または局所的に投与することができる。製剤については従来から周知であり、たとえばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （１８版）， Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，１９９０， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡおよびＬａｎｇｅｒ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２４９： １５２７−１５３３ （１９９０） を参照できる。経口投与を目的とした成分は、固体または液体の形状をとり、薬剤用化合物の製造に関する従来技術によって生成できる。これらの成分には、より口当たりのよい薬剤とするため、任意で甘味剤、風味剤、着色料、香料および／または保存剤を含有させることができる。固形の経口投与用剤型として、カプセル剤、錠剤、丸薬、粉剤および顆粒剤が挙げられる。こうした固形の剤型においては、活性成分は、少なくとも１つの製薬に使用可能な不活性キャリアまたは添加剤と混合される。これらには、たとえば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、セルロース、デンプン、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム、カオリンなどの不活性希釈剤が含まれる。結合剤、緩衝剤および／または潤滑剤（すなわち、ステアリン酸マグネシウム）を用いることもできる。錠剤および丸薬はさらに腸溶性コーティングを施すことができる。
【００５８】
液体の経口投与用剤型として、製薬に使用できるエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよび軟ゼラチンカプセル剤が挙げられる。これらの剤型は、従来から一般に使用される水性媒体または油性媒体などの不活性の希釈剤を含有しうる。こうした不活性の希釈剤以外に、成分には保湿剤、乳化剤および懸濁剤などの添加剤を含めることができる。
【００５９】
好ましくは、薬剤用化合物は静脈内に投与する。非経口投与のための製薬として、無菌の水性溶液または非水性溶液、懸濁液またはエマルションが挙げられる。種々の水性のキャリア、すなわち、水、緩衝水、０．４％生理食塩水などを使用することができる。その他、好適なキャリアの例としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、水素添加したナフタレン、およびオレイン酸メチルなどの注射可能な有機エステルが挙げられる。こうした製剤は、保存剤、保湿剤、緩衝剤、乳化剤および分散剤などの補助物質を含有することができる。生体適合性および生体分解性のあるラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーを用いて、成分の放出を制御することができる。その他、本発明の成分を腹腔内へ送達するシステムで生理的に有用なものとして、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透ポンプ、インプラント注入システムおよびリポソームが挙げられる。
【００６０】
液剤は、たとえば細菌除去フィルターによる濾過、成分への殺菌剤の組込み、または成分への照射または成分の加熱により、滅菌することができる。あるいは、無菌固形成分の形状で製造し、使用直前に滅菌水または何らかの滅菌した注射液に溶解させることもできる。
【００６１】
液剤に用いるＳＬｅＸ 類似物化合物の濃度は、一般に少なくとも約１重量％で、最大で１０〜３０重量％であり、選択した投与法に適合する液体容量、粘度などによって選択される。経口投与では、一般に有効成分（すなわち、ＳＬｅＸ 類似物化合物）が１０〜９５％、好ましくは約２０％である（上記のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｓｕｐｒａ参照）。
【００６２】
エアロゾルによる投与法では、意図されたＳＬｅＸ 類似物化合物を、好ましくは界面活性剤または噴射剤とともに細かくして供給する。ＳＬｅＸ 類似物化合物の典型的な割合は、約０．５〜約３０重量％であり、好ましくは約１〜約１０重量％である。界面活性剤は当然非毒性でなければならず、噴霧剤に溶解可能であることが好ましい。こうした添加剤の代表例は、カプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノレイン酸、リノレン酸、オレステリン酸、オレイン酸などの６〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸とエチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニトール、ソルビトール、ソルビトール由来のヘキシトール無水物などの脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物とのエステルまたは部分エステル、および、これらのエステル由来のポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン誘導体である。混合または天然のグリセリドなどの混合エステルを使用することができる。界面活性剤は、約０．１〜２０重量％、好ましくは約０．２５〜５重量％を成分に含めることができる。成分の残部は、通常、噴霧剤である。液化噴霧剤は典型的には室温でガスであり、圧力下で液化する。好適な液化噴霧剤としては、ブタンおよびプロパンなど、５個までの炭素原子を含む低級アルカン、および好ましくはフッ化またはフッ化塩化アルカンがある。上記の混合物を用いることもできる。エアロゾルを生成するには、好適なバルブを備えた容器に、微細化した化合物および界面活性剤を含有する適切な噴霧剤を充填する。このように、成分はバルブの作動によって放出されるまで高圧で維持される。
【００６３】
上述の通り、本発明の成分の有効成分量は多岐にわたる。投与される特定のＳＬｅＸ 化合物、投与時間、投与経路、製剤の性質、排泄率、治療対象となる特定の疾患およびその重症度および、患者の年齢、体重、健康状態および性別をはじめとする種々の因子に応じて、調節すべき正確な個々の添加量を当業者は判断しうる。一般に、１日あたり１０μｇ／ｋｇ・体重〜１００ｍｇ／ｋｇ・体重の用量を１回または数回に分けて投与する。必要とされる用量は、種々の投与経路によって効率が異なることから幅広いといえる。たとえば、経口投与は一般に静脈注射による投与よりも高用量を必要とすると考えられる。これらの種々の用量は、従来から周知である標準的な適正化の実験的手法を用いて調節することができる。一般に、治療に有効な正確な用量は、上述の因子を考慮して医師の参加のもとで決定する。
【００６４】
ＳＬｅＸ 化合物は、たとえば米国特許第５，６７２，６５９号および第５，５９５，７６０号に記載のあるように、徐放性成分に含めて投与することができる。即放性成分を使用するか、徐放性成分を使用するかについては、治療する病態による。病態が急性または超急性疾患からなる場合、即放タイプによる治療が徐放性成分によるよりも好ましい。あるいは、予防的治療または長期にわたる治療の場合は、徐放性成分の方が一般には好ましい。
【００６５】
本発明の薬剤用化合物は、種々の疾患に起因する細胞接着を遮断または阻害するために用いることができる。たとえば、多数の炎症性疾患は、セクレチンが血管内皮細胞および血小板に発現することに関係する。治療すべき炎症性反応は、特異的または非特異的防御系のいずれかまたはその両方に対する反応である。特異的防御系反応の例として、ウイルスなどの抗原への抗体反応、および遅延型過敏反応が挙げられる。非特異的防御系反応の例として、一般に免疫記憶が機能しない白血球を介する炎症性反応が挙げられる。こうした細胞には、マクロファージ、好酸球および好中球が含まれる。非特異的反応の例としては、ハチ刺され直後の腫れ、および細菌感染部位への末梢単核（ＰＭＮ）白血球の凝集（たとえば、細菌性肺炎における肺浸潤および膿瘍における膿形成）が挙げられる。
【００６６】
その他、治療可能な疾患としては、たとえばリウマチ様関節炎、虚血後の白血球を介する組織障害（再かん流障害）、凍傷またはショック、急性の白血球を介する肺障害（たとえば、成人呼吸困難症候群）、喘息、感染症、血栓性疾患（たとえば、卒中、心筋梗塞、深部静脈血栓症、肺塞栓など）、外傷性ショック、敗血性ショック、腎炎、およびアトピー性皮膚炎、乾せん症および炎症性腸疾患をはじめとする急性および慢性炎症が挙げられる。アテローム性硬化症および凝血などの種々の血小板を介する症状も治療することができる。また、腫瘍の転移は循環する癌細胞の接着を阻害することによって、阻害または予防することができる。たとえば、結腸のメラノーマ（黒色腫）およびカルチノーマ（癌腫）が挙げられる。
【００６７】
哺乳類における炎症性反応の複雑性に照らせば、意図された薬剤用化合物がさらにその他の細胞接着分子の機能を阻害することが知られている化合物を含むことができることは、当業者には容易に理解しうる。たとえば、接着分子のインテグリンファミリー（ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｆａｍｉｌｙ）に属する物質は、感染部位における白血球の管外遊出において役割を果たす。セレクチン受容体をはじめとする細胞間の接着分子受容体の検討およびその免疫機能に果たす役割に関しては、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ， ３４６： ４２５−４３４ （１９９０）を参照できる。また、意図された薬剤用化合物を用いた治療が奏効するかどうかは、治療すべき条件の進行状況によっても決定される。異なる接着分子は、疾患または条件の経過において、様々な因子によって増加または減少するため、炎症状態が異なればそれに応じた薬剤用化合物が治療に要求されることは、当業者に理解できることである。
【００６８】
ＳＬｅＸ 類似物化合物を含む薬剤用化合物は、予防処置として、治療処置としても、投与することができる。治療目的で用いる場合、組成物はすでに上述のような疾患を来した患者に、セレクチンを発現する細胞とＳＬｅＸ を表面に生ずる細胞との結合を阻害するのに十分な量（すなわち、疾患およびその合併症を治癒させるか、少なくとも部分的に症状を抑えるのに十分な量）だけ投与される。上述の通り、この目的を果たすための正確な有効量は、特に疾患の重症度および患者の体重および全身状態によって異なるが、一般に７０ｋｇの患者では１日あたりＳＬｅＸ 類似物化合物を約０．５ｍｇ〜約１０，０００ｍｇであり、さらに一般的には１日あたり約５ｍｇ〜約２，０００ｍｇである。
【００６９】
予防目的で用いる場合、意図された成分を含む組成物は、特定の疾患を来すおそれがあるか、さもなければリスクを有する患者に投与される。この目的で用いる場合も、正確な量は患者の健康状態および体重によって異なるが、一般に７０ｋｇの患者では１日あたり約０．５ｍｇ〜約５，０００ｍｇ、さらに一般的には体重７０ｋｇに対して１日あたり約５ｍｇ〜約２，０００ｍｇである。
【００７０】
意図されたＳＬｅＸ 類似物または接合体化合物の接着阻害量を評価するもう一つの方法は、その結合の強さをＳＬｅＸ 自体の結合の強さと比較する方法である。この比較に便利な方法に、比較する２つの物質のＩＣ５０ （結合を半分に阻害するのに必要な濃度）を使用し、ＳＬｅＸ の量およびＩＣ５０ が２倍のＳＬｅＸ 類似物化合物の量に用いられている阻害量に基づくものである。
【００７１】
成分の１回投与または反復投与は、医師が選択する用量および投与法で実現することができる。どのような場合でも、製剤は、患者の治療が奏効するのに十分な量のＳＬｅＸ 類似物または接合体化合物を提供する必要がある。
【００７２】
また、本発明の化合物は診断用の薬剤として使用することもできる。たとえば、標識化した化合物は炎症を有すると考えられる患者において、炎症または主要の転移の部位を確かめるために用いることができる。この使用目的のため、化合物は １２５Ｉ、 １４Ｃまたはトリチウムで標識化される。あるいは、上述の通り、本発明のＳＬｅＸ 接合体化合物は、ＭＲＩ、超音波または放射線造影技術に有用な診断用の薬剤を含むリポーター部分と、結合させることができる。ＭＲＩ用の常磁性金属錯体の投与量は、約０．０５〜約０．３ｍｍｏｌ／ｋｇ・体重である。放射性薬剤用化合物では、ある臓器を診断のため造影するなどという使用目的によって、従来から公知の方法で投与量を選択できる。投与量は約２〜２００ｍＣｉまたは、その放射性薬剤が有する生体内の線量によって制限される量である。
【００７３】
化合物の合成
本発明のＳＬｅＸ 類似物は多数の方法で生成することができる。代表的な合成方法を、下記の実施例の反応式１〜９で概説する。この概説は、ＳＬｅＸ 類似物４−（アセタミド）フェニル（メチル５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラヌロネート）−（２−＞３）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１−＞３））−２−デオキシ−２−（アセタミド）−β−Ｄ−グルコピラノシドの生成方法を説明するものであるが、異なる適切な素材を最初の材料として用いれば本発明のその他の類似物が得られる。このように、本明細書で述べる合成方法は、一般的な性質のものである。
【００７４】
式２ａの四糖の合成は、２つの基本的な段階からなる。第１に、４個の異なる保護された単糖サブユニット（グルコスマニル、フコシル、ガラクトシルおよびシアリル残基）を合成する。次に、このモノマーを結合させて、最終的な四糖化合物を得る。４つのモノマーユニットは好ましくは、グルコスマニル、フコシルおよびガラクトシル残基を最初に組み合わせ、その後シアリル残基を追加するという３＋１手法を用いて結合させる。あるいは、保護されたフコシル−グルコシドおよびシアリル−ガラクトシドを生成し、次にこの２個の二糖を結合させるという２＋２手法を用いることができる。
【００７５】
本発明を以下の実施例で説明するが、実施例ではＳＬｅＸ 類似物の合成および結合特性が記載される。ただし、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
【００７６】
シアリル・ルイスＸ 類似物４−（アセタミド）フェニル（メチル５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラヌロネート）−（２−＞３）−Ｏ−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル−（１−＞３））−２−デオキシ−２−（アセタミド）−β−Ｄ−グルコピラノシドの合成方法の概説
ａ．  ４個の保護された単糖ユニットの合成：
ｉ）  ４−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリジン２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）の合成
【化２４】
2004518704.tif 000015
式１に示すように、ベンジリジンが保護する（４−ニトロフェニル）２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物４）を、ベンズアルデヒドジメチルアセタールで、９７％収率のＤＭＦにおけるＰＴＳによる触媒下で処理することにより（実施例２参照）、４−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリジン２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）を得て、フコシル供与体（化合物９）と結合させる際のグリコシル受容体として用いた。
【００７７】
ｉｉ）  ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシルブロミド（化合物９）の合成
【化２５】
2004518704.tif 000016
式２は、フコシル供与体（化合物９）の調製方法を示す。２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−フコピラノース（化合物６）を、ＣＨ２ Ｃｌ２ 中のピリジンの存在下で、４−塩化ニトロベンゾイル（化合物７）を用いて処理し、８０％収率のαおよびβエピマー混合物である中間生成物（化合物８）を得た。混合物８のＣＨ２ Ｃｌ２ 中のＨＢｒによる臭素化により、９５％収率でフコシルα−ブロミドを得た。このブロミドは不安定であったため、すぐに次の段階で使用した。
【００７８】
ｉｉｉ）  ２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）の合成
【化２６】
2004518704.tif 000017
式３では以下の試薬を用いた。
【００７９】
ａ）（ＣＨ３ ）３ ＳｉＣＨ２ ＣＨ２ ＯＨ，ＨｇＯ，ＨｇＢｒ２ ，ＣＨ２ Ｃｌ２
ｂ）ＮａＯＭｅ，ＭｅＯＨ
ｃ）ＰｈＣＨ（ＯＣＨ３ ）２ ，ＰＴＳ，ＤＭＦ
ｄ）Ａｃ２ Ｏ，Ｎ（Ｅｔ）３ ，ＣＨ２ Ｃｌ２
ｅ）ＢＨ３ ，ＮＭｅ３ ，ＡｌＣｌ３ ，ＴＨＦ，モレキュラーシーブ４Å
ｆ）Ａｃ２ Ｏ，Ｎ（Ｅｔ）３ ，ＣＨ２ Ｃｌ２
ｇ）ＴＦＡ，ＣＨ２ Ｃｌ２ および
ｈ）ＣＣｌ３ ＣＮ，ＤＢＵ，ＣＨ２ Ｃｌ２ 。
【００８０】
式３は、ガラクトピラノシル供与体（化合物１４）の生成方法を示す。まず、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（化合物１０）を、ＣａＳＯ４ 、ＨｇＯおよびＨｇＢｒ２ の存在下で、ＣＨ２ Ｃｌ２ 中の１−（トリメチルシリル）−エタノールと反応させ、７４％収率でガラクトシド１１を得た。メタノール中のナトリウムメトキシドで脱アセチル化し、ＤＭＦ中のＰＴＳの存在下でベンジリジン化して、８４％収率で保護されたジオール１２を得た。このジオール１２を、ＮＥｔ３ の存在下でＡＣ２ Ｏでアセチル化して、８２％収率でジアセタート１３を得た。ＴＨＦ中のＡｌＣｌ３ の存在下で、ＢＨ３ −ＮＭｅ３ で処理することにより、化合物１３のケタール環を開環し、同時に中間生成物のヘミアセタールを還元した後、ピリジン中のＡＣ２ Ｏでアセチル化して、４９％収率で直交的に保護されたガラクトシド化合物１４を得た。化合物１４をＴＦＡで加溶媒分解し、続いてＣＨ２ Ｃｌ２ 中のＤＢＵの存在下でＣＣｌ３ ＣＮと反応させることにより、７５％収率で２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）を得た。δ６．５８（ｄ，ｊ１，２ ＝３．５Ｈ２ Ｈ−１およびδ８．６３（Ｃ＝ＮＨ）でプロトンＮＭＲ測定を行い、化合物１５のアノマー配置はαであることを確認した。
【００８１】
ｉｖ）メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）
【化２７】
2004518704.tif 000018
式４は、シアル酸部分に基づくフェニルチオ単糖１９の生成方法を示す。５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロン酸（化合物１６）を、Ｄｏｗｅｘ−５０−Ｈ＋ の存在下でＭｅＯＨで処理し、９８％収率で対応するメチルエステル化合物１７に変換した。エステル（化合物１７）のフェニルチオグリコシド（化合物１９）への変換は、Ｓｈａｒｍａ ａｎｄ Ｅｂｙ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， １２７： ２０１−２１０ （１９８４） に記載されている方法で実現した。化合物１７をピリジン中のＡｃ２ Ｏで過アセチル化して、８９％収率で、ＮＭＲスペクトルによればアノマーの混合物（３．３／１．０）であるアセチル化メチルエステル１８を得た。化合物１８をＣＨ２ Ｃｌ２ 中のＢＦ３ −Ｅｔ２ Ｏの存在下で、チオフェノールで処理して、９２％収率でアノマーの混合物（８０／２０）である、メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）を得た。
【００８２】
ｂ．  保護されたモノマーの結合による接合可能なアミノフェニル四糖（化合物２ａ）の入手：
４個のモノマーユニットの合成を終了し、次に、これらを結合して所望の接合可能なアミノフェニル四糖２ａの合成する。モノマーをグルコスマニル残基、フコシル残基、ガラクトシル残基、最後にシアリル残基という順序で組み合わせる３＋１手法が、最も有効かつ許容可能な合成方法である。
【００８３】
ｉ）  保護されたグルコサミンと保護された臭化フコシルを糖化して、二糖ユニット２１を得る。
【００８４】
【化２８】
2004518704.tif 000019
式５は、二糖ユニット２１の合成方法を示す。４−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）を、ＤＭＦおよびＣＨ２ Ｃｌ２ の混合物中のＴＥＡＢおよびモレキュラーシーブ４Åの存在下で、２，３，４−Ｏ−トリベンジル−α−臭化フコピラノシル（化合物９）と結合させ、６９％収率で二糖２０を得た。δ５．０６でのプロトンＮＭＲ測定で、二糖２０中のフコースユニットのアノマー配置はαであることを確認した。ＴＨＦ中のＡｌＣｌ３ の存在下でＢＨ３ −ＮＭｅ３ で処理することにより、化合物２０のアセタール環を開環し、同時に中間生成物のヘミアセタールを還元して、５０％収率で直交的に保護された４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２１）を得た。
【００８５】
ｉｉ）  二糖２１を保護されたガラクトピラノシルトリクロロアセチミデートで糖化して、三糖２３を得る。
【００８６】
【化２９】
2004518704.tif 000020
三糖ユニット２３を式６に示すように調製した。４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２１）および２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）をＣＨ２ Ｃｌ２ に溶解した溶液を、−５℃で１時間、０℃で４８時間、ＴＭＳ−ＯＴｆで処理して、６３％収率で４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２）を得た。メタノール中のＮａＯＭｅで脱アセチル化を行い、８９％収率で４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２３）を得た。
【００８７】
ｉｉｉ） ＮＩＳ−ＴＭＳ−Ｏｔｆにより、三糖２３と保護されたチオフェニルシアル酸メチルエステルユニットとの糖化を促進し、四糖２５を得る。
【００８８】
【化３０】
2004518704.tif 000021
四糖ユニット２５の合成を実現するため、最終的な結合を式７に示す通り行った。メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）および４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−１）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２３）をアセトニトリルに溶解した溶液を、−４０℃まで冷却し、次に、ＮＩＳおよびＴＭＳ−ＯＴｆで処理して、６５％収率で４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２４）を得た。３つのヒドロキシル基のうち最も束縛されていない基が反応すると、ほぼ例外なく所望のグリコシル結合が得られることは言及に値する。この知見はＴｅｒａｄａら、Ｊ． Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ． Ｃｈｅｍ．， ８：２８５ （１９８９） の報告２１とも矛盾しない。ピリジン中のＡｃ２ Ｏを用いて０℃でアセチル化して、７８％収率で所望の４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２５）を得た。
【００８９】
ｃ．  化合物２５の官能基を脱保護および再保護し、四糖ユニットに有効なＮを結合させる。
【００９０】
【化３１】
2004518704.tif 000022
四糖ユニット２５は、塩基に不安定なエステル保護基と、塩基に安定なベンジル保護基の両方を有する。これは、実施した化学処理の性質および特定の保護基のモノマーのみがすぐに利用可能であったことによる。我々の意図は、ニトロ基を場合によっては還元し、その結果得られたアミノ基を多官能性の足場に接合させるのに用いることができるようにすることであった。この目的を達するためには、均一な塩基に不安定な保護基が、最終分子中のすべてのヒドロキシルに付いていること、すなわち過アセチル保護が望ましい。この目的は、式８に記載の手法に従うことにより実現した。
【００９１】
混合し保護した四糖２５を、メタノール中のラネー・ニッケルを用いて、５０ｐｓｉで水素添加し、その結果得られたアミン生成物をＢｏｃ−カルボネートおよびＴＨＦ中のＥｔ３ Ｎで処理して、７５％収率でカルバメート２６を得た。化合物２６をメタノール混合物中のＰｄ（ＯＨ）２ および酢酸といった触媒で水素添加分解により脱ベンジル化し、次にＥｔ３ Ｎの存在下でＡｃ２ Ｏでアセチル化して、８６％収率で過アセチル化カルバメート２７を得た。化合物２７をＣＨ２ Ｃｌ２ 中でＴＦＡ脱保護し、９９％収率で所望の接合可能な保護されたシアリル・ルイスＸ 類似物２ａを得た。さらに、Ｅｔ３ Ｎの存在下でＣＨ２ Ｃｌ２ 中の塩化アセチルを用いてアセチル化を行い、８６％収率で相当するアセタミド２８を得た。これは活性化した親電子性物質と接合がすばやくできることを示した。
【００９２】
ｄ．  過アセチル化アセタミド−フェニルシアリル・ルイスＸ エステル類似物を、完全に脱保護したシアリル・ルイスＸ 酸３ａに変換する。
【００９３】
過アセチル化誘導体２８の脱保護方法を式９に示す。メタノール中のナトリウムメトキシドを用いた第一処理で、Ｚｅｍｐｌｉｎ脱アセチル化を行い、次に、アルカリ環境で水で処理して、８３％収率ですぐに所望の４−（アセタミド）フェニル（５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロン酸−（２−＞３）−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物３ａ）を得た。この接合可能な四糖は、逆相ＨＰＬＣで純度１００％であることを確認し、高分解能質量分析法およびＮＭＲデータによって完全に同定した。
【００９４】
【化３２】
2004518704.tif 000023
【００９５】
ｅ．  １４Ｃ−アセタミド−フェニルシアリル・ルイスＸ 酸３ｂの合成
本明細書に記載したアセタミド−フェニル類似物３ａの合成方法に従うが、最後から２番目のＮ−アセチル化工程で、塩化アセチルの代わりにＣＨ３ １４ＣＯＣｌを用いて、Ｖｉｔｒａｘ  Ｃｏ．社 （６６０ Ｓ． Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｓｔ．， Ｐｌａｃｅｎｔｉａ， ＣＡ９２６７０） の方法で放射性標識類似物３ｂを合成した。この生成物の化学的純度は＞９９％、放射化学的純度は＞９９％、特異活性は５０ｍＣｉ／ｍｍｏｌであった。
【００９６】
実施例１
ｐ−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリジン２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）の合成
この化合物の生成は、Ｊ． Ｒｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， ６：１８４−１９６ （１９６８） の記載、および下記の通り行った。
【００９７】
ｐ−ニトロフェニル−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物４）（１０．０ｇ，３０ｍｍｏｌ）、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１０．０ｇ）およびＰＴＳ．Ｈ２ Ｏ（０．１８ｇ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）中で混合して、５０℃で約３時間撹拌した。この反応混合物のＴＬＣによって、この出発材料が完全にベンジリジン誘導体に変換されていることが確認された。この混合物を室温まで冷却し、ゆっくりと氷水（７００ｍＬ）に加えて撹拌した。形成された白色の固形物を濾過によって採集し、水で洗浄して真空中で乾燥し、ｐ−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリジン２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）（１２．２ｇ、収率９７％）を得た。ＴＬＣ分析（シリカゲル、ＣＨ２ Ｃｌ２ 中の５％ＭｅＯＨ）では、スポットは１つ（Ｒｆ ０．５、出発材料の０．２５と比較）であり、したがって、生成物が実質的に純度が高いことが示された。このため、この材料を次の工程に用いた。ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝４５４； １Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ −ＤＭＳＯｄ６ ）：１．９１（ｓ，３Ｈ，ＮＣＯＣＨ３ ），３．５−４．０（ｍ，５Ｈ），４．３２（ｄｄ１Ｈ），５．０５（ｂｓ，１Ｈ，ＯＨ），５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｃ１ −Ｈ），５．５８（ｓ，１Ｈ，ＣＨ（Ｐｈ），７．１６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．３８，Ａｒ−Ｈ，），７．３６（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．４９（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．１８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．３８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ，）。スペクトルを１００％ＤＭＳＯ−ｄ６ で操作すると、５．６１（Ｊ＝４．６９Ｈｚ）でＯＨプロトンが二重線で現れ、ベンジリジンプロトン（ＯＣＨＯ）は５．７３（ｓ）でわずかに低磁場にシフトした。
【００９８】
実施例２
２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノース（化合物８）の合成
この化合物の合成は、Ｍ． Ｄｅｊｔｅｒ−ＪｕｓｚｙｎｓｋｉとＨ． Ｍ． Ｆｌｏｗｅｒｓ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， １８：２１９−２１６ （１９７１） の記載、および下記の通り行った。
【００９９】
乾燥ＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）中の２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−フコピラノース（化合物６）（６．０ｇ，１３．４５ｍｍｏｌ）の溶液を冷却し（５℃）、ピリジン（７．５ｍＬ）を加えた後、ｐ−塩化ニトロベンゾイル（化合物７）（３．１５ｇ，１７ｍｍｏｌ）を５分間にわたってゆっくりと分けて添加した。添加後、この混合物を５℃で５〜１０分間、次に室温で１８時間撹拌した。この混合物をＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）で希釈し、この溶液を冷却１Ｎ  ＨＣｌ、水、冷却水性ＮａＨＣＯ３ 、水の順序で連続して洗浄し、乾燥および濃縮して、ゴム様の生成物（９．０ｇ）を得た。ＴＬＣ分析（シリカゲル、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ３：１）を行い、大きなピーク（Ｒｆ ０．６）および小さなピーク（Ｒｆ ０．４８）の存在を確認したが、出発材料は認められなかった。これは、αおよびβ異性体の混合物が、エステルとして存在する場合には分離することによると思われる。生成物をシリカゲル（４００ｇ）のカラムでクロマトグラフィーにかけ、ヘキサン中の５〜３０％ＥｔＯＡｃで溶離して、５０ｍＬの留分を採集した。留分６５〜７５からは、ゴム様物質の２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾイル−α−Ｌ−フコピラノースを得た（６．７ｇ、収率８５％）。留分８０〜９６からは、２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ｐ−ニトロベンゾイル−β−Ｌ−フコピラノースを得た（１．１３ｇ、収率１５％）。
【０１００】
αおよびβ異性体の両方から同じβ−ブロミド（化合物９）が得られたため、カラム精製は省略し、その代わりに混合物のままで使用することを決定した。この場合、２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−フコピラノース（化合物６）（２５ｇ、５５ｍｍｏｌ）を上述の通りｐ−塩化ニトロベンゾイル（化合物７）で処理し、この粗製材料（３３．０ｇ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）に溶解し、シリカゲルの短いカラムで簡単に濾過を行った。これにより、色材およびその他の極性物質を除去した。この方法により、ゴム様物質のエステルのアノマー混合物（化合物８）（２５．７ｇ、収率８０％）で得た。
【０１０１】
α異性体の特性：ＴＬＣ：Ｒｆ ０．６（α異性体）；シリカゲル、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ３：１）．ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０１．３（Ｍ＋ＮＨ４ ）＋ ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１．１８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４５Ｈｚ，ＣＨ３ ），３．７８（ｄ，１Ｈ，−Ｃ２ Ｈ−Ｏ），３．９８−４．０９（ｍ，２Ｈ，−ＣＨＯ），４．２９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５２Ｈｚ，Ｊ＝９．９７Ｈｚ，ＯＣＨ−），４．７０−５．１０（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２Ｐｈ），６．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｃ１ −Ｈ），７．２−７．５（１５Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），８．１２（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．２７（ｄ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１６．６７（ＣＨ３ ），６９．８（ＣＨ），７２．９４（ＯＣＨ２ Ｐｈ），７３．３４（ＯＣＨ２ Ｐｈ），７４．９６（ＯＣＨ２ Ｐｈ），７５．１６（ＯＣＨ），７７．００（ＯＣＨ），７８．４７（ＯＣＨ），９２．８４（Ｏ−ＣＨ−Ｏ），１２３．５１，１２７．５４，１２７．７１，１２７．８３，１２８．２９，１２８．３７，１３０．８２，１３５．６，１３７．９，１３８．２，１３８．３（芳香族炭素），１５０．６（ＡｒＣ−ＮＯ２ ），１６３．３０（Ｃ＝Ｏ）。
【０１０２】
β異性体の特性：ＴＬＣ：０．４８（β異性体）（シリカゲル、ヘキサン−ＥｔＯＡｃ３：１）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ６０１．３（Ｍ＋ＮＨ４ ）＋ ；１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４５Ｈｚ，ＣＨ３ ），３．７１（ｍ，３Ｈ，ＯＣＨ），４，７２−５．０５（ｍ，６Ｈ，ＣＨ２ Ｐｈ），５．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｃ１−Ｈ），７．１８−７．４１（ｍ，１５Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．１２（ｍ，２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ＡｒＨ），８．２４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，ＡｒＨ）．１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１６．７３（ＣＨ３ ），７１．８５（ＯＣＨ），７３．１４（ＯＣＨ２ ），７４．８４（ＯＣＨ２ ），７５．２７（ＯＣＨ２ ），７５．８２（ＯＣＨ），７７．６０（ＯＣＨ），８２．９６（ＯＣＨ），９５．３５（ＯＣ１ −Ｏ），１２３．４５，１２７．６６，１２７．８６，１２８．００，１２８．１５，１２８．３２，１２８．５５，１３１．１７，１３８．０５，１３８．２０（芳香族炭素），１５０．７２（芳香族Ｃ−ＮＯ２ ），１６３．２８（Ｃ＝Ｏ）。
【０１０３】
実施例３
２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−臭化フコピラノシル（化合物９）の合成
この化合物の合成は、Ｍ． Ｄｅｊｔｅｒ−ＪｕｓｚｙｎｓｋｉとＨ．Ｍ． Ｆｌｏｗｅｒｓ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， １８：２１９−２１６ （１９７１） の記載、および下記の通り行った。
【０１０４】
ＨＢｒをＣＨ２ Ｃｌ２ （２０ｍＬ）に溶解した飽和溶液を、無水ＨＢｒを０℃で３０分間、ＣＨ２ Ｃｌ２ に通すことにより生成した。この溶液を、０〜５℃のＣＨ２ Ｃｌ２ （１５０ｍＬ）に２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジルフコピラノース−ｐ−ニトロベンゾエートのα−イソマー（化合物８）（６．５ｇ，１１ｍｍｏｌ）を溶解した冷却溶液に添加し、この混合物を５℃で３０〜４０分間撹拌した。沈殿したｐ−ニトロ安息香酸を濾過によって取り出し、濾過物を冷却した飽和ＮａＨＣＯ３ および水で連続して中性になるまで洗浄した。この抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４ ）、室温で溶媒を真空によって除去して、粘度のきわめて高い液体のα−臭化フコピラノシルだけを得た（５．３ｇ、収率９５％）。
【０１０５】
同じく、フコピラノシル−ｐ−ニトロベンゾエート（化合物８）（５８３ｍｇ，１ｍｍｏｌ）のβ異性体を、ＨＢｒのＣＨ２ Ｃｌ２ （５ｍＬ）との飽和溶液を用いて５℃で３０分間処理して、α−臭化フコピラノシル（５５０ｍｇ）を得た。この生成物のＮＭＲスペクトルは、以前にα−フコピラノシルｐ−ニトロベンゾエートから得たα−ブロミドのスペクトルと同じであった。しかし、このブロミドは不安定であったため、そのままで即刻次の工程で用いた。１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１．１７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４５Ｈｚ，ＣＨ３ ），３．６−４．２（ｍ，ＯＣＨ），４，８−５．０２（ｍ，ＯＣＨ２ ），６．５３（ｄ，１Ｈ，ＯＣＨＢｒ），７．２−７．５（１５Ｈ，Ａｒ−Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：１６．６１（ＣＨ３ ），７２．３６（ＯＣＨ），７３．２３（ＯＣＨ２ ），７４．００（ＯＣＨ２ ），７５．５９（ＯＣＨ２ ），７６．５７（ＯＣＨ），７４．４９（ＯＣＨ），８０．０２（ＯＣＨ），９５．２６（ＯＣＨＢｒ），１２７．９７，１２８．０９，１２８．２３，１２８．３２，１２８．４３，１２８．７５，１２８．８６（芳香族炭素）。
【０１０６】
実施例４
２−（トリメチルシリル）エチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１１）の合成
この化合物の合成は、Ｋ． Ｊ． Ａｈｌｆｏｒｓら，Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， ５３：５６２９−５６４７ （１９９８） の記載、および下記の通り行った。
【０１０７】
アセトブロモα−Ｄ−ガラクトース（１０）（２５ｇ，６０ｍｍｏｌ）、１−（トリメチルシリル）エタノール（１０．７２ｇ，１３．０ｍＬ，９１ｍｍｏｌ）およびＣａＳＯ４ （２０ｇ）を０℃のＣＨ２ Ｃｌ２ （５００ｍＬ）に混合した混合物に、赤色酸化水銀（１３．２ｇ）および臭化水銀（５００ｍｇ）を添加した。次に、この赤色のスラリーを室温で４８時間撹拌した。無機塩を濾過し、ＣＨ２ Ｃｌ２ 溶液を水性ＮａＨＣＯ３ 、水で洗浄して、乾燥した（Ｎａ２ ＳＯ４ ）。溶媒を蒸発させ、きわめて粘度の高い油を得た。これをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン−酢酸エチル、９：１、８：２、７：３）で精製した。化合物を含有する留分を採集し、溶媒を蒸発させて、高粘度の油である化合物１１を得た（２０．０ｇ、収率７３．５％）。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：０．０１（ｓ，９Ｈ，ＳｉＭｅ３ ），０．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），１．９６，２．０３および２．１２（ｓ，９Ｈ，ＣＯＣＨ３ ），３．５７および３．９９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），３．９０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−５），４．１３および４．２０（ｄｄ，２Ｈ，Ｈ−６），４．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１），５．０１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），５．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），５．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４）。ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝４７１．５。
【０１０８】
実施例５
２−（トリメチルシリル）エチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１１ａ）の合成
この化合物の合成は、Ｋ． Ｊ． Ａｈｌｆｏｒｓら，Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， ５３：５６２９−５６４７ （１９９８） の記載、および下記の通り行った。
【０１０９】
２−（トリメチルシリル）エチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１１）（２０．０ｇ，４４．６ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）を溶解した溶液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液（メタノール２００ｍＬ中にナトリウム２００ｍｇ）を添加し、室温で３時間撹拌した。次に、この反応混合物を、Ｄｏｗｅｘ５０ｘ８−４００イオン交換（Ｈ＋ ）樹脂で中和し、濾過した。メタノールを蒸発させ、残留物をエーテル（５００ｍＬ）に溶解して、室温で１５分間放置した。沈殿した固形物を濾過し、真空中で乾燥させて、化合物１１ａを得た（１２．０ｇ、収率９６％）。１ＨＮＭＲ（Ｄ２ Ｏ）：０．０１（ｓ，９Ｈ，ＳｉＭｅ３ ），１．０２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），３．４４（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），３．５７および３．９９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），３．５９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），３．７８（ｍ，５Ｈ，Ｈ−６），３．８８（ｄｄ，１Ｈ−４），４．３５（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝３０３．１。
【０１１０】
実施例６
２−（トリメチルシリル）エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１２）の合成
この化合物の合成は、Ｋ． Ｊ． Ａｈｌｆｏｒｓら，Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．， ５３： ５６２９−５６４７ （１９９８） の記載、および下記の通り行った。
【０１１１】
２−（トリメチルシリル）エチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（２８．０ｇ，１００ｍｍｏｌ）およびベンズアルデヒドジメチルアセタール（１８．２４ｇ，１２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６０ｍＬ）に溶解した溶液に、ＰＴＳ（５００ｍｇ）を添加し、この混合物を５０℃で１６時間加熱した。ＤＭＦを真空下で除去し、生成物を酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ３ 、水で洗浄して、乾燥した（Ｎａ２ ＳＯ４ ）。酢酸エチルを除去して、ガラス状の固形物である２−（トリメチルシリル）エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１２）を得た（２４．０ｇ、収率８７％）。さらなる精製を行わず、これを次の工程に用いた。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：０．０２（ｓ，９Ｈ，ＳｉＭｅ３ ），０．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），３．５７および３．９９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），３．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｈ−５），３．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），３．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６），４．２７（ｄ，１Ｈ，Ｈ−１），４．１６（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４），４．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６），５．５２（ｓ，１Ｈ，ＰｈＣＨ），７．２５および７．５（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝３９１．５。
【０１１２】
実施例７
２−（トリメチルシリル）エチル−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１３）の合成
２−（トリメチルシリル）エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１２）（２３．０ｇ，６２．５ｍｍｏｌ）をピリジン（１００ｍＬ）に溶解した溶液に、無水酢酸（１００ｍＬ）を添加し、この混合物を室温で１６時間撹拌した。ピリジンおよび無水酢酸を真空下で除去した。トルエン（４ｘ７５ｍＬ）を添加し、蒸発させて残留物からピリジンおよび無水酢酸をすべて除去した。この残留物をシリカゲル（７：３ヘキサン／酢酸エチル）のクロマトグラフィーに通し、シロップ状の２−（トリメチルシリル）エチル−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１３）を得た（２３．０ｇ、収率８２％）。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：０．０３（ｓ，９Ｈ，ＳｉＭｅ３ ），０．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），２．０５（ｓ，６Ｈ，ＣＯＣＨ３ ），３．５（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−５），３．５７および４．０５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），４．１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６），４．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１），４．９５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４），５．５（ｓ，１Ｈ，ＣＨＰｈ），７．３２−７．５８（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝４７５。
【０１１３】
実施例８
２−（トリメチルシリル）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１４）の合成
２−（トリメチルシリル）エチル−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１３）（４．９７ｇ，１１ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２５ｍＬ）に溶解した溶液に、モレキュラーシーブ４Å（ＡＷ−３００，５ｇ）を添加し、この混合物を室温で１時間撹拌した。次に、ＢＨ３ −ＮＭｅ３ 複合体（４．８ｇ，６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温でさらに３０分間撹拌した。次に、溶液を冷却し（０℃）、無水塩化アルミニウム（８．８ｇ，６ｍｍｏｌ）を２回に分けて添加した。塩化アルミニウムの添加中に反応混合物は発熱を伴うようになり、撹拌を室温で継続した。ＴＬＣ（ＣＨ２ Ｃｌ２ −ＥｔＯＡｃ，８：２）により、反応が終了したことを確認し（４時間）、混合物を濾過して、濾過物をＤｏｗｅｘ５０（Ｈ＋ ）樹脂で処理し、濾過、濃縮した。この残留物をメタノール（３ｘ１００ｍＬ）で同時蒸発させた。シロップ状の残留物を水（４０ｍＬ）に溶解し、酢酸エチル（３ｘ７５ｍＬ）で抽出した。酢酸エチルの蒸発によって得た高粘度の油を、シリカゲルのクロマトグラフィー（ＣＨ２ Ｃｌ２ −ＥｔＯＡｃ，８：２）に通した。所望の化合物を含む留分を一つにし、溶媒を除去して、２−（トリメチルシリル）エチル−２，３−ジ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドを得た（２．４５ｇ、収率４９％）。この生成物（２．４８ｇ）をピリジン（１０ｍＬ）に溶解した溶液を、無水酢酸（１０ｍＬ）で処理し、室温で一晩撹拌した。トルエン（３ｘ５０ｍＬ）を添加し、残留物から蒸発させて、ピリジンおよび無水酢酸をすべて除去した。この残留物をシリカゲル（７：３ヘキサン：酢酸エチル）のクロマトグラフィーに通し、無色の油の２−（トリメチルシリル）エチル−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１４）を得た（２．４３ｇ、収率９０％）。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：０．０３（ｓ，９Ｈ，ＳｉＭｅ３ ），０．９８（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），１．９８，２．０１，２．０５（ｓ，９Ｈ，ＣＯＣＨ３ ），３．５（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−５），３．５７および４．０５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２ ＣＨ２ Ｓｉ），４．１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−６），４．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），４．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１），５．０３（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３），５．２０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−２），５．３９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−４），４．５（ｑ，２Ｈ，ＣＨ２ Ｐｈ），７．３２−７．５８（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝５１８．９。
【０１１４】
実施例９
２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）の合成
２−（トリメチルシリル）エチル２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（化合物１４）（４．９６ｇ，１０ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）に溶解した撹拌溶液を０℃に冷却し、ＴＦＡ（７．５ｍＬ）を添加した。この反応混合物を室温まで温め、次に１８時間撹拌した。ＣＨ２ Ｃｌ２ およびＴＦＡを回転式蒸発器で除去し、残留物をトルエン（３ｘ２５ｍＬ）で同時蒸発させた。生成物をＣＨ２ Ｃｌ２ に溶解し、ＮａＨＣＯ３ （５ｍＬ）の飽和溶液で処理した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ ＳＯ４ ）、濃縮し、真空下で２４時間乾燥させ、２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノース（化合物１４ａ）（３．７ｇ、収率９４％；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝４１９．１）を得た。さらなる精製を加えずに、この生成物を次の工程に用いた。
【０１１５】
２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノース（化合物１４ａ）（３．７ｇ，９．３ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （５０ｍＬ）に溶解した冷却溶液（−５℃）に、トリクロロアセトニトリル（４．５ｍＬ）およびＤＢＵ（２５０ｍＬ）を添加した。この混合物を０℃で１時間、室温で３時間撹拌した。混合物をシロップ状まで濃縮し、次にシリカゲル（ヘキサンＥＴＯＡｃ，７：３）のクロマトグラフィーにかけ、非晶質の固形物である２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）（３．８ｇ、収率８０％）を得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：２．００，２．０１，２．０５（ｓ，９Ｈ，ＣＯＣＨ３ ），４．５（ｄｄ，２Ｈ，ＣＨ２ Ａｒ），６．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−１），７．２９（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），８．６３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｎａ）＋ ＝５６１．８。
【０１１６】
実施例１０
メチル５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロソネート（化合物１７）の合成
この化合物の合成は、Ｒ． Ｋｕｈｎら，Ｃｈｅｍ． Ｂｅｒ．， ９９：６１１−６１７， （１９６６） の記載、および下記の通り行った。
【０１１７】
５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロソン酸（化合物１６）（１０ｇ，３２．３６ｍｍｏｌ）とメタノール（１０００ｍＬ）のスラリーに、ＤｏｗｅｘＨ＋ ５０ｘ８−４００イオン交換樹脂（３０．０ｇ、メタノールで洗浄し、真空で一晩２５℃で乾燥）を添加し、この混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を濾過し、樹脂をメタノール（７５ｍＬ）で洗浄した。濾過物および洗浄液を合わせ、さらにメタノール（５００ｍＬ）を添加して、溶液をさらに１時間室温で撹拌した。メタノールを回転式蒸発器で除去し、メチルエステル１７（１０．２ｇ、収率９８％）を得た。融点（ＭＰ）：１７８−１７９℃（ｌｉｔ１７ 融点１７８−１８０℃）；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６ ）：１．７６（ｔ，１Ｈ，Ｈ−３ａ），１．９１（ｓ，３Ｈ，ＮＨＣＯＣＨ３ ），２．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ−３ｅ），４．３２（１Ｈ，ｄｄ），５．０５（１Ｈ，ｂｓ，ＯＨ），５．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６２Ｈｚ，Ｃ１ −Ｈ），５．５８（１Ｈ，ｓ，Ｏ−ＣＨ（Ｐｈ）−Ｏ），７．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３８，Ａｒ−Ｈ，Ａ２Ｂ２系の一部），７．３６（３Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），７．４９（２Ｈ，ｍ，Ａｒ−Ｈ），８．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）。
【０１１８】
実施例１１
メチル５−アセタミド−２，４，７，８，９−ペンタ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロソネート（化合物１８）の合成
この化合物の合成は、Ｍ． Ｎ． ＳｈａｒｍａとＲ． Ｅｂｙ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， １２７：２０１−２１０ （１９８４） の記載、および下記の通り行った。
【０１１９】
乾燥ピリジン（１００ｍＬ）および無水酢酸（１００ｍＬ）の混合物を冷却し（０℃）、メチル５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロソネート（化合物１７）（１０ｇ，３１．０ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を０℃で４時間、室温で４８時間撹拌した。ピリジンおよび無水酢酸を真空下で除去した。トルエン（４ｘ７５ｍＬ）を添加し、残留物から蒸発させてピリジンおよび無水酢酸をすべて除去し、結果得られた泡状の固形物を真空下で乾燥した。ヘキサン−酢酸エチルから再結晶化し、過アセチル化生成物１８を得た（１４．７ｇ、収率８９％）。融点（ＭＰ）：１５６−１５８℃（ｌｉｔ１８ ．融点１５７−１５８℃）；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：２．０１，２．０２，２．０４，２．０５，２．０７（５ｓ，１５Ｈ，５ＣＯＣＨ３ ），２．４５（ｄｄ，Ｈ−３ａｘ ），２．６２（ｄｄ，Ｊ３ｅｑ，４ ＝５．１Ｈｚ，Ｊｇｅｍ ＝１３．４Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ−β），３．７８（ｓ，３Ｈ，ＣＯ２ ＣＨ３ ）および３．８０（ｓ，３Ｈ，ＣＯ２ ＣＨ３ ），４．１９（ｄｄ，Ｊ８，９ ＝７．２Ｈｚ，Ｊ９， ９’ ＝１２．６Ｈｚ，Ｈ−９），４．２０（ｄｄ，Ｊ５， ６ ＝１０．１Ｈｚ，Ｊ６， ７ ＝２．２Ｈｚ，Ｈ−６），４．４３（ｄｄ，Ｊ８， ９’ ＝２．４Ｈｚ，Ｈ−９’），４．９７（ｔ，Ｊ４，５ ＝Ｊ５，６ ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−５），５．１５（（ｄｄｄ，Ｈ−８α），５．２７（ｄｄｄ，Ｈ−４α），５．３９（ｄｄ，Ｊ７，８ ＝６．４Ｈ−７α）および５．５４（ｍ，Ｈ−８β），４．９０−５．４４（ｄｄｄ，Ｈ−４β）。アノマー比（ａ：ｂ）は、メチルエステル信号の強度比から予測した；ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ ＝５３４。
【０１２０】
実施例１２
メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）の合成
この化合物の合成は、Ｍ． Ｎ． ＳｈａｒｍａとＲ． Ｅｂｙ， Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．， １２７：２０１−２１０ （１９８４） の記載、および下記の通り行った。
【０１２１】
メチル５−アセタミド−２，４，７，８，９−ペンタ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロソネート（化合物１８）（１０．６６ｇ，２０ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２ Ｃｌ２ （２００．０ｍＬ）に溶解した冷却溶液（０℃）に、チオフェノール（２．２ｍＬ，２０．２ｍｍｏｌ）および三フッ化ホウ素エーテラート（３．０ｍＬ，２５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で一晩撹拌した。次に、反応混合物をＣＨ２ Ｃｌ２ （２００ｍＬ）で希釈し、重炭酸ナトリウムの飽和溶液および水で連続的に洗浄し、乾燥（Ｎａ２ ＳＯ４ ）および濃縮した。この結果得られた高粘度の油を、ヘキサン（３００ｍＬ）とすり混ぜ、生成した固形物を濾過し、ヘキサン−酢酸エチルから再結晶化して、メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）（１．３２ｇ、収率９２％）を得た。融点（ＭＰ）：１８０−８２℃（ｌｉｔ１８１−８２℃）；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：（ｄｄ，Ｊ３ｅｑ，４ ＝５．１Ｈｚ，Ｊｇｅｍ ＝１３．９Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ−β），２．８９（ｄｄ，Ｊ３ｅｑ，４ ＝４．８Ｈｚ，Ｊｇｅｍ ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−３ｅｑ−α），４．９０（ｄｄｄ，Ｈ−４α），５．４４（ｄｄｄ，Ｈ−４β），３．５６（ｓ，３Ｈ，ＣＯ２ ＣＨ３ ）および３．６７（ｓ，３Ｈ，ＣＯ２ ＣＨ３ ）。アノマー比（ａ：ｂ）はメチルエステル信号の強度比から予測した；ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ ＝５８４。
【０１２２】
実施例１３
４−ニトロフェニル４，６−ベンジリデン−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２０）の合成
４−ニトロフェニル２−アセタミド−４，６−ベンジリジン２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物５）（４．３ｇ，１０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡＢ（２．２ｇ，１０ｍｍｏｌ）および粉末モレキュラーシーブ（４ＡＯ ，１５ｇ）とＣＨ２ Ｃｌ２ （２５ｍＬ）およびＤＭＦ（１０ｍＬ）との撹拌混合物に、２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−臭化フコピラノシル（化合物９）（７．５ｇ，１５ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （１５ｍＬ）に溶解した溶液を添加し、この混合物を窒素雰囲気下、室温で５０時間撹拌した。メタノール（２ｍＬ）を添加して、撹拌をさらに２時間継続した。次に、この溶液をＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）で希釈し、セライトのパッドで濾過し、濾過ケーキをＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）で洗浄した。集めた濾過物を固形の重炭酸ナトリウムで処理し、濾過して、濾過物を濃縮した。糊状の残留物を水（１００ｍＬ）ですり混ぜた。一晩（１２時間）撹拌した後、固形物を採集して乾燥した。この物質をヘキサン（３００ｍＬ）で懸濁させ、３〜４時間撹拌した。その結果得られた固形物を濾過によって採集し、ヘキサン（３００ｍＬ）で再懸濁させ、２〜３時間撹拌した。こうして得た固形物を採集して乾燥させた（８．４５ｇ）。この物質をメタノールから再結晶化させ、白色固形物の４−ニトロフェニル４，６−ベンジリデン−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２０）（５．８５ｇ、収率６９％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ ０．４５（シリカゲル、ＣＨ２ Ｃｌ２ ／ヘキサン／ＭｅＯＨ９／１／０．２５）；ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３ ）：０．８３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４１Ｈｚ，ＣＨ３ ），１．６１（ｓ，３Ｈ，ＮＣＯＣＨ３ ），３．６０−５．００（ｍ，ＯＣＨ，ＯＣＨ２ ），５．０６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，フコシル残留物に対してＣ１ −Ｈ），５．５３（ｓ，１Ｈ，ＯＣＨＯ），５．６８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，グルコサミン残留物のＣ１ −Ｈ），７．０３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．３８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ），７．２０−７．６０（ｍ，Ａｒ−Ｈ），８．１７（ｄ，２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３８Ｈｚ，Ａｒ−Ｈ）；ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ ＝８４７。元素分析：確認：Ｃ，６８．１６；，Ｈ，５．８９；Ｎ３．２２％。Ｃ４８ Ｈ５０ Ｎ２ Ｏ１２ で算出；Ｃ，６８．０７；Ｈ，５．９５，；Ｎ，３．３１；Ｏ，２２．６７％。
【０１２３】
実施例１４
４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２１）の合成
４−ニトロフェニル４，６−ベンジリデン−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２０）（５．０ｇ，５．９ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（５０．０ｍＬ）に溶解した溶液に、モレキュラーシーブ４Å（ＡＷ−３００，５ｇ）を添加し、この混合物を室温で１時間撹拌した。次に、ＢＨ３ −ＮＭｅ３ 複合体（４．８２ｇ，３６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をさらに３０分間室温で撹拌した。次に、溶液を冷却（０℃）し、無水塩化アルミニウム（５．３ｇ，３９．８ｍｍｏｌ）を２回に分けて添加した。反応混合物は、塩化アルミニウムの添加中に発熱を伴い、撹拌を５０℃で継続した。反応混合物のＴＬＣにより、反応が終了したことを確認し（２時間）、混合物を濾過して、濾過物をＤｏｗｅｘ５０（Ｈ＋ ）樹脂で処理し、濾過、濃縮した。この残留物をメタノール（３ｘ１００ｍＬ）で同時蒸発させた。シロップ状の残留物を水（１００ｍＬ）に溶解し、沈殿した固形物を濾過して乾燥させた。次に、シリカゲルのクロマトグラフィー（ＣＨ２ Ｃｌ２ −酢酸エチル，８：２）に通した。目的の化合物を含む留分を一つにし、溶媒を除去して、４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２１）を得た（２．５２ｇ、収率５０．４％）。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ ＝８４９。
【０１２４】
実施例１５
４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２）の合成
４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２１）（１．５ｇ，１．８ｍｍｏｌ）および２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−６−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルトリクロロアセチミデート（化合物１５）（１．５ｇ，２．８ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （２０．０ｍＬ）に溶解した溶液を−５℃に冷却した。ＴＭＳ−ＯＴｆ（３０μＬ）をこの溶液に添加し、−５℃で１時間、０℃で４８時間で撹拌した。反応混合物を、ＮａＨＣＯ３ （１ｍＬ）の飽和溶液で処理し、有機層を分離し、水層をさらにＣＨ２ Ｃｌ２ （３ｘ５ｍＬ）で抽出する。有機層を集めて乾燥させ、濃縮した。残留物をエーテル（１５ｍＬ）ですり混ぜ、沈殿した出発材料２１を濾過した。濾過物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２ Ｃｌ２ ：ＥｔＯＡｃ，８：２）で精製した。生成物を含む留分を採集し、蒸発させて結晶質の固形物である６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２）を得た。さらに、メタノールから結晶化させ、純粋な生成物を得た（１．３８ｇ、収率６３％）。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ ＝１２４４．５。
【０１２５】
実施例１６
４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２３）の合成
４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２２）（１．３８ｇ，１．１１ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解させ、この溶液をナトリウム１００ｍｇおよびメタノール５ｍＬからなるメトキシドナトリウム溶液を用いて室温で６時間処理した。反応混合物をイオン交換樹脂ＤｏｗｅｘＨ＋ で中和し、濾過して、濾過物を濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ＣＨ２ Ｃｌ２ ：ＭｅＯＨ，８：２）で精製して、４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−＞１）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−＞１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２３）（１．１０ｇ、収率８９％）を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ ＝Ｘ（シリカゲル、ＣＨ２ Ｃｌ２ ：メタノール８：２）；ＭＳ：（Ｍ＋ＮＨ４ ）＋ ＝１１１８．５。
【０１２６】
実施例１７
４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２５）の合成
【０１２７】
工程（ｉ）：
４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２４）の合成
メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−Ｓ−フェニル−２−チオ−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピロノスロネート（化合物１９）（１．６ｇ，２．７４ｍｍｏｌ）および４−ニトロフェニル６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセタミド−（４−１）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（３−１）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２３）（１．０ｇ，９．０ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリル（２５．０ｍＬ）に溶解した溶液に、モレキュラーシーブ４Å（１．０ｇ）を添加し、この混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物を撹拌しながら冷却（−４０℃）し、ＮＩＳ（１．３ｇ，５．８ｍｍｏｌ）およびＴＭＳ−ＯＴｆ（０．０１２ｇ，１００μＬ，０．５４ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を−４０℃で２４時間継続した。反応混合物にＥｔ３ Ｎ（３００μＬ）を添加し、濾過して、アセトニトリル（５ｍＬ）で洗浄した。濾過物および洗浄液を合わせ、濃縮し、ＣＨ２ Ｃｌ２ （１００ｍＬ）で抽出し、水性Ｎａ２ Ｓ２ Ｏ７ および水で連続的に洗浄して、乾燥させた（Ｎａ２ ＳＯ４ ）。この溶液を濃縮し、残留物をシリカゲルのクロマトグラフィーにかけて（６：４および次に５：５、エーテル：ＥｔＯＡｃ）、淡い茶色の固形物である４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２４）（０．９８ｇ、収率６５％）を得た。
【０１２８】
工程（ｉｉ）：
化合物２４をアセチル化して化合物２５を得る。
【０１２９】
乾燥ピリジン（１０．０ｍＬ）および無水酢酸（１０．０ｍＬ）の冷却混合物（０℃）に、化合物２４（１．０ｇ，０．６３ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を０℃で４時間、室温で２４時間撹拌した。ピリジンおよび無水酢酸を真空下で除去した。トルエン（４ｘ５ｍＬ）を添加し、残留物から蒸発させて、ピリジンおよび無水酢酸をすべて除去し、その結果得られた泡状の固形物をシリカゲル（エーテル：ＥｔＯＡｃ，５：５）のクロマトグラフィーにかけて、４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２５）（０．８２ｇ、収率７８％）を得た。ＨＲＭＳ：確認、（Ｍ＋Ｎａ）＝１６８０．６１７８；Ｃ８５ Ｈ９９ Ｎ３ Ｏ３１ で算出：１６８０．６１５７。
【０１３０】
実施例１８
４−（Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２６）の合成
４−ニトロフェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２５）（４９８ｍｇ，０．３ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解した溶液にラネーニッケル（１００ｍｇ）を添加し、この混合物を室温、５０ｐｓｉで１６時間かけて水素添加した。触媒を濾過によって除去し、メタノールを真空中で除去した。残留物をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶解して、氷浴で冷却し、Ｂｏｃ−カルボネート（１００ｍｇ）およびＥｔ３ Ｎ（１４０ｍｇ）を添加して、混合物を室温で２４時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、生成物を含む残留物を、酢酸エチルおよびヘキサンを溶出液に用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した。留分をＴＬＣで分析し、純粋な生成物を含む留分を一つにし、溶媒を除去して、４−（Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−β−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（６−Ｏ−ベンジル−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２６）（３７０ｍｇ、収率７５％）を得た。ＭＳ：１７２８（Ｍ＋Ｈ）＋ 。
【０１３１】
実施例１９
４−（Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２７）の合成
化合物２６（３５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍｌ）に溶解した溶液に、酢酸（２．０ｍｌ）および過酸化パラジウム（１５０ｍｇ）を添加し、この混合物を５０ｐｓｉで４８時間水素添加した。触媒を濾過によって除去し、残留物をＣＨ２ Ｃｌ２ （１５ｍｌ）に溶解した。この溶液に、Ｅｔ３ Ｎ（１．０ｍｌ）および無水酢酸（２０４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。試薬および溶媒を真空で除去し、残留物をＣＨ２ Ｃｌ２ （２５ｍｌ）に溶解して、水（２ｘ１５ｍｌ）で洗浄して、乾燥した。溶媒の除去によって無色の固形物を得た。これを、ＣＨ２ Ｃｌ２ およびメタノールの混合物を溶出液として用いたシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製した。留分をＴＬＣで分析し、純粋な生成物を含む留分を一つにし、溶媒を除去して、無色の固形物である４−（Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２７）（２６０ｍｇ、収率８６％）を得た。ＭＳ：１４８８（Ｍ＋Ｈ）＋ 。
【０１３２】
実施例２０
４−（アセタミド）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２８）の合成
【０１３３】
工程（ｉ）：
４−（アミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２ａ）の合成
化合物２７（２２２ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （２．０ｍＬ）に溶解した溶液を、ＴＦＡ（２０ｍｌ）で処理し、この混合物を１６時間撹拌した。ＣＨ２ Ｃｌ２ およびＴＦＡを真空で除去し、残留物をヘキサンですり混ぜて、４−（アミノ）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２ａ）（２０５ｍｇ、収率９９％）を得た。
【０１３４】
工程（ｉｉ）：
化合物２ａをアセチル化して化合物２８を得る。
【０１３５】
化合物２（２８ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）をＣＨ２ Ｃｌ２ （２．０ｍｌ）に溶解した溶液を、氷浴で冷却し、塩化アセチル（１１ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）およびＥｔ３ Ｎ（１０ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を１８時間撹拌しつづけた。溶媒および試薬を真空で除去し、残留物をメタノールおよびＣＨ２ Ｃｌ２ を用いたシリカゲル（５ｇ）の小さなカラムで濾過した。目的の化合物を含む留分を一つにし、溶媒を除去して、４−（アセタミド）フェニル（メチル５−アセタミド−４，７，８，９−テトラ−Ｏ−アセチル−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロネート）−（２−＞３）−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−６−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物２８）（２５ｍｇ、収率８７％）を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）＋ １４３０。
【０１３６】
実施例２１
４−（アセタミド）フェニル（５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロン酸）−（２−＞３）−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物３ａ）の合成
化合物２８（２０ｍｇ，０．０１４ｍｍｏｌ）をメタノール（１．０ｍｌ）に溶解した溶液に、メトキシドナトリウム（５．４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を室温で２２時間撹拌した。反応混合物を冷却し、水（０．１ｍｌ）を添加して、撹拌を２４時間継続した。次に、溶液のｐＨをＤｏｗｅｘ５０（Ｈ＋ ）を用いた処理によって６に調節し、濾過した。濾過物から溶媒を除去することにより、無色の固形物（１１ｍｇ）を得た。これを分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（カラム、Ｖｙｄａｃ Ｃ−１８（半製品）；溶出液、２％メタノール水溶液；流速４．０ｍＬ／分、検出、ＵＶ２５４ｎｍ）で精製した。留分を分析用ＨＰＬＣで分析し、目的の生成物を含む留分を一つにして、凍結乾燥して、無色の固形物である４−（アセタミド）フェニル（５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロン酸）−（２−＞３）−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物３ａ）（７ｍｇ、収率５２％）を得た。ＨＰＬＣ：保持時間９．９分（カラム、Ｖｙｄａｃ Ｃ−１８，４．６ｘ２５ｃｍ；溶出液、６０分間０−６０％ＣＨ３ ＣＮ；流速１．０ｍｌ／分；検出、ＵＶ２５４ｎｍ）；ＨＲＭＳ：確認：９５４．３４５３；Ｃ３９ Ｈ５９ Ｎ３ Ｏ２４ で算出：９５４．３５６６。
【０１３７】
実施例２２
４−（１４Ｃ−アセタミド）フェニル（５−アセタミド−３，５−ジデオキシ−α−Ｄ−グリセロ−Ｄ−ガラクト−２−ノヌロピラノスロン酸）−（２−＞３）−（β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−（１−＞４）−（α−Ｌ−フコピラノシル）（１−＞３））−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物３ｂ）の合成
化合物３ａの調製方法に従うが、ＣＨ３ ＣＯＣｌの代わりＣＨ３１４ ＣＯＣｌを用いて、ＶＩＴＲＡＸ  Ｃｏ．社（６６０Ｓ． Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｓｔ．， Ｐｌａｃｅｎｔｉａ， ＣＡ）により、１４Ｃで識別した化合物３ｂを調製した。ＨＰＬＣ：保持時間４．００８および４．２００分（カラム、Ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ Ｃ−１８，５μＭｘ２５ｃｍ；溶出液、水：ＭｅＯＨ［９７：３］；流速１．０ｍｌ／分；検出、それぞれ放射能およびＵＶ２４０ｎｍ）；特異活性：５０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ；放射化学的純度：ＨＰＬＣで＞９９％；化学的純度：２４０ｎｍのＨＰＬＣで＞９９％；全活性：１００μＣｉ；包装：２５ｍＣｉ／ｍＬ  Ｈ２ Ｏ：ＥｔＯＨ，［２：１］クリンプシールバイアル。
【０１３８】
実施例２３
Ｎ−アセチル化誘導体の結合特性の評価：
放射性同位体で識別したアセタミド−フェニルシアリル・ルイスＸ 類似物３ｂの生体内におけるヒト大動脈内皮細胞への結合能を評価した。この類似物は濃度０．１〜０．２ｍＭで活性化細胞に相当に結合するが、これは、Ｓ． Ａ． ＤｅＦｒｅｅｓら，Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１７：６６−７９ （１９９５） に発表されている天然のシアリル・ルイスＸ （式Ａ）の 生体内のＫｄ の値１〜２ｍＭの１０倍である。ＴＮＦ−αで刺激した細胞で認められた結合は、刺激を加えなかった対照細胞の２倍となった。これにより、Ｅ−セレクチン量がＴＮＦ−αの刺激によってこれらの細胞で増加していることが示唆された。結合部位は天然のシアリル・ルイスＸ に特異的であった。なぜなら、濃度１０ｍＭにおける冷却した標識化されていないシアリル・ルイスＸ （式Ａ）は、濃度０．２ｍＭで結合数の５０％近くが置換されたからである。このように、接合可能な類似物３ｂは、このＥ−セレクチン結合測定では天然のシアリル・ルイスＸ より優れていることを確認できた。
【０１３９】
上記の知見は、モノマーのシアリル・ルイスＸ 類似物のＥ−セレクチンへの結合は、このｍＭの範囲内だけで起こり、したがって、これをターゲティングに応用するには弱すぎるという考え方を裏付けるものである。このモノマーに多官能性の足場を結合させるか、リン脂質部分に結合させて、リポソーム構造を形成する必要があると思われる。こうした共有または非共有結合した多価構造を有するため、結合の強さがターゲティングに応用するのに十分なだけ増幅した化合物を作成することは可能である。我々が合成に成功した接合可能な４−アミノフェニルシアリル・ルイスＸ 類似物２ａは、こうした応用にきわめて好適である。
【０１４０】
略号
本明細書では、以下の略号を用いている。
【０１４１】
Ｂｏｃ−カルボネート：ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセン−７
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルフォルムアミド
ＨＲＭＳ：高分解能質量スペクトル
ＭＰ：融点
ＭＳ：質量スペクトル
ＮＩＳ：Ｎ−ヨードスクシニミド
ＰＴＳ．Ｈ２Ｏ：ｐ−トルエンスルホン酸一水塩
ＲＴ：室温
ＴＥＡＢ：臭化テトラエチルアンモニウム
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
ＴＭＳ−ＯＴｆ：トリメチルシリルトリフルロメタンスルホネート
ＴＮＦ−α：組織壊死因子α
【０１４２】
その他の実施形態
本発明を好ましい実施形態を引用して説明してきたが、当業者にとってはその基本的特徴は明らかであり、発明の本質や範囲から外れない限りにおいて、本発明に種々の変更および改善を加え、種々の使用および条件に適応させることができる。当業者は、通常の実験により、本明細書に記載の特定の実施例と等価の多くの物質を認識または確認することができる。こうした等価物質は、本発明の範囲に含まれる。
【０１４３】
本明細書に記載のすべての発行物および特許は、本明細書に参照として組み込まれる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
2004518704.tif 000102
【国際調査報告】
2004518704.tif 000103
2004518704.tif 000104
2004518704.tif 000105
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