(57)【要約】ＨＥＲ−２の濃度上昇によって特徴づけられる増殖性障害を治療する新規な方法で、患者にはＨＳＰ９０阻害剤の有効量が投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ−２の発現濃度が上昇している細胞によって特徴づけられる増殖性障害の患者を治療する方法であって、
該障害の疑いのある患者からの細胞、組織または体液を提供し、
ＨＥＲ−２の発現濃度の指標として、ＨＥＲ−２の遺伝子コピー数、ＨＥＲ−２ｍＲＮＡの量またはＨＥＲ−２蛋白の量の１つまたはそれ以上について該細胞、組織または体液を検査し、および
該濃度が上昇していれば、該患者にＨＳＰ９０阻害剤の医薬的に有効な量を投与する、
ことを含む上記方法。
【請求項２】
該阻害剤がアンサマイシンである請求項１の方法。
【請求項３】
該アンサマイシンがゲルダマイシン、１７−ＡＧＧ、ハービマイシンおよびマクベシンからなる群から選ばれる請求項２の方法。
【請求項４】
該阻害剤が１７−ＡＧＧである請求項１の方法。
【請求項５】
該阻害剤がＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合する阻害剤である請求項１の方法。
【請求項６】
該阻害剤がラジシコールまたはその類縁体である請求項５の方法。
【請求項７】
該検査がＨＥＲ−２メッセンジャーＲＮＡの濃度を測定するために、核酸のハイブリダイゼーションまたはＰＣＲの使用を含む請求項１の方法。
【請求項８】
該検査がＨＥＲ−２の濃度を測定するために、抗生物質の使用を含む請求項１の方法。
【請求項９】
該検査または該投与の１つまたはそれ以上がエクス・ビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で行われる請求項１の方法。
【請求項１０】
該投与が病変内である請求項１の方法。
【請求項１１】
該投与が非経口である請求項１の方法。
【請求項１２】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２倍低い請求項１の方法。
【請求項１３】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも５倍低い請求項１の方法。
【請求項１４】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍低い請求項１の方法。
【請求項１５】
該ＨＳＰ９０阻害剤を投与する前に、該患者の細胞のＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性を検査することを更に含む請求項１の方法。
【請求項１６】
該検査が１つまたはそれ以上の標準の使用を含む請求項１の方法。
【請求項１７】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１００ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項１８】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約７５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項１９】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５０ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２０】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約２５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２１】
該阻害剤のＩＣ50が、該癌細胞で約１０ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２２】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２３】
該方法が該投与後、治療効果をモニターするための検査を更に含む請求項１の方法。
【請求項２４】
該治療効果のモニターがＨＥＲ−２の濃度を示す分子マーカーの測定を含む請求項２３の方法。
【請求項２５】
該分子マーカーがＨＥＲ−２、サイクリンおよびリン酸化ＡＫＴからなる群の１つまたはそれ以上から選ばれる請求項２４の方法。
【請求項２６】
該分子マーカーがＤ１およびＤ２からなる群から選ばれるサイクリンである請求項２３の方法。
【請求項２７】
Ｈｅｒ−２が上昇していない該細胞が該患者からのものである請求項１２の方法。
【請求項２８】
該ＩＣ50値が１つまたはそれ以上の標準を使用して計算される請求項１２の方法。
【請求項２９】
該阻害剤が小さな合成分子である請求項１の方法。
【請求項３０】
該検査が、ＨＥＲ−２の遺伝子複写数を測定するためのサザンブロッティングの使用を含む請求項１の方法。
【請求項３１】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２倍大きい請求項１の方法。
【請求項３２】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも３倍大きい請求項１の方法。
【請求項３３】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも５倍大きい請求項１の方法。
【請求項３４】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍大きい請求項１の方法。
【請求項３５】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２５倍大きい請求項１の方法。
【請求項３６】
Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞ががん細胞である請求項１〜３５のいずれか一項の方法。
【請求項３７】
該がん細胞が乳がん細胞である請求項３６の方法。
【請求項３８】
不均一な細胞集団の中で、上昇したＨｅｒ−２濃度で特徴づけられる細胞を選択的に標的化する方法であって、該方法が
種々のＨｅｒ−２濃度に関する不均一性について細胞集団をサンプリングし、
該不均一性を測定し、および
該集団に、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞に有効であるが、Ｈｅｒ−２が上昇していない該集団の細胞には比較的有効でないＨＳＰ９０阻害剤の量を投与する、
ことを含む上記方法。
【請求項３９】
該阻害剤がアンサマイシンである請求項３８の方法。
【請求項４０】
該アンサマイシンがゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ，ハービマイシンＡおよびマクベシンからなる群から選ばれる請求項３９の方法。
【請求項４１】
該阻害剤が１７−ＡＡＧである請求項３８の方法。
【請求項４２】
該阻害剤がＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合する阻害剤である請求項３８の方法。
【請求項４３】
該阻害剤がラジシコールまたはその類縁体である請求項４２の方法。
【請求項４４】
該測定が、ＨＥＲ−２の濃度を測定するために、核酸のハイブリダイゼーションまたはＰＣＲの使用を含む請求項３８の方法。
【請求項４５】
該検査が、ＨＥＲ−２の濃度を測定するために、抗生物質の使用を含む請求項３８の方法。
【請求項４６】
該測定または該投与の１つまたはそれ以上がエクス・ビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で行われる請求項３８の方法。
【請求項４７】
該投与が病変内である請求項３８の方法。
【請求項４８】
該投与が非経口である請求項３８の方法。
【請求項４９】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞で、少なくとも２倍低い請求項３８の方法。
【請求項５０】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞で、少なくとも５倍低い請求項３８の方法。
【請求項５１】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍低い請求項１の方法。
【請求項５２】
該ＨＳＰ９０阻害剤を投与する前に、該集団内の細胞の部分集団のＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性を検査することを更に含む請求項３８の方法。
【請求項５３】
該検査が１つまたはそれ以上の標準の使用を含む請求項３８の方法。
【請求項５４】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１００ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項５５】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約７５ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項５６】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５０ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項５７】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約２５ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項５８】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１０ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項５９】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５ｎＭまたはそれ以下である請求項３８の方法。
【請求項６０】
該方法が、該投与後、治療効果をモニターするための検査を更に含む請求項３８の方法。
【請求項６１】
該治療効果のモニターがＨＥＲ−２濃度を示す分子マーカーの測定を含む請求項６０の方法。
【請求項６２】
該分子マーカーがＨＥＲ−２、サイクリンおよびリン酸化ＡＫＴからなる群の１つまたはそれ以上から選ばれる請求項６１の方法。
【請求項６３】
該分子マーカーがＤ３８およびＤ３からなる群から選ばれるサイクリンである請求項６１の方法。
【請求項６４】
Ｈｅｒ−２が上昇していない該細胞が該集団からのものである請求項４９の方法。
【請求項６５】
該ＩＣ50値が１つまたはそれ以上の標準を使用して計算される請求項４９の方法。
【請求項６６】
該阻害剤が小さな合成分子である請求項３８の方法。
【請求項６７】
該測定が核酸のハイブリダイゼーションの使用を含む請求項３８の方法。
【請求項６８】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも２倍大きい請求項３８の方法。
【請求項６９】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも３倍大きい請求項３８の方法。
【請求項７０】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも５倍大きい請求項３８の方法。
【請求項７１】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも１０倍大きい請求項３８の方法。
【請求項７２】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも２５倍大きい請求項３８の方法。
【請求項７３】
Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞ががん細胞である請求項３８〜７２のいずれか一項の方法。
【請求項７４】
該がん細胞が乳がん細胞である請求項７３の方法。
【請求項７５】
細胞増殖性障害がＨＥＲ−２濃度の上昇で特徴づけられる細胞増殖性障害の治療のための医薬組成物の調製のためのＨＳＰ９０の使用。
【請求項７６】
ＨＳＰ９０阻害剤が請求項２〜６、１２〜１４および１７〜２２のいずれか一項に記載されている通りである請求項７５の使用。
【請求項７７】
細胞増殖性障害がＨＥＲ−２濃度の上昇で特徴づけられる細胞増殖性障害の治療のための医薬組成物であって、該組成物がＨＳＰ９０阻害剤を含む組成物。
【請求項７８】
該ＨＳＰ９０阻害剤が請求項２〜６、１２〜１４および１７〜２２のいずれか一項に記載されている通りである請求項７７の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、癌の化学療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
以下の記載は本発明の理解に有用な情報を含む。ここに提供する任意の情報が、ここで請求された本発明に先行する技術、または関連した技術であること、または明確にまたは暗黙に引用された任意の出版物が先行する技術であることを認めるものではない。
【０００３】
真核生物の熱ショック蛋白９０Ｓ（ＨＳＰ９０ｓ）はシグナル伝達、細胞周期制御および転写レギュレーションに関与する重要な蛋白を含む広範な蛋白の折りたたみ、活性化および集合に関与するユビキタス  シャペロン蛋白である。ＨＳＰ９０シャペロン蛋白はステロイドホルモン受容体および例えばＲａｆ−１，ＥＧＦＲ，ｖ−Ｓｒｃファミリーキナーゼ、Ｃｄｋ４およびＥｒｂＢ−２（Ｂｕｃｈｎｅｒ  Ｊ．，１９９９，ＴＩＢＳ，２４：１３６−１４１；Ｓｔｅｐａｎｏｖａ，Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，１９９６、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１０：１４９１−５０２；Ｄａｉ，Ｋ．ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２０３０−４）を含むプロテインキナーゼのような重要なシグナル蛋白に関係していることが研究者によって報告されている。研究ではさらに、例えばＨｓｐ７０，ｐ６０／Ｈｏｐ／Ｓｔｉｌ，Ｈｉｐ，Ｂａｇ１，ＨＳＰ４０・Ｈｄｊ２／Ｈｓｊ１、イムノフィリン、ｐ２３およびｐ５０のようなコシャペロンがＨＳＰ９０の機能を助ける可能性が示されている（例えばＣａｌｐｌａｎ，Ａ．，１９９９，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．，２６２−６８参照）。
【０００４】
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓから得られるアンサマイシン（ａｎｓａｍｙｃｉｎ）抗生物質はＨＳＰ９０ｓを阻害することが知られている。これらの抗生物質、例えばハービマイシンＡ（ＨＡ）およびゲルダナマイシン（ＧＭ）、およびラジシコールのような他のＨＳＰ９０阻害剤は、ＨＳＰ９０のＮ端のポケットに強固に結合する（Ｓｔｅｂｂｉｎｓ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｅｌｌ，８９：２３９−２５０）。このポケットは高度に維持され、ＤＮＡジャイレースのＡＴＰ結合部位との相同性は少ない（Ｓｔｅｂｂｉｎｓ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｇｒｅｎｅｒｔ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２：２３８４３−５０）。更に、ＡＴＰとＡＤＰはこのポケットに弱い親和性で結合し、弱いＡＴＰアーゼ活性を有することが示されている（Ｐｒｏｒｏｍｏｕ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｃｅｌｌ，９０：６５−７５；Ｐａｎａｒｅｔｏｕ，Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，１９９８，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１７：４８２９−３６）。Ｉｎ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験で、アンサマイシンおよび他のＨＳＰ９０阻害剤によるこのＮ末端の占有は、ＨＳＰ９０の機能を変え、蛋白の折りたたみを阻害することが示されている。高濃度において、アンサマイシンおよび他のＨＳＰ９０阻害剤はＨＳＰ９０への蛋白基質の結合を妨げることが示されている（Ｓｃｈｅｉｂｅｌ，Ｔ．，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９６：１２９７−３０２；Ｓｃｈｕｌｔｅ，Ｔ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２４５８５−８；Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：８３２４−８３２８）。アンサマイシンはまた、シャペロン関連蛋白基質のＡＴＰ依存性遊離を阻害することが証明されている（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９３：１４５３６−４１；Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６５８０−１６５８７）。いずれにおいても、基質プロテアソーム中でユビキチン依存性過程によって分解される（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｃ．，Ｌ．，ｓｕｐｒａ；Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｎｏ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７０：１６５８０−１６５８７；Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：８３２４−８３２８）
【０００５】
この基質の不安定化は腫瘍と非形質転換細胞で同様に起こり、例えばＲａｆ（Ｓｃｈｕｌｔｅ，Ｔ．Ｗ．ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３９：６５５−９；Ｓｃｈｕｌｔｅ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：２４５８５−８）、核ステロイド受容体（Ｓｅｇｎｉｔｚ，ＢおよびＵ．Ｇｅｈｒｉｎｇ．１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１８６９４−１８７０１；Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．１５：６８０４−１２）、ｖ−ｓｒｃ（Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：８３２４−８３２８）およびＥＧＦ受容体（ＥＧＦＲ）およびＨｅｒ２／Ｎｅｕ（Ｈａｒｔｍａｎｎ、Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ７０：２２１−９；Ｍｉｌｌｅｒ，Ｐ．ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５４：２７２４−２７３０；Ｍｉｍｎａｕｇｈ，Ｅ．Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２７９６−８０１；Ｓｃｈｎｕｒ，Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３８：３８０６−３８１２）のようなある膜貫通チロシンキナーゼ（Ｓｅｐｐ−Ｌｏｒｅｎｚｉｎｏ，Ｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６５８０−１６５８７）のようなシグナルレギュレーターの部分群に特に有効であることが示されている。アンサマイシンによって誘発されたこれらの蛋白の損失によって、あるレギュラトリー経路の選択的崩壊が生じ、細胞周期の特別な相での成長停止、（Ｍｕｉｓｅ−Ｈｅｉｍｅｒｉｃｋｓ，Ｒ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２９８６４−７２）、そのように処理された細胞のアポトーシスおよび／または分化が生じる（Ｖａｓｉｌｅｖｓｋａｙａ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５９：３９３５−４０）。
【０００６】
この種の成長停止が、選択的できる場合は増殖性疾患、即ち癌の治療に重要な結果を齎す。これまでの癌の治療は従来の外科的切除、放射線および／または化学療法に限られ、これらの手技は多少成功したが、より有効で副作用の少ない新しい治療を開発するニーズが残っている。特に、例えばＨＥＲ−２／ｎｅｕの過剰発現で特徴づけられる特別な癌のタイプを標的とする癌治療のニーズが残っている。
【０００７】
ｅｒｂＢ２とも云われるＨＥＲ−２／ｎｅｕ癌遺伝子はｐ１８５として知られるチロシンキナーゼ活性を有する糖蛋白の暗号を規定する（Ｓｃｈｅｃｈｔｅｒ，Ａ．Ｌ．ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：５１３−５１６）。ＨＥＲ−２は上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）ファミリーのメンバーで、他のファミリーのメンバーと部分的に相同性がある。正常成人の組織において、ＨＥＲ−２の発現は低い。しかし、ＨＥＲ−２はヒトの乳癌、肺癌、卵巣およびすい臓腫瘍のかなりの割合を含む多くの腫瘍で過剰発現していることが報告されている（Ｈｙｎｅｓ，Ｎ．Ｅ．とＳｔｅｒｎ，Ｄ．Ｆ．，１９９４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１１９８：１６５−１８４）。ＨＥＲ−２は乳癌の少なくとも２５−３０％で過剰発現していることが報告されている（ＭｃＧｕｉｒｅ＆Ｇｒｅｅｎｅ，１９８９，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：１４８−１５５）。更に悪性乳癌におけるＨＥＲ−２の過剰発現は転移の増加、化学療法抵抗性および低い生存率に相関している（Ｓｌａｍｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５：１７７−１８２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ＨＥＲ−２の過剰発現は哺乳類の増殖性疾患の多くの型に関係し、寄与するので、そのような過剰発現を制御する手段が最も必要である。同時に正常細胞および組織に対する害を避け、最小にする治療が最も望ましい。本発明はこれらのニーズを満たし、同時に関連した利点を提供する。
【０００９】
出願人等は、各種の増殖性障害の典型的な細胞のアンサマイシンＣＮＦ−１０１（“１７−ＡＡＧ”）に対する感受性が、これらの細胞中のＨＥＲ−２の濃度に比例することを見出した。癌遺伝子を標的にする化学療法剤の大半は、その標的蛋白に関して完全に逆に相関し（通常癌遺伝子の標的蛋白の濃度の上昇は、所与の薬物に対する後天的または先天的抵抗性に関係する。）、蛋白が多いほど感受性は低い。（例えばＩｎａｂａ，Ｍ．，１９９７，Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ  ５５：１０３０−１０３７；Ｍｃｌｅｏｄ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ７４：５０８−５１２；Ｋｉｎｓｅｌｌａ，Ａ．ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３０：６２３−６２６；Ｉｎａｂａ，Ｍ．，ｓｕｐｒｅ；Ｍｕｒａｋａｍｉ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．１７：２７７−２８３を参照のこと）。
【００１０】
特に、本発明は、ＨＥＲ−２の発現濃度の上昇に関係した癌を含む細胞増殖性障害患者の治療法に関する。その方法には、ＨＥＲ−２の上昇した濃度を測定する検査とＨＳＰ９０阻害剤の有効治療量の投与が含まれる。好ましい実施形態では、特別な障害は、癌であり、特に乳癌である。
【００１１】
従って、最初の態様において、その方法は増殖性障害の疑いのある患者からの細胞、組織または体液を提供すること、ＨＥＲ−２の１つまたはそれ以上の遺伝子複写数、ＨＥＲ−２ｍＲＮＡの量、またはＨＥＲ−２蛋白の量について、その細胞、組織または体液を検査することを含む。正常細胞と比較してＨＥＲ−２濃度が上昇していれば、その方法は更にＨＳＰ９０阻害剤の医薬品的有効量を患者に投与することを含む。
【００１２】
その阻害剤はアンサマイシンまたは、例えばラディシコール、またはその類縁体のような他の型の低分子のＨＳＰ９０阻害剤であってもよい（米国特許第５，９７７，１６５号，５，６５０，４３０号および５，５９７，８４６号参照）。これらの化合物は合成物または天然物であってもよい。好ましい阻害剤にはゲルダマイシン、１７−ＡＡＧ，ハービマイシン、およびマクベシンが含まれる。阻害剤はＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位と結合するのが好ましく、また癌細胞に対して、正常細胞よりも好ましくは少なくとも２倍、少なくとも５倍、最も好ましくは少なくとも１０倍低いＩＣ50を有することがより好ましい。その阻害剤は約１００ｎＭまたはそれ以下のＩＣ50を示すことが好ましい。他の実施形態では７５ｎＭまたはそれ以下、５０ｎＭまたはそれ以下、２５ｎＭまたはそれ以下、１０ｎＭまたはそれ以下、および５ｎＭまたはそれ以下である。好ましい実施形態では、その阻害剤は１７−ＡＡＧである。
【００１３】
検査の段階で、好ましい実施形態には、ＨＥＲ−２遺伝子複写数またはＨＥＲ−２メッセンジャーＲＮＡ濃度を測定するための核酸ハブリッド形成またはＰＣＲの使用が含まれる。加えて、または別法として、例えば当技術分野で周知の抗体に基づいた各種の任意の技術を用いてＨＥＲ−２蛋白の存在を検査することができる。検査はｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で行うことができ、後者は例えば細胞生検による。
【００１４】
ＨＳＰ９０阻害剤の投与は、ｅｘ  ｖｉｖｏまたは例えば非経口投与、末梢投与または病変内投与で、患者に直接投与してもよい。治療としての特別なＨＳＰ９０阻害剤の投与に先立って、１つまたはそれ以上のＨＳＰ９０阻害剤に対する患者の感受性を測定するために検査を行ってもよい。投与について適切な治療量を決定するために、この検査は異常細胞および／または正常細胞について同様に行うことができる。検査の段階で、陽性および／または陰性標準を用いてＨＥＲ−２濃度の測定および／または阻害化合物の感受性を評価してもよい。
【００１５】
いくつかの実施形態において、本発明の方法には、治療効果をモニターするために、ＣＳＰ９０阻害剤投与後１つまたはそれ以上の段階を含めることができる。この段階は、例えばＨＥＲ−２ｍＲＮＡ，サイクリンおよび／またはリン酸化ＡＫＴの濃度のような、ＨＥＲ−２の濃度の指標である分子マーカーの測定を含んでもよい。サイクリンはＤ1とＤ3からなる群から選ぶのが好ましい、何故ならばこれらの分子種は当技術分野で周知であるからである。この段階で標準を用いてもよい。
【００１６】
本発明の利点の１つは、ＨＥＲ−２の濃度の上昇を示している細胞によって特徴づけられる増殖性障害を、これらの特別な細胞に対して有効であるが、正常細胞には比較的無効であるＨＳＰ９０阻害剤の量を投与することによって、選択的に標的にする能力である。他の利点は図、詳細な明細書および後に示す請求項から明らかであろう。
【００１７】
定義
ここで用いられているように、次の用語は次の意味を有する。
【００１８】
「ＨＥＲ−２発現濃度の上昇」は正常細胞に比べてより多いＨＥＲ−２蛋白の存在を意味する。これは、遺伝子増幅（複数の遺伝子の複写）、転写および／または既存のＨＥＲ−２遺伝子およびｍＲＮＡからの翻訳の亢進、および／または翻訳後の安定性の増加の結果の可能性がある。「ＨＥＲ−２の上昇」は１つまたはそれ以上のＨＥＲ−２遺伝子の複写、ｍＲＮＡ転写または蛋白の増加を意味する。
【００１９】
「ＨＳＰ９０阻害化合物」または「ＨＳＰ９０阻害剤」はＨＳＰ９０シャペロン蛋白および／またはＨＳＰ９０依存性蛋白の構造および／または機能を崩壊するものである。ＨＳＰ９０蛋白は事実高度に維持されている。（例えばＮＣＢＩ受け入れ番号＃Ｐ０７９００およびＸＭ００４５１５（それぞれヒトαおよびβＨＳＰ９０）、Ｐ１１４９９（マウス）、ＡＡＢ２３６９（ラット）、Ｐ４６６３３（チャイニーズハムスター）、ＪＣＩ１４６８（チキン）、ＡＡＦ６９０１９（フレッシュフライ）、ＡＡＣ２１５６６（ゼブラフィッシュ）、ＡＡＤ３０２７５（サーモン）、Ｏ０２０７５（ピッグ）、ＮＰ０１５０８４（酵母）およびＣＡＣ２９０７１（フロッグ）を参照）。Ｇｒｐ９４およびＴｒａｐ−１は、ここで用いられているＨＳＰ９０の定義の範囲に該当する関連分子である。従って、同様の予想される効果と阻害能力を有する多くの異なったＨＳＰ９０ｓがある。本発明のＨＳＰ９０阻害剤は特別な宿主患者のＨＳＰ９０に特に方向づけることができ、または異種由来のＨＳＰ９０同族体またはＨＳＰ９０変異種に対する反応性に基づいて同定できる。使用される阻害剤は環状構造の抗生物質、例えばベンゾキノンアンサマイシン、または他の型の分子、例えばアンチセンス核酸またはラディシコールおよびその類縁体であってもよい。
【００２０】
「アンサマイシン」にはゲルダマイシン、１７−ＡＡＧ，ハービマイシンおよびマクベシンが含まれるが、これらに限定されない。特別なアンサマイシンは１７−アリールアミノ１７−デメトキシゲルダマイシンを意味する。使用できるこれらまたは他のアンサマイシンは当技術分野で周知である。例えば米国特許第３，５９５，９５５号，４，２６１，９８９号，５，３８７，５８４号および５，９３２，５６６号を参照のこと。アンサマイシンは合成、天然由来または標準的な化学誘導体合成技術を用いて作られる、天然由来のアンサマイシンの任意の誘導体であってもよい。
【００２１】
「医薬品的に有効な用量」は治療上または予防上の効果を提供できる量を意味する。治療上および／または予防上の効果を得るために本発明によって投与される化合物の特別な量は、勿論、例えば投与された特別な化合物、投与経路、治療されている状態および治療されている個人等の症例を取り巻く特別な環境によって決定される。典型的な一日用量（単回または分割投与）は約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは５０ｍｇ／ｋｇを含む。好ましい一日用量は一般に約０．０５ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ、理想的には約０．１ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇｍｇ／ｋｇである。
【００２２】
好ましい治療効果は、例えば乳癌のような増殖性障害の特徴を有する細胞の成長をある程度阻害することである。治療効果はまた、通常、細胞の成長または細胞の塊のサイズ以外の１つまたはそれ以上の症状を完全に軽快する必要はないが、ある程度軽快する。治療効果には例えば１）細胞数の減少；２）細胞のサイズの減少；３）例えば癌の転移の場合は、末梢器官への細胞の浸潤の阻害（即ち、ある程度の遅延、好ましくは停止）３）腫瘍の転移の阻害（即ち、ある程度の遅延、好ましくは停止）；４）細胞の成長のある程度の阻害；５）障害に関連した１つまたはそれ以上の症状のある程度の軽快。
【００２３】
用語「ＩＣ50」はある集団の５０％の細胞または、例えばより大きな細胞集団内の癌細胞対非癌細胞のようなある特別な細胞型の死滅を達成するのに必要なＨＳＰ阻害剤の濃度として定義される。必ずしも必要ではないが、ＩＣ50は好ましくは増殖性障害を示す細胞に対してよりも、正常細胞に対して大きいことが好ましい。
【００２４】
「標準」とは陽性または陰性の対照を意味する。ＨＥＲ−２発現濃度の体系での陰性対照は、例えば正常細胞と相関するＨＥＲ−２（遺伝子、転写および／または対応した蛋白産物）の量を有する標本である。陰性対照はまた、例えばｍＲＮＡまたは蛋白のようなＨＥＲ−２遺伝子または遺伝子産物を含まない標本を含んでもよい。対照的に、陽性対照はＨＥＲ−２遺伝子または遺伝子産物を含み、例えば乳癌のような増殖性障害に見られるような過剰発現に相関した量を含むのが好ましい。対照は細胞または組織標本から得てもよく、または不動化されたまたは不動化されていない精製されたリガンド（またはリガンドがない）を含むものから得てもよい。幾つかの実施形態では１つまたはそれ以上の対照が診断の「ディップスティック」の形であってもよい。
【００２５】
「選択的に標的にする」は、例えば比較的低いか正常なＨＥＲ−２濃度に対して高いＨＥＲ−２濃度の細胞の場合において、他の細胞型に比べて、１つの細胞型により大きな程度で影響することを意味する。
【００２６】
一般
本発明はＨＥＲ−２の過剰発現の細胞は、例えば正常細胞のようなＨＥＲ−２を過剰に発現していない細胞よりもＨＳＰ９０により敏感であると言う所見に基づいた、高濃度のＨＥＲ−２に関係した細胞増殖性障害の治療法に関する。いずれにせよ、治療前の診断のために、また治療後の評価がなされる実施形態において、ＨＥＲ−２の濃度を測定してもよい。
【００２７】
ＨＥＲ−２濃度の測定
蛋白濃度を決定し、細胞内および体液検体中の蛋白濃度を測定し、または予測する多くの異なった型の方法が当技術分野で周知である。非直接的な方法には、核酸のハイブリダイゼーションおよび、例えばポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）を用いる増幅が含まれる。これらの技術は当業者には周知であり、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｈ＆Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，Ａｕｓｕｂｅｌ，ａｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４，で考察されており、例えば米国特許第４，６９９，８７７号，４，９１８，１６２号，４，９６８，６０３号および５，８４６，７４９号のように患者検体でＨＥＲ−２／ｎｅｕの定量、検出および相対活性に特別に応用されている。用いることができる２つの遺伝子技術について次に簡単に考察する。
【００２８】
ａ．免疫検出
細胞がＨＥＲ−２を過剰発現しているか、または上昇したＨＥＲ−２濃度を含むか否かは、例えばイムノブロティング、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロティング、イムノプレシピテーション、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、およびＨＥＲ−２に向けられた抗体を使用するデリバティブ技術のような従来の周知の技術を使用して測定できる。例えば乳癌細胞でのＨＥＲ−２の発現は、例えばＤａｋｏ  Ｈｅｒｃｅｐ（商標）試験（Ｄａｋｏ  Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）のような免疫組織化学的アッセイを用いて測定できる。Ｈｅｒｃｅｐ（商標）試験は腫瘍組織標本におけるＨＥＲ−２の過剰発現を検出するためにデザインされた抗体染色アッセイである。この特別なアッセイはＨＥＲ−２の発現を４つのレベルに順位づける。即ち０，１，２および３で、３はＨＥＲ−２の最高の発現レベルを示す。正確な定量は、例えばＰｒｅｓｓ，Ｍ，ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １３：２２５Ａに記載されている自動細胞イメージングシステム（ＡＣＩＳ）を用いて増強できる。
【００２９】
ポリクロナールまたはモノクロナール抗体は様々な商業的供給者から購入でき、または、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ；Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）に記載されたような周知の方法を用いて製造できる。
【００３０】
ｂ．核酸技術
ｉ．ＰＣＲ
ＨＥＲ−２蛋白の過剰発現とそれを暗合化する遺伝子の増幅の間に高い相関性が報告されているので、ＨＥＲ−２過剰発現は核酸の濃度で測定することができる。これを検査する１つの方法はＲＰ−ＰＣＲの使用である。ＨＥＲ−２のゲノムおよびｃＤＮＡ配列は周知である。標準的な周知の技術を用いて特別なＤＮＡプライムを作ることができ、ついで既に細胞中に存在するテンプレートを増幅するために用いることができる。この１例はＫｕｒｏｋａｗａ、Ｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：５８８７−５８９４（２０００）に記載されており（配列５’−ＴＣＴＧＧＡＣＧＴＧＣＣＡＧＴＧＴＧＡＡ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．１）を有するプライマーおよび配列５’−ＴＧＣＴＣＣＣＴＧＡＧＧＡＣＡＣＡＴＣＡ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．２）を有する反対のプライマーが記載されている。）  ＰＣＲは正常と異常細胞、例えば癌細胞と非癌細胞の間に定量的な差が認められるように標準化できる。例えば濃度計を用いる周知の方法を用いて、ＰＣＲを用いて増幅された核酸濃度を定量および／または比較できる。
【００３１】
ｉｉ．ハイブリダイゼーションに基づく技術
同様に、例えばノザンおよび／またはサザンブロティングのような、蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）アッセイおよび他のアッセイを使用できる。これらは、ＨＥＲ−２遺伝子またはｍＲＮＡと、上記のＰＣＲプライマーについてと同じまたは類似した方法でデザインできる対応した核酸プローブとの間の核酸ハイブリダイゼーションに依存する。例えば、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ＭＳ，およびＰｒｅｓｓ  ＭＦ，１９９９，Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，Ｓｕｐｌ．１２：１０８−１６を参照。ＦＩＳＨについては、この核酸プローブは、好ましくはハイブリダイゼーションに干渉しない、例えばフルオレッセンおよび／またはロダミンのような蛍光分子と結合でき、その蛍光はハイブリダイゼーション後に測定できる。例えばＫｕｒｏｋａｗａ，Ｈ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：５８８７−５８９４（２０００）（配列５’−ＦＡＭ−ＣＡＧＡＡＧＧＣＣＡＡＧＴＣＣＧＣＡＧＡＡＧＣＣ−ＴＡＭＲＡ−ｐ−３’（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．３）を有する核酸プローブを記載している）。上記のＡＣＩＳに基づいた方法はアッセイをより定量的にするために用いることができる（ｄｅ  ｌａ  Ｔｏｒｒｅ−Ｂｕｅｎｏ，Ｊ，ｅｔ  ａｌ，２０００，Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １３；２２１  Ａ）。
【実施例１】
【００３２】
種々の量のＨＥＲ−２を発現している癌細胞への１７−ＡＡＧ（ＣＮＦ−１０１）の抗増殖性効果
ヒト癌細胞細胞系ＢＴ−４７４、ＳＫＢＲ−、ＳＫＯＶ−３、ＭＣＦ−ＨＥＲ−２、ＭＣＦ−７、ＭＤＡ−４６８、ＭＤＡ−２３１、Ｔ４７−ＤおよびＭＤＡ４３５はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（“ＡＴＣＣ；”  Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＵＳＡ）から得た。細胞系は５％胎児ウシ血清（ＢＲＬ）、２ｍＭグルタミンおよびペニシリンとストレプトマイシン各５０Ｕ／ｍｌを補給したＤＭＥＭ／Ｆ２／１培地に５％ＣＯ2雰囲気中、３７℃で維持した。
【００３３】
細胞を１から１０００ｎＭの濃度のＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で２４時間処理した。処理後、核をエチジウムブロマイドで染色し、フローサイトメトリーで分析した。核をフローサイトメトリーアッセイのために分離し、エチジウムブロマイドで染色し、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ蛍光−活性化セルソーターを用いて分析した。Ｍｕｌｔｉｃｙｃｌｅプログラムソフトウエアを用いて統計データを得た。
【００３４】
図１に示したように、検討した細胞系において、ＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）処理は試験したすべての細胞系において成長を停止した。最高のＨＥＲ−２濃度を発現しているこれらの細胞はＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（図１）に最も敏感であった。図１はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるヒト乳癌細胞のパネルへのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）の抗増殖性効果を示す。内因性の高いＨＥＲ−２（ＢＴ−４７４，ＳＫＢＲ−３，ＳＫＯＶ−３，ＭＤＡ４３５）濃度を発現している細胞系は低い濃度のＨＥＲ−２ライン（ＭＤＡ−４６８，ＭＤＡ−２３１，Ｔ４７Ｄ）よりもＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）に顕著に感受性が高い。更に、ＨＥＲ−２濃度だけが異なる類似遺伝子対からの２つの細胞間の感受性の１０倍の差は、細胞系間の潜在的な変動よりも、むしろＨＥＲ−２が重要な因子であることを示す。
【実施例２】
【００３５】
ＨＥＲ−２陰性細胞およびＨＥＲ−２過剰発現の細胞におけるＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）誘発蛋白発現の変化
ＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理したＭＣＦ−７（ＨＥＲ−２陰性）またはＢＴ−４７４（ＨＥＲ−２＋＋＋）細胞系における、有糸分裂サイクリン、ＨＥＲ−２、ＡＫＴおよびＲａｆ１の発現濃度を免疫ブロット分析を用いて評価した。５０ｎＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）または５００ｎＭ（１７−ＡＡＧ）のいずれかで処理した細胞からの溶解産物を抗サイクリン  Ｄ1、抗サイクリン  Ｄ3、抗サイクリン  ｃｄｋ４、抗ＡＫＴまたは抗Ｒａｆ１抗体を用いてウエスタンブロットで分析した。抗体はすべてＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ  ）から入手した。処理した細胞を収穫し、ＰＢＳで洗浄し、ＮＰ４０溶解緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１％Ｎｐ４０、１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ、４０ｍＭ  Ｎａｆ、１ｍＭ  Ｎａ3ＶＯ4，１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライドおよびリウペプチン、アプロチニンおよびソイビーントリプシン阻害剤各１０μｇ／ｍｌ）で、氷上で３０分間溶解した。溶解産物を１５，０００ｘｇで１０分間遠心し、蛋白濃度をビシンコニン酸蛋白アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）で測定した。全蛋白の当量をＳＤＳ−ＰＡＧＥで溶解し、電子ブロティングでＩｍｍｏｂｉｌｏｎ  ＰＶＤＦ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に移した。ブロットを４℃でＴＢＴ−Ｔ（０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０  ＴＢＳ、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、１５０ｍＭ  ＮａＣＬ）中の５％脱脂ミルク中で一昼夜ブロックし、ついで抗ＨＥＲ−２、抗サイクリン  Ｄ3、抗ｃｄｋ４、抗ＡＫＴまたは抗Ｒａｆ１抗体を用いてプローブにした。ＨＲＰ結合二次抗体とともに培養後、蛋白を化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で検出した。
【００３６】
図２はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理した後のＨＥＲ−２濃度の変化を示す。１７−ＡＡＧによるＢＴ−４７４細胞（ＨＥＲ−２の過剰発現の）の処理でサイクリン  Ｄ1およびサイクリン  Ｄ3が急速に減少した。このサイクリンＤ1およびサイクリン  Ｄ3蛋白濃度の減少はＭＣＦ−７細胞系（ＨＥＲ−２の低発現）では見られなかった（図２）。ｃｄｋ４およびＡＫＴの蛋白濃度は１７−ＡＡＧによる処理後、ＨＥＲ−２の過剰発現の細胞またはＨＥＲ−２の低発現細胞のいずれでも影響がなかった（図２）。サイクリン  Ｄ1およびサイクリン  Ｄ3は本発明によって、ＨＥＲ−２の発現およびＨＳＰ９０阻害剤によって誘発される、それに対する阻害効果の間接的なモニターに使用できる。
【実施例３】
【００３７】
ＡＫＴ発現、リン酸化および活性へのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）の影響
図３はｉｎ  ｖｉｔｒｏでＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理した後のＨＥＲ−２＋＋＋およびＨＥＲ−２細胞中の蛋白濃度、リン酸化状況およびＡＫＴのキナーゼ活性の変化を示す。１ｕＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で２４時間処理した細胞は洗浄し、収穫し、ＮＰ−４０中で溶解した。溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで溶解し、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ  ＰＶＤＦ膜に移し、５％脱脂ミルク中でブロックし、ＡＫＴに対する抗体またはＵｐｓｔａｔｅ社から入手したチロシンリン酸化ＡＫＴ（ｐｈｏｓｐｈｏ―ＡＫＴ）を用いてプローブにした。ＨＲＰ−結合二次抗体と培養後、化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて蛋白を検出した。免疫沈降後、ＡＫＴキナーゼ活性を組み替えＡＫＴ基質蛋白グリコーゲンシンターゼキナーゼー１（ＧＳＫ−１）および３２ｐをラベルしたＡＴＰを用いる標準キナーゼアッセイで評価した。ＡＫＴは腫瘍細胞の中心的なキナーゼである。蛋白自身はＨＳＰ９０クライアントでなく、従ってＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）による処理は蛋白の顕著な損失を生じない。しかし、乳癌（即ち、ＨＥＲ−２）におけるＡＫＴ経路の主要な上流レギュレーターは減成しているので、ＡＫＴのリン酸化（従って蛋白の活性）に必要なシグナルは失われ、処理された細胞からホスホ−ＡＫＴは消失する。本実施例はまた、ＨＥＲ−２濃度とＡＫＴ阻害の間の定量的関係を示す。１００ｎＭＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）は、高ＨＥＲ−２（ＳＫＢｒ３）細胞のＡＫＴ活性を３時間以内に完全になくすが、その１０倍の量でも、ＨＥＲ−２低ＭＣＦ−７ラインのＡＫＴキナーゼ活性の部分的な損失を生じるのに１２時間を要する。
【実施例４】
【００３８】
ヒト細胞系のパネルにおけるＡＫＴおよびリン酸化ＡＫＴ濃度へのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）の影響
図４はｉｎ  ｖｉｔｒｏで１ｕＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理した後の乳癌細胞系のパネル中の蛋白濃度とＡＫＴのリン酸化状況の変化を示す。細胞を１ｕＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で２４時間処理し、洗浄し、収穫し、ＮＰ−４０中で溶解した。溶解産物をＳＤＳ−ＰＡＧＥで溶解し、Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ  ＰＶＤＦ膜に移し、５％脱脂ミルク中でブロックし、ＡＫＴに対する抗体またはＵｐｓｔａｔｅ社から入手したチロシンリン酸化ＡＫＴ（ｐｈｏｓｐｈｏ―ＡＫＴ）を用いてプローブにした。ＨＲＰ−結合二次抗体と培養後、化学発光（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を用いて蛋白を検出した。ＡＫＴは腫瘍細胞における主要なキナーゼである。蛋白自身はＨＳＰ９０クライアントでなく、従ってＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）による処理は蛋白の顕著な損失を生じない。しかし、乳癌（即ち、ＨＥＲ−２）におけるＡＫＴ経路の主要な上流レギュレーターは減成しているので、ＡＫＴのリン酸化（従って蛋白の活性）に必要なシグナルは失われ、処理された細胞からホスホ−ＡＫＴは消失する。本実施例は、ＣＮＦ−１０１によって誘発されたＨＥＲ−２の分解は複数の細胞系でＡＫＴ活性の損失を生じるが、高ＨＥＲ−２（ＢＴ−４７４，ＳＫＢＲ−３）の細胞系は、低ＨＥＲ−２発現（Ｕ８７，ＭＣＦ−７，ＭＤＡ−４６８）の細胞系に比べて、より速い、完全なＡＫＴの損失を示すことを証明している。
【実施例５】
【００３９】
乳癌異種移植についての試験
図５はｉｎ  ｖｉｔｖｏでＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）による処理後の各時点でのＨＥＲ−２＋＋＋乳癌異種移植中のＨＳＰ９０クライアント蛋白（ＨＥＲ−２）濃度の変化および下流標的蛋白ＡＫＴのリン酸化状況の変化を示す。ＢＴ−４７４乳癌細胞をＳｗｉｓｓ  ｎｕ／ｎｕマウスの側腹部の皮下に移植し、直径が５ｍｍになるまで放置した。動物はＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）の最適用量で腹膜内処理され、その後、腫瘍は指示された時間に除去された。腫瘍組織は除去するときに瞬間凍結された。分析のために、組織は急速解凍し、溶解され、ウエスタンブロティングでＨＥＲ−２，ＡＫＴおよびホスホＡＫＴをアッセイした。本実施例はＣＮＦ−１０１が誘発したＨＥＲ−２の分解とＡＫＴ活性の損失は、単にｉｎ  ｖｉｔｒｏの現象ではなく、その薬物がこれらの主要なメカニズムに基づく同じ強度と動態の変化を全動物の設定で誘発することを示している。
【００４０】
実施例２−５を要約すれば、培養細胞にＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）を添加するとＨＥＲ−２の過剰発現の細胞で最も強い抗増殖性効果をもたらす。例えば、異なった量のＨＥＲ−２を発現している細胞系（ＢＴ−１７４，ＳＫＢＲ−３＞ＳＫ−ＯＶ−３＞ＭＣＦ−ＨＥＲ−２＞ＭＤＡ−４３５＞ＭＣＦ−７；ＭＤＡ−２３１；ＭＤＡ−４６８＞Ｔ４７−Ｄ）で、高い量のＨＥＲ−２を発現している細胞は、低い量のＨＥＲ−２を発現している細胞に比べて、ＨＳＰ阻害剤、ＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）に、より感受性であった（図１参照）。
【００４１】
５０ｎＭまたは５００ｎＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理後の、ＨＥＲ−２発現亢進細胞（ＢＴ−４７４）およびＨＥＲ−２の低い細胞における蛋白発現の０，４，１２および２４時間でのウエスタンブロットは、ＨＥＲ−２発現亢進細胞の処理がサイクリン  Ｄ1およびサイクリン  Ｄ3蛋白発現の減少をもたらしたことを示した（図２）。ＨＥＲ−２陰性の細胞がＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理されたときには、この減少は見られなかったが、その薬物は、両細胞型でＨＳＰ９０クライアント蛋白Ｒａｆ−１の分解を生じた（図２）。
【００４２】
更に、ＨＥＲ−２発現亢進細胞のＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）による処理はＡＫＴ活性とリン酸化（＝活性）ＡＫＴ（図３および４）の急速な損失の結果を招いた。このＡＫＴ活性とリン酸化ＡＫＴの急速な損失はＨＥＲ−２発現の低い細胞では見られなかった（図３および４）。ＡＫＴのリン酸化濃度と活性へのＣＮＦ−１０１の影響は、ＨＥＲ−２発現亢進細胞がＨＥＲ−２発現の低い細胞と比較して、ＨＳＰ９０阻害剤に、より感受性であることを示す図１のデータと相関している。同様に、ＨＥＲ−２の発現が最高である細胞は、最も速いＡＫＴのリン酸化の損失を示し、これは図１に示した細胞の増殖の阻害がＡＫＴ活性のダウンレギュレーションによるものであること、およびＡＫＴ活性の損失自体がＨＥＲ−２の分解によって誘発されることを示唆している。
【００４３】
５０ｍｇ／ｋｇのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）で処理されたＢＴ−４７４異種移植の蛋白発現とＡＫＴリン酸化濃度の分析において、ＨＥＲ−２蛋白濃度が低下し、ＡＫＴ蛋白濃度は一定のままであったが、リン酸化された（活性な）ＡＫＴ蛋白の量は急速に低下したことを示した（図５）。これらのデータはｉｎ  ｖｉｔｒｏで示されたＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）の効果は、ｉｎ  ｖｉｖｏにも当てはまることを示している。
【実施例６】
【００４４】
医薬組成物の製剤化と投与
ゲルダマイシンは、受け入れ番号ＮＲＲＬ３６０２でＵ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ  Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｐｅｏｒｉａ．Ｉｌｌ，ＵＳＡに預託されているＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓの継代培養を使用して、米国特許第、５９５，９５５号によって作ることができる。この化合物の多くの誘導体は、標準的な技術によって、特許第４，２６１，９８９，５，３８７，５８４号および５，９３２，５６６号に特定されたように作ることができる。
【００４５】
当業者は、例えばＧｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ‘ｓ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ；Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ；ａｎｄ  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ．）Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａで考察されているような、本発明の使用に採用できる製剤および投与技術に精通している。
【００４６】
この発明の方法に使用される化合物は、単独でまたは医薬組成物中の医薬品的に許容される担体、賦形剤または希釈剤と併用して標準的な医薬品投与法で投与できる。化合物は経口または、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸および局所投与経路を含む非経口で投与できる。
【００４７】
例えば、本発明の治療または医薬品の組成物は、治療が必要な領域に局所的に投与できる。これは、例えば手術中の局所注射、クリーム、軟膏、注射、カテーテルまたはシアラスティック膜または繊維を含む、多孔性、非多孔性、またはゼラチン様の物質の内からつくられた移植のような局所使用によって達成できるが、これらに限られない。腫瘍または新生物また前新生物組織部位（または以前の部位）での直接注入による投与も可能である。
【００４８】
更にまた、治療または医薬組成物は小包，例えば  リポソームのような小包に入れてデリバリーできる（例えばＬａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４９：１５２７−１５３３；Ｔｒｅａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｆｉｄｌｅｒ（ｅｄｓ），Ｌｉｓｓ，Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．３５３−３６５参照）。
【００４９】
本発明の方法の中で使用される医薬組成物は制御された放出システムでデリバリーできる。１つの実施形態では、ポンプを使用できる（Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ，８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３２１：５７４）。加えて、制御された放出システムは治療標的に近接して配置できる（Ｇｏｏｄｓｏｎ，１９８４，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８参照）。
【００５０】
本発明の方法の中で使用される医薬組成物は、例えば錠剤、トローチ、ロゼンジ、水性または油性の懸濁物、分散性粉末または顆粒、エマルジョン、硬カプセルまたは軟カプセルまたはシロップまたはエリキシルのような経口使用に適した形で活性成分を含むことができる。経口使用を意図した組成物は、医薬組成物の製造技術として周知の任意の方法によって調製でき、そのような組成物は、医薬品として上品で口に合う製剤を提供するために、甘味料、芳香剤、着色剤および防腐剤からなる群から選ばれた１つまたはそれ以上の添加剤を含んでもよい。表は、錠剤の製造に適した医薬品的に許容される毒性のない賦形剤を混合した活性成分を含む。これらの賦形剤は、例えば澱粉、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、燐酸カルシウムまたは燐酸ナトリウムのような希釈剤；微結晶セルローズ、クロスカルメロース、コーンスターチまたはアルギン酸のような造粒および脱造粒剤；例えばゼラチン、ポリビニルピロリドンまたはアラビアゴムのような結合剤および例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような潤滑剤であってもよい。この錠剤はコーティングしなくてもよく、または薬物の味を隠すためにまた胃腸管での崩壊と吸収を遅らすために、周知の方法でコーティングしてもよく、それによって、長時間に亘って持続した活性を提供できる。例えばヒドロキシプロピルメチルセルローズまたはヒドロキシプロピルセルローズのような水溶性の味を隠す物質、またはエチルセルローズ、セルローズアセテートブチレートを使用してもよい。
【００５１】
経口用の製剤は、例えば炭酸カルシウム、燐酸カルシウムまたはカオリンのような不活性な固体の希釈剤と活性成分を混合した硬ゼラチンカプセルとして、または、例えばポリエチレングリコールのような水溶性担体、または例えばピーナッツ油、液状パラフィンまたはオリーブ油のような油性媒体と活性成分を混合した軟ゼラチンカプセルとして提供できる。
【００５２】
水溶性懸濁液は、水溶性懸濁液を製造するのに適した賦形剤と混合した活性物質を含む。そのような賦形剤は、例えばカルボキシメチルセルローズナトリウム、メチルセルローズ、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントおよびアラビアゴムのような懸濁剤である。分散剤または湿潤剤は、例えば天然のレシチン、例えばポリオキシエチレンステアレートのようなアルキレンオキサイドと脂肪酸の縮合物または、例えばヘプタデカエチレンオキシセタノールのようなエチレンオキサイドと長鎖脂肪アルコールの縮合物、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレエートのようなエチレンオキサイドと脂肪酸とヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合物、または例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートのようなエチレンオキサイドと脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合物である。水溶性懸濁物は、例えばエチルまたはｎ−プロピルーｐ−ヒドロキシベンゾエートのような１つまたはそれ以上の防腐剤、１つまたはそれ以上の着色剤、例えばショ糖、サッカリンまたはアスパルテームのような１つまたはそれ以上の甘味剤を含んでもよい。
【００５３】
油性の懸濁物は、例えばピーナッツ油、ゴマ油またはココナッツ油のような植物油、または液状パラフィンのような鉱油中に活性成分を懸濁して製剤化できる。油性の懸濁物は、例えば蜜蝋、硬パラフィンまたはセチルアルコールのような増濃剤を含んでもよい。口に合う経口製剤を提供するために、上記のような甘味剤および芳香剤を加えてもよい。これらの組成物は例えばブチル化ヒドロキシアニソールまたはα−トコフェロ−ルの様な抗酸化剤を添加して保存できる。
【００５４】
水の添加による水性懸濁物の調製に適した分散性粉末または顆粒は、活性成分を分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１つまたはそれ以上の防腐剤との混合物中に提供する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤の例は、既に上に記載した通りである。例えば甘味剤、芳香剤および着色剤のような追加の賦形剤があってもよい。組成物は例えばアスコルビン酸のような抗酸化剤を添加して保存してもよい。
【００５５】
本発明の方法に用いられる医薬組成物は、水中油型のエマルジョンの形であってもよい。油性層は、例えばオリーブ油またはピーナツ油のような植物油または液状パラフィンまたはこれらの混合物のような鉱物油であってもよい。適切な乳化剤は、例えば大豆レシチンのような天然のホスファチドおよび、例えば脂肪酸とソルビタンモノオレエートのような脂肪酸と無水ヘキシトールから誘導されたエステルまたは部分エステル、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートのようなその部分エステルとエチレンオキサイドとの縮合物であってもよい。エマルジョンは甘味剤、芳香剤、防腐剤および抗酸化剤を含んでもよい。
【００５６】
例えばグリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはショ糖のような甘味剤を用いてシロップおよびエリキシルを製剤化できる。そのような製剤はまた粘滑剤，防腐剤、芳香剤および着色剤、および抗酸化剤を含んでもよい。
【００５７】
医薬組成物は滅菌した注射用水溶液の形であってもよい。使用が許容できる小包および溶剤は水、リンゲル溶液および等張性塩化ナトリウム溶液である。
【００５８】
滅菌した注射用製剤は、活性成分が油層に溶解した滅菌した注射用水中油型のミクロエマルジョンであってもよい。例えば活性成分は先ず、大豆油とレシチンの混合物に溶解してもよい。ついで油の溶液を水とグリセロールの混合物に導入し、ミクロエマルジョンを形成するために加工される。
【００５９】
注射用溶液またはミクロエマルジョンは、局所のボーラス注入によって患者の血流に導入してもよい。別法として、本化合物の循環濃度を一定に保つような方法で、溶液またはミクロエマルジョンを投与することが有利であることがある。そのような一定の濃度を維持するために、連続的な静脈内デリバリー用具を使用できる。そのような用具の一例はＤｅｌｔｅｃ  ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（商標）モデル５４００静脈内ポンプである。
【００６０】
医薬組成物は、滅菌した注射用水溶液または筋肉内および皮下投与用の油性の懸濁物の形であってもよい。懸濁物は上に記載した適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、周知の技術によって製剤化してもよい。滅菌した注射用製剤は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液のような、非毒性の非経口が許容される希釈剤または溶剤中の滅菌した注射用溶液または懸濁物であってもよい。更に、便宜上、滅菌した不揮発性油が溶剤または懸濁媒体として用いられる。この目的に、合成したモノまたはジグリセライドを含む任意の刺激のない不揮発性油を用いてもよい。更にオレイン酸のような脂肪酸は注射の製剤に使用できる。
【００６１】
本発明の方法に使用されるＨＳＰ９０阻害剤は、その薬物の直腸投与のための座薬の形で投与してもよい。このような組成物は、その阻害剤を、通常の温度では固体であるが、直腸温度で液体であり、従って直腸でその薬物を放出する適切な非刺激性の賦形剤と混合することによって調製できる。そのような物質にはココアバター、グリセリン化ゼラチン、水素化植物油、各種の分子量のポリエチレングリコールの混合物およびポリエチレングリコールの脂肪酸エステルが含まれる。
【００６２】
局所使用には、ＨＳＰ９０阻害剤を含むクリーム、軟膏、ゼリー、溶液または懸濁物等を用いることができる。ここで使用されるように、局所使用には口腔洗浄剤および嗽剤が含まれる。
【００６３】
本発明の方法に使用される化合物は適切な鼻腔内賦形剤およびデリバリー用具の局所使用による鼻腔内用剤型または当業者に周知の経皮皮膚パッチの剤型を用いる経皮経路で投与できる。経皮デリバリーシステムの剤型で投与するためには、投与プログラムを通して投与は勿論間欠的よりもむしろ連続的である。
【００６４】
本発明の方法と化合物は治療されている状態に特別に有用性が選択された周知の治療剤と併用して用いてもよい。例えば、本方法と化合物は周知の抗癌剤および細胞毒性剤と併用して使用してもよい。更に本方法と化合物は、細胞表面成長因子受容体を細胞増殖を開始する核シグナルに結合するシグナル経路の部分の他の阻害剤との併用に有用である。
【００６５】
本発明の方法は、血管新生を阻害し、それによって腫瘍細胞の成長と浸潤を阻害する他の薬剤との併用において有用であり、他の薬剤にはリボザイム、ＶＥＧＦ受容体を標的とするアンチセンス、アンジオスタチンおよびエンドスタチンを含むＶＥＧＦ受容体阻害剤が含まれるが、ＶＥＧＦ受容体阻害剤に限定されない。
【００６６】
本発明の方法と併用して使用できる抗新生物剤の例には、一般的に、アルキル化剤、抗代謝剤；エピドフィロトキシン；抗新生物酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカバジン；ミトキサントロン；プラチナ配位錯体；生物学的応答修飾剤および成長阻害剤；ホルモン／抗ホルモン治療剤および造血成長因子等が含まれる。
【００６７】
抗新生物剤の薬物系列には、例えばアントラサイクリン系薬物、ビンカ薬物、マイトマイシン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレオサイド、エポチロン、ディスコデルモライド、プテリディン系列薬物、ジイネンおよびポドフィロトキシンが含まれる。特に有用なこれらの系列のメンバーには、例えばカーミノマイシン、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセート、マイトマイシンＣ、ポーフィロマイシン、５−フロロウラシル、６−メルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノサイド、例えばエトポサイド、燐酸エトポサイドまたはテニポサイド、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、リューロシジン、ビニデシン、リューロシン、パクリタキセルおよび類似物のようなポドフィロトキシンまたはポドフィロトキシン誘導体が含まれる。他の有用な抗新生物剤には、エストラムスチン、カルボプラチン、シクロフォスファマイド、ブレオマイシン、ゲムシタビン、イソファマイド、メルファラン、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキセート、トリメトレキセート、ダカルバジン、Ｌ−アスパラギネース、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１，トポテカン、アラーＣ、ビカルタマイド、フルタマイド、リュープロライド、ピリドベンゾインドール誘導体、インターフェロンおよびインターロイキンが含まれる。
【００６８】
本発明の方法に用いられるＨＳＰ９０阻害剤をヒト被験者に投与する時、１日投与量は、処方する医師によって、患者の症状の重症度とともに、年齢、体重および各患者の反応に基づいて一般的に変えられる。
【００６９】
１つの例示的な用途において、適切な量のＨＳＰ阻害剤が、例えば乳癌のような、癌を治療中の哺乳類に投与される。投与は各タイプの阻害剤を１日あたり、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約６０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ体重から４０ｍｇ／ｋｇ体重で行う。本組成物を含む特別な治療用量はＨＳＰ９０阻害剤を約０．０１ｍｇから約１０００ｍを含む。好ましくは、用量はＨＳＰ９０阻害剤を約１ｍｇから約１０００ｍを含む。
【００７０】
医薬品製剤は単位用量剤型であるのが好ましい。そのような剤型で、製剤は、例えば所望の目的を達成するための有効量のような活性成分の適切量を含む単位用量に分割される。
【００７１】
製剤の単位用量中の活性化合物の量は特別な用途によって、約０．１ｍｇから１０００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇから３００ｍｇまで、より好ましくは１０ｍｇから２００ｍｇまで変化または調整される。
【００７２】
実際に用いられる用量は、患者の要求と治療されている状態の重症度に依存して変化してもよい。特別な状況についての適切な用量の決定は当技術分野の範囲内である。一般的に、治療はその化合物の至適用量よりも少ない小用量で開始される。その後、その環境下で至適効果に達するまで、用量を少量ずつ増加する。便宜上、望まれるならば、１日の合計量を分割し、その日の内に分割量を投与してもよい。
【００７３】
本発明の方法に使用されるＨＳＰ９０阻害剤および該当すれば他の化学療法剤および／または放射線療法の用量と投与回数は担当臨床医（内科医）の判断によって、治療されている疾患の重症度とともに、患者の年齢、状態および大きさのような因子を考慮して、制御される。
【００７４】
化学療法剤および／または放射線療法は当技術分野で周知の治療プロトコールに従って投与できる。化学療法剤および／または放射線療法は治療されている疾患とその疾患での化学療法剤および／または放射線療法の周知の効果に依存して変化できることは当業者には明白なことである。また、治療プロトコール（例えば、用量および投与回数）は、専門医師の知識によって、投与された治療剤（即ち、抗新生物剤または放射線）の患者で観察される効果および投与された治療剤に対するその疾患の観察される反応を考慮して変えることができる。
【００７５】
また、一般に、ＨＳＰ９０阻害剤および化学療法剤は同じ医薬組成物で投与される必要はなく、異なった物理化学的性質のために、異なった投与経路で投与される必要がある場合がある。例えば、ＨＳＰ９０阻害剤は、その良好な血中濃度を与え、維持するために経口で投与できるが、化学療法剤は静脈内投与してもよい。可能な場合は、同じ医薬組成物での投与法と投与の推奨の決定は専門臨床医の知識の範囲内である。最初の投与は当技術分野で知られている確立されたプロトコールに従って行うことができ、専門臨床医は次いで観察された効果に基づいて、用量、投与方法および投与回数を修正できる。
【００７６】
ＨＳＰ９０阻害剤および化学療法剤および／または放射線の特別な選択は担当内科医の診断と患者の状態についての担当内科医の判断と適切な治療プロトコールによる。
【００７７】
ＨＳＰ９０阻害剤および化学療法剤および／または放射線は、増殖性疾患の性質、患者の状態、およびＨＳＰ９０阻害剤と共に投与されるべき化学療法剤および／または放射線（即ち単一の治療プロトコールの範囲内で）の実際の選択によって、同時に（例えば同時に、実質的に同時に、または同じプロトコールの範囲内で）または連続して投与してもよい。
【００７８】
ＨＳＰ９０阻害剤および化学療法剤および／または放射線が同時にまたは実質的に同時に投与されない場合は、ＨＳＰ９０阻害剤および化学療法剤および／または放射線の最初の投与順序は重要でないかもしれない。従って、ＨＳＰ９０阻害剤を最初に投与し、ついで化学療法剤および／または放射線を投与することができる；または化学療法剤および／または放射線を最初に投与し、ついでＨＳＰ９０阻害剤を投与することができる。単一の治療プロトコール中で交互の投与を繰り返すことができる。治療プロトコール中の投与順序の決定と、各治療剤の繰り返し投与回数は治療中の疾患と患者の状態の評価後、専門医の知識の十分な範囲内にある。例えば、化学療法および／または放射線は、特に細胞毒性剤の場合は、最初に投与し、ついで、ＨＳＰ９０阻害剤を投与して治療を続け、それが有利であると決定されたならば、その後化学療法および／または放射線等を投与し、治療プロトコールが完了するまで治療を続けることができる。
【００７９】
故に、経験と知識に従って、内科医は、治療が進むにつれて、個別の患者のニーズに従って、治療の成分（治療剤、即ち、ＨＳＰ９０阻害剤、化学療剤または放射線）投与の各プロトコールを修正することができる。
【００８０】
担当臨床医は、投与された用量で治療が有効か否かを判断において、患者の一般的な安寧および疾患に関連した症状の緩和、腫瘍の成長の阻害、腫瘍の実際の縮小、または転移の阻害を考慮する。腫瘍の大きさは例えば、ＣＡＴまたはＭＲＩスキャンのような放射線検査のような標準的な方法で測定することができ、継続的な測定は、腫瘍の成長が遅延しているか、逆転しているかを判断するのに使うことができる。疼痛のような疾患に関連した症状の緩和、および全体状態の改善は治療の有効性判断の補助に使用することができる。
【００８１】
これらの例は限定的でなく、本発明の様々な態様と特徴を単に代表するものである。引用した文書は本発明が関係する当業者の技術レベルの指標である。各文書の開示は参考として、あたかもそれぞれが個別に、その全体を参考に含むようにここに含められるが、これらの文書はいずれも先行技術として認められるものではない。
【００８２】
当業者は本発明がその目的を実行し、その結果と示した利点およびその中での固有の利点を得るのに良く適合していることを十分評価するであろう。好ましい実施形態を説明するために記載した方法と組成物は代表例であり、本発明の範囲の限定を意図するものではない。当業者は一定の修正および他の用途を想起するであろうが、それらは請求項の範囲で定義された本発明の精神の範囲に包含される。
【００８３】
当業者には、本発明の範囲と精神から逸脱せずに、本発明に対して様々な置換や修正が可能である事は極めて明らかであろう。従ってそのような付け加えられる実施形態は本発明と次の請求項の範囲内である。
【００８４】
ここに適切に、例示的に記載した本発明は、ここに特別開示していない、任意の１つの要素または複数の要素、および１つの制約または複数の制約なしに実施できる。従って、例えば、この中の各実施例において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」および「〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」と言う用語は他の２つの用語の、いずれかで置き換える事ができる。使用している用語と表現は記述用語として用いられ、制限用語として用いられるものでなく、そのような用語と表現を使用することで、ここに示し、記載した特徴と同等な特徴またはその一部を排除することを意図するものではない。請求された本発明の範囲内で様々な修正が可能であることは認識されている。従って、本発明を好ましい実施形態によって特に開示したが、任意性のある特徴、修正およびここに開示した観念の変化は当業者によって免れられる可能性があること、およびそのような修正や変化は明細書および添付の請求項で定義した本発明の範囲内と考えられることを理解すべきである。
【００８５】
加えて、本発明の特徴または態様がマルクーシュ群、または代替の他の群分けの用語で記載される場合は、本発明は、それによって、マルクーシュ群、または他の群の任意の個々のメンバーまたはメンバーの部分群の用語（適切ならば各メンバーを除外して）によっても、記載されることを当業者は認識するであろう。
【００８６】
その他の実施形態は次の請求項の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのヒト乳癌パネルに対するＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（１７−ＡＡＧ）の抗増殖性効果を示す。
【図２】ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（１７−ＡＡＧ）による治療後のＨＳＰ９０クライアント蛋白（Ｒａｆ−１）およびＨＥＲ−２＋＋＋およびＨＥＲ−２細胞中の４つの下流標的蛋白の濃度の変化を示す。
【図３】ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（１７−ＡＡＧ）による治療後のＨＥＲ−２＋＋＋およびＨＥＲ−２細胞中の蛋白濃度、リン酸化状況およびＡＫＴのキナーゼ活性の変化を示す。
【図４】ｉｎ  ｖｉｖｏでの１ｕＭのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（１７−ＡＡＧ）による治療後の乳癌細胞系のパネルにおける蛋白濃度とＡＫＴのリン酸化状況の変化を示す。
【図５】ｉｎ  ｖｉｖｏでのＣＮＦ−１０１（１７−ＡＡＧ）（１７−ＡＡＧ）による治療後の各時点でのＨＥＲ−２＋＋＋乳癌異種移植におけるＨＳＰ９０クライアント蛋白（ＨＥＲ−２）濃度の変化および下流標的蛋白ＡＫＴの蛋白濃度およびリン酸化状況の変化を示す。
【図１】
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【図３】
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【国際公開パンフレット】
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【手続補正書】
【提出日】平成15年7月9日(2003.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＥＲ−２の発現濃度が上昇している細胞によって特徴づけられる増殖性障害の患者を治療する方法であって、
該障害の疑いのある患者からの細胞、組織または体液を提供し、
ＨＥＲ−２の発現濃度の指標として、ＨＥＲ−２の遺伝子コピー数、ＨＥＲ−２ｍＲＮＡの量またはＨＥＲ−２蛋白の量の１つまたはそれ以上について該細胞、組織または体液を検査し、および
該濃度が上昇していれば、該患者にＨＳＰ９０阻害剤の医薬的に有効な量を投与し、該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２倍低い、
ことを含む上記方法。
【請求項２】
該阻害剤がアンサマイシンである請求項１の方法。
【請求項３】
該アンサマイシンがゲルダマイシン、１７−ＡＧＧ、ハービマイシンおよびマクベシンからなる群から選ばれる請求項２の方法。
【請求項４】
該阻害剤が１７−ＡＧＧである請求項１の方法。
【請求項５】
該阻害剤がＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合する阻害剤である請求項１の方法。
【請求項６】
該阻害剤がラジシコールまたはその類縁体である請求項５の方法。
【請求項７】
該検査がＨＥＲ−２メッセンジャーＲＮＡの濃度を測定するために、核酸のハイブリダイゼーションまたはＰＣＲの使用を含む請求項１の方法。
【請求項８】
該検査がＨＥＲ−２の濃度を測定するために、抗生物質の使用を含む請求項１の方法。
【請求項９】
該検査または該投与の１つまたはそれ以上がエクス・ビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で行われる請求項１の方法。
【請求項１０】
該投与が病変内である請求項１の方法。
【請求項１１】
該投与が非経口である請求項１の方法。
【請求項１２】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも５倍低い請求項１の方法。
【請求項１３】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍低い請求項１の方法。
【請求項１４】
該ＨＳＰ９０阻害剤を投与する前に、該患者の細胞のＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性を検査することを更に含む請求項１の方法。
【請求項１５】
該検査が１つまたはそれ以上の標準の使用を含む請求項１の方法。
【請求項１６】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１００ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項１７】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約７５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項１８】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５０ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項１９】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約２５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２０】
該阻害剤のＩＣ50が、該癌細胞で約１０ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２１】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５ｎＭまたはそれ以下である請求項１の方法。
【請求項２２】
該方法が該投与後、治療効果をモニターするための検査を更に含む請求項１の方法。
【請求項２３】
該治療効果のモニターがＨＥＲ−２の濃度を示す分子マーカーの測定を含む請求項２２の方法。
【請求項２４】
該分子マーカーがＨＥＲ−２、サイクリンおよびリン酸化ＡＫＴからなる群の１つまたはそれ以上から選ばれる請求項２３の方法。
【請求項２５】
該分子マーカーがＤ１およびＤ２からなる群から選ばれるサイクリンである請求項２２の方法。
【請求項２６】
Ｈｅｒ−２が上昇していない該細胞が該患者からのものである請求項１の方法。
【請求項２７】
該ＩＣ50値が１つまたはそれ以上の標準を使用して計算される請求項１の方法。
【請求項２８】
該阻害剤が小さな合成分子である請求項１の方法。
【請求項２９】
該検査が、ＨＥＲ−２の遺伝子複写数を測定するためのサザンブロッティングの使用を含む請求項１の方法。
【請求項３０】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２倍大きい請求項１の方法。
【請求項３１】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも３倍大きい請求項１の方法。
【請求項３２】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも５倍大きい請求項１の方法。
【請求項３３】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍大きい請求項１の方法。
【請求項３４】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも２５倍大きい請求項１の方法。
【請求項３５】
Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞ががん細胞である請求項１〜３４のいずれか一項の方法。
【請求項３６】
該がん細胞が乳がん細胞である請求項３５の方法。
【請求項３７】
不均一な細胞集団の中で、上昇したＨｅｒ−２濃度で特徴づけられる細胞を選択的に標的化する方法であって、該方法が
種々のＨｅｒ−２濃度に関する不均一性について細胞集団をサンプリングし、
該不均一性を測定し、および
該集団に、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞に有効であるが、Ｈｅｒ−２が上昇していない該集団の細胞には比較的有効でないＨＳＰ９０阻害剤の量を投与する、
ことを含む上記方法。
【請求項３８】
該阻害剤がアンサマイシンである請求項３７の方法。
【請求項３９】
該アンサマイシンがゲルダナマイシン、１７−ＡＡＧ，ハービマイシンＡおよびマクベシンからなる群から選ばれる請求項３８の方法。
【請求項４０】
該阻害剤が１７−ＡＡＧである請求項３７の方法。
【請求項４１】
該阻害剤がＨＳＰ９０のＡＴＰ結合部位に結合する阻害剤である請求項３７の方法。
【請求項４２】
該阻害剤がラジシコールまたはその類縁体である請求項４１の方法。
【請求項４３】
該測定が、ＨＥＲ−２の濃度を測定するために、核酸のハイブリダイゼーションまたはＰＣＲの使用を含む請求項３７の方法。
【請求項４４】
該検査が、ＨＥＲ−２の濃度を測定するために、抗生物質の使用を含む請求項３７の方法。
【請求項４５】
該測定または該投与の１つまたはそれ以上がエクス・ビボ（ｅｘ  ｖｉｖｏ）で行われる請求項３７の方法。
【請求項４６】
該投与が病変内である請求項３７の方法。
【請求項４７】
該投与が非経口である請求項３７の方法。
【請求項４８】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞で、少なくとも２倍低い請求項３７の方法。
【請求項４９】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該集団の細胞で、少なくとも５倍低い請求項３７の方法。
【請求項５０】
該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該患者の該細胞で、少なくとも１０倍低い請求項３７の方法。
【請求項５１】
該ＨＳＰ９０阻害剤を投与する前に、該集団内の細胞の部分集団のＨＳＰ９０阻害剤に対する感受性を検査することを更に含む請求項３７の方法。
【請求項５２】
該検査が１つまたはそれ以上の標準の使用を含む請求項３７の方法。
【請求項５３】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１００ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５４】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約７５ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５５】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５０ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５６】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約２５ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５７】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約１０ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５８】
該阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で約５ｎＭまたはそれ以下である請求項３７の方法。
【請求項５９】
該方法が、該投与後、治療効果をモニターするための検査を更に含む請求項３７の方法。
【請求項６０】
該治療効果のモニターがＨＥＲ−２濃度を示す分子マーカーの測定を含む請求項５９の方法。
【請求項６１】
該分子マーカーがＨＥＲ−２、サイクリンおよびリン酸化ＡＫＴからなる群の１つまたはそれ以上から選ばれる請求項６０の方法。
【請求項６２】
該分子マーカーがＤ３８およびＤ３からなる群から選ばれるサイクリンである請求項６０の方法。
【請求項６３】
Ｈｅｒ−２が上昇していない該細胞が該集団からのものである請求項４８の方法。
【請求項６４】
該ＩＣ50値が１つまたはそれ以上の標準を使用して計算される請求項４８の方法。
【請求項６５】
該阻害剤が小さな合成分子である請求項３７の方法。
【請求項６６】
該測定が核酸のハイブリダイゼーションの使用を含む請求項３７の方法。
【請求項６７】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも２倍大きい請求項３７の方法。
【請求項６８】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも３倍大きい請求項３７の方法。
【請求項６９】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも５倍大きい請求項３７の方法。
【請求項７０】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも１０倍大きい請求項３７の方法。
【請求項７１】
該上昇した濃度が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞で、少なくとも２５倍大きい請求項３７の方法。
【請求項７２】
Ｈｅｒ−２が上昇している該細胞ががん細胞である請求項３７〜７１のいずれか一項の方法。
【請求項７３】
該がん細胞が乳がん細胞である請求項７２の方法。
【請求項７４】
細胞増殖性障害がＨＥＲ−２濃度の上昇で特徴づけられる細胞増殖性障害の治療のための医薬組成物の調製のためのＨＳＰ９０の使用であって、該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している細胞で、少なくとも２倍低い上記使用。
【請求項７５】
ＨＳＰ９０阻害剤が請求項２〜６、１２、１３および１６〜２１のいずれか一項に記載されている通りである請求項７４の使用。
【請求項７６】
細胞増殖性障害がＨＥＲ−２濃度の上昇で特徴づけられる細胞増殖性障害の治療のための医薬組成物であって、該組成物がＨＳＰ９０阻害剤を含み、該ＨＳＰ９０阻害剤のＩＣ50が、Ｈｅｒ−２が上昇していない細胞に比べて、Ｈｅｒ−２が上昇している細胞で、少なくとも２倍低い上記医薬組成物。
【請求項７７】
該ＨＳＰ９０阻害剤が請求項２〜６、１２、１３および１６〜２１のいずれか一項に記載されている通りである請求項７６の組成物。
【国際調査報告】
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