(57)【要約】本発明は、高コルチゾール血症関連の障害の治療、特に大うつ病の治療をするための薬剤を調製するためのコルチゾール封鎖剤の使用、コルチゾール封鎖剤を含む薬剤組成物、およびコルチゾール封鎖剤である６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリンに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
高コルチゾール血症関連の障害を治療する薬剤を製造するためのコルチゾール封鎖剤の使用。
【請求項２】
障害が大うつ病、クッシング症候群、統合失調症（精神分裂病）および重度の不安症から選択される請求項１に記載の使用。
【請求項３】
障害が大うつ病である請求項２に記載の使用。
【請求項４】
コルチゾール封鎖剤が環状オリゴ糖である請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
環状オリゴ糖がシクロデキストリンまたはその誘導体である請求項４に記載の使用。
【請求項６】
シクロデキストリンがγ−シクロデキストリン誘導体である請求項５に記載の使用。
【請求項７】
γ−シクロデキストリン誘導体が、
６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリン、
６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２−ヒドロキシエチルチオ）−γ−シクロデキストリン、
６−ペル−デオキシ−６−ペル−（３−カルボキシプロピル）チオ−γ−シクロデキストリン、
６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２−カルボキシエチル）チオ−γ−シクロデキストリン、および
６−ペル−デオキシ−６−ペル−（４−カルボキシフェニル）チオ−γ−シクロデキストリン、
から選択される請求項６に記載の使用。
【請求項８】
薬学的に許容される助剤と混合したコルチゾール封鎖剤を含む薬剤組成物。
【請求項９】
コルチゾール封鎖剤が６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリンである請求項８に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
シクロデキストリン誘導体である６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリン。
【請求項１１】
内因性コルチゾールとホスト−ゲスト錯体を形成することができる有効量の封鎖剤を当該患者に静脈投与することを含む、高コルチゾール血症関連の精神障害患者を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、高コルチゾール血症関連の障害の治療、特に大うつ病の治療をする薬剤を調製するための封鎖剤の使用に関する。
【０００２】
精神医学の最も一貫した発見の１つは、大うつ病である患者は高コルチゾール血症を示すことである（Ｈｏｌｓｂｏｅｒ，Ｆ．他、Ｃｏｒｔｉｓｏｌ、１１−ｄｅｏｘｙ−ｃｏｒｔｉｓｏｌ　ａｎｄ　ＡＣＴＨ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ａｆｔｅｒ　ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ　ｉｎ　ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ　Ｒｅｓ．１１、１５−２３、１９８４））。この高コルチゾール血症は、一桁の大きさに達することがあり、かつ内分泌ストレスＨＰＡ（視床下部−下垂体−副腎）系を正常では強く制御している負のフィードバック機構の大きな障害を示す。全てのうつ病患者が顕性の高コルチゾール血症を示すわけではないが、最も重度のタイプのモノアミン耐性うつ病患者は、大部分が高レベルのストレスホルモン、コルチゾールが明らかな患者である。さらに、ほぼ全ての症例で、そのような患者は、強力な合成グルココルチコイドのデキサメタゾンを外部から投与された後、内因性コルチゾールの放出を明らかに止めることができないことを示した（いわゆるデキサメタゾン非抑制患者）（Ｇｏｌｄ　Ｐ．Ｗ．他、Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｓｔｒｅｓｓ．Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊ．Ｍｅｄ．３１９、４１３−４２０、１９８８）。この「亜群」の重度の危険性がある患者は、うつ病が生命を危うくする病気となり、入院が避けられなくなる患者となる場合が極めて多い。電気ショック療法（ＥＴＣ）のような迅速な治療戦略が、このような患者には欠かせないであろう。
【０００３】
副腎機能不全（いずれもコルチゾール分泌促進物質ＡＣＴＨを産生する下垂体腫瘍または二次腫瘍による）の結果、高いコルチゾールレベルが報告されている他の状態は、クッシング症候群である。クッシング症候群と関連があるうつ症状は、その疾患の根本原因を治療し、コルチゾールレベルが正常に戻ってしまえば、比較的速やかに消失する。このような治療には、苦痛をもたらす腫瘍の除去、またはメチラポン、ケトコノゾール、またはアミノグルテチミドなどのコルチゾール合成阻害剤を用いた治療が必要となるかもしれない（Ｍｕｒｐｙ，Ｂ．Ｅ．Ｐ、Ｓｔｅｒｏｉｄ　ａｎｄ　Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　ａｎｄ　Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８、５３７−５５８、１９９１）。
【０００４】
同様に、比較的最近の臨床試験によって、コルチゾール合成阻害剤を使用して、重度の難治性非クッシングうつ病患者のうつ症状を改善できることが実証されている（Ｍｕｒｐｈｙ，Ｂ．Ｅ．Ｐ、Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｉｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｍａｊｏｒ　ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ　ｔｏ　ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ　ｔｈｅｒａｐｙ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈ．４３、２７９−２８６、１９８８；米国特許第４，８１４，３３３号（Ｒａｖａｒｉｓ，Ｃ．Ｌ．）：Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｙｐｅｒｃｏｒｔｉｓｏｌｅｍｉｃ、ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ　ｐａｔｉｅｎｔｓも参照のこと）。
【０００５】
血漿コルチゾールレベルを下げるために、コルチゾール合成阻害剤を使用することの欠点は、その高い毒性、および他の内部で産生されるステロイド（鉱質コルチコイド、性ステロイド等）の合成に対するコルチゾール合成の阻害の比較的低度の選択性のために、副腎機能不全を起こす恐れがあることである。他の重大な欠点は、これらのコルチゾール合成阻害剤の治療効果の開始が、古典的な抗うつ薬で認められる開始と同程度に時間がかかる（たとえば数週間）ことである。
【０００６】
したがって、治療効果の開始が速やかで、過度の望ましくない副作用がない、高コルチゾール血症関連の障害に悩む患者を治療する代替手段が必要とされている。
【０００７】
したがって本発明は、血液のコルチゾールレベルを下げ、高コルチゾール血症関連の障害を治療するためのコルチゾール封鎖剤を提供する。本発明によるコルチゾール封鎖剤を非経口的に投与することによって、患者のコルチゾールを下げる安全で急速な方法が提供される。
【０００８】
本発明の一態様は、高コルチゾール血症関連の障害を治療する薬剤を製造するためのコルチゾール封鎖剤の使用に関する。好ましい高コルチゾール血症関連の障害は、大うつ病、クッシング症候群、統合失調症（精神分裂病）および重度の不安症である。大うつ病、特にモノアミンベースの抗うつ薬、たとえば特異的なセロトニン再吸収阻害剤（ＳＳＲＩ）を用いた治療に充分応答しない大うつ病の治療において、本発明によるコルチゾール封鎖剤を使用することがより好ましい。
【０００９】
高コルチゾール血症は、相対的な用語である。ヒトの正常なコルチゾールの血漿レベルが、１４０〜５５２ｎｍｏｌ／Ｌの範囲にあるのと全く同様に（Ｇｒｅｅｎｓｐａｎ，Ｆ．Ｓ．１９９４「Ｂａｓｉｃ　ａｎｄ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｅｎｄｏｃｌｉｎｏｌｏｇｙ」４ｔｈ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｎｏｒｗａｌｋ、Ａｐｐｌｅｔｏｎ−Ｌａｎｇｅ）、血漿コルチゾールレベルはうつ病患者毎に大幅に変わり得るが、このレベルは８００ｎｍｏｌ／Ｌを超えた量で一般に最大になり、それは１日の時間と共に変わる。うつ病患者は、絶えず高レベルのコルチゾールを示すクッシング病患者とは異なり、やや平坦化しているが、ある程度の日周性の変動を保っている。しかしながら、診断手段として広く受け入れられている１つのコルチゾールレベルは、デキサメタゾン抑制レベルである。この至る所で利用されているうつ病に関する「試験」では、１ｍｇのデキサメタゾンを就寝時に与え、翌日の午後４時にコルチゾールレベルを引き出す（正常では分泌が極小となる）。デキサメタゾンの非抑制患者は、午後４時に１３６ｎｍｏｌ／Ｌ以上のレベルを示す患者として分類される。したがって、コルチゾール封鎖剤を作用させることが必要と思われる治療範囲は、１００〜１０００ｎｍｏｌ／Ｌの血漿コルチゾールレベルを含むと推定される。
【００１０】
本発明で使用する、封鎖剤（または封鎖物質）という語は、ステロイドコルチゾールとのホスト−ゲスト錯体形成に携わることができる、任意の有機化合物を意味する。封鎖剤はホスト分子として作用し、コルチゾールはゲスト分子である。特異的な分子錯体、ホスト−ゲスト錯体は、非共有的な分子間力によって１つに保たれている２つ以上の成分の会合から生じた、組織化された化学的物体として定義する。
【００１１】
コルチゾールの封鎖剤は、さまざまなクラスの、水溶液中でさまざまな有機ゲスト分子、特にステロイド化合物と錯体を形成するその能力が知られている、主に環状有機化合物、たとえばシクロデキストリンなどの環状オリゴ糖類、シクロファン、環状ペプチド、カリックスアレーン、クラウンエーテルおよびアザクラウンエーテルなどから選択されるホスト分子であってよい。これらの化合物の構造および化学的性質は、充分に文書化されている（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌｕｍｅｓ　１−１１、Ａｔｗｏｏｄ　Ｊ．Ｌ．、Ｄａｖｉｅｓ　Ｊ．Ｅ．Ｄ．、ＭａｃＮｉｃｏｌ　Ｄ．Ｄ．、Ｖｏｇｔｌｅ　Ｆ．、ｅｄｓ；Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｌｔｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ、１９９６）。
【００１２】
本発明で使用するのに好ましい封鎖剤は、環状オリゴ糖類である。本発明で使用するのに適した環状オリゴ糖類の例は、シクロデキストリン、ある種の天然シクロマルトオリゴ糖類、シクロマンニン（１，４位置でα結合によって結合した５つ以上のα−Ｄ−マンノピラノース単位）、シクロガラクチン（１，４位置でβ結合によって結合した５つ以上のβ−Ｄ−ガラクトピラノース単位）、シクロアルトリン（１，４位置でα結合によって結合した５つ以上のα−Ｄ−アルトロピラノース単位）であり、これらはそれぞれ、ホスト−ゲスト錯体を形成することができる。
【００１３】
特に好ましいのは、シクロデキストリン誘導体のクラス内で選択されるコルチゾールの封鎖剤である：
【００１４】
【化１】
2004512358.tif 000002
【００１５】
シクロデキストリンは、アミロース中と同様に、１，４位置でα結合によって結合した６個以上のα−Ｄ−グルコピラノース単位を含む環状分子である。この環状配置の結果、シクロデキストリンは、ゲスト分子を引き寄せることができる親油性のキャビティを有するが、その外側はより親水性かつ水溶性である円錐形の分子として存在する。６、７、８および９個のグルコピラノース単位から構成されるシクロデキストリンは、それぞれα−、β−、γ−、およびδ−シクロデキストリンとして一般的に知られている。
【００１６】
デンプンの酵素的分解によって調製された本来のシクロデキストリン（α、β、γ）と、化学的に改質されたシクロデキストリンの両方が、ホスト−ゲスト錯体を形成することができるために、特に製薬分野で多数の応用が既に見出されている。（Ｓｔｅｌｌａ　ａｎｄ　Ｒａｊｅｗｓｋｉ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１４、５５６−５６７、１９９７）。これらの適用例の大部分は、薬物の製剤におけるものである（たとえばＵｅｋａｍａ他、「Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ　Ｄｒｕｇ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｓｙｓｔｅｍｓ」Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　１９９８、９８、２０４５−２０７６；Ｚｈａｎｇ，Ｍ．ａｎｄ　Ｒｅｅｓ，Ｄ．Ｃ．：Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、９、１６９７−１７１７、１９９９を参照のこと）。
【００１７】
いくつかの知られているシクロデキストリン（ＣＤ）は、コルチゾールと包接錯体を形成する。ＣＤとコルチゾールの間の包接錯体は、ｉｎ　ｖｉｖｏで形成されると、その生物学的受容体に対するコルチゾールの利用度を低下させ、したがってＨＰＡ系を正常化させる可能性がある。さらにＣＤは、コルチゾールの腎クリアランスを増大させることにより、遊離コルチゾールの血漿レベルを効果的に下げると予想される。
【００１８】
表１に、水中での化学量論比が１：１であることが報告されている選択したＣＤ−コルチゾール錯体、および新規のシクロデキストリン誘導体であるペル−６−デオキシ−ペル−６−（２−カルボキシエチル）チオ−γ−シクロデキストリンとの錯体の会合定数を列挙する。
【００１９】
【表１】
2004512358.tif 000003
【００２０】
コルチゾールの適切な封鎖剤の選択に関する１つの重要な規準は、テストステロン、エストラジオール、プロゲステロン、コレステロールなどの他の内因性ステロイドと比べた場合の、コルチゾールと結合する選択性であろう。コレステロールは比較的高い血漿濃度で存在するが、このステロイドは化学的構造がコルチゾールとは明らかに異なる。コレステロールは縮合したＡ環とＢ環の間にシス立体配置を有しており、したがって「曲がった」または「Ｌ形」コンホメーションで存在する。対照的にコルチゾールは、縮合したＡ環とＢ環の間にトランス立体配置を有しており、したがってより「直線状の」コンホメーションで存在する。コルチゾールはまた、分子中にヒドロキシル官能基を３個有している。ステロイド間のこのような構造が、選択的な封鎖剤を設計し選択することができる基礎をなすことは、当業者によって理解されるであろう。
【００２１】
コルチゾールと包接錯体を形成するために、ホスト分子は、そのキャビティ中にステロイドを少なくとも部分的に被包することができる、サイズおよび形状を有していなければならない。α−ＣＤのキャビティは相当に大きいコルチゾールの被包には小さすぎることは表１から明らかである。したがって、α−ＣＤの結合親和性は、より大きなβ−ＣＤおよびγ−ＣＤの結合親和性よりもはるかに弱い。ＣＤのキャビティの深さ（約８Å）は、コルチゾールの４つの環を完全に被包するために必要とされる深さよりも大幅に小さく、たとえば第一級および／または第二級のヒドロキシル基をペル置換することによって、キャビティの深さを増すことは、親和性を増大させるための方法であると思われる。
【００２２】
【化２】
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【００２３】
封鎖剤とコルチゾールの間の相互作用は、核磁気共鳴分光法（ｎｍｒ）（Ｆｉｅｌｄｉｎｇ，Ｌ．：Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５６（３４）、６１５１−６１７０、２０００）および微量熱量分析（Ｓｔｏｅｄｅｍａｎ　Ｍ．ａｎｄ　Ｗａｄｓｏｅ　Ｉ．：Ｐｕｒｅ　Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．、６７（７）、１０５９−６８、１９９５）などの物理的方法によって分析することができる。これらの技法によって、他の内因性ステロイド化合物と比べた、コルチゾールへの結合の選択性を確立させることもできる。
【００２４】
本発明で使用する封鎖剤は、非経口的に投与される。注射経路は静脈内注射、皮下注射、皮内注射、筋肉内注射、または動脈内注射であってよい。静脈内経路が好ましい経路である。使用する正確な用量は、薬剤が投与される個々の対象の必要性に応じたものとすべきである。コルチゾールの封鎖剤の体外での施用、たとえば透析中または血漿交換中に封鎖剤と血液を混合させることも意図している。
【００２５】
たとえば標準的な参照文献Ｇｅｎｎａｒｏ他、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、（１８ｔｈ　ｅｄ．、Ｍａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０、Ｐａｒｔ　８：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｉｒ　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ；特に「Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ」に関するＣｈａｐｔｅｒ　８４、ｐｐ．１５４５−１５６９；および「Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ　ａｄｍｉｘｔｕｒｅ」に関するＣｈａｐｔｅｒ　８５、ｐｐ．１５７０−１５８０を参照のこと）中に記載されたように、薬剤として適切な助剤および薬剤として適切な液体と混合させると、封鎖剤は、たとえば注射用調製物として使用するための、溶液の形態で施用することができる。
【００２６】
あるいは薬剤組成物は、単位用量または多用量容器、たとえば密閉されたバイアルおよびアンプル中に存在してよく、滅菌した液体担体のみを加えること、たとえば使用前に水を加えることを必要とする、凍結乾燥させた（凍結乾燥）状態で保存することができる。
【００２７】
本発明は、前記組成物に適したパッケージ材と組み合わせて、前に記載したような薬剤調合物をさらに含み、前記パッケージ材は、前に記載したような使用に関して組成物を使用するための教示書を含む。
【００２８】
以下の実施例で、本発明をさらに例示する。
【００２９】
実施例１．６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリン（Ｏｒｇ２６２７６）
【００３０】
【化３】
2004512358.tif 000005
６０％水素化ナトリウム分散液（４５０ｍｇ）を油を含まないヘプタンで洗浄し、次いで乾燥ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）中に懸濁させた。チオグリセロール（１．０ｍｌ）をジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中に溶かした溶液をゆっくりと加え、混合物を１５分間窒素下で攪拌した。ペル−６−デオキシ−ペル−６−ブロモ−γ−シクロデキストリン（１．８ｇ：Ｇｏｒｉｎ　Ｂ．Ｉ．、Ｒｉｏｐｅｌｌｅ　Ｒ．Ｊ．、Ｔｈａｔｃｈｅｒ　Ｇ．Ｒ．Ｊ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ．１９９６、３７、４６４７−４６５０）を加え、混合物を９０℃で３時間攪拌した。アセトンを冷却した反応混合物に加え、生成した固体を濾過除去し、水（６０ｍｌ）中に溶かし、６時間透析してナトリウム塩を除去した。水溶液を濃縮し、次にアセトンを加えることによりシクロデキストリンチオグリセロール誘導体を沈殿させることによって、淡黄褐色の固体、１．５５ｇ（収率７７％）を得た。ＨＰＬＣ−ＥＬＳＤ）による純度は９９．６％であった。
【００３１】
１Ｈ　ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：δ、２．７１（８Ｈ，ｍ，Ｈ−７ａ）、２．８１（８Ｈ，ｍ，Ｈ−７ｂ）、２．９５（８Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａ）、３．２０（８Ｈ，ｍ，Ｈ−６ｂ）、３．４５〜３．５２（１６Ｈ，ｍ，Ｈ−９ａ，Ｈ−４）、３．５５〜３．６６（１６Ｈ，ｍ，Ｈ−９ｂ，Ｈ−２）、３．８〜３．９（１６Ｈ，ｍ，Ｈ−８，Ｈ−３）、３．９５（８Ｈ，ｍ，Ｈ−５）、５．１１（８Ｈ，Ｈ−１）。
【００３２】
１３Ｃ　ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：３４．１、３４．３（Ｃ−６）、３６．１５、３６．２（Ｃ−７）、６４．８０、６４．８３（Ｃ−９）、７１．２、７１．３（Ｃ−８）、７１．８（Ｃ−５）、７２．２（Ｃ−２）、７３．０（Ｃ−３）、８３．６（Ｃ−４）、１０１．７（Ｃ−１）。
【００３３】
ＭＳ（ＥＳＩ）、（Ｍ−Ｈ）−２０１７（Ｃ７２Ｈ１２８Ｏ４８Ｓ８）。
【００３４】
実施例２．コルチゾール封鎖剤の選択
ＵＶ可視分光法を使用して、コルチゾールとシクロデキストリン誘導体のライブラリーの間の錯体形成を調べた。コルチゾールのＵＶスペクトルは、２４６ｎｍで最大値を有する吸収バンドを含む。ＵＶ線の強度は、シクロデキストリンのホスト分子を加えることによって、コルチゾールの錯体形成時に低下する。典型的なホスト分子（シクロデキストリン誘導体のような）を加えることによる、ゲスト分子（コルチゾール）の水溶液の吸光度の低下は、ゲスト分子が極性である水性環境から、通常では極性がより低いホスト分子の内部の環境に移動した証拠として考えられる。超分子化学の分野では、その方法論が充分に確立されている（Ｔｓｕｋｕｂｅ，Ｈ他、Ｉｎ　Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｓｕｐｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｄａｖｉｅｓ　ＪＥＤ、Ｒｉｐｍｅｅｓｔｅｒ　ＪＡ、（Ｅｄｓ）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ　Ｏｘｆｏｒｄ、１９９６：Ｖｏｌ８、ｐｐ４２５−４８３）。
【００３５】
錯体形成の会合定数は、コルチゾールへのシクロデキストリンの滴定を行ない、シクロデキストリン／ステロイド比の関数としてＵＶスペクトルを記録することによって決定する。シクロデキストリンを段階的に加えることによる、２４６ｎｍでのコルチゾールの吸光度の変化（△Ａ）を記録する。データに対する最適な線によって、コルチゾール−シクロデキストリン錯体のＫａを与える（Ｌｉｕ　Ｙ、Ｌｉ，Ｂ、Ｙｏｕ　Ｃ−Ｃ、Ｗａｄａ，Ｔ、Ｉｎｏｕｅ　Ｙ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００１、６６、２２５−２３２）。ＵＶ方法論によって、この定数が１０５Ｍ−１未満であるときは、充分に良い会合定数の推定値が与えられる。コルチゾールのγ−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、および２つのγ−シクロデキストリン誘導体への結合に対する会合定数を決定するために使用した結果を、図１に示す。そのデータは、元のシクロデキストリンはコルチゾールと相互作用するための親和性が比較的低いことを示す。コルチゾールに対する親和性が著しく高い、いくつかのシクロデキストリン誘導体を、ＵＶ分光法によって確実に測定することができるものよりも大きなＫａを有するライブラリー中で同定した。これは、コルチゾール中の発色団が比較的弱く、充分希釈された溶液ではノイズ発生のために装置のシグナルが妨げられるためである。３つのシクロデキストリン誘導体、すなわち６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリン、６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２−ヒドロキシエチルチオ）−γ−シクロデキストリン、および６−ペル−デオキシ−６−ペル−（３−カルボキシプロピル）チオ−γ−シクロデキストリンについてのＫａ（表２を参照のこと）は１０５Ｍ−１よりも大幅に高く、さらに約１０６であることさえもある。これらのγ−シクロデキストリン誘導体の高いコルチゾール結合定数によって、これらの誘導体が潜在的に非常に活性のあるコルチゾール封鎖剤であることが示される。コルチゾール結合定数を決定するための代替的ではあるがより面倒な方法は、恒温滴定型熱量計によるものであり（Ｗｉｓｅｍａｎ他、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍ．１９８９、１７９、１３１−１３７を参照のこと）、これを使用して高いＫａをより正確に決定することができる。
【００３６】
【表２】
2004512358.tif 000006
【００３７】
実施例３．
Ａ．ラットにおける外因性コルチゾールの尿中排泄
ラットは内因性コルチゾールの生成を行わない。２グループの４匹のラット（冠毛つきリスター系ラット、３００〜３２０ｇ）に、４０μｇ／ｋｇのコルチゾールを単独で（グループＩ）、あるいはコルチゾール、その１５分後に１回当たり２０ｍｇ／ｋｇの静脈内用量で６−ペル−デオキシ−６−ペル−（２，３−ジヒドロキシプロピルチオ）−γ−シクロデキストリン（Ｏｒｇ２６２７６）を（グループＩＩ）、投与した（静脈内に）。それぞれのラットは、尿の回収用の代謝ケージ中に置いた。尿サンプルを最初の５時間で回収し、その後２４時間で残りを回収した。回収した尿サンプルを、ＨＰＬＣ−ＭＳ（ＰＥ　Ｓｃｉｅｘ　ＡＰＩ３０００質量分析計に結合させたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ　Ｌｕｎａ（５０×２ｍｍ；５μｍ）カラム上での高圧液体クロマトグラフィー）にかけた。尿中のコルチゾールの定量の限度は２．５ｎｇ／ｍｌであり、血漿中は１０ｎｇ／ｍｌであった。
【００３８】
尿中コルチゾール排泄の大部分が最初の５時間で起こり、５〜２４時間の間に有意なコルチゾールの排泄はなかった。グループＩから最初の５時間で回収した尿中の平均コルチゾールレベルは１０．５±７．８ｎｇ／ｍｌであり、一方グループＩＩの尿中の平均コルチゾールレベルは１１１±７８ｎｇ／ｍｌであることが分かった。これらの結果によって、Ｏｒｇ２６２７６が静脈内ボーラス投与後に、コルチゾールを投与したがコルチゾール封鎖剤Ｏｒｇ２６２７６は投与しなかった対照グループと比べて約１０倍、コルチゾールの排泄を促進したことが実証される。
【００３９】
Ｂ：モルモットにおける内因性コルチゾールの尿中排泄
モルモットではコルチゾールは内因性的に生成され、その基底レベルは血漿中では約１２０〜１５０ｎｇ／ｍｌである。５ｍｇ／２５０ｇでＯｒｇ２６２７６を静脈内に投与することによって、２４時間中に排泄される尿中コルチゾールの量を決定し、Ｏｒｇ２６２７６を投与しなかった対照グループと比べて３倍に増大することが分かった。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、コルチゾールの、２４６ｎｍのＵＶ吸収線の強度に対するシクロデキストリン濃度の影響を示す図である。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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