(57)【要約】マイクロ粒子およびそれらの製造方法が記載される。本発明の方法は、非水溶性活性剤を含有するマイクロ粒子の製造のための、簡単で迅速で効率的なワンポット法を提供する。該マイクロ粒子は、好ましくは、製薬用途用に用いられそして少なくとも８０ｗｔ％のマイクロスフェアを含む。
2004516263.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーマイクロ粒子の製造方法であって、少なくとも部分的に水と混和し得るハロゲン不含溶媒中にポリマーを溶解してポリマー溶液を形成させ、非水溶性活性剤を該ポリマー溶液に添加して容器中に含有された薬物相を形成させ、混合しながら該薬物相を含有する該容器に予定量の水性界面活性剤相を添加することを含み、しかも該容器から該溶媒の除去を必要とすることなく該薬物相への該界面活性剤相の添加時にマイクロ粒子の懸濁液が生成されるように該薬物相から該溶媒のある量を抽出するために、該予定量は該界面活性剤相が連続相かつ抽出媒質になるようにするのに十分である方法。
【請求項２】
溶媒を除去することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
溶媒を、洗浄、濾過、真空または蒸発により除去する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
溶媒が、水中において少なくとも１．５〜４０ｗｔ％の水中溶解度を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
溶媒の溶解度が、水中において少なくとも５ｗｔ％である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
溶媒の溶解度が、水中において少なくとも１０ｗｔ％である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
界面活性剤相の容積分率が少なくとも０．６０である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
界面活性剤相の容積分率が０．６５〜０．７５である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
水混和性共溶媒を界面活性剤相に添加することを更に含み、しかもポリマー用溶媒は該共溶媒に可溶でありかつポリマーは該共溶媒に可溶でない、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
共溶媒が、アルコール、ポリエチレングリコールおよびエーテルから成る群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
共溶媒が、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコールおよびポリエチレングリコールから成る群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
緩衝剤を薬物溶液に添加することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
緩衝剤を界面活性剤相に添加することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
ポリマーが、界面活性剤相に可溶でない、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
マイクロ粒子が、マイクロカプセルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
マイクロ粒子が、マイクロスポンジを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
マイクロ粒子が、マイクロスフェアを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
非水溶性薬物をポリマー溶液中に溶解して薬物相を形成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
緩衝剤水溶液を薬物相に添加することを更に含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
水性界面活性剤相を薬物相に少なくとも１分の期間にわたってゆっくり添加することを更に含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
生じるマイクロ粒子が、マイクロカプセルのポリマー壁内に疎水性薬物が埋め込まれているマイクロカプセルを含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
マイクロスフェアを更に含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
３０ｗｔ％までの、マイクロスポンジとマイクロカプセルの混合物を含み、かつ残部がマイクロスフェアより成る、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
水性界面活性剤相を薬物相に即時に添加することを更に含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
生じるマイクロ粒子が、少なくとも８０ｗｔ％のマイクロスフェアを含む、請求項１８または２４に記載の方法。
【請求項２６】
生じるマイクロ粒子が、２０ｗｔ％までの、マイクロカプセルのポリマー壁内に埋め込まれた疎水性薬物を含むマイクロカプセルを更に含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
疎水性薬物の懸濁液をポリマー溶液に添加する、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
生じるマイクロ粒子が、マイクロカプセルコア中に活性剤が懸濁液にて含有されているマイクロカプセルを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
粘度調整剤を水性界面活性剤相に添加することを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
５〜５０ｗｔ％の粘度調整剤を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
粘度調整剤が、グリセロールまたはポリエチレングリコールから成る群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
緩衝溶液が、リン酸塩緩衝剤溶液、クエン酸塩緩衝剤溶液およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン溶液から成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項３３】
ポリマーが、ポリアミド、ポリ酸無水物、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリアセテート、ポリラクトンおよびポリオルトカーボネートから成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
ポリマーが、α−、β−およびγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステル、またはα−、β−およびγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルと線状もしくは星状ポリ（エチレングリコール）のブロックコポリマーから成る群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
ポリマーが、ポリラクチド−コ−グリコリドポリマーを含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
部分的に水と混和し得る溶媒が、アセトン、エタノール、アルキルアセテート、アルキルホルメート、トリアセチン、トリエチルシトレートおよびアルキルラクテート、またはそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
溶媒が、エタノール、アセトン、メチルアセテート、エチルアセテート、プロピルアセテート、イソプロピルアセテート、ブチルアセテート、メチルホルメート、エチルホルメート、プロピルホルメート、イソプロピルホルメート、ブチルホルメート、トリアセチン、トリエチルシトレート、メチルラクテート、エチルラクテートまたはそれらの混合物から成る群から選択される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
δ［ポリマー用溶媒］−δ［水性相］がゼロより小さい、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
δ［ポリマー用溶媒］−δ［水性相］が、０〜−１５以内にある、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ポリマー相：界面活性剤相の容積比が１：２〜１：３０の範囲内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１、４、７、９、２９、３３、または３９〜４１のいずれか一項に記載の方法により製造されたマイクロ粒子。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、非水溶性生物活性物質を含有するマイクロ粒子の製造方法、並びにこの方法により製造されたマイクロ粒子に向けられる。本発明によれば、かかるマイクロ粒子を製造するための単純化ワンポット法が提供される。
【０００２】
発明の背景
多くの生物活性薬物は、水中における取るに足りない溶解性をもたらすことになる強い親油性を有する。それ故、これらの活性物質の適切な処方の開発は難しい問題である。
【０００３】
これらの薬理活性物質の現在利用可能な処方の一つの選択的方法は、生分解性ポリマーのナノおよびマイクロ粒子中におけるカプセル化である。疎水性の薬物またはペプチドおよびタンパク質についてのかかるデポー処方（「貯蔵所型処方」）は、広く知られており、また文献に記載されている。
【０００４】
しかしながら、ほとんどすべての先行技術方法は、溶媒として、非常に大きい毒性学的潜在力を有するハロゲン化炭化水素（ジクロロメタンまたはクロロホルム）を用いる（Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ Ｄ．，Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ．，１９６（１９９４），１９９７〜２０１２）。先行技術方法の例は、以下に簡単に論考される。
【０００５】
Ｉ．  溶媒蒸発
溶媒蒸発は、溶解または分散された活性剤を含有する有機溶媒中にポリマーを溶解することを含む。次いで、ポリマー／活性剤の混合物は、掻き混ぜられている連続相（典型的には、水性である）に添加される。水中油型エマルジョンを安定化するために、乳化剤が水性相中に含められる。次いで、有機溶媒は数時間またはそれ以上の期間にわたって蒸発され、それによりポリマーをコア物質の周りに沈着させる。かかる溶媒蒸発手法は、米国特許第４，３８９，３３０号に開示されている。
【０００６】
しかしながら、溶媒蒸発技法はしばしば好まれず、何故なら活性成分がしばしば溶媒抽出過程中に失われるからである。これは、この過程が水性相中への乳化を含み、そして水溶性薬物はより疎水性のポリマー溶液相から水性周囲中にしばしば急速に分配される故である。
【０００７】
溶媒蒸発法によるカプセル化はまた、マイクロスフェアの製造に通じる。カプセル化される活性成分は、伝統的には、揮発性有機溶媒中のポリマーの溶液中に分散される。この相は、非混和性分散媒質（水または鉱油）中に界面活性剤により乳化される。有機溶媒は、撹拌しながら蒸発される。蒸発後、マイクロスフェアは、濾過または遠心分離により回収される。
【０００８】
この技法の利点は、ヘプタンのような毒性溶媒の不存在並びにマイクロスフェアの集塊化の不存在である。溶媒蒸発は、相分離またはコアセルベーションのような他の方法より簡単であり、より融通性がありそして工業化するのがより容易であり、またそれは減少量の溶媒を用いることを可能にする。
【０００９】
伝統的には、溶媒蒸発は、主として、ステロイドおよびニトロソ尿素のような親油性物質のカプセル化に適用される。親水性活性成分のマイクロカプセル化は、鉱油のような非極性分散相の使用を必要とする。慣用的には、アセトン／パラフィン系が用いられる。しかしながら、マイクロスフェア中への親水性活性成分の組込みレベルは、この方法において用いられる量に関してかなり低く、そしてその上この系は、ポリマーがアセトンに可溶である（乳酸ポリマーの場合そうであるが、しかし乳酸とグリコール酸のコポリマーの場合そうでない）ことを必要とすると考えると、用いられ得るポリマーのタイプに関して制限を伴う。それ故、エマルジョン／蒸発によるこの技法は、伝統的に、水溶性ペプチドについておよびすべての水溶性物質について不適当であると認識されている。
【００１０】
溶媒蒸発法により製造されるマイクロ粒子は、二つのカナダ国特許出願すなわちＣＡ２，１００，９２５（Ｒｈｏｎｅ−Ｍｅｒｉｅｕｘ）およびＣＡ２，０９９，９４１（Ｔａｎａｂｅ Ｓｅｉｙａｋｕ Ｃｏ．）に記載されている。
【００１１】
ＣＡ２，０９９，９４１によれば、水溶性活性成分および生分解性ポリマーが、最初に溶媒または溶媒混合物中に溶解される。次いで、溶媒／溶媒混合物が除去され、そして形成された固体分散体は水と混和しない別の有機溶媒中に溶解される。生じた溶液（油相）は、Ｏ／Ｗ型エマルジョンが形成されるように、水性相中に乳化される。最後に、油相の有機溶媒が蒸発される。この特許に挙げられている特定例は、マトリックスとしてポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマー（ＰＬＧＡ）そして活性成分としてチロトロピン放出ホルモン（ＴＲＨ）またはその誘導体の一つの使用を記載する。
【００１２】
これらの成分は、最初に、アセトニトリル／エタノールおよび随意に水の混合物もしくはアセトニトリルのみ中に、またはアセトニトリルと水性ゼラチンもしくはジクロロメタンとエタノールから成る混合物中に溶解される。
【００１３】
ジクロロメタンまたはクロロホルムのような有機溶媒が、形成する固体分散体を溶解するために用いられる。ポリビニルアルコール水溶液が、水性相を成す。マイクロ粒子のサイズは１から１００μｍの直径にあり、しかして特定例によれば約５０μｍないし≦１００μｍにある。
【００１４】
ＣＡ２，１００，９２５によれば、ＬＨＲＨホルモンおよび類似体のマイクロ粒子が、２種の有機溶媒であってしかも一方の溶媒（分散溶媒）が簡単な掻き混ぜによって均質懸濁液の生成を可能にする２種の有機溶媒中に粉末化ＬＨＲＨホルモンを分散することにより製造される。第２溶媒は水と容易に混和し得、そしてそれ故水性相中における有機相のマイクロ分散を可能にする。ジクロロメタンまたは代替物としてクロロホルムが、第２溶媒として用いられる。マイクロ粒子は、１〜２５０μｍの直径を有する。マイクロ粒子は、好ましくは、５０〜６０μｍより大きい。
【００１５】
そのように製造されたマイクロ粒子のモルホロジーもまた、非常に不均質である。既に上記に記載されたように、用いられるハロゲン化溶媒もまた毒性学上支障がある。この方法はまた、多量の界面活性剤を必要とする。
【００１６】
ＩＩ．  相分離
マイクロ粒子を形成させるために用いられ得る別の技法は、油中水型エマルジョンまたは水中油型エマルジョンの形成を含む相分離である。ポリマーは、温度、ｐＨ、イオン強度の変化または沈殿剤の添加により、連続相から活性剤上に沈殿される。この方法もまた、主として、変性に因る活性成分の損失の難点がある。
【００１７】
従って、マイクロ粒子の製造のための相分離の使用は、より水溶性の化合物特に水溶性ポリペプチドを含有するマイクロ粒子の処方のためにより適合し得る。マイクロ粒子製造についての相分離法は、薬物のより効率的組込みを可能にし、また工業的目的のために容易にスケールアップされ得る。相分離法は、通常、高分子量ポリマーおよびポリマー用有機溶媒の溶液中の薬物粒子のエマルジョンまたは懸濁液を用いる。次いで、非溶媒が懸濁液またはエマルジョンに添加されて、ポリマーが溶液から分離しそして懸濁薬物粒子または薬物粒子を含有する液滴をカプセル化するようになる。次いで、生じたマイクロ粒子（溶媒で依然膨潤される）は、通常、非溶媒の更なる添加によりまたはマイクロ粒子の性質を強化および改善する何らかの他の方法により硬化される。
【００１８】
第１に、カプセル化される製品は、引き続いてマイクロカプセルのマトリックスを形成するよう意図されたポリマーの溶液中に分散される。第２に、ポリマーのコアセルベーションが、反応媒質の物理化学的改質により、特に相分離誘発剤によって誘発される。第３に、カプセル化される物質の周りに形成するコアセルベート液滴は、ポリマーについての非溶媒たとえばヘプタンにより、安定化および固化される。
【００１９】
コアセルベーションおよびエマルジョン相分離に基づいて製造されたところの、マイクロカプセル形態における水溶性のペプチドおよびタンパク質の製薬処方物は、米国特許第４，６７５，１８９号、第４，６７５，８００号、第４，８３５，１３９号、第４，７３２，７６３号および第４，８９７，２６８号、英国特許出願第２，２３４，８９６号、並びにＥＰ３３０，１８０およびＥＰ０，３０２，５８２から、並びにＲｕｉｚ等の国際的なＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９８９）４９：６９〜７７においておよびＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０）９：９２８〜９３４において知られている。
【００２０】
これらの開示刊行物において、用いられるコポリマー好ましくはポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーがハロゲン化有機溶媒好ましくはジクロロメタン中に溶解されそしてペプチド水溶液がこのポリマー溶液中に分散される方法が記載されている。次いで、いわゆるコアセルベーション剤が添加される。コアセルベーション剤は用いられた有機溶媒に可溶であるが、しかしポリマーはそうではなく、そのためポリマーの沈殿が起こると共に分散ポリペプチドが組み込まれる。
【００２１】
シリコーン油が、相分離用コアセルベーション剤として通常用いられる。シリコーン油の添加後、マイクロカプセルの硬化をもたらす多量のヘプタンもまた添加されねばならない。この方法のカプセル化効率は、約７０％である（ＵＳ４，８３５，１３９）。そのように製造されたマイクロカプセルは、実施例によれば１〜５００μｍ、好ましくは１０〜５０μｍの直径を有する。
【００２２】
この方法の主要な不利は、多量の溶媒の使用であり、しかしてコストの圧迫に加えて、用いられる溶媒（ヘプタンのような）に関連した毒性の問題を伴う。これは、ヘプタンを用いるコアセルベーションによる技法がその完全な除去を可能にしない故である。５ないし１０％程度のヘプタンという多量の残留溶媒が、マイクロスフェアにおいて観測される。
【００２３】
上記のこととは無関係に、この方法によるこれらのマイクロスフェアの製造において収量の高損失の原因となるマイクロスフェアの凝集体がしばしば生成され、しかも時には該凝集体によりかくして使用不能になったいくつかのバッチの全体的不合格が余儀なくされた、ということも観察された。マイクロスフェアが凝集する傾向は、注射可能なマイクロスフェアの場合において、注射のためにマイクロスフェアを懸濁する時に追加的難点の原因となる。
【００２４】
相分離による技法の別の不利は、不規則な放出および一般に第１相の加速放出（「バースト効果」）を伴うマイクロスフェア中の活性物質の不均質分布である。これは、特に活性物質がポリマーについての溶媒に可溶でない故、活性物質がポリマー溶液中に懸濁される場合特に観察される。これは、一般に、たとえばポリペプチドについて当てはまる。加えて、問題は、非球状粒子の形成、滑らかでないおよび欠陥を有する粒子の形成、広範囲のサイズと共に大きい粒子の存在、並びに非微粒子状物質の存在を包含する。
【００２５】
ＩＩＩ．  二重エマルジョン
マイクロ粒子を形成させる方法の別の例は、米国特許第３，５２３，９０６号に示されている。この方法において、カプセル化される物質は、水と混和しない溶媒中のポリマー物質の溶液中に乳化され、そして次いでこのエマルジョンは、親水性コロイドを含有する水溶液中に乳化される。次いで、マイクロカプセルからの溶媒除去が蒸発による単一工程において成し遂げられて、生成物が得られる。
【００２６】
やはり米国特許第３，５２３，９０６に開示されている二重エマルジョン（Ｗ／Ｏ／Ｗ）・溶媒蒸発法は工業的用途用であり、そして壁物質として非生分解性ポリマー（たとえば、ポリスチレン）を用い、しかして非生分解性ポリマーはハロゲン化炭化水素（ジクロロメタンまたはクロロホルム）中に溶解される。
【００２７】
米国特許第５，３３０，７６７号は、製薬の目的のために、米国特許第３，５２３，９０６に開示されたＷ／Ｏ／Ｗ二重エマルジョン・溶媒蒸発法の使用を記載する。米国特許第３，５２３，９０６に記載された方法とは対照的に、ここでは生分解性ポリマーのみが用いられる。マイクロカプセル化のための他の二重エマルジョン法は、欧州特許１９０，８３３およびＷＯ９９／５８１１２、並びに米国特許第５，６４８，０９５号、第５，９０２，８３４号、第４，９５４，２９８号、第５，８４１，４５１号、第４，９１７，８９３号および第４，６５２，４４１号に開示されている。
【００２８】
しかしながら、これらの方法の重大な欠点は、そのように製造されたマイクロ粒子がモノリシックマイクロスフェアおよびマイクロカプセルの混合物から成ることである。限られたカプセル化効率（３０〜６０％）に加えて、マイクロ粒子の不均質モルホロジーは、製品の放出挙動に有意的影響を及ぼす（Ｒ．Ｂａｋｅｒ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ Ａｃｔｉｖｅ Ａｇｅｎｔｓ，Ａ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８７）。これは同時にまた、製品品質の再現性を妨げる。
【００２９】
更に、該方法は、製品品質に対する個々のプロセス工程の特定効果が不確実でありそしてそのためプロセスの最適化もまた困難である複雑な多工程法を含む。該方法は、非常に時間がかかり、また多量の界面活性剤溶液を必要とする。該方法の別の欠点は、高い毒性学的潜在力を有する溶媒の使用である（Ｈｅｎｓｃｈｌｅｒ Ｄ．，Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ．，１０６（１９９４），１９９７〜２０１２）。
【００３０】
ＩＶ．  噴霧乾燥
欧州特許０，３１５，８７５（Ｈｏｅｃｈｓｔ ＡＧ）に記載されているところの、水溶性のペプチドおよびタンパク質が組み込まれ得る生分解性マイクロ粒子の製造のための別の方法は、噴霧乾燥法に基づいている。この方法において、ペプチドまたはタンパク質の水溶液がポリマー有機溶液中に乳化され、そして次いでこのエマルジョンが噴霧乾燥される。他の噴霧乾燥法の例は、米国特許第５，６４８，０９６号、第５，７２３，２６９号および第５，６２２，６５７号に開示されている。
【００３１】
９９：１と２０：８０の間の混合比におけるポリヒドロキシ酪酸とポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーの混合物が、生分解性ポリマーとして用いられる。また、ペプチド／タンパク質は、マイクロ状形態または水溶液状態にある。クロロホルム、ジクロロメタン、ＤＭＦ、または水／エタノール／クロロホルムの溶媒混合物が、溶媒として考慮される。クロロホルムが、記載された実施例において用いられている。噴霧乾燥は、好ましくは、４５℃から９５℃の温度にて行われる。
【００３２】
この方法の欠点は、低い収量（理論的に可能な収量の４５％）および高い初期バースト効果を包含する。加えて、ジクロロメタンおよびクロロホルムのような溶媒の使用は、最終生成物における毒性学上支障がある残留溶媒汚染に通じる。原則的に、噴霧乾燥マイクロ粒子はまた集塊化の強い傾向を示し、そして１００μｍまでの直径を有する集塊がしばしば形成される。
【００３３】
噴霧乾燥において、ポリマーおよび薬物が、ポリマーについての溶媒中において一緒に混合される。次いで、この溶液を乾燥室（乾燥剤の源も備えられる）中に噴霧することにより、溶媒が蒸発される。これは、薬物を含有するポリマー液滴をもたらすことになる。しかしながら、タンパク質のような感受性物質は、この過程中に、用いられた高められた温度および有機溶媒／空気界面への暴露に因り不活性化され得る。更なる不利は、有機溶媒の急速除去に因る高い多孔度の発生を包含する。これらの欠点を回避するために導入された変型は、マイクロスフェアの形成中における低温の使用である（米国特許第５，０１９，４００、ＷＯ９０／１３７８０および米国特許第４，１６６，８００）。マイクロカプセルは、米国特許第４，５６８，５５９に記載されているように、ＰＬＧＡポリマーでの薬物含有マイクロ粒子の吹付け被覆を用いて製造された。
【００３４】
マイクロカプセル化法の他の例は、先行技術において知られている。たとえば、慣用の先行技術マイクロカプセル化法の別の例は、米国特許第３，７３７，３３７号に示されており、しかして溶媒中の壁またはシェル形成性ポリマー物質の溶液が作製される。溶媒は、水に部分的にのみ可溶である。固体すなわちコア物質がポリマー含有溶液中に溶解または分散され、そしてその後単一工程において、マイクロカプセルから溶媒を除去するために、有機溶媒と混和しない水性液中にコア物質含有溶液が分散される。米国特許第３，６９１，０９０号に示されているような更に別の方法において、有機溶媒は、単一工程において、好ましくは減圧下で、水性媒質中のマイクロカプセルの分散液から蒸発される。同様に、米国特許第３，８９１，５７０号の開示は、多価アルコール媒質中のマイクロカプセルの分散液からの溶媒が熱の適用によりまたはマイクロカプセルを減圧下に付すことによりマイクロカプセルから蒸発される方法を示す。一工程溶媒除去法の別の例は、米国特許第３，９６０，７５７号に示されている。
【００３５】
ＷＯ９７／１９６７６は、親水性活性剤のマイクロカプセル化方法を開示する。６．０〜８．０のｐＨを有する活性剤水溶液が、ポリマー溶液に添加される。次いで、水性界面活性剤相が添加されて、活性剤を含有する内部水性コアを含むマイクロカプセルが形成される。
【００３６】
ＷＯ９９／２０２５３は、マイクロ粒子を形成させる方法であって、連続相としてかつ抽出媒質として作用するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）水溶液中に、薬物のエマルジョンまたは分散液が注入される方法を開示する。エマルジョンまたは分散液についての溶媒は、水／ＰＥＧ溶液と混和しないかまたは本質的に混和しないがしかしわずかにまたは非常にわずかに可溶であるべきである。その例は、エチルアセテート、ジクロロメタン、メチルエチルケトンおよびメチルイソブチルケトンを単独にてまたは組合わせにて包含する。ＰＥＧの高濃度が、液滴／粒子からの活性剤の拡散を防ぐために用いられる。該方法は、マイクロ粒子を生成させるために数時間の混合を必要とする。
【００３７】
マイクロ粒子を製造するための追加的方法は、米国特許第６，２９１，０１３号、第５，７９２，４７７号、第５，６４３，６０５号、第５，９２２，３５７号、第６，３０９，５６９号、並びにＰＣＴ公報ＷＯ９９／５９５４８およびＷＯ０１／２８５９１に開示されている。該方法が何であれ、マイクロ粒子についての薬物放出パターンは、数多くの因子に依存する。たとえば、カプセル化される薬物のタイプ並びにそれが存在する形態（すなわち、液体または粉末）は、薬物放出パターンに影響を及ぼし得る。薬物放出パターンに影響を及ぼし得る別の因子は、薬物をカプセル化するために用いられるポリマーのタイプである。薬物放出パターンに影響を及ぼす他の因子は、薬物充填量、ポリマー中における分布の態様、粒子サイズおよび粒子形状を包含する。製薬用途用のマイクロ粒子を製造するために上記の方法の数多くの改変にもかかわらず、特に制御放出性送達系における使用について、これらの方法により製造されたマイクロ粒子の効力および再現性を減じる問題が残存している。
【００３８】
定義
本発明において用いられる場合、用語「薬物相」は、水性界面活性剤相の添加の前に存在するポリマー有機溶液への活性剤の添加から生じるところの、本発明によるマイクロ粒子の製造中に形成されるポリマー／活性剤含有相を指す。薬物相は、溶液、分散体、懸濁液またはエマルジョンであり得る。
【００３９】
本発明において用いられる場合、用語「マイクロカプセル」は、ポリマー壁が水性の溶液または懸濁液から成るコアを包んでいるマイクロ粒子を指す。疎水性活性剤をカプセル化するマイクロカプセルの場合において、活性剤はコア中に含有され得、しかしてこの場合コアは活性剤の水性懸濁液を含み、あるいは活性剤はポリマー壁それ自体中に埋め込まれ得、しかしてこの場合コアは活性剤が実質的に存在しない水性の溶液または懸濁液を含む。
【００４０】
本発明において用いられる場合、用語「マイクロ粒子」は、約２０ｎｍないし１，０００μｍ以内の平均直径を有する実質的に球状の粒子を指し、そしてマイクロカプセル、マイクロスフェアおよびマイクロスポンジを包含する。
【００４１】
本発明において用いられる場合、用語「マイクロスフェア」は、活性剤が固体ポリマーマトリックス内に埋め込まれているマイクロ粒子を指す。
【００４２】
本発明において用いられる場合、用語「マイクロスポンジ」は、連続気泡構造を含むポリマーマトリックス内に活性剤が埋め込まれているマイクロ粒子を指す。本発明において用いられる場合、用語「界面活性剤相」は、界面活性剤または界面活性剤の混合物が追加的賦形剤と共にまたは追加的賦形剤なしに溶解されている水溶液を指す。
【００４３】
本発明において用いられる場合、用語「容積分率」は、本発明によるマイクロ粒子の懸濁液を生成させるために用いられる物質の全容積に関して言及相の容積を指す。たとえば、水性界面活性剤相の容積分率は、薬物相と水性界面活性剤相の総容積で割られた水性界面活性剤相の容積である。
【００４４】
発明の要約
本発明は、先行技術において見られる不利を回避または低減するところの、生分解性ポリマー中における非水溶性活性剤のカプセル化のための新規な簡単で穏和な方法を提供する。該方法は、毒性学上容認され得る溶媒を用いて、８５％より大きい好ましくは９０％より大きいカプセル化効率にて、２０ｎｍから１，０００μｍのサイズ範囲の非集塊化性マイクロ粒子を生成する。本発明の方法は最小容量の界面活性剤溶液を用い、しかして他の先行技術方法と比べて減少された製造時間をもたらすことになる。加えて、本発明による方法は商業規模の製造ニーズを満たすために容易にスケールアップされ得、何故ならそれは先行技術の方法と比べてはるかに単純化されたワンポット法を提供するからである。
【００４５】
加えて、本発明による方法は、粒子サイズ分布についてより大きい制御を与え、所望サイズ分布およびより均一なモルホロジーを有するマイクロ粒子の製造を可能にし、並びにマイクロ粒子を得るために必要とされる混合エネルギーの減少を可能にする。更に、本発明は、薬物相が典型的には大過剰の界面活性剤溶液中に注入される先行技術方法と比べて、マイクロ粒子懸濁液を形成させるためにより少ない量の界面活性剤溶液しか必要とされないようにする。これは処理時間を大いに減少し、また界面活性剤（ある場合には、予定使用の前にマイクロ粒子から除去されることが必要である）の量を最小にする。
【００４６】
一層特定的には、本発明は、生分解性ポリマー中において疎水性活性剤をカプセル化する方法であって、少なくとも部分的に水と混和し得るハロゲン不含溶媒中にポリマーを溶解してポリマー溶液を形成させ、疎水性活性剤を該ポリマー溶液に添加して容器中に含有された薬物相を形成させ、混合しながら該薬物相を含有する該容器に予定量の水性界面活性剤相を添加することを含み、しかも該容器から溶媒の除去を必要とすることなく該薬物相への該界面活性剤相の添加時にマイクロ粒子の懸濁液が生成されるように該薬物相から該溶媒のある量を抽出するために、該予定量は該界面活性剤相が連続相かつ抽出媒質になるようにするのに十分である方法に関する。
【００４７】
発明の詳細な記載
少なくとも部分的に水と混和し得る好ましくは約１．５〜４０ｗｔ％の水中溶解度を有する有機溶媒または溶媒混合物を含む薬物相への水性界面活性剤相の適切な選択および添加により、該水性界面活性剤相が連続相および抽出媒質の両方として作用し、それにより溶媒蒸発または他のかかる溶媒除去工程を必要とすることなく、マイクロ粒子の懸濁液がほとんど即時に形成されることが可能になる、ということが驚くべきことに見出された。好ましい具体的態様によれば、本発明の方法は、主としてマイクロスフェア好ましくは少なくとも８０ｗｔ％のマイクロスフェアでそして残部がマイクロカプセルとマイクロスポンジの混合物であるマイクロ粒子を製造するために実施され得る。
【００４８】
本発明によれば、マイクロカプセル化用のポリマーは、部分的に水と混和し得るハロゲン不含溶媒または溶媒混合物中に溶解されて、ポリマー有機溶液が形成される。水または水性界面活性剤相（緩衝剤を有するまたは有さない）中における有機溶媒または溶媒混合物の溶解度は、１．５％（ｗ／ｗ）と４０％（ｗ／ｗ）の間の値を有する。４０％ｗ／ｗより大きい水中溶解度を有する溶媒を用いる場合、それは、溶媒混合物の水中溶解度が４０％ｗ／ｗ未満に低減されるように、より低い水中溶解度を有する別の溶媒のより多い容量と混合して用いられる。次いで、薬物相が、以下に詳細に記載されるように、カプセル化される活性剤および所望のマイクロ粒子モルホロジーに依存して作製される。
【００４９】
薬物相が作製されると、下記に詳述されるように、薬物相が含有されている容器に水性界面活性剤相が添加される。ポリマー用溶媒は、水性界面活性剤相中におけるその混和性に基づいて選択される。本発明によれば、ポリマー用溶媒および水性界面活性剤溶液は、それらの溶解パラメーター（δ（ｃａｌ／ｃｍ３）１／２）に基づいて選択される。好ましい具体的態様によれば、δ［ポリマー用溶媒］−δ［水性相］＜０であり、好ましくはδ［ポリマー用溶媒］−δ［水性相］は０〜−１５δ（ｃａｌ／ｃｍ３）１／２の範囲内にある。
【００５０】
溶解パラメーターに加えて、薬物相を水性相と一緒にするとほとんど即時にマイクロ粒子の懸濁液が形成されるようにするために、本発明の方法により一緒にされる溶液の各々の容積分率が選択される。従って、ポリマー相：界面活性剤相の容積比は、１：２〜１：３０好ましくは１：２〜１：２０の範囲内にある。
【００５１】
マイクロ粒子の懸濁液は、即時に好ましくは１分の混合以内に形成される。更なる混合が、好ましくは約３０分まで一層好ましくは約４〜１０分遂行される。次いで、マイクロ粒子は、周知技法により懸濁液から取り去られ得る。マイクロ粒子を製造するためのこの驚くべき程簡単な方法は、より毒性の小さいポリマー用溶媒の使用、マイクロ粒子モルホロジーについての制御、および先行技術方法と比べて劇的に減少された製造時間でもってのはるかに単純化された方法を含めて、先行技術に対して有意改善をもたらすことになる。更に、本発明は、大規模製造のためにスケールアップするのに容易に適する。
【００５２】
本発明の第１の具体的態様は、マイクロカプセル中における疎水性活性剤の実質的に均質なカプセル化に向けられる。この具体的態様によれば、疎水性活性剤は、下記に記載されるようにおよびたとえば実施例１〜４において見られるように薬物相の作製に依存して、マイクロカプセルポリマー壁内に埋め込まれ得または水性懸濁液としてマイクロカプセルコア内に含有され得る。
【００５３】
作製された薬物相が溶液を含む場合、該方法は、マイクロカプセルのポリマー壁中に埋め込まれた活性剤を含むマイクロカプセルを製造する。特定的には、薬物相は、疎水性活性剤およびポリマーを有機溶媒中に溶解して溶液を形成させることにより作製される。次いで、緩衝剤水溶液が、混合しながら薬物相に添加される。次いで、相転移を誘発させそして即時にマイクロカプセルの懸濁液を形成させるために、水性界面活性剤相が、随意に別の緩衝剤と共に、上記に論考されたように薬物相に添加される。
【００５４】
薬物相が懸濁液として作製される場合、本発明の方法は、疎水性活性剤の水性懸濁液を含有するコアを含むマイクロカプセルを製造する。特定的には、薬物相は、緩衝剤を有するまたは有さない疎水性活性剤の水性懸濁液をポリマー溶液に添加することにより作製される。次いで、相転移を誘発させるために、水性界面活性剤相が、上記に論考されたように薬物相に添加される。相転移は、本発明の比較的速い処理時間、並びに水性界面活性剤相の添加が有機相からポリマー用溶媒を水性界面活性剤相中に抽出し、それにより相転移およびマイクロカプセル懸濁液の即時の形成を誘発させるようにポリマーを溶解するのに必要な量のみのポリマー用溶媒の使用から生じる。
【００５５】
本発明の好ましい具体的態様は、マイクロスフェアの実質的に均質な混合物好ましくは少なくとも８０ｗｔ％のマイクロスフェア中における疎水性活性剤のカプセル化に向けられる。残りのマイクロ粒子は、マイクロカプセルまたはマイクロスポンジを含む。この好ましい具体的態様は、図１を参照して記載される。この具体的態様によれば、薬物相は、活性剤をポリマー有機溶液中に溶解してポリマー／薬物の溶液１００を形成させることにより作製される。次いで、ポリマー／薬物の溶液１００は、容器３００に添加される。次いで、マイクロ粒子の懸濁液を生成させるために、水性界面活性剤相２００が、上記に論考されたように薬物相を含有する容器３００に添加される。
【００５６】
ポリマー有機溶液に可溶である疎水性活性剤のカプセル化に向けられるこの具体的態様によれば、粒子モルホロジーについての制御は、薬物相への水性界面活性剤相の添加速度を制御することによりまたは適切な有機溶媒の選択により遂行され得る。薬物相への水性界面活性剤相の急速な（即時の）添加は実質的にすべてマイクロスフェアを含む懸濁液の生成をもたらすことになるのに対して、徐々の添加（好ましくは１分を越える期間にわたって）はマイクロカプセル、マイクロスフェアおよびマイクロスポンジの混合物が生成されることになる。その代わりに、より疎水性の有機溶媒の選択は実質的にすべてマイクロスフェアの生成をもたらすことになるのに対して、より親水性の溶媒の選択は約７０〜８０％ｗ／ｗまでのマイクロスフェアおよび３０〜２０％ｗ／ｗのマイクロカプセルまたはマイクロスポンジを含むマイクロカプセルとマイクロスフェアの混合物の生成をもたらすことになる。
【００５７】
更に別の具体的態様において、ポリマー有機溶液に可溶でない疎水性活性剤は該ポリマー有機溶液中に懸濁されて、薬物相が形成される。次いで、水性界面活性剤相が、上記に論考されたように薬物相に添加されて、実質的に均一なモルホロジーのマイクロスフェアの懸濁液が生成されることになる。
【００５８】
マイクロ粒子懸濁液を形成させるために、界面活性剤または界面活性剤混合物を含有する水溶液または緩衝剤水溶液の規定容量が、掻き混ぜ中、均質化により生成された薬物相に連続相として添加され、その結果有機相から水性相への相転移がマイクロ粒子懸濁液の即時の形成と共に起こる。好ましい具体的態様において、相転移のために必要とされる水性界面活性剤連続相の容量は、水性界面活性剤連続相中のポリマーマイクロ粒子が「体心立方」もしくは「面心立方」または「六方最密」配列におけるキャビティ（「空所」）を占めるという想定下で算出される。この好ましい具体的態様によれば、水性界面活性剤相の容積分率は、おおよそ６０％より大きく好ましくは６５％と８０％の間最も好ましくは６８％と７４％の間にある。
【００５９】
薬物相への水性界面活性剤相の添加は、マイクロ粒子懸濁液のほとんど即時の形成をもたらすことになる。その結果、本発明の方法は、粒子サイズ分布についてより良好な制御を与え、またより小さい平均直径およびより均一なモルホロジーのマイクロ粒子並びに増加カプセル化効率をもたらす。加えて、マイクロ粒子懸濁液は、数時間までの生成時間を必要とする先行技術方法と比べて、何分かの薬物相への水性界面活性剤相の添加以内に好ましくは１分以内に形成される。マイクロ粒子の懸濁液が形成されると、溶媒または溶媒混合物は、通常の方法により好ましくは真空および／もしくは空気／窒素流中でまたは濾過もしくは抽出によっても除去される。溶媒を除去した後、マイクロ粒子は、所望される場合、追加的に、「クロスフロー」濾過に付される。その結果、それらは、界面活性剤残分および溶媒残分並びに非カプセル化活性物質または場合によっては表面に付着している活性物質が穏和に除去される。
【００６０】
マイクロ粒子は、水で洗浄した後濃縮され（遠心分離または濾過）、そして随意に、上記に挙げられた特許に記載されているように凍結乾燥もしくは噴霧乾燥され、またはたとえば米国特許第６，０８０，４２９号に記載されているように、流動床にて乾燥される。
【００６１】
好ましい具体的態様によれば、粘度調整剤が、水性界面活性剤相に添加される。グリセロールのような粘度調整剤での水性界面活性剤相の水の一部の置換は、より小さい平均マイクロ粒子直径およびより小さいマイクロ粒子サイズ分布、並びに薬物充填量およびカプセル化効率の増加をもたらすことになる、ということが驚くべきことに見出された。
【００６２】
水性界面活性剤相の粘度は、グリセリンによる水の逐次置換により、数桁にわたって変動され得る。この具体的態様によれば、水性界面活性剤相は、約１〜８０ｗｔ％好ましくは５〜５０ｗｔ％の、グリセロールのような粘度調整剤が付与される。他の粘度調整剤は、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、セルロースポリマーおよびそれらの誘導体、キトサン、生物接着剤ポリマー、並びに米国特許第４，６５２，４４１号、第４，７１１，２８２号、第４，９１７，８９３号および第５，０６１，４９２号（これにより参照することによってそっくりそのまま組み込まれる）に開示されているもののような当該技術において知られた他の薬剤を包含する。
【００６３】
別の好ましい具体的態様によれば、共溶媒が水性界面活性剤相に添加される。共溶媒は水混和性であり、そして更に、ポリマーについての溶媒でないけれども、ポリマー用溶媒についての溶媒であると特徴づけられる。この具体的態様によれば、該水性界面活性剤相は、共溶媒が存在しない水性界面活性剤相の等容量と比べて、ポリマー有機溶液からポリマー用溶媒のより多くを抽出することが可能である。これはマイクロ粒子懸濁液を形成させるために必要とされる水性界面活性剤相の容積分率を低減させ、かくしてマイクロ粒子懸濁液から除去される界面活性剤の量を減少する。水性界面活性剤相に添加される共溶媒の量は、主として、選択されたポリマーおよびポリマー用溶媒に依存する。この具体的態様によれば、典型的には、約１〜４０ｗｔ％の共溶媒が水性界面活性剤相に添加される。適当な共溶媒は、エタノール、メタノールのようなアルコール、エーテルおよびポリエチレングリコールを包含するが、しかしそれらに限定されない。
【００６４】
水性界面活性剤相のｐＨを活性剤が可溶でない範囲に保つために、水性界面活性剤相は、緩衝剤が付与され得る。緩衝剤のかかる選択は、活性剤を薬物相中に保ちかつ水性界面活性剤相抽出媒質中への活性剤の移行を防ぐよう作用し、それによりマイクロカプセル中への活性剤のカプセル化の効率を増加する。緩衝剤のかかる使用はまた、上記に記載されたその他の具体的態様のいずれかに従ってカプセル化効率を増加するために用いられ得る、ということが理解されるべきである。
【００６５】
本発明によれば、所望粒子サイズは、撹拌速度および撹拌時間により並びにまた界面活性剤濃度により調整され得る。本発明のマイクロスフェアは、撹拌速度、相転移工程において用いられる溶媒の容量、温度、ポリマーの濃度およびポリマーの固有粘度のようなプロセスパラメーターを変動することにより、直径について約０．１μｍから約１，０００μｍを越える範囲のいかなる所望のサイズにても製造され得る。かかる選択基準は、当業者により容易に決定され得る。
【００６６】
本発明は、広範囲の疎水性活性剤をカプセル化するために実施され得る。本発明において用いるのに適した薬剤の例は、カルシトニン、エリトロポイエチン（ＥＰＯ）、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、セレダーゼ、セレザイム（ｃｅｒｅｚｙｍｅ）、シクロスポリン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、アルファ−１プロテイナーゼインヒビター、エルカトニン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）および成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）を含めて成長ホルモン、ヘパリン、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマを含めてインターフェロン、インターロイキン−２、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）およびゴセレリンを含めてＬＨＲＨ類似体、インスリン、ソマトスタチン、オクトレオチドを含めてソマトスタチン類似体、バソプレシンおよびその類似体、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、インスリン様成長因子、インスリントロピン、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト、インターロイキン−３、インターロイキン−４、インターロイキン−６、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、神経成長因子、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、チモシンアルファ１、ＩＩｂ／ＩＩＩａインヒビター、アルファ−１抗トリプシン、ＶＬＡ−４、呼吸器系合胞体ウイルス抗体、嚢胞性線維症膜貫通調節（ＣＦＴＲ）遺伝子、デオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮアーゼ）、殺菌性／透過性亢進タンパク質（ＢＰＩ）、抗ＣＭＶ抗体、インターロイキン−１受容体、ワクチン、１３−シスレチノイン酸、ペンタミジンイセチオネート、硫酸アルブテロール、硫酸メタプロテレノール、ベクロメタゾンジプロピオネート、トリアムシノロンアセトアミド、ブデソニドアセトニド、フルチカソン、イプラトロピウムブロマイド、フルニソリド、クロモリンナトリウム、エルゴタミンタートレート、並びに上記のものの類似体、アゴニストおよびアンタゴニストを包含するが、しかしそれらに限定されない。
【００６７】
カプセル化される活性剤の量は、物質のタイプ、持続期間、時間および所望効果に依存する。本発明による薬物充填量は、約４０ｗｔ％までの範囲にある（充填度＝活性成分の重量×１００／活性成分の重量＋ポリマーの重量）。
【００６８】
本発明の実施のために適したポリマーは、文献から公知であり、そしてたとえばポリアミド、ポリ酸無水物、ポリエステル、ポリオルトエステル、ポリアセテート、ポリラクトンおよびポリオルトカーボネートを包含する。本発明による好ましい生分解性ポリマーは、α−、β−およびγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステル、またはα−、β−およびγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルと線状もしくは星状ポリ（エチレングリコール）のブロックコポリマーを含む。ポリラクチド−コ−グリコリドポリマーは、本発明によるポリマーの特に好ましいクラスを代表する。
【００６９】
典型的には、適当なポリマー溶液は、約１％（ｗ／ｗ）と約５０％（ｗ／ｗ）の間の適当な生体適合性ポリマーを含有し、しかして該生体適合性ポリマーは、典型的には、適当なポリマー用溶媒中に溶解されている。好ましくは、ポリマー溶液は、約５％（ｗ／ｗ）ないし約３０％（ｗ／ｗ）のポリマーを含有する。本発明のマイクロ粒子についての分解速度は、部分的には、ポリマーの分子量により決定される。所望の分解プロフィールをもたらすために、異なる分子量（または固有粘度）のポリマーが混合され得る。好ましい具体的態様によれば、分解速度は、ポリマー中のラクチド対グリコリドの比率により制御される。
【００７０】
本発明の方法に用いるための生分解性ポリマーの例は、当該技術において知られており、そしてポリグリコリド（ＰＧＡ）、並びにグリコリド／ラクチドコポリマー（ＰＧＡ／ＰＬＬＡ）またはグリコリド／トリメチレンカーボネートコポリマー（ＰＧＡ／ＴＭＣ）のようなグリコリドのコポリマー；Ｌ−ポリラクチド（ＰＬＡ）、並びにポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ），ポリ（ＤＬ−ラクチド）コポリマーおよびＬ−ラクチド／ＤＬ−ラクチドコポリマーのようなポリラクチドのステレオコポリマー；ラクチド／テトラメチルグリコリドコポリマー、ラクチド／δ−バレロラクトンコポリマーおよびラクチド／ε−カプロラクトンコポリマーのようなＰＬＡのコポリマー；ポリ（β−ヒドロキシブチレート）（ＰＨＢＡ）、ＰＨＢＡ／β−ヒドロキシバレレートコポリマー（ＰＨＢＡ／ＨＶＡ）、ポリ（β−ヒドロキシプロピオネート）（ＰＨＰＡ）、ポリ（ｐ−ジオキサノン）（ＰＤＳ）、ポリ（δ−バレロラクトン）、ポリ（ε−カプロラクトン）、ポリ（ポリアミノ酸）、疎水性にされた多糖、または疎水性にされたヒアルロン酸、または疎水性にされたデキストラン、または自己組織化態様にて疎水性にされたアミロペクチンもしくはヒアルロン酸を包含するが、しかしそれらに限定されない。
【００７１】
ＰＬＡおよびＰＥＧより成るＡＢブロックコポリマー、ＰＬＡ−ＰＥＧ−ＰＬＡより成るＡＢＡトリブロックコポリマー、Ｓ（３）−ＰＥＧ−ＰＬＡブロックコポリマーおよびＳ（４）−ＰＥＧ−ＰＬＡブロックコポリマーは、ヒドロキシカルボン酸のポリエステルと線状または星状ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）のブロックコポリマーとして、本発明による方法において用いるのに適する。
【００７２】
本発明に従って用いるための適当な商業的に入手できるポリマーは、Ｒｅｓｏｍｅｒ（登録商標）（Ｂｏｈｒｉｎｇｅｒ−Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）Ｌ−１０４、Ｌ−２０６、Ｌ−２０７、Ｌ−２０８、Ｌ−２０９、Ｌ−２１０、Ｌ−２１４、Ｒ−１０４、Ｒ−２０２、Ｒ−２０３、Ｒ−２０６、Ｒ−２０７、Ｒ−２０８、Ｇ−１１０、Ｇ−２０５、ＬＲ−９０９、ＲＧ−５０２、ＲＧ−５０２Ｈ、ＲＧ−５０３、ＲＧ−５０３Ｈ、ＲＧ−５０４、ＲＧ−５０４Ｈ、ＲＧ−５０５、ＲＧ−５０５Ｈ、ＲＧ−５０６、ＲＧ−５０８、ＲＧ−７５２、ＲＧ−７５５、ＲＧ−７５６およびＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−８５８を包含するが、しかしそれらに限定されない。
【００７３】
本発明による好ましい溶媒または溶媒混合物は、アセトン、エタノール、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチルまたはブチルアセテートのようなアルキルアセテート、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたはイソブチルホルメートのようなアルキルホルメート、トリアセチン、トリエチルシトレートおよび／またはＣ１〜Ｃ４−アルキルラクテートたとえばメチルまたはエチルラクテート、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、１−メチル−２−ピロリドンおよび３−メチル−１−ブタノール、アセトニトリル、ＴＨＦ、ＤＭＳＯ、ＰＥＧ１００、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、Ｎ−メチルピロリドン、グリコフロール、ジエチルカーボネート、トリエチルシトレート、並びに２−メチル−１−プロパノールを包含する。
【００７４】
好ましい界面活性剤はカチオン性、アニオン性および非イオン性界面活性剤を包含し、しかしてＰｏｌｏｘａｍｅｒｅ（登録商標）、Ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ（登録商標）、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標））、スクロースエステル（Ｓｉｓｔｅｒｎａ（登録商標），オランダ国）、スクロースエステル（Ｒｙｏｔｏ Ｓｕｇａｒ Ｅｓｔｅｒ，東京）、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、脂肪アルコールポリグリコシド、Ｃｈａｒｐｓ、Ｃｈａｒｐｓｏ、デシル−β−Ｄ−グリコピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリエトキシル化脂肪酸エーテル（Ｂｒｉｊ（登録商標））、トリトンＸ１００、またはそれらの混合物を包含するが、しかしそれらに限定されない。安定な水性処方物をもたらすのに有効な量、通常約０．１％（ｗ／ｖ）から約３０％（ｗ／ｖ）の範囲の量が用いられる。
【００７５】
本方法のカプセル化効率は少なくとも８５％であり、好ましくは９０と９５％の間のカプセル化効率が達成される。カプセル化効率は、カプセル化された活性成分の重量×１００／用いられた活性成分の重量を意味すると理解される。更に、本発明は、生じるマイクロ粒子が少なくとも８５ｗｔ％好ましくは少なくとも９０ｗｔ％最も好ましくは９５ｗｔ％より大きい単一の均一モルホロジー（すなわち、少なくとも９５ｗｔ％のマイクロスフェア）を含むような高度に均一なモルホロジーをもたらす。
【００７６】
本発明の処方物は、保存剤、トレハロースまたはマンニトールのようなポリオールに加えてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のような多種の賦形剤を含有し得る。処方物用の適当な保存剤の例は、フェノール、ベンジルアルコール、メタ−クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、ベンザルコニウムクロライドおよびベンゼトニウムクロライドを包含する。好ましい保存剤は約０．２ないし０．４％（ｗ／ｖ）のフェノールおよび約０．７ないし１％（ｗ／ｖ）のベンジルアルコールを包含するけれども、保存剤のタイプおよび濃度範囲は決定的には重要でない。
【００７７】
一般に、本発明の薬物相、ポリマー有機溶液および／または界面活性剤相は、安定な形態の作製を損ねない量にておよび有効で安全な製薬投与に適した量にて、他の成分を含有し得る。たとえば、当業者に周知の他の製薬上容認され得る賦形剤は、本組成物の一部を構成し得る。これらは、たとえば、塩類、様々な増量剤、追加的緩衝剤、キレート化剤、酸化防止剤、共溶媒、等を包含し、しかしてそれらの特定例は、トリス−（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩（「トリス緩衝剤」）およびエデト酸二ナトリウムを包含する。糖、糖アルコールのような凍結保護剤、または低分子量ポリビニルピロリドンおよび誘導体のような、米国特許第５，６７６，９６８号に開示されているもののような結晶化抑制剤は、凍結乾燥のために随意に添加される。
【００７８】
製薬用途についてのマイクロ粒子の好ましい使用によれば、マイクロスフェアが、いずれかの必要とされる補因子と一緒に、製薬上容認され得る無菌の等張処方物中に入れられ、そして随意に当該分野において周知の標準手段により投与される。マイクロスフェア処方物は、典型的には、乾燥粉末として貯蔵される。本発明のマイクロ粒子は、工業用化学物質、除草剤、肥料および染料のような他の用途に有用であり得る、ということが理解されるべきである。
【００７９】
本発明は以下に実施例にて更に説明されるが、本発明はそれらに限定されない。上記に挙げられた特許はすべて、参照することによりそっくりそのまま本明細書に組み込まれる。
【００８０】
実施例１
親油性活性成分
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６を１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１．０ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、このポリマー溶液中に、２０ｍｇのブデソニドを含有する５ｍＬの５０ｍｍｏｌトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン水溶液（ｐＨ７．４）を、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）により、室温において９，０００ｒｐｍにて４分間分散する。
【００８１】
次いで、４％のプルロニックＦ−６８を含有する５０ｍＬの５０ｍｍｏｌクエン酸塩緩衝剤溶液（ｐＨ６．０）を、連続相として、９，０００ｒｐｍにての掻き混ぜ中に添加する。３０秒の分散時間後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。次いで、溶媒エチルホルメートを、真空の適用により、窒素もしくは空気の導入によりまたは水での抽出により、２０℃にて除去する。５時間後、この懸濁液を５Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【００８２】
「クロスフロー」濾過を、ポリオレフィン膜（カットオフ０．２μｍ）を備えたＳａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）装置で行う。溶媒不含のかつほとんど乳化剤不含のこの懸濁液を、液体窒素でもってできる限り速く凍結して凍結乾燥する。
【００８３】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、２．２％の活性成分含有率を有するマイクロカプセルを含有する。これらのマイクロカプセルは０．２から２０μｍの直径を有すると共に、活性剤ブデソニドはマイクロカプセルのコア中に懸濁されている。カプセル化効率は、８５％である。
【００８４】
実施例２
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６を２０ｍｇのブデソニドと一緒に１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１．０ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、この溶液に５ｍＬの５０ｍｍｏｌトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン水溶液（ｐＨ７．４）を添加し、そしてこのポリマー溶液中に、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）により、９，０００ｒｐｍにて４分間分散する。
【００８５】
この形成された分散液に、プルロニックＦ−６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（５０ｍｍｏｌおよびｐＨ６．０）を、掻き混ぜ（９，０００ｒｐｍ）中に添加する。３０秒の分散時間後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして実施例１においてのように更に処理する。
【００８６】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、２．２％の活性成分含有率を有するマイクロカプセルを含有する。これらのマイクロカプセルは０．２から２０μｍの直径を有すると共に、活性剤ブデソニドはポリマーのマイクロカプセル壁中に埋め込まれている。カプセル化効率は、８５％である。
【００８７】
実施例３
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６を１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１．０ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、このポリマー溶液中に、５ｍＬの、２０ｍｇタキソールおよび５０ｍｍｏｌトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン溶液の水性懸濁液（ｐＨ７．４）を、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）により、室温において９，０００ｒｐｍにて４分間分散する。
【００８８】
次いで、この形成された分散液に、４％のプルロニックＦ−６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（５０ｍｍｏｌおよびｐＨ６．０）を、掻き混ぜ（９，０００ｒｐｍ）中に添加する。３０秒の分散時間後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。次いで、溶媒エチルホルメートを、真空の適用により、窒素もしくは空気の導入によりまたは水での抽出により、２０℃にて除去する。５時間後、この懸濁液を５Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【００８９】
「クロスフロー」濾過を、ポリオレフィン膜（カットオフ０．２μｍ）を備えたＳａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）装置で行う。溶媒不含のかつほとんど乳化剤不含のこの懸濁液を、液体窒素でもってできる限り速く凍結して凍結乾燥する。
【００９０】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、２．２％の活性成分含有率を有するマイクロカプセルを含有する。これらのマイクロカプセルは０．２から２０μｍの直径を有すると共に、活性剤タキソールはマイクロカプセルのコア中に懸濁されている。カプセル化効率は、８５％である。
【００９１】
実施例４
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６を２０ｍｇのタキソールと一緒に１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１．０ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、このポリマー溶液中に、５ｍＬの５０ｍｍｏｌトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン溶液（ｐＨ７．４）を、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）により、室温において１０，０００ｒｐｍにて４分間分散する。
【００９２】
次いで、この形成された分散液に、４％のプルロニックＦ−６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（５０ｍｍｏｌおよびｐＨ６．０）を、１０，０００ｒｐｍの掻き混ぜにて添加する。３０秒の分散時間後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして実施例３においてのように更に処理する。
【００９３】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、２．２％の活性成分含有率を有するマイクロカプセルを含有する。これらのマイクロカプセルは０．２から２０μｍの直径を有すると共に、活性剤タキソールはポリマーのマイクロカプセル壁中に埋め込まれている。カプセル化効率は、８５％である。
【００９４】
実施例５
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６を１５ｍＬのエチルアセテート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１．０ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（６，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【００９５】
次いで、溶媒エチルアセテートを、真空の適用によりまたは１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）装置により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【００９６】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結して凍結乾燥する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、１から２０μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【００９７】
実施例６
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−８５８を１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（６，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。このマイクロ粒子懸濁液のその後の処理を、実施例５に記載されたように行う。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、１から３０μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【００９８】
実施例７
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−５０３を１５ｍＬのメチルアセテート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのトゥイーン−２０を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（６，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。このマイクロ粒子懸濁液のその後の処理を、実施例５に記載されたように行う。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、０．２から１５μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【００９９】
実施例８
ポリマー：  ＲＧ−８５８，使用量：７５０ｍｇ。ポリマーを、表１に挙げられた溶媒１５ｍＬ中に溶解する。
界面活性剤溶液：  容量：５０ｍＬ。表１に挙げられた界面活性剤２ｇを、ｐＨ６．０の５０ｍｍｏｌのクエン酸塩緩衝液５０ｍＬ中に溶解する。
【０１００】
この実施例において挙げられた諸成分からのマイクロスフェアは、実施例５に記載された方法に従って製造された。水または水溶液で再懸濁される凍結乾燥物は、１から３０μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【０１０１】
【表１】
2004516263.tif 000003
【０１０２】
実施例９
ポリマー：  ＲＧ ７５６，使用量：７５０ｍｇ。ポリマーを、表２に挙げられた溶媒１５ｍＬ中に溶解する。
【０１０３】
界面活性剤溶液：  容量：５０ｍＬ。表２に挙げられた界面活性剤２ｇを、ｐＨ７．４の５０ｍｍｏｌのＰＢＳ緩衝液５０ｍＬ中に溶解する。
【０１０４】
この実施例において挙げられた諸成分からのマイクロスフェアは、実施例５に記載された方法に従って製造された。水または水溶液で再懸濁される凍結乾燥物は、１から２０μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【０１０５】
【表２】
2004516263.tif 000004
【０１０６】
実施例１０
ポリマー：  ＲＧ ５０２Ｈ，使用量：７５０ｍｇ。ポリマーを、表３に挙げられた溶媒１５ｍＬ中に溶解する。
【０１０７】
界面活性剤溶液：  容量：５０ｍＬ。表３に挙げられた界面活性剤２ｇを、ｐＨ７．４の５０ｍｍｏｌのトリス緩衝液５０ｍＬ中に溶解する。
【０１０８】
この実施例において挙げられた諸成分からのマイクロスフェアは、実施例５に記載された方法に従って製造された。水または水溶液で再懸濁される凍結乾燥物は、０．２から８μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【０１０９】
【表３】
2004516263.tif 000005
【０１１０】
実施例１１
ポリマー：  Ｒ−２０２，使用量：７５０ｍｇ。ポリマーを、表４に挙げられた溶媒１５ｍＬ中に溶解する。
【０１１１】
界面活性剤溶液：  容量：５０ｍＬ。表４に挙げられた界面活性剤２ｇを、ｐＨ６．６の５０ｍｍｏｌのクエン酸塩緩衝液５０ｍＬ中に溶解する。
【０１１２】
この実施例において挙げられた諸成分からのマイクロスフェアは、実施例５に記載された方法に従って製造された。水または水溶液で再懸濁される凍結乾燥物は、０．２から１０μｍの直径を有するマイクロスフェアを含有する。
【０１１３】
【表４】
2004516263.tif 000006
【０１１４】
実施例１２
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−５０３および４０ｍｇのブデソニドを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機により掻き混ぜる。
【０１１５】
次いで、溶媒エチルホルメートを、真空の適用によりまたは１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）装置を用いて、「クロスフロー」濾過によってより穏和に行われ得る。
【０１１６】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結して凍結乾燥する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、４％のブデソニド含有率（ブデソニド重量×１００／（ブデソニド重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてそれらは０．２から１０μｍの直径を有する。
【０１１７】
実施例１３
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−５０３および３０ｍｇのブデソニドを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ１２７を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。
【０１１８】
５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１１９】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
【０１２０】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、３％のブデソニド含有率（ブデソニド重量×１００／（ブデソニド重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは０．２から１０μｍの直径を有する。
【０１２１】
実施例１４
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−８５８および５０ｍｇのブデソニドを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。約５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１２２】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
【０１２３】
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、６％のブデソニド含有率（ブデソニド重量×１００／（ブデソニド重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてそれらは１から１５μｍの直径を有する。
【０１２４】
実施例１５
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および５０ｍｇのブデソニドを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのトリス緩衝剤水溶液（ｐＨ７．４，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１２５】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、６％のブデソニド含有率（ブデソニド重量×１００／（ブデソニド重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてそれらは０．２から１０μｍの直径を有する。
【０１２６】
実施例１６
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−５０３および４０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのエチルアセテート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのトゥイーン−８０を含有する５０ｍＬのリン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ７．４，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１２７】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、４％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてそれらは１から２０μｍの直径を有する。
【０１２８】
実施例１７
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および４０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１２９】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、４．３％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から２０μｍの直径を有する。
【０１３０】
実施例１８
７５０ｍｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−８５８および４０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのエチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、２ｇのプルロニックＦ６８を含有する５０ｍＬのクエン酸塩緩衝剤水溶液（ｐＨ６．０，５０ｍｍｏｌ）を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を５００ｍＬの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１３１】
その後の処理を、実施例１２に記載されたように行う。
水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、４％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてそれらは１から２０μｍの直径を有する。
【０１３２】
実施例１９
４ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−５０２および５０ｍｇのタキソールを１６ｍＬのエチルホルメートおよび４ｍＬのプロピルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、４ｇのプルロニックＦ−１２７を含有する１００ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１３３】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１３４】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１３５】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液中に再懸濁されるこの凍結乾燥物は、１．００％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１３６】
実施例２０
２ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および２５ｍｇのタキソールを２０ｍＬのｔｅｒｔ−ブチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、４ｇのプルロニックＦ−１２７を含有する１００ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１３７】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１３８】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１３９】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液中に再懸濁されるこの凍結乾燥物は、０．９７％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１４０】
実施例２１
２ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および２５ｍｇのタキソールを２０ｍＬのイソプロピルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、４ｇのプルロニックＦ−１２７を含有する１００ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１４１】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１４２】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１４３】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液中に再懸濁されるこの凍結乾燥物は、０．９６％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１４４】
実施例２２
２ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および２５ｍｇのタキソールを２０ｍＬのイソプロピルアセテート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、４ｇのプルロニックＦ−１２７を含有する１００ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１４５】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１４６】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１４７】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、０．９３％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１４８】
実施例２３
０．７５ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および５０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのメチルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、１２ｇのゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎｅ Ｂ）を含有する１５０ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１４９】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１５０】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１５１】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、５．３０％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１５２】
実施例２４
０．７５ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および５０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのイソプロピルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、１２ｇのゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎｅ Ｂ）を含有する１５０ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１５３】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１５４】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１５５】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、５．３４％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１５６】
実施例２５
０．７５ｇのポリマーＲｅｓｏｍｅｒ（登録商標）ＲＧ−７５６および５０ｍｇのタキソールを１５ｍＬのイソプロピルホルメート中に溶解し、そして二重壁鋼製容器（内側の高さ１１ｃｍ，内径４ｃｍ）に移す。次いで、６ｇのゼラチン（Ｇｅｌａｔｉｎｅ Ｂ）を含有する１５０ｍＬの水を、連続相として、機械かき混ぜ機（Ｄｉｓｐｅｒｍａｔ ＦＴ，ＶＭＡ−Ｇｅｔｚｍａｎｎ ＧｍｂＨ，２ｃｍのディソルバーディスク）での掻き混ぜ（８，０００ｒｐｍ）中に添加する。５分の掻き混ぜ後、このマイクロ粒子懸濁液を１Ｌの二口フラスコに移し、そして磁気撹拌機でもって掻き混ぜる。
【０１５７】
溶媒を、真空の適用または１リットルの水での抽出により、室温にて除去する。２時間後、この懸濁液を６Ｌの水または水溶液で洗浄し、そして遠心分離または濾過により所望容量に濃縮する。
【０１５８】
精製および濃縮は、Ｓａｒｔｏｃｏｎ ｍｉｎｉ（登録商標）装置（ゲッティンゲンのＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＡＧ）により、クロスフロー濾過でもってより穏和に行われ得る。
【０１５９】
溶媒不含のかつほとんど界面活性剤不含のこの懸濁液を凍結保護剤と（たとえば、糖、糖アルコールまたはポリビニルピロリドン誘導体と）混合し、できる限り速く（たとえば、液体窒素でもって）凍結する。水または水溶液で再懸濁されるこの凍結乾燥物は、４．９２％のタキソール含有率（タキソール重量×１００／（タキソール重量＋ポリマー重量）＝充填度）を有するマイクロスフェアを含有し、そしてこれらは１から３０μｍの直径を有する。
【０１６０】
実施例２６
タキソールのインビトロ放出
実施例１９〜２２のタキソールマイクロ粒子を、インビトロ放出試験において評価した。９．８〜１０．２ｍｇの凍結乾燥マイクロスフェアを、２５ｍＬの凍結乾燥バイアル中に量り取った。各時点につき２個のバイアルを試験し、そして６週までのインビトロ放出調査を遂行するのに適切な数のバイアルを用意した。０．１％のアジ化ナトリウムおよび０．０１％のトゥイーン２０を含有するｐＨ７．４の５ｍＬの１０ｍＭリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）を添加し、そしてこれらのバイアルを１３０ｒｐｍおよび３７℃における軌道式振とう機上に置いた。
【０１６１】
予定時間間隔にて、各時点につき２個のバイアルを取り去った。マイクロ粒子を遠心分離により放出媒質から分離し、２回蒸留された水で２回洗浄し、そして再び遠心分離した。この湿潤ペレットを、一晩凍結乾燥した。この乾燥残部を凍結乾燥バイアル中に正確に量り取り、そしてＤＭＳＯ中に溶解した。この溶液を分析に先だって０．２２μｍフィルターを通じて濾過し、そして次いでＨＰＬＣ法を用いてタキソール含有率について検定した。
【０１６２】
このインビトロ放出が、図２に示されている。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、本発明の一つの側面による方法の概略図である。
【図２】
図２は、実施例１９〜２２に従って製造されたマイクロ粒子からのインビトロ放出を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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