(57)【要約】本発明は、インターフェロン−γを安定に保持し、使用時に容器内で微粒子粉末に調製可能な経肺投与用のインターフェロン−γ凍結乾燥組成物を提供する。  本発明の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物は、(i) 疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、(ii) 非粉末のケーキ状形態を有する、(iii)崩壊指数が０．０１５以上である、及び(iv) 少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になるという特性を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記(i)〜(iv)の特性を有する経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物：
(i) 疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、
(ii) 非粉末のケーキ状形態を有する、
(iii)崩壊指数が０．０１５以上である、及び
(iv) 少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる。
【請求項２】
親水性安定化剤が、塩基性アミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項３】
親水性安定化剤が、塩基性アミノ酸、塩基性アミノ酸のジペプチド、塩基性アミノ酸のトリペプチド、塩基性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項４】
親水性安定化剤が、中性ヒドロキシアミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸のジペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸のトリペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項５】
親水性安定化剤が、アルギニン、リジン、ヒスチジン、スレオニン、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項６】
疎水性安定化剤が疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項７】
疎水性安定化剤が、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項８】
疎水性安定化剤１００重量部に対して、親水性安定化剤を１〜５００重量部の割合で含有する、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項９】
崩壊指数が０．０２以上である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項１０】
崩壊指数が０．０１５〜１．５である、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項１１】
少なくとも２m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項１２】
少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも２０ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項１３】
空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が５ミクロン以下または有効粒子割合が２０％以上の微粒子になる、請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
【請求項１４】
下記(i)〜(iv)の特性を有する請求項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物：
(i) 疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、
(ii) 非粉末のケーキ状形態を有する、
(iii) 崩壊指数が０．０１５〜１．５の範囲にある、及び
(iv) １〜３００m/secの範囲にある空気速度及び１７ml/sec〜１５L/secの範囲の空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる。
【請求項１５】
(1)請求項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、
(2) 上記容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることのできる手段、及び微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を排出する手段を備えたデバイスとを組み合わせて用いられる経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
【請求項１６】
吸入時に上記容器と上記デバイスとが組み合わされて用いられる、請求項１５に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
【請求項１７】
デバイスとして、
i) 容器に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を使用者に吸入させるために用いられるデバイスであって、
空気噴射流路を有する針部と、排出流路を有する針部と、前記針部の空気噴射流路に空気を送るための空気圧送手段と前記針部の排出流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺して空気噴射流路及び排出流路と前記容器内部とを連通し、前記空気圧送手段によって前記空気噴射流路を通じて前記容器内に空気を噴射することにより、噴射空気の衝撃で前記凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を前記排出流路を通じて吸入口から排出させるように構成したことを特徴とする経肺投与用の乾燥粉末吸入デバイス、または
ii) 容器内に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を被験者に吸入させるために用いられるデバイスであって、
吸引流路を有する針部と、空気導入流路を有する針部と、前記吸引流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺した状態で、被験者の吸気圧で前記吸入口から前記容器内の空気を吸入すると共に負圧となった容器内に前記空気導入流路を通じて前記容器内に空気を流入させることにより、流入した空気の衝撃によって前記凍結乾燥組成物を微粒子化して、得られた微粒子を前記吸引流路を通じて吸入口から排出させるように構成したことを特徴とする経肺投与用の乾燥粉末吸入デバイス
を用いる請求項１５に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
【請求項１８】
(1)請求項１４に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、
(2) 上記容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる手段、及び微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を排出する手段を備えたデバイスとを組み合わせて用いられる、請求項１５に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
【請求項１９】
１回投与量のインターフェロン−γを含有する請求項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器に、上記容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有するの空気衝撃を与えることのできるデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を導入し、
それによって上記凍結乾燥組成物を平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子とする，経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
【請求項２０】
調製される微粒子の平均粒子径が５ミクロン以下であるか、または有効粒子割合が２０％以上である、請求項１９に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
【請求項２１】
容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも２m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段を有するデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を凍結乾燥組成物を収容した容器に導入することによって行う、請求項１９に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
【請求項２２】
１回投与量のインターフェロン−γを含有する請求項１４に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器に、上記容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできるデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を導入し、
それによって上記凍結乾燥組成物を平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子とする、請求項１９に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
【請求項２３】
１回投与量のインターフェロン−γを含有する請求項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物に、使用時に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上になるように微粒子化し、
該微粒子化された粉末を使用者に吸入により投与させることを含む、経肺投与方法。
【請求項２４】
経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物が容器内に収容されており、微粒子化された粉末が、当該容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる手段と微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を容器から排出する手段を備えたデバイスを用いて調製されるものである、請求項２３に記載の経肺投与方法。
【請求項２５】
請求項１５乃至１８のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムを使用して、微粒子化されたインターフェロン−γ乾燥粉末を使用者に吸入により投与させることを含む、請求項２３に記載の経肺投与方法。
【請求項２６】
請求項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子に粉末化して用いる、該凍結乾燥組成物の吸入による経肺投与への使用。
【請求項２７】
請求項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物の、吸入による経肺投与用のインターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターフェロン−γを含有する経肺投与用の凍結乾燥組成物に関する。より詳細には、本発明はインターフェロン−γを安定に保持し、使用時に経肺投与に適した微粒子粉末（以下、経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤ともいう）に調製可能なインターフェロン−γ凍結乾燥組成物に関する。
【０００２】
また、本発明は、当該凍結乾燥組成物を用いた経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに関する。より詳細には、本発明は容器に収容して提供される当該凍結乾燥組成物を使用時に微粒子化することによって経肺投与に適した製剤形態に調製し、そのまま吸入投与できる経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに関する。
【０００３】
更に、本発明は、当該経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに関連する下記の発明を包含する。これらの発明の具体例としては、インターフェロン−γ凍結乾燥組成物から経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤を製造する方法、上記インターフェロン−γ含有凍結乾燥組成物を用いた吸入による経肺投与方法、並びに経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤を使用時に製造するためのインターフェロン−γ凍結乾燥組成物の使用などを挙げることができる。尚、本明細書において「微粒子」という用語は、粉末粒子を含む意味で用いられる。当該微粒子の形状については、制限されない。
【背景技術】
【０００４】
一般的に、経肺投与に際しては、医薬品に含まれる有効成分の平均粒子径を１０ミクロン以下、望ましくは５ミクロン以下にすることによって該有効成分を効率良く肺へ到達させることができることが知られている。このため、従来の経肺投与用吸入剤は、医薬品原体を予め経肺投与に適した粒子径にするために、スプレードライ法やジェットミル法などで微粒子を調製し、又は更に加工処理をして、これを吸入デバイスに充填して提供されている（例えば、国際公開第ＷＯ９５／３１４７９号パンフレット及び国際公開ＷＯ９１／１６０３８号パンフレット等参照。）。
【０００５】
また、従来の経肺投与用乾燥粉末吸入剤の調製には、微粉末をスプレードライ装置またはジェットミル装置から回収して容器に小分け充填するという操作が必要である。このため，かかる操作に伴って、回収や充填ロスによる調製収率の低下及びそれに伴う原価コストの上昇、並びに製剤への夾雑物の混入等という問題が不可避的に生じてしまう。また、一般に粉末を微量で精度良く小分け充填することは困難である。従って、かかる粉末状での微量の小分け充填が必須であるスプレードライ法やジェットミル法によると必然的に高精度な微量粉末充填法の確立が必要とされる。事実、米国特許公報第５,８２６,６３３号には，微粉末を粉末充填するシステム、装置及び方法について詳細な内容が記載されている。
【０００６】
インターフェロンは、抗ウイルス特性、免疫調節特性或いは細胞増殖抑制特性等の生物学的特性を有する経肺投与可能な薬効成分として知られている。該インターフェロンはタンパク質であるが故に、本来的に、熱やｐＨ等の影響を受けて活性を喪失し易いという傾向がある。特に、各種のインターフェロンの中でもインターフェロン−γは、活性が損なわれやすく、安定性に乏しいという欠点を有している。故に、インターフェロン−γを薬効成分として含有する経肺投与用乾燥粉末吸入剤は、上記従来の経肺投与用乾燥粉末吸入剤の問題点に加えて、調製時に或いは経時的にインターフェロン−γの活性が低下するという問題点がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明の目的は、上記のような従来の種々の問題を解決することである。詳細には、本発明は、インターフェロン−γを安定に保持し、使用時に容器内で微粒子に調製可能な経肺投与用のインターフェロン−γ凍結乾燥組成物を提供することを目的とするものである。
【０００８】
更に、本発明は、容器内に１回投与量の有効成分が予め小分け収容された経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を、該容器内で使用時に経肺投与に適した粒子径に微粒子化し，そのまま吸入による経肺投与に使用できる新規な製剤システム並びに投与システムを提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討したところ、(i)疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、(ii)非粉末のケーキ状形態を有する、(iii)崩壊指数が０．０１５以上である、及び(iv)少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合（fine particle fraction）が１０％以上の微粒子になる、という特性を備えるインターフェロン−γ凍結乾燥組成物は、容器内に収納されたままで比較的弱い空気衝撃によって微粒子化できること、及び該組成物中のインターフェロン−γは優れた安定性を備えていることを見出した。
【００１０】
本発明者らは更に研究を重ねることによって、容器内に一回投与量収容された上記インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を、該組成物に所定の空気衝撃を与えることができるように、容器内に所定の速度と流量で空気を導入する手段と微粒子化された粉末組成物を容器から排出する手段とを備えたデバイスと組み合わせて用いることによって，使用者において使用時（特に吸入時）に且つ簡単に、凍結乾燥された非粉末製剤を経肺投与に適した微粒子状態に調製でき，この微粒子をそのまま吸入服用できることを見出した。
【００１１】
本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
（I）本発明には下記に掲げる経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物が包含される。
項１．  下記(i)〜(iv)の特性を有する経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物：
(i)疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、
(ii)非粉末のケーキ状形態を有する、
(iii)崩壊指数が０．０１５以上である、及び
(iv)少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる。
項２．  親水性安定化剤が、塩基性アミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項３．  親水性安定化剤が、塩基性アミノ酸、塩基性アミノ酸のジペプチド、塩基性アミノ酸のトリペプチド、塩基性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項４．  親水性安定化剤が、中性ヒドロキシアミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸のジペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸のトリペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項５．  親水性安定化剤が、アルギニン、リジン、ヒスチジン、スレオニン、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項６．疎水性安定化剤が疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項７．疎水性安定化剤が、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項８．  疎水性安定化剤１００重量部に対して、親水性安定化剤を１〜５００重量部含有する、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項９．  崩壊指数が０．０２以上である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項１０．  崩壊指数が０．０１５〜１．５である、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項１１．  少なくとも２m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項１２．  少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも２０ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項１３.  空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が５ミクロン以下または有効粒子割合が２０％以上の微粒子になる、項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物。
項１４．  下記(i)〜(iv)の特性を有する項１に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物：
(i) 疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の疎水性安定化剤；親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも1種の親水性安定化剤；並びにインターフェロン−γを含有する、
(ii) 非粉末のケーキ状形態を有する、
(iii) 崩壊指数が０．０１５〜１．５の範囲にある、及び
(iv) １〜３００m/secの範囲にある空気速度及び１７ml/sec〜１５L/secの範囲の空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になる。
【００１２】
（II）また、本発明には下記に掲げる経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムが包含される。
項１５．(1) １回投与量のインターフェロン−γを含有する項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、
(2) 上記容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる手段、及び微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を排出する手段を備えたデバイスを組み合わせて用いられる経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
項１６．  吸入時に、上記容器と上記デバイスとが組み合わされて用いられる項１５に記載の経肺投与用乾燥粉末吸入システム。
項１７．  デバイスとして 
i)  容器に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を被験者に吸入させるために用いられるデバイスであって、
空気噴射流路を有する針部と、排出流路を有する針部と、前記針部の空気噴射流路に空気を送るための空気圧送手段と前記針部の排出流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺して空気噴射流路及び排出流路と前記容器内部とを連通し、前記空気圧送手段によって前記空気噴射流路を通じて前記容器内に空気を噴射することにより、噴射空気の衝撃で前記凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を前記排出流路を通じて吸入口から排出させるように構成したことを特徴とする経肺投与用の乾燥粉末吸入デバイスまたは、
ii)  容器内に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、得られた微粒子を被験者に吸入させるために用いられるデバイスであって、
吸引流路を有する針部と、空気導入流路を有する針部と、前記吸引流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺した状態で、被験者の吸気圧で前記吸入口から前記容器内の空気を吸入すると共に負圧となった容器内に前記空気導入流路を通じて前記容器内に空気を流入させることにより、流入した空気の衝撃によって前記凍結乾燥組成物を微粒子化して、得られた微粒子を前記吸引流路を通じて吸入口から排出させるように構成したことを特徴とする経肺投与用の乾燥粉末吸入デバイスを用いる項１５に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
項１８．  デバイスとして
空気衝撃を受けることによって微粒子化する非粉末のケーキ状形態の凍結乾燥組成物が収容され且つ口栓で密封された容器を保持するためのホルダー部と、
該容器内の前記凍結乾燥組成物に空気衝撃を与え、該空気衝撃により微粒子化された粉末状の前記凍結乾燥組成物を前記容器内から吸引するための手段と、を備えた乾燥粉末吸入デバイスであって、
前記凍結乾燥組成物を前記容器内から吸引するための吸引流路、及び外気を前記容器内に導入するための空気導入流路を有する針部と、
前記針部の前記吸引流路と連通する吸引口部と、
前記ホルダー部を前記針部の軸線方向にガイドするためのガイド部と、
前記ホルダー部に前記容器が保持された際に、当該容器を前記針部の針先に向けて前進させて容器の口栓を前記針先に突き刺し、また前記針先から後退させて容器の口栓を前記針先から引き離すための機構部、及び該機構部を操作する操作体を有し、該機構部は容器の口栓を前記針部に突き刺すのに要する力よりも小さい力で前記操作体を操作できるように構成されているホルダー作動部と、
前記針部を支持し、且つ、前記吸引口部と前記ガイド部と前記ホルダー作動部を設けるためのハウジングと、
を備え、
前記口栓を前記針部に突き刺して前記針部の吸引流路及び空気導入流路と前記容器内とを連通させると共に空気導入流路の先に前記凍結乾燥組成物を位置させた状態において、被験者の吸気圧で前記吸引口部から前記容器内の空気を吸入して、空気導入流路を通じて前記容器内に空気を流入させることにより、前記容器内の凍結乾燥組成物に空気衝撃を与えることを特徴とする経肺投与用の乾燥粉末吸入デバイスを用いる項１７に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
項１９．  (1)項１４に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、
(2) 上記容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる手段、及び微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を排出する手段を備えたデバイスとを組み合わせて用いられる、項１５に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム。
【００１３】
（III）更に、本発明には下記に掲げる経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法が包含される。
項２０．  １回投与量のインターフェロン−γを含有する項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器に、上記容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることのできるデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を導入し、
それによって上記凍結乾燥組成物を平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子とする，経肺投与用乾燥粉末製剤の製造方法。
項２１．  調製される微粒子の平均粒子径が５ミクロン以下であるか、または有効粒子割合が２０％以上である、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２２．  容量が０．２〜５０ｍｌの容器内で凍結乾燥組成物を微粒子化する方法である、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２３．  容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも２m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段を有するデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を凍結乾燥組成物を収容した容器に導入することによって行う、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２４．  容器内の凍結乾燥組成物に１〜３００m/secの範囲にある空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段を有するデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を凍結乾燥組成物を収容した容器に導入することによって行う、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２５．  容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも２０ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段を有するデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を凍結乾燥組成物を収容した容器に導入することによって行う、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２６．  容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び１７ml/sec〜１５L/secの範囲の空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段を有するデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を凍結乾燥組成物を収容した容器に導入することによって行う、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２７．  １回投与量のインターフェロン−γを含有する項１４に記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器に、上記容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることのできるデバイスを用いて、当該空気衝撃を備えた空気を導入し、
それによって上記凍結乾燥組成物を平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子とする、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
項２８．  項１５乃至１９のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムを使用することによって経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を微粒子化することを特徴とする、項２０に記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法。
【００１４】
（IV）更に、本発明には、上記の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を用いることを特徴とする経肺投与方法が包含される。当該経肺投与方法は，吸入投与時に使用者（患者）において，非粉末状態で容器内に収容された凍結乾燥組成物を、使用時に経肺投与可能な微粒子化し、微粒子形態の粉末状製剤を吸入投与することのできる方法である。当該投与方法には下記の態様が包含される。
項２９．  １回投与量のインターフェロン−γを含有する項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物に、使用時に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることによって平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上になるように微粒子化し、
該微粒子化された粉末を使用者に吸入により投与させることを含む、経肺投与方法。
項３０．  経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物が容器内に収容されており、微粒子化された粉末が、当該容器内の凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる手段と微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を容器から排出する手段を備えたデバイスを用いて調製されるものである、項２９に記載の経肺投与方法。
項３１．  項１５乃至１９のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムを使用して、微粒子化されたインターフェロン−γ乾燥粉末を使用者に吸入により投与させることを含む、項２９に記載の経肺投与方法。
項３２．  空気速度が１〜２５０m/secである、項２９に記載の経肺投与方法。
項３３．  空気流量が２０ml/sec〜１０L/secである、項２９に記載の経肺投与方法。
（V）更に、本発明には下記に掲げるインターフェロン−γ凍結乾燥組成物の使用が包含される。
項３４．  項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子に粉末化して用いる、該凍結乾燥組成物の吸入による経肺投与への使用。
項３５．  項１乃至１４のいずれかに記載の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物の、吸入による経肺投与用のインターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造のための使用。
【００１５】
（Ｉ）経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物（以下、単に、経肺投与用凍結乾燥組成物ということもある。）は、インターフェロン−γ、疎水性安定化剤及び親水性安定化剤を含有するものである。
【００１６】
本発明に使用するＩＦＮ−γは、その由来については制限されない。該ＩＦＮ−γには、例えば、細胞培養技術を用いて製造された天然型ＩＦＮ−γや組換えＤＮＡ技術によって製造されたＩＦＮ−γ(ＩＦＮ−γ１ａ、ＩＦＮ−γ１ｂ等、例えば特開平7-173196号公報、特開平9-19295号公報等の記載のＩＦＮ−γ)等が含まれる。
【００１７】
本発明において、疎水性安定化剤としては、疎水性アミノ酸、疎水性アミノ酸のジペプチド、疎水性アミノ酸のトリペプチド、疎水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩が挙げられる。
【００１８】
本発明において、疎水性アミノ酸としては、具体的には、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン等のタンパク質構成アミノ酸を挙げることができる。疎水性アミノ酸のジペプチドとは、上記疎水性アミノ酸を少なくとも１つ有するジペプチドであり、例えばロイシル−バリン、イソロイシル−バリン、イソロイシル−ロイシン、ロイシル−グリシン等を例示することができる。また疎水性アミノ酸のトリペプチドとは、上記疎水性アミノ酸を少なくとも１つ有するトリペプチドであり、例えばイソロイシル−ロイシル−バリン、ロイシル−グリシル−グリシン等を例示できる。疎水性アミノ酸の誘導体としては、具体的にはＬ−ロイシンアミド塩酸塩、Ｌ−イソロイシル−β−ナフチルアミド臭化水素酸塩、Ｌ−バリン−β−ナフチルアミド等の疎水性アミノ酸のアミド等を挙げることができる。さらに塩としては、ナトリウムやカリウムなどのアルカリ金属やカルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩；燐酸、塩酸及び臭化水素酸等の無機酸やスルホン酸等の有機酸との付加塩等を例示することができる。
【００１９】
上記疎水性安定化剤として、好ましくはバリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン及びこれらの塩が挙げられる。
【００２０】
これらの疎水性安定化剤は、単独で又は２種以上を任意に組み合わせて用いることができる。
【００２１】
本発明において、親水性安定化剤としては、親水性アミノ酸、親水性アミノ酸のジペプチド、親水性アミノ酸のトリペプチド、親水性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩が挙げられる。
【００２２】
本発明に用いられる親水性アミノ酸は、親水性の側鎖を有するアミノ酸であれば、タンパク質構成アミノ酸であるか否かの別を問わず、いずれのアミノ酸であってもよい。親水性アミノ酸としては、具体的には、アルギニン、リジン、ヒスチジン等の塩基性アミノ酸；セリン、スレオニン等の中性ヒドロキシアミノ酸；アスパラギン酸、グルタミン酸等の酸性アミノ酸；アスパラギン、グルタミン等のアミド型アミノ酸；グリシン、アラニン、システイン、チロシン等のその他のアミノ酸等が挙げられる。尚、ここでいう塩基性アミノ酸とは、塩基性の側鎖を有するアミノ酸のことであり、また中性ヒドロキシアミノ酸とは側鎖にヒドロキシル基（水酸基）を有するアミノ酸のことである。親水性アミノ酸のジペプチドとは、同一又は異なる２つの親水性アミノ酸を有するジペプチドである。また親水性アミノ酸のトリペプチドとは、同一又は異なる３つの親水性アミノ酸を有するトリペプチドである。親水性アミノ酸の誘導体としては、例えば親水性アミノ酸のアミド等を挙げられる。さらに塩としては、ナトリウムやカリウムなどのアルカリ金属やカルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩；燐酸、塩酸及び臭化水素酸等の無機酸やスルホン酸等の有機酸との付加塩等が例示される。具体的には、塩酸アルギニン、リジン一塩酸塩、リジン二塩酸塩、ヒスチジン塩酸塩、ヒスチジン二塩酸塩の親水性アミノ酸の塩等が挙げられる。
【００２３】
好ましい親水性安定化剤としては、例えば、塩基性アミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩；塩基性アミノ酸、塩基性アミノ酸のジペプチド、塩基性アミノ酸のトリペプチド、塩基性アミノ酸の誘導体及びこれらの塩；中性ヒドロキシアミノ酸、中性ヒドロキシアミノ酸のジペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸のトリペプチド、中性ヒドロキシアミノ酸の誘導体及びこれらの塩；アルギニン、リジン、ヒスチジン、スレオニン、これらのアミノ酸のジペプチド、これらのアミノ酸のトリペプチド、これらのアミノ酸の誘導体及びこれらの塩；アルギニン、リジン、ヒスチジン、スレオニン及びこれらの塩；アルギニン、リジン、ヒスチジン及びこれらの塩；並びにアルギニン及びその塩が挙げられる。
【００２４】
これらの親水性安定化剤は、１種単独で用いてもよく、また２種以上を任意に組み合わせて用いてもよい。
【００２５】
経肺投与用凍結乾燥組成物中のＩＦＮ−γの含有量は、適用疾患、期待される効果等に応じて適宜設定することができる。ＩＦＮ−γの含有割合としては、例えば、該組成物中に０．０１〜９９．８重量％、好ましくは０．１〜９５重量％、更に好ましくは０．１〜９０重量％となる範囲が挙げられる。
【００２６】
経肺投与用凍結乾燥組成物中の疎水性安定化剤の含有量は、ＩＦＮ−γの含有割合、使用する疎水性安定化剤の種類、該組成物の崩壊指数等に応じて適宜設定することができる。疎水性安定化剤の含有割合として、例えば、該組成物中に０．１〜９９．８９重量％、好ましくは１〜９５重量％、更に好ましくは５〜９０重量％程度となる範囲が挙げられる。
【００２７】
経肺投与用凍結乾燥組成物中の親水性安定化剤の含有割合は、ＩＦＮ−γの配合割合、疎水性安定化剤の含有量、使用する親水性安定化剤の種類等に応じて異なり、一律に規定することはできないが、例えば該組成物中に０．１〜９９．８９重量％、好ましくは１〜９０重量％、更に好ましくは２〜８０重量％、更により好ましくは５〜７０重量%となる範囲が挙げられる。
【００２８】
また、経肺投与用凍結乾燥組成物中に含まれる疎水性安定化剤と親水性安定化剤の割合としては、疎水性安定化剤１００重量部に対して、親水性安定化剤の配合割合が１〜５００重量部、好ましくは２〜４００重量部、更に好ましくは５〜３００重量部、更により好ましくは８〜２５０重量部、特に好ましくは１０〜２００重量部程度が挙げられる。
【００２９】
また、経肺投与用凍結乾燥組成物の単回投与量（１回投与量）中に含まれるＩＦＮ−γの量としては、例えば１万〜５０００万IU（国際単位）、好ましくは１０万〜４０００万IU、更に好ましくは1０万〜３０００万IUである。
【００３０】
経肺投与用凍結乾燥組成物の単回投与量中に含まれる疎水性安定化剤の量は、０．０１〜１０ｍｇ、好ましくは０．１〜５ｍｇ、更に好ましくは０．２〜０．５ｍｇの範囲内である。
【００３１】
経肺投与用凍結乾燥組成物の単回投与量中に含まれる親水性安定化剤の量は、０．０１〜１０ｍｇ、好ましくは０．１〜５ｍｇ、更に好ましくは０．１〜２．５ｍｇの範囲内である。
【００３２】
このように、疎水性安定化剤及び親水性安定化剤を経肺投与用凍結乾燥組成物に配合することによって、該組成物に後述する所望の崩壊指数を充足させると供に、更に該組成物中のＩＦＮ−γに優れた安定性を付与することが可能となる。
【００３３】
尚、本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物には、最終調製物が後述する崩壊指数を充足するものであれば、上記成分に加えて、更にブドウ糖等の単糖類；ショ糖，麦芽糖，乳糖，トレハロース等の二糖類；マンニット等の糖アルコール；シクロデキストリン等のオリゴ糖類；デキストラン４０やプルラン等の多糖類；ポリエチレングリコール等の多価アルコール；カプリン酸ナトリウム等の脂肪酸ナトリウム；ヒト血清アルブミン；無機塩；ゼラチン；界面活性剤；緩衝剤等を含むことができる。界面活性剤には、通常医薬品に用いられる界面活性剤であれば、アニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤及び非イオン性界面活性剤の別を問わず、広く用いることができる。好適には、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ型界面活性剤）、ソルビタントリオレート等の非イオン性界面活性剤である。
【００３４】
また、本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物は、非粉末のケーキ状の形態を有する凍結乾燥組成物である。ここで、非粉末のケーキ状の凍結乾燥組成物とは、溶液を凍結乾燥して得られる乾燥固体であり、通常、凍結乾燥ケーキと呼ばれるものを意味する。但し、凍結乾燥工程あるいはその後のハンドリングでケーキにひびが入ったり、数個の大きな塊になったり、一部が破損して粉状になったものも、本発明の効果を損なわないことを限度として本発明が対象とする非粉末状の凍結乾燥組成物に包含される。
【００３５】
更に、本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物は、０．０１５以上の崩壊指数を備えるものである。ここでいう崩壊指数は、凍結乾燥組成物について下記の方法に従って測定することによって得ることができる当該凍結乾燥組成物固有の値である：
＜崩壊指数＞
胴径φ１８ｍｍあるいは胴径φ２３ｍｍの容器に、対象とする凍結乾燥組成物を構成する目的の成分を含有する溶液を０．２〜０．５ｍｌの範囲で液充填して、それを凍結乾燥する。次いで得られた非粉末状の凍結乾燥組成物に，ｎ−ヘキサンを容器の壁を通じて静かに１.０ml滴下する。これを３０００rpmで約１０秒間攪拌させた混合液を光路長１ｍｍ,光路幅１０ｍｍのＵＶセルに投入し，速やかに分光光度計を用いて測定波長５００ｎｍで濁度を測定する。得られた濁度を凍結乾燥組成物を構成する成分の総量（重量）で割り、得られた値を崩壊指数と定義する。
【００３６】
ここで本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物が備える崩壊指数の下限値としては、上記の０．０１５、好ましくは０．０２、より好ましくは０．０３、さらに好ましくは０．０４、更により好ましくは０．０５、特に好ましくは０．１又は０．１５を挙げることができる。また本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物が備える崩壊指数の上限値としては特に制限されないが、１．５、好ましくは１、より好ましくは０．９、さらに好ましくは０．８、更により好ましくは０．７を挙げることができる。好適には本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物は、０．０１５以上であることを限度として、上記から任意に選択される下限値と上限値から構成される範囲内にある崩壊指数を有することが望ましい。例えば、崩壊指数の範囲として具体的には０．０１５〜１．５、０．０２〜１．０、０．０３〜０．９、０．０４〜０．８、０．０５〜０．７、０．１〜０．７、０．１５〜１．５、０．１５〜１、及び０．１５〜０．７が例示される。
【００３７】
更に、本発明の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物は、前記範囲の崩壊指数と非粉末状のケーキ状の形態の形態を備えており、上記崩壊指数で表現される該乾燥組成物の固有の性質に基づいて、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子になるという特性を備えるものである。
【００３８】
ここで、微粒子の平均粒子径とは、経肺用吸入剤に関する当業界において通常採用される平均粒子径を意味するものである。具体的には、平均粒子径は、幾何学的な粒子径ではなく、空気力学的な平均粒子径（mass median aerodynamic diameter, MMAD）を示すものである。当該空気力学的平均粒子径は，慣用方法によって求めることができる。例えば、空気力学的平均粒子径は、人工肺モデルであるエアロブリザーを装着した乾式粒度分布計（Amherst Process Instrument, Inc社製，USA,），ツインインピンジャー（G.W. Hallworth and D.G. Westmoreland:J.Pharm.Pharmacol., 39, 966-972(1987)，米国特許公報第6153224号）、マルチステージリギッドインピンジャー，マープルミラーインパクター，アンダーセンカスケードインパクター等で測定される。また，B.Olssonらは，空気力学的平均粒子径が５μｍ以下の粒子の割合が増加するにつれて，肺へのデリバリーが増加することが報告している（B.Olsson et al:Respiratory Drug Delivery V,273-281(1996)）。このような肺にデリバリーできる量を推定する方法として，ツインインピンジャー，マルチステージリギッドインピンジャー，マープルミラーインパクター，アンダーセンカスケードインパクター等で測定される有効粒子割合（Fine Particle Fraction）やFine Particle Dose等がある。
【００３９】
好ましい経肺投与用凍結乾燥組成物は、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を受けることによって、平均粒子径が１０ミクロン以下、好ましくは５ミクロン以下、または有効粒子割合が１０％以上、好ましくは２０％以上、より好ましくは２５％以上、さらに好ましくは３０％以上、特に好ましくは３５％以上の微粒子になるものである。
【００４０】
尚、経肺投与用凍結乾燥組成物に与える空気衝撃は、前述するように１m/sec以上の空気速度及び１７ml/sec以上の空気流量を有する空気によって生じる衝撃であれば特に制限されない。具体的には、上記の空気衝撃としては、１m/sec以上、好ましくは２m/sec以上、より好ましくは５m/sec以上、よりさらに好ましくは10m/sec以上の空気速度によって生じる衝撃が挙げられる。ここで空気速度の上限としては、特に制限されないが、通常３００m/sec、好ましくは２５０m/sec、より好ましくは２００m/sec、よりさらに好ましくは１５０m/secを挙げることができる。なお、空気速度は、上記から任意に選択される下限と上限から構成される範囲内にあれば特に制限されないが、具体的には１〜３００m/sec、１〜２５０m/sec、２〜２５０m/sec、５〜２５０m/sec、５〜２００m/sec、１０〜２００m/sec、１０〜１５０m/secの範囲を挙げることができる。
【００４１】
また、上記の空気衝撃としては、通常１７ml/sec以上、好ましくは２０ml/sec以上、より好ましくは２５ml/sec以上の空気流量によって生じる衝撃を例示することができる。ここで空気流量の上限は、特に制限されないが、９００L/min、好ましくは１５L/sec、より好ましくは１０L/sec、さらに好ましくは５L/sec、さらにより好ましくは４L/sec、特に好ましくは３L/secである。より具体的には、空気流量は上記から任意に選択される下限と上限から構成される範囲内にあればよく、特に制限されないが、かかる範囲としては例えば１７ml/sec〜１５L/sec、２０ml/sec〜１０L/sec、２０ml/sec〜５L/sec、２０ml/sec〜４L/sec、２０ml/sec〜３L/sec、２５ml/sec〜３L/secを挙げることができる。
【００４２】
本発明の経肺用凍結乾燥組成物は、ＩＦＮ−γ、疎水性安定化剤及び親水性安定化剤を含む溶液を調製し、ＩＦＮ−γの単回若しくは数回投与の有効量に相当する量の該溶液を容器に入れ、そのまま凍結乾燥することによって製造される。かかる経肺用凍結乾燥組成物の製造には、用時溶解型の注射剤等の凍結乾燥製剤（凍結乾燥組成物）の製造に一般的に用いられる製造方法を用いることができる。
【００４３】
タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、遺伝子、核酸、低分子薬物等の各種活性成分、及び必要に応じてアミノ酸、糖類等の担体を含有する非粉末のケーキ状形態を有する凍結乾燥組成物は、該組成物中に含まれる塩類が少ない程、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃で平均粒子径がより小さい又は有効粒子割合がより高い微粒子に調製することが可能となる。故に、上記空気衝撃で平均粒子径がより小さく又は有効粒子割合がより高くなるように微粒子化できる経肺投与用凍結乾燥組成物を調製するには、凍結乾燥処理に供せられる溶液中の塩類の濃度を低くすることが好ましい。例えば、使用する活性成分の精製粉末又は溶液中に保存剤又は安定化剤等として塩類が含まれている場合であれば、該生理活性成分の精製粉末又は溶液を予め脱塩処理して使用することによって、或いは凍結乾燥処理に供する溶液自体を脱塩処理することによって、凍結乾燥処理に供せられる溶液中の塩類の濃度を低くすることができる。脱塩処理する方法は、制限されず、例えば限外濾過法、沈殿法、イオン交換法、減圧透析法等を挙げることができる。
【００４４】
上記空気衝撃で平均粒子径がより小さく又は有効粒子割合がより高くなるように微粒子化できる経肺投与用凍結乾燥組成物を調製するには、凍結乾燥処理に供せられる溶液中に少量のエタノールを添加したり、凍結乾燥時に、結晶が大きくならないように条件を適宜設定したりする方法がある。
【００４５】
本発明の経肺用凍結乾燥組成物の製造において、例えば、容器中にＩＦＮ−γの単回投与量が含まれるように、経肺用凍結乾燥組成物を調製することによって、経肺投与する直前に該容器中で該組成物をそのまま経肺投与に適した粒径に微粉化して、微粉化された該組成物を該容器からそのまま吸入（経肺投与）することが可能となる。
【００４６】
本発明の経肺投与用凍結乾燥組成物の単回投与量は、対象とする疾患、期待される効果、含有するＩＦＮ−γの種類等に応じて適宜設定すればよい。例えば、該組成物の単回投与量としては、０．１〜２０ｍｇ、好ましくは０．２〜１５ｍｇ、更に好ましくは０．３〜１０ｍｇ、更により好ましくは０．４〜８ｍｇ、特に好ましくは０．５〜５ｍｇである。
【００４７】
斯くして得られた経肺用凍結乾燥組成物は、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃によって経肺投与に適した微粉末状に調製できる。このように、空気衝撃によって本発明の経肺用凍結乾燥組成物を微粉化し、微紛化された該組成物を吸入（経肺投与）するためのデバイスとしては、例えば、容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることのできる手段、及び微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を排出する手段を備えた乾燥粉末吸入デバイスを挙げることができる。故に、単回投与量のＩＦＮ−γを含有する上記経肺投与用凍結乾燥組成物を収容した容器に、上記デバイスを組み合わせて使用することによって、使用者が非粉末状態で提供される上記経肺投与用凍結乾燥組成物を使用時（吸入時）に、経肺投与に適した剤型である平均粒子径１０ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上の微粒子からなる粉末製剤に自ら調製し、かつ投与（服用）することが可能となる
（II）経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システム
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムは、上記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、該容器中の凍結乾燥組成物に上記空気衝撃を付与でき、更に生じた微粒子を排出できる乾燥粉末吸入デバイスとを組み合わせてなるものである。
【００４８】
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される上記乾燥粉末吸入デバイスについて以下に記載する。
【００４９】
本発明で用いられる乾燥粉末吸入デバイスは、(1)上記凍結乾燥組成物に、それを微粒子化し得る程度の空気衝撃を与えることのできる手段、及び(2)微粒子化された粉末状の凍結乾燥組成物を使用者に吸入投与することのできる手段を備えることによって、凍結乾燥組成物の微粒子化と使用者への吸入投与の両方を実施可能とするものである。なお、上記(1)の手段は上記凍結乾燥組成物を収容した容器内に、上記空気衝撃を備えた空気を導入する手段ということもできる。また(2)は容器内で微粒子化された粉末製剤を容器から排出する手段ということもできる。本発明においては、かかる手段を備えるものであれば、従来公知のものまた将来開発されるもののいずれのデバイスも使用することができる。
【００５０】
(1)の手段は、具体的には、容器に収容された凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与えることのできる空気を、該容器に導入する手段によって実現することができる。なお当該(1)の手段には、容器内の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気衝撃を与えることのできる手段であることもできる。(2)の手段によって若しくは該手段を介して、経肺投与に適した形態に調製された乾燥粉末製剤を患者などの使用者に吸入投与することができる。なお、(2)の手段には、さらに組成物が微粒子化または分散されるような、例えば部屋や流路が設けられていてもよい。
【００５１】
当該乾燥粉末吸入デバイスには、下記（ａ）に掲げる噴射型の乾燥粉末吸入デバイスと（ｂ）に掲げる自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスが含まれる。
（ａ−１）  容器に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、吸入に用いられるデバイスであって、
空気噴射流路を有する針部と、排出流路を有する針部と、前記針部の空気噴射流路に空気を送るための空気圧送手段、排出流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺して空気噴射流路及び排出流路と前記容器内部とを連通し、前記空気圧送手段によって前記空気噴射流路から前記容器内に空気を噴射することにより、噴射空気の衝撃で前記凍結乾燥組成物を微粒子化して、得られた微粒子を前記排出流路を通じて吸入口から排出するように構成したことを特徴とする乾燥粉末吸入デバイス。
（ａ−２）  前記空気圧送手段は手動式であって、吸込弁付き吸込口と吐出弁付き吐出口とを有するベロー体を備え、吸込弁を閉じた状態で該ベロー体を縮めて吐出弁を開放することにより、吐出口に連通した針部の空気噴射流路を通じて前記ベロー体内の空気を容器内に圧送し、前記吐出弁を閉じ吸込弁を開いた状態で弾性復元力によって前記ベロー体を伸張させることにより前記ベロー体内に空気を導入するように構成されたことを特徴とする（ａ−１）に記載の乾燥粉末吸入デバイス。
（ａ−３）  一本の針部に前記空気噴射流路及び前記排出流路を形成したことを特徴とする上記（ａ−１）又は（ａ−２）に記載の乾燥粉末吸入デバイス。
【００５２】
（ｂ）自己吸入型デバイス：Passive powder inhaler
（ｂ−１）  容器内に非粉末状態で収容された凍結乾燥組成物を微粒子化し、吸入に用いられるデバイスであって、
吸引流路を有する針部と、空気導入流路を有する針部と、前記吸引流路に連通する吸入口とを備え、
前記容器を密封する口栓に前記針部を突き刺した状態で、使用者の吸気圧で前記吸入口から前記容器内の空気を吸入すると共に負圧となった容器内に前記空気導入流路を通じて前記容器内に空気を流入させることにより、流入した空気の衝撃によって前記凍結乾燥組成物を微粒子化して、得られた微粒子を前記吸引流路を通じて吸入口から排出するように構成したことを特徴とする乾燥粉末吸入デバイス。
（ｂ−２）  使用者の一回の吸入によって、前記凍結乾燥組成物の大部分が微粒子化して前記吸入口から排出されるように構成したことを特徴とする（ｂ−１）に記載の乾燥粉末吸入デバイス。
（ｂ−３）  一本の針部に前記吸引流路及び前記空気導入流路を形成したことを特徴とする（ｂ−１）又は（ｂ−２）に記載の乾燥粉末吸入デバイス。
【００５３】
容器内に空気を導入する手段（前述する(1)の手段）は、常圧で外部から空気を導入する手段であればよく、ジェットミルなどの圧縮空気を特段使用する必要はない。なお、外部から空気を導入する手段は、特に制限されず、例えば前述する噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの場合は、人為的に外部エアーを容器内に噴射導入する手段を採用することができ、また自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスの場合は、使用者の吸入服用に伴う容器内の負圧化によって自然に外部エアーを容器内に吸引導入する手段を採用することができる。なお、前者噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの場合、人為的に外部エアーを容器内に噴射導入する方法は、手動であっても、任意の機械を使用して自動的に行う方法であってもよい。
【００５４】
本発明の乾燥粉末吸入デバイスは、噴射型及び自己吸入型の別を問わず、上記空気導入手段によって容器内に導入（流入）された外部エアー（空気）の衝撃（噴射圧）を利用して、容器内に非粉末状態で収容された凍結乾燥製剤を微粒子化することのできるものである。
【００５５】
なお、ここで用いられる容器としては、例えば凍結乾燥に供することのできるものを用いることができ、材質、形状などに特に制限されない。例えば、材質としては、ポリエチレン，ポリプロピレン，ポリスチレンなどのポリオレフィン系を主とするプラスチック，ガラス，アルミ等が例示できる。また形状としては、円筒状、カップ状、三角柱（三角錐）、正方柱（正方錐）、六角柱（六角錐）、八角柱（八角錐）などを多角柱（多角錐）を例示することができる。
【００５６】
かかる効果を効率よく得るためには、凍結乾燥組成物を収容する容器の容量としては、０.２〜５０ｍｌ、好ましくは０.２〜２５ｍｌ、より好ましくは１〜１５ｍｌの範囲である。また、容器の胴径として、φ２〜100ｍｍ、好ましくはφ２〜75ｍｍ、より好ましくはφ２〜50ｍｍのものを使用することが望ましい。
【００５７】
更に、かかる容器内に収容する経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物の量は、単位投与量（１回投与量）または数回、具体的には２〜３回投与量のインターフェロン−γを含む量であることが好ましい。より好ましくは単位投与量（１回投与量）の有効成分を含む量である。
【００５８】
更に、容器内に導入する外部エアー（空気）により生じる空気衝撃は少なくともヒトの１回若しくは数回の吸気動作によって容器内に空気が流入する空気流量やそれによって生じる空気速度によって規定される。勿論，容器の耐久性を限度として，これを越える空気流量や空気速度を持って外部エアーを導入することは特に制限されない。ヒトが１回吸入する空気流量は通常５〜３００Ｌ／分、より詳細には１０〜２００Ｌ／分である。また、噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの場合、１回の空気の噴射量が５〜１００ｍｌ、好ましくは１０〜５０ｍｌとなるものを使用することができる。好ましくは容器内部に充填された凍結乾燥組成物の表面に少なくとも１m/secの空気速度によって生じる空気衝撃が当たるように調整することができる。より好ましい空気衝撃は少なくとも２m/secの空気速度によって生じる衝撃、さらに好ましくは少なくとも５m/secの空気速度によって生じる衝撃、よりさらに好ましくは少なくとも10m/secの空気速度によって生じる衝撃である。ここで空気衝撃の上限としては、特に制限されないが、例えば３００m/secの空気速度によって生じる衝撃を挙げることができる。かかる上限として好ましくは２５０m/secの空気速度によって生じる衝撃、より好ましくは２００m/secの空気速度によって生じる衝撃、よりさらに好ましくは１５０m/secの空気速度によって生じる衝撃である。
【００５９】
空気衝撃は、上記から任意に選択される下限と上限から構成される範囲内にある空気速度を備えた空気によって生じるものであればよく、特に制限されないが、例えば１〜３００m/sec、１〜２５０m/sec、２〜２５０m/sec、５〜２５０m/sec、５〜２００m/sec、１０〜２００m/sec、１０〜１５０m/secの範囲にある空気速度によって生じる衝撃を挙げられる。
【００６０】
なお、ここで凍結乾燥組成物に付与される空気の速度は、下記のようにして測定することができる。すなわち、後述する実施態様例１で示した噴射型乾燥粉末吸入デバイスでは，ベロー体１０に蓄えられている空気を空気噴射流路３から強制的に容器内に充填された凍結乾燥組成物（ケーキ状の凍結乾燥組成物：以下「凍結乾燥ケーキ」ともいう）に導入し，空気衝撃を与えて，結果として生じた微粒子が排出経路４から排出される機構を採用している。この場合、空気噴射流路３を流れる空気流量はベロー体１０に蓄えられている空気量をその空気を容器に送り込む時間で割ることにより算出することができる。次いで，この空気流量を空気噴射流路３等の容器に空気を導入する流路の断面積で割ることにより，凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）に衝撃を与える空気速度を算出することができる。
【００６１】
【数１】
2006509825.tif 000002
【００６２】
具体的には、例えば，空気噴射流路３の孔径φ1.2mm,排出経路の孔径φ1.8mm，ベロー体１０に蓄えられている空気量が約２０mlに設計した噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの場合、ベロー体１０に蓄えられている約２０mlの空気量を約０．５秒で空気噴射流路３から強制的に容器内の凍結乾燥組成物に導入した場合、空気流量は約４０ml/secとなる。そこでこの値を空気導入流路（空気噴射流路）の断面積（0.06 ｘ 0.06 ｘ3.14=0.0113cm2）で割ると，3540cm/secとなる。つまり，空気速度は約35m/secとなる。
【００６３】
また、後述する実施態様例２、３及び４で示す自己吸入型乾燥粉末吸入デバイスでは，空気導入流路１７から流入した空気が凍結乾燥ケーキに衝撃を与えた後，結果として生じた微粒子が吸引流路１６から排出される機構を採用しているため、空気導入流路１７と吸引流路１６の孔径が該流路を流れる空気流量を規定することになる。従って、容器に収容された凍結乾燥組成物に付与される空気速度は、空気導入流路１７に流れる空気流量を測定し、これを空気導入流路１７のノズルの断面積で割ることにより算出することができる。
【００６４】
【数２】
2006509825.tif 000003
【００６５】
具体的には，ヨーロッパ薬局方（European Pharmacopoeia, Third Edition Supplement 2001, p113-115）に記載されている装置A(Apparatus A)（ツインインピンジャー(Twin Impinger):Copley社製，UK）のスロート部分に容器を含む吸入デバイスを装着させて、Flow Meter（KOFLOC DPM-3）を用いて空気導入流路１７に流れる空気流量を測定する。
【００６６】
例えば，空気導入流路１７の孔径をφ1.99mm，吸引流路の孔径をφ1.99mmに設計された自己吸入型乾燥粉末吸入デバイスにおいて、Flow Meter（KOFLOC DPM-3）を用いて測定された空気導入流路１７に流れる空気流量が17.7L/min即ち、295ml/secであった場合に、空気速度は、この値を空気導入流路の断面積（0.0995 ｘ 0.0995 ｘ 3.14=0.0311cm2）で割ることによって得ることができる（9486cm/sec、つまり95m/sec）。
【００６７】
また容器内部に充填された凍結乾燥組成物に付与される空気の流量としては、少なくとも１７ml/secを挙げることができる。空気の流量として、好ましくは少なくとも２０ml/sec、より好ましくは少なくとも２５ml/secである。ここで空気流量の上限としては、特に制限されないが、例えば９００L/minを挙げることができる。かかる上限として好ましくは１５L/sec、より好ましくは１０L/sec、さらに好ましくは５L/sec、さらにより好ましくは４L/sec、特に好ましくは３L/secである。具体的には、空気流量は上記から任意に選択される下限と上限から構成される範囲内にあればよく、特に制限されないが、かかる範囲としては例えば１７ml/sec〜１５L/sec、２０ml/sec〜１０L/sec、２０ml/sec〜５L/sec、２０ml/sec〜４L/sec、２０ml/sec〜３L/sec、２５ml/sec〜３L/secを挙げることができる。
【００６８】
また、本発明で用いる乾燥粉末吸入デバイスは、外部から導入された空気の衝撃圧を高める手段として、実施例で詳述する空気導入流路若しくは空気噴射流路を備えた針部のように、容器底部に収容された凍結乾燥組成物に接近させた状態で流路の吐出口、好ましくは細孔を備えた吐出口から空気を吐出させる手段を備えることができる。なお、かかる流路吐出口の孔径は、容器の大きさなどの関係で好ましい範囲が変動するため、特に制限されないが、直径φ０.３〜１０ｍｍ、好ましくは０．５〜５ｍｍ、より好ましくは０.８〜５ｍｍ、さらに好ましくは１〜４ｍｍの範囲であることができる。
【００６９】
かかる容器内への空気導入によって容器内に非粉末状態で収容されている凍結乾燥組成物を微粒子化することができる。ここで微粒子化の程度は、経肺投与に適した粒子径となるものであればよく、平均粒子径として１０μｍ以下、好ましくは５μｍ以下を挙げることができる。また、微粒子化の程度は、有効粒子割合（Fine Particle Fraction）として、１０％以上、好ましくは２０％以上、より好ましくは２５％以上、さらに好ましくは３０％以上、特に好ましくは３５％以上となる割合を挙げることができる。
【００７０】
本発明の当該システムによれば、本発明の乾燥粉末吸入デバイスを用いて上記容器内に空気を導入して、その内部の凍結乾燥組成物に少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることによって、吸入による経肺投与が可能な粒子径を備えたインターフェロン−γ乾燥粉末製剤を調製することができる。また、当該システムによれば、調製されたインターフェロン−γ乾燥粉末製剤を使用者にそのまま吸入経肺投与することができる。こうした意味で、本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムは、吸入による経肺投与に適したインターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造システムであるとともに、該乾燥粉末製剤を使用者に経肺投与する投与システムであるといえる。
【００７１】
（III）インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法
また，本発明は，容器内に収容された１回投与量のインターフェロン−γを含有する前記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を該容器内で微粒子化することによって、吸入による経肺投与に適した粒子径を備えたインターフェロン−γ乾燥粉末製剤（経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤）を製造する方法に関する。当該方法は，容器に収容された前記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物に特定の空気衝撃を与えることによって実施することができる。具体的には、本発明のインターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法は、前述する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物に、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃を与えることによって実施することができ、これにより、当該凍結乾燥組成物を平均粒子径が１０ミクロン以下、好ましくは５ミクロン以下または有効粒子割合が１０％以上、好ましくは２０％以上、より好ましくは２５％以上、さらに好ましくは３０％以上の微粒子形態を有するインターフェロン−γ乾燥粉末製剤に調製することができる。上記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物に上記の空気衝撃を与える手段としては特に制限されないが、前述する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイスが好適に使用される。
【００７２】
当該製造方法は、好ましくは前記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物が収容された容器に、上記空気衝撃を、該凍結乾燥組成物に与えることのできる空気を導入することによって実施することができる。
【００７３】
本発明のインターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造方法は、インターフェロン−γ乾燥粉末製剤を使用する患者が、自ら、使用時（吸入時）に、容器に収容された経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を経肺投与に適した粒子径の粉末製剤に調製することができることを特徴の一つとするものである。
【００７４】
（IV）経肺投与方法
さらに，本発明は，１回投与量のインターフェロン−γを含有する前記経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を使用時（投与時）に経肺投与可能な微粒子化し、該微粒子形態のインターフェロン−γ乾燥粉末製剤を吸入投与することを含む経肺投与方法に関する。当該経肺投与方法は、前述する経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物を収容した容器と、前述する経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイスを含む、本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムを用いることによって行うことができる。
【００７５】
（V）経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物の使用
さらに，本発明は、経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物について吸入による経肺投与への使用に関する。
【００７６】
さらに、本発明は、経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物について吸入による経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末製剤の製造のための使用に関する。
【発明の効果】
【００７７】
本発明の経肺用凍結乾燥組成物は、容器内で、少なくとも１m/secの空気速度及び少なくとも１７ml/secの空気流量を有する空気の衝撃によって、肺への送達に必要な大きさにまで微粒子化される。故に、使用者が使用時（特に吸引時）に簡便な手段で該経肺用凍結乾燥組成物を、容器内で経肺投与に適した微粒子状態に調製することができる。
【００７８】
本発明の経肺用凍結乾燥組成物によれば、有効粒子割合（Fine Particle Fraction）は少なくとも１０％以上であり、さらに２０％以上、２５％以上、３０％以上、並びに３５％以上に高めることが可能である。米国特許公報第6153224号によると、従来のドライパウダー吸入装置の多くは、肺下部に付着する有効成分（粒子）が吸入される有効成分の１０％程度に過ぎないことが記載されている。また、特開2001-151673号公報においても、一般的な吸入用粉末製剤の肺への薬物の到達量（肺到達率）は、該製剤から排出される薬物の１０％程度であることが記載されている。ゆえに、本発明の経肺投与用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物は、従来の吸入用粉末製剤よりも高い有効粒子割合（Fine Particle Fraction）を達成することができる点で有用な経肺用組成物であるといえる。
【００７９】
従来の経肺投与用組成物は微粒子粉末状であり、調製に際して取り扱いが困難であった。一方、本発明の経肺用凍結乾燥組成物は、ケーキ状の形態であり取り扱いが容易であることに加え、１回投与量を容器内で直接調製できるので、容器に小分けする作業が不要である。故に、本発明の経肺用凍結乾燥組成物は、微粒子粉末状の経肺用組成物に比して、高い収率で調製することが可能であり、更に微粒子粉末を容器に小分けする際の夾雑物の混入を回避することもできる。
【００８０】
更に、本発明の経肺用インターフェロン−γ凍結乾燥組成物はＩＦＮ−γを安定に保持できるため、調製時の凍結乾燥処理や長期間の保存に供しても、ＩＦＮ−γの活性を高い割合で維持することができる。
【００８１】
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムによれば、インターフェロン−γの肺への吸入投与を簡便に行うことが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００８２】
以下、本発明について実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００８３】
なお、以下の実施例において、本発明の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）の崩壊指数、及び微粉末化された乾燥粉末製剤の肺への送達を評価する指標である有効粒子割合（Fine Particles Fraction（％））は下記の方法に従って算出した。
【００８４】
＜崩壊指数の算出＞
調製した非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）に、n-ヘキサンを容器の壁を通じて静かに1.0ml滴下し、これをAutomatic Lab-Mixer NS-8(Pasolina社製)を用いて3000rpmで約10秒間攪拌する。得られた混合液を光路長1mm,光路幅10mmのUVセル（島津GLCセンター製）に投入し、速やかに分光光度計（UV-240,島津製作所製）を用いて測定波長500nmで該混合液の濁度を測定する。得られた濁度を総処方量（有効成分と担体との総量（重量））で割った値を崩壊指数とする。
【００８５】
＜有効粒子割合（Fine Particles Fraction）の算出＞
調製した非粉末状の凍結乾燥組成物を充填した容器を乾燥粉末吸入デバイスに装着し、該デバイスを用いて所定の空気衝撃を与えて微粉末化された粉末製剤をヨーロッパ薬局方（European Pharmacopoeia, Third Edition Supplement 2001, p113-115）に記載されている装置Ａ（Apparatus A）（ツインインピンジャー（Twin Impinger）：Copley社製，UK）に直接排出する。その後、該装置のStage 1とStage2中に入った溶媒をそれぞれ回収して、Bioassay法やＨＰＬＣ等の凍結乾燥組成物中の有効成分に応じて所望の方法により，Stage 1とStage 2の各溶媒中に含まれる有効成分を定量する〔Lucasらの報告（Pharm. Res., 15(4), 562-569(1998)）や飯田らの報告（薬学雑誌119(10)752-762(1999)参照）。なお，肺への送達が期待できるフラクションはStage 2（このフラクションで回収される空気力学的粒子径は６.４μｍ以下である。）であり、通常，このStage2に達し回収される有効成分の割合を有効粒子割合（肺へ到達が期待できる量,Fine Particles Fraction）と呼び，経肺投与用の吸入剤としての適性を評価する基準とされている。
【００８６】
下記の本実施例及び比較例では、Stage1とStage2のそれぞれに含まれる有効成分の重量を定量し、得られたStage2中の有効成分の重量を、噴射された有効成分の重量総量（Stage1とStage2に含まれる有効成分の重量総量：以下「Stage1＋Stage2」ともいう。）で割った値を有効粒子割合（Fine Particles Fraction（％））として算出した。また、原則として、ヨーロッパ薬局方ではツインインピンジャー（Copley社製，UK）を用いる場合，空気の吸引流量として60L/min、即ち1L/secで吸引することが規定されているので、下記の本実施例及び比較例もこれに従った。
【００８７】
実施態様例１    乾燥粉末吸入デバイス（噴射型１）
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの一実施態様を図１を用いて説明する。
【００８８】
乾燥粉末吸入デバイスは、容器１の底部に収容された非粉末性の単位若しくは数回投与量の凍結乾燥組成物２を微粒子化して肺器官に送るための空気噴射型の器具であって、空気噴射流路３及び排出流路４を有する針部５と、吸入口６を有し且つ針部５の基端に取り付けられる吸気部材７と、針部５を囲繞し且つ容器１の保持も兼ねる筒状安全カバー８と、空気圧送手段９とを備えている。
【００８９】
空気圧送手段９は、手動式であって筒状のベロー体１０を備え、ベロー体１０には吸込弁１１の付いた吸込口１２と吐出弁１３の付いた吐出口１４とが設けられ、吐出口１４は針部５の空気噴射流路３の基端側に形成された接続口１５に取り付けられ、空気噴射流路３に連通している。そして、吸込弁１１を閉じた状態でベロー体１０に圧縮力を加えて収縮させることにより吐出弁１３が開放して、ベロー体１０内の空気が吐出口１４から空気噴射流路３を通じて容器１内に排出される。一方、圧縮力を解除すると、ベロー体１０の弾性復元力によってベロー体１０が伸張して吐出弁１３が閉じた状態で吸込弁１１が開いて、ベロー体１０内に空気が導入されるようになっている。
【００９０】
該乾燥粉末吸入デバイスを使用するときには、図１に示すように、容器１を筒状安全カバー８にはめ込み、容器１の口栓１ａに針部５を突き刺して空気噴射流路３及び排出流路４と容器１の内部とを連通させる。この状態で、空気圧送手段９のベロー体１０を収縮させて吐出口１４から空気を排出すると、該空気は空気噴射流路３を通り針部５の先端から容器内の凍結乾燥組成物２に向けて噴射され、その空気衝撃によって凍結乾燥組成物２は微粒子となって、針部５の排出流路４を通って吸気部材７の吸入口６から排出される。そして、使用者（患者）はこの微粒子を吸気部材の吸気口６から吸気することにより、凍結乾燥組成物２の微粒子が患者の肺器官内に送られる。なお、本発明で用いられる容器の口栓は、その材質を特に制限されることなく、例えばゴム、プラスチックまたはアルミニウムなどの通常薬物や化合物を収容する容器の口栓として使用される材質を任意に選択して使用することができる。
【００９１】
この噴射型の吸入デバイスでは、空気噴射量が約２０ｍｌ、容器の容量が約５ｍｌ、空気噴射流路３の孔径（直径）が約１.２ｍｍ、及び排出流路４の孔径（直径）が約１.８ｍｍになるように設定されている。
【００９２】
但し、これに限定されることなく、空気噴射流路３及び排出流路４の孔径は、容器の大きさ等の関係で好ましい範囲が変動するため、特に制限されないが、直径０．３〜１０ｍｍ、好ましくは０．３〜７ｍｍ、より好ましくは０．５〜５ｍｍの範囲内から適宜選択される。
【００９３】
また、空気圧送手段９は、ベロー体１０の圧縮速度を調整することによって吸入投与に必要な微粒子の排出量を調節することが可能であり、また、かかる空気噴射によっても凍結乾燥組成物２の大部分を微粒子化するように調整することができる。
【００９４】
実施態様例２    乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型１）
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスの一実施態様（その１）を図２を用いて説明する。図２に示す乾燥粉末吸入デバイスは、吸引流路１６及び空気導入流路１７を有する針部５と、筒状安全カバー８と、吸引流路１６に連通する吸入口１８を有する吸気部材１９とを備え、吸気部材１９は針部５の吸引流路１６の基端側に連結されている。
【００９５】
乾燥粉末吸入デバイスを使用するときには、図２に示すように、容器１を筒状安全カバー８にはめ込み、容器１の口栓１ａに針部５を突き刺して吸引流路１６及び空気導入流路１７と容器１の内部とを連通させる。この状態で、患者の吸気圧で吸入口１８から吸引流路１６を介して容器１内の空気を吸引すると共に、これによって負圧となった容器１内に空気導入流路１７から外気を流入させる。このとき、凍結乾燥組成物２に作用する空気衝撃によって凍結乾燥組成物２が微粒子化され、調製された微粒子が吸引流路１６を通じて吸入口１８から患者の肺器官内に送られる。
【００９６】
また、当該乾燥粉末吸入デバイスは、患者の１回の吸入によって凍結乾燥組成物２の大部分が微粒子化して吸入口１８から排出されるように設定されている。なお、患者の１回の吸入の空気流量は５〜３００Ｌ／分、好ましくは１０〜２００Ｌ／分、より好ましくは１０〜１００Ｌ／分とされるが、本発明の自己吸入型乾燥粉末吸入デバイスは、使用する患者の呼吸能力に応じて適宜設計変更される。図２に示す吸入デバイスは、かかる患者の呼吸能力に応じて、容器の容量を約１０ｍｌに、空気導入流路１７及び吸引流路１６の孔径を直径約１.５ｍｍに設定したものである。これによって、患者の１回の吸入によって凍結乾燥組成物２がほぼ残らず微粒子化して吸入口１８から排出されるように設定される。
【００９７】
実施態様例３    乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型２）
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスの一実施態様（その２）を図３を用いて説明する。図３に示す乾燥粉末吸入デバイスは、図１に示す噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの接続口１５から空気圧送に使用するベロー体１０を取り外したときの形態と同じになっており、また、図１の噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの排出流路４が吸引流路１６に、空気噴射流路３が空気導入流路１７に、吸入口６を有する吸気部材７が吸入口１８を有する吸気部材１９に、それぞれ相当するようになっている。
【００９８】
そして、かかる自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスを使用するときには、図２に示した乾燥粉末吸入デバイスと同じ要領で、患者の吸気圧で吸入口１８から吸引流路１６を介して容器１内の空気を吸引すると共に、これによって負圧となった容器１内に空気導入流路１７から外気を流入させ、該空気流入に伴って生じる空気衝撃によって凍結乾燥組成物２が微粒子化される。そして、得られた該微粒子は吸入口１８から患者の肺器官内に送られる。なお、前述するように患者の１回の吸入の空気流量は通常５〜３００Ｌ／分の範囲にあるが、図３に示す吸入デバイスは、かかる患者の呼吸能力に応じて、容器の容量を約５ｍｌに、空気導入流路１７の孔径（直径）を約１.２ｍｍに、吸引流路１６の孔径（直径）を約１.８ｍｍにそれぞれ設定したものである。これによって、患者の１回の吸入によって凍結乾燥組成物２の大部分が微粒子化して吸入口１８から排出されるように設定される。
【００９９】
このようにして自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスを構成すれば、接続口１５にベロー体１０などの空気圧送手段９を着脱自在に取り付けることによって、該自己吸入型の吸入デバイスを噴射型に変更することもできる。これによって、一つの乾燥粉末吸入デバイスを所望に応じて自己吸入型・噴射型のいずれの態様にも適宜選択し使用することができる。
【０１００】
以上の乾燥粉末吸入デバイスは、自己吸入型又は噴射型のいずれのタイプであっても、凍結乾燥組成物が１０ミクロン以下、好ましくは５ミクロン以下の平均粒子径の微粒子になってほぼ残らず飛散するように空気衝撃の大きさを選択設定することができるように構成することができる。
【０１０１】
実施態様例４    乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型３）
本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスの一実施態様（その３）を図４から図１０を用いて説明する。なお、図４は当該乾燥粉末吸入デバイスを示す斜視図、図５は当該乾燥粉末吸入デバイスを示す断面図である。また図６の（ａ）は当該乾燥粉末吸入デバイスの針部５及び吸引口３１を示す部分断面図、（ｂ）は針部５の側面図である。さらに図７〜１０は、各々当該乾燥粉末吸入デバイスの動作を説明する断面図である。
【０１０２】
乾燥粉末吸入デバイスは、吸引流路１６及び空気導入流路１７が形成された針部５と、容器１を保持するためのホルダー部２２と、該ホルダー部２２を介して容器１を収容するための収容室２０と、ホルダー部２２を針部５の軸線方向にガイドするために収納室２０に設けられるガイド部２３と、ホルダー部２２をガイド部２３に沿って前進及び後退させるホルダー作動部２４とを備えており、これらは筒状のハウジング２１に収容されている。またこのハウジング２１の先部には、針部５の吸引流路１６と連通する吸引口３１を有するマウスピース３２を備えている。
【０１０３】
図７に示すように、ハウジング２１は、詳細にはホルダー部２２が後退した位置に出し入れ口２５が形成されたハウジング本体２６と、出し入れ口２５を開閉する蓋２７とで形成されている。蓋２７はハウジング本体２６にヒンジ２１Ａにて連結され、また、蓋２７には容器１の装填を確認するための窓２８が設けられている。
【０１０４】
ハウジング２１の壁部には外気を導入するための導入口２９が設けられ、導入口２９には逆止弁３０が装着されている。また、ハウジング２１の先部にはマウスピース３２が取り付けられている。マウスピース３２は、本乾燥粉末吸入デバイスを使用しないときには、吸引口３１はキャップ３２ａで塞がれる。
【０１０５】
針部５の基端部にはフランジ状の隔壁部３３が形成され、空気導入流路１７の端部は隔壁部３３内を通って隔壁部３３の外周方向に開口している。また、隔壁部３３の外周縁部からマウスピース３２の吸引口３１に向けて周壁部３４が延び、ハウジング２１の先端部に隔壁部３３を嵌め込むことにより、ハウジング２１内に針部５が取り付けられている。この取り付けによってハウジング２１の軸線方向と針部５の軸線方向とを合致させている。
【０１０６】
ホルダー部２２には容器１をホルダー部２２の底部から起こして取り出すための取り出し体３５が取り付けられ、取り出し体３５には容器１を起こすためのレバー３６が形成されている。
【０１０７】
ホルダー作動部２４は、ホルダー部２２をハウジング２１の軸線方向に往復動させるための機構部３７と、機構部３７を操作する操作レバーとを備えている。機構部３７は連結体３９を備えている。連結体３９の一端はホルダー部２２にヒンジ４０にて連結され、連結体３９の他端は蓋２７にヒンジ４１にて連結されている。蓋２７は前記操作レバーを兼ねている。蓋２７の開閉操作によってホルダー部２２をガイド部２３の沿って前進及び後退させる。
【０１０８】
蓋２７を倒すための力の作用点を図７の矢印Ｃで示す点とする。すなわち、ヒンジ２１Ａからヒンジ４１までの長さよりもヒンジ２１Ａから該作用点までの長さを長くする。これにより、「てこの原理」により、容器１の口栓１ａを針部５に突き刺すのに要する力よりも小さい力で蓋（操作レバー）２７を操作できる。
【０１０９】
また、図６に示すように、乾燥粉末吸入デバイスには空気を補助的に導入するための第２導入路４２が形成されている。粉末化した凍結乾燥組成物をマウスピース３２から吸引するときには、外気はこの第２導入路４２を通って直接マウスピース３２の吸引口３１に流入する。これにより、肺活量が低下した患者や子供の患者でも、負担をかけずに乾燥粉末吸入デバイスを使用できるようになっている。なお、第２導入路４２を省略しても良い。
【０１１０】
第２導入路４２は、針部５の隔壁部３３に導入溝４２ａを、周壁部３４に導入溝４２ｂをそれぞれ設け、針部５の周壁部３４にマウスピース３２を嵌め込むことにより、マウスピース３２と導入溝４２ａ及び４２ｂとで形成されるものである。
【０１１１】
マウスピース３２とハウジング２１との間には僅かな隙間４３が形成され、第２導入路４２の一端４４は隙間４３を通じて外部に開口し、第２導入路４２の他端４５はマウスピース３２の吸引口３１に開口している。
【０１１２】
また、図６に示すように、吸引口３１には通気孔４６を有する壁４７が設けられている。したがって、吸引力の不足等により凍結乾燥組成物２に与える空気衝撃力が小さくなり、凍結乾燥組成物２の一部に非粉末部分が発生する場合でも、該非粉末部分は壁４７の通気孔４６を通過する際に粉末化させることができる。
【０１１３】
また、図６（ａ）に示すように、針部５の空気導入流路１７の先端口１７ａは吸引流路１６の先端口１６ａよりも凍結乾燥組成物２に近づけている。これにより、空気導入流路１７の先端口１７ａから容器１内に流入する空気の流速低下をできるだけ抑え、凍結乾燥組成物２に効果的な空気衝撃を与えることができるようにしている。また、針部５の吸引流路１６の先端口１６ａは空気導入流路１７の先端口１７ａよりも凍結乾燥組成物２から離れているので、針部５の吸引流路１６に吸引される前に、容器１内での凍結乾燥組成物２の微粉末化をできるだけ進ませることができる。
【０１１４】
乾燥粉末吸入デバイスは次のようにして使用されるものである。まず、図７のように、蓋２７を起こしてハウジング２１の出し入れ口２５を開くことにより、ホルダー部２２が引き寄せられてハウジング２１の出し入れ口２５まで後退する。次に、容器１を口栓１ａを前向きにしてホルダー部２２に取り付ける。次に、図８のように蓋２７を倒してハウジング２１の出し入れ口２５を閉じることにより、連結体３９によってホルダー部２２が針部５の方に押し込まれて容器１の口栓１ａが針部５の先端に突き刺さり、針部５の吸引流路１６及び空気導入流路１７と容器１の内部とが連通する。次に、患者の吸気圧でマウスピース３２の吸引口３１から針部５の吸引流路１６を介して容器１内の空気を吸引する。このとき容器１内は負圧になって逆止弁３０が開き、外気が針部５の空気導入流路１７を通って容器１内に外気が流入する。これにより、容器１内で空気衝撃が発生して凍結乾燥組成物２が微粒子化され、調製された微粒子が吸引流路１６を通じて吸引口３１から患者の肺器官内に送られる。使用後は、蓋２７を起こしてホルダー部２２をハウジング２１の出し入れ口２５まで引き寄せた後、レバー３６で取り出し体３５を起こして容器１をホルダー部２２から取り出す。
【０１１５】
一方、マウスピース３２の吸引口３１から容器１内に空気を吹き込んでも、微粒子化した凍結乾燥組成物２の外部への排出は逆止弁３０によって阻止される。
【０１１６】
前述したように患者の１回の吸入の空気流量は通常５〜３００Ｌ／分の範囲にあるが、図４から図１０に示す吸入デバイスは、かかる患者の呼吸能力に応じて、容器１の容量を約５ｍｌに、空気導入流路１７の口径（直径）を約２.５ｍｍに、吸引流路１６の口径（直径）を約２.５ｍｍにそれぞれ設定したものである。これによって、患者の１回の吸入によって凍結乾燥組成物２の大部分が微粒子化して吸引口３１から排出されるように設定される。
【０１１７】
乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型）の他の実施態様例を、図１１から図１３に示す。
【０１１８】
図１１に示す乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型４）は、矢印のようにハウジング２１の周方向に操作体４８が回転自在に設けられている。図示しないホルダー作動部の機構部は、螺旋溝とこれに係合するフォロワーを備え、操作体４８の回転運動によりホルダー部２２を針部５の軸線方向への直線運動に変換させる。なお、操作体４８の回転角度はほぼ１８０度である。
【０１１９】
図１２及び図１３に示す乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型５）は、ハウジング２１に環状の操作体４９が回転自在に取り付けられている。図示しないホルダー作動部の機構部は、送りねじを備え、操作体４９の回転運動によりホルダー部２２を針部５の軸線方向への直線運動に変換させる。ホルダー部２２はハウジング２１の後部から引き出し自在となっている。
【０１２０】
実施例１−４
限外濾過膜（ウルトラフリー１５、Millipore製）を用いて、インターフェロン−γ（IFN-γ）原液（力価：1×107IU/ml）を脱塩した。得られた脱塩IFN-γを10万IUと下表１に示す量の各種担体を注射用蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（実施例１―４及び比較例１及び２）。
【０１２１】
得られた非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、崩壊指数を算出した。
【０１２２】
また、該凍結乾燥組成物の有効粒子割合を算出して肺への送達効率を評価するために、乾燥粉末吸入デバイスを用いて容器に充填された凍結乾燥ケーキに空気速度約３５m/sec及び空気流量約４０ml/secで生じる空気衝撃を与えて、粉砕された微粒子状の凍結乾燥物をツインインピンジャー（Copley社製，UK）に直接排出した。その後，Stage 1とStage2の溶媒をそれぞれ回収して、Bioassay法により、Stage 1とStage 2の各溶媒中のIFN-γを定量した。得られたStage2中のIFN-γ量を噴射されたIFN-γの総量（Stage1＋Stage2）で割った値を有効粒子割合（Fine Particle Fraction）として算出した。
【０１２３】
得られた凍結乾燥組成物のIFN-γの安定性を評価するために、凍結乾燥前のIFN-γ活性（100%）に対する凍結乾燥直後のIFN-γの残存活性（以下、凍結乾燥後残存活性という。）、及び凍結乾燥直後のIFN-γ活性（100%）に対する70℃で2週間保存した後のIFN-γの残存活性（以下、高温保存後残存活性という。）をBioassay法により測定した。
【０１２４】
各凍結乾燥組成物（実施例１−４及び比較例１及び２）の崩壊指数、有効粒子割合（％）、凍結乾燥後残存活性（％）及び高温保存後残存活性（％）を併せて表１に示す。
【０１２５】
【表１】
2006509825.tif 000004
【０１２６】
実施例１―４及び比較例１の凍結乾燥組成物はいずれも凍結乾燥後は、非粉末状のケーキ状塊（凍結乾燥ケーキ）であった。表１に示すように、実施例１−４及び比較例１の凍結乾燥組成物は、空気速度約３５m/sec及び空気流量約４０ml/secで生じる空気衝撃により、容器内で容易に微粒子化され、良好な有効粒子割合が得られた。よって、実施例１−４及び比較例１の凍結乾燥組成物は、経肺投与に適した粉末製剤に調製可能であることが明らかとなった。一方、担体としてプルランを配合した比較例２の凍結乾燥組成物は、上記空気衝撃により、崩壊せず、微粒子化することはできなかった。
【０１２７】
また、実施例１―４の凍結乾燥組成物は、親水性アミノ酸を配合していない比較例１の凍結乾燥組成物に比して、凍結乾燥処理によってIFN-γの活性が高い割合で保持されていることが確認された。更に、親水性アミノ酸を配合していない比較例１の凍結乾燥組成物は、極めて過酷な温度（70℃）条件下ではIFN-γが失活するのに対して、疎水性アミノ酸及び親水性アミノ酸を配合した実施例１―４の凍結乾燥組成物ではかかる温度条件下でもIFN-γの活性が高い割合で保持されていることが分かった。
【０１２８】
実施例５−１１
限外濾過膜（ウルトラフリー１５、Millipore製）を用いて、インターフェロン-γ（IFN-γ）原液（力価：1×107IU/ml）を脱塩した。得られた脱塩IFN-γを10万IU又は100万IUと下表２に示す量の各種担体を注射用蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（実施例５−１１）。
【０１２９】
得られた非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、崩壊指数を算出した。
【０１３０】
次に、得られた実施例５−１１の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）を含有する容器を空気噴射流路３の孔径をφ１.２ｍｍ、排出流路４の孔径をφ１.８ｍｍに設計した噴射型の乾燥粉末吸入デバイス（空気量約２０mlを供給できるベロー体１０を有する。図１）に装着した。に装着した。このデバイスを人工肺モデルであるエアロブリーダーを装着したエアロザイザー(Amherst Process Instrument,Inc社製，USA)に取り付け，空気量約２０ｍLを吸入デバイスから容器に導入することにより、上記凍結乾燥ケーキに空気速度約３５m/sec及び空気流量約４０ml/secで生じる空気衝撃を与えた。これによって、噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの空気噴射流路３から空気が容器１内に導入され、その空気衝撃で、容器内の非粉末状の凍結乾燥組成物が微粒子化されるのが観察された。この微粒子の粒度分布を上記のエアロブリダー（測定条件、Breath Rate：６０L/min, Breath Volume：１L,アクセラレーション：１９）を装着したエアロサイザーを用いて測定した。そして該粒度分布から各凍結乾燥組成物の空気力学平均粒子径（μm±SD）を算出した。
【０１３１】
実施例１−４と同様の方法で、有効粒子割合（％）、凍結乾燥後残存活性（％）及び高温保存後残存活性（％）を評価した。
【０１３２】
得られた実施例５−１１の凍結乾燥組成物は、いずれも凍結乾燥後は非粉末状のケーキ状塊（凍結乾燥ケーキ）であった。また、表２に示すように、実施例５−１１の凍結乾燥組成物は、いずれも0.15以上の崩壊指数を備えており、空気速度約３５m/sec及び空気流量約４０ml/secで生じる空気衝撃により、容器内で容易に微粒子化され、空気力学平均粒子径が５ミクロン以下の微粒子となり、経肺投与に適した微粒子状の粉末製剤となった。また、いずれの凍結乾燥組成物においても良好な有効粒子割合が得られた。更に、実施例５−１１の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後残存活性及び高温保存後残存活性が高く、該組成物の調製時及び高温保存条件下において、IFN-γの活性が高い割合で保持されることが確認された。
【０１３３】
【表２】
2006509825.tif 000005
【０１３４】
実施例１２−１４
限外濾過膜（ウルトラフリー１５、Millipore製）を用いて、インターフェロン-γ（IFN-γ）原液（力価：1×107IU/ml）を脱塩した。得られた脱塩IFN-γ100万IUと下表３に示す量の各種担体を注射用蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（実施例１２−１４）。
【０１３５】
得られた非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、崩壊指数を算出した。
【０１３６】
実施例５−１１と同様の方法で、各凍結乾燥組成物の空気力学平均粒子径（μm±SD）を算出した。更に、実施例１−４と同様の方法で、凍結乾燥後残存活性（％）及び高温保存後残存活性（％）を評価した。
【０１３７】
得られた実施例１２−１４の凍結乾燥組成物は、いずれも凍結乾燥後は非粉末状のケーキ状塊（凍結乾燥ケーキ）であった。また、表３に示すように、実施例１２−１４の凍結乾燥組成物は、いずれも0.25以上の崩壊指数を備えており、空気速度約３５m/sec及び空気流量約４０ml/secで生じる空気衝撃により、容器内で容易に微粒子化され、空気力学平均粒子径が５ミクロン以下の微粒子となり、経肺投与に適した微粒子状の粉末製剤となった。更に、実施例１２−１４の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後残存活性及び高温保存後残存活性が高く、該組成物の調製時及び高温保存条件下において、IFN-γの活性が高い割合で保持されることが確認された。
【０１３８】
【表３】
2006509825.tif 000006
【０１３９】
実施例１５
限外濾過膜（ウルトラフリー１５、Millipore製）を用いて、インターフェロン-γ（IFN-γ）原液（力価：1×107IU/ml）を脱塩した。得られた脱塩IFN-γ100万IUと下表４に示す量の各種担体を注射用蒸留水とエタノールの混合溶液（エタノール濃度１重量％）に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（実施例１５）。
【０１４０】
得られた実施例１５の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、崩壊指数を算出した。
【０１４１】
次に、得られた実施例１５の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）を含有する容器を空気噴射流路３の孔径をφ１.２ｍｍ、排出流路４の孔径をφ１.８ｍｍに設計した噴射型の乾燥粉末吸入デバイス（空気量約５０mlを供給できるベロー体１０を有する。図１）に装着した。このデバイスを人工肺モデルであるエアロブリーダーを装着したエアロザイザー(Amherst Process Instrument,Inc社製，USA)に取り付け，空気量約５０ｍLを吸入デバイスから容器に導入することにより、上記凍結乾燥ケーキに空気速度約８９m/sec及び空気流量約１００ml/secで生じる空気衝撃を与えた。これによって，噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの空気噴射流路から空気が容器内に導入され、その空気衝撃で、容器内の非粉末状の凍結乾燥組成物が微粒子化されるのが観察された。この微粒子の粒度分布を上記のエアロブリーダー（測定条件、Breath Rate：６０L/min, Breath Volume：１L,アクセラレーション：１９）を装着したエアロサイザーを用いて測定した。そして該粒度分布から各凍結乾燥組成物の空気力学平均粒子径（μm±SD）を算出した。
【０１４２】
実施例１−４と同様の方法で、凍結乾燥後残存活性（％）及び高温保存後残存活性（％）を評価した。
【０１４３】
得られた実施例１５の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後は非粉末状のケーキ状塊（凍結乾燥ケーキ）であった。また、表４に示すように、実施例１５の凍結乾燥組成物は、０．０５以上の崩壊指数を備えており、空気速度約８９m/sec及び空気流量約１００ml/secで生じる空気衝撃により、容器内で容易に微粒子化され、空気力学平均粒子径が５ミクロン以下の微粒子となり、経肺投与に適した微粒子状の粉末製剤となった。更に、実施例１５の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後残存活性及び高温保存後残存活性が高く、該組成物の調製時及び高温保存条件下において、IFN-γの活性が高い割合で保持されることが確認された。
【０１４４】
【表４】
2006509825.tif 000007
【０１４５】
実施例１６
限外濾過膜（ウルトラフリー１５、Millipore製）を用いて、インターフェロン-γ（IFN-γ）原液（力価：1×107IU/ml）を脱塩した。得られた脱塩IFN-γ100万IUと下表５に示す量の各種担体を注射用蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（実施例１６）。
【０１４６】
得られた実施例１６の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、崩壊指数を算出した。
【０１４７】
次に、得られた実施例１６の非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）を含有する容器を空気噴射流路の孔径をφ4.0ｍｍ、排出流路の孔径をφ4.0ｍｍに設計した自己吸入型の乾燥粉末吸入デバイスに装着した。このデバイスを人工肺モデルであるエアロブリーダー（Amherst Process Instrument，Inc．社、USA；測定条件：Breath rate 1L/min、Breath Volume  0.1L）を装着したエアロザイザー（Amherst Process Instrument，Inc．社、USA）に取り付け、上記凍結乾燥ケーキに空気速度約１m/sec及び空気流量約17ml/secで生じる空気衝撃を与えた。これによって、噴射型の乾燥粉末吸入デバイスの空気噴射流路から空気が容器内に導入され、その空気衝撃で、容器内の非粉末状の凍結乾燥組成物が微粒子化されるのが観察された。この微粒子の粒度分布を上記のエアロブリーダー（測定条件、Breath Rate：６０L/min, Breath Volume：１L,アクセラレーション：１９）を装着したエアロサイザーを用いて測定した。そして該粒度分布から各凍結乾燥組成物の空気力学平均粒子径（μm±SD）を算出した。
【０１４８】
実施例１−４と同様の方法で、凍結乾燥後残存活性（％）及び高温保存後残存活性（％）を評価した。
【０１４９】
得られた実施例１６の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後は非粉末状のケーキ状塊（凍結乾燥ケーキ）であった。また、表５に示すように、実施例１6の凍結乾燥組成物は、0.2以上の崩壊指数を備えており、空気速度約１m/sec及び空気流量約１７ml/secで生じる空気衝撃により、容器内で容易に微粒子化され、空気力学平均粒子径が５ミクロン以下の微粒子となり、経肺投与に適した微粒子状の粉末製剤となった。更に、実施例１６の凍結乾燥組成物は、凍結乾燥後残存活性及び高温保存後残存活性が高く、該組成物の調製時及び高温保存条件下において、IFN-γの活性が高い割合で保持されることが確認された。
【０１５０】
【表５】
2006509825.tif 000008
【０１５１】
参考試験例１
凍結乾燥組成物に含まれる塩類が該組成物の空気衝撃による微粒子化に及ぼす影響を調べるために、下記の試験を行った。
【０１５２】
表６に示す量のインターフェロン-α（IFN-α）、各種アミノ酸及びクエン酸塩（クエン酸及びクエン酸ナトリム）を注射蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に入れ、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（参考例１−５）。得られた非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、実施例１−４と同様の方法で、崩壊指数及び有効粒子割合（％）を評価した。
【０１５３】
得られた結果を表６に併せて示す。表６から分かるように、凍結乾燥組成物中のクエン酸塩の含有割合が低い程、崩壊指数が大きくなることが明らかとなった。また、凍結乾燥組成物中のクエン酸塩の配合割合が低い程、優れた有効粒子割合が得られることが確認された。
【０１５４】
【表６】
2006509825.tif 000009
【０１５５】
参考試験例２
凍結乾燥組成物に含まれる塩類が該組成物の空気衝撃による微粒子化に及ぼす影響を調べるために、下記の試験を行った。
【０１５６】
表７に示す量のインターフェロン-γ（IFN-γ）、各種アミノ酸及びリン酸塩（リン酸二水素ナトリウム２水和物及びリン酸水素二ナトリウム１２水和物）を注射蒸留水に溶解して全量を0.5mlに調製し、これを容器（胴径φ18mm）に充填し、棚状凍結乾燥機（LYOVAC GT-4, LEYBOLD社製）を用いて凍結乾燥した（参考例６−８）。得られた非粉末状の凍結乾燥組成物（凍結乾燥ケーキ）について、実施例１−４と同様の方法で、崩壊指数及び有効粒子割合（％）を評価した。
【０１５７】
得られた結果を表７に併せて示す。表７から明らかなように、凍結乾燥組成物中のリン酸塩の含有割合が低い程、崩壊指数が大きく、有効粒子割合が高くなることが確認された。
【０１５８】
【表７】
2006509825.tif 000010
【０１５９】
参考試験例１及び２の結果から、非粉末状の凍結乾燥組成物に含まれる塩類が該組成物の空気衝撃による微粒子化を阻害していることが明らかとなり、非粉末状の凍結乾燥組成物中に塩類の含有割合が低い程、崩壊指数が大きく、有効粒子割合が高くなることが確認された。即ち、空気衝撃によって優れた有効粒子割合の微粒子を調製可能な非粉末状の凍結乾燥組成物を得るには、凍結乾燥に供する溶液中の塩類濃度を低くするとよいことが分かった。
【図面の簡単な説明】
【０１６０】
【図１】図１は、実施態様例１として記載する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイス（噴射型１）を示す断面図である。なお、図中、矢印は外部エアーの流れを示す（以下、図２及び３において同じ）。
【０１６１】
また各符号の意味は下記の通りである：１．容器、１ａ．口栓、２．凍結乾燥組成物、３．空気噴射流路、４．排出流路、５．針部、６．吸入口、７．吸気部材、８．筒状安全カバー、９．空気圧送手段、１０．ベロー体、１１．吸込弁、１２．吸込口、１３．吐出弁、１４．吐出口、１５．接続口（以下、図２〜１１において同じ）。
【図２】図２は、実施態様例２として記載する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型１）を示す断面図である。また各符号の意味は下記の通りである：１６．吸引流路、１７．空気導入流路、１８．吸入口、１９．吸気部材（以下、図３において同じ）。
【図３】図３は、実施態様例３として記載する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型２）を示す断面図である。
【図４】図４は、実施態様例４として記載する本発明の経肺投与用インターフェロン−γ乾燥粉末吸入システムに使用される乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型３）を示す斜視図である。また各符号の意味は下記の通りである：２１．ハウジング、２２．ホルダー部、２７．蓋、２８．窓、３２．マウスピース、３２ａ．マウスピースのキャップ、３９．連結体（以下、図５〜１３において同じ）。
【図５】図５は、上記乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型３）の断面図である。また各符号の意味は下記の通りである：２０．収容室、２１Ａ．ヒンジ、２３．ガイド部、２４．ホルダー作動部、２６．ハウジング本体、２９．導入口、３０．逆止弁、３１．吸引口、３３．隔壁部、３５．取り出し体、３６．レバー、３７．機構部、３９．連結体、４０．ヒンジ、４１．ヒンジ（以下、図６〜１３において同じ）。
【図６】図６の（ａ）は上記乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型３）の部分断面図、（ｂ）は同乾燥粉末吸入デバイスの針部の側面図である。また各符号の意味は下記の通りである：１６ａ．吸引流路１６の先端口、１７ａ．空気導入流路１７の先端口、３４．周壁部、４２．第２導入路、４２ａ．隔壁部３３の導入溝、４２ｂ．周壁部３４の導入溝、４３．隙間、４４．第２導入路４２の一端、４５．第２導入路４２の他端、４６．通気孔、４７．壁（以下、図７〜１３において同じ）。
【図７−１０】図７〜１０は、上記乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型３）の動作を説明する断面図である。符号２５は出し入れ口を示す。
【図１１】図１１は、その他の実施形態の乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型４）の斜視図である。符号４８は操作体を示す。
【図１２−１３】図１２及び１３は、その他の実施形態の乾燥粉末吸入デバイス（自己吸入型５）の斜視図である。符号４９は操作体を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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