(57)【要約】新規ポリペプチドをコードする核酸配列が本明細書中で開示される。これらの核酸配列によってコードされるポリペプチド、このポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体、ならびに前述のポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体の誘導体、改変体、変異体またはフラグメントがまた、開示される。本発明は、これらの新規ヒト核酸およびタンパク質のいずれか１つに関連する障害の、治療剤、診断方法ならびに、診断、処置および予防のための研究方法を、さらに開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたポリペプチドであって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列；ならびに
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のポリペプチドであって、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の天然に存在する対立遺伝子改変体のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項３】
請求項２に記載のポリペプチドであって、ここで、前記対立遺伝子改変体が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および／または４１からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる核酸配列の翻訳であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
【請求項４】
前記改変体のアミノ酸配列が、保存的アミノ酸置換含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
単離された核酸分子であって、以下：
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群から選択されるアミノ酸配列の成熟形態；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の成熟形態の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該成熟形態のアミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列の改変体であって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、改変体；
（ｅ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは該ポリペプチドの改変体の、少なくとも一部をコードする核酸フラグメントであって、ここで、該改変体中の１以上のアミノ酸残基が、該成熟形態のアミノ酸配列と異なり、ただし、該改変体は、該アミノ酸配列と、そのアミノ酸残基のうちの１５％以下が異なる、核酸フラグメント；ならびに
（ｆ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）または（ｅ）の相補体を含む、核酸分子、
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項６】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が天然に存在する対立遺伝子核酸改変体のヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項７】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、天然に存在するポリペプチド改変体のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸分子。
【請求項８】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および／または４１からなる群から選択される核酸配列と単一ヌクレオチドで異なる、核酸分子。
【請求項９】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が以下：
（ａ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および／または４１からなる群より選択されるヌクレオチド配列；
（ｂ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および／または４１からなる群より選択されるヌクレオチド配列と１つ以上のヌクレオチドで異なる、ヌクレオチド配列であって、ただし、そのヌクレオチドの２０％以下が、該ヌクレオチド配列と異なる、ヌクレオチド配列；
（ｃ）（ａ）の核酸フラグメント；ならびに
（ｄ）（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１０】
請求項５に記載の核酸分子であって、ここで、該核酸分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および／または４１からなる群より選択されるヌクレオチド配列または該ヌクレオチド配列の相補鎖にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、核酸分子。
【請求項１１】
請求項５に記載の核酸分子であって、該核酸分子は、以下：
（ａ）第１ヌクレオチド配列であって、前記アミノ酸配列をコードするコード配列と１以上のヌクレオチド配列で異なるコード配列を含み、ただし、該第１ヌクレオチド配列中のコード配列におけるヌクレオチドの２０％以下が、該コード配列と異なる、第１ヌクレオチド配列；
（ｂ）該第１ポリヌクレオチドの相補体である、単離された第２ポリヌクレオチド；ならびに
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の核酸フラグメント；
からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項１２】
請求項１１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１３】
前記核酸分子に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
請求項１２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項１５】
請求項１に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する、抗体。
【請求項１６】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１８】
サンプル中の請求項１に記載のポリペプチドの存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該ポリペプチドに免疫特異的に結合する抗体と接触させる工程；および
（ｃ）該ポリペプチドに結合した抗体の存在または量を決定して、それによって該サンプル中のポリペプチドの存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１９】
サンプル中の請求項５に記載の核酸分子の存在または量を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該サンプルを提供する工程；
（ｂ）該サンプルを、該核酸分子に結合するプローブと接触させる工程；および
（ｃ）該核酸分子に結合した該プローブの存在または量を決定して、それによって該サンプル中の該核酸分子の存在または量を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載のポリペプチドに結合する因子を同定する方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを該因子と接触させる工程；および
（ｂ）該因子が該ポリペプチドに結合するか否かを決定する工程；
を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載のポリペプチドの発現または活性を調節する因子を同定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該ポリペプチドを発現する細胞を提供する工程；
（ｂ）該因子と該細胞とを接触させる工程；および
（ｃ）該因子が、該ポリペプチドの発現または活性を調節するか否かを決定する工程、
を包含し、それによって、該ペプチドの発現または活性における変化が、外因子の該ポリペプチドの発現または活性の調節を示す、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載のポリペプチドの活性を調節するための方法であって、該方法は、請求項１に記載のポリペプチドを発現する細胞サンプルを、該ポリペプチドの活性を調節するのに十分な量で、該ポリペプチドに結合する化合物とを接触させる工程を包含する、方法。
【請求項２３】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
前記被験体がヒトである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項５に記載の核酸を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２６】
前記被験体がヒトである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該方法は、そのような処置または予防が所望される被験体に、該被験体における該ＮＯＶＸ関連障害を処置または予防するに十分な量で、請求項１５に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２８】
前記被験体がヒトである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
請求項１に記載のポリペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３０】
請求項５に記載の核酸分子および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３１】
請求項１５に記載の抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物。
【請求項３２】
請求項２９に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３３】
請求項３０に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３４】
請求項３１に記載の薬学的組成物を１つ以上の容器に含む、キット。
【請求項３５】
ヒト疾患に関連する症候群を処置するための医薬品の製造における治療剤の使用であって、該疾患は、ＮＯＶＸ関連障害から選択され、ここで、該治療剤は、ＮＯＶＸポリペプチド、ＮＯＶＸ核酸、およびＮＯＶＸ抗体からなる群より選択される、使用。
【請求項３６】
ＮＯＶＸ関連障害の活性もしくは潜伏のモジュレータまたはＮＯＶＸ関連障害の素因についてスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
（ａ）ＮＯＶＸ関連疾患について増大した危険にされされている試験動物に対して、試験化合物を投与する工程であって、ここで、該試験動物は、請求項１に記載のポリペプチドを組換え可能に発現する、工程；
（ｂ）工程（ａ）の化合物を投与する工程の後に、該試験動物における該ポリペプチドの活性を測定する、工程；
（ｃ）該ポリペプチドが投与されていないコントロール動物における該ポリペプチドの活性と、該試験動物における該タンパク質の活性を比較する工程であって、ここで、該コントロール動物と比較した場合の該第１の試験動物における該ポリペプチドの活性における変化が、該試験化合物がＮＯＶＸ関連疾患の潜伏のモジュレータまたはＮＯＶＸ関連疾患の素因を示す、工程
を包含する、方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であって、ここで、前記試験動物が組換え試験動物であり、該組換え試験動物は試験タンパク質導入遺伝子を発現するか、野生型試験動物と比較して増大したレベルでプロモーターの制御下において該導入遺伝子を発現し、そして、ここで該プロモーターが該導入遺伝子のネイティブ遺伝子プロモーターではない、方法。
【請求項３８】
第１の哺乳動物被験体における請求項１に記載のポリペプチドの変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該ポリペプチドの発現レベルを測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該ポリペプチドの量を、該疾患を有さないことが既知であるか、または該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該ポリペプチドの量と、比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の該第１の被験体における該ポリペプチドの発現レベルにおける変化が、疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項３９】
第１の哺乳動物被験体における請求項５に記載の核酸分子の変化したレベルと関連する疾患の存在または該疾患に対する素因を決定するための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）該第１の哺乳動物被験体由来のサンプル中の該核酸の量を測定する工程；および
（ｂ）工程（ａ）のサンプル中の該核酸の量を、該疾患を有さないことが既知であるかまたは該疾患にかかりにくいことが既知の、第２の哺乳動物被験体由来のコントロールサンプル中に存在する該核酸の量と比較する工程、
を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の、該第１の被験体における該核酸のレベルにおける変化が、該疾患の存在または該疾患に対する素因を示す、方法。
【請求項４０】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、該病理状態を緩和するに十分な量でポリペプチドを該哺乳動物に投与する工程を包含し、ここで、該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および／または４２のうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはそれらの生物学的に活性なフラグメントと、少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドである、方法。
【請求項４１】
哺乳動物において病理学的状態を処置する方法であって、該方法は、該病理学的状態を緩和するに十分な量で請求項１５に記載の抗体を該哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ポリヌクレオチドおよびこのようなポリヌクレオチドにコードされたポリペプチド、ならびにベクター、宿主細胞、抗体、およびポリペプチドおよびポリヌクレオチドを産生するための組換え方法、ならびにこれらを使用する方法に関する。
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、一部タンパク質をコードする核酸に基づき、このタンパク質は、以下のタンパク質ファミリーの新しいメンバーである：カリウムチャネル様、ガラニンレセプター１型（ＧＡＬ１−Ｒ）（ＧＡＬＲ１）様、Ｐ２Ｙプリノセプター（Ｐ２Ｙ  Ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ）１様、ＬＯＭＰ様、上皮増殖因子様、ヒアルロナン仲介型運動性レセプター様、セルピン様、Ｂ７ファミリー様およびアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ様。より詳細には、本発明は、新規のポリペプチドをコードする核酸、ならびにベクター、宿主細胞、抗体、およびこれらの核酸およびポリペプチドを生成するための組換え方法に関する。
【０００３】
（発明の要旨）
本発明は、新規のポリペプチドをコードする核酸配列の開示の一部に基づく。本明細書中において、新規の核酸およびポリペプチドとは、ＮＯＶＸまたはＮＯＶ１、ＮＯＶ２、ＮＯＶ３、ＮＯＶ４、ＮＯＶ５、ＮＯＶ６、ＮＯＶ７、ＮＯＶ８ならびにＮＯＶ９の核酸およびポリペプチドをいう。これらの核酸およびポリペプチドならびにその誘導体、ホモログ、アナログおよびフラグメントは、以下に集合的に「ＮＯＶＸ」核酸配列または「ＮＯＶＸ」ポリペプチド配列と命名される。
【０００４】
１つの局面において、本発明は、ＮＯＶＸポリペプチドをコードする単離されたＮＯＶＸ核酸分子を提供し、ここでＮＯＶＸ核酸分子は、配列番号（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ）１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１に開示される核酸と同一性を有する核酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＮＯＶＸ核酸分子は、ＮＯＶＸ核酸配列の中のタンパク質コード配列を含む核酸分子と相補的な核酸配列に対しストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。本発明はまた、ＮＯＶＸポリペプチド、またはそのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体をコードする単離された核酸を含む。例えば、核酸は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２のアミノ酸配列を含むポリペプチドと少なくとも８０％同一のポリペプチドをコードし得る。例えば、この核酸は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１のいずれかの核酸配列を含むゲノムＤＮＡフラグメントまたはｃＤＮＡ分子であり得る。
【０００５】
ＮＯＶＸ核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１）の少なくとも６つの連続するヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドまたは上記のオリゴヌクレオチドの相補体のようなオリゴヌクレオチドはまた、本発明に含まれる。実質的に精製されたＮＯＶＸポリペプチド（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２）はまた、本発明に含まれる。ある実施形態において、ＮＯＶＸポリペプチドは、ヒトＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む。
【０００６】
本発明はまた、ＮＯＶＸポリペプチド、あるいはそのフラグメント、ホモログ、アナログまたは誘導体に免疫選択的に結合する抗体を特徴とする。
【０００７】
別の局面において、本発明は、治療上または予防上有効な量の治療的にまたは薬学的に受容可能なキャリアを含有する、薬学的組成物を含む。治療剤は、例えば、ＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチドまたはＮＯＶＸポリペプチドに特異的な抗体であり得る。さらなる局面において、本発明は、１つ以上の容器中に治療上または予防上有効な量の上記の薬学的組成物を含む。
【０００８】
さらなる局面において、本発明は、ＤＮＡによってコードされるＮＯＶＸポリペプチドの発現を可能にする条件下において、ＮＯＶＸ核酸を含む細胞の培養によってポリペプチドを産生する方法を含む。望まれる場合、次いで、ＮＯＶＸポリペプチドは、回収され得る。
【０００９】
別の局面において、本発明は、サンプル中のＮＯＶＸポリペプチドの存在を検出する方法を含む。この方法において、ポリペプチドと化合物との複合体の形成を可能とする条件下で、サンプルは、選択的にポリペプチドに結合する化合物に接触される。もし存在する場合、この複合体は、検出され、その結果、サンプルの中のＮＯＶＸポリペプチドを同定する。
【００１０】
本発明はまた、ＮＯＶＸの発現に基づき、特定の細胞または組織型を同定するための方法を含む。
【００１１】
サンプルとＮＯＶＸ核酸プローブまたはＮＯＶＸ核酸プライマーと接触させ、サンプル中において核酸分子プローブまたは核酸分子プライマーが、ＮＯＶＸ核酸分子に結合するかどうかを検出することによりサンプル中のＮＯＶＸ核酸分子の存在を確認する方法もまた、本発明に含まれる。
【００１２】
さらなる局面において、本発明は、ＮＯＶＸポリペプチドを含む細胞サンプルと、ＮＯＶＸポリペプチドに結合する化合物とを上記のポリペプチドの活性を調節するために十分な量で接触させることにより、ＮＯＶＸポリペプチドの活性を調節する方法を提供する。この化合物は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、炭水化物、脂質または他の有機分子（炭素を含有する）もしくは無機分子のような低分子であり得、さらに本明細書中に記載される。
【００１３】
障害または症候群の処置または予防のための医薬品の製造における治療剤の使用はまた、本発明の範囲内であり、このような障害または症候群として、例えば、以下：外傷、再生（インビボおよびインビトロ）、ウイルス／細菌／寄生虫の感染、フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、光線性角化症、挫瘡、毛髪成長疾患（ｈａｉｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脱毛症、色素沈着障害、内分泌障害、重症新生児マルファン症候群のような結合組織障害、優性水晶体転位症、家族性上行大動脈瘤（ｆａｍｉｌｉａｌ  ａｓｃｅｎｄｉｎｇ  ａｏｒｔｉｃ  ａｎｅｕｒｙｓｍ）、マルファン症候群の孤発性骨格形態（ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｓｋｅｌｅｔａｌ  ｆｅａｔｕｒｅ）、シュプリンゼン−グルトベルグ（Ｓｈｐｒｉｎｔｚｅｎ−Ｇｏｌｄｂｅｒｇ）症候群、遺伝性皮膚症、拘縮性クモ指症、変形性関節症および慢性関節リウマチのような炎症性障害、炎症性腸疾患、クローン病；免疫性障害、ＡＩＤＳ；癌（肺癌、結腸癌、新生物が挙げられるがこれらに限定されない）；腺癌；リンパ腫；前立腺癌；子宮癌、白血病または膵臓癌；血液障害；喘息；乾癬；血管障害、高血圧、皮膚障害、アルポート症候群を含む腎臓障害、免疫性障害、組織の損傷、線維形成障害（ｆｉｂｒｏｓｉｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、骨疾患、エーレルス−ダンロー症候群ＶＩ型、ＶＩＩ型、ＩＶ型、Ｓ−連関型（Ｓ−ｌｉｎｋｅｄ）弛緩性皮膚およびエーレルス−ダンロー症候群Ｖ型、骨形成不全症、神経疾患、脳および／または自己免疫障害様脳脊髄炎、変性神経障害、免疫障害、造血障害、筋肉障害、炎症および創傷の回復、細菌性、真菌性、原生動物性、およびウイルス性の感染（特にＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感染）、疼痛、急性心不全、低血圧、高血圧、尿道停留（ｕｒｉｎａｒｙ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）、骨粗しょう症、オールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、狭心症、心筋梗塞、潰瘍、良性前立腺肥大、先天性多発性関節拘縮症、骨形成不全、円錐角膜、脊柱側弯症、十二指腸閉鎖（ｄｕｏｄｅｎａｌ  ａｔｒｅｓｉａ）、食道閉鎖症、腸管異常回転、膵炎、肥満性全身性エリテマトーデス（Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、自己免疫疾患、気腫、強皮症、アレルギー、ＡＲＤＳ、神経防護作用（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ）、妊娠重症筋無力症、糖尿病、肥満、成長および再生障害血友病、凝固能亢進（Ｈｙｐｅｒｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）、特発性血小板減少性紫斑病、免疫欠損、移植片対宿主拒絶（Ｇｒａｆｔ  ｖｅｓｕｓ  ｈｏｓｔ）、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、子宮内膜症、口内乾燥症、潰瘍、肝硬変、移植、憩室性疾患、ヒルシュスプルング病、虫垂炎、関節炎、強直性脊椎炎、腱炎、腎動脈狭窄、間質性腎炎、糸球体腎炎、多発性嚢胞腎疾患、エリテマトーデス、尿細管性アシドーシス、ＩｇＡ腎症、食欲不振、過食症、不安を含む神経異常、精神分裂病、躁鬱病（ｍａｎｉｃ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ）、せん妄、痴呆、重度の精神遅滞（ｍｅｎｔａｌ  ｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ）およびハンティングトン病のような運動障害ならびに／または他の病理状態および障害などが挙げられる。
【００１４】
治療剤は、例えばＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチド、またはＮＯＶＸ特異的抗体、あるいはその生物学的に活性な誘導体またはフラグメントであり得る。
【００１５】
例えば、本発明の組成物は、上記に開示された疾患および障害および／または他の病理状態および障害などに苦しむ患者の処置のために効力を有する。ポリペプチドは、本発明に対して特異的な抗体を産生するための免疫原およびワクチンとして使用され得る。このポリペプチドはまた、潜在的なアゴニスト化合物およびアンタゴニスト化合物をスクリーニングするために使用され得る。例えば、ＮＯＶＸをコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そしてＮＯＶＸは、それを必要とする患者に投与する場合有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組み合わせは、上記に開示された疾患および障害ならび／または他の病理状態および障害などに苦しむ患者の処置のために効力を有する。
【００１６】
本発明はさらに、障害または症候群（例えば、上記に開示された疾患ならびに障害ならびに／または他の病理状態および障害などが挙げられる）の調節のためのモジュレーターをスクリーニングするための方法を含む。この方法は、試験化合物とＮＯＶＸポリペプチドとの接触させる工程および試験化合物が上記のＮＯＶＸポリペプチドと結合するか否かを決定する工程を含む。試験化合物のＮＯＶＸポリペプチドへの結合は、試験化合物が活性、または上述の障害または症候群についての潜伏または素因のモジュレーターであることを示す。
【００１７】
さらに、障害または症候群（上記に開示された疾患および障害ならびに／または他の病理状態および障害などを含む）についての活性のモジュレータ−、または潜在的なまたは素因性のモジュレーターをスクリーニングするための方法も、本発明の範囲内であり、例えば、上述の障害または症候群についての危険性が高められた試験動物に試験化合物を投与することによる。試験動物は、ＮＯＶＸ核酸によってコードされる組換えポリペプチドを発現する。次いで、ＮＯＶＸポリペプチドを組換えによって発現し、かつ障害または症候群のリスクが増加していないコントロール動物におけるタンパク質の発現または活性と同様に、ＮＯＶＸポリペプチドの活性発現または活性を、試験動物において測定する。次に、試験動物とコントロール動物の両方においてＮＯＶＸポリペプチドの発現を、比較する。コントロール動物と比較して試験動物におけるＮＯＶＸポリペプチドの活性の変化は、試験化合物が障害または症候群の潜在的なモジュレーターであることを示す。
【００１８】
さらに別の局面において、本発明は、患者（例えば、ヒト被験体）における、ＮＯＶＸポリペプチド、ＮＯＶＸ核酸またはその両方の存在もしくは変化したレベルと関連する疾患の素因を決定するための方法を含む。この方法は、被験体由来の試験サンプル中のＮＯＶＸポリペプチドの量を測定する工程および試験サンプル中のポリペプチドの量とコントロールサンプル中に存在するＮＯＶＸポリペプチドの量とを比較する工程を含む。コントロール産物と比較して試験サンプル中におけるＮＯＶＸポリペプチドのレベルの変化は、被験体における疾患の存在または疾患についての素因を示す。好ましくは、素因は、例えば、上記に開示された疾患および障害ならびに／または他の病理状態および障害などを含む。さらに、本発明の新しいポリペプチドの発現レベルは、種々の癌のスクリーニングのための、ならびに癌の病期を決定するための方法において使用され得る。
【００１９】
さらなる局面において、本発明は、病理状態を軽減するまたは阻止するために十分な量のＮＯＶＸ核酸、ＮＯＶＸポリペプチド、または被験体に対するＮＯＶＸ特異的抗体を、被験体（例えば、ヒト被験体）に投与することによって、哺乳動物において障害に関連する病理状態を処置または予防するための方法を含む。好ましい実施形態において、障害としては、上記に開示された疾患および障害ならびに／または他の病理状態および障害などが挙げられる。
【００２０】
さらに別の局面において、本発明は、当該分野で一般に使用されている多くの技術のうちのいずれかを用いることによって、本発明の細胞内レセプターおよび下流のエフェクターを同定するための方法において使用される。これらの方法は、２−ハイブリッドシステム、アフィニティー精製、抗体を用いる共沈または他の特異的相互作用分子を含むが、これらに限定されない。
【００２１】
ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドは、治療法または診断法での使用のための新規のＮＯＶＸ物質に対し免疫特異的に結合する抗体の産生にさらに有用である。これらのＮＯＶＸ抗体は、以下の「抗ＮＯＶＸ抗体」の項で記載されるように、疎水性チャートに基づく推測による、当該分野で公知の方法に従って産生され得る。開示されたＮＯＶＸタンパク質は、複数の親水性領域を有し、各々が免疫原として使用される。これらのＮＯＶＸタンパク質は、種々のヒトの障害の機能分析についてのアッセイシステムに使用され得、疾患の病理学についての理解および種々の障害に対する新しい薬物標的の開発の助けとなる。
【００２２】
本明細書中で同定されるＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸタンパク質は、以下に示されるような種々の病理状態および障害に関与する（しかしこれらに限定されない）、潜在的な治療適用において有用であり得る。本発明についての潜在的な治療適用としては以下：タンパク質治療（ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）、低分子薬剤標的、抗体標的（治療用、診断用、薬剤ターゲッティング／細胞傷害性抗体）、診断マーカーおよび／または予後マーカー、遺伝子治療（遺伝子送達／遺伝子除去（ｇｅｎｅ  ａｂｌａｔｉｏｎ））、研究ツール、本明細書中において規定されるものを構成する（しかし限定されない）全ての組織および細胞型のインビボおよびインビトロにおける組織再生が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２３】
他に規定がなければ、本明細書中で使用される全ての専門用語およ科学用語は、本発明が属する当業者によって通常理解されているのと同一の意味を有する。本明細書中に記載されるのと類似または等価な方法および材料が、本発明の実施または試験に使用され得るが、適切な方法および材料を、以下に示す。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が、支配する。さらに、材料、方法、および実施例は、例示のためのみであり、制限されることを意図しない。
【００２４】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および請求の範囲によって明らかとなる。
【００２５】
（発明の詳細な説明）
本発明は、新規のポリヌクレオチドおよびそれによってコードされるポリペプチドを提供する。新規の核酸配列およびそれにコードされるポリペプチドが、本発明に含まれる。配列は、本明細書中において、集合的に「ＮＯＶＸ核酸」または「ＮＯＶＸポリヌクレオチド」とよばれ、そして対応するコードされたポリペプチドは、「ＮＯＶＸポリペプチド」または「ＮＯＶＸタンパク質」とよばれる。他に指示がなければ、「ＮＯＶＸ」は、本明細書中に開示される新規の配列のどれかをいうことを意味する。表Ａは、ＮＯＶＸ核酸およびそれにコードされるポリペプチドの概要を提供する。
【００２６】
【数１】
2004537266.tif 000002
ＮＯＶＸ核酸およびそれにコードされるポリペプチドは、種々の適用および状況において有用である。本発明に基づく種々のＮＯＶＸ核酸およびポリペプチドは、以前に記載されたタンパク質のドメインおよび配列関連性の存在に基づくタンパク質ファミリーの新規のメンバーとして有用である。さらに、ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドはまた、ＮＯＶＸポリペプチドが属するファミリーのメンバーであるタンパク質の同定に使用され得る。
【００２７】
ＮＯＶ１は、カリウムチャネル様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ１核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経変性、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、喘息、気腫、強皮症、アレルギーおよび／またはＡＲＤＳならびに／あるいは他の病理状態／障害。
【００２８】
ＮＯＶ２は、ガラニンレセプター１型（ＧＡＬ１−Ｒ）（ＧＡＬＲ１）様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ２核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛および／または他の病理状態／障害。
【００２９】
ＮＯＶ３は、Ｐ２Ｙプリノセプター−１様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ３核酸およびポリペプチド、抗体ならびに関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：上皮小体機能亢進症、受胎能、子宮内膜症、フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、肝硬変、移植、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンティングトン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経保護作用、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、喘息、気腫、強皮症、アレルギーおよび／またはＡＲＤＳならびに／あるいは他の病理状態／障害。
【００３０】
ＮＯＶ４は、ＬＯＭＰ様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ４核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：癌、発生障害および／または神経障害。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ、およびマウスの遺伝学を用いる実験的な証拠は、ＰＤＺタンパク質が上皮細胞の増殖、分化、および発達の際の形態形成運動、ならびにシナプス連結の構成要素の間の相互作用および／または他の病理状態／障害に関与することを示す。
【００３１】
ＮＯＶ５は、上皮増殖因子様タンパク質ファミリーと相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ５核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：無ガンマグロブリン血症、２型、Ｘ−連鎖型（Ｘ−ｌｉｎｋｅｄ）；エカルディ症候群；頭蓋前頭鼻骨形成異常（Ｃｒａｎｉｏｆｒｏｎｔｏｎａｓａｌ  ｄｙｓｐｌａｓｉａ）；難聴、Ｘ−連鎖６型、感音性；多結節性甲状腺腫２；精神遅滞、Ｘ−連鎖型、非特異的、５８；オピッツＧ症候群、Ｉ型；（Ｐａｒｔｉｎｇｔｏｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅＩＩ）；シンプソン−（Ｓｉｍｐｓｏｎ−Ｇｏｌａｂｉ−Ｂｅｈｍｅｌ）症候群、２型；；腫瘍形成；受胎能；細胞周期の調節、増殖過程および発達過程ならびに／または他の病理状態／障害。
【００３２】
ＮＯＶ６はヒアルロナン仲介型運動性レセプター様ファミリーのタンパク質に相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ６核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：癌遺伝子仲介型および増殖因子仲介型細胞移動、細胞移動が関与する障害（例えば、腫瘍浸潤（ｔｕｍｏｕｒ  ｉｎｖａｓｉｏｎ））、出生時欠損、急性および慢性炎症性障害、アルツハイマーおよび他の形態の痴呆（パーキンソン病およびハンティングトン病を含む）、ＡＩＤＳ、糖尿病、自己免疫疾患、角膜形成異常および角膜肥大、やけど、外科的切開および癒着、発作、乳癌、気管支喘息、好酸球増加症、家族性筋ジストロフィー、肢帯（ｌｉｍｂ−ｇｉｒｄｌｅ）２Ｆ型および多発性硬化症。本発明に基づくＮＯＶ６核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物はまた、例えば、ＣＮＳおよび脊髄再生、避妊およびインビトロでの受精および胚発生ならびに／あるいは他の病理状態／障害において使用され得る。
【００３３】
ＮＯＶ７は、セルピン様ファミリーのタンパク質のメンバーと相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ７核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：肝臓毒性、癌、代謝疾患、炎症、ＣＮＳ疾患および／または他の病理状態／疾患。
【００３４】
ＮＯＶ８はＢ７ファミリー様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ８核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は、以下の関連する治療適用および診断適用において有用であり得、例えば：癲癇を含む脳疾患、摂食障害、精神分裂病、ＡＤＤ，癌；心臓病、クローン病を含む炎症および自己免疫疾患、ＩＢＤ、アレルギー、リウマチ様疾患および変形性関節症、炎症性皮膚障害、血液障害、乾癬、結腸癌、白血病、ＡＩＤＳ、視床疾患（ｔｈａｌａｍｕｓ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ）、糖尿病および肥満を含む代謝障害、喘息のような胚疾患、気腫、嚢胞性線維症、癌、膵不全および膵癌を含む膵臓障害、；および前立腺癌を含む前立腺障害ならびに／または他の病理状態／障害。
【００３５】
ＮＯＶ９は、アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ様ファミリーのタンパク質と相同である。従って、本発明に基づくＮＯＶ９核酸、ポリペプチド、抗体および関連化合物は以下の関連する治療適用および診断適用において有用である。例えば：肥満、糖尿病、悪液質、癌、炎症、ＣＮＳ障害およびＳＣＡＤ障害ならびに／または他の病理状態／障害。
【００３６】
ＮＯＶＸ核酸およびポリペプチドはまた、ＮＯＶＸの活性または機能を阻害または増強する分子をスクリーニングするために使用され得る。具体的には、本発明に基づく核酸およびポリペプチドは、例えば、神経発生、細胞分化、細胞増殖、血造、創傷治癒および新脈管形成を調節または阻害する低分子を同定するための標的として使用され得る。
【００３７】
本発明に基づくＮＯＶＸ核酸およびポリペプチドのさらなる有用性が、本明細書中で開示される。
【００３８】
（ＮＯＶ１）
新規カリウムチャネル様タンパク質をコードする１９５３ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ１核酸（ＣＧ５０２４９−０１とも呼ばれる）を、表１Ａに示す。ヌクレオチド１６〜１８のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド１９３０〜１９３２のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流の推定非翻訳領域を、表１Ａに下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【００３９】
【表１Ａ】
2004537266.tif 000003
ＮＯＶ１核酸配列は、第１２染色体に存在し、これは、１９５２塩基中１７５８塩基（９０％）が、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のＫ＋チャネルタンパク質（ＫＳＨＩＩＩＡ３）ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＲＡＴＳＨＩＩＩＣ｜ａｃｃ：Ｍ８４２０３．１）と同一である（Ｅ＝０．０）。類似性の情報は、全てのＧｅｎＢａｎｋデータベースおよびＧｅｎｅＳｅｑ特許データベースを含む公的なヌクレオチドデータベースを使用して評価された。染色体の情報を、ＯＭＩＭおよびＣｕｒａｔｏｏｌｓ由来の電子的ノーザンツールを使用することによって割り当て、本発明に含まれたＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ集合、Ｇｅｎｏｍｉｃクローン、および／またはＥＳＴ配列の染色体マッピングを誘導した。
【００４０】
本明細書における全てのＢＬＡＳＴアライメントにおいて、「Ｅ値（Ｅ−ｖａｌｕｅ）」または「期待値（Ｅｘｐｅｃｔ）」とは、その整列された配列が、検索したデータベース内で、単なる偶然によって、ＢＬＡＳＴ問い合わせ配列に対してその類似性を達成し得た確率の数的な指標である。例えば、ＮＯＶ１  ＢＬＡＳＴ分析から検索された対象（「Ｓｂｊｃｔ」）（例えば、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のＫ＋チャネルタンパク質（ＫＳＨＩＩＩＡ３）  ｍＲＮＡ）が、純粋に偶然に問い合わせ（Ｑｕｅｒｙ）ＮＯＶ１配列にマッチした確率（可能性）は、０．０である。期待値（Ｅｘｐｅｃｔ  ｖａｌｕｅ）（Ｅ）は、特定のサイズのデータベースを検索する場合に、全く偶然に見出すことを「期待」し得る、ヒット数を示すパラメーターである。これは、２つの配列の間のマッチに割り当てられるスコア（Ｓｃｏｒｅ）（Ｓ）に伴い、指数関数的に減少する。本質的に、このＥ値は、配列の間のマッチに存在するランダムなバックグラウンドノイズを示す。
【００４１】
期待値（Ｅｘｐｅｃｔ  ｖａｌｕｅ）は、結果を報告するための有意な閾値を作成するための都合のよい手段として使用される。ＢＬＡＳＴ処理を行うために使用されるデフォルト値は、代表的には、０．０００１に設定される。ＢＬＡＳＴ２．０において、この期待値をまた、Ｐ値（確率）の代わりに用いて、マッチの有意性を報告する。例えば、１ヒットに割り当てられる１であるＥ値は、現在のサイズのデータベースにおいて、類似のスコアを有する１つのマッチを単なる偶然によって見出すことを期待し得ることを意味すると解釈され得る。ゼロであるＥ値は、類似のスコアを有するいかなるマッチも単なる偶然では見出すことが期待されないことを意味する。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／ＢＬＡＳＴｉｎｆｏ／を参照のこと。時には、文字列Ｘおよび文字列Ｎが、ＢＬＡＳＴ検索から生じる。これは、人為的なヒットを妨げるように実施される、低い複雑性の配列の問い合わせの自動的フィルタリングの結果である。このフィルターは、ヌクレオチド配列において文字「Ｎ」（例えば、「ＮＮＮＮＮＮＮＮ」）またはタンパク質配列において文字「Ｘ」（例えば、「ＸＸＸ」）によって、見出される任意の低い複雑性の配列を置換する。低い複雑性の領域は、有意な位置ごとのアラインメントではなく、組成の偏りを反映する、高いスコアを生じ得る。ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  ２６６：５５４〜５７１、１９９６。
【００４２】
配列番号１によってコードされる開示されたＮＯＶ１ポリペプチド（配列番号２）は、６３８アミノ酸残基を有し、１文字アミノ酸コードを使用して表１Ｂに表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ１が、シグナルペプチドを含まず、そして０．６０００の確実性で形質膜中に局在する可能性が高いことを予測する。
【００４３】
【表１Ｂ】
2004537266.tif 000004
2004537266.tif 000005
ＮＯＶ１アミノ酸配列は、Ｒａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来の６３８アミノ酸残基の電圧依存性（ｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ）カリウムチャネルタンパク質ＫＶ３．２（ＫＳＨＩＩＩＡ）（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ２２４６２）に、６３８アミノ酸残基中６２３アミノ酸残基（９７％）同一であり、６３８アミノ酸残基中６２５アミノ酸残基（９７％）が類似する（Ｅ＝０．０）。
【００４４】
ＮＯＶ１は、少なくとも以下の組織中で発現される：脳および肺。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ源、公的なＥＳＴ源、および／またはＲＡＣＥ源を含む（がそれらに限定されない）本発明に含まれた配列の組織源を決定することによって導き出された。さらに、密接に関連したＲａｔｔｕｓ  ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ由来のＫ＋チャネルタンパク質（ＫＳＨＩＩＩＡ３）ｍＲＮＡホモログ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＲＡＴＳＨＩＩＩＣ｜ａｃｃ：Ｍ８４２０３．１）の発現パターンから、ＮＯＶ１は脳組織で発現されると予想される。
【００４５】
ＮＯＶ１は、表１Ｃに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【００４６】
【表１Ｃ】
2004537266.tif 000006
これらの配列と他の配列との間の相同性は、表１Ｄに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析に図示される。ＮＯＶ１タンパク質のＣｌｕｓｔａｌＷアライメント、および本明細書中の全ての他のＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、黒地に白抜きで示されるアミノ酸残基は、保存配列の領域（すなわち、構造的特性または機能的特性を保存するために必要とされ得る領域）を示し、強調していないアミノ酸残基は、それほど保存されておらず、そして潜在的に、タンパク質の構造または機能を変化させることなく、非常に広範な程度に変更され得る。
【００４７】
【表１Ｄ】
2004537266.tif 000007
2004537266.tif 000008
ＮＯＶ１ならびに他の全てのＮＯＶＸタンパク質における同定可能なドメインの存在は、ソフトウェアアルゴリズム（例えば、ＰＲＯＳＩＴＥ、ＤＯＭＡＩＮ、Ｂｌｏｃｋｓ、Ｐｆａｍ、ＰｒｏＤｏｍａｉｎ、およびＰｒｉｎｔｓ）を用いる検索と、続いて、Ｉｎｔｅｒｐｒｏウェブサイト（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｎｔｅｒｐｒｏ）を用いてドメインマッチ（または数）をクロスすることによってＩｎｔｅｒｐｒｏ数を決定することによって、決定した。表１Ｅ〜表１Ｇに開示されるようにＮＯＶ１についてのＤＯＭＡＩＮ結果を、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｏｓｉｔｉｏｎ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＢＬＡＳＴ分析を用いて、Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ  Ｄｏｍａｉｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＣＤＤ）から収集した。このＢＬＡＳＴ分析ソフトウェアは、ＳｍａｒｔおよびＰｆａｍコレクションに見出されるドメインをサンプリングする。表１Ｅ、表１Ｆ、表１Ｇおよびその後の全てのＤＯＭＡＩＮ配列アライメントについて、完全に保存された単一の残基を、黒色影付きまたは印（｜）によって示し、そして「強い」半保存残基は、灰色影付きまたは印（＋）によって示す。この保存アミノ酸残基の「強い」グループは、以下のアミノ酸のグループのいずれか１つであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ。
【００４８】
表１Ｅ〜表１Ｇは、ＮＯＶ１に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。これは、ＮＯＶ１配列が、このドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似する特性を有することを示す。
【００４９】
【表１Ｅ】
2004537266.tif 000009
【００５０】
【表１Ｆ】
2004537266.tif 000010
【００５１】
【表１Ｇ】
2004537266.tif 000011
カチオンチャネルは、膜を通したカチオンの移動を担う輸送タンパク質である。このファミリーは、ナトリウムイオンチャネル、カリウムイオンチャネルおよびカルシウムイオンチャネルを含む。これらのタンパク質は、最後の二つのへリックスがイオン選択性を決定するループに隣接した６回膜貫通へリックスを含む。いくつかのサブファミリー（例えば、Ｎａチャネル）において、ドメインは４回繰り返され、一方、他のファミリー（例えば、Ｋチャネル）では、このタンパク質は膜で四量体を形成する（ＩＰＲ０００６３６）。Ｎ末端の、電圧依存性Ｋ＋チャネルの細胞質四量体化ドメイン（Ｔ１）は、αサブユニットの機能的四量体チャネルへのサブファミリー特異的集合についての分子決定基をコードする。これは、ＢＴＢ／ＰＯＺドメインＰＦＡＭ  ＰＦ００６５１にわずかに関連する（ＩＰＲ００３１３１）。
【００５２】
カリウムチャネルは、電圧依存性イオンタンパク質の複雑なクラスを表す。これらのチャネルは、膜電位を維持し、細胞容積を調節し、そしてニューロンの電位興奮性を調整する。カリウムチャネルの遅延整流機能は、神経細胞を活動電位に後に効率的に再分極させる。ＮＯＶ１はラット電圧依存性カリウムチャネルタンパク質のヒトオルソログであり、多くの組織（特に脳および心臓）で重大な役割を果たす大きなファミリーのタンパク質の一つである。電圧依存性カリウムチャネルタンパク質は、薬学的介入に関して、現在標的化されている。これらの処置は、てんかんおよび不整脈を含む心臓障害のような神経学的障害に対して指向される。
【００５３】
電気生理学研究は、多くの異なる型のカリウム（Ｋ）チャネル電流が、哺乳動物のニューロンに存在することを示した。迅速不活性化Ａ型電流（ＫＡ）および遅効不活性化遅延整流型電流（ＫＤＲ）として分類される電圧依存性Ｋチャネル電流は、それらニューロンの中に存在する。Ｋチャネルの２つの主な分子スーパーファミリーが、同定された；それは、各々のスーパーファミリーにおいて多くの異なる孔形成αサブユニットを有する、ＫＩＲスーパーファミリーおよびＳｈａｋｅｒ関連スーパーファミリーである。ＫＶファミリーは、Ｓｈａｋｅｒ関連スーパーファミリー内にあり、典型的に規定されるＫＡおよびＫＤＲ電流のほぼ間違いなく基礎となる少なくとも１８の異なるαサブユニットを含む。しかし、これらクローニングされたαサブユニットの各々とネイティブの電圧依存性Ｋ電流との間の関係は、ほとんどの部分について明らかにされていないままである。テトラエチルアンモニウムイオン（ＴＥＡ）、４−アミノピリジン（４−ＡＰ）、および特定の毒素のような電圧依存性Ｋチャネルの典型的な薬理学的遮断剤は、異なるネイティブのチャネル電流間および異なるクローニングされたＫチャネル電流間の選択性を欠如する。他の多くの薬剤は、ニューロンの電圧依存性Ｋチャネルをブロックする。これらの化合物の全ては、それらが有する他の作用について主に使用される。これら化合物には、有機カルシウム（Ｃａ）チャネル遮断剤、二価および三価金属イオンならびにカフェインのような特定のカルシウムシグナル伝達薬剤が挙げられる。イミプラミン、アミトリプチリン、およびクロルプロマジンのような多くの臨床的に活性な三環化合物はまた、ニューロンの電圧依存性Ｋチャネルの強力なインヒビターである。これらの化合物は弱い塩基であり、これらの非荷電型が活性に要求されるように思われる。これら化合物は、新規の選択性Ｋチャネル遮断薬剤の合理的な設計に対する有用な開始点を提供し得る（Ｍａｔｈｉｅら、Ｖｏｌｔａｇｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｂｌｏｃｋ  ｂｙ  ｎｏｖｅｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｇｅｎｔｓ．Ｇｅｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３０（１）：１３−２４，１９９８）。
【００５４】
電圧依存性Ｋ＋チャネル（Ｋｖ１−４）のサブファミリーは、ニューロン興奮性および基礎をなす機能的パラメーターの制御に寄与する。これらタンパク質群の各々由来の複数のαサブユニットをコードする遺伝子がクローニングされ、発現され、そして結果として得られる異なるＫ＋電流を特徴付けた。予想されたアミノ酸配列は、各々のαサブユニットが、チャネルの電圧検知を担うと考えられているセグメント（Ｓ４）を有する、６個の推定膜貫通αへリックスセグメント（Ｓ１−６）を含むことを示した。さらに、完全に規定された構造ではないが、膜を横切り、イオン孔を形成するＨ５領域がある；Ｋ＋選択性を担うその中の残基が、同定された。Ｓｈａｋｅｒ関連サブファミリー（Ｋｖ１）によって産出される特定のＫ＋電流のαデンドロトキシンによる阻害への感受性は、哺乳動物の脳由来の本物のＫ＋チャネルの精製を可能にした。これらＫ＋チャネルは、（α）４（β）４の化学量論でαサブユニットおよびβサブユニットからなる大きく（Ｍ（ｒ）は約４００ｋＤ）、八量体の（ｏｃｔｏｍｅｒｉｃ）シアロ糖タンパク質であり、サブタイプは、サブユニットアイソフォームの組合せによって精製される。β１サブユニット、β２サブユニットおよびβ３サブユニットに対する遺伝子の以後のクローニングによって、膜の内側のαサブユニットと結合すると仮定される、これら親水性タンパク質についての新規配列が明らかにされた。β１サブユニットおよびＫｖ１．４サブユニットの同時発現によって、この補助のβタンパク質は、Ｋ＋電流の不活性化を加速し、顕著な効果をＮ末端部分によって媒介することが示された（ＤｏｌｌｙおよびＰａｒｃｅｊ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｖｏｌｔａｇｅ−ｇａｔｅｄ  Ｋ＋  ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｊ  Ｂｉｏｅｎｅｒｇ  Ｂｉｏｍｅｍｂｒ  ２８（３）：２３１−５３、１９９６）。
【００５５】
電圧依存性カリウムチャネルαサブユニット、Ｋ（Ｖ）１．１を欠損するマウスは、成体期を通して頻繁に突発的な発作を示す。これらのデータは、Ｋ（Ｖ）１．１のＣＡ３領域の軸索および末端中の通常の局在からの消失によってＣＡ３反回軸索側枝系における興奮性が増加する結果となる。おそらく、この興奮性は、観察されたてんかんの表現型の辺縁系成分および緊張性間代性成分に寄与する（Ｓｍａｒｔら、Ｄｅｌｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｋ（Ｖ）１．１  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｃａｕｓｅｓ  ｅｐｉｌｅｐｓｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｎ  ２０（４）：８０９−１９、１９９８）。他の研究は、Ｋｖ１．１が侵害受容的および反侵害受容的シグナル伝達経路において重要な役割を果たすことを示す（ＣｌａｒｋおよびＴｅｍｐｅｌ、Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｌａｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｋｖ１．１  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｇｅｎｅ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２５１（２）：１２１−４，１９９８）。
【００５６】
乳頭結節状の核（ｔｕｂｅｒｏｍａｍｍｉｌａｒｙ  ｎｕｃｌｅｕｓ）のヒスタミン含有ニューロンは、海馬形成を計画し、基本的介在ニューロンおよび阻害的介在ニューロンの両方のＨ１レセプターおよびＨ２レセプターを神経支配する。研究は、Ｈ２レセプター活性化は、阻害的介在ニューロンにおけるＰＫＡリン酸化を含む機構によるＫｖ３．２含有カリウムチャネルを通した外向きの電流を負に調整する（Ａｔｚｏｒｉら、Ｈ２  ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｋｖ３．２  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｉｎｔｅｒｎｅｕｒｏｎ  ｆａｓｔ  ｓｐｉｋｉｎｇ．Ｎａｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ３（８）；７９１−８、２０００）。
【００５７】
典型的な心臓遅延整流電流は、神経組織および骨格筋組織での遅延整流電流より、少なくとも２桁の大きさ遅く活性化される。多くの心臓組織が、神経および筋肉の組織と同様の速度論を有する、遅延整流電流を生成することが最近明らかになった（Ｎａｔｔｅｌら、Ｃａｒｄｉａｃ  ｕｌｔｒａｒａｐｉｄ  ｄｅｌａｙｅｄ  ｒｅｃｔｉｆｉｅｒｓ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ９（４−５）：２１７−２６，１９９９）。
【００５８】
ＮＯＶ１について上記で規定された情報は、このカリウムチャネル様タンパク質がカリウムチャネルタンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示唆する。従って、本発明のＮＯＶ１核酸およびタンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害ならびに／または他の病理に関連する、潜在的な治療適用に有用である。例えば、本発明のＮＯＶ１組成物は、フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンチントン病、脳性麻痺、てんかん、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細血管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経変性、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、喘息、気腫、硬皮症、アレルギーおよび／またはＡＲＤＳを患う患者の処置に効力を有する。カリウムチャネル様タンパク質および本発明のカリウムチャネル様タンパク質またはそれらのフラグメントをコードするＮＯＶ１核酸は、さらに診断的適用において有用であり得、ここでは、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。
【００５９】
（ＮＯＶ２）
新規ガラニン（Ｇａｌａｎｉｎ）レセプター１型（ＧＡＬＲ１）様タンパク質をコードする１２２７ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ２核酸（ＣＧ５０２９３−０１とも呼ばれる）を、表２Ａに示す。ヌクレオチド３７〜３９のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド１２２５〜１２２７のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流の推定非翻訳領域を、表２Ａに下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【００６０】
【表２Ａ】
2004537266.tif 000012
第５染色体に局在化する開示されたＮＯＶ２核酸配列は、任意の公知の核酸配列に全く相同性を有さない。
【００６１】
配列番号３によってコードされるＮＯＶ２ポリペプチド（配列番号４）は、３９６アミノ酸残基を有し、一文字表記を使用して表２Ｂに表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ２が、シグナルペプチドを含み、そして０．６０００の確実性で形質膜中に局在する可能性が高いことを予測する。ＮＯＶ２ペプチドについて最も可能性が高い切断部位は、アミノ酸４１と４２との間の、ＶＧＮ−ＬＣである。
【００６２】
【表２Ｂ】
2004537266.tif 000013
2004537266.tif 000014
ＮＯＶ２アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の３４９アミノ酸残基のガラニンレセプター１型（ＧＡＬ１−Ｒ）タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｐ４７２１１）に、２８９アミノ酸残基中８０アミノ酸残基（２７％）同一であり、２８９アミノ酸残基中１３５アミノ酸残基（４６％）が類似する（Ｅ＝５．０ｅ−２１）。
【００６３】
開示されたＮＯＶ２は少なくとも以下の組織で発現される：脳。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ源、公的なＥＳＴ源、文献源および／またはＲＡＣＥ源を含む（がそれらに限定されない）本発明に含まれた配列の組織源を決定することによって導き出された。
【００６４】
ＮＯＶ２について見られる可能な小ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）を表２Ｃおよび表２Ｄに列挙する。深度は、ＳＮＰの領域をカバーするクローンの数を表す。推定対立遺伝子頻度（ＰＡＦ）は、ＳＮＰを含むこれらのクローンの割合である。示される場合、ダッシュは、塩基が存在しないことを意味する。記号「＞」は「に変えられる」を意味する。
【００６５】
【表２Ｃ】
2004537266.tif 000015
【００６６】
【表２Ｄ】
2004537266.tif 000016
ＮＯＶ２は、表２Ｅに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【００６７】
【表２Ｅ】
2004537266.tif 000017
2004537266.tif 000018
これらの配列の相同性は、表２Ｆに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析に図示される。
【００６８】
【表２Ｆ】
2004537266.tif 000019
2004537266.tif 000020
表２Ｇは、ＮＯＶ２に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの説明を列挙する。これは、ＮＯＶ２配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似する特性を有することを示す。
【００６９】
【表２Ｇ】
2004537266.tif 000021
ヒトおよびＧＡＬＲ１ガラニンレセプターｃＤＮＡクローンは、以前に発現クローニングを使用して単離されていた。ハイブリダイゼーションスクリーニングにおいて、ヒトＧＡＬＲ１  ｃＤＮＡを、ヒト（ＧＡＬＮＲ）およびマウス（Ｇａｌｎｒ）の両方においてＧＡＬＲ１をコードする遺伝子を単離するために使用した。遺伝子は、両方の種において、約１５〜２０ｋｂにわたり；その構造構成は保存され、Ｇタンパク質共役レセプターの間では独特である。コード配列は、３つのエキソンに含まれ、エキソン１は、レセプターのＮ末端および最初の５つの膜貫通ドメインをコードする。エキソン２は、３つ目の細胞内ループをコードし、エキソン３は、レセプターの、膜貫通ドメイン６からレセプタータンパク質のＣ末端までの、残りをコードする。マウスＧＡＬＲ１レセプタータンパク質およびヒトＧＡＬＲ１レセプタータンパク質は、それぞれ、３４８アミノ酸長および３４９アミノ酸長であり、アミノ酸レベルで９３％の同一性を示す。マウスＧａｌｎｒ遺伝子は、活性化Ｔ細胞の核因子、細胞質１、およびミエリン塩基性タンパク質をコードする遺伝子と同じシンテー群の、以前に報告されたヒトＧＡＬＮＲ遺伝子の１８ｑ２３への局在化と同祖である、染色体１８Ｅ４に局在化した（Ｊａｃｏｂｙら、Ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｇａｌａｎｉｎ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ａ  ｒａｎｇｅ  ｏｆ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ４５（３）：４９６−５０８、１９９７）。
【００７０】
構造組成のこの保存は、ＧＡＬＮＲ２およびＧＡＬＮＲ３についての共通の進化的起源を示唆する。ＧＡＬＲ１をコードする遺伝子（ＧＡＬＮＲ１）のエクソン：イントロン組成は、ＧＡＬＮＲ２およびＧＡＬＮＲ３のエクソン：イントロン組成と異なり、ＮＨ２末端から膜貫通ドメイン５の終端までをコードするエクソン１、第３番目の細胞内ループをコードするエクソン２、および膜貫通ドメイン６からＣＯＯＨ末端までのレセプターの残りの部分をコードするエクソン３を有する。ＧＡＬＮＲ１の構造組成は、この遺伝子の収束性進化を示唆し、そしてＧタンパク質共役レセプターをコードする遺伝子の中でも独特な構造的組成を示す（Ｉｉｓｍａａら，Ｈｕｍａｎ  ｇａｌａｎｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ＧＡＬＲ１，ＧＡＬＲ２，ａｎｄ  ＧＡＬＲ３  ａｒｅ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｂｙ  ｓｅｐａｒａｔｅ  ｇｅｎｅｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｌｏｃａｔｅｄ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ  １８ｑ２３，１７ｑ２５．３，ａｎｄ  ２２ｑ１３．１，それぞれ  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ８６３：５６−６３，１９９８）。
【００７１】
研究により、ガラニンレセプターが異なるＧｉ／Ｇｏタンパク質を介して、アデニルシクラーゼの阻害、Ｋ＋チャンネルの開口およびＣａ２＋チャンネルの閉口を媒介することが示唆される。ガラニンは、プロラクチンおよび成長ホルモンの放出を刺激する一方で、インスリン、アセチルコリン、セロトニンおよびノルアドレナリンの分泌を阻害する。最近行われたペプチドリガンドの結合に必要なガラニンレセプターの構造成分の決定は、アルツハイマー病、栄養補給障害、疼痛および鬱病において治療上の可能性を有するガラニン作用性システムに対して、特異的に作用する分子のスクリーニングおよび設計を容易にする（Ｋａｓｋら、Ｇａｌａｎｉｎ，ａ  ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ａ  ｍｕｌｔｉｔｕｄｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ａｎｄ  ａｃｔｓ  ｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｇ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｕｐｌｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ６０（１８）：１５２３−３３，１９９７）。
【００７２】
除去の間にガラニンペプチドｍＲＮＡレベルが変化しないことが研究により示されているが、ガラニンレセプターのレベルがオピエートの除去に次いで制御されるかどうかについては知られていない。より最近の研究により、ＬＣにおけるガラニン結合が、長期的、断続的なモルヒネ投与により、またはモルヒネの沈殿除去により上方制御されるが、急性のモルヒネ処置では上方制御されないことが実証され、このことはＬＣにおいて増加した活性が、ガラニン結合部位を調節し得ることを示唆する。さらに、除去後にガラニンｍＲＮＡレベルが劇的にＬＣにおいて増加することから、ガラニン結合部位の増加は、ガラニンレセプター１（ＧａｌＲ１）遺伝子の転写増強または安定性増強により引き起こされるようである。従って、ＧａｌＲ１の増加が、ＬＣニューロンのｃＡＭＰレベルおよびおそらく炎症頻度の調節を導く、適応性機構があり得ることを可能とする（Ｚａｃｈａｒｉｏｕら，Ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅ  ｇａｌａｎｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｒｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｏｃｕｓ  ｃｏｅｒｕｌｅｕｓ（ＬＣ），ａ  ｂｒａｉｎ  ａｒｅａ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｒｕｇ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２３（２）：１２７−３７，２０００）。
【００７３】
他の研究により、外因性に投与されたガラニンが食物摂取を刺激し得、そして内在性ガラニンが栄養補給および体重に影響し得ることが示唆されている。こららの研究より、食欲失調を処置するための、非ペプチドガラニンレセプターアゴニストの治療的可能性が示唆される（Ｃｒａｗｌｅｙら，Ｇａｌａｎｉｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｆｏｏｄ  ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓａｔｉａｔｅｄ  ｒａｔｓ．  Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ３３（５）：３６９−７５，１９９９）。
【００７４】
上記のＮＯＶ２の情報は、ＮＯＶ２タンパク質が、新規のガラニンレセプター１型（ＧＡＬＲ１）様タンパク質のファミリーのメンバーとして機能し得ることを示唆する。従って、本発明のＮＯＶ２核酸およびＮＯＶ２タンパク質は、以下に記される種々の疾患および障害、および／または他の病理学に関係する、可能性のある治療用途に有用である。例えば、本発明のＮＯＶ２組成物は、フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンチントン病、脳性麻痺、癲癇、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細管拡張性運動失調、白質ジストロフィー、行動障害、嗜癖、不安、疼痛および／または神経保護に苦しむ患者の処置に対して有効性を有する。本発明の、ガラニンレセプター１（ＧＡＬＲ１）型様タンパク質をコードするＮＯＶ２核酸、およびガラニンレセプター１（ＧＡＬＲ１）型様タンパク質、またはそのフラグメントは、さらに診断用途において有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が測定されるベきである。
【００７５】
（ＮＯＶ３）
新規Ｐ２Ｙプリノセプター（ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ）１様タンパク質をコードする、１５６０ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ３核酸（ＣＧ５０２３７−０１とも称される）が、表３Ａ中に示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド３５３−３５５のＡＴＧ開始コドンより始まり、ヌクレオチド１３６４−１３６６のＴＧＡコドンで終結することが同定された。開始コドン上流および終結コドン下流の推定非翻訳領域は、表３Ａ中で下線で示され、そして開始コドンおよび終止コドンは太字である。
【００７６】
【表３Ａ】
2004537266.tif 000022
開示されたＮＯＶ３核酸配列は、第１３染色体に位置し、そしてＧａｌｌｕｓ  ｇａｌｌｕｓ  Ｇ．ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓの、Ｇタンパク質共役Ｐ２レセプター（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＧＤＰ２Ｙ３｜ａｃｃ：Ｘ９８２８３．１）のｍＲＮＡに対して、６３９塩基中３９８塩基（６２％）が同一である（Ｅ＝２．７ｅ−１９）。
【００７７】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５によりコードされる、開示されたＮＯＶ３タンパク質（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６）は、３３７アミノ酸残基を有し、そして１文字コードを使用して表３Ｂ中に提示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ３がシグナルベプチドを含まず、そして０．６０００の確実性で形質膜に位置している可能性があることを予測する。
【００７８】
【表３Ｂ】
2004537266.tif 000023
ＮＯＶ３アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓの３７３アミノ酸残基（Ｐ２Ｙプリノセプター１（ＡＴＰレセプター）（Ｐ２Ｙ１）（プリンレセプター）（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＮＥＷ−ＡＣＣ：Ｐ４７９００））に対して、３０６アミノ酸残基中１１１アミノ酸残基（３６％）が同一であり、３０６アミノ酸残基中１７９アミノ酸残基（５８％）が類似する（Ｅ＝７．５ｅ−５５）。
【００７９】
ＮＯＶ３は少なくとも以下の組織において発現する：脳、肺、頚部、結腸、甲状腺、子宮、精巣、臍帯静脈、神経内膜および肝臓。この情報は、本発明において包含される配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｐｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｌｏｎｅ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、それらに限定されない）を定めることで、引き出される。
【００８０】
ＮＯＶ３について見出される、可能性ある小ヌクレオチド遺伝子多型（ＳＮＰ）が、表３Ｃ中に列挙される。
【００８１】
【表３Ｃ】
2004537266.tif 000024
ＮＯＶ３は、表３Ｄ中に列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に対して、相同性を有する。
【００８２】
【表３Ｄ】
2004537266.tif 000025
これらの配列の相同性は、表３Ｅ中に示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。
【００８３】
【表３Ｅ】
2004537266.tif 000026
表３Ｆは、ＮＯＶ３に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記述を記す。このことは、このＮＯＶ３配列がこれらのドメインを有することが既知の他のタンパク質の特性に類似の特性を有することを示唆する。
【００８４】
【表３Ｆ】
2004537266.tif 000027
ＮＯＶ３はＧＰＣＲスーパーファミリーに類似であり、そして特にロドプシンサブファミリーおよびＰ２Ｙプリノセプターサブタイプに類似である。Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）は、幅広い機能に（例として、多様なオートクライン過程、パラクライン過程およびエンドクライン過程が挙げられる）渡る、広大なタンパク質ファミリーを構成する。ロドプシン様ＧＰＣＲ自体は、ホルモン、神経伝達物質および光受容体を含む、幅広いタンパク質ファミリーを表し、その全てがグアニンヌクレオチド結合（Ｇ）タンパク質との相互作用を介して、細胞外シグナルを伝達する。これらの活性化リガンドは構造および機能において広範に変動するが、レセプターのアミノ酸配列は非常に似通っており、そして７つの膜貫通（ＴＭ）ヘリックスを含む共通の構造骨格に適合することが考えられる。ＡＴＰに対する細胞応答は、Ｐ２プリノセプター（薬理学的にＰ２Ｘ、Ｐ２Ｙ、Ｐ２Ｕ、Ｐ２ＴおよびＰ２Ｚと定義されている５つのサブクラス）として特定の高親和性レセプターにより媒介される。ロドプシンファミリーのＧＰＣＲドメインの存在、およびプリノセプターに対する相同性のため、発明者らは本明細書に記載した新規の配列が、これら遺伝子に類似の、有用な特性および機能を有することを予想する（Ｔｏｋｕｙａｍａら，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｒａｔ  ａｎｄ  ｍｏｕｓｅ  Ｐ２Ｙ  ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２１１（１）：２１１〜８，１９９５；Ｌｅｏｎら，Ｃｌｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｃＤＮＡ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｐ２Ｙ１．Ｇｅｎｅ  １７１（２）：２９５〜７，１９９６）。
【００８５】
上記のＮＯＶ３についての情報は、このＮＯＶ３タンパク質がＰ２Ｙプリノセプター１タンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示唆する。従って、本発明のＮＯＶ３核酸およびＮＯＶ３タンパク質は、可能性のある治療的および診断的用途において有用である。例えば、ＮＯＶ３タンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療において有用であり得、そしてそのＮＯＶ３タンパク質は、これを必要とする被験体に投与される場合に有用であり得る。非限定的な例として、本発明の組成物は、上皮小体機能亢進症、受胎能、子宮内膜症、フォン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）症候群、肝硬変症、移植術、アルツハイマー病、発作、結節硬化症、高カルシウム血症、パーキンソン病、ハンチントン病、脳性麻痺、癲癇、レッシュ−ナイハン症候群、多発性硬化症、毛細管拡張性運動失調、白質萎縮症、行動障害、嗜癖、不安、疼痛、神経保護、全身性エリテマトーデス、自己免疫疾患、喘息、気腫、強皮症、アレルギーおよび／またはＡＲＤＳに羅患する患者の処置に対して有効性を有する。本発明の、Ｐ２Ｙプリノセプター１様タンパク質をコードするＮＯＶ３核酸、およびＰ２Ｙプリノセプター１様タンパク質、またはそのフラグメントはさらに、診断用途において有用であり得、ここで、その核酸またはタンパク質の存在または量が測定されるベきである。
【００８６】
（ＮＯＶ４）
ＮＯＶ４は、以下に開示される２つの新規なＬＯＭＰ様タンパク質を含む。この開示されたタンパク質は、ＮＯＶ４ａおよびＮＯＶ４ｂと名付けられている。
【００８７】
（ＮＯＶ４ａ）
新規のＬＯＭＰ様タンパク質をコードする、１５０８ヌクレオチドの、開示されたＮＯＶ４ａ核酸（ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＣＧ５０２５５−０１と命名されている）は、表４Ａ中に示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド３７７−３７９のＡＴＧ開始コドンより始まり、ヌクレオチド１４２１−１４２３のＴＡＡコドンで終結することが同定された。開始コドン上流および終結コドン下流の推定非翻訳領域は、表４Ａ中で下線で示され、そして開始コドンおよび終止コドンは太字である。
【００８８】
【表４Ａ】
2004537266.tif 000028
2004537266.tif 000029
ＮＯＶ４ａの核酸配列は、第１３染色体に位置し、そしてＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＬＯＭＰタンパク質ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１４４２３７｜ａｃｃ：ＡＦ１４４２３７．１）に対して、１１００塩基中１１００塩基（１００％）が同一である（Ｅ＝４．３ｅ−２９２）。
【００８９】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７によりコードされる、開示されたＮＯＶ４ａポリペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８）は、３４８アミノ酸残基を有し、そして１文字コードを使用して表４Ｂ中に提示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ４ａがシグナルベプチドを含まず、そして０．５１４７の確実性でミトコンドリアのマトリックス空間に、そして０．４５００の確実性で細胞質に位置する可能性があることを予測する。ＰＤＺドメインを含むタンパク質が、細胞の連結形成、受容体形成またはチャネルクラスター形成、および細胞内シグナル伝達現象において役割を果たすことが示されているので、細胞質の局在化は、非常に可能性が高い（Ｐｏｉｎｔｉｎｇら、ＰＤＺ  ｄｏｍａｉｎｓ：ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｔｏ  ｓｕｂ−ｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ  ｓｉｔｅｓ．Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  １９９７  ６月号；１９（６）：４６９−７９）。
【００９０】
【表４Ｂ】
2004537266.tif 000030
ＮＯＶ４ａアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  Ｓａｐｉｅｎｓの７９７アミノ酸残基ＬＯＭＰタンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＲＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＵＱＭ５）に対して、３２９アミノ酸残基中２６２アミノ酸残基（７９％）が同一であり、３２９アミノ酸残基中２７８アミノ酸残基（８４％）が類似である（Ｅ＝４．６ｅ−１２６）。
【００９１】
ＮＯＶ４ａは少なくとも以下の組織において発現する：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎仔脳、胎仔腎臓、胎仔肝臓、胎仔肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、精巣、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、睾丸、甲状腺、気管、子宮、蝸牛、結腸、冠状動脈、表皮、包皮、毛包、ランゲルハンス島、肝臓肺、卵巣、胸腺および生物体全体。この情報は、本発明において包含される配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｐｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｃｌｏｎｅ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、それらに限定されない）を定めることにより、引き出される。
【００９２】
さらに、関係の近いＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＬＯＭＰタンパク質ｍＲＮＡホモログ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１４４２３７｜ａｃｃ：ＡＦ１４４２３７．１）の発現パターンから、ＮＯＶ４ａは成人の脳組織において発現することが予想される。
【００９３】
（ＮＯＶ４ｂ）
新規のＬＯＭＰ様タンパク質をコードする、１４３６ヌクレオチドの、開示されたＮＯＶ４ｂ核酸（ＣｕｒａＧｅｎ  Ａｃｃ．Ｎｏ．ＣＧ５０２５５−０２と命名されている）は、表４Ｃ中に示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド２１−２３のＡＴＧ開始コドンより始まり、ヌクレオチド１３７４−１３７６のＴＡＡコドンで終結することが同定された。開始コドン上流および終結コドン下流の推定非翻訳領域は、表４Ｃ中で下線で示され、そして開始コドンおよび終止コドンは太字である。
【００９４】
【表４Ｃ】
2004537266.tif 000031
ＮＯＶ４ｂの核酸配列は、第１３染色体に位置し、そしてＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＬＯＭＰタンパク質ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１４４２３７｜ａｃｃ：ＡＦ１４４２３７．１）に対して、１０５４塩基中１０５１塩基（９９％）が同一である（Ｅ＝５．４ｅ−２７９）。
【００９５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９によりコードされる、ＮＯＶ４ｂポリペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０）は、４５１アミノ酸残基を有し、そして１文字コードを使用して表４Ｄ中に提示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ４ｂがシグナルベプチドを含まず、そして０．４５００の確実性で細胞質に、そして０．４４７５の確実性でミトコンドリアのマトリックス空間に位置する可能性があることを予測する。
【００９６】
【表４Ｄ】
2004537266.tif 000032
ＮＯＶ４ｂアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  Ｓａｐｉｅｎｓの７９７アミノ酸残基ＬＯＭＰタンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＵＱＭ５）に対して、３２９アミノ酸残基中２５９アミノ酸残基（７８％）が同一であり、３２９アミノ酸残基中２７６アミノ酸残基（８３％）が類似である（Ｅ＝３．９ｅ−１２４）。
【００９７】
ＮＯＶ４ｂは少なくとも脳において発現している。発現情報は、ＮＯＶ４ｂの派生物について含まれる配列の組織供給源に由来した。さらに、関係の近いＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ＬＯＭＰタンパク質ｍＲＮＡホモログ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１４４２３７｜ａｃｃ：ＡＦ１４４２３７．１）の発現パターンから、ＮＯＶ４ｂは成人の脳組織において発現することが予想される。
【００９８】
ＮＯＶ４ａについて見出される、可能性のある小ヌクレオチド遺伝子多型（ＳＮＰ）が、表４Ｅ中に列挙される。
【００９９】
【表４Ｅ】
2004537266.tif 000033
ＮＯＶ４ｂについて見出される、可能性のある小ヌクレオチド遺伝子多型（ＳＮＰ）が、表４Ｆ中に列挙される。
【０１００】
【表４Ｆ】
2004537266.tif 000034
ＮＯＶ４ａおよびＮＯＶ４ｂは、表４Ｇ中のアミノ酸アラインメントにおいて示されるように、非常に近い相同である。
【０１０１】
【表４Ｇ】
2004537266.tif 000035
2004537266.tif 000036
上記のＮＯＶ４タンパク質の全ての相同性は、上記に示されるように、他のＮＯＶ４タンパク質が互いに相同である限り、他のＮＯＶ４タンパク質によって共有される。ＮＯＶ４に関する全ての引用は、ＮＯＶ４タンパク質の両方について一般的に、参照することが考えられるが、さもなくば記されない。
【０１０２】
ＮＯＶ４ａはまた、表４Ｈ中に列挙されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列に対して、ホモロジーを有する。
【０１０３】
【表４Ｈ】
2004537266.tif 000037
これらの配列のホモロジーは、表４Ｉ中に示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示される。
【０１０４】
【表４Ｉ】
2004537266.tif 000038
2004537266.tif 000039
2004537266.tif 000040
表４Ｊは、ＮＯＶ４ａに対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメインの記載を記す。このことは、このＮＯＶ４ａ配列がこれらのドメインを有することが既知の他のタンパク質の特性に類似の特性を有することを示唆する。
【０１０５】
【表４Ｊ】
2004537266.tif 000041
ＬＯＭＰは、１つのＬＩＭドメインおよびＰＤＺドメインを含むタンパク質である。これは、成人の脳より単離されており、そしてその機能は未知である。非常に多くのＰＤＺ−含有タンパク質および広い範囲の可能性ある結合特性が提供されれば、多くの膜貫通タンパク質、イオンチャネル、およびレセプターが、ＰＤＺドメイン複合体により、組織化されそして制御されるようである。神経細胞の複雑な解剖論は、高い程度の機能的組織化を要求する。従って、膜レセプターおよびイオンチャネルは、しばしば選択された細胞内部位に位置し、そして特異的なシグナル伝達機構に結び付いている。ＰＤＺドメインは、膜レセプターおよびイオンチャネルに対する副細胞膜タンパク質の１つのクラスの結合を媒介し、そして従ってこれらの組織化された局面を補助するタンパク質相互作用分子として、注目されつつある。
【０１０６】
多様な膜結合タンパク質（グアニル酸キナーゼホモログのＭＡＧＵＫファミリーのメンバー、いくつかのタンパク質ホスファターゼおよびキナーゼ、ニューロン一酸化窒素シンターゼ、およびいくつかのジストロフィン結合タンパク質（集合的にシントロフィンとして公知である）において、ＰＤＺ（ＤＨＲまたはＧＬＧＦともよばれる）ドメインがみられる。多くのＰＤＺドメイン包含タンパク質は、高特異的な膜下部位に局在化されているのがみられ、細胞結合形成、レセプタークラスタリングまたはチャネルクラスタリング、ならびに細胞内シグナル事象における関与を示す。いくつかのＭＡＧＵＫのＰＤＺドメインは、サブセットのＮＭＤＡレセプターサブユニットのＣ末端ポリペプチドと相互作用し、そして／またはＳｈａｋｅｒ型Ｋ＋チャネルと相互作用する。他のＰＤＺドメインは、他の膜貫通型レセプターの類似リガンドを結合することが示されている。ＰＤＺドメインの結晶構造（リガンドを有するおよび有さない）が決定されている。これらは、多様なＰＤＺドメインの間の配列保存におけるリガンド結合の形態および構造的基盤を示す。モジュラーＰＤＺドメインは、多くの細胞結合関連タンパク質内でみられ、これらのＣ末端に結合することにより、膜イオンチャネルのクラスタリングを媒介する。シナプスタンパク質ＰＳＤ−９５由来の第３ＰＤＺドメインのそれらのペプチドリガンドとの複合体およびそれらのペプチドリガンドの非存在下でのＸ線結晶回折構造は、それぞれ１．８オングストロームおよび２．３オングストロームと決定される。この構造は、４残基Ｃ末端伸長（Ｘ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ−Ｘ−Ｖａｌ−ＣＯＯ（−））が、ドメインのβシートの逆平行主鎖相互作用によって、このＰＤＺドメインに係合することを明白にする。このペプチドの末端カルボキシレート基の認識は、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅループにより与えられる主鎖アミドのクラドル（ｃｒａｄｌｅ）によりならびにアルギニン側鎖により、与えられる。特異的な側鎖相互作用および顕著な疎水性のポケットは、Ｃ末端コンセンサス配列の選択的な認識を説明する。
【０１０７】
数ダースのシグナルタンパク質は、８０〜１００残基のＰＤＺ繰り返しドメインを含み、これらのうちのいくらかが、イオンチャネルおよび／またはレセプターのＣ末端テトラペプチドモチーフＸ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ−Ｘ−Ｖａｌ−ＣＯＯ−と相互作用することが公知である。ＰＤＺドメインは、哺乳動物、ハエ、虫、酵母、植物および細菌において注目される。２つのＰＤＺドメインが、細菌性高温所要量（ｈｉｇｈ−ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ）Ａ（ｈｔｒＡ）内にあり、１つのＰＤＺドメインが、テイル特異プロテアーゼ（ｔｓｐ）ホモログ内にあり、そして酵母ｈｔｒＡホモログが４つのＰＤＺドメインを含むことが示されている。配列比較は、これらの多様な生物体におけるＰＤＺドメインの広がりが、水平方向遺伝子転移により生じ得たことを示唆する。Ｃ末端ポリペプチドに対するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｔｓｐの公知の親和性は、動物ＰＤＺドメインによるＣ末端ポリペプチドの結合と類似の様式で、このＰＤＺ様ドメインにより媒介されることが提案される。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓおよびマウスの遺伝子を用いた実験的証明は、ＰＤＺタンパク質が、発生の間に、上皮細胞増殖、分化、および形態形成変動の調節に関与することを示す。これらのシステムは、これらの現象においてＰＤＺタンパク質が果たす役割への大きな洞察を明らかに提供しつづける。しかし、上皮組織内でＰＤＺタンパク質により媒介される分子複合体の正確な性質は、いまだ解決せず、そしてこのことは積極的な研究領域のままである。
【０１０８】
ＮＯＶ４における上記の定義された情報は、このＮＯＶ４タンパク質が、ＬＯＭＰタンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示す。それゆえ、このＮＯＶ４核酸および本発明のタンパク質は、可能性のある治療的適用および診断的適用に有用である。例えば、ＮＯＶ４をコードするｃＤＮＡは遺伝子治療において有用であり、そしてＮＯＶ４タンパク質は、必要な被験者に投与する場合、有用であり得る。非制限的な例として、本発明の組成物は、癌、発生障害および／または神経障害に苦しむ患者の処置に対する効力を有する。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓおよびマウスの遺伝学を用いた実験的証明は、ＰＤＺタンパク質が、発生の間に、上皮細胞増殖、分化、および形態形成変動の調節に関与し、そして、ＰＤＺタンパク質は、シナプス結合の成分間の相互作用にも関与する（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１０３（６）、７６７−７７２、１９９９；Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｒｅｓ  ３２（１）：１−７、１９９８）。ＬＯＭＰ様タンパク質をコードするＮＯＶ４核酸および本発明のＬＯＭＰ様タンパク質またはそれらのフラグメントは、さらに診断の適用に有用であり得、ここで核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。
【０１０９】
（ＮＯＶ５）
新規な表皮細胞増殖因子様タンパク質をコードする１８８２ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ５核酸（１６４６７９４５＿０＿８８＿ｄａ１とも呼ばれる）を表５Ａに示す。ヌクレオチド２４３〜２４５のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド１８５１〜１８５３のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流の推定非翻訳領域を、表５Ａに下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【０１１０】
【表５Ａ】
2004537266.tif 000042
2004537266.tif 000043
ＮＯＶ５核酸は、染色体Ｘｐ２２上で同定され、そしてＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ上皮増殖因子繰り返し含有タンパク質（ＥＧＦＬ６）ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ１８６０８４｜ａｃｃ：ＡＦ１８６０８４．１）に対して、６９９塩基のうち４７７塩基（６８％）同一である塩基を有する（Ｅ＝２．０ｅ−５４）。
【０１１１】
開示されるＮＯＶ５ポリペプチド（配列番号１２）（配列番号１１によりコードされる）は、５３６のアミノ酸残基であり、そして表５Ｂにおいて一文字コードを用いて表される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ５が、シグナルペプチドを含み、そして０．７４７５の確実度で細胞外に局在するようであることを予想する。ＮＯＶ５ペプチドについての最も可能性の高い切断部位は、アミノ酸１９とアミノ酸２０との間（ＡＡＡ−ＥＦ）である。
【０１１２】
【表５Ｂ】
2004537266.tif 000044
ＮＯＶ５アミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ５５３アミノ酸残基上皮増殖因子繰り返し含有タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＮＺＬ７）に対して、２２５アミノ酸残基のうち１３５アミノ酸残基（６０％）同一であり、かつ２２５アミノ酸残基のうち１７９アミノ酸残基（７９％）類似する、アミノ酸残基を有する（Ｅ＝１．１ｅ−１１２）。
【０１１３】
ＮＯＶ５は、少なくとも以下の組織において発現される：肺腫瘍、胎児肺、胎児皮膚、胎児臍帯、胎児肝臓／脾臓および胎盤。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源、ゲノムクローン情報源、文献情報源、および／またはＲＡＣＥ情報源を含むがこれに限定されない。
【０１１４】
ＮＯＶ５でみられる可能な一塩基多型（ｓｍａｌｌ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）（ＳＮＰ）を表５Ｃおよび表５Ｄに列挙する。
【０１１５】
【表５Ｃ】
2004537266.tif 000045
2004537266.tif 000046
【０１１６】
【表５Ｄ】
2004537266.tif 000047
ＮＯＶ５は、表５Ｅに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【０１１７】
【表５Ｅ】
2004537266.tif 000048
これらの配列の相同性を、表５Ｆに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において図示する。
【０１１８】
【表５Ｆ】
2004537266.tif 000049
2004537266.tif 000050
表５Ｇ−５Ｉは、ＮＯＶ５に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメイン記載を列挙する。これは、ＮＯＶ５配列が、これらのドメインを含むことが公知の他のタンパク質の特性と類似する特性を有することを示す。
【０１１９】
【表５Ｇ】
2004537266.tif 000051
【０１２０】
【表５Ｈ】
2004537266.tif 000052
【０１２１】
【表５Ｉ】
2004537266.tif 000053
上皮増殖因子（ＥＧＦ）は、Ｃｏｈｅｎによって最初に述べられた（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３７：１５５５−１５６２、１９６２）。ＥＧＦはインビボにおいて特異的細胞の分化に対して意義のある効果を有し、ならびに種々の外胚葉性起源および中胚葉性起源の両方の培養細胞において、強力なマイトジェン因子である（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８：１９３−２１６、１９７９）。Ｇｒａｙら（Ｎａｔｕｒｅ  ３０３：７２２−７２５、１９８３）は、マウスＥＧＦ  ｃＤＮＡクローンの配列を示し、これは、ＥＧＦが１，１６８個のアミノ酸の大タンパク質前駆体として合成されることを示す。成熟ＥＧＦは、５３のアミノ酸からなる単鎖ポリペプチドであり、ならびに約６，０００の分子量を有する。Ｕｒｄｅａら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０：７４６１−７４６５、１９８３）は、ヒトＥＧＦの遺伝子を合成した。
【０１２２】
ゲノムＤＮＡプローブを用いたヒト−げっ歯類体細胞ハイブリッドの研究により、Ｂｒｉｓｓｅｎｄｅｎら（Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．３６：１３３Ｓのみ、１９８４）は、おそらくＴＣＧＦの近くの、４ｑ２１−４ｑｔｅｒに、ＥＧＦ遺伝子座をマップし、この遺伝子座がＴ細胞増殖因子（１４７６８０）をコードする。両神経増殖因子（ＮＧＦＢを参照、１６２０３０）およびＥＧＦは、マウス第３染色体上であり、ヒトにおいては異なる染色体上であり：それぞれ１ｐおよび４である（Ｚａｂｅｌら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８２：４６９−４７３、１９８５）。Ｚａｂｅｌら（１９８５）は、マウス第３染色体は、ヒトの末梢１ｐへのかなり広範囲な相同性を有する１番目のセグメントおよびヒトの近接１ｐに対する相同性を有する２番目のセグメントを有することを指摘した。インサイチュでのハイブリダイゼーションにより、Ｍｏｒｔｏｎら（Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｔ．４１：２４５−２４９、１９８６）は、ＥＧＦを４ｑ２５−ｑ２７に割り当てた。ＥＧＦのレセプター（ＥＧＦＲ；１３１５５０）は、第７染色体上である。
【０１２３】
遺伝子のＥＧＦ繰り返しスーパーファミリーは、細胞性の増殖応答を支配するタンパク質をしばしばコードする（Ｙｅｕｎｇ  Ｇら；Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  １９９９  Ｄｅｃ  １；６２（２）：３０４−７）。ハイブリダイゼーションアプローチによる高処理能力を用いて、ヒト染色体Ｘにマッピングする新規のヒトＥＧＦ繰り返しスーパーファミリーメンバーが同定された。ＥＧＦＬ６と称される遺伝子は、予測されたシグナルペプチドをコードし、分泌されることを示唆する。他の予測された特性は、４．５のＥＧＦ様繰り返しドメイン、２つのＮ結合グリコシル化部位、インテグリン結合モチーフ（ＲＧＤ）およびチロシンリン酸化部位を含む。重大なことに、この転写は、一般に正常成人組織に存在しないが、脳腫瘍および肺腫瘍および胎児組織に発現される。細胞サイクル調節および腫瘍形成に対する関連が示されている。
【０１２４】
ＥＧＦ繰り返しモチーフは、種々の細胞プロセスおよび生理的プロセスの調節を含む、多様なタンパク質のスーパーファミリーを定義する。このモチーフは、３０〜４０残基のドメインに位置づけられた、一連の保存システインおよび保存グリシンを特徴づける。ＥＧＦ様繰り返しファミリーメンバーは、優位に分泌されるかまたは細胞表面分子であり、これらは、しばしば細胞サイクル、増殖および発生プロセスの調節を含む。ハイブリダイゼーションによる高処理能力スクリーニングのアプローチを用いて、Ｙｅｕｎｇら（１９９９）は、ＥＧＦＬ６遺伝子を同定した。予測５５３−アミノ酸ＥＧＦＬ６タンパク質は、推定のＮ−末端シグナルペプチド（これは、このタンパク質が分泌されることを示唆する）；４完全ＥＧＦ様繰り返しおよび１部分的ＥＧＦ様繰り返しを含むＥＧＦ繰り返し領域；インテグリン結合モチーフ（ＲＧＤ）；２つの潜在的なＮ−グリコシル化部位；および潜在的なチロシンリン酸化部位を有する。種々の正常ヒト組織のノーザンブロット分析は、胎盤内のみで約２．４−ｋｂのＥＧＦＬ６転写物を検出した。試験した癌細胞の内、ＥＧＦＬ６発現は、髄膜腫瘍にのみ見られた。種々のｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションによるスクリーニング分析は、肺腫瘍、胎児肺、胎児皮膚、胎児臍帯、胎児肝臓／脾臓および胎盤においてＥＧＦＬ６発現を示したが、肺を含む正常成人組織では示さなかった。体細胞ハイブリッドマッピングパネルの分析により、Ｙｅｕｎｇら（１９９９）は、染色体ＸにＥＧＦＬ６遺伝子をマップした。彼らはＥＧＦＬ６遺伝子に対応するＵｎｉＧｅｎｅクラスターがＸｐ２２にマップされたＳＴＳを含むことを指摘した。上皮増殖因子（ＥＧＦ）繰り返し含有タンパク質は、血液凝固、フィブリン溶解、細胞接着ならびに神経および脊椎の発生のようないくつかの細胞活性に関与するタンパク質の拡張ファミリーを構成する（Ｂｕｃｈｎｅｒ  Ｇら；Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２０００  Ａｐｒ  １；６５（１）：１６−２３）。
【０１２５】
ＥＧＦは、マウス顎下腺により豊富に産生される。Ｔｓｕｔｓｕｍｉら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３３：９７５−９７７，１９８６）は、唾液腺切除術が循環ＥＧＦを検出以下のレベルに減少させたが、テストステロンレベルにもＦＳＨレベルを影響しなかったことを見い出した。同時に、精巣の精子細胞の減少および副睾丸の成熟精子が減少した。この変化は、ＥＧＦの投与により修正された。ヒト男性の不妊症、特に説明されていない精子減少の場合におけるＥＧＦの役割が提案された。
【０１２６】
マイトジェンへの哺乳動物細胞のごく初期の応答の間、ヒストンＨ３（６０１１２８を参照）は、急速および一過的に１つ以上のキナーゼによりリン酸化される。Ｓａｓｓｏｎｅ−Ｃｏｒｓｉら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８５：８８６−８９１、１９９９）は、Ｈ３のＥＧＦ−刺激リン酸化が、ＲＳＫ２（３０００７５）、増殖コントロールに関連するキナーゼのｐｐ９０（ＲＳＫ）ファミリーのメンバーを必要とすることを提示した。
【０１２７】
ＥＧＦ繰り返し含有タンパク質は、血液凝固、フィブリン溶解、細胞接着ならびに神経および脊椎の発生のようないくつかの細胞活性に関与するタンパク質の拡張ファミリーを構成する。生物情報学のアプローチを用いて、Ｂｕｃｈｅｒらは、このファミリーの新しいメンバーをＭＡＥＧ（ＭＡＭ−およびＥＧＦ−含有遺伝子；ＨＧＭＷ−許容遺伝子シンボルおよび遺伝子名）と同定した。配列分析は、ＭＡＥＧが分泌タンパク質（５つのＥＧＦ繰り返しが存在し、そのうちの３つがＣａ（２＋）結合コンセンサス配列を示すことにより特徴づけられた）をコードすることを示す。さらに、ＭＡＭドメインはまた、予測タンパク質生成物のＣ末端において存在する。ヒト全長ｃＤＮＡおよびマウス全長ｃＤＮＡを同定し、そしてヒトＸｐ２２およびマウス遺伝子相同性領域にマップした。ノーザン分析は、ＭＡＥＧが発生する間、早期に発現することを示す。まとめるとこれらのデータは、ＭＡＥＧがヒト発生障害およびマウス発生障害における候補であることを示す（Ｂｕｃｈｎｅｒ  Ｇら；Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２０００  Ａｐｒ  １；６５（１）：１６−２３）。
【０１２８】
ＮＯＶ５における、上記に定義された情報は、このＮＯＶ５タンパク質が、上皮増殖因子様タンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示す。それゆえ、本発明のＮＯＶ５核酸およびタンパク質は、下記に記載された種々の疾患および障害および／または他の病態に関係する潜在的な治療的適用に有用である。例えば、本発明のＮＯＶ５組成物は、２型Ｘ−連結無ガンマグロブリン血症；エカルディ症候群；前頭鼻骨形成異常；Ｘ−連結６型難聴、感音難聴；多結節２型甲状腫；Ｘ−連結非特異的５８型精神遅延；Ｉ型Ｏｐｉｔｚ  Ｇ症候群；Ｐａｒｔｉｎｇｔｏｎ症候群ＩＩ；２型Ｓｉｍｐｓｏｎ−Ｇｏｌａｂｉ−Ｂｅｈｍｅｌ症候群；腫瘍形成；受胎能；細胞サイクル、増殖、および発生プロセスの調節に苦しむ患者の処置に対する効力を有する。上皮増殖因子様タンパク質をコードするＮＯＶ５核酸および本発明の上皮増殖因子様タンパク質またはそれらのフラグメントは、さらに診断的適用に非常に有用であり得、ここで核酸の存在または量は評価される。
【０１２９】
（ＮＯＶ６）
ＮＯＶ６は、下記に開示される新規な３つのヒアルロナン−媒介Ｍｏｔｉｌｉｔｙレセプター様タンパク質を含む。開示されるタンパク質は、ＮＯＶ６ａ、ＮＯＶ６ｂおよびＮＯＶ６ｃと名付けられた。
【０１３０】
（ＮＯＶ６ａ）
新規なヒアルロナン−媒介Ｍｏｔｉｌｉｔｙレセプター様タンパク質をコードする２６８４ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ６ａ核酸（ＣＧ５０２３９−０１とも呼ばれる）を表６Ａに示す。ヌクレオチド３７〜３９のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド２１６４〜２１６６のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流の推定非翻訳領域を、表６Ａに下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【０１３１】
【表６Ａ】
2004537266.tif 000054
2004537266.tif 000055
ＮＯＶ６ａ核酸は、第５染色体上で同定され、そしてＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ヒアルロナンレセプター（ＲＨＡＭＭ）ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＳＵ２９３４３｜ａｃｃ：Ｕ２９３４３．１）に対して、２４５３塩基のうち２４４４塩基（９９％）同一である塩基を有する（Ｅ＝０．０）。
【０１３２】
開示されるＮＯＶ６ａポリペプチド（配列番号１４）（配列番号１３によりコードされる）は、７０９のアミノ酸残基であり、そして表６Ｂにおいて一文字コードを用いて表される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ６ａが、シグナルペプチドを含まず、そして０．４５００の確実度で細胞質に局在するようであることを予想する。
【０１３３】
【表６Ｂ】
2004537266.tif 000056
ＮＯＶ６ａアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ７２４アミノ酸残基ヒアルロナン−媒介Ｍｏｔｉｌｉｔｙレセプター（細胞内ヒアルロン酸結合タンパク質）（ヒアルロナン−媒介運動性に対するレセプタータンパク質）（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｏ７５３３０）に対して、７２４アミノ酸残基のうち７０３アミノ酸残基（９７％）同一であり、かつ７２４アミノ酸残基のうち７０６アミノ酸残基（９７％）類似する、アミノ酸残基を有する（Ｅ＝０．０）。
【０１３４】
ＮＯＶ６ａは、少なくとも以下の組織において発現される：骨髄、脳、大腸、冠動脈、表皮、肝臓、肺、リンパ節、乳腺／乳房、卵巣、胎盤、前立腺、胃、精巣、扁桃、子宮および生物体全体。この情報は、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ情報源、Ｐｕｂｌｉｃ（公的）ＥＳＴ情報源、文献情報源、および／またはＲＡＣＥ情報源を含むがこれに限定されない、本発明に含まれる配列の組織情報源を決定することによって導かれた。
【０１３５】
（ＮＯＶ６ｂ）
新規なヒアルロナン−媒介Ｍｏｔｉｌｉｔｙレセプター様タンパク質ををコードする２０２０ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ６ｂ核酸（ＣＧ５０２３９−０２とも呼ばれる）を表６Ｃに示す。ヌクレオチド３６〜３８のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド１９７４〜１９７６のＴＡＡコドンで終結する、オープンリーディングフレームが同定された。開始コドンの上流および終止コドンの下流の推定非翻訳領域を、表６Ｃに下線で示す。開始コドンおよび終止コドンを、太字で示す。
【０１３６】
【表６Ｃ】
2004537266.tif 000057
ＮＯＶ６ｂ核酸は、染色体５ｑ３２上で同定され、そしてＨｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ  ヒアルロナンレセプター（ＲＨＡＭＭ）ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＳＵ２９３４３｜ａｃｃ：Ｕ２９３４３．１）に対して、１５７１塩基のうち１５７１塩基（１００％）同一である塩基を有する（Ｅ＝０．０）。
【０１３７】
開示されるＮＯＶ６ｂポリペプチド（配列番号１６）（配列番号１５によりコードされる）は、６４６のアミノ酸残基であり、そして表６Ｄにおいて一文字コードを用いて表される。ＳｉｇｎａｌＰ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ６ｂが、シグナルペプチドを含まず、そして０．４５００の確実度で細胞質に局在するようであることを予想する。
【０１３８】
【表６Ｄ】
2004537266.tif 000058
ＮＯＶ６ｂのアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の７２５アミノ酸残基のヒアルロナンレセプタータンパク質（ｐｔｎｒ：ｐｉｒ−ｉｄ：ＪＣ５０１６）に対して、同一の５２７アミノ酸残基を６２６アミノ酸残基中に有し（８４％）および類似の５５５アミノ酸残基を６２６アミノ酸残基中に有する（８８％）（Ｅ＝７．６ｅ−２６３）。
【０１３９】
ＮＯＶ６ｂは、少なくとも次の組織に発現される：骨髄、脳、結腸、冠動脈、表皮、肝臓、肺、リンパ節、乳腺／乳房、卵巣、胎盤、前立腺、胃、精巣、扁桃および子宮。この情報は、本発明に含まれる配列の組織供給源（限定しないが、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、公開ＥＳＴ供給源、文献供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源を含む）を測定することにより誘導された。
【０１４０】
（ＮＯＶ６ｃ）
新規ヒアルロナン媒介運動性レセプター様タンパク質をコードする２１８７ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ６ｃ核酸（ＣＧ５０２３９−０３ともいう）が、表６Ｅに示される。オープンリーディングフレームが同定されており、ヌクレオチド３７〜３９のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド２１６４〜２１６６のＴＡＡコドンで終結する。開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域、終止コドンより下流の推定非翻訳領域は、表６Ｅにおいて下線が引かれ、そして開始コドンおよび終止コドンは、太字である。
【０１４１】
【表６Ｅ】
2004537266.tif 000059
第５ｑ３３．２染色体に位置決めされたＮＯＶ６ｃ核酸は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の細胞内ヒアルロン酸結合タンパク質（ＩＨＡＢＰ）ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＦ０３２８６２｜ａｃｃ：ＡＦ０３２８６２．１）に、同一な１９４４塩基を１９５６塩基中に有する（９９％）（Ｅ＝０．０）。
【０１４２】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１７によってコードされる開示されるＮＯＶ６ｃポリペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１８）は、７０９アミノ酸残基であり、そして表６Ｆに一文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ６ｃが、シグナルペプチドを含まず、かつ細胞質に確実性０．４５００で局在化される可能性があることを、予測する。
【０１４３】
【表６Ｆ】
2004537266.tif 000060
ＮＯＶ６ｃアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の７２４アミノ酸残基のヒアルロナン媒介運動性レセプター（細胞内ヒアルロン酸結合タンパク質）（ヒアルロナン媒介運動性のためのレセプター）タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｏ７５３３０）に対して、同一である７０６アミノ酸残基を７２４アミノ酸残基中に有し（９７％）類似する７０６アミノ酸残基を７２４アミノ酸残基中に有する（９７％）（Ｅ＝０．０）。
【０１４４】
ＮＯＶ６ｃは、少なくとも次の組織に発現される：心臓、動脈、冠動脈、胃、肝臓、垂、結腸、骨髄、リンパ節、扁桃、脳、頸、乳腺／乳房、卵巣、胎盤子宮、前立腺、精巣、肺、気管支、腎臓、皮質、網膜および表皮。この情報は、本発明に含まれる配列の組織供給源（限定しないが、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、公開ＥＳＴ供給源、文献供給源、および／またはＲＡＣＥ供給源を含む）を測定することにより誘導された。
【０１４５】
ＮＯＶ６ａおよびＮＯＶ６ｃについて見出された可能な小ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が、表６Ｇおよび表６Ｈにそれぞれ、記載される。
【０１４６】
【表６Ｇ】
2004537266.tif 000061
2004537266.tif 000062
【０１４７】
【表６Ｈ】
2004537266.tif 000063
ＮＯＶ６ａ〜ＮＯＶ６ｃは、表６Ｉ中のアミノ酸整列において示されるように、とても密接に相同である。
【０１４８】
【表６Ｉ】
2004537266.tif 000064
2004537266.tif 000065
上記任意のＮＯＶ６タンパク質のいずれかに対する相同性は、これらが上記に示されたようにお互いに相同である範囲内で、他のＮＯＶ６タンパク質によって共有される。ＮＯＶ６に対するどの言及も、他のように示されない限り、これらのＮＯＶ６タンパク質両方を、一般的に指すことが想定される。
【０１４９】
ＮＯＶ６ａはまた、表６Ｊ中に記載されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【０１５０】
【表６Ｊ】
2004537266.tif 000066
これらの配列の相同性は、表６Ｋに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、図表で示される。
【０１５１】
【表６Ｋ】
2004537266.tif 000067
2004537266.tif 000068
ヒアルロナンは、細胞外マトリックス中の広範囲に分布する大きなグリコサミノグリカンであり、そしてその合成は、細胞の移動、増殖および形質転換に関連付けられている。ヒアルロナンは、多くの生物学的効果を媒介する特定のタンパク質レセプター（ヒアルロナン媒介運動性のためのレセプター）を介して、細胞表面と相互作用する。Ｈａｒｄｗｉｃｋら（１９９２；Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１７：１３４３−５０）は、マウス３Ｔ３細胞からヒアルロナンレセプターｃＤＮＡをクローン化した。その２．９ｋｂのｃＤＮＡは、推定４７７アミノ酸タンパク質（ＲＨＡＭＭと命名された）をコードする。このタンパク質に対する抗体は、変異体Ｈ−ｒａｓの発現によって導入される細胞の移動運動をブロックした。Ｓａｖａｎｉら（１９９５；Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９５：１１５８−６８）は、ＲＨＡＭＭは、創傷治癒に応答してアップレギュレートされることを示した。ヒアルロナンがＲＨＡＭＭと結合した場合、限局的な接触キナーゼｐｐ１２５−ＦＡＫを含む多くのタンパク質のリン酸化が、生じる（Ｈａｌｌら、１９９４；Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １２６：５７５−８８）。後者は、限局的な接触および引き続く運動性の分解のために、必要な段階である。Ｅｎｔｗｉｓｔｌｅら（１９９５；Ｇｅｎｅ  １６３：２３３−８）は、マウス遺伝子は、１５ｋｂよりも長く広がる少なくとも１４個のエクソンを含み、そして選択的スプライシングされたｍＲＮＡを生成し得、そのｍＲＮＡのうちの１つは、ヒアルロナンレセプターＣＤ４４（１０７２６９）と同様に、形質転換する（Ｈａｌｌら、１９９５；Ｃｅｌｌ  ８２：１９−２８）。Ｓｐｉｃｅｒら（１９９５；Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ３０：１１５−７）は、ヒト染色体５ｑ２３−ｑ３５に対してシンテニーの領域内で、マウス遺伝子を第１１染色体にマッピングするのために種間の戻し交配分析を使用した。彼らは、ヒトにおけるＨＭＭＲ遺伝子の末端５ｑマップ位置（５ｑ３３．２−ｑｔｅｒ）を確認するために、体細胞ハイブリッドＤＮＡおよび照射ハイブリッドパネルを使用した。ヒトＲＨＡＭＭ遺伝子のマップ位置は、この遺伝子を、以下に挙げる疾患に関連する遺伝子を含む疾患関連遺伝子において比較的豊富な領域に配置する：低周波数聴力損失、優性肢帯筋ジストロフィー、変形形成異常症、トレーチャー・コリンズ症候群および５ｑ症に関連する骨髄障害。ＲＨＡＭＭ遺伝子の位置および過剰発現した場合に細胞を形質転換するその能力は、先ごろ記載されたｔ（５；１４）（ｑ３３−ｑ３４；ｑ１１）急性リンパ芽球性白血病の病因において、可能性のある候補遺伝子として、ＲＨＡＭＭと暗示する。
【０１５２】
ＮＯＶ６に関する上記に定義された情報は、ＮＯＶ６が、ヒアルロナン媒介運動性レセプタータンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示唆する。従って、本発明のＮＯＶ６核酸およびＮＯＶ６タンパク質は、下記の様々な疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する潜在的な治療適用に有用である。例えば、本発明のＮＯＶ６組成物は、発癌遺伝子媒介細胞移動運動および増殖因子細胞移動運動、細胞移動運動に関与する障害（例えば、腫瘍浸潤）、出生時欠損、急性慢性炎症性障害および慢性炎症性障害、アルツハイマー病および他の形態の痴呆（パーキンソン病およびハンティングトン病を含む）、ＡＩＤＳ、糖尿病、自己免疫疾患、角膜形成異常および角膜肥大、やけど、外科切開および外科接着、発作、乳癌、気管支喘息、好酸球増加、家族性；筋ジストロフィー、肢帯、２Ｆ型および多発生硬化症を含む）に苦しむ患者の治療のための効力を有する。これらはまた、例えば、ＣＮＳおよび脊髄の再生、避妊およびインビトロ授精および胚発生において使用し得る。本発明のヒアルロナン媒介運動性レセプター様タンパク質をコードするＮＯＶ６核酸、およびヒアルロナン媒介運動性レセプター様タンパク質、またはこれらのフラグメントは、診断用途においてさらに有用であり得、ここで、この核酸もしくはタンパク質の存在または量が、評価される。
【０１５３】
（ＮＯＶ７）
新規セルピン様タンパク質をコードする１１９６ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ７核酸（ＡＣ０１９３５５．３ともいう）が、表７Ａに示される。オープンリーディングフレームが同定されており、これは、ヌクレオチド６０〜６２のＡＴＧ開始コドンから始まり、ヌクレオチド１１５５〜１１５７のＴＡＡコドンで終結する。開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域、終止コドンより下流の推定非翻訳領域は、表７Ａにおいて下線が引かれ、そして開始コドンおよび終止コドンは、太字である。
【０１５４】
【表７Ａ】
2004537266.tif 000069
2004537266.tif 000070
第１８染色体に位置決めされた開示されたＮＯＶ７核酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓ由来の細胞質のアンチプロテイナーゼ３（ＣＡＰ３）のｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＨＵＭＣＡＰ３Ａ｜ａｃｃ：Ｌ４０３７８．１）に対して、同一な２５８塩基を４０８塩基中に有する（６３％）（Ｅ＝３．６ｅ−４１）。
【０１５５】
ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１９によってコードされる開示されるＮＯＶ７ａポリペプチド（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２０）は、３６５アミノ酸残基であり、そして表７Ｂに一文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ７が、シグナルペプチドを含まず、かつ確実性０．６０００で核に、そして確実性０．５４３９でマイクロボディ（ペルオキシソーム）に局在化される可能性があることを、予測する。
【０１５６】
【表７Ｂ】
2004537266.tif 000071
ＮＯＶ７アミノ酸配列は、Ｂｏｓ  ｔａｕｒｕｓ由来の３７８アミノ酸残基のセリンプロテイナーゼインヒビターＢ−４３タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＷＩＳＳＰＲＯＴ−ＡＣＣ：Ｏ０２７３９）に対して、同一の１７４アミノ酸残基を３７８アミノ酸残基中に有し（４６％）および類似の２４２アミノ酸残基を３７８アミノ酸残基中に有する（６４％）（Ｅ＝８．５ｅ−７９）。
【０１５７】
ＮＯＶ７について見出された可能な小ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）が、表７Ｃに記載される。
【０１５８】
【表７Ｃ】
2004537266.tif 000072
ＮＯＶ７は、表７Ｄ中に記載されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【０１５９】
【表７Ｄ】
2004537266.tif 000073
2004537266.tif 000074
これらの配列の相同性は、表７Ｅに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、図表で示される。
【０１６０】
【表７Ｅ】
2004537266.tif 000075
2004537266.tif 000076
表７Ｆおよび表７Ｇは、ＮＯＶ７に対するＤＯＭＡＩＮ分析結果からのドメイン記述を列挙する。これは、ＮＯＶ７配列が、これらのドメインを含むことが既知の他のタンパク質の性質と類似する性質を有することを示す。
【０１６１】
【表７Ｆ】
2004537266.tif 000077
【０１６２】
【表７Ｇ】
2004537266.tif 000078
セルピンは、組織再生および腫瘍の治療に対する用途を有するプロテアーゼインヒビターである。
【０１６３】
Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９２（８）；３１４７−５１、１９９５）は、１８ｑ２１．３が、セリンプロテイナーゼインヒビター（すなわち「セルピン」）（扁平上皮癌抗原（ＳＣＣＡ）遺伝子のタンデム型重複およびセリンプロテイナーゼインヒビターの卵白アルブミンの他の２つのメンバー、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター２型（１７３３９０）およびマスピン（ｍａｓｐｉｎ）（プロテアーゼインヒビター−５；１５４７９０）を含む）のクラスターを含むことを実証した。Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら（１９９５）は、ＳＣＣＡの中性および酸性の形態が、それぞれ、ＳＣＣＡ１（６００５１７）およびＳＣＣＡ２によってコードされるという証拠を示した。
【０１６４】
ＢａｒｎｅｓおよびＷｏｒｒａｌｌ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．３７３（１）：６１−５、１９９５）は、変性ＰＣＲによるセリンプロテアーゼインヒビターのセルピンファミリーのメンバーのクローニングおよびＨｅＬａ細胞ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングを記載した。単離されたｃＤＮＡは、彼らによってロイピン（ｌｅｕｐｉｎ）と命名された３９０アミノ酸タンパク質をコードし、このタンパク質は、ＳＣＣＡ１に対して９１．８％同一である。ロイピンの反応部位は、標的プロテアーゼに対して偽基質として作用するループ領域内におけるＰ（１）位置で、セリンではなくロイシン残基の存在によってＳＣＣＡ１と異なることを、著者らは述べた。ＢａｒｎｅｓおよびＷｏｒｒａｌｌ（１９９５）は、ロイピンはシステインプロテアーゼインヒビターであり得ると推測した。Ｓｃｈｉｃｋら（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７２（３）：１８４９−５５、１９９７）は、ＳＣＣＡ２は、インビトロにおいて、キモトリプシン様プロテイナーゼカテプシンＧ（１１６８３０）および肥満細胞キマーゼ（１１８９３８）を阻害することを実証した。ＳＣＣＡ２は、パパイン様システインプロテイナーゼに対して有効でなかった。このパパイン様システインプロテイナーゼは、ＳＣＣＡ１に阻害されることが示されている。
【０１６５】
哺乳動物の肝臓は、再生のための異常な能力を有する。ラットにおいて、肝臓は、肝切除後数日以内で、そのもとの質量のほとんどを再生する；再生は、手術後２週間で実質的に完了する。Ｎｅｗら（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２２３（２）：４０４−１２、１９９６）は、７０〜９０％の肝切除の４８時間後、肝臓から単離されたＲＮＡで、ｃＤＮＡライブラリーを構築およびスクリーニングすることによって、血漿タンパク質をコードする遺伝子を単離した。Ｎｅｗら（１９９６）は、急性期炎症性のタンパク質の発現は、実質的に減少させ、それによって、「バックグラウンド」を減少させ、そして再生に関する遺伝子の同定を促進すべきであるることを述べた。彼らは、再生する肝臓において上方制御された様々なクローンを同定した。彼らは、「再生関連セルピン１’」（ＲＡＳＰ１）と名付けられた、１クローンを単離し、そのクローンは、正常な肝臓において発現され、しかし、肝切除４８時間後まで、約３〜４倍の上方制御された。ＤＮＡ配列分析は、ＲＡＳＰ１遺伝子は、４３６アミノ酸の新規分泌タンパク質をコードすることを示した。セリンプロテアーゼインヒビターのセルピンファミリーのいくつかのメンバーとの、中程度の相同性が、見出された。１．７ｋｂのＲＡＳＰ１のｍＲＮＡは、ラットの肝臓においてより高く発現したが、脳、心臓、腎臓、肺、精巣または脾臓では発現しなかった。このｍＲＮＡは、正常ラットの血漿および肝切除したラットの血漿中で見出された。
【０１６６】
ＮＯＶ７に対する上記に定義した情報は、このＮＯＶ７タンパク質は、セルピンタンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを示唆する。従って、本発明のＮＯＶ７核酸およびＮＯＶ７タンパク質は、下記の様々な疾患および障害ならびに／または他の病理に関与する潜在的な治療用途において有用である。例えば、本発明のＮＯＶ７組成物は、肝臓毒性、癌、代謝病、炎症、ＣＮＳ障害、および他の疾患、障害および状態などに苦しむ患者の治療のための効力を有する。本発明のセルピン様タンパク質をコードするＮＯＶ７核酸、およびセルピン様タンパク質、またはこれらのフラグメントは、診断用途においてさらに有用であり得、ここで、この核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。
【０１６７】
（ＮＯＶ８）
ＮＯＶ８は、以下に開示される７つの新規Ｂ７ファミリー様タンパク質を含む。この開示されるタンパク質は、ＮＯＶ８ａ〜ＮＯＶ８ｇと名付けられた。
【０１６８】
（ＮＯＶ８ａ）
開示される１５９０ヌクレオチドのＮＯＶ８ａ核酸（またＣＧ５０３０９−０１と呼ばれる）は、新規のＢ７ファミリー様タンパク質をコードしており、表８Ａに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１６〜１８でのＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド１４１１〜１４１３でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。表８Ａにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の（ｐｕｔｉｔｉｖｅ）非翻訳領域に、下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０１６９】
【表８Ａ】
2004537266.tif 000079
開示されるＮＯＶ８ａの核酸配列は、第１染色体に局在し、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）（Ｅ＝０．０）と１５９５塩基の内１５３５塩基（９６％）の同一性を有する。
【０１７０】
配列番号２１によりコードされる、開示されるＮＯＶ８ａポリペプチド（配列番号２２）は、４６５アミノ酸残基であり、そして表８Ｂにおいて１文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標（Ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙ）の結果は、ＮＯＶ８ａがシグナルペプチドを含み、そして０．６９０２の確実度（ｃｅｒｔａｉｎｔｙ）で細胞外に局在する可能性があると予測する。このＮＯＶ８ａペプチドの最も有望な切断部位は、アミノ酸３７とアミノ酸３８との間（ＶＶＡ−ＧＤ）である。
【０１７１】
【表８Ｂ】
2004537266.tif 000080
ＮＯＶ８ａのアミノ酸配列は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの４０４アミノ酸残基タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｎ０Ｃ１）（Ｅ＝１．８ｅ−２１１）に対し、４０４アミノ酸残基の内３９６アミノ酸残基（９８％）の同一性、および４０４アミノ酸残基の内３９７アミノ酸残基（９８％）の類似性を有する。
【０１７２】
ＮＯＶ８ａは、少なくとも以下の組織で発現される：脳、心臓、視床、肺、膵臓、前立腺、および生物全体。この情報は、配列の組織供給源を決定することにより得られる。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない配列の組織供給源が、本発明に含まれる。
【０１７３】
さらに、ＮＯＶ８ａは、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡホモログ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）と密接な関係のある発現パターンのため、脳組織に発現されると予測される。
【０１７４】
（ＮＯＶ８ｂ）
開示される１５９３ヌクレオチドのＮＯＶ８ｂ核酸（またＣＧ５０３０９−０２と呼ばれる）は、新規のＢ７ファミリー様タンパク質をコードしており、表８Ｃに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１６〜１８でのＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド１４１４〜１４１６でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。表８Ｃにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に、下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０１７５】
【表８Ｃ】
2004537266.tif 000081
開示されるＮＯＶ８ｂの核酸配列は、第１染色体に局在し、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）（Ｅ＝０．０）に１５９５塩基の内１５３６塩基（９６％）の同一性を有する。
。
【０１７６】
配列番号２３によってコードされる、開示されるＮＯＶ８ｂポリペプチド（配列番号２４）は、４６６アミノ酸残基であり、そして表８Ｄにおいて１文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ８ｂがシグナルペプチドを含み、そして０．６２３３の確実度で細胞外に局在する可能性があると予測する。このＮＯＶ８ｂペプチドの最も有望な切断部位は、アミノ酸２４と２５との間（ＡＲＧ−ＹＬ）である。
【０１７７】
【表８Ｄ】
2004537266.tif 000082
ＮＯＶ８ｂのアミノ酸配列は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの４０４アミノ酸残基タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｎ０Ｃｌ）（Ｅ＝５．９ｅ−２１３）に対し、４０４アミノ酸残基の内３９７アミノ酸残基（９８％）の同一性、および４０４アミノ酸残基の内３９８アミノ酸残基（９８％）の類似性を有する。
【０１７８】
ＮＯＶ８ｂは、少なくとも以下の組織で発現される：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児の脳、胎児の腎、胎児の肝，胎児の肺、心臓、腎臓、リンパ腫−Ｒａｊｉ、乳腺、膵臓、下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、睾丸、甲状腺、気管および子宮。この情報は、配列の組織供給源を決定することにより得られる。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない配列の組織供給源が、本発明に含まれる。
【０１７９】
さらに、ＮＯＶ８ｂは、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡホモログ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢＯ４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）と密接な関係のある発現パターンのため、脳組織に発現されると予測される。
【０１８０】
（ＮＯＶ８ｃ）
開示される１４０７ヌクレオチドのＮＯＶ８ｃ核酸（またＣＧ５０３０９−０３と呼ばれる）は、新規のＢ７ファミリー様タンパク質をコードしており、表８Ｅに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド１〜３でのＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド１４０２〜１４０４でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。表８Ｅにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に、下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０１８１】
【表８Ｅ】
2004537266.tif 000083
2004537266.tif 000084
開示されるＮＯＶ８ｃの核酸配列は、第１染色体に局在し、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）（Ｅ＝３．５ｅ−２９４）に対して１４０７塩基の内１３６３塩基（９６％）の同一性を有する。
【０１８２】
配列番号２５にコードされる、開示されるＮＯＶ８ｃポリペプチド（配列番号２６）は、４６７アミノ酸残基であり、そして表８Ｆにおいて１文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ８ｃがシグナルペプチドを含み、そして０．６２３３の確実度で細胞外に局在する可能性があると予測する。このＮＯＶ８ｃペプチドの最も有望な切断部位は、アミノ酸２４とアミノ酸２５との間（ＡＲＧ−ＹＬ）である。
【０１８３】
【表８Ｆ】
2004537266.tif 000085
ＮＯＶ８ｃのアミノ酸配列は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの４０４アミノ酸残基タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｎ０Ｃｌ）（Ｅ＝１．２ｅ−２１６）に対し、４０４アミノ酸残基の内４０１アミノ酸残基（９９％）の同一性、および４０４アミノ酸残基の内４０１アミノ酸残基（９９％）の類似性を有する。
【０１８４】
ＮＯＶ８ｃは、少なくとも以下の組織で発現される：脳、心臓、視床、肺、膵臓、および前立腺。この情報は、配列の組織供給源を決定することにより得られる。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない配列の組織供給源が、本発明に含まれる。
【０１８５】
（ＮＯＶ８ｄ）
開示される６８２ヌクレオチドのＮＯＶ８ｄ核酸（またＣＧ５０３０９−０４と呼ばれる）は、新規のＢ７ファミリー様タンパク質をコードしており、表８Ｇに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４〜６でのＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド６６１〜６６３でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。表８Ｇにおいて、開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に、下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０１８６】
【表８Ｇ】
2004537266.tif 000086
2004537266.tif 000087
開示されるＮＯＶ８ｄの核酸配列は、第１染色体に局在し、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）（Ｅ＝７．７ｅ−ｌ２４）に対して、６５３塩基の内６０１塩基（９２％）の同一性を有する。
【０１８７】
配列番号２７にコードされる、開示されるＮＯＶ８ｄポリペプチド（配列番号２８）は、２１９アミノ酸残基であり、そして表８Ｈにおいて１文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ８ｄがシグナルペプチドを含まず、そして０．４５００の確実度で細胞質に局在する可能性があると予測する。
【０１８８】
【表８Ｈ】
2004537266.tif 000088
ＮＯＶ８ｄのアミノ酸配列は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの４０４アミノ酸残基タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｎ０Ｃｌ）（Ｅ＝  ２．３ｅ−７０）に対し、１３２アミノ酸残基の内１３０アミノ酸残基（９８％）の同一性、および１３２アミノ酸残基の内１３１アミノ酸残基（９９％）の類似性を有する。
【０１８９】
ＮＯＶ８ｄは、少なくとも以下の組織で発現される：脳、心臓、視床、肺、膵臓、および前立腺。この情報は、配列の組織供給源を決定することにより得られる。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない配列の組織供給源が、本発明に含まれる。
【０１９０】
（ＮＯＶ８ｅ）
開示される９９２ヌクレオチドのＮＯＶ８ｅ核酸（またＣＧ５０３０９−０５と呼ばれる）は、新規のＢ７ファミリー様タンパク質をコードしており、表８Ｉに示される。オープンリーディングフレームは、ヌクレオチド４〜６でのＡＴＧ開始コドンで始まり、ヌクレオチド８１４〜８１６でのＴＧＡコドンで終止することが同定された。表８Ｉにおいて開始コドンから上流および終止コドンから下流の推定の非翻訳領域に、下線を付し、そして開始コドンおよび終止コドンを太字で示す。
【０１９１】
【表８Ｉ】
2004537266.tif 000089
2004537266.tif 000090
開示されるＮＯＶ８ｅの核酸配列は、第１染色体に局在し、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの脳ｃＤＮＡ、クローン：ＱｃｃＥ−１３９２７（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＢ０４６００９｜ａｃｃ：ＡＢ０４６００９．１）（Ｅ＝５．３ｅ−９０）に対して、４３６アミノ酸の内４１８アミノ酸（９５％）の同一性を有する。
【０１９２】
配列番号２９にコードされる、開示されるＮＯＶ８ｅポリペプチド（配列番号３０）は、２７０アミノ酸残基であり、そして表８Ｊにおいて１文字アミノ酸コードを用いて示される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／または疎水性親水性指標の結果は、ＮＯＶ８ｅがシグナルペプチドを含み、そして０．８４５７の確実度でリソソーム（内腔）に、そして０．６２３３の確実度で細胞外に局在する可能性があると予測する。このＮＯＶ８ｅペプチドの最も有望な切断部位は、アミノ酸２４とアミノ酸２５との間（ＡＲＧ−ＹＬ）である。
【０１９３】
ＰＳＯＲＴは、ＮＯＶ８ｅがリソソーム（内腔）に局在され得ると示唆するが、ＮＯＶ８ｅはＢ７ファミリーに類似しており、そのいくつかのメンバーは分泌される。従って、このＮＯＶ８ｅタンパク質は、細胞外に局在する可能性がある。
【０１９４】
【表８Ｊ】
2004537266.tif 000091
ＮＯＶ８ｅのアミノ酸配列は、Ｍａｃａｃａ  ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの４０４アミノ酸残基タンパク質（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９Ｎ０Ｃｌ）（Ｅ＝７．６ｅ−７３）に対し、１８７アミノ酸残基の内１５３アミノ酸残基（８１％）の同一性、および１８７アミノ酸残基の内１６１アミノ酸残基（８６％）の類似性を有する。
【０１９５】
ＮＯＶ８ｅは、少なくとも以下の組織で発現される：脳、心臓、視床、肺、膵臓、および前立腺。この情報は、配列の組織供給源を決定することにより得られる。ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、Ｐｕｂｌｉｃ  ＥＳＴ供給源、Ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ供給源および／またはＲＡＣＥ供給源が挙げられるが、これらに限定されない配列の組織供給源が、本発明に含まれる。
【０１９６】
（ＮＯＶ８ｆおよびＮＯＶ８ｇ）
ＮＯＶ８ｃおよびＮＯＶ８ｅの両方は、「インフレーム」でのクローニングに供される。ＮＯＶ８ｃ（ＣＧ５０３０９−０３）の成熟形態（残基２５〜４６７）をコードするｃＤＮＡは、ＰＣＲによる「インフレーム」でのクローニングのために標的化された。挿入アセンブリーＮＯＶｆ（またアセンブリー１６９３７６００６と呼ばれる）は、ＮＯＶ８ｃの残基２５と残基４６７との間のオープンリーディングフレームをコードすることが見出された。このＮＯＶｆの核酸配列（配列番号３１）およびその対応するアミノ酸配列（配列番号３２）は、それぞれ表８Ｋおよび表８Ｌに示される。
【０１９７】
【表８Ｋ】
2004537266.tif 000092
2004537266.tif 000093
【０１９８】
【表８Ｌ】
2004537266.tif 000094
ＮＯＶ８ｅ（ＣＧ５０３０９−０５）の成熟形態（残基２５〜残基２５４）をコードするｃＤＮＡは、ＰＣＲによる「インフレーム」でのクローニングのために標的化された。挿入アセンブリーＮＯＶ８ｇ（またアセンブリー１７０４０３９２５と呼ばれる）は、ＮＯＶ８ｇ標的配列の残基２５と残基２５４との間のオープンリーディングフレームをコードすることが見出された。このＮＯＶｇの核酸配列（配列番号３３）およびその対応するアミノ酸配列（配列番号３４）は、それぞれ表８Ｍおよび表８Ｎに示される。
【０１９９】
【表８Ｍ】
2004537266.tif 000095
【０２００】
【表８Ｎ】
2004537266.tif 000096
ＮＯＶ８ａ、ＮＯＶ８ｄおよびＮＯＶ８ｅに関して見出された、有力な小ヌクレオチド多型（ＳＮＰｓ）は、それぞれ表８Ｏ、表８Ｐ、および表８Ｑに記載されている。
【０２０１】
【表８Ｏ】
2004537266.tif 000097
2004537266.tif 000098
【０２０２】
【表８Ｐ】
2004537266.tif 000099
【０２０３】
【表８Ｑ】
2004537266.tif 000100
表８Ｒでのアミノ酸アラインメントにおいて示されるように、ＮＯＶ８ａ〜ＮＯＶ８ｇは、非常に厳密に相同である。
【０２０４】
【表８Ｒ】
2004537266.tif 000101
2004537266.tif 000102
上記に示されるように、それらが互いに相同である限り、任意の上記ＮＯＶ８タンパク質に対する相同性は、他のＮＯＶ８タンパク質によって共有される。ＮＯＶ８への任意の言及は、一般に、特に断りのない限り、それらのＮＯＶ８タンパク質の両方に言及すると考えられる。
【０２０５】
開示されるＮＯＶ８ａポリペプチドはまた、表８Ｓに列挙されたＢＬＡＳＴＰデータに示されるアミノ酸配列に対する相同性を有する。
【０２０６】
【表８Ｓ】
2004537266.tif 000103
これらの配列と他の配列との間の相同性は、表８Ｔに示されるＣｌｕｓｔａｌＷ解析で写実的に示される。
【０２０７】
【表８Ｔ】
2004537266.tif 000104
2004537266.tif 000105
2004537266.tif 000106
2004537266.tif 000107
2004537266.tif 000108
2004537266.tif 000109
2004537266.tif 000110
2004537266.tif 000111
2004537266.tif 000112
2004537266.tif 000113
表８Ｕおよび表８Ｖは、ＮＯＶ８ａに対するＤＯＭＡＩＮ解析結果からのドメインの記載を列挙する。これは、ＮＯＶ８ａ配列が、これらのドメインを含むことが公知である他のタンパク質の配列に類似の特性を有することを示す。
【０２０８】
【表８Ｕ】
2004537266.tif 000114
【０２０９】
【表８Ｖ】
2004537266.tif 000115
Ｂ７分子は、Ｔ細胞活性化において、Ｂ７分子を、癌、ＡＩＤＳ、および炎症の治療の格好の標的にする、重大な役割を担う。本明細書中で記載されるＮＯＶ８タンパク質は、脳、心臓、視床、肺、膵臓、および前立腺組織で発現されることが知られている。ＮＯＶ８タンパク質は、脳傷害およびＣＮＳ傷害、内分泌傷害、炎症傷害および自己免疫傷害、膵臓障害、ならびに、肺、膵臓、脳、および前立腺を含む癌において役割を示し得る。
【０２１０】
多くの腫瘍が、「外来の」ペプチド抗原を提示するＭＨＣクラスＩ分子を発現するという事実にも関わらず、種々の腫瘍を自動的に破壊する免疫応答は、めったに検出されない。可能な解釈は、腫瘍が、専門的な抗原提示細胞によって提供されるような適切な同時刺激シグナルを提供し得ないということである。Ｂ７と相互作用する際、ＣＤ２８は、Ｔ細胞応答に重要な、同時刺激シグナルを誘発する。Ｂ７を有する腫瘍細胞のトランスフェクションは、抗腫瘍免疫応答が増幅され得るように、腫瘍の免疫原性を増強する。Ｂ７−ＣＤ２８の同時刺激が提供される場合、別のサイレントなエピトープに特異的な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が、活性化され得る。従って、多くの腫瘍抗原に対するＴ細胞の無応答性は、寛容よりもむしろ無視とみなされるべきである。従って、免疫寛容は、腫瘍抗原に対して応答する免疫系の欠損に寄与し得る（Ｍｅｌｅｒｏら、Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ａｎｄ  ｉｇｎｏｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ６０（２３）：２０３５−４１，１９９７）。
【０２１１】
癌細胞に対するＣＴＬ応答を発生させることは、以下を必要とする：適切に進行じ、そしてＭＨＣタンパク質によって提示される腫瘍特異的抗原；腫瘍特異的抗原を認識する適切な特異性のレセプターを有するＴリンパ球；および免疫原性環境における免疫系への初期抗原提示。インビトロで、自己腫瘍特異的ＣＴＬは、腫瘍の数に対して上昇した。従って、少なくともいく人かの患者は、抗原およびレセプターの適切な組み合わせを有する。抗原、あるいは抗原をコードするＤＮＡまたはウイルスベクターでのワクチン接種は、免疫環境において同定された抗原の提示を引き起こし、動物モデルにおいて腫瘍からの保護を提供するＴ細胞を活性化し得る。代替のアプローチは、Ｔ細胞への遺伝子導入を用い、Ｔ細胞に新規のレセプターを発現させる。この新規のレセプターは、そのＴ細胞の、腫瘍に対する細胞傷害性の活性を誘導する。Ｔ細胞活性化に対する要求の理解における新しい進歩は、免疫環境において効果的に抗原を提示し損なうことが、インビボでの腫瘍特異的ＣＴＬ活性化の明らかな欠損を説明し得る。マウスにおいて、遺伝子導入後の腫瘍細胞での同時刺激分子Ｂ７−１の発現は、改変された腫瘍細胞が、抗原提示細胞として作用することを可能にし、いくつかの場合に置いて、保護性のＣＴＬ応答および治療上のＣＴＬ応答を含む（ＳｅａｒｌｅおよびＹｏｕｎｇ、Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ＩＩ：Ａｎｔｉｇｅｎｓ，ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃｏｓｔｉｍｕｒａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  Ｒｅｖ  １５（３）：３２９−４９，１９９６）。
【０２１２】
全身性エリテマトーデスの抗原提示細胞は、インターフェロンγに対する応答において、Ｂ７−１（ＣＤ８０）の発現を上方制御できない；Ｂ７−１の発現不全が、抗原を回復するための狼瘡細胞応答が減少した原因である（Ｔｓｏｋｏｓ，Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｉｍｍｕｎｅ  ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ８（５）：３９５−４０２，１９９６）。
【０２１３】
免疫応答におけるＴ細胞の増殖および活性化の調節の際の同時刺激分子の重要な役割を支持する、重要な証拠が存在する。特に関連するのは、Ｔ細胞上のＣＤ２８と抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面上に発現されるＢ７との間の相互作用である。活性化されたＴ細胞上に存在する別の分子であるＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞活性を下方制御し得るが、その役割は、不確かなままである。ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（ＣＴＬＡ４の細胞外ドメインおよびヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）のＦｃ部分からなる融合タンパク質）は、免疫応答におけるＣＤ２８／Ｂ７相互作用の役割を研究をするために有用である。多くの研究は、ＣＴＬＡ４−ＩｇがＴ細胞活性をスイッチオフし得ることを示している。抗Ｂ７−２処置は、Ｂ７−２のＣＤ２８との相互作用が、マウスでのＴｈ−２型の炎症性応答の発達に重要であるということを示す、同様の効果を有する。最近の観察によると、ヒトアレルギー性疾患に関連している。インビトロでの研究は、ＣＴＬＡ４−Ｉｇまたは抗Ｂ７−２抗体が、アトピー性の被験体由来の末梢血の単核細胞により、アレルゲン誘導性増殖およびサイトカイン産生を阻害し得ることを示している。同時刺激の役割は、喘息のヒト気管支移植モデルにおいて研究されている。ＣＴＬＡ４−Ｉｇ融合タンパク質は、アトピー性喘息由来の気管支移植片でのアレルゲン誘導性のＩＬ−５およびＩＬ−１３の産生を効果的にブロックする。これらの研究は、サイトカイン産生およびアレルギー性の炎症における同時刺激分子の間の相互作用の必要性を確認し、そして、喘息における抗原誘導性炎症に重要であるような、ＣＤ２８−Ｂ７経路を示す。霊長類における臓器移植の研究は、ＣＴＬＡ４−Ｉｇが、臓器拒絶を防止する際に非常に効果的であることを示唆する。（Ｄｊｕｋａｎｏｖｉｃ，Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃｏ−ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｉｒｗａｙ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ａｌｌｅｒｇｙ．２３０  Ｓｕｐｐｌ  １：４６−５０，２０００）。
【０２１４】
ゆえに、腫瘍がアロ抗原についての遺伝子、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）−Ｂ７、クラスＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ）を用いて形質移入される、免疫に基づく遺伝子治療戦略が、選択される。これは、抗腫瘍応答を誘導するために、腫瘍内の抗原提示機構を回復させる。有意な進歩が、癌のための遺伝子治療の分野において、なされている。アロ抗原遺伝子治療は、癌治療において効力を有し、そして、頭部腫瘍および頸部腫瘍における腫瘍応答を誘導し得る。アロ抗原遺伝子治療は、頭部腫瘍および頸部腫瘍の付属治療として、有意な可能性を有する。
【０２１５】
ＣＤ４＋応答へのＢ７同時刺激の寄与は、Ｔ細胞の活性化歴およびＴ細胞抗原レセプターシグナル強度に依存する。Ｂ７同時刺激は、ネイティブのＣＤ４＋  Ｔ細胞および以前に活性化されたＣＤ４＋  Ｔ細胞の両方によって、インターロイキン（ＩＬ）−２生成物に寄与する。Ｂ７同時刺激は、ネイティブＣＤ４＋  Ｔ細胞のＩＬ−４生産体への分化にとって最も重要であるが、以前に活性化されたＣＤ４＋細胞によって、ＩＬ−２生成に優勢的に影響を与える。Ｂ７同時刺激は、ヘルパーＴ細胞の影響およびＣＤ８＋細胞の直接的な同時刺激による影響の両方を介する、細胞毒性のＴ細胞の発達において重要である（ＭｃＡｄａｍら、ＣＤ４＋  Ｔ細胞およびＣＤ８＋  Ｔ細胞の活性化および分化におけるＢ７同時刺激の役割。Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ  １９９８  １０月；１６５：２３１〜４７、１９９８）。
【０２１６】
Ｔ細胞活性化の現在のモデルは、２つのシグナルを必要とする。第１のシグナルは特異的であり、Ｔ細胞レセプター認識を必要とし、そして、抗原提示細胞によって提示されるＭＨＣ／Ａｎｔｉｇｅｎへ結合する。第２のシグナルは非特異的であり、抗原提示細胞上のＢ７リガンドとＴ細胞上のレセプター（ＣＤ２８）の結合を生じる。両方のシグナルが提供される場合、Ｔ細胞は増殖し、そしてサイトカインを分泌する。近年、ＣＴＬＡ４（Ｂ７に対する別のレセプターであって、活性化後にＴ細胞に続いて上方制御される）は、Ｔ細胞の増殖を下方制御する阻害シグナルを送達し得る。リガンドのＢ７ファミリーは、２つのファミリーメンバー（Ｂ７−１およびＢ７−２）を有する。これらは両方とも、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４に結合するが、結合親和性、構造および時間的発現において、異なる。かなりの研究が、ＣＤ２８／Ｂ７同時刺激経路においてなされている。この経路を操作する異なる手段は、対立する病理学的状態の機構および治療への見識を、提供する。ＣＤ２８／Ｂ７経路のブロックは、自己免疫疾患、臓器移植、および対宿主性移植片病の治療に関連する免疫抑制を生じ得る。ＣＤ２８／Ｂ７経路の活性化は、免疫系を回避する腫瘍を認識し、そして排除するような免疫系を含有するために、有用である。最後に、ＣＤ２８／Ｂ７経路は、免疫耐性の維持に関与し得る。なぜならば、近年の研究はＢ７−ＣＴＬＡ４経路の優先的な結合が、応答するＴ細胞の下方制御を生じることを示唆するからである。従って、Ｂ７／ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４経路は、免疫応答を正にも負にも調節する能力を有する（Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄら、ＣＤ２８／Ｂ７同時刺激：総説。Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８；１８（５）：３８９〜４１８、１９９８）。
【０２１７】
自己免疫疾患（例えば、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ））の開始および進行は、自己抗原曝露、遺伝的感受性、および自己侵略を促進する二次的な現象に依存する、複雑なプロセスである。Ｔ細胞同時刺激（ＣＤ２８／Ｂ７相互作用によって、大半が媒介される）は、マウスモデルにおいてＩＤＤＭを引き起こすＴ細胞の、活性化および分化における主要な調節経路である（Ｈｅｒｏｌｄら、自己免疫糖尿病のＣＤ２８／Ｂ７調節。Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ．１６（１）：７１〜８４、１９９７；Ｔｏｅｓら、細胞毒性のＴリンパ球刺激および抗腫瘍免疫におけるＣＤ４０−ＣＤ４０リガンドの相互作用およびその役割。Ｓｅｍｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０（６）：４４３〜８、１９９８）。
【０２１８】
ＮＯＶ８について上記で定義された情報は、ＮＯＶ８がＢ７タンパク質ファミリーのメンバーとして機能し得ることを、示唆する。ゆえに、本発明のＮＯＶ８核酸およびＮＯＶ８タンパク質は、以下に記載する種々の疾患および障害、ならびに／または他の病理学に関与する潜在的な治療的適用において有用である。例えば、本発明のＮＯＶ８組成物は、以下を罹患する患者の治療に対して有効である：脳傷害（癲癇を含む）、摂食障害、精神分裂病、ＡＤＤ、癌；心臓疾患、炎症および自己免疫疾患（クローン病を含む）、ＩＢＤ、アレルギー、リウマチおよび変形性関節症、炎症性皮膚障害、血障害、乾癬、結腸癌、白血病、ＡＩＤＳ、視床障害、代謝障害（糖尿病および肥満を含む）、肺疾患（例えば、喘息）、気腫、嚢胞性線維症、癌、膵臓障害（膵臓不全および癌を含む）；ならびに前立腺障害（前立腺癌を含む）。Ｂ７ファミリー様タンパク質をコードするＮＯＶ８核酸、および本発明のＢ７ファミリー様タンパク質、またはそのフラグメントはさらに、治療上の適用に有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。
【０２１９】
（ＮＯＶ９）
ＮＯＶ９は、以下で開示される４つの新規なアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質を含む。この開示されたタンパク質は、ＮＯＶ９ａ、ＮＯＶ９ｂ、ＮＯＶ９ｃおよびＮＯＶ９ｄと、名付けられた。
【０２２０】
（ＮＯＶ９ａ）
新規なアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする、１４４６ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ９ａ核酸（ｃｇ−１４０５０９４４６ともいう）は、表９Ａに示される。ヌクレオチド８８〜９０のＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１４４４〜１４４６のＴＡＧコドンで終結するオープンリーディングフレームが同定された。表９Ａでは、開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域および終止コドンより下流の推定非翻訳領域に下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを、太字とする。
【０２２１】
【表９Ａ】
2004537266.tif 000116
開示されたＮＯＶ９ａ核酸配列は第１２染色体に位置し、（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＣＥＬＫ０９Ｈ１１｜ａｃｃ：Ｕ９７００２．２）からのＣａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ  ｅｌｅｇａｎｓコスミドＫ０９Ｈ１１  ｍＲＮＡに対して３６０塩基のうちの２３６塩基の同一性（６５％）を有する（Ｅ＝２．８ｅ−１７）。
【０２２２】
配列番号３５にコードされる、開示されたＮＯＶ９ａポリペプチド（配列番号３６）は、４５２アミノ酸残基であり、そして、表９Ｂ中に１文字アミノ酸コードを使用して、表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ９ａがシグナルペプチドを含まず、そして、０．４５００の信頼度で細胞質中に局在化されそうであることを、予想する。
【０２２３】
【表９Ｂ】
2004537266.tif 000117
ＮＯＶ９ａアミノ酸配列は、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａのアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼと推定可能な４０９アミノ酸残基（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＡＡＧ０５９３８）に対して、３９６アミノ酸残基のうちの２４５アミノ酸残基の同一性（６１％）、および３９６アミノ酸残基のうちの２９４アミノ酸残基の類似性（７４％）を有する（Ｅ＝６．４ｅ−１２９）。
【０２２４】
ＮＯＶ９ａは、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪（Ａｄｉｐｏｓｅ）、扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、脳（Ｂｒａｉｎ）、結腸（Ｃｏｌｏｎ）、包皮（Ｆｏｒｅｓｋｉｎ）、毛胞（Ｈａｉｒ  Ｆｏｌｌｉｃｌｅ）、心臓（Ｈｅａｒｔ）、Ｋｉｄｎｅｙ（腎臓）、肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、卵巣（Ｏｖａｒｙ）、副甲状腺（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  Ｇｌａｎｄ）、下垂体（Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｇｌａｎｄ）、胎盤（Ｐｌａｃｅｎｔａ）、前立腺（Ｐｒｏｓｔａｔｅ）、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）、胸腺（Ｔｈｙｍｕｓ）、甲状腺（Ｔｈｙｒｏｉｄ）、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）および子宮（Ｕｔｅｒｕｓ）。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源（ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ供給源、公的なＥＳＴ供給源、文献供給源および／またはＲＡＣＥ供給源を含むが、これらに限定されない）を決定することによって導き出された。
【０２２５】
（ＮＯＶ９ｂ）
新規なアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする、１３６３ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ９ｂ核酸（ＣＧ５５９００−０２ともいう）は、表９Ｃに示される。ヌクレオチド５〜７のＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１３６１〜１３６３のＴＡＧコドンで終結するオープンリーディングフレームが同定された。表９Ｃでは、開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域および終止コドンより下流の推定非翻訳領域に下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを、太字とする。
【０２２６】
【表９Ｃ】
2004537266.tif 000118
開示されたＮＯＶ９ｂ核酸配列は、第１２染色体に位置し、完全第２染色体のｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ  Ｒ１部門１の２に関するＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ  ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＥＢＡＮＫ−ＩＤ：ＡＥ００１８６２｜ａｃｃ：ＡＥ００１８６２．１）対して１１７７塩基のうちの７７８塩基の同一性（６６％）を有する（Ｅ＝７．０ｅ−８４）。
【０２２７】
配列番号３７にコードされる、開示されたＮＯＶ９ｂポリペプチド（配列番号３８）は、４５２アミノ酸残基であり、そして、表９Ｄ中に１文字アミノ酸コードを使用して、表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ９ｂがシグナルペプチドを含まず、そして、０．４５００の信頼度で細胞質中に局在化されそうであることを、予想する。
【０２２８】
【表９Ｄ】
2004537266.tif 000119
ＮＯＶ９ｂアミノ酸配列は、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ  ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓのアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼと推定される４１５アミノ酸残基（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＲＹＷ０）に対して３９９アミノ酸残基のうちの２４７アミノ酸残基の同一性（６１％）、および類似な３９９アミノ酸残基のうちの２９６アミノ酸残基の類似性（７４％）を有する（Ｅ＝１．２ｅ−１２９）。
【０２２９】
ＮＯＶ９ｂは、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪（Ａｄｉｐｏｓｅ）、副腎（Ａｄｒｅｎａｌ  Ｇｌａｎｄ／Ｓｕｐｒａｒｅｎａｌ  ｇｌａｎｄ）、羊膜（Ａｍｎｉｏｎ）、扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、大動脈（Ａｏｒｔａ）、脳（Ｂｒａｉｎ）、頸（Ｃｅｒｖｉｘ）、結腸（Ｃｏｌｏｎ）、包皮（Ｆｏｒｅｓｋｉｎ）、毛胞（Ｈａｉｒ  Ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ）、心臓（Ｈｅａｒｔ）、腎臓（Ｋｉｄｎｅｙ）、肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、肺（Ｌｕｎｇ）、卵巣（Ｏｖａｒｙ）、副甲状腺（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  Ｇｌａｎｄ）、下垂体（Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｇｌａｎｄ）、前立腺（Ｐｒｏｓｔａｔｅ）、網膜（Ｒｅｔｉｎａ）、右小脳（Ｒｉｇｈｔ  Ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ）、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）、胸腺（Ｔｈｙｍｕｓ）、甲状腺（Ｔｈｙｒｏｉｄ）、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）および子宮（Ｕｔｅｒｕｓ）。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、導き出された。
【０２３０】
（ＮＯＶ９ｃ）
新規なアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする、１３８０ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ９ｃ核酸（ＣＧ５５９００−０３ともいう）は、表９Ｅに示される。ヌクレオチド８８〜９０のＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド１３００〜１３０２のＴＡＧコドンで終結するオープンリーディングフレームが同定された。表９Ｅでは、開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域および終止コドンより下流の推定非翻訳領域に下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを、太字とする。
【０２３１】
【表９Ｅ】
2004537266.tif 000120
開示されたＮＯＶ９ｃ核酸配列は、第１２染色体に位置し、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓクローンＭＧＣ：５６０１  ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＢＣ００３６９８｜ａｃｃ：ＢＣ００３６９８．１）に対して１０９０塩基のうちの１０８５塩基の同一性（９９％）を有する（Ｅ＝１．５ｅ−２５３）。
【０２３２】
配列番号３９にコードされる、開示されたＮＯＶ９ｃポリペプチド（配列番号４０）は、４０４アミノ酸残基であり、そして、表９Ｆ中に１文字アミノ酸コードを使用して、表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ９ｃがシグナルペプチドを含まず、そして、０．４５００の信頼度で細胞質中に局在化されそうであることを、予想する。
【０２３３】
【表９Ｆ】
2004537266.tif 000121
2004537266.tif 000122
ＮＯＶ９ｃアミノ酸配列は、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓのＭＧＣ：５６０１タンパク質の４５５アミノ酸残基（ｐｔｎｒ：ＴＲＥＭＢＬＮＥＷ−ＡＣＣ：ＡＡＨ０３６９８）に対して２６６アミノ酸残基のうちの２６３アミノ酸残基の同一性（９８％）、および２６６アミノ酸残基のうちの２６５アミノ酸残基の類似性（９９％）を有する（Ｅ＝３．１ｅ−１４４）。
【０２３４】
ＮＯＶ９ｃは、少なくとも以下の組織において発現される：脂肪（Ａｄｉｐｏｓｅ）、副腎（Ａｄｒｅｎａｌ  Ｇｌａｎｄ／Ｓｕｐｒａｒｅｎａｌ  ｇｌａｎｄ）、羊膜（Ａｍｎｉｏｎ）、扁桃（Ａｍｙｇｄａｌａ）、大動脈（Ａｏｒｔａ）、脳（Ｂｒａｉｎ）、頸（Ｃｅｒｖｉｘ）、結腸（Ｃｏｌｏｎ）、包皮（Ｆｏｒｅｓｋｉｎ）、毛胞（Ｈａｉｒ  Ｆｏｌｌｉｃｌｅｓ）、心臓（Ｈｅａｒｔ）、腎臓（Ｋｉｄｎｅｙ）、肝臓（Ｌｉｖｅｒ）、肺（Ｌｕｎｇ）、卵巣（Ｏｖａｒｙ）、副甲状腺（Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  Ｇｌａｎｄ）、下垂体（Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｇｌａｎｄ）、前立腺（Ｐｒｏｓｔａｔｅ）、網膜（Ｒｅｔｉｎａ）、右小脳（Ｒｉｇｈｔ  Ｃｅｒｅｂｅｌｌｕｍ）、胃（Ｓｔｏｍａｃｈ）、胸腺（Ｔｈｙｍｕｓ）、甲状腺（Ｔｈｙｒｏｉｄ）、扁桃（Ｔｏｎｓｉｌ）および子宮（Ｕｔｅｒｕｓ）。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、導き出された。
【０２３５】
（ＮＯＶ９ｄ）
新規なアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードする、３４９０ヌクレオチドの開示されたＮＯＶ９ｄ核酸（ＣＧ５５９００−０４ともいう）は、表９Ｇに示される。ヌクレオチド１１３〜１１５のＡＴＧ開始コドンで始まり、そしてヌクレオチド３３５３〜３３５５のＴＡＡコドンで終結するオープンリーディングフレームが同定された。表９Ｇでは、開始コドンよりも上流の推定非翻訳領域および終止コドンより下流の推定非翻訳領域に下線を引き、そして開始コドンおよび終止コドンを、太字とする。
【０２３６】
【表９Ｇ】
2004537266.tif 000123
2004537266.tif 000124
開示されたＮＯＶ９ｄ核酸配列は、第１２ｑ２４染色体に位置し、Ｈｏｍｏ  ｓａｐｉｅｎｓクローンＭＧＣ：５６０１  ｍＲＮＡ（ｇｂ：ＧＥＮＢＡＮＫ−ＩＤ：ＢＣ００３６９８｜ａｃｃ：ＢＣ００３６９８．１）に対して２８７９塩基のうちの２８７８塩基の同一性（９９％）を有する（Ｅ＝０．０）。
【０２３７】
配列番号４１にコードされる、開示されたＮＯＶ９ｄポリペプチド（配列番号４２）は、１０８０アミノ酸残基であり、そして、表９Ｈ中に１文字アミノ酸コードを使用して、表される。Ｓｉｇｎａｌ  Ｐ、Ｐｓｏｒｔおよび／またはＨｙｄｒｏｐａｔｈｙの結果は、ＮＯＶ９ｄがシグナルペプチドを含まず、そして、０．３９３０の信頼度でマイクロボディ（ペルオキソーム）に局在化されそうであることを、予想する。
【０２３８】
【表９Ｈ】
2004537266.tif 000125
ＮＯＶ９ｄアミノ酸配列は、Ｍｕｓ  ｍｕｓｃｕｌｕｓの２４１００２１Ｐ１６ＲＩＫタンパク質の６２９アミノ酸残基（ｐｔｎｒ：ＳＰＴＲＥＭＢＬ−ＡＣＣ：Ｑ９ＣＲＨ８）に対して５７７アミノ酸残基のうちの４５５アミノ酸残基の同一性（７８％）、および類似な５７７アミノ酸残基のうちの５０３アミノ酸残基の類似性（８７％）を有する（Ｅ＝３．５ｅ−２４８）。
【０２３９】
ＮＯＶ９ｄは、少なくとも以下の組織において発現される：哺乳類組織（Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ）、唾液腺（Ｓａｌｉｖａｒｙ  Ｇｌａｎｄ）、肝臓（Ｌｉｖｅｒ）および乳腺（Ｍａｍｍａｒｙ  ｇｌａｎｄ／Ｂｒｅａｓｔ）。この情報は、本発明に含まれた配列の組織供給源を決定することによって、導き出された。
【０２４０】
ＮＯＶ９ｂに対して見出される可能な小型ヌクレオチド多型性（ＳＮＰ）は、表９Ｉ中に記載される。
【０２４１】
【表９Ｉ】
2004537266.tif 000126
ＮＯＶ９ａ、ＮＯＶ９ｂ、ＮＯＶ９ｃおよびＮＯＶ９ｄは、表９Ｊ中のアミノ酸アライメントにおいて示されるように、非常に高い相同性がある。
【０２４２】
【表９Ｊ】
2004537266.tif 000127
2004537266.tif 000128
任意の上記ＮＯＶ９タンパク質に対する相同性は、上記に示されるように互いに相同である範囲で、他のＮＯＶ９タンパク質によって共有される。ＮＯＶ９についての任意の参考は、他に記載しない限り、一般にＮＯＶ９タンパク質の両方についていうと想定される。
【０２４３】
ＮＯＶ９ａはまた、表９Ｋ中に記載されるＢＬＡＳＴＰデータにおいて示されるアミノ酸配列と、相同性を有する。
【０２４４】
【表９Ｋ】
2004537266.tif 000129
2004537266.tif 000130
これらの配列の相同性は、表９Ｌ中に示されるＣｌｕｓｔａｌＷ分析において、図解的に示される。
【０２４５】
【表９Ｌ】
2004537266.tif 000131
2004537266.tif 000132
表９Ｍおよび表９Ｎは、ＮＯＶ９ａに対するＤＯＭＡＩＮ分析の結果からのドメインの記載を列挙する。これは、ＮＯＶ９ａ配列が、これらのドメインを含むことが既知である他のタンパク質の配列に類似した特性を有することを、意味する。
【０２４６】
【表９Ｍ】
2004537266.tif 000133
【０２４７】
【表９Ｎ】
2004537266.tif 000134
アシル−ＣｏＡは、脂肪として蓄積され得るか、または筋肉中で燃焼され得る、重要なエネルギー蓄積分子である。この分子を改変する酵素は、重要な肥満標的および糖尿病標的であり得る。
【０２４８】
遺伝性の短鎖アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ（ＳＣＡＤ、またはＡＣＡＤＳ；ＥＣ  １．３．９９．２）欠損の２つの明確な臨床的表現型が、同定されている。１方の型は、急性アシドーシスおよび筋力低下を有する乳児において見出された；他方の型は、慢性筋障害を有する中年の患者において、見出された。ＳＣＡＤ欠損は前者の型において一般的であり、そして、後者においては骨格筋に局在化される。新生児の発生に関する場合は、代謝性アシドーシス、成長障害、発育遅延、および癲癇、ならびに筋障害を含む、種々の表現型を含む。中鎖（ＭＣＡＤ；２０１４５０）アシルデヒドロゲナーゼ欠損および長鎖（ＬＣＡＤ；２０１４６０）アシルデヒドロゲナーゼ欠損の特徴である、非ケトン性の低血糖の発症はない。ＳＣＡＤ欠損についての確定的な診断試験は、ブチリルＣｏＡを基質として用いるＥＴＦに関連した酵素アッセイであり、そして、ＭＣＤＡの免疫活性後に実施され、この活性は類似した活性を有する（Ｂｈａｌａら、短鎖アシル補酵素Ａデヒドロゲナーゼ欠損の臨床的および生化学的特性。Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ．１２６（６）：９１０〜５、１９９５；Ｔｅｉｎら、短鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損：眼筋麻痺およびマルチコア筋障害の原因。Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．５２（２）：３６６〜７２、１９９９）。
【０２４９】
Ｔｕｒｎｂｕｌｌら（Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．３１１（１９）：１２３２〜６、１９８４）は、骨格筋中で脂質蓄積筋障害および低濃度のカルニチンカルニチンを示す５３歳の女性の場合を、報告した。筋肉中の脂肪酸酸化異常は、ミトコンドリア中の短鎖アシルＣｏＡ（ブチリルＣｏＡ）デヒドロゲナーゼ活性の欠損によって生じることが、見出された。筆者らは、筋カルニチン欠損が、この酵素の欠損に次いで起こることを示唆し、そして、カルニチン欠損を有する脂肪蓄積筋障害の他の場合においても考えられることを、主張した（２１２１６０）。筋障害の開始は、４６歳の時であった。Ａｍｅｎｄｔら（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．７９（５）：１３０３〜９、１９８７）は、２人の無関係な患者（その両方が、新生児代謝アシドーシスおよびエチルマロネートの排出を示す）について、記載した。短鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼの欠損は、電子伝達黄色タンパク質（ＥＴＦ）に連結する色素減少アッセイ、およびトリチウム放出ＡＤＨアッセイの両方によって、線維芽細胞において、立証された。Ｔｕｒｎｂｕｌｌら（１９８４）によって記載された患者は、線維芽細胞において、正常なＳＣＡＤＨ活性を有し、このことは、明瞭なＳＣＡＤＨアイソザイムが哺乳類の筋肉中に存在する可能性を、上昇させる。しかし、Ａｍｅｎｄｔら（１９９２）は、マウスのＳＣＡＤが、筋肉および線維芽細胞の両方において同じであることを、見出した。この理由として、Ｂｈａｌａら（１９９５）は、Ｔｕｒｎｂｕｌｌら（１９８４）の場合、ＳＣＡＤ欠損の一次的なケースではなく、むしろ、ＤｉＤｏｎａｔｏら（Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．２５（５）：４７９〜８４、１９８９）によって報告されるように、リボフラビン応答性である複数のアシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ欠損のケースである、ということを提案した。
【０２５０】
ＮＯＶ９についての、タンパク質類似性情報、発現パターン、およびマップ位置は、ＮＯＶ９がアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼタンパク質ファミリーの重要な構造特性および／または生理学的機能特性を有し得ることを、示唆する。ゆえに、本発明のＮＯＶ９核酸およびＮＯＶ９タンパク質は、以下に記載される種々の疾患および障害、ならびに／または他の病理学に関与する潜在的な治療的適用において、有用である。例えば、本発明のＮＯＶ９組成物は、肥満、糖尿病、悪液質、癌、炎症、ＣＮＳ障害およびＳＣＡＤ障害に罹患した患者の治療に有効である。アシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質をコードするＮＯＶ９核酸、および本発明のアシル−ＣｏＡデヒドロゲナーゼ様タンパク質、またはそれらのフラグメントはさらに、診断適用において有用であり得、ここで、核酸またはタンパク質の存在または量が、評価される。
【０２５１】
（ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチド）
本発明の１つの局面は、ＮＯＶＸポリペプチドまたはその生物学的に活性な部分をコードする単離された核酸分子に関する。ＮＯＶＸコード核酸（例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するに十分な核酸フラグメント、およびＮＯＶＸ核酸分子の増幅および／または変異のためのＰＣＲプライマーとして使用するためのフラグメントもまた本発明に含まれる。本明細書中で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを用いて生成されたＤＮＡもしくはＲＮＡのアナログ、これらの誘導体フラグメントおよびホモログを含むことが意図される。この核酸分子は、１本鎖または２本鎖であり得るが、好ましくは、２本鎖ＤＮＡである。
【０２５２】
ＮＯＶＸ核酸は、成熟ＮＯＶＸポリペプチドをコードし得る。本明細書中で用いられる場合、本発明において開示されるポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、天然に存在するポリペプチドまたは前駆体形態もしくはプロタンパク質の産物である。この天然に存在するポリペプチド、前駆体またはプロタンパク質としては、非限定的な例として、対応する遺伝子によりコードされる全長遺伝子産物が挙げられる。あるいは、これは、本明細書中に記載されるＯＲＦによりコードされるポリペプチド、前駆体またはプロタンパク質として規定され得る。産物の「成熟」形態は、この遺伝子産物が生じる細胞、または宿主細胞内で生じ得る場合に、１以上の自然に起こるプロセシング工程の結果として（再び、非限定的な例として）生じ得る。「成熟」形態のポリペプチドまたはタンパク質をもたらすこのようなプロセシング工程の例としては、ＯＲＦの開始コドンによりコードされるＮ末端メチオニン残基の切断、またはシグナルペプチドもしくはリーダー配列のタンパク質分解切断が挙げられる。従って、残基１〜Ｎを有する（ここで、残基１は、Ｎ末端メチオニンである）前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、Ｎ末端メチオニンの除去後に残っている残基２〜Ｎを有する。あるいは、残基１〜Ｎ（ここで、残基１〜残基ＭのＮ末端シグナル配列が切断される）を有する前駆体ポリペプチドまたはタンパク質から生じる成熟形態は、残っている残基Ｍ＋１〜残基Ｎの残基を有する。さらに、本明細書中で使用される場合、ポリペプチドまたはタンパク質の「成熟」形態は、タンパク質分解切断事象以外の翻訳後修飾の工程から生じ得る。このようなさらなるプロセスとしては、非限定的な例として、グリコシル化、ミリストイル化またはリン酸化が挙げられる。一般に、成熟ポリペプチドまたはタンパク質は、これらのプロセスの１つのみの操作またはこれらのプロセスのいずれかの組み合わせから生じ得る。
【０２５３】
本明細書中で用いられる場合、用語「プローブ」は、特定の用途に依存して、種々の長さ（好ましくは、少なくとも約１０ヌクレオチド（ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、ほぼ６，０００ｎｔ程度の長さ）の核酸配列をいう。プローブは、同一の、類似の、または相補的な核酸配列の検出に用いられる。より長い長さのプローブは、一般に、天然供給源または組換え供給源から得られ、より短い長さのオリゴマープローブより高度に特異的であり、かつよりゆっくりとハイブリダイズする。プローブは、１本鎖または２本鎖であり得、そしてＰＣＲ、膜ベースのハイブリダイゼーション技術、またはＥＬＩＳＡ様技術において特異性を有するように設計され得る。
【０２５４】
本明細書中で用いられる場合、用語「単離された」核酸分子は、核酸の天然の供給源に存在する他の核酸分子から分離された核酸分子である。好ましくは、「単離された」核酸分子は、その核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中の核酸に天然に隣接する配列（すなわち、核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）がない。例えば、種々の実施形態において、この単離されたＮＯＶＸ核酸分子は、核酸が由来する細胞／組織（例えば、脳、心臓、肝臓、脾臓など）のゲノムＤＮＡ中の核酸分子に天然に隣接するヌクレオチド配列の約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０．１ｋｂ未満を含み得る。さらに、ｃＤＮＡ分子のような「単離された」核酸分子は、組換え技術により生成された場合、他の細胞物質もしくは培養培地を実質的に含み得ず、または化学的に合成される場合、化学的前駆体または他の化学物質を実質的に含み得ない。
【０２５５】
本発明の核酸分子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１のヌクレオチド配列を有する核酸分子、またはこの前述のヌクレオチド配列の相補体）は、標準的な分子生物学技術および本明細書中で提供される配列情報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーションプローブとして配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の核酸配列の全部または一部を用いて、ＮＯＶＸ分子は、標準的なハイブリダイゼーション技術およびクローニング技術を用いて単離され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ら（編），ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ  ２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌ，ら（編），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９３に記載される）。
【０２５６】
本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技術に従って、テンプレートおよび適切なオリゴヌクレオチドプライマーとして、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡ、または代わりにゲノムＤＮＡを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクターにクローニングされ得、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられる。さらに、ＮＯＶＸヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技術により、例えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いて、調製され得る。
【０２５７】
本明細書中で用いられる場合、用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結されたヌクレオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応において使用される十分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲノムＤＮＡ配列またはｃＤＮＡ配列に基づき得るか、またはこれらの配列から設計され得、そして特定の細胞もしくは組織中の同一の、類似の、または相補的なＤＮＡもしくはＲＮＡを増幅、確認またはこれらの存在を明らかにするために用いられる。オリゴヌクレオチドは、約１０ｎｔ長、５０ｎｔ長、または１００ｎｔ長、好ましくは、約１５ｎｔ〜３０ｎｔ長を有する、核酸配列の一部を含む。本発明の１つの実施形態において、１００ｎｔ長未満の核酸分子を含むオリゴヌクレオチドは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１、またはその相補体の少なくとも６つの連続するヌクレオチドをさらに含む。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとしても用いられ得る。
【０２５８】
別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１に示されるヌクレオチド配列、またはこのヌクレオチド配列の一部（例えば、プローブもしくはプライマーとして用いられ得るフラグメント、またはＮＯＶＸポリペプチドの生物学的に活性な部分をコードするフラグメント）の相補体である核酸分子を含む。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、または４１に示されるヌクレオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、または４１に示されるヌクレオチド配列に十分相補的なものであり、これは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１に示されるヌクレオチド配列に対してほとんどまたは全くミスマッチなく水素結合し得、これにより安定な二重鎖を形成する。
【０２５９】
本明細書中で用いられる場合、用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間のワトソンクリック塩基対形成またはフーグスティーン塩基対形成をいい、そして用語「結合」は、２つのポリペプチドもしくは化合物、または関連するポリペプチドもしくは化合物、またはこれらの組み合わせの間の物理的相互作用または化学的相互作用を意味する。結合としては、イオン性相互作用、非イオン性相互作用、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用などが挙げられる。物理的相互作用は、直接的または間接的のいずれかであり得る。間接的相互作用は、別のポリペプチドまたは化合物の効果を介し得るか、またはこの効果に起因し得る。直接的結合とは、別のポリペプチドまたは化合物の効果を介して、またはこの効果に起因して生じない相互作用をいうが、代わりに、他の実質的な化学的中間体がない。
【０２６０】
本明細書中で提供されるフラグメントは、核酸の場合は、特異的ハイブリダイゼーションを可能にするに十分な長さ、またはアミノ酸の場合には、エピトープの特異的認識を可能にするに十分な長さの、少なくとも６つの（連続する）核酸または少なくとも４つの（連続する）アミノ酸の配列としてそれぞれ規定され、このフラグメントは、全長配列より短い、多くていくつかの部分である。フラグメントは、最適な核酸配列またはアミノ酸配列の任意の連続する部分から誘導され得る。誘導体は、直接的に、または改変もしくは部分的置換のいずれかによりネイティブの化合物から形成される核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、特定の成分または側鎖に関してネイティブの化合物とは異なる以外は、ネイティブの化合物に類似であるが、同一ではない構造を有する核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、合成であり得るか、または異なる進化起源に由来し得、そして野生型と比較して、類似もしくは逆の代謝活性を有し得る。ホモログは、異なる種に由来する特定の遺伝子の核酸配列またはアミノ酸配列である。
【０２６１】
誘導体およびアナログは、以下に記載されるように、誘導体またはアナログが、改変された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長であってもよいし、全長以外のものでもよい。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：種々の実施形態において、同一のサイズの核酸配列またはアミノ酸配列に対して、または整列された配列と比較した場合に、（ここで、このアラインメントは、当該分野で公知のコンピューター相同性プログラムにより行われる）、少なくとも約７０％、８０％、または９５％同一性（好ましくは８０〜９５％の同一性を有する）で本発明の核酸またはタンパク質に実質的に相同である領域を含む分子か、またはそのコード核酸が、ストリンジェントな条件下、中程度にストリンジェントな条件下、または低いストリンジェントな条件下で前述のタンパク質をコードする配列の相補体とハイブリダイズし得る領域を含む分子。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，ら，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９３、および以下を参照のこと。
【０２６２】
「相同な核酸配列」または「相同なアミノ酸配列」あるいはこれらのバリエーションとは、上記で議論されるように、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルで相同性により特徴付けられる配列をいう。相同なヌクレオチド配列は、ＮＯＶＸポリペプチドのアイソフォームをコードする配列をコードする。アイソフォームは、例えば、ＲＮＡの交互スプライシングの結果として同じ生物の異なる組織において発現され得る。あるいは、アイソフォームは、異なる遺伝子によりコードされ得る。本発明において、相同なヌクレオチド配列は、ヒト以外の種（脊椎動物が挙げられるが、これらに限定されず、従って、例えば、カエル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、および他の生物種が挙げられ得る）のＮＯＶＸポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相同なヌクレオチド配列としてはまた、天然に存在する対立遺伝子バリエーション、および本明細書中に記載されるヌクレオチド配列の変異が挙げられるが、これらに限定されない。しかし、相同なヌクレオチド配列は、ヒトＮＯＶＸタンパク質をコードする正確なヌクレオチド配列を含まない。相同な核酸配列は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１における保存的アミノ酸置換（以下を参照のこと）ならびにＮＯＶＸの生物学的活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む。ＮＯＶＸタンパク質の種々の生物学的活性が以下に記載される。
【０２６３】
ＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸ核酸のオープンリーディングフレーム「ＯＲＦ」によりコードされる。ＯＲＦは、ポリペプチドに潜在的に翻訳され得るヌクレオチド配列に対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止コドンにより妨げられない。完全タンパク質についてのコード配列を示すＯＲＦは、ＡＴＧ「開始」コドンで始まり、３つの「終止」コドン（すなわち、ＴＡＡ、ＴＡＧまたはＴＧＡ）の１つで終わる。本発明の目的上、ＯＲＦは、開始コドン、終止コドンまたはその両方を有するか、または有さないコード配列の任意の部分であり得る。ｂｏｎａ  ｆｉｄｅ細胞タンパク質をコードするための良好な候補と考えられるＯＲＦについては、最小のサイズ要件が、例えば、５０以上のアミノ酸のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチとして、しばしば設定される。
【０２６４】
ヒトＮＯＶＸ遺伝子のクローニングから決定されるヌクレオチド配列は、他の細胞型における（例えば、他の組織由来の）ＮＯＶＸホモログ、ならびに他の脊椎動物からのＮＯＶＸホモログの同定および／またはクローニングにおける使用のために設計されたプローブおよびプライマーの生成を可能にする。プローブ／プライマーは、代表的に、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。このオリゴヌクレオチドは、代表的には、以下の領域を含む：配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の少なくとも約１２、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００の連続したセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列；あるいは配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の天然に存在する変異体のヌクレオチド配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域。
【０２６５】
ヒトＮＯＶＸヌクレオチド配列に基づくプローブは、同じタンパク質または相同なタンパク質をコードする転写物またはゲノム配列を検出するために用いられ得る。種々の実施形態において、このプローブは、これらに結合する標識基をさらに含む（例えば、標識基は、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子であり得る）。このようなプローブは、ＮＯＶＸタンパク質を間違って発現する細胞または組織を同定するための診断試験キットの一部として、例えば、被験体からの細胞のサンプルにおけるＮＯＶＸコード核酸のレベルを測定する（例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡレベルを検出するか、ゲノムＮＯＶＸ遺伝子が変異しているか、または欠失しているか否かを決定する）ことにより用いられ得る。
【０２６６】
「ＮＯＶＸポリペプチドの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」とは、用量依存性であってもそうでなくても、特定の生物学的アッセイにおいて測定された場合に、本発明のポリペプチドの活性に類似するが、この活性に必ずしも同一ではない活性を示すポリペプチド（成熟形態を含む）をいう。「ＮＯＶＸの生物学的に活性な部分」をコードする核酸フラグメントは、ＮＯＶＸ生物学的活性（ＮＯＶＸタンパク質の生物学的活性は以下に記載される）を有するポリペプチドをコードする配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の一部分を単離し、ＮＯＶＸタンパク質のコードされた部分を発現し（例えば、インビトロでの組換え発現により）、ＮＯＶＸのコードされた部分の活性を評価するすることにより、調製され得る。
【０２６７】
（ＮＯＶＸ核酸およびＮＯＶＸポリペプチドの改変体）
本発明はさらに、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１に示されるヌクレオチド配列とは異なり、従って、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるタンパク質と同じＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸分子を包含する。別の実施形態において、本発明の単離された核酸分子は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０２６８】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１に示されるヒトＮＯＶＸヌクレオチド配列に加えて、このＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列における変化を導くＤＮＡ配列多型が、集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ることが、当業者によって理解される。ＮＯＶＸ遺伝子中のこのような遺伝的多型は、天然の対立遺伝子のバリエーションに起因して、集団内の個体間に存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＮＯＶＸタンパク質、好ましくは脊椎動物のＮＯＶＸタンパク質をコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む核酸分子をいう。このような天然の対立遺伝子のバリエーションは、代表的には、ＮＯＶＸ遺伝子のヌクレオチド配列において１〜５％の不一致を生じ得る。天然の対立遺伝子バリエーションの結果であり、かつこのＮＯＶＸポリペプチドの機能的活性を変化させない、ＮＯＶＸポリペプチド内の任意および全てのこのようなヌクレオチドのバリエーションならびに得られるアミノ酸多型は、本発明の範囲内であると意図される。
【０２６９】
さらに、他の種由来のＮＯＶＸタンパク質をコードし、従って、ヒトの配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子は、本発明の範囲内にあることが意図される。本発明のＮＯＶＸのｃＤＮＡの天然の対立遺伝子改変体およびホモログに対応する核酸分子は、本明細書中に開示されるヒトＮＯＶＸ核酸に対するその相同性に基づいて、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、標準的なハイブリダイゼーション技術に従うハイブリダイゼーションプローブとしてヒトｃＤＮＡまたはその一部を用いて単離され得る。
【０２７０】
従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、少なくとも６ヌクレオチド長であり、そしてストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形態では、この核酸は、少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、１５００、または２０００以上のヌクレオチド長である。なお別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、コード領域にハイブリダイズする。本明細書中で用いられる場合、用語「ストリンジェント条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄に関して、互いに少なくとも６０％相同なヌクレオチド配列が代表的には互いにハイブリダイズしたまま残る条件を記載することを意図する。
【０２７１】
ホモログ（すなわち、ヒト以外の種由来のＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸）または他の関連配列（例えば、パラログ）は、特定のヒト配列の全てまたは一部をプローブとし、核酸ハイブリダイゼーションおよびクローニングに関して当該分野で周知の方法を使用して、低い、中程度の、または高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーションによって入手され得る。
【０２７２】
本明細書で用いられる場合、語句「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、その標的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない条件をいう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で異なる。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズする。一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで、特定の配列の熱融解点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。このＴｍは、標的配列に相補的なプローブの５０％が、（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下で）平衡状態で標的配列にハイブリダイズする温度である。標的配列は一般に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有されている。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩濃度が約１．０Ｍナトリウムイオンより低く、代表的には約０．０１〜１．０Ｍナトリウムイオン（またはその他の塩）であり、そして温度が、短いプローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）については、少なくとも約３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチドについては、少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドのような、不安定化剤の添加で達成され得る。
【０２７３】
ストリンジェント条件は、当業者に公知であり、そしてＡｕｓｕｂｅｌら（編），ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、互いに少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％または約９９％相同な配列が、代表的には互いにハイブリダイズしたまま残るような条件である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％  ＢＳＡ、および５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡを含む高塩緩衝液中での６５℃でのハイブリダイゼーションであり、これは続いて、０．２×ＳＳＣ、０．０１％  ＢＳＡ中での５０℃での１回以上の洗浄を行う。ストリンジェント条件下で配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の配列にハイブリダイズする、本発明の単離された核酸分子は、天然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子をいう。
【０２７４】
第２の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のヌクレオチド配列、またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体を含む核酸分子に、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする核酸配列が提供される。中程度のストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、５５℃での６×ＳＳＣ、５×デンハルト溶液、０．５％  ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ中でのハイブリダイゼーション、続いて１×ＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳ中での３７℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹおよびＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。
【０２７５】
第３の実施形態では、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のヌクレオチド配列、またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体を含む核酸分子に、低ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズし得る核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件の非限定的な例は、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．０２％  ＰＶＰ、０．０２％  Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％  ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌの変性サケ精子ＤＮＡ、１０％（重量／容量）デキストラン硫酸中での４０℃でのハイブリダイゼーション、続いて２×ＳＳＣ、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．１％  ＳＤＳ中での５０℃での１回以上の洗浄である。用いられ得る低ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である（例えば、種交差ハイブリダイゼーションについて用いられるような条件）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編），１９９３，ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＹならびにＫｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，ＧＥＮＥ  ＴＲＡＮＳＦＥＲ  ＡＮＤ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ７８：６７８９−６７９２を参照のこと。
【０２７６】
（保存的変異）
集団中に存在し得る、ＮＯＶＸ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加えて、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のヌクレオチド配列への変異によって変化が導入され得、それによって、前記ＮＯＶＸタンパク質の機能的能力を変更することなく、コードされるＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列に変化がもたらされることを、当業者はさらに理解する。例えば、「非必須」アミノ酸残基にてアミノ酸置換をもたらすヌクレオチド置換は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２の配列において行われ得る。「非必須」アミノ酸残基は、その生物学的活性を変更することなく、このＮＯＶＸタンパク質の野生型配列から変更され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、このような生物学的活性に必要とされる。例えば、本発明のＮＯＶＸタンパク質の間で保存されているアミノ酸残基は、特に変更を受け入れ難いと予測される。保存的置換がなされ得るアミノ酸は、当該分野で周知である。
【０２７７】
本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基における変化を含む、ＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸分子に関する。このようなＮＯＶＸタンパク質は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のアミノ酸配列とは異なるが、生物学的活性をなお保持する。１つの実施形態では、単離された核酸分子は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、ここで、このタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子によってコードされるタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に対して少なくとも約６０％相同であり；より好ましくは配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に対して少なくとも約７０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に対してして少なくとも約８０％相同であり；なおより好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に対して少なくとも約９０％相同であり；そして最も好ましくは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に対して少なくとも約９５％相同である。
【０２７８】
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２のタンパク質に相同なＮＯＶＸタンパク質をコードする単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のヌクレオチド配列に１以上のヌクレオチドの置換、付加または欠失を導入することにより作製され得、その結果、１以上のアミノ酸の置換、付加または欠失が、このコードされるタンパク質に導入される。
【０２７９】
変異は、標準技術（例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘発）によって配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換が、１以上の推定非必須アミノ酸残基にてなされる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換される、アミノ酸置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーとしては、以下が挙げられる：塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。従って、ＮＯＶＸタンパク質中の推定非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖のファミリー由来の別のアミノ酸残基で置換される。あるいは、別の実施形態では、変異は、ＮＯＶＸコード配列の全てまたは一部に沿って（例えば、飽和変異誘発（ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）によって）ランダムに導入され得、そして得られる変異体は、ＮＯＶＸの生物学的活性についてスクリーニングされて、活性を維持する変異体を同定し得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１の変異誘発に続いて、コードされるタンパク質は、当該分野で公知の任意の組換え技術によって発現され得、そしてこのタンパク質の活性が決定され得る。
【０２８０】
アミノ酸ファミリーの関連性はまた、側鎖の相互作用に基づいて決定され得る。置換されたアミノ酸は、完全に保存された「強い」残基または完全に保存された「弱い」残基であり得る。保存されたアミノ酸残基の「強い」群は、以下の群のいずれか１つであり得る：ＳＴＡ、ＮＥＱＫ、ＮＨＱＫ、ＮＤＥＱ、ＱＨＲＫ、ＭＩＬＶ、ＭＩＬＦ、ＨＹ、ＦＹＷ（ここで、一文字アミノ酸コードは、互いに置換され得るアミノ酸残基によりグループ化される）。同様に、保存された残基の「弱い」群は、以下のいずれか１つであり得る：ＣＳＡ、ＡＴＶ、ＳＡＧ、ＳＴＮＫ、ＳＴＰＡ、ＳＧＮＤ、ＳＮＤＥＱＫ、ＮＤＥＱＨＫ、ＮＥＱＨＲＫ、ＶＬＩＭ、ＨＦＹ（ここで、各群内の文字は、一文字アミノ酸コードを表す）。
【０２８１】
１つの実施形態では、変異体ＮＯＶＸタンパク質は、以下についてアッセイされ得る：（ｉ）他のＮＯＶＸタンパク質、他の細胞表面タンパク質、または生物学的に活性なこれらの部分と、タンパク質：タンパク質相互作用を形成する能力、（ｉｉ）変異体ＮＯＶＸタンパク質と、ＮＯＶＸのリガンドとの間の複合体形成；または（ｉｉｉ）変異体ＮＯＶＸタンパク質が細胞内標的タンパク質またはその生物学的に活性な部分に結合する能力；（例えば、アビジンタンパク質）。
【０２８２】
なお別の実施形態において、変異体ＮＯＶＸタンパク質は、特定の生物学的機能を調節する能力（例えば、インスリン放出の調節）についてアッセイされ得る。
【０２８３】
（アンチセンス核酸）
本発明の別の局面は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１またはこれらのフラグメント、アナログもしくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズし得るかまたは相補的である、単離されたアンチセンス核酸分子に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「センス」核酸に相補的である（例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子のコード鎖に相補的であるかまたはｍＲＮＡ配列に相補的である）ヌクレオチド配列を含む。特定の局面では、少なくとも約１０、約２５、約５０、約１００、約２５０もしくは約５００ヌクレオチドまたはＮＯＶＸコード鎖の全体、またはこれらの一部のみに相補的な配列を含む、アンチセンス核酸分子が提供される。配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２のＮＯＶＸタンパク質のフラグメント、ホモログ、誘導体およびアナログをコードする核酸分子、または配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１のＮＯＶＸ核酸配列に相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。
【０２８４】
１つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「コード領域」に対してアンチセンスである。用語「コード領域」とは、アミノ酸残基に翻訳されるコドンを含む、ヌクレオチド配列の領域をいう。別の実施形態では、このアンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸタンパク質をコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非コード領域」に対してアンチセンスである。用語「非コード領域」とは、コード領域に隣接する、アミノ酸に翻訳されない、５’配列および３’配列をいう（すなわち、５’非翻訳領域および３’非翻訳領域ともいわれる）。
【０２８５】
本明細書中に開示されるＮＯＶＸタンパク質をコードするコード鎖配列を考慮すれば、本発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎの塩基対形成の規則に従って設計され得る。アンチセンス核酸分子は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡのコード領域全体に相補的であり得るが、より好ましくは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡのコード領域または非コード領域の一部にのみアンチセンスであるオリゴヌクレオチドである。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、約５、約１０、約１５、約２０、約２５、約３０、約３５、約４０、約４５または約５０ヌクレオチド長であり得る。本発明のアンチセンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いて、化学的合成または酵素連結反応を用いて構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、またはこの分子の生物学的安定性を増大させるように、もしくはアンチセンス核酸とセンス核酸との間で形成される二重鎖の物理的安定性を増大させるように設計された種々に改変されたヌクレオチドを用いて化学的に合成され得る（例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換ヌクレオチドが用いられ得る）。
【０２８６】
アンチセンス核酸を作製するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例としては以下が挙げられる：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、プソイド（シュード）ウラシル、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリン。あるいは、このアンチセンス核酸は、核酸がアンチセンス方向でサブクローニングされた発現ベクターを用いて生物学的に生成され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは、以下の小節にさらに記載されるように、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）。
【０２８７】
本発明のアンチセンス核酸分子は、代表的には被験体に投与されるか、またはインサイチュで生成され、その結果これらは、ＮＯＶＸタンパク質をコードする細胞性ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか、またはそれに結合し、それによってこのタンパク質の発現を阻害する（例えば、転写および／または翻訳を阻害することによって）。このハイブリダイゼーションは、安定な二重鎖を形成する従来のヌクレオチド相補性によってか、または例えばＤＮＡ二重鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合には、二重らせんの主溝における特異的相互作用を介してであり得る。本発明のアンチセンス核酸分子の投与経路の例としては、組織部位での直接的注射が挙げられる。あるいは、アンチセンス核酸分子は、選択された細胞を標的化するように改変され得、次いで全身に投与され得る。例えば、全身投与のために、アンチセンス分子は、選択された細胞表面上に発現されるレセプターまたは抗原にそれらが特異的に結合するように改変され得る（例えば、そのアンチセンス核酸分子を細胞表面レセプターまたは抗原に結合するペプチドまたは抗体に連結することによって）。このアンチセンス核酸分子はまた、本明細書中に記載されるベクターを用いて細胞に送達され得る。十分な核酸分子を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐｏｌ  ＩＩプロモーターまたはｐｏｌ  ＩＩＩプロモーターの制御下に置かれているベクター構築物が、好ましい。
【０２８８】
なお別の実施形態において、本発明のアンチセンス核酸分子は、α−アノマー核酸分子である。α−アノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、ここで、通常のβ−ユニットとは対照的に、これらの鎖は、互いに平行に延びる。例えば、Ｇａｕｌｔｉｅｒら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：６６２５−６６４１を参照のこと。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボヌクレオチド（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１５：６１３１〜６１４８を参照のこと）またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（例えば、Ｉｎｏｕｅら，１９８７，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２１５：３２７〜３３０を参照のこと）を含み得る。
【０２８９】
（リボザイムおよびＰＮＡ部分）
核酸の改変としては、非制限的な例として、改変塩基、および糖リン酸骨格が改変または誘導体化された核酸が挙げられる。これらの改変は、改変された核酸の化学的安定性を少なくとも部分的に増強するために実施され、その結果、それらは、例えば、被験体での治療的適用におけるアンチセンス結合核酸として使用され得る。
【０２９０】
１つの実施形態において、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リボザイムは、一本鎖核酸（例えば、ｍＲＮＡ）を切断し得るリボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡ分子であり、これらは、その一本鎖核酸に対して相補領域を有する。従って、リボザイム（例えば、ＨａｓｅｌｈｏｆｆおよびＧｅｒｌａｃｈ  １９８８．Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５８５−５９１に記載されるハンマーヘッド型リボザイム）を使用して、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それによってＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの翻訳を阻害し得る。ＮＯＶＸをコードする核酸に特異性を有するリボザイムは、本明細書中に開示されるＮＯＶＸ  ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、および４１）に基づいて設計され得る。例えば、活性部位のヌクレオチド配列が、ＮＯＶＸをコードするｍＲＮＡ内で切断されるヌクレオチド配列に相補的である、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）Ｌ−１９  ＩＶＳ  ＲＮＡの誘導体が構築され得る。例えば、Ｃｅｃｈら，に対する米国特許第４，９８７，０７１号およびＣｅｃｈら，に対する米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡをまた使用して、ＲＮＡ分子のプールから、特異的リボヌクレアーゼ活性を有する触媒性ＲＮＡを選択し得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌら，（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１４１１〜１４１８を参照のこと。
【０２９１】
あるいは、ＮＯＶＸ遺伝子発現は、ＮＯＶＸ核酸の調節領域（例えば、ＮＯＶＸのプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的なヌクレオチド配列を標的化し、標的細胞中でＮＯＶＸ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を形成することによって阻害され得る。例えば、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．６：５６９〜８４；Ｈｅｌｅｎｅら，１９９２．Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；Ｍａｈｅｒ，１９９２．Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４：８０７−１５を参照のこと。
【０２９２】
種々の実施形態において、ＮＯＶＸ核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格で改変され、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーションまたは可溶性を改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変して、ペプチド核酸を生成し得る（例えば、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．Ｂｉｏｏｒｇ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ  ４：５−２３を参照のこと）。本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド核酸」または「ＰＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格が偽ペプチド骨格によって置換され、そして４つの天然の核酸塩基のみが保持されている核酸模倣物（例えば、ＤＮＡ模倣物）をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低いイオン強度の条件下でＤＮＡおよびＲＮＡに対する特異的ハイブリダイゼーションを可能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３：１４６７０−１４６７５において記載されるような標準的固相ペプチド合成プロトコルを用いて実行され得る。
【０２９３】
ＮＯＶＸのＰＮＡは、治療的適用および診断的適用において使用され得る。例えば、ＰＮＡは、例えば転写または翻訳の停止を誘導することまたは複製を阻害することによる、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスまたは抗遺伝子（ａｎｔｉｇｅｎｅ）剤として使用され得る。ＮＯＶＸのＰＮＡはまた、例えば、遺伝子における１塩基対変異の分析において（例えば、ＰＮＡ指向性ＰＣＲクランピング（ｃｌａｍｐｉｎｇ）；他の酵素（例えば、Ｓ１ヌクレアーゼ）と組み合わせて使用される場合の人工制限酵素として（Ｈｙｒｕｐら，１９９６．前出を参照のこと）；またはＤＮＡ配列およびハイブリダイゼーションのプローブもしくはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら，１９９６，前出を参照のこと））使用され得る。
【０２９４】
別の実施形態において、ＮＯＶＸのＰＮＡは、例えば、それらの安定性または細胞性取り込みを増強するために、ＰＮＡに親油基または他のヘルパー基を結合することによってか、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によってか、またはリポソームもしくは当該分野において公知の薬物送達の他の技術の使用によって改変され得る。例えば、ＰＮＡおよびＤＮＡの有利な特性を組合せ得る、ＮＯＶＸのＰＮＡ−ＤＮＡキメラが生成され得る。このようなキメラは、ＰＮＡ部分が高い結合親和性および特異性を提供する一方で、ＤＮＡ認識酵素（例えば、ＲＮａｓｅ  ＨおよびＤＮＡポリメラーゼ）がＤＮＡ部分と相互作用するのを可能にする。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは、塩基のスタッキング、核酸塩基間の結合数および方向を考慮して選択される適切な長さのリンカーを使用して連結され得る（Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出を参照のこと）。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐら，１９９６，前出およびＦｉｎｎら，１９９６，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  ２４：３３５７−３３６３において記載されるように実行され得る。例えば、ＤＮＡ鎖は、標準的なホスホルアミダイトカップリング化学を用いて固体支持体上で合成され得、そして改変されたヌクレオシドアナログ（例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジンホスホルアミダイト）が、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に使用され得る。例えば、Ｍａｇら，１９８９，Ｎｕｃｌ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １７：５９７３〜５９８８を参照のこと。次いで、ＰＮＡモノマーが段階様式でカップリングされ、５’ＰＮＡセグメントおよび３’ＤＮＡセグメントを有するキメラ分子を生成する。例えば、Ｆｉｎｎら，１９９６，前出を参照のこと。あるいは、５’ＤＮＡセグメントおよび３’ＰＮＡセグメントを用いて、キメラ分子が合成され得る。例えば、Ｐｅｔｅｒｓｅｎら，１９７５、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．５：１１１９〜１１１２４を参照のこと。
【０２９５】
他の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、以下のような他の付属の基を含み得る：ペプチド（例えば、インビボで宿主細胞レセプターを標的化するための）、または細胞膜を横切る輸送を容易にする因子（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら，１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３〜６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら，１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８〜６５２；ＰＣＴ公開番号ＷＯ８８／０９８１０を参照のこと）、または血液脳関門（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ８９／１０１３４を参照のこと）を横切る輸送を容易にする因子。さらに、オリゴヌクレオチドは、ハイブリダイゼーション誘発切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら，１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：９５８〜９７６を参照のこと）、またはインターカレート剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９〜５４９を参照のこと）で改変され得る。この目的のために、オリゴヌクレオチドは、別の分子（例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発切断剤など）に結合され得る。
【０２９６】
（ＮＯＶＸポリペプチド）
本発明に従うポリペプチドは、その配列が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に提供されるＮＯＶＸポリペプチドのアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明はまた、なおそのＮＯＶＸ活性および生理学的機能を維持するタンパク質、またはその機能的フラグメントをコードする一方で、その任意の残基が配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、および４２に示される対応する残基から変化し得る、変異体または改変体タンパク質を含む。
【０２９７】
一般に、ＮＯＶＸ様機能を保持するＮＯＶＸ改変体は、配列中の特定位置の残基が他のアミノ酸により置換されている任意の改変体を含み、そしてさらに、親タンパク質の２つの残基間にさらなる残基を挿入する可能性、および親配列から１つ以上の残基を欠失する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入または欠失が、本発明に包含される。好適な状況では、この置換は、上記で規定されるような保存的置換である。
【０２９８】
本発明の１つの局面は、単離されたＮＯＶＸタンパク質、およびその生物学的に活性な部分、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに関する。抗ＮＯＶＸ抗体を惹起するための免疫原としての使用のために適切なポリペプチドフラグメントもまた提供される。１つの実施形態において、ネイティブなＮＯＶＸタンパク質は、標準的なタンパク質精製技術を用いる適切な精製スキームによって、細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、組換えＤＮＡ技術によって産生される。組換え発現に代わるものとして、ＮＯＶＸタンパク質またはポリペプチドが、標準的なペプチド合成技術を用いて化学合成され得る。
【０２９９】
「単離された」または「精製された」ポリペプチドまたはタンパク質あるいはこれらの生物学的に活性な部分は、ＮＯＶＸタンパク質の由来する細胞または組織供給源由来の細胞性物質または他の夾雑タンパク質を実質的に含まないか、あるいは化学合成される場合に化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、ＮＯＶＸタンパク質が単離または組換え産生される細胞の細胞性成分から、このタンパク質が分離されているＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「細胞性物質を実質的に含まない」は、非ＮＯＶＸタンパク質（本明細書中において「夾雑タンパク質」ともいわれる）を（乾燥重量にて）約３０％未満、より好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約２０％未満、なおより好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約１０％未満、そして最も好ましくは非ＮＯＶＸタンパク質の約５％未満を有する、ＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分が組換え産生される場合、好ましくは、調製物はまた培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地は、そのＮＯＶＸタンパク質調製物の容量の約２０％未満、より好ましくは約１０％未満、そして最も好ましくは約５％未満に相当する。
【０３００】
用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパク質が、そのタンパク質の合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離されるＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態において、用語「化学前駆体または他の化学物質を実質的に含まない」は、化学前駆体または非ＮＯＶＸの化学物質の約３０％未満（乾燥重量にて）、より好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約２０％未満、なおより好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約１０％未満、そして最も好ましくは化学前駆体または非ＮＯＶＸ化学物質の約５％未満を有する、ＮＯＶＸタンパク質の調製物を含む。
【０３０１】
ＮＯＶＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、全長ＮＯＶＸタンパク質より少ないアミノ酸を含み、そしてＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの活性を示す、ＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２に示されるアミノ酸配列）に十分に相同なアミノ酸配列、またはＮＯＶＸタンパク質のアミノ酸配列に由来するアミノ酸配列を含むペプチドを含む。代表的には、生物学的に活性な部分は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの活性を有するドメインまたはモチーフを含む。ＮＯＶＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、長さが１０、２５、５０、１００またはそれより多いアミノ酸残基であるポリペプチドであり得る。
【０３０２】
さらに、タンパク質の他の領域が欠失している他の生物学的に活性な部分は、組換え技術によって調製され得、そしてネイティブなＮＯＶＸタンパク質の機能的活性のうちの１つ以上について評価され得る。
【０３０３】
１つの実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２に示されるアミノ酸配列を有する。他の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２に実質的に相同であり、そして以下に詳細に記載されるように、天然の対立遺伝子改変体または変異誘発に起因してアミノ酸配列が異なるが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２のタンパク質の機能的活性を保持する。従って、別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２のアミノ酸配列に少なくとも約４５％相同なアミノ酸配列を含み、そして配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２のＮＯＶＸタンパク質の機能的活性を保持するタンパク質である。
【０３０４】
（２つ以上の配列間の相同性の決定）
２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性の百分率を決定するために、配列は、至適な比較の目的のために整列される（例えば、ギャップは、第２のアミノ酸または核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸または核酸配列の配列中に導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でのアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められる場合、分子は、その位置で相同である（すなわち、本明細書中で使用される場合、アミノ酸または核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である）。
【０３０５】
核酸配列の相同性は、２つの配列間の同一性の程度として決定され得る。相同性は、当該分野において公知のコンピュータープログラム（例えば、ＧＣＧプログラムパッケージにおいて提供されるＧＡＰソフトウェア）を用いて決定され得る。ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，１９７０  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ４８：４４３〜４５３を参照のこと。核酸配列比較のための以下の設定（ＧＡＰ作製ペナルティー、５．０、およびＧＡＰ伸長ペナルティー、０．３）を用いてＧＣＧ  ＧＡＰソフトウェアを使用すると、上記で言及される類似の核酸配列のコード領域は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１に示されるＤＮＡ配列のＣＤＳ（コード）部分と、好ましくは少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％または９９％の同一性の程度を示す。
【０３０６】
用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチド配列またはポリペプチド配列が、特定の比較領域にわたって、残基毎を基準として同一である程度をいう。用語「配列同一性のパーセンテージ」は、以下により算出される：この比較領域にわたって最適に整列された２つの配列を比較すること、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、核酸の場合にはＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）が存在する位置の数を決定し、一致した位置の数を導くこと、この一致した位置の数を、比較領域の内の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で除算すること、およびその結果を１００で乗算して、配列同一性のパーセンテージを導くこと。用語「実質的な同一性」は、本明細書中で使用される場合、ポリヌクレオチド配列の特徴を示し、ここで、このポリヌクレオチドは、比較領域にわたり参照配列と比較して、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少なくとも８５％の同一性、そして頻繁には９０〜９５％の配列同一性、より通常には少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【０３０７】
（キメラタンパク質および融合タンパク質）
本発明はまた、ＮＯＶＸキメラタンパク質または融合タンパク質を提供する。本明細書中で使用される場合、ＮＯＶＸ「キメラタンパク質」またはＮＯＶＸ「融合タンパク質」は、非ＮＯＶＸポリペプチドに作動可能に連結された、ＮＯＶＸポリペプチドを含む。「ＮＯＶＸポリペプチド」は、ＮＯＶＸタンパク質（配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０および４２）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいうが、「非ＮＯＶＸポリペプチド」は、ＮＯＶＸタンパク質に対して実質的に相同ではないタンパク質（例えば、ＮＯＶＸタンパク質とは異なり、かつ同一かまたは異なる生物体に由来するタンパク質）に対応するアミノ酸配列を有するポリペプチドをいう。ＮＯＶＸ融合タンパク質において、このＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸタンパク質のすべてまたは一部分に対応し得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む。なお別の実施形態において、ＮＯＶＸ融合タンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の少なくとも３つの生物学的に活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「作動可能に連結された」は、ＮＯＶＸポリペプチドおよび非ＮＯＶＸポリペプチドが、インフレームで互いに融合されることを示すことが意図される。非ＮＯＶＸポリペプチドは、ＮＯＶＸポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。
【０３０８】
１つの実施形態において、融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＮＯＶＸ融合タンパク質であり、ここではＮＯＶＸ配列が、ＧＳＴ（グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。このような融合タンパク質は、組換えＮＯＶＸポリペプチドの精製を容易にし得る。
【０３０９】
別の実施形態において、融合タンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配列を含むＮＯＶＸタンパク質である。特定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、ＮＯＶＸの発現および／または分泌は、異種シグナル配列の使用を介して増加され得る。
【０３１０】
なお別の実施形態において、融合タンパク質は、ＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質であり、ここで、ＮＯＶＸ配列が、免疫グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。本発明のＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込まれ、そして被験体に投与されて、細胞の表面上でＮＯＶＸリガントとＮＯＶＸタンパク質との間の相互作用を阻害し、それによってインビボのＮＯＶＸ媒介シグナル伝達を抑制し得る。ＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質を用いて、ＮＯＶＸ同族リガンドの生体利用性に影響を与え得る。ＮＯＶＸリガンド／ＮＯＶＸ相互作用の阻害は、増殖障害および分化障害の両方の処置、および細胞生存を調節（例えば、促進または阻害）するために、治療的に有用であり得る。さらに、本発明のＮＯＶＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗ＮＯＶＸ抗体を産生するための免疫原として用いられ、ＮＯＶＸリガンドを精製し、そしてＮＯＶＸリガンドとのＮＯＶＸの相互作用を阻害する分子を同定するスクリーニングアッセイで用いられ得る。
【０３１１】
本発明のＮＯＶＸのキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技術により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラグメントを、従来の技術に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着（ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じて粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端のフィルイン、所望しない連結を避けるためのアルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を採用することにより、インフレームで一緒に連結する。別の実施形態において、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合成機を含む従来技術により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得る、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープライマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合部分（例えば、ＧＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている。ＮＯＶＸをコードする核酸は、この融合部分がＮＯＶＸタンパク質にインフレームで連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。
【０３１２】
（ＮＯＶＸのアゴニストおよびアンタゴニスト）
本発明はまた、ＮＯＶＸアゴニスト（すなわち、模倣物）として、またはＮＯＶＸアンタゴニストのいずれかとして機能するＮＯＶＸタンパク質の改変体に関する。ＮＯＶＸタンパク質の改変体（例えば、ＮＯＶＸタンパク質の離散した点変異または短縮型）が、変異誘発により生成され得る。ＮＯＶＸタンパク質のアゴニストは、天然に存在する形態のＮＯＶＸタンパク質と実質的に同じ生物学的活性、またはその生物学的活性のサブセットを保持し得る。ＮＯＶＸタンパク質のアンタゴニストは、天然に存在する形態のＮＯＶＸタンパク質の１つ以上の活性を、例えば、ＮＯＶＸタンパク質を含む細胞性シグナル伝達カスケードの下流または上流のメンバーに競合的に結合することにより阻害し得る。従って、特定の生物学的効果が、限られた機能の改変体を用いた処理により誘発され得る。１つの実施形態において、このタンパク質の天然に存在する形態の生物学活性のサブセットを有する改変体を用いた被験体の処置は、ＮＯＶＸタンパク質の天然に存在する形態を用いた処置に対して、被験体においてより少ない副作用を有する。
【０３１３】
ＮＯＶＸアゴニスト（すなわち、模倣物）、またはＮＯＶＸアンタゴニストのいずれかとして機能するＮＯＶＸタンパク質の改変体は、ＮＯＶＸタンパク質のアゴニストまたはアンタゴニスト活性についてＮＯＶＸタンパク質の変異体（例えば短縮型変異体）のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより同定され得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ改変体の多彩なライブラリーは、核酸レベルでのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多彩な遺伝子ライブラリーによりコードされる。ＮＯＶＸ改変体の多彩なライブラリーは、例えば、潜在的なＮＯＶＸ配列の縮重セットが、個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＮＯＶＸ配列のセットを含む（例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合タンパク質のセットとして発現可能であるように、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、遺伝子配列に酵素的に連結することによって、作製され得る。縮重オリゴヌクレオチド配列から潜在的なＮＯＶＸ改変体のライブラリーを産生するために用いられ得る種々の方法が存在する。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化ＤＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に連結される。遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＮＯＶＸ配列の所望のセットをコードする配列のすべての供給を可能にする。縮重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当該分野において周知である。例えば、Ｎａｒａｎｇ，１９８３．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら，１９８４．Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９８：１０５６；Ｉｋｅら，１９８３．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：４７７を参照のこと。
【０３１４】
（ポリペプチドライブラリー）
さらに、ＮＯＶＸタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用いて、ＮＯＶＸタンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のためのＮＯＶＸフラグメントの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態において、コード配列フラグメントのライブラリーは、ＮＯＶＸコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグメントを、１分子あたり約１つのみのニックが生じる条件下で、ヌクレアーゼで処理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からのセンス／アンチセンス対を含み得る二本鎖ＤＮＡを形成するためにこのＤＮＡを再生すること、Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二重鎖から一本鎖部分を除去すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結することにより生成し得る。この方法によって、ＮＯＶＸタンパク質の種々のサイズのＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが派生され得る。
【０３１５】
点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産物をスクリーニングするため、および選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするための種々の技術が当該分野で公知である。このような技術を、ＮＯＶＸタンパク質のコンビナトリアル変異誘発により生成された遺伝子ライブラリーの迅速なスクリーニングに適用可能である。大きな遺伝子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に従う最も広く用いられる技術は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベクター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細胞を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条件下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大させる新規技術であるリクルーシブアンサンブル変異誘発（ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ  ｅｎｓｅｍｂｌｅ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）（ＲＥＭ）を、スクリーニングアッセイと組み合わせて用い、ＮＯＶＸ改変体を同定し得る。例えば、ＡｒｋｉｎおよびＹｏｕｒｖａｎ，１９９２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａｖｅら，１９９３．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ６：３２７−３３１を参照のこと。
【０３１６】
（抗ＮＯＶＸ抗体）
ＮＯＶＸタンパク質、またはＮＯＶＸタンパク質のフラグメントに対する抗体がまた本発明に含まれる。用語「抗体」とは、本明細書中で使用される場合、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に特異的に結合（抗原と免疫反応する）抗原結合部位を含む分子）をいう。このような抗体としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、およびＦ（ａｂ’）２フラグメント、ならびにＦａｂ発現ライブラリーが挙げられるがこれらに限定されない。一般に、ヒトから得た抗体分子は、この分子に存在する重鎖の性質が互いに異なるクラスであるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＤのいずれかに関する。特定のクラスは、同様にサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）を有する。さらに、ヒトにおいては、軽鎖は、κ鎖またはλ鎖であり得る。抗体に対する本明細書における言及は、ヒト抗体種のこのようなクラス、サブクラス、およびタイプの全てに対する言及を包含する。
【０３１７】
本発明の単離されたＮＯＶＸ関連タンパク質は、抗原、またはその部分もしくはフラグメントとして役立つように意図され得、さらに、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の調製のための標準的な技術を用いて、抗原に免疫特異的に結合する抗体を産生するための免疫原として用いられ得る。完全長のタンパク質が用いられ得るか、あるいは、本発明は、免疫原としての使用のための抗原の抗原性ペプチドフラグメントを提供する。抗原性ペプチドフラグメントは、完全長のタンパク質のアミノ酸配列の少なくとも６アミノ酸残基を含み、そしてこのペプチドに対して惹起された抗体が完全長のタンパク質またはエピトープを含む任意のフラグメントと特異的な免疫複合体を形成するように、そのエピトープを含む。好ましくは、抗原性ペプチドは、少なくとも１０アミノ酸残基、または少なくとも１５アミノ酸残基、または少なくとも２０アミノ酸残基、または少なくとも３０アミノ酸残基を含む。抗原性ペプチドによって包含される好ましいエピトープは、その表面に位置するタンパク質の領域である；一般的に、これらは、親水性領域である。
【０３１８】
本発明の特定の実施形態において、抗原性ペプチドに含まれる少なくとも１つのエピトープは、タンパク質の表面上に位置するＮＯＶＸ関連タンパク質の領域、例えば、親水性領域である。ヒトＮＯＶＸ関連タンパク質配列の疎水性分析は、ＮＯＶＸ関連タンパク質のどの領域が特に親水性であり、従って、抗体産生を標的するための有用な表面残基をコードしそうであるかを示す。抗体産生を標的する手段として、親水性および疎水性の領域を示すヒドロパシープロットを、例えば、フーリエ変換を伴うかまたは伴わないかのいずれかの、Ｋｙｔｅ  ＤｏｏｌｉｔｔｌｅまたはＨｏｐｐ  Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で周知の任意の方法により生成し得る（例えば、各々がその全体において本明細書に参考として援用される、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：３８２４−３８２８；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ  １９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５−１４２を参照のこと）。抗原性タンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ内の１つ以上のドメインに対して特異的な抗体はまた、本明細書中で提供される。
【０３１９】
本発明のタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログもしくはオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）は、これらのタンパク質成分に免疫特異的に結合する抗体の産生における免疫原として利用され得る。
【０３２０】
当該分野において公知の種々の手順が、本発明のタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログもしくはオルソログに対して指向されるポリクローナル抗体またはモノクロナール抗体の産生のために使用され得る（例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，１９８８，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（本明細書中に参考として援用される）を参照のこと）。これらの抗体のうちのいくつかは、以下で考察される。
【０３２１】
（ポリクローナル抗体）
ポリクローナル抗体の産生のために、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ、ヤギ、マウスまたは他の動物）は、ネイティブなタンパク質、その合成改変体、または上記の誘導体を用いる１以上の注射によって免疫され得る。適切な免疫原性調製物は、例えば、天然に存在する免疫原性タンパク質、免疫原性タンパク質を提示する化学的に合成されたポリペプチド、または組換え的に発現される免疫原性タンパク質を含み得る。さらに、このタンパク質は、免疫されている哺乳動物において免疫原性であることが知られている第２のタンパク質に結合体化され得る。このような免疫原性タンパク質の例としては、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、および大豆トリプシンインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。この調製物はさらに、アジュバントを含み得る。種々のアジュバントが免疫学的応答を増加させるために使用され、このようなアジュバントとしては、フロイントのアジュバント（完全および不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳濁液、ジニトロフェノールなど）、ヒトにおいて使用可能なアジュバント（例えば、Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−ＧｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）、または類似の免疫刺激剤が挙げられるが、これらに限定されない。使用され得るアジュバントのさらなる例としては、ＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリルリピドＡ、合成トレハロースジコリノミコレート）が挙げられる。
【０３２２】
免疫原性タンパク質に対して指向されるポリクローナル抗体分子は、哺乳動物から（例えば、血液から）単離され得、そして周知の技術（例えば、プロテインＡまたはプロテインＧを用いるアフィニティクロマトグラフィー（これは、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供する））によってさらに精製され得る。続いて、または代替的に、求められる免疫グロブリンの標的である特定の抗原、またはそのエピトープが、カラムに固定され、免疫アフィニティクロマトグラフィーによって免疫特異的抗体を精製し得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  ＰＡより発行）、第１４巻、第８号（２０００年４月１７日）、２５〜２８頁）によって考察される。
【０３２３】
（モノクローナル抗体）
本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、独特の軽鎖遺伝子産物および独特の重鎖遺伝子産物から構成される唯一の分子種の抗体分子を含む抗体分子の集団をいう。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、すべての分子の集団に同一である。従って、ＭＡｂは、抗原への独特の結合親和性によって特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応可能な抗原結合部位を含む。
【０３２４】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ方法（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載されるような方法）を使用して調製され得る。ハイブリドーマ方法において、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は、免疫因子で代表的に免疫され、その免疫因子に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生し得るリンパ球を誘発する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫され得る。
【０３２５】
免疫因子としては、代表的に、タンパク質抗原、そのフラグメントまたはその融合タンパク質が挙げられる。一般的には、以下のいずれかである：ヒト起源の細胞が望まれる場合は、末梢血リンパ球が使用され、または非ヒト哺乳動物供給源が望まれる場合は、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、適切な融合因子（例えば、ポリエチレングリコール）を使用して、リンパ球を不死化細胞株に融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ  ＡＮＤ  ＰＲＡＣＴＩＣＥ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）第５９−１０３頁）。不死化細胞株は、通常、形質転換された哺乳動物細胞、特にげっ歯類、ウシおよびヒト起源の骨髄腫細胞である。通常、ラットまたはマウスの骨髄腫細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、１以上の物質（融合されていない不死化細胞の増殖または生存を阻害する）を含む適切な培養培地中で培養され得る。例えば、親の細胞が酵素、ヒポキサンチングアニンンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマからの培養培地は、代表的にヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、それらの物質はＨＧＰＲＴ欠失細胞の増殖を妨げる。
【０３２６】
好ましい不死化細胞株は、効率的に融合する細胞株であり、選択された抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体の発現を支持し、そしてＨＡＴ培地のような培地に感受性である。より好ましい不死化細胞株は、マウス骨髄腫株であり、それらを、例えば、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａおよびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから入手可能である。ヒト骨髄腫およびマウス−ヒト異種骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株はまた、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＹ  ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ  ＡＮＤ  ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９８７）第５１−６３頁）。
【０３２７】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培養培地は、抗原に対して指向されるモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって決定されるか、またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ））によって決定される。このような技術およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、ＭｕｎｓｏｎおよびＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャード分析によって決定され得る。好ましくは、標的抗原に対する高い程度の特異性および高結合親和性を有する抗体が、単離される。
【０３２８】
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、限界希釈手順によって、クローンをサブクローニングし得、そして標準的な方法によって増殖し得る。この目的のために適切な培養培地としては、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）およびＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物内の腹水のようなインビボで増殖され得る。
【０３２９】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製手順（例えば、タンパク質Ａセファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィー）によって、培養培地または腹水から、単離または精製され得る。
【０３３０】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ方法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される方法）によって作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され得、そして配列決定され得る。本発明のハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに配置され得、次いでそれらは、宿主細胞（例えば、さもなければ免疫グロブリンタンパク質を産生しないサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞）にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞内でのモノクローナル抗体の合成を得る。ＤＮＡはまた、例えば、相同なマウス配列の代わりにヒトの重鎖および軽鎖の定常ドメインについてのコード配列の置換（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３６８，８１２−１３（１９９４））によってか、または非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列のすべてまたは一部の配列をコードする免疫グロブリンへの共有結合的な連結によって改変され得る。このような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常領域に置換され得るか、または本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインに置換され得、キメラの二価抗体を作製する。
【０３３１】
（ヒト化抗体）
本発明のタンパク質抗原に対して指向される抗体は、さらにヒト化抗体またはヒト抗体を含み得る。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対するヒトによる免疫応答を引き起こすことなく、ヒトへの投与に適切である。抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列）であり、それらは主にヒト免疫グロブリンの配列から構成され、そして非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含む。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列に対してげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を置換することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従って達成され得る。（米国特許第５，２２５，５３９号もまた参照のこと。）いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖ骨格（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ）残基は、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエントの抗体においても、移入されたＣＤＲまたは骨格配列においても見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および代表的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含む。これらの領域内で、すべてのまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、そしてすべてまたは実質的にすべての骨格領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、代表的には、ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む（Ｊｏｎｅｓら、１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２））。
【０３３２】
（ヒト抗体）
完全なヒト抗体とは、ＣＤＲを含む軽鎖および重鎖の両方の配列全体がヒト遺伝子から本質的に生じる抗体分子をいう。このような抗体を、「ヒト抗体」、または「完全なヒト抗体」と本明細書中で呼ぶ。ヒトモノクローナル抗体は、トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術によって調製され得る；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，第７７−９６頁を参照のこと）。ヒトモノクローナル抗体は、本発明の実施において使用され得、そしてヒトハイブリドーマの使用によってか（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロでのエプスタイン−バーウイルスを用いたヒトＢ細胞の形質転換によって（Ｃｏｌｅら、１９８５：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，第７７−９６頁を参照のこと）産生され得る。
【０３３３】
さらに、ヒト抗体はまた、さらなる技術（ファージディスプレイライブラリー（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））を含む）を使用して産生され得る。同様に、ヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物（例えば、内因性免疫グロブリン遺伝子が、部分的または完全に不活化されているマウス）に導入することによって、ヒト抗体は作製され得る。チャレンジの際にヒト抗体の産生が観察され、このことはすべての点（遺伝子再配列、アセンブリー、および抗体レパートリーを含む）でヒトにおいて観察されたことに密接に類似する。このアプローチは、例えば、以下に記載される：米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号、そしてＭａｒｋｓら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０、７７９−７８３（１９９２））；Ｌｏｎｂｅｒｇら（Ｎａｔｕｒｅ  ３６８  ８５６−８５９（１９９４））；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ  ３６８、８１２−１３（１９９４））；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４、８４５−５１（１９９６））；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ（Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １４、８２６（１９９６））；ならびにＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３  ６５−９３（１９９５））。
【０３３４】
ヒト抗体は、抗原によるチャレンジに応答する動物の内因性抗体よりも完全なヒト抗体を産生するように改変されたトランスジェニック非ヒト動物を使用して、さらに産生され得る。（ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０２６０２を参照のこと。）非ヒト宿主における重鎖免疫グロブリンおよび軽鎖免疫グロブリンをコードする内因性遺伝子は、無能力にされ、そしてヒトの重鎖および軽鎖の免疫グロブリンをコードする活性な座位が、宿主のゲノムに挿入される。例えば、不可欠なヒトＤＮＡセグメントを含む酵母人工染色体を使用して、ヒト遺伝子は組み込まれる。次いで、すべての所望の改変を提供する動物を、完全な改変の相補体よりもより少ない改変の相補体を含む中間トランスジェニック動物を交配することによって子孫として得る。このような非ヒト動物の好ましい実施形態は、マウスであり、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／３３７３５およびＷＯ９６／３４０９６に開示されるようにＸｅｎｏｍｏｕｓｅＴＭと呼ばれる。この動物は、完全なヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。目的の免疫原での免疫後の動物から（例えば、ポリクローナル抗体の調製物として）、あるいは動物由来の不死化されたＢ細胞（例えば、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ）から、抗体を直接得ることが可能である。さらに、ヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子は、抗体を直接得るために回収および発現され得るか、または抗体のアナログ（例えば、単鎖Ｆｖ分子）を得るために、さらに改変され得る。
【０３３５】
内因性免疫グロブリン重鎖の発現を欠く非ヒト宿主（マウスとして例示される）を作製するための方法の例は、米国特許第５，９３９，５９８号に開示される。それを、以下の工程を包含する方法によって得ることが可能である：座位の再配列を防ぎ、そして再配列された免疫グロブリン重鎖座位の転写物の形成、および選択マーカーをコードする遺伝子を含む標的化ベクターによってもたらされる欠失を防ぐために、胚幹細胞における少なくとも１つの内因性重鎖座位由来のＪセグメント遺伝子を欠失する工程；およびトランスジェニックマウス（その体細胞および生殖細胞は、選択マーカーをコードする遺伝子を含む）を、胚幹細胞から作製する工程。
【０３３６】
目的の抗体（例えば、ヒト抗体）を産生する方法は、米国特許第５，９１６，７７１号に開示される。それは以下の工程を包含する：重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、培養中の１つの哺乳動物宿主細胞に導入する工程、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、別の哺乳動物宿主細胞に導入する工程、およびハイブリッド細胞を形成するために２つの細胞を融合する工程。ハイブリッド細胞は、重鎖および軽鎖を含む抗体を発現する。
【０３３７】
この手順に関するさらなる改善において、免疫原上の臨床的に関連するエピトープを同定するための方法、および関連するエピトープに高い親和性で免疫特異的に結合する抗体を選択するための相関する方法は、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５３０４９に開示される。
【０３３８】
（Ｆａｂフラグメントおよび単鎖抗体）
本発明に従って、本発明の抗原性タンパク質に特異的な単鎖抗体の産生のための技術が、適用され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。さらに、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築のための方法が適用され得（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１を参照のこと）、タンパク質またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログについての所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂフラグメントの迅速かつ効果的な同定を可能にする。タンパク質抗原に対するイディオタイプを含む抗体フラグメント（（ｉ）抗体分子のペプシン消化によって産生されるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメントのジスルフィド架橋を還元することによって産生されるＦａｂフラグメント；（ｉｉｉ）パパインおよび還元剤を用いる抗体分子の処理によって産生されるＦａｂフラグメント、および（ｉｖ）Ｆｖフラグメントを含むが、これらに限定されない）は、当該分野で公知の技術によって産生され得る。
【０３３９】
（二重特異的抗体）
二重特異的抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体（好ましくはヒトモノクローナル抗体またはヒト化されたモノクローナル抗体）である。この場合において、結合特異性の１つは、本発明の抗原性タンパク質に対してである。第２の結合標的は、任意の他の抗原であり、そして有利には細胞表面タンパク質またはレセプターもしくはレセプターサブユニットである。
【０３４０】
二重特異的抗体を作製する方法は、当該分野において公知である。伝統的に、二重特異的抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリンの重鎖／軽鎖の対の同時発現に基づき、ここで２つの重鎖は異なる特異性を有する（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリンの重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせに起因して、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、このうち１つのみが正確な二重特異的構造を有する。この正確な分子の精製は、通常アフィニティークロマトグラフィー工程によって達成される。同様の手順は、１９９３年５月１３日公開のＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１  ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０：３６５５−３６５９において開示される。
【０３４１】
所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。この融合物は、好ましくは、免疫グロブリン重鎖定常ドメインを有し、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも部分を含む。融合物の少なくとも１つに存在する軽鎖結合のために必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体、および所望の場合、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、そして適切な宿主生物に同時トランスフェクトされる。二重特異的抗体の作製のさらなる詳細は、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
【０３４２】
ＷＯ９６／２７０１１に記載される別のアプローチに従って、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーのパーセンテージを最大化するために操作され得る。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法において、第１の抗体分子の界面からの１つ以上の小さなアミノ酸側鎖は、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置換される。大きな側鎖と同一または同様のサイズの代償的な「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖を小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置換することによって、第２の抗体分子の界面上に生成される。このことは、ホモダイマーのような他の不必要な最終生成物よりも、ヘテロダイマーの収量を増加させるための機構を提供する。
【０３４３】
二重特異的抗体は、全長抗体または抗体フラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異的抗体）として調製され得る。抗体フラグメントから二重特異的抗体を生成するための技術は、文献において記載される。例えば、二重特異的抗体は、化学結合を使用して調製され得る。Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１（１９８５）は、インタクトな抗体がタンパク分解的に切断されてＦ（ａｂ’）２フラグメントを生成する手順を記載する。これらのフラグメントは、隣接するジチオールを安定化し、そして分子間ジスルフィド形成を阻止するために、ジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元される。次いで、生成されたＦａｂ’フラグメントは、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つは、メルカプトエチルアミンでの還元によってＦａｂ’−チオールに再変換され、そして等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて二重特異的抗体を形成する。生成された二重特異的抗体は、酵素の選択的固定化のための薬剤として使用され得る。
【０３４４】
さらに、Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収され得、そして化学的にカップリングされて二重特異的抗体を形成する。Ｓｈａｌａｂｙら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５（１９９２）は、完全にヒト化された二重特異的抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成を記載する。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別々に分泌され、そしてインビトロの指向性化学的カップリングに供され、二重特異的抗体を形成する。従って、形成された二重特異的抗体は、ＥｒｂＢ２レセプターを過剰発現する細胞および正常なヒトＴ細胞に結合し得、そしてヒト胸部腫瘍標的に対するヒト細胞傷害性リンパ球の溶解性活性を誘因し得る。
【０３４５】
組換え細胞培養物から直接的に二重特異的抗体フラグメントを作製し、そして単離するための種々の技術がまた、記載されてきた。例えば、二重特異的抗体は、ロイシンジッパーを使用して産生される。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドは、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合された。抗体ホモダイマーは、ヒンジ領域で還元されてモノマーを形成し、次いで再酸化されて抗体ヘテロダイマーを形成した。この方法はまた、抗体ホモダイマーの産生のために使用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）に記載される「ディアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）」技術は、二重特異的抗体フラグメントを作製するための代替的な機構を提供した。このフラグメントは、短すぎて同じ鎖上の２つのドメインの間で対形成できないリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。従って、１つのフラグメントのＶＨドメインおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬドメインおよびＶＨドメインと対になるように強制され、これによって２つの抗原結合部位を形成する。単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用によって二重特異的抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーもまた、報告されてきた。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
【０３４６】
２より多くの結合価を有する抗体が意図される。例えば、三重特異的抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０３４７】
例示的な二重特異的抗体は、２つの異なるエピトープに結合し得、このうち少なくとも１つは、本発明のタンパク質抗原に起源を有する。あるいは、免疫グロブリン分子の抗抗原性アームは、Ｔ細胞レセプター分子のような白血球（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８、もしくはＢ７）、またはＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））上の標的化分子に結合するアームに、特定の抗原を発現する細胞に対する細胞の防御機構に焦点を合わせるように結合され得る。二重特異的抗体はまた、特定の抗原を発現する細胞に対する細胞傷害性因子に指向するように使用され得る。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害性因子または放射性核種キレーター（例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡ、またはＴＥＴＡ）に結合するアームを保有する。目的の別の二重特異的抗体は、本明細書中に記載されるタンパク質抗原に結合し、そしてさらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
【０３４８】
（ヘテロ結合体抗体）
ヘテロ結合体抗体はまた、本発明の範囲内である。ヘテロ結合体抗体は、２つの共有結合した抗体からなる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を不必要な細胞に標的化するために（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の処置のために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９）提案されてきた。この抗体（架橋剤を含む抗体を含む）は、インビトロで、合成タンパク質化学において公知の方法を使用して調製され得ることが意図される。例えば、免疫毒素は、ジスルフィド交換反応の使用またはチオエーテル結合の形成によって構築され得る。この目的のための適切な試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば米国特許第４，６７６，９８０号において開示される試薬が挙げられる。
【０３４９】
（エフェクター機能操作）
本発明の抗体を、エフェクター機能について、例えば癌の処置における抗体の効力を増大するように改変することが望まれ得る。例えば、システイン残基は、Ｆｃ領域に導入され得、これによってこの領域における鎖間ジスルフィド結合の形成を可能にする。このように作製されるこのホモダイマー抗体は、改良されたインターナリゼーション能力および／または増加した補体媒介細胞死滅、ならびに抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を有し得る。Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと。増大した抗腫瘍活性を有するホモダイマー抗体はまた、Ｗｏｌｆｆら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されるヘテロ二官能性架橋剤を使用して調製され得る。あるいは、二重のＦｃ領域を有する抗体は操作され得、そしてこれによって増大した補体溶解およびＡＤＣＣ能力を有し得る。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと。
【０３５０】
（免疫結合体）
本発明はまた、細胞傷害性の薬剤（例えば、化学療法剤）に結合体化した抗体、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、または動物起源の酵素学的に活性な毒素、あるいはそれらのフラグメント）に結合化した抗体、または放射性同位体に結合体化した抗体（すなわち、放射性結合体）を含む免疫結合体に関する。
【０３５１】
このような免疫接合体の作製において有用な化学療法剤は、上記に記載される。使用され得る酵素学的に活性な毒素およびそれらのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、α−サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａインヒビター、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓインヒビター、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎ）が挙げられる。種々の放射性核種は、放射性結合体化抗体の作製のために利用可能である。その例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、および１８６Ｒｅが挙げられる。
【０３５２】
抗体と細胞傷害性因子との結合体は、種々の二官能性タンパク質結合因子（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ）（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、ジメチルアジピミデート  ＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ））、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６−ジイソシアネート）、およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を使用して作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製され得る。炭素−１４−標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体への結合のための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
【０３５３】
別の実施形態において、腫瘍の前標的化における利用のために、この抗体は、「レセプター」（例えば、ストレプトアビジン）に結合され得、ここで抗体−レセプター結合体は患者に投与され、続いて除去剤を使用して結合していない結合体が循環から除去され、次いで、次に細胞傷害性因子に結合体化させた「リガンド」（例えば、アビジン）が投与される。
【０３５４】
１つの実施形態において、所望の特異性を保有する抗体のスクリーニングのための方法は、当該分野内で公知の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および他の免疫学的に媒介される技術を含むが、これに限定されない。特定の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質の特定のドメインに対して特異的である抗体の選択は、このようなドメインを所有しているＮＯＶＸタンパク質のフラグメントに結合するハイブリドーマの生成により容易にされる。このように、ＮＯＶＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ内の所望のドメインについて特異的である抗体がまた、本願明細書において提供される。
【０３５５】
抗ＮＯＶＸ抗体は、ＮＯＶＸタンパク質の局在化および／または定量に関する当該分野で公知の方法において用いられ得る（例えば、適切な生理学的なサンプル内のＮＯＶＸタンパク質のレベルを測定する際の使用のために、診断的方法における使用のために、タンパク質の画像化における使用のために、など）。所定の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに対する抗体（抗体由来の結合ドメインを含む）は、薬理学的に活性な化合物（本明細書中、以降において「治療剤」）として利用される。
【０３５６】
抗ＮＯＶＸ抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準技術（例えば、親和性クロマトグラフィまたは免疫沈降）によって、ＮＯＶＸポリペプチドを単離するために用いられ得る。抗ＮＯＶＸ抗体は、細胞からの天然のＮＯＶＸポリペプチドの精製、そして宿主細胞において発現される組換え的に産生されたＮＯＶＸポリペプチドの精製を容易にし得る。さらに、抗ＮＯＶＸ抗体が、（例えば、細胞溶解物または細胞上清において）ＮＯＶＸタンパク質を検出するために用いられ、ＮＯＶＸタンパク質の発現の量およびパターンを評価し得る。抗ＮＯＶＸ抗体は、例えば、所定の処置レジメンの有効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として組織におけるタンパク質レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物質に連結する（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易にされ得る。検出可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光物質の例としては、ルミノールが挙げられる；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；そして、適切な放射性物質の例としては１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０３５７】
（ＮＯＶＸ組換え発現ベクターおよび宿主細胞）
本発明の別の局面は、ＮＯＶＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログ、もしくはホモログをコードする核酸を含むベクター、好ましくは発現ベクターに関する。本明細書中で使用される場合、用語「ベクター」は、これが接続された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。ベクターの１つの型は「プラスミド」であり、これはさらなるＤＮＡセグメントが連結し得る環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。ベクターの別の型はウイルス性ベクターであり、ここでさらなるＤＮＡセグメントはこのウイルス性ゲノムに連結され得る。特定のベクターは、導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入される際に宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そしてこれによって宿主のゲノムと同調して複製される。さらに、特定のベクターは、作動可能に連結される遺伝子の発現を指向し得る。このようなベクターは、本明細書中で「発現ベクター」といわれる。一般に、組換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、しばしばプラスミドの形態である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるため、交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価な機能を果たすウイルス性ベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス）のような発現ベクターのこのような他の形態を含むことを意図する。
【０３５８】
本発明の組換え発現ベクターは、本発明の核酸を、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態で含み、これはこの組換え発現ベクターが、発現のために使用される宿主細胞に基いて選択される１つ以上の調節配列（これは発現される核酸配列に作動可能に連結される）を含むこと意味する。組換え発現ベクターにおいて、「作動可能に連結される」とは、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列の発現を（例えば、このベクターが宿主細胞に導入される場合、インビトロの転写／翻訳系または宿主細胞において）可能にするような様式で調節配列に連結されることを意味することを意図する。
【０３５９】
用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指向する配列、および特定の宿主細胞のみにおいてヌクレオチド配列の発現を指向する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計が形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のタンパク質の発現のレベルなどのような因子に依存し得ることは当業者に理解される。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され、それにより、本明細書に記載されるような核酸によりコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク質または融合ペプチドを含む）（例えば、ＮＯＶＸタンパク質、ＮＯＶＸタンパク質の変異形態、融合タンパク質など）を生成し得る。
【０３６０】
本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、ＮＯＶＸタンパク質の発現のために設計され得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅｌ、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）においてさらに考察される。あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリメラーゼを用いて、インビトロで転写および翻訳され得る。
【０３６１】
原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または非融合タンパク質のいずれかの発現を指向する構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターを含むベクターを用いて、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ．ｃｏｌｉにおいて実行される。融合ベクターは、そこにコードされるタンパク質に、通常、組換えタンパク質のアミノ末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、以下の３つの目的のために役立つ：（ｉ）組換えタンパク質の発現を増加させること；（ｉｉ）組換えタンパク質の溶解度を増加させること；および（ｉｉｉ）親和性精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の精製の際に補助すること。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分解性切断部位が、融合部分の結合部に導入され、そして融合タンパク質の精製の後に、組換えタンパク質が組換えタンパク質の融合部分から分離されることを可能にする。このような酵素、およびその同族の認識配列としては、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナーゼが挙げられる。代表的な融合発現ベクターとしては、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを、それぞれ、標的の組換えタンパク質に融合するｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｉｎｃ；Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられる。
【０３６２】
適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例としては、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ  ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ  １１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げられる。
【０３６３】
Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラテジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力が損なわれた宿主細菌中でタンパク質を発現させることである。例えば、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ  ＩＮ  ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ  １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラテジーは、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用されるように、発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：２１１１−２１１８を参照のこと）。本発明の核酸配列のこのような変更は、標準的なＤＮＡ合成技術によって実行され得る。
【０３６４】
別の実施形態において、ＮＯＶＸ発現ベクターは、酵母発現ベクターである。酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ．ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：２２９−２３４）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌｌ  ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９８７）Ｇｅｎｅ  ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙げられる。
【０３６５】
あるいは、ＮＯＶＸは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞中で発現され得る。培養された昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質発現のために利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２１５６−２１６５）およびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １７０：３１−３９）が挙げられる。
【０３６６】
なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ  ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ  Ｊ  ６：１８７−１９５）が挙げられる。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のための他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照のこと。
【０３６７】
別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型（例えば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）中で優先的に核酸の発現を指向し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切な組織特異的プロモーターの非限定的な例としては、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１：２６８−２７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３：２３５−２７５）、Ｔ細胞レセプターの特定のプロモーター（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ．８：７２９−７３３）および免疫グロブリンのプロモーター（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７２９−７４０；ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ  ３３：７４１−７４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：５４７３−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：９１２−９１６）、および乳腺特異的プロモーター（例えば、ミルク乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公開第２６４，１６６号）が挙げられる。発生的に調節されるプロモーターもまた含まれる（例えば、マウスホックス（ｈｏｘ）プロモーター（ＫｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３７４−３７９）およびα−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．３：５３７−５４６）。
【０３６８】
本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分子は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡに対してアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（ＤＮＡ分子の転写による）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される。種々の細胞型におけるアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現を指向する、アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結される調節配列が選択され得る。例えば、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または細胞型特異的発現を指向する、ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー、または調節配列が選択され得る。アンチセンス発現ベクターは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態であり得、ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、その活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺伝子を使用する遺伝子発現の調節の議論については、例えば、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＲＮＡ  ａｓ  ａ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔｏｏｌ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅｔｉｃ  ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。
【０３６９】
本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能に使用される。このような用語は、特定の対象の細胞をいうのみでなく、そのような細胞の子孫または潜在的な子孫をいうことが理解される。変異または環境的影響のいずれかに起因して、特定の改変は次の世代において存在し得るので、このような子孫は、実際、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中で使用されるような用語の範囲内に含まれる。
【０３７０】
宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母または哺乳動物細胞（例えば、ヒトチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣＯＳ細胞）で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
【０３７１】
ベクターＤＮＡは、従来的な形質転換またはトランスフェクション技術を介して原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための当該分野で認識される種々の技術をいうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、またはエレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され得る。
【０３７２】
哺乳動物細胞の安定なトランスフェクションについては、使用される発現ベクターおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来ＤＮＡをそのゲノム中に組み込み得ることが知られている。これらの組み込み体を同定および選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。種々の選択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレキセート）に対する耐性を付与するマーカーが含まれる。選択マーカーをコードする核酸は、ＮＯＶＸをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入され得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入された核酸で安定にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マーカー遺伝子を組み込んだ細胞は生存するが、他の細胞は死滅する）。
【０３７３】
本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物宿主細胞および真核生物宿主細胞）は、ＮＯＶＸタンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得る。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、ＮＯＶＸタンパク質を産生するための方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＮＯＶＸタンパク質が産生されるような適切な培地中で、本発明の宿主細胞（ここに、ＮＯＶＸタンパク質をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を培養する工程を包含する。別の実施形態において、この方法はさらに、培地または宿主細胞からＮＯＶＸタンパク質を単離する工程を包含する。
【０３７４】
（トランスジェニックＮＯＶＸ動物）
本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使用され得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、ＮＯＶＸタンパク質コード配列が導入された、受精した卵母細胞または胚性幹細胞である。次いで、このような宿主細胞は、非ヒトトランスジェニック動物（ここで外因性のＮＯＶＸ配列が、それらのゲノムに導入される）または相同組換え動物（ここで内因性のＮＯＶＸ配列が変更されている）を作製するために使用され得る。このような動物は、ＮＯＶＸタンパク質の機能および／または活性を研究するため、ならびにＮＯＶＸタンパク質の活性のモジュレーターを同定および／または評価するために有用である。本明細書中で使用される場合、「トランスジェニック動物」とは、非ヒト動物、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは、ラットまたはマウスのような齧歯動物であり、ここでこれらの動物の１つ以上の細胞は、導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物の他の例には、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などを含む。導入遺伝子は、細胞のゲノムに組み込まれ（この細胞からトランスジェニック動物が発生する）、そして成熟動物のゲノムに残存し、それによって、このトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコードされる遺伝子産物の発現を指向する、外因性のＤＮＡである。本明細書中で使用される場合、「相同組換え動物」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物、より好ましくはマウスであり、ここで、内因性ＮＯＶＸ遺伝子は、動物の発生の前に、この内因性の遺伝子と、動物の細胞（例えば、動物の胚細胞）に導入された外因性ＤＮＡ分子との間の相同組換えによって、変更されている。
【０３７５】
本発明のトランスジェニック動物は、ＮＯＶＸをコードする核酸を、受精した卵母細胞の雄性前核に導入し（例えば、マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって）、そしてこの卵母細胞を偽妊娠雌性フォスター動物（ｆｏｓｔｅｒ  ａｎｉｍａｌ）中で発生させることによって作製され得る。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１のヒトＮＯＶＸ  ｃＤＮＡ配列は、非ヒト動物のゲノムに導入遺伝子として導入され得る。あるいは、ヒトＮＯＶＸ遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスＮＯＶＸ遺伝子）は、ヒトＮＯＶＸ  ｃＤＮＡに対するハイブリダイゼーションに基づいて単離され得（上述にさらに記載される）、そして導入遺伝子として使用され得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた導入遺伝子中に含まれ、その導入遺伝子の発現の効率を増大させ得る。組織特異的調節配列（単数または複数）は、特定の細胞に対して、ＮＯＶＸタンパク質の発現を指向するために、ＮＯＶＸ導入遺伝子に作動可能に連結される。胚の操作およびマイクロインジェクションを介するトランスジェニック動物（特に、マウスのような動物）を生成するための方法は、当該分野で従来的になっており、そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号；同第４，８７０，００９号；および同第４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａｎ  １９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩＮＧ  ＴＨＥ  ＭＯＵＳＥ  ＥＭＢＲＹＯ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。同様の方法は、他のトランスジェニック動物の産生のために使用される。トランスジェニック初代動物は、そのゲノムにおけるＮＯＶＸ導入遺伝子の存在および／またはその動物の組織または細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの発現に基づいて同定され得る。次いで、トランスジェニック初代動物は、導入遺伝子を有するさらなる動物を繁殖させるために使用され得る。さらに、ＮＯＶＸタンパク質をコードする導入遺伝子を有するトランスジェニック動物は、さらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動物へと繁殖され得る。
【０３７６】
相同組換え動物を作製するために、欠失、付加、または置換が導入されて、それによってＮＯＶＸ遺伝子が変更（例えば、機能的に破壊）されている、ＮＯＶＸ遺伝子の少なくとも一部を含むベクターを調製する。ＮＯＶＸ遺伝子は、ヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１のｃＤＮＡ）であり得るが、より好ましくは、ヒトＮＯＶＸ遺伝子の非ヒトホモログである。例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１のヒトＮＯＶＸ遺伝子のマウスホモログは、マウスゲノムにおいて内因性ＮＯＶＸ遺伝子を変更するのに適切な相同組換えベクターを構築するために使用され得る。１つの実施形態において、そのベクターは、相同組換えに際して、内因性ＮＯＶＸ遺伝子が、機能的に破壊される（すなわち、機能的タンパク質をもはやコードしない；「ノックアウト」ベクターともいわれる）ように設計される。
【０３７７】
あるいは、このベクターは、相同組換えの際に、内因性ＮＯＶＸ遺伝子が変異されるか、あるいはさもなければ、変更されるが、なお機能性タンパク質をコードするように設計される（例えば、上流の調節領域を変更して、それによって内因性ＮＯＶＸタンパク質の発現を変更し得る）。相同組換えベクターにおいて、ＮＯＶＸ遺伝子の変更された部分は、ＮＯＶＸ遺伝子のさらなる核酸によって、その５’末端および３’末端で隣接され、相同組換えが、ベクターによって運ばれる外因性ＮＯＶＸ遺伝子と胚幹細胞中の内因性ＮＯＶＸ遺伝子との間で起こることを可能にする。さらなる隣接するＮＯＶＸ核酸は、内因性遺伝子との首尾よい相同組換えに十分な長さである。代表的に、数キロベースの隣接するＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方）が、ベクターに含まれる。例えば、相同組換えベクターの記載について、Ｔｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ  ５１：５０３を参照のこと。このベクターは、胚幹細胞株に導入され（例えば、エレクトロポレーションによって）、この導入されたＮＯＶＸ遺伝子が内因性ＮＯＶＸ遺伝子と相同組換えされた細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９９２）Ｃｅｌｌ  ６９：９１５を参照のこと）。
【０３７８】
次いで、この選択された細胞を、動物（例えば、マウス）の胚盤胞へ注入して、凝集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９８７）のＴＥＲＡＴＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡＳ  ＡＮＤ  ＥＭＢＲＹＯＮＩＣ  ＳＴＥＭ  ＣＥＬＬＳ：Ａ  ＰＲＡＣＴＩＣＡＬ  ＡＰＰＲＯＡＣＨ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｄ  １１３頁〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚を、適切な偽妊娠雌性フォスター動物に移植し得、そしてこの胚を、一定期間置く。それらの生殖細胞中に相同組換えＤＮＡを保有する子孫を使用して、動物を繁殖し得、ここで、この動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達によって、この相同組換えＤＮＡを含む。相同的組換えベクターおよび相同的組換え動物を構築するための方法が、さらに以下に記載される；Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開番号：ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；およびＷＯ９３／０４１６９。
【０３７９】
別の実施形態において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含む、非ヒトトランスジェニック動物が産生され得る。このような系の１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏら、１９９２、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：１３５１−１３５５を参照のこと）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発現を調節するために使用される場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が、必要となる。このような動物は、例えば、２種のトランスジェニック動物（一方は選択されたタンパク質をコードした導入遺伝子を含み、他方はリコンビナーゼをコードした導入遺伝子を含む）を交配することによる、「二重の」トランスジェニック動物の構築によって提供され得る。
【０３８０】
本明細書中に記載されるトランスジェニック非ヒト動物のクローンがまた、Ｗｉｌｍｕｔら、１９９７、Ｎａｔｕｒｅ  ３８５：８１０−８１３に記載される方法に従って、産生され得る。簡単には、トランスジェニック動物由来の細胞（例えば、体細胞）を、単離および誘導し、増殖サイクルから出し、そしてＧ０期に入らせ得る。次いで、この静止細胞を、例えば、電気パルスの使用により、静止細胞が単離される同種動物由来の、除核された卵母細胞へ融合し得る。次いで、この再構築された卵母細胞を培養し、これにより、これは桑実胚または未分化胚芽細胞に発達し、次いで、偽妊娠雌性フォスター動物に移入される。この雌性フォスター動物の産生子孫は、この細胞（例えば、体細胞）が単離される動物のクローンである。
【０３８１】
（薬学的組成物）
本発明のＮＯＶＸ核酸分子、ＮＯＶＸタンパク質、および抗ＮＯＶＸ抗体（これはまた、本明細書中で「活性化合物」といわれる）、ならびにそれらの誘導体、フラグメント、アナログ、およびホモログが、投与に適した薬学的組成物に組み込まれ得る。このような組成物は、代表的に、核酸分子、タンパク質または抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に適合した、任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤（ｄｅｌａｙｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。適切なキャリアは、当該分野における標準的な参考書である、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版（本明細書中で参考として援用される）に記載される。このようなキャリアまたは賦形剤の好ましい例としては、水、生理食塩水、フィンガー溶液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）はまた、使用され得る。薬学的に活性な物質に対する、このような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。この活性化合物と不適合性である任意の従来の媒体または薬剤の範囲を除いて、組成物におけるその使用は、企図される。補助的な活性化合物はまた、この組成物に組み込まれ得る。
【０３８２】
本発明の薬学的組成物は、その意図される投与の経路と適合可能に処方される。投与経路の例としては、非経口投与（例えば、静脈内、皮内、皮下）、経口投与（例えば、吸入）、経皮的投与（すなわち、局所的）、経粘膜投与、および直腸投与が挙げられる。非経口、皮内、または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液としては、以下の成分が挙げられ得る：滅菌賦形剤（注射のための水、生理食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌性剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝液（例えば、アセテート、シトラートまたはホスフェート）；および張度の調整のための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウム）を用いて調整され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数用量バイアルに封入され得る。
【０３８３】
注射使用に適した薬学的組成物は、滅菌の水溶液（ここで、水溶性）または分散液および滅菌注射可能な溶液または分散液の即席調製のための滅菌粉末を含む。静脈内投与について、適切なキャリアとしては、生理食塩水、静菌性水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）またはリン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は、滅菌性でなくてはならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動的であるべきである。これは、製造および保存の条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されなくてはならない。このキャリアは、例えば、以下を含む溶媒または分散媒体であり得る：例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれらの適切な混合物。適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散に関しては、要求される粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。微生物の作用の予防は、種々の抗菌および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場合、組成物中に等張剤（例えば、糖、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、アルミニウムモノステアレートおよびゼラチン）を組成物に含ませることによってもたらされ得る。
【０３８４】
滅菌注射可能溶液は、必要量のこの活性化合物（例えば、ＮＯＶＸタンパク質あるいは抗ＮＯＶＸ抗体）を、適切な溶媒中に、上記で列挙される成分の１つまたは組み合わせと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することによって調製され得る。一般的に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒体および上記で列挙される成分から必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクル中へ組み込むことによって調製される。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合において、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、活性成分および予め滅菌濾過されたその溶液からの任意のさらなる所望の成分の粉末を得る。
【０３８５】
経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へ圧縮され得る。経口治療投与の目的のために、この活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、そして錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、マウスウォッシュ（ｍｏｕｔｈｗａｓｈ）としての使用のために流体キャリアを使用して調製され得、ここで、この流体キャリア中のこの化合物は、経口的に適用され、そして素早く動かされ（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料が、この組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、以下のいずれかの成分または同様の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムトラガカントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸）、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチ；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０３８６】
吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エアロゾルスプレーの形態で送達される。
【０３８７】
全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または経皮投与について、浸透されるバリアに対して適切な浸透剤が、処方において使用される。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、経粘膜投与としては、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用を通じて達成され得る。経皮投与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤、軟膏、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０３８８】
この化合物はまた、直腸送達のための坐剤の形態（例えば、ココアバターおよび他のグリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）または保持浣腸の形態で調製され得る。
【０３８９】
１つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な排出に対してこの化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような処方物の調製のための方法は、当業者には明らかである。これらの材料はまた、Ａｌｚａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｎｏｖａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能である。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を含む、感染させた細胞へ標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるような、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０３９０】
投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物または非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される投薬単位形態は、処置される被験体のための単位投薬量として適切な、物理的に個々の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して、所望の治療的効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位形態についての詳細は、この活性化合物の固有の特性、および達成される特定の治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合する当該分野に固有の制限によって決定されるか、あるいはこれらに直接依存する。
【０３９１】
本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとして使用され得る。遺伝子治療ベクターは、被験体へ、例えば、静脈内注射、局所投与（例えば、米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）または定位注射（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．９１：３０５４−３０５７を参照のこと）によって送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能な希釈剤中の遺伝子治療ベクターを含み得るか、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれる徐放性マトリックスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターが、組換え細胞からインタクトで産生され得（例えば、レトロウイルスベクター）、この薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１以上の細胞を含み得る。
【０３９２】
薬学的組成物は、投与のための使用説明書とともに、容器、包装、またはディスペンサーに含まれ得る。
【０３９３】
（スクリーニング方法および検出方法）
本発明の単離された核酸分子は、以下にさらに記載されるように、ＮＯＶＸタンパク質を発現させるため（例えば、遺伝子治療適用において宿主細胞における組換え発現ベクターを介して）、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ（例えば、生物学的サンプルにおける）またはＮＯＶＸ遺伝子における遺伝的損傷を検出するため、およびＮＯＶＸ活性を調節するために使用され得る。さらに、ＮＯＶＸタンパク質は、ＮＯＶＸタンパク質の活性または発現を調節する薬物または化合物をスクリーニングするため、ならびにＮＯＶＸタンパク質の不十分かもしくは過剰な産生またはＮＯＶＸ野生型タンパク質と比較して減少された活性もしくは異常な活性を有するＮＯＶＸタンパク質形態の産生によって特徴づけられる障害（例えば、糖尿病（インスリン放出を調節する）；肥満（脂質に結合しかつそれを輸送する）；肥満に関連する代謝障害、代謝症候群Ｘおよび食欲不振、慢性疾患および種々の癌に関連する消耗障害、ならびに感染症（抗菌活性を有する）および種々の異脂肪血症）を処置するために使用され得る。さらに、本発明の抗ＮＯＶＸ抗体は、ＮＯＶＸタンパク質を検出および単離するため、ならびにＮＯＶＸ活性を調節するために使用され得る。なおさらなる局面において、本発明は、ポジティブな様式およびネガティブな様式の両方で、食欲、栄養素の吸収および代謝基質の性質に影響を与えるために、方法において使用され得る。
【０３９４】
本発明は、さらに、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される新規の薬剤および上記される処置のためのそれらの使用に関する。
【０３９５】
（スクリーニングアッセイ）
本発明は、調節因子、すなわち、ＮＯＶＸタンパク質に結合するか、あるいは例えば、ＮＯＶＸタンパク質発現またはＮＯＶＸタンパク質活性に対して刺激効果または阻害効果を有する、候補化合物または候補薬剤、あるいは試験化合物または試験薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣物、低分子または他の薬物）を同定するための方法（本明細書中において「スクリーニングアッセイ」とも称される）を提供する。本発明はまた、本明細書中で記載されるスクリーニングアッセイにおいて同定される化合物を含む。
【０３９６】
１つの実施形態において、本発明は、ＮＯＶＸのタンパク質またはポリペプチド、あるいはその生物学的に活性な部分の膜結合形態に結合するか、またはそれら膜結合形態の活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングするためのアッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナトリアルライブラリー法における任意の多数のアプローチを使用して得られ得、これらのライブラリーには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的にアクセス可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎ）を要する合成ライブラリー法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマーもしくは化合物の低分子ライブラリーに適用可能である。Ｌａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １２：１４５を参照のこと。
【０３９７】
本明細書中で使用される場合、「低分子」とは、約５ｋＤ未満の分子量、最も好ましくは約４ｋＤ未満の分子量を有する組成物をいうように意味される。低分子は、例えば、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣体、糖質、脂質または他の有機分子もしくは無機分子であり得る。化学的および／または生物学的混合物（例えば、真菌、細菌または藻類抽出物）のライブラリーは、当該分野で公知であり、そして本発明のアッセイのいずれかを用いてスクリーニングされ得る。
【０３９８】
分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：２０６１；およびＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３。
【０３９９】
化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １３：４１２〜４２１）、あるいはビーズ上（Ｌａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ  米国特許第５，２３３，４０９号）、プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：６３７８〜６３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：３０１〜３１０；Ｌａｄｎｅｒ、米国特許第５，２３３，４０９号）において示され得る。
【０４００】
１つの実施形態において、アッセイは細胞ベースのアッセイであり、ここで、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上に発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物がＮＯＶＸタンパク質に結合する能力が、決定される。例えば、細胞は、哺乳動物起源または酵母細胞であり得る。この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質に結合する能力の決定は、例えば、その試験化合物を放射性同位体標識または酵素標識とカップリングさせて、その結果、この試験化合物のＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分に対する結合が、複合体におけるその標識化合物を検出することによって決定され得ることによって達成され得る。例えば、試験化合物は、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、または３Ｈで直接的または間接的のいずれかで標識され得、そしてその放射性同位体が、放射線放射の直接の計数によってか、またはシンチレーション計数により、検出され得る。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識され得、そしてこの酵素的標識が、適切な基質の生成物への転換を決定することにより、検出され得る。１つの実施形態において、このアッセイは、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分をその細胞表面上に発現する細胞を、ＮＯＶＸと結合する公知の化合物と接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物に試験化合物を接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分と優先的に結合する能力を決定することを包含する。
【０４０１】
別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、これは、膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を細胞表面上で発現する細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＮＯＶＸまたはその生物学的に活性な部分の活性を調節する能力の決定は、例えば、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合するかまたはＮＯＶＸ標的分子と相互作用する能力を決定することによって、達成され得る。本明細書中において使用する場合には、「標的分子」とは、ＮＯＶＸタンパク質が自然に結合または相互作用する分子であり、例えば、ＮＯＶＸ相互作用タンパク質を発現する細胞表面上の分子、第二の細胞の表面上の分子、細胞外環境中の分子、細胞膜の内部表面と会合する分子、または細胞質分子である。ＮＯＶＸ標的分子は、非ＮＯＶＸ分子あるいは本発明のＮＯＶＸタンパク質またはポリペプチドであり得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸ標的分子は、シグナル伝達経路の構成要素であり、これは、細胞膜を通って細胞内への細胞外シグナル（例えば、化合物が膜結合ＮＯＶＸ分子に結合することにより発生するシグナル）の伝達を促進する。その標的は、例えば、触媒活性を有する第二の細胞内タンパク質、または下流シグナル分子のＮＯＶＸとの会合を容易にするタンパク質であり得る。
【０４０２】
ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合するかまたはＮＯＶＸ標的分子と相互作用する能力の決定は、直接的結合を決定するための上記方法の１つにより、達成され得る。１つの実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合するかまたはＮＯＶＸ標的分子と相互作用する能力の決定は、その標的分子の活性を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その標的の細胞セカンドメッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ２＋、ジアシルグリセロール、ＩＰ３など）の誘導を検出すること、適切な基質への標的の触媒活性／酵素活性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフェラーゼ）をコードする核酸に作動可能に連結されたＮＯＶＸ応答性調節エレメントを含む）の誘導を検出すること、または細胞応答（例えば、細胞生存度、細胞分化、または細胞増殖）を検出することにより、決定され得る。
【０４０３】
なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞アッセイであり、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分と結合する能力を決定する工程を包含する。ＮＯＶＸタンパク質へのこの試験化合物の結合は、上記のように、直接的または間接的にのいずれかで決定され得る。１つのこのような実施形態において、このアッセイは、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＮＯＶＸを結合する公知の化合物に接触させて、アッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＮＯＶＸ、またはその生物学的に活性な部分と優先的に相互作用する能力を決定することを包含する。
【０４０４】
さらに別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工程、ならびにその試験化合物がＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＮＯＶＸの活性を調節する能力の決定は、例えば、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のための上記方法の１つによって決定することにより、達成され得る。代替の実施形態において、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質の活性を調節する能力の決定は、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子をさらに調節する能力を決定することにより、達成され得る。例えば、適切な基質に対するこの標的分子の触媒活性／酵素活性は、上記のように決定され得る。
【０４０５】
なお別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＮＯＶＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を、ＮＯＶＸタンパク質を結合する公知の化合物に接触させてアッセイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここで、この試験化合物がＮＯＶＸタンパク質と相互作用する能力の決定は、ＮＯＶＸタンパク質がＮＯＶＸ標的分子と優先的に結合するか、またはＮＯＶＸ標的分子の活性を優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。
【０４０６】
本発明の無細胞アッセイは、ＮＯＶＸタンパク質の可溶性の形態または膜結合形態の両方の使用に受け入れられる。膜結合形態のＮＯＶＸタンパク質を含む無細胞アッセイの場合には、ＮＯＶＸタンパク質の膜結合形態が溶液中に維持されるように、可溶化剤を利用することが望ましくあり得る。このような可溶化剤の例としては、非イオン性界面活性剤が挙げられ、例えば、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレングリコールエーテル）ｎ（Ｉｓｏｔｒｉｄｅｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ｅｔｈｅｒ）ｎ、Ｎ−ドデシル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−１−ｐｒｏｐａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳ）、または３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐａｎｅ  ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）である。
【０４０７】
本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質またはその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の非複合形態からの複合形態の分離を促進すること、およびそのアッセイに自動化に適用させることが、望ましくあり得る。ＮＯＶＸタンパク質への試験化合物の結合、または候補化合物の存在下および非存在下での、ＮＯＶＸタンパク質の標的分子との相互作用は、これらの反応物を収容するために適切な任意の容器内で、達成され得る。このような容器の例としては、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管が挙げられる。１実施形態において、そのタンパク質の一方または両方がマトリックスに結合することを可能にするドメインを付加する融合タンパク質が、提供され得る。例えば、ＧＳＴ−ＮＯＶＸ融合タンパク質またはＧＳＴ標的融合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着され得、次いでこれらは、試験化合物と合わせられるか、あるいは試験化合物および吸着されない標的タンパク質またはＮＯＶＸタンパク質のいずれかと合わせられ、そしてこの混合物が、複合体形成に導く条件下（例えば、塩およびｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーションに続いて、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄して、結合していないあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックスを固定し、例えば上記のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定する。あるいは、複合体がマトリックスから解離され得、そしてＮＯＶＸタンパク質の結合レベルまたは活性レベルを、標準的な技術を使用して決定し得る。
【０４０８】
タンパク質をマトリックスに固定するための他の技術がまた、本発明のスクリーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、ＮＯＶＸタンパク質またはその標的分子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合体化を利用して、固定され得る。ビオチニル化ＮＯＶＸタンパク質または標的分子は、当該分野において周知の技術を使用して、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得（例えば、ビオチニル化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）、そしてストレプトアビジンで被覆した９６ウェルのプレート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定され得る。あるいは、ＮＯＶＸタンパク質または標的分子と反応性であるが、その標的分子へのＮＯＶＸタンパク質の結合を妨害しない抗体が、そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはＮＯＶＸタンパク質が、抗体の結合体化によってウェル内にトラップされ得る。このような複合体を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記のものに加えて、ＮＯＶＸタンパク質または標的分子と反応性の抗体を使用する、複合体の免疫検出、ならびにＮＯＶＸタンパク質または標的分子に関する酵素活性の検出に依存する、酵素結合アッセイが挙げられる。
【０４０９】
別の実施形態において、ＮＯＶＸタンパク質発現のモジュレーターは、細胞を候補化合物と接触させ、そして細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を決定する方法において同定される。候補化合物の存在下でのＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、候補化合物の非存在下でのＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルと比較される。次いで、候補化合物は、この比較に基づいて、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質発現のモジュレーターとして同定され得る。例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下より、その存在下における方が大きい（すなわち、統計的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の刺激物質として同定される。あるいは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下よりその存在下の方が少ない（統計的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中のＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはタンパク質を検出するために本明細書中に記載の方法によって決定され得る。
【０４１０】
本発明のなお別の局面において、ＮＯＶＸタンパク質は、ツーハイブリッドアッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「ベイトタンパク質」として使用されて（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら、１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら、１９９３  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １４：９２０−９２４；Ｉｗａｂｕｃｈｉら、１９９３  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ８：１６９３−１６９６；およびＢｒｅｎｔ  ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）、ＮＯＶＸに結合するか、またはこれと相互作用し、そしてＮＯＶＸ活性を調節する他のタンパク質（「ＮＯＶＸ結合タンパク質」または「ＮＯＶＸ−ｂｐ」）を同定し得る。このようなＮＯＶＸ結合タンパク質はまた、例えば、ＮＯＶＸ経路の上流または下流エレメントとしてＮＯＶＸタンパク質によるシグナル伝達の増幅に関与するようである。
【０４１１】
ツーハイブリッドシステムは、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインからなる、大部分の転写因子のモジュール的性質に基づく。簡潔には、このアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。一方の構築物においては、ＮＯＶＸをコードする遺伝子が、公知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮＡ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物においては、ＤＮＡ配列のライブラリー由来の、未同定タンパク質（「プレイ」または「サンプル」）をコードするＤＮＡ配列が、公知の転写因子の活性化ドメインをコードする遺伝子に融合される。「ベイト」および「プレイ」タンパク質がインビボで相互作用して、ＮＯＶＸ依存性複合体を形成し得る場合、この転写因子のＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ドメインは、非常に近くにある。近位にあることにより、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子（例えば、ＬａｃＺ）の転写を可能にする。レポーター遺伝子の発現が検出され得、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーが、単離され得、そしてＮＯＶＸと相互作用するタンパク質をコードするクローニングされた遺伝子を得るために使用され得る。
【０４１２】
本発明はさらに、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤および本明細書中に記載されるような処置のためのこの薬剤の使用に関する。
【０４１３】
（検出アッセイ）
本明細書中で同定されるｃＤＮＡ配列の一部分またはフラグメント（および対応する完全な遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で使用され得る。例えば（限定はされない）、これらの配列を使用して、（ｉ）染色体上のそれら各々の遺伝子をマッピングし、それにより遺伝子疾患に遺伝子領域を位置決めし得る：（ｉｉ）微量の生物学的サンプルから個体を同定し得る（組織型決定）；および（ｉｉｉ）生物学的サンプルの法医学的識別を助け得る。これらの適用のうちのいくつかは、以下の節において記載される。
【０４１４】
（染色体マッピング）
一旦遺伝子の配列（または配列の一部分）が単離されると、この配列を用いて染色体上に遺伝子の位置をマッピングし得る。このプロセスは、染色体マッピングとよばれる。従って、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１に示されるＮＯＶＸ配列の一部またはフラグメント、あるいはそのフラグメントはまたは誘導体を用いて、それぞれ、ＮＯＶＸ遺伝子の位置を染色体上にマッピングし得る。ＮＯＶＸ配列を染色体にマッピングすることは、これらの配列を疾患に関連する遺伝子と相関付ける際の重要な第一工程である。
【０４１５】
簡潔には、ＮＯＶＸ遺伝子は、ＮＯＶＸ配列からＰＣＲプライマー（好ましくは、１５〜２５ｂｐの長さ）を調製することにより染色体にマッピングし得る。ＮＯＶＸ配列のコンピューター分析が、ゲノムＤＮＡにおける１つより多いエキソンにまたがらないプライマー（従って、これは、増幅プロセスを複雑にする）を迅速に選択するために使用され得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用され得る。ＮＯＶＸ配列に対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが、増幅されたフラグメントを生じる。
【０４１６】
体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒト細胞およびマウス細胞）を融合することにより調製される。ヒトおよびマウスの細胞のハイブリッドが増殖および分裂するにつれ、それらは、無作為な順序で徐々にヒト染色体を失うが、マウス染色体を維持する。マウス細胞は、それらが特定の酵素を欠いているので増殖できないが、ヒト細胞が増殖できる培地を使用することにより、必要な酵素をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が維持される。種々の培地を使用することによって、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルにおける各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体のいずれかおよびマウス染色体の完全なセットを含み、これにより、個々の遺伝子を特定のヒト染色体にマッピングすることが容易に可能になる（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２０：９１９−９２４を参照のこと）。ヒト染色体のフラグメントのみを含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を伴うヒト染色体を使用することにより生成され得る。
【０４１７】
体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体に特定の配列を割り当てるためには迅速な手順である。１つのサーマルサイクラーを用いて一日に３つ以上の配列が割り当てられ得る。ＮＯＶＸ配列を使用して、オリゴヌクレオチドプライマーを設計することにより、二次位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）が、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて達成され得る。
【０４１８】
中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）をさらに使用して、一工程で正確な染色体位置を提供し得る。染色体スプレッドは、コルセミド（染色体紡錘体を破壊する）のような化学物質により分裂が中期においてブロックされた細胞を使用して行われ得る。この染色体は、トリプシンで短時間処理され得、次いで、ギムザ染色され得る。薄いバンドおよび濃いバンドのパターンが各染色体で発生し、その結果、この染色体は、個々に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基ほどの短さのＤＮＡ配列と共に使用され得る。しかし、１，０００塩基より大きなクローンは、簡単な検出に十分なシグナル強度で、独特の染色体位置に結合する可能性がより高い。好ましくは、１，０００塩基、そしてより好ましくは、２，０００塩基が、妥当な時間量で良好な結果を得るために十分である。この技術の総説については、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ  ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ  ＭＡＮＵＡＬ  ＯＦ  ＢＡＳＩＣ  ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８８）を参照のこと。
【０４１９】
染色体マッピングの試薬は、単一の染色体またはその染色体上の単一部位を印付けするために個々に使用され得るか、または試薬パネルが、複数部位および／または複数染色体を印付けするために使用され得る。実際には、遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、マッピング目的のために好ましい。コード配列は、遺伝子ファミリー内に保存されており、従って、染色体マッピングの間に交叉ハイブリダイゼーションの機会が増大する可能性が高い。
【０４２０】
一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、その配列の染色体上の物理的位置が、遺伝子マップデータと相関され得る。このようなデータは、例えば、ＭｃＫｕｓｉｃｋ，ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ  ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ  ＩＮ  ＭＡＮ（Ｊｏｈｎｓ  Ｈｏｐｋｉｎｓ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｗｅｌｃｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで入手可能）において見い出される。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる遺伝子と疾患との間の関係は、例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ，３２５：７８３−７８７に記載される連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によって同定され得る。
【０４２１】
さらに、ＮＯＶＸ遺伝子と関連する疾患に罹患した個体と、この疾患に罹患していない個体との間のＤＮＡ配列における差異が決定され得る。罹患した個体のいくらかまたは全てにおいて変異が認められるが、非罹患個体のいずれにおいても認められない場合、この変異は、特定の疾患の原因因子である可能性が高い。罹患個体と非罹患個体の比較は、一般に、染色体における構造的変化（例えば、染色体スプレッドから可視できるか、またはそのＤＮＡ配列に基づいたＰＣＲを用いて検出可能な、欠失または転座）を最初に探索する工程を包含する。最終的に、いくらかの個体に由来する遺伝子の完全な配列決定を行って、変異の存在を確認し、かつ多型に由来する変異を区別する。
【０４２２】
（組織型決定（ｔｉｓｓｕｅ  ｔｙｐｉｎｇ））
本発明のＮＯＶＸ配列はまた、わずかな生物学的サンプルから個体を識別するために使用され得る。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の制限酵素で消化され、そして同定のために独特のバンドを生成するためにサザンブロット上でプローブされる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号に記載の「制限フラグメント長多型」）のためのさらなるＤＮＡマーカーとして有用である。
【０４２３】
さらに、本発明の配列を用いて、個体のゲノムの選択された部分について実際の塩基ごとにＤＮＡ配列を決定する代替的技術を提供し得る。従って、本明細書中に記載のＮＯＶＸ配列を用いて、配列の５’末端および３’末端から２つのＰＣＲプライマーを調製し得る。次いで、これらのプライマーを使用して、個体のＤＮＡを増幅し得、引き続いて、配列決定し得る。
【０４２４】
このように調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が、対立遺伝子差異に起因するこのようなＤＮＡ配列の独特のセットを有するので、唯一の個体識別を提供し得る。本発明の配列は、個体由来および組織由来の配列のこのような識別を得るために使用され得る。本発明のＮＯＶＸ配列は、ヒトゲノムの部分を独特に表す。対立遺伝子変異は、これらの配列のコード領域においてある程度生じ、そして非コード領域においてより大きな程度に生じる。個々のヒト間での対立遺伝子変異は、各５００塩基につき約１回の頻度で生じると見積もられる。対立遺伝子変異の多さは、制限フラグメント長多型（ＲＦＬＰ）を含む単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に起因する。
【０４２５】
本明細書中で記載の配列の各々は、ある程度、標準物質（これに対して個体由来のＤＮＡが識別の目的で比較され得る）として使用され得る。より多くの多型が非コード領域で生じるので、個体を区別するために、それほど多くの配列が必要であるわけではない。非コード配列は、おそらく１０〜１，０００個プライマーのパネルを用いてポジティブな個体識別を不自由なく提供し得る。これらのプライマーは、各々が１００塩基の増幅された非コード配列を生じる。推定コード配列（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１における配列）が使用される場合、ポジティブな個体識別に関するプライマーのより適切な数は、５００〜２，０００である。
【０４２６】
（予測医療）
本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）の目的に使用され、これによって個体を予防的に処置する、予測医療の分野に関する。従って、本発明の１つの局面は、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）の場合においては、ＮＯＶＸタンパク質および／または核酸の発現、ならびにＮＯＶＸの活性を決定するための診断アッセイに関し、これによって、個体が異常なＮＯＶＸの発現または活性した疾患または障害に罹患しているかどうか、あるいは障害を発症する危険性があるかどうかを決定する。この障害としては、以下が挙げられる：代謝障害、糖尿病、肥満症、感染症、食欲不振、癌関連悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、ならびに種々の異常脂肪性浮腫（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａｓ）、肥満に関連する代謝障害、Ｘ代謝症候群（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｘ）、ならびに慢性疾患および種々の癌と関連する消耗疾患。本発明はまた、個体が、ＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または活性と関連した障害を発症する危険性があるかどうかを決定するための予後的（または予測的）アッセイを提供する。例えば、ＮＯＶＸの遺伝子における変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイは、予後的または予測的な目的に使用され、これによってＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または生物学的活性によって特徴付けられるかまたはこれらに関連した障害の発病の前に、個体を予防的に処置し得る。
【０４２７】
本発明の別の局面は、個体におけるＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または活性を決定するための方法を提供し、これによって、その個体についての適切な治療薬または予防薬（本明細書において「薬物ゲノム」と呼ばれる）を選択する。薬物ゲノムは、個体の遺伝型（例えば、特定の因子に対して応答する個体の能力を決定するために試験された個体の遺伝型）に基づいて、個体の治療的処置または予防的処置のための因子（例えば、薬物）の選択を可能にする。
【０４２８】
本発明のなお別の局面は、臨床試験におけるＮＯＶＸの発現または活性に対する因子（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。
【０４２９】
これらおよび他の因子は、以下の節でさらに詳細に記載される。
【０４３０】
（診断アッセイ）
生物学的サンプルにおけるＮＯＶＸの存在または非存在を検出するための例示的な方法は、試験被験体から生物学的サンプルを得る工程、およびその生物学的サンプルをＮＯＶＸのタンパク質またはＮＯＶＸタンパク質をコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物もしくは因子とを接触させ、その結果、ＮＯＶＸの存在が、その生物学的サンプルにおいて検出される工程を包含する。ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出するための因子は、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る、標識された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、全長のＮＯＶＸの核酸（例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９および４１の核酸またはそれらの一部）（例えば、少なくとも、１５、３０、５０、１００、２５０もしくは５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであり、ストリンジェントな条件下でＮＯＶＸ  ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと特異的にハイブリダイズするに十分である核酸）であり得る。本発明の診断アッセイにおける使用のための他の適切なプローブは、本明細書において記載されている。
【０４３１】
ＮＯＶＸタンパク質を検出するための因子は、ＮＯＶＸタンパク質に結合し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、ポリクローナルであり得るか、またはより好ましくはモノクローナル抗体であり得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’）２）が使用され得る。用語「標識（された）」とは、プローブまたは抗体に関して、検出可能な物質をそのプローブもしくは抗体にカップリングさせる（すなわち、物理的に連結する）ことによってそのプローブまたは抗体を直接標識すること、ならびに、直接標識された別の試薬との反応性によってそのプローブもしくは抗体を間接的に標識することを包含することが意図される。間接的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにＤＮＡプローブのビオチンを用いた末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、被験体内から単離された、組織、細胞および生物学的流体ならびに被験体に存在する組織、細胞および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を用いて、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡを、生物学的サンプル中で、インビトロおよびインビボで検出し得る。例えば、ＮＯＶＸ  ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＮＯＶＸタンパク質の検出のためのインビトロ技術としては、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。ＮＯＶＸのゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。さらに、ＮＯＶＸタンパク質の検出のためのインビボ技術としては、標識された抗ＮＯＶＸ抗体を被験体に導入することが挙げられる。例えば、その抗体は、放射性マーカーを用いて標識され得る。被験体における放射性マーカーの存在および位置は、標準的な画像化技術によって検出され得る。
【０４３２】
１つの実施形態において、この生物学的サンプルは、その試験被験体由来のタンパク質分子を含む。あるいは、その生物学的サンプルは、その試験被験体由来のｍＲＮＡ分子またはその試験被験体由来のゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ましい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された末梢血白血球サンプルである。
【０４３３】
別の実施形態において、本発明の方法はさらに、コントロール被験体からコントロール生物学的サンプルを得る工程、そのコントロールサンプルを、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物もしくは因子と接触させ、その結果、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在がその生物学的サンプルにおいて検出される工程、およびそのコントロールサンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在と、その試験サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの存在とを比較する工程を包含する。
【０４３４】
本発明はまた、生物学的サンプルにおけるＮＯＶＸの存在を検出するためのキットを包含する。例えば、このキットは、以下を備え得る：生物学的サンプルにおいてＮＯＶＸのタンパク質またはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合物もしくは因子；そのサンプルにおいてＮＯＶＸの量を決定するための手段；およびそのサンプルにおけるＮＯＶＸの量と標準とを比較するための手段。この化合物または因子は、適切な容器内に包装され得る。このキットは、さらに、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸を検出するためにキットを用いるための指示書を備え得る。
【０４３５】
（予後アッセイ）
本明細書において記載された診断方法をさらに利用して、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連した疾患もしくは障害を有するか、またはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例えば、上述の診断アッセイまたは下記のアッセイ）を利用して、ＮＯＶＸのタンパク質、核酸の発現または活性に関連する障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。あるいは、この予後アッセイを利用して、疾患または障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体を同定し得る。従って、本発明は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患もしくは障害を同定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルは、被験体から得られ、そしてＮＯＶＸのタンパク質または核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）が検出され、ここで、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸の存在は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を有するかまたはその発症の危険性を有する被験体についての診断指標である。本明細書において使用される場合「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学的サンプルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サンプル、または組織であり得る。
【０４３６】
さらに、本明細書に記載される予後アッセイを使用して、被験体に因子（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核酸、低分子、または他の薬物候補）を投与してＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を処置し得るか否かを、決定し得る。例えば、このような方法を使用して、被験体が障害のための因子で有効に処置され得るか否かを決定し得る。従って、本発明は、ＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する障害のための因子を用いて、被験体が有効に処置され得るか否かを決定するための方法を提供する。ここで、試験サンプルが得られ、そしてＮＯＶＸのタンパク質または核酸が検出される（例えば、ここで、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸の存在は、この因子が投与されてＮＯＶＸの異常発現または異常活性に関連する障害が処置され得る被験体についての、診断指標である）。
【０４３７】
本発明の方法はまた、ＮＯＶＸ遺伝子における遺伝的損傷を検出し、それによって、その損傷遺伝子を有する被験体が異常な細胞増殖および／または分化によって特徴付けられる障害についての危険性を有するか否かを決定するためにも使用され得る。種々の実施形態において、この方法は、その被験体由来の細胞のサンプルにおいて、ＮＯＶＸタンパク質をコードする遺伝子の統合性に影響を与える少なくとも１つの変更によって特徴付けられる遺伝的損傷の存在または非存在、あるいはＮＯＶＸ遺伝子の誤発現を検出する工程を包含する。例えば、そのような遺伝的損傷は、以下の少なくとも１つの存在を確認することによって検出され得る：（ｉ）ＮＯＶＸ遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；（ｉｉ）ＮＯＶＸ遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；（ｉｉｉ）ＮＯＶＸ遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、（ｉｖ）ＮＯＶＸ遺伝子の染色体再配置；（ｖ）ＮＯＶＸ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変更、（ｖｉ）ＮＯＶＸ遺伝子の異常改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パターンの異常改変）、（ｖｉｉ）ＮＯＶＸ遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、（ｖｉｉｉ）ＮＯＶＸタンパク質の非野生型レベル、（ｉｘ）ＮＯＶＸ遺伝子の対立遺伝子の欠失、ならびに（ｘ）ＮＯＶＸタンパク質の不適切な翻訳後修飾。本明細書において記載されるように、当該分野において、ＮＯＶＸ遺伝子における損傷を検出するために使用され得る、多数の公知のアッセイ技術が存在する。好ましい生物学的サンプルは、従来手段によって被験体から単離された末梢血白血球サンプルである。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプルが使用され得、これには、例えば、頬粘膜細胞が挙げられる。
【０４３８】
特定の実施形態において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ  ＰＣＲ）、あるいは、連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：３６０−３６４を参照のこと）におけるプローブ／プライマーの使用を包含する。後者は、ＮＯＶＸ遺伝子における点変異を検出するために特に有用であり得る（Ａｂｒａｖａｙａら，１９９５  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、患者から細胞のサンプルを収集する工程、核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはその両方）をそのサンプルの細胞から単離する工程、ＮＯＶＸの遺伝子に特異的にハイブリダイズする１つ以上のプライマーとその核酸サンプルとを、ＮＯＶＸ遺伝子（存在する場合）のハイブリダイゼーションおよび増幅が生じるような条件下で接触させる工程、ならびに増幅産物の存在もしくは非存在を検出する工程、またはその増幅産物のサイズを検出する工程およびその長さをコントロールサンプルと比較する工程を包含し得る。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲは、本明細書中に記載される変異を検出するために使用される技術のいずれかとともに予備的増幅工程として使用されることが望ましくあり得ることが予想される。
【０４３９】
代替的な増幅方法としては、以下が挙げられる：当業者に周知な技術を用いた、その増幅された分子の検出の前の、自己維持配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８を参照のこと）、転写増幅系（Ｋｗｏｈら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１１７３−１１７７を参照のこと）、Ｑβレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７を参照のこと）、または他の任意の核酸増幅方法。これらの検出スキームは、核酸分子が非常に極少数で存在する場合に、そのような核酸分子の検出のために特に有用である。
【０４４０】
代替の実施形態において、サンプル細胞由来のＮＯＶＸ遺伝子における変異は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅され（必要に応じて）、１つ以上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長の大きさがゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコントロールＤＮＡとの間のフラグメント長の大きさにおける差異は、そのサンプルＤＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイムの使用（例えば、米国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位の発生または喪失による特異的な変異の存在についてスコア付けし得る。
【０４４１】
他の実施形態において、ＮＯＶＸにおける遺伝子変異は、サンプル核酸およびコントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリゴヌクレオチドプローブを含む高密度アレイにハイブリダイズさせることによって同定され得る。例えば、Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）Ｈｕｍａｎ  Ｍｕｔａｔｉｏｎ  ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：７５３−７５９を参照のこと。例えば、ＮＯＶＸにおける遺伝子変異は、Ｃｒｏｎｉｎら（前出）に記載されるように光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同定され得る。手短には、プローブの第一ハイブリダイゼーションアレイを用いて、サンプルおよびコントロールにおける長いストレッチのＤＮＡにわたって走査し、連続的に重複するプローブの線形アレイを作成することによって、その配列間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程に第二のハイブリダイゼーションアレイが続き、これは、検出される全ての改変体または変異体に相補的な、より小さな特化されたプローブアレイを用いることによる特定の変異の特徴付けを可能にする。各変異アレイは、一方が野生型遺伝子に対して相補的であり、そして他方が変異遺伝子に対して相補的である並行プローブセットから構成される。
【０４４２】
なお別の実施形態において、当該分野で公知の種々の配列決定反応のいずれかを使用して、ＮＯＶＸ遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルＮＯＶＸ配列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって、変異を検出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘｉｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ  ７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｉｃ．ＵＳＡ  ７４：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。診断アッセイを実施する場合、種々の自動化配列決定手順のいずれかを利用し得ることもまた意図される（例えば、Ｎａｅｖｅら（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １９：４４８を参照のこと）。これらには、質量分析法による配列決定法（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３８：１４７−１５９を参照のこと）が挙げられる。
【０４４３】
ＮＯＶＸ遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断剤からの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡもしくはＲＮＡ／ＤＮＡのヘテロ二重鎖におけるミスマッチ塩基を検出する方法が挙げられる。例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３０：１２４２を参照のこと。一般に、「ミスマッチ切断」の当該分野の技術は、野生型のＮＯＶＸ配列を含む（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡを、組織サンプルから得られた潜在的な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズさせることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供する工程によって始まる。この二本鎖の二重鎖を、二重鎖の一本鎖領域（例えば、そのコントロールとサンプルの鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するもの）を切断する因子を用いて処理する。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖を、ＲＮａｓｅを用いて処理し得、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドを、そのミスマッチ領域を酵素的に消化するために、Ｓ１ヌクレアーゼで処理し得る。他の実施形態において、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかの二重鎖を、ミスマッチ領域を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウム、およびピペリジンで処理し得る。そのミスマッチ領域の消化後、次いで、得られた物質を変性ポリアクリルアミドゲル上で、大きさにより分離して、変異の部位を決定する。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５を参照のこと。１つの実施形態において、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。
【０４４４】
なお別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、二本鎖ＤＮＡにおけるミスマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ修復」酵素）を、細胞のサンプルから得られたＮＯＶＸ  ｃＤＮＡにおける点変異を検出およびマッピングするために規定された系において使用する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅＬａ細胞由来のチミジンＤＮＡグリコシラーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断する。例えば、Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ  １５：１６５７〜１６６２を参照のこと。例示的な実施形態に従って、ＮＯＶＸ配列（例えば、野生型ＮＯＶＸ配列）に基づくプローブは、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハイブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素で処理され、そしてその切断産物（もしあれば）は、電気泳動プロトコルなどから検出され得る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。
【０４４５】
他の実施形態において、電気泳動の移動度における変化は、ＮＯＶＸ遺伝子における変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖コンホメーション多型（ＳＳＣＰ）は、変異体と野生型核酸との間の電気泳動の移動度における差異を検出するために使用され得る。例えば、Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ：８６：２７６６；Ｃｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５〜１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ．Ａｐｐｌ．９：７３〜７９を参照のこと。サンプルおよびコントロールＮＯＶＸ核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは、変性され、そして再生される。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気泳動の移動度において得られる変化は、１つの塩基変化の検出さえも可能にする。ＤＮＡフラグメントは、標識され得るか、または標識されたプローブを用いて検出され得る。アッセイの感度は、ＤＮＡよりもむしろ、二次構造が配列中の変化に対してより感受的であるＲＮＡを使用することによって増強され得る。１つの実施形態において、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動の移動度における変化に基づいて二本鎖のヘテロ二重鎖分子を分離する。例えば、Ｋｅｅｎら（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｇｅｎｅｔ．７：５を参照のこと。
【０４４６】
なお別の実施形態において、一定勾配の変性剤を含有するポリアクリルアミドゲルにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる。例えば、Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１３：４９５を参照のこと。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、ＤＮＡは、例えば、ＰＣＲにより約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを付加することによって、完全には変性されないことを確実するように改変される。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールＤＮＡおよびサンプルＤＮＡの移動度における差異を同定するために、変性剤勾配の代わりに使用される。例えば、ＲｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．２６５：１２７５３を参照のこと。
【０４４７】
点変異を検出するための他の技術の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマー伸長。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、既知の変異が中心的に配置されるように調製され得、次いで、完全なマッチが見出される場合にのみハイブリダイゼーションを許容する条件下で標的ＤＮＡにハイブリダイズされる。例えば、Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２４：１６３；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：６２３０を参照のこと。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、このオリゴヌクレオチドがハイブリダイズ膜に付着され、そして標識された標的ＤＮＡとハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多くの異なる変異にハイブリダイズされる。
【０４４８】
あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明と合わせて使用され得る。特異的増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心において（その結果、増幅は、差次的ハイブリダイゼーションに依存する）（例えば、Ｇｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１７：２４３７〜２４４８を参照のこと）か、あるいは適切な条件下でミスマッチが妨げられ得るかまたはポリメラーゼ伸長を減少し得る、１つのプライマーの３’の最末端で、目的の変異を保有し得る（例えば、Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ．１１：２３８を参照のこと）。さらに、切断に基づく検出を行うために、変異領域に新規な制限部位を導入することが、望ましくあり得る。例えば、Ｇａｓｐａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｂｅｓ  ６：１を参照のこと。特定の実施形態において、増幅はまた、増幅用Ｔａｑリガーゼを使用して実施され得ることが予測される。例えば、Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：１８９を参照のこと。このような場合において、連結は、５’配列の３’末端に完全なマッチが存在する場合にのみ生じ、増幅の存在または非存在を探索することによって、特定の部位における既知の変異の存在を検出することを可能にする。
【０４４９】
本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載れる少なくとも１つのプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キットを利用することによって実施され得、これは、例えば、ＮＯＶＸ遺伝子を含む疾患または疾病の症状または家族病歴を示す患者を診断するための臨床的設定において好都合に使用され得る。
【０４５０】
さらに、ＮＯＶＸが発現される任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢血白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて利用され得る。しかし、有核細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が、使用され得る。
【０４５１】
（薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ））
ＮＯＶＸ活性（例えば、ＮＯＶＸ遺伝子発現）に対する刺激性または阻害性の影響を有する因子、すなわちモジュレーターは、本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定されるように、障害（この障害は、代謝障害、糖尿病、肥満症、感染症、食欲不振、癌関連悪液質、癌、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、および造血障害、および種々の異常脂肪性浮腫、肥満に関連する代謝障害、Ｘ代謝症候群、ならびに慢性疾患および種々の癌と関連する消耗疾患を含む）を（予防的または治療的に）処置するために個体に投与され得る。このような処置と合わせて、個体の薬理ゲノム学（すなわち、個体の遺伝子型と外来化合物または薬物に対するその個体の応答との間の関係についての研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬理学的に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関係を変更することによって、重篤な毒性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理ゲノム学は、個体の遺伝子型の考慮に基づく予防的処置または治療的処置のために有効な因子（例えば、薬物）の選択を可能にする。このような薬理ゲノム学は、さらに、適切な投薬量および治療剤レジメンを決定するために使用され得る。従って、ＮＯＶＸタンパク質の活性、ＮＯＶＸ核酸の発現、あるいは個体におけるＮＯＶＸ遺伝子の変異含量が決定されて、それによって個体の治療的処置または予防的処置のために適切な因子を選択し得る。
【０４５２】
薬理ゲノム学は、罹患した人おける変更された薬物の性質および異常な作用に起因して、薬物に応答する臨床的に有意な遺伝性変更を扱う。例えば、Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ、１９９６、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３：９８３〜９８５；Ｌｉｎｄｅｒ、１９９７、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，４３：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学状態が、区別され得る。薬物が身体に作用する方法を変更する１つの因子として伝達される遺伝的状態（変更された薬物作用）、または身体が薬物に作用する方法を変更する１つの因子として伝達される遺伝的状態（変更された薬物代謝）。これらの薬理ゲノム学状態は、稀な欠損としてか、または多型としてのいずれかで生じ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ６ＰＤ）欠損は、一般的な遺伝性酵素病であり、この主な臨床的合併症は、酸化剤薬物（抗マラリア剤、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取およびソラマメの摂食後の溶血である。
【０４５３】
例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および持続期間の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランスフェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、幾人かの患者が予期される薬物効果を得ないか、または標準的かつ安全な用量の薬物を摂取した後に過大な薬物応答および深刻な毒性を示すことに関しての説明を提供した。これらの多型は、集団において２つの表現型（高い代謝能を持つ人（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＥＭ）および低い代謝能を持つ人（ｐｏｏｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｚｅｒ）（ＰＭ））で表現される。ＰＭの有病率は、異なる集団の間で異なる。例えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型であり、そしていくらかの変異がＰＭにおいて同定されており、この全ては機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在に至る。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低い代謝能を持つ人は、彼らが標準的な用量を受ける場合に、かなり頻繁に過大な薬物応答および副作用を経験する。代謝産物が活性な治療的部分である場合、そのＣＹＰ２Ｄ６によって形成される代謝産物であるモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるように、ＰＭは治療的応答を示さない。他の極端なものは、標準的な用量に応答しない、いわゆる超迅速な代謝能を持つ人である。最近、超迅速な代謝の基準となる分子は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因していることが同定されている。
【０４５４】
従って、ＮＯＶＸタンパク質の活性、ＮＯＶＸ核酸の発現、あるいは個体におけるＮＯＶＸ遺伝子の変異内容を決定して、それによって、その個体の治療的処置または予防的処置のために適切な因子を選択し得る。さらに、薬理ゲノム学の研究を使用して、個体の薬物応答性の表現型の同定に対して薬物代謝酵素をコードする多型対立遺伝子の遺伝子型を適用し得る。この知見は、用量または薬物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、従って、被験体をＮＯＶＸの調節因子（例えば、本明細書中に記載される例示的なスクリーニングアッセイの１つによって同定される調節因子）を用いて処置する場合に治療的効率または予防的効率を増強し得る。
【０４５５】
（臨床試験中の効果のモニタリング）
ＮＯＶＸの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を調節する能力）に対する因子（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングすることは、基本的な薬物スクリーニングだけでなく臨床試験にも適用され得る。例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイによって、ＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを増加するため、またはＮＯＶＸ活性をアップレギュレートするために決定される因子の効力は、減少したＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはダウンレギュレートしたＮＯＶＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。あるいは、スクリーニングアッセイによって、ＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを減少するため、またはＮＯＶＸの活性をダウンレギュレートするために決定される因子の効力は、増加したＮＯＶＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはアップレギュレートしたＮＯＶＸの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターされ得る。このような臨床試験において、ＮＯＶＸの発現または活性、および好ましくは、例えば、細胞増殖または免疫障害に関与する他の遺伝子が、「リードアウト（読み出し）（ｒｅａｄ  ｏｕｔ）」、すなわち、特定の細胞の免疫応答性のマーカーとして使用され得る。
【０４５６】
例えば、ＮＯＶＸを含む遺伝子（これは、ＮＯＶＸ活性（例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同定される）を調節する因子（例えば、化合物、薬物または低分子）を用いる処置によって、細胞内で調節される）が同定され得るが、これらに限定されない。従って、細胞性増殖障害に対する因子の効果を研究するために、例えば、臨床試験において、細胞が単離され得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＮＯＶＸおよびこの障害に関与する他の遺伝子の発現のレベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（すなわち、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるように、ノーザンブロット分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによるか、あるいは産生されるタンパク質の量を測定することによるか、本明細書中に記載されるような方法の１つによるか、あるいはＮＯＶＸまたは他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、定量され得る。この様式で、この遺伝子発現パターンは、この因子に対する細胞の生理学的応答の指標であるマーカーとして作用し得る。従って、この応答状態は、この因子を用いる個体の処置の前、および処置の間の種々の時点で、決定され得る。
【０４５７】
１つの実施形態において、本発明は、因子（例えば、アゴニスト、アンタゴニスト、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣物、核酸、低分子、または本明細書中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補物）を用いる、被験体の処置の効力をモニタリングするための方法を提供し、これは、以下の工程を包含する：（ｉ）因子の投与の前に、被験体から投与前サンプルを得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおける、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）この被験体から１つ以上の投与後サンプルを得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルにおける、ＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、この投与後サンプルにおけるＮＯＶＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルと比較する工程；ならびに（ｖｉ）然るべく、この被験体への因子の投与を変更する工程。例えば、この因子の増加した投与は、検出されるよりも高いレベルにＮＯＶＸの発現または活性を増加するため（すなわち、この因子の効力を増加するため）に所望され得る。あるいは、この因子の減少した投与は、検出されるよりも低いレベルにＮＯＶＸの発現または活性を減少するため（すなわち、この因子の効力を減少するため）に所望され得る。
【０４５８】
（処置方法）
本発明は、異常なＮＯＶＸの発現または活性に関連する障害の危険性がある（またはこの障害に感受性である）か、またはこの障害を有する被験体を処置する予防的方法および治療的方法の両方を提供する。この障害としては、心筋症、アテローム性動脈硬化症、高血圧症、先天性心欠損症、大動脈狭窄症、心房中隔欠損症（ＡＳＤ）、房室（Ａ−Ｖ）管欠損症、動脈管、肺動脈弁狭窄症、大動脈弁下部狭窄症、心室中隔欠損症（ＶＳＤ）、弁疾患、結節硬化症、強皮症、肥満症、移植、副腎脳白質ジストロフィー、先天性副腎過形成、前立腺癌、新形成；腺癌、リンパ腫、子宮癌、受胎能、血友病、凝固能亢進、特発性血小板減少性紫斑病、免疫欠損症、対宿主性移植片病、ＡＩＤＳ、気管支ぜんそく、クローン病；多発性硬化症、オールブライト遺伝性骨形成異常症の処置、ならびに他の疾患、障害および状態などが挙げられる。
【０４５９】
これらの処置方法は、以下により詳細に考察される。
【０４６０】
（疾患および障害）
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）増加したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を拮抗する（すなわち、低減または阻害する）治療剤を用いて処置され得る。活性を拮抗する治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上記ペプチドに対する抗体；（ｉｉｉ）上記ペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）相同組換えによって上記ペプチドの内因性機能を「ノックアウトする」ために利用される、アンチセンス核酸および「機能不全性」である（すなわち、上記ペプチドに対するコード配列のコード配列内の異種挿入に起因する）核酸の投与（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）；または（ｖ）上記ペプチドとその結合パートナーとの間の相互作用を変化させる、調節因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアンタゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに対して特異的な抗体を含む））。
【０４６１】
（その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）減少したレベルまたは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を増加させる（すなわち、活性に対するアゴニストである）治療剤を用いて処置され得る。活性をアップレギュレートする治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。
【０４６２】
増加したレベルまたは減少したレベルは、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定量することによって、容易に検出され得る。この定量は、患者の組織サンプルを（例えば、生検組織から）入手し、そしてそのサンプルを、発現したペプチド（または上記ペプチドのｍＲＮＡ）のＲＮＡレベルまたはペプチドレベル、構造および／または活性をインビトロでアッセイすることによる。当該分野において周知の方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イムノアッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、免疫沈降、次いで、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫細胞化学などによる）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイゼーションなど）。
【０４６３】
（予防方法）
１つの局面において、本発明は、被験体において異常なＮＯＶＸの発現または活性と関連する疾患または状態を、ＮＯＶＸの発現または少なくとも１つのＮＯＶＸ活性を調節する因子をこの被験体に投与することによって予防するための方法を提供する。異常なＮＯＶＸの発現または活性によって引き起こされるかまたはこれらに起因する疾患についての危険性がある被験体は、例えば、本明細書中に記載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせによって、同定され得る。予防因子の投与は、疾患または障害が予防されるか、あるいはその進行を遅延させるように、ＮＯＶＸ異常に特徴的な症状が現れる前に行い得る。このＮＯＶＸ異常の型に依存して、例えば、ＮＯＶＸアゴニスト因子またはＮＯＶＸアンタゴニスト因子が、被験体を処置するために使用され得る。適切な因子は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイに基づいて決定され得る。本発明の予防方法は、以下の小節において、さらに議論される。
【０４６４】
（治療方法）
本発明の別の局面は、治療目的のためにＮＯＶＸの発現または活性を調節する方法に関する。本発明の調節方法は、細胞を、その細胞に関するＮＯＶＸタンパク質活性のうちの１つ以上の活性を調節する因子と接触させる工程を包含する。ＮＯＶＸタンパク質活性を調節する因子は、核酸またはタンパク質、ＮＯＶＸタンパク質の天然に存在する同族リガンド、ペプチド、ＮＯＶＸペプチド模倣物、または他の低分子のような、本明細書中に記載されるような因子であり得る。１つの実施形態において、この因子は、１つ以上のＮＯＶＸタンパク質活性を刺激する。このような刺激因子の例としては、活性なＮＯＶＸタンパク質、および細胞に導入されたＮＯＶＸをコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態において、この因子は、１つ以上のＮＯＶＸタンパク質活性を阻害する。このような阻害因子の例としては、アンチセンスＮＯＶＸ核酸分子、および抗ＮＯＶＸ抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、その因子とともに細胞を培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、被験体にその因子を投与することによって）実施され得る。このように、本発明は、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸分子の異常な発現または異常な活性によって特徴付けられる、疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つの実施形態において、この方法は、ＮＯＶＸの発現または活性を調節する（例えば、アップレギュレートまたはダウンレギュレートする）因子（例えば、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される因子）あるいはそのような因子の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態において、この方法は、低下したかまたは異常なＮＯＶＸの発現または活性を補完するための治療として、ＮＯＶＸのタンパク質または核酸分子を投与する工程を包含する。
【０４６５】
ＮＯＶＸ活性の刺激は、ＮＯＶＸが異常にダウンレギュレートされている状況、および／またはＮＯＶＸ活性の増加が有益な効果を有する可能性がある状況において、望ましい。このような状況の１つの例は、被験体が、異常な細胞増殖および／または細胞分化によって特徴付けられる障害（例えば、癌または免疫関連障害）を有する場合である。このような状況の別の例は、被験体が妊娠性疾患（例えば、子癇前症（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ））を有する場合である。
【０４６６】
（治療剤の生物学的効果の決定）
本発明の種々の実施形態において、適切なインビトロまたはインビボアッセイを行って、特定の治療剤の効果およびその投与が罹患組織の処置を示すか否かを決定する。
【０４６７】
種々の特定の実施形態において、インビトロアッセイが患者の障害に関与する代表的な細胞型で行われ、所定の治療剤がこの細胞型に対して所望の効果を発揮するか否かを決定し得る。治療において使用する化合物は、ヒト被験体において試験する前に、適切な動物モデル系において試験され得る。これらの動物モデル系としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウサギなど。同様に、インビボ試験については、当該分野で公知の任意の動物モデル系が、ヒト被験体に対する投与の前に使用され得る。
【０４６８】
（本発明の組成物の予防的用途および治療的用途）
本発明のＮＯＶＸ核酸およびタンパク質は、以下を含むが、これらに限定されない種々の障害に関連する潜在的な予防的適用および治療的適用に有用である：代謝障害、糖尿病、肥満症、感染症、食欲不振、癌関連癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、造血障害、および種々の異脂肪性浮腫、肥満に関連する代謝障害、Ｘ代謝症候群、ならびに慢性疾患および種々の癌と関連する消耗疾患。
【０４６９】
例えば、本発明のＮＯＶＸタンパク質をコードするｃＤＮＡは、遺伝子治療に有用であり得、そしてこのタンパク質は、遺伝子治療を必要とする被験体に投与される場合、有用であり得る。非制限的例示として、本発明の組成物は、以下に罹患した患者の処置についての効力を有する：代謝障害、糖尿病、肥満症、感染症、食欲不振、癌関連悪液質、癌、神経変性障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、免疫障害、造血障害、および種々の異脂肪性浮腫。
【０４７０】
本発明のＮＯＶＸタンパク質をコードする新規な核酸、およびＮＯＶＸタンパク質の両方、またはそれらのフラグメントは、診断適用にも有用であり得、ここでは、この核酸またはタンパク質の存在または量が評価される。さらなる用途は、抗菌分子としての用途であり得る（すなわち、いくつかのペプチドは、抗菌特性を有することが見出されている）。これらの材料は、治療的または診断的な方法における用途のための、本発明の新規物質に免疫特異的に結合する抗体の産生においてさらに有用である。
【０４７１】
本発明を以下の実施例においてさらに記載する。この実施例は、特許請求の範囲に記載した本発明の範囲を限定しない。
【０４７２】
（実施例）
（実施例１．ＮＯＶＸ核酸の同定）
ポリペプチドまたはホモログに関するＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの配列ファイルを使用するＴｂｌａｓｔＮを、ＧｅｎＢａｎｋによって利用可能になったＧｅｎｏｍｉｃ  Ｄａｉｌｙ  Ｆｉｌｅｓまたは個々の配列決定センターからダウンロードしたファイルに対して実行した。エキソンを相同性によって推定し、そしてイントロン／エキソンの境界を標準的な遺伝子規則を使用して決定した。エキソンを複数のＢＬＡＳＴ（例えば、ｔＢｌａｓｔＮ、ＢｌａｓｔＸ、およびＢｌａｓｔＮ）検索、およびいくつかの場合には、ＧｅｎｅＳｃａｎおよびＧｒａｉｌを使用する類似性の決定手段によって、さらに選択し、そして精緻化した。利用可能な場合、公的なデータベースおよび独自データベースの両方からの発現配列をもまた加え、この遺伝子配列をさらに定義しそして完全なものとした。次いで、そのＤＮＡ配列を、明白な不一致について手作業で補正し、それによって全長タンパク質をコードする配列を得た。
【０４７３】
本発明で同定した新規なＮＯＶＸ標的配列を、この配列を確認するためにエキソン連結プロセス（ｅｘｏｎ  ｌｉｎｋｉｎｇ  ｐｒｏｃｅｓｓ）に供した。ＰＣＲプライマーを、順方向プライマーについては利用可能な最も上流の配列で、そして逆方向プライマーについては利用可能な最も下流の配列で開始するように設計した。ＰＣＲプライマーの配列を、種々のクローンを得るために使用した。それぞれの場合について、適切な配列（すなわち、特有であるかまたは高度に選択的であるかのいずれかである）に遭遇するまで、または逆方向プライマーの場合には終止コドンに達するまで、コード配列に向ってそれぞれの末端から内向きにウォーキングさせることによって、配列を試験した。このようなプライマーを、標的配列の全長のｃＤＮＡ，ＤＮＡの一部（１つ以上のエキソン）、もしくはタンパク質配列についてのインシリコ（ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ）予測に基づいて、または他の種由来の密接に関連するヒト配列に対する推定エキソンの翻訳物の相同性によって、設計した。次いで、これらのプライマーを、以下のヒトｃＤＮＡのプールに基づくＰＣＲ増幅において使用した：副腎、骨髄、脳−扁桃、脳−小脳、脳−海馬、脳−黒質、脳−視床、脳−全体、胎児の脳、胎児の腎臓、胎児の肝臓、胎児の肺、心臓、腎臓、リンパ腫−ラージ、乳腺、膵臓、脳下垂体、胎盤、前立腺、唾液腺、骨格筋、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、甲状腺、気管、子宮。通常は、得られたアンプリコンをゲル精製し、クローン化し、そして高い重複性について配列決定した。エキソン連結によって誘導されたＰＣＲ産物を、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのｐＣＲ２．１ベクター中にクローン化した。得られた細菌クローンは、ｐＣＲ２．１ベクター中にクローン化した完全なオープンリーディングフレームを包含するインサートを有する。全てのクローンから得られた配列を、それ自体とともに、ＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのデータベース中の他のフラグメントとともに、そして公的なＥＳＴとともにまとめた。集合の別の成分との同一性の程度が５０ｂｐにわたって少なくとも９５％である場合に、そのフラグメントおよびＥＳＴを集合の成分として含ませた。さらに、少数の配列を手作業によって評価し、そして適切である場合には修正を施した。これらの手順によって本明細書中に報告する配列を提供する。
【０４７４】
物理的なクローン：エキソンを相同性によって推定し、そしてイントロン／エキソンの境界を標準的な遺伝子規則を使用して決定した。エキソンを複数のＢＬＡＳＴ（例えば、ｔＢｌａｓｔＮ、ＢｌａｓｔＸ、およびＢｌａｓｔＮ）検索、およびいくつかの場合には、ＧｅｎｅＳｃａｎおよびＧｒａｉｌを使用する類似性の決定手段によって、さらに選択し、そして精緻化した。利用可能な場合、公的なデータベースおよび独自データベースの両方からの発現配列をもまた加え、この遺伝子配列をさらに定義しそして完全なものとした。次いで、そのＤＮＡ配列を、明白な不一致について手作業で補正し、それによって全長タンパク質をコードする配列を得た。
【０４７５】
（実施例２：ＮＯＶＸ核酸配列における一塩基多型の同定）
変異体配列もまた、本出願に含まれる。変異体配列は、一塩基多型（ＳＮＰ）を含み得る。変異体配列は、一塩基多型（ＳＮＰ）を含み得る。ＳＮＰは、いくつかの例においては、ＳＮＰを含有するヌクレオチド配列がｃＤＮＡとして生じることを示す、「ｃＳＮＰ」と呼ばれる。ＳＮＰは、いくつかの方法で生じ得る。例えば、ＳＮＰは、多形現象の部位で別のヌクレオチドへの１つのヌクレオチドの置換に起因し得る。このような置換は、トランジションまたはトランスバージョンのいずれかであり得る。ＳＮＰはまた、参照対立遺伝子と比較して、ヌクレオチドの欠失またはヌクレオチドの挿入によっても生じ得る。この場合には、多型の部位は、１つの対立遺伝子が、別の対立遺伝子中の特定のヌクレオチドに関してギャップを保有している部位である。遺伝子中に存在しているＳＮＰは、ＳＮＰの位置で遺伝子によってコードされるアミノ酸の変化を生じ得る。しかし、ＳＮＰを含むコドンが遺伝子コードの縮重の結果として同じアミノ酸をコードする場合には、遺伝子内ＳＮＰはまた、サイレントであり得る。遺伝子の領域の外側に存在している、または遺伝子内のイントロンに存在しているＳＮＰは、タンパク質のアミノ酸配列には全く変化を生じないが、発現パターンの調節の変更を生じ得る。例としては、一過性発現、生理学的応答の調節、細胞型による発現調節、発現の強度および転写されたメッセージの安定性における変更が挙げられる。
【０４７６】
エキソン連結プロセスによって作製されたＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリを、以下の基準を使用して選択および伸長した。初期配列または伸長配列の全てまたは一部と９８％の同一性を有する領域を有するゲノムクローンを、問い合わせヒトゲノムデータベースに関連した配列を使用するＢＬＡＳＴＮ検索によって同定した。得られたゲノムクローンを、さらなる分析について選択した。なぜなら、この同一性は、これらのクローンがこれらのＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリに対するゲノム位置を含むことを示しているからである。これらの配列を、推定コード領域ならびに既知のＤＮＡおよびタンパク質配列との類似性について分析した。これらの分析のために使用されるプログラムとしては、Ｇｒａｉｌ、Ｇｅｎｓｃａｎ、ＢＬＡＳＴ、ＨＭＭＥＲ、ＦＡＳＴＡ、Ｈｙｂｒｉｄおよび他の関連するプログラムが挙げられる。
【０４７７】
いくつかのさらなるゲノム領域もまた、同定される。なぜなら、選択されたＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリがこれらの領域をマッピングするからである。このようなＳｅｑＣａｌｌｉｎｇ配列は、相同性またはエキソン予測によって規定される領域とオーバーラップし得る。これらはまた、フラグメントの位置が、類似性または本来の推定配列に含まれるエキソン予測によって同定されるゲノム領域の近傍にあるので、含まれ得る。そのように同定された配列を、手動で構築し、次いで、ＣｕｒａＧｅｎ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎのヒトＳｅｑＣａｌｌｉｎｇデータベースから得られる１つ以上のさらなる配列を使用して伸長し得る。封入に適したＳｅｑＣａｌｌｉｎｇフラグメントを、ＣｕｒａＴｏｏｌｓＴＭプログラムＳｅｑＥｘｔｅｎｄによってか、または分析されたゲノムクローンの適切な領域にマッピングするＳｅｑＣａｌｌｉｎｇフラグメントを同定することによって、同定した。
【０４７８】
次いで、上記手順によって規定される領域を手動で組み込み、そして、例えば、本来のフラグメントの誤った塩基または推定エキソン接合部（ＥＳＴの位置および配列類似性の領域）の間の差異から生じ得る明らかな不一致を補正して、本明細書中に開示される最終配列を誘導した。必要な場合、ＳｅｑＣａｌｌｉｎｇアセンブリおよびゲノムクローンを同定および分析するためのプロセスを繰り返して、全長配列を誘導した（Ａｌｄｅｒｂｏｒｎら、Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ  ｂｙ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ  Ｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ＤＮＡ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１０（８）１２４９〜１２６５，２０００）。
【０４７９】
（実施例３．種々の細胞および組織中でのクローンの定量的発現分析）
種々のクローンの定量的な発現を、種々の正常細胞および病理から得られる細胞、細胞株、および組織由来のＲＮＡサンプルを含有するマイクロタイタープレートを使用し、実時間定量ＰＣＲ（ＲＴＱ  ＰＣＲ）を使用して評価した。ＲＴＱ  ＰＣＲを、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７７００またはＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ（登録商標）７９００ＨＴ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍによって実施した。サンプルの種々のコレクションをプレート上に組立て、そしてこれらをパネル１（正常な組織および癌細胞株を含む）、パネル２（正常な供給源および癌の供給源に由来する、組織由来のサンプルを含む）、パネル３（癌細胞株を含む）、パネル４（正常な組織由来の細胞および細胞株ならびに炎症状態に関係している細胞を含む）、パネル５Ｄ／５Ｉ（代謝疾患に対する重要性を有するヒト組織および細胞株）、ＡＩ＿包括＿パネル（ＡＩ＿ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ＿ｐａｎｅｌ）（正常な組織および自己炎症疾患由来のサンプルを含む）、パネルＣＮＳＤ．０１（正常な脳および疾患の脳由来のサンプルを含む）、およびＣＮＳ＿神経変性＿パネル（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｐａｎｅｌ）（正常な脳およびアルツハイマー病の脳由来のサンプルを含む）と呼ぶ。
【０４８０】
全てのサンプルに由来するＲＮＡの完全性を、指針として２８Ｓおよび１８ＳリボソームＲＮＡの染色強度比（２：１〜２．５：１の２８ｓ：１８ｓ）、および分解産物の指標である低分子量のＲＮＡが存在しないことを使用して、アガロースゲル電気泳動の視覚的な評価によって質を管理した。サンプルを、単一のエキソンの範囲全体を増幅するように設計したプローブおよびプライマーのセットを使用して、逆転写酵素の非存在下でＲＴＱ  ＰＣＲ反応を実行することにより、ゲノムＤＮＡの混入に対して、管理した。
【０４８１】
最初に、ＲＮＡサンプルを、構成的に発現される遺伝子（例えば、β−アクチンおよびＧＡＰＤＨ）のような、参照核酸に対して標準化した。標準化したＲＮＡ（５μｌ）をｃＤＮＡに転換させ、そしてＯｎｅ  Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３０９１６９）および遺伝子特異的プライマーを製造業者の説明書に従って使用し、ＲＴＱ−ＰＣＲによって分析した。
【０４８２】
他の場合において、規格化されていないＲＮＡサンプルを、製造業者の指示書に従ってＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；カタログ番号１８０６４−１４７）およびランダムな六量体を使用して、一本鎖ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ）に転換した。１０μｇまでの全ＲＮＡを含有する反応を、２０μｌの容量で行い、そして６０分間４２℃にてインキュベートした。この反応を、１００μｌの最終容量において５０μｇまでの全ＲＮＡにまでスケールアップし得る。次いで、ｓｓｃＤＮＡサンプルを、製造業者の指示書に従って、１×ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３２４０２０）を使用して、以前に記載されたように、核酸を参照するために規格化する。
【０４８３】
プローブおよびプライマーを、Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＰｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅパッケージ（Ａｐｐｌｅ  ＣｏｍｐｕｔｅｒのＭａｃｉｎｔｏｓｈ  Ｐｏｗｅｒ  ＰＣ用バージョンＩ）または同様のアルゴリズムに従って、入力として標的配列を使用して、それぞれのアッセイについて設計した。デフォルト設定を反応条件について使用し、そして以下のパラメーターを、プライマーの選択の前に設定した：プライマー濃度＝２５０ｎＭ、プライマーの融解温度（Ｔｍ）範囲＝５８〜６０℃、プライマーの最適Ｔｍ＝５９℃、最大のプライマー差分＝２℃、プローブは５’にＧを有さない、プローブのＴｍはプライマーのＴｍよりも１０℃高くなければならない、アンプリコンの大きさは７５ｂｐから１００ｂｐである。選択したプローブおよびプライマー（下記を参照のこと）を、Ｓｙｎｔｈｅｇｅｎ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）によって合成した。プローブを、カップリングしていない色素を除去するためにＨＰＬＣによって二重精製し、そしてプローブのそれぞれ５’および３’末端へのレポーターおよび失活剤色素のカップリングを確認するために質量分析法によって評価した。それらの最終濃度は：順方向および逆方向プライマーについてはそれぞれ９００ｎＭ、そしてプローブは２００ｎＭであった。
【０４８４】
ＰＣＲ条件：ＲＮＡサンプルを用いて研究する場合、各組織および各細胞株由来の標準化したＲＮＡを、９６ウェルまたは３８４ウェルのＰＣＲプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の各ウェルにスポットした。ＰＣＲカクテルは、単一の遺伝子特異的プローブおよびプライマーセット、または２つの多重合化（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄ）プローブおよびプライマーセット（標的クローンに特異的なセット、および標的プローブと多重合化する別の遺伝子特異的セット）のいずれかを含有した。ＰＣＲ反応を、ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｏｎｅ−Ｓｔｅｐ  ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４３１３８０３）を使用して、製造業者の指示書に従って設定した。逆転写を、４８℃で３０分間行い、続いて以下のような増幅／ＰＣＲサイクルを行った。：９５℃で１０分間、次いで４０サイクルの、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。結果を、ＣＴ値（所定のサンプルが蛍光の限界値と交差するサイクル）として対数目盛を使用して記録し、ここで、所定のサンプルと最も低いＣＴ値を有するサンプルとの間でのＲＮＡ濃度の差分は、２のΔＣＴ乗として表される。次いで、相対的な発現の割合を、このＲＮＡ差分の逆数をとり、そして１００を乗算することによって得る。
【０４８５】
ｓｓｃＤＮＡサンプルを用いて研究する場合、規格化されたｓｓｃＤＮＡを、ＲＮＡサンプルについて以前に記載したように使用した。１セットまたは２セットのプローブおよびプライマーを、１×ＴａｑＭａｎ（登録商標）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍａｓｔｅｒ  ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ；カタログ番号４３２４０２０）を使用して、製造業者の指示書に従って、以前に記載したように設定した。ＰＣＲ増幅を、以下のように行った：９５℃で１０分間、次いで４０サイクルの、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。結果を分析し、そして以前に記載したように評価した。
【０４８６】
（パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄ）
パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄのプレートは、２つのコントロールウェル（ゲノムＤＮＡコントロールおよび化学コントロール）および種々のサンプル由来のｃＤＮＡを含有する９４個のウェルを含む。これらのパネルのサンプルは、２つのクラスに分類される：培養細胞株由来のサンプルおよび初代正常細胞由来のサンプル。この細胞株は、以下の型の癌に由来する：肺癌、乳癌、黒色種、結腸癌、前立腺癌、ＣＮＳ癌、扁平上皮癌、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌および膵臓癌。これらのパネルにおいて使用される細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（培養細胞株の貯蔵所）によって広く利用可能であり、ＡＴＣＣによって推奨される条件を使用して培養される。これらのパネルにおいて見出された正常組織は、一人の成人個体または胎児の全ての主要な器官系由来のサンプルから構成される。これらのサンプルは、以下の器官由来である：成人の骨格筋、胎児の骨格筋、成人の心臓、胎児の心臓、成人の腎臓、胎児の腎臓、成人の肝臓、胎児の肝臓、成人の肺、胎児の肺、脳の種々の領域、脾臓、骨髄、リンパ節、膵臓、唾液腺、下垂体、副腎、脊髄、胸腺、胃、小腸、大腸、膀胱、気管、胸部、卵巣、子宮、胎盤、前立腺、精巣および脂肪。
【０４８７】
パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄの結果においては、以下の略号を使用する：
ｃａ．＝癌腫
＊＝転移によって確立された
ｍｅｔ＝転移
ｓ  ｃｅｌｌ  ｖａｒ＝小細胞変異株
ｎｏｎ−ｓ＝ｎｏｎ−ｓｍ＝非小
ｓｑｕａｍ＝扁平上皮細胞
ｐｌ．ｅｆｆ＝ｐｌ  ｅｆｆｕｓｉｏｎ＝胸水
ｇｌｉｏ＝神経膠腫
ａｓｔｒｏ＝星状細胞腫、および
ｎｅｕｒｏ＝神経芽細胞腫。
【０４８８】
（一般＿スクリーニング＿パネル＿ｖ１．４（Ｇｅｎｅｒａｌ＿ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ＿ｐａｎｅｌ＿ｖ１．４））
パネル１．４のプレートは、２つのコントロールウェル（ゲノムＤＮＡコントロールおよび化学コントロール）および種々のサンプル由来のｃＤＮＡを含有する９４個のウェルを含む。パネル１．４のサンプルは、２つのクラスに分類される：培養細胞株由来のサンプルおよび初代正常細胞由来のサンプル。この細胞株は、以下の型の癌に由来する：肺癌、乳癌、黒色種、結腸癌、前立腺癌、ＣＮＳ癌、扁平上皮癌、卵巣癌、肝臓癌、腎臓癌、胃癌および膵臓癌。パネル１．４において使用される細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）（培養細胞株の貯蔵所）によって広く利用可能であり、ＡＴＣＣによって推奨される条件を使用して培養される。パネル１．４において見出された正常組織は、２〜５人の異なる成人個体または胎児の全ての主要な器官系由来のサンプルのプールから構成される。これらのサンプルは、以下の器官由来である：成人の骨格筋、胎児の骨格筋、成人の心臓、胎児の心臓、成人の腎臓、胎児の腎臓、成人の肝臓、胎児の肝臓、成人の肺、胎児の肺、脳の種々の領域、脾臓、骨髄、リンパ節、膵臓、唾液腺、下垂体、副腎、脊髄、胸腺、胃、小腸、大腸、膀胱、気管、胸部、卵巣、子宮、胎盤、前立腺、精巣および脂肪。
略語は、パネル１、１．１、１．２および１．３Ｄについて記載される通りである。
【０４８９】
（パネル２Ｄおよび２．２）
パネル２Ｄおよび２．２のプレートは、一般的には、２つのコントロールのウェルと９４個の試験サンプルを含む。これは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＣｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｎｅｔｗｏｒｋ（ＣＨＴＮ）またはＮａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＮＤＲＩ）との緊密な共同研究において、外科医の作業によって入手したヒト組織から単離したＲＮＡまたはｃＤＮＡを含む。組織は、ヒトの悪性腫瘍に由来し、そして示される場合、多くの悪性組織は、腫瘍にすぐ隣接している非癌性組織から得られる「ぴったり沿った境界（ｍａｔｃｈｅｄ  ｍａｒｇｉｎ）」を有する。これらを、正常な隣接組織と呼び、そして以下の結果には「ＮＡＴ」と記載する。腫瘍組織および「ぴったり沿った境界」を、２人の別々の病理学者によって評価する（外科の病理学者、およびＮＤＲＩまたはＣＨＴＮの病理学者によって再度）。この分析は、腫瘍の分化の段階の全体的な組織病理学的評価を提供する。さらに、ほとんどのサンプルは、もともとの外科の病理報告を含む。これは、患者の臨床段階に関する情報を提供する。これらのぴったり沿った境界を、外科手術領域の周辺（すなわち、すぐ隣接している）組織（表ＲＲにおいては正常な隣接組織を「ＮＡＴ」と明示する）から採取する。さらに、ＲＮＡおよびｃＤＮＡサンプルを、高齢者または突然死の被害者（事故など）について行った検死による種々のヒト組織から得た。これらの組織が疾患を有さないことを確認し、そしてこれを、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、およびＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのような種々の商業的な供給源から購入した。
【０４９０】
（パネル３Ｄ）
パネル３Ｄのプレートは、９４個のｃＤＮＡサンプルおよび２個のコントロールサンプルを含む。詳細には、これらのサンプルのうちの９２個は、培養されたヒトの癌細胞株に由来し、２個のサンプルはヒトの初代小脳組織であり、そして２つはコントロールである。ヒトの細胞株は、一般的には、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション）、ＮＣＩ、またはＧｅｒｍａｎ腫瘍細胞バンクから入手し、そして以下の組織グループに分ける：舌の扁平上皮細胞癌、乳癌、前立腺癌、黒色腫、類表皮癌腫、肉腫、膀胱癌、膵臓癌、腎臓癌、白血病／リンパ腫、卵巣／子宮／子宮頚癌、胃癌、結腸癌、肺癌、およびＣＮＳ癌細胞株。さらに、小脳の２つの異なるサンプルが存在する。これらの細胞の全てを、標準的な推奨される条件下で培養し、そして標準的な手順を使用してＲＮＡを抽出した。パネル３Ｄおよび１．３Ｄの細胞株は、科学技術文献において使用される最も一般的な細胞株である。
【０４９１】
（パネル４Ｄ、４Ｒおよび４．１Ｄ）
パネル４は、９６ウェルプレート（２個のコントロールのウェル、９４個の試験サンプル）上にサンプルを含む。これは、炎症状態に関連している種々のヒトの細胞株または組織から単離したＲＮＡ（パネル４Ｒ）またはｃＤＮＡ（パネル４Ｄ／４．１Ｄ）を含む。結腸および肺（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）ならびに胸腺および腎臓（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のようなコントロールの正常組織に由来する全ＲＮＡを使用した。肝硬変患者由来の肝臓組織および狼瘡患者由来の腎臓に由来する全ＲＮＡを、ＢｉｏＣｈａｉｎ（Ｂｉｏｃｈａｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｉｎｃ．，Ｈａｙｗａｒｄ，ＣＡ）から入手した。クローン病および潰瘍性大腸炎を有すると診断された患者からのＲＮＡの調製のための腸組織を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅ（ＮＤＲＩ）（Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）から入手した。
【０４９２】
星状細胞、肺繊維芽細胞、皮膚繊維芽細胞、冠状動脈平滑筋細胞、小気道上皮細胞、気管支上皮細胞、微小血管皮膚内皮細胞、微小血管肺内皮細胞、ヒトの肺大動脈の血管内皮細胞、ヒトの臍帯静脈の血管内皮細胞を、全て、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入し、そしてＣｌｏｎｅｔｉｃｓによってこれらの細胞型に供給される培地中で増殖させた。これらの初代細胞型を、示すように、種々のサイトカインまたはサイトカインの組合せを用いて６時間および／または１２〜１４時間の間、活性化した。以下のサイトカインを使用した：約１〜５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１β、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＴＮＦα、約２０〜５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−９、約５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３。内皮細胞を、時折、０．１％の血清を有するＣｌｏｎｅｔｉｃｓによる基底培地中での培養によって種々の時間枯渇させた。
【０４９３】
単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌを使用して、ＣｕｒａＧｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの従業員の血液から調製した。ＬＡＫ細胞を、ＤＭＥＭ、５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびインターロイキン２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２）中での４〜６日間の培養によってこれらの細胞から調製した。次いで、細胞を、１０〜２０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ、および１〜２μｇ／ｍｌのイオノマイシン、５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１２、２０〜５０ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ、および５〜１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１８のいずれかで、６時間活性化した。いくつかの場合には、単核細胞を、約５μｇ／ｍｌのＰＨＡ（フィトヘマグルチニン）またはＰＷＭ（アメリカヤマゴボウ有糸分裂促進物質）を含有する、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で、４〜５日間培養した。ＲＮＡの調製のために、サンプルを２４、４８、および７２時間で採取した。ＭＬＲ（混合リンパ球反応）サンプルを、２人のドナーからの採血、Ｆｉｃｏｌｌを使用する単核細胞の単離、および単離した単核細胞を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、メルカプトエタノール（５．５×１０−５Ｍ）（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中において約２×１０６個の細胞／ｍｌの最終濃度で１：１にて混合することによって得た。このＭＬＲを培養し、そしてＲＮＡの調製のために１〜７日までの範囲の種々の時点でサンプルを採取した。
【０４９４】
単球を、製造業者の説明書に従って、ＣＤ１４  Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｅａｄｓ、＋ｖｅＶＳ選択カラムおよびＶａｒｉｏ  Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞から単離した。単球を、ＤＭＥＭ  ５％のウシの胎児の血清（ＦＣＳ）（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、５０ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦ、および５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４中での５〜７日間の培養によって樹状細胞に分化させた。マクロファージを、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、および１０％のＡＢヒト血清、または約５０ｎｇ／ｍｌのＭＣＳＦ中で５〜７日間の単球の培養によって調製した。単球、マクロファージ、および樹状細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）で６時間および１２〜１４時間刺激した。樹状細胞をまた、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で６時間および１２〜１４時間刺激した。
【０４９５】
ＣＤ４リンパ球、ＣＤ８リンパ球、およびＮＫ細胞をまた、製造業者の説明書に従って、ＣＤ４、ＣＤ８、およびＣＤ５６のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズ、ポジティブＶＳ選択カラム、およびＶａｒｉｏ  Ｍａｇｎｅｔを使用して単核細胞から単離した。ＣＤ４５ＲＡリンパ球およびＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球を、ＣＤ８、ＣＤ５６、ＣＤ１４、およびＣＤ１９のＭｉｌｔｅｎｙｉビーズおよびポジティブ選択を使用してＣＤ８細胞、ＣＤ５６細胞、ＣＤ１４細胞、およびＣＤ１９細胞の単核細胞を除去することによって単離した。次いで、ＣＤ４５ＲＯビーズを使用してＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球を単離し、残りの細胞はＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４リンパ球であった。ＣＤ４５ＲＡ  ＣＤ４、ＣＤ４５ＲＯ  ＣＤ４、およびＣＤ８のリンパ球を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中に入れ、そしてＰＢＳ中の０．５μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および３μｇ／ｍｌの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３、ＡＴＣＣ）で一晩コーティングしたＦａｌｃｏｎ  ６ウェル組織培養プレート上に１０６細胞／ｍｌでプレートした。６時間および２４時間後、細胞をＲＮＡの調製のために回収した。慢性的に活性化されたＣＤ８リンパ球を調製するために、本発明者らは、抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３でコーティングしたプレート上で４日間、単離したＣＤ８リンパ球を活性化し、次いで細胞を回収して、それらをＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびにＩＬ−２中で拡大させた。次いで再び、拡大させたＣＤ８細胞を、プレートに結合させた抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で４日間活性化し、そして先のように拡大させた。ＲＮＡを２回目の活性化の６時間および２４時間後、ならびに２回目の培養物の拡大の４日後に単離した。単離したＮＫ細胞を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、ならびにＩＬ−２中でＲＮＡを調製する前に４〜６日間培養した。
【０４９６】
Ｂ細胞を得るために、扁桃をＮＤＲＩによって獲得した。扁桃を、滅菌した解剖用の鋏で切断し、次いで篩を通過させた。次いで、扁桃体の細胞をスピンダウンさせ、そしてＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中に１０６個の細胞／ｍｌで再懸濁した。細胞を活性化するために、本発明者らは、５μｇ／ｍｌでＰＷＭ、または約１０μｇ／ｍｌで抗ＣＤ４０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および５〜１０ｎｇ／ｍｌでＩＬ−４を使用した。細胞をＲＮＡの調製のために、２４、４８、および７２時間で回収した。
【０４９７】
初代細胞ならびに２次Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞および２次Ｔｒ１細胞を調製するために、６ウェルのＦａｌｃｏｎプレートを、１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）および２μｇ／ｍｌのＯＫＴ３（ＡＴＣＣ）で一晩コーティングし、次いでＰＢＳで２回洗浄した。臍帯血ＣＤ４リンパ球（Ｐｏｉｅｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｅｒｍａｎ  Ｔｏｗｎ，ＭＤ）を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびＩＬ−２（４ｎｇ／ｍｌ）中で１０５〜１０６個の細胞／ｍｌで培養した。ＩＬ−１２（５ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＬ−４（１μｇ／ｍｌ）を、Ｔｈ１に指向させるために使用し、一方で、ＩＬ−４（５ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＦＮγ（１μｇ／ｍｌ）をＴｈ２に指向させるために使用し、そして５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１０をＴｒ１に指向させるために使用した。４〜５日後、活性化させたＴｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球、およびＴｒ１リンパ球をＤＭＥＭ中で１回洗浄し、そしてＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）、およびＩＬ−２（１ｎｇ／ｍｌ）中で４〜７日間拡大させた。この後、活性化させたＴｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球、およびＴｒ１リンパ球を、抗ＣＤ２８／ＯＫＴ３および上記のようなサイトカインを用いて、しかしアポトーシスを防ぐために抗ＣＤ９５Ｌ（１μｇ／ｍｌ）の添加を用いて５日間再刺激した。４〜５日後、Ｔｈ１リンパ球、Ｔｈ２リンパ球、およびＴｒ１リンパ球を洗浄し、次いで再びＩＬ−２を用いて４〜７日間拡大させた。活性化させたＴｈ１リンパ球およびＴｈ２リンパ球を最大３回のサイクルまで、この方法で維持した。ＲＮＡを、プレートに結合させた抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８  ｍＡｂでの２回目および３回目の活性化の６時間および２４時間後、ならびにＩｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２中での２回目および３回目の拡大培養の４日目に、初代および２次Ｔｈ１、Ｔｈ２、およびＴｒ１から調製した。
【０４９８】
以下の白血球株をＡＴＣＣから入手した：Ｒａｍｏｓ、ＥＯＬ−１、ＫＵ−８１２。ＥＯＬ細胞を、５×１０５個の細胞／ｍｌの０．１ｍＭのｄｂｃＡＭＰ中での８日間の培養、３日毎の培地の交換、および５×１０５個の細胞／ｍｌの細胞濃度への調節によってさらに分化させた。これらの細胞の培養のために、本発明者らは、５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）を添加した、（ＡＴＣＣによって推奨されるように）ＤＭＥＭまたはＲＰＭＩを使用した。ＲＮＡを、休止細胞または１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡおよび１μｇ／ｍｌのイオノマイシンで６時間および１４時間活性化した細胞のいずれかから調製した。角質細胞株ＣＣＤ１０６および気道上皮腫瘍株ＮＣＩ−Ｈ２９２をまたＡＴＣＣから入手した。両方を、ＤＭＥＭ  ５％のＦＣＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１００μＭの必須ではないアミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、５．５×１０−５Ｍのメルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）、および１０ｍＭのＨｅｐｅｓ（Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。ＣＣＤ１１０６細胞を、約５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦαおよび１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１βで６時間および１４時間活性化し、一方、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞を、以下のサイトカインを用いて６時間および１４時間活性化した：５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−９、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１３、および２５ｎｇ／ｍｌのＩＦＮγ。
【０４９９】
これらの細胞株および血液細胞について、約１０７個の細胞／ｍｌをＴｒｉｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を使用して溶解させることによってＲＮＡを調製した。簡潔には、１／１０容量のブロモクロロプロパン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）をＲＮＡサンプルに添加し、ボルテックスし、そして室温で１０分後、チューブをＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４回転装置で１４，０００ｒｐｍで回転させた。水相を採取し、そして１５ｍｌのＦａｌｃｏｎ  Ｔｕｂｅに入れた。等量のイソプロパノールを添加し、そして−２０℃で一晩静置した。沈殿させたＲＮＡをＳｏｒｖａｌｌ  ＳＳ３４回転装置中で９，０００ｒｐｍで１５分間スピンダウンさせ、そして７０％のエタノール中で洗浄した。このペレットを３００μｌのＲＮＡｓｅを含まない水中に再度溶解させ、そして３５μｌの緩衝液（Ｐｒｏｍｅｇａ）、５μｌのＤＴＴ、７μｌのＲＮＡｓｉｎ、および８μｌのＤＮＡｓｅを添加した。チューブを、混入しているゲノムＤＮＡを除去するために３７℃で３０分間インキュベートし、フェノールクロロホルムで１回抽出し、そして１／１０容量の３Ｍの酢酸ナトリウムおよび２倍容量の１００％エタノールで再度沈殿させた。ＲＮＡをスピンダウンさせ、そしてＲＮＡｓｅを含まない水中に入れた。ＲＮＡを−８０℃で保存した。
【０５００】
（ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０）
ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０のプレートは、２個のコントロールのウェルおよび８９個の試験サンプルを含む。これは、Ｂａｃｋｕｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓ（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）から入手した外科的な死後のヒト組織から単離されたｃＤＮＡを含む。総ＲＮＡを、ＣｕｒａＧｅｎの施設にあるＢａｃｋｕｓ病院からの組織サンプルから抽出した。他の組織由来の総ＲＮＡを、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手した。
【０５０１】
滑液、滑膜、骨および軟骨を含む関節組織を、Ｂａｃｋｕｓ病院で全ての膝または股関節部の置換手術を経験した患者から入手した。組織サンプルは、単離されたＲＮＡが最適な量で、分解されないことを確実にするように液体窒素中で瞬時に冷凍した。変形性関節症および慢性関節リウマチ結合組織のさらなるサンプルが、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手された。正常なコントロール組織がＣｌｉｎｏｍｉｃｓによって供給され、そして外傷犠牲者の死体解剖の間に得られた。
【０５０２】
乾癬組織の外科検体および隣接一致組織がＣｌｉｎｏｍｉｃｓによって総ＲＮＡとして提供された。二人の男性患者および二人の女性患者が、２５歳と４７歳の間で選択された。その患者の誰もサンプルが単離された時に薬剤を投与されていない。
【０５０３】
潰瘍性大腸炎およびクローン病に罹患した患者由来の病気にかかった結腸の外科検体および隣接一致組織が、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから入手された。４１歳〜６９歳の三人の女性クローン病患者および３人の男性クローン病患者由来の腸組織が使用された。他の患者がデキサメタゾン、フェノバルビタール、またはタイレノールを摂取する一方、二人の患者が処方箋を必要とする薬を摂取しなかった。潰瘍性大腸炎組織は、三人の男性患者および四人の女性患者由来である。その患者のうちの四人は、Ｌｅｂｖｉｄ（ｌｅｂｖｉｄ）を摂取し、二人は、フェノバルビタールを摂取した。
【０５０４】
疾病または肺気腫、気腫またはＣＯＰＤに冒されていない外傷犠牲者からの死後の肺組織由来の総ＲＮＡを、Ｃｌｉｎｏｍｉｃｓから購入した。４０歳〜７０歳の範囲の肺気腫患者は、全てが喫煙者であり、この年齢範囲は、タバコ関連肺気腫の患者に焦点を当て、α−１抗トリプシン欠乏の患者を避けるために選択した。気腫患者は、３６歳〜７５歳の範囲であり、ＣＯＰＤも有し得る患者であることを避けるために喫煙者を除いた。ＣＯＰＤ患者は、３５歳〜８０歳の範囲であり、喫煙者と非喫煙者の両方を含んだ。ほとんどの患者が副腎皮質ステロイド、および気管支拡張薬を摂取していた。
【０５０５】
ＡＩ＿包括的パネル＿ｖ１．０パネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＡＩ＝自己免疫
Ｓｙｎ＝滑液
Ｎｏｒｍａｌ＝見かけ上の疾患なし
Ｒｅｐ２２／Ｒｅｐ２０＝個々の患者
ＲＡ＝慢性関節リウマチ
Ｂａｃｋｕｓ＝Ｂａｃｋｕｓ病院由来
ＯＡ＝変形性関節症
（ＳＳ）（ＢＡ）（ＭＦ）＝個々の患者
Ａｄｊ＝隣接組織
Ｍａｔｃｈ  ｃｏｎｔｒｏｌ＝隣接組織
−Ｍ＝男性
−Ｆ＝女性
ＣＯＰＤ＝慢性閉塞性肺疾患
（パネル５Ｄおよび５Ｉ）
パネル５Ｄおよび５Ｉのプレートは、代謝病に重点をおいて、２個のコントロールウェルおよびヒト組織から単離された種々のｃＤＮＡおよび細胞株を含む。代謝組織は、妊娠糖尿病に羅患した患者から得られた。細胞は、ヒト間葉幹細胞由来の脂肪細胞の分化における異なる段階の間に得られた。ヒト膵臓島がまた、得られた。
【０５０６】
妊娠糖尿病研究において、被験体は若く（１８歳〜４０歳）、慣用的な（選択的な）帝王切開を引き起こす妊娠糖尿病に罹患しているかまたは罹患していない、その他の点では健常な女性である。胎児の分娩後、外科的切開が修復され／閉じられ、産科医は、小さいサンプルを除去した。
【０５０７】
患者２：ラテンアメリカ系糖尿病患者、体重超過、インスリンなし
患者７〜９：非糖尿病の白人、肥満（ＢＭＩ＞３０）
患者１０：ラテンアメリカ系糖尿病患者、体重超過、インスリン投与
患者１１：非糖尿病のアメリカ黒人、体重超過
患者１２：ラテンアメリカ系糖尿病患者、インスリン投与
脂肪細胞分化は、Ｏｓｉｒｕｓ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ／ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒの部門）から入手されたドナー前駆体細胞において、２つの複製のみ有するドナー３Ｕを除いて三連で誘導された。Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓの科学者は、ＣｕｒａＧｅｎに対してＭａｒｋ  Ｆ．Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒら、Ｍｕｌｔｉｌｉｎｅａｇｅ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｕｍａｎ  Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９９年４月２日：１４３−１４７において見出される公開された手段に基づいてヒト間葉幹細胞（ＨｕＭＳＣｓ）を単離し、増殖および分化した。Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓはトリゾール溶解物、ｍＲＮＡ単離およびｄｓ  ｃＤＮＡ生成に適切な凍結ペレットを提供した。各ドナーの一般的な記載は以下のようである：
ドナー２および３Ｕ：間葉幹細胞、未分化の脂肪
ドナー２および３ＡＭ：脂肪、分化中の脂肪
ドナー２および３ＡＤ：脂肪、分化された脂肪
ヒトの細胞株は、一般的には、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション）、ＮＣＩ、またはＧｅｒｍａｎ腫瘍細胞バンクから入手し、そして以下の組織グループに分けた：曲尿細管、子宮平滑筋、小腸、肝臓ＨｅｐＧ２癌細胞、心臓１次基質細胞、および副腎皮質アデノーマ細胞。これらの細胞は全て標準の推奨条件下において培養され、そしてＲＮＡは、標準の手順を用いて伸長された。全てのサンプルは一本鎖ｃＤＮＡを生成するためにＣｕｒａＧｅｎで加工された。
【０５０８】
パネル５Ｉは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉａｍｉ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  ＭｅｄｉｃｉｎｅにおけるＤｉａｖｅｔｅｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから入手した５８歳の女性患者由来の膵臓島を追加された、前に記載した全てのサンプルを含む。島組織は、外側の供給源における総ＲＮＡに加工され、そしてパネル５Ｉに加えるためにＣｕｒａＧｅｎに運ばれた。
【０５０９】
５Ｄパネルおよび５Ｉパネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＧＯ  Ａｄｉｐｏｓｅ＝より大きい網脂肪
ＳＫ＝骨格筋
ＵＴ＝子宮
ＰＬ＝胎盤
ＡＤ＝分化された脂質
ＡＭ＝分化中の脂質
Ｕ＝分化されない幹細胞
（パネルＣＮＳＤ．０１）
パネルＣＮＳＤ．０１のプレートは、２個のコントロールのウェルおよび９４個の試験サンプルを含む。これは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒから入手した死後のヒトの脳組織から単離されたｃＤＮＡを含む。脳を、死後４時間から２４時間の間にドナーの頭蓋冠から切り出し、神経解剖学者によって断片化し、そして液体窒素蒸気中で−８０℃で凍結させた。全ての脳を断片化し、そして明確な関連する神経病理学の診断を確認するために神経病理学者によって試験した。
【０５１０】
疾患の診断を患者の記録から入手する。パネルは、以下の診断のそれぞれに由来する２つの脳、および「正常なコントロール」を含む：アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、欝状態。これらの脳のそれぞれの中で以下の領域を示す：帯状回、大脳側頭極、淡蒼球（ｇｌｏｂｕｓ  ｐａｌｌａｄｕｓ）、黒質、ブロードマン野  ４（主要な運動ストリップ（ｐｒｉｍａｒｙ  ｍｏｔｏｒ  ｓｔｒｉｐ））、ブロードマン野  ７（頭頂皮質）、ブロードマン野  ９（前前頭皮質）、およびブロードマン野  １７（後頭の皮質）。全てではない脳の領域を全ての症例において示す；例えば、ハンチントン病は、淡蒼球の神経変性によって一部特徴付けられ、従ってこの領域は確立されたハンチントン病の症例からは得ることができない。同様に、パーキンソン病は黒質の退化によって特徴付けられ、この領域を得ることをさらに困難にする。正常なコントロールの脳を神経病理学について試験し、そして神経変性に関係しているいかなる病理も含まないことを見出した。
【０５１１】
ＣＮＳパネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用した：
ＰＳＰ＝進行性核上性麻痺
Ｓｕｂ  Ｎｉｇｒａ＝黒質
Ｇｌｏｂ  Ｐａｌｌａｄｕｓ＝淡蒼球
Ｔｅｍｐ  Ｐｏｌｅ＝大脳側頭極
Ｃｉｎｇ  Ｇｙｒ＝帯状回
ＢＡ  ４＝ブロードマン野  ４。
【０５１２】
（パネルＣＮＳ＿神経変性（Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）＿Ｖ１．０）
パネルＣＮＳ＿神経変性＿Ｖ１．０のプレートは、２個のコントロールウェルおよび４７個の試験サンプルを含む。これは、Ｈａｒｖａｒｄ  Ｂｒａｉｎ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＭｃＬｅａｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ）およびＨｕｍａｎ  Ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＶＡ  Ｇｒｅａｔｅｒ  Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍ）から入手した死後のヒトの脳組織から単離されたｃＤＮＡを含む。脳を、死後４時間から２４時間の間にドナーの頭蓋冠から切り出し、神経解剖学者によって断片化し、そして液体窒素蒸気中で−８０℃で凍結させた。全ての脳を断片化し、そして明確な関連する神経病理学の診断を確認するために神経病理学者によって試験した。
【０５１３】
疾患の診断を患者の記録から入手する。パネルは、アルツハイマー病（ＡＤ）患者に由来する６つの脳、および生前に痴呆の兆候を示さない「正常なコントロール」に由来する８つの脳を含む。８つの正常なコントロールの脳は、２つのカテゴリーに分けられる：痴呆もアルツハイマー様の病理症状もないコントロール（コントロール）および重症のアルツハイマー様病理症状の証拠を示す痴呆がないコントロール、（特に、老人斑負荷を０〜３のスケールでレベル３として評価した；０＝斑を示さない、３＝重症のＡＤの老人斑負荷）。これらの脳のそれぞれの範囲で、以下の領域を示す：海馬、側頭皮質（ブロードマン野２１）、体性感覚皮質（ブロードマン野７）、および後頭皮質（ブロードマン野１７）。これらの領域は、ＡＤでの神経変性のすべてのレベルを含むように選ばれた。海馬は、ＡＤでの早期かつ重症の神経欠損の領域である；側頭皮質は、海馬の後に、ＡＤでの神経変性を示すことが知られている；体性感覚皮質は、疾患の後期段階で中程度の神経の死を示す；後頭皮質は、ＡＤで残され、したがってＡＤ患者内の「コントロール」領域として働く。脳のすべての領域がすべての症例において示されるわけではない。
【０５１４】
ＣＮＳ＿神経変性＿Ｖ１．０パネル中の組織を同定するために使用した標識には、以下の略号を使用する：
ＡＤ＝アルツハイマー病の脳；痴呆になっており、そして検死でＡＤ様の病理症状を示した患者
コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）＝コントロールの脳；痴呆がなく、神経病理症状を示さない患者
コントロール（Ｃｏｎｔｒｏｌ）（Ｐａｔｈ）＝コントロールの脳；痴呆ではないが重症のＡＤ様の病理症状を示す患者
Ｓｕｐ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｃｔｘ＝上位の側頭皮質
Ｉｎｆ  Ｔｅｍｐｏｒａｌ  Ｃｔｘ＝下位の側頭皮質。
【０５１５】
（Ａ．ＮＯＶ１：カリウムチャネル様）
ＮＯＶ１遺伝子（ＣＧ５０２４９−０１）の発現は、表１０に記載されたＡｇ２５０３のプライマー−プローブのセットを使用して評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験からの結果を、表１１〜１６に示す。
【０５１６】
【表１０】
2004537266.tif 000135
【０５１７】
【表１１】
2004537266.tif 000136
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【０５１８】
【表１２】
2004537266.tif 000138
2004537266.tif 000139
【０５１９】
【表１３】
2004537266.tif 000140
2004537266.tif 000141
【０５２０】
【表１４】
2004537266.tif 000142
2004537266.tif 000143
2004537266.tif 000144
【０５２１】
【表１５】
2004537266.tif 000145
2004537266.tif 000146
2004537266.tif 000147
【０５２２】
【表１６】
2004537266.tif 000148
2004537266.tif 000149
（ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０の概要）：Ａｇ２５０３。このＮＯＶ１遺伝子、カリウムチャネルホモログは、海馬、皮質、扁桃、黒質および視床における高い脳優先発現を示す。これらの領域は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病および他の病理学的な神経変性条件に関連する神経変性に感染しやすい（ｓｕｃｃｅｐｔａｂｌｅ）。実際、カリウムチャネルは、アルツハイマー病を含む神経変性疾患に関連する。これらのチャネルを調節して、Ｋ＋流れを減少させることは、アルツハイマー病の患者における神経変性を減少させるアプローチを提供し得るすると考えられる。従って、この遺伝子産物の機能を調節する試薬は、アルツハイマー病および他の神経変性疾患の患者における神経変性を潜在的に減少し得る。
【０５２３】
さらに、不完全なカリウムチャネルは、てんかんおよびミオキミアを伴う偶発性失調を含むいくつかのＣＮＳ疾患を引き起こすことが公知である。従って、この遺伝子産物の発現または機能の調節は、失調およびてんかんによって引き起こされる症状を処置するのに潜在的に有用であり得る（Ｊｈａｍａｎｄａｓら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｆｏｒ  Ａｍｙｌｏｉｄ  ｂｅｔａ−Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒａｔ  Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｂａｓａｌ  Ｆｏｒｅｂｒａｉｎ  Ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  ８６（３）：１３１２−２０，２００１；ＣｈｉらＰｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌ  ｏｐｅｎｅｒｓ  ｐｒｅｖｅｎｔ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｂｏｖｉｎｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２９０（１）：９−１２，２０００；Ｐｉｃｃｉｎｉ  ら，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ＡＰＰ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｏｐｐｏｓｉｔｅｌｙ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ａｎ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ  ｌｏｏｐ．Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  １１（７）：１３７５−９，２０００；Ｙｕら，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｏｕｔｗａｒｄ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｍａｙ  ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ  ｉｎ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｅｐｔｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｏｒｔｉｃａｌ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｅａｔｈ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ  ５（２）：８１−８，１９９８；Ｃｏｌｏｍら，Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  ｃｈａｎｎｅｌｓ  ｉｎ  ａｍｙｌｏｉｄ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ７０（５）：１９２５−３４，１９９８）。
【０５２４】
（一般＿スクリーニング＿パネル＿ｖ１．４（Ｇｅｎｅｒａｌ＿ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ＿ｐａｎｅｌ＿ｖ１．４）の概要）
Ａｇ２５０３。同じプローブ／プライマーセットを用いた２つの実験の結果は、脳における最も高い発現を伴うよい一致を示す。中枢神経系における潜在的な有用性の議論についてはＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０を参照のこと。
【０５２５】
正常な前立腺ならびに乳癌、肺癌、および卵巣癌から誘導された細胞株における中程度〜低い発現がまた存在する。従って、この発現は、これらの組織のいずれかにおける癌の存在に対する診断マーカーとして使用され得る。さらに、抗体または低分子インヒビターによる遺伝子産物の活性の阻害が、これらの癌の処置に潜在的に使用され得る。
【０５２６】
両方の実験において、成人の腎臓（ＣＴ＝３５〜３６）と比較する場合、胎児の腎臓における有意に高いレベルの発現（ＣＴ＝３０〜３１）がまた存在する。従って、この遺伝子の発現は、この組織の成人と胎児との間の供給源を区別するために使用され得る。さらに、胎児の腎臓におけるより高いレベルの発現は、この遺伝子産物がこの器官の発達に関与し得ることを示唆する。従って、この遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または機能の治療的な調節は、腎臓の疾患の処置に有用であり得る。
【０５２７】
代謝機能を伴う組織の間における、このカリウムチャネルホモログの発現は、脳下垂体において最も高く、２つの独立した実験の間に非常に良好な一致を示す。カリウムチャネルは、下垂体細胞における分泌の調節に関与し、そして低分子インヒビターまたは抗体のような治療剤によるそれらの調節は、下垂体における特異的な分泌活性を調節するために使用され得る。
【０５２８】
（パネル１．３Ｄの概要：）Ａｇ２５０３。同じプローブ／プライマーセットを用いた２つの実験の結果は、両方の実験において最も高い発現が脳において見られるよい一致を示す。中枢神経系における潜在的な有用性の議論についてはＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０を参照のこと。
【０５２９】
中程度〜低い発現がまた、いくつかの癌細胞株（肺および卵巣）ならびに正常な前立腺および乳房において観察される。従って、この発現は、肺癌および卵巣癌に対する診断マーカーとして使用され得る。さらに、抗体または低分子インヒビターの適用を介するこの遺伝子産物の活性の阻害は、肺癌または卵巣癌の処置に効果的である。
【０５３０】
パネル１．４に示すように、代謝組織の間のＮＯＶ１遺伝子の発現は、下垂体において最も高い。有意に低いレベルの発現が、副腎および胎児の骨格筋に見られる。カリウムチャネルは、下垂体細胞における分泌の調節に関与し、そして低分子インヒビターまたは抗体のような治療剤によるそれらの調節は、下垂体ならびに他の組織における特異的な分泌活性を調節するために使用され得る。
【０５３１】
両方の実験において、成人の骨格筋における発現（ＣＴ＝４０）と比較して、胎児の骨格筋の有意に高いレベルの発現（ＣＴ＝３３）がまた存在する。従って、ＮＯＶ１遺伝子の発現は、この組織の成人と胎児との間の供給源を区別するために使用され得る。さらに、胎児の骨格筋におけるより高いレベルの発現は、この遺伝子が胎児における骨格筋の発達に関与し得ることを示唆する。従って、ＮＯＶ１遺伝子によってコードされるタンパク質発現または機能の治療的調節は、弱い筋肉またはジストロフィーの筋肉の質量または機能を成人において回復するために有用であり得る。
【０５３２】
（パネル２Ｄの概要：）Ａｇ２５０３。ＮＯＶ１遺伝子の発現は、２つの独立した実験の間に良好な一致を示し、乳癌サンプルにおいて発現が最も高い（ＣＴ＝２５〜２７）。ＮＯＶ１遺伝子の発現は正常な隣接組織と比較して、乳癌および前立腺癌において増加する。従って、ＮＯＶ１遺伝子の発現は、乳癌および前立腺癌の存在に対する診断マーカーとして使用され得る。さらに、抗体または低分子インヒビターの適用を介するＮＯＶ１遺伝子の活性の治療阻害は、これらの癌の処置に効果的であり得る。
【０５３３】
（パネル３Ｄの概要：）Ａｇ２５０３。ＮＯＶ１遺伝子の発現は、２つの独立した実験の間に良好な一致を示す。最も高いレベルの発現は、肺癌細胞株（ＮＣＩ−Ｈ１４６）（ＣＴ−３０〜３３）に見られる。従って、ＮＯＶ１遺伝子の発現は、肺癌に対する診断マーカーとして潜在的に使用される。さらに、ＮＯＶ１遺伝子によってコードされるタンパク質の活性の阻害はまた、肺癌の処置において有用であり得る。
【０５３４】
（パネル４Ｄの概要：）Ａｇ２５０３。このプローブ−プライマーセットを用いる１つの実験からのデータは含まれない。良好でないａｍｐプロットは、この実験での実験的な困難さが存在すること示す。
【０５３５】
（パネルＣＮＳ＿１の概要：）Ａｇ２５０３。このパネルに遍在する発現は、このタンパク質産物の脳における存在を確認する。中枢神経系における潜在的な有用性を議論するために、ＣＮＳ＿神経変性＿ｖ１．０を参照すること。
【０５３６】
（Ｂ．ＮＯＶ２：ガラニンレセプター１型（ＧＡＬＲ１）様）
ＮＯＶ２遺伝子（ＣＧ５０２９３−０１）の発現は、表１７に記載されたＡｇ２５３４のプライマー−プローブのセットを使用して評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験からの結果を、表１８、および１９に示す。
【０５３７】
【表１７】
2004537266.tif 000150
【０５３８】
【表１８】
2004537266.tif 000151
2004537266.tif 000152
【０５３９】
【表１９】
2004537266.tif 000153
2004537266.tif 000154
2004537266.tif 000155
（パネル１．３Ｄの概要：）Ａｇ２５３４。ＮＯＶ２遺伝子の発現は、神経膠腫細胞株（ＳＦ−２９５）に制限される。従って、この７ｔｍレセプターホモログの発現は、脳癌のこの形態に対するマーカーとして使用され得る。さらに、ＮＯＶ２遺伝子産物の治療阻害は、この分子を過剰発現する癌の処置に有用であり得る。サンプルウェルの１つにおける潜在的な問題のために同じプローブ−プライマーセットを用いる第２の実験からのデータが含まれないことに注意していただきたい。
【０５４０】
（パネル３Ｄの概要：）Ａｇ２５３４。発現は、このパネルの全てのサンプルにおいて低い／検出不可能である（ＣＴ＞３４．５）。（データは示さない）。
【０５４１】
（パネル４Ｄの概要：）Ａｇ２５３４。この転写物は、ＴＮＦ−α刺激された線維芽細胞および微細血管内皮において発現される。それはまた、記憶Ｔ細胞（ＣＤ４５ＲＯ）および分極されたＴ細胞（Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｒ１）に発現される。この転写物によってコードされるタンパク質は、Ｔ細胞、活性化された線維芽細胞および内皮のサブセットを同定するために使用され得る。このタンパク質で設計される治療剤は、活性化されたＴ細胞、内皮または線維芽細胞が重要である疾患（喘息、肺気腫、乾癬およびＩＢＤが挙げられる）の処置に使用され得る。
【０５４２】
（Ｃ．ＮＯＶ３：Ｐ２Ｙプリン受容体１様）
遺伝子ＣＧ５０２３７−０１の発現は、表２０に記載されたＡｇ１９０５のプライマー−プローブのセットを使用して評価された。ＲＴＱ−ＰＣＲ実験からの結果を、表２１〜２３に示す。
【０５４３】
【表２０】
2004537266.tif 000156
【０５４４】
【表２１】
2004537266.tif 000157
2004537266.tif 000158
2004537266.tif 000159
【０５４５】
【表２２】
2004537266.tif 000160
2004537266.tif 000161
【０５４６】
【表２３】
2004537266.tif 000162
2004537266.tif 000163
2004537266.tif 000164
（パネル１．３Ｄの概要：）Ａｇ１９０５。同じプローブ／プライマーセットを用いた２つの実験の結果は、肺癌細胞株ＳＨＰ−７７（ＣＴ＝３０）および気管（ＣＴ＝３０〜３１）において最も高い発現を伴うよい一致を示す。結腸および卵巣由来の細胞株中のＮＯＶ３遺伝子の有意な発現がまた存在する。この遺伝子は正常な組織と比較して、肺癌、卵巣癌および結腸癌由来の細胞株においてより高く発現されるように、異なる型のこれらの癌において役割を果たし得る。さらに、正常な脳および膵臓における発現は、これらの組織から誘導される癌細胞株よりも高いと思われる。従って、ＮＯＶ３遺伝子の発現は、結腸癌、卵巣癌、脳癌、肺癌および膵臓癌に対するマーカーまたは治療法として使用され得る。さらに、ペプチド、キメラ分子または低分子薬物を用いるこの遺伝子の生成物の治療的変調は、これらの癌の治療において有用であり得る。
【０５４７】
扁桃体、海馬、視床、大脳皮質、および脊髄を含む中枢神経系に含まれる組織におけるＮＯＶ３遺伝子の有意な発現がまた存在する。
【０５４８】
ＧＤＮＦ感受性感覚ニューロンにおいて見出されるプリン受容体は、侵害受容器機能を媒介する。ＮＯＶ３遺伝子産物は、プリン受容体のホモログであるため、このレセプターの作用をブロックする薬剤は、疼痛の処置に有用性を有し得、鎮痛剤として作用するかまたは慢性的疼痛の樹立を阻害するかのいずれかである。さらに、アデノシンは、海馬、皮質、脳幹神経節、および視床のような脳領域において有意な神経調節性役割を果たすため、ＮＯＶ３プリン受容体−ホモログは、これらの脳領域においてアデノシンの作用に関与するためにある部分に局在化される。ＮＯＶ３遺伝子によってコードされるタンパク質は、Ｐ２Ｙ４プリン受容体およびＰ２Ｙ６プリン受容体にたいして最も相同であり、その機能は、これらのレセプターによって誘導されるＰＬＣ媒介Ｃａ２＋流動化と類似であり得ることを示唆する。Ｃａ２＋流動化は、神経伝達物質放出を導く分子プロセスの重要な要素である。アデノシンは、脳におけるグルタミン酸（主要な興奮性アミノ酸神経伝達物質）の放出を調節する。グルタミン酸は、脳卒中を含む多数の病理学条件における興奮毒性神経損傷および神経死を及ぼす。Ａ１アデノシンレセプターのアゴニストは、グルタミン酸放出のＧタンパク質結合阻害を介してこの損傷を弱毒化する。Ａ２レセプターのアンタゴニストはまた、グルタミン酸により誘導される興奮毒性を弱毒化する。従って、ＮＯＶ３遺伝子によってコードされるタンパク質を阻害または刺激する薬剤は、脳におけるグルタミン酸の放出、および、これらの領域におけるグルタミン酸の引き続く作用に影響を及ぼす可能性がある。ＮＯＶ３遺伝子産物がグルタミン酸放出に関してＡ１レセプターと類似に機能する場合、推定レセプターのアゴニストが脳卒中の処置に有用性を有する可能性がある。さらにＡ２ａプリン受容体のアンタゴニストは、抗鬱薬である。従って、ＮＯＶ３遺伝子産物のアンタゴニストは、有用な抗鬱薬であり得る。Ａ２ａレセプターアンタゴニストもまた、マウスにおけるパーキンソン様症状を阻止し、ＮＯＶ３遺伝子産物アンタゴニストがまたパーキンソン病の処置に有用性を有し得ることを示唆する（Ｌｉｕら，Ｐ２Ｙ  ｐｕｒｉｎｏｃｅｐｔｏｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｍｏｂｉｌｉｚｅｓ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｃａ２＋  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｉｎ  ｒａｔ  ｉｎｔｒａｃａｒｄｉａｃ  ｎｅｕｒｏｎｅｓ．Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．５２６  Ｐｔ２：２８７−９８，２０００；Ｏｎｇｉｎｉら，Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｆａｒｍａｃｏ．５６（１−２）：８７−９０，２００１；Ｃｈｅｎら，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｃａｆｆｅｉｎｅ  ａｎｄ  Ａ（２Ａ）  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２１：ＲＣ１４３，２００１；Ｗａｒｄａｓら，ＳＣＨ５８２６１，ａｎ  Ａ（２Ａ）  ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ｃｏｕｎｔｅｒａｃｔｓ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ−ｌｉｋｅ  ｍｕｓｃｌｅ  ｒｉｇｉｄ��ｔｙ  ｉｎ  ｒａｔｓ．Ｓｙｎａｐｓｅ．４１：１６０−７１，２００１；Ｄｒｉｅｓｓｅｎら，Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃ  ｆｉｂｅｒ−ｅｖｏｋｅｄ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｒｅｄ  ２  ｉｎ  ｒａｔ  ｔｈａｌａｍｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．７９６（１２）：２８４−９０，１９９８；Ｅ１  Ｙａｃｏｕｂｉら，Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａ２Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｎｏｃｋｏｕｔ  ｍｉｃｅ．Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３４：６８−７７，２００１）。
【０５４９】
（パネル２Ｄの概要：）Ａｇ１９０５。ＮＯＶ３遺伝子の最も高い発現は、結腸癌において検出される（ＣＴ＝３０．４）。さらに、この遺伝子の発現は、このパネル中に存在する６つ全ての対応する組織の対における正常な隣接組織と比較する場合、結腸癌において、過剰発現されることを示す。従って、ＮＯＶ３遺伝子の発現は、結腸癌と正常の組織の間を区別するために使用され得る。さらに、ＮＯＶ３遺伝子産物の機能または活性の治療的調節は、結腸癌の処置に有効であり得る。そのＮＯＶ３遺伝子はまた、対応する癌にかかった組織と比較する際に、正常な腎臓に存在するその遺伝子の過剰発現によって、腎臓における逆の結合を示す。従って、その遺伝子の発現はまた、正常な腎臓組織と癌にかかった腎臓組織との間を区別するために使用され得、そしてその遺伝子産物の治療的調節は、腎臓癌の処置に効果があり得る。
【０５５０】
（パネル４Ｄの概要：）Ａｇ１９０５。ＮＯＶ３遺伝子の発現は、胸腺に限定される（ＣＴ＝３１．９）。この遺伝子によってコードされる推定ＧＰＣＲは、プリン受容体が胸腺細胞において示されたので、Ｔ細胞増殖において重要であり得る。ＮＯＶ３遺伝子によってコードされるタンパク質で設計される免疫調節治療薬物は、胸腺におけるＴ細胞生成を調節し得、組織拒絶の予防、自己免疫障害の処置およびＡＩＤＳのようなウイルス性疾患の処置に重要であり得る。さらに、転写体によってコードされるタンパク質に対して設計された転写体または抗体は、特定の成長段階における胸腺細胞のサブセットを同定する診断マーカーとして使用され得る（Ｎａｇｙら，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ＡＴＰ  ｉｓ  ｄｏｓｅ−  ａｎｄ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｐＨ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．７２：２３−３０，２０００）。
【０５５１】
（Ｄ．ＮＯＶ４ａおよびＮＯＶ４ｂ：ＬＯＭＰ様）
ＮＯＶ４ａ遺伝子（ＣＧ５０２５５−０１）およびＮＯＶ４ｂ改変体（ＣＧ５０２５５−０２）の発現を、プライマー−プローブセットＡｇ２５１０を用いて評価し、表２４に記載した。ＲＴＱ−ＰＣＲの実行の結果を表２５〜表２８に示す。
【０５５２】
【表２４】
2004537266.tif 000165
【０５５３】
【表２５】
2004537266.tif 000166
2004537266.tif 000167
【０５５４】
【表２６】
2004537266.tif 000168
2004537266.tif 000169
【０５５５】
【表２７】
2004537266.tif 000170
2004537266.tif 000171
2004537266.tif 000172
【０５５６】
【表２８】
2004537266.tif 000173
2004537266.tif 000174
（ＣＮＳ  神経変性  ｖ１．０の概要）：（Ａｇ２５１０）このパネルは、試験された条件での発現レベルと疾患との間の明確な関連の証拠を示さない。しかし、これらの結果は、脳内のＮＯＶ４遺伝子の発現を確認する。中枢神経系における潜在的有用性の議論に関してパネル１．３Ｄを参照のこと。
【０５５７】
（パネル１．３Ｄの概要）（Ａｇ２５１０）ＮＯＶ４遺伝子は、このパネル上のほとんどの組織中および細胞株で、低いレベル〜中程度のレベルで発現され、肺癌細胞株（ＣＴ＝２８．６２）において最も高い発現が見出される。この遍在する発現は、その発現が、大多数の細胞型についての細胞の生存および増殖において、役割を果たすことを示唆する。正常な前立腺、膵臓、および卵巣における発現が、これらの組織由来の腫瘍細胞株と比較して、より低いことが明らかである。従って、ＮＯＶ４遺伝子の発現は、潜在的に、これらの癌についての診断マーカーとして用いられ得る。
【０５５８】
代謝組織の中で、心臓および骨格筋におけるこのＬＯＭＰ様遺伝子の発現は、最も強力であるが、胎児の心臓および胎児の骨格筋は、非常に低いレベルのこの遺伝子の発現をする。従って、ＮＯＶ４遺伝子を用いて、これらの２つの組織の成熟状態と胎児の状態との間で区別し得る。胃、膵臓、唾液腺、小腸、肝臓、胎児の肝臓、および脂肪において、より低いレベルのＮＯＶ４遺伝子が発現される。配列中のＬＩＭドメインおよびＰＤＺドメインの存在によって証明されるように、ＮＯＶ４遺伝子によってコードされるＬＯＭＰ様タンパク質は、タンパク質−タンパク質相互作用に関連し得る。従って、ＮＯＶ４遺伝子の発現または活性の調節は、この遺伝子を発現する器官の発達または生理学的活性に影響し得る。
【０５５９】
脳を通しての中程度の発現、および特に扁桃、海馬、黒質、皮質、小脳における中程度の発現は、これらのＣＮＳ組織において可能性のある機能を示唆している。
【０５６０】
ＬＩＭドメインのみのタンパク質は、タンパク質−タンパク質相互作用を媒介するＬＩＭドメインのみを含み、一方、他のドメイン（例えば、ジンクフィンガードメイン）は存在しない。従って、これらのタンパク質は、ドメインの非存在に依存する機能を有する、ＬＩＭタンパク質のインヒビターとして作用し得る。ＬＩＭドメインタンパク質は、神経発達および下垂体発達における役割を果たす。従って、ＮＯＶ４遺伝子によってコードされるタンパク質の発現または機能を調節する薬剤は、調節不全の神経発達の疾患（例えば、自閉症または運動失調）に有用で有り得る（Ｐｕｔｉｌｉｎａら、Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｃＤＮＡ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ａ  ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙ  ｓｐｅｉｃｅｄ  ＬＩＭ  ｄｏｍａｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２５２（２）：４３３−９，１９９８；Ｎｅｔｃｈｉｎｅら、Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ＬＨＸ３  ｒｅｓｕｌｔ  ｉｎ  ａ  ｎｅｗ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｒｅｖｅａｌｅｄ  ｂｙ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  ２５（２）：１８２−６、２０００）。
【０５６１】
（パネル２．２の概要）：（Ａｇ２５１０）ＮＯＶ４遺伝子は、このパネル上のほとんどの組織において低いレベル〜中程度のレベルで発現され、肺周縁サンプルにおいて最も高い発現（ＣＴ＝２８．４）を有する。ＮＯＶ４遺伝子の発現は、このパネル中に存在する７対の組織うち５対における癌と比較した場合、正常な肺において過剰発現されることが明らかであり、そして正常な隣接組織と比較して、肝臓に対する転移性癌での減少した発現が明らかである。従って、ＮＯＶ４タンパク質の減少した発現は、潜在的に、これらの癌の存在についての診断マーカーとして用いられ得る。さらに、ＮＯＶ４遺伝子産物の増加した活性または発現は、肺癌の治療において作用し得る。
【０５６２】
（パネル４Ｄの概要）：（Ａｇ２５１０）この翻訳物は、処置に関らず、線維芽細胞および上皮細胞において高度に発現され、皮膚線維芽細胞において最も高い発現（ＣＴ＝２６）を有する。この翻訳物はまた、正常な組織においても高度に発現される。従って、この発現プロファイルは、この翻訳物またはその翻訳物がコードするＮＯＶ４タンパク質が、線維芽細胞および内皮細胞を同定するために用いられ得ることを示唆する。
【０５６３】
（Ｅ．ＮＯＶ５：上皮増殖因子様）
ＮＯＶ５遺伝子（ＣＧ５０２５３−０１）の発現を、表２９に記載されるプライマー−プローブセットＡｇ２５０５を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ試行の結果を、表３０〜３２に示す。
【０５６４】
【表２９】
2004537266.tif 000175
【０５６５】
【表３０】
2004537266.tif 000176
2004537266.tif 000177
【０５６６】
【表３１】
2004537266.tif 000178
2004537266.tif 000179
【０５６７】
【表３２】
2004537266.tif 000180
2004537266.tif 000181
（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０の概要：Ａｇ２５０５）アルツハイマー病患者の側頭皮質におけるＮＯＶ５遺伝子の非常に高い発現は、神経変性疾患におけるこの遺伝子（ＥＧＦホモログ）の機能的役割を示唆する。一般に、βセクレターゼの有利な選択的プロセシングであると考えられるαセクレターゼ活性は、神経細胞においてＥＧＦによって増大される。このことは、ここで観察された増大した発現が、脳において補償的に作用して、アルツハイマー病の機構に対抗することを示唆する。従って、ＮＯＶ５遺伝子によってコードされるタンパク質は、アルツハイマー病および他の神経変性疾患の処置のための潜在的な治療剤であり得る。
【０５６８】
ＥＧＦはまた、海馬における長期相乗作用（ＬＴＰ）（学習および記憶の基礎となると考えられるプロセス）を促進することが公知である。従って、ＮＯＶ５遺伝子は、単独でか、またはｂＦＧＦのような他の増殖因子と組み合わせて使用される場合、記憶障害（例えば、神経変性疾患および加齢）を処置する際の有用性を有する。
【０５６９】
さらに、ＥＧＦは、パーキンソン病における喪失に対して選択的に攻撃されやすいドーパミン作用性ニューロンの増殖および分化を支持する。従って、ＮＯＶ５遺伝子産物は、パーキンソン病を処置する際の有用性を有し得る（Ｓｌａｃｋら、Ｒａｐｉｄ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｂｙ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ：ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ  Ｃ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ  ３２７（Ｐｔ  １）：２４５−９、１９９７；Ａｂｅら、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｂａｓｉｃ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｏｎ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｎｔａｔｅ  ｇｙｒｕｓ  ｏｆ  ｆｉｍｂｒｉａ−ｆｏｒｎｉｘ−ｌｅｓｉｏｎｅｄ  ｒａｔｓ、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ５９３（２）：３３５−８、１９９２；Ｓｔｏｒｃｈら、Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｓｅｎｃｅｐｈａｌｉｃ  ｎｅｕｒａｌ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ、Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ  １７０（２）：３１７−２５、２００１）。
【０５７０】
（パネル１．３Ｄの概要：Ａｇ２５０５）ＮＯＶ５遺伝子の最も高い発現は、甲状腺（ＣＴ＝２９．３）においてであったが、他の代謝組織（骨格筋、胎児骨格筋、小腸、胃、膵臓、脂肪および胎児心臓を含む）においては、低いがなお有意なレベルの発現が見られた。非常に低いレベルはまた、心臓および胎盤において見られた。ＮＯＶ５遺伝子は、推定新規接着分子をコードする。マウスでの研究は、ＰＯＥＭ（メプリン（ｍｅｐｒｉｎ）を有する前骨芽細胞上皮増殖因子様反復タンパク質、Ａ５タンパク質およびレセプタータンパク質チロシンホスファターゼのｍｕドメイン）またはネフロネクチン（ｎｅｐｈｒｏｎｅｃｔｉｎ）と称される、ＮＯＶ５遺伝子に非常に相同な遺伝子（おそらく、このヒト遺伝子のマウスオルソログ）を明らかにした。ＰＯＥＭ／ネフロネクチンは、２つの独立した公開データセットによって証明されるように、α（８）β（１）インテグリンのリガンドであるようである。インテグリンは、発生および器官形成を媒介することが公知である。α（８）β（１）インテグリンの他の公知のリガンドとしては、フィブロネクチン、ビトロネクチン、テネイシンおよびオステオポンチンが挙げられる。従って、タンパク質または抗体の治療剤によって生じるＮＯＶ５遺伝子の発現または活性の調節は、α（８）β（１）インテグリンシグナル伝達に関与する障害についての有効な治療剤であり得る。
【０５７１】
全体的に、ＮＯＶ５遺伝子は、このパネル上の正常組織において低い〜中程度のレベルで発現される。さらに、脳、前立腺、肺および結腸の癌細胞株は、正常器官と比較して、非常に低レベルの発現を示す。このことは、この分子が、これらの癌の治療的インヒビターとして潜在的に使用され得ることを示唆する。
【０５７２】
脳の黒質、海馬、皮質、扁桃、視床および脊髄における発現は、これらの領域によって媒介されるＣＮＳプロセスにおける、ＮＯＶ５遺伝子産物のさらなる機能的役割を示す。中枢神経系における有用性の議論については、ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０を参照のこと（Ｍｏｒｉｍｕｒａら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ＰＯＥＭ：ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ  ｔｈａｔ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｌｐｈａ８ｂｅｔａ１  ｉｎｔｅｇｒｉｎ、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４５）：４２１７２−８１、２００１；Ｂｒａｎｄｅｎｂｅｒｇｅｒら、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｎｅｐｈｒｏｎｅｃｔｉｎ  ｔｈａｔ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｌｐｈａ８ｂｅｔａ１  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｋｉｄｎｅｙ、Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １５４（２）：４４７−５８、２００１；Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ：ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｐａｒａｄｉｇｍｓ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１１、５４９−５９９、１９９５；ＣｌａｒｋおよびＢｒｕｇｇｅ、Ｉｎｔｅｇｒｉｎｓ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐａｔｈｗａｙｓ：ｔｈｅ  ｒｏａｄ  ｔａｋｅｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６８、２３３−２３９、１９９５）。
【０５７３】
（パネル４Ｄの概要：Ａｇ２５０５）この転写物の最も高い発現は、胸腺および肺において見出される（ＣＴ＝２７〜２８）。この肺の発現と一致して、この転写物は、肺粘膜表皮細胞株Ｈ２９２において見出され、そしてＴｈ２サイトカインであるＩＬ４およびＩＬ９での処理の際にアップレギュレートされる。ＮＯＶ５遺伝子はまた、ＩＬ４で処理された胚線維芽細胞において低レベルで発現される。この転写物プロフィールは、タンパク質または抗体の治療剤によって生じるＮＯＶ５遺伝子の発現または活性の調節が、炎症性肺疾患（例えば、喘息、気腫および慢性閉塞性肺疾患）の処置のために有益であり得ることを示唆する。さらに、この転写物によってコードされるタンパク質を用いて設計される治療剤は、炎症の間に胸腺の正常な機能を維持または回復するために重要であり得る。
【０５７４】
（Ｆ．ＮＯＶ６ａ〜ＮＯＶ６ｃ：ヒアルロナン（ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ）媒介性運動性レセプター様）
ＮＯＶ６ａ遺伝子（ＣＧ５０２３９−０１）ならびに改変体ＮＯＶ６ｂ（ＣＧ５０２３９−０２）およびＮＯＶ６ｃ（ＣＧ５０２３９−０３）の発現を、表３３に記載されるプライマー−プローブセットＡｇ１９０１を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ試行の結果を、表３４〜３７に示す。
【０５７５】
【表３３】
2004537266.tif 000182
【０５７６】
【表３４】
2004537266.tif 000183
2004537266.tif 000184
2004537266.tif 000185
【０５７７】
【表３５】
2004537266.tif 000186
2004537266.tif 000187
【０５７８】
【表３６】
2004537266.tif 000188
2004537266.tif 000189
2004537266.tif 000190
【０５７９】
【表３７】
2004537266.tif 000191
2004537266.tif 000192
（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０の概要：Ａｇ１９０１）
発現は、このパネル中の全てサンプルにおいて、低い／検出不能である（ＣＴ＞３５）（データ示さず）。
【０５８０】
（パネル１．３Ｄの概要：Ａｇ１９０１）ＮＯＶ６遺伝子は、このパネル中のほとんど全ての癌細胞株によって発現され、神経膠星状細胞腫において最も高い発現である（ＣＴ＝２９．８）。ほとんどの正常組織において、有意に低い発現レベルが存在する。このことは、ＮＯＶ６遺伝子の発現が、細胞増殖に必要とされることを示唆する。従って、ペプチド、抗体、化学分子または低分子薬物の使用を介した、ＮＯＶ６遺伝子産物の治療的調節は、これらの細胞株が由来する癌の治療において有用であり得る。
【０５８１】
代謝組織の中で、低いが有意な発現レベルは、胎児骨格筋、胎児肝臓および小腸において見られる。これらの組織におけるＮＯＶ６遺伝子の発現は、これらの組織における増殖因子に対する細胞の応答を調節し得る。従って、ペプチド、低分子薬物または抗体によるＮＯＶ６遺伝子の調節は、特定の細胞外シグナルまたは増殖因子に対するこれらの組織の応答を調節し得る（Ｃｈｅｕｎｇら、Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ（ＲＨＡＭＭ）、ａ  ｈｙａｌａｄｈｅｒｉｎ  ｔｈａｔ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｔｏ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ２７（２）：１３５−４２、１９９９）。
【０５８２】
（パネル２Ｄの概要：Ａｇ１９０１）ＮＯＶ６遺伝子は、このパネルにおいて低レベルで発現され、最も高い発現は、卵巣癌サンプルにおいて見られる（ＣＴ＝３１．１）。ＮＯＶ６遺伝子の発現は、正常な対応する組織と比較して、結腸、肺、腎臓、卵巣、膀胱、乳房および胃の癌に関連する。従って、ＮＯＶ６遺伝子の発現は、これらの癌のマーカーとして使用され得る。さらに、ペプチド、抗体、化学分子または低分子薬物の使用を介したＮＯＶ６遺伝子産物の治療的調節は、これらの癌の治療において有用であり得る（ＨａｌｌおよびＴｕｒｌｅｙ、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ：ＲＨＡＭＭ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｃｅｌｌ  ｌｏｃｏｍｏｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｏｎｃｏｌ  ２６（３）：２２１−９、１９９５）。
【０５８３】
（パネル３Ｄの概要：Ａｇ１９０１）ＮＯＶ６遺伝子の発現は、このパネル中に存在する全ての癌細胞株間に遍在している。癌に関してのＮＯＶ６遺伝子の潜在的な有用性の議論については、パネル２Ｄを参照のこと。
【０５８４】
（パネル４Ｄの概要：Ａｇ１９０１）ＮＯＶ６転写物の最も高い発現は、活性化Ｂ細胞（Ｂ細胞およびＰＷＭを含む）および活性化バーキットリンパ腫細胞株であるＲａｍｏｓにおいて見出される（ＣＴ  ２７．５）。より低いレベルで、この転写物は、活性化Ｔｈ２  Ｔ細胞において観察されたレベルよりも高いレベルで、活性化Ｔｈ１細胞およびＴｒ１細胞において見出される。この転写物は、ヒアルロン酸媒介性運動性様分子のレセプターと相同であるタンパク質をコードする。このタンパク質は、細胞移動の調節、ならびに線維芽細胞、平滑筋細胞、マクロファージ、リンパ球、神経膠星状細胞および精子の密度依存性接触阻害に関連する。抗体または低分子治療剤によるコードされたタンパク質の発現または活性の調節は、炎症部位に対する活性化Ｔ細胞およびＢ細胞のリクルートメントを予防する際に潜在的に有用であり得、従って、Ｔ細胞またはＢ細胞媒介性の疾患（例えば、自己免疫疾患、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患および狼瘡）の処置において有益であり得る。
【０５８５】
ＮＯＶ６転写物の発現は、例えば、クローン病患者および悪性Ｂ細胞中のインビボの活性化Ｂ細胞において報告されている。従って、抗体または低分子治療剤による、コードされたタンパク質の発現または活性の調節はまた、Ｂ細胞悪性疾患または慢性的に活性化されたＢ細胞（クローン病および慢性関節リウマチを含む）を含む状態の処置において有益であり得る。
【０５８６】
さらに、ＮＯＶ６遺伝子は、活性化された皮膚の繊維芽細胞において発現される。従って、ＮＯＶ６遺伝子によってコードされるタンパク質の発現の調節はまた、例えば、創傷治癒および他の皮膚炎症性疾患（例えば、疥癬）に関連する線維増殖症の処置について有用であり得る（Ｐｉｌａｒｓｋｉら、ＲＨＡＭＭ、ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ，ｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｔｈｙｍｏｃｙｔｅｓ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  ｃｅｌｌｓ：ａ  ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｉｎ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ？Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １４（５−６）：３６３−７４、１９９４；Ｃｒａｉｎｉｅら、Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ（ＲＨＡＭＭ）ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｓ  ｔｈｅ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｌｏｎｅ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＲＨＡＭＭ  ｖａｒｉａｎｔｓ、Ｂｌｏｏｄ  ９３（５）：１６８４−９６、１９９９；Ｔｕｒｌｅｙら、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｍｏｔｉｌｉｔｙ  ｏｎ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ、Ｂｌｏｏｄ  ８１（２）：４４６−５３、１９９３；Ｌｏｖｖｏｒｎ  ３ｒｄら、Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｉｎ  ｆｅｔａｌ  ｅｘｃｉｓｉｏｎａｌ  ｓｋｉｎ  ｗｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｆｉｂｒｏｐｌａｓｉａ、Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｓｕｒｇ  ３３（７）：１０６２−９、考察１０６９−７０、１９９８）。
【０５８７】
（Ｇ．ＮＯＶ７：セルピン（Ｓｅｒｐｉｎ）様）
ＮＯＶ７遺伝子（ＣＧ５４３０８−０５）の発現を、表３８に記載されるプライマー−プローブセットＡｇ５４８を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ試行の結果を、表３９〜４２に示す。
【０５８８】
【表３８】
2004537266.tif 000193
【０５８９】
【表３９】
2004537266.tif 000194
2004537266.tif 000195
【０５９０】
【表４０】
2004537266.tif 000196
2004537266.tif 000197
2004537266.tif 000198
【０５９１】
【表４１】
2004537266.tif 000199
2004537266.tif 000200
2004537266.tif 000201
【０５９２】
【表４２】
2004537266.tif 000202
2004537266.tif 000203
2004537266.tif 000204
（パネル１．２の概要：Ａｇ５４８）ＮＯＶ７遺伝子は、このパネルにおいて非常に低いレベルで発現される。最も高い発現は、胸腺において見られる（ＣＴ＝３４．３３）。従って、ＮＯＶ７遺伝子の発現は、このパネル上の他のサンプルから胸腺組織を識別する為に使用され得る。さらに、高度に特異的な発現パターンは、ＮＯＶ７遺伝子産物が、胸腺の正常な恒常性に関与し得ることを示唆する。
【０５９３】
（パネル１．３Ｄの概要：Ａｇ５４８）ＮＯＶ７遺伝子は、このパネルにおいて非常に低いレベルで発現される。最も高い発現は、胸腺において見られる（ＣＴ＝３４．３３）。従って、ＮＯＶ７遺伝子の発現は、このパネル上の他のサンプルから胸腺組織を識別する為に使用され得る。さらに、高度に特異的な発現パターンは、ＮＯＶ７遺伝子産物が、胸腺の正常な恒常性に関与し得ることを示唆する。
【０５９４】
（パネル２Ｄの概要：Ａｇ５４８）このパネルにおける最も高い発現は、膀胱癌サンプルであり、２回の試行の間の良好な一致をみる（ＣＴ＝３０．３４および３０．０１）。従って、ＮＯＶ７遺伝子の発現はまた、正常な膀胱組織と癌性膀胱組織との間を識別するために使用され得る。さらに、抗体、化学分子または低分子インヒビターを介したＮＯＶ７遺伝子産物の治療的調節は、膀胱癌の処置において有効であり得る。
【０５９５】
（パネル４Ｄの概要：Ａｇ５４８）この転写物は、ＴＮＦα＋ＩＬ−１βで活性化された小気道上皮において誘導され、そしてまた正常な腎臓においても存在する。この転写物は、推定セルピン様分子（セリンプロテアーゼインヒビター）をコードする。セルピンは、複数の生物学的プロセスに関与し；セルピン機能を変更する変異は、喘息および気腫を含む肺機能不全を生じ得る。この転写物によってコードされるタンパク質を用いて設計される治療剤は、肺障害（例えば、喘息および気腫）の処置について重要であり得る（ＰａｒｍａｒおよびＬｏｍａｓ、Ａｌｐｈａ−１−ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｔｈｅ  ｓｅｒｐｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ  ａｎｄ  ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ、Ｊ  Ｒ  Ｃｏｌｌ  Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｌｏｎｄ  ３４（３）：２９５−３００、２０００；Ｍａｌｅｒｂａら、Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １４  ｌｉｎｋａｇｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ２  ｓｅｒｐｉｎ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ａｓｔｈｍａｔｉｃ  ｆａｍｉｌｉｅｓ、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０７（４）：６５４−８１４、２００１）。
【０５９６】
（Ｈ．ＮＯＶ８ａ〜ＮＯＶ８ｃおよびＮＯＶ８ｅ：Ｂ７ファミリー様）
ＮＯＶ８ａ遺伝子（ＣＧ５０３０９−０１）および改変体ＮＯＶ８ｂ（ＣＧ５０３０９−０２）、ＮＯＶ８ｃ（ＣＧ５０３０９−０３）、ＮＯＶ８ｅ（ＣＧ５０３０９−０４）の発現を、表４３および４４に記載されるプライマー−プローブセット、Ａｇ２５４７およびＡｇ４９３９を使用して評価した。ＲＴＣ−ＰＣＲ試行の結果を、表４５〜５０に示す。
【０５９７】
【表４３】
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【０５９８】
【表４４】
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【０５９９】
【表４５】
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【０６００】
【表４６】
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【０６０１】
【表４７】
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【０６０２】
【表４８】
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【０６０３】
【表４９】
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【０６０４】
【表５０】
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（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０およびパネルＣＮＳ＿１の概要：Ａｇ２５４７）
ＮＯＶ８遺伝子の発現は、このパネルにおいて、いずれの明らかな疾患関連性をも示さない。しかし、これらの結果は、脳におけるＮＯＶ８遺伝子の発現を確認する。脳における潜在的有用性の議論については、パネル１．３Ｄを参照のこと。
【０６０５】
（パネル１．３Ｄの概要）ＮＯＶ８遺伝子は、高度に脳優先的な発現を示し、最も高い発現は、海馬においてである（ＣＴ＝２６．６）。ＮＯＶ８遺伝子は、Ｂ７ファミリー分子と相同なタンパク質をコードする。これらの分子は、中枢神経系炎症の初期段階の間に、Ｔ細胞活性化において役割を果たし得る。炎症プロセスは、アルツハイマー病、多発性硬化症、自閉症、精神分裂病およびうつ病の基礎となる病因として、提案されている。従って、この遺伝子産物の発現または活性を阻害する薬剤は、これらのＣＮＳ障害の処置において有用性を有し得る。
【０６０６】
中程度〜低い発現がまた、２つの肺癌細胞株（ＳＨＰ−７７およびＮＣＩ−Ｈ６９）において見られる。従って、この遺伝子産物の治療的調節は、これらの細胞株の誘導において使用された肺癌の処置において有効であり得る。
【０６０７】
代謝組織の中で、ＮＯＶ８遺伝子は、副腎において中程度の発現を示す。より低い発現は、胎児骨格筋、胎児肝臓および胎盤において見られ、そして非常に低い発現は、胸腺、膵臓、下垂体、胎児心臓および脂肪において見られる。従って、ＮＯＶ８遺伝子またはその産物の調節は、副腎に関与する代謝障害（例えば、クッシング病、アディソン病など）についての治療において使用され得る。
【０６０８】
ＮＯＶ８遺伝子の発現は、成人供給源由来の対応する組織におけるよりも（ＣＴ＝３７〜４０）、胎児供給源由来の骨格筋および肝臓においてより高い（ＣＴ＝３３〜３４）。従って、ＮＯＶ８遺伝子の発現は、成人および胎児の肝臓および骨格筋を識別するために使用され得る。さらに、胎児組織における最も高い発現は、ＮＯＶ８遺伝子産物が、これらの器官の発生に関与し得ることを示唆する。従って、ＮＯＶ８遺伝子の発現または機能の治療的調節は、これらの器官に影響を与える疾患の処置において有効であり得る（Ｌｉｕら、Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｂｅｔａ−１ａ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １１２（１−２）：１５３−６２、２００１；ＯｍａｒｉおよびＤｏｒｏｖｉｎｉ−Ｚｉｓ，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  Ｂ７−１（ＣＤ８０）  ａｎｄ  Ｂ７−２（ＣＤ８６）  ｉｎ  ａｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｂｌｏｏｄ−−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １１３（１）：１２９−１４１、２００１）。
【０６０９】
（パネル２Ｄの概要：Ａｇ２５４７）ＮＯＶ８遺伝子は、このパネル中のほとんどの組織において低レベルで発言される。最も高いレベルの発現は、乳癌転移のサンプルにおいて見られる（ＣＴ＝２８．１３）。正常な隣接組織より僅かに高い発現が、胃、肝臓および前立腺癌において存在する。ＮＯＶ８遺伝子の発現はまた、正常な胃組織と癌性の胃組織、正常な肝臓組織と癌性の肝臓組織、正常な前立腺組織と癌性の前立腺組織の間を識別するために使用され得、そしてこの遺伝子産物の治療的調節は、これらの癌の処置において有効であり得る。
【０６１０】
（パネル４．１Ｄの概要：Ａｇ４９３９）ＮＯＶ８転写物の最も高い発現は、腎臓、肺および胸腺において見出される。この転写物は、Ｔ細胞に対する重要な同時刺激分子であるＢ７様分子をコードする。タンパク質治療剤または抗体による、この転写物によってコードされるタンパク質の活性の調節は、これらの組織の正常な恒常性において役割を果たし得る。
【０６１１】
（パネル４Ｄの概要：Ａｇ２５４７）ＮＯＶ８転写物の最も高い発現は、肺、胸腺および腎臓において見出される。この転写物は、Ｔ細胞に対する重要な同時刺激分子であるＢ７様分子をコードする。タンパク質治療剤または抗体による、この転写物によってコードされるタンパク質の活性の調節は、これらの組織の正常な恒常性において役割を果たし得る。
【０６１２】
（Ｉ．ＮＯＶ９ａ〜ＮＯＶ９ｄ：アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼ様）
ＮＯＶ９ａ遺伝子（ｃｇ−１４０５０９４４６／ＣＧ５５９００−０１）ならびに改変体ＮＯＶ９ｂ（ＣＧ５５９００−０２）、ＮＯＶ９ｃ（ＣＧ５５９００−０３）およびＮＯＶ９ｄ（ＣＧ５５９００−０４）の発現を、表５１に記載されるプライマー−プローブセットＡｇ２６４７を使用して評価した。ＲＴＱ−ＰＣＲ試行の結果を、表５２〜５５に示す。
【０６１３】
【表５１】
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【０６１４】
【表５２】
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【０６１５】
【表５３】
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【０６１６】
【表５４】
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【０６１７】
【表５５】
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（ＣＮＳ＿ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ＿ｖ１．０の概要：Ａｇ２６４７）
ＮＯＶ９遺伝子の発現は、いずれの明らかな疾患関連性をも示さないが、これらの結果は、脳におけるＮＯＶ９遺伝子の発現を確認する。
【０６１８】
（パネル１．３Ｄの概要：Ａｇ２６４７）ＮＯＶ９遺伝子は、このパネル中のサンプル間で遍在して発現され、胎児骨格筋において発現が最も高い（ＣＴ＝２８．７）。中程度のレベルまたは発現は、腎臓および卵巣において検出される。より低いが有意なレベルが、種々の代謝組織（骨格筋、心臓、甲状腺、副腎、胎盤、下垂体、膵臓、胎児肝臓および脂肪を含む）において見られる。ＮＯＶ９遺伝子は、アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼとの相同性を有するタンパク質をコードし、そして脂肪酸代謝に関与し得る。さらに、ＮＯＶ９遺伝子産物に対する低分子治療剤は、肥満のような代謝障害において有用であり得る。
【０６１９】
成人骨格筋（ＣＴ＝３１．９）と比較した場合により高いレベルの胎児骨格筋における発現（ＣＴ＝２８．７）は、ＮＯＶ９遺伝子の発現が、これら２つの組織供給源間を識別するために使用され得ることを示唆する。さらに、胎児骨格筋における最も高いレベルの発現は、ＮＯＶ９によてコードされるタンパク質が、胎児において筋肉の増殖または発達を増強し得、従って、成人における再生能力においても作用し得ることを示唆する。従って、ＮＯＶ９遺伝子にコードされるタンパク質の治療的調節は、筋肉関連疾患の処置において有用であり得る。より具体的には、ＮＯＶ９遺伝子によってコードされるタンパク質を用いる、弱いかまたはジストロフィーの筋肉の処置は、筋肉の量または機能を回復し得る。
【０６２０】
（パネル２Ｄの概要：Ａｇ２６４７）ＮＯＶ９遺伝子は、このパネル中のほとんどの組織において中程度〜低いレベルで発現し、正常な腎臓において最も高い発現であった（ＣＴ＝２８．４３）。以下の器官の正常な隣接組織と比較して、胃、卵巣、乳房、肺および結腸の癌において、僅かに増加した発現が存在する。従って、ＮＯＶ９遺伝子の発現は、これらの癌の存在についての診断マーカーとして潜在的に使用され得る。さらに、低分子インヒビターの適用を介した、ＮＯＶ９遺伝子によってコードされるタンパク質の活性の阻害は、これらの癌の処置について有用であり得る。
【０６２１】
（パネル４Ｄの概要：Ａｇ２６４７）この転写物は、胸腺（ＣＴ  ２８．４）、粘膜表皮細胞株（Ｈ２９２）、活性化正常Ｂ細胞（ＰＷＭで刺激したＢ細胞）、リンパ球Ｂ細胞（Ｒａｍｏｓ）および初代Ｔｈ１細胞において高レベルで発現される。ＮＯＶ９遺伝子は、健康および疾患における免疫応答に重要な広範な細胞型において、低いが有意なレベルで発現される。従って、低分子薬物の適用を介した、ＮＯＶ９遺伝子によってコードされるタンパク質の機能の阻害は、Ｂ細胞、Ｔ細胞および他の細胞型（例えば、粘液産生細胞、胚線維芽細胞）の機能をブロックし得る。この阻害は、自己免疫疾患および炎症性疾患（喘息、慢性閉塞性肺疾患、アレルギー、炎症性腸疾患、エリテマトーデスおよび慢性関節リウマチを含む）に罹患している患者の症状の改善を潜在的に導き得る。
【０６２２】
（他の実施形態）
特定の実施形態が本明細書中で詳細に開示されているが、これは例示の目的のみのための例として行われており、そして添付される特許請求の範囲の範囲に関して限定するようには意図されない。詳細には、種々の置換、変更、および改変が、特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲を逸脱することなく本発明に対して行われ得ることが、本発明者らによって企図される。核酸の出発物質、目的のクローン、ライブラリーの型の選択は、本明細書中に記載されている実施形態の知見を考慮すると、当業者にとって慣用的な事項であると考えられる。他の局面、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲内にあると考えられる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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