(57)【要約】本発明は、健康増強品質を有する組成物の使用法、より具体的にはカバラクトンを有する組成物、並びに組成物の使用および調製に関する。
2004529944.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1重量%〜90重量%、ならびに薬学的に許容される担体を含む薬用軟膏。
【請求項２】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項３】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項４】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項５】
ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1.5重量%〜30重量%、ならびに薬学的に許容される担体を含む、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項６】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項5記載の薬用軟膏。
【請求項７】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項5記載の薬用軟膏。
【請求項８】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項5記載の薬用軟膏。
【請求項９】
ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを2重量%〜25重量%、ならびに薬学的に許容される担体を含む、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項１０】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項9記載の薬用軟膏。
【請求項１１】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項9記載の薬用軟膏。
【請求項１２】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項9記載の薬用軟膏。
【請求項１３】
材料層および材料層に付随する組成物を含むパッチであって、該組成物は、材料層と付随した、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1重量%〜90重量%で有する、パッチ。
【請求項１４】
活性カバラクトンの透過に抵抗性のある、材料層の片側に密接に粘着した保護層をさらに含む、請求項13記載のパッチ。
【請求項１５】
材料層が圧力感受性粘着剤を含む、請求項14記載のパッチ。
【請求項１６】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項15記載のパッチ。
【請求項１７】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項15記載のパッチ。
【請求項１８】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項15記載のパッチ。
【請求項１９】
粘着層に、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1.5重量%〜30重量%と、薬学的に許容される担体とを含む、請求項15記載のパッチ。
【請求項２０】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項19記載のパッチ。
【請求項２１】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項19記載のパッチ。
【請求項２２】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項19記載のパッチ。
【請求項２３】
粘着層に、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを2重量%〜25重量%と、薬学的に許容される担体とを含む、請求項15記載のパッチ。
【請求項２４】
活性カバラクトンがジヒドロカワインである、請求項23記載のパッチ。
【請求項２５】
活性カバラクトンがジヒドロメチスティシンである、請求項23記載のパッチ。
【請求項２６】
活性カバラクトンが、ジヒドロメチスティシン、ジヒドロカワイン、およびカワインの組合せである、請求項23記載のパッチ。
【請求項２７】
ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1重量%〜90重量%、ならびに薬学的に許容される担体を含む薬用軟膏を、疼痛寛解の必要な被験者に投与する段階を含む、疼痛の処置法。
【請求項２８】
材料層および材料層に付随する組成物を含むパッチを疼痛寛解の必要な被験者に投与する段階を含む疼痛処置法であって、該組成物は、材料層に付随した、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを1重量%〜90重量%で有する、疼痛処置法。
【請求項２９】
デスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、およびヤンゴニン、ならびにその組合せからなる群より選択されるカバラクトンを1重量%〜90重量%と、薬学的に許容される担体とを含む薬用軟膏を疼痛寛解の必要な被験者に投与する段階を含む、疼痛の処置法。
【請求項３０】
疼痛が筋膜性疼痛である、請求項27記載の方法。
【請求項３１】
疼痛が痛覚過敏である、請求項27記載の方法。
【請求項３２】
疼痛が予防的鎮痛である、請求項27記載の方法。
【請求項３３】
疼痛が変形性関節性疼痛である、請求項27記載の方法。
【請求項３４】
疼痛が炎症性疼痛である、請求項27記載の方法。
【請求項３５】
疼痛が神経因性疼痛である、請求項27記載の方法。
【請求項３６】
薬用軟膏が、ワセリン、蜜蝋、植物油、またはその組合せをさらに含む、請求項27記載の方法。
【請求項３７】
薬用軟膏が実質的にパラ-アミノ安息香酸を含まない、請求項27記載の方法。
【請求項３８】
ジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシンが合成品である、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項３９】
活性カバラクトンが、水素化カバ抽出物に由来する、請求項1記載の薬用軟膏。
【請求項４０】
パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な水素化抽出物であって、該抽出物は、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含む、水素化抽出物。
【請求項４１】
7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含むパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物を調製するためのプロセスであって、水素ガスの存在下、触媒による生カバ抽出物溶液の化学的還元を含む、プロセス。
【請求項４２】
7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含むパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物においてマイコトキシンの量を減少させるためのプロセスであって、水素ガスの存在下、触媒による生カバ抽出物溶液の化学的還元を含む、プロセス。
【請求項４３】
パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な、マイコトキシン含有量の低減された水素化抽出物であって、該抽出物は、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含み、かつ0.1%未満のマイコトキシンを含む、水素化抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、2002年1月22日に提出された米国出願第60/351,167号、2001年11月30日に提出された米国出願第10/010,201号、2001年5月11日に提出された米国出願第09/853,304号の恩典を主張し、これらはその全体が参照として本明細書に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
背景
有史以前にカバ（パイパー・メチスティカム・フォルスト、Piper methysticum Forst.）が使用されていたと考えられている。植物の起源は、ニューギニア/インドネシア地域であり、ポリネシア人が島から島へとそれを普及させたと考えられている。オセアニア（すなわち、ミクロネシア、メラネシアおよびポリネシアの太平洋諸島の地域社会）は、沈静効果および社交性促進能が報告されているために、儀式およびお祝いにおいて、カバとも称されカバの根から得られる、飲料を何世紀にもわたり飲用していることが知られている地域である。この根および飲料は、キャプテン・ジェームス・クックが1768年に南太平洋を探検した結果、初めて西洋社会で記述されるようになった。多くの神話および逸話がカバの使用に関して語られ、これらは文化毎に異なる。
【０００３】
カバ根の抽出物は、カバラクトンとして知られる構造的に関連した化学化合物のクラスを含むことが知られている。この化学的クラスは少なくとも16個の異なるメンバーが存在することが知られている。抽出物の弛緩作用（すなわち、沈静効果、睡眠誘導効果）が、このクラスの特定のメンバーには存在する。カバラクトンのバイオアベイラビリティーは低く；事実、実際的に水には不溶性である。従って、経口投与の設定におけるバイオアベイラビリティーはいつも解決しなければならない問題である。カバラクトンの活性機序は依然として不明であり、インターロイキンなどのサイトカインに対するその効果も明らかになっていない。
【０００４】
インターロイキン-12（IL-12）などのサイトカインは、炎症刺激に対する急性相応答を媒介し、マクロファージおよび他の細胞の殺菌機能を増強し、特定のリンパ球応答を促進する。例えば、FearonおよびLocksley、Science 272:50(1996)を参照されたい。近年、インビボでの研究により、敗血症（Zismanら、Eur.J.Immunol.27:2994(1997)）、コラーゲン誘導関節炎（Malfaitら、Clin.Exp.Immunol.111:377(1998)）、樹立された大腸炎（米国特許第5,853,697号）、実験的な自己免疫脳脊髄炎（Leonardら、J.Exp.Med.181:381(1995)）、実験的な自己免疫ブドウ膜網膜炎（Yokoiら、Eur.J.Immunol.27:641(1997)）、乾癬（Turkaら、Mol.Med.1:690(1995)）、およびシクロホスファミド誘導糖尿病（Rotheら、Diabetologia 40:641(1997)）などの炎症疾患に対する治療効果において、IL-12の産生阻害が関連づけられている。従って、IL-12阻害活性を有する化合物は、これらの疾病およびIL-12が介する他の疾病を解決するための治療戦略における新しいアプローチを提供する。
【発明の開示】
【０００５】
概要
本発明は、一部には、3つのカバラクトン、すなわちジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、およびカワイン（構造を下記に示す）がIL-12阻害活性を示すという意外な発見に基づく。
【化１】
2004529944.tif 000003
【化２】
2004529944.tif 000004
【化３】
2004529944.tif 000005
【０００６】
従って、本発明の化合物、組成物、および方法は、IL-12が介する疾病および疾病症状（例えばIL-12過剰産生に関連した疾患）の被験者における処置に有用である。IL-12が介する疾病または疾病症状とは、IL-12が関与している疾病または疾病症状、例えば、IL-12が、疾病プロセスのシグナル伝達、媒介、変調、または調節に関与している疾病もしくは疾病症状を意味する。IL-12過剰産生に関連した疾患には、疾患の根源となるIL-12の過剰産生部分が含まれる。
【０００７】
1つの局面において、本発明は、1重量%〜90重量%（例えば1重量%〜40重量%、1.5重量%〜30重量%、2重量%〜25重量%、あるいは、下限が1重量%以上89重量%以下の任意の整数%であり、上限が2%以上90%以下の任意の整数%であるような任意の範囲）で、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトン、ならびに薬学的に許容される担体を含む、薬用軟膏に関する。本明細書における「活性カバラクトン」という用語は、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、またはその組合せのみを意味する。他の局面において、組成物（例えば薬用軟膏）および使用法は、ジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシンが合成品であるもの、すなわち、根の抽出物から直接得られておらず、むしろ1つ以上の化学的転換反応を使用して合成されているものである。
【０００８】
別の局面において、本発明は、活性カバラクトン含有材料層を含む、パッチ（例えば米国特許第5,186,938号を参照されたい）である。より具体的には、材料層、例えばパッドまたは圧力感受性粘着剤は、1重量%〜90重量%（例えば1重量%〜40重量%、1.5重量%〜30重量%、2重量%〜25重量%、あるいは、下限が1重量%以上89重量%以下の任意の整数%であり、上限が2重量%以上90重量%以下の任意の整数%であるような任意の範囲）で、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを受容する基質として作用する。活性カバラクトンは、材料層（例えば表面上に含浸、包埋、または覆膜）に付随した、1重量%〜90重量%（例えば1重量%〜40重量%、1.5重量%〜30重量%、2重量%〜25重量%、あるいは、下限が1重量%以上89重量%以下の任意の整数%であり、上限が2重量%以上90重量%以下の任意の整数%であるような任意の範囲）の活性カバラクトンを有する組成物の形態であり得る。パッチは、選択的に、活性カバラクトンの透過に抵抗性のある、材料層の片側に密接に粘着した保護層を有する。
【０００９】
本発明はまた、必要とする被験者（例えばヒト、イヌ、ネコ）に、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択された活性カバラクトンの有効量を投与する段階を含む、IL-12過剰産生に関連した疾患の処置（例えば治癒、予防、または寛解）法にも関する。処置法は、疾病自体に対して、または症状に対して効果を有する。効果は、客観的、すなわち、測定可能な身体的効果（例えば運動範囲の拡大、腫脹の減少、発疹領域の減少）、あるいは、主観的、すなわち、被験者の感覚または知覚（例えば刺激の減少、過敏の減少、全般的な安堵感）であり得る。方法により処置可能な疾患には、大腸炎、クローン病、糖尿病、脳脊髄炎、多発性硬化症、変形性関節症、歯周病、乾癬、関節リウマチ、敗血症、およびブドウ膜網膜炎などが含まれる。
【００１０】
本発明はまた、必要とする被験者（例えば哺乳動物、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ）に、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択された活性カバラクトンの有効量を投与する段階を含む、疼痛の処置（例えば治癒、予防、または寛解）法にも関する。処置法は、疼痛自体に対して、または症状に対して効果を有する。効果は、客観的、すなわち、測定可能な身体的効果（例えば灼熱感の減少、疼痛の緩和、腫脹の減少、運動性または運動範囲の向上）、あるいは、主観的、すなわち、被験者の感覚または知覚（例えば刺激感の減少、過敏の減少、全般的な安堵感）であり得る。方法により処置可能な疾患には、原発性または続発性痛覚過敏、カプサイシンに伴う灼熱感、筋膜性疼痛、変形性関節性疼痛、予防的鎮痛、神経因性疼痛、および炎症性疼痛などが含まれる。疼痛を処置するための本明細書に記載の化合物および組成物の投与は、本明細書に記載するような化合物または組成物を含む任意のパッチを介することを含む、局所的なものであってもよい。1つの局面においては、方法により、本明細書に記載の化合物または組成物の1回の適用または投与につき約8時間から約24時間の疼痛寛解が得られる。
【００１１】
別の局面において、本発明は、疼痛寛解を必要とする被験者（例えば哺乳動物、ヒト、動物、イヌ、ネコ、ウマ）に、6つの主要なカバラクトン（例えばデスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、およびヤンゴニン）のいずれかまたはそのいずれかの組合せを有する組成物（例えば局所組成物）を投与することによる、疼痛の処置法に関する。別の局面において、本明細書の方法には、6つの主要なカバラクトン（例えばデスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、およびヤンゴニン）のいずれかまたはそのいずれかの組合せを有する組成物（例えば局所組成物）を投与する段階が含まれ、組成物は、実質的に、パラ-アミノ安息香酸（PABA）、カルシウム-d-パントテン酸、またはアロエのいずれかが欠けている（例えば1%未満、0.5%未満、0%から1%の間の任意の比率未満、または0%）。別の局面において、本明細書の方法には、6つの主要なカバラクトン（例えばデスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、ヤンゴニン、またはそのいずれかの組合せ）のいずれかを有する組成物（例えば局所組成物）を投与する段階が含まれ、組成物はさらに、ワセリン、蜜蝋、または植物油（例えばホホバ油）のいずれか、あるいはそのいずれかの組合せを含む。
【００１２】
本発明の別の局面は、容器を含む梱包製品、容器中に配置された活性カバラクトン（カバラクトンは、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される）を含む組成物、ならびに、容器に付着し、IL-12過剰産生に関連した疾患を処置するために活性カバラクトンを適用するための説明書を有するラベル（例えばステッカー、製品折り込み）に関する。
【００１３】
また、本発明には、疾病（例えばIL-12が介する疾病もしくは疾病症状（例えば変形性関節症））または他の疾病（例えば線維筋痛）の処置に使用する本明細書の組成物、ならびに、前記の疾病もしくは疾病症状の処置用の医薬の製造におけるこのような組成物の使用も含まれる。
【００１４】
本発明は、カバカバと称されるパイパー・メチスティカム・フォルスト（Piper methysticum Forst.）（コショウ嗜好品、Piperacerae科）の地下茎由来のカバラクトン高含量の組成物および組成物の製造法に関する。組成物には、高含量のカバラクトンを有するものが含まれ、高い比率でカバラクトン、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを有するものが含まれる。他に、それらを製造する組成物および方法はまた、1つ以上の有害な副作用を伴い得る、カバカバ抽出物に存在する特定の化学的化合物を減少または排除する。
【化４】
2004529944.tif 000006
【化５】
2004529944.tif 000007
【００１５】
本発明の目的はまた、カバラクトンの水素化（例えば触媒的に）により、4つの活性なカバカバ成分（例えばカバラクトン）を、2つの活性なカバラクトン（ジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシン）に収束する方法を提供することである。本発明は、一部には、4つの活性カバラクトンが2セットの化合物群に分類でき、各セットの2つの間の差異が、分子内におけるC-7およびC-8（炭素-炭素結合）連結における二重結合（不飽和）または単結合（飽和結合）の存在であるという洞察に基づく。カバ抽出物は、高い比率で4つのカバラクトン（カワイン、メチスティシン、ジヒドロカワイン、およびジヒドロメチスティシン）を含み、これは水素化によって、より高い比率でジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシンが得られる。さらに、還元プロセス（例えば水素化）により、フラボカワインの側鎖（または他のカバカバ成分）の炭素-炭素二重結合が還元されて、飽和フラボカワイン誘導体（またはより毒性が低いかより容易に単離されるカバカバ成分の他の誘導体）が得られ、これは一部には、色の変化および刺激作用の減少の説明となる。さらに、フラボカワインまたは他のカバカバ成分を塩基水処理（例えばLiOH、NaOH）に暴露しても、フラボカワインまたは他のカバカバ成分は水溶性誘導体へと変換され、この水溶性誘導体は、より色が少ないか（そして刺激性も少ない）または最初の形態の不飽和側鎖もしくはカバカバ成分を有するフラボカワインよりも、他のカバラクトンから分離（例えば除去、抽出、クロマトグラフィー、単離）し易い。
【００１６】
1つの局面において、本発明は、パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な水素化抽出物（例えばカバラクトン抽出物）であり、抽出物は、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを、カバラクトン全含量の少なくとも50重量%（例えば少なくとも60重量%、少なくとも70重量%、少なくとも80重量%、少なくとも50重量%から99重量%の間の任意の整数）で含む。
【００１７】
本発明の別の局面は、パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な、7,8-エポキシヤンゴニン含有量および7,8-エポキシ-5,6-でヒドロカワイン含有量の低減された水素化抽出物（例えばカバラクトン抽出物）であり、抽出物は、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを、カバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含み、7,8-エポキシヤンゴニンおよび7,8-エポキシ-5,6-デヒドロカワインの各々を0.01（重量）%未満で含む。
【００１８】
本発明の別の局面は、パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な、マイコトキシン含有量の低減された水素化抽出物（例えばカバラクトン抽出物）であり、抽出物は、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを、カバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含み、マイコトキシンを0.1（重量）%未満で含む。
【００１９】
別の局面において、本発明は、水素ガスの存在下、触媒により生カバ抽出物溶液を化学的に還元（例えば水素化）する段階を含む、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを、カバラクトン全含量の少なくとも50重量%（例えば少なくとも60重量%、少なくとも70重量%、少なくとも80重量%、少なくとも50重量%から99重量%の間の任意の整数）で含むパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物を調製するためのプロセスである。本明細書に記載のプロセスはさらに、パイパー・メチスティカム・フォルスト（地下茎カバカバ）の粉末化地下茎を抽出（超臨界抽出法を含む有機溶媒を用いた種々の抽出法により）し、抽出溶液を得る段階を含むことができる。抽出有機溶媒は、EtOH（80%〜100%）、MeOH（80%〜100%）、酢酸エチル、クロロホルム、アセトンのいずれか、またはその組合せを含む、任意の適切な有機溶媒でよい。本明細書に記載のプロセスはさらに、水素化反応で抽出溶液を化学的に還元して、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンの豊富な水素化混合物を得；水素化混合物を真空下でろ過して溶液を得；溶液を濃縮して乾燥し、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンを、カバラクトン全含量の少なくとも50重量%で有する抽出物を得る段階を含むことができる。
【００２０】
別の局面において、本発明は、水素化反応をエタノール中で実施するか、水素化反応を酢酸エチル中で実施するか；水素化反応をエタノールと酢酸エチルの混合物中で実施するか；水素化反応を酢酸エチルと別の溶媒の混合物中で実施するか；または水素化反応をメタノール以外の溶媒中で実施する、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。別の局面において、本発明は、全水素化反応を室温で実施するか；全水素化反応を5℃より高い温度で実施するか；全水素化反応を、範囲の下限が約5℃から39℃の間の整数であり範囲の上限が約6℃から40℃の間の整数であるいずれかの温度範囲で実施するか；または、全水素化反応を約15℃から30℃の間で実施する、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。別の局面において、本発明は、水素化反応を大気圧で実施するか；または水素化反応を圧力下（例えば、大気圧より高い、1気圧、Parr水素化装置）で実施する、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。別の局面において、本発明は、反応開始時における反応混合物（例えば出発材料または試薬および溶媒の混合物）が自然では均一性である（触媒またはその支持体は例外である）、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。
【００２１】
本発明の別の局面は、本明細書に記載の任意のプロセスであり、触媒は、パラジウム、白金、ニッケル、鉄、またはその組合せのいずれかである触媒金属を含み；触媒金属は、触媒の重量を基準にして0.001〜5重量%の量であり；触媒は活性炭支持体上のパラジウムであるか；または、パラジウムは、活性炭支持体上のパラジウム重量を基準にして、約1〜30重量%（例えば約1〜10、およそ下限が1から29の整数であり、上限が2から30の整数であるような任意の範囲）である。
【００２２】
本発明の別の局面は、ろ過プロセスがセライト（CELITE）、アルミナ、シリカゲル、またはフロリシル（FLORISIL）を含む任意のろ過助剤を使用することにより行なわれる、本明細書に記載の任意のプロセスである。本発明の別の局面は、溶液をアルカリ水溶液（例えば0.05〜0.5N、0.05〜1N、0.05〜3N、0.05〜5N、0.05〜10N）で処理して純粋な抽出溶液を得；中性アルミナ、シリカゲルまたはフロリシルを使用したクロマトグラフィーにより前記の純粋な抽出溶液を精製する段階をさらに含む、本明細書に記載の任意のプロセスである。別の局面において、プロセスは、アルカリ水溶液がLiOH、NaOH、またはKOH溶液のいずれかである、本明細書に記載のプロセスである。
【００２３】
別の局面において、本発明は、第2の溶媒を抽出溶液に導入する段階をさらに含む、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。第2の溶媒は酢酸エチルであり得る。
【００２４】
別の局面において、本発明は、得られたパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来乾燥抽出物が、化学的還元処理前の乾燥抽出物よりも、マイコトキシンの含量が低い（例えば少なくとも50%未満、少なくとも10から90%未満の間の整数%）、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。
【００２５】
本発明はまた、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含むパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物においてマイコトキシンの量を低減するための、水素ガスの存在下における触媒による生カバ抽出溶液の化学的還元を含むプロセスに関する。
【００２６】
別の局面において、本発明は、得られたパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物が、化学的還元処理前の乾燥抽出物よりも、7,8-エポキシヤンゴニンおよび7,8-エポキシ-5,6-デヒドロカワイン含量の低い（例えば少なくとも50%未満、少なくとも10から90%未満の間の整数%）、本明細書に記載の任意のプロセスに関する。
【００２７】
本発明はまた、7,8-ジヒドロカワインおよび7,8-ジヒドロメチスティシンをカバラクトン全含量の少なくとも50重量%で含むパイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎由来の乾燥抽出物において7,8-エポキシヤンゴニンおよび7,8-エポキシ-5,6-デヒドロカワインの量を低減するための、水素ガスの存在下における触媒による生カバ抽出物溶液の化学的還元を含む、プロセスに関する。
【００２８】
カバカバ抽出物は、神経を落ち着かせ、緊張をほぐして睡眠を誘導し、疲労を打ち消し、尿路の健康に、喘息およびリウマチに、体重の減少に有用であることが知られている。抽出物の弛緩作用（すなわち沈静効果、睡眠誘導効果）、鎮痛効果、および抗微生物活性は、抽出物の特定のメンバーに起因する。カバの最も一般的な適用は、天然の抗不安薬であり、いくつかの研究においては有利に、ベンゾジアゼピンを含む多くの処方薬と比較されている。また、神経質および過剰興奮の場合において緊張をほぐすための精神安定薬のように使用される民間薬として、睡眠誘導剤として知られている。カバラクトンは、観察されている多くの効果に関与している。
【００２９】
カバ根の抽出物は、カバラクトンとして知られる構造的に関連した化学的化合物のクラスを含むことが知られている。この化学的クラスでは少なくとも16個の異なるメンバーが知られている。しかし、4つのカバラクトン分子（カワイン、ジヒドロカワイン、メチスティシン、およびジヒドロメチスティシン）に、有意な生物学的効果があることが判明した（M.Greewood-Robinson、Dell Publishingから出版のKava（第5章）、ニューヨーク、1999）。特に、ジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシンは、鎮痛薬または疼痛寛解剤として有用である（Kava an overview: Special review Herbalgram Vol. 39（1998）The Journal of the American Botanical CouncilおよびHerb Research Foundation）。従って、これらのカバラクトン量の増加を確実にする方法は有用であり得る。
【００３０】
天然薬草から最大の利点を得るために、活性構成成分の含有率の増加したカバ抽出物を製造することが望ましい。しかし、実際的な見地からは分画および/または他の精製法により特定の活性構成成分を単離することは困難である。なぜなら、多くのカバラクトンは、非常に類似した官能基、類似した極性、および非常に異なる外見（例えば油状物、結晶）を有するからである。文献には、カバラクトン抽出混合物からジヒドロカワインおよびジヒドロメチスティシンのカバラクトンを一緒に単離する特別な分離法および精製法は報告されていない。
【００３１】
本発明の1つ以上の局面の詳細を、添付図面および下記に示す。本発明の他の特徴、目的、および利点は、明細書および特許請求の範囲から明らかとなろう。
【００３２】
詳細な説明
本発明は、一部には、特定のカバラクトンが、IL-12（この過剰産生は、多くの疾病および疾病症状に関与している）の産生を阻害するという意外な発見に基づく。6つの主要なカバラクトン（例えばデスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、およびヤンゴニン）のIL-12阻害活性は、IL-12サイトカイン阻害を決定するための細胞アッセイ法を使用して測定した。その中で、カワイン、ジヒドロカワイン、およびジヒドロメチスティシンは、他のカバラクトンに比べて、はるかに高いIL-12阻害活性を有することが判明した。これらの結果を図1に示す。従って、3つの活性カバラクトンであるカワイン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシンの1つ、またはその組合せを含む組成物は、IL-12過剰産生に関連した疾病または疾病症状の処置に有用である。
【００３３】
活性カバラクトンであるカワイン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、またはその組合せは、本明細書に記載の化合物または組成物の有効量の投与（例えば局所投与）により、被験者における疼痛または疼痛症状の処置にもまた有用である。または、6つの主要なカバラクトン（例えばデスメトキシヤンゴニン、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、メチスティシン、およびヤンゴニン）またはその組合せは、本明細書に記載の疼痛または疼痛症状の処置法に有用である。局所軟膏におけるカバラクトンの使用は、経口投与よりも効率的な投与経路を提供できる。なぜなら、カバラクトンは経口バイオアベイラビリティーに関連した初回通過効果（例えば代謝、分解）を受けないからである。種々の酵素プロセスが、経口投与後1時間以内にカバラクトンを分解し得る。さらに、本明細書に記載の組成物における局所担体は、カバラクトンの親油性特性と相乗的に作用して、被験者（例えば哺乳動物、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ）における疼痛部位（すなわち皮膚を通して、注射針により注射することなく）にカバラクトンをより有益に送達する方法を提供できる。
【００３４】
図1に戻ると、6つのカバラクトンを、以下のようなIL-12阻害アッセイ法で試験した：リポ多糖（LPS、Serratia marscencens）は、シグマ（MO州セントルイス）から得た。ヒト組換えIFNgは、ベーリンガー・マンハイム（マンハイム、ドイツ）から購入した。ヒト末梢血単核細胞は、フィコール-パック（ファルマシア・バイオテック、ウプサラ、スウェーデン）を使用して遠心分離により単離し、96穴プレート中で1×106細胞/穴で、10%FCSおよび抗生物質を補充したRPMI培地中で調製した。ヒトPBMCをIFNγ（30U/mL）で16時間準備刺激し、その後、異なる濃度の試験化合物の存在下で1mg/mLのLPSで刺激した。細胞を含まない上清を、サイトカイン測定のために20時間後に採取した。細胞生存度を、MTS[3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウム]（プロメガ、WI州マディソン）の生物還元を使用して評価した。細胞生存度は、化合物で処置した群と化合物を含まない対照において、吸光度の比として推定した。ヒトIL-12を、実質的に製造業者の指示に従って、ELISAキット（Endogen、MA州ケンブリッジ）を使用してアッセイした。IL-12阻害はまた、別の酵素阻害活性アッセイ法（例えばインビボ、インビトロ、動物モデル）によっても測定できる。
【００３５】
本発明はまた、一部、別の意外な発見にも基づく：活性カバラクトン、すなわちジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、およびカワインは、経皮的に効果的に投与できる（例えば薬用軟膏、マッサージオイル）。不活性担体中で均一に製剤化した場合に、活性カバラクトンは、浸透増強剤（例えばジメチルスルホキシド、1-ドデシオアザシクロヘプタン-2-オン、グアイアズレン-3-スルホン酸ナトリウム）の非存在下で効果的に投与できる。従って、本発明の組成物は、軟膏として投与でき、従って、経口投与に伴うバイオアベイラビリティー問題（例えば初回通過効果、血中における短い半減期、分解、チトクロムP450による代謝、腸による代謝、肝臓または腎臓による代謝、または吸収）を回避できる。このような投与技術により、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、またはその組合せの全身的または局所的投与が可能となる。本発明の薬用軟膏により、1つ以上の活性カバラクトンが皮下レベルへと到達でき、皮膚レベルでの活性（例えば皮膚細胞呼吸、再生、および水分補給）に影響を及ぼすような、化粧品または皮膚医薬品の効果を超えた効果がもたらされる。
【００３６】
本発明の軟膏組成物は、鉱油、液状ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックス、水、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート60、セチルエステルワックス、セチルアルコール、2-オクチルドデカノール、およびステアリルアルコールなどの、担体に懸濁または溶解した1つ以上の活性カバラクトンを用いて製剤化できる。許容される担体には、水、溶媒、緩和剤、界面活性剤、保存剤、またはその組合せなどが含まれ得る。水（存在する場合）は、5〜80重量%の量であり得る。水以外で、許容される担体には、1〜70重量%の量の、比較的揮発性の溶媒、例えば一価C1〜C3アルカノール（例えばメチルアルコールまたはエチルアルコール）、ならびに、0.1〜30重量%の量の緩和剤、例えばシリコンオイルおよび合成エステルの形態のものなどが含まれ得る。許容される担体である他の溶媒には、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、およびカワインの投与に適したあらゆるもの、例えばジメチルスルホキシド、C1〜C20アルコール、グリコール、およびエーテルなどが含まれる。アニオン性、非イオン性、またはカチオン性界面活性剤も生物学的に許容される担体に含めることができる。全界面活性剤の濃度は、0.1〜40重量%であり得る。アニオン性界面活性剤の例には、石鹸、アルキルエーテルスルフェートおよびスルホネート、アルキルスルフェートおよびスルホネート、アルキルベンゼンスルホネート、アルキルおよびジアルキルスルホスクシネート、C8〜C20アシルイセチオネート、アシルグルタメート、C8〜C20アルキルエーテルホスフェート、およびその組合せなどが含まれる。非イオン性界面活性剤の例には、C10〜C20脂肪アルコール、あるいは、1モルの疎水性物質あたり2〜100モルのエチレンオキシドまたはプロピレンオキシドが縮合した酸性疎水性物質；2〜20モルのアルキレンオキシドが縮合したC2〜C10アルキルフェノール；エチレングリコールのモノおよびジ-脂肪酸エステル；脂肪酸モノグリセリド；ソルビタン、モノ-およびジ-C8〜C20脂肪酸；ブロックコポリマー（エチレンオキシド/プロピレンオキシド）；ポリオキシエチレンソルビタン、およびその組合せが含まれる。保存剤も、有害の可能性のある微生物の増殖を予防するために、生物学的に許容される担体中に含めることができ、0.01〜2重量%の量で使用できる。保存剤の例には、パラヒドロキシ安息香酸のアルキルエステル、ヒダントイン誘導体、プロピオン酸塩、および種々の4級アンモニウム化合物が含まれる。各保存剤は、組成物中の他の成分との適合性に基づいて選択すべきである。本発明の軟膏は、身体のあらゆる特定の表面領域（歯肉を含む）に適用可能である。
【００３７】
本発明の範囲内には、必要とする被験者（例えばヒト、イヌ、ネコ）に、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択された活性カバラクトンの有効量を投与する段階を含む、IL-12の過剰産生に関連した疾患または疼痛を処置する方法が含まれる。活性カバラクトンの有効量は、1日あたり0.01〜100mg/kg（体重）、または1日あたり0.5から75mg/kg（体重）のジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、またはその組合せである。有効量は、前記の範囲内の任意の具体的な量または任意の範囲の量の活性カバラクトンであり得、ただし下限は0.01以上99.99以下の任意のmg/kg（体重）の数であり、上限は、0.02以上100以下の任意のmg/kg（体重）の数である。有効量は、IL-12の過剰産生に関連した疾病もしくは疾病症状、または疼痛もしくは疼痛症状の処置のための単独療法もしくは併用療法に有用である。当業者は理解するであろうように、前記に列挙した用量よりも低いまたは高い用量が必要である場合もある。任意の具体的な被験者（例えばヒト、イヌ、ネコ）用の有効量および処置方式は、使用した具体的な化合物の活性、年齢、体重、全般的な健康状態、性別、食事、投与時刻、排泄速度、薬物併用、疾病の重度および経過、容態または症状、疾病、容態もしくは症状に対する患者の素因、および処置する医師または獣医の判断を含む、種々の因子に依存する。
【００３８】
本発明の方法を実践するために、活性カバラクトン含有組成物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所的に、直腸に、鼻腔内に、頬側に、膣内に、神経周囲に、硬膜外に、イオントフォレーシスで、または埋め込み式リザーバーにより投与できる。本明細書に使用したような「非経口」なる語には、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑膜内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、および頭蓋内注射または注入技術などが含まれる。
【００３９】
無菌注射製剤、例えば無菌注射水性懸濁液または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤（例えばTween80など）および懸濁化剤を使用して、当技術分野における既知の技術に従って製剤化できる。無菌注射製剤はまた、無毒性の非経口的な希釈剤または溶媒中の無菌注射溶液または懸濁液、例えば1,3-ブタンジオール中の溶液などであり得る。使用できる許容される媒質および溶媒には、マンニトール、水、リンガー液、および等張塩化ナトリウム溶液などがありうる。他に、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒体（例えば合成モノ-またはジグリセリド）として慣用的に使用されている。脂肪酸、例えばオレイン酸およびそのグリセリド誘導体は、オリーブオイルまたはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油（特にそのポリオキシエチル化形）であるので、注射液の調製に有用である。これらの油状溶液または懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤もしくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロースもしくは類似の分散剤も含むことができる。他の一般的に使用されている界面活性剤（例えばTweenまたはSpan）、または他の類似の乳化剤またはバイオアベイラビリティー増強剤は、薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造に一般的に使用されており、製剤化のために使用することもできる。
【００４０】
経口投与用の製剤は、カプセル、錠剤、乳濁液および懸濁水、分散液および溶液（例えば飲料を含む）を含むがこれに限定されない、任意の経口的に許容される剤形であり得る。経口で使用するための錠剤の場合、一般的に使用される担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウムも典型的に添加される。カプセル形で経口投与するために、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが含まれる。懸濁水または乳濁液を経口投与する場合、活性成分は、乳化剤または懸濁剤と合わせた油相に懸濁または溶解できる。所望であれば、特定の甘味料、芳香剤、または着色料を添加できる。鼻腔用エアゾールまたは吸入用組成物も薬学的製剤の分野で公知の技術に従って調製でき、生理食塩水中の溶液として、ベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティーを増強するための吸収促進剤、フルオロカーボン、および/または当技術分野において公知の他の溶解剤または分散剤を使用して調製できる。活性カバラクトン含有組成物はまた、坐剤または埋め込み型装置の形態でも投与することができる。埋め込み型装置および関連技術は、当技術分野において既知であり、本明細書に記載の純粋なカバラクトン化合物または組成物の連続的送達もしくは徐放送達が望まれる送達システムとして有用である。さらに、埋め込み型装置送達システムは、純粋なカバラクトン化合物または組成物の送達を特定の点（例えば局所部位または器官）に標的化するのに有用である。Negrin CM、Delgado A、Llabres MおよびEvora C.、Biomaterials 22(6)、563(2001)を参照されたい。代替的な送達法を含む徐放技術も本発明に使用できる。例えば、ポリマー技術、持続放出技術およびカプセル化技術に基づいた徐放性製剤（例えばポリマーまたはリポソーム）も、本明細書に記載の純粋なカバラクトン化合物および組成物の送達に使用できる。純粋なジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワインもしくはその組合せ、またはその組成物を有する局所パッチも本発明に含まれる。
【００４１】
本発明の活性カバラクトン含有組成物の調製に使用できる許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、自己乳化薬物送達システム（例えばd-α-トコフェロールポリエチレングリコール1000スクシネート）、薬学的剤形に使用される界面活性剤（例えばTweenまたは他の類似のポリマー送達基剤）、緩衝物質（例えばホスフェート）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば硫酸プロタミン）、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよび羊毛脂が含まれるがこれに限定されない。ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、またはその組合せの送達の増強に使用するために、他の可溶化剤も有利に使用できる。
【００４２】
本発明内には、活性カバラクトンを送達するためのパッチも含まれる。パッチには、材料層（例えば、ポリマー、布、ガーゼ、包帯）、ならびに、1重量%〜90重量%（例えば、1重量%〜40重量%、あるいは、下限は1重量%以上89重量%以下の任意の整数%であり、上限は、2重量%以上90重量%以下の任意の整数%である）の、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、およびその組合せからなる群より選択される活性カバラクトンを含む。材料層の片側は、活性カバラクトン組成物を透過させないために、材料層に粘着した保護層を有し得る。パッチはさらに、被験者の定位にパッチを保持するための粘着剤を含むことができる。被験者の皮膚に接触すると一時的に皮膚に粘着する、天然起源または合成起源の組成物を含む接着剤である。耐水性でもよい。粘着剤は、より長時間に及んで被験者の皮膚と接触したままとなるように、パッチ上に配置することができる。粘着剤は偶発的な接触があった場合にも定位に装置を保持するような、接着力または粘着強度からなり得るが、積極的な作用（例えば剥ぎ取る、剥がす、または他の意識的な除去）時には、粘着剤は、装置または粘着剤自体にかかった外的圧力に屈し、粘着的接触が壊れる。粘着剤は圧力感受性であってもよく、すなわち、粘着剤または装置上への圧力（例えば押す、こする）をかけることにより、皮膚に対する粘着剤（および皮膚に粘着する装置）の位置決めが可能である。また、フィルム形成ポリマー（例えばポリビニルアルコール）および粘着促進ポリマー（例えば疎水性アクリレートまたはメタクリレートポリマー、例えばB.F.Goodrich社製のPemulen TR2.RTM）からなる保護層上にゲルまたはペーストとして組成物を塗布することにより製剤化できる、剥がすことのできるマスクも含まれる。または、活性カバラクトンのいずれか1つ以上を含むヒドロゲル組成物（例えば、米国特許第5,961,479号または米国特許第5,306,504号を参照されたい）を使用できる。
【００４３】
本発明はまた、ジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、カワイン、またはその組合せからなる群より選択される純粋な活性カバラクトンを有する薬学的組成物も網羅する。このような組成物は、IL-12が介する疾病もしくは疾病症状、または他の疾病（例えば線維筋痛）、または疼痛もしくは疼痛症状の処置に有用である。本発明にはまた、被験者に純粋なカバラクトン含有組成物を投与することにより、被験者における疾病または疾病症状（IL-12が介する疾病または疾病症状、疼痛または疼痛症状を含む）の処置法も含まれる。被験者はヒトでも動物（例えばイヌ、ネコ）でもよい。「純粋」という用語は、90%以上の水準を意味する。純粋な活性カバラクトンは、天然手段（例えば根の抽出および精製）でも合成手段（例えば天然材料または合成材料からの合成）でもその組合せからでも得られうる。
【００４４】
カバ根の粗抽出物（種々の抽出法（例えば単純な溶媒浸漬、超臨界抽出法）を使用して得られる）を、本発明の組成物の調製のための活性カバラクトン源として使用できる。所望であれば、活性カバラクトンは、カラムクロマトグラフィーによりさらに精製できる。それらはまた、慣用的な化学的方法により容易に入手可能な出発材料から合成することもできる。例えば、Kostermans, Reclk.Trav.Chim.Pays-Bas.、70、79(1951)；Klohsら、J.Org.Chem.、24、1829(1959)；Spinoら、Tetrahedron Lett.、37、6503(1996)；および各々に引用された参考文献を参照されたい。組成物中に存在する活性カバラクトンは、それらのカバラクトン（天然源または合成源に由来する）の添加により濃縮できる。3つの活性カバラクトン（例えばジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、およびカワイン）は1つ以上の不斉中心を含み、従って、ラセミ体およびラセミ混合物、単一エナンチオマー、個々のジアステレオマーおよびジアステレオ混合物として存在することができる。それらはまたシス-もしくはトランス-またはE-もしくはZ-二重結合異性体形で存在することもできる。全てのこのような異性体形は、その阻害活性を決定するためにIL-12アッセイ法を使用して試験することができる。
【００４５】
分子中の他の官能基（例えばγ-ピロン環中の二重結合）を還元することなく、C-7とC-8の間の二重結合を選択的に還元するための種々の成功裡の試みの後に、活性炭支持体上のパラジウム、白金またはその組合せに基づいた触媒を使用した接触水素化により所望の還元を実施した。従って、カバラクトンの製造法には、不飽和官能基（例えば炭素-炭素二重結合）を有するカバラクトン（例えば化合物、カバカバ根の抽出物、パイパー・メチスティカム・フォルストの地下茎の抽出物）の接触水素化反応を含む方法が含まれる。1つの局面において、本明細書の方法における水素化反応により、化合物のγ-ピロン環もしくはラクトン環に付着する飽和官能基を含んだカバラクトンを含むカバラクトン類が得られるような還元（例えば、水素化；触媒水素化；触媒の存在下または非存在下における水素ガスでの処理）が生じる。
【００４６】
カバ根の粗抽出物（種々の抽出法（例えば単純な溶媒浸漬、超臨界抽出法）を使用して得られる）は、本発明の組成物および方法の調製のための活性カバラクトン源として使用できる。溶媒浸漬は、アルコール（例えばメタノール、エタノール）、酢酸エチル、クロロホルム、アセトン、塩化メチレン、エーテル（例えばエチルエーテル）またはその組合せなどの任意の標準的な溶媒を使用して達成できる。超臨界抽出法が使用でき、これには当技術分野において説明されている方法も含まれる（例えば、V.J.Krukonis、ACS Symposium Series 289(1984)、155-175頁を参照されたい）。
【００４７】
カバラクトンは、カバカバ根に見出される、またはその構造にラクトン環官能基を有するカバカバ抽出物から得られる任意の化学的化合物を含む。カバラクトンには、例えば、（1）ヤンゴニン、（2）カワイン、（3）メチスティシン、（4）7,8-ジヒドロメチスティシン、（5）デスメトキシヤンゴニン、（6）7,8-ジヒドロカワイン、（7）ジヒドロデスメトキシヤンゴニン、（8）7,8-ジヒドロヤンゴニン、（9）11-ヒドロキシヤンゴニン、（10）7,8-ジヒドロデスメトキシヤンゴニン、（11）11-メトキシ-12-ヒドロキシデヒドロカワイン、（12）10-メトキシヤンゴニン、（13）11-メトキシヤンゴニン、（14）11-、12-ジメトキシ7,8-ジヒドロカワイン、（15）5,6-ジヒドロヤンゴニン、（16）5,6,7,8-テトラヒドロキシヤンゴニン、および（17）5,6-ジヒドロ-5-ジヒドロキシ-4-メトキシ-6-（2-フェニルエチル）-2H-ピラン-2-オンのいずれかが含まれる。例えば、Dictionary of Natural ProductsのCD-ROM、Chapman & Hall/CRC Press、ISBN/ISSN：0412491508、v.8.2を参照されたい。
【００４８】
これらの化合物は、核磁気共鳴法（プロトン、炭素プローブ、1次元、2次元）、赤外分光法、質量分析法、高速液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、元素分析、紫外線分光法などを含む、標準的な物理化学的および分光学的分析技術を使用して同定できる。
【００４９】
本発明はまた、実質的に無色のカバ抽出物を提供するための方法に関し、結果として実質的に無色のカバ抽出物がこれにより生じる。有機溶媒または水性有機溶媒を使用した通常の抽出法では、抽出物がフラボカワイン（例えばフラボカビン（flavokavin）、フラボカバイン、フラボカビンA、フラボカビンB、ジヒドロカバイン-5-オールを含む）および他の天然マトリックス色素として知られる化合物をその中に有しているという事実から主に、強力な黄色を有する抽出物が生じる。これらの着色材料は、「カバ皮膚障害」と称される鱗状の皮膚紅斑などの望ましくない続発作用を誘発することが多く、これは、黄色の粗カバ抽出物を長期間または大量に服用した場合に生じる。抽出物中にこれらの材料を有する抽出物はまた、皮膚に適用した場合には、望ましくない（例えば不快、見た目が悪い、変色）染色も伴う。1つの局面において、これらの実質的に無色な抽出製剤は、実質的にフラボカワイン含量を有さず、1%未満である（例えば、フラボカワインは1重量%未満である任意の比率（1%の数割））である。これらの実質的に無色なカバ抽出物またはその製剤（フラボカワインが実質的に含まれていない）が、典型的なカバ抽出製剤に伴う望ましくない作用（例えば皮膚障害、染色、皮膚過敏）を回避しつつ、カバラクトンの健康上の利点を投与するのに望ましい。
【００５０】
またカバカバ抽出物が特定の肝毒性事象に関連しているという、ある事例報告もある。依然として完全に実証されていないが、このような事象に関与している1つの可能性ある因子は、抽出物中のマイコトキシンの存在に関連があり得る。マイコトキシン（真菌源由来の天然毒素、例えばアスペルギルスおよびフサリウム）と肝臓病との関連は、公知である。例には、いくつか挙げると、アフラトキシンB1（T.Asaoら、J.Am.Chem.Soc.、1963、85、1705）、アフラトキシンG1（B.E.Nesbittら、Nature(ロンドン)、1962、195、1062）、アフラトキシンGM1（J.G.Heathcoteら、Tetrahedron、1969、25、1497）、アフラトキシンM1（C.W.Hozapfelら、Tetrahedron Lett.、1966、2799）、オクラトキシン（K.J.Van der Merwe、J.Chem.Soc.、1965、7083）、ステリグマトシスチン（J.E.Davisら、1962、4179）、ルブロスキリン（Rubroskyrin）（A.C.Ghoshら、Appl.Environ.Microbiol.、1978、35、563）が含まれる。また、C.W.Hesseltine、Mycotoxins and Phycotoxins、Elsevier：アムステルダム、（1986）；およびその中の参考文献も参照されたい。これらの大半の化合物には、不安定な二重結合（これは正常な代謝プロセス中に、毒性および他の疾病プロセスにつながる化合物（例えばDNAアルキル化剤、発癌物質）に容易に酸化される）および/またはその毒性プロファイルに必須であるCOOH置換基が含まれている。カバ抽出物の水素化により、不安定な炭素-炭素二重結合を有するマイコトキシンを、より毒性が低いか、無毒性である、あるいはより容易に分離可能である対応するジヒドロ形へと変換できる。アルカリ処理によっても、マイコトキシン中のCOOH官能基は解離形（COO-）へと変換され、この形態は容易に抽出および単離できる。従って、本発明は、望ましくない副作用を引き起こすマイコトキシンを排除および/または低減するための簡便な方法を提供する。
【００５１】
2つのエポキシド含有誘導体が、カバ抽出画分から単離された。一方は7,7-エポキシヤンゴニン（R = OCH3）である（日本特開2001-316260号Aを参照されたい）。他方は7,8-エポキシ-5,6-ジヒドロカワイン（R = H）である（J.Indian Chem.Soc.、63、1986、780頁を参照されたい）。以下の式を参照されたい。どちらの分子もベンジル位に非常に反応性の高いエポキシド部分を有し、これが肝臓傷害の原因として関与している。これらの2つの天然カバラクトンは、長期かつ大量の使用で肝毒性を引き起こす危険性を有している。これらの反応性カバラクトンは、DNA、酵素およびタンパク質と共有結合を形成して肝臓壊死を引き起こし得る。従って、本発明の方法はまた、これらの望ましくない天然カバラクトンエポキシドを、毒性がより低く単離可能もしくは分離可能であるヒドロキシ形（R = H、OCH3）へと変換（水素化により）する。
【化６】
2004529944.tif 000008
【００５２】
水素化とは、化学的化合物を水素ガスに暴露することによる化学反応（例えば水素化）を意味する。これは触媒の存在下または非存在下で実施でき、大気圧または高圧下で実施できる（例えばParr発生機）。触媒は、問題の反応を促進できる任意の化学的組成物であり、例えば、水素化触媒には、炭素上パラジウム金属、酢酸パラジウム、二塩化ルテニウム、酸化白金、ロジウムクロリドトリ-(トリフェニルホスフィン)などが含まれる。触媒には、パラジウム、ルテニウム、ニッケル、ロジウム、白金などの所望の反応を促進できる任意の金属を含む触媒金属が含まれ得る。また、P.N.Rylander、Hydrogenation Methods、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1985も参照されたい。標準的な条件および触媒は当技術分野において既知であり、R.Larock、Comprehensive Organic Transformations、VCH Publishers(1989)；T.W.GreeneおよびP.G.M.Wuts、Protective Groups in Organic Synthesis、第3版、John Wiley and Sons編(1999)；L.FieserおよびM.Fieser、FieserおよびFieser's Reagents for Organic Synthesis、John Wiley and Sons(1994)；およびL.Paquette編、Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis、John Wiley and Sons(1995)；およびその続版も参照されたい。ろ過助剤は、混合物の1成分を他成分から分離できる任意の適切なフィルターであり、これにはろ紙、セライト、アルミナ、FlORISIL、シリカ、ガラス（フリット化）などが含まれる。アルカリ性物質には、水酸化リチウム、水酸化カリウム、または水酸化ナトリウムなどの任意の塩基性物質もしくは塩が含まれる。これらのプロセスに適した装置、溶媒、化学物質、および触媒は、例えばアルドリッチ・ケミカル社、フルカAG、および東京化成工業を含む業者から容易に入手できる。
【００５３】
カバラクトン（例えばジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン）は、1つ以上の不斉中心を含み、従って、ラセミ体およびラセミ混合物、単一エナンチオマー、個々のジアステレオマーおよびジアステレオ混合物として存在し得る。それらはまた、シス-もしくはトランス-またはE-もしくはZ-二重結合異性体形であり得る。全てのこのような異性体形が、カバラクトンの実体に含まれる。
【００５４】
本明細書に記載した本発明をより容易に理解し得るために、以下の実施例を示す。これらの実施例は単に説明のためのものであり、いずれにしても本発明を限定するものとは捉えないことを理解すべきである。本明細書に引用した全ての参考文献は、その全体を参照として明確に組み込む。
【００５５】
実施例1
カワインは、実質的に下記のように合成する。N-ブロモスクシンイミド（1当量）を、2.3Mのβ-メトキシクロトン酸エチル（1当量）の四塩化炭素溶液にゆっくりと加える。反応が平衡に達すると、混合物を約4時間加熱還流する。その後、混合物を冷却（0℃）し、ろ過し、その後、沈降物を冷CCl4で洗浄する。合わせたろ液を濃縮し（真空、回転蒸発器）、残渣を蒸留すると所望の生成物であるγ-ブロモ-β-メトキシクロトン酸エチルが得られ、その同一性は、プロトン核磁気共鳴分光法および質量分析法を含む種々の手段により確認される。
【００５６】
0.5Mのγ-ブロモ-β-メトキシクロトン酸エチル（1当量）のベンゼン溶液を、亜鉛片（1.2当量）を含むフラスコに注ぐ。桂皮アルデヒド（1.2当量）を加える。穏やかに加温して反応を開始した時、混合物を約1時間還流する。混合物を冷却し、冷飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎ、水相を3回エチルエーテルで抽出した。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮する。得られた残渣を再結晶（MeOH）すると、所望の生成物が得られ、その同一性は、プロトン核磁気共鳴分光法および質量分析法を含む種々の手段により確認される。
【００５７】
実施例2
ジヒドロカワインは、実質的に下記のように合成する。3-ヒドロキシ-5-フェニルペンタン酸メチル（1当量）のテトラヒドロフラン溶液を、-78℃でt-ブチルアセテート（3当量、リチウムジイソプロピルアミンおよびt-ブチルアセテートから）のリチウムエノレート溶液に加え、ゆっくりと0℃まで加温する。混合物を1N HCl溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出する。合わせた抽出物を重炭酸ナトリウム水、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮すると残渣が得られる。残渣は精製（シリカゲルクロマトグラフィー）または直接変換できる。得られたβ-ジケトンは、実質的にTabuchiら（トリフルオロ酢酸、ジクロロメタン；J.Org.Chem.59、4749、(1994)）の手順に従ってその後のラクトン化を用いて加水分解すると、所望の生成物が得られ、その同一性は、プロトン核磁気共鳴分光法および質量分析法を含む種々の手段により確認される。
【００５８】
実施例3
ジヒドロメチスティシンは、実質的に下記のように合成する。炭素上10%パラジウム（0.03当量（重量））を、1Mのメチスティシン（1当量）のテトラヒドロフラン溶液に加える。混合物を約35p.s.i.でParr装置を使用して水素化にかける。混合物をろ過し、合わせたろ液を濃縮（真空、回転蒸発器）し、固体を得る。固体材料を再結晶（iPrOH）すると所望の生成物が得られ、その同一性はプロトン核磁気共鳴分光法および質量分析法を含む種々の手段により確認される。
【００５９】
実施例4
約40gのカバラクトン（NJ、Pure World botanicals社）を含むカバカバ（100g）の粗EtOH抽出物を、水（300mL）と酢酸エチル（200mL）の混合物に懸濁した。不溶性残渣を除去した後、有機層を水層から分離した。水層をさらに、酢酸エチル（200mL×2）で抽出して有機抽出物を生成した。全ての有機抽出物を合わせて有機溶液を得、これを飽和NaCl溶液（200mL×2）で洗浄し、無水NaSO4で乾燥し、乾燥した。得られた暗褐色油状物（45g）を、n-ヘキサン/酢酸エチル（2：1）を溶出溶媒として、800gのKieselgel60（230〜400メッシュのASTM、EM Science社、ドイツ）を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。淡黄色のカバラクトン画分を収集し、乾燥して部分的に結晶化した無定形油状物（36g）を生成した。このようにして得られた生成物中のカバラクトン全含量は、約93重量%であった。3つの各カバラクトンであるジヒドロカワイン、ジヒドロメチスティシン、およびカワインは、高圧液体クロマトグラフィーにより同定した。
【００６０】
実施例5
約15gのカバラクトン（NJ、Pure World botanicals社）を含むカバカバの粗EtOH抽出物（100mL）を減圧下で濃縮し、過剰のEtOHを除去した。濃縮した抽出物（60mL）を、n-ヘキサン/酢酸エチル（2：1）を溶出溶媒として、500gのFlorisil（200メッシュ、アルドリッチ）を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。黄色のカバラクトン画分を収集し、乾燥すると、淡黄色の無定形油状物（13g）が得られた。このようにして得られた生成物中のカバラクトンの全含量は、約95重量%であった。
【００６１】
実施例6
超臨界抽出法（V.J.Krukonis、ACS Symposium Series 289(1984)、155-175頁）により得られた約5gのカバラクトン（MA州 Phasex社が抽出）を含む明るい黄色のカバカバ抽出物（10g）を、n-ヘキサン/酢酸エチル（2：1）を溶出溶媒として、300gの酸化アルミニウム（中性）（J.T.Barker、NJ）を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製した。淡黄色のカバラクトン画分を収集し、乾燥すると、部分的に結晶化した無定形油状物（4.2g）が得られた。このようにして得られた生成物中のカバラクトンの全含量は、約95重量%であった。
【００６２】
実施例7
本発明のカバラクトン含有クリームの組成：
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【００６３】
実施例8
本発明の別のカバラクトン含有クリームの組成：
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【００６４】
実施例9
本発明の別のカバラクトン含有クリームの組成：
2004529944.tif 000011
【００６５】
実施例10
種々の量のカバラクトンを添加できるクリームの組成：
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【００６６】
実施例11
本発明のカバラクトン含有ゼリーの組成：
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【００６７】
実施例12
種々の量のカバラクトンを添加できる水中油滴型乳濁液の組成：
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【００６８】
実施例13
関節リウマチ（左肢、関節）患者は、数個の経口薬物療法に無反応であった。5gのクリーム（実施例10に記載のような）および500mgのカバラクトン（実施例4に従って調製した抽出物のような）を含む組成物を、関節に1日3回投与した。関節リウマチ症状のかなりの寛解が、カバラクトン含有クリームを関節に局所適用した30分後に得られた。
【００６９】
実施例14
患者は、経口薬物（アスピリンおよびイブプロフェンなど）により寛解できない慢性背部障害に罹患していた。症状のかなりの寛解（例えば罹患領域における灼熱感の寛解、日常の活動（例えばウォーキング）を再開する全般的な寛解）が、実施例13に記載のカバラクトン含有クリームを背部に塗布した10分後に得られた。
【００７０】
実施例15
患者は、左膝の線維筋痛症状に罹患している。実施例13に記載のカバラクトン含有クリームを膝に塗布した10分後に、患者は不快感が寛解したと感じた。
【００７１】
実施例16
患者は、歯周病（臼歯）に罹患している。実施例11に記載のカバラクトン含有ゼリー（実施例4に従って調製したカバラクトン抽出物を使用）を歯肉領域に塗布した10分後に、症状は軽減し、これには罹患領域の発赤の減少および不快感の寛解が含まれる。
【００７２】
実施例17
4名の被験者の2つの肢に1%の局所カプサイシンを暴露した。約1時間後、灼熱感が極めて強力になった時に、プラセボまたは30%カバを盲目的に効果的領域に塗布した。全ての被験者がカプサイシンを受けた側におけるカプサイシンに伴う灼熱感の顕著な減少を報告したが、プラセボを受けた側はそうではなかった。これにより、カバ（例えばカバラクトン）は、カプサイシンに伴う灼熱感（続発性および原発性痛覚過敏）を打ち消すことができることが示される。
【００７３】
実施例18
局所カバを、難治性筋膜疼痛および変形性関節性疼痛を示す3名の個体に適用した。全ての患者において疼痛は完全に減少した。この疼痛寛解は、1回の適用で8〜24時間持続した。
【００７４】
実施例19
1%カプサイシンクリームは、455gのEUCERINクリームを10mlのEtOH溶液および5gの天然カプサイシン（トランス-8-メチル-N-バニリル-6-ノネアミド）（WI州ミルウォーキー、アルドリッチケミカルカンパニー社から購入）とを混合することにより調製した。
【００７５】
実施例20
粗粉末化カバ根粉末（500g）（園芸品種名：Mo'i（Botanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入））を、3時間機械的な攪拌下で、還流EtOAc（1.8L）で抽出し、室温まで冷却し、ろ過し、EtOAc（500mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、蒸発すると粗抽出物（60g）が残った。粗材料を酢酸エチル（300mL）に溶かし、5%Pd/C（6.0g）および活性炭（6.0g）を加えた。その後、混合物を、60分間、40p.s.i.のH2でParr水素化器により水素化した。触媒および炭素をろ別した。溶媒の除去により、最終カバ抽出物が灰白色のペースト（50g、カバ根から10%の収率）として得られた。7,8-ジヒドロカワイン（38%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（24%）の全含量は62重量%である。
【００７６】
実施例21
カバ乾燥根粉末（500g）（園芸品種名：Nene ele ele、これはBotanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入）を、95%EtOH（1.8L）と共に還流下で3時間攪拌し、室温まで冷却し、ろ過し、95%EtOH（800mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、活性炭（20g）により80℃で30〜60分間処理し、室温まで冷却し、Al2O3（中性、活性化、120g）およびセライト（100g）の層を通してろ過し、95%EtOH（2×500mL）で洗浄した。合わせたろ液および洗浄液を蒸発すると、粗抽出物（38g）が残った。300mLの粗抽出物に、5%Pd/C（3.8g）をゆっくりと加えた。その後、混合物を40p.s.i.のH2でParr水素化器により30分間水素化した。触媒および炭素をセライト層を通してろ別した。溶媒を除去すると最終カバ混合物が灰白色のペーストとして得られた（30g、カバ根から6%の収率）。7,8-ジヒドロカワイン（48%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（20%）の全含量は68重量%である。
【００７７】
実施例22
乾燥し粉末化したカバ根（500g）（起源：Vanuatu、これはBotanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入）をアセトン（1.8L）と共に還流下で3〜5時間攪拌し、室温まで冷却し、ろ過し、アセトン（800mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、活性炭（10g）により45℃で60分間処理し、室温まで冷却し、Al2O3（中性、活性化、90g）およびセライト（50g）の層を通してろ過し、アセトン（2×500mL）で洗浄した。合わせたろ液および洗浄液を蒸発すると粗抽出物（40g）が残った。300mLの粗抽出物の酢酸エチル溶液に、5%Pd/C（4.3g）を加えた。その後、混合物を40p.s.i.のH2でParr水素化器により30分間水素化した。触媒および炭素をセライト層を通してろ別した。溶媒を除去すると、最終カバ混合物が灰白色のペーストとして得られた（33g、カバ根から6.6%の収率）。
【００７８】
実施例23
粗粉末化カバ根（500g）（園芸品種名：Mo'i、これはBotanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入）を、3時間機械的な攪拌下で、還流EtOAc（1.8L）で抽出し、室温まで冷却し、ろ過し、EtOAc（500mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、蒸発すると粗抽出物（35g）が残った。300mLの粗抽出物の酢酸エチル溶液に、5%Pd/C（3.5g）および活性炭（3.5g）を加えた。その後、混合物を40p.s.i.のH2でParr水素化器により60分間水素化した。触媒および炭素をろ別した。ろ液を0.2N LiOH（2×150mL）で処理した。有機層を分離した。溶媒の除去後、最終カバラクトン混合物が灰白色ペーストとして得られた（32g、カバ根から6.4%の収率）。7,8-ジヒドロカワイン（38%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（23%）の全含量は61重量%である。
【００７９】
実施例24
カバラクトン84%を含むカバ黄色抽出物（100g）（Kaviar+80、Cosmopolitan Trading、P.O.Box 85840、シアトル、WA 98145から購入）をEtOAc（150ml）に溶かした。その後、溶液を40p.s.i.のH2でParr水素化器により5%Pd/C（5g）を用いて60分間水素化した。触媒および炭素をセライト層を通してろ別した。溶媒の除去により、最終カバ混合物が淡緑色のペースト（95g）として得られた。7,8-ジヒドロカワイン（47%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（20%）の全含量は67重量%である。
【００８０】
実施例25
その後、実施例5で製造した淡緑色のペースト（30g）を0.2N LiOH溶液（200ml×2）で処理した。有機層を水（200ml×2）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。有機溶媒を蒸発すると、淡緑色のペースト（27g）が残った。7,8-ジヒドロカワイン（49%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（22%）の全含量は71重量%である。
【００８１】
実施例26
その後、実施例6で製造した淡緑色のペースト（20g）を、200gの中性アルミナでのカラムクロマトグラフィー（ヘキサン/酢酸エチル = 2：1）にかけ、15gの7,8-ジヒドロカワイン（64重量%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（30重量%）が混合物として得られた。
【００８２】
実施例27
乾燥粉末化カバ根（500g）（園芸品種名：Nene、これはBotanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入）を、95%EtOH（1.8L）と共に還流下で3〜5時間攪拌し、室温まで冷却し、ろ過し、95%EtOH（800mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、活性炭（8g）で80℃で30分間処理し、室温まで冷却し、Al2O3（中性、活性化、120g）およびセライト（50g）の層を通してろ過し、95%EtOH（2×500mL）で洗浄した。合わせたろ液および洗浄液を蒸発すると、粗抽出物（43g）が残った。300mLの粗抽出物の酢酸エチル溶液に、5%Pd/C（3.2g）を加えた。その後、混合物を40p.s.i.のH2でParr水素化器により60分間水素化した。触媒および炭素を、セライト層を通してろ別した。溶媒の除去により、最終カバ混合物が灰白色のペーストとして得られた（39g、カバ根から7.8%の収率）。7,8-ジヒドロカワイン（37%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（27%）の全含量は64重量%である。
【００８３】
実施例28
粉末化カバ根（500g）（園芸品種名：Molokai green、これはBotanical Liaisons、1180 Crestmoor Drive、Boulder、CO 80303から購入）を、95%EtOH（1.8L）と共に3時間還流下で攪拌し、室温まで冷却し、ろ過し、95%EtOH（800mL）で洗浄した。ろ液および洗浄液を合わせ、活性炭（10g）で80℃で30分間処理し、室温まで冷却し、Al2O3（中性、活性化、120g）およびセライト（50g）の層を通してろ過し、95%EtOH（2×500mL）で洗浄した。合わせたろ液および洗浄液を蒸発すると、粗抽出物（32g）が残った。その後、粗抽出物をEtOAc（300mL）に溶かし、5%Pd/C（3.2g）を加えた。その後、混合物を40p.s.i.のH2でParr水素化器により30分間水素化した。触媒および炭素を、セライト層を通してろ別した。ろ液を0.2N LiOH（2×150mL）およびその後H2O（150mL）と共に振盪した。有機層を分離し、真空で濃縮すると、最終カバラクトン混合物が灰白色ペースト（30g、カバ根から6%の収率）として得られた。7,8-ジヒドロカワイン（46%）および7,8-ジヒドロメチスティシン（19%）の全含量は65重量%である。
【００８４】
本明細書に引用した全参考文献は、印刷されたものであれ、電子的なものであれ、コンピューターで解読可能な保存媒体であれ、または他の形式であれ、その全体は参照として明示的に組み込まれ、これらには非限定的に要約書、論文、ジャーナル、刊行物、文書、専門書、技術的データシート、インターネットウェブサイト、データベース、特許、特許出願、および特許公報が含まれる。
【００８５】
本発明の多くの態様が記載されている。それにも関わらず、種々の改変を、本発明の精神および範囲から逸脱することなく行ない得ることが理解される。
【図面の簡単な説明】
【００８６】
【図１】6つのカバラクトンのIL-12阻害活性を示す。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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