(57)【要約】本発明は、抗炎症性および免疫抑制性活性を有する新規のベンズアミジン化合物を提供する。本発明の新規化合物は、下記式（Ｉ）で示される。【化１】2004531489.tif 000022（式中、Ａはカルボキサミド基、チオカルボキサミド基およびカルボニル基から選ばれ；Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５およびｎは、特許請求の範囲の記載と同意義であって、アミジン基は“Ａ−ＮＨ”基に対してパラまたはメタ位にある）
2004531489.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：
【化１】
2004531489.tif 000019
［式中、Ａはカルボキサミド基、チオカルボキサミド基およびカルボニル基から選ばれ；
Ｒ１は非置換またはニトロ基もしくはメチル基で置換された、炭素数１〜３のアルキル基およびアミノ基から選ばれ；
Ｒ２は非置換またはメチル、メトキシ、ヒドロキシ、アミノもしくはハロゲン基で置換された、水素、炭素数１〜４のアルキル基、メトキシ、エトキシもしくはプロポキシ基、炭素数５〜１２のモノ、ジもしくはトリ環式シクロアルカン残基、アダマンチル基、アリール、ナフチルもしくは複素環式基から選ばれ；
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素および炭素数１〜３のアルキル基から選ばれ；
Ｒ５は水素、メチル、メトキシおよびヒドロキシル基から選ばれる１または２個の置換基；および
ｎは０〜６の整数であって、アミジン基は“−Ａ−ＮＨ−”基に対してパラまたはメタ位にある］
で示される化合物、またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ａがチオカルボキサミド基；Ｒ１が炭素数１〜３のアルキル基；Ｒ２がメチルまたは炭素数５〜１２のモノ、ジもしくはトリ環式シクロアルカン残基；Ｒ３，Ｒ４およびＲ５が共に水素；およびｎが０〜６の整数であって、アミジン基が“−Ａ−ＮＨ−”基に対してパラ位にある請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容しうる塩。
【請求項３】
Ａがチオカルボキサミド基の代わりに、カルボキサミド基およびカルボニル基から選ばれる請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が炭素数１〜３のアルキル基の代わりに、非置換またはニトロもしくはメチル基で置換されたアミノ基から選ばれる請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がメチル基またはモノ、ジもしくはトリ環式シクロアルカン基の代わりに、非置換またはハロゲン基で置換されたアリール基から選ばれる請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ａがチオカルボキサミド基；Ｒ１がメチル基、アミノ基またはニトロ−アミノ基から選ばれ；Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４およびＲ５が共に水素；およびｎが５であって、アミジン基がチオカルボキサミド基に対してパラ位にある請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物。
【請求項７】
炎症性または自己免疫現象に関係する病的症状の処置用の薬剤の製造のための、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩の使用。
【請求項８】
活性物質として、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容しうる塩の少なくとも１種を含有する医薬製剤。
【請求項９】
炎症性および自己免疫現象に関係する病的症状の治療処置に用いる、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
慢性関節リウマチや変形性関節症などの変性関節疾患の管理および予防のための治療処置に用いる、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
潰瘍性大腸炎、過敏性結腸およびクローン病などの胃腸管の炎症性疾患の治療処置に用いる、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
固形腫瘍症状の抗増殖管理のための治療処置に用いる、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１３】
ビヒクル、結合剤、フレーバー、甘味剤、離解剤、保存剤、湿潤剤およびこれらの混合物からなる群から選ばれる医薬的に許容しうる不活性成分、または直腸、経皮もしくは経粘膜吸収を促進する成分、または時間にわたる活性物質の徐放性を可能にする成分をさらに含有する請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１４】
Ａ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５およびｎが請求項１の記載と同意義である一般式（Ｉ）の化合物の製造法であって、
ａ）Ｒ５が前記と同意義の式（ＩＶ）の１，３−もしくは１，４−フェニレンジアミンを中性溶媒中、過剰のフェニレンジアミンを用い、４℃から上記使用溶媒の還流温度の温度にて、Ｒ２，Ｒ３およびｎが前記と同意義の、式（ＶＡ）のイソチオシアネート、または式（ＶＢ）のアシルクロリド、または式（ＶＣ）のイソシアネートと反応させて、式：
【化２】
2004531489.tif 000020
（式中、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ａおよびｎは前記と同意義であって、アミン基は“Ａ−ＮＨ”基を持つ鎖に対してメタまたはパラ位にある）
の対応アニリン化合物を得；
ｂ）該式（ＩＩＩ）のアニリン化合物を不活性無水溶媒中、４℃から該溶媒の沸点の温度にて、理論量の第三塩基、たとえばトリエチルアミンの存在下、Ｒ１が前記と同意義の、過剰の式（ＩＩ）のイミデート塩酸塩と反応させて、式：
【化３】
2004531489.tif 000021
（式中、Ａ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５およびｎは前記と同意義であって、アミジン基は“Ａ−ＮＨ”基に対してパラまたはメタ位にある）
の対応する化合物を得、該反応マスより式（Ｉ）の化合物それ自体または医薬的に許容しうる塩で回収し、次いで常法により精製する工程、
ｃ）別法として、Ｒ１がＮＨ２またはＮＨ−ＮＯ２の場合、式（ＩＩＩ）のアニリン化合物をそれぞれ、ベンゾトリアゾロ−１−カルボキサミジニウム・トシレートまたはＮ−メチル−Ｎ−ニトロソ−Ｎ’−ニトログアニジンと反応させて、Ａ，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５およびｎが前記と同意義の、一般式（Ｉ）の対応化合物を得る工程
から成る製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の対象は、下記一般式（Ｉ）で示すことができるフェニレンジアミンの新規アミジン誘導体である。
【化１】
2004531489.tif 000003
【０００２】
式中、Ａはカルボキサミド基、チオカルボキサミド基およびカルボニル基から選ばれ；
Ｒ１は非置換またはニトロ基もしくはメチル基で置換された、炭素数１〜３のアルキル基およびアミノ基から選ばれ；
Ｒ２は非置換またはメチル、メトキシ、ヒドロキシ、アミノもしくはハロゲン基で置換された、水素、炭素数１〜４のアルキル基、メトキシ、エトキシもしくはプロポキシ基、炭素数５〜１２のモノ、ジもしくはトリ環式シクロアルカン残基、アダマンチル基、アリール、ナフチルもしくは複素環式基から選ばれ；
【０００３】
Ｒ３およびＲ４はそれぞれ独立して、水素および炭素数１〜３のアルキル基から選ばれ；
Ｒ５は水素、メチル、メトキシおよびヒドロキシル基から選ばれる１または２個の置換基；および
ｎは０〜６の整数であって、アミジン基は“−Ａ−ＮＨ−”基に対してパラまたはメタ位にある。
【０００４】
本発明の化合物において、Ｒ２はＡ基に直接結合するか（ｎ＝０）、または炭素数１〜６の、必要に応じて炭素数１〜３のアルキル基の１個以上で置換されたアルキレン基を介してＡに結合する。
【０００５】
本発明の化合物は、炎症の各種メディエイタの効力あるアンタゴニストであり、かつ免疫抑制性特性をも有することがわかった。本発明化合物はインビトロで、誘引できる酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）や酵素シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）のインヒビターであることがわかった。本発明化合物はインビボで、サイトカイン“腫瘍壊死因子”（ＴＮＦ−α）の効力あるインヒビターであることがわかった。さらに、本発明の生成物の多くは、メタロプロテアーゼのコラゲナーゼ活性を拮抗することができる。
【０００６】
酸化窒素（ＮＯ）は、酵素ＮＯＳを使って、Ｌ−アルギニンによって細胞レベルで形成される。この酵素には、３つの亜類型がある。プロ−炎症性サイトカインあるいはエンドトキシンの存在下で誘発しうる酵素（ｉＮＯＳ）は、多くのタイプ、中でもマクロファージや好中球である細胞にて発現される。
【０００７】
急性炎症が特色である血管拡張は、炎症性プロセスの多くのメディエイタ、たとえばヒスタミン、ブラジキニン、サブスタンスＰ、ＰＡＦなどの場合、ＮＯの放出に左右される。一般に、ＮＯは多くの実験モデル、急性および慢性の両方において、炎症性レスポンスを増加する。
【０００８】
注目すべき点は、慢性関節リウマチや変形性関節症を持つ患者の炎症を起こした関節において、ＮＯをサイトカインによって誘発される刺激に応じて大量に産生できること、およびこれらの患者における滑液中のＮＯのプラスマ濃度が一般に非常に高いことである。また、ｉＮＯＳの活性が潰瘍性大腸炎を持つ患者の結腸において非常に高いという事実も、興味を起こさせる。
【０００９】
プロスタグランジン（ＰＧＥ）は、酵素シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）によって発生する炎症のメディエイタである。誘引できる同形（isoform）（ＣＯＸ−２）は、炎症を起こした組織で過剰産生（“アップレギュレーション”）し、このことは、ＰＧＥの合成の増加に導く。ＮＯＳおよびＣＯＸシステム間に相互作用があり、従って、炎症におけるＮＯの役割は、ＰＧＥの生合成に対するその直接的効果ばかりでなく、その調節的効果にも依存するかもしれない。
【００１０】
ＴＮＦ−αは一次サイトカインであって、二次サイトカインおよび酵素、たとえばメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ、中でもコラゲナーゼ）、ｉＮＯＳおよびＣＯＸ−２の合成および放出を含む、炎症性プロセスの特性を表わす事象（events）のカスケードを開始する。既に述べられているように、腸管粘膜はプロ−炎症性サイトカイン産生の最も重要な部位の一つであって、これは、結腸（ＩＢＳ）および潰瘍性大腸炎の慢性炎症などの病的症状において観察される。
【００１１】
従って、本発明の化合物は、非特異的炎症の特徴があるヒトの各種疾患の処置に有利に使用しうることが考えられ、上記非特異的炎症としては、たとえば関節および関節周囲組織の進行性破壊に進展しうる慢性推移の症候群である慢性関節リウマチ、関節軟骨の変性の特徴があり、たびたび骨膜の二次炎症が付随することがある疾患である、あるいは他の病的症状における、たとえば胃腸系、潰瘍性大腸炎、クローン病、ＩＢＳもしくは食物アレルギーおよび不耐症における変形性関節症などが挙げられる。
【００１２】
また本発明化合物の有利な使用は、他の領域や体系においても、たとえばｉＮＯＳインヒビターの処置に敏感な炎症性またはアテローム硬化基底（basis）を持つ心臓血管系の病的症状の処置において予測することができる。さらに、ＭＭＰ−抑制活性を有する本発明化合物の場合の有利な使用は、腫瘍症状の処置において予測できるが、それは、これらの化合物が種々の成長因子の賦活を抑制し、かつ脈管形成をブロックすることにより、腫瘍細胞の限局性または転移性浸潤を潜在的に防止するからである。
【００１３】
プロ−炎症性サイトカインに対し抑制作用を果すことができ、かつ通常の抗炎症性薬物（ＣＯＸインヒビター）の副作用がない、抗炎症性活性を持つ薬物のサーチにおける、莫大な数の研究が行なわれている。
Ｃhiouらは最近に、「Ｅxp．Ｏpin．Ｔher．Ｐatents」（６（１）、４１−５６、１９９６年）において、モノグラフ研究で、多数の刊行物や特許を再検討したところ、サイトカインの産生を、その放出、そのレセプターあるいはその変換酵素のブロックによって抑制する種々の化合物が記載されていることを発表した。
【００１４】
また、ＭＭＰｓらのインヒビター、たとえばＳummersらの「Ａnnual  Ｒeports  in  Ｍed．Ｃhemistry」（３３、１３１−１４０、１９９８年）に記載のインヒビターなどに関する多くのモノグラフ研究が発表されており、種々の化学的部類のＭＭＰインヒビターが吟味され、その治療可能性が議論されている。他の文献等の中で、各種アミジン化合物のＮＯ−シンターゼ抑制活性を記載した特許、たとえばＰＣＴ／ＧＢ／９２／０２３８７およびＰＣＴ／ＧＢ／９４／０１３２５の特許が公開されている。
【００１５】
しかしながら、記載の化合物は、Ｌ−アルギニンの類似誘導体、たとえばＷＯ９１／０４０２４の特許の対象であるＬ−Ｎ−モノメチルアルギニンに構造上極めて類似するアミノ酸のアミジン誘導体であって、本発明のベンズアミジン化合物とは、構造上もおよびその薬理学的活性の全体に関しても相違する。
【００１６】
これらの刊行物やリサーチの全てから、常により効力ありかつ耐性良好な新しい抗炎症性薬物を見つけることが、治療上極めて必要であることが示される。この必要に従って、本発明の目的は、そのｉＮＯＳおよびＣＯＸアンタゴニスト総合活性、そのＭＭＰ−抑制活性、およびＴＮＦ−αの産生を抑制するその活性によって発現する、抗炎症性および免疫抑制性活性を同時に有し、かつ従って非特異的なまたは自己免疫に基づく炎症の特徴があるヒトの病的症状の処置に有利に使用できる、処置用の新しい薬物を提供することである。
【００１７】
本発明化合物の医薬剤形は、通常の技法によって、たとえば錠剤、丸剤、坐剤、懸濁液、溶液、パッチ、クリームまたは軟膏で調製でき、かつ経口、非経口、直腸、経皮または経粘膜ルートで投与でき、あるいは治療効果を達成するのに適切な他の形状、たとえば時間にわたる活性物質の徐放性（制御放出）を可能にする遅延作用を持つ、経口用途用の固形製剤などの形状で調製できる。
【００１８】
活性成分は通常、１回用量当り０．１〜１０ｍｇ／体重（ｋｇ）に変化しうる基準用量で、患者に投与される。
非経口投与の場合、本発明化合物の水溶性塩、たとえば塩酸塩あるいは非毒性でかつ医薬的に許容しうる無機もしくは有機酸から誘導される他の塩の使用が好ましい。やや酸性の本発明の誘導体（化合物）、たとえばＲ１がニトロ−アミノ基である誘導体の場合、対応するナトリウム塩もしくは等価塩は、通常の方法で製造することができる。
【００１９】
医薬品で普通に用いられている物質、たとえば賦形剤、結合剤、フレーバー、離解剤、経皮および経粘膜吸収を活気づける物質、着色剤、湿潤剤等を、不活性成分として使用されてよい。
【００２０】
本発明の誘導体の製造法は、
ａ）適当に置換されたおよびＲ５が前記と同意義の式（ＩＶ）の１，３−もしくは１，４−フェニレンジアミンを不活性溶媒中、過剰のフェニレンジアミン存在下、４℃から上記使用溶媒の還流温度の温度にて、Ｒ２，Ｒ３およびｎが前記と同意義の、適当なイソチオシアネート（ＶＡ）、またはアシルクロリド（ＶＢ）、またはイソシアネート（ＶＣ）と反応させて、式（ＩＩＩ）（式中、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ａおよびｎは前記と同意義であって、アミン基は“Ａ−ＮＨ”基を持つ鎖に対してメタまたはパラ位にある）の対応アニリン化合物を得（後記概略合成反応式のステップ１参照）；次いで
ｂ）該式（ＩＩＩ）（式中、Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５，Ａおよびｎは前記と同意義である）のアニリン化合物を、一般に塩酸塩形状に塩化した、式（ＩＩ）（式中、Ｒ１は前記と同意義である）の適当なイミデートと反応させる
ことから成る、一連の反応で構成される。
【００２１】
反応は、不活性無水溶媒（たとえばテトラヒドロフランなど）中、４℃から該溶媒の沸点の温度にて、２〜４８時間にわたって、化合物（ＩＩ）を化合物（ＩＩＩ）に対して過剰に（好ましくは、２モル：１モルで）存在させ、かつ化合物（ＩＩ）に対して理論量の第三塩基、好ましくはトリエチルアミンの存在下で起こり、これによって、式（Ｉ）（式中、Ａ，Ｒ１，Ｒ２，Ｒ３，Ｒ４，Ｒ５およびｎは前記と同意義であって、アミジン基は“Ａ−ＮＨ”基に対してパラまたはメタ位にある）
の対応する最終誘導体が得られる。
【００２２】
下記表２に記載の式（Ｉ）の化合物（Ｉ−３０およびＩ−３１）はそれぞれ、一般式（ＩＩ）の化合物以外の試薬、特にベンゾトリアゾロ−１−カルボキサミジニウム・トシレート（実施例５参照）およびＮ−メチル−Ｎ−ニトロソ−Ｎ’−ニトログアニジン（実施例６参照）の使用によって得られる。
【００２３】
出発フェニレンジアミン化合物、並びにイソチオシアネート（ＶＡ）、アシルクロリド（ＶＢ）、イソシアネート（ＶＣ）、および式（ＩＩ）のイミデートは、商業上入手しうるか、あるいは現存する文献に記載の通常の方法によって製造される。
【００２４】
概略合成反応式（反応式１）：
ステップ１
【化２】
2004531489.tif 000004
【００２５】
ステップ２
【化３】
2004531489.tif 000005
【００２６】
次に実施例を挙げて、本発明をより具体的に説明する。
実施例１
Ｎ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素（表１の化合物ＩＩＩ−４）の製造：
７１．８ｇの１，４−フェニレンジアミン（０．６６モル）を３００ｍＬのテトラヒドロフランに懸濁し、撹拌下および周囲温度にて、５０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した４３ｇのペンチルイソチオシアネート（０．３３モル）をゆっくりと滴下する。２４時間後、溶媒を減圧蒸発し、残渣を酢酸エチルで溶かし、これを水、０．１Ｎクエン酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび水で洗って、中性ｐＨとする。無水硫酸ナトリウムで溶媒を無水とし、減圧蒸発して７５ｇの粗生成物を得、これをトルエンより再結晶する。６０ｇが得られる。
【００２７】
化学式：Ｃ１２Ｈ１９Ｎ３Ｓ（Ｍ．Ｗ．２３７．４６）、収率７７％
ＴＬＣ：（クロロホルム／メタノール＝９：１），Ｒｆ０．７、Ｍ．Ｐ．１２５℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）４．６０分
ＨＰＬＣ条件：Ｓupelcosil  ＬＣ−ＤＰカラム、１００×４．６ｍｍ、溶離剤０．０１Ｍ−ＫＨ２ＰＯ４  ２５／ＭetＯＨ  ２７／ＭetＣＮ４８（ｐＨ２．１）、流速０．４ｍＬ／分、２４８ｎｍのＵＶ検出器
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ２．２１（ｂｔ、３Ｈ、Ｊ＝５．６０Ｈｚ）、０．９８−１．７１（ｍ、６Ｈ）、３．３３（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝６．６８Ｈｚ）、４．９３（ｂｓ、２Ｈ）、６．４５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５９Ｈｚ）、６．８１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５９Ｈｚ）、７．０５（ｍ、１Ｈ）、８．８８（ｓ、１Ｈ）
【００２８】
Ａがチオカルボキサミド基である本発明に係る式（ＩＩＩ）の中間体化合物の全ては、同じ方法の使用で合成した（反応式１のステップ１ａ参照）。
【００２９】
Ｎ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−ペンチル・アミド（表１の化合物ＩＩＩ−２２）の製造：
２０．２ｇの１，４−フェニレンジアミン（０．１８１モル）を１１．１ｍＬのトリエチルアミン（０．０８０モル）と共に、２００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解する。溶液を０℃に冷却し、温度が５℃を越えないように、１０ｍＬの塩化カプロイル（０．０７２４モル）をゆっくり滴下する。滴下が終了すると、温度を周囲温度まで上げる。２４時間の反応後、溶媒を減圧蒸発し、残渣を酢酸エチルで溶かし、これを水で洗う。無水硫酸ナトリウムで溶媒を無水とし、減圧蒸発して１２ｇの粗生成物を得、これをトルエンより再結晶する。７．５ｇが得られる。
【００３０】
化学式：Ｃ１２Ｈ１８Ｎ２Ｏ（Ｍ．Ｗ．２０６．２８）、収率５１％
ＴＬＣ：（クロロホルム／メタノール＝９：１），Ｒｆ０．５１、Ｍ．Ｐ．８８．５〜８９℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）５．５４分
ＨＰＬＣ条件：実施例１参照
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．８６（ｂｔ、３Ｈ、Ｊ＝５．５９Ｈｚ）、１．０３−１．７９（ｍ、６Ｈ）、２．１８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝６．９９Ｈｚ）、４．６９（ｓ、２Ｈ）、６．４３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．３９Ｈｚ）、７．１５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．３９Ｈｚ）、９．２８（ｓ、１Ｈ）
【００３１】
実施例３
Ｎ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−シクロヘキシル・尿素（表１の化合物ＩＩＩ−２８）の製造：
１０．４ｇの１，４−フェニレンジアミン（０．０９５モル）を１００ｍＬのテトラヒドロフランに懸濁し、撹拌下および周囲温度にて、２０ｍＬのテトラヒドロフランに溶解した５ｍＬのシクロヘキシル・イソシアネート（０．０３８モル）をゆっくりと滴下する。２４時間後、形成した固体を濾別し、冷テトラヒドロフラン、水およびエチルエーテルで洗う。８．８ｇが得られる。
【００３２】
化学式：Ｃ１３Ｈ１９Ｎ３Ｏ（Ｍ．Ｗ．２３３．３１）、収率９８％
ＴＬＣ：（クロロホルム／メタノール＝９：１），Ｒｆ０．４０、Ｍ．Ｐ．１９９．８〜２０２．４℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）６．３９分
ＨＰＬＣ：実施例１参照
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．７５−２．００（ｍ、１０Ｈ）、３．４７（ｍ、１Ｈ）、４．６２（ｂｓ、２Ｈ）、５．７５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．５０Ｈｚ）、６．４９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７５Ｈｚ）、７．００（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７５Ｈｚ）、７．７５（ｂｓ、１Ｈ）
【００３３】
上記で得た式（ＩＩＩ）の誘導体の幾つかを、幾つかの同定する化学的および物理的特数値と共に下記表１に示す。
【００３４】
【化４】
2004531489.tif 000006
【００３５】
【化５】
2004531489.tif 000007
【００３６】
【化６】
2004531489.tif 000008
【００３７】
注ａ）具体例として挙げた全ての化合物において、Ｒ４はＨ、但し、Ｒ４がＣＨ３の化合物  ＩＩＩ−９を除く
ｂ）具体例として挙げた全ての化合物において、アミノ基は“ＮＨ−Ａ”基に対してパラ位にあり、但し、アミノ基が“ＮＨ−Ａ”基に対してメタ位にある化合物ＩＩＩ−２９を除く
ｃ）具体例として挙げた全ての化合物において、Ｒ５はＨ、但し、Ｒ５が２，５−ジメチルである化合物ＩＩＩ−２１を除く
ｄ）結晶溶剤：Ａ（イソプロパノール）、Ｂ（トルエン）
ｅ）溶離剤：（Ｉ）クロロホルム／メタノール＝９：１（ｖ／ｖ）、（ＩＩ）クロロホルム／メタノール／水／アンモニア＝８５：２５：２：１（ｖ／ｖ）
【００３８】
実施例４
Ｎ−［４−（Ｎ−アセタミジン）フェニル］−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素（表２化合物Ｉ−４）の製造：
５５ｇのＮ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素（０．２３モル）を、３００ｍＬのテトラヒドロフランに溶解し、撹拌下および周囲温度にて、６４．５ｍＬのトリエチルアミン（０．４６モル）および５０．７ｇのメチル・アセチミデート塩酸塩（０．４６モル）を加え、懸濁液のｐＨは約９である。２４時間後（ｐＨが７に下がる）、固体を濾別し、少量のテトラヒドロフランおよびエチルエーテルで洗う。残渣を水で溶かし、これを４Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ１１の塩基性とし、撹拌下で１時間放置し、次いで濾過し、水およびエチルエーテルで洗い、アセトニトリルで温精製する。５１ｇが得られる。
【００３９】
化学式：Ｃ１４Ｈ２２Ｎ４Ｓ（Ｍ．Ｗ．２７８．４２）、収率８０％
ＴＬＣ：（ブタノール／酢酸／水＝５：２：２），Ｒｆ０．７０；（クロロホルム／アンモニアで飽和したメタノール＝９：１）Ｒｆ０．３７、Ｍ．Ｐ．１９１．４℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）７．７０分
ＨＰＬＣ条件：実施例１参照
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．８８（ｂｔ、３Ｈ、Ｊ＝５．６０Ｈｚ）、１．００−１．５５（ｍ、６Ｈ）、１．８２（ｓ、３Ｈ）、３．３５（ｍ、２Ｈ）、５．９１（ｂｓ、１Ｈ）、６．６３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５６Ｈｚ）、７．１１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５６Ｈｚ）、７．２８（ｂｓ、１Ｈ）、９．０８（ｂｓ、１Ｈ）
【００４０】
Ｒ１がメチルである式（Ｉ）の誘導体の全ては、Ｎ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素の代わりに式（ＩＩＩ）の適当なアニリン化合物を用い、同様にして製造した。
実施例５
１−グアニジノフェニル−４−シクロヘキシル・チオ尿素（表２の化合物Ｉ−３０）の製造：
１５ｇのＮ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−シクロヘキシル・チオ尿素（０．０６モル）を１００ｍＬのアセトニトリルに懸濁し、撹拌下および周囲温度にて、２０ｇのベンゾトリアゾロ−１−カルボキサミジニウム・トシレート（０．０６モル）［Ｋatrizky  Ａ．Ｒ．らの「Ｓynth．Ｃomm．」（２５（８）、１１７３−１１８６、１９９５年）参照］を加える。７２時間後、溶媒を減圧蒸発し、残渣を酢酸エチルで溶かし、これを０．１Ｎ水酸化ナトリウムで洗い、０．１Ｎクエン酸で抽出する。水性相を２Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ９に調整し、酢酸エチルで抽出し、有機相を水で洗う。無水硫酸ナトリウム上で溶媒を無水とし、減圧蒸発して８ｇの粗生成物を得、これをイソプロピルエーテルで結晶化する。７．４ｇが得られる。
【００４１】
化学式：Ｃ１４Ｈ２１Ｎ５Ｓ（Ｍ．Ｗ．２９１．４２）、収率４３％
ＴＬＣ：（ブタノール／酢酸／水＝５：２：２），Ｒｆ０．７１、Ｍ．Ｐ．１８８．６℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）８．０分
ＨＰＬＣ条件：実施例１参照
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．６７−２．１７（ｍ、１０Ｈ）、４．０５（ｍ、１Ｈ）、５．７３（ｂｍ、６Ｈ）、６．７１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４３Ｈｚ）、７．１７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４３Ｈｚ）
【００４２】
実施例６
１−ニトログアニジノフェニル−４−シクロヘキシル・チオ尿素（表２の化合物Ｉ−３１）の製造：
９ｇのＮ−（４−アミノフェニル）−Ｎ’−シクロヘキシル・チオ尿素（０．０３６モル）を１４０ｍＬのエタノール／水（１：１）混合物に懸濁し、撹拌下および周囲温度にて、３ｇのＮ−メチル−Ｎ−ニトロソ−Ｎ’−ニトログアニジン（０．０２１モル）［Ｍckay  Ａ．Ｆ．の「Ｊ．Ａｍ．Ｃhem．Ｓoc．」（７１、１９６８−１９７０、１９４９年）参照］を加える。周囲温度で２時間後、反応混合物を１時間加熱還流し、形成した沈澱物を温濾別し、エチルエーテルで洗い、乾燥する。３．８ｇが得られる。
【００４３】
化学式：Ｃ１４Ｈ２０Ｎ６Ｏ２Ｓ（Ｍ．Ｗ．３３６．４１）、収率５４％
ＴＬＣ：（ブタノール／酢酸／水＝５：２：２），Ｒｆ０．９５、Ｍ．Ｐ．２１５．２℃
ＨＰＬＣ：保持時間（ｒｔ）４．１６分
ＨＰＬＣ条件：実施例１参照
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．８４−１．９９（ｍ、１０Ｈ）、４．０１（ｍ、１Ｈ）、７．１５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７６Ｈｚ）、７．４２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７６Ｈｚ）、７．５２（ｂｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．６４Ｈｚ）、８．０３（ｂｓ、２Ｈ）、９．２８（ｓ、１Ｈ）、９．４２（ｂｓ、１Ｈ）
【００４４】
実施例７
Ｎ−［４−（Ｎ−アセタミジノ）フェニル］−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素・塩酸塩（化合物Ｉ−４の塩酸塩）の製造：
３ｇのＮ−［４−（Ｎ−アセタミジノ）フェニル］−Ｎ’−ペンチル・チオ尿素（０．０１１モル）を、１Ｎ−ＨＣｌに溶解する。周囲温度で０．５時間後、形成した沈澱物を濾別し、少量の水およびエチルエーテルで洗い、乾燥する。３．２ｇが得られる。
【００４５】
化学式：Ｃ１４Ｈ２３ＣｌＮ４Ｓ（Ｍ．Ｗ．３１４．８８）、収率９３％
ＴＬＣ：（ブタノール／酢酸／水＝５：２：２），Ｒｆ０．７０、Ｍ．Ｐ．１８０．６℃
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍ０．８４（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝５．６０Ｈｚ）、１．０２−１．７８（ｍ、６Ｈ）、２．２８（ｓ、３Ｈ）、３．４３（ｂｑ、２Ｈ、Ｊ＝６．０５Ｈｚ）、７．１５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５６Ｈｚ）、７．７３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．５６Ｈｚ）、８．３９（ｍ、１Ｈ）、９．４２（ｂｓ、１Ｈ）、１０．３８（ｓ、１Ｈ）、１１．２８（ｓ、１Ｈ）
【００４６】
本発明に従って得た式（Ｉ）の誘導体の幾つかを、幾つかの同定する化学的および物理的特数値と共に下記表２に示すが、これによって、いかなる場合も、本発明の精神または技術的範囲を制限することはない。
【００４７】
【化７】
2004531489.tif 000009
【００４８】
【化８】
2004531489.tif 000010
注ａ）具体例として挙げた全ての化合物において、Ｒ４はＨ、但し、Ｒ４がＣＨ３の化合物  Ｉ−９を除く
ｂ）具体例として挙げた全ての化合物において、アミノ基は、“ＮＨ−Ａ”基に対してパラ位にあり、但し、アミノ基が“ＮＨ−Ａ”基に対してメタ位にある化合物Ｉ−３２を除く
ｃ）具体例として挙げた全ての化合物において、Ｒ５はＨ、但し、Ｒ５が２，５−ジメチルである化合物ＩＩＩ−２２を除く
ｄ）結晶溶剤：Ａ（アセトニトリル）、Ｂ（トルエン）
ｅ）溶離剤：ブタノール／酢酸／水＝５：２：２（ｖ／ｖ）
【００４９】
薬理学的活性
ａ）ＮＯ２−（ニトリット）で測定されるＮＯ、ＰＧＥ２および中性プロテアーゼの形成を抑制する活性をインビトロで、サイトカインＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍＬ）によって４８時間刺激されたラビットの関節軟骨細胞の培養ブイヨンについて調べる。軟骨細胞の調製のため、Ｂerenbaumらの「ＦＥＢＳ  Ｌetters」（３４０、５１−５５、１９９４年）に記載の方法を行なう。簡単に言えば、ラビットの肩、ヒップおよびヒザの関節頭部から無菌条件下で取出した軟骨のフラグメントを、微細に切り刻み、３７℃にてヒアルロニアーゼ、トリプシンおよびコラーゲナーゼ溶液で消化し、次いで無菌ガーゼにて濾過および６０ｘｇで遠心分離を行い、１０％ＤＭＥＭ−ＦＣＳで適当に希釈して、約１×１０５細胞／ウェル（well）の濃度を生じさせる。
【００５０】
細胞を交会までこれらの条件に保持し（約１５日）、ブイヨンを３日毎に変える。この時点で、試験下の産物（products）を溶解したものを各試験サンプルに加え、２０分後、１ｎｇ／ｍＬの最終濃度を有するために３５０μＬのＩＬ−１βを加える。刺激の持続時間は、３７℃で４８時間である（培養、空気−ＣＯ２７％）。次いで細胞上澄み液について、Ｇreenらの「Ａnal．Ｂiochem．」（１２６、１３１−１３８、１９８２年）に記載のニトリットの測定、およびＲＩＡ測定によるＰＧＥ２の測定を行なう。
【００５１】
ｐ−アミノフェニル酢酸水銀（ＡＰＭＡ）活性薬を含有する細胞上澄み液において、中性プロテアーゼの測定を行ない、このとき、Ｃhaviraらの「Ａnal．Ｂiochem．」（１３６、４４６−４５０、１９８４年）の記載に準じ、基質としてアゾコール（azocoll）を用い、かつ３７℃で１７ｈ培養する。細胞上澄み液の加水分解活性について、試験下の化合物の直接的抑制効果を評価するため、ＩＬ−１βで誘発され、かつ既にＡＭＰＡで活性化されたプロテアーゼを含有する上澄み液に、試験下化合物を加える。
【００５２】
得られる結果を下記表３に示す。表３中、ＩＣ５０、すなわち、ニトリット、ＰＧＥ２および中性プロテアーゼそれぞれの形成を、対照グループ（すなわち、ＩＬ−１βで刺激されるが、アンタゴニストを加えていない細胞）に対して５０％を抑制することができるアンタゴニストの濃度（ミクロモル）を、表２で具体例として挙げた前記幾つかの本発明化合物に対して記載する。
【００５３】
【化９】
2004531489.tif 000011
【００５４】
【化１０】
2004531489.tif 000012
【００５５】
【化１１】
2004531489.tif 000013
注ａ）構造同定に関して、前記表２の注ａ、ｂおよびｃを参照
ｂ）ＮＯをニトリットで測定
ｃ）ＭＰ：メタロプロテアーゼ
【００５６】
表３に示すデータから、本発明の対象でありかつ試験を行った幾つかの化合物は、ラビットの軟骨細胞培養において、ＩＬ−１βサイトカインで誘発されるニトリット、ＰＧＥ２およびメタロプロテアーゼの産生に対し、ミクロモルレベルで効力ある抑制効果を有することが認められる。最良の化合物は、Ｒ１がＣＨ３、Ｒ３およびＲ４がＨ、Ｒ２がＣＨ３（ｎが４または５のとき）、イソプロピル（ｎが２のとき）または２，６−ジフルオロ−フェニル基（ｎが２のとき）の化合物、およびＡがＮＨ−ＣＳの化合物である（それぞれ、化合物Ｉ−４、Ｉ−５、Ｉ−７およびＩ−１８）。
【００５７】
また、Ｒ１がＮＨ−ＮＯ２基、Ｒ２がシクロヘキシル、およびＡがＮＨ−ＣＳ基の化合物Ｉ−３１も、非常に活性である。興味を起こさせる点として、メタロプロテアーゼに関する抑制活性は、ＡがＮＨ−ＣＳ基の化合物によってのみ発現されることが注目される。また注目すべき点は、参考のＮＯ−シンターゼ・インヒビター化合物、Ｌ−ＮＡＭＥが概して、本発明の最良化合物、たとえば化合物Ｉ−４と比較して約３０〜１００倍も効力が少ない活性しか有さず、かつメタロプロテアーゼの抑制においては全く不活性であったことである。
【００５８】
ｂ）本発明化合物の幾つか、たとえば化合物Ｉ−４、Ｉ−１１およびＩ−３１を、一連の実験管外遊出モデルにおいて、インビボ評価し、ここで、生理的溶液に溶解した５μＬの前もって選んだ炎症発生剤を、Ｅrdoらの「Ａgents  and  Ａctions」（３９、１３７−１４２、１９９３年）の記載を少し改変し、これに準じてマウスの耳の皮内に注射する。
【００５９】
試験下の産物を、攻撃の１時間前と３０分前に経口投与し、染料エバンス・ブルーを１００ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に注射する。攻撃後３０分から２時間の、試験に応じた所定の時間にマウスを殺す。組織を２ｍＬのホルムアミド中で均質化し、５０℃で２時間培養を行った後抽出した、耳に存在する染料の量を測定することによって、管外遊出を評価する。
【００６０】
遠心分離後、６２０ｎｍの吸収量を測定することにより、染料の量を決定する。最大効果％（％ＭＰＥ）を下記式によって算定する。
【数１】
2004531489.tif 000014
式中、ＥＶは炎症発生剤のみで処置したマウスのグループに見られる平均吸収量；ＥＤは炎症発生剤および薬物で処置したグループ；およびＥＢは基本値、すなわち、生理的溶液単独を注射したマウスの値である。
【００６１】
使用した炎症発生剤は、以下の通りである。
アラキドン酸（ＥｔＯＨに溶解）：１ｍｇ／マウス、殺＋３０分；ヒスタミン：３ｎmoli／マウス、殺＋３０分；ＰＡＦ：３０ｐmoli／マウス、殺＋６０分；チモサン：１０μｇ／マウス、殺＋１２０分）；ブラジキニン：０．６ｎmoli／マウス、殺＋３０分
【００６２】
化合物Ｉ−４の場合に得られる結果を、下記表４に要約する。
2004531489.tif 000015
【００６３】
化合物Ｉ−４は特に、チモサンによって誘発される管外遊出に有効であることが認められ（ＥＤ５０＝３．１ｍｇ／ｋｇ）；しかしながら、他の調べた管外遊出モデルでは、わずか５ｍｇ／ｋｇの用量で、約３５％の平均抑制効果をもたらした。比較薬物として、非選択的ＮＯ−シンターゼ・インヒビター、Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニン・メチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）、ＣＯＸ１インヒビター（ピロキシカム）およびＣＯＸ２インヒビター（Ｎimesulide）を用いた。
【００６４】
得られる結果を、下記表５に示す。
2004531489.tif 000016
【００６５】
一般に、化合物Ｉ−４が調べた化合物の中で最も活性である。実際に、参考化合物の中で、Ｌ−ＮＡＭＥはヒスタミンやブラジキニンによって誘発される管外遊出において化合物Ｉ−４とほぼ同じ活性を有するが、ＡＡによる管外遊出では活性が２倍少なく、ＰＡＦへの拮抗でははるかに活性が少なく、かつチモサンによる誘発の管外遊出では全く不活性であった。
【００６６】
ピロキシカムは、ＰＡＦやチモサンを用いたモデルで化合物にＩ−４より活性が２〜３倍少なく、Ｎimesulideは、ＡＡへの拮抗の活性が２倍少なく、かつＰＡＦへの拮抗に不活性であった。化合物Ｉ−３１は、化合物Ｉ−４のそれに似た活性プロフィールを有するが、概して活性は２〜３倍少ない。
【００６７】
ｃ）化合物Ｉ−４の免疫抑制活性を、ラットにおいてインビボ試験で評価し、ここで、細菌起始のリポ多糖類（ＬＰＳ）を６ｍｇ／ｋｇの用量でｉ．ｐ．注射し、切迫した下痢の特徴があるショックを誘発し、プラスマＴＮＦα濃度の大きな増加が付随する。
【００６８】
攻撃の９０分後に殺したマウスから血液を取り、Ｅlisa（Ａmersham  Ｋit  cod．  ＲＰＮ２７３４）で、プラスマ中のＴＮＦα濃度を測定する。このようにして得られる結果を、表６に示す。
2004531489.tif 000017
【００６９】
上記のデータから、化合物Ｉ−４は、ＬＰＳで誘発した内毒素ショック中のプラスマＴＮＦαの増加を抑制するのに非常に活性であることが明らかである。たとえば、２０ｍｇ／ｋｇの経口用量で、ＬＰＳの効果を約５０％抑制した。
【００７０】
ｄ）腸の抗炎症性活性
ＴＮＦαは、免疫学に基づく種々の炎症性疾患、中でも腸の炎症の病因に関係するサイトカインである。ＣＯＸ１型抗炎症性薬物によって誘発される、ＴＮＦαの過剰産生の誘発は、好中球の活性化と、組織ｉＮＯＳの活性化に基づくニトリットの産生の増加をひき起こし、これらは共に、腸粘膜に対する毒性−潰瘍性効果の一因となることが知られている［Ｂertrandらの「Ｂｒ．Ｊ．Ｐharmacol．」（１２４、１３８５−１３９４、１９９８年）］。
【００７１】
本発明化合物の幾つかの、ｉＮＯＳおよびＴＮＦαの合成を共に抑制する総合能力は、組織たん白に結合し、細胞−仲介免疫を刺激することができる、化学的ハプテンのトリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によって起こる大腸炎の実験モデルでチェックされている活性に導く。ＴＮＢＳをエタノールと共に直腸内に投与すると、甚大な潰瘍化および壊死の特徴がある急性炎症が起こる。
【００７２】
従って、ラットにおいて、５０％エタノール（０．５ｍＬ／ラット）に溶解したＴＮＢＳ（４０ｍｇ／ｋｇ）を直腸内に点滴注入することにより、遠位大腸炎を誘発する。−２、−１、０、＋１日目に、薬物を１日に２回経口投与し、ＴＮＢＳ投与の４８時間後にラットを殺す。
【００７３】
検査したパラメーターは、結腸の総重量（ｇ）、肉眼の組織損傷“スコア”、組織ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性の測定値（これは好中球の浸潤のマーカである）、およびｉＮＯＳ活性の測定値（ｐモル／組織（ｇ）／分）である。
【００７４】
肉眼スコア（ＭＤＳ）付けは、約１０ｃｍの結腸に対し、以下に示す恣意的な等級に従って行なう。
０：損傷なし
１：充血（潰瘍なし）
２：１つの小さな潰瘍もしくはびらん
３：炎症を持つ１つの潰瘍
４：２つの潰瘍化部位
５：３つ以上の潰瘍化部位または１つの＞１ｃｍ潰瘍
６〜１０：損傷が＞２ｃｍのとき、スコアは１ｃｍ毎に１つ増加する
【００７５】
組織ＭＰＯ測定は、ＶelgaraらのＪＰＥＴ１９９４の記載に従って行なう。組織ニトリットの測定は、組織ホモジネートの上澄み液に、上記軟骨細胞の場合に記載した方法を適用して行なう。
【００７６】
化合物Ｉ−４（５、１０および２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与）と化合物Ｉ−１１を、経口投与して検査し、潰瘍性大腸炎の処置に広く使用されている２つの薬物，スルファサラジン（sulphasalazine）（２５０ｍｇ／ｋｇ）と５−アミノサリチル酸（５−ＡＳＡ）（１００ｍｇ／ｋｇ）と比較する。
【００７７】
このようにして得られる結果を、下記表に示す。
2004531489.tif 000018
表７中、数値は平均値±標準偏差値
（＊）：ＴＮＢＳ対照グループと有意的に異なる数値
【００７８】
表７のデータから、化合物Ｉ−４は、ラットのＴＮＢＳによって誘発される大腸炎の実験モデルにおいて強い保護効果を有することが明らかである。実際、化合物Ｉ−４は、肉眼損傷および他の考慮される全ての炎症性パラメーターを共に、中および高用量（１０および２０ｍｇ／ｋｇ）の用量−依存および意味のある態様で縮小する。特に、それはＴＮＢＳによる処置で誘発した結腸重量の増加を縮小し、１０および２０ｍｇ／ｋｇの用量で肉眼損傷を約５０％縮小し、およびＴＮＢＳによって誘発される組織ＭＰＯ活性およびｉＮＯＳ活性の増加をそれぞれ、同用量で４０％および５０％縮小する。
【００７９】
これに対して、選んだ２つの参考薬物の中で、５−ＡＳＡ（１００ｍｇ／ｋｇ）は全てのパラメーターに対し不活性であり、スルファサラジンは、肉眼損傷（約２０％効果）およびｉＮＯＳ活性（約５０％効果）に対してのみ、２５０ｍｇ／ｋｇの非常に高い用量でおよび非統計的に意味のある態様で少し活性がある。また、試験した他の本発明化合物（化合物Ｉ−１１）も、２０ｍｇ／ｋｇの用量で活性であるが、結腸重量の増加のパラメーター、およびＭＰＯ活性に関する、損傷縮小の効果は、化合物Ｉ−４のそれらよりも明らかに小さい。
【００８０】
最後に、ヒトの潰瘍性大腸炎と相互に関係がある病的症状を、できるだけ密接にまねる、ラットにおける大腸炎の実験モデルにおいて［Ｍorrisらの「Ｇastroenterology」（９６、７９５−８０３、１９８９年）］、本発明の幾つかの化合物は、潰瘍性大腸炎およびクローン病の処置に広く用いられている薬物であるスルファサラジンのそれよりも、低い用量でかつはるかに大きな保護効果を有する。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
2004531489.tif 000067
2004531489.tif 000068
2004531489.tif 000069
2004531489.tif 000070