(57)【要約】ＣＤ２結合因子（例えば、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド））を補助因子（例えば、ＵＶＢ照射）と組み合わせて使用する、表皮または真皮の障害（例えば、乾癬）を処置または予防するための方法が、開示される。補助因子は、１以上の以下の特性を有する因子である：（ｉ）インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の産生および／またはレベルを低下する；（ｉｉ）罹患組織におけるＴ細胞（特に、ＣＤ６９＋Ｔ細胞）の数を低下する；（ｉｉｉ）ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ（すなわち、ＣＤ１５４））発現を低下する；あるいは（ｉｖ）Ｔ細胞死（例えば、アポトーシス）を増加する。さらに、本発明は、異常なＴ細胞の活性および増殖によって特徴付けられる表皮または真皮の障害の処置または予防のための方法および組成物を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体における、異常なＴ細胞活性またはＴ細胞増殖により特徴付けられる表皮または真皮の障害の処置または予防の方法であって、該方法が、以下：
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターを補助因子と組み合わせて該被検体に投与する工程であって、それによって、該表皮または真皮の障害を処置または予防する、工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記表皮または真皮の障害が、Ｔ細胞ＩＦＮγ産生の増加により特徴付けられる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記表皮または真皮の障害が、慢性の炎症性障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記表皮または真皮の障害が、自己免疫障害である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記表皮または真皮の障害が、乾癬である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターが、ＣＤ２結合因子である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターが、免疫グロブリンまたはそのフラグメントと融合したＬＦＡ−３のＣＤ２−結合フラグメントである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターが、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記補助因子が、光線療法、メトトレキサート、レチノイド、マクロライド、マクロラクタム、シクロスポリン、およびエトレチナートからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記補助因子が、ＵＶＢ照射である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
症状あるいはサイトカインレベルまたは免疫細胞集団における変化について、被検体をモニタリングする工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ステロイド、ビタミン、タール、アントラリン、およびマクロラクタムからなる群より選択される、局所的に適用される因子を、被検体に投与する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記被検体が、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
被検体における、乾癬の処置または予防の方法であって、該方法が、以下：
ＩｇＧの定常領域のフラグメントに融合したＬＦＡ−３のＣＤ２−結合フラグメントを含む融合ポリペプチドを、該被検体の表皮におけるインターフェロンγレベルを低下させるために十分な量のＵＶＢと組み合わせて該被検体に投与する工程であって、それによって、該乾癬を処置または予防する、工程
を包含する、方法。
【請求項１５】
被検体における、炎症性障害の処置または予防の方法であって、該方法が、以下：
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターを、補助因子と組み合わせて該被検体に投与する工程であって、それによって、該炎症性障害を処置または予防する、工程
を包含する、方法。
【請求項１６】
被検体における、自己免疫障害の処置または予防の方法であって、該方法が、以下：
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターを、補助因子と組み合わせて該被検体に投与する工程であって、それによって、該自己免疫障害を処置または予防する、工程
を包含する、方法。
【請求項１７】
請求項１６に記載の方法であって、ここで、前記自己免疫障害が、乾癬、真性糖尿病、関節炎、慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎からなる群より選択される、方法。
【請求項１８】
被検体における、アトピー性皮膚炎の処置または予防の方法であって、該方法が、以下：
ＩｇＧの定常領域のフラグメントに融合したＬＦＡ−３のＣＤ２−結合フラグメントを含む融合ポリペプチドを、該被検体の表皮におけるインターフェロンγレベルを低下させるために十分な量のＵＶＢと組み合わせて該被検体に投与する工程であって、それによって、該アトピー性皮膚炎を処置または予防する、工程
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００１年２月１日に出願された、米国仮出願第６０／２６５，９６４号に対する優先権を主張する。この出願の内容は、本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、補助因子（例えば、ＵＶＢ照射）と組み合わせて、障害（例えば、乾癬，あるいは異常なＴ細胞活性またはＴ細胞増殖により特徴付けられる他の表皮または真皮の障害）を処置するための、ＣＤ２結合因子（例えば、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド））の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
皮膚障害（例えば、乾癬、湿疹、菌状息肉腫、光線性角化症、および扁平苔癬）は、毎年１５０，０００〜２６０，０００もの新たな症例の発生を伴って、米国人口の１〜２％に発症していることが公知である（「Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｅｅｄｓ  ｉｎ  １１  Ｍａｊｏｒ  Ａｒｅａｓ  ｉｎ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ」Ｉ．Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ．Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７３：４０２−１３，１９７９）。これらの多数の皮膚障害は、真皮および表皮でのＴ細胞の活性化および異常な抗原提示の増加によって特徴付けられる（Ｃｏｏｐｅｒ，「Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ」，Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖａｎ  Ｖｌｏｔｅｎら編、１９，６９−８０頁の７３頁、７４頁、７６頁（１９９０））。例えば、接触アレルギー性皮膚炎において、皮内のＴ細胞の活性化が観察される。アトピー性皮膚炎を示す患者由来の皮膚が、ランゲルハンス細胞数の増加を含むことは、公知である（Ｃｏｏｐｅｒ，「Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ」，Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖａｎ  Ｖｌｏｔｅｎら編、１９，７４頁（１９９０））。乾癬の皮膚において、ランゲルハンス細胞および非ランゲルハンス細胞のクラスＩＩ  ＭＨＣ保持抗原提示細胞の両方から構成される、抗原提示細胞数の増加が見られる（Ｃｏｏｐｅｒ，「Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ」，Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖａｎ  Ｖｌｏｔｅｎら編、１９，７５頁（１９９０））。
【０００４】
皮膚のＴ細胞リンパ腫は、真皮および表皮でのＴ細胞の悪性クローン集団の拡大により特徴付けられる。病変の表皮細胞は、ＣＤ１＋ＤＲ＋抗原提示細胞数の増加を含む（Ｃｏｏｐｅｒ，「Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ」Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，ｖａｎ  Ｖｌｏｔｅｎら編、１９，７６−７７頁（１９９０））。
【０００５】
上述の皮膚疾患についての現在知られている治療は、限られている。ステロイドまたはシクロスポリンＡは、一般に、以下の処置において使用される：乾癬、扁平苔癬、蕁麻疹、アトピー性皮膚炎、ＵＶ損傷、壊疽性膿皮症、白斑、眼の瘢痕性類天疱瘡（ｏｃｕｌａｒ  ｃｉｃａｔｒｉｃｉａｌ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）、円形脱毛症、アレルギー性皮膚炎および刺激性接触皮膚炎ならびに皮膚のＴ細胞リンパ腫。さらに、これらの皮膚障害のいくつかについて、種々の治療として以下が挙げられる：レチノイド、ＰＵＶＡ、ナイトロジェンマスタード、インターフェロン、化学療法、メトトレキサート、光線療法（例えば、ＵＶ光線およびＰＵＶＡ）、抗生物質ならびに抗ヒスタミン剤。一般に、Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第３版、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ（１９８７）を参照のこと。ＵＶＡ治療およびＵＶＢ治療の両方の紫外光治療は、３２０〜４００ｎｍの間（ＵＶＡ照射）または２９０〜３２０ｎｍの間（ＵＶＢ照射）のＵＶ照射に皮膚を曝す。ＰＵＶＡ治療は、ソラレンまたはソラレンベースの化合物の皮膚の罹患領域への局所適用を繰り返し、続いてその罹患領域をＵＶＡ照射に曝すことによる、光化学療法の形態である。増殖性の皮膚疾患（特に乾癬および菌状息肉腫）を処置するために使用される別の方法は、光力学治療（ＰＤＴ）である。
【０００６】
これらの治療に対する副作用は、公知である。最も一般的に遭遇されるシクロスポリンＡの欠点としては、免疫抑制による毒性ならびに腎毒性および神経毒性が挙げられる。ステロイドは、クッシング症候群の誘導を含む周知の副作用を有する。他の前述の治療のいくつかの副作用としては、以下が挙げられる：皮膚癌、骨髄毒性および全身毒性、靱帯カルシウム沈着（ｌｉｇａｍｅｎｔ  ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、肝線維症および他の障害。光線療法に関しては、これらの型の治療を用いた皮膚疾患の長期処置は、有意な急性および慢性の有害な効果（紅斑、そう痒、皮膚癌、および慢性の光誘導性の皮膚損傷を含む）を生じ得る。（Ｓｔｅｒｎら、Ｎ．Ｅ．Ｊ．ｏｆ  Ｍｅｄ．３００：８０９−８１２，１９７９）。
【０００７】
従って、Ｔ細胞の活性化および異常な抗原提示の増加を示す皮膚障害の予防または処置のための治療様式の改善の必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、部分的に、ＣＤ２結合因子（例えば、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド）と補助因子（例えば、ＵＶＢ照射）との組み合わせが、乾癬病変の処置において非常に効果的であるという発見に基づく。この補助因子は、１以上の以下の特性を有する因子である：（ｉ）インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の産生および／またはレベルを低下する；（ｉｉ）罹患組織におけるＴ細胞（特に、ＣＤ６９＋Ｔ細胞）の数を低下する；（ｉｉｉ）ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ（すなわち、ＣＤ１５４））発現を低下する；あるいは（ｉｖ）Ｔ細胞死（例えば、アポトーシス）を増加する。理論に縛られることを望まないが、この処置は、乾癬病変におけるＴｈ１型細胞の数および活性の低下によって作用すると考えられる。さらに、本発明は、異常なＴ細胞の活性および増殖によって特徴付けられる表皮または真皮の障害の処置または予防のための方法および組成物を提供する。
【０００９】
概して、本発明は、被験体における、異常な（例えば、増加した）Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１型細胞）の活性および増殖によって特徴付けられる皮膚障害（表皮または真皮の障害）の処置または予防の方法を特徴とする。本方法は、以下を包含する：
ＣＤ２結合因子、ＬＦＡ−３結合因子、またはＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、ＣＤ２結合因子）を、補助因子（例えば、１以上の以下の特性を有する因子：（ｉ）インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）産生および／またはレベルを低下する；（ｉｉ）罹患組織におけるＴ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞（特に、ＣＤ６９＋Ｔ細胞））の数を低下する；（ｉｉｉ）ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）発現を低下する；あるいは（ｉｖ）Ｔ細胞死（例えば、アポトーシス）を増加する）と組み合わせて被験体に投与する工程であって、それにより、この皮膚障害を処置または予防する、工程。
【００１０】
好ましい実施形態において、この皮膚障害は、１以上の以下の特性により特徴付けられる：（ｉ）ＩＦＮγレベルの増加（例えば、Ｔ細胞ＩＦＮγ産生の増加）；（ｉｉ）Ｔ細胞集団（例えば、ＣＤ３陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４５陽性Ｔ細胞および／またはＣＤ６９陽性Ｔ細胞）レベルの上昇；（ｉｉｉ）ＣＤ４０リガンド発現の増加；もしくは（ｉｉｉ）ケラチノサイトの過剰増殖。
【００１１】
好ましい実施形態において、その皮膚障害は、慢性炎症性障害（例えば、乾癬）である。
【００１２】
好ましい実施形態において、その皮膚障害は、自己免疫障害（例えば、慢性の自己免疫障害（例えば、乾癬））である。
【００１３】
好ましい実施形態において、その皮膚障害は、以下の１以上から選択される：乾癬，アトピー性皮膚炎，皮膚のＴ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉腫）、アレルギー性皮膚炎および刺激性接触皮膚炎、扁平苔癬、脱毛症（例えば、円形脱毛症）、壊疽性膿皮症、白斑、眼の瘢痕性類天疱瘡、または蕁麻疹。好ましくは、その皮膚障害は、乾癬，アトピー性皮膚炎，アレルギー性皮膚炎，または円形脱毛症である。最も好ましくは、その障害は、乾癬である。
【００１４】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、例えば、以下のＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターである：抗ＣＤ２抗体ホモログ；ＬＦＡ−３の可溶性ＣＤ２結合フラグメント；別の部分（例えば、血漿タンパク質の全てまたは一部（例えば、免疫グロブリンの全てまたは一部（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥ（しかし、好ましくは、ＩｇＧ））またはそのフラグメント（例えば、免疫グロブリン定常領域））、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、または合成親水性ポリマー（例えば、ペグ化（例えば、ＰＥＧ）））に結合（例えば、融合）されたＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメント；ＣＤ２結合低分子またはペプチド模倣物；ＣＤ２結合ポリペプチドフラグメント（例えば、ファージディスプレイによってか、またはペプチドコンビナトリアルライブラリーを使用することによって同定された）。
【００１５】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、免疫グロブリンヒンジおよび重鎖定常領域の全てまたは部分あるいはその一部に融合された、ＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメント（例えば、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド（例えば、米国特許第６，１６２，４３２号（本明細書によって参考として援用される）の配列番号７および８に示されるヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を有する、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド））である。なお別の好ましいＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合タンパク質は、図１に示されるアミノ酸配列を有し、そして同図に示されるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００１６】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド（例えば、米国特許第６，１６２，４３２号（本明細書によって参考として援用される）の配列番号３に示されるＬＦＡ−３配列のアミノ酸１〜９２、１〜８０、５０〜６５、２０〜８０から選択されるポリペプチド）である。
【００１７】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、抗ＣＤ２抗体ホモログ（例えば、モノクローナル抗ＣＤ２抗体（例えば、組換え体（例えば、キメラ抗ＣＤ２抗体またはヒト化抗ＣＤ２抗体））またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＣＤ２抗体ホモログのＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメントまたはインタクトな免疫グロブリン重鎖））である。
【００１８】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、ＣＤ２に結合する第１の部分およびエフェクター細胞を動員する第２の部分を含む。第１の部分は、ＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメント（例えば、本明細書中に記載されるフラグメント）またはＣＤ２に結合する抗体ホモログ（例えば、本明細書中に記載される抗体ホモログ）であり得る。第２の部分は、エフェクター細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）を動員し得るポリペプチドであり得る。好ましくは、第２の部分としては、以下が挙げられる：免疫グロブリン定常領域のフラグメント（例えば、本明細書中に記載される免疫グロブリンフラグメント）；またはＦｃレセプター（例えば、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩ）結合抗体ホモログ。
【００１９】
特に好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、ＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメントおよびエフェクター細胞を動員し得るポリペプチドを含む、キメラ（例えば、融合）ポリペプチドである。好ましい実施形態において、このキメラまたは融合ポリペプチドは、ＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメント（例えば、本明細書中に記載されるフラグメント）またはＣＤ２に結合する抗体ホモログ（例えば、本明細書中に記載される抗体ホモログ）、および免疫グロブリン定常領域のフラグメント（例えば、本明細書中に記載される免疫グロブリンフラグメント）；またはＦｃレセプター結合抗体ホモログを含む。
【００２０】
好ましい実施形態において、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターは、例えば、以下のＬＦＡ−３結合因子である：抗ＬＦＡ−３抗体ホモログ；ＣＤ２の可溶性ＬＦＡ−３結合フラグメント；別の部分（例えば、血漿タンパク質（例えば、免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）、ＩｇＤおよびＩｇＥ（好ましくは、ＩｇＧ））またはそのフラグメント（例えば、免疫グロブリン定常領域））、血清アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）、またはペグ化）に融合されたＣＤ２のＬＦＡ−３結合フラグメント；ＬＦＡ−３結合低分子またはペプチド模倣物；ＬＦＡ−３結合ペプチドフラグメント（例えば、ファージディスプレイによってか、またはペプチドコンビナトリアルライブラリーを使用することによって同定された）。
【００２１】
好ましい実施形態において、ＬＦＡ−３結合因子は、抗ＬＦＡ−３抗体ホモログ（例えば、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体（例えば、組換え体（例えば、キメラ抗ＬＦＡ−３抗体またはヒト化抗ＬＦＡ−３抗体））またはその抗原結合フラグメント（例えば、抗ＬＦＡ−３抗体ホモログのＦａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメントまたはインタクトな免疫グロブリン重鎖））である。
【００２２】
好ましい実施形態において、補助因子は、以下の１以上を直接的または間接的に引き起こす因子である：（ｉ）インターフェロン−γ（ＩＦＮγ）の産生および／またはレベルの減少；（ｉｉ）罹患組織におけるＴ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）（特に、ＣＤ６９＋Ｔ細胞）の数の減少；（ｉｉｉ）ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）発現の減少；または（ｉｖ）Ｔ細胞死（例えば、アポトーシス）の増加。このような効果は、以下の１以上から生じ得る：Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）の数または活性の減少；ＩＦＮγ産生免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の数または活性の減少；またはＩＦＮγの隔絶または他の不活性化；免疫細胞によるＩＦＮγの合成および／または分泌の干渉；Ｔ細胞（例えば、ＩＦＮγ産生免疫細胞）の細胞（例えば、エフェクター細胞）媒介殺傷の誘導。例示的な補助因子としては、以下が挙げられる：光線療法（例えば、ＵＶＡ、ＵＶＢまたはＰＵＶＡ）；メトトレキサート；レチノイド；シクロスポリン；エトレチナート；サイトカインインヒビター（例えば、マクロラクタム（例えば、ピメクロリムス（ｐｉｍｅｃｒｏｌｉｍｕｓ）））；ＩＦＮγ結合因子（例えば、抗ＩＦＮγ抗体またはその抗原結合フラグメント）；ＩＦＮγまたはＩＦＮγレセプターのアンタゴニスト（例えば、ＩＦＮγレセプター相互作用を阻害する抗体またはその抗原結合フラグメント）、低分子またはペプチド模倣物インヒビター。
【００２３】
好ましい実施形態において、補助因子は、以下から選択される：紫外線照射（例えば、ＵＶＡまたはＵＶＢ照射、ＰＵＶＡ照射）、メトトレキサート、レチノイド、シクロスポリン、エトレチナート、マクロライド、マクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）またはアスコマイシンマクロラクタム（例えば、ピメクロリムス））、またはこれらの任意の組み合わせ。好ましい因子は、ＵＶＢ照射である。
【００２４】
好ましい実施形態において、この方法は、例えば、症状について、あるいはサイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）または免疫細胞集団（例えば、Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）；ＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の変化について、被験体をモニターする工程をさらに包含する。被験体は、処置を開始する前、処置中、または処置の１以上の要素が付与された後に、モニターされ得る。モニタリングは、同じ因子でのさらなる処置またはさらなる因子でのさらなる処置についての必要性を評価するために使用され得る。一般に、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）または選択された免疫細胞集団（例えば、Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）；あるいはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の減少は、被験体の障害の改善を示す。
【００２５】
処置は、なお他の因子との組み合わせを含み得る。従って、好ましい実施形態において、この方法は、以下をさらに包含する：Ｔ細胞レセプター同時刺激シグナルを阻害する因子（例えば、Ｂ７−ＣＤ２８相互作用、ＩＣＡＭ−ＬＦＡ−１相互作用またはＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ相互作用のインヒビター、あるいはそれらの組み合わせ）を被験体に投与する工程。この因子は、リガンド（例えば、Ｂ７、ＩＣＡＭ、ＣＤ４０）と対リガンド（例えば、ＣＤ２８、ＬＦＡ−１、ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を干渉する任意の分子（例えば、抗体またはそのフラグメント、可溶性ポリペプチド、低分子またはペプチド模倣物）であり得る。好ましくは、この因子は、ＬＦＡ−１またはＣＤ４０Ｌに対する抗体ホモログ（例えば、ヒト化抗ＬＦＡ−１抗体）である。
【００２６】
好ましい実施形態において、この方法は、以下をさらに包含する：局所的に適用される因子（例えば、１以上のステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）、タール、アントラリン、マクロライド、あるいはマクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）またはアスコマイシンマクロラクタム（例えば、ピメクロリムス）））を被験体に投与する工程。
【００２７】
好ましい実施形態において、被験体は、哺乳動物（例えば、霊長類、好ましくは、高等霊長類（例えば、ヒト））である。１つの実施形態において、被験体は、表皮または真皮の障害を有する患者（例えば、軽度、中程度または重度の形態の乾癬に罹患している患者）である。
【００２８】
好ましい実施形態において、皮膚障害は、表皮組織、真皮組織または皮下組織を冒す。好ましくは、皮膚障害は、表皮組織を冒す。
【００２９】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子および補助因子は、同時に投与され得る。他の実施形態において、ＣＤ２結合因子および補助因子は、連続的に（例えば、ＣＤ２結合因子を最初に投与し、その後、補助因子を投与するか、またはその逆によって）投与される。このＣＤ２結合因子および補助因子は、局所治療（例えば、ステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）またはタール、アントラリン、あるいはマクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）またはアスコマイシンマクロラクタム（例えば、ピメクロリムス）））との組み合わせで投与され得る。
【００３０】
他の実施形態において、ＣＤ２結合因子および補助因子は、ローテーションで投与される。例えば、ＣＤ２結合因子の投与の後に、局所治療のローテーションスケジュール（例えば、ステロイド治療、次いで、ビタミン（例えば、ビタミンＤ３処置）、次いで、アントラリンの過程）が続き得る。局所因子の任意の組み合わせおよび順序が、使用され得る。
【００３１】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子および補助因子は、十分に近接して（例えば、空間的にかまたは時間的に）投与され、その結果、所望の効果（例えば、ＩＦＮγレベルの減少）または症状の減少が、ＣＤ２結合因子を伴わずに投与された補助因子によって観察されるか、または補助因子を伴わずに投与されたＣＤ２結合因子によって観察される効果または減少よりも大きい。
【００３２】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、ＩＦＮγレベルが、ＩＦＮγ低下因子によって減少される一定期間投与される。例えば、ＣＤ２結合因子は、１以上のステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）、タール、アントラリン、マクロライド、またはマクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）またはアスコマイシンマクロラクタム（例えば、ピメクロリムス））、あるいはそれらの任意の組み合わせでの局所治療と同時に、その前に、またはその後に、被験体（軽度の形態の乾癬を患う患者）に投与され得る。被験体（例えば、中程度〜重度の形態の乾癬を患う患者）において、ＣＤ２結合因子は、光線療法（例えば、ＵＶＢおよび／またはＰＵＶＡでの処置）と同時に、その前に、またはその後に、投与され得る。他の実施形態において、ＣＤ２結合因子は、１以上のレチノイド、メトトレキサートまたはシクロスポリンとの組み合わせでの光線療法と同時に、その前に、またはその後に、投与され得る。１つの実施形態において、中程度〜重度の乾癬患者は、以下を含むスケジュールの間の任意の時点で、ＣＤ２結合因子で処置される：光線療法およびレチノイド、次いで、メトトレキサート、次いで、シクロスポリン。
【００３３】
いくつかの実施形態において、ＣＤ２結合因子は、全身的に（例えば、静脈内に、筋内に、注入デバイスによって、または皮下に）投与される。他の実施形態において、ＣＤ２結合因子は、罹患領域（例えば、乾癬病変）に局所的（ｌｏｃａｌｌｙ）（例えば、局所的（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ））に投与される。
【００３４】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子は、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチドであり、そして全身的に投与される。１つの実施形態において、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチドは、１２週間の治療処置期間の間に、１週間に１回、被験体に投与される。
【００３５】
好ましい実施形態において、補助因子は、例えば、光の曝露（例えば、ＵＶＡ、ＵＶＢまたはＰＵＶＡ照射）によって局所的に投与される。他の実施形態において、補助因子（例えば、メトトレキサート、経口レチノイド、シクロスポリン、マクロラクタム（例えば、タクロリムスまたはピメクロリムス）は、全身的に投与される。
【００３６】
好ましい実施形態において、補助因子は、ＵＶＢ（例えば、２９０〜３２０ｎｍの範囲の紫外光、より好ましくは、３１１ｎｍでの狭帯域ＵＶＢの形態の紫外光）である。
【００３７】
ＣＤ２結合因子および補助因子の投与形態の任意の組み合わせは、本発明の範囲内である。
【００３８】
ＣＤ２結合因子および補助因子は、活性な疾患の期間中あるいは寛解期またはより低い活性の疾患の期間中に投与され得る。ＣＤ２結合因子および補助因子は、疾患の処置前、疾患の処置と同時に、疾患の処置後に、または疾患の寛解中に投与され得る。
【００３９】
別の局面において、本発明は、被験体における乾癬を処置または予防する方法を特徴とする。この方法は、以下：
被験体の表皮におけるインターフェロン−γレベルを減少し、それによって、乾癬を処置または予防するのに十分な量のＵＶＢと組み合わせて、融合ポリペプチドを、被験体に投与する工程を包含し、この融合ポリペプチドは、ＩｇＧの定常領域のフラグメントに融合された、ＬＦＡ−３のＣＤ２結合フラグメントを含む。有利には、この組み合わせ処置方法は、いずれかの因子単独で達成されるものと比較して、有意に増強された程度の疾患寛解（排除を含む）および／または疾患の寛解または排除の有意に延長された期間を生じ得る。
【００４０】
好ましい実施形態において、ＬＦＡ−３のフラグメントは、免疫グロブリンヒンジおよび重鎖定常領域の全てまたは一部に融合される（例えば、米国特許第６，１６２，４３２号（本明細書によって参考として援用される）の、配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有する核酸によってコードされ、そして配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合ポリペプチド）。なお別の好ましいＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合タンパク質は、図１に示されるアミノ酸配列を有し、そして同図に示されるヌクレオチド配列によってコードされる。
【００４１】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合ＬＦＡ−３ポリペプチドとしては、米国特許第６，１６２，４３２号（本明細書によって参考として援用される）の配列番号３に示されるＬＦＡ−３配列のアミノ酸１〜９２、１〜８０、５０〜６５、２０〜８０が挙げられる。
【００４２】
好ましい実施形態において、この方法は、例えば、症状について、あるいはサイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）または免疫細胞集団（例えば、Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）；またはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の変化について、被験体をモニターする工程をさらに包含する。被験体は、処置を開始する前、または処置の１以上の要素が付与された後に、モニターされ得る。モニタリングは、同じ因子でのさらなる処置またはさらなる因子でのさらなる処置についての必要性を評価するために使用され得る。一般に、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）または選択された免疫細胞集団（例えば、Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）；あるいはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の減少は、被験体の障害の改善を示す。
【００４３】
処置は、なお他の因子との組み合わせを包含し得る。従って、好ましい実施形態において、この方法は、Ｔ細胞レセプター副刺激シグナルを阻害する因子（例えば、Ｂ７／ＣＤ２８のインヒビター、ＩＣＡＭ−ＬＦＡ−１のインヒビター、もしくはＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ（すなわち、ＣＤ１５４）のインヒビター、またはそれらの任意の組み合わせ）を、その被検体に投与する工程を、さらに包含する。この因子は、そのリガンド（例えば、Ｂ７、ＩＣＡＭ、ＣＤ４０）と対リガンド（ｃｏｕｎｔｅｒｌｉｇａｎｄ）（例えば、Ｃｄ２８、ＬＦＡ−１、ＣＤ４０Ｌ）との相互作用を妨害する、任意の分子（例えば、抗体もしくはそのフラグメント、可溶性ポリペプチド、低分子またはペプチド模倣物）であり得る。好ましくは、この因子は、ＬＦＡ−１に対する抗体ホモログ（例えば、ヒト化抗ＬＦＡ−１抗体）である。
【００４４】
好ましい実施形態において、この方法は、局所適用される因子（例えば、ステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）、タール、またはアントラリンのうちの１つ以上）を、その被検体に投与する工程をさらに包含する。
【００４５】
好ましい実施形態において、その被検体は、哺乳動物であり、例えば、霊長類、好ましくは、高等霊長類（例えば、ヒト）、例えば、表皮障害または皮膚障害を有する患者（例えば、軽度形態の乾癬、中程度形態の乾癬、もしくは重篤形態の乾癬に罹患している患者）である。
【００４６】
好ましい実施形態において、その融合ポリペプチドおよびＵＶＢは、同時投与される。他の実施形態において、そのＣＤ２結合因子および補助因子は、例えば、まずその融合タンパク質を投与しその後ＵＶＢ処理を施すことによってか、またはその逆を行うことによって、連続投与される。ＵＶＢがまず投与される場合、融合タンパク質は、ＵＶＢ治療効果（例えば、ＩＦＮ−γのレベルの減少）がなお存在している間に、投与されるべきである。融合タンパク質がまず投与される場合、ＵＶＢは、その融合タンパク質の治療効果（例えば、（例えば、ＩＦＮ−γのレベルの減少）がなお存在している間に、投与されるべきである。
【００４７】
その融合ポリペプチドおよびＵＶＢは、局所療法（例えば、ステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）またはタール、アントラリン、またはマクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）もしくはアスコマイシンマクロラクタム（例えば、ピメクロリムス））と組み合わせて投与され得る。他の実施形態において、融合ポリペプチドおよびＵＶＢが、ローテーションで投与される。１つの実施形態において、ＣＤ２結合因子の投与の後に、局所療法のローテーションスケジュール（例えば、ステロイド療法、その後、ビタミン（例えば、ビタミンＤ３処置）、その後、アントラリンという経過）が行われ得る。
【００４８】
局所因子および／または全身因子の任意の組み合わせおよび順序が、使用され得る。
【００４９】
好ましい実施形態において、融合ポリペプチドおよびＵＶＢは、効果（例えば、ＩＦＮγレベルの低下または症状の減少）が、融合ポリペプチドを伴わずにＵＶＢが投与された場合またはＵＶＢを伴わずに融合ポリペプチドが投与された場合に観察されるよりも大きくなるように、（例えば、空間的にかまたは時間的に）十分に近接して、投与される。
【００５０】
いくつかの実施形態において、その融合ポリペプチドは、全身投与（例えば、静脈投与、筋肉内投与、注入（例えば、注入デバイス）により投与、または皮下投与）される。１つの実施形態において、その融合ポリペプチドは、１２週間の治療処置期間の間に、１回、被検体に投与される。
【００５１】
好ましい実施形態において、補助因子は、ＵＶＢであり、例えば、２９０〜３２０ｎｍの範囲の紫外光であり、より好ましくは、３１１ｎｍの狭周波数帯ＵＶＢの形態である。
【００５２】
好ましい実施形態において、ＵＶＢは、局所投与（例えば、光暴露（例えば、ＵＶＢ照射）により投与）される。
【００５３】
融合ポリペプチドおよび／またはＵＶＢは、活動性疾患の間にか、または寛解疾患もしくはより活動性が低い疾患の間に、投与され得る。
【００５４】
別の局面において、本発明は、被検体において、障害（例えば、炎症障害）を処置または予防する方法を特徴とする。この炎症障害は、慢性炎症障害（例えば、異常な（例えば、増加した）Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１型細胞）の活性または増殖）により特徴付けられる、慢性炎症障害）であり得る。この方法は、
その被検体に、ＣＤ２／ＬＡＦ−３相互作用のインヒビター（例えば、本明細書中に記載されるインヒビター）を、補助因子（例えば、本明細書中に記載される因子）と組み合わせて投与し、それにより、その慢性炎症障害を処置または予防する工程を、包含する。
【００５５】
好ましい実施形態において、この方法は、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）の変化または免疫細胞集団（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞；またはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の変化をモニターする工程をさらに包含し、ここで、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）の減少または免疫細胞集団の減少は、その被検体の障害の改善を示す。
【００５６】
好ましい実施形態において、この慢性炎症障害は、乾癬である。
【００５７】
別の局面において、本発明は、被検体において、自己免疫障害を処置または予防する方法を特徴とする。この自己免疫障害は、異常な（例えば、増加した）Ｔ細胞（例えば、Ｔｈ１型細胞）の活性または増殖）により特徴付けられる、慢性自己免疫障害であり得る。この方法は、
その被検体に、ＣＤ２／ＬＡＦ−３相互作用のインヒビター（例えば、本明細書中に記載されるインヒビター）を、補助因子（例えば、本明細書中に記載される因子）と組み合わせて投与し、それにより、その自己免疫障害を処置または予防する工程を、包含する。
【００５８】
好ましい実施形態において、この方法は、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）の変化または免疫細胞集団（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞、またはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の変化をモニターする工程をさらに包含し、ここで、サイトカインレベル（例えば、ＩＦＮγ）の減少または免疫細胞集団の減少は、その被検体の障害の改善を示す。
【００５９】
好ましい実施形態において、その自己免疫障害は、乾癬、真性糖尿病、関節炎（慢性関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む）、多発性硬化症、脳脊髄炎、重症筋無力症、全身性エリテマトーデス、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）である。
【００６０】
好ましい実施形態において、この自己免疫障害は、身体表面（例えば、表皮粘膜、皮膚粘膜、眼の粘膜、頬の粘膜、および／または鼻咽頭粘膜）にあるかもしくはその付近にある、細胞、組織、または器官に発症する。他の実施形態において、その自己免疫障害は、送達デバイス（例えば、内視鏡または針）を使用して接近され得る、細胞、組織、または器官に発症する。
【００６１】
好ましい実施形態において、この自己免疫症は、乾癬または皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）から選択される。
【００６２】
別の局面において、本発明は、被検体において、乾癬を処置または予防する方法を特徴とする。この方法は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、ＣＤ２結合因子）を、照射（例えば、ＵＶＢ照射またはＰＵＶＡ照射）、メトトレキサート、レチノイド（例えば、経口レチノイド）およびシクロスポリンからなる群より選択される因子と組み合わせて、被検体に投与し、それにより乾癬を処置または予防する工程を包含する。
【００６３】
好ましい実施形態において、この因子は、照射（例えば、ＵＶＢ照射）である。
【００６４】
なお別の局面において、本発明は、Ｔ細胞（例えば、記憶エフェクターＴリンパ球（例えば、ＣＤ８／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞またはＣＤ４／ＣＤ４５  ＲＯ＋細胞）またはＩＦＮγ産生Ｔ細胞）の活性または増殖を調節（例えば、減少）する方法を特徴とする。この方法は、
このＴ細胞を、そのＴ細胞の活性または増殖を調節（例えば、減少）するに十分な量のＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、ＣＤ２結合因子）と、補助因子（例えば、本明細書中に記載される因子）との組み合わせと、接触させる工程を包含する。
【００６５】
この方法は、無細胞条件（例えば、再構築された系）において、培養中（例えば、インビトロまたはエキソビボで（例えば、Ｔ細胞を含む培養））の細胞において、使用され得る。例えば、細胞が、培養培地中にてインビトロで培養され得、そして本明細書中に記載されるインヒビターおよび／または因子が、その培養培地中に導入され得る。他の実施形態において、そのＴ細胞は、この接触工程の前に被検体から取り出される。その後、処理された細胞が、その被検体に戻され得る。あるいは、この方法は、被検体中に存在する細胞において、例えば、インビボ（例えば、治療または予防）療法プロトコルの一部として、実施され得る。
【００６６】
別の局面において、本発明は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、本明細書中に記載されるＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター）を、補助因子（例えば、本明細書中に記載される因子）と組み合わせて含み、そして薬学的に受容可能なキャリアを含む、組成物（例えば、薬学的組成物）を特徴とする。
【００６７】
別の局面において、本発明は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター（例えば、本明細書中に記載されるＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター）を、補助因子（例えば、本明細書中に記載される因子）とかまたはそのような因子の組み合わせの使用方法に関する指示書と組み合わせて含む、キットを特徴とする。
【００６８】
好ましい実施形態において、このＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターは、ＬＦＡ−３／Ｉｇ融合ポリペプチドである。好ましくは、このＬＦＡ−３／Ｉｇ融合ポリペプチドは、凍結乾燥されている。
【００６９】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲からより明らかになる。
【００７０】
（発明の詳細な説明）
本発明がより容易に理解され得るように、特定の用語が、まず定義される。さらなる定義が、この詳細な説明全体にわたり示される。
【００７１】
本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ２」は、天然に存在するＬＦＡ−３ポリペプチドと相互作用（例えば、結合）し、かつ米国特許第６，１６２，４３２号（本明細書中に参考として援用される）の配列番号５に示されるアミノ酸配列を有するかもしくはそのアミノ酸配列と相同である（例えば、少なくとも約８５％ホモロジー）である（すなわち、（ａ）天然に存在する哺乳動物のＣＤ２核酸配列（例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号５）によりコードされるか；（ｂ）天然に存在するＣＤ２核酸配列と縮重する核酸配列によりコードされるか；（ｃ）天然に存在する哺乳動物ＣＤ２核酸配列（例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号５）と少なくとも８５％相同である核酸配列によりコードされるか；または（ｄ）上記の核酸配列のうちの１つに、Ｔｍより約２０℃〜２７℃下および１Ｍ塩化ナトリムと等価な条件下でハイブリダイズする核酸配列（例えば、ストリンジェントな条件（例えば、高度にストリンジェントな条件）下で上記の核酸配列のうちの１つにハイブリダイズする核酸配列）によりコードされる）、ＣＤ２ポリペプチドを意味する。
【００７２】
本明細書中で使用される場合、「ＬＦＡ−３」は、天然に存在するＣＤ２ポリペプチドと結合し、かつ米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号１もしくは配列番号３に示されるアミノ酸配列を有するかもしくはそのアミノ酸配列と相同である（例えば、少なくとも約８５％ホモロジー）である（すなわち、（ａ）天然に存在する哺乳動物ＬＦＡ−３核酸配列（例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号１もしくは配列番号３）によりコードされるか；（ｂ）天然に存在するＬＦＡ−３核酸配列と縮重する核酸配列によりコードされるか；（ｃ）天然に存在する哺乳動物ＬＦＡ−３核酸配列（例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号１もしくは配列番号３）と少なくとも８５％相同である核酸配列によりコードされるか；または（ｄ）上記の核酸配列のうちの１つに、Ｔｍより約２０℃〜２７℃下および１Ｍ塩化ナトリムと等価な条件下でハイブリダイズする核酸配列（例えば、ストリンジェントな条件（例えば、高度にストリンジェントな条件）下で上記の核酸配列のうちの１つにハイブリダイズする核酸配列）によりコードされる）、ＬＦＡ−３ポリペプチドを意味する。
【００７３】
「ＣＤ２結合因子」とは、ＣＤ２と相互作用（例えば、結合）し、かつ、好ましくは、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を調節（好ましくは減少）し、かつ／またはＣＤ２シグナル伝達を調節する、因子である。ＣＤ２結合因子の例としては、天然に存在するＣＤ２リガンドの可溶性ＬＦＡ−３結合フラグメント；ＬＦＡ−３もしくはそのＣＤ２結合フラグメントと別のタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、免疫グロブリンもしくはそのフラグメント）との可溶性融合物、ＬＦＡ−３／ＣＤ２融合ポリペプチド；ＣＤ２に結合する抗体（例えば、組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または齧歯類抗体）；および低分子またはペプチド模倣物が挙げられる。
【００７４】
「ＬＦＡ−３結合因子」とは、ＬＦＡ−３と相互作用（例えば、結合）し、かつ、好ましくは、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用を調節（好ましくは減少）し、かつ／またはＬＦＡ−３シグナル伝達を調節する、因子である。ＬＦＡ−３結合因子の例としては、天然に存在するＬＦＡ−３リガンドの可溶性ＣＤ２結合フラグメント；ＣＤ２もしくはそのＬＦＡ−３結合フラグメントと別のタンパク質もしくはポリペプチド（例えば、免疫グロブリンもしくはそのフラグメント）との可溶性融合物、ＬＦＡ−３／ＣＤ２融合ポリペプチド；ＬＦＡ−３に結合する抗体（例えば、組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、または齧歯類抗体）；および低分子またはペプチド模倣物が挙げられる。
【００７５】
「ＬＦＡ−３／ＩｇＧ」融合ポリペプチドとは、ＣＤ２に結合するＬＦＡ−３配列と、免疫グロブリン配列のうちのすべてまたは一部（例えば、Ｆｃレセプターと相互作用する免疫グロブリン配列の一部）とを含む、融合ポリペプチドである。このＬＦＡ−３配列は、全長ＬＦＡ−３であっても、またはそのＣＤ２結合フラグメントであってもよい。好ましい実施形態において、このＬＦＡ−３配列は、ヒトＬＦＡ−３であり、好ましくは、その被検体の１つの対立遺伝子または両方の対立遺伝子と同一である、配列である。他の実施形態は、改変ＬＦＡ−３配列（例えば、少なくとも１残基、しかし、３残基未満、４残基未満、５残基未満、または６残基未満、ヒトＬＦＡ−３配列と異なる、ＬＦＡ−３配列）を包含し得る。（ヒトＬＦＡ−３の完全アミノ酸配列は、本明細書中に参考として援用される、米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号１もしくは配列番号３に見出される）。特に好ましいＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合タンパク質は、本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号７に示されるヌクレオチド配列を有する核酸によってコードされ、かつ本明細書中に参考として援用される米国特許第６，１６２，４３２号の配列番号８に示されるアミノ酸配列を有する。なお別の好ましいＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合タンパク質（本明細書中で「大スプライス生成物」とも呼ばれる）は、図１に示されるアミノ酸配列を有し、かつ図１に示されるヌクレオチド配列によりコードされる。そのシグナルペプチドが、図１のアミノ酸１〜２８に対応し；成熟ＬＦＡ−３領域が、図１のアミノ酸２９〜１２０に対応し；そしてＩｇＧ１領域が、図１のアミノ酸１２１〜３５１に対応する。
【００７６】
本明細書中で使用される場合、「可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド」または「可溶性ＣＤ２ポリペプチド」とは、生体膜にそれ自身を固定することができない、ＬＦＡ−３ポリペプチドまたはＣＤ２ポリペプチドである。このような可溶性ポリペプチドとしては、例えば、そのポリペプチドを固定するに十分なその膜貫通ドメイン部分を欠く、ＣＤ２ポリペプチドおよびＬＦＡ−３ポリペプチド；またはその膜貫通ドメインが機能性でないように改変されている、ＣＤ２ポリペプチドおよびＬＦＡ−３ポリペプチドが、挙げられる。本明細書中で使用される場合、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは、全長または（例えば、内部欠失により）短縮した、ＰＩ結合ＬＦＡ−３を包含する。
【００７７】
本明細書中で使用される場合、「抗体ホモログ」とは、免疫グロブリン軽鎖、免疫グロブリン重鎖、および１つ以上の抗原と結合可能であるそれらの抗原結合フラグメントから選択される、１つ以上のポリペプチドを含むタンパク質である。１つより多くのポリペプチドから構成される抗体ホモログの構成成分ポリペプチドは、必要に応じて、ジスルフィド架橋され得るか、または共有架橋され得る。従って、抗体ホモログとしては、ＩｇＡ型、ＩｇＧ型、ＩｇＥ型、ＩｇＤ型、ＩｇＭ型（ならびにそれらのサブタイプ）のインタクトな免疫グロブリンが挙げられ、その免疫グロブリンの軽鎖は、κ型でもλ型でもあり得る。抗体ホモログとしてはまた、インタクトな免疫グロブリンのうちの抗原結合特異性を保持する部分（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、重鎖モノマー（単量体）もしくは重鎖ダイマー（二量体）、軽鎖モノマーもしくは軽鎖ダイマー、１つの重鎖および１つの軽鎖からなるダイマーなどが挙げられる。
【００７８】
本明細書中で用いられる場合、「ヒト化組換え抗体ホモログ」は、組換えＤＮＡ技術によって産生される抗体ホモログであり、ここで、抗原結合に必要とされるヒト免疫グロブリンの軽鎖または重鎖のアミノ酸のいくつかまたは全てが、非ヒト哺乳動物免疫グロブリンの軽鎖または重鎖に由来する対応するアミノ酸で置換されている。
【００７９】
本明細書中で用いられる場合、「キメラ組換え抗体ホモログ」は、組換えＤＮＡ技術によって産生される抗体ホモログであり、ここで、免疫グロブリンの軽鎖、重鎖、またはその両方のヒンジ領域および定常領域の全てまたは一部が、別の免疫グロブリンの軽鎖または重鎖に由来する対応する領域に置換されている。
【００８０】
本明細書中に開示される配列に類似または相同する（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性）配列もまた、本適用の一部である。いくつかの実施形態の場合、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上であり得る。あるいは、実質的な同一性は、核酸のセグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件下（例えば、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）で、鎖の相補体にハイブリダイズする場合に存在する。核酸は、細胞全体に、細胞溶解物に、または部分的に精製された形態または実質的に純粋な形態で、存在し得る。
【００８１】
２つの配列の間の「相同性」または「配列同一性」（この用語は、本明細書中で交換可能に用いられる）の計算は、以下のように実行される。配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、ギャップは、最適な整列のための第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入され得、そして非相同配列は、比較目的のために無視され得る）。好ましい実施形態では、比較目的のために整列される参照配列の長さは、参照配列の長さの、少なくとも３０％、好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも、７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置でアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占有される場合、この分子は、この位置において同一である（本明細書中で用いられる場合、アミノ酸または核酸の「同一性」とは、アミノ酸または核酸の「相同性」と同等である）。２つの配列の間の同一性％は、ギャップの数および各ギャップの長さ（これらは２つの配列の最適な整列のために導入される必要がある）を計算に入れた、配列により共有される同位置の位置の数の関数である。
【００８２】
配列の比較および２つの配列の間の同一性％の決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成され得る。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列の間の同一性％は、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４−４５３）アルゴリズムを用いて決定される。このアルゴリズムは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍ）のＧＡＰプログラムに組み込まれており、このプログラムは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２行列またはＰＡＭ２５０行列のいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップウェイト、および１、２、３、４、５、または６のレングスウェイトを用いる。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列の間の同一性％は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍ）のＧＡＰプログラムを用いて決定される。このプログラムは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列および４０、５０、６０、７０、または８０のギャップウェイト、および１、２、３、４、５、または６のレングスウェイトを用いる。パラメーターの特定の好ましいセット（および分子が本発明の配列同一性制限内または相同性制限内にあるか否かを決定するために、どのパラメーターを適用すべきかについて実務家が断定できない場合に、用いられるべきもの）は、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２スコアリング行列（１２のギャップペナルティー、４のギャップエクステンドペナルティー、および５のフレームシフトギャップペナルティー）である。
【００８３】
本明細書中で用いられる場合、用語「相同」とは、「類似性」と同義であり、そして目的の配列が、１つ以上のアミノ酸置換の存在（適度なアミノ酸挿入またはアミノ酸欠失もまた存在し得る）により、参照配列と異なることを意味する。参照配列に対する相同性または類似性の程度を計算する現在の好ましい手段は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＰｆａｍアルゴリズムの使用を介する。これらのアルゴリズムは、それぞれ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙを通じて、ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕおよびｈｔｔｐ：／／ｐｆａｍ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕで利用可能であり、各々の場合において、計算した配列関連性の優位性を決定するためのアルゴリズムのデフォルトパラメーターまたは推奨パラメーターを用いる。２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列の間の同一性％は、Ｅ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ、４：１１−１７）のアルゴリズムを用いて決定され得る。このアルゴリズムは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれており、ＰＡＭ１２０ウェイト残基表、１２のギャップレングスペナルティー、および４のギャップペナルティーを用いる。
【００８４】
本明細書中で用いられる場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載している。ストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１．−６．３．６に見出され得る。水性および非水性の方法は、参考文献に記載されており、そしていずれも使用され得る。好ましい、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の例は、６Ｘ塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、０．２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、６×  ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、０．２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６×  ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、０．２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での１回以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６×  ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、次いで、０．２×  ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での１回以上の洗浄である。特に好ましい非常にストリンジェントな条件（および分子が本発明のハイブリダイゼーション制限内にあるか否かを決定するために、どの条件を適用すべきかについて実務家が断定できない場合に、用いられるべき条件）は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ、６５℃、次いで、０．２×  ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６５℃での１回以上の洗浄である。
【００８５】
本発明のポリペプチドが、さらなる保存的アミノ酸置換または非必須アミノ酸置換（これらの置換は、ポリペプチドの機能にたいする実質的影響を有さない）を有し得ることが理解される。特定の置換が許容される（すなわち、所望の生物学的特性に不利な影響を与えない）か否かにかかわらず、このような結合活性は、Ｂｏｗｉｅ，ＪＵら（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０に記載されるように決定され得る。
【００８６】
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基と交換される置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で規定されている。これらのファミリーとしては、以下を有するアミノ酸が挙げられる：塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β−分枝側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）。および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）。
【００８７】
「非必須」アミノ酸残基は、生物学的活性を無効にすることなく、または、より好ましくは、生物学的活性を実質的に変化することなく、ハイブリッド抗体の野生型配列から変化され得る残基であり、一方、「必須」アミノ酸残基は、このような変化を生じる残基である。
【００８８】
（皮膚障害）
本発明の方法は、真皮および表皮における増加したＴ細胞活性化および異常な抗原提示により特徴付けられる、哺乳動物（例えば、霊長類、またはヒト）の皮膚障害を、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターを投与することによって、予防または処置するために有用である。このような障害としては、乾癬、ＵＶ損傷、アトピー性皮膚炎、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（例えば、菌状息肉腫）、アレルギー性皮膚炎および刺激性接触皮膚炎、扁平苔癬、脱毛症（例えば、円形脱毛症）、壊疽性膿皮症、白斑、眼瘢痕性類天疱瘡、およびじんま疹が挙げられる。壊疽性膿皮症およびじんま疹のような皮膚障害の処置および予防の方法は、本発明の範囲内に含まれることが理解される。これらの後者の皮膚障害はまた、シクロスポリンＡ感受性皮膚炎であり、従って、Ｔ細胞活性化を伴う。好ましくは、本発明の方法は、乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、または円形脱毛症、およびより好ましくは、乾癬の予防または処置に用いられる。
【００８９】
本発明の方法は、任意の被験体（例えば、哺乳動物（好ましくは、ヒト））において実行され得る。本明細書中で用いられる場合、用語「被験体」とは、ヒトおよび非ヒト動物を含むことが意図される。好ましいヒト動物としては、真皮および上皮における増加したＴ細胞活性化および異常な抗原提示により特徴付けられる皮膚障害を有するヒト患者が挙げられる。本発明の用語「非ヒト動物」としては、全ての脊椎動物（例えば、哺乳動物（例えば、非ヒト霊長類（特に高等な霊長類）、ヒツジ、イヌ、げっ歯類（例えば、マウスまたはラット）、モルモット、ヤギ、ブタ、ネコ、ウサギ、ウシ）および非哺乳動物（例えば、ニワトリ、両生類、は虫類）など）が挙げられる。
【００９０】
（ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター）
ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用の任意のインヒビターは、本発明の方法に有用である。このようなインヒビターとしては、抗ＬＦＡ−３抗体ホモログ、抗ＣＤ２抗体ホモログ、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、低分子、例えば、（例えば、２５００Ｄａ未満、好ましくは１５００Ｄａ未満の分子量を有する化学薬剤、化学物質、例えば、有機低分子、例えば、コンビナトリアルライブラリーの生成物）、ＬＦＡ−３模倣因子およびＣＤ２模倣因子およびその誘導体が挙げられる。好ましいインヒビターは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドおよび抗ＬＦＡ−３抗体ホモログである。
【００９１】
特定の可溶性ＣＤ２ポリペプチド、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、抗ＬＦＡ−３抗体ホモログ、抗ＣＤ２抗体ホモログ、またはＣＤ２模倣因子およびＬＦＡ−３模倣因子の本発明の方法における有用性は、ＬＦＡ−３／ＣＤ２相互作用を阻害するそれらの能力をアッセイすることにより、容易に決定され得る。この能力は、例えば、単純な細胞結合アッセイ（これは、これらの分子を保有する細胞においてＬＦＡ−３とＣＤ２との間の相互作用を阻害する、推定のインヒビターの能力の（拡大下での）視覚的評価を可能にする）を用いてアッセイされ得る。Ｊｕｒｋａｔ細胞は、ＣＤ２＋基質として好ましく、そしてヒツジ赤血球またはヒトＪＹ細胞は、ＬＦＡ−３＋基質として好ましい。本発明に有用な可溶性ポリペプチド、抗体ホモログ、および模倣因子の結合特徴は、いくつかの公知の方法（例えば、抗体ホモログ、ポリペプチド、または因子を放射性標識（例えば、３５Ｓもしくは１２５Ｉ）し、次いで、適切なように、標識したポリペプチド、模倣因子、または抗体ホモログを、ＣＤ２＋細胞またはＬＦＡ−３＋細胞と接触させることによる）でアッセイされ得る。結合特徴はまた、適切な酵素学的に標識した二次抗体を用いてアッセイされ得る。Ｓｅｅｄら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，３３６５−６９頁（１９８７））により記載されるようなロゼッティング（ｒｏｓｅｔｔｉｎｇ）競合アッセイもまた用いられ得る。
【００９２】
（抗ＬＦＡ−３および抗ＣＤ２抗体ホモログ）
抗ＬＦＡ−３または抗ＣＤ２抗体ホモログの多くの型は、本発明の方法に有用である。これらとしては、モノクローナル抗体、組換え抗体、キメラ組換え抗体、ヒト化組換え抗体、および前述のものの抗原結合部位が挙げられる。
【００９３】
抗ＬＦＡ−３抗体ホモログについて、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体を用いることが好ましい。受諾番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９４（ＨＣ−１Ｂ１１）、ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）、およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９６（８Ｂ８）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより産生されたモノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体、またはＴＳ２／９として公知であるモノクローナル抗体（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄら、「Ｔｈｒｅｅ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ：ＬＦＡ−１，ＬＦＡ−２  ａｎｄ  ＬＦＡ３」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，７４８９−９３頁（１９８２））を使用することがより好ましい。より好ましくは、モノクローナル抗ＬＦＡ−３抗体は、受諾番号ＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９５（７Ａ６）およびＡＴＣＣ  ＨＢ  １０６９３（１Ｅ６）を有するハイブリドーマの群から選択されるハイブリドーマにより産生される。
【００９４】
抗ＣＤ２抗体ホモログについて、ＴＳ２／１８（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｍａｄｒｉｄら、「Ｔｈｒｅｅ  Ｄｉｓｔｉｎｃｔ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｔ−Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｃｙｔｏｌｙｓｉｓ：ＬＦＡ−１，ＬＦＡ−２  ａｎｄ  ＬＦＡ−３」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７９，７４８９−９３頁（１９８２））を含む、Ｔ１１１エピトープ抗体として公知である抗ＣＤ２モノクローナル抗体のような、モノクローナル抗ＣＤ２抗体を使用することが好ましい。
【００９５】
モノクローナル抗体を産生するための技術は周知である。簡単には、不死化細胞株（代表的には、骨髄腫細胞）が、所定の抗原を含む調製物で免疫した哺乳動物由来のリンパ球（代表的には、脾細胞）に融合され、そして得られたハイブリドーマ細胞の培養上清が、抗原に対する抗体についてスクリーニングされる。一般的には、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ，「Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｏｆ  Ｆｕｓｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  Ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｆ  Ｐｒｅｄｅｆｉｎｅｄ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ」，２５６，４９５−９７頁（１９７５）を参照のこと。本発明の目的のために有用な免疫原としては、ＣＤ２保有細胞またはＬＦＡ−３保有細胞、ならびにＬＦＡ−３、ＣＤ２、またはそれらの、カウンターレセプター結合フラグメント（例えば、ＬＦＡ−３に結合するＣＤ２フラグメント、またはＣＤ２に結合するＬＦＡ−３フラグメント）を含む無細胞調製物が挙げられる。
【００９６】
免疫は、標準的な手順を用いて達成され得る。単位用量および免疫レジメンは、免疫される哺乳動物の種、その免疫状態、この哺乳動物の体重などに依存する。代表的には、免疫される哺乳動物を採血し、そして各血液サンプル由来の血清を、適切なスクリーニングアッセイを用いて、特定の抗体についてアッセイする。例えば、有用な抗ＬＦＡ−３抗体または抗ＣＤ２抗体は、免疫血清がＪｕｒｋａｔ細胞のヒツジ赤血球ロゼッティング（ｒｏｓｅｔｔｉｎｇ）（これは、これらの細胞のそれぞれの表面上のＬＦＡ−３およびＣＤ２の存在から生じる）をブロックする能力を試験することにより同定され得る。ハイブリドーマ細胞の産生に用いられるリンパ球は、代表的には、免疫された哺乳動物（その血清は、このようなスクリーニングアッセイを用いて、所望の抗体の存在について、既に陽性であると試験されている）から単離される。
【００９７】
代表的には、不死化細胞株（例えば、骨髄腫細胞株）は、リンパ球と同じ哺乳動物種由来である。好ましい不死化細胞株は、マウス骨髄腫細胞株であり、この細胞株は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含む培養培地（「ＨＡＴ培地」）に対して感受性である。
【００９８】
代表的には、ＨＡＴ感受性マウス骨髄腫細胞は、ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）３３５０を用いて、マウス脾細胞に融合される。次いで、融合から生じるハイブリドーマ細胞は、ＨＡＴ培地（これは、非融合骨髄腫細胞および非生産的な融合骨髄腫細胞を殺す（非融合脾細胞は数日後に死ぬ。なぜならば、それらは形質転換されないからである））を用いて選択される。所望の抗体を産生するハイブリドーマは、例えば、それぞれのカウンターレセプターに結合する能力について、またはヒツジ赤血球に対するＪｕｒｋａｔ細胞付着をブロックする能力について、ハイブリドーマ培養上清をスクリーニングすることにより、検出される。限界希釈によるハイブリドーマ培養物のサブクローニングは、代表的には、モノクローン性を保証するように実施される。
【００９９】
抗ＬＦＡ−３モノクローナル抗体または抗ＣＤ２モノクローナル抗体を産生するために、このようなスクリーニングアッセイにおいて陽性である試験されたハイブリドーマ細胞は、ハイブリドーマ細胞が培養培地中にモノクローナル抗体を分泌するのに十分な条件下および時間で、栄養培地中で培養される。組織培養技術およびハイブリドーマ細胞に適切な培養培地は周知である。馴化ハイブリドーマ培養上清は、収集され得、そして所望の抗体が、必要に応じて、周知の方法でさらに精製される。
【０１００】
あるいは、所望の抗体は、ハイブリドーマ細胞をプリスタンをプライムしたマウスの腹腔内に注射することにより産生され得る。ハイブリドーマ細胞は、腹腔内で増殖し、抗体を分泌する。この抗体は、腹水液として蓄積する。抗体は、腹腔から腹水液を注射器を用いて引き出すことにより、収集され得る。
【０１０１】
本発明に有用な抗ＣＤ２抗体ホモログおよび抗ＬＦＡ−３抗体ホモログはまた、所望の抗体の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを用いて形質転換された宿主細胞により産生された、組換え抗体であり得る。組換え抗体は、周知の遺伝子操作技術により産生され得る。例えば、米国特許第４，８１６，３９７号（これは本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【０１０２】
例えば、組換え抗体は、本発明において有用な抗体ホモログを生成するハイブリドーマ細胞由来の所望の抗体の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡをクローニングすることにより生成され得る。次いで、これらのポリペプチドをコードするｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡは、発現ベクターに挿入され得、その結果、両方の遺伝子が、それら自体の転写および翻訳発現制御配列に作動可能に連結される。この発現ベクターおよび発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。代表的には、両方の遺伝子は、同じ発現ベクターに挿入される。
【０１０３】
原核生物宿主細胞または真核生物宿主細胞が使用され得る。真核生物宿主細胞における発現が好ましい。なぜなら、このような細胞は、原核生物細胞より、適切に折りたたまれかつ免疫学的に活性な抗体をアセンブリしかつ分泌する可能性が高いからである。しかし、不適切な折りたたみに起因して不活性な、生成される任意の抗体は、周知の方法（ＫｉｍおよびＢａｌｄｗｉｎ、「Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｆｏｌｄｉｎｇ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｓｍａｌｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｏｌｄｉｎｇ」，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５１，ｐｐ．４５９−８９（１９８２））に従って再生可能であり得る。宿主細胞が、本発明に従う抗体ホモログでもある、インタクトな抗体の一部（例えば、軽鎖二量体もしくは重鎖二量体）を生成することが可能である。
【０１０４】
上記手順に対するバリエーションは、本発明において有用であることが理解される。例えば、抗体ホモログの軽鎖または重鎖のいずれか（両方ではない）をコードするＤＮＡで宿主細胞を形質転換することは望ましいことであり得る。組換えＤＮＡ技術はまた、軽鎖および重鎖（ＣＤ２対応レセプター結合にもＬＦＡ−３対応レセプター結合にも必要ではない）のいずれかまたはその両方をコードするＤＮＡの一部または全てを取り除くために使用され得る。このような短縮されたＤＮＡ分子から発現される分子は、本発明の方法において有用である。さらに、二機能性抗体が生成され得、この二機能性抗体においては、１つの重鎖および１つの軽鎖が抗ＣＤ２抗体ホモログまたは抗ＬＦＡ−３抗体ホモログであり、他の重鎖および軽鎖は、ＣＤ２もしくはＬＦＡ−３以外の抗原、またはＣＤ２もしくはＬＦＡ−３の別のエピトープに特異的である。
【０１０５】
キメラ組換え抗ＬＦＡ−３抗体ホモログまたはキメラ組換え抗ＣＤ２抗体ホモログは、所望の免疫グロブリン軽鎖および重鎖をコードするＤＮＡを含む適切な発現ベクターで宿主細胞を形質転換することにより生成され得、このＤＮＡにおいて、この重鎖および／または軽鎖のヒンジ領域および定常領域をコードするＤＮＡの全てまたはいくつかが、異なる種の免疫グロブリン軽鎖または重鎖の対応する領域由来のＤＮＡで置換される。もとの組換え抗体が非ヒトであり、インヒビターがヒトに投与される場合、対応するヒト配列の置換が好ましい。例示的なキメラ組換え抗体は、マウス可変領域、ならびにヒトのヒンジ領域および定常領域を有する。一般には、米国特許第４，８１６，３９７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｄｏｍａｉｎｓ  Ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｒｅｇｉｏｎ  Ｄｏｍａｉｎｓ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，ｐｐ．６８５１−５５（１９８４）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願１８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願１７１，４９６；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３）；Ｌｉｕら（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら、１９８７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）ＰＮＡＳ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７、Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら、（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；ならびにＳｈａｗら、１９８８、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照のこと。
【０１０６】
ヒト化組換え抗ＬＦＡ−３抗体またはヒト化組換え抗ＣＤ２抗体は、抗原結合に直接は関与しないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域由来の等価な配列で置換することにより生成され得る。ヒト化抗体を生成するのための一般的方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７、Ｏｉら、１９８６、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４、およびＱｕｅｅｎら、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号および同第５，６９３，７６２号（これらの全ての内容は、本明細書中に参考として援用される）により提供される。これらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変領域の全てまたは一部をコードする核酸配列を単離し、操作し、そして発現させる工程を包含する。このような核酸の供給源は、当業者に周知であり、例えば、抗ＬＦＡ−３抗体または抗ＣＤ２抗体を生成するハイブリドーマから得られ得る。次いで、ヒト化抗体またはそのフラグメントをコードする核酸は、適切な発現ベクターにクローニングされ得る。
【０１０７】
ヒト化またはＣＤＲグラフト化された抗体分子または免疫グロブリンは、ＣＤＲグラフト化またはＣＤＲ置換により生成され得る。ここで、免疫グロブリン鎖の１つ、２つまたは全てのＣＤＲが置換され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６  Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒら、１９８８  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ  米国特許第５，２２５，５３９号（これらの全ての内容は、明示的に本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。Ｗｉｎｔｅｒは、ＣＤＲグラフト化法を記載し、この方法は、本発明のヒト化抗体を調製するために使用され得る（英国特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ（１９８７年３月２６日出願）；Ｗｉｎｔｅｒ  米国特許第５，２２５，５３９号（これらの内容は、明示的に本明細書中に参考として援用される））。特定のヒト抗体のＣＤＲの全ては、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部と置換され得るか、またはこのＣＤＲのいくつかのみが非ヒトＣＤＲと置換され得る。このヒト化抗体の所定の抗原（例えば、ＬＦＡ−３またはＣＤ２）に対する結合に必要なＣＤＲの数を置換することのみが必要である。
【０１０８】
特定のアミノ酸が置換、欠失または付加された免疫グロブリンを含むヒト化抗体もまた、本発明の範囲内である。特に、好ましいヒト化抗体は、例えば、抗原への結合を改善するために、フレームワーク領域にアミノ酸置換を有する。例えば、ヒト化免疫グロブリン鎖のアクセプターフレームワーク残基の選択された少数が、対応するドナーアミノ酸により置換され得る。置換の好ましい位置としては、ＣＤＲに隣接するアミノ酸残基、すなわちＣＤＲと相互作用し得るアミノ酸残基が挙げられる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号を参照のこと）。ドナーからアミノ酸を選択するための基準は、米国特許第５，５８５，０８９号（例えば、その内容が、本明細書中に参考として援用される米国特許第５，５８５，０８９号の第１２欄〜第１６欄）に記載される。免疫グロブリン鎖（抗体を含む）をヒト化するための他の技術は、Ｐａｄｌａｎら、ＥＰ５１９５９６Ａ１（１９９２年１２月２３日公開）に記載される。
【０１０９】
ヒトＬＦＡ−３またはＣＤ２に対するヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、マウス系よりむしろ完全なヒト免疫系を有するトランスジェニックマウスを使用して生成され得る。目的の抗原で免疫されたこれらトランスジェニックマウス由来の脾細胞は、ヒトタンパク質由来のエピトープに対する特異的親和性を有するヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを生成するために使用される（例えば、Ｗｏｏｄら、国際出願ＷＯ９１／００９０６、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉら、ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１０７４１；Ｌｏｎｂｅｒｇら、国際出願ＷＯ９２／０３９１８；Ｋｅｙら、国際出願９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら、１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：８５６−８５９；Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ら、１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ら、１９９４  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１−６８５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら、１９９３  Ｙｅａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３−４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら、１９９３  ＰＮＡＳ  ９０：３７２０−３７２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら、１９９１  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２１：１３２３−１３２６を参照のこと）。
【０１１０】
モノクローナル抗体はまた、組換えＤＮＡ技術の当業者に公知の他の方法により生成され得る。別の方法（「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」法といわれる）が、特定の抗原特異性を有する抗体フラグメントを同定および単離するために開発され、モノクローナル抗体を生成するために利用され得る（コンビナトリアル抗体ディスプレイの記載については、例えば、Ｓａｓｔｒｙら、１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：５７２８；Ｈｕｓｅら、１９８９  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５；およびＯｒｌａｎｄｉら、１９８９  ＰＮＡＳ  ８６：３８３３を参照のこと）。上記の免疫原で動物を免疫した後、得られたＢ細胞プールの抗体レパートリーがクローニングされる。オリゴマープライマーの混合物およびＰＣＲを使用することによる、免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得るための方法は、一般に公知である。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合されたオリゴヌクレオチドプライマー、ならびに保存３’定常領域に対するプライマーは、多くのマウス抗体の重鎖および軽鎖の可変領域のＰＣＲ増幅のために使用され得る（Ｌａｒｒｉｃｋら、１９９１、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １１：１５２−１５６）。同様のストラテジーもまた、ヒト抗体由来のヒト重鎖可変領域および軽鎖可変領域を増幅するために使用され得る（Ｌａｒｒｉｃｋら、１９９１、Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ２：１０６−１１０）。
【０１１１】
例示的実施形態において、ＲＮＡは、標準的プロトコル（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号；Ｏｒｌａｎｄｉら、ＰＮＡＳ（１９８９）８６：３８３３−３８３７；Ｓａｓｔｒｙら、ＰＮＡＳ（１９８９）８６：５７２８−５７３２；およびＨｕｓｅら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１）を使用して、Ｂリンパ球（例えば、末梢血細胞、骨髄、または脾臓調製物）から単離される。第１鎖ｃＤＮＡは、重鎖ならびにκ軽鎖およびλ軽鎖の各々の定常領域に特異的なプライマー、ならびにシグナル配列に対するプライマーを使用して合成される。可変領域ＰＣＲプライマーを使用すると、重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、各々単独でまたは組み合わせてかのいずれかで増幅され、ディスプレイパッケージを生成する際のさらなる操作のために適切なベクターに連結される。増幅プロトコルにおいて有用なオリゴヌクレオチドプライマーは、独特もしくは縮重であり得るか、または縮重部位にイノシンが組み込まれ得る。制限エンドヌクレアーゼ認識配列もまた、発現のための所定のリーディングフレームにおいて、ベクターへの増幅されたフラグメントのクローニングを可能にするように、プライマーに組み込まれ得る。
【０１１２】
免疫により得られた抗体レパートリーからクローニングされるＶ遺伝子ライブラリーは、ディスプレイパッケージの集団（好ましくは、繊維状ファージに由来する）により発現されて、抗体ディスプレイライブラリーが形成され得る。理想的には、ディスプレイパッケージは、非常に大きな多様化された抗体ディスプレイライブラリーのサンプリング、各アフィニティー分離のラウンドの後の迅速な分類、および精製されたディスプレイパッケージからの抗体遺伝子の容易な単離を可能にする系を含む。ファージディスプレイライブラリーを精製するための市販のキット（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ｐｈａｇｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ  ＳｕｒｆＺＡＰＴＭファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）に加えて、多様化された抗体ディスプレイライブラリーを生成する際の使用に特に扱いやすい方法および試薬の例は、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｋａｎｇら、国際公開ＷＯ９２／１８６１９；Ｄｏｗｅｒら、国際公開ＷＯ９１／１７２７１；Ｗｉｎｔｅｒら、国際公開ＷＯ９２／２０７９１；Ｍａｒｋｌａｎｄら、国際公開ＷＯ９２／１５６７９；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇら、国際公開ＷＯ９３／０１２８８；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開ＷＯ９２／０１０４７；Ｇａｒｒａｎｒｄら、国際公開ＷＯ９２／０９６９０；Ｌａｄｎｅｒら、国際公開ＷＯ９０／０２８０９；Ｆｕｃｈｓら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓら（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｄら（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓら（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２において見出され得る。
【０１１３】
特定の実施形態において、重鎖および軽鎖のＶ領域ドメインは、単鎖Ｆｖフラグメントを形成するように可撓性リンカーにより連結される、同じポリペプチド上で発現され得、このｓｃＦＶ遺伝子は、続いて、所望の発現ベクターまたはファージゲノムにクローニングされ得る。ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ（１９９０）３４８：５５２−５５４に一般的に記載されるように、可撓性（Ｇｌｙ４−Ｓｅｒ）３リンカーにより連結される、抗体の完全なＶＨおよびＶＬドメインは、抗原親和性に基づいて、ディスプレイパッケージを分離可能にし得る単鎖抗体を生成するために使用され得る。抗原と免疫反応性の単離されたｓｃＦＶ抗体は、引き続いて、本発明の方法において使用するための薬学的調製物に処方され得る。
【０１１４】
一旦、ディスプレイパッケージ（例えば、繊維状ファージ）の表面にディスプレイされると、抗体ライブラリーは、抗原またはそのペプチドフラグメントに対してスクリーニングされて、抗原に対する特異性を有する抗体を発現するパッケージが同定および単離される。選択された抗体をコードする核酸は、ディスプレイパッケージ（例えば、ファージゲノム）から回収され得、標準的な組換えＤＮＡ技術により他の発現ベクターにサブクローニングされ得る。
【０１１５】
表面タンパク質に対する高親和性を有する特定の抗体は、当業者に公知の方法（例えば、ライブラリーのスクリーニングを含む方法（Ｌａｄｎｅｒ，Ｒ．Ｃ．ら，米国特許第５，２３３，４０９号；Ｌａｄｎｅｒ，Ｒ．Ｃ．ら，米国特許第５，４０３，４８４号））に従って作製され得る。さらに、これらのライブラリーの方法は、抗体の構造決定基の模倣物である結合決定基を得るためのスクリーニングにおいて使用され得る。
【０１１６】
特に、特定の抗体分子のＦｖ結合表面は、タンパク質−タンパク質相互作用の原則に従って、その標的リガンドと相互作用する。従って、ＶＨおよびＶＬについての配列データ（これらのうちの後者は、κ鎖型またはλ鎖型であり得る）は、当業者に公知のタンパク質操作技術に基づく。結合決定基を含むタンパク質表面の詳細は、ＮＭＲ研究データまたは結晶学的（ｃｒｙｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ）データから得られる、他の抗体から先に決定された３次元構造を使用したモデル構築手順により、抗体配列情報から得られ得る。例えば、Ｂａｊｏｒａｔｈ，Ｊ．およびＳ．Ｓｈｅｒｉｆｆ，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔ．，Ｆｕｎｃｔ．，ならびにＧｅｎｅｔ．２４（２），１５２−１５７；Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｄ．Ｍ．およびＡ．Ｒ．Ｒｅｅｓ，１９９５，「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ，」ｉｎ  Ｓ．Ｐａｕｌ編，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．５１，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，ｐｐ１７−４９；ならびにＪｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．，Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．およびＥ．Ａ．Ｋａｂａｔ，１９９５，「Ｓｅｑｈｕｎｔ：Ａ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｔｏ  ｓｃｒｅｅｎ  ａｌｉｇｎｅｄ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎｄ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌ．５１，ｏｐ．ｃｉｔ．，ｐｐ１−１５を参照のこと。
【０１１７】
抗原結合領域は、所望の結合活性を有するコンビナトリアルライブラリーの種々の型をスクリーニングし、記載された方法によって活性な種を同定することにより得られ得る。
【０１１８】
１つの実施形態において、多様化されたペプチドライブラリーは、ペプチドディスプレイライブラリーを形成するようにディスプレイパッケージの集団により発現される。理想的には、このディスプレイパッケージは、非常に大きな多様化されたペプチドディスプレイライブラリーのサンプリング、各親和性分離のラウンドの後の迅速な分類、および精製されたディスプレイパッケージからペプチドコード遺伝子の容易な分離を可能にする系を含む。ペプチドディスプレイライブラリーは、例えば、原核生物およびウイルス中に存在し得、これらの生物は、迅速に増殖しかつ比較的操作しやすく、多くのクローンの生成を可能にする。好ましいディスプレイパッケージとしては、例えば、増殖型（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ）細菌細胞、細菌芽胞、および最も好ましくは、細菌性ウイルス（特に、ＤＮＡウイルス）が挙げられる。しかし、本発明はまた、可能なディスプレイパッケージとして真核生物細胞（酵母およびそれらの芽胞を含む）の使用を意図する。ファージディスプレイライブラリーは、上に記載される。
【０１１９】
他の技術としては、結合因子を単離するための適切な「レセプター」を有するアフィニティークロマトグラフィー、続いて、従来の技術（例えば、質量分析およびＮＭＲ）による、単離された結合因子またはリガンドの同定が挙げられる。好ましくは、可溶性レセプターは、リガンド結合を示すことが検出され得る標識（例えば、発蛍光団、発色性酵素、放射性同位体、または発光化合物）に結合体化される。あるいは、固定化化合物が、選択的に放出され得、レセプターと相互作用するために膜を通して拡散することを可能にされ得る。
【０１２０】
化合物のコンビナトリアルライブラリーはまた、ライブラリーの各メンバーの正体をコードする「タグ」とともに合成され得る（例えば、Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌら，国際出願ＷＯ９４／０８０５１を参照のこと）。一般に、この方法は、不活性であるが容易に検出可能なタグの使用を特徴とし、このタグは、固相支持体にまたは化合物に結合される。活性な化合物が検出される場合、この化合物の正体は、独特の付随するタグの同定により決定される。このタグ化法は、ライブラリー中の全ての化合物の総セットの中でも非常に低レベルで同定され得る化合物の大きなライブラリーの合成を可能にする。
【０１２１】
インタクトな抗体でない、抗ＣＤ２抗体ホモログおよび抗ＬＦＡ−３抗体ホモログもまた、本発明において有用である。そのようなホモログは、任意の上記抗体ホモログに由来し得る。例えば、上記抗体由来の、抗原結合フラグメント、および全長モノマーポリペプチド、全長ダイマーポリペプチドまたは全長トリマーポリペプチドは、それ自体有用である。この型の有用な抗体ホモログとしては、（ｉ）Ｆａｂフラグメント（ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価のフラグメント）；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント（ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された、２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント）（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）；ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメイン（ＶＬおよびＶＨ）は、別個の遺伝子によってコードされるが、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対合して一価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として公知）を形成する単一タンパク質鎖とそれらのドメインがなされるのを可能にする合成リンカーによって、組換え方法を使用してそれらのドメインは結合され得る（例えば、Ｂｉｒｄら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照のこと）。そのような単鎖抗体はまた、用語、抗体の「抗原結合フラグメント」内に含まれることが意図される。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を使用して得られ、このフラグメントは、インタクト抗体と同じ方法で、有用性についてスクリーニングされる。抗ＬＦＡ−３重鎖が、好ましい抗ＬＦＡ−３抗体フラグメントである。
【０１２２】
抗体フラグメントはまた、化学的な方法によって（例えば、インタクトな抗体を、ペプシンまたはパパインのようなプロテアーゼで切断することによって）、そして必要に応じて切断された生成物を還元剤で処理することによって、生成され得る。あるいは、有用なフラグメントを、短縮された重鎖遺伝子および／または短縮された軽鎖遺伝子で形質転換された宿主細胞を使用することによって、生成し得る。重鎖モノマーおよび軽鎖モノマーを、インタクトな抗体をジチオトレイトールのような還元剤で処理し、続いてそれら鎖を分離するために精製することによって、生成し得る。重鎖モノマーおよび軽鎖モノマーをまた、所望の重鎖または軽鎖のいずれかをコードするが、両方ともはコードしないＤＮＡを用いて形質転換された宿主細胞によって、生成し得る。例えば、Ｗａｒｄら、「Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  Ｓｉｎｇｌｅ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ  Ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ」，Ｎａｔｕｒｅ，３４１，ｐｐ．５４４−４６（１９８９）；Ｓａｓｔｒｙら、「Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｉｎ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ  ｆｏｒ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ｃａｔａｌｙｔｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｈｅａｖｙ  Ｃｈａｉｎ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｒｅｇｉｏｎ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃＤＮＡ  Ｌｉｂｒａｒｙ」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６，ｐｐ．５７２８−３２（１９８９）を参照のこと。
【０１２３】
（可溶性ＣＤ２ポリペプチドおよび可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド）
ＬＦＡ−３とＣＤ２との相互作用を阻害する、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドは、本発明の方法で有用である。可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドが、好ましい。
【０１２４】
可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは、ＬＦＡ−３の膜貫通形態、特に細胞外ドメイン（例えば、参考として本明細書中に援用される、米国第６，１６２，４３２号の配列番号２のＡＡ１−ＡＡｌ８７）に由来し得る。そのようなポリペプチドは、参考として本明細書中に援用される、米国特許出願第４，９５６，２８１号および同時係属中である米国特許出願第０７／６６７，９７１号（これは、本出願と共通の譲受人を共有する）に記載される。好ましい可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは、配列番号２のＡＡ１−ＡＡ９２、配列番号２のＡＡ１−ＡＡ８０、配列番号２のＡＡ５０−ＡＡ６５および配列番号２のＡＡ２０−ＡＡ８０からなるポリペプチドを含み、ここで、配列番号２は、参考として本明細書中に援用される米国第６，１６２，４３２号に示される。配列番号２をコードするＤＮＡ配列（すなわち、配列番号１）を含むベクターは、登録番号７５１０７で、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄに寄託され、ここで配列番号１および２は、参考として本明細書中に援用される米国第６，１６２，４３２号に示されている。
【０１２５】
この型の最も好ましい融合タンパク質は、成熟ＬＦＡ−３のアミノ末端９２アミノ酸、鎖間ジスルフィド結合に関係すると考えられる２つのシステイン残基を含むヒトＩｇＧ１ヒンジ領域のＣ末端１０アミノ酸、およびヒトＩｇＧ１重鎖定常ドメインのＣＨ２領域およびＣＨ３領域（例えば、配列番号８）を含む。この融合タンパク質は、本明細書中で、「ＬＦＡ３ＴＩＰ」といわれる。例示的なＬＦＡ３ＴＩＰをコードするプラスミドｐＳＡＢ１５２は、登録番号ＡＴＣＣ６８７２０で、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄに寄託されている。ｐＳＡＢ１５２インサートのＤＮＡ配列は、配列番号７である。配列番号７および８は、参考として本明細書中に援用される、米国第６，１６２，４３２号に示されている。
【０１２６】
米国第６，１６２，４３２号に示される改変体より長い、ＬＦＡ−３ＴＩＰのスプライス改変体のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列は、図１に示される。このより長いＬＦＡ−３ＴＩＰ改変体のシグナルペプチドは、図１のアミノ酸１〜２８に対応し；成熟ＬＦＡ−３領域は、図１のアミノ酸２９〜１２０に対応し；そしてＩｇＧ１領域は、図１のアミノ酸１２１〜３５１に対応する。ＬＦＡ−３ＴＩＰの、このより長いスプライス改変体は、Ｃ末端に付加された６アミノ酸を有することによって、より短い改変体と異なる。
【０１２７】
本発明の方法での使用のためのＬＦＡ３ＴＩＰを生成する１つの方法は、同時係属中の共有に係る米国特許出願第０７／７７０，９６７号中に記載される。一般的に、ｐＳＡＢ１５２でトランスフェクトされたＣＯＳ７細胞またはＣＨＯ細胞の馴化培養培地を、ＡＭＩＣＯＮ  Ｓ１Ｙ３０渦巻カートリッジシステム（ＡＭＩＣＯＮ，Ｄａｎｖｅｒｓ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）を使用して濃縮し、プロテインＡ−セファロース４Ｂ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）クロマトグラフィーに供した。結合したタンパク質を溶出し、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ−１２（Ｐｈａｒｍａｃｉａ／ＬＫＢ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮｅｗＪｅｒｓｅｙ）ゲル濾過クロマトグラフィーに供した。
【０１２８】
ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上でそしてウエスタンブロット分析によって測定した場合に（Ｔｏｗｂｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７４，ｐｐ．４３５０−５４（１９７９）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｐｐ．４７４−５１０（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）を参照のこと）最小量の夾雑タンパク質を有するＬＦＡ３ＴＩＰを含むＳｕｐｅｒｏｓｅ−１２画分は、プールされ、ＹＭ３０セントリコン（ＡＭＩＣＯＮ）中で濃縮された。ＬＦＡ３ＴＩＰを、ウサギ抗ＬＦＡ−３ポリクローナル抗血清、続いて、検出可能に標識したヤギ抗ウサギＩｇＧを使用したウエスタンブロットで検出した。ＣＯＳ７細胞またはＣＨＯ細胞の、精製されたＬＦＡ３ＴＩＰは、ジスルフィド結合によって結合された、２つのモノマーＬＦＡ−３−Ｉｇ融合タンパク質のダイマーであった。
【０１２９】
別の好ましい融合タンパク質は、ヒトＩｇＧ１のヒンジＣＨ２領域およびＣＨ３領域に融合された、第１および第２のＬＦＡ−３ドメインからなり、本明細書中でＬＬＦＡ３−Ｉｇといわれる。
【０１３０】
可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドはまた、ＰＣＴ特許出願番号ＷＯ９０／０２１８１に記載されるポリペプチドのような、ＬＦＡ−３のＰＩ結合形態由来であり得る。ＰＩ結合ＬＦＡ−３をコードするＤＮＡ配列（すなわち、配列番号３）を含むベクターは、登録番号６８７８８で、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄに寄託されている。ＬＦＡ−３のＰＩ結合型およびＬＦＡ−３の膜貫通型が、細胞外ドメイン全体を通じて、同一のアミノ酸配列を有することが理解されるべきである。従って、好ましいＰＩ結合ＬＦＡ−３ポリペプチドは、ＬＦＡ−３の膜貫通型に関して同じである。
【０１３１】
可溶性ＣＤ２ポリペプチドは、全長ＣＤ２（特に細胞外ドメイン（例えば、配列番号６のＡＡ１−ＡＡ１８５））由来であり得る。そのようなポリペプチドは、ＣＤ２の細胞外ドメインの全てまたはその一部を含み得る。例示的な可溶性ＣＤ２ポリペプチドは、参考として本明細書中に援用される、ＰＣＴ  ＷＯ９０／０８１８７号に記載される。
【０１３２】
本発明で有用な可溶性ポリペプチドの生成は、当該分野で公知の種々の方法によって達成され得る。例えば、このポリペプチドは、エキソペプチダーゼと組み合わせて特定のエンドペプチダーゼを使用するタンパク質分解、エドマン分解、またはこれらの両方によって、インタクトな膜貫通ＬＦＡ−３分子または膜貫通ＣＤ２分子あるいはインタクトなＰＩ結合ＬＦＡ−３分子から誘導され得る。インタクトなＬＦＡ−３分子またはインタクトなＣＤ２分子を、順番に、従来の方法を使用してその天然供給源から精製し得る。あるいは、インタクトなＬＦＡ−３またはＣＤ２は、ｃＤＮＡを使用して、公知の組換えＤＮＡ技術によって生成され得る（例えば、Ｗａｌｌｎｅｒらに対する米国特許第４，９５６，２８１号；ＡｒｕｆｆｏおよびＳｅｅｄ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）；Ｓａｙｒｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，ｐｐ．２９４１−４５（１９８７）を参照のこと）。
【０１３３】
好ましくは、本発明で有用な可溶性ポリペプチドは、直接生成され、それにより、出発物質としての、ＬＦＡ−３分子全体またはＣＤ２分子全体についての必要性を消す。これは、従来の化学合成技術によって、または周知の組換えＤＮＡ技術によって達成され得、ここで、所望のペプチドをコードするＤＮＡ配列のみが、形質転換された宿主中で発現される。例えば、所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺伝子を、オリゴヌクレオチド合成機を使用した化学的手段によって合成し得る。そのようなオリゴヌクレオチドを、所望の可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドのアミノ酸配列に基づいて設計する。所望のペプチドをコードする特定のＤＮＡ配列はまた、特定の制限エンドヌクレアーゼフラグメントの単離によって、または特定の領域のＰＣＲ合成によって、全長ＤＮＡ配列から誘導され得る。
【０１３４】
標準の方法が、本発明で有用な、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードする遺伝子の合成に適用され得る。例えば、完全なアミノ酸配列は、逆翻訳遺伝子を構築するために使用され得る。本発明で有用な、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーは、単一工程で合成され得る。あるいは、所望のポリペプチドの一部をコードする、いくつかのより小さなオリゴヌクレオチドを合成し得、次いで、ライゲーションし得る。好ましくは。本発明で有用な、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドまたは可溶性ＣＤ２ポリペプチドを、いくつかの分離したオリゴヌクレオチドとして合成し得、その後、これらのオリゴヌクレオチドが一緒に結合され得る。代表的には、個々のオリゴヌクレオチドは、相補的なアセンブリのために５’または３’の突出を含む。
【０１３５】
一旦、アセンブルされると、好ましい遺伝子は、制限エンドヌクレアーゼによって認識される配列（クローニングベクターまたは発現ベクター中への直接アセンブリのための単一の制限部位を含む）、使用される宿主発現系を考慮する好ましいコドン、および転写される場合、安定で効率的に翻訳されるｍＲＮＡを生成する配列によって特徴付けられる。適切なアセンブリは、ヌクレオチド配列決定、制限マッピング、および適切な宿主での生物学的に活性なポリペプチドの発現によって確認され得る。
【０１３６】
遺伝的コードの縮重に起因して、他の多くのヌクレオチド配列を含むＤＮＡ分子が、上記特定のＤＮＡ配列によってコードされる、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドおよび可溶性ＣＤ２ポリペプチドもまたコードし得ることは、当業者によって認識される。これらの縮重配列もまた、本発明で有用なポリペプチドをコードする。
【０１３７】
このＤＮＡ配列は、単細胞宿主中で発現され得る。当該分野で周知であるように、宿主中におけるトランスフェクトされた遺伝子の高発現レベルを得るために、その遺伝子は、選択された発現宿主内で機能性である、転写発現制御配列および翻訳発現制御配列と作動可能に連結されなければならない。好ましくは、それらの発現制御配列および目的の遺伝子は、細菌選択マーカーおよび複製起点をさらに含む発現ベクター内に含まれる。発現宿主が、真核生物細胞である場合、発現ベクターは、その発現宿主中で有用なさらなる発現マーカーをさらに含むべきである。
【０１３８】
望ましい可溶性ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列は、シグナル配列をコードしてもまたはコードしなくてもよい。発現宿主が、原核生物宿主である場合、ＤＮＡ配列は、シグナル配列をコードしないことが、一般的に望ましい。発現宿主が、真核生物宿主である場合、シグナル配列がコードされることが、一般的に望ましい。
【０１３９】
アミノ末端メチオニンは、発現産物に存在してもかまたは存在しなくてもよい。末端メチオニンが、発現宿主によって切断されない場合、所望される場合、標準的な技術によって、その末端メチオニンは化学的に除去され得る。
【０１４０】
発現宿主／ベクターの広く種々の組合せを、使用し得る。真核生物宿主にとって有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルスおよびサイトメガロウイルス由来の発現制御配列を含むベクターが挙げられる。細菌宿主にとって有用な発現ベクターとしては、公知の細菌プラスミド、例えば、（ｃｏｌＥ１、ｐＣＲＩ、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９およびこれらの誘導体を含む）Ｅ．ｃｏｌｉ由来のプラスミド、（ＲＰ４のような）より広い宿主範囲のプラスミド、ファージＤＮＡ（例えば、λファージの数多くの誘導体（例えば、ＮＭ９８９））、ならびに（例えば、Ｍ１３ファージおよび繊維状一本鎖ＤＮＡファージのような）他のＤＮＡファージが挙げられる。酵母細胞にとって有用な発現ベクターとしては、２μプラスミドおよびその誘導体が挙げられる。昆虫細胞にとって有用なベクターとしては、ｐＶＬ９４１が挙げられる。
【０１４１】
さらに、任意の広い範囲の発現制御配列が、これらのベクター内で使用され得る。そのような有用な発現制御配列は、前述の発現ベクターの構造遺伝子に関連する、発現制御配列を含む。有用な発現制御配列の例としては、例えば、ＳＶ４０またはアデノウイルスの初期プロモーターおよび後期プロモーター、ｌａｃ系、ｔｒｐ系、ＴＡＣ系またはＴＲＣ系、λファージの主要なオペレーター領域およびプロモーター領域、ｆｄコートタンパク質の制御領域、３−ホスホグリセレートキナーゼまたは他の解糖酵素についてのプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター（例えば、Ｐｈｏ５）、酵母α接合系のプロモーターならびに原核生物細胞もしくは真核生物細胞またはこれらのウイルスの遺伝子発現を制御することが公知の他の配列、そしてこれらの種々の組合せが挙げられる。
【０１４２】
広い種々の単細胞宿主細胞が、有用である。これらの宿主としては、周知の原核生物宿主または真核生物宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、真菌、酵母の株）（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ＳＦ９）のような）昆虫細胞、（ＣＨＯ細胞およびマウス細胞のような）動物細胞、（ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ１、ＢＳＣ４０、およびＢＭＴ１０のような）アフリカ緑ザル細胞、およびヒト細胞、ならびに組織培養中の植物細胞が挙げられ得る。動物細胞発現のために、本発明者らは、ＣＨＯ細胞およびＣＯＳ７細胞を選ぶ。
【０１４３】
もちろん、全てのベクターおよび発現制御配列が、本明細書中に記載されるＤＮＡ配列を発現するために、等しく良好に機能するわけではないことは理解されるべきである。全ての宿主が、同じ発現系を使用して、等しく良好に発現されるわけでもない。しかし、当業者は、過度の実験をせずにこれらのベクター、発現制御配列および宿主の間で、選択をし得る。例えば、ベクターの選択において、ベクターが宿主内で複製されなければならないので、宿主が考慮されなければならない。ベクターのコピー数、そのコピー数を制御する能力、および（抗生物質マーカーのような）このベクターによってコードされる任意の他のタンパク質の発現もまた、考慮されるべきである。
【０１４４】
発現制御配列の選択において、種々のベクターもまた、考慮されるべきである。例えば、これらとしては、配列の相対的強度、その制御可能性、および本明細書中で議論されるＤＮＡ配列との適合性（特に潜在的な二次構造に関して）が挙げられる。単細胞宿主は、選択されたベクターとの適合性、ＤＮＡ配列によってコードされる産物の毒性、これらの分泌特性、これらの正しく可溶性ポリペプチドを折りたたむ能力、これらの発酵または培養の必要条件、およびＤＮＡ配列によってコードされる産物の精製の容易さの考慮によって、選択されるべきである。
【０１４５】
これらのパラメーター内で、当業者は、発酵または例えば、ＣＨＯ細胞もしくはＣＯＳ７細胞を使用した大スケールの動物培養で、所望のＤＮＡ配列を発現する種々のベクター／発現制御配列／宿主の組合せを選択し得る。
【０１４６】
可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドおよび可溶性ＣＤ２ポリペプチドを、任意の種々の従来法を使用して、発酵または細胞培養から単離し、精製し得る。当業者は、最も適切な単離技術および精製技術を選択し得る。
【０１４７】
組換えＤＮＡ技術が、２０アミノ酸を越える配列を有する、有用な可溶性ＣＤ２ポリペプチドまたは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドを産生する好ましい方法であるのに対して、約２０アミノ酸未満のアミノ酸を有するより短いＣＤ２ポリペプチドまたはＬＦＡ−３ポリペプチドは、好ましくは従来の化学合成技術によって生成される。本発明で有用な、合成生成されたポリペプチドは、非常に高収率で生成され得、容易に精製され得る
好ましくは、このような可溶性ＣＤ２ポリペプチドまたは可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドは、溶相ポリペプチド合成または固相ポリペプチド合成により合成され、そして必要に応じて、（Ｃ末端アミノ酸を除去するために）カルボキシペプチダーゼを用いて消化されるかまたは（Ｎ末端アミノ酸を除去するために）手動のエドマン分解により分解される。ポリペプチドの適切な折りたたみは、Ｋｅｎｔ，「Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５７，９５７〜８９頁（１９９８）により記載されるようにジスルフィド架橋形成を支持する酸化的条件下で達成され得る。次いで、この方法で産生されたポリペプチドは、当該分野で広範に知られている分離技術、好ましくは逆層ＨＰＬＣを使用することにより精製され得る。溶相合成の使用は、成長するポリペプチド鎖（例えば、チロシンのＯ−硫酸エステル）に特定の誘導体化アミノ酸の直接的な添加を有利に可能にする。これは、本発明に有用なポリペプチドの任意の残基を改変する次の誘導体化工程の必要性を取り除く。
【０１４８】
（ＬＦＡ−３模倣因子およびＣＤ２模倣因子または低分子因子）
ＬＦＡ−３模倣因子およびＣＤ２模倣因子もまた、本発明の方法に有用である。ペプチド、セミペプチド化合物または非ペプチド化合物（例えば低有機分子）であり得るこれらの因子は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用のインヒビターである。好ましいＣＤ２模倣因子およびＬＦＡ−３模倣因子は、ＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用、ならびに少なくとも抗−ＬＦＡ−３モノクローナル抗体７Ａ６または抗−ＣＤ２モノクローナル抗体ＴＳ２／１８（前出）を阻害する。
【０１４９】
好ましい実施形態において、試験因子は、組み合わせライブラリーのメンバー、例えば、ペプチドまたは有機コンビナトリアルライブラリー、または天然物ライブラリーのメンバーである。好ましい実施形態において、複数の試験化合物（例えば、ライブラリーメンバー）は、少なくとも１０、１０２、１０３、１０４、１０５、１０６、１０７または１０８の化合物を含む。好ましい実施形態において、複数の試験化合物（例えば、ライブラリーメンバー）は、構造特性または機能特性を共有する。
【０１５０】
１つの実施形態において、本発明は、ＬＦＡ−３インヒビターおよび／またはＣＤ２インヒビターのライブラリーを提供する。組み合わせライブラリーの合成は、当該分野で周知であり、そして概説されている（例えば、Ｅ．Ｍ．Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９４）３７：１３８５〜１４０１；ＤｅＷｉｔｔ，Ｓ．Ｈ．；Ｃｚａｒｎｉｋ，Ａ．Ｗ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９６）２９：１１４；Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ，Ｒ．Ｗ．；Ｃｏｍｂｓ，Ａ．Ｐ．；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．Ａ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｓ．Ｄ．；Ｋｅａｔｉｎｇ，Ｔ．Ａ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９６）２９；１２３；Ｅｌｌｍａｎ，Ｊ．Ａ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９６）２９：１３２；Ｇｏｒｄｏｎ，Ｅ．Ｍ．；Ｇａｌｌｏｐ，Ｍ．Ａ．；Ｐａｔｅｌ，Ｄ．Ｖ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．（１９９６）２９：１４４；Ｌｏｗｅ，Ｇ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．（１９９５）３０９，Ｂｌｏｎｄｅｌｌｅら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）１４：８３；Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９４）１１６：２６６１；米国特許第５，３５９，１１５号、同第５，３６２，８９９号および同第５，２８８，５１４号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９２／１００９２、ＷＯ９３／０９６６８、ＷＯ９１／０７０８７、ＷＯ９３／２０２４２、ＷＯ９４／０８０５１を参照のこと）。
【０１５１】
本発明の化合物のライブラリーは、当該分野で公知のいくつかの、種々の方法に従い調製され得る。例えば、「スプリット−プール（ｓｐｌｉｔ  ｐｏｏｌ）」ストラテジーは、以下の方法で実行され得る：官能化した重合体支持体のビーズを、複数の反応容器に置く；固相ペプチド合成に適した種々の重合体支持体は、公知であり、そしていくつかは、市販されている（例えば、Ｍ．Ｂｏｄａｎｓｋｙ「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ（１９９３）．を参照のこと）。異なる活性化アミノ酸の溶液を、ビーズの各アリコートに添加し、そして反応を、各反応容器の中のひとつで、複数の固定化されたアミノ酸を生じるように進める。次いで、誘導体化ビーズのアリコートを、洗浄し、プールし（すなわち、再結合し）、そしてビーズのプールを、再び分割し、各アリコートを、別の反応容器に移す。次いで、別の活性化アミノ酸を、ビーズの各アリコートに添加する。合成のサイクルは、所望のペプチド長が得られるまで、繰り返される。各合成サイクルで添加されたアミノ酸残基は、ランダムに選択されるか；あるいは、アミノ酸は、「偏った（ｂｉａｓｅｄ）」ライブラリー、例えば、インヒビターの特定の部分が非ランダムに選択されるライブラリーを提供するために、例えば、抗体と相互作用し得る公知のペプチド（例えば、抗イディオタイプ抗原抗体結合部位）に対する公知の構造の類似性または相同性を有するインヒビターを提供するために選択され得る。広範な種々のペプチド化合物、ペプチド擬態性化合物または非ペプチド化合物が、容易にこの方法で生成され得ることが理解される。
【０１５２】
「スプリット−プール」ストラテジーは、ペプチド（例えば、インヒビター）のライブラリーを生じる、これは、本発明の試験化合物のライブラリーを調製するために使用され得る。別の例示的合成において、「ダイバーサマー（ｄｉｖｅｒｓｏｍｅｒ）ライブラリー」は、Ｈｏｂｂｓ  ＤｅＷｉｔｔらの方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９（１９９３））により作成される。他の合成方法（Ｈｏｕｇｈｔｅｎの「ティーバッグ（ｔｅａ−ｂａｇ）」技術（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎら、Ｎａｔｕｒｅ３５４：８４〜８６（１９９１）を参照のこと）を含む）はまた、本発明に従う化合物のライブラリーを合成するために使用され得る。
【０１５３】
化合物のライブラリーは、スクリーニングされ得、このライブラリーの任意のメンバーが、所望の活性を有するか否かを決定し、そして、もし有するならば、活性種を同定する。コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングする方法は、記載されている（例えば、Ｇｏｒｄｏｎら、Ｊ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，前出）。可溶性化合物のライブラリーは、レセプターのためのリガンドを単離するために、適切なレセプターを用いるアフィニティークロマトグラフィーに続いて、従来の技術（例えば、質量スペクトル、ＮＭＲなど）による単離されたリガンドの同定によりスクリーニングされ得る。固定化された化合物は、可溶性レセプターと化合物を接触することによりスクリーニングされ得；好ましくは、この可溶性レセプターは、リガンド結合を示すために検出され得る標識（例えば、発色光団、比色定量酵素、放射性同位体、発光化合物など）に結合される。あるいは、固定化された化合物は、選択的に放出され得、そしてレセプターと相互作用するためにメンブレンを介して拡散され得る。本発明のライブラリーをスクリーニングするために有用な例示的なアッセイは、以下に記載される。
【０１５４】
１つの実施形態において、本発明の化合物は、ポリペプチドに直接的に結合するかまたはＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用を阻害する各化合物の活性をアッセイすることにより（例えば、標準的な９６ウェルマイクロタイタ−プレートのような多数のウェルプレートの１つのウェルの中で例えば、ＣＤ２ポリペプチドまたはＬＦＡ−３ポリペプチドおよび溶解物（例えば、ＴまたはＡＰＣ細胞溶解物）と共に試験化合物をインキュベートすることにより）ＣＤ２ポリペプチドまたはＬＦＡ−３ポリペプチドとの相互作用の能力についてスクリーニングされ得る。この実施形態において、個々の化合物の活性が、決定され得る。試験化合物を有さないウェルは、コントロールとして使用され得る。インキュベーション後、各試験化合物の活性は、各ウェルをアッセイすることにより決定され得る。したがって、複数の試験化合物の活性が、平行して決定され得る。
【０１５５】
さらなる別の実施形態において、多数の試験化合物は、結合活性について同時に試験され得る。例えば、試験化合物は、「１ビーズ−１化合物（ｏｎｅ  ｂｅａｄ−ｏｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」合成において、固体樹脂ビーズ上で合成され得る；この化合物は、感光性リンカーを介して樹脂支持体上で固定化され得る。次いで、複数のビーズ（例えば、１００，０００ビーズ以上もの数）は、酵母細胞と結合され得、そして複数の「ナノ液滴（ｎａｎｏ−ｄｒｏｐｌｅｔｓ）」に噴霧される、ここで各液滴は、ひとつのビーズ（および、したがって、ひとつの試験化合物）を含む。次いで、ＵＶ光へのナノ液滴の照射は、ビーズからの化合物の切断を生じる。このアッセイ形式が、速い形式での試験化合物の大きなライブラリーのスクリーニングを可能にすることが理解されている。
【０１５６】
化合物のコンビナトリアルライブラリーは、「タグ」と共に合成され得、ライブラリーの各メンバーの同一性をコードする（例えば、Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌら、米国特許第５，５６５，３２４号およびＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／０８０５１およびＷＯ９５／２８６４０を参照のこと）。一般的に、この方法は挿入物の使用を特徴とするが、容易に検出可能なタグは、固体支持体または化合物に付着される。活性化合物が検出される場合（例えば、上記で記載される技術のひとつにより）、化合物の同一性は、個有の添付のタグの同一性により決定される。このタギング（ｔａｇｇｉｎｇ）法は、非常に低いレベルで同定され得る化合物の大きなライブラリーの合成を可能にする。このようなタギングスキームは、ビーズから放出された化合物を同定するために、例えば、上で記載される「ナノ液滴」スクリーニングアッセイにおいて、有用であり得る。
【０１５７】
好ましい実施形態において、本発明の化合物のライブラリーは、少なくとも３０の化合物、さらに好ましくは少なくとも１００の化合物、およびさらにより好ましくは少なくとも５００の化合物を含む。好ましい実施形態において、本発明の化合物のライブラリーは、１０９より少ない化合物、さらに好ましくは１０８より少ない化合物およびさらにより好ましくは１０７より少ない化合物を含む。
【０１５８】
（誘導体化インヒビター）
例えば、本明細書中で記載される任意の抗体ホモログ、可溶性ＣＤ２ポリペプチドおよび可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、またはＣＤ２模倣因子およびＬＦＡ−３模倣因子が、抗−ＬＦＡ−３抗体ホモログおよび抗−ＣＤ２抗体ホモログ、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドおよび可溶性ＣＤ２ポリペプチド、ＣＤ２模倣因子およびＬＦＡ−３模倣因子、細胞毒性因子および薬学的な因子からなる群から独立して選択される１つ以上のメンバーに（化学カップリング、遺伝子融合または他の方法により）機能的に連結される、ＣＤ２／ＬＦＡ−３の相互作用の誘導体化インヒビターもまた、本発明の方法において有用である。
【０１５９】
誘導体化インヒビターのひとつの型は、２つ以上のインヒビター（同じ型または異なる型の）を架橋結合することにより生成される。適切な架橋リンカーは、適切なスペ−サー（例えば、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）またはホモ二官能性（例えば、ジスクスシンイミジルスベレート）により分離された２つの明確な反応基を有する、ヘテロ二官能性であるものを含む。このようなリンカーは、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ．から入手可能である。
【０１６０】
架橋結合に対する別の可能性は、ＰＩ連結ＬＦＡ−３におけるＰＩ連結シグナル配列またはこれらのフラグメントを利用する。特に、ＰＩ連結シグナル配列をコードするＤＮＡ（例えば、配列番号４のＡＡ１６２−ＡＡ２１２）は、所望のポリペプチド、好ましくは可溶性のＬＦＡ−３ポリペプチドをコードするＤＮＡの下流に連結される。この構築物が、適切な真核細胞内で発現される場合、この細胞は、ＰＩ結合シグナル配列を認識し、そしてＰＩをポリペプチドに共有結合的に結合する。次いで、ＰＩの疎水性特性は、ポリペプチドのミセル凝集体を形成するために利用され得る。
【０１６１】
１つ以上の細胞毒性因子または薬学的な因子に連結されたインヒビターもまた有用である。有用な薬学的な因子は、生物学的に活性ペプチド、ポリペプチドおよびタンパク質（例えば、ＣＤ２またはＬＦＡ−３以外のヒトポリペプチドに特異的な抗体ホモログ）、またはこれらの部分を含む。有用な薬学的な因子および細胞毒性因子はまた、シクロスポリンＡ、プレドニゾン、ＦＫ５０６、メトトレキセート、ステロイド、レジノイド、インターフェロンおよびナイトロジェンマスタードを含む。
【０１６２】
薬学的因子を用いて誘導体化された好ましいインヒビターは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチド、可溶性ＣＤ２ポリペプチド、またはペプチジルＣＤ２模倣因子またはペプチジルＬＦＡ−３模倣因子が、免疫グロブリンの重鎖ヒンジ領域の全てまたは部分、および重鎖定常領域のすべてまたは部分に融合される、組換え産生ポリペプチドを含む。このような融合タンパク質を調製するための好ましいポリペプチドは、可溶性ＬＦＡ−３ポリペプチドである。最も好ましいのは、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域（鎖間ジスルフィド結合に関与すると思われる２つのシステイン残基を含むヒンジ領域のＣ末端の１０個のアミノ酸を含む）およびＩｇＧ１の重鎖定常ドメインのＣＨ２領域およびＣＨ３領域の一部分に融合されたＬＡＦ−３のＡＡ１−ＡＡ９２（例えば、配列番号２）を含む融合タンパク質である。このような融合タンパク質は、延長された血清の半減期を示すことおよびインヒビターの二量体化を可能にすることが予想される。
【０１６３】
（併用治療）
結合因子（例えば、ＣＤ２またはＬＦＡ−３結合因子）は、他の治療、例えば光療法（例えば、ＵＶＡ、ＵＶＢまたはＰＵＶＡ）；化学治療（例えば、メトトレキセート；レチノイド；シクロスポリン、エトレチナート）；または局所療法（例えば、ステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）、タール、アントラリン、マクロライドまたはマクロラクタム（例えば、タクロリムスまたはピメクロリムス）との組み合わせて使用され得る。このような併用治療は、低い用量の治療因子または予後因子を優位に有利し得る。
【０１６４】
本明細書中で使用される場合、「組み合わせて」投与されるとは、２つ（またはそれ以上）の異なる処置が、障害を有する被験体の苦痛の過程の間に被験体に送達される（例えば、２つ以上の処置が、被験体が障害を有すると診断された後およびこの障害が回復または取り除かれる前に送達される）。いくつかの実施形態において、ひとつの処置の送達は、第２の送達が始まる時にもまだ生じており、その結果、重複が存在する。これは、時々「同時」または「同時の送達」と本明細書中でいわれる。他の実施形態において、ひとつの処置の送達は、他の処置の送達が始まる前に、終わる。いずれかの場合のいくつかの実施形態において、処置は、組み合わされた投与に起因してさらに有効である。例えば、第２の処置がさらに効果的であるか、例えば、等しい効果が、第２の処置ではあまり見られないか、あるいは第２の処置は、第２の処置が、第１の処置の非存在で投与される場合に見れるよりも、第２の処置がより多くの部分に対して症状を減少するか、あるいは類似の状況が、第一の処置に関して見られる。いくつかの実施形態において、送達は、症状における減少、または障害に関する他のパラメーター（例えば、ＩＦＮγレべルまたは産生における減少、Ｔ細胞アポトーシスの誘導、またはＣＤ４０Ｌ発現における減少）が、他の処置の非存在において送達されたひとつの処置に関して観察されたものよりも大きくなるようなものである。２つの処置の効果は、部分的に加算的、全体的に加算的または加算的よりも大きくする。この送達は、送達された第１の処置の効果が、第２が送達された場合に、さらに検出可能になる（例えば、ＵＶＢが第１に送達された場合、ＩＦＮγにおける減少は、ＬＦＡ−３／Ｉｇが送達された場合、さらに検出可能となる）ようなものであり得る。好ましい実施形態において、第１の処置の送達および第２の処置の送達は、互いの送達の１日、２日、５日、１０日、１５または３０日以内に生じる。
【０１６５】
本明細書中で記載される結合因子は、皮膚傷害（例えば、乾癬）の従来の処置に対する補助剤として使用され得る。例えば、結合因子は、経時的な乾癬の治療に先だってか、同時にか、または後に導入され得る（Ｋｏｏ，Ｊ．（１９９９）Ｊ  Ａｍ  Ａｃａｄ  Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４１（３Ｐｔ２）：Ｓ２５−８で概説される）。用語「経時的な治療」は、治療的な結果を最適化するために慎重な順序で特定の治療因子の使用を含む処置ストラテジーをいう。乾癬におけるこのストラテジーについての理論的根拠は、長期間の維持療法、および症状の迅速な軽減を必要とする慢性疾患であること、ならびに乾癬について利用可能ないくつかの治療は、早いクリアランスにより適切である一方で他のものが長期間の維持により適切であることである。経時的な治療には以下の３つの工程を含む：（１）清掃、または「応急処置」の段階；（２）移行段階；および（３）維持段階。
【０１６６】
経時的な全身治療の１つの例は、迅速に作用する補助剤（例えば、皮膚科学的な最大用量（１日に５ｍｇ／ｋｇ）でのシクロスポリン、またはメトトレキセートの使用を含む。約１ヶ月後、移行段階は、維持因子としてＣＤ２結合因子および／または他の補助剤（例えば、アシトレチン）の漸進的導入と共に開始される。一旦、ＣＤ２結合因子および／または他の補助剤（例えば、アシトレチン）の最大耐量が確立されると、迅速に作用する補助剤（例えばサイクロスポリン）は、ゆるやかに減らされ、そしてＣＤ２結合因子および／または別の補助剤（例えば、アシトレチン）は、長期間の維持のために続けられる。光療法（ＵＶＢまたはＰＵＶＡ）との組み合わせは、必要であるならば、改良されたコントロールに添加される。
【０１６７】
他の例示的な実施形態において、ＣＤ２結合因子は、延長された期間（例えば、１２週間の治療的な処置期間）にわたって投与され得る。緩解の期間またはあまり活性ではない疾患の間、ＣＤ２結合因子は、単独または局所薬（例えば、ステロイド、ビタミン（例えば、ビタミンＤ）、タール、アントラリン、マクロライドまたはマクロラクタム（例えば、タクロリムス（ＦＫ５０６）またはピメクロリムス））および／または光療法（例えば、ＵＶＡ、ＵＶＢまたはＰＵＶＡ、しかし好ましくはＵＶＢ）との組み合わせで投与され得る。活性な疾患の期間の間、迅速に作用するが毒性の補助剤（例えば、メトトレキサートおよび／またはシクロスポリン）が、短い処置期間に投与され得る。
【０１６８】
アスコマイシンマクロラクタム誘導体（例えば、ピメクロリムス（ＡＳＭ９８１クリーム１％）は、炎症皮膚障害（例えば、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、刺激性接触皮膚炎および乾癬）を処置するのに現在使用されている炎症サイトカインの選択的なインヒビターである（Ｓｔｕｅｔｚ，Ａ．ら、（２００１）Ｓｅｍｉｎ．Ｃｕｔａｎ．Ｍｅｄ．Ｓｕｒｇ．２０（４）：２３３−４１；Ｂｏｒｎｈｏｖｄ．Ｅ．ら、（２００１）Ｊ．Ａｍ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．４５（５）：７３６−４３）。
【０１６９】
好ましい実施形態において、ＣＤ２結合因子（例えば、ＬＦＡ−３／Ｉｇ融合物）または同じものを含む薬学的組成物は、（例えば、注入により（例えば、輸液用器具を使用して）、静脈内に、筋肉内に、皮下に、関節内に、くも膜下腔内に、骨膜内に（ｐｅｒｉｏｓｔａｌｌｙ）、腫瘍内に、病巣内に、病巣周囲に、経口的に、局部的または吸入により）全身的に投与される。好ましくは、ＣＤ２結合因子は、筋肉内または静脈内に投与される。他の実施形態において、ＣＤ２結合因子は、患部（例えば、乾癬損傷）に局部的（例えば、局所的に）に投与される。
【０１７０】
（光線療法）
１つの実施形態において、本明細書中で開示される結合剤（例えば、本明細書中に記載されるＣＤ２結合剤）は、光線療法（ｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｙ）（本明細書中で「光線療法（ｌｉｇｈｔ  ｔｈｅｒａｐｙ」とも呼ばれる）と組み合わせて投与される。光線療法は、皮膚による紫外線（ＵＶ）照射の光学的吸収を利用して、迅速に増殖する細胞を死滅させ、増殖を停止させる。現在、ＵＶＡ療法およびＵＶＢ療法（ＵＶＡ療法は、皮膚を３２０〜４００ｎｍの間のＵＶ照射に曝し、ＵＶＢ療法は、皮膚を２９０〜３２０ｎｍの間のＵＶ照射に曝す）は両方とも、皮膚障害を処置するために効果的かつ広範に使用されている。好ましい実施形態において、２９０〜３２０ｎｍの範囲のＵＶＢ照射、より好ましくは、３１１ｎｍでの狭周波数帯ＵＶＢの形態が使用される。他の実施形態において、皮膚の罹患領域へのソラレンまたはソラレンベースの化合物の反復的な局所適用、その後のその領域のＵＶＡ照射への曝露を含む光化学療法の形態のＰＵＶＡ療法もまた、使用され得る。さらに他の実施形態において、光力学療法（ＰＤＴ）が、皮膚障害、特に乾癬および菌状息肉腫を処置するために使用され得る。この方法において、癌細胞に選択的に保持される薬物である光感作剤が、被験体に投与される。光の吸収（代表的には、３２０〜７００ｎｍであり、薬物に依存する）の後、光感作剤は、光化学反応を起こし、細胞傷害性の一重項酸素を生成し、最終的に、皮膚における腫瘍血管を破壊する（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、（１９９２）Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２８：１６３１−１６３６）。
【０１７１】
多くの場合、ＣＤ２結合剤（例えば、ＬＦＡ−３／Ｉｇ融合体）および光線療法（例えば、ＵＶＢ）の１つまたは両方が、反復的に送達される。ＣＤ２結合剤は、等間隔または非等間隔で送達され得る。例えば、ＣＤ２結合剤は、３〜１２日毎（例えば、１週間に一度）送達され得る。送達は、３回、６回、１２回、１５回、２４回、またはそれ以上繰り返され得る。第２の処置（例えば、光線療法（例えば、ＵＶＢ）の送達）の１つ以上の課程）が、融合タンパク質の送達課程の前、後、または同時に行なわれ得る。
【０１７２】
（薬学的組成物）
本発明は、哺乳動物に１つ以上のＣＤ２結合剤（例えば、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビター）またはその誘導体化形態を補助剤と組み合わせて投与することにより、被験体における上記の皮膚障害を予防または処置するための方法を提供する。
【０１７３】
好ましくは、有効量のＣＤ２結合剤またはその誘導体化形態が投与される。「有効量」は、本明細書中に記載される皮膚障害の拡散または重篤度を低減し得る量を意味する。
【０１７４】
インヒビターの有効量は、特に、投与スケジュール、投与される単位用量、そのインヒビターが他の治療剤と組み合わせて投与されるか否か、患者の免疫状態および健康、投与される特定のインヒビターの治療活性または予防活性、ならびに血清半減期に依存することが、当業者に明らかである。
【０１７５】
好ましくは、ＣＤ２結合剤は、体重１ｋｇあたり約０．００１ｍｇと約５０ｍｇとの間インヒビターの用量で、より好ましくは、体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇと約１０ｍｇとの間のインヒビターの用量で、最も好ましくは、体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇと約４ｍｇとの間のインヒビターの用量で投与される。
【０１７６】
単位用量は、効果が観察されるまで投与されるべきである。この効果は、種々の方法（インビトロＴ細胞活性アッセイおよび罹患皮膚領域の洗浄を含む）により測定され得る。好ましくは、単位用量は、１週間に約１〜３回、または１日に１〜３回投与される。より好ましくは、約３日と約７日との間、１日あたり約１〜３回投与されるか、または約３日と約７日との間、１日あたり約１〜３回、１ヶ月ベースで投与される。しかし、より低い用量またはより高い用量および他の投与スケジュールが用いられ得ることが認識されている。
【０１７７】
ＣＤ２結合剤またはその誘導体化形態はまた、好ましくは、薬学的に受容可能なキャリアを含む組成物中で投与される。「薬学的に受容可能なキャリア」は、投与される患者においてアレルギー反応または他の有害な影響を引き起こさないキャリアを意味する。
【０１７８】
適切な薬学的に受容可能なキャリアとして、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどのうちの１つ以上およびそれらの組み合わせが挙げられる。薬学的に受容可能なキャリアはさらに、インヒビターの有効期間または効果を増強する微量の補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、防腐剤または緩衝液）を含み得る。
【０１７９】
上記のように、薬学的組成物またはＣＤ２結合剤は、他の補助治療剤または補助予防剤と組み合わせて投与され得る。これらとして、例えば、シクロスポリンＡ、ステロイド、レチノイド、ナイトロジェンマスタード、インターフェロン、メトトレキセート、抗生物質、および抗ヒスタミン薬が挙げられる。
【０１８０】
これらの補助剤は、インヒビターと共に単一投薬形態で（すなわち、同一の薬学的組成物の一部として）、インヒビターと別々であるが同時の複数投薬形態で、または２つの成分が別々であるが連続的に投与される複数投薬形態で投与され得る。あるいは、ＣＤ２結合剤および他の活性薬剤は、単一の結合体分子の形態であり得る。２つの成分の結合は、当該分野で周知の標準的な架橋技術により達成され得る。単一の分子はまた、組み換え融合タンパク質の形態を採り得る。さらに、本発明において有用なインヒビターまたは薬学的組成物は、他の治療（例えば、ＰＵＶＡ、化学療法、およびＵＶ光）と組み合わせて使用され得る。このような併用療法は、低用量の治療剤または予防剤を使用し得るという利点を有する。
【０１８１】
ＣＤ２結合剤または薬学的組成物は、種々の形態であり得る。これらとして、例えば、固体投薬形態、半固体投薬形態、および液体投薬形態（例えば、錠剤、丸剤、散剤、液体溶液、分散物または懸濁物、リポソーム、坐薬、注射可能物、注入物、および局所調製物）が挙げられる。好ましい形態は、投与および治療適用の意図する様式に依存する。好ましい形態は、注射可能溶液または注入可能溶液である。
【０１８２】
本発明は、局所適用される日焼け止め剤またはＵＶ保護剤として使用するのに適した処方物を包含する。好ましい実施形態として、ＬＦＡ３ＴＩＰ調製物が挙げられる。活性成分は、リポソーム中に処方され得る。製品は、ＵＶ曝露の前、間、または後、あるいは赤みの発生の前、間、または後に適用され得る。
【０１８３】
（キット）
別の局面において、本発明は、本明細書中に記載されるようなＣＤ２結合剤を、補助剤（例えば、本明細書中に記載される薬剤）またはこのような薬剤の使用方法に関する指示書と組み合わせて含むキットを提供する。
【０１８４】
好ましい実施形態において、ＣＤ２／ＬＦＡ−３相互作用のインヒビターは、ＬＦＡ−３／Ｉｇ融合ポリペプチドである。好ましくは、ＬＦＡ−３／Ｉｇ融合ポリペプチドは、凍結乾燥される。
【０１８５】
本発明を、以下の実施例によりさらに説明する。この実施例は、さらなる限定を構成するものではない。本願を通して列挙される全ての参考文献、係属中の特許出願、および公開された特許の内容は、明確に、本明細書により参考として援用される。
【実施例】
【０１８６】
（実施例１：ＬＦＡ３ＴＩＰ同時培養後のＩＦＮγのインビトロ阻害およびＣＤ２５レベルにおける減少）
非乾癬ボランティアおよび乾癬ボランティア由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いたＬＦＡ３ＴＩＰのインビトロ実験は、ＬＦＡ３ＴＩＰの同時培養後のＩＦＮγの有意な阻害およびＣＤ２５レベルの減少を実証した。ＩＦＮγレベルの減少はまた、ＬＦＡ３ＴＩＰ処置患者由来のＴ細胞のインビボ実験においても反映された。インビトロでのＰＭＢＣに対するＬＦＡ３ＴＩＰの有意な効果が得られたので、本発明者らは、インビボでのＬＦＡ３ＴＩＰの投与が、処置ボランティア由来のＰＢＭＣに対する効果を有するか否かを決定することとした。このことに取り組むために、採血した末梢血を、各々の角膜切開刀で切除したサンプル（ｋｅｒａｔｏｍｅ  ｓａｍｐｌｅ）と同時に本発明者らがＬＦＡ３ＴＩＰ処置集団由来のＰＢＭＣにおけるＩＦＮγおよびＣＤ２５レベルを試験できるよう時間を調整してプロトコルに加えた。ＰＢＭＣの調製を、Ｆｉｃｏｌｌ上で実施し、そして当該分野で公知のＰＢＭＣプロトコルに従って刺激した。インビボでのＬＦＡ３ＴＩＰ処置患者から得られたＰＢＭＣを、さらなるフローサイトメトリー実験に使用した。この末梢血実験により、各時点で、各患者に対する調査課題に１５のさらなる実験点が追加される。これは、ＣＤ３、ＣＤ６９、ＣＤ２５、ＣＤ２、ＩＦＮγ、ＣＤ４０Ｌ、およびＡｐｏ２．７の染色からなる。さらに、ＣＤ４０Ｌの発現もまた、インビボで処置した患者由来のＰＢＭＣにおいて試験した。
【０１８７】
（実施例２：ヒトＬＦＡ−３／ＩｇＧ１融合タンパク質は、正常な末梢血Ｔ細胞および乾癬性末梢血Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生を阻害し、ＵＶＢの作用を増強する）
乾癬は、一部、活性化Ｔ細胞のインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）産生により媒介される。アレファセプト（ヒトＬＦＡ−３／ＩｇＧ１融合タンパク質であるＬＦＡ３ＴＩＰ、現在は、商品名Ａｍｅｖｉｖｅ（登録商標）の下でＢｉｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．により製造されている）は、インビトロおよびインビボでＴ細胞に対する阻害効果を示す。アレファセプトのフェーズ３臨床試験は、乾癬において継続中である。ＵＶＢ照射は、乾癬の最も有効な処置の中の１つであり、本発明者らは、一度のインビボでのＵＶＢへの曝露が、Ｔ細胞のＩＦＮγ産生を選択的に減少させ得ることを以前に報告している。
【０１８８】
Ｔ細胞のＩＦＮγ産生に対するアレファセプトの効果を調査するために、正常な個体（ｎ＝７）または乾癬患者（ｎ−７）由来のＰＢＭＣを活性化し、ＩＦＮγ産生をフローサイトメトリーにより測定した。８μｇ／ｍｌのアレファセプトで処置した非乾癬ＰＢＭＣについて、ＩＦＮγ＋Ｔ細胞の数は、７事例中５事例で減少し（２０〜９０％減少）、７事例中１事例で増加し、そして７事例中１事例で変化しなかった。乾癬ＰＢＭＣにおいて、８μｇ／ｍｌのアレファセプト処置により、試験した７人の患者のうち６人でＩＦＮγ産生が減少した（平均５６±０．１２％の減少）（Ｐ＜０．００５）。ＰＢＭＣ集団は、ＩＦＮγ産生に基づき、２つの群（高（＞１０％）または低（＜１０％）ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋）に分割され得る。別々に考慮する場合、非乾癬性高産生体および乾癬性高産生体は両方とも、８μｇ／ｍｌのアレファセプトにより効果的に阻害され、その平均減少は、それぞれ、５６％および６５％であった。対照的に、低産生体は、ほとんど阻害を示さなかった。抗ＦｃγＲＩおよびＲＩＩＩ  ｍＡｂによる前処置は、アレファセプトによるＩＦＮγの減少を無効にした。ＰＢＭＣ集団をＵＶＢ照射（０〜２０ｍｌ／ｃｍ２）で前処置した場合、アレファセプトは、ＵＶＢにより誘導されるアポトーシスを増強し、そしてＩＦＮγをさらに減少させた（３２．２％）（ｐ＝０．００９、ｎ＝３）。
【０１８９】
これらの結果は、アレファセプトがＴ細胞のＩＦＮγ産生を阻害すること、ＦｃγＲ保有細胞との相互作用が必要とされること、およびＵＶＢとの組み合わせが乾癬病巣におけるＴｈ１型細胞の数および活性を減少させる上で有効であることを証明し得ることを示す。
【０１９０】
（実施例３：ヒトＬＦＡ−３／ＩｇＧ１融合タンパク質による乾癬処置は、損傷皮膚における浸潤ＩＦＮγ＋産生Ｔ細胞の数を減少させる）
乾癬は、活性化された病変部のＴ細胞によるＩＦＮγを通じて一部媒介される、慢性炎症皮膚疾患である（Ｔｈ１に傾いている（Ｔｈ１  ｓｋｅｗｅｄ））。アレファセプト（ヒトＬＦＡ−３／ＩｇＧ１融合タンパク質、ＬＦＡ３ＴＩＰ、現在は、商品名ＡＭＥＶＩＶＥＴＭの下で開発されている）は、ＣＤ３＋ＣＤ４５ＲＯ＋血液Ｔ細胞の可逆的な減少を誘導する新規の組換えタンパク質である。
【０１９１】
皮膚Ｔ細胞に対する効果を研究するために、オープンラベルアレファセプトフェーズＩＩＩ乾癬研究を、６人の患者に対して、週に１回７．５ｍｇＩＶのアレファセプトを１２週間連続で与えて実施した。表皮細胞および真皮細胞におけるＣＤ３＋Ｔ細胞およびＩＦＮγ産生ＣＤ３＋集団の割合をフローサイトメトリーにより分析し、そしてＣＤ３＋またはＩＦＮγＣＤ３＋の細胞密度（細胞数／ｍｍ２）を算出した。
【０１９２】
１３週目で臨床的改善を示した６人の患者中５人の患者において、ＩＦＮγ（ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋）を産生する表皮Ｔ細胞の密度は、ベースラインの０．２６±０．３％に減少された。ベースラインでの６人の患者全てについてのＩＦＮγ＋ＣＤ３＋細胞の平均密度は１８２±９１／ｍｍ２であるのに対して、アレファセプト処置の１２週目では７７±４５／ｍｍ２であった（ｐ＝０．０５）。６人の患者全てについて、ＰＡＳＩの改善は、ｒ＝０．８０、ｐ＝０．０６でＩＦＮγ＋ＣＤ３＋表皮細胞における％変化と相関した。興味深いことに、処置の最初のフェーズにおいて、数人の患者は、３週目に、表皮の厚みの一時的な増加を伴う、ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋病変部Ｔ細胞における一時的な増加を示した。次いで、ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋Ｔ細胞および表皮の厚みは、ともに、その後の週に減少した。
【０１９３】
本発明者らの結果は、アレファセプトが、臨床的な改善を伴い、浸潤性Ｔｈ１型ＩＦＮγ＋ＣＤ３＋Ｔ細胞の数を有意に減少させ得ることを示唆する。ＩＦＮγは乾癬の病因の重要な因子であると考えられているので、皮膚におけるＴｈ１細胞の減少は、乾癬の臨床的改善の重要な工程を表し得る。
【０１９４】
（寄託物）
本発明において有用なマウスハイブリドーマ細胞および抗ＬＦＡ−３抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｕ．Ｓ．Ａ．によって、１９９１年３月５日付でブタベスト条約の下に寄託された培養物により例証され、そして以下のように識別された。
【０１９５】
寄託物                  ＡＴＣＣ受託番号
１Ｅ６                  ＨＢ  １０６９３
ＨＣ−１Ｂ１１          ＨＢ  １０６９４
７Ａ６                  ＨＢ  １０６９５
８Ｂ８                  ＨＢ  １０６９６
膜貫通ＬＦＡ−３をコードするプラスミドを保有するバクテリオファージは、ブタベスト条約の下でＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｔｈｉｃｕｍ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｕ．Ｓ．Ａ．に、１９８７年５月２８日付で、受託番号ＩＶＩ−１０１３３の下で受託された。この寄託物は、１９９１年６月２０日付でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに移管され、そして以下のように識別された。
【０１９６】
名称                                      ＡＴＣＣ受託番号
λＨＴ１６［λｇｔ１０／ＬＦＡ−３］      ７５１０７
ＰＩ連結ＬＦＡ−３をコードするプラスミドで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉは、ブタベスト条約の下でＩｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．に、１９８８年７月２２日付で、受託番号ＩＶＩ−１０１８０の下で受託された。この寄託物は、１９９１年６月２０日付でＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに移管され、そして以下のように識別された。
【０１９７】
名称                    ＡＴＣＣ受託番号
ｐ２４                  ６８７８８
（配列）
以下は、米国特許第６，１６２，４３２号に記載される配列および本願を通して参照される配列の要約である。
配列番号１  膜貫通ＬＦＡ−３のＤＮＡ配列
配列番号２  膜貫通ＬＦＡ−３のアミノ酸配列
配列番号３  ＰＩ連結ＬＦＡ−３のＤＮＡ配列
配列番号４  ＰＩ連結ＬＦＡ−３のアミノ酸配列
配列番号５  ＣＤ２のＤＮＡ配列
配列番号６  ＣＤ２のアミノ酸配列
配列番号７  ＬＦＡ３ＴＩＰのＤＮＡ配列
配列番号８  ＬＦＡ３ＴＩＰのアミノ酸配列
（等価物）
当業者は、慣用的な実験のみを用いて、本明細書中に記載される本発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識または確認し得る。このような等価物は、特許請求の範囲に包含されることが意図される。
【０１９８】
他の実施形態は、特許請求の範囲に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【０１９９】
【図１】図１は、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ融合タンパク質のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す。シグナルペプチドが、図１のアミノ酸１〜２８に対応し；成熟ＬＦＡ−３領域が、図１のアミノ酸２９〜１２０に対応し；そしてＩｇＧ１領域が、図１のアミノ酸１２１〜３５１に対応する。
【図１】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004527477.tif 000069
2004527477.tif 000070