(57)【要約】試料中の粒子間のサイズの変動性が著しい場合に粒子をより正確に数えることができるようにする方法が開示される。この方法は、粒子の補正カウントを得るために移行所要時間（44）及び待ち時間（22）を使用する。
2004537724.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粒子数の計数方法であって、
複数の粒子をして粒子感知ゾーンを順次通過させるステップと、
ある一定時間第一の信号を前記粒子感知ゾーンに導くステップと、
前記粒子感知ゾーンから発する第二の信号を測定するステップであって、前記第二の信号が、前記粒子が前記粒子感知ゾーンを通過することによる前記第一の信号の変調によって生じる、ステップと、
前記第二の信号を使って生データを生成するステップであって、前記生データが前記チェンバーを通過する粒子の生カウント、待ち時間カウント及び各粒子のサイズに相関する、ステップと、
粒子の補正カウントを得るために真の平均移行所要時間及び真の平均待ち時間を使って前記生データを処理するステップと、
を含む、粒子数の計数方法。
【請求項２】
前記粒子が生物学的粒子である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
前記粒子が血球である、請求項1に記載の方法。
【請求項４】
前記粒子が白血球である、請求項1に記載の方法。
【請求項５】
50％を超えて変動するサイズを有する複数の粒子を含有する試料が前記測定チェンバーを通過させられる、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
前記試料中の粒子濃度が高く、粒子間の平均時間が移行所要時間より小さい、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
前記粒子試料が、さまざまな試料間で50倍を超える粒子密度変動性を有すると予想されるものである、請求項1に記載の方法。
【請求項８】
前記真の平均移行所要時間が、前記第二の信号が閾値を上回る真の平均移行所要時間に一致する、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
前記真の平均待ち時間が、粒子が前記感知ゾーンに不在である真の平均時間に一致する、請求項1に記載の方法。
【請求項１０】
さらに、前記試料の粒度変動性を斟酌して生データを補正するために、平均周期補正法の計算及び強化同時計数補正計算を使用するステップを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
試料中の粒子数の計数装置であって、
1つまたはそれ以上のセンサであり、各センサが感知ゾーンを有する、センサと、
前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つに粒子を送り出すための粒子送り出しユニットであり、前記粒子が少なくとも1つの感知ゾーンを通過する、粒子送り出しユニットと、
前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つを通過する粒子のサイズを決定するため及びある一定時間に前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つを通過する粒子の数を決定するための粒子測定ユニットであり、前記センサが粒度信号を生成し、前記粒子センサが粒子数信号を生成する、粒子測定ユニットと、
前記粒度信号及び前記粒子数信号に基づいて前記試料中の前記粒子の前記平均移行所要時間を計算するための装置と、
粒子の補正カウントを得るために真の平均移行所要時間を真の平均待ち時間に加算することによって見かけの粒子数を調整粒子数に補正するための補正ユニットと、
を備える、粒子数の計数装置。
【請求項１２】
粒子数の計数装置であって、
入り口、出口及び前記入り口と前記出口の間に配置される粒子感知ゾーンを有するチェンバーと、
粒子を含有する流体を前記入り口から前記粒子感知ゾーンを通って前記出口の外まで通すためのポンプと、
前記粒子感知ゾーンに電流を通すために配置される電源と、
粒子が前記粒子感知ゾーンを通過するとき電流を測定するための電流検出器であり、該検出器が前記粒子感知ゾーンを通過する粒子の数及び前記粒子感知ゾーンを通過する粒子のサイズを示す生データを生成する、検出器と、
前記検出器からの生データを処理するためのプログラムであり、該プログラムが、真の平均移行所要時間を平均待ち時間に加算して真の平均周期値を求める機能を有する、プログラムと、
を備える、粒子数の計数装置。
【請求項１３】
前記プログラムが、前記試料中の粒度の変動性を斟酌して前記検出器からの生データを補正するために、平均周期補正法の計算及び強化同時計数補正計算を使用する、請求項12に記載の装置。
【請求項１４】
粒子数の計数方法であって、
複数の粒子をして粒子感知ゾーンを順次通過させるステップと、
ある一定時間前記粒子感知ゾーンに第一の信号を導くステップと、
前記粒子感知ゾーンから発する第二の信号を測定するステップであって、前記第二の信号が、前記粒子が前記粒子感知ゾーンを通過することによる前記第一の信号の変調によって生じる、ステップと、
前記第二の信号を使って生データを生成するステップであって、前記生データが、前記チェンバーを通過する粒子の生カウント、待ち時間及び各粒子のサイズに相関する、ステップと、
真の平均移行所要時間を使用することによって前記生データを処理することによって、同時計数補正を行うステップと、
を含む、粒子数の計数方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粒子の計数に関するものである。この方法は、特に高密度でサイズの変動性が高い粒子の試料の計数において有益である。
【背景技術】
【０００２】
多くの産業及び医療応用分野において、試料液に含有される粒子の濃度を決定する必要がある。この試料液は、一般的にいって、ほぼ最小限のサイズ及びこれより大きいサイズの1種類の粒子を含有する。これらの粒子は、計数対象の粒子を含む試料液の流体に電流が通っている開口を通過させることによって数えられる。粒子が開口を通過するとき、電気パルスが発生し、そのピーク電圧は粒子のサイズに比例する。このアナログ粒子電圧パルスはコンパレータ回路に与えられ、この回路は、コンパレータ閾値を超えると+5ボルト・レベルの粒子カウント・パルスを生成する。粒子カウント・パルス信号は、通常、粒子が閾値を超えるまでは0ボルトであり、信号が閾値を上回る限り+5ボルトとなり、粒子が開口感知ゾーンに存在しなくなるとゼロ・ボルトに戻る。この+5ボルトの粒子カウント・パルスがカウンタを駆動して、各粒子カウント・パルスごとに前縁または後縁でカウントを増す。
【０００３】
この計数方法は、低濃度の試料の場合には非常にうまく機能するが、高濃度の試料の計数の場合には非常に不正確である。高濃度の試料の場合過少計数の傾向がある。この過少計数は、主に、開口内における粒子の同時計数によって生じる。開口において複数の粒子が同時に感知され1つの粒子しか数えられないときに同時計数が生じる。その結果、高濃度試料の場合過少計数が生じる。
【０００４】
一般に、高濃度試料のカウントを改良するために、このような同時計数損失を補正するために、同時計数補正アルゴリズムが生カウントに応用される。もっとも基本的で効果的な統計的に導出された同時計数補正式の1つは、（Wynn and Hounslow−電気ゾーンCOULETR COUNTER）（登録商標）粒度アナライザの同時計数補正（Powder Technology, 93, 163-175(1997)、特にP.164、式1を参照のこと。この参照文献の内容全体が参照により本出願に組み込まれる）である。
【０００５】
【数１】
2004537724.tif 000003
【０００６】
TC=カウント/秒の単位で表される真の同時計数補正カウント
RC=生カウント
ESV=μLの単位で表される有効感知容積
FR=μL/秒の単位で表される流量
Z=秒の単位で表されるESV/FR
Zの値は、結果が線形になるまで調整される。パラメータZは、開口サイズ、流量及び平均粒度の関数である。
【０００７】
（2）FC=TC*(DR/FR)*CF
FC=カウント/μLの単位で表される最終カウント
DR=希釈比
CF=校正係数
この補正は、カウントをある程度は改良するが、高濃度の場合の損失はまだ非常に大きく、濃度がさらに高いと生カウントは濃度の増大に伴って増大せず、カウントが低くなる場合さえある。この同時計数補正式は、このような場合にはもはや有効ではない。このように非常に高い濃度の場合の生カウントを補正できるとしたら、同時計数補正アルゴリズムをより良く機能させることができるだろう。濃度の高い試料の場合の粒子損失を減少する別の方法が必要とされる。
【０００８】
試料をさらに希釈して検査しなおして、損失を減少し生カウントを改良することができるが、その結果、試料を再度検査しなければならないので、検査室の処理能力が減少するだろう。損失を減少して生カウントを改良するために計器希釈比を上げることができるが、その結果カウント時間が長くなり、計器の処理能力に影響するだろう。これは、また、カウント数の小さい通常の試料の場合カウントの精度を低下させる。これは、カウントの直線性を改良するための望ましい方法ではないだろう。
【０００９】
最適の解決法は最短時間で高濃度及び低濃度の試料について正確かつ直線的粒子数を得ることである。これは、異常細胞濃度対正常細胞濃度比が非常に高い（450,000：5000すなわち90：1）白血球などある種の試料の場合非常に難しい。正常白血球の処理能力及び精度を高めるために、希釈比は一般に低い（251対1）。この低い希釈が高濃度の白血球を非常に数えにくくする。
【００１０】
別のカウント補正の方法は、業界で周知である（Farrellに対する米国特許第4,447,883号を参照のこと。その内容全体が参照により本出願に組み込まれる）。この方法は、粒子間の平均時間または計数対象の粒子の流れの合計待ち時間を計算し、補正カウントを平均待ち時間の逆数に等しく設定する。基本的な理論式は、秒あたりの度数またはカウントが粒子パルス・ストリームの平均周期の逆数に等しい、というものである。
【００１１】
この方法は、開口サイズ、粒度及び移行所要時間の効果を無視できると仮定している。この方法は、待ち時間が同時計数によって失われるカウントに関する情報を含んでいることを踏まえた上で成り立つ。2つの粒子が密着しすぎて開口を通過する場合、1つのカウントが失われる。しかし、2つの粒子は開口を通過するために最高2倍の時間かかる。これが合計待ち時間を減少し、真のカウントを増大させる。
【００１２】
この方法で測定される合計移行所要時間は、さまざまな同時計数イベントによって効果を損ねる。従って、平均移行所要時間は合計移行所要時間を生カウントで割ることによって正確に決定することはできない。
【００１３】
合計待ち時間は、まったく粒子が存在しない時間の正確な測定値である。したがって、合計待ち時間を生カウントで割ることによって導出される平均待ち時間は、実質的に信頼できる測定値である。また、合計待ち時間は、合計移行所要時間を測定し、合計カウント時間からこれを差し引くことによって計算することができる。
【００１４】
上述の2つの方法を含めて現在の方法においては、1つの重要なパラメータが十分に扱われていない。これは、粒度が適切な同時計数補正に対して持つ影響についての考証である。上記の2つの方法は、異なるサイズの粒子が開口を通過する場合には適切に作用しないだろう。同時計数補正法は、有効感知容積を決定するために固定平均粒度を使用する。粒度が試料ごとに異なる場合、公式は適切に作用しなくなる。待ち時間カウント補正法は、式に真の合計移行所要時間を含まない。この方法が合計移行所要時間を測定するにしても、合計待ち時間を計算するためにしかこの情報を使用しない。測定される合計移行所要時間は、同時計数によって効果を損ない、真の移行所要時間の適切な測定値ではない。この方法は、また、異なるサイズの粒子にはうまく機能しない。これは、白血球などの試料タイプには重要なことである。白血球は、一般に広範囲の粒度を有する。多数のサイズの粒子を含む高濃度の試料において補正法を適切に作用させるためには、補正法に粒度の影響を含めなければならないのは明らかである。ほとんどのカウント・システムは、計数対象の粒子に関するサイズ・ヒストグラムも生成する。計数対象の母集団の平均サイズは、ヒストグラムから決定することができる。
【００１５】
さまざまな同時計数補正法がWales and Wilson（The Review of Scientific Instruments, Vol. 36, No.10, p.1132-1136(1961)、Princen and Kwolek（The Review of Scientific Instruments, Vol. 36, No.5, p.646-653(1965)、Feierその他に対する米国特許第4,580,093号、Bergその他に対する第5,247,461号及びJones, Jr.に対する第5,452,237号において説明されている。
【００１６】
ほとんどのカウント補正法は、補正を行うために1つの技法しか拠り所にしていない。各々の技法から得られるより穏やかな補正によってより直線的な（正確な）最終結果を得るために、複数の技法を利用することが望ましいだろう。
［発明の要約］
本発明は、多様な粒度及び多様な濃度（高濃度は精度を低下させることが多い）の試料に関してより優れた粒子数直線性（より高い精度）を持つ改良された粒子数補正法に関するものである。
【００１７】
これは、粒子の計数方法を提供することによって実施され、この方法は、複数の粒子をして粒子感知ゾーンを順次通過させるステップと、ある一定時間前記粒子感知ゾーンに第一の信号を導くステップと、前記粒子感知ゾーンから発せられる第二の信号を測定するステップであり、前記第二の信号が、前記粒子が前記粒子感知ゾーンを通過することによる前記第一の信号の変調によって生じる、ステップと、前記第二の信号を使って生データを生成するステップであり、前記生データが前記チェンバーを通過する粒子の生カウント、待ち時間カウント及び各粒子のサイズに相関する、ステップと、粒子の補正カウントを得るために真の平均移行所要時間及び真の平均待ち時間を使うことによって前記生データを処理するステップと、を含む。
【００１８】
別の実施態様においては、本発明は、試料中の粒子の計数装置に関するものであり、この装置は、各々が感知ゾーンを有する1つまたはそれ以上の粒子センサと、前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つに粒子を送り出すための粒子送り出しユニットであり、前記粒子が少なくとも1つの感知ゾーンを通過する、送り出しユニットと、前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つを通過する粒子のサイズを決定するため及びある一定時間に前記粒子感知ゾーンのうち少なくとも1つを通過する粒子の数を決定するための粒子測定ユニットであり、前記センサが粒度信号及び粒子数信号を生成する、測定ユニットと、前記粒度信号及び前記粒子数信号に基づいて前記試料中の前記粒子の平均移行所要時間を計算するための装置と、粒子の補正カウントを得るために真の平均移行所要時間を真の平均待ち時間に加算することによって見かけの粒子数を調整粒子数に補正するための補正ユニットと、を備える。
【００１９】
さらに別の実施態様においては、本発明は、粒子の計数装置に関するものであり、この装置は、入り口、出口及び前記入り口と前記出口の間に配置される粒子感知ゾーンを有するチェンバーと、粒子を含有する流体を前記入り口から前記粒子感知ゾーンを通って前記出口の外まで通すためのポンプと、前記粒子感知ゾーンに電流を通すために配置される電源と、粒子が前記粒子感知ゾーンを通るとき電流を測定するための電流検出器であり、この検出器が前記粒子感知ゾーンを通過する粒子の数及び前記粒子感知ゾーンを通過する粒子のサイズを示す生データを生成する、検出器と、前記検出器からの生データを処理するためのプログラムであり、このプログラムが真の平均移行所要時間を平均待ち時間に加算して真の平均周期値を得る機能を有する、プログラムと、を備える。
【００２０】
さらに別の実施態様においては、本発明は、真の平均移行所要時間を真の待ち時間に加算することによって待ち時間カウント補正法を改良して、白血球など広範囲の細胞サイズを有する試料についてより正確なカウントを生じる真の平均周期値を与える。これは、より正確に言うと、平均周期カウント補正法である。真の平均移行所要時間は試料母集団のサイズ・ヒストグラムの平均値及び粒子移行所要時間と平均サイズを関係付ける式から導出される。この式は、計数機器から経験的に導出され、開口サイズ、粒子サイズ及び流量の関数である。
【００２１】
この方法は、また、生カウントを補正するために平均周期カウント補正法及び強化同時計数補正式の両方を使用する。各々がカウントに対して持つ補正の量を調整するためにそれぞれの方法において調整係数FTCF、BaseZ及びCCRFTが使用される。
【００２２】
平均周期補正法公式
APC=平均周期カウント
CT=秒の単位で表されるカウント時間
RC=1回のCTに関する生カウントまたは複数のCTから得られる平均
WTC=1回のCTに関する待ち時間カウントまたは複数のCTから得られる平均
CTClk＝カウント/秒の単位で表されるカウント時間クロック
AFT=マイクロ秒の単位で表される平均移行所要時間
（カウント変換10はカウント/マイクロ秒の単位で表される）
FTCF＝移行所要時間補正係数
【００２３】
【数２】
2004537724.tif 000004
【００２４】
強化同時計数補正式
TC=真のカウント
APC=平均周期カウント
BaseZ=同時計数補正を制御するための主係数
CCRFT=同時計数補正移行所要時間係数
Z=BaseZ + (AFT*CCRFT)（粒度に関する補正を含む）
【００２５】
【数３】
2004537724.tif 000005
【００２６】
［望ましい実施態様の詳細な説明］
定義
本出願においては、文脈上他の意味を示さない限り、下記の用語及び略語は下記の意味を有する：
平均周期法：  高レベルの同時計数損失が存在する場合に粒子数を補正するための方法。この方法は、計数対象の粒子の導出平均周期の逆数から補正粒子数を生成する。この方法は、計器に異なるサイズの粒子が通されるとき自動的にカウントを補正する。この方法は、粒子濃度が非常に高くなるまではうまく機能する。
【００２７】
強化同時計数補正法：  高レベルの同時計数損失が存在する場合に粒子数を補正するための方法。この方法は、粒度に基づいて必要な補正の量の調整を行えるように平均移行所要時間を含めるために強化された標準同時計数補正アルゴリズムから補正粒子数を生成する。この方法は、異なるサイズの粒子が計器に通されるとき自動的にカウントを補正する。この方法は、濃度が非常に高くなるまでは生カウントに対して単独でうまく機能する。
【００２８】
平均周期カウント（APC）：  平均周期補正法から導出される補正粒子数。これは、生カウントを補正するために生カウント、待ち時間カウント及びサイズ・ヒストグラムを使用する。
【００２９】
真の同時計数補正カウント（TC）：  強化同時計数補正法から導出される補正粒子数。直線性及び精度を改良するために、平均周期カウントに応用される。
【００３０】
最終カウント：  カウント/μLの単位で最終粒子数の結果を得るために、真のカウントに計数逓減率（DR/FR）及び校正係数を掛けたもの。
【００３１】
補正係数（FTCF、BaseZ、CCRFT）：  これらの補正係数は、さまざまな濃度のさまざまなサイズのラテックス・ビーズ溶液並びに血液制御物質を使用することによって、経験的に並行して決定される。1つの試験液には1つのサイズのビーズしか使用されない。補正係数は、さまざまなサイズの試験粒子についてカウント直線性が最適化されるまで、調整される。どの計器にも、許容可能な結果を生じる比例値のセットが多数ある。異なる計器は、開口サイズ、粒度及び流量に応じて異なる係数を必要とする。補正係数の例として下記のものがある：
移行所要時間補正係数（FTCF）：  この係数は、平均周期法によって行われる補正の量を調整する。
【００３２】
BaseZ：  この係数は同時計数補正アルゴリズムによって行われる補正の量を調整する。
【００３３】
移行所要時間からの同時計数補正係数（CCRFT）：  この係数は、導出された平均移行所要時間を使って同時計数補正アルゴリズムの補正の量を調整する。
【００３４】
カウント時間（CT）：  開口において粒子が数えられる時間。この方法の望ましいカウント時間は、ヒストグラム・サイズ処理が完全であるか否かに応じて4回から10回反復される1秒間である。ただし、技術上周知のその他の適切なカウント時間を使用することもできる。秒あたりのカウントに関する情報を持つことは、問題のデバックのために非常に有益である。また、他のものと著しく異なるカウントを排除することも可能である。これによって、気泡またはつまりによる断続の問題を取り除くことができる。
【００３５】
生カウント（RCまたはARC）：  丁度1カウント時間にカウント・パルスの立上りまたは立下りによって増加するカウンタの合計カウント。生カウントは図2Bに示されている。このカウントはバッファに記憶され、毎秒ごとにリセットされる。その後、システムはバッファに入れられた各値を読み出す。カウント時間が複数回反復される場合、この値は複数カウントの平均とすることができる。
【００３６】
カウント時間クロック（CTClk）：  開口感知ゾーンに全く粒子が存在しないとき待ち時間カウンタのカウントを増加するために使用されるクロック。これは、カウント/秒の単位で表される。例えば、10MHzクロックCTClk＝10,000,000カウント/秒である。10MHzクロック・パルスのグラフ表示の例が図2Cに示されている。これは、待ち時間カウントを秒数に変換するために使用される。
【００３７】
待ち時間：  現在の粒子が開口感知ゾーンを出てから次の粒子を待つために費やされる時間。これは、図2Aにおいて示されるとおり開口において粒子が感知されずカウント信号が低い、2つの粒子の間の時間である。
【００３８】
待ち時間カウント（WTC）：  カウント時間中開口に全く粒子が存在しないとき固定周波クロックからのカウントを増加することができるカウンタからの合計カウント。カウント時間が複数回反復される場合、この値は複数カウントの平均とすることができる。デジタル・カウント・パルス及びカウント時間クロックと関連する待ち時間カウントのグラフ表示が図2B−2Dに示されている。
【００３９】
合計待ち時間（TWT）：  カウント時間中に開口有効感知容積において十分なサイズの粒子が全く存在しない合計時間。これは、閾値を超えるアナログ・パルス間の全てのスペースの合計である。TWT=WTC/CTClk。これは、移行所要時間のように高濃度のときに効果を損ねることがないので、粒子間の合計時間の測定値である。
【００４０】
移行所要時間（パルス幅）（FT）：  結果として生じるアナログ・パルスがカウント閾値を上回るように1つの粒子が開口有効感知容積において感知される時間。図2Aに示される通り、これは、十分なサイズの1つの粒子が開口を通過するとき感知される時間である。これは、アナログ・パルスがカウント閾値を上回る点及びその後下回る点で測定される、アナログ・パルスのパルス幅時間に等しい。
【００４１】
移行所要時間カウント（FTC）：  1つの粒子がカウント時間中開口に存在するとき固定周波クロックからのカウントを増加できるカウンタからの合計カウント。
【００４２】
合計移行所要時間（TFT）：  カウント時間中開口有効感知容積に十分なサイズの1つの粒子が存在する合計時間。これは、閾値を超える全てのアナログ・パルス幅の合計である。典型的な式は、TFT1=FTC/(CTClk*CT)である。この測定値は、高濃度の場合同時計数イベントによって効果を損ない、粒子の真の合計移行所要時間の適切な測定値ではない。本発明の新規の方法は、平均移行所要時間及び生カウントを使って、真の合計移行所要時間のより正確な推定値を示す。TFT2＝(RC*10*AFT)/(CTClk*CT)
平均チャネル（AC）：  これは、256チャネル・サイズ・ヒストグラムから導出されるチャネル番号（0から255まで）である。このチャネル番号は、計数対象となった粒子の平均サイズを表す。
【００４３】
平均移行所要時間（AFT）：  これは、計数対象となった粒子の推定される真の平均移行所要時間またはパルス幅である。これは、粒子パルスがカウント閾値を上回った平均時間である。これは、平均チャネル、及びチャネル番号をパルス幅または移行所要時間に変換する経験的に導出される式から導出される。試料中の粒子が1つのサイズのものであっても、広範囲のサイズ変動幅を持っていても、問題ではなく、平均移行所要時間値はカウントを直線化する。
【００４４】
Z：  これは、本発明に従った方法において使用される同時計数補正式に使われる主要な補正係数である。これは、基本的に1つの粒子が開口感知ゾーンに存在する平均時間に等しい。一般には、これはマイクロ秒の単位で表される。この値は、ESVすなわち有効感知容積及びFRすなわち流量によって決定される。式はZ(s)=ESV(μL)/(FR(μL/s)である。
【００４５】
有効感知容積（ESV）：  これは、有効開口容積プラス粒度による有効容積の増加から成る、マイクロリットルの単位で表される容積である。粒子は実際に開口に存在する前に感知されるので、有効開口容積は実際より大きいように見える。大きい粒子は小さい粒子より感知ゾーンに長くいる。容積のこの部分は粒子のサイズに応じて変動的である。一般に、粒子の平均サイズが使用される。上述の強化補正法は、粒度変動に関する補正を含む。
粒子試料
本発明は、特に、高密度の（または著しい密度変動の可能性のある）かつ（または）粒度変動の大きい試料中の粒子の計数に応用される。例えば、本発明は、粒子濃度が高くて粒子間の平均時間が移行所要時間より小さい試料に特に有益である。開口を通過するときの細胞密度は（（450,000個/μL）/251）/1.12（係数）＝1600細胞/マイクロリットルである。白血球のサイズは30から450フェムトリットルまで変動する。LH-750TMにおいて、これは、それぞれ15から30マイクロ秒の移行所要時間に相当する。WBC流量は40マイクロリットル/秒である。450,000WBC個の血液の平均粒子計数率＝（（WBC*FR）/DR）/計算係数＝（（450,000個/μL*40μL/s）/251）/1.12=64,029である。これは、細胞が等間隔で開口を通過する場合の平均細胞周期1/64,029＝15.6マイクロ秒に相当する。このような高濃度の場合、細胞が等間隔に通過すると細胞が近寄りすぎて1つの細胞しか感知されないことは明らかである。白血球のパルス幅は細胞の平均間隔と同じかこれより大きい。それは、カウントを回収できるのは細胞が無作為に間隔を取るからに他ならない。試料に高密度及び粒度の高変動性の両方が存在する場合、現在の方法では、粒子数カウントが不正確になることがしばしばある。しかし、本発明は、実質的に均等の粒度配分の試料にも有効である。
【００４６】
望ましい実施態様においては、計数対象の粒子は白血球または赤血球などの血液細胞である。ただし、本発明は、特に粒度の変動及び粒子密度の変動が予想される多様なタイプの粒子の計数に応用できる。計数可能な他のタイプの粒子の例としてはラテックス粒子及びその他の生物学的または工業的粒子がある。本発明の望ましい実施態様は、一定の最小サイズ及びそれ以上のサイズを有する単一のタイプの粒子または細胞の計数に応用される。
【００４７】
血小板の計数は、通常これより大きい赤血球が同時に存在して、PLTカウントを著しく減少させる可能性があるので特に難しい。赤血球は、PLTが赤血球と一緒に開口を通るときPLTカウントの同時計数損失を引き起こす。同一槽内で赤血球を数える場合本発明を血小板係数に応用するために、式（4）は、赤血球の存在による同時計数損失を反映するように修正する必要がある。
【００４８】
白血球は、通常赤血球及び血小板よりサイズの変動が大きいので、本発明は、特に白血球の計数に適合する。例えば、「正常な」血液試料（感染症を持たない者から採取された試料）において、白血球は、50%以上のサイズの変動があることが多く、100％以上変動する可能性がある（小さいほうの血液細胞が測定変動の基準サイズとなる）。異常な血液においては、白血球のサイズは、病気の性質に応じて大きく変動しうる。試料によっては、図9に示されるような小さい白血球を含み、試料によっては図8に示されるような大きい白血球を含む。図6及び7も参照のこと。このように、本発明は、白血球のサイズが広範囲に変動する（50fLから400fLまで）試料のより正確な計数を可能にする。
【００４９】
さらに、白血球の数（密度）は「正常な」（無感染）患者と「異常な」（感染）患者とでは大きく変動する可能性がある。例えば、感染患者の白血球の数は正常な患者の白血球の数の90倍にもなる可能性がある。このように、本発明は、2倍またはそれ以上、望ましくは10倍またはそれ以上、より望ましくは75倍またはそれ以上、さらには100倍またはそれ以上の濃度差を持つことが予想される試料のより正確な計数を可能にする。このように、粒子カウンタは低密度試料（正常な者から採取したもの）及び高密度試料（感染者から採取したもの）の白血球を同じ試験条件の下で正確に数えることができる。これによって、異常に高い数の細胞が検出される場合、より正確な値を得るために試料を（希釈後）機械に再び通す必要がなくなる。
望ましい実施態様
図1に示される通り、粒子計数装置2のセンサは、粒子感知ゾーンに在る粒子のサイズ及びある一定時間に粒子感知ゾーンを通過する粒子の数に関する測定を行う。センサは、COULTER COUNTER（登録商標）または技術上周知のその他の適切な粒子計数装置など粒子計数装置2の中に在る場合がある。このような装置の場合、導電性媒体（通常、食塩水）に浮遊する粒子は、粒子懸濁液に電流が流れる小さい穴または開口を通過させることによって測定される。これが粒子感知ゾーンである。粒子感知ゾーンを通過する粒子は、導電率の減少を引き起こす。センサは導電率の変化を電圧パルス（粒子パルス信号）に変換するので、このパルスを数えることができる（図2A及び2Bを参照のこと）。パルスの大きさ（振幅）は、粒子の体積にほぼ比例する。2つの粒子が粒子感知ゾーンを同時に（または非常に接近して）通過する場合、この2つの粒子は単一の粒子として数えられる可能性がある（図2Aを参照のこと）。これが「同時計数損失」として知られるものである。
【００５０】
各COULER COUNTERまたはその他の粒子計数装置は、1つまたはそれ以上の開口及び各開口に対応するセンサを有する。
【００５１】
粒子計数装置2のセンサは前置増幅器4に接続され、前記増幅器はセンサが生成する出力粒子パルス信号を受信する。前置増幅器4は、信号を増幅して、アナログ電圧信号Vsig 6を生成する。前置増幅器4は、またコンパレータ8、ピーク検出器26及び制御＆エディタ回路30にも接続される。
【００５２】
コンパレータ8は、前置増幅器4、ANDゲート20及び粒子カウンタ12に接続される。コンパレータ8は、前置増幅器4からVsig 6を受信し、Vsig 6を閾値Vth（図2Aに示される）と比較して、閾値Vthを上回るVsigの部分を表すデジタル信号10を生成する。コンパレータ8のデジタル信号10は粒子カウンタ12及びANDゲート20によって受信される。
【００５３】
粒子カウンタ21はコンパレータ18及び平均生カウント・ジェネレータ14に接続される。粒子カウンタ12は、信号10の各パルスの立上りまたは立下りによって増加する生カウントを生成する。
【００５４】
平均生カウント・ジェネレータ14は、粒子カウンタ14から出力される生カウントを受信し、平均生カウントARCを生成する。
【００５５】
クロック18（10MHzクロックが望ましい）は、ANDゲート20に接続される。ANDゲートはコンパレータ8からの信号10及びクロック18からの信号を受信する。ANDゲート20は、クロック信号がANDゲート20を通過することをデジタル信号10が許容する場合クロック18からの信号を出力する。
【００５６】
待ち時間カウンタ22はANDゲート20及び平均待ち時間カウント・ジェネレータ24に接続され、クロック信号がANDゲートから出力されるとき、待ち時間カウンタ22は待ち時間カウントを増加する。
【００５７】
平均待ち時間カウンタ24は待ち時間カウンタ22及び平均周期カウント・ジェネレータ16に接続される。平均待ち時間カウント・ジェネレータ24は、待ち時間カウンタ22から待ち時間カウントを受信し、平均待ち時間カウントAWTCを生成する。
【００５８】
ピーク検出器26は、前置増幅器4、制御＆エディタ回路30及びアナログ-デジタル変換器28に接続される。ピーク検出器は、前置増幅器4からVsig 6を受信して、アナログ-デジタル変換器28にパルスのピーク値の振幅Vpkを出力する。Vsig及びVpkは、制御＆エディタ回路30にも出力される。
【００５９】
制御＆エディタ回路30は、ピーク検出器26およびバッファ32に接続される。制御＆エディタ回路30は、Vpk及びVsigを受信し、これらを比較して、当業者には周知の適切な技法によってパルスを編集する。制御＆エディタ回路はデータ・バッファ32に良好な細胞のサイズ・データのみを記憶するために良好な細胞の書き込みパルスを生成する。
【００６０】
デジタル変換器28は、バッファ32に接続され、Vpkデータを受信し、デジタル・サイズ・データを生成する。このデータはデータ・バッファ32に記憶される。
【００６１】
データ・バッファ32はチャネライザ34にも接続される。チャネライザは、良好な細胞のデジタル・サイズ・データなどバッファ32に記憶されるデータを読み出して、チャネル・サイズ・ヒストグラムを生成することができる。チャネル・サイズ・ヒストグラムの例が図6−9に示されている。
【００６２】
チャネライザは、また、チャネライザ34からチャネル・サイズ・ヒストグラムを受信してヒストグラムを平滑化するスムーザ36にも接続される。
【００６３】
ヒストグラム平均値＆並数ジェネレータ38は、スムーザ36及び平均チャネル・ジェネレータ40に接続される。ヒストグラム平均値＆並数ジェネレータ38は、スムーザ38から平滑化されたヒストグラムを受信し、平均母集団サイズの推定値を生成する。
【００６４】
平均チャネル・ジェネレータはヒストグラム平均値＆並数ジェネレータから平均母集団サイズの推定値を受け取り、平均チャネル・サイズACを出力する。
【００６５】
平均移行所要時間ジェネレータ42は、平均チャネル・ジェネレータ40、Z係数ジェネレータ及び補正平均移行所要時間ジェネレータ44に接続される。平均チャネル・サイズACは平均移行所要時間ジェネレータ42の入力として受信され、平均移行所要時間ジェネレータ42は平均チャネル・サイズを平均移行所要時間/パルスAFTに変換する。
【００６６】
平均移行所要時間AFTは、補正平均移行所要時間ジェネレータ44及びZ係数ジェネレータ46の両方によって受信される。補正平均移行所要時間ジェネレータ44は、ここに記憶される移行所要時間補正係数を平均移行所要時間AFTに掛けて、補正平均移行所要時間CAFTを生成する。
【００６７】
平均周期カウント・ジェネレータ16は、補正平均移行所要時間ジェネレータ44、平均生カウント・ジェネレータ14及び平均待ち時間カウント・ジェネレータ24に接続され、この3つのジェネレータ44、14及び24全ての出力を使って、平均周期カウントAPCを計算する。
【００６８】
Z係数ジェネレータは、平均移行所要時間ジェネレータ42及び同時計数補正カウント・ジェネレータ48に接続され、平均移行所要時間ジェネレータ42から平均移行所要時間AFTを受信し、移行所要時間CCRFT及びBaseZ係数から同時計数補正係数の入力を受信する。これらの入力を使用して、Z係数ジェネレータはZ係数を計算して、同時計数補正カウント・ジェネレータ48にZ係数を出力する。
【００６９】
同時計数補正カウント・ジェネレータ48は、平均周期カウント・ジェネレータ16並びにZ係数ジェネレータ46に接続され、平均周期カウント・ジェネレータによって出力される平均周期カウントAPC及びZ係数ジェネレータ46によって出力されるZ係数を受信する。平均周期カウントAPC及びZ係数を使用して、同時計数補正カウント・ジェネレータ48は、データについて同時計数補正計算を行い、真のカウントTCを出力する。
【００７０】
真のカウントは、同時計数補正カウント・ジェネレータ48に接続される乗算器50によって受信される。乗算器50は、データを変換しスケール変更して、試料中の白血球など計数対象の粒子の最終カウント52を生成する。
【００７１】
上述の通り、粒子センサは、COULTER COUNTERまたは技術上周知のその他の適切な粒子計数装置の一部とすることができる。前置増幅器4、コンパレータ8、粒子カウンタ12、クロック18、ANDゲート20、ピーク検出器26、アナログ-デジタル変換器28及び制御＆エディタ回路30も、ハードウェア・コンポーネントとしてCOULTER COUNTERまたはその他の適切な粒子計数装置の一部とすることができる。待ち時間カウンタ22は、COULTER COUNTERまたはその他の適切な粒子計数装置内のマイクロプロセッサによって操作されるハードウェアまたはソフトウェア・コンポーネントとすることができる。平均生カウント・ジェネレータ14、平均待ち時間カウント・ジェネレータ24、平均周期カウント・ジェネレータ16、チャネライザ34、スムーザ36、ヒストグラム平均値ジェネレータ38、平均チャネル・ジェネレータ40、平均移行所要時間ジェネレータ42、補正平均移行所要時間ジェネレータ44、Z計数ジェネレータ46、同時計数補正カウント・ジェネレータ48及び乗算器50は、COULTER COUNTERまたはその他の適切な粒子計数装置と結合されるコンピュータ・システム、コンピュータまたはマイクロプロセッサに組み込まれ実行されるソフトウェア・アプリケーションである。
【００７２】
本発明は、当業者には分かるだろうが、代わりのさまざまな実施態様を持ちうることを特記しておく。例えば、コンパレータ8、粒子カウンタ21、ピーク検出器26、制御＆エディタ回路30及び待ち時間カウンタ22の各々については、ハードウェアの代わりに、ソフトウェア・アプリケーションを利用することができる。さらに、ソフトウェア・アプリケーションを1つまたはそれ以上のコンピュータ・プロセッサまたはマイクロプロセッサに組み込むことができる。
【００７３】
下に、本発明の望ましい動作方法を3つの開口を持つLH-750においてWBCパラメータにいかに応用するかについての例を示す。これは、他のパラメータ、例えば白血球、任意の数の開口及び他の適切な粒子計数装置にも同様に応用することができる。
【００７４】
この方法は、LH-750の3つの開口のうち1つの開口について説明されている。ただし、同様の処理が各開口について行われる。各開口から得られるデータは、その後、下で説明される通り最終カウントを生成するために乗算器50によってまとめられる。
ステップ1：生カウント及び待ち時間カウント・データの入手
図1に示される通り、粒子計数装置2の中のセンサは、センサの開口を通過する粒子に対応する波形信号（粒子パルス信号）を生成する（図2A−2Dも参照のこと）。電圧波形信号は、時間の関数として開口を通過する粒子を表す。電圧は粒子のサイズの影響を受ける。センサからの波形信号は、信号を最高約10ボルトまで増幅するために前置増幅器4に送られる。増幅されたアナログ電圧信号6（Vsig）は、前置増幅器4からコンパレータ8に送られ、ここで、アナログ信号はデジタル信号に変換される。図2Aに示される通り、一定の電圧閾値（Vth）を下回る全ての信号はコンパレータ8において取り除かれる。コンパレータ8からの信号10は生カウントを生成するために粒子カウンタ12に送られ、ここで粒子は1秒間のカウント時間の間数えられる。平均生カウント・ジェネレータは粒子カウンタ12からの生カウントを使って平均RCを生成する。平均RCは複数の生カウント（4−10個の生カウントなど）を平均化することによって計算される。例えば、4つの1秒間生カウントまたは10個の1秒間生カウントを平均化して平均RCを生成することができる。
【００７５】
平均RCは、その後平均周期カウント（APC）が生成ための3つの入力のうちの1つとして使用される。注：他の値と比較して不均等であることを根拠にして任意の1秒間値を除外することができる。
【００７６】
デジタル信号10が低ボルトまたはゼロ・ボルトで、十分なサイズの粒子が感知ゾーンにないことを示す場合、カウント時間クロック18（すなわち、10MHz定周波クロック）がANDゲート20を通過して待ち時間カウンタ22を増加できるようにするためにも、コンパレータ10からのデジタル信号10が使われる。カウント時間の終了時のカウンタの値が待ち時間カウントである。平均待ち時間カウント・ジェネレータ24は、待ち時間カウンタ22からの待ち時間カウントを使って、平均WTCを生成する。平均WTCは、複数の待ち時間カウント（4−10個の待ち時間カウントなど）を平均化することによって計算される。例えば、4つの1秒間待ち時間カウントまたは10個の1秒間待ち時間カウントを平均化して、平均WTCを生成することができる。平均WTCは、その後平均周期カウント（APC）を生成するための3つの入力のうちの1つとして平均周期カウント・ジェネレータ16によって使用される。注：他の値と比べて不均等であることを根拠として任意の1秒間値を除外することができる。
【００７７】
これは、少なくとも合計移行所要時間測定値を合計カウント時間から差し引くことによって時間を導出する代わりに粒子間の時間が直接測定される点で、前に参照した米国特許4,447,883号と異なる。
ステップ2：平均周期法を使用する生カウント値の補正
平均移行所要時間（AFT）または平均パルス幅は、待ち時間のように、合計移行所要時間測定値及び生カウントから導出できない。合計移行所要時間測定値は、同時に開口を通過する同時計数粒子のために効果を損ねる。平均移行所要時間を計算するためには、まず平均細胞サイズを推定しなければならない。
【００７８】
このために、アナログ信号が、パルスのピーク値（Vpk）または振幅を記憶するピーク検出器26に送られる。アナログ・パルスの振幅は粒度に比例する。Vpkはアナログ-デジタル変換器28に送られ、ここでアナログVpk値に比例するデジタル信号が生成される。アナログ信号6及びVpkは制御＆エディタ回路30にも送られ、ここで、パルスの編集を行うためにリアルタイム信号がピーク信号と比較される。この編集プロセスは、技術上周知であり、異常なアナログ波形を持つ粒子を排除する。例えば、参照により本出願に組み込まれる米国特許第3,710,264号を参照のこと。これは、計数対象となった試料母集団の真の表示であるサイズ・ヒストグラムを作るのに役立つ。データ書き込み信号は、良好な細胞についてのみパルスとして送られるので、不良の細胞は拒絶されてデータ・バッファ32には書き込まれない。回路30からのデータ書き込み信号が送られると、変換器28からのデジタル・サイズ値はデータ・バッファ32に記憶される。データ・バッファ32は、制御＆エディタ回路30によって決定される通りに各良好な細胞のサイズ情報を記憶する。
【００７９】
チャネライザ34、スムーザ36、ヒストグラム平均値＆並数ジェネレータ40及び平均チャネル・ジェネレータ40は、当業者には周知の方法を使って動作する。
【００８０】
バッファ32に記憶されたデジタル・サイズ・データは、チャネライザ34によって読み出され、サイズ・ヒストグラムにチャネル化される。チャネライザ34は、デジタル・サイズ値のスケールを変更し、スケール変更されたデジタル・サイズを使って、256バイト配列のバイトすなわちチャネルのうち1つを選択して増加する。これによって、サイズまたは度数ヒストグラムが生成される。サイズ・ヒストグラムの例が図6−9に示されている。
【００８１】
34に示される通り全ての粒子のチャネル・ヒストグラムから、感知ゾーンを通過した全ての粒子の平均的平均サイズを計算することができる。スムーザ36は、適切な標準平滑化アルゴリズムを使用してサイズ・ヒストグラムを平滑化する。
【００８２】
平均値及び並数値は、下の式5及び6を使ってヒストグラム平均値＆並数ジェネレータ38によって平滑化ヒストグラムから生成される。ただし、真の母集団サイズの適切な推定値を示す当業者に既知の任意の方法を使用することができる。この例においては、ヒストグラム並数＆平均値チャネルの平均が使用される。平均チャネル・ジェネレータ40は式7を使って、平均チャネルを生成する。この計算は、同時計数及び信号処理によるヒストグラムのゆがみを補正する。目標は、計数対象の粒子の真の平均サイズのできる限り適切な推定値を得ることである。
【００８３】
【数４】
2004537724.tif 000006
【００８４】
平均移行所要時間ジェネレータ42は、経験的に導出される式を使って平均チャネルを平均移行所要時間/パルスに変換する。粒度と粒子パルス幅の間の関係は、特定の開口サイズ及び流量ごとに特徴付けなければならない。計器にさまざまなサイズの粒子が通され、粒度とパルス幅の間の関係が特徴付けられる。各計器は異なる帯域幅及び処理能力を持ち、これがパルス幅時間に影響するので、上記の値は計器と相関する。各システムは、それぞれ粒度とパルス幅時間の間に異なる特徴的関係を持ち得る。
【００８５】
平均チャネルACから平均移行所要時間AFTへの変換にはさまざまな式を使用することができる。下に示すのはそのうち2つの式の例である：
（8a）AFT=15.47 + (AC/13.7)及び
（8b）AFT=7.3983*Ln(AC)-10.431
補正平均移行所要時間ジェネレータ44は、平均移行所要時間にFTCF相関係数を掛けて、CAFTすなわち平均補正移行所要時間を求める。この計算が式9として例示されている。
【００８６】
FTCF＝移行所要時間補正係数＝0.59（これは、Beckman Coulter LH-750を使ったラテックス・ビーズの実験から決定された。これによって補正の量を調整することができる。ただし、他の適切な移行所要時間補正係数を利用することができる）。
【００８７】
（9）CAFT=補正平均移行所要時間＝FTCF*AFT=0.59*AFT
平均移行所要時間ジェネレータによって生成されるCAFTは、平均周期カウント・ジェネレータ16がAPC値を計算するために使用する3つの入力のうちの1つである。
【００８８】
平均周期カウント・ジェネレータ16は、下記の式を使ってAPC値を生成する。平均周期カウント一般式は下記の通りである：
APC=ARC(14からの平均生カウント)/APT(平均周期時間)
平均周期時間式は下記の通りである：
APT=TWT(合計待ち時間)+TFT2
ここで、
TWT=合計待ち時間＝WTC(24から)/(CTClk*CT)であり、
また、
TFT2＝合計移行所要時間＝（CAFT(44から)*10*RC(14から) /(CTClk*CT)である。
CAFTはマイクロ秒の単位で表されるので、待ち時間カウントが表される単位である100nsの単位で示すには10を掛けなければならない。その代わりに、APT式を下記の通りに書くことができる：
APT=(WTC+(CAFT*10*RC)) /(CTClk*CT)
平均周期カウント・ジェネレータ16が使用する最終式は下記の通りである：
（10）APC=RC/((WTC+(CAFT*10*RC)) /(CTClk*CT))
ステップ3：平均周期補正カウントの同時計数補正
APC及びZを使用することによってデータがさらに同時計数補正カウント・ジェネレータ48によって補正される。
【００８９】
Z係数は主要な調整係数であり、式11を使ってZ係数ジェネレータ46によって生成される。
【００９０】
（11）Z=BaseZ+(ATF*CCRFT)=34.35*10＾-6+（AFT*-0.3*10＾-6）、
ここで、
BaseZ=Z基準値＝34.35*10＾-6（ラテックス・ビーズを使った実験で決定された）
AFT=ステップ2（図1の42）から得られる平均移行所要時間
CCRFT=移行所要時間から得られる同時計数補正係数＝-0.3*10＾-6（ラテックス・ビーズを使った実験で決定された）
Z基準値及び同時計数補正係数は実験によって決定されるが、これらの係数は、適切な補正係数の例であり、他の適切な係数を使用することができる。
【００９１】
同時計数補正カウント・ジェネレータ48は、式12を使って真のカウントTCを生成する。
【００９２】
【数５】
2004537724.tif 000007
【００９３】
ここで
TC=真の同時計数補正カウント
APC=平均周期カウント
乗算器50は、同時計数補正カウント・ジェネレータ48から真のカウントTCを受信する。図1は同時計数補正カウント・ジェネレータ48から乗算器50まで1本のライン54しか示していないが、乗算器は各開口に対応して真のカウントTC1つを受信する。ここに説明される実施態様においては、3つの開口があるので、乗算器50は3つの真のカウントを受信する。他の実施態様においては、乗算器が受信する真のカウントTCの数は3より大きい場合もあるし小さい場合もある。
ステップ4：スケール変更、整合、平均化及び最終カウント
乗算器50は、各開口から得られる真のカウントTCの計算を行って、最終カウント52を生成する。計算には、当業者には周知の方法によるデータのスケール変更、整合及び平均化が含まれる。
【００９４】
データが便利なまたは使用可能な形式であるように、データは乗算器50によってカウント/μLに戻るように変換される。他の形式への他の変換も必要に応じて行うことができる。複数のチャネルがある場合には複数のチャネルからの値が平均化される。試料中の白血球の合計数を表す最終カウントが、最終カウント52に示される通りに得られる。
【００９５】
平均周期カウント補正法は、これまでの方法より正確である。この補正法は、補正式において粒度の影響を考慮に入れているので、システムにどのようなサイズの粒子が通されても、図3に示される通り直線的である（これは正確であることに一致する）。強化同時計数補正式と一緒にこの方法を使用することによって、450Kという高白血球数の試料に見られる非常に高い試料濃度の場合にも、カウントの直線性を維持できる。このように高い濃度を可能にすることによって、計器の高い処理能力が維持される。処理能力及び精度は、上記の補正法を使用するように改作される現在の技術で達成することができる。
【００９６】
本発明は上記の実施態様に限定されない。例えば、上記の実施態様において、複数のカウント時間の平均化は、平均生データ・カウント・ジェネレータ14及び平均待ち時間カウント・ジェネレータ24の生データについて行われる。これらの平均化のステップは、平均周期カウント・ジェネレータ16で、または同時計数補正カウント・ジェネレータの後で及び最終カウント52でも行うことができる。4−10個の平均周期カウントAPC値を生データから算出して、その後平均化することができる。4−10個の真のカウントTCを計算し平均化することができる。あるいは、4−10個の最終カウント値を計算し、平均化することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】装置の望ましい実施態様の各種動作ユニットを示している。
【図２Ａ】異なるサイズの粒子の相互関係及び開口波形における同時計数を示すパルス図であり、対応する移行所要時間パルス幅と待ち時間並びに対応するカウントと待ち時間カウントを示している。
【図２Ｂ】デジタル・カウント・パルスを示している。
【図２Ｃ】クロック・パルスを示している。
【図２Ｄ】待ち時間カウント・クロック・パルスを示している。
【図３】簡単に入手できるWBC直線性制御物質を使用する従来の別の方法と比べて本発明の方法の1つの実施態様の直線性の改良を示すグラフである。
【図４】平均生カウント（ARC）値、及び図3と同じデータを使って各々の方法を応用した後に得られる結果を示すグラフである。APCは、平均周期法がARCに対して持つ影響を示している。TCは、強化同時計数補正法をAPCに応用した結果を示している。
【図５】WBCが異常に多い血液試料に関する本発明の方法と参照方法との間の相関を示している。参照方法の値は、試料を事前希釈し、これをBeckman Coulter, Inc. のGEN・STMで検査するによって得られた。本発明を使用する場合の値は、希釈せずにBeckman Coulter, Inc. のLH-750TMを使って得た。
【図６】図5のデータのうちWBCカウントが異常に高い4つの異なる試料に関するWBCヒストグラムである。
【図７】図5のデータのうちWBCカウントが異常に高い4つの異なる試料に関するWBCヒストグラムである。
【図８】図5のデータのうちWBCカウントが異常に高い4つの異なる試料に関するWBCヒストグラムである。
【図９】図5のデータのうちWBCカウントが異常に高い4つの異なる試料に関するWBCヒストグラムである。
【図１】
2004537724.tif 000008
【図２】
2004537724.tif 000009
【図３】
2004537724.tif 000010
【図４】
2004537724.tif 000011
【図５】
2004537724.tif 000012
【図６】
2004537724.tif 000013
【図７】
2004537724.tif 000014
【図８】
2004537724.tif 000015
【図９】
2004537724.tif 000016
【国際公開パンフレット】
2004537724.tif 000017
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2004537724.tif 000046
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【国際調査報告】
2004537724.tif 000048