(57)【要約】DNA低メチル化により腫瘍細胞の固有の腫瘍抑制機能を回復することにより異常な細胞増殖と関連する疾患、例えば、癌を治療するための組成物及び方法が提供される。その方法は癌を患っている患者にin vivoの抗腫瘍薬としての活性が異常なDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬の有効量と組み合わせて治療有効量のDNAメチル化インヒビター、例えば、デシタビンを送出することを含む。抗腫瘍薬はアルキル化剤、抗生物質薬、抗代謝薬、レチノイド、ホルモン薬、植物由来薬、抗血管形成薬及び生物学的薬剤、例えば、モノクローナル抗体及びインターフェロンであってもよい。【特許請求の範囲】
【請求項１】
DNAメチル化インヒビター、及び
in vivoの抗腫瘍薬としての活性が異常なDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬
を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
DNAメチル化インヒビターがシチジン類似体である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
シチジン類似体がデシタビンである請求項２記載の医薬組成物。
【請求項４】
抗腫瘍薬がアルキル化剤、抗生物質薬、レチノイド、抗代謝薬、ホルモン薬、植物由来薬、抗血管形成薬及び生物学的薬剤からなる群から選ばれる請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】
抗腫瘍薬がビスクロロエチルアミン、アジリジン、アルキルアルコンスルホネート、ニトロソ尿素、非古典的アルキル化剤及び白金化合物からなる群から選ばれたアルキル化剤である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項６】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬がシスプラチン又はカルボプラチンである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項７】
抗腫瘍薬がドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びアントラセンジオン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、並びにプリカトマイシンからなる群から選ばれた抗生物質薬である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項８】
抗腫瘍薬がフルオロウラシル、フロキシウリジン、メトトレキセート、ロイコボリン、ヒドロキシ尿素、チオグアニン、メルカプトプリン、シタラビン、ペントスタチン、フルダラビンホスフェート、クラドリビン、アスパラギナーゼ、及びゲムシタビンからなる群から選ばれた抗代謝薬である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項９】
抗腫瘍薬がジエチルスチベストロール、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、アミノグルテチミド、テトラゾール、ケトコナゾール、ゴセレリンアセテート、ロイプロリド、メゲストロールアセテート及びミフェプロストンからなる群から選ばれたホルモン薬である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１０】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬がタモキシフェンである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１１】
抗腫瘍薬がビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンゾリジン、ビノレルビン、エトポシドテニポシド、パクリタキセル及びドセタキセルから選ばれた植物由来薬である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１２】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬が全トランス-レチノール、全トランス-レチノイン酸、13-シス-レチノイン酸、及び9-シス-レチノイン酸からなる群から選ばれたレチノイドである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１３】
抗腫瘍薬が免疫調節タンパク質、モノクローナル抗体、腫瘍サプレッサー遺伝子、及び癌ワクチンからなる群から選ばれた生物学的薬剤である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１４】
免疫調節タンパク質がインターロイキン２、インターロイキン４、インターロイキン12、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ、エリトロポイエチン、顆粒球-CSF、顆粒球、マクロファージ-CSF、バチルスカルメット-ゲラン、レバミソール、及びオクトレオチドからなる群から選ばれる請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】
モノクローナル抗体がヘルセプチン、リツキサン、ミエロターグ、及びカンパスからなる群から選ばれる請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１６】
腫瘍サプレッサー遺伝子がDPC-4、NF-1、NF-2、RB、p53、WT1、BRCA、及びBRCA2からなる群から選ばれる請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１７】
癌ワクチンがガングリオシド、前立腺特異性抗原、α-フェトプロテイン、癌胎児抗原、メラノーマ関連抗原MART-1、gp100、パピローマウイルスE6フラグメント、パピローマウイルスE7フラグメント、自己腫瘍細胞の全細胞又は部分／溶解産物、及び同種異系腫瘍細胞からなる群から選ばれる請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記組成物が異常な細胞増殖又は異常な血管形成と関連する疾患の治療に有益である請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１９】
抗腫瘍薬が131Iである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項２０】
異常な細胞増殖と関連する疾患を有する患者に、in vivoの抗腫瘍薬としての活性が異常なDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬の治療有効量と組み合わせて、治療有効量のDNAメチル化インヒビターを投与することを特徴とする上記疾患の治療方法。
【請求項２１】
異常な細胞増殖と関連する疾患が再狭窄、良性腫瘍、癌、血液学的障害及びアテローム硬化症から選ばれる請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
良性腫瘍が血管腫、肝細胞アデノーマ、海綿状血管腫、巣状小結節過形成、聴神経腫、神経繊維腫、胆管アデノーマ、胆管のう腺腫、繊維腫、脂肪腫、平滑筋腫、中皮腫、奇形腫、粘液腫、再生小結節過形成、トラコーマ及び化膿性肉芽腫からなる群から選ばれる請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
癌が乳癌、皮膚癌、骨癌、前立腺癌、肝臓癌、肺癌、脳癌、喉頭、胆嚢、膵臓、直腸、副甲状腺、甲状腺、副腎、神経組織、頭部及び首、結腸、胃、気管支、腎臓の癌、基底細胞癌、潰瘍型及び乳頭型の両方の扁平上皮癌、転移性皮膚癌、骨肉腫、ユーイング肉腫、ベチクラム細胞肉腫、ミエローマ、巨細胞腫瘍、小細胞肺腫瘍、胆石、膵島細胞腫瘍、原発性脳腫瘍、急性及び慢性のリンパ球及び顆粒細胞の腫瘍、有毛細胞腫瘍、アデノーマ、過形成、髄様癌、褐色細胞腫、粘膜神経腫、腸神経節神経腫、増殖性角膜神経腫瘍、マルファノイド・ハビタス腫瘍、ビルムス腫瘍、精上皮腫、卵巣腫瘍、平滑筋腫、子宮頸部形成異常及びin situ癌腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、軟組織肉腫、悪性カルチノイド、局所皮膚病変、菌状息肉腫、横紋筋肉腫、カポージ肉腫、骨原性肉腫及びその他の肉腫、悪性過カルシウム血、腎細胞腫瘍、一次性赤血球増加、腺癌、多形性膠芽腫、悪性メラノーマ、及び類表皮癌からなる群から選ばれる請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
血液学的障害が急性骨髄性白血病、急性前骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄形成異常症候群、及び鎌状細胞貧血から選ばれる請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
疾患が非小細胞肺癌であり、かつDNAメチル化インヒビターがデシタビンである請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬がレチノイドである請求項２０記載の方法。
【請求項２７】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬がホルモン薬である請求項２０記載の方法。
【請求項２８】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、かつ抗腫瘍薬がシスプラチン又はカルボプラチンである請求項２０記載の方法。
【請求項２９】
DNAメチル化インヒビターを皮下投与又は静脈内投与する請求項２０記載の方法。
【請求項３０】
DNAメチル化インヒビターがデシタビンであり、静脈内投与又は皮下投与される請求項２０記載の方法。
【請求項３１】
デシタビンを１〜100mg/m2の範囲の用量で毎日患者に静脈内投与する請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
デシタビンを２〜50mg/m2の範囲の用量で毎日患者に静脈内投与する請求項３０記載の方法。
【請求項３３】
デシタビンを５〜20mg/m2の範囲の用量で毎日患者に静脈内投与する請求項３０記載の方法。
【請求項３４】
デシタビンを１〜100mg/m2の範囲の用量で治療サイクル当り少なくとも３日にわたって毎日患者に静脈内投与する請求項３０記載の方法。
【請求項３５】
DNAメチル化インヒビターを抗腫瘍薬の投与の前に投与する請求項２０記載の方法。
【請求項３６】
デシタビン及びin vivoの抗腫瘍薬としての活性が異常なDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬を含む容器を含むことを特徴とする異常な細胞増殖と関連する疾患の治療用キット。
【請求項３７】
抗腫瘍薬がレチノイドである請求項３６記載のキット。
【請求項３８】
抗腫瘍薬がシスプラチン又はカルボプラチンである請求項３６記載のキット。
【請求項３９】
抗腫瘍薬がホルモン薬である請求項３６記載のキット。
【請求項４０】
ホルモン薬がジエチルスチベストロール、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、アミノグルテチミド、テトラゾール、ケトコナゾール、ゴセレリンアセテート、ロイプロリド、メゲストロールアセテート及びミフェプロストンからなる群から選ばれる請求項３９記載のキット。
【請求項４１】
抗腫瘍薬がヘルセプチン、リツキサン、ミエロターグ、及びカンパスからなる群から選ばれたモノクローナル抗体である請求項３９記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗腫瘍薬を使用して異常な細胞増殖と関連する疾患、例えば、癌を治療するための組成物及び方法、更に詳しくは、DNA低メチル化により腫瘍細胞の固有の腫瘍抑制機能を回復することにより癌を治療する際の抗腫瘍薬の有効性を改良するための組成物及び方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多種の抗腫瘍薬が癌を治療するために開発されていた。抗腫瘍薬の例として、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン、アメタントロンアセテート、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンゾデパ、ビカルタミド、ビサントレン塩酸塩、ビスナフィドジメシレート、ビゼレシン、ブレオマイシンスルフェート、ブレキナーナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、セデフィンゴール、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトルメシレート、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デキソルマプラチン、デザグアニン、デザグアニンメシレート、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、ドロロキシフェンシトレート、ドロモスタノロンプロピオネート、デュアゾマイシン、エダトレキセート、エフロルニチン塩酸塩、エルサミトルシン、エンロプラチン、エンプロメート、エピプロピジン、エピルビシン塩酸塩、エルブロゾール、エソルビシン塩酸塩、エストラムスチン、エストラムスチンホスフェートナトリウム、エタニダゾール、エチオダイズド(Ethiodized)オイルI131、エトポシド、エトポシドホスフェート、エトプリン、ファドロゾール塩酸塩、ファザラビン、フェンレチニド、フロクスウリジン、フルダラビンホスフェート、フルオロウラシル、フルロシタラビン、フォスキドン、ホストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、ゲムシタビン塩酸塩、金Au198、ヒドロキシ尿素、イダルビシン塩酸塩、イフォスファミド、イモフォシン、インターフェロンα-2a、インターフェロンα-2b、インターフェロンα-n1、インターフェロンα-n3、インターフェロンβ-Ia、インターフェロンγ-Ib、イプロプラチン、イリノテカン塩酸塩、ランレオチドアセテート、レトロゾール、ロイプロリドアセテート、リアロゾール塩酸塩、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロソキサントロン塩酸塩、マソプロコル、マイタンシン、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロールアセテート、メレンゲストロールアセテート、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン、ミトマルシン、マイトマイシン、ミトスパー、ミトタン、ミトキサントロン塩酸塩、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ、ペリオマイシン、ペンタムスチン、ペプロマイシンスルフェート、ペルフォスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピロキサントロン塩酸塩、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン塩酸塩、プロマイシン、プロマイシン塩酸塩、ピラゾフリン、リボプリン、ログレチミド、サフィンゴール、サフィンゴール塩酸塩、セムスチン、シムトラゼン、スパルフォセートナトリウム、スパルソマイシンＩ、スピロゲルマニウム塩酸塩、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、塩化ストロンチウムSr89、スロフェナー、タリソマイシン、タキサン、タキソイド、テコガランナトリウム、テガファー、テロキサントロン塩酸塩、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、チアミプリン、チオグアニン、チオテーパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポテカン塩酸塩、トレミフェンシトレート、トレストロンアセテート、トリシリビンホスフェート、トリメトレキセート、トリメトレキセートグルクロネート、トリプトレリン、ツブロゾール塩酸塩、ウラシルマスタード、ウレデパ、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチンスルフェート、ビンクリスチンスルフェート、ビンデシン、ビンデシンスルフェート、ビネピジンスルフェート、ビングリシネートスルフェート、ビンロイロシンスルフェート、ビノレルビンタートレート、ビンロシジンスルフェート、ビンゾリジンスルフェート、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾルビシン塩酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【０００３】
抗腫瘍化合物の追加の例として、20-エピ-1,25ジヒドロキシビタミンD3、5-エチニルウラシル、アビラテロン、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール、アドゼレシン、アルデスロイキン、ALL-TKアンタゴニスト、アルトレタミン、アンバムスチン、アミドクス、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラフォリド、血管形成インヒビター、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリクス、抗背方化形態形成タンパク質-1、アンチアンドロゲン前立腺癌、アンチエストロゲン、アンチネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子モジュレーター、アポトーシス調節因子、アプリン酸、ara-CDP-DL-PTBA、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン、アザチロシン、バッカチンIII誘導体、バラノール、バチマスタット、BCR/ABLアンタゴニスト、ベンゾクロリン、ベンゾイルスタウロスポリン、βラクタム誘導体、β-アレチン、ベータクラマイシンＢ、ベツリン酸、bFGFインヒビター、ビカルタミド、ビサントレン、ビスアジリジニルスペルミン、ビスナフィド、ビストラテンＡ、ビゼレシン、ブレフレート、ブロピリミン、ブドチタン、ブチオニンスルフォキシミン、カルシポトリオール、カルフォスチンＣ、カンプトテシン誘導体、カナリポックスIL-2、カペシタビン、カルボキサミド-アミノ-トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、CaRest M3、CARN700、軟骨由来インヒビター、カルゼレシン、カゼインキナーゼインヒビター(ICOS)、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリクス、クロリン、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス-ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシンＡ、コリスマイシンＢ、コムブレタスタチンA4、コムブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシジン816、クリスナトール、クリプトフィシン８、クリプトフィシンＡ誘導体、クラシンＡ、シクロペントアントラキノン、シクロプラタム、シペマイシン、シタラビンオクフォスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン、ダクリキシマブ、デシタビン、
【０００４】
デヒドロジデムニンＢ、デスロレリン、デキシフォスファミド、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジクオン、ジデムニンＢ、ジドクス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ-5-アザシチジン、ジヒドロタキソール,9-、ジオキサマイシン、ジフェニルスピロムスチン、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカマイシンSA、エブセレン、エコムスチン、エデルフォシン、エドレコロマブ、エフルオルニチン、エレメン、エミテファー、エピルビシン、エプリステリド、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、エトポシドホスフェート、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン、フルアステロン、フルダラビン、フルオロダウノルビシン塩酸塩、フォルフェニメックス、フォルメスタン、フォストリエチン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼインヒビター、ゲムシタビン、グルタチオンインヒビター、ヘプスルファム、ヘレグリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ハイペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン、イドキシフェン、イドラマントン、イルモフォシン、イロマスタット、イミダゾアクリドン、イミキモド、免疫刺激ペプチド、インスリン様成長因子-1受容体インヒビター、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン、ヨードドキソルビシン、イポメアノール,4-、イリノテカン、イロプラクト、イルソグラジン、イソベンガゾール、イソホモハリコンドリンＢ、イタセトロン、ジャスプラキノリド、カハラリドＦ、ラメラリン-Nトリアセテート、ランレオチド、ライナマイシン、レノグラスチム、レンチナンスルフェート、レプトルスタチン、レトロゾール、白血病抑制因子、白血球αインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミソール、
【０００５】
リアロゾール、線状ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド７、ロバプラチン、ロムブリシン、ロメトレキソール、ロニダミン、ロソキサントロン、ロバスタチン、ロキソリビン、ルートテカン、ルテチウムテキサフィリン、リソフィリン、溶菌ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコル、マスピン、マトリリシンインヒビター、マトリックスメタロプロテイナーゼインヒビター、メノガリル、メルバロン、メテレリン、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、MIFインヒビター、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミスマッチ型二本鎖RNA、ミトグアゾン、ミトラクトール、マイトマイシン類似体、ミトナフィド、マイトトキシン繊維芽細胞成長因子-サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体, ヒトコリオゴナドトロピン、モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリウム細胞壁sk、モピダモル、多薬剤耐性遺伝子インヒビター、多腫瘍サプレッサー１をベースとする療法、マスタード抗癌剤、マイカペルオキシドＢ、ミコバクテリア細胞壁エキス、ミリアポロン、N-アセチルジナリン、N-置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン、ナフテルピン、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン、ネリドロン酸、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン、酸化窒素モジュレーター、ニトロキシド酸化防止剤、ニトルリン、06-ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン、オリゴヌクレオチド、オナプリストン、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン、経口サイトカイン誘発剤、オルミアプラチン、オサテロン、オキサリプラチン、オキサウノマイシン、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン、パゼリプチン、ペガスパルガーゼ、ペルデシン、
【０００６】
ペントサンポリスルフェートナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール、ペルフルブロン、ペルフォスファミド、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、フェニルアセテート、ホスファターゼインヒビター、ピシバニル、ピロカルピン塩酸塩、ピラルビシン、ピリトレキシム、プラセチンＡ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター、白金錯体、白金化合物、白金-トリアミン錯体、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プロピルビス-アクリドン、プロスタグランジンJ2、プロテアソームインヒビター、プロテインＡをベースとする免疫モジュレーター、プロテインキナーゼＣインヒビター、プロテインキナーゼＣインヒビター、ミクロアルガル、プロテインチロシンホスファターゼインヒビター、プリンヌクレオシドホスホリラーゼインヒビター、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、rafアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、rasファルネシルプロテイントランスフェラーゼインヒビター、rasインヒビター、ras-GAPインヒビター、脱メチル化レテリプチン、レニウムRe186エチドロネート、リゾキシン、リボザイム、RIIレチナミド、ログレチミド、ロヒツキン、ロムルチド、ロキニメクス、ルビギノンB1、ルボキシル、サフィンゴール、セイントピン、SarCNU、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Sdi１ミメチクス、セムスチン、セネセンス由来インヒビター１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達インヒビター、シグナル伝達モジュレーター、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウムボロカプテート、ナトリウムフェニルアセテート、ソルベロール、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォシン酸、スピカマイシンＤ、スピロムスチン、スプレノペンチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、幹細胞インヒビター、幹細胞分裂インヒビター、スチピアミド、ストロメリシンインヒビター、スルフィノシン、スーパーアクチブバソアクチブインテスティナルペプチドアンタゴニスト、スラジスタ、スラミン、スベインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガファー、テルラピリウム、テロメラーゼインヒビター、
【０００７】
テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、タリブラスチン、タリドミド、チオコラリン、トロンボポイエチン、トロンボポイエチンミメチック、チマルファシン、チモポイエチン受容体アゴニスト、チモトリナン、甲状腺刺激ホルモン、スズエチルエチオプルプリン、チラパザミン、チタノセンジクロリド、トポテカン、トプセンチン、トレミフェン、全能幹細胞因子、翻訳インヒビター、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド、チロシンキナーゼインヒビター、チルフォスチン、UBCインヒビター、ユベニメクス、泌尿生殖洞由来成長抑制因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド、バリオリンＢ、ベクター系赤血球遺伝子療法、ベラレソル、ベラミン、ベルジン、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン、ボロゾール、ザノテロン、ゼニプラチン、ジラスコーブ、ジノスタチンスチマラマーが挙げられる。
【０００８】
何千もの潜在性抗癌剤が評価されたが、ヒトの癌の治療はしばしば多くの最適以下の治療選択を与える合併症及び副作用を伴ったままである。多数の抗腫瘍薬が癌治療のために診療所で使用されるにもかかわらず、癌を一層遺伝的に特異的な様式で治療するのに一層有効な薬物養生法に対する要望が依然として存する。本発明は癌、特に悪性充実性腫瘍を治療するためのこのような改良された薬物養生法に関する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明はDNAメチル化インヒビター、及びin vivoの抗腫瘍薬としての活性が高レベルのDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬を含む組み合わせ療法を使用して癌を治療するための新規かつ改良された組成物、キット、及び方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
一実施態様において、DNAメチル化インヒビターはシチジン類似体である。この実施態様の好ましい変化において、DNAメチル化インヒビターは5-アザ-2'-デオキシシチジン（5-アザ-CdR又はデシタビン）である。
【００１１】
一実施態様において、抗腫瘍薬はアルキル化剤である。アルキル化剤の例として、ビスクロロエチルアミン（窒素マスタード、例えば、クロラムブシル、シクロフォスファミド、イフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード）、アジリジン（例えば、チオテパ）、アルキルアルコンスルホネート（例えば、ブスルファン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン）、非古典的アルキル化剤（アルトレタミン、デカルバジン、及びプロカルバジン）、白金化合物（カルボプラスチン及びシスプラチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
その実施態様の変化において、抗腫瘍薬はシスプラチン又はカルボプラスチンである。
その実施態様の別の変化において、抗腫瘍薬はシクロホスファミドである。
【００１２】
別の実施態様において、抗腫瘍薬はレチノイドスーパーファミリーの一員である。レチノイドはビタミンＡ（全トランス-レチノール）に由来又は関連する構造上かつ機能上関係する分子のファミリーである。レチノイドの例として、全トランス-レチノール、全トランス-レチノイン酸（トレチノイン）、13-シスレチノイン酸（イソトレチノイン）及び9-シス-レチノイン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
更に別の実施態様において、抗腫瘍薬は抗生物質薬である。抗生物質薬の例として、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びアントラセンジオン）、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカトマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１３】
更に別の実施態様において、抗腫瘍薬はホルモン薬である。このようなホルモン薬の例は合成エストロゲン（例えば、ジエチルスチベストロール）、アンチエストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール及びラロキシフェン）、アンチアントロゲン（ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド）、アロマターゼインヒビター（例えば、アミノグルテチミド、アナストロゾール及びテトラゾール）、ケトコナゾール、ゴセレリンアセテート、ロイプロリド、メゲストロールアセテート及びミフェプリストンである。
【００１４】
更に別の実施態様において、抗腫瘍薬は植物由来薬である。植物由来薬の例として、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンゾリジン及びビノレルビン）、カンプトテシン（20(S)-カンプトテシン、9-ニトロ-20(S)-カンプトテシン、及び9-アミノ-20(S)-カンプトテシン）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド(VP-16)及びテニポシド(VM-26)）、及びタキサン（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）が挙げられるが、これらに限定されない。
更に別の実施態様において、抗腫瘍薬は生物学的薬剤である。生物学的薬剤の例として、免疫調節タンパク質、例えば、サイトカイン、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体、腫瘍サプレッサー遺伝子、及び癌ワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得るインターロイキンの例として、インターロイキン２（IL-2）、及びインターロイキン４（IL-4）、インターロイキン12（IL-12）が挙げられるが、これらに限定されない。DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得るインターフェロンの例として、インターフェロンα、インターフェロンβ（繊維芽細胞インターフェロン）及びインターフェロンγ（繊維芽細胞インターフェロン）が挙げられるが、これらに限定されない。このようなサイトカインの例として、エリトロポイエチン（エポイエチンα）、顆粒細胞-CSF（フィルグラスチム）、及び顆粒細胞、マクロファージ-CSF（サルグラモスチム）が挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン以外の免疫調節薬として、バチルスカルメット-ゲラン、レバミソール、及びオクトレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得る腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体の例として、ヘルセプチン（登録商標）（トラストルズマブ）、リツキサン（登録商標）（リツキシマブ）、ミエロターグ（登録商標）（抗CD33）、及びカンパス（登録商標）（抗CD52）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１６】
本発明の組成物、キット及び方法は第二の抗腫瘍薬が治療活性を有する多種の適応症を治療するのに使用し得る。このような適応症として、乳癌、皮膚癌、骨癌、前立腺癌、肝臓癌、肺癌、脳癌、喉頭、胆嚢、膵臓、直腸、副甲状腺、甲状腺、副腎、神経組織、頭部及び首、結腸、胃、気管支、腎臓の癌、基底細胞癌、潰瘍型及び乳頭型の両方の扁平上皮癌、転移性皮膚癌、骨肉腫、ユーイング肉腫、ベチクラム(veticulum)細胞肉腫、ミエローマ、巨細胞腫瘍、小細胞肺腫瘍、胆石、膵島細胞腫瘍、原発性脳腫瘍、急性及び慢性のリンパ球及び顆粒細胞の腫瘍、有毛細胞白血病、アデノーマ、過形成、髄様癌、褐色細胞腫、粘膜神経腫、腸神経節神経腫、増殖性角膜神経腫瘍、マルファノイド・ハビタス（marfanoid habitus）腫瘍、ビルムス腫瘍、精上皮腫、卵巣腫瘍、平滑筋腫、子宮頸部形成異常及びin situ癌腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、軟組織肉腫、悪性カルチノイド、局所皮膚病変、菌状息肉腫、横紋筋肉腫、カポージ肉腫、骨原性肉腫及びその他の肉腫、悪性過カルシウム血、腎細胞腫瘍、一次性赤血球増加、腺癌、多形性膠芽腫、白血病、リンパ腫、悪性メラノーマ、類表皮癌、並びにその他の癌腫及び肉腫を含むが、これらに限定されない種々の型の癌が挙げられる。
【００１７】
また、本発明の組成物、キット及び方法は第二の抗腫瘍薬が治療活性を有する種々の血液学的障害を治療するのに使用し得る。血液学的障害として、血液細胞中の形成不全変化及び血液学的悪性、例えば、種々の白血病をもたらし得る血液細胞の異常な増殖が挙げられる。血液学的障害の例として、急性骨髄性白血病、急性前骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄形成異常症候群、及び鎌状細胞貧血が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明の組成物に関して、組成物は一種以上の抗腫瘍薬と組み合わせてデシタビンの如きDNAメチル化インヒビターを含んでもよい。一つの特別な実施態様において、抗腫瘍薬はシスプラチン、レチノイド又はマイトマイシンＣである。
本発明のキットに関して、キットは一種以上の抗腫瘍薬と組み合わせてデシタビンの如きDNAメチル化インヒビターを含んでもよい。一つの特別な実施態様において、抗腫瘍薬はシスプラチン、レチノイド又はマイトマイシンＣである。
【００１９】
本発明の方法に関して、その方法は治療有効量のデシタビンの如きDNAメチル化インヒビター、及び抗腫瘍薬を癌を有する患者に投与することを含んでもよい。DNAメチル化インヒビター及び抗腫瘍薬は別々に又は組み合わせて送出されてもよい。一実施態様において、DNAメチル化インヒビターは抗腫瘍薬を送出する前に送出される。
【００２０】
DNAメチル化インヒビター及び抗腫瘍薬は投与の種々の経路により送出されてもよい。それらは経口、非経口、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮、舌下、筋肉内、直腸、経頬、鼻内、リポソーム、吸入、膣、眼内、局所送出（例えば、カテーテル又はステントによる）、皮下、脂肪内、関節内、又はくも膜下に投与又は同時投与されてもよい。本発明の化合物及び／又は組成物はまた除放投薬形態で投与又は同時投与されてもよい。
【００２１】
本発明はDNAメチル化インヒビター、及びin vivoの抗腫瘍薬としての活性が高レベルのDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬を含む組み合わせ療法を使用して癌を治療するための新規かつ改良された組成物、キット、及び方法を提供する。
【００２２】
抗腫瘍薬の医薬活性は癌関連遺伝子の異常な高メチル化により悪影響されると考えられる。特に腫瘍サプレッサー遺伝子のプロモーター領域における、癌関連遺伝子の高メチル化のために、これらの遺伝子の発現レベルが低下される。一方では、多くの抗腫瘍薬はこれらの腫瘍サプレッサー遺伝子によりコードされたタンパク質を伴うシグナル伝達カスケードを誘発することによりそれらの抗癌作用を加える。癌細胞中のこれらの遺伝子の不十分な発現により、これらの抗腫瘍薬の抗癌作用がひどく低下され、又は完全に根絶されるかもしれない。こうして、癌関連遺伝子の異常な高メチル化の抑制が癌患者に投与された抗腫瘍薬により送られるシグナルに応答して癌細胞に対する腫瘍抑制機能を回復すると考えられる。
【００２３】
加えて、本発明の方法はまた腫瘍細胞表面抗原提示と関連する或る種の遺伝子の異常な高メチル化の抑制により癌についての免疫療法を増進するのに使用し得る。腫瘍細胞又は白血病細胞は、少なくとも部分的に標的抗原をコードする遺伝子のメチル化により、細胞表面抗原をダウンレギュレートすることにより免疫検出及び／又は根絶を回避すると考えられる。このような高メチル化の抑制及び標的抗原遺伝子発現のサイレンシングは腫瘍特異性抗原を標的とする免疫療法の治療効力を増大する。免疫療法の例として、腫瘍特異性抗原を標的とするモノクローナル抗体、移植片対白血病効果(GVL)により寛解を誘発するためのドナーリンパ球が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２４】
一実施態様において、DNAメチル化インヒビターはシチジン類似体である。この実施態様の好ましい変化において、DNAメチル化インヒビターは5-アザ-2'-デオキシシチジン（5-アザ-CdR又はデシタビン）である。
【００２５】
1.  癌関連遺伝子の異常な高メチル化
哺乳類細胞中で、ゲノムDNA中のシトシン残基の約３％〜５％が5-メチルシトシンとして存在する。Ehrlichら(1982) Nucleic Acid Res. 10:2709-2721を参照のこと。シトシンのこの修飾はDNA複製後に起こり、メチルドナーとしてS-アデノシル-メチオニンを使用するDNAメチルトランスフェラーゼを特徴とする。5-メチルシトシン残基の約70％〜80％がCpG配列中に見られる。Bird(1986) Nature 321:209-213を参照のこと。この配列は、ゲノム中で高頻度で見られる場合、CpGアイランドと称される。未メチル化CpGアイランドはハウスキーピング遺伝子と関連し、一方、多くの組織特異性遺伝子のアイランドは、それらが発現される組織中以外で、メチル化される。Yevin及びRazin(1993) DNA メチル化：分子生物学及び生物学的重要性 Basel: Birkhauser Verlag, p523-568を参照のこと。DNAのこのメチル化は胚発達中の真核生物細胞中の異なる遺伝子の発現の調節に重要な役割を果たすと提案されていた。この仮説と一致して、DNAメチル化の抑制が哺乳類細胞中で分化を誘発することがわかった。Jones及びTaylor(1980) Cell 20:85-93を参照のこと。
【００２６】
遺伝子の調節領域中のDNAのメチル化はその遺伝子の転写を抑制し得る。これは5-メチルシトシンがDNAらせんの主要な溝に突出し、これが転写因子の結合を妨げるからであるかもしれない。
DNA中のメチル化シトシン、5-メチルシトシンは、シトシンからウラシルへの脱アミン化よりも極めて高い速度で自発的脱アミン化を受けてチミンを生成し得る。Shenら(1994) Nucleic Acid Res. 22:972-976を参照のこと。5-メチルシトシンの脱アミン化が修復されない場合、それはＣからＴへの転移突然変異をもたらすであろう。例えば、ヒトp53遺伝子中のDNA損傷の多くの“ホットスポット”はCpGからTpGへの転移突然変異と関連している。Denissenkoら(1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:3893-1898を参照のこと。
【００２７】
p53遺伝子以外の、多くの腫瘍サプレッサー遺伝子はまたそれらのプロモーター領域中のCpGアイランドの異常なメチル化により失活し得る。多くの腫瘍サプレッサー及びその他の癌関連遺伝子はヒト癌細胞及び原発性腫瘍中で高メチル化されることがわかった。腫瘍増殖を抑制するのに関与し、異常な高メチル化によりサイレンスにされる遺伝子の例として、腫瘍サプレッサー、例えば、p15/INK4B（サイクリンキナーゼインヒビター）、p16/INK4A（サイクリンキナーゼインヒビター）、p73（p53同族体）、ARF/INK4A（レギュラーレベルp53）、ビルムス腫瘍、フォン・ヒッペル・リンダウ(VHL)、レチノイン酸受容体-β（RARβ）、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、癌(HIC1)、及び網膜芽細胞腫(Rb)中で高メチル化された乳由来成長インヒビター；侵入／転移サプレッサー、例えば、E-カドヘリン、組織インヒビターメタロプロテイナーゼ-2(TIMP-3)、mts-1及びCD44；DNA修復／解毒カルシノーゲン、例えば、メチルグアニンメチルトランスフェラーゼ、hMLH1（ミスマッチDNA修復）、グルタチオンS-トランスフェラーゼ、及びBRCA-1；血管形成インヒビター、例えば、トロンボスポンジン-1(TSP-1)及びTIMP3；並びに腫瘍抗原、例えば、MAGE-1が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
特に、p16のサイレンシングは多くの異なる型の癌中の異常なメチル化と頻繁に関連している。p16/INK4A腫瘍サプレッサー遺伝子は構成的に発現されるサイクリン依存性キナーゼインヒビターをコードし、これはサイクリンD-Rb経路による細胞サイクルの調節に重要な役割を果たす。Hamel及びHanley-Hyde(1997) Cancer Invest. 15:143-152を参照のこと。p16は染色体9pに配置され、その部位は原発性肺腫瘍中の異型接合の損失(LOH)を頻繁に受ける。これらの癌では、非欠失対立遺伝子の失活の原因のメカニズムは異常なメチル化であると仮定される。実際に、p16を発現しなかった肺癌細胞系について、48％がこの遺伝子のメチル化の兆候を示した。Ottersonら(1995) Oncogene 11:1211-1216を参照のこと。原発性非小細胞肺腫瘍の約26％がp16のメチル化を示した。胸部及び結腸の原発性腫瘍が夫々p16の31％及び40％のメチル化を示す。Hermanら(1995) Cancer Res. 55:4525-4530を参照のこと。
【００２９】
レチノイン酸受容体の異常なメチル化はまた乳癌、肺癌、卵巣癌等の発生の原因である。レチノイン酸受容体はDNA中のレチノイン酸応答性要素(RARE)に結合して遺伝子発現を活性化する核転写因子である。特に、推定の腫瘍サプレッサーRARβ遺伝子が染色体3p24に配置され、その部位が乳癌中の異型接合の頻繁な損失を示す。Dengら(1996) Science 274:2057-2059を参照のこと。或る種の腫瘍細胞へのRARβcDNAのトランスフェクションが末梢分化を誘発し、ヌードマウスでそれらの腫瘍形成性を低下した。Caliaroら(1994) Int. J. Cancer 56:743-748、及びHouleら(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:985-989を参照のこと。RARβ遺伝子の発現の欠如が乳癌及びその他の型の癌について報告されていた。Swisshelmら(1994) Cell Growth Differ. 5:133-141、及びCrowe(1998) Cancer Res. 58:142-148を参照のこと。RARβ遺伝子の発現の欠如についてのこの理由はRARβ遺伝子の高メチル化を原因としている。実際に、RARβのメチル化が原発性結腸癌の43％及び原発性乳癌の30％で検出された。Coteら(1998) Anti-Cancer Drugs 9:743-750、及びBovenziら(1999) Anticancer Drugs 10:471-476を参照のこと。
【００３０】
エストロゲン受容体遺伝子の5'-領域中のCpGアイランドの高メチル化が多腫瘍型に見られた。Issaら(1994) J. Natl. Cancer Inst. 85:1235-1240を参照のこと。エストロゲン受容体発現の欠如は、遺伝子突然変異の不在下でさえも、ホルモン非応答性乳癌の共通の特徴である。Roodiら(1995) J. Natl. Cancer Inst. 87:446-451を参照のこと。エストロゲン受容体陰性である原発性乳腫瘍の約25％がこの遺伝子内の一つの部位における異常なメチル化を示した。エストロゲン受容体のmRNAを発現しない乳癌細胞系は増大されたレベルのDNAメチルトランスフェラーゼ及びこの遺伝子のプロモーター領域の広範なメチル化を示した。Ottavianoら(1994) 54:2552-2555を参照のこと。
【００３１】
ヒトミスマッチ修復遺伝子（hMLH-1）の高メチル化がまた種々の腫瘍中で見られる。ミスマッチ修復は細胞増殖中にDNA複製の忠実度を増大するために細胞により使用される。この活性の欠如は正常な細胞中で観察される突然変異率よりも極めて高い突然変異率をもたらし得る。Modrich及びLahue(1996) Annu. Rev. Biochem. 65:101-133を参照のこと。ミスマッチ修復遺伝子（hMLH-1）のプロモーター領域のメチル化は原発性結腸腫瘍中の発現のそれの欠如と相関関係があることが示され、一方、正常な隣接組織及びこの遺伝子を発現する結腸腫瘍はそのメチル化の兆候を示さなかった。Kaneら(1997) Cancer Res. 57:808-811を参照のこと。
【００３２】
DNAの異常なメチル化が腫瘍形成中に起こる分子メカニズムは明らかではない。おそらく、DNAメチルトランスフェラーゼが親ストランド中の相補メチル化CpGを生じないでDNAのナセントストランド中のCpGアイランドをメチル化することによりミステークをつくる。またおそらく、異常なメチル化はこれらの部位がメチル化されることから保護するCpG結合タンパク質の除去のためであるかもしれない。メカニズムがどうであろうとも、異常なメチル化の頻度は正常な哺乳類細胞中で稀なイベントである。
【００３３】
2.  DNAメチル化のインヒビターとしてのデシタビン
デシタビン、5-アザ-2'-デオキシシチジンはその関連の天然ヌクレオシド、デオキシシチジンのアンタゴニストである。これらの二種の化合物の間の唯一の構造上の相違はデオキシシチジンについての５位の炭素と較べてデシタビン中のシトシン環のこの位置の窒素の存在である。デシタビンの二種の異性体は区別し得る。β-アノマーが活性形態である。水溶液中のデシタビンの分解の様式は(a)不活性α-アノマーへの活性b-アノマーの変換（Pomponら(1987) J. Chromat. 388:113-122）；(b)N-(ホルミルアミジノ)-N'-β-D-2'-デオキシ-(リボフラノシル)-尿素を生成するためのアザ-ピリミジン環の環開裂（Mojaverian及びRepta(1984) J. Pharm. Pharmacol. 36:728-733）；及び(c)グアニジン化合物のその後の生成（Kissinger及びStemm(1986) J. Chromat. 353:309-318）である。
【００３４】
デシタビンは多くの薬理学的特徴を有する。分子レベルでは、それはDNAへのとり込みについてＳ期依存性である。細胞レベルでは、デシタビンは細胞分化を誘発し、血液学的毒性を加えることができる。in vivoの短い半減期を有するにもかかわらず、デシタビンは優れた組織分布を有する。
【００３５】
デシタビンの最も顕著な機能はDNAメチル化を特異的かつ強力に抑制するその能力である。例としてCpGアイランド中のシトシンのメチル化について上記したように、5-メチルシトシンへのシトシンのメチル化はDNAのレベルで起こる。細胞内で、デシタビンは最初にデオキシシチジンキナーゼ（これは主として細胞サイクルのＳ期中に合成される）によりその活性形態、リン酸化5-アザ-デオキシシチジンに変換される。デオキシシチジンキナーゼの触媒部位に関するデシタビンのアフィニティーは天然基質、デオキシシチジンと同様である。Momparlerら(1985) 30:287-299を参照のこと。デオキシシチジンキナーゼによるそのトリホスフェート形態への変換後に、デシタビンは天然基質、dCTPの率と同様の率で複製DNAにとり込まれる。Bouchard及びMomparler(1983) Mol. Pharmacol. 24:109-114を参照のこと。
【００３６】
DNAストランドへのデシタビンのとり込みは低メチル化効果を有する。分化細胞の夫々のクラスがそれ自体の特有のメチル化パターンを有する。染色体重複後に、このメチル化のパターンを保存するために、親ストランドの5-メチルシトシンが相補性娘DNAストランドのメチル化を誘導するのに利用できる。シトシンの５位にある炭素を窒素に置換することはDNAメチル化のこの正常なプロセスを妨げる。メチル化の特定部位におけるデシタビンによる5-メチルシトシンの置換は、おそらくDNAメチルトランスフェラーゼとデシタビンの間の共有結合の形成のために、その酵素の不可逆的失活を生じる。Juttermannら(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:11797-11801を参照のこと。メチル化に必要とされる酵素であるDNAメチルトランスフェラーゼを特異的に抑制することにより、腫瘍サプレッサー遺伝子の異常なメチル化が防止し得る。
【００３７】
本発明によれば、本発明者らは異常な高メチル化によりサイレンスにされた腫瘍サプレッサー遺伝子を再活性化するデシタビンの如きDNAメチル化インヒビターの能力を利用する。高メチル化を減少することにより、これらの薬剤は医薬活性がin vivoの高メチル化により悪影響される抗腫瘍薬を一層有効にする。
【００３８】
3.  レチノイドとのDNAメチル化インヒビターの組み合わせ
好ましい実施態様において、DNAメチル化インヒビターがレチノイドと組み合わせて使用されて癌の如き異常な細胞増殖疾患を有する患者を治療する。更に好ましい実施態様において、デシタビンとレチノイドの組み合わせ療法が乳癌、結腸癌及び肺癌、特に非小細胞肺癌を治療するのに使用される。
【００３９】
レチノイドは天然及び合成のビタミンＡ類似体のグループであり、種々の癌及び疾患の予防及び治療に有望な薬剤である。レチノイドの抗癌作用は主としてそれらの核受容体、レチノイン酸受容体(RAR)及びレチノイドＸ受容体(RXR)により媒介される。トランス-レチノイン酸の如きレチノイドは、RARβ発現を有効に誘発し、ホルモン依存性乳癌細胞の増殖を抑制するが、ホルモン非依存性乳癌細胞の増殖を抑制しない。ホルモン依存性乳癌細胞中のRARβの誘発はRARβプロモーター中のRA応答要素(RARE)に結合するRAR/RXRヘテロダイマーにより媒介される。RAR及びRXRの発現はRARβ発現をRAに応答性にするのに充分ではない。その他の転写因子及び／又はアダプターがまたRA応答性転写活性化に必要とされるかもしれない。加えて、これらの因子がRARβプロモーターに対する低い結合アフィニティーを有する場合、RARβの発現レベルが低下され、これが癌細胞をRAに非応答性にする。実際に、レチノイド応答は大半の肺癌細胞中で損なわれ、RARβの損失が主としてその欠陥に応答性である。
【００４０】
RARβの低い発現レベル又は発現の欠如はRARβ遺伝子のプロモーター領域の異常な高メチル化に起因すると考えられる。デシタビン又は別のDNAメチル化インヒビターを使用してRARβプロモーターの異常な高メチル化を抑制することにより、癌細胞のRA応答性が改善し得る。デシタビンとレチノイドの組み合わせはレチノイドが癌細胞（RAに対するそれらの耐性がRARβプロモーターの高メチル化の抑制により抑制される）のアポトーシスを誘発する点で癌細胞に対する相乗効果を有し得る。
【００４１】
デシタビンと組み合わせて使用し得るレチノイドはレチノイン酸受容体(RAR)に結合し、RAR媒介シグナル伝達を誘発する天然又は合成のレチノイドであってもよい。レチノイドの例として、全トランス-レチノール、全トランス-レチノイン酸（トレチノイン）、13-シスレチノイン酸（イソトレチノイン）及び9-シス-レチノイン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
4.  シスプラチンとのDNAメチル化インヒビターの組み合わせ
別の好ましい実施態様において、DNAメチル化インヒビターはシスプラチンと組み合わせて使用されて癌の如き異常な細胞増殖疾患を有する患者を治療する。
シスプラチンはDNA複製転写を抑制し、おそらくDNAミスマッチ修復によりアポトーシスを誘発する種々のDNA付加物を生成するアルキル化剤である。1,2d(GpG)イントラストランドDNA付加物がin vitro及びin vivoで見られる最も普通の付加物である。ヒト癌細胞におけるシスプラチン耐性はDNAミスマッチ修復の欠陥と関連する。
【００４３】
ミスマッチ修復遺伝子（例えば、hMLH-1）の低い発現レベル又は発現の欠如はミスマッチ修復遺伝子のプロモーター領域の異常な高メチル化に起因すると考えられる。デシタビン又は別のDNAメチル化インヒビターを使用してミスマッチ修復遺伝子のプロモーターの異常な高メチル化を抑制することにより、癌細胞のシスプラチン応答性が回復され得る。デシタビンとシスプラチンの組み合わせはシスプラチンがDNAをアルキル化し、癌細胞（シスプラチンに対するそれらの耐性がミスマッチ修復遺伝子プロモーターの高メチル化の抑制により抑制される）のアポトーシスを誘発する点で癌細胞に対する相乗効果を有し得る。
【００４４】
その他のアルキル化剤がまた癌患者を治療するためにDNAメチル化インヒビターと組み合わせて使用されてもよい。一実施態様において、抗腫瘍薬はアルキル化剤である。アルキル化剤の例として、ビスクロロエチルアミン（窒素マスタード、例えば、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード）、アジリジン（例えば、チオテパ）、アルキルアルコンスルホネート（例えば、ブスルファン）、ニトロソ尿素（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン）、非古典的アルキル化剤（アルトレタミン、ダカルバジン、及びプロカルバジン）、及びその他の白金化合物（例えば、カルボプラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
5.  ホルモン薬とのDNAメチル化インヒビターの組み合わせ
好ましい実施態様において、DNAメチル化インヒビターがホルモン薬と組み合わせて使用されて癌の如き異常な細胞増殖疾患を有する患者を治療する。更に好ましい実施態様において、デシタビンとホルモン薬の組み合わせ療法が乳癌、卵巣癌、子宮癌、前立腺癌及びエンドクリン調節に応答性であるその他の型の癌を治療するのに使用される。
【００４６】
ホルモンはそれらの標的器官の成長及び発達を調節するのに重要な役割を果たす。種々のホルモン薬がこれらの標的器官、即ち、胸部、子宮、卵巣、及び前立腺に由来する腫瘍の治療に使用されていた。ホルモン薬の殆どが性ステロイド及びそれらの誘導体並びにこれらの類似体、例えば、エストロゲン、アンドロゲン、及びプロゲスチンである。これらのホルモン薬は生体遺伝子の転写をダウンレギュレートするために性ステロイドの受容体のアンタゴニストとして利用できるかもしれない。このようなホルモン薬の例は合成エストロゲン（例えば、ジエチルスチベストロール）、アンチエストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール及びラロキシフェン）、アンチアンドロゲン（ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド）、アロマターゼインヒビター（例えば、アミノグルテチミド、アナストロゾール及びテトラゾール）、ケトコナゾール、ゴセレリンアセテート、ロイプロリド、メゲストロールアセテート及びミフェプリストンである。CPT及びホルモン薬を含む組み合わせ療法は癌に対する治療相乗効果を有し、またこれらの化学療法薬と関連する副作用を低減し得る。
【００４７】
エストロゲン、アンドロゲン、及びプロゲスチンは主としてそれらの夫々の受容体によりそれらの機能を加える。高アフィニティーで受容体に結合した後、ステロイドは受容体分子の形態を変え、それらをホルモン応答要素と称されるDNA鋳型のセグメントに結合することができるようにし、この場合、それらは遺伝子転写を調節し、細胞の成長及び機能を調節する。
【００４８】
これらのホルモンの多くのアンタゴニストは種々の組織中のそれらの同族受容体とのこれらのホルモンの相互作用と関連するマイトジェン効果を抑制しようと試みて開発された。ホルモン応答性は乳癌進行及び処理の重要な決定因子であり、エンドクリン療法に対する応答は腫瘍細胞のエストロゲン受容体(ER)及びプロゲステロン受容体(PR)状態と高度に相関関係がある。ホルモンアンタゴニストの殆どがホルモン受容体との競合的結合により機能し、これが細胞成長を刺激するのに必要とされる活性コンホメーションとは異なる変化されたコンホメーションをもたらし得る。このような“デッドロックド”コンホメーションにより、受容体が細胞のアポトーシスをもたらすシグナル伝達経路に関与し得る。こうして、細胞をこれらのホルモンアンタゴニストに応答性にするために、充分なレベルのホルモン受容体を癌細胞中で維持することが重要であるかもしれない。しかしながら、多くの癌細胞では、ホルモン受容体の発現がダウンレギュレートされ、又は変化されて異なるスプライシングメカニズムにより受容体の突然変異体を生成して突然変異体受容体をこれらのホルモンアンタゴニストとの低い結合アフィニティーにする。
【００４９】
全乳癌の1/3がER及びPRを欠いている。これらの症状は少ない分化腫瘍及び不十分な臨床結果と関連している。加えて、ER陽性腫瘍の約1/2がPRタンパク質を欠いており、この表現型を有する患者は腫瘍が両方の受容体を発現するものよりもホルモン療法に応答しそうにない。PRはERにより誘導されるので、その存在は機能性ERのマーカーである。
【００５０】
例えば、過去20年中に、乳癌の治療のための特別なホルモン療法はアンチエストロゲン、タモキシフェンであった。タモキシフェンの使用は腫瘍がエストロゲン受容体陽性(ER+)/プロゲステロン受容体陽性(PR+)と分類される患者で有利な応答及び生存上の利点を生じると判明されていた。更に、タモキシフェンは対側性疾患の発生率を低下すると知られている唯一の薬物である。この薬物は比較的少ない有害な副作用を生じるとともに、幾つかの有益な効果、例えば、骨密度を維持し、また月経後の婦人の心筋梗塞の発生率を低下することを示す。
【００５１】
しかしながら、腫瘍が最終的にタモキシフェン耐性表現型又はタモキシフェン刺激表現型を獲得し、疾患再発を生じる。幾つかのメカニズムが、一層有効な第一系列又はおそらく第二系列の治療戦略を開発することを希望して、タモキシフェン耐性乳癌を説明するのに提案されていた。一つの理論はエストロゲン受容体、薬物標的中の突然変異の発生である。多くの研究がエストロゲン受容体mRNAスプライス変異体の検出を報告しており、これらの変異体mRNAの蓄積がタモキシフェン耐性乳癌の発生の原因であることが示唆されていた。
【００５２】
ER遺伝子及びPR遺伝子内のその他の構造変化、例えば、メチル化、欠失、又は多形性が乳癌細胞中のER遺伝子発現及びPR遺伝子発現の損失に寄与すると考えられる。特に、本発明者らはER遺伝子の低い発現レベル又は発現の欠如がこれらの遺伝子のプロモーター領域中の異常な高メチル化に起因し得ると考える。こうして、デシタビン又は別のDNAメチル化インヒビターを使用してER遺伝子のプロモーターの異常な高メチル化を抑制することにより、癌細胞のホルモン応答性が回復し得る。デシタビンとホルモン薬の組み合わせはホルモン薬がERに結合し、癌細胞（ホルモン薬に対するそれらの耐性がERプロモーターの高メチル化の抑制により抑制される）のアポトーシスを誘発する点で癌細胞に対する相乗効果を有し得る。
【００５３】
6.  免疫療法とのDNAメチル化インヒビターの組み合わせ
本発明はまた免疫療法治療と連係して癌をDNAメチル化インヒビターで治療する方法を提供する。
一実施態様において、DNAメチルインヒビターが癌細胞表面抗原のモノクローナル抗体と組み合わせて使用される。腫瘍細胞又は白血病細胞は部分的に標的抗原をコードする遺伝子のメチル化により細胞表面抗原をダウンレギュレートすることにより免疫検出及び／又は根絶を回避するので、このようなメチル化の抑制及び標的抗原遺伝子発現のサイレンシングは腫瘍特異性抗原を標的とする免疫療法の治療効力を増大すべきである。
本明細書に使用される、腫瘍抗原のモノクローナル抗体は腫瘍及び白血病細胞、好ましくは腫瘍特異性抗原により発現された抗原に対して誘導された抗体である。モノクローナル抗体はまた完全ヒト抗体及びヒト化抗体を含む。
【００５４】
例えば、モノクローナル抗体ヘルセプチン（登録商標）（トラストルズマブ）は転移性乳癌を含む幾つかの乳腫瘍中で過剰発現されるヒト表皮成長因子受容体２(HER2)に対し形成される。HER2タンパク質の過剰発現は一層攻撃的な疾患及び診療所における不十分な予後と関連している。ヘルセプチン（登録商標）は腫瘍がHER2タンパク質を過剰発現する転移性乳癌を有する患者の治療のための単一薬剤として使用される。特に、転移性乳癌はこの遺伝子のDNAメチル化によりHER2タンパク質の発現をダウンレギュレートすることによりこのような免疫療法を回避し得る。例えば、デシタビンを使用することによるこの遺伝子のDNAメチル化の抑制はHER2遺伝子の発現を増大し、この細胞表面受容体のモノクローナル抗体（例えば、ヘルセプチン（登録商標））による治療の治療効力を高めるべきである。それ故、DNAメチル化インヒビター及びHER2タンパク質を標的とする抗体を含む組み合わせ療法は腫瘍、特に転移性癌に対し治療相乗効果を有し得る。
【００５５】
腫瘍抗原のモノクローナル抗体の別の例はリツキサン（登録商標）（リツキシマブ）であり、これはリンパ腫細胞のCD20に対し生じられ、正常及び悪性のCD20+プレＢ細胞及び成熟Ｂ細胞を選択的に枯渇する。リツキサン（登録商標）は再発又は治療抵抗性の低グレード又は小胞性のCD20+B細胞非ホジキンリンパ腫を有する患者の治療のための単一薬剤として使用される。DNAメチル化インヒビター及びリツキサン（登録商標）を含む組み合わせ療法はリンパ腫だけでなく、その他の形態もしくは型の悪性腫瘍に対する治療相乗効果を有し得る。
【００５６】
DNAメチル化インヒビターはまたリンパ球の表面で発現された抗原を標的とするモノクローナル抗体と組み合わせて使用されてもよい。例えば、カンパス（登録商標）（アレムツズマブ）がＢリンパ球及びＴリンパ球に見られるCD52抗原を特異的に標的とするこのようなモノクローナル抗体である。このCD53抗体はリンパ球に結合し、アポトーシスを含む、幾つかの方法でそれらを溶解する。カンパス（登録商標）は慢性リンパ性白血病(CLL)及びリンパ腫の治療に使用される。特に、再発白血病細胞はこの遺伝子のDNAメチル化によりCD52抗原の発現をダウンレギュレートすることによりカンパス（登録商標）の治療を回避し得る。例えば、デシタビンを使用することによるこの遺伝子のDNAメチル化の抑制はCD52抗原遺伝子の発現を増大し、この抗体による治療の治療効力を高めるべきである。それ故、DNAメチル化インヒビター及びCD52抗原を標的とする抗体を含む組み合わせ療法は白血病及びリンパ腫に対する治療相乗効果を有し、こうしてその他の非標的細胞に対する毒性を低下し、副作用を有意に低下し得る。
【００５７】
DNAメチル化インヒビターはまた細胞傷害薬とコンジュゲートされて抗体により認識される抗原を発現する癌細胞を選択的に標的とし、死滅する抗体と組み合わせて使用されてもよい。例えば、ミエロターグ（登録商標）（ゲムツズマブ・ゾガマイシン）は再発成人急性骨髄性白血病の治療に望ましいこのような抗体コンジュゲートである。この抗体コンジュゲートは特異性抗体、CD33を化学療法薬（ゾガマイシン）と組み合わせる。詳しくは、抗体が白血病細胞に見られるCD33抗原に結合し、これが次いでゾガマイシンの毒性用量を癌細胞に送出する。特に、再発白血病細胞はこの遺伝子のDNAメチル化によりCD33抗原の発現をダウンレギュレートすることにより抗体コンジュゲートに対する耐性を発生し得る。例えば、デシタビンを使用することによるこの遺伝子のDNAメチル化の抑制はCD33抗原遺伝子の発現を増大し、抗体コンジュゲートによる治療の治療効力を高めるべきである。それ故、DNAメチル化インヒビター及びCD33抗原を標的とする抗体を含む組み合わせ療法は白血病、特に再発白血病に対する治療相乗効果を有し、こうしてその他の非標的細胞に対する毒性を低下し、副作用を有意に低減し得る。
【００５８】
別の実施態様において、DNAメチル化インヒビターは再発後骨髄移植片(BMT)の治療のためにドナーリンパ球注入と組み合わせて使用される。同種異系BMTは慢性骨髄性白血病(CML)を有する患者についてのケアーの標準である。BMT後に再発する或る種の患者では、初期の一人以上の骨髄ドナーからの同種異系リンパ球の注入は移植片対白血病効果により寛解を再誘導し得る。例えば、デシタビンを使用することによるDNAメチル化の抑制は白血病抗原の発現を増大し、ドナーリンパ球の治療効力を高めるべきである。好ましい実施態様において、患者がドナーリンパ球注入の前にデシタビンで治療される。
更に別の実施態様において、DNAメチル化インヒビターは甲状腺癌の治療のために131Iと組み合わせて使用される。殆どの甲状腺癌は静脈内投与された131Iに応答する。何とならば、甲状腺細胞がこの放射性薬品を有効に吸収する高度に特異的なナトリウム／ヨウ素同伴輸送(NIS)を有するからである。進行又は治療抵抗性甲状腺癌では、細胞がメチル化及びその遺伝子のサイレンシングのためにこのポンプの発現を失っていた。DNAメチル化インヒビター、例えば、デシタビンによる甲状腺癌の組み合わせ治療はNIS発現の損失を予防し、131Iの治療効力を高めるであろう。
【００５９】
7.  組み合わせて使用されるその他の抗腫瘍薬
多種の抗腫瘍薬が異常な細胞増殖と関連する種々の疾患、例えば、癌を治療するためにデシタビンの如きDNAメチル化インヒビターと組み合わせて使用されてもよい。DNAメチル化インヒビターと組み合わされる一種以上の特別な抗腫瘍薬は治療すべき癌の特別な型に依存し得る。上記された特別な組み合わせは本発明の例示の例にすぎない。
【００６０】
抗腫瘍薬は抗生物質薬であってもよい。抗生物質薬は天然産物の修飾により抗生物質と同様の様式で生成される抗癌薬のグループである。抗生物質薬の例として、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びアントラセンジオン）、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカトマイシンが挙げられるが、これらに限定されない。これらの抗生物質薬は異なる細胞成分を標的とすることにより細胞成長を妨げる。例えば、アントラサイクリンは転写活性DNAの領域でDNAトポイゾメラーゼIIの作用を妨げ、これがDNAストランド切断をもたらすと一般に考えられる。ブレオマイシンは鉄をキレート化し、活性化錯体を生成し、次いでこれがDNAの塩基に結合して、ストランド切断及び細胞死滅を生じると一般に考えられる。デシタビン及び抗生物質薬を含む組み合わせ療法は癌に対する治療相乗効果を有し、これらの化学療法薬と関連する副作用を低減し得る。
【００６１】
抗腫瘍薬は抗代謝薬であってもよい。抗代謝薬は癌細胞の生理学及び増殖に重要な代謝プロセスを妨げる薬物のグループである。活発に増殖している癌細胞は多量の核酸、タンパク質、脂質、及びその他の重要な細胞成分の連続合成を必要とする。抗代謝産物の多くはプリンもしくはピリミジンヌクレオシドの合成を抑制し、又はDNA複製の酵素を抑制する。或る種の抗代謝産物はまたリボヌクレオシド及びRNAの合成及び／又はアミノ酸代謝及びタンパク質合成を同様に妨げる。重要な細胞成分の合成を妨げることにより、抗代謝産物は癌細胞の成長を遅延又は停止し得る。抗代謝薬の例として、フルオロウラシル(5-FU)、フロキシウリジン(5-FUdR)、メトトレキセート、ロイコボリン、ヒドロキシ尿素、チオグアニン(6-TG)、メルカプトプリン(6-MP)、シタラビン、ペントスタチン、フルダラビンホスフェート、クラドリビン(2-CDA)、アスパラギナーゼ、及びゲムシタビンが挙げられるが、これらに限定されない。DNAメチル化インヒビター及び抗代謝薬を含む組み合わせ療法は癌に対する治療相乗効果を有し、これらの化学療法薬と関連する副作用を低減すると考えられる。
【００６２】
抗腫瘍薬はまた植物由来薬であってもよい。植物由来薬は植物に由来し、又はこれらの薬剤の分子構造に基づいて修飾される薬物のグループである。植物由来薬の例として、ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンゾリジン及びビノレルビン）、水溶性又は水不溶性のカンプトテシン（例えば、20(S)-カンプトテシン、9-ニトロ-カンプトテシン、9-ニトロ-カンプトテシン、及びトポテカン）、ポドフィロトキシン（例えば、エトポシド(VP-16)及びテニポシド(VM-26)）、タキサン（例えば、パクリタキセル及びドセタキセル）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの植物由来薬は一般にツブリンに結合し、有糸分裂を抑制する抗有糸分裂薬として作用する。カンプトテシンは核酵素DNAトポイソメラーゼＩ（topo-I）（これは別のDNAストランドが転写中に通過し得る一本鎖破断を生じることによりスーパーコイル二本鎖DNAの“弛緩”の原因である）の強力なインヒビターであると考えられる。topo-Iはその破断を再シールしてDNA複製が生じることを可能にする。topo-Iの抑制は安定なDNA-トポイソメラーゼ複合体の形成をもたらすとともに、不可逆の二本鎖DNA破断の最終的な形成をもたらし、アポトーシス及び／又は細胞死滅のその他の形態をもたらす。エトポシドの如きポドフィロトキシンはトポイソメラーゼIIと相互作用することによりDNA合成を妨げ、DNAストランド切断をもたらすと考えられる。デシタビン及び植物由来薬を含む組み合わせ療法は癌に対する治療相乗効果を有し、これらの化学療法薬と関連する副作用を低減し得る。
【００６３】
抗腫瘍薬は生物学的薬剤であってもよい。生物学的薬剤は単独で、又は化学療法及び／又は放射線療法と組み合わせて使用される場合に癌／腫瘍回帰を誘発する生物分子のグループである。生物学的薬剤の例として、免疫調節タンパク質、例えば、サイトカイン、腫瘍抗原のモノクローナル抗体、腫瘍サプレッサー遺伝子、及び癌ワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。DNAメチル化インヒビター及び生物学的薬剤を含む組み合わせ療法は癌に対する治療相乗効果を有し、催腫瘍シグナルに対する患者の免疫応答を高め、この生物学的薬剤と関連する潜在的な副作用を低減し得る。
【００６４】
サイトカインは顕著な免疫調節活性を有する。或る種のサイトカイン、例えば、インターロイキン-2（IL-2、アルデスロイキン）及びインターフェロンα（IFN-α）が抗腫瘍活性を示し、転移性腎細胞癌及び転移性悪性メラノーマを有する患者の治療に認可されていた。IL-2はＴ細胞媒介免疫応答に重要であるＴ細胞成長因子である。或る種の患者に関するIL-2の選択的抗腫瘍効果は自己と非自己の間で識別する細胞媒介免疫応答の結果であると考えられる。DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得るインターロイキンの例として、インターロイキン２(IL-2)、及びインターロイキン４(IL-4)、インターロイキン12（IL-12）が挙げられるが、これらに限定されない。
インターフェロンαは重複活性を有する23種より多い関連サブタイプを含み、IFN-αサブタイプの全てが本発明の範囲内にある。IFN-αは多くの充実性悪性及び血液学的悪性に対し活性を示し、後者が特に感受性であることが明らかである。DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得るインターフェロンの例として、インターフェロンα、インターフェロンβ（繊維芽細胞インターフェロン）及びインターフェロンγ（繊維芽細胞インターフェロン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
DNAメチル化インヒビターと連係して使用し得るその他のサイトカインとして、造血及び免疫機能に顕著な効果を与えるこれらのサイトカインが挙げられる。このようなサイトカインの例として、エリトロポイエチン（エポイエチンα）、顆粒細胞CSF（フィルグラスチム）、及び顆粒細胞、マクロファージCSF（サルグラモスチム）が挙げられるが、これらに限定されない。これらのサイトカインは化学療法誘導造血毒性を低減するためにDNAメチル化インヒビターと連係して使用し得る。
【００６６】
サイトカイン以外の免疫調節薬がまた異常な細胞成長を抑制するためにDNAメチル化インヒビターと連係して使用し得る。このような免疫調節薬の例として、バチルスカルメット-ゲラン、レバミソール、及びオクトレオチド、即ち、天然産ホルモンソマトスタチンの効果を模擬する長く作用するオクタペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
腫瘍サプレッサー遺伝子は細胞の成長及び分裂サイクルを抑制するように機能し、こうして腫瘍の発生を防止する遺伝子である。腫瘍サプレッサー遺伝子中の突然変異は細胞に抑制シグナルのネットワークの一種以上の成分を無視させ、細胞サイクルチェックポイントを解消し、高率の制御された細胞成長−癌をもたらす。腫瘍サプレッサー遺伝子の例として、DPC-4、NF-1、NF-2、RB、p53、WT1、BRCA1及びBRCA2が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
8.  治療の適応症
本発明の組成物を使用して治療し得る好ましい適応症として、望ましくなく、又は制御されない細胞増殖を伴う症状が挙げられる。このような適応症として、良性腫瘍、種々の型の癌、例えば、原発性腫瘍及び腫瘍転移、再狭窄（例えば、冠、頚動脈、及び脳の病変）、血液学的障害、内皮細胞の異常な刺激（アテローム硬化症）、手術のための生体組織への傷害、異常な創傷治癒、異常な血管形成、組織の繊維症を生じる疾患、反復運動障害、高度に血管化されない組織の障害、及び臓器移植片と関連する増殖性応答が挙げられる。
【００６９】
一般に、良性腫瘍中の細胞はそれらの分化された特徴を保持し、完全に制御されない様式では分裂しない。良性腫瘍は通常局在化され、非転移性である。本発明を使用して治療し得る特別な型の良性腫瘍として、血管腫、肝細胞アデノーマ、海綿状血管腫、巣状小結節過形成、聴神経腫、神経繊維腫、胆管アデノーマ、胆管のう腺腫、繊維腫、脂肪腫、平滑筋腫、中皮腫、奇形腫、粘液腫、再生小結節過形成、トラコーマ及び化膿性肉芽腫が挙げられる。
【００７０】
悪性腫瘍では細胞が分化されなくなり、生体の成長調節シグナルに応答せず、制御されない様式で増殖する。悪性腫瘍は侵食性であり、遠位部位まで広がることができる（転移）。悪性腫瘍は一般に二つのカテゴリー：一次及び二次に分けられる。一次腫瘍はそれらが見られる組織から直接生じる。二次腫瘍、又は転移は生体中のいずれかで生じたが遠位の臓器にすでに広がった腫瘍である。転移に普通の経路は隣接構造への直接増殖、血管系又はリンパ系による広がり、並びに組織面及び生体間隙（腹膜液、脳脊髄液等）に沿ってのトラッキングである。
【００７１】
本発明を使用して治療し得る特別な型の癌又は悪性腫瘍（一次又は二次）として、乳癌、皮膚癌、骨癌、前立腺癌、肝臓癌、肺癌、脳癌、喉頭、胆嚢、膵臓、直腸、副甲状腺、甲状腺、副腎、神経組織、頭部及び首、結腸、胃、気管支、腎臓の癌、基底細胞癌、潰瘍型及び乳頭型の両方の扁平上皮癌、転移性皮膚癌、骨肉腫、ユーイング肉腫、ベチクラム細胞肉腫、ミエローマ、巨細胞腫瘍、小細胞肺腫瘍、胆石、膵島細胞腫瘍、原発性脳腫瘍、急性及び慢性のリンパ球及び顆粒細胞の腫瘍、有毛細胞腫瘍、アデノーマ、過形成、髄様癌、褐色細胞腫、粘膜神経腫、腸神経節神経腫、増殖性角膜神経腫瘍、マルファノイド・ハビタス腫瘍、ビルムス腫瘍、精上皮腫、卵巣腫瘍、平滑筋腫、子宮頸部形成異常及びin situ癌腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、軟組織肉腫、悪性カルチノイド、局所皮膚病変、菌状息肉腫、横紋筋肉腫、カポージ肉腫、骨原性肉腫及びその他の肉腫、悪性過カルシウム血、腎細胞腫瘍、一次性赤血球増加、腺癌、多形性膠芽腫、白血病、リンパ腫、悪性メラノーマ、類表皮癌、並びにその他の癌腫及び肉腫が挙げられる。
【００７２】
血液学的障害として、血液細胞中の形成不全型変化をもたらし得る血液細胞の異常な成長及び血液学的悪性、例えば、種々の白血病が挙げられる。血液学的障害の例として、急性骨髄性白血病、急性前骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ芽球性白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄形成異常症候群、及び鎌状細胞貧血が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７３】
急性骨髄性白血病(AML)は成人に生じる急性白血病の最も普通の型である。幾つかの遺伝性遺伝子障害及び免疫不全状態はAMLの増大されたリスクと関連している。これらとして、ランダム染色体分解をもたらす、DNA安定性における欠陥による障害、例えば、ブルーム症候群、ファンコニ貧血、リイ-フラウメニ（Li-Fraumeni）同族、毛細管拡張性運動失調、及びＸ結合型無ガンマグロブリン血が挙げられる。
【００７４】
急性前骨髄性白血病(APML)はAMLの特有のサブグループに相当する。このサブタイプはt(15;17)染色体トランスロケーションを含む前骨髄芽細胞を特徴とする。このトランスロケーションはレチノイン酸受容体及び配列PMLを含む融合転写産物の生成をもたらす。
急性リンパ芽球性白血病(ALL)は種々のサブタイプにより示される特有の臨床特徴を有するヘテロジェネラス(heterogenerous)疾患である。再発細胞発生異常がALLで実証されていた。最も普通の細胞発生異常は9;22トランスロケーションである。得られるフィラデルフィア染色体は患者の不十分な予後に相当する。
【００７５】
慢性骨髄性白血病(CML)は多能性幹細胞のクローン骨髄増殖障害である。CMLは染色体９及び22のトランスロケーションを伴って、フィラデルフィア染色体を生じる特異的染色体異常を特徴とする。イオン化放射線がCMLの発生と関連している。
骨髄形成異常症候群(MDS)は骨髄、赤血球、及び骨髄巨核球系中の形成異常変化を含む一種以上の造血系列中の形成異常変化の存在のために一緒に類別された異質クローン造血幹細胞障害である。これらの変化は三つの系列のうちの一つ以上で血球減少をもたらす。MDSで冒された患者は典型的には貧血、好中球減少症（感染症）、又は血小板減少症（出血）に関連する合併症を発生する。一般に、MDSを有する患者の約10％から約70％までが急性白血病を発生する。
【００７６】
外科手術中の生体組織への傷害のための異常な細胞増殖の治療は関節手術、腸手術、及びケロイド瘢痕形成を含む、種々の外科処置について可能であり得る。繊維症組織を生じる疾患として、気腫が挙げられる。本発明を使用して治療し得る反復運動障害として、手根管症候群が挙げられる。本発明を使用して治療し得る細胞増殖障害の例は骨腫瘍である。
【００７７】
本発明を使用して治療し得る器官移植と関連する増殖応答として、潜在的器官拒絶又は関連合併症に寄与する増殖応答が挙げられる。詳しくは、これらの増殖応答は心臓、肺、肝臓、腎臓、及びその他の生体器官又は器官系の移植中に生じるかもしれない。
本発明を使用して治療し得る異常な血管形成として、慢性関節リウマチ、虚血性再潅流関連脳浮腫及び損傷、皮質虚血、卵巣形成異常及び血管過多（多のう胞性卵巣症候群）、子宮内膜症、乾癬、糖尿病性網膜症、及びその他の眼の血管形成疾患、例えば、早期網膜症（水晶体後繊維増殖）、黄斑変性、角膜移植片拒絶、ニューロスクラー(neuroscular)緑内障及びオスター・ウェバー症候群を伴うこれらの異常な血管形成が挙げられる。
【００７８】
異常な血管形成と関連する疾患は血管成長を必要とし、又は誘導する。例えば、角膜血管形成は三つの期：前血管潜伏期、活発な新生血管形成、並びに血管の成熟及び回帰を伴う。炎症応答の要素、例えば、白血球、血小板、サイトカイン、及びエイコサノイド、又は未同定血漿成分を含む、種々の血管形成因子の同一性及びメカニズムが未だに明らかにされる必要がある。
【００７９】
本発明の別の実施態様において、望ましくない血管形成又は異常な血管形成と関連する疾患の治療方法が提供される。その方法は望ましくない血管形成又は異常な血管形成を患っている患者にDNAメチル化インヒビター、及びin vivoの抗腫瘍薬としての活性が高レベルのDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬を含む組成物を投与することを含む。血管形成及び／又は血管形成疾患を抑制するのに必要とされるこれらの薬剤の用量はその症状の重度、投与の経路、及び担当医師により決められる関連因子に依存し得る。一般に、認められ、かつ有効な毎日の用量は血管形成及び／又は血管形成疾患を有効に抑制するのに充分な量である。
【００８０】
この実施態様によれば、本発明の組成物は望ましくない血管形成、例えば、腎臓／脈絡膜の新生血管形成及び角膜の新生血管形成と関連する種々の疾患を治療するのに使用し得る。腎臓／脈絡膜の新生血管形成の例として、ベスト病、近視、眼の小か(pit)、スターガート病、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、鎌状細胞貧血、サルコイド、梅毒、弾性繊維偽黄色腫、頚動脈アボストラクチブ(abostructive)疾患、慢性ブドウ膜炎／ビトリチス(vitritis)、ミコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、早期網膜症、イールズ病、糖尿病性網膜症、黄斑変性、ベチェット病、網膜炎又は脈絡膜炎を生じる感染症、推定の眼のヒストプラスマ症、扁平部炎、慢性網膜剥離、過粘稠度症候群、トキソプラスマ症、トラウマ及び後レーザー合併症、ルベオーシスと関連する疾患（角の新生血管形成）及び全ての形態の増殖性硝子体網膜症を含む繊維血管組織又は繊維状組織の異常増殖により生じた疾患が挙げられるが、これらに限定されない。角膜新生血管形成の例として、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズ着用過多、アトピー性角膜炎、上肢角膜炎、表皮爪膜乾性角膜炎、シェーグレン、赤鼻、フィレクテヌロシス(phylectenulosis)、糖尿病性網膜症、早期網膜症、角膜移植片拒絶、モーレン潰瘍、テリエン辺縁変性、辺縁表皮剥離、多発性関節炎、ウェジナーサルコイドーシス、強膜炎、ペリフィゴイド・ラジアル(periphigoid radial)角膜切開、血管新生緑内障及び水晶体後繊維増殖、梅毒、ミコバクテリア感染症、脂質変性、薬品火傷、細菌性潰瘍、菌類潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、原生動物感染症及びカポージ肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００８１】
本発明の更に別の実施態様において、異常血管形成と関連する慢性炎症疾患の治療方法が提供される。その方法は異常血管形成と関連する慢性炎症疾患を患っている患者にDNAメチル化インヒビター、及びin vivoの抗腫瘍薬としての活性が高レベルのDNAメチル化により悪影響される抗腫瘍薬を含む組成物を投与することを含む。慢性炎症は炎症細胞のインフラックスを維持するための毛細管新芽の連続形成に依存する。炎症細胞のインフラックス及び存在が肉芽腫を生じ、こうして慢性炎症状態を維持する。本発明の組成物を使用する血管形成の抑制は肉芽腫の形成を防止し、それによりその疾患を軽減する。慢性炎症疾患の例として、炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎、乾癬、サルコイドーシス、及び慢性関節リウマチが挙げられるが、これらに限定されない。
【００８２】
炎症性腸疾患、例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎は胃腸道中の種々の部位における慢性炎症及び血管形成を特徴とする。例えば、クローン病は最も普通に遠位の回腸及び結腸を冒す慢性経壁炎症疾患として生じるが、また口からアヌス及び肛門周囲の領域までの胃腸道のあらゆる部分中に生じ得る。クローン病を有する患者は一般に腹痛、発熱、食欲減退、体重損失及び腹部膨化と関連する慢性下痢を有する。潰瘍性大腸炎はまた結腸粘膜中に生じる慢性の、非特異性の、炎症性かつ潰瘍性の疾患であり、出血性下痢の存在を特徴とする。これらの炎症性腸疾患は一般に胃腸道中の慢性肉芽腫性炎症により生じられ、炎症細胞のシリンダーにより包囲された新しい毛細管新芽を伴う。本発明の組成物による血管形成の抑制は新芽の形成を抑制し、肉芽腫の形成を防止すべきである。また、炎症性腸疾患は特別な腸の症状発現、例えば、皮膚病変を示す。このような病変は炎症及び血管形成を特徴とし、胃腸道以外の多くの部位で生じ得る。本発明の組成物による血管形成の抑制は炎症性細胞のインフラックスを減少し、病変形成を防止すべきである。
【００８３】
サルコイドーシス、別の慢性炎症性疾患は多系肉芽種性障害として特徴づけられる。この疾患の肉芽腫は生体中のいずれでも形成でき、こうしてその症候は肉芽腫の部位及びその疾患が活性である場所に依存する。肉芽腫は炎症性細胞の一定の供給を与える血管形成性毛細管新芽により形成される。本発明の組成物を使用して血管形成を抑制することにより、このような肉芽腫形成が抑制し得る。乾癬、また慢性かつ再発性の炎症性疾患は、種々のサイズの丘疹及びプラークを特徴とする。本発明の組成物を使用する治療は特徴的な病変を維持するのに必要な新しい血管の形成を防止し、症候からの患者の軽減を与えるべきである。
【００８４】
また、慢性関節リウマチ(RA)は末梢の関節の非特異的炎症を特徴とする慢性炎症性疾患である。関節の滑膜ライニング中の血管は血管形成を受けると考えられる。新しい血管ネットワークを形成することに加えて、内皮細胞はパンヌス成長及び軟骨分解をもたらす因子及び反応性酸素種を放出する。血管形成に関係する因子は慢性関節リウマチの慢性に炎症した状態に活発に寄与し、またその状態を維持することを助けるかもしれない。本発明の組成物を単独で、又はその他の抗RA薬と連係して使用する治療は慢性炎症を維持するのに必要な新しい血管の形成を防止し、症候からのRA患者の軽減を与えるべきである。
【００８５】
9.  投与の経路及び投薬養生法
多種の送出方法及び異なる送出方法のための製剤が本発明の組み合わせ療法に使用し得る。
本発明の治療薬の組み合わせは本発明の治療薬の組み合わせを含む組成物として投与されてもよい。このような組成物は、本発明の治療薬の組み合わせに加えて、通常の医薬賦形剤、及びその他の通常の医薬上不活性の薬剤を含んでもよい。更に、組成物は本発明の治療薬の組み合わせに加えて活性薬剤を含んでもよい。これらの付加的な活性薬剤は本発明の付加的な化合物、又は一種以上のその他の医薬上活性な薬剤を含んでもよい。好ましい実施態様において、本発明の組成物は関係する適応症を治療するのに有効な量の、本発明の治療薬の組み合わせを含む、活性薬剤を含むであろう。
【００８６】
本発明の治療薬の組み合わせ及び／又は組成物は経口、非経口、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮、舌下、筋肉内、直腸、経頬、鼻内、リポソーム、吸入、膣、眼内、局所送出（例えば、カテーテル又はステントによる）、皮下、脂肪内、関節内、又はくも膜下に投与又は同時投与されてもよい。本発明の化合物及び／又は組成物はまた除放投薬形態で投与又は同時投与されてもよい。
【００８７】
本発明の治療薬の組み合わせ及び組成物は種々の経路により投与されてもよく、あらゆる通常の投薬形態で投与又は同時投与されてもよい。本発明の状況における同時投与は改良された診療結果を得るために協調治療の経過中の一種より多い治療薬の投与を意味すると定義される。このような同時投与はまた同時に広範囲にわたってもよく、即ち、時間の重なり期間中に生じてもよい。例えば、デシタビンは抗腫瘍薬が投与される前、同時、又は後に患者に投与されてもよい。好ましい実施態様において、患者がDNAメチル化インヒビター（例えば、デシタビン）で前治療され、次いで抗腫瘍薬で治療されてもよい。
【００８８】
本発明の治療薬の組み合わせの量は、当業者によりなされる決定に従って、変化し得るが、所望の部位で細胞傷害又は細胞静止効果を生じるのに有効な量であることが好ましい。これらの合計量は本発明の治療薬の組み合わせの全身投与に関する合計量よりも少ないことが好ましく、最大の寛容用量よりも少ないことが好ましい。除放投薬形態について、適切な放出時間は変化し得るが、約１時間から約６ヶ月まで、最も好ましくは約１週から約４週まで持続することが好ましい。本発明の治療薬の組み合わせ及び／又は組成物を含む製剤は、当業者により決められるように、特別な状況に従って、また一般に本明細書に教示されるように、変化し得る。
【００８９】
好ましい実施態様において、デシタビンは注射、例えば、巨丸剤i.v.注射、連続i.v.注入及び１時間以上のi.v.注入により患者に投与される。例えば、デシタビンは1-1000mg/m2の範囲、好ましくは1-200mg/m2の範囲、更に好ましくは2-50mg/m2の範囲、最も好ましくは5-20mg/m2の用量で治療サイクル当り3-5日にわたって毎日1-24時間のi.v.注入により患者に投与されてもよい。デシタビンについて50mg/m2以下の好ましい用量は癌の通常の化学療法に使用される用量よりも極めて低いと考えられる。このような低用量のデシタビンを使用することにより、癌細胞中でサイレンスにされた遺伝子の転写活性が活性化されて細胞成長停止、分化及びアポトーシスのための下流のシグナル伝達を誘発し得る。細胞死滅への癌細胞のこのような感作はデシタビンと連係して使用される抗腫瘍薬の低用量を必要とするかもしれず、それにより治療における高治療インデックスを得る。更に、両方の薬剤の用量を低下することは正常な細胞に対する少ない全身の細胞傷害効果を有し、こうして治療される患者に少ない副作用を有するべきである。
【００９０】
デシタビンは、緩衝塩、例えば、二水素カリウム塩及びpH調節剤、例えば、水酸化ナトリウムと一緒に、注射用の無菌粉末として供給されてもよい。この製剤は2-8℃で貯蔵されることが好ましく、これは薬物を少なくとも２年にわたって安定に保つべきである。この粉末製剤は注射用の無菌水10mlで再生し得る。この溶液は更に当業界で知られている注入液体、例えば、0.9％の塩化ナトリウム注射液、５％のデキストロース注射液及び乳酸処理したリンゲル注射液で希釈されてもよい。再生され、希釈された溶液は最大効力の送出のために4-6時間以内に使用されることが好ましい。
【００９１】
細胞傷害抗癌薬物と関連する潜在的な造血毒性は造血成長因子、例えば、G-CSF又はGM-CSFを使用することにより低減し得る。また、正常な造血幹細胞は遺伝子療法を使用することにより薬物誘発毒性から保護し得る。例えば、ヒトシチジンデアミナーゼcDNAが造血幹細胞に導入されてそれらをデシタビンの細胞傷害から保護し得る。シチジンデアミナーゼはシトシンヌクレオチド及び関連類似体の脱アミン化を触媒作用する。デシタビンの如きシトシンヌクレオチド類似体の脱アミン化はそれらの薬理学的活性の損失をもたらす。
【００９２】
本発明の治療薬の組み合わせはキットの形態で使用されてもよい。このようなキットの配置及び構築は通常当業者に知られている。このようなキットは本発明の治療薬の組み合わせ及び／又は組成物を含むための容器、及び／又は本発明の治療薬の組み合わせ及び／又は組成物を投与するためのその他の装置を含んでもよい。
種々の改良及び変化が本発明の精神又は範囲から逸脱しないで本発明の化合物、組成物、キット、及び方法になし得ることは当業者に明らかであろう。こうして、本発明は本発明の改良及び変化が特許請求の範囲及びそれらの均等物内にあることを条件としてそれらを包含することが意図されている。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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