(57)【要約】本発明は、細胞保護活性を有する、修飾されたヒドロキシ担持芳香族環構造に関する。より詳細には、本発明の第１の具体例はフェノール化合物に関するものであり、詳細には、未縮合多環式疎水性置換基がそのヒドロキシ置換Ａ−環に結合しているステロイド（例えば、エストロゲン）に関する。さらに本発明は、化合物を投与することを含む、細胞集団に細胞保護を付与する方法に関する。
2004518637.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシ置換芳香族環構造およびそれに結合した未縮合多環式疎水性置換基を含む細胞保護活性を有する化合物を、細胞変性疾患の治療を要する対象に投与することを特徴とする、細胞変性疾患の治療方法。
【請求項２】
化合物が式：
【化１】
2004518637.tif 000020
［式中、ｎは１または２であり、Ｒ１は未縮合多環式置換基であり、Ｒ２およびＲ３は水素、ハロゲン、置換もしくは未置換ヒドロカルビルからなる群より独立して選択される］を有するものである請求項１の方法。
【請求項３】
Ｒ２およびＲ３が異なる炭素原子に結合しており、さらにＲ２およびＲ３およびそれらが結合する炭素原子が縮合環を形成している請求項２の方法。
【請求項４】
該化合物が式：
【化２】
2004518637.tif 000021
［式中、Ｒ１およびＲｘは未縮合多環式疎水性置換基、水素、および置換もしくは未置換アルキルからなる群より独立して選択され、Ｒ１およびＲｘのうち少なくとも１つが未縮合多環式疎水性置換基であり；Ｒ１３は水素または置換もしくは未置換アルキルであり；Ｒｚは水素、ヒドロキシ、置換もしくは未置換アルキルまたはオキソである］を有するものである請求項３の方法。
【請求項５】
該未縮合多環式置換基がアダマンチルである請求項４の方法。
【請求項６】
Ｒｚがオキソである請求項５の方法。
【請求項７】
該化合物が式：
【化３】
2004518637.tif 000022
または
【化４】
2004518637.tif 000023
［式中、Ｒｘは請求項４における定義と同じ］を有するものである請求項６の方法。
【請求項８】
Ｒｘが水素またはメチルである請求項７の方法。
【請求項９】
化合物が式：
【化５】
2004518637.tif 000024
を有するものである請求項８の方法。
【請求項１０】
化合物が式：
【化６】
2004518637.tif 000025
を有するものである請求項８の方法。
【請求項１１】
該化合物が式：
【化７】
2004518637.tif 000026
または
【化８】
2004518637.tif 000027
［式中、Ｒ１およびＲｘは請求項４における定義と同じ］を有するものである請求項４の方法。
【請求項１２】
Ｒ１がアダマンチルであり、Ｒｘが水素、メチルまたはメチルプロピルである請求項１１の方法。
【請求項１３】
化合物が式：
【化９】
2004518637.tif 000028
を有するものである請求項１２の方法。
【請求項１４】
化合物が式：
【化１０】
2004518637.tif 000029
を有するものである請求項１２の方法。
【請求項１５】
化合物が式：
【化１１】
2004518637.tif 000030
を有するものである請求項１２の方法。
【請求項１６】
未縮合多環式疎水性置換基が二環式である請求項１の方法。
【請求項１７】
該置換基がビシクロ［２．２．１］ヘプタニルおよびビシクロ［３．２．１］オクタニルからなる群より選択されるものである請求項１６の方法。
【請求項１８】
未縮合多環式疎水性置換基が三環式である請求項１の方法。
【請求項１９】
該置換基がアダマンチルである請求項１８の方法。
【請求項２０】
ヒドロキシ置換芳香族環構造が多環式である請求項１の方法。
【請求項２１】
多環式の環構造がステロイド構造である請求項２０の方法。
【請求項２２】
ステロイド構造がフェノール性のものである請求項２１の方法。
【請求項２３】
該多環式フェノールがエストラジオール、エストラトリエノールおよびエストロンからなる群より選択されるものである請求項２２の方法。
【請求項２４】
多環式フェノールがエストロンである請求項２３の方法。
【請求項２５】
該エストロンが２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン、および２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシ−４−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンからなる群より選択されるものである請求項２４の方法。
【請求項２６】
該多環式フェノールがエストラジオールである請求項２３の方法。
【請求項２７】
該エストラジオールが（１７β）−２−（１−アダマンチル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオール、（１７α）−２−（１−アダマンチル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオール、（１７β）−２−（１−アダマンチル）−４−（１−メチルプロピル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオール、（１７α）−２−（１−アダマンチル）−４−（１−メチルプロピル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオール、またはそのエナンチオマーからなる群より選択されるものである請求項２６の方法。
【請求項２８】
ステロイド構造がカテコール性である請求項２１の方法。
【請求項２９】
該多環式カテコールが２−ヒドロキシ−（１７β）−エストラジオール、２−ヒドロキシ−（１７α）−エストラジオール、またはそのエナンチオマーからなる群より選択されるものである請求項２８の方法。
【請求項３０】
該化合物および医薬上許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物を投与することを特徴とする請求項１の方法。
【請求項３１】
該対象が動物である請求項１の方法。
【請求項３２】
該対象がヒトである請求項１の方法。
【請求項３３】
ヒドロキシ置換芳香族環構造およびそれに結合した未縮合多環式疎水性置換基を含む細胞保護活性を有する化合物を細胞の集団に投与することを特徴とする、細胞の集団に細胞保護を付与する方法。
【請求項３４】
該化合物および医薬上許容される担体、賦形剤または希釈剤を含む医薬組成物を投与することを特徴とする請求項３３の方法。
【請求項３５】
該細胞がニューロンである請求項３４の方法。
【請求項３６】
式：
【化１２】
2004518637.tif 000031
［式中、ｎは１または２であり；Ｒ１は未縮合多環式疎水性置換基であり；Ｒｘは水素および置換もしくは未置換アルキルからなる群より選択され；Ｒ１３は水素または置換もしくは未置換アルキルであり；Ｒｚは水素、ヒドロキシ、置換もしくは未置換アルキル、またはオキソであり；ただし、化合物が下記の構造：
【化１３】
2004518637.tif 000032
を有する場合にはＲｘは水素でない］を有する細胞保護活性を有する化合物。
【請求項３７】
式：
【化１４】
2004518637.tif 000033
または
【化１５】
2004518637.tif 000034
［式中、Ｒ１およびＲｘは請求項３６における定義と同じ］を有する請求項３６の化合物。
【請求項３８】
Ｒ１がアダマンチルであり、Ｒｘが水素またはメチルである請求項３６の方法。
【請求項３９】
式：
【化１６】
2004518637.tif 000035
を有する請求項３８の化合物またはそのエナンチオマー。
【請求項４０】
式：
【化１７】
2004518637.tif 000036
を有する請求項３８の化合物またはそのエナンチオマー。
【請求項４１】
式：
【化１８】
2004518637.tif 000037
または
【化１９】
2004518637.tif 000038
［式中、Ｒ１およびＲｘは請求項３６における定義と同じ］を有する請求項３６の化合物。
【請求項４２】
Ｒ１がアダマンチルであり、Ｒｘが水素、メチルまたはメチルプロピルである請求項４１の化合物。
【請求項４３】
式：
【化２０】
2004518637.tif 000039
を有する請求項４２の化合物またはそのエナンチオマー。
【請求項４４】
式：
【化２１】
2004518637.tif 000040
を有する請求項４２の化合物またはそのエナンチオマー。
【請求項４５】
式：
【化２２】
2004518637.tif 000041
を有する請求項４２の化合物またはそのエナンチオマー。
【請求項４６】
式：
【化２３】
2004518637.tif 000042
［式中、化合物は芳香族Ａ−環と共役してＣ−６とＣ−７の間、Ｃ−８とＣ−９の間、Ｃ−９とＣ−１１の間に１個またはそれ以上の不飽和結合を有していてもよく、ただし、Ｃ−８またはＣ−９が不飽和である場合、Ｒｙはそれに結合せず；
ｎは１ないし３の範囲であり；
Ｒ１は未縮合多環式疎水性置換基であり；
Ｒｘは水素および置換もしくは未置換アルキルからなる群より選択され；
ＲｙおよびＲｖは水素、置換もしくは未置換アルキル、ハロ、アミド、スルフェートおよびニトレートから独立して選択され；
ｐおよびｑは１ないし３の範囲であり；
Ｒ１３は水素または置換もしくは未置換ヒドロカルビル、ハロ、アミド、スルフェートまたはニトレートであり；
Ｒｚは水素、ヒドロキシ、置換もしくは未置換アルキル、またはオキソであり、
ｔは１ないし３の範囲であり；
ただし、化合物が下式：
【化２４】
2004518637.tif 000043
を有する場合にはＲｘは水素でない］を有する、細胞保護活性を有する化合物。
【請求項４７】
Ｒ１がアダマンチルである請求項４６の化合物。
【請求項４８】
単一のＲｚ置換基がＤ−環上のＣ−１７位に存在する請求項４７の化合物。
【請求項４９】
Ｒｚがオキソ、またはアルファもしくはベータヒドロキシである請求項４８の化合物。
【請求項５０】
ＲｘおよびＲ１３がメチルである請求項４９の化合物。
【請求項５１】
Ｃ−８、Ｃ−９、Ｃ−１３およびＣ−１４における配置がそれぞれアルファ、ベータ、アルファ、およびベータである請求項５０の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
本発明は、一般的には、細胞保護活性を有する修飾されたヒドロキシ置換またはヒドロキシ担持芳香族構造、ならびにその有効量を投与することを特徴とする治療方法に関する。より詳細には、本発明は、未縮合多環式疎水性置換基の付加により修飾されたフェノール化合物またはカテコール化合物に関する。かかる化合物は、かかる置換基を含まないそれらのアナログと比較して、増強された細胞保護活性を有することがわかった。この活性を、有効量の該修飾化合物を投与して対象中の細胞集団に付与してもよい。
【０００２】
細胞変性疾患は細胞の機能不全および死滅により特徴づけられ、ニューロンの場合、この機能不全または死滅は脳、脊髄および末梢神経系により伝達される神経学的機能の損失を招く。慢性神経変性疾患の例は、アルツハイマー病、末梢ニューロパシー（糖尿病または化学療法処置に対して二次的な）、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病およびパーキンソン病、クロイツフェルト−ヤコブ病およびエイズの痴呆を包含する。正常な脳の老化には正常なニューロン機能の損失も伴い、特定のニューロンの枯渇を伴うことがある。急性神経変性疾患の例は卒中および多発性梗塞性痴呆である。ニューロンの突然の損失は癲癇患者ならびに低血糖および脳、末梢神経または脊髄の外傷性傷害を有する患者の脳を特徴づけることもある。
【０００３】
例えば、疾病、外傷、身体からの組織または細胞の単離および除去、あるいは毒素への曝露のごとき出来事から生じる細胞の死滅から細胞を保護する処置が必要となっている。この必要性は、とりわけ、（ｉ）慢性または急性の神経変性疾患または外傷に関連した神経細胞の損失；（ｉｉ）虚血が卒中、心疾患、移植イベント、あるいは組織への栄養のカットオフにおいて生じる他のイベントの結果として起こった場合の虚血から生じる組織ダメージを最小化するための処置、ならびに（ｉｉｉ）他の変性的状態（骨粗しょう症または貧血のごとき）に関連した細胞の死滅をモジュレートするための処置に対して存在する。有効な細胞保護的処置の不存在は生命の損失あるいは患者、患者の家族およびヘルスケアのプロバイダーに対して高いヘルスケア費用のかかる恒久的な機能喪失を包含する生活の質の全般的低下を引き起こす可能性がある。
【０００４】
変性から細胞を保護するための薬剤を開発するために評価される多くの実験的アプローチおよび標的が存在している。中枢神経系における主要興奮性神経伝達物質であるグルタメートは、学習および記憶を包含する多くの正常な神経学的機能に必要である。しかしながら、グルタメート受容体の過剰活性化は毒素興奮性（ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃ）のニューロン傷害を引き起こすものであり、低酸素状態／虚血を包含するいくつかの急性損傷後の中枢神経系（ＣＮＳ）におけるニューロンの損失の発症に関与している。脳虚血により引き起こされる卒中または外傷性傷害の間に、過剰量の興奮性アミノ酸グルタメートがダメージを受けたあるいは酸素枯渇したニューロンから放出される。この過剰なグルタメートはＮ−メチル−Ｄ−アスパルテート（ＭＮＤＡ）受容体に結合し、該受容体はリガンドによって開くイオンチャンネルをオープンにし、そのことによりカルシウムフラックスを可能にし、細胞の死滅を導く蛋白、ＤＮＡ、および膜の変性を生じさせる生化学的カスケードを活性化させる高レベルの細胞内カルシウムを生じさせる。毒素興奮（ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）として知られるこの現象は、低血糖および心停止から癲癇に至る他の疾病に関連した神経学的ダメージが原因とも考えられる。さらに、ハンチントン病、パーキンソン病およびアルツハイマー病の慢性神経変性における類似の関連性を示す以前の報告がある。したがって、グルタメート過剰のレベルを低下させる多くの薬理学的戦略が評価されてきた。
【０００５】
反応性酸素種により引き起こされる酸化的ストレスは、同じ急性および慢性の疾病の多くにおいて関与する別の傷害機構である。反応性酸素種（例えば、スーパーオキサイドラジカル）は、細胞膜脂質の過酸化、輸送蛋白の不活性化、およびミトコンドリアによるエネルギー産生の阻害のごとき細胞成分に対する酸化的ダメージを引き起こすであろう。
【０００６】
グルタメート毒素興奮性および酸化的ストレスは相互に関連している。反応性酸素種の形成はグルタメート受容体過剰刺激の直接的結果として生じる可能性があり、よって、グルタメートの成分を伝達する。そして、Ｃ、Ｚｎ−スーパーオキサイドジスムターゼ、２１−アミノステロイド「ラザロイド（ｌａｚａｒｏｉｄｓ）」、ビタミンＥアナログであるトロロックス（ｔｒｏｌｏｘ）、フェニルブチル−Ｎ−ニトロンのごときスピン−トラッピング剤、および反応性酸素種の量を減少させるユビキノンアナログであるイデベノン（ｉｄｅｂｅｎｏｎｅ）を包含するフリーラジカルスキャベンジャーにより毒素興奮性が低下されうる。
【０００７】
Ｍｏｏｒａｄｉａｎは、ある種のエストロゲンがインビトロ生化学的アッセイにおいて有意な抗−オキシダント特性を有するが、この効果はすべてのエストロゲンに見られるわけではないことを報告している（Ｊ． Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ．， ４５ （１９９３） ５０９−５１１）。Ｍｏｏｒａｄｉａｎにより報告された彼の生化学的アッセイにおける抗−オキシダント特性のバリエーションを理由として、彼は、ステロイド分子はその時には未知であったある種の抗−オキシダント決定基を有するにちがいないと結論した。フェノール性Ａ環を伴うステロイドに関する同様の観察結果がＰＣＴ特許出願ＷＯ９５／１３０７６に報告されており、その中で、抗−オキシダント活性を示すために生化学的アッセイが用いられた。しかしながら、Ｍｏｏｒａｄｉａｎにより使用されたアッセイ、ならびにＷＯ９５／１３０７６において使用されたアッセイは、そのままでは細胞上のこれらの分子の効果を直接試験するものではなかった。対照的に、Ｓｉｍｐｋｉｎｓらは、例えば、米国特許第５５５４６０１号において、示された細胞保護効果に基づいてエストロゲン化合物を用いる、細胞集団に神経保護を与える方法を決定するための細胞をベースにしたアッセイを記載している。結果として、近年、エストロゲンならびに他の多環式フェノール類をこの目的に使用できることが認識されるようになってきた（例えば、米国特許第５９７２９２３号；第５８７７１６９号；５８５９００１号；５８４３９３４号；５８２４６７２号および５５５４６０１号参照、参照により本明細書に取り入れる）。
【０００８】
エストロゲン化合物が神経保護的効果を生じさせる機構は未だ完全に理解されていない。しかしながら、これらの化合物は、ニューロンに対する多くの異なる生理学的および生化学的効果を有することが示されている。例えば、エストロゲンは、神経栄養性の薬剤の産生を刺激し、そして、ニューロンの成長を刺激することが示されている。エストロゲン化合物は、一次ニューロン培養物においてＮＭＤＡにより誘導される細胞の死滅を抑制すること（例えば、Ｂｅｈｌ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ． （１９９５） ２１６： ９７３； Ｇｏｏｄｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． （１９９６） ６６： １８３６参照）、さらに酸素フリーラジカルを除去でき、脂質過酸化を抑制できること（例えば、Ｄｒｏｅｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． ＷＯ９５／１３０７６参照）も見出されている。例えば、Ｄｒｏｅｓｃｈｅｒらは、終点として脂質過酸化を用いる無細胞インビトロアッセイ系を記載しており、数種のエストロゲンならびにビタミンＥが活性を有することが示されている。エストラジオールもまた、膜の脂質過酸化を抑制することが報告されている（例えば、Ｎｉｋｉ （１９８７） Ｃｈｅｍ． Ｐｈｙｓ． Ｌｉｐｉｄｓ ４４： ２２７； Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍ． （１９８７） １４２： ９１９； Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｃｅｒ． Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ． （１９９１） １１： ２９２照）。ある種の２１−アミノステロイド類およびグルココルチコステロイドを包含する他の化合物は抗−オキシダント剤として作用することが示され、脊髄傷害ならびに頭部外傷におけるそれらの使用について調べられた（例えば、Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ． Ｔｒａｕｍａ ３９： ４７３； Ｌｅｖｉｔｔ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ２３： １３６； Ａｋｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９４） Ｓｔｒｏｋｅ ２５： ４１８参照）。
【０００９】
抗−オキシダント挙動は重要な特性であると考えられているが、その一方で、他の多くの因子が神経保護の達成に関与していると考えられている。結果として、単一の生化学的機構に基づいて選択される治療薬は患者における疾病または外傷の治療において限定された一般的な有用性を有する可能性があることに注目すべきである。例えば、インビトロにおいてエストロゲンを用いて抗−オキシダント効果を達成するために、Ｄｒｏｅｓｃｈｅｒらは非常に高用量のエストロゲンを使用した。かかる用量は、インビボにおいてニューロンに対して有効であるとしても、これらの高用量を長く使用することから生じる関連毒性の問題により、慢性の神経学的症状を治療することにおいては限定された有用性を有するであろう。
【００１０】
化合物の毒性に関する問題のほかに、個々の化合物の標的部位への到達能も考慮しなくてはならない。というのは、いくつかの適用例は化合物の血液−脳関門を通過する能力により制限されるからである。血液−脳関門は形態学的および酵素学的成分の複合体であり、大型および小型両方の荷電分子の通過を遅らせ、かくしてかかる分子の脳細胞へのアクセスを制限する。さらにそのうえ、化合物が標的部位に到達可能でなくてはならないだけでなく、化合物がその設計された機能を果たすことが可能な状態または配置となって標的部位に到達しなければならない。
【００１１】
上で述べたことから、身体組織における異常な細胞の死滅の結果からヒトを保護することにおいて生物学的有効性が示されている化合物；血液−脳関門を通過する能力のある化合物；そして無毒であり投与に適する化合物の同定に対する必要性が存在しつづけている。この同定は、神経保護に関連しうる組成物に対する構造上の要件の理解が連続して進行することを必要とするが、この同定により、、増強された細胞保護特性を有し、同時に副作用が少ない新規薬剤の設計の基礎が提供される。
【００１２】
発明の概要
本発明にはいくつかの目的および特徴があるが、細胞の死滅または細胞のダメージに対して細胞の集団を処置する方法がまず提供される。該方法において、有効用量のかかる細胞保護または神経保護化合物が細胞の集団に投与され、該化合物は、いくいつかの具体例において、（ｉ）未縮合多環式疎水性置換基、または（ｉｉ）架橋構造、スピロ構造（リンカーを介して結合）もしくは環アッセンブリーにより修飾されたヒドロキシ−置換芳香族環構造を有する。さらに細胞変性または神経変性的疾患の治療方法も提供され、該方法において、有効用量のかかる化合物が投与される。
【００１３】
さらに本発明にはいくつかの目的および特徴があるが、上記のごとく修飾されたヒドロキシ置換芳香族環構造を有する化合物が提供され、いくつかの場合には、化合物はさらに少なくとも１つの他の非−水素置換基により修飾され、細胞保護または神経保護活性を有するものである。さらにヒドロキシ置換された芳香族環構造もまた多環式であるかかる化合物が提供される。
【００１４】
簡単に説明すると、それゆえ本発明は、細胞の集団に細胞保護を与える方法に関し、該方法は、ヒドロキシ置換芳香族環構造およびそれに結合した未縮合多環式疎水性置換基を含む化合物を細胞集団に投与することを特徴とする。さらに本発明は、細胞がニューロンであるかかる方法に関する。
【００１５】
さらに本発明は、細胞変性疾患の治療方法に関し、該方法は、治療を要する対象（例えば、ヒトまたは動物）にかかる化合物またはかかる化合物を含む医薬組成物を投与することを含む。
【００１６】
さらに本発明は細胞保護活性を有する化合物であって式：
【化２５】
2004518637.tif 000003
［式中、ｎは１または２であり；Ｒ１は未縮合多環式疎水性置換基であり；Ｒｘは水素および置換もしくは未置換アルキルからなる群より選択され；Ｒ１３は水素または置換もしくは未置換アルキルであり；Ｒｚは水素、ヒドロキシ、置換もしくは未置換アルキル、またはオキソであり、化合物が以下の構造：
【化２６】
2004518637.tif 000004
を有する場合にはＲｘは水素でない］を有する化合物に関する。
【００１７】
本発明の他の目的および特徴は以下において、一部において明らかになり、一部において指摘される。
【００１８】
好ましい具体例の詳細な説明
ある種の多環式フェノール化合物、詳細には、エストロゲンをベースにした化合物が細胞保護活性を、そしていくつかの場合には神経保護活性を有することが現在認識されている（例えば、米国特許第５９７２９２３号、第５８７７１６９号、第５８５９００１号、第５８４３９３４号、第５８２４６７２号、第５５５４６０１号、第６１９７８３３号、および第６２０７６５８号参照、参照により本明細書に取り入れる）。特定の理論に拘束されることなく、エストロゲン化合物に関連した活性は、少なくとも一部には、エストロゲン、あるいはより一般的には多環式フェノール化合物の能力の結果であると信じられる。なぜなら、それらは親油性であり、細胞膜中に入るからである。この立場にたてば、インタクトなフェノール基はヒドロキシ水素ラジカルを供与して膜脂質過酸化のカスケードを妨害しうる。さらにそのうえ、エストロゲンの有意な能力は、Ａ環上のいくつかの位置からのヒドロキシ水素フリーラジカルを供与する能力によるものであり、さらに、この水素ラジカルの供与の結果として相対的に安定な酸化されたエストロゲンが形成される（共鳴安定性の効果による）という理由による。
【００１９】
驚くべきことに、これらの化合物ならびにそれらのジヒドロキシ（例えば、カテコール）、トリヒドロキシ等のアナログを、ヒドロキシ置換環上あるいはヒドロキシ基に近い、いくつかの位置に大型のあるいはかさ高い疎水性置換基を結合することにより修飾して、細胞（例えば、ニューロン）の集団に細胞保護を付与する能力を有する化合物を得ることができることを、今回、見出した。実際、出願人の実験データは、かかる置換基の付加、例えば、架橋多環式置換基の付加により、未置換アナログと比較して、これらの化合物の細胞保護活性が実際に向上することを示唆するものである。
【００２０】
修飾フェノールまたはカテコール化合物
上記のごとく、意外なことに、以前報告されたフェノール化合物ならびにそのジヒドロキシアナログ（例えば、カテコール化合物）を、大型の疎水性置換基（）をヒドロキシ担持環上またはその近くに結合することにより修飾して、細胞保護活性、いくつかの場合には神経保護活性が増強された新規クラスの化合物を得ることができることが、今回、見出された。より詳細には、式（Ｉ）：
Ｘ−Ｒ１
（Ｉ）
［式中、一般的には、Ｘはコアまたは中心構造であり、それは１の具体例においてフェノールであり（例えば、米国特許第５９７２９２３号、第５８７７１６９号、第５８５９００１号、第５８４３９３４号、第５８２４６７２号、第５５５４６０１号、第６１９７８３３号、および第６２０７６５８号に開示されたような）、第２の具体例においてカテコールであり（上記米国特許に開示された分子のジヒドロキシアナログのような）、それに修飾疎水性置換基Ｒ１が結合している］を有する化合物が、例えば、疾病、外傷、身体からの組織または細胞の単離または除去のような出来事から生じる細胞の死滅から細胞の集団を保護する処置における使用に適することが見出された。
【００２１】
一般的に言うと、コア構造Ｘは、本質的にはヒドロキシ置換芳香族環を有するいずれかの化合物である。第１の具体例において、Ｘは末端フェノール環を有する化合物であり、一方、第２の具体例において、Ｘは末端ジヒドロキシ置換（例えば、カテコール）環を有する化合物である。より詳細には、これらの具体例において、本発明は、一般式（ＩＩ）
【化２７】
2004518637.tif 000005
［式中、第１および第２の具体例の場合にそれぞれｎ＝１または２であり；Ｒ１は上記のもの、および本明細書でさらに定義するものであり；Ｒ２およびＲ３は水素またはいくつかの他の置換基であり、それらは本明細書においてさらに説明されるものであり、これら２つの置換基がヒドロキシ置換環上の異なる炭素原子に結合し、これらの置換基とそれらが結合する炭素原子とが第２の縮合環を形成する場合も含まれ；Ｘは一般的には式（ＩＩＩ）：
【化２８】
2004518637.tif 000006
により表される］を有する化合物に関する。
【００２２】
この点において、さらに本明細書において説明されるように、別の具体例において、Ｘは多環式式化合物であり、すなわちＸは２個またはそれ以上（すなわち、２、３、４、５個またはそれ以上）の炭化水素環構造またはヘテロ炭化水素環構造（異種原子は環中に存在する）を有する化合物であり、それらはいくつかの連結により縮合または結合されていてもよいが、末端環が１個またはそれ以上のヒドロキシ基を有すること（例えば、フェノール、カテコール等）が条件であるということに注意すべきである。いくつかの特に好ましい具体例において、さらに本明細書で説明するように、Ｘはステロイド様構造であってもよい。
【００２３】
さらに、かかる多環式化合物は、本質的に疎水性置換基Ｒ１の反対側である末端に、あるいはその付近に極性または親水性置換基を有し、かくして化合物全体（すなわち、Ｘ−Ｒ１）として両親媒性となってもよい。かかる極性または親水性置換基は、例えば、オキソおよびヒドロキシ、ならびにアルコキシまたはアルキルオキシを包含する（例えば、ヒドロキシ置換基がエーテルを形成するために用いられており、あるいは当該分野で通常の手段によりエステル化されている）。
【００２４】
さて、図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃを参照すると、本発明における使用に適したコア構造Ｘの例は：（ｉ）スチベステロールのごとき連結された二環構造（例えば、ジメチルスチベステロール、ジエチルスチベステロール、ジメチルスチベステロール−モノ−Ｏ−メチル、およびジエチルスチベステロール−モノ−Ｏ−メチル）；（ｉｉ）三環化合物のごとき、末端ヒドロキシ担持環および少なくとも２個のさらなる炭化水素環構造を有する非−スイテロイド構造（例えば、［２Ｓ−（２ａ，４ａα，１０αβ）］−１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ−オクタヒドロ−７−ヒドロキシ−２−メチル−２−フェナンスレンメタノール（ＰＡＭ）および）［２Ｓ−（２ａ，４ａα，１０αβ）］−１，２，３，４，４ａ，９，１０，１０ａ−オクタヒドロ−７−ヒドロキシ−２−メチル−２−フェナンスレンカルボキシアルデヒド（ＰＡＣＡ））；（ｉｉｉ）末端ヒドロキシ担持環および少なくとも３個のさらなる炭素環を有する化合物（例えば、３，１７α−エストラジオール；３，１７β−エストラジオール；エストラトリエン−３−オール；２−ヒドロキシ−１７α−エストラジオール；２−ヒドロキシ−１７β−エストラジオール；エストロン；２−ヒドロキシエストロン；エストリオール；２−ヒドロキシエストリオール；エチニルエストラジオール；および２−ヒドロキシエチニルエストラジオール）を包含する。
【００２５】
この点において、上記化合物リストがすべてではないことに注意すべきである。例えば、末端環上のヒドロキシ基（複数も可）の位置は、すべての場合において狭く限定されたものではなく、すなわち、いくつかの場合において、ヒドロキシ基は本質的にいすれの利用可能な位置を占めてもよい（個々のＸの構造により、末端環上の１、２、３、４位等であってよい）。さらに、いくつかの場合において、Ｘが、ヒドロキシ担持芳香族環と共役したさらなる二重結合を含んでいてもよく（ジスチルベステロール化合物の場合のように）、例えば、一般構造式（ＩＶ）：
【化２９】
2004518637.tif 000007
［式中、炭素−炭素二重結合はＣ−６とＣ−７との間、Ｃ−８とＣ−９との間、Ｃ−９とＣ−１１との間、あるいはそれらのあり得る組み合わせの１つに存在する］を有する多環式化合物の場合のようであってもよい。
【００２６】
特定の理論に拘束されることなく、この付加的な共役は、化合物のより安定な酸化された形態の形成を可能にするので、すなわち、ヒドロペルオキシド（酸素ラジカル種と不飽和脂肪酸との相互作用により形成される）をクエンチする水素ラジカルの損失の結果として形成されると信じられているフェノキシラジカルのさらなる脱局在化を可能にするので、好ましいものであると一般的に信じられる。したがって、Ｘは、本発明の範囲から離れることなく、本明細書記載のもの以外のものであってもよい。
【００２７】
本発明によれば、未置換アナログと比較して、増強された細胞保護活性を達成させるために、１個またはそれ以上の大型の疎水性置換基Ｒ１によりコア構造Ｘを修飾してもよいことが見出された（本明細書においてさらに議論し、説明するように）。より詳細には、例えば、上記フェノール化合物（Ｓｉｍｐｋｉｎｓらにより記載された化合物のごとき）ならびにそのジヒドロキシ−アナログの細胞保護活性が、（ｉ）末端ヒドロキシ担持環、または（ｉｉ）該環のヒドロキシ基に近い、いくつかの他の位置のいずれかの上におけるかかる置換基の結合により増強されることが見出された（例えば、図３参照）。さらにそのうえ、疎水性置換基Ｒ１を直接あるいは何らかの連結により結合させることができる（本明細書においてさらに説明するように、例えば図３も参照）。
【００２８】
一般的に言えば、１の具体例において、Ｒ１が架橋多環式疎水性置換基である場合に、増強された細胞保護活性が達成されることが見出された。図２Ａを参照すれば、適切な置換基は、例えば、約４、６、８、１０、１２個またはそれ以上の炭素原子を含む二環式、三環式、四環式等の構造、例えば下記のような構造を包含する：ビシクロ［１．１．０］ブタニル； ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル （すなわち、ノルボルニル）； ビシクロ［３．２．１］オクタニル； ビシクロ［４．３．２］ニナニル； ビシクロ［４．３．２］ウンデカニル； トリシクロ［２．２．１．Ｏ１］ヘプタニル； トリシクロ［５．３．１．１ｌ］ドデカニル； トリシクロ［３．３．１．１３，７］デカニル （すなわち、アダマンチル）； トリシクロ［５．４．０．０２，９］ウンデカニル； およびトリシクロ［５．３．２．０４，９］ドデカニル。
【００２９】
特定の理論に拘束されずに、この増強された活性は、少なくとも一部には、疎水性置換基Ｒ１が細胞膜または脂質二重層のボイド領域中の位置を占め、かくして、化合物に「錨」を降ろさせ、脂質鎖の脂肪酸中の二重結合に近い位置にヒドロキシ担持芳香族環（例えば、フェノールまたはカテコール）が配置されるように化合物を方向づける作用をする結果であると信じられる。それゆえ、本発明化合物の有効性または活性の増強は、これらの化合物が、それらの成分および構造ゆえに、それらの有効性が最適化される位置にデリバリーされる環境中に自然と配置されるという事実の結果であると信じられる。
【００３０】
さらにそのうえ、いくつかの場合には、疎水性置換基Ｒ１が結合する実質的に反対側の末端である化合物の末端においてあるいはその近くにおいて極性または親水性基を付加または結合させることにより、脂質二重層または細胞膜中の本発明化合物の方向付けが促進されうると一般的に信じられる。化合物の方向付けに影響しうる他の因子は：（ｉ）実質的に平面的なコア構造Ｘ、さらには化合物全体（それは本発明化合物の品質を向上させると信じられている）；および／または（ｉｉ）化合物の中心部に存在する極性または親水性置換基（Ｒ２、Ｒ３等）（それは品質に悪影響を及ぼすと信じられている）を包含する。例えば、エストロゲン様化合物の場合には、現在に至るまでの出願人の実験により、例えばＢ環を開環させることによりＢ環またはＣ環の立体化学を変化させること、ならびにＢ環またはＣ環上の極性基の存在は、同様に活性を低下させることが示唆されている。
【００３１】
したがって、本質的には、所望の結果を達成する（すなわち、化合物に「錨」を降ろさせ、脂質二重層または細胞膜中の最適位置に方向づけるように作用する）大型の疎水性置換基を本発明に用いてもよい。より詳細には、以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）を条件として、本質的にいずれの置換基を用いてもよいことが一般的に信じられる：置換基が（ｉ）二重層または膜の疎水性部分中に「引き付けられ」または「引っ張られる」るように性質上十分に疎水的であること；（ｉｉ）疎水性領域に入ったならば、膜中の脂肪酸をかく乱し、かくして、置換基が膜のボイド中に入る程度にまで膜の完全性を破壊するように十分に大型であること；および（ｉｉｉ）ヒドロキシ置換環が脂肪酸の二重結合に近くに配置されるように、それ自体あるいはリンカーを使用して十分に長いこと。さて、図２Ｂを参照すると、Ｒ１の適当な別の具体例は、架橋構造または環アッセンブリーのごとき無極性の多環式置換基を包含し、それを単独で用いてもよく、あるいはさらに別の環構造と縮合させてもよい。
【００３２】
ヒドロキシ置換環の位置に関して、典型的な膜のリン脂質は、極性頭部基のほぼ末端からＣ−１６アルキル鎖のほぼ末端までを測定した場合（当該分野において標準的な分子モデリングプログラムを用いることにより）、約２０ないし約３０オングストロームの長さを有することに注意すべきである。したがって、かかる場合において、本質的には、（ｉ）末端ヒドロキシ担持芳香族環構造（例えば、フェノールまたはカテコール）、および（ｉｉ）芳香族環構造上のヒドロキシ基上あるいはその近くの疎水性置換基のいずれの組み合わせを用いてもよいが、疎水性の「錨を降ろす」置換基Ｒ１のほぼ末端とヒドロキシ担持環の反対側のほぼ末端との間の距離が約１０オングストロームないし約３０オングストロームの範囲（すなわち、約１５オングストローム、２０オングストローム、２５オングストローム）であることが条件とされることに注意すべきである。
【００３３】
さて、図３を参照すると、すでに述べたように、典型的には「錨を降ろす」置換基をヒドロキシ担持芳香族環に直接結合させるが、それをこのヒドロキシ基（複数も可）の近くに結合させてもよく、すなわち、この置換基の結合ポイントはすべての適用例において狭く限定されるものではないのであるが、かかる適用例において、該置換基の結合ポイントは、所望の活性増強が達成されるように化合物を方向付けるに十分なものであることが条件となることにさらに注意すべきである。したがって、置換基Ｒ１は、いくつかの場合において、ヒドロキシ担持炭素から１、２、３、４個またはそれ以上の炭素だけ離れていてもよい。しかしながら、典型的には、置換基Ｒ１はヒドロキシ担持炭素に隣接したものであるか、あるいはそれにに対してα位にあるものであろう。例えば、ある好ましい具体例において、ヒドロキシ基は２または３位にあり、そのことは、好ましくはＲ１は２、３または４位にあることを意味する。
【００３４】
後で（そして図３において）説明するように、錨を下ろす置換基Ｒ１をコア分子に直接結合させてもよく、あるいはそれをリンカー（Ｌ）を介して結合させてもよいが、一般的に、リンカーは、上記のヒドロキシ担持芳香族環構造の位置を決めるに十分な長さであることが条件であることにさらに注意すべきである。
【化３０】
2004518637.tif 000008
典型的には、主鎖において約１個ないし約６個の炭素の長さ（例えば、メチレン、エチレン、エテニレン、プロピレン、プロペニレン）を有するヒドロカルビレンリンカー（例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル）、が用いられ、いくつかの具体例においては主鎖において１、２または３個の炭素を有するものが好ましいであろう。しかしながら、あるいは、いくつかの具体例において、ヘテロ−置換ヒドロカルビレンリンカー（エーテルまたはチオエーテルのごとき）を用いてもよい。
【００３５】
さらなるおよび／または別の置換
上記のごとく１個またはそれ以上の疎水性置換基Ｒ１の存在のほかに、１個またはそれ以上の同じまたは異なってもよい他の置換基（例えば、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４等）がヒドロキシ担持芳香族環に、あるいはコア構造Ｘの他のセグメントまたは部分に結合していてもよいが、ヒドロキシ担持環が化合物全体（すなわち、Ｘ−Ｒ１）として見た場合に実質的に末端位置にあることが条件となることに注意すべきである。すなわち、後で説明するように、本発明化合物は、同じまたは異なっていてもよい１個またはそれ以上のさらなる置換基を、コア構造Ｘ上の種々の利用可能な位置に含んでいてもよいことに注意すべきであり、ここにＸは式（Ｖ）：
【化３１】
2004518637.tif 000009
を有する多環式構造である。
【００３６】
いくつかの具体例において、これらの他の置換基（例えば、Ｒｙ、Ｒｖ、Ｒｚ）は、水素、置換または未置換ヒドロカルビル（例えば、メチル、エチル、プロピル、プロペニル、ブチル等）、ハロゲン（例えば、フルオロ、ブロモ、クロロ）、アミド、スルフェート、およびニトレートからなる群より独立して選択されうる（式中、一般的には、ｐ、ｑおよびｔは、この場合はそれぞれＢ、ＣおよびＤ環上に存在しているかかる置換基の数を表し、典型的には、ＢおよびＣ環に関しては０ないし２の数、Ｄ環に関しては０ないし３の数である）。
【００３７】
さらにそのうえ、今度は図４を参照すれば、すでに述べたように、置換基（例えば、Ｒ２およびＲ３）は、それらが結合する炭素原子と一緒になって、末端ヒドロキシ他担持環を有する第２の縮合環（例えば、５員、６員、７員等のヒドロカルビルまたはヘテロヒドロカルビル）構造を形成してもよい。そして、この第２の環は、末端ヒドロキシ担持環について本明細書で説明したのと同じようにさらに置換されていてもよく、すなわち、第２の環は上記群より独立して選択される１個またはそれ以上の置換基（例えば、Ｒ４、Ｒ５等）を有していてもよく、いくつかの具体例において、Ｒ２およびＲ３が与えられた場合に、Ｘは第３、第４、第５等の環構造を含んでいてもよい（例えば、図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃに示されるように、そして本明細書でさらに説明するように）。
【００３８】
いくつかの好ましい具体例において、置換基Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５等ならびにＲｙ、Ｒｖ、Ｒｚは、例えば以下のものであってもよい：
（ａ）主鎖または環構造中に約６個までの炭素原子を含むアルキル、アルケニル、アルキニル （例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ジメチル、イソブチル、イソペンチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、メチルペンチル、ネオペンチル、イソヘキシル、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘキサジエニル、１， ３−ヘキサジエン−５−イニル、イソプロペニル、エチニル、エチリデニル、ビニリデニル、イソプロピリデニル）； スルフェート； メルカプト、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、メチルスルフィニル、メチルスルホニル、チオヘキサニル、チオペンチル、チオシアナト、スルホエチルアミド、チオニトロシル、チオホスホリル、ｐ−トルエンスルホニル、アミノ、イミノ、シアノ、カルバモイル、アセトアミド、ヒドロキシアミノ、ニトロソ、ニトロ、シアナト、セレシアナト、アルコシン、ピリジニウム、ヒドラジド、セミカルバゾン、カルボキシメチルアミド、オキシム、ヒドラゾン、サルファートリメチルアンモニウム、セミカルバゾン、Ｏ−カルボキシメチルオキシム、アルデヒドヘミアセテート、メチルエーテル、エイルエーテル、プロピルエーテル、ブチルエーテル、ベンジルエーテル、メチルカルボネート、カルボキシレート、アセテート、クロロアセテート、トリメチルアセテート、シクロペンチルプロピオネート、プロピオネート、フェニルプロピオネート、カルボン酸メチルエーテル、ホルメート、ベンゾエート、ブチレート、カプリレート、シンナメート、デシレート、ヘプチレート、エナンテート、グルコスイズロネート、サクシネート、ヘミサクシネート、パルミテート、ノナノエート、ステアレート、トシレート、バレラート、バルプロエート、デカノエート、ヘキサヒドロベンゾエート、ラウレート、ミリステート、フタレート、ヒドロキシ、エチレンケタール、ジエチレンケタール、クロロホルメート、ホルミル、ジクロロアセテート、ケト、ジフルオロアセテート、エトキシカルボニル、トリクロロホルメート、ヒドロキシメチレン、エポキシ、ペルオキシ、ジメチルケタール、アセトニド、シクロヘキシル、ベンジル、フェニル、ジフェニル、ベンジリデン、およびシクロプロピル。置換基（複数も可）は、例えば、下のセクション（ｂ）中の６員環または５員環のいずれかも包含しうる。
（ｂ）芳香族または非芳香族環であってもよく、ヒドロキシ置換環に結合（直接またはリンカーを介して）または縮合していてもよい環式またはヘテロ環式の炭素環。この環式またはヘテロ環式の環は上の（ａ）に記載したいすれかの置換基で置換されていてもよい。このさらなる環構造は、単独であるいはヒドロキシ置換Ａ環と組み合わさって、例えば、下記の構造の１つまたはそれ以上のものから選択されるものであってもよい：フェナンスレン； ナフタレン； ナフトール； ジフェニル； ベンゼン； シクロヘキサン； １，２−ピラン； １，４−ピラン； １，２−ピロン； １，４−ピロン； １，２−ジオキシン； １，３−ジオキシン （ジヒドロ形態）； ピリジン； ピリダジン； ピリミジン； ピラジン； ピペラジン； ｓ−トリアジン； ａｓ−トリアジン； ｖ−トリアジン； １，２，４−オキサジン； １，３，２−オキサジン； １，３，６−オキサジン （ペントオキサゾール）； １，２，６−オキサジン； １，４−オキサジン； ｏ−イソオキサジン； ｐ−イソオキサジン； １，２，５−オキサチアジン； １，２，６−オキサチアジン； １，４，２−オキサジアジン； １，３，５，２−オキサジアジン； およびモルホリン （テトラヒドロ−ｐ−イソオキサジン）。さらに、上記炭素環構造のいずれかが直接あるいは連結基を介してヘテロサイクリック芳香族または非芳香族炭素環、例えば、下記のものに連結されていてもよい：フラン； チオフェン （チオフラン）； ピロール （アゾール）； イソピロール （イソアゾール）； ３−イソピロール （イソアゾール）； ピラゾール （１，２−ジアゾール）； ２−イソイミダゾール （１，３−イソジアゾール）； １，２，３−トリアゾール； １，２，４−トリアゾール； １，２−ジオチオール； １，２，３−オキサチオール； イソオキサゾール （フロ（ａ）モノゾール）； オキサゾール （フロ（ｂ）モナゾール）； チアゾール； イソチアゾール； １，２，３−オキサジアゾール； １，２，４−オキサジアゾール； １，２，５−オキサジアゾール； １，３，５−オキサジアゾール； １，２，３，４−オキサトリアゾール； １，２，３，５−オキサトリアゾール； １，２，３−ジオキサゾール； １，２，４−ジオキサゾール； １，３，２−ジオキサゾール； １，３，４−ジオキサゾール； １，２，５−オキサチアゾール； １，３−オキサチオール； およびシクロペンタン。そして、これらの化合物は、セクション（ａ）またはセクション（ｂ）から選択される結合置換基を有していてもよく、それらは環上の利用可能な部位のいずれかにおいて置換されている。
【００３９】
この点において、いくつかの具体例において、Ｒｚはシクロアルキルまたはシクロアルケニル（例えば、シクロペンチル、シクロペンテニル）であるか、あるいはアルコキシ（エーテル置換基が、例えば、構造のＤ環上に存在してもよく、例えば、メトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ等のごときＣ１ないしＣ８アルコキシ置換基である）またはアルキルオキシ（エステル置換基がその上に存在する）であってもよいことに注意すべきである。さらに、Ｒｚはスピロ構造であってもよく、それが結合している環の炭素も環状構造である。好ましい具体例において、ｔは２であり（すなわち、２個のＲｚ置換基が存在する）、Ｒｚはスピロ（例えば、シクロペンチル）置換基と組み合わさったヒドロキシまたはオキソ置換基である。
【００４０】
本発明のコアヒドロキシ置換構造Ｘはシクロペンタノフェン（ａ）アンスレン化合物であってもよく、例えば、下記のヒドロキシ置換アナログからなる群より選択される：１，３，５（１０），６，８−エストラペンタエン； １，３，５（１０），６，８，１１−エストラヘキサエン； １，３，５（１０），６，８，１５−エストラヘキサエン； １，３，５（１０），６−エストラテトラエン； １，３，５（１０），７−エストラテトラエン； １，３，５（１０），８−エストラテトラエン； １，３，５（１０），１６−エストラテトラエン； １，３，５（１０），１５−エストラテトラエン； １，３，５（１０）−エストラトリエン； および １，３，５（１０），９（１１）−エストラテトラエン。
【００４１】
さらに本発明は本明細書記載のいずれかの化合物に関し、さらに細胞変性疾患の治療のための、ラロキシフェン、タモキシフェン、アンドロゲン性化合物から選択される前駆体または誘導体、ならびにそれらの塩を包含するそれらの化合物の投与に関するものであり、化合物においてインタクトなヒドロキシ担持芳香族環が存在し、ヒドロキシ基は末端フェノール環の炭素１、２、３および４上に存在する。
【００４２】
これらの化合物はプロドラッグの形態であってもよく、それらは代謝されて、細胞保護活性、およびいくつかの場合には神経保護活性のある多環式フェノール化合物またはカテコール化合物を生成しうるものであってもよい。
【００４３】
さらなる置換基（例えば、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒｘ、Ｒｙ、Ｒｖ、Ｒｚ等）に関し、かかるさらなる置換基が末端のヒドロキシ置換された芳香族環上あるいはその近くに存在する場合、いくつかの具体例において、本発明のＲ１置換基のサイズと比較してこれらの置換基が小型（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）であることが好ましいということに注意すべきである。別の言い方をすれば、本発明のいくつかの具体例において、唯１個の大型の疎水性基がヒドロキシ担持芳香族環に結合し、あるいはその近くにあることが好ましい。
【００４４】
さらに、より小さな置換基が存在する場合、この置換基が同様に疎水性であることが好ましいことに注意すべきである。さらに、特別な理論に拘束されることなく、親水性基の存在は細胞膜または脂質二重層中の化合物全体の位置および／または方向づけを妨害しうるということが一般的に信じられる。
【００４５】
最後に、置換基Ｒ１自身が置換されていてもよいことに注意すべきである。例えば、Ｒ１がアダマンチルのごとき未縮合多環式置換基である場合、アダマンチル環が置換されて（例えば、ハロゲンの結合により）疎水性が高まっていてもよい。
【００４６】
さらなる好ましい具体例
１．ヒドロキシ置換芳香族環構造の修飾
すでに述べたように、コアまたは末端ヒドロキシ置換芳香族環構造は、Ｒ１置換基（例えば、未縮合多環式疎水性置換基）のほかに１個またはそれ以上の置換基で修飾されていてもよい。１の好ましい具体例において、ヒドロキシ置換された芳香族環は、置換もしくは未置換のヒドロカルビル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル等）置換基でさらに修飾されていてもよい。より好ましくは、Ｒ１がアダマンチルのごとき未縮合多環式疎水性置換基である場合、ヒドロキシ置換芳香族環はアルキル置換基（メチル、エチル、プロピル、メチルプロピル等のごとき）またはアルケニル置換基（エチレン、プロピレン、メチルプロピレン等のごとき）でさらに置換されていてもよい。さらにより好ましくは、これらの置換基は芳香族環上のヒドロキシ基に対してアルファであるかあるいは隣接している。すなわち、好ましくは、ヒドロキシ基は２個の置換基の間にあり、２個の置換基は、ヒドロキシ基により占領される炭素原子に直接結合した炭素原子を占領する。
【００４７】
さらに、出願人の現在までの経験によれば、別の具体例において非−多環式の疎水性置換基（例えば、アルキルまたはアルケニル置換基）を用いて未置換アナログよりも細胞保護活性を増大させうることが示されることに注意すべきである。より詳細には、現在に至るまでの経験によれば、いくつかの具体例において、例えば、メチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ−プロピル、イソプロピル）、プロペニル、メチルプロピル、メチルプロペニル、ブチル（例えば、イソブチル、ｔ−ブチル）から選択される１個またはそれ以上の基を結合させることによりヒドロキシ置換芳香族環構造を修飾してもよい。好ましい具体例において、ｔ−ブチルまたはメチル−プロピル基（またはより大型のもの）のごとき大型またはバルキーなアルキル基を用いる。もう１つの好ましい具体例において、ヒドロキシ置換環を２個のかかる置換基、例えば、ｔ−ブチル／メチルもしくはエチル、プロピルまたはプロペニル／メチルもしくはエチル等で修飾してもよい。
【００４８】
２．多環式ヒドロキシ置換芳香族環構造
すでに述べたように、コアヒドロキシ置換芳香族環構造は大型の多環式コア構造（例えば、二環式、三環式、四環式等）の一部であってもよい。１の好ましい具体例において、ヒドロキシ−置換コア構造は式（ＶＩ）：
【化３２】
2004518637.tif 000010
［式中、典型的には、ｎは１または２であり、Ｒ１は大型またはバルキーな疎水性置換基（例えば、未縮合多環式）であり、ヒドロキシ置換環は構造の末端またはＡ−環であり、Ｒｘ、Ｒｙ、ＲｖおよびＲｚは上記定義に同じ］を有する。しかしながら、より好ましくは、本発明の化合物は式（ＶＩＩ）：
【化３３】
2004518637.tif 000011
［式中、ｎは上記定義に同じであり、Ｒ１は未縮合多環式疎水性置換基（あるいはｔ−ブチル、メチルプロピル等のごときバルキーなヒドロカルビル基）であり、Ｒｘは水素および置換もしくは未置換ヒドロカルビル（例えば、アルキル）からなる群より選択され、Ｒ１３は水素または置換もしくは未置換ヒドロカルビル（例えば、アルキル）であり、Ｒｚは水素、ヒドロキシ、置換もしくは未置換アルキル、またはオキソ（Ｒｙ、Ｒｖは水素）から選択される１個またはそれ以上の置換基である］を有する。かかる置換基のいくつかの好ましい組み合わせは以下のものを包含する：
2004518637.tif 000012
ここに、例えば、Ｒ１、ＲｘおよびＲｚはそれぞれ環上のＣ−２、Ｃ−４およびＣ−１７位を占領する（例えば、Ｒｚがヒドロキシである場合にはＲｚはアルファ位またはベータ位にある）。
【００４９】
この点において、本発明は、１個またはそれ以上のキラル中心を有する多くの化合物を包含することに注意すべきである。それゆえ一般的に言えば、これらのキラル中心の１個またはそれ以上における配置が本発明の範囲から逸脱することなく変更されてもよいことが理解されるべきであり、本発明は、特別にあるいは一般的に本明細書に記載された化合物ならびにすべての関連ジアステレオマーおよびエナンチオマー（例えば、（ｉ）天然に存在するエストロゲン配置（Ｃ−８、Ｃ−９、Ｃ−１３およびＣ−１４位に置換基が存在する場合にはそれらはそれぞれベータ、アルファ、ベータおよびアルファである）、あるいは（ｉｉ）天然に存在しないエストロゲン配置（存在する場合には、これらの置換基はアルファ、ベータ、アルファ、ベータ配置を有する））を包含することが理解されるべきである。
【００５０】
投与／適用
一般的に言えば、本発明の方法は、有効用量の上記化合物を投与することにより対象（例えば、動物またはヒト）中の細胞集団を処理して、その細胞集団に細胞保護を付与することを包含する。現在に至るまでの経験は、かかる保護は、本発明の化合物の未置換（すなわち、Ｒ１で置換されていない）アナログに必要とされる濃度よりも低い血漿濃度において達成されうることを示唆する。より詳細には、いくつかの具体例において、細胞保護あるいは神経保護効果は約１０μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、１００ｎＭ、１０ｎＭ、あるいは１ｎＭ（すなわち、約０．１ｎＭないし約１ｎＭ）未満の血漿濃度において達成されうる。
【００５１】
当該分野において標準的な手段により本発明の化合物の投与を行なってもよく、細胞保護化合物、それらのエナンチオマーまたはジアステレオマー、あるいはそれらの医薬上許容される塩を単独または混合して用いることを包含しうる。本発明化合物の推奨される投与経路は経口、筋肉内、経皮、ほほ側、鼻腔内、静脈内および皮下投与を包含する。本発明化合物の投与方法は服用でもよく、あるいは除放性担体によってもよい。
【００５２】
さらに、Ｓｉｍｐｋｉｓらの米国特許第５９７２９２３号（参照により本明細書に一体化させる）に記載されたアプローチと同様に、医薬調合物は１またはそれ以上の本発明化合物のほかに付加的な抗酸化剤を含んでいてもよい。本発明化合物に類似の化合物についてＳｉｍｐｋｉｎｓらにより記載されたように、かかる組み合わせが用いられた場合、ある種の環境において相乗効果が達成されうる。例えば、Ｓｉｍｐｋｉｎｓらは、エストラジエンが抗酸化剤であるグルタチオンとともに投与された場合、それらの細胞保護活性が約１０００〜５０００倍に増大することを報告している。
【００５３】
本発明化合物は、例えば、外傷、慢性の変性疾患または虚血性発作により誘発されるような急性疾患の治療に適する。特別な例は、アルツハイマー病、パーキンソン病、卒中、虚血、心臓発作または血管形成、あるいは脳または脊髄の外傷、低血糖症、酸素欠乏、組織への栄養供給を失わせるやけどまたは外科手術を包含する。本発明化合物で治療できる他の疾病は以下のものを包含する：心筋梗塞を包含する心疾患、黄斑変性、水晶体もしくは網膜の変性、白内障および緑内障の発生を包含する眼科学的疾患、アルコール中毒、アルコール中止（ａｌｃｏｈｏｌ ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ）、薬剤により誘発される発作、血管閉塞、てんかん、脳血管出血、出血、環境毒素刺激（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｅｘｃｉｔｏｔｏｘｉｎｓ）、すべてのタイプの痴呆、薬剤により誘発される脳のダメージならびに壊死またはアポトーシス細胞死により特徴づけられる他の全身的または急性の変性疾患。現在に至るまで、これらの疾病の治癒は知られておらず、それらの進行を遅延させる少しの治療が知られているだけである。しかしながら、本発明は、徴候の発生を処置、防止または遅延するための治療薬または予防薬として使用できる化合物を提供する。
【００５４】
さらに本発明の特定の具体例は、細胞、組織または器官の除去または再潅流の前、途中または後、あるいは細胞、組織または器官の保存中における組織移植プロセスに適用でき、身体中のいずれの細胞にも適用可能である。
【００５５】
製造
一般的に言えば、当該分野において標準的な手段により本発明の化合物を製造することができる。特定の好ましい化合物の製造の詳細な細部を後で実施例にて示す。
【００５６】
活性
当該分野において標準的な手段により本発明の化合物の活性を調べることができる（例えば、米国特許第５９７２９２３号、第５８７７１６９号、第５８５９００１号、第５８４３９３４号、第５８２４６７２号、および第５５５４６０１号参照、参照によりこれらすべてを本明細書に一体化させる）。活性を調べるための別法は後の実施例で詳細に説明される。
【００５７】
定義
本明細書で用いる以下の語句または用語を注釈するが、これらの定義は補足的かつ説明的なものであり、当業者に知られた定義を排除あるいは置換するものではないことを理解すべきである。
【００５８】
「ヒドロキシ置換芳香族」または「ヒドロキシ担持芳香族」構造または環ならびにそれらのバリエーションは、本発明の化合物の末端環をいい、芳香族であり、かつ１個またはそれ以上のヒドロキシ基で置換されているものをいう。それゆえ、かかる語句は全体構造が芳香族性である化合物（例えば、ナフタレン、アントラセンおよびフェナンスレン）ならびに末端環のみが芳香族性である化合物（例えば、インダンおよび１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン）の両方をいうものと理解すべきである。
【００５９】
「細胞保護」は、保護剤が存在しなければ生じるであろう細胞死滅または細胞ダメージに対する細胞の保護をいい、ここに細胞の死滅または細胞ダメージは機械液ダメージ、栄養枯渇（酸素枯渇を包含）、外傷、疾病プロセス、化学薬品または過剰な温度への曝露によるダメージにより引き起こされ得るものである。
【００６０】
「神経保護」は細胞保護の一形態であり、細胞の死滅を導くニューロンの進行性の変質の抑制をいう。
【００６１】
「増大した細胞保護または神経保護活性」は、本発明化合物の未置換アナログ（すなわち、Ｒ１で置換されていない）と比較した場合に、本発明化合物（すなわち、大型の疎水性置換基Ｒ１が結合した化合物）の活性が増大していることをいう。
【００６２】
「未縮合多環式」は縮合システム以外の多環式システムをいい、架橋およびスピロシステムならびに環アッセンブリーを包含する（例えば、Ｎａｍｉｎｇ ａｎｄ Ｉｎｄｅｘｉｎｇ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ ｆｏｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ， ａ ｒｅｐｒｉｎｔ ｏｆ Ａｐｐｅｎｄｉｘ ＩＶ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ １９９７ Ｉｎｄｅｘ Ｇｕｉｄｅ， １４７−１５５， ｐｐ． ２６０Ｉ−２６６１参照）。
【００６３】
「縮合システム」は、（ｉ）「オルト」縮合のみ（結合している環は共通原子を２個だけ有し、かくしてｎ個の共通面および２ｎ個の共通原子を有する）を有する（例えば、ナフタレン）、あるいは（ｉｉ）「オルト」および「ペリ」縮合（１の環は、２個またはそれ以上の環のそれぞれと共通した２個、およびたった２個の原子を有し、システム全体はｎ個の共通面および２ｎ個よりも少ない共通原子を有する）を有する（例えば、ピレン）、５員またはそれ以上の少なくとも２個の環を含む多環式構造である（例えば、上掲文献参照）。
【００６４】
「架橋システム」は、構造の異なる部分に連結された共有結合、原子または鎖を有する単環式または縮合システムである。
【００６５】
「スピロシステム」は、唯１個の共通原子を有する環のペアーを有する（例えば、上掲文献参照）。
【００６６】
「環アッセンブリー」は、一重結合により連結された環（または環システム）のペアーを有する（例えば、上掲文献参照）。
【００６７】
「エストロゲン化合物」は、ｔｈｅ ｌｌｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ”Ｓｔｅｒｏｉｄｓ” ｆｒｏｍ Ｓｔｅｒａｌｏｉｄｓ Ｉｎｃ．， Ｗｉｌｔｏｎ Ｎ． Ｈ．（参照により本明細書に一体化させる）に記載された構造のいずれかをいう。Ｓｔｅｒａｌｏｉｄの文献中の化合物の修飾または置換により得られる非ステロイドエストロゲンを包含する異性体およびエナンチオマーはこの定義に包含される。この定義に包含される他のエストロゲン化合物はエストロゲン誘導体、エストロゲン代謝物およびエストロゲン前駆体、ならびに細胞結合エストロゲン受容体に結合しうる化合物、ならびに結合の結果が特徴的なエストロゲン効果の特異的に引き金を引く他の分子である。１種よりも多いエストロゲンの混合物も包含され、かかる混合物の例は、例えば、米国特許第５９７２９２３号に示されている。単独または他の薬剤との組み合わせにおいて有用性のあるα−エストロゲン構造の例は、例えば、やはり米国特許第５９７２９２３号に示されている。
【００６８】
「非エストロゲン化合物」は、上で定義したエストロゲン化合物以外の化合物をいう。
【００６９】
用語「１７−Ｅ２」、「β−エストラジオール」、「１７β−エストラジオール」、「β−１７−Ｅ２」、「１７β−Ｅ２」、「Ｅ２」、「１７βＥ２」および「βＥ２」は同義語である。同様に、本明細書および特許請求の範囲の用語「α１７−Ｅ２」、「α−１７−Ｅ２」、「α−エストラジオール」、「１７α−エストラジオール」、「１７αＥ２」、および「αＥ２」は同義語であり、１７β−エストラジオールのα−異性体に対応する。
【００７０】
「Ｅ−３−オール」はエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３−オールをいう。
【００７１】
本明細書の用語「多環式フェノール化合物」、「多環式化合物」または「多環式フェノール」は一般的には同義語であり、例えば、米国特許第５８５９００１号（参照により本明細書に一体化させる）において定義されており、該用語は一般的にはフェノール性Ａ環を有する化合物を包含し、本明細書記載の化合物により例示される２、３、４個またはそれ以上のさらなる環構造を含んでいてもよい。
【００７２】
「ステロイド」は、４−環構造中に配置された番号付けられた炭素原子を有する化合物をいう（例えば、Ｊ． Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ， ８２： ５５２５−５５８１ （１９６０）； および， Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ３１： ２８５−３２２ （１９７２）参照）。
【００７３】
「細胞変性」疾患または疾病は、細胞の死滅または細胞のダメージに関連した疾患または疾病をいい、機械的ダメージ、栄養枯渇（酸素枯渇を包含）、外傷、疾病プロセス、化学物質または過剰な温度への曝露によるダメージ、老化または他の原因により引き起こされうるものである。
【００７４】
「神経変性疾患」または「神経変性疾病」は、進行性の神経損失が末梢神経系または中枢神経系において起こる疾患または疾病をいう。神経変性疾患の例は：アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、糖尿病性末梢ニューロパシー、多発性硬化症、筋萎縮性側索硬化症、老化のごとき慢性神経変性疾患；ならびに卒中、外傷性脳傷害、分裂病、末梢神経ダメージ、低血糖症、脊髄傷害、てんかん、および低酸素症および高酸素症のごとき急性神経変性疾患を包含する。
【００７５】
「リンカー」は、飽和または部分的に飽和した部分、典型的には、コア環構造Ｘと修飾された疎水性置換基Ｒ１との間、あるいはコア間構造Ｘと別の置換基（例えば、Ｒ２、Ｒ３等）との間に配置されたヒドロカルビレン（例えば、アルキレン、アルケニレン、アルキニレン）、あるいはヘテロ−置換ヒドロカルビレン（例えば、主鎖中の炭素が酸素またはイオウのごとき異種原子により置換されているもの）を包含する。
【００７６】
「ヒドロカルビル」は、他の炭化水素、ハロ（例えば、塩素、フッ素、臭素）またはヘテロ（例えば、酸素、イオウ）置換基で置換されていてもよい、直鎖状または分枝鎖あるいは環状構造の、炭素および水素である元素のみからなる部分を包含する。これらの部分はアルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリール部分、ならびに他の脂肪族または環状炭化水素基で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニルおよびアリール部分、例えば、アルカリル、アルケナリルおよびアルキナリルを包含する。
【００７７】
本明細書記載のアルキル基は、いくつかの具体例において、好ましくは約１個ないし約６個の炭素原子を主鎖中に含む低級アルキルである。それらは直鎖状または分枝鎖であってよく、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル等を包含する。それらは脂肪族または環状炭化水素部分で置換されていてもよく、あるいは本明細書で定義する種々の置換基でヘテロ−置換されていてもよい。
【００７８】
本明細書記載のアルケニル基は、いくつかの場合には、好ましくは約２個ないし約６個の炭素原子を主鎖中に含む低級アルケニルである。それらは直鎖状または分枝鎖であってよく、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ペンテニル、ヘキセニル等を包含する。それらは脂肪族または環状炭化水素部分で置換されていてもよく、あるいは本明細書で定義する種々の置換基でヘテロ−置換されていてもよい。
【００７９】
本明細書記載のアルキニル基は、いくつかの場合には、好ましくは約２個ないし約６個の炭素原子を主鎖中に含む低級アルキニルである。それらは直鎖状または分枝鎖であってよく、エチニル、プロピニル、イソプロピニル、ブチニル、イソブチニル、ペンチニル、ヘキシニル等を包含する。それらは脂肪族または環状炭化水素部分で置換されていてもよく、あるいは本明細書で定義する種々の置換基でヘテロ−置換されていてもよい。
【００８０】
本明細書の用語「シクロアルキル」は、単一環または複数の縮合環を有する飽和環状非芳香族炭化水素部分をいう。典型的なシクロアルキル部分は、例えば、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロオクタニル等を包含する。
【００８１】
本明細書の用語「シクロアルケニル」は、単一環または複数の縮合環を有する部分的に不飽和の（すなわち、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を有する）環状非芳香族炭化水素部分をいう。典型的なシクロアルキル部分は、例えば、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロオクテニル等を包含する。
【００８２】
「置換シクロアルキル」および「置換シクロアルケニル」は、それぞれ直前に説明したシクロアルキルおよびシクロアルケニル部分であって、これらの部分のいずれかの炭素に対する１個またはそれ以上の水素原子がハロゲン、アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、置換アルケニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、アルコキシ、アリールオキシ、ボリル、ホスフィノ、アミノ、シリル、チオ、セレノおよびこれらの組み合わせのごとき別の基に置きかえられているものをいう。
【００８３】
ヒドロキシ置換芳香族環構造（すなわち、Ｒ１）に結合した置換基の文脈において用いられる「疎水性」は、一般的には、非水性環境に対するこの置換基の親和性、そしてより詳細には、脂質二重層中に導入された場合の脂質二重層の疎水性領域に対する親和性をいう。
【００８４】
ヒドロキシ置換芳香族環構造の文脈において用いられる「末端」は、一般的には、分子の残りの部分に対する環の位置をいい、環は、例えば四環式エストロゲン化合物の場合のように分子の端または分子の端近くに存在する（ヒドロキシ置換芳香族環は化合物のＡ環である）。
【００８５】
以下の実施例は、本発明の化合物を製造し、試験するための１のアプローチを示すものである。これらの実施例は特定の具体例のみに好ましい化合物ならびにニューロン保護におけるそれらの個々の活性の説明を意図したものである。しかしながら、一般的に言えば、多くの場合において、ニューロンを保護する薬剤は非神経細胞の保護においても活性を示す。したがって、神経保護を誘導しうる組成物に必要とされる構造上の要件の理解を進める際に、これらの結果が、向上した細胞保護特性を有する新規薬剤の設計のための基礎を提供することになる。それゆえ、これらの実施例は限定的なものと解してはならない。
【００８６】
実施例１：２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンの製造
【化３４】
2004518637.tif 000013
エストロン［３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン］２７０ｍｇおよび１−アダマンタノール（１７０ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を無水ｎ−ペンタン（６ｍＬ）に添加し、撹拌されている混合物をアイスバスで冷却した。三フッ化ホウ素エーテレート（ＢＦ３・ＥｔＯＥｔ、０．４ｍＬ）を１０分かけて添加した。さらに１５分後、アイスバスを取り去り、室温で撹拌をさらに４５分継続した。４５分の間に反応混合物中に存在する固体が溶解し、黄色油状物質が得られた。次いで、反応フラスコを振盪し回転させながら砕いた氷を添加し、ピンク色固体を得た。濾過された粗ピンク色生成物を、濾液が中性のｐＨを有するまで水洗し、次いで、固体を減圧オーブン中５０℃で乾燥させた。粗ピンク色粉末（０．４ｇ）をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％酢酸エチルで溶出）により精製して純粋な生成物を得た（０．３１ｇ，７６．７％）。クロロホルムおよびイソプロピルアルコールの混合物から生成物を再結晶させ、以下のように特徴づけた：（ｉ）融点＝３２２〜３２４℃（例えば、Ｌｕｎｎ， Ｗ． Ｈ． Ｗ．； Ｆａｒｋａｓ， Ｅ．， Ａｄａｍａｎｔｙｌ Ｃａｒｂｏｎｉｕｍ Ｉｏｎ ａｓ ａ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｎｇ Ａｇｅｎｔ： Ｉｔｓ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ Ｅｓｔｒｏｎｅ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９６９，２４， ６７７３−７６参照， 融点として２９５−２９６℃を引用）；（ｉｉ）１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ３００ ＭＨＺ） δ０． ９４ （ｓ， ３Ｈ， Ｃ１８−ＣＨ３）， ２．８ （ｍ， ２Ｈ， Ｃ６−ＣＨ２）， ４．７ （ｓ， １Ｈ， Ｃ３−ＯＨ）， ６．４ （ｓ， １Ｈ， Ｃ４−Ｈ）， ７．１２ （ｓ， １Ｈ， Ｃ１−Ｈ） ； （ｉｉｉ） １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ３００ ＭＨＺ） δ １３．７６， ２１．４７， ２５．９３， ２６．４１， ２８．６３， ２８．９５ （３ ｘ Ｃ）， ３１．５６， ３５．８１， ３６．５６， ３６．９８ （３ ｘ Ｃ）， ３８．４２， ４０．６９ （３ ｘ Ｃ）， ４４．２５， ４７．９９， ５０．３５， １１６．８７， １２４．１１， １３１．５９， １３４．００， １３５．０２， １５２．４４， ２２１．４３． （Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［２１００３−０１−０］）。
【００８７】
実施例２：（１７β）−２−（１−アダマンチル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオールの製造
【化３５】
2004518637.tif 000014
２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン（２５０ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）を冷エタノール（２５ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）に添加してにごった溶液を得た。水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４，１４０ｍｇ）を一度に添加し、撹拌しながら反応を２時間継続した。ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、砕いた氷を添加した。一晩放置すると、最初に得られた油状物質が固化した。濾液のｐＨが中性になるまで固体を濾過した。固体を減圧オーブン中５０℃で乾燥させて粗生成物（０．２５ｇ）を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中１８％酢酸エチルで溶出）により精製した。純粋な生成物（２００ｍｇ，７９．６％）をクロロホルムおよびヘキサンから再結晶させて結晶を得て（１５０ｍｇ）、ついで、以下のように特徴づけた：（ｉ）融点＝１７４〜１７５℃；（ｉｉ）１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３， ３００ ＭＨＺ） δ０． ８１ （ｓ， ３Ｈ， Ｃ１８−ＣＨ３）， ２．７６ （ｍ， ２Ｈ， Ｃ６−ＣＨ２）， ３．７３ （ｔ， １Ｈ， Ｃ１７−Ｈ）， ４．７８ （ｓ， １Ｈ， Ｃ３−ＯＨ）， ６．３８ （ｓ， １Ｈ， Ｃ４−Ｈ）， ７．１６ （ｓ， １Ｈ， Ｃｌ−Ｈ） ； （ｉｉｉ） １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３， ３００ ＭＨＺ） δ １０．９５， ２３．０２， ２６．３３， ２７．１２， ２８．７７， ２８．９８ （３ ｘ Ｃ）， ３０．４９， ３６．５４， ３６．７１， ３７．０１ （３ ｘ Ｃ）， ３８．８９， ４０．６８ （３ ｘ Ｃ）， ４３．２０， ４４．２２， ４９．９６， ８１．９９， １１６．８４， １２４．０６， １３２．０６， １３３．８３， １３５．２０， １５２．３６。
【００８８】
実施例３：１７−β−エストラジオールおよびそのアダマンチル修飾アナログの活性の比較研究
方法
グリア細胞培養：Ｐ１マウスからグリア細胞培養物を調製した。簡単に説明すると、Ｐ１マウスの皮質を切除し、０．０２５％トリプシンで３０〜４０分消化した。粉砕後、細胞をポリ−Ｄ−リジン／ラミニン被覆ガラス底ディッシュに、ディッシュ１枚あたり約５ｘ１０６個の密度で撒いた。１０％ウシ胎児血清、１０％ウマ血清、１０ｎｇ／ｍｌ上皮成長因子、２ｍＭグルタミンおよび２０ｍＭグルコースを補足したイーグルの最少必須培地にて細胞を７〜１０日間増殖させた。培養物が集密に達するまで、培養物をを加湿ＣＯ２雰囲気下、３７℃に保った。ついで、培養物を用いてニューロンを支持した（下記参照）。
【００８９】
皮質ニューロン培養：Ｅ１５−１６マウス胚から皮質ニューロンを調製した。解離した皮質細胞を、５％ウシ胎児血清、５％ウマ血清、２ｍＭグルタミンおよび２１ｍＭグルコースを補足したイーグルの最少必須培地中にて集密となったグリア細胞層（インビトロで７〜１０日間）上に撒いた（ディッシュ１枚あたり５ｘ１０６個の密度で）。培養物を加湿５％ＣＯ２雰囲気下、３７℃に保った。インビトロで３〜５日後、１０−５Ｍシトシンアラビノシドに２日間曝露することにより非ニューロン細胞の分裂を停止させ、培養物を、１０％ウシ胎児血清を欠くこと以外はプレーティング培地を同一の増殖培地に移した。インビトロで９〜１４日培養後したものを実験に使用した。
【００９０】
神経細胞の死滅：混合されたニューロン／グリア培養物を、培地ストック（ＭＳ）（１５．８ｍＭ ＮａＨＣＯ３および２０ｍＭグルコースを含む最少必須培地、ｐＨ７．４）中にてＮＭＤＡ（３０μＭ）に３７℃で２４時間曝露した。トリパンブルー染色（０．４％に３７℃で１０分間）された細胞を計数することにより細胞の死滅を定量的に評価した。ディッシュ１枚あたり３つのランダムな視野から染色されたニューロンを計数した。１７−β−エストラジオールおよびアダマンチル−修飾アナログの神経保護効果を試験する実験のために、ＮＭＤＡを培地に添加する前に、培養物を薬剤とともに種々の時間インキュベーションした。
【００９１】
結果
他人によって観察されたように、１７−β−エストラジオールとともに２４時間プレインキュベーションすると、３０μＭのＮＭＤＡに２４時間曝露した場合の皮質細胞死滅が抑制された。我々は、アダマンチル−修飾アナログが皮質ニューロンを毒性刺激から防御することにおいて、より効果的であることを見出した。図５に示すように、１０μＭに１７−β−エストラジオールはＮＭＤＡへの曝露によるニューロン損失を１５％減少させたが、１μＭのアダマンチル−修飾アナログ（ｚｙｃ−５という）はニューロン細胞死滅を約半分に抑制した。すなわち、１０分の１の用量でアダマンチル−修飾化合物は３倍以上の有効性があることがわかった。アダマンチル−修飾化合物の保護効果は用量依存的であり、１００ｎＭの用量で１０％にまで低下した。
【００９２】
図６を参照すると、ＮＭＤＡへの曝露の前に、培養皮質ニューロンが１μＭのアダマンチル−修飾化合物とともに１、３、６、１２および２４時間インキュベーションされた。１〜１２時間のプレインキュベーションではニューロン生存に有意な相違はなかった。２４時間のプレインキュベーションは最良の保護結果をもたらした。
【００９３】
実施例４：３−ヒドロキシ−２−（１−メチルプロピル）−エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンの製造
１０ｍＬの無水エタノールに溶解された既知の３−ヒドロキシ−２−（１−メチル−２−プロペニル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン（Ｐａｔｔｏｎ， １９６２； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［９８５４３−８５−２］参照， ３０ ｍｇ， ０．０９３ ｍｍｏｌ）の溶液に、２０ｍｇの５％ Ｐｄ／Ｃを添加した。反応フラスコを２．７ａｔｍの水素下で３時間振盪した。次いで、反応混合物を濾過し、触媒をエタノールで洗浄した。溶媒除去後、粗生成物をクロマトグラフィー（ヘキサン中１２．５％の酢酸エチルで溶出するシリカゲル）により精製し、次いで、塩化メチレンから再結晶させて２０ｍｇの純粋な生成物を得た。融点１８６〜１８７℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．８５−０．９０ （ｍ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ０． ９１ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， １．２０−１．２４ （ｍ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．８１−２． ８９ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２）， ６．５１ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ Ｈ）， ７．０６ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ） ； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ １２．１７， １３．７５， ２０．４４， ２１．４６， ２５．９３， ２８．９１， ２９．８３， ３１．４９， ３３．８７， ３５．８１， ３８．３３， ４４．０５， ４８．０１， ５０．２４， １１５．３７， １２３．９９， １２４．１７， １３０．８６， １３１．８８， １３４．７８， １５７．２６７， ２２１．７９。
【００９４】
実施例５：２−（１，１−ジメチルエチル）−３−ヒドロキシ−４−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンの製造
１ｍＬの無水ペンタンおよび０．５ｍＬのｔ−ブタノール中の既知の３−ヒドロキシ−４−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン（Ｋａｎｅｋｏ ｅｔ ａｌ．， １９６４； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［６８９６９−９０−４］参照， ３０ ｍｇ， ０． １１ｍｍｏｌ）の懸濁液に、アイスバスで冷却し、撹拌しながら、０．０３ｍＬの三フッ化ホウ素ジエチルエーテレートを添加した。２０分後、反応物を室温で２．５時間撹拌した。氷を添加し、生成した固体を濾過し、水洗し、減圧デシケーター中で一晩乾燥させた。粗生成物をクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル）により精製し、次いで、塩化メチレン−ヘキサンから再結晶させて２０ｍｇの純粋な生成物を得た（収率５６％）。融点１９０〜１９２℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．９０ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， １．４２ （ｓ， ９Ｈ， Ｃ（ＣＨ３）３）， ２．１３ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．７９−２．８１ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２）， ７．１６ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ） ； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣＬ３） δ １１．０６， １３．７０， ２１．４４， ２６．１６， ２６．６０， ２６．６８， ２７．５４， ２９．８２ （３ ｘ Ｃ）， ３１．５５， ３４．４３， ３５．８４， ３７．６３， ４４．５２， ４７．８９， ５０．３４， １２１．４２， １３１．２８， １３３．００， １３３．５５， １５０．５６， ２２１．４５． （元素分析 Ｃ２３Ｈ３２０２ として計算値： Ｃ， ８１．１３； Ｈ， ８１．０９． 実測値： Ｃ， ８１．０９； Ｈ， ９．５９）。
【００９５】
実施例６：
２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシ−４−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンの製造
【化３６】
2004518637.tif 000015
１ｍＬの無水ペンタン中の既知の３−ヒドロキシ−４−メチルエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン（Ｋａｎｅｋｏ ｅｔ ａｌ．， １９６４； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［６８９６９−９０−４］参照， ３０ ｍｇ， ０．１１ ｍｍｏｌ）および３０ｍｇ（０．１９７ｍｍｏｌ）の１−アダマンタノールの懸濁液に、アイスバスで冷却し、撹拌しながら、０．０２ｍＬの三フッ化ホウ素ジエチルエーテレートを添加した。０℃で１５分撹拌後、反応物を室温で４５分撹拌した。氷を添加し、生成した白色固体を濾過し、水洗し、Ｐ２Ｏ５で乾燥させた。粗生成物をクロマトグラフィー（ヘキサン中７％酢酸エチルで溶出するシリカゲル）により精製して３０ｍｇの純粋な生成物を得た（収率６８％）。塩化メチレン−ヘキサンからの再結晶後、生成物の融点２６２〜２６３℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．９０ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．１３ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．７ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２）， ７．１１ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ １１．０２， １３．７０， ２１．４４， ２６．２２， ２６．６７， ２７．５４， ２８．９５ （３ ｘ Ｃ）， ３１．５６， ３５．８４， ３６．６０， ３６．９８ （３ ｘ Ｃ）， ３７．６３， ４０．８２ （３ ｘ Ｃ）， ４４．６０， ４７．９１， ５０．３４， １２１．４１， １２１．５１， １３１．４５， １３３．３２， １５０．７９， ２２１．４９． （元素分析 Ｃ２９Ｈ３９０２ として計算値： Ｃ， ８３． ２１； Ｈ， ９．１５、実測値： Ｃ， ８３．４５； Ｈ， ８．９４）。
【００９６】
実施例７：（１７β）−２−（１−アダマンチル）−４−（１−メチルプロピル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オールの製造
【化３７】
2004518637.tif 000016
（２工程の合成が含まれ、１番目の化合物は中間体であり、２番目の化合物は上記化合物である）：２ｍＬの無水ペンタン中の既知の３−ヒドロキシ−４−（１−メチルプロピル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オン（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９６； Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［１７７３５３０６−９］参照， ７０ ｍｇ， ０．２１５ ｍｍｏｌ）および５０ｍｇ（０．３２８ｍｍｏｌ）の１−アダマンタノールの混合物に、アイスバスで冷却し、撹拌しながら、０．１ｍＬの三フッ化ホウ素ジエチルエーテレートを添加した。１時間後、室温で撹拌をさらに１時間継続し、黄味がかったオレンジ色の懸濁液を得た。氷を添加後、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。一緒にした抽出物をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒除去後、粗生成物をクロマトグラフィー（ヘキサン中６％酢酸エチルで溶出するシリカゲル）により精製して４０ｍｇの生成物を油状物質として得た（収率４０．５％）。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．８４−０．９９ （ｍ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ０． ９０ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．８６−３．１６ （ｍ， ２Ｈ， Ｃｈｅｚ） ； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ １３．０５， １３．３５， １３．６７， １３．７２， １３．９７， １８．３０， ２１．４３， ２２．５２， ２６．２２， ２７．０４， ２７．４５， ２７．５７， ２８．２９， ２８．９７ （３ ｘ Ｃ）， ３１．４７， ３１．６２， ３３．８２， ３４．２３， ３５．８４， ３６．６８， ３６．９８ （３ ｘ Ｃ）， ３７．３３， ３７．４０， ４０．９６ （３ ｘ Ｃ）， ４４．８０， ４７．８５， ５０．４４， １２２．０１， １３０．３３， １３２．９２， １３３．８０， １５２．４９， ２２１．３２。
【００９７】
上記化合物を製造するために、−１０℃の５．５ｍＬの無水メタノール中の４０ｍｇ（０．０８７ｍｍｏｌ）の２−（１−アダマンチル）−３−ヒドロキシ−４−（１−メチルプロピル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−オンの溶液に、５０ｍｇの水素化ホウ素ナトリウムを一度に添加し、−５℃で撹拌を１時間継続した。溶媒除去後、氷を添加し、生成した固体を濾過し、水洗し、Ｐ２Ｏ５で乾燥させた。クロマトグラフィー（ヘキサン中１２．５％酢酸エチルで溶離するシリカゲル）により精製して２０ｍｇの精製生成物を得た（収率５０％）。融点１５２〜１５４℃。１Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣｌ３） δ ０．７８ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ０．８５−０．９５ （重複したｔ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ３Ｈ， ＣＨ３）， １．３４−１．３６ （ｄ， Ｊ ＝ ７．４ Ｈｚ， ３Ｈ， ＣＨ３）， ２．８１−２．８４ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ８．１ Ｈｚ， １Ｈ， ＣＨＯＨ）， ７．１２ （ｍ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ）； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ １０．８６， １０．９０， １３．０６， １３．３７， １８．３０， ２２．９７， ２６．６０， ２７．６９， ２８．３２， ２９．００ （３ ｘ Ｃ）， ３０．５８， ３３．７５， ３４．１７， ３６．６８， ３６．７８， ３７．００ （３ ｘ Ｃ）， ３７．７９， ３７．８６， ４０． ９６ （３ ｘ Ｃ）， ４３．０７， ４４．７８， ４４．８２， ５０．０８， ８１．９３， １２１．９８， １３０．２７， １３１．８９， １３３．１４， １３３．６７， １５２．３３。
【００９８】
実施例８：Ｅｎｔ−（１７β）−２−（１−アダマンチル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオールの製造
【化３８】
2004518637.tif 000017
１ｍＬの無水ペンタン中の既知のｅｎｔ−１７β−エストラジオール（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［３７３６−２２９］参照， ４０ ｍｇ， ０．１４７ ｍｍｏｌ）および２０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）の１−アダマンタノールの懸濁液を室温で２０分撹拌し、次いで、−５℃で１５分撹拌した。この懸濁液に０．０５ｍＬの三フッ化ホウ素ジエチルエーテレートを１分間かけて添加した。次いで、０℃ないし−５℃で２０分撹拌し、うす黄色溶液を得た。次いで、反応物を室温で１５分撹拌し、その間に粘着性物質が生成した。４５分後、撹拌しながら氷を添加して粘着性物質を固化させた。次いで、固体を濾過し、水洗し、減圧デシケーターで乾燥させて５０ｍｇの粗生成物を得た。クロマトグラフィー（ヘキサン中２０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル）により生成して４０ｍｇの純粋な生成物を得た（収率６７％）。塩化メチレンから再結晶後、純粋な生成物の融点は１７４〜１７６℃であった。［α］ （２４， Ｄ） − １９８ （ｃ＝０． １， ＣＨＣ１３） ； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．７８ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３） ； ２．７５−２．７６ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２） ； ３．７８ （ｔ， Ｊ ＝ ８Ｈｚ， １Ｈ， ＣＨＯＨ） ； ６．３９ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ）； ７．１５ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ） ； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ １５２．１６， １３５．１６， １３３．７３， １３２．１３， １２４．０２， １１６．８１， ８１．９８， ５０．０８， ４４．３１， ４３．２９， ４０．８２ （３ ｘ Ｃ）， ３９．０１， ３７．１０ （３ ｘ Ｃ）， ３６．８１， ３６．６４， ３０．６５， ２９．１０ （３ ｘ Ｃ）， ２８．８７， ２７．２２， ２６．４４， ２３．１４， １１．０７ （元素分析  Ｃ２８Ｈ３８０２  ＭＳ ｍ／ｚ ４０６ （Ｍ＋））。
【００９９】
実施例９：Ｅｎｔ−（１７β）−２−（１，１−ジメチルエチル）エストラ−１，３，５（１０）−トリエン−３，１７−ジオールの製造
１ｍＬの無水ペンタン中の既知のｅｎｔ−１７β−エストラジオール（Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ 登録番号 ［３７３６−２２９］参照， ３０ ｍｇ， ０．１１ ｍｍｏｌ）および０．０６ｍＬの２−メチル−２−プロパノール（０．６３ｍｍｏｌ）の懸濁液を室温で１５分撹拌した。この懸濁液に０．０７ｍＬの三フッ化ホウ素ジエチルエーテレートを１分かけて添加し、０℃ないし−５℃で撹拌を２０分継続した。反応物を放置して室温まで温め、この間（約１５分）に黄色固体がフラスコに貼り付いた。室温で３０分撹拌後、氷を添加した。粉末様固体を梨香し、水洗し、減圧デシケーターで一晩乾燥させた。粗生成物をクロマトグラフィー（）により精製して純粋な生成物を得て、次いで、アセトン−ヘキサンから再結晶させた。純粋な生成物（２０ｍｇ，収率５５％）は融点が１７７〜１７９℃であった。［ａ］ （２５， Ｄ）−９１．３３ （ｃ＝０． ２２５， ＣＨＣ１３） ； １Ｈ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ ０．７８ （ｓ， ３Ｈ， ＣＨ３）， １．４０ （ｓ， ９Ｈ， Ｃ（ＣＨ３）３）， ２．７４−２．７５ （ｍ， ２Ｈ， ＣＨ２）， ３．７４ （ｔ， Ｊ ＝ ８． ４ Ｈｚ， ＣＨＯＨ）， ６．４１ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ）； ７．１９ （ｓ， １Ｈ， Ａｒ−Ｈ） ； １３Ｃ ＮＭＲ （ＣＤＣ１３） δ １５２．０５， １３５．３３， １３３．３７， １３１．８１， １２４．０４， １１６．５５， ８１．９８， ６０．４４， ５０．０３， ４４．２３， ４３．２６， ３８．９８， ３６．７８， ３４．４７， ３０．５７， ２９．７４ （３ ｘ Ｃ）， ２８．９０， ２７．２２， ２６．３８， ２３．１２， １４．１７， １１．０７ （元素分析 Ｃ２２Ｈ３２０２  ＭＳ ｍ／ｚ ３２８ （Ｍ＋）， ３１３）。
【０１００】
実施例１０：化合物の活性に関する比較研究
方法：ＨＴ−２２細胞神経保護アッセイ
標準的な培養条件に従って、ＨＴ−２２細胞（ネズミ起源の不死化海馬ニューロン）を、１０％ ｃｈａｒｃｏａｌ−Ｓｔｒｉｐｐｅｄ ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．， Ｌｏｇａｎ， ＵＴ）および２０μｇ／ｍＬゲンタマイシンを補足したＤＭＥＭ培地中で維持した。
透明な底を有するＮｕｎｃ９６−ウェルプレート（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｏｒｌａｎｄｏ， ＦＬ）に細胞をウェル１個あたり５０００個の密度で撒き、一晩インキュベーションした。ＤＭＳＯに溶解したステロイドを０．０１ないし１０μＭの範囲の濃度で添加し、グルタメート（１０ｍＭまたは２０ｍＭ）を同時添加した。ＤＭＳＯを０．１％体積／体積の濃度で用いて担体対照としたが、細胞の生存可能性に対して識別可能な影響はなかった。グルタメートに曝露してから約１６時間後、細胞をｐＢＳ，ｐＨ７．４ですすぎ、ＰＢＳ中の２５μＭカルセインＡＭ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ， Ｉｎｃ．， Ｅｕｇｅｎｅ， ＯＲ）を室温で１５分添加することにより生存可能性を評価した。Ｆｌｕｐｒｅｓｃｅｎｃｅ ＦＬ６００ ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ （Ｂｉｏｔｅｋ， Ｗｉｎｏｉｏｓｋｉ， ＶＴ）蛍光を調べた（励起４８５ｎｍ、発光５３０ｎｍ）。メタノールの添加により溶解した細胞をブランクとして用いた。すべてのデータを、（対照値−傷害値）／対照値 Ｘ １００により計算して、細胞死滅％に対して正規化した。
【０１０１】
結果
以下の表１および表２に試験結果を示す。
【０１０２】
【表１】
2004518637.tif 000018
【０１０３】
【表２】
2004518637.tif 000019
【０１０４】
上記のことから、本発明のいくつかの目的が達成さるたことがわかるであろう。本発明の範囲から逸脱することなく種々の変更が上記方法および化合物に施されてもよく、上記説明に含まれるすべての事柄は説明的であり、限定的な意味を持たないと解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、いくつかの好ましいヒドロキシ置換芳香族化合物（例えば、フェノール類、カテコール類等、ｎ＝１、２またはそれ以上）の化学構造を一般的に図説したものであり、化合物は本明細書で説明する大型の疎水性置換基で修飾されていてもよく、有効量の化合物を投与して細胞集団に細胞保護を付与するために使用してもよい。
【図２】図２Ａおよび２Ｂは、いくつかの具体例における、本発明における使用に適した好ましい多環式疎水性置換基（例えば、架橋された置換基）ならびにいくつかの別の疎水性置換基（例えば、架橋含有または環アッセンブリー置換基）の化学構造を一般的に図説したものである。
【図３】図３は、いくつかの別のヒドロキシ置換芳香族化合物（例えば、フェノール類、カテコール類等、ｎ＝１、２またはそれ以上）の化学構造を一般的に図説したものであり、式中、修飾置換基Ｒ１はヒドロキシ置換芳香族環に直接結合していないが該環の近くにあり、さらに該置換基Ｒ１はリンカー（例えば、アルキレンリンカー）を介して結合している。
【図４】図４は、本発明の化合物の特定の具体例を一般的に図説したものであり、化合物中、末端ヒドロキシ置換芳香族環に結合した他の置換基（例えば、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５等）は縮合して多環式環構造（すなわち、図１Ａ−１Ｃに示したような２個、３個またはそれ以上の環を有する構造）を形成する。
【図５】図５は、後で実施例３にてさらに説明される棒グラフであり、種々の用量の本発明の化合物の細胞死滅に対する影響を調べるために行なった分析の結果を示す。
【図６】図６は、後で実施例３にてさらに説明される棒グラフであり、（本発明の化合物に）種々の時間曝露した場合の細胞死滅に対する影響を調べるために行なった分析の結果を示す。
【図５】
2004518637.tif 000044
【図６】
2004518637.tif 000045
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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