(57)【要約】本発明は、一般的に、パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランのエナンチオマーまたはその同種のものに関する。生物学的アッセイによって、ラセミ型パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、セロトニン摂取およびノルエピネフリン摂取の阻害がほぼ等しい（ノルエピネフリンでは、ＩＣ５０＝２８．６ｎＭ、セロトニンでは、ＩＣ５０＝２１．７ｎＭ）ことが明らかになった。興味深いことに、（＋）パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、セロトニン摂取よりもノルエピネフリン摂取をより強く阻害する（ノルエピネフリンでは、ＩＣ５０＝１０．３ｎＭ、セロトニンでは、ＩＣ５０＝２２ｎＭ）。対照的に、（−）パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、ノルエピネフリン摂取よりもセロトニン摂取をより強く阻害する（ノルエピネフリンでは、ＩＣ５０＝８８．５ｎＭ、セロトニンでは、ＩＣ５０＝４０．３ｎＭ）。本発明はまた、上記化合物の塩およびプロドラッグ形状にも関連する。いくつかの態様において、本発明の化合物および薬学的に許容される添加剤を組み合わせて、患者に投与するための製剤を調製する。最終的に、本発明は、種々の苦痛、例えば、鬱病、慢性痛、または線維筋痛症を患う哺乳動物を治療するための方法であって、本発明の化合物の治療的有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ａ（化１）で表される、単離された化合物。
【化１】
2006503920.tif 000020
式中、Ｘは、それぞれ個別に、Ｏ、Ｓ、またはＮＲを表し、
Ｒは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、へテロアリール、アリールアルキル、ホルミル、アシル、シリル、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ１は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ２は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ３は、それぞれ個別に、Ｈ，アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ４は、１〜４回存在する、または存在しない、
Ｒ４は、もし存在すれば、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ８０は、それぞれ個別に、アリール、シクロアルキル，シクロアルケニル、ヘテロアシル、またはポリシクリル部分を表し、
ｍは、それぞれ個別に、０〜８の間の整数であり、そして
化合物は、単一のエナンチオマーであり;または、
それらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
【請求項２】
式Ｂ（化２）で表される、単離された化合物。
【化２】
2006503920.tif 000021
式中、Ｘは、それぞれ個別に、Ｏ、Ｓ、またはＮＲを表し、
Ｒは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、へテロアリール、アリールアルキル、ホルミル、アシル、シリル、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ１は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ２は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ３は、それぞれ個別に、Ｈ，アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ４は、１〜４回存在する、または存在しない、
Ｒ４は、もし存在すれば、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ８０は、それぞれ個別に、アリール、シクロアルキル，シクロアルケニル、ヘテロアシル、またはポリシクリル部分を表し、
ｍは、それぞれ個別に、０〜８の間の整数であり、そして
化合物は、単一のエナンチオマーであり;または、
それらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
【請求項３】
ＸはＯを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
ＲはＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１はＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２はＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３はアルキルを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４は存在しない、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項９】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１０】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１１】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１２】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１３】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表し、Ｒ４は存在しない、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１４】
ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はエチルを表し、Ｒ４は存在しない、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項１または２に記載の化合物、および薬学的に許容される添加剤を含む、製剤。
【請求項１６】
請求項１または２に記載の化合物、ならびに鎮痛剤、抗炎症剤、解熱剤、抗抑鬱剤、抗てんかん薬、抗ヒスタミン剤、抗片頭痛薬、抗ムスカリン作動薬、抗不安剤、鎮静剤、催眠薬、抗精神病薬、気管支拡張剤、抗喘息薬、心臓血管薬、コルチコステロイド、ドーパミン作動薬、電解液、胃腸薬、筋弛緩剤、栄養剤、ビタミン剤、副交感神経作動薬、刺激剤、抗ナルコレプシー薬、および食思減退薬からなる群から選択される化合物を含む、製剤。
【請求項１７】
請求項１または２に記載の化合物、ならびにアセクロフェナク、アセトアミノフェン、アドメキセチン（adomexetine）、アルモトリプタン、アルプラゾラム、アマンタジン、アムシノニド、アミノシクロプロパン、アミトリプチリン、アモロジピン（amolodipine）、アモキサピン、アンフェタミン、アリピラゾール、アスピリン、アトモキセチン、アザセロトニン（azasetron）、アザタジン、ベクロメタソン、ベナクチジン、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、ベタメタゾン、ビシファジン（bicifadine）、ブロモクリプチン、ブデソニド、ブプレノルフィン、ブプロピオン、ブスピロン、ブトルファノール、ブトリプチリン、カフェイン、カルバマゼピン、カルビドーパ、カリソプロドール、セレコシブ、クロルジアゼポキシド、クロルプロマジン、サリチル酸コリン、シタロプラム、クロミプラミン、クロナゼパム、クロニジン、クロニタゼン、クロラゼペート、クロチアゼパム、クロキサゾラム、クロザピン、コデイン、コルチコステロン、コルチゾン、シクロペンザプリン、シプロヘプタジン、デメキシプチリン（demexiptiline）、デシプラミン、デソモルフィン（desomorphine）、デキサメタゾン、デキサナビノール、デキストロアンフェタミンスルフェート、デキストロモラミド、デキストロプロポキシフェン、デゾシン、ジアゼパム、ジベンゼピン、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサール、ジヒドロコデイン、ジヒドロエルゴタミン、ジヒドロモルフィン、ジメタクリン、ジバルプロキセス、ジザトリプタン（dizatriptan）、ドラセトロン、ドネペジル、ドチエピン、ドキセピン、デュロキセチン、エルゴタミン、エスシタロプラム、エスタゾラム、エトスクシミド、エトドラク、フェモキセチン、フェナメート、フェノプロフェン、フェンタニル、フルジアゼパム、フルオキセチン、フルフェナジン、フルラゼパム、フルビプロフェン、フルタゾラム、フルボキサミン、フロバトリプタン、ガバペンチン、ガランタミン、ゲピロン、ギンコビルボア（ginko bilboa）、グラニセトロン、ハロペリドール、フペルジンＡ，ヒドロコドン、ヒドロコルチゾン、ヒドロモルホン、ヒドロキシジン、イブプロフェン、イミプラミン、インディプロン、インドメタシン、インドプロフェン、イプリンドール、イプサピロン、ケタセリン、ケトプロフェン、ケトロラク、レソピトロン（lesopitron）、レボドーパ、リパーゼ、ロフェプラミン、ロラゼパム、ロクサピン、マプロチリン、マチンドール、メフェナム酸、メラトニン、メリトラセン、メマンチン、メペリジン、メプロバメート、メサラミン、メタプラミン、メタキサロン、メタドン、メタドンメタンフェタミン、メトカルバモール、メチルドーパ、メチルフェニデート、メチルサリチラート、メチセルジド、メトクロプラミド、ミアンセリン、ミフェプリストン、ミルナシプラン、ミナプリン、ミルタザピン、モクロベミド、モダフィニル、モリンドン、モルフィン、モルフィンヒドロクロリド、ナブメトン、ナドロール、ナプロキセン、ナラトリプタン、ネファゾドン、ニューロンチン、ノミフェンシン、ノルトリプチリン、オランザピン、オルサラジン、オンダンセトロン、オピプラモール、オルフェナドリン、オキサフロザン（oxaflozane）、オキサプラジン（oxaprazin）、オキサゼ��ム、オキシトリプタン、オキシコドン、オキシモルフォン、パンクレリパーゼ、パレコシブ（parecoxib）、パロキセチン、ペモリン、ペンタゾシン、ペプシン、ペルフェナジン、フェナセチン、フェンジメトラジン、フェンメトラジン、フェニルブタゾン、フェニトイン、ホスファチジルセリン、ピモジド、ピルリンドール、ピロキシカム、ピゾチフェン、ピゾチリン、パラミペキソール（pramipexole）、プレドニソロン、プレドニソン、プレガバリン、プロパノロール、プロピゼピン（propizepine）、プロポキシフェン、プロトリプチリン、クアゼパム、キヌプラミン（quinupramine）、レボキシチン、レセルピン、リスペリドン（risperidone）、リタンセリン、リバスチグミン、リザトリプタン、ロフェコシブ、ロピニロール、ロチゴチン、サルサレート、セルトラリン、シブトラミン、シルデナフィル、スルファサラジン、スリンダク、スマトリプタン、タクリン、テマゼパム、テトラベノジン（tetrabenozine）、チアジド、チオリダジン、チオチキセン、チアプリド、チアシピロン（tiasipirone）、チザニジン、トフェナシン、トルメチン、トロキサトン、トピラメート、トラマドール、トラゾドン、トリアゾラム、トリフルオロペラジン、トリメトベンズアミド、トリミブラミン、トロピセトロン、バルデコシブ（valdecoxib）、バルプロ酸、ベンラファキシン、ビロキサジン、ビタミンＥ、ジメルジン、ジプラシドン、ゾルミトリプタン、ゾルピデム、およびゾピクロンからなる群から選択される化合物を含む、製剤。
【請求項１８】
鬱病を患う哺乳動物を治療する方法であって、前記哺乳動物に、請求項１または２に記載の化合物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１９】
線維筋痛症候群を患う哺乳動物を治療する方法であって、前記哺乳動物に、請求項１または２に記載の化合物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２０】
機能的体細胞性障害、例えば、鬱病、線維筋痛症候群、慢性疲労症候群、痛み、注意欠陥多動性障害、および内臓痛症候群（VPS）、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ）、機能性消化不良、間質性膀胱炎、本態性外陰痛（essential vulvodynia）、尿道症候群、睾丸痛、ならびに抑鬱性障害（主要な抑鬱性障害、胸腺機能不全, 非定型の鬱病）および不安障害（全身性不安障害、恐怖症, 強迫性障害、パニック障害、心的外傷後ストレス障害）、月経前不快性障害、顎関節障害、非定型の顔面痛、片頭痛、ならびに緊張性頭痛を含む精神的障害を患う哺乳動物を治療する方法であって、前記哺乳動物に、請求項１または２に記載の化合物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物が霊長類、ウマ、イヌ、ネコである、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記化合物は、経口投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記化合物は、静脈投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物は、舌下投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２６】
前記化合物は、眼から投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２７】
前記化合物は、経皮投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２８】
前記化合物は、直腸投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項２９】
前記化合物は、膣投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３０】
前記化合物は、局所投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物は、筋内投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３２】
前記化合物は、皮下投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３３】
前記化合物は、頬側投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物は、経鼻投与される、請求項１８、１９または２０に記載の方法。
【請求項３５】
選択的セロトニン再摂取抑制剤および請求項１または２に記載の化合物を含む組成物。
【請求項３６】
選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤、および請求項１または２に記載の化合物を含む組成物。
【請求項３７】
選択的セロトニン再摂取抑制剤、選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤、および請求項１または２に記載の化合物を含む組成物。
【請求項３８】
選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤は、ミルナシプランである、請求項３６または３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記請求項１または２に記載の化合物は、ＣＳ１７１３である、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４０】
前記請求項１または２に記載の化合物は、ＣＳ１７１４である、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４１】
前記組成物は、ＣＳ１８１４をさらに含む、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】
選択的セロトニン再摂取抑制剤およびＣＳ１８１４を含む組成物。
【請求項４３】
選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤およびＣＳ１８１４を含む組成物。
【請求項４４】
選択的セロトニン再摂取抑制剤、選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤およびＣＳ１８１４を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
有効性と認容性は、精神の抑鬱および機能的体細胞性障害（Functional Somatic Disorders）を含むその他の精神障害に対する薬物療法の選択を決定する際の重要な因子である。三環性の抗抑鬱剤（ＴＣＡ）から、選択的セロトニン再摂取抑制剤（ＳＳＲＩ）への移行は、ＴＣＡの有害な副作用の原因となる直接的な受容体相互作用失くすだけでなく、ノルエピネフリンの再摂取を阻害する能力をも含む。単一の神経伝達物質、セロトニンに対して選択性を有することから、特により重篤な鬱においては、ＳＳＲＩがＴＣＡよりも効果が低くなる傾向にあることの理由が説明され得る（Lopez-Ibor J. et al., 1996, Int. Clin.
Psychopharm., 11:41-46）。より古いＴＣＡは、有意な行動毒性、特に、精神運動性および認識障害および鎮静に関連している。ＳＳＲＩには、主としてこれらの作用はない。しかし、吐気や消化不良などの消化管障害は、これらの作用物質に共通している（Hindmarch I., 1997, Human Psychopharmacology,
12:115-119）。例えば、広く処方されてきたＳＳＩＲセルトラリン （Zoloft（登録商標）、Pfizer）については、治療の中断と関連する３つの主な副作用は、吐気、不眠および下痢であった（Physician’s Desk Reference, 57th Edition, 2003,
Thomson Medical）。  
【０００２】
抗抑鬱剤を用いた薬物療法を向上させようとする努力は、鬱病におけるモノアミン機能を高める治療的能力を支持する神経化学的および臨床的研究において証明されてきたものの累積によって導かれる。デュロキセチン、ベンラファキシン、ミルナシプランといった多くの抗抑鬱剤、セロトニンおよびノルエピネフリン再摂取抑制剤（ＳＮＲＩ）は、それらとセロトニン（５−ＨＴ）およびノルエピネフリン（ＮＥ）受容体の双方との相互作用に基づいて開発されてきた。ミルナシプランはまた、ノルエピネフリン（「ＮＥ」）とセロトニン（「５−ＨＴ」）との比率が２：１であるので、ノルエピネフリンおよびセロトニン再摂取抑制剤（ＮＳＲＩ）と呼ばれることも多い（Moret et al., 1985,
Neuropharmacology, 24:1211-1219; Palmier et al., 1989, Eur. J. Clin. Pharmacol.,
37:235-238）。現時点での臨床的な証拠は、これらの新規な作用物質は、ＳＳＲＩと比較して、有効性の向上および/または作用の迅速な開始をもたらすかもしれないということを示唆している（Tran P.V. et al., 2003,
J. Clin. Psychopharmacol., 23:78-86）。ミルナシプランの最近の試験によれば、この化合物は、鬱病に関連する、および無関係の痛みを除去するのに効果的であることを示唆されている（Briley M., 2003, Curr. Opin. Investig. Drugs, 4:42-45; Cypress
Bioscience Inc., Cypress Bioscience Inc. Announces Final Results of Milnacipran Phase II Clinical Trial in Fibromyalgia, Media
Release, March 21, 2003, Available from: URL: http://www.cypressbio.com）。
【０００３】
米国特許第4,478,836号にミルナシプランおよびその合成方法が記載されている。ミルナシプラン（ミダルシプラン（midalcipran）、ミダシプラン（midacipran）、Ｆ２２０７）は、ＮＥ対５−ＨＴの比率２：１で、ノルエピネフリン（ＮＥ）およびセロトニン（５−ＨＴ）の双方の摂取を阻害する（Moret et al., 1985, Neuropharmacology,
24:1211-1219; Palmier et al., 1989, Eur. J. Clin. Pharmacol., 37:235-238）が、ドーパミンの摂取には影響を及ぼさない。ミルナシプランは、アルファおよびベータアドレナリン作動性、ムスカリン作動性、ヒスタミン作動性、およびドーパミン作動性の受容体に対して親和性を持たない。このことは、ミルナシプランは、アンチコリン作動性効果、鎮静効果および刺激効果を生成する能力が低いことを示唆している。ミルナシプランは、慢性投与後、ラット皮質においてベータアドレナリン受容体の数に影響を及ぼさない（Briley M. et al., Int. Clin. Psychopharmac.,
1996, 11:10-14）。ミルナシプランに関する更なる情報については、Merck Index、第１２版、見出し6281に見出すことができる。
【０００４】
ミルナシプラン（Ixel（登録商標）、Pierre Fabre）は、用量を増やすことで認容性を減少させたヒト臨床試験において、無数の副作用を示した（Puech A. et al., 1997, Int. Clin. Psychopharm.,
12:99-108）。二重盲検、無作為抽出で、多機関で研究を行ったところ、１日２回１００ｍｇ／日のミルナシプラン投与において最も頻繁に自発的に報告された副作用は、腹痛（１３％）、便秘（１０％）および頭痛（９％）であった。興味深いことに、同様の研究において、ミルナシプランを２００ｍｇ／日で１日２回投与した場合、副作用に関連する痛みは減少した（頭痛は８％、腹痛７％となった）が、吐気および嘔吐が著明な副作用として、患者の７％において認められた（Guelfi J.D., 1998, Int. Clin. Psychopharm.,
13:121-128）。２１９例の高齢の鬱病患者を対象とした二重盲検による比較研究においては、ＴＣＡイミプラミンレシピエントよりも、ミルナシプランレシピエントにおいてより頻繁に報告された唯一の副作用は吐気であった。患者に対して、１日２回８週間、ミルナシプランまたはイミプラミンのいずれかを７５〜１００ｍｇ／日投与した（Tignol J. et al., 1998, Acta Psychiatrica
Scandinavica, 97:157-165）。ミルナシプランを１０例の患者に静脈投与したとき、5例が吐気を報告したことが観察された。吐気は、主にミルナシプラン血漿濃度がピークに達したときに報告された（Caron J. et al., 1993, Eur. Neuropsychopharmacol.,
3:493-500）。本研究は、吐気がミルナシプラン血漿濃度と直接的に関連していることを明らかに証明した。さらに、本研究においては、薬物は静脈投与されるので、吐気は中枢作用的に媒介された副作用であり得ることが示唆されている。他の研究からのデータによれば、ミルナシプランは、胃の刺激によって局所的に媒介された吐気もまた誘発し得る可能性を示唆している（血漿濃度がピークに達する前にさえ、吐気が急速に発症することが観察された）。 
【０００５】
プラシーボを用いた対照群の臨床試験において自発的に報告されたミルナシプランの副作用の発生率を図６３に示す（副作用は、ミルナシプラン１００ｍｇ／日投与群において頻度が２％より高い場合にリストに記載している）。図６３に示されたデータから明らかなように、吐気、嘔吐、発汗、熱感、動悸、振戦、不安感、排尿障害および不眠といった特定の副作用の発生率は、用量に伴って増加する。 
【０００６】
早期の鬱病試験の1つにおいて、副作用を減少させるためにミルナシプラン用量を増加させた1週間後でさえ、副作用によって治療を中断した最も一般的な理由は、吐気と嘔吐であったことに注目することが重要である（Leinonen E., 1997, Acta Psychiatr. Scand.,
96:497-504）。ミルナシプラン副作用を減少させるために長期的用量増加（４週間）を行った線維筋痛症の最近の臨床試験において、患者から報告された最も一般的な用量関連性の副作用は吐気であった（Cypress Bioscience Inc., Cypress Bioscience Inc.
Announces Final Results of Milnacipran Phase II Clinical Trial in Fibromyalgia、Media
Release, March 21, 2003）。
【０００７】
図６３に示したデータから、現在即座に入手可能なミルナシプランの放出製剤は、１日１回もしくは２回投与の場合、患者の認容性が低くなる治療的緊急副作用の発生率が高いため、ミルナシプランの用量が１００ｍｇ／日以上必要な健康状態の治療には適さないことがわかる。重篤な鬱病および他の関連疾患の治療においては、より高い用量が必要である。早期の抗抑鬱剤の臨床試験において示されているように、２００ｍｇ／日のミルナシプラン用量は、低用量よりもすぐれている（Von Frenckell R et al., 1990, Int. Clin.
Psychopharmacology., 5:49-56）。毎日１００〜２５０ｍｇのミルナシプラン投与計画が、線維筋痛症治療に関して最近報告された（米国特許第6,602,911号）。用量関連性の緊急の副作用および必要な用量に到達するために長期間滴定する必要性があることから、現在入手可能な製剤を用いた用量の範囲の上限に到達することは、非常に難しいであろう。
【０００８】
ミルナシプランの（＋）−デキストロ（dexitro）エナンチオマー（Ｆ２６９５、（＋）−１Ｓ、２Ｒ−ミルナシプラン）は、ノルエピネフリンおよびセロトニン再摂取の阻害活性が、そのラセミ混合物の約２倍である。Viazzo et al. Tetrahedron Lett. 1996,
37, 4519-4522; Deprez et al. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1998,
23, 166-171参照。さらに、ミルナシプランの（−）−レブロ（levro）エナンチオマー（Ｆ２６９６、（−）−１Ｒ、２Ｓ−ミルナシプラン）は、はるかに力価が低い。ｉｄ．参照。
【０００９】
総合的に、ミルナシプランは、主な鬱病の発症の治療において合理的に有効ではあるが、主な鬱病および機能的体細胞的障害を含む他の精神的な障害の発症を効果的に治療するためには、より有効な方法が必要である。
【発明の開示】
【００１０】
本発明の一局面は、パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランのエナンチオマーまたはその同種に関する。生物学的アッセイによって、（＋）−パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、セロトニン摂取の阻害と比較して、ノルエピネフリンの摂取の阻害が約２倍であることが明らかにされた。対照的に、（−）−パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、ノルエピネフリン摂取の阻害と比較して、セロトニンの摂取の阻害が約２倍である。パラ−ヒドロキシ−ミルナシプランの各エナンチオマーの阻害特性は、セロトニン摂取およびノルエピネフリン摂取をほぼ等しい力価で阻害するラセミ混合物のそれと対照的である。本発明の別の局面は、上記化合物の塩およびプロドラッグの形態に関する。本発明の第３の局面は、機能的体細胞性障害を含む種々の精神的障害、例えば、鬱病、慢性痛、または線維筋痛症に苦しむ哺乳動物を治療する方法であって、本発明の化合物の治療的有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む方法に関する。本発明のさらに別の局面は、本発明の化合物および薬学的に許容される添加剤を含む製剤に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
定義
便宜上、本明細書、実施例、および添付の請求の範囲において採用した特定の用語をここに集めた。
【００１２】
用語「ミルナシプラン」は、下記式によって表される三置換のシクロプロペンのラセミ混合物を意味する。
【化３】
2006503920.tif 000002
【００１３】
用語「ＥＤ５０」は、その最高の反応または効果の５０％をもたらす薬物の用量を意味する。あるいは、被験体もしくは調製物の５０％において、所定の反応が生じる用量を意味する。
【００１４】
本明細書および図面において言及された化合物は、６文字の英数字コードを用いて確認されている。例えば、ラセミ型ｐ−ヒドロキシ−ミルナシプランは、ＣＳ１８１４である。いくつかの例においては、６文字の英数字コードは、前にスラッシュのついた数字が後に続いて記載される。前にスラッシュの付いた数字は、そのデータを取得したバッチを示している。例えば、ＣＳ１８１４／１とは、化合物は、ｐ−ヒドロキシ−ミルナシプランであり、そのデータはバッチ１から取得されたことを意味する。
【００１５】
用語「ＬＤ５０」は、被験体の５０％が死に到る薬物の用量を意味する。
【００１６】
用語「治療指数」は、ＬＤ５０/ＥＤ５０として定義される薬物の治療指数を表す。
【００１７】
用語「構造活性相関（ＳＡＲ）」は、薬物の分子構造を変更することによって、それらの、受容体、酵素などとの相互作用を変更する方法を意味する。
【００１８】
用語「アゴニスト」は、天然の輸送体の作用に類似する、または天然の輸送体が知られていない場合は、他の受容体リガンドの不存在下で、受容体複合体において変化をもたらす化合物を意味する。
【００１９】
用語「アンタゴニスト」は、受容体部位に結合するが、他の受容体リガンドが存在しない場合は、いかなる生理学的変化も引き起こさない化合物を意味する。
【００２０】
用語「競合的アンタゴニスト」は、受容体部位に結合する化合物であって、その作用はアゴニストの濃度を増加させることによって取り除くことができる。
【００２１】
用語「部分的アゴニスト」は、受容体部位に結合するが、その濃度とは無関係に最大の効果を生成することはない化合物を意味する。
【００２２】
用語「逆アゴニスト」は、構成活性のある受容体に結合し、その生理学的機能を減少させる化合物を意味する。
【００２３】
用語「リガンド」は、受容体部位に結合する化合物を意味する。
【００２４】
本明細書において用いられる用語「ヘテロ原子」は、炭素または水素以外のあらゆる元素の原子を意味する。好ましいヘテロ原子は、ホウ素、窒素、酸素、リン、硫黄およびセレニウムである。 
【００２５】
用語「電子吸引基」は、当該技術分野において認識されており、置換基が隣接する原子から価電子を引き付ける置換基の傾向、すなわち、置換基が隣接する原子に対して電気陰性であることを意味する。電子吸引能のレベルの定量化は、Hammettシグマ（σ）定数によって得られる。この公知の定数は、多くの文献、例えば、J. March, Advanced Organic Chemistry,
McGraw Hill Book Company, New York, （1977年版） pp. 251-259に記載されている。Hammett定数値は、通常、電子供与基（ＮＨ２ではσ［Ｐ］＝−０．６６）では負の値、電子吸引基（ニトロ基ではσ［Ｐ］＝０．７８）では正の値となる。σ［Ｐ］は、パラ置換を意味する。電子吸引基の例としては、ニトロ、アクリル、ホルミル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、トリフルオロメチル、シアノ、クロリドなどが挙げられる。電子供与基の例としては、アミノ、メトキシなどが挙げられる。
【００２６】
用語「アルキル」は、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含む飽和脂肪族基のラジカルを意味する。好ましい態様において、直鎖または分枝鎖アルキルは、その骨格に３０以下の炭素原子を有している（例えば、直鎖ではＣ１−Ｃ３０、分枝鎖ではＣ３−Ｃ３０）、そしてより好ましくは２０以下の炭素原子を有している。同様に、好ましいシクロアルキルは、それらの環構造に３〜１０、より好ましくは、５、６または７の炭素原子を有している。 
【００２７】
本明細書において用いられている用語「アラルキル」は、アリール基で置換されたアルキル基を言う（例えば、芳香族基またはヘテロ芳香族基）。
【００２８】
「アルケニル」および「アルキニル」は、長さが類似し、上述のアルキルに置換することができるが、少なくとも1つの二重または三重結合をそれぞれ含有する不飽和脂肪族基を言う。
【００２９】
炭素数が特に規定されていなければ、本明細書において用いられている「低級アルキル」は、上で定義したように、その骨格構造に１〜１０の炭素原子、より好ましくは１〜６の炭素原子を有するアルキル基を意味する。同様に、「低級アルケニル」および「低級アルキニル」は、同様の鎖長を持つ。好ましいアルキル基は、低級アルキルである。好ましい態様において、本明細書において、アルキルとして示されている置換基は、低級アルキルである。
【００３０】
本明細書において用いられている用語「アリール」は、０〜４個のヘテロ原子を含むことができる５、６および７員環芳香族基を含む。例えば、ベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジンおよびピリミジンなどが含まれる。環構造中にヘテロ原子を持つこれらのアリール基はまた、「アリールへテロ環」または「ヘテロ芳香族」とも呼ばれる。芳香族環は、１以上の環位置において上記したような置換基、例えば、ハロゲン、アジド、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、スルホンアミド、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロ環、芳香族もしくは芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどと置換することができる。用語「アリール」もまた、2以上の炭素原子が２つの結合環に共通しており（そのような環を「融合環」という）、そのような環の少なくとも１つが芳香族である（例えば、他の環式環は、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリールおよび/またはへテロ環であることができる）、2以上の環式環を持つ多環系を含む。
【００３１】
用語オルト、メタおよびパラは、１，２−、１，３−および１，４−ジ置換ベンゼンにそれぞれ該当する。例えば、１，２−ジメチルベンゼンおよびオルト−ジメチルベンゼンは同義である。
【００３２】
用語「ヘテロ環」または「ヘテロ環基」は、その環構造が１〜４のヘテロ原子を含む３〜１０員環、より好ましくは３〜７員環構造を言う。ヘテロ環はまた、多環であることもできる。ヘテロ環基としては、例えば、チオフェン、チアンスレン、フラン、ピラン、イソベンゾフラン、クロメン、キサンテン、フェノキサチイン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、イソインドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、ピリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェナルサジン、フェノチアジン、フラザン、フェノキサジン、ピロリジン、オキソラン、チオラン、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリン、ラクトン、アゼチジノンおよびピロリジノンなどのラクタム、スルタム、サルトンなどが挙げられる。ヘテロ環式環は、1以上の位置において上記の置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミド、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロ環、芳香族もしくはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどと置換され得る。
【００３３】
用語「多環」または「多環基」は、２以上の炭素原子が２つの結合環に共通している（例えば、そのような環は「融合環」である）、２以上の環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール、および/またはへテロ環）を意味する。隣接しない原子を介して結合する環は、「架橋された」環と呼ばれる。多環の環のそれぞれは、上記のような置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、アラルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、スルフヒドリル、イミノ、アミノ、ホスホナート、ホスフィナート、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、アルキルチオ、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ケトン、アルデヒド、エステル、ヘテロ環、芳香族もしくはヘテロ芳香族部分、−ＣＦ３、−ＣＮなどと置換される。
【００３４】
本明細書において用いられている用語「ニトロ」は、−ＮＯ２を意味する。用語「ハロゲン」は、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを表す。用語「スルフヒドリル」は、−ＳＨを意味する。用語「ヒドロキシ」および「ヒドロキシル」は、−ＯＨを意味する。そして、用語「スルホニル」は、−ＳＯ２−を意味する。
【００３５】
用語「アミン」および「アミノ」は、当該技術分野において認識されており、置換されていない、および置換されたアミン、例えば、下記の一般式によって表され得る部分を言う。
【化４】
2006503920.tif 000003
式中、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ’１０は、それぞれ個別に原子価の法則によって許容される基を表す。
【００３６】
用語「アシルアミノ」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式によって表され得る部分を言う。
【化５】
2006503920.tif 000004
式中、Ｒ９は上述したとおりであり、Ｒ’１１は、水素、アルキル、アルケニルまたは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８を表し、ここでｍおよびＲ８は上で定義したとおりである。
【００３７】
用語「アミド」は当該技術分野においてアミノ置換されたカルボニルとして認識されており、下記の一般式によって表され得る部分を言う。
【化６】
2006503920.tif 000005
式中、Ｒ９およびＲ１０は、上で定義したとおりである。アミドの好ましい態様は、不安定かもしれないイミドを含まない。
【００３８】
用語「アルキルチオ」は、上で定義したように、それに付着した硫黄ラジカルを持つアルキル基を言う。好ましい態様において、「アルキルチオ」部分は、−Ｓ−アルキル、−Ｓ−アルケニル、−Ｓ−アルキニルおよび−Ｓ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８（ｍおよびＲ８は、上で定義したとおりである）のいずれかによって表される。代表的なアルキルチオ基は、メチルチオ、エチルチオなどを含む。
【００３９】
用語「カルボニル」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化７】
2006503920.tif 000006
式中、Ｘは、結合であり、酸素または硫黄を表し、Ｒ１１は、水素、アルキル、アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８もしくは薬学的許容される塩を表し、Ｒ’１１は、水素、アルキル、アルケニルもしくは−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８（ｍおよびＲ８は、上で定義したとおり）を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ１１またはＲ’１１が水素でないとき、式は「エステル」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ１１が上記したとおりであるとき、部分は、本明細書においてカルボキシル基と呼ぶ。特に、Ｒ１１が水素であるとき、該式は、「カルボン酸」を表す。Ｘが酸素であり、Ｒ’１１が水素であるとき、該式は「ホルマート」を表す。一般的に、上記式の酸素原子を硫黄で置換した場合、該式は「チオールカルボニル」基を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ１１またはＲ’１１が水素でないとき、該式は「チオールエステル」を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ１１が水素であるとき、該式は、「チオールカルボン酸」を表す。Ｘが硫黄であり、Ｒ’１１が水素であるとき、該式は、「チオールホルマート」を表す。一方、Ｘが結合であり、Ｒ１１が水素でないとき、上記式は「ケトン」基を表す。Ｘが結合であり、Ｒ１１が水素であるとき、上記式は「アルデヒド」基を表す。
【００４０】
本明細書において用いられている用語「アルコキシル」または「アルコキシ」は、上で定義したように、それに付着した酸素ラジカルを持つアルキル基を言う。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、第３ブトキシなどがある。「エーテル」は、酸素によって共有結合した２つの炭化水素である。したがって、アルキルの置換基は、そのアルキルに対してエーテルを付与するか、またはアルコキシルに類似する。例えば、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−アルキニル、−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８（ｍおよびＲ８は、上で定義したとおりである）である。
【００４１】
用語「スルホン酸塩」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化８】
2006503920.tif 000007
式中、Ｒ４１は、電子対、水素、アルキル、シクロアルキル、またはアリールである。
【００４２】
用語トリフリル（triflyl）、トシル（tosyl）、メシル（mesyl）およびノナフリル（nonaflyl）は、当該技術分野において認識されており、トリフルオロメタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、メタンスルホニル、およびノナフルオロブタンスルホニル基をそれぞれ示す。用語トリフラート、トシラート、メシラート、およびノナフラート（nonaflate）は、当該技術分野において認識されており、トリフルオロメタンスルホン酸エステル、p-トルエンスルホン酸エステル、メタンスルホン酸エステル、およびノナフルオロブタンスルホン酸エステル官能基および前記基を含有する分子をそれぞれ示す。 
【００４３】
略語Ｍｅ、Ｅｔ、Ｐｈ、Ｔｆ、Ｎｆ、Ｔｓ、Ｍｓは、メチル、エチル、フェニル、トリフルオロメタンスルホニル、ノナフルオロブタンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、およびメタンスルホニルをそれぞれ表す。通常の技量を有する有機化学者によって用いられている、より総合的な略語のリストは、Journal
of Organic Chemistryの各版の第１刊に記載されている。このリストは典型的に、Standard List of Abbreviationsというタイトルの表中に示されている。前記リストに含まれている略語、および通常の技量を有する有機化学者によって用いられている略語の全てを本明細書において引用によって援用する。
【００４４】
用語「硫酸塩」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化９】
2006503920.tif 000008
式中、Ｒ４１は、上で定義したとおりである。
【００４５】
用語「スルホニルアミノ」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化１０】
2006503920.tif 000009
【００４６】
用語「スルファモイル」は、当該技術分野において認識されており、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化１１】
2006503920.tif 000010
【００４７】
本明細書において用いられている「スルホニル」は、下記の一般式で表すことができる部分を含む。
【化１２】
2006503920.tif 000011
式中、Ｒ４４は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール、またはヘテロアリールからなる群から選択される。
【００４８】
本明細書において用いられている「スルホキシド」は、下記の一般式で表すことができる部分を言う。
【化１３】
2006503920.tif 000012
式中、Ｒ４４は、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アルキル、またはアリールからなる群から選択される。
【００４９】
「セレノアルキル」は、置換されたセレノ基が付着したアルキル基を意味する。アルキル上で置換され得る「セレノエーテル」の例としては、−Ｓｅ−アルキル、−Ｓｅ−アルケニル、−Ｓｅ−アルキニル、および−Ｓｅ−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ７（ｍおよびＲ７は上で定義したとおりである）から選択される。
【００５０】
類似の置換を行ってアルケニルおよびアルキニル基を、例えば、アミノアルケニル、アミノアルキニル、アミドアルケニル、アミドアルキニル、イミノアルケニル、イミノアルキニル、チオアルケニル、チオアルキニル、カルボニル置換アルケニルまたはアルキニルを生成することができる。
【００５１】
本明細書において記載されているように、例えば、アルキル、ｍ、ｎなどの各表現の定義は、それがあらゆる構造に複数回発生するとき、同じ構造中の他の箇所のその定義とは独立していることが意図される。
【００５２】
「置換」または「〜で置換された」は、そのような置換が、その置換された原子および置換基の許容される原子価にしたがっていること、および置換の結果、例えば、再組み換え、環形成、除去などの変性を自発的に行わない安定した化合物が得られるという暗黙の条件を含んでいることが理解されるであろう。
【００５３】
本明細書において用いられている用語「置換された」は、有機化合物の全ての許容可能な置換基を含むことを意図している。広い局面において、許容可能な置換基は、非環式および環式、枝分かれしているおよび枝分かれしていない、炭素環式およびヘテロ環式、芳香族および非芳香族基の置換基を含む。例示の置換基は、例えば、本明細書において上記したものを含む。許容可能な置換基は、１もしくは複数の、および同じもしくは異なる適切な有機化合物とすることができる。本発明の目的において、窒素などのヘテロ原子は、水素置換基、および/または、本明細書に記載した、該ヘテロ原子の原子価を満たすあらゆる有機化合物の許容可能な置換基を含むことができる。本発明は、許容可能な、有機化合物の置換基によって、いかなる方法においても制限されることを意図していない。
【００５４】
本明細書において用いられているフレーズ「保護基」は、潜在的に反応性のある官能基を望ましくない化学的変性から保護する一時的な置換基を意味する。そのような保護基の例としては、カルボン酸のエステル、アルコールのシリルエーテルおよびアセタール、ならびにアルデヒドのケタールおよびケトンをそれぞれ含む。保護基化学の分野は概説されている（Greene, T.W.; Wuts, P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed.;
Wiley:  New York, 1991）。
【００５５】
本発明のいくつかの化合物は、特定の幾何学形状または立体異性体形状で存在し得る。本発明は、シス−およびトランスアイソマー、Ｒ−およびＳ−エナンチオマー、ジアステレオマー、（ｄ）−アイソマー、（ｌ）−アイソマー、そのラセミ混合物、およびその他の混合物を含む全てのそのような化合物を本発明の範囲であると考えている。さらに非対称的な炭素原子は、アルキル基などの置換基に存在することができる。そのような全てのアイソマーならびにその混合物は、本発明に含まれることが意図されている。
【００５６】
例えば、本発明の化合物の特定のエナンチオマーが望ましい場合、それは非対称合成、またはキラル補助によって調製してもよい。そこでは、得られたジアステレオマー混合物が分離され、補助基が切断され、純粋な所望のエナンチオマーが提供される。あるいは、分子がアミノなどの塩基性官能基、またはカルボキシルなどの酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩は、適切な、任意に活性のある酸または塩基を用いて形成され、当該技術分野において公知の分別結晶作用またはクロマトグラフィーの手段によって形成されたジアステレオマーを溶解させ、その後純粋なエナンチオマーが回収される。
【００５７】
上記した化合物と均等であると考えられているものとして、それに対応し、同じ一般的な特性（例えば、鎮痛剤として機能する）を有し、化合物の有効性に悪影響を及ぼさない１以上の単純な置換基の変形がシグマ受容体との結合中に形成されている化合物を含む。一般的に、本発明の化合物は、例えば、下記の一般的な反応スキームに示されている方法によって、またはその変形例によって、容易に入手可能な開始物質、試薬および従来の合成手順を用いて、調製することができる。これらの反応においては、公知であるが、ここに記載していない変形例を使用することも可能である。
【００５８】
本発明の目的において、化学元素は、CAS版、Handbook of Chemistry and Physics, 第67刷、1986〜87年の裏表紙に記載の元素周期表によって確認される。
【００５９】
p-ヒドロキシ-ミルナシプランの個別のエナンテリオマーの合成
４−メトキシベンジルシアニドとエナンチオマーとして純粋なエピクロルヒドリン（図１）（双方とも市販されており入手可能）の縮合反応によって、対応するラクトンＣＳ１５９０およびＣＳ１５９１を十分な収率で取得した。引き続いて、ブチルリチウムおよびジエチルアミンから生成されたリチウムジエチルアミドの存在下でラクトンを切断し、ＣＳ１６０８と対応するエナンチオマーをそれぞれ供給した。１級アルコールＣＳ１６０８およびＣＳ１６０９のアジドＣＳ１６２８およびＣ１６４８への変換は、対応するメシラートのin situ生成、それに続く、アジ化ナトリウムとの求核性の置き換えによって、ポット処理において達成された。このプロトコルの後、所望のアジドが収率３６〜４０％で得られた。続いて、ホウ素トリブロミドの存在下で、−３０℃で４８時間、保護基の除去を行い、脱保護されたフェノールＣＳ１６４９およびＣＳ１６５８を収率６６％で得た。標準的な反応条件下でのＣＳ１６４９およびＣＳ１６５８のアジド部分の最終的な還元によって、所望の標的化合物ＣＳ１６６５およびＣＳ１７１０が得られた。ジオキサン中で塩酸を使用して、塩酸塩の調製を行い、続いて溶媒を除去した。
【００６０】
エナンチオマーの分解方法
個別のエナンチオマーの別の単離手順は、エナンチオマーのラセミ混合物からの溶解によるものである。今日、陽イオン性薬物のキャピラリー電気泳動法によるキラル分離は、負に帯電したシクロデキストリン（ＣＤ）を、流れる緩衝液に付加することによって行われる。一方、陰イオン性または中性薬物の分離は、二重性ＣＤ系（中性ＣＤおよび帯電性ＣＤの混合物）の使用が必要である。いくつかの塩基性薬物（イダゾキサン、エファロキサン（efaroxan）、ミルナシプラン）のキラル分離は、硫酸塩ｄ−β-ＣＤ（Ｓ−β−ＣＤ）およびヒドロキシプロピル−γ−ＣＤ（ＨＰ−γ−ＣＤ）との混合物を用いて研究されてきた。下記のパラメータ（中性ＣＤの性質および濃度、Ｓ−β−ＣＤの濃度）が、多くの分離ファクター（電気泳動移動度、選択性、効率性、非対称ファクター、分解能）に及ぼす影響は、第２の移動エナンチオマーの対称性を向上させるために二重ＣＤ系が塩基性薬物のキラル分離に有用であることを示している。実際、中性のＣＤは、移動回転による電気移動の範囲を減少させる。最終的に、０．５ｍｇ／ｍＬのＳ−β-ＣＤと５ｍｇ／ｍＬのＨＰ−γ−ＣＤ二重系がイダゾキサンエファロキサンおよびミルナシプランエナンチオマーを９分未満でキラル分離させた。Grard, S. et al. Electrophoresis 2000,
21, 3028-3034を参照されたい。
【００６１】
生物学的活性の分析
ＣＳ１８１４、ＣＳ１７１３、ＣＳ１７１４および種々の参照化合物の生物学的試験の結果を図３２〜６２に示す。ＣＳ１８１４（バイアル番号１）、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）を種々の放射性リガンド結合アッセイでＣＹＰ４５０ ３Ａ４を１０μＭの開始濃度での阻害について評価した。図５９および６０に示したように、セロトニン輸送体結合部位（バイアル番号１、Ｋｉ＝６．７３ｎＭ、バイアル番号２、Ｋｉ＝３．８８ｎＭ、バイアル番号３、Ｋｉ＝８．１５ｎＭ）およびノルエピネフリン輸送体結合部位（バイアル番号１、Ｋｉ＝０．２１８μＭ、バイアル番号２、Ｋｉ＝０．１１２μＭ、バイアル番号３、Ｋｉ＝１．６８μＭ）からの放射性リガンドのズレに関して、有意な活性（≧５０％）が認められた。
【００６２】
さらに、セロトニンおよびノルエピネフリン摂取の阻害に関して、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）およびＣＳ１８１４（バイアル番号１）を評価した。
【００６３】
図６１に示されているように、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）は、セロトニンおよびノルエピネフリン摂取の阻害はほぼ等しかった（ノルエピネフリンについては、ＩＣ５０＝２８．６ｎＭ、セロトニンについては、ＩＣ５０＝２１．７ｎＭ）。興味深いことに、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）は、セロトニン摂取よりもノルエピネフリン摂取に対してより強力な阻害剤である（ノルエピネフリンについては、ＩＣ５０＝１０．３ｎＭ、セロトニンについては、ＩＣ５０＝２２ｎＭ）。対照的に、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）は、ノルエピネフリン摂取と比較して、セロトニン摂取に対してより強力な阻害剤である（ノルエピネフリンに対しては、ＩＣ５０＝８８．５ｎＭ、セロトニンに対しては、ＩＣ５０＝４０．３ｎＭ）。ＣＳ１７１３（バイアル番号２）がノルエピネフリン摂取のより強力な阻害剤であるという事実は、ノルエピネフリン摂取に関する疾患の優れた治療薬であることを示すものである。さらに、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）は、セロトニン摂取の選択的阻害を必要とする治療条件にとって有用である。
【００６４】
重要なことに、１０μＭでは、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）またはＣＳ１８１４（バイアル番号１）について、細胞毒性は認められなかった。さらに、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）は、ノルエピネフリンおよびセロトニン受容体の選択的阻害剤である。ＣＳ１８１４が通常他の受容体と結合しないという事実は、図３２および３３に示すように、実質的に、患者に対して当該化合物を投与することに関する否定的な副作用のリスクを減少させることを示す。したがって、ＣＳ１７１３およびＣＳ１７１４は、有害な副作用を持たないであろう。
【００６５】
本発明の化合物および方法
いくつかの態様において、本発明の化合物は、下記式Ａで表された単離された化合物である。
【化１４】
2006503920.tif 000013
式中、Ｘは、それぞれ個別に、Ｏ、Ｓ、またはＮＲを表し、
Ｒは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、へテロアリール、アリールアルキル、ホルミル、アシル、シリル、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ１は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ２は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ３は、それぞれ個別に、Ｈ，アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ４は、１〜４回存在する、または存在しない、
Ｒ４は、もし存在すれば、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ８０は、それぞれ個別に、アリール、シクロアルキル，シクロアルケニル、ヘテロアシル、またはポリシクリル部分を表し、
ｍは、それぞれ個別に、０〜８の間の整数であり、そして
化合物は、単一のエナンチオマーであり;または、
それらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
【００６６】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表す。
【００６７】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＲはＨを表す。
【００６８】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、Ｒ１はＨを表す。
【００６９】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、Ｒ２はＨを表す。
【００７０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、Ｒ３はアルキルを表す。
【００７１】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、Ｒ４は存在しない。
【００７２】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表す。
【００７３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表す。
【００７４】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表す。
【００７５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表す。
【００７６】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表し、Ｒ４は存在しない。
【００７７】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ａおよび付属の定義によって表され、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はエチルを表し、Ｒ４は存在しない。
【００７８】
哺乳動物ＧＰＣＲに基づくアッセイにおいて、構造Ａによるいくつかの化合物において、ＩＣ５０値は、１０μＭ未満、より好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは１００ｎＭ未満、そして最も好ましくは１０ｎＭである。
【００７９】
哺乳動物ＧＰＣＲに基づくアッセイにおいて、構造Ａによるいくつかの化合物において、ＥＣ５０値は、１０μＭ未満、より好ましくは、μＭ未満、さらに好ましくは１００ｎＭ未満、そして最も好ましくは１０ｎＭである。  
【００８０】
いくつかの態様において、構造Ａの化合物は、鬱病に罹患した哺乳動物の治療に有効である。
【００８１】
いくつかの態様において、構造Ａの化合物は、線維筋痛症に罹患した哺乳動物の治療に有効である。
【００８２】
いくつかの態様において、構造Ａに示されている化合物は、機能的体細胞性障害、例えば、鬱病、線維筋痛症候群、慢性疲労症候群、痛み、注意欠陥多動性障害、および内臓痛症候群（ＶＰＳ）、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ）、機能性消化不良、間質性膀胱炎、本態性外陰痛（essential vulvodynia）、尿道症候群、睾丸痛、ならびに抑鬱性障害（主要な抑鬱性障害、胸腺機能不全, 非定型の鬱病）および不安障害（全身性不安障害、恐怖症, 強迫性障害、パニック障害、心的外傷後ストレス障害）、月経前不快性障害、顎関節障害、非定型の顔面痛、片頭痛、ならびに緊張性頭痛を含む精神的疾患に罹患した哺乳動物の治療に効果的である。
【００８３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、下記式Ｂで表された単離された化合物である。
【化１５】
2006503920.tif 000014
式中、Ｘは、それぞれ個別に、Ｏ、Ｓ、またはＮＲを表し、
Ｒは、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、へテロアリール、アリールアルキル、ホルミル、アシル、シリル、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ１は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ２は、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ３は、それぞれ個別に、Ｈ，アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ４は、１〜４回存在する、または存在しない、
Ｒ４は、もし存在すれば、それぞれ個別に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシル、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ（arylakylamino）、スルフヒドリル、アルキルチオ、アリールチオ、アリールアルキルチオ（arylakylthio）、ニトロ、アジド、アルキルセレノ、ホルミル、アシル、カルボキシル、シリル、シリルオキシ、（アルキルオキシ）カルボニル、（アリールオキシ）カルボニル、（アリールアルキルオキシ）カルボニル、（アルキルアミノ）カルボニル、（アリールアミノ）カルボニル、（アリールアルキルアミノ）カルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、または−（ＣＨ２）ｍ−Ｒ８０を表し、
Ｒ８０は、それぞれ個別に、アリール、シクロアルキル，シクロアルケニル、ヘテロアシル、またはポリシクリル部分を表し、
ｍは、それぞれ個別に、０〜８の間の整数であり、そして
化合物は、単一のエナンチオマーであり;または、
それらの薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグである。
【００８４】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表す。
【００８５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＲはＨを表す。
【００８６】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、Ｒ１はＨを表す。
【００８７】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、Ｒ２はＨを表す。
【００８８】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、Ｒ３はアルキルを表す。
【００８９】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、Ｒ４は存在しない。
【００９０】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表す。
【００９１】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表す。
【００９２】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表す。
【００９３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表す。
【００９４】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＸはＯを表し、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はアルキルを表し、Ｒ４は存在しない。
【００９５】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、Ｂおよび付属の定義によって表され、ＲはＨを表し、Ｒ１はＨを表し、Ｒ２はＨを表し、Ｒ３はエチルを表し、Ｒ４は存在しない。
【００９６】
哺乳動物ＧＰＣＲに基づくアッセイにおいて、構造Ｂによるいくつかの化合物において、ＩＣ５０値は、１０μＭ未満、より好ましくは１μＭ未満、さらに好ましくは１００ｎＭ未満、そして最も好ましくは１０ｎＭである。
【００９７】
哺乳動物ＧＰＣＲに基づくアッセイにおいて、構造Ｂによるいくつかの化合物において、ＥＣ５０値は、１０μＭ未満、より好ましくは、μＭ未満、さらに好ましくは１００ｎＭ未満、そして最も好ましくは１０ｎＭである。  
【００９８】
いくつかの態様において、構造Ｂの化合物は、鬱病に罹患した哺乳動物の治療に有効である。
【００９９】
いくつかの態様において、構造Ｂの化合物は、線維筋痛症に罹患した哺乳動物の治療に有効である。
【０１００】
いくつかの態様において、構造Ａに示されている化合物は、機能的体細胞性障害、例えば、鬱病、線維筋痛症候群、慢性疲労症候群、痛み、注意欠陥多動性障害、および内臓痛症候群（ＶＰＳ）、例えば、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、非心臓性胸痛（ＮＣＣＰ）、機能性消化不良、間質性膀胱炎、本態性外陰痛（essential vulvodynia）、尿道症候群、睾丸痛、ならびに抑鬱性障害（主要な抑鬱性障害、胸腺機能不全, 非定型の鬱病）および不安障害（全身性不安障害、恐怖症, 強迫性障害、パニック障害、心的外傷後ストレス障害）、月経前不快性障害、顎関節障害、非定型の顔面痛、片頭痛、ならびに緊張性頭痛を含む精神的疾患に罹患した哺乳動物の治療に効果的である。
【０１０１】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、１Ｓ、２Ｒ
１−（４−メトキシ−フェニル９−３−オキサ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−オン（ＣＳ１５９０）、１Ｒ、２Ｓ １−（４−メトキシ−フェニル９−３−オキサ−ビシクロ［３．１．０］ヘキサン−２−オン（ＣＳ１５９１）、１Ｓ、２Ｒ ２−ヒドロキシメチル−１−（４−メトキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６０８）、１Ｒ、２Ｓ ２−ヒドロキシメチル−１−（４−メトキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６０９）、１Ｓ、２Ｒ ２−アジドメチル−１−（４−メトキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６２８）、１Ｒ、２Ｓ ２−アジドメチル−１−（４−メトキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６４８）、１Ｓ、２Ｒ ２−アジドメチル−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６４９）、１Ｒ、２Ｓ ２−アジドメチル−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６５８）、１Ｓ、２Ｒ ２−アミノメチル−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１６６５）、１Ｒ、２Ｓ ２−アミノメチル−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１７１０）、およびラセミ型２−アミノメチル−１−（４−ヒドロキシ−フェニル）−シクロプロパンカルボン酸ジエチルアミド（ＣＳ１８１４）からなる群から選択される。
【０１０２】
いくつかの態様において、本発明は、上記概説した構造のいずれかによって表される化合物と、薬学的に許容される添加剤とを含む製剤に関する。.
【０１０３】
いくつかの態様において、本発明の化合物は、鎮痛剤、抗炎症剤、解熱剤、抗抑鬱剤、抗てんかん薬、抗ヒスタミン剤、抗片頭痛薬、抗ムスカリン作動薬、抗不安剤、鎮静剤、催眠薬、抗精神病薬、気管支拡張剤、抗喘息薬、心臓血管薬、コルチコステロイド、ドーパミン作動薬、電解液、胃腸薬、筋弛緩剤、栄養剤、ビタミン剤、副交感神経作動薬、刺激剤、抗ナルコレプシー薬、および食思減退薬などの他の活性化合物とともに補助的に投与することができる。
【０１０４】
本発明の化合物とあわせて、補助的に投与することができる化合物の具体例としては、限定されないが、アセクロフェナク、アセトアミノフェン、アドメキセチン（adomexetine）、アルモトリプタン、アルプラゾラム、アマンタジン、アムシノニド、アミノシクロプロパン、アミトリプチリン、アモロジピン（amolodipine）、アモキサピン、アンフェタミン、アリピラゾール、アスピリン、アトモキセチン、アザセロトニン（azasetron）、アザタジン、ベクロメタソン、ベナクチジン、ベノキサプロフェン、ベルモプロフェン、ベタメタゾン、ビシファジン（bicifadine）、ブロモクリプチン、ブデソニド、ブプレノルフィン、ブプロピオン、ブスピロン、ブトルファノール、ブトリプチリン、カフェイン、カルバマゼピン、カルビドーパ、カリソプロドール、セレコシブ、クロルジアゼポキシド、クロルプロマジン、サリチル酸コリン、シタロプラム、クロミプラミン、クロナゼパム、クロニジン、クロニタゼン、クロラゼペート、クロチアゼパム、クロキサゾラム、クロザピン、コデイン、コルチコステロン、コルチゾン、シクロペンザプリン、シプロヘプタジン、デメキシプチリン（demexiptiline）、デシプラミン、デソモルフィン（desomorphine）、デキサメタゾン、デキサナビノール、デキストロアンフェタミンスルフェート、デキストロモラミド、デキストロプロポキシフェン、デゾシン、ジアゼパム、ジベンゼピン、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサール、ジヒドロコデイン、ジヒドロエルゴタミン、ジヒドロモルフィン、ジメタクリン、ジバルプロキセス、ジザトリプタン（dizatriptan）、ドラセトロン、ドネペジル、ドチエピン、ドキセピン、デュロキセチン、エルゴタミン、エスシタロプラム、エスタゾラム、エトスクシミド、エトドラク、フェモキセチン、フェナメート、フェノプロフェン、フェンタニル、フルジアゼパム、フルオキセチン、フルフェナジン、フルラゼパム、フルビプロフェン、フルタゾラム、フルボキサミン、フロバトリプタン、ガバペンチン、ガランタミン、ゲピロン、ギンコビルボア（ginko bilboa）、グラニセトロン、ハロペリドール、フペルジンＡ，ヒドロコドン、ヒドロコルチゾン、ヒドロモルホン、ヒドロキシジン、イブプロフェン、イミプラミン、インディプロン、インドメタシン、インドプロフェン、イプリンドール、イプサピロン、ケタセリン、ケトプロフェン、ケトロラク、レソピトロン（lesopitron）、レボドーパ、リパーゼ、ロフェプラミン、ロラゼパム、ロクサピン、マプロチリン、マチンドール、メフェナム酸、メラトニン、メリトラセン、メマンチン、メペリジン、メプロバメート、メサラミン、メタプラミン、メタキサロン、メタドン、メタドンメタンフェタミン、メトカルバモール、メチルドーパ、メチルフェニデート、メチルサリチラート、メチセルジド、メトクロプラミド、ミアンセリン、ミフェプリストン、ミルナシプラン、ミナプリン、ミルタザピン、モクロベミド、モダフィニル、モリンドン、モルフィン、モルフィンヒドロクロリド、ナブメトン、ナドロール、ナプロキセン、ナラトリプタン、ネファゾドン、ニューロンチン、ノミフェンシン、ノルトリプチリン、オランザピン、オルサラジン、オンダンセトロン、オピプラモール、オルフェナドリン、オキサフロザン（oxaflozane）、オキサプラジン（oxaprazin）、オキサゼパム、オキシトリプタン、オキシコドン、オキシモルフォン、パンクレリパーゼ、パレコシブ（parecoxib）、パロキセチン、ペモリン、ペンタゾシン、ペプシン、ペルフェナジン、フェナセチン、フェンジメトラジン、フェンメトラジン、フェニルブタゾン、フェニトイン、ホスファチジルセリン、ピモジド、ピルリンドール、ピロキシカム、ピゾチフェン、ピゾチリン、パラミペキソール（pramipexole）、プレドニソロン、プレドニソン、プレガバリン、プロパノロール、プロピゼピン（propizepine）、プロポキシフェン、プロトリプチリン、クアゼパム、キヌプラミン（quinupramine）、レボキシチン、レセルピン、リスペリドン（risperidone）、リタンセリン、リバスチグミン、リザトリプタン、ロフェコシブ、ロピニロール、ロチゴチン、サルサレート、セルトラリン、シブトラミン、シルデナフィル、スルファサラジン、スリンダク、スマトリプタン、タクリン、テマゼパム、テトラベノジン（tetrabenozine）、チアジド、チオリダジン、チオチキセン、チアプリド、チアシピロン（tiasipirone）、チザニジン、トフェナシン、トルメチン、トロキサトン、トピラメート、トラマドール、トラゾドン、トリアゾラム、トリフルオロペラジン、トリメトベンズアミド、トリミブラミン、トロピセトロン、バルデコシブ（valdecoxib）、バルプロ酸、ベンラファキシン、ビロキサジン、ビタミンＥ、ジメルジン、ジプラシドン、ゾルミトリプタン、ゾルピデム、およびゾピクロン、ならびにそれらの異性体、塩、および組み合わせが含まれる。
【０１０５】
補助的投与とは、化合物を同じ剤型で同時に投与すること、別個の剤型で同時に投与すること、および化合物を分離して投与することを含む。
【０１０６】
いくつかの態様において、本発明は、ＧＰＣＲ、例えば、神経伝達物質の受容体、のためのリガンドであって、上で概説した構造および構造に関連するあらゆる定義によって表されるリガンドに関する。いくつかの態様において、本発明のリガンドは、ＧＰＣＲのアンタゴニスト、アゴニスト、部分的アゴニスト、または逆アゴニストである。いくつかの好ましい態様において、本発明のリガンドは、セロトニンまたはノルエピネフリンまたはその両方の再摂取のアンタゴニストである。どのような場合でも、本発明のリガンドは、約１０マイクロモル未満、より好ましくは、約１マイクロモル未満、さらに好ましくは、約１００ナノモル未満、そして最も好ましくは、１０ナノモル未満の濃度でＧＰＣＲに影響を及ぼすことが好ましい。いくつかの好ましい態様において、本発明のリガンドは、約１０マイクロモル未満、より好ましくは、約１マイクロモル未満、さらに好ましくは、約１００ナノモル未満、そして最も好ましくは、１０ナノモル未満の濃度での、セロトニンまたはノルエピネフリンまたはその両方の再摂取のアンタゴニストとなる。
【０１０７】
本発明の化合物は、炎症性、免疫学的、気管支肺の、心血管系の、腫瘍の、またはＣＮＡ変性障害の治療において用いることが指示されている。炎症性および/または免疫学的障害、例えば、喘息、気管支炎、もしくはアトピー性疾患（例えば、鼻炎、アトピー性皮膚炎）といった炎症性障害を含む気道の疾患、炎症性腸障害、例えば、クローン病または大腸炎；自己免疫疾患、例えば、多発性硬化症、糖尿病、アテローム性動脈硬化症、乾癬、全身紅はん性エリテマトーデスもしくはリウマチ性関節炎；悪性疾患、例えば、皮膚癌もしくは肺癌；ＨＩＶ感染もしくはＡＩＤＳの経口または局所治療、臓器移植の拒絶反応の阻害には経口または局部治療が好ましい。本発明の化合物は、心不全の治療、および黄斑の浮腫を伴う糖尿病もしくは糖尿病性の網膜症の患者の治療に用いることが指示されている。
【０１０８】
本発明の一態様は、炎症性の痛みを持つ患者の治療である。例えば、いくつかのキナーゼ阻害剤を投与することによって、炎症物質カラゲナンに曝された結果生じる急性および慢性の痛覚過敏が有意に軽減する。さらにいくつかのキナーゼ阻害剤を投与することによって、糖尿病、化学療法または外傷性神経損傷による痛覚過敏が減少する。そのような炎症性の痛みは、急性のこともあるし慢性のこともあり、限定されないが、日焼け、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、大腸炎、心臓炎、皮膚炎、筋炎、神経炎、および膠原血管病を含む炎症によって特徴付けられる多くの状態に起因し得る。さらに、本発明の化合物を、炎症の直前、炎症が起こっているとき、および炎症後に被験体に対して投与することによって、被験体がそれでもなお経験する急性の痛みおよび慢性の感覚過敏を緩和することができる。 
【０１０９】
本発明の別の好ましい態様は、神経障害的な痛みを持つ患者の治療である。そのような患者は、神経根障害、モノニューロパシー、多発性モノニューロパシー、ポリニューロパシーまたはプレオキソパシー（plexopathy）として分類されるニューロパシーを有している可能性がある。これらのクラスの疾患は、限定されないが、外傷、発作、脱髄性疾患、膿瘍、外科手術、切断術、神経の炎症性疾患、灼熱痛、糖尿病、膠原血管病、三又神経痛、リウマチ性関節炎、体毒素、癌（直接的もしくは遠隔的（例えば、新生物）神経損傷）、慢性アルコール依存症、ヘルペス感染、ＡＩＤＳ、および化学療法を含む種々の神経損傷状態や処置によって引き起こされ得る。痛覚過敏を引き起こす神経損傷は、末端神経またはＣＮＳ神経において起こり得る。本発明のこの態様は、いくつかのキナーゼ阻害剤の投与が化学療法または外傷性神経損傷による痛覚過敏を減少するという事実に基づいている。
【０１１０】
本発明の好ましい態様は、本発明の化合物と、１以上のさらなる痛みを軽減する作用物質とを組み合わせた組成物、およびそのような組成物を投与する方法を含む。個別の痛みの薬物療法は、多くのうちの１つの痛みの導入経路のみを妨害するにすぎないため、部分的に有効な痛みの軽減をもたらすだけであることが多い。あるいは、本発明の化合物は、痛みを感じるプロセスの異なる点において作用する、痛み軽減剤（鎮痛剤）と組み合わせて投与することができる。
【０１１１】
線維筋痛症候群は、全身にわたる広範囲の痛みと硬化を特徴とし、重度の疲労と頭痛を伴う慢性の衰弱状態である。世界中の人口の推定２％〜４％がそれに罹患し、米国のリウマチ専門医による診断で、変形性関節炎に次いで２番目に多い一般的な診断となっている。この症候群は、有症率が高く、重篤であるにもかかわらず、米国あるいは他の国においてＦＭＳに特異的な治療は承認されていない。本発明の別の好ましい態様は、本発明の化合物の治療的有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することによって、線維筋痛症を治療することに関する。
【０１１２】
プロドラッグおよび中間物質
最終的な脱保護段階の前に作製することができる、本発明の化合物のいくつかの保護された誘導体は、そのような薬理活性を有していないかもしれないにもかかわらず、非経口的もしくは経口的に投与され、その後体内で代謝され、薬理学的に活性のある本発明の化合物となり得るということを当該技術分野の当業者は理解するであろう。そのような誘導体は、したがって、「プロドラッグ」と記載される。さらに、本発明のいくつかの化合物は、本発明の他の化合物のプロドラッグとして機能し得る。批判的に、本発明の化合物のプロドラッグの全ては、本発明の範囲に含まれる。本明細書においてこれまでに記載したような新規な中間物質、および本発明の他の化合物を製造するためのそれらの使用もまた本発明の一部をなしている。
【０１１３】
薬学的組成物
別の局面において、本発明は、１以上の上記薬学的に許容される単体（添加物）および/または希釈剤とともに製剤される上記化合物の治療的有効量を含む薬学的に許容される組成物を提供する。下記に詳細に示すように、本発明の薬学的組成物は、固体もしくは液体剤型で投与するために具体的に製剤することができる。下記に適用されるものを含む。（１）経口投与、例えば、飲薬（水性もしくは非水性溶液、または懸濁液）、錠剤（例えば、頬側、舌下および全身吸収を目標としたもの）、ボーラス、粉末、顆粒、舌に投与するためのパスタ剤；（２）非経口投与、例えば、皮下、筋内、静脈内もしくは硬膜外注射、例えば、無菌溶液もしくは懸濁液、または持続性放出製剤；（３）局所投与、例えば、クリーム、軟膏、または徐放パッチ、または皮膚に適用されるスプレー；（４）膣内もしくは腸内投与、例えば、ペッサリー、クリームもしくは泡剤；（５）舌下投与；（６）眼内投与；（７）経皮投与；または（８）経鼻投与。
【０１１４】
本明細書において用いられているフレーズ「治療的有効量」は、化合物、材料、または本発明の化合物を含む組成物の、少なくとも動物の細胞のサブポピュレーションにおいて、あらゆる医学的治療に適用可能な合理的な利益/リスク比で、なんらかの所望の治療的効果を生じさせるのに有効な量を意味する。
【０１１５】
本明細書において用いられている「薬学的に許容される」というフレーズは、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応もしくは他の問題、または合併症を引き起こすことなく、ヒトおよび動物の組織に接触させて用いるのに適した、合理的な利益/リスク比率をもたらす化合物、材料、組成物および/または剤型を意味する。
【０１１６】
本明細書において用いられている「薬学的に許容される担体」というフレーズは、対象となる化合物を１つの臓器から、または体の一部から、他の臓器または体の一部へ運ぶ、または輸送することに関与する、薬学的に許容される材料、組成物、または液体もしくは固体の充填剤などの賦形剤、希釈剤、添加剤、または材料をカプセル化する溶媒を意味する。各担体は、製剤の他の成分と相溶性であるという意味で、「許容可能」でなくてはならず、患者に対して有害であってはならない。薬学的に許容される担体として機能することができる材料のいくつかの例としては、（１）ラクトース、グルコースおよびスクロースなどの糖類；（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなど；（４）粉末化されたトラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）カカオ脂や座剤用ワックスなどの添加剤；（９）ピーナッツオイル、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブオイル、コーン油および大豆油などの油類；（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール；（１２）オレイン酸エチルやラウリン酸エチルなどのエステル；（１３）寒天；（１４）水酸化マグネシウムや水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；（１５）アルギン酸；（１６）発熱因子を含まない水；（１７）等張塩水；（１８）リンゲル溶液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝溶液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ無水化物；ならびに（２２）薬学的製剤に採用される他の非毒性相溶性物質が含まれる。
【０１１７】
上記したように、本発明化合物のいくつかの態様は、アミノまたはアルキルアミノなどの塩基性官能基を含有し、したがって、薬学的に許容される酸を用いて薬学的に許容される塩を作製することができる。この意味における用語「薬学的に許容される塩」は、相対的に非毒性の、本発明の化合物の無機および有機酸添加塩を言う。これらの塩は、賦形剤の投与または剤型製造プロセスにおいて、または精製された本発明の化合物をその遊離塩基形態において個別に好適な有機もしくは無機の酸と反応させ、続く精製の間に形成された塩を単離させることによってin situ で調製することができる。代表的な塩としては、水素酸塩、ヒドロクロリド硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシラート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチレート（napthylate）、メシラート、グルコヘプトン酸、ラクトビオネート（lactobionate）、およびラウリルスルフォン酸塩などが含まれる（例えば、Berge et al. （1977） "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19参照）。
【０１１８】
対象となる化合物の薬学的に許容される塩としては、従来の非毒性の塩、例えば、非毒性の有機もしくは無機酸からのまたは化合物の４級アンモニウム塩が含まれる。例えば、そのような従来の非毒性塩としては、ヒドロクロリド、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸由来のもの、および酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタン二スルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸などの有機酸から調製された塩が含まれる。
【０１１９】
別の場合において、本発明の化合物は、１以上の酸性官能基を含有し、したがって、薬学的に許容される塩基を用いて薬学的に許容される塩を作製することが可能である。これらの例における用語「薬学的に許容される塩」は、相対的に非毒性の、本発明の化合物の無機および有機塩基添加塩を言う。これらの塩は同様に、賦形剤の投与または剤型製造プロセスにおいて、または精製された本発明の化合物をその遊離塩形態において、個別に好適な塩基、例えば、薬学的許容される金属カチオンのヒドロキシド、カーボネートまたは重炭酸塩、アンモニア、または薬学的に許容される有機１級アミン、２級アミン、もしくは３級アミンとを反応させることによってin situ で調製することができる。代表的なアルカリ塩またはアルカリ土類塩としては、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩などがある。塩基添加塩を作製するために有用な代表的な無機アミンとしては、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジンなどが挙げられる（例えば、Berge et al.,の上掲文献参照）。
【０１２０】
湿潤剤、乳化剤および潤滑剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム）、ならびに着色剤、剥離剤、コーティング剤、甘味料および香味剤、防腐剤および抗酸化剤もまた組成物中に含むことができる。
【０１２１】
薬学的に許容される抗酸化剤の例としては、（１）水溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸、システインヒドロクロリド、ナトリウム重硫酸塩、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウムなど；（２）油溶性抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レクチン、プロピルプロピルガレート、アルファトコフェノール、など、ならびに（３）メタルキレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸、などが含まれる。
【０１２２】
本発明の製剤は、経口、鼻腔内、局所（頬側および舌下投与を含む）、直腸内、膣内、および/または非経口投与に好適なものを含む。該製剤は、都合よく単一の剤型で存在してもよく、また、薬学の分野において公知の方法によって調製されてもよい。担体とともに組み合わされて単一の剤型を成す活性成分の量は、治療を受ける患者、特定の投与形態によって変わるであろう。担体材料とともに組み合わされて単一の剤型を成す活性成分の量は、通常、治療効果を生み出す化合物の量であろう。一般的に、１００％中、この量は、約１％〜約９９％、好ましくは約５％〜約７０％、最も好ましくは、約１０％〜約３０％の活性成分の量となるであろう。
【０１２３】
いくつかの態様において、本発明の製剤は、シクロデキストリン、リポソーム、胆汁酸などのミセル形成剤、およびポリエステルやポリ無水物などのポリマー担体から選択される添加剤、ならびに本発明の化合物を含む。いくつかの態様において、上記製剤は、本発明の化合物に経口の生物学的利用可能性を付与する。
【０１２４】
これらの製剤または組成物を調製する方法は、本発明の化合物を、担体および任意に１以上の副成分と結合させることを含む。一般的に、該製剤は、均一かつ緊密に本発明の化合物を液体担体もしくは最終的に分割された固体担体もしくはその両方と結合させることによって、さらに必要であれば、その生成物を形づくることによって、調製される。
【０１２５】
経口投与に好適な本発明の製剤としては、カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香料基剤、通常は、スクロースおよびアラビアゴムもしくはトラガカントを用いる）、粉末、顆粒、または水性もしくは非水性溶液または懸濁液、または油中水または水中油液体エマルジョン、またはエリキシル剤もしくはシロップ、または香錠（ゼラチンやグリセリンなどの不活性基剤、アラビアゴムもしくはトラガカントを用いる）、および/またはマウス含嗽液などがある。それぞれは、活性成分として所定量の本発明の化合物を含有している。本発明の化合物はまた、ボーラス、舐剤またはパスタ剤として投与することもできる。
【０１２６】
経口投与のための本発明の固体剤型（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣丸、粉末、顆粒など）においては、活性成分は、クエン酸ナトリウム、またはリン酸二カルシウム、および/または下記のうちのいずれかといった１以上の薬学的に許容される担体と混合されている。（１）充填剤または拡張剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよび／またはケイ酸；（２）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよび／またはアラビアゴム；（３）湿潤剤、例えば、グリセロール；（４）崩壊剤、例えば、寒天−寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモやタピオカのデンプン、および炭酸ナトリウムなど；（５）溶解遅延剤、例えば、パラフィン；（６）吸収促進剤、たとえば、４級アンモニウム化合物；（７）湿潤剤、例えば、セチルアルコール、グリセロールモノステアリン酸、および非イオン界面活性剤；（８）吸着剤、例えば、カオリンやベントナイト粘土など；（９）潤滑剤、例えば、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびそれらの混合物；ならびに（１０）着色剤。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、薬学的組成物は、緩衝剤を含んでもよい。同様の種類の固体組成物は、ラクトースや乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどのような添加剤を用いた、ゼラチン軟カプセルおよびゼラチンこ硬カプセルにおいて充填剤として用いることができる。
【０１２７】
錠剤は、任意に１以上の副成分を用いて、圧縮または成形によって作製することができる。圧縮された錠剤は、結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、ナトリウムデンプングリコレート、または架橋されたナトリウムカルボキシメチルセルロース）、表面活性剤または分散剤）を用いて調製することができる。成形された錠剤は、好適な機械の中で、不活性液体希釈剤で湿らされた粉末化合物の混合物を成形することによって作製することができる。
【０１２８】
本発明の薬学的組成物の錠剤および他の固体剤型、例えば、糖衣丸、カプセル剤、丸薬、および顆粒は、任意に刻みをつけてもよいし、または例えば、腸溶コーティングや薬学的製剤の技術分野において公知の他のコーティングなどのコーティングやシェルによって調製してもよい。それらはまた、例えば、所望の放出プロファイルを提供するためのヒドロキシプロピルメチルセルロースや他のポリマー基質、リポソームおよび/または小球体を、比率を変えて用いて、その内部の活性成分を徐放または制御された放出させるように製剤することもできる。それらは、急速に放出が行われるように製剤することもできる（例えば、フリーズドライ）。それらは、例えば、細菌捕獲フィルターで濾過することによって、または滅菌水に溶解させることができる滅菌固体組成物の形態に滅菌剤を組み込むことによって、または使用直前にいくつかの他の滅菌注射可能媒体を用いて、滅菌することができる。これらの組成物は、任意に不透明化剤を含有してもよく、好ましくは、胃腸管の特定の部分において、任意に徐放によって、活性成分のみを放出する組成物にしてもよい。使用可能な埋め込み組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスがある。活性成分はまた、適切であれば、１以上の上記添加剤を用いて、マイクロカプセル化の形状で作製することもできる。
【０１２９】
延長放出製剤は、通常、分散系または浸透系として、例えば、“Remington−The science and practice of
pharmacy”（第２０版、Lippincott Williams
& Wilkins, Baltimore, MD, 2000）に記載のようにして調製することができる。分散系は、典型的に２つの種類のデバイス、リザーバーおよび基質からなり、当該技術分野において公知であり、記載がある。基質デバイスは、通常、薬物を、緩やかにポリマー担体を錠剤形態に溶解させながら圧縮することによって調製することができる。基質デバイスを調製するときに用いられる物質の３つの主なタイプは、不溶性プラスチック、親水性ポリマー、および脂質化合物である。プラスチック材料としては、限定されないが、メチルアクリレート−メチルメタクリレート、ポリビニルクロリド、およびポリエチレンがある。親水性ポリマーとしては、限定されないが、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、およびカルボポール（carbopol）934、酸化ポリスチレンが含まれる。脂質化合物には、限定されないが、カルナバワックスおよびグリセロールトリステレート（glyceryl tristearate）などの種々のワックスが含まれる。
【０１３０】
あるいは、延長放出製剤は、浸透系を用いて、または半透性のコーティングを剤型に塗布することによって調製することができる。後の場合、所望の薬物放出プロファイルは、透過性の低いコーティング材料と、透過性の高いコーティング材料とを好適な比率で組み合わせることによって達成することができる。
【０１３１】
上記異なる放出メカニズムを持つデバイスは、単一もしくは複数のユニットを含む最終的な剤型において、組み合わせることができるだろう。複数のユニットの例としては、多層構造の錠剤や、錠剤、ビーズ、顆粒などを含有するカプセルが含まれる。
【０１３２】
即時放出層を延長放出コアの上部にコーティングを用いて塗布するか、圧縮プロセスを行うか、または延長および即時放出ビーズを含有するカプセルなどの多数のユニット内において、即時放出部を延長放出系に添加することができる。  
【０１３３】
親水性ポリマーを含有する延長放出錠剤を、直接的な圧縮、湿式顆粒化、または、乾式顆粒化プロセスなどの当該技術分野において公知の技法によって調製する。それらの製剤は、通常、ポリマー、希釈剤、結合剤および潤滑剤、ならびに活性のある医薬品成分を組み込んでいる。通常の希釈剤は、多くの異なる種類のデンプンのいくつか、粉末セルロース、特に結晶セルロースおよび微結晶セルロース、糖類（フルクロース、マンニトール、およびスクロース）、穀類の粉末、および類似の食用の粉末、などの不活性の粉末物質を含む。典型的な希釈剤は、例えば、種々のデンプン、ラクトース、マンニトール、カオリン、リン酸カルシウムもしくは硫酸カルシウム、塩化ナトリウムなどの無機塩、および粉末化した糖が含まれる。粉末化したセルロースの誘導体も有用である。典型的な錠剤結合剤は、デンプン、ゼラチン、およびラクトース、フルクトース、グルコースなどの糖類を含む。アラビアゴム、アルギン酸塩、メチルセルロースおよびポリビニルピロリドンを含む、天然および合成ゴムを用いることもできる。ポリエチレングリコール、親水性ポリマー、エチルセルロースおよびワックスを結合剤として用いることもできる。錠剤製剤中、錠剤と押し抜き具がダイ中でくっつかないようにするために、潤滑剤が必要である。潤滑剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、並びに、硬化植物油等の粘着性の固体から選択される。
【０１３４】
ワックス材料を含有する延長放出錠剤は、直接ブレンド法、凝結法、および水性分散法などの、通常当該技術分野において公知の方法を用いて調製される。凝結方法において、薬物は、ワックス材料と混合され、スプレー凝結または凝結され、そして、スクリーニングされ、プロセシングされる。
【０１３５】
徐放製剤は、胃の酸環境では不溶性で、小腸の中性環境では可溶性の固形剤型をポリマーの膜でコーティングすることによって作製される。
【０１３６】
徐放剤ユニットは、例えば、薬物または薬物含有組成物を選択されたコーティング材料を用いてコーティングすることによって調製することができる。薬物含有組成物は、例えば、カプセルに挿入するための錠剤、コーティングされた「コア剤型」として使用するための錠剤、または、複数の薬物含有ビーズ、錠剤もしくはカプセルに組み込むための粒子もしくは顆粒とすることができる。好ましいコーティング材料は、生物侵食性で、段階的加水分解可能であり、段階的水溶性であり、および/または酵素分解可能であるポリマーを含み、そして従来の「腸溶」ポリマーであることができる。当該技術分野の当業者は理解するであろうが、「腸溶」ポリマーは、胃腸管下部の高ｐＨ環境においては可溶性であり、または該剤型が胃腸管を通過するときにゆっくりと侵食する。一方、酵素分解可能なポリマーは、胃腸管下部、特に結腸に存在する細菌性酵素によって分解される。徐放を引き起こす好ましいコーティング材料としては、限定されないが、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルセルロース、エチルセルロース、酢酸セルロース、酢酸セルロースフタレート、酢酸セルローストリメリトおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロースポリマー；好ましくは、アクリル酸、メタクリル酸、メチルアクリレート、エチルアクリレート、メチルメタクリレートおよび/またはエチルメタクリレート、およびEudragit（登録商標）Ｌ３０Ｄ−５５およびＬ１００−５５（ｐＨ５．５以上で可溶）、Eudragit（登録商標）Ｌ−１００（ｐＨ６．０以上で可溶）、Eudragit（登録商標）Ｓ（高度のエステル化の結果pH7.0以上で可溶）およびEudragits（登録商標）ＮＥ，ＲＬおよびＲＳ（異なる程度の浸透性と拡張性を持つ水不溶性ポリマー）を含むEudragit（登録商標）（Rohm Pharma; Westerstadt、Germany）という商標名で市販されている他のメタクリル樹脂から作製されるアクリル酸ポリマーおよびコポリマー；ポリビニルピロリドン、ビニルアセテート、ビニルアセテートフタレートなどのビニルポリマーおよびコポリマー、ビニルアセテートクロトン酸コポリマー、およびエチレン−ビニルエチルアセテートコポリマー；アゾポリマー、ペクチン、キトサン、アミロースおよびグアルゴムなどの酵素分解性ポリマー；ゼインおよびシェラックが含まれる。異なるコーティング材料の組み合わせを用いることもできる。異なるポリマーを用いた多層コーティングを適用することもできる。
【０１３７】
コーティング材料の好ましいコーティング重量は、異なる量の種々のコーティング材料を用いて調製した錠剤、ビーズおよび顆粒の個別の放出プロファイルを評価することによって、当該技術分野の当業者によって容易に変更される。望ましい放出特性をもたらす材料、方法および投与形態の組み合わせについては、当業者が臨床的研究からのみ決定することができる。 
【０１３８】
コーティング組成物は、可塑剤、顔料、着色料、安定剤、グリダント（glidants）などの従来の添加剤を含むことができる。通常、コーティングの脆弱さを減少させるために可塑剤は存在し、ポリマーの乾燥重量に対して一般的に約１０重量％〜５０重量％である。典型的な可塑剤の例としては、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、トリアセチン、ジメチルフタレート、ジエチルフタレート、ジブチルフタレート、ジブチルセバケート（sebacate）、クエン酸トリエチル、クエン酸トリブチル、アセチルクエン酸トリエチル、ひまし油、およびアセチル化されたモノグリセリドが含まれる。安定剤は、分散中、粒子を安定化するために用いることが好ましい。典型的な安定剤は、ソルビタンエステル、ポリソルベートおよびポリビニルピロリドンなどの非イオン系の乳化剤である。グリダントは、成膜および乾燥中の固着作用を減少させるために用いることが推奨される。そしてそれは通常、コーティング溶液中のポリマー重量の約２５重量％〜１００重量％である。１つの効果的なグリダントは、タルクである。ステアリン酸マグネシウムやグリセロールモノステアリン酸などの他のグリダントも用いることができる。二酸化チタンなどの顔料も用いることができる。シリコン（例えば、シメチコン）などの少量の抗発泡剤もコーティング用組成物に添加することができる。
【０１３９】
別法として、徐放性錠剤は、薬物を、親水性ポリマーまたは脂質化合物などの好適な材料の基質内に分散させることによって製剤してもよい。親水性ポリマーは、上記のようにセルロース、セルロースエステル、アクリル酸、メタクリル酸、メチルアクリレート、エチルアクリレート、およびビニルのポリマーもしくはコポリマー、または酵素分解可能なポリマーもしくはコポリマーから構成することができる。これらの親水性ポリマーは、徐放性基質を提供するために特に有用である。用いられる脂質化合物は、限定されないが、ワックス（例えば、カルナバワックス）およびグリセロールトリステアリン酸である。一旦、活性成分を基質材料と混合して、混合物を錠剤中に圧縮することができる。
【０１４０】
本発明の化合物の経口投与用液体剤型は、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤を含む。活性成分に加えて、該液体剤型は、当該技術分野において一般的に用いられる不活性の希釈剤、例えば、水もしくは他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、ベンジル安息香酸、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、オイル（特に、綿実油、落花生油、胚芽油、オリーブオイル、ひまし油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、およびその混合物が含まれる。
【０１４１】
不活性希釈剤の他に、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香料、着色剤、香料および防腐剤などのアジュバントも含むことができる。
【０１４２】
懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化されたイソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天−寒天およびトラガカントおよびその混合物のような懸濁化剤を含有することができる。
【０１４３】
本発明の直腸投与または膣投与用の薬学的組成物の製剤は、１以上の本発明の化合物を、例えば、カカオ脂、ポリエチレングリコール、坐剤用ワックスもしくはサリチレートを含み、室温では固体であるが、体温では液体となり、したがって、直腸もしくは膣腔では液体となり活性化合物を放出させる、１以上の好適な非刺激性の添加剤もしくは担体と混合させることによって調製され得る坐剤である。
【０１４４】
膣内投与に好適な本発明の製剤はまた、当該技術分野において適切であることが既知の担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、パスタ剤、泡剤またはスプレー製剤が含まれる。
【０１４５】
局所または経皮投与用の本発明の化合物の剤型は、粉末、スプレー、軟膏、パスタ剤、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチおよび吸入剤が含まれる。活性化合物は、必要かもしれない、薬学的に許容される担体および防腐剤、緩衝剤、もしくは噴射剤と、無菌条件の下で混合することができる。
【０１４６】
軟膏、パスタ剤、クリームおよびゲルは、本発明の化合物に加えて、動物油および植物油、オイル類、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、珪酸、タルクおよび酸化亜鉛、またはそれらの混合物などの添加剤を含有することができる。
【０１４７】
粉末およびスプレーは、本発明の化合物に加えて、ラクトース、タルク、珪酸、水酸化アルミニウム、珪酸カルシウムおよびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの添加剤を含有することができる。スプレーは、さらに、クロロフルオロカーボネートなどの通常の噴射剤、およびブタンやプロパンなどの揮発性非置換型炭化水素を含有することができる。
【０１４８】
経皮パッチは、本発明の化合物の体へのコントロールされた送達を提供するという更なる利点を有する。そのような剤型は、適切な媒体中に化合物を溶解させるか、または分散させることによって作製することができる。皮膚を介しての化合物の流動を増加させるために吸収増強剤を用いることもできる。そのような流動の速度は、速度制御膜を設けるか、またはポリマー基質またはゲル中に化合物を分散させることによって制御することができる。
【０１４９】
眼科用製剤、眼内軟膏、粉末、溶液なども、本発明の範囲に含まれると考えられる。
【０１５０】
非経口投与に好適な本発明の薬学的組成物は、１以上の本発明の化合物を、１以上の薬学的に許容される無菌の等張水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液、もしくはエマルジョン、または使用直前に無菌の注射可能溶液もしくは分散剤に再構成し得る無菌の粉末と組み合わせて含む。それは、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、製剤を予定されているレシピエントの血液と等張にするための溶質、または懸濁化剤もしくは硬化剤を含有することができる。
【０１５１】
本発明の薬学的組成物に用いることができる好適な水溶性および非水溶性担体の例としては、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、および好適なそれらの混合物、オリーブオイルなどの植物油、オレイン酸エチルなどの注入可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを用いることによって、分散剤の場合、必要な粒子サイズを維持することによって、および界面活性剤を使用することによって維持することができる。
【０１５２】
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散などのアジュバントを含むこともできる。微生物の活動の阻害は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、ソルビン酸フェノールなどを含むことによって確実に行うことができる。糖類、塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物に含むことも望ましいかもしれない。さらに、注入可能な剤型の持続性吸収は、アルミニウムモノステアリン酸やゼラチンなど、吸収を遅らせる物質を含むことによってもたらされる。
【０１５３】
いくつかのケースにおいて、薬物の効き目を持続させるために、皮下または筋内注射からの薬物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、水溶性の低い結晶性もしくは非結晶性の液体懸濁剤を用いることによって達成してもよい。そのとき、薬物の吸収速度は、溶解の速度に依存し、ひいては、結晶サイズおよび結晶の形状に依存する。別法として、非経口的に投与される薬物の吸収を遅らせることは、油性賦形剤中に薬物を溶解もしくは懸濁させることによって達成することができる。
【０１５４】
注射可能なデポー製剤は、対象となる化合物を、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生物分解性のポリマー中でマイクロカプセル基質を作製することによって作製することができる。薬物とポリマーの比率、および用いられる特定のポリマーの性質に基づいて、薬物の放出速度を制御することができる。他の生物分解性のポリマーの例としては、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が含まれる。デポー注射可能製剤はまた、体組織に相溶性のリポソームまたはマクロエマルジョン中に薬物をエントラップすることによって調製することができる。
【０１５５】
本発明の化合物を調合薬として、ヒトおよび動物に投与するとき、それ自身または、例えば、０．１〜９９．５％（より好ましくは、０．５〜９０％）の活性成分を薬学的に許容される担体と組み合わせて含有する薬学的組成物として投与される。
【０１５６】
本発明の調剤は、経口的、非経口的、局所的、または直腸的に投与される。それらはもちろん、各投与経路のために好適な形状で付与される。例えば、それらは、錠剤またはカプセル形状、注射、吸入剤、眼内ローション、軟膏、坐剤などの、注射、注入もしくは吸入による投与、および坐剤による直腸投与によって投与される。経口投与が好ましい。
【０１５７】
本明細書において用いられているフレーズ「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、経腸および局所投与以外の投与形態、通常は注射による投与を意味し、それは、限定されないが、静脈内、筋内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、気管内、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、ならびに組織内に注射および注入される。
【０１５８】
本明細書において用いられている「全身投与」、「全身に投与される」、「末端投与」および「末端に投与される」というフレーズは、化合物、薬物または他の物質の、中枢神経系に直接投与しない投与で、患者の系に入り、代謝などのプロセスを経るような投与、例えば、皮下投与を意味する。
【０１５９】
これらの化合物は、ヒトおよび他の動物に、経口、経鼻（例えば、スプレーによる）、経直腸、経膣、非経口、嚢内および局所（粉末、軟膏または滴剤、頬側および舌下を含む）を含めたあらゆる好適な投与経路によって投与される。、
【０１６０】
選択された投与経路とは無関係に、好適な水和された形状で用いられ得る本発明の化合物、および/または本発明の薬学的組成物は、当該技術分野の当業者に公知の従来からの方法によって、薬学的に許容される剤型に製剤される。
【０１６１】
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際のレベルは、特定の患者の所望の治療的反応、組成物、および投与形態を、患者に対して毒性をもたらさずに達成するのに有効な活性成分の量を取得するために変化させてもよい。
【０１６２】
選択された用量レベルは、用いられた本発明の特定の化合物またはエステル、塩またはそのアミドの活性、投与経路、投与時間、用いられた特定の化合物の排出または代謝の速度、治療の継続時間、用いられた化合物と組み合わせて用いられる他の薬剤、化合物、および/または材料、治療を受ける患者の年齢、性別、体重、健康状態、全身的な健康状態、および病歴、および当該技術分野において公知の同様のファクターを含む種々のファクターに依存する。
【０１６３】
通常の技量を有する内科医または獣医は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、薬学的組成物中において用いられる本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なものより低いレベルで開始し、所望の効果を達成するため徐々に用量を増加させることができる。
【０１６４】
通常、本発明の化合物の好適な１日用量は、治療効果を達成するために有効な最低限の用量となる化合物の用量であろう。そのような有効用量は、通常上記のファクターに依存するであろう。通常、ある患者に対する本発明の化合物の静脈内、脳室内および皮下の用量は、指示さた鎮痛剤効果に用いられる場合、体重１ｋｇあたり、１日０．０００１〜約１００ｍｇであろう。
【０１６５】
望ましければ、活性のある化合物の１日の有効用量は、１日を通して適切な間隔で、任意にユニット剤型で、別個に投与される、２、３、４、５、６またはそれ以上のサブ用量として投与してもよい。
【０１６６】
本発明の化合物は単独で投与することができるが、該化合物は、薬学的製剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０１６７】
別の局面において、本発明は、治療的有効量の１以上の上記対象となる化合物を含み、１以上の薬学的に許容される担体（添加剤）および/または希釈剤ととも製剤される薬学的に許容される組成物を提供する。下記に詳細に示すように、本発明の薬学的組成物は、固体もしくは液体剤型で投与するために特別に製剤することができる。下記に適用されるものを含む。（１）経口投与、例えば、飲薬（水性もしくは非水性溶液、または懸濁液）、錠剤（例えば、頬側、舌下および全身吸収を目標としたもの）、ボーラス、粉末、顆粒、舌に投与するためのパスタ剤；（２）非経口投与、例えば、皮下、筋内、静脈内もしくは硬膜外注射、例えば、無菌溶液もしくは懸濁液、または持続性放出製剤；（３）局所投与、例えば、クリーム、軟膏、または徐放パッチ、または皮膚に適用されるスプレー；（４）膣内もしくは腸内投与、例えば、ペッサリー、クリームもしくは泡剤；（５）舌下投与；（６）眼内投与；（７）経皮投与；または（８）経鼻投与。
【０１６８】
本発明の化合物は、他の製剤との類似性によって、ヒトまたは獣医学的医療に使用するのに都合のよいあらゆる投与方法のために製剤することができる。
【０１６９】
用語「治療」は、予防、治療および治癒をも含むことが意図される。
【０１７０】
この治療を受ける患者は、霊長類、特にヒトおよび他の哺乳動物、例えば、ウマ、家畜、ブタおよびヒツジなど、ならびに家禽および一般的なペット動物を含んだ、治療を必要とするあらゆる動物である。
【０１７１】
本発明の化合物は、そのまま、または薬学的に許容される担体との混合物において投与することができ、ペニシリン、セファロスポリン、アミノグルコシドおよびグリコペプチドなどの殺菌薬と組み合わせて投与することもできる。したがって、組み合わせの治療は、引き続いて投与が行われたとき、最初の投与の治療効果が全て消失してしまわないように、連続的、同時、および別個に化合物を投与することを含む。
【０１７２】
本発明の活性な化合物の、動物の餌への添加は、活性な化合物の治療的有効量を含有する適切な飼料プレミックスを調製し、そのプレミックスを完全な糧食に組み込むことによって達成することができる。
【０１７３】
あるいは、中間濃縮物または活性成分を含有する餌補充剤を餌に混合させることができる。そのような餌プレミックスおよび完全な糧食を調製し、投与する方法は、参照文献に記載されている（例えば、"Applied Animal Nutrition", W.H.
Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969 or "Livestock Feeds and
Feeding" O and B books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977）
【０１７４】
組み合わせ療法
本発明の化合物は、１以上の治療薬と組み合わせて患者に投与してもよい。補助薬または薬物を主要な薬物と混合して、単一の錠剤、丸薬、カプセル、または非経口投与用の溶液などに製剤してもよい。あるいは、主要な薬物と補助薬を別個の組成物、例えば、別個の錠剤もしくは溶液を介して投与してもよい。主要な薬物は、補助薬と同時に投与してもよく、または主要な薬物は、完全な薬物とともに断続的に投与してもよい。補助薬の用量は、通常、治療を受ける患者の健康状態、所望の治療の範囲、同時に行う治療の性質および種類、もしあれば、治療の頻度および所望の効果の性質を含む多くの要因に依存するであろう。一般的に、補助薬の用量範囲は、体重１ｋｇ当たり１日０．００１〜約２５０ｍｇ／ｋｇであることが多い。体重約７０ｋｇの正常の成人では、典型的に体重１ｋｇ当たり１日約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇが好ましい。しかしながら、この一般的な用量範囲は、治療を受ける被験体の年齢および体重、意図されている投与経路、投与される特定の薬物などにしたがって変化させる必要がある。２以上の異なる活性剤が治療と組み合わせて使用されているので、各薬物の力価およびそれらを一緒に用いることによって達成される相互作用を考慮しなければならない。しかしながら、用量の範囲の決定および特定の哺乳動物にとっての最適な用量も十分に、本開示の利点を持つ、当該技術分野の当業者の能力の範囲内である。いくつかの態様において、本発明の化合物は、鎮痛剤、抗炎症剤、解熱剤、抗抑鬱剤、抗てんかん薬、抗ヒスタミン剤、抗片頭痛薬、抗ムスカリン作動薬、抗不安剤、鎮静剤、催眠薬、抗精神病薬、気管支拡張剤、抗喘息薬、心臓血管薬、コルチコステロイド、ドーパミン作動薬、電解液、胃腸薬、筋弛緩剤、栄養剤、ビタミン剤、副交感神経作動薬、刺激剤、抗ナルコレプシー薬、および食思減退薬などの他の化合物と組み合わせて投与することができる。
【０１７５】
本発明の別の態様は、本発明の化合物とセロトニン輸送体、ノルエピネフリン輸送体、またはその両方を阻害する１以上の化合物との組み合わせ療法に関する。組み合わせ療法における治療薬の相対的比率は、セロトニン輸送体とノルエピネフリン輸送体に対する阻害の特定のレベルを達成すべく選択される。例えば、いくつかの態様において、セロトニン輸送体とノルエピネフリン輸送体を同じ力価で阻害する組み合わせ療法を用いて、患者を治療することが有用かもしれない。しかしながら、いくつかの態様において、セロトニン輸送体に対する阻害を、ノルエピネフリン輸送体に対する阻害よりも大きくした組み合わせ療法を用いて患者を治療することが有用かもしれない。例えば、いくつかの態様において、ノルエピネフリン輸送体の阻害に対するセロトニン輸送体に対する阻害の比率は２、４、６もしくは１０である。あるいは、いくつかの態様において、セロトニン輸送体の阻害に対するノルエピネフリン輸送体に対する阻害の比率は２、４、６もしくは１０である。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、２つの治療薬を含む。しかしながら、組み合わせ療法は、２より多くの、例えば、３、４、５の治療薬を含むことができるであろう。 
【０１７６】
いくつかの態様において、組み合わせ療法は、選択的セロトニン再摂取抑制剤（ＳＳＲＩ）および式ＡまたはＢの化合物を含む。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、選択的ノルエピネフリン再摂取抑制剤（ＳＮＲＩ）および式ＡまたはＢの化合物を含む。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＳＳＲＩ、ＳＮＲＩおよび式ＡまたはＢの化合物を含む。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、少なくとも１つの本発明の化合物、ＳＳＲＩおよびＳＮＲＩを含む。いくつかの態様において、ＳＮＲＩは、ミルナシプランである。      
【０１７７】
いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１３およびＳＳＲＩである。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１３およびＳＮＲＩである。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１３、ＳＳＲＩおよびＳＮＲＩである。
【０１７８】
いくつかの態様において、本発明は、さらにＣ１８１４を含むＣＳ１７１３の上記組み合わせ療法に関する。
【０１７９】
いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１４およびＳＳＲＩである。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１４およびＳＮＲＩである。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１７１４、ＳＳＲＩおよびＳＮＲＩを含む。いくつかの態様において、本発明は、本発明は、さらにＣ１８１４を含むＣＳ１７１３の上記組み合わせ療法に関する。
【０１８０】
いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１８１４およびＳＳＲＩを含む。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１８１４およびＳＮＲＩを含む。いくつかの態様において、組み合わせ療法は、ＣＳ１８１４、ＳＳＲＩおよびＳＮＲＩを含む。
【０１８１】
コンビナトリアルライブラリー
対象となる化合物は、薬学的、アグロケミカルもしくは他の生物学的もしくは医学に関連する活性、または材料に関連する質のスクリーニングを行うためのコンビナトリアルライブラリーを利用する、コンビナトリアルケミストリーの方法を用いて容易に調製される。本発明の目的のためのコンビナトリアルライブラリーは、所望の特性についてスクリーニングすることができる、化学的に関連する化合物の混合物であり、前記ライブラリーは、溶液の形状でもよいし、または固体支持体に共有結合されていてもよい。多くの関連する化合物の、単一の反応における調製は、行う必要のある多くのスクリーニングプロセスを大いに減らし、単純化する。適切な生物学的、薬学的、農薬学的または物理学的特性のスクリーニングは、従来の方法によって行ってもよい。
【０１８２】
ライブラリーの多様化は、種々の異なるレベルで可能である。例えば、コンビナトリアルアプローチに用いられる基質アリール基は、コアアリール部分の点で多様であることができる（例えば、リング構造について多様である）、および/または他の置換基に関して多様であることができる。
【０１８３】
小有機分子のコンビナトリアルライブラリーを作製するためには、当該技術分野における種々の技法を用いることができる。例えば、Blondelle et al. （1995） Trends Anal. Chem. 14:83; Affymaxの米国特許第5,359,115号および第5,362,899号： Ellmanの米国特許第5,288,514号：StillらのＰＣＴ国際公開公報WO 94/08051号；Chen et al. （1994） JACS
116:2661: Kerr et al. （1993） JACS
115:252；ＰＣＴ国際公開公報 WO92/10092号、WO93/09668号およびWO91/07087号；Lerner et alらのＰＣＴ国際公開公報 WO93/20242号）を参照されたい。したがって、約１６〜１，０００，０００以上のダイバーソマーを持つ、種々のライブラリーを合成し、特別の活性もしくは特性についてスクリーニングすることができる。
【０１８４】
ある実施態様において、置換されたダイバーソマー（diversomer）のライブラリーは、StillらのＰＣＴ国際公開公報WO
94/08051号に記載の望ましい技法に適用される対象となる反応、例えば、加水分解可能または光分解可能基によるポリマービーズに結合させる、例えば、基質の部分基質の１つに位置づけるといった反応を用いて合成することができる。Stillらの技法によれば、ライブラリーは、１セットのビーズ上に合成される。各ビーズは、ビーズ上の特別のダイバーソマーを同定する１セットのタグを含んでいる。酵素阻害剤を発見するために特に好適なある態様において、該ビーズは、浸透膜の表面に分散させることができ、ダイバーソマーは、ビーズリンカーの溶解によってビーズから放出され得る。各ビーズからのダイバーソマーは、膜を超えてアッセイ帯域まで分散し、酵素アッセイと相互作用することになる。多くのコンビナトリアル方法の詳細な説明を以下に示す。
【０１８５】
Ａ．直接的な特徴づけ
コンビナトリアルケミストリーの分野において増大している傾向は、例えば、化合物のサブフェムトモル量の特徴を調べる、および直接的にコンビナトリアルライブラリーから選択された化合物の化学的構造を決定するために用いることができるマススペクトロメトリー（ＭＳ）などの技法の開発である。例えば、ライブラリーが、不溶性支持体基質上に設けられている場合、化合物の別個のポピュレーションをまず最初に支持体から放出させ、ＭＳによって特徴付けることができる。別の態様において、ＭＳサンプル調製技法の一部として、そのようなＭＳ技法をＭＡＬＤＩとして使用して、特に、当初から化合物を基質につなぐために、不安定な結合が用いられている場合に、基質から化合物を放出させることができる。例えば、ライブラリーから選択されたビーズは、ＭＡＬＤＩステップにおいて、基質からダイバーソマーを放出し、ＭＳ分析するために該ダイバーソマーをイオン化するために、照射することができる。
【０１８６】
Ｂ）マルチピン合成
当該方法のライブラリーは、マルチピンライブラリーフォーマットを用いることができる。簡潔に言えば、Geysenと共同研究者（Geysen et al. （1984） PNAS
81:3998-4002）は、マイクロタイタープレートフォーマットに配列されたポリアクリル酸グレートの（grated）ポリエチレンピン上でのパラレル合成によって化合物ライブラリーを作製する方法を導入した。Geysenの技法を使用して、マルチピン法を用いて、１週間に数千もの化合物を合成およびスクリーニングすることができる。そして、結合された化合物は、多くのアッセイにおいて再利用することができる。適切なリンカー部分をピンに付加して用い、純度の評価およびさらなる評価を行った後、化合物を支持体から切断してもよい（Bray et al. （1990） Tetrahedron Lett 31:5811-5814; Valerio et al. （1991） Anal Biochem 197:168-177; Bray et al. （1991） Tetrahedron Lett 32:6163-6166参照）。
【０１８７】
Ｃ）分割−結合−組換え
さらに別の態様において、化合物の多様なライブラリーは、分割−結合−組換え法を用いて、１セットのビーズ上に設けることができる（例えば、Houghten （1985） PNAS
82:5131-5135; and 米国特許第4,631,211号；第5,440,016号；第5,480,971号参照）。簡潔に述べれば、名前が示唆しているように、縮退がライブラリーに導入される各合成ステップにおいては、ビーズをライブラリーの特定の位置に付加されるべき異なる置換基の数と等しい別個のグループに分割して入れ、別個の反応において異なる置換基を結合し、そして次の反復のために１つのプールに組み込んだ。
【０１８８】
ある態様において、Houghtenが最初に開発した、内部の多孔性のポリプロピレンバッグに密閉された樹脂上で化合物の合成が行われる、いわゆる「ティーバッグ」法に類似するアプローチを用いた分割−結合−組換え法を用いることができる（Houghten et al. （1986） PNAS
82:5131-5135）。バッグを適切な反応溶液に置くことによって、置換基を化合物を持つ樹脂に結合する。一方、全てに共通のステップ、例えば、樹脂洗浄や脱保護は、１つの反応容器において同時に行われる。合成が終わったとき、各バッグは、単一の化合物を含有している。
【０１８９】
Ｄ）光指示、空間アドレス可能なパラレル化学合成によるコンビナトリアルライブラリー
合成基質上のその位置によって化合物の同定がなされるコンビナトリアル合成のスキームを空間アドレス可能合成と呼ぶ。ある態様において、コンビナトリアルプロセスは、化学的試薬を、固体支持体の特異的な位置への添加をコントロールすることによって行うことができる（Dower et al. （1991） Annu Rep Med Chem 26:271-280; Fodor, S.P.A. （1991） Science
251:767; Pirrung et al. （1992） 米国特許第5,143,854号; Jacobs et al. （1994） Trends Biotechnol 12:19-26）。フォトリソグラフィーの空間分解能によって小型化が可能になる。この技法は、感光性保護基を用いた保護／脱保護反応によって行うことができる。
【０１９０】
この技法のキーポイントは、Gallop et al. （1994） J Med Chem
37:1233-1251に示されている。合成基質は、感光性ニトロベラトリルオキシカルボニル（NVOC）保護アミノリンカーまたは他の感光性リンカーの共有結合的付着を介して結合するために調製される。結合のための合成支持体の特異的な領域を活性化するために光が選択的に用いられる。感光保護基を光によって除去（脱保護）した結果、選択された領域が活性化される。活性化の後、それぞれ感光性保護基をアミノ末端に有している第１のアミノ酸アナログのセットを表面全体に曝露する。先行するステップにおいて、光によってアドレス指定された領域にのみ結合が生じる。反応を止め、プレートを洗浄し、基質を第２のマスクを介して再び照射し、第２の保護構築ブロックを用いた反応の異なる領域を活性化する。マスクのパターンおよび反応物の配列によって生成物およびそれらの位置を定義する。このプロセスは、フォトリソグラフィー技法を用いているので、合成され得る化合物の数は、適切な分解能によってアドレス指定され得る合成部位の数によってのみ限定される。各化合物の位置は、正確に知られている。したがって、その他の分子との相互作用を直接的に評価することができる。
【０１９１】
光指向型化学合成において、生成物は、その照射パターンおよび反応物の添加のレベルに依存する。リソグラフィーのパターンを変化させることによって、多くの異なるセットの試験化合物を同時に合成することができる。この特徴によって、多くの異なるマスキング法を作り出すことになる。
【０１９２】
Ｅ）コードされたコンビナトリアルライブラリー
さらに別の態様において、対象となる方法は、コードされたタグシステムを備えた化合物ライブラリーを使用する。近年、所与のビーズの反応ステップを独自にコードするタグ用いた化学的指標系および推測でそれが持つ構造を採用して、コンビナトリアルライブラリーからの活性化合物の同定が向上している。概念上、このアプローチは、活性が発現したペプチドに由来するファージディスプレイライブラリーを模倣しているが、活性ペプチドの構造は、対応するゲノムＤＮＡ配列から推論される。合成コンビナトリアルライブラリーの第１のコード化は、コードとしてＤＮＡを採用した。配列可能なバイオ−オリゴマー（例えば、オリゴヌクレオチドおよびペプチド）、および更なる非配列可能タグを用いたバイナリーコード化を含む、他の形態の種々のコード化が報告されている。
【０１９３】
１）配列可能なバイオオリゴマーを用いたタグ付け
コンビナトリアル合成ライブラリーをコードするオリゴヌクレオチドを用いる原則は、１９９２年に記載されている（Brenner et al. （1992） PNAS 89:5381-5383）。そのようなライブラリーの例は、翌年にも報告されている（Needles et al. （1993） PNAS
90:10700-10704）。各々、特異的なジヌクレオチド（それぞれＴＡ、ＴＣ、ＣＴ、ＡＴ、ＴＴ、ＣＡおよびＡＣ）によってコードされているＡｒｇ、Ｇｌｎ、Ｐｈｅ、Ｌｙｓ、Ｖａｌ、ｄ−ＶａｌおよびＴｈｒ（３文字アミノ酸コード）の全ての組み合わせからなる、名目上７７（＝８２３，５４３）個のペプチドのコンビナトリアルライブラリーを、固体支持体上で一連のペプチドおよびオリゴヌクレオチド合成を交互に行うことによって調製した。本研究において、ビーズ上のアミン結合機能性は、ビーズを、オリゴヌクレオチド合成のための保護ＯＨ基およびペプチド合成のための保護ＮＨ２基（ここでは、比率は１：２０）を生成する試薬を用いて同時にプレインキュベートし、ペプチドまたはオリゴヌクレオチド合成へ特異的に分化させた。完了時、タグはそれぞれ６９量体からなり、そのうち１４ユニットはコードを有していた。ビーズ結合ライブラリーを、蛍光標識した抗体、および強く蛍光発光した結合抗体を含有するビーズを蛍光活性化された細胞分類によって回収した（ＦＡＣＳ）。ＤＮＡタグは、ＰＣＲによって増幅し、配列させ、予測されるペプチドを合成した。そのような技法を行った後、当該方法で使用するために化合物ライブラリーを誘導することができ、タグのオリゴヌクレオチド配列は、特定のビーズが行う連続的なコンビナトリアル反応を同定し、したがって、ビーズ上で化合物を同定する。
【０１９４】
オリゴヌクレオチドタグによって、優れて感受性の高いタグ分析が可能となる。そうであっても、この方法は、タグとライブラリーメンバーの共合成を選択するために必要とされる保護基の直交系の選択には注意が必要である。さらに、タグの化学的不安定性、特にリン酸塩と糖のアノマー結合は、非オリゴマーライブラリーに用いることができる試薬の選択と条件を制限することになる。好ましい態様において、ライブラリーは、アッセイのための試験化合物ライブラリーメンバーの選択的解離を可能とするリンカーを採用する。
【０１９５】
ペプチドもまた、コンビナトリアルライブラリーのタグ分子として使用されてきた。２つのアプローチの例が当該技術分野において記載されている。その双方は、コーディングおよびリガンド鎖が交互に作製された固体相への分枝リンカーを採用している。第１のアプローチにおいては（Kerr JM et al. （1993） J Am Chem Soc 115:2529-2531）、コード鎖の酸不安定保護および化合物鎖の塩基不安的保護を採用することによって、合成の直交性が達成されている。
【０１９６】
もう一方のアプローチ（Nikolaiev et al. （1993） Pept Res 6:161-170）では、コードユニットと試験化合物の両方が樹脂上の同じ官能基に付着することができるように分枝リンカーが採用される。ある態様においては、切断によってコードと化合物の双方を含有する分子を放出することができるように切断可能なリンカーを分枝点とビーズの間に配置する（Ptek et al. （1991） Tetrahedron Lett 32:3891-3894）。別の態様において、切断可能リンカーは、コードを後ろにした状態で、試験化合物が選択的にビーズから分離され得るように配置することができる。この最後の構築物は、特に価値がある。なぜなら、それは、コード基に妨害される可能性なく、試験化合物のスクリーニングを可能とするからである。独立した切断およびペプチドライブラリーメンバーの配列の例、並びに、それらの対応するタグによって、該タグが正確にペプチド構造を予測することができることが確認された。
【０１９７】
２）非配列可能タグ：バイナリーコーディング
試験化合物ライブラリーをコードするための別の形態は、バイナリーコードとして使用される一連の配列可能な電気泳動的な分子のタグ付けを採用する（Ohlmeyer et al. （1993） PNAS
90:10922-10926）。タグの例としては、トリメチルシリルエーテルとして、電子捕獲型ガスクロマトグラフィー（ＥＣＧＣ）によって、フェムトモル量未満で検出可能なハロ芳香族アルキルエーテルがあげられる。アルキル鎖の長さ、ならびに芳香族ハライド置換基の性質および位置を変化させることで、原則的に２４０（例えば、１０１２まで）の異なる分子をコードすることができる、少なくとも４０のそのようなタグの合成が可能となる。最初の報告（Ohlmeyer et al., 上掲）においては、該タグは、ペプチドライブラリーの約１％の入手可能なアミン基へ、光分裂可能なｏ−ニトロベンジルリンカーを介して結合している。このアプローチは、ペプチド様もしくは他のアミン含有分子を調製する場合に便利である。しかしながら、本質的にあらゆるコンビナトリアルライブラリーをコードすることが可能な、より万能な系が開発された。ここで、化合物は、光分裂可能なリンカーを解して固体支持体に付着し、タグは、カテコールエーテルリンカーに、カルベンのビーズ基質への挿入を介して結合することになる（Nestler et al. （1994） J Org Chem 59:4723-4724）。この直交な付着法によって、溶液中のアッセイのためのライブラリーメンバーの選択的付着および、続く、タグセットの酸性の分解後のＥＣＧＣによるデーコーディングを可能とする。
【０１９８】
当該技術分野におけるいくつかのアミド結合ライブラリーは、アミン基に付着した電気泳動的タグを用いたバイナリーコーディングを採用しているが、これらのタグを直接的にビーズ基質に付着させることによって、コードされたコンビナトリアルライブラリーにおいて調製可能な構造中にさらに高い万能性をもたらす。このように付着されているので、タグおよびそれらのリンカーは、殆どビーズ基質自身として反応しない。電気泳動的タグが直接的に固体相に付着した２つのバイナリーコードされたコンビナトリアルライブラリーが報告されており（Ohlmeyer et al.（1995）PNAS 92:6027-6031）、対象となる化合物ライブラリーを生成する指示を提供している。双方のライブラリーは、ライブラリーメンバーが固体相に結合し、タグが、強い酸化によってのみ分解されうるリンカーを介して付着された、直交付着法を用いて構築された。ライブラリーメンバーは、それぞれ固体支持体から部分的に光溶出が可能であるので、ライブラリーメンバーは、多くのアッセイにおいて使用することができる。連続した光溶出は、非常にハイスループットの相互作用的スクリーニング法を可能にしている。第１に、多数のビーズを９６ウェルマイクロタイタープレートに置き、第２に、化合物をアッセイプレートに部分的に付着させ、移し、第３に、金属結合アッセイが活性なウェルを同定し、第４に、対応するビーズを新しいマイクロタイタープレートに単一に再配列し、第５に、単一の化合物を同定し、そして第６に、構造をデコーディングする。
【０１９９】
毒物学的評価
薬物開発プロセスにおいて、潜在力のある治療薬または薬物候補物質は、使用するには、安全性と有効性の両方が実証されなければならない。薬物開発プロセスにおいて、潜在力のある薬物候補物質について、安全性を実証するための毒性学的評価を行う。
【０２００】
通常、化合物とポピュレーションとを接触させて、化合物がポピュレーションのメンバーに及ぼす効果を測定した。化合物がポピュレーションのメンバーに及ぼす効果は通常、１以上の異なる表現型パラメータを評価することによって決定される。本発明の対象となる所与のアッセイにおいて評価される表現型パラメータは、少なくとも部分的に、用いられる多細胞生物の性質によって、広く変化する。典型的に、所与のアッセイにおいて評価される表現型パラメータは、（１）生存力；（２）形態学的不良；および（３）生殖能力のうちの１以上を含む。評価され得る特異的なパラメータは、（１）致死量（例えば、ＬＤ５０、ＬＤ１０など）；（２）成長不良；（３）不妊効果用量；（４）発育不全；（５）神経学的損傷；（５）寿命調節、例えば、寿命の延長または短縮などのうちの１以上を含む。
【０２０１】
多くの異なるタイプの非哺乳類多細胞生物を用いて毒物学的評価を行うことができる。ここでは、これらのタイプの生物は、昆虫、両生類、魚類などを含む。関連する具体的な生物としては、アフリカツメガエル、ゼブラフィッシュ、線虫（Caenerhabditis）、ショウジョウバエなどが含まれる。特別に興味深いものは、無脊椎動物、特に、節足動物門のメンバーである。より特別には、昆虫綱のメンバーである。特に興味深いものは、ハエである。例えば、ショウジョウバエファミリーのハエであり、キイロショウジョウバエであることが多い。用いられる多細胞生物は、それらの生命のいずれの段階のものでもよく、例えば、幼虫の段階でもよく、成虫の段階でもよい。
【０２０２】
例えば、化合物を多細胞生物のポピュレーションと接触させて、化合物が、ポピュレーションの個別の生物の全部でなくとも、少なくとも実質的な部分に活性を及ぼし得るようにする。実質的な部分とは、４０数量％、通常少なくとも５０数量％、より通常少なくとも６０数量％である。ここで、数量％は、８０、９０または９５％以上であってもよい。通常、生物によって内部移行されるように、各化合物をポピュレーションのメンバーに接触させる。典型的には、内部移行は、経口摂取によって、すなわち、経口的に成されるであろう。その結果、化合物を栄養培地、例えば、水、生物の更なる栄養剤の水溶液などに組み込むことによって、各化合物が複数の生物と接触するであろう。例えば、多細胞生物がハエである場合、候補物質は、該物質をハエ栄養培地に混合し、該培地をハエ（幼虫または成虫、通常は幼虫）の存在下に配置し、ハエが培地上で栄養を供給されるようにすることによって、ハエに経口投与される。
【０２０３】
上記パラメータに加えて、試験生物の遺伝子発現レベルをアッセイすることができる。例えば、治療された幼虫、さなぎ、および/またはハエにおいて遺伝子発現を評価することができる。遺伝子は、どの組織または細胞の種類が、そしていつ影響を受けるかを評価するための基本的な代謝情報を発育途上の組織特異的遺伝子に供給する「ハウスキーピング」遺伝子由来であることができる。アッセイベースのプロトコルを含む、種々の異なる遺伝子発現プロトコルが当該技術分野の当業者に公知であり、欧州特許第0 328 829 B1号、ならびに米国特許第5,468,613号、第5,580,726号、第5,599,672号、第5,512,462号、第5,162,209号、および第5,162,209に記載されている。それらの開示を引用によって本明細書に援用する。異なる遺伝子発現を分析する方法もまたManiatis, et al., Molecular Cloning, A
Laboratory Manual（Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y.）（1989）; Nucleic
Acid Hybridization, A Practical Approach （Hames, B. D., and Higgins, S. J. eds, IRL Press,
Oxford）（1985）; WO 95/21944; Chalifour, et al., Anal. Biochem. （1994） 216:
299-304; Nguyen et al., Genomics （1995） 29: 207-216; Pietu et al., Genome Res. （1996） 6: 492-503;
and Zhao et al., Gene （1995） 166: 207-213に記載されている。
【０２０４】
化合物が、評価される特定の物理的パラメータまたは複数のパラメータに及ぼす作用は、手動またはロボットによって決定することができる。その結果、多くの態様において、化合物が生物に及ぼす作用は、自動化された手順によって達成される。
【０２０５】
次に、化合物が表現型パラメータまたは複数のパラメータに及ぼす作用は、その化合物の毒性に関連している。そうであるので、表現型パラメータに及ぼす作用を用いて、アッセイされた化合物についての毒性プロファイルを導く。毒性プロファイルは、所与の化合物の毒性、すなわち、その１以上の毒性（致死性、不妊症が引き起こす活性など）の集合を意味する。
【０２０６】
毒性学のためのハエモデル
候補化学物質を、飽和点またはそれに近い点で水に溶解する。この保存溶液を段階希釈して、ハエのインスタント培地を再水和する（Fisher Scientific）。特に、ある毒性アッセイは、純粋な化学物質の保存溶液で再水和したハエのインスタント培地を含む。一方、別のアッセイは、化学物質の１０％溶液（水中）で再水和する。このフォーマットは、それぞれの被検化学物質について４〜５ログ用量（log dose）範囲でデータを作成するために使用することができるであろう。
【０２０７】
公知の量の胚、典型的には、４０〜５０を入力に用いる。具体的に、４０〜５０の胚を計数し、試験される培地/化学物質の混合物を含有する貯蔵容器に入れる。胚は、手動または自動（例えば、ダイオードを流れる胚の液体懸濁液）で計数できる。幼虫は、培地/化学物質上で栄養供給される。幼虫段階から成虫への発展の全ての局面は、通常化学物質の存在下で行われる。幼虫およびハエが取得可能な食物と水のソースのみが化学物質を含有している。容易にアッセイすることが可能な、幼虫に化学物質を供給することによるプロトコルを用いて期待できる摂取量は可変であることが示されている。具体的に、鉄、銅、亜鉛が選択されてきた。これらの化学物質を１重量部/ミリオンの濃度まで分析するための、高感度の正確なキットが市販されており入手可能である。これについて、定量的アッセイを行い、試験貯蔵容器に入れた幼虫と異なる貯蔵容器に入れた幼虫の間の可変性が測定される。
【０２０８】
発育途中の幼虫およびさなぎを、正常の成長および発達について調べる。次いで、成虫のハエについて、致死性、不妊性、発育不全および寿命変化について分析する。致死性は、含まれる成虫ハエの数を、貯蔵容器に入った胚の数で割ることによって求める。不妊性は、それらを正常のハエと交配させて、雌雄について調べる。成虫の身体検査によって、手足の欠陥、組織形成上の欠陥、異常な状態など目に見える欠陥を明らかにする。最終的に、ハエは、それらの天然の平均寿命の間生存することができ、ハエの平均寿命を短くするもしくは長くするのか、いずれの効果を発生させたかを決定することができる。
【実施例】
【０２０９】
本発明を概略的に解説したところで、以下の実施例を参考にすれば、より容易に理解されようが、以下の実施例は単に本発明の特定の局面および態様の描写を目的に含まれたのであり、本発明を限定するものとは、意図していない。
【０２１０】
実施例１
ＣＳ１５９０およびＣＳ１５９１の合成
撹拌棒、サーモメーターおよびガスアダプターを備えた２００ｍＬの三口丸底フラスコに、４−メトキシフェニルアセトニトリル（９．３８ｇ、６３．７６ｍｍｏｌ）およびベンゼン（７０ｍＬ）を充填した。その反応混合物を０℃に冷却させ、ナトリウムアミド（４．９７ｇ、１２７．５ｍｍｏｌ）を加え、さらに２時間この温度で撹拌した。この期間の後、（Ｒ）−エピクロルヒドリン（５．９ｇ、６３．７６ｍｍｏｌ）を添加し、得られた反応混合物を一晩撹拌し、その溶媒を減圧下で還元し、残基をエタノール（５０ｍＬ）および水溶性水酸化ナトリウム（１ｍｏｌ／Ｌ、４０ｍＬ）中に溶解した。次いでその溶液を加熱し、一晩還流させ、濃縮した塩酸を添加し、ｐＨ＝１に調節した。その水相を第３ブチルメチルエーテル（２００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍ１）を用いて抽出した。有機相を結合させ、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で還元し、粗ＣＳ１５９０を得た。それを、溶離剤として、酢酸エチル／ジクロロメタン（１：４）を用いたシリカゲル上で、カラムクロマトグラフィーによって精製した。所望の生成物を含有する画分を結合させ、減圧下で還元し、ＣＳ１５９０（５．４２ｇ、４１．７％）をオフホワイトの固体として得た。
【０２１１】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１５９１を合成した。
【０２１２】
実施例２
ＣＳ１６０８およびＣＳ１６０９の合成
撹拌棒、サーモメーターおよびガスアダプターを備えた２００ｍＬの三口丸底フラスコに、ｎ−ブチルリチウム（１．６ｍｏｌ／Ｌ、２９．８ｍＬ、４７．７ｍｍｏｌ）を充填し、０℃に冷却し、エチルアミン（３．４９ｇ、４７．７ｍｍｏｌ）を加えた。その溶液を２０分間撹拌し、−７８℃に冷却させ、ＣＳ１５９０（６．０８ｇ、２９．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液（５０ｍＬ）を添加した。その反応混合物を一晩室温に加温し、その後その反応混合物をクエンチングし、塩化アンモニウム（２００ｍｌ）の飽和水溶液に入れ、次いで酢酸エチルで抽出した。有機相を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、溶媒を減圧下で還元し、粗ＣＳ１６０８（８．１９ｇ、９８％）を得た。それをさらなる精製を行わずに次のステップに用いた。
【０２１３】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１６０９を合成した。
【０２１４】
実施例３
ＣＳ１６２８およびＣＳ１６４８の合成
撹拌棒、サーモメーターおよびガスアダプターを備えた２００ｍＬの三口丸底フラスコに、ＣＳ１６０８（５．６ｇ、２０．１９ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）を充填し、０℃に冷却し、アジ化ナトリウム（５．２ｇ、８０．７６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１０．２ｇ、１００．９５ｍｍｏｌ）およびメタンスルホクロリド（４．６ｇ、６０．５７ｍｍｏｌ）を添加した。その懸濁液を２４時間撹拌し、水（２００ｍｌ−）中に入れてクエンチングし、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、その溶媒を減圧下で還元し、粗ＣＳ１６２８を得た。それを、溶離剤としてヘプタン／酢酸エチル（５：１）を用いたシリカゲル上で精製し、ＣＳ１６２８（２．２ｇ、３６％）をオフホワイトの固体として得た。
【０２１５】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１６４８を合成した。
【０２１６】
実施例４
ＣＳ１６４９およびＣＳ１６５８の合成
撹拌棒、サーモメーターおよびガスアダプターを備えた５０ｍＬの三口丸底フラスコに、ＣＳ１６２８（２．２ｇ、７．２７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（２００ｍＬ）を充填し、−３５℃に冷却し、三臭化ホウ素のジクロロメタン溶液（１．０ｍｏｌ／Ｌ、２１．８ｍＬ、２１．８ｍｍｏｌ）を加えた。その反応混合物を４８時間、−２８℃で保ち、−４０℃に冷却し、メタノールを添加した。得られた混合物を水（２００ｍｌ）中に注ぎ、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で抽出し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、その溶媒を減圧下で還元し、粗ＣＳ１６４９を得た。それを、溶離剤としてヘプタン／酢酸エチル（２：１）を用いたシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーにより精製し、ＣＳ１６４９（１．３９ｇ、６６．５％）をオフホワイトの固体として得た。
【０２１７】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１６５８を合成した。
【０２１８】
実施例５
ＣＳ１６６５およびＣＳ１７１０の合成
２００ｍＬの水素化ボトルに、ＣＳ１６４９（１．１ｇ、３．８１ｍｍｏｌ）、メタノール（５０ｍＬ−）および触媒量のＰｄ／Ｃを充填した。完全な変換が観察されるまで、その反応物に１バールの水素圧をかけ、その反応混合物をセライトのパッドを介して濾過し、減圧下で溶媒を除去し、粗ＣＳ１６５５を得た。それを、溶離剤として、ジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン（１０：０．５：０．２５）を用いたシリカゲル上でカラムクロマトグラフィーによって精製し、ＣＳ１６６５（０．８０ｇ、８０％）をオフホワイトの固体として得た。
【０２１９】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１７１０を合成した。
【０２２０】
ＣＳ１６６５の分析データ
【表１】
2006503920.tif 000015
【０２２１】
ＣＳ１７１０の分析データ
【表２】
2006503920.tif 000016
【０２２２】
実施例６
ＣＳ１７１３およびＣＳ１７１４の合成
１０ｍＬの丸底フラスコに、ＣＳ１６６５（０．５１ｇ、１．７１ｍｍｏｌ）およびジオキサン（５ｍｏｌ／Ｌ、１０ｍＬ）を充填した。混合物を室温で１時間撹拌し、減圧下で溶媒を除去し、Ｃ１７１３（０．４３ｇ、８４％）をオフホワイトの固体として得た。
【０２２３】
同様の方法で、所望のエナンチオマーＣＳ１７１４を合成した。
【０２２４】
ＣＳ１７１３の分析データ
【表３】
2006503920.tif 000017
【０２２５】
ＣＳ１７１４の分析データ
【表４】
2006503920.tif 000018
【０２２６】
実施例７
ＣＳ１８１４の調製
マグネティック撹拌棒を備えた１０ｍＬのフラスコに、ＣＳ１６６５／２（１２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ＣＳ１７１０／１（１２０ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）および塩酸の入ったジオキサン（５ｍｏｌ／Ｌ、５ｍｌ）を充填した。その懸濁液を１時間撹拌し、減圧下で還元し、残基を再び塩酸の入ったジオキサン（５ｍｏｌ／Ｌ、１ｍｌ）に取り上げた。その懸濁液をさらに１時間撹拌し、減圧下で還元し、ＣＳ１８１４（２４０ｍｇ量）をオフホワイトの固体として得た。その固体をメタノール（１０ｍＬ、均質溶液）に溶解し、２０ｍＬの丸底フラスコに移し、そのフラスコをさらに５ｍＬのメタノールで洗浄し、上記溶液と混合し（合計量約１５ｍＬ、均質溶液）、減圧下で還元し、ＣＳ１８１４（２４０ｍｇ量）をオフホワイトの固体として得た。その固体を高真空化で乾燥させた。この物質の５０ｍｇを取り出し、メタノール（１０ｍｌ−）中に溶解させ、続いて、旋光性を測定した。後にその溶液を２０ｍＬのフラスコ（均質溶液）に移し、減圧下で溶媒を除去した。
【０２２７】
ＣＳ１８１４の分析データ
【表５】
2006503920.tif 000019
【０２２８】
実施例８
ＣＳ１８１４および参照化合物の生物学的試験
ＣＳ１８１４および種々の参照化合物の生物学的試験の結果を図３２〜４０および５９に示す。図５９のデータは、ＣＳ１８１４は、ノルエピネフリン輸送体の阻害についてはＩＣ５０＝０．２２μＭ、セロトニン輸送体の阻害についてはＩＣ５０＝１２．７ｎＭであることを示している。ＣＳ１８１４の結合定数は、ノルエピネフリン輸送体についてはＫｉ＝０．２１８μＭ、セロトニン輸送体については、Ｋｉ＝６．７３ｎＭである。
【０２２９】
本研究において用いた方法は、信頼性および再生性を最大化するために、科学文献から採用した。参照は、各アッセイのインテグラルパートとして行い、得られた結果の有効性を確認した。アッセイは、下記に示した条件下で行った。各アッセイの文献の符号については、下記にまとめている。本明細書においてそれを引用によって援用する。
【０２３０】
示されている場合、ＩＣ５０値は、Data Analysis ToolboXTM （MDL Information Systems、San Leandro、CA、USA）を用いた、非線形の少なくとも２乗回帰分析によって測定した。阻害定数（Ｋｉ）が示されている場合、Ｋｉ値は、試験された化合物の観察されたＩＣ５０、アッセイにおいて採用した放射性リガンドの濃度、およびリガンドのＫｄのヒストリカル値（MDS
Pharma Servicesにおいて実験によって取得）を用いて、ChengとPrusoffの式（Cheng, Y., Prusoff, W.H., Biochem. Pharmacol.
22:3099−3108, 1973）を使って計算したものである。示されている場合、競合する結合曲線の傾斜を定義するＨｉｌｌ係数（ｎＨ）は、Data Analysis Toolbox（登録商標）を用いて計算した。Ｈｉｌｌ係数が１．０と有意に異なる場合、結合のズレは、単一の結合部位を持つ質量作用の法則に従わないことを示唆するかもしれない。ＩＣ５０、Ｋｉおよび／またはｎＨのデータが、Standard Error of the Mean （ＳＥＭ）なしで示されている場合、データは、量的に不十分であり、示された値（Ｋｉ、ＩＣ５０、ｎＨ）の解釈には注意が必要である。
【０２３１】
方法：
１１８０５０  ＣＹＰ４５０、１Ａ２
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：５μＭの３−シアノ−７−エトキシクマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：３０分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３２】
１１８０７０  ＣＹＰ４５０、２Ｃ１９
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：２５μＭの３−シアノ−７−エトキシクマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：４５分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３３】
１１８０６０  ＣＹＰ４５０、２Ｃ９
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：２５μＭの３−シアノ−７−エトキシクマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：４５分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３４】
１１８０８０  ＣＹＰ４５０、２Ｄ６
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：５０μＭの３−シアノ−７−エトキシクマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：４５分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：３−シアノ−７−ヒドロキシクマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３５】
１１８０９０  ＣＹＰ４５０、３Ａ４
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：５０μＭの７−ベンジルオキシ−４−（トリフルオロメチル）−クマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：３０分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：７−ヒドロキシ−４−（トリフルオロメチル）−クマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３６】
２００５１０  アデノシンＡ１
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：１ｎＭの[３Ｈ]ＤＰＣＰＸ
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＮａＣｌ
非特異的リガンド：１００μＭ  Ｒ（−）−ＰＩＡ
Ｋｄ：１．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２．７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３７】
２００６１０  アデノシンＡ２Ａ
起源：ヒト組換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．０５μＭの[３Ｈ]ＣＧ５−２１６８０
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ、２Ｕ／ｍＬのアデノシンデアミナーゼ
非特異的リガンド：５０μＭのＮＥＣＡ
Ｋｄ：０．０６４μＭ*
Ｂｍａｘ：７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３８】
２０３１００  アドレナリン作動薬α１Ａ
起源：Wistarラット顎下腺
リガンド：０．２５ｎＭの[３Ｈ]プラゾシン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのフェントラミン
Ｋｄ：０．１７ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．１８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２３９】
２０３２００  アドレナリン作動薬α１Ｂ
起源：Wistarラット肝臓
リガンド：０．２５ｎＭの[３Ｈ]プラゾシン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのフェントラミン
Ｋｄ：０．３１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．１８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４０】
２０３４００  アドレナリン作動薬α１Ｄ
起源：ヒト組換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．６ｎＭの[３Ｈ]プラゾシン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸
非特異的リガンド：１０μＭのフェントラミン
Ｋｄ：０．５８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．１７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４１】
２０３６２０  アドレナリン作動薬α２Ａ
起源：ヒト組換え昆虫Ｓｆ９細胞
リガンド：１ｎＭの[３Ｈ]ＭＫ−９１２
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１２．５ｍＭのＭｇＣｌ２、２ｍＭのＥＤＴＡ
非特異的リガンド：１０μＭのＷＢ−４１０１
Ｋｄ：０．６ｎＭ*
Ｂｍａｘ：４．６ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４２】
２０３７１０  アドレナリン作動薬α２Ｂ
起源：ヒト組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：２．５ｎＭの[３Ｈ]ラウオイシン（Rauwoiscine）
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、１ｍＭのＥＤＴＡ、１２．５ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、０．２％ＢＳＡ、２５℃
非特異的リガンド：１０μＭのプラゾシン
Ｋｄ：２．１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４３】
２０４０１０  アドレナリン作動薬β１
起源：ヒト組換えＲｅｘ１６細胞
リガンド：０．０３ｎＭの[１２５Ｉ]シアノピンドロール
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、５ｍＭのＥＤＴＡ、１．５ｍＭのＣａＣｌ２、１２０ｍＭのＮａＣｌ、１．４ｍＭのアスコルビン酸、１０ｍｇ／ＬのＢ５Ａ，ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１００μＭの５（−）−プロプラノール
Ｋｄ：０．０４１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．０７２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４４】
２０４１１０  アドレナリン作動薬β２
起源：ヒト組換えＣＨＯ−ＮＢＲ１細胞
リガンド：０．２ｎＭの[３Ｈ]ＣＧＰ−１２１７７
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、５．０ｍＭのＭｇＣｌ２、１２０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭの１Ｃｌ−１１８５５１
Ｋｄ：０．４４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．４３７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４５】
２１２５００  ブラジキニンＢ１
起源：ヒトＨｓ７２９細胞
リガンド：２．５ｎＭの[３Ｈ]（Ｄｅｓ−Ａｒｇ１０）−カリジン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１２５ｍＭのＮ−メチル−Ｄグルカミン、５ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭの１，１０−フェナントロリン、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭの（Ｄｅｓ−Ａｒｇ９−Ｌｅｕ８）−ブラジキニン
Ｋｄ：０．５ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．０５９ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４６】
２１２６１０  ブラジキニンＢ２
起源：ヒト組み換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：０．２ｎＭの[３Ｈ]ブラジキニン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：２４ｍＭのＴＥＳ−ＮＨ４ＯＨ、ｐＨ６．８、１ｍＭの１，１０−フェナントロリン、０．３％ＢＳＡ
非特異的リガンド：５μＭのブラジキニン
Ｋｄ：０．２９ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４７】
２１４５１０  カルシウムチャネルＬ型、ベンゾチアゼピン
起源：Wistarラット脳
リガンド：２ｎＭの[３Ｈ]ジルチアゼム
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４、２５℃
非特異的リガンド：１０μＭのジルチアゼム
Ｋｄ：０．０１６μＭ*
Ｂｍａｘ：０．２１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７３％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４８】
２１４６００  カルシウムチャネルＬ型、ジヒドロピロリジン
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：０．１ｎＭの[３Ｈ]ニトレンジピン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．７、２５℃
非特異的リガンド：１μＭのニトレンジピン
Ｋｄ：０．１８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．２３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９１％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２４９】
２１６０００  カルシウムチャネルＮ型
起源：Wistarラット前頭葉
リガンド：１０ｐＭの[１２５Ｈ]ω−コノトキシン  ＧＶＩＡ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／４℃
インキュベーション緩衝液：２０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、０．１％ＢＳＡ
非特異的リガンド：０．１μＭのω−コノトキシン  ＧＶＩＡ
Ｋｄ：０．０５１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．８８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９６％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５０】
２１９５００  ドーパミンＤ１
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：１．４ｎＭの[３Ｈ]ＳＣＨ−２３３９０
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／３７℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．４ｍＭのアスコルビン酸、０．００１％ＢＳＡ
非特異的リガンド：１０μＭの（+）−ブタクラモール
Ｋｄ：１．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．６３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５１】
２１９５００  ドーパミンＤ２Ｌ
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．１６ｎＭのスピペロン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．４ｍＭのアスコルビン酸、０．００１％ＢＳＡ
非特異的リガンド：１０μＭのハロペリドール
Ｋｄ：０．０８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．４８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５２】
２１９８００  ドーパミンＤ３
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．７ｎＭのスピペロン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／３７℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．４ｍＭのアスコルビン酸、０．００１％ＢＳＡ
非特異的リガンド：２５μＭのＳ（−）−スルピリド
Ｋｄ：０．３６ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５３】
２１９８００  ドーパミンＤ４．２
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．５ｎＭの[３Ｈ]スピペロン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１．４ｍＭのアスコルビン酸、０．００１％ＢＳＡ
非特異的リガンド：１０μＭのハロペリドール
Ｋｄ：０．２７ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５４】
２２４０１０  エンドセリンＥＴＡ
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．０３ｎＭの[１２５Ｉ]エンドセリン−１
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／３７℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、０．５ｍＭのＣａＣｌ２、０．０５％のトウィーン−２０、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ
非特異的リガンド：０．１μＭのエンドセリン−１
Ｋｄ：０．０４８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．３５ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５５】
２２４１１０  エンドセリンＥＴＢ
起源：ヒト組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：０．１ｎＭの[１２５Ｉ]エンドセリン−１
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１ｍＭのＣａＣｌ２、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．５％のＢＳＡ、ｐＨ７．４  （プロテアーゼなし）
非特異的リガンド：０．１μＭのエンドセリン−１
Ｋｄ：０．０８５ｎＭ*
Ｂｍａｘ：４．３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５６】
２２５５００  上皮成長因子（ＥＧＦ）
起源：ヒトＡ４３１細胞
リガンド：０．０５ｎＭの[１２５Ｉ] 上皮成長因子（ＥＧＦ）（ネズミ）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１３８ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、ｐＨ７．７
非特異的リガンド：１０ｎＭの上皮成長因子（ＥＧＦ）（ヒト）
Ｋｄ１：０．０３２ｎＭ*
Ｋｄ２：０．０３ｎＭ*
Ｂｍａｘ１：１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
Ｂｍａｘ２：４．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５７】
２２６０１０  エストロゲンＥＲα
起源：ヒト組換え昆虫Ｓｆ９細胞
リガンド：０．５ｎＭの[３Ｈ]エストラジオール
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：１０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．５、１０％グリセロール、１ｍＭのＤＴＴ、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ
非特異的リガンド：１μＭのジエチルスチルベステロール
Ｋｄ：０．２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１４００ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５８】
２２６５００  ＧＡＢＡＡ、アゴニスト部位
起源：Wistarラット脳（マイナス、小脳）
リガンド：１ｎＭの[３Ｈ]ムスシモール
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：１０分／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：０．１μＭのムスシモール
Ｋｄ：３．８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２５９】
２２６６００  ＧＡＢＡＡ、ベンゾジアゼピン、中枢
起源：Wistarラット脳（マイナス、小脳）
リガンド：１ｎＭの[３Ｈ] フルニトラゼパム
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＮａ−Ｋホスフェート、ｐＨ
非特異的リガンド：１０μＭのジアゼパム
Ｋｄ１：４．４ｎＭ*
Ｋｄ２：０．３ｎＭ*
Ｂｍａｘ１：１．２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
Ｂｍａｘ２：４．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９１％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６０】
２２８５１０  ＧＡＢＡＢ、非選択的
起源：Wistarラット脳
リガンド：０．６ｎＭの[３Ｈ]ＣＧＰ−５４６２６
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．４、２５℃
非特異的リガンド：１００μＭのＣＧＰ−５４６２６
Ｋｄ：２．３ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６１】
２３２０１０  グルココルチコイド
起源：ヒトＨｅＬａ５３細胞
リガンド：６ｎＭの[３Ｈ] デキサメタゾン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：ＲＰＭＩ１６４０、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２
非特異的リガンド：２０μＭのデキサメタゾン
Ｋｄ：５ｎＭ*
Ｂｍａｘ：６１０００Ｒ／細胞*
特異的結合：７５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６２】
２３２７００  グルタメート、カイニン酸塩（Kainate）
起源：Wistarラット脳（マイナス小脳）
リガンド：５ｎＭの[３Ｈ]カイニン酸
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０００μＭのＬ−グルタメート
Ｋｄ：０．０１２μＭ*
Ｂｍａｘ：０．３５ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６３】
２３２８１０  グルタメート、ＮＭＤＡ、アゴニズム
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：２ｎＭの[３Ｈ]ＣＧＰ−３９６５３
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２０分／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０００μＭのＬ−グルタメート
Ｋｄ：０．０１９μＭ*
Ｂｍａｘ：２．３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６４】
２３２９１０  グルタメート、ＮＭＤＡ、グリシン
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：０．３３ｎＭの[３Ｈ]ＭＤＬ−１０５５１９
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．７
非特異的リガンド：１０μＭのＭＤＬ−１０５５１９
Ｋｄ：６ｎＭ*
Ｂｍａｘ：３．７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６５】
２３３０００  グルタメート、ＮＭＤＡ、フェンシクリジン
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：４ｎＭの[３Ｈ]ＴＣＰ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：４５分／２５℃
インキュベーション緩衝液：１０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．７
非特異的リガンド：１μＭのジゾルシピン（Dizolcipine）（ＭＫ−８０１） 
Ｋｄ：８．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．７８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９４％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６６】
２３９６１０  ヒスタミンＨ１
起源：ヒト組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：１．２ｎＭ[３Ｈ]ピリラミン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、２ｍＭのＭｇＣｌ２、１００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのスクロース
非特異的リガンド：１μＭのピリラミン
Ｋｄ：１．１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：６．７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９４％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６７】
２３９７１０  ヒスタミンＨ２
起源：ヒト組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：０．１ｎＭ[１２５Ｉ]アミノポテンチジン（Aminopotentidine）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＫＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：３μＭのチオチジン
Ｋｄ：０．４５ｎＭ*
Ｂｍａｘ：６．９ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６８】
２３９８１０  ヒスタミンＨ３
起源：ヒト組換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：３ｎＭ[３Ｈ]Ｒ（−）−α−メチルヒスタミン（ＲＡＭＨ）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．０４％のＢＳＡ
非特異的リガンド：１μＭのＲ（−）−α−メチルヒスタミン（ＲＡＭＨ）
Ｋｄ：２．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：４．２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２６９】
２４１０００  イミダゾリン、Ｉ２、中枢
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：２ｎＭの[３Ｈ] イダゾキサン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．４、２５℃
非特異的リガンド：１μＭのイダゾキサン
Ｋｄ：４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．１４ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７０】
２４３５１０  非選択性
起源：マウス３Ｔ３細胞
リガンド：１０ｐＭの[１２５Ｉ]インターロイキン−Ｉα（ＩＬ−１α）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／３７℃
インキュベーション緩衝液：ＲＰＭＩ１６４０、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％アジ化ナトリウム、１％のＢＳＡ、ｐＨ７．２
非特異的リガンド：０．０３μＭのインターロイキン−Ｉα（ＩＬ−１α）
Ｋｄ：６ｐＭ*
Ｂｍａｘ：８．３ｆｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７１】
２５０６００  ロイコトリエンＬＴＤ４
起源：Duncan Hartley 由来モルモット肺
リガンド：０．２ｎＭの[３Ｈ] ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．０１％のＢＳＡ、５ｍＭのＣａＣｌ２、５ｍＭのＭｇＣｌ２、１００μｇ／ｍＬのバシトラシン、１ｍＭのベンズアミジン、０．１ｍＭのフェニルメチルスルホニルフロリド
非特異的リガンド：０．１μＭのロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４）
Ｋｄ：０．２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．２４ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７２】
２５２６００  ムスカリン作動性Ｍ１
起源：ヒト組換え昆虫Ｓｆ９細胞
リガンド：０．２９ｎＭの[３Ｈ] メトスコポラミン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ
非特異的リガンド：１μＭのアトロピン
Ｋｄ：０．０９２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７３】
２５２７００  ムスカリン作動性Ｍ２
起源：ヒト組換え昆虫Ｓｆ９細胞
リガンド：０．２９ｎＭの[３Ｈ] メトスコポラミン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ
非特異的リガンド：１μＭのアトロピン
Ｋｄ：０．１６ｎＭ*
Ｂｍａｘ：４．９ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９６％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７４】
２５２８００  ムスカリン作動性Ｍ３
起源：ヒト組換え昆虫Ｓｆ９細胞
リガンド：０．２９ｎＭの[３Ｈ] メトスコポラミン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＥＤＴＡ
非特異的リガンド：１μＭのアトロピン
Ｋｄ：０．０７８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：３．２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９６％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７５】
２５７０００  ニューロペプチドＹ１
起源：ヒトＳＫ−Ｎ−ＭＣ細胞
リガンド：０．０１３ｎＭの[１２５Ｉ]ペプチドＹＹ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：４５分／２５℃
インキュベーション緩衝液：ＨＢＳＳ、２ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、１ｍＭのＭｇＣｌ２、１ｍＭのＣａＣｌ２
非特異的リガンド：０．１μＭのニューロペプチドＹ（ヒト、ラット）
Ｋｄ：０．６２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：５８００Ｒ／細胞受容体／細胞*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７６】
２５７１１０  ニューロペプチドＹ２
起源：ヒトＫＡＮ−ＴＳ神経芽腫細胞
リガンド：２０ｐＭの[１２５Ｉ]ペプチドＹＹ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／３７℃
インキュベーション緩衝液：２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、２．５ｍＭのＣａＣｌ２、１ｍＭのＭｇＣｌ２、０．１％のバシトラシン、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１μＭのニューロペプチドＹ（１３−３６）（ブタ）
Ｋｄ：０．０１２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．５ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７７】
２５８５９０  ニコチン性アセチルコリン
起源：ヒトＩＭＲ−３２細胞
リガンド：０．１ｎＭの[１２５Ｉ]エピバチジン（Epibatidine）
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：３００μＭの（−）−ニコチン
Ｋｄ：０．２２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．４６ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９７％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７８】
２６０１１０  オピエート５（ＯＰ１、ＤＯＰ）
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．９ｎＭのナルトリンドール
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、５ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのナロキソン
Ｋｄ：０．４９ｎＭ*
Ｂｍａｘ：８．６ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２７９】
２６０２１０  オピエートκ（ＯＰ２、ＫＯＰ）
起源：ヒト組換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．６ｎＭの[３Ｈ] シプレノルフィン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのナロキソン
Ｋｄ：０．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８０】
２６０４１０  オピエートμ（ＯＰ３、ＭＯＰ）
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．６ｎＭの[３Ｈ] シプレノルフィン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのナロキソン
Ｋｄ：０．４１ｎＭ*
Ｂｍａｘ：３．８ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８１】
２６４５００  ホルボルエステル
起源：ＩＣＲマウス脳
リガンド：３ｎＭの[３Ｈ]ＰＤＢｕ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのＣａＣｌ２を含有する２０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、２５℃
非特異的リガンド：１μＭのＰＤＢｕ
Ｋｄ：８．７ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２６ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８２】
２６５０１０  血小板活性化因子（ＰＡＦ）
起源：ヒト血小板
リガンド：０．１２ｎＭの[３Ｈ]ＰＡＦ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、１００ｍＭのＫＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２５％のＢＳＡ（ｗ／ｖ）
非特異的リガンド：１μＭのＰＡＦ
Ｋｄ：０．１３ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１２０Ｒ／細胞*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８３】
２６５６００  カリウムチャネル[ＫＡＴＰ]
起源：シリアンハムスター膵臓ベータ細胞ＨＩＴ−Ｔ１５
リガンド：５ｎＭの[３Ｈ] グリベンクラミド
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのＭＯＰＳ、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１μＭのグリブリド
Ｋｄ：０．６４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８４】
２６８７００  プリン作動性Ｐ２Ｘ
起源：ニュージーランドアルビノラビット膀胱
リガンド：８ｎＭの[３Ｈ]α、β−メチレン−ＡＴＰ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１００μＭのβ、γ−メチレン−ＡＴＰ
Ｋｄ１：２．２ｎＭ*
Ｋｄ２：２．２μＭ*
Ｂｍａｘ１：２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
Ｂｍａｘ２：７９０ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８５】
２６８８１０  プリン作動性Ｐ２ｒ
起源：Wistarラット脳
リガンド：０．１ｎＭの[３５Ｓ]ＡＴＰ−αＳ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのＡＤＰ−βＳ
Ｋｄ：０．０１５μＭ*
Ｂｍａｘ：１６ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８７％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８６】
２７１１１０  セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）５−ＨＴ１Ａ
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：１．５ｎＭの[３Ｈ]８−ＯＨ−ＤＰＡＴ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、１０ｍＭのＭｇＳＯ４、０．５ｍＭのＥＤＴＡ、０．１％のアスコルビン酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのメテルゴリン
Ｋｄ：２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８７】
２７１９１０  セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）５−ＨＴ３
起源：ヒト組換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．６９ｎＭの[３Ｈ]ＧＲ−６５６３０
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．５、１ｍＭのＥＤＴＡ、５ｍＭのＭｇＣｌ２
非特異的リガンド：１０μＭのＭＤＬ−７２２２２
Ｋｄ：０．２ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８８】
２７８１１０  シグマσ１
起源：ヒトジャーカット（jurkat）細胞
リガンド：８ｎＭの[３Ｈ] ハロペリドール
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：４時間／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのＫ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４緩衝液、ｐＨ７．５
非特異的リガンド：１０μＭのハロペリドール
Ｋｄ：５．８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．７１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２８９】
２７８２００  シグマσ２
起源：Wistar ラット脳
リガンド：３ｎＭの[３Ｈ] イフェンプロジル
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／３７℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのイフェンプロジル
Ｋｄ：４．８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１．３ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９０】
２７９４５０  ナトリウムチャネル、部位１
起源：Wistar ラット脳
リガンド：２ｎＭの[３Ｈ] サキシトキシン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／４℃
インキュベーション緩衝液：（１）ホモゲナイズ緩衝液、１４０ｍＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．１、１ｍＭのＰＭＳＦ、（２）７５ｍＭのＨｅｐｅｓ／１４０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５、（３）アッセイ緩衝液、ホモゲナイズ緩衝液：緩衝液（２）＝１：４
非特異的リガンド：１０μＭのテトロドトキシン
Ｋｄ：１．４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：３．７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９１】
２７９５１０  ナトリウムチャネル、部位２
起源：Wistar ラット脳
リガンド：５ｎＭの[３Ｈ] バトラコトキシニンＡ ２０−α−ベンゾエート
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：６０分／３７℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、ｐＨ７．４、２５℃、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１３０ｍＭのコリン−Ｃｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、０．８ｍＭのＭｇＳＯ４、７Ｈ２Ｏ（またはＭｇＣｌ２）、５．５ｍＭのグルコース、４０μｇ／ｍｌのＬｑＴｘ
非特異的リガンド：１００μＭのベラトリジン
Ｋｄ：０．０５２μＭ*
Ｂｍａｘ：０．７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７７％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９２】
２５５５１０  タヒキニンＮＫ１
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．２５ｎＭの[３Ｈ] ＳＲ−１４０３３３
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１ｍＭのＭｎＣｌ２，０．０１％のＢＳＡ
非特異的リガンド：２μＭのＬ−７０３、６０６
Ｋｄ：０．３ｎＭ*
Ｂｍａｘ：１０ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９３】
２８５０１０  テストステロン
起源：ラット組換え大腸菌
リガンド：１．５ｎＭの[３Ｈ] ミボレロン
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：４時間／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸（ｐＨ７．５）、０．８ＭのＮａＣｌ、１０％のグリセロール、２ｍＭのジチオトレイトール、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、２％エタノール
非特異的リガンド：１０μＭのミボレロン
Ｋｄ：３ｎＭ*
Ｂｍａｘ：９３０ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９４】
２２０３２０  テストステロン、ドーパミン（ＤＡＴ）
起源：ヒト組換えＣＨＯ細胞
リガンド：０．１５ｎＭの[１２５Ｉ]ＲＴＩ−５５
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトリス塩酸、１μＭのロイペプチン、１０μＭのＰＭ５Ｆ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのノミフェンシン
Ｋｄ：０．５８ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．０４７ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９５】
２２４４１０  テストステロン、ノルエピネフリン（ＮＥＴ）
起源：ヒト組換えＭＤＣＫ細胞
リガンド：０．２ｎＭの[１２５Ｉ]ＲＴＩ−５５
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、１μＭのロイペプチン、１０μＭのＰＭ５Ｆ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのデシプラミン
Ｋｄ：０．０２４ｎＭ*
Ｂｍａｘ：２．５ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０２９６】
２７４０２０  テストステロン、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）（ＳＥＲＴ）
起源：ヒト組換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．１５ｎＭの[１２５Ｉ]ＲＴＩ−５５
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトリス塩酸、１μＭのロイペプチン、１０μＭのＰＭ５Ｆ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのイミプラミン
Ｋｄ：０．１７ｎＭ*
Ｂｍａｘ：０．４１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値のｆ５０％
【０２９７】
２２６４００  テストステロン、ＧＡＢＡ
起源：Wistarラット大脳皮質
リガンド：６ｎＭの[３Ｈ]ＧＡＢＡ
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：２０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：１０ｍＭのＮａ−ＨＥＰＥＳ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、４ｍＭのＣａアセテート、１０μＭのイソグバシン、１０μＭの（−）バクロフェン、ｐＨ７．５
非特異的リガンド：１０μＭのＮＯ−７１１
Ｋｄ：０．３μＭ*
Ｂｍａｘ：６０ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：８０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
＊は、ヒストリカル値を示す。
【０２９８】
文献の引用
カタログ番号、引用文献
118050.  Crespi, C. L.,
Miller, V. P. and Penman, B.W. (1997)、  Microtiter plate assays for
inhibition of human, drug-metabolizing cytochromes P450. Anal Biochem 248(l):
188 - 190.Gentest Technical
Bulletin (Version 4.2: Revised 27 September 2000) A high throughput method for
measuring cytochrome P450 inhibition. Gentest Technical Bulletin
(Version 4-2. Revised 27 September 2000).118060.  Crespi, C. L., Miller, V. P. and
Penman, B.W. (1997) Microtiter plate assays for inhibition of human,
drug-metabolizing cytochromes P450. Anal Biochem 248(1):
188-190.Gentest Technical Bulletin (Version 4.2: Revised 27 September 2000)
A high throughput method for measuring cytochrome P450 inhibition. Gentest
Technical Bulletin (Version 4-2: Revised 27 September
2000).118070.  Crespi, C. L.,
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human, drug-metabolizing cytochromes P450. Anal Biochem 248(1):
188 - 190.Gentest Technical Bulletin (Version 4.2: Revised 27 September
2000)
A high throughput method for measuring cytochrome P450 inhibition. Gentest
Technical Bulletin (Version 4-2: Revised 27 September
2000).118080.  Crespi, C. L.,
Miller, V. P. and Penman, B.W. (1997) Microtiter plate assays for inhibition of
human, drug-metabolizing cytochromes P450. Anal Biochem 248(1):
188 - 190.Gentest Technical Bulletin (Version 4.2: Revised 27 September 2000) A
high throughput method for measuring cytochrome P450 inhibition. Gentest
Technical Bulletin (Version 4-2:  Revised 27 September 2000).118090.  Crespi, C. L., Miller, V. P. and Penman, B.W. (1997)
Microtiter plate assays for inhibition of human, drug-metabolizing cytochromes
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【０２９９】
実施例９
ＣＳ１８１４、ＣＳ１７１３およびＣＳ１７１４の生物学的試験
ＣＳ１８１４、ＣＳ１７１３、ＣＳ１７１４および種々の参照化合物の生物学的試験の結果を図４１〜５８および６０〜６２に示す。方法は、信頼性および再生性を最大化するために、科学文献から採用した。参照は、各アッセイのインテグラルパートとして行い、得られた結果の有効性を確認した。アッセイは、下記に示した条件下で行った。各アッセイの文献の符号については、下記にまとめている。本明細書においてそれを引用によって援用する。
【０３００】
示されている場合、ＩＣ５０値は、Data Analysis ToolboXTM （MDL Information Systems、San Leandro、CA、USA）を用いた、非線形の少なくとも２乗回帰分析によって測定した。阻害定数（Ｋｉ）が示されている場合、Ｋｉ値は、試験された化合物の観察されたＩＣ５０、アッセイにおいて採用した放射性リガンドの濃度、およびリガンドのＫＤのヒストリカル値（MDS
Pharma Servicesにおいて実験によって取得）を用いて、ChengとPrusoffの式（Cheng, Y., Prusoff, W.H., Biochem. Pharmacol.
22:3099−3108, 1973）を使って計算したものである。示されている場合、競合する結合曲線の傾斜を定義するＨｉｌｌ係数（ｎＨ）は、Data Analysis Toolbox（登録商標）を用いて計算した。Ｈｉｌｌ係数が１．０と有意に異なる場合、結合のズレは、単一の結合部位を持つ質量作用の法則に従わないことを示唆するかもしれない。ＩＣ５０、Ｋｉおよび／またはｎＨのデータが、Standard Error of the Mean （ＳＥＭ）なしで示されている場合、データは、量的に不十分であり、示された値（Ｋｉ、ＩＣ５０、ｎＨ）の解釈には注意が必要である。
【０３０１】
ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）およびＣＳ１８１４（バイアル番号１）を、細胞セロトニンおよびノルエピネフリン再摂取について評価した。さらに、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）を、ＣＹＰ４５０ ３Ａ４を、１０μＭの開始濃度での阻害について、種々の放射線リガンド結合アッセイにおいて評価した。図６０に示されているように、放射性リガンドのセロトニン輸送体結合部位からのずれについて（バイアル番号２：Ｋｉ＝３．８８ｎＭ、バイアル番号３：Ｋｉ＝８．１５ｎＭ）、およびノルエピネフリン輸送体結合部位からのズレについて（バイアル番号２：Ｋｉ＝０．１１２μＭ、バイアル番号３：Ｋｉ＝１．６８μＭ）、有意な活性（５０％以上）が観察された。
【０３０２】
図６１に示されているように、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）は、セロトニンおよびノルエピネフリンの摂取（ノルエピネフリンにおいては、ＩＣ５０＝２８．６ｎＭ、セロトニンにおいて、ＩＣ５０＝２１．７ｎＭ）がほぼ等電位である。興味深いことに、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）は、セロトニン摂取よりノルエピネフリン摂取をより強く阻害する（ノルエピネフリンにおいては、ＩＣ５０＝１０．３ｎＭ、セロトニンにおいては、ＩＣ５０＝２２ｎＭ）。対照的に、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）は、ノルエピネフリン摂取より、セロトニン摂取をより強く阻害する（ノルエピネフリンにおいては、ＩＣ５０＝８８．５ｎＭ、セロトニンにおいては、ＩＣ５０＝４０．３ｎＭ）。ＣＳ１７１３（バイアル番号２）がノルエピネフリン摂取のより強い阻害剤であるという事実は、ノルエピネフリン摂取に関連する疾患を治療するための優れた治療薬を提供する。さらに、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）は、セロトニン摂取の選択的阻害を治療するために有用であろう。
【０３０３】
重要なことに、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）、またはＣＳ１８１４（バイアル番号１）は、１０μＭにおいて、細胞毒性は認められなかった。さらに、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）は、ノルエピネフリン輸送体およびセロトニン輸送体の選択的阻害剤である。図３２および３３に示すように、通常ＣＳ１８１４が他の受容体に結合しないという事実は、患者に当該化合物を投与することに関する、否定的な副作用のリスクを実質的に減少させる。したがって、ＣＳ１７１３およびＣＳ１７１４は、副作用を有害な副作用を持たない。
【０３０４】
方法：
１１８０９０  ＣＹＰ４５０、３Ａ４
起源：ヒト組換えＳｆ９昆虫細胞
基質剤：５０μＭの７−ベンジルオキシ−４−（トリフルオロメチル）−クマリン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
プレインキュベーション時間／温度：なし
インキュベーション時間／温度：３０分／３７℃
インキュベーション緩衝液：７５ｍＭのリン酸カリウム緩衝液、ｐＨ７．５
定量方法：７−ヒドロキシ−４−（トリフルオロメチル）−クマリンの分光蛍光法による定量化
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０３０５】
２１２６１０  ブラジキニンＢ２
起源：ヒト組み換えＣＨＯ−Ｋ１細胞
リガンド：０．２ｎＭの[３Ｈ]ブラジキニン
賦形剤：０．１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：９０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：２４ｍＭのＴＥＳ−ＮＨ４ＯＨ、ｐＨ６．８、１ｍＭの１，１０−フェナントロリン、０．３％ＢＳＡ
非特異的リガンド：５μＭのブラジキニン
ＫＤ：０．２９ｎＭ*
ＢＭＡＸ：２ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９０％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０３０６】
２１４５１０  カルシウムチャネルＬ型、ベンゾチアゼピン
起源：Wistarラット脳
リガンド：２ｎＭの[３Ｈ]ジルチアゼム
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、０．１％ＢＳＡ、ｐＨ７．４、２５℃
非特異的リガンド：１０μＭのジルチアゼム
ＫＤ：０．０１６μＭ*
ＢＭＡＸ：０．２１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７３％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０３０７】
２０４４１０  輸送体、ノルエピネフリン（ＮＥＴ）
起源：ヒト組み換えＭＤＣＫ細胞
リガンド：０．２ｎＭの[１２５Ｉ]ＲＴＩ−５５
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：５０ｍＭのトリス塩酸、１００ｍＭのＮａＣｌ、１μＭのロイペプチン、１０μＭのＰＭＳＦ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのデシプラミン
ＫＤ：０．０２４μＭ*
ＢＭＡＸ：２．５ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：７５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値の５０％以上
【０３０８】
２７４０２０  輸送体、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）（ＳＥＲＴ）
起源：ヒト組み換えＨＥＫ−２９３細胞
リガンド：０．１５ｎＭの[１２５Ｉ]ＲＴＩ−５５
賦形剤：１％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３時間／４℃
インキュベーション緩衝液：１００ｍＭのＮａＣｌ、５０ｍＭのトリス塩酸、１μＭのロイペプチン、１０μＭのＰＭＳＦ、ｐＨ７．４
非特異的リガンド：１０μＭのイミプラミン
ＫＤ：０．１７ｎＭ*
ＢＭＡＸ：０．４１ｐｍｏｌｅ/ｍｇのタンパク質*
特異的結合：９５％*
定量方法：放射リガンド結合
有意性評価基準：刺激または阻害の最大値のｆ５０％
【０３０９】
３０２１００  細胞毒性、ノルエピネフリン摂取
標的：ヒトＭＤＣＫ細胞イヌ腎臓
賦形剤：０．４％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのトリス塩酸、７．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、１ｍＭのアスコルビン酸、ｐＨ７．１
定量方法：Alamar Blue の分光蛍光法による定量化
有意性評価基準−Ａｇ：該当なし
有意性評価基準−Ａｎｔ：蛍光強度の、賦形剤対照に対する５０％以上の減少
【０３１０】
３６４１００  細胞毒性、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）摂取
標的：ヒトＨＥＫ−２９３細胞ヒト胎児性腎臓
賦形剤：０．４％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：３０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのトリス塩酸、７．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、１ｍＭのアスコルビン酸、ｐＨ７．１
定量方法：Alamar Blue の分光蛍光法による定量化
有意性評価基準−Ａｇ：該当なし
有意性評価基準−Ａｎｔ：蛍光強度の、賦形剤対照に対する５０％以上の減少
【０３１１】
３０２０００  摂取、ノルエピネフリン
標的：ヒトＭＤＣＫ細胞イヌ腎臓
賦形剤：０．４％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：１０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのトリス塩酸、７．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、１ｍＭのアスコルビン酸、ｐＨ７．１
定量方法：[３Ｈ]ノルエピネフリンの定量化
有意性評価基準−Ａｇ：該当なし
有意性評価基準−Ａｎｔ：デシプラミン反応に対する、[３Ｈ]ノルエピネフリン摂取の５０％以上の阻害
【０３１２】
３６４０００  摂取、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）
標的：ヒトＨＥＫ−２９３細胞ヒト胎児性腎臓
賦形剤：０．４％ＤＭＳＯ
インキュベーション時間／温度：１０分／２５℃
インキュベーション緩衝液：５ｍＭのトリス塩酸、７．５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１２０ｍＭのＮａＣｌ、５．４ｍＭのＫＣｌ、１．２ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、５ｍＭのグルコース、１ｍＭのアスコルビン酸、ｐＨ７．１
定量方法：[３Ｈ]セロトニン摂取の定量
有意性評価基準−Ａｇ：該当なし
有意性評価基準−Ａｎｔ：フルキセチン（fluxetine）反応に対する[３Ｈ]セロトニン摂取の５０％以上の阻害
【０３１３】
文献の引用
（カタログ番号、引用）
118090. 
Crespi, C. L., Miller, V. P and Penman, B.W. (1997) Microtiter plate
assays for inhibition of human, drug-metabolizing cytochromes P450.  Anal Biochem 248(1):
188-190.
Gentest Technical Bulletin (Version 4.2:  Revised 27 September 2000) A high
throughput method for measuring cytochrome P450 inhibition.  Gentest Technical Bulletin
(Version 4.2)  Revised 27 September
2000).
204410.  Galli,
A., DeFelice, L., Duke, B.-J., Moore, K. Blakely, R. (1995) Sodium dependent
norepinephrine induced currents in norephinephrine transporter transfected
HEK293 cells blocked by cocaine and antidepressants.  J. Exp. Biol. 198:2197-2212.
212610. 
Eggerickx, D., Raspe, E. Bertrand, D., Vassart, G., Parmentier, M.
(1992) Molecular cloning, functional expression and pharmacological
characterization of a human bradykinin B2 receptor gene. Biochem Biophys Res
Commun 187 (3): 1306 - 1313.
214510. 
Schoemaker, H. and Langer, S.Z. (1985) [3H]Diltiazem binding to calcium
channel antagonist recognition sites in rat cerebral cortex.  Eur. J. Pharmacol. 111:273-277.
274020.  Gu,
H., Wall, S., Rudnick, G. (1994) Stable expression of biogenic amine
transporters reveals differences in inhibitor sensitivity, kinetics, and ion
dependence.  J. Biol. Chem. 269(10):7124-7130.
302000.  Galli,
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norephinephrine-induced currents in
norepinephrine-transporter-transfected
HEK-293 cells blocked by cocaine and antidepressants.  J. Exp. Biol. 198:2197-2212.
302100.  Page,
B., Page, M. and Noel, C. (1993) A new fluorometric assay for cytotoxicity
measurements in vitro.  Ing. I
3:473-476, 1993.
364000.  Gu,
H., Wall, S., Rudnick, G. (1994) Stable expression of biogenic amine
transporter reveals differences in inhibitor sensitivity, kinetics, and ion
dependence.  J. Biol. Chem. 269(1):7124-7130.
364100.  Page,
B., Page, M. and Noel, C. (1993) A new fluorometric assay for cytotoxicity measurements
in vitro.  Int. J. Oncology 3:473-476,
1993.
【０３１４】
引用された更なる特許および文献
１．  米国特許第4,478,836号
２．  米国特許第5,034,541号
３．  米国特許第5,621,142号
４．  Moret, C. et al.  Neuropharmacology 1985,
24, 1211-1219.
５．  Bonnaud, B. et al. J. Med. Chem. 1987, 30, 318-325.
６．  Shuto, S. et al. J. Med. Chem. 1995, 38, 2964-2968.
７．  Viazzo, P. et al. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 4519-4522.
８．  Shuto, S. et al. Tetrahedron Lett. 1996, 37, 641-644.
９．  Shuto, S. et al. J. Med. Chem. 1996, 39, 4844-4852.
１０．  Shuto, S. et al. J. Med. Chem. 1998, 41, 3507-3514.
１１．  Deprez, D.
et al. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1998, 23, 166-171.
１２．  Puozzo, C.
et al. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1998, 23, 273-279.
１３．  Puozzo C.
et al. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 1998, 23, 280-286.
１４．  Shuto, S. et al. Jpn. J. Pharmacol. 2001, 85, 207-213.
１５．  Doyle, M.P. et al. Adv. Synth. Catal. 2001, 343, 299-302.
１６．  Kazuta, Y. et al. Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 1777-1791.
１７．  Labat, L. et al. J. Chromatogr. B 2002, 773, 17-23.
１８．  Grard, S. et al. Electrophoresis 2000, 21, 3028-3034.
【０３１５】
引用による援用
本明細書において引用されている、すべての特許および文献を本明細書に引用によって援用する。
【０３１６】
均等物 
当業者なら、ルーチンの実験法を用いるだけで、ここに記載された本発明の特定の実施形態に対して多くの均等物を認識または確認することになろう。そのような均等物は、以下の請求項に包含されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０３１７】
【図１】図１は、ｐ−ヒドロキシ−ミルナシプランの個別のエナンチオマーを調製するために用いられる合成経路を示す図である。
【図２】図２は、ラクトンＣＳ１５９０の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３】図３は、ラクトンＣＳ１５９０の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図４】図４は、アミドＣＳ１６０８の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図５】図５は、アミドＣＳ１６０８の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図６】図６は、ＣＳ１６２８の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図７】図７は、ＣＳ１６２８の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図８】図８は、ＣＳ１６４９の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図９】図９は、ＣＳ１６４９の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１０】図１０は、ＣＳ１６６５のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である（ＨＰＬＣ条件：１０％〜９５％アセトニトリルで８分以内；０．１％ＴＦＡを含む９５％ＬＭで２分、流速：２．０ｍＬ／分、Saule: Zorbax XDB-C8）。
【図１１】図１１は、ＣＳ１６６５のマススペクトルを示す図である。
【図１２】図１２は、ＣＳ１６６５の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１３】図１３は、ＣＳ１６６５の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１４】図１４は、ＣＳ１７１０のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である（ＨＰＬＣ条件：１０％〜９５％アセトニトリルで８分以内；０．１％ＴＦＡを含む９５％ＬＭで２分、流速：２．０ｍＬ／分、Saule: Zorbax XDB-C8）。
【図１５】図１５は、ＣＳ１７１０のマススペクトルを示す図である。
【図１６】図１６は、ＣＳ１７１０の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１７】図１７は、ＣＳ１７１０の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図１８】図１８は、ＣＳ１７１３のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である（ＨＰＬＣ条件：１０％〜９５％アセトニトリルで８分以内；０．１％ＴＦＡを含む９５％ＬＭで２分、流速：２．０ｍＬ／分、Saule: Zorbax XDB-C8）。
【図１９】図１９は、ＣＳ１７１３のマススペクトルを示す図である。
【図２０】図２０は、ＣＳ１７１３の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２１】図２１は、ＣＳ１７１３の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２２】図２２は、ＣＳ１７１４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である（ＨＰＬＣ条件：１０％〜９５％アセトニトリルで８分以内；０．１％ＴＦＡを含む９５％ＬＭで２分、流速：２．０ｍＬ／分、Saule: Zorbax XDB-C8）。
【図２３】図２３は、ＣＳ１７１４のマススペクトルを示す図である。
【図２４】図２４は、ＣＳ１７１４の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２５】図２５は、ＣＳ１７１４の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図２６】図２６は、ＣＳ１８１４のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である（ラセミ型ｐ−ヒドロキシ−ミルナシプランヒドロクロリド；ＨＰＬＣ条件：１０％〜９５％アセトニトリルで８分以内；０．１％ＴＦＡを含む９５％ＬＭで２分、流速：２．０ｍＬ／分、Saule: Zorbax XDB-C8）。
【図２７】図２７は、ＣＳ１８１４のＬＣ／ＭＳクロマトグラムを示す図である。
【図２８】図２８は、ＣＳ１８１４のＬＣ／ＭＳクロマトグラムからの選択されたピークのマススペクトルを示す図である。
【図２９】図２９は、ＣＳ１８１４のＬＣ/ＭＳクロマトグラムからのピークのマススペクトルを示す図である。
【図３０】図３０は、ＣＳ１８１４の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３１】図３１は、ＣＳ１８１４の１３Ｃ ＮＭＲスペクトルを示す図である。
【図３２】図３２は、ヒト（ｈｕｍ）およびラットの受容体を用いたアッセイにおけるＣＳ１８１４の生物学的活性データを示す図である。
【図３３】図３３は、ヒト（ｈｕｍ）、マウス、モルモット（ｇｐ）、シリアンハムスター（ｓｙｈ）およびラットの受容体を用いたアッセイにおけるＣＳ１８１４の生物学的活性データを示す図である。
【図３４】図３４は、ヒト（ｈｕｍ）およびラットの受容体を用いたアッセイにおけるＣＳ１８１４の生物学的活性データを示す図である。
【図３５】図３５は、ヒト（ｈｕｍ）受容体を用いたアッセイにおけるＣＳ１８１４の生物学的活性データを示す図である。
【図３６】図３６は、種々の参照化合物の生物学的活性データを示す図である。
【図３７】図３７は、種々の参照化合物の生物学的活性データを示す図である。
【図３８】図３８は、種々の参照化合物の生物学的活性データを示す図である。
【図３９】図３９は、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）によるノルエピネフリン（Norephinephrine）輸送体（ＮＥＴ）の％阻害を示すグラフである。
【図４０】図４０は、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）によるセロトニン輸送体（ＮＥＴ）の％阻害を示すグラフである。
【図４１】図４１は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の生物学的活性データを示す図である。
【図４２】図４２は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の生物学的活性データを示す図である。
【図４３】図４３は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の生物学的活性データを示す図である。
【図４４】図４４は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）およびＣＳ１８１４（バイアル番号１）の生物学的活性データを示す図である。
【図４５】図４５は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）、およびＣＳ１８１４（バイアル番号１）の生物学的活性データを示す図である。
【図４６】図４６は、ＣＳ１７１４（バイアル番号３）の生物学的活性データを示す図である。
【図４７】図４７は、ＣＳ１８１４（ＣＥＬ−１）およびデシプラミンによるノルエピネフリン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図４８】図４８は、ＣＳ１８１４（ＣＥＬ−１）およびフルオキセチンによるセロトニン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図４９】図４９は、ＣＳ１７１３（ＣＥＬ−３）およびデシプラミンによるノルエピネフリン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５０】図５０は、ＣＳ１７１３（ＣＥＬ−３）およびＧＢＲ−１２９０９によるセロトニン輸送体の％阻害を示すグラフである。
【図５１】図５１は、ＣＳ１７１３（ＣＥＬ−３）およびデシプラミンによるノルエピネフリン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５２】図５２は、ＣＳ１７１３（ＣＥＬ−３）およびフルオキセチンによるセロトニン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５３】図５３は、ＣＳ１７１４（ＣＥＬ−５）およびデシプラミンによるノルエピネフリン輸送体摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５４】図５４は、ＣＳ１７１４（ＣＥＬ−５）およびＧＢＲ−１２９０９によるセロトニン輸送体摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５５】図５５は、ＣＳ１７１４（ＣＥＬ−５）およびデシプラミンによるノルエピネフリン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５６】図５６は、ＣＳ１７１４（ＣＥＬ−５）およびフルオキセチンによるセロトニン摂取の％阻害を示すグラフである。
【図５７】図５７は、参照化合物の細胞アッセイデータを示す図である。
【図５８】図５８は、参照化合物の細胞アッセイデータを示す図である。
【図５９】図５９は、ＣＳ１８１４の有意な第1の結果をまとめた図である。
【図６０】図６０は、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の有意な第1の結果をまとめた図である。
【図６１】図６１は、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の有意な第1の結果をまとめた図である。
【図６２】図６２は、ＣＳ１８１４（バイアル番号１）、ＣＳ１７１３（バイアル番号２）、およびＣＳ１７１４（バイアル番号３）の第２の結果をまとめた図である。
【図６３】図６３は、プラシーボを用いた対照群の臨床試験において自発的に報告されたミルナシプランの有害履歴の発生率を示す図である。
【図１】
2006503920.tif 000022
【図２】
2006503920.tif 000023
【図３】
2006503920.tif 000024
【図４】
2006503920.tif 000025
【図５】
2006503920.tif 000026
【図６】
2006503920.tif 000027
【図７】
2006503920.tif 000028
【図８】
2006503920.tif 000029
【図９】
2006503920.tif 000030
【図１０】
2006503920.tif 000031
【図１１】
2006503920.tif 000032
【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
2006503920.tif 000035
【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
2006503920.tif 000040
【図２０】
2006503920.tif 000041
【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
2006503920.tif 000049
【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
2006503920.tif 000059
【図３９】
2006503920.tif 000060
【図４０】
2006503920.tif 000061
【図４１】
2006503920.tif 000062
【図４２】
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【図４３】
2006503920.tif 000064
【図４４】
2006503920.tif 000065
【図４５】
2006503920.tif 000066
【図４６】
2006503920.tif 000067
【図４７】
2006503920.tif 000068
【図４８】
2006503920.tif 000069
【図４９】
2006503920.tif 000070
【図５０】
2006503920.tif 000071
【図５１】
2006503920.tif 000072
【図５２】
2006503920.tif 000073
【図５３】
2006503920.tif 000074
【図５４】
2006503920.tif 000075
【図５５】
2006503920.tif 000076
【図５６】
2006503920.tif 000077
【図５７】
2006503920.tif 000078
【図５８】
2006503920.tif 000079
【図５９】
2006503920.tif 000080
【図６０】
2006503920.tif 000081
【図６１】
2006503920.tif 000082
【図６２】
2006503920.tif 000083
【図６３】
2006503920.tif 000084
【国際調査報告】
2006503920.tif 000085