(57)【要約】本発明は、ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する新規な脳細胞保護のための組成物、特に脳卒中の予防または治療のための組成物に関するものである。  本発明による組成物に含有されるジンセノサイドＲｈ２は、好ましくは人参から製造されることができ、さらに具体的には人参から製造された紅参を水または有機溶媒で抽出した後、これを乳酸菌または腸内細菌で生物転換させることにより、高い収率で得ることができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分としてジンセノサイドＲｈ２を組成物の総重量に対する乾燥重量に対して０．０２〜９０乾燥重量％を含有することを特徴とする脳細胞保護のための組成物。
【請求項２】
脳卒中により誘導される脳細胞の損傷から脳細胞を保護することを特徴とする請求項１に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項３】
前記脳卒中が、虚血性脳卒中であることを特徴とする請求項２に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項４】
前記ジンセノサイドＲｈ２が人参を蒸して得られた紅参を水または有機溶媒で抽出した後、腸内細菌または乳酸菌で生物転換させることにより製造されることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項５】
前記Ｒｈ２が、下記の工程（１）〜（４）を含む方法により製造されることを特徴とする請求項４に記載の脳細胞保護のための組成物：
（１）人参の原材料、特に水参から異物を除去するために、水参の原材料を水で洗滌した後、任意に酸を含有した水で更に洗滌する工程；
（２）前記工程（１）を経て得られた洗滌された人参を、通常の紅参製造機内において９８−１００℃で１−１０時間、好ましくは２−５時間蒸した後、得られた生成物を約６０℃で約５時間通常の乾燥機内において乾燥させることにより紅参を製造する工程；
（３）工程（２）において得られた紅参から水抽出物または有機溶媒抽出物を得る工程；
（４）工程（３）に紅参の水抽出物または有機溶媒抽出物を乳酸菌または腸内細菌を利用して生物転換する工程。
【請求項６】
前記工程（４）に使用され得る腸内細菌が、バクテリオイド（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）属及びフゾバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の菌株からなる群より選ばれた１種以上の腸内細菌であることを特徴とする請求項５に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項７】
前記工程（４）に使用され得る乳酸菌が、ビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ラクトバチルスラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）、ビフィドバクテリウムＣ−１３（慶熙大学校薬科大学、金  ドンヒョン教授室）及びビフィドバクテリウムＣ−３４（慶熙大学校薬科大学、金  ドンヒョン教授室）からなる群より選ばれた１種以上の乳酸菌菌株より選ばれたことを特徴とする請求項５に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項８】
パナキシトリオール（ｐａｎａｘｙｔｒｉｏｌ）、パナキシドール（ｐａｎａｘｉｄｏｌ）、パナキシノール（ｐａｎａｘｉｎｏｌ）、ジンセノサイドＲｃ、ジンセノサイドＲｂ１、Ｒｂ２、化合物Ｋ、２０（Ｒ）−プロトパナキサジオール（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ）、２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｈ１、２０（Ｓ）−プロトパナキサトリオール（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ）からなる群より選ばれる１種以上のサポニン誘導体を更に含有することを特徴とする請求項１乃至３のいずれか１項に記載の脳細胞保護のための組成物。
【請求項９】
乳酸菌株ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ  １０４９３）。
【請求項１０】
脳細胞の保護及び脳卒中に対する予防の効果を示す請求項１乃至３のいずれか１項による脳細胞保護のための組成物及び食品学的に許容可能な食品補助添加剤を含むことを特徴とする健康補助食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する新規な脳細胞保護のための組成物、特に脳卒中の予防または治療のための組成物に関するものである。また、本発明による組成物に含有されるジンセノサイドＲｈ２は、好ましくは人参(ｇｉｎｓｅｎｇ)から製造されることができ、更に具体的には人参から製造された紅参を水または有機溶媒により抽出した後、これを乳酸菌または腸内細菌で生物転換することにより高い収率で得ることができる。
【背景技術】
【０００２】
人参は、植物分類学上によると、ウコギ科人参属に属する多年生宿根草である。地球中に約１１種の人参が知られている。代表的な種として、（１）高麗人参（Ｐａｎａｘ  ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）は、アジアの極東地域（北緯３３〜４８°の韓国、北満州、ロシアの一部）に自生し、薬効に極めて優れており、（２）西洋人参（Ｐａｎａｘ  ｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍ  Ｌ．）は、米国、カナダにおいて自生するか、または栽培されており、（３）田七人参（Ｐａｎａｘ  ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ  Ｆ．Ｈ．Ｃｈｅｎ）は、中国の雲南省東南部から広西チワン族自治区西南部の地域において野生するか、または栽培されており、（４）トチバニンジン（Ｐａｎａｘ  ｊａｐｏｎｉｃｕｓ  Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ）は、日本、中国の西南部、ネパールに至るまで分布するものと知られている（和漢薬百科図鑑、１巻、ｐｐ１−８、難波恒雄（Ｔｓｕｎｅｏ  Ｎａｎｂａ）、保育社（Ｈｏｉｋｕ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．），１９８０年）。
【０００３】
人参は、中国の神農本草経に商品として記載されているだけでなく、昔から貴重な補薬として使用されてきた。これまで多くの薬理実験を通じて、人参は、ストレスに対する生体の非特異的抵抗性を強化させ、抗酸性作用を有していることが明らかになった。その他に、高血圧の改善、インスリン作用の増強、アロキサン（ａｌｌｏｘａｎ）糖尿マウスにおける血糖降下効果、白ネズミの肝臓ＲＮＡ合成、蛋白質の合成、糖及び脂質代謝の促進効果、抗癌効果等があることが明らかになった。
【０００４】
このような人参は、主に韓国、中国、日本等のアジア国家において生薬の形態で精神医学的疾病、神経系の疾病及び糖尿病等の様々な疾病に対して使用されてきた。前記人参の主要成分であるサポニンは、ロバスト性、スタミナ、鎮静、造血及び抗高血圧等に対して効果を示すものと知られている（難波恒雄（Ｔｓｕｎｅｏ  Ｎａｎｂａ）、和漢薬百科図鑑、１巻、ｐｐ１−８、１９８０）。
【０００５】
一方、人参と関連した従来技術として、韓国特許公告第２０００−０５８９９７号には、酸糖化による人参の分解に硫酸または塩酸を利用して吸収され易い酸糖化人参を作る製造方法が開示されている。また、韓国特許公告第１９９６−０１７６７０号には、薬効が増強された加工人参を製造するために人参を１２０〜１８０℃で処理することにより、従来の人参とは異なりジンセノサイドＲｇ３とＲｇ５が多量に含有された人参組成物の製造方法が開示されている。
【０００６】
前述したとおり、従来技術は、人参を酸処理または熱処理することにより低分子化された人参組成物またはジンセノサイドＲｇ３とＲｇ５が多量に含有された人参を製造する方法に過ぎない。従って、人参には、本来存在しないか、または極めて極小量存在するが、薬理作用に非常に優れたジンセノサイドＲｈ２、化合物Ｋのようなサポニンの代謝産物を得るには限界がある。
【０００７】
これと関連し、韓国登録特許第１９９７−０６１９０９号は、腸内細菌を利用して人参のサポニンから化合物Ｋを中心としたサポニンの代謝体を大量に生産できる方法を開示している。
【０００８】
一方、脳卒中は、脳の血液循環障害により起こる急激な意識障害と運動麻痺を伴う症候群を称する言葉であり、脳卒中は大きく二つに分かれるが、一つは、脳組織にいく血液供給の減少或いは遮断による脳組織の虚血状態において発生する虚血性脳卒中（ｉｓｃｈｅｍｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ）であり、また他の一つは、血管が破れて脳組織に出血が発生して起こる出血性脳卒中（ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ  ｓｔｒｏｋｅ）である。臨床において報告されたところによると、虚血性脳卒中は、脳卒中の患者全体の約８０％程度を占めるものと知られている。
【０００９】
また、脳卒中は、それ自体よりはそれにより発生する深刻な脳神経細胞の損傷等を含む脳損傷が大きな危険要因である。従って、脳卒中による脳損傷の発生機序を見出そうとする多くの研究が当業界において行われてきた。しかしながら、今まで脳神経細胞の損傷機序の複雑性等により、脳卒中による脳神経細胞の損傷の原因が具体的に明らかになってはいなかった。前記損傷は、過度の興奮性神経伝達物質の遊離、フリーラジカル（ｆｒｅｅ  ｒａｄｉｃａｌ）の生成、蛋白質合成の阻害、遺伝子発現異常及び免疫反応の活性化等に起因するものと報告されている。
【００１０】
最近の報告によると、神経系が非免疫性器官（ｉｍｍｕｎｅ  ｐｒｉｖｉｌｅｇｅｄ  ｏｒｇａｎ）であるという既存の学説とは異なり、多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）、外傷、アルツハイマー疾患（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）、脳卒中、特に脳虚血性脳卒中及び各種の脳損傷等の神経疾患時に中枢神経系内でも炎症反応が起こることがあり、このような炎症反応により神経退行が引き起こされ得ると報告されている。このような報告と共に、脳卒中による脳細胞の損傷機序に免疫反応が関与するものと推測された。その結果として、神経系における免疫抑制を通じて脳卒中後の脳細胞の損傷が抑制できることが知られるにつれ、これと関連して多くの研究が行われている。
【００１１】
例えば、脳虚血においてシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の抑制は、（ＰＧ）Ｅ２の生成抑制及びこれによるグルタミン酸塩の遊離抑制により脳神経細胞保護の作用を有すると報告した。関節炎や痛みを訴える多くの人々が既にＣＯＸ−２抑制剤を服用している。従って、このような患者において脳卒中の発病率等についての疫学的調査が行われれば、今後の脳卒中の予防及び治療剤の開発に新たな目標となり得るものと報告している（Ｉａｄｅｃｏｌａ  Ｃ．ら、ＰＮＡＳ．、３０巻、ｐｐ１２９４−１２９９、２００１）。
【００１２】
また、中枢神経系においても炎症反応が示されており、これは、神経の退行を引き起こす主な原因中の一つであると報告されている。従って、脳虚血後の炎症反応は、新たな脳卒中、特に脳虚血治療剤の標的となるものである。このような治療剤は、細胞毒性物質の遊離に関与する酵素を抑制するか、または好中球（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ）の沈着を抑制する薬物から構成され得る（Ｄｉｒｎａｇｌ  Ｕ．ら、ＴＩＮＳ．、２２、ｐｐ３９１−３９７、１９９９）。
【００１３】
また、脳組織に浸透された好中球においては、ＮＯを遊離することのできるｉＮＯＳ（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）が誘導され、誘導されたｉＮＯＳからＮＯが遊離されて脳細胞の損傷をもたらすと知られており、グルタミン酸塩によるＮＭＤＡ受容体の活性化による神経の毒性またはＮＯを経由したものと報告された。従って、ｉＮＯＳ発現の抑制等と関連した脳神経保護剤の開発がなされている(Ｖａｕｇｈａｎ  ＣＪ．ら、Ｓｔｒｏｋｅ、３０、ｐｐ１９６９−７３、１９９９)。
【００１４】
上記において検討したように、脳卒中、特に脳虚血後に起こる神経系における炎症反応が脳細胞の損傷を起こすことができ、よって神経における炎症を抑制することにより、脳細胞の損傷を抑制し、脳損傷を治療することができるということを明らかにした。
【００１５】
本発明者らは、脳卒中の発生を抑制しながらも、脳卒中の発生時に脳細胞を保護することのできる物質を見出すために多くの研究を行った。その結果として、特殊加工処理された人参の抽出物、またはその乳酸菌発酵物が非常に優れた脳細胞保護の効果、特に脳卒中の予防及び治療の効果を有することを発見した。このような発見に基づいて、これを２００２年４月８日付で、“薬効が増加した特殊加工処理された人参抽出物を含有する脳卒中の予防及び治療のための組成物”として出願した(第２００２−１８８４４号)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
よって、本発明者らは、前記特殊加工処理された人参抽出物、またはその乳酸菌或いは腸内細菌発酵物中で、特に脳細胞保護の効果、及び脳卒中の予防並びに治療の効果を有する物質を見出すために多くの研究を行った。その結果、サポニン成分の中でジンセノサイドＲｈ２が前記効果を示す有効成分であることを発見し、本発明を完成した。
従って、本発明の目的は、新規な脳細胞保護のための組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
前述した目的を達成するために、本発明による組成物は、有効成分としてジンセノサイドＲｈ２を組成物の総乾燥重量に対して０．０２〜９０乾燥重量％含有することにより、脳細胞保護の効果、特に脳卒中、更に具体的には脳虚血性脳卒中の予防または治療の効果を有することを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
以下、本発明をより具体的に説明する。
本発明による組成物に開始成分として含有されるジンセノサイドＲｈ２は、人参を原料として製造できる。即ち、人参を９８〜１００℃において加熱して得られた産物（紅参）を水または有機溶媒により抽出した後、得られた抽出液を乳酸菌または腸内細菌で生物転換処理することによりジンセノサイドＲｈ２が得られる。このように得られたジンセノサイドＲｈ２は、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｈ２、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｈ２またはこの混合物のうちいずれであってもよい。
【００１９】
より具体的には、ジンセノサイドＲｈ２は、下記の工程（１）〜（４）を含む方法により製造できる。
（１）人参の原材料、特に水参（ｇｒｅｎｎ  ｇｉｎｓｅｎｇ）から異物を除去するために、水参の原材料を水で洗滌した後、任意に酸を含有した水で更に洗滌する工程（任意的な工程）；
（２）前記工程（１）を経て得られた洗滌された人参を、通常の紅参製造機内において９８−１００℃で１−１０時間、好ましくは２−５時間蒸した後、得られた生成物を約６０℃で約５時間通常の乾燥機内において乾燥させることにより紅参を製造する工程；
（３）工程（２）において得られた紅参から水抽出物または有機溶媒抽出物を得る工程；
（４）工程（３）に紅参の水抽出物または有機溶媒抽出物を乳酸菌または腸内細菌を利用して生物転換する工程。
【００２０】
前記工程（１）は任意の工程であり、（２）乃至（４）の工程は必須の連続製造工程であり得る。また、前記工程（４）は、紅参抽出物と菌株を混合して培養しなくてもよく、カプセル化してヒトの腸内で反応が起こるように製造することができる。この全ての工程は、最終の人参製品の形態によって選択的に適用することができる。
【００２１】
一方、前記工程を経ながら、原材料に含有された化合物であるジンセノサイドＲｂ１、ジンセノサイドＲｂ２、ジンセノサイドＲｃ等が紅参の製造過程においてジンセノサイドＲｇ３に転換される。生物転換によりジンセノサイドＲｇ３等が乳酸菌または腸内細菌を介して生物転換され、最終代謝産物であるジンセノサイドＲｈ２に転換される。当業者は、最終産物としてジンセノサイドＲｈ２が多量に含有されるように、前記工程を含む方法に適した変形を行うことができ、前記工程以外の他の工程等も含むことができる。このような当業者に自明な変形等も本発明の範囲内であることが理解され得る。
【００２２】
以下、各工程について具体的に説明する。
前記工程（１）において、前述した人参の原材料は、人参及び人参加工品並びに副産物等を含んでおり、好ましくは、水参、紅参、白参、人参の細根、人参の葉、人参エキス及び粉末状の人参を含む。たとえ、前記工程（１）の洗滌工程は、水のみで洗浄を行うことができるが、水洗滌後に、特に生理学的に受容収容可能な酸を含有した水溶液で洗滌して、人参の原材料に付着している汚染微生物を除去することができる。前記酸洗滌に利用され得る成分としては、酢酸、クエン酸、乳酸または酸味を有する食品等がある。
【００２３】
本発明によると、水のみで洗滌する場合は、約１３×１０３／ｇの総菌数が計数された。しかしながら、水洗滌後に酸含有水溶液による洗滌を更に行った場合は、およそ総菌数６×１０３／ｇの総菌数が計数された。従って、酸含有水溶液による洗滌は、約５０％以上の汚染微生物を除去できることが見られた（計数方法：人参約５ｇを正確に測り、滅菌パック（韓国３Ｍ株式会社）に入れた。滅菌生理食塩水（９倍量）をパックに入れて細かく挽いた。前記混合物を再度１０倍、１００倍に希釈した。このうち１ｍｌをペトリフィルム（ｐｅｔｒｉｆｉｌｍ；韓国３Ｍ株式会社）に垂直に接種した。上部フィルムを気泡が生じないように覆った後、押し板を押圧した。３０秒〜６０秒経過した後に、ゲル化が完了すると約２４〜４８時間培養して、赤色のコロニーを計数した）。一方、これに使用される酸含有水溶液としては、特に好ましくは酢酸含有水溶液、具体的には０．１％酢酸含有水溶液を利用することができる。
【００２４】
前記工程（２）を通じて紅参が製造される（市販されている人参製品は、栽培して直ちに採取した水参；該水参を常温で乾燥させた白参；前記水参を９８〜１００℃で加熱処理して製造された紅参がある）。本発明において目的とするジンセノサイドＲｈ２を製造するためには、水参から紅参を製造することが好ましい。
【００２５】
一方、人参の原材料から紅参を製造する方法については当業界に通常知られている。例えば、前記工程（１）を経て得られた洗滌された人参を通常の紅参製造機において９８〜１００℃で１−１０時間、好ましくは２−５時間蒸した後、６０℃で５時間通常の乾燥機において乾燥させることにより製造できる。しかしながら、前記蒸す温度及び時間、蒸した後の乾燥過程等について当業界の自明な変形が行われ得る。このような変形温度もまた、本発明の範囲内である。
【００２６】
次いで、工程（３）においては、紅参から水抽出物または有機溶媒抽出物を得る。例えば、乾燥状態の紅参に約１〜５０倍重量／体積の水、有機溶媒としてのアルコール、好ましくはエタノール、特に７０％のアルコール、または水とアルコールの混合物で２０〜８０℃、好ましくは５０〜６０℃の温度で１時間〜２日間、好ましくは３時間抽出して濃縮することにより、紅参から水抽出物または有機溶媒抽出物が得られる。しかしながら、抽出溶媒の種類、抽出温度及び抽出時間について特別な限定があるのではなく、ジンセノサイドＲｈ２を得ることが可能であれば、任意に使用され得る。
【００２７】
前記工程（４）は、紅参抽出物、特に水抽出物または有機溶媒抽出物を腸内細菌または乳酸菌を利用して生物転換させる工程である。生物転換に使用される微生物、その微生物を利用して生物転換させる条件、及び生物転換期間は、生物転換後にジンセノサイドＲｈ２を十分な収率で得られるのであれば、特に限定されるものではない。例えば、工程（３）において製造された紅参水抽出物または有機溶媒抽出物を６時間〜５日、好ましくは２４時間〜４８時間、２０〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃の培養温度において、乳酸菌または腸内細菌と共に培養して生物転換工程を行うことができる。
【００２８】
また、前記工程（４）に使用され得る腸内細菌は、人参サポニンを代謝して生物転換体であるジンセノサイドＲｈ２を生成できるものであればいずれも可能である。本発明において使用された腸内細菌は、好ましくはバクテリオイド（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）属、フゾバクテリウム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の腸内細菌、より好ましくはバクテリオイドＪＹ-６（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、２３、ｐｐ１４８１−１４８５、２０００）、フゾバクテリウムＫ−６０（Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２３，ｐｐ１４８１−１４８５、２０００）を含む。
【００２９】
また、工程（４）の紅参抽出物の生物転換工程に使用される乳酸菌は、人参サポニンを代謝して生物転換体であるジンセノサイドＲｈ２を生成できるものであればいずれも可能である。前記乳酸菌は、好ましくはビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の乳酸菌、より好ましくはビフィドバクテリウムインファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ラクトバチルスラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムＨ−１（ＫＣＣＭ−１０４９３）、ビフィドバクテリウムＣ−１３（慶熙大学校薬科大学、金  ドンヒョン教授室）、ビフィドバクテリウムＣ−３４（慶熙大学校薬科大学、金  ドンヒョン教授室）の乳酸菌の中より選ばれた一つまたはこれらの混合菌株を含む。
【００３０】
この中で、ビフィドバクテリウムＨ−１は、ジンセノサイドＲｈ２を多量に含有した紅参抽出物の生物転換産物を得るために本発明者らにより開発された微生物であって、前記ビフィドバクテリウムＨ−１は、寄託番号ＫＣＣＭ−１０４９３（寄託日：２００３．０５．０１）であって、韓国微生物保存センター（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ）に寄託されている。
【００３１】
本発明によるビフィドバクテリウムＨ−１菌株は、グラム陽性菌であり、桿菌であり、嫌気性の菌株であり、フルクトース６−フォスフェートホスホケトラーゼ（ｆｒｕｃｔｏｓｅ ６-ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｐｈｏｓｐｈｏｋｅｔｏｌａｓｅ）陽性を示し、下記のような糖利用性を有する。
【００３２】
2006526008.tif 000003
【００３３】
一方、前記ビフィドバクテリウムＨ−１は、既存のビフィドバクテリウムと比較するとき、一般的な分類学的特性は同一であるが、人参の乳酸菌発酵に利用する場合、より多い含量のジンセノサイドＲｇ３をジンセノサイドＲｈ２に転換させることにより、ジンセノサイドＲｈ２を多量に含有する生物転換産物を提供することができる。
【００３４】
前記製造工程（１）〜（４）を経て得られた本発明の人参抽出物は、（ジンセノサイドＲｈ２／（ジンセノサイドＲｇ３＋Ｒｃ＋Ｒｄ＋Ｒｂ１＋Ｒｂ２）の比率が０．１以上であり、これは、前記製造工程（１）〜（３）を経て得られた紅参抽出物よりジンセノサイドＲｈ２が１０倍以上多く含有されたものである。
【００３５】
また、前記製造工程（１）〜（４）を経た紅参の生物転換産物は、そのまま濃縮して使用してもよく、それを凍結乾燥させて使用してもよい。或いは、紅参の生物転換産物を水または有機溶媒で抽出した抽出液を遠心分離した後、上澄みを濾過した後、濾液を減圧濃縮して生物転換した紅参抽出物内の不純物及び沈殿物を除去すると共に、濃縮した後に凍結乾燥のような乾燥工程を経て濃縮させた形態で使用してもよい。
【００３６】
前記生物転換産物の抽出液から活性成分としてジンセノサイドＲｈ２を抽出するための適切な溶媒として、水、メタノール及びエタノール等のような低級アルコール溶液を使用することができる。抽出方法としては、超臨界抽出法のような特殊な抽出法を使用して有効成分を分離してもよく、次いで凍結乾燥法による乾燥工程（Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒｏｃｅｓｓ）及び加工飲料や加工食品を製造するための攪拌過程（Ａｇｉｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓ）または希釈工程（Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｓｓ）を更に行うことができる。
【００３７】
本発明によると、前記工程（１）〜（４）を含む製造方法を通じて製造された紅参の生物転換産物をＢｕＯＨで抽出した後、濃縮してシリカゲルカラム（５×５０cm、溶出溶媒：クロロホルム：メタノール＝２０：１）を行うことによりジンセノサイドＲｈ２を単離することができる。その化学的特性は、次のとおりである：
２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｈ２：白色結晶、ｍｐ  ２０８−２１０℃（ｄｅｃ．）ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）６２３［Ｍ＋１］＋。
【００３８】
この１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの分析結果は、下記の表１からみられるとおりである：
【表１】
2006526008.tif 000004
【００３９】
前記ジンセノサイドＲｈ２の製造方法により得られるジンセノサイドＲｈ２は、２０（Ｒ）−ジンセノサイドＲｈ２、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｈ２またはこの混合物のうちいずれであってもよい。
【００４０】
本発明によると、紅参の生物転換産物から分離されたジンセノサイドＲｈ２を単独で使用して脳細胞保護の効果、特に脳卒中の治療または予防の効果を更に向上させることができるが、紅参抽出物に含有されている薬理活性成分として、パナキシトリオール（ｐａｎａｘｙｔｒｉｏｌ）、パナキシドール（ｐａｎａｘｉｄｏｌ）、パナキシノール（ｐａｎａｘｉｎｏｌ）、ジンセノサイドＲｃ、ジンセノサイドＲｂ１、Ｒｂ２、化合物Ｋ、２０（Ｒ）−プロトパナキサジオール（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｄｉｏｌ）、２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール、２０（Ｓ）−ジンセノサイドＲｈ１、２０（Ｓ）−プロトパナキサトリオール（ｐｒｏｔｏｐａｎａｘａｔｒｉｏｌ）からなる群より選ばれる１種以上のサポニン誘導体を更に含有することができる。好ましくは、紅参抽出物の乳酸菌または腸内細菌による生物転換産物（以下、‘紅参抽出物の生物転換産物’という）の形態で使用される。
【００４１】
一方、本発明は、前記紅参抽出物の生物転換産物を利用して様々な加工人参製品を提供することができる。例えば、前記加工人参（または、紅参）製品には、人参乾燥粉末、エキス剤、アンプル製剤、茶類、錠剤等を含む。
【００４２】
また、本発明は、脳細胞の保護及び脳卒中に対する予防効果を示す本発明による脳細胞保護の組成物、及び食品学的に許容可能な食品補助添加剤を含むことを特徴とする健康補助食品を提供する。前記食品学的に許容可能な食品補助添加剤については当業界に通常知られており、前記健康補助食品の製造方法についても当業者は自明に認識している。例えば、前記健康補助食品は、例えば、健康飲料、ゼリー、砂糖、菓子等の様々な任意の形態であってもよい。本発明は、これらの形態により制限されない。
【００４３】
ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物の脳卒中の予防及び治療に対する効果は、既に試験法が確立されている中脳大動脈閉塞モデルを利用して生体内試験法においてオウゴニン（ｗｏｇｏｎｉｎ）及びその誘導体の虚血性脳卒中を抑制する効果として確認できる。
【００４４】
前記方法は、ナイロンフィラメントを内頸動脈（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｃａｒｏｔｉｄ  ａｒｔｅｒｙ）に挿入して中脳大動脈を閉塞させた後、１２０分後に再度フィラメントを除去することにより再貫流させる方法であって、この際に試料を経口投与して虚血性脳卒中に対する効果を確認するものである。
【００４５】
一方、ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物は、当業界において通常公知になった適切な担体、賦形剤及び希釈剤を更に含むことができる。
【００４６】
ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物に含まれ得る担体、賦形剤及び希釈剤としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリトリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギン酸塩、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルハイドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート及び鉱物油等がある。
【００４７】
ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物は、それぞれ通常の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアゾール等の経口型の剤形、外用剤、座剤及び滅菌注射溶液の形態で剤形化されて使用され得る。本発明による組成物内に含有されるジンセノサイドＲｈ２の使用量は、患者の年齢、性別、体重によって異なり得る。しかしながら、０．１〜１００mg／kgの量を一日一回〜数回にわたって投与できる。また、その抽出物または化合物の投与量は、投与経路、疾病の程度、性別、体重、年齢等によって増減され得る。従って、前記投与量は、どの面でも本発明の範囲を限定するものではない。
【００４８】
ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物は、前記のような剤形で脳細胞の保護及び脳卒中の予防及び治療のための薬剤、食品及び飲料等に多様に利用され得る。本人参抽出物または化合物を添加することのできる食品としては、例えば、各種の食品類、飲料、ガム、茶、ビタミン複合剤、健康補助食品類等がある。
【００４９】
本発明による組成物内に含有されるジンセノサイドＲｈ２自体は、毒性及び副作用はほとんどないため、予防の目的で長期間の服用時にも安心して使用することのできる薬剤である。
【００５０】
ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による組成物は、脳細胞の保護及び脳卒中の予防を目的として食品または飲料に添加され得る。この際の食品または飲料中の前記抽出物または化合物の量は、一般的に本発明の健康食品組成物は、食品重量の全体０．０１〜１５重量％で加えることができ、食品健康飲料組成物は、１００ｍｌを基準に０．０２〜０．１ｇ、好ましくは０．３〜１ｇの比率で加えることができる。
【００５１】
本発明の健康飲料組成物は、指示された比率で必須成分として前記抽出物を含有することの他には、液体成分に特別な制限点はなく、通常の飲料のように様々な香味剤または天然炭水化物等を追加成分として含有することができる。
【００５２】
前述した天然炭水化物の例としては、単糖、例えば、ブドウ糖、果糖等；二糖、例えば、マルトース、スクロース等；及び多糖、例えば、デキストリン、シクロデキストリン等のような通常の糖、及びキシリトール、ソルビトール、エリトリトール等の糖アルコールである。前述したもの以外の香味剤として、天然香味剤（タウマチン（ｔａｕｍａｔｉｎ）、ステビア抽出物（例えば、レバウディオサイドＡ、グリシルヒジン（ｇｌｙｃｉｒｈｉｚｉｎ）等）及び合成香味剤（サッカリン、アスパルテーム等）を有利に使用することができる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍｌ当り、一般的に約１〜２０ｇ、好ましくは約５〜１２ｇである。
【００５３】
前記の他に本発明の組成物は、様々な栄養剤、ビタミン、鉱物（電解質）、合成風味剤及び天然風味剤等の風味剤、着色剤及び増進剤（チーズ、チョコレート）、ペクチン酸及びその塩、アルギン酸及びその塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料に使用される炭酸化剤等を含有することができる。その他に、本発明の組成物は、天然果汁及び果汁飲料及び野菜飲料の製造のための果肉を含有することができる。このような成分は、独立的にまたは組み合わせて使用することができる。このような添加剤の比率はそれほど重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当り０〜約２０重量部の範囲において選択されることが一般的である。
【実施例】
【００５４】
本発明は、次の実施例に基づいてさらに詳細に説明されるが、実施例は、本発明の具現を例示するためであり、本発明は、これにより制限されるものではない。
【００５５】
実施例１．加工処理された人参抽出物の製造例（１）
錦山人参市場（韓国忠▲清▼道に位置する）において購入した５年生の水参１kgを水で洗滌し、最後に０．１％含有酢酸で洗滌した。次いで、９８−１００℃で人参蒸し器（ＫＩ−ＨＴ０１；Ｄｏｏ−Ｓｕｎｇエンジニアリング、ソウル、韓国）により４時間蒸し、６０℃で乾燥機（ＫＵ−ＤＲ９９；（株）国際企業、ソウル、韓国）により５時間乾燥させる。この乾燥させた紅参を７０％のアルコールで抽出することにより紅参抽出物を得た。この紅参抽出物を濃縮し、水に懸濁した。懸濁物をＢｕＯＨで抽出した。最後に、抽出物を濃縮することにより紅参抽出物を得た（以下、ＨＢという）。
【００５６】
実施例２．加工処理された人参(紅参)抽出物の製造例（２）
錦山人参市場において購入した５年生の水参１kgを水で洗滌し、最後に０．１％含有酢酸で洗滌した。次いで、９８−１００℃で人参蒸し器（ＫＩ−ＨＴ０１；Ｄｏｏ−Ｓｕｎｇエンジニアリング、ソウル、韓国）により４時間蒸し、６０℃で乾燥機（ＫＵ−ＤＲ９９；（株）国際企業、ソウル、韓国）により５時間乾燥させる。この乾燥させた紅参を７０％のアルコールで抽出することにより紅参抽出物を得た。この紅参抽出物を１．５％(好ましくは０．１〜５％)となるように滅菌蒸留水に懸濁させた。ビフィドバクテリウムＨ−１菌株（湿重量１０ｇ）を懸濁物に添加して３７℃で７２時間培養した。それから、培養物をＢｕＯＨで抽出した。最後に、抽出物を濃縮することにより加工処理された人参４ｇを得た（以下、ＨＭという）。
【００５７】
実施例３．加工処理された人参抽出物の製造例（３）
錦山人参市場において購入した５年生の水参１kgを水で洗滌し、最後に０．１％含有酢酸で洗滌した。次いで、９８−１００℃で人参蒸し器（ＫＩ−ＨＴ０１；Ｄｏｏ−Ｓｕｎｇエンジニアリング、ソウル、韓国）により４時間蒸し、６０℃で乾燥機（ＫＵ−ＤＲ９９；（株）国際企業、ソウル、韓国）により５時間乾燥させる。この乾燥させた紅参を７０％のアルコールで抽出することにより紅参抽出物を得た。この紅参抽出物を１．５％(好ましくは０．１〜５％)となるように滅菌蒸留水に懸濁させた。腸内細菌叢(ヒトの新鮮な糞便をトリプシンソイブロス（ｔｙｐｔｉｃ  ｓｏｙ  ｂｒｏｔｈ）に懸濁して得られた菌体の湿重量１０ｇ)を紅参抽出物の懸濁物に２４時間添加し、３７℃で７２時間培養した。培養物をＢｕＯＨで抽出した。最後に、抽出物を濃縮することにより加工処理された人参４ｇを得た（以下、ＨＩＭという）。
【００５８】
実施例４．加工処理された人参抽出物からジンセノサイドＲｈ２の生産製造例（９）
錦山人参市場において購入した５年生の水参１kgを水で洗滌し、最後に０．１％含有酢酸で洗滌した。次いで、９８−１００℃で人参蒸し器（ＫＩ−ＨＴ０１；Ｄｏｏ−Ｓｕｎｇエンジニアリング、ソウル、韓国）により４時間蒸し、６０℃で乾燥機（ＫＵ−ＤＲ９９；（株）国際企業、ソウル、韓国）により５時間乾燥させる。この乾燥させた紅参を７０％のアルコールで抽出することにより紅参抽出物を得た。この紅参抽出物を１．５％(好ましくは０．５〜５％)となるように滅菌蒸留水に懸濁させた。
【００５９】
腸内細菌叢(ヒトの新鮮な糞便をトリプシンソイブロスに懸濁させた。得られた菌体の湿重量１０ｇ)を紅参抽出物の懸濁物に２４時間添加し、３７℃で７２時間培養した。培養物をＢｕＯＨで抽出した。最後に、抽出物を濃縮することにより加工処理された人参１２ｇを得た。濃縮抽出物としての加工人参をシリカゲルカラム（５×５０cm、溶出溶媒：クロロホルム：メタノール＝２０：１）で溶出させることにより、０．５ｇジンセノサイドＲｈ２を分離した。
【００６０】
比較例１．未加工処理された人参抽出物の製造
錦山人参市場において購入した５年生の水参２０ｇを細切して５倍分量の水を入れて６０℃で５時間抽出した。得られた抽出物を濃縮器（Ｅｙｅｌｌａ、ＫＮ−ＩＮ  Ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ、日本）により減圧濃縮し、凍結乾燥器（Ｓａｍ−Ｗｏｎ冷熱のＳＦＤＳＭ２４Ｌモデル、韓国）により乾燥させた。最後に、未加工処理された白参の乾燥粉末１ｇを得た。
【００６１】
実施例５．含量分析実験
前記比較例１の未加工処理された水参と実施例１、２及び３の処理人参粉末をそれぞれ２ｇずつ取り、メタノール１００ｍｌずつで３回抽出した。この抽出物を減圧濃縮させた後、これに水１００ｍｌを入れて懸濁させた。懸濁物をエーテル１００ｍｌずつで３回抽出し、減圧濃縮させた。次いで、ブタノール１００ｍｌずつで３回抽出し、減圧濃縮させた。次いで、得られた濃縮物をメタノール１００ｍｌに溶解させることによりサポニン画分１００mgを得た。この画分をこれをＴＬＣ（展開溶媒：ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：Ｈ２Ｏ＝６５：３５：１０、発色試薬：５％の硫酸メタノール溶液、探知器（Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）：島津社（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）ＴＬＣ  Ｓｃａｎｎｅｒ  ＣＳ−９３０１ＰＣ）で分析した。
【００６２】
表２のようなサポニン含量の分析結果を得た。
【表２】
2006526008.tif 000005
【００６３】
実験の結果、人参を蒸したときにジンセノサイドＲｇ３の成分含量が急激に増加しており、この人参を乳酸菌により処理したとき、蒸し人参（紅参）中のジンセノサイドＲｇ３が代謝されたジンセノサイドＲｈ２の成分含量が急激に増加したことが確認できた。
【００６４】
実験例１：脳細胞の保護及び脳卒中に対する効果実験
本発明の加工処理された人参抽出物及びこれから分離された化合物の脳細胞の保護及び脳卒中に対する治療効果を比較例１の未加工処理された白参の乾燥粉末、比較例２の酸処理された白参の乾燥粉末の薬理効果と互いに比較するために、下記のような実験を行った。
【００６５】
ラット（バイオジェノミックス（ＢＩＯＧＥＮＯＭＩＸ）、韓国）を利用した脳虚血性の動物モデルに再貫流を開始する約５分前に、１、３、１０、５０mg／kg投与して再貫流させた。最初の手術後約２４時間後に動物を致死させて脳を摘出した。脳マトリクス（ｂｒａｉｎ  ｍａｔｒｉｘ）を利用して２ｍｍ厚さに脳切片（ｂｒａｉｎ  ｓｌｉｃｅ）を製造した。脳切片を２，３，５−トリフェニルテトラゾリヌムクロリド（２，３，５−ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｎｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ；ＴＴＣ）染色法を利用して染色した後、脳梗塞部位を映像分析システムを利用して分析した。
【００６６】
その結果は、下記の図１に示したように、実施例２及び３において製造された紅参抽出物の生物転換産物、及び実施例４において得られたジンセノサイドＲｈ２は、有意性のある脳細胞保護の活性を示した。ジンセノサイドＲｈ２が脳細胞保護の活性があるということは、先行技術において全く報告されたところがない。一方、図１において、Ｃｏｎｔは対照群（ビヒクル投与群）、ＧＢは比較例１、ＨＢは実施例１、ＨＭは実施例２、ＨＩＭは実施例３、ジンセノサイドＲｈ２は実施例４の試料を示し、*は、対照群と比較時に９５％有意水準において有意性のあることを意味する。
【００６７】
以上のような結果を総合してみるとき、人参を蒸して乳酸菌または腸内細菌を処理させると、脳細胞の保護、特に脳卒中の予防及び治療の効果が増強された薬効を示す。従って、より優れた品質の人参含有医薬品や健康補助食品を製造するのに効果的であり得るということが確認された。
【００６８】
下記において前記薬学組成物の製剤例を説明するが、これは、本発明を限定するためでなく単に具体的に説明するためである。
【００６９】
製剤例１．散剤の製造
韓国薬箋製剤総則のうち、散剤の製造方法に従って、１包当り下記の成分含量で製造する。
実施例３の乾燥粉末・・・・・・・・・・・・・・・・・・５０mg
乳糖・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１００mg
タルク・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１０mg
【００７０】
製剤例２．錠剤の製造
韓国薬箋製剤総則のうち、錠剤の製造方法に従って、１錠当り下記の成分含量で製造する。
実施例３の乾燥粉末・・・・・・・・・・・・・・・・・・５０mg
トウモロコシ澱粉・・・・・・・・・・・・・・・・・・１００mg
乳糖・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１００mg
ステアリン酸マグネシウム・・・・・・・・・・・・・・・・２mg
【００７１】
製剤例３．カプセル剤の製造
韓国薬箋製剤総則のうち、カプセル剤の製造方法に従って、１カプセル当り下記の成分含量で製造する。
実施例３の乾燥粉末・・・・・・・・・・・・・・・・・・５０mg
トウモロコシ澱粉・・・・・・・・・・・・・・・・・・１００mg
乳糖・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１００mg
ステアリン酸マグネシウム・・・・・・・・・・・・・・・・２mg
【００７２】
製剤例４．注射剤の製造
韓国薬箋製剤総則のうち、注射剤の製造方法に従って、１アンプル当り（２ｍｌ）下記の成分含量で製造する。
実施例３の乾燥粉末・・・・・・・・・・・・・・・・・・５０mg
注射用滅菌蒸留水・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・適量
ｐＨ調節剤・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・適量
【００７３】
製剤例５．液剤の製造
韓国薬箋製剤総則のうち、液剤の製造方法に従って、液剤１００ｍｌ当り下記の成分含量で製造する。
実施例３の乾燥粉末・・・・・・・・・・・・・・・・・・５０mg
異性化糖・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１０ｇ
マンニトール・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・５ｇ
精製水・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・適量
【００７４】
また、下記のような方法により健康飲料を製造する。
実施例３の乾燥粉末０．１〜８０％、砂糖５〜１０％、クエン酸０．０５〜０．３％、カラメル０．００５〜０．０２％、ビタミンＣ０．１〜１％の添加物を混合し、これに７９〜９４％の精製水を混ぜてシロップを製造する。前記シロップを８５〜９８℃で２０〜１８０秒間殺菌して冷却水と１：４の比率で混合してから、炭酸ガスを０．５〜０．８２％注入する。最後に、ジンセノサイドＲｈ２の含量の高い紅参抽出物の生物転換産物を含有する炭酸飲料を製造した。
【００７５】
液状果糖（０．５％）、オリゴ糖（２％）、砂糖（２％）、食塩（０．５％）、水（７５％）のような副材料と実施例３の乾燥粉末とを均質に配合して瞬間殺菌する。前記液体をガラス瓶、ペットボトル等の小包装容器に包装することにより健康飲料を製造した。
【００７６】
前記組成比は、比較的嗜好飲料に適した成分を好ましい実施例として混合して組成したが、需要階層や、需要国家、使用用途等の地域的、民族的嗜好によって変更され得る。当業界において許容される変更及び適用は、通常、本発明の範囲にある。
【産業上の利用可能性】
【００７７】
以上において検討したように、紅参抽出物の生物添加産物及びそれから分離されたジンセノサイドＲｈ２は、非常に優れた脳卒中治療の効果を有する。従って、ジンセノサイドＲｈ２を有効成分として含有する本発明による新規な脳細胞保護のための組成物は、非常に有効に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】紅参抽出物の生物転換産物及びジンセノサイドＲｈ２の脳虚血に対する効果を実験した図面である（図１において、Ｃｏｎｔは、ビヒクルのみを投与した対照群を示し；ＧＢは、比較例１において製造された未加工処理された白参１００mg／kgの経口投与群を示し；ＨＢは、実施例１において製造された紅参抽出物１００mg／kgの経口投与群を示し；ＨＭは、実施例２において製造された紅参抽出物の生物転換産物１００mg／kgの経口投与群を示し；ＨＩＭは、実施例３において製造された紅参抽出物の生物転換産物１００mg／kgの経口投与群を示し；Ｒｈ２は、ジンセノサイドＲｈ２の１００mg／kgの経口投与群を示し；対照群の動物数は１０匹であり、各実験群当りの動物数は５匹であり、＊は有意差であって、ｐ＜０．０５を意味する）。
【図１】
2006526008.tif 000006
【国際調査報告】
2006526008.tif 000007
2006526008.tif 000008
2006526008.tif 000009