(57)【要約】生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び脂肪酸またはその誘導体からなる分子包接化合物、その製造方法及びその使用。【解決手段】（ａ）生化学触媒反応により製造される、１種類の、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び（ｂ）１種または複数種の脂肪酸または脂肪酸誘導体からなることを特徴とする分子包接化合物；及び、生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライドと脂肪親和性化合物を均一に混合し、場合によっては、脂肪親和性化合物と結合しない過剰量を抽出によって除去する、分子包接化合物の製造方法；分子包接化合物を、医薬品調合における作用物質担体または作用物質として、化粧品調合における機能性栄養剤（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄｓ）の構成成分として及び食品添加剤、食品補助剤並びに試験用微生物含有剤の共生剤として使用すること。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも、（ａ）生化学触媒反応により製造される、１種類の、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び（ｂ）１種または複数種の脂肪酸または脂肪酸誘導体からなることを特徴とする分子包接化合物。
【請求項２】
脂肪酸または脂肪酸誘導体の、非分子包接脂肪酸または非分子包接脂肪酸誘導体を抽出後の分子包接化合物に対する比率が少なくとも５重量％、好ましくは、少なくとも７重量％、より好ましくは、少なくとも９重量％、理想的には、少なくとも１０重量％であることを特徴とする請求項１に記載の分子包接化合物。
【請求項３】
抽出にクロロフォルムが使用されることを特徴とする請求項２に記載の分子包接化合物。
【請求項４】
脂肪酸または脂肪酸誘導体がフリーの脂肪酸、脂肪酸エステル、生理的に摂取可能な脂肪酸塩またはトリグリセライドであることを特徴とする請求項１乃至３の何れか１項に記載の分子包接化合物。
【請求項５】
使用されるポリサッカライドが生化学触媒反応により製造される、直鎖状、ポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンであり、このグルカンにおけるα−１，４分岐が通常の方法で検出できるものであることを特徴とする請求項１乃至４の何れか１項に記載の分子包接化合物。
【請求項６】
脂肪酸または脂肪酸誘導体の基本的骨格が、鎖長が１２〜３０個の炭素原子からなり、少なくとも２つの炭素−炭素二重結合を有するものあることを特徴とする請求項１乃至５の何れか１項に記載の分子包接化合物。
【請求項７】
包接化合物がα―アミラーゼに対して強化された抵抗性性を有し、エングリスト（Ｅｎｇｌｙｓｔ）試験における、検出され得る、ＲＳ含量が少なくとも３０重量％、好ましくは、少なくとも５０重量％、より好ましくは、少なくとも７５重量％、最も好ましくは、少なくとも９５重量％であることを特徴とする請求項１乃至６の何れか１項に記載の分子包接化合物。
【請求項８】
生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライドと脂肪親和性化合物の混合物が均一に混合され、場合によっては、結合しない過剰量の脂肪親和性化合物が抽出によって除去されることを特徴とする請求項１乃至７の何れか１項に記載の分子包接化合物の製造方法。
【請求項９】
混合物が均一に混合されるに先立ち、可塑剤を添加することを特徴とする請求項７（原文のまま）に記載の分子包接化合物の製造方法
【請求項１０】
エクストルージョン操作が行なわれる請求項８に記載の分子包接化合物の製造方法。
【請求項１１】
請求項１乃至１０の何れか１項に記載の分子包接化合物の、医薬品調合における作用物質担体または作用物質として、化粧品調合における機能性栄養剤（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄｓ）の構成成分として、及び食品添加剤、食品補助剤並びに試験用微生物含有剤の共生剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び脂肪酸またはその誘導体からなる分子包接化合物、その製造方法及びその使用に関する。
【０００２】
被覆用マイクロカプセルまたはナノカプセル用物質または物質混合物の製造のための研究が多数行なわれている。その際、マイクロカプセルは次の二つに分類される。即ち、カプセルに封入される物質が、海綿状のマトリックス中に混入した状態で、微細に懸濁されているか（例えば、ＫＲ９４−９４００４１９）、または、カプセルに封入される物質がカプセル物質中に混在せず、その周囲に存在するような構造であるもの（例えば、Ａｒｓｈａｄｙ ｅｔ ａｌ．１９９１、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｅｎｇ．Ｓｃｉ．３０（１５）、９０５〜９１４及び９１５〜９２４）、の二つである。
【０００３】
両者の場合、カプセル物質は、不定形の多重分子の集合である。更に、殿粉構成物質であるアミロース及びアミロペクチンが前記マイクロカプセル形成に使用できることが知られている。
【０００４】
これらの場合、マイクロカプセルは外的影響（例えば、熱、紫外線、酸化）に対するカプセルに封入される化合物の保護のために最も使用される。しかし、本質的には、加工が容易なことが寄与している（例えば、良好な流動性、粘着性及び固体中への流体の移送）。マイクロカプセルの他の用途としては、経口投与における知覚特性の改善のために使用される。
【０００５】
マイクロカプセル（ＭＣ）形成に天然殿粉が使用できることが知られている。その際、殿粉として、高い比率で抵抗性殿粉（ＲＳ）が含まれるものが使用され、これは、大腸で、醗酵により分解し、胃および小腸では膵液アミラーゼによる通常どおりの分解はしない。
【０００６】
これに対して、ヨード殿粉化合物のような錯体化合物では１種または複数種のヨード原子または脂肪酸分子が螺旋状殿粉に組み込まれる（図１参照）。この錯体は次に、分子包接化合物として処理される。螺旋状ヨード殿粉錯体及びその医療及び医薬的用途は例えば、Ｇｅｈｎｔ及びＥｓｋｉｎによって、ＵＳ５，９５５，１０１号に述べられている。
【０００７】
ＷＯ９４／１７６７６号には組み入れ脂肪親和性化合物用のマトリックスとしての加水分解殿粉からなる組成物が記載されている。
【０００８】
ドイツ特許、ＤＥ４４１１４１４号には、分子包接と懸濁の組み合わせが提案されている。そこでは脂肪酸の腸内補給のための産物が明らかにされ、この脂肪酸は少くなくとも産物の１０％存在する。その際、脂肪酸は、可塑化された殿粉マトリックス中で、微細に懸濁され、脂肪酸は少なくとも部分的に螺旋状アミロース中に包含される。螺旋状アミロース中に脂肪酸分子がどの程度の比率で存在するかは明らかではない。
【０００９】
また、分子包接化合物は、天然の、分岐を有する、水溶性の殿粉、またはその分解物に基づき、通常の、専門家としての知識に従えば、殿粉含有量に対して、４．６重量％以下の脂肪酸が組み込まれ得るものとして公知である（積載量も）［実施例４及びＫｒｕｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎａｔｓｓｃｈｒ．Ｂｒａｕｗｉｓｓ．（１９８４）３７（１２）５０５〜５１２頁を参照］。ファンタ（Ｆａｎｔａ）等は４．６重量％のミリスチン酸をアミロースリッチの殿粉に組み込んでいる（積載量）［Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｐｏｌｙｍ．（１９９９）３８（１）１〜６頁］。しかし、本質的に脂肪酸含有量のより高い（より高い積載量）分子包接化合物が得られる物質及び製造方法が切望されている。
【００１０】
例えば、抱き込まれた分子を酵素の影響から保護する機能があるので、分子包接化合物は、特に医薬品の調合用、化粧品の調製における機能性栄養剤（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄｓ）及び食品添加剤並びに食品補助剤に好適である。このような分子包接化合物の用途は、全く、偏に、包接に使用される物質の性質に左右される。
【００１１】
本発明の分子包接化合物の特定の用途について、使用される物質がα−アミラーゼに対し抵抗性を有し（消化過程の）後期に、大腸で消化されることが特に好ましい。これによって、分子包接化合物が、通常の食物消化よりも、速い、加水分解的、酵素的な消化が行なわれるのを回避できる。もし、分子包接化合物の内部で包含されている脂肪親和性分子が最初に大腸のみで遊離されれば、脂肪親和性分子は、膵液酵素と接触し、続いて酵素的に分解されるか、または、変化させられることなく、腸壁細胞から直接吸収され得る。それによって、分子包接化合物の生化学的利用性が特に有利なものになる。
【００１２】
本発明の課題は、上記から、所謂、分子包接化合物中に、脂肪酸を本質的に、量的に大きく組み込むことが可能な物質及びその製造方法を提供することにある。本発明のその他の課題は、包接に使用する物質が、分子包接化合物の用途にとって、新しい性質またはこれらの用途に対して、新しい利点を提起する分子包接化合物及びその製造方法を提供することにある。本発明の更に他の課題は、使用される物質がヒトの医薬調合物または獣医学上の薬品調合物成分として、食品の成分または飼料の成分並びに化粧品の成分として使用可能な、包接化合物、並びに、それを製造する方法を提供することにある。
【００１３】
これらの課題は、少なくとも、（ａ）生化学触媒反応により製造される、１種類の、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド及び（ｂ）１種または複数種の脂肪酸または脂肪酸誘導体からなることを特徴とする分子包接化合物の提供によって解決される。
【００１４】
本出願の他の好ましい実施形態及び対象は特許請求の範囲に記載されている。
【００１５】
発明者等は、例えば、生化学的触媒経路を経て得られる、分岐の全く無い、水不溶性のポリサッカライドが、天然の殿粉に比較して、より高い積載量の分子包接化合物を与えることを見出し、驚愕した。
【００１６】
それ故、本発明の対象は、生化学的触媒反応により製造され、水不溶性、直鎖状のポリサッカライド及び螺旋状、複合、脂肪親和性分子、例えば、脂肪酸またはそのエステルであって、螺旋状、複合、脂肪親和性化合物が組み込まれるポリグルカンに対する比率が少なくとも５重量％のものである。好ましくは、螺旋状、複合、脂肪親和性化合物の、上記組み込まれるポリグルカンに対する比率が少なくとも７重量％であり、特に好ましくは、上記組み込まれるポリグルカンに対する比率が９重量％を超えるものであり、最も好ましくは、上記組み込まれるポリグルカンに対する比率が１０重量％を超えるものである。
【００１７】
本発明の分子包接化合物の製造方法は、生化学触媒反応により製造された、直鎖状、水不溶性のポリサッカライドと脂肪親和性化合物とを均一に混合し、均一なマトリックスに加工するものである。
【００１８】
必要ならば、可塑剤（軟化剤）を添加することができる。これが添加された場合は、均一化は、押出しにより行なうことができる。専門家にとっては自明のことであるが、更に、フレーバー（香味）改善剤、外観改善剤または加工性改善剤を添加することができる。
【００１９】
本発明における好ましい軟化剤は、無臭、無色、耐光、耐寒、耐熱性で、僅かな、または、非吸湿性、耐水性、健康を損なわず、難燃性で、揮発性ができるだけ低く、非反応性で、ポリマー及び助剤と混合し、そして良好なゲル化性を示すものである。
【００２０】
特に、本発明における軟化剤は使用される各成分に対して親和性を示し、ゲル化能力及び軟化効果を示すものであるべきである。好適な軟化剤を挙げると、水；エチレングリコール、グリセリン、プロパンジオール、エリスリトール、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール；マレイン酸、アジピン酸、コハク酸のような多価アルカン酸；乳酸、２−ヒドロキシ酪酸、クエン酸、マレイン酸のような多価ヒドロキシアルカン酸；ジメチルスルホキシド；尿素または他の殿粉用溶剤である。
【００２１】
軟化剤の使用は専門家にとっては、よく知られている。その使用量は、本発明の混合物のポリサッカライド成分に対して、２〜５０重量％が好ましい。
【００２２】
フレーバー、フレーグランス、結合剤等は、例えば、化粧品または医薬品用途または、食品または食品添加剤に使用される場合は、添加されるべきである。
【００２３】
天然の殿粉の積載度（含有率）は、クロロフォルムで洗浄できないパルミチン酸重量の２〜３重量％である。ポリサッカライドとしての、生化学触媒反応により製造された、直鎖状、水不溶性の１，４−α−Ｄ−ポリグルカンを使用した、本発明の分子包接化合物では、この数値は驚くべきことに、７．７重量％まで上昇した。脂肪酸が分子接合化合物から放出され、好適条件下、酵素分解または化学的加水分解後、再分離される。
【００２４】
本発明における直鎖状、水不溶性ポリサッカライドは、モノサッカライド、ジサッカライドまたは他のモノマー成分からなるもので、モノサッカライド、ジサッカライドまたは他のモノマー成分が、常に同じ方法で相互に結合して生成される。一定の基本単位または構成成分毎に、或一種と他の或モノマーとがその都度対になって、正確に２個の結合を有している。例外は両末端の単位である。両末端単位はポリサッカライドの始点と終点を形成する。これらの基本単位は、他の或モノマーとのみ結合する。一つの基本単位の３つの結合（共有結合）を分岐という。本発明における直鎖状、水不溶性ポリサッカライドはそのポリサッカライド鎖中で、分岐を示さないか、または極く僅かに示すだけである。それで、この非常に小さい分岐含有率は、通常の分析法、例えば、１３Ｃ−または１Ｈ−ＮＭＲ−分光光度計では検出できない程度である。
【００２５】
本発明における水不溶性ポリサッカライドの概念は、ドイツ医薬品ブック（ＤＡＢ＝Ｄｅｕｔｓｃｈｅｓ ａｒｚｎｅｉｂｕｃｈ、Ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｂＨ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｏｖｉ−Ｖｅｒｌａｇ ＧｍｂＨ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、第９版、１９８７）の定義に従がって、クラス４からクラス７までの、僅かに溶ける；溶け難い；非常に溶け難い；及び、通常の不溶；の化合物に分類される。
【００２６】
本発明で使用されるポリサッカライドは、組み込まれる量の少なくとも９８％、特に、少なくとも、９９．５％が標準条件下（Ｔ＝２５℃±２０％、ｐ＝１０１３２５パスカル±２０％）で水不溶性である（クラス４または５に対応する）。それ故、本発明における好ましい水不溶性ポリサッカライドはＤＡＢのクラス４に分類される。即ち、ポリサッカライドの室温、標準圧力下の飽和溶液は３０〜１００容量部の溶剤、即ち、物質部あたりの水を含む（３０〜１００ｍｌの水に対する１ｇの物質）。本発明における好ましい水不溶性ポリサッカライドはＤＡＢのクラス５に分類される。即ち、ポリサッカライドの室温、標準圧力下の飽和溶液は１００〜１０００容量部の溶剤、即ち、物質部あたりの水を含む（１００〜１０００ｍｌの水に対する１ｇの物質）。本発明における、更に、より好ましい水不溶性ポリサッカライドはＤＡＢのクラス６に分類される。即ち、ポリサッカライドの室温、標準圧力下の飽和溶液は１０００〜１００００容量部の溶剤、即ち、物質部あたりの水を含む（１０００〜１００００ｍｌの水に対する１ｇの物質）。本発明における、最も好ましい水不溶性ポリサッカライドはＤＡＢのクラス７に分類される。即ち、ポリサッカライドの室温、標準圧力下の飽和溶液は１００００〜１０００００容量部の溶剤、即ち、物質部あたりの水を含む（１００００〜１０００００ｍｌの水に対する１ｇの物質）。
【００２７】
本発明においては、溶け難い、から、通常の不溶、までの範囲の水不溶性ポリサッカライド、特に、非常に溶け難い、から、通常の不溶、までの範囲の水不溶性ポリサッカライドが好ましい。
【００２８】
クラス６に対応する非常に溶け難いポリサッカライドについては後続の試験で具体的に説明される。
【００２９】
１グラムの試験用ポリサッカライドを１リットルの脱イオン水に加えて、摂氏１３０度、１バールの圧力下に加熱する。生成溶液を数分間安定に保持する。標準条件下で冷却すると、溶質は再沈殿する。室温で冷却、遠心分離で分離後、実験ロスを配慮して、少なくとも、投入量の６６％が収得された。
【００３０】
水不溶性のポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンの使用が好ましい。
【００３１】
本発明の範囲内では、直鎖状、水不溶性ポリサッカライドは、生化学的触媒反応（同義語：生化学的変換）または醗酵プロセスで製造されることが好ましい。
【００３２】
本発明の範囲内の生化学的触媒反応（同義語：生化学的変換）で製造される、直鎖状ポリサッカライドは、オリゴサッカライド、例えば、モノ及び／またはジサッカライドのような、モノマー状の基本構成単位のいわゆる生化学触媒反応、通常、酵素を使用した触媒反応によって製造される。生化学触媒作用は、生きて、生長している細胞、不活性細胞、固定されている細胞を使用するか、または遺伝子工学的に分離または製造された酵素を使用して、単相または多相システムで実施される。
【００３３】
醗酵法により得られた直鎖状ポリサッカライドは、本発明においては、やはり、直鎖状ポリサッカライドを意味するが、これは醗酵プロセスにより、自然界に存在する真菌類、藻類またはバクテリアを使用して、または、バクテリアなどの自然界に存在する微生物に、遺伝子工学的手法を適用して、一般に定義されるような、自然界に存在しない微生物に変換したものを使用することによって得られるか、または、醗酵プロセスの利用により得ることができる。
【００３４】
本発明における直鎖状ポリサッカライドとしては、更に加えて、好ましくは、１，４−α−Ｄ−ポリグルカン及び他のポリグルカンまたは他のプルラン、ペクチン、マンナンまたはポリフラクタンのような直鎖状ポリサッカライドが使用可能である。
【００３５】
更に、本発明の分子包接化合物の製造に使用される直鎖状ポリサッカライドは非直鎖状ポリサッカライドの反応から得られる。その反応においては、分岐部分を含有する、非直鎖状ポリサッカライドが酵素で処理され、分岐部分が分解され、直鎖状ポリサッカライドが得られる。この目的に使用される酵素としては、例えば、アミラーゼ、イソ−アミラーゼ、グルコノハイドロラーゼまたはプルラナーゼがある。いずれにしても、本発明のポリサッカライドは常に厳密に直鎖状でなければならぬ。
【００３６】
本発明の特に好ましい、実施態様は、ポリサッカライドとして１，４−α−Ｄ−ポリグルカンを使用する形態である。好ましくは、１，４−α−Ｄ−ポリグルカンは生化学的触媒反応（生化学的変換反応）プロセスにより、ポリサッカライドシンテーゼ、殿粉シンテーゼ、グリコシルトランスフェラーゼ、α−１，４−グルカントランスフェラーゼ、グリコーゲンシンテーゼ、アミロシュークラーゼまたはフォスフォリラーゼの作用によって製造される。
【００３７】
本発明に使用される直鎖状ポリサッカライドの分子量ＭＷは１０３ｇ／ｍｏ１〜１０７ｇ／ｍｏ１の広い範囲内の値を取ることができる。好ましい直鎖状ポリサッカライドは、１，４−α−Ｄ−ポリグルカンであり、その分子量は１０４ｇ／ｍｏｌ〜１０５ｇ／ｍｏｌであり、特に好ましくは、２×１０４ｇ／ｍｏｌ〜５×１０４ｇ／ｍｏ１である。
【００３８】
本発明のα−アミラーゼー抵抗性ポリサッカライドは、１，４−α−Ｄ−ポリグルカンを、公知の方法で変換したものである。
【００３９】
このようにして、１，４−α−Ｄ−ポリグルカンの２−、３−または６−位置が、化学的変換により、エーテル化またはエステル化され得る。専門家はこの化学的変換については十分精通している。例えば、以下の文献を参照されたい。
【００４０】
１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ、第２版、Ｙ．Ｐｏｍｅｒａｎｚ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ（１９９１）。
２．Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ［“Ｌｅｈｒｂｕｃｈ ｄｅｒ Ｌｅｂｅｎｓｍｉｔｔｅｌｃｈｅｍｉｅ”］、Ｂｅｌｉｔｚ ＆ Ｇｒｏｓｃｈ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９２）。
３．“Ｃｉｔｒａｔ Ｓｔａｒｃｈ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｓ ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ Ｓｔａｒｃｈ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｆｏｏｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ”、Ｂ．Ｗｅｐｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｅｕｐｏｐｅａｎ Ａｉｒ Ｃｏｎｃｅｒｔｅｄ Ａｃｔｉｏｎ、Ａｂｓｔｒａｃｔ：ａｉｒ３ｃｔ９４−２２０３、Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｎｏｎ−ｄｉｇｅｓｔｉｂｌｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ、Ｐｒｏ Ｆｉｂｒｅ−Ｔａｇｕｎｇ、Ｌｉｓｓａｂｏｎ、Ｆｅｂｒｕａｒ １９９８、５９頁。
【００４１】
本発明の目的達成のために、一定のＲＳ含量は、α−アミラーゼ−抵抗性ポリサッカライドの含有量と定義される。この値はエングリスト（Ｅｎｇｌｙｓｔ）等の方法によって決定される［Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｓｔａｒｃｈ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、４６（第２３増補版）（１９９２）３３〜５０］。
【００４２】
更に、本発明の目的達成のために、本発明の分子包接化合物は、ポリサッカライドと、脂肪親和性化合物の１種類の複合体からなるだけでなく（図１）、これらの化合物のかなりの量が、例えば、粉末の形態である。
【００４３】
本発明の分子包接化合物はその好ましい実施例において、天然の殿粉に比較して、α−アミラーゼに対する高い抵抗性を示す。特に好ましい本発明の実施例において、本発明のα−アミラーゼ−抵抗性包接化合物は、エングリスト（Ｅｎｇｌｙｓｔ）によるＲＳ含量が少なくとも３０重量％、好ましくは、５０重量％、特に好ましくは、７５重量％、または、最も好ましくは、９５重量％を示す。
【００４４】
本発明においては、以下のことが非常に重要である。本発明において使用可能な、生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライドは、天然殿粉及び従来技術の、天然殿粉の酵素処理により、直鎖状にされた殿粉とは多数の特徴において異なる。その相違点をまとめて下記の表１に記載した。
【００４５】
【表１】
天然殿粉と本発明で使用可能な、生化学触媒反応により製造される、直鎖状、水不溶性、ポリサッカライド、特に１，４−α一Ｄ−ポリグルカンとの間の相違点。
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【００４６】
十分に確実性があるわけではないが、本発明の包接化合物の積載量が従来技術の包接化合物に比較して驚異的に高いことを確信している。本発明の請求項の分子包接化合物はこれらの個々の素材の特徴に起因するのではなく、むしろ、これらの特徴の総和、即ち、本発明における分子の厳密な直鎖性及びリン酸エステルを含まないことが、全体として、低い水溶解性と結びついて、本発明の包接化合物が、このように驚異的に有利な特性を示すことの要因となっている。
【００４７】
直鎖状１，４−α−Ｄ−ポリグルカンでは、天然の殿粉に比較してより大きな抵抗性を有する（ＲＳ＞３０％）ので、これは、化合物の経口投与において、その効果が胃及び小腸を通過後に初めて発揮されるという利点を有する。
【００４８】
そして、例えば、脂肪親和性の活性素材が、初めて、大腸のみで放出され得る。
【００４９】
本発明で使用可能な脂肪親和性素材の例としては、飽和脂肪酸または不飽和脂肪酸であって、所謂、ＰＵＦＡｓである。本発明の目的に使用されるＰＵＦＡｓ（ｐｏｌｙ−ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ）は、炭素原子数１２を超える鎖長で、少なくとも、二つの二重結合を有する脂肪酸であると定義される（表２参照）。この場合、フリーの脂肪酸及び脂肪酸エステル、生理的に摂取可能な脂肪酸塩、トリグリセライドまたはその他の誘導体の形態のものである。
【００５０】
下記の表は本発明において特に好適に使用される脂肪酸についての、全てではないが、纏めた一覧表である。
【００５１】
【表２】
本発明において特に好適に使用可能な脂肪酸。
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【００５２】
本発明の特に好ましいα−アミラーゼ抵抗性分子包接化合物による包接によって、これら脂肪酸は消化システムにおける先駆的消化に対して保護され得る。
【００５３】
本発明における混合物のポリサッカライド成分では、相異なる、生化学的触媒反応で製造された、水不溶性で、直鎖状のポリサッカライドの混合物であることが明らかである。
【００５４】
分子包接化合物の用途は下記の疾病分野及びその他である。腸腫瘍［Ｂｏｕｇｎｏｕｘ １９９９、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｅ、２（２）、１２１〜１２６；Ｗｉｓｏｎｔ １９９９、Ｉｎｆｏｒｍ １０（５）、３８０〜３９７］、腸炎（例えば、局限性回腸炎またはコリティス）、精神神経系疾病（例えば、鬱病、精神分裂病、アルツハイマー病）及び血管系の疾病（例えば、高血圧、動脈硬化症）。
【００５５】
本発明の分子包接化合物の更に重要な用途分野は、子供用食品、幼児及び新生児用食品、臨床用食品、機能性栄養剤、化粧品添加剤及び食品添加剤である。
【００５６】
図１は分子包接化合物の描写図である。（Ａ）は螺旋状ポリサッカライドへ脂肪酸が結合しつつある過程、（Ｂ）は脂肪酸が完全に納まった状態、である。
【００５７】
図２はポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンと３５％グリセリンとの組成物（１）及びこれに各々２．５％パルミチン酸添加の組成物（２）、同じく５％添加の組成物（３）、同じく１０％添加の組成物（４）の各々のＸ線スペクトルを示す。
【００５８】
【実施例】
以下の実施例で本発明を更に詳しく説明する。
【００５９】
実施例１：
ポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンの製造
５リットルの容器に５リットルの滅菌済み３０％サッカロース溶液を投入した。
ナイセリア・ポリサッカレア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｅａ）から得られたアミロシュークラーゼを含む（ＷＯ９５ ３１ ５５３参照）酵素抽出液の一定量を添加し、混合した。この実験で添加された酵素の活性は１４８，０００ユニットである。密閉された容器で２７℃で培養した。生化学的変換の間に白色沈殿が形成された。反応は３９時間後に完了した。沈殿物を遠心分離し、−７０℃に凍結し、次いで、凍結乾燥した。凍結乾燥された固形物の重量は５２６．７ｇであった（収率７０．２％）。
【００６０】
低分子量の砂糖を除去するために、２００ｇの固形物を水で、３０分間、室温で攪拌しながら、洗浄した。−７０℃で凍結し、凍結乾燥した。フラクトースとサッカロースの含有量の測定は、固形物をＤＭＳＯに溶かし、結合している酵素のアッセイ１によって決められ、１００ｍｇ固形物あたり、４．６１ｍｇフラクトース（４．６％）であった。サッカロースの含有量は検出限界以下であった。
【００６１】
生化学的変換の上澄み液は９５℃で変成する。室温まで冷却後、新たに遠心分離した。透明な上澄みは−７０℃に凍結され、４℃で３日間かけて、解凍した。このようにして得られた沈殿を−７０℃で凍結し、凍結乾燥した。
【００６２】
低分子量の砂糖を除去するために、３９．５ｇの固形物を水で、３０分間、室温で攪拌しながら、洗浄した。−７０℃で凍結し、凍結乾燥した。フラクトースとサッカロースの含有量の測定は、固形物をＤＭＳＯに溶かし、シュティット等（Ｓｔｉｔｔ ｅｔ ａｌ．）の結合している酵素アッセイ［Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．、１７４（１９８９）５１８〜５５２］によって決められ、１００ｍｇ固形物あたり、２．２７ｍｇフラクトースであった。サッカロースの含有量は検出限界以下であった。
【００６３】
実施例２：
出発物質の特徴
実施例１（図１）の、合成された水不溶性ポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンの分子量の決定。
【００６４】
実施例１のポリ−１，４−Ｄ−グルカン２ｍｇを室温でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｒｉｅｄｅｌ−ｄｅ−Ｈａｅｎ社気付）に溶かし、濾過した。溶液の一部をゲル透過クロマトグラムのカラムに注入した。溶出液として、ＤＭＳＯを使用した。シグナル強さをＲＩ検出器で測定し、標準プルラン（Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）に対して測定値を得た。流量は１．０ｍｌ／分であった。
【００６５】
数平均分子量（Ｍｎ）は２．３２６ｇ／ｍｏｌで、平均重量分子量（Ｍｗ）は３．３６７ｇ／ｍｏｌである。再現生は１００％であった。
【００６６】
実施例３：
最高複合化度の決定
ポリ−α−１，４−Ｄ−グルカン２００ｇ（実施例１の物質）、７０ｇグリセリン及びこれと各々５ｇ、１０ｇ、２０ｇ、及び３０ｇのパルミチン酸（上記ポリグルカン重量の各々２．５％、５％、１０％及び１５％に相当する）との各混合物を調製し、１７０℃、１００ｒｐｍで、エクストルーダーで均一に混合した。冷却後、試料を取り出した。ＤＳＣ（ｄｉｇｉｔａｌ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃａｌｏｒｉｍｅｔｒｙ）により、試料の溶融ピークを測定した。次いで、ソックスレー抽出（クロロフォルム、４８時間）で、非複合化パルミチン酸を遊離させることにより、複合化度Ｋｘを決定した。
【００６７】
複合体形成の結果、パルミチン酸が螺旋状アミロース中に取り込まれ、そこには凝集性のパルミチン相は存在しない。過剰量のパルミチン酸がある場合、酸の非複合化部分が、その固有の溶融ピークの干渉性の相として存在する。パルミチン酸の溶融ピークが存在しないことは、複合化が完全に行なわれていることの証明である。残余の溶融ピークが、なお存在すると、複合化された酸の比率が面積の差異から算出される。これらの値は表３に、ソックスレー抽出の結果と対比して記載した。表３の最後の欄に、その他のソックスレー抽出の結果を記載した。そこでは、実施例１の試料調製時に、天然殿粉（精製じゃがいも殿粉）をポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンの代わりに使用した。
【００６８】
【表３】
ＤＳＣ及びソックスレー抽出の結果。
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【００６９】
その結果、精製ポリ−α−１，４−Ｄ−グルカン重量の３５％の軟化剤としてのグリセリン、同じく上記グルカン重量の７．５％〜７．７％のパルミチン酸の使用で、複合化が可能であることが結論付けられた。それに対して、天然ジャガイモ殿粉の使用によっては、最高の複合化は２．５％パルミチン酸で可能であった。
【００７０】
実施例４：
Ｘ線による構造調査
実施例３記載の試料をＸ線構造解析に供試した。３５％グリセリン含有のポリ−α−１，４−Ｄ−グルカン（１）及び、これに、各々、２．５％（２）、５％（３）及び１０％（４）パルミチン酸を添加した、各混合物のＸ線スペクトルを図２に示した。精製され、可塑剤を添加された、非晶質塩からのポリ−α−１，４−Ｄ−グルカン（１）のスペクトルは、１３．７°、１５．５°、２１．１°２Θ、で３つの大きなピークを示し、そして、幾つかのより小さいピークを示すことが解る。１３．７°及び２１．１°における反射はＶ−アミロースの簡単な螺旋構造、複合化澱粉の典型的タイプの構造の特徴を示す。それに加えて、１５．５°の反射及び幾種類かのより小さい反射が裏付ける、なお幾つかの構造が存在する。これらの構造はパルミチン酸含量の増加に伴って減少する。これに対して、Ｖ−アミロース構造タイプは反射１３．７°で継続して、著しく明瞭に現われる。これはパルミチン酸非含有で僅かに形成され、パルミチン酸含量の増加に伴って［（２）→（４）］より明瞭に現出する。最高の複合化度で、Ｖ−アミロース構造タイプの全結晶相が現われる。１０％パルミチン酸（４）では、７．５°２Θで、精製パルミチン酸に分類されるべき反射が観察される。この濃度での非複合性パルミチン酸の存在は、ＤＳＣ測定及びソックスレー抽出結果が一致し、Ｘ線スペクトルでは、１０％パルミチン酸から初めて決定することができ、２．５％及び５％では反射が現われなかった。
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は分子包接化合物の描写図である。（Ａ）は螺旋状ポリサッカライドへ脂肪酸が結合しつつある過程、（Ｂ）は脂肪酸が完全に納まった状態、を示す。
【図２】
図２はポリ−α−１，４−Ｄ−グルカンと３５％グリセリン組成物（１）及びこれに、それぞれ、２．５％パルミチン酸添加の組成物（２）、同じく５％添加の組成物（３）、同じく１０％添加の組成物（４）の各場合の、各々のＸ線スペクトルを示す。
【図１】
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【図２】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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