(57)【要約】本発明は、大腸癌を検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングのための新規な方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における大腸癌の存在を診断する方法であって、
（ａ）患者における細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルを測定すること、および
（ｂ）正常ヒト対照由来の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルと、測定されたＣＳＧレベルとを比較すること、ここで、正常ヒト対照に対する患者における測定ＣＳＧレベルの変化は、大腸癌の存在に関連する、
を含む、前記方法。
【請求項２】
患者における大腸癌の転移を診断する方法であって、
（ａ）転移したことがわかっていない大腸癌を有する患者を同定すること、
（ｂ）該患者由来の細胞、組織または体液の試料中のＣＳＧレベルを測定すること、および
（ｃ）正常ヒト対照の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルと、測定ＣＳＧレベルとを比較すること、ここで、正常ヒト対照に対する患者における測定ＣＳＧレベルの増加は、転移した癌に関連する、
を含む、前記方法。
【請求項３】
大腸癌を有する患者における大腸癌をステージングする方法であって、
（ａ）大腸癌を有する患者を同定すること、
（ｂ）患者由来の細胞、組織または体液の試料中のＣＳＧレベルを測定すること、および
（ｃ）正常ヒト対照の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルと、測定ＣＳＧレベルとを比較すること、ここで、正常ヒト対照に対する患者における測定ＣＳＧレベルの増加は、進行している癌に関連し、測定ＣＳＧレベルの減少は、消退または寛解している癌に関連する、
を含む、前記方法。
【請求項４】
転移の発生に関して、患者における大腸癌をモニタリングする方法であって、
（ａ）転移したことがわかっていない大腸癌を有する患者を同定すること、
（ｂ）患者由来の細胞、組織または体液の試料中のＣＳＧレベルを定期的に測定すること、および
（ｃ）正常ヒト対照の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルと、定期的に測定したＣＳＧレベルとを比較すること、ここで、正常ヒト対照に対する患者において定期的に測定した前記ＣＳＧレベルの１つの増加のいずれもが、転移した癌に関連する、
を含む、前記方法。
【請求項５】
患者における大腸癌のステージの変化をモニタリングする方法であって、
（ａ）大腸癌を有する患者を同定すること、
（ｂ）患者由来の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルを定期的に測定すること、および
（ｃ）正常ヒト対照の細胞、組織または体液におけるＣＳＧレベルと、定期的に測定したＣＳＧレベルとを比較すること、ここで、正常ヒト対照に対する患者において定期的に測定した前記ＣＳＧレベルの１つの増加のいずれもが、ステージが進行している癌に関連し、減少が、ステージが後退しているかまたは寛解している癌に関連する、
を含む、前記方法。
【請求項６】
大腸癌のイメージングおよび処置における使用のための潜在的治療剤を発見する方法であって、分子を、ＣＳＧに結合する能力、または該剤の非存在下におけるＣＳＧに相対してＣＳＧの発現を減少させる能力に関してスクリーニングすることを含み、ここで、ＣＳＧに結合する分子の能力またはＣＳＧの発現を減少させる能力は、該分子が大腸癌のイメージングおよび処置において有用であることを示す、前記方法。
【請求項７】
ＣＳＧが、配列番号８４、配列番号１もしくは配列番号２またはこれらによりコードされるポリペプチドを含む、請求項１、２、３、４、５または６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドが、配列番号３または配列番号４を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
配列番号８４、配列番号１または配列番号２によりコードされるポリペプチドを特異的に結合する抗体。
【請求項１０】
配列番号３もしくは４またはこれらのエピトープを含むポリペプチドを結合する、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】
エピトープが表１に記載されている、請求項１０に記載の抗体。
【請求項１２】
請求項９に記載の抗体を患者に投与することを含む、患者における大腸癌のイメージングの方法。
【請求項１３】
抗体が、常磁性イオンまたは放射性同位体で標識されている、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＳＧの発現または活性を下方調節する分子を患者に投与することを含む、患者における大腸癌の処置の方法。
【請求項１５】
ＣＳＧを発現する標的細胞に対する免疫応答を誘発する方法であって、免疫応答が標的細胞に対して惹起されるように、免疫原性刺激量のＣＳＧタンパク質をヒト患者に送達することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の技術分野
本発明は、部分として、癌、特に大腸癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングおよび処置のための新たに開発されたアッセイに関する。
【０００２】
発明の背景
大腸の癌は、腸管に限局していれば、高度に処置可能で、多くの場合治癒する疾患である。それは、米国において最も頻繁に診断される悪性腫瘍の１つであるとともに、２番目に多い癌死の原因である。初期治療は手術であり、それにより約５０％の患者が治癒する。しかしながら、術後の再発が大きな問題であり、多くの場合それが最終的な死因となる。
大腸癌の予後判定は、腸管壁を介した腫瘍の侵入度合およびリンパ節転移（ｎｏｄａｌ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）の有無に明白に関係している。これら２つの特徴は、この疾患のために開発された全てのステージングシステムの基礎を形成している。処置の決定は、通常、ステージングのための旧デューク（ｏｌｄｅｒ Ｄｕｋｅ’ｓ）分類または改変Ａｓｔｌｅｒ−Ｃｏｌｌｅｒ（ＭＡＣ）分類を参照してなされる。
【０００３】
腸管閉塞および腸管穿孔が、大腸癌患者における不良な予後の指標である。処置前の癌胎児性抗原（ＣＥＡ）および糖鎖抗原１９−９（ＣＡ１９−９）の上昇した血清レベルもまた、予後に関してネガティブな意味を有する。
上診時における７０歳を超える年齢は、標準的な治療にとって禁忌ではない。許容し得る罹患率および死亡率、ならびに長期の生存が、この患者集団で達成されている。
【０００４】
本疾患が高頻度であり（年間約１６０，０００件の新たな結腸および直腸癌の症例）、ハイリスク集団が分かっており、一次病変の増殖が緩徐であること証明されており、早期の病変での生存が良好であり、そしてスクリーニング検査が比較的容易で正確なため、大腸癌のスクリーニングは、５０歳以上の全ての成人、特に結腸直腸癌の一等親血縁者の日常的なケアの一部となるべきである。
【０００５】
大腸癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、および予後判定に用いられる手順は、患者の予後にとって決定的に重要である。例えば、早期大腸癌と診断された患者は、一般的に、遠隔転移性大腸癌と診断された患者の５年生存率と比較して、はるかに高い５年生存率を有する。大腸癌を早期に検出するための、より感受性が高く特異的な新たな診断方法が明らかに必要である。
【０００６】
初期治療後およびアジュバント療法中に、大腸癌患者を綿密にモニタリングして、治療に対する応答を測定し、持続性もしくは再発性の転移の疾患を検出する。大腸癌、その再発および進行を検出する際に、より感受性が高く特異的な大腸癌マーカーが明らかに必要である。
【０００７】
大腸癌を管理する際の別の重要なステップは、患者の疾患のステージを決定することである。ステージの決定は、潜在的な予後判定価値を有し、最適治療を設計するための基準を提供する。一般に、大腸癌の病理学的ステージングは、より正確な予後判定を与えるため、臨床的ステージングよりも好ましい。しかしながら、臨床的ステージングは、病理学的評価用組織を得るための侵襲的方法によらないので、少なくとも病理学的ステージングと同程度に正確である場合には好ましいであろう。大腸癌のステージングは、異なる浸潤のステージを識別することができる、細胞、組織または体液における新規マーカーを検出することにより改良されるであろう。
【０００８】
したがって、かかる癌が転移しているか否かを決定するための、より高感度で正確な、ヒトにおける大腸癌をステージングする方法、および転移の発生に関して、ヒトにおける転移していない大腸癌の進行をモニタリングする方法が強く求められている。
【０００９】
本発明では、本明細書中でＣＳＧと呼ばれる大腸特異遺伝子による大腸癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングおよび処置の方法が提供される。本発明に関しては、ＣＳＧはとりわけ配列番号１のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子により発現される未変性（ｎａｔｉｖｅ）タンパク質を表す。本明細書中では、「ＣＳＧ」の意味には、配列番号８４のポリヌクレオチドのスプライス変異体も含まれる。本発明の典型的なＣＳＧのスプライス変異体は、配列番号１および２に記載されている。
【００１０】
本明細書中では、「ＣＳＧ」はまた、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号８４、配列番号１または配列番号２に比べヌクレオチド配列中に変化を含むが、依然として同一タンパク質をコードするポリヌクレオチドをも意味する。配列番号１によりコードされる本発明の典型的なＣＳＧタンパク質は、配列番号３に示されている。配列番号２によりコードされる本発明の典型的なＣＳＧタンパク質は、配列番号４に示されている。
【００１１】
あるいは、本明細書中で用いられるＣＳＧが意味するものは、配列番号８４、配列番号１または配列番号２のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によりコードされる未変性ｍＲＮＡ、配列番号８４、配列番号１または配列番号２のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のレベル、または配列番号８４、配列番号１または配列番号２のアンチセンス配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドのレベルを意味する。配列番号８４はまたＣｌｎ１０６とも呼ばれ、一方配列番号１および２は、Ｃｌｎ１０６のスプライス変異体と呼ばれる。
【００１２】
本発明の他の目的、特徴、利点および側面は、以下の説明より当業者に明らかになるだろう。しかしながら、以下の説明および具体的な例は、発明の好ましい態様を示すものではあるが、例示のみを目的として記載されたものであることが理解されるべきである。以下の記述を読むことにより、そして本開示のその他の部分を読むことにより、開示の発明の精神および範囲内での各種変更および改良は当業者に容易に明らかになるだろう。
【００１３】
発明の概要
これらの目的、およびその他の目的に対し、本発明の目的は、細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルの変化を、正常ヒト対照の、好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧのレベルと比較して分析することにより、大腸癌の存在を診断する方法であって、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの変化が大腸癌に関連する方法を提供することである。
【００１４】
さらに、転移した大腸癌を有することが疑われるヒト患者を同定し、かかる患者由来の細胞、組織または体液試料をＣＳＧについて分析し、かかる細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルを正常ヒト対照の、好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することにより、転移をしたことがわかっていない大腸癌を有する患者における転移性大腸癌を診断する方法であって、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの増加が、転移をした大腸癌に関連する方法が提供される。
【００１５】
発明はさらに、大腸癌を有するヒト患者を同定し、かかる患者由来の細胞、組織または体液試料を分析し、かかる細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルを、正常ヒト対照試料の、好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することにより、かかる癌を有するヒトにおいて大腸癌をステージングする方法であって、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの増加が、進行している癌またはより進んだステージにある癌に関連し、減少が消退している癌またはより低いステージにある癌または寛解している癌に関連する方法を提供する。
【００１６】
さらに、転移の発生について、大腸癌を有するヒトにおける大腸癌をモニタリングする方法が提供される。この方法は、転移したことがわかっていないかかる癌を有する患者を同定することと、かかる患者由来の細胞、組織または体液試料をＣＳＧについて定期的に分析することと、かかる細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルを、正常ヒト対照試料の、好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することとを含み、ここで、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの増加が、転移した癌に関連している。
【００１７】
さらに、大腸癌を有するヒトにおけるＣＳＧレベルを観察することにより、大腸癌を有するヒトの大腸癌のステージの変化をモニタリングする方法が提供される。この方法は、かかる癌を有するヒト患者を同定することと、かかる患者由来の細胞、組織または体液試料をＣＳＧについて定期的に分析することと、かかる細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルを、正常ヒト対照試料の、好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することとを含み、ここで、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの増加が、進行している癌に関連し、ＣＳＧレベルの減少が、消退または寛解している癌に関連する。
【００１８】
さらに、大腸癌のイメージングおよび処置に使用するための、ＣＳＧを標的とする新たな治療剤を設計する方法を提供する。例えば、一態様では、ＣＳＧを標的とする抗体、またはかかる抗体の断片などの治療剤を用い、疾患もしくは症状を検出または診断することを目的とし、患者におけるＣＳＧの局在を処置、検出またはイメージングすることができる。このイメージングの態様では、正常組織に比して検出される標識抗体量の増加が腫瘍転移または成長の指標となるであろう。かかる抗体は、ポリクローナル、モノクローナルまたはオムニクローナルであることができ、あるいは分子生物学的技術により調製できる。
【００１９】
本発明にて、および本明細書全体にわたって用いられる場合、「抗体」という用語はまた、ＳＥＬＥＸと呼ばれ、当業者に既知であるｉｎ ｖｉｔｒｏ進化プロトコルに由来するものなどのアプタマーおよび一本鎖オリゴヌクレオチドを含むとされる。抗体は放射性同位体および常磁性金属を含むが、これらに限定されない各種の検出可能な標識および治療剤で標識することができる。ＣＳＧの濃度および／または活性を下げる小分子および抗体などの治療剤もまたＣＳＧの過剰発現を特徴とする疾患の処置に使用できる。かかる剤は本明細書中の教示に従い容易に同定できる。
【００２０】
本発明の他の目的、特徴、利点および側面は、以下の説明から当業者に明らかになるだろう。しかしながら、以下の説明および具体的な例は、発明の好ましい態様を示しているが、例示のみを目的としていると理解されるべきである。以下の説明を読み、および本開示のその他部分を読むことから、開示の発明の精神および範囲内の各種変更および改良は当業者に容易に明らかになるだろう。
【００２１】
発明の詳細な説明
本発明はとりわけ、ヒト患者のＣＳＧレベルと、正常ヒト対照でのＣＳＧのレベルとを比較することにより、癌、そして特に大腸癌を検出、診断、モニタリング、ステージング、および予後判定する定量的および定性的両方の診断アッセイならびに方法に関する。現在、大腸癌組織においてＣＳＧレベルが、正常組織に比較して上昇していることが見出されている。
【００２２】
本発明に関しては、ＣＳＧはとりわけ配列番号８４のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子により発現される未変性タンパク質を表す。本明細書中では、「ＣＳＧ」の意味には、配列番号８４のポリヌクレオチドのスプライス変異体も含まれる。本発明の典型的なＣＳＧのスプライス変異体は、配列番号１および配列番号２に記載されている。本明細書中では、「ＣＳＧ」はまた、遺伝コードの縮重に起因して、配列番号８４、配列番号１または配列番号２に比べヌクレオチド配列中に変化を含むが、依然として同一タンパク質またはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドをも意味する。配列番号１によりコードされる本発明の典型的なＣＳＧタンパク質は、配列番号３に示されている。配列番号２によりコードされる本発明の典型的なＣＳＧタンパク質は、配列番号４に示されている。
【００２３】
あるいは、本明細書中で用いられるＣＳＧが意味するものは、配列番号８４、配列番号１または配列番号２のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によりコードされる未変性ｍＲＮＡ、配列番号８４、配列番号１または配列番号２のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のレベル、または配列番号８４、配列番号１または配列番号２のアンチセンス配列に、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズ可能なポリヌクレオチドのレベルを意味する。配列番号８４はまたＣｌｎ１０６とも呼ばれ、一方配列番号１および２は、Ｃｌｎ１０６のスプライス変異体と呼ばれる。
【００２４】
ＣＳＧのレベルは、好ましくは、正常および異常レベルの決定を含む、細胞、組織および／または体液の少なくとも１つについて測定される。したがって、例えば正常対照体液、細胞、または組織試料に比較したＣＳＧタンパク質の過剰発現を診断するための本発明による診断アッセイは、大腸癌の存在の診断に使用され得る。
本発明のすべての方法は、ＣＳＧと同様に、任意に他の癌マーカーのレベルを決定することを含んでもよい。ＣＳＧの以外の本発明に有用な他の癌マーカーは、当業者に既知である。
【００２５】
診断アッセイ
本発明は、好ましくは同種類の正常ヒト対照由来の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較した、細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルの変化を分析することにより、癌、そして特に大腸癌の存在を診断する方法であって、正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧレベルの増加が、大腸癌の存在に関連する方法を提供する。
【００２６】
本発明を限定するものではないが、典型的に、定量的診断アッセイにおいて、試験される患者が癌を有することを示す陽性の結果は、ＣＳＧなどの癌マーカーの細胞、組織または体液レベルが、正常ヒト対照の好ましくは同一細胞、組織または体液中より、少なくとも２倍高く、最も好ましくは少なくとも５倍高いものである。
【００２７】
本発明はまた、転移の発生に関して、いまだ転移していない大腸癌を有する患者において、転移性大腸癌を診断する方法も提供する。本発明の方法では、転移した大腸癌を持つと疑われる（しかしそれまでに転移したことはわかっていない）ヒト癌患者が同定される。このことは当業者に既知の各種手段により達成される。
【００２８】
本発明では、細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルの存在を決定することは、特に転移をしていない大腸癌と転移をしている大腸癌とを区別するのに有用である。従来技術は、転移をしている大腸癌と転移をしていない大腸癌とを区別することが難しく、適切な処置の選択はかかる知識に依存することが多い。
【００２９】
本発明では、かかる細胞、組織または体液にて測定される癌マーカーレベルはＣＳＧであり、正常ヒト対照の好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較される。すなわち、観察される癌マーカーがまさに血清中のＣＳＧである場合、このレベルは好ましくは、正常ヒト対照の血清中のＣＳＧレベルと比較される。正常ヒト対照に対する患者におけるＣＳＧの増加は、転移を有する大腸癌に関連する。
【００３０】
本発明を限定するものではないが、典型的に、定量的診断アッセイにおいて試験またはモニターされる患者における癌が転移していることを示す陽性結果は、ＣＳＧなどの癌マーカーの細胞、組織または体液レベルが、正常患者の好ましくは同一細胞、組織または体液中よりも、少なくとも２倍高く、最も好ましくは少なくとも５倍高いものである。
【００３１】
本明細書中で用いる正常ヒト対照は、癌を有しないヒト患者および／または患者由来の非癌性試料を含み、転移を診断またはモニタリングする方法では、正常ヒト対照はまた、好ましくは、信頼性の高い方法により転移していない大腸癌を有することが決定されているヒト患者由来の試料を含んでもよい。
【００３２】
ステージング
本発明はまた、ヒト患者における大腸癌をステージングする方法も提供する。この方法は、かかる癌を持つヒト患者を同定すること、およびかかるヒト患者由来の細胞、組織または体液をＣＳＧについて分析することを含む。次に、患者において決定されたＣＳＧレベルを、正常ヒト対照の好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較し、ここで、正常ヒト対照に対するヒト患者のＣＳＧレベルの増加が進行している癌またはより高いステージにある癌に関連し、ＣＳＧレベルの低下（それでも真の正常レベルよりは高い）が、消退している癌またはより低いステージにある癌または寛解している癌に関連する。
【００３３】
モニタリング
さらにかかる癌を持つヒト患者において、転移の発生に関して大腸癌をモニタリングする方法を提供する。この方法は、転移がしていることがわかっていないかかる癌を持つヒト患者を同定すること、かかる患者由来の細胞、組織または体液を定期的にＣＳＧレベルについて分析すること、およびヒト患者において決定されたＣＳＧレベルを、正常ヒト対照の好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することを含み、ここで正常ヒト対照に対するヒト患者のＣＳＧレベルの増加が、転移している癌に関連する。この方法では、正常ヒト対照試料には、同一の患者からの以前の試料もまた含まれ得る。
【００３４】
さらに本発明により提供されるのは、大腸癌のステージの変化を、かかる癌を有するヒト患者においてモニタリングする方法である。該方法は、かかる癌を有するヒト患者を同定すること、かかるヒト患者由来の細胞、組織または体液をＣＳＧについて定期的に分析すること、およびヒト患者において決定されたＣＳＧレベルを、正常ヒト対照の好ましくは同種類の細胞、組織または体液中のＣＳＧレベルと比較することを含み、ここで正常ヒト対照に対するヒト患者におけるＣＳＧレベルの増加が、ステージが進行している癌に関連し、ＣＳＧレベルの減少が、ステージが後退しているかまたは寛解している癌に関連する。この方法において、正常ヒト対照試料には、以前の患者試料も含まれる得る。
【００３５】
転移の発生に関しての患者のモニタリングは定期的であり、好ましくは４半期ごとに実施される。しかしながら、これは、癌、特定患者および癌のステージに依存して、より高頻度で、またはより低頻度で実施されてもよい。
【００３６】
予後判定試験および臨床試験モニタリング
本明細書中に記載の方法はさらに、ＣＳＧレベル増加に関連した疾患または障害を発症する対象、またはその危険性を有する対象を同定するための予後判定アッセイとしても利用できる。本発明は、試験試料をヒト患者より得て、ＣＳＧを検出する方法を提供する。正常ヒト対照に比べ高レベルのＣＳＧの存在は、癌、特に大腸癌を発症する危険性があるヒト患者のための診断である。
【００３７】
本発明のＣＳＧの発現または活性を低下させる治療剤の有効性は、臨床試験中における、または、ヒト細胞におけるものなどのｉｎ ｖｉｔｒｏスクリーニングアッセイにおける、ヒト患者のＣＳＧの発現レベル、例えば処置の最中におけるものを分析することによりモニタリングすることもできる。このようにして、ＣＳＧの発現パターンは、ヒト患者、場合によっては細胞の、試験される剤または患者を処置するために用いる剤に対する生理学的応答を示すマーカーとして利用できる。
【００３８】
遺伝子病変および突然変異の検出
本発明の方法はまた、ＣＳＧにおける遺伝子病変、または突然変異の検出にも使用することができ、これにより遺伝子病変を持つヒトが大腸癌に対する危険性を有するか、または大腸癌を有するかどうかを決定することができる。遺伝子病変は例えば、本発明のＣＳＧからの１または２以上のヌクレオチドの欠失および／または付加および／または置換の存在、ＣＳＧの染色体再配列、ＣＳＧの異常修飾（例えばゲノムＤＮＡのメチル化パターン）、ＣＳＧのｍＲＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、ＣＳＧの対立遺伝子の欠損、および／またはＣＳＧタンパク質の不適切な翻訳後修飾の存在を確認することにより検出することができる。本発明のＣＳＧにおけるかかる病変を検出する方法は、当業者に既知である。
【００３９】
アッセイ技術
患者由来の試料における、本発明のＣＳＧなどの遺伝子の発現レベル（タンパク質レベルを含む）を決定するのに使用可能なアッセイ技術は、当業者に既知である。かかるアッセイ方法としては、ラジオイムノアッセイ、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、免疫組織化学アッセイ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびプロテオミクスアプローチ、二次元ゲル電気泳動法（２Ｄ電気泳動）およびマススペクトロメトリーまたはタンパク質相互作用プロファイリングのような非ゲルベースのアプローチが挙げられるが、これらに限定されない。これらの中でも、ＥＬＩＳＡは生物学的液体中の遺伝子の発現タンパク質の診断に好まれることが多い。
【００４０】
ＥＬＩＳＡアッセイはまず、販売元から容易に入手できない場合には、ＣＳＧに特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを含む。さらにＣＳＧに特異的に結合するレポーター抗体が一般には調製される。レポーター抗体は、検出可能な試薬、例えば放射性、蛍光または酵素試薬、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ酵素あるいはアルカリホスファターゼに結合される。
【００４１】
ＥＬＩＳＡを行なうには、ＣＳＧに特異的な抗体を、抗体を結合する固体支持体、例えばポリスチレンディッシュ上でインキュベートする。次に、ディッシュの上のフリーなタンパク質結合部位をウシ血清アルブミンなどの非特異的タンパク質とインキュベートすることにより覆う。次に、分析する試料をこのディッシュにてインキュベートし、その間にＣＳＧはポリスチレンディッシュに結合した特異抗体に結合する。未結合試料は緩衝液により洗い流される。ＣＳＧに対し特異的であり、かつ西洋ワサビペルオキシダーゼなどの検出可能試薬に結合しているレポーター抗体をディッシュに載せ、その結果レポーター抗体はＣＳＧに結合している任意のモノクローナル抗体に結合する。
【００４２】
次に、未結合のレポーター抗体を洗い流す。次に、比色基質を含むペルオキシダーゼ活性用試薬をディッシュに添加する。ＣＳＧ抗体に結合した固定化ペルオキシダーゼが着色反応産物を生ずる。所定時間中に発色した色の量は、試料中に存在するＣＳＧタンパク質の量に比例する。定量的な結果は典型的に、標準曲線を参照することで得られる。
【００４３】
競合アッセイもまた用いられるが、この場合ＣＳＧに特異的な抗体は、固体支持体に結合され、標識ＣＳＧおよび宿主由来の試料を固体支持体の上を通過させる。固体支持体に結合した検出される標識量を試料中のＣＳＧ量に相関させることができる。
【００４４】
また、本発明のＣＳＧの核酸配列の全て、または一部をハイブリダイゼーションプローブとして使用して、核酸法を、大腸癌に関するマーカーとしてのＣＳＧのｍＲＮＡレベルの検出に使用することもできる。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびその他の核酸法、例えばリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）および核酸配列ベースの増幅法（ＮＡＳＢＡ）は、各種悪性腫瘍の診断およびモニタリングのための細胞の検出に使用できる。
【００４５】
例えば、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）は、数千の他のｍＲＮＡ種の複雑な混合物中において特異的なｍＲＮＡ集団の存在を検出するのに使用可能な強力な技術である。ＲＴ−ＰＣＲでは、ｍＲＮＡ種はまず、酵素、逆転写酵素を用いて相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写され、次にｃＤＮＡは標準的ＰＣＲ反応で増幅される。したがって、ＲＴ−ＰＣＲは増幅により、単一のｍＲＮＡ種の存在を示すことができる。したがって、ｍＲＮＡがそれを産生する細胞に非常に特異的である場合、ＲＴ−ＰＣＲを用いて、特定のタイプの細胞が存在すること、および／または存在しないことを同定することができる。
【００４６】
固体支持体上に配列された（すなわちグリッディング）クローンまたまオリゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションは、遺伝子の発現の検出、およびその発現レベルの定量の両方に使用できる。このアプローチでは、ＣＳＧ遺伝子をコードするｃＤＮＡの全体または部分が基板上に固定される。この基板はガラス、ニトロセルロース、ナイロンまたはプラスチックを含むが、これらに限定されない任意の適切なタイプであり得る。ＣＳＧ遺伝子をコードするＤＮＡの少なくとも一部がこの基板に結合され、次にＲＮＡまたはＲＮＡの相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）コピーであり得る、当該組織から単離された分析体とインキュベートされる。
【００４７】
基板に結合したＤＮＡと分析体との間のハイブリダイゼーションは、分析体の放射性標識または蛍光標識、またはハイブリッドを検出するために設計した二次分子を含むが、これらに限定されない複数の手段により検出および定量することができる。遺伝子発現レベルの定量は、分析体からのシグナル強度を既知の標準物質から決定されたシグナル強度と比較することで行うことができる。標準物質は標的遺伝子のｉｎ ｖｉｔｒｏ転写により得ることができ、その収量を定量し、次にその物質を使って標準曲線を作成する。
【００４８】
プロテオミクスアプローチのうち、２Ｄ電気泳動法が当業者に既知の技術である。血清などの試料からの個別のタンパク質の単離は、通常ポリアクリルアミドゲル上において、タンパク質を異なる特性により順次分離することで達成される。まずタンパク質は、電流を用い大きさにより分離される。電流は全てのタンパク質に均一に作用し、その結果小型のタンパク質ほど大型のタンパク質に比べゲル上を遠くへ移動する。
【００４９】
第二の次元は、第一の次元に対し垂直方向に電流を作用させ、タンパク質の大きさに基づいてではなく、各タンパク質の持つ特異的電荷により分離する。異なる配列を持つ２つのタンパク質は、大きさと電荷の両方に基づいて同一であることはないので、２Ｄ分離の結果は、各タンパク質が特有のスポットを占有する方形のゲルである。このスポットの化学的または抗体プローブによる分析、あるいは続くタンパク質のマイクロシークエンシングにより、試料中の所定のタンパク質の相対量を明らかにすること、および該タンパク質を同定することができる。
【００５０】
上記試験は、患者より得たホモジネートまたは可溶化組織などの、各種細胞、体液および／または組織抽出物由来の試料について行うことができる。組織抽出物は、組織生検および剖検材料から常法により得られる。本発明に有用な体液には、血液、尿、唾液またはそれらの任意の他の体分泌物または派生物が含まれる。血液とは、全血、血漿、血清または血液の任意の派生物を含むことを意味している。
【００５１】
ＣＳＧのｉｎ ｖｉｖｏターゲティング／大腸癌治療
このＣＳＧの同定はまた、癌、特に大腸癌のイメージングおよび処置のための新規治療物質の合理的設計において有用である。例えば、一側面では、ＣＳＧに特異的に結合する抗体を産生し、増加したＣＳＧレベルを伴う大腸癌を患うことが疑われる患者にｉｎ ｖｉｖｏで使用することができる。ＣＳＧを特異的に結合する抗体は、診断および／または治療目的で大腸癌が疑われる患者に注射することができる。したがって、本発明の別の側面は、ヒト患者に対し有効量の抗体を投与することにより、かかる治療を必要としている患者の大腸癌の発症を防止し、治療するための方法に関する。
【００５２】
「有効量」とは、腫瘍上に発現した標的抗原に結合し、外科的除去のための腫瘍の退縮または腫瘍の消失をもたらすのに必要な抗体量または濃度を意味する。過剰発現されたＣＳＧへの抗体の結合は、かかるＣＳＧを発現する癌細胞に死をもたらすと考えられる。抗体は、単独で、または当業者に既知の他の治療剤と共に投与することができる。
ｉｎ ｖｉｖｏ診断および処置のための抗体の調製および使用は、当該技術分野で既知である。例えば、インジウム−１１１で標識された抗体−キレーターは、癌胎児抗原発現腫瘍のラジオイムノシンチグラフィイメージングでの使用について記載されている（Ｓｕｍｅｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． Ｂｉｏｌ． １９９０ １７：２４７−２５４）。
【００５３】
特に、これらの抗体−キレーターは、再発性結腸直腸癌が疑われる患者における腫瘍検出に使用されている（Ｇｒｉｆｆｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃ． １９９１ ９：６３１−６４０）。磁気共鳴イメージングにおける使用のための、標識として常磁性イオンを有する抗体も記載されている（Ｌａｕｆｆｅｒ， Ｒ． Ｂ． Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９１ ２２： ３３９−３４２）。ＣＳＧに対する抗体を同様に使用することができる。ＣＳＧを特異的に結合する標識抗体は、患者の疾患状態の診断、モニタリングまたはステージングを目的として、大腸癌が疑われる患者に注射することができる。
【００５４】
使用される標識は、使用するイメージング様式に応じ選択されるであろう。例えば、インジウム−１１１、テクネチウム−９９ｍまたはヨウ素−１３１などの放射性標識体が平面スキャンまたは単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）に使用できる。フッ素−１９などの陽電子放射標識は、陽電子放射断層撮影法に使用できる。ガドリニウム（ＩＩＩ）またはマンガン（ＩＩ）などの常磁性イオンは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）に使用できる。正常組織のイメージングと比べた標識の存在から、癌の播種を決定することができる。器官または組織内の標識量からはまた、その器官または組織中の癌の有無を決定できる。
【００５５】
ｉｎ ｖｉｖｏの方法で使用可能な抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、およびオムニクローナル抗体、ならびに分子生物学的技術により調製される抗体が含まれる。抗体断片およびアプタマー、ならびにＳＥＬＥＸと呼ばれる、当業者に既知のインビトロ進化プロトコルより得た一本鎖オリゴヌクレオチドも利用できる。本発明はまたキメラ、単鎖およびヒト化抗体ならびにＦａｂ断片、またはＦａｂ発現ライブラリーの産物も含む。かかる抗体および断片の産生のための、当該技術分野で既知の様々な手法が使用できる。
抗体産生のための多様な方法が、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ， Ｃｈａｐｔｅｒ ２に記載されている。
【００５６】
例えば、本発明のＣＳＧポリペプチドを発現する細胞を動物に投与して、ポリクローナル抗体を含有する血清の生産を誘発することができる。好ましい方法では、分泌タンパク質調製物を調製し、それを天然の夾雑物を実質的に含まないように精製する。次に、より高い特異的活性を有するポリクローナル抗血清を産生するために、この調製物を動物に導入する。得られた抗体は、ポリペプチド自体と結合するだろう。このようにすれば、ＣＳＧポリペプチドの断片のみをコードする配列でも、これを用いて全未変性ポリペプチドに結合する抗体を生成することができる。次にかかる抗体を用いてそのＣＳＧポリペプチドを発現している組織から、ＣＳＧポリペプチドを単離できる。
【００５７】
あるいは、モノクローナル抗体を調製することができる。モノクローナル抗体の製造技術の例は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ， Ｇ． ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ， Ｃ．， Ｎａｔｕｒｅ ２５６： ４９５−４９７ （１９７５））、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４： ７２（１９８３））および（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．， ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ ． ｐｇ．７７−９６ （１９８５））を含むが、これらに限定されない。ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術は、ヒトモノクローナル抗体の製造に有用である。
【００５８】
ハイブリドーマ技術は、Ｋｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， （Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６： ５１１ （１９７６））、Ｋｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ． （Ｅｕｒ． Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ６： ２９２ （１９７６））およびＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（ｉｎ： Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ， Ｎ． Ｙ．， ｐｐ． ５６３−６８１ （１９８１））にも記載されている。一般に、かかる手法は、ＣＳＧポリペプチド、またはより好ましくは分泌ＣＳＧペプチド発現細胞で、動物（好ましくは、マウス）を免疫することを包含する。かかる細胞は、任意の適切な組織培養培地にて培養されてもよいが、１０％のウシ胎児血清（約５６℃にて不活性化）添加、ならびに非必須アミノ酸約１０ｇ／ｌ、ペニシリン約１，０００Ｕ／ｍｌ、およびストレプトマイシン約１００μｇ／ｍｌ添加、アール変法イーグル培地にて細胞を培養することが好ましい。かかるマウスの脾細胞を摘出し、適切な骨髄腫細胞系と融合させる。
【００５９】
本発明によれば、いかなる適切な骨髄腫細胞系を用いてもよいが、ＡＴＣＣから入手可能な親骨髄腫細胞系（ｐａｒｅｎｔ ｍｙｅｌｏｍａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ）（ＳＰ２０）を用いることが好ましい。融合後、得られたハイブリドーマ細胞は、ＨＡＴ培地にて選択的に保持され、続いてＷａｎｄｓ ｅｔ ａｌ． （Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０： ２２５−２３２ （１９８１））に記載されたように、限界希釈によりクローニングされる。次に、かかる選択により得られたハイブリドーマ細胞をアッセイして、ポリペプチドを結合することが可能な抗体を分泌するクローンを同定する。
【００６０】
あるいは、ポリペプチドに結合することが可能なさらなる抗体を、抗イディオタイプ抗体を用いた二段階手法にて産生することができる。かかる方法は、抗体自身が抗原であるという事実を利用するものであり、したがって、二次抗体に結合する抗体を得ることが可能である。この方法に従って、タンパク質特異抗体を用いて、動物、好ましくはマウスを免疫する。
【００６１】
次に、かかる動物の脾細胞を用いて、ハイブリドーマ細胞を生産し、ハイブリドーマ細胞をスクリーニングして、タンパク質特異抗体に結合する能力が、ポリペプチドにより阻止され得る抗体を産生するクローンを同定する。かかる抗体は、タンパク質特異抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、それを用いて、動物を免疫し、さらなるタンパク質特異抗体の形成を誘発することができる。
【００６２】
単鎖抗体の生成に関し記載された技術（米国特許第４，９４６，７７８号）は本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対する単鎖抗体の生成に適用することができる。さらにトランスジェニックマウス、ならびに他の非ヒトトランスジェニック動物もまた、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対するヒト化抗体の発現に使用され得る。
【００６３】
本発明の抗体のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに他の断片を、本明細書に開示する方法に従って用いてもよいことが理解されるであろう。かかる断片は、典型的に、（Ｆａｂ断片を産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２断片を産生するための）ペプシンなどの酵素を用いて、タンパク質分解性切断により産生される。あるいは、分泌タンパク質結合断片は、組換えＤＮＡ技術の適用により、または合成化学により産生され得る。
【００６４】
ヒトにおける抗体のｉｎ ｖｉｖｏ使用に関して、「ヒト化」キメラモノクローナル抗体を使用することが好ましい場合がある。かかる抗体は、上述のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝コンストラクトを用いて産生することができる。キメラ抗体を産生する方法は、当該技術分野で既知である（レビューとして、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９： １２０２ （１９８５）、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４： ２１４ （１９８６）、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．， 米国特許第４，８１６，５６７号、Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．， ＥＰ １７１４９６、Ｍｏｒｒｉｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＥＰ １７３４９４、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ ８６０１５３３、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＷＯ ８７０２６７１、Ｂｏｕｌｉａｎｎｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３１２： ６４３ （１９８４）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ ３１４： ２６８ （１９８５）を参照）。
【００６５】
上記抗体は、アフィニティークロマトグラフィーによる単離および／または精製のために、固体支持体に抗体を結合させることで、本発明のＣＳＧポリペプチドを発現しているクローンを単離または同定すること、またはＣＳＧポリペプチドを精製することに使用され得る。上記でさらに詳細に述べられているとおり、ＣＳＧに特異的な抗体はまた、癌に苦しむ患者において、腫瘍、特に大腸の癌のイメージングに用いてもよい。かかる抗体はまた、ＣＳＧを発現する標的腫瘍に対し治療的に用いてもよい。
【００６６】
以下の表は、ＣＳＧの好ましいエピトープ（本発明の抗体はそれらに対して作製される）として同定された配列番号３のＣＳＧの領域を示す。
【００６７】
【表１】
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【００６８】
【表２】
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【００６９】
【表３】
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【００７０】
スクリーニングアッセイ
本発明はまた、本発明のＣＳＧタンパク質に結合するか、または本発明のＣＳＧタンパク質の発現あるいは活性に対する調節効果を持つモジュレータを同定するための方法を提供する。本発明のＣＳＧタンパク質の発現または活性を低下させるモジュレータは、大腸癌の処置に有用であると考えられる。かかるスクリーニングアッセイは、当業者に既知であり、細胞ベースアッセイおよび無細胞アッセイが含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
コンピュータイメージングによりＣＳＧの領域に特異的に結合することが推測される小分子もまた、大腸癌のイメージングおよび処置における使用のために、設計、合成、および試験することができる。さらに、分子ライブラリーを、本発明で同定されたＣＳＧに対する分子の結合能力について評価することにより、潜在的な抗癌剤をスクリーニングすることができる。ライブラリーにてＣＳＧに結合できるものとして同定された分子は、大腸癌の処置における使用を目的としたさらなる評価のための重要な候補体である。好ましい態様では、これら分子は、細胞中のＣＳＧ発現および／または活性を下方調節するだろう。
【００７２】
養子免疫治療およびワクチン
癌の養子免疫治療は、細胞が、定着した腫瘍の消退を直接または間接的に媒介することを目的として、抗腫瘍応答性を持つ免疫細胞を、担腫瘍宿主に投与する治療的アプローチである。リンパ球、特にＴリンパ球の輸血は、この治療分類に入るものであり、国立癌研究所（ＮＣＩ）の研究者等は、末梢血リンパ球または腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、皮下リンパ節の生検材料由来のＴ細胞培養物の自己輸血を複数のヒト癌患者の処置に使用している（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ， Ｓ． Ａ．， 米国特許第４，６９０，９１４号、１９８７年９月１日発行； Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ， Ｓ． Ａ．， ｅｔ ａｌ．， １９８８、Ｎ． Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ． ３１９： １６７６−１６８０）。
【００７３】
本発明は、熱ショックタンパク質（ｈｓｐ）の非共役複合体ありまたはなしで、本発明の抗原性ＣＳＧ分子に対し感作されたマクロファージを用いた、原発性および転移性大腸癌の防止および／または処置のための養子免疫治療の組成物および方法に関する。本発明のＣＳＧの抗原性または免疫原性は、ＣＳＧタンパク質またはその断片の抗体を産生する能力、またはナイーブなエフェクター細胞を教育する能力（エフェクター細胞は、次に抗原（またはエピトープ）発現標的細胞を溶解する）から容易に確認できる。
【００７４】
癌細胞は、定義によれば、異常であり、正常組織には存在しないので、免疫系により外来物質として認識されるべきタンパク質を含む。しかしながら、免疫系はしばしばこの異常に気づかず腫瘍の攻撃をしないようである。癌細胞により産生される本発明の外来性ＣＳＧは、それらの存在を示すのに使用できる。ＣＳＧは腫瘍抗原と呼ばれる短い断片に分解され、細胞表面に提示される。
【００７５】
これらの腫瘍抗原はクラスＩおよびクラスＩＩの２つの型が存在するＭＨＣと呼ばれる分子により、細胞表面に保持または提示される。ＭＨＣクラスＩ分子と会合する腫瘍抗原は、細胞障害性Ｔ細胞によって認識されるが、一方抗原−ＭＨＣクラスＩＩ複合体はヘルパー細胞と呼ばれる第２のＴ細胞サブセットにより認識される。これらの細胞はサイトカインを分泌し、これが腫瘍の増殖を遅らせるか、または停止させ、別の型の白血球、Ｂ細胞が腫瘍細胞に対する抗体を作るのを助ける。
【００７６】
養子免疫治療では、Ｔ細胞またはその他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、本発明の腫瘍特異的ＣＳＧ抗原を用いて、体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）で刺激される。次に、刺激された細胞は、患者に再注入され、そこでそれらは癌細胞を攻撃する。研究から、細胞障害性Ｔ細胞およびヘルパーＴ細胞の両方を使用すると、いずれか一方のサブセットのみを使用した場合に比べはるかに効果的であることが示されている。さらに、ＣＳＧ抗原は、米国特許第５，９８５，２７０号に記載されているように、熱ショックタンパク質と複合体を形成し、ＡＰＣを刺激し得る。
【００７７】
ＡＰＣは、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球およびそれらの組合せを含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知の抗原提示細胞から選択でき、好ましくはマクロファージである。細胞がその個体に対して自己のものである好ましい使用では、養子移植のための免疫細胞のドナー選択の問題を回避するために、リンパ球、マクロファージ、またはその他のＡＰＣ等の自己の免疫細胞が用いられる。自己の免疫細胞の使用により回避できる他の問題は、処置が効を奏さない場合は致死的となる移植片対宿主病である。
【００７８】
遺伝子治療を用いた養子免疫治療では、本発明のＣＳＧのＤＮＡを従来の遺伝子治療と同様にしてエフェクター細胞内に導入することができる。これによりエフェクター細胞が抗原性タンパク質を産生するように操作されると、腫瘍細胞に対するこれら細胞の細胞障害性が高められ、結果として養子免疫治療が改善される。
【００７９】
本発明のＣＳＧ抗原はまた、大腸癌ワクチン構成成分としても有用である。ワクチンは、免疫刺激量の本発明のＣＳＧ抗原を含む。免疫刺激量とは、大腸癌の改善または処置を目的としてレシピエント内に所望の免疫応答を惹起することができる抗原量を表す。有効量は、当業者に既知の標準的方法により経験的に決定され得る。
【００８０】
ＣＳＧ抗原は、所望の型の免疫応答、例えば抗体および／または細胞媒介性の応答を誘発するために設計された多くのワクチン配合物のいずれか一つとして提供され得る。かかる配合物は、当該技術分野で既知であり、例えば米国特許第５，５８５，１０３号に記載されている配合物を含むが、これに限定されるものではない。免疫応答を刺激するのに使用される本発明のワクチン配合物はまた、薬学的に許容され得るアジュバントも含むことができる。
【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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