(57)【要約】アンチセンス化合物、ならびに、官能基と、１個または複数の炭素原子および任意選択で１個または複数の官能基を有する１個または複数の側鎖とをさらに有する多炭素骨格からなる浸透促進剤、を含有する組成物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）アンチセンス化合物と
（ｂ）式Ｉの化合物からなる浸透促進剤と、
【化１】
2004537516.tif 000004
（式中、
Ｑは
（１）部分的にもしくは完全に中和されたＣＯＯＨ、または
（２）部分的にもしくは完全に中和されたＳＯ３Ｈ、または
（３）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨもしくは‐ＳＯ３Ｈである置換基で一置換または二置換された、１〜約１２個の炭素原子を有するアルキルもしくはアルケニル基であり、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、
（１）１〜約１２個の炭素原子を有する非置換アルキルまたはアルケニル基、および
（２）中和もしくは部分的に中和された‐ＣＯＯＨもしくは‐ＳＯ３Ｈ、‐ＮＨ２、‐ＣＯＮＨ２、‐ＯＨからなる群から選択される置換基で置換された、１〜約１２個の炭素原子を有するアルキルまたはアルケニル基
からなる群から選択される）、ならびに
（ｃ）任意選択で、医薬として許容可能な媒体と
を含む組成物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に、１〜約１２個の炭素原子を有する直鎖の非置換アルキル基からなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記促進剤は、２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウム、および２‐ｎ‐ブチルオクタン酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
アンチセンス化合物はアンチセンス・オリゴヌクレオチドである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
直鎖脂肪酸の塩をさらに含む請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
前記直鎖脂肪酸の塩はカプリン酸ナトリウムである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム：前記カプリン酸ナトリウムの比が最大で約３：７である請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
医薬として有効な量のアンチセンス・オリゴヌクレオチドと促進効果を有する量の式Ｉの前記浸透促進剤とを含有する請求項１に記載の組成物を患者に投与することからなる、患者の状態を治療する方法。
【請求項９】
浸透促進剤は完全に中和された２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドが、塩基の修飾、ヌクレオチド間結合の修飾および糖部分の修飾からなる群から選択される修飾を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記糖部分の修飾が２’‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）修飾である、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬物の投与の際有用な浸透促進剤に関する。
薬物送達系は、一般に浸透の段階とそれに続く循環系中への吸収を含む。たとえば、薬物およびフィルムもしくは布からなり、患者の外皮に接着される経皮パッチの使用により、皮膚を通して薬物を施用し得る。薬物はまた、たとえば、（Ａ）鼻または肺への薬物のエアロゾル送達、（Ｂ）薬物の経口摂取とそれに続く胃腸管壁を通した浸透、および（Ｃ）頬と歯茎の間、または舌の下に保持されたトローチ剤または丸薬の溶解、それに続く口腔膜を通した輸送により、粘膜またはその他の細胞膜を通して（総称して「経粘膜」）送達されうる。
【０００２】
初期の経皮送達系の開発中に、研究者は、皮膚の油性、疎水性の性質が、水性の薬物溶液または分散物の吸収速度を有意に低下させることを発見した。すなわち、外部の物質の侵入に対して身体を保護する皮膚の生来の障壁特性が、施用した薬物への障壁としても作用し、それによって該薬物の浸透速度を、最終的にはそれらの生物学的利用率を低下させる。経粘膜の手段により満足できるように薬物を送達する場合にも問題に遭遇する。対象とする膜での薬物の生物学的利用率、および医薬として有用な濃度を実現するためには、薬物の浸透速度が重要な要因である。皮膚を通り、または経粘膜の手段により、薬物が浸透する速度を促進するという目的に対して、かなりの努力がささげられてきたことは驚くにあたらない。こうした努力の例を以下に要約する。
【背景技術】
【０００３】
本出願は、２００１年５月１１日に出願した米国仮出願第６０／２９０，４３６号に基づき、優先権を主張するものである。
ウエカマ（Ｕｅｋａｍａ）らの米国特許第５，８５４，２８１号には、プロスタグランジンの経皮浸透性を促進するための、直鎖脂肪酸、ならびにこれらの塩およびエステルの使用について教示されている。フェンカテシュワラン（Ｖｅｎｋａｔｅｓｈｗａｒａｎ）らの米国特許第５，９５２，０００号および第５，９１２，００９号には、それぞれ乳酸（またはその塩）の脂肪酸エステル、およびグリコール酸の脂肪酸エステル（またはその塩）の存在により促進される薬物送達系が開示されている。生物学的に活性なペルゴリドの皮膚浸透を促進するために脂肪酸のグリセリドを使用することが米国特許第６，００１，３９０号（ユン（Ｙｕｍ）ら）に開示されている。米国特許第４，７８９，５４７号には、プロピレングリコールなどの溶媒中の飽和または不飽和脂肪酸による、皮膚を通した薬物浸透の促進が教示されている。国際公開第００／２２９０９号には、薬剤として、またはその他の生物学的に活性な物質の経口送達系が開示されており、該送達系では薬剤またはその他の活性な物質が胃を通過して腸内で吸収されるように、同物質がカルボン酸によりコーティングまたは複合体化（ｃｏｍｐｌｅｘｅｄ）される。コーティングまたは複合体化は活性物質の酸性溶液およびカルボン酸から共沈によって達成され、カルボン酸は直鎖または分枝鎖状の９〜３０個の炭素原子を有し、飽和または不飽和で、非環式または環式構造であり、ステロイド環、フェニル基などの官能基でさらに置換されている、または非置換であると記載されている。国際公開第００／２２９０９号には、直鎖の飽和または不飽和またはステロイド性のカルボン酸、ドデカン酸、テトラデカン酸、ヘキサデカン酸、オクタデカン酸、オレイン酸、パルミトレイン酸、リシノール酸、およびフシジン酸から生成された複合体の具体例が開示されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
研究者は、経粘膜または経皮経路により医薬物質を安全かつ効果的に投与する方法を探索し続けている。これらの目標に対する障害としては、様々な種類の膜および皮膚の特性における複雑さおよび変動性がある。さらに、例えばアンチセンス・オリゴヌクレオチドのような巨大分子の医薬物質については、これらの種々の膜および皮膚を通過させることは特に困難である。アンチセンス・オリゴヌクレオチドの生物学的利用率達成にあたり、生体の膜および皮膚の生来の障壁特性を克服するという世間に認められた要求に照らして、本発明は、患者への送達のためにアンチセンス・オリゴヌクレオチドの浸透を促進する種類の化合物を供給することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明によって、アンチセンス化合物、ならびに、前記アンチセンス化合物の生物学的利用率を促進するのに有効な化合物であって、官能基と、１個または複数の炭素原子および任意選択で１個または複数の官能基を有する１個または複数の側鎖とをさらに有する多炭素骨格からなる化合物、を含む組成物が提供される。生物学的利用率を促進する好ましい種類の化合物は、以下の式Ｉの化合物からなる。
【０００６】
【化１】
2004537516.tif 000002
（式中、Ｑは、
（１）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、または
（２）部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈ、または
（３）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、または部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈである置換基で、一置換または二置換されている、１〜約１２個の炭素原子を有するアルキルまたはアルケニル基であって、
Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に
（１）１〜約１２個の炭素原子を有する非置換アルキルもしくはアルケニル基、または
（２）１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキルもしくはアルケニル基であって、その置換基が
（ｉ）部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ、
（ｉｉ）部分的にもしくは完全に中和された‐ＳＯ３Ｈ、
（ｉｉｉ）‐ＮＨ２、
（ｉｖ）‐ＣＯＮＨ２、および
（ｖ）‐ＯＨ
からなる群から選択される。）
好ましい形態では、アンチセンス化合物はアンチセンス・オリゴヌクレオチドからなる。アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、塩基の修飾、ヌクレオチド間結合の修飾および糖部分の修飾からなる群から選択される修飾を含むことが好ましい。好ましい形態において、アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、２’‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）修飾された糖部分を有する。同様に、好ましい形態において、促進剤はＱが部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨである化合物を含む。
【０００７】
本発明の他の態様は、医薬として有効な量のアンチセンス・オリゴヌクレオチドと促進効果を有する量の上記式Ｉの浸透促進剤とからなる組成物を患者に投与することからなる、患者の症状を治療する方法を含む。
【０００８】
以下に説明するように、本発明の際立った利点は、アンチセンス・オリゴヌクレオチドが対象者の腸の障壁中に浸透し障壁を通過するのを促進する化合物を、医学および薬学の専門家に提供することである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
上記のように、本発明の組成物は、アンチセンス化合物、本明細書で浸透促進剤として特徴づけられる化合物、および任意選択で媒体からなる。式Ｉで表される化合物中から浸透促進剤を選択する際は、使用するアンチセンス化合物の性質と、対象とする膜または皮膚のアンチセンス化合物を吸収する性質とが共に考慮に入れられる。以下の考察から明らかになるように、広範な疎水性‐親水性特性を有し、分枝鎖化合物として表現されうる化合物は、本発明の促進剤化合物の種類に含まれる。
【００１０】
式Ｉの化合物は、官能基と、１個または複数の炭素原子および任意選択で１個または複数の官能基を有する（１個または複数の）側鎖とをさらに有する多炭素骨格からなる。したがってこの化合物は、文献中に浸透促進剤特性を有すると報告された直鎖カルボン酸からは区別される。式ＩのＲ１およびＲ２はそれぞれ、１〜約１２個の炭素原子を有する非置換アルキル基もしくは非置換アルケニル基、または１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキルもしくは置換アルケニル基を表すが、あるいはＲ１またはＲ２の一方が１〜約１２個の炭素原子を有する置換アルキル基もしくは置換アルケニル基で、他方が非置換アルキル基または非置換アルケニル基であり得る。式ＩのＲ１およびＲ２はそれぞれ、直鎖、分枝、または環式の脂肪族基でもよい。
【００１１】
さらに、Ｒ１またはＲ２の一方がアルキル基で他方がアルケニル基であることもあり得る。アルキル基の例としては、メチル、エチル、イソプロピル、ヘキシル、オクチル、デシル、およびドデシルがある。アルキル基は少なくとも約４〜約１２個の炭素原子を有することが好ましい。アルケニル基の例には、オクテニル、ペンテニル、およびドデセニルがある。アルケニル基は、少なくとも約４〜約１２個の炭素原子を有することが好ましい。
【００１２】
さらに、好ましい形態では、Ｒ１およびＲ２中の炭素原子の合計が、少なくとも約１６である。本発明の特に好ましい形態では、Ｒ１がアルキルであり、Ｒ２がアルキルである。Ｒ１および／またはＲ２が置換アルキル基または置換アルケニル基を含む促進剤については、これらの置換基がヒドロキシル基であることが好ましい。
【００１３】
式Ｉで述べたように、本発明で有用な促進剤化合物は、部分的にもしくは完全に中和された‐ＣＯＯＨ基、または‐ＳＯ３Ｈ基を含み得る。本明細書では、「中和された」という用語は、カルボン酸またはスルホン酸の、酸の全量と反応するのに十分な量で存在する塩基との反応生成物を意味する。本明細書では、「部分的に中和された」という用語は、カルボン酸またはスルホン酸の、酸の全量未満であるが少なくとも酸の約５０％と反応する量の塩基との反応生成物を意味する。使用し得る塩基の例には、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、およびトリアルキルアミンがある。式Ｉの‐Ｑは、‐ＣＯＯＨのナトリウム塩が好ましい。式Ｉの‐Ｑが置換アルキルまたは置換アルケニル基である促進剤については、こうした基の例には以下のものがある：メチル、ヘキシル、オクチル、およびドデシル。好ましくはアルキル基またはアルケニル基の炭素原子の総数は約１〜約１２個であり、アルキル基であることが好ましい。
【００１４】
式Ｉの化合物の好ましい基は、Ｒ１がＣ６〜Ｃ１２アルキルであり、Ｒ２がＣ４〜Ｃ１０アルキルであり、‐Ｑが中和された‐ＣＯＯＨである。特に好ましい浸透促進剤は、Ｒ１がＣ６〜８アルキルであり、Ｒ２がＣ８〜１０アルキルであり、‐Ｑが‐ＣＯＯＮａである、式Ｉで表される化合物である。
【００１５】
本発明において有用な好ましい促進剤化合物は、Ｒ１が１０個の炭素原子を有するアルキル基（Ｃ１０Ｈ２１）であり、かつＲ２が８個の炭素原子を有するアルキル基（Ｃ８Ｈ１７）である式Ｉのカルボン酸のナトリウム塩、２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含む。その他の好ましい促進剤化合物には、２‐ｎ‐ヘキシルデカン酸ナトリウムおよび２‐ｎ‐ブチルオクタン酸ナトリウムがある。
【００１６】
本発明において有用な促進剤化合物は、不斉中心を含み得る。促進剤化合物が不斉中心を含む場合は、それは光学異性体のラセミ混合物として、または任意選択で実質上純粋な促進剤化合物のＤまたはＬ異性体として使用し得る。
【００１７】
本発明の範囲内の促進剤化合物は既知である。促進剤化合物の調製は当技術分野では通常の技術の１つの範囲内に十分入ることは理解されよう。一般的にいえば、本発明において有用なカルボン酸促進剤は、既知の調製方法に従って調製し得る。調製方法の非限定的な例としては、適度に不飽和な炭化水素の強い酸化剤による酸化的切断、およびそれに対応するエステルのけん化がある。代表的なエステルの非限定的な例は、所望の酸のグリセリドである。
【００１８】
カルボン酸またはスルホン酸の、水酸化ナトリウムなどのアルカリによる中和は、通常水または水とアルコールの混合物中に溶解された攪拌中の酸溶液にアルカリを加えることにより行う。
【００１９】
式Ｉの促進剤は、単官能性または多官能性であり得る。官能性の程度および炭素鎖の長さは、促進剤化合物の親水性‐疎水性（親油性）の性質に関連する。一般に、官能性の程度が高くなると、化合物はより親水性になる。同様に、一般には、化合物中の炭素原子数が多くなると、化合物はより疎水性になる。促進剤の疎水性‐親水性のバランスが薬物および対象とする組織に適合する場合は、アンチセンス・オリゴヌクレオチド送達の改善が達成され得る。比較的長い炭素鎖を有する‐Ｒ１、‐Ｒ２、および‐Ｑを選択すると、比較的疎水性の高い促進剤が提供されうる。反対に、比較的短い炭素鎖および多官能基を有する促進剤では、比較的親水性が高くなる。
【００２０】
本発明の組成物は、式Ｉの促進剤化合物を、１つまたはそれ以上の他の促進剤、例えば直鎖脂肪酸、そのエステルもしくは塩、またはリポソームもしくはマイクロエマルジョンの形成を促進する化合物などとの混合物として含んでもよい。追加の促進剤化合物を用いる場合は、式Ｉの塩１部に対して、追加の促進剤が重量比で最高約９９部まで存在してもよい。混合物の、追加の促進剤：式Ｉの塩の重量比の好適な範囲は、約９９：１〜約１：９９である。
【００２１】
好ましい形態、すなわち本発明の促進剤化合物（式Ｉの化合物）と追加の他の促進剤化合物とを含む組成物において、式Ｉの促進剤化合物は、存在する促進剤化合物の約５０重量％を占めるに過ぎない。
【００２２】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドからなる薬物の送達に関して使用される配合物中で、本発明の促進剤化合物が他の促進剤化合物と混合される場合、通常、式Ｉの促進剤化合物は配合物中に存在する促進剤化合物の少なくとも約１０重量％を占める。
【００２３】
本発明の組成物は、体内におけるタンパク質の生産および／または活性のレベルが望ましくないことに起因する疾患状態を治療するために使用されるアンチセンス化合物、特にアンチセンス・オリゴヌクレオチドをも含む。これらのアンチセンス化合物は、ある疾患状態に関与するタンパク質をコードする１つまたは複数の標的核酸と特異的にハイブリッド形成する。
【００２４】
本明細書中では、「標的核酸」という用語は、タンパク質をコードするＤＮＡ、そのようなＤＮＡから転写されたＲＮＡ（ｍＲＮＡ前駆体（ｐｒｅ‐ｍＲＮＡ）およびｍＲＮＡを含む）、およびそのようなＲＮＡ由来のｃＤＮＡをも含む。アンチセンス化合物とその標的核酸との特異的なハイブリッド形成は、該核酸の正常な機能を妨害する。このような、標的核酸と特異的にハイブリッド形成する化合物による同核酸の機能の調節は一般に「アンチセンス」と呼ばれる。妨害を受けるＤＮＡの機能には、複製および転写がある。妨害を受けるＲＮＡの機能には、例えばタンパク質翻訳部位へのＲＮＡの移動、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、１つまたは複数種のｍＲＮＡを生産するためのＲＮＡのスプライシング、およびＲＮＡが関与または促進しうる触媒活性などの、全ての生命維持に必要な機能が含まれる。そのような、標的核酸の機能を妨害することの全般的な効果は、同核酸によりコードされるタンパク質の発現の調節である。本発明においては、「調節」とは遺伝子発現の増大（刺激）または低下（阻害）のいずれかを意味する。本発明においては、阻害は遺伝子発現の調節の好ましい形態であり、ｍＲＮＡは好ましい標的である。
【００２５】
本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドを用いて特定の核酸を標的とすることが好ましい。本発明においては、アンチセンス化合物による特定の核酸の「ターゲティング（標的とすること）」は多段階のプロセスである。このプロセスは、その機能が調節を受ける核酸配列を特定することで通常始まる。この核酸配列は、例えば、その発現が特定の障害もしくは疾患状態との関連を有する細胞内の遺伝子（もしくはその遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）、または感染物質由来の核酸でもよい。ターゲティングプロセスには、所望の効果、例えばタンパク質発現の検出もしくは調節が結果として生じるようなアンチセンス反応が起きるための、その遺伝子内の１つまたは複数の部位を決定することも含まれる。本発明の文脈においては、好適な遺伝子内部位は、その遺伝子の翻訳領域（ＯＲＦ）の翻訳開始または終止コドンを含む領域である。当業界で周知であるように、翻訳開始コドンは通常５’‐ＡＵＧ（ｍＲＮＡ分子に転写された状態；対応するＤＮＡ分子では５’‐ＡＴＧ）であるので、翻訳開始コドンは「ＡＵＧコドン」、「開始コドン」または「ＡＵＧ開始コドン」とも呼ばれる。一部の遺伝子は、ＲＮＡ配列５’‐ＧＵＧ、５’‐ＵＵＧまたは５’‐ＣＵＧを有する翻訳開始コドンを備えており、５’‐ＡＵＡ、５’‐ＡＣＧおよび５’‐ＣＵＧは生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）で機能することが示されている。従って、個々の場合における開始アミノ酸が通常はメチオニン（真核生物の場合）またはホルミルメチオニン（原核生物の場合）であるとはいうものの、「翻訳開始コドン」および「開始コドン」という用語は、多くのコドン配列を含みうる。同様に当業界において周知であるが、真核生物および原核生物の遺伝子は２つ以上の選択的（ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ）開始コドンを有する可能性があり、そのうちの任意の１つが特定の細胞のタイプや組織において、または特定の条件が揃った場合に優先的に使用されうる。本発明においては、「開始コドン」および「翻訳開始コドン」とは、そのコドンの配列に関係なく、タンパク質をコードする遺伝子から転写されたｍＲＮＡ分子の翻訳を開始するために生体内で使用される１つまたは複数のコドンをいう。
【００２６】
同じく当業界において周知であるが、遺伝子の翻訳終止コドン（または「停止コドン」）は３つの配列、すなわち５’‐ＵＡＡ、５’‐ＵＡＧおよび５’‐ＵＧＡ（対応するＤＮＡ配列はそれぞれ５’‐ＴＡＡ、５’‐ＴＡＧおよび５’‐ＴＧＡである）のうち１つを有しうる。「開始コドン領域」および「翻訳開始コドン領域」という用語は、翻訳開始コドンからいずれかの方向（すなわち５’または３’）の約２５〜約５０個の連続したヌクレオチドを含むｍＲＮＡまたは遺伝子の一部分を指す。同様に、「停止コドン領域」および「翻訳終止コドン領域」という用語は、翻訳終止コドンからいずれかの方向（すなわち５’または３’）の約２５〜約５０個の連続したヌクレオチドを含むｍＲＮＡまたは遺伝子の一部分を指す。
【００２７】
翻訳領域（ＯＲＦ）または「コーディング領域」は、翻訳開始コドンと翻訳終止コドンとの間の領域を指すことが当業界において知られているが、有効な標的となりうる領域でもある。その他の標的領域には、翻訳開始コドンから５’方向にあるｍＲＮＡの一部分であり、よってｍＲＮＡの５’キャップ部位と翻訳開始コドンとの間のヌクレオチドまたは遺伝子上の対応するヌクレオチドを含むことが当業界において周知である、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）、ならびに、翻訳終止コドンから３’方向にあるｍＲＮＡの一部分であり、よってｍＲＮＡの翻訳終止コドンと３’末端との間のヌクレオチドまたは遺伝子上の対応するヌクレオチドを含むことが当業界において周知である、３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）がある。ｍＲＮＡの５’キャップは、５’‐５’三リン酸結合によってｍＲＮＡの最も５’側の残基に結合されたＮ７‐メチルグアノシンを含む。ｍＲＮＡの５’キャップ領域は、５’キャップ構造自体ならびにキャップに隣接する最初の５０ヌクレオチドを含むとみなされる。５’キャップ領域も好適な標的領域となりうる。
【００２８】
一部の真核生物のｍＲＮＡ転写物は直接翻訳されるが、多くは、転写物が翻訳される前に切除される、「イントロン」として知られる１つまたは複数の領域を含む。切除により残る（従って翻訳される）領域は「エキソン」として知られ、一続きのｍＲＮＡ配列を形成するべく同時にスプライシングされる。ｍＲＮＡのスプライシング部位、すなわちイントロン‐エキソン結合部もまた好適な標的領域となりうるが、疾患において異常なスプライシングが起きている場合、または疾患において特定のｍＲＮＡスプライシング産物が過剰生産されている場合に特に有用である。再編成もしくは欠失による異常な融合の結合部も好適な標的である。イントロンも、例えばＤＮＡまたはｍＲＮＡ前駆体を標的としたアンチセンス化合物の、有効な、従って好ましい標的領域でありうることが見出されている。
【００２９】
ひとたび１つまたは複数の標的部位が特定されると、所望の効果を得るために同標的に対して十分相補的な、すなわち十分満足にかつ十分な特異性をもってハイブリッド形成するオリゴヌクレオチドが選択される。
【００３０】
本発明においては、「ハイブリッド形成」とは、相補的なヌクレオシドまたはヌクレオチドの塩基間の水素結合を意味し、該水素結合はワトソン‐クリック（Ｗａｔｓｏｎ‐Ｃｒｉｃｋ）型、ホーグスティーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ）型または逆ホーグスティーン型の水素結合でありうる。例えば、アデニンとチミンとは水素結合の形成により対合する相補的な核酸塩基である。本明細書において「相補的」とは、２つのヌクレオチド間で正確に対合しうることを指す。例えば、オリゴヌクレオチドのある部位のヌクレオチドがＤＮＡまたはＲＮＡ分子の同じ部位のヌクレオチドと水素結合しうる場合、該オリゴヌクレオチドと該ＤＮＡまたはＲＮＡとはその部位について互いに相補的であるとみなされる。該オリゴヌクレオチドと該ＤＮＡまたはＲＮＡとは、各分子中の十分な数の対応部位が互いに水素結合可能なヌクレオチドで占められている場合、互いに相補的である。従って、「特異的にハイブリッド形成可能」および「相補的」とは、オリゴヌクレオチドとＤＮＡまたはＲＮＡ標的との間に安定かつ特異的な結合を生じるような、十分な相補性または正確な対合を表すために使用される用語である。当業界においては当然のことであるが、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの配列は、特異的にハイブリッド形成可能であるためにその標的核酸の配列に対して１００％相補的である必要はない。アンチセンス・オリゴヌクレオチドが標的ＤＮＡまたはＲＮＡ分子に結合することにより同標的ＤＮＡまたはＲＮＡの正常な機能が妨害されて作用が失われ、かつ、該アンチセンス・オリゴヌクレオチドが、特異的結合が望まれる条件、すなわち生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）アッセイもしくは治療上の処置における生理的条件、および生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）アッセイの場合の、同アッセイが実施される条件において、非標的配列に非特異的に結合することを回避するのに十分な程度に相補的である場合、該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは特異的にハイブリッド形成可能である。
【００３１】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドはアンチセンス化合物の好ましい形態であるが、本発明には、下記に説明するようなオリゴヌクレオチド類似物（これに限定はされない）を含む、他のオリゴマーのアンチセンス化合物が含まれる。本発明に関与するアンチセンス化合物は、約８〜約５０個の核酸塩基（すなわち約８〜約５０個が連結されたヌクレオシド）を含むことが好ましい。特に好ましいアンチセンス化合物はアンチセンス・オリゴヌクレオチドであり、さらにより好ましくは約１２〜約２５個の核酸塩基からなるアンチセンス・オリゴヌクレオチドである。さらにより好ましくは、アンチセンス・オリゴヌクレオチドは約１５〜約２０個の核酸塩基からなる。最も好ましい実施形態において、本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドは約２０個の核酸塩基からなる。アンチセンス化合物には、リボザイム、外来誘導配列（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｇｕｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ；ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および標的核酸とハイブリッド形成してその発現を調節するその他の短い触媒ＲＮＡまたは触媒オリゴヌクレオチドがある。
【００３２】
本発明においては、「オリゴヌクレオチド」という用語は、リボ核酸（ＲＮＡ）もしくはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはそれらの類似物のオリゴマーまたはポリマーを指す。この用語は、天然に生じる核酸塩基、糖およびヌクレオシド（骨格）間の共有結合で構成されるオリゴヌクレオチド、ならびに天然には生じないが同様に機能する部分を有するオリゴヌクレオチドを含む。そのような修飾または置換されたオリゴヌクレオチドは、例えば細胞への取込みの増大、標的核酸に対する親和力の増大、およびヌクレアーゼ存在下での安定性の増大などの望ましい特性の故に、天然の形態より好適であることが多い。
【００３３】
本発明において有用な好ましいアンチセンス化合物の具体例には、修飾された骨格または天然にはないヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドがある。本明細書において規定するように、修飾された骨格を有するオリゴヌクレオチドには、骨格にリン原子を保有するオリゴヌクレオチドと骨格にリン原子を持たないオリゴヌクレオチドとがある。本明細書においては、また当業界で時折言及されるように、そのヌクレオシド間骨格にリン原子を持たない修飾オリゴヌクレオチドもまたオリゴヌクレオチドとみなすことができる。
【００３４】
好適な修飾オリゴヌクレオチド骨格には、例えばホスホロチオエート、不斉なホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよびその他のアルキルホスホネート（３’‐アルキレンホスホネート、５’‐アルキレンホスホネートおよび不斉なホスホネートなど）、ホスフィネート、ホスホルアミデート（３’‐アミノホスホルアミデートおよびアミノアルキルホスホルアミデートなど）、チオノホスホルアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、正常な３’‐５’結合を有するセレノホスフェートおよびボラノホスフェート（ｂｏｒａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、２’‐５’結合したこれらの類似体、ならびに１つまたは複数のヌクレオチド間結合が３’‐３’、５’‐５’または２’‐２’結合である逆向きの極性を有する前記化合物がある。逆向きの極性を有する好ましいオリゴヌクレオチドは、最も３’側のヌクレオチド間結合にあるただ一つの３’‐３’結合、すなわち、塩基がない（核酸塩基が無い、もしくはその場所に水酸基を有する）であろうただ一つの逆向きのヌクレオシド残基を含む。種々の塩、混合された塩および遊離酸の形態も含まれる。
【００３５】
上記のリン含有結合の調製を教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、米国特許第３，６８７，８０８号、第４，４６９，８６３号、第４，４７６，３０１号、第５，０２３，２４３号、第５，１７７，１９６号、第５，１８８，８９７号、第５，２６４，４２３号、第５，２７６，０１９号、第５，２７８，３０２号、第５，２８６，７１７号、第５，３２１，１３１号、第５，３９９，６７６号、第５，４０５，９３９号、第５，４５３，４９６号、第５，４５５，２３３号、第５，４６６，６７７号、第５，４７６，９２５号、第５，５１９，１２６号、第５，５３６，８２１号、第５，５４１，３０６号、第５，５５０，１１１号、第５，５６３，２５３号、第５，５７１，７９９号、第５，５８７，３６１号、第５，１９４，５９９号、第５，５６５，５５５号、第５，５２７，８９９号、第５，７２１，２１８号、第５，６７２，６９７号および第５，６２５，０５０号があり、各々本明細書に援用する。
【００３６】
その中にリン原子を含まない好適な修飾オリゴヌクレオチド骨格には、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルのヌクレオシド間結合、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルとが混合されたヌクレオシド間結合、または１つ以上の短鎖のヘテロ原子もしくは複素環のヌクレオシド間結合により形成される骨格を有する。これらは、モルフォリノ結合（一部はヌクレオシドの糖部分から形成される）を有する骨格；シロキサン骨格；スルフィド、スルフォキシドおよびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびメチレンチオホルムアセチル骨格；リボアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファミン酸骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホン酸およびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに構成要素Ｎ，Ｏ，ＳおよびＣＨ２が混在するその他の骨格がある。
【００３７】
上記のオリゴヌクレオチドの調製を教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、米国特許第５，０３４，５０６号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号、第５，２１４，１３４号、第５，２１６，１４１号、第５，２３５，０３３号、第５，２６４，５６２号、第５，２６４，５６４号、第５，４０５，９３８号、第５，４３４，２５７号、第５，４６６，６７７号、第５，４７０，９６７号、第５，４８９，６７７号、第５，５４１，３０７号、第５，５６１，２２５号、第５，５９６，０８６号、第５，６０２，２４０号、第５，６１０，２８９号、第５，６０２，２４０号、第５，６０８，０４６号、第５，６１０，２８９号、第５，６１８，７０４号、第５，６２３，０７０号、第５，６６３，３１２号、第５，６３３，３６０号、第５，６７７，４３７号、第５，７９２，６０８号、第５，６４６，２６９号および第５，６７７，４３９号があり、各々本明細書に援用する。
【００３８】
その他の好適なオリゴヌクレオチド類似物では、ヌクレオチド部分の糖とヌクレオシド間結合（すなわち骨格）との両方が新たな基で置換されている。塩基部分は適切な核酸標的化合物とのハイブリッド形成のために維持される。そのようなオリゴマー化合物の１つである、優れたハイブリッド形成特性を有することが示されているオリゴヌクレオチド類似物は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物においては、オリゴヌクレオチドの糖‐骨格がアミド含有骨格、具体的にはアミノエチルグリシン骨格で置換されている。核酸塩基は維持され、直接または間接的に骨格のアミド部分のアザ窒素原子に結合されている。
【００３９】
ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、米国特許第５，５３９，０８２号、第５，７１４，３３１号、および第５，７１９，２６２号があり、各々本明細書に援用する。ＰＮＡ化合物についてのさらなる教示は、ニールセン（Ｎｉｅｌｓｅｎ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２５４巻、１４９７‐１５００ページ、１９９１年にも見出すことができる。
【００４０】
本発明の最も好適な実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチド、ならびにヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシドであって、具体的には上述の米国特許第５，４８９，６７７号の‐ＣＨ２‐ＮＨ‐Ｏ‐ＣＨ２‐、‐ＣＨ２‐Ｎ（ＣＨ３）‐Ｏ‐ＣＨ２‐［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として知られる］、‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｎ（ＣＨ３）‐ＣＨ２‐、‐ＣＨ２‐Ｎ（ＣＨ３）‐Ｎ（ＣＨ３）‐ＣＨ２‐、および‐Ｏ‐Ｎ（ＣＨ３）‐ＣＨ２‐ＣＨ２‐［この場合天然のホスホジエステル骨格は‐Ｏ‐Ｐ‐Ｏ‐ＣＨ２‐として表される］、および上述の米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を有するオリゴヌクレオシドである。同様に、上述の米国特許第５，０３４，５０６号のモルフォリノ骨格構造を有するオリゴヌクレオチドも好ましい。
【００４１】
修飾オリゴヌクレオチドは１つ以上の置換された糖部分も含み得る。好適なオリゴヌクレオチドは、２’位に以下のうち１つを含む。すなわち、ＯＨ；Ｆ；Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルキル；Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルケニル；Ｏ‐、Ｓ‐もしくはＮ‐アルキニル；またはＯ‐アルキル‐Ｏ‐アルキル（ここでアルキル、アルケニルおよびアルキニルは、置換または非置換のＣ１〜Ｃ１０アルキルまたはＣ２〜Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルでもよい）。特に好ましくはＯ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２（式中、ｎおよびｍは１〜約１０）である。その他の好適なオリゴヌクレオチドは、２’位に以下のうち１つを含む。すなわち、Ｃ１〜Ｃ１０の低級アルキル、低級置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル（ａｌｋａｒｙｌ）、アラルキル、Ｏ‐アルカリルもしくはＯ‐アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡを切断する基（ＲＮＡ  ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）、リポーターとなる基、インターカレーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を向上させる基もしくはオリゴヌクレオチドの薬物動力学的特性を向上させる基、ならびに類似の特性を有するその他の置換基。好適な修飾には２’‐メトキシエトキシ（２‐Ｏ‐ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、同じく２’‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）もしくは２’‐ＭＯＥとしても知られている）（マーチン（Ｍａｒｔｉｎ）ら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．、第７８巻、４８６‐５０４ページ、１９９５年）、すなわちアルコキシアルコキシ基がある。さらに好ましい修飾には、２’‐ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわちＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基（２’‐ＤＭＡＯＥとしても知られている）および２’‐ジメチルアミノエトキシエトキシ（当業界では２’‐ジメチルアミノエトキシエチルもしくは２’‐ＤＭＡＥＯＥとしても知られている）、すなわち２’‐Ｏ‐ＣＨ２‐Ｏ‐ＣＨ２‐Ｎ（ＣＨ２）２がある。
【００４２】
さらに好ましい修飾には、２’‐ヒドロキシル基が糖の環の３’もしくは４’の炭素原子に連結され、それによって二環の糖部分を形成しているＬｏｃｋｅｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ（登録商標、ＬＮＡ）がある。連結部は、２’酸素原子と４’の炭素原子とを結ぶメチレン（‐ＣＨ２‐）ｎ基（ｎは１または２）であることが好ましい。ＬＮＡおよびその調製については国際出願国際公開第９８／３９３５２号および第９９／１４２２６号に記載されている。
【００４３】
その他の好ましい修飾には、２’‐メトキシ（２’‐Ｏ‐ＣＨ３）、２’‐アミノプロポキシ（２’‐ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、２’‐アリル（２’‐ＣＨ２‐ＣＨ＝ＣＨ２）、２’‐Ｏ‐アリル（２’‐Ｏ‐ＣＨ２‐ＣＨ＝ＣＨ２）および２’‐フルオロ（２’‐Ｆ）がある。２’‐修飾はａｒａｂｉｎｏ（上向き）の位置でもｒｉｂｏ（下向き）の位置でもよい。好ましい２’‐ａｒａｂｉｎｏ修飾は２’‐Ｆである。同様の修飾を、オリゴヌクレオチドの他の位置、具体的には、３’末端のヌクレオチドもしくは２’‐５’結合したオリゴヌクレオチドの糖の３’位、または５’末端のヌクレオチドの５’位に施してもよい。オリゴヌクレオチドは、ペントフラノシル糖の代わりにシクロブチル部分などの糖類似物を有してもよい。そのような修飾された糖構造の調製について教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、米国特許第４，９８１，９５７号、第５，１１８，８００号、第５，３１９，０８０号、第５，３５９，０４４号、第５，３９３，８７８号、第５，４４６，１３７号、第５，４６６，７８６号、第５，５１４，７８５号、第５，５１９，１３４号、第５，５６７，８１１号、第５，５７６，４２７号、第５，５９１，７２２号、第５，５９７，９０９号、第５，６１０，３００号、第５，６２７，０５３号、第５，６３９，８７３号、第５，６４６，２６５号、第５，６５８，８７３号、第５，６７０，６３３号、第５，７９２，７４７号、および第５，７００，９２０号があり、各々本明細書にその全体を援用する。
【００４４】
オリゴヌクレオチドは、核酸塩基（当業界では単に「塩基」と呼ばれることが多い）の修飾または置換を含んでもよい。本明細書で使用されるように、「非修飾」または「天然」の核酸塩基には、プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）がある。修飾核酸塩基にはその他の合成および天然の核酸塩基、例えば５‐メチルシトシン（５‐ｍｅ‐Ｃ）、５‐ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２‐アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６‐メチルおよびその他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２‐プロピルおよびその他のアルキル誘導体、２‐チオウラシル、２‐チオチミンおよび２‐チオシトシン、５‐ハロウラシルおよびシトシン、５‐プロピニル（‐Ｃ  Ｃ‐ＣＨ３）ウラシルおよびシトシンおよびピリミジン塩基のその他のアルキル誘導体、６‐アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５‐ウラシル（プソイドウラシル）、４‐チオウラシル、８‐ハロ、８‐アミノ、８‐チオール、８‐チオアルキル、８‐ヒドロキシルおよびその他の８‐置換アデニンおよびグアニン、５‐ハロ（特に５‐ブロモ、５‐トリフルオロメチル）およびその他の５‐置換ウラシルおよびシトシン、７‐メチルグアニンおよび７‐メチルアデニン、２‐Ｆ‐アデニン、２‐アミノ‐アデニン、８‐アザグアニンおよび８‐アザアデニン、７‐デアザグアニンおよび７‐デアザアデニン、ならびに、３‐デアザグアニンおよび３‐デアザアデニンがある。さらなる修飾核酸塩基には、三環系のピリミジン、例えばフェノキサジンシチジン（１Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾキサジン‐２（３Ｈ）‐オン）、フェノチアジンシチジン（１Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾチアジン‐２（３Ｈ）‐オン）、置換フェノキサジンシチジン（例えば９‐（２‐アミノエトキシ）‐Ｈ‐ピリミド［５，４‐ｂ］［１，４］ベンゾキサジン‐２（３Ｈ）‐オン）のようなＧ‐クランプ（Ｇ‐ｃｌａｍｐ）、カルバゾールシチジン（２Ｈ‐ピリミド［４，５‐ｂ］インドール‐２‐オン）、ピリドインドールシチジン（Ｈ‐ピリド［３’，２’：４，５］ピロロ［２，３‐ｄ］ピリミジン‐２‐オン）がある。修飾核酸塩基は、プリンまたはピリミジン塩基がその他のヘテロ環、例えば７‐デアザアデニン、７‐デアザグアノシン、２‐アミノピリジンおよび２‐ピリドンで置き換えられたものでもよい。さらなる核酸塩基には、米国特許第３，６８７，８０８号に開示されている核酸塩基、コンサイス・エンサイクロペディア・オブ・ポリマー・サイエンス・アンド・エンジニアリング（The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering ）、８５８‐８５９ページ、クロシュビッツ、ジェイ．アイ．（Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．）、ジョンワイリーアンドサンズ（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ）編、１９９０年に開示されている核酸塩基、エングリッシュ（Ｅｎｇｌｉｓｃｈ）ら、応用化学（Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ  Ｃｈｅｍｉｅ）、国際版、第３０巻、６１３ページ、１９９１年に開示されている核酸塩基、ならびにサングビ、ワイ．エス．（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．）、第１５章「ア��チセンスの研究と用途（Antisense Research and Applications ）」、２８９‐３０２ページ、クルーケ、エス．ティ．（Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．）およびレブルー、ビー．（Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．）編、ＣＲＣプレス、１９９３年に開示されている核酸塩基がある。これらの核酸塩基のうちある種のものは、本発明のオリゴマー化合物の結合親和性を高めるのに特に有用である。このような核酸塩基には、５‐置換ピリミジン、６‐アザピリミジンならびにＮ‐２、Ｎ‐６およびＯ‐６置換プリン（２‐アミノプロピルアデニン、５‐プロピニルウラシルおよび５‐プロピニルシトシンなど）がある。５‐メチルシトシン置換は、核酸二重鎖の安定性を０．６〜１．２℃増大させることが示されており（サングビ、ワイ．エス．（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．）、クルーケ、エス．ティ．（Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．）およびレブルー、ビー．（Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．）編、「アンチセンスの研究と用途（Antisense Research and Applications ）」、米国ボーカラトーン所在のＣＲＣプレス、１９９３年、２７６‐２７８ページ）、現時点で好適な塩基置換であるが、より特定的には２’‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）糖修飾と組み合わせる場合に好適である。
【００４５】
上述の修飾核酸塩基ならびにその他の修飾核酸塩基のうちいくつかの調製について教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、上述の米国特許第３，６８７，８０８号ならびに米国特許第４，８４５，２０５号、第５，１３０，３０２号、第５，１３４，０６６号、第５，１７５，２７３号、第５，３６７，０６６号、第５，４３２，２７２号、第５，４５７，１８７号、第５，４５９，２５５号、第５，４８４，９０８号、第５，５０２，１７７号、第５，５２５，７１１号、第５，５５２，５４０号、第５，５８７，４６９号、第５，５９４，１２１号、第５，５９６，０９１号、第５，６１４，６１７号、第５，６４５，９８５号、第５，８３０，６５３号、第５，７６３，５８８号、第６，００５，０９６号、第５，６８１，９４１号、および第５，７５０，６９２号があり、各々本明細書に援用する。
【００４６】
本発明のオリゴヌクレオチドのその他の修飾には、オリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞への取り込みを促進する１つ以上の部分または複合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）をオリゴヌクレオチドに化学的に結合することが含まれる。本発明の化合物は、１級または２級のヒドロキシル基などの官能基に共有結合した複合物基（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｇｒｏｕｐ）を含み得る。本発明の複合物基には、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴマーの薬物動力学的特性を促進する基、およびオリゴマーの薬物動態学的特性を促進する基がある。一般的な複合物基には、コレステロール、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、および色素がある。本発明において、薬物動力学的特性を促進する基とは、オリゴマーの取り込みを向上させ、オリゴマーの分解耐性を促進し、および／またはＲＮＡとの配列特異的ハイブリッド形成を強化する基を含む。本発明において、薬物動態学的特性を促進する基とは、オリゴマーの取り込み、分布、代謝または排泄を改善する基を含む。代表的な複合物基は、１９９２年１０月２３日に出願された国際特許出願番号第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９１９６に開示されており、この出願の全開示内容は本願に援用する。複合物部分には、特にこれらに限定はされないが、コレステロール部分（レチンガー（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ）ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９年、第８６巻、６５５３‐６５５６ページ）、コール酸（マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９４年、第４巻、１０５３‐１０６０ページ）、チオエーテル、例えばヘキシル‐Ｓ‐トリチルチオール（マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９２年、第６６０巻、３０６‐３０９ページ；マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９３年、第３巻、２７６５‐２７７０ページ）、チオコレステロール（オーベルハウザー（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ）ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９２年、第２０巻、５３３‐５３８ページ）、脂肪族鎖、例えばドデカンジオールまたはウンデシル残基（セゾン‐ベーモアラス（Ｓａｉｓｏｎ‐Ｂｅｈｍｏａｒａｓ）ら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９１年、第１０巻、１１１１‐１１１８ページ；カバノフ（Ｋａｂａｎｏｖ）ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．、１９９０年、第２５９巻、３２７‐３３０ページ；スビナーチャク（Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１９９３年、第７５巻、４９‐５４ページ）、リン脂質、例えばジヘキサデシル‐ｒａｃ‐グリセロールもしくはトリエチルアンモニウム１，２‐ジ‐Ｏ‐ヘキサデシル‐ｒａｃ‐グリセロ‐３‐Ｈ‐ホスホネート（マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９５年、第３６巻、３６５１‐３６５４ページ；シェア（Ｓｈｅａ）ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、１９９０年、第１８巻、３７７７‐３７８３ページ）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９５年、第１４巻、９６９‐９７３ページ）、またはアダマンタン酢酸（マノハラン（Ｍａｎｏｈａｒａｎ）ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．、１９９５年、第３６巻、３６５１‐３６５４ページ）などの脂質部分、パルミチル部分（ミシュラ（Ｍｉｓｈｒａ）ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１９９５年、第１２６４巻、２２９‐２３７ページ）、あるいはオクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ‐カルボニル‐オキシコレステロール部分（クルーケ（Ｃｒｏｏｋｅ）ら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６年、第２７７巻、９２３‐９３７ページ）がある。本発明のオリゴヌクレオチドは、活性の薬物、例えばアスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）‐（＋）‐プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン（ｄａｎｓｙｌｓａｒｃｏｓｉｎｅ）、２，３，５‐トリヨード安息香酸、フルフェナミン酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド（ｂｅｎｚｏｔｈｉａｄｉａｚｉｄｅ）、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメタシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）、バルビツル酸、セファロスポリン、サルファ剤、抗糖尿病薬、抗菌剤すなわち抗生物質と複合物化されてもよい。オリゴヌクレオチド‐薬物複合物およびその調製については、米国特許出願第０９／３３４，１３０号（１９９９年６月１５日出願）に記載されており、この出願はその全体を本願に援用する。
【００４７】
そのようなオリゴヌクレオチド複合物の調製を教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定されないが、米国特許第４，８２８，９７９号、第４，９４８，８８２号、第５，２１８，１０５号、第５，５２５，４６５号、第５，５４１，３１３号、第５，５４５，７３０号、第５，５５２，５３８号、第５，５７８，７１７号、第５，５８０，７３１号、第５，５８０，７３１号、第５，５９１，５８４号、第５，１０９，１２４号、第５，１１８，８０２号、第５，１３８，０４５号、第５，４１４，０７７号、第５，４８６，６０３号、第５，５１２，４３９号、第５，５７８，７１８号、第５，６０８，０４６号、第４，５８７，０４４号、第４，６０５，７３５号、第４，６６７，０２５号、第４，７６２，７７９号、第４，７８９，７３７号、第４，８２４，９４１号、第４，８３５，２６３号、第４，８７６，３３５号、第４，９０４，５８２号、第４，９５８，０１３号、第５，０８２，８３０号、第５，１１２，９６３号、第５，２１４，１３６号、第５，２４５，０２２号、第５，２５４，４６９号、第５，２５８，５０６号、第５，２６２，５３６号、第５，２７２，２５０号、第５，２９２，８７３号、第５，３１７，０９８号、第５，３７１，２４１号、第５，３９１，７２３号、第５，４１６，２０３号、第５，４５１，４６３号、第５，５１０，４７５号、第５，５１２，６６７号、第５，５１４，７８５号、第５，５６５，５５２号、第５，５６７，８１０号、第５，５７４，１４２号、第５，５８５，４８１号、第５，５８７，３７１号、第５，５９５，７２６号、第５，５９７，６９６号、第５，５９９，９２３号、第５，５９９，９２８号、および第５，６８８，９４１号があり、各々本明細書に援用する。
【００４８】
所与の化合物中のすべての部位が均一に修飾される必要はなく、実際に複数の上記修飾が単一の化合物に、またはオリゴヌクレオチド内の単一のヌクレオシドにすら為されることもある。本発明はキメラ化合物のアンチセンス化合物も含む。本発明において「キメラの（ｃｈｉｍｅｒｉｃ）」アンチセンス化合物または「キメラ（ｃｈｉｍｅｒａ）」とは、２つ以上の化学的に異なる領域を有し、各々が少なくとも１つのモノマー単位（すなわちオリゴヌクレオチド化合物の場合はヌクレオチド）で構成されているアンチセンス化合物、特にオリゴヌクレオチドである。このようなオリゴヌクレオチドは、同オリゴヌクレオチドにヌクレアーゼ分解に対する抵抗性の増大、細胞への取り込みの増大、および／または標的核酸に対する結合親和性の増大を与えるように修飾された少なくとも１つの領域を一般に含んでいる。オリゴヌクレオチドの付加的領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断する（ｃｌｅａｖｅ）能力を有する酵素の基質としての役割を果たし得る。例をあげれば、ＲＮａｓｅＨはＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞性エンドヌクレアーゼである。したがってＲＮａｓｅＨの活性化によりＲＮＡ標的が切断され、それによりオリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害の効率が著しく向上する。このため、キメラのオリゴヌクレオチドを使用する場合は、より短いオリゴヌクレオチドを用いて、同じ標的領域とハイブリッド形成するホスホロチオエート骨格のデオキシオリゴヌクレオチドに匹敵する結果を得られることが多い。ＲＮＡ標的の切断はゲル電気泳動によりごく普通に検出可能であり、必要であれば、当業界において周知の核酸ハイブリッド形成技法と組み合わせてもよい。
【００４９】
本発明のキメラのアンチセンス化合物は、複数のオリゴヌクレオチド、修飾オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシドおよび／または上述のオリゴヌクレオチド類似体の複合構成物として形成可能である。そのような化合物は、当業界ではハイブリッドまたはギャップマーとも呼ばれている。このようなハイブリッド構成物の調製について教示する代表的な米国特許には、特にこれらに限定はされないが、米国特許第５，０１３，８３０号、第５，１４９，７９７号、第５，２２０，００７号、第５，２５６，７７５号、第５，３６６，８７８号、第５，４０３，７１１号、第５，４９１，１３３号、第５，５６５，３５０号、第５，６２３，０６５号、第５，６５２，３５５号、第５，６５２，３５６号、および第５，７００，９２２号があり、各々その全体を本明細書に援用する。
【００５０】
本発明に関して使用されるアンチセンス化合物は、よく知られた固相合成の技法により首尾よくごく普通に作製可能である。このような合成のための機器は、例えば米国カリフォルニア州フォスター・シティ所在のアプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）などのいくつかの供給メーカーにより販売されている。当業界で知られた他の任意の合成手段を、付加的にまたは代替法として使用可能である。ホスホロチオエートおよびアルキル化誘導体などのオリゴヌクレオチドを調製するために同様の技法を用いることはよく知られている。
【００５１】
本発明のアンチセンス化合物は、医薬として許容可能な任意の塩、エステルもしくは該エステルの塩、またはヒトを含む動物に投与されると（直接または間接に）生物学的活性を有する代謝物もしくはその残基を生じうるその他の任意の化合物を含む。従って、例えば、開示は本発明の化合物のプロドラッグおよび医薬として許容可能な塩、医薬として許容可能な該プロドラッグの塩、ならびにその他の生物学的同等物にも及ぶ。
【００５２】
「プロドラッグ」という用語は、体内もしくは体内の細胞内において内在性酵素もしくはその他の化学物質の作用および／または条件によって活性型（すなわち薬物）へと変換される、不活性型に調製される治療剤を表す。具体的には、本発明のオリゴヌクレオチドのプロドラッグ版は、ＳＡＴＥ（（Ｓ‐アセチル‐２‐チオエチル）リン酸）誘導体として、１９９３年１２月９日に公開されたゴセリン（Ｇｏｓｓｅｌｉｎ）らの国際特許国際公開第９３／２４５１０号またはイムバック（Ｉｍｂａｃｈ）らの国際特許国際公開第９４／２６７６４および米国特許第５，７７０，７１３号に開示されている方法に従って調製される。
【００５３】
「医薬として許容可能な塩」という用語は、生理学的に許容可能、かつ医薬として許容可能な、本発明の化合物の塩、すなわち元の化合物の望ましい生物学的活性を維持し、かつ該化合物に望ましくない毒性をもたらさない塩、を指す。
【００５４】
本発明のアンチセンス化合物は、診断学、治療学、予防法において、また研究用試薬およびキットとして利用可能である。治療学的用途については、タンパク質発現を調節することにより治療可能な疾患または障害を有する疑いのある動物（好ましくはヒト）を、本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドを投与することにより治療する。アンチセンスの特異性と感受性とは治療の用途において特に有用であり、動物およびヒトの疾患状態の治療における治療用成分としてアンチセンス・オリゴヌクレオチドが使用されている。リボザイムを含む、アンチセンス・オリゴヌクレオチド薬は、安全かつ有効にヒトに投与されており、数多くの臨床試験が現在進行中である。よって、オリゴヌクレオチドは、細胞、組織、動物（特にヒト）の治療処置のための治療処置計画上便利なように設定可能な有用な治療方式となりうる、ということが立証される。有効な量のアンチセンス・オリゴヌクレオチドを医薬として許容可能な適当な希釈剤もしくは担体に添加することにより、本発明の化合物を医薬組成物に利用可能である。本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドおよび方法の使用は、予防的に、例えば感染、炎症もしくは腫瘍形成を抑制するかまたは遅延させるためにも有用である。
【００５５】
本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドは研究および診断学においても有用である。なぜならこれらの化合物は疾患状態に関与するタンパク質をコードする核酸とハイブリッド形成し、その事実を活用するべくサンドイッチ法およびその他のアッセイを容易に構築することを可能にするからである。本発明のアンチセンス・オリゴヌクレオチドと疾患状態に関与するタンパク質をコードする核酸とのハイブリッド形成は、当業界において知られた手段で検出可能である。そのような手段には、酵素のオリゴヌクレオチドへの結合、オリゴヌクレオチドの放射標識またはその他の任意の適当な検出手段がありうる。試料中の、疾患状態に関与するタンパク質のレベルを検出するための検出手段を用いるキットを作製することも可能である。
【００５６】
本発明は、その生物学的利用率および／または吸収特性が、本発明の浸透促進剤の使用により促進され得るアンチセンス・オリゴヌクレオチドとともに、非常に広く使用されるものと考えられる。本発明はさらに、本発明の浸透促進剤を、経口摂取されるが消化管（「ＧＩＴ」）中で比較的吸収され難いアンチセンス・オリゴヌクレオチドと組み合わせることにより、特に優れた効果を得るために使用し得るとものと考えられる。
【００５７】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドは任意の適当な形態でよく、たとえば結晶またはアモルファスの形態で、ならびにたとえばナノ粒子およびマイクロ粒子の形態またはより大きな粒子の形態などの固体、液体、またはゲルの形態であり得る。さらに、アンチセンス・オリゴヌクレオチドは組成物中に徐放性の形態で存在し得る。
【００５８】
本発明の組成物は、医薬として有効な量、すなわち患者に所望の予防、治療または、診断上の効果をもたらすのに有効な量のアンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む。当然のことながら、組成物を構成するアンチセンス・オリゴヌクレオチドの量は、たとえば使用される個々のアンチセンス・オリゴヌクレオチド、治療すべき症状の性質、および患者の性状を含む、様々な要因によって変わる。
【００５９】
同様に、本発明の組成物中に含まれる促進剤化合物は、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの生物学的利用率、および／または吸収特性を向上させるのに有効な量で存在する。組成物中の促進剤の量は、たとえば、他の促進剤化合物の存在、使用される個々のアンチセンス・オリゴヌクレオチド、使用されるアンチセンス・オリゴヌクレオチドの量、選択される剤形、剤形の性質、促進剤の性質、使用される個々の促進剤化合物、使用される促進剤化合物の光学純度（すなわち純粋な異性体の形態で使用されるか、または部分的もしくは完全にラセミ混合物として使用されるか）を含めた、様々な要因によって決まる。ほとんどの施用では、組成物は、約１：９９〜約９９：１の比のアンチセンス・オリゴヌクレオチド：促進剤化合物からなるものと考えられる。通常、この比は約１：２０〜約２０：１の間であろう。この比の範囲は、上記の様々な要因に応じてこの範囲から外れるアンチセンス・オリゴヌクレオチドと促進剤との比を使用し得るという了解の下に、ガイドラインの目的で示されている。
【００６０】
本発明の組成物は任意選択で媒体を含むが、媒体の性質は組成物の形態によって決まる。組成物は任意の適当な形態、たとえば顆粒、固体、半固体、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル剤、吸入剤、座薬、または浣腸の形態で使用し得る。錠剤およびカプセル剤は、たとえば遅延放出、持続放出、または即時放出系の形態であり得る。本発明の組成物は、固体もしくは半固体の経口剤形で最も広範に使用されるものと考えられる。
【００６１】
「媒体」という用語は概して、組成物の薬物および促進剤成分以外の組成を構成し得る、様々な種類の医薬として許容可能な成分を含むものとして使用される。媒体の例としては、充填剤、希釈剤、賦形剤、および、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの放出特性または促進剤化合物にとって有効な材料、すなわち放出制御用の材料が含まれる。充填剤および希釈剤の例としてはラクトース、マンニトール、デキストロース、野菜油、グリセリド、および微結晶性セルロースがある。賦形剤の例としては、リン酸塩およびクエン酸塩、ステアリン酸マグネシウム、シリカ、ならびにヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、およびデンプンなどの結合剤がある。放出制御用の材料の例としては、腸内ポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースがある。
【００６２】
担体を構成する、様々な種類の成分の量は、所望の効果を達成するためにユーザーにより選択され得る。
以下の実施例は本発明の例示であり、本発明を従来技術の組成物と比較する。
【実施例】
【００６３】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドを、適切に保護された出発原料（ｓｙｎｔｈｏｎ）を用いた固相有機合成により合成した。逆相クロマトグラフィを用いてアンチセンス・オリゴヌクレオチドを精製し、次いで脱保護し凍結乾燥した。
【００６４】
実施例１：ヒトＴＮＦ‐αを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む組成物
本開発の促進剤とアンチセンス・オリゴヌクレオチドとを含有する配合物の一例は、２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、およびＴＮＦ‐αを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドからなる組成物である。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、１０塩基の２’デオキシギャップを含む２’‐Ｏ‐（２‐メトキシエチル）修飾されたホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドであり、５‐１０‐５ＭＯＥギャップマーとも呼ばれ、１９個のヌクレオチド間結合が全てＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートであるオリゴヌクレオチドの３’末端および５’末端の５ヌクレオチドのみに２’ＭＯＥ修飾を有する。さらに、全てのシトシンが５‐メチルシトシンに修飾されている。２’ＭＯＥ修飾によりオリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ分解に対してより抵抗性となるので、そのＲＮＡ結合親和性が高まると同時に半減期が長くなる。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドはヒトＴＮＦ‐αを標的とし、関節リウマチなどの炎症性障害を治療するために使用可能である。該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは
ＧＣＴ  ＧＡＴ  ＴＡＧ  ＡＧＡ  ＧＡＧ  ＧＴＣ  ＣＣ    （配列番号１）
の配列を有する。
【００６５】
実施例２：ｃ‐ｒａｆキナーゼを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む組成物
２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、およびｃ‐ｒａｆキナーゼを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドからなり、種々の形態のがんなどの過剰増殖性障害の治療に使用可能な、治療用アンチセンス・オリゴヌクレオチド組成物が調製される。該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは
ＴＣＣ  ＣＧＣ  ＣＴＧ  ＴＧＡ  ＣＡＴ  ＧＣＡ  ＴＴ    （配列番号２）
の配列を有する。ヌクレオチド間結合は全てＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートである。
【００６６】
実施例３：ヒトパピローマウイルスを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む組成物
２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、およびヒトパピローマウイルスを標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドからなり、例えば陰部疣贅などの疣贅（いぼ）の治療に使用可能な、治療用アンチセンス・オリゴヌクレオチド組成物が調製される。該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは
ＴＴＧ  ＣＴＴ  ＣＣＡ  ＴＣＴ  ＴＣＣ  ＴＣＧ  ＴＣ    （配列番号３）
の配列を有する。ヌクレオチド間結合は全てＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートである。
【００６７】
実施例４：細胞間接着分子‐１（ＩＣＡＭ‐１）を標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドを含む組成物
２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウム、カプリン酸ナトリウム、および細胞間接着分子‐１（ＩＣＡＭ‐１）を標的とするアンチセンス・オリゴヌクレオチドからなり、例えば炎症性腸疾患、乾癬および関節リウマチなどの炎症性の障害の治療に使用可能な、治療用アンチセンス・オリゴヌクレオチド組成物が調製される。該アンチセンス・オリゴヌクレオチドは
ＣＣＣ  ＣＡＣ  ＣＡＣ  ＴＴＣ  ＣＣＣ  ＴＣＴ  Ｃ    （配列番号４）
の配列を有する。ヌクレオチド間結合は全てＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートである。
【００６８】
実施例５：２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含む組成物
巨大分子化合物、たとえばオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドの、本開発の促進剤化合物によってもたらされる生物学的利用率の促進を実証するために、カプリン酸ナトリウムおよびアンチセンス化合物を含み、本開発の促進剤化合物である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを有する組成物、および有しない組成物を動物に投与した。組成物中の促進剤とアンチセンス化合物との比を表６に示す。
【００６９】
アンチセンス・オリゴヌクレオチドを、適切に保護された出発原料を用いて固相有機合成により合成した。逆相クロマトグラフィを用いてアンチセンス・オリゴヌクレオチドを精製し、次いでそれを脱保護し、凍結乾燥した。
【００７０】
使用したアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、１０塩基の２’デオキシギャップを含む２’‐Ｏ‐（２−メトキシエチル）修飾されたホスホロチオエート・オリゴヌクレオチドであり、５‐１０‐５ＭＯＥギャップマーとも呼ばれ、１９個のヌクレオチド間結合が全てＯ，Ｏ‐結合したホスホロチオエートであるオリゴヌクレオチドの３’末端および５’末端の５ヌクレオチドのみに２’ＭＯＥ修飾を有している。さらに、すべてのシトシンが５‐メチルシトシンに修飾されている。２’ＭＯＥ修飾により、オリゴヌクレオチドはヌクレアーゼ分解に対する抵抗性が増し、それによってそのＲＮＡ結合親和性が高まると同時に半減期が長くなる。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、関節リウマチなどの炎症性障害を治療すべくヒトＴＮＦ‐αを標的とする。このアンチセンス・オリゴヌクレオチドは、次の配列、すなわち
ＧＣＴ  ＧＡＴ  ＴＡＧ  ＡＧＡ  ＧＡＧ  ＧＴＣ  ＣＣ    （配列番号１）
を有する。
【００７１】
組成物を、溶液の形態で被検対象にカテーテルを通して投与することにより比較した。空腸カテーテルを、６匹のオスのアカゲザル（３〜５歳、３〜５Ｋｇ）中に麻酔下で外科的に埋め込む。このカテーテルは皮下の入り口に結合していて、その入り口を通して空腸中に薬剤投与することを可能にする。投与する前に動物を少なくとも７日間回復させる。投与する前に動物を一晩絶食させ、投与２時間後に餌を与える。試験配合物を水中に調製し、各投与の間に１週間のウオッシュ・アウト期間を設けた交差試験法（ｃｒｏｓｓ‐ｏｖｅｒ  ｓｔｕｄｙ）で、ボーラス（０．５ｍｌ／ｋｇ）として動物に投与する。大腿静脈（静脈内投与のための投与部位以外）から、以下の時間間隔で全血試料を採取する。静脈内投与については、０（投与前）、２、５、１０，２０、３０、４５、６０、９０、１２０、１８０、２４０、および３６０分、ならびに空腸内投与に対しては、０（投与前）、５、１５、３０、４５、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２４０、３６０、および４８０分。試料をＥＤＴＡを含む試験管中に採取し、冷却遠心分離器（２〜８℃）中で遠心分離して血漿を得、これを分析するまで−７０℃で保管する。アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、陰イオン交換クロマトグラフィによって検出する。
【００７２】
配合物、および配合物投与後のアンチセンス・オリゴヌクレオチドの生物学的利用率、Ｔｍａｘ、および血漿中最大値の測定値を、以下の図表中に示す。生物学的利用率（すなわち、静脈内投与量に対する相対値）を、血漿中オリゴヌクレオチド濃度‐時間プロファイルの曲線下面積から計算する。
【００７３】
【表１】
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アンチセンス・オリゴヌクレオチドは、いずれの浸透促進剤系も使わずにサルに経口でまたは腸内に投与した場合は、浸透性に乏しい。この薬物を浸透促進剤と共に投与すると、生物学的利用率が有意に改善される。浸透促進剤である２‐ｎ‐オクチルドデカン酸ナトリウムを含む組成物において最も高い生物学的利用率が認められ、この場合生物学的利用率は５．２〜１８．２％の範囲であった。直鎖カプリン酸ナトリウム単独に比べて、分枝鎖促進剤化合物による生物学的利用率が増大することは、血漿中ピークの増大のみならず、曲線下面積全体の有意な増大にも関連する。直鎖カルボン酸塩であるカプリン酸ナトリウムのみを含む組成物により達成される生物学的利用率は、１．０％〜６．２％の範囲であり、浸透促進効果は有意に低かった。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
2004537516.tif 000049
2004537516.tif 000050