(57)【要約】本発明はＴｈ２が介在した病気又は疾患に対する予防的な処置、又は治療上の処置に関連する。これら治療の方法において有用なワクチンが供されている。ワクチンは活性剤として、免疫原性のアシル・グリセリル・フォスファチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライドを含んで成る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｈ２が介在した病気もしくは疾患に対する予防的な処置、又は治療上の処置において有効な免疫応答を、患者において誘導する為のワクチンであって、活性剤として免疫原性のアシル・グリセリル・フォスファチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライド（ＰＩＭ）を、免疫原性の形態において含んで成るワクチン。
【請求項２】
気管支の炎症及び／もしくは気道の好酸球増加症を伴う症状を患うか又は症状にかかりやすい患者において免疫応答を誘導する為のワクチンであって、活性剤として、免疫原性のＰＩＭを含んで成るワクチン。
【請求項３】
ワクチンであって、Ｔｈ２が介在した病気もしくは疾患の進行の危険性を減らす為の、免疫学的に有効な量の免疫原性のＰＩＭを含んで成るワクチン。
【請求項４】
前記ワクチンが呼吸器投与用に処方されている、請求項１−３のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項５】
前記免疫原性のＰＩＭがマイコバクテリウム（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）から単離されている、請求項１−４のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項６】
前記免疫原性のＰＩＭがＭ．ボビス（Ｍ．ｂｏｖｉｓ）生物から単離されている、請求項５記載のワクチン。
【請求項７】
前記Ｍ．ボビス生物がＭ．ボビス株Ａｎ５である、請求項６記載のワクチン。
【請求項８】
前記ＰＩＭが、マンノース成分として、１−６のマンノース単位を含む、請求項１−７のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項９】
前記ＰＩＭが、２−６の脂肪酸単位を含む、請求項１−８のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項１０】
前記ＰＩＭが、２つの脂肪酸単位を含む、請求項９記載のワクチン。
【請求項１１】
前記脂肪酸が、長さで１０−２２の炭素原子である、請求項９又は１０記載のワクチン。
【請求項１２】
前記脂肪酸が、長さで１６−２０の炭素原子である、請求項２２記載のワクチン。
【請求項１３】
前記免疫原性のＰＩＭが流体である、請求項１−１２のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項１４】
呼吸器が許容できるアジュバントを更に含んで成る、請求項１−１３のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項１５】
更に１又は複数のＴｈ１型の免疫応答を誘導する物質の中から選択された第二の免疫原を更に含んで成る、請求項１−１４のいずれか１項記載のワクチン。
【請求項１６】
マイコバクテリウム・ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）（バチルス・カルメッテ−グエリン）（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）が、前記Ｔｈ１型の免疫応答を誘導する物質として含まれている、請求項１５記載のワクチン。
【請求項１７】
患者において、Ｔｈ２が介在した病気もしくは疾患を治療的に処置する方法であって、有効な量の免疫原性のＰＩＭを投与することによって、前記患者において免疫応答を誘導する段階を含んで成る方法。
【請求項１８】
患者において喘息を治療的に処置する方法であって、有効な量の免疫原性のＰＩＭを投与することによって、前記患者において免疫応答を誘導する段階を含んで成る方法。
【請求項１９】
前記免疫原性のＰＩＭが呼吸器に投与される、請求項１７又は１８記載の方法。
【請求項２０】
前記免疫原性のＰＩＭが、請求項１−１２のいずれか１項記載のワクチンの形態において投与される、請求項１７−１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
前記免疫原性のＰＩＭが、前記患者の口を介して吸入によって投与される、請求項１７−２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
前記免疫原性のＰＩＭが、前記患者に対し鼻腔を介して投与される、請求項１７−２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
Ｔｈ２が介在した病気又は疾患の治療上の処置の為の薬剤の調製における、免疫原性のＰＩＭの利用。
【請求項２４】
Ｔｈ２が介在した疾患の進行に対する予防的な処置の為の薬剤の調製における、免疫原性のＰＩＭの利用。
【請求項２５】
前記Ｔｈ２が介在した疾患が喘息である、請求項２３又は２４記載の利用。
【請求項２６】
前記免疫原性のＰＩＭが、マイコバクテリウムから単離されている、請求項２３−２５のいずれか１項記載の利用。
【請求項２７】
前記マイコバクテリウムが、Ｍ．ボビス生物である請求項２６記載の利用。
【請求項２８】
前記Ｍ．ボビス生物が、Ｍ．ボビス株Ａｎ５である、請求項２７記載の利用。
【請求項２９】
前記免疫原性のＰＩＭが、そのマンノース成分として、１−６のマンノース単位を含む、請求項２３−２８のいずれか１項記載の利用。
【請求項３０】
前記薬剤の調製において、前記免疫原性のＰＩＭを呼吸器が許容できるアジュバントと組み合わせて、当該薬剤を呼吸器投与用に処方する、前記請求項２３−２９のいずれか１項記載の利用。
【請求項３１】
Ｔｈ２が介在した病気又は疾患を予防的又は治療的に処置をする為の装置であって、そのような治療を必要とする患者の気道に、請求項１−１２のいずれか１項記載のワクチンを分配できる容器を含む装置。
【請求項３２】
前記ワクチンを、患者の口を介する吸入によって分配できる、請求項３１記載の装置。
【請求項３３】
前記ワクチンを、鼻腔内に分配できる請求項３１記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はＴｈ−２が介在した病気又は疾患の治療に関連する。一層詳しくは、そのような病気又は疾患に苦しむ患者の治療上の処置及び係る病気又は疾患に対して苦しんではいない人々の予防的（予防薬）な処置に関連する。
【０００２】
技術背景
様々なＴｈ−２が介在した病気及び疾患がある。例えばこれらはアレルギー性及びアトピー性の疾患が挙げられる。例えばアレルギー性の鼻炎、皮フ炎及び乾癬である。喘息は別の例である。そして喘息は、本明細書中に記載の治療の注目の的である広義の典型的な疾患の型である。
【０００３】
喘息は、マスト細胞及び好酸球等の多くの細胞が働く、気道の慢性の炎症性の疾患である。感染しやすい個体において、この炎症は広範囲に広がるが、変わりやすい気道の閉塞に伴う症状を引き起こし、それは、往々にして、自然に又は治療により解消することが可能であり、そして様々な刺激に対する気道の応答の関連の増加を引き起こす。
【０００４】
喘息は先天性でありうるが、伝染性ではなくそして慢性且つ持続性であっても良いか又は周期的且つ通常少なくとも一時的に解消可能である発作の形態において生じうる。発作は人から人によって症度と頻度において様々である。多くの因子、例えば花粉、カビの胞子、ハウスダストのダニそして動物のフケのような吸い込んだアレルゲンへの曝露等が喘息の進行の原因になりうる。進行した喘息を持つ個体においては、多くの刺激が喘息の発作を誘発しうる。刺激の例は、アレルゲン、ウィルスの呼吸器感染（カゼ又はインフルエンザ）、空気中の刺激物（煙、大気の汚染、香水）、湿気、冷えた天候、及び運動が挙げられる。
【０００５】
喘息の発作の間、気管支の周辺の筋肉は引き締まり、そして気管支の裏の皮が腫れ（炎症になる）そして高粘度の粘液を産み、その結果管の内径が減少する。これらの変化は呼吸を困難にする空気の流れに対する抵抗を増やす。喘息が適当に制御されている時、気管支は正常の大きさである。
【０００６】
喘息は子供と大人の間で共通する病気である。アメリカ合衆国において７％の人々が喘息として診断されていると見込まれる。ニュージーランドについて、対応する数字は約１０％である（Ｂｕｒｎｅｙ， Ｐ．ら（１９９６） Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｓｙｍｐｔｏｍｓ， Ｓｅｌｆ−Ｒｅｐｏｒｔｅｄ Ａｓｔｈｍａ Ａｔｔａｃｋｓ、及びＵｓｅ ｏｆ Ａｓｔｈｍａ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｕｒｖｅｙ． Ｅｕｒ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｊ． ９ ： ６８７−６９５）。西側及び開発途上国の両方において、喘息の発症はこの３０年間で著しく増加した。この比較的短かい時間単位は遺伝的よりむしろ環境的な因子が働いていることを示唆する。
【０００７】
多くの場合、喘息はアトピー性の疾患である。ここにおいて基礎となる過程は、一般的な環境のアレルゲンに対するアレルギー応答が原因である。アレルギー性の応答は患者の呼吸に影響を及ぼす、気道の、特有の慢性の腫大及び炎症を生じる好酸球の活性化及び肺への補充によって特徴づけられた免疫系の機能である。
【０００８】
喘息の医薬治療は、様々な部類の薬物、例えばβアゴニスト、局所又は経口のステロイド及びテオフィリンを伴う。もし適切に用いられたならば、治療で喘息系は進行しなくなるか又はそれらが在る時に和らげて良い。主にβ作用薬及びテオフィリンは気道周辺の筋肉を弛緩することによって働く一方で、ステロイドは炎症及び粘液の生産を減らす（且つ予防し）為に作用する。既存及びそれ以上の他の薬物療法は喘息の流行、罹患率及び死亡率に関する世界的な注目及び懸念が高まりを見せることにより開発段階にある。
【０００９】
喘息においては、気道の炎症の進行に対する免疫学的な主成分がある。例えばＴｈ２リンパ球（Ｔｈ２ｓ）が挙げられる。これらの細胞はそれぞれ、Ｂ細胞による免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）の生産の促進並びに好酸球の生成及び補充につながるサイトカイン、例えば、インターロイキン４（ＩＬ−４）及びＩＬ−５等、を分泌する。アレルゲンによるマスト細胞の活性化は、急性の炎症性応答、例えば粘液の生産を誘発する、ヒスタミン及び他の介在する化学物質を放つ。好酸球が放つ介在物質は、例えば細胞毒素であり、それは気管上皮の炎症及び壊死につながる。生じた組織の傷害と一緒に好酸球の局所化した補充及び活性化は好酸球増加症といわれている。
【００１０】
従って、既に一度生じた気道の炎症を抑制する薬物による治療、か又は喘息患者において症状を軽減する薬による伝統的な治療に加えて、アトピー及び気道の炎症の進行の危険性を減らすのに、免疫系を調節する治療法に関する要請がある。もし係る治療が、現在のアトピー性疾患の患者においてもそれらの病気の症度を減らす同じ阻害作用を有するならば、更に有利だろう。
【００１１】
この要請に合うある免疫学的な方法は、マイコバクテリウム・ボビス−バチルス・カルメッテ−グエリン（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ−Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ）（ＢＣＧ）を包含する。この微生物による事前の活性感染はＥｒｂら（Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． Ｖｏｌ． １８７． Ｎｏ．４， Ｆｅｂｒｕａｒｙ １６ １９９８）によりマウスにおいて続いて起こる、アレルゲンが誘導した気道の好酸球を抑制することが報告されている。なお、鼻腔内感染が腹腔内又は皮下感染よりも一層効果的であるとも報告されている。
【００１２】
生物及びＢＣＧ−多糖類核酸としてのＢＣＧは又中国において喘息の治療において用いられているとして報告されている（例えばＣｈｉｎａ Ｊ． Ｐａｅｄｉａ （１９９１）； ３９（３）： １６５−１６７， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ １９８４： １５（２）： １６−１８）及びＡｃｔａ ｏｆ Ｈｕ−Ｎａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ １９９２； １７：３６５−３６７を参照のこと。完全なＢＣＧは生存及び死滅どちらでも投与されていることが報告されている。報告された投与の経路は、筋内注射及びスクラッチワクチンの間では異なる。
【００１３】
リポグリカン（例えばＬＡＭ）は予じめ免疫学的な成分中に含まれている。例えば、米国特許明細書第５，８５３，７３７号（Ｍｏｄｌｉｎ）は、制限されたＣＤ１免疫応答を誘導する様々な方法、及びＣＤ１提示非ポリペプチドの疎水性抗原を含むワクチンの教示及び、詳しくは、リポアラビノマンナン（ＬＡＭ）抗原を論じている。
【００１４】
米国特許第４，３２９，４５２号及び４，３９４，５０２号（Ｍａｒｕｙａｍａ）はどちらも腫瘍に対する免疫治療剤中の活性成分として、リポ多糖類の利用の教示をする。リポ多糖類はヒトの結核菌（ｔｕｂｅｒｃｌｅ ｂａｃｉｌｌｕｓ）より誘導できうる。
【００１５】
ＬＡＭは又気道の好酸球増加症の抑制における効能を持つことも報じられている。ＥｒｂらによりＢＣＧの成分は、マウスにおいて、アレルゲンが誘導した気道の好酸球増加症を抑制するＢＣＧの作用を担うことが示唆されている（上記を参照のこと）。
【００１６】
出願人は現在意外にも、Ｔｈ２が介在した応答、及びそれらの後に起きる、気道の好酸球増加症のような生理作用を抑制することが出来るマイコバクテリアの細胞壁の更なる活性成分を発見している。よって本発明は、免疫原性の形体において、この更なる活性剤アシル・グリセリル・ホスファチジリルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライド（ＰＩＭ）を含む代わりの免疫学的な方法に関する。
【００１７】
Ｍ．チュベルクロシス（ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）由来のＰＩＭ抽出物は、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞の補充に関連することが報じられている（Ａｐｏｓｔｏｌｏｕら、ＰＮＡＳ， １９９９， ９６， ５１４１−６）。肉芽腫性の応答を誘導するＰＩＭ−活性化ＮＫＴ細胞の利用は、Ａｐｏｓｔｏｌｏｕら、２０００及びＷＯ ００ ６３３４８号中で教示されている。
【００１８】
疎水性及び親水性の成分を含んで成る合成の非ペプチド抗原も又報じられている（Ｐｏｒｃｅｌｌ及びＭｏｏｄｙ， １９９９， ＷＯ ９９ １２５６２， ＵＳ， ６，２３６，６７６）。合成及びマイコバクテリア由来の抗原による治療後のＴ細胞系ＬＤＮ５のｉｎ−ｖｉｔｒｏでの、ＣＤ−１制限増殖が記載されている。
【００１９】
しかし、出願人の知見に関して、予防的もしくは治療的に、ＰＩＭは、Ｔｈ−２が介在した病気は疾患を治療する為のワクチン中で免疫活性剤として用いられるか又は提案されてはいない。
【００２０】
故に、本発明の目的は、予防的及び治療的に少なくとも従来の方法を卓越する有用な手段を担う、係る病気及び疾患の治療をする免疫学的な方法を供することである。
【００２１】
発明の概要
本発明は、第一の局面において、Ｔｈ２が介在した病気もしくは疾患に対する予防的な処置又は治療上の処置において有効な免疫応答を、患者において誘導する為のワクチンであって、活性剤として免疫原性のアシル・グリセル・ホスファチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライド（ＰＩＭ）を含んで成る、ワクチンを提供する。
【００２２】
本明細書中で用いた時には、「免疫原性のＰＩＭ」とは、患者中で免疫応答を誘導できる完全なマイコバクテリア生物の一部分以外のＰＩＭを意図する。
【００２３】
本明細書中で用いた時には、「Ｔｈ２が介在した病気又は疾患に対する予防的な処置」は、予防の為に係る病気もしくは疾患の非患者の治療、又は少なくともその病気もしくは疾患を患う個体の可能性を減らすことを意図する。
【００２４】
本明細書中で用いた時には、「Ｔｈ２が介在した病気又は疾患の治療上の処置」は、気管支の炎症及び好酸球増加症を含めて、Ｔｈ２が介在した病気もしくは疾患に関連した症状又はＴｈ２が介在した病気もしくは疾患の症度を予防又は軽減することを包含する。
【００２５】
好都合なことにはＴｈ−２が介在した病気又は疾患はアレルギー性及びアトピー性の疾患から選択されている。
【００２６】
例えば、アレルギー性の喘息、皮フ炎及び乾癬が挙げられる。好適に、前記Ｔｈ２が介在した病気又は疾患は喘息である。
【００２７】
更なる実施態様において、本発明は気管支の炎症及び／もしくは気道の好酸球増加症を伴う症状を患うもしくは症状にかかりやすい患者において免疫応答を誘導する為に、活性剤として、免疫原性のＰＩＭを含んで成るワクチンを提供する。
【００２８】
好適に、前記ワクチンは患者への呼吸器投与用に処方されている。しかし、他の投与の経路用の製剤も又熟考されているが、これらは、皮下、皮内、筋内、尿道内、直腸内、膣内及び眼内に限定されない。
【００２９】
本明細書中で用いた時には、「呼吸器投与」は、患者の気道への投与、例えば、気管支に到達する鼻腔内投与及び口を介した吸入による投与である。
【００３０】
本発明は更に、Ｔｈ２が介在した病気又は疾患の症度を減らす為の、免疫学的に有効な量の免疫原性のＰＩＭを含んで成るワクチンを提供する。前記ワクチンは好適に呼吸器投与用に処方されている。
【００３１】
更に尚、Ｔｈ２が介在した病気又は疾患の進行の危険性を減らす為の、免疫学的に有効な量の免疫原性のＰＩＭを含んで成る、好適には呼吸器投与用に処方されたワクチンを供する。
【００３２】
都合良いことには、前記免疫原性のＰＩＭはマイコバクテリウム（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）から、一層都合が良いことには、Ｍ．ボビス（Ｍ． ｂｏｖｉｓ）生物から、そして最も好都合には、Ｍ．ボビスの株ＡＮ５から単離されている。
【００３３】
前記免疫原性のＰＩＭに関しては流体であること、そして好適には溶液又は懸濁の形態にあるのが普通であろう。
【００３４】
都合が良いことには、呼吸器投与用のワクチンが好まれている時には、更に呼吸器的に許容できるアジュバントを含んで成り、アジュバントはデタージェント又は界面活性剤成分を含んで良い。
【００３５】
１又は複数のＴｈ１型の免疫誘導をする物質から選択された第二免疫原も又存在して良い。好適に、マイコバクテリウム・ボビス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）（バチルス・カルメッテ・グエリン（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ））は、前記Ｔｈ１型の免疫応答を誘導する物質として含まれているが、ＬＡＭも又第二免疫原として用いられて良い。
【００３６】
他の局面において、本発明はＴｈ２が介在した病気又は疾患に対して患者を治療的に処置する方法を提供する。この方法は、有効な量の免疫原性のＰＩＭを投与することによって、前記患者中で免疫応答を誘導する段階を含んで成る。
【００３７】
好適に、前記ＰＩＭは呼吸器へ投与される。
【００３８】
更に他の局面において、本発明は、患者において、Ｔｈ２が介在した病気又は疾患を治療的に処置する方法を供する。この方法は、有効な量の免疫原性のＰＩＭを投与することによって前記患者中で免疫応答を誘導する段階を含んで成る。
【００３９】
重ねて、ＰＩＭは呼吸器に投与されることが好ましい。
【００４０】
都合良いことに、前記免疫原性のＰＩＭは上記ワクチンの形態において投与される。
【００４１】
通常、免疫原性のＰＩＭは口又は鼻腔内を通して前記患者に吸入により投与されるだろう。
【００４２】
更に他の局面において、本発明は、Ｔｈ２が介在した病気又は疾患の予防的な処置の為の薬剤の調製における免疫原性のＰＩＭの利用を供する。
【００４３】
尚別の局面において、本発明は、Ｔｈ２が介在した疾患の進行に対する予防的な処置の為の薬剤の調製における免疫原性のＰＩＭの利用を供する。
【００４４】
好適な実施態様において、免疫原性のＰＩＭは、マイコバクテリウム、一層好適には、Ｍ．ボビス（Ｍ． ｂｏｖｉｓ）生物、そして最も好適には、Ｍ． ｂｏｖｉｓ株ＡＮ５から単離されている。
【００４５】
前記薬剤の調製において、前記免疫原性のＰＩＭは呼吸器が許容できるアジュバントと組み合わされる。従って薬剤が呼吸器投与用に処方されることが通例であろう。
【００４６】
最終的な局面において、本発明は、予防的もしくは治療的にＴｈ２が介在した病気もしくは疾患を処置する為の装置を供する。この装置は、上記ワクチンをそのような治療を必要とする患者の気道に分配できうる容器を含む。
【００４７】
装置は、前記ワクチンを患者の口を介した吸入用に分配できる、又は鼻腔内に分配できるものであるのが好都合であろう。
【００４８】
本発明を行う最適な方法
上記に広く説明したように、本発明は、患者においてＴｈ２が介在した病気又は疾患を治療する方法を提案する。これは喘息患者の喘息の治療及び／又は気道の好酸球増加症の進行の危険を減らすこと並びに喘息持ちではない人の喘息に特に、本発明を適用可能にする。
【００４９】
本発明を適用する他の免疫性及び／又はアトピー性の疾患は、アレルギー性の鼻炎、皮フ炎及び乾癬が挙げられるが、これらは例にすぎない。
【００５０】
本発明の方法の不可欠な特徴は、免疫原性の形態における生物学的活性量のアシル・グリセル・ホスファチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライド（ＰＩＭ）の投与である。好適にこれは、ＰＩＭを患者の気道へ導入することにより達成されるが、これに限定はされない。投与のもう一つの経路も同じように、他の例である経粘膜、腎臓内、皮下、皮内、筋内、経口、尿道内、直腸内、膣内及び眼内で用いることができる。
【００５１】
本明細書中で用いた時には、用語「ＰＩＭ」とは、４０以内のマンノース単位からなるＬＭであって良いが、ＬＡＭではない、アシル・グリセル・ホスファチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライドである。
【００５２】
脂肪酸成分は１又は複数の脂肪酸単位、好適には２−６単位、そして更に好適には２単位含んで成る。脂肪酸単位は好適に長さにおいて１０−２２の炭素原子、そして一層好適には長さにおいて１６−２０の炭素原子である。脂肪酸成分は、例えば、ミリステート、パルミテート、ヘプタデカノエート、ステアレート、トゥベルロステアレート（ｔｕｂｅｒｕｌｏｓｔｅａｒａｔｅ）もしくはリノレネエート、又はこれらの混合物である。
【００５３】
本発明中で用いたＰＩＭは下の一般式：
【化１】
2004501980.tif 000002
（式中、Ｘは１−４０、好適には１−６であり、そしてＲ及びＲ１は独立して、脂肪酸の鎖を表す）
を持って良い。
【００５４】
本明細書中で用いたＰＩＭは、合成されるか又は天然資源より得て良い。ＰＩＭは、ホスホチジル・イノシトール基とジアシルグリセロールを反応させ、しかる後にマンノシル化によってか又は当業界で周知の他の方法により化学的に合成されて良い。
【００５５】
ＰＩＭは又、特殊な系統のグラム陽性細菌である放線菌類（ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ）中にも存在する。この系統のメンバーは、ロドコッカス・エキ（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、コリネバクテリウム・ジプテリアエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム・マトルコッチ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍａｔｒｕｃｈｏｔｉｉ）、ゴルドナ・ルブロペルチンクタ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｒｕｂｒｏｐｅｒｔｉｎｃｔａ）、ゴルドナ・テラエ（Ｇｏｒｄｏｎａ ｔｅｒｒａｅ）、ロドコッカス・ロドニー（Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ ｒｈｏｄｎｉｉ）及びツカムレラ・パウロメタボルム（Ｔｓｕｋａｍｕｒｅｌｌａ ｐａｕｒｏｍｅｔａｂｏｌｕｍ）が挙げられる。
【００５６】
系統の他のメンバーはマイコバクテリアの細胞壁の成分であるＰＩＭを持つマイコバクテリアが挙げられる。
【００５７】
従って本発明中での利用に関して、ＰＩＭの形態も又任意の適切な放線菌類生物からの単離によって得ることができうる。しかしながら、本発明中で用いる為の免疫原性のＰＩＭはマイコバクテリア、特に、病原性のマイコバクテリアからか又は、病原性のマイコバクテリアの弱毒化した株から得られることが好まれている。しかしながら、非病原性の無毒のマイコバクテリア由来のＰＩＭを決して無視してはいない。
【００５８】
特にＰＩＭが獲得できうる適切な細菌は、Ｍ．ボビス（Ｍ． ｂｏｖｉｓ）、Ｍ．ツベロクロリス（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びＭ．パラツベルクロリス（Ｍ．ｐａｒａｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．ボビス（Ｍ． ｂｏｖｉｓ）生物、例えば現在好まれているＭ．ボビス（Ｍ． ｂｏｖｉｓ）株ＡＮ５である。
【００５９】
ＰＩＭは係る細菌から、そして詳細には、マイコバクテリアから当業界において標準的な技術を用いて、単離できうる。例によって、Ｓｅｖｅｎｎら、Ｊ． Ｍｉｃｒｏｂ． Ｍｅｔｈｏｄｓ， ２８， １２３−３０ （１９９７）の方法を用いることができうる。
【００６０】
単離したＰＩＭは、本発明中で用いる為に都合良く精製されるだろう。この効果は、ＰＩＭから、他の細菌成分（細菌の核酸等）を除くことである。重ねて、Ｓｅｖｅｎｎらによる記載のような当業界の標準的な技術を用いることができうる。
【００６１】
ＰＩＭが獲得され且つ好適に精製されると、投与用に処方される。製剤の詳細は選択された投与の経路に依存するだろうし、当業者に対する所定の手段の問題になるであろう。
【００６２】
好適にＰＩＭは呼吸器投与用に処方されている。呼吸器投与は、ＰＩＭの、治療される患者の気道への輸送を要する。一般的に、これは、口又は鼻腔内を介する輸送を伴うであろう。往々にして、患者による吸入はＰＩＭへの原動力を担うだろう。しかし、呼吸器投与は又例えば、ジェット又は超音波噴霧器を用いて生じたエアロゾルの形態において推進薬による輸送を伴いうる。これが現在は好適である。
【００６３】
係る用途に関して、ＰＩＭは都合が良いことに流体形態である。これは粉末として又は（特にエアロゾル適用については）溶液もしくは懸濁としてであって良い。
【００６４】
一般的にＰＩＭは又呼吸器が許容できるアジュバントと一緒に呼吸器投与用にも処方されるだろう。アジュバントの選択は製剤及び関係する分配の方法に依存するが、任意の場合は当業者による所定の手段の問題になるであろう。
【００６５】
ＰＩＭが噴霧器で生成したエアロゾルを介し投与されるのが好ましい時、当該ＰＩＭは、係るアジュバント成分を含有しても良い溶液又は懸濁の形態であろう。係る、任意であるが好適な成分は、無毒性のデタージェント又は界面活性剤である。ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）８０、ベラクタント（ｂｅｒａｃｔａｎｔ）（Ｓｕｒｖａｎｔａ Ｓａｓｐ （Ａｂｂｏｔｔ））及びコルホセリル（ｃｏｌｆｏｓｃｅｒｉｌ）パルミテート（Ｅｘｏｓｕｒｆ Ｎｅｏｎａｔａｌ （Ｇｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ））が挙げられる。
【００６６】
エアロゾルとしての投与の為の溶液又は懸濁中に、更なる免疫原を含むことも又可能である。係る免疫原は一般的には、Ｔｈ１型の免疫応答を誘導する物質であって良い。含まれて良い係るある物質は、生存又は死滅したＢＣＧであるが、死滅したのが好まれている。他の係る物質はＬＡＭである。
【００６７】
ＢＣＧが第二免疫原として含まれた場合、溶液又は懸濁について、微生物が一緒に結合することを妨げる為に、更に非クランピング剤（例えば、ウシの血清アルブミン）を含んで成ることが通常であろう。
【００６８】
エアロゾル投与が好ましいにも関わらず、他の投与形態におけるＰＩＭの投与を無視することを決して意図してはいない。反対に、ＰＩＭワクチンは例えば、乾燥粉末吸入器において、輸送ビヒクルとしてラクトースカプセルを用いることで、粉末としての投与用に処方できうる。
【００６９】
ＰＩＭは併用療法中又は製剤中で、そして他の治療的に許容できる薬剤と共に用いることができることも又好まれるだろう。
【００７０】
本発明は今、評価されるであろうことは実例であり且つ限定ではない以下の実験に基づく項を参照に実証されるだろう。
【００７１】
実験に基づく
項目Ａ
マイコバクテリウム・ボビスＡＮ５からのアシル・グリセロール・フォスフォチジルイノシトール・マンノ−オリゴサッカライド（ＰＭＩ）の単離
単離及び精製
一般法。トリトンＸ−１１４、プロテインナーゼＫ、ＲＮａｓｅ及びＤＮａｓｅをＢｏｅｈｉｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｎから（買った）。商業的試薬及び溶媒は分析用の等級であった。全ての実験をミリＱ水で行った。溶出した物質のゲルろ過特性は、それらの分配係数、Ｋａｖ＝（Ｖｅ−Ｖ０）／（Ｖｔ−Ｖ０）（式中、Ｖ０は系の有効な体積であり、Ｖｅは系の特定の物質の溶出体積、そしてＶｔは系の総体積である）に置き換えて表した。
【００７２】
細菌細胞の培養。Ｍ．ボビス（ｂｏｖｉｓ）ＡＮ５をＣｅｎｔｒａｌ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｙｂｒｉｄｇｅ，Ｕ．Ｋ．より入手し、そして改変レイズ（Ｒｅｉｄｓ）合成培地（Ｓ．Ｌａｎｄｉ、ｉｎ  Ｇ．Ｐ．  ＫＵＢＩＣＡ、及びＬ．Ｇ．  Ｗａｙｎｅ（Ｅｄｓ．）、Ｔｈｅ  Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ−  Ａ  Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ：Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｕｂｅｒｕｃｌｉｎ，Ｍａｒｃｅｌ  ＤＥＫＫＥＲ  Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ（１９８４）、ｐｐ５０５−５３５）上で菌膜として８週間に渡り増殖させた。粗いワットマンろ紙による収穫の前、細胞を３時間に渡り１００℃に加熱し殺した。
【００７３】
単離及び抽出の手段。収集した細胞をメタノール／クロロホルム（１：１）と共に攪拌することにより脂肪除去し、そして遠心により回収し、ペレットを乾燥した。次いで細胞を２．５％のトリス緩衝塩類液（ＴＢＳ）（０．０５Ｍ、ｐＨ７．５）で２度洗浄し、遠心（１０，０００ｇ、３０分）により回収し、そして凍結乾燥した。 （乾燥重量） 約２ｇの細胞を、ＥＤＴＡ（５ｍＭ）及びアジ化ナトリウム（０．０５％）を含むＴＢＳ（４ｍｌ）中でスラリー状にし、４℃迄冷却し、そして４０，０００ｋＰａで２度フレンチプレス（Ｆｒｅｎｃｈ ｐｒｅｓｓ）を通過することにより押し出した。破壊した細胞の溶液をＴＢＳで４０ｍｌの体積にし、そしてＭｇＣｌ（１０ｍＭ）の添加の後、破壊した細胞をＲＮａｓｅ及びＤＮａｓｅ（１μｇ／ｍｌ）で３７℃で６０分間に渡り消化し、次いで更に６０分間に渡って（消化した）。
【００７４】
トリトンＸ−１１４を溶解した細胞に８％（ｖ／ｖ）の濃度にする為に加え、そして氷上で冷却後、溶液を４℃で１６時間に渡り攪拌した。細胞の破片を遠心（１０，０００ｇ、４℃、３０分）により除去し、そして上清を、相分離を誘導する為に３７℃でインキュベートした。トリトンＸ−１１４に富むより下の相を遠心（４０００ｇ、３０℃、２０分）の後回収し、そして上方の水相を細胞の破片と混合し、そして上記のように再抽出した。デタージェントの相を組み合わせ、そして冷却したエタノール（−２０℃、９５％、５体積）の添加によりリポグリカンを沈殿させ、遠心（１０，０００ｇ、３０分）により回収した。
【００７５】
粗製のリポグリカン抽出物を、攪拌しながら一晩、水中で溶かし（１０−２０ｍｇ／ｍｌ）、そして３５，０００ｇで１６時間に渡る超遠心を行った。ペレットを回集し、最少量の水中に溶かし、そしてプロテインナーゼＫ（１ｍｇ／ｍｌ）で３７℃で１時間に渡り処理し、次いで更なる１時間６０℃で（処理した）。溶液を更に２度超遠心し、水中で再構築して、そして凍結乾燥した。
【００７６】
分画の手段。濃度を１０ｍｇ／ｍｌするのに、粗製の試料をトリス−デオキシコレート緩衝液（トリス−ＨＣｌ１０ｍＭ、ｐＨ８．０、ＥＤＴＡ１０ｍＭ、ＮａＣｌ０．２Ｍ、デオキシコレート０．２５％、ＮａＮ３０．０２％）中で再懸濁することによって、カラムクロマトグラフィー用に調製した。試料をセファシル（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）Ｓ−２００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）のカラムに適用し、そして同じ緩衝液を用いて溶出した。溶出物を、屈折率における変化について連続的に監視した。そして画分（２ｍｌ）を収集して中性グリコースについて比色的に解析（Ｄｏｕｂｏｉｓ、Ｍ．Ｇｉｌｌｅｓ、Ｋ．Ａ．、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、Ｊ．Ｋ．、Ｒｏｂｅｒｔｓ、Ｐ．Ａ． ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ、Ｆ．（１９５６） Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｇａｒｓ ａｎｄ  ｒｅｌａｔｅｄ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ． Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．２８、３５０−３５６）してＳＤＳ−ＰＡＧＥにより解析した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる画分の解析で、ＬＡＭに関する高分子量物質（Ｋａｖ＝０．１）並びにＬＭ及びＰＩＭに対応する画分は、それぞれ、０．３及び０．８のＫａｖを持つことが分かった。適切なＬＡＭ、ＬＭ及びＰＩＭ画分をプールし、３０００ＭＷのカット−オフ（ｃｕｔ−ｏｆｆ）膜を用いてセントリプラス濃縮器（Ａｍｉｃｏｎ）中で限外ろ過することにより脱塩し、水中で再懸濁しそして凍結乾燥した。
【００７７】
ＬＡＭ、ＬＭおよびＰＩＭを含有する画分を収集し、そして凍結乾燥した。純粋なＬＡＭは、カラムに適用した最初の粗製の材料に対し約２５％且つ最初の微生物の乾燥重量の全収率の１．４％の割合を占めた。分画後の純粋なＬＭ及びＰＩＭの回収率はそれぞれ、１．０％及び３．７％であった。
【００７８】
ＰＩＭの脱アシル化。
ＰＩＭを無水ヒドラジン中で（３０分）懸濁し、冷ましそして過剰のヒドラジンを破壊する為に冷却（−７０℃）したアセトンで冷急し、その後脱アシル化したＰＩＭを沈殿させた。ジアシル化したＰＩＭを遠心によりペレット状にし、そしてペレットをアセトンで洗浄し、水に溶かし、そして加水分解した。備考。炭水化物解析に関していえば分析値は完全ＰＩＭ分子についてであった。
【００７９】
リポ多糖類の分析
組み合わせたＰＩＭ画分の純度を調べた。ＰＩＭは以下の基準により純粋だと考えられた。ＢＣＡタンパク質アッセイによって示された時にタンパク質は０％、精製した抽出物の成分解析によって示された時に窒素の不在、グリコース解析におけるリボース又はデオキシリボースの不在。
【００８０】
精製したＰＩＭを、公知の方法によって加水分解しそしてアセチル化した。そして生じた多糖類の混合物をＧＬＣによって解析した。
【表１】
2004501980.tif 000003
【００８１】
項目Ｂ
免疫学実験に基づく
モデル
オボアルブミン（ＯＶＡ）が誘導した、アトピー性気道炎症の気道の好酸球増加症マウスモデルを、気道の好酸球増加症の進行を抑制する免疫原性ＰＩＭの効果を特定するのに用いた。このモデルは、マウスにおける「喘息様作用」を確認するのに広く用いられている。例えば、Ｅｒｂら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７（４）：５６１−５６９（１９９８）；Ｈｅｒｔｚら、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０２：８６７−８７４（１９９８）；及びＲａｎｄａｏｌｆら、Ｊ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ、１０４：１０２１−１０２９（１９９９）を参照のこと。
【００８２】
マウス
Ｃ５７Ｂ１／６ＪマウスをＷｅｌｌｉｎｇｔｏｎ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ａｎｉｍａｌ Ｆａｃｉｌｉｔｙ（Ｗｅｌｌｉｎｇｔｏｎ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）で繁殖及び飼育した。実験手段は動物倫理委員会により承認を受け、そしてＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｏｔａｇｏ（Ｄｕｎｅｄｉｎ，Ｎｅｗ Ｚｅａｌａｎｄ）の動物保護のガイドラインに従った。
【００８３】
ＯＶＡが誘導した気道炎症
感作−６−８週齢のマウス（４−５匹／群）を０日目に腹膜腔内（Ｉ．Ｐ．）に、２００μｌのアルムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３、Ｓｅｒｖａ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）中のオブアルブミン（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）２μｇで注射した。増強の、２００μｌのアルムアジュバント中のオボアルブミン２μｇの腹膜腔内注射を１４日目に行った。
ＯＶＡ投与−第二Ｉ．Ｐ．注射の−１４日後、マウスをケタミン及びキシラジンの混合物（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）によって麻酔した。次いでマウスに５０μｌのＰＢＳ中２ｍｇ／μｌのオボアルブミンを鼻腔内に摂取させた。
【００８４】
ＰＩＭによる免疫化のプロトコール
（ａ）第二Ｉ．Ｐ．注射の７日後、マウスを上記のように麻酔した。次いでマウスには、５０μｌのＰＢＳ中の表示の濃度のＰＩＭにより鼻腔内に免疫性を与えた。コントロールのマウスにはＰＢＳを鼻腔内に与えた。マウスを、ＰＩＭによる免疫原性の付与の７日後、鼻腔内にＯＶＡを投与した。
（ｂ）マウスには、（ａ）におけるように免疫性を与えていた。ＯＶＡの鼻腔内投与をＰＩＭによる処理の後６週投与した。
（ｃ）マウスには、ＯＶＡによる鼻腔内投与の前８週、６週、５週、４週、そして２週で鼻腔内にＰＩＭで免疫性を与えた。上記のように、マウスの感作は４及び２週で行った。
（ｄ）マウスには、ＯＶＡを鼻腔内に与えると同時にＰＩＭの鼻腔内投与で免疫化した。
【００８５】
気道の好酸球増加症の測定
ＯＶＡによる鼻腔内投与の４日後、マウスを犠牲にした。気管にカニューレを挿入した後、気管支肺胞洗浄（３×１ｍｌ ＰＢＳ）を行った。ＢＡＬ細胞の総数を数え、そしてサイトスピンを用いてガラススライド上で回転させた。好酸球、マクロファージ、リンパ球及び好虫球の百分率を標準的な解剖学的基準を用いて顕微鏡によって特定した。
【００８６】
結果
図１−１０は記載した実験の結果を示している。
【００８７】
図１は、ＰＩＭで処理したマウスにおけるＢＡＬ滲出物から回収した細胞の全数を示している。図２は、ＢＡＬ滲出物における好酸球の、投与量依存性減少における百分率を示している。図３は、ＰＩＭで処理したマウスにおける、好酸球の投与量依存性減少／ｍｌを示している。図４は、ＢＡＬ滲出物における、好酸球の数に対する脱アシル化したＰＩＭの作用を示している。図５は、非病原性のＭ．スメグマチス（ｓｍｅｇｍａｔｉｓ）由来のＰＩＭで処理したマウス由来の、ＢＡＬ滲出物中の好酸球の数における好酸球の投与量依存性減少を示している。図６は、ＯＶＡによる感作後のＢＡＬ滲出物における、好酸球に対するＰＩＭの長期抑制効果を示している。図７は、ＯＶＡによる感作後の前及び間のＰＩＭで処理したマウス由来の、ＢＡＬ滲出物中の好酸球の数における減少を示している。図８は、ＯＶＡ投与と同時にＰＩＭで処理したマウス由来の、ＢＡＬ滲出物中の好酸球の数における減少を示している。図９は、ＣＤ１ノックアウトマウスにおける、ＢＡＬ滲出物中の好酸球の数に対するＰＩＭの作用を示している。図１０は、ＩＦＮγノックアウトマウスにおけるＢＡＬ滲出物中の好酸球の数に対するＰＩＭの作用を示している。
【００８８】
結論
病原性及び非病原性の細菌から獲得したＰＩＭは、気道の好酸球増加症の抑制において効果的である。好酸球増加症の抑制は抗原に対する感作の前、間及び後並びに抗原投与の間に達成できうる。これらのデータは、様々なＴｈ２が介在した病気又は疾患、そして明確な例である喘息を治療する為の、ワクチンの活性剤としてのＰＩＭの明瞭な適用を証明する。データからＰＩＭは予防的及び治療的な用途の両方に利用できると考えられる。好酸球増加症の抑制は脂肪酸の末端の除去、ＣＤ１又はＩＦＮγの不在のどちらかにより取り消されてしまう。故に、３つ全てがＰＩＭ分子の作用の機構において重要であることが予測されている。
【００８９】
工業上の適用
上記から理解できるように、本発明の重要な用途は、Ｔｈ２が介在した病気又は疾患を治療することにある。その処置は、係る病気もしくは疾患の進行の危険性を妨害もしくは減らす予防的なものか又は、確立した病気もしくは症状を抑制する治療的なものであって良い。
【００９０】
本発明のＰＩＭ含有ワクチンは投与用に処方される。それは好適に便宜上、鼻腔内又は吸入による呼吸器投与を伴うであろう。投与の吸入様式は、ＰＩＭワクチン容器が一部を形成する分配装置の利用を伴うであろう。その方法は噴霧器、特にオムロン ＣＸ（Ｏｍｒｏｎ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ）、Ｍｅｄｉｃ Ａｉｄ Ｖｅｎｔｓｔｅｒａｍ又はＷｒｉｇｈｔ 噴霧器（Ａｅｒｏｓｏｌ Ｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｃｏｌｃｈｅｓｔｅｒ，ＵＫ）（ワクチンはエアロゾルとして投与される）又は乾燥粉末吸入装置（例えば、アクハーラー（Ａｃｃｕｈａｌｅｒ）及びディスクハーラー（ＤｉｓｋＨａｌｅｒ）（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ）として知られているような装置）として知られているようなジェット噴霧器であって良い。
【００９１】
呼吸器投与したＰＩＭは、好酸球数の減少、及び気管支の炎症の減少において有意な効果を示している。この意味合いは、Ｔｈ２が介在した症状（例えば喘息の発現）の開始を妨害すること及び症度を減らすこと、並びに喘息のようなＴｈ２が介在した症状の進行に対して患者を治療すること、の両方にあることは当業者に明らかであろう。
【００９２】
本発明の効果を発揮させる好適な方法の記載により、改良が行われ、更に本発明の概念を備えている事がわかるであろう。そのような方法は全て本発明の範囲内に含まれることを意図していることが理解されるだろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＢＡＬ滲出物の細胞数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＰＩＭで処理した。
【図２】ＢＡＬによって回収された好酸球の百分率を示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＰＩＭで処理した。
【図３】ＢＡＬによって回収された好酸球数ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＰＩＭで処理した。
【図４】ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）を脱アシル化したＰＩＭで処理した。
【図５】ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌ示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＭ．ｓｍｅｇｍａｔｉｓ由来のＰＩＭで処理した。
【図６】ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）を第二Ｉ．Ｐ注射の１週後およびＯＶＡ投与の６週前にＰＩＭで処理した。
【図７】ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＯＶＡ投与の８−２週前にＰＩＭで処理した。ＯＶＡ ｉ．ｐ．による感作は４及び２週で行った。
【図８】ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＯＶＡ投与と同時にＰＩＭで処理した。
【図９】ノックアウトマウスにおける、ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＰＩＭで処理した。
【図１０】ＩＮＦγノックアウトマウスにおける、ＢＡＬによって回収された好酸球数／ｍｌを示すグラフである。マウス（４−５匹／群）をＰＩＭで処理した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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