(57)【要約】本発明は、ＭＣＨ−１Ｒにおいて活性なＭＣＨ拮抗物質を対象とする。該拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲでのＭＣＨの作用を阻害することができる、場合により修飾されたペプチドである。ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとして使用すること及び被験対象において有益な作用を達成するために使用することを含む、様々な用途を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の構造：
【化１】
2004537581.tif 000017
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩。
【請求項２】
前記Ｘ６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５及びＸ１７が存在しない、請求項２に記載のペプチド。
【請求項４】
Ｘ６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項３に記載のペプチド。
【請求項５】
Ｘ７は、システインであり；
Ｘ８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１１は、アルギニンであり；
Ｘ１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ１３は、チロシンであり；及び
Ｘ１６は、システインである、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】
Ｘ１４及びＸ１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項５に記載のペプチド。
【請求項７】
Ｘ１４及びＸ１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項５に記載のペプチド。
【請求項８】
Ｘ１４及びＸ１５は各々β−アラニンである、請求項５に記載のペプチド。
【請求項９】
Ｚ１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、及びＺ２は−ＮＨ２である、請求項５に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
次の構造：
【化２】
2004537581.tif 000018
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニン、若しくはその誘導体であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１８は、次の構造：
【化３】
2004537581.tif 000019
［式中、ｎは、１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；
Ｘ１９は、存在する場合はω−カルボキシ−α−アミノ酸である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
但し、下記：
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であること
のいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩。
【請求項１３】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４及びＸ５が存在しない、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
Ｘ８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１１は、アルギニンであり；
Ｘ１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ１３は、チロシンであり；
Ｘ１９は、存在する場合は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸であり；及び
Ｚ１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３である、請求項１３に記載のペプチド。
【請求項１５】
次の構造：
【化４】
2004537581.tif 000020
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方が該当することを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩の有効量を被験対象に投与する段階を含む、前記被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法。
【請求項１６】
前記Ｘ６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方が該当する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５及びＸ１７が存在しない、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
Ｘ７は、システインであり；
Ｘ８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１１は、アルギニンであり；
Ｘ１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ１３は、チロシンであり；及び
Ｘ１６は、システインである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｘ６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
Ｘ１４及びＸ１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
Ｘ１４及びＸ１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
Ｘ１４及びＸ１５は各々β−アラニンである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
Ｚ１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、及びＺ２は−ＮＨ２である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
次の構造：
【化５】
2004537581.tif 000021
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン又はニトロアルギニン、若しくはその誘導体であり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩の有効量を被験対象に投与する段階を含む、体重減少を達成する又は体重を維持するために前記被験対象を治療する方法。
【請求項２７】
前記Ｘ６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５及びＸ１７が存在しない、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
Ｘ７は、システインであり；
Ｘ８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１１は、アルギニンであり；
Ｘ１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ１３は、チロシンであり；及び
Ｘ１６は、システインである、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
Ｘ６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
Ｘ１４及びＸ１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
Ｘ１４及びＸ１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
Ｘ１４及びＸ１５は各々β−アラニンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】
Ｚ１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３であり、及びＺ２は−ＮＨ２である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記方法が体重減少を引き起こす、請求項２９に記載の方法。
【請求項３８】
前記被験対象が肥満である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１２、１３又は１４のいずれかに記載の、場合により置換されたペプチドの有効量を被験対象に投与する段階を含む、前記被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法。
【請求項４０】
請求項１２、１３又は１４のいずれかに記載の、場合により置換されたペプチドの有効量を被験対象に投与する段階を含む、体重減少を達成する又は体重を維持するために前記被験対象を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願のクロスリファレンス）
本出願は、参照してここに組み込まれる、２００１年８月８日出願の米国特許仮出願通し番号第６０／３１０，９２８号による優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
視床下部に存在する神経ペプチドは、体重の調節を仲介する上で重要な役割を果たす。（Ｆｌｉｅｒら、１９９８、Ｃｅｌｌ，９２、４３７−４４０。）哺乳類において産生されるメラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）は、同様に神経ペプチドＮＥＩ及びＮＧＥをコードする、視床下部内のより大きなプレ−プロホルモン前駆体の一部として合成される環状１９アミノ酸神経ペプチドである。（Ｎａｈｏｎら、１９９０、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４、６３２−６３７；Ｖａｕｇｈａｎら、米国特許第５，０４９，６５５号；及びＶａｕｇｈａｎら、１９８９、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１２５、１６６０−１６６５。）ＭＣＨはサケの下垂体において最初に特定され、魚においてＭＣＨはメラニンの凝集に影響を及ぼし、それ故皮膚の色素沈着に影響する。マス及びウナギでは、ＭＣＨはストレス誘導性又はＣＲＦ刺激性ＡＣＴＨ放出にも関与することが示された。（Ｋａｗａｕｃｈｉら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ  ３０５、３２１−３２３。）
ヒトでは、脳内で発現される、ＭＣＨをコードする２つの遺伝子が特定された。（Ｂｒｅｔｏｎら、１９９３、Ｍｏｌ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１８、２９７−３１０。）哺乳類において、ＭＣＨは主として、外側視床下部及び不確帯の核周体を含む、食物摂取の制御に関わる視床下部の神経細胞体に局在した。（Ｋｎｉｇｇｅら、１９９６、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  １７、１０６３−１０７３。）
薬理的及び遺伝的データは、ＭＣＨの主要作用機構は栄養補給を促進すること（食欲促進、ｏｒｅｘｉｅｎｉｃ）であると示唆している。ＭＣＨ  ｍＲＮＡは、絶食マウス及びラット、ｏｂ／ｏｂマウス及び神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）に関する遺伝子を標的破壊したマウスにおいては、上方調節される。（Ｑｕら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  ３８０、２４３−２４７及びＥｒｉｃｋｓｏｎら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  ３８１、４１５−４１８。）ＭＣＨの中枢注入（ＩＣＶ）は食物摂取を刺激し、ＭＣＨは、αメラニン細胞刺激ホルモン（αＭＳＨ）で見られる摂食低下作用に拮抗する。（Ｑｕら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  ３８０、２４３−２４７。）ＭＣＨ欠損マウスは痩せて、摂食低下性であり、高い代謝率を有する。（Ｓｈｉｍａｄａら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ  ３９６、６７０−６７３。）ＭＣＨの投与は、摂食行動、食欲若しくは体重の増加又は維持を促進するために有用であることが示唆されている。（Ｍａｒａｔｏｓ−Ｆｌｉｅｒ、米国特許第５，８４９，７０８号。）
視床下部−下垂体−軸への作用が報告されているように、ＭＣＨの作用は食物摂取の調節に限定されない。（Ｎａｈｏｎ，１９９４、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖ．ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．８、２２１−２６２。）ＭＣＨはストレスが誘発する視床下部からのＣＲＦ放出及び下垂体からのＡＣＴＨ放出を調節することができるので、ＭＣＨはストレスに対する身体応答に関与すると考えられる。さらに、ＭＣＨ神経系は生殖又は母性機能に関与すると考えられる。
【０００３】
ＭＣＨは、少なくとも２つの異なる受容体：ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒに結合することができる。（Ｃｈａｍｂｅｒｓら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ  ４００、２６１−２６５；Ｓａｉｔｏら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ  ４００、２６５−２６９；Ｂａｃｈｎｅｒら、１９９９、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４５７：５２２−５２４；Ｓｈｉｍｏｍｕｒａら、１９９９、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２６１、６２２−６２６；Ｓａｉｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９８：７５６４−７５６９，２００１。）ＭＣＨ−２ＲとＭＣＨ−１Ｒの間のアミノ酸同一性は約３８％である。（Ｓａｉｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９８：７５６４−７５６９，２００１。）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、ＭＣＨ−１Ｒにおいて活性なＭＣＨ拮抗物質を対象とする。該拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲにおけるＭＣＨの作用を阻害することができる、場合により修飾されたペプチドである。ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとしての使用及び被験対象において有益な作用を達成するための使用を含めて、様々な用途を備える。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
哺乳類ＭＣＨへの変更の様々な組合せが、ＭＣＨ拮抗物質を生産するために有用であることをここで特定する。そのような変更の例は、（１）９位及び１０位が５−アミノ吉草酸であること及び（２）６位が５−グアニジノ吉草酸又はＤ−アルギニンであることのいずれか又は両方と組み合わせた、６位から１６位までを含み、その１４位及び１５位が５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンである、トランケート哺乳類ＭＣＨを包含する。
【０００６】
ＭＣＨ拮抗物質を得るために有用なトランケート哺乳類ＭＣＨへの種々の変更の特定は、さらなるＭＣＨ拮抗物質を得るために使用できる指針を提供する。さらなるＭＣＨ拮抗物質は、様々なで大きさをとることができ、様々な位置に様々な種類の変更を含みうる。化合物が拮抗物質として働く能力は、当技術分野において既知の手法を用いて評価することができる。
【０００７】
そこで、本発明の第一の局面はＭＣＨ拮抗物質を説明する。ＭＣＨ拮抗物質は、ジスルフィド又はラクタム環を有する、場合により修飾された環状ペプチドである。構造Ｉはジスルフィド環を表わし、構造ＩＩ及びＩＩＩはラクタム環を示す。
【０００８】
構造Ｉは次の通り。
【０００９】
【化１】
2004537581.tif 000002
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ９及びＸ１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。
【００１０】
構造ＩＩは次の通り。
【００１１】
【化２】
2004537581.tif 000003
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５及びＺ１は、構造Ｉについて述べた通りであり；Ｘ１８は、次の構造：
【００１２】
【化３】
2004537581.tif 000004
［式中、ｎは１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；及びＸ１９は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸などのω−カルボキシ−α−アミノ酸である］
である。Ｘ１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、Ｘ１９のアミノ酸のω−カルボキシ基に結合している。
【００１３】
構造ＩＩＩは次の通り。
【００１４】
【化４】
2004537581.tif 000005
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１８及びＺ１は、構造ＩＩについて述べた通りであり；及びＸ１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、位置１５のカルボキシ基に結合している］
である。
【００１５】
「アミノ酸」との言及は、天然に生じるアミノ酸及び変化したアミノ酸を含む。特に異なる記載がない限り、キラル中心を有するアミノ酸はＬ−鏡像異性体として提供される。「その誘導体」との言及は、対応するＤ−アミノ酸、Ｎ−アルキル−アミノ酸及びβ−アミノ酸を指す。
【００１６】
本発明のもう１つの局面は、被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法を述べる。この方法は、ＭＣＨ拮抗物質の有効量を被験対象に投与する段階を含む。
【００１７】
「有効」量との言及は、所望効果を達成するのに十分な量を示す。本発明のこの局面では、有効量はＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害するのに十分である。
【００１８】
本発明のもう１つの局面は、体重減少を達成するため又は体重を維持するために被験対象を治療する方法を述べる。この方法は、ＭＣＨ拮抗物質の有効量を被験対象に投与する段階を含む。
【００１９】
本発明の他の特徴及び利点は、種々の実施例を含めてここで提供するさらなる説明から明白である。提供する実施例は、本発明を実施する上で有用な種々の成分及び方法を例示する。これらの実施例は、特許請求する本発明を限定するものではない。本開示に基づき、当業者は、本発明を実施するために有用な他の成分及び方法を特定し、利用することができる。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
ＭＣＨ拮抗物質活性を提供する、哺乳類ＭＣＨへの種々の変更を特定する。そのような変更は、ＭＣＨ又はＭＣＨ様化合物を、ＭＣＨ拮抗物質を生産するように変えることができる種類の変化を示す。
【００２１】
好ましいＭＣＨ拮抗物質は約１１アミノ酸の長さである。より小さなサイズのＭＣＨ拮抗物質は長いＭＣＨ拮抗物質に比べて、合成の容易さ及び／又は生理的緩衝液への高い溶解度などの利点を提供する。
【００２２】
好ましいＭＣＨ拮抗物質は、ＭＣＨ−１Ｒ活性を有意に阻害することができる。ＭＣＨ−１Ｒ活性の有意の阻害は、ＭＣＨ−１Ｒ及びこの受容体を活性化するＭＣＨ−１Ｒ作用物質を含むアッセイにおいて拮抗物質のＩＣ５０を測定することによって評価できる。種々の実施形態では、機能的活性を測定するアッセイにおいて、ＭＣＨ拮抗物質は約５０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、及び約５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する。そのようなアッセイの例を下記の実施例の中で提供する。
【００２３】
本発明の１つの実施形態は、ＭＣＨ−２ＲよりもＭＣＨ−１Ｒにおいて選択的に活性なＭＣＨ−１Ｒ拮抗物質を述べる。好ましい選択的拮抗物質はＭＣＨ−１Ｒを有意に阻害するが、ＭＣＨ−２Ｒ活性は有意に阻害しない。化合物がＭＣＨ−２Ｒ活性を阻害する能力は、拮抗物質活性を評価することによって直接測定できる。選択的に、ＭＣＨ−２Ｒ作用物質活性の測定を利用して、化合物がＭＣＨ−２ＲにおいてＭＣＨ拮抗物質として働きうるかどうかを判定することができる。
【００２４】
ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとしての使用及び治療的使用を含む様々な用途を備える。研究ツール適用の例は、ＭＣＨの役割又は作用を検討すること及びＭＣＨ拮抗物質の役割又は作用を検討することを含む。
【００２５】
ＭＣＨ拮抗物質は、インビトロ又はインビボでＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害するために使用できる。「阻害する」又は「阻害すること」への言及は、検出可能な低下を示す。阻害及び阻害することは、活性の完全な不在を必要としない。例えば、ＭＣＨ−１ＲでのＭＣＨの作用を阻害することができるＭＣＨ拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲにおいてＭＣＨによって引き起こされる１又はそれ以上の活性を検出可能な度合で低下させることができる。
【００２６】
ＭＣＨ拮抗物質は被験対象に投与することができる。「被験対象」は、例えばヒト、ラット、マウス又は家畜を含む哺乳類を指す。被験対象への言及は、必ずしも疾患又は障害の存在を示唆しない。被験対象の語は、例えば、実験の一部としてＭＣＨ拮抗物質を投与される哺乳類、疾患又は障害を軽減するのを助けるために治療される哺乳類、及び予防的に治療される哺乳類を含む。
【００２７】
ＭＣＨ拮抗物質は、患者において有益な作用を達成するために使用できる。例えば、ＭＣＨ拮抗物質は、体重減少、食欲低下、体重維持、癌（例えば結腸癌又は乳癌）の治療、疼痛の軽減、ストレスの軽減及び／又は性機能障害の治療を促進するために使用できる。
【００２８】
（ＭＣＨ拮抗物質）
説明するＭＣＨ拮抗物質は、構造Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩの、場合により修飾されたペプチドを含む。構造Ｉは、次の通り。
【００２９】
【化５】
2004537581.tif 000006
［式中、Ｘ１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ１はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり；より好ましくは、存在する場合Ｘ１はアスパラギン酸であり；及びより好ましくは、Ｘ１は存在せず；
Ｘ２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ２はフェニルアラニン又はチロシンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ２はフェニルアラニンであり；及びより好ましくは、Ｘ２は存在せず；
Ｘ３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ３はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり；より好ましくは、存在する場合Ｘ３はアスパラギン酸であり；及びより好ましくは、Ｘ３は存在せず；
Ｘ４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ４はメチオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン又はノルロイシンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ４はメチオニンであり；及びより好ましくは、Ｘ４は存在せず；
Ｘ５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ５はロイシン、メチオニン、イソロイシン、バリン又はアラニンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ５はロイシンであり；及びより好ましくは、Ｘ５は存在せず；
Ｘ６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、Ｘ６は５−グアニジノ吉草酸、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であり；より好ましくはＤ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニンであり；より好ましくは、Ｘ６はデス−アミノ−アルギニンであり；
Ｘ７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ７はシステインであり；
Ｘ８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ８はメチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ９はロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；より好ましくは、Ｘ９はロイシン又は５−アミノ吉草酸であり；より好ましくは、Ｘ９は５−アミノ吉草酸であり；
Ｘ１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ１０はグリシン、Ｄ−ノルロイシン又は５−アミノ吉草酸であり；より好ましくは、Ｘ１０は５−アミノ吉草酸であり；
Ｘ１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ１１はアルギニンであり；
Ｘ１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ１２はバリン又はアラニンであり；
Ｘ１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ２、ＮＨ２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ１３はフェニルアラニン、（２’）ナフチルアラニン、ｐ−フルオロ−フェニルアラニン、チロシン又はシクロヘキシルアラニンであり；より好ましくは、Ｘ１３はチロシンであり；
Ｘ１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；好ましくは、Ｘ１４は５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；好ましくは、Ｘ１５は５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ１６はシステイン又はＤ−システインであり；
Ｘ１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ１７はチロシン又はトリプトファンであり；より好ましくは、Ｘ１７は存在せず；
Ｚ１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基である］
又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。
【００３０】
構造ＩＩは次の通り。
【００３１】
【化６】
2004537581.tif 000007
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５及びＺ１は、種々の実施形態を含めて構造Ｉについて述べた通りであり；Ｘ１８は、次の構造：
【００３２】
【化７】
2004537581.tif 000008
［式中、ｎは１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；及びＸ１９は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸などのω−カルボキシ−α−アミノ酸である］
である。Ｘ１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、Ｘ１９のアミノ酸のω−カルボキシ基に結合している。
【００３３】
構造ＩＩＩは次の通り。
【００３４】
【化８】
2004537581.tif 000009
［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５、Ｘ１８及びＺ１は、様々な実施形態を含めて構造ＩＩについて述べた通りであり、及びＸ１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、１５位のカルボキシ基に結合している］
である。
【００３５】
本発明は、ジアステレオマーならびにそれらのラセミ体及び分割された鏡像異性的に純粋な形態を包含することが意図されている。ＭＣＨ拮抗物質は、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸又はそれらの組合せを含みうる。好ましくは、ＭＣＨ拮抗物質中に存在するアミノ酸はＬ−鏡像異性体である。
【００３６】
より好ましい実施形態は、種々の位置の各々に好ましい（又はより好ましい）基を含む。種々の実施形態において、ＭＣＨ拮抗物質は、１又はそれ以上の異なる位置に１個の好ましい（又はより好ましい）基を含む；Ｘ９及びＸ１０は同じ基であり；及び／又はＸ１４及びＸ１５は同じ基である。
【００３７】
Ｎ−末端アミノ基に共有結合した保護基は、インビボ条件下でアミノ末端の反応性を低下させる。アミノ保護基は、場合により置換された−Ｃ１−１０アルキル、場合により置換された−Ｃ２−１０アルケニル、場合により置換されたアリール、−Ｃ１−６アルキル−場合により置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）１−６−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−場合により置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ１−６アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−場合により置換されたアリールを含む。好ましくは、アミノ末端保護基は、アセチル、プロピル、スクシニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル又はｔ−ブチルオキシカルボニルである。
【００３８】
Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合した保護基は、インビボ条件下でカルボキシ末端の反応性を低下させる。カルボキシ末端保護基は、好ましくは最後のアミノ酸のα−カルボニル基に結合している。カルボキシ末端保護基は、アミド、メチルアミド及びエチルアミドを含む。
【００３９】
「アルキル」は、１個の炭素原子の炭化水素基、又は炭素−炭素単結合によって連結された炭化水素基を表わす。アルキル炭化水素基は、直鎖であるか又は１若しくはそれ以上の分枝又は環状基を含んでいてもよい。好ましくは、アルキル基は１個から４個の炭素の長さである。アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル及びｔ−ブチルを含む。アルキル基は、場合により、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、１個から６個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ１−２アルキル、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、又は−ＯＣＦ３から成る群より選択される１又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００４０】
「アルケニル」は、１又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含む、場合により置換された炭化水素基を表わす。アルケニル炭化水素基は、直鎖であるか又は１若しくはそれ以上の分枝又は環状基を含んでいてもよい。好ましくは、アルケニル基は２−４個の炭素の長さである。アルケニル基は、場合により、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、１個から５個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ１−２アルキル、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、又は−ＯＣＦ３から成る群より選択される１又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００４１】
「アリール」は、２個までの共役又は縮合環系を含む、共役π電子系を有する少なくとも１個の環を備えた、場合により置換された芳香族基を表わす。アリールは、炭素環式アリール、ヘテロ環式アリール及びビアリール基を含む。好ましくは、アリールは５又は６員環であり、より好ましくはベンジルである。アリール置換基は、−Ｃ１−４アルキル、−Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ２、−ＮＯ２、１個から５個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ１−２アルキル、−ＣＦ３、又は−ＯＣＦ３から成る群より選択される。
【００４２】
標識誘導体は、検出可能な標識を有する基の変化を示す。検出可能な標識の例は、蛍光、酵素、及び放射能標識を含む。好ましい放射能標識は１２５Ｉである。標識は、ＭＣＨ受容体におけるＭＣＨ拮抗物質の活性を実質的に変化させないように選択し、位置を定めるべきである。ＭＣＨ拮抗物質活性への特定標識の影響は、ＭＣＨ活性を測定するアッセイを用いて判定することができる。
【００４３】
好ましい実施形態では、場合により修飾されたペプチドは、構造ＩＶ、Ｖ又はＶＩに対応する、構造Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのトランケート型である：
【００４４】
【化９】
2004537581.tif 000010
【００４５】
【化１０】
2004537581.tif 000011
【００４６】
【化１１】
2004537581.tif 000012
［式中、種々の基及び好ましい基は、前述した通りである］。
【００４７】
さらなる実施形態では、該ペプチドは、配列番号１１、１２、１３、１４、１６、１８、１９、２０、２１、２５、２７、２９、３０、３２及び３３から成る群より選択される配列を有するか、又くは前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。好ましいペプチドは、より低いＩＣ５０値を有することが示されたＭＣＨ拮抗物質である。好ましいＭＣＨ拮抗物質の例は、配列番号１１、１３、１４、１６、２０、２７、３０及び３３によって提供される。
【００４８】
ＭＣＨ拮抗物質は、当技術分野において周知の手法を用いて生産することができる。例えば、ＭＣＨ拮抗物質のポリペプチド領域は、化学的又は生化学的に合成することができ、所望する場合は、ブロックＮ末端及び／又はブロックＣ末端を生じるように修飾することができる。ポリペプチドの化学合成のための手法は当技術分野において周知である。（例えば、Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｄｅｋｋｅｒ，１９９０参照。）細胞への核酸の導入及び核酸の発現を含む生化学的合成のための手法の例は、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，１９８７−１９９８、及びＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９８９の中で提供される。
【００４９】
（ＭＣＨ拮抗物質についてのスクリーニング）
ＭＣＨ拮抗物質についてのスクリーニングは、組換え発現したＭＣＨ受容体を使用して容易に実施される。組換え発現ＭＣＨ受容体を使用することの利点は、ＭＣＨ受容体活性化合物への応答を他の受容体に対する応答からより容易に識別できるように、規定された細胞系において該受容体を発現できることを含む。例えば、発現ベクターを使用してＨＥＫ  ２９３、ＣＯＳ  ７及びＣＨＯなどの細胞系にＭＣＨ受容体を導入することができ、その場合、発現ベクターを含まない同じ細胞系が対照として使用できる。
【００５０】
ＭＣＨ拮抗物質のスクリーニングは、アッセイにおけるＭＣＨ作用物質の使用を通して容易になる。スクリーニングアッセイでのＭＣＨ作用物質の使用はＭＣＨ受容体活性を提供する。そのような活性への被験化合物の作用を測定して、例えばその化合物がＭＣＨ受容体活性を阻害する能力を評価することができる。
【００５１】
ＭＣＨ受容体活性は、ＭＣＨ受容体の細胞内コンフォメーションの変化、Ｇｉ又はＧｑ活性及び／又は細胞内メッセンジャーの変化を検出することなどの様々な手法を用いて測定することができる。Ｇｉ活性は、黒色素胞アッセイ、ｃＡＭＰ産生を測定するアッセイ、ｃＡＭＰ蓄積の阻害を測定するアッセイ、及び３５Ｓ−ＧＴＰの結合を測定するアッセイなどの当技術分野において周知の手法を用いて測定することができる。ｃＡＭＰは、放射線免疫検定法などの種々の手法を用いて、及びｃＡＭＰ応答性遺伝子レポータータンパク質によって間接的に測定することができる。
【００５２】
Ｇｑ活性は、細胞内Ｃａ２＋を測定するなどの手法を用いて測定できる。Ｃａ２＋を測定するために使用できる当技術分野で周知の手法の例は、Ｆｕｒａ−２などの染料の使用及びエクオリンなどのＣａ２＋−生物発光感受性レポータータンパク質の使用を含む。Ｇタンパク質活性を測定するためにエクオリンを使用する細胞系の一例は、ＨＥＫ２９３／ａｅｑ１７である。（どちらも参照してここに組み込まれる、Ｂｕｔｔｏｎら、１９９３、Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  １４，６６３−６７１、及びＦｅｉｇｈｎｅｒら、１９９９、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８４，２１８４−２１８８。）
（ＭＣＨ拮抗物質の使用）
ＭＣＨ拮抗物質は、被験対象において有益な作用を達成するため及び研究のための方法において使用できる。ＭＣＨ拮抗物質の有益な作用は、次の事柄の１つ又はそれ以上を含む：体重減少、食欲低下、体重維持、癌（例えば結腸癌又は乳癌）の治療、疼痛の軽減、ストレスの軽減及び／又は性機能障害の治療。
【００５３】
体重の維持又は体重減少を促進することは、過剰体重及び肥満の患者にとって特に有用である。過剰体重は、高血圧、高脂血症、心臓血管疾患、胆石、変形性関節症及びある種の形態の癌を含む様々な疾患に寄与する因子である。体重減少を生じさせることは、例えば、そのような疾患の可能性を低下させるため及びそのような疾患の治療の一部として、使用できる。
【００５４】
過剰体重の患者は、「正常」体重範囲の上限又はボディマス指数（「ＢＭＩ」）を約１０％若しくはそれ以上、２０％若しくはそれ以上、３０％若しくはそれ以上、又は５０％若しくはそれ以上上回る体重を有する患者を含む。「正常」体重範囲は当技術分野において周知であり、患者の年齢、身長及び体型などの因子を考慮に入れる。
【００５５】
ＢＭＩは身長／体重の比率を測定する。キログラムで表わした体重をメーターで表わした身長の二乗で除して算定することによって決定される。ＢＭＩの「正常」範囲は１９−２２である。
【００５６】
（投与）
ＭＣＨ拮抗物質は、当技術分野で周知の手法と共にここで提供する手引きを使用して、製剤し、被験対象に投与することができる。好ましい投与経路は、化合物の有効量が標的に達することを確実にする。一般に薬剤投与についてのガイドラインは、例えば、どちらも参照してここに組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ編集、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９０、及びＭｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  第２版、ＢａｎｋｅｒとＲｈｏｄｅｓ編集、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９９０に示されている。
【００５７】
ＭＣＨ拮抗物質は酸性又は塩基性塩として製造することができる。医薬適合性の塩（水溶性又は油溶性又は分散性生成物の形態）は、従来の非毒性塩又は、例えば無機又は有機酸又は塩基から生成される第四級アンモニウム塩を含む。そのような塩の例は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモイン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、及びウンデカン酸塩などの酸付加塩；及びアンモニウム塩などの塩基性塩、ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩などの有機塩基との塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、及びアルギニン及びリシンなどのアミノ酸との塩を含む。
【００５８】
ＭＣＨ拮抗物質は、経口、経鼻、注射、経皮及び経粘膜を含む様々な経路を用いて投与することができる。懸濁液として経口的に投与する有効成分は、医薬製剤の技術分野において周知の手法に従って調製することができ、かさを与えるための微結晶性セルロース、沈殿防止剤としてのアルギン酸又はアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、及び甘味料／香味料を含有しうる。即時放出性錠剤として、これらの組成物は、微結晶性セルロース、リン酸ジカルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム及びラクトース及び／又は他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤及び潤滑剤を含有しうる。
【００５９】
ＭＣＨ拮抗物質はまた、静脈内経路（ボーラス及び注入）、腹腔内経路、皮下経路、閉鎖を伴う若しくは伴わない局所経路、又は筋肉内経路を利用して投与することもできる。注射によって投与するときは、リンガー溶液若しくは等張塩化ナトリウム溶液などの、適切な非毒性で非経口的に許容される希釈剤若しくは溶剤、又は合成モノ−又はジグリセリドを含む無菌で無刺激性の不揮発性油及びオレイン酸を含む脂肪酸などの、適切な分散剤又は湿潤剤と沈殿防止剤を使用して、注射用溶液又は懸濁液を製剤することができる。
【００６０】
適切な投与プログラムは、好ましくは、投与される被験対象の種類；被験対象の年齢、体重、性別及び医学的状態；投与経路；被験対象の腎及び肝機能；所望効果；及び使用する特定化合物を含む、当技術分野で周知の因子を考慮に入れて決定される。
【００６１】
毒性を伴わずに効力を生じる範囲内の薬剤の最適濃度を厳密に達成するには、標的部位への薬剤のアベイラビリティーの動態に基づく投与プログラムを必要とする。これは、薬剤の分布、平衡及び排出を考慮することを含む。被験対象についての一日量は、０．０１ｍｇから１，０００ｍｇ／被験対象／日と予想される。
【００６２】
ＭＣＨ拮抗物質はキットとして提供することができる。そのようなキットは、典型的には、投与用剤型中に活性化合物を含有する。剤型は、１日当り１回から６回などの規則正しい間隔で、１日又はそれ以上の日数の期間にわたって被験対象に投与したとき有益な作用が得られるような、十分な量の活性化合物を含有する。好ましくは、キットは、体重減少（例えば肥満を治療するため）又はストレスの軽減のための剤型の用法及び規定された期間にわたって服用すべき剤型の量を示す指示書を含む。
【００６３】
（実施例）
本発明の種々の特徴をさらに説明するために実施例を下記に示す。これらの実施例はまた、本発明を実施するための有用な方法も例示する。これらの実施例は、特許請求する本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００６４】
ＭＣＨ拮抗物質の合成
ＭＣＨ拮抗物質を製造するための手順の一例を下記に述べる。ペプチドを生産し、修飾するための他の手順は当技術分野において周知である。
【００６５】
４−（２’、４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシ樹脂上のペプチジル鎖の伸長及び前記ペプチドのＮ−末端アミノ基のアセチル化を４３１Ａ  ＡＢＩペプチドシンセイサイザーで実施した。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）内のアミノ酸のヒドロキシベンゾトリアゾールエステルのカップリングのために、製造者が提供するプロトコールを適用した。フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基を半永久的α−アミノ保護基として使用し、一方側鎖保護基は、アスパラギン酸及びチロシンについてはｔｅｒｔ−ブチル、アルギニンについては２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、及びシステインについてはトリチルであった。
【００６６】
５％アニソールを含むＴＦＡでペプチドを樹脂から開裂した。室温で２時間後、樹脂をろ過し、ＴＦＡで洗って、併合ろ液を真空中で蒸発乾固させた。その残留物をエーテルで粉砕し、形成された沈殿物をろ取して、エーテルで洗い、乾燥した。
【００６７】
粗ペプチドを５％酢酸水溶液に溶解し、その溶液のｐＨを希薄水酸化アンモニウムで約８．２に調整した。その反応混合物を強く攪拌しながら、反応混合物が約５分間黄色のままになるまで０．０５％フェリシアン化カリウム（Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６）水溶液を滴下した。さらに２０分後、酢酸約１ｍｌを加えて酸化を終了させ、その反応混合物を凍結乾燥した。
【００６８】
粗凍結乾燥ペプチドを、自動Ｗｉｓｐ  ７１２インジェクター及び９９１  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ  ６００Ｅシステムに接続したＣ１８  Ｖｙｄａｃカラムでの分析用逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ  ＨＰＬＣ）によって分析した。３０分間で０％から１００％緩衝液Ｂの標準勾配系を分析に使用した：緩衝液Ａは０．１％トリフルオロ酢酸水溶液であり、緩衝液Ｂはアセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸であった。ＨＰＬＣプロフィールを２１０ｎｍ及び２８０ｎｍで記録した。半分取用Ｃ１８  ＲＰ  Ｗａｔｅｒｓカラムを備えるＷａｔｅｒｓ  Ｄｅｌｔａ  Ｐｒｅｐ  ４０００システムで分取分離を実施した。６０分間で２０％から８０％緩衝液Ｂの勾配において、上述した水とアセトニトリルの溶媒系を分離に使用した。クロマトグラフィーで均一な化合物をエレクトロスプレー質量分析法によって分析した。
【実施例２】
【００６９】
エクオリン生物発光機能アッセイ
エクオリン生物発光アッセイを使用して、Ｇｑ及びＧ１１から成るＧαタンパク質サブユニットファミリーを通して共役するＧタンパク質共役受容体の活性を測定することができる。そのような共役は、ホスホリパーゼＣの活性化、細胞内カルシウムの動員及びプロテインキナーゼＣの活性化を導く。
【００７０】
ラットＭＣＨ−１Ｒ及びヒトＭＣＨ−２Ｒ受容体活性の測定を、これらの受容体を発現する安定な細胞系を使用して、エクオリン発現安定レポーター細胞系２９３−ＡＥＱ１７（Ｂｕｔｔｏｎら、Ｃｅｌｌ  Ｃａｌｃｉｕｍ  １４：６６３−６７１，１９９３）において実施した。前記細胞中のアポ−エクオリンに、ＥＣＢ緩衝液（ＮａＣｌ  １４０ｍＭ、ＫＣｌ  ２０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ［ｐＨ＝７．４］２０ｍＭ、グルコース５ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １ｍＭ、ＣａＣｌ２  １ｍＭ、ウシ血清アルブミン０．１ｍｇ／ｍｌ）中、還元条件下で（還元グルタチオン３００μＭ）、コエレンテラジン（１０μＭ）を１時間充填した。
【００７１】
前記細胞を採集し、ＥＣＢ緩衝液中で１回洗って、５００，０００細胞／ｍｌに再懸濁した。次に細胞懸濁液１００μｌ（５×１０４細胞に相当する）を、ＭＣＨ又は被験化合物を含む試験平板に注入し、積算発光を０．５秒単位で３０秒間にわたって記録した。次に溶解緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００最終濃度）２０μＬを注入し、その積算発光を０．５秒単位で１０秒間にわたって記録した。Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００溶解応答を含む総積算発光に対する初期誘発への積算応答の比率を考慮することにより、各々のウエルについての「分別応答」値を算定した。
【実施例３】
【００７２】
結合アッセイ
ヒトＭＣＨ−１Ｒ又はヒトＭＣＨ−２Ｒへの結合を、ＭＣＨ−１Ｒ又はＭＣＨ−２Ｒ受容体を安定に発現する細胞から調製した膜への［１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ１３、Ｔｙｒ１９置換）の結合を阻害する化合物の能力を測定することによって検定した。アッセイに使用したヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ１３、Ｔｙｒ１９置換）は、１９Ｔｙｒで１２５Ｉにより〜２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性に放射能標識した（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）。
【００７３】
細胞膜を氷上で調製した。各々のＴ−７５フラスコを無酵素細胞分離緩衝液（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｍｅｄｉａ，Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ，ＮＪ）１０ｍｌで２回洗い、室温で１０分間インキュベートすることにより、さらなる１０ｍｌの無酵素細胞分離緩衝液中で細胞単層を分離した。分離した細胞を遠心分離し（５００×ｇ、４℃で１０分間）、均質化緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  １０ｍＭ、ｐＨ７．４、Ｐｅｆａｂｌｏｃ  ０．０１ｍＭ、ホスホルアミドン１０μＭ、バシトラシン４０μｇ／ｍｌ）５ｍｌに再懸濁して、その後ガラス製ホモジナイザー（１０ストロークから１５ストローク）を用いて均質化した。ホモジネートを１０分間遠心分離した（４℃で１，０００×ｇ）。次に、生じた上清を３８，７００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。ペレット化した膜を再懸濁し（２５ゲージの針に５回通した）、液体窒素でスナップ凍結して、使用時まで−８０℃で保存した。
【００７４】
ＭＣＨ−１Ｒ又はＭＣＨ−２Ｒを発現する安定なＣＨＯ又はＨＥＫ−２９３細胞系からの細胞膜を使用して、９６穴フィルターアッセイ又はシンチレーションプロキシミティアッセイ（ＳＰＡ）に基づく方式で結合を実施した。フィルターアッセイについては、次のものを含む総容量０．２ｍｌ中、２０℃で１時間反応を実施した：膜懸濁液０．０５ｍｌ（〜３μｇタンパク質）、［１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ１３、Ｔｙｒ１９置換；３０ｐＭ）０．０２ｍｌ、競合物質０．０１ｍｌ及び結合緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＥＤＴＡ  ２ｍＭ、バシトラシン２００μｇ／ｍｌ、ホスホルアミドン１μＭ）０．１２ｍｌ。
【００７５】
結合した放射性リガンドを、１％ポリエチレンイミンで１時間、前処理したＧＦ／Ｃフィルターを通して急速真空ろ過（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ９６穴セルハーベスター）によって分離した。膜懸濁液をフィルターに適用したあと、フィルターを氷冷Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＥＤＴＡ  ２ｍＭ、０．０４％Ｔｗｅｅｎ  ２０の各々３ｍｌで３回洗い、フィルター上の結合放射能をシンチレーション計数（ＴｏｐＣｏｕｎｔ装置）によって定量した。特異的結合（＞総結合の８０％）を、総結合と、非標識ヒトＭＣＨ  １００ｎＭの存在下で実施した非特異的結合の間の差として定義する。
【００７６】
ＳＰＡに基づくアッセイについては、ＷＧＡ−ＰＶＴビーズ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を、カルシウム及びマグネシウムを含むダルベッコＰＢＳに再懸濁した（ＰＢＳ  ４ｍｌ中ビーズ５００ｍｇ）。各々の９６穴アッセイ平板について、ビーズ０．１８ｍｌを、ＭＣＨ受容体ＣＨＯ細胞膜０．２ｍｌ（〜０．２−４ｍｇタンパク質）及びＳＰＡアッセイ緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ  ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＥＤＴＡ  ２ｍＭ、０．１％ＢＳＡ、１２％グリセロール）１．５ｍｌと混合することにより、ＭＣＨ受容体で前被覆した。前記懸濁液を２０分間静かに混合し、アッセイ緩衝液１２．３ｍｌ及びプロテアーゼ阻害因子を加えた（所与の最終濃度）：ロイペプチン２μｇ／ｍｌ、ホスホルアミドン１０μＭ、バシトラシン４０μｇ／ｍｌ、アプロチニン５μｇ／ｍｌ、Ｐｅｆａｂｌｏｃ  ０．１ｍＭ。
【００７７】
被覆したビーズを使用時まで氷上に保持した。各々の穴について、ビーズ０．１４５ｍｌをＯｐｔｉｐｌａｔｅアッセイ平板（Ｐａｃｋａｒｄ  ６００５１９０）に加え、次いで競合物質０．００２ｍｌから０．００４ｍｌ及び［１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ１３、Ｔｙｒ１９置換；３０ｐＭ）０．０５ｍｌを加えた。室温で３時間、結合反応を進行させた。シンチレーション計数（ＴｏｐＣｏｕｎｔ装置）によって定量を実施した。
【実施例４】
【００７８】
拮抗物質アッセイ
化合物がＭＣＨ拮抗物質として働く能力を、ラットＭＣＨ−１Ｒを発現する、エクオリン発現安定レポーター細胞系２９３−ＡＥＱ１７を使用して評価した。Ｔ７５フラスコ中、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、Ｇ４１８  ５００μｇ／ｍｌ、ヒグロマイシン２００μｇ／ｍｌ及びＨＥＰＥＳ  ２５ｍＭを補足したＤＭＥＭ（高グルコース）において細胞を増殖させた。
【００７９】
アッセイ自体は、コエレンテラジンｃｐ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｃ−１４２６０）をアポエクオリンに充填することを含み、次のように実施した：
１．集密なＴ７５フラスコをＨａｍｓ  Ｆ１２培地１２ｍｌ＋グルタチオン３００μＭ＋１％ＦＢＳで１回洗う。
２．Ｈａｍｓ  Ｆ１２  ８ｍｌ＋１％ＦＢＳ＋グルタチオン３００μＭ＋コエレンテラジン１０μＭを加えて細胞に充填し、３７℃で１時間インキュベートする。
３．Ｔ７５フラスコをＥＣＢ（ＮａＣｌ  １４０ｍＭ、ＫＣｌ  ２０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ  ２０ｍＭ、グルコース５ｍＭ、ＭｇＣｌ２  １ｍＭ、ＣａＣｌ２  １ｍＭ、ＢＳＡ０．１ｍｇ／ｍｌ  ｐＨ７．３−７．４）６ｍｌで洗う。
４．ＥＣＢ６ｍｌをフラスコに加え、先端がゴムのスクレイパーで分離して、２５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、細胞ペレットをＥＣＢ５ｍｌに再懸濁する。細胞を計数し、５×１０５／ｍｌに希釈する。
５．２Ｘリガンド濃度０．１ｍｌを含む９６穴平板に５０，０００細胞／０．１ｍｌを注入することにより、Ｌｕｍｉｎｏｓｃａｎ  ＲＴルミノメーターを使用してラットＭＣＨ−１ＲでのＥＣ５０を測定する。
６．結合アッセイにおいてＩＣ５０＜１０００ｎＭを示す化合物の拮抗物質活性を、５０，０００／０．１ｍｌ充填細胞を化合物と共に１０分間プレインキュベートし、その後２ＸＥＣ５０濃度のＭＣＨ０．１ｍｌを注入して反応を開始させることによって測定する。
【実施例５】
【００８０】
ＭＣＨ活性
ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒでの種々の被験化合物の活性を表１に示す。ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒでの結合及び拮抗物質活性は、実施例２及び３で述べたように測定した。拮抗物質のＩＣ５０は実施例４で述べたように測定した。Ｋｂは、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１４：２３７−２３９，１９９３に述べられている手順を用いて測定した。
【００８１】
表１の上部の構造を表の中で指示されているように修飾することにより、化合物２から３６の構造を表１に示す。ヒトＭＣＨは下記の構造を有する（「＊」は環化（Ｓ−Ｓ）を示す）：
【００８２】
【化１２】
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【００８３】
【表１】
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【００８４】
他の実施形態は本発明の特許請求の範囲内である。いくつかの実施形態を示し、説明したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な修正を加えることができる。
【国際公開パンフレット】
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【国際調査報告】
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