(57)【要約】本発明は、少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルス（HIV）抗原と、(i)及び(ii):（i）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び（ii）少なくとも１種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原のいずれか一方又は両方と、を含むワクチン組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（a）少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルス（HIV）抗原と、(b)及び(c):
（b）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び
（c）少なくとも１種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原
のいずれか一方又は両方と、を含むワクチン組成物。
【請求項２】
HIV抗原が、gp160、gp120、nef、tat、nef-tat融合タンパク質もしくはtat-nef融合タンパク質、gag、pol、又は免疫学的に活性なこれらの誘導体からなる群より選択される、請求項１記載のワクチン組成物。
【請求項３】
ワクチンが、HIV抗原gp120とnef-tat融合タンパク質とを含む、請求項２記載のワクチン組成物。
【請求項４】
Tat、Nef又はNef-Tatが、gp120と相乗作用的に働く、請求項２又は３記載のワクチン組成物。
【請求項５】
HPV抗原が、L1、L2、E6及びE7、又はこれらの組合せからなる群から選択されるものであり、かつ場合によっては融合タンパク質又はトランケート型の形態である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項６】
HPV抗原が、L1タンパク質又はそのC末端トランケート型形態を含むウイルス様粒子である、請求項５記載のワクチン組成物。
【請求項７】
HSV抗原が、HSV-2 gD又はそのトランケート型形態である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項８】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項９】
アジュバントがTH1細胞応答の優先的な刺激因子である、請求項８記載のワクチン組成物。
【請求項１０】
TH1細胞応答の優先的な刺激因子が、3D-MPL、粒子の大きさが好ましくは約100nm以下である3D-MPL、QS21、QS21とコレステロールとの混合物、及びCpGオリゴヌクレオチド、又はこれらの組合せを含むアジュバントの群より選択される、請求項９記載のワクチン組成物。
【請求項１１】
水中油滴型エマルションをさらに含む、請求項９又は１０記載の組成物。
【請求項１２】
HIV gp120、及びHIV NefとHIV Tatとの融合タンパク質を、QS21、3D-MPL及び水中油滴型エマルションと一緒に含む、請求項１１記載のワクチン組成物。
【請求項１３】
少なくとも１種の抗原がDNA又は生ベクターの形態である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載のワクチン組成物。
【請求項１４】
（a）少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルス（HIV）抗原と、(b)及び(c):
（b）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び
（c）少なくとも１種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原
のいずれか一方又は両方と、を含むワクチン接種キット。
【請求項１５】
医学的治療を必要とする個体に、HIV並びにHSV及び/又はHPVに対する有効量のワクチンを送達することを含む、医学的治療方法。
【請求項１６】
HIV及びHSVに対するワクチンを送達することを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
HIV及びHPVに対するワクチンを送達することを含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
HIV並びにHSV及び/又はHPVに由来する抗原の混合物を含む単独のワクチンを送達することを含む、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
HIV並びにHSV及び/又はHPVに対するワクチンを別々の投与部位に共投与する、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
HIVもしくはHSVの感染又は疾患の予防あるいは治療用の医薬の製造におけるHPV抗原の使用。
【請求項２１】
HIVもしくはHPVの感染又は疾患の予防あるいは治療用の医薬の製造におけるHSV抗原の使用。
【請求項２２】
HIVの感染もしくは疾患の予防又は治療のための、請求項２０又は２１記載の使用。
【請求項２３】
少なくとも１種のヒト免疫不全ウイルス（HIV）抗原を、(i)及び(ii):
i）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び
ii）少なくとも１種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原
のいずれか一方又は両方と、組み合わせることを含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のワクチンを製造する方法。
【請求項２４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載のワクチンを用いて治療することを含む、HIVウイルス感染を低減させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ワクチン製剤、それらの製造方法、ならびに予防法及び治療法におけるそれらの使用に関する。本発明は特に、HIV感染のおそれがある患者に投与するための組合せワクチンに関する。
【背景技術】
【０００２】
HIV-1及びHIV-2は、世界の主な健康問題の１つとされている後天性免疫不全症候群（AIDS）の原因である。ワクチンを作製するために世界中で広範な研究が行われてきたが、このような努力は未だ成功していない。
【０００３】
HIVのエンベロープ糖タンパク質gp120は、宿主細胞への付着のために使用されるウイルスタンパク質である。この付着は、ヘルパーT細胞及びマクロファージの2つの表面分子（これらは、CD4、及び2つのケモカイン受容体CCR-4またはCXCR-5のうちの1つとして知られるものである）に結合することによって媒介される。gp120タンパク質は、はじめに大きな前駆分子（gp160）として発現された後、翻訳後切断されてgp120及びgp41を生じる。gp120タンパク質は、gp41分子との結合によりビリオンの表面上に保持され、ウイルス膜の中に挿入される。
【０００４】
gp120タンパク質は、中和抗体の主な標的であるが、残念なことに、そのタンパク質の最も免疫原性の高い領域（V3ループ）は、そのタンパク質の最も可変な部分でもある。従って、中和抗体を誘導するためのワクチン抗原としてのgp120（又はその前駆体であるgp160）の単独使用は、防御範囲の広いワクチンとしての使用に限定されると考えられる。gp120タンパク質は、細胞傷害性Tリンパ球（CTL）により認識されるエピトープも含む。これらのエフェクター細胞は、ウイルス感染細胞を排除することができるので、２番目に重要な抗ウイルス性免疫機構を構成する。中和抗体の標的領域とは対照的に、幾つかのCTLエピトープは、異なるHIV株の間で比較的保存されているようである。このため、gp120及びgp160は、細胞性免疫応答（特にCTL)を引き出すことを目的としたワクチンにおける有用な抗原性成分であると考えられる。
【０００５】
HIV-1の非エンベロープタンパク質が記載されてきており、例えばgag遺伝子やpol遺伝子の産物などの内部構造タンパク質、ならびにRev、Nef、Vif及びTatなどの他の非構造タンパク質等が挙げられる（Greeneら, New England J. Med, 324,5,308以下参照(1991)及びBryantら（Pizzo編）, Pediatr. Infect. Dis. J., 11, 5, 390以下参照(1992)）。
【０００６】
HIV gag遺伝子は前駆体タンパク質p55をコードし、このp55は自発的に集合して未成熟なウイルス様粒子（VLP）となることができる。次にこの前駆体はタンパク質分解によって主たる構造タンパク質p24（キャプシド）及びp18（マトリックス）並びに幾つかのより小さなタンパク質へと切断される。
【０００７】
HIV Tat及びNefは初期タンパク質である。つまり、これらは感染初期に、構造タンパク質の不在下で発現される。
【０００８】
HSV-2は陰部ヘルペスの主な病原因子である。HSV-1は口唇ヘルペスの原因因子である。これらのウイルスはともに、両急性疾患を誘導する能力、及び（主に神経節細胞内での）潜伏性感染症を成立させる能力を特徴とする。
【０００９】
陰部ヘルペスは、アメリカ合衆国だけでも約500万人に発症していると推定されており、毎年500,000件の臨床症例が記録されている（一次感染及び反復感染）。一次感染は典型的には思春期以後に起こるものであり、痛みを伴う皮膚の病変の局所的出現を特徴とする。この病変は2〜3週間続く。一次感染後6ヶ月以内に、患者の50％はこの疾患を再発する。患者の約25％は、毎年この疾患を10〜15回周期的に発症する。免疫無防備状態の患者においては、高頻度で再発する率が、通常の患者集団に比べて統計的に高い。
【００１０】
HSV-1ウイルス及びHSV-2ウイルスはいずれも、ウイルスの表面上に位置する様々な糖タンパク質成分を有する。これらはgB、gC、gD及びgE等として知られている。
【００１１】
糖タンパク質Dはウイルス膜上に存在し、また感染細胞の細胞質内にも見られる（Eisenberg R.J.ら; J of Virol 1980 35 428-435）。この糖タンパク質は、シグナルペプチドを含む393個のアミノ酸を含み、約60kDの分子量を有する。全てのHSVエンベロープ糖タンパク質のうち、この糖タンパク質がおそらく最も良く特性解析がなされている（Cohenら, J. Virology 60 157-166）。糖タンパク質Dは、in vivoにおいて細胞膜へのウイルスの付着において中心的な役割を果たすことが知られている。さらに、糖タンパク質Dはin vivoにおいて中和抗体を誘導することができることが分かった（Eingら, J. Med. Virology l27: 59-65）。しかし、潜伏しているHSV-2ウイルスは、患者の血清中に高力価の中和抗体が存在していても、依然として再活性化されてその疾患の再発を誘導することができる。
【００１２】
パピローマウイルスは小さなDNA腫瘍ウイルスであり、これは非常に種特異的である。これまでに、70を超える異なるヒトパピローマウイルス（HPV）遺伝子型が記載されている。HPVは一般に、皮膚（例えばHPV-1及びHPV-2）又は粘膜表面（例えばHPV-6及びHPV-11）のいずれかに対して特異的であり、通常は数ヶ月又は数年間存続する良性腫瘍（いぼ）を引き起こす。このような良性腫瘍は、当事者にとって苦痛であるが、生命に危険を及ぼすようなものではない（幾つかの例外はある）。
【００１３】
幾つかのHPVは癌とも関係がある。HPVとヒト癌との最も強い正の関連性は、HPV-16及びHPV-18と子宮頸癌との間に存在する関連性である。子宮頸癌は、発展途上国において最も一般的な悪性疾患であり、毎年世界中で約500,000件の新しい症例が発生している。ワクチンを用いて、一次HPV-16感染、及びさらには成立したHPV-16を含む癌と積極的に闘うことは、現在では技術的には実現可能である。HPV-16に対する予防用及び治療用ワクチン接種の展望についての概説については、Cason J., Clin. Immunother. 1994; 1(4) 293-306及びHagenesee M.E., Infections in Medicine 1997 14(7) 555-556,559-564を参照されたい。
【００１４】
特に関心の高い他のHPVは血清型31、33及び45である。
【００１５】
今日では、様々なタイプのHPVが単離されており、それらは細菌中でのクローニング系の助けを借りてそしてより最近ではPCR増幅により、特徴付けられている。HPVゲノムの分子構成は、良く特徴付けがされたウシパピローマウイルス1型（BPV1）の分子構成との比較をもとに定められている。
【００１６】
マイナーな変異は生じるが、記載された全てのHPVゲノムが少なくとも7つの初期遺伝子E1〜E7と2つの後期遺伝子L1及びL2とを有する。さらに、上流の調節領域は、HPVゲノムの多くの転写事象を制御すると思われる調節配列を含んでいる。
【００１７】
E1及びE2遺伝子はそれぞれ、ウイルスの複製及び転写の制御に関与しており、ウイルスの組込みにより破壊される傾向にある。E6及びE7、そして（最近得られた証拠が示すところでは）E5も、ウイルスの形質転換に関与している。
【００１８】
HPV16及びHPV18等の子宮頸癌に関与するHPVにおいて、発癌プロセスはウイルスDNAが組み込まれた後に始まる。この組込みにより、キャプシドタンパク質L1及びL2をコードする遺伝子が不活化され、2つの初期タンパク質E6及びE7の継続的な過剰発現が行われるようになる。これにより、正常な細胞分化が徐々に失われ、癌種が発達することとなる。
【００１９】
子宮頸部の癌は女性の間では一般的であり、これは前癌性の中期段階を経て発達して浸潤性の癌となり、しばしば死をもたらす。この疾患の中期段階は頸部上皮内癌として知られ、進行する重篤度に応じて段階I〜IIIまでの等級に分けられる。
【００２０】
臨床的には、女性の肛門性器管（anogenital tract）のHPV感染は、子宮頚部の扁平コンジローム（その顕著な特徴は、子宮頚部の扁平上皮の表層細胞及び中間細胞に主に影響を及ぼす空胞細胞症である）として現れる。
【００２１】
ウイルスの細胞変性作用の結果であるコイロサイト（koilocyte）は、核周囲に透明な光輪を持つ多核細胞として現れる。上皮は異常な角質化（病変のいぼ状の外観の原因になる）により厚くなる。
【００２２】
このような扁平コンジロームは、HPV16もしくはHPV18血清型について陽性である場合、頸部上皮内癌（CIN）及び上皮内癌（CIS）（これら自体は浸潤性の子宮頚癌の前駆病変とみなされる）に発展する上でのハイリスク因子である。
【００２３】
国際公開第WO96/19496号は、ヒトパピローマウイルスE6及びE7タンパク質の変異体、特にE6タンパク質及びE7タンパク質の両方の中に欠失を有するE6/E7の融合タンパク質を開示している。これらの欠失融合タンパク質は、免疫原性であるといわれている。
【００２４】
HPV L1をベースとしたワクチンは、国際公開第WO94/00152号、第WO94/20137号、第WO93/02184号及び第WO94/05792号に開示されている。このようなワクチンは、一量体、キャプソマー又はウイルス様粒子としてL1抗原を含み得る。このような粒子はさらに、L2タンパク質を含んでいてもよい。L2をベースとしたワクチンは例えば国際公開第WO93/00436号に記載されている。他のHPVワクチンは、例えばE7などの初期タンパク質やL2-E7等の融合タンパク質をもとにしたものである。
【００２５】
HIVの感染は、性行為感染した他の病原体により引き起こされる性器の病変を通じて促進される(Fleming, DT, Wasserheit, J.N. From epidemiological synergy to public health policy and practice: the contribution of other sexually transmitted diseases to sexual transmission of HIV infection. Sex. Transm. Infect. 1999; 75:3-17）。性器病変の主な原因は、単純疱疹ウイルス（HSV）及びヒトパピローマウイルス（HPV）である。例えば、HSV-2感染は、HIVも大流行しているアフリカ諸国で頻繁に診断されている。中央アフリカ共和国における疫学調査により、HSVとHIVとの間には重要な関係があることが分かった（Mbopi-Keou, F.-X., Gresenguet, G., Mayaud, P., Weiss, H.A., Gopal, R., Matta, M., Paul, J.-L., Brown, D.W.G., Hayes, R.J., Mabey, D.C.W., Belec, L. Interactions between Herpes Simplex Virus type 2 and human Immunodeficiency Virus type 1 infection in African women: opportunities for intervention. J. Infect. Dis. 2000; 182:1090-1096）。HSV-2抗体、ウイルス排泄（virus shedding）及びHSV-2 DNAは、HIV-1血清陽性の女性においてかなり高い割合で存在していた。更に、HSV-2 DNAの存在とHIV-1 RNAの存在との間には相関関係があった。これらの知見は、HIV感染率の高い地域におけるこれら2つの病原体の間の相互作用を例証している。
【００２６】
HIVの効果的な治療法及び予防法はいまなお必要とされている。本発明はこの必要性に取り組むものである。
【発明の開示】
【００２７】
第１の態様において、本発明は、
（a）少なくとも1種のヒト免疫不全ウィルス（HIV）抗原と、(b)及び(c):
（b）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び
（c）少なくとも1種もしくは数種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原
のいずれか一方又は両方と、
を含むワクチン組成物を提供する。
【００２８】
本発明は主に、HIVと、HSV及び/又はHPVとの、両方に対する効果的な組合せワクチンを提供する。本発明者らは、これらのウイルスに由来する抗原を同時投与（simultaneous administration）又は共投与（co-administration）すると、全ての抗原に対する免疫応答を引き起こすことを示す。HIVと、HSV及び/又はHPVとの、両方に対する免疫化により、HIV感染からのより優れた防御をもたらすことができる（そして逆もまた同じである）。HIVに対する効果が不充分な予防用ワクチンであっても、例えば予防用もしくは治療用HSV又はHPVワクチンを追加的にもしくは並行して（concomitant）投与することにより、それを大幅に強化することができる。
【００２９】
本発明はさらに、HIVワクチンと、HSVワクチン及び/又はHPVワクチンとの、同時投与を提供する。同時投与は、好ましくはワクチン送達の前に適当な抗原を混合することによって行われる。
【００３０】
また本発明は、少なくとも１種のHIV抗原と、少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原及び/又は少なくとも１種のヒトパピローマ（HPV）抗原との、並行送達にも関する。並行送達は、このような抗原の組合せの実質的な同時投与又は共投与に関する。共投与は、同じ投与部位への投与であってもよく、またより好ましくは異なる投与部位への投与であってもよい。
【００３１】
従って本発明のワクチン組成物は、例えばキットの形態での、混合抗原調製物及び共投与用の抗原の組合せのいずれをも包含する。
【００３２】
同じ１つのワクチン製剤に入れるか又は別々の製剤に並行して入れた複数のワクチン抗原を投与することにより、これらのワクチン抗原それぞれに対する免疫応答の誘導における干渉が起こる場合がある（Schmittら. Primary vaccination of infants with diphtheria-tetanus-acellular pertussis-hepatitis B virus-inactivated polio virus and Haemophilus influenzae type b vaccines given as either separate or mixed injections. J. Pediatr. 2000, 137:304-312）。本発明の特定のワクチン製剤は干渉を示さないこと、つまり本発明の組成物中の各抗原に対する免疫応答は、各抗原を別々に与えることにより得られる免疫応答と本質的に同じであることが分かった。
【００３３】
本発明の好適な態様においては、同じ１つのワクチン製剤に入れるか又は別々の製剤に並行して入れた本発明の複数のワクチン抗原を投与しても、個々の抗原成分の免疫原性に実質的な影響を及ぼさない。
【００３４】
また本発明は、組合せワクチンの１つのウイルス成分に由来する１以上の抗原（例えばHPV成分に由来する抗原等）に対する免疫応答が、他のウイルス成分に由来する抗原の不在下でのそのウイルス成分の投与によって生じる応答と比較して低いような組成物であっても、その抗原又はウイルス成分が免疫応答（好ましくは防御的免疫応答）を生じることができる限り、そのような組成物まで及ぶものである。
【００３５】
好ましくは、組合せワクチンは、これらの疾患（HIV、HSV又はHPV）のうちの１つ以上に関して、個々のワクチン成分単独の場合と比べて、高い活性又は効果を有する。
【００３６】
好適な実施形態において、ワクチンのHSV及び/又はHPV成分は、HIV感染に関与する病変の数及び/又は重篤度及び/又は感染作用を低下させるのに十分な免疫原性を有する。
【００３７】
また本発明は、
（a）少なくとも1種のヒト免疫不全ウィルス（HIV）抗原と、(b)及び(c):
（b）少なくとも１種の単純疱疹ウイルス（HSV）抗原、及び
（c）少なくとも1種もしくは数種のヒトパピローマウイルス（HPV）抗原
のいずれか一方又は両方と、
を含むキットまで及ぶものである。
【００３８】
このキットは好適には、HIV並びに/又はHSV及び/もしくはHPVの感染又は疾患に対する必要な防御又は治療を提供するための、本発明で使用することができる個々のもしくは混合したワクチンの組合せを提供する。
【００３９】
本発明のワクチン組成物は、特にHIV並びに/又はHSV及び/もしくはHPV感染の危険性がある人々に投与する上で非常に有用である。例えばHSV又はHPVに既に感染している被験者における免疫化はまた、血清陰性である彼らの性的パートナーへのこれらのウイルスの感染を低減させてパートナーを感染から守るために行うことができるので、HSV又はHPVに既に感染している被験者であっても組合せワクチンから利益を得られるであろう。したがって本発明は、本発明のワクチンを用いた治療を含む、HIVウイルス感染等のウイルス感染を減らす又は予防する方法に関する。
【００４０】
本発明のワクチンは、感染及び/又は疾患の予防又は治療に使用するのに適している。
【００４１】
好ましくは、本発明のワクチン組合せはアジュバントも含む。
【００４２】
１つの実施形態において、本発明のアジュバントは、TH1細胞応答（本明細書中においてTH1型応答とも呼ばれる）の優先的な刺激因子（preferential stimulator）である。
【００４３】
免疫応答は、2つの極端なカテゴリー、つまり体液性免疫応答又は細胞性免疫応答（伝統的に、防御のための抗体によるエフェクター機能及び細胞によるエフェクター機構によりそれぞれ特徴付けられる）に大きく分けることができる。これらの応答のカテゴリーは、TH1型応答（細胞性応答）及びTH2型免疫応答（体液性応答）と名付けられている。
【００４４】
極端なTH1型免疫応答は、抗原特異的なハプロタイプ拘束性細胞傷害性Tリンパ球の産生及びナチュラルキラー細胞応答によって特徴付けることができる。マウスにおいて、TH1型応答はしばしばIgG2aサブタイプの抗体の生成により特徴付けられるが、ヒトにおいては、これらはIgG1型抗体に相当する。TH2型免疫応答は、マウスにおけるIgG1を含む一定範囲の免疫グロブリンアイソタイプの生成によって特徴付けられる。
【００４５】
これら2つのタイプの免疫応答の生起の背後にある駆動力はサイトカインであると考えられる。高レベルのTH1型サイトカインは、所与の抗原に対する細胞性免疫応答の誘導を促進する傾向があるが、高レベルのTH2型サイトカインは、抗原に対する体液性免疫応答の誘導を促進する傾向がある。
【００４６】
TH1型及びTH2型免疫応答の区別は絶対的なものではない。現実には、個人は、TH1優位又はTH2優位といわれる免疫応答を保持する。しかし、Mosmann及び Coffman (Mosmann, T.R. and Coffman, R.L. (1989) TH1 and TH2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, p145-173)によりマウスCD4+ve  T細胞クローンの場合に記載された観点で、サイトカインのファミリーを考慮することがしばしば便利である。伝統的に、TH1型応答は、Tリンパ球によるINF-γサイトカインの産生と関連付けられている。TH1型免疫応答の誘導としばしば直接関連付けられる他のサイトカインは、IL-12等のT細胞によって産生されない。これに対し、TH2型応答は、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10及び腫瘍壊死因子-β（TNF-β）の分泌と関連付けられている。
【００４７】
特定のワクチンアジュバントはTH1型もしくはTH2型のいずれかのサイトカイン応答の刺激に特に適していることが分かっている。伝統的に、ワクチン接種後又は感染後の免疫応答のTH1：TH2バランスを最も良く示す指標としては、抗原で再刺激した後にin vitroでのTリンパ球によるTH1もしくはTH2サイトカインの産生を直接測定すること、及び/又は抗原特異的抗体反応のIgG1:IgG2a比を（少なくともマウスにおいて）測定すること、が挙げられる。
【００４８】
このように、TH1型アジュバントは、単離されたT細胞集団を、in vitroにて抗原で再刺激したときに高レベルのTH1型サイトカインを産生するよう刺激して、TH1型アイソタイプに関連付けられる抗原特異的免疫グロブリン反応を誘導するものである。
【００４９】
TH1細胞応答を優先的に刺激することができるアジュバントは、国際特許出願公開番号第WO94/00153号及び第WO95/17209号に記載されている。
【００５０】
3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA（3 De-O-acylated monophosphoryl lipid A; 3D-MPL）は、このようなアジュバントの１つである。これは、GB2220211（Ribi）により公知である。化学的にはこれは3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAと4-、5-もしくは6-アシル化鎖との混合物であり、Ribi Immunochem, Montanaにより製造されている。3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドAの好適な形態は、欧州特許第0 689 454 B1（SmithKline Beecham Biologicals SA)に開示されている。MPL等の他の解毒化（detoxified）細菌LPS分子を使用することもでき、本明細書中において3D-MPLというとき、このような解毒化LPS分子も適宜包含するものとする。他の精製及び合成リポ多糖類が記載されている（米国特許第US 6,005,099号及びEP 0 729 473 B1; Hilgersら, 1986, Int.Arch.Allergy.Immunol., 79(4):392-6; Hilgersら, 1987, Immunology, 60(1):141-6; ならびにEP 0 549 074 B1）。
【００５１】
好ましくは、3D-MPLの粒子は、0.22ミクロンのメンブレンを通して滅菌濾過するのに十分な程度小さい（欧州特許第0 689 454号に記載）。3D-MPLは、１用量あたり、10μg〜100μg、好ましくは25〜50μgの範囲で存在する（この場合、抗原は典型的には１用量あたり2〜50μgの範囲で存在する）。
【００５２】
3D-MPLの好適な形態は、直径0.2μm未満の小さな粒径を有するエマルション形態であり、その製造方法は国際公開第WO94/21292号に開示されている。モノホスホリルリピドA及び界面活性剤を含む水性製剤は国際公開第WO9843670A2号に記載されている。
【００５３】
本発明のアジュバントの組合せ中に製剤化するための細菌性リポ多糖に由来するアジュバントは、細菌源から精製及び処理してもよいし、あるいは合成してもよい。例えば、精製モノホスホリルリピドAはRibi（前掲）に記載されており、サルモネラ種（Salmonella sp.）に由来する3-O-脱アシル化モノホスホリル（3-O-Deacylated monophosphoryl lipid A）もしくはジホスホリルリピドAは、GB2220211号及びUS4912094号に記載されている。特に好適な細菌性リポ多糖アジュバントは、US 6,005,099号及びEP 0 729 473 B1に記載されている3D-MPL及びβ(1-6)グルコサミン二糖類である。
【００５４】
従って、本発明で使用することができるLPS誘導体は、LPS、MPLもしくは3D-MPLに構造が似ているそのような免疫賦活剤である。本発明の他の態様において、LPS誘導体はアシル化単糖（MPLの上記構造の一部である）であってもよい。
【００５５】
LPSの好適な誘導体は、以下の構造式:
【化１】
2004531540.tif 000002
[上記式中、R2はH又はPO3H2であり、R3はアシル鎖もしくはβ-ヒドロキシミリストイル（β-hydroxymyristoyl）又は以下の構造式:
【化２】
2004531540.tif 000003
（上記式中、R4は、
【化３】
2004531540.tif 000004
であり、X及びYは0〜約20の値を有する）
を有する3-アシルオキシアシル残基である]
を有する、精製された又は合成されたリピドAである。
【００５６】
サポニンはLacaille-Dubois, M及びWagner H. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386)に教示されている。サポニンは、植物界及び海洋動物界に広く分布するステロイド又はトリテルペン配糖体である。サポニンについては、振盪時に泡立つコロイド状の水溶液を形成すること、及びコレステロールを沈殿させることが特記されている。サポニンは、細胞膜の近くにあると、細胞膜の中に孔状構造を生成して、膜の破裂を引き起こす。赤血球の溶血はこの現象の例であるが、これは、特定のサポニンの特性であって、全てのサポニンの特性というわけではない。
【００５７】
サポニンは全身投与用ワクチンのアジュバントとして知られている。個々のサポニンのアジュバント及び溶血作用は、当分野において広く研究されてきた（Lacaille-Dubois及びWagner, 前掲）。例えば、Quil A（南米の樹木キラヤ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮から得られる）及びその画分は、米国特許第5,057,540号、「ワクチンアジュバントとしてのサポニン（Saponins as vaccine adjuvants）」 Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2): 1-55、及びEP 0 362 279 B1に記載されている。Quil Aの画分を含む粒子構造（免疫刺激性複合体 [Immune Stimulating Complexes; ISCOMS] と呼ばれる）は溶血性であり、ワクチンの製造に使用されている（Morein, B., EP 0 109 942 B1; WO 96/11711; WO 96/33739）。溶血性サポニンQS21及びQS17（Quil AをHPLCで精製した画分）は、強力な全身性アジュバントとして記載されており、それらの製造方法は米国特許第5,057,540号及びEP 0 362 279 B1に開示されている。全身性ワクチン接種研究で使用されている他のサポニンとしては、カスミソウ（Gypsophila）及びシャボンソウ（Saponaria）等の他の植物種から得られるもの等が挙げられる（Bomfordら, Vaccine, 10(9):572-577, 1992）。
【００５８】
他の好適なアジュバントは、例えば上記のようなサポニンを含む。
【００５９】
好適なアジュバントは、キラヤ（Quillaja Saponaria Molina）の樹皮から得られるHPLCで精製した非毒性画分であるQS21を含む。場合により、これを3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA（3D-MDL）と混合してもよく、場合により担体も一緒に混合してもよい。
【００６０】
QS21を含む非反応原性（non-reactogenic）アジュバント製剤は、過去に記載されている（国際公開第WO96/33739号）。QS21及びコレステロールを含むこのような製剤は、抗原と一緒に製剤化したときに、優れたTH1刺激性アジュバントであることが分かっている。このように、本発明の一部をなすワクチン組成物は、QS21及びコレステロールの組合せを含み得る。
【００６１】
TH1細胞応答の優先的な刺激因子である更なるアジュバントとしては、免疫調節性オリゴヌクレオチド（例えば国際公開第WO96/02555号に開示されたような非メチル化（unmethylated）CpG配列）が挙げられる。
【００６２】
CpGはワクチンとして製剤化される場合、一般に、遊離型抗原と一緒にした（国際公開第WO 96/02555号、McCluskie及びDavis（前掲））又は抗原に共有結合させた（国際公開第WO 98/16247号）自由溶液（free solution）として、あるいは水酸化アルミニウム等の担体と一緒に製剤化して（(Hepatitis surface antigen) Davisら（前掲）; Brazolot-Millanら, Proc.Natl.Acad.Sci., USA, 1998, 95(26), 15553-8）、投与される。他の好適なアジュバントの組合せは、CpG及びサポニンを含む。
【００６３】
上記に記載したもの等の異なるTH1刺激性アジュバントを組合せたものも、TH1細胞応答の優先的な刺激因子であるアジュバントを提供するものと考えられる。例えば、QS21は、3D-MPLと一緒に製剤化することができる。QS21：3D-MPLの比率は、典型的には1：10〜10：1程度、好ましくは1：5〜5：1程度、及びしばしば実質的に1：1である。最適な相乗効果のために好ましい範囲は、2.5：1〜1：1（3D-MPL：QS21）である。
【００６４】
好ましくは、本発明のワクチン組成物中には担体も存在する。担体は水中油滴型エマルションであってもよいし、またはリン酸アルミニウムや水酸化アルミニウム等のアルミニウム塩であってもよい。
【００６５】
好適な水中油滴型エマルションは、スクアレン、αトコフェロール及びTween 80等の代謝可能な油を含む。特に好適な態様において、本発明のワクチン組成物中の抗原は、このようなエマルション中でQS21及び3D-MPLと混合される。さらに、水中油滴型エマルションは、スパン85（span 85）及び/又はレシチン及び/又はトリカプリリン（tricaprylin）を含み得る。
【００６６】
特に好適な態様において、本発明のワクチン組成物中の抗原は、3D-MPL及びミョウバンと混合される。
【００６７】
典型的には、ヒト投与の場合は、QS21及び3D-MPLはワクチン中に１用量あたり1μg〜200μgの範囲（例えば、10〜100μg、好ましくは10μg〜50μg）で存在する。典型的には、この油滴含有水は2〜10％のスクアレン、2〜10％のαトコフェロール、及び0.3〜3％のTween 80を含む。好ましくは、スクアレン：αトコフェロールの比率は、より安定なエマルションを提供するように、1以下である。スパン85（span 85）も1％のレベルで存在し得る。幾つかのケースでは、本発明のワクチンは、安定化剤をさらに含むことが有利である。
【００６８】
非毒性水中油滴型エマルションは、好ましくは水性担体中に非毒性油（例えばスクワランやスクアレン等）、乳化剤（例えばTween80等）を含む。水性担体は例えばリン酸緩衝生理食塩水であってもよい。
【００６９】
水中油滴型エマルション中にQS21、3D-MPL及びトコフェロールを含む特に効力の高いアジュバント製剤は、国際公開第WO95/17210号に記載されている。
【００７０】
アジュバント及び抗原の好適な組合せは、国際公開第WO95/17210号に記載されているように、水中油滴型エマルション中のQS21、3D-MPLと組み合わせた、HIV gp120及びNef-Tatタンパク質を含む。
【００７１】
本発明で使用するアジュバントと抗原との組合せの最適化は、当業者の技術範囲内で可能である。
【００７２】
本発明の他の態様において、ワクチンは、目的のHIV、HSVまたはHPVポリペプチドのうち１以上をコードするDNAを、そのポリペプチドがin situで生成されるように含むものであってもよい。DNAは、当業者に公知である種々の送達系（プラスミドDNA等の核酸発現系や細菌及びウイルス発現系等を含む）のうちいずれかの中に入れられる。Rolland, Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Systems 15:143-198, 1998及び本明細書中に引用されている参考文献に記載されたもの等の、多くの遺伝子送達技法が当分野において周知である。適当な核酸発現系は、患者における発現に必要なDNA配列（適当なプロモーター及び終結シグナル等）を含む。発現系が、ウイルスや細菌等の組換え生微生物である場合、目的の遺伝子は組換え生ウイルス又は組換え生細菌のゲノムの中に挿入することができる。この生ベクターを接種及びin vivo感染させると、その抗原のin vivo発現及び免疫応答の誘導につながる。この目的で使用されるウイルス及び細菌としては、例えばポックスウイルス（例えばワクシニアウイルス、鶏痘ウイルス、カナリア痘ウイルス、又は、改変型ウイルスアンカラ（Modified Virus Ankara; MVA）等の改変型ポックスウイルス）、アルファウイルス（シンドビスウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、フラビウイルス（黄熱病ウイルス、デング熱ウイルス、日本脳炎ウイルス）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ピコルナウイルス（ポリオウイルス、ライノウイルス）、ヘルペスウイルス（水痘-帯状疱疹ウイルス等）、リステリア、サルモネラ、赤痢菌、ナイセリア、BCGなどが挙げられる。これらのウイルス及び細菌は、有毒なものであってもよいし、生ワクチンを得るために様々な方法で弱毒化されたものであってもよい。このような生ワクチンも、本発明の一部をなす。
【００７３】
このように、本発明の好適なワクチンのHIV、HSV又はHPV成分は、所望のタンパク質をコードするポリヌクレオチドの形態で提供してもよい。ポリヌクレオチドは、例えば単一のタンパク質をコードするベクターの形態であってもよいし、あるいは、これら3つの病原体のうちの1以上に由来する複数の抗原を発現する単一のベクターであってもよい。
【００７４】
さらに、本発明の免疫化は、タンパク質及びDNAをベースとした製剤の組合せを用いて実施することができる。初回免疫-追加免疫は、広範な免疫応答を誘導するのに効果的であると考えられる。アジュバントを加えたタンパク質ワクチンは、主に抗体及びTヘルパー免疫応答を誘導するが、プラスミドもしくは生ベクターとしてDNAを送達すると、強力な細胞傷害性Tリンパ球（CTL）応答を誘導する。このように、タンパク質及びDNAワクチン接種の組合せは、様々な免疫応答をもたらす。これは特に、HIVの場合に関して言えることである。なぜなら、HIVに対する免疫防御では、中和抗体及びCTLの両方が重要であると考えられるからである。
【００７５】
本発明によると、HIVと、HSV及びHPV抗原のいずれか一方もしくは両方と、を単独で又は組み合わせて用いたワクチン接種のためのスケジュールは、タンパク質抗原及び前記タンパク質をコードするDNAの連続的（「初回免疫-追加免疫」）投与又は同時投与を含み得る。DNAは、プラスミドDNAとして、又は組換え生ベクターの形態（例えばポックスウイルスベクターまたは本明細書中に記載されるような他の好適な生ベクター等）で送達することができる。タンパク質抗原を１回又は数回注射した後、1回以上DNA投与を行うか、又はDNAをまず1回以上の投与で使用した後に、1回以上タンパク質で免疫化してもよい。
【００７６】
本発明のさらなる実施形態において、HIVと、HSV及びHPV抗原のいずれか一方もしくは両方と、を単独で又は組み合わせて用いたワクチン接種のためのスケジュールは、上記タンパク質をコードするDNAを、異なるDNA送達様式との組合せにより連続的（「初回免疫-追加免疫」）に投与するものであってもよい。例えば、1回以上の投与でまずネイキッド(裸の)DNAを用いた後、組換え生ベクターの形態で1回以上のDNA投与を行ってもよい。
【００７７】
本発明のHIV抗原は、好ましくは、HIVエンベロープタンパク質またはその誘導体と、調節タンパク質又は非構造タンパク質（例えばGag、Pol、Rev、Nef、Vif又はTat）との組合せを含む。
【００７８】
本発明の組成物中のHIV抗原は、好ましくは、以下の(a)〜(f)である：
（a）HIV Nefタンパク質もしくはその誘導体、
（b）HIV Tatタンパク質もしくはその誘導体、
（c） HIV Tatタンパク質もしくはその誘導体と結合した、HIV Nefタンパク質もしくはその誘導体、
（d）HIV Envタンパク質（gp160もしくはgp120）又はその誘導体、
（e）gp120もしくはその誘導体と組合せた、HIV Tatタンパク質もしくはその誘導体に結合したHIV Nefタンパク質もしくはその誘導体、あるいは
（f）HIV GagもしくはPolタンパク質又はその誘導体。
【００７９】
最も好ましいのは、国際公開第WO01/51719号（その全内容は本明細書中に参照として組み入れられる）に開示されたようなnef-tat融合体とgp120との組合せである。好ましくは、Tat、Nef又はNaf-Tatは、HIVの治療又は予防において、gp120と相乗作用的に働く。最も好ましくは、nef-tatとgp120との間には相乗作用がある。
【００８０】
本発明中に包含される誘導体としては、C末端にヒスチジン・テイル（尾部）（これは好ましくは5〜10個のヒスチジン残基を含む）を有する分子が挙げられる。一般に、ｎ個の残基を含むヒスチジン・テイルは、本明細書中においてHis（n）で表される。ヒスチジン（すなわち「His」）テイルの存在により、精製が容易になる。
【００８１】
好適な実施形態において、これらのタンパク質の幾つか又は全ては、5〜10個、好ましくは6個のヒスチジン残基を含むヒスチジン・テイルを有して発現される。これらは、精製を助けるのに有利である。酵母（サッカロミセス・セレビシエ）内でのNef（Macreadie I.G.ら, 1993, Yeast 9 (6) 565-573）及びTat(Braddock Mら, 1989, Cell 58 (2) 269-79)の分離発現が報告されている。融合構築物Nef-Tat-Hisの発現は、国際公開第WO99/16884号に記載されている。
【００８２】
本発明に包含される誘導体には、突然変異型タンパク質も含まれる。「突然変異型」という用語は、本明細書中において、部位特異的突然変異誘発を行うための周知技法又は他の任意の従来法を用いて1以上のアミノ酸の欠失、付加、又は置換を経た分子を意味するために使用される。この定義はHIV抗原のみに限定されず、本発明のワクチンに使用される全ての抗原に適用される。他の好適な誘導体の形態としては、融合タンパク質、架橋タンパク質、トランケート型タンパク質、及びコドンが最適化された配列（このような誘導体をコードするヌクレオチドを含む）が挙げられる。
【００８３】
抗原の誘導体もまた、好ましくは元の抗原とほぼ同じ程度の免疫原性を持っているものであるか、又は元の抗原とほぼ同じ程度の免疫原性を持っている抗原をコードするものである。
【００８４】
本発明の組成物中のHPV抗原は、好ましくはHPV16及び/もしくは18、又はHPV6及び/もしくは11、又はHPV31、33、45、52、58、35、56及び59に由来するものである。
【００８５】
１つの好適な実施形態において、本発明のワクチン組成物中のHPV抗原は、HPVの主要キャプシドタンパク質L1、及び場合によりL2タンパク質（特にHPV16及び/又はHPV18に由来するもの）を含む。この実施形態において、L1タンパク質の好適な形態は、トランケート型L1タンパク質であり、最も好ましくはC末端がトランケートされたものである。好ましくは、L1（場合によりL1-L2融合体中のもの）は、ウイルス様粒子（VLP）の形態である。ウイルス様粒子の作製方法は、当分野において周知である。L1タンパク質を他のHPVタンパク質（特にE7）に融合させて、L1-E7融合体を形成させてもよい。L1-E又はL1-L2-Eを含むキメラVLPが特に好ましい。
【００８６】
他の好適な実施形態において、本発明の組成物中のHPV抗原は、E6又はE7タンパク質、特にT細胞エピトープを有する免疫学的融合パートナーに結合されたE6又はE7から得られる。
【００８７】
本発明のこの実施形態の好適な形態において、免疫学的融合パートナーは、B型インフルエンザ菌（Heamophilus influenza B）のプロテインDから得られる。好ましくは、このプロテインD誘導体は、該タンパク質の最初のおよそ1/3（特にN末端側の最初のおよそ100〜110個のアミノ酸）を含む。
【００８８】
本発明のこの実施形態における好適な融合タンパク質は、HPV16由来のプロテインD-E6、HPV16由来のプロテインD-E7、HPV18由来のプロテインD-E7、及びHPV18由来のプロテインD-E6を含む。プロテインD部分は好ましくはプロテインDの最初の1/3を含む。
【００８９】
本発明のさらに他の実施形態において、HPV抗原は、L2-E7融合体（特にHPV6及び/又はHPV11由来のもの）の形態である。
【００９０】
本発明のHPVタンパク質は、好ましくは大腸菌（E.coli）の中で発現される。好適な実施形態において、該タンパク質は、5〜9個、好ましくは6個のヒスチジン残基を含むヒスチジン・テイルを有して発現される。これらは精製を容易にするのに有利である。このようなタンパク質の製造についての説明は、英国特許出願番号第GB9717953.5（国際公開第WO99/10375号として公開）に十分記載されている。
【００９１】
ワクチン組成物中のHPV抗原はAl(OH)3に吸着させたものであってもよい。
【００９２】
本発明の組成物中のHSV抗原は、好ましくはHSV-2に由来するもの、典型的には糖タンパク質Dである。糖タンパク質Dはウイルス膜上にあり、また感染細胞の細胞質の中にも見られる（Eisenberg R.J.ら; J of Virol 1980, 35, 428-435）。糖タンパク質Dは、シグナルペプチドを含む393個のアミノ酸を含み、約60kDの分子量を有する。全てのHSVエンベロープ糖タンパク質のうち、この糖タンパク質が恐らく最も良く特性解析がなされている（Cohenら; J. of Virology, 60, 157-166）。この糖タンパク質は、in vivoにおいて細胞膜へのウイルスの付着において中心的な役割を果たすことが知られている。さらに、糖タンパク質Dは、in vivoで中和抗体を誘導することができることが分かった（Eingら, J. Med. Virology l27: 59-65）。しかし、潜伏しているHSV-2ウイルスは、患者の血清中に高力価の中和抗体が存在するにも関わらず、依然として再活性化されて疾患の再発を誘導することができる。
【００９３】
本発明の好適な実施形態において、HSV抗原は、天然糖タンパク質の1〜306位アミノ酸を含有し、そのタンパク質のC末端にはさらにアスパラギン及びグルタミンを有するがその膜アンカー領域を持たない、308アミノ酸のトランケート型HSV-2糖タンパク質Dである。この形態の糖タンパク質Dはシグナルペプチドを含み、このシグナルペプチドが切断されて成熟283アミノ酸タンパク質を生成する。チャイニーズハムスター卵巣細胞中でのこのようなタンパク質の産生は、Genentechの欧州特許第EP-B-139417号に記載されている。
【００９４】
組換え成熟HSV-2糖タンパク質Dのトランケート型形態は、好ましくは、本発明のワクチン製剤において使用され、rgD2tと呼ばれる。
【００９５】
このHSV-2抗原とアジュバント3D-MPLとの組合せは、国際公開第WO92/16231号に記載されている。
【００９６】
最も好ましいのは、HSV由来のL1（全長もしくはトランケート型）及び/又はrgD2tを含むHPV VLPと組み合わせてgp120及びnef-tat融合体を含むワクチンである。
【００９７】
本発明は更なる態様において、医学的治療において使用するため、特にHIV感染、ヒトパピローマウイルス感染及び単純疱疹ウイルス感染の治療又は予防で使用するための、本明細書中に記載されるようなワクチン製剤を提供する。
【００９８】
本発明のワクチンは、免疫防御量の抗原を含み、従来技法によって調製することができる。
【００９９】
ワクチンの調製は、Pharmaceutical Biotechnology, Vol.61 Vaccine Design - the subunit and adjuvant approach, Powell及びNewman編, Plenurn Press, 1995、New Trends and Developments in Vaccines, Vollerら編, University Park Press, Baltimore, Maryland, U.S.A. 1978に一般的に記載されている。リポソーム中へのカプセル封入は、例えばFullertonの米国特許第4,235,877号に記載されている。高分子へのタンパク質の結合は、例えばLikhiteの米国特許第4,372,945号及びArmorらの米国特許第4,474,757号に開示されている。
【０１００】
各ワクチン用量中のタンパク質の量は、通常のワクチン被接種者において重大かつ有害な副作用を引き起こすことなく免疫防御応答を誘導する量として選択される。このような量は、具体的にどの免疫原を使用するかによって異なる。一般に、各用量はタンパク質を1〜1000μg、好ましくは2〜100μg、最も好ましくは4〜40μg含むと予測される。特定のワクチンに対して最適な量は、被験者における抗体力価及び他の応答の観察を含む標準的な検査によって確かめることができる。最初のワクチン接種を行った後、被験者は約4〜8週間間隔で1回もしくは数回の追加免疫を受けてもよい。
【０１０１】
HPV及び/もしくはHSV感染のいずれか一方もしくは両方、並びに/又はHIVに、罹りやすいヒトへのワクチン接種に加え、本発明の医薬組成物は、前記のウイルス感染した患者を免疫療法により治療するために使用することができる。
【０１０２】
このように、本発明は、このような治療を必要としている個体に、HIVと、HSV及び/又はHPVとの、両方に対する有効量のワクチンを送達する治療方法に関する。この方法は、HIV、並びに/又はHPV及び/もしくはHSVにより引き起こされる、感染または疾患を、適宜予防又は治療するためのものである。
【０１０３】
本発明のさらなる態様において、本明細書中に記載されるワクチンの製造方法が提供される。この方法は、ヒト免疫不全ウィルス抗原を、ヒトパピローマウイルス抗原及び単純疱疹ウイルス抗原のうちのいずれか一方もしくは両方と混合することを含む。あるいは、製造において、適当な抗原をコードするポリヌクレオチドを混合するか又はポリヌクレオチドとタンパク質を組み合わせて、本発明のワクチンを作製することを含んでもよい。好ましくは、それら抗原は、TH-1誘導性アジュバント（例えば3D-MPL）等のアジュバント及び好ましくは担体（例えばミョウバン）と一緒に製剤化される。
【０１０４】
所望により、他の抗原を、任意の便利な順序で加えて、本明細書中に記載されるような多価ワクチン組成物を提供することもできる。
【０１０５】
本発明のワクチン調製物は、
（a）粘膜経路（例えば経口/バッカル/腸内/膣内/直腸内もしくは鼻内経路等）、
（b）非経口送達（例えば筋肉内もしくは皮下投与等）、又は
（c）経皮（transdermal）、皮内、上皮内、局所もしくは経皮（transcutaneous）送達
によって前記ワクチンを投与することにより、疾患に罹りやすいもしくは疾患に罹っている哺乳動物を保護又は治療するために用いることができる。
【０１０６】
また本発明は、本発明のワクチンを含む送達用デバイス、例えば皮内もしくは粘膜送達用のデバイス又は遺伝子銃等にも関する。適当な送達デバイスは当分野において周知である。
【０１０７】
本発明のワクチン調製物は場合により、上に挙げた経路を組み合わせて投与してもよい。
【０１０８】
本発明を、以下の実施例によって例示する。これらの実施例は、本発明を説明するものであって、限定するものではない。
【実施例１】
【０１０９】
実施例１-HIV/HSV免疫化
10匹のマウスで構成されたグループを、2週間間隔で2回（0日目と14日目に）、HIV抗原（国際公開第WO/0154719号（本明細書中に参照により組み込まれる）に記載されたgp120/nef-tat融合タンパク質）及び/又はHSV抗原gD2t（例えば国際公開第WO92/16231号を参照されたい）の組合せを用いて免疫した。4μgのgD2tと一緒に20μg のgp120及び4μgのnef-tatタンパク質を用いた。これらの抗原を、アジュバント「A」又は「B」のいずれかに含有させて製剤化した。「A」は、国際公開第WO95/17210号に記載されるようなQS21及び3D MPLを含む水中油滴型エマルションであり、「B」は、特許出願第WO/0023105号に記載されたような3D MPLとアルミニウム塩との組合せであった。いずれかもしくは両方のアジュバントのみを用いた陰性対照も含めた。追加免疫を行った2週間後（28日目）に動物を犠牲にし、血清を集めて、これらの製剤によって誘導された免疫応答を分析した。
【表１】
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【０１１０】
抗体反応
各グループの免疫したマウスから得た血清をそれぞれgp120-、Nef-、Tat-及びgD-特異的抗体反応について別々に分析した。標準的なELISA分析を用いた。このような方法は、本発明のワクチンに使用される抗原の適性を評価するために使用することができる。
【０１１１】
図１及び図２の結果は、HIV及びHSV抗原の同時送達、ならびにHIV及びHSV抗原の並行送達（異なる注射部位への）のいずれでも、各成分に対する免疫応答が生じることを示している。
【実施例２】
【０１１２】
実施例２-HIV/HPV免疫化
実施例１で用いたものと同じ汎用プロトコールを用いて、HIVとHPVとの組合せをテストした。これらの実験では、HSVのgD成分を、HPV16及びHPV18由来のL1 VLP（各VLPは2μg）に置き換えた。
【０１１３】
図３及び図４は、HPV16及び18のL1 VLPに対して生じた平均抗体力価を表す。図５及び図６は、HIV成分Nef、tat及びgp120に対して生じた平均中間値（midpoint）抗体力価を表す。
【０１１４】
図３〜６の結果は、HIV及びHPV抗原の同時送達、ならびにHIV及びHPV抗原の並行送達（異なる注射部位への）のいずれでも、各成分に対する免疫応答が生じることを示している。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】図１は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHSV gDt2に対する抗体反応を示す。
【図２】図２は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHSV gDt2に対する抗体反応を示す。
【図３】図３は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHPVに対する抗体反応を示す。
【図４】図４は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHPVに対する抗体反応を示す。
【図５】図５は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHPVに対する抗体反応を示す。
【図６】図６は、本発明の各種製剤におけるgp120、Nef、Tat及びHPVに対する抗体反応を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際公開パンフレット】
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【国際公開パンフレット（コレクトバージョン）】
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【国際調査報告】
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