(57)【要約】本発明は、式(I):【化１】2006504626.tif 000024の化合物（3-([([(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミノ)カルボニル]-アミノメチル)-N-エチルベンズアミド）、およびその塩および溶媒和化合物、それらの調製法、それら化合物を含む医薬組成物および治療におけるそれらの使用に関する。
2006504626.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物、その塩および溶媒和化合物。
【化１】
2006504626.tif 000015
【請求項２】
式(II)の化合物またはその塩をエチルアミンとカップリングさせることを含む、式(I)の化合物、その塩または溶媒和化合物の調製法。
【化２】
2006504626.tif 000016
【請求項３】
治療剤として用いる、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の有効量の化合物を投与することを含む、炎症性症状を患うまたは患い易いヒトまたは動物被験体を治療する方法。
【請求項５】
請求項１に記載の化合物および当該化合物用の生理学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項６】
式(II)の化合物。
【化３】
2006504626.tif 000017
【請求項７】
式(III)の化合物。
【化４】
2006504626.tif 000018
【請求項８】
式(IV)の化合物。
【化５】
2006504626.tif 000019
【請求項９】
式(VI)の化合物。
【化６】
2006504626.tif 000020
【請求項１０】
式(VII)の化合物。
【化７】
2006504626.tif 000021
【請求項１１】
式(VIBR)の化合物。
【化８】
2006504626.tif 000022
[式中、Aは保護アミノ基である]
【請求項１２】
式(VIB)の化合物。
【化９】
2006504626.tif 000023
[式中、Aは保護アミノ基である]
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規化合物、それを製造する方法、それを含有する医薬組成物、および治療におけるそれの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、組織傷害または微生物侵害に対する一次応答であり、内皮への白血球接着、血管外遊出および組織内活性化を特徴とする。白血球活性化は、毒性酸素種（スーパーオキシドアニオンなど）の産生、および顆粒産物（ペルオキシダーゼおよびプロテアーゼなど）の放出を生じ得る。循環中の白血球には、好中球、好酸球、好塩基球、単球およびリンパ球が含まれる。様々な炎症の形態は、様々な浸潤する白血球のタイプと関わりがあり、特定のプロファイルは組織内の接着分子、サイトカインおよび走化因子発現のプロファイルにより調節される。
【０００３】
白血球の一次機能は、宿主を細菌および寄生虫などの侵入生物から守ることにある。組織が一旦傷害を受けるかまたは感染すると、循環系から患部組織への白血球の局所補充を引き起こす一連の事象が起こる。白血球補充は、外来または死滅細胞の規則的な破壊および食作用が行われ、次いで組織が修復されかつ炎症性浸潤物が吸収されるように制御される。しかし、慢性炎症状態においては、補充が不適切であることも多く、吸収が適切に制御されず、その結果、炎症反応は組織の破壊をもたらす。
【０００４】
喘息の特徴である気管支の炎症は細胞介在免疫の特殊な形態を表し、T-ヘルパー2（Th2）リンパ球によって放出されるIL-4およびIL-5などのサイトカイン産物が、顆粒球、特に好酸球および、程度は低いが、好塩基球の蓄積と活性化の準備を整えるという証拠が増えている。好酸球は、細胞傷害性の塩基性タンパク質、前炎症メディエータおよび酸素ラジカルの放出を介して、粘膜障害をもたらしかつ気管支過敏性の原因となる機構を開始させる。従って、Th2細胞および好酸球の補充と活性化をブロックすることは、喘息において抗炎症性を有すると思われる。さらに、好酸球は、鼻炎、湿疹、過敏性腸症候群および寄生虫感染などの他の疾患型に関わることが指摘されている。
【０００５】
ケモカインは、白血球の流通および補充に関わる小タンパク質の大きなファミリーである（総説として、例えば、Luster, New Eng. J. Med., 338, 436-445 (1998)を参照）。ケモカインは広範囲の様々な細胞により放出され、好酸球、好塩基球、好中球、マクロファージ、TおよびBリンパ球を始めとする様々な細胞型を誘引しかつ活性化する作用を果たす。ケモカインには２つの大きなファミリー、CXC-(α)およびCC-(β)ケモカインがあり、ケモカインタンパク質のアミノ末端に近い２つの保存されたシステイン残基の間隔により分類される。ケモカインは、Gタンパク質共役型7回膜貫通ドメインタンパク質のファミリーに属する特定の細胞表面レセプターと結合する（総説は、例えばLuster, 1998を参照)。ケモカインレセプターが活性化すると、他の応答のなかでも、細胞内カルシウムの増加、細胞形状の変化、細胞接着分子発現の増加、脱顆粒、および細胞遊走（走化性）の促進が起こる。
【０００６】
現在、複数のCCケモカインレセプターが同定されていて、本発明にとって特に重要なものは、好酸球に、およびまた好塩基球、肥満細胞およびTh2細胞において主に発現されるCC-ケモカインレセプター-3（CCR-3）である。RANTES、MCP-3およびMCP-4などのCCR-3に作用するケモカインは、好酸球を補充しかつ活性化することが公知である。特に重要なのは、CCR-3と特異的に結合するエオタキシンおよびエオタキシン-2である。CCR-3ケモカインの局在と機能は、これらが喘息などのアレルギー疾患の発症に中心的な役割を果たすことを示す。このようにCCR-3は、炎症性アレルギー応答に関わる主な細胞型の全てに特異的に発現する。CCR-3に作用するケモカインは炎症性刺激に応答して産生し、そしてこれら細胞型を炎症部位に補充し、かつそれらを活性化する作用を果たす（例えば、Griffiths ら, J. Exp. Med., 179, 881-887 (1994)、Lloyd ら, J. Exp. Med., 191, 265-273 (2000)）。さらに、抗CCR-3モノクローナル抗体は、完全に好酸球とのエオタキシン相互作用を阻害する（Heath, H. ら, J. Clin. Invest. 99 (2), 178-184 (1997)）一方で、CCR-3特異的ケモカインであるエオタキシンに対する抗体は、喘息の動物モデルにおける気管支過敏性および肺好酸球増加症の両方を軽減させる（Gonzaloら, J. Exp. Med., 188, 157-167 (1998)）。このように、多方面の証拠は、CCR-3レセプターのアンタゴニストがある範囲の炎症性症状の治療にほぼ間違いなく利用し得ることを示す。
【０００７】
炎症性傷害における中心的役割に加えて、ケモカインおよびそのレセプターはまた感染性疾患においてもある役割を果たす。哺乳類動物サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルスおよびポックスウイルスは、ケモカインレセプター同族体を発現し、これらはRANTESおよびMCP-3レセプターなどのヒトCCケモカインにより活性化され得る（総説は、WellsおよびSchwartz, Curr. Opin. Biotech., 8, 741-748, 1997を参照）。さらに、CXCR-4、CCR-5およびCCR-3のなどのヒトケモカインレセプターは、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）などの微生物による哺乳類動物細胞の感染に対する補助レセプターとして作用し得る。従って、CCR-3アンタゴニストを始めとするケモカインレセプターアンタゴニストは、HIVによるCCR-3発現細胞の感染をブロックする上でまたはサイトメガロウイルスなどのウイルスによる免疫細胞応答の操作を防止する上で有用である。
【０００８】
国際特許出願公開番号WO 01/24786（Shionogi & Co. Ltd.）は、糖尿病を治療するための特定のアリールおよびヘテロアリール誘導体を開示している。WO 00/69830（Torrey Pines Institute for Molecular Studies）は、特定のジアザ環式化合物およびそれを含有するライブラリーを生物学的スクリーニング用に開示している。WO 00/18767（Neurogen Corporation）は、特定のピペラジン誘導体をドーパミンD4レセプターアンタゴニストとして開示している。米国特許第6,031,097号およびWO 99/21848（Neurogen Corporation）は特定のアミノイソキノリン誘導体をドーパミンレセプターリガンドとして開示している。WO 99/06384（Recordati Industria Chimica）は下部尿路の神経筋機能不全の治療用に有用なピペラジン誘導体を開示している。WO 98/56771（Schering Aktiengesellschaft）は特定のピペラジン誘導体を抗炎症剤として開示している。WO 97/47601（Yoshitomi Pharmaceutical Industries Ltd.）は特定の縮合ヘテロ環式化合物をドーパミンD-レセプター遮断薬として開示している。WO 96/39386（Schering Corporation）は特定のピペリジン誘導体をニューロキニンアンタゴニストとして開示している。WO 96/02534（Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik GmbH）はヘリコバクター細菌を抑制するために有用な特定のピペラジンチオピリジンを開示している。WO 95/32196（Merck Sharp & Dohme Limited）は特定のピペラジン、ピペリジン、およびテトラヒドロピリジン誘導体を5-HT1D-αアンタゴニストとして開示している。米国特許第5,389,635号（E.I. Du Pont de Nemours and Company）は特定の置換イミダゾールをアンギオテンシン-IIアンタゴニストとして開示している。欧州特許出願公開番号0 306 440（Schering Aktiengesellschaft）は特定のイミダゾール誘導体を心血管薬として開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
この度、本発明者らはCCR-3アンタゴニストである新規のグループの化合物を見出した。この化合物は好酸球の遊走／走化性を遮断し、その結果、抗炎症特性を有する。従って、この化合物は、特に好酸球、好塩基球肥満細胞およびTh2-細胞型が関与する疾患、限定されるものでないが、気管支喘息、アレルギー性鼻炎およびアトピー性皮膚炎を始めとするアレルギー性疾患においてこのような細胞が誘発する組織障害から、これらの細胞を特に保護する治療効果を有する可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、本発明の一態様により式(I)の化合物およびその塩および溶媒和化合物が提供される。
【化１】
2006504626.tif 000003
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
式(I)は、3-([([(2S)-4-(3、4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミノ)カルボニル]-アミノメチル)-N-エチルベンズアミドである。
【００１２】
式(I)の化合物の適切な塩には、生理学的に許容される塩および生理学的に許容されないが式(I)の化合物およびその生理学的に許容される塩を調製するのに有用であり得る塩が含まれる。適宜、酸付加塩は無機酸または有機酸から誘導することができ、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、1-ヒドロキシ-2-ナフトエ酸塩、パモ酸塩、メタンスルホン酸塩、ギ酸塩またはトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。
【００１３】
溶媒和化合物の例は水和物を含む。
【００１４】
式(I)の化合物、その塩および溶媒和化合物は、本発明のさらなる態様を構成する、下記の方法論により調製することができる。
【００１５】
本発明に準拠した式(I)の化合物の調製法は、式(II)の化合物またはその塩をエチルアミンとカップリングさせることを含む。
【化２】
2006504626.tif 000004
【００１６】
その後、適宜、以下の1以上の工程を実施し得る:
(i)いずれかの保護基の除去、
(ii)形成した化合物の適切な塩または溶媒和化合物の調製。
【００１７】
式(II)の化合物のカップリングは、あらゆる適切な溶媒、例えば、極性有機溶媒、例えば、テトラヒドロフランとN,N-ジメチルホルムアミドの混合物等中で、適切な脱水剤、例えば、カルボジイミド剤等、例えば、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミドハイドロクロライドの存在下、かつ適宜、適切な活性化剤、例えば、活性化ヒドロキシ化合物、例えば、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール等の存在下で、かつ適宜、塩基、例えば3級アミン等、例えばN,N-ジイソプロピルエチルアミンの存在下で、所望の生成物を適切な割合で形成するあらゆる温度での従来のカップリング条件下、適切な反応時間、例えば12-24時間かけて行う。
【００１８】
適切な反応温度には、18℃〜25℃の範囲が含まれる。
【００１９】
反応生成物は、従来の方法を用いて単離精製する。
【００２０】
式(II)の化合物は、式(III)の化合物を加水分解することにより調製することができる。
【化３】
2006504626.tif 000005
【００２１】
加水分解は、適切な溶媒、例えば、アルコール水溶液、例えば、水とメタノールの混合物中、適切な触媒、例えば塩基水溶液、例えば水酸化ナトリウム水溶液の存在下、適切な温度、例えば18℃〜25℃の範囲の温度で、適切な時間、例えば12-24時間かけて行う。
【００２２】
式(III)の化合物は、式(IV)の化合物を式(V)の化合物と反応させることにより調製することができる。
【化４】
2006504626.tif 000006
【００２３】
式(IV)の化合物と式(V)の化合物の反応は、適切な溶媒、例えば極性有機溶媒、例えばN,N-ジメチルホルムアミドおよび適切な塩基、例えば3級アミン、例えばN,N-ジイソプロピルエチルアミン、適切な温度、例えば18℃〜25℃の範囲にある温度で、適切な時間、例えば60-100時間かけて行う。
【００２４】
式(IV)の化合物は、4-ニトロフェニルクロロホルメートと反応させることにより式(VI)の化合物から調製することができる。
【化５】
2006504626.tif 000007
【００２５】
式(VI)の化合物と4-ニトロフェニルクロロホルメートの反応は、適切な溶媒、例えば不活性有機溶媒例えばジクロロメタン中、適切な塩基、例えば3級アミン、例えばトリエチルアミンの存在下、適切な温度、例えば-5℃〜+5℃の範囲にある温度で、適切な時間、例えば3-5時間かけて行う。
【００２６】
式(VI)の化合物は、反応(a)、反応(b)、または反応(c)により調製することができる。
【００２７】
反応(a):式(IX)の化合物と式(X)の化合物の反応
【化６】
2006504626.tif 000008
【００２８】
式中、Aは、保護アミノ基、好ましくはフタルイミドであり、次いでアミノ基を脱保護して、式(VIR)の化合物を得る。
【化７】
2006504626.tif 000009
【００２９】
次いで式(VIR)の化合物の得られた両エナンチオマーの分割を行う。
【００３０】
または、
反応(b):上記に定義された式(IX)の化合物と式(XA)の化合物の反応
【化８】
2006504626.tif 000010
【００３１】
式中、Aは、式(X)に対して上記に定義されたものであり、次いでアミノ基の脱保護により、式(VI)の化合物を得る。
【００３２】
反応(c):式(VII)の化合物の加水分解
【化９】
2006504626.tif 000011
【００３３】
次いで式(VIR)の化合物の得られた両エナンチオマーの分割を行う。
【００３４】
反応(a)と(b)の両反応の場合、式(IX)の化合物と式(X)もしくは(XA)の化合物の反応における中間体ジオール(VIBR)と(VIB)の環化は、一般に、以下のMitsunobu条件下で行われる。
【００３５】
一般に、式(IX)の化合物および式(X)もしくは式(XA)の化合物の混合物を適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランに溶解し、好ましくは20-24時間、適切な温度、好ましくは溶媒の還流温度で、不活性雰囲気下、好ましくは窒素雰囲気下で攪拌する。その後、さらに溶媒を加え、混合物を好ましくは0-5℃まで冷却する。適切なホスフィン、適切なトリフェニルホスフィンを加え、混合物を固体が全て溶解するまで攪拌する。その後、適切なアゾ化合物、適切なジイソプロピルアゾジカルボキシレートを、好ましくは、10-15分かけて添加するが、温度は7℃未満に保持する。混合物を一定時間、好ましくは2-3時間静置し、その後、好ましくは、20-25℃まで温める。さらに一定時間、好ましくは4-6時間静置した後、さらにホスフィンおよびアゾ化合物を加える。さらに一定時間、好ましくは20-24時間静置した後、ほぼ乾燥するまで反応混合物を濃縮する。適切なアルコール、好ましくはプロパン-2-オールを加え、濃縮工程を繰り返す。即ち、その後、当該アルコール添加および濃縮工程を繰り返す。その後、さらにアルコールを添加し、混合物を、好ましくは65-75℃の温度にまで加熱する。適切な時間、好ましくは20-45分後、得られたスラリーを、好ましくは、20-25℃まで冷却し、その後、好ましくは1.5-3時間静置し、その後、生成物を濾別する。濾過固形物をさらにアルコールで洗浄し、その後真空下、35-45℃で乾燥して、式(VIR)または式(VI)の化合物の保護型をそれぞれ得た。
【００３６】
生成物から保護基を除去するのは、一般に、以下のように行う。適切な極性溶媒、好ましくは水中の式(VIR)または式(VI)の化合物の保護型のスラリーを、高温、好ましくは70-75℃まで加熱し、その後、濃無機酸、好ましくは濃硫酸を滴下処理する。混合物をその後、高温、好ましくは溶媒還流温度で、適切な時間、好ましくは20-24時間で加熱し、その後、反応混合物を20-25℃まで冷却し、その後、適切な無極性溶媒、好ましくはジクロロメタンで処理する。その後、塩基、好ましくは0.880のアンモニア溶液を、20-25℃の温度を保持しながら滴下する。その後、さらに無極性溶媒を加え、その後、水相を分離し、さらに無極性溶媒で抽出する。合わせた有機相を水で洗浄し、その後、乾燥するまで濃縮する。残渣を再溶解し、無極性溶媒を蒸発させて式(VIR)または式(VI)の化合物を得る。
【００３７】
また、上記の式(VIR)または式(VI)の化合物の保護型の調製法は2段階で行うこともでき、この場合、式(VIBR)または式(VIB)の中間体化合物をそれぞれ単離する。
【化１０】
2006504626.tif 000012
【００３８】
式中、Aは式(X)および(XA)に対して上記に定義されたものである。
【００３９】
一般に、式(IX)の化合物および式(X)もしくは式(XA)の化合物の混合物を、適切な溶媒、例えばテトラヒドロフランに溶解し、好ましくは20-24時間、適切な温度、好ましくは溶媒の還流温度、不活性雰囲気下、好ましくは窒素雰囲気下で攪拌する。さらに式(IX)の化合物を加え、混合物を適切な温度、好ましくは溶媒の還流温度で、不活性雰囲気下、好ましくは窒素雰囲気下で、適切な時間、好ましくは3-6時間加熱する。その後、反応混合物を好ましくは20-25℃まで冷却し、化合物を適切な助溶媒、好ましくはジイソプロピルエーテルを加えることにより沈殿させる。式(VIBR)または式(VIB)の化合物をそれぞれ濾別し、さらに助溶媒で洗浄し、真空下で乾燥させる。
【００４０】
その後、式(VIR)または式(VI)の化合物の保護型を、上記の式(IX)と式(X)もしくは(XA)の化合物との反応条件と類似の条件下(しかし、ホスフィンおよびアゾ化合物の添加前の還流時間は省略する)で、式(VIBR)または式(VIB)の化合物から調製することができる。
【００４１】
一般に反応(c)は、適切な溶媒、例えばメタノールと水の混合物に溶解した式(VII)の化合物の溶液を攪拌し、適切な塩基、例えば炭酸カリウムを添加することにより行われる。混合物を適切な温度、例えば20-25℃の範囲の温度で、適切な時間、例えば16-20時間で攪拌し、次いで有機溶媒の除去を真空下で行う。その後、水を加え、混合物を適切な有機溶媒、例えば酢酸エチルで抽出する。合わせた有機相を水および飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、その後、適切な乾燥剤、例えば硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で蒸発させる。その後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィーで精製する。
【００４２】
ラセミ生成物すなわち式(VIR)の化合物から式(VI)の化合物の分割は、当業者に周知の技術、例えば分取キラル高速液体クロマトグラフィー(キラルHPLC)またはジアステレオマー塩の分別結晶を用いることにより行うことができる。
【００４３】
式(VII)の化合物は、式(VIII)の化合物を3、4-ジクロロベンジルクロライドと反応させることにより調製できる。
【化１１】
2006504626.tif 000013
【００４４】
式(VIII)の化合物と3,4-ジクロロベンジルクロライドの反応は、一般に、適切な溶媒、例えばN,N-ジメチルホルムアミド中、不活性雰囲気下、例えば窒素雰囲気下、適切な塩基、例えば炭酸カリウム、および適切な活性化剤、例えばヨウ化ナトリウムを加えることにより行われる。その後、混合物を、適切な温度、例えば20-25℃の範囲における温度で、適切な時間、例えば16-20時間攪拌し、その後、揮発成分を真空下で除去する。
【００４５】
式(VIII)の化合物は、適切な有機溶媒、例えばメタノールに溶解したモルホリン-2-イルメチルアミン溶液を、不活性雰囲気下、例えば窒素雰囲気下で、適切な有機溶媒、例えばエーテルに溶解したエチル-α,α,α-トリフルオロアセテート溶液で処理することにより調製する。その後、混合物を適切な時間、例えば20-40分、適切な温度、例えば20-25℃の範囲における温度で攪拌し、揮発成分を真空下で除去する。その後、残渣を、適切な有機溶媒、例えばメタノールに溶解し、揮発成分を真空下で除去する。
【００４６】
式(V)の化合物は公知であり、従来の方法、例えばEur. J. Med. Chem. (1993)、28(7-8)、625-32に記載の方法により調製できる。エチルアミン、4-ニトロフェニルクロロホルメート、2-[(3、4-ジクロロベンジル)アミノ]エタノール、2-(オキシラン-2-イルメチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン、3,4-ジクロロベンジルクロライド、モルホリン-2-イルメチルアミン、2-[(3,4-ジクロロベンジル)アミノ]エタノールおよびエチル-α,α,α-トリフルオロアセテートは公知で市販の化合物であるかまたは公知の手法、例えばJ. March, Advanced Organic Chemistry, 3rd Edition (1985), Wiley Interscience等の合成技術の標準的な参考書に開示されている手法から類推して調製できる。
【００４７】
式(II)、(III)、(IV)、(VI)、(VII)、(VIBR)および(VIB)の化合物は新規であると考えられる。
【００４８】
したがって、式(II)の化合物が提供される。
【００４９】
また式(III)の化合物も提供する。
【００５０】
また式(IV)の化合物も提供する。
【００５１】
また式(VI)の化合物も提供する。
【００５２】
また式(VII)の化合物も提供する。
【００５３】
また式(VIBR)の化合物も提供する。
【００５４】
また式(VIB)の化合物も提供する。
【００５５】
上記のあらゆる反応において、適切な保護基は、当技術分野において従来用いられているものである。このような保護基の形成および除去の方法は、保護される分子に適切な従来法、例えば、P J Kocienski, Protecting Groups, (1994), Thiemeのような合成技術の標準的な参考書に論述されている方法である。
【００５６】
上記のあらゆる反応または方法に対して、加熱と冷却の従来の方法、例えば、電気ホットプレートおよび氷/塩浴をそれぞれ用いることができる。従来の精製法、例えば、結晶化およびカラムクロマトグラフィーを、必要に応じて用いることができる。
【００５７】
式(I)の化合物の塩および溶媒和化合物は、式(I)の化合物またはその適切な塩もしくは溶媒和化合物から調製でき、従来の手法により単離することができる。
【００５８】
本発明の化合物は、以下のアッセイにしたがって、in vitroの生物学的な活性を試験することができる。
【００５９】
(a)  CCR-3結合アッセイ
CCR-3競争結合SPA（シンチレーション近接アッセイ）を用いて新規化合物のCCR-3に対するアフィニティを評価した。CCR-3を安定して発現するK562細胞から調製した膜（2.5μg/ウエル）を0.25mg/ウエル麦芽凝集素SPAビーズ（Amersham）と混合し、結合バッファー（HEPES 50mM、CaCl2 1mM、MgCl2 5mM、0.5％ BSA）中で4℃にて1.5時間インキュベートした。インキュベーションの後、20pMの[125I]エオタキシン（Amersham）および濃度を順次高くした化合物（1pM〜30μM）を加え、96ウエルプレート中で22℃にて2時間インキュベートし、次いでMicrobetaプレートカウンター上でカウントした。全アッセイ容積は100μlであった。競合結合データは、データを４つのパラメータのロジスチック式（logistic equation）に適合させることにより分析した。データは、少なくとも２つの実験から得た平均pIC50値（[125I]エオタキシン結合を50％だけ阻害する化合物濃度の対数に負号をつけたもの）として表した。
【００６０】
(b)  好酸球走化性アッセイ
化合物の好酸球走化性に対する阻害効果を評価した。好酸球は、ヒト末梢血から標準CD16細胞欠乏により上記のMiltenyi細胞分離カラムおよび磁性Super Macsマグネット（Motegi & Kita, 1998; J.Immunology. 161:4340-6）を用いて精製した。細胞をRPMI 1640/10％ FCS溶液中に再懸濁し、カルセイン-AM（Molecular Probes）を用いて37℃にて30分間インキュベートした。インキュベーションの後、好酸球を400gにて5分間遠心分離し、RPMI/FCS中に2.2x106/mlにて再懸濁した。次いで細胞を、化合物の濃度を高くしながら（1pM〜30μM）存在させて、37℃にて30分間インキュベートした。対照応答として、細胞をRPMI/FCSだけを用いてインキュベートした。アゴニストエオタキシン（EC80濃度）を96ウエル走化性プレート（5μmフィルター：Receptor Technologies）の下方チャンバー(lower chamber)に加えた。好酸球（50μlの2x106/ml細胞）をフィルタープレートのトップチャンバーに加え、37℃にて45分間インキュベートした。走化性フィルターのトップに残留する細胞を取除いて、蛍光プレートリーダー上のプレートを読み取って遊走した好酸球数を数値化した。データを４つのパラメータロジスチック式に適合させ、化合物の好酸球走化性に対する効果について阻害曲線を解析した。機能的pKi値（fpKi）は、下記の式：
【数１】
2006504626.tif 000014
【００６１】
を用いて求めた（Lazareno & Birdsall, 1995. Br.J.Pharmacol 109: 1110-9）。
【００６２】
本発明の化合物を、CCR-3結合および／または好酸球走化性アッセイ（それぞれアッセイ(a)および(b)）で試験した。本発明の化合物をCCR-3結合アッセイで試験すると、9.2のpIC50値を有していた。CCR-3好酸球走化性アッセイで試験した本発明の化合物は、10.0のfpKi値を有していた。
【００６３】
本発明の化合物が潜在的に有効な抗炎症効能を有する病状の例には、気管支炎（例えば慢性気管支炎）、気管支拡張症、喘息（例えばアレルゲンが誘発する喘息性反応）、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、嚢胞性線維症、副鼻腔炎および鼻炎などの気道の疾患が含まれる。
【００６４】
また、上記病状の例は、炎症性腸疾患（例えば、クローン病または潰瘍性大腸炎）を始めとする腸炎症性疾患などの胃腸管疾患および放射線曝露またはアレルゲン曝露に伴う二次的腸炎症性疾患も含む。
【００６５】
さらに本発明の化合物を用いて、腎炎；乾癬、湿疹、アレルギー性皮膚炎および過敏性反応などの皮膚病；ならびに炎症性成分を有する中枢神経系の疾患（例えばアルツハイマー病、髄膜炎、多発性硬化症）、HIVおよびAIDS痴呆を治療することができる。
【００６６】
本発明の化合物はまた鼻ポリープ症、結膜炎またはそう痒症の治療にも利用することもできる。
【００６７】
本発明の化合物が潜在的に有効な効能を有する病状のさらなる例には、アテローム性動脈硬化症などの心血管症状、末梢血管疾患、および特発性好酸球増多症候群が含まれる。
【００６８】
本発明の化合物は、免疫抑制薬として有用であり、従って移植後の同種移植組織拒絶、慢性関節リウマチおよび糖尿病などの自己免疫疾患の治療に用途がある。
【００６９】
本発明の化合物はまた、転移の抑制に有用でもある。
【００７０】
特に関心のある疾患には、喘息、COPDならびに季節性および通年性鼻炎に関わる上気道の炎症性疾患が含まれる。
【００７１】
本明細書にて処置または治療の意味は、確立された症状の治療ならびにその予防を意味するとして当業者は理解するであろう。
【００７２】
上記のように、式(I)の化合物は治療剤として有用である。
【００７３】
従って、さらなる本発明の態様として、有効な治療剤として用いる式(I)の化合物またはその生理学的に許容される塩もしくは溶媒和化合物が提供される。
【００７４】
それ故にまた、炎症性症状、例えば喘息または鼻炎の治療に用いる式(I)の化合物またはその生理学的に許容される塩または溶媒和化合物も提供される。
【００７５】
本発明の他の態様によれば、炎症性症状、例えば喘息または鼻炎の治療用医薬品を製造するための式(I)の化合物またはその生理学的に許容される塩または溶媒和化合物の使用も提供される。
【００７６】
さらなるまたは代わりの態様においては、炎症性症状、例えば喘息または鼻炎を患うまたは患い易いヒトまたは動物被験体を治療する方法であって、有効量の式(I)の化合物またはその生理学的に許容される塩または溶媒和化合物を投与することを含む上記方法が提供される。
【００７７】
本発明による化合物は、あらゆる好都合な方法で投与するために製剤化することができる。
【００７８】
従ってさらに、式(I)の化合物、またはその生理学的に許容される塩もしくは溶媒和化合物を含み、および、１以上の生理学的に許容される希釈剤もしくは担体を含んでもよい医薬組成物が提供される。
【００７９】
さらに、式(I)の化合物またはその生理学的に許容される塩もしくは溶媒和化合物に１以上の生理学的に許容される希釈剤もしくは担体を加えて混合することを含む医薬製剤を製造する方法も提供される。
【００８０】
本発明による化合物は、例えば経口、吸入、鼻腔内、バッカル、非経口または直腸投与用に、好ましくは経口投与用に製剤化することができる。
【００８１】
経口投与用錠剤およびカプセルは、結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、デンプン漿剤（mucilage of starch）、セルロースもしくはポリビニルピロリドン；フィラー、例えば、ラクトース、微結晶セルロース、糖、トウモロコシ-デンプン、リン酸カルシウムもしくはソルビトール；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールもしくはシリカ；崩壊剤、例えば、ジャガイモデンプン、クロスカルメロースナトリウムもしくはデンプングリコール酸ナトリウム；または湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムなどの従来の賦形剤を含有してもよい。錠剤は当技術分野で周知の方法によりコーティングされていてもよい。
【００８２】
経口液製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、乳濁液、シロップまたはエリキシルの形態であってもよいしまたは使用前に水その他の適切なビヒクルで構成させるために乾燥品として与えられてもよい。かかる液体製剤は、懸濁剤、例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロース、グルコース/糖シロップ、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用脂肪；乳化剤、例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含み得る）、例えばアーモンド油、分留ココナッツ油、油状エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコール；または保存剤、例えば、p-ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸などの従来の添加物を含有してもよい。製剤はまた、適切にバッファー塩、香料、着色剤および／または甘味剤（例えば、マンニトール）を含有してもよい。
【００８３】
バッカル投与の場合には、組成物は従来の方法で製剤した錠剤またはトローチ剤の形態をとってもよい。
【００８４】
化合物はまた、例えばココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含有する座薬として製剤することもできる。
【００８５】
本発明による化合物はまた、ボーラス注射または連続輸液による非経口投与用に製剤してもよく、単位用量形態で、例えばアンプル、バイアル、小容量輸液または予め充填したシリンジとしてまたは多用量容器に保存剤を加えて提供してもよい。組成物は、水性または非水性ビヒクル中の溶液、懸濁液、または乳濁液などの形態をとってもよく、そして抗酸化剤、バッファー、抗微生物剤および／または張性調節剤などの補助剤を含有してもよい。あるいは、有効成分が、使用前に、例えば無菌の、発熱物質を含まない適切なビヒクルで構成させるために粉末形状であってもよい。無菌粉末を無菌状態で個々の無菌容器中に充填することによりまたは無菌溶液を無菌状態でそれぞれの容器中に充填し凍結乾燥することにより、乾燥固体剤形を調製してもよい。
【００８６】
本発明による化合物および医薬組成物はまた、他の治療剤、例えば抗ヒスタミン剤、抗コリン作用剤、副腎皮質ステロイドなどの抗炎症剤、例えば、プロピオン酸フルチカゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、トリアムシノロンアセトニドまたはブデソニド；または非ステロイド抗炎症剤（NSAIDs）、例えばクロモグリク酸ナトリウム、ネドクロミルナトリウム、PDE-4インヒビター、ロイコトリエンアンタゴニスト、INOSインヒビター、トリプターゼおよびエラスターゼインヒビター、β-2インテグリンアンタゴニストおよびアデノシン2aアゴニスト；またはサルメテロール、サルブタモール、フォルモテロール、フェノテロールまたはテルブタリンおよびそれらの塩などのβアドレナリン作動剤；または、抗感染性剤、例えば抗菌剤および抗ウイルス剤と一緒に使用してもよい。本発明の化合物を吸入または鼻腔内経路により通常投与される他の治療剤と一緒に投与する場合、得られる医薬組成物を吸入または鼻腔内経路により投与し得ることは理解されるであろう。
【００８７】
本発明の化合物は、例えば0.001〜500mg/kg体重、好ましくは0.01〜500mg/kg体重、さらに好ましくは0.01〜100mg/kg体重の量で、かつ適切な頻度で、例えば毎日1〜4回投与することが好都合となり得る。正確な投与管理は勿論、患者の治療徴候、年齢および症状などの因子、ならびに選ばれる特定の投与経路に依存するであろう。
【００８８】
本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、さまざまな語尾変化を含めて用語「含む（comprise）」は、示されたものもしくはステップまたはものもしくはステップのグループを含むことを意味するが、他の任意のものもしくはステップまたはものもしくはステップのグループを除外することを意味しないと理解されるであろう。
【実施例】
【００８９】
一般的実験の詳細
LC/MSシステム
この系は、3μm ABZ+PLUS（3.3cmx4.6mm内径）カラムを使用し、溶媒Aとして0.1％v/vギ酸+0.077％w/v酢酸アンモニウム水溶液；および溶媒Bとして95:5アセトニトリル：水+0.05％v/vギ酸を用いて、毎分3mlの流速にて溶出した。次の勾配プロトコルを用いた：100％ A、0.7分間；A+B 混合物、3.5分間で勾配プロファイル0-100％のB；100％のBにて1.1分間ホールド；0.2分間で100％のAに戻る。
【００９０】
サーモスプレーマススペクトル
サーモスプレーマススペクトルを、HP5989Aエンジンマススペクトロメータ、+veサーモスプレー、熱源温度250℃、プローブ温度120℃(stem)、190℃(tip)、検出マスレンジ100-850a.m.u.にて測定した。流速が0.7ml/分で、65%のメタノールと35%の0.05M酢酸アンモニウム水溶液を含む10μlの溶媒混合物中に化合物を注入した。
【００９１】
固相抽出(イオン交換)
「SCX」は、Isolute Flash SCX-2スルホン酸固相抽出カートリッジを意味する。
【００９２】
温度の単位は全て℃である。
【００９３】
説明
説明1:2,2,2-トリフルオロ-N-(モルホリン-2-イルメチル)アセトアミド
メタノール(70ml)に溶解したモルホリン-2-イルメチルアミン(3.1g)の攪拌溶液に窒素下で、エチル-α，α，α-トリフルオロアセテート(5mlを20mlのエーテルに溶解)のエーテル溶液を加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水およびブラインで洗浄し、乾燥した。混合物を30分、22℃で攪拌し、その後、真空下で揮発分を全て除去した。残渣をメタノール(10ml)に溶解し、再度、揮発分を真空下で除去して、表題化合物を白色のカリカリいう発泡体(crunchy foam)(4.9g)として得た。
【００９４】
サーモスプレーマススペクトル m/z 213 [MH+]。
【００９５】
説明2:N-[4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチル-2,2,2-トリフルオロアセトアミド
窒素下、N,N-ジメチルホルムアミド(50ml)に溶解した説明1(3.3g)の攪拌溶液に炭酸カリウム(2.46g)およびヨウ化ナトリウム(2.12g)を加えた。N,N-ジメチルホルムアミド(10ml)に溶解した3,4-ジクロロベンジルクロライド溶液(2ml)を混合物に滴下した。混合物を22℃で、18時間攪拌し、その後、真空下で揮発分を除去した。残渣をジクロロメタン(100ml)と飽和炭酸ナトリウム水溶液(50ml)に分配した。その後、有機相を新たな飽和炭酸ナトリウム水溶液(2x50ml)と水(50ml)で洗浄し、その後、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、真空下で溶媒を蒸発させて黄白色のオイルを得た。シクロヘキサンに溶解した25%の酢酸エチルで溶出する90gのシリカカートリッジを用いたBiotageフラッシュクロマトグラフィーでオイルを精製して、表題化合物を無色のオイル(2.97g)として得た。
【００９６】
LC/MS(システム A)保持時間2.63分、マススペクトル m/z 371[MH+]。
【００９７】
説明3:[4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミン
メタノール(15ml)および水(5ml)に溶解した説明2(2.97g)の攪拌溶液に炭酸カリウム(5.53g)を加えた。混合物を22℃で、18時間攪拌し、その後、メタノールを真空下で除去した。水(25ml)を加え、混合物を酢酸エチル(3x30ml)で抽出した。合わせた有機相を水(5ml)および飽和塩化ナトリウム水溶液(10ml)で洗浄し、その後、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、溶媒を真空下で蒸発させて、黄白色のオイルを得た。75:8:1のジクロロメタン/エタノール/0.880のアンモニア溶液で溶出する90gシリカカートリッジを用いたBiotageフラッシュクロマトグラフィーでオイルを精製した。必要な画分を合わせ、溶媒を真空下で蒸発させて表題化合物を無色のオイル(1.85g)として得た。
【００９８】
LC/MS(システム A)保持時間1.77分、マススペクトル m/z 275[MH+]。
【００９９】
説明4:[4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミン(代替合成)
2-[(3,4-ジクロロベンジル)アミノ]エタノール(Chem Abs No.40172-06-3、0.980g)と2-(オキシラン-2-イルメチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン(1.10g)の混合物を80℃、窒素下で3時間加熱した。得られた固形塊を濃硫酸(1.5ml)で処理し、その後、150℃で、24時間攪拌した。混合物を水(100ml)で処理し、その後、酢酸エチル(2x100ml)で洗浄した。浅黒い水相を5Mの水酸化ナトリウム水溶液を用いて約pH12まで塩基性にし、その後、酢酸エチル(2x100ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を水およびブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、真空下で濃縮して表題化合物を褐色オイル(1.02g)として得た。
【０１００】
LC-MS(システム A):保持時間1.6分。
【０１０１】
説明5:1-[(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミン
説明3(ラセミ混合物,8g)を分取キラル-HPLCにより単一のエナンチオマーに分割した。2" x22cm Chiralpak AD 20μmカラム、Merck self pack DAC system、95:5:0.1(v/v)のヘプタン:無水エタノール:ジエチルアミン(流速:40分かけて55ml/分、UV検出225nm)にて溶出;サンプルロード調製:20mlの3:2(v/v)無水エタノール:システム溶出液に溶解した400mgのサンプルを用いて分割を行った。
【０１０２】
以下のように表題化合物(2.49g)を得た:分取HPLC保持時間23.0分。
【０１０３】
説明5(代替手法)
水(8.5ml)中の説明7(1.00g)のスラリーを75℃にまで加熱し、その後、濃硫酸(2.5ml)で滴下処理した。その後、混合物を還流加熱した。23時間後、反応混合物を22℃まで冷却し、その後、ジクロロメタン(6ml)で処理した。その後、0.880のアンモニア溶液(7ml)を冷却しながら滴下した。さらにジクロロメタン(10ml)を加えた。水相を分離し、さらにジクロロメタン(10ml)で抽出した。合わせた有機相を水(5ml)で洗浄し、その後、乾燥するまで濃縮した。残渣をジクロロメタンに再溶解し、溶媒を再蒸発させて生成物をオイル(662mg)として得た。
【０１０４】
説明6:D-酒石酸と1-[(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メタンアミンの1:1の塩
説明3(0.613g)をメタノール(12.3ml)に溶解した。D-酒石酸(0.335g)を加え、スラリーを50分間、還流加熱した。混合物を0-5℃まで冷却し、沈殿物を濾別して、表題化合物を白色固体(0.4g)として得た。
【０１０５】
ee:76%ee。
【０１０６】
キラル分析 HPLC (Chiralpak AD カラム、4.6x250mm、50:50:0.1のMeOH:EtOH:ブチルアミンで溶出、流速0.5ml/分、220nmでUV検出)、保持時間8.9分。
【０１０７】
説明7:2-[4-(3,4-ジクロロ-ベンジル)-モルホリン-2-イルメチル]-イソインドール-1,3-ジオン
テトラヒドロフラン(3.3ml)に溶解した2-[(3,4-ジクロロベンジル)アミノ]エタノール(2.038g)と(S)-2-(オキシラン-2-イルメチル)-1H-イソインドール-1,3(2H)-ジオン(2.032g)の混合物を攪拌し、窒素下、還流加熱した。21.5時間後、さらにテトラヒドロフラン(12.5ml)を添加し、混合物を3℃まで冷却した。トリフェニルホスフィン(2.793g)を加え、固体が全て溶解するまで混合物を攪拌した。その後、温度を7℃未満に保持しながら12分かけてジイソプロピルアゾジカルボキシレート(2.1ml)を加えた。2.25時間後、混合物を22℃まで温めた。5.3時間後、さらにトリフェニルホスフィン(121mg)およびジイソプロピルアゾジカルボキシレート(0.09ml)を加えた。22.5時間後、反応混合物をほとんど乾燥するまで濃縮した。プロパン-2-オール(12ml)を加え、濃縮を繰り返し、これをもう一度繰り返した。さらにプロパン-2-オール(12ml)を加え、混合物を70℃まで加熱した。0.5時間後、スラリーを22℃まで冷却し、その後さらに2時間後、生成物を濾過により集めた。この固体をプロパン-2-オール(2x4ml)で洗浄し、その後、真空下、40℃で乾燥して、生成物(2.622g)を得た。
【０１０８】
説明8:4-ニトロフェニル[(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルカルバメート
無水ジクロロメタン(10ml)に溶解した4-ニトロフェニルクロロホルメート(2.92g)溶液に、0℃、窒素下で、無水ジクロロメタン(15ml)に溶解した説明5(4.0g)およびトリエチルアミン(2.07ml)の溶液を10分かけて滴下した。混合物を室温にまで温め、2.5時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、シクロヘキサンに溶解した25-50%酢酸エチルにて溶出するシリカゲルBiotageフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製して表題化合物(3.8g)を得た。
【０１０９】
LC-MS(システム A)保持時間3.1分。マススペクトル m/z 440[MH+]。
【０１１０】
説明9:メチル3-([([(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミノ)カルボニル]アミノメチル)ベンゾエート
N,N-ジメチルホルムアミド(4ml)に溶解した3-アミノメチル-安息香酸メチルエステル(0.1817g)(Eur.J.Med.Chem.1993、28(7-8)、624-632)の溶液に、攪拌しながら、N,N-ジメチルホルムアミド(4ml)に溶解した説明8(0.4612g)の溶液を加えた。N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.365ml)を加え、混合物を20℃で、4時間攪拌した。さらに67時間静置させた後、混合物をメタノール(約5ml)で希釈し、メタノールで前設定された2x10g SCXイオン交換カートリッジ(IST Isolute Flash SCX-2)にかけた。カートリッジをメタノールおよび10%の0.880のアンモニアメタノール溶液で溶出し、最初のアンモニア画分を合わせ、溶媒を真空下で蒸発させた。200:8:1のジクロロメタン/エタノール/0.880のアンモニア溶液で溶出したシリカゲルBiotage(登録商標)フラッシュクロマトグラフィーにより、表題化合物(0.4237g)を黄白色ゴムとして得た。
【０１１１】
LC/MS(システム A):保持時間=2.59分、m/z 466,468[MH+]。
【０１１２】
説明10:3-([([(2S)-4-(3、4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミノ)カルボニル]アミノメチル)安息香酸
メタノール(10ml)および温めたプロパン-2-オール(7ml)で溶解した説明9(0.3869g)の攪拌溶液に2Mの水酸化ナトリウム水溶液(0.85ml)および水(5ml)を加えた。混合物を20℃で、20時間攪拌し、その後、溶媒を真空下で蒸発させると、白色固体が残存した。固体を水に再溶解し、溶液のpHを2Mの塩酸水溶液を加えることによりおよそ6にまで調整した。メタノールで前設定した2x10g SCXイオン交換カートリッジ(IST Isolute Flash SCX-2)に混合物を適用した。カートリッジをメタノールおよびメタノールに溶解した5%のトリエチルアミンで溶出した。合わせた最初のメタノール画分中に溶出された生成物が得られ、溶媒を真空下で蒸発させて粗生成物を回収した。固体を水に再溶解し、2Mの塩酸水溶液を添加することにより溶液のpHをおよそ1にまで調整した。メタノールで前設定した2x10g SCXイオン交換カートリッジ(IST Isolute Flash SCX-2)に混合物を適用した。カートリッジをメタノールおよびメタノールに溶解した5%トリエチルアミンで溶出した。最初のトリエチルアミン画分を合わせ、溶媒を真空下で蒸発させて、表題化合物(0.186g)を淡黄色オイルとして得た。
【０１１３】
LC/MS(システム A):保持時間=2.45分、m/z 452,454[MH+]。
【０１１４】
実施例1:3-([([(2S)-4-(3,4-ジクロロベンジル)モルホリン-2-イル]メチルアミノ)カルボニル]-アミノメチル)-N-エチルベンズアミド
N,N-ジメチルホルムアミド(1ml)に溶解した説明10(0.035g)の攪拌溶液に、N,N-ジメチルホルムアミド(1ml)に溶解した1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミドハイドロクロライド(0.0208g)および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(0.012g)の溶液を20℃で加えた。N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.0196ml)およびテトラヒドロフラン(0.282ml)に溶解した2Mのエチルアミン溶液を加え、混合物を20℃で、18.5時間攪拌した。混合物をメタノール(約2ml)で希釈し、メタノールで前設定した5gのSCXイオン交換カートリッジ(IST Isolute Flash SCX-2)に適用した。カートリッジをメタノールおよび10%の0.880のアンモニアメタノール溶液で溶出した。最初のアンモニア画分を真空下で蒸発させ、さらに100:8:1のジクロロメタン/エタノール/0.880アンモニア溶液で溶出するシリカゲルBiotage(登録商標)フラッシュクロマトグラフィーにて残渣を精製して、表題化合物(0.0107g)を無色のガラス質の物質として得た。
【０１１５】
LC/MS(システム A):保持時間=2.35分、m/z 479,481[MH+]。
【国際調査報告】
2006504626.tif 000025
2006504626.tif 000026
2006504626.tif 000027
2006504626.tif 000028
2006504626.tif 000029