(57)【要約】ＵＶ誘発性ＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護する方法であって、１またはそれ以上のエクオル、デヒドロエクオル、イソフラブ−３−エンおよびイソフラバン化合物を皮膚的に許容される担体と混合して投与することを含む方法が記載されている。皮膚癌の形成を防止する方法も記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＵＶ誘発性ＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護する方法であって、式（ＩＩ）：
【化１】
2006501252.tif 000010
［式中
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルコキシアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであるか、あるいは
Ｒ３およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ１およびＲ２はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化２】
2006501252.tif 000011
から選択される５員環を形成するか、
Ｒ１およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ２およびＲ３はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化３】
2006501252.tif 000012
から選択される５員環を形成するか、または
Ｒ１およびＲ２は上記したとおりであり、Ｒ３およびＲ４はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化４】
2006501252.tif 000013
から選択される５員環を形成し、
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであり、
Ｒ８は水素、ヒドロキシ、アルキル、アリール、アミノ、チオ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は水素、アルキル、アリール、アリールアルキルまたはアミノ酸である）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は水素、アルキル、ハロアルキル、アリールまたはアリールアルキルである）であり、
Ｒ９はアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記したとおりである）またはＳｉ（Ｒ１５）３（Ｒ１５は、各々独立して、水素、アルキルまたはアリールである）であり、
Ｒ１０は水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、アリール、アリールアルキル、アミノ酸、アルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、
Ｒ１１は水素、アルキル、アリールアルキル、アルケニル、アリール、アミノ酸、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記と同じである）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は上記と同じである）であり、
Ｒ１２は水素、アルキルまたはアリールであるか、あるいは
Ｒ１１およびＲ１２はそれらの結合する窒素と一緒になってピロリジニルまたはピペリジニルを形成し、
線図「−−−」は単結合または二重結合、好ましくは二重結合を意味し、
Ｔは独立して水素、アルキルまたはアリールであって、
ＸはＯ、ＮＲ１２またはＳ、好ましくはＯである］
で示される１またはそれ以上の化合物（その医薬上許容される塩および誘導体を含む）を皮膚科学的に許容される担体と混合して含有する組成物を皮膚に局所的に投与することを含む方法。
【請求項２】
１またはそれ以上の式（ＩＩ）で示される化合物がエクオルおよびデヒドロエクオルを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
皮膚癌の形成を防止する方法である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
皮膚癌が基底細胞癌、扁平上皮癌および悪性黒色腫から選択される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
一またはそれ以上のシクロブタンピリミジンダイマーの修復速度の増加、メタロチオネインの形成の促進およびＰ５３発現の減少によって、皮膚をＵＶ−誘発の変異原性ダメージから保護する、請求項１記載の方法。
【請求項６】
ＵＶ暴露の前に、間におよび／または後に、組成物を投与する、請求項１ないし５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
ＵＶ暴露の前に、組成物を投与する、請求項６記載の方法。
【請求項８】
ＵＶ暴露の前および後に組成物を投与する、請求項６記載の方法。
【請求項９】
組成物が２０マイクロモルないし５００ミリモルの式（ＩＩ）の化合物を含む、請求項１ないし８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
式（ＩＩ）：
【化５】
2006501252.tif 000014
［式中
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルコキシアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであるか、あるいは
Ｒ３およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ１およびＲ２はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化６】
2006501252.tif 000015
から選択される５員環を形成するか、
Ｒ１およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ２およびＲ３はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化７】
2006501252.tif 000016
から選択される５員環を形成するか、または
Ｒ１およびＲ２は上記したとおりであり、Ｒ３およびＲ４はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化８】
2006501252.tif 000017
から選択される５員環を形成し、
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであり、
Ｒ８は水素、ヒドロキシ、アルキル、アリール、アミノ、チオ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は水素、アルキル、アリール、アリールアルキルまたはアミノ酸である）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は水素、アルキル、ハロアルキル、アリールまたはアリールアルキルである）であり、
Ｒ９はアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記したとおりである）またはＳｉ（Ｒ１５）３（Ｒ１５は、各々独立して、水素、アルキルまたはアリールである）であり、
Ｒ１０は水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、アリール、アリールアルキル、アミノ酸、アルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、
Ｒ１１は水素、アルキル、アリールアルキル、アルケニル、アリール、アミノ酸、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記と同じである）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は上記と同じである）であり、
Ｒ１２は水素、アルキルまたはアリールであるか、あるいは
Ｒ１１およびＲ１２はそれらの結合する窒素と一緒になってピロリジニルまたはピペリジニルを形成し、
線図「−−−」は単結合または二重結合、好ましくは二重結合を意味し、
Ｔは独立して水素、アルキルまたはアリールであって、
ＸはＯ、ＮＲ１２またはＳ、好ましくはＯである］
で示される１またはそれ以上の化合物（その医薬上許容される塩および誘導体を含む）の皮膚科学的に許容される担体との混合における、ＵＶ暴露に伴うＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護するための局所用組成物を製造するための使用。
【請求項１１】
１またはそれ以上の式（ＩＩ）で示される化合物がエクオルおよびデヒドロエクオルを含む、請求項１０載の使用。
【請求項１２】
皮膚癌の形成を防止する方法である、請求項１０記載の使用。
【請求項１３】
皮膚癌が基底細胞癌、扁平上皮癌および悪性黒色腫から選択される、請求項１２記載の使用。
【請求項１４】
一またはそれ以上のシクロブタンピリミジンダイマーの修復速度の増加、メタロチオネインの形成の促進およびｐ５３発現の減少によって、皮膚をＤＮＡ変異原性ダメージから保護する、請求項１０記載の使用。
【請求項１５】
ＵＶ暴露の前に、間におよび／または後に、組成物を投与する、請求項１０ないし１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
ＵＶ暴露の前に、組成物を投与する、請求項１５記載の使用。
【請求項１７】
ＵＶ暴露の前および後に組成物を投与する、請求項１５記載の使用。
【請求項１８】
組成物が２０マイクロモルないし５００ミリモルの式（ＩＩ）の化合物を含む、請求項１０ないし１７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
式（ＩＩ）の化合物のＵＶ暴露に伴うＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護するための使用。
【請求項２０】
組成物が化粧用または日焼け防止用組成物を含む、請求項１ないし９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
組成物が化粧用または日焼け防止用組成物を含む、請求項１０ないし１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２２】
上記した式（ＩＩ）の１またはそれ以上の化合物を皮膚的に許容される担体または賦形剤と一緒に含む、化粧用または日焼け防止用組成物。
【請求項２３】
メイクアップまたはファウンデーション組成物を含む、請求項２２記載の化粧用組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明はエクオル、デヒドロエクオルならびにイソフラブ−３−エンおよびイソフラバン化合物のＤＮＡ変異原性ダメージの修復の促進における使用に関する。
【０００２】
（従来技術）
メタロチオネイン（ＭＴ）は、ＤＮＡダメージ物質、例えばＵＶＲに応答して合成または過剰に発現される蛋白である（Hansenら、１９９７）。動物および組織培養での実験では大抵、高線量の放射線を用いてＭＴを誘発させており、これらの結果をヒトでの低レベルまたはＵＶＲに繰返し暴露した場合に当てはめることは困難である（Caiら、１９９９）。ＭＴの誘導的合成は低線量のＵＶＲの暴露に対する適応反応と関連付けられる機構の一つとして考えられており、高レベルのＭＴは、おそらく、皮膚にあるＲＯＳを取り除くことを介して、ＵＶＲからの保護と関係しているようである（Hanadaら、１９９２）。その上、ＭＴ＝ＩおよびＩＩノックアウトマウスにて明らかにされるように、ＭＴはＵＶＲの細胞介在応答に対する免疫抑制作用に拮抗する保護と関連付けられる（Reeveら、２０００）。ＵＶＲは、ｐ５３を光伝導させると同時に、角化細胞および真皮線維芽細胞にて免疫組織化学的に検出可能なＭＴを誘発し、このことはこれらの蛋白系が機能において保護的かつ優待的であることを示唆する。ＭＴはＵＶ暴露の２時間後から真皮線維芽細胞にて検出可能である（Ansteyら、１９９６）。
【０００３】
エクオル、デヒドロエクオル、イソフラブ−３−エンおよびイソフラバン化合物およびそれら化合物の製法が、出典明示により本明細書の一部とされる、同時係属の国際特許出願ＰＣＴ／ＡＵ０３／００４２７およびＷＯ９８／０８５０３に記載されている。
皮膚に暴露されたＵＶはＤＮＡにダメージをもたらし、発癌を引き起こす可能性がある。ヒトにおいて最も一般的な腫瘍が基底細胞癌（ＢＣＣ）であり、つづいて扁平上皮癌（ＳＣＣ）であって、稀なものとして悪性黒色腫が挙げられる。
【０００４】
この度、出願人は、本発明の化合物が、皮膚に塗布された場合に、皮膚、特に放射線照射された皮膚の基底層にてメタロチオネインの産生向上をもたらすことを見出した。
上記したように、メタロチオネインはＵＶ暴露に付された皮膚のＤＮＡ変異原性ダメージの修復に影響を及ぼしてその修復を容易にする。
本発明によれば、エクオル、デヒドロエクオル、イソフラブ−３−エンおよびイソフラバン構造物の、ＵＶ暴露に伴うＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護するための使用が提供される。
【０００５】
もう一つ別の態様において、エクオル、デヒドロエクオル、イソフラブ−３−エンおよびイソフラバン構造物の、皮膚、特に皮膚の基底層にてメタロチオネインを過剰に発現させるための使用が提供される。
本発明のもう一つ別の態様によれば、ＵＶ誘発のＤＮＡ変異原性ダメージから皮膚を保護する方法であって、１またはそれ以上のエクオル、デヒドロエクオル、イソフラブ−３−エンまたはイソフラバン化合物を皮膚的に許容される担体と混合して含有する組成物を皮膚に塗布することを含む方法が提供される。
【０００６】
イソフラブ−３−エンおよびイソフラバン化合物は、その医薬上許容される塩および誘導体を含め、一般式（ＩＩ）：
【化１】
2006501252.tif 000002
【０００７】
［式中
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、アルコキシアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであるか、あるいは
【０００８】
Ｒ３およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ１およびＲ２はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化２】
2006501252.tif 000003
から選択される５員環を形成するか、
【０００９】
Ｒ１およびＲ４は上記したとおりであり、Ｒ２およびＲ３はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化３】
2006501252.tif 000004
から選択される５員環を形成するか、または
【００１０】
Ｒ１およびＲ２は上記したとおりであり、Ｒ３およびＲ４はそれらの結合する炭素原子と一緒になって
【化４】
2006501252.tif 000005
から選択される５員環を形成し、
【００１１】
Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は独立して水素、ヒドロキシ、ＯＲ９、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１０、ＯＳ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＨＯ、Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、ＣＯＯＨ、ＣＯ２Ｒ１０、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、アルキル、ハロアルキル、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、チオ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ニトロまたはハロであり、
Ｒ８は水素、ヒドロキシ、アルキル、アリール、アミノ、チオ、ＮＲ１１Ｒ１２、ＣＯＮＲ１１Ｒ１２、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は水素、アルキル、アリール、アリールアルキルまたはアミノ酸である）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は水素、アルキル、ハロアルキル、アリールまたはアリールアルキルである）であり、
Ｒ９はアルキル、ハロアルキル、アリール、アリールアルキル、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記したとおりである）またはＳｉ（Ｒ１５）３（Ｒ１５は、各々独立して、水素、アルキルまたはアリールである）であり、
【００１２】
Ｒ１０は水素、アルキル、ハロアルキル、アミノ、アリール、アリールアルキル、アミノ酸、アルキルアミノまたはジアルキルアミノであり、
Ｒ１１は水素、アルキル、アリールアルキル、アルケニル、アリール、アミノ酸、Ｃ（Ｏ）Ｒ１３（Ｒ１３は上記と同じである）またはＣＯ２Ｒ１４（Ｒ１４は上記と同じである）であり、
Ｒ１２は水素、アルキルまたはアリールであるか、あるいは
Ｒ１１およびＲ１２はそれらの結合する窒素と一緒になってピロリジニルまたはピペリジニルを形成し、
線図「−−−」は単結合または二重結合、好ましくは二重結合を意味し、
Ｔは独立して水素、アルキルまたはアリールであって、
ＸはＯ、ＮＲ１２またはＳ、好ましくはＯである］
で示すことができる。
【００１３】
エクオルは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ５がヒドロキシであり、ＸがＯであり、そして「−−−」が単結合である場合の式（ＩＩ）の化合物に相当する。デヒドロエクオルは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ５がヒドロキシであり、ＸがＯであって、そして「−−−」が二重結合である式（ＩＩ）の化合物に相当する。
【００１４】
皮膚的に許容される担体およびローションは当該分野にて周知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences、Gennaro A．、第１８版、Mack Publishing Co.、Easton、PA、１９９０、１４９２１５１７頁に記載されている。皮膚科学的に許容されるいずれの担体も本発明の組成物に用いることができる。本明細書中で用いる場合の「皮膚科学的に許容される担体」とは、ビヒクル、希釈体、担体をいい、皮膚用の組成物における使用が知られている、アジュバント、添加物または賦形剤を含むこともできる。本発明の組成物として、クリーム、軟膏、溶液、スティック、ワイプ、クレンザーおよび／またはゲルが挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明の化合物は適当な担体と単に混合、混和またはブレンドされ、皮膚への塗布に適する組成物を得ることができる。皮膚的に許容される担体は１またはそれ以上の日焼け防止剤を包含しうる。日焼け防止剤は紫外線を遮断するのに通常使用される物質を包含する。代表的な化合物として、シンナメート、ＰＡＢＡ、サリチレートが挙げられる。例えば、オクチルメトキシシンナメートおよび２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとしても知られている）を用いることができる。オクチルメトキシシンナメートおよび２-ヒドロキシ-４-メトキシベンゾフェノンは、各々、商品名：パーソル（Parsol）ＭＣＸおよびベンゾフェノン（Benzophenone）−３の下で市販されている。利用される日焼け防止剤の正確な量は希望する太陽のＵＶ照射からの保護の程度に応じて変化しうる。
【００１５】
好ましい態様において、１またはそれ以上の式（ＩＩ）の化合物は化粧用製剤に処方される。化粧用処方の一例として、クリーム、ゲル、粉末、ペースト、ケーキなどが挙げられる。典型的には、かかる化粧品は「メイクアップ」および／またはファウンデーション（典型的には、皮膚を滑らかで平坦なものとし、着色化粧品の基剤として用いられる）ということもできる。
【００１６】
式（ＩＩ）の化合物は０．００１％から１００％まで、好ましくは０．１％から２０％まで、最も好ましくは０．１％から１０％ｗ／ｗまでの量にて組成物に用いることができる。例えば、該組成物は、２０マイクロモルないし４００マイクロモルなどの１マイクロモルないし５００ミリモルのエクオルまたは式（ＩＩ）の他の化合物を含んでいてもよい。組成物の残りは、当該分野にて周知の１またはそれ以上の皮膚科学的に許容される担体および賦形剤を含むであろう。１またはそれ以上の化合物を組成物に利用することができる。エクオルとデヒドロエクオルが特に好ましい。太陽に曝される前に、間におよび／または後に、組成物を皮膚に局所投与してもよい。典型的には、約１と５００ｍｇ／日の間の用量、２と１００ｍｇ／日の間の用量が好ましい。
【００１７】
本発明のもう一つ別の態様によれば、皮膚癌、例えば、基底細胞癌（ＢＣＣ）、扁平上皮癌（ＳＣＣ）および悪性黒色腫の形成を処理、改善または防止する方法であって、対象の皮膚に一般式（ＩＩ）のエクオル、デヒドロエクオルまたはイソフラブ−３−エンまたはイソフラバン化合物を皮膚に塗布することを含む、方法が提供される。
もう一つ別の態様によれば、皮膚、例えば、皮膚の基底層にてメタロチオネイン生成を増加させる方法であって、１またはそれ以上のエクオル、デヒドロエクオルまたはイソフラブ−３−エンまたはイソフラバン化合物を、皮膚的に許容できる担体と一緒に皮膚に塗布することを含む、方法が提供される。
【００１８】
出願人は本発明に係る化合物がさらにＤＮＡ修復を促進することを見出した。ＤＮＡ修復の促進は、１またはそれ以上の、シクロブタンピリミジンダイマー（ＣＰＤ）の修復速度の増加、Ｐ５３の発現を減少させることによるＤＮＡ修復の促進、および／またはメタロチオネイン（ＭＴ）の形成の促進によるものである。
ＣＰＤの形成はＵＶＲ暴露の重大な致命的かつ変異原性の結果であると考えられる（Mitchellら、１９８９；Liardetら、２０００）。動物実験により、表皮のＣＰＤ修復と皮膚発癌作用の間に逆の相関関係のあることが明らかにされた（Youngら、１９９６）。Ｐ５３蛋白（ＴＰ５３）はＵＶ照射によるＤＮＡダメージの後で発現する。Ｐ５３は細胞のＧ１期からＳ期への進行を遮断し、かくしてダメージを受けたＤＮＡの複製を妨げる、転写因子である（Campbellら、１９９３）。Ｐ５３蛋白は腫瘍促進剤として作用しうる（Murpheyら、２００１）。
【００１９】
本発明を以下の実施例を用いて説明するが、これに限定されるものではない。
実施例１
エクオルのＣＰＤの誘発に対する効果を、太陽光をシミュレートする紫外線照射（ＳＳＵＶ）に曝した無毛マウス（ヒト皮膚科学的研究のための標準的モデル）の皮膚にて試験した。ＳＳＵＶ後の種々の時点で、背部の皮膚を切り取り、標準的な固定培地（HistoChoice（登録商標）、Amersco Inc、Solon、Ohio、USA）に６時間固定し、処理してパラフィン包埋に付した。クエン酸抗原性復活およびＨ３抗−ピリミジンダイマー抗体を用いてピリミジンダイマーを免疫組織化学的に検出した。ダイマーポジティブ細胞の数を３０フィールド／マウスにて４０の倍率で手作業にて計数した。
エクオルローション（エクオルを２０μＭにて含有する）をＳＳＵＶを照射する前に７日間毎日塗布し、その後ＳＳＵＶの１ｘ３ＭＥＤで照射した場合、エクオルの効果はダイマーの初期の誘発を減少させ、２４時間でのダイマーの数の減少から明らかなように（表１）、その修復速度を向上させることであった。
【００２０】
【表１】
2006501252.tif 000006
【００２１】
ＳＳＵＶ暴露直後（および５日間継続する）のエクオルの塗布は、照射した１日後で（２３％の有意な減少）、２日で（４２％の有意な減少、データを示さず）ダイマーの有意な減少をもたらした。
エクオルローション（２０マイクロモル）をＳＳＵＶ暴露の前７日間および暴露の後５日間塗布した場合、ＣＰＤ数の減少は、対照群（ビヒクル単独）と比べて、直ちに、そして１、２４および４８時間後で自明であった（ｐ＜０．０５；各々、ＣＰＤの数が５４％、５０％および２６％減少した）。
【００２２】
実施例２
ＵＶ照射の直後、４時間および６時間後に、エクオルを５人のボランティアの皮膚に塗布した。エクオル不含の対照となるローションも用いた。ＵＶ照射の２４時間後に、皮膚の生検を採り、ＭＴの生成を免疫組織化学的操作を用いて測定した。
【００２３】
表２は基底表皮および表層真皮にてＭＴについてポジティブ染色を示した細胞の数を示す。基底表皮にある細胞のおよそ半分は本質的にベースラインにてＭＴを発現し、それに対してより表層側の表皮にある細胞はほとんどすべてＭＴを発現しなかった。２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に、エクオルで処理したセクションと、ベースローション(ビヒクル)中のＤＭＳＯで処理したセクションとの間では基底層の表皮におけるＭＴの発現には明らかな違いがあった。５人の参加者すべてで、ＭＴの発現はエクオルで処理した皮膚にて高く、大きさにて＋４％ないし＋２１％の範囲の違いがあった。
【００２４】
【表２】
2006501252.tif 000007
【００２５】
注意：「ベースライン」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露する前に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。
「１０分」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して１０分後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯまたはエクオルのいずれでも処理されなかった。
「ＤＭＳＯ」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚はベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯで処理したグリッドからのものであった。
「エクオル」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのエクオルで処理したグリッドからのものであった。
最近ＵＶ−に暴露した個体の基底および基底層直上の角化細胞におけるＭＴ免疫反応性の増加はエクオルで処理された皮膚にて最も高かった。
【００２６】
実施例３
実施例２からの５人のボランティアからの皮膚生検を免疫組織化学を用いてシクロブタンピリミジンダイマー形成について試験した。
表３はＣＰＤに拮抗する抗体でポジティブに染色する細胞の数およびパーセントを表す。これらのデータは、予想どおり、２．５ＭＥＤを照射する前には、表皮には基本的にＣＰＤポジティブ細胞はなかったことを示す。しかし、ＵＶ暴露の１０分後にすべての関係者から採取した皮膚セクションでは、ポジティブ染色細胞の割合が３６％（参加者Ｎ０１ＤＷＨおよびＮ０３ＰＰＡ）から８７％（参加者Ｎ１４ＧＢＯ）の範囲にある、高レベルのＤＮＡダメージを示した。
ＵＶ暴露の２４時間後に採取した皮膚セクションは、すべての対象にて、実質的に低レベルのＣＰＤダメージを示した。５人の参加者のうち４人については、エクオルローションで処理した皮膚セクションは、ベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯで処理した皮膚セクションよりもＣＰＤ−ポジティブ細胞が割合として少なかった。
【００２７】
【表３】
2006501252.tif 000008
【００２８】
注意：「ベースライン」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露する前に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。「１０分」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して１０分後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯまたはエクオルのいずれでも処理されなかった。
「ＤＭＳＯ」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚はベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯで処理したグリッドからのものであった。
「エクオル」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのエクオル含有のローションで処理したグリッドからのものであった。
【００２９】
すべての参加者からのデータを集め、エクオルで処理した皮膚セクションは２４時間でＣＰＤのダメージは中程度に低いレベルであったことがわかる。
【００３０】
実施例４
実施例２の５人のボランティアから由来の皮膚生検をＵＶ照射後のＰ５３染色について試験した。結果を表４に示す。
【表４】
2006501252.tif 000009
【００３１】
注意：「ベースライン」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露する前に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。
「１０分」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して１０分後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯまたはエクオルのいずれでも処理されなかった。
「ＤＭＳＯ」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚はベースローション（ビヒクル）中のＤＭＳＯで処理したグリッドからのものであった。
「エクオル」とは、２．５ＭＥＤ  ＳＳＵＶに暴露して２４時間後に採取したパンチ生検から由来の皮膚セクションをいう。皮膚は２００μＭのエクオルで処理したグリッドからのものであった。
【００３２】
予想どおり、いずれの参加者についても２．５ＭＥＤで照射する前に表皮にはＰ５３を発現する細胞は本質的に存在しなかった。同様に、ＵＶに暴露した１０分後の参加者より採取した皮膚セクションは、文献によれば、取るに足らないレベルのＰ５３を示した。
ＵＶに暴露した２４時間後に摂取した皮膚セクションは、対象すべてにおいて、実質的に高いレベルのＰ５３を示した。上面および／または基底表皮でのＰ５３発現のパーセントはエクオルで処理した対象の５人のうち４人で減少した。例えば、Ｎ１３ＰＤＯおよびＮ１４ＧＢＯの対象において、Ｐ５３染色のパーセントはビヒクル対照と比較して有意に（一般に５０％以上）減少した。
【００３３】
結論
これらの実験にて評価される生物指標は、（ＵＶ誘発のＤＮＡ変異性ダメージと直接関連する）皮膚癌とのその生物学的関連に基づいて選択された。
現在では、ＵＶ誘発の酸化ダメージが皮膚癌の潜在的に重要な原因となる要素であると認識されている。ＭＴは、ＵＶ暴露に応答して特異的に誘発される抗酸化特性を有する分子である。この実験により、エクオル（式（ＩＩ）の別の化合物も同様であると考えられる）で処理したヒトの皮膚は、ベースローションで処理した皮膚よりもより多くのＭＴを誘発するという一貫した証拠が見出された。
ＣＰＤはＵＶ照射に暴露した後の分子ダメージの初期のインジケータであり、修復されないと、皮膚細胞のＤＮＡにて固定されている変異をもたらす。かくして、暴露後の処理の一の作用機序はこれらの病変の修復率を上昇させることである。ここで行われた実験はＣＰＤ修復が局所的エクオル組成物および式（ＩＩ）の１またはそれ以上の化合物を含有する他の組成物により向上されうることを示唆する。
【００３４】
Ｐ５３は一般に表皮の皮膚癌にて変異される重要な調節遺伝子であるのは明らかである。さらには、正常な皮膚細胞にて、Ｐ５３はＵＶ暴露後にアップレギュレートされ、ＤＮＡダメージが修復されるまで細胞分裂を防止する。エクオルはこの実験にてＰ５３の発現を調節し、５人の対象のうち４人についてＰ５３を発現する上面表皮または基底表皮における細胞の数を減少させた。
【００３５】
この明細書および特許請求の範囲全体を通して、特に記載しない限り、「含む」なる語あるいは「その単数形」または「その動名詞」などの変形は、所定の数または工程あるいは一群の数または工程を含むニュアンスであり、他の数または工程または一群の数または工程を排除するものでないことが理解されよう。
本明細書における従来技術に関連する参考文献は、その従来技術がオーストラリアでの常識の一部を形成すると承認または何らかの形態の示唆をするものではなく、そのように取り上げるべきものではない。
【００３６】
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【国際調査報告】
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