(57)【要約】本発明は癌を治療する時の薬剤として用いるための式（１）【化１】2006516530.tif 000021で表されるメタロセン化合物を提供する。式（１）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは、この化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有し、Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、Ｙは、対イオンであり、そしてＭは、金属である。本発明は、また、Ｌ基の中の少なくとも１つが第四級テトラアルキルアンモニウム基を含んで成る式（１）で表される新規な化合物も提供する。本化合物は従来技術で公知の化合物に比べて癌の治療で有意に高い活性を示すことが分かった。
2006516530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する時の薬剤として用いるための式１
【化１】
2006516530.tif 000012
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは、該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、そして
Ｍは、金属である］
で表されるメタロセン化合物。
【請求項２】
前記金属Ｍがチタン、バナジウム、ニオブまたはモリブデンである請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項３】
前記対イオンＹがハライド、アセテート、テトラフルオロボレートまたはヘキサフルオロホスフェートイオンである請求項１または２記載のメタロセン化合物。
【請求項４】
ジクロライド塩の形態である請求項１、２または３記載のメタロセン化合物。
【請求項５】
溶媒和物またはプロドラッグの形態である請求項１から４のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項６】
両方の基Ｌが該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする官能化を受けている前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項７】
ただ１つの基Ｌが該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする官能化を受けている前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項８】
Ｌがペンダント型ルイス塩基を持つ基を含んで成る前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項９】
前記ルイス塩基がアミノ基によって与えられている請求項８記載のメタロセン化合物。
【請求項１０】
前記アミノ基が第二級アミノ基である請求項９記載のメタロセン化合物。
【請求項１１】
前記第二級アミノ基が−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２）５基を含んで成る請求項１０記載のメタロセン化合物。
【請求項１２】
前記基Ｌが式
−（ＣＨ２）ｎＺ
［式中、ｎは１から２０の整数であり、そしてＺはアミノ基を含んで成る］
で表される請求項９記載のメタロセン化合物。
【請求項１３】
式２：
【化２】
2006516530.tif 000013
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１４】
式３：
【化３】
2006516530.tif 000014
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１５】
式４：
【化４】
2006516530.tif 000015
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１６】
式５：
【化５】
2006516530.tif 000016
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１７】
式６：
【化６】
2006516530.tif 000017
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１８】
式７：
【化７】
2006516530.tif 000018
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１９】
式１
【化８】
2006516530.tif 000019
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは第四級テトラアルキルアンモニウム基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、そして
Ｍは、金属である］
で表されるメタロセン化合物。
【請求項２０】
前記金属Ｍがチタン、バナジウム、ニオブまたはモリブデンである請求項１９記載のメタロセン化合物。
【請求項２１】
前記対イオンＹがハライド、アセテート、テトラフルオロボレートまたはヘキサフルオロホスフェートイオンである請求項１９または２０記載のメタロセン化合物。
【請求項２２】
ジクロライド塩の形態である請求項１９、２０または２１記載のメタロセン化合物。
【請求項２３】
溶媒和物またはプロドラッグの形態である請求項１９から２２のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２４】
両方の基Ｌが第四級テトラアルキルアンモニウム基を含んで成る請求項１９から２３のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項２５】
ただ１つの基Ｌが第四級テトラアルキルアンモニウム基を含んで成る前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項２６】
式３：
【化９】
2006516530.tif 000020
で表される請求項１９記載のメタロセン化合物。
【請求項２７】
患者に経口、非経口、局所、鼻または徐放性ミクロ担体経由で投与するための前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項２８】
賦形剤が食塩水、無菌水、クリーム、軟膏、溶液、ゲル、ペースト、乳液、ローション、油、固体状担体またはエーロゾルを含んで成る前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項２９】
単独または他の少なくとも１種の化合物と組み合わせて投与するための前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項３０】
前記他の少なくとも１種の化合物が生物学的活性を有する請求項２９記載のメタロセン化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は官能化メタロセン（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ  ｍｅｔａｌｌｏｃｅｎｅｓ）を抗腫瘍薬（ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｕｒ  ｒｅａｇｅｎｔｓ）として用いることに関する。
【背景技術】
【０００２】
化学療法に伴う主な問題は薬剤が癌細胞に対して示す選択性が不足している点にある。その結果として、そのような治療の副作用は非常に不快であり、しばしば、実際の病気の症状よりも悪いこともあり得る。本分野の技術者に知られている最も良好な抗癌薬の１つはシスプラチンであり、この薬の作用および機構は現在でもあまり良くは理解されていない。しかしながら、シスプラチンが示す毒性のある副作用には、悪心、吐き気、神経障害、中毒性難聴（耳なり／聴力損失）およびネフロキシシティー（ｎｅｐｈｒｏｘｉｃｉｔｙ）が含まれる（非特許文献１）。白金が基になった代替薬（カルボプラチン）を用いた治療を行うとそのような副作用が軽減されはするが、この材料が示す骨髄毒性の方が高い（非特許文献２）。しかしながら、そのような化合物はこの分野の医学で幅広く用いられておりかつシスプラチンは睾丸癌の治療で高い特異性を示し、このことは、他の金属が基になった薬剤を合成して特定種の腫瘍を治療することができるであろうことを示唆している。
【０００３】
新しい有効な抗癌薬、好適には副作用が少ない抗癌薬を見つけだす探求が精力的に行われている。その上、シスプラチン耐性腫瘍の問題に取り組む新しいアプローチも必要とされている。例えば、卵巣癌患者は最初は前記薬剤に良好な反応を示すが、最終的には耐性が発現して、その病気に負けてしまう（非特許文献２）。抗腫瘍薬の候補品の中には初期遷移金属化合物であるメタロセンジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＭＣｌ２、Ｍ＝Ｔｉ、Ｖ、Ｎｂ、Ｍｏ、Ｒｅ］がある。チタノセン（ビス−シクロペンタジエニルチタン）ジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＴｉＣｌ２］、即ちＣｐ２ＴｉＣｌ２およびバナドセン（ビス−シクロペンタジエニルバナジウム）ジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＶＣｌ２］、即ちＣｐ２ＶＣｌ２は両方ともがいろいろな動物および異種移植ヒト腫瘍に対して抗腫瘍活性を示すことが確認された（非特許文献３、４）。
【０００４】
チタノセンジクロライド（ｔｉｔａｎｏｃｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）がそのような種類の中で最も有効な抗腫瘍薬の１つであり、現在、フェーズＩＩの臨床試験を受けている（非特許文献５）。Ｃｐ２ＴｉＣｌ２およびバナドセンジクロライド（ｖａｎａｄｏｃｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅｓ）は両方ともが毒物学および薬物動態学のレベルで興味が持たれている有効な抗腫瘍薬であり、これらが示す毒性および薬物動態学的挙動のパターンは有機抗腫瘍薬および細胞増殖抑制性白金薬のそれとは異なる（非特許文献３、６）。インビボ研究により、結腸、頭、胸、直腸、肺および胃の異種移植腫瘍はＣｐ２ＴｉＣｌ２に有意な感受性を示しかつその感受性の度合は一般にシスプラチンを用いた時に見られるそれよりも大きいことが示された（非特許文献６）。
【０００５】
Ｃｐ２ＶＣｌ２が示す活性とＣｐ２ＴｉＣｌ２が示す活性に違いがあり、例えばそれらがいろいろな肺癌に対して示す活性の点で異なることが示された（非特許文献７）。Ｃｐ２ＴｉＣｌ２は、臨床的に用いられている大部分の細胞増殖抑制薬に反応を示さないＬＸ１（これは組織学的に分類分けされていない腫瘍である）に対して有意な抗腫瘍活性を示さないが、Ｃｐ２ＶＣｌ２はそれに対して有意な活性を示す（非特許文献８）。その結果、その活性種の性質は未知でありかつそのような化合物を薬剤として投与するのは困難であり得る。
【０００６】
Ｃｐ２ＴｉＣｌ２およびＣｐ２ＶＣｌ２は、まさにその性質から加水分解を起こすと言った問題を有することから薬剤として欠点を有する（非特許文献６、９）。従って、水に不安定であることに関連した問題を持たない化合物を開発する要求が存在しており、本発明の目的は、そのような新規抗癌薬の要求を満足させる材料を提供することにある。従って、本発明は、抗癌化合物として活性があって安定な一連のメタロセンを提供することを探求するものである。
【０００７】
メタロセンジクロライドをイオン性にするとそのような化合物は安定性が向上し、それによってそれが水溶液中で示す溶解性が向上することが確認された。しかしながら、この分野に存在する従来技術は限られており、特にイオン性化合物である［（Ｃ５Ｈ５）２ＴｉＣｌ（ＮＣＣＨ３）］＋（ＦｅＣｌ４）−［これは抗腫瘍薬に関係した初期の研究の主題であった（非特許文献３）］に関する従来技術は限られていることを特記する。また、そのような種類のイオン性チタノセンの方が中性チタノセンおよびバナドセンジクロライドの両方よりも頭および首移植片に対して高い効果を示すことも確認された（非特許文献１０）。
【０００８】
本発明者らは、ＷＯ  ０１／４２２６０として公開された同時係属中の特許出願の中で、塩基性基で置換されているシクロペンタジエン基を少なくとも１個有するメタロセンハライド塩を合成する方法を開示した。しかしながら、その出願には、そのような材料を癌の治療で用いることに関する開示は全く含まれておらず、その結果として、そのような材料がそのような治療で効果を示すか或は他の様式で効果を示すことに関するデータは全く与えられていない。
【０００９】
本発明は、最も詳細には、いろいろなチタノセン、バナドセンおよびモリブドセン（ｍｏｌｙｂｄｏｃｅｎｅ）ジクロライド、それらの合成および特徴付け、そしてそれらを病気、主に癌の治療で用いることに関する。本発明は、また、そのような化合物が示す効力の調査にも関する。
【００１０】
従って、効力のある有効な抗癌薬として働く可能性のある数多くの水溶性メタロセンハライド塩を提供する。加うるに、そのようなイオン性メタロセンが向上した安定性を有しかついろいろな組の癌細胞株に関して向上した活性を示すことに関する証拠も提示する。
【非特許文献１】Ｔｒｉｍｍｅｒ，Ｅ．Ｅ．；Ｅｓｓｉｇｍａｎｎ，Ｊ．Ｍ．、「Ｅｓｓａｙｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  １９９９、３４、１９１−２１１
【非特許文献２】Ｋｅｌｌａｎｄ，Ｋ．Ｒ．、「ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ」；Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ；Ｌｏｎｄｏｎ、１９９４
【非特許文献３】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．「Ｍｅｔａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ６−Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ  ｔｉｔａｎｉｕｍ，ｖａｎａｄｉｕｍ，ｎｉｏｂｉｕｍ，ｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ  ａｎｄ  ｒｈｅｎｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ−ｅａｒｌｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｍｅｔａｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ  ｄｒｕｇｓ」；Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ；Ｌｏｎｄｏｎ、１９９４
【非特許文献４】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．「Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」；ＶＣＨ：Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３
【非特許文献５】Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｏｕ，Ｃ．Ｖ．；Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．Ｇ．；Ｙｏｕｎｇ，Ｌ．Ｓ．；Ｈｏｄｇｋｉｎｓ，Ｌ．；Ｆｅｒｒｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｋｅｒｒ，Ｄ．Ｊ．、「Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」  １９９８、７７、２０８８−２０９７
【非特許文献６】Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｍ．Ｍ．；Ｍｏｋｓｄｉ，Ｇ．Ｊ．、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  ２０００、７、１２８９−１３０３
【非特許文献７】Ｍｕｒｔｈｙ，Ｍ．Ｓ．；Ｒａｏ，Ｌ．Ｎ．；Ｋｕｏ，Ｌ．Ｙ．、「Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ」  １９８８、１５２、１５７７
【非特許文献８】Ｖｅｎｄｅｔｔｉ，Ｊ．、「Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．」  １９８１、８、３４９
【非特許文献９】Ｔｏｎｅｙ，Ｊ．Ｈ．；Ｍａｒｋｓ，Ｔ．Ｊ．、「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」  １９８５、１０７、９４７−９５３
【非特許文献１０】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．；Ｋｏｐｆ，Ｈ．Ｚ．、「Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．Ｂ」  １９７９、３４、８０５
【非特許文献１１】Ａｌｌｅｎ，Ｏ．Ｒ．；Ｋｎｏｘ，Ｒ．；ＭｃＧｏｗａｎ，Ｐ．Ｃ．、「Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ」
【発明の開示】
【００１１】
（発明の記述）
本発明の１番目の面に従い、癌を治療する時の薬剤として用いる目的でメタロセン化合物１
【００１２】
【化１】
2006516530.tif 000003
を提供し、
１において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは、本化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、そして
Ｍは、金属である。
【００１３】
前記金属は、好適にはチタン、バナジウム、ニオブまたはモリブデンである。典型的な対イオンにはハライド、アセテート、テトラフルオロボレートまたはヘキサフルオロホスフェートイオンが含まれる。好適なチタノセン、バナドセン、ニオビオセン（ｎｉｏｂｉｏｃｅｎｅ）およびモリブドセン化合物は、最も好適には、ジクロライド塩の形態である。このような化合物は溶媒和物またはプロドラッグ（ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ）の形態であってもよい。
【００１４】
本化合物が水溶性を示すように、少なくとも１個のシクロペンタジエニル環にＬ基による官能化を受けさせておく。好適には、少なくとも１個のシクロペンタジエニル環に水溶性を与えるペンダント型（ｐｅｎｄａｎｔ）ルイス塩基を持つＬ基、例えばアミノ官能化（ａｍｉｎｏ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ）側鎖（これに第四級化を受けさせておいてもよい）などによる官能化を受けさせる。
【００１５】
シクロペンタジエニル環に官能化を受けさせるためのＬ基は、典型的に、末端ルイス塩基を有するアルキル基を含んで成り、好適には、式
−（ＣＨ２）ｎＺ
［式中、ｎは１から２０の整数であり、そしてＺはアミノ基、例えば第二級アミノ基（特に好適な例は−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２）５基である）（これに第四級化を受けさせて、式２または３で表される化合物の如き化合物を生じさせてもよい）を含んで成る］
で表される。そのような化合物には、トリアルキルアンモニウムハライド、例えば式２で表される化合物など、または最も有利には、新規なテトラアルキルアンモニウム化合物が含まれ得、それには式３で表される化合物が含まれる。
【００１６】
【化２】
2006516530.tif 000004
従って、本発明のさらなる面に従い、式１
【００１７】
【化３】
2006516530.tif 000005
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは第四級テトラアルキルアンモニウム基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、そして
Ｍは、金属である］
で表されるメタロセン化合物を提供する。
【００１８】
如何なる場合にも、本発明のいずれかの面に従い、Ｌ基の中の少なくとも１つは、本化合物が水に溶解するようになるのを可能にする官能化を受けた置換基を含んで成り、そして両方の基がそのように置換基を含んで成っていてもよい。しかしながら、Ｌ基の中の１つのみがそのような官能化を受けた置換基を含んで成る場合、もう一方のシクロペンタジエニル環に存在させるＬ基は、この分子に水溶性を与えることに関連しない如何なる置換基を含んで成っていてもよく、そのような置換基の典型的な例はアルキル、アリール、アラルキル、または好適にはトリアルキルシリル基、例えばトリメチルシリル基であり、別法として、そのような場合のＬは水素であってもよい。
【００１９】
Ｌ基の中の１つのみがそのような官能化を受けている置換基を含んで成る化合物の特別な例には式４、５、６および７で表される化合物が含まれる。
【００２０】
【化４】
2006516530.tif 000006
具体的には、本発明は、イオン特徴が配位子の中に含まれている一連の化合物に関する。本化合物は、そのようなイオン特徴を有することから、従来技術の化合物に関連した劣った水溶性および加水分解に対する不安定さに関する問題を克服するものである。このように、本化合物は効力のある抗腫瘍薬として働くことが分かるであろう。
【００２１】
本発明は癌を治療および／または予防する方法を提供し、この方法は、患者に前記化合物１を治療有効量で投与することを包含する。
【００２２】
本発明の化合物の投与には数多くの経路が含まれ、それには経口、非経口、局所、鼻または徐放性ミクロ担体（ｓｌｏｗ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ）経由が含まれる。
【００２３】
適切な賦形剤には食塩水、無菌水、クリーム、軟膏、溶液、ゲル、ペースト、乳液、ローション、油、固体状担体およびエーロゾルが含まれる。
【００２４】
本化合物の特定必要量は数多くの要因、例えば使用する本化合物の生物学的活性、そして被験体の年齢、体および性などに依存するであろう。そのような被験体はヒトまたは哺乳動物であり得る。
【００２５】
本発明の化合物および組成物は単独または他の化合物との組み合わせで投与可能である。そのような他の化合物は生物学的活性（これは、本発明の化合物が示す活性を例えばこれが腫瘍を死滅させる点で示す効果を向上させるか或は本発明の化合物に関連した副作用を軽減することなどでそれを補足する活性である）を有する化合物であってもよい。
（発明の詳細な説明）
前記金属は、好適にはＩＶ族の金属、より好適にはチタンであり、一例は［Ｃｐ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）５］２ＴｉＣｌ２・２ＨＣｌ（２）であり、これに表１および２に詳述する如き数多くの細胞株（非特許文献１１）に対する試験を受けさせた。前記（２）は特に重要であり、これはＣｐ２ＴｉＣｌ２に比べてずっと高い活性を示し、（２）が示す効力はＣｐ２ＴｉＣｌ２が示す効力（非特許文献５）よりほぼ１０倍高い。実際、本発明の化合物が水性媒体中で示す安定性は従来技術の化合物が示すそれよりもずっと高く、かつこれが特定の癌細胞株に対して示す効力は一般にシスプラチンを用いた場合のそれよりほぼ１０倍高いことを見いだした。
【００２６】
そのような種類の錯体が白金耐性を克服するか否かをインビトロで測定する目的で、（２）がシスプラチン耐性Ａ２８７０に対して示す抗増殖効果を試験した（表３を参照）。卵巣腫瘍はしばしば白金化合物に対して耐性を発現することから、そのような株は選別に良好なモデルを与える。１４４時間後の耐性はシスプラチンの場合の方が（２）よりも３倍高いと思われる。そのように耐性率（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｆａｃｔｏｒ）が劇的に低下したことは、そのような官能化を受けさせておいたチタノセンジクロライド化合物は白金耐性卵巣腫瘍細胞株に対して効力のある抗増殖効果を示すことを示唆している。
【００２７】
その上、アミノ官能に結合させる基を変えた時、そのような薬がＡ２８７０細胞株に対して示す効果に関しては劇的な影響があったが、表４（これに式２で表される化合物と式３で表される化合物の比較データを含める）に示すように、Ａ２８７０−ｃｉｓのシスプラチン耐性細胞株に対しては影響がない。本発明の化合物が有する特別な利点はシスプラチン耐性細胞株に対して向上した活性を示す点にあり、本化合物が示す活性はシスプラチンの効果がなくなったとしても変わらないままであることを見いだした。
【００２８】
【表１】
2006516530.tif 000007
【００２９】
【表２】
2006516530.tif 000008
【００３０】
【表３】
2006516530.tif 000009
【００３１】
【表４】
2006516530.tif 000010
【００３２】
【表５】
2006516530.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成15年9月17日(2003.9.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する時の薬剤として用いるための式１
【化１】
2006516530.tif 000022
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは、該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、
Ｍは、金属であり、そして
ｎ＝１または２であり、
ここで、
前記側鎖置換基Ｌの中の一方が該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有する時にはｎ＝１でありそして前記側鎖置換基Ｌの中の両方が該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有する時にはｎ＝２である］
で表されるメタロセン化合物。
【請求項２】
前記金属Ｍがチタン、バナジウム、ニオブまたはモリブデンである請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項３】
前記対イオンＹがハライド、アセテート、テトラフルオロボレートまたはヘキサフルオロホスフェートイオンである請求項１または２記載のメタロセン化合物。
【請求項４】
ジクロライド塩の形態である請求項１、２または３記載のメタロセン化合物。
【請求項５】
溶媒和物またはプロドラッグの形態である請求項１から４のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項６】
両方の基Ｌが該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする官能化を受けている前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項７】
ただ１つの基Ｌが該化合物が水に溶解するようになるのを可能にする官能化を受けている前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項８】
Ｌがペンダント型ルイス塩基を持つ基を含んで成る前請求項のいずれか記載のメタロセン化合物。
【請求項９】
前記ルイス塩基がアミノ基によって与えられている請求項８記載のメタロセン化合物。
【請求項１０】
前記アミノ基が第二級アミノ基である請求項９記載のメタロセン化合物。
【請求項１１】
前記第二級アミノ基が−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２）５基を含んで成る請求項１０記載のメタロセン化合物。
【請求項１２】
前記基Ｌが式
−（ＣＨ２）ｎＺ
［式中、ｎは１から２０の整数であり、そしてＺはアミノ基を含んで成る］
で表される請求項９記載のメタロセン化合物。
【請求項１３】
式２：
【化２】
2006516530.tif 000023
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１４】
式３：
【化３】
2006516530.tif 000024
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１５】
式４：
【化４】
2006516530.tif 000025
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１６】
式５：
【化５】
2006516530.tif 000026
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１７】
式６：
【化６】
2006516530.tif 000027
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１８】
式７：
【化７】
2006516530.tif 000028
で表される請求項１記載のメタロセン化合物。
【請求項１９】
両方の基Ｌが第四級テトラアルキルアンモニウム基を含んで成る請求項１から１８のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２０】
一方のみの基Ｌが第四級テトラアルキルアンモニウム基を含んで成る請求項１から１８のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２１】
患者に経口、非経口、局所、鼻または徐放性ミクロ担体経由で投与するための請求項１から２０のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２２】
賦形剤が食塩水、無菌水、クリーム、軟膏、溶液、ゲル、ペースト、乳液、ローション、油、固体状担体またはエーロゾルを含んで成る請求項１から２１のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２３】
単独または他の少なくとも１種の化合物と組み合わせて投与するための請求項１から２１のいずれか１項記載のメタロセン化合物。
【請求項２４】
前記他の少なくとも１種の化合物が生物学的活性を有する請求項２３記載のメタロセン化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は官能化メタロセン（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ  ｍｅｔａｌｌｏｃｅｎｅｓ）を抗腫瘍薬（ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｕｒ  ｒｅａｇｅｎｔｓ）として用いることに関する。
【背景技術】
【０００２】
化学療法に伴う主な問題は薬剤が癌細胞に対して示す選択性が不足している点にある。その結果として、そのような治療の副作用は非常に不快であり、しばしば、実際の病気の症状よりも悪いこともあり得る。本分野の技術者に知られている最も良好な抗癌薬の１つはシスプラチンであり、この薬の作用および機構は現在でもあまり良くは理解されていない。しかしながら、シスプラチンが示す毒性のある副作用には、悪心、吐き気、神経障害、中毒性難聴（耳なり／聴力損失）およびネフロキシシティー（ｎｅｐｈｒｏｘｉｃｉｔｙ）が含まれる（非特許文献１）。白金が基になった代替薬（カルボプラチン）を用いた治療を行うとそのような副作用が軽減されはするが、この材料が示す骨髄毒性の方が高い（非特許文献２）。しかしながら、そのような化合物はこの分野の医学で幅広く用いられておりかつシスプラチンは睾丸癌の治療で高い特異性を示し、このことは、他の金属が基になった薬剤を合成して特定種の腫瘍を治療することができるであろうことを示唆している。
【０００３】
新しい有効な抗癌薬、好適には副作用が少ない抗癌薬を見つけだす探求が精力的に行われている。その上、シスプラチン耐性腫瘍の問題に取り組む新しいアプローチも必要とされている。例えば、卵巣癌患者は最初は前記薬剤に良好な反応を示すが、最終的には耐性が発現して、その病気に負けてしまう（非特許文献２）。抗腫瘍薬の候補品の中には初期遷移金属化合物であるメタロセンジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＭＣｌ２、Ｍ＝Ｔｉ、Ｖ、Ｎｂ、Ｍｏ、Ｒｅ］がある。チタノセン（ビス−シクロペンタジエニルチタン）ジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＴｉＣｌ２］、即ちＣｐ２ＴｉＣｌ２およびバナドセン（ビス−シクロペンタジエニルバナジウム）ジクロライド［（Ｃ５Ｈ５）２ＶＣｌ２］、即ちＣｐ２ＶＣｌ２は両方ともがいろいろな動物および異種移植ヒト腫瘍に対して抗腫瘍活性を示すことが確認された（非特許文献３、４）。
【０００４】
チタノセンジクロライド（ｔｉｔａｎｏｃｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）がそのような種類の中で最も有効な抗腫瘍薬の１つであり、現在、フェーズＩＩの臨床試験を受けている（非特許文献５）。Ｃｐ２ＴｉＣｌ２およびバナドセンジクロライド（ｖａｎａｄｏｃｅｎｅ  ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅｓ）は両方ともが毒物学および薬物動態学のレベルで興味が持たれている有効な抗腫瘍薬であり、これらが示す毒性および薬物動態学的挙動のパターンは有機抗腫瘍薬および細胞増殖抑制性白金薬のそれとは異なる（非特許文献３、６）。インビボ研究により、結腸、頭、胸、直腸、肺および胃の異種移植腫瘍はＣｐ２ＴｉＣｌ２に有意な感受性を示しかつその感受性の度合は一般にシスプラチンを用いた時に見られるそれよりも大きいことが示された（非特許文献６）。
【０００５】
Ｃｐ２ＶＣｌ２が示す活性とＣｐ２ＴｉＣｌ２が示す活性に違いがあり、例えばそれらがいろいろな肺癌に対して示す活性の点で異なることが示された（非特許文献７）。Ｃｐ２ＴｉＣｌ２は、臨床的に用いられている大部分の細胞増殖抑制薬に反応を示さないＬＸ１（これは組織学的に分類分けされていない腫瘍である）に対して有意な抗腫瘍活性を示さないが、Ｃｐ２ＶＣｌ２はそれに対して有意な活性を示す（非特許文献８）。その結果、その活性種の性質は未知でありかつそのような化合物を薬剤として投与するのは困難であり得る。
【０００６】
Ｃｐ２ＴｉＣｌ２およびＣｐ２ＶＣｌ２は、まさにその性質から加水分解を起こすと言った問題を有することから薬剤として欠点を有する（非特許文献６、９）。従って、水に不安定であることに関連した問題を持たない化合物を開発する要求が存在しており、本発明の目的は、そのような新規抗癌薬の要求を満足させる材料を提供することにある。従って、本発明は、抗癌化合物として活性があって安定な一連のメタロセンを提供することを探求するものである。
【０００７】
メタロセンジクロライドをイオン性にするとそのような化合物は安定性が向上し、それによってそれが水溶液中で示す溶解性が向上することが確認された。しかしながら、この分野に存在する従来技術は限られており、特にイオン性化合物である［（Ｃ５Ｈ５）２ＴｉＣｌ（ＮＣＣＨ３）］＋（ＦｅＣｌ４）−［これは抗腫瘍薬に関係した初期の研究の主題であった（非特許文献３）］に関する従来技術は限られていることを特記する。また、そのような種類のイオン性チタノセンの方が中性チタノセンおよびバナドセンジクロライドの両方よりも頭および首移植片に対して高い効果を示すことも確認された（非特許文献１０）。
【０００８】
本発明者らは、ＷＯ  ０１／４２２６０として公開された同時係属中の特許出願の中で、塩基性基で置換されているシクロペンタジエン基を少なくとも１個有するメタロセンハライド塩を合成する方法を開示した。しかしながら、その出願には、そのような材料を癌の治療で用いることに関する開示は全く含まれておらず、その結果として、そのような材料がそのような治療で効果を示すか或は他の様式で効果を示すことに関するデータは全く与えられていない。
【０００９】
本発明は、最も詳細には、いろいろなチタノセン、バナドセンおよびモリブドセン（ｍｏｌｙｂｄｏｃｅｎｅ）ジクロライド、それらの合成および特徴付け、そしてそれらを病気、主に癌の治療で用いることに関する。本発明は、また、そのような化合物が示す効力の調査にも関する。
【００１０】
従って、効力のある有効な抗癌薬として働く可能性のある数多くの水溶性メタロセンハライド塩を提供する。加うるに、そのようなイオン性メタロセンが向上した安定性を有しかついろいろな組の癌細胞株に関して向上した活性を示すことに関する証拠も提示する。
【非特許文献１】Ｔｒｉｍｍｅｒ，Ｅ．Ｅ．；Ｅｓｓｉｇｍａｎｎ，Ｊ．Ｍ．、「Ｅｓｓａｙｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  １９９９、３４、１９１−２１１
【非特許文献２】Ｋｅｌｌａｎｄ，Ｋ．Ｒ．、「ｐｒｏｂｌｅｍｓ  ｗｉｔｈ  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ」；Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ；Ｌｏｎｄｏｎ、１９９４
【非特許文献３】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．「Ｍｅｔａｌ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｃｈａｐｔｅｒ  ６−Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ  ｔｉｔａｎｉｕｍ，ｖａｎａｄｉｕｍ，ｎｉｏｂｉｕｍ，ｍｏｌｙｂｄｅｎｕｍ  ａｎｄ  ｒｈｅｎｉｕｍ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ−ｅａｒｌｙ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｍｅｔａｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｕｒ  ｄｒｕｇｓ」；Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ；Ｌｏｎｄｏｎ、１９９４
【非特許文献４】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．「Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」；ＶＣＨ：Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３
【非特許文献５】Ｃｈｒｉｓｔｏｄｏｕｌｏｕ，Ｃ．Ｖ．；Ｅｌｉｏｐｏｕｌｏｓ，Ａ．Ｇ．；Ｙｏｕｎｇ，Ｌ．Ｓ．；Ｈｏｄｇｋｉｎｓ，Ｌ．；Ｆｅｒｒｙ，Ｄ．Ｒ．；Ｋｅｒｒ，Ｄ．Ｊ．、「Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」  １９９８、７７、２０８８−２０９７
【非特許文献６】Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｍ．Ｍ．；Ｍｏｋｓｄｉ，Ｇ．Ｊ．、「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  ２０００、７、１２８９−１３０３
【非特許文献７】Ｍｕｒｔｈｙ，Ｍ．Ｓ．；Ｒａｏ，Ｌ．Ｎ．；Ｋｕｏ，Ｌ．Ｙ．、「Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ」  １９８８、１５２、１５７７
【非特許文献８】Ｖｅｎｄｅｔｔｉ，Ｊ．、「Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．」  １９８１、８、３４９
【非特許文献９】Ｔｏｎｅｙ，Ｊ．Ｈ．；Ｍａｒｋｓ，Ｔ．Ｊ．、「Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．」  １９８５、１０７、９４７−９５３
【非特許文献１０】Ｋｏｐｆ−Ｍａｉｅｒ，Ｐ．；Ｋｏｐｆ，Ｈ．Ｚ．、「Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ．Ｂ」  １９７９、３４、８０５
【非特許文献１１】Ａｌｌｅｎ，Ｏ．Ｒ．；Ｋｎｏｘ，Ｒ．；ＭｃＧｏｗａｎ，Ｐ．Ｃ．、「Ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ  Ｒｅｓｕｌｔｓ」
【発明の開示】
【００１１】
（発明の記述）
本発明に従い、癌を治療する時の薬剤として用いる目的でメタロセン化合物１
【００１２】
【化１】
2006516530.tif 000029
を提供し、
１において、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、Ｈ、アルキル、アリールまたはトリメチルシリルの組み合わせを表し、
Ｌは、側鎖置換基を表すが、これらの少なくとも１つは、本化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有し、
Ｘは、ハロ、アルコキシ、アセテートまたはＨ２Ｏであり、
Ｙは、対イオンであり、
Ｍは、金属であり、そして
ｎ＝１または２である。
【００１３】
具体的には、ｎの値は、当該分子が電気的中性を示すと言った要求で決まり、従って、本化合物が水に溶解するようになるのを可能にする基を含有する置換基Ｌの数で決まる。このように、当該分子が本化合物が水に溶解するようになるのを可能にする置換基Ｌを１個含有する場合にはｎ＝１であり、そして当該化合物がそのような基を２個含有する場合にはｎ＝２である。
【００１４】
前記金属は、好適にはチタン、バナジウム、ニオブまたはモリブデンである。典型的な対イオンにはハライド、アセテート、テトラフルオロボレートまたはヘキサフルオロホスフェートイオンが含まれる。好適なチタノセン、バナドセン、ニオビオセン（ｎｉｏｂｉｏｃｅｎｅ）およびモリブドセン化合物は、最も好適には、ジクロライド塩の形態である。このような化合物は溶媒和物またはプロドラッグ（ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ）の形態であってもよい。
【００１５】
本化合物が水溶性を示すように、少なくとも１個のシクロペンタジエニル環にＬ基による官能化を受けさせておく。好適には、少なくとも１個のシクロペンタジエニル環に水溶性を与えるペンダント型（ｐｅｎｄａｎｔ）ルイス塩基を持つＬ基、例えばアミノ官能化（ａｍｉｎｏ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ）側鎖（これに第四級化を受けさせておいてもよい）などによる官能化を受けさせる。
【００１６】
シクロペンタジエニル環に官能化を受けさせるためのＬ基は、典型的に、末端ルイス塩基を有するアルキル基を含んで成り、好適には、式
−（ＣＨ２）ｎＺ
［式中、ｎは１から２０の整数であり、そしてＺはアミノ基、例えば第二級アミノ基（特に好適な例は−（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ２）５基である）（これに第四級化を受けさせて、式２または３で表される化合物の如き化合物を生じさせてもよい）を含んで成る］
で表される。そのような化合物には、トリアルキルアンモニウムハライド、例えば式２で表される化合物など、または最も有利には、新規なテトラアルキルアンモニウム化合物が含まれ得、それには式３で表される化合物が含まれる。
【００１７】
【化２】
2006516530.tif 000030
本発明に従い、Ｌ基の中の少なくとも一方は本化合物が水に溶解するようになるのを可能にするような官能化を受けた置換基を含んで成り、そして両方の基がそのような置換基を含んで成っていてもよい。しかしながら、Ｌ基の中の一方のみがそのような官能化を受けた置換基を含んで成る場合、もう一方のシクロペンタジエニル環に存在させるＬ基は、この分子に水溶性を与えることに関連しない如何なる置換基を含んで成っていてもよく、そのような置換基の典型的な例はアルキル、アリール、アラルキル、または好適にはトリアルキルシリル基、例えばトリメチルシリル基であり、別法として、そのような場合のＬは水素であってもよい。
【００１８】
Ｌ基の中の１つのみがそのような官能化を受けている置換基を含んで成る化合物の特別な例には式４、５、６および７で表される化合物が含まれる。
【００１９】
【化３】
2006516530.tif 000031
具体的には、本発明は、イオン特徴が配位子の中に含まれている一連の化合物に関する。本化合物は、そのようなイオン特徴を有することから、従来技術の化合物に関連した劣った水溶性および加水分解に対する不安定さに関する問題を克服するものである。このように、本化合物は効力のある抗腫瘍薬として働くことが分かるであろう。
【００２０】
本発明は癌を治療および／または予防する方法を提供し、この方法は、患者に前記化合物１を治療有効量で投与することを包含する。
【００２１】
本発明の化合物の投与には数多くの経路が含まれ、それには経口、非経口、局所、鼻または徐放性ミクロ担体（ｓｌｏｗ  ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｍｉｃｒｏｃａｒｒｉｅｒｓ）経由が含まれる。
【００２２】
適切な賦形剤には食塩水、無菌水、クリーム、軟膏、溶液、ゲル、ペースト、乳液、ローション、油、固体状担体およびエーロゾルが含まれる。
【００２３】
本化合物の特定必要量は数多くの要因、例えば使用する本化合物の生物学的活性、そして被験体の年齢、体および性などに依存するであろう。そのような被験体はヒトまたは哺乳動物であり得る。
【００２４】
本発明の化合物および組成物は単独または他の化合物との組み合わせで投与可能である。そのような他の化合物は生物学的活性（これは、本発明の化合物が示す活性を例えばこれが腫瘍を死滅させる点で示す効果を向上させるか或は本発明の化合物に関連した副作用を軽減することなどでそれを補足する活性である）を有する化合物であってもよい。
【００２５】
（発明の詳細な説明）
前記金属は、好適にはＩＶ族の金属、より好適にはチタンであり、一例は［Ｃｐ（ＣＨ２）２ＮＨ（ＣＨ２）５］２ＴｉＣｌ２・２ＨＣｌ（２）であり、これに表１および２に詳述する如き数多くの細胞株（非特許文献１１）に対する試験を受けさせた。前記（２）は特に重要であり、これはＣｐ２ＴｉＣｌ２に比べてずっと高い活性を示し、（２）が示す効力はＣｐ２ＴｉＣｌ２が示す効力（非特許文献５）よりほぼ１０倍高い。実際、本発明の化合物が水性媒体中で示す安定性は従来技術の化合物が示すそれよりもずっと高く、かつこれが特定の癌細胞株に対して示す効力は一般にシスプラチンを用いた場合のそれよりほぼ１０倍高いことを見いだした。
【００２６】
そのような種類の錯体が白金耐性を克服するか否かをインビトロで測定する目的で、（２）がシスプラチン耐性Ａ２８７０に対して示す抗増殖効果を試験した（表３を参照）。卵巣腫瘍はしばしば白金化合物に対して耐性を発現することから、そのような株は選別に良好なモデルを与える。１４４時間後の耐性はシスプラチンの場合の方が（２）よりも３倍高いと思われる。そのように耐性率（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｆａｃｔｏｒ）が劇的に低下したことは、そのような官能化を受けさせておいたチタノセンジクロライド化合物は白金耐性卵巣腫瘍細胞株に対して効力のある抗増殖効果を示すことを示唆している。
【００２７】
その上、アミノ官能に結合させる基を変えた時、そのような薬がＡ２８７０細胞株に対して示す効果に関しては劇的な影響があったが、表４（これに式２で表される化合物と式３で表される化合物の比較データを含める）に示すように、Ａ２８７０−ｃｉｓのシスプラチン耐性細胞株に対しては影響がない。本発明の化合物が有する特別な利点はシスプラチン耐性細胞株に対して向上した活性を示す点にあり、本化合物が示す活性はシスプラチンの効果がなくなったとしても変わらないままであることを見いだした。
【００２８】
【表１】
2006516530.tif 000032
【００２９】
【表２】
2006516530.tif 000033
【００３０】
【表３】
2006516530.tif 000034
【００３１】
【表４】
2006516530.tif 000035
【００３２】
【表５】
2006516530.tif 000036
【国際調査報告】
2006516530.tif 000037
2006516530.tif 000038
2006516530.tif 000039
2006516530.tif 000040
2006516530.tif 000041