(57)【要約】本発明は、下記の式(I)または式(III)を有する化合物(式中、Rは下記の式(II)である)に関する：【化１】2006504753.tif 000018【化２】2006504753.tif 000019【化３】2006504753.tif 000020  また、本発明は、これら化合物の抗癌薬および抗感染症薬としての製薬組成物における使用にも関する。
2006504753.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を患っている対象者に、有効量の、下記の式：
【化１】
2006504753.tif 000003
(式中、Rは、
【化２】
2006504753.tif 000004
である)
を有する少なくとも１種の化合物、または下記の式：
【化３】
2006504753.tif 000005
を有する化合物を投与することを特徴とする癌の治療方法。
【請求項２】
原虫感染症を患っている対象者に、有効量の、下記の式：
【化４】
2006504753.tif 000006
(式中、Rは、
【化５】
2006504753.tif 000007
である)
を有する少なくとも１種の化合物、または下記の式：
【化６】
2006504753.tif 000008
を有する化合物を投与することを特徴とする原虫感染症の治療方法。
【請求項３】
下記の式：
【化７】
2006504753.tif 000009
(式中、Rは、
【化８】
2006504753.tif 000010
である)
または下記の式：
【化９】
2006504753.tif 000011
を有する化合物。
【請求項４】
少なくとも１種の請求項３記載の化合物、および製薬上許容し得る担体および/または賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項５】
ジヒドロアルテミシンまたはジヒドロアルテミシテンを、三フッ化ホウ素エーテル化物の存在下の酸性条件において、適切な必要に応じて置換された1,2もしくは1,3グリコールまたはジヒドロキシアセトンと反応させることを特徴とする、請求項３記載の各式の化合物の製造方法。
【請求項６】
癌の治療用医薬の製造における、下記の式：
【化１０】
2006504753.tif 000012
(式中、Rは、
【化１１】
2006504753.tif 000013
である)
を有する少なくとも１種の化合物、または下記の式：
【化１２】
2006504753.tif 000014
を有する化合物の使用。
【請求項７】
原虫感染症の治療用医薬の製造における、下記の式：
【化１３】
2006504753.tif 000015
(式中、Rは、
【化１４】
2006504753.tif 000016
である)
を有する少なくとも１種の化合物、または下記の式：
【化１５】
2006504753.tif 000017
を有する化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ジヒドロアルテミシニン(dihydroartemisinin)およびジヒドロアルテミシテン(dihydroartemisitene)の二量体、並びにこれらの癌治療におけるおよび抗原虫剤としての使用に関する。
（背景技術）
癌死亡は、米国のみで2001年に500,000人を越えており、多くの進歩にもかかわらず、癌は主要な死因の１つである(文献１)。新たな抗癌剤、とりわけ、新規且つ選択的な作用メカニズムを有する抗癌剤の開発が危機的に求められている。幾つかの非細胞毒性療法の展開が実現され始めているものの(例えば、免疫賦活剤、増殖因子拮抗薬、アンチセンス療法)、殆どの癌治療の主力は、細胞毒性薬によったままである。限られた成功率、毒性の発生率およびそのような薬物に対する耐性の発生を考慮すれば、新たな群のこれら薬物、とりわけ、新しいメカニズムにより作用しまたは利用可能な選択性を示し得る薬物が厳しく求められている。また、治療プロトコールを最適にするための投薬法、計画および併用療法についての良好な理解も求められている。
【０００２】
天然産生物は、歴史的に、新たな成功裏の先端化合物プロトタイプ群の豊富な源であり、それらからのアナログ類が開発されてきている。最近の論評によれば、成功裏に臨床にまで進んでいる抗感染症薬および抗癌薬の60％は、天然産生物に由来している(文献２)。現在使用されている抗癌剤のうちのこれらの例としては、アントラサイクリン群（例えば、ドキソルビシン）、カタランツス(ニチニチソウ)アルカロイド類、パクリタキセル、並びにポドフィロトキシンおよびカンプトテシンの誘導体がある。最近公表された天然産生物系抗腫瘍剤一覧によれば、現在第I相および第II相にある25種以上の薬剤が示されている(文献３)。このおよび他の最近の論評は、新たな抗腫瘍剤発見の源としての天然産生物の臨床的役割の重要な喚起書である(文献４、５)。
天然産生物アルテミシニン(1)は、中国植物のクソニンジン(Artemisia annua) (文献６)から1971年に初めて分離されたセスキテルペンエンドパーオキサイドである。本明細書において番号付けした各化合物は、図１に示している。上記化合物は、熱帯性マラリア原虫(Plasmodium falciparum)のクロロキン感受性株およびクロロキン耐性株の双方に対して抗マラリア活性を示すことが証明された。
【０００３】
マラリア治療におけるアルテミシニンの臨床効果の重要性故に、多くの誘導体が最も有効で最も毒性の低い抗マラリア剤を開発するために製造された。初期では、単純な誘導体が製造された[例えば、ジヒドロアルテミシニン(DHA、ラクトンカルボニルを還元してヘミアセタルを得ている)、アルテムエーテル(DHAのメチルエーテル)、並びに数種の他のエーテルおよびエステルアナログ類]。ヘミスクシネートエステルのナトリウム塩(ナトリウムアルテスネート)は、アルテムエーテルよりも高い活性と低い毒性を示すこれらの誘導体の１つであり、アルテムエーテルはアルテミシニン自体よりも活性である。アルテミシニンおよびDHAアナログ類の活性における絶え間のない興味は、その後、ジヒドロアルテミシニンと三フッ化ホウ素-エーテル化物との反応によるアルテミシニンアセタル二量体の製造をもたらした。
抗マラリア活性以外に、アルテミシニンは、EN-2腫瘍細胞(文献７)、P-388、A549、HT-29、MCF-7およびKB-腫瘍細胞(文献８)に対する細胞毒性作用を有することが報告された。さらなるアナログ類が抗腫瘍活性について評価されるにつれ、非対称形二量体(2)が強い細胞毒活性を示し、シスプラチンよりも強力であったことが報告された(文献９)。対称形二量体(3)も明確な細胞毒活性を示した(文献１０)。
この知見は、他のタイプのDHA二量体における興味を刺激した。Posner等(文献１１)は、ポリエチレングリコールスペーサー(3単位のエチレングリコール)、炭素8個のグリコールおよびジチオ誘導体で連結した二量体を調製した。また、これらの著者は、より単純なトリオキサン二量体類も調製した。また、Posner等は、ジヒドロアルテミシニンの２分子間の連結単位が種々のタイプのジカルボン酸である数種のDHA二量体も調製した(文献１２)。ZhangとDarbie(文献１３、１４)も、種々のカップリング剤により連結させる数種のジヒドロアルテミシニン二量体を提案した。これらのアルテミシニン二量体の幾つかおよび上記のより単純なトリオキサン類の幾つかは、抗マラリア作用、抗癌活性および抗増殖作用を有しており、幾つかの化合物は、マウス角化細胞における抗増殖アッセイにおいてカルシトリオールと同等に活性であった。
【０００４】
（発明の開示）
（発明が解決しようとする課題）
本発明は、抗癌剤並びに抗マラリアおよび抗リーシュマニア特性のような抗原虫剤としての活性を有するジヒドロアルテミシニンおよびジヒドロアルテミシテンの二量体を含有する組成物を含む。また、本発明は、これら組成物の製造方法並びに癌および原虫感染症(マラリアおよびリーシュマニア症のような)の治療におけるそのような組成物の使用方法も開示する。本発明の組成物は、これまでに開示されていない。
本発明の化合物は、可能性のある新たな群の抗癌剤に相当し、そのある種のものは固形癌に対して見込みある活性を示しており、さらに可能性ある新たな作用メカニズムを示唆する選択性像を有する。
【０００５】
（課題を解決するための手段）
新たな化学療法剤を開発するという興味において、アルテミシニン二量体を、本発明において、DHAと種々の近隣または非近隣グリコール類との縮合によって調製した。これらの二量体をNCI抗腫瘍スクリーニングプログラムにおいて評価したところ、全てが60種の細胞系スクリーニングに合格した(4〜9)。これらの化合物の幾つかは、NCIによる更なる試験に進み、中空繊維アッセイ(HFA)プロトコールに進んでいる(化合物4、5および6)。化合物5と6の追加の供給物を最近調製し、異種移植片腫瘍モデルにおける試験のためにNCIに提出した。
これらのDHA二量体の作用メカニズムは特定中であるが、可能性ある分子ターゲットに関する幾つかの糸口が示唆されている。NCI比較分析法の使用により、60種細胞系のアッセイにおけるこれら化合物の細胞感受性プロフィールは白金化合物と同様であることが明らかとなった。これらの化合物は、DNAストランド内架橋を形成することによって細胞複製を抑制する。また、60種細胞系におけるマイクロアレーデータでの相関も、これらの二量体に最も感受性のある細胞は、インテグリンと低酸素症のシグナル伝達に関与するたんぱく質をコード化するmRNAを低レベルでしか含有していないことを示唆している。これらたんぱく質の低レベルの発現は、これらのたんぱく質が直接のターゲットであるかまたはその発現の低下が感受性を増大させる細胞内の条件(例えば、レドックス電位)を反映しているかのいずれかであるので、感受性の増強をもたらし得る。
【０００６】
本発明の二量体の投与は、任意の通常の投与経路、例えば、経口、皮下、腹腔内、筋肉内、静脈内または直腸内により得る。好ましい実施態様においては、当該化合物は、投与の選択および経路に応じて固形または液体であり得る製薬上許容し得る担体と組合せて投与する。許容し得る担体の例としては、限定するものではないが、澱粉、デキストロース、サクロース、ラクトース、ゼラチン、寒天、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、アカシア、および同様な担体がある。液体の例としては、塩水、水、食用油、例えば、ピーナツおよびコーン油がある。
固体形で投与する場合、当該化合物と希釈担体は、任意の周知の方法により調製した錠剤、カプセル剤、粉末剤、トローチ剤、座薬の形であり得る。液体製剤として投与する場合、活性化合物と液体希釈剤担体との混合物がそのように投与する懸濁液の形であり得る。当該化合物は、増殖を抑制しおよび/または癌を破壊しまたはマラリアおよびリーシュマニアのような原虫生物体を破壊するのに十分な無毒性投与量濃度で投与する。実際の投与量単位は、患者の体重および/または患者が患っている病理症状の重篤度およびタイプのような周知の要因によって決定されるであろう。これらを勘案することにより、特定の患者に対する投与量単位は、医師であれば、医療技術における既知の方法に従い容易に決定し得ることである。
【０００７】
本発明の化合物は、ジヒドロアルテミシニンまたはジヒドロアルテミスエンを種々の必要に応じて置換された1,2-、1,3-または1,4-グリコールと乾燥エーテル中の酸性条件(三フッ化ホウ素エーテル化物)下に反応させ、その後、反応混合物のクロマトグラフィーを行って所望生成物を単離することによって調製する。必要に応じての置換基としては、例えば、アルコキシまたはアシロキシ基がある。また、本発明の二量体は、例えばジヒドロキシアセトンのようなジヒドロキシケトン類とDHAまたはジヒドロアルテミスエンとの反応、その後のケト基の還元および該ケトンの還元において形成されたヒドロキシ基と酸ハライドまたは酸無水物としてのモノまたはジカルボン酸のようなヒドロキシル反応性化合物との反応によっての調製し得る。出発物質(ジヒドロアルテミシニン)は、天然産生物アルテミシニン(1)の水素化ホウ素ナトリウム還元により調製する。後者の化合物は、以前に開示された手順に従い、クソニンジンの葉から分離する(文献１５、１６)。本発明の化合物をNCI抗腫瘍スクリーニングおよび抗マラリアおよび抗リーシュマニアスクリーニングにおいて試験した。その活性を、図２A、２B、３A、３B、４A、４B、および図５〜９において提示している表１〜８に示す。
【０００８】
（発明を実施するための最良の形態）
実施例
各反応は、開放乾燥丸底フラスコ内で行った。ジエチルエーテル(エーテル)は、アルゴン雰囲気下で使用する前に、ナトリウムベンゾフェノンケチルから蒸留した。薬品類は、すべてSigma-Aldrich社から購入し、さらに精製することなく使用したが、ジオール類は使用前に等級Iのアルミナ上で乾燥させた。アルテミシニン(1)は、地場繁殖クソニンジンL.植物体から、文献の手順(文献１５、１６)を使用して分離し、以前に報告されたようにしてジヒドロアルテミシニンに還元した(文献１７)。
カラムクロマトグラフィーは、フラッシュクロマトグラフィーを使用し、Merck社から購入したシリカゲル(粒度230〜400メッシュ)を使用して実施した。分析用薄層クロマトグラフィー(TLC)は、n-ヘキサン-EtOAc混合物を溶媒系として使用し、シリカゲル60 F254プレート(250μm厚；Merck社)により実施した。可視化は、p-アニスアルデヒドスプレー試薬をスプレーし、次いでホットエアガンを使用して加熱することによって実施した(文献１８)。
Mpは、Electrothermal 9100計器上で記録した。IRスペクトルは、AATI Mattson Genesis Series FTIRを使用して得た。旋光度は、JASCO, DIP-370デジタル偏光計を使用し、周囲温度で記録した。1Dおよび2D NMRスペクトルは、Bruker Avance DRX 500分光計において500 MHz (1H)および125 MHz (13C)で、或いはBruker DRX 400分光計において溶媒ピークを内部標準として使用して得た。HRESIFTMSは、Bruker Bioapex FT-MSを使用し、ESIモードで得た。低解像MSは、ThermoQuest aQa LC/MSにおいて測定した。
【０００９】
グリセリンによる1,3-β,β-ジヒドロアルテミシニン二量体の調製(化合物4)
実施例１
乾燥エーテル(10mL)中の丸底フラスコ(50mL)内ジヒドロアルテミシニン(160mg、0.56ミリモル)の攪拌溶液に、乾燥グリセリン(26mg)とBF3OEt2 (267μL)を、皮下注射用シリンジを使用して添加した。混合物をアルゴン下に70分攪拌し、次いで、失活させ、通常のようにして処理してガム状残留物(199mg)を残した。エーテルから結晶化させて、4 (52mg)を立方体結晶として得た(28.7％)；[α]D +173°(c0.022、CHCl3)；IR (フィルム)νmax：3525 (OH)、2953、2933、2881、1449、1376、1194、1176、1134、1107、1027、991 cm-1；1H NMR (CDCl3、500 MHz、２つの同一モノマー単位の一方において)：δ 5.40 (1H、s、H-5)、4.79 (1H、d、J J = 3.9、H-12)、4.78 (1H、d、J = 3.5 Hz、H-12')、3.87 (1H、m、H-16、H-16'、H-17)、3.49 (1H、dd、J = 5.9、4.3 Hz、H-18)、3.42 (1H、q、J = 5.4 Hz、H-18')、2.63 (1H、m、H-11)、2.34 (1H、ddd、J = 14.0、4.0、3.9Hz、H-3)、2.00 (1H、m、H-3')、1.85 (1H、m、H-2)、1.68 (3H、m、H-2'、H-8、H-9)、1.46 (2H、m、H-7、H-8')、1.39 (3H、s、Me-15)、1.34 (1H、m、H-10)、1.21 (1H、m、H-1)、0.92 (3H、d、J = 6.4 Hz、Me-14)、0.90 (3H、d、J = 7.4 Hz、Me-13)、0.89 (3H、d、J = 7.3 Hz、H-13')、0.87 (1H、m、H-9')；13C NMR (CDCl3、125 MHz)：δ 104.5 (s、C-4)、103.13 (d、C-12)、103.06 (s、C-12')、88.3 (d、C-5)、81.4 (s、C-6)、70.3 (t、C-16)、70.1 (t、C-18)、70.0 (d、C-17)、52.9 (d、C-1)、44.7 (d、C-7、C-7')、37.7 (d、C-10)、36.8 (t、C-3)、35.0 (t、C-9)、31.27 (d、C-11)、31.25 (d、C-11')、26.5 (q、C-15)、25.0 (t、C-2)、25.0 (t、C-8)、20.7 (q、C-14)、13.4 (q、C-13)；HRESIFTMS [m/z] 625.3512 [M+H]+ (C33H53O11における計算値、625.3582)。
【００１０】
化合物4の調製における好ましい手順
実施例２
化合物4を調製する好ましい方法は、先ずケトンプレカーサーをジヒドロキシアセトンとジヒドロアルテミシニンとの三フッ化ホウ素-エーテル化物の存在下での縮合により調製し、次いで、得られたケトンの水素化ホウ素ナトリウム還元を行って化合物4を得ることであった。このことは、以下の実施例において詳述する。
ジヒドロキシアセトンによるβ,β-ジヒドロアルテミシニン二量体の調製(化合物7)
実施例３
ジヒドロアルテミシニン(284mg、1ミリモル)と1,3-ジヒドロキシアセトン二量体(45.05mg、0.25ミリモル)をジエチルエーテル(10mL)中に懸濁させた。その後、混合物(アルゴン下に5℃に冷却した)に、35.5mgのBF3Et2O (0.25ミリモル、31μL)を添加し、混合物を5℃で20分、次いで室温で1時間攪拌した。通常のように処理して、319mgの残留物を得た。
残留物をシリカゲル(30g)上でクロマトグラフィー処理し、ヘキサン：EtOAC (95：5)で溶出させ、極性は80：20に上昇した。各画分を集め、TLC類似性に従ってプールして４つの主要画分を得た。最も極性のある画分(140.2mg)を化合物7として同定した(NaBH4還元時に化合物4に転化する)：
CDCl3中500 MHzでの1H-NMR：δ5.44 (2H、s、H-5およびH-5')、4.805 (2H、d、J = 3.39 Hz、H-12およびH-12')、δ4.46および4.285 (H-16およびH-18)を中心した2本の広い二重項 (各々2H、17.59)、2.665 (2H、m、H-11およびH-11')、2.355 (2H、ddd、H-3)、2.025 (2H、m、H-3')、1.88 (2H、m、H-2)、1.81 (4H、m、H-9およびH-9')、1.675 (2H、m、H-8)、1.475 (4H、H-7、H-7'、H-10およびH-10')、1.41 (6H、s、Me-15およびMe-15')、1.255 (2H、m、H-1およびH-1')、0.99-0.95 (12H、Me-14、Me-14'、Me-13およびMe-13')。
CDCl3中124 MHzでの13C-NMR：δ204.8 (s、C=0)、104.53 (s、C-4)、102.87 (d、C-12)、88.51 (d、C-5)、81.36 (s、C-6)、72.06 (t、C-16およびC-17)、52.89 (d、C-1)、44.67 (d、C-7)、37.75 (d、C-10)、36.77 (t、C-3)、34.99 (5、C-9)、31.13 (d、C-11)、26.47 (q、C-15)、25.03 (t、C-2)、24.74 (t、C-8)、20.69 (q、C-14)、13.43 (q、C-13)。
【００１１】
実施例４
エーテル(100mL)中の2.84gのジヒドロアルテミシニン(10ミリモル)と450mg (2.4ミリモル)の1,3-ジヒドロキシアセトン二量体の懸濁液に、127μLのBF3Et2O (142mg、1ミリモル)を5℃で添加した。混合物を室温で30分間攪拌し、BF3Et2Oの第２部分(127μL)を添加した。BF3Et2Oの第３および第４部分(254μL)を15分間隔で添加し、全体で4ミリモルとした。攪拌を1.5時間続行した。通常のように処理して油状残留物を得、これを実施例３に記載した方法と同様な方法でクロマトグラフィー処理し、各画分をそのTLC類似性に基づき一緒にした。
実施例３で調製した二量体に相応するRf値を有する画分を一緒にし溶媒を蒸発させて、真空中で発泡した2.05gの油状残留物を生成させた。この物質は、実施例３において調製した物質(化合物7)と同一であった。
実施例５
エーテル(100mL)中の3.3gのジヒドロアルテミシニン(11.6ミリモル)と522mg (2.9ミリモル)の1,3-ジヒドロキシアセトン二量体(0.25当量)の懸濁液に、0.88mLのBF3Et2O (0.986g、6.9ミリモル、0.6当量)を5℃で添加した。その後、混合物を室温で3時間攪拌し、次いで通常のように処理して油状残留物を得た。残留物をシリカゲルカラム(130g)上でクロマトグラフィー処理し、95：5〜85：15の範囲のヘキサン-EtOAC混合物で溶出させて数個の画分を得、これをTLC類似性に従って一緒にした。所望生成物を含有する画分(実施例３において調製した画分と同一)を一緒にして1.628gの化合物7を得た。
【００１２】
化合物7から出発してのグリセリンの1,3-β,β-ジヒドロアルテミシニン二量体の調製(化合物4)
実施例６
ケトン中間体(化合物7) (1.94g、312ミリモル)を、225mLのTHFと水の混合物(2：1)中に溶解した。溶液を攪拌し、その後、NBH4 (474mg、4モル当量)を室温で15分に亘って分割して添加した。その後、混合物を2N HClで中和した。次に、THFを真空下に蒸発させた。沈降物を濾過し、水洗し、風乾させて、実施例１において調製した化合物と同一の1.8g (収率92.5％)の化合物4を得た。
実施例７
実施例６に記載した同じ手順を、0.778gの化合物7を使用して繰返して、0.73gの化合物4を得た。
シクロヘキサンジオールによるβ,β-ジヒドロアルテミシニン二量体の調製(化合物5および6)
実施例８
丸底フラスコ(100mL)内にジヒドロアルテミシニン(850mg、3.0ミリモル)と乾燥エーテル(25mL)を導入し、次いで、混合物を、シクロヘキサン-1,4-ジオール(シスとトランス混合物) (170mg)と一緒に室温で攪拌した。その後、攪拌溶液に、BF3OEt2 (570μL)を、皮下注射用シリンジを使用して添加した。攪拌を80分間続行し、次いで、反応を失活させ、通常のようにして処理してガム状残留物(1.13g)を残した。残留物をSiゲルカラム(170g)上に負荷させn-ヘキサン中増分量のEtOAc (15→50％)により溶出させた。5mLの画分を集め、同様な画分をTLCの手引きに従ってプールして化合物5 (238mg、油状物)を得た。早期の画分をプールし、シリカゲルカラム上で再クロマトグラフィー処理して6を得た(70mg、白色非晶質固形物)。
【００１３】
化合物5；[α]D +142°(c 0.036、MeOH)；IR (フィルム)νmax：2938、2872、1448、1375、1227、1194、1122、1099、1029 cm-1；1H NMR (CDCl3、500 MHz、同一モノマー単位の一方において)：δ5.42 (1H、s、H-5)、4.90 (1H、d、J = 3.3、H-12)、3.78 (1H、brs, H-16), 2.62 (1H, m, H-11), 2.36 (1H, ddd, J = 14.0, 12.4, 3.8 Hz, H-3), 2.04 (1H, m, H-3'), 1.88 (2H, m, H-2, H-8), 1.77 (2H, m, H-2', H-8'), 1.71 (2H, m, H-17a、H-17b)、1.65-1.56 (4H、m、H-9、H-9'、H-17'a、H-17'b)、1.48 (1H、m、H-7)、1.43 (3H、s、Me-15)、1.32 (1H、m、H-10)、1.25 (1H、m、H-1)、0.95 (3H、d、J = 6.2 Hz、Me-14)、0.90 (3H、d、J = 7.2 Hz、Me-13)；13C NMR (CDCl3、125 MHz)：δ104.4 (s、C-4)、100.0 (d、C-12)、88.4 (d、C-5)、81.5 (s、C-6)、72.7 (d、C-16)、53.0 (d、C-1)、44.9 (d、C-7)、37.9 (d、C-10)、36.9 (t、C-3)、35.2 (t、C-9)、31.2 (d、C-11)、26.6 (q、C-15)、24.9 (t、C-2)、25.1 (t、C-8)、20.7 (q、C-14)、13.5 (q、C-13)；HRESIFTMS [m/z] 647.3445[M-1]-(C36H55O10の計算値、647.3510)。
化合物6；Rf 0.42 (n-ヘキサン：EtOAc、8：2)、[α]D +114°(c. 0.042、CHCl3)；IR (フィルム)  OH吸収無し；1H NMR (CDCl3、400 MHz)：δ5.41 (1H、s、H-5)、4.88(1H、d、J = 3.3 Hz、H-12)、3.75 (1H、brs、H-16)、1.47 (1H、m、H-7)、1.43 (3H、s、Me-15)、1.26 (2H、m、H-1、H-10)、0.95 (3H、d、J = 6.0 Hz、Me-14)、0.87 (3H、d、J = 7.3 Hz、Me-13)；13C NMR (CDCl3、100 MHz)：δ104.4 (s、C-4)、100.4 (d、C-12)、88.4 (d、C-5)、81.6 (s、C-6)、73.9 (t、C-16)、53.0 (d、C-1)、44.9 (m、C-7)、37.9 (d、C-10)、36.9 (t、C-3)、35.1 (t、C-9)、31.2 (d、C-11)、30.4 (t、C-17')、27.5 (t、C-17)、26.6 (q、C-15)、24.9 (t、C-2)、25.1 (t、C-8)、20.8 (q、C-14)、13.5 (q、C-13)；HRESIFTMS [m/z] 671.3772 [M+Na] +(C36H56O10Naの計算値、671.3765)。
【００１４】
実施例９
ジヒドロアルテミシニン(372mg、1.31ミリモル)と1,4-シクロヘキサンジオール(シスおよびトランス混合物) (74.4mg、0.64ミリモル)の混合物を10mLの乾燥エーテル中に懸濁させ、0.25mLのBF3Et2O (280mg、1.97ミリモル)を0℃で添加した。混合物を室温で80分間攪拌し、次いで、重炭酸ナトリウム溶液と一緒に振盪させることによって処理し、エーテル相を分離した。水性相をエーテル(2×10mL)で洗浄した。エーテル相を一緒にし、水および塩水で洗浄し、エーテル相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。エーテルを蒸発させて、油状残留物(429mg)を得、これをシリカゲルカラム(30g)上でクロマトグラフィー処理し、97：3〜80：20範囲のヘキサンエーテル混合物で溶出させ、各画分をそのTLC類似性に従い一緒にプールした。化合物6 (56mg)を白色固形物として単離し、化合物5 (24mg)を、真空下で発泡した油状物として単離した。これらは、実施例８において調製した化合物5および6と同一であることが判明した。
実施例１０
ジヒドロアルテミシニン(744mg、2.62ミリモル)とシスおよびトランス混合物の1,4-シクロヘキサンジオール(149mg、1.28ミリモル)の混合物を、20mLの乾燥エーテル中で5℃で攪拌した。混合物に、BF3Et2O (83μL、0.655ミリモル)を添加し、攪拌を室温で1時間続けた。第２部分のBF3Et2O (83μL)を添加し、混合物を1時間攪拌し続けた。その後、反応混合物を通常のようにして処理して890mgの油状残留物を得た。シリカゲル(32g)を使用しての残留物のカラムクロマトグラフィーおよびヘキサン：エーテル92：2、96：4、94：6、さらに90：10 (各200mL)での溶出により、TLC類似性に従ってプールした数種の画分を得た。化合物6を立方体結晶として単離した(238mg、融点146〜148℃)。化合物5を後の画分から非晶質発泡体として単離した(184mg、融点93〜97℃)。これらは、実施例８および９において前記で調製した化合物と同一であることが判明した。
【００１５】
実施例１１
ジヒドロアルテミシニン(10g、35.2ミリモル)と1,4-シクロヘキサンジオール(シスおよびトランス混合物) (2g、17.2ミリモル)の混合物を260mLの乾燥エーテル中に懸濁させ、1.11mLのBF3Et2Oをアルゴン下に0℃で添加した。2回の更なる部分のBF3Et2O (各1.11mL)を1時間後の間隔で添加した。その後、混合物を室温で最後のBF3Et2O添加後の1時間攪拌し、次いで通常のようにして処理して12gの非晶質残留物を得、これをシリカゲルカラム上でクロマトグラフィー処理して2.69gの化合物5と2.78gの化合物6を生成させた。これらは、実施例８〜１０において調製した化合物5および6と同一であることが判明した。
化合物5のみまたは化合物6のみを所望するならば、シスまたはトランス1,4-シクロヘキサンジオールのみを出発物質として使用して所望の生成物を生成させるべきことに触れなければならない。
化合物4のヘミスクシネートエステルの調製(化合物8)
実施例１２
乾燥塩化メチレン(4mL)中の化合物4 (200mg、0.32ミリモル)の攪拌溶液に、トリエチルアミン(0.14mL、1.3当量)、ジメチルアミノピリジン(16mg、0.4当量)および無水コハク酸(92mg、3当量)を添加した。得られた溶液を室温で16時間ゆっくり攪拌した。減圧下で溶媒を蒸発させた後、残留物を、ヘキサン：アセトン(6：4)を溶離剤として使用してのシリカゲルカラム上で精製した。反応の生成物を、スペクトルデータ(実施例１３における詳細参照)に基づき化合物4のヘミスクシネートエステル(化合物8)として同定した0.68のRf値(ヘキサン：アセトン、1：1)を有する白色非晶質固形物(156mg)を単離した。
【００１６】
実施例１３
実施例１２の反応を、全ての反応物を比例してスケールアップしたより大規模(550mgの化合物4により出発)において繰返した。同じ方法で反応生成物を精製して、下記のスペクトルを有する355mgの化合物8を非晶質白色粉末として生成させた。
特性：
1H-NMR (アセトン-d6、500 MHz)：δ5.442 (1H、s、H-5)、5.396 (IH、s、H-5')、5.181 (IH、t、J = 4.9 Hz、H-17)、4.755 (IH、d、J = 3.4 Hz、H-12)、4.740 (IH、d、J = 3.4 Hz、H-12')、3.990 (2H、m、H-16)、3.608 (IH、dd、J = 4.5 Hzおよび4.5 Hz、H-18)、3.560 (IH、q、J = 5.19 Hz、H-18)、2.652 (4H、m、CO-CH2-CH2-CO-)、2.548 (2H、m、H-11およびH-11')、2.304 (2H、ddd、J = 3.0、3.89および3.0 Hz、H-3)、2.065 (2H、m、H-3')、1.886 (2H、m、H-2)、1.786 (2H、m、H-2)、1.786 (2H、m、H-9)、1.686 (2H、m、H-8)、1.534 (2H、m、H-2')、1.489 (2H、m、H-7およびH-10)、1.332 (6H、s、Me-15およびMe-15')、1.213 (2H、m、H-1およびH-1')、0.980〜0.937 (12H、Me-14、Me-13、Me-14'およびMe-13')。
13CNMR (アセトン-d6、125 MHz)：δ172.99 (s、CO-OH)、171.7 (s、-CO-O-)、103.9 (s、C-4)、102.46 (d、C-12)、102.32 (d、C-12')、88.02 (d、C-5)、87.99 (d、C-5')、80.97 (s、C-6)、71.92 (d、C-17)、66.74 (t、C-16)、66.59 (t、C-18)、53.09 (d、C-1)、44.89 (d、C-7)、37.63 (d、C-10)、36.70 (t、C-3)、34.98 (t、C-8)、31.33 (d、C-11)、31.29 (d、C-11')、29.48および28.78 (t、CO-CH2-CH2-CO のメチレン)、25.72 (q、C-15)、24.98 (t、C-2)、24.7 (t、C-9)、20.23 (q、C-14)、12.81 (q、C-13)。
HRESIFTMS (m/z) 723.362 [M-H]+、(C37 H55 O14の計算値)。
【００１７】
エチレングリコールによるβ,β-ジヒドロアルテミシテン二量体の調製(化合物9)
実施例１４
乾燥エーテル(15mL)中のジヒドロアルテミシテン[以前に開示されたようにしてアルテミシニンから調製した(文献１９)] (75mg)とエチレングリコール(52mg)の攪拌溶液に、BF3OEt2 (18μL)を添加し、反応混合物を24時間放置し、その後、失活させ、通常のようにして処理した。n-ヘキサン中でのEtOAc勾配(20%→50％)を使用しての粗反応混合物のカラムクロマトグラフィーにより、化合物9をガム状物として得た(7mg)。
[α]D +181°(c 0.022、MeOH)；IR (フィルム)νmax：2937、2875、1681、1449、1376、1191、1102、987 cm-1；1H NMR (CDCl3、400 MHz)：δ5.89 (1H、s、H-5)、5.38 (1H、s、H-12)、5.08 (1H、s、H-13a)、4.94 (1H、s、H-13b)、3.89 (1H、d、J = 7.5 Hz、H-16a)、3.57 (1H、d、J = 7.6 Hz、H-16b)、2.31 (1H、m、H-7)、1.44 (3H、s、Me-15)、1.25 (2H、m、H-1、H-10)、0.7 (3H、d、J = 6.2 Hz、Me-14)；13C NMR (CDCl3、100 MHz)：δ143.1 (s、C-11)、114.5 (t、C-13)、103.5 (s、C-4)、101.2 (d、C-12)、88.1 (d、C-5)、80.8 (s、C-6)、66.6 (t、C-16)、51.9 (d、C-1)、48.3 (d、C-7)、37.0 (d、C-10)、36.5 (t、C-3)、34.4 (t、C-9)、31.4 (t、C-8)、24.6 (t、C-2)、25.8 (q、C-15)、20.0 (q、C-13)。
HRESIFTMS [m/z] 613.2943 [M+Na]+ (C32H46O10 Naの計算値、613.2983)。
【００１８】
実施例１５
本発明の化合物を米国立がん研究所(NCI)によってその標準プロトコールに従い60種の癌細胞系に対して実施された抗癌活性スクリーニングに供した。白血病、非小細胞肺癌、結腸癌、CNS癌、黒色腫、卵巣癌、腎臓癌、前立腺癌、および乳癌について選択された細胞系に対する本発明の化合物の活性を、GI50 (表１)、TGI (表２)およびLC50 (表3)濃度に関して測定した。GI50は、細胞増殖の50％を抑制する濃度であり；TGIは、完全増殖抑制を生ずる濃度であり；LC50は、細胞の50％を死滅させる濃度である。
実施例１６
本発明の化合物を生体内活性を評価するNCIの中空繊維アッセイ標準プロトコールにおいてさらに試験した。各化合物は、IPとSCの合計点数が ≧ 20であった場合、或いはSC点数が ≧ 8であった場合、或いは１種以上の細胞系の正味の細胞死滅があった場合に更なる試験に進むに十分な活性を有するものとみなされる。表４(図５)は、このアッセイにおける本発明の化合物の試験結果を示す。
実施例１７
本発明の化合物を、その抗血管形成活性を評価する各生体外アッセイに供した。これらのアッセイは、NCIにより、初期生体外試験のためのHUVECアッセイにおけるNCIの標準プロトコールに従い実施された。３つのアッセイは増殖抑制アッセイ、コード形成アッセイおよび細胞移動アッセイである。化合物は、活性が上記アッセイの少なくとも１つにおいて証明された場合に更なる試験について考慮される。表５(図６)は、これらのアッセイにおける本発明の化合物の活性を示す。
【００１９】
実施例１８
本発明の化合物を、ミシシッピー大学のNational Center for Natural Products Research (NCNPR)において、抗マラリアおよび抗リーシュマニア活性を評価するための標準プロトコールに従い、抗原虫症スクリーニングに供した。これら２種の生物体に対する化合物の活性を各生物体に対する標準の薬物の活性と比較した。
表６(図７)は、マラリア寄生虫(Plasmodium falciparum)の２つの株に対する本発明の化合物の活性を示しており、１つはクロロキン感受性(D6クローン)であり、１つはクロロキン耐性(W2クローン)である。各化合物の細胞毒性もベロ細胞を使用して評価した。データは、本発明の化合物が抗マラリア薬としてのクロロキンまたはアルテミシニンよりも活性であることを示している。
表７(図８)は、マラリア寄生虫に対する本発明の選択された群の化合物の活性を示している。これらの化合物は、表６(図７)において試験した化合物と異なる合成ロットに由来する。このことは、本発明の化合物の抗マラリア薬としての活性を確証している。
表８(図９)は、リーシュマニア寄生虫に対する本発明の化合物の活性をペンタミジンの活性に匹敵する活性によって示している。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本明細書において番号を付した各化合物を示す。
【図２Ａ】本発明の化合物のGI50濃度についての生体外抗癌試験の結果を示す表１である。
【図２Ｂ】表１の続きである。
【図３Ａ】本発明の化合物のTGI濃度についての生体外抗癌試験の結果を示す表２である。
【図３Ｂ】表２の続きである。
【図４Ａ】本発明の化合物のLC50濃度についての生体外抗癌試験の結果を示す表３である。
【図４Ｂ】表３の続きである。
【図５】本発明の化合物の生体内中空繊維アッセイにおける活性のデータを示す表４である。
【図６】本発明の化合物の生体外抗血管形成活性のデータを示す表５である。
【図７】本発明の化合物の抗マラリア活性のデータを示す表６である。
【図８】本発明の化合物の抗マラリア活性のもう１つのデータを示す表６である。
【図９】本発明の化合物の抗リーシュマニア活性のデータを示す表６である。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
2006504753.tif 000033