(57)【要約】本発明は、式（IA）を有するNPY-5受容体アンタゴニストを提供する。上述のNPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状および／または障害を治療するために有効な方法および医薬組成物もまた提供される。  【化１】2006511530.tif 000017
2006511530.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＡ）
【化１】
2006511530.tif 000016
〔式中、
Ｒ1は、水素または(C1-C4)アルキルであり；
Ｒ2は、水素、(C1-C4)アルキル、アリール、または酸素、窒素もしくは硫黄から選ばれる１〜３のヘテロ原子を有する５〜６員環のヘテロアリールであり；そして、
Ｒ3は、水素、(C1-C4)アルキル、またはハロ−置換(C1-C4) アルキルであるか；
または、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、場合により置換される芳香族の６員環の複素環（ここで、該複素環は、１〜２の環の窒素原子を有する）、または場合により置換される芳香族の６員環の炭素環を形成する〕
の化合物、薬学的に許容し得るその塩、該化合物もしくは塩のプロドラッグ、または該化合物、塩もしくはプロドラッグの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項２】
9-エチル-3-(5-メチル-4-フェニル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；
9-エチル-3-(4-フェニル-5-トリフルオロメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；
9-エチル-3-(5-メチル-4-ピリジン-2-イル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；
3-(4,5-ジメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；
9-エチル-3-(1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；
3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；
9-エチル-3-(3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；
9-エチル-3-(7H-プリン-8-イル)-9H-カルバゾール；および
2-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-1H- ベンゾイミダゾール-5-カルボン酸；
から成る群から選ばれる請求項１の化合物、薬学的に許容し得るその塩、または該化合物もしくは塩の溶媒和物もしくは水和物。
【請求項３】
請求項１の化合物、薬学的に許容し得るその塩、該化合物もしくは塩のプロドラッグ、または該化合物、塩もしくはプロドラッグの溶媒和物もしくは水和物、および薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤、または担体を含有する医薬組成物。
【請求項４】
請求項１の化合物が、9-エチル-3-(5-メチル-4-フェニル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(4-フェニル-5-トリフルオロメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(5-メチル-4-ピリジン-2-イル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；3-(4,5-ジメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(7H-プリン-8-イル)-9H-カルバゾール；および2-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボン酸から成る群から選ばれる請求項３に記載の医薬組成物、薬学的に許容し得るその塩、または該化合物もしくは塩の溶媒和物もしくは水和物。
【請求項５】
少なくとも１つの追加の薬剤をさらに含有する、請求項３または４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
少なくとも１つの追加の薬剤が、抗肥満剤、食欲抑制剤、ソルビトール脱水素酵素阻害剤、アルドース還元酵素阻害剤、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、コリン作動性薬剤、抗うつ剤、抗不安剤、および一般的または一般的でない抗精神病薬から成る群から選ばれる、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
動物におけるNPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状または障害を治療するための方法であって、かかる治療の必要性のある動物に、請求項１の化合物、薬学的に許容し得るその塩、該化合物もしくは塩のプロドラッグ、または該化合物、塩もしくはプロドラッグの溶媒和物もしくは水和物の治療上の有効量を投与する段階を含む、上記の方法。
【請求項８】
請求項１に記載の化合物が、9-エチル-3-(5-メチル-4-フェニル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(4-フェニル-5-トリフルオロメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(5-メチル-4-ピリジン-2-イル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；3-(4,5-ジメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(7H-プリン-8-イル)-9H-カルバゾール；および2- (9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボン酸；薬学的に許容し得るその塩、または該化合物もしくは塩の溶媒和物もしくは水和物から成る群から選ばれる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
疾患、症状または障害が、肥満症、摂食障害、発作、不安、糖尿病、高血圧、高脂血症、膵臓癌または乳癌、鼻閉、女性もしくは男性の性機能不全、うっ血性心不全、腸管機能障害または精神医学的障害である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
動物におけるNPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状または障害を治療するための薬剤の製造における、請求項１または２に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はカルバゾールNPY-5アンタゴニストならびに、NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状および／または障害の治療におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
神経ペプチドＹ(NPY)、３６アミノ酸のペプチド性神経伝達物質は、神経伝達物質／神経ホルモンの膵臓ポリペプチド類の一種である。NPYは中枢神経系全体に広く分布し、そして、基本的な生理的機能の制御において重要な役割を示唆する、進化において最も維持されるペプチドの一つである。現在までの研究は、摂食障害、発作、不安、糖尿病、高血圧、癌（例えば、乳癌または膵臓癌）、鼻閉、性機能不全、うっ血性心不全および腸管機能障害を含む多くの疾患の病態生理学において、NPYが関与することを示している。少なくとも６つのNPY受容体サブクラスが識別されており、そして現在までに、それらのサブクラスの２つ、摂食およびエネルギー消費を調節する最も重要な受容体の特殊型であると考えられるNPY-1およびNPY-5に関してはクローン化されている。論文としては、Balasubramaniam, A.,“Clinical potentials of neuropeptide Y family of hormones, ”Am. J. of Surgery, 183,430-434 (2002) を参照。
【０００３】
種々の動物の研究は、神経ペプチドＹ受容体の活性化が、完了行動の刺激（Flood and Morley Peptides, 10, 963-966 (1989), Leibowitz and Alexander, Peptides,12, 1251-1260 (1991), and Stanley et al. Peptides, 13,581-587 (1992)）、そして血管収縮（Wahlestedt et al. Regul. Peptides, 13,307-318(1986), McCauley and Westfall J. Pharmacol. Exp. Ther. 261,863-868 (1992), and Grundemar et al. Br. J. Pharmacol. 105,45-50 (1992)）に関係することを示している。
【０００４】
さらに、Grundemar and Hakanson TiPS, May 1994 [Vol. 15], 153-159は、動物においてNPYは摂食の強力な刺激、および高血圧を誘導する血管収縮の誘導物質であると記載する。それらはまた、NPYの低レベルは食欲の低下に関連すると指摘する。該研究報告は、
動物においてこのタンパク質の活性を阻害する化合物は高血圧および食欲を低下させ得ることを明らかに示している。
【０００５】
従って、NPYがそれらの受容体の特殊型に結合するのを阻止できる薬剤は、肥満症、神経性食欲不振症、神経性過食症を含む多くの摂食障害；インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血症および高血圧を含むがこれらに限定されない肥満症関連障害に効用を有し、ならびにNPY活性の阻害が有益である治療に関して他の効能を有するはずである。
【０００６】
加えて、前臨床および臨床上の両方の兆候は、NPYがその受容体と共に、うつ病および関連疾患を含むいくつかの精神医学的障害において直接的な影響を有し得ることを示唆している。NPY類似免疫活性およびNPY受容体は脳全体に発現し、大脳辺縁系全体に見出される多様な集中を有する。かかる脳構造は、抑うつ性障害の原因だけでなく、情動処理の調節において繰り返し影響を与えている。論文としては、Redrobe, J. P., et al.,“Neuropeptide Y (NPY) and Depression: From Animal Studies to the Human Condition,”Life Sciences, 71,2921-2937 (2002) を参照。
【０００７】
EP0759441およびU. S. 5,576,337は、NPYの過剰に関連する生理学的障害を報告する。
【０００８】
WO 99/01128は、或る種のNPY-5受容体伝達物質が或る種の血管収縮疾患、例えば本態性高血圧と同様に摂食障害、例えば肥満症および過食症の治療に有効であることを開示する。
【０００９】
NPY-5受容体アンタゴニストは既知であるが、特に、上述した基本的な生理的機能の制御においてNPY-5受容体が果たす重要な役割を考慮すると、NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患の治療において有効であり得る他のアンタゴニストに対する必要性が依然として存在する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、式（ＩＡ）
【化１】
2006511530.tif 000003
〔式中、
Ｒ1は、水素または(C1-C4)アルキルであり；
Ｒ2は、水素、(C1-C4)アルキル、アリール、または酸素、窒素もしくは硫黄から選ばれる１〜３のヘテロ原子を有する５〜６員環のヘテロアリールであり；そして、
Ｒ3は、水素、(C1-C4)アルキル、またはハロ−置換(C1-C4)アルキルであるか；
または、Ｒ2およびＲ3は一緒になって、場合により置換される芳香族の６員環の複素環（ここで、該複素環は、１〜２の環の窒素原子を有する）、または場合により置換される芳香族の６員環の炭素環（好ましくは、該芳香族の６員環の炭素環は一置換体である）を形成する〕
の化合物；薬学的に許容し得るその塩、該化合物もしくは該塩のプロドラッグ、または該化合物、該塩もしくは該プロドラッグの溶媒和物もしくは水和物を提供する。
【００１１】
式（ＩＡ）の好ましい化合物は、9-エチル-3-(5-メチル-4-フェニル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(4-フェニル-5-トリフルオロメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(5-メチル-4-ピリジン-2-イル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール；3-(4,5-ジメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(1H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；3- (1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール；9-エチル-3-(7H-プリン-8-イル)-9H-カルバゾール；および2-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボン酸；薬学的に許容し得るその塩、または該化合物もしくは該塩の溶媒和物もしくは水和物を含む。
【００１２】
熟練した当業者は、イミダゾール環が互変異性体で存在し得ることを理解し得る；従って、互変異性体は本発明の一部を形成する。
【００１３】
本発明の他の実施形態において、（１）本発明の化合物および（２）薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤または担体を含有する医薬組成物が提供される。好ましくは、該組成物は本発明の化合物の治療上の有効量を含有する。該組成物はまた、（本明細書中に記載する）少なくとも１つの追加の薬剤を含有し得る。
【００１４】
本発明のさらに他の実施形態において、動物におけるNPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状または障害を治療するための方法であって、かかる治療の必要性のある動物に、本発明の化合物（またはその医薬組成物）の治療上の有効量を投与する段階を含む、上記の方法が提供される。NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状または障害は、肥満症、摂食障害（例えば、神経性食欲不振症および神経性過食症）、発作、不安、糖尿病、高血圧、高脂血症、癌（例えば、乳癌および膵臓癌）、鼻閉、性機能不全、うっ血性心不全、腸管機能障害ならびに精神医学的障害（例えば、うつ病）を含む。
【００１５】
本発明の化合物は、（本明細書中に記載する）他の薬剤と組合わせて投与し得る。該併用療法は、（ａ）本発明の化合物、本明細書中に記載する少なくとも１つの追加の薬剤、および薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤または担体を含有する単一の医薬組成物；または（ｂ）（ｉ）本発明の化合物、および薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤または担体を含有する第一の組成物、ならびに（ii）本明細書中に記載する少なくとも１つの追加の薬剤、および薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤または担体を含有する第二の組成物を含有する２つの別々の医薬組成物として投与し得る。該医薬組成物は、同時または逐次的に、およびあらゆる順番で投与し得る。
【００１６】
定義
本明細書中で用いたように、“アルキル"という語は、一般式ＣnＨ2n+1の炭化水素基を指す。該アルカン基は直鎖または分枝鎖であり得る。例えば、“(C1-C6)アルキル”という語は、一価の直鎖または分枝鎖の、１〜６の炭素原子を有する脂肪族（例えばメチル、エチル、n-プロピル、i- プロピル、n-ブチル、i-ブチル、s-ブチル、t-ブチル、n-ペンチル、1-メチルブチル、2-メチルブチル、3-メチルブチル、ネオペンチル、3, 3-ジメチルプロピル、ヘキシル、2-メチルペンチルおよび類似のもの）を指す。同様に、アルコキシ、アシル(例えばアルカノイル)、アルキルアミノ、ジアルキルアミノおよびアルキルチオ基のアルキル部分（すなわち、アルキル部分構造）は、上述の通りである同一の定義を有する。“ハロ−置換アルキル”は、１つまたはそれ以上のハロゲン原子で置換されたアルキル基(例えばフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、パーフルオロエチルおよび類似のもの)を指す。
【００１７】
“部分的に飽和した、または完全に飽和した複素環”(“部分的に飽和した、または完全に飽和したヘテロ環”とも呼ばれる)という語は、部分的または完全のどちらかに水素添加された、そして単環、二環またはらせん状の環として存在し得る非芳香環を指す。他に特定しない限り、該複素環は一般的に、硫黄、酸素および／または窒素から選ばれる１〜３のヘテロ原子 (好ましくは、１または２のヘテロ原子) を有する３〜６員環である。部分的に飽和した、または完全に飽和した複素環は、エポキシ、アジリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、ジヒドロピリジニル、ピロリジニル、N-メチルピロリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、2H-ピラニル、4H-ピラニル、2H-クロメニル、オキサジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロチエニル1,1-ジオキシド、および類似のものといった基を含む。“場合により置換”されると表示した場合には、部分的に飽和したまたは完全に飽和した複素環基は、(C1-C6)アルキル、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、-CO2H、-CO2(C1-C4)アルキル、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-C4)アルキルまたは-C(O)N((C1-C4)アルキル)2から選ばれる１つまたはそれ以上の置換基（代表的には、１つまたは２つの置換基）で置換されていてもよいし、置換されてなくてもよい。
【００１８】
“アリール”または“芳香族炭素環”という語は、単一（例えばフェニル）または縮合した環構造（例えばナフタレン、アントラセン、フェナントレン等）を有する芳香族部分構造を指す。代表的なアリール基は、６〜10員環の芳香族炭素環である。好ましいアリール基はフェニルである。“場合により置換”されると表示した場合には、該アリール基は、(C1-C6)アルキル、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、(C1-C6)アルコキシ、アミノ、-CO2H、-CO2(C1-C4)アルキル、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-C4)アルキルまたは-C(O)N((C1-C4)アルキル)2から選ばれる１つまたはそれ以上の置換基（代表的には、１〜３の置換基）で置換されていてもよいし、置換されてなくともよい。置換された場合には、置換されたアリール基は芳香族部分構造の鎖(例えばビフェニル、テルフェニル、フェニルナフタリル等)を含む。該アリール基は、芳香環構造内の炭素原子のいずれか１つによって、化学的単位または部分構造に結合し得る。
【００１９】
“ヘテロアリール”または“芳香族複素環”という語は、５〜10員環の芳香環構造（例えばピロリル、ピリジル、ピラゾリル、インドリル、インダゾリル、チエニル、フラニル、ベンゾフラニル、オキサゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、トリアジニル、ピリミジル、ピラジニル、チアゾリル、プリニル、ベンゾイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル等）内に少なくとも１つのヘテロ原子（例えば酸素、硫黄、窒素またはそれらの組合わせ）を有する芳香族部分構造を指す。該複素芳香族部分構造は、単一または縮合した環構造から成り得る。代表的な単一ヘテロアリール環は、酸素、硫黄および窒素から選ばれる１〜３のヘテロ原子を有する５〜６員環であり、そして代表的な縮合ヘテロアリール環構造は、酸素、硫黄および窒素から選ばれる１〜４のヘテロ原子を有する９〜10員環構造である。“場合により置換”されると表示した場合には、該ヘテロアリール基は、(C1-C6)アルキル、ハロゲン、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アミノ、-CO2H、-CO2(C1-C4)アルキル、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-C4)アルキルまたは-C(O)N((C1-C4)アルキル)2から選ばれる、好ましくは１つまたはそれ以上の置換基(代表的には、１つまたは２つの置換基)で置換されていてもよいし、置換されてなくてもよい。該ヘテロアリール基は、芳香環構造（例えば、イミダゾール-1-イル、イミダゾール-2-イル、イミダゾール-4-イル、イミダゾール-5-イル、ピリダ-2-イル、ピリダ-3-イル、ピリダ-4-イル、ピリダ-5-イルまたはピリダ-6-イル）内の原子のいずれか１つによって、化学的単位または部分構造に結合し得る。
【００２０】
“溶媒和物”という語は、１つまたはそれ以上の溶媒分子を有する、式（Ｉ）によって表される化合物（プロドラッグおよび薬学的に許容し得るその塩を含む）の分子錯体を指す。かかる溶媒分子は、受容個体に無害であることが既知である、医薬分野で通常用いる溶媒分子、例えば水、エタノールおよび類似のものである。“水和物”という語は、溶媒分子が水である該錯体を指す。
【００２１】
“保護基”または“Pg”という語は、該化合物における他の官能基を反応させる際に、或る種の官能性をブロックまたは保護するために通常用いる置換基を指す。例えば、“アミノ−保護基”は、アミノ基に結合する置換基であって、化合物中のアミノ官能性をブロックまたは保護する置換基である。適当なアミノ−保護基は、アセチル、トリフルオロアセチル、t-ブトキシカルボニル(BOC)、ベンジルオキシカルボニル(CBz)および9-フルオレニルメチレンオキシカルボニル(Fmoc)を含む。同様に、“ヒドロキシ−保護基”は、ヒドロキシ官能性をブロックまたは保護する、ヒドロキシ基の置換基を指す。適当な保護基はアセチルおよびシリルを含む。“カルボキシ−保護基”は、カルボキシ官能性をブロックまたは保護する、カルボキシ基の置換基を指す。通常のカルボキシ−保護基は、-CH2CH2SO2Ph、シアノエチル、2-(トリメチルシリル)エチル、2-(トリメチルシリル)エトキシメチル、2-(p-トルエンスルホニル)エチル, 2-(p-ニトロフェニルスルフェニル)エチル、2-(ジフェニルホスフィノ)-エチル、ニトロエチルおよび類似のものを含む。保護基およびそれらの使用について一般的な記載としては、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, JohnWiley & Sons, New York, 1991を参照。
【００２２】
“治療上の有効量”という句は、(ｉ) 或る種の疾患、症状または障害を治療または予防するか、(ii) 或る種の疾患、症状または障害の１つまたはそれ以上の徴候を減弱、寛解または消失させるか、または (iii) 本明細書中に記載した或る種の疾患、症状または障害の１つまたはそれ以上の徴候の発現を予防または遅延させる、本発明の化合物の量を意味する。
【００２３】
“動物”という語は、ヒト（男性または女性）、コンパニオンアニマル（例えばイヌ、ネコおよびウマ）、食料源となる動物、動物園の動物、海洋動物、鳥類および他の同様な動物種を指す。“食用動物”は、食料源となる動物、例えばウシ、ブタ、ヒツジおよび家禽を指す。
【００２４】
“薬学的に許容し得る”という句は、製剤を構成する他の成分、および／またはそれを用いて治療する哺乳類に対して、化学的および／または毒物学的に適合性のあるはずである物質または組成物を表す。
【００２５】
“治療すること”、“治療する”または“治療”という語は、防止的すなわち予防的、および緩和的の両方の治療を含む。
【００２６】
“NPY-5受容体によって調整される”または"NPY-5 受容体の調整"という語は、NPY-5受容体の活性化または非活性化を指す。例えば、リガンドはアゴニスト、部分アゴニスト、インバースアゴニスト、アンタゴニストまたは部分アンタゴニストとして作用し得る。
【００２７】
本明細書中に使用するように、“アンタゴニスト”という語はインバースアゴニストと同様に、完全アンタゴニストおよび部分アンタゴニストの両方を含む。
【００２８】
“本発明の化合物”という語は(他に特に断定しない限り)、式(IA)の化合物、そのプロドラッグ、該化合物および／またはプロドラッグの薬学的に許容し得る塩、ならびに該化合物、塩および／またはプロドラッグの水和物または溶媒和物、さらにはすべての立体異性体（ジアステレオアイソマーおよび鏡像体を含む）、互変異性体および同位体標識化合物を指す。
【００２９】
本発明は、NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状および／または障害の治療に有効である、化合物およびその医薬製剤を提供する。
【００３０】
本発明の化合物は、本明細書中に含まれる記載を考慮すると特に、化学分野に公知の合成経路に類似の方法を含む合成経路によって合成され得る。出発物質は一般的に商業的経路、例えばAldrich Chemicals (Milwaukee, WI)から入手可能であるか、または熟練した当業者に公知の方法を用いて容易に製造される（例えば、 Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed. )、またはBeilstein Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin, including supplements に一般的に記載される方法によって製造される(Beilstein オンライン・データベースを通じても入手可能)）。
【００３１】
実例的な目的のために、以下に述べる反応スキームは、重要な中間体と同様に本発明の化合物を合成するための、存在し得る経路を提供する。個々の反応段階のより詳細な説明については、以下の実施例の箇所を参照。熟練した当業者は、本発明の化合物を合成するために他の合成経路を用い得ることを理解し得る。或る種の出発物質および試薬はスキームにおいて示しそして以下で論ずるが、他の出発物質および試薬は、誘導体および／または反応条件の多様性を提供するために容易に変更できる。加えて、後述する方法によって製造する化合物の多くは、熟練した当業者に公知の従来の化学を用いるこの開示を考慮すると、さらに修飾できる。
【００３２】
本発明の化合物の製法において、中間体の別種の官能性（例えば、第一級または第二級アミン）の保護が必要になり得る。かかる保護の必要性は、別種の官能性の特質および製造方法の条件によって変わり得る。好適なアミノ−保護基(NH-Pg)は、アセチル、トリフルオロアセチル、t-ブトキシカルボニル(BOC)、ベンジルオキシカルボニル(CBz)および9-フルオレニルメチレンオキシカルボニル(Fmoc)である。かかる保護の必要性は、熟練した当業者によって容易に決定される。保護基およびそれらの使用について一般的な記載としては、T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991を参照。
【００３３】
式(Ｉ)の化合物は、以下のスキーム１に要約した一般的な製法を用いて製造できる。
【化２】
2006511530.tif 000004
【００３４】
化合物(IA)は、酢酸アンモニウムを加えた酢酸中で、アルデヒドＩ−１ａを妥当な1,2-ジケトンと共に約100℃で加熱することによって製造し得る。好適な1,2-ジケトンは、2,3-ブタンジオン、1-フェニル-プロパン-1,2-ジオン、1-ピリジン-2-イル-プロパン-1,2-ジオンおよび3,3,3-トリフルオロ-1-ピリジン-2-イル-プロパン-1,2-ジオンおよび類似のものを含む。
【００３５】
式(II)の化合物もまた、以下のスキーム２に要約した一般的な製法を用いて製造できる。
【化３】
2006511530.tif 000005
【００３６】
化合物IBは、アルデヒドＩ−１ａを妥当な1,2-ジアミノ置換アリールまたはヘテロアリール（式中、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは、２つ以下が窒素であるという条件で、炭素または窒素であり得る）環１−２ｂと共に、溶媒、例えばニトロベンゼン中約100℃〜約150℃での加熱により縮合することによって直接形成し得る。好適なジアミノアリールおよびヘテロアリール環は、1,2-ジアミノベンゼン、2,3-ジアミノピリジン、3,4-ジアミノ安息香酸および4,5-ジアミノピリミジンを含む。
【００３７】
一般的な熟練した当業者に既知である分離および精製の従来の方法および／または技術は、それに関連する種々の中間体と同様に、本発明の化合物を分離するために用い得る。かかる技術は、一般的な熟練した当業者に公知のものであり得るし、そして例えば、あらゆる種類のクロマトグラフィー(高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、シリカゲルといった一般的な吸着剤を用いるカラムクロマトグラフィー、および薄層クロマトグラフィー)、再結晶および微分(すなわち液体−液体)抽出の技術であり得る。
【００３８】
本発明の化合物はそれ自体で、または薬学的に許容し得るその塩、溶媒和物および／または水和物の形で、分離しそして使用し得る。“塩”という語は、本発明の化合物の無機塩および有機塩を指す。これらの塩は、化合物の最終的な分離および精製の間にそのままで、または化合物、N-オキシドもしくはプロドラッグを適当な有機もしくは無機の酸とそれぞれ反応させそしてそうして形成した塩を分離することによって製造し得る。代表的な塩は、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、硝酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、シュウ酸塩、ベシル酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、マロン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トシル酸塩、ギ酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシル酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトビオン酸塩およびラウリル硫酸塩の塩、ならびに類似のものである。本発明の化合物の好ましい塩は塩酸塩である。該塩は、無毒性のアンモニウム、第四級アンモニウムと同様に、アルカリおよびアルカリ土類金属、例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、および類似のものに基づく陽イオン、ならびにアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンおよび類似のものを含むがこれらに限定されないアミンカチオンを含み得る。例えば、Berge, et al., J. Pharm.Sci.,66,1-19 (1977) を参照。
【００３９】
“プロドラッグ”という語は、生体内で変換して式(I)の化合物を生じる化合物、または該化合物の薬学的に許容し得る塩、水和物もしくは溶媒和物を意味する。変換は種々の仕組み、例えば血液中の加水分解によって起こり得る。プロドラッグの使用についての考察は、T. Higuchi and W. Stella,“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”Vol. 14 of the A. C. S. Symposium Series, and in Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987によって提供される。
【００４０】
例えば、本発明の化合物がカルボン酸官能基を有する場合は、プロドラッグは酸性基の水素原子を基、例えば(C1-C8)アルキル、(C2-C12)アルカノイルオキシメチル、４〜９の炭素原子を有する1-(アルカノイルオキシ)エチル、５〜10の炭素原子を有する1-メチル-1-(アルカノイルオキシ)-エチル、３〜６の炭素原子を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、４〜７の炭素原子を有する1-(アルコキシカルボニルオキシ)エチル、５〜８の炭素原子を有する1-メチル-1-(アルコキシカルボニルオキシ)エチル、３〜９の炭素原子を有するN-(アルコキシカルボニル)アミノメチル、４〜10の炭素原子を有する1-(N-(アルコキシカルボニル)アミノ)エチル、3-フタリジル、4-クロトノラクトニル、γ-ブチロラクトン-4-イル、ジ-N,N-(C1-C2)アルキルアミノ(C2-C3)アルキル(例えばβ-ジメチルアミノエチル)、カルバモイル-(C1-C2)アルキル、N,N-ジ(C1-C2)アルキルカルバモイル-(C1-C2)アルキルおよびピペリジノ-、ピロリジノ-またはモルホリノ(C2-C3)アルキルで置換することによって形成されるエステルを含み得る。
【００４１】
同様に、本発明の化合物がアルコール官能基を有する場合は、プロドラッグはアルコール基の水素原子を基、例えば(C1-C6)アルカノイルオキシメチル、1-((C1-C6)アルカノイルオキシ)エチル、1-メチル-1-((C1-C6)アルカノイルオキシ)エチル、(C1-C6)アルコキシカルボニルオキシメチル、N-(C1-C6)アルコキシカルボニルアミノメチル、サクシノイル、(C1-C6)アルカノイル、α-アミノ(C1-C4)アルカノイル、アリールアシルおよびα-アミノアシルまたはα-アミノアシル-α-アミノアシル〔式中、各α-アミノアシル基は独立して天然の L-アミノ酸、P(O)(OH)2、P(O)(O(C1-C6)アルキル)2、またはグリコシル（炭水化物のヘミアセタール型のヒドロキシル基を除去することにより生じる基）から選ばれる〕で置換することによって形成され得る。
【００４２】
本発明の化合物がアミン官能基を含む場合、プロドラッグはアミン基中の水素原子を基、例えばR-カルボニル、RO-カルボニル、NRR'-カルボニル（式中、RおよびR'は、それぞれ独立して(C1-C10)アルキル、(C3-C7)シクロアルキル、もしくはベンジルであるか、またはR-カルボニルは、天然α-アミノアシルもしくは天然α-アミノアシル-天然α-アミノアシルである）、-C(OH)C(O)OY'（式中、Y'は、H、(C1-C6)アルキルまたはベンジルである）、-C(OYo)Y1（式中、Yoは、(C1-C4)アルキルであり、そしてY1は、(C1-C6)アルキル、カルボキシ(C1-C6)アルキル、アミノ(C1-C4)アルキルまたはモノ-N-もしくはジ-N,N-( C1-C6)アルキルアミノアルキルである）、または-C(Y2)Y3（式中、Y2は、Hまたはメチルであり、そしてY3は、モノ-N-もしくはジ-N,N-(C1-C6)アルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジン-1-イルまたはピロリジン-1-イルである）で置換することによって形成され得る。
【００４３】
本発明の化合物は不斉中心またはキラル中心を有し得るものであり、そして従って異なる立体異性体で存在し得る。本発明の化合物のあらゆる立体異性体は、ラセミ混合物を含むそれの混合物と同様に、本発明の一部を形成すると意図される。加えて、本発明はすべての幾何および位置異性体を含む。例えば、本発明の化合物が二重結合または縮合環を含む場合は、シスおよびトランスの両方の形、ならびに混合物が本発明の範囲内に含まれる。ピリミジンおよびピラジン環のN-酸化により生じる単一の位置異性体、ならびに位置異性体の混合物の両方もまた、本発明の範囲内である。
【００４４】
ジアステレオイソマー混合物は、それらの物理化学的相違に基づいて、熟練した当業者に公知の方法、例えばクロマトグラフィーおよび／または分別結晶によって、それらの個々のジアステレオイソマーに分離できる。鏡像体はその鏡像体混合物を、妥当な光学活性化合物（例えば、キラルアルコールまたはモッシャーの（Mosher's）酸塩化物のようなキラル補助基）との反応によってジアステレオイソマー混合物に変換し、そのジアステレオイソマーを分離しそして個々のジアステレオイソマーを相当する純粋な鏡像体に変換（例えば、加水分解）することによって分離できる。また、本発明の化合物のいくつかは、アトロプ異性体（例えば、置換されたビアリール）であり得るものであり、そしてこの発明の一部と考えられる。鏡像体もまた、キラルHPLCカラムの使用によって分離できる。
【００４５】
本発明の化合物は、薬学的に許容し得る溶媒、例えば水、エタノール、および類似のものを用いる溶媒和物の形態と同様に、溶媒和物でない形態で存在し得るものであり、そして本発明は溶媒和物および溶媒和物でない形態の両方を含むと意図される。
【００４６】
本発明の化合物は、異なる互変異性体で存在し得ることもまた可能であり、そしてすべてのかかる形態は本発明の範囲内に含まれる。例えば、イミダゾール部分構造のすべての互変異性体は本発明に含まれる。また例えば、該化合物のすべてのケト-エノールおよび
イミン-エナミン体も本発明に含まれる。
【００４７】
本発明はまた、１つまたはそれ以上の原子が、自然界で通常見出される原子量または質量数とは異なる原子量または質量数を有する原子によって置換されるという事実以外は本明細書中に列挙する化合物と同一である、同位体で標識した本発明の化合物も含む。本発明の化合物中に組み込まれ得る同位体の例は、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素および塩素の同位体、例えばそれぞれ2H、3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、31P、32P、35S、18F、123I、125Iおよび36Clである。
【００４８】
本発明の或る種の同位体標識化合物（例えば、3Hおよび14Cで標識した化合物）は、化合物および／または基質の組織分布分析において有用である。トリチウム(すなわち3H) 標識された同位体および炭素-14(すなわち14C)同位体は、それらの製造および検出性の容易さから特に好ましい。さらに、より質量の大きい同位体、例えば重水素(すなわち2H)による置換は、より大きな代謝安定性(例えば、生体内での半減期の延長、または必要な投与量の減少)から生じる或る種の治療上の利点をもたらし得るものであり、そして従って一部の状況において好ましいものであり得る。同位体、例えば15O、13N、11Cおよび18Fを放射する陽電子は、基質の受容体占有率を測定する陽電子断層撮影法(PET)検査のために有用である。本発明の同位体標識化合物は一般的に、後述の本明細書中のスキームおよび／または実施例において開示する方法に類似の以下の方法によって、非同位体標識試薬を同位体標識試薬に代えることによって製造し得る。
【００４９】
本発明はさらに、動物におけるNPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状および／または障害を治療するための方法であって、かかる治療の必要性のある動物に、本発明の化合物の治療上の有効量、または本発明の化合物の有効量および薬学的に許容し得る賦形剤、希釈剤もしくは担体を含有する医薬組成物を投与することを含む、上記の方法を提供する。該方法は特に、NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状および／または障害の治療に有効である。NPY-5アンタゴニストの研究は、以下の疾患、障害および／または症状がNPY-5受容体アンタゴニストによって調整されることを示している: 肥満症、摂食障害（例えば、拒食症および神経性過食症）、発作、不安、糖尿病、高血圧、高脂血症、癌（例えば、乳癌および膵臓癌）、鼻閉、性機能不全、うっ血性心不全、腸管機能障害、および精神医学的障害（例えば、うつ病）。
【００５０】
従って、本明細書中に記載する本発明の化合物は、NPY-5受容体アンタゴニストによって調整される疾患、症状または障害の治療において有効である。その結果として、本発明の化合物(本明細書中に用いる組成物および方法を含む)は、本明細書中に記載する治療上の適用のための薬剤の製造に用い得る。
【００５１】
代表的な製剤は、本発明の化合物を担体、希釈剤または賦形剤と混合することによって製造する。適当な担体、希釈剤および賦形剤は、熟練した当業者に公知のものであり、そして炭水化物、ろう、水溶性および／または水膨潤可能な高分子、親水性または疎水性の物質、ゼラチン、油、溶媒、水および類似のものといった物質である。用いる或る種の担体、希釈剤または賦形剤は、適用される本発明の化合物の方法および目的により得る。溶媒は一般的に、哺乳類への投与が安全であることを、熟練した当業者に認識されている溶媒（GRAS）に基づいて選ばれる。一般的に、安全な溶媒は無毒性の水性溶媒、例えば水および、水に可溶性または混和性である他の無毒性の溶媒である。適当な水性溶媒は、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール(例えば、PEG400、PEG300)等、およびそれらの混合物を含む。該製剤はまた、１つまたはそれ以上の緩衝剤、安定剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁剤(sespending agents)、防腐剤、酸化防止剤、遮光剤、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、着香剤、調味剤および、薬剤(すなわち、本発明の化合物またはその医薬組成物)の精密簡潔な製造を提供するための他の既知の賦形剤、または医薬製品(すなわち医薬品)の製造における援助物質を含み得る。
【００５２】
該製剤は、従来の溶解および混合の手法を用いて製造し得る。例えば、原薬の物質(すなわち、本発明の化合物または該化合物の安定形態(例えば、シクロデキストリン誘導体もしくは他の既知の錯体化剤を用いた錯体))を適当な溶媒中に、１つまたはそれ以上の上述した賦形剤の存在下で溶解する。本発明の化合物は代表的には、容易に調節可能な薬用量を提供する、そして精密簡潔および容易に取り扱いできる医薬品を患者に与える薬剤剤形に調製される。
【００５３】
服用のための医薬組成物（または製剤）は、該薬剤を投与するために用いる方法によって種々の方法で包装され得る。一般的には販売のための製品は、その中に該医薬製剤を妥当な形態で有している容器を含む。適当な容器は、熟練した当業者には公知のものであり、そして瓶（プラスチックおよびガラス）、サッシェ、アンプル、プラスチック袋、金属製シリンダーおよび類似のものといった物質である。容器はまた、包装品の内容物への軽率なアクセスを予防する、いたずら防止のセットを含み得る。加えて、容器はその表面に、容器の内容物を表示するラベルを有している。ラベルはまた、妥当な注意を含み得る。
【００５４】
その医薬組成物および製剤を含む本発明の化合物は、上述の症状および疾患を治療するための幅広い種類の併用療法に用い得ることが、熟練した当業者によってまた理解され得る。従って本発明の化合物は、本明細書中に記載した疾患／症状の治療のための他の薬剤と組合わせて用い得る。例えば、それらは肥満症、糖尿病、高血圧、高脂血症、心血管疾患、不安、うつ病または精神病を治療する薬剤と組合わせて用い得る。併用療法の治療において、本発明の化合物および他の薬物療法の両方を、哺乳類（例えば、男性または女性のヒト、イヌ、ネコ、ウマ）に従来の方法によって投与し得る。
【００５５】
いずれかのβ−アドレナリン作動性アゴニストは、この発明の組合わせの態称における第二の化合物として用い得る。β-アドレナリン作動性薬剤はβ1、β2およびβ3サブタイプに分類されている。β-受容体のアゴニストはアデニルシクラーゼの活性化を促進する。β1-受容体の活性化は心拍数の上昇を引き起こす。β2-受容体の活性化は、骨格筋振せんの発現および血圧の低下を生じる、平滑筋組織の弛緩を促す。β3-受容体の活性化は、脂肪分解、すなわち脂肪組織トリグリセリドのグリセリンおよび脂肪酸への分解を刺激することが知られている。β3-受容体の活性化はまた代謝速度を刺激し、それによってエネルギー消費を増加させる。従って、β3-受容体の活性化は体脂肪量の減少を促進する。その結果、β-受容体を刺激する化合物は抗肥満剤として有効である。β3-受容体アゴニストである化合物は、血糖降下および／または抗糖尿病性活性を有する。かかる活性は、一般的な分析法に従って、熟練した当業者によって容易に測定される（国際特許出願、公開番号WO 96/35671）。いくつかの化合物を後述し、そして参照する；一方で、他のβ-アドレナリン作動性アゴニストは熟練した当業者に既知であり得る。国際特許出願、公開番号WO96/35671(その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる)は、β-アドレナリン作動性アゴニストである置換されたアミノピリジンといった化合物を開示する。国際特許出願、公開番号WO93/16189(その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる)は、肥満症の治療のために摂食行動を修正する化合物との組合わせにおける、選択的β3-受容体アゴニストの使用を開示する。
【００５６】
いずれかの甲状腺作動性抗肥満剤は、この発明の組合わせの態称における第二の化合物として用い得る。これらの化合物は組織選択的甲状腺ホルモンアゴニストである。それらの化合物は、食欲抑制以外の仕組み、例えば末梢組織における代謝速度を刺激し、そのことが次に体重減少を生じさせるという仕組みを通じて、体重減少を引き起こすことが可能である。かかる代謝効果は、一般的な分析法に従って(例えば、間接熱量測定法によって)、熟練した当業者によって容易に測定される。種々のこれらの化合物を後述し、そして参照するが、他の甲状腺作動性抗肥満剤は熟練した当業者に既知であり得る。発熱性効果の選択が例えば、肥満症および関連する症状の治療における有効な治療薬としての重要な必要条件であることは、一般的な熟練した当業者に公知である。米国特許番号5,401, 772； 5, 567,674 ； および 5,654, 468は一連のヘテロ酢酸誘導体を記載し、それらの開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００５７】
いずれかの摂食行動修正化合物は、追加の薬剤として用い得る。摂食行動を修正する化合物は、食欲を減少させる化合物である食欲抑制剤を含む。食欲抑制剤のかかる種類は、一般的な熟練した当業者に公知である。種々のこれらの化合物は上述され、そして参照される；一方で、他の食欲抑制剤は熟練した当業者に既知であり得るものであり、そして後述される。特に好ましいモノアミン再取込み阻害剤は、米国特許番号4,929,629において開示される通りに製造され得るシブトラミンであり、該特許の開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。好ましいセロトニン作動性薬剤は、米国特許番号3,198, 834において開示される通りに製造され得るフェンフルラミンおよびデキスフェンフルラミンを含み、該特許の開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。特に好ましいドーパミンアゴニストは米国特許番号3,752, 814および3,752, 888において開示される通りに製造され得るブロモクリプチンであり、該特許の開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。他の好ましい食欲抑制剤は、米国特許番号2,408, 345において開示される通りに製造され得るフェンテルミンであり、該特許の開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。
【００５８】
他のいずれかのNPY受容体アンタゴニストは、この発明の組合わせの態称における第二の化合物として用い得る。NPY受容体アンタゴニストという語は、NPY受容体に対して相互作用し、そしてそれらの受容体において神経ペプチドYの活性を阻害し、そしてその結果、神経ペプチドYが関連する疾患、例えば肥満症を含む摂食障害の治療に有効である化合物を指す。かかる阻害は、一般的な分析法に従って、熟練した当業者によって容易に測定される。加えて、以下に記載されそして参照される化合物はNPY受容体アンタゴニストである；一方で、他のNPY受容体アンタゴニストはまた、熟練した当業者に既知であり得る。WO 99/07703(その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる) は、神経ペプチドY受容体アンタゴニストとして或る種の4-アミノピロール(3,2-d)ピリミジンを開示する。他のかかる化合物は以下のWO公報に開示されるものであり、それらの開示は参照によって本明細書中に組み込まれる；WO96/14307；WO 96/40660；WO 98/03492；WO 98/03494；およびWO 98/03493。
【００５９】
アルツハイマー病の治療に関しては、いずれかのコリン作動性薬剤、例えばドネピジルを、この発明の組合わせの態称における第二の化合物として用い得る。
【００６０】
不安の治療に関しては、いずれかの抗不安剤、例えばベンゾジアゼピン、バリウムまたはリブリウムを、この発明の組合わせの態称における第二の化合物として用い得る。
【００６１】
うつ病の治療に関しては、いずれかの三環系抗うつ剤、例えばデシプラミン、またはいずれかの選択的セロトニン再取込み阻害剤(SSRI's)、例えばゾロフト（ZOLOFT)(R)およびプロザック（PROZAC)(R)を、本発明の化合物との組合せにおける追加の薬剤として用い得る。
【００６２】
精神病の治療に関しては、いずれかの一般的な、または一般的でない抗精神病薬、例えばハロペリドールまたはクロザピンを、本発明の化合物との組合せにおける追加の薬剤として用い得る。
【００６３】
糖尿病関連疾患／症状の治療に関しては、いずれかのアルドース還元酵素阻害剤を、本発明の化合物との組合せにおける追加の薬剤として用い得る。アルドース還元酵素阻害剤という語は、アルドース還元酵素という酵素によって触媒される、グルコースのソルビトールへの生物変換反応を阻害する化合物を指す。かかる阻害は一般的な分析法に従って、熟練した当業者によって容易に測定される(J.Malone, Diabetes, 29: 861-864, 1980,“Red Cell Sorbitol, an Indicator of Diabetic Control”)。種々のアルドース還元酵素阻害剤は以下に記載されそして参照される；一方で、他のアルドース還元酵素阻害剤は熟練した当業者に既知のものであり得る。好ましいアルドース還元酵素阻害剤の例はゾポルレスタット（zopolrestat）である。
【００６４】
糖尿病関連疾患／症状の治療に関しては、いずれかのグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤を、本発明の化合物との組合せにおける追加の薬剤として用い得る。グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤という語は、グリコーゲンホスホリラーゼの酵素作用を低下、遅延または除去する、いずれかの基質または薬剤または基質および／もしくは薬剤のいずれかの組合せを指す。グリコーゲンホスホリラーゼの現在既知の酵素作用は、グリコーゲン高分子および無機リン酸の、最初のグリコーゲン高分子に比べてグルコシル残基が１つ短いグリコーゲン高分子およびグルコース-1-リン酸への（グリコーゲン分解の正方向の）可逆反応という触媒作用によるグリコーゲンの分解である。かかる作用は、これらの種々の化合物を記載する以下の公報に記載される一般的な分析法に従って、熟練した当業者によって容易に測定される: WO 96/39384およびWO 96/39385。この結果、それらの開示は参照によって本明細書中に組み込まれる。他の好ましいグリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤は上述されている。
【００６５】
糖尿病関連疾患／症状の治療に関しては、いずれかのソルビトール脱水素酵素阻害剤を、本発明の化合物との組合せにおける追加の薬剤として用い得る。ソルビトール脱水素酵素阻害剤という語は、ソルビトールのフルクトースへの酸化を触媒する、ソルビトール脱水素酵素という酵素を阻害する化合物を指す。かかる阻害は、(米国特許番号5,728,704およびその中に引用される参照文献に記載される通りに)一般的な分析法に従って、熟練した当業者によって容易に測定される。これらの種々の化合物は以下に記載され、そして参照される；一方で、他のソルビトール脱水素酵素阻害剤は熟練した当業者に既知であり得る。米国特許番号5,728,704(その開示は参照によって本明細書中に組み込まれる)は、ソルビトール脱水素酵素を阻害し、フルクトースのレベルを低下させ、そして／または糖尿病の合併症、例えば糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症、糖尿病性細小血管症および糖尿病性血管障害を治療もしくは予防する、置換されたピリミジンを開示する。他の既知の、または商業的に売買される抗糖尿病性化合物は、本発明の併用療法の態称の実施において、第二の化合物として用い得る。
【００６６】
神経ぺプチドY(NPY)ならびに関連するペプチド(例えば、膵臓ポリペプチドおよびペプチドYY)は、中枢および末梢のニューロンに広く分布し、そして種々の組織に存在するNPY受容体が介在する広範で多数の生物活性を有する。NPY(および関連するペプチド)は、心臓血管系、血管系、ホルモン分泌、ならびに中枢神経系、腎、胃腸および肺の器官系、ならびに代謝に影響を及ぼす。NPYは食欲亢進を強く刺激し、そしてインスリン耐性を誘発する。現在までの研究は、摂食障害、肥満症、発作、不安、糖尿病、高血圧、癌（例えば、乳癌および膵臓癌）、鼻閉、女性または男性の性機能不全、うっ血性心不全、および腸管機能障害を含む多数の疾患の病態生理学にNPYが関与することを示している。
【００６７】
加えて、体脂肪の減少（脂肪分解）におけるそれらの作用の結果として、本発明の化合物は、家禽ならびに、ブタ、ウシ、ヒツジおよびヤギといった有蹄動物を含む食用動物において、赤肉の付着を増加し、そして／または脂肪に対する赤肉の割合を増大させる有用性を有し得る。本発明の化合物はその上、肥満体の家庭のペット、例えばイヌおよびネコといったコンパニオンアニマルの治療に用い得る。
【００６８】
本発明の化合物は、所望する組織（例えば、脳、腎臓または腸管の組織）に、該化合物を選択的に送出するいずれかの方法によって投与し得る。これらの方法は経口経路、非経口、十二指腸内経路等である。一般的に本発明の化合物は、単一（例えば、１日１回）もしくは複数の投与量で、または持続注入によって投与する。
【００６９】
一般的に本発明の化合物は経口的に、または非経口的（例えば、静脈内、筋肉内、皮下もしくは髄内）に投与する。また、局所投与は、例えば患者が嚥下障害を罹患している場合に、または該薬剤が担当医師によって判断された通りに組織もしくは器官の表面に最良に投与される場合には常に、指示され得る。
【００７０】
投与する該化合物の量およびタイミングは当然のことながら、治療される患者、疾患の重症度、投与方法、および処方する医師の判断により得る。従って患者毎の変動性という理由から、後述する投与量は１つの指針であり、そして医師は、患者に妥当であると医師が考える治療を達成するために該薬剤の量を決定し得る。所望する治療の程度を考慮するにおいて、医師は他の疾患（例えば、心血管疾患）の存在と同様に、種々の要素、例えば患者の年齢、既往症の存在を比較検討しなくてはならない。
【００７１】
従って例えば、１つの投与方法において、この発明の化合物を経口的に投与し得る。この発明の化合物はまた、長期の毎日の様式において投与し得る。
【００７２】
本発明の化合物は、用いる量が上述した効能に有効であるように（すなわち、治療上の有効量で）投与される。好ましい投与量は、この発明の化合物の約0.001〜100mg／kg／日である。特に好ましい投与量は、この発明の化合物の約0.01〜50mg／kg／日である。
【００７３】
本発明の化合物と組合わせて追加の薬剤を投与する場合には、追加の薬剤は一般的に体重当たり約0.01〜約100mg／kg／日、好ましくは体重当たり約0.1mg／kg／日〜約10mg／kg／日の範囲で投与する。該組合わせは単一で、または分割投与として投与し得る。特に、追加の薬剤が(1)シブトラミンである場合は、シブトラミンの投与量は体重当たり約0.01mg／kg／日〜約30mg／kg／日、好ましくは体重当たり約0.1mg／kg／日〜約１mg／kg／日であり；(2)デキスフェンフルラミンである場合は、デキスフェンフルラミンの投与量は体重当たり約0.01mg／kg／日〜約30mg／kg／日、好ましくは体重当たり約0.1mg／kg／日〜約１mg／kg／日であり；(3)ブロモクリプチンである場合は、ブロモクリプチンの投与量は体重当たり約0.01〜約10mg／kg／日、好ましくは体重当たり0.1mg／kg／日 〜約10mg／kg／日であり； (4)フェンテルミンである場合は、フェンテルミンの投与量は約0.01mg／kg／日〜約10mg／kg／日、好ましくは体重当たり約0.1mg／kg／日〜約１mg／kg／日である。
【００７４】
本発明の存在下で用い得るアルドース還元酵素阻害剤の有効量は、一般的には単一または分割の投与量で約0.1mg／kg／日〜100mg／kg／日、好ましくは単一または分割の投与量で0.1mg／kg／日〜20mg／kg／日の範囲におけるものである。
【００７５】
本発明の他の実施形態において、本発明の化合物は性機能障害の治療において有効であり得る。性機能障害(SD)は、男性および女性の両方に影響を及ぼし得る重要な臨床上の問題である。SDの原因は、器質的および心理的の両方であり得る。SDの器質的側面は一般的に、根本的な血管疾患、例えば高血圧または真性糖尿病に関連する疾患によって、処方薬によって、そして／または精神医学的疾患、例えばうつ病によって生じる。生理学的要因は恐怖、行為への不安、および対人的葛藤を含む。SDは性行為を損なわせ、自尊心を傷つけ、そして人間関係を混乱させ、それによって人としての悩みを引き起こす。臨床において、SD障害は女性の性機能不全(FSD)障害および男性の性機能不全(MSD)障害に分類されている(Melman, A. & Gingell, J. C.,“The epidemiology and pathophysiology of erectile dysfunction,”J. Urology, 161,5-11 (1999)). FSDは、女性が性的発現において満足感を見出すことに対する困難または不可能として最適に定義される。男性の性機能不全(MSD)は一般的に勃起不全に関連し、男性の勃起不全(MED)としても知られる(Benet et al,"Male Erectile dysfunction assessment and treatment options,"Comp. Ther. 20,669-673 (1994))。
【００７６】
本発明の化合物は特に、男性における性機能不全（例えば、男性の勃起不全-MED）、および女性においては女性の性機能不全(FSD)、例えば女性の性的興奮障害(FSAD)の予防および／または治療に有益であり得る。
【００７７】
一部の人々は男性の勃起不全(MED)に罹患し得ることが知られる。MEDは以下の通りに定義される:“満足な性行為のためのペニスの勃起を達成および／または維持することができないこと”(NIH Consensus Development Panel on Impotence, 1993)”。
【００７８】
すべての程度（低度、中度および完全なインポテンス）の勃起不全(ED)の罹患率は、40〜70歳の男性において52％、そして71歳以上の男性においてはより高い率であることが推定されている(Melman, A. & Gingell, J. C. ,“The epidemiology and pathophysiology of erectile dysfunction,” J.Uroloav, 161,5-11 (1999))。その状態は患者および彼らのパートナーの生活の質において著しく不快な影響を有し、不安および緊張を増加させることも多く、それによってうつ病および自尊心の損失が生じる。２０年前はMEDは心理学的疾患であると主に考えられていた(Benet, A. E. et al,“Male erectile dysfunction assessment and treatment options,” Comp. Ther. 20, 669-673, (1994))のに対して、現在は患者の大半に関して根本的な器質的原因が存在することが知られている。結果的に、正常なペニスの勃起の仕組みおよびMEDの病態生理学の認識において、多大な前進がなされている。
【００７９】
勃起は、陰核海綿体の平滑筋およびペニスの血管系の収縮および弛緩のバランスによる血行動態的現象である(Lerner, S. E. et al,“A review of erectile dysfunction: new insights and more questions,” J. Urology, 149, 1246-1255 (1993))。陰核海綿体の平滑筋はまた、本明細書中で身体の平滑筋、または複数の意味で海綿体と呼ばれる。陰核海綿体の平滑筋の弛緩は、海綿体の小柱隙への血流の増加を導き、それらを周囲の膜に対して膨張させ、そして流出中の静脈を圧迫する。このことによって血圧が相当に上昇し、その結果、勃起が生じる(Naylor, A. M., “Endogenous neurotransmitters mediating penile erection,”Br. J. Uroloay, 81, 424-431 (1998))。
【００８０】
勃起の過程中に生じる変化は複雑であり、そして末梢および中枢の神経系ならびに内分泌系を含む高度に調和的なコントロールを必要とする(Naylor, 1998)。身体の平滑筋の収縮は、シナプス後α1アドレナリン受容体の活性化を通じて、交感神経のノルアドレナリン作動性神経支配によって調整される。MEDは、海綿体の内因性の平滑筋緊張の増加に関連し得る。一方で、身体の平滑筋の弛緩の過程は、ある程度は非アドレナリン非コリン作動性(NANC)神経伝達の影響を受ける。ペニスにおいてNO以外に見出される他のNANC神経伝達物質、例えばカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)および血管作動性腸管ペプチド(VIP)が多数存在する。この弛緩をもたらす原因である主な弛緩因子は、L-アルギニンから一酸化窒素合成酵素(NOS)によって合成される一酸化窒素(NO)である(Taub, H. C. et al“Relationship between contraction and relaxation in human and rabbit corpus cavernosum,” Urology, 42,698-704 (1993))。身体の平滑筋の緊張低下は、NOが海綿体の弛緩を誘発するのを促進し得ると思われる。男性において性的興奮の間に、NOはニューロンおよび内皮から放出され、そして平滑筋細胞および内皮に存在する溶性グアニル酸シクラーゼ(sGC)と結合し、それを活性化し、細胞内の環状グアノシン3',5'-モノホスフェート(cGMP)のレベル上昇を導く。cGMPのこの上昇は、プロテインキナーゼGの活性化が関与すると思われる未知の仕組みを通じて、細胞内のカルシウム濃度([Ca2+]i)の低下によって、海綿体の弛緩を導く(おそらくは、Ca2+ポンプの活性化およびCa2+活性K+チャネルによる)。
【００８１】
女性の性機能不全(FSD)の分類は、それらを正常な女性の性反応の段階：欲求、興奮およびオルガスムと比較することによって最適に定義される(S R Leiblum, (1998), Definition and Classification of Female Sexual Disorders, Int. J. Impotence Res., 10, S104-S106を参照)。欲求または性欲は、性的表現のための動因である。その発現は、関心のあるパートナーと一緒の時も、または他の色情的な刺激を受けた時も、性的思考を含むことが多い。興奮は性的刺激に対する血管の反応を含むものであり、その重要な要素は、性器の充血および膣の潤滑の増加、膣の伸長および性器の感覚／感受性の増加および自覚的な興奮反応である。オルガスムは、興奮中に最高に達していた性的緊張の解放である。従ってFSDは、これらの段階、通常は欲求、興奮またはオルガスムのいずれか１つまたはそれ以上において女性が反応を有しないか、不適切な反応を有するか、または不満足な反応を有する場合に生じる。
【００８２】
米国精神医学会は女性の性機能不全(FSD)を４つの種類に分類する: FSAD、性的欲求低下障害(HSDD)、女性オルガスム障害(FOD)、および性交疼痛障害(例えば、性交疼痛症および腟痙) [the American Psychiatric Association's Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, 4th Edition (DSM-IV)を参照]。
【００８３】
DSM-IVは４つの種類を以下の通りに定義する: 
HSDD-性的空想、および性的活動に対する欲求の、持続的もしくは頻繁的な欠乏（または皆無）。欠乏または皆無の判断は、機能に影響を及ぼす要素、例えば年齢および患者の生活環境を考慮して臨床家によって下される。
【００８４】
FSAD-性的活動、性的興奮に対する適切な潤滑-膨潤反応の完了を達成、または完了までを維持することが持続的または頻繁的にできないこと。
【００８５】
FOD-正常な性的興奮の段階に続くオルガスムの持続的もしくは頻繁的な遅延または皆無。オルガスムを誘発する刺激の種類または強度において、女性は広範な多様性を示す。FOD の診断は、女性のオルガスムに到達し得る能力は彼女の年齢、性経験および彼女の受ける性的刺激の適切さに対して合理的であり得ることは決してないという臨床家の判断に基づくべきである。
【００８６】
性交疼痛障害、例えば性交疼痛症および腟痙。
性交疼痛症−性交に関連する頻繁的または持続的な性器の疼痛。腟痙-性交を妨げる、膣の外側３分の１の筋系の頻繁的または持続的な不随意性痙攣。
HSDDは、性的であるという欲望を女性が全く、または少ししか持たない、そして性的思考または空想を女性が全く、または少ししか持たない場合に存在する。FSDのこの種類は、正常な閉経または手術の結果生じる閉経のどちらかによる、テストステロンの低レベルに起因し得る。閉経前の女性（すなわち、閉経前である女性、および子宮摘出を経験していない女性）ならびに閉経後の女性の両者における他の原因は、疾患、薬剤、疲労、うつ病および／または不安を含む。潜在的な（意識的または潜在意識的な）心理的影響を有する要素、例えば関係性の困難さまたは宗教的な要素は、女性におけるHSDDの存在／発現に関連し得る。米国精神医学会の診断および統計の手引き(DSM)IVは、女性性的興奮障害(FSAD)を以下の通りに定義する:“・・・性的活動、性的興奮に対する適切な潤滑-膨潤反応の完了を達成、または完了までを維持することが持続的または頻繁的にできないこと。該障害は、深刻な悩みまたは人間関係の困難さを必ず引き起こす。・・・”。
【００８７】
興奮反応は、骨盤の充血、膣の潤滑および膨張、ならびに外陰部の膨潤から構成される。該障害は、深刻な悩みおよび／または人間関係の困難さを引き起こす。
【００８８】
FSADは、閉経前、閉経間近および閉経後（±ホルモン置換療法(HRT)）の女性が罹患する非常に一般的な性的障害である。それは、随伴する障害、例えばうつ病、心血管疾患、糖尿病および尿性器(UG)障害に関連する。FSADの第一の結果は、充血／膨潤の消失、潤滑の消失および快感を伴う性器の感覚の消失である。FSADの第二の結果は、性的欲望の低下、性交中の疼痛、およびオルガスム達成の困難さである。FSADの症状を有する患者のうち、少なくとも或る割合に対しては血管に理由があると最近は仮定されている(Goldstein et al., Int. J. Impot. Res., 10, S84-S90 (1998)) 。この考え方を支持する動物のデータに関しては、Park et al., Int. J. Impot. Res., 9, 27-37 (1997)。
【００８９】
有効性を研究中である、FSADを治療するための薬剤の候補は、男性性器に対して血行を促進する、主に勃起不全の治療法である。それらは２種類の剤形、経口または舌下の薬剤（アポモルフィン、フェントラミン、ホスホジエステラーゼタイプ５(PDE5)阻害剤、例えばシルデナフィル)、および男性に経尿道的に、そして女性性器に局所的に注入または投与するプロスタグランジン(PEG1)から構成される。
【００９０】
本発明の化合物は、正常な性的興奮反応−すなわち、膣、陰核および陰唇の充血を導く性器の血流の増加を回復する手段を提供することによって有利であり得る。これはプラズマ濾出による膣の潤滑の増加、膣コンプライアンスの増加、および性器の感覚の増加という結果になり得る。従って本発明は、正常な性的興奮反応を回復または増強する方法を提供する。
【００９１】
本明細書において本発明者は、女性性器によって以下を意味する：“内部および外部の群から成る生殖器。内部の器官は骨盤内に位置し、そして卵巣、卵管、子宮および膣から成る。外部の器官は尿生殖隔膜に表在し、そして下肢帯の下にある。それらは恥丘、外陰部の大陰唇および小陰唇、陰核、膣前庭、前庭球ならびに大前庭腺を含む”(Gray's Anatomy, C. D. Clemente, 13th American Edition)。R. J. Levinは本発明者に、“...男性および女性の性器は発生学的に共通の組織原基から発達し、[その] 男性および女性の性器構造は互いの相同器官であることを示す。従って、陰核は陰茎の相同器官であり、そして陰唇は陰嚢の相同器官である・・・”(Levin, R. J., Exp. Clin. Endocrinol., 98, 61-69 (1991))からだと教示する。
【００９２】
要するに、FSADは性的刺激に対する不適切な性器の反応を特徴とする。その性器は、正常な性的興奮の特徴である充血を生じない。膣壁は不十分に潤滑し、その結果、性交は疼痛を伴う。オルガスムは妨げられ得る。興奮障害は、閉経または出産後および授乳中におけるエストロゲン減少によって、そして血管の要素を伴う疾患、例えば糖尿病およびアテローム性動脈硬化症によって、生じ得る。他の原因は、利尿剤、抗ヒスタミン剤、抗うつ剤、例えば選択的セロトニン再取込み阻害剤（SSRIs）、または降圧剤を用いる治療に起
因する。
【００９３】
FODは、十分な性的刺激および興奮の後の、オルガスム到達の持続的もしくは頻繁的な困難、遅延、または皆無であり、これは個人的な苦痛を生じさせる。
【００９４】
性交疼痛障害（性交疼痛症および腟痙を含む）は、挿入および性的活動に起因する疼痛を特徴とするものであり、そして潤滑を減少させる薬剤、子宮内膜症、骨盤内感染症、炎症性腸疾患または尿路障害によって生じ得る。
【００９５】
他の態称に従って本発明は、先に詳述したように本発明の化合物を用いた治療を通じて、男性の性機能不全(MSD)、特に男性の勃起不全(MED)を治療および／または予防する方法を加えて提供する。
【００９６】
さらに他の態称に従って本発明は、前述の定義の通りである本発明の１つの化合物、および１つまたはそれ以上の、PDEの活性を阻害する化合物、特にcGMP PDE5の活性を阻害する化合物、および／または１つまたはそれ以上のNEPの活性を阻害する化合物の組合せを用いる治療を通じて、男性の性機能不全を治療および／または予防する方法を加えて提供する。
【００９７】
バイアグラTMを用いた治療に対して不十分な反応を示す、または反応を示さない男性は、本発明の化合物のみを用いた治療に基づく療法、または本発明の化合物およびcGMP PDE5i、例えばシルデナフィルに基づく併用療法のどちらかから、有効性を有し得る。低度から中度のMEDに罹患する患者は、本発明の化合物のみに基づく治療から、またはNEPiを組合わせた治療から必ず有効性を有するし、そして高度のMEDに罹患する患者もまた反応し得る。低度、中度および高度のMEDは、熟練した当業者に公知の語であり得るが、指針は以下に見出すことができる: The Journal of Urology, 151, 54-61 (1994)。
【００９８】
MEDの患者群は、Clinical Andrology. 23 (4), p773-782, and chapter 3 of the book by I. Eardley and K. Sethia “Erectile Dysfunction-Current Investigation and Management, published by Mosby-Wolfeにおいて、より詳細に記載されているが、以下の通りである: 心因性、内分泌学的、神経性、動脈性、薬物（催乳剤）性の性機能不全、および海綿体の要素、特に静脈の原因に関連する性機能不全。
【００９９】
本発明に記載のMEDの治療のための、本発明の化合物との組合せにおける使用に適するcGMP PDE5阻害剤は以下を含む：EP-A-0463756に開示されるピラゾロ[4,3-d]ピリミジン-7-オン；PCT公開番号WO 01/27112に開示されるピラゾロ [4,3-d] ピリミジン-7-オン；PCT公開番号WO 01/27113に開示されるピラゾロ [4,3-d] ピリミジン-7-オン；W095/19978に開示されるインドール-1,4-ジオンおよびPCT公開番号W099/24433に開示されるトリアジン-4-オン。
【０１００】
より好ましいのは、1-[[3-(6,7-ジヒドロ-1-メチル-7-オキソ-3-プロピル-1H-ピラゾロ[4,3-d] ピリミジン-5-イル)-4-エトキシフェニル]スルホニル]-4-メチルピペラジンとしても知られる、5-[2-エトキシ-5-(4-メチル-1-ピペラジニルスルホニル)フェニル]-1-メチル-3-n-プロピル-1,6-ジヒドロ-7H-ピラゾロ [4,3-d] ピリミジン-7-オン(シルデナフィル)(EP-A-0463756を参照)；
1-｛6-エトキシ-5-[3-エチル-6,7-ジヒドロ-2-(2-メトキシエチル)-7-オキソ-2H-ピラゾロ [4,3-d]ピリミジン-5-イル]-3-ピリジルスルホニル｝-4-エチルピペラジンとしても知られる、5-[2-エトキシ-5-(4-エチルピペラジン-1-イルスルホニル)ピリジン-3-イル]-3-エチル-2-[2-メトキシエチル]-2,6-ジヒドロ-7H-ピラゾロ [4,3-d]ピリミジン-7-オン(WO 01/27113、実施例８を参照)；
5-(5-アセチル-2-ブトキシ-3-ピリジニル)-3-エチル-2-(1-エチル-3-アゼチジニル)-2,6-ジヒドロ-7H-ピラゾロ [4,3-d] ピリミジン-7-オン(WO 01/27112、実施例132を参照)；
(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-ヘキサヒドロ-2-メチル-6-(3,4- チレンジオキシフェニル)-ピラジノ [2', 1':6, 1]ピリド [3,4-b]インドール-1,4-ジオン(IC-351、タダラフィル)、すなわちPCT公開番号W095/19978の実施例78および95の化合物、ならびに実施例１、３、７および８の化合物；そして1- [ [3-(3,4-ジヒドロ-5-メチル-4-オキソ-7-プロピルイミダゾ [5,1-f]-アス-トリアジン-2-イル)-4-エトキシフェニル] スルホニル]-4-エチルピペラジン(すなわち、PCT公開番号WO 99/24433の実施例20、19、337および336の化合物)としても知られる、2-[2-エトキシ-5-(4-エチル-ピペラジン-1-イル-1-スルホニル)-フェニル]-5-メチル-7-プロピル-3H-イミダゾ[5,1-f] [1,2,4]トリアジン-4-オン(バルデナフィル)；
そして、薬学的に許容し得るその塩といった化合物である。
【０１０１】
さらなる態称に従って本発明は、本発明の化合物およびシルデナフィルを含有するMEDの治療のための組成物を提供する。
【０１０２】
本発明の化合物と組合わせて使用するための、いずれかの或る種のcGMP PDE5阻害剤の適合性は、文献に記載の方法を用いた、その効力および選択性の測定によって、続いて一般的な医薬業務に従った、その毒性、吸収、代謝、薬物動態の測定等によって容易に判断され得る。
【０１０３】
本明細書中の使用のための好ましいcGMP PDE5阻害剤は、100ナノモル未満、より好ましくは50ナノモル未満、さらにより好ましくは10ナノモル未満のIC50を有する。好ましくは、本発明に記載の薬剤の組合わせにおいて使用するためのcGMP PDE5阻害剤は、PDE5酵素に対して選択的である。好ましくは、それらはPDE3に比べてPDE5に対して100倍超、より好ましくは300倍超の選択性を有する。より好ましくは、該PDE5阻害剤はPDE3およびPDE4の両者に比べて100倍超、より好ましくは300倍超の選択性を有する。
【０１０４】
選択性の比率は、熟練者によって容易に測定され得る。PDE3およびPDE4酵素に対するIC50値は、定評のある文献の方法を用いて測定され得るものであり、S A Ballard et al, Journal of Urology, 159, 2164-2171 (1998)を参照。
【０１０５】
本明細書中で好ましいものはNEP阻害剤であり、ここで前述のNEPは、EC 3.4. 24.11であり、そしてより好ましくは、ここで前述のNEP阻害剤はEC 3.4. 24.11に対する選択的阻害剤であり、より好ましくは、100nM未満のIC50を有するEC 3.4. 24.11に対する選択的阻害剤(例えば、オンパトリラト（ompatrilat）、カンドキサトリル、カンドキサトリラト（candoxatrilat）、サムパトリラト（sampatrilat）)である。適当なNEP阻害剤の化合物は、EP-A-1097719に記載される。
【０１０６】
本発明に記載のMEDの治療に使用するための補助剤として特に好ましいNEPi化合物は、PCT公開番号WO 02/079143(出願番号PCT/IB02/00807、2002年3月18日に出願)に記載される化合物である。
【０１０７】
特に好ましいのは、(S)-2-[(1-｛[3-(4-クロロフェニル)プロピル]-カルバモイル｝シクロ-ペンチル)メチル]-4-メトキシブタン酸または薬学的に許容し得る塩、例えば、PCT公開番号02/079143実施例22の詳述の通りのナトリウム塩である。
【０１０８】
さらなる態称に従って本発明は、本発明の１つの化合物および(S)-2-[(1-｛[3-(4-クロロフェニル)プロピル] カルバモイル｝ シクロペンチル)メチル]-4-メトキシブタン酸を含有する、MEDの治療のための組成物を提供する。
【０１０９】
本発明のよりさらなる態称に従って、女性の性機能不全(FSD)の治療のための本発明の１つの化合物の使用が提供される。
【０１１０】
本発明の別の態称に従って、女性の性機能不全(FSD)の治療のための、本発明の１つの化合物および１つまたはそれ以上の追加の有効薬剤の使用が提供される。
【０１１１】
好ましくは、１つまたはそれ以上の追加の有効薬剤は、以下から成る群から選ばれる:
1)エストロゲン受容体修飾物質および／またはエストロゲンアゴニストおよび／またはエストロゲンアンタゴニスト；
2) テストステロン置換薬剤および／またはテストステルノン(トストレル（Tostrelle）)および／またはジヒドロテストステロンおよび／またはデヒドロエピアンドロステロン(DHEA)および／または１つのテストステロンインプラント；
3)エストロゲン、エストロゲンおよびメドロキシプロゲステロンもしくは酢酸メドロキシプロゲステロン(MPA)(組合わせとして)、またはエストロゲンおよびメチルテストステロンホルモン置換療法剤；
4)１つまたはそれ以上のドーパミン作動性薬剤；
5)１つまたはそれ以上の5HTアゴニスト；
6)１つまたはそれ以上のメラノコルチン受容体アゴニストもしくは修飾物質、またはメラノコルチン賦活薬；
7)１つまたはそれ以上のNEP(中性エンドペプチダーゼ)阻害剤；
8)１つまたはそれ以上のPDE(ホスホジエステラーゼ)阻害剤；ならびに
9)１つまたはそれ以上のボンベシン受容体アンタゴニストまたは修飾物質。
【０１１２】
好ましくは、前述のFSDは女性の性的興奮障害(FSAD)である。他のものとしては、前述のFSDは女性のオルガスム障害(FOD)である。さらに他のものとしては、前述のFSDは機能低下性性的欲求低下障害(HSDD)である。さらになお他のものとしては、前述のFSDは性交疼痛障害、好ましくは性交疼痛症または腟痙である。
【０１１３】
エストロゲン受容体修飾物質および／またはエストロゲンアゴニストおよび／またはエストロゲンアンタゴニストの例は、ラロキシフェンまたはラソホキシフェン、(-)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールおよびその薬学的に許容し得る塩(以下の化合物(a))であり、その製法はWO 96/21656に詳述される。
【化４】
2006511530.tif 000006
【０１１４】
テストステロン置換薬剤の例は、デヒドロアンドロステンジオンである。
【０１１５】
ホルモン置換療法剤の例は、プレマリン、セネスチン、オエストロフェミナル（Oestrofeminal）、エキン（Equin）、エストレース（Estrace）、エストロフェン、エレステソロ（Elleste Solo）、エストリング（Estring）、イーストラデルム（Eastraderm）TTS、イーストラデルム  マトリックス（Eastraderm Matrix）、デルメストリル（Dermestril）、プレムフェイズ（Premphase）、プレエムプロ（Preempro）、プレムパク（Prempak）、プレミクエ（Premique）、エストラテスト（Estratest）HSおよびチボロンである。
【０１１６】
ドーパミン作動性薬剤の例は、アポモルヒネまたは選択的D2、D3もしくはD2/D3アゴニスト、例えばプラミペキソールおよびロピリノール（ropirinol）(WO-0023056で特許請求される通りである)、L-ドーパまたはカルビドパ、PNU95666(WO-0040226で開示される通りである)である。
【０１１７】
追加のNPY(神経ペプチドY)阻害剤の例は、NPY1またはNPY5阻害剤、好ましくはNPY1阻害剤である。前述のNPY阻害剤(NPY Y1およびNPYY5を含む)は、好ましくは100nM未満、より好ましくは50nM未満のIC50を有する。適当なNPY、および特にNPY1阻害剤化合物は、EP-A-1097718に記載される。
【０１１８】
5HT2c受容体アゴニストの例は、ピラジンおよびピリミジン誘導体、例えば2002年6月17日に両者とも出願されたPCT出願番号PCT/IB02/02293およびPCT/IB02/02261； PCT公開番号WO02/40456ならびに米国公開番号6,465,467に記載されるものである。
【０１１９】
メラノコルチン受容体アゴニストもしくは修飾物質またはメラノコルチン賦活薬の例は、メラノタンII、PT-14、PT-141またはWO-09964002、WO-00074679、WO-09955679、WO-00105401、WO-00058361、WO-00114879、WO-00113112もしくはWO-09954358に開示される化合物である。
【０１２０】
好適なNEP阻害剤は先に記載した通りである。
【０１２１】
さらなる態称に従って本発明は、本発明の１つの化合物および(S)-2-[(1-｛[3-(4-クロロフェニル)プロピル] カルバモイル｝シクロ-ペンチル)メチル]-4-メトキシブタン酸を含有する、FSDの治療のための組成物を提供する。
【０１２２】
好ましいPDE阻害剤は、PDE 2、3、4、5、7または8阻害剤、好ましくはPDE2またはPDE5
阻害剤、そしてより好ましくはPDE5阻害剤(先に記載した通りである)、最も好ましくはシルデナフィルである。
【０１２３】
さらなる態称に従って本発明は、本発明の１つの化合物およびシルデナフィルを含有する、FSDの治療のための組成物を提供する。
【０１２４】
１つまたはそれ以上のボンベシン受容体アンタゴニストまたは修飾物質の好ましい例は、BB1に対するアンタゴニストまたは修飾物質であり得るものであり、PCT公開番号WO 02/40008(出願番号PCT/GB01/05018、2001年11月14日に出願)およびPCT公開番号WO 02/40022(出願番号PCT/GB00/04380、2000年11月17日に出願)に記載されるものを含む。ボンベシンBB2、BB3、またはBB4受容体アンタゴニストもまた好ましいものである。好ましいボンベシン受容体アンタゴニストはまた、PCT公開番号WO 02/47670において“補助剤”として記載されている。
【０１２５】
存在し得る“追加の有効薬剤”の完全なリストはPCT公開番号WO 02/47670に見出すことができるし、そしてその中に“補助剤”として記載されることに留意すべきである。
【０１２６】
本発明の化合物は一般的に、薬学的に許容し得る担体、ビヒクルまたは希釈剤と共に、少なくとも１つのこの発明の化合物を含有する医薬組成物の形で投与する。従ってこの発明の化合物は、いずれかの従来の経口的、腸管外的、直腸的または経皮的剤形で、個別にまたは共に投与し得る。
【０１２７】
経口投与では、医薬組成物は水剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤および類似のものの形態を取り得る。種々の賦形剤、例えばクエン酸ナトリウム、炭酸カルシウムおよびリン酸カルシウムを含有する錠剤は、種々の崩壊剤、例えばデンプン、そして好ましくはジャガイモまたはタピオカデンプン、および或る種のシリケートコンプレックスに加えて、結合剤、例えばポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチンおよびアラビアガムを共に用いる。加えて、潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクは、成形の目的に非常に有益であることが多い。類似の種類の固体の組成物はまた、ソフトゼラチンカプセル剤およびハードゼラチンカプセル剤の充填剤としても用いる；この関連において好ましい物質はまた、高分子量のポリエチレングリコールと同様に、ラクトースまたは乳糖を含む。水性懸濁剤および／またはエリキシル剤を経口投与に所望する場合には、この発明の化合物は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンおよび種々のそれらの類似の組合わせといった希釈剤と同様に、種々の甘味剤、着香剤、着色剤、乳化剤および／または沈殿防止剤と混合できる。
【０１２８】
腸管外投与の目的のためには、相当する水溶性塩の滅菌水溶液と同様に、例えばゴマ油もしくは落花生油または水性プロピレングリコール中の溶液を用い得る。かかる水溶液は、必要な場合には緩衝剤で適切に処理し得るし、そして液体希釈剤は最初に十分な塩類またはグルコースを用いて等張にする。これらの水溶液は静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内注射の目的に特に適する。この関連において滅菌水媒体は、熟練した当業者に公知の一般的な技術によって、すべて容易に入手可能なものである。
【０１２９】
経皮(例えば、局所)投与の目的のためには、低濃度の滅菌の水溶液、または部分的に水性の溶液(通常は約0.1％〜５％の濃度)、他には前述の腸管外溶液に類似のものを調製する。
他の投与方法はイオン導入法、インプラントおよび吸入を含む。
【０１３０】
一定量の有効成分を用いて種々の医薬組成物を製造する方法は、熟練した当業者に既知のものであるか、またはこの開示を考慮すると明らかであり得る。医薬組成物を製造する方法の例としては、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975) を参照。
【０１３１】
本発明の実施形態は、以下の実施例によって説明する。しかし、その他の別種は一般的な熟練した当業者に既知であり得るか、または当該の開示を考慮すると明らかであり得るから、本発明の実施形態はこれらの実施例の具体的な詳細に限定されないものであると理解される。
【実施例】
【０１３２】
他に特定しない限り、出発物質は一般的に商業的製造業者、例えばAldrich Chemicals Co. (Milwaukee, WI), Lancaster Synthesis, Inc. (Windham, NH), Acros Organics (Fairlawn, NJ), Maybridge Chemical Company, Ltd. (Cornwall, England), Tyger Scientific (Princeton, NJ), および AstraZeneca Pharmaceuticals (London, England)から入手可能である。
【０１３３】
一般的な実験方法
NMRスペクトルは、ヴァリアン・ユニティ（Varian Unity）TM 400または500(Varian Inc., Palo Alto, CAから入手可能)において室温で、それぞれ400および500 MHz 1 Hで記録した。化学シフトは、内部標準としての残留溶剤に比較して百万分率（δ）で表現した。ピークの形態は以下に示す通りである：ｓ，一重線；d，二重線；t，三重線；q，四重線；m，多重線；br s，幅広の一重線；v br s，非常に幅広の一重線；br m，広範な多重線；2s，２本の一重線。一部のケースでは、代表的な1H NMRのピークのみが得られた。
【０１３４】
質量スペクトルは、陽性および陰性の大気圧化学イオン化(APcI)スキャンモードを用いて、直接フロー分析によって記録した。ギルソン（Gilson）215液体操作システムを装備したウォーターズ（Waters）APcl/MS モデル ZMD質量分析計を用いて実験を実施した。
【０１３５】
質量分光分析はまた、クロマトグラフィーによる分離のためのRP-HPLC 勾配法によって得られた。分子量の識別は、陽性および陰性のエレクトロスプレーイオン化(ESI)スキャンモードによって記録した。ギルソン（Gilson）215液体操作システムおよびHP 1100 DADを装備したウォーターズ／マイクロマス（Waters/Micromass）ESI/MSモデルZMDまたはLCZ質量分析計を使用して実験を実施した。
【０１３６】
塩素または臭素を含有するイオンの強度を記載した場合については、予想された強度の比率を観察し(35Cl／37Cl含有イオンに関しては約３：１、そして79Br／81Br含有イオンに関しては１：１)、そして低質量のイオンのみが得られた。MSピークはすべての実施例について報告した。
【０１３７】
カラムクロマトグラフィーは、ベーカー（Baker）TMシリカゲル(40μm； J. T. Baker,Phillipsburg, NJ)、またはガラスカラム中のシリカゲル50(EM SciencesTM, Gibbstown, NJ)、またはビオテージ（Biotage）TMカラム(ISC, Inc., Shelton, CT)中のいずれかにおいて低圧窒素下で実施した。円形クロマトグラフィーはクロマトトロン（Chromatotron)TM (Harrison Research)を用いて実施した。
【０１３８】
9-エチル-9H-カルバゾール-3-カルバアルデヒドはSigma-Adirich (St. Louis, MO)から入手可能である。
【０１３９】
実施例１
9-エチル-3-(5-メチル-4-フェニル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール(1A)の製造:
【化５】
2006511530.tif 000007
9-エチル-9H-カルバゾール-3-カルバアルデヒド(500 mg、2.23mmol)の溶液および1-フェニル-1,2-プロパンジオン(0.3 ml、2.23mmol)を、氷酢酸(5ml)中に溶解した。酢酸アンモニウム(410 mg、5.37mmol)を一度に加えた後、生じた混合物を100℃で４時間加熱した。その反応混合物を室温に冷却した。飽和炭酸ナトリウム水溶液を、反応混合物のpHが中性になるまで加えた後、１Ｎの水酸化ナトリウム水溶液を pHが約10になるまで加えた。次いでその反応混合物をジクロロメタンで抽出した後、有機抽出物を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして濃縮した。生成物を予備的薄層クロマトグラフィー(ヘキサン中20％酢酸エチル、プレートで２回展開)によって精製して、標題化合物1A(35 mg)を得た:
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) ;δ 1.38 (t, 3H); 2.44 (s, 3H); 4.41 (q, 2H); 7.21 (app t,1H), 7.30 (app t,1H) ; 7.45 (m, 4H); 7.55 (d, 1H), 7.62 (d, 2H); 8.00 (d, 1H) ; 8.12 (d, 1H) ; 8.62(d, 1H) ;
MS m/z 352.2 (MH+).
【０１４０】
以下の化合物を、化合物1Aの製造のための実施例１で述べた方法に類似の方法に従って、妥当な出発物質を用いて製造した。
【０１４１】
実施例２
9-エチル-3-(4-フェニル-5-トリフルオロメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール(2A)の製造:
【化６】
2006511530.tif 000008
MS m/s 406.2 (M++1).
【０１４２】
実施例３
9-エチル-3-(5-メチル-4-ピリジン-2-イル-1H-イミダゾール-2-イル)-9H-カルバゾール(3A)の製造:
【化７】
2006511530.tif 000009
MS m/s 353.2 (M++1).
【０１４３】
実施例４
3-(4,5-ジメチル-1H-イミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール(4A)の製造:
【化８】
2006511530.tif 000010
MS m/s 290.2(M++1).
【０１４４】
実施例５
9-エチル-3-(1 H-イミダゾ[4,5-c]ピリジン-2-イル)-9H-カルバゾール(5A)の製造:
【化９】
2006511530.tif 000011
ニトロベンゼン(1.5 ml) 中の9-エチル-9H-カルバゾール-3-カルバアルデヒド(444 mg、1.99mmol)および3, 4-ジアミノピリジン(217 mg、1.99mmol)の混合物を、145℃で24時間加熱した。その反応混合物を室温に冷却した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー(0.1％水酸化アンモニウム／５％メタノール／ジクロロメタン)によって直接精製して、標題化合物 5A (94mg)を得た:
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) ;δ 1.43 (t, 3H); 4.48 (q, 2H); 7.28 (t, 1H); 7.49 to 7.62 (br m, 3H); 7.68 (d, 1H) ; 8.19 (d, 1H) ; 8.25 (d, 1H) ; 8.29 (d, 1H) ; 8.86 (d, 2H); そして
MS m/s 313.3 (M++1).
【０１４５】
以下の化合物を、化合物5Aの製造のための実施例５で述べた方法に類似の方法に従って、妥当な出発物質を用いて製造した。
【０１４６】
実施例６
3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-9-エチル-9H-カルバゾール(6A)の製造:
【化１０】
2006511530.tif 000012
MS m/s 312.1 (M++1).
【０１４７】
実施例７
9-エチル-3-(3H-イミダゾ[4,5-b]ピリジン-2-イル)9H-カルバゾール(7A)の製造:
【化１１】
2006511530.tif 000013
MS m/s 313.2(M++1).
【０１４８】
実施例８
9-エチル-3-(7H-プリン-8-イル)-9H-カルバゾール(8A)の製造: 
【化１２】
2006511530.tif 000014
MS m/s 314.2(M++1).
【０１４９】
実施例９
2-(9-エチル-9H-カルバゾール-3-イル)-1H-ベンゾイミダゾール-5-カルボン酸(9A）の製造:
【化１４】
2006511530.tif 000015
MS m/s 356.2(M++1).
【０１５０】
薬理学的試験
当該発明の実施における本発明の化合物の効用は、以下に記載した少なくとも１つの実験記録における活性によって証明され得る。例えば、肥満症の患者において、体重減少の誘発、または食欲低下の活性が、後述した従来の前臨床試験における本発明の化合物の活性によって実証された。かかる試験はまた、それによって本発明の化合物の活性を、他の既知の化合物の活性と比較し得る方法を提供した。これらの比較の結果は、かかる疾患の治療のための、ヒトを含む哺乳類における投与量のレベルを決定するために有効であった。
【０１５１】
NPY-5の結合に関する試験
Sf9細胞に発現するヒトNPY受容体における[125I]ペプチドYY(PYY)の結合
組換型ヒトNPY5受容体を発現したパキュロウイルス感染Sf9細胞(American Tissue Culture Collection, ACTT, Rockville, MD)を、48時間で採取した。h NPY-Y5 受容体cDNAを、一般的なクローン技術を用いてクローン化し(以下を参照: Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Edition, J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis; Cold Spring Habor Laboratory Press; Cold Spring Habor, NY, 1989)、そして細胞をリン酸カルシウムを用いて移入した。採取時に、細胞ペレットは溶解緩衝剤(20 mM トリス-HCI、pH 7.4、５mM EDTA、0.5ug/ml ロイペプチン、２ug/mlアプロトニンおよび200 mM PMSF)中に再懸濁し、そしてポリトロン(３に設定、25〜30秒)を用いて均質化した。ホモジネートを４℃で５分間200×g (〜1.5 rpm)で遠心分離して、核をペレット化した。その上澄み液を新しい試験管に回収した後、48,000×gで10分間遠心分離した。ペレットを溶解緩衝剤中で１回洗浄した後、遠心分離した。その最終ペレットをリン酸緩衝食塩水(PBS)中に再懸濁し、そしてアリコート中に-80℃で保存した。精製膜をPBSを用いて洗浄した後、結合バッファー(50 mM トリス(HCI)、pH 7.4、５mM KCI、120 mM NaCl、２mM CaCl2、１mM MgCl2、 0.1 ％ウシ血清アルブミン(BSA))中に再懸濁した。膜(20μg／反応試験管)を、0.035 nM[125I] PYY(ブタ)(Dupont New Research Products, Boston MA)、10-12 M〜10-5 Mの範囲の化合物および緩衝剤を含有するポリプロピレン試験管に加えると、最終量0.5 mLが得られた。非特異性結合が1μM NPY(ヒト)(Sigma; St. Louis, MO)の存在下で測定され、そして結合全体の10％を占めた。続いて室温で2時間温置し、その反応を急速真空濾過によって終了させた。試料を、予浸したGF/Cワットマンフィルター(1.0％ポリエチレンミン)上で濾過した後、BSAを含有しない冷却した結合緩衝剤5 mLで2回すすいだ。ガンマカウンターを用いてフィルターを効率85％で計測した。IC50値を、プログラムRS/1(SigmaPlot, Jandel)に適合する非線形性曲線を用いて計算した。
【０１５２】
以下の表１は、上述の実施例で例示した化合物の一部に関して、観察した結合データの代表的な例を提供する。
〔表１〕
実施例番号  平均値  Y5Ki, nM（n）
1A                  15（4）
3A                  101
4A                  10（2）
5A                  15（2）
7A                  1.5（2）
8A                  8（2）
【０１５３】
Y5 Ca動員試験
安定なボーズ（Bowes）黒色腫細胞株を、カルシウム蛍光分析法を用いるY5アンタゴニストの第二のスクリーニングに有益な、機能的Y5受容体を発現させて産出した。
【０１５４】
ヒトY5 受容体 h NPY-Y5 受容体cDNAに対するコード配列は、一般的なクローン技術を用いてクローン化し(以下を参照: Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Edition, J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis; Cold Spring Habor Laboratory Press; Cold Spring Habor, NY, 1989)、そしてpM2と呼ぶ新規な哺乳類発現ベクター中にサブクローン化した(以下を参照: B. S. Sachais et al., J.Biol. Chem. , 1998, 266:2319-2322)。この発現ベクターは、Y5構造遺伝子の発現の動因となる、ハーベイ（Harvey）マウス肉腫ウイルスの長い末端反復配列を有した。このプラスミド構成をリン酸カルシウムと共に用いて、いくつかのG結合受容体が適切なレベルで発現しそして機能的反応に対して結合する細胞株である、ヒトボーズ黒色腫細胞(HMCB；ATCC,Rockville, MDから得た)に安定的に移入した。細胞を、0.1 mM非必須アミノ酸、1.0 mMピルビン酸ナトリウムおよび25 mM HEPESを有し、10％ウシ胎児血清(pH 7.3)を追加したイーグル最小必須培地中で、37℃および５％ CO2に維持した。この細胞ホストは、低いレベルのY1反応および部位を示し、そして他のNPY-誘導反応は示さなかった。10 μMでのY1アンタゴニストBIBP3226(Research Biochemicals International, Natick, MA)は、内在性NPY反応を完全に阻害した。唯一のクローン細胞株を分離した後、アゴニストペプチドNPYを用いて特定した。10μM BIBP3226の存在下でNPYは、10の独立した研究において、EC50 9nM〜54nMでカルシウム動員を刺激した。
【０１５５】
細胞を、96穴プレート上で30,000細胞／穴で24時間平板培養した。その細胞を緩衝生理食塩水(以下から構成: 115 mM NaCl、0.96 mM NaH2PO4、１mM MgSO4、25 mM HEPES、２mM
CaCl2、５mM KCl、５mMグルコース、１mMプロベネシド)ですすいだ後、同じ緩衝生理食塩水中で作成した蛍光Ca2+指示薬Fluo-3 AM(10μM, Teflabs, Austin, TX)中に1.5時間温置した。細胞を、１mMカルバコールおよび10μM BIBP3226を追加した緩衝剤で２回すすいだ。HMCB Y5細胞に適合するNPYは、フルオロメトリック・イメージング・プレート・リーダー（Fluorometric Imaging Plate Reader）(FLIPR, Molecular Devices, Sunnyvale, CA)上に表示される蛍光の増加によって測定されるように、細胞内カルシウムの増加に依存する濃度を生じた。これらの実験に用いたNPYの濃度は、各実験の直前に測定されたように、EC30〜EC50であった。試験化合物の存在下のNPYに対する反応における蛍光の増加を、同じプレート中の対照反応と比較し、そして各化合物に対するIC50を、計算上の等式にデータを適用して決定した(Kaleidograph software, Reading PA)。
【０１５６】
Sf9細胞中のGα0、Gβ1およびGγ2を用いて共発現させたヒトNPY Y5受容体における、PYY 3-36誘発GTPγ35S結合
Gタンパク質結合受容体(GPCR)によるアゴニスト誘発GTPγ35S結合は、Gタンパク質活性の機能的測標を提供した。この分析は、多くのGPCR'sに関して広く用いられているものであり、そして、アゴニストとアンタゴニストとを識別する可能性、および与えられたGPCRに関してアゴニストの潜在能力および有効性を測定する可能性を提供する(Thomas et al., 1995; O'Boyle and Lawler, 1995)。GTPγ35S結合の活性は、以前に記載された方法(Wieland and Jacobs, 1994)の改良法を用いて測定する。対数期のSf9細胞(ATCC, Rockville, MD)を、hNPY Y5（一般的なクローン技術を用いてクローン化(以下を参照: Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Edition, J. Sambrook, E. F. Fritsch, T. Maniatis ; Cold Spring Habor Laboratory Press; Cold Spring Habor, NY, 1989)）受容体をコード化した離生バキュロウイルス株、ならびにGタンパク質サブユニットα.o.β１.およびγ2（BioSignal Montreal, Canadaから購入した）を用いて同時感染し、続いて、4.1 mM L-Gln、3.3g/L LAH、3.3g/Lの限外濾過したイーストレート、および10％熱不活性化ウシ胎児血清を用いてグレースを補足したヒンクのTNM-FH昆虫培地中で、27℃で培養した。感染後72時間に、細胞懸濁液の試料をトリパンブルー色素排除によって生存度を分析した後、残存するSf9細胞を遠心分離(3000rpm/10min/４℃)によって採収した。各ペレットを均質化バッファー(10mM HEPES、250 mMスクロース、0.5μg/mlロイペプチン、２μg/mlアプロトニン、200μM PMSFおよび2.5 mM EDTA、pH 7.4)中に再懸濁し、そしてポリトロン（５に設定、30秒間）を用いてホモジナイズした。そのホモジネートを４℃で10分間536×gで遠心分離して、核をペレット化した。その上澄み液を新しい試験管に回収した後、同じバッファー中で48,000×gで40分間２回遠心分離した。各膜標本のためのその最終ペレットを、EDTA5mMを含有するDPBS中に再懸濁した後、アリコート中に-80℃で保存した。分析の当日に、解凍した膜ホモジネートをアッセイバッファー(50 mMトリスpH 7.0 、120 mM NaCl、２mM MgCl2、２mM EGTA、0.1％ BSA、0.1 mMバシトラシン、100KIU/mアプロチニン、５μM GDP)中に再懸濁し、そして反応試験管に30 mg／反応試験管の濃度で加えた。試験化合物を10-11M〜10-5Mの範囲の濃度で加えた後、100 pM GTPγ35Sおよび0.001 nM〜1.0 μMの濃度の範囲のPYY 3-36の両者を加えることによって、反応を開始させた(最終用量0.250ml)。RTでの30分間の温置の後、氷冷した洗浄バッファー(50 mMトリスpH 7.0、120mM NaCl)を用いた、GF/Cフィルター(洗浄バッファー、0.1％ BSA中に予浸)上の真空濾過によって反応を終了させた。結合GTPγ35Sを、液体シンチレーション分光測定によって測定した。非特異的結合を10 mM GTPγSによって定義した。EC50、IC50およびKiを推定するために、GTPγ35S結合実験の結果をシグマプロット・ソフトウェア（SigmaPlot software(Jandel)）を用いて分析した。
【０１５７】
インビボの方法
絶食ラットにおける食餌および水の摂取ならびに体重増加に対する、単回投与の有効性 対象
実験当初の体重が210〜300gのオスのSDラット(Sasco, St. Louis, MO)を用いた。動物は、温度(22℃±２℃)および湿度(40〜70％ RH)を制御し12：12時間の明暗サイクルを用いた動物用施設内の、ステンレス鋼の吊り下げ式ケージ中の３部屋に入れた。食餌(Standard Rat Chow, PMI Feeds Inc., ＃5012)および水は自由に入手可能であった。
【０１５８】
装置
該動物がナルゲン・メタボリック・ケージ(モデル＃650-0100)に生息する間に、摂取データを収集した。各ケージは、透明なポリメチルペンテン(PMP)、ポリカルボネート(PC)またはステンレス鋼(SS)製の部品から構成された。すべての部品は、迅速かつ正確なデータ収集および清掃のために分解可能であった。シリンダー型のプラスチックおよびSSのケージ全体は、SSのスタンドの上に置かれ、そして１匹の動物が生息した。
【０１５９】
動物は丸いアッパー・チャンバー（Upper Chamber）(PC)組立て部品(高さ12cmおよび直径20cm)中に収容され、そしてSSフロア上に置かれた。アッパー・チャンバーには、２つの下位部品が付属していた。その第一の部品は、底部にPC給餌用引き出しが付属するSS給餌箱(長さ10cm、高さ５cmおよび幅５cm)であった。給餌用引き出しは２つの区画を有した: 粉末状のラット用の餌約50gを収容できる食餌収納区画、および食餌をこぼす区画。動物は、給餌箱のSSフロアの開口部によって粉末状の餌に到達できた。給餌箱のフロアは、食餌をこぼす区画中に落ちた餌には接続していなかった。
【０１６０】
第二の部品は、水のボトルの支柱、PCの水のボトル(容量100ml)、およびこぼれた水を収集する目盛り付きの管であった。水のボトルの支柱は、すべてのこぼれた水を、こぼれた水を収集する管に送った。
【０１６１】
下のチャンバーは、PMPの分液用円錐体、PMPの収集用漏斗、PMPの液体(尿)収集管、およびPMPの固体(糞)収集管から構成された。分液用円錐体は収集用漏斗の一番上に接続し、収集用漏斗は順次アッパー・チャンバーの底部に付属した。尿は分液用円錐体から収集用漏斗の壁へと、そして尿収集管の中へと流れた。分液用円錐体はまた、糞を分離し、そしてそれを糞収集管へと送った。
【０１６２】
食餌摂取量、水摂取量、および体重を、オハウス・ポータブル・アドバンスト・スケール(精度±0.1g)を用いて測定した。
【０１６３】
方法
試験の日の前に、各動物をメタボリック・ケージに１時間入れることによって、動物を試験装置に順応させた。実験当日に、前夜から餌を与えなかった動物を秤量し、そして処置群に割当てた。割当は、体重を利用した準ランダムな方法を用いて行い、処置群が類似の平均体重を確実に有するようにした。次いで、動物にビヒクル(通常0.5％ メチルセルロース、MC)または試験化合物のいずれかを投与した。その時点で、給餌用引き出しを粉末状の餌で満たし、水のボトルを満たし、そして空の尿および糞の収集管を秤量した。試験化合物の処置後２時間に、各動物を秤量し、そしてメタボリック・ケージに入れた。１時間の試験セッションの後、動物を取り出しそして体重を得た。次いで、食餌および水の容器を秤量した後、データを記録した。
【０１６４】
試験化合物
試験化合物(0.5％MC中に懸濁)または0.5％ MCを、10ml/kgの容量で３または５mlのシリンジに接続した栄養補給管を用いて経口投与(経口(PO)投与量として0.1〜50 mg/kg)した。一部の事例では、試験化合物を全身性の経路によって（例えば、i. v.投与量として0.1〜20 mg/kgを静脈注射によって）投与した。経口投与用の試験化合物は、投与の少なくとも１時間前に、撹拌しそして超音波処理することによって、相同の懸濁液中に調製した。
【０１６５】
統計分析
食餌摂取量、水摂取量および体重変化に関して平均値および平均値の標準誤差(SEM)を算出した。シスタット(5.2.1)を用いた分散の一元分析を用いて、群差を試験した。有意な効果はｐ値＜0.05を有するものとして定義した。
【０１６６】
以下の指標を定義した:体重変化は、メタボリック・ケージに入れる直前の動物の体重と、１時間の試験セッション終了時におけるその体重との差である。食餌摂取量は、試験前の食餌引き出しの重量と、１時間の試験セッション後の重量との差である。水摂取量は、試験前の水のボトルの重量と、１時間の試験セッション後の重量との差である。
【０１６７】
一晩の食餌摂取量
対象
実験当初の体重が210〜300gのオスのSDラット(Sasco, St. Louis, MO)を用いた。動物は、温度(22℃±２℃)および湿度(40〜70％ RH)を制御し12：12時間の明暗サイクルを用いた動物用施設内の、ステンレス鋼の吊り下げ式ケージ中の２つまたは３つの部屋に入れた。食餌(Standard Rat Chow, PMI Feeds Inc., ＃5012)および水は自由に入手可能であった。
【０１６８】
装置
該動物がナルゲン・メタボリック・ケージ(モデル＃650-0100)に生息する間に、摂取および排泄のデータを得た。各ケージは、透明なポリメチルペンテン(PMP)、ポリカルボネート(PC)またはステンレス鋼(SS)製の下位部品から構成された。すべての部品は、迅速かつ正確なデータ収集および清掃のために分解可能であった。シリンダー型のプラスチックおよびSSのケージ全体は、SSのスタンドの上に置かれ、そして１匹の動物が生息した。
【０１６９】
動物は丸いアッパー・チャンバー（Upper Chamber）(PC)組立て部品(高さ12cmおよび直径20cm)中に収容され、そしてSSフロア上に置かれた。アッパー・チャンバーには、２つの下位部品が付属していた。その第一の部品は、底部にPC給餌用引き出しが付属するSS給餌箱(長さ10cm、高さ5cmおよび幅５cm)であった。給餌用引き出しは２つの区画を有した: 粉末状のラット用の餌約50gを収容できる食餌収納区画、および食餌をこぼす区画。動物は、給餌箱のSSフロアの開口部によって粉末状の餌に到達できた。給餌箱のフロアは、食餌をこぼす区画中に落ちた餌には接続していなかった。
【０１７０】
第二の部品は、水のボトルの支柱、PCの水のボトル(容量100ml)、およびこぼれた水を収集する目盛り付きの管であった。水のボトルの支柱は、すべてのこぼれた水を、こぼれた水を収集する管に送った。
【０１７１】
下のチャンバーは、PMPの分液用円錐体、PMPの収集用漏斗、PMPの液体(尿)収集管、およびPMPの固体(糞)収集管から構成された。分液用円錐体は収集用漏斗の一番上に接続し、収集用漏斗は順次アッパー・チャンバーの底部に付属した。尿は分液用円錐体から収集用漏斗の壁へと、そして尿収集管の中へと流れた。分液用円錐体はまた、糞を分離し、そしてそれを糞収集管へと送った。
【０１７２】
食餌摂取量、水摂取量、尿排泄量、糞排泄量および体重を、オハウス・ポータブル・アドバンスト・スケール(精度±0.1g)を用いて測定した。
【０１７３】
方法
実験当日に、動物を秤量し、そして処置群に割当てた。割当は、体重を利用した準ランダムな方法を用いて行い、処置群が類似の平均体重を確実に有するようにした。消灯（18:30）の２時間前に、動物にビヒクル(0.5％ メチルセルロース、MC)または試験化合物のいずれかを投与した。その時点で、給餌用引き出しを粉末状の餌で満たし、水のボトルを満たし、そして空の尿および糞の収集管を秤量した。投与後、各動物を秤量し、そしてメタボリック・ケージに入れた。翌朝（08:00）、動物をメタボリック・チャンバーから取り出し、そして体重を得た。食餌および水の容器、ならびに糞および尿の収集管を秤量した後、データを記録した。
【０１７４】
試験化合物
試験化合物(0.5％MC中に懸濁)または0.5％MCを、10ml/kgの容量で３または５mlのシリンジに接続した栄養補給管を用いて経口投与(PO)した。試験化合物は、投与の少なくとも１時間前に、撹拌しそして超音波処理することによって、相同の懸濁液中に調製した。一部の実験では、動物をさらに１晩試験した。これらの研究では、翌晩において動物に、それらが第一の晩に与えられていたのと同じ処置（試験化合物または0.5％MC）を投与した。
【０１７５】
統計分析
食餌摂取量、水摂取量、尿排泄量、糞排泄量および体重変化に関して平均値および平均値の標準誤差(SEM)を算出した。シスタット(5.2.1)を用いた分散の一元分析を用いて、群差を試験した。有意な効果はｐ値＜0.05を有するものとして定義した。
【０１７６】
以下の指標を定義した：体重変化は、メタボリック・ケージに入れる（16:30）直前の動物の体重と、翌朝（08:00）のその体重との差である。食餌摂取量は、16:30の食餌引き出しの重量と、08:00の重量との差である。水摂取量は、16:30の水のボトルの重量と、08:00の重量との差である。糞排泄量は、16:30の空の糞収集管の重量と、08:00の重量との差である。尿排泄量は、16:30の空の尿収集管の重量と、08:00の重量との差である。
【国際調査報告】
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