(57)【要約】本発明は、水性担体と、構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨを有するペプチドの薬学的に許容される塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、前記ペプチドを前記水性担体中に溶解させるのに有効な量の置換されたβ−シクロデキストリンと、を含み、前記組成物が４ないし９のｐＨを有する薬学的組成物、調製のための方法、及び前記薬学的化合物をヒト患者に投与することを含む、ヒト患者の全身性エリテマトーデスの症候を緩和する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの薬学的に許容される塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
前記ペプチドを前記水性担体中に溶解させるのに有効な量の置換されたβ−シクロデキストリンと、を含み、
４ないし９のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項２】
前記ペプチドの前記塩の濃度が少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
前記ペプチドの前記塩の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである、請求項２に記載の薬学的組成物。
【請求項４】
前記ペプチドの前記塩の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬないし２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項３に記載の薬学的組成物。
【請求項５】
前記組成物が６．５ないし８．５のｐＨを有する、請求項１から４の何れか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項６】
前記組成物が７．５ないし８．５のｐＨを有する、請求項５に記載の薬学的組成物。
【請求項７】
前記薬学的に許容される塩が酢酸塩である、請求項１から６の何れか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項８】
前記置換されたβ−シクロデキストリンが、ヒドロキシプロピル、スルホブチルエーテル又はスルホプロピルエーテルで置換されたβ−シクロデキストリンである、請求項１から７の何れか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項９】
前記置換されたβ−シクロデキストリンが、スルホブチルエーテルで置換されたβ−シクロデキストリンである、請求項８に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
前記置換されたβ−シクロデキストリンが、ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンである、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】
前記薬学的組成物のｐＨを４ないし９の範囲にするのに適した量及び種類の薬学的に許容される緩衝液をさらに含む、請求項１から１０の何れか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項１２】
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの酢酸塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンの組成物７０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬと、を含み、
前記ペプチドと前記ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンが、前記水性担体中に溶解され、
６．５ないし８．５のｐＨを有する、薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度が少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】
前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度が０．５ないし２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】
ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンの濃度が１２０ｍｇ／ｍＬであり、組成物のｐＨが７．５ないし８．５である、請求項１３に記載の薬学的組成物。
【請求項１７】
前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度が１．０ｍｇ／ｍＬである、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１８】
前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度が２．５ｍｇ／ｍＬである、請求項１６に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
ヒト患者の全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の症候を緩和する方法であって、前記ヒト患者のＳＬＥの症候を緩和するのに有効な量の、請求項１から１８の何れか１項に記載の薬学的組成物を前記ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
ヒト患者のＳＬＥの治療に使用するための、請求項１から１８の何れか１項に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】
請求項１から１８の何れか１項に記載の薬学的組成物を製造する方法であって、
ａ）水性担体中の置換されたβ−シクロデキストリンの溶液を所定の濃度で調製する工程と、
ｂ）ペプチドＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）の薬学的に許容される塩の所定量を、工程ａ）の溶液に添加する工程と、
ｃ）前記ペプチドが前記溶液中に溶解するまで、工程ｂ）の溶液のｐＨを調整する工程と、
ｄ）必要であれば、工程ｃ）の溶液のｐＨを４ないし９のｐＨに調整する工程と、を含み、
これにより、前記薬学的組成物を製造する方法。
【請求項２２】
前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度が、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度を７０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとする濃度である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度が、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度を１２０ｍｇ／ｍＬとする濃度である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ペプチドの前記所定量が、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度を少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬとする量である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
ペプチドの前記所定量が、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度を少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬとする量である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
ペプチドの前記所定量が、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度を２．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は０．１ｍｇ／ｍＬとする量である、請求項２１の方法。
【請求項２７】
工程ｂ）が、前記溶液を１時間混合することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
工程ｃ）において、ＨＣｌ又はＮａＯＨ  １．０Ｎを用いて前記ｐＨが調整される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
酢酸セルロースフィルターを通して工程ｄ）の溶液をろ過することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度が、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度を１２０ｍｇ／ｍＬとする濃度であり、
ペプチドの前記所定の量が、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度を２．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は０．１ｍｇ／ｍＬとする量であり、
工程ｂ）が、前記溶液を１時間混合することをさらに含み、
工程ｃ）において、ＨＣｌ又はＮａＯＨ  １．０Ｎを用いて前記ｐＨが調整され、
酢酸セルロースフィルターを通して工程ｄ）の前記溶液をろ過することをさらに含む、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】
請求項２１から３０の何れか１項に記載の方法によって調製される薬学的組成物。
【請求項３２】
請求項２に記載の薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４０℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４０℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）２０℃の温度を所定の時間維持する工程と、
ｅ）圧力を低下させ、２０℃の温度を所定の時間維持することにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる工程と、を含む方法。
【請求項３３】
工程ａ）が２時間以内で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
工程ｂ）が３時間以内で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
工程ｃ）が１３時間にわたって行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
工程ｃ）が１１０μバールの圧力で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
工程ｄ）が１３時間にわたって行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
工程ｄ）が１１０μバールの圧力で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
工程ｅ）において、圧力が１０μバールまで減少される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
工程ｅ）が５時間にわたって行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項４１】
工程ａ）が２時間以内で行われ、
工程ｂ）が３時間以内で行われ、
工程ｃ）が１３時間にわたって且つ１１０μバールの圧力で行われ、
工程ｄ）が１３時間にわたって且つ１１０μバールの圧力で行われ、
工程ｅ）が５時間にわたって行われ、且つ圧力が１０μバールに減少される、請求項３２に記載の方法。
【請求項４２】
請求項３２から４１の何れか１項に記載の方法によって調製される凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項４３】
請求項２に記載の薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４５℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４５℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を−２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）前記溶液の温度を２５℃まで上昇させる工程と、
ｅ）温度を２５℃に所定の時間維持することにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる工程と、を含む方法。
【請求項４４】
工程ａ）が６時間以内で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
工程ｂ）が３時間以内で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
工程ｃ）が１９時間にわたって行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４７】
工程ｃ）が１５０μバールの圧力で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
工程ｄ）が１３時間にわたって行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
工程ｄ）が１５０μバールの圧力で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
工程ｅ）が８時間にわたって行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
工程ｅ）が１５０μバールの圧力で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５２】
工程ａ）が６時間以内で行われ、
工程ｂ）が３時間以内で行われ、
工程ｃ）が１９時間にわたって且つ１５０μバールの圧力で行われ、
工程ｄ）が１３時間にわたって且つ１５０μバールの圧力で行われ、
工程ｅ）が８時間にわたって且つ圧力が１５０μバールの圧力で行われる、請求項４３に記載の方法。
【請求項５３】
請求項４３から５２の何れか１項に記載の方法によって調製される凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項５４】
前記組成物の水分含量が５％未満である、請求項５３に記載の凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項５５】
前記組成物の水分含量が４．０％未満である、請求項５４の凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項５６】
前記組成物の水分含量が３．５％未満である、請求項５５の凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項５７】
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの薬学的に許容される塩と、
置換されたβ−シクロデキストリンと、を含む凍結乾燥された薬学的組成物。
【請求項５８】
パッケージ材料と、
請求項５７に記載の凍結乾燥された薬学的組成物の所定量と、から構成されるパッケージされた薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００３年１月１４日に出願された米国仮出願第６０／４３９，９５０号の利益を主張するものであり、その内容全体を参照により本明細書に援用する。
【０００２】
本出願を通じて、様々な文献が完全な引用によって参照される。本明細書に記載され、権利が主張されている本発明が為された時点における、当業者に公知の技術水準をより完全に記述するために、これらの刊行物の開示内容の全体を参照により本出願に援用する。
【発明の背景】
【０００３】
全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）又は狼瘡は、ｄｓＤＮＡ、核抗原及びリボヌクレオタンパク質に対する抗体を含む、多数の自己抗体の存在を特徴とする衰弱性自己免疫疾患である。２０００人に約１人（米国では、７００人の女性に１人）がＳＬＥに罹患している。本疾患には、主に若い女性が罹患し、女性と男性の比率は約９：１である。
【０００４】
全身性狼瘡は、身体のほとんどあらゆる臓器又は系を冒し得る。全身性狼瘡には、ほとんど症候が認められない期間（「緩解」）と、疾病がより活動的になる他の期間（「再燃」）が含まれ得る。「狼瘡」という場合、該疾病の全身型を表すことが最も多い。
【０００５】
全身性自己免疫疾患の治療では、コルチコステロイドが主流である。命を脅かし、身体に重大な障害を与えるＳＬＥの症候は、大量のグルココルチコイド（１−２ｍｇ／ｋｇ／日）で治療される。長期にわたるグルココルチコイドの望ましくない効果には、クッシング様体型、中心性肥満、高血圧、感染、毛細血管の脆弱性、多毛、骨粗鬆症の加速、白内障、糖尿病、ミオパシー及び精神病などの、数多くの顕著な有害効果が含まれる。コルチコステロイドの毒性に加えて、患者による投薬計画の遵守にも重大な問題が生じる。
【０００６】
活動的な疾病を抑制し、疾病の再燃率を減らし、ステロイドの必要性を減らすために、細胞毒性薬も使用される。後者の望ましくない副作用には、骨髄抑制、日和見生物による感染症の増加、不可逆的卵巣不全、脱毛及び悪性腫瘍リスクの増加が含まれる。
【０００７】
ＳＬＥは、現在まで、決定的な治療又は療法が存在しない炎症性疾患である。本疾患は、急性及び慢性の合併症をもたらす。利用可能な唯一の治療は、急性の症候を軽減し、慢性の合併症を予防することを目的とする一時的なものであり、重い副作用を伴うことが多い。従って、本分野には未だ実現されていないニーズが存在し、医師及び患者ともに、本疾病の望ましくない症候を除去又は軽減できる可能性がある新しい治療を望んでいるであろう。
【０００８】
ＳＬＥ関連応答を免疫調節することができるヒトモノクローナル抗ＤＮＡ１６／６Ｉｄ抗体の相補性決定領域を基礎としたペプチドが、ＰＣＴ国際公開ＷＯ  ０２／０６７８４８  Ａ２に開示されており、その内容全体を参照により本明細書に援用する。特に、領域ＣＤＲ１は、ヒト抗ＤＮＡ１６／６Ｉｄ  ｍＡＢに対するＳＬＥ患者の末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の増殖性応答を阻害し、自発的又は実験的ＳＬＥに罹ったマウスの疾病症候を改善することが見出された。
【０００９】
図１に示されているヒトＣＤＲ１（化合物１）は、１６／６  Ｉｄと表記されるヒト抗ｄｓＤＮＡ  ｍＡｂの相補性決定領域１（ＣＤＲ１）を基礎とした１９アミノ酸の合成ペプチドである（Waisman, A., et al.“Modulation of murine systemic lupus erythematosus with peptides based on complementarity determining regions of pathogenic anti-DNA monoclonal antibodies.”Proc, Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1997), 94(4):4620-4625）。
【００１０】
実験的ＳＬＥモデル−Ｂａｌｂ／ｃマウス及びＳＬＥに罹りやすいマウス（すなわち、（ＮＺＢｘＮＺＷ）Ｆ１マウス）では、ｍＣＤＲを基礎としたペプチド又は化合物１の何れかによる処置が、ＳＬＥ関連の所見、特に腎臓中の免疫複合体沈着物（ＩＣＤ）、タンパク尿及び白血球減少症を著しく減少させた。この処置は、１６／６  Ｉｄ特異抗体応答に対して影響がなかった（Waisman, A., et al. “Modulation of murine systemic lupus erythematosus with peptides based on complementarity determining regions of pathogenic anti-DNA monoclonal antibodies.” Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.(1997), 94(4):620;Eilat, E., et al.,"Prevention of systemic lupus erythematosus-like disease in (NZBxNZW)F1 mice by treating with CDR1- and CDR3-based peptides of pathogenic autoantibody"J. Clin. Immunol. (2000), 20: 268; Eilat, E. , et al., "The mechanism by which a peptide based on complementarity determining region-1 of pathogenic anti-DNA antibody ameliorates experimental SLE" (2001), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 98:1148）。
【００１１】
これらのペプチドは、多くのペプチドと同様、あまり溶解度が高くない。従って、ペプチドの溶解性を改善する製剤が望まれている。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの薬学的に許容される塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
前記ペプチドを前記水性担体中に溶解させるのに有効な量の置換されたβ−シクロデキストリンと、を含み、
前記組成物が４ないし９のｐＨを有する、薬学的組成物を提供する。
【００１３】
本発明は、
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの酢酸塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンの組成物７０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬと、を含み、
前記ペプチドと前記ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンが、前記水性担体中に溶解され、
前記溶液が６．５ないし８．５のｐＨを有する、薬学的組成物も提供する。
【００１４】
本発明は、ヒト患者の全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の症候を緩和する方法であって、前記ヒト患者のＳＬＥの症候を緩和するのに有効な量の、上記薬学的組成物の何れかを前記ヒト患者に投与することを含む、方法も提供する。
【００１５】
本発明は、上記薬学的組成物を製造する方法であって、
ａ）水性担体中の置換されたβ−シクロデキストリンの溶液を所定の濃度で調製する工程と、
ｂ）ペプチドＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）の薬学的に許容される塩の所定量を、工程ａ）の溶液に添加する工程と、
ｃ）前記ペプチドが前記溶液中に溶解するまで、工程ｂ）の溶液のｐＨを調整する工程と、
ｄ）必要であれば、工程ｃ）の溶液のｐＨを４ないし９のｐＨに調整する工程と、を含み、
これにより、前記薬学的組成物を製造する方法も提供する。
【００１６】
本発明は、上記薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４０℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４０℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）温度を２０℃に所定の時間維持する工程と、
ｅ）圧力を１０μバールまで低下させる工程とを含み、
これにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる工程と、を含む方法も提供する。
【００１７】
本発明は、上記薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４５℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４５℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を−２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）前記溶液の温度を２５℃まで上昇させる工程と、
ｅ）温度を２５℃に所定の時間維持する工程とを含み、
これにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる方法も提供する。
【詳細な説明】
【００１８】
本発明は、
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの薬学的に許容される塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
前記ペプチドを前記水性担体中に溶解させるのに有効な量の置換されたβ−シクロデキストリンと、を含み、
前記組成物が４ないし９のｐＨを有する、薬学的組成物を提供する。
【００１９】
一実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬである。
一実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は０．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は０．５ｍｇ／ｍＬないし２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００２０】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は２．５ｍｇ／ｍＬないし５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は５ｍｇ／ｍＬないし７ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は７ｍｇ／ｍＬないし８．５ｍｇ／ｍＬである。
【００２１】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は８．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は９ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１０ｍｇ／ｍＬないし１５ｍｇ／ｍＬである。
【００２２】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１５ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１．０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００２３】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１５ｍｇ／ｍＬである。
【００２４】
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬないし０．５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬないし０．２ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．２ｍｇ／ｍＬないし０．３ｍｇ／ｍＬである。
【００２５】
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．３ｍｇ／ｍＬないし０．４ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．４ｍｇ／ｍＬないし０．５ｍｇ／ｍＬである。
さらなる実施形態において、前記組成物は６．５ないし８．５のｐＨを有する。
【００２６】
さらなる実施形態において、前記組成物は７．５ないし８．５のｐＨを有する。
さらなる実施形態において、前記組成物は４ないし５のｐＨを有する。
さらなる実施形態において、前記組成物は５ないし６のｐＨを有する。
【００２７】
さらなる実施形態において、前記組成物は６ないし７のｐＨを有する。
さらなる実施形態において、前記組成物は７ないし８のｐＨを有する。
さらなる実施形態において、前記組成物は８ないし９のｐＨを有する。
【００２８】
別の実施形態において、前記薬学的に許容される塩は、酢酸塩である。
別の実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンは、ヒドロキシプロピル、スルホブチルエーテル又はスルホプロピルエーテルで置換されたβ−シクロデキストリンである。
さらなる実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンは、スルホプロピルエーテルで置換されたβ−シクロデキストリンである。
【００２９】
さらなる実施形態において、前記薬学的に許容される塩は酢酸塩であり、前記置換されたβ−シクロデキストリンはヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンである。
別の実施形態において、前記組成物は、前記薬学的組成物のｐＨを４ないし９の範囲にするのに適した量及び種類の薬学的に許容される緩衝液をさらに含む。前記緩衝液は、酢酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液又は炭酸ナトリウムであり得る。
【００３０】
本発明は、
水性担体と、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの酢酸塩の組成物０．１ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬと、
ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンの組成物７０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬと、を含み、
前記ペプチドと前記ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンが前記水性担体中に溶解され、
前記組成物が６．５ないし８．５のｐＨを有する、薬学的組成物も提供する。
【００３１】
一実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬである。
一実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は０．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
さらなる実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は０．５ｍｇ／ｍＬないし２．５ｍｇ／ｍＬである。
【００３２】
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬないし０．５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．１ｍｇ／ｍＬないし０．２ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．２ｍｇ／ｍＬないし０．３ｍｇ／ｍＬである。
【００３３】
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．３ｍｇ／ｍＬないし０．４ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記塩の濃度は０．４ｍｇ／ｍＬないし０．５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は５ｍｇ／ｍＬないし７ｍｇ／ｍＬである。
【００３４】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は７ｍｇ／ｍＬないし８．５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は８．５ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は９ｍｇ／ｍＬないし１０ｍｇ／ｍＬである。
【００３５】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１０ｍｇ／ｍＬないし１５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１５ｍｇ／ｍＬないし２０ｍｇ／ｍＬである。
さらなる実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は１．０ｍｇ／ｍＬである。
【００３６】
さらなる実施形態において、前記ペプチドの前記酢酸塩の濃度は２．５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１０ｍｇ／ｍＬである。
【００３７】
別の実施形態において、前記ペプチドの前記塩の濃度は１５ｍｇ／ｍＬである。
別の実施形態において、ヘプタ−（スルホブチルエーテル）−β−シクロデキストリンの濃度は１２０ｍｇ／ｍＬであり、前記組成物のｐＨは７．５ないし８．５である。
【００３８】
本発明は、ヒト患者の全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）の症候を緩和する方法であって、前記ヒト患者のＳＬＥの症候を緩和するのに有効な量の上記薬学的組成物の何れかを前記ヒト患者に投与することを含む、方法も提供する。
本発明は、ヒト患者のＳＬＥの治療に使用するための上記薬学的組成物も提供する。
【００３９】
本発明は、上記薬学的組成物の何れかを製造する方法であって、
ａ）水性担体中の置換されたβ−シクロデキストリンの溶液を所定の濃度で調製する工程と、
ｂ）ペプチドＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）の薬学的に許容される塩の所定量を、工程ａ）の溶液に添加する工程と、
ｃ）前記ペプチドが前記溶液中に溶解するまで、工程ｂ）の溶液のｐＨを調整する工程と、
ｄ）必要であれば、工程ｃ）の溶液のｐＨを４ないし９のｐＨに調整する工程と、を含み、
これにより、前記薬学的組成物を製造する方法も提供する。
【００４０】
前記方法の一実施形態において、前記薬学的組成物中の前記置換されたβ−シクロデキストリンの得られる最終濃度は、７０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬである。
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が８０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
【００４１】
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が９０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１００ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
【００４２】
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１１０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１２０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
【００４３】
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１３０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１４０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
【００４４】
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたシクロデキストリンの最終濃度が１５０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１６０ｍｇ／ｍＬないし１７０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
【００４５】
前記方法の一実施形態において、前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度は、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度が１２０ｍｇ／ｍＬとなる濃度である。
別の実施形態において、ペプチドの前記所定量は、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度が少なくとも０．１ｍｇ／ｍＬとなる量である。
【００４６】
別の実施形態において、ペプチドの前記所定量は、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度が少なくとも０．５ｍｇ／ｍＬとなる量である。
別の実施形態において、ペプチドの前記所定量は、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度が２．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は０．１ｍｇ／ｍＬとなる量である。
【００４７】
別の実施形態において、ペプチドの前記所定量は、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度が５ｍｇ／ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬ又は１５ｍｇ／ｍＬとなる量である。
前記方法の別の実施形態において、工程ｂ）は、前記溶液を１時間混合することをさらに備える。
【００４８】
別の実施形態では、工程ｃ）において、前記ｐＨはＨＣｌ又はＮａＯＨ  １．０Ｎを用いて調整される。
別の実施形態において、前記方法は、酢酸セルロースフィルターを通して工程ｄ）の溶液をろ過することをさらに含む。
【００４９】
上記方法の別の実施形態では、
前記置換されたβ−シクロデキストリンの前記所定の濃度が、前記薬学的組成物中における置換されたβ−シクロデキストリンの最終濃度を１２０ｍｇ／ｍＬとする濃度であり、
ペプチドの前記所定量が、前記薬学的組成物中におけるペプチドの最終濃度を２．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は０．１ｍｇ／ｍＬとする量であり、
工程ｂ）が、前記溶液を１時間混合することをさらに含み、
工程ｃ）において、ＨＣｌ又はＮａＯＨ  １．０Ｎを用いて前記ｐＨが調整され、
前記方法が、酢酸セルロースフィルターを通して工程ｄ）の溶液をろ過することをさらに含む。
本発明は、上記方法によって調製される組成物も提供する。
【００５０】
本発明は、上記薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４０℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４０℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）温度を２０℃に所定の時間維持する工程と、
ｅ）温度を２５℃に所定の時間維持する工程と、を含み、
これにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる方法も提供する。
【００５１】
前記方法の一実施形態において、工程ａ）は２時間以内で行われる。
別の実施形態において、工程ｂ）は３時間以内で行われる。
さらなる実施形態において、工程ｃ）は１３時間にわたって行われる。
さらなる実施形態において、工程ｃ）は１１０μバールの圧力で行われる。
【００５２】
さらなる実施形態において、工程ｄ）は１３時間にわたって行われる。
さらなる実施形態において、工程ｄ）は１１０μバールの圧力で行われる。
さらなる実施形態において、工程ｅ）では、圧力が１０μバールまで減少される。
さらなる実施形態において、工程ｅ）は５時間にわたって行われる。
【００５３】
前記方法の別の実施形態において、
工程ａ）は２時間以内で行われ、
工程ｂ）は３時間以内で行われ、
工程ｃ）は１３時間にわたって且つ１１０μバールの圧力で行われ、
工程ｄ）は１３時間にわたって且つ１１０μバールの圧力で行われ、
工程ｅ）は５時間にわたって行われ且つ圧力が１０μバールまで減少される。
本発明は、上記方法によって調製される凍結乾燥された薬学的組成物も提供する。
【００５４】
本発明は、上記薬学的組成物を凍結乾燥する方法であって、
ａ）前記薬学的組成物の温度を−４５℃まで低下させる工程と、
ｂ）温度を−４５℃に所定の時間維持する工程と、
ｃ）前記溶液の温度を−２０℃まで上昇させる工程と、
ｄ）前記溶液の温度を２５℃まで上昇させる工程と、
ｅ）温度を２５℃に所定の時間維持する工程を含み、
これにより、前記薬学的組成物を凍結乾燥させる方法も提供する。
【００５５】
一実施形態において、工程ａ）は６時間以内で行われる。
別の実施形態において、工程ｂ）は３時間以内で行われる。
別の実施形態において、工程ｃ）は１９時間にわたって行われる。
別の実施形態において、工程ｃ）は１５０μバールの圧力で行われる。
【００５６】
別の実施形態において、工程ｄ）は１３時間にわたって行われる。
別の実施形態において、工程ｄ）は１５０μバールの圧力で行われる。
別の実施形態において、工程ｅ）は８時間にわたって行われる。
別の実施形態において、工程ｅ）は１５０μバールの圧力で行われる。
【００５７】
本方法の別の実施形態において、
工程ａ）は６時間以内で行われ、
工程ｂ）は３時間以内で行われ、
工程ｃ）は１９時間にわたって且つ１５０μバールの圧力で行われ、
工程ｄ）が１３時間にわたって且つ１５０μバールの圧力で行われ、
工程ｅ）が８時間にわたって且つ圧力が１５０μバールの圧力で行われる。
本発明は、上記方法の何れかによって調製される凍結乾燥された薬学的組成物も提供する。
【００５８】
上記凍結乾燥された薬学的組成物の一実施形態において、前記組成物の水分含量は５％未満である。
別の実施形態において、前記組成物の水分含量は４．０％未満である。
別の実施形態において、前記組成物の水分含量は３．５％未満である。
【００５９】
本発明は、
構造式  ＮＨ２−Ｇｌｙ  Ｔｙｒ  Ｔｙｒ  Ｔｒｐ  Ｓｅｒ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ａｒｇ  Ｇｌｎ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｇｌｕ  Ｇｌｕ  Ｔｒｐ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ−ＣＯＯＨ（配列番号１）を有するペプチドの薬学的に許容される塩と、
置換されたβ−シクロデキストリンと、を含む、凍結乾燥された薬学的組成物も提供する。
【００６０】
本発明は、
パッケージ材料と、
上記凍結乾燥された薬学的組成物の所定量と、から構成されるパッケージされた薬学的組成物も提供する。
【００６１】
本発明の調製物は、非経口的、局所的又は経直腸的に与え得る。本発明の調製物は、もちろん、各投与経路に適した形態によって与えられる。例えば、本発明の調製物は、注射、注入、軟膏、坐薬などによって、注射、注入又は吸入による投与によって、ローション又は軟膏により局所的に、及び坐薬により直腸から投与される。
【００６２】
本明細書において使用される「非経口投与」及び「非経口的に投与された」という用語は、経腸及び局所投与以外の、通常は注射による投与の様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、クモ膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、脊髄内及び胸骨内注射及び注入が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００６３】
本明細書において使用される「全身投与」、「全身的に投与された」、「末梢投与」及び「末梢的に投与された」という用語は、患者の系に入って、代謝及び他の類似の工程に供されるように、化合物、薬物又はその他の物質を中枢神経系に直接的に投与しない投与、例えば、皮下投与を意味する。
【００６４】
一般的な調剤の手順及び追加される賦形剤に関する情報の詳細は、「Remington:The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition」に見出すことができる。
本発明は、以下に記載されている実験の詳細を通じて、さらに深く理解されるであろう。しかしながら、論述されている具体的な方法及び結果は、引き続き記載されている特許請求の範囲により完全に記載されている本発明を例示するものにすぎないことが、当業者であれば自明であろう。
【実験の詳細】
【００６５】
実施例１：化合物１のための製剤開発
ヒトｈＣＤＲ１ペプチド（化合物１）は、２００２年９月６日に公開されたＰＣＴ国際公開ＷＯ  ０２／０６７８４８号に記載されており、本分野において周知の方法によって調製することができる（例えば、Peptides: Synthesis, Structure and Applications, ed. by B. Gutte, Academic Press, 1995; Peptide Synthesis Protocols, ed. By M. Pennington and B. Dunn, Humana Press, 1994; Schnolzer, M. et al. ,“In situ neutralization in Boc-chemistry solid phase synthesis. Rapid, High yield assembly of difficult sequences.” Int. J. Pept. Protein Res. (1992) 40:180-193を参照）。
【００６６】
化合物１は、１９個のアミノ酸から構成される合成ポリペプチドである。化合物１は、酢酸塩として与えられる。本ペプチドの水への溶解度は、０．５ｍｇ／ｍＬ未満であることが明らかとされている。図１は、化合物１を酢酸塩として示している。
【００６７】
２ｍｇ／ｍＬを超える、好ましくは最大１０ｍｇ／ｍＬのペプチド濃度を有する製剤を開発するために、幾つかの溶解度増強剤を用いて実験を行った。予備実験によって、２ｍｇ／ｍＬの濃度は容易に達成できないことが示された。皮下注射用の製剤を開発するためには、ｐＨが４ないし９の範囲にあり、溶液が等張であることも望ましい。
【００６８】
幅広い文献検索に基づいて、最大の溶解度を有する製剤を作製するために、数個の主要なアプローチを採用した。考慮した因子は、次のとおりであった。  ・ｐＨの調整及び緩衝液
・溶媒
・共溶媒
・可溶化剤
【００６９】
方法
選択した溶解度増強剤溶液中に、別個に又は他の賦形剤とともに、化合物１を溶かし、この溶液を少なくとも１時間攪拌した。必要であれば、ｐＨを調整した。溶解度を概測するためにこの溶液を目で調べ、分析アッセイ測定のために送付した。一部の特定の製剤については、生物学的活性も調べた。
【００７０】
結果
表１には、製剤開発のために使用された溶解度増強剤の種類が記載されている。表２と表３には、様々な溶解度増強剤を用いて行われた実験がまとめられている。表２には、５から１０ｍｇ／ｍＬの範囲のペプチド濃度を用いて行われた最初のスクリーニングがまとめられている。次いで、用量を減らして、さらに高いペプチド濃度で行われた実験作業を繰り返した（表３参照）。
【００７１】
最初の試験から、酸性及び塩基性ともに、所望のｐＨレベルの限度において化合物１の溶解性が向上することが示されたが、塩基性ｐＨ範囲では安定性が劣っていた。このため、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液及び炭酸ナトリウムを含む、数個の緩衝液及びｐＨ調整剤を調べた。最初に調べた緩衝液は何れも、所望のペプチド溶解度レベルを達成しなかった。ｐＨ９．２超及びｐＨ３．０未満に限り、２ｍｇ／ｍＬの溶解度レベルが観察された。それにもかかわらず、初期の段階では、初期毒性学研究のために、酢酸緩衝液とクエン酸緩衝液（等張化剤としてマニトールが加えられている。）を加えた製剤を選択した。これらの製剤の生物学的活性を調べると、活性であることが明らかとなった。
【００７２】
エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、Chremophore及びそれらの組み合わせなどの非水性溶媒（表１参照）を調べたが、化合物１の溶解度を増加させなかった。３０％のＤＭＡ（ジメチル−アセトアミド）の溶液は、所望の範囲の溶解度（５ないし９ｍｇ／ｍＬ）を与えたが、その毒性特性のために、薬学的製剤には適していなかった。３０％（ｗ／ｗ）のＰＥＧ  ４００を使用しても、溶解度の向上が観察された（５ないし９ｍｇ／ｍＬ）。毒性学研究のためにこの後者の製剤を選択したが、生物学的アッセイでは何れも不活性であることが明らかとなり、マウスの毒性研究では幾つかの悪影響の原因となり得る可能性があった。このため、この製剤をこれ以上追跡しないことに決めた。予備実験を考慮して、非水性溶媒は本製剤で使用しなかった。
【００７３】
タンパク質の溶解度を向上させるために、Ｌ−アルギニン、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−グリシン及びＬ−リジンを含む幾つかのアミノ酸（表１参照）を調べた。Ｌ−アルギニン中でのペプチドの溶解度は所望のレベルであったが、得られるｐＨは９を超えていた。ｐＨを減少させる試み又はアルギニン塩酸塩を使用する試みは、ペプチドの沈殿をもたらした。ヒト血清アルブミンも試したところ、低ペプチド濃度（１ｍｇ／ｍＬ）での前記ペプチドの溶解度が向上した（表３参照）。しかしながら、ヒト血清アルブミンは免疫原性を示す可能性があり、ペプチドの溶解度も低いので、以降の実験には使用しなかった。
【００７４】
マニトール、ソルビトール及びデキストランを含む充填剤（表１参照）を、単独で、及び他の賦形剤と組み合わせて調べたが、溶液中における前記ペプチドの溶解度を向上させなかった。
【００７５】
Polysorbate 20及びPolysorbate 80を含む共溶媒（表１参照）を、単独で、及び他の賦形剤と組み合わせて調べた。Polysorbateの濃度が低い（最大６％）と、ペプチドの溶解度は向上しなかったが、さらに高い濃度（最大１０％−表２参照）では、ペプチドの溶解度を最大２ｍｇ／ｍＬまで向上させた。しかし、このような高濃度のPolysorbateは、薬学的製剤には適していないと思われた。
【００７６】
何れも市販の非経口製品への使用が認可されている２種類のシクロデキストリン：ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（Captisol（登録商標））も調べた。何れも、ペプチドの溶解度を著しく増加させた（ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンの場合には１０ｍｇ／ｍＬ、Captisol（登録商標）の場合には２．５ｍｇ／ｍＬのレベルの濃度）。２つのシクロデキストリン製剤の生物活性を調べると、ペプチドのみの活性と等しいことが明らかとなった。
【００７７】
CAPTISOL（登録商標）は、ブチルエーテルスペーサー基又はスルホブチルエーテル（ＳＢＥ）によってスルホン酸ナトリウム塩が疎水性の空洞から隔てられている、市販のポリアニオン系β−シクロデキストリン誘導体である。CAPTISOL（登録商標）は、CyDexInc.の六置換されたスルホブチルエーテルβ−シクロデキストリン（ＳＢＥ７−β−ＣＤ）調製物に対する商品名である（www.Captisol.com）。CAPTISOL（登録商標）の構造によって、薬物分子が疎水性空洞中にフィットすることができ、これにより、薬物分子が水性溶媒から隔離される。CAPTISOL（登録商標）の外側表面は親水性なので、錯化された薬物分子の溶解度が、これにより増大する。薬物分子の溶解度を増大させるためのシクロデキストリンの使用は、米国特許第５，１３４，１２７号及び第５，３７６，６４５号に開示されており、これらの内容全体が参照により本明細書に援用される。
【００７８】
CyDex Inc.の文献によると、CAPTISOL（登録商標）は非経口的に投与されたときに安全であり、β−シクロデキストリンに伴う腎臓毒性を示さない。β−シクロデキストリンに比べて、CAPTISOL（登録商標）は、同等又はβ−シクロデキストリンを上回る錯化特性を与え、９０グラム／１００ｍＬを超える優れた水溶解度（５０倍の向上）を与える。
【００７９】
結論
複数の溶解度増強剤：ＤＭＡ、ＰＥＧ−４００、ジメチル−アセトアミド、ポリエチレングリコール、ポリオキシル化されたヒマシ油、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、１−エテニル−２−ピロリジノン、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン及びスルホブチルエーテル−β−シクロデキストリン（Captisol（登録商標））が、所望の溶解度範囲に合致することが見出された。これらの溶解度増強剤のうち、両シクロデキストリン類が溶解度、生物活性及び安定性に優れていることが明らかとなった。このため、実施例５の製剤で使用する溶解度増強剤として、Captisol（登録商標）を選択し、両シクロデキストリン製剤をさらに研究することに決めた。実施例５の臨床研究に対する最終製剤は、所望の量のペプチド（０．５、１．０又は２．５ｍｇ／ｍＬ）とｐＨ調整用のＨＣｌ及びＮａＯＨを有する１２０ｍｇ／ｍＬのCaptisol（登録商標）水溶液からなる。
【００８０】
【表１】
2006516034.tif 000002
【００８１】
【表２−１】
2006516034.tif 000003
【００８２】
【表２−２】
2006516034.tif 000004
【００８３】
【表２−３】
2006516034.tif 000005
【００８４】
【表３】
2006516034.tif 000006
【００８５】
実施例２：Captisol（登録商標）中の化合物１の溶液の調製プロトコール
乾燥した化合物１と乾燥したCaptisol（登録商標）を水の中に混合するか、又はCaptisol（登録商標）と水の調製された溶液に化合物１を添加するなどの標準的な溶解方法では、所望の濃度で完全な溶解が得られなかった。化合物１及びCaptisol（登録商標）の両方について複数の異なる濃度を、様々なｐＨレベルで調べた。しかしながら、化合物１のCaptisol（登録商標）溶液を作製するための以下の方法は、所望の濃度で完全な溶解を与えた。
【００８６】
材料：Captisol（登録商標）、化合物１及び水
方法：
１．Captisol（登録商標）の適切な量を秤量して、１２０ｍｇ／ｍＬの最終濃度を与える。
２．最終量の８０％の水を加え、磁性攪拌器で１０分間混合する。
３．化合物１を秤量して、２．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、０．５ｍｇ／ｍＬ又は０．１ｍｇ／ｍＬの最終濃度を与える。
【００８７】
４．Captisol（登録商標）溶液にペプチドを加える。１時間混合する。
５．ｐＨを高くして、透明な溶液を得る（２．０ｍｇ／ｍＬの製剤では、ｐＨを９より若干高くする必要があるかもしれない。）。ＨＣｌ  １．０Ｎ及びＮａＯＨ  １．０Ｎを用いて、ｐＨを調整すべきである。１０分間混合する。
６．必要であれば、（ＨＣｌ又はＮａＯＨ  １．０Ｎの何れかを用いて）ｐＨを７．５から８．５の範囲に補正する。
【００８８】
７．最終容量になるように水を加える。
８．０．２μの酢酸セルロースフィルターを通して、溶液をろ過する。
９．最終ｐＨを記録する。
１０．一定分量に分配し、適切な温度で保存する。
【００８９】
実施例３：化合物１及びCaptisol（登録商標）溶液の凍結乾燥
凍結乾燥された産物は通常５から１０％の固体を含有しているのに対して、本製剤中の固体のパーセントが高い（１２％）という点で、この凍結乾燥プロセスは、他の凍結乾燥プロセスとは異なっている。
【００９０】
装置
使用した凍結乾燥機は、Edwards lyophilizer Lyoflex 0.6であった。装置のＩＱ／ＯＱを行い、プロセスを開発する前に、品質保証によってコンプライアンスについてチェックした。
化合物１の濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ及び２．５ｍｇ／ｍＬの濃度の化合物１及びCaptisol（登録商標）の溶液を調製した。満杯容量（fill-volume）を１ｍＬ（１．０５ｇｒ）に調整した。
【００９１】
主要なプロセスのステップ：
１．凍結
２．維持（低温での）
３．２段階での真空下乾燥：
３．１  一次乾燥−棚温度（shelf temperature）を上限維持レベルに調節しながら、上限維持温度まで棚加熱する。
３．２  二次乾燥−上限維持棚温度の最小値まで減圧する。
【００９２】
バッチ１−３
凍結−室温から−４０℃まで、２時間以内に凍結させた。棚は、３時間、−４０℃に保った。
乾燥−乾燥は、１１０μバールの圧力で行った。１３時間にわたって２０℃まで、棚温度を増加させ、この温度にさらに１３時間に維持した。
総プロセス時間は３１時間であった。
【００９３】
結果：
水分含量の結果は以下のとおりであった。
バッチ１：３．８％
バッチ２：４．０％
バッチ３：４．９％
【００９４】
バッチ４及び５
バッチ１、２及び３をもたらすプロセスの水分含量の結果は、所望の値より高かったので、同じ温度と低い圧力で、二次乾燥工程を追加することに決めた。
乾燥−１１０μバールの圧力で乾燥を行った。１３時間の間に、棚温度を２０℃まで上昇させ、さらに１３時間（バッチ４）又は８時間（バッチ５）、この温度に保った。さらに５時間、圧力を１０μバールまで減少させた。
総プロセス時間は、３６時間であった。
【００９５】
結果：
水分含量の結果は、以下のとおりであった。
バッチ４：プラセボ：３．０％
１ｍｇ／ｍＬ：３．９％
バッチ５：プラセボ：４．１％  
【００９６】
結論
既述のように、Captisol（登録商標）とともに化合物１を適切に凍結乾燥する方法が開発された。固体の割合が高く、凝縮された塊の割合が高いため、開発された方法は、現在利用できるペプチド用凍結乾燥サイクルより長く、二次乾燥段階が追加される。表４には、開発された方法が要約されている。  
【００９７】
【表４】
2006516034.tif 000007
【００９８】
実施例４：
凍結乾燥された化合物溶液のインビボ生物活性の検査（ＤＰ、１ｍｇ／バイアル、１２％  Captisol（登録商標））
２つの濃度の凍結乾燥された化合物溶液（すなわち、薬物製品（ＤＰ））を皮下（ｓ．ｃ．）処置した後、化合物１参照標準（ＲＳ；reference standard）特異的細胞からのＩＬ−２の分泌の阻害によって、生物活性をモニターした。前記処理の結果を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中の化合物１（ＲＳ）でマウスを処置した結果と比較する。結果が下表２と図２に示されている。
【００９９】
実験のデザイン：
１．免疫化                        第０日
（４つの足蹠全てに、ＣＦＡで乳化された化合物１  ＲＳ）
２．処理                    第０日
（頸部の後ろに皮下、２００μＬ溶液中）
３．以下のものによりインビトロで活性化                      第１０日
ａ．０、０．５、１、２．５、５、１０、２５、５０及び１００μｇ／ｍＬの濃度の化合物１  ＲＳ
ｂ．化合物１のアミノ酸を逆の順番で有するペプチド（陰性対照）
ｃ．Ｃｏｎ  Ａ（陽性対照）
４．加湿された５％  ＣＯ２インキュベーター中において、２０時間３７℃で培養物のインキュベーション
５．ＥＬＩＳＡによるＩＬ−２測定
【０１００】
【表５】
2006516034.tif 000008
【０１０１】
【表６】
2006516034.tif 000009
【０１０２】
実施例５：処置のための最適用量の評価
以下の記述においては、以下の略号を使用する。
ＣＦＡ          完全フロイントアジュバント
Ｃｏｎ  Ａ      コンカナバリン  Ａ
ＤＰ            薬物製品
ＤＳ            薬物物質
ＥＭ−１        濃縮ＤＣＣＭ−１培地
ＥＭ−３        濃縮ＲＰＭＩ−１６４０＋ウシ胎児血清培地
ＦＣＳ          ウシ胎児血清
ＩＮＦ−γ      インターフェロン−γ
ＬＮ            リンパ節
ＰＢＳ          リン酸緩衝生理食塩水
ＲＳ            参照標準
ｓ．ｃ．        皮下
ＴＢ            トリパンブルー
ＴＧＦ−β      トランスフォーミング成長因子−β
ＷＦＩ          注射用の水
【０１０３】
序論
５０μｇ／マウスの化合物１  ＲＳによって、２０匹のマウス群を免疫した。以下のように、５つの処理群：プラセボ、２５、５０、１００及び２００μｇ／マウスの化合物１  ＤＰに、免疫されたマウスを割り振った（皮下投与）。免疫化及び処置から１０日後に、ＬＮを抽出し、単細胞懸濁液を調製した。次いで、複数の濃度の化合物１  ＲＳによる活性化に応じた培養細胞によるＩＦＮ−γ及びＴＧＦ−βのインビトロ分泌を測定した。
【０１０４】
実験のデザイン
１．免疫化                                                      −第０日
２．化合物１  ＤＰによる処置                                    −第０日
３．処置されたマウスから得たＬＮ細胞のインビトロ活性化          −第１０日
４．培地の収集
（ＩＦＮ−γ測定のため）                                        −第１２日
５．培地の収集
（ＴＧＦ−β測定のため）                                        −第１３日
６．ＩＦＮ−γに対するＥＬＩＳＡ
７．ＴＧＦ−βに対するＥＬＩＳＡ
【０１０５】
【表７】
2006516034.tif 000010
【０１０６】
材料と試薬
動物
マウス：２０匹の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス、Harlan動物繁殖センター、Rehovotによって供給。
免疫化時の年齢（週＋日）：１０
実験に含めたマウスの平均体重：１９．０１グラム。
【０１０７】
材料
一般的な試薬
精製されたＨ２Ｏで希釈することによって、９６％エタノールから７０％エタノールを調製した。
【０１０８】
免疫化のための化合物１溶液の調製
ＣＦＡ−化合物１  ＲＳエマルジョン（５００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／マウス）を以下のように調製した。
１．１．８７ｍＬのＷＦＩ中に１．８７４ｍｇの化合物１を溶かして、１ｍｇ／ｍＬの溶液を得た。
２．ｐＨ試験紙で前記溶液を調べ、ｐＨ５を有することが明らかとなった。
３．１．５ｍＬのＣＦＡで、１．５ｍＬの前記溶液を乳化し、５００μｇ／ｍＬの最終濃度とした。
【０１０９】
処置のための溶液の調製
処置は、２００μＬ溶液の皮下注射によって行った。
１２％のCaptisol（登録商標）溶液の調製
１．２グラムのCaptisol（登録商標）を１０ｍＬのＷＦＩ中に溶かして、１２％Captisol（登録商標）の溶液を得た。
【０１１０】
実験の手順
マウスの体重測定
免疫化の前に、マウスの体重を測定した。マウスの平均体重：１９．０１±０．９７グラム。
免疫化
１００μＬのエマルジョンを注射することによって、免疫化を行った（後ろの各足蹠中に５０μＬ）。
処置
免疫化工程に引き続き、表記の化合物１  ＤＰ又は１２％Captisol（登録商標）処置溶液から得た２００μＬを、マウスの頸部の後ろに皮下注射することによってマウスを処置した。
【０１１１】
インビトロ培養
頸部脱臼によって、マウスを屠殺した。後脚からＬＮを抽出し、約５ｍＬのＲＰＭＩを含有する無菌のペトリ皿に移した。２００μｍメッシュのステンレス鋼のネットに対して組織を穏やかに絞ることによって、細胞を抽出した。細胞を集め、室温で１０分間、３００Ｇで遠心した。
各実験群のプールしたＬＮから、単細胞懸濁液を調製した。
ＥＭ−１中の化合物１  ＲＳ（０−１００μｇ／ｍＬ）とともに、２５０万及び５００万細胞／ｍＬ／ウェルの懸濁液を培養した。
培地のＥＬＩＳＡによって、細胞応答の指標として、ＩＦＮ−γ及びＴＧＦ−βの分泌を測定した（ＩＦＮ−γの場合４８時間、ＴＧＦ−βの場合７２時間）。
【０１１２】
【表８】
2006516034.tif 000011
【０１１３】
細胞懸濁液の調製
【表９】
2006516034.tif 000012
【０１１４】
細胞懸濁液の調製（５×１０６個／ｍＬ）
５ｍＬの細胞懸濁液に５ｍｌのＥＭ−１を加えることによって、１０×１０６細胞／ｍＬ懸濁液を１：２希釈した。
４８ウェルプレート中でのＬＮ細胞培養物のインキュベーション
３つの組織培養プレートを調製した。各プレートに、以下のものを添加した。
【０１１５】
バックグラウンド対照（培地とともにインキュベートされた細胞）
０．５ｍＬの細胞懸濁液
０．５ｍＬの培地（ＥＭ−１）
システム陽性対照（ＣｏｎＡで刺激された細胞）
０．５ｍＬの細胞懸濁液
０．５ｍＬのＥＭ−１中の５μｇ／ｍＬのＣｏｎＡ  （最終濃度２．５μｇ／ウェル）
【０１１６】
化合物１活性化溶液とともにインキュベートされた細胞（サンプル）
０．５ｍＬの細胞懸濁液
０．５ｍＬの化合物１  ＲＳ  ６．２５−２００μｇ／ｍＬ（最終濃度３．１２５−１００μｇ／ｍＬ／ウェル）
９６ウェルプレート中でのＬＮ細胞培養物のインキュベーション
４８ウェルプレートを準備した後、細胞懸濁液から得た１００μＬ及び活性化溶液から得た１００μＬを適用することによって、９６ウェルプレートを準備した。
加湿された５％ＣＯ２インキュベータ中において、培養プレートを３７℃で４８時間又は７２時間インキュベートした。
【０１１７】
上清の収集
培養したプレートを、室温で１０分間、３００ｇで遠心した。ミラープレート又はチューブの何れかに、上清（各ウェルから得た８５０μＬ）を移した。サンプルを繰り返して凍結／融解するのを避けるため、次いで、この上清を作業アリコット（２００μＬのアリコットを２個及び４５０μＬのアリコットを１個）に分割した。各チューブに以下の内容のラベルを施した。
１．実験コードとインキュベーション後の時間
２．グループとサンプル番号
３．活性化因子と濃度
４．上清収集の日付
ＥＬＩＳＡ用に使用するまで、上清を−２０℃で保存した。
【０１１８】
結果
【表１０】
2006516034.tif 000013
【０１１９】
【表１１】
2006516034.tif 000014
結果は、図３−４にも記されている。
【０１２０】
観察
ＩＦＮ−γの分泌
１．プラセボ群では、インビトロでの化合物１による活性化に際して、線形用量反応が示された。このグラフは、同じ免疫化用量（５０μｇ／マウス）及び培地（ＥＭ−１）を用いたエキソビボについて得られたグラフと類似している。
２．試験された全ての群内で、化合物１によるインビトロでの活性化に際して、用量反応が存在した。
３．処置に使用された全ての用量で、ＩＦＮ−γ分泌の顕著な阻害が見られた（２５μｇ／マウスの処置用量で、平均９５％の阻害）。主として、５×１０６細胞／ウェルを使用したときに、処置に用いた用量と％阻害との間には逆相関を認めることができる。２．５×１０６細胞／ウェルを使用したときには、５０μｇ／マウスによる動物の処置が、１００又は２００μｇより優れた阻害を与えた。２５μｇの点は欠落している（細胞の欠如）。
【０１２１】
４．２．５×１０６細胞／ウェルの代わりに５×１０６細胞／ウェルを使用したときには、さらに優れた阻害が見られた。
５．グラフの線形範囲では、％阻害のＳＤは低かった。
６．２．５×１０６細胞／ウェルを使用したときには、ＣｏｎＡに関して技術的な問題が存在することが明らかである。
【０１２２】
ＴＧＦ−βの分泌
１．プラセボ群では、化合物１を用いてインビトロで活性化を行った際に、用量反応が見られなかった。ＴＧＦ−βの分泌レベルは、他の全ての処置群において、ＥＬＩＳＡの検出限界を下回っていた。
【０１２３】
実施例６：注射用の化合物１及びCaptisol（登録商標）を用いた凍結乾燥サイクルの最適化（０、０．５、１．０及び２．５ｍｇ／バイアル）
目的
本研究の目的は、凍結乾燥塊の形状を改善し、崩壊と亀裂を回避するために、Captisol（登録商標）を加えた注射用の化合物１に対する凍結乾燥サイクルを最適化することであった。このように、凍結乾燥サイクルを改良し、最適化することを決めた。相Ｉのバッチを製造するために、このサイクルは、生産凍結乾燥機に移される。
【０１２４】
プロセスの最適化
０．５ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬの濃度のペプチドのバッチ及びプラセボを調製し、複数の凍結乾燥サイクルを行った。使用した凍結乾燥機は、Edwards lyophilizer Lyoflex 0.6であった。
溶解度、水分含量及び塊の出現を調べた。得られた結果に従って、化合物１に対する新しい凍結乾燥サイクルを選択した。固体の割合が高く（１２％）、このため凝縮した塊の割合が高いため、この新しいプロセスは、実施例３の凍結乾燥サイクルよりも長く、一次乾燥段階が追加される。表１２には、プロセス間の差が要約されている。
【０１２５】
【表１２】
2006516034.tif 000015
【０１２６】
実施例７：ＳＬＥに罹りやすい（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１雌マウスの狼瘡の症候に対する化合物１（Captisol（登録商標）中に入れて投与）の効果
Captisol（登録商標）（スルホブチルエーテル  β−シクロデキストリンナトリウム）を賦形剤として用いて、臨床試験に参加している患者に化合物１を用いて処置を施すことが予定されている。このため、Captisol（登録商標）中に与えられた化合物１の製剤による（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マウスの処置が、マウスのこの系統をＰＢＳ中の化合物１で処置したときに狼瘡の症候に対して観察される同じ有益な効果を有するかどうかを決定することが重要であった。
【０１２７】
この目的のために、１０週間にわたって週に一度、Captisol（登録商標）のみ（ｎ＝８）又はCaptisol（登録商標）中の２５若しくは５０μｇ／マウスの化合物１（それぞれ、ｎ＝９及び１０）のうち何れかで皮下に処置された３つのグループに、（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１雌マウス（約８月齢）を分割した。事前研究によって、検査されたさらに高い用量（１００及び２００μｇ／マウス）に比べて、この範囲の用量がＳＬＥの症候を改善させる効果が大きいことが示されたので、これらの用量を選択した。本研究及び化合物１による最初の第Ｉ相臨床試験では、同じバッチの薬物物質を使用した。
【０１２８】
抗ｄｓＤＮＡ抗体及びタンパク尿について、マウスを追跡した。マウスを屠殺するとき、腎臓中のＩＣＤの強度を測定した。
図５から明らかなように、１０回の処置注射後に、ｄｓＤＮＡ特異的抗体のレベルに、グループ間で有意な差は観察できなかった。
【０１２９】
表１３も、化合物１による処置の有益な効果を観察することができ、５回目の注射から始まり、１０回目の注射まで持続することを示している。Captisol（登録商標）対照群中のタンパク尿の平均レベルは、化合物１処置群に比べて、一貫して高かった。表１３は、化合物１投薬群の両方の腎臓で、ＩＣＤ強度の減少が観察されたことも示している。これらのマウスにおけるＳＬＥの臨床症候を軽減する上で、低用量（２５μｇ／マウス）が、高用量（５０μｇ／マウス）より有効であることを示す一般的な傾向が存在した。
【０１３０】
【表１３】
2006516034.tif 000016
【０１３１】
図６は、各処置群から得られた１つの腎臓の代表的な切片を示している。上列の切片は、Captisol（登録商標）処置されたマウスから得た腎臓、中央の列の切片は、５０μｇ／マウスの化合物１で処置されたマウスから得た腎臓、下列の切片は２５μｇ／マウスの化合物１で処置されたマウスから得た腎臓である。化合物１（Captisol（登録商標）中に溶解）で処置されたマウスの腎臓切片中に観察された免疫複合体沈着物の強度は、何れの用量レベルにおいても、対照群で観察されたものよりずっと低いことが分かる。
【０１３２】
実施例８：第Ｉ相臨床試験
ＳＬＥ患者に皮下注射されたCaptisol（登録商標）中の化合物１の耐用性と安全性を評価するための第Ｉ相・多施設・無作為・二重盲検・プラセボ対照化・単回投与・四群研究
本研究は、フランスでヒトに対して実施されたCaptisol（登録商標）中の化合物１を用いた初めての臨床試験であった。本研究の主な目的は、ＳＬＥ患者に単回皮下注射として投与されたCaptisol（登録商標）中の化合物１の耐用性と安全性を評価することであった。本研究の二次的な目的は、Captisol（登録商標）中の化合物１を単回皮下投与した後のこれらの被験者における免疫学的反応を評価することであった。
【０１３３】
３６人の被験者が本研究に参加した。本研究への参加が適格であるためには、ＳＬＥ患者は、狼瘡の診断のために米国リウマチ学会によって使用されている少なくとも４つの基準を充足しなければならなかった。患者は、病状が安定していなければならず、軽度／中程度の疾病を有し、且つＳＬＥ疾病活動性指標、ＳＬＥＤＡＩ（ＳＬＥ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ）のスコアが１０以下でなければならない。
【０１３４】
以下のグループの割り振りに従って、各患者は、元に戻された注射用化合物又はその対応プラセボ（Captisol（登録商標））を単回皮下注射された。
・群Ａ：プラセボ（Captisol（登録商標））
・群Ｂ：Captisol（登録商標）中の０．５ｍｇの化合物１
・群Ｃ：Captisol（登録商標）中の１ｍｇの化合物１
・群Ｄ：Captisol（登録商標）中の２．５ｍｇの化合物１
【０１３５】
投薬の当日、投薬から２４時間後、投薬から２、４及び８週後に、スクリーニングして、臨床検査のための血液及び尿の収集を含む一連の標準的な安全性検査を行った。投薬の前及び予定された追跡訪問時に、ＳＬＥ関連の免疫学的検査、抗化合物１抗体及びＰＢＬ増殖アッセイのために、血液試料を採取した。以下の免疫学的検査を行った。
・クームズ試験（直接及び間接）
・Ｃ３、Ｃ４及びＣＨ５０
・総ＩｇＧ、ＩｇＭ及びＩｇＡ
・ＡＮＡ、抗ｄｓＤＮＡ（Ｆａｒｒアッセイ）、抗ｓｓＤＮＡ
・抗ＥＮＡ（抗Ｌａ、抗体Ｒｏ、抗体ＲＮＰ、抗Ｓｍを含む。）
・抗カルジオリピン抗体
・ＶＤＲＬ
・ＦＴＡ抗体
・リウマチ因子
【０１３６】
患者集団における、Captisol（登録商標）中の化合物１の安全性及び耐用性は、以下の基準に基づいて評価した。
・ＳＬＥフレアを含むＡＥｓの発生
・バイタルサイン
・１２誘導ＥＣＧ
・身体検査の変化
・日常的な臨床試験
・ＳＬＥＤＡＩスコア
・免疫学的検査の結果
【０１３７】
第Ｉａ相臨床研究の詳細
治験責任者及びそれぞれの研究場所：フランス内の６ケ所の研究センター：Jean Charles Piette教授(Hopital La Pitie Salpetrier、Paris)、Oliver Meyer教授(Hopital Bichat、Paris)、Jean Revuz教授(Hopital Henri Mondor,Creteil)、Loic Guillevin教授(Hopital Avicenne,Bobigny)、Eric Hachulla教授(Hopital Claude Huriez,Lille Cedex)、Xavier Mariette教授(Hopital Bicetre,Kremlin Bicetre)。
【０１３８】
注射アンプル用の化合物１（Captisol（登録商標）中）、プラセボ、水、投与の用量及び様式
以下の用量で、患者当り単回の投薬として、Captisol（登録商標）中の化合物１のバイアル（１２０ｍｇ／バイアル）を皮下注射した。
０．５ｍｇ  化合物１／バイアル、Captisol（登録商標）中、１ｍｇ  化合物１／バイアル、Captisol（登録商標）中、２．５ｍｇ  化合物１／バイアル、Captisol（登録商標）中。化合物１に対するプラセボ：１２０ｍｇ  Captisol（登録商標）／バイアル（外観は、Captisol（登録商標）中の化合物１のバイアルと同じ。）
【０１３９】
方法
本研究は、化合物１又はプラセボの単回皮下注射を用いた多施設・無作為・二重盲検・プラセボ対照化・四群研究であった。基礎手順に先立って、２１日まで、ＳＬＥ患者をスクリーニングした。０．５、１若しくは２．５ｍｇの化合物又はその対応するプラセボの皮下注射という４つの処置群のうちの１つに、適格性を有する各被験者を無作為に割り振った。全ての被験者は、投薬の前日に、病院に入院した。各被験者には、上記処置のうちの一つを単回投与した。投薬から２４時間後に、被験者は退院した。投薬から２、４及び８週の時点で、さらに被験者のモニタリングを行った。スクリーニング時、投薬の日（投薬前）、２日目（投薬後）、２、４及び８週（最後の訪問）の時点で、安全性臨床検査のための血液試料（血清及び全血）を採取した。スクリーニング、投薬日（投薬前）並びに４週及び８週の時点で、免疫学検査のための血液試料を採取した。末梢血リンパ球（ＰＢＬ）増殖は、投薬日（投薬前）並びに２、４及び８週の時点で調べた。
【０１４０】
患者の人数（合計及び各処置に対する人数）：
以下のように、３６人の被験者を本研究に無作為に割り振った。０．５ｍｇの処置群に９人の被験者、１ｍｇの処置群に９人の被験者、２．５ｍｇの処置群に１０人の被験者、プラセボ処置群に８人の被験者。
【０１４１】
診断及び主な選定基準：
本研究に対して適格な被験者は、米国リウマチ学会（ＡＣＲ）の少なくとも４つの診断基準を充足したＳＬＥ患者であった。患者の病状は安定していなければならず、２０００年に改定されたＳＬＥ疾病活動性指標（ＳＬＥＤＡＩ  ２Ｋ）のスコアが１０以下であって軽度から中程度の病状でなければならない。
【０１４２】
研究のスクリーニングに先立つ６ヶ月の間に、不安定であると報告されたＳＬＥ患者又は重い喘息、卒中、急性心筋梗塞、不安定狭心症、脳出血及び胚塞栓が報告されたＳＬＥ患者は、参加から除外した。臨床的に重要な又は不安定な何らかの医学的若しくは外科的症状、糖尿病、肝疾患（肝硬変、活動性肝炎、門脈圧亢進症及び／又は腹水症）、臨床的に重要な高血圧、何らかの悪性腫瘍の既往歴、透析、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を有するＳＬＥ患者も、本研究への参加から除外された。
【０１４３】
さらに、スクリーニングに先立つ三ヶ月の間に、血漿交換を行っていたＳＬＥ患者、又は以下に列記されている薬物の一つによる治療を受けていたＳＬＥ患者も、本研究への参加から除外した。プレドニゾン３０ｍｇ／日又はこれ以上（又は等価な用量の他のコルチコステロイド）、静脈内コルチコステロイド、静脈内免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、経口抗凝固剤及び任意の細胞毒性剤（例えば、アザチオプリン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ミコフェノレート・モフェチル、メトトレキサート、タクロリムス）。
【０１４４】
さらに、スクリーニングに先立つ直近３ヶ月の間に、コルチコステロイドによる治療（±１０ｍｇ／日を超えるプレドニゾン又は等価な用量の別のコルチコステロイド）及び／又は抗マラリア薬による治療を開始しているＳＬＥ患者を本研究から除外した。
本研究を通じて、基礎的なＳＬＥ医学的治療を保持するように努めたが、治験責任医師は、患者の福祉を維持し、最適化するために、研究中の任意の時点で、参加者の医学的治療を変更することが可能であった。
【０１４５】
評価の基準
安全性
スクリーニング、入院中、及び最終訪問を含む追跡訪問時に、以下の安全性パラメータ：バイタルサイン（収縮期血圧、拡張期血圧、脈拍、酸素飽和度、体温及び体重）、１２誘導ＥＣＧ、身体検査の変化及び日常的な臨床安全性検査、を評価した。投薬日及び以降の各訪問時に、有害事象を記録した。
【０１４６】
免疫学：
スクリーニング、入院中、及び最終訪問を含む追跡訪問時に、ＳＬＥ関連の免疫学的検査を行った。
投薬日及び最終訪問を含む追跡訪問時に、ＰＢＬ増殖アッセイ及び抗化合物１抗体アッセイを用いることによって、薬物関連の免疫学的反応を調べた。
【０１４７】
疾患の活動性：
スクリーニング、入院中、及び最終訪問を含む追跡訪問時に、２０００年に改定されたＳＬＥ疾患活動性指標のスコア（ＳＬＥＤＡＩ  ２Ｋ）を用いた疾患の活動性評価を行った。
【０１４８】
統計学的方法：
本研究中に集められたデータを解析し、提示するために、ＳＡＳ（登録商標）バージョン９．０ソフトウェアを使用した。この第Ｉａ相研究については、検出力の計算は行わず、正式な仮説検定は実施しなかった。
【０１４９】
有害な経験
有害な経験の発生と頻度は、器官別大分類及びＭｅｄＤＲＡ辞書バージョン５．０による好ましい用語によって表した。データは、処置群ごとに示されている。
【０１５０】
臨床試験データ
スクリーニング、１日目（投薬前）、２日目、２、４及び８週目に、観察の数、平均、標準偏差、最少及び最高を含む臨床検査値の記述的統計を決定し、処置群ごとに表されている。ベースラインから各時点／訪問までの変化も、処置の割り当てごとに、各訪問について表されている。異常な結果のパーセント（低及び高、適用可能な場合）は、処置群及び訪問／時点ごとに、パラメータを基礎として表されている。ベースラインから投薬後２４時間まで、及びベースラインから最終訪問までのシフト解析を行った。
【０１５１】
バイタルサイン
スクリーニング、１日目（投薬前及び投薬後並びに各時点）、２日目、２、４及び８週目について、観察の数、平均、標準偏差、中央値、最少及び最大値を含むバイタルサインのための記述的統計を決定し、割り振られた処置ごとに示されている。ベースラインから各時点／訪問までの変化は、訪問及び処置の割り振りごとに表されている。
【０１５２】
体重
ベースライン、終結時における体重（ｋｇ）の記述的統計及びベースラインからの変化が、処置群ごとに表されている。
【０１５３】
ＥＣＧ
ベースライン、終結時のＥＣＧパラメータの記述的統計及び及びベースラインからの変化が表されている。シフト解析は、正常／異常又は存在／不存在ＥＣＧパラメータ間のベースラインから終結までのシフトの表として表されている。臨床的に重要な可能性がある（ＰＣＳ；potentially clinically significant）ＱＴｃ（Bazett）測定は、予め定めた基準に従って同定した。ＰＣＳと非ＰＣＳ絶対ＱＴｃ（Bazett）間のシフト解析の表、及びベースラインから何れかの訪問までに生じたＱＴｃ（Bazett）のＰＣＳ変化の発生率の表が表されている。
【０１５４】
身体検査
ベースライン及び最終訪問時に各身体系に異常又は正常な知見を有する被験者の発生によって、身体検査の結果を分析する。正常から異常へのシフト解析及びその逆のシフト解析も適用した。ベースラインからの変化が生じなかったときには、「その他」として定義した。
【０１５５】
化合物１に関連する免疫学的検査
免疫学的パラメータについては、観察の数、平均、標準偏差、中央値、最少及び最大値を含む記述的統計を算出し、処置群及び訪問ごとに示されている。ベースラインから各追跡訪問時までに生じた変化も、処置群ごとに表されている。適用可能な場合、陰性／陽性結果を有する被験者の数とパーセントが、処置群と訪問ごとに表されている。
【０１５６】
ＳＬＥＤＡＩ  ２Ｋ
ＳＬＥＤＡＩ  ２Ｋの平均、標準偏差、中央値、最小値及び最大値を含む記述的統計が記されている。
【０１５７】
第Ｉａ相臨床試験の結果：
患者の性質とＳＬＥ特性
治験計画書に従い、３６人の被験者が本研究に参加し、終了した。全ての処置群の被験者の大多数（３４）が女性（９４．４％）であり、白人（３０、８３．３％）であった。全ての処置群の平均年齢は３５．６歳であった（平均のレンジは３２から３９歳であった。）。殆どの被験者（９１．７％）は、アメリカリウマチ学会（ＡＣＲ）の診断基準が４から６の間であり、平均群ＳＬＥＤＡＩ  ２Ｋスコアは２．１から４．１にわたっていた。
【０１５８】
安全性の結果
ＡＥの発生においては、治験薬処置群とプラセボ群の間に顕著な差は存在しなかった。全ての群において最も一般的なＡＥは、性質上軽度又は中程度に分類される頭痛及び性質上軽度に分類される注射部位の反応であった。用量反応は認められなかった。重大な有害事象（ＳＡＥ）、すなわち重篤に分類されるＡＥは、研究中には発生しなかった。
【０１５９】
血液学、生化学又は尿検査値について、治験薬に起因する臨床的に重大な影響は認められなかった。
バイタルサインパラメータ（収縮期血圧、拡張期血圧、脈拍、酸素飽和度）について、治験薬に起因する臨床的に重大な影響は認められなかった。
体温及び体重について、治験薬に起因する臨床的に重大な影響は認められなかった。
【０１６０】
化合物１処置群とプラセボの間には、カテゴリＥＣＧ測定値及びデジタル化されたＥＣＧパラメータについて、臨床的な有意差が認められなかった。ＰＣＳ  ＱＴｃ絶対値及びベースラインから６０ｍｓまでのＱＴｃ変化は記録されなかった。化合物１処置群とプラセボ群では、同様の数の被験者が、ベースラインから３０ないし６０ｍ秒の間にＱＴｃＢ変化を有した。
身体検査に対する化合物１の臨床的に重大な影響は認められなかった。
【０１６１】
免疫学の結果
全ての被験者から得た血清試料の評価によって、０．５、１及び２．５ｍｇ／患者の用量レベルで化合物１を単回皮下投与しても、抗化合物１特異的抗体の発生を誘導しないことが示された。７人の患者が、カットオフを上回る化合物１への応答を有していた。抗体レベルのこのような上昇は、投薬前に既に存在していた。研究の追跡期間（２ヶ月）中には、抗体のレベルの増加は観察されなかった。反応性抗体のイソタイプについて、これらの被験者の血清を分析した。２人の被験者における応答には、ＩｇＭイソタイプが付随しており、他の２人にはＩｇＧイソタイプが付随していた。７人のなかには、特異的ＩｇＥ抗体を有するものはいなかった。
【０１６２】
末梢血リンパ球（ＰＢＬ）アッセイによって、被験者の５０％（１８）が応答者に分類されることが明らかとなり（ＳＩ＞２）、全ての処置群で類似の分布を示した。治験薬を単回ＳＣ投薬したにすぎないことを考慮に入れると、Ｔ細胞応答は比較的低く、アッセイに使用された化合物１の治療用量又は濃度と応答者／非応答者状態との間には何らの関連も検出できなかった。また、経時的に応答者状態の発生が増加するという兆候は観察されなかった。安全性の対照となる破傷風トキソイド（ＴＴＸ）アッセイによって、全ての処置群で、研究期間を通じて、ＴＴＸに対する応答が保持されることが示され、Captisol（登録商標）中の化合物１がＴＴＸリコール抗原に対する免疫反応を変化させないことを示唆している。
この免疫学的知見は、治験薬化合物１の一度だけ投薬した場合の結果である。
【０１６３】
疾患活動性の結果
膿尿を示す尿検査に基づいて、ベースラインと４週目の間に、２から１０ポイントのＳＬＥＤＡＩスコアの変化が記録された、０．５ｍｇ処置群に属する１人の被験者を除き、化合物１は、試験中に、ＳＬＥＤＡＩスコアに対して臨床的に顕著な効果（３以上の変化、１２ポイント以下）を与えなかった。この尿検査の知見は、プロトコールの定義による狼瘡の再燃として治験責任医師によって確認されず、治療を変更せずに消散された。
【０１６４】
結論
この第Ｉａ相試験は、１２０ｍｇ  Captisol（登録商標）中の０．５、１又は２．５ｍｇの化合物１を単回皮下注射することは安全で、十分な耐用性があり、引き続き第Ｉｂ相複数回投与試験を実施できることを示した。
【０１６５】
実施例９：第Ｉｂ相臨床試験
ＳＬＥ被験者にCaptisol（登録商標）中の化合物１を皮下注射した場合の耐用性と安全性を評価するための第Ｉ相・多施設・二国・無作為化・二重盲検・四群・プラセボ対照化・複数回投与試験
本研究は、ＳＬＥ被験者への化合物１のｓｃ反復投与の安全性と耐用性を評価するために行われている。本研究の二次的な目的は、ＳＬＥ被験者に、Captisol（登録商標）中の化合物１を反復ｓｃ投与した後の免疫学的反応を評価することである。
【０１６６】
化合物１は、Captisol（登録商標）中の０．５、１．０又は２．５ｍｇの用量で与えられる。調査用製品を１日おきに投与し（週末を除く）、合計１２回ｓｃ注射する（すなわち、週に３回の投薬を４週間）。投薬の開始から２、４、８及び１２週後に予定された訪問時に、被験者を観察する。上記第Ｉａ相臨床試験に記載されている検査と同様の検査を用いて、安全性と耐用性を調べる。
【０１６７】
結果
この第Ｉｂ相試験は、１２０ｍｇ  Captisol（登録商標）中の０．５、１又は２．５ｍｇの化合物１を反復皮下注射しても、安全であり、十分な耐用性があることを示している。
【図面の簡単な説明】
【０１６８】
【図１】酢酸塩としてのヒトＣＤＲ１（化合物１）−ｈＣＤＲ１の分子式及び構造式、アミノ酸配列並びに物理的パラメータを示す。
【図２】化合物１及びCaptisol（登録商標）溶液で処置されたマウスから採取され、続いて、ＰＢＳ中の化合物１の溶液で活性化された細胞からのＩＬ−２の分泌。    −黒四角−化合物１（ＲＳ）  ５０μｇ／マウス  −黒三角−化合物１（ＲＳ）  ２００μｇ／マウス  −白四角−ＤＰ  ５０μｇ／マウス  −白三角−ＤＰ  ２００μｇ／マウス  −白丸−アンプル化された１２％  Captisol（登録商標）
【図３】化合物１の溶液で処置されたマウスから採取され、続いて、ＥＭ−１中の化合物１の溶液で活性化された細胞（２．５×１０６細胞／ウェル）からのＩＦＮ−γの分泌。    −黒菱形−プラセボ  −黒丸−化合物１  ５０μｇ／マウス（処置用量）  −白三角−化合物１  １００μｇ／マウス（処置用量）  −Ｘ−化合物１  ２００μｇ／マウス（処置用量）
【図４】化合物１の溶液で処置されたマウスから採取され、続いて、ＥＭ−１中の化合物１の溶液で活性化された細胞（５×１０６細胞／ウェル）からのＩＦＮ−γの分泌。    −白菱形−プラセボ  −白四角−化合物１  ２５μｇ／マウス  −白三角−化合物１  ５０μｇ／マウス  −Ｘ−化合物１  １００μｇ／マウス  −＊−化合物１  ２００μｇ／マウス
【図５】Captisol（登録商標）中の化合物１を１０回注射した後の（ＮＺＢｘＮＺＷ）Ｆ１マウス中の抗−ｄｓＤＮＡ抗体［ＯＤ＝光学密度；化合物１（Ｃ）＝Captisol（登録商標）中に溶解された化合物１］。    −白四角−プラセボ  −白菱形−化合物１  ５０μｇ／マウス  −白丸−化合物１  ２５μｇ／マウス
【図６】免疫複合体沈着物の強度を示す、（ＮＺＢｘＮＺＷ）Ｆ１マウスから得られた腎臓の切片。上列の切片はCaptisol（登録商標）で処置されたマウスから得たものであり、中央の列の切片は５０μｇ／マウスの化合物１で処置されたマウスから得たものであり、下列の切片は、２５μｇ／マウスの化合物１で処置されたマウスから得たものである。倍率：左：Ｘ１００、右：Ｘ４００．ＦＩＴＣ免疫組織学。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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