(57)【要約】本発明は、２つのアミノ基の間にオキシアルキレン鎖を含むジアミンに基づくグアニジン誘導体ポリマー、および薬学的に許容可能なそれらの塩を、作用物質として含む薬剤に関するものである。当該グアニジン誘導体は、グアニジン酸付加塩と、２つのアミノ基の間にポリアルキレン鎖を含むジアミンとの縮重合生成物である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２つのアミノ基の間にオキシアルキレン鎖を含むジアミンに基づくグアニジン誘導体ポリマーを作用物質として含み、
上記グアニジン誘導体は、グアニジン酸付加塩と、２つのアミノ基の間にポリアルキレン鎖を含むジアミンとの縮重合生成物、および薬学的に許容可能なそれらの塩を表す薬剤組成物。
【請求項２】
ポリオキシアルキレングアニジン塩の群を代表する化合物において、トリエチレングリコールジアミン（相対分子量：１４８）、ポリオキシプロピレンジアミン（相対分子量：２３０）、および、ポリオキシエチレンジアミン（相対分子量：６００）を用いることを特徴とする請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
少なくとも３つのグアニジニウム基を有するポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]が、作用物質として含まれることを特徴とする請求項１または２に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
上記作用物質の平均分子量が、５００〜３０００の範囲にあることを特徴とする請求項３に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
２つのアミノ基の間にオキシアルキレン鎖を含むジアミンに基づくグアニジン誘導体ポリマーの使用であって、
細胞増殖抑制活性を有する薬剤組成物を製造することを目的とし、
上記グアニジン誘導体は、グアニジン酸付加塩と、２つのアミノ基の間にポリアルキレン鎖を含むジアミンとの縮重合生成物、および薬学的に許容可能なそれらの塩を表すグアニジン誘導体ポリマーの使用。
【請求項６】
ポリオキシアルキレングアニジン塩の群を代表する化合物において、トリエチレングリコールジアミン（相対分子量：１４８）、ポリオキシプロピレンジアミン（相対分子量：２３０）、および、ポリオキシエチレンジアミン（相対分子量：６００）を用いることを特徴とする請求項５に記載のグアニジン誘導体ポリマーの使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、薬剤組成物に関するものであって、特に細胞増殖抑制剤（Zytostatikum）に関するものである。
【０００２】
ヨーロッパ（westlichen Zivilisation）では、人口の３分の１が癌にかかり、癌による死亡率は、少なくとも７５％である。悪性腫瘍は、今日、細胞分裂を抑制するように処置される。
【０００３】
これらの病気の化学療法に関する主要な問題は、癌細胞が、供給される細胞増殖抑制剤に対して、ある程度の割合までしか反応しないという点にある。さらに、腫瘍が上記治療に対して反応しても、完全な寛解を期待できないことが多い。
【０００４】
化学療法の効果増大に向けて、近年、複化学療法（Polychemotherapie）、つまり、複数の細胞増殖抑制剤の使用に目が向けられている。癌治療を改善するために、異なる作用点（Angriffspunkten）をもつ様々な細胞増殖抑制剤がますます頻繁に組み合わせられる。これにより、一方ではよりよい効果が得られるが、他方では、次第に抵抗性をもつようになるという問題が生じる。
【０００５】
さらなる可能性として、細胞保護剤（Zytoprotektoren）を同時に投与することにより、健康な細胞を細胞増殖抑制剤から選択的に保護することが挙げられる。これにより、投与量をより増やすことができると同時に、副作用を低減することができる（例えば、タキサン）。
【０００６】
これらの対策にもかかわらず、化学療法における副作用率は依然として非常に高い。まさにこの理由から、代謝されやすい（Vertraeglichkeit）ことに加えて効能が高い作用物質、つまり、できるだけ治療上の間口（Fenster）が広い作用物質を開発することが非常に重要である。
【０００７】
本発明の目的は、従来の細胞増殖抑制剤（例えば、５‐フルオロウラシル、シスプラチン、エピルビシン、および、マイトマイシンＣ）と比べて治療上の間口が広い細胞増殖抑制剤を提供することにある。
【０００８】
本発明の薬剤組成物は、２つのアミノ基の間にオキシアルキレン鎖を含むジアミンに基づくグアニジン誘導体ポリマーを作用物質として含む。ここで、上記グアニジン誘導体は、グアニジン酸付加塩と、２つのアミノ基の間にポリアルキレン鎖を含むジアミンとの縮重合生成物であり、さらに、薬学的に許容可能なそれらの塩も含まれる。
【０００９】
本発明の薬剤組成物の好ましい実施形態では、ポリオキシアルキレングアニジン塩の群（Reihe）を代表する化合物において、トリエチレングリコールジアミン（相対分子量：１４８）、ポリオキシプロピレンジアミン（相対分子量：２３０）、および、ポリオキシエチレンジアミン（相対分子量：６００）が用いられる。
【００１０】
また、作用物質として、少なくとも３つのグアニジニウム基（Guanidiniumresten）を有するポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]が含まれることが最も好ましい。また、上記作用物質の平均分子量は、特に５００〜３０００Ｄの範囲であることが好ましい。
【００１１】
さらに、本発明は、２つのアミノ基の間にオキシアルキレン鎖を含むジアミンに基づく、グアニジン誘導体ポリマーの、細胞分裂を抑制する活性をもつ薬剤組成物を製造することを目的とする使用に関するものである。上記グアニジン誘導体は、グアニジン酸付加塩と、２つのアミノ基の間にポリアルキレン鎖を含むジアミンとの縮重合生成物であり、薬学的に許容可能なそれらの塩も含まれる。
【００１２】
さらに、本発明は、トリエチレングリコールジアミン（相対分子量：１４８）、ポリオキシプロピレンジアミン（相対分子量：２３０）、および、ポリオキシエチレンジアミン（相対分子量：６００）を用いて製造されるポリオキシアルキレングアニジン塩の使用に関するものである。
【００１３】
本発明に用いられるグアニジン誘導体ポリマーについては、ＰＣＴ／ＡＴ０１／００１３４によって開示されている。この文献の内容を参照するために本発明の発明の詳細な説明に加えている。
【００１４】
本発明に用いられる、好ましい代表的な化合物の製造、および、細胞増殖抑制の効能（Wirksamkeit）の検出について、以下に記載する。
【００１５】
本発明に用いられる化合物の集団を代表するものとして、平均分子量が１０００Ｄである、ポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]の細胞増殖抑制の効能について、以下記載する（ＣＡＳ番号  ３７４５７２‐９１‐５）。
【００１６】
この化合物を製造するために、４．４３モルのグアニジニウム塩酸塩を、４．０３モルのトリエチレングリコールジアミンに、５０℃で溶解した。次に、溶解したものを、１２０℃に加熱し、この温度のまま２時間攪拌した。その後、これをこの温度のまま２時間保った。その後、真空状態（０．１バール）にし、さらに２時間、真空状態、１７０℃で攪拌した。続いて、これを標準圧で空気にさらし、１２０℃に冷却し、脱塩水によって約５０％に希釈した。リン酸によって、ｐＨを約６に中和して、冷却し、所望の濃度に希釈した。また、その分子量が１０００Ｄであることを確認した。
【００１７】
＜細胞成長抑止の効能（Wirksamkeit）の立証＞
結腸癌および膵臓癌の細胞株（例えば、Ｃａｐａｎ‐１、ＤＬＤ‐１、ＨＴ２９、ＨＣＴ‐８、ＭＩＡ‐ＰＡ‐ＣＡ２、ＰＡＮＣ１、ＢＸＰＣ‐３、ＡＳＰＣ‐１、および、ＨＴ‐２９）を試験した。試験された癌細胞株を、液体窒素の中で保存した。解凍した後、上記癌細胞をＲＰＭＩ−１６４０＋グルタミン培地（Ｇｉｂｃｏ番号  ５２４００２５）を用いて培養瓶の中で、５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で１４日間（bis zu 14 Tagen）、培養した。これにより、単層の細胞を形成できた。その後、これらの細胞を、トリプシン＋ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｒｏ番号  １５４００‐０５４）を用いて（mit）収集し、ＲＰＭＩ培地で２回洗浄した。
【００１８】
さらに、健康な被検査者のリンパ球を試験した。このとき、総量１００ｍｌの血液をＥＤＴＡ試験管に取り出した。リンパ球は、全血から、Mono‐Poly‐Resolving Medium/Ficol‐Hypaque‐gradientを用いて単離し、ＨＢＳＳ緩衝液を用いて３回洗浄し、このようにして調整した後、試験反応物（Testansatz）に加えられた（eingesetzt）。
【００１９】
ポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]の他に、比較のために、化学療法薬であるシスプラチン、エピルビシン、マイトマイシンＣ、および、５−フルオロウラシルを試験した。さらに、これらの化合物は、まず、それぞれのメーカーの手引きにしたがって溶解した後、１ｍｌずつ分注し、ストック溶液（作用物質濃度１０００μｇ／ｍｌ）として、液体窒素中、−１８０℃で保存した。溶解された原料は、同日中に使用した。
【００２０】
これらの物質の細胞毒性の活性（Aktivitaet）を調べるために、ＲＰＭＩによって洗浄された懸濁液（細胞濃度；２００００細胞／２００μｌ）の状態の癌細胞を培養瓶からマイクロタイタープレートに移した。様々な濃度の試験物質が存在する状態で、その後、癌細胞を、５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で３日間培養した。ポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]については、全ての試験構成（Versuchsanordnungen）において、濃度を０．１２〜５００μｇ／ｍｌ（２倍希釈化（Faktor 2 Verduennungen））として用いた。３日間の培養後、非放射性の細胞増殖および細胞毒性テストＥＺ４Ｕ（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ番号  ＢＩ‐５０００  １０×９６測定（Bestimmungen））を用いて評価を行った。ＥＺ４Ｕを用いて３時間培養を行ってから、スライド光度計（Dias-Photometer）による波長４９／６３０ｎｍの割合（試験試料（Testprobe）の吸光度／対照試料のブランク値（control-sample blank value））を用いて、光度測定法的に評価を行った。
【００２１】
リンパ球の活力（Vitalitaet）を、１．２×１０７／ｍｌの懸濁液の中で、様々な濃度の試験物質を用いて調べた。これらの細胞懸濁液を、試験物質が存在している状態で、２４時間、３７℃で５％ＣＯ２の雰囲気下でインキュベートし、その後、トリパンブルーによって染色した。染色後、リンパ球を計数盤上に供し、その活力をパーセンテージで評価した。
【００２２】
作用物質ポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]は、薬理的な観点から毒性が低く、かつ代謝されやすいという優れた薬力学的特性を有している。したがって、腫瘍学的な治療における医薬品として利用することができる。特に、この物質は、複数の癌細胞株（例えば、結腸癌（ＨＴ‐２９、ＨＣＴ‐８、ＤＬＤ‐１）または膵臓癌（ＡＳＰＣ‐１、ＢＸＰＣ‐３、ＣＡＰＡＮ‐１、ＰＡＮＣ‐１））を用いた試験によって実証できるように、優れた細胞増殖抑制活性を示す。
【００２３】
さらに、本発明に用いられる作用物質は、治療上の間口が広い。なぜなら、癌細胞において、細胞増殖抑制活性がすでに濃度２〜１６μｇ／ｍｌで生じている一方で（表１および表２）、健康な内生（koerpereigenen）細胞（例えば、リンパ球）では、当該活性は１００μｇ／ｍｌ以上の濃度でしか観察されなかった（表４）からである。比較するために、表３に、５−フルオロウラシル、シスプラチン、エピルビシン、および、マイトマイシンＣの細胞増殖抑制活性を示す。
【００２４】
１５ｍｇ／体重ｋｇまでの量のポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]を（静脈内または腹腔内を通して）全身（systemischer）投与した後、２時間後のラットの血液では、血中濃度は１００μｇ／ｍｌ以下で測定される。これにより、同時に代謝されやすい。したがって、ポリ−[２−（２−エトキシエトキシエチル）グアニジニウム塩酸塩]を細胞増殖抑制剤として用いることができる。
【００２５】
本発明に用いられる作用物質を、単独、または無機もしくは有機の薬理的不活性な補助剤と合わせて、実質的にある程度知られている医薬品に加工することができる。
【００２６】
【表１】
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【００２７】
【表２】
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【００２８】
【表３】
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【００２９】
【表４】
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【国際調査報告】
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