(57)【要約】トゥレット症候群（ＴＳ）および関連する他の異常に関与している遺伝子または遺伝子群の修飾を同定することである。  本発明は、破壊された、有機アニオン輸送ポリペプチド関連タンパク質-4（OATPRP4）遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質が、ＴＳの表現型および関連異常に関わることを明らかにした。さらに、ヒトOATPRP-4遺伝子の破壊された相同物および/またはその遺伝子の一以上の破壊された生産物タンパク質を有するトランスジェニック動物と化合物または低分子とを接触させ、ＴＳおよび/または関連する異常の何らかの徴候および/または症状の軽減、回復または調整を測定すること、および/または観測することの行程を含む、ＴＳおよび/または関連異常に関係する徴候および/または症状を軽減、回復または調整する化合物および/または低分子をスクリーニングするリサーチモデルを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの有機アニオン輸送ポリペプチド関連タンパク質-4（OATPRP-4）遺伝子の破壊された相同物および/またはその遺伝子の一以上の破壊された生産物タンパク質を有するトラ
ンスジェニック動物と化合物または低分子とを接触させ、トゥレット症候群および/また
は関連する異常の何らかの徴候および/または症状の軽減、回復または調整を測定するこ
と、および/または観測することの工程を含む、トゥレット症候群および/または関連の異常に関係する徴候および/または症状を軽減、回復または調整する化合物および/または低分子をスクリーニングするリサーチモデル。
【請求項２】
前記のトゥレット症候群および/または関連する異常の徴候および/または症状が、顔面チック、頭部の痙攣、身体の痙攣、自傷、多動および睡眠パターンの異常からなる群より選択されることを特徴とする、請求項1に記載のリサーチモデル。
【請求項３】
前記トランスジェニック動物が、ラット、マウス、蠕虫およびハエからなる群より選択されることを特徴とする、請求項1に記載のリサーチモデル。
【請求項４】
前記OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質の破
壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産
物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み合わせを含むことを特徴とする、請求項1に記載のリサーチモデル。
【請求項５】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項4に記載のリサーチモデル。
【請求項６】
OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他の遺
伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物
タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項1に記載のリサーチモデル。
【請求項７】
前記の破壊が染色体のt (6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項1に記載
のリサーチモデル。
【請求項８】
染色体のt (6; 8)均衡転座が、第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする
、請求項7に記載のリサーチモデル。
【請求項９】
OATPRP-4遺伝子の破壊されていない相同物を有する動物細胞株の表現型上の発現を観測することおよび/または測定すること、
OATPRP-4遺伝子の破壊された相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパ
ク質を有する動物細胞株の表現型上の発現を観測することおよび/または測定すること、
OATPRP-4遺伝子の破壊された相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパ
ク質を有する動物細胞株の表現型上の発現と、OATPRP-4遺伝子の破壊されていない相同物を有する動物細胞株の表現型上の発現とを比較すること、
OATPRP-4遺伝子の破壊された相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパ
ク質を有する動物細胞株と、化合物または低分子とを接触させること、ならびに
OATPRP-4遺伝子の破壊された該相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タン
パク質を有する動物細胞株の表現型上の発現と、OATPRP-4遺伝子の破壊されていない該相同物を有する動物細胞株の表現型上の発現とを比較すること、
を含み、トゥレット症候群および/または関連する異常に関係する徴候および/または症状
を治療または予防するために使用できる、化合物および/または低分子をスクリーニング
するリサーチモデル。
【請求項１０】
OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、改変さ
れた遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質
の修飾、一以上の破損およびこれらの組み合わせを含有することを特徴とする、請求項9
に記載のリサーチモデル。
【請求項１１】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項10に記載のリサーチモデル。
【請求項１２】
OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他の遺
伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物
タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項9に記載のリサーチモデル。
【請求項１３】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項9に記載のリサーチモデル。
【請求項１４】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項13に記載のリサーチモデル。
【請求項１５】
OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質の表現型
発現が、遺伝子の活動、タンパク質の生産またはこれらの組み合わせの上方または下方制御を含有することを特徴とする、請求項9に記載のリサーチモデル。
【請求項１６】
破壊されていないOATPRP-4遺伝子を有するヒト細胞株の表現型上の発現を観測することおよび/または測定すること、
破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質を有
するヒト細胞株の表現型上の発現を観測することおよび/または測定すること、
破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質を有
するヒト細胞株の表現型上の発現と、破壊されていないOATPRP-4遺伝子を有するヒト細胞株の表現型上の発現とを比較すること、
破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質を有
するヒト細胞株と、化合物または低分子とを接触させること、ならびに
破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質を有
するヒト細胞株の表現型上の発現と、破壊されていないOATPRP-4遺伝子を有するヒト細胞株の表現型発現とを比較すること、
を含み、トゥレット症候群および/または関連の異常に関係する徴候および/または症状を治療または予防するために使用できる、化合物および/または低分子をスクリーニングす
るリサーチモデル。
【請求項１７】
OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、改変された遺
伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾
、一以上の破損およびこれらの組み合わせを含有することを特徴とする、請求項16に記載のリサーチモデル。
【請求項１８】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項16に記載のリサーチモデル。
【請求項１９】
OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他の遺伝子ま
たはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質の
発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項16に記載のリサーチモデル。
【請求項２０】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項16に記載
のリサーチモデル。
【請求項２１】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項20に記載のリサーチモデル。
【請求項２２】
OATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の一以上の生産物タンパク質の表現型発現が
、遺伝子の活動、OATPRP-4タンパク質の生産またはこれらの組み合わせの上方または下方制御を含有することを特徴とする、請求項16に記載のリサーチモデル。
【請求項２３】
OATPRP-4遺伝子の破壊された相同物を有するトランスジェニック動物において、トゥレット症候群および/または関連する異常の徴候および/または症状を軽減、回復もしくは調整する、あるいは、破壊されたOATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子相同物および/ま
たはそれらの遺伝子の生産物タンパク質をそれぞれ有するヒトまたは動物細胞株の表現型発現を正常に復元する、基剤および作用物質を含有した組成物を治療法上有効な量、動物またはヒトに投与することを含む、トゥレット症候群および/または関連異常に罹病して
いる動物またはヒトを治療する方法。
【請求項２４】
トゥレット症候群および/または関連異常に関係する徴候および/または症状が、顔面チック、頭部の痙攣、身体の痙攣、腕の運動、足蹴運動、汚言症、コプロプラキシア、独語症、低フラストレーション耐性、激高、自傷、妄想、強迫性行動、集中力不足、学習欠陥、多動および不眠症からなる群より選択されることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
OATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子の相同物の表現型発現が、遺伝子の活動、OATPRP-4タンパク質またはOATPRP-4タンパク質相同物の生産またはこれらの組み合わせの上方または下方制御を含有することを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項２６】
前記トランスジェニック動物が、ラット、マウス、蠕虫およびハエからなる群より選択されることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項２７】
OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子の相同物および/またはその一以上の生産物タ
ンパク質の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後
の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み合わせを含有することを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項２８】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子の相同物および/またはその一以上の生産物タ
ンパク質の破壊が、他の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の発現、翻訳または機能へ
の間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項３０】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項23に記載
の方法。
【請求項３１】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
前記基剤が医薬上許容できる賦形剤または希釈剤であることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項３３】
前記組成物の個体への投与経路が、非経口、経口または腹腔内であることを特徴とする、請求項23に記載の方法。
【請求項３４】
非経口的投与経路が、静脈内；筋肉内；組織実質内；動脈内；皮下；眼球内；頭蓋内；心室内；滑液嚢内；経皮、肺吸入、眼、舌下、頬側を含む経上皮的；眼、皮膚、眼球、直腸、吹送または噴霧による鼻からの吸引を含む局所的なものからなる群より選択されることを特徴とする、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
基剤および作用物質の組成物が、硬殻もしくは軟殻ゼラチンカプセル、錠剤、トローチ剤、小袋剤、甘味入り錠剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエファー、粉末剤、顆粒剤、溶液または乳剤の形態で経口的に投与されることを特徴とする、請求項33に記載の方法。
【請求項３６】
基剤および作用物質の組成物の鼻への投与が、エアゾール剤、アトマイザ噴霧器およびネブライザ噴霧器からなる群より選択されることを特徴とする、請求項34に記載の方法。
【請求項３７】
前記の基剤および作用物質の組成物を、ほかの治療法上有効な組成物と一緒に同時もしくは間欠的に、治療法上有効な量投与することをさらに含む、請求項23に記載の方法。
【請求項３８】
動物またはヒトから細胞サンプルを単離すること、ならびに
OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパ
ク質の破壊について、その細胞サンプルを分析する工程
を含む、動物またはヒトにおけるトゥレット症候群および/または関連する異常を診断す
る方法。
【請求項３９】
前記細胞サンプルが、末梢血または動物もしくはヒトの完全な核型を含むその他の任意供給源から得られることを特徴とする、請求項38に記載の方法。
【請求項４０】
OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タン
パク質の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の
遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み合わせを含有することを特徴とする、請求項38に記載の方法。
【請求項４１】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項38に記載の方法。
【請求項４２】
OATPRP-4遺伝子もしくはOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タン
パク質の破壊が、他の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子および/またはそ
の一以上の生産物タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項38に記載の方法。
【請求項４３】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項38に記載
の方法。
【請求項４４】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項43に記載の方法。
【請求項４５】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊を含む、トゥレット症候群のためのトランスジェニック動物モデル。
【請求項４６】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み
合わせを含有することを特徴とする、請求項45に記載のトランスジェニック動物モデル。
【請求項４７】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項46に記載のトランスジェニック動物モデル。
【請求項４８】
OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他の遺
伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパ
ク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項45に記載のトランスジェニック動物モデル。
【請求項４９】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項45に記載
のトランスジェニック動物モデル。
【請求項５０】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項49に記載のトランスジェニック動物モデル。
【請求項５１】
前記トランスジェニック動物が、ラット、マウス、蠕虫およびハエからなるグループから選択されることを特徴とする、請求項45に記載のトランスジェニック動物モデル。
【請求項５２】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊を有す
る細胞を含む、動物細胞株。
【請求項５３】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み
合わせを含有することを特徴とする、請求項52に記載の動物細胞株。
【請求項５４】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項53に記載の動物細胞株。
【請求項５５】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他
の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生
産物タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項52に記載の動物細胞株。
【請求項５６】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項52に記載
の動物細胞株。
【請求項５７】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項56に記載の動物細胞株。
【請求項５８】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊を有す
るトランスジェニック動物から得られた細胞を含む、トランスジェニック動物の動物初代細胞培養株。
【請求項５９】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み
合わせを含有することを特徴とする、請求項58に記載の動物初代細胞培養株。
【請求項６０】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項59に記載の動物初代細胞培養株。
【請求項６１】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他
の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生
産物タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項58に記載の動物初代細胞培養株。
【請求項６２】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項58に記載
の動物初代細胞培養株。
【請求項６３】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項62に記載の動物初代細胞培養株。
【請求項６４】
前記トランスジェニック動物が、ラット、マウス、蠕虫およびハエからなるグループから選択されることを特徴とする、請求項58に記載の動物初代細胞培養株。
【請求項６５】
OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊を有する細胞を含
む、ヒト細胞株。
【請求項６６】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み
合わせを含有することを特徴とする、請求項65に記載のヒト細胞株。
【請求項６７】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項66に記載のヒト細胞株。
【請求項６８】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他
の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生
産物タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項65に記載のヒト細胞株。
【請求項６９】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項65に記載
のヒト細胞株。
【請求項７０】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項69に記載のヒト細胞株。
【請求項７１】
TSおよび/または関連する異常に罹病している患者から得られた細胞を含む、ヒト初代
細胞培養株。
【請求項７２】
前記細胞培養株が、ヒトOATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質
の破壊を有することを特徴とする、請求項71に記載のヒト初代細胞培養株。
【請求項７３】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物の破壊が、改変された遺伝子の発現、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、一以上の改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、一以上の破損およびこれらの組み
合わせを含有することを特徴とする、請求項71に記載のヒト初代細胞培養株。
【請求項７４】
遺伝子の発現を改変するためにアンチセンス化合物またはRNA干渉が用いられることを
特徴とする、請求項73に記載のヒト初代細胞培養株。
【請求項７５】
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の破壊が、他
の遺伝子またはタンパク質による、OATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生
産物タンパク質の発現、翻訳または機能への間接的な影響によるものであることを特徴とする、請求項72に記載のヒト初代細胞培養株。
【請求項７６】
前記の破壊が染色体のt(6; 8)均衡転座を含有することを特徴とする、請求項72に記載
のヒト初代細胞培養株。
【請求項７７】
染色体のt(6; 8)均衡転座が第8染色体の8q13バンドに配置されることを特徴とする、請求項76に記載のヒト初代細胞培養株。
【請求項７８】
細胞が末梢血または罹病している患者の完全な核型を有するその他の任意供給源から得られることを特徴とする、請求項71に記載のヒト初代細胞培養株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、修飾を受けたものがトゥレット症候群の表現型および関連するその他の異常に関与している遺伝子または遺伝子群の同定に関する。
【背景技術】
【０００２】
トゥレット症候群 (TS)は、多様な人種および民族集団において報告されている遺伝性
の神経学的異常であり、長期間かけて現れたり消えたりする、チックと呼ばれる多発性の不随意的な運動やコントロールできない発声を特徴とする。ときとして、このようなチックは不適切な言葉や表現を含んでいる。この異常は、1885年に86歳のフランス人の女性貴族についてこの症状を最初に記述した、先駆的なフランスの神経学者である Georges Gilles de la Tourette博士の名前をとって付けられた。
【０００３】
TSの男女比は、2〜14歳の間に始まり、典型的には2〜4：1の範囲であり、総人口10,000人あたり4〜10人の頻度で現れる。DSM IVによると、TSは長期的に増減する、多発性の運
動および一つまたは複数の発声チックの両方を特徴とする。チックは1日のうち何回も現
れたり、連続3ヶ月間を超えるチックのない期間が存在しないべきであると診断が求める
、1年を超える期間に渡って繰り返し再発することがある。チックが、短期間現れなくな
ったり新たなものに置き換わったりすることがあること、および青春期の後期までにまったく現れなくなることがあることは、よく確立されている。深刻なケースに関連した特質としては、反響様言語症（他人の発声の復唱）、汚語症（卑猥な言葉の発声）およびコプロプラキシア（copropraxis;卑猥な動作）さらに、TSの徴候の広がりとして、TSだけにとどまらず強迫神経症(OCD)、注意欠陥・多動性障害(ADHD)、うつ病、学習障害および睡眠
障害と一部重なり合っていることを、証拠は指し示している。
【０００４】
TSの病因は現在、完全には判っていない。しかし、遺伝的に伝播することが家族調査および双子調査から明白になっている。TS罹患家族の大家系の隔離分析によって、異型接合体による不完全な浸透度および低い浸透度を含む中間的な遺伝パターンを伴っている主要な遺伝子座の証拠がもたらされた。だが、多因性の多遺伝子による遺伝は排除されなかった。加えて、出産前および出産時の合併症といった後天的な要因が病気の表現型に影響を与えているかもしれない。
【０００５】
TSに罹患した個人のいる家系のゲノムスキャン（genome scans）について公表されている報告は少ない。最初の報告（Leppartら，1996）は、平均30cM離れた遺伝的マーカーを
用いて単一の大家族を調査し、一つは17q染色体上のLODスコアが2.21の、もう一つは8q染色体上のLODスコアが1.57の、二つの遺伝子座を同定した。Barrら（1999）は、10〜28cM
の間隔のマーカーを用いて、多様な年代構成の7家族におけるTSとの結びつきを検証した
。パラメトリック検定は、どのマーカーとTS表現型との連鎖についての有意な証拠をも示唆しなかったが、罹患家系構成員手法（affected pedigree member method）は5、7、11
、13、14、16および19番染色体上の遺伝子座を示唆した。ごく最近になって、トゥレット症候群協会国際遺伝研究コンソーシアム（1999）は、血縁関係のあるTS罹患ペアに対して、平均9.1cM間隔のマーカーを用いたゲノムスキャンの調査を行った。多点最尤法スコア
（multipoint maximum-likelihood score）（MLS）は、TS罹病性が増大した（MLS>2）異
なる二つの部位（4qおよび8p）を示唆した。その他の連鎖/関連研究はこれらと同じ結果
にはならなかったが、その代わり、第2染色体のセントロメア付近である11q23、あるいは6p、8q、20q、および21qの末端部分（Meretteら，2000；Simonicら，1998）を含む別の遺伝子座を示唆した。Simonicら（2001）は、彼らの以前の研究を繰り返し、ハプロタイプ
相対危険率および単一マーカーTDT分析を用いた患者対象研究における、追加的な関係を
もたない罹患個人とその両親を含んで拡張された同様のデータセットの中に、第2、第8および第11染色体との連鎖または関連を示す証拠を再び発見した。TSの細胞遺伝学的な調査は、TS患者における染色体異常、たとえば第9染色体に関係する染色体の欠失：9p上の欠
失およびX染色体の部分的な三重体化と同時発生の9pの異なる欠失、18q上の欠失のような、ならびに軽い知的障害もしくはいくらかの身体形成異常のTS患者が、新たに逆位の重複dup (7) (q22.1-q31.1)の核型をもっていることを確認した。
【０００６】
TS患者における t(7; 18) 染色体の転座が報告され、18q22.3転座切断点にまたがる2つのTACを同定した物理地図の作成によって、さらに分析されている。転座を持っている家
族構成員はTS患者と似た特徴を見せる、たとえば動きや音声におけるつながりだが、この両方ではない。均衡転座 t(3;8)(p21.2;q24.1) がTS患者において報告されている。均衡
転座 t(1;8)(q21.1;q22.1)もまた、1;8の転座を持つ4人の子供がTSおよび/またはチック
、ADHDまたはOCDのようなTSに同時に罹患した症状を見せている家族において報告されて
いる。この家族の父親はt(1;8)転座を持っているが、父親も母親もともに上述したような診断を受けているとは報告されていない。
【０００７】
したがって、この蹂躙的な異常を発現する上で顕著な役割を果たすかもしれない分子の相互作用を標的とすることを可能にするために、修飾を受けるとTSまたはTS表現型の何らかの病態を診断するに至るような、一以上の遺伝子および/またはその一以上の遺伝子に
よって生成される一以上のタンパク質を同定する必要性が存在する。
【発明の開示】
【０００８】
本発明は初めて、有機アニオン輸送ポリペプチド関連タンパク質-4（OATPRP-4）遺伝子および/またはその遺伝子の生産するタンパク質の修飾、すなわち破壊が、トゥレット症
候群および/または関連する異常の素因に関係しているという発見を提供する。さらに本
発明は、TSおよび/または関連する異常の軽減、改善または調整する能力について、化合
物および/または低分子をスクリーニングするリサーチモデルを提供する。これは、化合
物および/または低分子を、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の生産するタンパク質を有するトランスジェニック動物に投与し、TSおよび/または関連する異常
の徴候や症状を軽減、改善または調整するかどうかを測定または観察することによる。TSに関連する異常には、これだけに限らないが、強迫神経症(OCD)、注意欠陥・多動性障害(ADHD)、うつ病、学習障害、および睡眠障害が挙げられる。
【０００９】
本発明はまた、破壊されていないOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の生産する
タンパク質を有する細胞株（系列）の表現型発現を、その遺伝子の表現型発現の生理学的基準を決定するために観察および/または測定すること、この発現を、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の生産するタンパク質を有するヒトまたは動物の細胞株の改変された表現型発現と比較すること、ならびに上記化合物および/または低分子が、
改変された表現型発現を所定の生理学的基準まで回復させるかどうかを決定するために、細胞とそれらとを接触させることにより、化合物および/または低分子がTSおよび/または関連異常の徴候や症状を治療または予防するのに効果的であるかを検査するリサーチモデルを提供する。
【００１０】
本発明はさらに、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその生産物タンパク質を有
するトランスジェニック動物において、TSおよび/または関連異常の低減、改善または調
整することが示されているか、あるいは、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその
生産物タンパク質を有するヒトもしくは動物細胞株の表現型発現を所定の生理学的基準まで回復させることが示されている、基剤および薬剤を含む組成物を治療に有効な量を与えることによって、TSおよび/または関連異常に罹病している動物またはヒトを治療する方
法を提供する。
【００１１】
本発明はまた、個人におけるTSおよび/または関連異常の素因を、OATPRP-4遺伝子の破
壊および/またはその遺伝子の生産物タンパク質の分析によって診断する方法をも含む。OATPRP-4遺伝子の破壊および/またはその遺伝子の生産するタンパク質には、以下だけに限定されないが、一以上の転座、一以上の置換、一以上の欠失、一以上の付加、一以上の突然変異、転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物であるタンパク質の一以上の修飾、
破損またはそれらの会合が挙げられる。OATPRP-4遺伝子の破壊にはまた、第8染色体の8q13バンドに配置され得るt(6; 8)の染色体の均衡転座も挙げられる。さらに、間接的なOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子生産物のタンパク質の破壊には、これだけに限定さ
れないが、その他の遺伝子やタンパク質によるOATPRP-4遺伝子の発現、翻訳、または機能における影響を挙げることができる。
【００１２】
そのうえ、本発明はトゥレット症候群のトランスジェニック動物モデルを提供し、その場合トランスジェニック動物は破壊されたヒトOATPRP-4遺伝子相同物を持っている。
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質の相同物に破
壊を有する動物細胞株もまた提供される。加えて、本発明はトランスジェニック動物の動物初代細胞培養株を提供し、この場合ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以
上の生産物タンパク質相同物に破壊を有するトランスジェニック動物から該細胞が得られる。
【００１３】
さらに、本発明にはヒト細胞株も挙げられ、そこにおいては細胞のOATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質が破壊されている。
最後に、本発明はヒトの初代細胞培養株をも提供し、そこにおいてはトゥレット症候群および/または関連異常に罹病している患者から細胞が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明は、トゥレット症候群および/または関連異常と診断された相当数の個人におい
て、有機アニオン輸送ポリペプチド関連タンパク質-4 (OATPRP4)遺伝子および/またはそ
の生産物のタンパク質が修飾されている、すなわち破壊されていることを初めて決定付けたものである。この発見に基づいて本発明は、化合物および/または低分子について、破
壊されたヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその遺伝子の生産物タンパク質の相同
物を有するトランスジェニック動物に投与し、それら化合物および/または低分子が、TS
および/または関連異常の徴候や症状を軽減、改善または調整するかどうかを測定または
観測することにより、TSおよび/または関連異常の軽減、改善または調整する能力につい
て化合物および/または低分子をスクリーニングするというリサーチモデルを提供する。
【００１５】
本発明はまた、破壊されていないOATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物および/
またはその遺伝子の生産物のタンパク質をそれぞれ有するヒトまたは動物の細胞株の表現型発現を、その遺伝子の表現型発現の生理学的基準を決定するために観察および/または
測定すること、この発現を、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の生産
物のタンパク質を有するヒトまたは動物の細胞株の改変された表現型発現と比較すること、ならびに、化合物および/または低分子が改変された表現型発現を所定の生理学的基準
まで回復するかどうかを決定するために、細胞とそれらの化合物および/または低分子と
を接触させることにより、化合物および/または低分子がTSおよび/または関連異常の徴候や症状を治療または予防するのに効果的であるかを検査するリサーチモデルを提供する。
【００１６】
さらに本発明は、破壊されたヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその遺伝子の生
産するタンパク質を有するトランスジェニック動物において、TSおよび/または関連異常
を軽減、改善または調整することが示され、破壊されたOATPRP-4遺伝子および/またはそ
の遺伝子の生産物のタンパク質を有するヒトまたは動物細胞株の表現型発現を所定の生理学的基準まで回復させる作用物質および基剤を含む組成物を、TSおよび/または関連異常
に罹病している動物またはヒトに治療法上有効な量を与えることによって治療する方法を提供する。
【００１７】
本発明はまた、動物またはヒトにおけるTSおよび/または関連異常を診断する方法とし
て、動物またはヒトから細胞サンプルを単離し、破壊されたOATPRP-4遺伝子またはヒトのOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその遺伝子の生産物のタンパク質を検査することに
より診断する方法をも含む。細胞サンプルは、末梢血や、生物体の完全な染色体の核型を含有するその他のあらゆる好適な供給源から得られる。
【００１８】
そのうえ、本発明はトゥレット症候群のトランスジェニック動物モデルを提供し、そのトランスジェニック動物は破壊されたヒトOATPRP-4遺伝子相同物をもっている。
ヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生産物タンパク質が破壊されて
いる動物細胞株もまた提供される。加えて、本発明はトランスジェニック動物の動物初代細胞培養株を提供し、該細胞はヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/またはその一以上の生
産物タンパク質が破壊されたトランスジェニック動物から細胞が得られる。
【００１９】
さらに、本発明にはヒトの細胞株も挙げられ、そこにおいては細胞のOATPRP-4遺伝子および/またはその遺伝子の生産する一以上のタンパク質が破壊されている。
最後に、本発明はヒトの初代細胞培養株をも提供し、該細胞はトゥレット症候群および/または関連異常に罹病している患者から得られる。
【００２０】
OATP-JまたはSLC21A15としても知られているOATPRP-4遺伝子は、“solute carrier family”である21A (SLC21A) 遺伝子ファミリーに分類される。SLC21A遺伝子ファミリーには、9個の異なるヒト遺伝子が含まれる：SLC21A2, SLC21A3, SLC21A6, SLC21A8, SLC21A9, SLC21A11, SLC21A12, SLC21A14, およびSLC21A15である。OATPRP-4遺伝子はSLC21A15遺伝子と同一である。
【００２１】
さらに、ヒトOATPRP-4遺伝子の相同物は動物で同定されている。とくに、Slc21a遺伝子と呼ばれるヒトOATPRP-4遺伝子に対する遺伝子相同物が、ラットで11個、マウスで8個同
定されている。
【００２２】
ヒトの9個のSLC21A遺伝子およびげっ歯類のそれらの相同物、19個は、有機アニオン輸
送ポリペプチドに翻訳される。それらのポリペプチドは、輸送される基質に幅広い広がりをもつ“membrane solute carrier”のグループである。これまでに同定されたOATPの一
部だけが、機能、構造、および遺伝子レベルにおいて詳細に特徴づけられている。これらのトランスポーターファミリー（transporter family）の重要な構成員のいくつかは、げっ歯類およびヒトの肝臓で選択的に発現されるが、大部分のOATPは血液脳関門、脈絡叢、肺、心臓、腸、腎臓、胎盤、および精巣を含む多様な組織で発現される。
【００２３】
一つまたはより多くの遺伝子および/または遺伝子生産物が修飾されている、すなわち
破壊されているトランスジェニック動物モデルまたはヒトもしくは動物の細胞株を発生させる技術は、当業者によく知られている。修飾された、すなわち破壊されたOATPRP-4遺伝子を有するトランスジェニック動物モデル、またはヒトもしくは動物の細胞株を生産するいずれの認知されたプロトコルも、本発明の目的にとり好適である。トランスジェニック動物としては、これだけに限定されないが、ラット、マウス、蠕虫、ハエのように、動物界の一部に分類されるあらゆる動物を挙げることができる。その上、トランスジェニック動物、または疾患や異常の罹患患者から得られる初代細胞培養株の培養株は、当業者によく知られ実施されている。それゆえ、破壊されたヒトOATPRP-4遺伝子相同物および/また
はその遺伝子の一以上の生産物タンパク質が発現しているトランスジェニック動物、あるいはTSおよび/または関連異常に罹患している患者からの初代細胞培養株を発生させるた
めに当業界で実施されているいずれのプロトコルも、本発明の目的にとり好適である。
【００２４】
本明細書で用いられる“破壊された”という用語は、これらだけに限定されないが、改変された遺伝子発現、転座、置換、欠失、付加、突然変異、切断、改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質の修飾、あるいはこれらのいずれかの組み合
わせといった、OATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物および/もしくはその一以上
の生産物タンパク質のいかなる修飾をも含んでいる。より詳細には、この破壊にはt(6 ; 8)の染色体の均衡転座を、さらに具体的には第8染色体上の8q13バンドに配置されうるt(6
; 8)の染色体の均衡転座を挙げることができる。さらに、間接的なOATPRP-4遺伝子およ
び/またはその遺伝子の生産するタンパク質の破壊には、これらだけに限定されないが、
その他の遺伝子やタンパク質によるOATPRP-4遺伝子の発現、翻訳、または機能の影響を挙げることができる。
【００２５】
アンチセンス技術もまた、OATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物および/もしく
はその一以上のタンパク質生成物に干渉する、すなわち破壊するために用いることができる。たとえば、本明細書で例示されているポリヌクレオチドによってコードされる遺伝子の逆相補鎖を用いる細胞または生物の形質転換は、鎖のコサプレッション（strand co-suppression）および標的遺伝子（OATPRP-4遺伝子またはその相同物など）の転写抑制（silencing）または阻害といった結果になり得る。
【００２６】
遺伝子の発現に干渉する治療プロトコルおよびアンチセンス療法の実施方法は、当業者によく知られている。
さまざまな生物体において、アンチセンスRNAまたはdsRNAを媒介とする干渉（RNAiまたはdsRNA）を利用することにより生物遺伝子機能を特異的に阻害するための能力は、分子
生物学の分野ではよく知られている（たとえばC. P. Hunter, (1999) Current Biology, 9: R440-442; Hamiltonら, (1999) Science, 286: 950-952; および S. W. Ding, (2000)
Current Opinions in Biotechnology, 11 : 152-156、これら全部は参照により本明細書中に取り込まれる）。二重鎖干渉RNA（dsRNAiもしくはdsRNA）またはRNA媒介干渉（RNAi
）である干渉RNAは、典型的には、標的遺伝子と同一または相同であるポリヌクレオチド
配列、あるいは標的遺伝子もしくはその断片の配列と相補的なポリヌクレオチド配列と直接的もしくは間接的に連結している遺伝子の断片を含有している。DsRNAiは、リンカー配列（linker sequence）は必ずしも必要でないけれども、二つのポリヌクレオチド配列が
お互いに折りたたみ合い、ハイブリダイズしたりすることができるように、十分な長さのポリヌクレオチド・リンカー配列を含有していてもよい。このリンカー配列は、立体障害の影響を限定的なものとし、dsRNAi分子が形成できるように、RNAiのアンチセンス鎖とセンス鎖とを有意に離すように設計され、dsRNAi分子のハイブリダイズ部分にある配列とハイブリダイズすべきではない。この遺伝子転写抑制メカニズムの特異性はきわめて高いようであり、他の遺伝子に影響を与えずに標的にした遺伝子のみの発現を妨げる。したがって、OATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物を破壊するための本発明による一つの手法は、OATPRP-4遺伝子と同一または相同のポリヌクレオチド配列あるいはその相同物を含有するdsRNAかRNAiのいずれかを利用する試料および方法の使用を含む。“dsRNAi”、“RNAi”および“siRNA”という用語は、本明細書では特に記載しない限り相互交換可能に使用される。
【００２７】
標的遺伝子の断片と同一のヌクレオチド配列を含むRNAは、破壊に向いている；しかし
、標的配列に対応して挿入、欠失、点変異をもつRNA配列もまた、阻害に用いられ得る。
配列同一性は、当業界に知られている配列比較および整列アルゴリズム（Gribskov and Devereux, Sequence Analysis Primer, Stockton Press, 1991,ならびにここに引用されて
いる文献を見よ）、ならびにたとえば初期設定パラメータを用いるBESTFITソフトウェア
プログラム（たとえばウィスコンシン大学Genetic Computingグループ）で実行されてい
るSmith-Watermanアルゴリズムにより、ヌクレオチド配列同士の百分率差異（percent difference）を計算することによって、最適化することができる。あるいはRNAの重複部分
は、標的遺伝子転写物の断片とハイブリダイズすることができるヌクレオチド配列であると機能的に定義できるかもしれない。
【００２８】
RNAはin vivoかin vitroで合成することができる。細胞に内在するRNAポリメラーゼはin vivoで転写を媒介することができ、あるいはクローン化RNAポリメラーゼはin vivoもしくはin vitroで転写に用いられ得る。
【００２９】
in vivoの導入遺伝子からの転写または発現形成物について、調節領域（たとえばプロ
モーター、エンハンサー、サイレンサー、スプライスのドナーおよびアクセプター、ポリアデニル化）は、一以上のRNA鎖の転写に用いることができる；前記プロモーターはバキ
ュロウィルスのような既知の導入可能なプロモーターでもよい。破壊は、器官、組織または細胞のタイプにおける特定の転写を標的としてもよい。RNA鎖はポリアデニル化される
こともされないこともある：RNA鎖は細胞の翻訳装置によってポリペプチドに翻訳される
こともされないこともある。RNAは、手動的または自動的な反応で化学的または酵素的に
合成してもよい。そのRNAは、細胞のRNAポリメラーゼまたはバクテリオファージのRNAポ
リメラーゼ（たとえばT3、T7、SP6）で合成することができる。発現形成物の使用および
生産は、当業界で知られている（たとえば, WO 97/32016 ; U. S. Patent No. 5,593,874; 5,698,425; 5,712,135; 5,789,214; および 5,804,693; ならびにそれらに引用されて
いる文献を見よ）。RNAは、もし化学的にまたはin vitroの酵素的合成によって合成され
るならば、細胞内への導入に先立って精製してもよい。たとえば、RNAは溶媒もしくは樹
脂を用いた抽出、沈殿、電気泳動、クロマトグラフィーまたはそれらの組み合わせによって、混合物から精製することができる。あるいはまた、サンプル処理による損失を避けるために、RNAは精製純化を行わないまま、または最小限の精製で用いられるかもしれない
。RNAは保存のために乾燥したり水溶液に溶解してもよい。その水溶液は、アニーリング
および/または二重鎖安定化の促進のために、緩衝液や塩を含むのがよい。
【００３０】
好ましくは、そして最も好都合には、dsRNAiはOATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物についてポリヌクレオチド配列全体に対してターゲットとすることができる。本発明の好ましいRNAi分子は、OATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物のポリヌクレオチドと相同性が極めて高いかまたは同一である。
【００３１】
本明細書での“破壊されていない”という用語は、上述した一以上の修飾すなわち一以上の破壊を受けていないOATPRP-4遺伝子またはOATPRP-4遺伝子相同物について言う。
TSおよび関連異常の徴候および症状には、これだけに限らないが、顔面チック、頭部の痙攣、肩の痙攣、腕の運動、足蹴運動（kicking leg movements）、汚語症、コプロプラ
キシア、独語症（grunting）、低フラストレーション耐性（poor frustration tolerance）、激高（temper fits）、自傷（self mutilation）、妄想（obsessive thought）、強
迫性行動（complusive behavior）、集中力不足（poor attention span）、学習欠陥、多動、および不眠症が挙げられる。
【００３２】
治療作用のある化合物および/または低分子を含有する組成物は、非経口、経口、腹腔
内を含むさまざまな経路によって患者に投与される。非経口的投与には以下のような経路が挙げられる：静脈内；筋肉内；組織実質内；動脈内；皮下；眼球内；頭蓋内；心室内；滑液嚢内；経皮、肺吸入、眼、舌下、頬側を含む経上皮的；眼、皮膚、眼球、直腸、吹送または噴霧による鼻からの吸引を含む局所的。
【００３３】
経口的に投与される化合物または低分子は、硬殻もしくは軟殻ゼラチンカプセルに収めるか、または錠剤に圧縮することができる。活性化合物または低分子はまた、賦形剤と合わされ、錠剤、頬側の錠剤、トローチ剤、カプセル剤、小袋剤（sachets）、甘味入り錠
剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエファー、および類似物の摂取可能な形態で用いることができる。活性化合物を含有する医薬混合物は、粉末剤または顆粒剤、水性液体もしくは非水性液体の溶液または懸濁液あるいは油／水型または水／油型の乳剤の形態をとることができる。
【００３４】
錠剤、トローチ、丸剤、カプセル剤および類似物はまた、たとえばトラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチのような結合剤；リン酸二カルシウムのようなゼラチン賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸および類似物のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤；ショ糖、乳糖、サッカリンのような甘味料、または香料を含有することができる。投与単位の形態がカプセル剤のときは、上記材料に加えて、液体基剤を含有することができる。その他のさまざまな材料が、被覆剤として、あるいは投与単位の物理的形態を別のものに変えるために、存在することができる。たとえば、錠剤、丸剤またはカプセル剤は、シェラック、糖またはその両方で被覆することができる。シロップまたはエリキシル剤は、活性化合物、甘味料としてのショ糖、保存料としてのメチルもしくはプロピルパラベン、着色料および香料を含有することができる。何らかの投与単位の形態を調合するために使用されるどの材料も、医薬的に純粋で、実質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物は徐放性の調剤物および処方製剤中に取り込め得る。
【００３５】
活性化合物は非経口的または腹腔内的にCNSに投与される。遊離の塩基または医薬的に
許容される塩としての化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような好適な界面活性剤の混じった水で調合される。分散液は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびそれらの混合物ならびに油脂の中で調合される。通常の貯蔵または使用の条件下で、微生物の成長または化学的劣化を防ぐために、これらの調合製剤は保存剤および/
または酸化防止剤を含有することができる。
【００３６】
注射での使用に好適な医薬形態は、無菌の注射可能な溶液もしくは分散液を即席で調合するために、これだけに限定されないが、無菌の水溶液または分散液および無菌の粉末を含有する。すべての場合において、その形態は無菌で、注射器に容易に入れられる程度の流動性を有しなくてはならない。それは製造および保存の状況下で安定しており、細菌や菌類のような微生物の汚染的活動から保護されていなくてはならない。薬剤基剤は、たとえばこれだけに限定されないが、水、エタノール、（グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールのような）ポリオール、それらの好適な混合物または植物油を含有する、溶媒または分散媒がなり得る。適切な流動性は、たとえばレシチンのような被覆剤を使用すること、（分散液の場合は）必要な粒子サイズを維持することならびに界面活性剤を使用することで維持することができる。微生物の活動の抑止は、たとえばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール（thimerosal）、および類似物などの、さまざまな抗細菌性または抗菌性物質によってなし得る。多くの場合、たとえば糖または塩化ナトリウムといった等張化物質を含有することが好ましい。
【００３７】
無菌の注射可能な溶液は、活性化合物を必要な量だけ、適当な溶剤中で、必要ならば上で列挙したその他の多様な成分とともに混ぜ合わせ、その後フィルターで滅菌して調合される。分散液は一般的に、多様な無菌の活性化合物を、基礎となる分散媒、ならびに上で列挙した中のその他の任意の成分を含有する無菌の賦形剤と混ぜ合わせて調合される。無菌の注射可能な溶液を調合するための無菌粉末の場合、真空乾燥または凍結乾燥が好ましい調製方法である。
【００３８】
鼻や頬腔への投与に好適な医薬組成物は、これだけに限定されないが、エアゾール剤、アトマイザ噴霧器およびネブライザ噴霧器のような自己推進式の噴霧処方製剤が挙げられる。
【００３９】
本発明の治療化合物は、単体または医薬的に許容される基剤とともに、あるいは医薬的に許容される塩として哺乳類に投与することができ、その分量は化合物の溶解度および化学的特質、選択された投与経路ならびに標準的な医薬プラクティスによって決定される。
【００４０】
上記組成物は、本明細書中で議論されている病気や異常の治療に通常利用されているその他の医薬的に活性な化合物をも含有させることができる。本化合物およびその他の医薬的に活性な化合物を用いた治療は、同時にまたは間欠的に行うことができる。
【００４１】
OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質は、その生産物タンパク
質が化合物の輸送に関わっていること、ニューロンで発現すること、ならびに組織中のホルモンの取り込みおよび分散に顕著な役割を果たすかもしれないことから、TSおよび発育異常についての該当物質である。染色体の損傷、遺伝的多型（genetic variation）もし
くは突然変異、または改変された転写後および/または翻訳後の遺伝子生産物タンパク質
の修飾による直接的な、あるいはその他の遺伝子もしくはタンパク質によるOATPRP-4の発現、翻訳または機能に対する影響を通じた間接的な、この遺伝子および/またはその一以
上の生産物タンパク質の破壊もしくは修飾が、TS、OCD、発育異常、学習障害、ADHDおよ
び関連障害の出現に関与していることが、本明細書中に示されている。
【００４２】
染色体の均衡転座の物理地図もしくは転写地図は、疾病遺伝子のクローニングのための効果的な戦略を構成することができる。文献には異常の病因について重大な遺伝子を、異常が生じている個人に発生している染色体上の切断点の特徴を明らかにすることにより同定している先例が存在する（De Baerら, 2000）。この研究手法は最近、深刻な発声およ
び言語障害の進展に関わっている遺伝子の同定を可能にしている（Laiら, 2000, 2001）
。この戦略の使用は、異種混交性（heterogeneity）および/または不明瞭な伝播の態様（TSの場合があてはまるようだが）のために、連鎖分析が複雑な病気において特定の遺伝子座を同定することに功を奏しないとき、特に有用かもしれない。
【００４３】
OATPRP-4遺伝子および/またはその一以上の生産物タンパク質における修飾、すなわち
破壊が、TSおよび/または関連異常の素因に関わっているという決定は、以下に述べる互
いに関係しない二家族の調査の結果であり、TSと診断された個々の人達に染色体のt(6; 8)均衡転座が発生していた。これらの家族のうちの一つに、学習および行動における困難
に、その転座の伝播が関係していた；もう一つの家族では一人の親をたどることができないため伝播は立証できず、転座は新たに発生した可能性がある。第8染色体上の切断点は
、両方の家族でq13バンド内において発生しており、この領域の一つまたは複数の遺伝子
がTS表現型に寄与しているかもしれないことを示唆している。連鎖が存在することと、TSの家族および個人に第8染色体が関わっていることを示唆する細胞遺伝学的なデータは、
さらにこの仮説を裏書している。
【実施例】
【００４４】
この研究の実験プロトコルは以下のように要約される。
1. 細胞遺伝学
末梢血サンプルは二つの家族（A-TSおよびB-TSと称する）の個々の人たちから、インフォームドコンセントの下に採取された。標準的な細胞遺伝学的プロトコルに従って調製された末梢血のリンパ球から、GTG（トリプシン−ギムザによるG分染法）分析および細胞有糸分裂中期の染色体の核型分析が着手された。追加した細胞生物学的蛍光In Situハイブ
リダイゼーション法（FISH）研究は、標的染色体の全長にわたってユニーク配列とハイブリダイズするよう設計された、ビオチン標識COATASOME 6およびジゴキシゲニン標識COATASOME 8の全染色体プローブ（total chromosome probes）（Oncor社）との組み合わせを使用した。第6および第8染色体用のアルファサテライト領域セントロメア特異的プローブ（Alpha-satellite region centromere-specific probes）（Oncor社）もまた利用された。分析は、複数帯域のバンドパスフィルタ（multiband band pass filter）を備えた蛍光顕微鏡、冷却デジタルCCDカメラならびにキャプチャおよび画像化システムのスマートキャ
プチャ（Vysis社）を使用して実行された。
2. YACの同定
切断点の調査において、8q13領域の近位および遠位の境界に位置している2個の遺伝子
マーカー（D8S510およびD8S88）を、入手可能なNCBIデータベースから選択した。次に、
これらのマーカーの1つを各々が含有する2個のYACを同定するために、CEPH（Centre d'Etude du Polymorphism Humain）データベースを走査した。選択されたYAC 918D9およびYAC
820C9と呼ばれるYACは、それぞれ約24cM隔たっていた。NCBIの地図によると、D8S286遺
伝マーカーはD8S510およびD8S88マーカーのおよそ中間に位置し、そのためCEPHデータベ
ースからYAC 789F10を同定するために利用された。
3. YAC DNAの調製
YACは標準的な条件下で増殖され、DNAを標準的な手法（Shermanら, 1986）により抽出
および精製した。高分子量のDNAプラグを、Carle and Olson（1985）に記述された方法で調製した。それぞれのプラグ（22マイクロリットル）は、8×106個の細胞を含有していた。YAC DNAは、0.8%の低融点SeaPlaque GTG（FMC, Rockland, ME）アガロースゲル中で36
時間、90〜120秒ごとに切り替えなが4.5Vで行ったPFGEによって、酵母DNAから分離された。YACに対応するバンドを切り出し、Vivaspin濃縮器（Sartorius社）を使用して精製した。その後YAC DNAは、引き続き行われた、細胞有糸分裂中期の展開におけるFISH分析にプ
ローブとして使用された。
4. YAC In Situハイブリダイゼーション
YAC FISHは、6;8転座を有する患者の植物性血球凝集素（PHA）に刺激されたリンパ球からの細胞有糸分裂中期染色体に対してGenome System社により実施された。つまり、YACクローンである918D9、820C9および789F10に由来する精製DNAは、ニックトランスレーショ
ンによってジゴキシゲニン11 dUTP（Boehringer-Mannhein社, Indianiapolis, IN, USA）で標識化された。この標識プローブを、ビオチン標識第8染色体セントロメア特異的プロ
ーブと結合させ、60%のホルムアミド、10%のデキストラン硫酸、および2X SSCを含有するハイブリダイゼーション溶液で、最終濃度20ナノグラム/マイクロリットルに再懸濁した
。このプローブ・ハイブリダイゼーション混合物は、37℃での夜通しのハイブリダイゼーションに先立って変性させた。ハイブリダイゼーションのスライドを、アビジン・テキサスレッド（Vector Laboratories社）に加えてフルオレセイン抗ジゴキシゲニン抗体とと
もにインキュベートし、つづいてDAPIによる対比染色法、蛍光顕微鏡観察およびImage Pro Plusを用いた撮影をすることにより特異的標識シグナルの検出および分析を行った。
【００４５】
8q13領域の境界に位置する二つのYAC（918D9, 820C9）は、上述のようにして同定され
た。これらのYACは、FISH分析のためのプローブとして使用された。図3Aおよび3Bに示さ
れるように、正常な第8染色体および派生的な（(der): 転座、挿入またはその他の再配列の結果として結合した二以上の染色体からのセグメントからなる異常染色体）第8染色体
の両方へのYAC 918D9のハイブリダイゼーションは、このYACが切断点の近位であることを示した；つまりYAC 820C9の正常第6染色体およびもう一つの染色体（おそらくder(6)）とのハイブリダイゼーションは、YAC 820C9が転座の切断点に対し遠位であることを示した
。
【００４６】
YAC 918D9およびYAC 820C9の間に配置されているYAC 789F10は、図3Cに示されるように、次のFISHプローブとして利用された。YAC 789F10のシグナルは1つの第8染色体マーカー
と同じ位置にあるだけであり、YAC 820C9のようにこのYACが第8染色体の切断点の遠位に
位置し、調査下の領域を14cMまで狭めたことを示している。
5. 臨床的および細胞遺伝学的分析
家族A：家族Aの発端者（A-TS301）は、7番目の妊娠で出産した正規分娩男児である；母親は、最初の子供から発端者までの間に5回流産していた。この発端者は、まっすぐに座
ったのが11ヶ月のとき、歩いたのが18ヶ月のときというように、初期には成長の節目が遅れていたことが報告されている。
【００４７】
発育評価は小児科への紹介があって4ヵ月後、4歳の時に初めて行われた。関係者らは、彼の力のない発音および遅れた言葉遣いに加えて、著しく貧弱で細い筋肉運動の協調に注目した。この時点で、彼の身長は102cm、体重は15.876kg、そして頭部の外周は53.8cmで
あった。相対的に大頭蓋症であり、触知できる冠状縫合のある前頭部の突起を有して、頭蓋顔面の不均衡があった。彼は発育遅延、中枢神経性の低緊張、閉塞的な扁桃腺の肥大、およびアデノイド症による肥大と診断された。さらに、左肩の上がった非器質的な脊柱湾曲症、著しい運動機能障害およびストレス下において目の瞬きを伴う時折の顔面チックが記録された。検査では、原発性筋肉疾患または進行性の神経性異常の証拠はない。彼は16歳の時に、DSM-IVの判断基準に従ってTSと診断された。そのとき、彼は異常な頭部の痙攣、口のチック、（時間とともに増減する）目の瞬き、唾吐き（spitting）および咳払い（throat-clearing）発声を見せた。TSに加えて、彼は時折の不安とともに強迫神経的な行
動を示し、また学習困難の異常を患っていた。
【００４８】
発端者より8歳上の彼の異父姉妹（A-TS302）は、DSM-IVの判断基準に従って、18歳の時にTSおよび強迫神経的な行動があると診断された。23歳の時には、彼女はDSM-IVの判断基準によって統合失調症と診断された。
【００４９】
末梢血のリンパ球の定式化された細胞遺伝学的分析は、母子ともに同じ、図2Aの部分的な核型に示されているような染色体の均衡転座t(6; 8) (p23: ql3)を保有していることを明らかにした。母親はTSと診断されたことはなかった。しかし彼女は、ほぼ確実な学習障害とともに子供として尋常でない振る舞いを見せ、軽い臨床上の症状が無視されていた崩壊家庭の環境を経験したことを思い出した。家族Aの家系は図1Aに示されたとおりである
。
【００５０】
家族B：家族Bの発端者（B-TS301）は3番目の妊娠で出産した正規分娩男児である；母親は最初の子供と発端者の間に1回流産していた。彼の出生時の体重は3.568kg、身長は49.53cmであった。彼の幼年期は、生後9ヶ月までには自然消散した胃食道反射（gastroesophageal reflex）によって、面倒なものであった。発育上の節目は普通であったと報告され
ており、たとえば彼は生後8〜9ヶ月の時に立ち上がり、11ヶ月の時に歩いた。
【００５１】
2歳半の時までに、彼は同じ幼児仲間に対して執拗に攻撃的であり、直情的および活動
過多であると評された。彼は4歳の時にADHDと診断された。6歳の時にチックが始まり、最初は顔面のものであったが、そのあと上半身に及んだ。発声チックは、汚語症（制御できない、しばしば強迫観念的な卑猥な言葉の使用）およびコプロプラキシア（卑猥な動作）を伴い、喘ぎおよび動物のようなものだと記述された。彼は、TS、ADHDおよび異常反抗（oppositional disorder）と診断された。さらに、背丈の低い異形的な容貌、内眼角贅皮
、短い人中、大頭蓋症（mascocephaly）気味、第5指の末端指節骨関節の欠落を伴う手足
の指の異常および視覚運動の機能不全を含む、表現型的な異常が顕在化した。彼は不安に満ちていて、声が聞こえると供述した。10歳の時に、彼は自殺を試みた。家族の履歴は、彼の父親がアルコール中毒で攻撃的であること、ならびに彼の母親が子供の時に多動でペモリンを入手していたことを指摘している。さらに母親は、学校での学習に困難があったと述べている。母方の祖父はアルコール中毒で、学問の習得に問題があったことが報告さ
れている。
【００５２】
家族Bの発端者（TS301）だけが、6,8転座；図2Bに示すように、第8染色体上のq13バン
ドに生じている切断点および第6染色体上のq24にある切断を見せている構成員である。彼の母および母方の異父妹は、正常な核型を見せている。しかし父は追跡することができず、このため核型分析に供することはできなかった。したがって、この発端者において新たに転座が発生したとする可能性は排除されなかった。家族Bの家系は図1Bに示されたとお
りである。
6. 単離された染色体の地図作製
YACの918D9およびYACの789F10間の領域の詳細な地図の作製が行われ、これには転座を
有する個々の人間の一人から単離された正常および派生的染色体が必要とされた。家族A
の発端者（A-TS301）が、これらの単離される染色体の試料提供者に選ばれた。家族Aにおける6p8q転座に起因する派生的な染色体は、家族Bにおける派生的染色体が示すよりも大
きい、正常な第6および第8染色体のサイズ不一致を示し、このことはそれらの単離と精製を促進した。第6染色体、第8染色体、派生的第6染色体および派生的第8染色体は、患者のリンパ球に由来するGC標識化染色体のフローサイトメトリ分析法によって単離された（FAST systems）。
【００５３】
YAC 918D9およびYACの789F10間の領域を分析するために、増幅配列マーカー（Amplicon
markers）のD8S1616, D8S1748, D8S553, D8S1767, D8S1629, D8S1646, D8S1795, D8S530, D8S1059, D8S533, D8S1060, D8S1776, D8S2324, D8S1704が選択された。発端者の正常
染色体および派生的染色体におけるこれらのマーカーのPCR増幅（ゲノムDNAを追加的なポジティブコントロールとして用いた）は、ゲノムDNA、正常な第8染色体および片方もしくはもう片方の派生的染色体の増幅産物を生み出した。この方法体系によって、家族Aにお
ける切断点の近位および遠位（それぞれ）に位置するD8S1646およびD8S1795マーカーが同定され、関心領域を約1Mbまで狭めた。これらの2つのマーカーは目下、両家族における切断点をカバーする単一のクローンを同定する目的で、CEPH YACおよびBACライブラリーを
スクリーニングするために用いられている。このようにして、その領域の発現配列タグ（EST）を伴う遺伝子への調査に焦点を合わせている。
【００５４】
上記の研究において記載された事柄は、第6および第8染色体が関わる染色体の均衡転座を保有し、かつ互いに無関係のTS患者達ではあるが、さらなる研究によって、t(6; 8) (p23: ql3)およびt(6; 8 q24: ql3)として細胞遺伝学的に定義することができる。上記転座には同じ8ql3バンドが含まれていることから、物理地図の作製は第8染色体の切断点領域
に焦点が合わされた。これは病因として重要な遺伝子の部位を標識するかもしれないためである。多数の独立した研究は、TSの遺伝子座を第8染色体上に示唆しており、よってこ
の仮説を裏付けている。関心を向ける領域は、TS家族のゲノムスキャンで同定された2つ
の連鎖ピーク（linkage peaks）間に横たわっている。第8染色体上の切断の地点が、TS表現型に寄与するこの領域内にある遺伝子または他の遺伝子エレメントを破壊したという可能性をさらに支持するものである。その上、上記家族の一つは、（TSの徴候の広がりと関連した）幼児期異常の表現型の伝播を示しているようである。
【００５５】
TSと同時に起きている特定の染色体の切断点にあるかもしれない重要性を調べるための一つのアプローチは、破壊領域中にTSにおいて役割を果たすかもしれない同定済みの遺伝子があるのかないのかを決定することである。トゥレット症候群の表現型に関与しているかもしれない（たとえばドーパミン作動性、ノルアドレナリン作動性およびニコチン作動性のレセプターまたはサブユニットをコードしている遺伝子）とすでに言われている異なる遺伝子ファミリーの中に、我々が関心を向ける領域に位置しているものはなかった。
【００５６】
YACマッピングを用いて、関心のある部位はYACの 918D9および789F10間の8q13内の14cM
に絞り込まれ、その後に続く単離された染色体の緻密なマッピングによって切断点が1Mb
領域の中にまでさらに正確にされた。
【００５７】
該領域にある遺伝子マーカーを、転座を有する患者から単離された染色体（正常な第6
染色体、正常な第8染色体、派生的な第6染色体、派生的な第8染色体）のDNAをポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって増幅するために用いて、関係のない2家族についてのその後の調査は、t(6; 8)転座の切断点に最も近く隣接する2つの遺伝子マーカーを決定した。これには、正常第8染色体および派生的な第8染色体上の近位のマーカーの積極的な増幅を用いて、正常な第6染色体および派生的な第6染色体上の遠位のマーカーを必要とした。このことが、切断点の領域を100kbの遺伝的距離にまで確度を高める結果となり、転座の切断点
が両方の家族で発生している第8染色体の領域にかかっているバクテリア人工染色体（BAC）を同定することを可能にした。このBAC断片についての制限酵素分解、サブクローニン
グおよびそれに続くDNA配列決定は、関心領域にOATPRP4遺伝子が存在することを明らかにした。つぎに、オリゴヌクレオチドプライマーが設計されたが、これを用いてPCRに対し
てOATPRP4遺伝子のどちらの末端でもフラグメントが増幅される。この特別に設計された
オリゴヌクレオチドプライマーを、患者から単離した正常および派生的な第8染色体に適
用することにより、OATPRP4遺伝子が転座によって破壊されたことが決定された。
【００５８】
本明細書中で記載される態様は、例示の目的のためだけのものであること、そのことを考慮して、多様な修正または変更が当業者に示唆されるとともに、本発明の意図および範囲のうちに含まれることが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】図1は、家族A-TS (A)および家族B-TS (B)の家系図の一部である。
【図２】図2は、GTG (G)バンドの核型の一部であり、家族A-TS t(6; 8) (p23; ql3) (A)、および家族B-TS t(6; 8) (q24; ql3) (B)の、正常ならびに派生した第8および第6染色体を示している。矢印は切断点（breakpoint）を指している。
【図３】図3は、発端者(家族A)の細胞有糸分裂中期の染色体に対するYAC 918D9、YAC 820C9およびYAC 789F10クローンの蛍光in situハイブリダイゼーションである。
【図１】
2006505273.tif 000002
【図２】
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【図３】
2006505273.tif 000004
【国際調査報告】
2006505273.tif 000005