(57)【要約】本発明は、非ワクチン治療方法と共に、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）調製物又はα−２−マクログロブリン（α２Ｍ）調製物を投与することを含む、治療結果を改善する方法に関する。特に、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、癌又は感染性疾患の治療のための非ワクチン治療法と併せて投与する。本発明の実施に際し、抗原分子と非共有結合又は共有結合したＨＳＰ（限定するものではないが、例えばｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０及びｇｐ９６など）単独又はそれらの組み合わせ、あるいは抗原分子と非共有結合又は共有結合したα２Ｍ、を含む調製物を、非ワクチン治療法と併用して投与する。
2006501147.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における癌の治療方法であって、
（ａ）該被験体に、チロシンキナーゼ阻害剤を含む少なくとも１つの治療法を施すステップ、及び
（ｂ）精製された熱ショックタンパク質調製物を投与するステップ、
を含む上記方法。
【請求項２】
癌が慢性骨髄性白血病である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
癌が慢性期にある、請求項２記載の方法。
【請求項４】
癌が軟部組織肉腫である、請求項１記載の方法。
【請求項５】
癌がチロシンキナーゼレセプターｃ−ｋｉｔを発現する消化管間質腫瘍である、請求項１記載の方法。
【請求項６】
チロシンキナーゼ阻害剤がチロホスチン（tyrphostin）である、請求項１記載の方法。
【請求項７】
チロシンキナーゼ阻害剤が、メシル酸イマチニブ、ハービマイシンＡ、ゲニステイン、アーブスタチン、及びラベンダスチンＡからなる群より選択されるものである、請求項１記載の方法。
【請求項８】
チロシンキナーゼ阻害剤がメシル酸イマチニブである、請求項１記載の方法。
【請求項９】
メシル酸イマチニブが精製されたものである、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
被験体が熱ショックタンパク質調製物を使用しない少なくとも１つの治療法による処置に対して非応答性であった、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
精製された熱ショックタンパク質調製物が、１以上の熱ショックタンパク質−ペプチド複合体を含み、該熱ショックタンパク質がｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｐ９６又はカルレティキュリンである、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
精製された熱ショックタンパク質調製物がｈｓｐ７０を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
精製された熱ショックタンパク質が治療対象の被験体の自己由来のものである、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
被験体がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項１５】
治療法が、熱ショックタンパク質調製物の最初の投与前に施される、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
治療法が、熱ショックタンパク質調製物の投与と同時に施される、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
治療法が、熱ショックタンパク質調製物の最初の投与後に施される、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
被験体における慢性骨髄性白血病の治療方法であって、
（ａ）該被験体に、メシル酸イマチニブを含む少なくとも１つの治療法を施すステップ、及び
（ｂ）精製された熱ショックタンパク質調製物を投与するステップ、
を含む上記方法。
【請求項１９】
被験体がヒトである、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
メシル酸イマチニブが毎日投与される、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
メシル酸イマチニブが一日当たり４００ｍｇ投与される、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
メシル酸イマチニブが一日当たり６００ｍｇ投与される、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
メシル酸イマチニブが各日用量当たり４００ｍｇで二日間で８００ｍｇ投与される、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】
メシル酸イマチニブが熱ショックタンパク質調製物の被験体への最初の投与の前に投与される、請求項１８記載の方法。
【請求項２５】
メシル酸イマチニブが熱ショックタンパク質調製物の投与と同時に投与される、請求項１８記載の方法。
【請求項２６】
メシル酸イマチニブが熱ショックタンパク質調製物の被験体への最初の投与の後に投与される、請求項１８記載の方法。
【請求項２７】
一日当たり２００ｍｇ〜８００ｍｇのメシル酸イマチニブの投与を受けている被験体においてＣＭＬを治療する方法であって、該被験体に、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含む熱ショックタンパク質調製物を投与することを含む、上記方法。
【請求項２８】
ｈｓｐ７０−ペプチド複合体が該被験体から得た腫瘍細胞より単離されたものである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
熱ショックタンパク質調製物が１週間に１回投与される、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
精製された熱ショックタンパク質調製物を含有する第１容器と、メシル酸イマチニブを含有する第２容器とを含むキット。
【請求項３１】
熱ショックタンパク質調製物がｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含む、請求項３０記載のキット。
【請求項３２】
精製された熱ショックタンパク質調製物及びメシル酸イマチニブを含む医薬組成物。
【請求項３３】
熱ショックタンパク質調製物がｈｓｐ−ペプチド複合体を含む、請求項３２記載の医薬組成物。
【請求項３４】
被験体における癌の治療方法であって、
（ａ）癌を患う被験体に精製された熱ショックタンパク質調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験者にワクチンではない治療法を施すステップ、
を含む上記方法。
【請求項３５】
治療法が化学療法、放射線療法、生物学的療法又は免疫療法である、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
ワクチンではない第２治療法を施すステップをさらに含む、請求項３４記載の方法。
【請求項３７】
熱ショックタンパク質調製物が、熱ショックタンパク質−ペプチド複合体の集団を含むものであり、該ペプチドが、該被験体のその種の癌の腫瘍特異的抗原又は腫瘍関連抗原の抗原性を示すものである、請求項３４記載の方法。
【請求項３８】
ＨＳＰ調製物が該被験体のその種の癌の癌組織から得られた熱ショックタンパク質−ペプチド複合体の集団を含むものである、請求項３４記載の方法。
【請求項３９】
熱ショックタンパク質−ペプチド複合体の集団が該被験体の癌組織から得られたものである、請求項３８記載の方法。
【請求項４０】
熱ショックタンパク質調製物が治療法を施す前に投与される、請求項３４記載の方法。
【請求項４１】
熱ショックタンパク質調製物が、治療法を施さずに投与する場合には癌の治療に有効ではない量で投与するものである、請求項３４記載の方法。
【請求項４２】
被験体がＨＳＰ調製物を使用しない治療法による処置に対して非応答性であった、請求項３４記載の方法。
【請求項４３】
治療法がシクロホスファミドである、請求項３４記載の方法。
【請求項４４】
サイトカインの投与をさらに含む、請求項３４記載の方法。
【請求項４５】
治療法がＩＬ−１２である、請求項３６記載の方法。
【請求項４６】
癌が、ヒトの肉腫、癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、慢性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、又はＨ鎖病である、請求項３４記載の方法。
【請求項４７】
被験体がヒトである、請求項３４記載の方法。
【請求項４８】
熱ショックタンパク質調製物が１以上のＨＳＰ−ペプチド複合体を含むものであり、ＨＳＰがｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｈｓｐ１１０、ｇｐ９６、ｇｐｒ１７０又はカルレティキュリンである、請求項３４記載の方法。
【請求項４９】
被験体における感染性疾患の治療方法であって、
（ａ）感染性疾患を患う被験体に、精製された熱ショックタンパク質調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体に、ワクチンではない治療法を施すステップ、
を含む上記方法。
【請求項５０】
被験体における癌の予防方法であって、その必要がある被験体に、精製された熱ショックタンパク質調製物とワクチンではない治療法を投与することを含む上記方法。
【請求項５１】
被験体における感染性疾患の予防方法であって、その必要がある被験体に、精製された熱ショックタンパク質調製物とワクチンではない治療法を投与することを含む上記方法。
【請求項５２】
癌の治療が必要な被験体において治療効果を改善する方法であって、
（ａ）該被験体に、（ｉ）その種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す、又は（ｉｉ）該被験体の癌組織から単離した、ＨＳＰ−ペプチド複合体の集団を含む精製された熱ショックタンパク質調製物を最適以下の量で投与するステップ、並びに
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体に、上記癌の治療に有効な量の１以上の治療法を施すステップ、
を含み、ステップ（ｂ）を行わない場合には、上記最適以下の量が上記癌の治療に有効ではなく、またステップ（ａ）を行わない場合には、上記癌は上記治療法に応答しないものである、上記方法。
【請求項５３】
治療法がシクロホスファミド及びＩＬ−１２である、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
非ワクチン治療法を受けている被験体における該非ワクチン治療法を用いた治療の効果を改善する方法であって、該被験体にＨＳＰ調製物を投与することを含む、上記方法。
【請求項５５】
治療法が、抗生物質、抗ウイルス薬、抗菌薬、化学療法剤、放射線療法、生物学的治療剤、又は免疫療法剤である、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
被験体における癌の治療方法であって、
（ａ）該被験体に、該被験体の癌組織から得られた非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体の集団を含む精製されたＨＳＰ調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体に癌化学療法剤を投与するステップ、
を含む上記方法。
【請求項５７】
ステップ（ｂ）がサイトカインの投与をさらに含む、請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
薬剤及びサイトカインを同日に投与し、ＨＳＰ調製物を別日に投与する、請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
薬剤がシクロホスファミドであり、サイトカインがＩＬ−１２である、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
被験体がヒトである、請求項５６記載の方法。
【請求項６１】
ＨＳＰ調製物が薬剤の１日以上前に投与される、請求項５６記載の方法。
【請求項６２】
ＨＳＰ調製物が薬剤の少なくとも２週間前に投与される、請求項５６記載の方法。
【請求項６３】
（ａ）第１容器に、哺乳動物の癌組織から得られた非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体の集団を含む精製されたＨＳＰ調製物、
（ｂ）第２容器に、精製された癌化学療法剤を含む組成物、並びに
（ｃ）第３容器に、精製されたサイトカインを含む組成物、
を含むキット。
【請求項６４】
被験体における癌の治療方法であって、
（ａ）癌を患う被験体に精製されたα２Ｍ調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体にワクチンではない治療法を施すステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６５】
被験体における癌の治療方法であって、
（ａ）該被験体に、該被験体の癌組織から得られた非共有結合α２Ｍ−ペプチド複合体の集団を含む精製されたα２Ｍ調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体に癌化学療法剤を投与するステップ、
を含む上記方法。
【請求項６６】
被験体における感染性疾患の治療方法であって、
（ａ）感染性疾患を患う被験体に精製されたα２Ｍ調製物を投与するステップ、及び
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体にワクチンではない治療法を施すステップ、
を含む、上記方法。
【請求項６７】
被験体における癌の予防方法であって、その必要がある被験体に、精製されたα２Ｍ調製物とワクチンではない治療法を投与することを含む上記方法。
【請求項６８】
癌の治療が必要な被験体において治療効果を改善する方法であって、
（ａ）該被験体に、（ｉ）その種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す、又は（ｉｉ）該被験体の癌組織から単離した、α２Ｍ−ペプチド複合体の集団を含む精製されたα２Ｍ調製物を最適以下の量で投与するステップ、並びに
（ｂ）ステップ（ａ）に続いて、該被験体に、上記癌の治療に有効な量の１以上の治療法を施すステップ、
を含み、ステップ（ｂ）を行わない場合には、上記最適以下の量が上記癌の治療に有効ではなく、またステップ（ａ）を行わない場合には、上記癌は上記治療法に応答しないものである、上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、米国特許出願第１０／１３１，９６１号（２００２年４月２５日出願）の一部継続出願である、米国特許出願第１０／３２２，３１２号（２００２年１２月１６日出願）の継続出願であり、これらはそれぞれ全体を参照により本明細書に組み入れる。
【０００２】
１．導入
本発明は、非ワクチン治療方法と共に、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）調製物又はα−２−マクログロブリン（α２Ｍ）調製物を投与することを含む、治療結果を改善する方法に関する。特に、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、癌又は感染性疾患の治療のための非ワクチン治療法と併せて投与する。本発明の実施に際し、抗原分子と非共有結合又は共有結合したＨＳＰ（限定するものではないが、例えばｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０及びｇｐ９６など）単独又はそれらの組み合わせ、あるいは抗原分子と非共有結合又は共有結合したα２Ｍ、を含む調製物を、非ワクチン治療法と併用して投与する。
【背景技術】
【０００３】
２．発明の背景
本明細書における参考文献の引用又は検討は、それらが本発明に対する先行技術であると自認するものと解釈されるべきではない。
【０００４】
２．１．免疫応答
生物の免疫系は、病原体又はその他の有害な因子に対する２種類の応答、すなわち、体液性応答及び細胞性応答により反応する（Alberts, Bら、1994, Molecular Biology of the Cell. 1195-96）。休止Ｂ細胞が、抗原により活性化されて、増殖し、抗体分泌細胞に成熟すると、これらは、特有の抗原結合部位を有する抗体を産生及び分泌する。この抗体分泌反応は、体液性応答として知られている。これに対し、Ｔ細胞の多様な応答は、集合的に細胞媒介性免疫反応と呼ばれている。Ｔ細胞には、２つの主要クラス、すなわち、細胞傷害性Ｔ細胞とヘルパーＴ細胞がある。細胞傷害性Ｔ細胞は、ウイルス又はその他の細胞内微生物に感染した細胞を直接死滅させる。対照的に、ヘルパーＴ細胞は、その他の細胞の応答を刺激するのを助ける：例えば、ヘルパーＴ細胞は、マクロファージ、樹状細胞及びＢ細胞を活性化するのを助ける（Alberts, Bら、1994, Molecular Biology of the Cell. 1228参照）。細胞傷害性Ｔ細胞及びヘルパーＴ細胞のいずれも、標的細胞内部の外来タンパク質抗原の分解によって産生されるペプチド断片の形態の抗原を認識することから、両者とも、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に依存する。該分子は、これらのペプチド断片と結合し、これらを細胞表面に運搬して、そこでこれらをＴ細胞に提示する（Alberts, Bら、1994, Molecular Biology of the Cell. 1228参照）。ＭＨＣ分子は、一般に、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上に多量にみいだされる。
【０００５】
２．２．慢性骨髄性白血病
慢性骨髄性（骨髄性、骨髄球性、顆粒球性）白血病（ＣＭＬ）は、白血球の過剰産生を特徴とする血液及び骨髄の癌である。ＣＭＬは、慣用的な薬剤で処置した場合に３〜５年の平均持続期間を有する慢性期と、約３〜６ヶ月の持続期間の急速又は急性期と、不可避的な死の結果を特徴とする。最初は、症状及び兆候が全く又はほとんどないことが特徴の慢性期である。しかしながら、大部分の場合には、全身症状及び異常な身体的知見、例えば髄外異常（骨髄芽細胞腫など）が最終的には生じる。
【０００６】
ＣＭＬは、全白血病患者の７％〜２０％を占め、一般人口の１０万人に１〜２人が罹患していると推定されている。The American Cancer Societyは、本年度の米国におけるＣＭＬの新たな罹患が約４，４００であると推定している。
【０００７】
ＣＭＬは、特定の細胞遺伝学的異常、すなわちフィラデルフィア（Ｐｈ＋）染色体により生じ、これは、分化多能性造血幹細胞のクローン性骨髄増殖性障害の原因となる（Faderlら, 1999, New England J. Med. 341 (3): 164-172）。Ｐｈ＋染色体は９番染色体及び２２番染色体の長腕の間の平衡転座によって生じ、チロシンキナーゼ活性が改変された異常融合タンパク質を発現するｂｃｒ／ａｂｌキメラ遺伝子をもたらす。
【０００８】
ＣＭＬの慢性期にある患者の現在の治療の選択肢としては、ブスルファン（ＢＵＳ）、ヒドロキシウレア（ＨＵ）、インターフェロン（ＩＦＮ）に基づく治療計画、ｂｃｒ／ａｂｌに対する特異的キナーゼ阻害剤、又は骨髄／幹細胞移植（ＢＭＴ）が含まれる（Silverら, 1999, Blood 94 (5): 1517-1536）。数年前までは同種ＢＭＴが全ての患者にとって選択肢となる治療法であった。その理由は、かかる疾患の天然の経過に変化をもたらすと考えられた唯一の治療法であったためである。研究によって、移植した患者の少なくとも半数は治療後５〜１０年生存することが示された。しかしながら、この実施には依然としてドナーが少ないということと、移植片対宿主疾患及び感染症などの移植に関連する合併症が顕著であるという問題があった。ＩＦＮに基づく治療計画もまたＣＭＬの天然の経過に影響を及ぼすものである。しかしながら、ＩＦＮに基づく治療計画単独では、平均約２０ヶ月の生存というわずかな利益をもたらすにすぎない（Chronic Myeloid Leukemia Trialists' Collaborative Group, 1997, J. Natl. Cancer Inst. 89 (21): 1616-20）。
【０００９】
ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（グリーベック；メシル酸イマチニブ，ＮｏｖａｌｔｉｓＴＭ）などの特異的ｂｃｒ／ａｂｌ阻害剤は、フェーズＩ臨床試験において有望であることが示されている（Drucker及びLydon, 2000, J. Clin. Invest. 105(1) :3-7；Dazziら, 2000, Leukemia 14: 419-426；Hellman, Principles of Cancer Management: 第６版, 2001；DeVitaら編, J.B. Lippencott Company, Philadelphia, pp.2443-2444も参照されたい。これらはその全文が参照により本明細書に組み入れられる）。ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）はまた、シグナル伝達阻害剤５７１、ＳＴＩ−５７１、及びＣＧＰ ５７１４８として知られている。フェーズＩＩ試験に基づいて（Drukerら, 2001, New England J. Med. 344 (14): 1031-1037、及びDrukerら, 2001, New England J. Med. 344 (14): 1038-1042）、ＦＤＡは、ＣＭＬの以下の３つの期、すなわち標準的な治療（インターフェロン）に対してもはや応答しない慢性期、急性期、及び骨髄急性転化期を治療するためのＧｌｅｅｖｅｃＴＭの使用を承認した。しかしながら長期間にわたる効力及び毒性については不明な点がある。さらに、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ処置患者においては副作用、例えば浮腫、肝毒性及び血液毒性などが観察されている（Physician's Desk Reference(第５６版, 2002)）。さらに、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ抵抗性についてもすでに報告されている（Le Coutreら, 2000, Blood 95 (5): 1758-1766）。従って、当該分野においては、ＣＭＬを治療するための改良方法が必要とされている。
【００１０】
２．３．熱ショックタンパク質
熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）は、本明細書中では互換的にストレスタンパク質とも称し、以下の基準を満たすあらゆる細胞タンパク質の中から選択することができる。またこれは、細胞がストレス刺激に暴露された際にその細胞内濃度が増大するタンパク質であり、他のタンパク質又はペプチドと結合可能であり、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）又は低ｐＨの存在下又は酸性条件下において結合タンパク質又はペプチドを放出することができ、さらに上記の性質のいずれかを有する任意の細胞タンパク質と少なくとも３５％の相同性を示すものである。ＨＳＰには、ストレスにより誘導されるタンパク質の、構成的に発現される保存された細胞相同タンパク質が含まれる。従って、ストレスタンパク質／ＨＳＰには、上記性質を有する３つのファミリーのメンバーと少なくとも３５％〜５５％、好ましくは５５％〜７５％、最も好ましくは７５％〜８５％のアミノ酸同一性を有する、他のタンパク質、ミューテイン、類似体及び変異体が含まれる。
【００１１】
最初のストレスタンパク質は、ＨＳＰとして同定されたものである。その名が意味するように、ＨＳＰは熱ショックに応答して細胞により合成される。現在までに、ＨＳＰにはファミリーメンバーの分子量に基づいて３つの主要なファミリーがある。これらのファミリーは、ｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０及びｈｓｐ９０と呼ばれ、この数値は、そのストレスタンパク質のおおよその分子量（キロダルトン）を反映している。上記ファミリーの多くのメンバーは、他のストレス刺激、例えば、栄養欠乏、代謝破壊、酸素ラジカル及び細胞内病原体による感染などに応答して誘導されることが見出されている（Welch, May 1993, Scientific American 56-64; Young, 1990, Annu. Rev. Immunol. 8:401-420; Craig, 1993, Science 260:1902-1903; Gethingら, 1992, Nature 355:33-45; 及びLindquistら, 1988, Annu. Rev. Genetics 22:631-677を参照のこと。この開示内容は参照により本明細書に組み入れられる）。これら３つのファミリーに属するｈｓｐ／ストレスタンパク質は、本発明の実施に用いることができると考えられる。
【００１２】
ＨＳＰは、多量に存在し、可溶性で、かつ高度に保存されている細胞内分子である。ＨＳＰは、細胞内シャペロンとして、タンパク質の成熟の多くの生化学経路に関与し、ストレス時及び正常な細胞ホメオスタシスにおいて機能する。多くのストレスは細胞タンパク質の三次元構造又はその折りたたみを破壊しうる。修正されないまま誤って折りたたまれたタンパク質が存在すると、細胞を最終的に死滅させる沈殿を形成する。ＨＳＰは、これらの損傷を受けたタンパク質に結合し、それらが適切なコンホメーションに再生（再折りたたみ）されるのを補助する。正常（ストレスを受けていない）細胞のホメオスタシスにおいては、ＨＳＰは細胞の代謝に必要とされる。ＨＳＰは、新たに合成されたポリペプチドの折りたたみを補助し、それゆえ他のタンパク質との未成熟な相互作用を防止する。また、ＨＳＰは細胞の種々の細胞小器官へのタンパク質の輸送を補助する。
【００１３】
主要なＨＳＰは、ストレスをうけた細胞中に非常に高レベルで蓄積するが、これらはストレスをうけていない細胞においては低〜中程度のレベルで存在する。例えば、誘導性の高い哺乳動物ｈｓｐ７０は、通常の温度ではほとんど検出されないが、熱ショックをうけた細胞においては最も活発に合成されるタンパク質となる（Welchら, 1985, J. Cell. Biol. 101:1198-1211）。対照的に、ｈｓｐ９０及びｈｓｐ６０タンパク質は、通常の温度で全てではないが大部分の哺乳動物細胞中に多量に存在し、熱によりさらに誘導される（Laiら, 1984, Mol. Cell. Biol. 4:2802-10；van Bergen en Henegouwenら, 1987, Genes Dev. 1:525-31）。
【００１４】
ＨＳＰは、免疫及び抗原特性を有することがわかっている。特定の腫瘍から単離したｇｐ９６又はｐ８４／８６でマウスを免疫感作すると、これらのマウスは、その特定の腫瘍に対して免疫性を獲得するが、抗原的に異なる腫瘍に対しては免疫性を獲得しない（Srivastava, P.K.ら、1988, Immunogenetics 28:205-207；Srivastava, P.K.ら、1991, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 167：109-123）。さらに、ｈｓｐ７０は、それが単離された腫瘍に対しては免疫を誘発するが、抗原的に異なる腫瘍に対しては誘発しないことが明らかにされた。しかし、ペプチドを欠失したｈｓｐ７０は、その免疫原活性を喪失することがわかった（Udono, M.及びSrivastava, P.K.、1993, J. Exp. Med. 178:1391-1396）。これらの研究結果から、熱ショックタンパク質はそれ自体では免疫原性ではないが、抗原ペプチドとの非共有結合複合体を形成し、この複合体が、抗原ペプチドに対する特異的免疫を誘発する可能性があることが示唆される（Srivastava, P.K.、1993, Adv. Cancer Res. 62:153-177；Udono, H.ら、1994, J. Immunol., 152:5398-5403；Suto, R.ら、1995, Science, 269:1585-1588）。最近、ｈｓｐ６０及びｈｓｐ７０が、単球、マクロファージ又は細胞傷害性Ｔ細胞による前炎症性サイトカイン類（ＴＮＦα及びＩＬ−６など）の産生を刺激することが見いだされた（Breloerら、1999, J. Immunol. 162:3141-3147；Chenら、1999, J. Immunol. 162:3212-3219；Ohashiら、2000, J. Immunol. 164:558-561；Aseaら、2000, Nature Medicine, 6:435-442；Todrykら、1999, J. Immunol. 163:1398-1408）。ｈｓｐ７０はまた、未成熟樹状細胞を標的化し、それらの抗原捕捉能を大きくすることが示されている（Todrykら、1999, J. Immunol. 163:1398-1408）。例えば細胞死などに起因する、ｈｓｐ６０及びｈｓｐ７０の放出又はそれらの発現の誘導は、免疫反応が誘起する必要があるシグナル伝達において役割を果たし得る（Chenら、1999, J. Immunol. 162:3212-3219；Ohashiら、2000, J. Immunol. 164:558-561；Todrykら、1999, J. Immunol. 163:1398-1408）。
【００１５】
癌の治療及び予防のための、癌細胞から精製されたＨＳＰ及びペプチドの非共有結合複合体の使用が米国特許第５，７５０，１１９号、同第５，８３７，２５１号及び同第６，０１７，５４０号に記載されている。
【００１６】
養子免疫療法において用いる目的で、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原提示細胞を感作するのにＨＳＰ−ペプチド複合体を用いることについては、米国特許第５，９８５，２７０号及び同第５，８３０，４６４号に記載されている。
【００１７】
ＨＳＰ−ペプチド複合体はまた、病原体感染細胞から単離することができ、ウイルスのような病原体や、細菌、原生動物、真菌及び寄生生物などのその他の細胞内病原体によって起こる感染の治療及び予防に用いることができる。米国特許第５，９６１，９７９号及び同第６，０４８，５３０号を参照されたい。
【００１８】
さらに、免疫原性ＨＳＰ−ペプチド複合体は、ＨＳＰと抗原ペプチドとのｉｎ ｖｉｔｒｏでの複合体形成により調製することもでき、このような複合体を癌及び感染性疾患の治療及び予防に使用することは、米国特許第５，９３５，５７６号及び同第６，０３０，６１８号に記載されている。癌及び感染性疾患の治療のために、所定の抗原と組み合わせて熱ショックタンパク質を使用することも、１９９７年２月２７日付けのＰＣＴ公報ＷＯ９７／０６８２１号に記載されている。
【００１９】
細胞溶解物からのＨＳＰ−ペプチド複合体の精製については既に記載されている。例えば、米国特許第５，７５０，１１９号及び同第５，９９７，８７３号に記載されている。
【００２０】
２．４．α２−マクログロブリン
α−マクログロブリンは、補体成分であるＣ３、Ｃ４及びＣ５をも含む構造的に関連したタンパク質のタンパク質スーパーファミリーのメンバーである。ヒト血漿タンパク質α（２）マクログロブリン（α２Ｍ）は、主にプロテイナーゼインヒビター並びに血漿性及び炎症性液性プロテイナーゼスカベンジャー分子として知られている７２０ｋＤａのホモ四量体タンパク質である（総説としては、Chu及びPizzo, 1994, Lab. Invest. 71: 792を参照されたい）。α（２）マクログロブリンは１４７４アミノ酸の前駆体として合成され、そのうちシグナル配列として機能する最初の２３個が切り離されて１４５１アミノ酸の成熟タンパク質となる（Kanら, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82: 2282-2286）。
【００２１】
α（２）マクログロブリンは求核性アミノ酸側鎖を有するタンパク質及びペプチドに共有結合により無差別に結合し（Chuら, 1994, Ann. N.Y. Acad. Sci. 737: 291-307）、それらをα２Ｍ受容体（α２ＭＲ）を発現する細胞に標的化する（Chu及びPizzo, 1993, J. Immunol. 150: 48）。α２Ｍのα２Ｍ受容体への結合はα２ＭのＣ末端部分により仲介され（Holtetら, 1994, FEBS Lett. 344: 242-246）、その重要な残基が特定されている（Nielsenら, 1996, J. Biol. Chem. 271: 12909-12912）。
【００２２】
プロテイナーゼ活性の阻害について一般的に知られているように、α２Ｍは複数の結合部位で種々のプロテアーゼに結合する（例えばHallら, 1981, Biochem. Biophys. Res. Commum. 100(1): 8-16を参照されたい）。α２Ｍとプロテアーゼが相互作用すると、トランスフォーメーションと呼ばれる複雑な構造的再編成がおこる。これは、プロテイナーゼがチオエステルによって「トラップ」された後に、α２Ｍの「ベイト（bait; おとり）」領域内において開裂が起こる結果である。当該コンホメーション変化により受容体結合に必要な残基が露出し、α２Ｍプロテイナーゼ複合体がα２ＭＲに結合することが可能になる。メチルアミンは、プロテイナーゼにより誘導されたのと同様のコンホメーション変化と開裂を引き起こすことができる。この受容体に認識されないα２Ｍの未開裂の形態のものは、しばしば「遅延型」形態（ｓ−α２Ｍ）と称される。開裂した形態は「急速型」形態（ｆ−α２Ｍ）と称される（Chuら, 1994, Ann. N.Y. Acad. Sci. 737: 291-307に概説されている）。
【００２３】
プロテイナーゼ阻害機能のほかに、α２Ｍは、抗原と複合体を形成したときに、マクロファージのような抗原提示細胞に取り込まれてＴ細胞ハイブリドーマに提示されるその抗原の能力をｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて最大で２桁高め（Chu及びPizzo, 1994, Lab. Invest. 71: 792）、Ｔ細胞の増殖を誘導することができる（Osadaら, 1987, Biochem. Biophys. Res. Commun. 146: 26-31）ことが、研究により明らかになっている。更なる証拠により、α２Ｍと抗原との複合体形成は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて未処理脾臓細胞による抗体産生を高め（Osadaら, 1988, Biochem. Biophys. Res. Commun. 150: 883）、実験用ウサギ（Chuら, 1994, J. Immunol. 152: 1538-1545）及びマウス（Mitsudaら, 1993, Biochem. Biophys. Res. Commun. 101: 1326-1331）でのｉｎ ｖｉｖｏにおける抗体反応を誘起することが示唆されている。しかしながらこれらの研究は何れも、α２Ｍ−抗原複合体がｉｎ ｖｉｖｏにおいて細胞傷害性Ｔ細胞の応答を誘導することができるか否かを示すものではない。
【００２４】
α２Ｍは、抗原と複合体を形成することができ、それがα２ＭＲ（ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）又はＣＤ９１としても知られている）を介して抗原提示細胞（ＡＰＣ）に取り込まれる（ＰＣＴ／ＵＳ０１／１８０４７号を参照されたい。この出願はその全内容を参照により本明細書に組み入れる）。α２Ｍは、熱ショックタンパク質ｇｐ９６とα２ＭＲとの結合と直接競合する（Binderら, 2000, Nature Immunology 1(2), 151-154）。さらに、ｉｎ ｖｉｔｒｏで調製されたα２Ｍ−抗原ペプチド複合体は、動物に投与されると、該抗原分子に特異的な細胞傷害性Ｔ細胞応答を引き起こす（Binderら, 2001, J. Immunol. 166:49968-72）。従って、ｈｓｐ及びα２Ｍはいくつかの共通する機能的性質（例えばペプチドとの結合能、α２ＭＲによる認識と取り込み、細胞傷害性Ｔ細胞応答の刺激など）を有するため、α２Ｍは癌及び感染性疾患に対する免疫療法として有用となる可能性がある。
【発明の開示】
【００２５】
３．発明の概要
本発明は、一部において、ＨＳＰ調製物が非ワクチン治療法又は癌若しくは感染性疾患の治療のための治療法の治療効果を増強又は改善しうるという認識に基づいている。従って、本発明は、非ワクチン治療法と組み合わせてＨＳＰ調製物を投与することを含む方法及び組成物を包含する。また、非ワクチン治療法と組み合わせてα２Ｍ調製物を投与することを含む方法及び組成物を包含する。特に、本発明は、ＨＳＰ調製物若しくはα２Ｍ調製物単独の投与、又は非ワクチン治療法単独の施行よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療の方法及び組成物を包含する。ＨＳＰ又はα２Ｍの供与源は、好ましくは真核生物であり、最も好ましくは哺乳動物である。治療を受ける被験体は、好ましくは哺乳動物であり、例えば限定するものではないが、ペット動物（ネコ及びイヌなど）、野生動物（キツネ及びアライグマなど）、家畜及び家禽（ウマ、ウシ、ヒツジ、シチメンチョウ及びニワトリなど）、並びに任意のげっ歯類が含まれる。被験体は最も好ましくはヒトである。
【００２６】
本発明は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物のいずれかを、治療法の施行と組み合わせて投与することを含む、非ワクチン治療法の治療効果を改善する方法を提供する。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、非ワクチン治療法による治療計画に先行して、それと重複して及び／又はそれの後に一定期間にわたって投与することができる。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法を施すのと同時、その前又は後に投与することができる。治療法の例としては、限定するものではないが、抗生物質、抗ウイルス薬、抗菌性化合物、抗癌治療剤（例えば化学療法剤及び放射線）、並びに生物学的療法剤及び免疫療法剤）が含まれる。好ましい実施形態において、治療法は、癌の治療又は予防に有用である。特に好ましい実施形態において、治療法は、慢性骨髄性白血病又は軟部組織肉腫、例えば限定するものではないが、消化管間質腫瘍などの治療又は予防に有用である。別の好ましい実施形態において、治療法はＧｌｅｅｖｅｃＴＭである。
【００２７】
一実施形態において、本発明は、治療法又はＨＳＰ調製物単独の投与よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療方法を包含する。別の実施形態において、本発明は、治療法又はα２Ｍ調製物単独の投与よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療方法を包含する。本発明には、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物と共に治療法を施行することによって付加的効力又は付加的治療効果を有する方法が包含される。本発明はまた、治療効果が付加的よりも大きい相乗的効果を包含する。また、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物と共に治療法を施行することによって、望ましくない又は有害な作用が低減又は回避されることが好ましい。本発明により、特定の実施形態においては、非ワクチン治療法の用量を低減したり、又はその投与頻度を低減することができ、好ましくは患者のコンプライアンスを向上させ、治療を改善し、及び／又は望ましくない若しくは有害な作用を低減するものである。特定の実施形態において、化学療法又は放射線療法の用量が低減又は頻度が低減することにより、望ましくない作用を低減又は回避する。あるいは、ＨＳＰ調製物の用量及びα２Ｍ調製物の用量は、治療法と共に投与する場合には、低減するか又はその投与頻度が低減する。
【００２８】
一実施形態において、本発明は、ワクチンではない治療法を受けている被験体における治療効果を改善する方法を提供する。この方法は、熱ショックタンパク質調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物、又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物のいずれかを、治療法の施行前、それと同時又はその後に、被験体に投与することを含む。特定の実施形態においては、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法の治療利益を増強し、治療の効果を改善し得る。いかなる理論又は機序により制限されるものではないが、哺乳動物のＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の被験体への投与は、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増加及び／若しくは樹状細胞の成熟促進などにより被験体の非特異的免疫機構の応答性を増強したり、並びに／あるいは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数を上昇させることなどにより特異的免疫機構の応答性を増強しうる。好ましい特定の実施形態においては、ＨＳＰ調製物を治療法を施す前に投与する。別の好ましい実施形態においては、α２Ｍ調製物を治療法を施す前に投与する。
【００２９】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＰ調製物の投与の前、投与と同時又は投与後に被験体に非ワクチン治療法を施すことによる、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物の投与を受ける被験体における治療効果を改善する方法を提供する。特定の実施形態において、非ワクチン治療法はＨＳＰ調製物の治療利益を増強し、該治療の効果を改善しうる。
【００３０】
他の実施形態においては、本発明は、α２Ｍ調製物の投与の前、投与と同時又は投与後に被験体に非ワクチン治療法を施すことによる、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物の投与を受ける被験体における治療効果を改善する方法を提供する。特定の実施形態において、非ワクチン治療法はα２Ｍ調製物の治療利益を増強し、該治療の効果を改善しうる。
【００３１】
特定の実施形態において、治療法を施さないＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与、又はＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与を行わない治療法の施行は、治療上有効なものではない。特定の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法の量は、それ単独では治療上有効であるのに不十分な量で投与又は施行する。別の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法の両方又は少なくとも一方は、単独で投与した場合に治療上有効なものである。
【００３２】
種々の実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物を、癌若しくは感染性疾患の治療ための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性、又は感染因子の抗原の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチドを含む、すなわち、熱ショックタンパク質は、その複合体を得た癌細胞又は感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したものである。従って、一実施形態において、ＨＳＰ調製物の特異的免疫原性はＨＳＰに複合体化させたペプチド複合体に由来する。好ましい実施形態において、ＨＳＰ−ペプチド複合体は、癌組織、癌細胞又は感染組織などの抗原供与源から単離される。本発明の実施において、かかるＨＳＰ−ペプチド複合体は、好ましくは、個々の被験体の自己由来のもの、すなわちＨＳＰ調製物及び治療法の投与を受ける被験体の組織から得られたものであるが、これは必ずしも必要なわけではない（すなわち、個々の被験体の同種異形であってもよい）。
【００３３】
種々の他の実施形態において、本方法は、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物を、癌若しくは感染性疾患の治療ための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、α２Ｍ調製物は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性、又は感染因子の抗原の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含む、すなわち、α２Ｍは、その複合体を得た癌細胞又は感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したものである。従って、一実施形態において、α２Ｍ調製物の特異的免疫原性はＨＳＰに複合体化させたペプチドに由来する。好ましい実施形態において、α２Ｍ−ペプチド複合体は、癌組織、癌細胞又は感染組織などの抗原供与源から単離される。本発明の実施において、かかるα２Ｍ−ペプチド複合体は、好ましくは、個々の被験体の自己由来のもの、すなわちα２Ｍ調製物及び治療法の投与を受ける被験体の組織から得られたものであるが、これは必ずしも必要なわけではない（すなわち、個々の被験体の同種異形であってもよい）。
【００３４】
一実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、感染性疾患の治療のための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。そのような治療法は当技術分野で公知であり、限定するものではないが、抗生物質、抗ウイルス薬、抗菌薬、並びに生物学的療法剤及び免疫療法剤を含む。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、感染性疾患の因子の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。好ましくは、α２Ｍ調製物は、感染性疾患の因子の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。特定の実施形態において、非ワクチン治療法を受けている被験体におけるある種の感染性疾患の治療の効果は、当該種の感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したＨＳＰを含むＨＳＰ−ペプチド複合体を投与することにより改善される。好ましくは、ＨＳＰ−ペプチド複合体は、同じ感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍとの混合物として存在しない（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０１／２８８４０号、２００１年９月１５日出願を参照。その全文を参照により本明細書に組み入れる）。一実施形態において、ＨＳＰ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法は、ＨＳＰ調製物を投与する前に施行する。別の実施形態において、非ワクチン治療法を受けている被験体におけるある種の感染性疾患の治療の効果は、当該種の感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したα２Ｍを含むα２Ｍ−ペプチド複合体を投与することにより改善される。好ましくは、α２Ｍ−ペプチド複合体は、同じ感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍとの混合物として存在しない。一実施形態において、α２Ｍ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法は、α２Ｍ調製物を投与する前に施行する。
【００３５】
他の実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。かかる治療法としては、限定するものではないが、化学療法及び放射線療法、並びにホルモン療法、生物学的療法及び免疫療法が含まれる。好ましくは、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、癌の治療のための化学療法又は放射線療法を受けている被験体に投与する。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、治療対象の種の癌の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。調製物がα２Ｍ調製物である場合には、α２Ｍ調製物が治療対象の種の癌の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含むことが好ましい。従って、好ましい実施形態において、本発明は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したＨＳＰを含むＨＳＰ−ペプチド複合体、又はある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したα２Ｍを含むα２Ｍ−ペプチド複合体を用いた、ワクチンではない治療法を受けている被験体において癌治療の効果を改善する方法を提供する。特定の好ましい実施形態においては、かかるＨＳＰ−ペプチド複合体及びα２Ｍ−ペプチド複合体は、同種の癌の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍで希釈されたものではない。一実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与前に施行する。
【００３６】
種々の実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、抗癌剤と共に投与し、その抗癌剤とは、限定するものではないが、細胞毒性薬、抗分裂剤、チューブリン安定化剤、微小管形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アルキル化剤、ＤＮＡ相互作用剤、代謝拮抗剤、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗剤、ＤＮＡ代謝拮抗剤でありうる。特定の実施形態において、抗癌剤は化学療法剤である。
【００３７】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、癌の治療のための化学療法剤の投与を受けている被験体に投与する。別の好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、癌の治療のための化学療法剤の投与を受けている被験体に投与する。かかる化学療法剤は当技術分野で公知であり、限定するものではないが、以下のものが含まれる：メトトレキセート、タキソール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルビジン、エトポシド、カムパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、マイトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル及びドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、タキサン（ドセタキセル及びパクリタキセルなど）、ロイコボリン、レバミソール、イリノテカン、エストラムスチン、エトポシド、ニトロソウレア（カルムスチン及びロムスチンなど）、ビンカアルカロイド類、白金化合物、マイトマイシン、ゲムシタビン、ヘキサメチルメラミン、トポテカン、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＳＴＩ−５７１、又はＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）、ハービマイシンＡ、ゲニステイン、アーブステイン、及びラベンダスチンＡ。
【００３８】
好ましい実施形態において、上記各方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための２−フェニルアミノピリミジン系の薬剤の投与を受けている被験体に投与することを含むものである。より好ましくは、癌の治療のためにＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（すなわちメシル酸イマチニブ）の投与を受けている被験体である。
【００３９】
別の特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、癌の治療のために放射線療法を受けている被験体に投与する。放射線療法に関して、放射線は、γ線又はＸ線でありうる。この方法は、放射線療法、例えば遠隔照射放射線療法、放射性同位体（Ｉ１２５、パラジウム、イリジウム）、放射性同位体（ストロンチウム８９など）の間質移植、胸部放射線療法、腹腔内Ｐ−３２放射線療法、並びに／又は腹式及び骨盤部全放射線療法などを含む癌の治療を包含する。放射線療法の一般的な概説については、Hellman, Chapter 16: Principles of Cancer Management: Radiation Therapy,第６版,2001, DeVitaら編, J.B. Lippencott Company, Philadelphiaを参照のこと。好ましい実施形態において、放射線治療は、照射を遠隔照射源から行う、遠隔照射放射線療法又は遠隔療法として行う。種々の好ましい実施形態において、放射線治療は、放射線照射源を癌細胞又は腫瘍塊の近傍の体内に配置する、体内治療又は近接照射法として行う。
【００４０】
別の実施形態において、上記各方法は、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物を、癌の治療のための治療法の組み合わせを受けている被験体に投与することを含むものである。別の実施形態において、上記各方法は、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための治療法の組み合わせを受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、ＨＳＰ調製物及びα２Ｍ調製物はそれぞれ、治療対象の種の癌の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体及びα２Ｍ−ペプチド複合体をそれぞれ含む。かかる一実施形態においては、ＨＳＰ調製物は、生物学的療法、好ましくはサイトカインと組み合わせて化学療法を受けている被験体に投与する。別のかかる実施形態においては、α２Ｍ調製物は、生物学的療法、好ましくはサイトカインと組み合わせて化学療法を受けている被験体に投与する。種々の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、Ｌ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＮＦ−γ、ＩＮＦ−α、ＳＬＣ、内皮単球活性化タンパク質−２（ＥＭＡＰ２）、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−３β、又はＭＨＣ遺伝子（ＨＬＡ−Ｂ７など）からなる群より選択される。さらに、他のサイトカインの例としては、ＴＮＦファミリーの他のメンバー、例えば限定するうものではないが、ＴＮＦ−α関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦ−α関連活性化誘導性サイトカイン（ＴＲＡＮＣＥ）、アポトーシスのＴＮＦ−α関連弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＬＴ−α、Ｌｕ−β、ＯＸ４ＯＬ、ＣＤ４ＯＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１、ＴＮＦＳＦ１６、ＴＮＦＳＦ１７、及びＡＩＴＲ−Ｌ、又はそれらの機能的部分が含まれる。ＴＮＦファミリーの一般的な概説については、例えば、Kwonら, 1999, Curr. Opin. Immunol. 11: 340-345を参照されたい。一実施形態において、ＨＳＰ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法はＨＳＰ調製物を投与する前に施行する。
【００４１】
好ましい実施形態において、精製されたＨＳＰ調製物を、癌の治療のためにシクロホスファミドとＩＬ−１２の組み合わせの投与を受けている被験体に投与する。別の好ましい実施形態において、精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のためにシクロホスファミドとＩＬ−１２の組み合わせの投与を受けている被験体に投与する。
【００４２】
別の実施形態において、上記方法は、癌又は感染性疾患の予防のために有用である。特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、非ワクチン治療法と組み合わせて被験体に投与し、ある種の癌又は感染性疾患を患うリスクを低減する。他の特定の実施形態において、上記方法は、癌若しくは感染性疾患に対する遺伝的素因若しくは非遺伝的素因を有する被験体、又は感染性疾患の因子に対して曝露される被験体に、予防的手段として、非ワクチン治療法の施行と組み合わせてＨＳＰ調製物を投与することを包含する。さらなる実施形態において、本発明はまた、上記実施形態のそれぞれを、α２Ｍ調製物を非ワクチン治療法と組み合わせて投与する場合に適用することができる。
【００４３】
本発明の方法及び組成物は、治療を受けていない患者に有用なだけではなく、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物を使用しない治療法に対して又は治療法を使用しないＨＳＰ／α２Ｍ調製物に対して部分的又は完全に応答しない患者の治療にも有用である。種々の実施形態において、本発明は、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法のいずれか又は両方の投与又は施行を含む治療処置に対して非応答性である又は当該治療処置では難治性であることが示された又はその可能性がある患者における疾患又は障害の治療又は予防に有用な方法及び組成物を提供する。本発明はまた、他の形態の医療的処置を以前に受けていた又は現在受けている患者に対するＨＳＰ／α２Ｍ調製物及び治療法の投与又は施行を含む方法及び組成物を包含する。
【００４４】
本発明の方法及び組成物において使用するＨＳＰ調製物は、好ましくは精製されたものであり、何らかの分子に結合していない遊離ＨＳＰ、及びＨＳＰと別の分子（例えばペプチド）との分子複合体を含みうる。ＨＳＰ−ペプチド複合体は、ペプチドに共有結合又は非共有結合したＨＳＰを含む。本発明の方法は、被験体への投与の前に、ＨＳＰと任意の特異的抗原又は抗原性ペプチドとの共有結合又は非共有結合を必要としてもよいし又は必要としなくてもよい。ペプチド（１種若しくは複数）は、治療対象の感染性疾患若しくは障害又は特定の癌に関連していなくてもよいが、好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物は、それぞれ治療対象の感染性疾患の因子の抗原、又は特定種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す複合体を含む。より好ましくは、感染性疾患の治療に関して、ＨＳＰ調製物は、感染性疾患を引き起こす感染因子（又はその抗原性を示すその非感染性変異体）に感染した細胞から単離された非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。より好ましくは、ある種の癌の治療に関して、ＨＳＰ調製物は、患者に由来する（自己由来）又は由来しない（同種異系）、当該種の癌又はその転移癌の癌組織から単離された非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。従って、本発明の目的のため、ＨＳＰ調製物は、他の分子（例えばペプチド）と結合していない又は結合しているＨＳＰを含む。ＨＳＰは、好ましくは精製されたものである。ＨＳＰ調製物は、ＨＳＰを含む粗製細胞溶解物を含んでもよく、その溶解物の量は１００〜１０８細胞等価物に相当する。ＨＳＰは、大部分の細胞供与原から、ＨＳＰと非共有結合した種々のペプチドの複合体の集団として簡便に精製することができる。ＨＳＰは、低ｐＨ及び／若しくはアデノシン三リン酸への曝露又は当技術分野で公知のほかの方法により非共有結合ペプチドから分離することができる。
【００４５】
本発明の方法及び組成物において使用するα２Ｍ調製物は、好ましくは精製されたものであり、何らかの分子に結合していない遊離α２Ｍ、及びα２Ｍと別の分子（例えばペプチド）との分子複合体を含みうる。α２Ｍ−ペプチド複合体は、ペプチドに共有結合又は非共有結合したα２Ｍを含む。本発明の方法は、被験体への投与の前に、α２Ｍと任意の特異的抗原又は抗原性ペプチドとの共有結合又は非共有結合を必要としてもよいし又は必要としなくてもよい。ペプチド（１種若しくは複数）は、治療対象の感染性疾患若しくは障害又は特定の癌に関連していなくてもよいが、好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、それぞれ治療対象の感染性疾患の因子の抗原、又は特定種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す複合体を含む。より好ましくは、感染性疾患の治療に関して、α２Ｍ調製物は、感染性疾患を引き起こす感染因子（又はその抗原性を示すその非感染性変異体）に感染した細胞から単離された非共有結合α２Ｍ−ペプチド複合体を含む。より好ましくは、ある種の癌の治療に関して、α２Ｍ調製物は、患者に由来する（自己由来）又は由来しない（同種異系）、当該種の癌又はその転移癌の癌組織から単離された非共有結合α２Ｍ−ペプチド複合体を含む。従って、本発明の目的のため、α２Ｍ調製物は、他の分子（例えばペプチド）と結合していない又は結合しているα２Ｍを含む。ＨＳＰは、好ましくは精製されたものである。α２Ｍ調製物は、α２Ｍを含む粗製細胞溶解物を含んでもよく、その溶解物の量は１００〜１０８細胞等価物に相当する。α２Ｍは、大部分の細胞供与原から、α２Ｍと非共有結合した種々のペプチドの複合体の集団として簡便に精製することができる。α２Ｍは、低ｐＨ及び／若しくはアデノシン三リン酸への曝露又は当技術分野で公知のほかの方法により非共有結合ペプチドから分離することができる。
【００４６】
種々の実施形態において、ＨＳＰ及びα２Ｍの供与源は、好ましくは真核生物であり、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。従って、本発明の方法により使用されるＨＳＰ調製物は、真核生物ＨＳＰ、哺乳動物ＨＳＰ及びヒトＨＳＰを含む。α２Ｍ調製物は、真核生物α２Ｍ、哺乳動物α２Ｍ及びヒトα２Ｍを含む。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物が由来する真核生物の供与源、及びＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与を受ける被験体はそれぞれ同種であることが好ましい。
【００４７】
一実施形態において、ＨＳＰ調製物の特異的免疫原性は、熱ショックタンパク質と複合体化したペプチドによるものである。従って、種々の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、熱ショックタンパク質が特異的抗原供与源に由来するペプチドと複合体化した、熱ショックタンパク質ペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、ＨＳＰタンパク質調製物は、自己由来の熱ショックタンパク質−ペプチド複合体を含む。別の好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物は、その熱ショックタンパク質の由来する癌細胞の抗原性ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む。特定の実施形態において、抗原は腫瘍特異的抗原（すなわち、腫瘍細胞においてのみ発現する）である。別の実施形態において、抗原は腫瘍関連抗原（すなわち腫瘍細胞において比較的過剰発現する）である。また別の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、その熱ショックタンパク質の由来する感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む。
【００４８】
別の実施形態において、α２Ｍ調製物の特異的免疫原性は、α２Ｍと複合体化したペプチドによるものである。従って、種々の実施形態において、α２Ｍ調製物は、α２Ｍが特異的抗原供与源に由来するペプチドと複合体化した、α２Ｍペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、α２Ｍタンパク質調製物は、自己由来のα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。別の好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、そのα２Ｍの由来する癌細胞の抗原性ペプチドと複合体化したα２Ｍを含む。特定の実施形態において、抗原は腫瘍特異的抗原（すなわち、腫瘍細胞においてのみ発現する）である。別の実施形態において、抗原は腫瘍関連抗原（すなわち腫瘍細胞において比較的過剰発現する）である。また別の実施形態において、α２Ｍ調製物は、そのα２Ｍの由来する感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したα２Ｍを含む。
【００４９】
また本発明には、少なくとも１種の非ワクチン治療法とＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を投与又は施行することを含む治療方法及び送達方法、医薬組成物及び製剤、並びにかかる医薬組成物を含むキットが包含される。
【００５０】
４．図面の説明
図１は、第７節に記載した臨床プロトコールの概要である。この概要は、ＨＳＰ−ペプチド複合体でのワクチン接種の前、その間及びその後に行った全ての身体的検査、血液検査、Ｘ線検査及び骨髄検査を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５１】
５．発明の詳細な説明
本発明は、一部において、ＨＳＰ調製物が非ワクチン治療法又は癌若しくは感染性疾患の治療のための治療法の治療効果を増強又は改善しうるという認識に基づいている。従って、本発明は、非ワクチン治療法と組み合わせてＨＳＰ調製物を投与することを含む方法及び組成物を包含する。また、非ワクチン治療法と組み合わせてα２Ｍ調製物を投与することを含む方法及び組成物を包含する。特に、本発明は、ＨＳＰ調製物若しくはα２Ｍ調製物単独の投与、又は非ワクチン治療法単独の施行よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療の方法及び組成物を包含する。ＨＳＰ又はα２Ｍの供与源は、好ましくは真核生物であり、最も好ましくは哺乳動物である。治療を受ける被験体は、好ましくは哺乳動物であり、例えば限定するものではないが、ペット動物（ネコ及びイヌなど）、野生動物（キツネ及びアライグマなど）、家畜及び家禽（ウマ、ウシ、ヒツジ、シチメンチョウ及びニワトリなど）、並びに任意のげっ歯類が含まれる。被験体は最も好ましくはヒトである。
【００５２】
本発明は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物のいずれかを、治療法の施行と組み合わせて投与することを含む、非ワクチン治療法の治療効果を改善する方法を提供する。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、非ワクチン治療法による治療計画に先行して、それと重複して及び／又はそれの後に一定期間にわたって投与することができる。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法を施すのと同時、その前又は後に投与することができる。治療法の例としては、限定するものではないが、抗生物質、抗ウイルス薬、抗菌性化合物、抗癌治療剤（例えば化学療法剤及び放射線）、並びに生物学的療法剤及び免疫療法剤）が含まれる。好ましい実施形態において、治療法は、癌の治療又は予防に有用である。特に好ましい実施形態において、治療法は、慢性骨髄性白血病又は軟部組織肉腫、例えば限定するものではないが、消化管間質腫瘍などの治療又は予防に有用である。別の好ましい実施形態において、治療法はＧｌｅｅｖｅｃＴＭである。
【００５３】
一実施形態において、本発明は、治療法又はＨＳＰ調製物単独の投与よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療方法を包含する。別の実施形態において、本発明は、治療法又はα２Ｍ調製物単独の投与よりも良好な治療プロフィールをもたらす治療方法を包含する。本発明には、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物と共に治療法を施行することによって付加的効力又は付加的治療効果を有する方法が包含される。本発明はまた、治療効果が付加的よりも大きい相乗的効果を包含する。また、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物と共に治療法を施行することによって、望ましくない又は有害な作用が低減又は回避されることが好ましい。本発明により、特定の実施形態においては、非ワクチン治療法の用量を低減したり、又はその投与頻度を低減することができ、好ましくは患者のコンプライアンスを向上させ、治療を改善し、及び／又は望ましくない若しくは有害な作用を低減するものである。特定の実施形態において、化学療法又は放射線療法の用量が低減又は頻度が低減することにより、望ましくない作用を低減又は回避する。あるいは、ＨＳＰ調製物の用量及びα２Ｍ調製物の用量は、治療法と共に投与する場合には、低減するか又はその投与頻度が低減する。
【００５４】
一実施形態において、本発明は、ワクチンではない治療法を受けている被験体における治療効果を改善する方法を提供する。この方法は、熱ショックタンパク質調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物、又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物のいずれかを、治療法の施行前、それと同時又はその後に、被験体に投与することを含む。特定の実施形態においては、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法の治療利益を増強し、治療の効果を改善し得る。いかなる理論又は機序により制限されるものではないが、哺乳動物のＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の被験体への投与は、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増加及び／若しくは樹状細胞の成熟促進などにより被験体の非特異的免疫機構の応答性を増強したり、並びに／あるいは、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞数を上昇させることなどにより特異的免疫機構の応答性を増強しうる。好ましい特定の実施形態においては、ＨＳＰ調製物を治療法を施す前に投与する。別の好ましい実施形態においては、α２Ｍ調製物を治療法を施す前に投与する。
【００５５】
別の実施形態において、本発明は、ＨＳＰ調製物の投与の前、投与と同時又は投与後に被験体に非ワクチン治療法を施すことによる、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物の投与を受ける被験体における治療効果を改善する方法を提供する。特定の実施形態において、非ワクチン治療法はＨＳＰ調製物の治療利益を増強し、該治療の効果を改善しうる。
【００５６】
他の実施形態においては、本発明は、α２Ｍ調製物の投与の前、投与と同時又は投与後に被験体に非ワクチン治療法を施すことによる、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物の投与を受ける被験体における治療効果を改善する方法を提供する。特定の実施形態において、非ワクチン治療法はα２Ｍ調製物の治療利益を増強し、該治療の効果を改善しうる。
【００５７】
特定の実施形態において、治療法を施さないＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与、又はＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与を行わない治療法の施行は、治療上有効なものではない。特定の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法の量は、それ単独では治療上有効であるのに不十分な量で投与又は施行する。別の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法の両方又は少なくとも一方は、単独で投与した場合に治療上有効なものである。
【００５８】
種々の実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物を、癌若しくは感染性疾患の治療ための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性、又は感染因子の抗原の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチドを含む、すなわち、熱ショックタンパク質は、その複合体を得た癌細胞又は感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したものである。従って、一実施形態において、ＨＳＰ調製物の特異的免疫原性はＨＳＰに複合体化させたペプチド複合体に由来する。好ましい実施形態において、ＨＳＰ−ペプチド複合体は、癌組織、癌細胞又は感染組織などの抗原供与源から単離される。本発明の実施において、かかるＨＳＰ−ペプチド複合体は、好ましくは、個々の被験体の自己由来のもの、すなわちＨＳＰ調製物及び治療法の投与を受ける被験体の組織から得られたものであるが、これは必ずしも必要なわけではない（すなわち、個々の被験体の同種異形であってもよい）。
【００５９】
種々の他の実施形態において、本方法は、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物を、癌若しくは感染性疾患の治療ための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、α２Ｍ調製物は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性、又は感染因子の抗原の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含む、すなわち、α２Ｍは、その複合体を得た癌細胞又は感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したものである。従って、一実施形態において、α２Ｍ調製物の特異的免疫原性はＨＳＰに複合体化させたペプチドに由来する。好ましい実施形態において、α２Ｍ−ペプチド複合体は、癌組織、癌細胞又は感染組織などの抗原供与源から単離される。本発明の実施において、かかるα２Ｍ−ペプチド複合体は、好ましくは、個々の被験体の自己由来のもの、すなわちα２Ｍ調製物及び治療法の投与を受ける被験体の組織から得られたものであるが、これは必ずしも必要なわけではない（すなわち、個々の被験体の同種異形であってもよい）。
【００６０】
一実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、感染性疾患の治療のための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。そのような治療法は当技術分野で公知であり、限定するものではないが、抗生物質、抗ウイルス薬、抗菌薬、並びに生物学的療法剤及び免疫療法剤を含む。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、感染性疾患の因子の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。好ましくは、α２Ｍ調製物は、感染性疾患の因子の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。特定の実施形態において、非ワクチン治療法を受けている被験体におけるある種の感染性疾患の治療の効果は、当該種の感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したＨＳＰを含むＨＳＰ−ペプチド複合体を投与することにより改善される。好ましくは、ＨＳＰ−ペプチド複合体は、同じ感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍとの混合物として存在しない（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０１／２８８４０号、２００１年９月１５日出願を参照。その全文を参照により本明細書に組み入れる）。一実施形態において、ＨＳＰ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法は、ＨＳＰ調製物を投与する前に施行する。別の実施形態において、非ワクチン治療法を受けている被験体におけるある種の感染性疾患の治療の効果は、当該種の感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したα２Ｍを含むα２Ｍ−ペプチド複合体を投与することにより改善される。好ましくは、α２Ｍ−ペプチド複合体は、同じ感染性疾患の因子の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍとの混合物として存在しない。好ましくは、α２Ｍ調製物は、治療法を施す前に投与する。
【００６１】
他の実施形態において、本方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与することを含むものである。かかる治療法としては、限定するものではないが、化学療法及び放射線療法などの抗癌療法、並びにホルモン療法、生物学的療法及び免疫療法が含まれる。本発明の方法において、使用しうる抗癌剤には、限定するものではないが、細胞毒性薬、抗分裂剤、チューブリン安定化剤、微小管形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、アルキル化剤、ＤＮＡ相互作用剤、代謝拮抗剤、ＲＮＡ／ＤＮＡ代謝拮抗剤、ＤＮＡ代謝拮抗剤が含まれる。好ましくは、抗癌剤は化学療法剤である。好ましくは、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、癌の治療のための化学療法又は放射線療法を受けている被験体に投与する。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、治療対象の種の癌の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。調製物がα２Ｍ調製物である場合には、α２Ｍ調製物が治療対象の種の癌の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含むことが好ましい。従って、好ましい実施形態において、本発明は、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したＨＳＰを含むＨＳＰ−ペプチド複合体、又はある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すペプチドと複合体化したα２Ｍを含むα２Ｍ−ペプチド複合体を用いた、ワクチンではない治療法を受けている被験体において癌治療の効果を改善する方法を提供する。特定の好ましい実施形態においては、かかるＨＳＰ−ペプチド複合体及びα２Ｍ−ペプチド複合体は、同種の癌の抗原の抗原性を示すペプチドとは複合体化していないＨＳＰ又はα２Ｍで希釈されたものではない。好ましくは、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与前に施行する。
【００６２】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、癌の治療のための化学療法剤の投与を受けている被験体に投与する。別の好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、癌の治療のための化学療法剤の投与を受けている被験体に投与する。かかる化学療法剤は当技術分野で公知であり、限定するものではないが、以下のものが含まれる：メトトレキセート、タキソール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルビジン、エトポシド、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、マイトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル及びドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、５−フルオロウラシル、タキサン（ドセタキセル及びパクリタキセルなど）、ロイコボリン、レバミソール、イリノテカン、エストラムスチン、エトポシド、ニトロソウレア（カルムスチン及びロムスチンなど）、ビンカアルカロイド類、白金化合物、マイトマイシン、ゲムシタビン、ヘキサメチルメラミン、トポテカン、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）、ハービマイシンＡ、ゲニステイン、アーブステイン、及びラベンダスチンＡ。好ましい実施形態において、化学療法剤はＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）である。
【００６３】
他の実施形態において、好適な化学療法剤としては、限定するものではないが、メトトレキセート、タキソール、Ｌ−アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルビジン、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、シトキサン、エトポシド、５−フルオロウラシル、ＢＣＮＵ、イリノテカン、カンプトテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、マイトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル及びドセタキセルが挙げられる。好ましい実施形態において、抗癌剤は、限定するものではないが、表１に例示する薬剤でありうる。
【表１】
2006501147.tif 000003
【００６４】
2006501147.tif 000004
【００６５】
2006501147.tif 000005
【００６６】
2006501147.tif 000006
【００６７】
本発明の方法において使用しうる別の抗癌剤としては、限定するものではないが、以下のものが挙げられる：アシビシン（ａｃｉｖｉｃｉｎ）、アクラルビシン、アコダゾールヒドロクロリド（ａｃｏｄａｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アルトレタミン、アンボマイシン（ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）、アメタントロンアセテート（ａｍｅｔａｎｔｒｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン（ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アスパラギナーゼ、アスペルリン（ａｓｐｅｒｌｉｎ）、アザシチジン、アゼテパ（ａｚｅｔｅｐａ）、アゾトマイシン、バチマスタット（ｂａｔｍａｓｔａｔ）、ベンゾデパ（ｂｅｎｚｏｄｅｐａ）、ビカルタミド、ビサントレンヒドロクロリド（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ビスナフィドジメシレート（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ  ｄｙｍｅｓｙｌａｔｅ）、ビゼレシン、硫酸ブレオマイシン、ブレキナルナトリウム（ｂｒｅｑｕｉｎａｒ  ｓｏｄｉｕｍ）、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、カラセミド（ｃａｒａｃｅｍｉｄｅ）、カルベチマー（ｃａｒｂｅｔｉｍｅｒ）、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシンヒドロクロリド（ｃａｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）、セデフィンゴール（ｃｅｄｅｆｉｎｇｏｌ）、クロラムブシル、シロレマイシン（ｃｉｒｏｌｅｍｙｃｉｎ）、シスプラチン、クラドリビン、クリスナトールメシレート（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、塩酸ダウノルビシン、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、デキソルマプラチン（ｄｅｘｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）、デザグアニン（ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ）、デザグアニンメシレート（ｄｅｚａｇｕａｎｉｎｅ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、ジアジコン、ドセタキセル、ドキソルビシン、塩酸ドキソルビシン、ドロロキシフェン、クエン酸ドロロキシフェン、プロピオン酸ドロモスタノロン、デュアゾマイシン（ｄｕａｚｏｍｙｃｉｎ）、エダトレキセート、塩酸エフロルニチン、エルサミトルシン（ｅｌｓａｍｉｔｒｕｃｉｎ）、エンロプラチン（ｅｎｌｏｐｌａｔｉｎ）、エンプロメート（ｅｎｐｒｏｍａｔｅ）、エピプロピジン（ｅｐｉｐｒｏｐｉｄｉｎｅ）、塩酸エピルビシン、エルブロゾール（ｅｒｂｕｌｏｚｏｌｅ）、エソルビシンヒドロクロリド（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、エストラムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エタニダゾール、エトポシド、リン酸エトポシド、エトプリン（ｅｔｏｐｒｉｎｅ）、塩酸ファドロゾール、ファザラビン、フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）、フロクリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）、リン酸フルダラビン、フルロウラシル、フルロシタビン（ｆｌｒｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フォスキドン（ｆｏｓｑｕｉｄｏｎｅ）、フォストリエシンナトリウム、ゲムシタビン、塩酸ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、イダルビシンヒドロクロリド（ｉｄａｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、イフォスファミド、イルモフォシン（ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）、インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩ又はｒＩＬ２を含む）、インターフェロンα−２ａ、インターフェロンα−２ｂ、インターフェロンα−ｎ１、インターフェロンα−ｎ３、インターフェロンβ−Ｉａ、インターフェロンγ−Ｉｂ、イプロプラチン、塩酸イリノテカン、酢酸ランレオチド、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、塩酸リアロゾール、ロメトレキソールナトリウム（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ  ｓｏｄｉｕｍ）、ロムスチン、ロソキサントロンヒドロクロリド（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、マソプロコール（ｍａｓｏｐｒｏｃｏｌ）、マイタンシン、メクロレタミンヒドロクロリド（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メゲストロールアセテート（ｍｅｇｅｓｔｅｒｏｌ  ａｃｅｔａｔｅ）、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキセート、メトトレキセートナトリウム、メトプリン、メツレデパ（ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ）、ミチンドミド（ｍｉｔｉｎｄｏｍｉｄｅ）、マイトカルシン（ｍｉｔｏｃａｒｃｉｎ）、マイトクロミン（ｍｉｔｏｃｒｏｍｉｎ）、マイトギリン（ｍｉｔｏｇｉｌｌｉｎ）、マイトマルシン（ｍｉｔｏｍａｌｃｉｎ）、マイトマイシン、マイトスペル（ｍｉｔｏｓｐｅｒ）、ミトタン、塩酸ミトキサントロン、ミコフェノール酸、ノコダゾール、ノガラマイシン、オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）、オキシスラン（ｏｘｉｓｕｒａｎ）、パクリタキセル、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペリオマイシン（ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）、ペンタムスチン（ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）、硫酸ペプロマイシン、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン（ｐｉｐｏｓｕｌｆａｎ）、ピロキサントロンヒドロクロリド（ｐｉｒｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、プリカマイシン、プロメスタン（ｐｌｏｍｅｓｔａｎｅ）、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、塩酸プロカルバジン、ピューロマイシン、塩酸ピューロマイシンヒドロクロリド、ピラゾフリン（ｐｙｒａｚｏｆｕｒｉｎ）、リボプリン（ｒｉｂｏｐｒｉｎｅ）、ログレチミド（ｒｏｇｌｅｒｉｍｉｄｅ）、サフィンゴル（ｓａｆｉｎｇｏｌ）、サフィンゴルヒドロクロリド（ｓａｆｉｎｇｏｌ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、セムスチン、シムトラゼン（ｓｉｍｔｒａｚｅｎｅ）、スパルフォセートナトリウム、スパルソマイシン、塩酸スピロゲルマニウム、スピロムスチン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、スピロプラチン（ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル（ｓｕｌｏｆｅｎｕｒ）、タリソマイシン、テコガランナトリウム、テガフル、テロキサントロンヒドロクロリド（ｔｅｌｏｘａｎｔｒｏｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、テモポルフィン、テニポシド、テロキシロン（ｔｅｒｏｘｉｒｏｎｅ）、テストラクトン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チ��パザミン、クエン酸トレミフェン、トレストロンアセテート（ｔｒｅｓｔｏｌｏｎｅ  ａｃｅｔａｔｅ）、トリシリビンホスフェート（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、トリメトレキセート、グルクロン酸トリメトレキセート、トリプトレリン、ツブロゾールヒドロクロリド（ｔｕｂｕｌｏｚｏｌｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ウラシルマスタード、ウレデパ（ｕｒｅｄｅｐａ）、バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）、ベルテポルフィン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチン、ビンデシン、硫酸ビンデシン、ビネピジンスルフェート（ｖｉｎｅｐｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ビングリシネートスルフェート（ｖｉｎｇｌｙｃｉｎａｔｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ビンロイロシンスルフェート（ｖｉｎｌｅｕｒｏｓｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、酒石酸ビノレルビン、ビンロシジンスルフェート（ｖｉｎｒｏｓｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ビンゾリジンスルフェート（ｖｉｎｚｏｌｉｄｉｎｅ  ｓｕｌｆａｔｅ）、ボロゾール、ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）、ジノスタチン、ゾルビシンヒドロクロリド（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）が挙げられる。
【００６８】
使用しうるその他の抗癌剤としては、限定されるものではないが、２０−エピ−１，２５ジヒドロキシビタミンＤ３、５−エチニルウラシル、アビラテロン（ａｂｉｒａｔｅｒｏｎｅ）、アクラルビシン、アシルフルベン、アデシペノール（ａｄｅｃｙｐｅｎｏｌ）、アドゼレシン、アルデスロイキン、ＡＬＬ−ＴＫアンタゴニスト、アルトレタミン、アムバムスチン（ａｍｂａｍｕｓｔｉｎｅ）、アミドックス（ａｍｉｄｏｘ）、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アムルビシン、アムサクリン、アナグレリド、アナストロゾール、アンドログラホリド、血管形成阻害剤、アンタゴニストＤ、アンタゴニストＧ、アンタレリックス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）、抗背側化形態形成タンパク質−１、抗アンドロゲン、前立腺癌、抗エストロゲン、抗ネオプラストン、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アフィジコリングリシネート、アポトーシス遺伝子調節因子、アポトーシス制御因子、アプリン酸、アラ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ、アルギニンデアミナーゼ、アスラクリン（ａｓｕｌａｃｒｉｎｅ）、アタメスタン、アトリムスチン、アキシナスタチン（ａｘｉｎａｓｔａｔｉｎ）１、アキシナスタチン２、アキシナスタチン３、アザセトロン、アザトキシン（ａｚａｔｏｘｉｎ）、アザチロシン、バッカチンＩＩＩ誘導体、バラノール、バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）、ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト、ベンゾクロリン（ｂｅｎｚｏｃｈｌｏｒｉｎｓ）、ベンゾイルスタウロスポリン（ｂｅｎｚｏｙｌｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ）、βラクタム誘導体、β−アレチン（ａｌｅｔｈｉｎｅ）、ベタクラマイシンＢ、ベツリン酸、ｂＦＧＦ阻害剤、ビカルタミド、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、ビサジリジニルスペルミン（ｂｉｓａｚｉｒｉｄｉｎｙｌｓｐｅｒｍｉｎｅ）、ビスナフィド（ｂｉｓｎａｆｉｄｅ）、ビストラテン（ｂｉｓｔｒａｔｅｎｅ）Ａ、ビゼレシン、ブレフレート（ｂｒｅｆｌａｔｅ）、ブロピリミン、ブドチタン（ｂｕｄｏｔｉｔａｎｅ）、ブチオニンスルフォキサミン、カルシポトリオール、カルホスチンＣ、カンプトテシン誘導体、カナリポックスＩＬ−２、カペシタビン、カルボキサミド−アミノ−トリアゾール、カルボキシアミドトリアゾール、ＣａＲｅｓｔ  Ｍ３、ＣＡＲＮ  ７００、軟骨由来阻害剤、カルゼレシン（ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎ）、カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）、カスタノスペルミン、セクロピンＢ、セトロレリックス、クロールン（ｃｈｌｏｒｌｎｓ）、クロロキノキサリンスルホンアミド、シカプロスト、シス−ポルフィリン、クラドリビン、クロミフェン類似体、クロトリマゾール、コリスマイシン（ｃｏｌｌｉｓｍｙｃｉｎ）Ａ、コリスマイシンＢ、コンブレタスタチンＡ４、コンブレタスタチン類似体、コナゲニン、クラムベシディン（ｃｒａｍｂｅｓｃｉｄｉｎ）８１６、クリスナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ）、クリプトフィシン（ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ）８、クリプトフィシンＡ誘導体、キュラシンＡ、シクロペンタントラキノン、シクロプラタム（ｃｙｃｌｏｐｌａｔａｍ）、シペマイシン（ｃｙｐｅｍｙｃｉｎ）、シタラビンオクホスフェート、細胞溶解因子、サイトスタチン（ｃｙｔｏｓｔａｔｉｎ）、ダクリキシマブ（ｄａｃ���ｉｘｉｍａｂ）、デシタビン（ｄｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、デヒドロジデムニン（ｄｅｈｙｄｒｏｄｉｄｅｍｎｉｎ）Ｂ、デスロレリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）、デキサメタゾン、デキシフォスファミド（ｄｅｓｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、デクスラゾキサン、デクスベラパミル、ジアジコン、ダイデムニンＢ、ジドックス、ジエチルノルスペルミン、ジヒドロ−５−アザシチジン、ジヒドロタキソール、９−、ジオキサマイシン（ｄｉｏｘａｍｙｃｉｎ）、ジフェニルスピロムスチン（ｄｉｐｈｅｎｙｌ  ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ドセタキセル、ドコサノール、ドラセトロン、ドキシフルリジン、ドロロキシフェン、ドロナビノール、デュオカルマイシンＳＡ、エブセレン、エコムスチン（ｅｃｏｍｕｓｔｉｎｅ）、エデルフォシン（ｅｄｅｌｆｏｓｉｎｅ）、エドレコロマブ、エフロルニチン、エレメン、エミテフル（ｅｍｉｔｅｆｕｒ）、エピルビシン、エプリステリド（ｅｐｒｉｓｔｅｒｉｄｅ）、エストラムスチン類似体、エストロゲンアゴニスト、エストロゲンアンタゴニスト、エタニダゾール、リン酸エトポシド、エキセメスタン、ファドロゾール、ファザラビン（ｆａｚａｒａｂｉｎｅ）、フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）、フィルグラスチム、フィナステリド、フラボピリドール、フレゼラスチン（ｆｌｅｚｅｌａｓｔｉｎｅ）、フルアステロン、フルダラビン、フルオロダウノルニシンヒドロクロリド（ｆｌｕｏｒｏｄａｕｎｏｒｕｎｉｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フォルフェニメックス（ｆｏｒｆｅｎｉｍｅｘ）、フォルメスタン、フォストリエシン、フォテムスチン、ガドリニウムテキサフィリン、硝酸ガリウム、ガロシタビン、ガニレリックス、ゼラチナーゼ阻害剤、ゲムシタビン、グルタチオン阻害剤、ヘプスルファム（ｈｅｐｓｕｌｆａｍ）、ヘレギュリン、ヘキサメチレンビスアセトアミド、ヒペリシン、イバンドロン酸、イダルビシン（ｉdａｒｕｂｉｃｉｎ）、イドキシフェン、イドラマントン（ｉｄｒａｍａｎｔｏｎｅ）、イルモフォシン（ｉｌｍｏｆｏｓｉｎｅ）、イロマスタット（ｉｌｏｍａｓｔａｔ）、イミダゾアクリドン（ｉｍｉｄａｚｏａｃｒｉｄｏｎｅｓ）、イミキモド、免疫賦活ペプチド、インスリン様増殖因子−１受容体阻害剤、インターフェロンアゴニスト、インターフェロン、インターロイキン、イオベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）、ヨードドキソルビシン、イポメアノール（ｉｐｏｍｅａｎｏｌ）、４−、イロプラクト（ｉｒｏｐｌａｃｔ）、イルソグラジン、イソベンガゾール（ｉｓｏｂｅｎｇａｚｏｌｅ）、イソホモハリコンドリン（ｉｓｏｈｏｍｏｈａｌｉｃｏｎｄｒｉｎ）Ｂ、イタセトロン、ジャスプラキノリド（ｊａｓｐｌａｋｉｎｏｌｉｄｅ）、カハラリド（ｋａｈａｌａｌｉｄｅ）Ｆ、ラメラリン−Ｎトリアセテート、ランレオチド、レイナマイシン、レノグラスチム、硫酸レンチナン、レプトールスタチン（ｌｅｐｔｏｌｓｔａｔｉｎ）、レトロゾール、白血病阻害因子、白血球αインターフェロン、ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン、ロイプロレリン、レバミソール、リアロゾール、直鎖ポリアミン類似体、親油性二糖ペプチド、親油性白金化合物、リソクリナミド（ｌｉｓｓｏｃｌｉｎａｍｉｄｅ）７、ロバプラチン（ｌｏｂａｐｌａｔｎ）、ロムブリシン（ｌｏｍｂｒｉｃｉｎｅ）、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、ロニダミン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｒｏｎｅ）、ロバスタチン、ロキソリビン（ｌｏｘｏｒｉｂｉｎｅ）、ルルトテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）、ルテチウムテキサフィリン（ｌｕｔｅｔｉｕｍ  ｔｅｘａｐｈｙｒｉｎ）、リソフィリン、溶解ペプチド、マイタンシン、マンノスタチンＡ、マリマスタット、マソプロコール、マスピン、マトリリシン阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メノガリル、メルバロン（ｍｅｒｂａｒｏｎｅ）、メテレリン（ｍｅｔｅｒｅｌｉｎ）、メチオニナーゼ、メトクロプラミド、ＭＩＦ阻害剤、ミフェプリストン、ミルテフォシン、ミリモスチム、ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、マイトマイシン類似体、ミトナフィド（ｍｉｔｏｎａｆｉｄｅ）、ミトトキシン（ｍｉｔｏｔｏｘｉｎ）線維芽細胞増殖因子−サポリン、ミトキサントロン、モファロテン、モルグラモスチム、モノクローナル抗体、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリウム（ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）細胞壁ｓｋ、モピダモール（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）、多剤耐性遺伝子阻害剤、多発性腫瘍抑制因子１−をベースとする治療、マスタード抗癌剤、マイカペルオキシド（ｍｙｃａｐｅｒｏｘｉｄｅ）Ｂ、マイコバクテリア細胞壁抽出物、ミリアポロン（ｍｙｒｉａｐｏｒｏｎｅ）、Ｎ−アセチルジナリン、Ｎ−置換ベンズアミド、ナファレリン、ナグレスチップ（ｎａｇｒｅｓｔｉｐ）、ナロキソン＋ペンタゾシン、ナパビン（ｎａｐａｖｉｎ）、ナフテルピン（ｎａｐｈｔｅｒｐｉｎ）、ナルトグラスチム、ネダプラチン、ネモルビシン（ｎｅｍｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ネリドロン酸（ｎｅｒｉｄｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）、中性エンドペプチダーゼ、ニルタミド、ニサマイシン（ｎｉｓａｍｙｃｉｎ）、一酸化窒素モジュレーター、ニトロキシド酸化防止剤、ニトルリン（ｎｉｔｒｕｌｌｙｎ）、Ｏ６−ベンジルグアニン、オクトレオチド、オキセノン（ｏｋｉｃｅｎｏｎｅ）、オリゴヌクレオチド、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）、オンダンセトロン、オンダンセトロン、オラシン（ｏｒａｃｉｎ）、経口サイトカイン誘導物質、オルマプラチン（ｏｒｍａｐｌａｔｉｎ）、オサテロン、オキサリプラチン、オキザウノマイシン、パクリタキセル、パクリタキセル類似体、パクリタキセル誘導体、パラウアミン（ｐａｌａｕａｍｉｎｅ）、パルミトイルリゾキシン、パミドロン酸、パナキシトリオール、パノミフェン、パラバクチン（ｐａｒａｂａｃｔｉｎ）、パゼリプチン（ｐａｚｅｌｌｉｐｒｉｎｅ）、ペガスパルガーゼ（ｐｅｇａｓｐａｒｇａｓｅ）、ペルデシン（ｐｅｌｄｅｓｉｎｅ）、ペントサン多硫酸ナトリウム、ペントスタチン、ペントロゾール（ｐｅｎｔｒｏｚｏｌｅ）、ペルフルブロン（ｐｅｒｆｌｕｂｒｏｎ）、ペルホスファミド（ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ペリリルアルコール、フェナジノマイシン、酢酸フェニル、ホスファターゼ阻害剤、ピシバニル、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、ピリトレキシム（ｐ��ｒｉｔｒｅｘｉｍ）、プラセチン（ｐｌａｃｅｔｉｎ）Ａ、プラセチンＢ、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤、白金複合体、白金化合物、白金−トリアミド複合体、ポルフィマー間トリウム、ポルフィロマイシン、プレドニゾン、プロピル ビス−アクリドン、プロスタグランジンＪ２、プロテアソーム阻害剤、タンパク質Ａをベースとする免疫モジュレーター、プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類のプロテインキナーゼＣ阻害剤、プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤、プルプリン、ピラゾロアクリジン、ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート、ｒａｆアンタゴニスト、ラルチトレキセド、ラモセトロン、ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ阻害剤、ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤、脱メチル化レテリプチン（ｒｅｔｅｌｌｉｐｒｉｎｅ）、レニウムＲｅ１８６エチドロネート、リゾキシン、リボザイム、ＲＩＩレチナミド、ログレチミド（ｒｏｇｌｅｔｉｍｉｄｅ）、ロヒツキン（ｒｏｈｉｔｕｋｉｎｅ）、ロムルチド、ロキニメックス（ｒｏｑｕｉｎｉｍｅｘ）、ルビギノン（ｒｕｂｉｇｉｎｏｎｅ）Ｂ１、ルボキシル、サフィンゴル（ｓａｆｉｎｇｏｌ）、サイントピン（ｓａｉｎｔｏｐｉｎ）、ＳａｒＣＮＵ、サルコフィトールＡ、サルグラモスチム、Ｓｄｉ  １ミメティックス、セムスチン、セネセンス（ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ）由来阻害剤１、センスオリゴヌクレオチド、シグナル伝達阻害剤、シグナル伝達モジュレーター、一本鎖抗原結合タンパク質、シゾフィラン、ソブゾキサン、ナトリウムボロカプテイト、ナトリウムフェニルアセテート、ソルベロール（ｓｏｌｖｅｒｏｌ）、ソマトメジン結合タンパク質、ソネルミン、スパルフォン酸（ｓｐａｒｆｏｓｉｃ  ａｉｃｄ）、スピカマイシンＤ、スピロムスイン（ｓｐｉｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、スプレノペンチン、スポンジスタチン１、スクアラミン、幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド（ｓｔｉｐｉａｍｉｄｅ）、ストロメリシン阻害剤、スルフィノシン（ｓｕｌｆｉｎｏｓｉｎｅ）、過剰活動性血管活性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラジスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン（ｔａｌｌｉｍｕｓｔｉｎｅ）、タモキシフェンメチオジド、タウロムスチン（ｔａｕｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、タザロテン、
テコガランナトリウム、テガフル、テルラピリリウム（ｔｅｌｌｕｒａｐｙｒｙｌｉｕｍ）、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロミド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン（ｔｅｔｒａｚｏｍｉｎｅ）、タリブラスチン（ｔｈａｌｉｂｌａｓｔｉｎｅ）、チオコラリン（ｔｈｉｏｃｏｒａｌｉｎｅ）、トロンボポエチン、トロンボポエチンミメティック、チマルファシン（ｔｈｙｍａｌｆａｓｉｎ）、チモポエチン受容体アゴニスト、チモトリナン（ｔｈｙｍｏｔｒｉｎａｎ）、甲状腺刺激ホルモン、チンエチルエチオプルプリン、チラパザミン、チタノセンビクロリド、トプセンチン（ｔｏｐｓｅｎｔｉｎ）、トレミフェン、全能性幹細胞因子、翻訳阻害剤、トレチノイン、トリアセチルウリジン、トリシリビン、トリメトレキセート、トリプトレリン、トロピセトロン、ツロステリド（ｔｕｒｏｓｔｅｒｉｄｅ）、チロシンキナーゼ阻害剤、チルホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎｓ）、ＵＢＣ阻害剤、ウベニメックス、泌尿生殖器洞由来増殖阻害因子、ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト、バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ）、バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）Ｂ、ベクター系、赤血球遺伝子治療、ベラレソール（ｖｅｌａｒｅｓｏｌ）、ベラミン、ベルジン（ｖｅｒｄｉｎｓ）、ベルテポルフィン、ビノレルビン、ビンキサルチン、ビタキシン（ｖｉｔａｘｉｎ）、ボロゾール、ザノテロン（ｚａｎｏｔｅｒｏｎｅ）、ゼニプラチン（ｚｅｎｉｐｌａｔｉｎ）、ジラスコルブ（ｚｉｌａｓｃｏｒｂ）及びジノスタチンスチマラマーが挙げられる。本発明の好ましい化学療法剤としては、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマニチブ）及び他のチロシンキナーゼ阻害剤が挙げられる。
【００６９】
好ましい実施形態において、上記各方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物又は精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための２−フェニルアミノピリミジン系の薬剤の投与を受けている被験体に投与することを含むものである。より好ましくは、癌の治療のためにＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（すなわちメシル酸イマチニブ）の投与を受けている被験体である。
【００７０】
別の特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、癌の治療のために放射線療法を受けている被験体に投与する。放射線療法に関して、放射線は、γ線又はＸ線でありうる。この方法は、放射線療法、例えば遠隔照射放射線療法、放射性同位体（Ｉ１２５、パラジウム、イリジウム）、放射性同位体（ストロンチウム８９など）の間質移植、胸部放射線療法、腹腔内Ｐ−３２放射線療法、並びに／又は腹式及び骨盤部全放射線療法などを含む癌の治療を包含する。放射線療法の一般的な概説については、Hellman, Chapter 16: Principles of Cancer Management: Radiation Therapy,第６版,2001, DeVitaら編, J.B. Lippencott Company, Philadelphiaを参照のこと。好ましい実施形態において、放射線治療は、照射を遠隔照射源から行う、遠隔照射放射線療法又は遠隔療法として行う。種々の好ましい実施形態において、放射線治療は、放射線照射源を癌細胞又は腫瘍塊の近傍の体内に配置する、体内治療又は近接照射法として行う。
【００７１】
別の実施形態において、上記各方法は、ＨＳＰ調製物、好ましくは精製されたＨＳＰ調製物を、癌の治療のための治療法の組み合わせを受けている被験体に投与することを含むものである。別の実施形態において、上記各方法は、α２Ｍ調製物、好ましくは精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のための治療法の組み合わせを受けている被験体に投与することを含むものである。好ましくは、ＨＳＰ調製物及びα２Ｍ調製物はそれぞれ、治療対象の種の癌の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体及びα２Ｍ−ペプチド複合体をそれぞれ含む。かかる一実施形態においては、ＨＳＰ調製物は、生物学的療法、好ましくはサイトカインと組み合わせて化学療法を受けている被験体に投与する。別のかかる実施形態においては、α２Ｍ調製物は、生物学的療法、好ましくはサイトカインと組み合わせて化学療法を受けている被験体に投与する。種々の実施形態において、サイトカインはＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、Ｌ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＮＦβ、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＮＦ−γ、ＩＮＦ−α、ＳＬＣ、内皮単球活性化タンパク質−２（ＥＭＡＰ２）、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−３β、又はＭＨＣ遺伝子（ＨＬＡ−Ｂ７など）からなる群より選択される。さらに、他のサイトカインの例としては、ＴＮＦファミリーの他のメンバー、例えば限定するうものではないが、ＴＮＦ−α関連アポトーシス誘導性リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＴＮＦ−α関連活性化誘導性サイトカイン（ＴＲＡＮＣＥ）、アポトーシスのＴＮＦ−α関連弱誘導因子（ＴＷＥＡＫ）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＬＴ−α、Ｌｕ−β、ＯＸ４ＯＬ、ＣＤ４ＯＬ、ＦａｓＬ、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＡＰＲＩＬ、ＬＩＧＨＴ、ＴＬ１、ＴＮＦＳＦ１６、ＴＮＦＳＦ１７、及びＡＩＴＲ−Ｌ、又はそれらの機能的部分が含まれる。ＴＮＦファミリーの一般的な概説については、例えば、Kwonら, 1999, Curr. Opin. Immunol. 11: 340-345を参照されたい。一実施形態において、ＨＳＰ調製物は、治療法を施す前に投与する。別の実施形態において、治療法はＨＳＰ調製物を投与する前に施行する。
【００７２】
特定の実施形態において、精製されたＨＳＰ調製物を、癌の治療のためにシクロホスファミドとＩＬ−１２の組み合わせの投与を受けている被験体に投与する。別の好ましい実施形態において、精製されたα２Ｍ調製物を、癌の治療のためにシクロホスファミドとＩＬ−１２の組み合わせの投与を受けている被験体に投与する。
【００７３】
別の実施形態において、化学療法剤はチロシンキナーゼ阻害剤であり、ＨＳＰ調製物は治療対象の癌被験体から得られたものであり、そして化学療法剤はＨＳＰ調製物の投与前に投与されたものである。別の特定の実施形態において、抗癌剤は化学療法剤ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）であり、ＨＳＰ調製物は治療対象の癌被験体から得られたｈｓｐ７０を含むものであり、そして化学療法剤はＨＳＰ調製物の投与前に投与されたものである。別の特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は治療対象の癌被験体から得られたｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含む。別の特定の実施形態は、一日約４００ｍｇ〜８００ｍｇのメシル酸イマチニブの投与を受けている被験体におけるＣＭＬの治療方法であって、該被験体に、ｈｓｐ７０ペプチド複合体を含む熱ショックタンパク質調製物を投与することを含む上記方法を包含する。好ましい実施形態において、熱ショックタンパク質調製物は１週間に１回投与し、熱ショックタンパク質調製物は上記被験体から得られたｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含むものである。
【００７４】
ある特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、既にＧｌｅｅｖｅｃＴＭの投与を受けている被験体に投与する（カプセル剤形で一日４００〜８００ｍｇ、一日１回４００〜６００ｍｇを投与、又は各４００ｍｇを２回の用量で一日８００ｍｇを投与）。かかる実施形態においては、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物は、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭに加えてＨＳＰ／α２Ｍ調製物を投与する２日前、２日〜１週間前、１週間〜１ヶ月前、１ヶ月〜６ヶ月前、６ヶ月〜１年前に、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物を使用しないで既にＧｌｅｅｖｅｃＴＭの投与を受けている被験体に最初に投与する。特定の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物は、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ単独での処置に対して抵抗性を示した被験体に投与する。
【００７５】
他の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物は、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭの最初の投与と同時に被験体に最初に投与する。
【００７６】
また別の特定の実施形態においては、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（例えばカプセル剤形で一日４００〜８００ｍｇ）を、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与を含む処置を既に受けている被験体に投与する。かかる実施形態において、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与に加えてＧｌｅｅｖｅｃＴＭを投与する２日前、２日〜１週間前、１週間〜１ヶ月前、１ヶ月〜６ヶ月前、６ヶ月〜１年前に、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭを使用しないで既にＨＳＰ／α２Ｍ調製物の投与を受けている被験体に最初に投与する。
【００７７】
特定の実施形態において、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは経口投与する。別の特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は皮内投与する。
【００７８】
上述した各方法においては、一例として、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭを、一日当たり、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、４００ｍｇ〜５００ｍｇ、５００ｍｇ〜６００ｍｇ、６００ｍｇ〜７００ｍｇ、７００ｍｇ〜８００ｍｇ、８００ｍｇ〜９００ｍｇ、又は９００ｍｇ〜１０００ｍｇで患者に投与する。特定の実施形態において、総日用量は、２回の日用量として、２５ｍｇ〜５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、又は４００ｍｇ〜５００ｍｇを被験体に投与する。
【００７９】
他の使用可能な治療法としては、限定されるものではないが、当技術分野で公知の抗ウイルス薬が含まれる。かかる抗ウイルス薬としては、限定されるものではないが、リバビリン、リファムピシン、ＡＺＴ、ｄｄＩ、ｄｄＣ、アシクロビル及びガンシクロビルが含まれる。
【００８０】
また、本発明には、当技術分野で公知の抗生物質薬剤である治療法が含まれる。かかる抗生物質薬剤としては、限定されるものではないが、アミノグリコシド抗生物質（アパラマイシン、アルベカシン、バムバーマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ネオマイシン、ネオマイシン、ウンデシルネート、ネチルミシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソミシン及びスペクチノマイシン）、アムフェニコール抗生物質（例えば、アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、フロルフェニコール及びチアムフェニコール）、アンサマイシン抗生物質（例えば、リファミド及びリファンピン）、カルバセフェム類（例えばロラカルベフ）、カルバペネム類（例えば、ビアペネム及びイミペネム）、セファロスポリン類（例えば、セファクロール、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾプラン、セフピミゾール、セフピラミド及びセフピロム）、セファマイシン類（例えば、セフブペラゾン、セフメタゾール及びセフミノックス）、モノバクタム類（例えば、アズトレオナム、カルモナム及びチゲモナム）、オキサセフェム類（例えば、フロモキセフ及びモキサラクタム）、ペニシリン類（例えば、アムジノシリン、アムジノシリンピボキシル、アモキシシリン、バカムピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリンナトリウム、エピシリン、フェンベニシリン、フロキサシリン、ペナムシリン、ペネサメートヒドリオダイド（ｐｅｎｅｔｈａｍａｔｅ ｈｙｄｒｉｏｄｉｄｅ）、ペニシリンｏ−ベネサミン、ペニシリン０、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザシン、ペニシリンＶヒドラバミン、ペニメピシクリン、及びフェンシヒシリンカリウム）、リンコサミド類（例えば、クリンダマイシン及びリンコマイシン）、マクロライド類（例えば、アジスロマイシン、カルボマイシン、クラリソマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、及びエリスロマイシンアシストレート）、アムホマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エンビオマイシン、テトラサイクリン類（例えば、アピシクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、及びデメクロサイクリン）、２，４−ジアミノピリミジン類（例えば、ブロジモプリム）、ニトロフラン類（例えば、フラルタドン及び塩化フラゾリウム）、キノロン類及びその類似体（例えば、シノキサシン、シプロフロキサシン、クリナフロキサシン、フルメキン、及びグレパグロキサシン）、スルホンアミド類（例えば、アセチルスルファメトキシピラジン、ベンジルスルファミド、ノプリルスルファミド、フタリルスルフアセトアミド、スルフアクリソイジン（ｓｕｌｆａｃｈｒｙｓｏｉｄｉｎｅ）、及びスルフアシチン）、スルホン類（例えば、ジアチモスルホン、グルコスルホンナトリウム、及びソラスルホン）、シクロセリン、ムピロシン及びツベリンが挙げられる。
【００８１】
また、本発明には、当技術分野で公知の抗菌剤である治療法が含まれる。かかる抗菌剤としては、限定されるものではないが、ポリエン類（例えば、アムホテリシンｂ、カンジシジン、メパルトリシン、ナタマイシン、及びナイスタチン）、アリルアミン類（例えば、ブテナフィン及びナフチフィン）、イミダゾール類（例えば、ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、フルトリマゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、及びラノコナゾール）、チオカルバメート類（例えば、トルシクレート、トリンデート及びトルナフテート）、トリアゾール類（例えば、フルコナゾール、イントラコナゾール、サペルコナゾール及びテルコナゾール）、ブロモサリチルクロルアニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロルフェネシン、シクロピロックス、アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ネオマイシンウンデシレネート、ピロルニトリン、シカニン、ツベルシジン及びビリジンが挙げられる。
【００８２】
別の実施形態において、上記方法は、癌又は感染性疾患の予防のために有用である。特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、非ワクチン治療法と組み合わせて被験体に投与し、ある種の癌又は感染性疾患を患うリスクを低減する。他の特定の実施形態において、上記方法は、癌若しくは感染性疾患に対する遺伝的素因若しくは非遺伝的素因を有する被験体、又は感染性疾患の因子に対して曝露される被験体に、予防的手段として、非ワクチン治療法の施行と組み合わせてＨＳＰ調製物を投与することを包含する。さらなる実施形態において、本発明はまた、上記実施形態のそれぞれを、α２Ｍ調製物を非ワクチン治療法と組み合わせて投与する場合に適用することができる。
【００８３】
本発明の方法及び組成物は、治療を受けていない患者に有用なだけではなく、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物を使用しない治療法に対して又は治療法を使用しないＨＳＰ／α２Ｍ調製物に対して部分的又は完全に応答しない患者の治療にも有用である。種々の実施形態において、本発明は、ＨＳＰ／α２Ｍ調製物又は治療法のいずれか又は両方の投与又は施行を含む治療処置に対して非応答性である又は当該治療処置では難治性であることが示された及び／又はその可能性がある患者における疾患又は障害の治療又は予防に有用な方法及び組成物を提供する。本発明はまた、他の形態の医療的処置を以前に受けていた又は現在受けている患者に対するＨＳＰ／α２Ｍ調製物及び治療法の投与又は施行を含む方法及び組成物を包含する。
【００８４】
本発明の方法及び組成物において使用するＨＳＰ調製物は、好ましくは精製されたものであり、何らかの分子に結合していない遊離ＨＳＰ、及びＨＳＰと別の分子（例えばペプチド）との分子複合体を含みうる。ＨＳＰ−ペプチド複合体は、ペプチドに共有結合又は非共有結合したＨＳＰを含む。本発明の方法は、被験体への投与の前に、ＨＳＰと任意の特異的抗原又は抗原性ペプチドとの共有結合又は非共有結合を必要としてもよいし又は必要としなくてもよい。ペプチド（１種若しくは複数）は、治療対象の感染性疾患若しくは障害又は特定の癌に関連していなくてもよいが、好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物は、それぞれ治療対象の感染性疾患の因子の抗原、又は特定種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す複合体を含む。より好ましくは、感染性疾患の治療に関して、ＨＳＰ調製物は、感染性疾患を引き起こす感染因子（又はその抗原性を示すその非感染性変異体）に感染した細胞から単離された非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。より好ましくは、ある種の癌の治療に関して、ＨＳＰ調製物は、患者に由来する（自己由来）又は由来しない（同種異系）、当該種の癌又はその転移癌の癌組織から単離された非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。従って、本発明の目的のため、ＨＳＰ調製物は、他の分子（例えばペプチド）と結合していない又は結合しているＨＳＰを含む。ＨＳＰは、好ましくは精製されたものである。ＨＳＰ調製物は、ＨＳＰを含む粗製細胞溶解物を含んでもよく、その溶解物の量は１００〜１０８細胞等価物に相当する。ＨＳＰは、大部分の細胞供与原から、ＨＳＰと非共有結合した種々のペプチドの複合体の集団として簡便に精製することができる。ＨＳＰは、低ｐＨ及び／若しくはアデノシン三リン酸への曝露又は当技術分野で公知のほかの方法により非共有結合ペプチドから分離することができる。
【００８５】
本発明の方法及び組成物において使用するα２Ｍ調製物は、好ましくは精製されたものであり、何らかの分子に結合していない遊離α２Ｍ、及びα２Ｍと別の分子（例えばペプチド）との分子複合体を含みうる。α２Ｍ−ペプチド複合体は、ペプチドに共有結合又は非共有結合したα２Ｍを含む。本発明の方法は、被験体への投与の前に、α２Ｍと任意の特異的抗原又は抗原性ペプチドとの共有結合又は非共有結合を必要としてもよいし又は必要としなくてもよい。ペプチド（１種若しくは複数）は、治療対象の感染性疾患若しくは障害又は特定の癌に関連していなくてもよいが、好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、それぞれ治療対象の感染性疾患の因子の抗原、又は特定種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す複合体を含む。より好ましくは、感染性疾患の治療に関して、α２Ｍ調製物は、感染性疾患を引き起こす感染因子（又はその抗原性を示すその非感染性変異体）に感染した細胞から単離された非共有結合α２Ｍ−ペプチド複合体を含む。より好ましくは、ある種の癌の治療に関して、α２Ｍ調製物は、患者に由来する（自己由来）又は由来しない（同種異系）、当該種の癌又はその転移癌の癌組織から単離された非共有結合α２Ｍ−ペプチド複合体を含む。従って、本発明の目的のため、α２Ｍ調製物は、他の分子（例えばペプチド）と結合していない又は結合しているα２Ｍを含む。ＨＳＰは、好ましくは精製されたものである。α２Ｍ調製物は、α２Ｍを含む粗製細胞溶解物を含んでもよく、その溶解物の量は１００〜１０８細胞等価物に相当する。α２Ｍは、大部分の細胞供与原から、α２Ｍと非共有結合した種々のペプチドの複合体の集団として簡便に精製することができる。α２Ｍは、低ｐＨ及び／若しくはアデノシン三リン酸への曝露又は当技術分野で公知のほかの方法により非共有結合ペプチドから分離することができる。
【００８６】
種々の実施形態において、ＨＳＰ及びα２Ｍの供与源は、好ましくは真核生物であり、より好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。従って、本発明の方法により使用されるＨＳＰ調製物は、真核生物ＨＳＰ、哺乳動物ＨＳＰ及びヒトＨＳＰを含む。α２Ｍ調製物は、真核生物α２Ｍ、哺乳動物α２Ｍ及びヒトα２Ｍを含む。ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物が由来する真核生物の供与源、及びＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与を受ける被験体はそれぞれ同種であることが好ましい。
【００８７】
一実施形態において、ＨＳＰ調製物の特異的免疫原性は、熱ショックタンパク質と複合体化したペプチドによるものである。従って、種々の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、熱ショックタンパク質が特異的抗原供与源に由来するペプチドと複合体化した、熱ショックタンパク質ペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、ＨＳＰタンパク質調製物は、自己由来の熱ショックタンパク質−ペプチド複合体を含む。別の好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物は、その熱ショックタンパク質の由来する癌細胞の抗原性ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む。特定の実施形態において、抗原は腫瘍特異的抗原（すなわち、腫瘍細胞においてのみ発現する）である。別の実施形態において、抗原は腫瘍関連抗原（すなわち腫瘍細胞において比較的過剰発現する）である。また別の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、その熱ショックタンパク質の由来する感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化した熱ショックタンパク質を含む。
【００８８】
別の実施形態において、α２Ｍ調製物の特異的免疫原性は、α２Ｍと複合体化したペプチドによるものである。従って、種々の実施形態において、α２Ｍ調製物は、α２Ｍが特異的抗原供与源に由来するペプチドと複合体化した、α２Ｍペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、α２Ｍタンパク質調製物は、自己由来のα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。別の好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、そのα２Ｍの由来する癌細胞の抗原性ペプチドと複合体化したα２Ｍを含む。特定の実施形態において、抗原は腫瘍特異的抗原（すなわち、腫瘍細胞においてのみ発現する）である。別の実施形態において、抗原は腫瘍関連抗原（すなわち腫瘍細胞において比較的過剰発現する）である。また別の実施形態において、α２Ｍ調製物は、そのα２Ｍの由来する感染細胞の抗原性ペプチドと複合体化したα２Ｍを含む。
【００８９】
種々の特定の実施形態において、上記方法は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、治療法を受けた被験体に投与することを含み、ここで該治療法は、単独で施行した場合に、該被験体を治療するのに臨床上十分なものではなく、それゆえ被験体が別の有効な治療法を必要とするもの、例えば、被験体がＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与を行わない治療法には応答しないものである。かかる実施形態には、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、治療法を受けている被験体に投与することを含み、ここで該被験体は、治療に対して応答するが、副作用を受けたり、再発したり、抵抗性を確立したりしているものである。かかる被験体は、治療法単独の治療に対して応答しない又は該治療では難治性と考えられる。上記実施形態により、ＨＳＰ調製物を治療法単独では難治性の被験体に投与することを含む本発明の方法が、本発明の方法により想定されるように施行された場合に、該治療法の治療の有効性を改善しうるものとなる。α２Ｍ調製物を治療法単独では難治性の被験体に投与することを含む本発明の方法が、本発明の方法により想定されるように施行された場合に、該治療法の治療の有効性を改善しうるものとなる。
【００９０】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与し、ここで、該被験体は、該治療法単独での治療に応答しない又は難治性である、すなわち、癌細胞の少なくともある程度の有意な部分が死滅しない又はその細胞分裂が停止しない。治療法の有効性の判定は、当技術分野で公知の方法を用いてｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイすることができる。難治性という当技術分野で許容される意味は癌に関しては周知である。一実施形態において、癌は、癌細胞数が有意に低減していないか又は増大している場合に、難治性又は非応答性である。好ましい実施形態において、ある種の癌の抗原性を示すＨＳＰ調製物は、治療法単独の施行に対して応答しない被験体に投与し、ここでＨＳＰ調製物の投与によって、該治療法の有効性が改善される。治療対象のこれらの被験体の中には、化学療法又は放射線療法を受けている被験体が含まれる。
【００９１】
特定の実施形態において、α２Ｍ調製物は、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与し、ここで、該被験体は、該治療法単独での治療に応答しない又は難治性である、すなわち、癌細胞の少なくともある程度の有意な部分が死滅しない又はその細胞分裂が停止しない。治療法の有効性の判定は、当技術分野で公知の方法を用いてｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイすることができる。難治性という当技術分野で許容される意味は癌に関しては周知である。一実施形態において、癌は、癌細胞数が有意に低減していないか又は増大している場合に、難治性又は非応答性である。好ましい実施形態において、ある種の癌の抗原性を示すα２Ｍ調製物は、治療法単独の施行に対して応答しない被験体に投与し、ここでα２Ｍ調製物の投与によって、該治療法の有効性が改善される。治療対象のこれらの被験体の中には、化学療法又は放射線療法を受けている被験体が含まれる。
【００９２】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与し、ここで該被験体は、該治療法単独での治療により望ましくない又は有害な作用を受けているものでありうる、例えば、該治療法が、単独で施行（投与）したときにその有効量では毒性又は有害でありうる。本発明により、ＨＳＰ調製物は、ＨＳＰ調製物と組み合わせて投与した場合に、該治療法の治療効果を改善することができ、その結果、上記治療法の施行（投与）量又はその頻度を低減することができる。好ましい実施形態において、ある種の癌の抗原性を示すＨＳＰ調製物は、治療法単独の望ましくない又は有害な作用を低減又は回避するために被験体に投与し、ここでＨＳＰ調製物の投与によって、治療法の施行（投与）量が低減し、及び／又はその頻度が少なくなる。治療対象のこれらの被験体の中には、化学療法又は放射線療法を受けている被験体が含まれる。
【００９３】
特定の実施形態において、α２Ｍ調製物は、癌の治療のための治療法を受けている被験体に投与し、ここで該被験体は、該治療法単独での治療により望ましくない又は有害な作用を受けているものでありうる、例えば、該治療法が、単独で施行（投与）したときにその有効量では毒性又は有害でありうる。本発明により、α２Ｍ調製物は、α２Ｍ調製物と組み合わせて投与した場合に、該治療法の治療効果を改善することができ、その結果、上記治療法の施行（投与）量又はその頻度を低減することができる。好ましい実施形態において、ある種の癌の抗原性を示すα２Ｍ調製物は、治療法単独の望ましくない又は有害な作用を低減又は回避するために被験体に投与し、ここでα２Ｍ調製物の投与によって、治療法の施行（投与）量が低減し、及び／又はその頻度が少なくなる。治療対象のこれらの被験体の中には、化学療法又は放射線療法を受けている被験体が含まれる。
【００９４】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物は、最適以下の量で、例えば、治療法を使用しないで投与した場合には、当技術分野で公知の方法により測定したときに検出可能な治療効果が現れない量で、投与する。かかる方法において、かかる最適以下の量のＨＳＰ調製物の、治療法を受けている被験体への投与によって、治療の有効性の全体的な改善がもたらされる。別の特定の実施形態において、α２Ｍ調製物は、最適以下の量で投与する。かかる方法において、かかる最適以下の量のα２Ｍ調製物の、治療法を受けている被験体への投与によって、治療の有効性の全体的な改善がもたらされる。
【００９５】
好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物は、治療法を使用しないでＨＳＰ調製物を投与した場合には、腫瘍の退行若しくは癌の寛解をもたらさない量で、又は癌細胞が有意に低減しない若しくは増大する量で、投与する。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、治療対象の種の癌の抗原性を示すＨＳＰ−ペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、ＨＳＰ調製物の最適以下の量を治療法を受けている被験体に投与し、それにより治療の全体的な有効性を改善する。別の好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物は、治療法を使用しないでα２Ｍ調製物を投与した場合には、腫瘍の退行若しくは癌の寛解をもたらさない量で、又は癌細胞が有意に低減しない若しくは増大する量で、投与する。好ましくは、α２Ｍ調製物は、治療対象の種の癌の抗原性を示すα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。好ましい実施形態において、α２Ｍ調製物の最適以下の量を治療法を受けている被験体に投与し、それにより治療の全体的な有効性を改善する。ＨＳＰ又はα２Ｍ調製物による治療対象のこれらの被験体の中には、化学療法又は放射線療法を受けている被験体が含まれる。最適以下の量は、適当な動物実験により決定しうる。ヒトにおけるかかる最適以下の量は、動物実験からの外挿により決定しうる。
【００９６】
ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、非ワクチン治療法の施行（投与）の前、それと同時、又はその後に投与することができる。一実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、正確に同時に投与（施行）する。別の実施形態において、α２Ｍ調製物及び治療法は、正確に同時に投与（施行）する。別の実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物のいずれか及び治療法は、ＨＳＰ調製物及び治療法が一緒に作用して、それらを単独で投与（施行）した場合よりも増大した効果をもたらすように、又はα２Ｍ調製物及び治療法が一緒に作用して、それらを単独で投与（施行）した場合よりも増大した効果をもたらすように、連続して及び一定期間をおいて投与する。他の実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、所望の治療効果が得られるように十分に近接した時間で投与する。他の実施形態において、α２Ｍ調製物及び治療法は、所望の治療効果が得られるように十分に近接した時間で投与する。ＨＳＰ又はα２Ｍ調製物、及び治療法は、任意の形態及び任意の好適な経路により、同時に又は別々に投与（施行）することができる。一実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、異なる投与経路により投与する。別の実施形態において、それぞれを同じ投与経路で投与する。ＨＳＰ調製物は、同じ又は異なる部位、例えば腕及び脚に投与しうる。。別の実施形態において、α２Ｍ調製物及び治療法は、異なる投与経路により投与する。あるいは、それぞれを同じ経路で投与する。さらに、それぞれを、同じ又は異なる部位に投与しうる。
【００９７】
上述した方法のように、種々の実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、１時間未満おいて、約１時間おいて、１時間〜２時間おいて、２時間〜３時間おいて、３時間〜４時間おいて、４時間〜５時間おいて、５時間〜６時間おいて、６時間〜７時間おいて、７時間〜８時間おいて、８時間〜９時間おいて、９時間〜１０時間おいて、１０時間〜１１時間おいて、１１時間〜１２時間おいて、２４時間未満おいて、若しくは４８時間未満おいて、又は１週間未満おいて、若しくは２週間おいて、又は１ヶ月おいて若しくは３ヶ月おいて、投与する。別の実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、２〜４日おいて、４〜６日おいて、１週間おいて、１〜２週間おいて、２〜４週間おいて、１ヶ月おいて、１〜２ヶ月おいて、又は２ヶ月以上おいて、投与する。好ましい実施形態においては、ＨＳＰ調製物及び治療法は、両方が依然として活性を保持している時間において投与する。当業者であれば、各投与成分の半減期を測定することによりそのような時間を決定することができるだろう。別の又は上記の実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、２週間未満、１ヶ月、６ヶ月、１年又は５年おいて投与する。好ましくは、ＨＳＰ調製物は、治療法の前に投与する。さらなる実施形態において、α２Ｍ調製物及び治療法は、上記実施形態の各々に記載した時間間隔で及び時間にわたり投与する。好ましくは、α２Ｍ調製物は、治療法の前に投与する。好ましくは、上記実施形態の各々において、治療法は、化学療法及びサイトカイン処置の組み合わせである。
【００９８】
一実施形態において、治療法は毎日施行（投与）し、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、最初の４週間は一週間に１回、その後二週間に１回投与する。一実施形態において、治療法は毎日施行（投与）し、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物は、最初の８週間は一週間に１回、その後二週間に１回投与する。
【００９９】
一実施形態において、２種以上の成分を同じ患者の診察時に投与する。一実施形態において、α２Ｍ調製物は治療法の施行（投与）前に投与する。別の実施形態において、α２Ｍ調製物は治療法の施行（投与）後に投与する。別の実施形態において、ＨＳＰ調製物は治療法の施行（投与）に続いて投与する。
【０１００】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、及び非ワクチン治療法は、周期的に被験体に投与する。周期的療法には、一定期間のＨＳＰ調製物の投与と、その後の一定期間の治療法の施行（投与）、及びこの逐次投与の反復が含まれる。あるいは、周期的療法には、一定期間のα２Ｍ調製物の投与と、その後の一定期間の治療法の施行（投与）、及びこの逐次投与の反復が含まれる。周期的療法は、１以上の治療法に対する抵抗性の確立を低減し、該治療法の１つの副作用を回避若しくは低減し、及び／又は治療の効力を改善することができる。かかる実施形態において、本発明は、ＨＳＰ調製物の投与と、その４〜６日後、好ましくは２〜４日後、より好ましくは１〜２日後の治療法の施行（投与）、の交互の投与（施行）であって、この周期が所望の回数で反復されうる投与を包含する。本発明はまた、α２Ｍ調製物の投与と、その４〜６日後、好ましくは２〜４日後、より好ましくは１〜２日後の治療法の施行（投与）、の交互の投与（施行）であって、この周期が所望の回数で反復されうる投与を包含する。
【０１０１】
特定の実施形態において、ＨＳＰ調製物及び治療法は、３週間未満の周期で、二週間に１回、１０日に１回又は一週間に１回の周期で、交互に投与（施行）する。他の実施形態において、α２Ｍ調製物及び治療法は、３週間未満の周期で、二週間に１回、１０日に１回又は一週間に１回の周期で、交互に投与（施行）する。本発明の特定の実施形態において、一周期は、各周期９０分、各周期１時間又は各周期４５分にわたり注入による化学療法剤の投与を含み得る。各周期は、少なくとも１週間の中断、少なくとも２週間の中断、少なくとも３週間の中断を含み得る。ある実施形態において、投与の周期数は、１〜１２周期、より典型的には２〜１０周期、そしてより典型的には２〜８周期である。
【０１０２】
好ましい実施形態において、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すＨＳＰ調製物は、化学療法とサイトカイン処置の組み合わせを受ける約２週間〜１ヶ月前に、前記癌の治療に有効ではない量で被験体に投与するものであり、ここで治療の有効性は、ＨＳＰ調製物又は化学療法とサイトカイン処置の組み合わせの単独投与の有効性よりも大きい。被験体がヒトであることが好ましい。好ましい実施形態において、被験体は、ＨＳＰ調製物の投与前に化学療法とサイトカイン処置の組み合わせに応答しないものである。別の好ましい実施形態において、化学療法はシクロホスファミドであり、サイトカインはＩＬ−１２であり、ＨＳＰ調製物は被験体の癌組織から得られたｇｐ９６−ペプチド複合体を含む。
【０１０３】
特定の好ましい実施形態において、ある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示すα２Ｍ調製物は、化学療法とサイトカイン処置の組み合わせを受ける約２週間〜１ヶ月前に、前記癌の治療に有効ではない量で被験体に投与するものであり、ここで治療の有効性は、α２Ｍ調製物又は化学療法とサイトカイン処置の組み合わせの単独投与の有効性よりも大きい。被験体がヒトであることが好ましい。
【０１０４】
好ましい実施形態において、被験体は、α２Ｍ調製物の投与前に化学療法とサイトカイン処置の組み合わせに応答しないものである。別の好ましい実施形態において、化学療法はシクロホスファミドであり、サイトカインはＩＬ−１２であり、α２Ｍ調製物は被験体の癌組織から得られたα２Ｍ−ペプチド複合体を含む。
【０１０５】
特定の実施形態において、上記方法は、癌の治療のためのＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）の投与を包含する。好ましい実施形態において、癌はＣＭＬであり、化学療法剤はＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）であり、ＨＳＰ調製物は治療対象の癌被験体から得られたｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含む。
【０１０６】
また本発明には、少なくとも１種の非ワクチン治療法とＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を投与又は施行することを含む治療方法及び送達方法、医薬組成物及び製剤、並びにかかる医薬組成物を含むキットが包含される。
【０１０７】
５．１．熱ショックタンパク質調製物
ＨＳＰの主要な３つのファミリーは、分子量に基づいて特定されている。そのファミリーはｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０及びｈｓｐ９０と呼ばれており、この数値は、そのストレスタンパク質のおおよその分子量（キロダルトン）を反映している。これらのファミリーの多くのメンバーは、他のストレス刺激、例えば限定されるものではないが、栄養欠乏、代謝破壊、酸素ラジカル、及び細胞内病原体による感染などに応答して誘導されることが見出されている（Welch, May 1993, Scientific American 56-64; Young, 1990, Annu. Rev. Immunol. 8:401-420; Craig, 1993, Science 260:1902-1903; Gethingら, 1992, Nature 355:33-45; 及びLindquistら, 1988, Annu. Rev. Genetics 22:631-677を参照のこと）。シャペロン機能に関与すると考えられているタンパク質のいくつかは、小胞体（ＥＲ）内腔に存在し、例えば、プロテインジスルフィドイソメラーゼ（ＰＤＩ；Gethingら, 1992, Nature 355:33-45）、カルレティキュリン（Herbertら, 1997, J. Cell Biol. 139:613-623、ｈｓｐ９０に関連するＧｒｐ９４又はＥＲｐ９９（Sorger及びPelham, 1987, J. Mol. Biol. 194:(2)341-4）、並びにｈｓｐ７０に関連するＧｒｐ７８又はＢｉＰ（Munroら,1986, Cell 46:291-300；Haas及びWebl, 1983, Nature 306:387-389）が含まれる。これら３つのファミリーの全てに属するＨＳＰ（かかるＨＳＰの断片も含む）は、本発明の実施に用いることができると考えられる。また、ＨＳＰは、ストレスにより誘導されるタンパク質の構成的に発現される保存された細胞性相同タンパク質を含むことに留意されたい。
【０１０８】
ＨＳＰは、本明細書中ではストレスタンパク質とも称し、以下の基準を満たすあらゆる細胞タンパク質の中から選択することができる。またこれは、細胞がストレス刺激に晒された際にその細胞内濃度が増大するタンパク質であり、他のタンパク質又はペプチドと結合可能であり、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の存在下又は低ｐＨにおいて結合タンパク質又はペプチドを放出することができ、さらに上記の性質のいずれかを有する任意の細胞タンパク質と少なくとも３５％の相同性を示すものである。
【０１０９】
熱ショックタンパク質は現存するタンパク質のうちで最も高度に保存されたタンパク質に入る。例えば、大腸菌由来のｈｓｐ７０であるＤＮＡＫは、擦過傷（excoriate）からのｈｓｐ７０タンパク質に対して約５０％のアミノ酸配列同一性を有する（Bardwellら, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81:848-852）。ｈｓｐ６０及びｈｓｐ９０ファミリーも同様に高いレベルのファミリー内保存性を示す（Hickeyら, 1989, Mol. Cell. Biol. 9:2615-2626; Jindal, 1989, Mol. Cell. Biol. 9:2279-2283）。さらに、ｈｓｐ６０、ｈｓｐ７０及びｈｓｐ９０ファミリーは、配列の点では例えば３５％を超えるアミノ酸同一性を有し、ストレスタンパク質に関係しているが、その発現レベルがストレスによって変化しないタンパク質を含むことが発見されている。従って、ストレスタンパク質／ＨＳＰは、ストレス刺激に応答して細胞内での発現レベルが増大する上記３つのファミリーのメンバーと少なくとも３５％〜５５％、好ましくは５５％〜７５％、最も好ましくは７５％〜８５％のアミノ酸同一性を有する他のタンパク質、その変異型タンパク質、類似体及び変異体も含むものとする。これらの３つのファミリーに属するストレスタンパク質の精製については後述する。
【０１１０】
さらに、ＨＳＰは免疫学的特性及び抗原性を有することが見出されている。現在、ＨＳＰは、免疫の調節において不可欠な役割を果たしていると理解されている。例えば、以前の実験では、ＨＳＰが、ＨＳＰに共有結合又は非共有結合している抗原性ペプチドに対して強力で長期間持続する特異的免疫応答を刺激することが証明されている。特異的ペプチドを使用することによって、誘起される免疫応答はそのペプチドに対して「特異的」すなわち標的化されたものとなる。
【０１１１】
ＨＳＰ−ペプチド複合体を非ワクチン治療法の施行と組み合わせて使用した場合、好ましくはペプチドがその症状に対して抗原性又は関連するものとなる。特に好ましい実施形態において、特定の種の癌を患う被験体に施した治療法の治療効果がＨＳＰ−ペプチド複合体の投与により改善されることが企図される（ここで、ペプチドはその種の癌の抗原の抗原性を提示する）。
【０１１２】
本発明においては、ＨＳＰ調製物は、限定するものではないが、未結合のｈｓｐ７０、ｈｓｐ９０、ｇｐ９６、カルレティキュリン、ｈｓｐ１１０、若しくはｇｐ１７０、又は、それらがペプチドと非共有結合若しくは共有結合により複合体化した複合体が含まれうる。
【０１１３】
５．２．熱ショックタンパク質及びα２Ｍの調製
本発明において、精製された未結合ＨＳＰ、特異的ペプチド若しくは非特異的ペプチドに共有結合若しくは非共有結合したＨＳＰ（本明細書中、これらをまとめてＨＳＰ−ペプチド複合体という）、及びこれらの組み合わせを使用する。複合体化形態又は非複合体化形態のＨＳＰの精製は、以下の小節において説明する。さらに、当業者であれば、同様に以下に記載するように、組換え発現又はペプチド合成により、ＨＳＰを合成することができる。
【０１１４】
また本発明には、精製された未結合α２Ｍ、特異的ペプチド若しくは非特異的ペプチドに共有結合若しくは非共有結合したα２Ｍ（本明細書中、これらをまとめてα２Ｍ−ペプチド複合体という）、及びこれらの組み合わせを使用する。複合体化形態又は非複合体化形態のα２Ｍの精製は、以下の小節において説明する。さらに、当業者であれば、同様に以下に記載するように、組換え発現又はペプチド合成により、α２Ｍを合成することができる。
【０１１５】
５．２．１．Ｈｓｐペプチド又はＨｓｐ７０−ペプチド複合体の調製及び精製
非共有結合の細胞により生成されるｈｓｐ７０−ペプチド複合体の精製は、以前に記載されており、例えば、Udonoら、1993, J. Exp. Med. 178:1391-1396を参照されたい。使用できる手順を以下に記載するが、これは例として示すに過ぎず、本発明を何ら制限するものではない：
最初に、５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）からなる、３容量の１×溶解バッファーにヒト又は哺乳動物細胞を懸濁させる。次に、ペレットを氷上で音波処理することにより、９９％以上の細胞を溶解させるが、これは顕微鏡検定により決定される。音波処理に代わり、細胞を機械的せん断により溶解させてもよく、この手法では、細胞は、典型的に３０ｍＭ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．５）と１ｍＭ ＰＭＳＦ中に再懸濁させ、氷上で２０分インキュベートした後、９５％以上の細胞が溶解するまで、ダウンス型（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイザーで均質化する。
【０１１６】
次に、溶解物を１，０００ｇで１０分遠心することにより、破壊されていない細胞、核及びその他の細胞屑を除去する。得られた上清を１００，０００ｇで９０分遠心した後、上清を回収してから、２ｍＭ Ｃａ２＋及び２ｍＭ Ｍｇ２＋を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化させたＣｏｎＡセファロースＴＭと混合する。機械的せん断により細胞を溶解させる場合には、、上清を等量の２×溶解バッファーで希釈した後、ＣｏｎＡセファロースＴＭと混合する。次に、上清をＣｏｎＡセファロースＴＭと４℃で２〜３時間結合させる。結合しなかった物質を回収し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＰＭＳＦに対して３６時間透析する（１００容量ずつ３回）。次に、透析物を１７，０００ｒｐｍ（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）で２０分遠心する。得られた上清を回収し、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ（ｐＨ７．５）、２０ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ及び１５ｍＭ ２−メルカプトエタノール中で平衡化させたＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にアプライする。このカラムを２０ｍＭから５００ｍＭのＮａＣｌ勾配で展開させた後、溶離した分画をドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により分離してから、適当な抗ｈｓｐ７０抗体（Ｓｔｒｅｓｓｇｅｎ製のクローンＮ２７Ｆ３−４由来のものなど）を用いたイムノブロッティングにより特性決定する。
【０１１７】
抗ｈｓｐ７０抗体と強い免疫反応性を示す分画をプールし、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を硫酸アンモニウム、具体的には、５０％〜７０％の硫酸アンモニウムカットで沈殿させる。得られた沈殿物を１７，０００ｒｐｍ（ＳＳ３４ Ｓｏｒｖａｌｌローター）での遠心分離により回収した後、７０％硫酸アンモニウムで洗浄する。洗浄した沈殿物を溶解させ、残留する硫酸アンモニウムをＳｅｐｈａｄｅｘ（登録商標）Ｇ２５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）上でのゲルろ過により全て除去する。必要であれば、このようにして得られたｈｓｐ７０調製物を前述のように、ＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて再精製することもできる。
【０１１８】
この方法を用いて、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を見かけ均質性まで精製することができる。典型的には、１ｇの細胞／組織から、１ｍｇのｈｓｐ７０−ペプチド複合体を精製することができる。
【０１１９】
ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を精製するための改良法は、細胞タンパク質を、固相基質に固定したＡＤＰ又はＡＴＰの非加水分解性類似体と接触させることにより、溶解物中のｈｓｐ７０を、ＡＤＰ又は非加水分解性ＡＴＰ類似体と結合させた後、結合ｈｓｐ７０を溶離することを含む。好ましい方法では、固相基質に固定したＡＤＰ（例えば、ＡＤＰ−アガロース）を用いたカラムクロマトグラフィーを用いる。得られたｈｓｐ７０調製物は、これまでより純度が高く、混入ペプチドを全く含まない。ｈｓｐ７０複合体の収率も約１０倍以上有意に高まる。これ以外に、ＡＤＰに代わり、ＡＴＰの非加水分解性類似体を用いるクロマトグラフィーを用いて、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を精製することもできる。例として、限定するものではないが、ＡＤＰ−アガロースクロマトグラフィーによるｈｓｐ７０−ペプチド複合体の精製は、次のように実施することができる：
ＭｅｔｈＡ肉腫細胞（５億個の細胞）を低張性バッファー中で均質化させ、溶解物を４℃にて１００，０００ｇで９０分遠心する。上清をＡＤＰ−アガロースカラムにアプライする。カラムをバッファー中で洗浄し、５カラム容量の３ｍＭ ＡＤＰで溶離する。ｈｓｐ７０−ペプチド複合体は、溶離する合計１５分画のうち２〜１０分画に溶離する。溶離した分画をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析する。この手順を用いて、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体を見かけ均質性まで精製することができる。
【０１２０】
ｈｓｐ７０−ペプチド複合体からのＨＳＰの分離は、ＡＴＰ又は低ｐＨの存在下にて行うことができる。これらの２つの方法は、ｈｓｐ７０−ペプチド複合体からのペプチドの溶出にも使用することができる。第１の手法は、ＡＴＰの存在下にてｈｓｐ７０−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。別の手法は、低ｐＨバッファー中でｈｓｐ７０−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。これらの方法及び当技術分野で公知のほかの方法を、ｈｓｐ−ペプチド複合体からのＨＳＰ及びペプチドの分離に適用することができる。
【０１２１】
５．２．２．Ｈｓｐ９０又は非共有結合細胞生成Ｈｓｐ９０−ペプチド複合体の調製及び精製
用いることができる手順を以下に記載するが、これは例として示すに過ぎず、本発明を制限するものではない：
最初に、５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ２、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）からなる、３容量の１×溶解バッファーにヒト又は哺乳動物細胞を懸濁させる。次に、このペレットを氷上で音波処理することにより、９９％以上の細胞を溶解させるが、これは顕微鏡検定により決定される。音波処理に代わり、細胞を機械的せん断により溶解させてもよく、この手法では、細胞は、典型的に３０ｍＭ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．５）と１ｍＭ ＰＭＳＦ中に再懸濁させ、氷上で２０分インキュベートした後、９５％以上の細胞が溶解するまで、ダウンス型（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイザーで均質化させる。
【０１２２】
次に、溶解物を１，０００ｇで１０分遠心することにより、破壊されていない細胞、核及びその他の細胞屑を除去する。得られた上清を１００，０００ｇで９０分再度遠心した後、上清を回収してから、２ｍＭ Ｃａ２＋及び２ｍＭ Ｍｇ２＋を含むＰＢＳで平衡化させたＣｏｎＡセファロースＴＭと混合する。機械的せん断により細胞を溶解させる場合には、上清を等量の２Ｘ溶解バッファーで希釈した後、ＣｏｎＡセファロースＴＭと混合する。次に、上清をＣｏｎＡセファロースＴＭと４℃で２〜３時間結合させる。結合しなかった物質を回収し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ａｃｅｔａｔｅ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＰＭＳＦに対して３６時間透析する（１００容量ずつ３回）。次に、透析物を１７，０００ｒｐｍ（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）で２０分遠心する。得られた上清を回収し、溶解バッファーで平衡化させたＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にアプライする。次に、２００ｍＭから５００ｍＭのＮａＣｌの塩勾配で、タンパク質を溶離する。
【０１２３】
溶離した分画をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分別した後、３Ｇ３（Affinity Bioreagents）などの抗ｈｓｐ９０抗体を用いて、イムノブロッティングすることにより、ｈｓｐ９０−ペプチド複合体を含む分画を同定する。この手順を用いて、ｈｓｐ９０−ペプチド複合体を見かけ均質性まで精製することができる。典型的には、１ｇの細胞／組織から、１５０〜２００μｇのｈｓｐ９０−ペプチド複合体を精製することができる。
【０１２４】
ｈｓｐ９０−ペプチド複合体からのＨＳＰの分離は、ＡＴＰ又は低ｐＨの存在下にて行うことができる。これらの２つの方法は、ｈｓｐ９０−ペプチド複合体からのペプチドの溶出にも使用することができる。第１の手法は、ＡＴＰの存在下にてｈｓｐ９０−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。別の手法は、低ｐＨバッファー中でｈｓｐ９０−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。これらの方法及び当技術分野で公知のほかの方法を、ｈｓｐ−ペプチド複合体からのＨＳＰ及びペプチドの分離に適用することができる。
【０１２５】
５．２．３．Ｇｐ９６又は非共有結合細胞生成Ｇｐ９６−ペプチド複合体の調製及び精製
用いることができる手順を以下に記載するが、これは例として示すに過ぎず、本発明を何ら制限するものではない：
３０ｍＭ炭酸水素ナトリウムバッファー（ｐＨ７．５）と１ｍＭ  ＰＭＳＦとからなる、３容量のバッファーにヒト又は哺乳動物細胞のペレットを再懸濁させ、細胞を氷上で２０分膨潤させる。次に、９５％以上の細胞が溶解するまで、細胞ペレットをダウンス型（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイザー（ホモジナイザーの適切なクリアランスは、各細胞型に応じて変動する）で均質化させる。
【０１２６】
溶解物を１，０００ｇで１０分遠心することにより、破壊されていない細胞、核及びその他の細胞屑を除去する。次に、この遠心分離ステップで得られた上清を１００，０００ｇで９０分再遠心する。１００，０００ペレット又は上清のいずれかから、ｇｐ９６−ペプチド複合体を精製することができる。
【０１２７】
上清から精製したら、この上清を等量の２×溶解バッファーで希釈した後、２ｍＭ Ｃａ２＋及び２ｍＭ Ｍｇ２＋を含むＰＢＳで平衡化させたＣｏｎＡセファロースＴＭと４℃で２〜３時間混合する。次に、このスラリーをカラムにパッキングした後、ＯＤ２８０がベースラインに下降するまで、１×溶解バッファーで洗浄する。次に、２ｍＭ Ｃａ２＋及び２ｍＭ Ｍｇ２＋を含むＰＢＳ中に溶解させた１／３カラム床容量の１０％α−メチルマンノシド（α−ＭＭ）でカラムを洗浄した後、カラムをパラフィン片で密封してから、３７℃で１５分インキュベートする。次に、カラムを室温まで冷却し、カラム底部からパラフィンを除去する。５カラム容量のα−ＭＭバッファーをカラムに導入し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより溶離液を分析する。典型的には、得られる物質は約６０〜９５％純粋であるが、これは、用いた細胞型及び組織対溶解バッファー比によって異なる。次に、５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７）を含むバッファーで平衡化させたＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にサンプルをアプライする。０〜１ＭのＮａＣｌ勾配を用いてカラムからタンパク質を溶離させると、ｇｐ９６分画が、４００ｍＭ〜５５０ｍＭ ＮａＣｌの間で溶離する。
【０１２８】
しかし、この手順は、２つの別のステップ（単独又は組み合わせて用いることができる）によって改変することにより、見かけ上均質なｇｐ９６−ペプチド複合体を一貫して生成することも可能である。１つの任意ステップは、ＣｏｎＡ精製ステップの前に硫酸アンモニウム沈殿を行なうものであり、もう一つの任意ステップは、ＣｏｎＡ精製ステップ後で、しかもＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭステップ前にＤＥＡＥ−セファロースＴＭ精製を実施するものである。
【０１２９】
第１の任意ステップを以下に例として説明するが、このステップでは、１００，０００ｇ遠心ステップから得られた上清を、硫酸アンモニウムの添加により、最終濃度が５０％硫酸アンモニウムとなるようにする。硫酸アンモニウムは、氷水のトレイ内に配置したビーカー中の溶液を穏やかに攪拌しながら、ゆっくりと添加する。この溶液を４℃で０．５〜１２時間攪拌し、得られた溶液を６，０００ｒｐｍで遠心分離する（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）。このステップから得られた上清を取り出し、硫酸アンモニウム溶液の添加により、７０％硫酸アンモニウム飽和に到らせた後、６，０００ｒｐｍで遠心する（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）。このステップから得られたペレットを回収し、７０％硫酸アンモニウムを含むＰＢＳ中に懸濁させることにより、ペレットをすすぐ。この混合物を６，０００ｒｐｍで遠心（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）した後、２ｍＭ Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含むＰＢＳ中にペレットを溶解させる。非溶解物質を１５，０００ｒｐｍでの短い遠心（Ｓｏｒｖａｌｌ ＳＳ３４ローター）により除去する。次に、溶液をＣｏｎＡセファロースＴＭと混合した後、前記と同様の手順を実施する。
【０１３０】
第２の任意ステップを以下に例として説明するが、このステップでは、ＣｏｎＡカラムから溶離した分画を含むｇｐ９６をプールした後、透析により、又は好ましくはＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５カラム上でのバッファー交換により、バッファーを５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、３００ｍＭ ＮａＣｌと交換する。バッファー交換後、予め５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、３００ｍＭ ＮａＣｌで平衡化させておいたＤＥＡＥ−セファロースＴＭと溶液を混合する。タンパク質溶液とビーズを１時間穏やかに混合し、カラムに注ぎ込む。次に、２８０ｎｍでの吸光度がベースラインに降下するまで、カラムを５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、３００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次に、５容量の５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）、７００ｍＭ ＮａＣｌを含むカラムから、結合したタンパク質を溶離する。タンパク質を含む分画をプールし、５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）で希釈することにより、塩濃度を１７５ｍＭまで低下させる。５ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７）で平衡化させたＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に、得られた物質を導入し、ＭｏｎｏＱ ＦＰＬＣＴＭイオン交換クロマトグラフィーカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）と結合したタンパク質を前記と同様に溶離する。
【０１３１】
しかし、当業者であれば、通常の実験により、第２の任意ステップを精製プロトコールに組み込む利点の評価を理解できる。さらに、任意ステップの各々を加える利点が、出発材料の供与源によって異なることも理解できる。
【０１３２】
ｇｐ９６分画を１００，０００ｇペレットから単離する場合、このペレットを１％デオキシコール酸ナトリウム又は１％オクスチル（oxtyl）グルコピラノシドのいずれかを含む５容量のＰＢＳ（ただし、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋は含まない）中に懸濁させ、氷上で１時間インキュベートする。懸濁液を２０，０００ｇで３０分遠心し、得られた上清をＰＢＳのいくつかの変種（同様に、Ｍｇ２＋及びＣａ２＋を含まない）に対して透析することにより、界面活性剤を除去する。透析物を１００，０００ｇで９０分遠心し、上清を回収した後、カルシウム及びマグネシウムを上清に添加することにより、それぞれ、最終濃度を２ｍＭとする。次に、非改変又は改変した方法のいずれかでサンプルを精製することにより、ｇｐ９６−ペプチド複合体を１００，０００ｇ上清から単離する（前記参照）。
【０１３３】
以上の手順を用いて、ｇｐ９６−ペプチド複合体を見かけ均質性まで精製することができる。約１０〜２０μｇのｇｐ９６を１ｇ細胞／組織から単離することができる。
【０１３４】
ｇｐ９６−ペプチド複合体からのＨＳＰの分離は、ＡＴＰ又は低ｐＨの存在下にて行うことができる。これらの２つの方法は、ｇｐ９６−ペプチド複合体からのペプチドの溶出にも使用することができる。第１の手法は、ＡＴＰの存在下にてｇｐ９６−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。別の手法は、低ｐＨバッファー中でｇｐ９６−ペプチド複合体の調製物をインキュベートすることを含む。これらの方法及び当技術分野で公知のほかの方法を、ｈｓｐ−ペプチド複合体からのＨＳＰ及びペプチドの分離に適用することができる。
【０１３５】
５．２．４．非共有結合細胞生成Ｈｓｐ１１０−ペプチド複合体の調製及び精製
用いることができる手順（Wangらにより、2001, J. Immunol. 166(1):490-7に記載）を以下に記載するが、これは例として示すに過ぎず、本発明を何ら制限するものではない：
ダウンス型（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジネートにより、５容量の低張バッファー（３０ｍＮ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．２）とプロテアーゼ阻害剤）中で細胞又は組織、例えば、腫瘍細胞組織のペレット（４０〜６０ｍｌ）を均質化させる。溶解物を４，５００×ｇ、次に１００，０００×ｇで２時間遠心する。細胞又は組織が、肝臓由来のものである場合には、得られた上清をまず青色セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に導入して、アルブミンを除去する。それ以外の場合には、結合バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５；１００ｍＭ  ＮａＣｌ；１ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＣａＣｌ２；１ｍＭ  ＭｎＣｌ２；及び１５ｍＭ  ２−ＭＥ）で予め平衡化させたＣｏｎＡ−セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）に、得られた上清を導入する。１５％α−Ｄ−ｏ−メチルマンノシドを含む結合バッファー（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）を用いて、結合したタンパク質を溶離する。
【０１３６】
ＣｏｎＡ-セファロース非結合物質を、まず、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５；１００ｍＭ  ＮａＣｌ；及び１５ｍＭ  ２−ＭＥの溶液に対して透析した後、ＤＥＡＥ−セファロースカラムに導入し、１００〜５００ｍＭのＮａＣｌの塩勾配により、溶離する。ｈｓｐ１１０を含む分画を回収、透析した後、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５；２００ｍＭ  ＮａＣｌ；及び１５ｍＭ  ２−ＭＥで平衡化させたＭｏｎｏＱ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）１０／１０カラムに導入する。結合したタンパク質は、２００〜５００ｍＭのＮａＣｌ勾配で溶出する。分画をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した後、Wangら、1999, J. Immunol. 162:3378に記載されているように、ｈｓｐ１１０の抗体（Ａｂ）を用いたイムノブロッティングを実施する。ｈｓｐ１１０を含む分画をプールし、これをＣｅｎｔｒｉｐｌｕｓ（Ａｍｉｃｏｎ、マサチューセッツ州ビバリー）により濃縮した後、Ｓｐｅｒｏｓｅ １２カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に導入する。４０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０；１５０ｍＭ  ＮａＣｌ；及び１５ｍＭ  ２−ＭＥにより、０．２ｍｌ／分の流速でタンパク質を溶離する。
【０１３７】
５．２．５．非共有結合細胞生成Ｇｒｐ１７０−ペプチド複合体の調製及び精製
用いることができる手順（Wangらにより、2001, J. Immunol. 166(1):490-7に記載）を以下に記載するが、これは例として示すに過ぎず、本発明を何ら制限するものではない：
ダウンス型（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジネートにより、５容量の低張バッファー（３０ｍＮ炭酸水素ナトリウム（ｐＨ７．２）とプロテアーゼ阻害剤）中で細胞又は組織、例えば、腫瘍細胞組織のペレット（４０〜６０ｍｌ）を均質化させる。溶解物を４，５００×ｇ、次に１００，０００×ｇで２時間遠心する。細胞又は組織が、肝臓由来のものである場合には、得られる上清をまず青色セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に導入して、アルブミンを除去する。それ以外の場合には、結合バッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５；１００ｍＭ  ＮａＣｌ；１ｍＭ  ＭｇＣｌ２；１ｍＭ  ＣａＣｌ２；１ｍＭ  ＭｎＣｌ２；及び１５ｍＭ  ２−ＭＥ）で予め平衡化させたＣｏｎＡ−セファロースカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）に、得られた上清を導入する。１５％α−Ｄ−Ｏ−メチルマンノシドを含む結合バッファー（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）を用いて、結合したタンパク質を溶離する。
【０１３８】
ＣｏｎＡ−セファロース結合物質を、まず、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）及び１５０ｍＭ  ＮａＣｌに対して透析した後、ＭｏｎｏＱ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）カラムに導入し、１５０〜４００ｍＭのＮａＣｌ勾配により、溶離する。プールした分画を濃縮した後、Ｓｕｐｅｒｏｓｅ １２カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）にアプライする。均質なｇｒｐ１７０を含む分画を回収する。
【０１３９】
５．２．６．α２Ｍ−抗原分子複合体
内因性α２Ｍ−抗原分子複合体は、以下の非限定的な方法により得ることができる。
【０１４０】
α−２−マクログロブリンは、市販のものを購入してもよいし又はヒトの血液から精製することにより調製してもよい。血液からα２Ｍを精製するために、例として以下のプロトコールを用い得るが、これに限定されるものではない。
【０１４１】
被験者から血液を採取し、凝血させる。次に、１４，０００×ｇで３０分遠心して血清を取得し、それを０．０４Ｍ Ｔｒｉｓバッファー（ｐＨ７．６）及び０．３Ｍ ＮａＣｌで平衡化したゲル濾過カラム（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−３００Ｒ）にアプライする。約１０ｍｌの血清について６５ｍｌのカラムを使用する。画分を３ｍｌ回収し、各画分を、α２Ｍ特異的抗体を用いてドットブロットによりα２Ｍの存在について試験する。α２Ｍ陽性画分をプールし、ＰＤ１０カラムにアプライして、バッファーを、ＰＭＳＦ添加０．０１Ｍリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．５）と交換する。次にプールした画分をリン酸バッファーで平衡化したＣｏｎＡカラム（１０ｍｌ）にアプライする。カラムを洗浄し、５％メチルマンノースピラノシドを用いてタンパク質を溶出する。溶出液をＰＤ１０カラムに通過させて、バッファーを酢酸ナトリウムバッファー（０．０５Ｍ；ｐＨ６．０）と交換する。続いてＤＥＡＥカラムを酢酸バッファーで平衡化し、サンプルをこのＤＥＡＥカラムにアプライする。カラムを洗浄し、０．１３Ｍ酢酸ナトリウムを用いてタンパク質を溶出させる。次にα２Ｍを含む画分をプールする。
【０１４２】
５．２．７．ＨＳＰ及びα２Ｍ、並びに抗原性ペプチドの組換え発現
当技術分野で公知の方法を使用して、ＨＳＰ及びα２Ｍを組換え手法により作製することができる。熱ショックタンパク質又はα２Ｍをコードする核酸配列を、宿主細胞における増殖及び発現のために発現ベクターに挿入しうる。
【０１４３】
発現構築物とは、本明細書中で使用する場合、適切な宿主細胞中でのＨＳＰ又はα２Ｍの発現を可能にする１以上の調節領域と機能的に連結されたＨＳＰ又はα２Ｍをコードするヌクレオチド配列を指す。「機能的に連結された」とは、調節領域と発現しようとするＨＳＰ又はα２Ｍの配列とが、転写及び最終的には翻訳されるように連結され、配置されている関係を指す。
【０１４４】
ＨＳＰ又はα２Ｍの転写に必要な調節領域を発現ベクターにより提供しうる。翻訳開始コドン（ＡＴＧ）もまた、元の開始コドンを欠損するＨＳＰ又はα２Ｍ遺伝子配列を発現させようとする場合には提供してもよい。適合可能な宿主−構築物系においては、細胞転写因子、例えばＲＮＡポリメラーゼ、を発現構築物上の調節領域に結合させ、宿主生物における改変型ＨＳＰ又はα２Ｍ配列の転写を実施してもよい。遺伝子発現に必要な調節領域の正確な性質は宿主細胞の種類に応じて異なり得る。一般には、ＲＮＡポリメラーゼに結合可能で、機能的に連結された核酸配列の転写を促進するプロモーターが必要である。かかる調節領域としては、転写及び翻訳の開始に関与する５’非コード配列、例えばＴＡＴＡボックス、キャッピング配列、ＣＡＡＴ配列などが含まれる。コード配列の３’側の非コード領域は、転写終止調節配列、例えばターミネーター及びポリアデニル化部位が含まれ得る。
【０１４５】
調節機能を有するＤＮＡ配列（プロモーターなど）をＨＳＰ若しくはα２Ｍ遺伝子配列に結合させるため、又はＨＳＰ若しくはα２Ｍ遺伝子配列をベクターのクローニング部位に挿入するために、適当な適合可能な制限部位を提供するリンカー又はアダプターを、当技術分野で周知の手法によりｃＤＮＡの末端に連結してもよい（Wuら, 1987, Methods in Enzymol 152: 343-349）。制限酵素による切断を利用して、連結前に一本鎖ＤＮＡ末端を消化又は充填することにより平滑末端を作製するよう改変しうる。あるいは、所望の制限酵素部位を、所望の制限酵素部位を含むプライマーを用いたＰＣＲを使用したＤＮＡの増幅によりＤＮＡの断片に挿入することができる。
【０１４６】
調節領域と機能的に連結されたＨＳＰ又はα２Ｍの配列を含む発現構築物を、それ以上クローニングすることなく、ＨＳＰ−ペプチド複合体又はα２Ｍ−ペプチド複合体の発現及び産生のための適切な宿主細胞中に直接的に導入することができる。例えば、米国特許第５，５８０，８５９号を参照。発現構築物にはまた、ＨＳＰ又はα２Ｍ配列の宿主細胞ゲノム中への組み込み（例えば相同組換えによる）を容易にするＤＮＡ配列を含ませることができる。この場合には、宿主細胞中でのＨＳＰ又はα２Ｍの増幅と発現のために、適切な宿主細胞に適した複製起点を含む発現ベクターを用いる必要がない。
【０１４７】
種々の発現ベクターを用いることが可能であり、例えば限定するものではないが、プラスミド、コスミド、ファージ、ファージミド、又は改変ウイルスが挙げられる。典型的には、そのような発現ベクターは、適当な宿主細胞において該ベクターが増殖するための機能的な複製起点、ＨＳＰ又はα２Ｍの遺伝子配列を挿入するための１以上の制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１以上の選択マーカーを含む。発現ベクターは、原核生物又は真核生物、例えば限定するものではないが、細菌、酵母、昆虫、哺乳動物及びヒトなどに由来しうる適合可能な宿主細胞と共に使用する必要がある。
【０１４８】
適切にプロセシングされたＨＳＰ／α２Ｍ又はＨＳＰ−ペプチド／α２Ｍ−ペプチド複合体の長期にわたる高収率の産生には、哺乳動物細胞中での安定な発現が好ましい。ＨＳＰ／α２Ｍ又はＨＳＰ−ペプチド／α２Ｍ−ペプチド複合体を安定に発現する細胞系は、選択マーカーを含有するベクターを用いて操作することができる。例えば限定するものではないが、発現構築物の導入後、操作された細胞を１〜２日間、富化培地中で増殖させ、次いで選択培地に換える。発現構築物中の選択マーカーは、その選択に対する耐性を付与し、最適な形としては細胞が安定にその発現構築物を染色体中に組み込み、培養下で増殖して細胞系へと増殖することができる。そのような細胞は長期間培養することができ、その一方でＨＳＰ／α２Ｍは連続的に発現される。
【０１４９】
組換え細胞は、温度、インキュベーション時間、吸光度、及び培地組成の標準的な条件下で培養することができる。しかしながら、組換え細胞の増殖条件は、ＨＳＰ／α２Ｍ及び抗原性タンパク質の発現についての条件とは異なり得る。ＨＳＰ／α２Ｍの産生を増強するために、改変された培養条件及び培地を用いてもよい。例えば、その元のプロモーターと共にＨＳＰを含有する組換え細胞を熱若しくは他の環境ストレス又は化学的ストレスに曝露してもよい。ＨＳＰ／α２Ｍ又はＨＳＰ−ペプチド／α２Ｍ−ペプチド複合体を産生するための最適条件を確立するために当技術分野で公知のあらゆる手法を適用することができる。
【０１５０】
細胞は、種々の供与源に由来するものとすることができ、例えば限定されるものではないが、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋細胞、肝細胞；Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージ、好中球、好酸球、巨核球、顆粒球等の血液細胞；種々の幹細胞又は前駆細胞、特に、例えば骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝等から得た造血幹細胞又は前駆細胞が挙げられる。細胞型の選択は、治療又は予防する腫瘍又は感染性疾患の種類に依存し、当業者により決定され得る。ある特定の実施形態では、ＨＳＰ／α２Ｍポリペプチドをコードする核酸配列を含む発現構築物を抗原性の細胞に導入する。本明細書中で用いる場合、抗原性の細胞には、感染性因子又は病原体に感染した細胞、非感染性の形態又は非病原性の形態の感染性因子又は病原体に（例えばヘルパー感染性因子の使用により）感染した細胞、弱毒化された形態の感染性因子又は病原体の非病原性の変異体若しくは複製ができない変異体に感染した細胞又はそれらを発現するように操作された細胞、癌の原因となる感染性因子（例えばウイルス）に感染しているものの未だ新生物性ではない前新生物性細胞；あるいは、突然変異原若しくは癌原因物質（例えばＤＮＡ損傷性物質、放射線など）に曝された抗原性の細胞が含まれうる。使用できる他の細胞は前新生物性細胞であって、形態、生理学的機能又は生化学的機能によって特性付けられるような正常の形態から新生物性の形態への移行の途上にあるものである。好ましくは本発明の方法に使用する癌細胞及び前新生物性細胞は哺乳動物起源のものである。本発明のこの態様から考えられる哺乳動物には、ヒト、ペット動物（例えばイヌ及びネコ）、家畜動物（例えばヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ及びウマ）、実験動物（例えばマウス、ラット及びウサギ）、及び捕獲した又は自由な野生動物が含まれる。
【０１５１】
種々の実施形態では、任意の癌細胞、好ましくはヒト癌細胞を、ペプチド−複合体を産生するための本発明の方法に使用することができる。癌細胞は、発現されたＨＳＰ／α２Ｍポリペプチドと共有結合により又は非共有結合により会合する抗原ペプチドを提供する。次に、ペプチド−複合体を該細胞から精製してかかる癌を治療するために使用する。本発明の方法で調製される免疫原性組成物により治療又は予防しうる癌には、肉腫及び癌腫のような腫瘍が含まれるがこれらには限らない。このように、前新生物性の病変、癌（複数の離れた部位に転移した癌を含む）から単離した任意の組織又は細胞は本発明の方法に使用することができる。例えば、充実性組織のみならず、異常に増殖している組織に見られる細胞、循環する白血病細胞、転移性の病変を使用することができる。
【０１５２】
他の実施形態では、前新生物性病変、癌組織又は癌細胞に由来する細胞系もまた、該細胞系の細胞が標的癌細胞上の抗原と共通する少なくとも１以上の抗原決定基を有している限り、使用することができる。癌組織、癌細胞、癌原因物質に感染した細胞、他の前新生物性細胞、及びヒト起源の細胞系が好ましい。
【０１５３】
癌細胞及び前新生物性細胞は当該技術分野において既知の任意の方法により同定できる。例えば、癌細胞は、形態、酵素アッセイ、増殖アッセイ、細胞質遺伝学的特性決定、ＤＮＡマッピング、ＤＮＡ配列決定、癌原因ウイルスの存在、又は突然変異原若しくは癌原因物質への曝露の履歴、イメージングなどにより同定できる。癌細胞はまた、外科的技術、内視鏡検査技術又は他の生検技術により得ることもできる。癌細胞のある特徴的な特性が知られている場合は、アフィニティークロマトグラフィー及び蛍光活性化細胞選別（例えば、癌細胞が発現する抗体に対する、蛍光により標識した抗体を用いる）のような、しかしながらこれらには限らない、当該技術分野で既知の任意の生化学的方法及び免疫学的方法により癌細胞を得る又は精製することもできる。
【０１５４】
癌組織、癌細胞又は細胞系統は単一の個体から得てもよいし、又は複数の個体からプールしてもよい。クローンの、同種の、又は精製された癌細胞の集団を使用することは必須ではない。また、標的癌細胞上の少なくとも１以上の抗原決定基がＨＳＰ／α２Ｍポリペプチドを発現するために使用する細胞に存在している限りは、ｉｎ ｖｉｖｏでの最終的な標的の細胞（例えば対象のレシピエントの腫瘍からの細胞）を使用する必要もない。加えて、離れた転移癌に由来する細胞を用いて原発癌に対する免疫原性組成物を調製することもできる。細胞の混合物は、該混合物中の細胞のうちの相当数が癌細胞であり且つ標的癌細胞と少なくとも１つの抗原決定基が共通しているのであれば、使用することができる。ある特定の実施形態では、ＨＳＰ／α２Ｍポリペプチドを発現するのに使用する癌細胞は精製されている。
【０１５５】
５．２．８．ペプチド合成
組換え手法によりＨＳＰ／α２Ｍを製造する以外に、ペプチド合成がある。例えばＨＳＰ／α２Ｍの全長又はＨＳＰ／α２Ｍの一部に対応するペプチドは、ペプチド合成装置を使用して合成することができる。慣用的なペプチド合成又は他の当技術分野で周知の合成プロトコールを使用しうる。
【０１５６】
ＨＳＰ／α２Ｍ又はその一部のアミノ酸配列を有するペプチドは、Merrifield, 1963, J. Am. Chem. Soc., 85:2149に述べられている手順と類似の手順を用いて固相ペプチド合成によって合成することができる。合成の際に、保護された側鎖を有するＮ−α−保護アミノ酸を、そのＣ末端で不溶性のポリマー支持体、例えばポリスチレンビーズに連結された伸長させるポリペプチド鎖に段階的に添加する。ペプチドは、Ｎ−α−脱保護アミノ酸のアミノ基を、Ｎ−α−保護アミノ酸（このアミノ酸はジシクロヘキシルカルボジイミドなどの試薬と反応させることによって活性化させている）のα−カルボキシル基と連結させることによって合成される。活性化カルボキシルに遊離アミノ基が結合することによってペプチド結合が形成される。最も一般的に用いられるＮ−α−保護基としては、酸に対して不安定なＢｏｃ、及び塩基に対して不安定なＦｍｏｃが挙げられる。適切な化学反応、樹脂、保護基、保護アミノ酸、及び試薬についての詳細は当該技術分野で周知であり、本明細書中では詳述しない（Athertonら, 1989, Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach, IRL Press、及びBodanszky, 1993, Peptide Chemistry, A Practical Textbook, 第２版, Springer-Verlagを参照されたい）。
【０１５７】
得られたＨＳＰ／α２Ｍの精製は、慣例的な手順、例えばゲル浸透、分配及び/若しくはイオン交換クロマトグラフィーを用いた分取ＨＰＬＣなどを用いて達成される。適切なマトリックス及びバッファーの選択については当該技術分野で周知であり、本明細書では詳述しない。
【０１５８】
５．３．抗原分子
以下の小節に、本発明のＨＳＰ／α２Ｍ−ペプチド複合体の抗原／免疫原成分として有用なペプチドについて概説し、また、そのようなペプチドの同定方法、例えばＨＳＰ／α２Ｍと抗原分子とのｉｎ ｖｉｔｒｏにおける複合体化のためのペプチドの組換え発現に使用するペプチドの同定について概説する。しかし、本発明の実施において、例えばＨＳＰ／α２Ｍ−ペプチド複合体を癌細胞又は病原体に感染した組織から直接精製する場合には、ＨＳＰ／α２Ｍ−ペプチド複合体の抗原分子の内容を知らなくてもよい。
【０１５９】
５．３．１．抗原／免疫原成分の単離
抗原ペプチド及び／又は成分は、ＡＴＰ又は低ｐＨのいずれかの存在下においてＨＳＰ／α２Ｍ複合体から溶出可能であることがわかっている。これらの実験条件を使用して、細胞から有用な抗原決定基を含むと考えられるペプチド及び／又は抗原成分を単離することができる。各抗原ペプチドは、単離した後、そのアミノ酸配列を慣例的なアミノ酸配列決定法を用いて決定しうる。続いて、かかる抗原分子は、化学合成法又は組換え手法により生成し、精製し、そしてｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＨＳＰと複合体化させることにより、本発明のＨＳＰ複合体を形成することができる。
【０１６０】
同様に、免疫原性を有する可能性のあるペプチドは、当該技術分野で周知の技法を用いてＭＨＣ−ペプチド複合体から溶出することができる（Falk, K.ら, 1990 Nature 348:248-251；Elliott, T.ら, 1990, Nature 348:195-197；Falk, K.ら, 1991, Nature 351:290-296）。
【０１６１】
従って、免疫原性又は抗原性を有する可能性のあるペプチドは、内因性ストレスタンパク質−ペプチド複合体又は内因性ＭＨＣ−ペプチド複合体のいずれかから単離し、その後抗原分子として用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＨＳＰ／α２Ｍと複合体化させることにより、本発明のＨＳＰ／α２Ｍ複合体を形成することができる。上記の複合体のいずれかからペプチド及び／又は抗原成分を単離するプロトコールの例は以下に記載するように当技術分野で公知である。
【０１６２】
５．３．２．ストレスタンパク質−ペプチド複合体からのペプチド
ストレスタンパク質−ペプチド複合体からペプチドを溶出させるには、２つの方法を用いることができる。
【０１６３】
１つの手法は、ストレスタンパク質−ペプチド複合体をＡＴＰの存在下にてインキュベートすることを含む。もう１つの手法は該複合体を低いｐＨのバッファー中でインキュベートすることを含む。
【０１６４】
簡潔に説明すると、対象とする複合体をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ１０ ａｓｓｅｍｂｌｙ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により遠心し、該複合体と弱く会合した低分子量物質を取り出す。高分子量の画分を取り出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析することができる。一方で、低分子量のものは下記のようにＨＰＬＣにより分析できる。ＡＴＰとインキュベートするプロトコールでは、高分子量画分中のストレスタンパク質−ペプチド複合体を１０ｍＭ ＡＴＰとともに３０分間室温にてインキュベートする。低いｐＨのプロトコールでは、酢酸又はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）をストレスタンパク質−ペプチド複合体に添加して最終濃度が１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）になるようにし、そして該混合物を室温にて、又は沸騰水浴中で、又はその間の任意の温度にて１０分間インキュベートする（Van Bleekら, 1990, Nature 348:213-216；及びLiら, 1993, EMBO JouＲＮＡl 12:3143-3151参照）。
【０１６５】
得られたサンプルを先に記載したようにＣｅｎｔｒｉｃｏｎ１０ ａｓｓｅｍｂｌｙにより遠心分離する。高分子量画分及び低分子量画分を回収する。残りの高分子量のストレスタンパク質−ペプチド複合体はＡＴＰ又は低ｐＨとともに再度インキュベートして残存するペプチドを取り出すこともできる。
【０１６６】
得られた低分子量画分をプールし、蒸発濃縮し、そして０．１％ＴＦＡ中に溶解する。次に溶解した物質を逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により、例えば０．１％ＴＦＡにより平衡化したＶＹＤＡＣ Ｃ１８逆相カラムを用いて分画する。次に、結合した物質を、約０．８ｍｌ／分の流速にて、０．１％ＴＦＡ中０〜８０％のアセトニトリルの直線的な勾配をかけてカラムを展開することにより溶出させる。ペプチドの溶出はＯＤ２１０によりモニターでき、ペプチドを含む画分を集めることができる。
【０１６７】
５．３．３．ＭＨＣ−ペプチド複合体からのペプチド
免疫原性を有する可能性のあるペプチドのＭＨＣ分子からの単離は当該技術分野において周知であるので、本明細書では詳しくは記載しない（Falkら, 1990, Nature 348:248-251; Rotzscheら, 1990, Nature 348:252-254; Elliottら, 1990, Nature 348:191-197; Falkら, 1991, Nature 351:290-296; Demotzら, 1989, Nature 343:682-684; Rotzscheら, 1990, Science 249:283-287を参照されたい。なおこれらの開示内容は参照により本明細書に組み入れる）。
【０１６８】
簡潔に説明すると、ＭＨＣ−ペプチド複合体は通常のイムノアフィニティーの手順により単離できる。ペプチドは、次に、アセトニトリル中約０．１％ ＴＦＡの存在下にてＭＨＣ−ペプチド複合体をインキュベートすることによりＭＨＣ−ペプチド複合体から溶出させることができる。溶出したペプチドは上記のように逆相ＨＰＬＣにより分画し精製することができる。
【０１６９】
溶出したペプチドのアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である手動の又は自動化されたアミノ酸配列決定技術の何れかにより決定することができる。潜在的に保護するペプチドのアミノ酸配列を決定した後、該ペプチドは、通常のペプチド合成又はその他の当該技術分野において周知のプロトコールを用いて所望の量を合成できる。
【０１７０】
上記で単離したペプチドのアミノ酸配列と同じアミノ酸配列を有するペプチドは、Merrifield, 1963, J. Am. Chem. Soc., 85:2149に述べられている手順と類似の手順を用いて固相ペプチド合成によって合成することができる。合成の際に、保護された側鎖を有するＮ−α−保護アミノ酸を、そのＣ末端で不溶性のポリマー支持体、例えばポリスチレンビーズに連結された伸長させるポリペプチド鎖に段階的に添加する。ペプチドは、Ｎ−α−脱保護アミノ酸のアミノ基を、Ｎ−α−保護アミノ酸（このアミノ酸はジシクロヘキシルカルボジイミドなどの試薬と反応させることによって活性化させている）のα−カルボキシル基と連結させることによって合成される。活性化カルボキシルに遊離アミノ基が結合することによってペプチド結合が形成される。最も一般的に用いられるＮ−α−保護基としては、酸に対して不安定なＢｏｃ、及び塩基に対して不安定なＦｍｏｃが挙げられる。
【０１７１】
簡単に説明すると、最初にＮ−α−保護アミノ酸のＣ末端をポリスチレンビーズに結合させる。続いてこのＮ−α−保護基を除去する。脱保護されたα−アミノ基を、次の（別の）Ｎ−α−保護アミノ酸の活性化α−カルボキシル基と連結させる。この工程を繰り返し行い、所望のペプチドを合成する。次に得られたペプチドを不溶性のポリマー支持体から切り出し、アミノ酸側鎖を脱保護する。長いペプチドは、複数の保護ペプチド断片を縮合することにより誘導することができる。適切な化学反応、樹脂、保護基、保護アミノ酸、及び試薬についての詳細は当該技術分野で周知であり、本明細書中では詳述しない（Athertonら, 1989, Solid Phase Peptide Synthesis:A Practical Approach, IRL Press、及びBodanszky, 1993, Peptide Chemistry, A Practical Textbook, 第２版, Springer-Verlagを参照されたい）。
【０１７２】
得られたペプチドの精製は、慣例的な手順、例えばゲル浸透、分配及び/若しくはイオン交換クロマトグラフィーを用いた分取ＨＰＬＣなどを用いて達成される。適切なマトリックス及びバッファーの選択については当該技術分野で周知であり、本明細書では詳述しない。
【０１７３】
５．３．４．外来性抗原分子
病原体の既知抗原又はある種の癌の腫瘍特異的抗原若しくは腫瘍関連抗原の抗原性を示す分子、例えば、抗原又はその抗原性部分は、ＨＳＰ／α２Ｍと複合体化するための抗原分子として使用するために、当該技術分野で公知のものから選択してもよいし、あるいは抗体若しくはＭＨＣ分子に結合可能な（抗原性をもつ）又は免疫応答を起こすことができる（免疫原性をもつ）ものをイムノアッセイにより決定してもよい。免疫原性及び抗原性を抗体への結合を検出することにより測定するために、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素免疫測定法）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫放射定量アッセイ、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、ｉｎ ｖｉｖｏ イムノアッセイ（例えばコロイド金標識、酵素標識、又はラジオアイソトープ標識を用いる）、ウエスタンブロット、免疫沈降反応、凝集アッセイ（例えばゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイ、免疫電気泳動アッセイ等の技術を用いる競合アッセイ系及び非競合アッセイ系を含むがこれらに限らない当該技術分野において既知の種々のイムノアッセイを使用することができる。一態様では、抗体結合は一次抗体上のラベルを検出することにより検出する。他の態様では、一次抗体を、二次抗体又は一次抗体への試薬の結合を検出することにより検出する。更なる態様では、二次抗体を標識化する。イムノアッセイで結合を検出するための多くの方法が当該技術分野において既知であり、それらを使用することが考えられる。免疫原性を検出するための一実施形態では、Ｔ細胞が介在する応答を標準的な方法により、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性アッセイ又はｉｎ ｖｉｖｏでの遅延型過敏反応アッセイにより、アッセイすることができる。
【０１７４】
抗原分子として用いるために有用であると考えられる抗原又はその誘導体は、種々の基準、例えば、（ある病原体による感染の治療又は予防を望む場合には）病原体の感染性の中和における抗原の関与（Vaccines 85, Lernerら（編）, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York, pp. 388-389中のNorrby, 1985, Summary）、種類若しくは群の特異性、患者の抗血清若しくは免疫細胞による認識、及び／又は抗原に特異的な抗血清又は免疫細胞による防御効果の証明により同定することができる。加えて、病原体が原因である疾患の治療又は予防を望む場合には、抗原にコードされているエピトープは、好ましくは時間的な、又は同じ病原体の異なる単離株間での抗原性の変動が小さいか又は全くない程度を示すべきである。
【０１７５】
好ましくは、癌の治療又は予防を望む場合は、既知の腫瘍特異的抗原分子（すなわち腫瘍細胞で発現される）若しくは腫瘍関連抗原（すなわち腫瘍細胞で比較的過剰発現される）又はその断片若しくは誘導体を使用する。例えば、このような腫瘍特異的抗原分子又は腫瘍関連抗原分子には、ＫＳ １／４全癌抗原（pancarcinoma antigen）（Perez及びWalker, 1990, J. Immunol. 142:3662-3667; Bumal, 1988, Hybridoma 7(4):407-415）; 卵巣癌抗原（ＣＡ１２５）（Yuら, 1991, Cancer Res. 51(2): 468-475）; 前立腺性酸フォスファタ−ゼ(phosphate)（Tailerら, 1990, Nucl. Acids Res. 18(16):4928）; 前立腺特異的抗原（Henttu及びVihko, 1989, Biochem. Biophys. Res. Comm. 160(2):903-910; Israeliら, 1993, Cancer Res. 53:227-230）; 黒色腫−関連抗原ｐ９７（Estinら, 1989, J. Natl. Cancer Inst. 81(6):445-446）; 黒色腫抗原ｇｐ７５（Vijayasardahlら, 1990, J. Exp. Med. 171(4):1375-1380）: 高分子量黒色腫抗原（Nataliら, 1987, Cancer 59:55-63）及び前立腺特異的膜抗原が含まれるがこれらに限らない。ＨＳＰ／α２Ｍと複合体化させうる他の外因性抗原としては、癌細胞において高頻度に突然変異を起こす部分又はタンパク質、例えば発癌遺伝子（ｒａｓ、特に４つのアミノ酸残基（１２，１３，５９若しくは６１）においてのみ起こる、活性化する突然変異を有するｒａｓの突然変異体（Gedde-Dahlら, Eur. J. Immunol. 24(2):410-414））、腫瘍抑制遺伝子（例えばｐ５３、これについて細胞傷害性Ｔ細胞応答を刺激しうる種々の突然変異体若しくは多型性p53ペプチド抗原が同定されている（Gnjaticら, 1995, Eur. J. Immunol. 25(6):1638-1642）などが挙げられる。
【０１７６】
ある特定の実施形態では、ある特定の腫瘍に特異的な抗原又はその断片若しくは誘導体を、ＨＳＰ／α２Ｍと複合体化させてＨＳＰ／α２Ｍ複合体を形成し、続いて希釈体と混合して、該腫瘍を有する患者に投与するために選択する。
【０１７７】
好ましくは、ウイルス性疾患の治療又は予防を望む場合には、既知のウイルスのエピトープを含む分子を使用する。例えばかかる抗原エピトープは、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスウイルスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）、牛疫、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、呼吸器合胞体（ＲＳ）ウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクスサッキーウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）、及びヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−ＩＩ）を含むがこれらに限らないウイルスから調製することができる。好ましくは、細菌感染症の治療又は予防を望む場合には、既知の細菌のエピトープを含む分子を使用する。例えば、かかる抗原エピトープは、マイコバクテリア（mycobacteria）、リケッチア（rickettsia）、マイコプラズマ（mycoplasma）、ナイセリア（neisseria）及びレジオネラ（legionella）を含むがこれらに限らない細菌から調製することができる。
【０１７８】
好ましくは、原生動物感染症の治療又は予防を望む場合には、既知の原生動物のエピトープを含む分子を使用する。例えばかかる抗原エピトープは、リーシュマニア（leishmania）、コクジジオア（kokzidioa）、及びトリパノゾーマ（trypanosoma）を含むがこれらに限らない原生動物から調製することができる。
【０１７９】
また好ましくは、寄生生物感染症の治療又は予防を望む場合には、既知の寄生生物のエピトープを含む分子を使用する。例えば、かかる抗原エピトープは、クラミジア（chlamydia）及びリケッチアを含むがこれらに限らない寄生生物から調製することができる。
【０１８０】
５．４．非共有結合ＨＳＰ／α２Ｍ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ生成
ＨＳＰ／α２Ｍと、それらが内在的にｉｎ ｖｉｖｏで結合したペプチドとの複合体を用いない実施形態では、ＨＳＰ／α２Ｍと抗原分子との複合体をｉｎ ｖｉｔｒｏで生成する。当業者には理解されるように、前述の手順で単離した、又は化学的に合成した、あるいは、組換え手法により生産したペプチドを、各種の精製された天然又は組換えストレスタンパク質とｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成して、非共有結合ストレスタンパク質−抗原分子複合体を生成することができる。あるいは、外因性抗原又は抗原若しくは免疫原断片又はその誘導体をストレスタンパク質と複合体化させることができる。ストレスタンパク質と抗原分子をｉｎ ｖｉｔｒｏで複合体化させる好ましいプロトコール例を以下に説明する。
【０１８１】
非共有結合ＨＳＰ−抗原分子複合体及びα２Ｍ−抗原分子複合体を作製する方法において、複合体は、Blachereら、1997 J. Exp. Med. 186(8):1315-22（参照によりその全文を本明細書に組み入れる）により記載された方法に従って調製する。Ｂｌａｃｈｅｒｅは、ｈｓｐと抗原分子のｉｎ ｖｉｔｒｏ複合体化を教示している。Ｂｌａｃｈｅｒｅに記載のプロトコールは、ｈｓｐ成分をα２Ｍで置き換えるように改変することができる。Ｂｉｎｄｅｒら（2001, J. Immunol. 166:4968-72）は、Ｂｌａｃｈｅｒｅの方法が抗原分子に結合したα２Ｍの複合体を生成するものであることを示している。
【０１８２】
複合体化の前に、ＨＳＰ／α２ＭをＡＴＰ又は低ｐＨで前処理することにより、目的とするＨＳＰ／α２Ｍと会合している可能性のあるペプチドを全て除去する。ＡＴＰ手法を用いる場合には、Levyら、1991, Cell 67:265-274により記載されているように、過剰なＡＴＰをアピラーゼ（apyranase）の添加により調製物から除去する。低ｐＨ手順を用いる場合には、ｐＨ調節試薬の添加により、バッファーのｐＨを中性ｐＨとなるよう再調節する。
【０１８３】
抗原分子と前処理したＨＳＰ／α２Ｍを混合して、抗原分子約５：ストレスタンパク質１のモル比を達成する。次に、２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．２）、３５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＭｇＣｌ２と１ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）を含むバッファーなどの好適な結合バッファー中で、上記混合物を４〜４５℃で、１５分〜３時間インキュベートする。調製物をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ１０アセンブリー（Ｍｉｌｉｐｏｒｅ）により遠心分離することにより、非結合ペプチドを全て除去する。ペプチドとストレスタンパク質との会合は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりアッセイすることができる。これは、内在性ＨＳＰペプチド複合体から解離したペプチドとＭＨＣ−ペプチド複合体から単離されるペプチドとのｉｎ ｖｉｔｒｏ複合体形成の好ましい方法である。
【０１８４】
ｈｓｐ７０と、タンパク質などの外因性抗原分子との複合体を生成するのに好ましい本発明の別の実施形態では、５〜１０μｇの精製ＨＳＰを等モル量の抗原分子と一緒に、容量が１００μＬの２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー（ｐＨ７．５）、０．５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＭｇＣｌ２及び１ｍＭ ＡＤＰにおいて３７℃で１時間インキュベートする。このインキュベーション混合物をさらにリン酸緩衝化生理食塩水中で１ｍｌまで希釈する。
【０１８５】
ｇｐ９６又はｈｓｐ９０とペプチドとの複合体を生成するのに好ましい本発明の別の実施形態では、５〜１０μｇの精製ｇｐ９６又はｈｓｐ９０を等モル量又は過剰量の抗原ペプチドと一緒に、２０ｍＭリン酸ナトリウムバッファーｐＨ７．５、０．５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｎＭ  ＭｇＣｌ２を含むバッファーのような好適なバッファーにおいて６０〜６５℃で５〜２０分インキュベートする。このインキュベーション混合物を室温まで冷却させ、必要であれば、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ１０アセンブリー（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて１回以上遠心分離することにより、非結合ペプチドを全て除去する。
【０１８６】
抗原分子は、種々の供与源から単離したり、化学合成したり、又は組換えにより生成しうる。かかる方法は、免疫療法又は予防用ワクチンの中規模又は大規模製造のために容易に適合させることができる。
【０１８７】
複合体形成の後、場合により、例えば以下に説明する混合リンパ球標的細胞アッセイ（ＭＬＴＣ）を用いて、免疫原性抗原分子複合体をｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイしてもよい。免疫原性複合体を単離した後、場合により、以下に説明する好ましい投与プロトコール及び賦形剤を用いて、これら複合体をさらに動物モデルにおいて特性決定してもよい。
【０１８８】
５．５．共有結合ＨＳＰ／α２Ｍ複合体の形成
ＨＳＰ／α２Ｍと抗原分子との非共有結合複合体の他に、抗原分子は、ＨＳＰ／α２Ｍと共有結合により結合させることもできる。ＨＳＰ／α２Ｍペプチド複合体は、好ましくは細胞又は組織から精製した後に架橋する。共有結合した複合体は、Ｂ細胞応答が望まれる場合の選択肢の１つである。
【０１８９】
一実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍは、化学的架橋により抗原分子と共有結合させる。化学的架橋方法は当該技術分野において周知である。例えば好ましい実施形態では、グルタルアルデヒド架橋を使用することができる。グルタルアルデヒド架橋はペプチドとｈｓｐとの共有結合による複合体形成のために使用されている（Barriosら, 1992, Eur. J. Immunol. 22: 1365-1372を参照されたい）。好ましくは、１〜２ｍｇのＨＳＰペプチド複合体を０．００２％のグルタルアルデヒドの存在下にて２時間かけて架橋させる。グルタルアルデヒドはリン酸緩衝化生理食塩水(ＰＢＳ)に対する終夜にわたる透析により除去される（Lussowら, 1991, Eur. J. Immunol. 21:2297-2302）。一実施形態においては、以下のプロトコールを採用する。場合により、ＨＳＰはＡＴＰ又は低ｐＨで前処理した後で複合体形成を行ってもよく、それによりＨＳＰポリペプチドと結合する可能性のあるペプチドを除去する。好ましくは、１ｍｇのＨＳＰを０．００２％のグルタルアルデヒドの存在下にて２時間かけて１ｍｇのペプチドと架橋させる。グルタルアルデヒドはリン酸緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)に対する終夜にわたる透析により除去される（Lussowら, 1991, Eur. J. Immunol. 21:2297-2302）。
【０１９０】
化学的架橋のための他の方法もまた使用してよく、さらに光架橋等のタンパク質を共有結合により結合させるための他の方法もまた使用してよい（Current Protocols in Molecular Biology, Ausubelら（編）, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, New Yorkを参照されたい）。
【０１９１】
他の実施形態においては、ＨＳＰと特異的抗原は紫外線（ＵＶ）架橋法により架橋する。
【０１９２】
一実施形態において、ＨＳＰは、化学的架橋により抗原分子と共有結合させる。化学的架橋方法は当該技術分野において周知である。例えば好ましい実施形態では、グルタルアルデヒド架橋を使用することができる。グルタルアルデヒド架橋はペプチドとＨＳＰとの共有結合による複合体形成のために使用されている（Barriosら, 1992, Eur. J. Immunol. 22: 1365-1372を参照されたい）。好ましくは、１〜２ｍｇのＨＳＰ−ペプチド複合体を０．００２％のグルタルアルデヒドの存在下にて２時間かけて架橋させる。グルタルアルデヒドはリン酸緩衝化生理食塩水(ＰＢＳ)に対する終夜にわたる透析により除去される（Lussowら, 1991, Eur. J. Immunol. 21:2297-2302）。あるいは、ＨＳＰ及びペプチドの集団を、当技術分野で公知の条件下における紫外線（ＵＶ）架橋により架橋してもよい。
【０１９３】
本発明の別の実施形態において、ペプチドの集団は、ペプチド断片とα２Ｍとを５０：１のモル比で５０℃にて１０分インキュベートした後、２５℃で３０分インキュベートすることにより、α２Ｍと複合体化させうる。次に、遊離（複合体化していない）ペプチドをサイズ排除濾過により除去する。タンパク質−ペプチド複合体は、好ましくはシンチレーションカウンターで測定し、モル濃度に基づいて、各タンパク質が等量のペプチドと結合しているかどうかを観察して確認することができる（約０．１％のペプチドの開始量）。詳細に関しては、Binder, 2001, J. Immunol. 166 (8):4968-72を参照されたい（その全文を参照により本明細書に組み入れる）。
【０１９４】
あるいは、抗原性ペプチドの集団を、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９４／１４９７６号及びＷＯ９９／５０３０３号（その全文を参照により本明細書に組み入れる）に記載のペプチドとα２Ｍとの複合体化方法により、α２Ｍと共有結合により複合体化させうる。抗原性ペプチドの集団とα２Ｍとの共有結合は、二官能性架橋剤を用いて実施しうる。かかる架橋剤及びその使用方法はまた当技術分野で周知である。
【０１９５】
一般に、α２Ｍをプロテアーゼと混合すると、α２Ｍの「べイト（bait）」領域の切断が起こり、プロテイナーゼがチオエステルにより「補足（トラップ）」され、コンホメーションの変化が起こり、これによって、α２Ｍ複合体とα２Ｍ受容体との結合が可能になる。α２Ｍのタンパク質分解活性化の間、非タンパク質分解リガンドは、活性化チオエステルと共有結合することができる。非タンパク質分解リガンドはまた、熱を用いて、求核活性化反応が逆転する間にアンモニア又はメチルアミンにより活性化α２Ｍ分子に組み込むこともできる（Gron及びPizzo, 1998, Biochemistry, 37:6009-6014）。α２Ｍ分子によるペプチドの偶然の補足を可能にする条件を用いて、本発明での使用のためにα２Ｍ−抗原複合体を調製する。このような共有結合の方法は、以前記載されている（Osadaら、1987, Biochem. Biophys. Res. Commun. 146:26-31；Osadaら、1988, Biochem. Biophys. Res. Commun. 150:833；Chu及びPizzo, 1993, J. Immunol. 150:48；Chuら、1994, Annu. N.Y. Acad. Sci. 737:291-307；Mitsudaら、1993, Biochem. Biophys. Res. Commun. 101：1326-1331）。このようにして、一実施形態では、α２Ｍ抗原分子複合体は、Gron及びPizzo, 1998, Biochemistry, 37:6009-6014により記載されたように調製することができる。Gron及びPizzoの方法により、抗原分子に共有結合したα２Ｍの複合体が得られる。
【０１９６】
例えば、α２Ｍポリペプチドを、プロテアーゼ、アンモニア又は、メチルアミンやエチルアミンなどのその他の小さなアミン求核試薬の存在下で、抗原分子と混合する。用いることができるプロテアーゼとして、限定するものではないが、トリプシン、ブタ膵臓エラスターゼ（ＰＥＰ）、ヒト好中球エラスターゼ、カテプシンＧ、Ｓ．アウレウス（S. aureus）Ｖ−８プロテイナーゼトリプシン、α−キモトリプシン、Ｖ８プロテアーゼ、パパイン、及びプロテイナーゼＫが挙げられる（Ausubelら編、”Current Protocols in Molecular Biology”, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience、ニューヨーク、17.4.6-17.4.8参照）。α２Ｍポリペプチドと抗原分子をｉｎ ｖｉｔｒｏで複合体化させる好ましいプロトコール例を以下に示す。抗原分子（１μｇ〜２０ｍｇ）とα２Ｍポリペプチド（１μｇ〜２０ｍｇ）を、プロテアーゼ、例えばトリプシン（約５００μｌ ＰＢＳ中０．９２ｍｇのトリプシン）の存在下で、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（１００μｌ〜５ｍｌ）中で混合することにより、約５：１の抗原分子：α２Ｍポリペプチドモル比を達成する。この混合物を３７℃で５〜１５分インキュベートする。５００μｌの４ｍｇ／４ｍｌ  ｐ−Ａフェニルメチルスルホニルフルオリド（ｐ−ＡＰＭＳＦ）を上記溶液に添加することにより、トリプシン活性を阻害し、２５℃で２時間インキュベートする。調製物をＣｅｎｔｒｉｃｏｎ１０アセンブリー（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により遠心分離することにより、非結合ペプチドを全て除去する。あるいは、遊離抗原分子をゲル透過カラムを通過させることにより除去することができる。ペプチドとα２Ｍポリペプチドの会合は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりアッセイすることができる。これは、ＭＨＣ−抗原分子複合体から単離した抗原分子、又は内在性α２Ｍ−抗原分子複合体から解離したペプチドをｉｎ ｖｉｔｒｏで複合体化させる好ましい方法である。上記方法は、ＨＳＰ−ペプチド複合体を生成するために容易に用いることができる。
【０１９７】
５．６．ＨＳＰ又はα２Ｍ融合タンパク質
本発明の特定の実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍ抗原分子複合体は、組換え融合タンパク質である。このような組換え融合タンパク質は、抗原分子の配列と連結されたＨＳＰ／α２Ｍの配列から構成され、本発明の方法において使用することができる。このような組換え融合タンパク質を生成するには、当該技術分野で公知の組換え方法を利用して、抗原分子をコードする配列と融合されたＨＳＰ／α２Ｍをコードする核酸配列を用いて発現ベクターを構築する（Suzueら、1997, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:13146-51）。続いて、ＨＳＰ／α２Ｍ抗原ペプチド融合体を発現させ単離する。その分子の抗原ペプチド部分を特異的に設計することによって、かかる融合タンパク質を、免疫応答を誘発するために、また標的とする癌及び感染性疾患に対する免疫療法において用いることができる。
【０１９８】
５．７．キット、投与量計画、投与、及び製剤
本発明はまた、本発明の治療方法を行うためのキットをも提供する。一実施形態において、かかるキットは、精製されたＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を含有する第１容器、癌の治療のための非ワクチン治療法を含有する第２容器を含む。好ましくは、癌はＣＭＬであり、ＨＳＰ調製物はｈｓｐ７０−ペプチド複合体を含み、治療法がＧｌｅｅｖｅｃＴＭである。特定の実施形態において、第２容器はメシル酸イマチニブを含む。別の特定の実施形態において、メシル酸イマチニブは精製されたものである。特定の実施形態において、キットは、精製されたＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、それ単独で投与した場合には疾患又は障害を治療するのに有効ではない量で含有する第１容器；並びに、非ワクチン治療法を、第１容器におけるＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与前、投与と同時又は投与後に施行した場合に、各成分を単独で投与したときの有効性の全体的な治療の有効性を改善するのに有効な量で含有する第２容器を含む。別の特定の実施形態において、キットは、精製されたＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、それ単独で投与した場合には疾患又は障害を治療するのに有効ではない量で含有する第１容器；並びに、１種以上の非ワクチン治療法を、第１容器におけるＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与前、投与と同時又は投与後に施行した場合に、ＨＳＰ調製物若しくはα２Ｍ調製物を単独で投与又は治療法を単独で施行したときの有効性の全体的な治療の有効性を改善するのに有効な量で含有する第２容器を含む。さらに別の特定の実施形態において、キットは、精製されたＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を、それ単独で投与した場合には疾患又は障害を治療するのに有効ではない量で含有する第１容器；並びに、それぞれ、非ワクチン治療法を、、第１容器におけるＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の投与前、投与と同時又は投与後に施行した場合に、ＨＳＰ調製物若しくはα２Ｍ調製物を単独で投与又は治療法を単独で施行したときの有効性の全体的な治療の有効性を改善するのに有効な量で含有する、第２容器及び第３容器を含む。好ましい実施形態において、本発明は、第１容器に、哺乳動物の癌組織から得られた非共有結合ＨＳＰ−ペプチド複合体又はα２Ｍ−ペプチド複合体の集団を含む精製されたＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物、第２容器に、精製された癌化学療法剤を含む組成物、並びに第３容器に、精製されたサイトカインを含む組成物、を含むキットを提供する。特定の実施形態において、メシル酸イマチニブを含有する第２容器は、精製されたメシル酸イマチニブを含有する。
【０１９９】
投与すべきＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物の用量は、大部分が、治療対象の被験体の状態及び大きさに、並びに施行する非ワクチン治療法の量、治療の頻度及び投与経路に応じて異なる。部位、用量及び頻度を含む、治療を継続するための治療計画は、最初の応答及び臨床判断により導き得る。
【０２００】
投与経路、及びＨＳＰ調製物中のＨＳＰの種類に応じて、ＨＳＰ調製物中のＨＳＰの量は、例えば投与当たり０．１〜１０００μｇの範囲としうる。ｇｐ９６又はｈｓｐ７０の好ましい量は、投与当たり１０〜６００μｇの範囲であり、ＨＳＰ調製物を皮内投与する場合には０．１〜１００μｇである。ｈｓｐ７０の特に好ましい量は、皮内投与する場合には投与当たり約５０μｇである。ｈｓｐ９０については、好ましい量は投与当たり約５０〜１０００μｇであり、皮内投与する場合には約５〜５０μｇである。投与するα２Ｍの量は、約４〜６週間に１回、皮内投与でその投与部位は逐次に変更して、２〜１０００μｇ、好ましくは２０〜５００μｇ、最も好ましくは約２５〜２５０μｇの範囲でありうる。
【０２０１】
いくつかの実施形態においては、本発明の方法がＨＳＰ調製物を最適以下の量で投与することを用いるため、投与経路及びＨＳＰ調製物中のＨＳＰの種類に応じて、ＨＳＰ調製物のＨＳＰの量は、投与当たり０．１〜１０００μｇの範囲の量よりも少ないものとしうる。従って、ｇｐ９６又はｈｓｐ７０の好ましい量は、投与当たり１０〜６００μｇの範囲未満であり、ＨＳＰ調製物を皮内投与する場合には０．１〜１０μｇの範囲未満である。ｈｓｐ９０については、好ましい量は投与当たり５０〜１０００μｇの範囲未満であり、皮内投与については５〜５０μｇの範囲未満である。投与するα２Ｍの量は、４〜６週間に１回、皮内投与でその投与部位は逐次に変更して、２〜１０００μｇ、好ましくは２０〜５００μｇ、最も好ましくは２５〜２５０μｇの範囲未満でありうる。
【０２０２】
可溶性及び治療法の施行（投与）部位は、本発明のＨＳＰ調製物の投与経路を選択する際の検討すべき因子である。投与経路は、例えば限定するものではないが、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、又は経粘膜でありうる。粘膜経路は、さらに、経口、直腸及び経鼻投与の形態をとることができる。上記因子を考慮して、ＨＳＰを、治療法の施行（投与）部位と同じ部位又は近接した部位に投与することが好ましい。
【０２０３】
本発明の一実施形態において、ＨＳＰ／α２Ｍは、任意の所望の投与経路を用いて投与しうる。皮内投与の利点としては、低用量を使用すること、及び急速な吸収が含まれる。皮下又は筋肉内投与の利点としては、ある程度不溶性の懸濁塩基及び油性懸濁液にとって好適であることが含まれる。粘膜投与経路は、限定されるものではないが、経口、直腸及び経鼻投与でありうる。粘膜投与用の調製物は、以下に記載する種々の製剤において好適である。
【０２０４】
ＨＳＰ／α２Ｍ調製物が水溶性の場合には、それを適当なバッファー、例えばリン酸緩衝化生理食塩水又は他の生理学的に混和性の溶液、好ましくは滅菌溶液中に製剤化しうる。あるいは、得られる複合体が水性溶媒において溶解度が低い場合には、それを非イオン性サーファクタント、例えばＴｗｅｅｎ、又はポリエチレングリコールなどで製剤化しうる。従って、化合物及びその生理学的に許容される溶媒を、吸引若しくは吸入（口腔又は鼻経由のいずれか）により、又は経口、口腔内、非経口若しくは直腸投与により、あるいは腫瘍の場合には直接固形腫瘍に注射することにより投与するために、製剤化しうる。
【０２０５】
経口投与のためには、医薬組成物は、例えば溶剤、シロップ剤又は懸濁剤の液状形態をとることができ、あるいは使用直前に水若しくは他の好適なビヒクルにより再構成するための乾燥製品として提供してもよい。かかる液体調製物は、懸濁化剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は食用硬化油脂）；乳化剤（例えばレシチン又はアカシア）；非水性ビヒクル（例えばアーモンド油、油性エステル又は精製植物油）；保存剤（例えばメチル−若しくはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、又はソルビン酸）などの薬学的に許容される添加物とともに通常の方法により調製することができる。医薬組成物は、例えば、結合剤（例えばα化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えばラクトース、微結晶セルロース又はリン酸水素カルシウム）；滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ）；崩壊剤（例えばジャガイモデンプン又はデンプングリコール酸ナトリウム）；又は湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容される賦形剤とともに通常の方法により調製した錠剤又はカプセル剤の形態をとることができる。錠剤は当該技術分野において周知の方法によりコーティングしてもよい。
【０２０６】
経口投与のためのＨＳＰ／α２Ｍ調製物は、活性複合体を制御放出できるように好適に製剤化することもできる。
【０２０７】
舌下投与のために、かかる調製物は、通常の方法で製剤化された錠剤又はロゼンジ剤の形態をとり得る。
【０２０８】
調製物は、注射による（例えばボーラス注射又は連続注入などによる）非経口投与用に製剤化することができる。注射用製剤は、単位投与剤形として、例えばアンプル又は複数投薬容器の中に保存剤を加えた形で提供することができる。調製物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁剤、溶剤又は乳剤などの形態であってもよく、懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散剤等の製剤化用物質を含み得る。あるいは、有効成分は、使用する前に好適なビヒクル（例えば発熱物質を含まない無菌水）で構成するための粉末状のものであってもよい。
【０２０９】
また調製物は、例えばカカオバター又は他のグリセリド等の従来の坐剤基剤を含む坐剤又は貯留浣腸等の直腸投与用調製物として製剤化してもよい。
【０２１０】
先に記載した製剤のほかに、調製物は、デポ製剤として製剤化されてもよい。このような長時間作用する製剤は、埋込（例えば皮下又は筋肉内）により、又は筋肉内注射により、投与することができる。したがって、例えば調製物は、好適なポリマー材料若しくは疎水性材料と一緒に（例えば許容可能な油中の乳剤として）、又はイオン交換樹脂と一緒に、あるいは例えば難溶性塩等の難溶性誘導体として、製剤化することができる。送達用ビヒクル又は親水性薬剤のキャリアの例として、リポソーム及びエマルションが周知である。
【０２１１】
吸入法により投与する場合、本発明に従って使用する複合体は、適切な噴射剤（例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体）を用いて、加圧パック又はネブライザーからエアロゾルスプレーとして都合よく送達される。加圧エアロゾルの場合、投与単位は、一定量を送達するためのバルブを備えることにより送達することができる。吸入器又は気体注入器で用いるカプセル及び薬包（例えばゼラチン製など）は、ラクトースやデンプンなどの好適な粉末基剤と化合物との混合粉末を含むように製剤化することができる。
【０２１２】
望ましい場合、調製物は、ＨＳＰ調製物又はα２Ｍ調製物を含む単位投与剤形を１つ以上含むパック又はディスペンサーデバイスに入れて提供してもよい。このパックは、例えば金属箔又はプラスチック箔製のもの（例えばブリスターパック等）としうる。パック又はディスペンサーデバイスに、投与に関する説明書を添付してもよい。
【０２１３】
治療法、例えば化学療法剤、放射線療法、及び生物学的／免疫療法剤（サイトカイン類など）を施すための適当な及び推奨される量、製剤及び投与（施行）経路は、当技術分野で公知であり、例えば、Physician's Desk Reference（第５６版、2002年）などの文献に記載されている。特定の実施形態において、本発明は、以下の表２に記載するものなどの抗癌剤を、好ましくは乳癌、卵巣癌、黒色腫、前立腺癌、大腸癌若しくは肺癌、ＣＭＬ若しくは軟部組織肉腫（例えば限定するものではないが、第５．１１節に記載のの消化管間質腫瘍）の治療のために投与することを含むものである。
【０２１４】
特定の実施形態においては、本発明の方法が治療法を最適以下の量で施行することを含むため、各治療法の量は標準的治療法で用いられる又は当技術分野で公知の量よりも低量でありうる。
【０２１５】
一実施形態において、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは、一日当たり、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、４００ｍｇ〜５００ｍｇ、５００ｍｇ〜６００ｍｇ、６００ｍｇ〜７００ｍｇ、７００ｍｇ〜８００ｍｇ、８００ｍｇ〜９００ｍｇ、又は９００ｍｇ〜１０００ｍｇで投与する。特定の実施形態において、総日用量は、２回の日用量として、２５ｍｇ〜５０ｍｇ、５０ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜２００ｍｇ、２００ｍｇ〜３００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ、又は４００ｍｇ〜５００ｍｇを被験体に投与する。ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは、１００ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは２００ｍｇ〜９００ｍｇ、より好ましくは３００ｍｇ〜８００ｍｇ、最も好ましくは４００ｍｇ〜６００ｍｇの用量で経口投与する。特定の実施形態において、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは、最適以下の日用量で経口投与する。好ましい実施形態において、経口投与するＧｌｅｅｖｅｃＴＭの最適以下の日用量は、約１０ｍｇ〜６００ｍｇ、約５０ｍｇ〜４００ｍｇ、約１００ｍｇ〜３００ｍｇ、又は約２００ｍｇである。他の実施形態において、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭは、一日おき、三日毎、四日毎、五日毎、六日毎、又は週に１回、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、又は４００ｍｇの用量で経口投与する。
【表２】
2006501147.tif 000007
【０２１６】
2006501147.tif 000008
【０２１７】
2006501147.tif 000009
【０２１８】
５．８．感染性疾患の治療及び予防
本発明の方法により治療することができる感染性疾患は、限定するものではないが、ウイルス、細菌、真菌、原生動物及び寄生生物などの感染因子により引き起こされる。
【０２１９】
本発明の方法により治療することができる感染因子は、限定するものではないが、ウイルス、細菌、真菌、原生動物性疾患の病原体が含まれる。
【０２２０】
本発明の方法により治療又は予防することができるウイルス性疾患として、限定するものではないが、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、単純ヘルペスＩ型（ＨＳＶ−Ｉ）、単純ヘルペスＩＩ型（ＨＳＶ−ＩＩ）、牛疫ウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、ロタウイルス、ＲＳウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、流行性耳下腺ウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、天然痘ウイルス、エプスタイン−バーウイルス、ヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）、ヒト免疫不全ウイルスＩＩ型（ＨＩＶ−ＩＩ）、及びウイルス性髄膜炎、脳炎、デング熱又は天然痘などのウイルス性疾患の病原体により引き起こされる疾患が挙げられる。
【０２２１】
本発明の方法により治療又は予防することができる細菌性疾患は、限定するものではないが、マイコバクテリア、リケッチア、マイコプラズマ、ナイセリア、肺炎双球菌、ボレリア・ブルグドルフェリ（ライム病）、バチルス・アントラシス（炭疽菌）、破傷風、ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、マイコバクテリア、破傷風、百日咳、コレラ、ペスト、ジフテリア、クラミジア、黄色ブドウ球菌、及びレジオネラなどの細菌により引き起こされる。
【０２２２】
本発明の方法と組み合わせた免疫反応薬剤の使用により治療又は予防することができる原生動物性疾患は、限定するものではないが、リーシュマニア、コクジジオア、及びトリパノソーマなどの原生動物により引き起こされる。
【０２２３】
本発明の方法の使用により治療又は予防することができる寄生生物性疾患は、限定するものではないが、クラジミア及びリケッチアなどの寄生生物により引き起こされる。
【０２２４】
５．９．癌の治療
現在、多数の非ワクチン癌治療法について臨床試験が行われており、当技術分野で周知である。ＨＳＰ／α２Ｍ調製物は、そのような非ワクチン癌治療法と一緒に、各種の癌の治療及び予防のために使用することができる。当業者であれば、本発明の方法に従って使用可能な、実験的かつ標準的な抗癌治療剤及び治療法を決定しうる。
【０２２５】
本発明の方法により治療することができる癌には、ヒトの肉腫及び癌腫、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜性腫瘍、中皮腫、ユーイング腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、大腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮癌、胎生期癌、ウィルムス腫、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上皮細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴音神経系腫、希突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽腫、白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄球性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病リンパ腫、非ホジキン病リンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、軟部組織肉腫、消化管間質腫瘍及び神経膠芽腫が含まれるがこれらに限定されない。
【０２２６】
６．実施例：
ＬＬＣ（Ｄ１２２）及びＢ１６などの腫瘍を担持するマウスは、シクロホスファミド（Ｃｙ）とインターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の組み合わせの処置に対して応答しない。二重移植実験において、ＭＣＡ２０７（Ｃｙ＋ＩＬ−１２処置に応答することが知られている腫瘍）及びＤ１２２を、マウスの反対側の２つの側面に注射し、有意な大きさ（１０×１０ｍｍ）になるまで成長させ、その後、マウスをＣｙ＋ＩＬ−１２で処置した。大きなＭＣＡ２０７腫瘍は迅速に退行したが、Ｄ１２２腫瘍は同じ動物の逆の側面において成長し続けた。この結果は、同じ動物において他の腫瘍に対しては強力な応答が存在しても、特定の腫瘍、例えばＤ１２２はＣｙ＋ＩＬ−１２に応答しないことを示した。
【０２２７】
処置に対して応答した腫瘍は免疫原性であると考えられるが、応答しなかった他の腫瘍はすべて免疫原性が低い。Ｃｙ＋ＩＬ−１２処置の前にＴ細胞プラミングの形態での宿主による腫瘍の免疫認識が処置に対する腫瘍応答となるかどうかを試験するため、以下の実験を実施した。以下の結果は、Ｃｙ＋ＩＬ−１２の単独処置に応答しないＤ１２２腫瘍を担持するマウスが腫瘍の免疫学的記憶を獲得し、以後のＣｙ＋ＩＬ−１２による処置を行ったマウスにおいて腫瘍拒絶反応が起こりうることを示した。
【０２２８】
マウスにおいてＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の両方を含むＴ細胞の強力な応答を誘発するために、熱ショックタンパク質−ペプチド複合体を使用した。
【０２２９】
６．１．材料及び方法
未処理マウスは、免疫しないか、又は第０日に、５及び２０μｇのＤ１２２由来ｇｐ９６−ペプチド複合体を皮下投与することにより免疫するか、又は２μｇのＤ１２２由来ｇｐ９６−ペプチド複合体を皮内投与することにより免疫した。陰性対照として、別のマウス群を、肝臓由来ｇｐ９６−ペプチド複合体で免疫した。Ｄ１２２由来ｇｐ９６−ペプチド複合体は、Ｄ１２２腫瘍細胞に対し内因性であり、それから単離したＨＳＰ−ペプチド複合体である。肝臓由来ｇｐ９６−ペプチド複合体は、肝細胞に対し内因性であり、それから単離したＨＳＰ−ペプチド複合体である。免疫の２週間後（第１４日）に、マウスを２００，０００個のＤ１２２細胞で皮下投与によりチャレンジした。免疫は、本発明者の以前の実験結果に従って腫瘍拒絶反応について最適以下の条件で行い、Ｄ１２２腫瘍は全てのマウスにおいて増殖した。腫瘍の大きさが直径１０ｍｍ以上に達したとき（第３２〜３４日）に、マウスをＣｙ＋ＩＬ−１２で処置した（Ｃｙ、３ｍｇを腹腔内投与；ＩＬ−１２、２００ｎｇを５日間かけて腹腔内投与）。
【０２３０】
６．２．結果
2006501147.tif 000010
【０２３１】
上記表にまとめたように、自己腫瘍由来のｇｐ９６−ペプチド複合体で抗原特異的免疫刺激を行った場合には、非応答性腫瘍Ｄ１２２はＣｙ＋ＩＬ−１２の処置に対し応答性となった。肝臓由来ｇｐ９６−ペプチド複合体で免疫していない群及び免疫した群においては、最も小さな腫瘍（直径１０〜１２ｍｍ未満）を担持するマウスのみが、Ｃｙ＋ＩＬ−１２処置後に腫瘍が退行した。対照的に、Ｄ１２２由来ｇｐ９６−ペプチド複合体で免疫したマウスにおいては、報告されている免疫療法の手法のいずれにおいても一般的に難治性の直径２２ｍｍ程度の大きなＤ１２２腫瘍がＣｙ＋ＩＬ−１２処置後に完全に退行した。さらに、各群から採取したいくつかの腫瘍サンプルについての免疫組織化学分析により次のことが明らかとなった。すなわち、１）Ｃｙ＋ＩＬ−１２処置の前後において、肝臓由来ｇｐ９６−ペプチド複合体で免疫した又は免疫していないマウスから採取した腫瘍においてＴ細胞の浸潤に兆候はなかった；２）対照的に、ある程度のＴ細胞浸潤（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋の両方）が、Ｃｙ＋ＩＬ−１２処置を開始してから第１２日においてＤ１２２由来ｇｐ９６−ペプチド複合体で免疫したマウスから採取した腫瘍において観察された（第６日では観察されなかった）。
【０２３２】
７．実施例：ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ及びＨＳＰ−ペプチド複合体の組み合わせを投与した後の慢性期ＣＭＬの患者における白血病細胞の完全な排除
慢性期ＣＭＬの患者を治療するための自己腫瘍由来ｈｓｐ７０−ペプチド複合体による免疫の可能性を試験するために、以下のプロトコールを使用した（図１）。図１にまとめた臨床プロトコールは、ＨＰＳ調製物でのワクチン接種の前、その間及びその後に行った全ての身体的検査、血液検査、Ｘ線検査及び骨髄検査を含む。試験を行う前に、ＣＭＬの被験者の診断を、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて被験者から得た末梢血又は骨髄のｂｃｒ／ａｂｌ分子タイピングによりｂｃｒ／ａｂｌキメラタンパク質又は転写産物の有無を測定して確認した。
【０２３３】
７．１．材料及び方法
参加被験者は以下の基準を満たした：米国東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）の試験スコア２未満を示した；年齢が少なくとも１８歳であり、インフォームドコンセントを得ることができた；フィラデルフィア染色体陽性の慢性期ＣＭＬという最初の診断を受けてから１年が経過していなかった；細胞遺伝学的寛解状態ではなかった；疾患の進行のために主治医によってそのような治療が必要であると認められない限り、６月以内に骨髄又は幹細胞移植を予定していなかった；ヒドロキシウレア、１０日間のＡｒａ−Ｃ／日又はＧｌｅｅｖｅｃＴＭ（メシル酸イマチニブ）の同時の標準的治療を維持していた；研究の参加によって健康状態が悪化するような重篤な病状を示さなかった；血清クレアチンレベルが２．０未満で適度な腎機能を示し、ビリルビン及びトランスアミナーゼが正常上限値の２．０倍未満の適度な肝機能を示した；コルチコステロイド治療又は他の免疫抑制治療を受けていなかった；カンジダ、マンプス及びＰＰＤを用いた皮膚試験による３つの抗原のうちの少なくとも１つに対して適度な遅延型過敏症（ＤＨＴ）応答により示されるアネルギーの欠如を示さなかった、すなわち硬化はその配置の４８時間後に０．５ｃｍより大きかった。
【０２３４】
以下のような被験者は除いた：２以上のＥＣＯＧ試験スコアを示した被験者；フィラデルフィア染色体陽性の慢性期ＣＭＬという最初の診断を受けてから３年以上経過している被験者；ＩＦＮ処置を受けている被験者；顕著な貧血（すなわちヘモグロビンが１０ｇ／ｍｌ未満）又は血小板減少（すなわち血小板が２０，０００／μｌ未満であって、輸血が必要）を示す被験者；末梢芽球数が１０％を超える被験者；尿又は血液妊娠試験で陽性を示した被験者；腎機能不全（すなわち血清クレアチンが２．０以上）又は肝機能不全（すなわちビリルビン又はトランスアミナーゼが正常上限値の２．０倍を超える）を示した被験者；登録時に入院が必要な有意な活性の感染症を示す被験者；適当な追跡調査を妨げるような顕著な行動的又は心理学的問題を有する被験者。
【０２３５】
以下の理由のいずれかのために被験者は試験を中断した：何らかの理由により取りやめを希望した被験者：実績のある有効な治療法を受けることが可能となり、そちらを選択した被験者（例えば、監督庁による他の試験中の薬剤の承認、同一のヒト白血病抗原（ＨＬＡ）が適合するドナーの特定）、追跡調査において失踪した被験者；以下の兆候及び症状により示される同時治療にもかかわらず疾患の促進の明らかな証拠を示した被験者（すなわち、末梢芽球１０％以上、末梢芽球＋前骨髄球３０％以上、末梢好塩基球２０％以上、治療に関係なく血小板減少１００，００／ｍｍ３未満、骨髄芽球１０％以上、有意な髄質線維症、治療に対して非応答性の進行性脾腫、ＷＢＣの３つが５０，０００／ｍｍ３未満、ヘマトクリット２５未満、治療により制御されずに血小板１００，０００／ｍｍ３、不明な持続性の熱、細胞遺伝学的クローン性進化；局所的な未成熟芽を伴う髄外疾患（緑色腫など）；研究者の意見が被験者の最良の目的を保護するためであるという他の理由。
【０２３６】
それらの最初のＨＳＰ調製物の投与の前に、被験者に、それぞれ２日、５ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月及び１年にわたりＧｌｅｅｖｅｃＴＭ治療を施した（カプセル剤形で一日４００〜８００ｍｇ、１日１回日用量４００〜６００ｍｇを投与、又は各４００ｍｇを２回の日用量で８００ｍｇを投与）。上記基準を満たす被験者は、試験期間にわたってＧｌｅｅｖｅｃＴＭ治療を受けることができた。続いて、被験者から、末梢単核細胞を採取するために末梢血管を用いてアファレーシスを行った。検体の大部分をｈｓｐ７０−ペプチド複合体の精製に使用した。その後、自己由来ｈｓｐ−７０ペプチド複合体は、実質的に第５．３．１節に記載のようにして、ＡＤＰ−アガロースプロトコールを用いて精製した。回収物の小さな画分をＣＴＬアッセイの標的として使用した。５０ｍｇのｈｓｐ７０−ペプチド複合体を２ヶ月間かけて合計８回被験者の前腕の皮膚に皮内投与し、さらにＧｌｅｅｖｅｃＴＭ治療を行った（カプセル剤形で一日４００〜８００ｍｇ、１日１回日用量４００〜６００ｍｇを投与、又は２日に１回８００ｍｇを投与）。血液サンプルを３回採取して免疫系の状態を確かめた。血液はワクチン接種の前、ワクチン接種の間、及び８回目のワクチン接種から１〜２週間後に採取した（図１参照）。処置の最後に、全被験者に骨髄について完全な血液学的及び細胞遺伝学的評価を行った（Silverら、1999, Blood 94 (5): 1517-1536参照）。
【０２３７】
実行可能性及び毒性データを採集するために、さらに、抗腫瘍免疫の発達について当技術分野で公知の方法に従って判定した。例えば、（１）自己由来ｂｃｒ／ａｂｌ陽性末梢単核細胞に対して応答性のＩＦＮ−γ産生ＣＤ８＋Ｔリンパ球の末梢血における増大（例えば、Janetzkiら、2000, Int. J. Cancer 88:232-238参照）；（２）ＨＬＡ−Ａ２陽性の患者におけるＰＲ１−ＨＬＡ−Ａ２テトラマー法によるＰＲ−１特異的ＣＴＬの増大（例えば、Clarkら、2001, Blood 98 (10):2887-2893、及びMolldremら、1999, Cancer Research 59:2675-2681参照）；（３）末梢リンパ球の免疫表現型の変化（例えば、Akelら、2002, Clin. Lab. Haem. 24:362-367参照）；並びに（４）骨髄からのフィラデルフィア染色体の細胞遺伝学的退行（例えば、Wangら、2002, British J. Haematology 118:771-777参照）。
【０２３８】
評価可能な５名の被験者における併用療法によって、以下の測定のように白血病細胞の完全な排除がもたらされた：処置患者から採取した末梢血又は骨髄におけるｂｃｒ／ａｂｌ転写産物の有無を測定するＲＴ−ＰＣＲ分析（例えば、Merxら、2002, Leukemia 16:1579-1583；Wangら、2002, British Journal of Haematology 118:771-777；及びStentoftら、2001, Eur. J. Haemotol. 67:302-308を参照）；ＧｌｅｅｖｅｃＴＭの認可に使用される基準の１つである細胞遺伝学的応答（Silverら、1999, Blood 94 (5):1517-1536参照）；あるいはＲＴ−ＰＣＲと細胞遺伝学的応答の組み合わせ。以前の報告を検討すると、ＧｌｅｅｖｅｃＴＭ単独で処置した患者の１０％未満が上記同基準を用いた応答を達成している。Drukerら、2002, Hematology (Am. Soc. Hematol. Educ. Program): 111-135, 114-115参照。
【０２３９】
本明細書で引用する全ての文献は、各個々の刊行物又は特許若しくは特許出願がその全ての目的のためにその全文が参照により組み込まれていると具体的かつ個々に示すのと同程度に、全ての目的のためにその全文を参照により本明細書に組み入れる。
【０２４０】
本発明の多数の改変及び変形は、当業者には明らかなように本発明の精神及び範囲を逸脱することなく行うことができる。本明細書に記載した具体的な実施形態は、単なる例示を目的として提供したものであり、本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ制限され、またその均等の全範囲もかかる特許請求の範囲に包含するものである。
【図面の簡単な説明】
【０２４１】
【図１】第７節に記載した臨床プロトコールの概要を示す。
【図１】
2006501147.tif 000011