(57)【要約】ヒト細胞中でコンピテント遺伝子産物を生産するための方法であって、前記方法は以下のステップ：修飾した熱誘導プロモーターに作用可能式に連鎖した注目のタンパク質をコードする遺伝子の構造を提供し、形質転換により又はトランスフェクションにより、前記DNA構造をヒト細胞株に導入し、形質転換又はトランスフェクトした宿主細胞株を形成し、前記形質転換又はトランスフェクトした細胞株を一時的に高温に曝し、そして当該温度が前記宿主細胞の正常な成長温度へ戻った後、タンパク質への翻訳を発生させることを可能にし、それによって重要な前記タンパク質の生産が起こること、を含んで成る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト細胞中でコンピテント遺伝子産物を生産するための方法であって、以下のステップ：
修飾した熱誘導プロモーターに作用可能式に連鎖した注目のタンパク質をコードする遺伝子の構造を提供し、
形質転換により又はトランスフェクションにより、前記DNA構造をヒト細胞株に導入して、形質転換又はトランスフェクトした宿主細胞株を形成し、
前記形質転換又はトランスフェクトした細胞株を一時的に高温に曝し、そして当該温度が前記宿主細胞の正常な成長温度へ戻った後、タンパク質への翻訳を発生させることを可能にし、それによって重要な前記タンパク質の生産が起こること、
を含んで成る方法。
【請求項２】
前記修飾した熱誘導プロモーターがHi-Hotプロモーターである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ヒト細胞株がコンピテントヒト肝細胞株である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記発現される遺伝子が治療用タンパク質をコードする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記発現される遺伝子がインターフェロン、インターロイキン、血液凝固因子、インスリン、成長ホルモン、ウロキナーゼ、EPO、TPA、FSH、ソマトスタチン、抗体、DNAase、ミオグロビン、プロ-及び抗-血管新生因子並びに動物用関連タンパク質等の治療遺伝子を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記発現される遺伝子が天然肝タンパク質である、請求項３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安定且つコンピテントヒト肝細胞株を用いる最適化したタンパク質生産システムに関する。
【背景技術】
【０００２】
治療用タンパク質は、２０世紀初期から科学及び医学団体において公知になったが、組織及び尿から採取し得る少量のものを治療に代替させることは不可能でないとしても困難であった。1980年代におけるゲノム技術の進歩は、多くの数の潜在的な治療用タンパク質('生物学的治療')の生産を担う遺伝子の同定、単離、及び特徴化を直接促進させた。
【０００３】
組換DNA技術は、多くの治療用タンパク質の大規模製造及び生産を可能にする。このアプローチでは、増殖のために原核生物又は真核生物の細胞源を使用し得る。任意のタンパク質、及び代用の治療用タンパク質の機能及び効能は、主に遺伝子配列に依存するが；当該タンパク質に対するいくつかの翻訳後修飾は、タンパク質の能力の中で最大の効能を有す機能への重大な役割も果たし得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
翻訳後修飾(PTMs)は、タンパク質の基礎を積む側鎖のアミノ酸特質を変化させ、かくして、それらはタンパク質の機能を変化させる。それらの翻訳後修飾は、集合的にタンパク質の最終的な構造及び機能に著しく貢献する。従って、治療用タンパク質がヒトに使用するために作製される場合、当該タンパク質はヒトパターンのタンパク質に付随する翻訳後修飾を有すことが重要であると考えられる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
工業例：原核生物でのEPO生産の起源は失敗した。なぜならヒト遺伝子生産をトランスフェクトしたバクテリアの宿主細胞により授けられた翻訳後修飾のパターンは、正確でないか、又は薬剤へ適した臨床有効レベルを与えるに十分でなかった。従って、ヒト以外の哺乳類の細胞においてEPOを生産することは、薬物の進化における重要なポイントであった。
【０００６】
天然と組換治療用タンパク質の記録された差異
【０００７】
生物学的治療の生物学的活性／治療の有効性に関連した正確なPTMsの重要性の報告は、特に臨床開発における新規生物学的治療分子の大量な情報の観点において多く存在する。以下は報告された研究のいくつかの例である。
【０００８】
組換糖タンパク質のグリコシル化(主にPTM)は、循環クリアランス率を含むそれらの生物学的活性に深く影響を及ぼすことができ、そして正確にグリコシル化された組換タンパク質は、不正確にグリコシル化された構造よりも有意に長い血清半減期を有す(Chitlaru T,Kronman C, Zeevi M, Kam M, Harel A, Ordentlich A, Velan B,Shafferman A (1998).Modulation of circulatory residence of recombinant acetylcholinesterase through biochemical or genetic manipulation of sialylation levels. Biochem J 1998 336: 647-658.)。
【０００９】
重要な用語の解説：
【００１０】
天然タンパク質：天然の生理学的状態において、任意の操作又は設計なしで、所定の組織、臓器、細胞によって日常的に合成されるタンパク質。
【００１１】
組換タンパク質：細胞又は臓器を遺伝子操作した後に得られる遺伝子産物(タンパク質)。
【００１２】
Misaizu T,Matsuki S, Strickland TW,Takeuchi M, Kobata A, Takasaki S (1995)。腎臓中で組換ヒトエリスロポイエチン(Blood 86：4097-4104.)を取り扱う中で、N-連鎖した糖鎖のアンテナ構造の役割は、天然物及びある程度グリコシル化した組換ヒトエリスロポエチン(EPO)が、in vivo活性に深く影響を及ぼすことであることが見出された。不正確なグリコシル化のパターンは、総体内クリアランス率を３倍超に増加させ、そして赤血球前駆細胞のより低い活性をもたらす。
【００１３】
多くの場合において、天然と組換糖タンパク質の間、異なる細胞株において発現した組換体の間、並びに異なる臓器からの関連した糖タンパク質の間のグリコシル化において有意な差異がある。Landberg E, Pahlsson P,Krotkiewski H, Stromqvist M, Hansson L, Lundblad A (1997)。ヒトミルクからの胆汁塩刺激リパーゼのグリコシル化：天然及び組換体の比較(Arch Biochem Biophys 344：94-102.)では、天然及び組換体のヒトミルクからの胆汁塩刺激リパーゼ(BSSL)のグリコシル化における差異が見出された。
【００１４】
天然BSSLは、多量のA2FファミリーN-グリカンを含み、一方、CHO又はマウス繊維化細胞株中で発現した組換体は主にA2ファミリーグリカンを有す。
【００１５】
Jacquinot PM, Leger D, Wieruszeski JM, Coddeville B, Montreuil J, Spik G (1994)。トリトランスフェリングリカン(chicken transferrin glycans)のグリコシル化における変化は、胚形成及び胚肝細胞の一次培養の間に生合成され(Glycobiology 4：617-624)、トリ血清、トリ胚血清、及び一次培養におけるトリ胚肝細胞の培養培地からのからのトランスフェリンのオリゴサッカライドの研究では、それぞれ区別されるグリコシル化のパターンが見出された。
【００１６】
Tanigawara Y, Hori R, Okumura K, Tsuji J, Shimizu N, Noma S, Suzuki J, Livingston DJ, Richards SM, Keyes LD,等.(1990)。マウスC127及びチャイニーズハムスター卵巣細胞において製造されたヒト組換組織型プラスミノーゲンアクチベーター(Chem Pharm Bull(Tokyo)1990 Feb；38(2)：517-22)のチンパンジーでの薬物動態は、異なる糖質構造を有すr-tPA's(組換組織プラスミノーゲンアクチベーター)の２つの調製物が、異なる薬物動態を示すことを実証し、当該糖質構造が生物学的活性、それから先のt-PAの治療効果に影響を及ぼすことができることを強く示唆する。
【００１７】
天然タンパク質である理由
【００１８】
正確なヒト翻訳後修飾を欠いた組換タンパク質は、中和抗体を導き出すことができ、有効性の減少をもたらす。更に、組換的に生産したタンパク質は、しばしば迅速に循環から消失し、半減期を延長されるために頻繁な注入又はpeg化を要求する。"Peg化"タンパク質の生産は高価であり、且つ当該タンパク質はいくつかの生物学的活性を消失させるおそれがあり、同一の効果のためにより高用量を要求する。
【００１９】
反対に、ヒト組織由来の天然タンパク質は、完全にヒトでのグリコシル化がなされ、現行の治療を克服する利点である、消失活性/有効性/安全性を有する製品を提供する。
【００２０】
最終タンパク質生産において天然に発生しているグリカン構造及びサブタイプの存在による、よりよい効果及びより広範な効果、並びに他の翻訳後修飾、より緊密に適合したヒト治療への要求；
【００２１】
低用量による、潜在的なより少ない副作用；
【００２２】
循環中のより長い半減期、及び適したPTMsのために殆ど存在しないアレルギー応答；
【００２３】
単一細胞源からの多種タンパク質の抽出、及び製造方法による、より低い製造コスト；
【００２４】
単一不死化ヒト細胞株、及び単一製造方法の使用による、より低い規制障壁；
【００２５】
バクテリア中で生産される非グリコシル化組換タンパク質と比較して、グリコシル化タンパク質のより長い半減期による、より少ない注入回数。
【００２６】
工業例：グリコーゲン貯蔵疾患タイプII(GSDII)は、タンパク質GAA(酸α-グルコシダーゼ)、グリコーゲン-分解リソソーム酵素の欠乏により引き起こされる常染色体劣性疾患である。
【００２７】
この欠乏は、２齢以前の体内の殆ど全ての組織中で、リソソームグリコーゲンの全身性沈着をもたらし、そして最終的に心不全を導くことができる(従ってGSDIIは生命を脅かす条件である)。
【００２８】
疾患のための現行の治療は、組換タンパク質を患者へ注入することにより欠乏を回復させることを含み、培養したチャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞、又はミルク特異的プロモーター下でタンパク質の導入遺伝子を保持するウサギ由来ミルク中の分泌物から作製される。
【００２９】
生産した両組換タンパク質は、それらの標的組織への取り込み及び機能が極めて不十分である。
【００３０】
NIH(米国-国立衛生研究所)は、天然ヒトGAAの生産のために、培養又はin vivoであるかを問わず、肝細胞の使用に関連する新規技術を公表している。
【００３１】
NIHのアプローチは、ヒト肝細胞を使用して、適切なグリコシル化により適宜細胞中の酵素の翻訳後修飾を生み出すことであり、それにより、標的組織に容易に取り込まれ、且つ標的組織の細胞内部に局在することができる、より優れた酵素を生産する。そこでの酵素は、リソソーム中に存在するグリコーゲンを消化する。
【００３２】
肝により天然で生産されるタンパク質
【００３３】
肝は、直接的な生物学的薬剤として、又は低分子薬剤開発を目的とする確認剤(validated drug)としての治療に関与する天然タンパク質を運搬するため、大きなスペクトルポテンシャルを有する生産細胞を提供する最も有望な器官/組織の一つである。実際に当該臓器は、酵素、ホルモン、凝固因子、及び免疫因子を含む宿主の注目のタンパク質を合成する。いくつかのタンパク質は、肝臓によって合成され、適切な血液機能のために必要とされ；これらは結合タンパク質及びアルブミンを含み、適切な血液量を維持することを助ける。フィブリノゲン、プロトロンビン(因子II)、因子VII、VIII、IX、X及びフォン・ヴィレブランド因子を含む凝固因子は肝によって生産される。急性期タンパク質(APP)は、組織損傷及び外傷に関連した炎症、及び／又は感染性疾患に対する応答の中で、肝によって合成された血漿タンパク質の他の一式である。トランスフェリン(Tf)、α-2-マクログロブリン(a2M)、ヘモペキシンは、まさにいくつかの重要な急性タンパク質である。(肝細胞により生産されるタンパク質の包括的リストのためのアペンディックスを参照)。
【００３４】
[MF notes：この問題(issue)はアペンディックスリストからの個々のタンパク質の全ての可能性のある疾患/治療標的を探索するために価値のある手段を検討する場合に提供され得る。
【００３５】
天然肝タンパク質アプローチの制限
【００３６】
一次肝細胞は増殖しないので、このタイプの細胞からのタンパク質の生産は、ヒト肝生検からの新規細胞調製物の安定供給を要求する。これは多くの関連した問題(QA、バッチ間のばらつき、無いに等しい規格、規制問題)を有す、要領が悪く且つ高価なアプローチを示す。この問題はTGE Corpのライセンス戦略を通して解決された（多細胞技術特有の不死化及び規格化された完全なコンピテントヒト肝細胞）。
【００３７】
治療又は他の使用のための天然肝細胞タンパク質を生産するために残存している制限は、培養での肝細胞から優れた収率で利用できる一式のタンパク質により明確に解決される。アペンディックスは、’天然タンパク質’のレベル下で潜在的に製造され得る全ての主なタンパク質を挙げている。
【００３８】
任意の他の治療用タンパク質候補物質は、遺伝子操作戦略を用いて製造する必要があるだろう。しかしながら、ヒト天然/これらの細胞基質起源（MCTの肝細胞株）の場合でさえ、現在利用されている最良の翻訳後修飾過程を保証し、故に好適な調節アウトルックを含む明確な競合的利点を有す組換最終産物を導く。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
アペンディックス1
高性能構造のための基礎、誘導可能プロモーター−遺伝子構造、発現している治療用タンパク質。
【００４０】
原核細胞及び真核細胞中のゼオシン(Zeocin)抗生物質(Cayla)を選定することにより、安定なトランスフェクション体の選定を可能にする発現ベクターが構築されるであろう。ゼオシン耐性遺伝子は、pZeoSVプラスミド(Invitrogen)由来の制限消化フラグメントとして得られ、そしてPCR増幅によって得られたpUCl9(New England Biolabs)由来のバクテリア起源の複製を含むフラグメントへ結紮されるであろう。その後この結紮混合物をコンピテントE.coli細胞を形質転換するために使用し、そして所望される組換プラスミド(pUC-Zeo)の存在は、ゼオシン含有バクテリアプレート上で選定されるだろう。合成のポリ(A)配列はpGL3-Basic(Promega)の消化由来の制限フラグメントとして得られ、そしてpUC-Zeo上流のHSP70Bプロモーターへ結紮され、そして所望される組換(pUC-ZeoA)は、ゼコシン耐性のために選択されるだろう。発現カセット(Hi-Hot)を駆動させるHSP70Bは、pHi&Hot-MCS (V3)(David Harris、アリゾナ大学)のPCR増幅由来の制限フラグメントとして得られ、ここでのマルチプルクローニング領域におけるXhoIフラグメントは欠失していた。Hi-Hot発現カセットは、pUC-ZeoA下流の合成のポリ(A)配列へ結紮され、そして所望される組換体(pHiHot-Zeo)がゼコシン耐性のために選択されるだろう。Hi-Hotシステムの制御下で発現される遺伝子は、pHi&Hot-MCSのマルチプルクローニング配列から由来する特有のXhoI及びXbaIサイトへ挿入することができる。Hi-Hotプラスミド構造はTsang等., Biotechniques, 20：51-52,1996及びTsang等, Biotechniques, 22：68でのそれらに由来する。
【００４１】
インターロイキン-2を発現しているルイス肺癌細胞株を用いた、一時的なトランスフェクション実験における発現システムの比較において、以下の結果が得られた:
【００４２】
Hsp70Bプロモーター-468 pg/mlのインターロイキン-2 
CMV プロモーター-573 pg/mlのインターロイキン-2 
Hi-Hot プロモーター-18,409 pg/mlのインターロイキン-2
【００４３】
HI-HOTプロモーターはHSP70Bプロモーターよりも39.3倍強力であり、且つCMVプロモーターよりも32.1倍強力であった。
【００４４】
【表１】
2006527582.tif 000002
【表２】
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【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【００４５】
アペンディックス3
今日、存在しているヒト細胞株生産システム
バイオテクノロジーの最初の成功は、DNA配列を生きている細胞へ転移させる能力により30年ほど前に成され、そして治療用タンパク質/ペプチドを大規模で生産させた。組換インスリンの生産は、かかる方法の最初の例であり、利用できる最も単純な細胞タイプであるバクテリア中にインスリン遺伝子を導入することにより1970年代に達成された。その後、今日までインスリンを生産したこれらの’操作されたバクテリア’は、糖尿病と闘うためになお継続的に使用される。
【００４６】
バイオテクノロジー産業として、より多くの複合タンパク質薬物の生産において興味を持たれたより巧妙な生産細胞タイプは、生産プラットフォームとして要求された。80年代初期において、哺乳類細胞における治療用タンパク質の大規模製造は、飛躍的進歩を示した。今日まで、動物細胞、例えばげっ歯類細胞株、そして特にチャイニーズハムスター卵巣細胞株(CHO)は、いくつかのブロックバスターバイオ技術薬剤を含む生物薬剤の生産のための最重要なプラットフォームを示す。
【００４７】
しかしながら、近年の臨床試験、特に組換マウス抗体での臨床試験では、非ヒト抗体が免疫応答を引き出す能力を有し、それにより治療の効果を遮断していることが急速に明らかになった。これらの所見は、今認識されている複合タンパク質産物の正確な'ヒト-型'翻訳後修飾の重要性を強調した。
【００４８】
PER.C6（商標）
Introgen b.v社(Leiden,NL)、現Crucell社は、ヒト生産プラットフォームに、げっ歯類由来の更なるバイオ生産工程の１つのステップを採用した。PER.C6(商標)はヒト細胞株から成る発現プラットフォームであり、ヒト治療に使用するための生物医薬を生産できる。PER.C6細胞株は、ヒト網膜由来一次細胞から作り出され、アデノウィルスEl遺伝子の挿入により不死化された。当該細胞株は、制御され、且つ十分に記録された方法において、健常ヒト細胞の単一起源から由来する。この会社は不死化細胞を有しているので、組換生物医薬製品を市販するために十分な量の生産のために、正常ヒト細胞とは異なり、それ自体の必須的特性、本質的要素を無制限に複製することができる。
【００４９】
現在、Crucell社は：rDNA技術によるモノクローナル抗体の生産；mAb's以外の多様な治療用タンパク質の生産；ワクチン生産、遺伝子治療応用のためのアデノウィルスベクターの生産、機能的ゲノミクスのためのPER.C6生産プラットフォームを促進している。
【００５０】
PER.C6（商標）である理由
Crucell社は、PER.C6を所有する会社であり、彼等のプラットフォームの権利を要求し、上記1-4等への適用のための今日の産業規格を示す。この主な理由は、以下の主張："Crucell社の技術は、'ヒト'グリコシル化パターンを保持する。"に由来する。
【００５１】
生物医薬生産のためのPER.C6細胞を用いる主な利点：
【００５２】
翻訳後修飾(特にグリコシル化)：半減期、生物学的活性、及び免疫適合性に関する最適な組換治療用タンパク質産物は、ヒトグリカン構造(即ち、グリコシル化パターン)を含む。CHO(the biotech'workhorse')のような哺乳類細胞又は他の確立された非ヒト動物細胞株は、組換タンパク質又は抗体に対して非ヒトグリカン構造を付加する。PER.C6 細胞はヒトグリコシル化パターンを実行し、より高い生物学的活性及びより長い半減期をもたらす。
【００５３】
規制問題：PER.C6は生物医薬のための製造プラットフォームとして開発され、細胞株の産出及び特徴化に関する広範囲の文献は、開始時から収集された。この文献は生物製剤マスターファイル(BMF)として、FDAにより寄託された。PER.C6は、遺伝子治療試験のための組換アデノウィルスの産出のために認可され、そしてHIVワクチンの、健常人及び免疫不全患者の両方に投与されるフェーズI/II臨床試験用に受け入れられた。
【００５４】
モノクローナルの生産量：モノクローナル抗体の生産のために現在使用される発現プラットフォームは、最終生産工程において、約0.5g/lの平均発現量を有すCHO及びNS/0細胞である。PER.C6は非最適化システムにおける抗体と同様のレベルを生産し、そして最適化供給(fed)バッチ培養システムにおいて著しく多く生産することが期待される。
【００５５】
知的所有権：Crucell社,Leiden,NL,はPER.C6に関連する技術及びノウハウを完全に所有し、それは生物医薬のための全ての他の生産プラットフォームのケースから離れず、開示される特許状況へと翻訳される。
【００５６】
使用の柔軟性：当該細胞は血清不存在下、及び動物成分不存在下での培養システムにおいて、接着物又は懸濁培養物として容易に成長し、そして１つの培地又は成長条件から他へ容易に運搬され得る。
【００５７】
拡張性(scalability)：本発明のアデノウィルスE1遺伝子はPER.C6細胞のアポトーシスを阻害し、バッチ生産培養中で成長する場合、高い生存率をもたらす。PER.C6細胞は、容易に拡張することができ、細胞は2,500L反応器中で容易に成長し、そして更に工程中で拡張する。
【００５８】
安定性：発現プラスミドによるPER.C6細胞のトランスフェクションは有効であり、その後、安定なサブクローンの産生が起こる。重要なことには、組換タンパク質の高い発現レベルは遺伝子増幅の不存在中で観察され、細胞株の使用にわたり、かなりの時間的有利性を与え、効率のよいタンパク質発現のための増幅を要求する。
【００５９】
2002年５月のヒアリング(http://www.fda.gov/ohrms/dockets/ac/0l/briefing/ 375bl 0l.htm)では、FDAは２つの新規細胞基質、即ちHEK293細胞及びPER.C6細胞の使用における潜在的なリスクを検討した。これらの細胞株は、アデノウィルスタイプ5(Ad5)の初期領域1(E1)を形質転換することによるヒト胚腎細胞(293)及びヒト胚網膜細胞(PER.C6)を形質転換することにより開発された。293及びPER.C6のような細胞株はAd5 El領域を発現するから、E1の欠失により”不活性(crippled)”になった欠陥のあるAd5ベクターの成長を補完することができる。欠陥のあるAd5ベクターは、ヒト免疫不全ウィルス(HIV)、AIDSの原因因子、及び本タイプのベクター由来のものといった外来遺伝子を発現させるために操作された。それらの外来遺伝子は、HIVに対して細胞を介した免疫応答を生み出す能力を実証したので、ワクチン開発に有意な潜在的可能性を有していると思われている。しかしながら、Ad5-形質転換細胞に関連した調節の重要性の特徴は、ヌードマウスのような免疫不全動物に腫瘍を形成するそれらの能力(capacity)である。
【００６０】
いわゆるデザイナー細胞基質(Designer Cell Substrates)-即ち、明確にされたウィルス性又は細胞性癌遺伝子により、或いは不死化細胞性遺伝子（例えばテロメラーゼ）により形質転換した正常細胞から由来する新生物の細胞の使用に関連した潜在的リスクの検討において、-OVRR/CBERは"defined-risks"assessment Lewis等.,"A defined-risks approach to the regulatory assessment of the use of neoplastic cells as substrates for viral vaccine manufacture", In Evolving Scientific and Regulatory Perspectives on Cell Substrates for Vaccine Development. Brown, Lewis, Peden, Krause (eds.) Develop. Biol. Stand.のフレームワークの中で概略化されたアプローチを検討している。このフレームワークは調査することを意図し、可能な限りワクチン生産のために使用される細胞基質の発癌性成分を”伝達する(transmitting)”潜在的リスクを定量化し、そしてワクチン接種を受けた者に"伝達"がリスクを引き起こすか否か、特に発癌性リスクを引き起こすか否かを決定する。デザイナー細胞基質の使用に関連したリスクに影響を与えることができる因子には、(a)発癌性細胞の発達を導く細胞形質転換の公知のメカニズム；(b)残留細胞基質DNA；及び(c)外来因子、特に発癌性ウィルスの存在を含む。
【００６１】
CRUCELL
Crucell社は全ヒト生物医薬を発見し開発する。この生物医薬は免疫系を利用して疾患と闘う。Crucell社の独占技術であるプラットフォーム、MAbstract(商標)、AdVac(商標)及びPER.C6(商標)は、新規抗原、抗体及びワクチンの発見、開発及び生産を可能にする。Crucell社は、医薬及びバイオテクノロジーパートナーにその技術を提供し、Crucell社所有の製品パイプラインを作り出すためにそれらを利用する。
【００６２】
PER.C6（商標）はヒト細胞製造プラットフォームであり、組換アデノウィルスベクターの生産のための工業規格となった。PER.C6は抗体及びワクチンの生産のための優れたプラットフォームであることも証明された。
【００６３】
Crucell社は、ノバルティス、ファイザー、GSK、アベンティス、ジェンザイム及びシェーリングを含むPER.C6(商標)技術の19のライセンスを有する。
【００６４】
Crucell社のプレスリリースでのPER.C6(商標)
PER.C6(商標)は、抗体、タンパク質及びワクチン等の生物医薬製品の開発及び製造のためのヒト細胞プラットフォームである。PER.C6の優れた収率及び拡張性、並びに広範な経歴及び安全性書類は、医薬産業が要求するPER.C6の安全性、コスト効率及び大容量製造プラットフォームを提供する。PER.C6は、Merck & Coと排他的ライセンス契約を通してHIVワクチン用のワクチンプラットフォームとしての用途で上市した。Crucell社は彼等のPER.C6ビジネスをワクチン分野に拡張することを目的とする。現在Rhein Biotechと本戦略について締結している。
【手続補正書】
【提出日】平成18年2月28日(2006.2.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３６】
一次肝細胞は増殖しないので、このタイプの細胞からのタンパク質の生産は、ヒト肝生検からの新規細胞調製物の安定供給を要求する。これは多くの関連した問題(QA、バッチ間のばらつき、無いに等しい規格、規制問題)を有す、要領が悪く且つ高価なアプローチを示す。この問題は特有の不死化及び規格化された完全なコンピテントヒト肝細胞を通して解決された。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
任意の他の治療用タンパク質候補物質は、遺伝子操作戦略を用いて製造する必要があるだろう。しかしながら、ヒト天然/これらの細胞基質起源の場合でさえ、現在利用されている最良の翻訳後修飾過程を保証し、故に好適な調節アウトルックを含む明確な競合的利点を有す組換最終産物を導く。
【国際調査報告】
2006527582.tif 000009
2006527582.tif 000010
2006527582.tif 000011