(57)【要約】本発明は、タキソール誘発性ニューロパシーの分野に関する。具体的には、本発明は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法であって、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を処置、予防および／または軽減するため、アゴニスト抗ｔｒｋＣ抗体を投与する工程を包含する方法に関する。別の局面において、本発明は、癌に罹患する個体を処置するための改良法であって、タキソールとともにアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与する工程を包含する方法を提供する。別の局面において、本発明は、本発明に係る方法のいずれかで使用するための、アゴニスト抗ｔｒｋＣ抗体を含む組成物およびキットを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するための方法であって、該個体に有効量の抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
前記抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ヒトｔｒｋＣに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ヒトｔｒｋＣと齧歯類ｔｒｋＣに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ｔｒｋＣのドメイン４中のエピトープに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ヒト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ヒト化抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
タキソール誘発性のニューロパシーの痛みが処置される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ニューロパシーの痛みが、異痛を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するための組成物であって、有効量の抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体および薬学的に受容されるキャリアを含む、組成物。
【請求項１１】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するためのキットであって、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体と、該抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体を使用してタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するための使用説明書とを含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２００２年１２月２３日出願の米国仮特許出願第６０／４３６，１４７号の優先権を主張し、その全部を参照として本明細書に援用する。
【０００２】
（連邦政府支援による研究開発に関する説明）
該当なし。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、タキソール誘発性ニューロパシーの分野に関する。より具体的には、本発明は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法であって、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を処置、予防および／または軽減するためのアゴニストである抗ｔｒｋＣ抗体を投与する工程を包含する方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
タキソールおよびその他のタキサンなどの化学療法剤は、癌の処置にうまく使用されてきた。米国だけでも約３００，０００人の人々が、乳癌、肺癌および結腸癌を処置するために毎年化学療法を受けることになる。しかしながら、タキソールによる処置を受けた患者の６０〜９０％が、感覚性ニューロパシーや神経細胞機能障害などのニューロパシー症状に悩む。タキソールによる処置を受けた患者に現れる症状でよく見られるのは、遠位性対称性多発性ニューロパシー、ポールハイプエスセジア（ｐａｌｌ−ｈｙｐｅｓｔｈｅｓｉａ）、位置感覚消失、痛みを伴う異常感覚、レールミット徴候、および痛みなどである。この他、それほど頻繁ではない症状は、進行性遠位性および／または近位性の不全麻痺（ｄｉｓｔａｌ  ａｎｄ／ｏｒ  ｐｒｏｘｉｍａｌ  ｐａｒｅｓｉｓ）、運動性ニューロパシー、筋肉痛、まれにミオパシー、麻痺性イレウス、起立性低血圧症、および不整脈である（Ｑｕａｓｔｈｏｆｆら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．２４９：９−１７（２００２））。重症の感覚性ニューロパシーの症状では、化学療法剤の投与量を減らして処置を遅延させざるを得なくなるため、抗癌治療の効果が限定されることになる。
【０００５】
神経栄養因子（ニューロトロフィン）は低分子のホモ二量体蛋白質のファミリーで、神経系の発達および維持に重要な役割を担っている。神経栄養因子ファミリーのメンバーには、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、神経栄養因子−３（ＮＴ−３）、神経栄養因子−４／５（ＮＴ−４／５）、神経栄養因子−６（ＮＴ−６）、および神経栄養因子−７（ＮＴ−７）などがある。他のポリペプチド成長因子と同様、神経栄養因子は、細胞表面レセプターとの相互作用によって標的細胞に影響を与える。最近の知見によれば、２種類の膜貫通型糖蛋白質が神経栄養因子に対するレセプターとして働いている。神経栄養因子反応性ニューロンは、ｐ７５ＮＴＲまたはｐ７５とも呼ばれる、共通の低分子量（６５〜８０ｋＤａ）で低親和性レセプター（ＬＮＧＦＲ）であって、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３およびＮＴ−４／５に２×１０−９ＭのＫＤで結合するレセプター、および高分子量（１３０〜１５０ｋＤａ）で高親和性（１０−１１Ｍ範囲のＫＤ）のレセプターであって、レセプター・チロシンキナーゼのｔｒｋファミリーの一員であるレセプターを有する。ｔｒｋレセプターファミリーと同定されたメンバーはｔｒｋＡ、ｔｒｋＢおよびｔｒｋＣである。
【０００６】
ＴｒｋＣは、中枢神経系において、および末梢神経系の一部のニューロン上で広く発現される。交感神経ニューロン上、および後根神経節（ＤＲＧ）の一次感覚性ニューロンの一部である、ＤＲＧの大径線維感覚ニューロン上で発現している。大径線維感覚ニューロンは、末端まで伸びている大きな有髄の軸索をもち、自己受容、ならびに微小な接感覚および振動感覚に関する情報を伝達する。
【０００７】
全長の天然型ｔｒｋＡレセプター、ｔｒｋＢレセプターおよびｔｒｋＣレセプターの細胞外ドメインには、他のさまざまな蛋白質において同定されている相同的な、さもなれれば類似した構造に関して定義されている５つの構造的ドメインがある。これらのドメインは、成熟ｔｒｋレセプターのアミノ酸配列のＮ−末端側から、１）第１システインリッチ・ドメイン、２）ロイシンリッチ・ドメイン、３）第２システインリッチ・ドメイン、４）第１免疫グロブリン様ドメイン、および５）第２免疫グロブリン様ドメインと名付けられている。例えば、ＷＯ  ０１９８３６１；Ｕｒｆｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：５８２９−５８４０（１９９８）を参照。
【０００８】
神経栄養因子は、さまざまな神経変性疾患および神経系疾患に対する治療薬となる可能性があるものとして興味をもたれている。ＮＧＦやＮＴ−３などの神経栄養因子は、ピリドキシンまたはシスプラチンによる処置に伴う感覚性ニューロパシーを処置するための動物モデルで試験された。米国特許第５，６０４，２０２号；ＷＯ  ０１９８３６１。神経変性疾患および神経系疾患の処置に神経栄養因子を使用することにはいくつか短所がある。重要な短所の一つは、特異性の欠如である。ほとんどの神経栄養因子は１種類以上のレセプターと相互作用する。例えば、ｔｒｋＣレセプターチロシンキナーゼの好適なリガンドであるＮＴ−３は、ｔｒｋＡおよびｔｒｋＢにも結合してこれらを活性化する（Ｂａｒｂａｃｉｄ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．２５：１３８６−１４０３（１９９４）；Ｂａｒｂａｒｃｉｄ，Ａｎｎ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃｅｄ．Ｓｃｉ．７６６：４４２−４５８（１９９５）；Ｒｙｄｅｎ  ａｎｄ  Ｉｂａｎｅｚ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５６２３−５６２７（１９９６），Ｂｅｌｌｉｖｅａｕら，Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１３６：３７５−３８８（１９９７）；Ｆａｒｉｎａｓら，Ｎｅｕｒｏｎ  ２１：３２５−３３４（１９９８））。結果的に、特定のニューロン集団を標的とする療法を考え出すことが難しくなる。神経栄養因子療法のもう一つの限界は、ＮＴ−３などの神経栄養因子が、痛覚過敏を誘導することが知られている点である（Ｃｈａｕｄｈｒｙら，Ｍｕｓｃｌｅ  ａｎｄ  Ｎｅｒｖｅ  ２３：１８９−１９２（２０００））。また、ＮＴ−３など、いくつかの神経栄養因子は、齧歯類において薬物動態特性および生物学的利用能特性が劣るため、人間への臨床応用について深刻な問題を提起している（Ｈａａｓｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．１６０：Ｓ９７−Ｓ１０５（１９９８）、Ｈｅｌｇｒｅｎら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１７（１）：３７２−８２（１９９７）における投薬量）。
【０００９】
化学療法剤による癌処置は、神経系の損傷および機能障害をともなうことがある。アゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体を、シスプラチン−およびピリドキシン−によって引き起こされた感覚性ニューロパシーの動物モデルにおける処置に使用することが記載されている。米国特許第５，９１０，５７４号；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ  ０１９８３６１。しかし、化学療法剤が原因となって起きるニューロパシーの病理学または症状は、癌処置に使用される化学療法剤によってさまざまなである。例えば、シスプラチンとピリドキシンでは症状が異なり、タキソールとは異なったメカニズムで神経を損傷する可能性が高いが、これら３種類の薬剤はすべてニューロパシーを引き起こす。例えば、シスプラチンはＤＮＡ付加物であって、ＤＮＡ内に一本鎖および二本鎖の架橋を生じさせる。Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２４９：９−１７。それに対し、タキソールは、微小管の脱重合を阻止するように機能して、細胞内の微小管の凝集をもたらす。例えば、タキソール処置を受けた個体のニューロパシーは、脱力、およびその他の急性症状を伴うため、タキソール処置は、振動を伝え、認知および位置感覚を付与する大径有髄線維など、すべての感覚様相に影響を与える。タキソール誘発性ニューロパシーをもつヒトおよび動物モデルでの電気生理学的特徴付けによって、感覚機能に対する急性の作用（例えば複合活動電位振幅の低下）および感覚神経伝導速度の低下が明らかになっている。Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ、前掲、Ｃｌｉｆｆｅｒら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．（１９９８）４３：４６−５５参照。これに対し、シスプラチン誘発型およびピリドキシン誘発型のニューロパシーでは脱力は滅多に観察されない。シスプラチンニューロパシーは、感覚神経伝導速度の低下をもたらすが、複合活動電位振幅にはほとんど変化がない。ピリドキシン処置は、複合活動電位振幅の低下をもたらす。Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ、前掲、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。このように、ピリドキシンおよびシスプラチンが原因で起こるニューロパシーは、タキソールが原因で起こるニューロパシーとは異なった症状を示す。
【００１０】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーのための新たな治療処置が大いに必要とされている。
【００１１】
本明細書において引用されている特許出願および特許公開などの参考文献はすべて、その全体が参照として本明細書に援用される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の開示）
本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体が、タキソールによる処置を受けた個体に現れる感覚性ニューロパシーを処置するという発見に基づいている。タキソール誘発性ニューロパシーとは、タキソールという薬剤もしくは同類のタキサン類を投与された後の個体に付随または出現する神経疾患を意味する。タキソール誘発性感覚性ニューロパシーは、末梢神経に影響を与え、大径線維末梢感覚ニューロンの変性またはその他の機能障害など、感覚、感覚運動または自律神経の機能障害が一つ以上併合したものとして最も頻繁に現れる。したがって、本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を用いて、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置し、予防し、症状の出現を遅延させ、回復速度を向上させ、および／または軽減させる方法を包含する。
【００１３】
したがって、一つの態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体によって個体を処置することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーに伴う症状の出現を遅延させる方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を改善する方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体で処置することによって、先在のタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを逆転させるための、および／または先在するタキソール誘発性感覚性ニューロパシーからの回復速度を高めるための方法を提供する。さらに別の態様において、本発明は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを有する個体において、末梢ニューロンの維持を促進し、および／または末梢ニューロンを再生させる方法を提供する。
【００１４】
別の態様において、本発明は、癌を患う個体を処置するための改良法であって、該改良が、タキソールとともにアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む方法を提供する。いくつかの実施態様において、癌は、乳癌、卵巣癌、肺癌、カポジ肉腫、前立腺癌、頭頸部癌、および悪性血液疾患のいずれか一つ以上である。
【００１５】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は当技術分野において知られている。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトｔｒｋＣに結合する。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトｔｒｋＣに特異的に結合する。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、ヒトおよび齧歯類ｔｒｋＣに結合してもよい。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、ヒト抗体（抗体６．４．１（ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１）など）であっても、または、ヒト化抗体（ヒト化モノクローナル抗体２２５６など）であってもよい。別の実施態様では、本明細書に説明されているように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒト化抗体Ａ５である。さらに別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、表１（配列番号：１）記載の重鎖可変領域のアミノ酸配列、および表２（配列番号：２）記載の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、抗体Ａ５のＣＤＲを一つ以上（１、２、３、４，５個など、またはいくつかの実施態様においては、Ａ５由来の６個のＣＤＲすべて）含む。ＣＤＲの同定は、当業者が適宜なしうることである。いくつかの実施態様において、ＣＤＲはＫａｂａｔのＣＤＲを含む。別の実施態様において、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲである。さらに別の実施態様において、ＣＤＲは、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲをともに含む。いくつかの実施態様において、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８２の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８３の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされる重鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８２の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされる軽鎖、および（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８３の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされる重鎖を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、（ａ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８２の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチド、および／または（ｂ）ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−５６８３の寄託番号をもつ宿主細胞によって産生されるポリヌクレオチドによってコードされるＣＤＲを一つ以上含む。
【００１６】
抗体は、基本的に、以下の一つ以上から選択される抗体と同じｔｒｋＣエピトープに結合することができる。６．１．２、６．４．１、２３４５、２３４９、２．５．１、２３４４、２２４８、２２５０、２２５３、および２２５６。ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。抗体は、免疫学的に不活生で、例えば、補体仲介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞仲介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進できない定常領域などの改変された定常領域を含むことも可能である。別の実施態様において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願番号９８０９９５１．８に記載されているように改変されている。
【００１７】
また、抗体は、以下の一つ以上から選択された抗体などの抗体断片であってもよい。抗体断片から形成されたＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、二重特異性抗体断片（ｄｉａｂｏｄｉｙ）、単鎖抗体分子および多特異的抗体、ならびに単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子。抗体は、キメラであることも可能であり、また、二重特異的であってもよい。
【００１８】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、タキソールを投与する前、投与中、または投与後に投与すること、および／または、タキソール療法コースを中断した後に投与することが可能である。投与は、ニューロパシーを発症する前に行うことも可能である。
【００１９】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与は、以下の方法の一つ以上など、当技術分野において知られている適当な方法によって行うことができる。静脈内、皮下、吸入による、動脈内、筋肉内、心臓内、脳室内、鞘内、髄腔内、および腹腔内投与。投与は全身的（例、静脈内）および／または局所的なものでもよい。投与は急性でも慢性でもよい。
【００２０】
別の態様において、本発明は、本発明に係る方法のいずれかで使用するための、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む組成物およびキットを提供する。
【００２１】
本発明は、また、薬剤としての使用および／または薬剤を製造するための使用に関連して本明細書で説明されているいずれかの使用について記載されている組成物およびキットを提供する。
【００２２】
（発明の実施態様）
本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体が、タキソールによる処置を受けた個体に現れる感覚性ニューロパシーを処置するという発見に基づいている。タキソール誘発性ニューロパシーとは、薬剤であるタキソール、もしくは同類のタキサン類を投与された後の個体（ヒトおよびヒト以外の哺乳動物など）に付随または出現する感覚ニューロンに影響を与える神経疾患を意味する。本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を用いて、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置し、予防し、症状の出現を遅延させ、回復速度を向上させ、および／または軽減させるのに有用な方法および組成物を包含する。
【００２３】
したがって、一つの態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体によって個体を処置することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーに伴う症状の出現を遅延させる方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を改善する方法を提供する。別の態様において、本発明は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体で処置することによって、先在のタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを逆転および／またはそれからの回復速度を高めるための方法を提供する。さらに別の態様において、本発明は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを有する個体において、末梢ニューロンの維持を促進し、および／または末梢ニューロンを再生させる方法を提供する。別の態様において、本明細書で説明されるように、タキソールをアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とともに投与することによって、タキソールによる癌の処置が促進される。
【００２４】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、タキソールを投与する前、投与中、または投与後に投与することができる。あるいは、抗体をタキソールとともに投与することも可能である。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、感覚性ニューロパシーの他の治療法を行う前、行っている最中、および／または行った後に投与することも可能である。別の態様において、抗体を、他の感覚性ニューロパシー療法剤とともに投与することも可能である。
【００２５】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与は、以下の方法の一つ以上を含む、当技術分野において知られている方法によって行うことができる。すなわち、静脈内、皮下、吸入による、動脈内、筋肉内、心臓内、脳室内、鞘内、および腹腔内投与。投与は全身的（例、静脈内）および／または局所的なものでもよい。投与は急性でも慢性でもよい。
【００２６】
別の態様において、本発明は、本発明に係る方法のいずれかで使用するための、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む組成物およびキットを提供する。
【００２７】
本発明は、また、薬剤としての使用および／または薬剤を製造するための使用に関連して本明細書で説明されているいずれかの使用について記載されている組成物を提供する。
【００２８】
（一般的技術）
本発明の実施においては、特段の記載がない限り、分子生物学（組換え技術など）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の通常の技術であって、当業者が適宜なしうるものを使用する。そのような技術は、以下の文献等で十分に説明されている。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ  Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ（編）１９９３−８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（編））；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ（編）１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら（編）１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら（編）１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら（編）１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ  ａｎｄ  Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８８−１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ  ａｎｄ  Ｃ．Ｄｅａｎ（編）Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ（編）Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａ��ｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）；および  Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｖ．Ｔ．ＤｅＶｉｔａ．ら（編）Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９３）。
【００２９】
（定義）
「抗体」（複数形と互換的に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する１個以上の抗原認識部位を介して、糖、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合できる免疫グロブリン分子である。本明細書において、この用語は、元のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部位を含む融合蛋白質、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性直鎖抗体、単鎖抗体、多特異的抗体（例、二重特異的抗体）、および、必要な特異性の抗原認識部位を含む、その他の改変された形態の免疫グロブリン分子であってもよい。抗体には、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭなどのクラスの抗体があるが、特定のクラスの抗体である必要はない。抗体の重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンはさまざまなクラスに分けられる。ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥおよびＩｇＭという、５つの主なクラスの免疫グロブリンがあり、さらに、これらのいくつかは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２などのサブクラス（アイソタイプ）に分けられる。異なったクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖の定常ドメインは、それぞれ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューと呼ばれている。また、軽鎖には２つのクラスがあり、カッパおよびラムダと名付けられている。異なったクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造と三次元構造は周知である。
【００３０】
「モノクローナル抗体」とは、モノクローナル抗体が、抗原への選択的結合に関与するアミノ酸（天然型および非天然型）から成る均一な抗体集団を意味する。モノクローナル抗体の集団は非常に特異的で、単一の抗原部位に対して向けられている。「モノクローナル抗体」という用語は、本来のモノクローナル抗体および全長のモノクローナル抗体だけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部位を含む融合蛋白質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、および、必要な特異性の抗原認識部位と抗原に結合できる能力を含む、その他の改変された形態の免疫グロブリン分子を含む。抗体の由来原またはその作成法（例、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物など）に関して制限されるものではない。
【００３１】
「ヒト化」抗体とは、ヒト以外の種の免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた、残りの分子の免疫グロブリン構造部分とを有する分子を意味する。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した全長の可変ドメインか、可変ドメイン中の適当なフレームワーク領域上に接ぎ木された相補性決定領域（ＣＤＲ）だけを含むことが可能である。抗原結合部位は、野生型であるかもしれないし、または、例えば、よりヒト免疫グロブリンに類似するよう、１個以上のアミノ酸置換によって改変してもよい。ヒト化抗体には、すべてのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体の６個のＣＤＲをすべて含むヒト化マウス抗体）を保存している型もある。ヒト化抗体の他の型は、元の抗体を改変した１個以上のＣＤＲ（１個、２個、３個、４個、５個、６個）を有する。
【００３２】
本明細書において、「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有する抗体、および／または、当技術分野において知られているか、本明細書に開示されているヒト抗体を作成するための技術を用いて作成された抗体を意味する。ヒト抗体のこの定義は、少なくとも１個のヒト重鎖ポリペプチド、または少なくとも１個のヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体を包含する。そのような一例は、マウスの軽鎖ポリペプチドとヒトの重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において知られている多様な方法を用いて作成することができる。一つの実施態様において、ヒト抗体は、ヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択される（Ｖａｕｇｈａｎら，１９９６，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９−３１４；Ｓｈｅｅｔｓら，１９９８，ＰＮＡＳ，（ＵＳＡ）９５：６１５７−６１６２；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら，１９９１，Ｊ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を、例えば、内在する免疫グロブリン遺伝子の一部または全部を不活化したトランスジェニック動物に導入して作成することもできる。この方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、５，５４５，８０６号、５，５６９，８２５号、５，６２５，１２６号、５，６３３，４２５号および５，６６１，０１６号に記載されている。あるいは、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球を不死化してヒト抗体を調製することも可能である（このようなＢリンパ球は個体から回収することも可能であるし、または、インビトロで免疫されたものでもよい）。例えば、Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５；および米国特許第５，７５０，３７３号参照。
【００３３】
「キメラ抗体」とは、重鎖および軽鎖それぞれのアミノ酸配列の一部が、特定の種に由来するか特定のクラスに属する抗体の対応する配列に相同的であるが、鎖の残りの部分は、別の種やクラスの対応配列に相同的である抗体を意味する。典型的には、これらのキメラ抗体において、軽鎖および重鎖の両鎖の可変領域は、哺乳動物の一つの種に由来する抗体の可変領域を模倣するが、定常部位は、別の種由来の抗体中の配列に相同的である。このようなキメラ型が明らかに有利な点は、例えば、可変領域を、ヒト以外の宿主生物に由来する、容易に利用可能なハイブリドーマまたはＢ細胞を用いて、現在知られている由来原から適宜取ってきて、例えば、ヒト細胞調製物から得られた定常領域と組み合わせることができることである。可変領域は、調製が容易であって、特異性がその由来原に影響されないという長所があるが、ヒトの定常領域は、非ヒト由来原からの定常領域よりも、抗体を注射したときにヒト被験者から免疫反応を誘導しにくい。しかしながら、該定義はこの特異的な例により制限されるものではない。
【００３４】
抗体またはポリペプチドに「特異的に結合する」または「選択的に結合する」（本明細書では互換的に使用される）エピトープは、当技術分野において十分に理解されている用語であり、そのように特異的または選択的な結合を測定する方法も当技術分野において周知である。分子が、他の細胞や物質よりも、特定の細胞または物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い時間、および／またはより高い親和性をもって反応または結合すれば、「特異的結合」を示すという。抗体は、他の物質に結合するよりも高い親和性、結合活性をもって、より容易に、および／またはより長時間結合すれば、標的に「特異的に結合」または「選択的に結合」する。例えば、ｔｒｋＣエピトープに特異的または選択的に結合する抗体は、他のｔｒｋＣエピトープまたは非ｔｒｋＣエピトープに結合するよりも、このｔｒｋＣエピトープに、より高い親和性、結合活性をもって、より容易に、および／またはより長時間結合する抗体である。また、この定義を見れば、例えば、ある標的に特異的または選択的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、別の標的に特異的または選択的に結合してもしなくてもよい。であるから、「特異的結合」または「選択的結合」は、必ずしも排他的な結合である必要はない（そうであってもよい）。必ずではないが一般的に、結合と言うときは選択的結合を意味する。
【００３５】
「機能的なＦｃ領域」は、ネイティブ配列のＦｃ領域のエフェクター機能を一つ以上有している。「エフェクター機能」の例には、Ｃ１ｑ結合、補体依存的細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃレセプター結合、抗体依存的細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面レセプター（例、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）の下方制御などがある。このようなエフェクター機能には、通常、結合ドメイン（例、抗体可変領域）と組み合わされるべきＦｃ領域が必要であり、また、エフェクター機能は、当技術分野において機知である、抗体エフェクター機能を評価するためのさまざまなアッセイ法を用いて評価することができる。
【００３６】
「ネイティブ配列のＦｃ領域」は、自然界で見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸を含む。「変異型Ｆｃ領域」は、１個以上のアミノ酸改変によってネイティブ配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含むが、ネイティブ配列のＦｃ領域のエフェクター機能を一つ以上保持している。好適には、変異型Ｆｃ領域は、ネイティブ配列のＦｃ領域または元のポリペプチドのＦｃ領域と比較すると１個以上のアミノ酸置換、例えば、ネイティブ配列のＦｃ領域または元のポリペプチドのＦｃ領域の中に約１個から約１０個のアミノ酸置換、好適には、約１個から約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異型Ｆｃ領域は、好適には、ネイティブ配列のＦｃ領域および／または元のポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列一致率を有し、もっとも好適には、それらと少なくとも約９０％の配列一致率を有し、さらに好適には、それらと少なくとも約９５％の配列一致率を有する。
【００３７】
本明細書において、「抗体依存的細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識して標的細胞の溶解をもたらす、細胞性反応を意味する。対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号および第５，８２１，３３７号に記載されたアッセイ法など、インビトロのＡＤＣＣアッセイ法を用いて測定することができる。あるいは、またはさらには、対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら，１９９８，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ），９５：６５２−６５６で開示されているような動物モデルにおいて、インビボで測定することも可能である。このようなアッセイ法に有効なエフェクター細胞は末梢血単核細胞およびＮＫ細胞を包含する。
【００３８】
「アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体」（「抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体」と互換的に呼ばれる）とは、ｔｒｋＣレセプターおよび／またはｔｒｋＣのシグナル機能によって仲介される下流経路に結合して活性化することができる抗体を意味する。例えば、アゴニスト抗体は、ｔｒｋＣレセプターの細胞外ドメインに結合して、レセプターの重合を引き起こし、その結果、細胞内触媒性キナーゼドメインを活性化することができる。その結果、インビトロおよび／またはインビボにおいて、レセプターを発現する細胞の増殖および／または分化を促進することになる。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、ｔｒｋＣに結合して、ｔｒｋＣの生物活性を活性化する。いくつかの実施態様において、本発明において有用なアゴニスト抗体は、ｔｒｋＣのドメインＶおよび／またはドメインＩＶを認識する。Ｕｒｆｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：５８２９−５８４０（１９９８）参照。
【００３９】
抗体の「可変領域」とは、抗体の軽鎖の可変領域または抗体の重鎖の可変領域を意味し、単独でも組み合わせたものでもよい。重鎖および軽鎖の可変領域は、それぞれ、超可変領域としても知られる相補性決定領域（ＣＤＲ）３個が結合している４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって近接してつながっており、他の鎖のＣＤＲとともに、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している。ＣＤＲを決定する技術は少なくとも２つある。（１）異種間の配列変異性に基づいた方法（すなわち、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ））、および（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づいた方法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８）。本明細書において、ＣＤＲは、どちらかの方法によって画定されたＣＤＲを意味することも、または、２つの方法を併用して画定されたＣＤＲを意味することも可能である。
【００４０】
抗体の「定常領域」とは、抗体の軽鎖の定常領域または抗体の重鎖の定常領域を意味し、単独でも組み合わせたものでもよい。
【００４１】
本明細書において、「Ｆｃレセプター」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを表す。好適なＦｃＲは、ネイティブ配列ヒトＦｃＲである。さらに、好適なＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマレセプター）であり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩのサブクラスのレセプターなどがあり、これらのレセプターの対立遺伝子変異体および選択的スプライシング型を含む。ＦｃγＲＩＩレセプターには、主に細胞質ドメインが異なるが類似したアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）などがある。ＦｃＲについては、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌら，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら，１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．，１２６：３３０−４１に概説されている。また、「ＦｃＲ」は、母体ＩｇＧの胎児への輸送に関与する、新生児のレセプターであるＦｃＲｎも含む（Ｇｕｙｅｒら，１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１７：５８７、およびＫｉｍら，１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２４：２４９）。
【００４２】
「補体依存的細胞傷害性」および「ＣＤＣ」は、補体存在下で標的を溶解することを意味する。補体活性化経路は、補体系の第一の成分（Ｃｌｑ）が、同族の（ｃｏｇｎａｔｅ）抗原と複合体した分子（例えば抗体）に結合して開始される。補体の活性化を測定するには、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０２：１６３（１９９６）に記載されているようにして、ＣＤＣアッセイ法を行うことができる。
【００４３】
本明細書において、「親和成熟した」抗体とは、そのＣＤＲの１個以上に１個以上の変異であって、その変異を有しない元の抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性が向上する結果となった変異を有する抗体を意味する。いくつかの実施態様において、親和成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモルまたはピコモルの親和性を有する。親和成熟した抗体は、当技術分野において既知の方法によって作成される（Ｍａｒｋｓら，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３；Ｂａｒｂａｓら，１９９４，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ，ＵＳＡ  ９１：３８０９−３８１３；Ｓｃｈｉｅｒら，１９９５，Ｇｅｎｅ，１６９：１４７−１５５；Ｙｅｌｔｏｎら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５５：１９９４−２００４；Ｊａｃｋｓｏｎら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５４（７）：３３１０−９；Ｈａｗｋｉｎｓ  ｅｔ  ａ１，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９−８９６）。
【００４４】
本明細書において、「ｔｒｋＣ」とは、チロシンキナーゼ・スーパーファミリーの一員であるｔｒｋＣレセプターポリペプチドを意味する。ｔｒｋＣは、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、霊長類、および齧歯類（マウスやラットなど）などであるが、これらに限定されない、あらゆる哺乳動物種のネイティブｔｒｋＣレセプターを包含する。完全長のネイティブｔｒｋＣの細胞外ドメインは、相同性によって、または、さまざまな他の蛋白質で同定された類似構造によって定義されてきた。これらのドメインは、成熟ｔｒｋＣレセプターのＮ末端から、１）アミノ酸番号１から４８までの第１のシステインリッチ・ドメイン、２）アミノ酸番号４９から１２０までのロイシンリッチ・ドメイン、３）アミノ酸番号１２１から１７７までの第２のシステインリッチ・ドメイン、４）アミノ酸番号約１９６から２５７までの第１の免疫グロブリン様ドメイン、および５）アミノ酸番号約２８８から３５１までの第２の免疫グロブリン様ドメインと名付けられている。例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ  １９８３６１を参照。ヒトｔｒｋＣレセプターのドメイン構造も、結晶構造によって以下の通り名付けられている。アミノ酸１からアミノ酸４７までのドメイン１、アミノ酸４８からアミノ酸１３０までのドメイン２、アミノ酸１３１からアミノ酸１７７までのドメイン３、アミノ酸１７８からアミノ酸１６５までのドメイン４、およびアミノ酸１６６からアミノ酸３８１までのドメイン５。例えばＰＣＴ公開番号ＷＯ  １９８３６１、Ｕｒｆｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：５８２９−５８４０（１９９８）を参照。また、ｔｒｋＣの変異体も含まれ、その例は、キナーゼドメインのない変異体（Ｓｈｅｌｔｏｎ，ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１５（１）：４７７−４９１（１９９５））、および改変されたキナーゼドメインをもつ変異体（Ｓｈｅｌｔｏｎ，ら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１５（１）：４７７−４９１（１９９５））などであるが、これらに限定されるものではない。
【００４５】
本発明のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体ともに用いられるとき、「生物活性」は、一般的に、ｔｒｋＣレセプターチロシンキナーゼおよび／またはｔｒｋＣのシグナル機能によって仲介される下流経路に結合して活性化することができることを意味する。本明細書において、「生物活性」は、ｔｒｋＣの本来のリガンドであるＮＴ−３の作用によって、ｔｒｋＣ発現細胞上で引き起こされるエフェクター機能と共通する一つ以上のエフェクター機能を包含する。また、ｔｒｋＣの「生物活性」は、ＮＴ−３の作用によって誘導されるものとは別の下流シグナル経路またはエフェクター機能を含むこともある。生物活性には、以下のものが無限定に含まれる。ｔｒｋＣに結合して、それを活性化できること；ｔｒｋＣレセプターの重合を促進できること；末梢（交感神経、感覚、および腸壁）ニューロン、および中枢（脳および脊髄）ニューロン、および、例えば、末梢血液白血球などの非ニューロン細胞など、特定のニューロンにおいて、インビトロまたはインビボで細胞（損傷した細胞を含む）の発生、生存、機能、維持、および／または再生を促進できることなど。特に好適な生物活性は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの一つ以上の症状を処置（予防を含む）できること、および／または、タキソールによって損傷を受けた感覚神経細胞の機能を修復および／または改善できることである。損傷を受けたニューロンの例としては、例えば、後根神経節ニューロンなどの感覚（大径線維感覚ニューロンなど）、交感神経、または腸壁のニューロン、脳神経節ニューロン、および、例えば、脊髄のニューロンなどの中枢ニューロンなどがある。
【００４６】
「タキソール誘発性感覚性ニューロパシー」は、化学療法剤であるタキソールまたは他のタキソンによる処置によって起こる神経疾患である。本明細書において、「タキソール誘発性感覚性ニューロパシー」とは、この神経疾患に伴う一つ以上の症状を意味するとともに、それらを含む。タキソール誘発性感覚性ニューロパシーは、さまざまなタイプの感覚ニューロン、交感神経ニューロンを含む自律神経ニューロン、ならびに、味覚、嗅覚、聴覚、および前庭感覚などの特殊感覚のニューロンに影響を与える。本明細書において、「タキソール誘発性感覚性ニューロパシー」とは、薬剤であるタキソールまたは同類のタキサン類を投与されている間またはその後に個体に付随または出現する、感覚ニューロンに影響を与える神経疾患を意味する。いくつかの実施態様において、「タキソール誘発性感覚性ニューロパシー」は、末梢感覚ニューロン（大径線維末梢感覚ニューロンなど）の変性という特徴をもつ。いくつかの実施態様において、「タキソール誘発性感覚性ニューロパシー」は、以下のいずれかによって特徴づけられる。遠位性対称性多発性ニューロパシー、ポールハイプエスセジア（ｐａｌｌ−ｈｙｐｅｓｔｈｅｓｉａ）、位置感覚消失、痛みを伴う異常感覚、レールミット徴候、進行性遠位性および／または近位性の不全麻痺、筋肉痛、麻痺性イレウス、起立性低血圧症、および不整脈、ならびに末梢感覚ニューロン（大径線維末梢感覚ニューロンなど）の変性。これらは、標準的な神経学的検査、問診、またはより特殊な定量試験によって判定することができる。これらより特殊な定量試験には、例えば、マイクロニューログラフィーまたは他の電気生理学的検査法を用いて影響を受けたニューロンの伝導速度を測定すること；例えば、熱、軽触、振動、または二点識別などの皮膚刺激を感知できる能力を定量的および／または定量的に測定すること；聴覚検査；平衡感覚の特殊検査；自己受容または運動感覚の特殊検査；自律機能の検査；血圧調節の検査；ならびに、さまざまな生理学的および薬理学的刺激に対する心拍反応の検査などがある。これらの検査には、運動神経の検査も含まれる。
【００４７】
本明細書において、「タキソール」とは、パクリタキセル（登録商標ＴＡＸＯＬ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、ドセタキセル（登録商標ＴＡＸＯＴＥＲＥ、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）、およびその他のタキサン類を意味する。タキソール（他のタキサン類も含む）は、単独でも、他の薬剤と併用してでも投与することができる。タキソールは、カポジ肉腫、乳癌、卵巣癌および肺癌など、さまざまな悪性腫瘍を処置するために認可されており、広く使用されている。また、タキソールは、その他、前立腺および頭頸部の悪性腫瘍ならびに悪性血液疾患を処置するためにも使用される。タキソールは、骨髄移植の際にも投与される。
【００４８】
本明細書において、「処置」とは、有益または望ましい臨床結果を得るための方法である。本発明の目的上、有益または望ましい臨床結果は以下のものを一つ以上含むが、これらに限定されるものではない。タキソール誘発性感覚性ニューロパシー（例、遠位性対称性多発性ニューロパシー、ポールハイプエスセジア、位置感覚消失、振動感覚消失、二点識別の消失、微触覚（ｆｉｎｅ  ｔｏｕｃｈ）の消失、不快な異常感覚、レールミット徴候、痛み（異痛および／または痛覚過敏など）、末梢神経（感覚ニューロンなど）の変性などの軽減；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの範囲の縮小；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの安定した（非悪化）状態；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発生または再発の防止；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症の遅延；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの進行の遅延または緩徐；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの改善；およびタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの（一部または全部の）鎮静化；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーからの回復速度の上昇；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーおよび／またはタキソール誘発性感覚性ニューロパシーに付随する症状の発生率の低下。
【００４９】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシー、またはタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状の一つ以上を「緩和させる」とは、本発明にしたがってアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処置を受けた個人または集団におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの望ましくない臨床症状の程度と経時変化を軽減させることを意味する。
【００５０】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの「症状の重症度の低下」または「症状の改善」とは、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与しない場合と比較して、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの一つ以上の症状が軽減および／または改善することを意味する。また、「重症度の低下」は、症状の継続時間の短縮または低下も含む。遠位性対称性多発性ニューロパシー、ポールハイプエスセジア、位置感覚消失、振動感覚消失、二点識別の消失、微触覚の消失、聴覚の消失またはその他の機能障害、不快な異常感覚、レールミット徴候、および／または痛み（異痛および／または痛覚過敏など）など、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状が上述されている。
【００５１】
本明細書において、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症の「遅延」とは、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症を延期、妨害、遅延、遅滞、安定化、および／または先送りすることを意味する。この遅延は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーおよび／または処置を受けている個体の経歴に応じて、時間の長さが変わることがある。当業者に明らかなように、個体がタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを発症しないという点において、十分または有意な遅延は、実際には、予防を含む。タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症を遅延させる方法とは、該方法を使用しない場合と比較して、所定の時間枠の中でタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを発症する確率を低下、および／または所定の時間枠の中で感覚性ニューロパシーの程度を軽減させる方法である。このような比較は、一般的には、統計学的に有意な数の対象者を用いた臨床実験に基づいている。
【００５２】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの「発症」とは、個体の体内においてタキソール誘発性感覚性ニューロパシーが開始および／または進行することを意味する。タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症は、本明細書に記載されているような標準的臨床技術を用いて検出できる。しかしながら、「発症」は、初期には検出不能の場合がある病気の進行にも属するものとする。本発明の目的上、進行とは、この場合、標準的な神経学的検査、問診、またはより特殊な定量試験によって判定される病気状態の生物学的経過を意味する。これらより特殊な定量試験は、例えば、マイクロニューログラフィー、熱、軽触、振動、または二点識別などの皮膚刺激を感知できる能力を定量的に測定すること、聴覚検査、平衡感覚の特殊検査、反射神経の検査、自己受容または運動感覚の特殊検査、自律機能の検査、血圧調節の検査、ならびに、さまざまな生理学的および薬理学的刺激に対する心拍反応の検査などの方法によって、影響を受けたニューロンの伝導速度を測定することを含みうるが、これらに限定されるものではない。これらの検査には、運動神経の検査も含まれうる。「発症」には、発生、再発および開始が含まれる。本明細書において、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの「開始」または「発生」には、最初の開始および／または再発が含まれる。
【００５３】
本明細書において、「リスクにさらされている」個体とは、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを発症するリスクにさらされている個体のことである。「リスクにさらされている」個体は、検知可能な病気を持っているかもしれないし、いないかもしれない。また、本明細書記載の処置法の前に発現した検知可能な病気を持っているかもしれないし、いないかもしれない。「リスクにさらされている」とは、個体が、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症と相関する測定可能なパラメータである、いわゆるリスクファクターを一つ以上持っていることを意味する。これらのリスクファクターを一つ以上持つ個体は、これらのリスクファクターを持たない個体よりもタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを発症する確率が高い。
【００５４】
「有効量」（タキソール誘発性感覚性ニューロパシーに関して）とは、臨床結果または病気の開始を遅延させるなど、有益または望ましい臨床結果をもたらすのに十分な量のことである。有効量は、一回以上の投与量にしてを投与することができる。本発明の目的上、本明細書に記載されているアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の有効量とは、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの進行を緩和、安定化、逆転、鈍化、および／または遅延させるか、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを予防するのに十分な量を意味する。また、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の有効量は、本明細書に記載されているように、癌のタキソール処置（治療効果）を促進するのに十分な量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体も包含する（このことは、言い換えると、タキソールの投薬量が増加、および／または、タキソール処置の副作用の軽減など、何か別の有益な効果が観察されることを意味する）。当技術分野において理解されているよに、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、とりわけ患者の履歴、および、使用されるアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体のタイプ（および／または投薬量）など他のファクターによって変化しうる。
【００５５】
本明細書において、「併用して」投与するとは、同時投与および／または異なった時間に投与することを含む。併用した投与には、混合製剤（例、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールが同じ組成物に含まれている）として投与されること、または、別々の組成物として投与されることも包含する。本明細書において、併用した投与は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールとが一個体に投与される環境であって、それが同時および／または別個に起こりうる環境を含むものである。本明細書においてさらに検討されるように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールは、異なった投薬回数または投薬間隔で投与できることは当然である。例えば、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を毎週投与するが、タキソールはそれよりも低い頻度にすることも可能である。当然ながら、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体およびタキソールを同一の投与経路を用いて投与することも可能であるし、異なった投与経路を用いることも可能である。
【００５６】
タキソール処置は、タキソール処置の態様が（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与しないでタキソールを投与する場合に較べて）改善されれば、「促進」される。例えば、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体非存在下における望ましくない副作用（感覚性ニューロパシーなど）の存在および／または度合いに較べて、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体存在下では、そのような副作用を減少および／または消失させることができる。この促進作用は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することによって示されるが、このような比較（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体投与対非投与）が、任意の個体について行われ、証明されなければならないと言っているわけではない。
【００５７】
「個体」は脊椎動物、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、家畜動物、スポーツ用動物（ｓｐｏｒｔ  ａｎｉｍａｌｓ）、ペット、霊長類、ウマ、ウシ、イヌ、および齧歯類（マウスやラットなど）が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【００５８】
本明細書において、単数形の「一つの」（「ａ」、「ａｎ」）および「その」（「ｔｈｅ」）は、特段に記載がないかぎり、複数形をも意味する。例えば、一つの（「ａ」）抗体は、一つ以上の抗体を意味し、「一つの症状」は一つ以上の症状を意味する。
【００５９】
本明細書において、「ベクター」とは、宿主細胞において、対象とする一つ以上の遺伝子または配列を送致、および好ましくは発現できる構築物を意味する。ベクターの例には、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、プラスミドベクター、コスミドベクターまたはファージベクター、カチオン性縮合剤に結合したＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡまたはＲＮＡの発現ベクター、および生成細胞（ｐｒｏｄｕｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ）のような一定の真核細胞があるが、これらに限定されるものではない。
【００６０】
本明細書において、「発現制御配列」とは、核酸の転写を指令する核酸配列を意味する。発現制御配列とは、構成型または誘導型のプロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーでありうる。発現制御配列は、転写されるべき核酸配列に機能するように結合している。
【００６１】
本明細書において、「核酸」または「ポリヌクレオチド」とは、一本鎖型または二本鎖型いずれかのデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのポリマーを意味し、特段の制限がない限り、天然型のヌクレオチドと同じような態様で核酸にハイブリダイズする天然型ヌクレオチドの既知の類似体を包含する。
【００６２】
本明細書において、「薬学的に受容されるキャリア」とは、活性成分と併用されると、その成分が生物活性を維持するのを可能にするが、対象者の免疫系とは反応しない材料を意味する。例としては、リン酸緩衝食塩水、水、油／水エマルジョンなどの乳液、およびさまざまなタイプの湿潤剤のような標準的医薬用キャリアがあるが、これらに限定されるものではない。エアロゾルまたは非経口投与に好適な希釈剤はリン酸緩衝食塩水または普通の食塩水（０．９％）である。
【００６３】
このようなキャリアを含む組成物は、よく知られている常法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒａｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００参照）によって製剤される。
【００６４】
本明細書において、「アジュバント」は、当技術分野において免疫応答を促進させるために広く使用されているアジュバントを含む。アジュバントの例は、ヘルパーペプチド；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバン）またはリン酸アルミニウムなどのアルミニウム塩；フロイントの不完全アジュバントおよび完全アジュバント（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）；メルクアジュバント６５（Ｍｅｒｃｋ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｈａｗａｙ，ＮＪ）；ＡＳ−２（Ｓｍｉｔｈ−Ｋｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ）；ＱＳ−２１（Ａｑｕｉｌｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＭＰＬまたは３ｄ−ＭＰＬ（Ｃｏｒｉｘｉａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；ＬＥＩＦ；カルシウム、鉄または亜鉛の塩類；アシル化チロシンの不溶性懸濁液；アシル化糖；カチオン誘導体化またはアニオン誘導体化された多糖類；ポリホスファゼン；生物分解性ミクロスフィア、モノホスホリル・リピドＡおよびクイルＡ（ｑｕｉｌ  Ａ）；ムラミールトリペプチドホスファチジルエタノールアミン、またはサイトカイン（例、ＧＭ−ＣＳＦまたはインターロイキン−２、−７または−１２）などの免疫刺激性複合体、および免疫刺激性ＤＮＡ配列などであるが、これらに限定されるものではない。ポリヌクレオチド性ワクチンの使用を伴うなど、いくつかの実施態様において、ヘルパーペプチドまたはサイトカインなどのアジュバントは、該アジュバントをコードするポリヌクレオチドを経由して提供することができる。
【００６５】
（本発明の方法）
本明細書に記載した全ての方法について、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とは、これらの抗体を一つ以上含む組成物をも含む。さらに、これらの組成物は、当技術分野においてよく知られている緩衝液などの薬学的に受容される賦形剤のような適当な賦形剤を含みうる。
【００６６】
（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を用いたタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの処置法）
本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を用いてタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状の発生を処置、予防、遅延する方法、および／またはタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを緩和する方法を包含する。これらの方法は、これらの抗体を、それらを必要とする個体に有効量投与することを伴う（さまざまな目安と態様が本明細書に記載されている）。有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、他の治療薬をともない、または伴うことなく投与することができる。いくつかの態様において、個体はヒトである。しかしながら、説明されている方法は、獣医学に関連して適用することもできる（例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマなどの非ヒト哺乳動物）。
【００６７】
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの測定法および処置法は、当技術分野において知られており、本明細書にも記載されている。
【００６８】
一つの態様において、本発明は、個体におけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法であって、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することを含む方法を提供する。さらに別の態様において、本発明は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを有する個体における末梢ニューロンの維持および／または再生を促進する方法を提供する。別の態様において、本明細書に記載されているように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とともにタキソールを投与することによって、タキソールによる癌処置を促進する。さらに別の態様において、本明細書に記載されているように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とともにタキソールを投与することによって骨髄移植を促進する。いくつかの態様において、個体は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーのリスクにさらされている個体である。
【００６９】
明らかなように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、タキソールによる処置の前、間、または後に投与することができ、あるいは、タキソール治療コースを開始する前に、タキソール治療コースの過程で、および／またはタキソール治療コースを停止した後に送達することもできる。投与は、ニューロパシーを発症する前に行うこともできる。いくつかの実施態様において、個体は、タキソールによる処置を受けている最中である。別の実施態様において、個体は、タキソールおよびその他の薬剤（シスプラチンなど）による処置を受けている最中である。さらに別の実施態様において、個体は以前タキソール処置を受けていた。
【００７０】
タキソールは、カポジ肉腫、乳癌、卵巣癌および肺癌など、さまざまな悪性腫瘍を処置するために認可されており、広く使用されている。また、タキソールは、その他、前立腺および頭頸部の悪性腫瘍などの悪性腫瘍、ならびにさまざまな悪性血液疾患を処置するためにも使用されている。また、タキソールは、骨髄移植の際にも投与される。したがって、本発明の一つの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体によって処置される個体は、乳癌、肺癌、卵巣癌、カポジ肉腫、前立腺癌、頭頸部癌、および悪性血液疾患のいずれか一つ以上をもつ。別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処置を受ける個体は、骨髄移植を必要とするか、それを受けている。別の実施態様において、個体は、タキソールによって処置可能な適用疾患（癌など）を有するか、タキソールによる処置を受けたことがある。
【００７１】
（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体）
本発明の方法は、ｔｒｋＣを活性化するようｔｒｋＣと相互作用する抗−ｔｒｋＣ抗体を使用することを伴う。抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、以下の特徴の一つ以上を示すはずである。（ａ）ｔｒｋＣレセプターに結合する；（ｂ）ｔｒｋＣレセプターの一つ以上のエピトープに結合する；（ｃ）ｔｒｋＣに結合し、ｔｒｋＣの生物活性を活性化するか、またはｔｒｋＣのシグナル機能によって仲介される一つ以上の下流経路を活性化する；（ｄ）ｔｒｋＣに結合し、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの一つ以上の症状を処置、予防、逆転または改善する；（ｅ）ｔｒｋＣレセプターの二量体化を促進する；（ｆ）ｔｒｋＣに結合し、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーに伴う痛み（異痛および／または痛覚過敏など）を処置、予防、逆転または改善する；（ｇ）ｔｒｋＣレセプターの活性化を高める；（ｈ）好適な薬理動態学的特性および生物利用能特性を示す；（ｉ）細胞の発生、生存、機能、維持および／または再生を促進する；（ｊ）癌のタキソール処置を促進する；（ｋ）骨髄移植片のタキソール処置を促進する。
【００７２】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は当技術分野において知られている。ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１；Ｕｌｆｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ（１９９８）２７３：５８２９−５８４０参照。いくつかの実施態様において、抗ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、抗体「Ａ５」と名付けられたヒト化マウス抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体であって、以下の変異を含むヒトの重鎖ＩｇＧ２ａの定常領域を含む抗体である。Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２ａ配列に対するアミノ酸番号で）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４）；ヒト軽鎖カッパ定常領域；および表１および２に示された重鎖よび軽鎖の可変領域。
【００７３】
【表１】
2006513187.tif 000002
【００７４】
【表２】
2006513187.tif 000003
Ａ５の重鎖可変領域または軽鎖可変領域をコードする以下のポリヌクレオチドを、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｎｉａ，ＵＳＡ（ＡＴＣＣ）に寄託した。
【００７５】
【化１】
2006513187.tif 000004
Ｅｂ．ｐｕｒ．２２５６．Ａ５ベクターは、Ａ５の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドであり、Ｄｂ．２２５６．Ａ５ベクターは、Ａ５の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。
【００７６】
別の実施態様において、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、抗体Ａ５の一個以上のＣＤＲを含む（Ａ５由来の１個、２個、３個、４個、５個のＣＤＲ、または、いくつかの実施態様において、全てのＣＤＲなど）。ＣＤＲ領域の決定は、当業者が容易になしうることである。ＣＤＲを決定するいくつかの技術がある。（１）異種間の配列変異性に基づいた方法（すなわち、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，（５ｔｈ  ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ  ＭＤ））、（２）抗原−抗体複合体の結晶学的研究に基づいた方法（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８）など。ＣＤＲの同定は、当業者が適宜なしうることである。いくつかの実施態様において、ＣＤＲはＫａｂａｔのＣＤＲを含む。別の実施態様において、ＣＤＲはＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲを含む。さらに別の実施態様において、ＣＤＲはＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲをともに含む。
【００７７】
抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部位を含む融合蛋白質、および、必要な特異性の抗原認識部位を含む、その他の改変された形態の免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、マウス、ラット、ヒト、またはその他に由来することができる（ヒト化抗体を含む）。したがって、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、ヒト抗体（抗体６．４．１（ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１）など）でもよく、または、ヒト化抗体（ヒト化モノクローナル抗体Ａ５など）でもよい。
【００７８】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトｔｒｋＣに結合することができる。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、ヒトおよび齧歯類のｔｒｋＣに結合することもできる。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトおよびラットのｔｒｋＣに結合することができる。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトおよびマウスのｔｒｋＣに結合することができる。一つの実施態様において、抗体は、ヒトｔｒｋＣ細胞外ドメイン上の一つ以上のエピトープを認識する抗体である。別の実施態様において、抗体は、ヒトｔｒｋＣ細胞外ドメイン上の一つ以上のエピトープを認識するマウスまたはラットの抗体である。いくつかの実施態様において、抗体はヒトｔｒｋＣに結合し、他の哺乳動物種（いくつかの実施態様においては脊椎動物種）由来のｔｒｋＣには顕著に結合しない。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトｔｒｋＣに結合し、他の哺乳動物種（いくつかの実施態様においては脊椎動物種）由来のｔｒｋＣの一種類以上にも結合する。別の実施態様において、抗体は、霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシの一つ以上から選択されるｔｒｋＣ上の一つ以上のエピトープを認識する。いくつかの実施態様において、抗体はｔｒｋＣに結合し、他の神経栄養因子（ｔｒｋＡおよび／またはｔｒｋＢなど近縁の神経栄養因子レセプターなど）とは顕著に交差反応（結合）しない。いくつかの実施態様において、抗体はｔｒｋＣに結合し、さらにｔｒｋＡおよび／またはｔｒｋＢに結合する。
【００７９】
ｔｒｋＣアゴニスト抗体によって認識されるエピトープは、連続しているものでも、非連続のものでもよい。いくつかの実施態様において、抗体は、基本的に、以下の一つ以上から選択される抗体と同じｔｒｋＣエピトープに結合することができる。６．１．２、６．４．１、２３４５、２３４９、２．５．１、２３４４、２２４８、２２５０、２２５３、および２２５６。ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。抗体が結合することのできるエピトープの例には、ｔｒｋＣのドメインＶおよび／またはドメインＩＶなどがあるが、これらに限定されるものではない。別の実施態様において、エピトープは、以下の残基を一つ以上含む。ヒトｔｒｋＣのＬ２８４、Ｅ２８７、およびＮ３３５。Ｕｒｆｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９８）２７３：５８２９−５８４０参照。さらに別の実施態様において、抗体は、免疫学的に不活生な定常領域、例えば、補体仲介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞仲介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進できない定常領域など、改変された定常領域を含む。別の実施態様において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願番号９８０９９５１．８に記載されているように改変されている。いくつかの実施態様において、定常領域は、以下の変異を含むヒトの重鎖ＩｇＧ２ａの定常領域を含む抗体である。Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２ａ配列に対するアミノ酸番号で）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４）。
【００８０】
抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体のｔｒｋＣに対する結合アフィニティーは、約５００ｎＭ、４００ｎＭ、３００ｎＭ、２００ｎＭ、１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのいずれかまででよい。いくつかの実施態様において、結合アフィニティーは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭ、または約５０ｐＭよりも低い。いくつかの実施態様において、結合アフィニティーは、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかよりも低い。さらに別の実施態様において、結合アフィニティーは、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭ、または約４０ｐＭよりも高い。当技術分野においてよく知られているとおり、結合アフィニティーは、ＫＤ、すなわち解離定数で表すことができ、結合アフィニティーの上昇は、ＫＤの減少に対応する。マウス抗−ｔｒｋＣアゴニストモノクローナル抗体２２５６のヒトｔｒｋＣに対する結合アフィニティーは、ＢＩＡｃｏｒｅ解析法を用いて測定すると約４０ｎＭであり、ヒト化抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体Ａ５（本明細書記載）のヒトｔｒｋＣに対する結合アフィニティーは、ＢＩＡｃｏｒｅ解析法を用いて測定すると約０．２８ｎＭである。
【００８１】
抗体のｔｒｋＣに対する結合アフィニティーを測定法の一つは、抗体の単機能性Ｆａｂ断片の結合アフィニティーを測定して行われるものである。単機能性Ｆａｂ断片を得るため、抗体（例えばＩｇＧ）をパパインで切断するか、組換え発現させることができる。抗体の抗−ｔｒｋＣ  Ｆａｂ断片のアフィニティーは、表面プラスモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラスモン共鳴（ＳＰＲ）装置、ＢＩＡｃｏｒｅ、ＩＮＣ、Ｐｉｓｃａｗａｙ  ＮＪ）によって測定できる。ＣＭ５チップは、供給業者の指示にしたがって、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）によって活性化させることができる。ヒトｔｒｋＣ−Ｆｃ融合蛋白質（「ｈｔｒｋＣ」）（または、ラットｔｒｋＣなどその他のｔｒｋＣ）は、ｐＨ５．０の１０ｍＭの酢酸ナトリウムで希釈することができ、０．０００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化されたチップに注入することができる。各チップの流路を通過させる流入時間を変えて用いると、詳しい動力学的研究用の２００〜４００応答ユニット（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｕｎｉｔ：ＲＵ）およびスクリーニングアッセイ法用の５００〜１０００ＲＵという２種類の抗原濃度範囲を実現することができる。このチップは、エタノールアミンによってブロックすることができる。再生実験によって、Ｐｉｅｒｃｅ社の溶出用バッファー（製品番号２１００４、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｂｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）と４Ｍ  ＮａＣｌ（２：１）との混合液が、２００回以上にわたる注射の間チップ上のｈｔｒｋＣの活性を保ちつつ、結合したＦａｂを有効に除去することが示された。ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ法には、ＨＢＳ−ＥＰバッファー（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４，０．１５  ＮａＣｌ，３ｍＭ  ＥＤＴＡ，０．００５％界面活性剤Ｐ２９）を泳動用バッファーとして使用する。精製したＦａｂサンプルの段階希釈液（０．１〜１０×推定ＫＤ）を１００μＬ／分にて１分間注射すると、２時間までの解離時間が可能になる。既知の濃度のＦａｂ（アミノ酸解析によって決定されたもの）を標準として使用し、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によってＦａｂ蛋白質の濃度を決定する。結合反応速度（Ｋｏｎ）および解離反応速度（Ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いた１：１ラングミュア結合モデルに適合させることによって同時に得られる（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｏｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６：９９−１１０）。平衡解離定数（ＫＤ）値はＫｏｆｆ／Ｋｏｎとして計算される。
【００８２】
別の態様において、ヒトｔｒｋＣレセプターを活性化できる抗体（例、ヒト、ヒト化、マウス、キメラ）は、ｔｒｋＣの細胞外ドメインを一つ以上発現する免疫原を用いることによって作成することができる。免疫原の一例は、ｔｒｋＣを高発現する細胞で、本明細書に記載されているように取得可能である。使用することのできる免疫原の別例は、ｔｒｋＣレセプターの細胞外ドメインまたは細胞外ドメインの一部を含む可溶性蛋白質（ｔｒｋＣのイムノアドヘシン（ｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｓｉｎ））である。
【００８３】
本明細書においてさらに説明されているように、宿主動物を免疫する経路およびスケジュールは、抗体を刺激および産生するために確立された従来からの技術に沿ったものである。ヒトおよびマウス抗体を産生するための一般的な技術は、当業者に知られており、また、本発明において述べられる。
【００８４】
ヒトを含む哺乳動物被験体、またはそれに由来する抗体産生細胞は、ヒトなどの哺乳動物ハイブリドーマ細胞株を作成するための材料として用いるために操作することができる。典型的には、本明細書に記載されているものなど、一定量の免疫原を腹腔内から宿主動物に接種する。
【００８５】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞雑種技術、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら（１９８２）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１による修正法を用いて、リンパ球および不死化ミエローマ細胞から調製することができる。Ｘ６３−Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡから入手できるものなど、利用可能なミエローマ細胞株をハイブリダイゼーションに用いることができる。通常、この技術は、ポリエチレングリコールなどの細胞融合剤を用いて、または、当業者に周知の電気的手段によって、ミエローマ細胞とリンパ球様細胞を融合することを含む。融合後、融合用培地から細胞を分離して、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択増殖培地の中で増殖させて、ハイブリダイズしなかった親細胞を除去する。本明細書に記載された培地は、血清を添加するか、無添加のままで、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために用いることができる。この細胞融合技術の代替法の一つとして、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を用いて、本発明の抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体を作成することができる。ハイブリドーマは、所望であれば、規模を大きくしてサブクローン化し、上清について、通常の免疫測定処理法（例、放射免疫測定法、酵素免疫測定法、または蛍光免疫測定法）によって抗−免疫原活性を測定する。
【００８６】
抗体の由来原として使用できるハイブリドーマは、ｔｒｋＣ、またはその一部に対して特異的なモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの子孫細胞である派生細胞のすべてを包含する。
【００８７】
このような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の方法を用いてインビトロまたはインビボで増殖させることができる。所望であれば、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過など、通常の免疫グロブリン精製処理法によって、培養培地または体液から単離することができる。もし不要な活性があれば、調製物を、例えば、固相に付着させた免疫原から作られた吸着剤の上を通過させてから、所望の抗体を免疫原から溶出または放出させて除去することができる。ヒトまたは他の種のｔｒｋＣレセプター、またはヒトまたは他の種のｔｒｋＣレセプターの断片、または、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンなど、免疫される種において免疫原性のある蛋白質に、例えば、マレイミドベンゾイル・スルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介して結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介して）、グルタルアルデヒド（ｇｌｙｔａｒａｄｅｈｙｄｅ）、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここで、ＲおよびＲ１は異なったアルキル基などの二官能性剤または誘導体化剤を用いて結合された標的アミノ酸配列を含む、ヒトまたは他の種のｔｒｋＣレセプターまたは断片によって宿主動物を免疫すると、抗体集団（例、モノクローナル抗体）が得られる。免疫原の別例は、ｔｒｋＣを高発現する細胞であって、組換え法によって、または、高レベルのｔｒｋＣを発現する天然の由来原から細胞を単離または濃縮することによって得ることができる細胞である。これらの細胞は、ヒトまたは他の動物に由来するものでよく、また、直接単離された免疫原として使用することもでき、または、免疫原性が高まるように、あるいは、（ｔｒｋＣの断片の）ｔｒｋＣ発現が上昇または増加するように処理することができる。このような処理は、例えばホルムアミド、グルタルアルデヒド、エタノール、アセトンおよび／またはさまざまな酸など、安定性または免疫原性を高めるよう設計された薬剤によって、細胞またはその断片を処理することなどであるが、これに限定されるものではない。さらに、このような処理の前後いずれかに、所望の免疫原、この場合、ｔｒｋＣまたはその断片を増加させるために細胞を処理することができる。これらの処理工程は膜分画技術を含むが、それらは、当技術分野においてよく知られている。
【００８８】
所望であれば、目的とする抗−ｔｒｋＣ抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）の配列を決定してから、発現または増殖させるためにポリヌクレオチド配列をベクターにクローニングすることができる。目的とする抗体をコードする配列を、宿主細胞のベクターの中で維持することができ、次に、将来使用するために、その宿主細胞を増量し、凍結することができる。別の方法として、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するため、または、抗体のアフィニティーまたはその他の特徴を改善するための遺伝子操作に使用することができる。例えば、抗体をヒトの臨床試験および処置に使用する場合には、免疫反応を回避するために、ヒトの定常領域により似せて定常領域を改造することができる。抗体の配列を遺伝子操作して、ｔｒｋＣレセプターに対するより高いアフィニティーおよびより高いｔｒｋＣレセプター活性化効率を得るのが望ましいかもしれない。抗−ｔｒｋＣ抗体について１箇所以上のポリヌクレオチド変異を作り出すが、ｔｒｋＣの細胞外ドメインまたはｔｒｋＣのエピトープへの結合能力は維持されたままにできることは、当業者にとって明らかである。
【００８９】
モノクローナル抗体をヒト化するには４つの一般的な工程がある。それらは、（１）最初の抗体の軽鎖および重鎖の可変領域の塩基配列および推定アミノ酸配列を決定すること、（２）ヒト化抗体の設計、すなわち、ヒト化処理過程において、どの抗体フレームワーク領域を利用するかを決定すること、（３）実際のヒト化方法論／技術、および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；第５，８０７，７１５号；第５，８６６，６９２号；第６，３３１，４１５号；第５，５３０，１０１号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，５８５，０８９号；第６，１８０，３７０号；および第６，５４８，６４０号参照。例えば、抗体をヒトの臨床試験および処置に使用する場合には、免疫反応を回避するために、ヒトの定常領域により似せて定常領域を改造することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および第５，８６６，６９２号参照。
【００９０】
組換えヒト化抗体では、Ｆｃγ部位を改変して、Ｆｃγレセプターおよび補体免疫系との相互作用を回避することができる。このタイプの改変は、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ大学の病理学部のＭｉｋｅ  Ｃｌａｒｋ博士によって設計され、そのような抗体を調製する技術については、１９９９年１１月１８日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２に記載されている。
【００９１】
ヒトの定常ドメインに融合した齧歯類のＶ領域、または改変された齧歯類Ｖ領域およびそれらに関係する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体など、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む「ヒト化」抗体が数多く記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９（１９９１），Ｌｏｂｕｇｌｉｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４（１９８９），Ｓｈａｗら，Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７）参照。別の参考文献は、適当なヒト抗体定常ドメインと融合させる前に、ヒトの支持フレームワーク領域（ＦＲ）に連結させた齧歯類のＣＤＲについて記載している。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８），Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８），およびＪｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）参照。別の参考文献は、組換えによって合板された齧歯類のフレームワーク領域によって支持された齧歯類のＣＤＲについて記載している。例えば、欧州特許公開第５１９，５９６号参照。これらの「ヒト化」分子は、齧歯類の抗ヒト抗体分子に対する不要な免疫反応であって、ヒトレシピエントにおいてそれらの分子を治療への適用期間と有効性を制約する反応を最小化するように設計されている。抗体の定常領域を改造して、例えば、補体仲介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞仲介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を促進できないなど、免疫学的に不活生にすることができる。別の実施態様において、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号に記載されているように改変される。例えば、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；英国特許出願第９８０９９５１．８号参照。抗体をヒト化する他の方法で利用可能なものが、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１−２４７６（１９９１）および米国特許第６，１８０，３７７号；第６，０５４，２９７号；第５，９９７，８６７号；第５，８６６，６９２号；第６，２１０，６７１号；第６，３５０，８６１号；およびＰＣＴ公開第ＷＯ０１／２７１６０号に開示されている。
【００９２】
さらにもう一つの別法では、特異的なヒト免疫グロブリン蛋白質を発現するように改造されている市販のマウスを用いて完全なヒト抗体を得ることができる。より所望の（例、完全なヒト抗体）またはより強い免疫反応を生じるよう設計されているトランスジェニック動物は、ヒト化された、またはヒトの抗体を作成するために使用することもできる。このような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）、およびＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅｄ（登録商標）およびＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
【００９３】
代替法では、抗体を、当技術分野において既知の方法を用いて組換えによって作成し発現させることができる。別の代替法では、抗体を、ファージディスプレイ技術を用いて組換えによって作成し発現させることができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、第５，５８０，７１７号、第５，７３３，７４３号および第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒら，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）参照。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３  （１９９０））を用いて、免疫されたドナーの免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメインの遺伝子レパートリーからインビトロでヒト抗体および抗体断片を作成することができる。この技術によれば、抗体のＶドメインの遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの繊維状ファージの主要な外被蛋白質または副次的な外被蛋白質のいずれかの遺伝子にインフレームでクローニングされて、機能的な抗体断片として、ファージ粒子の表面上に提示される。繊維状の粒子は、ファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むため、抗体の機能的な性質に基づいた選択を行うことによって、それらの性質をコードする遺伝子の選択をもたらす。このように、ファージは、Ｂ細胞の性質のいくつかを模倣する。ファージディスプレイは、さまざまな方法で行うことができる。概説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３，５６４−５７１（１９９３）参照。Ｖ−遺伝子分節のいくつかの由来原をファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小規模なランダムコンビナトリアルライブラリーから抗−オキサゾロン抗体の多様な数多くの抗体を単離した。免疫されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、基本的には、Ｍａｒｋら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）にしたがって、多様な数多くの抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を単離することができる。自然の免疫反応において、抗体遺伝子は、速い速度で変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入される変化の中には、より高いアフィニティーを付与するものがあって、高アフィニティー表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞が、その後の抗原投与の過程で選択的に複製および分化する。この自然のプロセスは、「チェーン・シャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）法」としてしられる技術を用いて模倣することができる。Ｍａｒｋｓ，ら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３（１９９２）。この方法では、重鎖および軽鎖のＶ領域遺伝子を、免疫されていないドナーから得たＶドメイン遺伝子の天然変異体（レパートリー）によって連続的に置き換えることによって、ファージディスプレイ法によって得られた「一次」ヒト抗体のアフィニティーを向上させることができる。この技術によって���ｐＭ〜ｎＭの範囲のアフィニティーをもつ抗体および抗体断片の作成が可能になる。非常に大きなファージ抗体レパートリー（「究極のライブラリー（ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｉｒａｒｉｅｓ）」としても知られる）を作成する方法については、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３）に記載されている。遺伝子シャッフリングも、齧歯類の抗体からヒト抗体を誘導するために用いることができ、その場合、ヒト抗体は、元の齧歯類の抗体と同じようなアフィニティーと特異性を有する。「エピトープ・インプリンティング」とも呼ばれる、この方法によれば、ファージディスプレイ技術によって得られた齧歯類抗体の重鎖および軽鎖のＶ領域遺伝子をヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで連続的に置き換えて、齧歯類−ヒトキメラを作り出す。抗原に対して選抜を行うと、機能的な抗原結合部位を回復できるヒト可変領域が単離される。すなわち、エピトープが、パートナーの選択を支配している（インプリントする）。残りの齧歯類Ｖドメインを置換するために処理を繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０６２１３を参照）。ＣＤＲの接ぎ木による齧歯類抗体の伝統的なヒト化とは異なり、この技術は、齧歯類由来のフレームワークやＣＤＲをもたない完全なヒト抗体を提供する。上記考察はヒト化抗体に属するものであるが、考察された一般原則は、例えばイヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシで使用するために抗体をカスタマイズするのに適用できる。
【００９４】
抗体は、異なった２つ以上の抗原に結合特異性を有するモノクローナル抗体であるでもよく、本明細書で開示されている抗体を用いて調製することができる。二重特異的抗体を作成する方法は、当技術分野において既知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら，１９８６，．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０参照）。従来から、組換え法による二重特異的抗体の作成法は、２つの重鎖が異なった特異的を有する２組の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の共発現に基づいていた（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５，５３７−５３９）。
【００９５】
二重特異性抗体を作成する一つの方法によれば、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリンの定常ドメインの配列と融合する。この融合は、好ましくは、免疫グロブリンの重鎖定常ドメインで、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含むドメインとの融合である。第一の重鎖定常領域（ＣＨ１）であって、軽鎖の結合に必要な部位を含み、融合体の少なくとも一方に存在する領域があるのが好適である。免疫グロブリンの重鎖融合体、および所望であれば、免疫グロブリンの軽鎖をコードするＤＮＡを別々の発現ベクターに挿入して、適当な宿主生物に同時形質転換する。こうすると、構築に用いられる３種類のポリペプチド鎖の割合が均等でないときに最適な收率が提供されるという態様において、３種類のポリペプチド断片の互いの割合を調整するのに大いに融通がきくからである。しかし、２種類以上のポリペプチド鎖が同じ割合いで発現したときに高い收率がもたらされる場合や、この割合が特別な意味をもたないときには、２種類または３種類すべてのポリペプチド鎖に対するコード配列を一つの発現ベクターに挿入することも可能である。
【００９６】
一つの方法において、二重特異性抗体は、一方のアームに第一の結合特異性をもつハイブリッド免疫グロブリン重鎖、および他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第二の結合特異性を提供する）から構成されている。二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリンの軽鎖をもつ、この非対称構造は、不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから所望の二重特異的化合物を分離するのを容易にする。この方法は、１９９４年３月３日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／０４６９０に記載されている。
【００９７】
共有結合した２つの抗体を含むヘテロ結合抗体も、本発明の範囲に含まれる。このような抗体は、免疫系細胞を不要な細胞に向かわせたり（米国特許第４，６７６，９８０号）、ＨＩＶ感染症を処置したりする（ＰＣＴ公開番号ＷＯ９１／００３６０およびＷＯ９２／２００３７３、およびＥＰ０３０８９）ために使用されている。ヘテロ結合抗体は、使いやすい架橋法を用いて作成することができる。適当な架橋剤および技術は、当技術分野において周知されており、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【００９８】
抗体は、まず宿主動物が作成する抗体を単離し、遺伝子配列を得、また、この遺伝子配列を用いて宿主細胞（例、ＣＨＯ細胞）の中で組換えによって抗体を発現させることによって、組換えによって作成することができる。使用することができる別の方法は、植物（例、タバコ）、トランスジェニックミルク、またはその他の生物の中で抗体の配列を発現させることである。植物またはミルク中で抗体を組換え技術により発現させる方法が述べられている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５；およびＰｏｌｌｏｃｋら（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７参照。例えば、ヒト化、一本鎖など、抗体の誘導体を作成する方法は、当技術分野において知られている。
【００９９】
キメラまたはハイブリッドの抗体も、架橋剤を含む方法など、蛋白質化学合成の既知の方法を用いてインビトロで調製することができる。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、または、チオエーテル結合を形成することによって、抗毒素（イムノトキシン）を構築することができる。この目的に適した試薬の例は、イミノチオラートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデートなどである。
【０１００】
例えば、Ｉｌｉａｄｅｓら，１９９７，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４０９：４３７−４４１に記載されているように、一本鎖Ｆｖ断片を作成することもできる。さまざまなリンカーを用いて、このような一本鎖断片を結合することが、Ｋｏｒｔｔら，１９９７，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，１０：４２３−４３３に記載されている。抗体を組換えによって作成および操作するためのさまざまな技術および操作が、当技術分野においてよく知られている。
【０１０１】
抗体は、１９９９年１１月１８日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／５８５７２の記載にしたがって改変することができる。これらの抗体は、標的分子に対する結合ドメイン以外に、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常ドメインの全部または一部に実質的に相同的な配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、最初に顕著な補体依存的溶解や細胞仲介性の標的破壊がなくても、標的分子に結合できる。好適には、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂに特異的に結合できる。これらは、典型的には、２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインに由来するキメラドメインに基づいている。このようにして改変された抗体は、長期の抗体療法で使用して、従来の抗体療法に付随する炎症その他の有害な反応を回避するのに好適である。
【０１０２】
宿主動物の免疫または組換え法によって作成した抗体は、以下の特徴の一つ以上を示すはずである。（ａ）ｔｒｋＣレセプターに結合する；（ｂ）ｔｒｋＣレセプターの一つ以上のエピトープに結合する；（ｃ）ｔｒｋＣに結合し、ｔｒｋＣの生物活性を活性化するか、またはｔｒｋＣのシグナル機能によって仲介される一つ以上の下流経路を活性化する；（ｄ）ｔｒｋＣに結合し、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの一つ以上の症状を処置、予防、逆転または改善する；（ｅ）ｔｒｋＣレセプターの二量体化を促進する；（ｆ）ｔｒｋＣに結合し、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーに伴う痛み（異痛および／または痛覚過敏など）を処置、予防、逆転または改善する；（ｇ）ｔｒｋＣレセプターの活性化を高める；（ｈ）好適な薬理動態学的特性および生物利用能特性を示す；（ｉ）細胞の発生、生存、機能、維持および／または再生を促進する；（ｊ）癌のタキソール処置を促進する；（ｋ）骨髄移植片のタキソール処理を促進する。
【０１０３】
また、イムノアッセイ法、および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーによる選別技術を用いてｔｒｋＣに特異的な抗体を単離することもできる。
【０１０４】
抗体は、さまざまなキャリアに結合できる。キャリアは活性化および／または不活性化することができる。周知のキャリアの例は、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然型または修飾型のセルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、およびマグネタイトなどである。キャリアの性質は、発明の目的上、可溶性か不溶性である。当業者は、この他にも、抗体に結合させるのに適したキャリアを知っているか、日常的な実験を用いて、そのようなものを確認することができよう。
【０１０５】
当技術分野において知られているように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体をコードするＤＮＡの配列を決定することができる。ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。一般的に、モノクローナル抗体は、常法（例えば、そのモノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）容易に単離・配列決定することができる。ハイブリドーマ細胞が、そのようなｃＤＮＡの好適な由来原となる。単離されたところで、ＤＮＡを発現ベクター（ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８７／０４４６２に開示されている発現ベクターなど）の中に入れ、次に、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、またはミエローマ細胞などの宿主細胞であって、それ以外には免疫グロブリン蛋白質を産生しないものに形質転換して、組換え宿主細胞の中でモノクローナル抗体の合成を行うことができる。例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ８７／０４４６２参照。また、このＤＮＡも、例えば、ヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインをコードする配列を、相同なマウスの配列の代わりに用いて、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４）、または、非免疫グロブリンポリペプチドをコードする配列の全部または一部に、免疫グロブリンをコードする配列を共有結合させて改変することができる。このようにして、本明細書記載の抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」の抗体を調製する。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体（その抗原結合断片など）をコードするＤＮＡも、本明細書に記載したとおり、所望の細胞にアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を導入して発現させるために利用することができる。ＤＮＡ導入技術については、本明細書においてさらに説明する。
【０１０６】
抗−ｔｒｋＣ抗体は、当技術分野において周知の方法を用いて特徴づけすることができる。例えば、一つの方法は、それが結合するエピトープを同定するもので、抗体−抗原複合体の結晶構造、競合アッセイ法、遺伝子断片発現アッセイ法、および合成ペプチドによるアッセイ法などがあり、例えば、ＨａｒｌｏｗとＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｏｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９の第１１章に記載されている。さらに別の例では、エピトープマッピングを用いて、抗−ｔｒｋＣ抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、例えばＰｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｓ）など、さまざまな販売元から購入できる。エピトープは直鎖状エピトープ、すなわち、アミノ酸の一本鎖に含まれているかもしれないし、または、必ずしも一本鎖の中に含まれていないアミノ酸の３次元的相互作用によって形成される立体配座的エピトープ（ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ  ｅｐｉｔｏｐｅ）であるかもしれない。さまざまな長さのペプチド（例、４〜６アミノ酸以上の長さ）を単離または（例えば、組換えによって）合成することができ、抗−ｔｒｋＣ抗体とともに結合アッセイに用いることができる。別例では、ｔｒｋＣの細胞外配列に由来する重複ペプチド（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｐｅｐｔｉｄｅｓ）を用いて抗−ｔｒｋＣ抗体による結合を測定することよって、体系的なスクリーニング法で、抗−ｔｒｋＣ抗体が結合するエピトープを決定することができる。遺伝子断片発現アッセイ法では、ｔｒｋＣをコードするオープンリーディングフレームを、ランダムまたは特定の遺伝子構成によって断片化して、発現されたｔｒｋＣ断片と、試験される抗体との反応性を決定する。これらの遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって作成してから、放射性アミノ酸存在下、インビトロで蛋白質に転写および翻訳することができる。そして、放射標識されたｔｒｋＣ断片への抗体結合を、免疫沈殿およびゲル電気泳動によって決定する。また、一定のエピトープは、ファージ粒子（ファージライブラリー）の表面上に提示されたランダムなペプチドの大規模ライブラリーを用いて同定することもできる。
【０１０７】
抗−ｔｒｋＣ抗体の特徴を調べることができるさらに別の方法は、同一の抗原、すなわちｔｒｋＣの細胞外ドメインに結合することが知られている別の抗体との競合アッセイ法を用いて、抗−ｔｒｋＣ抗体が別の抗体と同じエピトープに結合するか否かを決定するものである。競合アッセイ法は当業者に周知されている。競合アッセイ法に役立つ抗体の例は以下のものなどである。抗体６．１．２、６．４．１、２３４５、２３４９、２．５．１、２３４４、２２４８、２２５０、２２５３、および２２５６。ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。
【０１０８】
また、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１に記載されているようなドメイン交換変異体（ｄｏｍａｉｎ  ｓｗａｐ  ｍｕｔａｎｔｓ）を用いてエピトープマッピングを行うこともできる。一般的に、この方法は、ｔｒｋＡともｔｒｋＢとも有意に交差反応しない抗−ｔｒｋＣ抗体にとって有用である。ｔｒｋＣのドメイン交換変異体は、ｔｒｋＣの細胞ドメインを、ｔｒｋＡまたはｔｒｋＢの対応するドメインで置き換えて作成することができる。ＥＬＩＳＡまたは当技術分野において既知の方法を用いて、さまざまなドメイン交換変異体への各アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の結合を評価し、野生型（ネイティブ）ｔｒｋＣへの結合と比較することができる。別の方法では、アラニンスキャン法が行われる。ｔｒｋＣレセプターである抗原の各残基を体系的に別のアミノ酸（通常アラニン）に変異させ、改変されたｔｒｋＣの抗体への結合能力を、ＥＬＩＳＡまたは当技術分野において既知の方法を用いてテストすることによって、変異の効果を測定する。
【０１０９】
（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の同定）
以下の方法の一つ以上など、当技術分野において認められている方法を用いてアゴニスト抗体を同定することができる。例えば、米国特許第５，７６６，８６３号および第５，８９１，６５０号に記載されているキナーゼレセプター活性化（ＫＩＲＡ）アッセイ法を使用することができる。このＥＬＩＳＡ型アッセイ法は、レセプター蛋白質チロシンキナーゼ（ｒＰＴＫ、例、ｔｒｋレセプター）のキナーゼドメインの自己リン酸化を測定して、キナーゼ活性化の定性的または定量的な測定を行うのに、また、選択したｒＰＴＫのアゴニストまたはアンタゴニストである可能性があるものを同定・特徴づけするのに適している。このアッセイ法の最初の段階は、キナーゼレセプター、本件の場合はｔｒｋＣレセプターであって、真核細胞の細胞膜に存在するレセプターのキナーゼドメインをリン酸化することを含む。このレセプターは、内在性のレセプター、もしくはそのレセプターをコードする核酸、または、レセプター構築物であってもよく、細胞に形質転換されうる。典型的には、第一の固相（例、第一アッセイプレートのウエル）を、その細胞（通常は哺乳動物細胞株）の実質的に均質な集団でコートして、細胞を固相に付着させる。しばしば、細胞は接着性であるため、第一の固相に自然に付着する。「レセプター構築物」を使用する場合には、それは、通常、キナーゼレセプターとフラグ用ポリペプチドとの融合物を含む。フラグ用ポリペプチドは、該アッセイ法のＥＬＩＳＡ部分において、しばしば捕捉抗体である捕捉因子によって認識される。次に、候補アゴニストなどの検体を、付着細胞を有するウエルに加えて、チロシンキナーゼレセプター（例、ｔｒｋＣレセプター）を検体に曝露する（または接触させる）。このアッセイ法は、対象となるチロシンキナーゼレセプター（例、ｔｒｋＣ）に対するアゴニストリガンドの同定を可能にする。検体に曝露した後、溶解バッファー（可溶化用界面活性剤を含む）を用いて、付着した細胞を可溶化し、ゆっくりと撹拌して、細胞溶解液の濃縮や清澄化を必要とせず、そのまま該アッセイ法のＥＬＩＳＡ部分を行うことができる細胞溶解液を放出する。
【０１１０】
そして、このようにして調製した細胞溶解液はいつでも該アッセイ法のＥＬＩＳＡ段階に用いることができる。ＥＬＩＳＡ段階の最初の工程として、第二の固相（通常、ＥＬＩＳＡ用マイクロタイタープレート）を、チロシンキナーゼレセプターに、レセプター構築物の場合には、フラグ用ポリペプチドに特異的に結合する捕捉因子（しばしば捕捉抗体）でコートする。第二の固相のコーティングは、捕捉因子が第二の固相に付着するように実施する。捕捉因子は、通常、モノクローナル抗体であるが、本明細書の実施例に記載されているように、ポリクローナル抗体またはその他の因子を使用することもできる。つぎに、得られた細胞溶解液を、付着した捕捉因子に曝露または接触させて、レセプターまたはレセプター構築物を第二の固相に付着（またはそれに捕捉）させる。次に、捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物を残して、結合しなかった細胞溶解液を除去するために洗浄段階を行う。次に、付着または捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物を、チロシンレセプターキナーゼ内のリン酸化されたチロシン残基を識別する抗リン酸化チロシン抗体に曝露または接触させる。好適な実施態様において、抗リン酸化チロシン抗体は、非放射性呈色試薬の変色を触媒する酵素に（直接的または間接的に）結合している。したがって、続いて起こる試薬の変色によってレセプターのリン酸化を測定することができる。この酵素を抗−リン酸化チロシン抗体に直接結合させるか、または、結合用分子（例、ビオチン）を抗−リン酸化チロシン抗体に結合してから、該酵素を、結合用分子を介して抗−リン酸化チロシン抗体に結合させることができる。最後に、捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物への抗−リン酸化チロシン抗体の結合を、例えば、呈色試薬の変色によって測定する。
【０１１１】
最初の同定の後、標的となっている生物活性を試験できることが知られている生物アッセイ法によって、候補抗体のアゴニスト活性をさらに確認・精緻化する。例えば、抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体がｔｒｋＣに作用する能力を、全長のヒトｔｒｋＣで形質転換したＰＣ１２細胞を用いたＰＣ１２神経突起伸長アッセイ法で試験することができる（Ｕｒｆｅｒら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３６：４７７５−４７８１（１９９７）；Ｔｓｏｕｌｆａｓら，Ｎｅｕｒｏｎ  １０：９７５−９９０（１９９３））。このアッセイ法は、適当なリガンドによる刺激に反応して、ラットの褐色細胞腫細胞（Ｐ１２）により、神経突起の伸長を測定する。これらの細胞は、内在性ｔｒｋＡを発現するため、ＮＧＦに反応する。しかし、内在性のｔｒｋＣは発現していないため、ｔｒｋＣアゴニストに対する反応を誘発するためにｔｒｋＣ発現構築物で形質転換される。抗−ｔｒｋＣ抗体で形質転換した細胞をインキュベートした後、神経突起の伸長を測定して、例えば、細胞半径の２倍を超える神経突起をもつ細胞の数を数える。形質転換されたＰＣ１２細胞において神経突起の伸長を促す抗−ｔｒｋＣ抗体は、ｔｒｋＣアゴニスト活性があることを示している。
【０１１２】
また、胚発生の特定の段階にあるさまざまな特異的ニューロンを用いて、ｔｒｋＣの活性化を決定することも可能である。適正に選ばれたニューロンは、生存するためにｔｒｋＣの活性化を必要とするようにできるため、これらのニューロンのインビトロにおける生存によって、ｔｒｋＣの活性化を判定することが可能になる。適当なニューロンの一次培養液に候補抗体を添加して、候補抗体がｔｒｋＣを活性化できた場合には、少なくとも数日間はこれらのニューロンを生存させる結果となろう。このため、候補抗体のｔｒｋＣ活性化能力を測定することが可能になる。このタイプのアッセイ法の一例では、Ｅ１１マウス胚の三叉神経節を切除し、解離してから、得られたニューロンを組織培養皿において低密度で培養する。そして、候補抗体を培地に加え、培養皿を２４〜４８時間インキュベートする。この時間経過後、さまざまな方法のいずれかによって、ニューロンの生存を測定する。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与されたサンプルは、典型的には、対照用抗体を付加されたサンプルよりも生存率が高くなるため、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体が存在すると判断できる。例えば、Ｂｕｃｈｍａｎら（１９９３）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １１８（３）：９８９−１００１参照。
【０１１３】
自然に、または、ｔｒｋＣをコードするＤＮＡで形質転換された後、ｔｒｋＣを発現するさまざまな細胞型において下流シグナル伝達を活性化できることによって、アゴニスト抗体を同定することができる。このｔｒｋＣは、ヒトのものでも、別の哺乳動物（齧歯類や霊長類）のｔｒｋＣでもよい。下流シグナル伝達カスケードは、蛋白質の発現レベルもしくは蛋白質の蛋白質リン酸化のレベル、または、細胞の代謝状態または成長状態（本明細書に記載されているようなニューロンの生存および／または神経突起伸長など）の変化など、ｔｒｋＣ発現細胞のさまざまな生化学的または生理学的なパラメータの変化によって検出することができる。関連する生化学的または生理学的なパラメータの検出法は、当技術分野において知られている。
【０１１４】
（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与）
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体のさまざまな製剤を投与に使用することができる。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はそれだけで投与することができる。いくつかの実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、薬学的に受容される賦形剤を含む組成物にして投与される。薬学的に受容される賦形剤は、当技術分野において知られていて、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形や堅さを付与したり、希釈剤として働いたりすることができる。適当な賦形剤は、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を変化させる塩類、カプセル化剤、バッファー、および皮膚浸透促進剤などであるが、これらに限定されるものではない。賦形剤、ならびに非経口および経口による薬剤輸送のための製剤については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（２０００）に示されている。
【０１１５】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、注射によって（腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内などに）投与するよう製剤することができる。したがって、これらの抗体は、食塩水、リンゲル氏液、デキストロース溶液など薬学的に受容される媒体と組み合わせることができる。具体的な投薬法、すなわち用量、時期および反復法は、具体的な個体、およびその個体の病歴によって異なる。一般的に、約１μｇ／ｋｇ体重よりも少ない、約１μｇ／ｋｇ体重以上、約２μｇ／ｋｇ体重以上、約５μｇ／ｋｇ体重以上、約１０μｇ／ｋｇ体重以上、約２０μｇ／ｋｇ体重以上、約５０μｇ／ｋｇ体重以上、約１００μｇ／ｋｇ体重以上、約２００μｇ／ｋｇ体重以上、約５００μｇ／ｋｇ体重以上、約１ｍｇ／ｋｇ体重以上、約２ｍｇ／ｋｇ体重以上、約５ｍｇ／ｋｇ体重以上、約１０ｍｇ／ｋｇ体重以上、約３０ｍｇ／ｋｇ体重以上の用量、またはそれよりも多い用量（約５０ｍｇ／ｋｇ体重、約１００ｍｇ／ｋｇ体重、約２００ｍｇ／ｋｇ体重または約５００ｍｇ／ｋｇ体重など）が投与される。
【０１１６】
半減期などの実験的な考慮事項が、投薬量の決定に影響する。ヒト化抗体または完全なヒト抗体など、ヒト免疫系と適合性のある抗体を用いて、その抗体の半減期を延長したり、宿主の免疫系によって攻撃されないようにしたりできる。投与頻度は、治療コース全体について決定・調節することができ、絶対的にではないが、通常は、患者の体内で有効濃度のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を維持すること、および、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの一つ以上の症状を抑制および／または改善および／または遅延させるという観点から決められる。あるいは、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の製剤の持続的な放出も適切である。持続的な放出を行わせるためのさまざまな製剤および装置が、当技術分野において知られている。本発明における方法にしたがったアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的条件によって、投与目的が治療的なものか予防的なものかによって、また、当業者に既知の別の要素によって、継続的にすることも、間歇的にすることも可能である。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与は、本質的には、予め決められた期間全体にわたって継続させることができ、または、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を発症する前、その間、またはその後；タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの症状を発症する前およびその間；前後；間およびその後；および／または前、その間、およびその後のいずれかに間隔をあけて連続する用量にすることも可能である。
【０１１７】
一般的に、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与については、まず候補投薬量を約２ｍｇ／ｋｇにすることができる。本発明の目的上、典型的な一日当たりの投与量は、上記の要素に応じて、約３０μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ以上になるかもしれない。数日以上の期間にわたる反復投与については、条件によって、病気の症状が所望のように抑えられるまで、または、治療のレベルがタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置または予防に至るまで、処置を継続する。投薬計画の一例は、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量を投与し、その後は、約１ｍｇ／ｋｇの抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体の用量を毎週維持するか、一週間おきに約１ｍｇ／ｋｇの投与量を維持することを含む。
【０１１８】
一つの実施態様において、抗体の投与量は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するためにｔｒｋＣレセプターを活性化するアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の投与を１回以上受けている個体において経験的に決定することができる。個体は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の増分的投薬を受ける。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の効果を評価するために、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの疾患状態の指標を、本明細書に記載したように追跡することもできる。
【０１１９】
その他の製剤は、リポソームなど、当技術分野において知られている適当な輸送形態のものを含む。例えば、Ｍａｈａｔｏら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：８５３−８５９参照。リポソーム製剤は、サイトフェクチン（ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ）、多重膜小胞体、および一枚膜小胞体などがあるが、これらに限定されるものではない。
【０１２０】
インビボ投与に使用される製剤は滅菌されていなければならない。これは、例えば、滅菌濾過用膜に濾過するなどして容易に行うことができる。治療用のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体組成物は、一般的に、例えば、静注用溶液バックまたは皮下注射用注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアルなど、滅菌された接続口をもつ容器の中に入れられる。
【０１２１】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、例えば、ボーラスとして、または一定の時間継続する輸液による静脈内投与、筋肉内、腹腔内、皮下、経口、鞘内、または局所という経路などによって、既知の方法にしたがって個体に投与される。また、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は吸入によって投与することもできる。ジェット式噴霧器および超音波噴霧器など、液体製剤用に市販されている噴霧器が投与に役立つ。液体製剤は、直接噴霧することもできるし、凍結乾燥した粉末を再構成した後噴霧することもできる。あるいは、フルオロカーボン製剤および計量式吸入器を用いてアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体をエアロゾル化するか、または、凍結乾燥または破砕粉末として吸入することができる。
【０１２２】
いくつかの実施態様においては、一つ以上の抗体が存在しうる。これらの抗体は、互いの同一でも異なっていてもよい。いくつかの実施態様において、一つ以上、２つ以上、３つ以上、４つ以上、５つ以上の異なったｔｒｋＣアゴニスト抗体が存在する。好適には、これらの抗体は、互いに悪影響を与えない相補的な活性をもつ。
【０１２３】
また、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体（その抗原結合断片など）をコードするポリヌクレオチドも、所望の細胞の中にアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を導入し、発現させるために使用することができる。発現ベクターを用いてアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の発現を行わせることができることは明らかである。発現ベクターは、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、鞘内、脳室内、経口、経腸、非経口、鼻内、経皮、または吸入によって投与することができる。例えば、発現ベクターの投与は、注射、経口投与、パーティクル・ガン、またはカテーテルによる投与など、一部または全身への投与、および局所投与などである。当業者は、発現ベクターを投与して、外来性の蛋白質のインビボでの発現を得ることに慣れている。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号、第６，４１３，９４２号、および第６，３７６，４７１号参照。
【０１２４】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体をコードするポリヌクレオチドを含む、標的された治療用組成物の導入を用いることもできる。レセプターによるＤＮＡ導入技術について、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）１１：２０２；Ｃｈｉｏｕら，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．）（１９９４）；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３：６２１；Ｗｕら，Ｊ：．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４）２６９：５４２；Ｚｅｎｋｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）（１９９０）８７：３６５５；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：３３８に記載されている。ポリヌクレオチドを含む治療用組成物を、遺伝子治療プロトコールにおいて、約１００ｎｇから約２００ｎｇのＤＮＡの範囲内で局所投与のために投与する。また、遺伝子治療プロトコールの間、約５００ｎｇから約５０ｍｇ、約１μｇから約２ｍｇ、約５μｇから約５０μｇ、および約２０μｇから約１００μｇの濃度範囲のＤＮＡを使用することもできる。本発明に係る治療用ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子導入用輸送媒体を用いて導入することができる。遺伝子導入用輸送媒体は、ウイルス性のものでも、非ウイルス性由来のものであってもよい（一般的には、Ｊｏｌｌｙ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）１：５１；Ｋｉｍｕｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）５：８４５；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９５）１：１８５；およびＫａｐｌｉｔｔ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４）６：１４８参照）。このようなコード配列の発現は、内在性の哺乳動物のまたは異種性のプロモーターを用いて誘導することができる。コード配列の発現は、構成的なものか、調節的なものかいずれかである。
【０１２５】
所望の細胞にポリヌクレオチドを導入して発現させるためにウイルスから作成したベクターは、当技術分野においてよく知られている。ウイルスに基づく輸送媒体には、組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／０７９３６；ＷＯ９４／０３６２２；ＷＯ９３／２５６９８；ＷＯ９３／２５２３４；ＷＯ９３／１１２３０；ＷＯ９３／１０２１８；ＷＯ９１／０２８０５；米国特許第５，２１９，７４０号、第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；およびＥＰ０３４５２４２参照）、アルファウイルスに基づくベクター（例、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４９；ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／１２６４９，ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４およびＷＯ９５／００６５５参照）。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７に記載されているように、死滅させたアデノウイルスに結合させたＤＮＡの投与を利用することもできる。
【０１２６】
死滅させたアデノウイルスに結合した、または結合していないポリカチオン性縮合ＤＮＡだけ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７参照）、リガンド結合したＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４：１６９８５参照）、真核細胞輸送媒体細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／０７９９４；ＷＯ９６／１７０７２；ＷＯ９５／３０７６３；およびＷＯ９７／４２３３８参照）、および核電荷の中和または細胞膜との融合など、ウイルスによらない輸送媒体と方法を用いることもできる。裸のＤＮＡを使用することもできる。裸のＤＮＡを導入する方法の例が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９０／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載されている。遺伝子の輸送媒体として働くことができるリポソームについては、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ９５／１３７９６；ＷＯ９４／２３６９７；ＷＯ９１／１４４４５；およびＥＰ０５２４９６８に記載されている。さらに別の方法が、Ｐｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（１９９４）１４：２４１１およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：１５８１に記載されている。
【０１２７】
タキソール（他のタキサン類を含む）は、単独、または他の薬剤とともに投与することができる。最も普通には、エタノールおよびＣｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）を含む製剤にタキソールを導入して、処置のためには塩水溶液に希釈する。また、タキソールは、乳液など、他のさまざまな形に製剤することもできる。タキソールは、普通、放射線治療および／または、さまざまなプラチナ含有化合物（シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン）、イホスファミド、５−フルオロウラシル、ドクソルビシン、エピルビシン、シクロホスファミド、ジェムシタビン、カペシタビン、エキサリンド、トポテカン、エトポシド、ビンカ・アルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン（ｖｉｎｂｌａｔｉｎ）、ビノレルビン）、およびその他、当技術分野において既知の化学療法剤など、他の化学療法剤とともに投与される。また、タキソールは、タキソール、および／またはタキソールと併用して投与される他の化学療法剤の有害な副作用を中和および処置するように設計された薬剤とともに投与される。例えば、エリスロポエチン（エポエチン（Ｅｐｏｉｔｅｎ）、ダルベポエチン（Ｄａｒｂｏｐｏｉｔｅｎ））、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦなどの薬剤をタキソールとともに投与して、化学療法剤の血液学的作用を処置することができる。別の例として、化学療法剤の使用にしばしば付随する吐き気を処置するために、フェノチアジン（コンパジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ））、ゾフランおよびアンゼメット（Ａｎｚｅｍｅｔ）などの薬剤が、タキソールとともに投与される。患者は、タキソール処置を受ける前に事前に薬剤治療を受けることができる。
【０１２８】
タキソールは、カポジ肉腫、乳癌、卵巣癌および肺癌など、さまざまな悪性腫瘍を処置するために認可されており、広く使用されている。また、タキソールは、その他、前立腺および頭頸部の悪性腫瘍ならびに悪性血液疾患を処置するためにも使用される。タキソールは、骨髄移植の際にも、例えば、骨髄処置を行う前に幹細胞を動員するために投与される。代表的なタキソール用法には、３週間ごとに３時間にわたって１３５ｍｇ／ｍ２または１７５ｍｇ／ｍ２を静脈内に投与する（卵巣癌に対し）；３週間ごとに３時間にわたって１７５ｍｇ／ｍ２を静脈内に投与する（乳癌に対し）；２４時間にわたって１３５ｍｇ／ｍ２を静脈内に投与する（非小細胞肺癌に対し）；３週間ごとに３時間にわたって１３５ｍｇ／ｍ２を静脈内に投与するか、または、２週間ごとに３時間にわたって１００ｍｇ／ｍ２を静脈内に投与する（カポジ肉腫に対し）。また、タキソールの処方情報（製品の同梱物）、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ（１９９８）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔａｘｏｌ．ｃｏｍ／ｔｘｐｉ．ｈｔｍｌで入手可能）も参照。別の実施態様において、タキソールは、７７５ｍｇ／ｍ２、４７５ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、および／または３５０ｍｇ／ｍ２で投与される。また、タキソールは、骨髄移植の際には高用量で用いられ、例えば、８２５ｍｇ／ｍ２もの高用量で用いられる。いくつかの実施態様において、骨髄移植中のタキソール処置は、以下の薬剤の一つ以上とともに行われる。メルファラン、シクロホスファミド、チオテパおよびカルボプラチン。例えば、Ｖａｈｄａｔら（２００２）Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  ３０（３）：１４９−１５３参照。
【０１２９】
アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体は、タキソールとともに投与することができる。すなわち、タキソールと併用して、協同して、または連続して投与することができる。このような投与には、ニューロパシーを誘発する薬剤（タキソールなど）を投与する前に患者に抗体を投与すること、ニューロパシーを誘発する薬剤を投与している間に患者に抗体を投与すること、または、ニューロパシーを誘発する薬剤を投与した後に患者に抗体を投与することを含む。本明細書において、ともに投与することは、同時投与および／または異なった時に投与することを含む。また、ともに投与することは、同一製剤（すなわち、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールが同じ組成物に（併用されて）存在する）および／または別々の組成物として投与することとを包含する。本明細書において、「ともに投与すること」とは、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールとを有効量にして個体に投与する状況を意味する。本明細書においてさらに検討するように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールを、異なった投薬回数および／または間隔で投与しうるのは当然である。例えば、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を毎週投与しながら、タキソールはより頻繁に投与することも可能である。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とタキソールを、同一の投与経路または異なった投与経路を用いて投与し、また、投与コースの間中さまざまに投薬処方を変えうるのは当然である。投与は、感覚性ニューロパシーを発症する前に行うことができる。
【０１３０】
また、本明細書に記載されているように、タキソールをアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とともに投与することによってタキソールによる癌処置を促進することもできる。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与することによって、末梢性感覚性ニューロパシーなど、タキソール処置の用量を制限する副作用を除去できるため、タキソールの投薬量を増加させることができる。アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体およびタキソールの相対量と比率はさまざまなである。いくつかの実施態様において、タキソール処置によって誘発されるか、またはタキソール処置に付随する望ましくない副作用（感覚性ニューロパシーなど）の抑制を可能にするのに十分なアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を投与する。
【０１３１】
（アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処置の有効性を評価する方法）
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの評価法および診断法は、当技術分野において周知されている。いくつか異なったレベルについて、処置効果の評価を行うことができる。評価は、例えば、電気生理学的反応、またはニューロン（感覚ニューロンを含む）に影響を与える解剖学的もしくは分子的な変化などの臨床的徴候を観察することによって行うことができる。例えば、Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ２４９：９−１７参照。いくつかの実施態様において、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーは、以下の症状のいずれかによって特徴づけられる。遠位性対称性多発性ニューロパシー、ポールハイプエスセジア（ｐａｌｌ−ｈｙｐｅｓｔｈｅｓｉａ）、位置感覚消失、痛みを伴う異常感覚、レールミット徴候、痛み（異痛および／または痛覚過敏など）、進行性遠位性および／または近位性の不全麻痺、筋肉痛、麻痺性イレウス、起立性低血圧症、および不整脈、ならびに末梢感覚ニューロン（大径線維末梢感覚ニューロンなど）の変性。これらは、標準的な神経学的検査、問診、またはより特殊な定量試験によって判定することができる。これらのより特殊な定量試験には、例えば、マイクロニューログラフィーまたは他の電気生理学的検査法を用いて、影響を受けたニューロンの伝導速度を測定すること；熱、軽触、振動、または二点識別などの皮膚刺激を感知できる能力を定量的および／または定量的に測定すること；聴覚検査；平衡感覚の特殊検査；自己受容または運動感覚の特殊検査；血圧調節などの自律機能の検査；および、さまざまな生理学的および薬理学的刺激に対する心拍反応の検査などがあるが、これらに限定されるものではない。これらの検査には、運動神経の検査も含まれる。
【０１３２】
（タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの処置で使用するための組成物）
本発明は、本明細書に記載された方法のいずれかで使用するための組成物も提供する。本発明に係る方法で使用される組成物は、有効量のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む。このような組成物の例、およびその製剤の仕方についても、上述および後述される。本発明は、薬剤としての使用および／または薬剤製造法における使用に関連して、本明細書において記載されているいずれかの使用について説明されている組成物を提供する。
【０１３３】
本発明において使用される組成物は、さらに、凍結乾燥製剤または水性溶液の形で、薬学的に受容されるキャリア、賦形剤、または安定化剤を含みうる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ  Ｅｄ．Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）。受容されるキャリア、賦形剤、または安定化剤は、その投薬量および濃度ではレシピエントに対して無害であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジル・アンモニウム・クロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノールアルコール、ブチルアルコール、またはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基よりも少ない）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどの蛋白質；ポリビニルピロリドンなどの疎水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、および、グルコース、マンノース、またはデキストランなど、その他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例、Ｚｎ−蛋白質複合体）；および／または、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むことができる。薬学的に受容される賦形剤については、本明細書においてさらに説明されている。
【０１３４】
一つの態様において、本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む組成物を提供する。別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒトｔｒｋＣを認識する。さらに別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒト化されている（本明細書に記載されている抗体Ａ５など）。別の実施態様において、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、抗体Ａ５のＣＤＲを一つ以上（１、２、３、４，５個など、またはいくつかの実施態様においては、Ａ５由来の６個のＣＤＲすべて）を含む。さらに別の実施態様において、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、表１記載の重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号：１）、および表２記載の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号：２）を含む。さらに別の実施態様において、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体はヒト抗体である。
【０１３５】
組成物が、一つよりも多いアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体（例えば、ｔｒｋＣの異なったエピトープを認識するアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の混合物など）を含みうるのは当然である。別の組成物の例は、同じエピトープを認識する一つ以上のアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体か、または、ｔｒｋＣの異なったエピトープに結合するアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体のさまざまな種を含む。
【０１３６】
また、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体およびその組成物は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の有効性を促進および／または相補する働きをする他の薬剤とともに用いることもできる。例えば、このような付加的化合物は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシー、または、例えば貧血や吐き気など、タキソール処置の副作用を処置するのに役立つことが知られている化合物を含むことができ、エリスロポエチン（エポエチン（Ｅｐｏｉｔｅｎ）、ダルベポエチン（Ｄａｒｂｏｐｏｉｔｅｎ））、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ、フェノチアジン（コンパジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ））、ゾフランおよびアンゼメット（Ａｎｚｅｍｅｔ）などがあるが、これらに限定されるものではない。このような分子は、意図した目的に効果的である組み合わせ、量にして、適切に存在する。ｔｒｋＣアゴニスト抗体およびその組成物は、エリスロポエチン（エポエチン（Ｅｐｏｉｔｅｎ）、ダルベポエチン（Ｄａｒｂｏｐｏｉｔｅｎ））、Ｇ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦ、フェノチアジン（コンパジン（Ｃｏｍｐａｚｉｎｅ））、ゾフランおよびアンゼメット（Ａｎｚｅｍｅｔ）など、抗体の有効性を促進および／または相補する働きをする他の薬剤とともに用いることもできる。
【０１３７】
（キット）
また、本発明は、本発明に係る方法で使用するためのキットも提供する。本発明のキットは、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む一つ以上の容器を含み、いくつかの実施態様においては、さらに、本明細書に記載されている方法（タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置する方法など）のいずれかに従って使用するための説明書を含む。いくつかの実施態様において、これらの説明書は、個体がタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを有し、かつ／または、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを発症する危険に瀕しているかを確認することに基づいて、処置に適した個体を選択することに関する説明を含み、また、感覚性ニューロパシーを処置および／または予防するためにｔｒｋＣアゴニスト抗体を投与することをさらに説明してもよい。本発明は、また、薬剤としての使用および／または薬剤を製造するための使用に関連して本明細書で説明されている使用のために記載されているキットも提供する。
【０１３８】
このように、一つの実施態様において、本発明は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含むキットを提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、本明細書に記載されている方法であって、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体を含む方法で使用するためのキットを提供する。さらに別の実施態様においては、説明書は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体とともにタキソールを投与することについての説明を含む。
【０１３９】
本発明に係るキットは適当にパッケージされている。適当なパッケージには、バイアル、ボトル、広口瓶、可塑性パッケージ（例、密封されたマイラーバッグ、またはプラスチック袋）などがあるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施態様において、キットは、容器、および、容器の上またはそれに付随して、ラベルまたはパッケージインサートを含む。ラベルまたはパッケージインサートは、組成物が、タキソール誘発性ニューロパシーを処置、予防、または改善するのに役立つことを表示する。説明書は、本明細書に記載されている方法を実施するために提供される。容器は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーを処置するのに有効な組成物を保持し、また、滅菌した接続口をもつことができる（例えば、容器は、静脈内用の溶液バック、または、皮下注射針で穿刺可能なストッパーを有するバイアルでもよい）。組成物中の活性薬剤の少なくとも一つがｔｒｋＣアゴニスト抗体である。容器は、さらに、第二の薬学的に活性のある薬剤を含みうる。キットは、選択的に、バッファーおよび説明用の情報など、付加的な構成部品を提供することもできる。
【０１４０】
以下の実施例は例示のためのものであって、発明を制限するものではない。
【実施例】
【０１４１】
（実施例１．ニューロンの生存と軸索の伸長に対するＮＴ３とアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体の効果）
ＮＴ３は、シスプラチンおよびピリドキシンによって誘発されるニューロパシーの処置に含まれてきた。この実施例では、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、ｔｒｋＣレセプターの生理学的リガンドであるＮＴ−３の生物活性のすべてを模倣したわけではないことを明らかにする。
【０１４２】
（ＮＴ−３またはアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体が成人のＤＲＧニューロンの神経突起伸長を促進する能力）
抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が、成人の感覚ニューロンに対するＮＴ−３の作用を模倣できるかを調べるために、成人のＤＲＧニューロンの培養細胞を、さまざまな濃度のＮＴ−３またはマウスアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体２２５６の存在下または非存在下で増殖させた。４８時間培養した後、培養細胞を固定してＲＴ９７抗体で染色して、神経突起伸長をＲＴ９７＋ニューロンで評価した。図１に示すように、ＮＴ−３による処理は、神経突起伸長の増加をもたらしたが、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処理は顕著な伸長をもたらさなかった。
【０１４３】
成獣（６月齢）のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから後根神経節を切除し、標準的な技術によって解離・培養した（Ｌｉｎｄｓａｙ，１９８８，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｊｕｌ；８（７）：２３９４−４０５）。要するに、神経節の鞘を剥いで、コラゲナーゼの中、３７℃で９０分間２回インキュベートした。そして、それらを十分に洗ってから、トリプシンの中で３０分間インキュベートした。さらに洗浄した後、炎で滑らかにしたパスツールピペットに通してやさしく粉砕して神経節を解離させた。そして、この混合液を、記載されている（Ｈｏｒｉｅ，１９９４，ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ  ６，３７−４０）ようにして、３０％Ｐｅｒｃｏｌｌ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の勾配によって沈降させて濃縮した。濃縮されたニューロンを、ポリオルニチンおよびラミニンでコートした９６−ウエルプレート上に６．２５／ｍｍ２の密度でプレートした。培地はＦ−１４からなり、添加剤である２ｍＭグルタミン、０．３５％Ａｌｂｕｍａｘ  ＩＩ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）、６０ｎｇ／ｍｌプロゲステロン、１６μｇ／ｍｌプトレッシン、４００ｎｇ／ｍｌ  Ｌ−チロキシン、３８ｎｇ／ｍｌ亜セレン酸ナトリウム、３４０ｎｇ／ｍｌトリ−ヨード−チロニン、６０μｇ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含み、また、適当な被験因子を指定された濃度で加えた。４８時間培養した後、セ氏４度で１６〜２４時間、５％ショ糖を含むＰＢＳ中４％ホルムアルデヒドで細胞を固定した。
【０１４４】
抗体ＲＴ−９７による染色を用いて、大型細胞体をもつＤＲＧニューロンのサブクラスであって、インビボで大径有髄軸索を有するものを示した。このクラスは、選択的にｔｒｋＣを発現した。培養細胞を、ＰＢＳで３回、０．１％ゼラチン、０．９％ＮａＣｌ、および０．３％トリトン（ＴＧＳＴ）を含む０．１Ｍトリスで３回リンスした。そして、培養細胞を、５％ショ糖および４％正常ロバ血清を含むＴＧＳＴ中１／１００の濃度のＲＴ−９７の中で一晩インキュベートした。ＴＧＳＴで培養細胞を十分に洗浄してこのインキュベーションを終わらせてから、Ｃｙ−３結合ヤギ抗−マウスＩｇＧ二次抗体を、５％ショ糖および４％正常ロバ血清を含むＴＧＳＴ中１：４００の希釈度で細胞に加えた。ＴＧＳＴでさらに十分に洗浄した後、細胞を検査して、対物倍率４倍で蛍光によってデジタル処理により画像を捉えた。これらの画像を分析して、得られたニューロン突起のピクセル面積を閾値化、二値化、骨格化、および測定することによって、ニューロンの突起を選択的に示した。結果は、図１に示されているが、ニューロン突起のピクセル面積の平均値で示されている（＋／−は平均値の標準誤差）（ｎ＝４）。ＮＴ−３で処理した結果、神経突起伸長が増加したが、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体で処理しても、有意な伸長はもたらされなかった。
【０１４５】
（ＮＴ−３およびアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体がラット胚の三叉神経ニューロンの生存を促進する能力）
三叉神経節（ＴＧ）は、顔面領域に分布する皮膚感覚ニューロンからなる。マウスの三叉神経ニューロンに対するアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体の生存促進活性を測定するのに適した年齢は、この年齢のときニューロンがｔｒｋＣを発現し、培養液中でＮＴ３に応答し、神経栄養因子の支えがないと生存できなくなるので、１１日目の胎児である（Ｅ１１）。ラットでこれに相当する年齢はＥ１２である。
【０１４６】
Ｅ１１のＳｗｉｓｓ−ＷｅｂｓｔｅｒマウスまたはＥ１２のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットから解離したＴＧニューロンの培養細胞を樹立した。切除した神経節をトリプシン処理して、粉砕によって解離した（Ｄａｖｉｅｓら，１９９３，Ｎｅｕｒｏｎ  １１，５６５−５７４）。このニューロンを低密度で、直径３５ｍＭの組織培養用ペトリ皿の、ポリオルニチン／ラミニン基層上の定義済みで無血清の培地の中にプレートした。陽性対照としてＢＤＮＦ（２ｎｇ／ｍｌ）を加え、陰性対照として、一部のニューロンは因子非存在下で増殖させた。ＮＴ３（２、０．４および０．８ｎｇ／ｍｌ）およびマウス抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体である２２５６（ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照）（（２、０．４および０．８μｇ／ｍｌ）を、さまざまな濃度でプレートした時に加え、２回反復実験した。さまざまな実験条件下で生き残ったニューロンの数を計測するために、ニューロンの総数をプレートしてから４から６時間後に数え、２４時間後および４８時間後にふたたび数えた。２４時間後および４８時間後のニューロンの数を６時間後の数のパーセントで表した。
【０１４７】
この実験の結果を図２に示す。ＮＴ−３による処理は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体と同様、三叉神経ニューロンの生残をもたらした。ＢＤＮＦは、因子がなければ死滅していたＥ１１マウスとＥ１２ラットの三叉神経（ＴＧ）ニューロンの大部分の生残を促進した。培養して２４時間後、僅か０．０８ｎｇ／ｍｌという濃度のＮＴ−３で、すべてのニューロンの生残が促進され、これがｔｒｋＣによる事象であることを示唆した。培養して４８時間になると、マウスＴＧニューロンの一部集団だけがＮＴ−３によってレスキューされたが、一方、ラットＴＧニューロンの培養液においては、４８時間後、ＮＴ３存在下でほとんどのニューロンが生き残った。これは、ラットの対照用培養細胞の生存率が、マウスに較べて高かったということから分かるように、ラットＴＧニューロンの全体的に健康状態がよかったことを一部は反映していたのかもしれない。抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体は、Ｅ１１マウスおよびＥ１２ラットのＴＧニューロンの生存率をともに上昇させることができた。
【０１４８】
（実施例２：実験動物モデルにおけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症と用量依存性）
タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症と用量依存性を成獣ラットで調べた。Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール（５０：５０）の溶液としてタキソールを調製し、投与の直前に食塩水（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノールを１に対し、食塩水を４）で希釈した。実験１日目と４日目にＩＶ注射をゆっくりと行って成獣ラットを処置した。一つのグループには１２ｍｇ／ｋｇのタキソールを与え、一つのグループには１５ｍｇ／ｋｇのタキソールを与え、一つのグループには１８ｍｇ／ｋｇのタキソールを与え、また、一つのグループには媒体だけを与えた。０日目、１４日目および２８日目に、基本的にはＣｌｉｆｆｅｒら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．（１９９８）４３：４６−５５に記載されている電気生理学的方法を用いて大径線維感覚ニューロンの機能を試験した。具体的には、Ｈ波（反射神経感覚応答、感覚神経伝導速度、およびＨ波の複合活動電位とＭ波の複合活動電位の比率を、腿とふくらはぎの坐骨神経を刺激した後の足の筋肉の記録を取って測定した。
【０１４９】
（坐骨神経の記録）
坐骨神経の記録収集を以下のようにして行った。ステンレス製針を、刺激用（２１６ゲージ）、記録用（２８−ゲージ）および接地極用に使用した。坐骨神経を刺激するために、坐骨切痕に陽極を挿入し、陰極を陽極から１ｃｍ遠位に挿入した。頸骨を刺激するには、陽極を踝（アキレス腱）に挿入し、陰極を陽極から１ｃｍ近位に挿入した。記録用電極を足に置き、活性電極を足の母指外転筋に、また参照用電極を第５趾節骨の基部に置いた。接地電極を尾の基部に置いた。定電流の二相性方形波刺激を、絶縁パルス刺激装置（Ａ−Ｍ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｏｄｅｌ  ２１００）によって、０．２〜０．５Ｈｚの周波数で０．２ｍｓ間連続して供給した。記録された出力は、示差的に増幅され（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，Ｍｏｄｅｌ  ２１０Ａ）、２０，０００〜４０，０００サンプル／秒でデジタル処理（ＡＤ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＰｏｗｅｒＬａｂ／４ＳＰ）によって得られ、後の解析のためにコンピュータに保存された。
【０１５０】
Ｍ波またはＨ波の閾値に到達させるため刺激用電極の位置を調整し、Ｈ波振幅（Ｈｍａｘ）とＭ波振幅（Ｍｍａｘ）を最大化するために刺激強度を変化させた。坐骨にある陽極と頸骨にある陽極との間の距離を、この２つの位置からのＭ波およびＨ波の（最初の主要な負のピークまでの）潜時の差で割って、運動神経と感覚神経の伝導速度を計算した。Ｍ波およびＨ波のピークからピークまでの振幅を測定して、Ｍ波振幅に対して標準化されたＨ波振幅の測定値を提供するためにＨｍａｘ／Ｍｍａｘの比を計算した。
【０１５１】
（尾部神経の記録）
尾部神経の記録収集と刺激は、尾の側面の皮下に挿入した２６ゲージのステンレス製針を用いて行った。接地極用電極は、刺激用電極と記録用電極から常に等距離になるように置いた。刺激には、０．５Ｈｚで０．２ｍｓ間連続する０．８〜１ｍＡ振幅の一相性方形波パルスを用いた。記録用電極間の距離は一定（１０ｍＭ）であった。２種類の配置を用い（ＡおよびＢ）、記録用電極からの２つの距離のところで、それぞれに刺激を与えた。
【０１５２】
Ａ）刺激用電極が近位、記録用電極が遠位：この配置で、尾部における運動神経の機能をテストした。一回目の測定では、尾の基部から３０ｍＭのところに陽極を置き、陰極を１ｃｍ近位に置いた。二回目の測定では、刺激用電極を３０〜３５ｍＭ遠位に動かした。どちらの場合にも、記録用電極は、尾の基部から１１０〜１３０ｍＭのところに置いた。
【０１５３】
Ｂ）刺激用電極が遠位、記録用電極が近位：この配置で、尾部における感覚神経の機能をテストした。記録用電極を尾の基部から３０ｍＭのところに置いた。一回目の測定（Ｓ１）では、尾の基部から約１１０〜１３０ｍＭのところに記録用電極を置いた。二回目の測定（Ｓ２）では、刺激用電極を約３０〜３５ｍＭより近位になるように置いた。２つの刺激点の間の距離を測定し、その結果を近位および遠位の刺激点の間の潜時の差で割って神経伝導速度を得た。
【０１５４】
（結果）
１２ｍｇ／ｋｇおよび１８ｍｇ／ｋｇのタキソールで処置すると、感覚機能の低下が生じた。具体的には、電気生理学的検査によって、頸骨および坐骨のＨ波振幅が低下し（それぞれ図３Ａおよび３Ｂ）、坐骨神経の伝導速度が低下し（図３Ｃ）、尾部神経のＨ波振幅が低下する（それぞれ図４Ａおよび４Ｂ）が、尾部の感覚神経の伝導速度は低下しない（図４Ｃ）ことが明らかになった。１５ｍｇ／ｋｇのタキソールで処置しても、感覚機能が低下した（該当データは示さない）。ニューロパシーの重度も用量依存的であった（図３Ａ〜３Ｃおよび４Ａ〜４Ｃ参照）。さらに実験を行うため、１２ｍｇ／ｋｇおよび１５ｍｇ／ｋｇのタキソール投与を、これらの用量で得られたニューロパシーの速さと深さに基づいて選択した。
【０１５５】
（実施例３．ラット動物モデルにおけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーに対するアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体の効果）
発明者らは、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体が、タキソール処置によって誘発された感覚性ニューロパシーから防御できることをテストした。実験０日目と７日目に５ｍｇ／ｋｇのマウスアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体２２５６（ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照）で静注によって成獣ラットを処置した。１日目と４日目にＩＶ注射をゆっくりと行って１５ｍｇ／ｋｇのタキソールを投与した。１４日目に上記した方法にしたがって、電気生理学的に尾部神経の機能をテストした。要するに、本明細書に記載されているように尾部神経を刺激した後、Ｍ波（直接的運動神経）およびＨ波（反射的感覚神経）の反応を記録した。結果を、運動神経の複合活動電位振幅に対する感覚神経の複合活動電位振幅の割合で示した。図５に示すように、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体で処置すると、タキソールに誘発された複合活動電位振幅の消失が防止された。このことは、ラットモデルにおいて、抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体による処置が、タキソール処置によって誘発された感覚性ニューロパシーを改善することを示している。マウスのアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体に対するラットの二次抗体が、抗体処置を開始してから約１０日後に観察された。
【０１５６】
（実施例４：マウスモデルにおけるタキソール誘発性感覚性ニューロパシーの発症、およびタキソール誘発性感覚性ニューロパシーに対するアゴニスト抗−ｔｒｋＣモノクローナル抗体の効果）
本実施例は、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーのマウスモデルを説明するとともに、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処置が、このモデルにおいてタキソール誘発性感覚性ニューロパシーを改善したことを実証する。マウスモデルは、マウス抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体が種適合的であるため、投与しても不要な免疫反応を起こさなかったという点で有利であった。
【０１５７】
雌のＳｗｉｓｓ−Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（８週齢）は、投薬を開始する前に一週間設備に慣れさせた。動物は、媒体単独（対照）、タキソール単独、またはアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体およびタキソールによって処置した。タキソールは、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍから入手して、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノール（５０：５０ｗ／ｗ）で２０ｍｇ／ｋｇの溶液として調製し、食塩水（容量：容量でＣｒｅｍｏｐｈｏｒ／エタノールを１に対し、食塩水を４）で希釈し、０．１ミクロンのフィルターで濾過して、調製してから２０分以内に投与した。処置した動物はすべて、一日おき、例えば月曜日、水曜日および金曜日に、一ラウンド当たり３回のタキソールまたは対照（媒体）による処置を受けた。各動物に投与されたタキソールの総量は３００ｍｇ／ｍ２で、上記の３回分の用量に等分した。タキソールの用量は、ｍｇ／ｍ２単位で決定した（体表面積（平方ｃｍで）は、体重のグラム数に１０．５を掛けて、３分の２乗したものに等しい）。マウス抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体２２５６は、最初にタキソールを投与した日から始めて、一週間隔で投与した。タキソールは、ＩＰ投与、抗−ｔｒｋＣ抗体は首筋に皮下注射して投与した。すべての投薬は、イソフルレンで軽く麻酔した状態で行った。タキソール処置した週の次の週には、タキソール誘発性の一時的な免疫抑制に伴う日和見感染の可能性を防止するために、食餌の中に予防用の抗生物質を以下の通り入れた。一日あたり５個の食餌用錠剤につき、スルファメトキサゾール（６０ｍｇ）およびトリメトプリム（１０ｍｇ）（Ｂｉｏ−Ｓｅｒｖ製品Ｓ０４４３−Ｊ）。
【０１５８】
下記に説明するような電気生理学的方法を用いて、大径線維感覚ニューロンの機能を検査した。具体的には、下記に記載したように尾部神経を刺激した後、尾部におけるＨ波ＣＡＰとＭ波ＣＡＰの比率を決定した。
【０１５９】
（尾部神経の記録）
すべての記録収集および解析は、動物の実験処置について何も知らない実験者によって行われた。動物は、ケタミン／キシラジン、すなわち、６０ｍ／ｋｇのケタミンをＩＰで、また５ｍ／ｋｇのキシラジンをＩＰで麻酔し、動物を暖かいパッド（ｄｅｌｔａｐｈａｓｅ）にのせたままにして、セッションの間中、直腸を３６〜３７度に保った。記録収集と刺激は、尾の側面の皮下に挿入した２６ゲージのステンレス製針を用いて行った。接地極用電極は、刺激用電極と記録用電極から常に等距離になるように置いた。電極は、ＲＸ−４４４（または他の適当な殺菌剤）で殺菌して、動物相互間で水によりリンスした。刺激には、０．５Ｈｚで０．２ｍｓ間連続する０．８〜１ｍＡ振幅の一相性方形波パルスを用いた。記録用電極間の距離は一定（１０ｍＭ）であった。
【０１６０】
神経の運動成分と感覚成分を調べるために、２種類の配置（ＡおよびＢ）を用い、記録用電極からの２つの距離のところで、それぞれに刺激を与えた。
【０１６１】
Ａ）刺激用電極が近位、記録用電極が遠位：この配置で、尾部における運動神経の機能をテストした。一回目の測定（Ｓ１）では、尾の基部から１５ｍＭのところに刺激用陽極を置き、陰極を、陽極から１ｃｍ近位に置いた。二回目の測定（Ｓ２）では、刺激用電極を１０〜１５ｍＭ遠位に動かした。どちらの測定についても、記録用電極は、尾の基部から３５ｍＭのところに置いた。
【０１６２】
Ｂ）刺激用電極が遠位、記録用電極が近位：この配置で、尾部における感覚神経の機能をテストした。記録用電極を尾の基部から５ｍＭのところに置て、刺激用電極を尾の基部から、最初は３５ｍＭのところに、２回目は１０〜１５ｍＭより近位になるように置いた。
【０１６３】
（結果）
図６に示すように、タキソールで処置した動物において、活動電位のサイズが有意に減少したが、これは、２ｍｇ／ｋｇのｔｒｋＣアゴニスト抗体で処置することによって防止できた。このように、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体による処置は、タキソール処置によって誘発された感覚性ニューロパシーを改善した。グループの大きさ；媒体ではｎ＝１０、タキソール単独ではｎ＝５、また、タキソール＋抗体ではｎ＝８。
【０１６４】
（実施例５：タキソール誘発性異痛に対するマウスｔｒｋＣアゴニスト抗体２２５６の効果）
本実験では、タキソール処置によって生じたニューロパシーの痛みの症状、すなわち機械的異痛を軽減する。タキソール処置されたラットは異痛を発症する。例えば、Ｐｏｌｏｍａｎら，Ｐａｉｎ（２００１）９４（３）：２９３−３０４；Ｄｉｎａら（２００１）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｎｅｃｅ  １０８（３）：５０７−１５参照。ラットをタキソールで処置したところ、長期に持続する機械的異痛（すなわち、通常の非有害刺激に対するよりも強い不快感）を発症した。抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体２２５６で処置すると、タキソール誘発性異痛が改善した。さらに、ｔｒｋＣアゴニスト抗体およびタキソールで処置した動物は、タキソール単独で処置された動物よりも速い、タキソール誘発性異痛からの回復が見られた。
【０１６５】
雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，Ｏｒｅｇｏｎ，ＷＩ）で実験を行った。５０頭のラットを１週間で施設に慣れさせ、さらにテスト前の２日間、フォン・フレイ試験用チャンバー（ワイヤー製の網底をもつプラスチック製ケージで、動物の手足に完全に触れることができる）に慣れさせた。
【０１６６】
Ｃｈａｐｌａｎら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，５３（１）：５５−６３  （１９９４）に記載されている上下法を用いて、機械的な引っ込めの閾値（ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ）を評価するために、標準的なフォン・フレイの毛（ナイロン製の単繊維）シリーズを用いて、機械的な刺激（接触）に対する異痛をテストした。２つの基準線をテストするセッションの後、この２つの基準線テストセッションの間における一貫した結果、および右手と左手の間における一貫した結果に基づいて、３８頭のラットを実験のために選んだ。これらのラットを各グループ１３頭ずつの２つのグループ（タキソールによる処置またはタキソール＋ｍＡｂ２２５６処置のため）と、１２頭のグループ（媒体による処置（対照）に分けた。これらのグループは、基準反応閾値および体重に関してバランスがとれていた。
【０１６７】
２日前（「−２」）に、１３頭の動物からなるグループに２ｍｇ／ｋｇのマウス抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体ｍＡｂ  ２２５６を腹腔内に注射して投与した。実験の期間中は、これらの抗体注射を毎週繰り返した。
【０１６８】
０日目に、基本的には前掲のＰａｌｏｍｉｎｏに記載されているように、タキソールまたは媒体による動物の処置を開始した。医療等級のタキソール（無水エタノールおよびＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬ（登録商標）（５０：５０、ｖ：ｖ）；Ｍｅａｄ  Ｊｈｏｎｓｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｒｉｓｔｒｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂの一部門）を含む媒体中に６ｍｇ／ｍｌの保存液として得られる。使用直前に、このタキソール保存液を、デキストロース食塩水で１ｍｇ／ｍｌに希釈して、０．２ミクロンのフィルターに通して滅菌濾過した。同様に希釈・濾過したＣｒｅｍｏｐｈｏｒｅ  ＥＬ（登録商標）／エタノール溶液を、媒体グループにおける対照として用いた。
【０１６９】
基本的には、Ｐｏｌｏｍａｎｏら，Ｐａｉｎ  ９４（３）：２９３−３０４（２００１）に記載されているとおりに、動物の処置状態について何も知らない調査者がタキソールおよび対照溶液を投与した。具体的には、０、２、４および６日目に、１３頭の動物からなる両方のグループ（ｍＡｂ２２５６処置したグループとしないグループ）に１．０ｍｇ／ｋｇのタキソールを腹腔内注射した。１２頭の動物からなるグループ（媒体グループ）には、容量を合わせた対照溶液を同じ投薬スケジュールに基づいて注射した。
【０１７０】
タキソール処置した後間隔を開けて（７日から１１日毎に）、各動物の処置やグループの振り分けについて何も知らない調査者によって、機械的な閾値（すなわち機械的異痛）の測定が行われた。右手と左手の引っ込め閾値の測定値を平均して、全体の引っ込め閾値の測定値を得た。これを図７に示すように、タキソール処置前の各動物について得られた平均閾値、すなわち基準値のパーセントとして表した。データの統計的解析には、２元配置分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用いた。
【０１７１】
図７に示すように、タキソール単独で処置したラットでは、動物の反応閾値の顕著かつ長時間継続する低下が生じ、異痛を示した（２元配置ＡＮＯＶＡ解析法を用いるとｐ＜０．０００１）。タキソールとアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体によって動物を同時処置すると、タキソール処置した動物で観察された異痛の深度が低下し、異痛からの回復速度が劇的に増加した（２元配置ＡＮＯＶＡ解析法を用いるとｐ＜０．０５）。
【０１７２】
タキソール誘発性ニューロパシーの齧歯動物モデルを標準化しようとする努力にもかかわらず、これらのモデルは変異を示した。具体的には、マウスモデルにおいては、本出願において記載されたようにタキソールを投与して、電気生理学的に検出できる感覚性ニューロパシーを生じさせようとする試みを３回行ったうち、１回だけが統計的に有意なニューロパシーを与えた。ニューロパシーを生じた実験を、ここに実施例として示し、タキソールとアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体で処置した動物が、タキソールの作用から顕著な防御を示した。残りの２回の試みでニューロパシーが起こらなかったのは、１回目の実験のためのマウス供給業者のところで病原菌の大発生が起きたため、顕著なニューロパシーを生じなかった２回の実験では動物の由来原を変えたせいかもしれない（すなわち、２回目と３回目の実験における動物は、最初の実験の動物とは異なった動物に由来した）。電気生理学を評価項目として用いたラットモデルでは、タキソールでラットを処置したことのさまざまな効果があった。ここで述べた実験に加えて、顕著なニューロパシーを検出できなかった２回の実験があった。さらに、顕著なニューロパシーを生じた２回の実験があり、抗体処置した動物ではニューロパシーの改善傾向が見られたが、ｔｒｋＣアゴニスト抗体処置の効果は、統計的有意性の標準であるｐ＜０．０５には達しなかった。異痛を評価項目として用いたラットモデルでは、タキソール処置による異痛状態を生じさせようとする試みた全部で６回の実験のうち２回で、異痛をもつラットを生み出すことができた。これらのうちの一つが、ここに実施例として示されているものであり（ｔｒｋＣアゴニスト抗体処置によって異痛が改善した）、もう１回は、モデルをテストして、異痛が検出できるかどうかを判定するための最初の実験であった。この実験では、抗体で処置したラットグループがないため、それから、ｔｒｋＣアゴニスト処置の効果の可能性について、何らかの結論を引き出すことはできなかった。
【０１７３】
前述の発明は、具体例と実施例をもって、理解を明確にする目的で幾分詳しく説明されているが、一定の変更および改変を行いうることは、当業者にとって明らかである。したがって、この明細書と実施例を、発明の範囲を制限するものと解すべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１】図１は、アゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体ではなくＮＴ３が、成人の感覚ニューロンの軸索伸長をもたらしたことを示すグラフである。ラットの成熟後根神経節（ＤＲＧ）ニューロンの培養物を、さまざまな濃度のＮＴ−３または抗−ｔｒｋＣアゴニストであるマウスモノクローナル抗体２２５６の存在下または非存在下で増殖させた。ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／９８３６１参照。４８時間培養した後、培養物を固定し、ＲＴ９７抗体で染色してから、ＲＴ９７＋ニューロンにおける神経突起伸長を測定した。ＮＴ−３による処理は神経突起伸長を劇的に増加させたが、抗−ｔｒｋＣ抗体アゴニストによる処理は、顕著な伸長をもたらさなかった。
【図２】図２は、ＮＴ−３またはアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体２２５６存在下でのラットＥ１２三叉神経感覚ニューロンの生存率を示すグラフである。異なった実験条件下で生き残ったニューロンの数を定量するために、平板培養開始後４〜６時間でニューロンの総数をカウントし、２４時間後と４８時間後にもカウントした。２４時間後と４８時間後のニューロンの数を、６時間後のカウント数に対するパーセントで表示してある。
【図３】図３Ａ〜３Ｃは、ラット尾部神経の電気生理学的記録によって測定した、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの進行と用量依存性を示すグラフである。ラットを、１日目と４日目に１２もしくは１８ｍｇ／ｋｇのタキソールまたは対照（賦形剤）をゆっくりとＩＶ注射によって処置した。本明細書に記載されているように、電気生理学記録は、０、１４および２８日目に行った。
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、ラット坐骨神経の電気生理学的記録によって測定した、タキソール誘発性感覚性ニューロパシーの進行と用量依存性を示すグラフである。ラットを、１日目と４日目に１２もしくは１８ｍｇ／ｋｇのタキソールまたは対照（賦形剤）をゆっくりとＩＶ注射によって処置した。本明細書に記載されているように、電気生理学記録は、０、１４および２８日目に行った。
【図５】図５は、ラットモデルにおいて、タキソール処置によって誘発された感覚性ニューロパシーが抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体による処置によって改善したことを示すグラフである。ラットを、０日目と７日目に５ｍｇ／ｋｇのマウスモノクローナル抗体２２５６を静脈内（ＩＶ）に投与して処置した。１日目と４日目に１５  ｍｇ／ｋｇの用量で２回、ゆっくりとしたＩＶ注射によってタキソールを投与した。尾部神経について電気生理学記録を１４日目に行った。データは、運動神経複合活動電位振幅に対する感覚神経複合活動電位振幅の比率として表している。
【図６】図６は、マウスモデルにおいて、タキソール処置によって誘発された感覚性ニューロパシーが抗−ｔｒｋＣアゴニスト抗体による処置によって改善したことを示すグラフである。ラットを、０日目と７日目に２ｍｇ／ｋｇのマウスモノクローナル抗体２２５６を皮下投与によって処置（首筋下に送達）した。１、３および５日目に総投与量３００ｍｇ／ｍ２を３回分の用量に均等に分けて腹腔内（ＩＰ）に投与した。本明細書に記載されているように、電気生理学記録によって尾部神経の感覚機能を１４日目に測定した。結果は、運動神経複合活動電位振幅に対する感覚神経複合活動電位振幅の比率として表示している。
【図７】図７は、タキソール処置の前後のさまざまな時点で測定した、機械的な刺激に対するニューロパシーの痛み（機械的異痛）を示すグラフである。タキソールで処置した動物に機械的異痛を生じさせた。タキソール単独で処置したラットでは、動物の応答閾値が顕著かつ持続的な低下を生じ、異痛が起きていることを示した（ｐ＜０．０００１、２元配置分散分析法を用いて）。タキソールとアゴニスト抗−ｔｒｋＣ抗体で動物を同時処置すると、タキソール処置された動物に見られた異痛の程度を低下させ、かつ異痛からの回復速度を劇的に速めた（ｐ＜０．０５、２元配置分散分析法を用いて）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年10月31日(2005.10.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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