(57)【要約】軟組織増強によって、皮膚欠損症を処置し、所望の美容変化をもたらすための新規組成物であって、少なくとも１つの軟組織充填物および少なくとも１つのペプチド銅錯体を合わせた組成物。代表的には、この組成物は、そのよう処置を必要とする皮膚領域への注射に適している。また、皮膚欠損症を処置し、所望の美容変化をもたらすための方法を開示する。開示された１つの方法では、この軟組織充填物およびペプチド銅錯体が混合された開示された組成物を使用する。開示された他の方法では、軟組織充填物およびペプチド銅錯体の注射または注射と局所的な適用との組み合わせにより本方法自体を適用する間に、軟組織充填物およびペプチド銅錯体を混合する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
軟組織充填物およびペプチド銅錯体を含有する、組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物が、動物組織から誘導される天然物質を含有する、組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物であって、前記天然物質が、コラーゲン、自己脂質、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の改変形態またはそれらの混合物である、組成物。
【請求項４】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物が、合成物質を含有する、組成物。
【請求項５】
請求項４に記載の組成物であって、前記合成物質が、低融点パラフィン、植物油、ラノリン、蜜蝋、シリコンポリマー、発泡ポリフルオロエチレン（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、セルロースポリマー、ポリメチルメタクリレート、ポリメチルメタクリレートに基づくポリマーまたはそれらの混合物である、組成物。
【請求項６】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物が、該組成物の約０．００１重量％〜約９９重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物が、該組成物の約０．０１重量％〜約９０重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項８】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物が、該組成物の約０．０１重量％〜約５０重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項９】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、アラニル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）である、組成物。
【請求項１０】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、バリル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）である、組成物。
【請求項１１】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、グリシル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）である、組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、Ｌ−アラニル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）、Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）またはグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）である、組成物。
【請求項１３】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、［グリシル−ヒスチジル−リジン−Ｒ］：銅（ＩＩ）であり、Ｒが、１個〜１８個の炭素原子を含有するアルキル部分、６個〜１２個の炭素原子を含有するアリール部分、１個〜１２個の炭素原子を含有するアルコキシ部分または６個〜１２個の炭素原子を含有するアリールオキシ部分である、組成物。
【請求項１４】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体におけるペプチドと銅とのモル比が、約１：１〜約３：１の範囲である、組成物。
【請求項１５】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体におけるペプチドと銅とのモル比が、約１：１〜約２：１の範囲である、組成物。
【請求項１６】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、該組成物の約０．０１重量％〜約１０重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項１７】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、該組成物の約０．０２５重量％〜約１重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項１８】
請求項１に記載の組成物であって、前記ペプチド銅錯体が、該組成物の約０．０５重量％〜約０．５重量％の範囲の濃度で存在する、組成物。
【請求項１９】
請求項１に記載の組成物であって、前記軟組織充填物および前記ペプチド銅錯体の組み合わせまたは前記ペプチド銅錯体が、該ペプチド銅錯体の送達を助けるのに適合した、または該組成物の安定性を高めるのに適合したリポソームまたはマイクロスポンジに被包される、組成物。
【請求項２０】
請求項１に記載の組成物であって、該組成物が、溶液、濃い溶液、懸濁液またはゲルの形態である、組成物。
【請求項２１】
請求項１に記載の組成物であって、不活性で生理学的に受容可能な担体または希釈剤をさらに含む組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物であって、前記不活性で生理学的に受容可能な担体または希釈剤が、生理食塩水または精製水である、組成物。
【請求項２３】
請求項１に記載の組成物であって、賦形剤をさらに含む、組成物。
【請求項２４】
請求項２３に記載の組成物であって、前記賦形剤が、リン酸緩衝生理食塩水、静菌性生理食塩水、プロピレングリコール、デンプン、ショ糖、ソルビトールまたはそれらの混合物である、組成物。
【請求項２５】
請求項１に記載の組成物であって、該組成物が増粘剤をさらに含む、組成物。
【請求項２６】
請求項２５に記載の組成物であって、前記増粘剤が、アクリルアミドコポリマー、カルボマー、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリビニルアルコールまたはそれらの混合物である、組成物。
【請求項２７】
請求項１に記載の組成物であって、乳化剤をさらに含む、組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組成物であって、前記乳化剤が、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、セテアレス−７、セチルアルコール、セチルホスフェート、イソステアレス−１１、イソステアリン酸ナトリウムまたはそれらの混合物である、組成物。
【請求項２９】
請求項１に記載の組成物であって、保存剤をさらに含む、組成物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の組成物であって、前記保存剤が、ベンジルアルコール、パラベン、ジアゾリジニル尿素、ＤＭＤＭヒダントイン、フェノキシエタノール、ヨードプロピニルブチルカルバメートまたはそれらの混合物である、組成物。
【請求項３１】
皮膚欠損症を処置するための方法であって、処置の必要な皮膚領域に、請求項１に記載の組成物の有効量を注射する工程を包含する、方法。
【請求項３２】
皮膚欠損症を処置するための方法であって、処置の必要な皮膚領域に軟組織充填物の有効量を注射する工程、続いて該領域にペプチド銅錯体を含む組成物の有効量を注射する工程を包含する、方法。
【請求項３３】
皮膚欠損症を処置するための方法であって、処置の必要な皮膚領域に軟組織充填物の有効量を注射する工程、続いてペプチド銅錯体を含む組成物の有効量を局所的に適用する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
請求項３３に記載の方法であって、ペプチド銅錯体を含む前記組成物が、日焼け止め剤、皮膚ライトニング剤、日焼け剤、皮膚コンディショニング剤、皮膚保護剤、皮膚軟化剤、湿潤剤またはそれらの混合物をさらに含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般的に、皮膚欠損症を処置し、および／または所望の美容の変化をもたらすために使用される組成物、そしてさらに詳細には、ペプチド銅錯体および軟組織充填物を含む組成物および調製物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（関連技術の説明）
軟組織の増強は、患部皮膚の直下に、固形物質または半固形物質を注射して、この欠損を充填する工程を含む、皮膚欠損症を矯正するための手順を含む。この方法で矯正され得る欠損症としては、皮膚の正常な老化によって生じる皺、目または口の周りのくぼんだラインまたは溝、顎および首のひだ、鼻形成術から生じるくぼみ、または臨床プロセスに関連した欠損症（例えば、尋常性ざ瘡から生じる陥没した瘢痕）が挙げられる。軟組織増強は、本質的により純粋に美容になり得、例えば、唇の輪郭を変える手順を含み得る。
【０００３】
軟組織増強のために使用されている多くの物質がある。これらの軟組織充填物の幾つかは、死体もしくはドナー源（主に皮膚から）から得られているか、または合成ポリマーである。死体またはドナー組織から得られる軟組織充填物は、代表的には、コラーゲンおよび皮膚から単離された他の物質の高度に加工された形態、自己脂質あるいは皮膚または動物源（例えば、雄鶏のとさか）から単離されるヒアルロン酸である。より最近では、遺伝子改変微生物の醗酵から生成される改変されたヒアルロン酸が、使用されている。合成の軟組織増強生成物としては、広範囲にわたる物質（低融点パラフィン、植物油、ラノリン、蜜蝋、種々のシリコンポリマー、発泡ポリフルオロエチレン（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、セルロースポリマーおよびポリメチルメタクリレートならびに関連するポリマーが挙げられる）が挙げられる。これらの軟組織充填物は、その物質の性質および意図する用途に依存して種々の形態に調製される。そのような形態としては、とりわけ濃い溶液、ゲル、マイクロビーズ、粉砕ビーズおよび懸濁液が挙げられる。
【０００４】
既存の軟組織充填組成物の欠点の１つは、身体がこの組成物を分解するので、この組成物の繰り返しの注射および適用が必要なことである。そのような分解は、代表的には、約３ヵ月ごとに交換注射を必要とする。特に合成軟組織充填物の別の欠点は、正常組織との違いを感じ、皮膚下で触知可能ことである。合成軟組織充填物に伴う別の問題は、生体適合性の欠如である。後者は、炎症反応、異物肉芽腫の形成および注射された物質の被包を生じ得る。幾つかの場合、これらの免疫学に基づいた反応は、不足した美容の結果およびさらなる処置を生じる、本来の欠損症の過剰矯正を生じる（例えば、Ｃｈｅｎｇ,Ｊａｃｑｕｅｌｉｎｅ  Ｔ．，Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｓｔｅｐｈｅｎ  Ｗ．，およびＨａｍｉｌｔｏｎ，Ｍａｒｋ  Ｍ．，「Ｃｏｌｌａｇｅｎ  ａｎｄ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｆｉｌｌｅｒｓ」、Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌｉｎｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ３５（１）：７３−８５，２００２；Ｅｌｌｉｓ  Ｄａｖｉｄ  Ａ．Ｆ．，Ｍａｋｄｅｓｓｉａｎ，Ａｒａ  Ｓ．，およびＢｒｏｗｎ  Ｄｅｒｏｎ  Ｊ．，「Ｓｕｒｖｅｙ  ｏｆ  Ｆｕｔｕｒｅ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅｓ」、Ｆａｃｉａｌ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９（３）：４０５−４１１，２００１；Ｍａａｓ  Ｃｏｒｅｙ  Ｓ．およびＤｅｎｔｏｎ，Ａｎｄｒｅｗ  Ｂ．，「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｓｏｆｔ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｓ」、Ｆａｃｉａｌ  Ｐｌａｓｔｉｃ  Ｓｕｒｇｅｒｙ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ  ９（２）：２１９−２２７，２００１を参考のこと）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、上記の欠点および問題のうちの幾つかまたは全てを避けながらも、軟組織増強に有用な組成物が、当該分野において必要とされたままである。このような組成物を用いた、皮膚欠損症を処置するための方法もまた、当該分野において必要とされたままである。本発明はこれらの必要性を満たし、さらなる関連の利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の簡単な要旨）
簡潔には、本発明は、軟組織充填物を含む組成物に、およびこの組成物を利用して皮膚欠損症を処置するための方法に関する。
【０００７】
１つの代表的な実施形態において、本発明は、少なくとも１つの軟組織充填物および少なくとも１つのペプチド銅錯体を合わせた組成物に関する。そのような組成物は、軟組織増強に有用であるので、組成物は、そのような増強の必要な皮膚領域下の注射に適した形態である。別の代表的な実施形態では、この組成物は、少なくも１つの軟組織充填物および少なくとも１つのペプチド銅錯体を含む。ここで、少なくとも１つのペプチド銅錯体は、この錯体の送達を補助すること、またはこの組成物の安定性を高めることに適合させるためにリポソームまたはマイクロスポンジに被包されている。
【０００８】
本発明の組成物のさらなる実施形態は、不活性な担体または希釈剤、賦形剤、増粘剤（テクスチャ改変）、乳化剤、保存剤またはそれらの混合物をさらに含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液またはゲルの形態であり得る。これらの組成物から作製される皮膚欠損症を処置するための薬学的調製物もまた、開示される。
【０００９】
別の代表的な実施形態において、本発明はまた、そのような処置の必要な皮膚領域に、本発明の組成物の有効量を注射することによって、皮膚欠損症を処置するための方法に関する。別の関連する実施形態において、この皮膚領域は、軟組織充填物を含有する組成物が最初に注射され、次いで、適切なビヒクル中にペプチド銅錯体を含む組成物を注射または局所的に適用することによってさらに処置される。
【００１０】
本発明のこれらの局面および他の局面は、本発明の以下の詳細な説明を参考にすると明らかである。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
上記のように、１つの代表的な実施形態において、少なくとも１つの軟組織充填物および少なくとも１つのペプチド銅錯体を合わせた組成物を開示する。そのような組成物は、注射に適した形態であり、従って軟組織増強に有用である。皮膚欠損症を処置するための方法および所望の美容変化をもたらすための方法もまた、開示される。
【００１２】
本明細書中で使用される場合、表現「軟組織増強」は、所望の美容変化をもたらす目的または皮膚欠損症を矯正する目的で、患部皮膚下領域に、組成物を注射する工程および／またはこの患部皮膚上に同一の組成物または異なる組成物を局所的に適用する工程を含む手順を意味する。そのような皮膚欠損症の例には、皺、くぼんだラインまたは溝、顎および首のひだ、鼻形成術から生じるくぼみおよび臨床プロセスから生じる欠損症（例えば、尋常性ざ瘡から生じる陥没した瘢痕）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１３】
従って、軟組織増強に有用な組成物に関して本明細書中で使用される場合、用語「注射可能物質」は、患部皮膚下領域に注射され得、それによって、皮膚欠損症（例えば、上記に挙げた欠損症）を矯正し、ならびにさらに純粋に美容上の欠損（例えば、望ましくない唇の輪郭）を矯正するか、または任意の所望の美容変化をもたらし得る組成物をいう。
【００１４】
本明細書中で使用される場合、表現「軟組織充填物」は、軟組織増強に使用され得る、任意の天然または合成の、固体、半固体または流体の物質を意味する。天然の軟組織充填物の例としては、コラーゲンおよび皮膚から単離された他の物質の高度にプロセスされた形態、自己脂質、皮膚また動物源から単離されたヒアルロン酸ならびに遺伝子改変微生物の醗酵により生成された改変ヒアルロン酸が挙げられるが、これらに限定されない。合成軟組織充填物の例には、低融点パラフィン、植物油、ラノリン、蜜蝋、種々のシリコンポリマー、発泡ポリフルオロエチレン（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、セルロースポリマー、ポリメチルメタクリレートおよびポリメチルメタクリレートならびに関連するポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
また、本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド銅錯体」は、非共有結合的に錯化したペプチド分子および銅イオンを含有する配位化合物をいう。このペプチド分子は、電子を銅イオンに供与して非共有結合錯体を生じるために役立つ。このペプチド分子は、アミド結合（例えば、−ＣＯＮＨ−）を介して一緒に共有結合した２個以上のアミノ酸単位の鎖であり、このような結合の形成は、水脱離を伴う。このアミノ酸単位は、天然に存在するアミノ酸または天然に存在しないアミノ酸に由来する。また、少なくとも１個のアミド結合窒素原子は、水素原子または別の部分と共有結合し得る。
【００１６】
一般的に、アミノ酸は、アミノ基、カルボキシル基、水素原子およびアミノ酸側鎖部分から成り、α−アミノ酸の場合、α炭素と呼ばれる単一の炭素原子に全て結合する。本発明の組成物に含有されるペプチド銅錯体のアミノ酸単位は、α−アミノ酸以外のアミノ酸によって提供され得る。例えば、このアミノ酸は、β−アミノ酸またはγ−アミノ酸（例えば、以下に示すアミノ酸）であり得る。
【００１７】
【化１】
2006504448.tif 000002
【００１８】
ここでＸは、アミノ酸側鎖部分である。
【００１９】
天然に存在するアミノ酸、すなわち天然に存在するタンパク質のアミノ酸単位を誘導するアミノ酸、およびそれぞれの天然に存在するアミノ酸側鎖を以下の表１に示す。アミン酸側鎖を有するα炭素または他の炭素原子の光学配向性に関するこれらの天然に存在するアミノ酸は全てＬ配置である。このペプチド分子を構成するアミノ酸はまた、Ｄ光学配置のものであり得る。
【００２０】
【表１】
2006504448.tif 000003
【００２１】
銅ペプチド錯体の１つの例は、アラニル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）である。当業者に充分に理解されているように、銅（ＩＩ）は、２価の銅イオンを示す（例えば、Ｃｕ＋２）。本発明の実施形態に包含される、銅ペプチド錯体のさらなる例としては、米国特許第４，６６５，０５４号；同第４，７６０，０５１号；同第４，７６７，７５３号；同第４，８７７，７７０号；同第５，０２３，２３７号；同第５，０５９，５８８号；同第５，１２０，８３１号；同第５，１３５，９１３号；同第５，１４５，８３８号；同第５，１７７，０６１号；同第５，２１４，０３２号；同第５，３４８，９４３号；同第５，５３８，９４５号および同第５，５５０，１８３号に記載される銅ペプチド錯体が挙げられるが、これらに限定されない。これらの全ては、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【００２２】
さらに、本明細書中で使用する場合、表現「ペプチド銅錯体」は、ペプチド銅錯体誘導体を包含する。本明細書中で使用する場合、表現「ペプチド銅錯体誘導体」は、このペプチド分子が、以下を有するペプチド銅錯体をいう：１）天然に存在するアミノ酸側鎖部分の改変体および／もしくは変異体である、少なくとも１つのアミノ酸側鎖部分；ならびに／または２）異なる部分で置換される、アミド結合窒素原子に結合した少なくとも１つの水素：ならびに／または３）エステル化または他の方法で改変されたカルボキシル末端残基のカルボキシル基；ならびに／または４）異なる部分で置換された、アミノ末端残基の窒素原子に結合した、少なくとも１つの水素。
【００２３】
例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンのアミノ酸側鎖部分は、一般的に、低級鎖アルキル（１〜１２炭素原子）部分、低級鎖アリール（６〜１２炭素原子）部分、または低級鎖アラルキル（７〜１２炭素原子）部分に分類される。ペプチド銅錯体誘導体のアミノ酸側鎖部分は、他の直鎖または分枝鎖の、環式または非環式の、置換または非置換の、飽和または不飽和の低級鎖アルキル部分、低級鎖アリール部分または低級鎖アラルキル部分を含み得る。ペプチド銅錯体誘導体はまた、例えば、１つ以上のペプチド結合にＮ−アルキル化され得；および／またはそのカルボキシル末端は、例えば、メチル基、エチル基またはベンジル基でエステル化され得るか、あるいはヒドロキシまたはアルデヒドに還元され得る。さらに、ペプチド銅錯体誘導体は、アミノ末端で、例えば、メチル部分、ベンジル部分、アセチル部分、ベンゾイル部分、メタンスルホニル部分またはフルオレニルオキシカルボニル部分で、例えば、Ｎ−アルキル化、Ｎ−アシル化、またはＮ−スルホニル化され得る。
【００２４】
本発明の実施形態に包含されるペプチド銅錯体誘導体の例としては、ペプチド銅錯体に関する上記米国特許に開示され記載されたもの、ならびに国際公開番号ＷＯ  ９４／０３４８２を有する公開されたＰＣＴ出願に開示され記載されたものが挙げられるが、これらに限定はされない。これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【００２５】
銅は、皮膚に関した種々のプロセス（例えば、コラーゲン、エラスチンおよびグリコサミノグリカンの生成）を刺激することを含む、多くの有益な生物学的適用を有することが、公知である（例えば、Ｍａｑｕａｒｔ，Ｆ．Ｘ．，Ｐｉｃｋａｒｔ，Ｌ．，Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｍ．，Ｇｉｌｌｅｒｙ，Ｐ．，Ｍｏｎｂｏｉｓｓｅ，Ｊ．Ｃ．，Ｂｏｒｅｌ，Ｊ．Ｐ．，「Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｉｎ  Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｐｐｅｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｌｙｃｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｙｌ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ−Ｃｏｐｐｅｒ（２＋）」ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２３８（２）：３４３−３４６，１９８８；Ｗｅｇｒｏｗｓｋｉ，Ｙ．，Ｍａｑｕａｒｔ，Ｆ．Ｘ．およびＢｏｒｅｌ，Ｊ．Ｐ．，「Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｕｌｆａｔｅｄ  Ｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｐｐｅｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｌｙｃｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｙｌ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ−Ｃｏｐｐｅｒ（２＋）」，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ５１：１０４９-１０５６，１９９２；Ｍａｇｕａｒｔ，Ｆ．Ｘ．，Ｂｅｌｌｏｎ，Ｇ．，Ｃｈａｑｏｕｒ，Ｂ．，Ｗｅｇｒｏｗｓｋｉ，Ｊ．，Ｐａｔｔ  Ｌ．Ｍ．，Ｔｒａｃｈｙ，Ｒ．Ｅ．，Ｍｏｎｂｏｉｓｓｅ，Ｊ．Ｃ．，Ｃｈａｓｔａｎｇ，Ｆ．，Ｂｉｒｅｍｂａｕｔ，Ｐ．，Ｇｉｌｌｅｒｙ，Ｐ．およびＢｏｒｅｌ，Ｊ．Ｐ．「Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ−Ｃｏｐｐｅｒ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  Ｇｌｙｃｙｌ−Ｌ−Ｈｉｓｔｉｄｙｌ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ−Ｃｏｐｐｅｒ（２＋）ｉｎ  Ｒａｔ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｗｏｕｎｄｓ」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：２３６８−２３７６，１９９３を参照のこと）。上記で引用した参考文献は、その全体が本明細書中に援用される。
【００２６】
銅塩単独では、そのような適用には効果がなく、阻害的でさえある。銅は、生物学的に受容可能な形態で送達されなければならない。１例として、銅が、生物学的に受容可能な担体分子（例えば、ペプチド）と錯化される場合、銅は細胞に効果的に送達され得る。
【００２７】
ペプチド銅錯体が、皮膚中のコラーゲン量を増加させ、例えば、コラーゲン、エラスチンおよびグリコサミノグリカンの蓄積を刺激することによって、天然の細胞外マトリックス蓄積を刺激する能力は、本発明に特に関連している。さらに詳細には、この能力は、軟組織増強によって皮膚欠損症を処置して、所望の美容変化をもたらすために軟組織充填物を使用することに関連した上記欠点および問題を緩和または除去する、ペプチド銅錯体と軟組織充填物との組み合わせの使用の基礎をなす。そのような適用のために軟組織充填物とペプチド銅錯体とを合わせる際に、軟組織充填物は、この欠損症の迅速な矯正を提供するために使用されるが、一方、ペプチド銅錯体は、長期にわたって皮膚欠損症を矯正するために使用される。このアプローチの利点としては、皮膚欠損症を除去するための処置の経過の間に、この繰り返し処置の頻度を減少させること、および１回の処置あたりでより少ない物質を注射することが挙げられる。
【００２８】
本発明の組成物のある特定の実施形態において、少なくとも１つのペプチド銅錯体は、それぞれ、アラニル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）（「ＡＨＫ−Ｃｕ」）、バリル-ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）（「ＶＨＫ−Ｃｕ」）またはグリシル−ヒスチジル−リジン：銅（ＩＩ）（「ＧＨＫ−Ｃｕ」）である。当該分野で十分に理解されているように、銅（ＩＩ）は、２価の銅イオンを示す（例えば、Ｃｕ＋２）。さらにそのようなペプチドは、Ｌ型またはＤ型であり得る。関連するさらなる特定の実施形態において、ペプチドは全て、Ｌ型である。
【００２９】
別の特定の実施形態において、本発明の組成物は、一般式：［グリシル−ヒスチジル−リジン−Ｒ］：銅（ＩＩ）を有するＧＨＫ−Ｃｕの誘導体である、ペプチド銅錯体誘導体を含む。ここで、Ｒは、１個〜１８個の炭素原子を含むアルキル部分、６個〜１２個の炭素原子を含むアリール部分、１個〜１２個の炭素原子を含むアルコキシ部分または６個〜１２個の炭素原子を含むアリールオキシ部分である。さらに、このＧＨＫ−Ｃｕの誘導体は、ペプチド銅錯体に関する上記の米国特許に記載されている。
【００３０】
さらに関連する実施形態において、本発明の組成物は、ペプチド銅錯体のペプチドと銅とのモル比が、それぞれ、約１：１〜約３：１および約１：１〜約２：１の範囲であるペプチド銅錯体を含む。ここで、このペプチド銅錯体の濃度は、それぞれ、組成物の重量に基づいて、約０．０１％〜約１０％、約０．０２５％〜約１％および約０．０５％〜約０．５％の範囲である。
【００３１】
組成物に関する別の特定の実施形態において、少なくとも１つの軟組織充填物は、動物組織から誘導された天然物質である。より特定の関連する実施形態において、この天然物質は、改変形態を含むコラーゲン、自己脂質またはヒアルロン酸である。本発明の組成物に関するさらに別の特定の実施形態において、少なくとも１つの軟組織充填物は、合成物質であり、これは、さらに関連する特定の実施形態において、低融点パラフィン、植物油、ラノリン、蜜蝋、シリコンポリマー、発泡ポリフルオロエチレン（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標））、ポリ乳酸、ポリグルタミン酸、セルロースポリマー、ポリメチルメタクリレートまたはポリメチルメタクリレートに基づくポリマーである。
【００３２】
ある実施形態において、軟組織充填物の濃度は、それぞれ、この組成物の重量に基づいて、約０．００１％〜約９９％、約０．０１％〜約９０％、および約０．０１％〜約５０％の範囲である。
【００３３】
開示される組成物は、ゲルまたは微細な懸濁液として調製される軟組織充填物とペプチド銅錯体水溶液とを合わせることによって調製され得る。そのようなゲルまたは微細な懸濁液は、当業者に周知の方法によって調製され得る。さらに、このような水溶液はまた、当業者に周知の方法によって調製され得る。例えば、所望の濃度に適した量の乾燥ペプチド銅錯体は、混ぜたり、穏やかに加熱したりして、すぐに水に溶解する。別の方法は、所望のペプチド溶液を調製し、続いて、所望のモル比の銅塩を加えて所望のペプチド銅錯体水溶液を生じる方法である。使用され得る銅塩の例は、塩化第２銅、酢酸第２銅である。ペプチド銅錯体水溶液が調製される場合、この溶液は、代表的には、ＮａＯＨで中和される。
【００３４】
別の代表的な実施形態において、本発明はまた、少なくとも１つのペプチド銅錯体と少なくとも１つの軟組織充填物とを合わせることによって形成される注射用の軟組織増強組成物に関する。ここで、この合わせる化合物またはペプチド銅錯体は、このペプチド銅錯体の送達を助けるため、またはこの組成物の安定性を増加させるために、リポソームまたはマイクロスポンジに被包される。
【００３５】
本発明の組成物は、主に、ヒト皮膚へ注射するための生成物として意図される。従って、１つの特定の実施形態において、この組成物は、溶液、濃い溶液、懸濁液またはゲルの形態である。また、別の特定の実施形態において、この組成物およびこの組成物を含む調製物は、皮膚への注射に適合させた適切な賦形剤を、さらに含む。適切な賦形剤は、充分に耐えられるべきであり、安定性であるべきであり、簡単で快適な利用を可能にする粘稠度を与えるべきである。
【００３６】
なお別の特定の実施形態において、本発明の組成物およびこれから誘導される調製物は、さらなる物質（例えば、それぞれ、不活性で生理学的に受容可能な担体または希釈剤、賦形剤、増粘剤（テクスチャ改変）、乳化剤、保存剤およびそれらの混合物）を、さらに含む。上記のさらなる物質の適切な例としては、代表的に薬学的調製物およびスキンケア調製物において、通常使用される物質が挙げられる。さらに詳細には、不活性で生理学的に受容可能な担体または希釈剤のそのような例としては、生理食塩水および精製水が挙げられる。賦形剤のそのような例には、リン酸緩衝生理食塩水、静菌性生理食塩水、プロピレングリコール、デンプン、ショ糖およびソルビトールが挙げられる。適切な増粘剤には、アクリルアミドコポリマー、カルボマー、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸およびポリビニルアルコールが挙げられる。
【００３７】
適切な乳化剤としては、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、セテアレス−７、セチルアルコール、セチルリン酸、イソステアレス−１１およびイソステアリン酸ナトリウムが挙げられる。保存剤は、微生物攻撃への耐性および細菌への毒性を本発明の組成物に与える。適切な例には、ベンジルアルコール、パラベンのいずれか、ジアゾリジニル尿素、ＤＭＤＭヒダントイン、フェノキシエタノールおよびヨードプロピニルブチルカルバメートが挙げられる。列挙した以外の、上記のさらなる物質の例にまた、当業者によって十分理解されるように、本発明の実施形態において用いられ得る。
【００３８】
別の局面において、本発明は、皮膚欠損症を処置して、さらに純粋に美容変化をもたらすための方法に関し、そのような皮膚欠損症および美容変化の例としては、先に述べたものが挙げられる。１つのそのような実施形態において、この方法は、そのような処置の必要な皮膚領域に、少なくとも１つの軟組織充填物と少なくとも１つの銅ペプチド錯体とを合わせた本発明の組成物を注射する工程を含む。別のそのような実施形態において、この方法は、そのような処置の必要な皮膚領域に軟組織充填物の有効量を注射する工程、続いてこの領域にペプチド銅錯体の有効量を注射する工程を含む。
【００３９】
なお別の関連する実施形態において、この方法は、そのような処置の必要な皮膚領域に軟組織充填物の有効量を注射し、続いてこの領域にペプチド銅錯体の有効量を、局所的に適用する工程を含む。後者の方法において、局所的に適用されるペプチド銅錯体含有組成物は、さらなる物質（例えば、上記した物質）を含むのに加えて、日焼け止め剤、皮膚ライトニング剤、日焼け剤、皮膚コンディショニング剤、皮膚保護剤、皮膚軟化剤、湿潤剤またはそれらの混合物を、さらに含み得る。
【００４０】
以下の実施例は、説明の目的で提供され、制限されない。
【実施例】
【００４１】
（実施例１）
（代表的な軟組織充填物および代表的なペプチド銅錯体の注射によるコラーゲン合成およびグリコサミノグリカン合成の刺激）
ラットにおいて、ステンレス鋼チャンバの皮下移植は、新しいマトリックス合成の回収可能な部位を提供することによって、細胞外マトリックス成分（コラーゲンおよびグリコサミノグリカン）の合成を研究するためのモデルを提供する。このアッセイは、２つの円柱状のステンレス鋼チャンバ（Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）の末端キャップの付いた直径１ｃｍ×長さ２．５ｃｍ、３１２ＳＳ、２０メッシュ）をラット背部正中線の双方に１つ、各々のラットに移植する工程を含む。チャンバを被包した後に、移植後４日目に代表的な軟組織充填物または生理食塩水を含む０．２ｍｌの溶液、そして６、８、１１、１３、１５、１６および１８日目に試験ペプチド銅化合物（またはコントロールとして生理食塩水のみ）を各ラットにおける両方のチャンバに注射した。生化学分析のために移植後３０日目に動物からチャンバを取り出した。
【００４２】
生化学分析のために、このチャンバを凍結乾燥して、内容物を取り出した。試験される生物化学的パラメータは、コラーゲン含量を含み、この後者は、ヒドロキシプロリン（「ＨＹＰ」）含量として測定される。コラーゲンに特異的なアミノ酸である後者の酸加水分解後、ＨＹＰについて比色アッセイを使用して測定した。（例えば、Ｂｅｒｇｍａｎ，Ｉ  および  Ｌｏｘｌｅｙ，Ｒ．，「Ｔｈｅ  Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ  ｉｎ  Ｕｒｉｎｅ  Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｓ」、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．２７：３４７−３４９，１９７０を参照のこと）。コラーゲン含量を、チャンバあたりのＨＹＰのμｇ、またはタンパク質のミリグラムあたりのＨＹＰのμｇとして表した。
【００４３】
グリコサミノグリカン含量、細胞外マトリックスの別の成分または皮膚について、このチャンバをまた、分析した。グリコサミノグリカン（「ＧＡＧ」）含量を、ＧＡＧに特異的な炭水化物成分であるウロン酸（「ＵＡ」）の量を定量することによって決定した。ＵＡを、記載されたように、試薬として２−ヒドロジフェニルを使用する比色アッセイにより決定した（例えば、Ｖｉｌｉｍ，Ｖ．，「Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ｕｓｉｎｇ  ２−ｈｙｄｒｏｘｙｄｉｐｈｅｎｙｌ  ａｓ  ａ  Ｒｅａｇｅｎｔ」、Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．４４  １１／１２ｓ：１７１７−１７２０，１９８５を参照のこと）。ＧＡＧ含量を、チャンバあたりのＵＳのμｇとして表した。
【００４４】
この実施例において、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを、軟組織充填物として使用した。ヒドロキシプロピルメチルセルロースの６ミリグラムの用量を、（ゲルとして）各チャンバに注射した。生理食塩水の注射をコントロールとした。
【００４５】
グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）（「ＧＨＫ−Ｃｕ」）を、使用されるペプチド銅錯体として使用した。このＧＨＫ−Ｃｕを、２モルのペプチドと１モルの銅（ＩＩ）のモル比で調製して、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水溶液に溶解した。０．２ｍｇの用量のＧＨＫ−Ｃｕを、各処置日に注射した。
【００４６】
コラーゲン形成を刺激するために、ペプチド銅錯体としてＧＨＫ−Ｃｕおよび軟組織充填物としてヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）を注射した結果を、４群のラットについて、以下の表に示す。第１群のラットは、生理食塩水のみを注射したコントロールラットだった。第２群のラットは、ペプチド銅錯体（ＧＨＫ−Ｃｕ）溶液のみが注射された。第３群のラットは、組織充填物（ＨＰＭＣ）のみで注射された。第４群のラットは、組織充填物（ＨＰＭＣ）およびペプチド銅錯体（ＧＨＫ−Ｃｕ）の両方が注射された。
【００４７】
【表２】
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【００４８】
上の表に示された結果から明らかなように、組織充填物単独を注射すると、コラーゲン合成の刺激は生じないが、一方、ペプチド銅錯体単独か、ペプチド銅錯体と組織充填物との組み合わせかのいずれかを注射すると、コラーゲン合成の増加が生じる。
【００４９】
ＧＡＧ（ＵＡとして）形成を刺激するために、ペプチド銅錯体としてＧＨＫ−Ｃｕおよび軟組織充填物としてヒドロキシプロピルメチルセルロースを注射した結果を、４群のラットについて以下の表に示す。
【００５０】
【表３】
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【００５１】
上の表に示された結果から明らかなように、組織充填物単独を注射すると、ＧＡＧ合成の刺激は生じないが、一方、ペプチド銅錯体単独か、ペプチド銅錯体と組織充填物との組み合わせかのいずれかを注射すると、ＧＡＧ合成の増加が生じる。
【００５２】
（実施例２）
（種々のペプチド銅錯体の注射によるコラーゲン合成およびＧＡＧ合成の刺激）
種々のペプチド銅錯体の注射によるコラーゲン合成およびＧＡＧ合成の刺激は、実施例１に記載した方法により決定されている。使用されたペプチド銅錯体は、Ｌ−アラニル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジン：銅（ＩＩ）（「ＡＨＫ−Ｃｕ」）（１モルのペプチドと１モルの銅（ＩＩ）とのモル比で調製された）およびグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−リジル−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−バリン：銅（ＩＩ）（「ＧＨＫＶＦＶ−Ｃｕ」）（２モルのペプチドと１モルの銅（ＩＩ）のモル比で調製された）であった。このペプチド銅錯体を、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水に溶解した。２．４ミクロモルの用量のペプチド銅錯体を各処置日に注射した。
【００５３】
コラーゲン形成を刺激することに関して上記のペプチド銅錯体（ＡＨＫ−ＣｕおよびＧＨＫＶＦＶ−Ｃｕ）を注射した結果を、３群のラットについて、以下の表に示す。
【００５４】
【表４】
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【００５５】
上の表に示される結果から明らかなように、ペプチド銅錯体の注射により、コラーゲン合成の増加が生じる。
【００５６】
ＧＡＧ（ＵＡとして）形成を刺激することに関して上記のペプチド銅錯体（ＡＨＫ−ＣｕおよびＧＨＫＶＦＶ−Ｃｕ）を注射した結果を、３群のラットについて、以下の表に示す。
【００５７】
【表５】
2006504448.tif 000007
【００５８】
上の表に示される結果から明らかなように、ペプチド銅錯体の注射により、ＧＡＧ（ＵＡとして）合成の増加が生じる。
【００５９】
（実施例３）
（ロイシンを含む種々のペプチド銅錯体の注射によるコラーゲン合成の刺激）
種々のペプチド銅錯体の注射によるコラーゲン合成の刺激は、実施例１および２に記載した方法により決定されている。使用されたペプチド銅錯体は、グリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシン：銅（ＩＩ）（「ＧＨＬ−Ｃｕ」）（２モルのペプチドと１モルの銅（ＩＩ）のモル比で調製された）およびグリシル−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−ロイシンメチルエステル：銅（ＩＩ）（「ＧＨＬ−Ｍｅ−Ｃｕ」）（２モルのペプチドと１モルの銅（ＩＩ）とのモル比で調製された）であった。このペプチド銅錯体を、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で生理食塩水溶液に溶解した。０．６ｍｇの用量のペプチド銅錯体を各処置日に注射した。
【００６０】
コラーゲン形成を刺激することに関して、上記のペプチド銅錯体（ＧＨＫ−ＣｕおよびＧＨＬ−Ｍｅ−Ｃｕ）を注射した結果を、３群のラットについて、以下の表に示す。
【００６１】
【表６】
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【００６２】
上の表に示される結果から明らかなように、ペプチド銅錯体の注射により、コラーゲン合成の増加が生じる。
【００６３】
前述から、説明のために本発明の特定の実施形態が、本明細書中で記載されているが、発明の意図および範囲から逸脱することなく、種々の改変がなされ得ることは、十分に理解される。従って、添付の特許請求の範囲によって限定されることを除き、本発明は限定されない。
【国際調査報告】
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