(57)【要約】本開示は、哺乳動物において神経筋障害を処置するための方法を提供する。開示される方法は、神経筋障害に対して感受性である被験体に対してか、または神経筋障害を有する被験体に対して、治療上有効な量のＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとを投与して、望ましいレベルの筋肉機能を維持する工程を、包含する。本出願はまた、筋肉機能が低下している哺乳動物を処置するための方法も提供する。本出願はさらに、筋肉衰弱を処置するための方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
筋肉機能が低下している哺乳動物を処置するための方法であって、該方法は、
該哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターと、治療上有効な量の少なくとも１種のコルチコステロイドとを、筋肉機能の低下を処置するために十分な量でかつ該処置のために十分な時間にわたって投与する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、少なくとも１種の筋肉の筋肉機能を、筋肉量、筋肉収縮力、血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）濃度、または筋肉形態から選択される少なくとも１つのパラメーターによって評価する、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法であって、機能が処置される筋肉を、緋腹筋、前脛骨筋、四頭筋、足の長指伸筋、心筋、または横隔膜筋のうちの少なくとも１つから選択する、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法であって、前記哺乳動物を処置することにより、該哺乳動物の体重増加がもたらされる、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法であって、前記哺乳動物を処置することにより、握力増加がもたらされる、方法。
【請求項６】
筋肉衰弱を処置するための方法であって、該方法は、
哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターと、治療上有効な量の少なくとも１種のコルチコステロイドとを、握力損失を処置するために十分な量でかつ該処置のために十分な時間にわたって投与する工程
を包含する、方法。
【請求項７】
コルチコステロイド誘導性筋萎縮症を処置するための方法であって、該方法は、
哺乳動物に、該コルチコステロイド誘導性筋萎縮症を処置するために十分な治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターを投与する工程
を包含する、方法。
【請求項８】
神経筋障害を処置するための方法であって、該方法は、
該神経筋障害を有する哺乳動物または該神経筋障害のリスクがある哺乳動物に、治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターと、治療上有効な量の少なくとも１種のコルチコステロイドとを、該神経筋障害を処置するために十分な量でかつ該処置のために十分な時間にわたって投与する工程
を包含する、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記神経筋障害は、筋ジストロフィである、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記筋ジストロフィは、デュシェーヌ筋ジストロフィである、方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の方法であって、前記筋ジストロフィは、ベッカー筋ジストロフィである、方法。
【請求項１２】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記哺乳動物は、ヒトである、方法。
【請求項１３】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記コルチコステロイドを、
（ａ）ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、コルチゾル、デキサメタゾン、フルチカゾンプロピオネート、モメタゾンフロエート、プレドニゾン、またはトリアムシノロンアセトニドのうちの少なくとも１つ；
（ｂ）ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、コルチゾル、デキサメタゾン、フルチカゾンプロピオネート、モメタゾンフロエート、プレドニゾン、またはトリアムシノロンアセトニドのうちの少なくとも１つの、誘導体；あるいは
（ｃ）ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、コルチゾル、デキサメタゾン、フルチカゾンプロピオネート、モメタゾンフロエート、プレドニゾン、またはトリアムシノロンアセトニドのうちの少なくとも１つの、薬学的に受容可能な塩；
のうちの少なくとも１つから選択する、方法。
【請求項１４】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記コルチコステロイドは、プレドニゾンまたはプレドニゾロンである、方法。
【請求項１５】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記コルチコステロイドを、０．１ｍｇ／ｋｇ／日と２．０ｍｇ／ｋｇ／日との間の用量で投与する、方法。
【請求項１６】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記コルチコステロイドを、経口投与する、方法。
【請求項１７】
請求項１〜１１のうちのいずれか１項に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８インヒビターを、ＧＤＦ−８に対する抗体、ＧＤＦ−８レセプターに対する抗体、可溶性ＧＤＦ−８レセプター、ＧＤＦ−８プロペプチド、ＧＤＦ−８の低分子インヒビター、フォリスタチン、またはフォリスタチンドメイン含有タンパク質から選択する、方法。
【請求項１８】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８に対する抗体を、ＪＡ−１６、Ｍｙｏ２９、Ｍｙｏ２８、またはＭｙｏ２２から選択する、方法。
【請求項１９】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８プロペプチドは、アスパラギン酸残基において変異している、方法。
【請求項２０】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８プロペプチドは、免疫グロブリンのＦｃ部分に結合している、方法。
【請求項２１】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８レセプターは、ＡｃｔＲＩＩＢである、方法。
【請求項２２】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８レセプターは、免疫グロブリンのＦｃ部分に結合している、方法。
【請求項２３】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８インヒビターは、フォリスタチンである、方法。
【請求項２４】
請求項１７に記載の方法であって、前記フォリスタチンドメイン含有タンパク質は、ＧＡＳＰ−１である、方法。
【請求項２５】
請求項１７に記載の方法であって、前記ＧＤＦ−８インヒビターは、低分子インヒビターである、方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の方法であって、該方法は、前記哺乳動物の心筋症の処置をもたらす、方法。
【請求項２７】
請求項１に記載の方法であって、ＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとの投与は同時である、方法。
【請求項２８】
請求項１に記載の方法であって、ＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとの投与は逐次的である、方法。
【請求項２９】
請求項８に記載の方法であって、ＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとの投与は同時である、方法。
【請求項３０】
請求項８に記載の方法であって、ＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとの投与は逐次的である、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２００３年６月２日に出願した米国仮出願番号６０／４７４，６０３（これは、その全体が参考として本明細書中に援用される）に対する優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、臨床病態生理学の分野に関し、より具体的には、神経筋障害（例えば、筋ジストロフィ）を処置するための方法に関する。本発明はまた、コルチコステロイドと、増殖および分化のインヒビターとを含む、薬学的処方物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
筋ジストロフィ（ＭＤ）は、筋肉の消耗および衰弱によって特徴付けられる、進行性の遺伝性神経筋障害である（Ｅｍｅｒｙ（２００２）Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ、３５９：６８７〜６９５）。多くの形態の筋ジストロフィは、致死性であり、現在は治癒不能である。
【０００４】
デュシェーヌ筋ジストロフィ（ＤＭＤ）は、最も一般的なＸ連鎖神経筋疾患である。この疾患は、ジストロフィンをコードするＤＮＤ遺伝子中の変異によって引き起こされる。このタンパク質の変化またはこのタンパク質が存在しないことによって、異常な筋細胞膜の断裂が生じる。近位筋肉における筋線維直径の異常な変化（萎縮性線維および肥大性線維）ならびに進行する筋肉損傷が、この疾患の顕著な特徴である。損傷した筋肉は、細胞内酵素であるクレアチンキナーゼ（ＣＫ）を放出する。結果として、ＤＭＤ患者における血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベルは、特徴的に（正常人の１０倍まで）高い。病態生理学的カスケードは、組織炎症、微小線維壊死、および線維組織による筋肉の置換によって、悪化する。
【０００５】
上記ＤＭＤ遺伝子の別の対立遺伝子改変体は、ベッカー筋ジストロフィ（ＢＭＤ）として公知である、より軽度の型のＭＤを引き起こす。ＢＭＤは、臨床的にはＤＭＤと類似しているが、症状の発症は、寿命の後期に生じる。
【０００６】
多くの薬剤が、ＭＤにおいて試みられているが、いずれも、この疾患の経過を阻止することにおいて有効であるとは証明されていない。現在の処置様式は、依然として、物理療法医学およびリハビリテーションの領域にある。
【０００７】
コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよび／またはその誘導体）を使用する多数の試行が、ＭＤを有する個体において、特に短期間に改善を実証している。コルチコステロイドがこの疾患の表現型を軽減する正確な機構は不明であるが、コルチコステロイドは、炎症を低減し、免疫系を抑制し、カルシウムホメオスタシスを改善し、補償タンパク質の発現をアップレギュレートし、そして筋芽細胞増殖を増加することによって作用すると、考えられる（Ｋｈｕｒａｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２：２７９〜３８６）。しかし、経時的に投与されるコルチコステロイドは、筋萎縮を誘導し得る。この筋萎縮は、主に、近位筋肉（ＤＭＤおよびＢＭＤにおいて罹患する、まさに同じ筋肉）に影響を与える。コルチコステロイド誘導性の筋肉および他の副作用は、コルチコステロイド治療の長期有効性を制限し得る。
【０００８】
ＧＤＦ−８は、ＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーであり、筋肉成長の負の調節因子として機能する。このスーパーファミリーの他のメンバーと同様に、ＧＤＦ−８は、前駆体分子として合成されるが、分泌前に、ＧＤＦ−８は、Ｎ末端の阻害プロペプチドと、Ｃ末端の活性成熟ＧＤＦ−８とに切断される。プロペプチドは、ＧＤＦ−８に結合されたままであり得、それにより、成熟ＧＤＦ−８の生物学的活性を阻害し得る。プロペプチドは、ＧＤＦ−８についての複合体から解離して、アクチビンＩＩ型レセプター（ＡｃｔＲＩＩＢ）に結合するはずである。結合の際、ＡｃｔＲＩＩＢは、シグナル伝達カスケードを開始し、最終的には、筋芽細胞発達の阻害をもたらす。インビボでのＧＤＦ−８の抗体媒介性阻害は、正常な成体マウスにおける骨格筋の大きさを有意に増加し（Ｗｈｉｔｔｅｍｏｒｅら（２００３）ＢＢＲＣ  ３００：９６５〜９７１）、そしてＤＭＤのｍｄｘマウスモデルにおいてジストロフィ表現型を軽減する（Ｂｏｇｄａｎｏｖｉｃｈら（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４２０（２８）：４１８〜４２１）ことが、示されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
（発明の要旨）
筋肉機能の減少により特徴付けられる障害または筋肉機能の減少のリスクに関連する障害を処置するための、方法および組成物を提供することが、本発明の目的の１つである。本発明のさらなる目的は、以下の説明において部分的に示され、そして部分的には、その説明から理解されるか、または本発明の実施によって学習され得る。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ＤＭＤのマウスモデルにおいて、中和抗ＧＤＦ−８抗体とプレドニゾンとの投与による処置が、筋肉量および筋肉強度を増加することにおいて、プレドニゾン単独での処置と比較して有効であるという、発見および実証に部分的に基づく。本発明はさらに、抗ＧＤＦ−８抗体とプレドニゾンとの投与が、プレドニゾン誘導性筋萎縮を減少するという発見および実証に部分的に基づく。
【００１１】
従って、本発明は、哺乳動物において神経筋障害を処置するための方法を提供する。開示される方法は、神経筋障害に対して感受性である被験体または神経筋障害を有する被験体に、治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターと少なくとも１種のコルチコステロイドとを投与して、望ましいレベルの筋肉完全性または筋肉機能（例えば、血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）濃度、筋肉組織学、組織画像化、毎日の生活の滑動、筋肉強度および／または筋肉量によって評価する）を維持する工程を包含する。本発明の方法により処置される集団としては、筋ジストロフィ（例えば、ＤＭＤまたはＢＭＤ）を有する患者または筋ジストロフィ（例えば、ＤＭＤまたはＢＭＤ）を発症するリスクがある患者、ならびにこれらの障害または他の障害についてのコルチコステロイド治療を受けている患者が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
本発明はさらに、筋肉衰弱を処置する方法、ならびにコルチコステロイド誘導性筋萎縮を処置する方法を提供する。
【００１３】
本発明の方法において使用される投与方法および組成物が、提供される。開示される方法において、ＧＤＦ−８インヒビターとコルチコステロイドとが、同時に投与されるか、または重複する間隔または重複しない間隔で交互に投与される。
【００１４】
本発明の方法において使用されるＧＤＦ−８インヒビターとしては、ＧＤＦ−８に対する抗体；ＧＤＦ−８レセプターに対する抗体；可溶性ＧＤＦ−８レセプターおよびそのフラグメント（例えば、米国特許出願番号１０／６８９，６７７号において記載されるようなＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチド（これは、可溶性ＡｃｔＲＩＩＢレセプターを含み、ＡｃｔＲＩＩＢは、免疫グロブリンのＦｃ部分に結合されている））；ＧＤＦ−８プロペプチドおよびその改変形態（例えば、ＷＯ０２／０６８６５０または米国特許出願番号１０／０７１，４９９号に記載される（これは、ＧＤＦ−８プロペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に結合している形態、および／またはＧＤＦ−８がアスパラギン酸（ａｓｐ）残基（例えば、マウスＧＤＦ−８プロペプチド中のａｓｐ−９９およびヒトＧＤＦ−８プロペプチド中のａｓｐ−１００）において変異されている形態を包含する）；ＧＤＦ−８の低分子インヒビター；フォリスタチン（例えば、米国特許第６，００４，９３７号に記載される）またはフォリスタチンドメイン含有タンパク質（例えば、米国特許出願番号１０／３６９，７３６および同１０／３６９，７３８に記載される、ＧＡＳＰ−１もしくは他のタンパク質）；ならびに米国特許出願番号１０／６６２，４３８に記載されるようなＧＤＦ−８活性化に影響を及ぼすメタロプロテアーゼ活性モジュレーターが、挙げられるが、これらに限定されない。
【００１５】
いくつかの実施形態において、上記ＧＤＦ−８インヒビターは、ＧＤＦ−８レセプターにＧＤＦ−８が結合するのをブロックする、モノクローナル抗体またはそのフラグメントである。非限定的な例示実施形態としては、非ヒトモノクローナル抗ＧＤＦ−８抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体ＪＡ−１６（米国特許出願番号１０／２５３，５３２；ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４２３６）；その誘導体（例えば、ヒト化抗体）；ならびにヒトモノクローナル抗ＧＤＦ−８抗体（例えば、米国特許出願番号１０／６８８，９２５に記載されるＭｙｏ２９、Ｍｙｏ２８、およびＭｙｏ２２；これらは、それぞれ、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−４７４１、ＰＴＡ−４７４０、およびＰＴＡ−４７３９である）またはその誘導体が、挙げられる。
【００１６】
本発明の方法において使用されるコルチコステロイドとしては、ベクロメタゾンジプロピオネート、ブデソニド、コルチゾル、デキサメタゾン、フルチカゾンプロピオネート、モメタゾンフロエート、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、およびこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
上記の一般的な説明および以下の詳細な説明は、例示および説明だけのものであり、特許請求される本発明を限定するものではないことが、理解されるべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
（発明の詳細な説明）
（Ｉ．定義）
本発明がより容易に理解され得るために、特定の用語が、まず定義される。さらなる定義が、この詳細な説明全体にわたって示される。
【００１９】
用語「抗体」とは、本明細書中で使用される場合、免疫グロブリンまたはその一部を指し、この用語は、その供給源、産生方法、および他の特徴には関わらず、抗原結合部位を含む任意のポリペプチドを包含する。非限定的例として、用語「抗体」としては、ヒト抗体、オランウータン抗体、マウス抗体、ラット抗体、ヤギ抗体、ヒツジ抗体、およびニワトリ抗体が挙げられる。この用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、一重特異的抗体、多重特異的抗体、非特異的抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、変異型抗体、およびＣＤＲ移植抗体を包含するが、これらに限定はされない。本発明の目的のためには、この用語はまた、他のように示されない限りにおいては、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖフラグメント、ｄＡｂフラグメント、および抗原結合機能を保持する他のフラグメントを包含する。
【００２０】
抗体は、例えば、従来のハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９９）、組換えＤＮＡ方法（米国特許第４，８１６，５６７号）、または抗体ライブラリーを使用するファージディスプレイ技術（Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７）を介して、生成され得る。種々の他の抗体産生技術に関しては、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ編、Ｈａｒｌｏｗら、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと。
【００２１】
用語「抗原結合ドメイン」とは、抗原の一部または抗原すべてに対して、特異的に結合する領域または相補的である領域を含む、抗体分子の部分を指す。抗原が大きい場合、抗体は、その抗原の特定の部分にだけ結合し得る。そのエピトープまたは抗原決定基は、抗体の抗原結合ドメインとの特異的相互作用を担う抗原分子の一部である。抗原結合ドメインは、１つ以上の抗体可変ドメインにより提供され得る（例えば、ＶＨドメインからなる、いわゆるＦｄ抗体フラグメント）。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
【００２２】
用語「抗体ＧＤＦ−８抗体」または「ＧＤＦ−８に対する抗体」とは、ＧＤＦ−８の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する、任意の抗体を指す。用語「ＧＤＦ−８レセプター抗体」および「ＧＤＦ−８レセプターに対する抗体」とは、ＧＤＦ−８レセプター（例えば、ＡｃｔＲＩＩＢ）の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する、任意の抗体を指す。用語「中和抗体」とは、ＧＤＦ−８インヒビターである抗体を指す。
【００２３】
用語「特異的相互作用」または「特異的に結合する」などは、２つの分子は、生理条件下で比較的安定である複合体を形成することを意味する。この用語はまた、例えば、抗原結合ドメインが特定のエピトープに対して特異的であり、そのエピトープが多数の抗原上に存在し得る場合に、適用可能である。特異的結合は、高親和性と、低い能力〜中程度の能力とによって、特徴付けられる。非特異的結合は、通常は、中程度の能力〜高い能力とともに、低い親和性を有する。代表的には、その結合は、親和性定数Ｋａが、１０６Ｍ−１より大きい場合、１０７Ｍ−１より大きい場合、または好ましくは１０８Ｍ−１より大きい場合に、特異的であると見なされる。必要な場合には、非特異的結合は、その結合条件を変化させることによって、特異的結合に実質的には影響を及ぼすことなく減少され得る。そのような条件は、当該分野で公知であり、慣用的技術を使用する当業者は、適切な条件を選択し得る。それらの条件は、通常は、抗体濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、非関連分子（例えば、血清アルブミン、乳汁カゼイン）などに関して規定される。
【００２４】
用語「筋肉機能」とは、筋肉が生理的機能（例えば、攣縮またはテタヌスの間に生じる力の量によって測定される、収縮）を実施する能力を指す。筋肉機能を評価するための他の方法は、当該分野で周知であり、その方法としては、筋肉量の測定、握力、血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）レベル、毎日の生活の滑動、運動試験または強度試験、組織学（例えば、Ｅ＆Ａ染色もしくはコラーゲンＩＩＩ染色）、または組織画像化が挙げられるが、これらに限定されない。筋肉機能を評価するための非限定的な例示方法が、実施例において示される。
【００２５】
用語「ＧＤＦ−８」とは、特異的増殖分化因子８を指し、適切な場合には、ＧＤＦ−８に構造的または機能的に関連する因子（例えば、ＢＭＰ−１１およびＴＧＦ−βスーパーファミリーに属する他の因子）を指す。この用語は、ＧＤＦ−８のプロセシングされていない全長前駆体形態、ならびに翻訳後切断から生じるその成熟形態およびプロペプチド形態を指す。この用語はまた、本明細書中にて考察される成熟ＧＤＦ−８に関連する少なくともいくつかの生物学的活性を維持する、ＧＤＦ−８の任意のフラグメントおよび改変体（改変された配列を含む）を指す。本発明は、すべての脊椎動物種（ヒト、ウシ、ニワトリ、マウス、ラット、ブタ、ヒツジ、シチメンチョウ、ヒヒ、および魚類が挙げられるが、これらに限定されない）に由来するＧＤＦ−８（配列情報に関しては、例えば、ＭｃＰｈｅｒｒｏｎら（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：１２４５７〜１２４６１を参照のこと）を指す。
【００２６】
用語「成熟ＧＤＦ−８」とは、ＧＤＦ−８前駆体タンパク質のカルボキシ末端から切断されたタンパク質を指す。この成熟ＧＤＦ−８は、モノマーとしてか、ホモダイマーとしてか、またはＧＤＦ−８潜在型複合体の状態で、存在し得る。条件に依存して、成熟ＧＤＦ−８は、これらの種々の形態のうちのいずれかまたはすべての間で平衡状態を確立し得る。その生物学的に活性な形態では、この成熟ＧＤＦ−８はまた、「活性ＧＤＦ−８」とも呼ばれる。
【００２７】
用語「ＧＤＦ−８プロペプチド」とは、ＧＤＦ−８前駆体タンパク質のアミノ末端ドメインから切断されたポリペプチドを指す。このＧＤＦ−８プロペプチドは、成熟ＧＤＦ−８上にあるプロペプチド結合ドメインに結合することが可能である。
【００２８】
用語「ＧＤＦ−８潜在型複合体（ｌａｔｅｎｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ）」とは、成熟ＧＤＦ−８ホモダイマーと、ＧＤＦ−８プロペプチドとの間で形成される、タンパク質複合体を指す。そのホモダイマー中にある成熟ＧＤＦ−８の２つの分子に２つのＧＤＦ−８プロペプチドが会合して、不活性なテトラマー複合体を形成すると考えられる。この潜在型複合体は、１つ以上の上記ＧＤＦ−８プロペプチドの代わりにかまたはそれらのＧＤＦ−８プロペプチドに加えて、他のＧＤＦインヒビターを含み得る。
【００２９】
用語「ＧＤＦ−８活性」とは、活性ＧＤＦ−８タンパク質に関連する、１種以上の生理的に増殖を調節する活性または形態学的活性を指す。例えば、活性ＧＤＦ−８は、骨格筋量の負の調節因子である。活性ＧＤＦ−８はまた、筋肉特異的酵素（例えば、クレアチンキナーゼ）の産生を調節し得、筋芽細胞増殖を刺激し得、そしてプレ脂肪細胞から脂肪細胞への分化を調節し得る。インビボおよびインビトロでＧＤＦ−８活性を調節するための例示的手順は、例えば、米国特許出願番号１０／６８８，９２５号において見出される。
【００３０】
本明細書中で使用される場合、「ＧＤＦ−８インヒビター」とは、一般的には、ＧＤＦ−８の活性をダウンレギュレートする任意の化合物を指し、この用語は、ＧＤＦ−８の活性、発現、プロセシング、または分泌を阻害することが可能である、任意の因子を包含する。ＧＤＦ−８インヒビターは、例えば、ＧＤＦ−８の安定性または前駆体分子から活性成熟形態への変換に影響を及ぼし得るか；１つ以上のレセプターに対するＧＤＦ−８の結合に干渉し得るか；またはＧＤＦ−８レセプターであるＡｃｔＲＩＩＢの細胞内シグナル伝達に干渉し得る。そのようなインヒビターとしては、ＧＤＦ−８を特異的に阻害する、タンパク質、抗体、ペプチド、ペプチド模倣物、リボザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、二本鎖ＲＮＡ、および他の低分子が挙げられる。そのようなインヒビターは、ＧＤＦ−８の生物学的活性を「阻害する」、「中和する」または「減少（低減）する」と言われる。
【００３１】
用語「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」、「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ）」、「阻害性の」およびそれらの同義語は、ＧＤＦ−８インヒビターが存在しない場合のＧＤＦ−８の活性と比較して、ＧＤＦ−８インヒビターによりＧＤＦ−８の活性が減少することをいう。活性の減少は、好ましくは、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上である。ＧＤＦ−８インヒビターの中和または阻害性の生物学的活性を評価するための方法は、当該分野で公知であり、例えば、ＡｃｔＲＩＩＢアッセイ（例えば、Ｗｈｉｔｔｅｍｏｒｅら（２００３）ＢＢＲＣ，３００：９６５−９７；または米国特許出願第１０／２５３，５３２号に記載される）およびＲＧＡアッセイ（Ｔｈｉｅｓ（２００１）Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ，１８：２５１−２５９または米国特許出願第１０／２５３，５３２号に記載される）を用いて行われ得る。
【００３２】
用語「治療上有効な用量」または「治療上有効な量」とは、患者における症状の発症の危険性の予防、減少、またはその症状の改善、あるいは望ましい生物学的結果（例えば、改善された筋機能、臨床的症状の発生の遅れなど）を生じる化合物の量をいう。その有効量は、後の節において記載されるように決定され得る。
【００３３】
用語「処置」、「治療法」、およびこれらの同義語は、処置手段または予防手段（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）手段／予防（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段をいう。処置が必要な人々としては、特定の医学的障害を既に有する個体およびその障害を最終的に獲得し得る人々が挙げられ得る。処置は、本願に記載される障害の任意の症状の任意の減少（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）を含む。症状の減少または軽減（ｌｅｓｓｅｎｉｎｇ）に加えて、処置はまた、悪化が予測される場合に患者の現在の状態を維持すること、または症状、障害、もしくは疾患の発生が予測される個体における症状の発症を予防することを包含する。処置は、正常から１種以上の生理学的機能が低下（ｄｅｃｒｅａｓｅ）または減少することを包含し得る。処置は、その状態、障害、もしくは疾患の予測される症状または予測される進行と比較した減少もまた、包含し得る。
【００３４】
（ＩＩ．本発明の方法において使用するための成分）
本発明の方法において、１種以上のＧＤＦ−８インヒビターは、１種以上のコルチコステロイドと組み合わせて使用される。
【００３５】
（Ａ．ＧＤＦ−８インヒビター）
本発明の方法において使用されるＧＤＦ−８インヒビターとしては、ＧＤＦ−８に対する抗体；ＧＤＦ−８レセプターに対する抗体；可溶性ＧＤＦ−８レセプターおよびそのフラグメント（例えば、米国特許出願第１０／６８９，６７７号に記載されるＡｃｔＲＩＩＢ融合ポリペプチド（ＡｃｔＲＩＩＢが免疫グロブリンのＦｃ部分に結合される可溶性ＡｃｔＲＩＩＢレセプターを含む））；ＧＤＦ−８プロペプチドおよびその改変形態（例えば、ＷＯ０２／０６８６５０または米国特許出願第１０／０７１，４９９号に記載される（ＧＤＦ−８プロペプチドが免疫グロブリンのＦｃ部分に結合した形態を含む））および／またはＧＤＦ−８がアスパラギン酸（ａｓｐ）残基で変異した形態（例えば、マウスＧＤＦ−８プロペプチドにおけるａｓｐ−９９およびヒトＧＤＦ−８プロペプチドにおけるａｓｐ−１００）；フォリスタチン（例えば、米国特許第６，００４，９３７号）またはフォリスタチンドメイン含有タンパク質（例えば、米国特許出願第１０／３６９，７３６号および同第１０／３６９，７３８号に記載されるＧＡＳＰ−１もしくは他のタンパク質）；ならびにＧＤＦ−８活性化に影響を与えるメタロプロテアーゼ活性のモジュレーター（米国特許出願第１０／６６２，４３８号に記載される）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３６】
いくつかの実施形態において、このＧＤＦ−８インヒビターは、ＧＤＦ−８がそのレセプターに結合することをブロックする、モノクローナル抗体またはそのフラグメントである。非限定的な例示的実施形態は、非ヒトモノクローナル抗ＧＤＦ−８抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体ＪＡ−１６（米国特許出願第１０／２５３，５３２号；ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−４２３６に記載される）；その誘導体（例えば、ヒト化抗体）；ならびに完全ヒトモノクローナル抗ＧＤＦ−８抗体（米国特許出願第１０／６８８，９２５号に記載される、例えば、Ｍｙｏ２９、Ｍｙｏ２８、およびＭｙｏ２２；それぞれ、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−４７４１、ＰＴＡ−４７４０、およびＰＴＡ−４７３９）もしくはその誘導体を包含する。
【００３７】
いくつかの実施形態において、このＧＤＦ−８インヒビターは、ＧＤＦ−８またはＧＤＦ−８レセプターへ結合することによって、ＧＤＦ−８がそのレセプターに結合することからブロックする。種々の実施形態において、このＧＤＦ−８インヒビターは、ある親和性定数（Ｋａ）で表される、ＧＤＦ−８に対して親和性を有する抗ＧＤＦ−８抗体である。ここでＫａは、少なくとも１０５Ｍ−１、１０６Ｍ−１、１０７Ｍ−１、１０８Ｍ−１、１０９Ｍ−１、１０１０Ｍ−１、１０１１Ｍ−１、または１０１２Ｍ−１である。ヒトにおける使用についても企図されるのは、インヒビターであって、そのインヒビターは、ヒト化形態、または本明細書に引用される特許出願もしくはＡｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編，第２版，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９５；およびＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗら編，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８において記載される任意の脊椎動物に由来する非ヒト抗体の誘導体である、インヒビターである。
【００３８】
（Ｂ．コルチコステロイド）
本発明の方法において使用されるコルチコステロイドとしては、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、コルチゾール、デキサメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、プレドニゾン、フロン酸モメタゾン、トリアムシノロンアセトニド、およびこれらの誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３９】
本明細書に開示される化合物の薬学的に受容可能な塩もまた、使用され得る。
【００４０】
コルチコステロイドは、種々の薬学的処方物において市販されｒている（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２）。例えば、経口処方物は、コルチゾン、ヒドロコルチゾン（Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標））、プレドニゾン（Ｄｅｌｔａｓｏｎｅ（登録商標）、Ｍｅｔｉｃｏｒｔｅｎ（登録商標）、Ｏｒａｓｏｎｅ（登録商標））、プレドニゾロン（Ｄｅｌｔａ−Ｃｏｒｔｅｆ（登録商標）、Ｐｅｄｉａｐｒｅｄ（登録商標）、Ｐｒｅｌｏｎｅ（登録商標））、トリアムシノロン（Ａｒｉｓｔｏｃｏｒｔ（登録商標）、Ｋｅｎａｃｏｒｔ（登録商標））、メチルプレドニゾロン（Ｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）、Ｄｅｘｏｎｅ（登録商標）、Ｈｅｘａｄｒｏｌ（登録商標））、ベタメタゾン（Ｃｅｌｅｓｔｏｎｅ（登録商標））、ならびにデフラザコート（Ｃａｌｃｏｒｔ（登録商標））について市販されている。これらおよび他のコルチコステロイドの他の処方物は、本発明の方法において使用され得る。
【００４１】
（Ｃ．治療方法および予防方法）
本発明は、筋機能の損失、筋肉衰弱、筋萎縮症、心筋症および／またはコルチコステロイド誘導性筋萎縮症を処置するための方法を包含する、哺乳動物被験体を処置する方法を提供する。
【００４２】
本発明の方法は、治療上有効な量の少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターおよび治療上有効な量の少なくとも１種のコルチコステロイドを、筋機能、筋肉量の損失、筋肉衰弱、筋萎縮症、または心筋症を処置するために十分な量および時間で、哺乳動物に投与する工程を包含する。この方法は、神経筋障害（例えば、筋ジストロフィ）を処置するために使用され得る。いくつかの実施形態において、筋機能は、ＧＤＦ−８インヒビターまたはコルチコステロイドのいずれも存在しない場合の同じ処置と比較して、改善される。処置される筋肉としては、腓腹筋、前脛骨筋、四頭筋、指伸筋、心筋、または横隔膜筋が挙げられる。
【００４３】
神経筋障害としては、筋機能を損なうか、筋肉傷害を引き起こすか、そうでなければ筋肉量および／もしくは筋機能における減少を引き起こす、任意の急性または慢性の疾患または障害が挙げられる。広い種々の疾患または障害が公知であり、これらの疾患または障害としては、例えば、筋ジストロフィ（例えば、デュシェーヌ筋ジストロフィ、ベッカー筋ジストロフィ、エメリー−ドライフス筋ジストロフィ、肢帯筋ジストロフィ、脊椎硬直症候群（ｒｉｇｉｄ  ｓｐｉｎｅ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウルリッヒ症候群、福山筋ジストロフィ、ウォーカーヴァルブルク症候群、筋眼脳病（ｍｕｓｃｌｅ−ｅｙｅ−ｂｒａｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ）、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィ、先天性筋ジストロフィ、筋緊張性ジストロフィ（シュタイネルト病）、非ジストロフィ性筋緊張症、周期性四肢麻痺、脊髄性筋萎縮症、家族性筋萎縮性側索硬化症、遺伝的な運動神経および感覚神経の神経障害、シャルコー−マリー−ツース病、慢性炎症性神経障害、遠位型ミオパシー、筋細管／中心核ミオパシー、ネマリンミオパシー、ミニコア病、中心コア病、デスミオパチー（ｄｅｓｍｉｎｏｐａｔｈｙ）、封入体筋炎、ミトコンドリアミオパシー、先天性筋無力症症候群、ポリオ後の筋肉機能不全、およびＥｍｅｒｙ（２００２）Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ，３５９：６８７−６９５；およびＫｈｕｒａｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃ．，２：３７９−３８６に記載される障害が挙げられる。患者は、軽度、中程度、または重度の筋肉衰弱、筋肉消耗、およびこのような障害と関連する独立歩行に対する影響を示し得る。これらの障害を有するかまたはこれらの障害を発症する危険性のある患者は、ＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドにより利益を受ける。
【００４４】
概して、ＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドの同時投与により利益を受ける患者は、血清クレアチンキナーゼ（ＣＫ）活性における２〜１０倍以上の増大、ポジティブな家族歴、直径および筋肉線維における異常な変化、ジストロフィンの欠損もしくはジストロフィン遺伝子の変異、筋肉量の損失、筋肉衰弱、心筋症、および／または筋肉強度の損失を示す患者である。適切な遺伝子検査を含む診断手順は、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｅｍｅｒｙ編，第２版，Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載される。組み合わせ処置はまた、神経筋障害以外の障害についてコルチコステロイド治療を受ける被験体および／または長期間のコルチコステロイドの使用歴を有する被験体が、筋肉衰弱、筋肉量の損失、および／または筋萎縮症などによって特徴づけられるような筋機能の減少を示すか、このような危険性がある限りにおいて、これらの被験体に有益であり得る。コルチコステロイド治療がしばしば使用される障害の例としては、喘息、アレルギー、関節炎、皮膚障害（例えば、炎症性皮膚病、湿疹、乾癬など）、エリテマトーデス、および他の慢性炎症状態が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
本発明の方法において使用される投与方法および組成物が、提供される。投与は、任意の特定の送達系に限定されるわけではなく、非経口送達系（皮下注射、静脈内注射、骨髄内注射、関節内注射、筋肉内注射、または腹腔内注射が挙げられる）、直腸送達系、局所的送達系、経皮的送達系または経口的送達系（例えば、カプセル剤で、懸濁液でまたは錠剤で）が挙げられ得るが、これらに限定されない。個体への投与は、単一用量または反復投与において、そして種々の生理学的に受容可能な塩形態のいずれかにおいて、そして／または薬学的組成物の一部としての受容可能な薬学的キャリアおよび／もしくは添加剤とともに生じ得る。生理学的に受容可能な塩形態および標準的な薬学的処方技術および賦形剤は、当業者に周知である（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｅｎｎａｄｏら編，第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００に記載される）。
【００４６】
ＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドは、同時に、または間隔が重なってかもしくは重ならない間隔で連続的に投与される。逐次的投与において、このＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドは、任意の順番で投与され得る。いくつかの実施形態において、ｔｈｅ  ｌｅｎｇｔｈ  ｏｆ  ａｎ  重なる間隔または重ならない間隔の長さは、２週間、４週間、６週間、１２週間、２４週間、または４８週間を超える。
【００４７】
コルチコステロイドに関して、処方する医師は、慣用的に、投薬量およびレジメンを選択する。例えば、プレドニゾロンは、約１日に体重１ｋｇあたり０．１〜２ｍｇで、および最も一般的には、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ／日で（例えば、０．７５ｍｇ／ｋｇ／日で）使用される。このコルチコステロイドは、平均１週間に１回の用量で約１〜１４ｍｇ／ｋｇ体重（１週間あたり約１ｍｇ／ｋｇ体重、２ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重、７ｍｇ／ｋｇ体重、１０ｍｇ／ｋｇ体重、１２ｍｇ／ｋｇ体重、または１５ｍｇ／ｋｇ体重を含む）を投与され得、処方する医師は、必要に応じて、投与の頻度を選択し得る。単回投与、連続または周期的なコルチコステロイド投与が、選択され得、１時間に１回、１日に１回、２週間に１回、１週間に１回、または他の周期的間隔での投与が含まれる。好ましくは、コルチコステロイドは、１日あたり１回〜４回、経口的にまたは注射により投与される。コルチコステロイド投薬量は、組み合わせ治療として最適化され得、投薬量は、投与の重大な副作用を軽減するために低くされ得る。
【００４８】
このＧＤＦ−８インヒビターは、単独で、またはコルチコステロイドもしくは別の化合物と混合して投与され得る。ＧＤＦ−８インヒビターは、生理機能、症状の重篤度、および疾患の進行に依存して、約１μｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇの用量で投与され得る。単回投与、連続投与または周期的投与が選択され得、ＧＤＦ−８インヒビター投与の間の間隔は、１時間に１回、１日に１回、２週間に１回、１週間に１回、２ヶ月に１回、１ヶ月に１回、または他の適切な間隔から選択される。例えば、ＧＤＦ−８インヒビター（例えば、抗体）は、静脈内（ＩＶ）注入、腹腔内注射、または皮下注射によって、約０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ用量での１週間に１回の投与で設定されている外来患者において投与される。一般に、ＧＤＦ−８インヒビターの適切な治療上有効な用量は、処置する臨床医によって選択され、約１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、および５００μｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇの範囲に及ぶ。ＧＤＦ−８インヒビターの例示的な有効用量としては、約０．１ｍｇ／ｋｇ／週、０．３ｍｇ／ｋｇ／週、０．５ｍｇ／ｋｇ／週、１ｍｇ／ｋｇ／週、５ｍｇ／ｋｇ／週、１０ｍｇ／ｋｇ／週、または２０ｍｇ／ｋｇ／週が挙げられる。さらに、実施例に示されるかまたはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）２００３，第５７版，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，２００２に示される特定の投薬量が使用され得る。
【００４９】
（Ｄ．治療有効性について化合物を試験する方法）
本発明は、動物（例えば、齧歯類または霊長類）において、治療用化合物が、少なくとも１種のＧＤＦ−８インヒビターおよび少なくとも１種のコルチコステロイドと組み合わせて投与される場合に有効であるか否かを試験するための方法をさらに提供する。いくつかの実施形態において、化合物の有効性を評価する方法は、以下の工程を包含する：この化合物を、ＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドと組み合わせて第１の動物に投与する工程；このＧＤＦ−８インヒビターおよびコルチコステロイドを第２の動物に投与する工程；投与後に、この第１の動物および第２の動物における筋機能のレベルを決定する工程；ならびに筋機能のレベルを比較する工程。第１の動物におけるレベルが、第２の動物におけるレベルより低い場合、このことは、化合物または組み合わせが有効であることを示す。
【００５０】
他の実施形態において、この化合物は、ＧＤＦ−８インヒビターおよび／またはコルチコステロイドと組み合わせて投与される場合に、筋ジストロフィの処置において有効性について評価され得る。
【００５１】
いくらかの動物モデルは、このような評価目的で利用可能である。例えば、ｍｄｘモデルは、例えば、ｂｙ  Ｔｏｒｒｅｓら（１９８７）Ｂｒａｉｎ，１１０：２６９−２９９、およびＨｏｆｆｍａｎら（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３８：３４７−３５０によって記載された。極めて高レベルのクレアチンキナーゼ（ＣＫ）は、筋細胞膜損傷に起因して、ｍｄｘマウスおよびＤＭＤヒトにおけるジストロフィン欠損と一致して注目されている（Ｂｕｌｆｉｅｌｄら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：１１８９−１１９２；およびＭａｔｓｕｄａら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（Ｔｏｋｙｏ），１１８：９５９−６４）。別の例として、２つの他の動物モデルが使用され得る：ｕｔｒ−／−ｍｄｘマウス（Ｇｉｌｌｉｓ（２００２）Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌ．Ｄｉｓｏｒｄ．，１２（１）：９０−８４；およびＤｅｃｏｎｉｃｋら（１９９７）Ｃｅｌｌ，９０：７２９−７３８）およびｎｕ−／−ｍｄｘマウス（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（２０００）Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８０：８８１−８９１）。
【実施例】
【００５２】
（実施例１：ジストロフィマウスに対するＧＤＦ−８中和抗体の効果）
インビボでのＧＤＦ−８の阻害が筋ジストロフィを改善する能力を、ＤＭＤのｍｄｘマウスモデルにおいて試験した。５〜７週齢の雄Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ−ｍｄｘ／ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、ＧＤＦ−８中和マウス抗体ＪＡ−１６の１週間に１回の腹腔内注射（６０ｍｇ／ｋｇ、第１週目に２回投薬、ｎ＝１１）、およびビヒクル単独のの１週間に１回の腹腔内注射（コントロール群、ｎ＝１０）により１２週間処置した。これらのマウスをまた、ジストロフィン欠損なしの同じバックグラウンド系統のマウス（Ｃ５７ＢＬ／１０、ｎ＝１２）と比較した。
【００５３】
処置前、処置中および処置後に、体重をモニターした。処置群のマウスは、ビヒクルコントロール群におけるマウスに対して、体重が増加した。結果を表１に示す。
【００５４】
（表１．総体重（ｇ）  平均値と平均値の標準誤差（ＳＥＭ））
【００５５】
【表１】
2006527193.tif 000002
マウスをまた、投薬の６週間後と１０週間後にグリップ試験に供した。４週目および１０週目で、処置群のマウスは、ビヒクルコントロール群のマウスよりもそれぞれ、９％（ｐ＝０．０９）および１９％（ｐ＜０．０５）、握力が大きかった。結果を表２に示す。
【００５６】
（表２．握力（ｌｂ）  平均値と平均値の標準誤差（ＳＥＭ））
【００５７】
【表２】
2006527193.tif 000003
処置とビヒクルコントロールとの間の筋肉量の差異を提供するために、動物を屠殺し、四頭筋と腓腹筋を切り出し、秤量した。処置群の動物由来の四頭筋は、コントロールより１３％重かった（０．３７１±０．００９  対  ０．３１７±０．００８ｇ；ｐ＜０．０５）。処置群の動物由来の腓腹筋は、コントロールより１７％重かった（０．２２３±０．００８  対  ０．１９７±０．００５ｇ；ｐ＜０．０００５）。
【００５８】
（実施例２：正常筋肉およびジストロフィ筋肉に対するＧＤＦ−８中和抗体およびプレドニゾンの効果）
雄Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ−ｍｄｘ／ｊおよびＣ５７ＢＬ／１０（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）。マウスモノクローナル抗ＧＤＦ−８抗体ＪＡ−１６、プレドニゾン（Ｐ−９９０１、Ｓｉｇｍａ）、またはビヒクル（落花生油）を、５〜７週齢で開始して４週間注射した。マウスに、６０ｍｇ／ｋｇ／週（第１週には２回投与）の用量のＪＡ−１６を腹腔内（ＩＰ）注射したか、または１週間に３回、２ｍｇ／ｋｇのプレドニゾンを皮下（ＳＣ）注射した。
【００５９】
体重および握力を、処置前、処置中または処置後にモニターした。結果を、それぞれ表３および表４に示す。
【００６０】
（表３．総体重（平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ），ｇ）
【００６１】
【表３】
2006527193.tif 000004
（表４．握力（平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ），ｌｂ）
【００６２】
【表４】
2006527193.tif 000005
研究の終わりに、マウスを屠殺し、筋肉量を、腓腹筋および四頭筋を切り出し、秤量することによって評価した。結果を表５に示す。プレドニゾンの生物学的活性を確認するために、マウスの別のコホートに由来する血清を回収し、ＩＬ６およびＩＬ１β（Ａｎｉ  Ｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）について分析した。両方のサイトカインは、プレドニゾンで処置したマウスの血清中で原ｓｙ王していることが分かった。
【００６３】
（表５．筋肉重量（平均±平均値の標準誤差（ＳＥＭ），ｇ）
【００６４】
【表５】
2006527193.tif 000006
従って、この結果は、筋ジストロフィにおいて、ＧＤＦ−８のインヒビター（すなわち、抗ＧＤＦ−８抗体）、およびプレドニゾンの投与が、筋肉量および強度を増大することにおいて、プレドニゾン単独またはビヒクルでの処置と比較して、有効であることを実証する。
【００６５】
さらに、これらの研究において、ＪＡ１６＋プレドニゾン処置（実施例２）の効果は、ＪＡ１６単独での処置（実施例１）の効果よりも大きかった。処置の４週間後に、ビヒクルと比較した体重の増加は、ＪＡ１６処置単独よりも、ＪＡ１６＋プレドニゾン処置でより劇的であった。ＪＡ１６＋プレドニゾンでの処置の４週間後に、ビヒクルコントロールと比較した握力の増大は、ＪＡ１６単独での処置の６週間後または１０週間後の増大よりも大きかった。ＪＡ１６＋プレドニゾンでの処置の４週間後の筋肉量における、ビヒクルコントロールを超える増大はまた、ＪＡ１６単独での処置の２週間後の増大よりも大きかった。
【００６６】
（実施例３：プレドニゾン誘導性筋萎縮症に対するＧＤＦ−８中和抗体の効果）
実施例２に記載されるように処置したマウスにおいて、横隔膜筋を、実施例１に記載のように組織学的に試験した。形態変化を、処置群の割り当てを知らない独立した病理学研究室に評価させた。いくつかの評点を、０〜４（０＝なし；１＝最小；２＝軽度；３＝中程度；および４＝顕著）に割り当てた。結果を図１Ａ（重篤度スコア）および図１Ｂ（筋線維が萎縮した割合）に示す。これらの結果は、抗ＧＤＦ−８抗体をプレドニゾンと一緒に投与すると、プレドニゾン誘導性筋萎縮症が減少することを示す。
【００６７】
（実施例４：筋ジストロフィの処置）
ヒトにおけるＭＤを処置する例として、Ｍｙｏ２９抗体を、プレドニゾンまたはプレドニゾロンと組み合わせて投与した。非限定的な例示的処置レジメンおよび結果を、表６にまとめる。他の処置レジメンは、上記で議論されるように、コルチコステロイドおよびＧＤＦ−８インヒビター投薬量の範囲および投与とともに、処置する医師により決定され得る。
【００６８】
【表６−１】
2006527193.tif 000007
【００６９】
【表６−２】
2006527193.tif 000008
本開示において引用される全ての刊行物および特許、ならびに本開示における受託番号またはデータベース参照番号によって同定される配列は、それらの全体が参考として援用される。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１Ａおよび図１Ｂは、抗ＧＤＦ８中和抗体であるＪＡ−１６（６０ｍｇ／ｋｇ、週１回）およびプレドニソン（２ｍｇ／ｋｇ、週３回）でか、プレドニゾン単独でか、またはビヒクルコントロール単独で、４週間処理されたｍｄｘマウス由来の横隔膜筋肉の組織学的分析の結果を示す。図１Ａは、試験の最後における筋線維萎縮の重篤度を０〜４の目盛りで示す。図１Ｂは、試験の最後における罹患（萎縮）筋線維の割合を示す。各棒は、１匹のマウスを示す。
【図１】
2006527193.tif 000009
【国際調査報告】
2006527193.tif 000010
2006527193.tif 000011
2006527193.tif 000012
2006527193.tif 000013
2006527193.tif 000014