(57)【要約】本発明は、１種または複数の他の化学療法剤と組み合わせたリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）シグナル伝達を活性化する組成物を含む併用療法、ならびにリンホトキシンβ受容体アゴニスト因子と組み合わせて腫瘍阻害に相乗効果を有する治療方法および薬剤を同定するためのスクリーニング方法を特徴とする。本発明は、腫瘍体積を抑制するための方法を提供する。本方法は、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストと有効量の少なくとも１種の化学療法剤とを投与する工程を包含する。本方法は、有効量のＬＴ−β−Ｒ抗体と有効量の少なくとも１種の化学療法剤とを投与する工程を包含する。本発明はまた、本発明の方法の実施で使用するための薬学的組成物、送達デバイス、およびキットを提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍体積を抑制するための方法であって、有効量のリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストと有効量の少なくとも１種の化学療法剤とを投与する工程を包含し、ここで、該ＬＴ−β−Ｒアゴニストと化学療法剤との投与が、該腫瘍の相乗的抑制をもたらす、方法。
【請求項２】
腫瘍体積を抑制するための方法であって、有効量の抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）抗体と有効量の少なくとも１種の化学療法剤とを投与する工程を包含し、ここで、該抗ＬＴ−β−Ｒ抗体と化学療法剤との投与が、該腫瘍の相乗的抑制をもたらす、方法。
【請求項３】
薬学的組成物であって、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストと、有効量の少なくとも１種の化学療法剤と、薬学的に受容可能なキャリアとを含み、被験体への投与によって腫瘍の相乗的抑制をもたらす、薬学的組成物。
【請求項４】
癌の処置のための医薬の調製のための、有効量のリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストと有効量の化学療法剤との使用であって、被験体への投与によって腫瘍の相乗的抑制をもたらす、使用。
【請求項５】
前記腫瘍の相乗的抑制が協力性である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項６】
前記腫瘍の相乗的抑制が、１．００未満の組み合わせ指数を有する、請求項５に記載の方法、使用または組成物。
【請求項７】
前記腫瘍の相乗的抑制が増強される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項８】
前記腫瘍の相乗的抑制が、０．０５未満のＰ値を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項９】
前記ＬＴ−β−Ｒアゴニストが、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体である、請求項１または請求項３〜８のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１０】
前記抗ＬＴ−β−Ｒ抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１１】
前記モノクローナル抗体が、ＢＫＡ１１、ＣＤＨ１０、ＢＣＧ６、ＡＧＨ１、ＢＤＡ８、ＣＢＥ１１、およびＢＨＡ１０からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＬＴ−β−Ｒ抗体が、ヒト化抗体である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１３】
前記ヒト化抗体が、ｈｕＣＢＥ１１およびｈｕＢＨＡ１０からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１４】
前記ヒト化抗体が、ｈｕＣＢＥ１１である、請求項１３に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１５】
前記抗ＬＴ−β−Ｒ抗体が、多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１６】
前記多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体構築物が、多特異的である、請求項１５に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１７】
前記抗体が、前記化学療法剤に結合されている、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１８】
前記化学療法剤が、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤である、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項１９】
前記ＤＮＡ合成を妨害する薬剤が、ヌクレオシドアナログ化合物である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ヌクレオシドアナログ化合物が、ゲムシタビンである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＤＮＡ合成を妨害する薬剤が、アントラサイクリン化合物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記アントラサイクリン化合物が、アドリアマイシンである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法剤が、トポイソメラーゼＩインヒビターである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項２４】
前記トポイソメラーゼＩインヒビターが、カンプトサールである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記化学療法剤が、アルキル化剤である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項２６】
前記アルキル化剤が、白金化合物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記白金化合物が、カルボプラチンおよびシスプラチンからなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記白金化合物が、シスプラチンである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記化学療法剤が、植物アルカロイドである、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【請求項３０】
前記植物アルカロイドが、タキサンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記タキサンが、タキソールである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記化学療法剤が、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤、トポイソメラーゼＩインヒビター、白金化合物、およびタキサンからなる群から選択される、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法、使用または組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００２年１２月２０日提出の米国仮特許出願番号６０／４３５１８５号の優先権を主張する。本願は、２００２年１２月２０日提出の米国仮特許出願番号６０／４３５１５４号にも関連する。これらの各特許および特許出願の内容全体が本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、免疫学ならびに癌の診断および治療分野に属する。より詳細には、本発明は、治療方法における化学療法剤と組み合わせた活性化リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）薬の使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
リンホトキシンβ受容体（本明細書中でＬＴ−β−Ｒという）は、多数の免疫系細胞（濾胞性樹状細胞が含まれる）および多数の幹細胞型の免疫系の発達および機能維持の両方における役割が十分に記載されている腫瘍壊死因子ファミリーのメンバーである（Ｃｒｏｗｅら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：７０７；Ｂｒｏｗｎｉｎｇら（１９９３）７２：８４７；Ｂｒｏｗｎｉｎｇら（１９９５）１５４：３３；Ｍａｔｓｕｍｏｔｏら（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１５６：１３７）。ＬＴ−β−Ｒの活性化により、インビボでの一定の癌細胞のアポトーシス性死を誘導することが示されている（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０１３８６）。したがって、特異的ヒト化抗ＬＴ−β−Ｒ抗体などのアゴニストＬＴ−β−Ｒ活性化因子での治療は、被験体（例えば、ヒト）の新形成の進行、重症度、または影響の治療または軽減に有用である。癌は、合衆国で５人の個体のうち約１人が罹患する今日の世界で最も一般的な健康上の問題の１つである。したがって、新形成細胞の成長抑制および種々の癌の治療は主要なヘルスニードであり、且つあり続ける可能性が高い。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（発明の要旨）
本発明は、部分的に、リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストおよびリンホトキシン受容体アゴニストではない化学療法剤の使用を含む、腫瘍体積の抑制および癌の治療方法を提供する。アゴニストと薬剤との組み合わせにより、アゴニストおよび薬剤の単独での効果の単純な和によって予想される以上の腫瘍抑制が達成される。このような効果を、本明細書中で「相乗的」抑制といい、相乗的または増強された相互作用に起因し得る。本発明はまた、本発明の方法の実施で使用するための薬学的組成物、送達デバイス、およびキットを提供する。
【０００５】
本発明は、有効量のリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストおよび有効量の少なくとも１種の化学療法剤を投与する工程と、前記ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤の投与によって腫瘍が相乗的に抑制されることとを含む、腫瘍体積の抑制方法を提供する。
【０００６】
本発明はまた、有効量の抗リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）抗体および有効量の少なくとも１種の化学療法剤を投与する工程と、前記抗ＬＴ−β−Ｒ抗体および化学療法剤の投与によって腫瘍が相乗的に抑制されることとを含む、腫瘍体積の抑制方法を提供する。
【０００７】
本発明は、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニスト、有効量の少なくとも１つの化学療法剤、および薬学的に受容可能なキャリアを含み、被験体への投与によって腫瘍が相乗的に抑制される、薬学的組成物を提供する。
【０００８】
本発明はまた、被験体に投与した場合に腫瘍が相乗的に抑制される癌治療薬調製用の有効量のリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストおよび有効量の化学療法剤の使用を含む。
【０００９】
本発明の１つの実施形態では、腫瘍の相乗的抑制が協力作用である。さらなる実施形態では、腫瘍の相乗的抑制の組み合わせ指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）が１．００未満である。さらに別の実施形態では、腫瘍の相乗的抑制が増強される。本発明のさらなる実施形態では、腫瘍の相乗的抑制のＰ値が０．０５未満である。
【００１０】
本発明の１つの実施形態では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストは、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体である。別の実施形態では、本発明の抗ＬＴ−β−Ｒ抗体はモノクローナル抗体であり、モノクローナル抗体は、ＢＫＡ１１、ＣＤＨ１０、ＢＣＧ６、ＡＧＨ１、ＢＤＡ８、ＣＢＥ１１、およびＢＨＡ１０からなる群から選択される。本発明のさらに別の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は、ヒト化抗体（ｈｕＣＢＥ１１およびｈｕＢＨＡ１０が含まれる）である。さらに別の実施形態では、本発明の抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は、多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体である。１つの実施形態では、多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体構築物は多特異的である。
【００１１】
本発明のさらに別の実施形態では、抗体は化学療法剤に結合している。
【００１２】
本発明のさらに別の実施形態では、化学療法剤はＤＮＡ合成を妨害する薬剤である。１つの実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤は、ヌクレオシドアナログ化合物（例えば、ゲムシタビンが含まれる）である。さらに別の実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤は、アントラサイクリン化合物（例えば、アドリアマイシンが含まれる）である。
【００１３】
本発明のさらに別の実施形態では、化学療法剤は、トポイソメラーゼＩインヒビター（例えば、カンプトサールが含まれる）である。さらなる実施形態では、化学療法剤はアルキル化剤（例えば、白金化合物が含まれる）である。１つの実施形態では、白金化合物は、カルボプラチンおよびシスプラチンのいずれかである。
【００１４】
さらに別の実施形態では、本発明の化学療法剤は植物アルカロイドである。１つの実施形態では、植物アルカロイドがタキサン（例えば、タキソールが含まれる）である。
【００１５】
１つの実施形態では、腫瘍体積の阻止方法は、有効量のリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストおよび有効量のリンホトキシン受容体アゴニストではない化学療法剤を投与する工程と、前記ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤の投与によって腫瘍が相乗的に抑制されることとを含む。腫瘍の相乗的抑制は協力作用であり得るが、一定の実施形態では、腫瘍の相乗的抑制の組み合わせ指数は１．００未満である。あるいは、組み合わせ指数は、約０．８５と約０．９０との間、約０．７０と約０．８５との間、約０．３０と約０．７０との間、約０．１０と約０．３０との間である。さらに別の実施形態では、組み合わせ指数は０．１０未満である。他の実施形態では、腫瘍の相乗的抑制を増強することができ、一定の実施形態では、腫瘍の相乗的抑制のｐ値は０．０５未満である。あるいは、腫瘍の相乗的抑制のｐ値は、約０．０５と約０．０４との間、約０．０４と約０．０３との間、約０．０３と約０．０２との間、約０．０２と約０．０１との間である。さらに別の実施形態では、ｐ値は０．０１未満である。
【００１６】
任意の種々のＬＴ−β−Ｒアゴニストを、本発明の方法で使用することができる。一定の実施形態では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストは抗ＬＴ−β−Ｒ抗体であり得る。１つの実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体はモノクローナル抗体である。一定の実施形態では、モノクローナル抗体を、ＢＫＡ１１、ＣＤＨ１０、ＢＣＧ６、ＡＧＨ１、ＢＤＡ８、ＣＢＥ１１、およびＢＨＡ１０からなる群から選択することができる。他の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体はヒト化抗体である。一定の実施形態では、ヒト化抗体を、ｈｕＣＢＥ１１およびｈｕＢＨＡ１０からなる群から選択することができる。１つの実施形態では、ヒト化抗体はｈｕＣＢＥ１１である。一定の実施形態では、本発明で使用するためのヒト化抗体を、Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許受託番号ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許受託番号３７６５）からなる群から選択される細胞株によって産生することができる。さらに他の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体構築物であり、一定の実施形態では、多特異的であり得る。本発明の１つの実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は化学療法剤に結合している。
【００１７】
同様に、アゴニストと薬剤との組み合わせにより、アゴニストおよび薬剤の単独での効果の単純な和によって予想される以上の腫瘍抑制が達成される場合、任意の種々の化学療法剤を本発明の方法で使用することができる。一定の実施形態では、化学療法剤はＤＮＡ合成を妨害する薬剤である。１つの実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤は、ヌクレオシドアナログ化合物である。１つの実施形態では、ヌクレオシドアナログ化合物はゲムシタビンである。別の実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤は、アントラサイクリン化合物であり、一定の実施形態では、アントラサイクリン化合物はアドリアマイシンである。他の実施形態では、化学療法剤は、トポイソメラーゼＩインヒビターである。１つの実施形態では、トポイソメラーゼＩインヒビターは、イリノテカン（例えば、カンプトサールが含まれる）である。他の実施形態では、化学療法剤はアルキル化剤であり得る。１つの実施形態では、アルキル化剤は白金化合物であり、一定の実施形態では、カルボプラチンおよびシスプラチンからなる群から選択することができる。１つの実施形態では、白金化合物はシスプラチンである。さらに他の実施形態では、化学療法剤は植物アルカロイドであり得る。１つの実施形態では、植物アルカロイドはタキサンであり、一定の実施形態では、タキソールであり得る。
【００１８】
本発明は、リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストと共に投与した場合に腫瘍体積の抑制に相乗効果を示す化学療法剤のスクリーニング方法を提供する。１つの実施形態では、このような方法は、（ａ）試験被験体中の第１の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストとを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、（ｂ）試験被験体中の比較可能な第２の腫瘍と候補化学療法剤とを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、（ｃ）試験被験体中の比較可能な第３の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方と接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方の存在下での腫瘍体積の抑制がそれぞれのＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤による腫瘍体積抑制の合計よりも大きい場合、候補化学療法剤が腫瘍体積抑制に相乗効果を示すと見なされることとを含む。
【００１９】
本発明の方法で使用するための薬学的組成物も提供する。１つの実施形態では、薬学的組成物は、ＬＴ−β−Ｒアゴニストと化学療法剤との組み合わせ投与によって腫瘍が相乗的に抑制される、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニスト、有効量の少なくとも１つのＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。一定の実施形態では、化学療法剤は、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤、ヌクレオシドアナログ化合物、アルキル化剤、および植物アルカロイドからなる群から選択される。一定の実施形態では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストは抗ＬＴ−β−Ｒ抗体であり得るが、いくつかの実施形態では、ヒト化抗体であり得る。１つの実施形態では、ヒト化抗体はｈｕＣＢＥ１１であり得る。他の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は、多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体構築物であり得る。
【００２０】
本方法で使用するためのさらなる薬学的送達デバイスを提供する。１つの実施形態では薬学的送達デバイスは、デバイスを使用したＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤の投与によって腫瘍が相乗的に抑制される、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニスト、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤、および薬学的に受容可能なキャリアを含むか、これらを負荷することができる。一定の実施形態では、デバイスを使用したアゴニストおよび化学療法剤の投与は同時である。一定の実施形態では、アゴニストおよび化学療法剤を、デバイスを使用した投与前にデバイス中で混合することができる。さらに他の実施形態では、デバイスを使用したアゴニストおよび化学療法剤の投与は連続的である。
【００２１】
本発明の組成物および送達デバイスを使用した癌の治療または腫瘍体積の抑制方法も提供する。１つの実施形態では、被験体の癌の治療方法は、被験体に有効量の本発明の薬学的組成物を投与する工程を含む。一定の実施形態では、被験体はヒトである。一定の実施形態では、癌は充実性腫瘍を含む。組成物を、腫瘍部位に局所的に投与することができる。１つの実施形態では、組成物を腫瘍動脈血供給に直接投与する。別の実施形態では、被験体の癌治療方法は、本発明の薬学的送達デバイスを使用して、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤を被験体に投与する工程を含む。他の実施形態では、被験体の腫瘍体積の抑制方法は、有効量の本発明の組成物を被験体に投与する工程を含む。さらに別の実施形態では、被験体の腫瘍体積の抑制方法は、本発明の薬学的送達デバイスを使用して、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤を被験体に投与する工程を含む。
【００２２】
本発明は、さらに、本発明の薬学的組成物または薬物送達デバイスおよび任意選択的にその使用説明書を含むキットを提供する。このようなキットの使用は、例えば、治療への適用が含まれる。一定の実施形態では、任意のキット中に含まれる本発明の組成物は凍結乾燥されており、使用前に再水和する必要がある。
【００２３】
１つの実施形態では、本発明は、デバイスを使用したＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤の投与によって腫瘍が相乗的に抑制されるように、（１）有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニスト、（２）有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない少なくとも１つの化学療法剤、および（３）薬学的に受容可能なキャリアを含むかこれらを負荷することができる薬学的送達デバイスを提供する。１つの実施形態では、デバイスにより、ＬＴ−β−Ｒおよび化学療法剤が同時に投与される。別の実施形態では、デバイスでの同時投与前にＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤をデバイス中で混合する。個別の実施形態では、デバイスを使用してＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤を連続的に投与する。
【００２４】
他の実施形態では、前述の任意の薬学的送達デバイスを使用した有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤の被験体への投与によって被験体の癌を治療する。
【００２５】
本発明の別の実施形態は、特許請求の範囲に記載の任意の薬学的組成物の有効量の薬学的組成物を被験体に投与する工程を含む、患者の癌の治療方法を提供する。１つの実施形態では、被験体はヒトである。別の実施形態では、癌は充実性腫瘍を含む。充実性腫瘍の治療のために、１つの実施形態は、腫瘍部位への薬学的組成物の局所的投与を提供する。充実性腫瘍の治療に関する別の実施形態では、薬学的組成物を、腫瘍の動脈血供給に直接投与する。
【００２６】
本発明の別の実施形態では、有効量の任意の上記薬学的組成物の被験体への投与によって、被験体の腫瘍体積を抑制する。個別の実施形態では、任意の上記薬学的送達デバイスを使用した有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤の被験体への投与によって、被験体の腫瘍体積を抑制する。
【００２７】
さらに別の実施形態では、本発明は、上記の任意の薬学的組成物を含む、被験体の癌の治療用キットを提供する。別の実施形態では、キットは、さらに、被験体に組成物を投与するための説明書を含む。
【００２８】
別の実施形態では、本発明は、有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤ならびに任意選択的に使用説明書を含む、薬学的送達デバイスを使用した被験体の癌の治療用キットを提供する。
【００２９】
最後の実施形態では、本発明は、リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストと一緒に投与した場合に腫瘍体積抑制に相乗効果を示す、化学療法剤のスクリーニング方法を提供する。本方法は、以下：
（ａ）試験被験体中の第１の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストとを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程；
（ｂ）試験被験体中の比較可能な第２の腫瘍と候補化学療法剤とを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程；および
（ｃ）試験被験体中の比較可能な第３の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方とを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程、
を包含し、
ここで、ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方の存在下での腫瘍体積の抑制がＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤のそれぞれによる腫瘍体積抑制の合計よりも大きい場合、この候補化学療法剤は、腫瘍体積抑制に相乗効果を示すと見なされる。
【００３０】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
（発明の詳細な説明）
（１．定義）
便宜上、本発明のさらなる説明前に、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲中の一定の使用用語をここに定義する。
【００３１】
文脈中で別であることが明確に示されていない限り、単数形「一つの」（「ａ」、「ａｎ」）、および「その」（「ｔｈｅ」）には複数形が含まれる。
【００３２】
用語「投与する」は、被験体の系または被験体中または被験体上の特定の領域への薬学的組成物または治療薬の任意の送達方法を含む。本明細書中で使用される、句「全身投与」、「全身に投与する」、「末梢投与」、および「末梢に投与する」は、患者の系に侵入し、それにより代謝および他の同様のプロセスに供されるように中枢神経系への化合物、薬剤、または他の材料の直接以外の投与（例えば、皮下投与）を意味する。「非経口投与」および「非経口で投与する」は、通常注射による経腸および局所投与以外の投与様式（静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、および胸骨内への注射および注入が含まれるが、これらに限定されない）を意味する。
【００３３】
用語「ＤＮＡ合成を妨害する薬剤」は、ＤＮＡ合成プロセスを減少または阻害することができる任意の分子または化合物をいう。ＤＮＡ合成を妨害する薬剤の例には、トポイソメラーゼＩなどのＤＮＡ合成に影響を与えるか促進する酵素のインヒビターまたはピリミジンまたはプリンアナログなどのヌクレオシドアナログが含まれるが、これらに限定されない。
【００３４】
用語「アルキル化剤」は、（例えば、アミン、アルコール、フェノール、有機酸、および無機酸）の求核基と反応し、それによりタンパク質または核酸などの別の分子にアルキル基（例えば、エチル基またはメチル基）を付加することができる任意の分子または化合物をいう。化学療法剤として使用されるアルキル化剤の例には、ブスルファン、クロラムブシル（ｃｈｌｏａｒｍｂｕｃｉｌ）、シクロホスファミド、イフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、チオテパ、種々のニトロソ尿素化合物、ならびにシスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金化合物が含まれる。
【００３５】
用語「抗腫瘍活性」は、物質または組成物と相互作用する腫瘍細胞の増殖を遮断するか腫瘍の細胞死を誘導する物質または組成物の能力をいう。用語「アポトーシス」は、プログラム細胞死のプロセスをいう。
【００３６】
用語「癌」または「新形成」は、一般に、任意の悪性新生物または細胞の自然成長または増殖をいう。本明細書中で使用されるこの用語は、完全に発達した悪性新生物および前癌病変を含む。「癌」を有する対象は、例えば、腫瘍または白血病などの白血球増殖を有し得る。一定の実施形態では、癌を有する対象は、充実性腫瘍などの腫瘍を有する被験体である。充実性腫瘍を含む癌には、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、精巣癌、肺癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、膵臓癌、結腸直腸癌（ＣＲＣ）、乳癌、前立腺癌、胃癌、皮膚癌、胃癌、食道癌、および膀胱癌が含まれるが、これらに限定されない。
【００３７】
用語「化学療法剤」は、外来細胞または腫瘍細胞などの悪性細胞に起因する疾患の治療に使用した任意の分子または組成物をいう。本明細書で意図される化学療法剤には、本発明の抗体と結合することができる薬剤または抗体と結合することなく本発明の抗体と組み合わせて使用することができる薬剤が含まれる。本発明の１つの実施形態では、本発明の抗体と組み合わせて使用することができる化学療法剤には、以下が含まれるが、これらに限定されない：白金（すなわち、シスプラチン）、アントラサイクリン、ヌクレオシドアナログ（プリンおよびピリミジン）、タキサン、カンプトセシン、エピポドフィロトキシン、ＤＮＡアルカリ化剤、葉酸アンタゴニスト、ビンカアルカロイド、リボヌクレオチドレダクターゼインヒビター、エストロゲンインヒビター、プロゲステロンインヒビター、アンドロゲンインヒビター、アロマターゼインヒビター、インターフェロン、インターロイキン、モノクローナル抗体、タキソール、カンプトサール、アドリアマイシン（ｄｏｘ）、５−ＦＵ、およびゲムシタビン。このような化学療法剤を、抗体および化学療法剤の同時投与によって本発明の抗体と組み合わせて本発明の実施において使用することができる。１つの実施形態では、本発明の抗体を、化学療法剤と結合しない。本発明の別の実施形態では、化学療法剤および抗ＬＴ−βＲアゴニスト抗体を結合する。
【００３８】
用語「組み合わせ指数」は、ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚ．Ｒｅｇｕｌ．２２：２７の方法によって決定される少なくとも２つの分子または化合物の組み合わせ用量−効果の基準をいい、発明の詳細な説明および実施例にさらに説明する。用量効果が協力性である場合、組み合わせ指数は１．００未満である。あるいは、相乗効果を示す組み合わせ指数は約０．８５と約０．９０との間、約０．７０と約０．８５との間、約０．３０と約０．７０との間、約０．１０と約０．３０との間であり得る。
【００３９】
用語「有効量」は、所望の効果（例えば、インビトロまたはインビボのいずれかでの腫瘍体積の減少が含まれるが、これに限定されない）に影響を与えるのに十分な本発明の化合物、材料、または化合物を含む組成物の量をいう。本発明の薬学的組成物の有効量は、所望の臨床結果（例えば、対象の癌の改善、安定化、防止、または進行の遅延が含まれるが、これらに限定されない）に影響を与えるのに十分な薬学的組成物の量である。いずれかの場合、有効量の本発明の化合物を、１回または複数回投与することができる。これらの上記指標の検出および測定は当業者に公知であり、例えば、全身腫瘍組織量の減少、腫瘍サイズの抑制、二次腫瘍増殖の減少、腫瘍組織中の遺伝子発現、バイオマーカーの存在、リンパ節転移、組織学的悪性度、および核異型度が含まれるが、これらに限定されない。
【００４０】
用語「ヒト化抗体」は、ある種由来の抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）をヒトの可変領域のフレームワーク領域に移植した抗体または抗体構築物をいう。
【００４１】
用語「腫瘍体積の抑制」は、腫瘍体積の任意の低減または減少をいう。薬学的組成物または治療薬の腫瘍体積を抑制する能力を、「影響率」によって測定することができる。用語「影響率（Ｆａ）」は、治療群の平均腫瘍体積減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した腫瘍抑制率の基準をいう。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。Ｆａの計算を、発明の詳細な説明にさらに記載する。
【００４２】
用語「リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニスト」は、ＬＴ−β−Ｒへのリガンド結合、細胞表面ＬＴ−β−Ｒクラスター形成、および／またはＬＴ−β−Ｒシグナル伝達を増加させることができる任意の薬剤をいう。
【００４３】
用語「抗ＬＴ−β−Ｒ抗体」は、ＬＴ−β受容体の少なくとも１つのエピトープを認識して結合する任意の分子をいう。抗ＬＴ−β−Ｒ抗体の例には、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、および多価抗体が含まれる。「抗体」は、例えば、任意のイソ型の全抗体（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥなど）および脊椎動物（例えば、哺乳動物）のタンパク質および抗体フラグメントを含む融合タンパク質とも特異的に反応するそのフラグメントが含まれることが意図される。従来の技術を使用して抗体を断片化し、フラグメントを上記の全抗体と同一の様式で有用性についてスクリーニングすることができる。したがって、この用語には、一定のタンパク質と選択的に反応することができる抗体分子のタンパク質酵素で切断されたか組換えによって調製された部分のセグメントが含まれる。このようなタンパク質分解および／または組換えフラグメントの非限定的な例には、ペプチドリンカーによって連結されたＶ［Ｌ］および／またはＶ［Ｈ］ドメインを含むＦａｂ、Ｆ（ａｂ‘）２、Ｆａｂ’、Ｆｖ、および一本鎖抗体（ｓＦｖ）が含まれる。用語「抗体」には、５つのＩｇクラス（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）のうちの任意の１つ由来の定常領域に結合した２つまたはそれ以上の可変領域を含み得る「抗体構築物」も含まれる。本発明には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、または抗体および組換え抗体の他の精製調製物が含まれる。
【００４４】
用語「モノクローナル抗体」は、特定のエピトープと免疫反応するか結合することができる抗原結合部位のたった一片を含む抗体分子をいう。エピトープに指向するモノクローナル抗体、その誘導体、フラグメント、アナログ、またはホモログの調製のために、連続細胞株培養によって抗体分子の産生を提供する任意の技術を使用することができる。このような技術には、ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７を参照のこと）；トリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ４：７２を参照のこと）、およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，１９８５  Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体を本発明の実施で使用することができ、ヒトハイブリドーマ（Ｃｏｔｅら（１９８３）．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）またはインビトロでのエプスタイン・バーウイルスでのヒトＢ細胞の形質転換（Ｃｏｌｅら（１９８５）Ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）の使用によって産生することができる。
【００４５】
句「多価抗体」または「多価抗体構築物」は、１つを超える抗原認識部位を含む抗体または抗体構築物をいう。例えば、「２価」抗体構築物は、２つの抗原認識部位を有するのに対し、「４価」抗体構築物は４つの抗原認識部位を有する。用語「単一特異性」、「二重特異性」、「三重特異性」、「四重特異性」などは、本発明の多価抗体構築物中に存在する異なる抗原認識部位の特異性数（抗原認識部位数と対照的）をいう。例えば、「単一特異性」抗体構築物の抗原認識部位は全て同一のエピトープに結合する。「二重特異性」抗体構築物は、第１のエピトープに結合する少なくとも１つの抗原認識部位および第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する少なくとも１つの抗原認識部位を有する。「多価単一特異性」抗体構築物は、同一のエピトープに全て結合する複数の抗原認識部位を有する。「多価二重特異性」抗体構築物は、複数の抗原認識部位を有し、そのうちのいくつかが第１のエピトープに結合し、いくつかが第１のエピトープと異なる第２のエピトープに結合する。このような多価抗体構築物ならびにその作製および使用方法の例は、２００２年１２月２０日提出の発明の名称が「Ａｎｔｉ−ＬＴ−β−Ｒ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ，ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  Ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓａｍｅ」の仮特許出願（２００２年、１２月２０日提出の米国仮特許出願番号６０／４３５１５４号）（その全体が本明細書中で参考として援用される）に記載されている。
【００４６】
用語「Ｐ値」は、確率値をいう。ｐ値は、試験によって得られた結果が偶然のみにどの程度起因する可能性があるかを示す。本発明の１つの実施形態では、両側１サンプルＴ検定のｐ値である。０．０５未満のｐ値が統計的に有意であると見なされる（すなわち、偶然のみに起因する可能性がない）あるいは、統計的に有意なｐ値は、約０．０５と約０．０４との間、約０．０４と約０．０３との間、約０．０３と約０．０２との間、約０．０２と約０．０１との間であり得る。一定の場合、ｐ値は０．０１未満であり得る。本明細書中で使用される、ｐ値を、リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストおよびリンホトキシン受容体アゴニストではない化学療法剤を腫瘍または腫瘍を有する被験体に投与した場合に腫瘍体積に対する任意の統計的に有意な相乗的阻害が存在するかどうか測定するために使用する。不定期のある日よりもむしろ一連の治療日で統計的有意性が認められる場合にｐ値に生物学的関連性が存在する。
【００４７】
「患者」、「被験体」、または「宿主」は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかをいう。
【００４８】
用語「薬学的送達デバイス」は、被験体への治療薬の投与に使用することができる任意のデバイスをいう。薬学的送達デバイスの非限定的な例には、皮下注射用シリンジ、多室シリンジ、ステント、カテーテル、経皮パッチ、顕微針、微小研磨器、および移植可能な徐放デバイスが含まれる。１つの実施形態では、用語「薬学的送達デバイス」は、注射前に２つの化合物を混合することができる２室シリンジをいう。
【００４９】
句「薬学的に受容可能な」を、本明細書中で、正常な医学的判断の範囲内で妥当な利益／リスク比と釣り合った過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴うことなくヒトおよび動物組織との接触での使用に適切な化合物、材料、組成物、および／または投薬形態をいうために使用する。
【００５０】
本明細書中で使用される、句「薬学的に受容可能なキャリア」は、ある器官または身体の一部から別の器官または身体の一部への本発明の化合物の運搬または輸送に関与する液体もしくは固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒カプセル化物質などの薬学的に受容可能な材料、組成物、または賦形剤を意味する。各キャリアは、処方物の他の成分と適合可能であり、且つ患者に有害でないという意味で許容可能でなければならない。薬学的に受容可能なキャリアとして使用することができる材料のいくつかの例には、（１）ラクトース、グルコース、およびスクロースなどの糖、（２）トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン、（３）セルロースならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびセルロースアセテートなどの誘導体、（４）粉末トラガカント、（５）麦芽、（６）ゼラチン、（７）タルク、（８）ココアバターおよび座剤用ワックスなどの賦形剤、（９）ピーナツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、およびダイズ油などの油、（１０）プロピレングリコールなどのグリコール、（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコールなどのポリオール、（１２）オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル、（１３）寒天、（１４）水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、（１５）アルギン酸、（１６）無発熱物質水、（１７）等張生理食塩水、（１８）リンゲル液、（１９）エチルアルコール、（２０）ｐＨ緩衝化溶液、（２１）ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリアンヒドライド、ならびに（２２）薬学的処方物で使用される他の無毒の適合可能な物質が含まれる。
【００５１】
「薬学的に受容可能な塩」は、化合物の比較的無毒の無機酸付加塩および有機酸付加塩をいう。これらの塩を、投与賦形剤もしくは投薬形態製造プロセスにおいてｉｎ  ｓｉｔｕで調製するか、遊離塩基形態の本発明の精製化合物と適切な有機酸もしくは無機酸との個別の反応、およびその後の精製におけるこのようにして形成された塩の単離によって調製することができる。本発明の化合物の薬学的に受容可能な塩には、例えば、非毒性有機酸または無機酸由来の化合物の従来の非毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。
【００５２】
用語「植物アルカロイド」は、アルカリンファミリー（生物学的に活性であり細胞傷害性を示す植物由来の窒素含有分子）に属する化合物をいう。植物アルカロイドの例には、ドセタキセルおよびパクリタキセルなどのタキサンならびにビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビンなどのビンカが含まれるが、これらに限定されない。１つの実施形態では、植物アルカロイドはタキソールである。
【００５３】
用語「相乗的」は、薬剤の組み合わせ由来の効果の合計が個別の薬剤による効果の合計よりも高い薬剤の組み合わせ由来の効果をいう。相乗効果の例には、増強および協力作用が含まれる。用語「増強」は、２つまたはそれ以上の薬剤の同時効果が薬剤の個別の効果の合計を超える場合をいう。１つの実施形態では、第１の薬剤を単独で投与した場合に抑制効果を示さないが、組み合わせて投与した場合に第２の薬剤の効果を増強する場合、増強が起こる。本発明の１つの実施形態では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストまたは化学療法剤の１つのみが個別に腫瘍体積を抑制する能力を有するが、組み合わせると薬剤の効果が増強される。
【００５４】
用語「腫瘍の相乗的抑制」は、個別の薬剤に起因する薬剤の組み合わせの効果の合計を超える腫瘍体積の全減少をいう。本発明の１つの実施形態では、腫瘍の相乗的抑制には、ＬＴ−β−Ｒアゴニストまたは化学療法剤のいずれかのみの個別の投与によって得られた腫瘍抑制の合計を統計学的に有意に超えるＬＴ−β−ＲアゴニストとＬＴ−β−Ｒアゴニストではない化学療法剤との組み合わせの投与によって得られた平均腫瘍抑制が含まれる。ＬＴ−β−Ｒアゴニストと化学療法剤との組み合わせ投与によって得られた腫瘍阻害が予想される各化合物の値の和よりも「統計的に有意に高い」かどうかを、発明の詳細な説明に記載の種々の統計学的方法によって決定することができる。
【００５５】
用語「協力性」は、任意の２つまたはそれ以上の単一薬剤の効果の和よりも有効な組み合わせをいう。本発明の１つの実施形態では、用語「協力性」は、ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤の両方がそれぞれ腫瘍体積の抑制能力を有する相乗的抑制型を含む。
【００５６】
用語「トポイソメラーゼＩインヒビター」は、トポイソメラーゼＩ酵素の生物活性を抑制または低減する分子または化合物をいう。トポイソメラーゼＩインヒビターの非限定的な例には、ダウノルビシン、ドキソラビシン、およびイダムビシンなどのアントラサイクリンならびにエトポシドおよびテニポシドなどのエピポドフィロトキシンが含まれる。
【００５７】
「癌治療」または「癌を有する被験体の治療」は、癌の範囲が減少するか妨げられるような薬学的治療薬への被験体の投与（例えば、薬物の投与）をいう。癌治療は、癌細胞の複製の抑制、癌の拡大の抑制、腫瘍サイズの減少、体内の癌細胞数の減少または低減、および／または癌に起因する疾患の症状の改善もしくは緩和を意味する。治療は、死亡率および／または罹患率が減少する場合に、治療と見なされる。本発明の１つの実施形態では、用語「癌治療」は、腫瘍サイズの減少をいう。治療には、薬学的組成物などの組成物の投与が含まれ（これらに限定されない）、予防的または病理学的事象の開始後のいずれかで行うことができる。
【００５８】
用語「腫瘍体積」は、腫瘍自体および適用可能な場合に罹患リンパ節を含む腫瘍の全サイズをいう。腫瘍体積を、当該分野で公知の種々の方法（例えば、キャリパーを使用した腫瘍の大きさの測定、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンまたは磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）スキャン、ならびに例えばｚ軸直径、または球形、楕円、または立方体などの標準的形状に基づいた方程式を使用した体積の計算など）によって決定することができる。
（２．リンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニスト）
任意の種々のＬＴ−β−Ｒアゴニストを本発明の方法で使用することができる。米国特許第６，３１２，６９１号およびＷＯ９６／２２７８８号（その内容全体が本明細書中で参考として援用される）は、癌細胞死を誘発するためにＬＴ−β−Ｒアゴニストを使用した癌治療のための方法および組成物を記載する。例えば、米国特許第６，３１２，６９１号は、本発明で使用するためのＬＴ−β−Ｒアゴニスト（膜結合ＬＴ−α／β複合体、可溶性ＬＴ−α／β複合体、および抗ＬＴ−β−Ｒ抗体が含まれる）ならびに調製および精製のための方法を記載する。
【００５９】
表面ＬＴ−α／βヘテロマー複合体を、ＬＴ−α遺伝子およびＬＴ−β遺伝子の両方での宿主細胞の同時トランスフェクションによって再構築することができる。表面ＬＴ複合体を、いずれかのＬＴ遺伝子のみを発現する安定な細胞株では認められない。しかし、通常、宿主細胞が大量のＬＴ−αを産生する場合（例えば、ＲＰＭＩ１７８８細胞；以下を参照のこと）、所望のＬＴ−βポリペプチドをコードするＬＴ−β遺伝子でのトランスフェクションは、全長ＬＴ−αサブユニットを含むＬＴ−α／β複合体の作製に十分なはずである。
【００６０】
多数の真核生物発現系でのＬＴ−αポリペプチドおよびＬＴ−βポリペプチドの同時発現により、そのアセンブリが得られ、活性リガンドとして搬出される（Ｃｒｏｗｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６８，７９−８９（１９９４））。使用することができる宿主系には、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、Ｂ細胞（骨髄腫が含まれる）、バキュロウイルス感染昆虫細胞、および酵母が含まれるが、これらに限定されない。本発明のＬＴ−α／βヘテロマー複合体のＬＴ−αサブユニットを、リンホトキシンα、天然のヒトまたは動物リンホトキシンα、組換えリンホトキシンα、可溶性リンホトキシンα、分泌性リンホトキシンα、ＬＴ−α生物活性を有するリンホトキシンα変異タンパク質、またはＬＴ−α生物活性を有する任意の上記のリンホトキシンαフラグメントから選択することができる。
【００６１】
可溶性（非膜結合）ＬＴ−α／βヘテロマー複合体は、膜結合形態から可溶性形態に変化したＬＴ−βサブユニットを含む。これらの複合体は、出願人の同時係属国際出願（１９９２年１月９日にＷＯ９４／１３８０８号として公開のＰＣＴ／ＵＳ９３／１１６６９）に詳述されている。可溶性ＬＴ−βペプチドを、Ｂｒｏｗｎｉｎｇら（１９９３）Ｃｅｌｌ  ７２：８４７の付番方式にしたがって、膜貫通領域の末端（すなわち、およそアミノ酸番号４４）と第１のＴＮＦ相同領域（すなわち、アミノ酸番号８８）との間の任意のポイントで配列が切断されたリンホトキシンβのアミノ酸配列によって定義する。
【００６２】
可溶性ＬＴ−βポリペプチドを、細胞質テールおよび膜貫通領域を除去するためのＬＴ−βのＮ末端の短縮によって産生することができる（Ｃｒｏｗら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６４，ｐｐ．７０７−７１０（１９９４））。あるいは、膜貫通ドメインを、欠失または通常は膜貫通ドメインを含む疎水性アミノ酸残基の親水性の残基への置換によって不活化することができる。いずれかの場合、脂質親和性を減少し、水溶性を改善する実質的に親水性のハイドロパシープロフィールを作成した。潜在的免疫原性エピトープの導入が回避されるので、親水性アミノ酸残基と置換して膜貫通ドメインを欠失させるのが好ましい。
【００６３】
可溶性ＬＴ−α／βヘテロマー複合体を、ＬＴ−αおよび可溶性ＬＴ−βをコードするＤＮＡでの適切な宿主細胞の同時トランスフェクションによって産生することができる（Ｃｒｏｗら，（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６８：７９）。ＬＴ−αの非存在下で分泌された可溶性ＬＴ−βは高度にオリゴマーを形成している。しかし、ＬＴ−αと同時発現した場合、両タンパク質を含む７０ｋＤａの三量体様構造が形成される。可溶性ＬＴ−βポリペプチドをコードする遺伝子での通常はＬＴ−αのみを発現する細胞株（上記考察のＲＰＭＩ１７８８細胞など）へのトランスフェクションによって可溶性ＬＴ−α１／β２ヘテロマー複合体を産生することも可能である。ＬＴ−αおよびＬＴ−βポリペプチドを個別に合成し、中性界面活性剤を使用して変性させ、共に混合し、界面活性剤の除去によって復元して分離することができる混合ＬＴヘテロマー複合体を形成することができる（以下を参照のこと）。
【００６４】
一定の実施形態では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストは抗ＬＴ−β−Ｒ抗体であり得る。一定の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は、ポリクローナル抗体であり得る。免役化後、ＬＴ−β−Ｒと反応性を示す抗血清を得ることができ、所望ならば、血清からポリクローナル抗体を単離することができる。別の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体はモノクローナル抗体である。一定の実施形態では、モノクローナル抗体を、ＢＫＡ１１、ＣＤＨ１０、ＢＣＧ６、ＡＧＨ１、ＢＤＡ８、ＣＢＥ１１、およびＢＨＡ１０からなる群から選択することができる。モノクローナル抗体を産生するために、抗体産生細胞（リンパ球）を、免役化動物から採取し、標準的な体細胞融合手順によって骨髄腫細胞などの不死化細胞と融合してハイブリドーマ細胞を得ることができる。このような技術は当該分野で周知であり、例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂａｒら，（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，４：７２）としてのハイブリドーマ技術（最初、Ｋｏｈｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７によって開発された）およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶ─ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，（１９８５）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．ｐｐ．７７−９６）が含まれる。ハイブリドーマ細胞を、ＬＴ−β−Ｒと特異的な反応性を示す抗体および単離されたモノクローナル抗体の産生について免疫化学的にスクリーニングすることができる。一定の実施形態では、本発明で使用するためのモノクローナル抗体を、表１中の細胞株からなる群から選択される細胞株によって産生することができる。
【００６５】
【表１】
2006513225.tif 000002
他の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体はヒト化抗体である。一定の実施形態では、ヒト化抗体を、ｈｕＣＢＥ１１およびｈｕＢＨＡ１０からなる群から選択することができる。１つの実施形態では、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０２／３０９８６；米国仮特許出願番号６０／２４０，２８５号；米国仮特許出願番号６０／２７５，２８９号；米国仮特許出願番号６０／２９９，９８７号に記載のように、ヒト化抗体はｈｕＣＢＥ１１である。別の実施形態では、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴＵＳ０３／２０７６２号；米国仮特許出願番号６０／３９２，９９３号；および米国仮特許出願番号６０／４１７，３７２号に記載のように、ヒト化抗体はｈｕＢＨＡ１０である。
【００６６】
上記表中の出願人の出願（その内容全体が本明細書中で参考として援用される）は、癌細胞死を誘発するためのｈｕＣＢＥ１１およびｈｕＢＨＡ１０をそれぞれ使用した癌治療のための方法および組成物を記載する。動物を所望の抗原で免役化し、対応する抗体を単離し、特異的抗原結合を担う可変領域配列部分を取り出す。次いで、動物由来の抗原結合領域を、抗原結合領域が欠失したヒト抗体遺伝子の適切な位置にクローン化する。例えば、Ｊｏｎｅｓ，Ｐら（１９８６），Ｎａｔｕｒｅ  ３２１，５２２−５２５またはＴｅｍｐｅｓｔら（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９，２６６−２７３を参照のこと。また、トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動物を使用して、ヒト化抗体を発現することができる。このようなヒト化は、部分的であっても完全であってもよい。ヒト化抗体は、ヒト抗体中のヒト抗体中の異種（種間）配列の使用を最小にし、処置した被験体において免疫応答を誘発する可能性が低い。一定の実施形態では、本発明で使用するためのヒト化抗体を、Ｅ４６．４（ＡＴＣＣ特許受託番号ＰＴＡ−３３５７）または細胞株Ｅ７７．４（ＡＴＣＣ特許受託番号３７６５）からなる群から選択される細胞株によって産生することができる。
【００６７】
抗ＬＴ−β−Ｒ抗体の種々の形態を、標準的な組換えＤＮＡ技術（ＷｉｎｔｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３４９，ｐｐ．２９３−９９（１９９１））を使用して作製することもできる。例えば、動物抗体由来の抗原結合ドメインがヒト定常ドメインに連結した「キメラ」抗体を構築することができる（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに付与された米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１，ｐｐ．６８５１−５５（１９８４））。キメラ抗体は、ヒト臨床治療で使用した場合に動物抗体によって誘発される免疫応答を減少させる。異なるクラスの免疫グロブリンから単離された抗ＬＴ−β−Ｒ可変ドメインおよびヒト定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）を含むキメラ抗体またはヒト化抗体の作製によって、組換え抗ＬＴ−β−Ｒ抗体の異なるクラスを構築することもできる。例えば、抗原結合部位の価数が増加した抗ＬＴ−β−Ｒ  ＩｇＭ抗体を、ヒトμ鎖定常領域を保有するベクターへの抗原結合部位のクローニングによって組換え産生することができる（Ａｒｕｌａｎａｎｄａｍら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７７，ｐｐ．１４３９−５０（１９９３）；Ｌａｎｅら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２２，ｐｐ．２５７３−７８（１９９３）；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３３９，ｐｐ．６８−７０（１９８９））。さらに、標準的な組換えＤＮＡ技術を使用して、抗原結合部位周囲のアミノ酸残基の変化によって組換え抗体のその抗原に対する結合親和性を変化させることができる。例えば、（Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８６，ｐｐ．１００２９−３３（１９８９）；ＷＯ９４／０４６７９号）を参照のこと。
【００６８】
当該分野で公知のように、本発明の抗ＬＴ−β−Ｒ抗体を架橋することもできる。架橋後の最終結合体は、血液などの生理液に可溶性を示すことが好ましい。ポリマーは結合体形態で高免疫原性であるべきでなく、静脈内注入または注射のいずれかの投与経路を意図する場合、これらに適合可能な粘度を有するべきである。
【００６９】
さらに他の実施形態では、抗ＬＴ−β−Ｒ抗体は多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体構築物であり、一定の実施形態では、多特異性であり得る。このような多価抗体構築物ならびにその作製および使用方法の例は、同日付で発明の名称が「Ａｎｔｉ−ＬＴ−β−Ｒ  Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓ，ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  ａｎｄ  Ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｓａｍｅ」（その全体が本明細書中で参考として援用される）である米国仮特許出願番号６０／４３５，１５４号およびＰＣＴ出願番号 号に記載されている。
【００７０】
１つの実施形態では、多価抗体はリンホトキシンβ受容体のアゴニストであり、受容体に結合することができる少なくとも２つのドメインを含み、ＬＴ−β−Ｒシグナル伝達を誘導する。これらの構築物は、ＬＴ−β受容体への結合に特異的な抗原認識部位を含む２つまたはそれ以上の可変領域を含む重鎖および１つまたは複数の可変領域を含む軽鎖を含むか、ＬＴ−β受容体への結合に特異的なＣＤＲを含む２つまたはそれ以上の可変領域を含む重鎖または軽鎖のみを含む様に構築することができる。
【００７１】
１つの態様では、本発明は、ヒトリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストである多価抗体構築物を含む。１つの実施形態では、多価抗体構築物は、ＬＴ−β−Ｒエピトープに特異的な少なくとも１つの抗原認識部位を含む。一定の実施形態では、少なくとも１つの抗原認識部位はｓｃＦｖドメイン内に存在する一方で、他の実施形態では、全ての抗原認識部位はｓｃＦｖドメイン内に存在する。
【００７２】
抗体構築物は、２価、３価、４価、または５価であり得る。一定の実施形態では、抗体構築物は単一特異性である。１つの実施形態では、抗体構築物は、ＣＢＥ１１に結合するエピトープに特異的である。他の実施形態では、本発明の抗体は、４つのＣＢＥ１１抗原認識部位を含む単一特異性の４価のＬＴ−β−Ｒアゴニスト抗体である。別の実施形態では、抗体構築物は、ＢＨＡ１０エピトープに特異的であり、いくつかの実施形態では、４価である。任意のこれらの実施形態では、少なくとも１つの抗原認識部位は、ｓｃＦｖ上に存在し得るが、一定のこれらの実施形態では、全ての抗原認識部位がｓｃＦｖドメイン上に存在し得る。抗体は、本発明の抗体がヒトＬＴ−β受容体上の異なるエピトープに結合する多価であり得る。
【００７３】
一定の実施形態では、抗体構築物は二重特異性である。他の実施形態では、抗体構築物は、以下の抗体の１つが結合するエピトープからなるリンホトキシンβ受容体（ＬＴ−β−Ｒ）エピトープ群の少なくとも２つのメンバーに特異的である：ＢＫＡ１１、ＣＤＨ１０、ＢＣＧ６、ＡＧＨ１、ＢＤＡ８、ＣＢＥ１１、およびＢＨＡ１０。１つの実施形態では、抗体構築物は、ＣＢＥ１１およびＢＨＡ１０抗体が結合するエピトープに特異的であり、一定の実施形態では、４価である。１つの実施形態では、抗体構築物は、２つのＣＢＥ１１特異的抗原認識部位および２つのＢＨＡ１０特異的認識部位を有し、抗体は二重特異性の４価ＬＴ−β−Ｒアゴニスト抗体である。任意の多特異性抗体構築物では、少なくとも１つの抗原認識部位は、ｓｃＦｖドメイン上に存在することができ、一定の実施形態では、全ての抗原認識部位はｓｃＦｖドメイン上に存在する。
【００７４】
さらに他の実施形態では、本発明の抗体構築物は、以下のポリヌクレオチド配列を含み、表２のポリペプチド配列をコードする。
【００７５】
【表２】
2006513225.tif 000003
配列番号１１〜１４に記載の重鎖および軽鎖を含む五量体ＣＢＥ１１構築物をスクリーニングアッセイで使用して、併用療法を同定することもできる。
【００７６】
抗原認識部位または全可変領域は、１つまたは複数の親抗体に由来し得る。親抗体には、天然に存在する抗体もしくは抗体フラグメント、天然に存在する抗体を適合させた抗体もしくは抗体フラグメント、ＬＴ−β受容体に特異的であることが公知の抗体もしくは抗体フラグメントの配列を使用してデノボで構築した抗体が含まれ得る。親抗体に由来し得る配列には、重鎖および／または軽鎖可変領域および／またはＣＤＲ、フレームワーク領域、またはその他の部分が含まれる。
【００７７】
多価多特異性抗体は、２つまたはそれ以上の可変領域を含む重鎖および／または１つまたは複数の可変領域を含む軽鎖を含み得るが、可変領域の少なくとも２つがＬＴ−β受容体上の異なるエピトープを認識する。
【００７８】
多価多特異的抗体の作製方法は当該分野で公知である。全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の無作為な組み合わせにより、これらのハイブリドーマ（クアドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａ））は、１０個の異なる抗体分子の潜在的混合物を産生し、そのうちのたった１つが正確な二重特異性構造を有する。通常はアフィニティクロマトグラフィ工程によって行われる正確な分子の精製はむしろ扱いにくく、産物の収率は低い。類似の手順は、ＷＯ９３／０８８２９号およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【００７９】
多価抗ＬＴ−β−Ｒ抗体を、親抗ＬＴ−β−Ｒ抗体（マウスまたはヒト化ＢＨＡ１０（Ｂｒｏｗｎｉｎｇら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：３３（１９９５）；ＢｒｏｗｎｉｎｇらＲ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：８６７（１９９６））および／またはマウスまたはヒト化ＣＢＥ１１（米国特許第６，３１２，６９１号）が含まれる）由来の種々の異なる配列を使用した種々の異なる方法で構築することができる。
【００８０】
異なるアプローチによれば、所望の結合特異性（抗体−抗原組み合わせ部位）を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。融合は、好ましくは、少なくともヒンジの一部、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを使用する。少なくとも１つの融合物中に存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物および所望ならば免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、個別の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクトする。構築で使用される不釣り合いな比の３つのポリペプチド鎖により適切な収率がえられる実施形態では、これにより３つのポリペプチドフラグメントの相互の性質の調整が非常に柔軟になる。しかし、少なくとも２つのポリペプチド鎖の同一の比での発現により収率が高くなるかその比が特に有意でない場合、１つの発現ベクター中の２つまたは３つ全てのポリペプチド鎖のコード配列を挿入することが可能である。
【００８１】
本発明の別の実施形態は、非ヒト動物（１つまたは複数ヒト免疫グロブリン導入遺伝子を保有するトランスジェニック動物など）で産生することができるヒト抗ＬＴ−β−Ｒ抗体の使用を含む。米国特許第５，５６９，８２５号、ＷＯ０００７６３１０号、ＷＯ０００５８４９９号、およびＷＯ０００３７５０４号（本明細書中で参考として援用される）に記載のように、このような動物をハイブリドーマ産生用の脾臓細胞供給源として使用することができる。
【００８２】
いくつかの実施形態では、所望の効果を得るために、本発明の抗体および抗体フラグメントを化学修飾することができる。例えば、以下の参考文献に記載の当該分野で公知の任意のペグ化反応によって、本発明の抗体および抗体フラグメントをペグ化することができる：Ｆｏｃｕｓ  ｏｎ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ３：４−１０（１９９２）；欧州特許第０１５４３１６号；および欧州特許第０４０１３８４号（それぞれその全体が本明細書中で参考として援用される）。好ましくは、反応性ポリエチレングリコール分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応によってペグ化する。本発明の抗体および抗体フラグメントのペグ化のための好ましい水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。本明細書中で使用される、「ポリエチレングリコール」は、他のタンパク質の誘導で使用されている任意のＰＥＧ形態（モノ（Ｃｌ−ＣｌＯ）アルコキシ−またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールなど）を含むことを意味する。
【００８３】
本発明のペグ化抗体および抗体フラグメントの調製方法は、一般に、（ａ）抗体または抗体フラグメントが１つまたは複数のＰＥＧ基に結合するようになる条件下で、抗体または抗体フラグメントをＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコールと反応させる工程と、（ｂ）反応生成物を得る工程とを含む。公知のパラメーターおよび所望の効果に基づいて至適な反応条件またはアシル化反応を選択することが当業者に明らかである。
【００８４】
一般にペグ化抗体および抗体フラグメントを使用して、本明細書中に記載の抗体および抗体フラグメントの投与によって緩和するか調整することができる病態を処置することができる。一般に、ペグ化抗体および抗体フラグメントは、非ペグ化抗体および抗体フラグメントと比較して半減期が増大した。ペグ化抗体および抗体フラグメントを、単独、共に、または他の薬学的組成物と組み合わせて使用することができる。
【００８５】
本発明の他の実施形態では、当該分野で認識されている技術を使用して、抗体またはその抗原結合フラグメントを卵白に結合する。
【００８６】
本発明の別の実施形態では、潜在的なグリコシル化部位を減少または消失するために抗体またはそのフラグメントを修飾する。このような修飾抗体を、しばしば「グリコシル化」抗体という。抗体またはその抗原結合フラグメントの結合親和性を改良するために、例えば、変異誘発（例えば、部位特異的変異誘発）によって抗体のグリコシル化部位を変化させることができる。「グリコシル化部位」は、糖残基結合のための位置として真核細胞によって認識されるアミノ酸残基をいう。オリゴサッカリドなどの炭水化物が結合するアミノ酸は、典型的には、アスパラギン残基（Ｎ結合）、セリン残基（Ｏ結合）、およびトレオニン残基（Ｏ結合）である。抗体または抗原結合フラグメント内の潜在的なグリコシル化部位を同定するために、抗体の配列を、例えば、Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓによって提供されているウェブサイトなどの公的に利用可能なデータベース（Ｎ結合グリコシル化部位の予想については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋｌｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＮＧｌｙｃ／を参照のこと）およびＯ結合グリコシル化部位についてはｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＯＧｌｙｃ／）の使用によって試験する。抗体のグリコシル化部位をさらに変化させる方法は、米国特許第６，３５０，８６１号および同第５，７１４，３５０号に記載されている。
【００８７】
本発明のさらに別の実施形態では、非修飾抗体と関して少なくとも１つの定常領域媒介生物エフェクター機能を減少させるために抗体の定常領域を修飾して抗体またはそのフラグメントを変化させることができる。Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への結合が減少するように本発明の抗体を修飾するために、抗体の免疫グロブリン定常領域セグメントを、ＦｃＲ相互作用に必要な特定の領域で変異することができる（例えば、Ｃａｎｆｉｅｌｄら（１９９１）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３およびＬｕｎｄ，Ｊ．ら（１９９１）Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２６５７を参照のこと）。抗体のＦｃＲ結合能力の減少により、オプソニン作用、食作用、および抗原依存性細胞傷害性などのＦｃＲ相互作用に依存する他のエフェクター機能を減少させることもできる。
【００８８】
特定の実施形態では、本発明は、さらに、エフェクター分子（例えば、エフェクター細胞上の補体または受容体）に結合する能力などのエフェクター機能が変化した抗体を特徴とする。特に、本発明のヒト化抗体は、Ｆｃ領域中の少なくとも１つのアミノ酸残基が異なる残基または側鎖に置換され、それにより抗体のＦｃＲに結合する能力が減少した、変化した定常領域（例えば、Ｆｃ領域）を有する。抗体のＦｃＲ結合能力の減少により、オプソニン作用、食作用、および抗原依存性細胞傷害性などのＦｃＲ相互作用に依存する他のエフェクター機能を減少させることもできる。１つの実施形態では、修飾ヒト化抗体はＩｇＧクラスであり、ヒト化抗体は、例えば、非修飾ヒト化抗体と比較してエフェクター機能が変化するようにＦｃ領域中で少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されている。特定の実施形態では、本発明のヒト化抗体は、免疫原性が低く（例えば、望ましくないエフェクター細胞活性、溶解、または補体結合を誘発しない）、そして／またはより望ましい半減期を有しながらＬＴβＲまたはそのリガンドに対する特異性を保持するような変化したエフェクター機能を有する。
【００８９】
あるいは、本発明は、ＦｃＲ結合（例えば、ＦｃγＲ３結合）を増強するために定常領域を変化させたヒト化抗体を特徴とする。このような抗体は、エフェクター細胞機能の調整（例えば、ＡＤＣＣ活性の増加）、例えば、特に、本発明の腫瘍学での使用に有用である。
【００９０】
本明細書中で使用される、「抗体依存性細胞媒介細胞傷害性」および「ＡＤＣＣ」は、ＦｃＲを発現する非特異的細胞傷害細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後標的細胞を溶解させる細胞媒介反応をいう。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞（ＮＫ細胞）は、抗体（例えば、抗体の結合体および別の薬剤または抗体）のＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対して、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。
【００９１】
さらに別の実施形態では、相乗様式で腫瘍体積を抑制するために、本発明の抗ＬＴ−β−Ｒ抗体を化学療法剤に結合することができる。本発明の抗体に結合することができる化学療法剤の例には、放射性結合体（ｒａｄｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（９０Ｙ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１８６Ｒｎなど）、腫瘍活性化プロドラッグ（メイタンシノイド、ＣＣ−１０６５アナログ、クリケアミシン（ｃｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）誘導体、アントラサイクリン、ビンカアルカロイドなど）、リシン、ジフテリア毒素、シュードモナス外毒素が含まれるが、これらに限定されない。
【００９２】
他のＬＴ−β−Ｒアゴニスト（インビトロ腫瘍細胞傷害性アッセイを使用して同定したものが含まれるが、これらに限定されない）は、動物またはヒトに単独で投与するか組み合わせて投与した場合にインビボで類似の抗腫瘍効果を示し得ると考えられる。
【００９３】
腫瘍細胞に対するＬＴ−β−Ｒアゴニストの細胞傷害効果を、ＬＴ−β−Ｒ活性化薬（特に、ＩＦＮγ）の存在によって増強することができる。インターフェロン（好ましくは、ＩＦＮγ）を誘導することができ、且つ腫瘍細胞に対するＬＴ−α／βヘテロマー複合体および抗ＬＴ−β−Ｒ抗体の細胞傷害効果を強化する任意の薬剤は、本発明のＬＴ−β−Ｒアゴニスト群に分類される。例えば、臨床試験によって二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）処理によるインターフェロン誘導が証明されている。したがって、ポリリボグアニル酸／ポリリボシチジル酸（ポリ−ｒＧ／ｒＣ）およびｄｓＲＮＡの他の形態は、インターフェロンインデューサーとして有効である（ＪｕｒａｓｋｏｖａらＥｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２２１，ｐｐ．１０７−１１（１９９２））。
【００９４】
上記のように産生されたＬＴ−β−Ｒアゴニストを、薬学的組成物として使用するために適切な純度に精製することができる。一般に、精製組成物は、組成物中に存在する全ての種の約８５％超、存在する全ての種の約８５％、９０％、９５％、９９％、またはそれ以上含まれる１つの種を有する。本発明の種を、組成物が本質的に単一の種からなるように本質的に均一に精製することができる（従来の検出方法では組成物中に汚染種を検出することができない）。当業者は、本明細書中の教示に照らしてタンパク質精製のための標準的な技術を使用して本発明のポリペプチドを精製することができる。当業者に公知の多数の方法（例えば、アミノ末端アミノ酸配列分析、ゲル電気泳動、および質量分析が含まれる）によって、ポリペプチドの純度を決定することができる。
【００９５】
（３．ＬＴ−βＲアゴニストおよび化学療法剤の相乗的抑制）
（３．１  化学療法剤）
本発明は、癌を治療するための化学療法剤と組み合わせたリンホトキシン−β受容体アゴニストの使用を提供する。同様に、アゴニストと薬剤との組み合わせによりアゴニストおよび薬剤のみの効果の単純な和による予想よりも高い腫瘍抑制が達成される場合、任意の種々の化学療法剤を、本発明の方法で使用するか試験することができる。化学療法剤を、どのようにして癌細胞内で特定の化学物質に影響を与えるのか、薬物がどの細胞作用またはプロセスを妨害するのか、および薬物がどの細胞周期の特定の時期に影響を与えるのかに基づいていくつかのカテゴリーに分類する。
【００９６】
一定の実施形態では、化学療法剤はＤＮＡ合成を妨害する薬剤である。１つの実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤はヌクレオシドアナログ化合物である。一定の実施形態では、ヌクレオシドアナログ化合物はゲムシタビンである。別の実施形態では、ＤＮＡ合成を妨害する薬剤はアントラサイクリン化合物であり、一定の実施形態では、アントラサイクリン化合物はアドリアマイシンである。
【００９７】
他の実施形態では、化学療法剤はトポイソメラーゼＩインヒビターである。一定の実施形態では、トポイソメラーゼＩインヒビターはカンプトサールである。
【００９８】
他の実施形態における化学療法剤は、アルキル化剤である。アルキル化剤は、ＤＮＡに直接作用して癌細胞の再生を防止する。１つの薬物クラスとして、これらの薬剤は周期特異的ではない（言い換えれば、これらは細胞周期の全ての時期で作用する）。アルキル化剤は、一般に、慢性白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、ならびに肺、乳房、および卵巣の一定の癌に有効である。アルキル化剤の例には、ブスルファン、シスプラチン、カルボプラチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、およびメルファランが含まれる。１つの実施形態では、アルキル化剤は白金化合物であり、一定の実施形態では、カルボプラチンおよびシスプラチンからなる群から選択することができる。一定の実施形態では、白金化合物はシスプラチンである。
【００９９】
さらに他の実施形態では、化学療法剤は植物アルカロイドである。１つの実施形態では、植物アルカロイドはタキサン（例えば、タキソールが含まれる）である。
【０１００】
種々の形態の化学療法剤および／または他の生物活性薬を使用することができる。これらには、腫瘍に移植するか、注射するか、挿入した場合に生物学的に活性である非電荷分子、分子複合体、塩、エーテル、エステル、アミドなどの形態が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０１】
（３．２  相乗的化学療法剤のスクリーニング）
本発明は、リンホトキシン−β受容体（ＬＴ−β−Ｒ）アゴニストを投与した場合に腫瘍体積抑制に相乗効果を示す化学療法剤のスクリーニング方法を提供する。１つの実施形態では、このような方法は、（ａ）試験被験体中の第１の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストとを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、（ｂ）試験被験体中の比較可能な第２の腫瘍と候補化学療法剤とを接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、（ｃ）試験被験体中の比較可能な第３の腫瘍とＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方と接触させて腫瘍体積の抑制を測定する工程と、ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤の両方の存在下での腫瘍体積の抑制がそれぞれのＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび候補化学療法剤による腫瘍体積抑制の合計よりも大きい場合、候補化学療法剤が腫瘍体積抑制に相乗効果を示すと見なされることとを含む。
【０１０２】
本明細書中で使用される「腫瘍の相乗的抑制」は、ＬＴ−β−Ｒアゴニストのみまたは化学療法剤のみのいずれかの個別の投与によって得られる腫瘍抑制の合計よりも統計的に有意に高いＬＴ−β−Ｒアゴニストと化学療法剤との組み合わせの投与によって得られる平均腫瘍抑制をいう。ＬＴ−β−Ｒアゴニストと化学療法剤との組み合わせ投与によって得られた腫瘍抑制が個別の化合物の予想される値の和よりも「統計的に有意に高い」かどうかを、以下のように決定することができる。上記定義のように、このような相乗的抑制を増強するか、協力性であり得る。
【０１０３】
一般に、組み合わせ治療によって、治療群における個別の治療によってそれぞれ得られた平均腫瘍体積の減少の合計と比較して治療群で統計的に有意に相乗的に平均腫瘍体積が減少するかどうかの決定によって増強を評価することができる。平均腫瘍体積の減少を、コントロール群と治療群の間の平均腫瘍体積の減少の相違として計算することができる。腫瘍体積の抑制率（影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算することができる。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。統計的に有意な増強の試験には、各治療群のＦａの計算が必要である。組み合わせのいずれかの成分を投与した群由来の平均Ｆａの合計となるように、組み合わせ治療についての予想されるＦａの和を取った。例えば、両側１サンプルｔ検定を使用して、ｐ値によって計算したところ試験によって得られた結果が偶然のみにどの程度起因する可能性があるかを評価することができる。０．０５未満のｐ値が統計的に有意であると見なされ（すなわち、偶然のみに起因する可能性がない）、約０．０５と約０．０４との間、約０．０４と約０．０３との間、約０．０３と約０．０２との間、約０．０２と約０．０１との間が含まれるが、これらに限定されない。一定の場合、ｐ値は０．０１未満であり得る。したがって、組み合わせにより相乗効果が増強されると見なすためには、組み合わせ治療群のＦａは、単一成分での治療群についての予想されるＦａの和よりも統計的に有意に高くなければならない。
【０１０４】
相乗効果が組み合わせ治療に起因するかどうかを、半数影響／組み合わせ指数アイソボログラム法によって評価することができる（Ｃｈｏｕ，Ｔ．，ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ，Ｐ．（１９８４）Ａｄ．Ｅｎｚｙｔｎｅ  Ｒｅｇ．，２２：２７−５５）。この方法では、ＬＴ−β−Ｒアゴニストのみ、化学療法剤のみ、および固定モル比での２つの組み合わせの半数影響プロット由来のパラメーターに基づいて、異なる用量−効果レベルについての組み合わせ指数（ＣＩ）値を計算する。１未満のＣＩ値は相乗効果を示し、約０．８５と約０．９０との間、約０．７０と約０．８５との間、約０．３０と約０．７０との間、約０．１０と約０．３０との間が含まれるが、これらに限定されない。さらに別の実施形態では、組み合わせ指数は０．１０未満である。この分析を、ＣａｌｃｕＳｙｎ（用量効果分析のためのＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ））を使用して実施することができる。
【０１０５】
併用療法について相乗効果を示すかどうかを分析するために当該分野で公知であるか後に開発された任意の方法は、適切な化学療法剤のスクリーニングでの使用が意図される。
【０１０６】
本発明の１つの実施形態では、癌治療で組み合わせた相乗効果を示すＬＴ−β−Ｒアゴニスト／化学療法剤の組み合わせを、当該分野で公知のスクリーニングアッセイ（腫瘍体積の抑制を試験するアッセイが含まれる）によって同定する。腫瘍体積は、一般に、化合物または化合物の組み合わせの抗癌有効性の評価のための代用物として使用される（例えば、Ｎａｕｎｄｏｒｆら（２００２）Ｉｎｔ．Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，１００：１０１；Ｇｏｅｌ．ら（２００１）Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７：１７５；Ｌｉａｏら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：６８０５；Ｐｒｅｗｅｔｔら（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：５２０９；Ｂｏｕｄｒｅａｕ  Ｍ．Ｄ．ら（２００１）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１：１３８６を参照のこと）。異種移植片モデルを使用して、腫瘍体積を研究することができる。潜在的アゴニスト／化学療法剤のスクリーニングに使用される異種移植片モデルの例には、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌およびＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺癌が含まれる。抗Ｅｒｂ２抗体ヘルセプチン（米国特許第６，６２７，１９６号を参照のこと）および抗ＶＥＧＦ抗体（米国特許第５，９５５，３１１号を参照のこと）のマウスモデルを使用した腫瘍体積の減少または抑制についても記載されている。腫瘍サイズ（例えば、腫瘍体積）の評価ガイドラインは、「ＮＣＩ−ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  ｇｒｏｕｐ−ｉｎｄｕｓｔｒｙ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，ａｐｐｅｎｄｉｘ  ＸＶＩＩ（Ｓｔａｔｕｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＮＣＩ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｇｅｎｔ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｓｃｒｅｅｎ，ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｕｐｄａｔｅｓ）」に記載されている。
【０１０７】
抗体および／または化学療法化合物の抗癌効果の他の評価方法には、生存率および死亡率の分析ならびに適切な場合の分子マーカーの評価（例えば、前立腺癌のＰＳＡ、結腸癌のＴＰＡ）が含まれ、このようなマーカーのレベルを化合物の抗癌活性の評価において評価することができる。
【０１０８】
（４．薬学的組成物および送達デバイス）
（４．１  薬学的組成物）
本発明は、上記ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤を含む薬学的組成物を提供する。１つの態様では、本発明は、１つまたは複数の薬学的に受容可能なキャリア（添加物）および／または希釈剤とともに処方した治療有効量の１つまたは複数の上記化合物を含む薬学的に受容可能な組成物を提供する。別の態様の一定の実施形態では、本発明の化合物自体または薬学的に受容可能なキャリアとの混合物として投与することができ、他の化学療法剤と組み合わせて投与することもできる。したがって、組み合わせ（併用）療法には、第１の投与物の治療効果がその後の投与で完全に消滅しない方法での活性化合物の連続的、同時、および個別、または同時投与が含まれる。
【０１０９】
選択された投与経路に無関係に、適切な水和形態で使用することができる本発明の化合物および／または本発明の薬学的組成物を、当業者に公知の従来の方法によって薬学的に受容可能な投薬形態に処方する。本発明の化合物を単独で投与することが可能であるが、薬学的処方物（組成物）として化合物を投与することが好ましい。本発明の化合物を、ヒトまたは動物の薬物のための任意の従来の方法において他の医薬品との類推によって投与のために処方することができる。
【０１１０】
以下で詳述するように、本発明の薬学的組成物を、固体または液体形態（以下に適合する形態が含まれる）での投与のために特に処方することができる：（１）経口投与（例えば、飲薬（水性または非水性溶液または懸濁液）、錠剤（例えば、口腔内用、舌下用、および全身吸収用））、ボーラス、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペースト、（２）例えば、皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注射による非経口投与（例えば、滅菌溶液もしくは懸濁液または徐放性処方物）、（３）例えば、クリーム、軟膏、徐放性パッチ、または皮膚に適用するスプレーとしての局所塗布、（４）膣内または直腸内（例えば、ペッサーリー、クリーム、またはフォームとして）、（５）舌下、（６）眼内、（７）経皮、または（８）鼻腔内。１つの実施形態では、非経口投与のために薬学的組成物を処方する。別の実施形態では、動脈内注射のために薬学液組成物を処方する。別の実施形態では、全身投与のために薬学的組成物を処方する。
【０１１１】
他の場合、本発明の化合物は、１つまたは複数の酸性官能基を含むことができるので、薬学的に受容可能な塩基と薬学的に受容可能な塩を形成することができる。
【０１１２】
湿潤剤、乳化剤、および潤滑剤（ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなど）、ならびに着色料、遊離薬、コーティング剤、甘味料、香味物質、防腐剤、および抗酸化剤を組成物中に含めることもできる。
【０１１３】
本発明の処方物には、経口、鼻腔内、局所（口腔内および舌下が含まれる）、直腸、膣内、および／または非経口投与に適切な処方物が含まれる。処方物は、単位投薬形態で存在することが都合がよく、薬学分野で周知の任意の方法によって調製することができる。単回投薬形態を得るためにキャリア材料と混合物することができる有効成分の量は、治療を受ける宿主、特に投与様式によって変化する。単回投薬形態を得るためにキャリア材料と混合することができる有効成分の量は、一般に、治療効果が得られる化合物の量である。
【０１１４】
本発明の化合物の経口投与のための液体投薬形態には、薬学的に受容可能な乳濁液、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。有効成分に加えて、液体投薬形態は、当該分野で一般的に使用されている不活性希釈剤（例えば、水または他の溶媒など）、可溶化剤および乳化剤（エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなど）、オイル（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステルならびにその混合物を含み得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、潤滑剤、乳化剤、および懸濁剤などのアジュバント、甘味料、香味物質、着色料、香料、および防腐剤も含み得る。活性化合物に加えて、懸濁液は、懸濁剤（例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、ソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天−寒天、およびトラガカントならびにその混合物）を含み得る。
【０１１５】
経口投与に適切な本発明の処方物は、それぞれ有効成分として所定量の本発明の化合物を含む、カプセル、カシェ、丸薬、錠剤、ロゼンジ（香りづけをした基剤（通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント）を使用）、粉末、顆粒、または水性もしくは非水性の溶液または懸濁液、水中油滴型もしくは油中水滴型乳濁液、エリキシルもしくはシロップ、香錠（ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースおよびアカシアなどの不活性基剤を使用）、および／または洗口剤などの形態であり得る。本発明の化合物を、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与することもできる。
【０１１６】
経口投与のための本発明の固体投薬形態（カプセル、錠剤、丸薬、ドラジェ、粉末、および顆粒など）では、有効成分を、１つまたは複数の薬学的に受容可能なキャリア（クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウムなど）および／または任意の以下と混合する：（１）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、および／またはケイ酸などの充填剤または増量剤、（２）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、および／またはアカシアなどの結合剤、（３）グリセロールなどの保湿剤（４）寒天−寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカのデンプン、アルギン酸、一定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、（５）パラフィンなどの溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、（６）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、（７）例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセロール、および非イオン性界面活性剤などの湿潤剤、（８）カオリンおよびベントナイトクレイなどの吸収剤、（９）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびその混合物などの潤滑剤、ならびに（１０）着色料。カプセル、錠剤、および丸薬の場合、薬学的組成物は緩衝剤も含み得る。ラクトースまたは乳糖などの賦形剤および高分子量のポリエチレングリコールなどを使用して、軟カプセルおよび硬ゼラチンカプセルで類似の型の固体組成物を充填剤として使用することもできる。
【０１１７】
任意選択的に１つまたは複数の副成分を使用して、圧縮または成形によって錠剤を作製することができる。結合剤（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムまたは架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤、または分散剤を使用して、圧縮錠剤を調製することができる。適切な装置での不活性液体希釈剤で湿らせた粉末化合物の混合物の成形によって、成形錠剤を作製することができる。任意選択的に、本発明の薬学的組成物の錠剤または他の固体投薬形態（ドラジェ、カプセル、丸薬、および顆粒など）を、腸溶性コーティングおよび医薬品処方分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを使用して得るか調製することができる。例えば、所望の放出プロフィールを得るための種々の比でのヒドロキシプロピルセルロース、他のポリマーマトリクス、リポソーム、および／またはミクロスフィアを使用して有効成分を持続的に放出するか徐放するようにこれらを処方することもできる。急速放出のためにこれらを処方することができる（例えば、凍結乾燥）。例えば、細菌保持フィルターによる濾過または使用直前に滅菌水もしくはいくつかの他の滅菌注射液に溶解することができる滅菌固体組成物の形態での滅菌剤の組み込みによってこれらを滅菌化させることができる。これらの組成物はまた、任意選択的に、乳白剤も含むことができ、有効成分のみを優先的には胃腸管の一定の部分に任意選択的には徐放様式で放出する組成物であり得る。使用することができる包埋組成物の例には、高分子剤およびワックスが含まれる。有効成分はまた、適切な場合、１つまたは複数の上記賦形剤を含むマイクロカプセル化形態であり得る。
【０１１８】
本発明の化合物の局所投与または経皮投与のための投薬形態には、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤が含まれる。活性化合物を、滅菌条件下で必要とされ得る薬学的に受容可能なキャリア、任意の防腐剤、緩衝液、または噴射剤と混合することができる。本発明の活性化合物に加えて、軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、動物性脂肪および植物性脂肪、オイル、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、および酸化亜鉛、またはその混合物などの賦形剤を含み得る。本発明の活性化合物に加えて、粉末およびスプレーは、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物などの賦形剤を含み得る。スプレーは、さらに、フロンガスなどの慣習的噴射剤ならびにブタンおよびプロパンなどの揮発性非置換炭化水素を含み得る。
【０１１９】
非経口投与に適切な本発明の薬学的組成物は、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、処方物を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質、懸濁剤、または増粘剤を含み得る１つまたは複数の薬学的に受容可能な滅菌等張水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液、乳濁液、または使用直前に滅菌注射用溶液または分散液に再構成することができる滅菌粉末と組み合わせた１つまたは複数の本発明の化合物を含む。これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含み得る。本発明の化合物に対する微生物作用の防止を、種々の抗菌薬および抗真菌薬（例えば、パラベン、クロロブタノール、およびソルビン酸フェノールなど）の封入によって確実にすることができる。等張化剤（糖および塩化ナトリウムなど）などを組成物に含めることも望ましい。さらに、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤の封入によって注射可能な薬学的形態の吸収を延長することができる。
【０１２０】
いくつかの場合、薬物の効果を延長するために、皮下注射または筋肉内注射からの薬物の吸収を遅延させることが望ましい。水溶性の低い結晶または無定型材料の液体懸濁物の使用によってこれを行うことができる。次いで、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、言い換えると、結晶サイズおよび結晶形態に依存し得る。あるいは、非経口投与薬物形態の吸収を、オイル賦形剤中の薬物の溶解または懸濁によって遅延する。
【０１２１】
ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中での本発明の化合物のマイクロカプセルマトリクスの形成によって注射可能な蓄積形態を作製する。薬物：ポリマー比および使用した特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドライド）が含まれる。蓄積注射処方物を、体内組織に適合可能なリポソームまたはマイクロエマルジョン中での薬物の捕捉によっても調製する。
【０１２２】
（４．２  送達方法およびデバイス）
種々の薬学的送達デバイス（皮下注射用シリンジ、多室シリンジ、ステント、カテーテル、経皮パッチ、顕微針、微小研磨器、および移植可能な徐放デバイスが含まれ得る）を使用して、本発明の薬学的組成物を投与することもできる。１つの実施形態では、薬学的送達デバイスは、少なくとも有効量のＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび有効量の化学療法剤を含むかこれらを負荷することができる。いくつかの実施形態では、デバイスは、ＬＴ−β−Ｒアゴニストおよび化学療法剤を同時に送達するか投与することができる。デバイスは、デバイスを使用した投与前にアゴニストと化学療法剤を混合する能力を有し得る。さらに他の実施形態では、デバイスは、アゴニストおよび化学療法剤を連続的に投与することができる。
【０１２３】
１つの潜在的な薬学的送達デバイスは、注射前に２つの化合物を混合するかこれらを連続的に送達することができる多室シリンジである。典型的な２室シリンジおよびこのような前充填シリンジの自動化製造プロセスは、Ｎｅｕｅ  Ｖｅｒｐａｃｋｕｎｇ，Ｎｏ．３，１９８８，ｐ．５０−５２；Ｄｒｕｇｓ  Ｍａｄｅ  ｉｎ  Ｇｅｒｍａｎｙ，Ｖｏｌ．３０，Ｐａｇ．１３６−１４０（１９８７）；Ｐｈａｒｍ．Ｉｎｄ．４６，Ｎｒ．１０（１９８４）ｐ．１０４５−−１０４８およびＰｈａｒｍ．Ｉｎｄ．４６，Ｎｒ．３（１９８４）ｐ．３１７−３１８に開示されている。シリンジ型アンプルは、ニードルを取りつけるためのボトル型の前部開口部、前部チャンバー中の凍結乾燥粉末を後部チャンバー中の再構成液と混合するための２つのピストンおよび外部型バイパスを具備する２室デバイスである。記載のプロセスは、主に、シリンジ外筒の洗浄およびシリコン処理工程、キャリアトレイ中への複数の外筒の挿入工程、滅菌工程、外筒後部を介した中央のピストンの導入工程、トレイを逆さまにする工程、前部開口部による粉体水溶物の導入工程、乾燥粉末への凍結乾燥工程、前部開口部を閉じて凍結乾燥チャンバーに送達する工程、トレイを回転させる工程、外筒後部による再構成液体の導入工程、後部ピストンの挿入、トレイからの生成物の取出し工程、最後の調節およびパッケージング工程を含む。種々の成分を予め充填したアンプルを、シリンジと共に使用するために製造することができる。
【０１２４】
別の実施形態では、多室シリンジは、Ｌｙｏ−ｊｅｃｔシステム（Ｖｅｔｔｅｒ  Ｐｈａｒｍａ  Ｔｕｒｍ，Ｙａｒｄｌｅｙ，ＰＡ）である。Ｌｙｏ−Ｊｅｃｔにより、使用者は薬物を迅速な再構成および注射のための希釈剤をパッケージングしたシリンジ中で直接凍結乾燥させることが可能である。これは、特許第４，８７４，３８１号および同第５，０８０，６４９号に記載されている。
【０１２５】
他の実施形態では、２つの個別のシリンジ、カテーテル、顕微針、または注射することができる他のデバイスを使用して化合物を投与する。
【０１２６】
罹患組織中、その周囲、もしくはそれと連携して存在するか血流中のミクロスフィア、リポソーム、他の微粒子送達系、または徐放処方物を使用して、本発明の薬学的組成物を投与することもできる。徐放キャリアの適切な例には、座剤またはマイクロカプセルなどの成形品の形態の半透性ポリマーマトリクスが含まれる。移植可能かマイクロカプセルの徐放マトリクスには、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，３１９号；欧州特許第５８，４８１号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸とのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２，ｐｐ．５４７−５６（１９８５））；ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはエチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５，ｐｐ．１６７−２７７（１９８１）；Ｌａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２，ｐｐ．９８−１０５（１９８２））が含まれる。取り組まれる特定の臨床症状の治療に有効な用量で本発明の組成物を投与する。例えば、患者の病態および体重、所望の治療範囲、および患者の治療耐性を考慮した所与の適用のための好ましい薬学的処方物および治療に有効な投与計画の決定は、十分に当業者の範囲内である。
【０１２７】
経皮パッチは、本発明の化合物の身体への送達の調節にさらなる利点を有する。適切な媒質への化合物の溶解または分散によって、このような投薬形態を作製することができる。吸収増強剤を使用して、皮膚を介した化合物の流動を増加させることもできる。このような流動の速度を、速度調節膜を得るかポリマーマトリクスまたはゲルへの化合物の分散によって調節することができる。
【０１２８】
（５．治療方法）
本発明は、さらに、任意選択的に上記送達デバイスを使用して被験体に有効量の本発明の薬学的組成物を投与する工程を含む新規の癌治療方法を提供する。
【０１２９】
本発明の方法を使用して、任意の癌を治療することができる（充実性腫瘍の治療が含まれるがこれに限定されない）。本発明の化合物によって治療することができる充実性腫瘍の例には、乳癌、精巣癌、肺癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、結腸癌、前立腺癌、胃癌、皮膚癌、胃癌、食道癌、および膀胱癌が含まれるが、これらに限定されない。一定の実施形態では、方法は、有効量の本発明の薬学的組成物の被験体への非経口投与を含む。１つの実施形態では、方法は、本発明の組成物を被験体に動脈内投与する工程を含む。他の実施形態では、方法は、有効量の本発明の組成物を被験体中の腫瘍動脈血供給に直接投与する工程を含む。１つの実施形態では、方法は、カテーテルを使用して有効量の本発明の組成物を癌性腫瘍の動脈血供給へ直接投与する工程を含む。カテーテルを使用して本発明の組成物を投与する実施形態では、カテーテルの挿入を、蛍光顕微鏡法または観察および／または誘導することができる当該分野で公知の他の方法によって誘導または観察することができる。別の実施形態では、方法は、化学塞栓を含む。例えば、化学塞栓法は、オイル基剤（例えば、ポリビニルアルコールを含むエチオドール）と混合した樹脂様材料および１つまたは複数の化学療法剤から構成される組成物を使用して癌性腫瘍を供給する血管を遮断する工程を含み得る。さらに他の実施形態では、方法は、本発明の組成物を被験体に全身投与する工程を含む。
【０１３０】
一般に、本発明の薬学的組成物を使用した化学塞栓または直接動脈内もしくは静脈内注射療法を、典型的には、部位に関係なく類似の様式で行う。簡単に述べれば、Ｘ線を照射する動脈または静脈（塞栓または注射すべき部位に依存する）に挿入されたカテーテルを介した放射線不透過性造影剤の注射によって、塞栓すべき領域の血管造影法（血管の道筋）または一定の実施形態でより詳細には動脈造影法を最初に行うことができる。経皮的または手術によってカテーテルを挿入することができる。次いで、流れが停止するまでカテーテルによって本発明の薬学的組成物を逆流することによって、血管を塞栓することができる。血管造影の繰り返しによって閉塞を確認することができる。次いで、直接注射を使用する実施形態では、血管に所望の用量の本発明の薬学的組成物を注入する。
【０１３１】
塞栓療法により、一般に、治療すべき腫瘍または血管塊の隙間を介してインヒビターを含む組成物が分布する。動脈管腔を詰まらせる閉塞性粒子の物理的な束により、血液供給が閉塞する。この効果に加えて、抗血管因子の存在により、腫瘍または血管塊に供給される新規の血管形成が防止され、血液供給遮断の喪失効果が増強される。直接動脈内または静脈内投与により、一般に、同様に治療すべき腫瘍または血管塊の隙間全体にインヒビターを含む組成物が分布する。しかし、血液供給は、一般に、この方法を使用して閉塞されないと予想されない。
【０１３２】
本発明の１つの態様内で、塞栓または直接動脈内もしくは静脈内注射療法を使用して、肝臓または他の組織の原発性または二次腫瘍を治療することができる。簡単に述べれば、大腿動脈または上腕動脈を介してカテーテルを挿入し、Ｘ線透視ガイダンス下での動脈系を介した肝動脈のステアリングによって肝動脈に進める。腫瘍に供給する血管を完全に遮断する必要がある限りカテーテルを肝動脈樹（ｈｅｐａｔｉｃ  ａｒｔｅｒｉａｌ  ｔｒｅｅ）に進める一方で、できるだけ多数の正常な構造に供給する動脈枝を損傷させない。理想的には、これは、肝動脈の部分的枝であるが、胃十二指腸動脈の起源から離れた全肝動脈または複数の個別の動脈でさえも腫瘍範囲およびその個別の血液供給に依存して遮断される必要があるということもあり得る。一旦カテーテルが望ましく位置づけられると、遮断すべき動脈の流れが停止するまで（観察から５分後でも好ましい）の動脈カテーテルを介した組成物の注射（上記）によって動脈を塞栓する。カテーテルを介した放射線不透過性造影剤の注入および透視検査またはＸ線フィルムによって予め造影剤を充填した血管にもはや注入されないことの証明によって動脈閉塞を確認することができる。直接注射を使用する実施形態では、動脈カテーテルによる所望の用量の組成物（上記）の注射によって動脈に注入する。閉塞すべき動脈へのそれぞれの供給を使用して、同一の手順を繰り返すことができる。
【０１３３】
ほとんどの実施形態では、本発明の薬学的組成物には、予防または治療上の処置の一部として治療有効量の組み込まれた治療薬または他の材料を患者に送達するのに十分な量で送達される物質が組み込まれる。粒子中の所望の濃度の活性化合物は、薬物の吸収速度、不活化速度、および排出速度、ならびに化合物の送達速度に依存する。投薬量は緩和すべき病態の重症度によっても変化し得ることに留意すべきである。任意の特定の被験体のために、個体のニーズおよび組成物を投与するか投与を監督する者の専門的判断に従って特定の投薬計画を長期的に調整すべきであることをさらに理解すべきである。典型的には、当業者に公知の技術を使用して、投与を決定する。選択された投薬レベルは、種々の要因（使用した本発明の特定の化合物、そのエステル、塩、またはアミドの活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の排出または代謝速度、治療の持続時間、使用した特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物、および／または材料、治療をうける患者の年齢、性別、体重、病態、一般的な健康状態、および病歴、ならびに医学分野で周知の同様の要因が含まれる）に依存する。
【０１３４】
投薬量は、患者の体重１ｋｇあたりの組成物の量に基づき得る。他の量は当業者に公知であり、容易に決定される。あるいは、本発明の投薬量を、組成物の血漿濃度を参照して決定することができる。例えば、最大血漿濃度（Ｃｍａｘ）および０から無限大までの血漿濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ（０〜４））を使用することができる。本発明の投薬量には、ＣｍａｘおよびＡＵＣ（０〜４）についての上記値が得られる投薬量およびこれらのパラメーターについての値よりも高いか低くなる他の投薬量が含まれる。
【０１３５】
当該分野の通常の技術を有する医師および獣医師は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定および処方することができる。例えば、医師および獣医師は、薬学的組成物中で使用される本発明の化合物の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルから開始し、所望の効果が得られるまで投薬量を段階的に増加させることができる。
【０１３６】
一般に、本発明の化合物の適切な１日量は、治療効果を得るために有効な最も低い用量である化合物量である。このような有効用量は、一般に、上記因子に依存する。
【０１３７】
所与の患者を最も有効に治療する任意の特定の化合物の正確な投与時間および量は、特定の化合物の活性、薬物動態学、および生物学的利用能、患者の生理学的条件（年齢、性別、疾患の型および悪性度、全身的な身体状態、薬物の所与の投薬量および型に対する反応性が含まれる）、ならびに投与経路などに依存する。本明細書中に記載のガイドラインを使用して被験体のモニタリングならびに投薬量および／またはタイミングの調整からなる日常的実験しか必要としない治療（例えば、投与の最適な時間および／または量の決定）を至適化することができる。
【０１３８】
被験体が治療を受ける間、２４時間体制で所定の時間１つまたは複数の関連指標の測定によって患者の健康をモニタリングすることができる。治療（投与および処方の補足、量、時間が含まれる）を、このようなモニタリングの結果にしたがって至適化することができる。同一のパラメーターの測定によって、改善範囲を決定するために患者を定期的に再評価することができ、典型的には、治療開始から４週間後に最初の再評価を行い、その後治療中の４〜８週間毎に再評価し、その後３ヶ月ごとに再評価する。治療を数ヵ月または数年継続することができ、ヒトの治療では最低１ヶ月が典型的な期間である。薬剤の投与量およびおそらく投与時間を、これらの再評価に基づいて調整することができる。
【０１３９】
化合物の至適用量よりも少ない投薬量で治療を開始することができる。その後、至適な治療効果が得られるまで少しずつ増加させながら投薬量を増加させることができる。
【０１４０】
これを知ることは、１つを超える薬物を使用する場合にどの薬物が相互に十分に作用する可能性が高いかについての癌専門医の決定を補助し、各薬物を投与する場合に、正確に計画される（順序および頻度）。
【０１４１】
いくつかの本発明の化合物または他の化学療法剤の組合わせ使用により、異なる成分の効果の開始および持続時間が相補的（ｃｏｍｐｌｉｍｅｎｔａｒｙ）であり得るので、任意の各成分に必要な投薬量を減少させることができる。このような併用療法では、異なる活性成分を同時または個別に送達し、且つ１日のうちで同時または異なる時間で送達することができる。本発明の化合物の毒性および治療効果を、例えば、ＬＤ５０およびＥＤ５０の決定のための細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる。治療指数の高い組成物が好ましい。有毒な副作用を示す化合物を使用することができるにもかかわらず、副作用を減少させるために所望の部位に化合物をターゲティングする送達系をデザインするように配慮すべきである。
【０１４２】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータを、ヒトで使用するための投薬範囲の処方で使用することができる。任意の補助物質（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）または補助物質中の任意の成分の投薬量は、好ましくは、ＥＤ５０値がほとんどまたは全く毒性を示さない循環濃度範囲内である。投薬量は、使用した投薬形態および使用した投与経路に依存してこの範囲内で変化させることができる。本発明の薬剤のために、治療有効用量を最初に細胞培養アッセイから推定することができる。細胞培養で決定したところＩＣ５０（すなわち、症状を最大で半分阻害する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するために、動物モデルの用量を処方することができる。このような情報を使用して、ヒトの有用な用量をより正確に決定することができる。例えば、高速液体クロマトグラフィによって血漿レベルを測定することができる。
【０１４３】
（６．キット）
本発明は、種々の癌治療のためのキットを提供する。例えば、キットは、１つまたは複数の上記薬学的組成物および任意選択的にその使用説明書を含み得る。さらに他の実施形態では、本発明は、１つまたは複数の薬学的組成物およびこのような組成物の投与のための１つまたは複数のデバイスを含むキットを提供する。例えば、本発明のキットは、薬学的組成物および癌性腫瘍への組成物の直接動脈内注射のためのカテーテルを含み得る。他の実施形態では、本発明のキットは、任意選択的に医薬品として処方したか凍結乾燥した送達デバイスと共に使用するためのＬＴ−β─Ｒアゴニストおよび化学療法剤を予め充填したアンプルを含み得る。
【実施例】
【０１４４】
（実施例）
本発明を、以下の実施例によってさらに例示するが、決して本発明を制限すると解釈すべきではない。
【０１４５】
（材料と方法）
（ＷｉＤｒマウスモデル）
ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせた化学療法剤の効果を研究するために、ＷｉＤｒ異種移植片モデルを使用した。ＣＢＥ１１は、重症複合型免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウス中で異種移植片として成長したＷｉＤｒ腫瘍に対して抗腫瘍活性を示すことが示されている（Ｂｒｏｗｎｉｎｇら（１９９６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：８６７）。治療薬（すなわち、ＬＴβＲアゴニストおよび化学療法剤）を、ＷｉＤｒ腫瘍細胞を移植した胸腺欠損ヌードマウスに投与した。抗腫瘍活性（併用療法の任意の協力効果または効果の増強が含まれる）を、確立された予備形成腫瘍塊に対して治療を開始する、ＷｉＤｒ異種移植片ヒト結腸直腸腫瘍成長にしたがって研究した。
【０１４６】
ＷｉＤｒ細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から入手した。細胞を、抗生物質を含まない２ｍＭ  Ｌ−グルタミンならびに１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、および１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含むように調整したイーグル平衡塩類溶液（ＢＳＳ）を含み、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えた９０％イーグル最少基本培地にてインビトロで成長させた（５％ＣＯ２）。マウスに移植した腫瘍ホモジネート調製物のアリコートに対して細菌培養を行い、移植から２４時間後および４８時間後の両方で全ての培養物が細菌汚染について陰性であることを確認する。
【０１４７】
０日目に、２×１０６個のＷｉＤｒ細胞を含み、且つ血清を含まない２００μＬ  ＲＰＭＩ１６４０の接種物を右側腹部に皮下移植した。３日目から腫瘍重量および体重の測定値を１週間に２回記録し、４日目にカンプトサールを含む研究についても記録した。腫瘍の長さが約５ｍｍおよび幅が５ｍｍと測定された場合、マウスを治療群およびコントロール群に無作為に分けた。０日目から開始して、１週間に２回体重を記録した。
【０１４８】
（ＫＭ−２０Ｌ２マウスモデル）
ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせた化学療法剤の効果を研究するために、ＫＭ−２０Ｌ２異種移植片モデルを使用した。治療薬（すなわち、ＬＴβＲアゴニストおよび化学療法剤）を、ＷｉＤｒ腫瘍細胞を移植した胸腺欠損ヌードマウスに投与した。抗腫瘍活性（併用療法の任意の協力効果または効果の増強が含まれる）を、確立された予備形成腫瘍塊に対して治療を開始する、ＷｉＤｒ異種移植片ヒト結腸直腸腫瘍成長にしたがって研究した。
【０１４９】
ＫＭ−２０Ｌ２を、ＮＣＩ  ｔｕｍｏｒ  ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙから入手した。細胞を、抗生物質を含まない１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含む９０％ＲＰＭＩ−１６４０で成長させた。マウスに移植した腫瘍細胞ホモジネート調製物のアリコートに対して細菌培養を行い、移植から２４時間後および４８時間後の両方で全ての培養物が細菌汚染について陰性であることを確認する。
【０１５０】
０日目に、２×１０６個または３×１０６個のＫＭ−２０Ｌ２細胞を含み、且つ血清を含まない培地をマウスの右側腹部に皮下移植した。腫瘍サイズを定期的に記録した。腫瘍の長さが約５ｍｍおよび幅が５ｍｍ（６５ｍｇ）と測定された場合、マウスを治療群およびコントロール群に無作為に分けた。
【０１５１】
（腫瘍の測定）
ノギスを使用して腫瘍を測定した。腫瘍サイズの測定値を、研究終了まで研究にしたがって定期的に記録した。長楕円の体積を計算するための以下の式を使用して、二次元腫瘍測定値から腫瘍体積（ｍｍ３）を評価した：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２［ＬｘＷ２］）÷２。単位密度を仮定し、体積を重量に変換した（すなわち、１ｍｍ３＝１ｍｇ）。腫瘍成長抑制を、Ｔ／Ｃ率（式中、Ｔは治療群の平均腫瘍重量であり、Ｃはコントロール群の平均腫瘍重量である）として評価する。この研究型における４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率を、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＵＳＡ）による有意な活性の指標と見なす。その結果、動物を屠殺した。
【０１５２】
（統計分析）
標準的な統計学的方法にしたがって、腫瘍重量測定値の統計分析を行った。全ての評価における全ての用量群についての体重および腫瘍重量の平均、標準偏差（ＳＤ）、および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を決定した。各治療群と賦形剤群との間および各組み合わせ治療群と各ｈｕＣＢＥ１１群との間に任意の統計的有意差が存在するかどうかを決定するために、各評価（各研究の終了時が含まれる）における平均腫瘍重量に対してスチューデントｔ検定を行った。
【０１５３】
ｈｕＣＢＥ１１および化学療法剤を使用した組み合わせ治療時に抗腫瘍活性の協力作用または増強が起こるかどうかを決定するために、分析を行った。化学療法剤のみを使用したＷｉＤｒ腫瘍を保有するマウスの治療によって用量応答抗腫瘍効果が得られた場合、ｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤との組み合わせの協力作用を、組み合わせ指数の計算によって正式に評価することができる（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚ．Ｒｅｇｕ．２２：２７）。さらに、いくつかの組み合わせ治療による増強を、組合わせ治療によって各治療によって得られる有効性の合計と比較して統計的に有意な相乗効果が得られるかどうかの決定によって評価した。
【０１５４】
各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍効果を決定した。コントロール群と治療群との間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。腫瘍体積の抑制率（すなわち、影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示した。その結果、さらなる統計分析を行った。
【０１５５】
（協力性分析）
ＣＩによって示した協力作用または拮抗作用（記号で示す）の程度の全解釈を、以下の表３に記載する。
【０１５６】
【表３】
2006513225.tif 000004
（実施例１：アルキル化化学療法剤と組み合わせたＬＴβＲアゴニストの抗腫瘍効果）
ｈｕＣＢＥ１１のシスプラチンとの組み合わせ抗腫瘍効果。ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたアルキル化化学療法剤（例えば、シスプラチン）の投与により相乗的抗腫瘍活性（例えば、協力作用または増強作用）が得られるかどうかを決定するために、ＷｉＤｒ異種移植片モデルを使用して、ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせてシスプラチンを投与した。
【０１５７】
シスプラチンおよびｈｕＣＢＥ１１の抗腫瘍効果の研究のために、適切なシスプラチンおよびｈｕＣＢＥ１１の用量を決定するための投薬範囲の研究を行った。投与研究により、それぞれの腫瘍成長抑制に対する各薬剤の抗腫瘍効果も試験した。確立されたＷｉＤｒ腫瘍を保有する胸腺欠損ヌードマウスを、生理食塩水（コントロール）、ｈｕＣＢＥ１１（５０μｇまたは５００μｇ）、シスプラチン（０．２５ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量）のいずれかで処置した（生理食塩水コントロールはｎ＝３０／用量、実験群はｎ＝１０／用量）。３日目に腫瘍サイズを測定し、その後悪性度分類日まで定期的に測定した。
【０１５８】
５０日目の２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、および０．２５ｍｇ／ｋｇのシスプラチン用量群の腫瘍成長は、生理食塩水コントロール群と有意に異ならなかった。ＮＣＩ活性基準（Ｔ／Ｃ率が４２％またはそれ以下）に基づいて、２ｍｇ／ｋｇ〜０．２５ｍｇ／ｋｇのシスプラチンはＷｉＤｒモデルで不活性であると判断された。５０日目に、０．５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）の用量のみのシスプラチンにより、ヌードマウスにおいてＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍成長が有意に抑制された。並行研究では、４４日目に、５００μｇ（Ｐ＜０．００１）および５０μｇ（Ｐ＜０．０１）のｈｕＣＢＥ１１により、腫瘍成長が有意に抑制されると判断された。シスプラチンのみでの処置では、用量反応抗腫瘍効果は得られなかったので、シスプラチンとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせの協力作用を評価することができなかった。
【０１５９】
シスプラチンとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ治療により腫瘍成長の抑制が有意に増加するかどうかを決定するために、上記の確立された腫瘍を有する確立されたＷｉＤｒ腫瘍細胞を保有する胸腺欠損ヌードマウスに対して組み合わせ研究を行った。有効性、協力作用、および増強を決定するために、本研究により、種々の組み合わせのｈｕＣＢＥ１１（５０μｇまたは５００μｇ）およびシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇ）の効果を比較した。シスプラチン（１および２ｍｇ／ｋｇ）およびｈｕＣＢＥ１１（５０および５００μｇ）の４つの異なる用量の組合わせを評価した。
【０１６０】
組合わせ研究（表４〜６および図４および６に示す）の結果は、シスプラチンと組み合わせたｈｕＣＢＥ１１は治療マウスの腫瘍体積を有意に減少させることを証明する。全ての腫瘍データを４４日目に得た。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍効果を決定した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。表４は、ｈｕＣＢＥ１１およびシスプラチンの個別治療および組み合わせ治療についての用量−結果の関係を示す。
【０１６１】
【表４】
2006513225.tif 000005
５００μｇのｈｕＣＢＥ１１と２ｍｇ／ｋｇのシスプラチンまたは１ｍｇ／ｋｇのシスプラチンとの組み合わせにより、５００μｇのｈｕＣＢＥ１１のみと比較して統計的に有意に（それぞれＰ＜０．０１およびＰ＜０．０５）低いＷｉＤｒ腫瘍重量が得られた。５０μｇのｈｕＣＢＥ１１と２ｍｇ／ｋｇのシスプラチンまたは１ｍｇ／ｋｇのシスプラチンとの組み合わせによっても、５０μｇのｈｕＣＢＥ１１のみと比較して統計的に有意に（それぞれＰ＜０．００１およびＰ＜０．０１）低いＷｉＤｒ腫瘍重量が得られた。４４日目では、ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇとシスプラチン２ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ（Ｐ＜０．０１）（図１）またはｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇとシスプラチン１ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ（Ｐ＜０．０５）での処置後の腫瘍重量はｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇのみよりも有意に低かった。さらに、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとシスプラチン２ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．００１）およびｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとシスプラチン１ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．０１）での処置後の平均腫瘍重量はｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇのみの群よりも有意に低かった。
【０１６２】
ｈｕＣＢＥ１１とシスプラチンとの組み合わせは、ＮＣＩ活性基準（Ｔ／Ｃ率が４２％またはそれ以下）に基づいて、試験した全ての用量の組み合わせで、ＷｉＤｒモデルで活性であると判断された。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇおよびシスプラチン２ｍｇ／ｋｇにおいて、２４日目（３８．４％）から４４日目（１９．４％）までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇおよびシスプラチン１ｍｇ／ｋｇにおいて、３０日目（３７．３％）から４４日目（２９．０％）までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった（図２）。ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇおよびシスプラチン２ｍｇ／ｋｇにおいて、２７日目（４０．５％）から４４日目（２５．０％）までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった（図３）。ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇおよびシスプラチン１ｍｇ／ｋｇにおいて、３４日目（４０．０％）から４４日目（３４．６％）までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった。
【０１６３】
これらの研究から得た腫瘍重量データを使用して、ｈｕＣＢＥ１１とシスプラチンとの組み合わせにより増強させるかどうかを決定するための統計学的比較を行った。４４日目の個別の腫瘍体積（表５）を使用して、各動物の腫瘍体積の抑制率（すなわち、Ｆａ）を計算した（表６）。統計的に有意な増強についての試験には、各動物のＦａの計算が必要であった。各腫瘍体積（表５）を使用して、各動物の腫瘍体積の抑制率（Ｆａ）を計算した（表６）。表４に示すように、（コントロール群の平均腫瘍体積−個別の動物の腫瘍体積）÷コントロール群の平均腫瘍体積としてＦａを計算した。組み合わせ治療についての予想される累加Ｆａを、組み合わせのいずれかの成分（ｈｕＣＢＥ１１またはシスプラチン）を投与した群由来の平均Ｆａ‘の合計であると解釈する。組合わせ治療の実際の効果と治療が単に累加であると予想される効果との間の相違も計算した（表６）。両側１サンプルｔ検定を使用して、組み合わせ治療により予想される累加値と統計的に有意に異なる平均Ｆａが得られるかどうかを決定した（表６）。本研究で使用したｈｕＣＢＥ１１およびシスプラチンを使用した全ての組み合わせ治療計画により、予想される累加抗腫瘍効果と比較した場合に抗腫瘍効果が統計的に有意に増強された。
【０１６４】
【表５】
2006513225.tif 000006
【０１６５】
【表６】
2006513225.tif 000007
ｈｕＣＢＥ１１／シスプラチン研究で使用した全ての組み合わせにより、腫瘍体積の統計的に有意な相乗的抑制が得られた（表６）。５０μｇまたは５００μｇのｈｕＣＢＥ１１と組み合わせた場合、１ｍｇ／ｋｇおよび２ｍｇ／ｋｇのシスプラチンにより、統計的に有意な相乗効果が得られた。これらの組み合わせにより、ｈｕＣＢＥ１１の抗腫瘍効果が有意に増強された。要するに、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるシスプラチンとの組み合わせ治療により、ｈｕＣＢＥ１１投与のみおよびシスプラチン投与のみと比較して有意に改善された結果を示した（すなわち、増強された）。
【０１６６】
（実施例２：アントラサイクリンアナログである化学療法剤と組み合わせたＬＴβＲアゴニストの抗腫瘍効果）
ｈｕＣＢＥ１１とアドリアマイシンとの組み合わせの抗腫瘍効果。ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたアントラサイクリンアナログ化学療法剤（例えば、アドリアマイシン）の投与により相乗的抗腫瘍活性（例えば、協力作用または増強）が得られるかどうかを決定するために、ＷｉＤｒ異種移植片腫瘍モデルを使用して、アドリアマイシンをｈｕＣＢＥ１１と組み合わせて投与した。
【０１６７】
アドリアマイシンとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ抗腫瘍効果の研究のためのアドリアマイシンおよびｈｕＣＢＥ１１の適切な用量を決定するためおよび各薬物のみの個別の効果を決定するために、用量範囲決定研究（ｄｏｓｅ  ｒａｎｇｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ）を最初に行った。１ｍｇ／ｋｇから６ｍｇ／ｋｇまでの漸増用量のアドリアマイシンを、ＷｉＤｒ腫瘍細胞を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスへの腹腔内注射によって投与した（０日目）。全ての試験用量で、アドリアマイシンは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）の活性基準（４２％またはそれ以下の試験／コントロール率（Ｔ／Ｃ率））に基づいて、ＷｉＤｒモデルにおいて化学療法剤として不活性であると判断された。４２日目（研究の終了日）に、アドリアマイシン群と賦形剤コントロール群との間に有意差は認められなかった。個別の研究では、３５日目（評価日）で、６ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇのいずれかのアドリアマイシンでも腫瘍成長に対する有意な阻害を示さなかった。したがって、アドリアマイシンはＷｉＤｒ腫瘍を有意に抑制せず、アドリアマイシン群と生理食塩水群との間の有意差は存在しなかった。
【０１６８】
並行研究では、５００μｇ、１００μｇ、および５０μｇのｈｕＣＢＥ１１は、４２日目で腫瘍成長を抑制することが見出され、ＮＣＩ活性基準に基づいて、ＷｉＤｒモデルにおいて化学療法剤として活性であると判断された。ＷｉＤｒ腫瘍重量は、研究終了時（４２日目）に賦形剤コントロール群と比較して全てのｈｕＣＢＥ１１抗体試験群で統計的に有意に低かった。Ｔ／Ｃ率は、ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇの群および１００μｇの群において３２〜４２日目に４２％未満であることが認められた（従って、ＮＣＩ活性基準を満たす）。
【０１６９】
試験したｈｕＣＢＥ１１とアドリアマイシンとの全ての組み合わせは、ＮＣＩ基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいてＷｉＤｒモデルで活性であると判断された。ｈｕＣＢＥ１１  １００μｇ／注射または５００μｇ／注射とアドリアマイシン  ６ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．００１）およびｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇ／注射とアドリアマイシン  ６ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．０５）は、対応するｈｕＣＢＥ１１のみの群よりも腫瘍重量が統計的に有意に低かった。１８日目、２１日目、または３２日目から４２日目までの全ての組み合わせ用量群のＴ／Ｃ率は４２％未満であり、４２日目のｈｕＣＢＥ１１  １００μｇとアドリアマイシン６ｍｇ／ｋｇとの群では８．４％に低下した。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇまたは１００μｇとアドリアマイシン６ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群の研究終了時（４２日目）の腫瘍重量は、各ｈｕＣＢＥ１１のみの群よりも統計的に有意に（Ｐ＜０．００１）低いことが認められた（図５および図７）。
【０１７０】
アドリアマイシンおよびｈｕＣＢＥ１１の活性研究後、併用療法の認められた投与効果をより良好に特徴づけるための研究を行った。ＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍成長モデルを使用して、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍を異種移植した実験胸腺欠損ヌードマウスに５０、１００、または５００μｇのｈｕＣＢＥ１１のみまたは４または６ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンとの組み合わせを投与した。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍有効性を決定した。コントロール群と治療群の間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。腫瘍体積の抑制率（すなわち、影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。表７は、個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。
【０１７１】
【表７】
2006513225.tif 000008
アドリアマイシンのみでのＷｉＤｒ腫瘍を保有するマウスの治療により、用量応答抗腫瘍有効性が得られなかった；したがって、ｈｕＣＢＥ１１＋アドリアマイシンの組み合わせの協力作用を、組み合わせ指数の計算によって正式に評価することができなかった（ＣｈｏｕおよびＴａｌａｌａｙ（１９８４）Ａｄｖ．Ｅｎｚ．Ｒｅｇｕｌ．２２：２７）。
【０１７２】
組み合わせ治療による増強を、ｈｕＣＢＥ１１／アドリアマイシンの組み合わせ治療によって各治療によって得られた有効性の合計と比較した場合に統計的に有意な相乗効果が得られるかどうかの決定によって評価した。統計的に有意な増強の試験には、各動物のＦａの計算が必要であった。各腫瘍体積（表８）を使用して、３５日目の各動物の腫瘍体積の抑制率（Ｆａ）（表９）を計算した。上記の表７に示すように、（コントロール群の平均腫瘍体積−個別の動物の腫瘍体積）÷コントロール群の平均腫瘍体積としてＦａを計算した。組み合わせ治療についての予想される累加Ｆａを、組み合わせのいずれかの成分（ｈｕＣＢＥ１１またはアドリアマイシン）を投与した群由来の平均Ｆａ‘の合計であると解釈する。組み合わせ治療の実際の効果と治療が単に累加であると予想される効果との間の相違も計算した（表９）。両側１サンプルｔ検定を使用して、組み合わせ治療により予想される累加値と統計的に有意に異なる平均Ｆａが得られるかどうかを決定した（表９）。
【０１７３】
【表８】
2006513225.tif 000009
【０１７４】
【表９】
2006513225.tif 000010
表９に示すように、両側１サンプルｔ検定の使用によって、多数のｈｕＣＢＥ１１：アドリアマイシンの組み合わせ治療のｈｕＣＢＥ１１抗体のみを超える相乗効果が証明された。５０μｇのｈｕＣＢＥ１１と組み合わせた場合、４および６ｍｇ／ｋｇアドリアマイシンの両方により相乗効果が得られた（それぞれＰ＜０．０００１およびＰ＝０．００１３）。１００μｇまたは５００μｇのｈｕＣＢＥ１１のいずれかと組み合わせた場合、アドリアマイシン６ｍｇ／ｋｇにより、相乗効果が得られた（Ｐ＜０．０００１）。したがって、これらの組み合わせは、ｈｕＣＢＥ１１の抗腫瘍効果を有意に増強することが認められた。
【０１７５】
本研究で使用したｈｕＣＢＥ１１およびアドリアマイシンを使用した大多数の組み合わせ治療計画は、抗腫瘍効果の予想される累加と比較して抗腫瘍有効性を統計的に有意に増強した。ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１および化学療法剤であるアドリアマイシンの組み合わせ治療により、ｈｕＣＢＥ１１のみおよびアドリアマイシンのみの投与と比較して有意に改善された結果を示した。これらの組み合わせにより、ｈｕＣＢＥ１１の抗腫瘍効果が有意に増強された。
【０１７６】
（実施例３：トポイソメラーゼＩ化学療法剤と組み合わせたＬＴβＲアゴニストの抗腫瘍効果）
（Ａ．ＷｉＤｒ異種移植片モデルにおけるｈｕＣＢＥ１１／カンプトサール併用療法の抗腫瘍効果）
ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたトポイソメラーゼＩ化学療法剤（例えば、カンプトサール（イリノテカンともいわれる））の投与によって相乗的抗腫瘍活性（例えば、協力活性または増強活性）が得られるかどうかを決定するために、癌療法として試験するためのＷｉＤｒマウスモデルを使用してｈｕＣＢＥ１１と組み合わせてカンプトサールを投与した。
【０１７７】
適切なカンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１の用量を決定するためおよび各薬物のみの個別の活性を決定するために用量範囲決定研究を行った。１．８ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまでの漸増量のカンプトサールをＷｉＤｒ腫瘍細胞を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスに投与した（０日目）。１０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）、６ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）、および３ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）のカンプトサールは、４３日目で、賦形剤コントロールと比較してＷｉＤｒ腫瘍成長を統計的に有意に阻害した。２４〜３１日目にカンプトサール１０ｍｇ／ｋｇ群で４１％に減少したことを除き、全ての用量群における全ての他の評価でのＴ／Ｃ率は４５％超であった。投与研究由来の結果により、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅの活性基準（ＮＣＩ；４２％またはそれ以下の試験／コントロール率（Ｔ／Ｃ率）が活性を構成する）によってＷｉＤｒモデルにおいてカンプトサールが不活性であると判断された。
【０１７８】
並行研究では、５００μｇ（Ｐ＜０．００１）、５０μｇ（Ｐ＜０．００１）、および５μｇ（Ｐ＜０．０５）のｈｕＣＢＥ１１は、４３日目で腫瘍成長を抑制することが見出された。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇおよび５０μｇの群では、３５日目または３８日目〜４２日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。賦形剤コントロールと比較して、５００μｇ（Ｐ＜０．００１）、５０μｇ（Ｐ＜０．００１）、および５μｇ（Ｐ＜０．０５）の用量ならびに研究終了時の１０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）および６ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）、および３ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）のｈｕＣＢＥ１１により、腫瘍成長が統計的に有意に抑制された。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇの群および５０μｇの群における３５日目／３８日目〜４２日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。結果は、ｈｕＣＢＥ１１は、ＮＣＩ活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいたＷｉＤｒモデルで活性であることを証明した。
【０１７９】
ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールの組み合わせ活性の分析も行った。４２日目に、腫瘍重量は、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇのみ（Ｐ＜０．００１）での治療後よりもｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとカンプトサール１０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせでの治療後に有意に低かった（図１を参照のこと）。さらに、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとカンプトサール６ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．０１）およびｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとカンプトサール３ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ群（Ｐ＜０．０５）における平均腫瘍重量は、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇのみの群における平均腫瘍重量と有意に異なった。ｈｕＣＢＥ１１  ５０  μｇおよびカンプトサール  １０ｍｇ／ｋｇの群におけるＴ／Ｃ率は、１７日目で４２％未満に下落し、４２日目に６．２％であった。さらに、Ｔ／Ｃ率は、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇおよびカンプトサール６ｍｇ／ｋｇの群における１７日目〜４２日目ならびにｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇおよびカンプトサール３ｍｇ／ｋｇの群における２４〜４２日目で４２％未満であった。
【０１８０】
４２日目のｈｕＣＢＥ１１  １８μｇとカンプトサール１０ｍｇ／ｋｇ、ｈｕＣＢＥ１１  １０．５μｇとカンプトサール６ｍｇ／ｋｇ、またはｈｕＣＢＥ１１  ５．４μｇとカンプトサール３ｍｇ／ｋｇとの併用療法群と各カンプトサール用量のみとの間での平均腫瘍重量の統計的に有意な差は認められなかった。Ｔ／Ｃ率は、ｈｕＣＢＥ１１  １８μｇとカンプトサール１０ｍｇ／ｋｇとの群のみで４２％未満であった（２１〜４２日目）。
【０１８１】
要するに、ｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせは、ＮＣＩ活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＷｉＤｒモデルで活性であると判断された。予め確立されたＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍の重量は、ｈｕＣＢＥ１１のみよりもｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるカンプトサールとの組み合わせを使用した治療後で統計的に有意に低かった。（６．２％に低下）
（１）５０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１および１０ｍｇ／ｋｇカンプトサールを５０μｇ  ｈＣＢＥ１１のみ（Ｐ＜０．００１）と比較し、１７日目〜４２日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。
【０１８２】
（２）５０μｇ  ｈＣＢＥ１１および６ｍｇ／ｋｇカンプトサールを５０μｇ  ｈＣＢＥ１１のみ（Ｐ＜０．０１）と比較し、１７日目〜４２日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。
【０１８３】
（３）５０μｇ  ｈＣＢＥ１１および３ｍｇ／ｋｇカンプトサールを５０μｇ  ｈＣＢＥ１１のみ（Ｐ＜０．０５）と比較し、２４日目〜４２日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。
【０１８４】
ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールが協力性に作用することができるかどうかを決定するために、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍成長モデルを移植した胸腺欠損ヌードマウスを使用して相乗作用研究を行った。これらのｈｕＣＢＥ１１／カンプトサール組み合わせ研究のために、１０ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、または３ｍｇ／ｋｇのカンプトサールを選択した。Ｆａ値を計算するために使用する全ての腫瘍データを２１日目にとった。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍有効性を決定した。コントロール群と治療群との間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって、腫瘍体積の抑制率（影響率（Ｆａ））を計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。表１０は、個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。次いで、ｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせ治療についての協力作用および増強の評価のために、得られたＦａ値を使用した。
【０１８５】
【表１０】
2006513225.tif 000011
本研究で薬物の増強を評価するために使用した用量は、固定比の組み合わせを制限しなかった。統計的に有意な増強の試験には、各動物のＦａの計算が必要である。各腫瘍体積（表４１）を使用して、各動物の腫瘍体積の抑制率（Ｆａ）を計算した（表４２）。（コントロール群の平均腫瘍体積−個別の動物の腫瘍体積）÷コントロール群の平均腫瘍体積としてＦａを計算した。組み合わせ治療についての予想される累加Ｆａを、組み合わせのいずれかの成分を投与した群由来の平均Ｆａ‘の合計であると解釈する。組み合わせ治療の実際の効果と治療が単に累加であると予想される効果との間の相違も計算した（表４２）。両側１サンプルｔ検定を使用して、組み合わせ治療により予想される累加値と統計的に有意に異なる平均Ｆａが得られるかどうかを決定した（表４２）。
【０１８６】
【表４１】
2006513225.tif 000012
【０１８７】
【表４２】
2006513225.tif 000013
カンプトサールのみでのＷｉＤｒ腫瘍を保有するマウスの治療によって用量応答抗腫瘍有効性が得られるので、組み合わせ指数（ＣＩ）の計算によって、ｈｕＣＢＥ１１＋カンプトサール組み合わせの協力作用を正式に評価することができた。ｍｇ／ｋｇカンプトサール：μｇ  ｈｕＣＢＥ１１の固定比が０．５５５：１である協力性薬物作用の評価のために使用した用量を投与した。この比は、上記研究で決定した２つの薬剤の中央値効果用量の比に基づいた。協力作用の正式な評価には、Ｗｉｎｄｄｏｗｓベースの用量効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用した組み合わせ指数（ＣＩ）の計算を使用した。上記のように、組み合わせで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示す。ＣＩ＜１は協力作用を示す。ＣＩ＞１は拮抗作用を示す。ＣＩ計算で使用した用量−効果関係（Ｆａ値）を、表１１に示す。
【０１８８】
【表１１】
2006513225.tif 000014
カンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１について計算したＣＩ値に基づいて、カンプトサール／ｈｕＣＢＥ１１組み合わせの固定比組み合わせ治療（０．５５５ｍｇ／ｋｇ：１μｇ）により協力性抗腫瘍有効性を示すと判断した。個別の治療および組み合わせ治療についての用量−応答関係の可能性および形状を、それぞれ表１２および１３に示す。本研究で使用された正確な実験用量レベルについて計算したＣＩ値を、表１４に示す。本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、排反ＣＩ値を適用した。３ｍｇ／ｋｇカンプトサール＋５．４μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、６ｍｇ／ｋｇカンプトサール＋１０．５μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、および１０ｍｇ／ｋｇカンプトサール＋１８μｇ  ｈｕＣＢＥ１１を使用した組み合わせ用量により協力効果が認められた。組み合わせの用量レベル範囲を超えるＣＩのシミュレーションを表１５に示す。３．３ｍｇ／ｋｇカンプトサール＋６μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が３５％抑制される）から３１３ｍｇ／ｋｇカンプトサール＋５６３μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が９９％抑制される）までの範囲の組み合わせ用量により、協力効果が認められた。ＣＩによって示した協力作用または拮抗作用の程度の全解釈を表３に示す。影響率の関数としてのＣＩを図８に示す。要するに、カンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１を使用した固定比の組み合わせ治療（０．５５５：１）により、２１日目に評価した場合、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌の確立された異種移植片に対して協力性抗腫瘍有効性が認められた。
【０１８９】
【表１２】
2006513225.tif 000015
【０１９０】
【表１３】
2006513225.tif 000016
【０１９１】
【表１４】
2006513225.tif 000017
【０１９２】
【表１５−１】
2006513225.tif 000018
【０１９３】
【表１５−２】
2006513225.tif 000019
要するに、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるカンプトサールとの組み合わせ治療により、ｈｕＣＢＥ１１投与のみおよびカンプトサール投与のみと比較して有意に改善された結果が認められた。特に、ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールを使用した固定比（０．５５５ｍｇ／ｋｇカンプトサール：１μｇ  ｈｕＣＢＥ１１）での組み合わせ治療の効果は、組み合わせ指数分析によって協力性であると判断された。
【０１９４】
（Ｂ．ＫＭ−２０Ｌ２異種移植片モデルにおける組み合わせｈｕＣＢＥ１１／カンプトサール療法の抗腫瘍効果）
カンプトサールをｈｕＣＢＥ１１と組み合わせて投与した場合にｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたトポイソメラーゼＩ化学療法剤（例えば、カンプトサール）の投与によって協力性抗腫瘍活性（例えば、増強または協力性）を示すかどうかを決定するために、さらなるヒト結腸直腸腺癌マウスモデル系であるＫＭ−２０Ｌ２モデルも使用した。
【０１９５】
カンプトサールとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ抗腫瘍効果の研究のための適切なカンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１の用量を決定するために、用量範囲決定研究を行った。１．８ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇまでの漸増用量のカンプトサールを、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍細胞を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスに投与した（０日目）。３３日目（研究終了時）での１０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）、６ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）、および３ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）でのカンプトサール治療によって、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍成長が統計的に有意に抑制された。１１〜１４日目に最初に抑制が認められた。１０ｍｇ／ｋｇの群における１８日目から３３日目までのＴ／Ｃ率は４２％またはそれ以下であるので、ＮＣＩ活性基準を満たしていた。個別の研究では、生理食塩水コントロール群と比較して、５５日目の終了時のカンプトサール群で有意な腫瘍抑制は認められないが、６ｍｇ／ｋｇでは１３日目〜５１日目（１３日目〜４４日目にＰ＜０．００１；４８日目にＰ＜０．０１；５１日目にＰ＜０．０５）、３ｍｇ／ｋｇでは１３日目〜４８日目（１３日目〜４１日目にＰ＜０．００１；４４日目にＰ＜０．０１；４８日目にＰ＜０．０５）、１．８ｍｇ／ｋｇでは９日目〜４４日目（１６日目〜２７日目、４１日目にＰ＜０．００１；１３日目、３０日目〜３７日目にＰ＜０．０１；９日目、４４日目にＰ＜０．０５）に統計的に有意な腫瘍成長の抑制が認められた。６ｍｇ／ｋｇ群で１６日目〜３０日目および３ｍｇ／ｋｇ群で２０日目に４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率であった。したがって、カンプトサールは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）の活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて活性であると判断された。
【０１９６】
ＫＭ−２０Ｌ２異種移植片モデルにおけるｈｕＣＢＥ１１の抗腫瘍活性を評価するための並行投与研究では、腫瘍成長は、賦形剤コントロール群と比較して、ｈｕＣＢＥ１１  ２ｍｇ／ｋｇ（２８日目および３３日目）および４ｍｇ／ｋｇ（２１日目〜２８日目）の投与群で有意に（Ｐ＜０．０５）減少することが認められた。並行個別研究では（併用療法の有効性も試験される）、以下の用量のｈｕＣＢＥ１１によって腫瘍成長が有意に抑制された。
【０１９７】
（１）１６日目〜５５日目で２０ｍｇ／ｋｇ（２０日目〜４８日目でＰ＜０．００１；１６日目、５１日目、５５日目でＰ＜０．０１）、
（２）１６日目〜５５日目で２ｍｇ／ｋｇ（１６日目〜５１日目でＰ＜０．００１；５５日目でＰ＜０．０１）、および
（３）２０日目〜５５日目で０．２ｍｇ／ｋｇ（２７日目〜３０日目でＰ＜０．００１；２０日目〜２３日目、３４日目〜３７日目、４４〜４８日目でＰ＜０．０１；５１日目〜５５日目でＰ＜０．０５）。
ｈｕＣＢＥ１１用量群のＴ／Ｃ率は、一連の両研究を通して４２％未満であった。第２の研究群で認められた最も低いＴ／Ｃ率は、２７日目の２０ｍｇ／ｋｇ群での４２．４％であった。要するに、ｈｕＣＢＥ１１は、ＮＣＩの活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて不活性であると判断された。３３日目の投与研究の終了時に、２ｍｇ／ｋｇのｈｕＣＢＥ１１は、賦形剤コントロールと比較して腫瘍成長を統計的に有意に抑制した。４ｍｇ／ｋｇ群の２１日目〜２８日目および２ｍｇ／ｋｇ群の２８日目でも抑制が認められた。個別の試験では、賦形剤コントロールと比較して、１６日目〜５５日目の２０ｍｇ／ｋｇ、１６日目〜５５日目の２ｍｇ／ｋｇ、および２０日目〜５５日目の０．２ｍｇ／ｋｇのｈｕＣＢＥ１１で腫瘍成長の有意な抑制が認められた。２７日目の２０ｍｇ／ｋｇ群のｈＣＢＥ１１におけるＴ／Ｃ率は４２．４％に低下した。
【０１９８】
ｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせ効果も試験した。ｈｕＣＢＥ１１  ２０ｍｇ／ｋｇとカンプトサール３ｍｇ／ｋｇとの組み合わせにより、ｈｕＣＢＥ１１  ２０ｍｇ／ｋｇのみと比較して腫瘍成長が統計的に有意に減少した（１６日目〜４１日目、４８日目でＰ＜０．００１；１３日目、４４日目〜５５日目でＰ＜０．０１）（図８）。ｈｕＣＢＥ１１  ２ｍｇ／ｋｇと組み合わせた場合、３ｍｇ／ｋｇ（１６日目〜４４日目でＰ＜０．００１；４８日目〜５５日目でＰ＜０．０１；１３日目でＰ＜０．０５）または１．８ｍｇ／ｋｇ（２０日目でＰ＜０．００１；２３日目でＰ＜０．０１；１６日目、２７日目〜３７日目でＰ＜０．０５）のカンプトサール用量でもｈｕＣＢＥ１１  ２ｍｇ／ｋｇのみと比較して平均腫瘍重量が有意に低下した。ｈｕＣＢＥ１１  ０．２ｍｇ／ｋｇと組み合わせた場合、ｈｕＣＢＥ１１  ０．２ｍｇ／ｋｇのみと比較して、カンプトサール１．８ｍｇ／ｋｇは１３日目〜２３日目で腫瘍成長を統計的に有意に（Ｐ＜０．０５）抑制した。さらに、ｈｕＣＢＥ１１  ９．４８ｍｇ／ｋｇおよびカンプトサール６ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）、ｈｕＣＢＥ１１  ４．７４ｍｇ／ｋｇおよびカンプトサール３ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）、ならびにｈｕＣＢＥ１１  ２．８４ｍｇ／ｋｇおよびカンプトサール１．８ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）は、研究終了時に腫瘍成長を統計的に有意に抑制した。これらのｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせ群の大部分のＴ／Ｃ率は、研究終了時に１６日目または２０日目で４２％未満であった。したがって、ｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせは、ＮＣＩの活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて活性であると判断された。
【０１９９】
ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールのいずれかが互いに増強されるか協力性に作用することができるかどうかを試験するために、上記のように腫瘍成長モデルにおいてＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺癌を移植した胸腺欠損ヌードマウスを使用して、相乗作用研究を行った。これらのｈｕＣＢＥ１１／カンプトサール組み合わせ研究のために、６ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１．８ｍｇ／ｋｇのカンプトサール用量を選択した。９日目、１３日目、１６日目、２０日目、２３日目、２７日目、３０日目、３４日目、３７日目、および４１日目でＦａ値の計算のために使用した腫瘍データを取った。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍有効性を決定した。コントロール群と治療群との間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。腫瘍体積の抑制率（すなわち、影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示した。表１５は、実験の経時変化にわたる個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。次いで、ｈｕＣＢＥ１１とカンプトサールとの組み合わせ治療についての協力作用および強化の評価で得られたＦａ値を使用した。
【０２００】
【表１５−３】
2006513225.tif 000020
【０２０１】
【表１５−４】
2006513225.tif 000021
ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールの個別の治療および組み合わせ治療の抗腫瘍活性の所見およびＦａ値の計算後、協力作用についてｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールの間の関係を試験した。カンプトサールのみでのＫＭ−２０Ｌ２腫瘍を保有するマウスの治療により用量応答腫瘍有効性が得られるので、ｈｕＣＢＥ１１＋カンプトサールの組み合わせの協力作用を、組み合わせ指数（ＣＩ）の計算によって正式に評価することができた。ＣＩ計算で使用した用量−効果関係を表１６に示し、中央値効果用量を表１７にまとめる。固定比が１：０．６３（ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１：ｍｇ／ｋｇカンプトサール）である本研究で協力性薬物作用を評価するために使用した用量を投与した。この比は、上記研究で決定した２つの薬剤の中央値効果用量の比に基づいた。協力作用の正式な評価には、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ベースの用量−効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用した組み合わせ指数（ＣＩ）の計算を使用した。上記のように、組み合わせで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示す。ＣＩ＜１は協力作用を示す。ＣＩ＞１は拮抗作用を示す。組み合せで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示した。１未満のＣＩは協力作用を示した。１を超えるＣＩは拮抗作用を示した。カンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１の組み合わせ指数試験を通して、１：０．６３（ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１：ｍｇ／ｋｇカンプトサール）の固定比の組み合わせ治療により協力性抗腫瘍有効性を示すことが認められた。カンプトサールおよびｈｕＣＢＥ１１の個別の治療および組み合わせ治療についての用量−応答関係の可能性および形状を、それぞれ表１８および１９に示す。組み合わせ治療研究で使用された正確な実験用量レベルのために計算したＣＩ値を、表１９に示す。
【０２０２】
【表１６】
2006513225.tif 000022
【０２０３】
【表１７】
2006513225.tif 000023
【０２０４】
【表１８】
2006513225.tif 000024
【０２０５】
【表１９】
2006513225.tif 000025
本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、排反ＣＩ値を適用した。２．８４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋１．８ｍｇ／ｋｇカンプトサール、４．７４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋３ｍｇ／ｋｇカンプトサール、および９．４８ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋６ｍｇ／ｋｇカンプトサールは、１６日目〜４１日目で協力効果を示した（表１９）。組み合わせの用量レベル範囲を超えるＣＩのシミュレーションを表２０におよび２１に示し、ＣＩによって示した協力作用または拮抗作用の程度の全解釈を表３に示す。全治療期間を通して協力効果が認められた。腫瘍抑制率の関数としてのＣＩを図１０に示す。５０％を超える腫瘍抑制レベルで協力作用が最も顕著であった。組み合わせの協力性効果のピークは、１６日目に示された。２０％〜８０％の腫瘍抑制が得られる用量範囲は、１ｍｇ／ｋｇと１００ｍｇ／ｋｇとの間の用量レベルでの２つの薬物の組み合わせであった。要するに、ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールの固定比の組み合わせ治療（１：０．６３）により、協力性抗腫瘍有効性が認められた。
【０２０６】
【表２０−１】
2006513225.tif 000026
【０２０７】
【表２０−２】
2006513225.tif 000027
【０２０８】
【表２１−１】
2006513225.tif 000028
【０２０９】
【表２１−２】
2006513225.tif 000029
要するに、ＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるカンプトサールとの組み合わせ治療により、ｈｕＣＢＥ１１投与のみおよびカンプトサール投与のみと比較して有意に改善された結果が認められた。特に、ｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールを使用した固定比１：０．６３（ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１：ｍｇ／ｋｇカンプトサール）での組み合わせ治療の効果は、同一の化合物を使用したＷｉＤｒマウスモデルについての組み合わせ分析の結果と類似しており、組み合わせ指数分析によって協力性であると判断された。
【０２１０】
（実施例４：ヌクレオシドアナログである化学療法剤と組み合わせたＬＴβＲアゴニストの抗腫瘍効果）
（Ａ．ＷｉＤｒ異種移植片マウスモデルにおけるｈｕＣＢＥ１１／ゲムシタビン併用療法の抗腫瘍効果）
ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたヌクレオシドアナログ化学療法剤（例えば、ゲムシタビン）の投与によって相乗的（例えば、協力性）抗腫瘍活性が得られるかどうかを決定するために、ＷｉＤｒマウスモデルを使用してｈｕＣＢＥ１１と組み合わせてゲムシタビンを投与した。
【０２１１】
ゲムシタビンおよびｈｕＣＢＥ１１の組み合わせ抗腫瘍効果の研究のための適切なゲムシタビン用量を決定するために、用量範囲決定研究を行った。４つのゲムシタビン群（１４０、１００、５０、および２５ｍｇ／ｋｇ）および生理食塩水コントロール群の平均（±平均の標準誤差（ＳＥＭ））腫瘍重量を、一連の投与研究にわたって測定した（０〜４２日目）。移植時の腫瘍取り込み率（ｔｕｍｏｒ  ｔａｋｅ  ｒａｔｅ）は９８％を超え、治療を開始するために狭いサイズ範囲の５６頭のマウスを選択した。ゲムシタビン１４０ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＝０．００１）、１００ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＝０．０００２）、５０ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＝０．００８）、および２５ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＝０．００６）において、生理食塩水コントロール群と比較して４２日目に腫瘍成長の有意な阻害が認められた。これらの用量群において、１１日目〜１４日目までに最初に抑制が明らかとなった。従って、研究したゲムシタビンの全ての用量（１４０、１００、５０、および２５ｍｇ／ｋｇ）は、予め確立されたＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍を有する胸腺欠損ヌードマウスにおいて、生理食塩水コントロールと比較して腫瘍成長を有意に（Ｐ≦０．０１）抑制した。
【０２１２】
個別の研究では、５０、２５、１２．５、および６．２５ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン用量の効果を試験した。移植時の腫瘍取り込み率は１００％であり、治療を開始するために狭いサイズ範囲の１８０頭のマウスを選択した。ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．００１）、２５ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．００１）、および６．２５ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．０５）において、賦形剤コントロール群と比較して４１日目（研究終了時）に腫瘍成長の有意な阻害が認められた。これらの用量群において、１０日目まで抑制が明らかであった。１２．５ｍｇ／ｋｇ群においては、４１日目で有意な抑制は認められなかった。ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ群の１７日目〜２８日目ならびにゲムシタビン２５ｍｇ／ｋｇ群の２１日目および２８日目のＴ／Ｃ率は４２％に低下した。これらの測定点とは別に、ゲムシタビンのみの投与の応答では、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＣＩ）の活性基準（４２％またはそれ以下の試験／コントロール率（Ｔ／Ｃ率））を超えず、試験した全てのゲムシタビン治療は、４１日目（研究終了時）でＮＣＩガイドラインによって不活性であると見なされた。要するに、５０ｍｇ／ｋｇ〜６．２５ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン用量は、ＮＣＩ活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて４１日目の第２の研究終了時にＷｉＤｒモデルにおいて不活性であると判断された。ゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．００１）、２５ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．００１）、および６．２５ｍｇ／ｋｇ群（Ｐ＜０．０５）において、生理食塩水コントロール群と比較して４１日目に腫瘍成長の有意な阻害が認められた。
【０２１３】
並行研究では、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌異種移植片モデルにおいてｈｕＣＢＥ１１活性も試験した。漸増用量（５、５０、および１００μｇ）のゲムシタビンを投与した３つの群および生理食塩水群を、抗腫瘍活性についてアッセイした。腫瘍成長は、賦形剤コントロール群と比較してｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇ群および１００μｇ群で４１日目で有意に（Ｐ＜０．００１）減少した。この減少は、１４日目まで明らかであった。ｈｕＣＢＥ１１  ５μｇでの治療は、腫瘍成長を有意に抑制しなかった。Ｔ／Ｃ率は、ｈｕＣＢＥ１１  １００μｇでは４１日目に４０．０％に低下し、５０μｇ群では４１日目に４３．５％に低下した。従って、ＮＣＩ活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＷｉＤｒモデルにおいてｈｕＣＢＥ１１  １００μｇは活性であると判断された。
【０２１４】
ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌異種移植片モデルにおけるｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせ抗腫瘍効果も試験した。ｈｕＣＢＥ１１  １００μｇとゲムシタビン２５ｍｇ／ｋｇまたは１２．５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療（図２）は、ｈｕＣＢＥ１１  １００μｇのみと比較して４１日目に胸腺欠損ヌードマウスにおいて腫瘍成長を有意に（Ｐ＜０．０１）抑制した。ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇとゲムシタビン２５ｍｇ／ｋｇまたは１２．５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ｈｕＣＢＥ１１  ５０μｇのみと比較して腫瘍成長を有意に（それぞれＰ＜０．０１およびＰ＜０．０５）抑制した。この抑制は、２つの用量のｈｕＣＢＥ１１および全ての用量のゲムシタビンの投与後、１７日目までに全ての群で一貫して明らかであった。この結果は、研究を通して持続した。全てのこれらのｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビン組み合わせ群における１７日目または２１日目から４１日目までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった。４１日目に最も低いＴ／Ｃ率が認められた（全用量群範囲で２０．１〜２６．８％）。
【０２１５】
さらに、８８μｇ／５０ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）、４４μｇ／２５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）、２２μｇ／１２．５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０１）、１１μｇ／６．２５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＝０．０１）のｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンの組み合わせ群において、研究終了時に腫瘍成長の有意な阻害が認められた。この阻害は、１４日目と１７日目との間で明らかとなった。ｈｕＣＢＥ１１  ８８μｇとゲムシタビン５０ｍｇ／ｋｇとの群（１９．６％に減少）ならびにｈｕＣＢＥ１１  ４４μｇとゲムシタビン２５ｍｇ／ｋｇとの群（２４．５％に減少）における１４日目または１７日目から４１日目までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった。ｈｕＣＢＥ１１  ２２μｇとゲムシタビン１２．５ｍｇ／ｋｇとの群（３７．９％に減少）における２８日目から４１日目までのＴ／Ｃ率は４２％未満であった。ｈｕＣＢＥ１１  １１μｇおよびゲムシタビン６．２５ｍｇ／ｋｇにおける最も低いＴ／Ｃ率は、４１日目の４２．６％であった。ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンの最も低い用量の組み合わせのほとんどのＴ／Ｃ率が４１日目で４２％またはそれ以下であった（用量群の範囲：２０．１％〜３８．１％）。したがって、ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンの組み合わせ治療は、ＮＣＩ活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＷｉＤｒモデルで活性であると判断された。
【０２１６】
ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンが協力性に作用することができるかどうかを試験するために、上記のように腫瘍成長モデルにおいてＷｉＤｒヒト結腸腺癌を移植した胸腺欠損ヌードマウスを使用して相乗作用研究を行った。これらのｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビン組み合わせ研究のために、５０、２５、１２．５、および６．２５ｍｇ／ｋｇの用量のゲムシタビンならびに１００、８８、５０、４４、２２、および１１μｇの用量のｈｕＣＢＥ１１を選択した。Ｆａ値計算のために使用した全腫瘍データを、２８日目にとった。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって、抗腫瘍有効性を決定した。コントロール群と治療群との間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。腫瘍体積の抑制率（影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。表２２は、個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。次いで、得られたＦａ値を、ｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせ治療についての協力作用の評価に使用した。
【０２１７】
【表２２】
2006513225.tif 000030
これらの組み合わせ治療研究から得た腫瘍重量データを使用して、ｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせがその作用様式で協力性であるかどうかを決定するために、統計的比較を行った。ゲムシタビンのみでのＷｉＤｒ腫瘍を保有するマウスの治療により用量応答抗腫瘍有効性が得られるので、組み合わせ指数（ＣＩ）の計算によってｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビン組み合わせの協力作用を正式に評価することができた（Ｃｈｏｕ，１９８４）。協力作用の正式な評価には、Ｗｉｎｄｄｏｗｓベースの用量−効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用した組み合わせ指数（Ｃ．Ｉ．）の計算を使用した。上記のように、組み合わせで投与した治療について、Ｃ．Ｉ．＝１は累加有効性を示す。Ｃ．Ｉ．＜１は協力作用を示す。Ｃ．Ｉ．＞１は拮抗作用を示す。本研究における協力性薬物作用の評価に使用した用量の固定比は０．５６８：１（ｍｇ／ｋｇゲムシタビン：μｇ  ｈｕＣＢＥ１１）であった。この比は、以前のパイロット研究で決定した２つの薬剤についての中央値効果用量の比を基本としていた。協力作用の正式な評価には、Ｗｉｎｄｄｏｗｓベースの用量効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用した組み合わせ指数（ＣＩ）の計算を使用した。組み合わせで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示した。１未満のＣＩは協力作用を示した。１を超えるＣＩは拮抗作用を示した。ＣＩ計算で使用した用量−効果関係を、表２３に示す。
【０２１８】
【表２３】
2006513225.tif 000031
ゲムシタビンおよびｈｕＣＢＥ１１の個別の治療および組み合わせ治療についての用量−応答関係の可能性および形状を、それぞれ表２４および２５に示す。この研究で使用された正確な実験用量レベルのために計算したＣＩ値を、表２６に示す。
【０２１９】
本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、たいてい排反ＣＩ値を適用した。６．２５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋１１．０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、１２．５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋２２．０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、２５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋４４μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、および５０ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋８８．０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１は、協力効果を示した。組み合わせの用量レベル範囲を超えるＣＩのシミュレーションを表２７に示し、ＣＩによって示した協力作用または拮抗作用の程度の全解釈を表３に示す。０．００５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン＋０．００８μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が２％抑制される）から８５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン＋１５０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が８５％抑制される）までの範囲の組み合わせ用量が協力効果を示した。したがって、ゲムシタビン：ｈｕＣＢＥ１１の固定比が０．５６８：１の組み合わせ治療は協力性抗腫瘍有効性を示した。影響率の関数としてのＣＩを、図１１に示す。
【０２２０】
【表２４】
2006513225.tif 000032
【０２２１】
【表２５】
2006513225.tif 000033
【０２２２】
【表２６】
2006513225.tif 000034
【０２２３】
【表２７】
2006513225.tif 000035
本研究で薬物の増強を評価するために使用した用量は、固定比の組み合わせを制限しなかった。統計的に有意な増強の試験には、各動物のＦａの計算が必要である。各腫瘍体積（表４３）を使用して、各動物の腫瘍体積の抑制率（Ｆａ）を計算した（表４４）。（コントロール群の平均腫瘍体積−個別の動物の腫瘍体積）÷コントロール群の平均腫瘍体積としてＦａを計算した。組み合わせ治療についての予想される累加Ｆａを、組み合わせのいずれかの成分を投与した群由来の平均Ｆａ‘の合計であると解釈する。組み合わせ治療の実際の効果と治療が単に累加であると予想される効果との間の相違も計算した（表４４）。両側１サンプルｔ検定を使用して、組み合わせ治療により予想される累加値と統計的に有意に異なる平均Ｆａが得られるかどうかを決定した（表４４）。
【０２２４】
本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、たいてい排反ＣＩ値を適用した。６．２５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋１１μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、１２．５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋２２μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、２５ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋４４μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、および５０ｍｇ／ｋｇ  ゲムシタビン＋８８μｇ  ｈｕＣＢＥ１１の組み合わせ用量は、協力効果を示した。０．００５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン＋０．００８μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が２％抑制される）から８５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン＋１５０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が８５％抑制される）までの範囲の組み合わせ用量が協力効果を示した。Ｃ．Ｉ．によって示した協力作用または拮抗作用の程度の全解釈を表１５に示す。５０または１００μｇのｈｕＣＢＥ１１と組み合わせた場合、１２．５または２５ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンにより、累加未満の統計的に有意な効果が得られた（表４４）。
【０２２５】
【表４３−１】
2006513225.tif 000036
【０２２６】
【表４３−２】
2006513225.tif 000037
【０２２７】
【表４４】
2006513225.tif 000038
要するに、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるゲムシタビンとの組み合わせ治療により、低濃度のｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンで協力性であると判断されるｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンの組み合わせ治療の効果が示された。
【０２２８】
（Ｂ．ＫＭ−２０Ｌ２マウスモデルを使用したｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせの抗腫瘍効果）
ｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたヌクレオシドアナログ化学療法剤（例えば、ゲムシタビン）の投与によって相乗的（例えば、増強または協力性）抗腫瘍活性を示すかどうかを決定するために、さらなるヒト結腸直腸腺癌マウスモデル系であるＫＭ−２０Ｌ２モデルも使用した。
【０２２９】
ゲムシタビンとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ抗腫瘍効果の研究のための適切なゲムシタビンおよびｈｕＣＢＥ１１の用量を決定するために、最初に用量範囲決定研究を行った。２５ｍｇ／ｋｇから１４０ｍｇ／ｋｇまでの漸増用量のゲムシタビンを、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍細胞を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスに投与した（０日目）。移植時の腫瘍取り込み率は１００％であり、治療を開始するために狭いサイズ範囲の１１０頭のマウスを選択した。生理食塩水コントロール群と比較して、１０日目から研究最終日の４１日目までに、１４０ｍｇ／ｋｇ（１０日目にＰ＜０．０５；１４日目〜４１日目にＰ＜０．００１）、１００ｍｇ／ｋｇ（１０日目にＰ＜０．０５；１４日目〜４１日目にＰ＜０．００１）、５０ｍｇ／ｋｇ（１０日目〜４１日目にＰ＜０．００１）、および２５ｍｇ／ｋｇ（１９日目および４１日目にＰ＜０．０１；１４日目〜３７日目にＰ＜０．００１）のゲムシタビン群で統計的に有意な腫瘍成長の抑制が認められた。１４日目または１７日目のＴ／Ｃ率は４２％またはそれ以下であり、１４０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、および５０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン群での研究期間中この比率を維持した。２５ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン群のＴ／Ｃ率は１７日目に４２％またはそれ以下であり、３１日目までこの比率を維持した。個別の研究では、ＫＭ−２０Ｌ２ヒト腺癌異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性について、５、１０、２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン用量を試験した。移植時の腫瘍取り込み率は１００％であり、治療を開始するために狭いサイズ範囲の１２９頭のマウスを選択した。賦形剤コントロール群における腫瘍成長は、十分にこのモデルを使用して本研究所で認められた典型的な範囲内であった。賦形剤コントロール群と比較して、ゲムシタビン群（２０ｍｇ／ｋｇでは１３日目〜５５日目（１３日目〜４７日目にＰ＜０．００１、５０日目〜５５日目にＰ＜０．０１）、１０ｍｇ／ｋｇでは１６日目〜５５日目（１６日目〜５０日目にＰ＜０．０１、５５日目にＰ＜０．０５）、５ｍｇ／ｋｇでは１３日目〜４３日目（２０日目〜２３日目にＰ＜０．０１、１３日目〜１６日目および２７日目〜４３日目にＰ＜０．０５））で有意な腫瘍成長の抑制が認められた。１６日目のＴ／Ｃ率は４２％またはそれ以下であり、２０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン群で３４日間この比率を維持した。したがって、ゲムシタビンは、ＮＣＩの活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて活性であると判断された。
【０２３０】
並行用量範囲決定研究では、ＫＭ−２０Ｌ２ヒト腺癌異種移植片モデルにおけるｈｕＣＢＥ１１の活性を試験した。０．２、２、４、および２０ｍｇ／ｋｇのｈｕＣＢＥ１１を投与した。移植時の腫瘍取り込み率は９９．５％であり、治療を開始するために狭いサイズ範囲の１１０頭のマウスを選択した。賦形剤コントロール群と比較して、２ｍｇ／ｋｇ（２８日目〜３３日目）および４ｍｇ／ｋｇ（２１日目〜２８日目）のｈｕＣＢＥ１１群で腫瘍成長が有意に（Ｐ＜０．０５）減少した。これらの用量群の最も低いＴ／Ｃ率は４２％を超えた。個別の研究では、０．２、２、および４ｍｇ／ｋｇのゲムシタビン群を、ＫＭ−２０Ｌ２モデルマウスに投与した。これらのマウスのために、賦形剤コントロール群と比較して、２０日目〜５５日目に４ｍｇ／ｋｇ（２０日目〜２３日目でＰ＜０．０１；２７〜５５日目でＰ＜０．００１）および２ｍｇ／ｋｇ（２０日目〜２３日目でＰ＜０．０１；２７〜５５日目でＰ＜０．００１）のｈｕＣＢＥ１１群で腫瘍成長が有意に減少した。Ｔ／Ｃ率は、４ｍｇ／ｋｇのｈｕＣＢＥ１１群では５０日目および５５日目ならびに２ｍｇ／ｋｇのｈｕＣＢＥ１１では４１日目〜５５日目で４２％またはそれ以下であった。したがって、ｈｕＣＢＥ１１は、ＮＣＩの活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて活性であると判断された。
【０２３１】
ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンの組み合わせ効果も試験した。コホート動物を、７日目から開始する単一の薬剤として以下の同一の投与計画を使用して処置した：生理食塩水コントロール（０．９％滅菌生理食塩水）、漸減量のゲムシタビン（２０、１０、５ｍｇ／ｋｇ）、漸減量のｈｕＣＢＥ１１（４、２、および０．２ｍｇ／ｋｇ）、またはｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせ用量（４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋２０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋１０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、０．２ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋２０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、０．２ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋１０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、８ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋１０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、および２０ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋２５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン）。腫瘍の長さが平均して５ミリメートル（ｍｍ）および幅が５ｍｍに到達した場合、全ての治療を開始した。ｈｕＣＢＥ１１  ４ｍｇ／ｋｇとゲムシタビン２０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ｈｕＣＢＥ１１  ４ｍｇ／ｋｇのみと比較して、１０日目〜５５日目に腫瘍成長を有意に抑制した（１０日目にＰ＜０．０１；１３〜５５日目にＰ＜０．００１）（図１２）。この用量群のＴ／Ｃ率は、１６日目から５５日目までは４２％またはそれ以下であり、３７日目に１３．６％に低下した。ｈｕＣＢＥ１１  ４ｍｇ／ｋｇとゲムシタビン１０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ｈｕＣＢＥ１１  ４ｍｇ／ｋｇのみと比較して、１３日目〜５５日目に腫瘍成長を有意に抑制した（１６日目〜５０日目にＰ＜０．００１；１３日目および５５日目にＰ＜０．０１）。この用量群のＴ／Ｃ率は、２０日目〜５５日目までは４２％またはそれ以下であり、１５．８％に低下した。ｈｕＣＢＥ１１  ０．２ｍｇ／ｋｇとゲムシタビン２０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ゲムシタビン２０ｍｇ／ｋｇのみと比較して、２７日目〜５５日目に腫瘍成長を有意に抑制した（２７日目、３７日目、および４３日目にＰ＜０．０５；３０日目〜３４日目、４１日目、４７〜５５日目にＰ＜０．０１）。この用量群のＴ／Ｃ率は、１６日目から５５日目までは４２％またはそれ以下であり、３０日目に１９．８％に低下した。ｈｕＣＢＥ１１  ０．２ｍｇ／ｋｇとゲムシタビン１０ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ゲムシタビン１０ｍｇ／ｋｇのみと比較して、腫瘍成長を有意に抑制せず、Ｔ／Ｃ率は、いかなる期間においても４２％またはそれ以下であった。ｈｕＣＢＥ１１４ｍｇ／ｋｇとゲムシタビン５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせ治療は、ｈｕＣＢＥ１１  ４ｍｇ／ｋｇのみと比較して、９日目〜４３日目、５５日目に腫瘍成長を有意に抑制した（９日目、４１日目、４３日目、および５５日目にＰ＜０．０５；１３日目、２０日目、２７日目、３４日目、および３７日目にＰ＜０．０１；１６日目、２３日目、および３０日目にＰ＜０．００１）。この用量群のＴ／Ｃ率は、２０日目〜５５日目に４２％またはそれ以下であり、３７日目に２５．６％に低下した。腫瘍成長の抑制についてｈｕＣＢＥ１１  ８ｍｇ／ｋｇおよびゲムシタビン１０ｍｇ／ｋｇとｈＣＢＥ１１  ８ｍｇ／ｋ���との比較またはｈｕＣＢＥ１１  ２０ｍｇ／ｋｇおよびゲムシタビン２５ｍｇ／ｋｇとｈＣＢＥ１１  ２０ｍｇ／ｋｇとの比較は不可能であるが、これらの群で認められたＴ／Ｃ率は、１６日目〜５５日目で４２％またはそれ以下であった。要するに、ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンの上記６つの組み合わせ治療は、ＮＣＩの活性基準（４２％またはそれ以下のＴ／Ｃ率）に基づいて、ＫＭ−２０Ｌ２腫瘍モデルにおいて活性であると判断された。これらの６つのｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビン併用療法はそれぞれ腫瘍成長を統計的に有意に減少させた。
【０２３２】
これらの組み合わせ治療研究から得た腫瘍重量データを使用して、ｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせがその作用様式で協力性であるかどうかを決定するための統計的比較を行った。ゲムシタビンまたはｈｕＣＢＥ１１のみでのＫＭ−２０Ｌ２腫瘍保有マウスの治療は用量応答抗腫瘍有効性を示したので、組み合わせ指数（ＣＩ）の計算によってｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビン組み合わせの協力作用を正式に評価することができた（Ｃｈｏｕ，１９８４）。
【０２３３】
ｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビンの組み合わせ投与を使用して相乗効果が得られるかどうかを評価することができるために、各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍有効性を最初に決定した。コントロール群と治療群の間の平均腫瘍体積の相違として平均腫瘍体積の減少を計算した。腫瘍体積の抑制率（すなわち、影響率（Ｆａ））を、治療群の平均腫瘍体積の減少をコントロール群の平均腫瘍体積で割ることによって計算した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。本研究における協力性薬物作用の評価に使用した用量の固定比は４：５（ｍｇ／ｋｇゲムシタビン：μｇ  ｈｕＣＢＥ１１）であった。この比は、２つの薬剤の中央値効果用量の比に基づく。この比は、以前のパイロット研究で決定した２つの薬剤についての中央値効果用量の比を基本としていた。表２８は、個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。
【０２３４】
【表２８−１】
2006513225.tif 000039
【０２３５】
【表２８−２】
2006513225.tif 000040
【０２３６】
【表２８−３】
2006513225.tif 000041
【０２３７】
【表２８−４】
2006513225.tif 000042
Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ベースの用量効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用したＣＩの計算によって、表２８に示すｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビン組み合わせ療法の固定比データによって協力作用を正式に評価した。組み合わせで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示した。１未満のＣＩは協力作用を示した。１を超えるＣＩは拮抗作用を示した。ＣＩ計算で使用した用量−効果関係を、表２９に示す。
【０２３８】
【表２９】
2006513225.tif 000043
ｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの個別の治療および組み合わせ治療の中央値効果用量を表３０に示す。ゲムシタビンおよびｈｕＣＢＥ１１の個別の治療および組み合わせ治療についての用量−応答関係の可能性および形状を、それぞれ表３１および３２に示す。この研究で使用された正確な実験用量レベルのために計算したＣＩ値を、表３２に示す。
【０２３９】
本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、たいてい排反ＣＩ値を適用した（表３および３２〜３４を参照のこと）。４ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、８ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋１０ｍｇ／ｋｇゲムシタビン、および２０ｍｇ／ｋｇ  ｈｕＣＢＥ１１＋２５ｍｇ／ｋｇゲムシタビン（すなわち、４：５の固定比組み合わせ）は、３４日目〜３７日目で協力効果を示した。より低いこれらの２用量組み合わせがほとんどの治療日数で協力作用を示した（表３２）。組み合わせの用量レベル範囲を超えるＣＩのシミュレーションを表３３におよび３４に示し、ＣＩによって示した協力作用または拮抗作用の程度の全解釈を表３に示す。全治療期間を通して協力効果が認められた。腫瘍抑制率の関数としてのＣＩを、図１３に示す。６０％未満の腫瘍抑制レベルで協力作用が最も顕著であった。組み合わせの協力性効果のピークは、３４日目に示された。有効性に対する協力効果を超える用量範囲を、図１４に示す。２０％〜８０％の腫瘍抑制が得られる用量範囲は、０．１ｍｇ／ｋｇと１０ｍｇ／ｋｇとの間の用量レベルでの２つの薬物の組み合わせであった（図１４）。この分析結果は、ｈｕＣＢＥ１１＋ゲムシタビンを使用した固定比の組み合わせ治療（４：５）により、協力性抗腫瘍有効性を示すことが証明された。
【０２４０】
【表３０】
2006513225.tif 000044
【０２４１】
【表３１】
2006513225.tif 000045
【０２４２】
【表３２】
2006513225.tif 000046
【０２４３】
【表３３−１】
2006513225.tif 000047
【０２４４】
【表３３−２】
2006513225.tif 000048
【０２４５】
【表３３−３】
2006513225.tif 000049
【０２４６】
【表３４−１】
2006513225.tif 000050
【０２４７】
【表３４−２】
2006513225.tif 000051
【０２４８】
【表３４−３】
2006513225.tif 000052
要するに、ＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺癌を皮下移植した胸腺欠損ヌードマウスにおけるＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１と化学療法剤であるゲムシタビンとの組み合わせ治療により、ｈｕＣＢＥ１１とゲムシタビンとの組み合わせ治療の効果は協力性であると判断された。
【０２４９】
（実施例５：植物アルカロイドである化学療法剤と組み合わせたＬＴβＲアゴニストの抗腫瘍効果）
（ｈｕＣＢＥ１１とタキソールの組み合わせの抗腫瘍効果）
植物アルカロイド化学療法剤（例えば、タキソール）とＬＴβ受容体活性化ｍＡｂであるｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ治療を使用して癌治療で相乗効果が得られるかどうかを決定するために、ＷｉＤｒ異種移植片モデルにおいて抗体／化学療法剤組み合わせを使用して、潜在的な協力性抗腫瘍活性および抗腫瘍活性の増強を試験した。
【０２５０】
組み合わせ抗腫瘍効果の研究のための適切なタキソールおよびｈｕＣＢＥ１１の用量を決定するために、用量範囲決定研究を最初に行った。各薬剤の研究により、腫瘍成長抑制に対する各薬剤の抗腫瘍効果も試験した。確立されたＷｉＤｒ腫瘍を保有する胸腺欠損ヌードマウスを、生理食塩水（コントロール）、ｈｕＣＢＥ１１（５μｇ、５０μｇ、１００μｇ、または５００μｇ）、またはタキソール（３．１３ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇまでの用量範囲）のいずれかで処置した（生理食塩水コントロールはｎ＝３０／用量、実験群はｎ＝１０／用量）。３日目に腫瘍サイズを測定し、その後悪性度分類日まで定期的に測定した。
【０２５１】
タキソールのみの実験群で腫瘍成長が阻害された。５０日目に、２５ｍｇ／ｋｇタキソールは、胸腺欠損ヌードマウスのＷｉＤｒヒト結腸直腸腫瘍成長を有意に阻害した（Ｐ＜０．０００１）。２５ｍｇ／ｋｇ群の２１日目から５０日目までのＴ／Ｃ率は４２％またはそれ以下であった。１２．５ｍｇ／ｋｇ、６．２５ｍｇ／ｋｇ、および３．１３ｍｇ／ｋｇのタキソール用量群の腫瘍成長は、賦形剤コントロール群と有意に異ならず、これらの用量群における研究を通してＴ／Ｃ率は８２％を超えた。さらに、タキソールにより、２５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０００１）、１８．７５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．００１）、および６．２５ｍｇ／ｋｇの群では３９日目および１２．５ｍｇ／ｋｇ（Ｐ＜０．０５）の群では１３日目〜３２日目に腫瘍成長が有意に抑制された。Ｔ／Ｃ率は、２５ｍｇ／ｋｇ群では１３日目〜３９日目および１８．７５ｍｇ／ｋｇ群では２１日目〜３４日目に４２％またはそれ以下であった。
【０２５２】
ｈｕＣＢＥ１１実験群の腫瘍成長も抑制された。４５日目に、５００μｇ（Ｐ＜０．００１）、１００μｇ（Ｐ＜０．００１）、５０μｇ（Ｐ＜０．００１）、および５μｇ（Ｐ＜０．０５）の用量のｈｕＣＢＥ１１は、腫瘍成長を有意に抑制した。３９日目に類似の結果が認められ、５００μｇ（Ｐ＜０．００１）および５０μｇ（Ｐ＜０．０１）のｈｕＣＢＥ１１での治療後の腫瘍重量は賦形剤よりも有意に低かった。５００μｇ群における３１日目〜４５日目のＴ／Ｃ率は４２％未満であった。
【０２５３】
タキソールとｈｕＣＢＥ１１との組み合わせ治療が腫瘍成長抑制に有効であるかどうかを決定するために、上記のように確立された腫瘍を有する確立されたＷｉＤｒ腫瘍細胞を保有する胸腺欠損ヌードマウスに対して組み合わせ研究を行った。ｈｕＣＢＥ１１とタキソールとの組み合わせは、ＮＣＩ活性基準に基づいて、ＷｉＤｒモデルにおいて活性であると判断された。（Ｔ／Ｃ率は４２％またはそれ以下であった。）ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇとタキソール１２．５ｍｇ／ｋｇとの組み合わせは、３９日目にｈｕＣＢＥ１１（５００μｇ）のみよりも有意にＷｉＤｒ腫瘍成長を大幅に抑制した（Ｐ＜０．０５）。ｈｕＣＢＥ１１  ５００μｇおよびタキソール１２．５ｍｇ／ｋｇの２４日目〜３９日目、ｈｕＣＢＥ１１  ７５μｇおよびタキソール２５ｍｇ／ｋｇの１３日目〜３９日目、ｈｕＣＢＥ１１  ５６．２５μｇおよびタキソール１８．７５ｍｇ／ｋｇの１８日目〜３４日目、およびｈｕＣＢＥ１１  ３７．５μｇおよびタキソール１２．５ｍｇ／ｋｇの２７日目、３４日目および３９日目でのＴ／Ｃ率は４２％未満であった（図３）。
【０２５４】
組み合わせ研究の結果（表３５〜３９および図３および１５に示す）は、タキソールと組み合わせたｈｕＣＢＥ１１が治療マウスで腫瘍体積を有意に減少させることを証明する。抗腫瘍有効性を決定した。各治療群の腫瘍体積とコントロール群の腫瘍体積との比較によって抗腫瘍有効性を決定した。１．０００のＦａは、腫瘍の完全な抑制を示す。表３５は、３４日目のｈｕＣＢＥ１１およびタキソールの個別の治療および組み合わせ治療の用量−効果の関係を示す。
【０２５５】
【表３５】
2006513225.tif 000053
タキソールのみでのＷｉＤｒ腫瘍を保有するマウスの治療が用量応答抗腫瘍有効性を示すので、組み合わせ指数の計算によってｈｕＣＢＥ１１とタキソールとの組み合わせの協力作用を正式に評価することができた。本研究における協力性薬物作用の評価に使用した用量の固定比は０．３３３：１（ｍｇ／ｋｇタキソール：μｇ  ｈｕＣＢＥ１１）であった。この比は、以前のパイロット研究で決定した２つの薬剤についての中央値効果用量の比を基本としていた。協力作用の正式な評価には、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）ベースの用量効果分析のためのＣａｌｃｕＳｙｎ  Ｖ１．１（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ）ソフトウェアを使用した組み合わせ指数（ＣＩ）の計算を使用した。組み合わせで投与した治療について、ＣＩ＝１は累加有効性を示した。１未満のＣＩは協力作用を示した。１を超えるＣＩは拮抗作用を示した。ＣＩ計算で使用した用量−効果関係を、表３６に示す。
【０２５６】
【表３６】
2006513225.tif 000054
３４日目の腫瘍体積を使用して、組み合わせ指数の使用にて協力作用を評価した。タキソールおよびｈｕＣＢＥ１１の個別の治療および組み合わせ治療についての用量−応答関係の可能性および形状を、それぞれ表３７および３８に示す。この研究で使用された正確な実験用量レベルのために計算した組み合わせ指数を、表３９に示す。
【０２５７】
【表３７】
2006513225.tif 000055
【０２５８】
【表３８】
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【０２５９】
【表３９】
2006513225.tif 000057
本研究は完全に独立した作用様式を有すると考えられる薬物を使用するので、たいてい排反ＣＩ値を適用した。６．２５ｍｇ／ｋｇタキソール＋１８．７５μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、１２．５ｍｇ／ｋｇタキソール＋３７．５μｇ  ｈｕＣＢＥ１１、および２５ｍｇ／ｋｇタキソール＋７５μｇ  ｈｕＣＢＥ１１を使用した組み合わせ用量が協力効果を示した。組み合わせの用量レベル範囲を超えるＣＩのシミュレーションを表４０に示す。４．９ｍｇ／ｋｇタキソール＋１４．７μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が４０％抑制される）から５７ｍｇ／ｋｇタキソール＋１７０μｇ  ｈｕＣＢＥ１１（腫瘍体積が９５％抑制される）までの範囲の組み合わせ用量が協力効果を示した。影響率の関数としての組み合わせ指数を、図１２に示す。
【０２６０】
【表４０−１】
2006513225.tif 000058
【０２６１】
【表４０−２】
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本研究で薬物の増強を評価するために使用した用量は、固定比の組み合わせを制限しなかった。統計的に有意な増強の試験には、各動物のＦａの計算が必要である。各腫瘍体積（表４５）を使用して、各動物の腫瘍体積の抑制率（Ｆａ）を計算した（表４６）。（コントロール群の平均腫瘍体積−個別の動物の腫瘍体積）÷コントロール群の平均腫瘍体積としてＦａを計算した。組み合わせ治療についての予想される累加Ｆａを、組み合わせのいずれかの成分を投与した群由来の平均Ｆａの合計であると解釈する。組み合わせ治療の実際の効果と治療が単に累加であると予想される効果との間の相違も計算した（表４６）。両側１サンプルｔ検定を使用して、組み合わせ治療により予想される累加値と統計的に有意に異なる平均Ｆａが得られるかどうかを決定した（表４６）。
【０２６２】
【表４５】
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【０２６３】
【表４６】
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要するに、タキソールおよびｈｕＣＢＥ１１を使用した固定比の組み合わせ治療（０．３３３：１）は、ＷｉＤｒヒト結腸直腸腺癌に対して協力性抗腫瘍有効性を示した。
【０２６４】
（同等物）
本発明は、特に、ＬＴ−β−Ｒアゴニストを含む組み合わせ治療薬を提供する。本発明の特定の実施形態を考察しているが、上記明細書は例示であり、本発明を制限しない。本発明の多数の変形形態は、本明細書を再検討により、当業者に明らかとなる。本発明の全範囲は、特許請求の範囲およびその等価物の全範囲ならびに明細書およびこのような変形形態を参照して決定すべきである。
【０２６５】
以下に列挙した項目を含む本明細書中に記載の全ての刊行物および特許は、各刊行物または特許が具体的且つ個別に参考として援用されるように示されるかのようにその全体が本明細書中で参考として援用される。抵触に関しては、本明細書に記載のすべての定義を含む本出願が規制する。
【図面の簡単な説明】
【０２６６】
【図１】図１は、生理食塩水コントロール（クロス）、イリノテカンのみ（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたイリノテカン（カンプトサール）（四角）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の最初の投与を矢印で示す。
【図２】図２は、生理食塩水コントロール（クロス）、ゲムシタビンのみ（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１（四角）と組み合わせたゲムシタビン（四角）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の最初の投与を矢印で示す。
【図３】図３は、生理食塩水コントロール（クロス）、タキソールのみ（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたタキソール（四角）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の最初の投与を矢印で示す。
【図４】図４は、生理食塩水コントロール（クロス）、シスプラチン（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたシスプラチン（ＣＤＤＰ）（四角）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の最初の投与を矢印で示す。
【図５】図５は、生理食塩水コントロール（クロス）、アドリアマイシンのみ（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１と組み合わせたアドリアマイシン（四角）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の最初の投与を矢印で示す。
【図６】図６は、生理食塩水コントロール（クロス）、シスプラチンのみ（黒塗りの四角）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（白抜きの四角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１（三角；５００μｇ）と組み合わせたシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の投与を矢印で示す。
【図７】図７は、生理食塩水コントロール（黒塗りの三角）、アドリアマイシンのみ（黒塗りの円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（白抜きの四角）と比較した、一連の治療におけるＷｉＤｒヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１（黒塗りの四角；５００μｇ）と組み合わせたアドリアマイシン（６ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の投与を矢印で示す。
【図８】図８は、生理食塩水コントロール（四角）、カンプトサールのみ（三角）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（円）と比較した、一連の治療におけるＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１（菱形；２０ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせたカンプトサール（３ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の投与を矢印で示す。
【図９】図９は、ＷｉＤｒ腺癌モデルにおける腫瘍体積の減少に対するｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサールの組み合わせの各効果レベルでの組み合わせ指数のプロットを示す。組み合わせ指数（ＣＩ）を、影響率（Ｆａ）に対してプロットした。１未満の組み合わせ指数が相乗効果を示す。
【図１０】図１０は、ＫＭ−２０Ｌ２腺癌モデルにおける複数の治療時点での腫瘍体積の減少に対するｈｕＣＢＥ１１およびカンプトサール（固定投与比はｈｕＣＢＥ１１：カンプトサール＝１：０．６３）の組み合わせの各効果レベルでの組み合わせ指数のプロットを示す。組み合わせ指数（ＣＩ）を、認められた腫瘍抑制率に対してプロットした。１未満の組み合わせ指数が相乗効果を示す。
【図１１】図１１は、ＷｉＤｒ腺癌モデルにおける腫瘍体積の減少に対するｈＣＢＥ１１およびゲムシタビンの組み合わせの各効果レベルでの組み合わせ指数のプロットを示す。組み合わせ指数（ＣＩ）を、影響率（Ｆａ）に対してプロットした。１未満の組み合わせ指数が相乗効果を示す。
【図１２】図１２は、生理食塩水コントロール（クロス）、ゲムシタビンのみ（円）、およびｈｕＣＢＥ１１のみ（三角）と比較した、一連の治療におけるＫＭ−２０Ｌ２ヒト結腸直腸腺腫重量に対するｈｕＣＢＥ１１（四角；４ｍｇ／ｋｇ）と組み合わせたゲムシタビン（２０ｍｇ／ｋｇ）の効果を示すグラフを示す。各薬剤の投与を矢印で示す。
【図１３】図１３は、ＫＭ−２０Ｌ２腺癌モデルにおける複数の治療時点での腫瘍体積の減少に対するｈｕＣＢＥ１１およびゲムシタビン（固定投与比はｈｕＣＢＥ１１：ゲムシタビン＝４：５）の組み合わせの各効果レベルでの組み合わせ指数のプロットを示す。組み合わせ指数（ＣＩ）を、認められた腫瘍抑制率に対してプロットした。１未満の組み合わせ指数が相乗効果を示す。
【図１４】図１４は、ＫＭ−２０Ｌ２腺癌モデルマウスに固定比４：５で投与した場合のｈｕＣＢＥ１１：ゲムシタビン組み合わせ治療についての用量−応答範囲の三次元グラフを示す。
【図１５】図１５は、腫瘍体積の減少に対するｈｕＣＢＥ１１およびタキソールの組み合わせの各効果レベルでの組み合わせ指数のプロットを示す。組み合わせ指数（ＣＩ）を、影響率（Ｆａ）に対してプロットした。１未満の組み合わせ指数が相乗効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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