(57)【要約】本発明は、患者（特に哺乳類動物）腎臓の代償療法における、慢性腎不全及び他の腎臓障害の予防並びに／又は治療用の、薬剤、治療方法、及び医薬品を提供する。本発明の方法は、ＡＣＥ（アンギオテンシン転換酵素）阻害薬又はアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）と１以上の蛋白質のＯＰ／ＢＭＰファミリー（モルフォゲン、若しくはモルフォゲンの誘導物質、又は相当するモルフォゲンレセプターのアゴニスト等）との共投与を行なう。本発明は又、ＡＣＥ阻害薬又はＡＩＩＲＡとそれらのモルフォゲンとの共投与により誘発された腎臓細胞の移植方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の共投与を行なう方法。
【請求項２】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の共投与を行なう方法。
【請求項３】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類への内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の共投与を行なう方法。
【請求項４】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類への内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の共投与を行なう方法。
【請求項５】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の共投与を行なう方法。
【請求項６】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の共投与を行なう方法。
【請求項７】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、ＡＣＥＩ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤を組み合わせて前処理した治療的有効量の腎間葉前駆細胞を上記哺乳類の腎臓中へ導入する方法。
【請求項８】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、ＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤を組み合わせて前処理した治療的有効量の腎間葉前駆細胞を上記哺乳類の腎臓中へ導入する方法。
【請求項９】
上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンである請求項７又は８の方法。
【請求項１０】
上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンの誘導物質である請求項７又は８の方法。
【請求項１１】
上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニストである請求項７又は８の方法。
【請求項１２】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びＡＣＥＩの共投与を行なう方法。
【請求項１３】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びＡＩＩＲＡの共投与を行なう方法。
【請求項１４】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、上記哺乳類への内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びＡＣＥＩの共投与を行なう方法。
【請求項１５】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、上記哺乳類への内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びＡＩＩＲＡの共投与を行なう方法。
【請求項１６】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びＡＣＥＩの共投与を行なう方法。
【請求項１７】
慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、上記哺乳類へのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びＡＩＩＲＡの共投与を行なう方法。
【請求項１８】
上記哺乳類は：慢性腎不全（ＣＲＦ）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、慢性糖尿病性腎障害、糖尿病性腎糸球体症、糖尿病性腎肥大、高血圧性腎硬化症、高血圧性糸球体硬化症、慢性糸球体腎炎、遺伝性腎炎、又は腎臓異形成から選ばれる症状に悩んでいる請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項１９】
上記哺乳類の腎臓の生体検査は、上記哺乳類が：糸球体肥大、尿細管肥大、糸球体硬化症、又は尿細管間質性硬化症から選ばれる症状に悩んでいることを示す請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２０】
上記哺乳類の検査は腎繊維症を示す請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２１】
上記検査は上記哺乳類の超音波、ＮＭＲ又はＣＡＴスキャンである請求項２０の方法。
【請求項２２】
上記哺乳類は無傷な健康な腎臓を有する哺乳類中に存在する機能している腎単位の数の約４０％未満の数の機能している腎単位（ネフロンユニット）を有する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２３】
上記哺乳類は無傷な健康な腎臓を有する哺乳類中に存在する機能している腎単位の数の約２０％未満の数の機能している腎単位を有する請求項２２の方法。
【請求項２４】
上記哺乳類は腎臓移植レシピエントである請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２５】
上記哺乳類は腎臓１つのみを有する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２６】
上記哺乳類の尿沈渣の検査は、ろう様円柱の存在を示す請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２７】
上記哺乳類は慢性的に上記哺乳類のＧＦＲexp（糸球体ろ過値測定）の約４０％未満のＧＦＲを有する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項２８】
上記哺乳類は慢性的に上記哺乳類のＧＦＲexpの約２０％未満のＧＦＲを有する請求項２７の方法。
【請求項２９】
上記哺乳類は約５０ｋｇ以上の体重のヒト男性であり、慢性的に約４０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３０】
上記哺乳類は約４０ｋｇ以上の体重のヒト女性であり、慢性的に約３０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３１】
上記治療又は予防は、上記哺乳類の血清クレアチニン濃度を３月間約５％以上減少させる請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３２】
上記治療又は予防前に、上記哺乳類は腎臓機能の臨床検査値の慢性的減少を示し、約３月以上の上記治療又は予防の後、上記検査値は安定化する請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３３】
１以上の上記ＡＣＥＩ、上記ＡＩＩＲＡ又は上記モルフォゲンは経口で、腸管外（非経口）で、静脈注射で、腹腔内に、又は腎臓カプセル中に、又は埋め込み装置により投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３４】
１以上の上記ＡＣＥＩ、上記ＡＩＩＲＡ又は上記モルフォゲンの上記投与用にステントが上記哺乳類中に埋め込まれる請求項３３の方法。
【請求項３５】
１以上の上記ＡＣＥＩ又は上記ＡＩＩＲＡと１以上の上記モルフォゲンとが週一回以上約１月以上の間共投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３６】
１以上の上記ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡと、１以上の上記モルフォゲンとが週一回以上約１年以上の間共投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３７】
上記ＡＣＥＩ又は上記ＡＩＩＲＡと上記モルフォゲンとが異なる経路を通して投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３８】
上記ＡＣＥＩ又は上記ＡＩＩＲＡと上記モルフォゲンとが異なる頻度で共投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項３９】
上記モルフォゲンは約０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ上記哺乳類の体重の投薬量で投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４０】
上記モルフォゲンは約１０〜３００μｇ／ｋｇ上記哺乳類の体重の投薬量で投与される請求項３９の方法。
【請求項４１】
上記ＡＣＥＩは経口で約１〜１００００ｍｇ／Ｌ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ／Ｌ、１０〜１００ｍｇ／Ｌ、１００〜１０００ｍｇ／Ｌ、最も好ましくは１００ｍｇ／Ｌの濃度で投与される請求項１、３、５、１２、１４及び１６いずれか１項の方法。
【請求項４２】
上記ＡＩＩＲＡは経口で約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重、最も好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で投与される請求項２、４、６、１３、１５及び１７いずれか１項の方法。
【請求項４３】
上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは単一の医薬品組成物で投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４４】
上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは分離した医薬品組成物で又はほとんど同時に投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４５】
上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは分離した医薬品組成物で異なる時に投与される請求項１〜６及び１２〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４６】
上記モルフォゲンは慢性腎不全又はその危険性のある  哺乳類へ投与された場合、（ａ）異所性骨アッセイにおいて軟骨形成を誘発し；（ｂ）慢性腎不全の動物モデルにおける腎臓機能の損傷を予防、阻止、遅延若しくは軽減し、又は（ｃ）腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を生じる請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４７】
上記モルフォゲンは、ポリペプチドの前駆体（ｐｒｏ型）、完全体（ｍａｔｕｒｅ型）、又は可溶体から選ばれた少なくとも蛋白質のＣ−末端システインドメインを含有するポリペプチドを含有し、そのポリペプチドは：ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ９である請求項１〜１７いずれか１項の方法。
【請求項４８】
上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１の前駆体、完全体、又は可溶体から選ばれるポリペプチドの１以上のＣ−末端システインドメインを含有するポリペプチドを含有する請求項４７の方法。
【請求項４９】
上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７０％以上ホモロジー又は５０％同一であるポリペプチドを含有する請求項１の方法。
【請求項５０】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７５％以上ホモロジー又は６０％同一であるポリペプチドを含有する請求項４９の方法。
【請求項５１】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と８０％以上ホモロジー又は７０％同一であるポリペプチドを含有する請求項４９の方法。
【請求項５２】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と９０％以上同一であるポリペプチドを含有する請求項４９の方法。
【請求項５３】
上記ＡＣＥＩは：式Ｉ〜ＸＸＶＩＩＩのいずれかの化合物又はそれらの塩；アシルメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン；カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）；エーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン；ゾフェノプリル；カルボキシアルキルジペプチド；エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）；リジノプリル；キナプリル；ラミプリル；カルボキシアルキルジペプチドミミック；シラザプリル；ベナザプリル；ホスフィニルアルカノイルプロリン；フォシノプリル；トランドロプリル（ｔｒａｎｄｏｌｏｐｒｉｌ）；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩；セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）；ＢＲＬ３６３７８；ＭＣ−８３８；ＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）；ＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸（酢酸））；セタプリル（アラセプリル商標、大日本製薬株式会社製）；Ｒｕ４４５７０；シラザプリル；Ｒｏ３１−２２０１；リジノプリル；インダラプリル（Ｉｎｄａｌａｐｒｉｌ）（デラプリル商標）；レンチアプリル（Ｒｅｎｔｉａｐｒｉｌ）（フェンチアプリル（Ｆｅｎｔｉａｐｒｉｌ）、サンテン社製）；インドラプリル（Ｉｎｄｏｌａｐｒｉｌ）；スピラプリル；ペリンドプリル；キナプリル；ＣＩ９２５（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）；ＷＹ−４４２２１；メルカプト−含有化合物；ピボプリル（ｐｉｖｏｐｒｉｌ）；ＹＳ９８０；オマパトリラト；アラセプリル；モベルトプリル（ｍｏｖｅｌｔｏｐｒｉｌ）；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（ｐｅｒｉｎｏｄｐｒｉｌ）（Ｓ−９４９０）；ペントプリル（ｐｅｎｔｏｐｒｉｌ）；アンコベニン（ａｎｃｏｖｅｎｉｎ）；フェナセイン（ｐｈｅｎａｃｅｉｎ）；又はニコチアナミンである請求項１、３、５、７、９〜１２、１４、及び１６いずれか１項の方法。
【請求項５４】
上記ＡＩＩＲＡは：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）、テルミサルタン（ミカルディス商標）、タソサルタン、ゾラルサルタン（ｚｏｌａｒｓａｒｔａｎ）、テベテン（エプロサルタンメシラート）又はオルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）である請求項２、４、６、８〜１１、１３、１５、及び１７いずれか１項の方法。
【請求項５５】
上記ＡＣＥＩはエナラプリルである請求項１、３、５、７、９〜１２、１４、及び１６いずれか１項の方法。
【請求項５６】
医薬的に許容される塩、キャリア、賦形剤又は希釈剤と共に配合された治療的有効量のＡＣＥ阻害薬及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを含有する医薬品組成物。
【請求項５７】
医薬的に許容される塩、キャリア、賦形剤又は希釈剤と共に配合された治療的有効量のＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを含有する医薬品組成物。
【請求項５８】
ＡＣＥ阻害薬はエナラプリルである請求項５６の医薬品組成物。
【請求項５９】
ＡＩＩＲＡは：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）、テルミサルタン（ミカルディス商標）、タソサルタン、ゾラルサルタン、テベテン（エプロサルタンメシラート）又はオルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）である請求項５７の医薬品組成物。
【請求項６０】
モルフォゲンはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３のポリペプチドである請求項５６又は５７の医薬品組成物。
【請求項６１】
上記モルフォゲンは、第二ポリペプチドの前駆体、完全体、又は可溶体から選ばれた少なくとも蛋白質のＣ−末端システインドメインを含有する第一ポリペプチドであり、その第二ポリペプチドはＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ９である請求項５６又は５７の医薬品組成物。
【請求項６２】
上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７０％以上ホモロジー又は５０％同一であるポリペプチドを含有する請求項５６又は５７の医薬品組成物。
【請求項６３】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７５％以上ホモロジー又は６０％同一である請求項６２の医薬品組成物。
【請求項６４】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と８０％以上ホモロジー又は７０％同一である請求項６２の医薬品組成物。
【請求項６５】
上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と９０％以上同一である請求項６２の医薬品組成物。
【請求項６６】
上記ＡＣＥＩは：式Ｉ−ＸＸＶＩＩＩのいずれかの化合物又はそれらの塩；アシルメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン；カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）；エーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン；ゾフェノプリル；カルボキシアルキルジペプチド；エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）；リジノプリル；キナプリル；ラミプリル；カルボキシアルキルジペプチドミミック；シラザプリル；ベナザプリル；ホスフィニルアルカノイルプロリン；フォシノプリル；トランドロプリル；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩；セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）；ＢＲＬ３６３７８；ＭＣ−８３８；ＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）；ＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸）；セタプリル（アラセプリル商標、大日本製薬株式会社製）；Ｒｕ４４５７０；シラザプリル；Ｒｏ３１−２２０１；リジノプリル；インダラプリル（デラプリル）；レンチアプリル（フェンチアプリル商標、サンテン社製）；インドラプリル；スピラプリル；ペリンドプリル；キナプリル；ＣＩ９２５（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）；ＷＹ−４４２２１；メルカプト−含有化合物；ピボプリル；ＹＳ９８０；オマパトリラト；アラセプリル；モベルトプリル；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（Ｓ−９４９０）；ペントプリル；アンコベニン；フェナセイン；又はニコチアナミンである請求項５６の医薬品組成物。
【請求項６７】
上記ＡＩＩＲＡは：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）、テルミサルタン（ミカルディス商標）、タソサルタン、ゾラルサルタン、テベテン（エプロサルタンメシラート商標）又はオルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）である請求項５７の医薬品組成物。
【請求項６８】
請求項５６〜６７いずれか１項の医薬品組成物を、慢性腎不全の治療又は予防のために組成物を哺乳類へ投与する説明書と共に含有するパッケージ医薬品。
【請求項６９】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の使用。
【請求項７０】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びアンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の使用。
【請求項７１】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のための内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の使用。
【請求項７２】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のための内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質及びアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の使用。
【請求項７３】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びアンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）の使用。
【請求項７４】
哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）の使用。
【請求項７５】
ＡＣＥＩ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤で前処理した間葉前駆細胞の哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防のために哺乳類腎臓へ導入する医薬の製造用の使用。
【請求項７６】
ＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤で前処理した間葉前駆細胞の哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防のために哺乳類腎臓へ導入する医薬の製造用の使用。
【請求項７７】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びＡＣＥＩの使用。
【請求項７８】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及びＡＩＩＲＡの使用。
【請求項７９】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のための内因性のＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現及びＡＣＥＩの誘導物質の使用。
【請求項８０】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のための内因性のＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現及びＡＩＩＲＡの誘導物質の使用。
【請求項８１】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びＡＣＥＩの使用。
【請求項８２】
哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のためのＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト及びＡＩＩＲＡの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府資金援助；
本発明の一部は米国政府（国立衛生研究所認可番号第ＤＫ５９６０２、ＤＫ０９９７６号）及びワシントン大学糖尿病研究教育センター（ＤＲＴＣ）（国立衛生研究所認可番号第ＤＫ２０５７９号）により支援された。米国政府は本発明の一部に権利を有する。
【０００２】
関連出願；
本出願の請求項は、米国予備出願番号第６０／４０６４３１号、２００２年８月２８日出願、題名「慢性腎不全の治療におけるモルフォゲン及びＡＣＥ阻害薬の共投与」の出願日の優先権を主張し、その全ての内容をここで資料として使用する。
【背景技術】
【０００３】
哺乳類の腎臓のシステムは、異化作用の老廃物の血流からの除去及び体内の流体及び電解質バランスの維持の両方に中心的な役割を果たす。従って腎臓障害は、カタボライト及び他の毒素の蓄積、及び／又は電気分解又は流体における顕著な平衡失調の進行が他の主要器官系の障害及び死亡を引き起こす致命的な症状である。一般的に、腎臓障害は「急性」又は「慢性」に区分される。下記詳述されるように、これら２つの症状の違いは単なる重篤度又は進行度の問題ではなくむしろ、病因、予後、及び治療の違いを反映するものである。
【０００４】
急性腎臓障害：
急性腎臓障害は腎臓機能の急性停止又は実質的な減少として定義され、症例の９０〜９５％の数では、外傷、手術又は別の急性医学的症状に伴われる。急性腎臓障害は、腎前性病因（例えば心拍出量の減少、血液量減少、血管抵抗変化）又は腎後性病因（例えば尿管、膀胱又は尿道の閉塞症又は絞窄）に起因し、直接に腎臓に影響せず、迅速に治療すれば顕著なネフロンの損失又は腎臓への他の損傷を引き起こさない。一方、急性腎臓障害は、腎臓への更に直接な障害又は損傷を含み、ネフロン又は他の腎臓構造への恒久的損傷を引き起こす内因性腎臓の病因による場合がある。急性腎臓障害の内因性病因は、伝染性疾患（例えば各種細菌性、ウィルス性又は寄生虫性感染）、炎症性疾患（例えば糸球体腎炎、全身性エリテマトーデス）、虚血（例えば腎臓の動脈閉塞）、毒性症候群（例えば重症の金属中毒、殺菌治療又は化学療法の副作用）、及び直接的外傷を含むがこれらに限定されるものではない。
【０００５】
急性腎臓障害の診断及び治療は、その病因により様々である。ヒト患者中で、尿量減少症（尿排出量＜４００ｍｌ／日）又は無尿症（尿排出量＜５０ｍｌ／日）は症例の５０〜７０％に存在し、ＢＵＮ濃度は１０〜２０ｍｇ／ｄＬ／日又はより早く上昇し、血漿クレアチニン濃度も０．５〜１．０ｍｇ／ｄＬ／日で上昇し、代謝性アシドーシスがほとんどいつも存在する。手当されなければ、急性腎臓障害を伴う電解質及び流体平衡失調（例えば高カリウム血症、アシドーシス、水腫）は致命的な不整脈、鬱血性心臓障害、又は複合臓器システム障害をもたらす。現在の治療法は通常、急性腎臓障害の根本的病因（例えば腎前性、腎後性、又は伝染性病因）及び合併症の管理に向けられている。急性腎臓障害の重篤度に従い、まれに死亡せずに数週以上続く症状は入院患者に対して治療する。
【０００６】
慢性腎不全：
慢性腎不全（ＣＲＦ）は腎臓機能の進行性喪失である。腎臓は残存している機能性ネフロン（糸球体及び対応する細管から構成されるろ過ユニット）中での超ろ過（血液の過度のろ過）により腎臓の損傷を代償しようとする。次第に、超ろ過は更なる機能の損失を引き起こす。
慢性機能の損失は、腎臓の全ての部位中の一般化された消耗症（サイズ減少）及び進行性はん痕を引き起こす。そのうちに、はん痕全体は初期の損傷部位を覆い隠す。しかし、多くの患者（以下「患畜」も含む）は、腎臓対を組み合わせた正常な機能の７０％以上が失われて初めて腎臓障害の症状を呈するようになる。従って、慢性腎不全とは、ネフロンの顕著な継続的喪失による糸球体ろ過速度（ＧＦＲ）の進行的、恒久的な顕著な減少と定義できる。
慢性腎不全は通常、何らかの障害から慢性腎臓の機能不全（即ち、腎臓機能の５０〜６０％以上の恒久的減少）が起こる時点に始まり、腎臓組織は腎単位の顕著な喪失を引き起こす。初期の障害は、急性腎臓障害の症状の出現を伴うこともある。初期の障害の性質には関係なく、慢性腎不全は、ネフロンが進行的に喪失し、ＧＦＲが進行的に減少する徴候及び症状の「最終共通路」を発現する。この腎臓機能の進行性悪化は遅く、通常ヒト患者で数年又は数十年にわたるが、不可避のようである。
【０００７】
慢性腎不全の初期段階は、通常ＧＦＲが正常値（例えば平均的ヒト成人で３０〜４０ｍｌ／分）の約三分の一まで減少した時に始まる。顕著なネフロン喪失、及びより少ないネフロンで全体のＧＦＲを保つ明らかな「試み」の結果、残っているネフロンの構造的及び機能性レベルの両方での適応により平均の単一ネフロンＧＦＲ（ＳＮＧＦＲ）は増加する。生検サンプルの顕微鏡検査により容易に観察できるこの適応の構造的症状発現の一つは、腎臓の糸球及び細管の両方の「代償性肥大」であり、糸球及び細管の膨張そのものによりそれぞれ残っているネフロンにより製造できるろ液体積を文字通り増加させるプロセスである。実際、集合管の肥大又は拡張の結果、慢性腎不全患者の尿はしばしば通常正常な直径の２〜６倍を有し、「腎不全円柱」とも言われるろう様「円柱」を含有するかの診断に利用される。同時に、残っているネフロンの機能性変化、例えば正常に排出された溶質の吸収減少又は分泌物増加等が起こり、それらは体内のどこでも起こるホルモン性又はパラクリン変化への応答でもよい（例えばカルシウム及びホスフェートの血清濃度変化に応じた副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の濃度増加）。
【０００８】
慢性腎不全の初期段階におけるこれらの適応は、ＧＦＲ又は腎臓機能の他のパラメータを完全に回復せず、実際、患者の残っているネフロンの喪失の危険性は増加する。例えばＳＮＧＦＲの増加は、高血圧及び超潅流のために糸球体上の物理的ストレスを伴う。有足突起接合の完全性の喪失は、巨大分子に対する糸球体の透過性又は糸球体のカプセルの「漏出」の増加を引き起こす。増殖性効能は又メサンギウム細胞、上皮細胞及び内皮細胞中に観察され、コラーゲン及び他のマトリックス蛋白質の沈着を増加させる。糸球及び細管の両方の硬化症は、肥大化したネフロンの別の通常の症状であり、糸球体中の凝固の危険性は増加する。好ましくは、ＳＮＧＦＲの正常なレベルを超えるような残っているネフロンのこのような適応は、実際に水、溶質、又は酸負荷の急激な変化に応じて残っているネフロンの能力を減少させ、その結果実際に追加的なネフロン喪失の可能性を増大させる。
【０００９】
慢性腎不全が進行し、ＧＦＲが正常値（例えば５〜１０ｍｌ／分）の１０％未満まで減少し続けるに従い、患者は末期腎不全（ＥＳＲＤ）となる。この段階では、残っているネフロンが適切に血液から老廃物を除去する能力がない場合、有用な生成物を維持し、流体及び電解質バランスを保持する一方、多くの器官システム、特に心臓血管システムが不全となる急速な衰退を引き起こす。例えばＢＵＮ濃度６０〜１００ｍｇ／ｄＬ及び血清クレアチニン濃度８〜１２ｍｇ／ｄＬまでのＢＵＮ及びクレアチニン濃度の上昇が予測され、通常尿毒性症候群が進行して腎臓はもはや窒素代謝の最終生成物を除去できない。この時点で、腎臓障害は患者が腎臓の代償療法（即ち、慢性血液透析、連続的腹膜透析、又は腎臓移植）を受けない限り容易に進行して死亡へ至る。
【００１０】
米国において毎年１００万人当り約６００人の患者が慢性透析を受け、平均的費用は１年に患者一人当たり６００００〜８００００ドルに達している。毎年末期腎不全の新症例のうち、約２８〜３３％は糖尿病性腎障害（又は糖尿病性腎糸球体症又は糖尿病性腎肥大）、２４〜２９％は高血圧性腎硬化症（又は高血圧性糸球体硬化症）で、１５〜２２％は糸球体腎炎を病因とする。
全慢性透析患者における５年生存率は約４０％であるが、６５歳を超える患者ではその率は約２０％へ低下する。
【００１１】
モルフォゲン及び成長因子：
現在非常に多くの蛋白質が、形態発生因子又は成長因子として働き、細胞増殖又は分化を調整するものとして特定されている。通常これら成長因子は、細胞又は組織の特定のセット又はサブセットに対してそれらの効能を示す。従って、例えば上皮増殖因子、神経成長因子、線維芽細胞増殖因子、各種ホルモン、及び、細胞増殖又は分化を含有し又は阻止する多くの他の蛋白質が特定され、細胞又は組織の何らかのサブ群に働くことを示す。
形態発生的蛋白質の１つの群、ここで言う「モルフォゲン」として、異所性、軟骨内骨形態発生を誘発するその能力により最初に特定された骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）のファミリーメンバーが挙げられる。
【００１２】
ＢＭＰの核酸及びアミノ酸配列の次のキャラクタリゼーションは、それらが成長因子のＴＧＦ−βスーパーファミリーのサブ群であることを明らかにした。現在このモルフォゲンファミリーのメンバーとして、哺乳類性骨形成性蛋白質−１（ＯＰ−１、同様にＢＭＰ−７として知られる。）、骨形成性蛋白質−２（ＯＰ−２）、骨形成性蛋白質−３（ＯＰ−３）、ＢＭＰ−２（同様にＢＭＰ−２Ａ又はＣＢＭＰ−２Ａとして知られる。）、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−４（同様にＢＭＰ−２Ｂ又はＣＢＭＰ−２Ｂとして知られる。）、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、Ｖｇｒ−１、及びＧＤＦ−１、並びにアフリカツメガエルホモログＶｇｌ及びショウジョウバエホモログＤＰＰ及び６０Ａが挙げられる。このファミリーのメンバーは分泌（排出）されるポリペプチドをエンコードし、それらは通常の構造的態様を有し、同様に処理されて前駆体（ｐｒｏ）蛋白質からシステイン保存されたパターンを有するカルボキシ末端完全（ｍａｔｕｒｅ）蛋白質を生成する。これら蛋白質の活性体は、ジスルフィド結合した単一のファミリーメンバーのホモダイマー、又は２つの異なるメンバーのヘテロダイマーのいずれかである（参照、例えばＭａｓｓａｇｕｅ（１９９０）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．６：５９７；Ｓａｍｐａｔｈら、（１９９０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５：１３１９８）。
【００１３】
蛋白質のモルフォゲンファミリーのメンバーは発生中の各種の組織中に発現する。例えばＢＭＰ−３は発育ヒト肺及び腎臓中に発現することが示され（Ｖｕｋｉｃｅｖｉｃら（１９９４）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．４２：８６９−８７５）、ＢＭＰ−４は胚性マウス中の初期のひげ小胞を伴う、発育四肢、心臓、表面（顔面）突起及び凝縮された間葉中に発現することが示され（Ｊｏｎｅｓら（１９９１）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１１１：５３１−５４２）、ＯＰ−１（ＢＭＰ−７）は免疫組織化学的にヒト胚中の基底膜を伴い、発育する肺、膵臓、皮膚、及び曲尿細管のそれらを含むことが示されている（Ｖｕｋｉｃｅｖｉｃら（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９８：６９３−７００）。幾つかのモルフォゲン（例えばＯＰ−２及びＢＭＰ−２）は成人組織の分析では検出されないことは、これらモルフォゲンは初期の発生的役割のみであることを示唆する（Ｏｚｋａｙｎａｋら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２５２２０−２５２２７）。反対に、高濃度のネズミＯＰ−１発現が成人マウス腎臓中で観察された（Ｏｚｋａｙｎａｋら（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１７９：１１６−１２３）。これは、腎臓中で合成されたＯＰ−１の、骨成長のパラクリン調節因子としての可能性を示唆し、カルシウム調節及び骨ホメオスタシスの両方に対する腎臓の役割とも一致する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
非常に各種の成長因子は、腎臓組織の成長及び修復の調節に作用すると考えられている（参照、例えばＴｏｂａｃｋ（１９９２）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４１：２２６−２４６）。例えばＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＭＩ、ＰＤＧＦ、ＦＧＦ、レニン／アンギオテンシンＩＩ、ＩＬ−１及びＯＰ−１は全て、各種成人腎臓細胞又は組織により発現し、腎臓細胞増殖又は分化に対する効能を有することが確認されている（参照、Ｔｏｂａｃｋ（１９９２）ｓｕｐｒａ、Ｏｚｋａｙｎａｋら（１９９１）ｓｕｐｒａ）。更に、これらの数種は発育腎臓中で発現することが発見され、例えばＩＧＦ−Ｉ、ＴＧＦ−β及びＯＰ−１が挙げられる（参照、例えばＢａｒｄら（１９９４）Ｍｅｃｈ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，４８：３−１１）。
【００１５】
興味深いことには、ＴＧＦ−βは、密集した上行肢−初期の遠位の細管を除き、発達するネフロンの全ての分節の全体の成長及び分節性分化を遅延させるネズミ後腎器官培養システム中に発見される（Ａｖｎｅｒ及びＳｗｅｅｎｅｙ（１９９０）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．４：３７２−３７７）。更に、ＴＧＦ−β発現は腎不全のいくつかの例で増加することが発見され、細胞外のマトリックス成分の合成中にＴＧＦ−βが介在した増加は糖尿病性腎障害（又は糖尿病性腎糸球体症又は糖尿病性腎肥大）、腎繊維症、糸球体硬化症及び糸球体腎炎、間質性繊維症、及び高血圧性腎硬化症の病因中に含まれることを示唆する（Ｓｈａｎｋｌａｎｄら（１９９４）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４６：４３０−４４２；Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９９４）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４５：９１６−９２７；Ｙａｍａｍｏｔｏら（１９９３）ＰＮＡＳ９０：１８１４Ｔａｍａｋｉら（１９９４）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４５：５２５−５３６；Ｂｏｒｄｅｒら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ３４６：３７１−３７４；Ｈａｍａｇｕｃｈｉら（１９９５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ２６：１９９−２０７）。
【００１６】
同様に興味深いのはヒト成長ホルモン（ＧＨ）の血清濃度が慢性腎不全患者中で上昇する事実である（Ｗｒｉｇｈｔら（１９６８）Ｌａｎｃｅｔ２：７９８；Ｓａｍａａｎ及びＦｒｅｅｍａｎ（１９７０）Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，１９：１０２）。組み換え型ＧＨは、栄養失調の慢性腎不全患者の蛋白質バランスの維持や、慢性腎不全の児童での「回復的」成長の促進を助けることが示された。
これら効能はＩＧＦ−Ｉにより介在されることが示唆された（参照、例えばＫｏｐｐｌｅ（１９９２）Ｍｉｎｅｒ．Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  Ｍｅｔａｂ．１８：２６９−２７５）。ＩＧＦ−Ｉの投与は慢性腎不全患者の腎臓の血漿流及びＧＦＲを増加させることが幾つかの研究により明らかになったが（例えばＧｕｌｅｒら（１９８９）ＰＮＡＳ８６：２８６８−２８７２；Ｈｉｒｓｃｈｂｅｒｇら（１９９３）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４３：３８７−３９７）、他の研究ではこの効能は単なる一過性であるとされた（Ｍｉｌｌｅｒら（１９９４）Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｌ．４６：２０１−２０７）。
【００１７】
従って、何らかの成長因子が発育及び成人腎臓組織の両方に発現することが示されたにも拘わらず、そして１以上の因子が短期間で腎臓機能を増加させることが示されたにも拘わらず、慢性腎不全を特徴づける腎臓機能の進行性喪失の予防、阻止、又は遅延において治療的効果は示されていない。従って、数十万の患者が慢性透析に依存するようになり、その結果毎年数万の早死を生じる腎臓機能の進行性喪失を予防する治療が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、慢性腎不全又はその危険性のある、又は腎臓の代償療法の必要の危険性のある脊椎動物患者（好ましくは哺乳類動物）の治療に、アンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）及びモルフォゲンの組み合わせを使用する治療方法、及び医薬品製剤に関する。
本発明の適切な患者として、既に慢性腎不全に罹患している、既に腎臓の代償療法を受けている、及び機能している腎単位の進行性損失を伴う腎臓機能の進行性喪失に悩ことが当然予測される患者が挙げられる。特定の患者が病気の危険性があるか否かは、関係する医学的又は獣医学的分野の当業者により通常行われる決定である。上記慢性腎不全があるかその危険性のある、又は腎臓の代償療法の必要の危険性のある患者は、下記を含むがこれらに限定されるものではない：慢性腎不全、末期腎不全、慢性糖尿病性腎障害、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、遺伝性腎炎、及び／又は腎臓異形成に罹患しているとされる患者；糸球体肥大、尿細管肥大、慢性糸球体硬化症、及び／又は慢性尿細管間質硬化症を示す生検結果を有する患者；腎繊維症を示す、超音波、ＭＲＩ、ＣＡＴスキャン、又は他の非侵襲的検査結果を有する患者；尿沈渣中に異常な数のろう様円柱が存在する患者；慢性的に、患者に予定されるＧＦＲの約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満であるＧＦＲを有する患者；慢性的に、約５０ｍｌ／分未満、特に約４０ｍｌ／分未満、３０ｍｌ／分未満又は２０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約５０ｋｇ以上の重量であるヒト男性患者；慢性的に、約４０ｍｌ／分未満、特に約３０ｍｌ／分未満、２０ｍｌ／分未満又は１０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約４０ｋｇ以上の重量であるヒト女性患者；健康である以外は患者と同様である対象が有する機能している腎単位数の約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満の機能している腎単位数を有する患者；単一の腎臓を有する患者；及び腎臓移植レシピエントである患者。
【００１９】
本発明の方法及び組成物は、真核由来のある種のモルフォゲン及びＡＣＥ（アンギオテンシン転換酵素）の阻害薬を組み合わせて、ここでいう慢性腎不全の危険性のある又は腎臓の代償療法が必要な患者の治療に治療薬として使用することを発見してある程度利用するものである。一般的に、これら蛋白質は、蛋白質の骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）ファミリーメンバー又はそのアナログである。好ましくはＡＣＥ阻害薬はエナラプリルである
【００２０】
従って、本発明の有用なＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンとして；ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ９から選ばれる哺乳類性蛋白質のＣ−末端６−又は７−システインドメインを少なくとも含有するポリペプチド、又はポリペプチドの機能性変種；７０％以上、好ましくは７５％又は８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以上のアミノ酸配列ホモロジー、又は５０％以上同一性、更に好ましくは５５％、６０％、６５％、７０％、８０％、９０％、９９％又はより高い同一性を示し、上記モルフォゲンのいずれか（ヒトＯＰ−１等）の７−システインドメインのアミノ酸配列を有する蛋白質；並びに、慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類へ投与された場合に、（ａ）Ｒｅｄｄｉ−Ｓａｍｐａｔｈ異所性骨アッセイ（Ｓａｍｐａｔｈ及びＲｅｄｄｉ（１９８１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８：７５９９−７６０３）、又は実質的に等価のアッセイ中の軟骨形成を含むことのできるもの、（ｂ）標準的慢性腎不全の動物モデル中の腎臓機能の進行性喪失を顕著に予防、阻止、遅延又は緩和することのできるもの、又は（ｃ）腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を生じることのできるもの、が挙げられる。
更に一般的に、本発明は１以上の真核（例えば哺乳類性）細胞、組織又は器官の形態発生を誘起する二量体蛋白質である「モルフォゲン」の使用を提供する。
【００２１】
本発明は特に、少なくとも、機能性腎臓の上皮及び、好ましくは機能性糸球体上皮及び尿細管上皮の形成を含む、哺乳類性腎臓組織の形態発生を誘起するモルフォゲンに関する。モルフォゲンは、折り畳まれた時に上記モルフォゲン固有のレセプターを示す細胞及び組織中の形態発生的反応を引き起こす二量体蛋白質を生じるために適切な配置を取る一対のポリペプチドを含有する。即ち、モルフォゲンは、一般的に形態生成的に許容できる環境中で次の生物学的機能全てを誘起する：前駆細胞の増殖の刺激；前駆細胞の分化の刺激；分化した細胞の増殖の刺激；及び分化した細胞の成長及び維持の保持。「前駆」細胞は、それらゲノムのレパートリー及び形態発生が誘発される許容できる環境での組織特異性に応じて１以上の分化細胞の特定種へ分化可能な未分化の細胞である。モルフォゲンは更に表現型及び／又は組織機能の老化関連型又は静止関連型喪失の発現を遅延又は緩和できる。モルフォゲンは分化した細胞の表現型の発現、分泌性等のそれらの性質の発現も刺激できる。更に、モルフォゲンは適切な周囲の環境下で、抗原感作細胞の再分化を誘起出来る。上記のように、少なくとも哺乳類性腎臓組織の増殖及び／又は分化を誘起し／又は、哺乳類性ネフロンの成長、維持及び／又は機能性性質を支持するモルフォゲンが、本発明の目的である。
【００２２】
好ましくは、一対のモルフォゲンポリペプチドはレファレンスモルフォゲンのアミノ酸配列と特定の関係する配列を含有するアミノ酸配列サーチを有する。ここで、好ましいモルフォゲンポリペプチドは、形態生成的に活性なヒトＯＰ−１中に存在する配列と特定の関係する。しかし、ここで記載されるいずれの天然性又は生合成配列も、同様にレファレンス配列として使用できる。好ましいモルフォゲンポリペプチドは、少なくともヒトＯＰ−１のＣ−末端６システインドメイン、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基４３〜１３９と特定の関係する。好ましくは、モルフォゲンポリペプチドは少なくともヒトＯＰ−１のＣ−末端７システインドメイン、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基３８〜１３９と特定の関係する。即ち、好ましい形態発生活性を有する二量体蛋白質のモルフォゲンポリペプチドは、それぞれレファレンス配列に関する配列を含有するか機能的にそれらと等価である。
【００２３】
機能的に等価の配列としては、レファレンス配列中に表されたシステイン残基と機能的に等価の配置が挙げられ、例えば二量体モルフォゲン蛋白質の、これらシステインの直線的配置を変化させるが、折り畳み構造中のそれらの関係、及び形態発生活性に必要な鎖内又は鎖間ジスルフィド結合を形成するそれらの能力を実質的に損なわないアミノ酸挿入又は削除が挙げられる。
【００２４】
機能的に等価の配列として更に、ヒトＯＰ−１のＣ−末端７システインドメイン（又は「骨格」）等のレファレンスモルフォゲン配列の対応する残基とは異なる１以上のアミノ酸残基であるが、この違いは形態発生活性を損なわないものが挙げられる。従って、レファレンス配列中の対応するアミノ酸の同類置換基が好ましい。レファレンス配列中の対応する残基の「同類置換基」であるアミノ酸残基は、物理的に又は機能的に対応するレファレンス残基と類似するものであり、例えば同様なサイズ、形状、電荷、共有結合又は水素結合、等を形成する能力を有する化学的性質を有するものである。特に好ましい同類置換基は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、「蛋白質配列及び構造地図」Ｖｏｌ．５（追補３）、ｃｈ．２２（ｐｐ．３５４−３５２）、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、ワシントン、Ｄ．Ｃ．（下記参照、その内容をここで資料として使用する）に表された「可能な点変異」に対する評価を満たすものである。
【００２５】
例えば本発明では、レファレンスモルフォゲンポリペプチドと機能的に等価であると推定されるポリペプチドは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（１９７０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３の方法を使用して配列され、アラインプログラム又は他のその改良プログラム／変種（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）等のコンピュータプログラムを利用して実行された。
例えばＬａｓｅｒｇｅｎｅ５．０のＭｅｇ  Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）は幾つかの下記複数配列アラインメント方法を提供する。Ｊ．Ｈｅｉｎ方法は、Ｈｅｉｎ、Ｊ．Ｊ．（１９９０）「アラインメント及び系統発生の統一化アプローチ」、「酵素学法」、Ｖｏｌ．１８３：ｐｐ．６２６−６４５参照；クラスタルＶ方法は、Ｈｉｇｇｉｎｓ、Ｄ．Ｇ．及びＰ．Ｍ．Ｓｈａｒｐ（１９８９）。「マイクロコンピュータでの高速・高感度複数配列アラインメント」、Ｃａｂｉｏｓ、Ｖｏｌ．５、ナンバー２、ｐｐ．１５１−１５３参照；クラスタルＷ方法は、Ｊ．Ｄ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ等（１９９４）「核酸研究」、Ｖｏｌ．２２、ｐｐ．４６７３−８０）参照。これらはそれぞれ異なるアルゴリズムを有し、それぞれ使用者にギャップ等のパラメータを決定する機会を与える。
特に、ギャップ及び挿入は、ユーザーが指定したペナルティいわゆるギャップペナルティ（アラインメントギャップ用のアラインメントスコアからそれぞれ控除された量。同一のペナルティを有する異なるサイズのギャップ。）、及びギャップ長ペナルティ（最初の増殖後のアラインメントスコアからギャップの長さ分控除された値。長いギャップは短いギャップよりも大きいペナルティを有する。）により、比較される２つの配列のアミノ酸間の相関性を最高度に達成する様に配置される。配列した配列は次に候補及びレファレンス配列間の同一性（ホモロジー）割合を算出するために使用される。配列した配列のセクション間の配列ホモロジーも又作成出来る。好ましくは、ギャップ又は挿入のアミノ酸はそれぞれ％同一性の測定目的には不適切な組み合わせであるとみなされる。
【００２６】
本発明は、特に哺乳類の腎臓へ投与された場合に、腎単位の分化及び成長の正常な状態を誘起する又は維持するモルフォゲンに関する。又、本発明は好ましくは、哺乳類へ投与した場合、糸球体肥大及び／又は尿細管肥大を含む代償性肥大の発生を予防、阻害又は遅延するモルフォゲンに関する。これらモルフォゲンは、腎単位機能の進行性損失及びその結果の腎臓機能の進行性喪失の予防、阻害又は遅延により、慢性腎不全又はその危険性のある  哺乳類の治療に使用できる。
【００２７】
又、本発明は、モルフォゲンの代わりにモルフォゲン刺激剤又はモルフォゲン誘導物質を含有する方法及び組成物でも使用できる。「モルフォゲン誘導物質」は、ｉｎ  ｖｉｖｏ生成を刺激する化合物であり、例えば哺乳類の体内で腎臓組織を再生する又は維持する、及び／又はその追加的な喪失を阻止するのに充分な内因性モルフォゲンの治療的有効濃度を発現する。これら化合物は、哺乳類へ投与した場合、哺乳類のゲノム内にエンコードされたモルフォゲンを正常に生成及び／又は分泌する能力がある組織又は器官の細胞へ働き、哺乳類の体内のモルフォゲンの内因性濃度を変化させる物質を含むと考えられる。内因性又は投与したモルフォゲンは、エンドクリン、パラクリン又はオートクライン因子として作用することが出来る。即ち、内因性モルフォゲンがその中で形態発生的反応が隣接細胞、又は離れた組織の細胞により誘発される細胞により合成されることが出来、その環境で分泌（排出）された内因性モルフォゲンは形態発生部位へ例えば個人の血流により移送される。好ましくは、薬剤は内因性モルフォゲンの発現及び／又は分泌を刺激して、腎臓組織中のその量を増大させる。
【００２８】
他の例として、モルフォゲンレセプターのアゴニストとして作用する薬剤は、モルフォゲンそのものの代わりに投与されてもよい。レセプターの「アゴニスト」は、レセプターへ結合する化合物を意味し、そのためにそのような結合は、レセプターの天然性、内因性リガンドの結合を生じる同様な機能性を有する。即ち、化合物は、レセプターとの相互作用により内因性リガンドと同一の又は実質的に同様な膜内外及び／又は細胞内の効能を生成する。従って、モルフォゲンレセプターのアゴニストはレセプターへ結合し、これら結合は、モルフォゲン結合と同一又は同様な機能性効果を有する（例えば形態発生の誘起）。アゴニストの活性又は有効性は、アゴニストは天然性リガンドよりも低くてもよく、その場合「部分アゴニスト」と称され、天然性リガンドと同様又はそれ以上でもよくその場合「完全アゴニスト」と称される。従って、例えばモルフォゲンのレセプターへ結合し活性化してモルフォゲンの活性を模倣できる小ペプチド又は他の分子は、モルフォゲンの均等物として使用できる。本発明のアゴニストは好ましくは完全アゴニストであるが、部分モルフォゲンレセプターアゴニストも又有利に使用できる。これらアゴニストを同定する方法は当分野で公知であり、モルフォゲン介在性反応を誘起する化合物のアッセイが挙げられる（例えば後腎間葉の分化の誘起、軟骨内骨形成の誘起等）。これら薬剤も又ここで言うモルフォゲン「ミミック」、「ミメティック」又は「アナログ」である。
【００２９】
本発明のＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、又はモルフォゲン誘導物質／モルフォゲンレセプターのアゴニスト、又はＡＣＥＩは、選ばれた薬剤に適合するいずれの投与経路でも投与でき、その投与経路に適切ないずれの医薬的に許容されるキャリアとも配合できる。好ましい投与経路は腸管外（非経口）であり、更に好ましくは静脈注射、腹腔内、及び腎臓被膜下である。治療は又、好ましくは原則的に外来患者に対して長期間行なわれる。精密な投薬量は使用される固有の治療薬や患者固有の医学的症状及び病歴に応じて変化するが、モルフォゲンの毎日の投与量は、例えば約０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ体重、好ましくは約１０〜３００μｇ／ｋｇ体重の範囲でもよい。
【００３０】
最後に本発明では、腎臓細胞が慢性腎不全若しくはその危険性のある、又は腎臓の代償療法を必要とする危険性のある患者の腎臓へ埋め込まれて、モルフォゲンソースとして作用するか、及び／又は追加的な機能性腎臓組織のソースを供給されてもよい。好ましくは、細胞は、移植前又は後のいずれかにモルフォゲン（例えばＯＰ−１）で治療されることにより後腎分化を行なうことを誘発される。
これら細胞は腎間葉前駆細胞、又は後腎分化を行なうよう誘発された腎間葉前駆細胞でもよい。細胞はドナー由来でもよく（例えばａ組織−型が適合したドナー、兄弟、一卵性双生児）、組織培養由来でもよく（例えば未分化の腎臓の間葉培養、胎児腎臓組織培養）、又は患者から体外培養され、増殖及び／又は分化後に再移植されてもよい。
【００３１】
本発明の方法は、腎単位機能の進行性損失、及びその結果である慢性腎不全を代表する腎臓機能の進行性喪失の予防、阻害又は遅延に有用である。本発明は、予防や、慢性腎臓の機能不全患者での慢性透析又は腎臓の代償療法の必要性の遅延、又は末期腎不全患者の慢性腎臓の透析の必要頻度の減少に非常に効果がある。本発明は、慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している患者の寿命を延ばし、生活の質を維持するのに有用である。
【００３２】
関連して、本発明は又、慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している患者への、死亡率及び／又は罹患率を減少させ、慢性腎不全を特徴とする腎臓機能の進行性喪失を予防、阻止、遅延又は軽減する、アンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬／ブロッカー（ＡＩＩＲＡ）及びある種の蛋白質ベースのモルフォゲンの共投与にも関する。又、本発明のアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー及びモルフォゲンの共投与は、徐々にしかし必然的に腎臓の代償療法（即ち、腎臓の移植又は慢性透析）の必要をもたらす腎単位機能の進行性損失及び糸球体ろ過値（ＧＦＲ）の進行性衰退又は死亡を予防、阻害又は遅延できる。好ましくは、本発明の治療薬は蛋白質のＴＧＦ−βスーパーファミリー中の骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）ファミリーメンバー、及びアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカーである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
Ｉ．概略
本発明は、一部は、慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している患者へのＡＣＥ阻害薬とある種の蛋白質ベースのモルフォゲンとの共投与が慢性腎不全を特徴とする腎臓機能の進行性喪失の死亡率及び／又は罹患率を減少させ、予防、阻止、遅延又は軽減できるという驚くべき発見に基づく。又、本発明のＡＣＥ阻害薬及びモルフォゲンの共投与は、徐々にしかし必然的に腎臓の代償療法（即ち、腎臓の移植又は慢性透析）の必要又は死亡をもたらす腎単位機能の進行性損失及び糸球体ろ過値（ＧＦＲ）の進行性衰退を予防、阻害又は遅延できる。好ましくは、本発明の治療薬は、蛋白質のＴＧＦ−βスーパーファミリー中の骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）ファミリーメンバー、及び蛋白質のＡＣＥファミリーの阻害薬である。
【００３４】
本発明は又、慢性腎不全を特徴とする腎臓機能の進行性喪失の死亡率及び／又は罹患率を減少させ、予防、阻止、遅延又は軽減するために、慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している患者へのアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬／ブロッカー（ＡＩＩＲＡ）及びある種の蛋白質ベースのモルフォゲンの共投与に関する。又本発明のアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー及びモルフォゲンの共投与は、徐々にしかし必然的に腎臓の代償療法（即ち、腎臓の移植又は慢性透析）の必要又は死亡をもたらす腎単位機能の進行性損失及び糸球体ろ過値（ＧＦＲ）の進行性衰退予防、阻害又は遅延できる。好ましくは、本発明の治療薬は、蛋白質のＴＧＦ−βスーパーファミリー中の骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）ファミリーメンバー、及びアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカーである。
【００３５】
ＩＩ．定義
更に明確に簡潔に本発明の対象を示すため、下記定義を明細書及び請求の範囲に使用される用語を特定するために使用する。
ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン；
ここで使用する「ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン」とは、ポリペプチド、又はポリペプチドの機能性変種であり、少なくとも、ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ９の群から選ばれる哺乳類性蛋白質のＣ−末端６−又は７−システインドメイン、及びヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１）等のいずれか１の上記モルフォゲンの７−システインドメインのアミノ酸配列と６５％以上、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、又は９５％以上のアミノ酸配列ホモロジーを示すか、又は５０％以上、好ましくは５５％、６０％、７０％、８０％、９０％、９９％以上の同一性を示す蛋白質であり、；（ａ）Ｒｅｄｄｉ−Ｓａｍｐａｔｈ異所性骨アッセイ（Ｓａｍｐａｔｈ及びＲｅｄｄｉ（１９８１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７８：７５９９−７６０３）又は実質的にそれと等価のアッセイにおいて軟骨形成が誘起できる、（ｂ）標準的慢性腎不全の動物モデルの腎臓機能の進行性喪失を顕著に予防、阻止、遅延又は緩和できる、又は（ｃ）慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類へ投与された場合、腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を起こすことのできる、蛋白質を含む。
【００３６】
本発明で使用される、「アミノ酸配列ホモロジー」又は２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ「ホモロジー」は、アミノ酸配列同一性及び保存された置換基の両方を含むと考えられる。従って、ここで使用される、２つのアミノ酸配列間のパーセンテージ「ホモロジー」は、配列間で同一又は保存された置換基であるアミノ酸残基のパーセンテージを示す。アミノ酸の「同類置換基」は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、「蛋白質配列及び構造地図」Ｖｏｌ．５（追補３）、ｃｈ．２２（ｐｐ．３５４−３５２）、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、ワシントン、Ｄ．Ｃ．に表された「可能な点変異」に対する評価を満たすものである。従って、「同類置換基」とは、対応するレファレンス残基と物理的に又は機能的に類似し、同様なサイズ、形状、電荷、及び／又は共有結合又は水素結等を形成できる能力等の化学的性質を有する残基である。同類置換の好ましい例として、あるアミノ酸の同様な特徴を有する別のアミノ酸との置換が挙げられ、例えば下記群内の置換が挙げられる：（ａ）Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ；（ｂ）Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；（ｃ）Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；（ｄ）Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ；（ｅ）Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ。更に好ましい同類置換として、下記群内での１のアミノ酸の別のアミノ酸への置換が挙げられる：（ａ）グリシン、アラニン；（ｂ）バリン、イソロイシン、ロイシン；（ｃ）アスパラギン酸、グルタミン酸；（ｄ）アスパラギン、グルタミン；（ｅ）セリン、スレオニン；（ｆ）リシン、アルギニン、ヒスチジン；及び（ｇ）フェニルアラニン、チロシン。図８４のＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）、「蛋白質配列及び構造地図」Ｖｏｌ．５（追補３）、ｃｈ．２２（ｐｐ．３５４−３５２）、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、ワシントン、Ｄ．Ｃ．を参照のこと。「同類置換」又は「保存的変種」は又、目的のポリペプチド鎖中の非置換の親アミノ酸の代わりの置換されたアミノ酸の使用を含み、置換されたポリペプチド鎖は本発明の治療的効能を同様に有する。
【００３７】
ここで使用される、本発明の治療薬（モルフォゲン及び／又はＡＣＥＩ）は、その量の薬剤が、慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類動物（例えばヒト患者）へ投与した場合に、腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を引き起こすのに充分な場合、「治療的効能」を有すると言われ、その薬剤量は「治療的有効（量）」であると言われる。このような腎臓機能のマーカーは医学的分野で公知であり、本発明を限定するものではないが、例えばＢＵＮ濃度の増大速度、血清クレアチニンの増大速度、ＢＵＮの静的測定、血清クレアチニンの静的測定、糸球体ろ過値（ＧＦＲ）、ＢＵＮ／クレアチニン割合、ナトリウム（Ｎａ+）血清濃度、クレアチニンの尿／血漿割合、尿素の尿／血漿割合、尿容量オスモル濃度、毎日の尿排出量等（例えばＢｒｅｎｎｅｒ及びＬａｚａｒｕｓ（１９９４）、「内科のハリソンの法則」１３版、Ｉｓｓｅｌｂａｃｈｅｒら、ｅｄｓ．、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｔｅｘｔ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｌｕｋｅ及びＳｔｒｏｍ（１９９４）、「内科」４版、Ｊ．Ｈ．Ｓｔｅｉｎ、ｅｄ．、Ｍｏｓｂｙ−Ｙｅａｒ  Ｂｏｏｋ、Ｉｎｃ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ参照）が挙げられる。
【００３８】
ここで使用される、「共投与」とは、対象患者へ２以上の薬剤を単一の治療的処方の一部として投与することをいう。投与は、同時でも連続してでもよく、連続とは、第一の薬剤の投与後に、投与した薬剤が治療された患者中に共存する間に第二（及び／又は第三番目等）を投与するか、１以上の薬剤が、標的組織がまだ他の薬剤の影響下にある間に上記他の薬剤と同一の標的組織へ作用する機会を有するものでもよい。好ましくは、投与される薬剤は、単一の医薬品組成物中に含まれ、共投与されることができる。好ましくは、薬剤は分離した経路を経由して同時に投与されてもよい。好ましくは、１以上の薬剤は連続的に投与され、一方他の薬剤は所定の間隔で投与されてもよい（大投薬量で単回、又は小投薬量で週２回等）。例えばモルフォゲンは週３回直接注射で投与され、一方ＡＣＥ阻害薬は連続的に移植物により放出されてもよい。
投与経路はそれぞれ薬剤の必要性又は適切な投与方法に応じて同一又は異なるものでもよい。いずれの適切な投与経路も患者へＡＣＥＩ及びモルフォゲンの効果的投薬量を与えるために使用できる。例えば経口、直腸、腸管外（非経口）、経皮、皮下、筋肉内、吸入等が使用できる。投薬剤形として、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁液、溶液、カプセル、貼付剤等が挙げられる。例えば本発明では、モルフォゲンは直接注射で投与され、一方ＡＣＥ阻害薬は飲料水により投与されてもよい。
【００３９】
ここで使用される「予防」又は「防止」は、患者（細胞、組織、器官若しくは生物等）の症状の進行の可能性／危険性の減少、患者の症状の発現の遅延、患者において進行する病状の１以上の徴候の重篤度の低減、又はそれらの組み合わせを意味する。
【００４０】
ろ過；
腎臓の主な機能は、体の新陳代謝の結果蓄積する毒素（尿毒性老廃物）の除去である。体は正常な体機能を行うために食物及び貯蔵された栄養物から得られた消化成分を連続的に使用する。栄養物新陳代謝及び細胞機能の副生成物は血液から腎臓によりろ過され、尿として老廃物が排泄（排出）される。毎日、約２００リットルの血液流が腎臓へ供給され、そこで２リットルの老廃物がろ過され取り出される。
【００４１】
ＢＵＮ及びクレアチニン；
尿素として知られる血液尿素窒素（ＢＵＮ）の血液中の濃度（血液濃度）、及びクレアチニン（Ｃｒ）は通常の実験室試験により測定できる。ＢＵＮ及びクレアチニン濃度は、腎臓の一般的機能を示す。ＢＵＮは、肉（牛、ブタ等）、鶏肉、及びある種の野菜等の蛋白質−リッチ食物の代謝性副生成物である。ＢＵＮは血液から腎臓によりろ過され、尿中に排出される。クレアチニンは連続的に筋肉中で正常な細胞新陳代謝により生成される。クレアチニンも又は血液から腎臓によりろ過され、尿中に排出される。
血液中のＢＵＮ及びクレアチニンの量は、腎臓により排出された量と等しい。ＢＵＮ及びＣｒの血液濃度は腎臓機能の突然の悪化がない限り変化せずに保持される。腎臓が突然機能しなくなると、ＢＵＮ及びＣｒは毎日増大する。この症状は急性腎臓障害として公知である。慢性腎不全はＢＵＮ及びＣｒが長期間徐々に増大する特徴を有する症状である。
【００４２】
腎臓機能の測定；
腎臓機能が減少する場合、腎臓が効果的に血液を清浄にすることが出来ないためにＣｒ及びＢＵＮの血液濃度は増大する。腎臓に関係ない因子も又、ＢＵＮ及びＣｒ濃度に影響を与える。特にクレアチニンは、年齢、性別、重量、及び筋肉量により影響される。
腎臓機能は、腎臓対が血液を清浄にできる速度を評価して測定した。腎臓機能を測定するために、２４時間尿サンプルが採取されなくてはならない。２４時間サンプルが完全であり（即ち、尿が失われず）、真の腎臓機能過小評価されないようにすることが重要である。
尿サンプル中のＣｒの量はＣｒの血液濃度と比較される。この値はクレアチニンクリアランス（ＣｒＣｌ）、腎臓対の血液を清浄化する割合、として公知である。正常なＣｒＣｌは約９０〜１３０ミリリットル／分（ｍｌ／分）である。多くの人々は年齢を重ねると徐々に腎臓機能を失う。代わりの腎臓機能測定は、年齢、体重、性別、及び血液クレアチニンに影響される表又は式に依存する。
いくつかの米国健康管理機関は、腎臓機能を評価するＧｌｏｆｉｌ−１２５アッセイを提供する。ヨータラム酸ナトリウムＩ−１２５（放射性医薬品）が皮膚中に注射され、血液及び尿サンプルを腎臓機能を決定するために採取する。試験は容易に実施でき、血液クレアチニン測定よりも更に高感度であり、２〜３時間以内に結果が得られる。腎臓機能の測定は腎臓損傷の重篤度を決定する。時間をかけて腎臓機能を監視することが、治療による悪化又は改善速度を実証するために重要である。
【００４３】
糸球体ろ過値（ＧＦＲ）；
「糸球体ろ過値」又は「ＧＦＲ」は、血清蛋白質により結合されておらず、糸球体を通して自由にろ過されず、腎臓の細管により分泌（排出）されず、再吸収されない血漿担持された（ｂｏｒｎｅ）物質の尿へのクリアランス速度に対応する。従って、ここで使用されるＧＦＲは好ましくは下記方程式により定義される。
ＧＦＲ＝ＵconcｘＶ／Ｐconc
但し、Ｕconcはマーカーの尿濃度、Ｐconcはマーカーの血漿濃度であり、Ｖは尿流量速度（ｍｌ／分）である。任意でＧＦＲは体表面積により修正されてもよい。従って、ここで使用されるＧＦＲ値の単位はｍｌ／分／１．７３ｍ2である。
【００４４】
好ましいＧＦＲの測定はインスリンのクリアランスであるが、この物質の濃度測定の困難性のために、クレアチニンのクリアランスが通常臨床的設定に使用される。例えば平均的サイズとして健康なヒト男性（７０ｋｇ、２０〜４０歳）のクレアチニンクリアランスにより測定した標準的ＧＦＲは、クレアチニン血漿濃度０．７〜１．５ｍｇ／ｄＬ（約１２５ｍｌ／分）である。比較用に、平均的サイズ女性のクレアチニンクリアランスにより測定した標準的ＧＦＲは、クレアチニン濃度０．５〜１．３ｍｇ／ｄＬ（約１１５ｍｌ／分）である。健康良好な間は、ヒトＧＦＲ値は、通常ＧＦＲが年齢につれて減少し始める約４０歳まで比較的安定である。８５〜９０歳まで長生きしている患者では、ＧＦＲは４０歳での比較値の５０％まで減少する。
【００４５】
期待される糸球体ろ過値（ＧＦＲexp）；
「期待されるＧＦＲ」又は「ＧＦＲexp」の推定は、患者の、年齢、重量、性別、体表面積及び筋肉割合、並びに血液試験により測定される何らかのマーカー化合物（例えばクレアチニン）の血漿濃度を考慮してなされる。従って、例えば期待されるＧＦＲ又はＧＦＲexpは下記のように推定されてもよい：
ＧＦＲexp＝（１４０−年齢）ｘ重量（ｋｇ）／［７２ｘＰconc（ｍｇ／ｄｌ）］
上記推定は表面積、筋肉割合、又は体脂肪割合等の因子を考慮しない。血漿クレアチニン濃度をマーカーとして使用するにも拘わらず、この式は、ＧＦＲを推定する安価な手段としてヒト男性のために使用されている。クレアチニンは横紋筋により生成されるため、ヒト女性患者の期待されるＧＦＲ又はＧＦＲexpは、予測される筋肉量の違いを考慮に入れて同一の方程式に０．８５を乗じて推定される（Ｌｅｍａｎｎ等（１９９０）ＡＭ．Ｊ．Ｋｉｄｎｅｙ  Ｄｉｓ．１６（３）：２３６参照）。
【００４６】
ろう様円柱；
形成された成分の存在用の尿沈渣の顕微鏡検査は、尿分析の標準的操作である。尿中に存在する形成された成分中の、通常遠位尿細管又は集合細管の管腔のモールド又は「円柱」の形である物体が凝集した円柱状塊である。健康なヒト患者では、このような円柱は通常直径１５〜２５μｍである。しかし慢性腎不全患者では細管の肥大は、標準円柱の２〜６倍の直径を有し、しばしば均一なワックス状外観を有する「ろう様円柱」又は「腎不全円柱」の存在を生じる。従って、ここで使用される「ろう様円柱」は、ヒト円柱で標準の２〜６倍又は約３０〜１５０μｍの直径を有する尿沈渣円柱を意味する。
【００４７】
慢性；
尿中円柱、測定ＧＦＲ、又は他の腎臓機能のマーカー等の臨床的指標としてここで使用される「慢性」は、３月以上、好ましくは６月以上の期間存続することを意味する。従って、例えば測定したＧＦＲが慢性的にＧＦＲexpの５０％未満である患者は、３月以上、好ましくは６月以上間をおいた２種以上の測定でＧＦＲがＧＦＲexpの５０％未満であることが実証され、その期間中ＧＦＲが実質的に（例えば１０％）その測定値より高いと信じるに足りる確実な医学的理由が無い患者である。
【００４８】
慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している患者；
ここで使用される「患者」は、患者が機能している腎単位の進行性損失を伴う腎臓機能の進行性喪失に悩まされることが合理的に期待される場合、慢性腎不全又はその危険性のある、又は腎臓の代償療法の必要性の危険性があると言われる。特定の患者が慢性腎不全又はその危険性のあるか否かは、関連する医学的又は獣医学的分野の当業者により通常行われる診断である。慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している、又は腎臓の代償療法の必要性の危険性のある患者は、下記を含むがこれらに限定されるものではない：慢性腎不全、末期腎不全、慢性糖尿病性腎障害、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、遺伝性腎炎、及び／又は腎臓異形成に罹患していると考えられる患者；糸球体肥大、尿細管肥大、慢性糸球体硬化症、及び／又は慢性尿細管間質硬化症を示す生検結果を有する患者；腎繊維症を示す、超音波、ＮＭＲ、ＣＡＴスキャン、又は他の非侵襲的検査結果を有する患者；尿沈渣中に異常な数のろう様円柱が存在する患者；慢性的に、患者に予定されるＧＦＲの約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満であるＧＦＲ（ａｇａｒ）を有する患者；慢性的に、約５０ｍｌ／分未満、特に約４０ｍｌ／分未満、３０ｍｌ／分未満又は２０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約５０ｋｇ以上の重量であるヒト男性患者；慢性的に、約４０ｍｌ／分未満、特に約３０ｍｌ／分未満、２０ｍｌ／分未満又は１０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約４０ｋｇ以上の重量であるヒト女性患者；健康である以外は患者と同様である対象が有する機能している腎単位数の約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満の機能している腎単位数を有する患者；単一の腎臓を有する患者；及び腎臓移植レシピエントである患者。
【００４９】
ＩＩＩ．好ましい例
Ａ．治療薬；
本発明のモルフォゲンは、蛋白質のＴＧＦ−βスーパーファミリー中の骨形成性蛋白質／骨形態発生的蛋白質（ＯＰ／ＢＭＰ）ファミリーである、天然性蛋白質、又は天然性蛋白質の機能性変種である。本発明のＡＣＥ阻害薬は一般的な小有機性分子である。ここで使用される「小分子」は、約５ｋＤ未満及び最も好ましくは約２．５ｋＤ未満の分子量を有する組成物を意味する。小分子は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドミメティック、炭水化物、脂質又は他の有機性（炭素含有する）又は無機性分子でもよい。
【００５０】
（ｉ）モルフォゲンのＯＰ／ＢＭＰファミリー；
蛋白質の「ＯＰ／ＢＭＰファミリー」は、ＴＧＦ−βスーパーファミリーとして知られる配列関連蛋白質のゆるい進化学的群中の明確なサブ群を形成する。この蛋白質ファミリーのメンバーは、通常の構造的特徴を有し、前駆体蛋白質からカルボキシ末端完全蛋白質を生成するために同様にプロセスされ、分泌（排出）されるポリペプチドを含有する。この蛋白質のファミリーも又ここで言うモルフォゲンである。上記のように、蛋白質は、新しい、器官−特定の組織の形成を最高潮にする細胞的及び分子的事件の発生のカスケードを誘起する場合にはここでいう形態発生的である。
モルフォゲンはニューロンの生存を強化し、神経経路を維持することが発見された。上記記載のように、モルフォゲンは、ニューロンの生存を強化し、ニューロン性ＣＡＭ発現を刺激し、分化したニューロンの表現型発現を維持し、神経由来の形質転換された細胞の再分化を誘起し、神経突起中の裂け目（ｂｒｅａｋｓ）、特に軸索中の大きなギャップ、を超える軸索の成長を刺激することができる。モルフォゲンは又、免疫学的関連の神経組織損傷を伴う組織破壊を予防する。更に、モルフォゲンは哺乳類中の神経組織の生存能力の監視方法の一部として使用できる。
【００５１】
好ましくは、モルフォゲンは二量性蛋白質であり、そのそれぞれのポリペプチド成分は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２に含まれる、ヒトＯＰ−１の少なくとも保存されたＣ−末端６又は７システイン骨格に対応する又は機能的に等価の配列を有し、及び／又はこの領域中でＯＰ−１と７０％アミノ酸配列ホモロジー又は５０％同一性を示す。モルフォゲンは、一般的に形態生成的に許容できる環境中で下記事件のカスケードを誘起する能力がある：前駆細胞の増殖の刺激；前駆細胞の分化の刺激；分化した細胞の増殖の刺激；及び分化した細胞の成長及び維持の保持。適切な条件下で、モルフォゲンは又、異常な分化をした細胞を再分化誘起する能力がある。本発明で有用なモルフォゲンの同定方法の詳細、その製造、使用及びその形態発生活性試験方法の記載は、数多くの発行物中に開示され、例えば米国特許番号５０１１６９１及び５２６６６８３、及び国際公開ＷＯ９２／１５３２３；ＷＯ９３／０４６９２；及びＷＯ９４／０３２００を、それぞれここで資料として使用する。それらに開示されているように、モルフォゲンは、天然由来物から精製でき、好ましくは原核生物又は真核宿主細胞から、それらに開示された遺伝子配列を使用して組み換えで生成される。又、新規な形態発生配列は、それらに開示された操作に従い特定できる。
【００５２】
天然性モルフォゲンは、そのＣ−末端配列中に実質的なアミノ酸配列ホモロジーを有する（例えば６又は７システイン骨格配列を有する）。通常、天然性モルフォゲンは、前駆体、通常長さ約３５未満の残基のＮ−末端シグナルペプチド配列を有する前駆体として翻訳され、開裂されて生物学的に活性なＣ−末端骨格配列を有する完全ポリペプチドを生成するプロ（ｐｒｏ）領域となる。シグナルペプチドは翻訳において容易に開裂され、その開裂部位はＶｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１４：４６８３−４６９１（１９８６）の方法を使用して目的の配列中にあると予想できる。プロ領域は約２００〜４００を超える残基内の配列及び長さの両方において変更可能である。プロ領域は、開裂して９７〜１０６残基の保存された６−又は７−システインＣ−末端ドメインを含有する約１１５〜１８０残基の「完全」Ｃ−末端ドメインを生成する。プロポリペプチドは通常、完全に処理された、完全Ｃ−末端ポリペプチドよりも約３倍大きい。本来の環境下では、蛋白質は完全二量体として分泌（排出）され、開裂されるプロポリペプチドはおそらく完全二量性蛋白質の溶解性を改良するためにそれらと関連したまま残って蛋白質複合体を形成しすると考えられる。モルフォゲンの複合化した形状は、一般的に生理的環境下で完全体よりも溶解しやすいことが観察される。
【００５３】
ここで使用されるＯＰ／ＢＭＰファミリーメンバーの「前駆体（ｐｒｏ型）」は、折り畳まれた一対のポリペプチドを含有する蛋白質であり、それらはそれぞれＯＰ／ＢＭＰポリペプチドの完全ドメインと共有又は非共有結合するプロ領域を含有する。前駆体は培養された哺乳類性細胞から分泌（排出）される主要な形であることが示された。蛋白質の「完全体」は、プロ領域と共有的にも非共有的に結合していない完全Ｃ−末端ドメインを言う。製剤中のプロ領域量が「完全」Ｃ−末端ドメイン量の５％以下であれば、ＯＰ−１製剤は完全体を含有すると考えられる。
天然由来の完全型形態発生蛋白質、天然型、は通常、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ測定で明らかな分子量約３０〜３６ｋＤａを有するグリコシル化二量体である。３０ｋＤａ蛋白質は還元されると、明らかな約１６ｋＤａ及び約１８ｋＤａの範囲の分子量を有する２つのグリコシル化ポリペプチドサブユニットを生じる。非グリコシル化二量性蛋白質も又形態発生活性を有するが、通常明らかな約２７ｋＤａの範囲の分子量を有する。２７ｋＤａ蛋白質は還元されると、通常約１４ｋＤａ及び約１６ｋＤａの範囲の分子量を有する２つの非グリコシル化ポリペプチドを生じる。
【００５４】
ここで有用なＯＰ／ＢＭＰファミリーメンバーとして、対立遺伝子の、系統発生的等価（相補）物を含むいずれの公知の天然蛋白質及び天然由来又は生合成的に生成された（例えば「ムテイン」又は「突然変異蛋白質」）いずれのその他の変種、並びに蛋白質のＯＰ／ＢＭＰファミリーの新しく、活性なメンバーが挙げられる。特に有用な配列として、哺乳類性のＣ−末端７システインドメインを含有するもの、好ましくはヒト、ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、ＢＭＰ８及びＢＭＰ９が挙げられる。他の本発明の実施で有用な蛋白質として、ＤＰＰ、Ｖｇ１、Ｖｇｒ−１、６０Ａ、ＧＤＦ−１、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−７、ＢＭＰ１０、ＢＭＰ１１；ＢＭＰ１３、ＢＭＰ１５、ＵＮＩＶＩＮ、ＮＯＤＡＬ、ＳＣＲＥＷ、ＡＤＭＰ又はＮＵＲＡＬ及びそれらのアミノ酸配列変種の活性体が挙げられる。好ましくは、本発明のモルフォゲンはＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、及びＢＭＰ９のいずれかから選ばれる。
【００５５】
好ましくは、ここでいう二量体形態発生蛋白質のポリペプチドサブユニットはそれぞれ、レファレンスモルフォゲンのアミノ酸配列と特定の関係するアミノ酸配列を有する。例えば好ましい形態発生ポリペプチド鎖は、形態生成的に活性な完全長ヒトＯＰ−１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３中に存在する配列と特定の関係する。しかし、ここで記載されるいずれの１以上の天然性又は生合成形態発生蛋白質も、同様にレファレンス配列として使用できる。好ましい形態発生ポリペプチド鎖は、少なくともヒトＯＰ−１のＣ−末端６システイン骨格、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３の残基３３５〜４３１（又はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基３８〜１３９）と特定の関係する。更に好ましくは、形態発生蛋白質は、少なくともヒトＯＰ−１のＣ−末端７システイン骨格、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３の残基３３０〜４３１（又はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基３８〜１３９）と特定の関係する。
【００５６】
機能的に等価の配列としては、レファレンス配列中に表されたシステイン残基と機能的に等価の配置が挙げられ、例えばこれらシステインの直線的配置を変化させるが、二量体モルフォゲン蛋白質の折り畳み構造中のそれらの関係、及び形態発生活性に必要な鎖内又は鎖間ジスルフィド結合を形成するそれらの能力を実質的に損なわないアミノ酸挿入又は削除が挙げられる。例えばいくつかの天然性モルフォゲン中に１以上の内部的削除（１の残基の；ＢＭＰ２）又は挿入（４つの残基の；ＧＤＦ−１）が存在するが生物活性を阻害しないことが開示されている。更に、機能的に等価の配列として、レファレンス配列、例えばヒトＯＰ−１のＣ−末端７システイン骨格、の対応する残基とは異なる１以上のアミノ酸残基が組織の形態発生活性を破壊しないものも挙げられる。従って、対応するアミノ酸レファレンス配列中の同類置換も好ましい。対応する残基レファレンス配列中の「同類置換基」であるアミノ酸残基は、物理的に又は機能的に対応するレファレンス残基と類似するものであり、例えば同様なサイズ、形状、電荷、共有結合又は水素結合、等を形成する能力を有する化学的性質を有するものである。特に好ましい同類置換基は、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）、「蛋白質配列及び構造地図」Ｖｏｌ．５（追補３）、ｃｈ．２２（ｐｐ．３５４−３５２）、Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、ワシントン、Ｄ．Ｃ．（ｓｕｐｒａ）（その内容をここで資料として使用する。）に表されたものに対する評価を満たすものである。「同類置換」は又対応する天然性親アミノ酸の代わりに合成又は誘導体化アミノ酸を使用して、得られた変種ポリペプチドに対して引き起こされた抗体が同様に、対応する天然由来モルフォゲンポリペプチドとも免疫反応することも示す。
【００５７】
本発明で有用なモルフォゲンは本来骨形成性蛋白質として特定される蛋白質であり、例えばＯＰ−１、ＯＰ−２及びＣＢＭＰ２蛋白質等、並びにＤＰＰ（ショウジョウバエ由来）、Ｖｇｌ（アフリカツメガエル由来）、Ｖｇｒ−１（マウス由来、参照、米国特許番号５０１１６９１、Ｏｐｐｅｒｍａｎｎら）、ＧＤＦ−１（マウス由来、参照Ｌｅｅ（１９９１）ＰＮＡＳ８８：４２５０−４２５４）、表ＩＩ中に全てを示す）、及び近年特定された６０Ａ蛋白質（ショウジョウバエ由来、参照、Ｗｈａｒｔｏｎら（１９９１）ＰＮＡＳ８８：９２１４−９２１８）等のアミノ酸配列関連する蛋白が挙げられる。上記の通り、このファミリーのメンバーは、例えば蛋白質のＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーであり、そのＣ−末端領域中に実質的なアミノ酸配列ホモロジーを有する。蛋白質は、Ｎ−末端シグナルペプチド配列、通常約３０未満の残基を有する前駆体として翻訳され、開裂されて完全配列を生成するプロ領域となる。シグナルペプチドは翻訳において容易に開裂され、その開裂部位はＶｏｎ  Ｈｅｉｊｎｅ，（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１４：４６８３−４６９１）の方法を使用して目的の配列中にあると予想できる。
【００５８】
下記表Ｉは、ＯＰ／ＢＭＰファミリーの各種天然性メンバーをまとめ、ここで使用されるそれらの名称、それらの配列リストレファレンス、及び配列リスト中に含まれない完全長蛋白質のアミノ酸配列の文献資料名を特定して示した。表Ｉに記載されたそれぞれのジェネリック用語は、ここに記載され、配列リスト中に記載された特定された配列をエンコードする核酸から発現する治療的効果的蛋白質、活性なフラグメント又はそれらの前駆体、又は天然性又は生合成変種等のそれらの機能性等価物を含むことを意図しており、そう理解される。天然性変種には単一の生物種の他の個体から単離された対立遺伝子の変種型、並びに系統発生的に明確な生物種から単離された変種（相同）型が含まれる。
【００５９】
表Ｉ（モルフォゲン例）；
「ＯＰ−ｌ」は総称的に、対立遺伝子及びその変種を含む、ＯＰ−ｌ蛋白質をエンコードする一部又は全てのＤＮＡ配列から発現する形態生成的に活性な蛋白質の群をいい、例えばヒトＯＰ−１（「ｈＯＰ−１」、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１、完全蛋白質アミノ酸配列）、又はマウスＯＰ−１（「ｍＯＰ−１」、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：４、完全蛋白質アミノ酸配列）が挙げられる。保存された７システイン骨格はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１及び４の残基３８〜１３９により定義される。完全長蛋白質をエンコードするｃＤＮＡ配列及びアミノ酸はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１７及び３（ｈＯＰ−１）並びにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１８及び１９（ｍＯＰ−１）中に示される。完全蛋白質は、残基２９３〜４３１（ｈＯＰ−１）及び２９２〜４３０（ｍＯＰ−１）により定義される。開裂されて完全、形態生成的に活性な蛋白質を生成する蛋白質のプロ領域は、本質的に残基３０〜２９２（ｈＯＰ−１）及び残基３０〜２９１（ｍＯＰ−１）により定義される。
【００６０】
「ＯＰ−２」は総称的に、対立遺伝子及びその変種を含む、ＯＰ−２蛋白質をエンコードする一部又は全てのＤＮＡ配列から発現する活性な蛋白質の群をいい、例えばヒトＯＰ−２（「ｈＯＰ−２」、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：５、完全蛋白質アミノ酸配列）又はマウスＯＰ−２（「ｍＯＰ−２」、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：６、完全蛋白質アミノ酸配列）が挙げられる。保存された７システイン骨格はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：５及び６の残基３８〜１３９により定義される。完全長蛋白質をエンコードするｃＤＮＡ配列及びアミノ酸はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：２０及び２１（ｈＯＰ−２）並びにＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：２２及び２３（ｍＯＰ−２）中に示される。完全蛋白質は、本質的に残基２６４〜４０２（ｈＯＰ−２）及び２６１−３９９（ｍＯＰ−２）により定義される。開裂されて完全、形態生成的に活性な蛋白質を生成しやすい蛋白質のプロ領域は、本質的に残基１８〜２６３（ｈＯＰ−２）及び残基１８〜２６０（ｍＯＰ−２）により定義される。別の開裂部位は又両方のＯＰ−２蛋白質の上流の２１残基で起こる。
【００６１】
「ＣＢＭＰ２」は総称的に対立遺伝子及びその変種を含む、ＣＢＭＰ２蛋白質をエンコードするＤＮＡ配列から発現する形態生成的に活性な蛋白質をいい、例えばＣＢＭＰ２Ａ（「ＣＢＭＰ２Ａ（ｆｘ）」、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０）又はヒトＣＢＭＰ２ＢＤＮＡ（「ＣＢＭＰ２Ｂ（ｆｘ）」）、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１）が挙げられる。ここでいうＢＭＰ２Ａ及びＢＭＰ２Ｂ、又はＢＭＰ２及びＢＭＰ４の完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｗｏｚｎｅｙら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：１５２８−１５３４に示され、その内容をここで資料として使用する。ＢＭＰ２（ＢＭＰ２Ａ）のプロ領域は残基２５〜２４８又は２５〜２８２を含み；完全蛋白質は残基２４９〜３９６又は２８３〜３９６を含むと思われる。ＢＭＰ４（ＢＭＰ２Ｂ）のプロ領域は残基２５〜２５６又は２５〜２９２を含み；完全蛋白質は残基２５７〜４０８又は２９３〜４０８を含むと思われる。
【００６２】
「ＤＰＰ（ｆｘ）」は、ショウジョウバエＤＰＰ遺伝子（ＤＰＰ蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：７）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｐａｄｇｅｔｔら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ３２５：８１−８４に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基４５６まで延びており；完全蛋白質は残基４５７〜５８８により定義されると思われる。ＤＰＰ（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６３】
「Ｖｇｌ（ｆｘ）」は、アフリカツメガエルＶｇｌ遺伝子（Ｖｇ１蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：８）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｗｅｅｋｓ（１９８７）ｃｅｌｌ５１：８６１−８６７に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基２４６まで延びており；完全蛋白質は残基２４７〜３６０により定義されると思われる。Ｖｇ１（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６４】
「Ｖｇｒ−１（ｆｘ）」は、ネズミｖｇｒ−１遺伝子（Ｖｇｒ−１蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：９）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｌｙｏｎｓら、（１９８９）ＰＮＡＳ８６：４５５４−４５５８に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基２９９まで延びており；完全蛋白質は残基３００〜４３８により定義されると思われる。Ｖｇｒ−１（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６５】
「ＧＤＦ−１（ｆｘ）」は、ヒトＧＤＦ−１遺伝子（ＧＤＦ−１蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３中に示される。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基２１４まで延びており；完全蛋白質は残基２１５〜３７２により定義されると思われる。ＧＤＦ−１（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６６】
「６０Ａ」は総称的に、対立遺伝子及びその変種を含む、６０Ａ蛋白質（参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４）をエンコードする一部又は全てのＤＮＡ配列（ショウジョウバエ６０Ａ遺伝子由来）から発現する形態生成的に活性な蛋白質をいう。「６０Ａ（ｆｘ）」は保存された７システイン骨格（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１４の残基３５４〜４５５）を定義する蛋白質配列をいう。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基３２４まで延びており；完全蛋白質は残基３２５〜４５５により定義されると思われる。６０Ａ（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６７】
「ＢＭＰ３（ｆｘ）」は、ヒトＢＭＰ３遺伝子（ＢＭＰ３蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｗｏｚｎｅｙら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：１５２８−１５３４に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基２９０まで延びており；完全蛋白質は残基２９１〜４７２により定義されると思われる。ＢＭＰ３（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６８】
「ＢＭＰ５（ｆｘ）」は、ヒトＢＭＰ５遺伝子（ＢＭＰ５蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｃｅｌｅｓｔｅら（１９９１）ＰＮＡＳ８７：９８４３−９８４７に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基３１６まで延びており；完全蛋白質は残基３１７〜４５４により定義されると思われる。ＢＭＰ５（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００６９】
「ＢＭＰ６（ｆｘ）」は、ヒトＢＭＰ６遺伝子（ＢＭＰ６蛋白質、参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６）によりエンコードされ、保存された７システイン骨格を定義する蛋白質配列をいう。完全長蛋白質のアミノ酸配列は、Ｃｅｌｅｓｔｅら（１９９０）ＰＮＡＳ８７：９８４３−９８４７に示され、その内容をここで資料として使用する。プロ領域はシグナルペプチド開裂部位から残基３７４まで延びており；完全蛋白質は残基３７５〜５１３により定義されると思われる。ＢＭＰ６（ｆｘ）の配列は表ＩＩに示す。
【００７０】
ＯＰ−２蛋白質は、このファミリー中の他の蛋白質と共通する保存されたシステイン骨格に加え、この領域中（例えばＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：２１及び２３の残基４１参照）に「追加的な」システイン残基を有する。ＧＤＦ−１蛋白質は保存された骨格中に４つのアミノ酸挿入（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１９とＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１３との比較）を有するが、この挿入は、折り畳み構造においてシステインの関係に影響しないと思われる。更に、ＣＢＭＰ２蛋白質は、システイン骨格中で失われた１のアミノ酸残基である。
【００７１】
モルフォゲンは還元された場合に不活性であるが、他の本発明のモルフォゲン（例えばヘテロダイマーとして）と組み合わせて酸化された場合に酸化されたホモダイマーとして活性である。従って、ここではモルフォゲンは一対のポリペプチド鎖を有する二量性蛋白質であり、それぞれのポリペプチド鎖は、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基４３〜１３９により定義される少なくともＣ−末端６システイン骨格及び、これらシステインと機能的に等価の配置（例えば配列中のシステインの直線的配置を変化させるが、折り畳み構造中のそれらの関係を変化させない実質的アミノ酸挿入又は削除）を含有し、そのためポリペプチド鎖が折り畳まれた時、一対のポリペプチド鎖を含有する二量性蛋白質種は適切に三次元構造を有し、その構造は蛋白質がここでいうモルフォゲンとして作用できる適切な鎖内又は鎖間ジスルフィド結合を有する。特に、モルフォゲン一般的には、形態生成的に許容できる環境下で全ての下記生物学的機能を達成できる：前駆細胞の増殖の刺激；前駆細胞の分化の刺激；分化した細胞の増殖の刺激；及び、形質転換された細胞の「再分化」を含む分化した細胞の成長及び維持の保持。更に又、これらモルフォゲンは、適切な周囲の環境下で抗原感作細胞の再分化を誘起できることも予測できる。
【００７２】
下記発行物は、公開されたモルフォゲンポリペプチド配列、並びに天然性及び／又は合成モルフォゲンの関連する化学的及び機械的性質を開示する：ＯＰ−１及びＯＰ−２：米国特許番号５，０１１，６９１，米国特許番号５，２６６，６８３，Ｏｚｋａｙｎａｋら，ＥＭＢＯＪ．９：２０８５−２０９３（１９９０）；ＯＰ−３：ＷＯ（国際公開番号）９４／１０２０３（ＰＣＴＵＳ９３／１０５２０）；ＢＭＰ−２，ＢＭＰ−３，及びＢＭＰ−４：ＷＯ８８／００２０５，Ｗｏｚｎｅｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：１５２８−１５３４（１９８８）；ＢＭＰ−５及びＢＭＰ−６：Ｃｅｌｅｓｔｅら，ＰＮＡＳ８７：９８４３−９８４７（１９９１）；Ｖｇｒ１：Ｌｙｏｎｓら，ＰＮＡＳ８６：４５５４−４５５８（１９８９）；ＤＰＰ：Ｐａｄｇｅｔｔら，Ｎａｔｕｒｅ３２５：８１−８４（１９８７）；Ｖｇ−１：Ｗｅｅｋｓ，Ｃｅｌｌ，５１：８６１−８６７（１９８７）；ＢＭＰ−９：ＷＯ９５／３３８３０（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０７０８４）；ＢＭＰ−１０：ＷＯ９４／２６８９３（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０５２９０）；ＢＭＰ−１１：ＷＯ９４／２６８９２（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０５２８８）；ＢＭＰ−１２：ＷＯ９５／１６０３５（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１４０３０）；ＢＭＰ−１３：ＷＯ９５／１６０３５（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１４０３０）；ＧＤＦ−１：ＷＯ９２／００３８２（ＰＣＴ／ＵＳ９１／０４０９６）及びＬｅｅら，ＰＮＡＳ８８：４２５０−４２５４（１９９１）；ＧＤＦ−８：ＷＯ９４／２１６８１（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０３０１９）；ＧＤＦ−９：ＷＯ９４／１５９６６（ＰＣＴ／ＵＳ９４／００６８５）；ＧＤＦ−１０：ＷＯ９５／１０５３９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１１４４０）；ＧＤＦ−１１：ＷＯ９６／０１８４５（ＰＣＴ／ＵＳ９５／０８５４３）；ＢＭＰ−１５：ＷＯ９６／３６７１０（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０６５４０）；ＭＰ１２１：ＷＯ９６／０１３１６（ＰＣＴ／ＥＰ９５／０２５５２）；ＧＤＦ−５（ＣＤＭＰ−１，ＭＰ５２）：ＷＯ９４／１５９４９（ＰＣＴ／ＵＳ９４／００６５７）及びＷＯ９６／１４３３５（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１２８１４）及びＷＯ９３／１６０９９（ＰＣＴ／ＥＰ９３／００３５０）；ＧＤＦ−６（ＣＤＭＰ−２，ＢＭＰ−１３）：ＷＯ９５／０１８０１（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０７７６２）及びＷＯ９６／１４３３５及びＷＯ９５／１０６３５（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１４０３０）；ＧＤＦ−７（ＣＤＭＰ−３，ＢＭＰ−１２）：ＷＯ９５／１０８０２（ＰＣＴ／ＵＳ９４／０７７９９）及びＷＯ９５／１０６３５（ＰＣＴ／ＵＳ９４／１４０３０）。例えば有用な蛋白質として、２以上の公知のモルフォゲンからの配列を使用するように設計された新規な生合成形態発生蛋白質及びキメラ蛋白質を含む生物学的に活性な生合成構成体が挙げられる。同様に米国特許番号５０１１６９１（例えばＣＯＰ−１、ＣＯＰ−３、ＣＯＰ−４、ＣＯＰ−５、ＣＯＰ−７、及びＣＯＰ−１６）中に開示された生合成構成体参照。モルフォゲン及び他の関連する蛋白質を記載した全ての引用文献の開示をここで資料として使用する。．
【００７３】
好ましくは、有用な形態発生蛋白質として、アミノ酸配列はここでリストする例示的天然性形態発生蛋白質から選ばれるレファレンス形態発生蛋白質と、７０％以上のアミノ酸配列ホモロジー、好ましくは８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％以上ホモロジー（同一性又は保存された置換）である配列を含むものが挙げられる。好ましくは、レファレンス蛋白質はヒトＯＰ−１であり、そのレファレンス配列はヒトＯＰ−１の骨形成性活性体中に存在するＣ−末端７システイン骨格、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３の残基３３０〜４３１（又はＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１の残基３８〜１３９）である。従って有用な形態発生蛋白質として、天然性又は生合成された（例えば「ムテイン」又は「突然変異蛋白質」等）かに拘らず、対立遺伝子の、系統発生的等価（相補）物及び他の変種、並びにここで記載された及び上記特定されたものを含む蛋白質の一般的形態発生ファミリーの新規なメンバーが挙げられる。ある種の特に好ましい形態発生ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１の好ましいレファレンス配列又は上記他のモルフォゲンのどれかと５０％以上アミノ酸同一性を示すか、更に好ましくは５５％以上、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以上のそれらとアミノ酸と同一性を示す。
【００７４】
図２８は、ＯＰ−１をレファレンス配列として使用して、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの各種代表的メンバーのＣ−末端７システイン骨格との、アミノ酸配列ホモロジー割合及び同一性割合を示す。図中に示される相同性割合は、Ｍｅｇａ  Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）を使用して配列した配列により決定した。レファレンスモルフォゲン配列（Ｃ−末端、生物学的に活性なｈＯＰ−１の７−システイン骨格）からの挿入及び削除は、算出の目的では無視した（詳細は下記参照）。
図２８にリストされた蛋白質配列研究分野の当業者に明らかなように、実質的な形態発生活性を保持すると同時に顕著なアミノ酸変化がレファレンス配列から作成できる。更に、ＧＤＦ−１はＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３）の残基３７２〜３７３に対応する２つの残基間に挿入された４つのアミノ酸（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３１）を含有する。同様に、ＢＭＰ３はｈＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３）の残基３８５〜３８６に対応する２つの残基間に挿入された「余分の」残基、バリンを含有する。同様に、ＢＭＰ２及びＢＭＰ４は両方共ＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３）の残基３８９に対応する残基を「欠失」したアミノ酸である。これらレファレンス配列からの「逸脱」はいずれも生物活性へ実質的に影響を与えていない。
【００７５】
好ましくは、本発明で有用な、形態発生ポリペプチドのファミリー、及びそのメンバーは、一般的アミノ酸配列により定義される。例えば下記に開示された一般的配列１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４）及び一般的配列２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５）は、示すために好ましい特定された蛋白質ファミリーメンバー間で観察される変種まで含むものであり、少なくともＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、ＢＭＰ３、６０Ａ、ＤＰＰ、Ｖｇｌ、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６；Ｖｇｒ−１、及びＧＤＦ−ｌを含む。これら蛋白質のアミノ酸配列は、上記でまとめたようにここで及び／又は当分野で記載されている。一般的配列は、６及び７システイン骨格（それぞれ一般的配列１及び２）により定義されるＣ−末端骨格中のこれら配列、並びに配列中の変更可能な位置の選択的残基で共通にされている両方のアミノ酸同一性を有する。一般的配列は鎖内又は鎖間ジスルフィド結合が形成できる適切なシステイン骨格を提供し、折り畳まれた蛋白質の三次構造へ影響しやすいある種の決定的アミノ酸を含有する。更に、一般的配列は位置３６（一般的配列１）又は位置４１（一般的配列２）における追加的なシステインを可能とし、ＯＰ−２及びＯＰ−３の形態生成的に活性な配列の範囲を広げている。
【００７６】
一般的配列１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４）
【００７７】
【表１】
2006516020.tif 000002
但し、それぞれのＸａａは独立して下記記載の１以上の特定のアミノ酸の群から選ばれる：「Ｒｅｓ．」は「残基」を意味し、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｔｙｒ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝Ｖａｌ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４＝（Ｓｅｒ，Ａｓｐ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６＝（Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７＝（Ａｓｐ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８＝（Ｌｅｕ，Ｖａｌ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１１＝（Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ｈｉｓ，Ａｓｎ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１２＝（Ａｓｐ，Ａｒｇ，Ａｓｎ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１３＝（Ｔｒｐ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１４＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１５＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１６（Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１８＝（Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１９＝（Ｇｌｙ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２０＝（Ｔｙｒ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２１＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ，Ｈｉｓ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２３＝（Ｔｙｒ，Ａｓｎ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２６＝（Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ，Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２８＝（Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３０＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ｇｌｎ，Ｉｌｅ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３１＝（Ｐｈｅ，Ｌｅｕ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３３＝（Ｌｅｕ，Ｖａｌ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３４＝（Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｔｈｒ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３５＝（Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ａｌａ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３６＝（Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，Ｓｅｒ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３７＝（Ｍｅｔ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３８＝（Ａｓｎ，Ｓｅｒ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３９＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４０＝（Ｔｈｒ，Ｌｅｕ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４４＝（Ｉｌｅ，Ｖａｌ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４５＝（Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４６＝（Ｇｌｎ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４７＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４８＝（Ｌｅｕ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４９＝（Ｖａｌ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５０＝（Ｈｉｓ，Ａｓｎ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５１＝（Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｌａ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５２＝（Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ａｓｎ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５３＝（Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５４＝（Ｐｒｏ，Ｓｅｒ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５５＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５６＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｉｌｅ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５７＝（Ｖａｌ，Ａｌａ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５８＝（Ｐｒｏ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５９＝（Ｌｙｓ，Ｌｅｕ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６０＝（Ｐｒｏ，Ｖａｌ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６３＝（Ａｌａ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６５＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔｒｅｓ．６６＝（Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６７＝（Ｌｅｕ，Ｍｅｔ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６８＝（Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６９＝（Ａｌａ，Ｐｒｏ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７０＝（Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７１＝（Ｓｅｒ，Ａｌａ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７２＝（Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７４＝（Ｔｙｒ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７５＝（Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７６＝（Ａｓｐ，Ａｓｎ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７７＝（Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ａｒｇ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７８＝（Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７９＝（Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８０＝（Ａｓｎ，Ｔｈｒ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８２＝（Ｉｌｅ，Ｖａｌ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８４＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８５＝（Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８６＝（Ｔｙｒ，Ｇｌｕ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８７＝（Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｇｌｕ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８８＝（Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｔｒｐ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９０＝（Ｖａｌ，Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９２＝（Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９３＝（Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｕ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９５＝（Ｇｌｙ又はＡｌａ）及びＸａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９７＝（Ｈｉｓ又はＡｒｇ）である。
【００７８】
一般的配列２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２５）は全ての一般的配列１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２４）を含有し、更に下記配列（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２６）をそのＮ−末端に含有する：
【００７９】
【表２】
2006516020.tif 000003
従って、残基７で開始すると、一般的配列２中のそれぞれの「Ｘａａ」は一般的配列１用に定義される特定のアミノ酸であり、一般的配列１で記載されたそれぞれ残基数は一般的配列２中５個シフトしているという特徴を有する。そのため、一般的配列１中の「Ｘａａ．  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｔｙｒ又はＬｙｓ）」は一般的配列２中の「Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７」である。一般的配列２中、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｌａ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４＝（Ｈｉｓ，Ａｒｇ又はＧｌｎ）；及びＸａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５＝（Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，又はＴｙｒ）である。
【００８０】
例えば有用な骨形成性蛋白質として、上記記載の一般的配列３及び４（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：２７及び２８、それぞれ）により定義されるものが挙げられる。特に、一般的配列３及び４は複合アミノ酸、下記蛋白質の配列である：ヒトＯＰ−１、ヒトＯＰ−２、ヒトＯＰ−３、ヒトＢＭＰ２、ヒトＢＭＰ３、ヒトＢＭＰ４、ヒトＢＭＰ５、ヒトＢＭＰ６、ヒトＢＭＰ８、ヒトＢＭＰ９、ヒトＢＭＰ１０、ヒトＢＭＰ１１、ショウジョウバエ６０Ａ、アフリカツメガエルＶｇ１、ウニＵＮＩＶＩＮ、ヒトＣＢＭＰ１（マウスＧＤＦ−５）、ヒトＣＢＭＰ２（マウスＧＤＦ−６、ヒトＢＭＰ１３）、ヒトＣＢＭＰ３（マウスＧＤＦ−７、ヒトＢＭＰ１２）、マウスＧＤＦ３、ヒトＧＤＦ−１、マウスＧＤＦ−１、ニワトリＤＯＲＳＡＬＩＮ、ショウジョウバエＤＰＰ、ショウジョウバエＳＣＲＥＷ、マウスＮＯＤＡＬ、マウスＧＤＦ−８、ヒトＧＤＦ−８、マウスＧＤＦ−９、マウスＧＤＦ−１０、ヒトＧＤＦ−１１、マウスＧＤＦ−１１、ヒトＢＭＰ１５、及びラットＢＭＰ３ｂ。一般的配列１と同様、一般的配列３はＣ−末端６システイン骨格に適応し、一般的配列２と同様、一般的配列４は７システイン骨格に適応する。
【００８１】
一般的配列３（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２７）
【００８２】
【表３】
2006516020.tif 000004
但し、それぞれのＸａａは独立して下記記載の１以上の特定のアミノ酸の群から選ばれる：「Ｒｅｓ．」は「残基」を意味し、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１＝（Ｐｈｅ，Ｌｅｕ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ，Ｖａｌ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝（Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４＝（Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５＝（Ｐｈｅ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６＝（Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ａｌａ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７＝（Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ａｌａ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８＝（Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９＝（Ｇｌｙ，Ｈｉｓ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１０＝（Ｔｒｐ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１１＝（Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１２＝（Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１３＝（Ｔｒｐ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１４＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１５＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１６＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ又はＴｒｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１８＝（Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１９＝（Ｇｌｙ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２０＝（Ｔｙｒ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２１＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｍｅｔ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２２＝（Ａｌａ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２３＝（Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ａｓｎ，Ａｌａ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２４＝（Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２６＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２８＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３０＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｐｈｅ，Ｇｌｎ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３１＝（Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３２＝（Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３３＝（Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３４＝（Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ｔｈｒ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｌｅｕ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３５＝（Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３６＝（Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｃｙｓ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３７＝（Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｐｈｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３８＝��Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ｍｅｔ，Ｖａｌ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３９＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏ又はＰｈｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４０＝（Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ｈｉｓ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４１＝（Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４２＝（Ｈｉｓ，Ｔｙｒ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４３＝（Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４４＝（Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ｖａｌ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｍｅｔ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４５＝（Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４６＝（Ｇｌｎ，Ａｒｇ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４７＝（Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ａｓｎ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４８＝（Ｌｅｕ，Ａｓｎ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４９＝（Ｖａｌ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５０＝（Ｈｉｓ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５１＝（Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｍｅｔ，Ａｌａ，Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５２＝（Ｉｌｅ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｌａ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５３＝（Ａｓｎ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５４＝（Ｐｒｏ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ｖａｌ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５５＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ又はＨｉｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５６＝（Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ｔｙｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５７＝（Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｌｅｕ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５８＝（Ｐｒｏ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ａｓｐ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５９＝（Ｌｙｓ，Ｌｅｕ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．：６０＝（Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｔｈｒ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６１＝（Ｃｙｓ，Ｖａｌ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６３＝（Ａｌａ，Ｖａｌ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６５＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｖａｌ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６６＝（Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，Ｇｌｕ，Ａｒｇ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６７＝（Ｌｅｕ，Ｍｅｔ，Ｔｈｒ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６８＝（Ａｓｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｔｈｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｌｙｓ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６９＝（Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｇｌｙ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７０＝（Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７１＝（Ｓｅｒ，Ｐｒｏ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ａｓｎ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７４＝（Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７５＝（Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｌ���ｕ，Ｉｌｅ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７６＝（Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ又はＧｌｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７７＝（Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ａｒｇ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ又はＰｒｏ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７８＝（Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ａｌａ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｇｌｕ，Ａｓｎ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７９＝（Ｓｅｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｇｌｎ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８０＝（Ａｓｎ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｐｒｏ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ａｒｇ；Ｓｅｒ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８１＝（Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８２＝（Ｉｌｅ，Ａｓｎ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｔｙｒ，Ａｓｐ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８３＝（Ｌｅｕ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８４＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ又はＧｌｙ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８５＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｈｉｓ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｇｌｕ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８６＝（Ｔｙｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ又はＩｌｅ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８７＝（Ａｒｇ，Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｐｒｏ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８８＝（Ａｓｎ，Ａｓｐ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８９＝（Ｍｅｔ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９０＝（Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９１＝（Ｖａｌ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９２＝（Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｖａｌ，Ａｌａ，Ｓｅｒ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９３＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９５＝（Ｇｌｙ，Ａｌａ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９７＝（Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ｌｅｕ又はＳｅｒ）。更に、ｒＢＭＰ−３ｂ及びｍＧＤＦ−１０中のｒｅｓ．５３の後ろにはＩｌｅがあり；ＧＤＦ−１中のｒｅｓ．５４の後ろにはＴがあり；ＢＭＰ３中のｒｅｓ．５４の後ろにはＶがあり；ＢＭＰ８及びＤｏｒｓａｌｉｎ中のｒｅｓ．７８の後ろにはＧがあり；ｈＧＤＦ−１中のｒｅｓ．３７の後ろにはＰｒｏ，Ｇｌｙ，Ｇｌｙ，Ｐｒｏがある。
【００８３】
一般的配列４（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２８）は全ての一般的配列３（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２７）を含有し、更に下記配列（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２６）をそのＮ−末端に含有する：
【００８４】
【表４】
2006516020.tif 000005
従って、残基６で開始すると、一般的配列４中のそれぞれの「Ｘａａ」は一般的配列３用に定義される特定のアミノ酸であり、一般的配列３で記載されたそれぞれ残基数は一般的配列４中５個シフトしているという特徴を有する。そのため、一般的配列３中の「Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１＝（Ｔｙｒ，Ｐｈｅ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｎ，Ｖａｌ又はＧｌｕ）」は一般的配列４中の「Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６」である。一般的配列４中、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｕ，Ａｌａ，又はＣｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｔｙｒ，又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４＝（Ｈｉｓ，Ｇｌｎ，Ａｒｇ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｖａｌ，Ｐｒｏ，又はＴｙｒ）；及びＸａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５＝（Ｇｌｎ，Ｔｈｒ，Ｈｉｓ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ｓｅｒ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，又はＬｅｕ）である。
【００８５】
一般的配列４の定義中の天然性モルフォゲンの配列に基づくと、１以上のアミノ酸残基のギャップ及び／又は挿入は、少なくとも残基１１〜１２、４２〜４３、５９〜６０、６８〜６９及び８３〜８４の間又はこれらを含むものの場合（生物活性を失うか実質的に損なうことなしに）許容できることは明らかである。
【００８６】
本発明でモルフォゲンとして使用できる特に有用な配列として、Ｃ−末端ドメインが挙げられ、例えばＣ−末端９６−１０２アミノ酸残基Ｖｇｌ、Ｖｇｒ−１、ＤＰＰ、ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、ＧＤＦ−１（参照、下記表ＩＩ、及びＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１〜１３）、並びに、その全ては少なくとも保存された６又は７システイン骨格を含有するＣ−末端ドメイン６０Ａ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５及びＢＭＰ６（参照ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１２、１４〜１６）を含有する蛋白質である。更に、米国特許番号５０１１６９１に開示されたＣＯＰ−１、３〜５、７、１６等の一般的配列から設計された生合成構成体も又、有用である。他の配列としてインヒビン／アクティビン蛋白質が挙げられる（参照、例えば米国特許番号４９６８５９０及び５０１１６９１）。従って、他の有用な配列は、いずれかの上記配列と７０％以上アミノ酸配列ホモロジー又は５０％同一性、好ましくは８０％ホモロジー又は７０％同一性を有する。これらは対立遺伝子、変種及び突然変異種、並びに生合成ムテイン、同様に蛋白質の形態発生ファミリーの新規なメンバーを含むことが予測できる。特に関連する蛋白質のファミリーで考えられるのは形態発生活性を発現するが好ましい配列からのアミノ酸変化は保存的変化を含む蛋白質である。保存されたアミノ酸変化に関する知見は当分野で公知である。例えばＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）、「蛋白質配列及び構造地図」Ｖｏｌ．５（追補３）、ｃｈ．２２（ｐｐ．３４５−３６２）、（Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ、ｅｄ．、Ｎａｔ’ｌＢｉｏＭｅｄ．ＲｅｓｅａｒｃｈＦｄｎ．ワシントン、Ｄ．Ｃ．１９７８）には進化学的保存された蛋白質中のある種のアミノ酸置換は無作為の機会で予測されるよりも高い期待される頻度で発生することが記載されている。従って、保存されたアミノ酸置換は図８４（ｓｕｐｒａ）に従って決定されることが出来る。ここで使用される、可能性のある有用な配列はＮｅｅｄｌｅｍａｎら（（１９７０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３）の方法及びＭｅｇａ  Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）により算出された同一性を使用して公知のモルフォゲン配列で配列した。
【００８７】
下記表ＩＩはモルフォゲンとして特定された天然蛋白質の活性な領域のアミノ酸配列を比較する。上記モルフォゲンとして、ヒトＯＰ−１（ｈＯＰ−１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１〜３）、マウスＯＰ−１（ｍＯＰ−１、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：４及び１９）、ヒト及びマウスＯＰ−２（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：５、６、２１、及び２３）、ＣＢＭＰ２Ａ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１０）、ＣＢＭＰ２Ｂ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１１）、ＢＭＰ３（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１２）、ＤＰＰ（ショウジョウバエ由来、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：７）、Ｖｇｌ（アフリカツメガエル由来、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：８）、Ｖｇｒ−１（マウス由来、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：９）、ＧＤＦ−１（マウス由来、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１３）、６０Ａ蛋白質（ショウジョウバエ由来、ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏｓ：１４）、ＢＭＰ５（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１５）及びＢＭＰ６（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：１６）が挙げられる。配列は、実質的に下記Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（１９７０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３の方法を使用して、アラインプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）を使用して算出して配列した。表中、３つの点はその位置のアミノ酸がｈＯＰ−１中のアミノ酸と同一であることを示す。３つのダッシュはその位置に存在するアミノ酸がないことを示し、相同性を表示する目的のために記載した。例えばＣＢＭＰ−２Ａ及びＣＢＭＰ−２Ｂのアミノ酸残基６０は「欠失」している。勿論、この領域中両方のこれらアミノ酸配列は、Ａｓｎ−Ｓｅｒ（残基５８、５９）を含有し、ＣＢＭＰ−２ＡはＬｙｓ及びＩｌｅを含有する一方ＣＢＭＰ−２ＢはＳｅｒ及びＩｌｅを含有する。
【００８８】
表ＩＩ
【００８９】
【表５−１】
2006516020.tif 000006
【表５−２】
2006516020.tif 000007
【表５−３】
2006516020.tif 000008
【表５−４】
2006516020.tif 000009
【表５−５】
2006516020.tif 000010
†ＢＭＰ３の残基５６及び５７間にＶａｌ残基があり；ＧＤＦ−１の残基４３及び４４間にはアミノ酸配列Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏがある。
【００９０】
上記アミノ酸配列比較から明らかなとおり、顕著なアミノ酸変化が形態発生活性を保持しながら一般的配列中に発生できる。
上記のように、本発明で有用なある種の好ましい形態発生ポリペプチド配列は、好ましいｈＯＰ−１のレファレンス配列を定義するアミノ酸配列（特に保存された６−ｈＯＰ−１の７−システイン骨格、例えばＳＥＱｅｑＩＤＮｏ：１の残基３９〜１３９）、又は本明細書に記載された他のモルフォゲンからの等価の領域と５０％を超える同一性、好ましくは５５％、６０％、６５％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％を超える同一性を有する。特に好ましい配列として、ＯＰ−１及びＯＰ−２蛋白質の対立遺伝子の及び系統発生的等価（相補）物変種、例えばショウジョウバエ６０Ａ蛋白質、並びに近接した関連する蛋白質ＢＭＰ５、ＢＭＰ６及びＶｇｒ−１が挙げられる。従って、有用な形態発生蛋白質は好ましくは、ここで言う一般的アミノ酸配列「ＯＰＸ」（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２９）中の一対のポリペプチド鎖を含有する活性な蛋白質であり、その配列は７システイン骨格を限定し、ＯＰ−１及びＯＰ−２の幾つかの特定された変種間の相同性を提供するものである。従って、それぞれ独立してＯＰＸ中の目的の位置にある「Ｘａａ」は、マウス又はヒトＯＰ−１若しくは−ＯＰ−２のＣ−末端配列の対応する位置に存在する残基から選ばれる。特に、それぞれの「Ｘａａ」は独立して下記のように定義される１以上の特定のアミノ酸の群から選ばれる：
【００９１】
【表６】
2006516020.tif 000011
但し、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１１＝（Ａｒｇ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１６＝（Ｇｉｎ又はＬｅｕ）；Ｘａａ．  ａｔ  ｒｅｓ．１９＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２３＝（Ｇｌｕ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２６＝（Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３５＝（Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３９＝（Ａｓｎ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４１＝（Ｔｙｒ又はＣｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５０＝（Ｖａｌ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５２＝（Ｓｅｒ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５６＝（Ｐｈｅ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５７＝（Ｉｌｅ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５８＝（Ａｓｎ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６０＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６１＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６５＝（Ｐｒｏ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７１＝（Ｇｌｎ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７３＝（Ａｓｎ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７５＝（Ｉｌｅ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８０＝（Ｐｈｅ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８２＝（Ａｓｐ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８４＝（Ｓｅｒ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８９＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９１＝（Ｔｙｒ又はＨｉｓ）；及びＸａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９７＝（Ａｒｇ又はＬｙｓ）。
下記特許又は発行物又は特許出願公開はモルフォゲン又は有用な／活性なモルフォゲンの式を開示し、その全ての内容をここで資料として使用する：欧州特許番号６０１１０６、及び米国特許出願０８／９３７７５５（１９９７年９月２５日出願）。
【００９２】
本発明の方法、組成物及び器具で有用なモルフォゲンとして、天然由来から精製され、又は組み換え型ＤＮＡ又は他の合成技術により合成されたいずれかの上記ポリペプチド鎖を含有する蛋白質、及び対立遺伝子及びこれら蛋白質の変種、天然性又はその生合成突然変異、並びに各種一部切断（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）及び融合構成体が挙げられる。削除型又は添加型突然変異も又活性があると考えられ、保存されたＣ−末端システイン骨格が変化し、その変化が折り畳み構造中のこれらシステイン関係を機能的に破壊しないものも挙げられる。従って、このような活性体は特にここで記載される構成体と等価であると考えられる。
蛋白質は種々のグリコシル化パターン、種々のＮ−末端、アミノ酸配列ホモロジーの領域を有する関連する蛋白質のファミリー、及び、宿主細胞中の組み換え型ＤＮＡの発現により生成された、天然又は生合成蛋白質の活性な一部切断又は突然変異型の形でもよい。
【００９３】
形態発生蛋白質は、無傷又は一部切断ｃＤＮＡから、原核生物又は真核宿主細胞中での合成ＤＮＡから発現し、精製され、開裂され、再折り畳まれ、二量体化されて、形態生成的に活性な組成物を形成することができる。一般に好ましい宿主細胞として、Ｅ．ｃｏｌｉ又は、ＣＨＯ、ＣＯＳ又はＢＳＣ細胞等の適切な哺乳類性宿主細胞のいずれかが挙げられる。本発明の方法、組成物及び器具で有用なモルフォゲンの詳細な記載は、同時係属中のＵＳ特許出願番号０８／９３７７５５、１９９７年９月２５日出願、及び欧州特許番号６０１１０６中に開示されており、その全ての内容をここで資料として使用する。従って、この開示により、遺伝子学分野の当業者は、適切なアミノ酸配列、又はオリゴヌクレオチドからの構成体ＤＮＡをエンコードする各種異種のｃＤＮＡ又はゲノムライブラリーから遺伝子を単離して、それらを原核生物及び真核生物の両方を含む各種の宿主細胞中で発現して、大量の活性な蛋白質を生成でき、その蛋白質はヒトを含む各種の哺乳類において、免疫細胞介在性組織破壊からの組織及び器官の保護でありこのような損傷の実質的な阻止及び／又は損傷された組織の再生を含む保護に活性を示す。
【００９４】
更に好ましくは、有用な形態生成的に活性な蛋白質は、レファレンスモルフォゲン配列をエンコードするＤＮＡ又はＲＮＡとハイブリダイズする核酸によりエンコードされた配列を含有するアミノ酸配列を含むポリペプチド鎖を有し、例えばＯＰ−１、ＯＰ−２、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、６０Ａ、ＧＤＦ−３、ＧＤＦ−５、ＧＤＦ−６、ＧＤＦ−７等の保存された７システイン骨格を特定するＣ−末端配列が挙げられる。ここで使用される、高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件は公知技術に従うハイブリダイゼーションであり、４０％ホルムアミド、５ＸＳＳＰＥ、５Ｘデンハルト液中、３７℃で一晩０．１％ＳＤＳ中、及び０．１ＸＳＳＰＥ、０．１％ＳＤＳにより５０℃で洗浄として定義される。標準的ストリンジェンシー条件は、標準的分子生物学クローニングテキストで良く記載されている。例えば「分子クローニング−Ａ実験室マニュアル」２版、ｅｄ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｆｒｉｔｓｃｈ及びＭａｎｉａｔｉｓ著（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ：１９８９）；「ＤＮＡクローニング」、Ｉ及びＩＩ巻（Ｄ．Ｎ．Ｇｌｏｖｅｒ  ｅｄ．、１９８５）；「オリゴヌクレオチド合成」（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔｅｄ．、１９８４）；「核酸ハイブリダイゼーション」（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ＆Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ．１９８４）；及びＢ．Ｐｅｒｂａｌ、「分子クローニングへの実務案内」（１９８４）参照。
【００９５】
例えば形態発生蛋白質投与の選択選択肢として、哺乳類中の内因性モルフォゲン発現増加を刺激又は誘起できる有効量の薬剤は、ここで記載されるいずれかの経路によって投与されることができる。このようなモルフォゲン誘導物質は例えば哺乳類への全身性投与により、神経組織への直接投与により哺乳類へ供給される。目的の組織中の内因性モルフォゲン濃度を調整可能な誘導物質（刺激剤）の特定及び試験方法は、出願公開ＷＯ９３／０５１７２及びＷＯ９３／０５７５１に記載されており、それぞれここで資料として使用する。簡略には、候補化合物は試験組織又は細胞、又はそれら由来の培養されたセルラインと、化合物が生成物に影響を与える、即ちその組織の細胞により生成されたモルフォゲンの発現及び／又は分泌を引き起こすのに充分な時間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養して特定され試験される。適切な組織、又は適切な組織の培養された細胞は好ましくは腎臓の上皮、卵巣組織、線維芽細胞、及び骨芽細胞から選ばれる。
【００９６】
例えばモルフォゲンレセプターのアゴニストとして作用する薬剤がモルフォゲン自身の代わりに投与されてもよい。このような薬剤も又ここで言うモルフォゲン「ミミック、」「ミメティック」又は「アナログ」である。従って、例えばモルフォゲンのレセプターと結合及び作用するモルフォゲンの活性を模倣できる小ペプチド又は他の分子もモルフォゲンの等価物として使用される。好ましくはアゴニストは完全アゴニストであるが、部分モルフォゲンレセプターアゴニストも又有利に使用できる。このようなアゴニストの特定方法は当分野で公知であり、例えばモルフォゲン介在性反応（例えば後腎間葉の分化の誘起、軟骨内骨形成の誘起）を誘起する化合物のアッセイが挙げられる。例えばモルフォゲン誘導物質又はモルフォゲンレセプターのアゴニストの特定方法は、米国特許出願０８／４７８０９７、１９９５年６月７日出願；米国特許出願０９／７９１９４６、２００１年２月２２日出願；米国特許番号５８３４１８８；米国特許番号６２７３５９８；ＷＯ９７／２６２７７；欧州特許番号０８７６４０１；米国予備出願番号６０／０８００３２、１９９８年３月３０日出願；米国予備出願番号６０／２９６２９１、２００１年６月１０日出願；米国予備出願番号６０／３５４８２０、２００２年２月５日出願；及び米国予備出願２００２年４月１０日出願（筆頭発明者Ｐｅｔｅｒ  Ｋｅｃｋ、題名「モルフォゲンアナログ及びその製造方法」）に記載されており、それらの開示をここで資料として使用する。
【００９７】
本発明のモルフォゲンのＯＰ／ＢＭＰファミリーも又生物学的活性を有することは当業者に容易に理解される。特に本発明のモルフォゲンは、（ａ）Ｒｅｄｄｉ−Ｓａｍｐａｔｈ異所性骨アッセイ（Ｓａｍｐａｔｈ及びＲｅｄｄｉ（１９８１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８：７５９９−７６０３）又はその実質的に等価アッセイで軟骨形成誘起可能、（ｂ）標準的慢性腎不全の動物モデルでの腎臓機能の進行性喪失を顕著に予防、阻止、遅延又は緩和可能、又は（ｃ）慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類へ投与された場合、腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善発揮可能、である。
Ｒｅｄｄｉ−Ｓａｍｐａｔｈ異所性骨アッセイは、軟骨形成性活性アッセイとして当分野で公知である。容易に実施できる上記アッセイは及び慢性腎不全を検出するその機能について、例えばＳａｍｐａｔｈ及びＲｅｄｄｉ（１９８１）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８：７５９９−７６０３に記載されている。
【００９８】
最後に、本発明のモルフォゲン慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類（例えばヒト患者）へ投与した場合、腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を引き起こすそれらの治療的効能により評価できる。このような腎臓機能のマーカーは医学的分野では公知であり、本発明を限定するものではないが、例えばＢＵＮ濃度の増大速度、血清クレアチニンの増大速度、ＢＵＮの静的測定、血清クレアチニンの静的測定、糸球体ろ過値（ＧＦＲ）、ＢＵＮ／クレアチニン割合、ナトリウム（Ｎａ+）血清濃度、クレアチニンの尿／血漿割合、尿素の尿／血漿割合、尿容量オスモル濃度、毎日の尿排出量等（例えばＢｒｅｎｎｅｒ及びＬａｚａｒｕｓ（１９９４）、「内科のハリソンの法則」１３版、Ｉｓｓｅｌ  ｂａｃｈｅｒら、ｅｄｓ．、ＭｃＧｒａｗ  Ｈｉｌｌ  Ｔｅｘｔ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｌｕｋｅ及びＳｔｒｏｍ（１９９４）、「内科」４版、Ｊ．Ｈ．Ｓｔｅｉｎ、ｅｄ．、Ｍｏｓｂｙ−ＹｅａｒＢｏｏｋ、Ｉｎｃ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ参照）が挙げられる。
【００９９】
本発明のモルフォゲンは、無傷又は一部切断されたゲノム又はｃＤＮＡから、原核生物又は真核宿主細胞中での合成ＤＮＡから発現することができる。二量性蛋白質はｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養媒体から単離され及び／又は再折り畳まれ、二量体化され、生物学的に活性な組成物を形成する。ヘテロダイマーは分離した、明確なポリペプチド鎖の結合によりｉｎ  ｖｉｔｒｏで形成できる。一方、ヘテロダイマーは又、分離した、明確なポリペプチド鎖をエンコードする核酸の共発現により単一細胞中で形成できる。例えば幾つかの例示的組み換え型ヘテロ二量性蛋白質生成プロトコルとしてＷＯ９３／０９２２９、又は米国特許番号５４１１９４１参照。一般に好ましい宿主細胞として、本発明を限定しないが、Ｅ．ｃｏｌｉ等の原核生物、又は、酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ等）、昆虫細胞、又はＣＨＯ、ＣＯＳ又はＢＳＣ細胞等のいずれかの適切な哺乳類性宿主細胞を含む真核生物が挙げられる。当業者には他の宿主細胞も有利に使用できることは当然である。本発明の方法、組成物及び器具で有用なモルフォゲンの詳細な記載は、軟骨形成性活性物質の製造、使用、試験方法を含み、それらは数多くの発行物に開示されており、例えば米国特許番号５２６６６８３及び５０１１６９１に記載され、それらの明細書をここで資料として使用する。
【０１００】
一般的に、本発明の方法は、神経組織損傷又は神経障害の危険性又は罹患しているいずれの哺乳類動物の治療に適用できる。本発明は霊長類、好ましくはヒト等の高級霊長類の治療に有用である。しかし、本発明は更に家畜哺乳類の治療に使用でき、例えばヒトの仲間として飼育されるもの（例えば犬、猫、馬）、顕著な商品価値のあるもの（例えばヤギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、競技用又は荷役用動物）、顕著な科学的価値のあるもの（例えば行動制限された又はされていない実験対象動物、又は近親交配種又は工学的に作成された動物種）、又は他の価値のあるものが挙げられる。
【０１０１】
（ｉｉ）ＡＣＥの阻害薬（アンギオテンシン転換酵素）
アンギオテンシンＩ−転換酵素（ＥＣ３．４．１５．１）又はキニナーゼＩＩ、はジペプチジルカルボキシペプチダーゼであり、それはアンギオテンシンＩをアンギオテンシンＩＩ（効能のある昇圧剤）及びアルドステロン刺激性ペプチドへ加水分解することにより血圧調節及び電解質バランスにおいて重要な役割を果たす。この酵素も又、ブラジキニン、効能のある血管拡張剤を不活性化できる。ＡＣＥ遺伝子は２アイソザイムをエンコードする。体性ＡＣＥアイソザイムは、例えば血管性内皮細胞、腎臓の上皮細胞、及び睾丸性ライジッヒ細胞等の多くの組織中で発現し、睾丸性又は胚性ＡＣＥアイソザイムは精液中でのみ発現する（Ｒａｍａｒａｊら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２：３７１−３７８、１９９８）。
【０１０２】
本発明のアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害薬として、米国特許番号４４７３５７５及び４４１０５２０（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（Ｉ）で表される３−アミノ−［１］ベンズアゼピン−２−オン−１−アルカノイック酸（カルボン酸）及び誘導体が挙げられる：
【０１０３】
【化１】
2006516020.tif 000012
但し、ＲA及びＲBは下式の基であり：
【０１０４】
【化２】
2006516020.tif 000013
【０１０５】
但し、それぞれ：
Ｒ0はカルボキシル又は機能的改質カルボキシルであり；
Ｒ1は水素、低級アルキル、アミノ（低級）アルキル、アリール、アリール（低級）アルキル、環状アルキル、環状アルキル（低級）アルキル、アシルアミノ（低級）アルキル、モノ−又はジ−（低級）アルキルアミノ（低級）アルキル、低級アルキルチオ（低級）アルキル、カルボキシ（低級）アルキル、エステル化カルボキシ（低級）アルキル、カルバモイル（低級）アルキル、エーテル化又はアシル化ヒドロキシ（低級）アルキル、アリーロキシ（−低級）アルキル、アリール−（チオ−、スルフィニル−、又はスルホニル−）低級アルキル、アリール−Ｎ−（低級）アルキルアミノ（低級）アルキル、又はアリールアミノ（低級）アルキルであり；
【０１０６】
Ｒ2は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ3及びＲ4は、それぞれ独立して、水素、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルカノイルオキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、トリフルオロメチルを表すか、
Ｒ3及びＲ4は共に低級アルキレンジオキシを表し；
Ｒ5は水素又は低級アルキルであり；
Ｘはオキソ、２つの水素、又は１の水素と一緒の１のヒドロキシ又はアシル化ヒドロキシを表し；
但し、炭素環式環は又ヘキサヒドロ又は６，７，８，９−テトラヒドロでもよく；
並びにそれらの塩及び複合体。
【０１０７】
記号Ｒ0の意味中の機能的改質カルボキシル基は、例えば窒素原子を任意で置換されたエステル化カルボキシル基又はカルバモイル基でもよい。更に特に基ＲA中のＣＯＲ6で表され基ＲB中のＣＯＲ7で表される１又は両方のＲ0は、独立してカルボキシ、エステル化カルボキシ、カルバモイル又は置換されたカルバモイルを表す。
【０１０８】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３８５０５１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＩＩ）で表される二環式化合物及びそれらの誘導体が挙げられる：
【０１０９】
【化３】
2006516020.tif 000014
【０１１０】
但し、Ｒ1及びＲ2は同一の又は異なりそれぞれ、水素、ヒドロキシ又は低級アルコキシを表し；
Ｒ3は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ4は水素、低級アルキル、アミノ−低級−アルキル又はアシルアミノ−低級−アルキルであり；
Ｒ5は置換されてもよい水素、低級アルキル又はアラルキルであり；
Ｒ6はヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ又は低級アルキルアミノであり；
ｍ及びｎはそれぞれ１又は２を表す；及びその塩。
【０１１１】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３３７２０１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＩＩＩ）で表されるホスフィニルアルカノイル置換されたプロリン化合物が挙げられる：
【０１１２】
【化４】
2006516020.tif 000015
及びその塩、但し、Ｒ1はアルキル、アリール、アリールアルキル、環状アルキル、又は環状アルキル（アルキル）であり；
Ｒ2及びＲ4はそれぞれ独立して水素、アルキル、アリールアルキル又は
【０１１３】
【化５】
2006516020.tif 000016
であり；
但し、Ｘは水素、アルキル、又はフェニルであり、Ｙは水素、アルキル、フェニル又はアルコキシであり、又はＸ及びＹは一緒に−（ＣＨ2）2−、−（ＣＨ2）3−、−ＣＨ＝ＣＨ−、又は
【０１１４】
【化６】
2006516020.tif 000017
を表し；
Ｒ3は水素又はアルキルであり；
−Ｒ5−ＣＯＯＲ4は
【０１１５】
【化７】
2006516020.tif 000018
であり；
Ｒ6は水素、ヒドロキシ、アルキル、ハロゲン、アジド、アミノ、環状アルキル、アリール、アリールアルキル、カルバモイルオキシ；
【０１１６】
【化８】
2006516020.tif 000019
Ｎ、Ｎ−ジアルキルカルバモイルオキシ、又はＺ−Ｒ9であり；
Ｒ7及びＲ7は同一でありそれぞれハロゲン又はＺ−Ｒ10であるか、Ｒ7及びＲ7は共に＝Ｏ、−Ｏ−（ＣＨ2）m−Ｏ−又はＳ−（ＣＨ2）m−Ｓ−であり；
Ｒ8は水素及びＲ8'はフェニル、２−ヒドロキシフェニル又は４−ヒドロキシフェニルであり、Ｒ8及びＲ8'は共に＝Ｏであり；
Ｒ9はアルキル、アリール、アリールアルキル、１−又は２−ナフチル、又はビフェニルであり；
Ｒ10はアルキル、アリール又はアリールアルキルであり；
Ｚは酸素又はイオウであり；
ｎは０又は１であり；
ｍは１又は２であり；−Ｒ5−ＣＯＯＲ4が下式の場合
【０１１７】
【化９】
2006516020.tif 000020
１以上のＲ2及びＲ4は下式である。
【０１１８】
【化１０】
2006516020.tif 000021
【０１１９】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４０４６８８９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＩＶ）で表されるアゼチジン−２−カルボン酸誘導体化合物が挙げられる：
【０１２０】
【化１１】
2006516020.tif 000022
【０１２１】
但し、Ｒはヒドロキシ、ＮＨ2又は低級アルコキシであり；
Ｒ1及びＲ4はそれぞれ水素、低級アルキル又はフェニル−低級アルキルであり；
Ｒ2は水素又はＲ5−ＣＯであり；
Ｒ3は水素、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ5は低級アルキル、フェニル又はフェニル−低級アルキルであり；
ｍは１〜３であり；
ｎは０〜２であり、アスタリスクは不斉炭素原子を示す。Ｒ1が水素以外である場合、非環式側鎖中の炭素は非対称である。
【０１２２】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３７４８２９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（Ｖ）で表されるカルボキシアルキルジペプチド化合物及びその誘導体が挙げられる：
【０１２３】
【化１２】
2006516020.tif 000023
【０１２４】
但し、Ｒ及びＲ6は同一又は異なり、ヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルケノキシ、ジ低級アルキルアミノ低級アルコキシ（ジメチルアミノエトキシ）、アシルアミノ低級アルコキシ（アセチルアミノエトキシ）、アシロキシ低級アルコキシ（ピバロイルオキシメトキシ）、フェノキシ等のアリーロキシ、ベンジロキシ等のアリール（低級）アルコキシ；置換されたアリーロキシ又は置換されたアリール（低級）アルコキシ（但し、置換基はメチル、ハロ又はメトキシ、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ（低級）アルキルアミノ、ヒドロキシアミノ、又はベンジルアミノ等のアリール（低級）アルキルアミノ）であり；
Ｒ1は水素、下記を含む１〜２０炭素原子のアルキルであり、分岐した及び環式及び不飽和（アリル等）アルキル基、置換された低級アルキル（但し、置換基はハロ、ヒドロキシ、低級アルコキシ、フェノキシ等のアリーロキシ、アミノ、ジ低級アルキルアミノ、アシルアミノ、アセトアミド及びベンズアミドアリールアミノ等、グアニジノ、イミダゾリル、インドリル、メルカプト、低級アルキルチオ、フェニルチオ等のアリールチオ、カルボキシ又はカルボキシアミド、カルボ低級アルコキシ、フェニル又はナフチル等のアリール）、置換された（フェニル等の）アリール（但し、置換基は低級アルキル、低級アルコキシ又はハロ）、アリール低級アルキル、アリール低級アルケニル、ベンジル、スチリル又はインドリルエチル等のヘテロアリール低級アルキル又はヘテロアリール低級アルケニル、置換されたアリール低級アルキル、置換されたアリール低級アルケニル、置換されたヘテロアリール低級アルキル、又は置換されたヘテロアリール低級アルケニル（但し、置換基はハロ、ジハロ、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、アミノメチル、アシルアミノ（アセチルアミノ又はベンゾイルアミノ）ジ低級アルキルアミノ、低級アルキルアミノ、カルボキシル、ハロ低級アルキル、シアノ又はスルホンアミド、アルキル部分をアミノ又はアシルアミノ（アセチルアミノ又はベンゾイルアミノ）により置換されたアリール低級アルキル又はヘテロアリール低級アルキル；
【０１２５】
Ｒ2及びＲ7は同一又は異なり、水素又は低級アルキルであり；
Ｒ3は水素、低級アルキル、フェニル低級アルキル、アミノメチルフェニル低級アルキル、ヒドロキシフェニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アシルアミノ低級アルキル（ベンゾイルアミノ低級アルキル、アセチルアミノ低級アルキル等）アミノ低級アルキル、ジメチルアミノ低級アルキル、ハロ低級アルキル、グアニジノ低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、インドリル低級アルキル、メルカプト低級アルキル、低級アルキルチオ低級アルキルであり；
Ｒ4は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ5は水素、低級アルキル、フェニル、フェニル低級アルキル、ヒドロキシフェニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アミノ低級アルキル、グアニジノ低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、インドリル低級アルキル、イミダゾリル低級アルキル、インドリル低級アルキル、メルカプト低級アルキル又は低級アルキルチオ低級アルキルであり；
Ｒ4及びＲ5は共に結合して２〜４炭素原子のアルキレン架橋、２〜３炭素原子及び１のイオウ原子のアルキレン架橋、二重結合を含有する３〜４炭素原子のアルキレン架橋又はヒドロキシ、低級アルコキシ、低級アルキル又はジ低級アルキルで上記置換されたアルキレン架橋を形成してもよい。
【０１２６】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４５０８７２９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＶＩ）で表されるイミノジカルボン酸化合物が挙げられる：
【０１２７】
【化１３】
2006516020.tif 000024
【０１２８】
但し、環Ａは飽和してｎ＝０又は１であるか、環Ａはベンゼン環でｎ＝１であり、
Ｒ1はアミノ基を有しても良い１〜４炭素原子を有する低級アルキル基を表し、
Ｒ2は水素原子又は１〜４炭素原子を有するアルキル基を表し、
【０１２９】
Ｒ3は、直鎖又は分岐アルキル基、合計９以下の炭素原子を有する、モノ−又はジ環状アルキルアルキル又はフェニルアルキル基、又は下式の置換されたアルキル基であり：
【０１３０】
【化１４】
2006516020.tif 000025
但し、Ｒ4はＨ、低級アルキル（Ｃ1〜Ｃ4）又は環状アルキル（Ｃ3〜Ｃ6）基であり、
Ｒ5はＨ、低級アルキル（Ｃ1〜Ｃ4）、環状アルキル（Ｃ3〜Ｃ6）又はアルコキシカルボニル基であり、
Ｙ＝Ｓ又は＞Ｎ−Ｑ但しＱ＝Ｈ、又はアセチル又はベンジロキシカルボニル基、及びｐ＝１又は２、及びｑ＝０又は１である。
【０１３１】
本発明のＡＣＥ阻害薬化合物として又、米国特許番号４３４４９４９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＶＩＩ）で表される１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸化合物の置換されたアシル誘導体が挙げられる：
【０１３２】
【化１５】
2006516020.tif 000026
【０１３３】
但し、Ｒは水素、低級アルキル又はアラルキルであり；
Ｒ1は水素、低級アルキル、又はベンジルであり；
Ｒ2は水素又は低級アルキルであり；
Ａｒはフッ素、塩素、臭素、低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ又はアミノの群から選ばれる１又は２の置換基で置換されたフェニル又はフェニルであり；
Ｘ及びＹは独立して水素、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルスルフィニル（ｓｕｆｉｎｙｌ）、低級アルキルスルホニル、ヒドロキシであるか、Ｘ及びＹは共にメチレンジオキシであり；
ｍは０〜３であり；
並びに医薬的に許容されるその塩。
【０１３４】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１６８２６７（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＶＩＩＩ）で表されるホスフィニルアルカノイルプロリン化合物が挙げられる：
【０１３５】
【化１６】
2006516020.tif 000027
但し、Ｒ1は低級アルキル、フェニル又はフェニル−低級アルキルであり；
Ｒ2は水素、フェニル−低級アルキル又は金属イオンであり；
Ｒ3は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ4は水素、低級アルキル、フェニル−低級アルキル又は金属イオンであり；
ｎは０又は１である。
【０１３６】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３１６９０６（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＩＸ）で表されるエーテル及びチオエーテルメルカプトアシルプロリン化合物が挙げられる：
【０１３７】
【化１７】
2006516020.tif 000028
但し、基Ｘ−Ｒ1は環中の３−又は４−位に位置し；
Ｘは酸素又はイオウであり；
Ｒは水素又は低級アルキルであり；
Ｒ1は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、環状アルキル、１−又は２−アダマンチル、アリール、置換されたアリール、フェニル−低級アルキレン又は置換されたフェニル−低級アルキレンであり；
Ｒ2及びＲ3は独立して水素、低級アルキル、及びトリフルオロメチルから選ばれ；
【０１３８】
Ｒ4は水素、Ｒ5−ＣＯ−、又は下式であり、
【０１３９】
【化１８】
2006516020.tif 000029
Ｒ5は低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アルキレン；置換されたフェニル、又は置換されたフェニル−低級アルキレンであり；
ｎは０、１又は２である；及びその塩。
【０１４０】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１０５７７６（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（Ｘ）で表されるプロリン誘導体及び関連する化合物が挙げられる：
【０１４１】
【化１９】
2006516020.tif 000030
但し、Ｒはヒドロキシ、ＮＨ2又は低級アルコキシであり；
Ｒ1及びＲ4はそれぞれ水素、低級アルキル、フェニル又はフェニル−低級アルキルであり；
Ｒ2は水素、低級アルキル、フェニル、置換されたフェニル（但し、フェニル置換基はハロ、低級アルキル又は低級アルコキシ）、フェニル−低級アルキル、ジフェニル低級アルキル、トリフェニル−低級アルキル、低級アルキルチオメチル、フェニル−低級アルキルチオメチル、低級アルカノイル−アミドメチル、下式であり
【０１４２】
【化２０】
2006516020.tif 000031
【０１４３】
Ｒ3は水素、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
Ｒ5は低級アルキル、フェニル又はフェニル−低級アルキルであり；
Ｒ6は低級アルキル、フェニル、置換されたフェニル、（但し、フェニル置換基はハロ、低級アルキル又は低級アルコキシ）、ヒドロキシ−低級アルキル又はアミノ（カルボキシ）低級アルキル、下式であり；
【０１４４】
【化２１】
2006516020.tif 000032
ＭはＯ又はＳであり；
ｍは１〜３であり；及び
ｎ及びｐはそれぞれ０〜２であり；
アスタリスクは不斉炭素原子を示し、置換基Ｒ1、Ｒ3及びＲ4を有するそれぞれの炭素は、置換基が水素以外である場合非対称である。
【０１４５】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４５１２９２４（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＩ）で表される二環式ピリダゾ［１，２−Ａ］［１，２］ジスアゼピン化合物が挙げられる：
【０１４６】
【化２２】
2006516020.tif 000033
但し、Ｂはメチレン（−ＣＨ2−）、エチレン（−ＣＨ2−ＣＨ2−）又はビニレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）基を表し；
【０１４７】
Ｒ1は水素原子又はアルキル、アラルキル、アミノ−アルキル、モノアルキルアミノ−アルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノ−アルキル、フタルイミド−アルキル、アルコキシカルボニルアミノ−アルキル、アリーロキシカルボニルアミノ−アルキル、アラルコキシカルボニルアミノ−アルキル、アルキルアミノカルボニルアミノアルキル、アリールアミノカルボニルアミノ−アルキル、アラルキルアミノカルボニルアミノ−アルキル、アルキルスルホニルアミノ−アルキル又はアリールスルホニルアミノ−アルキル基を表し；
【０１４８】
Ｒ2はカルボキシル、アルコキシカルボニル又はアラルコキシカルボニル基又は下式の基を表し：
【０１４９】
【化２３】
2006516020.tif 000034
Ｒ3はカルボキシル、アルコキシカルボニル又はアラルコキシカルボニル基を表し；
Ｒ4及びＲ5はそれぞれ水素原子を表し、Ｒ4及びＲ5は共にオキソ基を表し；
Ｒ6及びＲ7はそれぞれ水素原子又はアルキル又はアラルキル基を表し、Ｒ6及びＲ7は共に結合している窒素原子と共に、更に窒素原子又は酸素又はイオウ原子を含有してもよい飽和５員又は６員複素単環を形成してもよく、ｎは０，１又は２である、医薬的に許容されるその塩。
【０１５０】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４２３４４８９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＩＩ）で表されるピログルタミン酸誘導体が挙げられる：
【０１５１】
【化２４】
2006516020.tif 000035
及びその塩、但し、
Ｒは水素、アルキル又はジフェニルメチルであり；
Ｒ1は水素、アルキル又はトリフルオロメチルであり；
Ｒ2は水素であり、
【０１５２】
【化２５】
2006516020.tif 000036
Ｒ3は水素、アルキル、フェニル、又はフェニルアルキルであり；
Ｘは酸素又はイオウであり；
ｎは０又は１である。
【０１５３】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４４３２９７１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＩＩＩ）で表されるホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩が挙げられる：
【０１５４】
【化２６】
2006516020.tif 000037
【０１５５】
但し、Ｘは下式のイミノ又はアミノ酸であり：
【０１５６】
【化２７】
2006516020.tif 000038
【０１５７】
Ｒ7は水素、低級アルキル、ハロゲン、ケト、ヒドロキシ、下式のもの
【０１５８】
【化２８】
2006516020.tif 000039
【０１５９】
下式の１−又は２−ナフチル：
【０１６０】
【化２９】
2006516020.tif 000040
【０１６１】
下式の１−又は２−ナフチロキシ：
【０１６２】
【化３０】
2006516020.tif 000041
【０１６３】
又は下式の１−若しくは２−ナフチルチオ：
【０１６４】
【化３１】
2006516020.tif 000042
【０１６５】
−Ｏ低級アルキル、下式の１−又は２−ナフチロキシ：
【０１６６】
【化３２】
2006516020.tif 000043
【０１６７】
又は下式の１−若しくは２−ナフチルチオであり：
【０１６８】
【化３３】
2006516020.tif 000044
【０１６９】
Ｒ10はハロゲン又は−ＹＲ16であり；
Ｒ11、Ｒ11、Ｒ12及びＲ12は独立して水素及び低級アルキルから選ばれ、又はＲ11、Ｒ12及びＲ12は水素であるか、Ｒ11は下式であり；
【０１７０】
【化３４】
2006516020.tif 000045
【０１７１】
Ｒ13は水素、１〜４炭素の低級アルキル、１〜４炭素の低級アルキルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルチオ、又はフェニルメチルであり；
Ｒ14は水素、１〜４炭素の低級アルキル、１〜４炭素の低級アルコキシ、１〜４炭素の低級アルキルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、又はヒドロキシであり；
ｍは０，１，２又は３であり；
ｐは、１，２又は３であり、Ｒ13又はＲ14が水素、メチル、メトキシ、クロロ、又はフルオロの場合にはｐは１以上であり；
Ｒ15は水素又は１〜４炭素の低級アルキルであり；
Ｙは酸素又はイオウであり；
【０１７２】
Ｒ16は１〜４炭素の低級アルキルであり；
【０１７３】
【化３５】
2006516020.tif 000046
又はＲ16基は結合して非置換の５−又は６員環又は１以上の炭素は１〜４炭素の低級アルキル又はジ（１〜４炭素の低級アルキル）置換基を有する上記環を完成しても良く；
【０１７４】
Ｒ4は水素、低級アルキル、−（ＣＨ2）m環状アルキルであり；
【０１７５】
【化３６】
2006516020.tif 000047
【０１７６】
Ｒ5は水素、低級アルキル、下式のものであり；
【０１７７】
【化３７】
2006516020.tif 000048
【０１７８】
ｒは１〜４の整数であり；
Ｒ1は水素、低級アルキル、又は環状アルキルであり；
Ｒ2は水素、低級アルキル、ハロ置換された低級アルキル、下式のものであるか、
【０１７９】
【化３８】
2006516020.tif 000049
Ｒ1及びＲ2は共に−（ＣＨ2）n（但し、ｎは２〜４の整数）であり．
【０１８０】
Ｒ3及びＲ6は独立して、水素、低級アルキル、ベンジル、ベンズヒドリル、又は下式から選ばれ；
【０１８１】
【化３９】
2006516020.tif 000050
【０１８２】
但し、Ｒ17は水素、低級アルキル、環状アルキル、又はフェニルであり；
Ｒ18は水素、低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルであるか、Ｒ17及びＲ18は共に下式であり；
【０１８３】
【化４０】
2006516020.tif 000051
Ｒ19は低級アルキル、ベンジル、又はフェネチルであり；
Ｒ20は水素、低級アルキル、ベンジル又はフェネチルであり；
Ｒ21は１〜１０炭素原子のアルキルであり；
【０１８４】
【化４１】
2006516020.tif 000052
但し、ｑは０又は１〜７の整数であり、ｓは１〜８の整数であり、Ｒ13及びｐは上記定義と同様である。
【０１８５】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４４５２７９０（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＩＶ）で表されるホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩が挙げられる：
【０１８６】
【化４２】
2006516020.tif 000053
【０１８７】
Ｘは下式のイミノ又はアミノ酸であり：
【０１８８】
【化４３】
2006516020.tif 000054
Ｒ4は水素、低級アルキル、ハロゲン、ケト、ヒドロキシ、下式：
【０１８９】
【化４４】
2006516020.tif 000055
【０１９０】
下式の１−又は２−ナフチル：
【０１９１】
【化４５】
2006516020.tif 000056
【０１９２】
下式の１−又は２−ナフチロキシ：
【０１９３】
【化４６】
2006516020.tif 000057
【０１９４】
又は下式の１−若しくは２−ナフチルチオであり：
【０１９５】
【化４７】
2006516020.tif 000058
【０１９６】
Ｒ5はケト、ハロゲン、下式：
【０１９７】
【化４８】
2006516020.tif 000059
【０１９８】
−Ｏ低級アルキル、下式の１−又は２−ナフチロキシ：
【０１９９】
【化４９】
2006516020.tif 000060
【０２００】
−Ｓ低級アルキル：
【０２０１】
【化５０】
2006516020.tif 000061
【０２０２】
又は下式の１−若しくは２−ナフチルチオであり：
【０２０３】
【化５１】
2006516020.tif 000062
【０２０４】
Ｒ7はケト又は下式のものであり；
【０２０５】
【化５２】
2006516020.tif 000063
【０２０６】
それぞれのＲ8は独立してハロゲン又は−ＹＲ14であり；
Ｒ9、Ｒ9、Ｒ10は独立して水素及び低級アルキルから選ばれるか、Ｒ9、Ｒ10及びＲ10は水素でありＲ9は下式であり；
【０２０７】
【化５３】
2006516020.tif 000064
【０２０８】
Ｒ11は水素、１〜４炭素の低級アルキル、１〜４炭素の低級アルコキシ、１〜４炭素の低級アルキルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルチオ、又はフェニルメチルであり；
Ｒ12は水素、１〜４炭素の低級アルキル、１〜４炭素の低級アルコキシ、１〜４炭素の低級アルキルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、又はヒドロキシであり；
ｍは０，１，２又は３であり；
ｐは、１，２又は３であり、Ｒ11又はＲ12が水素、メチル、メトキシ、クロロ、フルオロの場合にはｐは１以上であり；
Ｒ13は水素又は１〜４炭素の低級アルキルであり；
Ｙは酸素又はイオウであり；
【０２０９】
Ｒ14は１〜４炭素の低級アルキルであるか；
【０２１０】
【化５４】
2006516020.tif 000065
Ｒ14基は結合して非置換の５−又は６員環又は１以上の炭素は１〜４炭素の低級アルキル又はジ（１〜４炭素の低級アルキル）置換基を有する上記環を完成しても良く；
【０２１１】
Ｒ21は水素、低級アルキル、環状アルキル、フェニル、又は下式であり；
【０２１２】
【化５５】
2006516020.tif 000066
【０２１３】
Ｒ22は水素、低級アルキル、下式であり；
【０２１４】
【化５６】
2006516020.tif 000067
ｒは１〜４の整数であり；
【０２１５】
Ｒ1は１〜１０炭素原子のアルキル、アミノアルキル、ハロアルキル、下式であり；
【０２１６】
【化５７】
2006516020.tif 000068
但し、ｑは０又は１〜７の整数及びＲ12及びｐは上記で定義され；
【０２１７】
Ｒ19及びＲ20は独立して水素、低級アルキル、ハロ置換された低級アルキル、下式から選ばれ；
【０２１８】
【化５８】
2006516020.tif 000069
但し、ｍ、Ｒ11、及びｐは上記定義と同様である；
【０２１９】
Ｒ2は水素、低級アルキル、ハロ置換された低級アルキル、下式のものであり；
【０２２０】
【化５９】
2006516020.tif 000070
但し、ｒは上記定義と同様である；
【０２２１】
Ｒ3及びＲ6は独立して水素、低級アルキル、ベンジル、Ｌｉ、Ｎａ又はＫ等のアルカリ金属、ベンズヒドリル、又は下式から選ばれ；
【０２２２】
【化６０】
2006516020.tif 000071
【０２２３】
但し、Ｒ15は水素、低級アルキル、環状アルキル、又はフェニルであり、Ｒ16は水素、低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルであるか、Ｒ15及びＲ16は共に−（ＣＨ2）2−、−（ＣＨ2）3−、−ＣＨ＝ＣＨ−、又は下式であり；
【０２２４】
【化６１】
2006516020.tif 000072
Ｒ17は低級アルキル、ベンジル、又はフェネチルであり；
Ｒ18は水素、低級アルキル、ベンジル又はフェネチルである。
【０２２５】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、欧州特許番号００６０６６８（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＶ）で表される化合物が挙げられる：
【０２２６】
【化６２】
2006516020.tif 000073
又はその医薬的に許容される塩、但し、
ｍは０〜３であり；
ｎは１〜５であり；
Ｒ1は水素又はＣ1~6アルキルであり；
Ｒ2は水素、Ｃ1~4アルキル、−（ＣＨ2）pＮＨ2であり
（但し、ｐは１〜４、又は−ＮＨＣＯＲ5であり、Ｒ5はＣ1~4アルキル）；
Ｒ3は水素又はＣ1~6アルキルであり；
Ｒ4はＣ1~4アルキル、Ｃ1~4アルコキシ、ハロゲン又はＣＦ3であり；
ＸはＣＨ2又はＳである。
ジヒドロベンゾフラニル成分は、２−位又は３−位、好ましくは、２−位で残りの構造と結合してもよく；
好ましくはＸはＣＨ2である。
【０２２７】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、欧州特許番号００８０８２２（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＶＩ）で表される化合物が挙げられる：
【０２２８】
【化６３】
2006516020.tif 000074
又はその医薬的に許容される塩、
【０２２９】
但し、Ｒ1は任意でＮＨＲ6、（但し、Ｒ6は水素又はＣ1~5）アルキルカルボニル）置換され又は任意でハロゲンで置換されたフェニル又はナフチル置換されたＣ1~5アルキル、任意でベンゾ成分をＣ1~5アルキル、Ｃ1~5アルコキシ、ハロゲン又はトリフルオロメチルにより置換されたジヒドロベンゾフラン−２−イルで置換されたＣ1~5アルキル又はＣ1~5アルコキシ；
Ｒ2及びＲ5は同一又は異なり、それぞれヒドロキシ、Ｃ1~5アルコキシ、Ｃ2~6アルキルカルボニル又は、任意でＣ1~5アルキルで置換された、アミノであり；
Ｒ3は任意で基−ＮＨＲ7置換されたＣ1~5アルキルであり（但し、Ｒ7は水素、Ｃ1~5アルキル又はＣ2~6アルキルカルボニル）であり；
Ｒ4は任意でハロゲンで置換されたフェニル、Ｃ1~5アルコキシ、トリフルオロメチル又はＣ1~5アルキルである。
【０２３０】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、欧州特許番号０００９１８３（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＶＩＩ）で表されるリン酸系アミノ酸誘導体が挙げられる：
【０２３１】
【化６４】
2006516020.tif 000075
但し、ｎは０又は１であり；
【０２３２】
Ｒは水素、低級アルキル、フェニル低級アルキル、ヒドロキシフェニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アミノ低級アルキル、グアニジノ低級アルキル、イミダゾイル低級アルキル、インドリル低級アルキル、メルカプト低級アルキル、低級アルキルメルカプト低級アルキルであり；
Ｒ3は水素であり；
Ｒ4は水素、低級アルキル、フェニル低級アルキル、ヒドロキシフェニル低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、アミノ低級アルキル、グアニジノ低級アルキル、グアニジノ低級アルキル、イミダゾイル低級アルキル、インドリル低級アルキル、メルカプト低級アルキル、低級アルキルメルカプト低級アルキルであり；
Ｒ3及びＲ4は共に結合して２〜４炭素原子のアルキレン架橋、２〜３炭素原子及び１のイオウ原子のアルキレン架橋を形成してもよく；
Ｘは０、ＮＲ5、Ｓであり（但し、Ｒ5はＨ又は低級アルキル）；
Ｒ1は水素、低級アルキル、アラルキル又はアリールであり；
Ｒ2は水素、低級アルキル、アラルキル又はアリールである；及び医薬的に許容されるその塩。
【０２３３】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４２１７３５９（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＶＩＩＩ）で表されるメルカプトアシルヒドロキシプロリンカルバメート誘導体が挙げられる：
【０２３４】
【化６５】
2006516020.tif 000076
但し、Ｒ、Ｒ2及びＲ3それぞれは水素又は低級アルキルであり；
【０２３５】
Ｒ0及びＲ1それぞれは水素、低級アルキル、環状低級アルキル、アリル、プロパルギル、フェニル又は置換されたフェニルであり；又はＲ0及びＲ1は窒素と結合して５−又は６員複素環式を完成しても良く；
Ｒ4は水素又は式Ｒ5−ＣＯ−の加水分解可能な有機性保護基又は下記であり；
【０２３６】
【化６６】
2006516020.tif 000077
【０２３７】
Ｒ5は低級アルキル、フェニル、置換されたフェニル、フェニル−低級アルキル、置換されたフェニル−低級アルキル、環状アルキル、チエニル、又はフリルであり；
ｎは０、１又は２である；及びその塩。
アスタリスクは不斉中心を示す。Ｒ2及び／又はＲ3が水素以外である場合、非環式側鎖中の炭素は非対称である。それぞれの不斉中心は下記記載の従来法により分離されることができるＤ及びＬ形を提供する。
【０２３８】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１２９５７１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＩＸ）で表されるアミノ酸の置換されたアシル誘導体が挙げられる：
【０２３９】
【化６７】
2006516020.tif 000078
及びその塩、但し：
【０２４０】
Ｒはヒドロキシ又は低級アルコキシであり；
Ｒ1は水素、低級アルカノイル又はアミノ（イミノ）−メチルであり；
Ｒ2は水素、低級アルキル又はフェニル−低級アルキレンであり；
Ｒ3は水素、低級アルカノイル、ベンゾイル又は下記式であり
【０２４１】
【化６８】
2006516020.tif 000079
Ａは水素、低級アルキル又はヒドロキシ−低級アルキレンであり；
Ｂは水素、低級アルキル、フェニル、フェニル−低級アルキレン、ヒドロキシ−低級アルキレン、ヒドロキシフェニル−低級アルキレン、アミノ−低級アルキレン、グアニジノ−低級アルキレン、メルカプト−低級アルキレン、低級アルキルチオ−低級アルキレン、イミダゾリル−低級アルキレン、インドリル−低級アルキレン、カルバモイル−低級アルキレン又はカルボキシ−低級アルキレンであり；
【０２４２】
又はＡ及びＢは
共に窒素及び炭素と結合して（ＣＨ2）p架橋を形成し、５−又は６員環を完成しても良く（１の炭素は任意でヒドロキシ基を有しても良い）；
ｎは０又は１であり；
ｍは０、１、２、３又は４であり；
１以上のｍ及びｎは０以外であり；
ｐは３又は４である。
アスタリスクは不斉中心を示す。
【０２４３】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１５４９３５（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸ）で表されるハロゲン化化合物が挙げられる：
【０２４４】
【化６９】
2006516020.tif 000080
【０２４５】
但し、Ｒは水素、低級アルカノイル又は下記であり
【０２４６】
【化７０】
2006516020.tif 000081
Ｒ1は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ2及びＲ2'はそれぞれ独立して水素又はハロゲンを表し；
Ｒ3及びＲ4はそれぞれ独立して水素、低級アルキル又はトリフルオロメチルを表し、１以上はトリフルオロメチルでなく、１以上のＲ2、Ｒ2'、Ｒ3又はＲ4は上記定義と同様の記号で表されるハロゲン又はトリフルオロメチル置換基であり；
ｍは２であり；
ｎは０又は１である。
アスタリスクは不斉炭素原子を示す。
【０２４７】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、カルボキシアルキルアシルアミノ酸及び関連する化合物が挙げられ、独立して米国特許番号４０５２５１１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、それらはプロリン、ピペコリン酸、アゼチジン−２−カルボン酸の誘導体であり下記式（ＸＸＩ）で表される：
【０２４８】
【化７１】
2006516020.tif 000082
【０２４９】
但し、Ｒはヒドロキシ、アミノ又は低級アルコキシであり；
Ｒ1及びＲ4それぞれは水素、低級アルキル又はフェニル−低級アルキルであり；
Ｒ2はヒドロキシ、アミノ、ヒドロキシアミノ又は低級アルコキシであり；
Ｒ3は水素、ヒドロキシ又は低級アルキルであり；
ｍは１〜３であり；
ｎは０〜２である。
アスタリスクは不斉炭素原子を示す。Ｒ1又はＲ4が水素以外である場合、非環式側鎖中の炭素は非対称である。
【０２５０】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１２９５６６（その全ての内容をここで資料として使用する。）に独立して開示され、下記式（ＸＸＩＩ）で表される脱水素環式イミノ酸化合物が挙げられる：
【０２５１】
【化７２】
2006516020.tif 000083
【０２５２】
但し：Ｒ及びＲ2それぞれは水素又は低級アルキルであり；
Ｒ1は水素、低級アルカノイル又は下記であり；
【０２５３】
【化７３】
2006516020.tif 000084
ｍ及びｎそれぞれは０又は１である。
アスタリスクは不斉炭素原子を示す。Ｒ1が水素以外である場合、非環式側鎖中の炭素は非対称である。
【０２５４】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４０５３６５１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸＩＩＩ）で表される化合物が挙げられる：
【０２５５】
【化７４】
2006516020.tif 000085
又はその塩；
【０２５６】
但し、Ｒ1は水素、低級アルキル、フェニル−低級アルキレン、ヒドロキシ−低級アルキレン、アミノ−低級アルキレン、グアニジノ−低級アルキレン、イミダゾリル−低級アルキレン、インドリル−低級アルキレン、メルカプト−低級アルキレン、低級アルキルメルカプト−低級アルキレン、カルバモイル−低級アルキレン又はカルボキシ−低級アルキレンであり；
Ｒ2、Ｒ3及びＲ4それぞれは水素、低級アルキル又はフェニル−低級アルキレンであり；
Ｒ5は水素、低級アルカノイル、ベンゾイル又は下記であり
【０２５７】
【化７５】
2006516020.tif 000086
ｎは０、１又は２である。
アスタリスクは不斉中心を示す。
【０２５８】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、独立して米国特許番号４３１１６９７（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸＩＶ）で表されるメルカプトアシルプロリン及びピペコリン酸の誘導体が挙げられる：
【０２５９】
【化７６】
2006516020.tif 000087
Ｒ及びＲ6は独立して水素及び低級アルキルから選ばれ（但し、Ｒ3も又低級アルキルの場合にはＲ6は低級アルキルである）；
【０２６０】
Ｒ3及びＲ4は独立して水素、低級アルキル、低級アルキルチオ、−（ＣＨ2）nＳＨ、及びハロ置換された低級アルキルから選ばれ；
Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は独立して低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル（ａｌｋｙｎｌ）、環状アルキル、ハロ置換された低級アルキル、ヒドロキシ置換された低級アルキルから選ばれ；
【０２６１】
【化７７】
2006516020.tif 000088
Ｒ1及びＲ2はポリメチレン鎖中で結合し完全な非置換又は置換の５−又は６員環を形成してもよい。
【０２６２】
Ｒ1及びＲ2が２又は３炭素原子のポリメチレン鎖中で結合する場合、これら環式ケタール及びチオケタールは下記で表される：
【０２６３】
【化７８】
2006516020.tif 000089
【０２６４】
但し、ｔは２又は３でありＲ9及びＲ10は両方共水素、両方共低級アルキル、又は一方が水素で他方が低級アルキル、ハロ置換された低級アルキル、ヒドロキシ置換された低級アルキルである。
【０２６５】
【化７９】
2006516020.tif 000090
好ましくは、ポリメチレン鎖の１つのみの炭素が置換される。
Ｒ7は水素、１〜４炭素の低級アルキル、特にメチル、１〜４炭素の低級アルコキシ、特にメチル、１〜４炭素の低級アルコキシ、特にメトキシ、低級アルキルチオ１〜４炭素、特にメチルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、又はヒドロキシであり；
【０２６６】
Ｒ5は水素、加水分解可能な脱離可能な保護基、化学的に脱離可能な保護基であり、Ｒ3及びＲ4が−（ＣＨ2）mＳＨ以外の場合、下式のスルフィド；
【０２６７】
【化８０】
2006516020.tif 000091
ｍは０、１又は２であり；
ｎは、１，２又は３であり；
ｐ及びｑはそれぞれ１又は２であるが両方は同時に２ではない。
上記式中のアスタリスクは非対称な環の中心を示す。プロリン（ｐｒａｌｉｎｅ）の場合、即ちｐ及びｑが両方共１である場合、この中心はＬ−配置であり、ピペコリン酸の場合、即ちｐ及びｑの一つが２である場合、この中心はＤ、Ｌ又はＬ−配置である。
【０２６８】
非対称中心も又、Ｒ3、Ｒ4及びＲ6の定義に応じてメルカプトアシル側鎖中に存在できる。別の非対称中心も又、Ｘ1−Ｒ1及びＸ2−Ｒ2が異なる場合環中に存在できる。従って生成物は立体異性体又はそれらの混合物であるラセミ体として存在できる。
【０２６９】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３１０４６１（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸＶ）で表されるメルカプトアシルプロリン及びピペコリン酸のイミド、アミド及びアミノ誘導体化合物が挙げられる：
【０２７０】
【化８１】
2006516020.tif 000092
及びその塩、並びにその対称二量体。
【０２７１】
但しＲ1及びＲ2は同一又は異なり、水素、アルキル、環状アルキル、１−アダマンチル、アリール、アリールアルキル、アルキルカルボニル、アリールカルボニル、アリールアルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アリルスルホニル、又はアリールビニルカルボニル（アリール−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ−）であり、
Ｒ1及びＲ2は共に結合している窒素原子と共に下記を形成してもよく；
１−ピロリジニル、１−ピペリジニル、１−ホモピペリジニル、４−モルホリニル、４−アルキル−１−ピペラジニル、４−アリール−１−ピペラジニル、１−イミダゾリル、１−ピロリジニル−２、５−ジオン（サクシンイミド）、３−アルキル−１−ピロリジニル−２、５−ジオン、３−アリール−１−ピロリジニル−２、５−ジオン、１−ピペリジニル−２、６−ジオン、２Ｈ−イソインドール−２−イル−１，３−ジオン（フタルイミド）、ヘキサヒドロ−２Ｈ−イソインドール−２−イル−１，３−ジオン（ヘキサヒドロフタルイミド）、２、５−ジヒドロ−２、５−ジオキソ−１Ｈ−ピロル−１−イル（マレイミド）、１，１，３−トリオキソ−１，２−ベンジゾ−チアゾル−２（３Ｈ）−イル（２−サッカリニル）、又は１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−ベンズ［デ］イソキノリン−２−イル（１，８−ナフタレンジカルボキシイミド）；
Ｒ3は水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、又はアルカノイル又はアリールカルボニル等の加水分解可能なアシル保護基であり；
Ｒ4は水素、アルキル、アルキルチオ又はトリフルオロメチルであり；
Ｒ5は水素、アルキル、又はアリールアルキルであり；
ｎは０、１又は２であり；ｐは１又は２である。
【０２７２】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４１５１１７２（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸＶＩ）で表されるホスホノアシルプロリン及び関連する化合物が挙げられる：
【０２７３】
【化８２】
2006516020.tif 000093
但し、Ｒ1及びＲ2それぞれは水素、低級アルキル、低級アルケニル、非置換又は置換のフェニル−低級アルキル又は金属イオンであり；
Ｒ3は水素又は低級アルキルであり；
Ｒ4は水素、低級アルキル、フェニル−低級アルキル又は金属イオンであり；
ｎは０又は１である。
【０２７４】
本発明のＡＣＥ阻害薬として又、米国特許番号４３１６９０５（その全ての内容をここで資料として使用する。）に開示され、下記式（ＸＸＶＩＩ）で表される各種４−シス置換されたプロリンのメルカプトアシル誘導体及びその塩が挙げられる：
【０２７５】
【化８３】
2006516020.tif 000094
但し、Ｒは水素又は低級アルキルを表し；
【０２７６】
Ｒ1は−（ＣＨ2）m−環状アルキル、１−シクロヘキセニル、１，４−シクロヘキサジエニル、及び下式を表し；
【０２７７】
【化８４】
2006516020.tif 000095
但し、Ｒ2及びＲ3は独立して水素、低級アルキル、低級アルキルチオ及びハロ置換された低級アルキルから選ばれ；
ｎは０、１又は２であり；
【０２７８】
Ｒ4は水素、加水分解可能な脱離可能な保護基、化学的に脱離可能な保護基、又は下式であり；
【０２７９】
【化８５】
2006516020.tif 000096
但し、ｍは０，１，２又は３であり；
Ｒ5は水素、１〜４炭素の低級アルキル、好ましくはメチル、１〜４炭素の低級アルコキシ、更に好ましくはメトキシ、１〜４炭素の低級アルキルチオ、特に好ましくはメチルチオ、クロロ、ブロモ、フルオロ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、フェニル、フェノキシ、フェニルチオ、又はフェニルメチルであり（ヒドロキシ置換された化合物は対応するメトキシ置換された化合物をピリジンＨＣ１と共に加熱して得られる。）；
ｑは、１，２又は３（但し、Ｒ5は水素、メチル、メトキシ、クロロ又はフルオロの場合にのみｑは１以上である）であり；
Ｘは酸素又はイオウである。
【０２８０】
ＡＣＥ阻害薬は又好ましくは下記に示される：ａｙｌメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン（米国特許番号４０４６８８９）（カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４１０５７７６）等）及びエーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン（ゾフェノプリル（米国特許番号４３１６９０６）等）；カルボキシアルキルジペプチド（エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４３７４８２９）、リジノプリル（米国特許番号４３７４８２９）、キナプリル（米国特許番号４３４４９４９）、及びラミプリル（米国特許番号４５０８７２９）等）；カルボキシアルキルジペプチドミミック（シラザプリル（米国特許番号４５１２９２４）及びベナザプリル（米国特許番号４４１０５２０）等）；ホスフィニルアルカノイルプロリン（米国特許番号４１６８２６７）（フォシノプリル（米国特許番号４３３７２０１）及びトランドロプリル等）；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸（米国特許番号４４３２９７１）；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩（セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４４５２７９０）等）；ビーチャムのＢＲＬ３６３７８（欧州特許番号８０８２２及び６０６６８）；中外製薬のＭＣ−８３８（ＣＡ１０２：７２５８８ｖ及びＪａｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：３７３（１９８６）に開示）；チバガイギーのＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）（英国特許番号２１０３６１４）及びＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸）（米国特許番号４４７３５７５）；セタプリル（アラセプリル、大日本製薬株式会社製）（Ｅｕｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．３９：６７１（１９８６）；４０：５４３（１９８６））；Ｒｕ４４５７０（ヘキスト社製）（Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ３５：１２５４（１９８５））；シラザプリル（ホフマン−ラロッシュ社製）（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．９：３９（１９８７）；Ｒｏ３１−２２０１（ホフマン−ラロッシュ社製）（ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１６５：２０１（１９８４）；リジノプリル（メルク）（Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．３７：３４２（１９８５）及び欧州特許出願番号１２−４０１）；インダラプリル（デラプリル）（米国特許番号４３８５０５１）；レンチアプリル（フェンチアプリル、サンテン社製）（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０：１３１（１９８３）；インドラプリル（シェーリング社製）（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：６４３、６５５（１９８３））；スピラプリル（シェーリング社製）（Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５９（Ｓｕｐｐ．５）：１７３（１９８６）；ペリンドプリル（セルヴィエ社製）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３１：５１９（１９８７）；キナプリル（ワーナー−ランバート社製）（米国特許番号４３４４９４９）；ＣＩ９２５（ワーナー−ランバート社製）（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｓｔ２６：２４３、２６６（１９８４））；ＷＹ−４４２２１（ワイエス社製）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：３９４（１９８３））；メルカプト含有化合物（ピボプリル及びＹＳ９８０（米国特許番号６１２７３７０）等）；オマパトリラト（ドラッグスＲ．Ｄ．１９９９１（４）：３５０−１）（米国特許番号６３００５０３）；アラセプリル（日本特許出願番号７８／８２８０９）；モベルトプリル；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（Ｓ−９４９０）（薬剤データ年次報告７、９９（１９８５））；ペントプリル；アンコベニン（薬剤データ年次報告６、２０（１９８４））；フェナセイン（薬剤データ年次報告７、２０（１９８５））；及びニコチアナミン（西独特許番号ＤＤ２２６８８０。上記引用特許、出願公開、及び発行物の内容をここで資料として使用する。
【０２８１】
最も好ましいＡＣＥＩはエナラプリル、即ち（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）、（米国特許番号４３７４８２９、その全ての内容をここで資料として使用する。）及び他の同様な又は誘導体カルボキシアルキルジペプチドである。他の好ましいＡＣＥ阻害薬はリジノプリル又はカプトプリルである。
【０２８２】
（ｉｉｉ）アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー／アンタゴニスト；
アンギオテンシンは前駆体、肝臓により生成され、血漿のα−グロブリンフラクション中に見られるアンギオテンシノゲンから形成される。血圧低下は腎臓によるレニンの血液への分泌に対する刺激である。レニンはアンギオテンシノゲン末端デカペプチド、アンギオテンシンＩから開裂する。これは更にアンギオテンシンコンバルチン酵素（ＡＣＥ）によりジペプチドの酵素的除去が行なわれ変化し、アンギオテンシンＩＩが形成される。アンギオテンシンＩＩは、血圧の、及び、水及び電解質バランスの有効な調節因子である。アンギオテンシンＩＩは２つの薬理的に著名な細胞表面レセプターサブタイプ、タイプ１及び２と相互作用する。一方、ＡＧＴＲ１、アンギオテンシンＩＩのタイプ−１レセプターはアンギオテンシンＩＩの昇圧（血管収縮）的、及びアルドステロン分泌能に介在し、タイプ−２アンギオテンシンレセプター（ＡＧＴＲ２）の機能は、それが成人及び胚性生命体の両方で発現するにも拘わらず、比較的不明確であった。近年、タイプ−２アンギオテンシンレセプターは胚性発育に必要ではないが、レニン−アンギオテンシンシステムにより介在される中枢神経系及び心臓血管機能中の役割を果たす証拠が報告された（Ｈｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ３７７：７４４−７４８、１９９５）。Ｉｃｈｉｋｉ糖（Ｎａｔｕｒｅ３７７：７４８−７５０、１９９５）は、マウスＡＧＴＲ２遺伝子を標的とする分断は、顕著な血圧増加、及びアンギオテンシンＩＩの昇圧作用への感受性の増加を生じた予期されない発見を報告した。著者達はタイプ−２レセプターは、降圧機能を介在し、アンギオテンシンＩＩのＡＧＴＲ１介在性昇圧作用に拮抗すると結論した。更に、ＡＧＴＲ２遺伝子の分断は診査挙動を弱体化し血圧を下げる。それらの結果はアンギオテンシンＩＩは、互いに血流力学的効果をうち消しあうＡＧＴＲ１及びＡＧＴＲ２に作用すること、及びＡＧＴＲ２は挙動を含む中枢神経系機能を調節することを示した。Ｉｃｈｉｋｉら（１９９５）はこの事実についてＨｅｉｎら（１９９５）は基底血圧の増大は検知しなかったことを述べ、これは研究対象のマウスの遺伝子学背景の差異による可能性があることを示唆した。
【０２８３】
アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬は、特定の膜結合レセプターへの結合により、そのタイプ１−レセプターサブタイプ（ＡＧＴＲ１）からのアンギオテンシンＩＩを置き換える作用をする。従ってこれら薬剤は選択的ブロッカーとして機能する。ＡＴ−ＩＩ昇圧作用はＡＧＴＲ１により介在される。アンギオテンシン転換酵素阻害薬と異なり、それらはブラジキニン新陳代謝を阻止せず、プロスタグランジン合成を強化する。アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬は許容性が高い。アンギオテンシン転換酵素阻害薬に比べてこれら薬剤では咳は非常に起こりにくく、脂質プロファイルに悪影響を与えたり（治療）中止後の反跳現象高血圧を引き起こしたりしない。この新しい種類の薬剤のメンバーは急速に発展してきた。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により高血圧様に指定されたアンギオテンシンＩＩレセプター拮抗薬は、ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）及びテルミサルタン（ミカルディス商標）である。他の一般に研究されているアンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬として、タソサルタン、ゾラルサルタン、テベテン（エプロサルタンメシラート）が挙げられる。現在カナダでは下記４種が広く市販されている：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）。
【０２８４】
ロサルタン；
ロサルタン（米国特許番号５１５３１９７）は最初のアンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬であり、１９９５年に紹介された。親薬に比べて活性な代謝産物（ＥＸＰ３１７４）は、より長い半減期及び血漿濃度とより関連の深い抗高血圧性効能を有する。二重盲検法でロサルタンは許容性が高く、血圧低下にエナラプリル及びニフェジピンと同様に有効であることが示された。ロサルタン投薬量５０〜１５０ｍｇ一日１回で達成される平均血圧減少は、５．５〜１０．５ｍｍＨｇ収縮血圧（最大血圧）及び３．５〜７．５ｍｍＨｇ拡張期圧（最小血圧）である。本質的な高血圧の治療でのロサルタンの効能及び安全性の検討は、数週間の継続的治療において血圧が低くなるゆっくりとした応答発現を示した。
ロサルタンの初期投薬量は５０ｍｇ一日１回である。投与の活性持続時間は２４時間である。抗高血圧性効能の場合一日２回投薬も使用できる。最小値での測定は不適切である。しかし、投薬量１００ｍｇ一日１回及び５０ｍｇ毎日２回のロサルタンの比較は、抗高血圧性効能で顕著な差異を示さなかった。
ハイドロクロロチアジド−ロサルタン組み合わせ（ハイザール商標）も又使用できる。この組み合わせ薬は１２．５ｍｇのハイドロクロロチアジド及び５０ｍｇのロサルタンを含有する。研究者の一部は、投与量依存作用が起こりにくいため単一薬の増大の代わりにこの組み合わせの使用を推奨する。投薬は一日１回又は２回である。
【０２８５】
バルサルタン；（米国特許番号５３９９５７８；６２９４１９７）
プラセボ−コントロール試験はバルサルタンが高血圧の治療に安全で効果的なことを明らかにした。バルサルタンが投薬量８０〜３２０ｍｇ一日１回で摂取されると、拡張期血圧（最小血圧）の平均減少は６〜９ｍｍＨｇ、収縮血圧の平均減少は３〜６ｍｍＨｇである。研究によりバルサルタンはマイルドから中程度の高血圧の治療でＡＣＥ阻害薬エナラプリル、リジノプリル及びアムロジピンと同様に効果的であることが明らかになった。
バルサルタンのＡＴ１レセプターとの親和力はそのＡＴ２レセプターとの親和力より約２００００倍大きい。比較では、ロサルタンのＡＴ１レセプターとの親和力はそのＡＴ２レセプターとの親和力より約１０００倍大きい。レセプター親和力の臨床的影響はまだ明らかではない。
バルサルタンも又ハイドロクロロチアジド（ディオバンＨＣＴ）との組み合わせ生成物として使用できる。この組み合わせ薬は８０又は１６０ｍｇのバルサルタン及び１２．５ｍｇのハイドロクロロチアジドを含有する。ハイドロクロロチアジドの添加型で、血圧は更に（即ち、６ｍｍＨｇ収縮期及び３ｍｍＨｇ拡張期）減少する。投薬は一日１回である。
【０２８６】
イルべサルタン；
イルべサルタン（米国特許番号５２７０３１７；５９９４３４８；６３４２２４７）は安全で効果的である。アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬のＡＴ１レセプターとの親和力は、そのＡＴ２レセプターとの親和力より８５００倍以上大きい。この薬剤はそのクラスの他の薬剤よりも高い生物学的利用能（６０〜８０％）を有する。
ある研究では、マイルドから中程度の高血圧を有する５３０患者へ、プラセボ、ロサルタン投薬量１００ｍｇ／日又はイルべサルタン投薬量１５０又は３００ｍｇ／日を投与した。治療のわずか１週間後、血圧最小値の減少はイルべサルタン投薬量３００ｍｇ／日ではロサルタン投薬量１００ｍｇ／日よりも大きかった。
プラセボ−コントロール試験はイルべサルタン投薬量１５０〜３００ｍｇ／日は平均収縮血圧を８〜１２ｍｍＨｇ、平均拡張期圧を５〜８ｍｍＨｇ低下させたことを示した。イルべサルタンも又、血圧の低下にエナラプリル及びアテノロールと同様効果的であることが明らかになった。
イルべサルタン及びハイドロクロロチアジドを有する組み合わせ製品も研究された。
【０２８７】
カンデサルタン；
カンデサルタンシレキセチル（米国特許番号５１９６４４４）は高血圧の治療に効果的であることが示された。カンデサルタンそれ自身は経口投与後ほとんど吸収されない；エステルプロドラッグ、カンデサルタンシレキセチルは生物学的利用能を改良する。カンデサルタンシレキセチルの経口投与では、活性な化合物への転換が胃腸部の吸収中急速に完全に起きる。カンデサルタンのＡＴ１レセプターへの親和力は、そのＡＴ２レセプターとの親和力より１００００倍を超えて大きい。
カンデサルタンは投薬量８〜３２ｍｇ／日で安全で許容性がある。これら投薬量で、収縮血圧は８〜１２ｍｍＨｇ減少され、拡張期圧は４〜８ｍｍＨｇ減少された。
拡張期血圧（最小血圧）の相当する同様の減少は、カンデサルタン投薬量８ｍｇ／日及びエナラプリル投薬量１０ｍｇ／日で達成された。ある試験では、平均座位拡張期圧での顕著な減少がカンデサルタン投薬量８又は１２ｍｇ／日及びエナラプリル投薬量１０ｍｇ／日（Ｐ＜０．０１）での１２週の治療後起こったが、カンデサルタン投薬量４ｍｇ／日（Ｐ＝０．０７４）では発生しなかった。同一の研究でロサルタン投薬量５０ｍｇ／日と、カンデサルタン投薬量８及び１６ｍｇ／日とを比較した。１６ｍｇ投薬量カンデサルタンは拡張期血圧（最小血圧）を５０ｍｇロサルタン投薬量よりも平均で３．７ｍｍＨｇ低下させた。
【０２８８】
テルミサルタン；
テルミサルタン（米国特許番号５５９１７６２）は最も最近アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬として指定された。そのＡＴ１レセプターとの親和力はそのＡＴ２レセプターとの親和力よりも３０００倍を超えて大きい。非直線的薬物動態は、増加する投薬量で、血漿テルミサルタン濃度よりも大きなの比例的増加を示した。
テルミサルタンの高血圧の治療での効能はプラセボ−コントロール試験で示された。４４０患者の３か月の研究によりテルミサルタン投薬量４０、８０、１２０又は１６０ｍｇ／日は、エナラプリル投薬量２０ｍｇ／日よりも僅かに大きな抗高血圧性効能を示した。
この研究では、テルミサルタンでの拡張期血圧（最小血圧）減少は８．６〜９．３ｍｍＨｇであり、収縮血圧減少は１０〜１１．９ｍｍＨｇであった。エナラプリルでの拡張期及び収縮血圧の減少はそれぞれ７．２及び８．２ｍｍＨｇであった。
【０２８９】
他のアンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬と同様、テルミサルタンはプラセボのそれと類似する副次効果プロファイルを有することが示された。臨床的試験は反跳現象高血圧がなく初回投与の起立性効果のないことを示した。
最も最近、ＦＤＡは、高血圧の治療用に新しいアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー、名称オルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）を認可した。２０ｍｇオルメサルタンメドキソミルの初期投与は、収縮血圧を平均で１５ｍｍＨｇ、拡張期圧を平均で１２ｍｍＨｇ減少させた。製造元三共製薬（米国）は研究ではその薬はロサルタンは優れており、ベニカー（商標）の販売開始は２００２前半期を予定していると発表した。
【０２９０】
更に、Ｉｙｅｒら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９３：９９６０−９９６５、１９９６）はＡＧＴＲ１を阻止するために遺伝子療法使用の可能性を研究した。かれらは、レトロウィルス介在デリバリーシステムによるアンギオテンシンタイプ１レセプターアンチセンスのデリバリーは、自然発生的高血圧（ＳＨ）ラットモデルのニューロン中でのアンギオテンシンＩＩの細胞作用の選択的減衰作用を生じたことを示した。単回注射は長期間でＳＨラット中の血圧を標準化した。患者へのこのアプローチの使用が提案された。従って、この型のＡＧＴＲ１アンタゴニストも又本発明のＡＩＩＲＡの範囲内である。
【０２９１】
ＡＣＥ阻害薬及びＡＩＩＲＡは両方共ＡＧＴＲ１の活性化を防止するが、これら２つのクラスの化合物の効能には差異がある。これは非ＡＣＥ経路も又いくつかのアンギオテンシンＩＩを生成できるからである。ＡＣＥ阻害薬は又、ブラジキニン分解を減少させ、この作用はそのクラスの薬剤の何らかの有益及び欠点に含まれる。従って、特異的な臨床的効能の可能性がこれら２つのクラスの薬剤に存在する。例えばアンギオテンシンレセプターブロッカーは、ＡＣＥ阻害薬を必要とするが、薬剤誘発された空咳のためにそれを使用できない患者へ適用された。同様な考慮は又モルフォゲンのＡＣＥ阻害薬又はＡＩＩＲＡのいずれかとの共投与に有益である。
【０２９２】
Ｂ．配合物及び治療方法
例えば本発明は、医薬的に許容される塩、キャリア、賦形剤又は希釈剤と共に配合された治療的有効量のＡＣＥ阻害薬及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを含有する医薬品組成物に関する。例えばＡＣＥ阻害薬はエナラプリルでもよい。例えばＡＣＥ、ＡＣＥＩは：式Ｉ−ＸＸＶＩＩＩのいずれかの化合物又はそれらの塩でもよい；アシルメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン；カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）；エーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン；ゾフェノプリル；カルボキシアルキルジペプチド；エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）；リジノプリル；キナプリル；ラミプリル；カルボキシアルキルジペプチドミミック；シラザプリル；ベナザプリル；ホスフィニルアルカノイルプロリン；フォシノプリル；トランドロプリル；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩；セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）；ＢＲＬ３６３７８；ＭＣ−８３８；ＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）；ＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸）；セタプリル（アラセプリル、大日本製薬株式会社製）；Ｒｕ４４５７０；シラザプリル；Ｒｏ３１−２２０１；リジノプリル；インダラプリル（デラプリル）；レンチアプリル（フェンチアプリル、サンテン）；インドラプリル；スピラプリル；ペリンドプリル；キナプリル；ＣＩ９２５（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）；ＷＹ−４４２２１；メルカプト含有化合物；ピボプリル；ＹＳ９８０；オマパトリラト；アラセプリル；モベルトプリル；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（Ｓ−９４９０）；ペントプリル；アンコベニン；フェナセイン；又はニコチアナミン。
【０２９３】
例えば本発明は、医薬的に許容される塩、キャリア、賦形剤又は希釈剤と共に配合された治療的有効量のＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを含有する医薬品組成物に関する。例えばＡＩＩＲＡは：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）、テルミサルタン（ミカルディス商標）、タソサルタン、ゾラルサルタン、テベテン（エプロサルタンメシラート）又はオルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）である。
例えば上記医薬品組成物例中のモルフォゲンはＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３のポリペプチドでもよい。
例えば上記医薬品組成物例中のモルフォゲンは第二ポリペプチドの前駆体、完全体、又は可溶体から選ばれた少なくとも蛋白質のＣ−末端システインドメインを含有する第一ポリペプチドであり、その第二ポリペプチドはＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ９でもよい。
【０２９４】
例えば上記医薬品組成物例中のモルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７０％以上ホモロジー又は５０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７５％以上ホモロジー又は６０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と８０％以上ホモロジー又は７０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば上記ポリペプチドは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と９０％以上同一であるポリペプチドを含有する。
【０２９５】
本発明は又、上記医薬品組成物を、慢性腎不全の治療又は予防のために組成物を哺乳類へ投与する説明書と共に含有するパッケージ医薬品に関する。
本発明は又、上記医薬品組成物を、慢性透析治療の必要性の遅延又は頻度の減少用に組成物を哺乳類へ投与する説明書と共に含有するパッケージ医薬品に関する。
例えば本発明は哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類への（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）アンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）；の共投与を行う方法に関する。
【０２９６】
例えば本発明は哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、上記哺乳類への（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）；の共投与を行う方法を提供する。
例えば本発明は哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、ＡＣＥＩ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤を組み合わせて前処理した治療的有効量の腎間葉前駆細胞を上記哺乳類の腎臓中へ導入する方法を提供する。
【０２９７】
例えば本発明は哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防方法であり、ＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤を組み合わせて前処理した治療的有効量の腎間葉前駆細胞を上記哺乳類の腎臓中へ導入する方法を提供する。例えば薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンでもよい。例えば上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンの誘導物質でもよい。例えば上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニストでもよい。
例えば本発明は慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、哺乳類への：（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）ＡＣＥＩ；の共投与を行う方法を提供する。
【０２９８】
例えば本発明は慢性透析治療の必要性の遅延又はその頻度の減少方法であり、哺乳類への：（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）ＡＩＩＲＡ；の共投与を行う方法を提供する。
上記記載の治療又は予防方法において、上記哺乳類は：慢性腎不全（ＣＲＦ）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、慢性糖尿病性腎障害、糖尿病性腎糸球体症、糖尿病性腎肥大、高血圧性腎硬化症、高血圧性糸球体硬化症、慢性糸球体腎炎、遺伝性腎炎、又は腎臓異形成から選ばれる症状に悩んでいてもよい。
上記記載の治療又は予防方法において、上記哺乳類の腎臓の生体検査は、上記哺乳類が：糸球体肥大、尿細管肥大、糸球体硬化症、又は尿細管間質性硬化症から選ばれる症状に悩んでいることも示てもよい。
上記記載の治療又は予防方法において、上記哺乳類の腎臓の生体検査は腎繊維症を示してもよい。例えば上記検査は上記哺乳類の超音波、ＮＭＲ又はＣＡＴスキャンでもよい。
【０２９９】
本発明は又、哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のための：（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）アンギオテンシン転換酵素阻害薬（ＡＣＥＩ）；の使用方法に関する。
本発明は又、哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防用医薬製造のための：（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）アンギオテンシン−ＩＩレセプター拮抗薬（ＡＩＩＲＡ）；の使用方法に関する。
【０３００】
例えば本発明は、ＡＣＥＩ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤で前処理した間葉前駆細胞の哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防のために哺乳類腎臓へ導入する医薬の製造用の使用に関する。
例えば本発明は、ＡＩＩＲＡ及びＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンを豊富に増加させる薬剤で前処理した間葉前駆細胞の哺乳類の慢性腎不全の治療又は予防のために哺乳類腎臓へ導入する医薬の製造用の使用を提供する。例えば薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンでもよい。例えば上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンの誘導物質でもよい。例えば上記薬剤はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニストでもよい。
【０３０１】
本発明は又、哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のための（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）ＡＣＥＩの使用に関する。
本発明も又、医薬哺乳類の慢性透析治療の遅延又は頻度の減少用医薬の製造のための（ｉ）ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン、内因性ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン発現の誘導物質、又はＯＰ／ＢＭＰモルフォゲンレセプターのアゴニスト；及び（ｉｉ）ＡＩＩＲＡの使用に関する。
上記例において、上記哺乳類は無傷な健康な腎臓を有する哺乳類中に存在する機能している腎単位の数の約４０％未満の数の機能している腎単位を有してもよい。例えば上記哺乳類は無傷な健康な腎臓を有する哺乳類中に存在する機能している腎単位の数の約２０％未満の数の機能している腎単位を有してもよい。
上記例において、上記哺乳類は腎臓移植レシピエントでもよい。例えば上記哺乳類は腎臓１つのみを有してもよい。上記例において、上記哺乳類の尿沈渣の検査は、ろう様円柱の存在を示してもよい。
【０３０２】
上記例において、上記哺乳類は慢性的に上記哺乳類のＧＦＲexpの約４０％未満のＧＦＲを有する。上記例において、上記哺乳類は慢性的に上記哺乳類のＧＦＲexpの約２０％未満のＧＦＲを有する。
上記例において、上記哺乳類は約５０ｋｇ以上の体重のヒト男性であり、慢性的に約４０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有する。上記例において、上記哺乳類は約４０ｋｇ以上の体重のヒト女性であり、慢性的に約３０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有する。
【０３０３】
上記例において、上記治療方法又は予防、又は上記医薬は、上記哺乳類の血清クレアチニン濃度を３月間約５％以上減少させる。
上記例において、上記治療又は予防前に、上記哺乳類は腎臓機能の臨床検査値の慢性的減少を示し、約３月以上の上記治療又は予防の後、上記検査値は安定化する。
上記例において、１以上の上記ＡＣＥＩ、上記ＡＩＩＲＡ又は上記モルフォゲンは経口で、腸管外（非経口）で、静脈注射で、腹腔内に、又は腎臓カプセル中に、又は埋め込み装置により投与される。上記例において、１以上の上記ＡＣＥＩ、上記ＡＩＩＲＡ又は上記モルフォゲンの上記投与用にステントが上記哺乳類中に埋め込まれる。
上記例において、１以上の上記ＡＣＥＩ又は上記ＡＩＩＲＡと１以上の上記モルフォゲンとが週一回以上約１月以上の間共投与される。
上記例において、１以上の上記ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡと、１以上の上記モルフォゲンとが週一回以上約１年以上の間共投与される。
上記例において、上記ＡＣＥＩ又は上記ＡＩＩＲＡと上記モルフォゲンとが（ｉ）異なる経路を通して又は（ｉｉ）異なる頻度で投与される。
上記例において、上記モルフォゲンは約０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ上記哺乳類の体重の投薬量で投与される。
上記例において、上記モルフォゲンは約１０〜３００μｇ／ｋｇ上記哺乳類の体重の投薬量で投与される。
上記例において上記ＡＣＥＩは経口で約１〜１００００ｍｇ／Ｌ、好ましくは１０〜１０００ｍｇ／Ｌ、１０〜１００ｍｇ／Ｌ、１００〜１０００ｍｇ／Ｌ、最も好ましくは１００ｍｇ／Ｌの濃度で投与されるＡＣＥＩの投与又は使用が含有される。
上記例において上記ＡＩＩＲＡは経口で約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、０．２〜５ｍｇ／ｋｇ体重、０．５〜２ｍｇ／ｋｇ体重、最も好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重の濃度で投与されるＡＣＥＩの投与又は使用が含有される。
【０３０４】
上記例において上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは単一の医薬品組成物で投与される。上記例において上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは分離した医薬品組成物で又はほとんど同時に投与される。上記例において上記ＯＰ／ＢＭＰモルフォゲン及び、ＡＣＥＩ又はＡＩＩＲＡは分離した医薬品組成物で異なる時に投与される。
上記例において上記モルフォゲンは慢性腎不全又はその危険性のある哺乳類へ投与された場合、（ａ）異所性骨アッセイにおいて軟骨形成を誘発し；（ｂ）慢性腎不全の動物モデルにおける腎臓機能の損傷を予防、阻止、遅延若しくは軽減し、又は（ｃ）腎臓機能の標準マーカーにおける臨床的に顕著な改善を生じる。
上記例において上記モルフォゲンは、ポリペプチドの前駆体（ｐｒｏ型）、完全体（ｍａｔｕｒｅ型）、又は可溶体から選ばれた少なくとも蛋白質のＣ−末端システインドメインを含有するポリペプチドを含有し、そのポリペプチドは：ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＢＭＰ２、ＢＭＰ３、ＢＭＰ４、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、又はＢＭＰ９。
【０３０５】
上記例において上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１の前駆体、完全体、又は可溶体から選ばれるポリペプチドの１以上のＣ−末端システインドメインを含有するポリペプチドを含有する。
例えば、上記例において使用される上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７０％以上ホモロジー又は５０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば、上記例において使用される上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と７５％以上ホモロジー又は６０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば、上記例において使用される上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と８０％以上ホモロジー又は７０％同一であるポリペプチドを含有する。例えば、上記例において使用される上記モルフォゲンは、ヒトＯＰ−１（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：２）のＣ−末端７−システインドメインのアミノ酸配列と９０％以上同一であるポリペプチドを含有する。
【０３０６】
上記例において上記ＡＣＥＩは：式Ｉ〜ＸＸＶＩＩＩのいずれかの化合物又はそれらの塩；アシルメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン；カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）；エーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン；ゾフェノプリル；カルボキシアルキルジペプチド；エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）；リジノプリル；キナプリル；ラミプリル；カルボキシアルキルジペプチドミミック；シラザプリル；ベナザプリル；ホスフィニルアルカノイルプロリン；フォシノプリル；トランドロプリル；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩；セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）；ＢＲＬ３６３７８；ＭＣ−８３８；ＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）；ＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸）；セタプリル（アラセプリル商標、大日本製薬株式会社製）；Ｒｕ４４５７０；シラザプリル；Ｒｏ３１−２２０１；リジノプリル；インダラプリル（デラプリル商標）；レンチアプリル（フェンチアプリル、サンテン社製）；インドラプリル；スピラプリル；ペリンドプリル；キナプリル；ＣＩ９２５（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）；ＷＹ−４４２２１；メルカプト含有化合物；ピボプリル；ＹＳ９８０；オマパトリラト；アラセプリル；モベルトプリル；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（Ｓ−９４９０）；ペントプリル；アンコベニン；フェナセイン；又はニコチアナミンである。好ましくはＡＣＥＩはエナラプリルである。
【０３０７】
上記例において上記ＡＩＩＲＡは：ロサルタン（コザール商標）、バルサルタン（ディオバン商標）、イルべサルタン（アバプロ商標）、カンデサルタン（アタカンド商標）、テルミサルタン（ミカルディス商標）、タソサルタン、ゾラルサルタン、テベテン（エプロサルタンメシラート）又はオルメサルタンメドキソミル（ベニカー商標）である。
【０３０８】
ＡＣＥ  阻害薬、ＡＩＩＲＡ及び／又はモルフォゲンは、１以上の医薬的に許容されるキャリア（添加剤）及び／又は希釈剤と一緒に配合できる。下記に詳細に記載されるように、本発明の医薬組成物は特に、下記のように固体又は液体剤形での投与のために配合できる：（１）経口投与（水性又は非水性溶液又は懸濁液の飲薬、錠剤、ボーラス、散剤、顆粒剤、舌への投薬用ペースト等）；（２）非経口投与（例えば、皮下、髄腔内、脳室内、筋肉内、又は静脈経由の、例えば、無菌溶液又は懸濁液の形での注射であり、ミニポンプ又は、制御した速度で連続的に薬剤を供給するＡＬＺＥＴオスモティックポンプ等の他の機械的供給補助具を使用してもよい）；（３）局所（経皮）的適用（皮膚用クリーム、軟膏又は噴霧剤等）；又は（４）膣内又は直腸内（ペッサリー、クリーム又はフォーム等）。又、本発明の化合物は、単に無菌水中に溶解又は懸濁されてもよい。本発明の医薬調合剤は非発熱性であり、患者の体温を上昇させない。
【０３０９】
本発明での「治療的有効量」は、本発明の化合物を含有する化合物、物質又は組成物の量を意味し、それは、少なくとも動物中の細胞の部分母集団中で幾つかの目的とする治療用効果を生成するのに効果的であり、従って、治療される細胞中でのその経路の生物学的結果を合理的な受益度／危険度割合で遮断するどのような医学的治療へも適用できる。
ここで「医薬的に許容範囲内での」とは、医学的判断の確実な範囲内で、過剰な毒性、炎症、アレルギー反応又は他の問題又は合併症無しに、合理的な受益度／危険度割合に対応して、適当にヒト及び動物の組織へ接触させるための化合物、物質、組成物及び／又は剤形をいう。
【０３１０】
本発明での「医薬的に許容されるキャリア」は、本発明の化合物を体の１器官又は部位から体の別の器官又は部位へ移動又は輸送するのに使用され、液体又は固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又はカプセル封入物質等の、医薬的に許容される物質、組成物又は賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）をいう。それぞれのキャリアは、配合物の残りの成分と適合し、患者に有害ではない観点から「許容範囲内」でなくてはならない。医薬的に許容されるキャリアとして使用できる物質の例として、下記が挙げられる：（１）糖類（乳糖、ブドウ糖及びショ糖等）；（２）澱粉（コーン澱粉及び馬鈴薯澱粉等）；（３）セルロース、及びその誘導体（カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースナトリウム及びセルロースアセテートナトリウム等）；（４）粉末状トラガカント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）タルク；（８）賦形剤（ココアバター及び座薬ワックス等）；（９）油類（落花生油、綿実油、紅花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び大豆油等）；（１０）グリコール類（プロピレングリコール等）；（１１）ポリオール類（グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコール等）；（１２）エステル類（エチルオレイン酸エステル及びエチルラウリン酸等）；（１３）寒天；（１４）バッファ剤（水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム等）；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ホスフェートバッファ液；及び（２１）医薬品配合物中に使用される他の非毒性の適合物質。
【０３１１】
上記のように、ある種の化合物はアミノ又はアルキルアミノ等の塩基性基を含有してもよく、このように医薬的に許容される酸と医薬的に許容される塩を形成してもよい。この観点から「医薬的に許容される塩」は、本発明の化合物の、相対的に無毒性の無機酸及び有機酸付加塩をいう。これら塩は、本発明の化合物の最終的分離及び精製中ｉｎ  ｓｉｔｕで調製してもよく、本発明の精製化合物の遊離塩基形を適当な無機酸及び有機酸と別々に反応させ、及びこのように形成された塩を単離して調製してもよい。代表的な塩として、臭化水素塩、塩化水素塩、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メタンスルホン酸塩、グルコヘプトン酸塩、ラクトンビオン酸塩、及びラウリルスルホン酸塩等が挙げられる。（例えば、Ｂｅｒｇｅら（１９７７）「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９参照。）
本発明の化合物の医薬的に許容される塩として、化合物の通常の無毒性塩又は第四級アンモニウム塩、例えば無毒性無機酸及び有機酸から得られる塩が挙げられる。これらの通常の無毒性塩として、塩酸、臭化水素、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等の無機酸に由来する塩；並びに酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イソチオン酸等の有機酸から調製される塩が挙げられる。
【０３１２】
又、本発明の化合物は１以上の酸性基を含んで、医薬的に許容される塩基と医薬的に許容される塩を形成することが可能である。下記では「医薬的に許容される塩」とは、本発明の化合物の比較的無毒性の無機塩基及び有機塩基付加塩をいう。これら塩は、化合物の最終的分離及び精製中ｉｎ  ｓｉｔｕで調製してもよく、精製化合物の遊離酸形を、アンモニア又は医薬的に許容される有機１級、２級又は３級アミンとで、医薬的に許容される金属カチオンの水酸化物、炭酸塩又は炭酸水素塩とを形成するように、適当な塩基と別々に反応させて同様に調整できる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類塩として、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム及びアルミニウム塩等が挙げられる。代表的な有機アミンも、塩基付加塩の形成に使用でき、エチルアミン、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン等が挙げられる。（例えば、ＢｅｒｇｅらＳｕｐｒａ参照。）
【０３１３】
湿潤剤、ラウリル硫酸ナトリウム及びマグネシウムステアレート等の乳化剤及び滑剤、並びに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、風味剤及び香料、防腐剤及び抗酸化剤も、又本発明の組成物中に含まれてもよい。
医薬的に許容される抗酸化剤として、（１）水溶性抗酸化剤（アスコルビン酸、システイン塩酸塩、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等）；（２）油溶性抗酸化剤（アスコルビン酸パルミテート、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α−トコフェロール等）；並びに（３）金属キレート剤（クエン酸、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等）が挙げられる。
【０３１４】
本発明の配合物は、経口、経鼻的、局所（経皮）（頬及び舌下を含む）、直腸的に、経膣的及び／又は腸管外（非経口）投与に適している。配合物は、単位剤形として便利であり、又薬学的に公知であるどのような方法でも調製できる。キャリア物質と組み合わせて単一の剤形を形成できる活性成分の量は、治療されるホスト、特定の投与様式に依存して変化できる。キャリア物質と組み合わせて単一剤形を形成できる活性成分の量は通常、治療用効果を示す化合物量である。通常この量は、活性成分１００％中の約１〜約９９％、好ましくは約５〜約７０％、最も好ましくは約１０〜約３０％である。
【０３１５】
これら配合物又は組成物の製造方法は、本発明の化合物をキャリア及び、任意で１以上の副成分と接触させるステップを含む。一般に、配合物は、本発明の化合物を均一に密接に液体キャリアと配合するか、固体キャリアを精密に粉砕し、又は双方を粉砕し、必要であれば次に製造品を形成して調製される。
適当な経口投与用の本発明の配合物には、それぞれ活性成分として所定の量の本発明の化合物を含む下記の形状が挙げられる；カプセル、カシェ剤、丸薬、錠剤、薬用ドロップ（風味基剤、通常ショ糖及びアカシア又はトラガカントを使用する。）、散剤、顆粒剤の剤形；水性又は非水性の溶液又は懸濁液；水中油滴型又は油中水滴型液体エマルジョン；又はエリキシル剤又はシロップ；又は香錠（ゼラチン又はグリセリン、又はショ糖及びアカシア等の不活性ベースを使用する。）；及び／又はマウスウォッシュ等。本発明の化合物は又ボーラス、舐剤又はペーストを投与できる。
【０３１６】
経口投与用の本発明の固形剤形（カプセル、錠剤、丸薬、糖衣錠、散剤、顆粒剤等）において、活性成分は、クエン酸ナトリウム塩又はリン酸二カルシウム等の１以上の医薬的に許容されるキャリア及び／又は下記のいずれかと混合できる：（１）充填剤又は増量剤（澱粉、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール、及び／又はケイ酸等）；（２）結合剤（カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖及び／又はアカシア等）；（３）保湿剤（グリセロール等）；（４）崩壊剤（寒天、カルシウム炭酸塩、馬鈴薯又はタピオカ澱粉、アルギン酸、特定のケイ酸塩及び炭酸ナトリウム等）；（５）難溶剤（パラフィン等）；（６）吸収促進剤（第四級アンモニウム化合物等）；（７）湿潤剤（セチルアルコール及びグリセロールモノステアレート等）；（８）吸収剤（カオリン及びベントナイトクレイ等）；（９）滑剤（タルク、カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びそれらの混合物等）；並びに（１０）着色剤。カプセル、錠剤及び丸薬の場合、医薬組成物はバッファ剤を含んでも良い。類似のタイプの固体組成物も、高分子量ポリエチレングリコール等と同様に、乳糖（ｌａｃｔｏｓｅ又はｍｉｌｋｓｕｇａｒ）等の賦形剤を使用した軟及び硬ゼラチンカプセル中の充填剤として使用できる。
【０３１７】
錠剤は任意で１以上の副成分と共に圧縮又は成形して製造できる。圧縮錠は、結合剤（例えば、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、澱粉グリコレートナトリウム又は架橋したカルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤又は分散剤を使用して製造できる。成形錠は、不活性液体希釈剤で湿らされた粉末化合物の適当な機械的混合物中での成形で製造できる。
【０３１８】
本発明の医薬組成物の、糖衣錠、カプセル、丸薬及び顆粒剤等の錠剤、及び他の固体剤形は、任意でスコアされ、医薬配合技術で公知の溶腸性コーティング及び他のコーティング等のコーティング及びシェルを使用して製造できる。それらは、本発明の活性成分の徐放又は調節投与が出来るように、目的とする投与プロファイルとするため割合を変化させたヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム及び／又はミクロスフィア等と配合できる。それらは例えば細菌保持フィルタでのろ過、又は使用直前に無菌水に溶解できる殺菌用固体組成物の形状の殺菌消毒剤若しくは他の注入直前に使用する注入用殺菌媒体の使用により殺菌状態にすることができる。これら組成物は又任意で乳白剤を含んでもよく、胃腸管の特定部位で、活性成分のみ又は選択的に任意に遅く放出できる組成物から構成されてもよい。使用できる担持組成物の例として、ポリマー性物質及びワックスが挙げられる。活性成分は又、適切なら１以上の上記の賦形剤と共にマイクロカプセル化された形でも良い。
【０３１９】
本発明の化合物の経口投与用液体剤形として、医薬的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて液体剤形は、一般的に当分野で使用される不活性希釈剤（水又は他の溶媒）並びに、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジル安息香酸、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油及びごま油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物等の可溶化剤及び乳化剤を含んでもよい。
【０３２０】
不活性希釈剤の他に、経口用組成物は又、湿潤剤、乳化剤及び沈殿防止（懸濁）剤、甘味剤、風味剤、着色剤、香料及び防腐剤等の補助薬を含んでもよい。
活性化合物に加えて、懸濁液は、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性セルロース、アルミニウムメタハイドロオキサイド、ベントナイト、寒天及びトラガカント、及びそれらの混合物等の沈殿防止剤（懸濁剤）を含んでもよい。
【０３２１】
直腸又は経膣的投与用の本発明の医薬組成物の配合物は、１以上の本発明の化合物を１以上の適当な非刺激性賦形剤又はキャリアと混合して調製できる座薬としてもよい。上記賦形剤又はキャリアは、ココアバター、ポリエチレングリコール、座薬ワックス又はサリチレート等を含有し、室温で固体であるが体温で液体となり、直腸内又は膣内で融解して活性な化合物を放出できる。
経膣投与に適した本発明の配合物として、適切であることが当分野で知られているキャリアを含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ジェル、ペースト、フォーム又は噴霧配合物も挙げられる。
本発明の化合物の局所（経皮）的又は経皮的投与用剤形として、散剤、噴霧剤、軟膏、ペースト、クリーム、ローション剤、ジェル、溶液、貼付剤及び吸入剤が挙げられる。本発明の活性化合物は、無菌状態で医薬的に許容されるキャリア、及び必要な防腐剤、バッファ剤又は噴霧体と共に混合できる。
【０３２２】
軟膏、ペースト、クリーム及びジェルは、本発明の活性化合物に加えて、動物性及び植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、澱粉、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルク及び酸化亜鉛又はそれらの混合物等の賦形剤を含有してもよい。
散剤及び噴霧剤は、本発明の化合物に加えて、乳糖、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、カルシウムケイ酸塩及びポリアミド粉末又はこれら物質の混合物等の賦形剤を含有してもよい。噴霧剤は更に、クロロフルオロ炭化水素並びにブタン及びプロパン等の揮発性非置換炭化水素等の通常の噴霧体を含有してもよい。
【０３２３】
経皮投与用貼付剤は、本発明の化合物を体内へコントロールデリバリできる利点を付与する。これらの剤形は、本発明の化合物を適当な媒体中に溶解又は分散させて調製できる。吸収増強剤も又、化合物の皮膚の通過放出を増加させるために使用できる。流出速度は、速度調整膜を設けるか、化合物をポリマーマトリックス又はゲル中に分散させることにより調整できる。
【０３２４】
非経口投与に適当な本発明の医薬組成物として、１以上の医薬的に許容される無菌の、等張水溶液若しくは非水性溶液、分散体、懸濁液若しくはエマルジョン、又は無菌散剤と組み合わせた１以上の本発明の化合物が挙げられる。上記水溶液等は、使用直前に無菌注入用溶液又は分散体へ再構成（戻）されてもよく、抗酸化剤、バッファ剤、静菌薬、配合物を目的レシピエントの血液と等張にする溶媒、沈殿防止剤又は濃厚剤を含有してもよい。
本発明の医薬組成物が使用できる適当な水溶液及び非水性キャリアとして、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、及び適切なそれらの混合物、植物油（オリーブ油等）、並びに注入用有機エステル（オレイン酸エチルエステル等）が挙げられる。レシチン等のコーティング物質の使用、分散体の場合は必要とされる粒子サイズの維持、及び界面活性剤の使用等により、適当な流動性が保持できる。
【０３２５】
これら組成物は又、防腐剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤等の補助薬を含有してもよい。微生物活動の予防は、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸、等の種々の抗菌性及び抗真菌性剤を含有することにより確保できる。糖類、塩化ナトリウム等の等張剤が組成物中に含まれることも好ましい。更に、注入用医薬剤の長期間の吸収（除放）は、アルミニウムモノステアレート及びゼラチン等の吸収を遅延する作用薬を含有させることにより達成できる。
【０３２６】
時には、薬の効果を延長するために、皮下又は筋肉内注射からの薬の吸収を遅延することが好ましい。これは、水に難溶性の結晶又は非晶性物質の液体懸濁液を使用することにより達成できる。その場合、薬の吸収速度はその溶解速度に依存し、次にその結晶サイズ及び結晶形状に依存する。一方、非経口的に投与される剤形の吸収の遅延は、油媒体中への薬の溶解又は懸濁により達成できる。
蓄積注射用の剤形は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に本発明の化合物のマトリックスをマイクロカプセル化して形成することにより調製できる。薬のポリマーに対する割合及び使用される特定のポリマーの性質に依存して、薬放出速度が調整できる。他の生分解性ポリマーとして、ポリ（オルソエステル）及びポリ（アンハイドライド）が挙げられる。蓄積注射用配合物は又、体組織と適合性のあるリポソーム又はマイクロエマルジョン中に薬を包括することにより調製できる。
本発明の化合物がヒト又は動物へ薬剤として投与される場合、それらは、それ自体で又は例えば医薬的に許容されるキャリアと組み合わせた０．１〜９９．５％、好ましくは、０．５〜９０％の活性成分を含む医薬組成物として投与できる。
【０３２７】
本発明のモルフォゲン、モルフォゲン誘導物質、又はモルフォゲンレセプターのアゴニスト、並びにＡＣＥ阻害薬（ＡＣＥＩ）は、使用された特定のモルフォゲン、誘導物質、アゴニスト、又はＡＣＥＩに適合するいずれの経路ででも投与できる。従って、適切な場合、投与は静脈や腹腔内注射等の投与経路等の経口又は腸管外（非経口）でもよい。更に、投与は、モルフォゲンのボーラスの周期的注射でもよい。誘導物質、アゴニスト又はＡＣＥＩは又、外装（例えば、外装用（ｉｘ．）バッグ）又は内挿（例えば、生体内分解性移植物、又は移植されたモルフォゲン生成細胞のコロニー）されたリザーバからの静脈注入又は腹腔内投与が連続的に行われてもよい。
【０３２８】
本発明の治療薬（即ち、モルフォゲン、モルフォゲン誘導物質、モルフォゲンレセプターのアゴニスト、又はＡＣＥＩ）は個体（患者）へ、直接に（例えば、注射、移植又は局所（経皮）的投与して組織部位へ局所的に）又は全身的に（例えば、腸管外（非経口）又は経口で）いずれの適切な手段ででも供給できる。薬剤が腸管外（非経口）、例えば、静脈内、皮下、分子内、眼科的、腹腔内、筋肉内、バッカル内、直腸内、膣内、眼窩内、脳内、頭蓋内、髄腔内、心室内、髄腔内、槽内（クモ膜下槽内）、包内、鼻内注射により、又はエアロゾル投与により供給される場合、薬剤は好ましくは水性又は生理学的に適合する流体の懸濁液又は溶液の一部を含有してもよい。従って薬剤用キャリア又は賦形剤は、患者への目的の薬剤のデリバリーに加え、それが他に患者の電解質及び／又は体積バランスへ悪影響を与えないように生理学的に許容されるものである。従って薬剤用の流体媒体として、標準的な生理食塩水（例えば、９．８５％ＮａＣｌ水溶液、０．１５Ｍ、ｐＨ７〜７．４）が挙げられる。
【０３２９】
完全モルフォゲン二量体とモルフォゲンプロドメインとの関係は、対応する完全体よりも生理学的溶液へ通常更に可溶性のモルフォゲンの前駆体を生じる。実際、内因性モルフォゲンは、この形状で哺乳類の体内を移動（例えば、排出、循環）すると考えられる。この蛋白質の可溶体は、モルフォゲン分泌哺乳類細胞、例えばモルフォゲンをエンコードしそれを発現する機能を有する核酸でトランスフェクトされた細胞の培養媒体から得られると考えられる。一方、可溶性種は、完全な、形態生成的に活性なポリペプチド二量体（又はその活性フラグメント）とモルフォゲンプロドメインポリペプチド又はその溶解性強化（可溶性）フラグメントとの複合化により調製できる。溶解性強化プロドメインフラグメントとして、完全ポリペプチド二量体と複合化して得られた非共有又は共有複合体の安定性及び／又は溶解性を強化するモルフォゲンファミリーのメンバーの、プロ領域のいずれのＮ−末端、Ｃ−末端又は内部的フラグメントが挙げられる。通常、有用なフラグメントは、蛋白質分解性部位Ａｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ（ＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３０）で開裂されるものである。形態発生蛋白質（モルフォゲン）の可溶性複合体種、及びその製造方法、試験方法及び使用方法の詳細な記載はＷＯ９４／０３６００（ＰＣＴＵＳ９３／０７１８９）に記載されている。ＯＰ−１の場合、有用なプロドメインポリペプチドフラグメントとして、無傷プロドメインポリペプチド（残基３０〜２９２）及びフラグメント４８〜２９２及び１５８−２９２（全てＳＥＱ  ＩＤ  Ｎｏ：３）が挙げられる。経口投与に溶解性を強化できて特に有用な別の分子として、カゼインが挙げられる。例えば、０．２％カゼインの添加は、ＯＰ−１の完全活性体の溶解性を８０％増加する。乳及び／又は各種血清蛋白質中に見られる他の成分も又有用である。
【０３３０】
腸管外（非経口）投与に有用な溶液は、医薬品分野で公知のいずれの方法でも調製でき、例えば「Ｒｅｍｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  ＰＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ  ＳＣＩＥＮＣＥＳ」（Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．，ｅｄ．），Ｍａｃｋ  Ｐｕｂ．，１９９０に記載されている。
本発明の治療薬の配合物は、ポリアルキレングリコール（ポリエチレングリコール等）、植物油、水素化ナフタレン等を含有してもよい。直接投与用配合物は、好ましくは、薬剤を目的の部位へ維持する補助となるグリセロール及び他の高粘度組成物を含有してもよい。生体適合性、好ましくは生体内分解性のポリマー（例えば、ヒアルロン酸、コラーゲン、リン酸カルシウム、ポリブチレート、ラクチド、及びグリコリドポリマー及びラクチド／グリコリドコポリマー）、はｉｎ  ｖｉｖｏで薬剤の放出制御のために有用な賦形剤である。他の使用可能な有用な腸管外（非経口）でのこれら薬剤のデリバリーシステムとして、エチレン−ビニルアセテートコポリマー粒子、オスモティックポンプ、移植可能な注入系、及びリポソームが挙げられる。吸入投与用配合物は、賦形剤として乳糖等を含有してもよく、ポリオキシエチレン９−ラウリルエーテル、グリココレート及びデオキシコレート等を含有してもよい水性溶液でもよく、油性溶液でもよく、点鼻薬の形状、又は鼻内に適用されるジェルとして投与される。腸管外（非経口）投与用配合物は又、バッカル投与用にグリココレート、直腸投与用にメトキシサリチラート、又は膣内投与用にクエン酸を含有してもよい。又本発明の直腸投与用座薬は、モルフォゲン、誘導物質又はアゴニストココアバター又は室温で固体であるが体温で液体となる他の組成物等の非刺激性賦形剤と共に混合して調製してもよい。
【０３３１】
皮膚表面への局所投与用配合物は、モルフォゲン、誘導物質、アゴニスト、又はＡＣＥＩをローション、クリーム、軟膏又は石けん等の皮膚科的に許容されるキャリア中に分散させて製造できる。特に有用なものは皮膚上に膜又は層を形成して局所適用され、除去されにくくなるキャリアである。内的組織表面への局所投与用には、薬剤は液体組織接着剤又は組織表面への吸着を強化することが抗体の他の物質中に分散されてもよい。例えば、ヒドロキシプロピルセルロース又はフィブリノーゲン／トロンビン溶液が有利に使用できる。一方、ペクチン含有配合物等の組織被覆溶液も使用できる。
【０３３２】
一方、本発明の薬剤は、経口で投与できる。蛋白質の治療的経口投与は、多くの蛋白質は血流中に吸収される前に哺乳類性消化系中の消化酵素及び酸により容易に分解されるため、一般的に行なわれていない。しかし、本発明のモルフォゲンは通常、安定でプロテアーゼ抵抗性の酸である（参照、例えば米国特許番号４９６８５９０）。更に、１以上のモルフォゲン、ＯＰ−１が、乳腺抽出物、初乳及び５７日乳中に特定されている。更に、乳腺抽出物から精製されたＯＰ−１は、形態生成的に活性であり、又血流中でも検出された。母親からの摂取された乳を通した投与は、ＴＧＦ−βスーパーファミリー蛋白質の天然性デリバリー経路である。Ｌｅｔｔｅｒｉｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２６４：１９３６−１９３８（１９９４）は、ＴＧＦ−βはネズミ乳中に存在し、放射性標識したＴＧＦ−βは哺乳された子供（若年者）の胃腸粘膜により吸収されることを報告した。標識され、摂取されたＴＧＦ−βは容易に子供の肺、心臓及び肝臓等の体組織中に無傷の形で表われる。最後に、可溶体モルフォゲン、例えばプロドメインを伴う完全モルフォゲンは、形態生成的に活性である。これら発見、並びに下記例示は、経口及び腸管外（非経口）投与は、モルフォゲン等のＴＧＦ−βスーパーファミリー蛋白質を個体（患者）へ投与する実行可能な手段であることを示す。更に、本発明のある種のモルフォゲン完全体が通常難溶性である一方、乳（及び乳腺抽出物及び初乳）中に見いだされるモルフォゲン体は、形態生成的活性な完全体の、発現した完全長ポリペプチド配列の一部又は全てのプロドメインと結合、及び／又は１以上の乳成分と結合するために容易に溶解しやすいと思われる。従って、本発明の化合物も又それらのｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏ溶解性を強化できる分子と結合できる。
多くのＡＣＥ阻害薬は経口で投与できる。好ましくは、医薬品組成物としてのＡＣＥ阻害薬は、飲料水又は他の適切な液体キャリアを通して経口で投与できる。
【０３３３】
本発明の化合物は又、モルフォゲン、誘導物質、アゴニスト、又はＡＣＥＩを目的の組織へ作用させることの出来る分子と結合できる。例えば、抗体、抗体フラグメント、又は特に目的の組織細胞上の表面分子と相互作用する他の結合蛋白質が使用できる。有用な標的分子は例えば、米国特許番号５０９１５１３に開示された単一鎖結合部位技術を使用して設計される。標的分子は、モルフォゲン、誘導物質、アゴニスト、又はＡＣＥＩと共有的に又は非共有的に結合できる。
【０３３４】
当業者に当然であるように、本発明の配合組成物は、治療的有効量の、モルフォゲン、モルフォゲン誘導物質、モルフォゲンレセプターのアゴニスト又はＡＣＥＩを含有する。即ち、それらは、損なわれた腎臓のシステム機能の測定可能な修復及びその完全な修復を刺激するに充分な時間、適切な薬剤濃度を投与された組織へ提供する量である。当業者に当然であるように、これら濃度は数種の因子、即ち、選ばれた薬剤の生物学的効能、特定の薬剤の化学的特徴（例えば、疎水性）、その配合；１以上の賦形剤との混合物、投与経路、及び目的とする治療；活性成分が直接組織部位へ投与されるか、全身へ投与されるかに応じて変化できる。
好ましい投薬量も又、変更可能な所定の哺乳類の、罹患した又は損傷された組織の症状、及び全体の健康状態等の変化に応じて変化する。一般的に、モルフォゲン投薬量は、単回、毎日、隔週又は週１回で０．００００１〜１０００ｍｇで充分であり、０．０００１〜１００ｍｇが好ましく、０．００１〜１０ｍｇは更に好ましい。一方、単回、毎日、隔週（ＢＷ）又は週１回の投薬量約０．０１〜１０００μｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．０１〜１０μｇ／ｋｇ体重、又は約１０〜３００μｇ／ｋｇ体重も有利に使用できる。一般的に、ＡＣＥＩの投薬は、単回、毎日、隔週、又は週１回、経口で投与されてもよく、その量は通常約０．０１〜３００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）、１〜３０ｍｇ／ｋｇ（ＢＷ）、最も好ましくは約１〜３ｍｇ／ｋｇＢＷであり、例えば飲料水（経路）がＡＣＥ阻害薬には適切である。従って濃度は、他の因子（治療される哺乳類患者の平均的体重、及び上記特定の哺乳類性患者により１日当り消費される水の平均的量等）が規定された場合、１日に体重ｋｇ当り投与される必要のある薬量へ調節され又は発現する。本発明の効果的投与は、目的とする又は特定の条件下で適切と思われる単回投与又は複数の（２以上の）投薬分割投与として、投与されてもよい。ボーラス注射又は拡散性注入配合物も使用できる。反復又は頻繁な注入強化を目的とする場合、半恒久的ステントの移植（例えば、静脈、腹腔内、槽内（クモ膜下槽内）又は嚢内注入）も採用できる。モルフォゲン及び／又はＡＣＥＩの投薬量は、共投与の場合、それらが（共投与ではなく）単独投与される場合のモルフォゲン又はＡＣＥＩの投薬量とは異なってもよいことも又当然である。慢性腎不全の治療／予防用の所定のモルフォゲン又はＡＣＥＩの投薬量は、他の関連しない（骨形態発生等）に使用される場合のモルフォゲン又はＡＣＥＩの投薬量とは異なってもよいことも又当然である。
【０３３５】
本発明のモルフォゲン、誘導物質、アゴニスト、又はＡＣＥＩは、勿論単独、又は上記症状の治療に有益であることが公知の他の分子と組み合わせて投与できる。
例えば、各種公知である成長因子、ホルモン、酵素、治療的組成物、抗生物質、又は他の生物活性な薬剤も又モルフォゲン及びＡＣＥＩと共に投与できる。従って、ＮＧＦ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ、ＦＧＦ、ＴＧＦ−α、及びＴＧＦ−β等の各種公知の成長因子、並びに酵素、酵素阻害薬、抗酸化剤、抗炎症性薬剤、フリーラジカル捕捉剤、抗生物質及び／又は化学走性誘因物質／走化性因子も本発明のモルフォゲン及びＡＣＥＩ配合物中に含まれてもよい。
最後に、本発明のモルフォゲン配合物及びＡＣＥＩ配合物はいずれも、共に単一の医薬品組成物として配合されてもよく、２以上の医薬品組成物として分離して配合されてもよい。又、同一の配合物が、特定の必要性又は適切に治療症状に応じて異なる経路で投与されてもよい。
【０３３６】
Ｃ．慢性腎不全の種類；
多くの種類の慢性腎不全疾患が本発明で治療できる。下記記載は単に例示の目的であり、いずれの観点からも本発明を限定するものではない。
本発明は、慢性腎不全又はその危険性のある、又は腎臓の代償療法の必要の危険性のある脊椎動物患者（好ましくは哺乳類動物）の予防及び／又は治療方法及びその予防及び／又は治療へ使用するための医薬品を目的とする。このような患者として、既に慢性腎不全に罹患しているか、既に腎臓の代償療法を受けている、並びに患者が機能している腎単位の進行性損失を伴う腎臓機能の進行性喪失に悩まされることが合理的に期待される患者が挙げられる。特定の患者に危険性があるか否かは、関連する医学的又は獣医学的分野の当業者により通常行われる判断である。慢性腎不全の危険性があるか既に罹患している、又は腎臓の代償療法の必要の危険性のある患者は、下記を含むがこれらに限定されるものではない：慢性腎不全（ＣＲＦ）、末期腎不全（ＥＳＲＤ）、慢性糖尿病性腎障害、糖尿病性腎糸球体症、糖尿病性腎肥大、高血圧性腎硬化症、高血圧性糸球体硬化症、慢性糸球体腎炎、遺伝性腎炎、又は腎臓異形成に罹患していると考えられる患者；糸球体肥大、尿細管肥大、慢性糸球体硬化症、及び／又は慢性尿細管間質硬化症を示す生検結果を有する患者；腎繊維症を示す、超音波、ＮＭＲ、ＣＡＴスキャン、又は他の非侵襲的検査結果を有する患者；尿沈渣中に異常な数のろう様円柱が存在する患者；慢性的に、患者に予定されるＧＦＲの約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満であるＧＦＲを有する患者；慢性的に、約５０ｍｌ／分未満、特に約４０ｍｌ／分未満、３０ｍｌ／分未満又は２０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約５０ｋｇ以上の重量であるヒト男性患者；慢性的に、約４０ｍｌ／分未満、特に約３０ｍｌ／分未満、２０ｍｌ／分未満又は１０ｍｌ／分未満であるＧＦＲを有し、約４０ｋｇ以上の重量であるヒト女性患者；健康である以外は患者と同様である患者が有する機能している腎単位数の約５０％未満、特に約４０％未満、３０％未満又は２０％未満の機能している腎単位数を有する患者；単一の腎臓を有する患者；及び腎臓移植レシピエントである患者。
慢性腎不全（ＣＲＦ）は主要な損傷の部位により下記のように種類分け出来る：腎前性ＣＲＦ、腎後性ＣＲＦ及び腎臓のＣＲＦ。
【０３３７】
腎前性ＣＲＦ；
いくつかの医学的症状が腎臓の連続的低潅流（低血液流）を引き起こし、腎臓萎縮症、ネフロン機能の喪失、及び慢性腎不全（ＣＲＦ）へ至る。これら症状として、低心臓機能、慢性肝臓障害、及び腎臓動脈のアテローム性硬化症（「硬化」）が挙げられる。これら症状はいずれも、腎臓への不適切な血液流（低潅流）の結果である虚血性腎臓病を誘導する。低潅流の結果は、腎臓機能の進行性喪失及び腎臓萎縮症として表われる。腎臓障害はこのプロセスが腎臓対を損傷する結果である。
【０３３８】
腎後性ＣＲＦ；
尿の正常流の妨害は腎臓中に背圧を生成し、ネフロンを損傷し、閉塞性尿路疾患（尿路の疾患）をもたらす。この異常は尿流量を妨害し、下記例示のような腎後性ＣＲＦを引き起こす：
肥大化した前立腺／又は膀胱結石の結果の膀胱排出閉塞症；
神経性膀胱、膀胱から脊髄への伝達神経繊維の損傷により引き起こされた過膨張膀胱；
尿管対中の腎臓結石、それぞれ腎臓から膀胱へ尿が通過する管；
細管閉塞症、腎臓のネフロンの末端経路；
腹膜後線維症、腹腔を覆っている腹膜後部の繊維状組織形成；
膀胱尿管逆流（ＶＵＲ）、膀胱から尿管への尿の逆流。
【０３３９】
腎臓ＣＲＦ；
腎臓中の変化により引き起こされた慢性腎不全は腎臓ＣＲＦといわれ、下記に類型できる：
糖尿病性腎障害、糖尿病を伴う腎臓疾患、最もありふれたＣＲＦの原因；
高血圧腎硬化症、アフリカ系アメリカ人中で高い頻度で見られる症状、ＣＲＦの二番目の原因；
慢性糸球体の腎炎、糸球体を冒す疾患により引き起こされる症状であり、進行性機能障害が発生する；
慢性間質性腎炎、機能障害により引き起こされる症状であり、最後には進行性間質はん痕に至る；
腎臓血管性ＣＲＦ；腎臓動脈狭窄（腎臓へ（血液を）供給する大動脈の狭窄）等の大動脈不全；
脈管炎、小血管の炎症；
嚢胞腎疾患、複数の嚢に特徴を有する腎臓疾患（空洞の覆い又は包）；
腎臓の遺伝性疾患、アルポート症候群（遺伝性腎炎）等。
【０３４０】
上記症状のいくつかの更に詳細な記載を下記に示す。
糖尿病性腎障害は、真性糖尿病（ＤＭ）の結果生じる腎臓疾患である。ＤＭは単に糖尿病とも言われ、米国国民の約５％が罹患している。この疾患は、目、神経、血管、心臓、及び腎臓等の多くの器官を損傷する。ＤＭは米国における最もありふれた腎臓疾患の病因であり、その数は透析を受けている全ての患者の三分の一を超える。
ＤＭ患者は、炭水化物（例えば、食物澱粉、糖類、セルロース）を適切に代謝できない。この疾患は、過剰量の血液中の糖（血糖過多）及び尿中の糖；インスリンの不充分な生成及び／又は利用；及び渇き、飢え、及び体重減少、に特徴を有する。
生命維持のために毎日インスリン注射が必要な糖尿病患者は、インスリン依存性真性糖尿病又はＤＭ１である。この型の糖尿病では、膵臓β細胞は、インスリンをほとんど又は全く分泌せず、血糖濃度は治療なしでは高いままである。ＤＭ１は通常、児童及び若い成人で起こり、しばしば若年性糖尿病と呼ばれる。この疾患の発現は、急性である。患者は非常に重病になり、すぐにインスリン療法を必要とする。米国において約１１００万人がＤＭ１に罹患している。
【０３４１】
ＤＭ１患者の約２５％〜４０％は、最後にはだいたい５つの予定段階を通って進行し、糖尿病性腎障害（ＤＮ）へ至る。段階１（非常に初期の糖尿病）では、腎臓への負荷の増加は、上記正常な糸球体ろ過値（ＧＦＲ）により示される。段階２（糖尿病の進行）では、ＧＦＲは上昇したままであるか、正常に戻るが糸球体の損傷が進行して明白な微量アルブミン尿（尿中の蛋白質アルブミンの正常値よりやや高い）を示す。段階２の患者は、２４時間中の尿中に３０ｍｇを超えるアルブミンを排泄する。明白な微量アルブミン尿は進行して末期腎不全（ＥＳＲＤ）となる。従って、全ての糖尿病患者は、ルーチンで（毎年）微量アルブミン尿の測定を受けるべきである。段階３（明らかな、又は検尿陽性糖尿病）中、糸球体の損傷が進行して臨床的蛋白尿となる。尿は「検尿陽性」であり、２４時間中に３００ｍｇを超えるアルブミンを含有する。高血圧は、通常段階３中で発現する。段階４（後期段階糖尿病）中、糸球体の損傷が続き、尿中蛋白質アルブミン量が増加する。腎臓のろ過能力は着実に衰退し始め、血液尿素窒素（ＢＵＮ）及びクレアチニン（Ｃｒ）は増加し始める。糸球体ろ過値（ＧＦＲ）は一年に約１０％減少する。ほとんど全ての患者は段階４で高血圧である。段階５（末期腎不全、ＥＳＲＤ）中、ＧＦＲは１分当り約１０ミリリットル（＜１０ｍｌ／分）以下に落ち、腎臓の代償療法（即ち、血液透析、腹膜透析、腎臓移植）が必要とされる。ＤＭ１の発現は特定できるためこれら５段階を通過する進行はかなり予測可能であり、多くの患者は年齢関連の医学的問題からは関係ない。
【０３４２】
非インスリン−依存性糖尿病、又はＤＭ２は、主な問題はインスリンの作用に対する抹消（血管）抵抗である点においてＤＭ１とは異なる。ＤＭ２は通常、４０歳を超え、体重が重く、この疾患の家族歴がある成人に発病する。何人かの患者は、減量及び食事改善により、糖尿病を抑える。残りの患者は薬物治療を必要とし、ＤＭ２患者の多くは最後にはインスリンを必要となる。発現は徐々であり、患者はそれと知らずにいつかは病気になる。ほとんど９５％の糖尿病患者はＤＭ２であると診断される。ＤＭ２のおよそ５％〜１５％の症例も又、糖尿病性腎障害（ＤＮ）の５段階を通して進行するが、進行時期は明らかではない。何人かの患者は非常に迅速に各段階を通過して進行する。
【０３４３】
腎臓動脈狭窄（ＲＡＳ）は腎臓へ供給される大動脈の内層の狭窄である。多くのＲＡＳはアテローム性硬化症又は「動脈硬化」により引き起こされる。アテローム性硬化症は、動脈内層へのコレステロール蓄積又はプラークの積み重ねである。狭窄程度に応じて、患者は腎臓血管性高血圧（ＲＶＨ）と言われる高血圧を進行させる。この型の高血圧は、二次性高血圧の最も通常な原因である。実際、高血圧は腎臓障害の原因として糖尿病に次ぐ第二位である。米国では１５％〜２０％の腎臓障害症例は、高血圧が原因である。一方の腎臓へ供給する動脈の臨界狭窄を発生させるときにＲＶＨが起こる。臨界ＲＡＳは、血管造影（血管ｘ−線造影）評価を基礎にした腎臓動脈の７０％以上の狭窄として定義される。腎臓動脈を通る血液流の減少は腎臓からのレニンホルモンのリリース量増加を引き起こす。レニン、強力な血圧調節因子は、最後に高血圧となる一連の化学的出来事を開始する。腎臓血管性高血圧は非常に激しく、調整困難となる。
【０３４４】
ＲＡＳに罹患した腎臓は、減少血液流に悩まされ、しばしば大きさが縮む（萎縮）。このプロセスは虚血性腎臓病と呼ばれる。他の腎臓は、高血圧による発育損傷の危険性があり、しばしば高血圧性腎硬化症へと進行する。この非狭窄性腎臓中で継続的に上昇した血圧は、進行性はん痕（硬化症）を引き起こし、同様にその腎臓のろ過機能の進行性喪失へと結びつく。片側ＲＡＳも両側ＲＡＳも最後には慢性腎不全をもたらす。
２つの型のＲＡＳ：アテローム硬化性腎臓動脈狭窄症（ＡＳ−ＲＡＳ）及び線維性筋性異形成（ＦＭＤ）がある。ＡＳ−ＲＡＳは、腎臓動脈の内層上のコレステロールの蓄積が原因である。それはＦＭＤ−ＲＡＳの異常症例よりも更に非常に普通に見られる。ＦＭＤ−ＲＡＳは、ほとんど３０〜４０才代の女性のみであり、まれにアフリカ系アメリカ人又はアジア人に発生する。ＦＭＤ−ＲＡＳは、腎臓動脈の内層筋肉中の異常性を原因とする。しばしばＦＭＤＲＡＳの家族の病歴がある。
【０３４５】
嚢胞腎疾患は、流体充填嚢が腎臓中の中に形成される幾つかの症状を示す。嚢は一般的に、尿を糸球体から移動させる細管の弱い分節中に成長する。嚢の成長により、健康な腎臓組織は置き換えられる。腎臓は、２０ポンド（約９ｋｇ）程度の重量となることもある嚢を保持するために膨張する。下記３つの因子が嚢の性格を決定する：原因（後発的、先天的）、特徴（複合性、単純性、複数、単一）、及び位置（外側［皮質性］又は内側［骨髄性］腎臓組織）。
【０３４６】
多嚢胞腎疾患（ＰＫＤ；通常、腎臓中の複数嚢）は主要な嚢胞腎疾患である。ＰＫＤタイプ１及びＰＫＤタイプ２は、それぞれクロモソーム１６及び４上の常染色体優性変異により引き起こされる家族病である。ＰＫＤ常染色体劣性は、クロモソーム６に結合している。多嚢胞腎疾患（ＰＫＤ）は最もしばしば見られる遺伝性疾患である；米国において約６０００００人世界中で１２００００００人以上がそれに罹患している。大部分は常染色体優性型患者である。それは腎臓障害の原因の第４位であり、１０％の全末期腎不全（ＥＳＲＤ）を通常４０〜６０才で引き起こす。それは男性、女性、及び種族に関係なく発病する。
【０３４７】
二次性嚢胞腎疾患として下記後発的な嚢胞腎疾患（ＡＣＫＤ）が挙げられる；骨髄性包嚢性疾患（腎臓内部）、例えば、若年性ネフロンろう（ｎｅｐｈｒｏｎｏｐｈｔｈｉｓｉｓ、未成年期中）及び骨髄性スポンジ腎臓（嚢を含む腎臓の悪化）；及び嚢に関係する腎臓細胞癌。
常染色体優性骨髄性嚢胞腎疾患（ＭＣＫ）は、内部の腎臓組織中で形成され、非常に若年で進行する嚢を引き起こす。劣性若年ネフロンろうは通常ＭＣＫよりも遅く発生するが、慢性腎不全及び成長問題を含む同様な症状を伴う。内部の腎臓の集合管中の小嚢は、骨髄性スポンジ腎臓（ＭＳＫ）を特徴づけ、それは血尿及び腎臓結石を伴うが慢性腎不全（ＣＦＲ）ではない。
後発的な嚢胞腎疾患（ＡＣＫＤ）は患者を慢性腎不全にし、血尿、赤血球増加（赤い血液細胞の増加）を引き起こし、癌の発生を伴う。後発的な嚢胞腎疾患（ＡＣＫＤ）の原因は、長期間の疾患（糸球体腎炎）及びしばしば透析の結果のはん痕（ｓｃａｒｒｉｎｇ）である。ＡＣＫＤは、慢性腎不全（ＣＲＦ）患者によく見られる。５年以上透析を続けているほとんど全ての患者はＡＣＫＤに罹患する。
【０３４８】
蛋白尿は、異常に多量の尿中蛋白質をいう。アルブミン及び免疫グロブリン等の血中蛋白質は、凝固（クロット）、体液バランス、及び抗感染を助ける。腎臓は蛋白質リッチ血液から老廃物を数百万の糸球体と言われる微細なろ過スクリーンを通して除去する。多くの蛋白質は非常に大きいため糸球を通して尿へ通過できない。糸球体は負に荷電されるため、負に帯電した蛋白質を排除する。従って、サイズ及び荷電バリアは蛋白質分子が尿へ入ることを防止している。しかし糸球が損傷した場合、種々のサイズの蛋白質がそれら糸球を通って尿中へ排出される。
【０３４９】
下記に蛋白尿を、２４時間尿採取中に測定した蛋白質のミリグラム（ｍｇ）で５種に分けた：
１．微量アルブミン尿；３０〜１５０ｍｇ、
２．マイルド；１５０〜５００ｍｇ、
３．中程度；５００〜１０００ｍｇ、
４．重度；１０００〜３０００ｍｇ、
５．ネフローゼ域；３５００ｍｇ以上。
【０３５０】
腎臓疾患が進行するに従い、更に蛋白質は尿中に含まれるようになる。ネフローゼ域蛋白尿患者は、通常広い範囲の糸球体損傷を有し、通常ネフローゼ症候群（下記参照）を発現する。
高血圧及び糖尿病は、蛋白尿の２つの最も大きな危険因子である。加齢及び体重増加も同様に、その危険を増大させる。下記症状は蛋白尿を引き起こす：急性糸球体腎炎；アミロイドーシス（慢性疾患を伴う蛋白質蓄積）；巣状糸球体腎炎；高血圧；ＩｇＡ腎臓病；メサンギウム増殖；最小数の変化疾患。
多泡尿及びむくみ（水腫）は蛋白尿の２つの徴候であり、疾患が進行するに従い更に顕著になる。過剰の蛋白質は水中で尿を泡だたせる。これは蛋白質が尿及び水間の表面張力を変化させるために起こる。水腫は通常ネフローゼ域蛋白尿でのみ発生する。
【０３５１】
アルブミンは体液を血液中へ吸収するために特に有用である。アルブミン分子は比較的小さいため、それはしばしば糸球が損傷された後に尿中へ混じる最初の蛋白質である。従って、小さな腎臓機能障害でも微量アルブミン尿の適切な診断で測定できる。血液中のアルブミンレベルの減少は液体滞留（閉尿）及びむくみを引き起こし、それは最初に手、下肢、及び足の裏で明らかになる。更に重い症例では、腹部及び顔面がむくむ。
【０３５２】
起立性蛋白尿は、時折児童及び若い成人に見られる機能障害であり、直立（起立性）した時に顕著な量の尿を漏出する。おそらく、起立は糸球への圧力を増加させ、蛋白質が更に尿中へ入ることを促進する、一方、寝ている状態は圧力を緩和し、蛋白質漏出を低下させる。これは多くの若い人々に起こる良性機能障害である。
蛋白尿が進行する高血圧患者では、腎臓障害が非常に起こりやすい。アフリカ系アメリカ人はコーカサス系人種より約２０倍多く高血圧関連腎臓障害に罹患する。糖尿病患者の蛋白尿は、腎臓疾患が悪化した徴候である。微量アルブミン尿は、しばしば心臓動脈疾患（ＣＡＤ）の虞があるとされ、しばしばＣＡＤ及び関連する心臓血管症状の診断指標である。
【０３５３】
ネフローゼ症候群（ＮＳ）は、腎臓のろ過系、即ち糸球を損傷する疾患群のいずれかによりしばしば引き起こされる症状である。糸球の構造は、多くの蛋白質がろ過を通過して尿中へ入ることを防止する。健康人は、２４時間内に１５０ｍｇ未満の蛋白質を尿中に失う。ネフローゼ域蛋白尿は、３．５グラム以上又は正常値の２５倍量の蛋白質が２４時間中に排尿されることであり、ＮＳの主要な指標である。
１００００人に約２人は、ネフローゼ症候群を示す。その症状は通常潜在する疾患の結果であるためにネフローゼ症候群罹患率は、成人では確定することは困難である。児童では、通常２及び３才間では少女より少年の方が罹患しやすい。
【０３５４】
更に蛋白尿には、尿へ漏出する蛋白質を伴うネフローゼ症候群には下記３つの主症状がある：低アルブミン症（血液中の低濃度のアルブミン）；水腫（むくみ）；高コレステロール血症（血液中高濃度のコレステロール）。
低アルブミン症は蛋白尿を原因とする血液中の低濃度のアルブミン（蛋白質）である。血液中の低アルブミンは血液から組織への流体の移動を引き起こし、むくみを引き起こす。腎臓は血液中の流体の減少を感知し、積極的に出来る限り多くの流体及び塩を残そうとする。これは体を流体過剰負荷状態とするのに寄与する。
ネフローゼ関連のむくみは組織をふくらませ、柔らかく、触ると可塑化するようにする。水腫は多くは、特に一日中立っていた後の肢及び足の裏で通常起きる。それは四肢中中の窮屈な感じを引き起こし、移動性に影響する。より後の段階で、むくみは朝、腹部（腹水）、手、及び目の周囲に起こる（眼窩周囲水腫という）。更に後の段階で、身体全体がむくむ（全体浮腫）。何人かの患者は、流体がそれらの体内に長期間蓄積した後は体重が増加する。
【０３５５】
高コレステロール血症、血液の高いコレステロールはネフローゼ症候群ではありふれている。アルブミンに加え、コレステロール新陳代謝に含まれる他の重要な酵素も、糸球を通過して排出され、高い血液コレステロールに寄与する。
ネフローゼ症候群は腎臓障害を伴う。ＮＳを引き起こす疾患は、糸球を損傷し、血液を清浄化するそれらの能力を妨害する。下肢内に起こる水腫は又腎臓組織それ自身中にも発生し、腎臓の血液を清浄化する能力を妨害する。腎臓障害は徐々に（ＣＲＦ）又は急性（ＡＲＦ）でも起こりうる。
【０３５６】
血液が異常にオーバークロットする凝固能亢進状態も又何人かのＮＳ患者に見られる。これは彼らの下肢又は血液を腎臓から移動させる腎臓静脈中に血液クロットが発育する危険性のあることを意味する。一部の患者は血液を薄くしてこの合併症を予防する。
ＮＳを引き起こす多くの異なる機能障害がある。糖尿病及び、より低い範囲では高血圧が糸球への損傷拡散を引き起こし、最後にはＮＳをもたらす。下記疾患は糸球へ特定の損傷を引き起こし、しばしば重度の蛋白尿の発生及び多くのＮＳ例へ至る：アミロイドーシス（繊維状蛋白質の組織内蓄積による腎臓の硬化及びそれに続く機能不全）；先天的ネフローゼ；巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）（糸球体中の傷組織を発生し、その蛋白質排除膜を損傷する）；糸球体腎炎（ＧＮ）、例えばメサンギウム増殖性糸球体腎炎ＧＮ（メサンギウムを冒す）、膜性（蛋白質−排除膜を損傷する）、及び後感染性（感染後に発生する）；ＩｇＡ腎臓病（バージャー病）（炎症性反応を引き起こし糸球体腎炎となる特定の免疫グロブリンＡの蓄積）；微少変化群疾患（リポイドネフローゼ）；及び子癇（しかん）前症（まれにＮＳを伴い、更にしばしば重症の蛋白尿を伴う）。
【０３５７】
多くのこれら疾患は、更にしばしば特定の年齢群で起こりやすい。１才未満は先天的ネフローゼ、１５歳未満は微少変化群、ＦＳＧＳ及びその他、１５〜４０才は微少変化群、ＦＳＧＳ及びその他、４０才以上は膜性ＧＮ、及び糖尿病性腎障害、６０才以上はアミロイドーシスが症例の２０％までを占める。
更に、腎臓への物理的損傷（腎臓の一つの喪失及び他の損傷等）及び、機能性ネフロン（糸球体及び対応するろ過単位からなる細管）の総数を損なう疾患のための腎臓機能の完全又は部分喪失等の他の同様な状態は、残っている機能性ネフロンが超ろ過（血液の過度のろ過）により腎臓の損傷を代償する「試み」を引き起こす。そして次第に、超ろ過は更なる腎臓機能の損失を引き起こし、慢性腎不全となる。
【実施例】
【０３５８】
本発明の実施、並びに追加的な好ましい範囲及び及び具体例は、下記実施例から更に完全に理解されるが、下記記載は例示のためであり本発明を限定するものではない。
下記実施例では、「ＯＰ−１」は、「ｓＢＭＰ−７」と区別なく使用できる。
【０３５９】
実施例１、腎臓摘出手術慢性腎不全損傷モデル；
部分（５／６）腎臓摘出手術を受けたラット又は残遺腎臓モデル（ＲＲＫＭ）ラットのモデルは、（Ｖｕｋｉｃｅｖｉｃら（１９８７）Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｒｅｓ．２：５３３、その全ての内容をここで資料として使用する。）に実質的に記載されているものを使用した。オスＭｕｎｉｃｈ−Ｗｉｓｔａｒラット（２〜３月齢、重量約２００〜２５０ｇ）に腎臓塊除去手術を行なった。特に、右腎臓を、腎臓の三分の一が残され潅流するように（５／６ＮＰＸ、図１２参照）左腎臓動脈枝の選択的結紮（けっさつ）により切除した。手術直後に、腎臓塊及び機能の喪失のために血漿クレアチニン及びＢＵＮ濃度が劇的に上昇した。この「急性」障害段階の次の数週間で、生存した動物の血漿クレアチニン及びＢＵＮ濃度はなんとか標準値まで低下しだしたが、やはり高いままであった。次に腎臓機能は可変的な期間中比較的一定又は安定であった。この状態の後、動物は腎臓機能の実質的な直線的衰退のある慢性腎不全期間に入り、死亡へ至った。これらの理由で、動物へは治療の開始に先立ち４週の回復期間を与えた。
【０３６０】
腎臓摘出手術４週後、ラットは４つの治療群へ分けた（参照表ＩＩＩ）、即ちＯＰ−１（１５０μｇ／ｋｇ体重、３×／週、ｉ．ｐ．注射による）、賦形剤（ｖｅｈｉｃｌｅ）（２０ｍＭアルギニン／１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％商標「Ｔｗｅｅｎ−８０」、ｐＨ９．０、１ｍｌ／ｋｇ体重、３×／週、注射による）、エナラプリル（１００ｍｇ／Ｌ飲料水、８〜１６ｍｇ／ｋｇ体重）、及びＯＰ−１及びエナラプリル。最初の２つの群では（ＯＰ−１及び賦形剤）、動物を腎臓摘出手術後１４週で犠牲にした。残りの２つの群では（エナラプリル、及びＯＰ−１及びエナラプリル）、動物を腎臓摘出手術後２６週で犠牲にした。外科コントロールとして、ラットへ腎臓は被膜剥離されたが腎臓組織を切除しない「擬似」操作を行なった。擬似−治療した動物を手術後２６週で犠牲にした。この研究中ラットはいずれの群でも死ななかった。収縮血圧、尿蛋白質及び／又は糸球体硬化症は、手術後４〜２６週間隔で監視された。
【０３６１】
【表７】
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【０３６２】
擬似操作したコントロールに比べると、動物は腎臓摘出手術後、高い血圧及び高い蛋白尿症状を示した。腎臓摘出手術後１４週後で、ＯＰ−１は血圧レベル（図１３参照）を劇的に低くしない一方、ＯＰ−１は蛋白尿レベルを顕著に減少させた、即ち９１ｍｇ／日に対し７１ｍｇ／日（Ｐ＜０．０５）（図１４参照）。動物がＯＰ−１及びエナラプリルを共投与された場合、ＡＣＥ阻害薬エナラプリル単独治療した動物に比べて、腎臓摘出された動物は、血圧を標準的レベルまで減少させることに追加的な効果はなかった（図１５参照）。しかし、ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせは、エナラプリル単独よりも蛋白尿レベルを減少させることに有効であった、即ち６２ｍｇ／日に対し１０５ｍｇ／日（図１６参照）。
結論として、腎臓摘出手術慢性腎不全損傷モデルの結果は、ＯＰ−１が糸球体ろ過値を改良し、糸球体硬化症を減少させ、蛋白尿を減少させることを示す。ＯＰ−１及びエナラプリルの共投与はエナラプリル単独よりも遅い段階で蛋白尿減少させ、従って腎臓機能へより良い効果を有する。
【０３６３】
実施例２、片側尿管閉塞症（ＵＵＯ）腎繊維症モデル；
このＵＵＯモデルは、（Ｍｏｌｌｅｒら（１９８４）ＶｉｒｃｈｏｗｓＡｒｃｈ４０２：２０９−２３７、その全ての内容をここで資料として使用する。）に実質的に記載されているものを使用した。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（約２５０ｇ）を擬似操作（尿管に対して手術されるが結紮されない）又は片側尿管性結紮のいずれかを行なった。５ｍｍ離れた２つの結紮を尿管周囲に巻いたポリエチレンチューブ部位の上の尿管の上部三分の二に行なった（図１７参照）。尿管を遮断するために結ばれた縫合糸を第５日にチューブと共に除去し、閉塞を解いた。このモデルでは、高血圧、蛋白尿、及び脂質調節不全は進行性ネフロン破壊には影響せず、糸球体の損傷は、損傷が生成される過程での初期には顕著ではない。尿毒症は、遮断された腎臓が破壊されるに従い肥大及び過形成を受ける反対側の腎臓の機能により避けられる。ＵＵＯの腎臓の損傷の一部は腎臓のアンギオテンシンＩＩ生成の刺激を通して介在され、尿中細管間質炎症及び繊維症を最高潮にする事件のカスケード中でのタイプ−１Ａ−ＩＩレセプター及び下流ＴＧＦ−βを活性化する。ＡＣＥ阻害薬によるアンギオテンシンＩＩ生成の阻止（又はＡ−ＩＩレセプターの阻止）は、繊維症を伴う腎臓の間質部の拡大を減少させる。
【０３６４】
腎繊維症へのＯＰ−１の効能は、（Ｈｒｕｓｋａら（２０００）Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２７９：Ｆ１３０−４３、ここで資料として使用する。）に公開されており、その概要は下記の通りである。ＯＰ−１の投与（１００又は３００μｇ／ｋｇ体重）は、閉塞後最初の５日間中の間質性炎症及び線維形成を予防した。ＡＣＥ阻止（エナラプリル治療による）に比べて、ＯＰ−１は尿細管間質繊維症の予防及び腎臓機能の維持に更に有効であった（図１８参照）。ＯＰ−１誘発された腎臓の保護機構は、尿細管萎縮症の予防を伴い、その効能はエナラプリルとは一緒ではなかった（図１９参照）。ＯＰ−１は、ＵＵＯにより生成した上皮細胞アポトーシスの刺激をブロックし、それは尿細管上皮の完全性の維持を促進した。ＯＰ−１はＵＵＯ中腎臓の血液流（ＲＢＦ）を保存したが、エナラプリルも又ＲＢＦを刺激した。ＯＰ−１はイヌリンクリアランス値に示される糸球体ろ過値の改善においてエナラプリルよりも更に有効であった（図２０参照）。ＯＰ−１は又、ＵＵＯの腎臓の損傷により刺激された尿細管上皮分断を阻止した。ＯＰ−１の追加的な効能がこのラットＵＵＯモデル中に観察された。例えば、ＯＰ−１はＡＣＥ阻害薬ではないが、約２４％から約１６％まで（ＯＰ−１、１００μｇ／ｋｇ）又は約１３％（ＯＰ−１、３００μｇ／ｋｇ）（Ｐ＜０．０１）、顕著に腎臓中の骨髄性組織の喪失を減少させた（図２１参照）。
結論として、ＵＵＯ腎繊維症モデルからの結果は、ＯＰ−１は腎繊維症を減少させ、糸球体ろ過値を増加させ、尿細管萎縮症及び骨髄壊死を減少させることを示した。ＯＰ−１はエナラプリルよりも更に効果的である。しかし、ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせは、腎臓機能へ添加的効果を有する。
【０３６５】
実施例３、ストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害モデル；
腎臓病はＩ型真性糖尿病の最も通常かつ多い重度合併症のひとつである。腎臓の合併は通常、腎肥大及び糸球体の超ろ過で開始され、それは糖尿病発現後すぐに観察される（Ｍｏｇｅｎｓｅｎら（１９９４）「糖尿病治療」１７：７７０−７７５）。糸球体の超ろ過は、しばしば腎臓の機能性維持の喪失を伴う。数年後、微量アルブミン尿（３０〜３００ｍｇ／日）が始まり、糸球体の基底膜及びメサンギウム拡大の密集等の形態的変化も始まる。アルブミン漏出は更に悪化し、糖尿病の発現後通常１０〜２０年で蛋白尿（＞３００ｍｇ／日）を伴う明らかな腎臓病が起こる。この時、高血圧は更に定常的になる。ネフローゼ症候群が起き、糸球体ろ過値は減少する。最も重要な治療的手段が、血糖制御及び標準血圧の改良を目的として腎臓病の進行を回避又は遅延させるために採用される。ＡＣＥ阻害薬は後者の観点から有効であることが示された。
【０３６６】
ストレプトゾトシンは膵臓のβ細胞を死滅させ、Ｉ型糖尿病を誘起する（参考、Ｃｈｅｔａら（１９９８）Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ１１：１１−９参照）。それは動物に実験室的糖尿病性腎障害を誘起するために広く使用されている（図２２参照）。メスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ成ラット（重量２００〜２５０ｇ）の腹腔内にストレプトゾトシン（６０ｍｇ／ｋｇ体重）を注入して血糖過多を誘起した。この超血糖ラットに毎日インスリン注射をして血液ブドウ糖を２００〜４００ｍｇ／ｄＬに維持した。第１６週に腎臓機能が衰退した時、動物を週１回ＯＰ−１（１０、３０又は１００μｇ／ｋｇ体重）、エナラプリル（５０又は１００ｍｇ／Ｌ飲料水）又はＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせで治療した。ストレプトゾトシン治療なしのコントロール動物を治療した動物と全ての他の手順で同じに取り扱った。動物をストレプトゾトシン治療後第３２週で犠牲にした。
【０３６７】
ストレプトゾトシン治療した動物は、低い糸球体ろ過値及び高い蛋白尿レベルを示した。図２３のように、ＯＰ−１はエナラプリルと異なり、顕著に糸球体ろ過値（ＧＦＲ）を増加させた。第３２週の糖尿病性動物の平均ＧＦＲが約０．３８ｍｌ／分／１００ｇ体重である一方、１００μｇ／ｋｇのＯＰ−１で治療した動物の平均ＧＦＲは約０．７ｍｌ／分／１００ｇ体重（Ｐ＜０．０５）であった。ＯＰ−１及びエナラプリルを共投与された動物の平均ＧＦＲはやはり高かった、約０．７５ｍｌ／分／１００ｇ体重（Ｐ＜０．０５）。図２４のように、ＯＰ−１（３０及び１００μｇ／ｋｇ）、エナラプリル（５０及び１００ｍｇ／Ｌ）又はＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせは、顕著に蛋白尿レベルを約１４０ｍｇ／日からほとんど標準的レベルまで減少させた。
結論として、ストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害モデルの結果は、ＯＰ−１は糸球体ろ過値を増加し、蛋白尿を減少させることを示した。ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせ治療は、腎臓機能に対するよりよい効能を有する。
【０３６８】
実施例４、アロキサン誘発された糖尿病性腎障害モデル；
ストレプトゾトシンと同様に、アロキサンは膵臓のβ細胞を死滅させ、Ｉ型糖尿病を誘起した（参考、Ｃｈｅｔａら（１９９８）Ｊ  Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ１１：１１−９参照）。アロキサンも又、動物に実験的糖尿病性腎障害を誘起するために広く使用されている（図２５参照）。メスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ成ラット（重量２００〜２５０ｇ）の腹腔内にアロキサン（７０ｍｇ／ｋｇ体重）を注入して血糖過多を誘起した。腎臓動脈を直接的腎臓毒性を予防するため注射直前にクランプし、次にクランプを注射後５分で除去した。第１６週に腎臓機能が衰退した時、動物をＯＰ−１（１０μｇ／ｋｇ体重、３×／週、又は３０μｇ／ｋｇ体重、１×／週）、エナラプリル（１００ｍｇ／Ｌ飲料水）又はＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせで治療した。アロキサン治療なしのコントロール動物を治療した動物と全ての他の手順で同じに取り扱った。治療持続時間は１２週であった。全てのラットを２６週後に犠牲にした。
【０３６９】
アロキサン治療した動物は、治療後１２週で高い血清クレアチニン濃度及び高い蛋白尿を示した。図２６のように、ＯＰ−１（１０又は３０μｇ／ｋｇ）は劇的に約１１５μモル／Ｌから約６５μモル／Ｌ又は５５μモル／Ｌ（Ｐ＜０．０１）まで血清クレアチニン濃度を減少させた。ＯＰ−１に比べて、エナラプリルは血清クレアチニン濃度をより少ない程度で減少させた。ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせも又顕著に血清クレアチニン濃度を減少させた。図２７のように、ＯＰ−１（１０又は３０μｇ／ｋｇ）又はエナラプリルは蛋白尿レベルを、それぞれ約１８０ｍｇ／ｄＬ／２４ｈｒから約８０（又は１１０）又は１４０ｍｇ／ｄＬ／２４ｈｒまで減少させた。反対に、ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせは非常に効果的に劇的に、蛋白尿レベルを約３０ｍｇ／ｄＬ／２４ｈｒ（Ｐ＜０．０１）の低さまで減少させた。
結論として、アロキサン誘発された糖尿病性腎障害モデルの結果は、ＯＰ−１又はエナラプリルは血清クレアチニン濃度を減少させ、蛋白尿レベルを減少させることを示した。ＯＰ−１及びエナラプリルの組み合わせ治療は、腎臓機能に対するよりよい効能を有する。
【０３７０】
実施例５、骨形態発生蛋白質−７（ＢＭＰ−７）、糖尿病性腎障害の新規な効果的治療；
概略；
長期間の糖尿病性腎障害のストレプトゾトシンモデルを試験に使用し、ＢＭＰ−７の治療効果をエナラプリルのそれと比較した。研究デザインは、糸球体肥大及び蛋白尿が確立される時である第１６週に開始される治療プロトコルであった。ＢＭＰ−７（１０、３０、又は１００μｇ／ｋｇｉｖ、ｂｗ）での治療の効能を、極量のエナラプリル（２０ｍｇ／ｋｇ）及び賦形剤コントロールと比較した。最大量のＢＭＰ−７及びエナラプリルは腎臓肥大を同様に部分的に逆転させた。ＢＭＰ−７、１００μｇ／ｋｇで治療した糖尿病性ラットで３２週のＧＦＲは、賦形剤治療した糖尿病性ラットより顕著に高かった、０．７＋０．０８に対し０．３４＋０．０２ｍｌ／分／１００ｇ（ＢＷ）（Ｐ＜０．０５）。３２週エナラプリル治療した糖尿病性ラットのＧＦＲは０．５８＋０．０６（賦形剤治療及び擬似注入されたラット０．５５＋０．０２に比べて顕著ではない）であった。蛋白尿はＢＭＰ−７により、投与量依存態様で標準まで逆転した。
【０３７１】
中間量のＢＭＰ−７による蛋白尿の減少は、エナラプリル治療の効能と同様である。糸球体面積及び間隙体積はＢＭＰ−７及びエナラプリル治療した動物では顕著に減少した。糸球体硬化症はＢＭＰ−７治療によりエナラプリルよりも有効に予防された。ＢＭＰ−７治療の機構に対する最初の洞察は、血圧の分析により形成された。エナラプリルは治療中ずっと高血圧を調節したが、ＢＭＰ−７は治療の最後の４週まで血圧へ有効ではなかった。重要な機械論的洞察が失われた上皮細胞分化は、超血糖で賦形剤治療した糖尿病性ラットでの喪失により腎臓中でのＢＭＰ−７発現を示した実例から示された。一方、別の発生的モルフォゲン、Ｗｎｔ４、は広く発現した。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は、Ｗｎｔ４発現へ影響せずに集合管中で高濃度でＢＭＰ−７発現を回復した。発明者はＢＭＰ−７は、糸球体肥大及び損傷で誘発された糖尿病性及び血糖過多を逆転し、ＧＦＲ、糸球体組織中の蛋白質排出を回復して標準に近づけ、一般的にエナラプリルより優れている結果を得た。集合管表現型の保存を表すＢＭＰ−７発現の修復は、標準発生的Ｗｎｔ４が相互作用する相手を回復した。これは、修復反応の成功及び失敗した損傷反応の逆転を伴った。
【０３７２】
序論；
最近の研究により、腎臓の尿細管発生的モルフォゲン、骨形態発生的蛋白質−７（ＢＭＰ−７）は、閉塞性尿路疾患により刺激された尿細管間質腎炎の予防に有効であるという驚くべき観察がなされた（１）。作用の機構は、上皮細胞表現型の保存、上皮−間葉トランス分化の阻止、及び損傷誘発された上皮細胞アポトーシスの阻止、であることが示された。これらＢＭＰ−７の作用は、モルフォゲンが発生中に行う効果を思わせる
脊椎動物の発生中、恒久的腎臓は尿管芽と後腎間葉との相互作用により生成される（２、３）。マウス受胎後（ｄｐｃ）１１日に、尿管芽が伸びて後腎間葉へ侵入する。その後、腎形成がこれら２つの組織間の相互誘導的相互作用により起こる。後腎間葉は尿管芽が成長し、分枝して集合管を形成するのを誘起する。同時に、尿管芽からの許容可能な生存シグナルが間葉シグナルと相互作用し、後腎間葉の上皮構造への転換を誘起する。上皮化がｐｃ１１．５日に尿管芽周囲に密集して起こり、凝縮された間葉は前尿細管集合体中へ分離しながら進行する。これら集合体の上皮化は、コンマ形状体（Ｓ字形状体）の発生、最後には糸球体の有足突起を含むネフロンの上皮成分の発生を引き起こす。
【０３７３】
ＢＭＰ−７は後腎間葉の凝縮及び上皮化、及び集合管分化の相互誘導へ導く目的の因子であることが示された（４〜６）。それは、第１１．５日に尿管芽中及び間葉凝縮中に発現する。ＢＭＰ−７はその欠如で１２．５及び１４．５日ｄｐｃ間に死亡する間葉細胞の凝縮の生存因子である（４）。第１２日ｐｃに、ＢＭＰ−７の欠如で、糸球体形成は間葉細胞アポトーシスとして停止する。ＢＭＰ−７は別の臨界尿細管誘起性モルフォゲン、Ｗｎｔ４と相互作用する（７）（８）。Ｗｎｔ４の発現は、第１２．５日に凝集間葉及び前尿細管集合体中で開始する。それは上皮形成誘起性シグナルとして必要である（７）。出生時に、ＢＭＰ−７遺伝子欠失腎臓は、間質性細胞、細胞外のマトリックス域により分離された非常に拡張された集合管を有し、劣性、形成不全及び包嚢性である。それらの腎臓は水腎性であり、後腎間葉を持たないか、皮質性腎形成性域中に糸球体形成の証拠を示さない（４、５）。嚢は尿管芽の誘導体から由来し、細胞サイクルの異常活性及びこれら細胞中の乱れた極性を示す。糸球体密度は、より大きい通常腎臓中の１００／断面（セクション）に比べ３未満／断面である（８）。一方、Ｗｎｔ４遺伝子欠失腎臓も又、形成異常及び水腎性であるが、完全に糸球体を欠いている（８）。
【０３７４】
多くの他のモルフォゲンに比較して、尿管芽由来の尿中細管上皮分節中のＢＭＰ−７の発現は、下記その発生的誘起性作用を停止せず、むしろその発現は存続し、集合管上皮細胞分化因子として生理学的に機能しやすい。このように、それはＧ１チェックポイントでの細胞サイクルの進行をブロックして増殖を阻止し、アポトーシスを予防する（１、９）。
組織損傷はしばしば、生存組織細胞の細胞サイクル中への参加を含む発生の総括である修復の試みを刺激する。これは、多分それらのレベルの減少により克服される分化因子の作用を必要とする。次に、キー因子の欠如は、これら試みられた修復を線維性プロセスに対して無効にし、その結果初期組織の恒久的喪失を生じる。損傷修復の不成功は、排泄機能の喪失をもたらす多くの腎不全を特徴づける。最近、高ブドウ糖レベルにより発生するものを含む腎臓の損傷は、ＢＭＰ−７レベルを減少させることを示した（１、１０〜１２）。ＢＭＰ−７を使用したこれら損傷の治療の一種は、腎臓の尿細管萎縮症及び上皮細胞アポトーシスを予防した。尿細管発生障害及び間葉アポトーシスは、ＢＭＰ−７遺伝子欠失状態の「発生」の形態である。
【０３７５】
ここで、ＢＭＰ−７が糖尿病性腎障害の効果的治療であることを基礎とする研究の結果を報告する。糖尿病により刺激された腎臓の損傷の新機構、即ち、発生中ＢＭＰ−７と相互作用する臨界尿細管上皮誘起性シグナル（Ｗｎｔ４）の再発現、の発見を報告する。Ｗｎｔ４が、尿細管間質繊維症を刺激し、その糖尿病性超血糖損傷中の再発現は商標「ＴＧＦ」との相乗（協力）作用の機構であり、損傷修復反応の失敗及び疾患の促進の結果を生じることは公知である。ＢＭＰ−７による糖尿病性腎障害の治療は、糖尿病及び血糖過多により誘発された腎臓の損傷を部分的に逆転させ、糸球体硬化症の発生を予防する。ＢＭＰ−７の作用を、公知の糖尿病性腎障害の治療薬−アンギオテンシン転換酵素阻害薬と比べた。両方の薬剤共有効であったが、ＢＭＰ−７は蛋白尿の逆転及び糸球体硬化症の予防に更に有効であった。糖尿病性損傷は、ＢＭＰ−７発現の喪失により引き起こされる尿細管上皮及び糸球体の有足突起表現型の喪失を生じ、ＢＭＰ−７での治療は、ＢＭＰ−７発現の修復により引き起こされる集合管の表現型を回復した。ＢＭＰ−７は次に、Ｗｎｔ４との相互作用及び商標「ＴＧＦ」の作用の阻止により可能な修復反応の成功を刺激した。
【０３７６】
物質及び方法
動物：メスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット１０週齢重量１９０〜２２０ｇを使用した。動物へ標準的ラット餌及び水道水を自由に与えた。標準食塩水中に溶解したストレプトゾトシンを単回の尾静脈注射（ＳＴＺ６２ｍｇ／ｋｇ体重、Ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐａｎｙ社製、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）して第０日に真性糖尿病を誘発した。７２時間後、血液ブドウ糖濃度＞３００ｍｇ／ｄｌであることを確認して糖尿病状態であると決定した。第３日から、全ての糖尿病性ラットへ１．０〜７．０ｕヒト組み換え型長時間作用型インスリン注射（ＥｌｉＬｉｌｌｙ＆Ｃｏ．社製、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＤ）を血液ブドウ糖濃度を３００〜５００ｍｇ／ｄｌ間に維持するために毎日皮下注射をした。尾血中ブドウ糖濃度を「ＡｃｃｕＣｈｅｋ  ＴＭ  Ａｄｖａｎｔａｇｅｍｅｔｅｒ」（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社製、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）で週２回測定した。体重を週一回測定した。食物及び水摂取を毎日監視した。
【０３７７】
賦形剤、ＢＭＰ−７、又はエナラプリルでの治療前１６週で、腎臓肥大がかなり進行した。１６週で、動物を８群に分割した。群１を１６週のＤＭとした。群２を１６週の標準コントロールとした。群３のＤＭ動物を、賦形剤週２回、１６週の尾静脈注射で治療した。群４、群５、及び群６のＤＭ動物を、ＢＭＰ−７１００、３０、及び１０μｇ／ｋｇ体重それぞれ週２回、１６週の尾静脈注射で治療した。群７を飲料水経由エナラプリル２０ｍｇ／ｋｇ、１６週で治療した。群８動物は、３２週で糖尿病性動物に比べた標準コントロールである。群１及び群２動物を１６週で犠牲にした。残りは３２週で犠牲にした。全ての治療は１６週で開始し、３２週まで継続した。糸球体ろ過値（ＧＦＲ）、尿アルブミン排泄、腎臓重量、糸球体面積、メサンギウムマトリックス面積、間隙体積、単核細胞及びマクロファージ湿潤、糸球体の基底膜（ＧＢＭ）及び糸球体硬化体の密集（凝集）性を測定した。
腎臓機能：全ての動物中、糸球体ろ過値（ＧＦＲ）をイヌリンクリアランスとして測定した。ラットをケタミン／Ｘｙｌｏｚｉｎｅ混合液で麻酔した。カテーテルを解剖顕微鏡下で注入用に大腿骨静脈中に挿入した。別のカテーテルを大腿骨動脈中に血液サンプル採取用に入れた。尿を膀胱カニューレにより採取した。
【０３７８】
手術完了後、２ｍｌ／ｋｇの３％イヌリン（Ｃｙｐｒｏｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ社製、Ｗ．Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）及び０．２％ｐ−アミノ馬尿酸塩（ＰＡＨ）の標準食塩水溶液のボーラスを初期負荷として注入し、次に同一の溶液を速度８ｍｌ／ｈ．ｋｇで持続的に注入した。１時間の平衡後、尿採取を３回２０分採取時間で開始した。動脈血液サンプルをそれぞれのクリアランス時間中得た。血漿及び尿をイヌリン分析した。
【０３７９】
尿蛋白質排出：クリアランス試験前に、ラットを代謝用個別の檻内に２回、２４時間尿採取用に入れた。尿体積を測定し、尿蛋白質濃度をＢｉｏ−Ｒａｄ蛋白質アッセイで測定した。
腎臓の医薬品：クリアランス研究後、ラットを安楽死させた。腎臓対をただちに取り出し氷冷リン酸バッファ食塩水（ＰＢＳ）中に入れた。腎臓の体重を測定し次に冷ガラス板上でスライスした。２つの２ｍｍ冠状切断を「Ｈｉｓｔｏｃｈｏｉｃｅ」中及び１０％バッファホルマリン中に浸した。腎臓断面パラフィン中に包埋し、３μｍで切断し、ヘマトキシリン及びエオシン、ゴモリ三色染色及び過ヨウ素酸シッフ試薬（ＰＡＳ）で染色した。
【０３８０】
腎臓形態：形体測定分析をブラインド法で行った。商標「Ｏｓｔｅｏｍｅａｓｕｒｅ」を形体測定分析に使用した。糸球体を×４００拡大で観察した。組織断面をＰＡＳを使用して染色した。測定した糸球体のパラメータは下記のとおり：（ａ）糸球体面積は、任意で選択した断面でその中に血管性柱を有する、群当り６０糸球体において測定した、（ｂ）メサンギウムマトリックス面積（メサンギウム中のＰＡＳ−陽性物質として定義される。）、（ｃ）メサンギウムマトリックス面積の糸球体面積に対する割合、及び（ｄ）巣状分節性糸球体硬化症（全面的硬化症又はまばらな標準細胞成分中のつぶれた、失われた毛管を示す糸球体の房状分岐の分節として定義される糸球体硬化症）。任意で選択した断面からの動物当たり１５０糸球体硬化性糸球体の割合を測定した（１３）。
【０３８１】
間隙体積をゴモリ三色染色方法で組織断面上の点計測技術により測定し、皮質中の５以下の区域内で間隙面積中に存在する格子点の平均割合として表した（１）（１４）。
湿潤中の単核細胞／マクロファージの測定を、組織断面中のＥＤ−１抗原陽性細胞の計測により行った（１）（１４）。腎臓をＨｉｓｔｏｃｈｏｉｃｅ中に、パラフィン包埋して断面で固定した。断面を、Ｈａｒｌａｎ社（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から入手したＥＤ−１抗体での培養前に脱ワックスし、再水和した。第一抗体の位置を、アルカリ性ホスホターゼ結合第二抗体を使用して視覚化した。糸球中の湿潤している単核細胞／マクロファージ数を得るために、それぞれ動物の糸球体の５０継続的断面を評価した。皮質性尿細管間質性腎炎中の湿潤している単核細胞／マクロファージ数を得るために、１０の継続的かつ重ならない区域をそれぞれ断面で計測し４００×拡大で観察した。
【０３８２】
電子顕微鏡：新鮮な組織を３％（ｗｔ／ｖｏｌ）グルタルアルデヒドバッファ中で固定し、固定後はＯｓＯ４中に置いた。組織を次にエタノール中で水和され、「Ｐｏｌｙ／ｂｅｄ８１２」樹脂（ＰｏｌｙＳｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ社製、Ｗａｒｒｉｎｇｔｏｎ、ＰＡ）中に包埋した。薄断面をウラニルアセテート及びクエン酸鉛で染色し、透過型電子顕微鏡を使用して分析した。
血圧測定：尾動脈カフ方法を下記血圧に使用した。
【０３８３】
Ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション：３５Ｓ−ＵＰＴ標識化センス及びアンチセンス構成体を公知技術に従い調製した（１５）。しばらくの間凍結した断面（４〜６ミクロン）をＰＢＡ中の４％ホルムアルデヒド中に、２０分室温で固定した。断面をＰＢＳ中の３倍の標準濃度の塩で１回洗浄した。次に断面をＰＢＳ中で５分、水中で２分、更に１回、０．１Ｍトリエタノールアミン（ｐＨ８．０）で１０分の計３回洗浄した。１０分で、０．１Ｍトリエタノールアミン溶液中の０．２５％無水酢酸（ｐＨ８．０）、及び２回のクエン酸ナトリウム中、２分、２×ａｎｄａｒｄで、追加的な洗浄を実施した。断面を次に、徐々に（濃度を）変化させたエタノールにより水和し、次に５分間空気乾燥した。更にこの後、１時間、室温で真空乾燥を行った。それぞれのスライドを次に下記条件でハイブリダイズした：１８時間、６０℃、１０６カウント／分の３３Ｐ放射性標識化「ｒｉｂｏｐｒｏｂｅ」、８０μｌのハイブリダイゼーション混合物中（５０％ホルムアミド；２％デンハルト液；１０％デキストランサルフェート；０．３ＭＮａＣｌ；１０ｍＭトリス、ｐＨ＝８．０；２ｍＭＥＤＴＡ、０．２５ｇ／ｍｌｔＲＮＡ）。ＢＭＰ−７用センス及びアンチセンスプローブは、Ｋｕｂｅｒ  Ｓａｍｐａｔｈ氏から寄贈された。Ｗｎｔ４用センス及びアンチセンスプローブは、公知である（１５）。次にスライドを下記の通り処理した：２０分、４×ＳＳＣ中、室温で；４×ＳＳＣ、５分、室温で；「ＲｎａｓｅＡ」（２０μｇ／ｍｌ）、３０分、３７℃、０．５ｍＮａＣｌ中、０．０１Ｍトリス、ｐＨ＝８．０及び１ｍＭＥＤＴＡ；２回２×ＳＳＣ、５分間、室温；１×ＳＳＣ、１０分間、室温；０．５×ＳＳＣ、１０分間、室温；及び０．１×ＳＳＣ、３０分間、６０℃。次に断面を、増加するエタノール濃度を使用して水和し、更に真空乾燥を３０分行った。スライドを液体写真用乳液（ＫｏｄａｋＮＴＢ２）中に浸し、１週間、４℃で現像した。発生後、スライドをヘマトキシリン及びエオシンで対比染色した。
【０３８４】
統計分析：結果を平均±ＳＥＭとして表した。Ｉｎ  ｓｉｔｕ方法統計分析を「ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ」、又は「ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ＡＮＯＶＡ」を使用して行った。統計有意性はｐ＜０．０５となるか否かで判断した。データを「ＩｎＳｔａｔ  ｓｏｆｔｗａｒｅ」を使用して分析した。
【０３８５】
結果；
一般群比較：
それぞれ群中の動物数、それぞれ群の、研究開始及び終了時の体重、腎臓重量、血液ブドウ糖濃度、インスリン投与量、尿蛋白質排出、ＧＦＲ及び死亡データを表１にまとめた。１６週の治療中、異なる群間で体重増加には顕著な差異はなかった。又、１６週の治療中、異なる群間で血中ブドウ糖濃度及びインスリン投与量には顕著な差異はなかった。血中ブドウ糖濃度は、１６週のＤＭ群では、全ての３２週治療群のそれより顕著に高く、インスリン投与量は１６週のＤＭは全ての３２週治療群のそれより顕著に低かった（ｐ＜０．０１）。試験中で血糖制御を強化するインスリン投与量を、目的とする死亡率を減少するために増加した。特に、血糖範囲が４００〜６００から３００〜５００まで低下した。表１のように、これら作用は、均等に全ての群へに適用された。各種治療群で観察された死亡は同じであった。死亡原因は、低血糖症、ケトアシドーシス、及び感覚消失であった。何頭かの動物の死亡原因は、死亡日の生化学的データが無く、死体解剖では原因としてケトアシドーシス又は低血糖症を示唆する情報を得られなかったため、不明であった。
【０３８６】
【表８】
2006516020.tif 000098
【０３８７】
ストレプトゾトシン糖尿病性腎障害モデルのキャラクタリゼーション：腎臓重量及びＧＦＲに対する糖尿病の効能を、図１に示す。ＤＭを週０で投与した。１６週のＤＭでは、腎臓重量は標準値に比べ１．８倍増加し（１．４２±０．０２対０．８１±０．０２ｇ、ｐ＜０．０１）、一方ＧＦＲは標準値に比べ３．２倍増加した（１．５６±０．２７対０．４９±０．０４ｍｌ／ｍｉｍ／１００ｇ体重、ｐ＜０．０１）。これらデータは、この動物モデルで顕著な腎肥大を誘発したことを示した。全ての治療は、１６週で開始し、３２週まで続けた（又は更に追加的１６週）。
【０３８８】
賦形剤治療１６週後、腎臓重量は変化しなかった（１．４４±０．０４ｇ対１．４２±０．０２ｇ）（図１）。しかし賦形剤治療した糖尿病性ラットのＧＦＲは７５％減少し、標準ラットが３２週で維持した値より顕著に低かった（０．３４±０．０２対０．５５±０．０２ｍｌ／分／１００ｇｂｗ、ｐ＜０．０５）。これは治療なしでは、試験期間中、コントロールラットの腎臓の超ろ過から腎臓障害への移行があることを示した。
他方で、図２に示すように、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療した動物では、賦形剤治療した糖尿病性ラットに比べて、腎臓重量が顕著に減少した（１．１０±０．０３ＢＭＰ−７多量投与群、１．０９±０．０４エナラプリル治療群）（ｐ＜０．０１）。ＢＭＰ−７治療群中では腎臓重量と順序の同じ（ｏｒｄｅｒｉｎｇ）投与量依存性があった（１．１９±０．０３、１．１９±０．０３、１．１０±０．０３、それぞれ）。これらデータは、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は糖尿病性腎肥大を部分的に逆転させることを示した。
【０３８９】
腎臓肥大の治療の効能：腎臓重量が賦形剤治療の１６週では影響されない一方、ＧＦＲは、１．５６±０．２７ｍｌ／分／１００ｇ（ＢＷ）から０．３４±０．０２まで減少し、それは標準の０．５５±０．０２（ｐ＜０．０５）から４０％低い（図１及び３）。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療群のＧＦＲは、標準又はそれより大きかった（図３）。ＢＭＰ−７多量投与群のＧＦＲは、ＤＭ群のＧＦＲより顕著に大きかった（０．７０±０．０８対０．３４±０．０２、ｐ＜０．０１）。ＢＭＰ−７治療群のＧＦＲと順序の同じ投与量依存性があった（０．５９±０．０７、０．６１±０．０９、及び０．７０±０．０８、それぞれ）。これらデータは、賦形剤コントロール群は、賦形剤の１６週間中、進行性腎臓障害が進行した、一方、治療群は、腎肥大の部分逆転及び更なる損傷の予防を示し、その結果、ＢＭＰ−７の多量投与でＧＦＲは標準値よりも顕著に大きくなり、ＢＭＰ−７投与量の減少により、投与量依存的に標準値まで低下する、ことを示した。
【０３９０】
尿蛋白質排出：尿蛋白質排出に関する糖尿病及び治療の効能は、図４に示す。糖尿病性ラットは、１６週（３５．６３±１３．３５対３．７６±０．３９ｍｇ／日）及び３２週（１７４．４４±５２．５０対８．２４±１．２８、ｐ＜０．０１）両方で、非糖尿病性ラットに比べて蛋白質排出速度を明白な増大させることを示した。糖尿病へのこの反応は、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療（ｐ＜０．０１、ＤＭ対ＢＭＰ１０；ｐ＜０．００１、ＤＭ対ＢＭＰ３０、ＢＭＰ１００及びエナラプリル）により逆転された。ＢＭＰ−７治療群での蛋白質排出と順序の同じ顕著な投与量依存性があった（５９．４６±２１．８４、３３．０２±９．１１、及び１４．２７±３．５０、それぞれ、ｐ＜０．０５、ＢＭＰ−７低量投与を多量投与と比較）。
【０３９１】
病状の治療効能：標準値に比べ、１６週糖尿病性ラットの腎臓は、大量の糸球体肥大を有して腎臓重量を増大させている（図５）。１６週糖尿病性腎臓は又、メサンギウムマトリックス並びに糸球体及び尿細管基底膜の密集が少し増加しており（図５）、今までの報告（１６）と合致する。３２週の糖尿病で、賦形剤治療したラットの腎臓は肥大化し続けたが、糸球体面積の大部分は巣状分節性パターンの硬化性を示した（図５及び２３）。硬化性面積は増加したマトリックス、毛管の閉塞及びまばらな細胞成分を示した。
電子顕微鏡は、図５に示されるように（データは非提示）、１６週で糖尿病により生成するＧＢＭ厚みを増大させることを示した。ストレプトゾトシン糖尿病性腎障害における巣状分節状糸球体硬化症は、間欠性キンメルスティール−ウィルソン結節性糸球体硬化症障害（１７）を有する、拡散する大規模な硬化症のヒト疾患病状の公知の変異である。この変異は今までの報告に示されている（１３）（１７）。
【０３９２】
ＢＭＰ−７での治療は、中間量の及び多量投与ＢＭＰ−７治療が、糸球体肥大の不完全な溶解を除き標準糸球体の組織近傍を伴うように、メサンギウムマトリックスの蓄積において投与量依存性減少を伴う糸球体硬化症の発生を予防した（図５〜７）。エナラプリル治療はＢＭＰ−７の中間量の又は多量投与よりも糸球体硬化症の予防に有効性が低く、メサンギウムマトリックスの蓄積の排除に対して効果性が低い（図５）。
【０３９３】
形体測定パラメータ：糖尿病及び各種治療の糸球体面積に対する効果を図７Ａに示す。糖尿病性ラットは、標準コントロールラットよりも、それらの増加した腎臓重量に一致する大量のより大きい糸球体面積を有する（１．２８±０．０３対０．９０±０．０２×１０４μｍ2、ｐ＜０．００１）。
賦形剤以外の全ての治療は、糸球体肥大を部分的に逆転した（ｐ＜０．００１）。メサンギウムマトリックス面積も又、全てのＢＭＰ−７及びエナラプリル治療群に比べて糖尿病性ラット中で増加したが、メサンギウムマトリックス面積の糸球体面積に対する割合は、異なる群間で違いがなかった（データは非提示）。
【０３９４】
図７Ｂに示されるように、皮質性間隙体積は、非糖尿病性ラットの９．０±０．６％からＤＭラットの１３．１±０．７％へ増加した。多量投与ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は、間隙体積の増大を顕著に減少させた（それぞれ１０．７±０．３％；及び１０．３±０．４％、ｐ＜０．０１）。ＤＭは、標準ラットに比べ、糸球体（２．０８±０．２４対１．０１±０．１７、ｐ＜０．０１）及び皮質性尿細管間質性腎炎（７．２５±０．５１対４．３０±０．３５、ｐ＜０．００１）の両方での単核細胞／マクロファージ湿潤を顕著に増加させた。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は尿細管間質湿潤を減少させた。
【０３９５】
糖尿病、ＢＭＰ−７、又はエナラプリル治療の糸球体の病状に対する効能は、図８に示す。巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）は３２週で、非糖尿病性ラットと比べて糖尿病性ラット中で進行する（１０．７±４．０％対０．７±０．２％、ｐ＜０．００１）。糸球体硬化症の程度及び型は、ＳＴＺＤＭに関して今までの研究報告のものと同様である（１３）（１７）。糸球体硬化症はＢＭＰ−７治療により著しく、エナラプリル治療によりやや少なく減少された。ＢＭＰ−７治療群の糸球体硬化症の減少と順序の同じ投与量依存性があった（それぞれ、４．１±１．４％、ｐ＜０．０５；３．５±０．８％、ｐ＜０．０１；及び２．１±０．３％、ｐ＜０．００１）（図８）。
【０３９６】
ＢＭＰ−７作用の機構：
公知研究において、陽性コントロールの腎臓保護的作用の顕著な成分（エナラプリル）は、糖尿病での高血圧の調節に寄与した（１８）（１９）（２０、２１）。従って、発明者は、本発明で図９に示されるように各種治療群間の血圧を比較し、１６週糖尿病性ラットは平均収縮血圧は１６０＋３であり、標準コントロールラットの１４１＋４に比べてやや高血圧であり今までの研究と合致した（１７）。２０週で、エナラプリル治療は糖尿病性ラットの高血圧を逆転させ、エナラプリル治療は、残りの３２週を通して正常血圧を維持した。反対に、ＢＭＰ−７治療は、血圧に対し２８週まで何の効果も示さなかったが、その後高血圧の減少が発生し、３２週での血圧はＢＭＰ−７多量投与治療した動物で標準まで戻った。３２週に賦形剤治療した糖尿病性ラットは、血管柔軟性の喪失の増加と一致（連動）する、収縮（最大）血圧の悪化及びその脈拍圧の拡大を示した（図９）。
【０３９７】
ＢＭＰ−７治療の腎臓保護的作用の機構の研究で、発明者は糖尿病の臨界発病学作用は、失敗した損傷反応を（再）開始することの出来る、ＢＭＰ−７等のキー分化因子の発現の喪失で誘発することができると推定した。この推定は図１０に示されるように証明された。標準ラット腎臓中で、ＢＭＰ−７は髄質部、皮質性集合管及び糸球体の有足突起中に発現する（２２）。糖尿病の１６週には、ＢＭＰ−７発現は、腎臓には起こらず、この不発現は賦形剤治療中維持された（図１０）。ＢＭＰ−７又はエナラプリルのいずれかでの治療は、高濃度でその標準パターンでＢＭＰ−７発現を回復した（図１０）。ＢＭＰ−７発現における変化の強度は、腎臓の損傷中の別の臨界腎臓発生的モルフォゲン（Ｗｎｔ４）の発現に関係する。Ｗｎｔ４は、ＢＭＰ−７に続く腎臓発生中、尿管芽の先端の周囲の後腎間葉の凝縮の上皮化時に、通常発現する（７、８）。
尿管芽（ＢＭＰ−７）からの相互的シグナルと一緒のＷｎｔ４は、コンマ及びＳ字形状体及び糸球体の発生の形成へ導く、間葉及び凝縮間葉の細管形成の上皮分化を対象とする。しかし、尿中細管間質損傷において、Ｗｎｔ４は、間質性繊維症を促進するキー因子（多分相互的発生的分化因子）の欠如で再発現する（１５）。図１１に示されるように、糖尿病性損傷は、腎臓中でＷｎｔ４発現を伴い、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療はＷｎｔ４発現に影響しない。発生中、Ｗｎｔ４及びＢＭＰ−７はネフロン発生において相互作用する。腎臓の損傷等のＢＭＰ−７の欠如で、Ｗｎｔ４の再発現は商標「ＴＧＦ」誘発されたシグナルを促進し（２３）、これはＷｎｔ４の再発現が腎臓の線維形成を促進することを示す機構であるらしい（１５）。上記のように、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は、成功する修復反応及びＢＭＰ−７発現の再誘起を刺激する。これはＷｎｔ４作用が、腎形成中のその役割と同様の修復反応の成功へ導くことを示す。
【０３９８】
検討
ここで挙げられるデータは、ストレプトゾトシン誘発された糖尿病の長期間のモデルは、Ｉ型糖尿病を伴うヒト糖尿病性腎障害の臨床的コースに類似する腎臓病及び腎臓障害の発生を伴うことを示す（２４、２５）。１６週で大量の腎肥大、超ろ過及び蛋白尿が本発明のモデルで発生した。その時、公知報告のとおり（１６）、糸球体のメサンギウムマトリックス蓄積の最も早い変化が測定できた。次に続く１６週いっぱい、糖尿病性腎臓の損傷は、ここで使用された各種治療コース中で進行し、又は部分的に逆転した。賦形剤治療した群では、糖尿病性損傷は進行し、糸球体硬化症、蛋白尿の悪化、ネフローゼ症候群の発生及び腎臓の機能不全の発生へと導かれる。腎臓病の過酷な蛋白尿及び腎臓の機能不全への進行は、糖尿病性糸球体の病状の硬化性糸球体のレベル１０％への進行に起因する。この疾患の重篤度は、ＳＴＺ誘発されたＤＭ腎臓病での糸球体硬化症の公知報告と同様であった（１３、１７、２６−２８）。
【０３９９】
糖尿病性ラットの３つの群へ、ＢＭＰ−７を週２回静脈注射で投与した（１０、３０、及び１００μｇ／ｋｇ／ｂｗ）。ＢＭＰ−７治療の効能は、意味深いものであった。ＢＭＰ−７は、腎臓重量を標準に向けて部分的に回復し、糸球体ろ過値を標準値まで回復し、投与量依存的に蛋白尿を排除し、糸球体肥大を部分的に逆転し、増大し拡大した間隙体積を逆転し、及び糸球体硬化症の発生を予防した。腎臓の損傷の逆転（機構）は、腎臓重量、糸球体面積、及び糸球体ろ過値が減少した機構である。評価された腎臓病のパラメータの全ては、存在するが小さなそれらの反応と順序の同じ投与量（依存性）を示した。低量投与及び多量投与群の間の蛋白質排出の差異のみが統計顕著性を達成した。
【０４００】
ＢＭＰ−７の治療的効能は、更にエナラプリル、アンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害薬の公知の治療効果との直接的比較に特徴を有する。ＡＣＥ阻止剤は、ＳＴＺ糖尿病における腎不全治療薬であることを最初に示し（１８、１９）（１６）（２０）、それはヒト糖尿病性腎障害において特に効果的であった（２１、２９）（３０）。次にＡＴ−１レセプターブロックと共に、それは疾患の進行を遅延させる主な腎不全治療となった（２９）（３０）。本発明の研究設計において、発生した疾患の治療も行なった。多量投与ＢＭＰ−７は、蛋白尿の逆転、ＧＦＲの維持、メサンギウムマトリックス拡大の減少、及び糸球体硬化症の発生の予防について、エナラプリルよりも更に効果的であった。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療は、腎臓重量の減少、糸球体肥大の逆転及び間隙体積拡大の減少に対して均等に有効であった。エナラプリル治療は、治療の全１６週コース中血圧を標準に戻した。エナラプリルの治療効果の重要な成分は、全身性及び糸球体の血流力学的制御によると推定された（１８−２０）。ＢＭＰ−７は研究のコース中の遅く、収縮（最大）血圧が顕著になり、血管性石灰沈着が存在する時になるまで血圧に影響しなかった（Ｄａｖｉｅｓ及びＨｒｕｓｋａ、データ非公開）。これらデータは血管性石灰沈着を予防するＢＭＰ−７の作用と関係すると考えられる（３１）。ここで使用されるエナラプリルの投与量（２０ｍｇ／ｋｇ）は極量であった（１、１４、３２）。それらは臨床的医薬品に使用される投与量よりも１０〜５０倍大きい。これまでの研究は５及び２０ｍｇ／ｋｇ間のエナラプリル反応に差異はなかったことを示した。更に、発明者は、エナラプリルの飲料水への添加は、腹膜内注射及び経口／食道からの供給等の更に困難なエナラプリル投与手段と同様に効果的であることを示した（Ｈｒｕｓｋａ、Ｗａｎｇ非公開データ）。従って、本発明では、ストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害ラットのＢＭＰ−７治療は、少なくともエナラプリル治療と同様に効果的であり、糸球体硬化症への進行の予防分野では明確に更に効果的であると考えられる。
【０４０１】
ＢＭＰ−７は、標準成人腎臓中で発現し、ここで糖尿病性腎障害に示された腎臓の損傷の影響を通して失われる臨界腎臓のモルフォゲンである。その腎不全の治療効果は、その発生的作用の反復に関係することが明らかになった。ＢＭＰ−７は上皮分化を刺激し、形態発生中後腎間葉生存シグナルを提供する（４）（５）（６）。これは腎臓の尿細管間質損傷中のＢＭＰ−７の作用と類似する（１）。ＢＭＰ−７は、ビメンチン及びα１（Ｉ）プロコラーゲン、α１（ＩＶ）コラーゲン等の損傷反応のマーカーの発現を減少させ、それはＥ−カドヘリン等の上皮表現型マーカーの発現を増加する（１、５、９、１２、２２、３３）（Ｈｒｕｓｋａ非公開）。それは尿細管上皮アポトーシスを予防し、損傷予防及び疾患抵抗力へと導く（１）（１２）。ＢＭＰ−７は、尿管芽発生時にウォルフ管中に発現する（４）。それは発生の間、尿管芽を発現し、集合管を発育させ続ける（３４）。更に、ＢＭＰ−７は、尿管芽の先端及び前尿細管集合体中で、第１２．５日に開始される後腎間葉の凝縮を発現し、それを目的とする（４）。ＢＭＰ−７発現は、その後コンマ及びＳ字形状体からは消滅する。成人腎臓中、ＢＭＰ−７は糸球体の有足突起、密集した上行肢、遠位の細管、及び集合管中に発現した（２２）。最も強い発現は、集合管中、特に骨髄性分節中である。ＢＭＰ−７の欠如で、後腎間葉の凝縮は、１２及び１４日ｄｐｃ間に消滅し、間葉細胞はアポトーシスが起こる（４）。これは、前尿細管集合体の形成時に後腎間葉の凝縮で発現する別の臨界尿細管発生的モルフォゲンであるＷｎｔ４の発現に反する（８）。Ｗｎｔ４は第１４ｄｐｃ日からの、初期のネフロンの発生を通じた管形成の誘起に必要であり充分である（８）。Ｗｎｔ４発現は消滅し、Ｓ形状体中に存在せず、以降その誘起性作用を示さない。第１２．５日及び１４ｄｐｃ日間にそれらの重複する発現パターン、それらのノックアウトの表現型、及びそれらを必要とする存在の重複期間から、Ｗｎｔ４及びＢＭＰ−７は腎臓の発生中相互作用することが明らかである（４）（５）（７、８）。成人腎臓中、Ｗｎｔ４発現は、末端骨髄性集合管に限定される（１５）。しかし、増加したＷｎｔ４発現が、腎臓の損傷へ反応して集合管全体で観察され、一方ＢＭＰ−７発現は失われることが、本明細書でも他の文献にも観察されている（１、７、１５）。本発明の発明者は、糖尿病性腎障害は尿管性閉塞症よりもＷｎｔ４のより広範囲の発現を引き起こすことを示した。腎臓の損傷への反応としてのＷｎｔ４発現は、ＴＧＦβと同様に、尿細管間質繊維症を促進し（１５）、上皮を間葉トランス分化（ＥＭＴ）へ促進する（１５、３５）。これは間質性筋原線維芽細胞の生成及び線維形成の促進の臨界機構である（３６）。ＷＮＴ４のこれら作用は、腎臓の損傷中のＴＧＦβのそれと類似する。腎臓の損傷におけるＷｎｔ４及び商標「ＴＧＦ」β間の関係の機構は、β−カテニンを安定化し及び核β−カテニン濃度を増加するＷｎｔ４シグナルである（３７、３８）。核中で、β−カテニンは、ＳＭＡＤ４を有する転写的複合体へ結合する（２３）。核中のＳＭＡＤ４は、調節因子ＳＭＡＤを含有する二量体として存在する。ＴＧＦ−βは、調節因子ＳＭＡＤの２及び３、及びβ−カテニンを伴う転写複合体中のＳＭＡＤ２／４及び３／４二量体、及びＴＣＦ／ＬＥＦファミリー調節遺伝子転写を誘起する。Ｗｎｔ４／ＴＧＦβ相互作用は、腎繊維症及びＥＭＴの促進を引き起こす（１５）（２３）。ＴＧＦ−βは糖尿病性損傷への反応を増加し（２６、３９）（２７）（２８）、ＢＭＰ−７は減少するため（データをここに示す）（４０）、Ｗｎｔ４の活性化は、ＴＧＦ−βの相乗（協力）作用を引き起こす（２３）。ＢＭＰ−７の存在下で、ＴＧＦ−βシグナルは阻止される（９）。ＢＭＰ−７シグナルは、Ｗｎｔ４発現と相互作用し、発生中にＢＭＰ−７刺激した調節因子ＳＭＡＤ１、５、及び８を含有する転写複合体の形成へ導く。従って、ＴＧＦ−βにより誘発された転写シグナルは、競争的に阻止される。更に、ＢＭＰ−７は阻害薬ＳＭＡＤ、ＳＭＡＤ６を刺激し（９）、ＴＧＦ−β誘発されたシグナルを更に阻止するＳＭＡＤ７を近位細管中で刺激する（４１）。
【０４０２】
ＳＴＺ誘発されたＤＭラットモデル及びＩ型ヒトＤＭは、腎臓の尿細管及び糸球体の細胞でＴＧＦβ１、２、及び３及びＴＧＦβＲＩＩを過剰に発現した（２６、２７、２７、２８、３９、４２）。ＴＧＦβ及びレセプターは一緒に、プロ線維性細胞表現型へのスイッチを誘起する主要な生物学的シグナルを構成する（４３）。本発明では、ＴＧＦβと相乗作用する別のプロ線維性サイトカイン（Ｗｎｔ４）は、ＳＴＺＤＭ中でアップレギュレートされることを示した。発明者はＷｎｔ４アップレギュレートは腎臓の損傷への通常の反応であり、それはＢＭＰ−７の欠如において、そのＴＧＦβとの相互作用を通して損傷反応不全を刺激することを明らかにした。
【０４０３】
結論として、本発明で報告された研究の証拠は、腎臓の機能不全におけるストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害のＢＭＰ−７による治療の成功を示す。ＢＭＰ−７効能は、陽性コントロール（エナラプリル治療）と比べて等しいか、幾つかの観点から更に有用である。糖尿病性損傷は損傷反応及び発生的モルフォゲンの再発現を表すＷｎｔ−４発現の拡散を誘発した。ＢＭＰ−７の欠如で、Ｗｎｔ４は糖尿病性損傷の刺激において商標「ＴＧＦ」βと相乗作用する。ＢＭＰ−７治療は、尿細管上皮表現型、ＢＭＰ−７発現を回復し、ＴＧＦβ作用を阻止した。結果的に、顕著な陽性修復反応がＢＭＰ−７により生成され、糸球体硬化症及び腎臓の機能不全の発生が予防された。
【０４０４】
引用文献リスト
2006516020.tif 000099
2006516020.tif 000100
2006516020.tif 000101
2006516020.tif 000102
2006516020.tif 000103
【０４０５】
均等物
本発明は、その本質的な特徴を含む限り他の変化態様を全て含むものである。上記例示は全て本発明を表示するためであり本発明を限定するものではない。本発明の範囲は、明細書の記載ではなく特許請求の範囲の記載に基づいて定めされ、その記載の範囲及びその均等物も含むものである。
明細書中の全ての引用文献（科学的発行物、要約等を含む）、特許、特許出願公開は、ここで資料として使用する。
【図面の簡単な説明】
【０４０６】
【図１Ａ】長期間ストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害モデルを示す。ＤＭを週０で投与し、ラットを観察した。１６週で、ＤＭでは腎臓重量は標準値に比べ１．８倍増加した（１．４２±０．０２対０．８１±０．０２ｇ、ｐ＜０．０１）。賦形剤治療１６週後、腎臓重量は顕著に変化しなかった。
【図１Ｂ】図１Ａと同様にラットを観察した。ＤＭではＧＦＲも又標準値に比べ３．２倍増加した（１．５６±０．２７対０．４９±０．０４ｍｌ／ｍｉｍ／１００ｇ体重、ｐ＜０．０１）。賦形剤治療のＧＦＲは３２週で標準値よりも７５％以下に減少した（０．３４±０．０２対０．５５±０．０２）。
【図２】ＤＭ誘発された腎肥大でのＢＭＰ−７及びエナラプリル治療効果を示す。ＤＭを週０で投与した。ＢＭＰ−７、若しくはエナラプリル、又は賦形剤治療を週１６に開始し週３２で終了した。１６週で、ＤＭでは腎臓重量は標準値に比べ１．４２に増加した。賦形剤治療の１６週後、腎臓重量はまだ上昇した（１．４４±０．０４ｇ）。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療群の腎臓重量は、ＤＭ賦形剤治療されたものに比べ、ＢＭＰ−７多量投与群で１．１０±０．０３、エナラプリル治療群で１．０９±０．０４、ｐ＜０．０１顕著に減少した。
【図３】ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療のＧＦＲでの効能を示す。１６週で、ＤＭラットではＧＦＲが標準値に比べ３．２倍増加した（１．５６±０．２７対０．４９±０．０４ｍｌ／ｍｉｍ／１００ｇ体重、ｐ＜０．０１）。しかし３２週で賦形剤治療中のＧＦＲは標準値よりも低くなるまで減少した（０．３４±０．０２対０．５５±０．０２）。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療はＧＦＲを標準値又はその僅か上まで回復させた。ＢＭＰ−７多量投与動物のＧＦＲはＤＭ群（賦形剤治療された）のＧＦＲより顕著に大きかった（０．７０±０．０８対０．３４±０．０２、ｐ＜０．０５）。ＢＭＰ−７治療群のＧＦＲには投与量依存機構があった（それぞれ、０．５９±０．０７、０．６２±０．０９、及び０．７０±０．０８）。
【図４】ＤＭでの尿蛋白質排泄へのＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。ＤＭを週０で投与した。ＢＭＰ−７、若しくはエナラプリル、又は賦形剤治療を週１６に開始し週３２で終了した。糖尿病性ラットは、非糖尿病性ラットに比べて、１６週（３５．６３±１３．３５対３．７６±０．３９ｍｇ／日）及び３２週（１７４．４±５２．５０対８．２４±１．２８、ｐ＜０．０１）の両方においてアルブミン排泄速度の明白な増大を示した。この反応は著しくＢＭＰ−７及びエナラプリル治療によりにより減少された（ｐ＜０．０１、ＤＭ対ＢＭＰ１０；ｐ＜０．００１、ＤＭ対ＢＭＰ３０、ＢＭＰ１００及びエナラプリル）。低量から多量投与までのＢＭＰ−７治療群での尿蛋白質レベルのオーダーとは逆転する投与量依存があった（それぞれ５９．４６±２１．８４、３３．０２±９．１１、及び１４．２７±３．５０）。エナラプリル治療群は同様な中間量の投与ＢＭＰ−７群と同様な尿蛋白質排泄レベルであった。
【図５】基底膜及びメサンギウムマトリックスを強調するために過ヨウ素酸シッフ試薬で染色した腎臓の冠状切断を示す。パネルＡは、１６週標準的な動物の腎臓の断面である。Ｂは１６週糖尿病性動物の腎臓の断面である。糸球体肥大及びメサンギウムマトリックスの初期の増加が存在する。糸球体の（矢印頭部）及び尿細管（矢印）基底膜が密集していることが確認できる。Ｃは３２週賦形剤治療された糖尿病性動物の腎臓の断面である。１つの糸球体が硬化性であり、両方共肥大化している。つぶれた糸球体の房状分岐（タフト）の分節とまばらな標準細胞成分がある。ＤはＢＭＰ−７を３０μｇ／ｋｇ体重ＩＶで週２回治療された動物の腎臓の断面である。ＥはＢＭＰ−７を１００μｇ／ｋｇ体重ＩＶで週２回治療された動物の腎臓の断面である。Ｆはエナラプリル１００ｍｇ／ｌ飲料水で治療された動物の腎臓の断面である。３つのＢＭＰ−７投与薬及びエナラプリルの全ての治療で糸球体硬化症が減少したが、エナラプリル治療は更にメサンギウムマトリックス蓄積を示した。
【図６】コラーゲンをゴモリ三色染色した腎臓の冠状切断を示す。この染色で、コラーゲン原線維は青に染色され、細胞は赤に染色される。Ａ及びＢは動物施設内で糖尿病性動物と共に３２週飼育された２匹の標準的なコントロール動物の腎臓の断面である。Ｃは賦形剤治療された糖尿病性動物のものの断面である。矢印は初期の間質性マトリックス蓄積を示す。糸球体は肥大し１個は分節性硬化症である。Ｄ、Ｅ、及びＦは、それぞれＢＭＰ−７を１０、３０、及び１００μｇ／ｋｇ体重ＩＶ週２回治療された動物の腎臓の断面である。１０μｇ／ｋｇ体重投与動物の腎臓は、糸球体肥大残存以外は標準とほとんど同じであった２つの高投与よりも大きなメサンギウムマトリックス蓄積を示した。
【図７Ａ】ＤＭラットの糸球体及び間隙（間質）面積におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。糸球体面積；糖尿病性ラットはコントロールラットよりも顕著に大きい糸球体面積標準値を有していた（１．２８±０．０３対０．９０±０．０２×１０4μｍ2、ｐ＜０．００１）。全ての治療群は部分的に糸球体肥大（ｐ＜０．００１）を改善した。
【図７Ｂ】ＤＭラットの糸球体及び間隙面積におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。間隙面積；皮質性間隙面積はＤＭラットで非糖尿病性ラット腎臓の９．０±０．６％断面から１３．１±０．７％まで増加した。ＢＭＰ−７多量投与及びエナラプリル治療は、賦形剤治療されたＤＭに比べて間隙面積（それぞれ１０．７±０．３％、ｐ＜０．０５；１０．３±０．４％、ｐ＜０．０１）が顕著に減少した。
【図８】糸球体硬化症におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。糖尿病性ラットは非糖尿病性ラットに比べて３２週の硬化性糸球体罹患率の顕著な増大を示した（１０．７±４．０％対０．７±０．２％、ｐ＜０．００１）。この反応は、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療により著しく減少された。ＢＭＰ−７治療群のオーダーには投与量依存があった（それぞれ４．１±１．４％、ｐ＜０．０５；３．５±０．８％、ｐ＜０．０１；及び２．１±０．３％、ｐ＜０．００１）。多量投与ＢＭＰ−７の効能は、エナラプリルのそれよりも良かった。
【図９】糖尿病性ラットの収縮血圧におけるエナラプリル及びＢＭＰ−７治療の効能を示す。血圧は動脈カフ方法により測定した。１６週で糖尿病性動物は顕著に高血圧性を示した。高血圧は賦形剤治療されたラットでは、収縮血圧が再度増加し始める週２８まで安定していた。２月間のエナラプリル療法は、血圧を標準値に回復した。ＢＭＰ−７療法は治療最後の第４週まで血圧に影響しなかった。
【図１０Ａ−１】図１０は下記治療による糖尿病ＢＭＰ−７腎臓の発現及び修復の損失を示す。図１０Ａ−１は、標準的な（ＮＯＲＭＡＬ）ラット腎臓中でＢＭＰ−７は髄質部、皮質性集合管及び糸球体の有足突起中に発現することを示す。
【図１０Ａ−２】３２週賦形剤治療された糖尿病性腎臓は、ＢＭＰ−７指標の完全な喪失を示した。
【図１０Ａ−３】ＢＭＰ−７治療は、ＢＭＰ−７発現の標準分布を回復した。ＢＭＰ−７治療した腎臓中のＢＭＰ−７メッセージレベルは、標準的な動物よりも高いことが明らかになった。
【図１０Ａ−４】エナラプリル治療は、ＢＭＰ−７発現の標準分布を回復した。エナラプリル治療した腎臓中のＢＭＰ−７メッセージレベルは、標準的な動物よりも高いことが明らかになった。
【図１０Ｂ】ＢＭＰ−７治療中のＢＭＰ−７の糸球体の発現を示す；明るい及び暗い区域は、ＢＭＰ−７治療された動物の糸球体中の顕著なＢＭＰ−７発現を示す。これら結果は、異なる腎臓を含む３つの別々の実施例で一致した。
【図１１−１】図１１は糖尿病によるＷｎｔ４発現の誘起、及びエナラプリル及びＢＭＰ−７療法の効能を示す。結果は、異なる腎臓を含む３つの別々の実施例で一致した。図１１−１はＷｎｔ４は標準的な腎臓中では発現しないことを示す。
【図１１−２】賦形剤治療された糖尿病性ラット中ではＷｎｔ４の腎臓全体での発現があったことを示す。発現は尿細管上皮細胞及び糸球の両方であった。
【図１１−３】ＢＭＰ−７治療はＷｎｔ４発現に効果がなかったことを示す。
【図１１−４】エナラプリル治療はＷｎｔ４発現に効果がなかったことを示す。
【図１２】５／６腎臓摘出手術（５／６ＮＰＸ）慢性腎不全（ＣＲＦ）損傷モデルの概略図である。
【図１３】ＯＰ−１は慢性腎不全の５／６腎臓摘出手術モデル中の血圧レベルを劇的に下げなかった。
【図１４】ＯＰ−１は慢性腎不全の５／６腎臓摘出手術モデル中の蛋白尿レベルを顕著に減少させた。
【図１５】モルフォゲン（ＯＰ−１）及びＡＣＥ阻害薬（エナラプリル）を共投与した動物中では、ＡＣＥ阻害薬（エナラプリル）単独治療された動物に比べて腎臓摘出された動物の血圧を標準的レベルまで減少させる追加的な効果は無かった。
【図１６】モルフォゲン（ＯＰ−１）及びＡＣＥＩ（エナラプリル）の共投与はＡＣＥＩ治療単独よりも更に腎臓摘出された動物中の蛋白尿レベル減少に有効である。
【図１７】片側尿管閉塞症（ＵＵＯ）腎繊維症モデルの概略図である。
【図１８】モルフォゲンＯＰ−１／ＢＭＰ−７は、片側尿管閉塞症モデルでの腎繊維症を防止する。
【図１９】モルフォゲン（ＯＰ−１）誘発された腎臓の保護の機構は、尿細管萎縮症の予防、ＡＣＥＩエナラプリルとは共有されない効能を伴う。
【図２０】モルフォゲン及びＡＣＥＩの両方は、ＧＦＲにより測定される腎臓機能を改良する。しかし、モルフォゲンＯＰ−１はＡＣＥＩエナラプリルよりも片側尿管閉塞症モデルでのイヌリンクリアランス値により測定される糸球体ろ過値の改良において更に有効である。
【図２１】ＡＣＥ阻害薬でないモルフォゲン（ＯＰ−１）は、片側尿管閉塞症モデルの腎臓中の骨髄性組織の喪失を減少させた。
【図２２】糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルの概略図である。
【図２３】ＡＣＥＩエナラプリルではなくモルフォゲン（ＯＰ−１）は、糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルで糸球体ろ過値（ＧＦＲ）を顕著に増加させた。
【図２４】モルフォゲン（ＯＰ−１）単独投与、ＡＣＥＩエナラプリル単独投与、又はモルフォゲン及びＡＣＥＩ共投与は、糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルで蛋白尿レベルを顕著に減少させた。
【図２５】糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデルの概略図である。
【図２６】モルフォゲンＯＰ−１は、糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデル中で、血清クレアチニン濃度を劇的に減少させる一方、ＡＣＥＩエナラプリルはより少なく血清クレアチニン濃度を減少させる。
【図２７】モルフォゲンＯＰ−１及びＡＣＥＩエナラプリル両方は、糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデル中で蛋白尿レベルを減少させるが、モルフォゲン及びＡＣＥＩの共投与は、蛋白尿レベルを相乗的効果で減少させる。
【図２８】ＴＧＦ−βスーパーファミリー蛋白質の各種代表的メンバーのＣ−末端７システイン骨格中の、ＯＰ−１をレファレンス配列として使用した、アミノ酸配列ホモロジー／共通性割合と同一性割合との比較。図中に表された相同性割合はＭｅｇａ  Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）を使用して配列された配列に基づく。
【図２９】配列表である。
【図３０】配列表である。
【図３１】配列表である。
【図３２】配列表である。
【図３３】配列表である。
【図３４】配列表である。
【図３５】配列表である。
【図３６】配列表である。
【図３７】配列表である。
【図３８】配列表である。
【図３９】配列表である。
【図４０】配列表である。
【図４１】配列表である。
【図４２】配列表である。
【図４３】配列表である。
【図４４】配列表である。
【図４５】配列表である。
【図４６】配列表である。
【図４７】配列表である。
【図４８】配列表である。
【図４９】配列表である。
【図５０】配列表である。
【図５１】配列表である。
【図５２】配列表である。
【図５３】配列表である。
【図５４】配列表である。
【図５５】配列表である。
【図５６】配列表である。
【図５７】配列表である。
【図５８】配列表である。
【図５９】配列表である。
【図６０】配列表である。
【図６１】配列表である。
【図６２】配列表である。
【図６３】配列表である。
【図６４】配列表である。
【図６５】配列表である。
【図６６】配列表である。
【図６７】配列表である。
【図６８】配列表である。
【図６９】配列表である。
【図７０】配列表である。
【図７１】配列表である。
【図７２】配列表である。
【図７３】配列表である。
【図７４】配列表である。
【図７５】配列表である。
【図７６】配列表である。
【図７７】配列表である。
【図７８】配列表である。
【図７９】配列表である。
【図８０】配列表である。
【図８１】配列表である。
【図８２】配列表である。
【図８３】配列表である。
【図８４】配列表である。
【図８５】配列表である。
【図８６】配列表である。
【図８７】配列表である。
【図８８】配列表である。
【図８９】配列表である。
【図９０】配列表である。
【図９１】配列表である。
【図９２】配列表である。
【図９３】配列表である。
【図９４】配列表である。
【図９５】配列表である。
【図９６】配列表である。
【図９７】配列表である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ−１】
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【図１０Ａ−２】
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【図１０Ａ−３】
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【図１０Ａ−４】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１１−３】
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【図１１−４】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
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【図７２】
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【図７３】
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【図７４】
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【図７５】
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【図７６】
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【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【図８１】
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【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【図８６】
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【図８７】
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【図８８】
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【図８９】
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【図９０】
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【図９１】
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【図９２】
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【図９３】
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【図９４】
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【図９５】
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【図９６】
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【図９７】
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