(57)【要約】  本発明は、レキトロプシンを含むリン脂質相によって構成される医薬製剤に関し、ヒト及び動物における局所及び全身性の感染症ならび腫瘍疾患の治療のためのそれらの使用に関する。そのような製剤は、レキトロプシンの分類中の、局所及び全身性双方の、抗感染症及び抗腫瘍剤の他の製剤と比較して最適な薬理学的性質を示す。この医薬製剤は、例えば、ジスタマイシン（式II、スタリマイシンとも知られている）、それらの類似体であるネトロピシン（式III）及びその類似体（式IVからVIIIａからi）、又は式IX、Ｘのような他の化合物及び一般式Ｉに包含されるいずれかの類似体のリポソーム又はミセル製剤、あるいはリン脂質複合体である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
放出系に存在する一般式Ｉ
【化１】
2006505506.tif 000007
（式中、Ｒ1は官能基、好ましくは、単一の又は置換されたアミジン、第２又は第３アミン、第４アンモニウム基、単一の又は置換されたグアニジン等の塩基性基であり、本発明を限定するものではないが、例として、−Ｃ （ＮＨ）ＮＨ2、−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−ＮＨ2、−ＮＨＲ3、−Ｎ (Ｒ3)2、−ＮＲ3Ｒ4、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨ2、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−Ｎ (ＣＨ2) 4 、−Ｎ (Ｒ3) 3+であってもよく、
Ｒ2は、脂肪族、芳香族又はアリール脂肪族アシル基を示し、これらは酸素、窒素原子等の１以上の異原子を含有する原子団で置換されていてもよい、あるいは、
Ｒ2は、１−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の１以上の残基配列、その配列は、Ｎ末端でアシル化されたもしくはアシル化されていない、また、１−メチル−４−カルボキサミドピロール−２−カルボン酸の残基で終端させられているか、または、本発明を限定するものではないが、フラン、イミダゾール、チオフェン、チアゾール等のピロールとは異なった複素環から誘導された、もしくはベンゼン、ピリジン、ジアジン、ピリミダジンから誘導された類似アミノ酸の残基で終端させられており、末端アミノ基はアシル基で置換もしくは非置換であり、あるいは遊離もしくは置換アミノ基に代えてカルボキシアミド基を含んでいる、
Ｒ3又はＲ4は、同一又は異なってＣ1〜Ｃ4の低級アルキル基を示す。）
のレキトロプシンからなり、
前記放出系は、リポソーム、ミセル、ナノ粒子、リン脂質複合体又は安定にかつ可逆的に一般式Ｉの化合物に組み込むことができる一般用語で超分子リン脂質構造をとるリン脂質製剤。
【請求項２】
有機又は無機塩、好ましくは塩酸塩の形態のジスタマイシン（II）
【化２】
2006505506.tif 000008
からなり、放出系の形態であって、
前記放出系はリポソーム、ミセル、ナノ粒子、リン脂質複合体又は安定にかつ可逆的に一般式IIの化合物に組み込むことができる一般用語で超分子リン脂質構造をとるリン脂質製剤。
【請求項３】
有機又は無機塩、好ましくは塩酸塩の形態の化合物（Ｘ）
【化３】
2006505506.tif 000009
からなり、放出系の形態であって、
前記放出系はリポソーム、ミセル、ナノ粒子、リン脂質複合体又は安定にかつ可逆的に一般式Ｘの化合物に組み込むことができる一般用語で超分子リン脂質構造をとるリン脂質製剤。
【請求項４】
微生物、ウィルス又は原生生物の局所感染症の治療用及び局所腫瘍の治療用であって、一般式Ｉの活性成分を０．１から１０％を含有する請求項１のレキトロプシン薬剤を主成分とする局所製剤。
【請求項５】
非経口経路、好ましくは静脈内、筋肉内、皮下経路による全身性微生物、ウィルス又は原生生物感染症又は播種性腫瘍の治療用であって、体重１ｋｇあたり一般式Ｉのレキトロプシンを０．１〜２０ｍｇ含む用量の請求項１のレキトロプシン薬剤を主成分とする注射可能製剤。
【請求項６】
微生物、ウィルス又は原生生物の局所感染症の治療又は局所腫瘍の治療用であって、一般式ＩＩの活性成分を０．１〜１０％含む請求項２のレキトロプシン薬剤を主成分とする局所製剤。
【請求項７】
非経口経路、好ましくは静脈内、筋肉内、皮下経路による全身性微生物、ウィルス又は原生生物感染症又は播種性腫瘍の治療用であって、体重１ｋｇあたり一般式ＩＩのレキトロプシンを０．１〜２０ｍｇ含む用量の請求項２のレキトロプシン薬剤を主成分とする注射可能製剤。
【請求項８】
微生物、ウィルス又は原生生物の局所感染症の治療又は局所腫瘍の治療用であって、一般式Ｘの活性成分を０．１〜１０％含む請求項３のレキトロプシン薬剤を主成分とする局所製剤。
【請求項９】
非経口経路、好ましくは静脈内、筋肉内、皮下経路による全身性微生物、ウィルス又は原生生物感染症又は播種性腫瘍の治療用であって、体重１ｋｇあたり一般式Ｘのレキトロプシンを０．１〜２０ｍｇ含む用量の請求項３のレキトロプシン薬剤を主成分とする注射可能製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
多くのヒト及び動物の疾患の治療において、有効な治療薬のさらなる改良の必要性は、望まない副作用がなく、より高い有効性を備えた新たな治療を得る観点から、強く求められている。これは、ウィルス性及び癌疾患ならびに種々の寄生虫症の症例において、特に緊急を要しており、なかでも、マラリアは、低開発国において引き起こされ（それらにおけるのみではないが）、大量の被害者を出すために非常に重要である。また、多くの細菌性感染症の症例において、耐性現象が発現し、ＡＩＤＳ又は抗がん剤の化学療法を受けている患者においては免疫防御メカニズムが減少しているため、特に緊急を要している。
【０００２】
しかし、潜在的な効力を備える活性成分の有効性は、常に、それらの安定性、バイオアベイラビリティ及び／又は生体内分布に関する治療上の問題の解決なしには十分ではない。したがって、まだ入手可能ではないが、適切で、活性な製剤の必要が生じている。これは、レキトロプシンによくあることであり、ウィルス感染、癌の発現、原生生物及び細菌感染のために重篤な健康状態において潜在的に有用な活性を示す化学物質の類である。
【背景技術】
【０００３】
レキトロプシンに関する科学文献は、現在では非常に広範囲に及んでいるが、リポソーム又はミセル製剤、より一般的には、レキトロプシンのリン脂質複合体の形態に基づく製剤は、今日に至るまで明らかになっていない。
【０００４】
ここに例示された活性成分に関して、それらは先の発明の対象になっている。Distamycin and distacin, F. Arcamoneら、Ger. Offen. 1039198 (Sept. 18, 1957), CA 55, 2012f、Pyrroles, F. Arcamoneら、Belg. Pat. 666612 (Nov. 3, 1965), CA 65, 5444d、Preparation of distamycin derivatives as antiviral, antitumor agents, F. Animatiら、PCT国際出願WO 92 9, 574 (Jun 11, 1992), CA 117, 130993、Preparation of distamycin analogs as antiviral and antitumor agents, F. Animatiら、PCT国際出願WO 92 14, 707 (Sep 3, 1992), CA 118, 38687、Preparation of Distamycin A derivatives as antimalarials. F. Animatiら、PCT国際出願WO 94 25, 436 (Nov. 10, 1994), CA 122, 105530。
【０００５】
ここに例示された同様の化合物は、科学刊行物に報告されている。Distamycin A. I. Isolation and structure of the antiviral agent distamycin A, F. Arcamoneら、Gazz. Chim. Ital., 97, 1097-1109 (1967)、Distamycin A. II. Total synthesis, S. Pencoら、ibid., 97, 1110-1115 (1967)、Distamycin A. III. Synthesis of analogs with modifications in the side chains, F. Arcamoneら、Gazz. Chim. Ital., 99, 620-631 (1969)、Distamycin A. IV. Synthesis of analogs with different numbers of l-methyl-4- aminopyrrole-2-carboxylic acid residues, F. Arcamoneら、Gazz. Chim. Ital., 99, 632-640 (1969)、Synthesis, DNA binding and antiviral activity of distamycin analogs containing different heterocyclic moieties, F. Arcamoneら、Anticancer Drug Design, 1,235-44 (1986)、Biological activity and DNA sequence specificity of synthetic carbamoyl analogues of distamycin. A. Alfieriら、Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 8, 243-254 (1997)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明においては、以下の本文で、好ましくはリポソーム系によって構成されたリン脂質複合体の形態が用いられた、これら物質のバイオアベイラビリティに関する問題の新規な解決を開示する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、レキトロプシンを含むリン脂質相によって構成される医薬製剤に関し、ヒト及び動物における局所及び全身性の感染症ならび腫瘍疾患の治療のためのそれらの使用に関する。そのような製剤は、レキトロプシンの分類中の、局所及び全身性双方の、抗感染症及び抗腫瘍剤の他の製剤と比較して最適な薬理学的性質を示す。
【０００８】
したがって、本発明の目的は、一般式Ｉ
【０００９】
【化１】
2006505506.tif 000002
（式中、Ｒ1は官能基、好ましくは、単一の又は置換されたアミジン、第２又は第３アミン、第４アンモニウム基、単一の又は置換されたグアニジン等の塩基性基であり、本発明を限定するものではないが、例として、−Ｃ （ＮＨ）ＮＨ2、−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−ＮＨ2、−ＮＨＲ3、−Ｎ (Ｒ3)2、−ＮＲ3Ｒ4、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨ2、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−Ｎ (ＣＨ2) 4 、−Ｎ (Ｒ3) 3+であってもよく、
Ｒ2は、脂肪族、芳香族又はアリール脂肪族アシル基を示し、これらは酸素、窒素原子等の１以上の異原子を含有する原子団で置換されていてもよい、あるいは、
Ｒ2は、１−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の１以上の残基配列、その配列は、Ｎ末端でアシル化されたもしくはアシル化されていない、また、１−メチル−４−カルボキサミドピロール−２−カルボン酸で終端させられているか、または、本発明を限定するものではないが、フラン、イミダゾール、チオフェン、チアゾール等のピロールとは異なった複素環から誘導された、もしくはベンゼン、ピリジン、ジアジン、ピリミダジンから誘導された類似アミノ酸の残基で終端させられており、末端アミノ基はアシル基で置換もしくは非置換であり、あるいは遊離もしくは置換アミノ基に代えてカルボキシアミド基を含んでいる、
Ｒ3又はＲ4は、同一又は異なってＣ1〜Ｃ4の低級アルキル基を示す。）
のレキトロプシンを含有するリポソーム、ミセル集合体又はより一般的にはリン脂質複合体に基づく製剤の製法及び治療に役立つ使用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
リポソームは、両親媒性の脂質が過剰水に分散した場合、自然に形成される分離した粒子である（Liposome Methodology,  vol. 107, Leserman & Barbet Eds. INSERM Publications, Paris, 1982）。脂質分子は、極性ヘッド基を水相にさらすことによってそれ自体配向すると同時に、疎水性炭素分子は互いに密着し、よって、最終的に溶液の残部から分離された内側の水相を維持する多重同心球の形態を取る二分子層をもたらす。
【００１１】
レキトロプシンは、一般に、C-末端位でアミジンのような塩基性基あるいは置換アミン又はグアニジンを、かつN-末端位で種々のアシル部分又はカルボキシアミノ基を示す、鎖状ペプチド型構造のモノマー・ユニットとして1−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の残部の存在によって特徴付けられる化合物として定義される。
レキトロプシンは、細菌生成物又はその合成類似化合物であってもよい。この後者の場合、1−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の残部に代えて、種々の複素環又は芳香環を含む同様の誘導体であってもよい。既知レキトロプシン構造のいくつかの例では、以下（式II〜VIII a-i）のようなものがある。
【００１２】
【化２】
2006505506.tif 000003
（式中、Ｒは、
【００１３】
【化３】
2006505506.tif 000004
である。）
【００１４】
レキトロプシンは、興味深く、有用な薬理学的性質を備える。つまり、既知の化合物のグループで、抗ウィルス、抗腫瘍、抗原生生物及び抗菌活性を示すことを見出している。
【００１５】
本発明は、レキトロプシンを含むリン脂質相によって構成される医薬製剤に関し、ヒト及び動物における局所及び全身性の感染症ならび腫瘍疾患の治療のためのそれらの使用に関する。そのような製剤は、レキトロプシンの分類中の、局所及び全身性双方の、抗感染症及び抗腫瘍剤の他の製剤と比較して最適な薬理学的性質を示す。
【００１６】
本発明の主な目的は、ヒト及び動物における感染症又は癌疾患に対する医療処方の製剤のために有用な、ジスタマイシン（式II、スタリマイシンとも知られている）、それらの類似体であるネトロピシン（式III）及びその類似体（式IVからVIIIａからi）、又は式IX、Ｘのような他の化合物及び一般式Ｉに包含されるいずれかの類似体のリポソーム又はミセル製剤、あるいはリン脂質複合体である。
【００１７】
【化４】
2006505506.tif 000005
【００１８】
本発明によれば、すべての生理活性のあるレキトロプシン、つまり、上記に定義された化学的化合物であるレキトロプシンの薬理学的活性は、ここに記載されたリン脂質製剤によって顕著に改善され、後者は、感受性がある病原体及び癌のために局所及び全身性の感染症の治療において使用することができる。本発明の範囲内で利用されるさらなる系列のレキトロプシン誘導体は、興味深い抗ウィルス及び抗菌活性を備える、一般式XI（ｎ＝１〜４）のビスアミジン類似体であり、さらにその治療の有効性は、本発明において記載されたリポソーム製剤の使用によって非常に改善することができる。
【００１９】
【化５】
2006505506.tif 000006
本発明の主な例は、リポソーム質量の１〜１０％の範囲の量の捕捉（エントラップされた）レキトロプシンを含むホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）及びコレステロール（Ｃ）から構成される、多重膜リポソームの製剤である。本発明の他の主な例は、レキトロプシンを１〜１０重量％含有するポリエチレングリコールエタノールアミン（ＰＥＧＰＥ）、ＰＧ及び部分的に水素化された卵ホスファチジルコリン（ＰＨＥＰＣ）によって構成される、リン脂質の小胞製剤である。本発明のさらなる主な例は、滅菌状態でアピロジェニック形態のレキトロプシンを含有する、リポソーム及びリン脂質複合体の製剤である。本発明の好ましい対象は、特に一般式Ｉのレキトロプシンを捕捉した上述のリポソーム製剤である。
【００２０】
本発明の重要な例は、本発明はここに示された特定の化合物の使用に限定されるものではないことを理解して、ジスタマイシンII又は、例えば、式III、IV、Ｖ、VI、VII、VIII、IX、Ｘ、XIの化合物のようなそれらの類似体のリポソーム又はミセル製剤あるいはリン脂質複合体の局在化したウィルス又は癌疾患における局所的な使用によって示される。また、本発明のさらなる重要な例は、ヒト及び動物における局所又は全身性の感染症ならびに癌の非経口経路による治療用の、一般式Ｉのレキトロプシンを含有する滅菌状態でアピロジェニックなリポソーム又はミセル製剤あるいはリン脂質複合体の治療用途である。そのような製剤は、レキトロプシンの化学的な類に属する抗感染症又は抗腫瘍剤の最適な薬理学的性質を示すことを可能にする。その結果、好ましい例は、ウィルス性疾患の治療のための、例えば、化合物II〜XIのような、一般式Ｉの化合物を捕捉したリポソームの非経口的な使用である。化合物Ｘは、抗マラリア活性の特徴を備えるものとして知られている。この性質は、その化合物を上述した製剤において使用した場合に顕著に高められ、よって、ヒトのマラリア治療に使用することができる。
本発明のさらなる目的は、それらを含有する医薬製剤の製造のために、上述した製剤を使用することによって示される。
【００２１】
実施例
実施例１
モル比が１：４：４のＰＧ：ＰＣ：コレステロールの混合物（クロロホルム中）６０マイクロモルと、有機又は無機酸塩（好ましくは塩酸塩）として、一般式Ｉのレキトロプシン３マイクロモルとをメタノール中に溶解することによって、多重膜リポソームを調製する。混合物は、次いで、室温にて、真空下、ロータリーエバポレータで蒸発させる。次いで、残部に、３７度でトリスＨＣｌ（１０ｍｌ）でｐＨ７．４に調整された生理的溶液を加え、得られた懸濁液を３７度にて一晩攪拌する。得られた多重膜リポソームの不均質懸濁液を、室温にて、４０〜８０ｐｓｉの圧力で、窒素下、多孔質フィルター（０．２〜０．４ミクロン）を通して押し出し、さらに、１時間、１３００００ｘｇで遠心分離し、非捕捉レキトロプシンを除去する。このようにして得られたリポソームを、１ｍｌの生理的溶液に懸濁液として採取し、３７℃にて、生理的溶液の１００ｍｌに対して透析し、得られた懸濁液をガラスバイアル中で凍結乾燥する。最終生成物は、原料レキトロプシンの６５％より多くを含有している。
【００２２】
実施例２
ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、コレステロール（Ｃ）をそれぞれ５０ｍｇ含有するクロロホルム溶液を、減圧下、ロータリーエバポレータで蒸発させ、溶媒のすべての超微量分を窒素流で除去する。得られた脂質層を、有機又は無機酸塩（好ましくは塩酸塩）として、一般式Ｉのレキトロプシン３９マイクロモルを含有する生理的溶液３ｍｌで、３０秒間隔で振動攪拌機にて攪拌するとともに、同じ時間６０℃の水浴で維持しながら、合計１０分間、水和する。得られたリポソーム懸濁液を、衛生浴中で、２分間、窒素下にて超音波処理し、次いで、１分間、氷水浴中で冷却する。このようにして得られたリポソームを２０分間１３００００ｘｇで超遠心分離することによって回収し、さらに１０％（ｗ／ｗ）ラクトースを含有する水中で再懸濁し、凍結乾燥する。捕捉レキトロプシンの収率は９０％である。
【００２３】
実施例３
遠心分離工程を用いる代わりに１０００〜５０００ダルトンの範囲のカットオフでの超遠心分離によって、実施例１及び２で記載したようにして得られた一般式Ｉの捕捉レキトロプシンを含有する多層膜リポソームを回収し、１０％（ｗ／ｗ）ラクトース水溶液で採取し、凍結乾燥する。
【００２４】
実施例４
実施例１及び２で記載したようにして得られた一般式Ｉの捕捉レキトロプシンを含有する多層膜リポソームを、３７度にて、生理的溶液の１００〜２００ｍｌに対して透析し、次いで、ろ過により無菌化し、ろ液を、無菌バイアルに、無菌かつ無パイローゲン状態で分配し、凍結乾燥する。
【００２５】
実施例５
実施例３で記載したようにして得られた一般式Ｉの捕捉レキトロプシンを含有する多層膜リポソームを、１０％ラクトース水溶液で採取し、ろ過により無菌化する。リポソームの無菌溶液を、最終的に、無菌バイアルに、無菌かつ無パイローゲン状態で分配し、凍結乾燥する。
【００２６】
実施例６
脂質を形成する小胞として、モル比が０．１５：０．３：１．８５：１のＰＥＧ−ＰＥ（ポリエチレングリコール  ホスホチジル  エタノールアミン）：ＰＧ：ＰＨＥＰＣ（部分的に水素化された卵ホスホチジルコリン）：コレステロールを、最終総脂質濃度が２５マイクロモル（リン脂質／ｍｌ）で、クロロホルムに溶解する。溶媒を減圧下で除去し、得られた乾燥脂質層を、０．９％ＮａＣｌ水溶液中、有機又は無機酸塩（好ましくは塩酸塩）として、一般式Ｉのレキトロプシン１０ｍＭの温溶液（６０℃）で水和する。水和を、脂質５０マイクロモルの水溶液１ｍｌを用いて、液体窒素と温水浴を使用して１０サイクル凍結及び解凍を繰り返しながら行う。最適な大きさのリポソームを、２種類のポリカーボネート膜、つまり０．４ミクロンフィルターで３サイクル、０．２ミクロンのフィルターで２サイクルによって押し出すことによって得る。リポソームの最終径は、直径０．１ミクロンのオーダーである。このようにして得られたリポソームを、合計２４時間かけて、５％ラクトース水溶液で３回、５０〜１００容量に対して透析する。最後に、１時間持続した４回目の透析工程を、ｐＨ６．５〜７の範囲の５％ラクトース溶液に対して行う。レキトロプシンの比捕捉の画分を、酸及び塩基性イオン交換樹脂の混合床で処理し、その後の５分間の低速遠心分離によって除去する。次いで、リポソーム懸濁液を０．４５ミクロンの膜を通してろ過することにより無菌化し、凍結乾燥し、５℃で保存する。
【００２７】
実施例７
モル比が１：４：４のＰＧ：ＰＣ：コレステロールの混合物（クロロホルム中）６０マイクロモルと、塩酸塩としてジスタマイシン（II）１．５ｍｇとをメタノール中に溶解することによって、多重膜リポソームを調製する。混合物を、室温にて、減圧下、丸底フラスコ中で蒸発させる。得られた残部を、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタンＨＣｌ緩衝液でｐＨ７．４に調整された生理的溶液で、３７℃にて一晩攪拌し、３７℃にて採取する。不均質リポソーム懸濁液を、室温にて、４０〜８０ｐｓｉの圧力で、窒素下、多孔質フィルター（０．２〜０．４ミクロン）を通して押し出し、さらに、１時間室温にて、１３００００ｘｇで超遠心分離し、非捕捉のIIを除去する。このようにして得られたリポソームを、生理的溶液の１００〜２００容量に対して透析し、凍結乾燥する。捕捉ジスタマイシンの収率は、原料サンプルの６５％より大である。
【００２８】
実施例８
ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、コレステロール（Ｃ）をそれぞれ５０ｍｇ含有するクロロホルム溶液を、減圧下、ロータリーエバポレータで蒸発させ、溶媒のすべての超微量分を窒素流で除去する。得られた脂質層を、ジスタマイシン（II）塩酸塩１５ｍｇを含有する生理的溶液３ｍｌで、３０秒間、振動攪拌機にて攪拌し、続いて同じ時間６０℃の水浴で維持することを、合計１０分間繰り返して、水和する。得られたリポソーム懸濁液を、衛生浴中で、２分間、窒素下にて超音波処理し、次いで、１分間、氷水浴中で冷却する。このようにして得られたリポソームを２０分間１３００００ｘｇで超遠心分離することによって回収し、さらに１０％（ｗ／ｗ）ラクトースを含有する水中で再懸濁し、凍結乾燥する。捕捉ジスタマイシンの収率は９０％である。
【００２９】
実施例９
実施例７及び８で記載したようにして得られた多層膜リポソームを、多孔フィルターを通して押し出した後、非捕捉ジスタマイシンを除去し、超遠心分離工程の代わりに１０００〜５０００ダルトンの範囲のカットオフでの超遠心分離工程によって回収し、生理的溶液で採取し、凍結乾燥する。
【００３０】
実施例１０
モル比が１：４：４のＰＧ：ＰＣ：コレステロールの混合物（クロロホルム中）６０マイクロモルと、塩酸塩として化合物Ｘ１．５ｍｇとをメタノール中に溶解することによって、多重膜リポソームを調製する。混合物を、室温にて、減圧下、丸底フラスコ中で蒸発させる。得られた残部を、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタンＨＣｌ緩衝液でｐＨ７．４に調整された生理的溶液で、３７℃にて一晩攪拌し、３７℃にて採取する。不均質リポソーム懸濁液を、室温にて、４０〜８０ｐｓｉの圧力で、窒素下、多孔質フィルター（０．２〜０．４ミクロン）を通して押し出し、さらに、１時間室温にて、１３００００ｘｇで超遠心分離し、上清中で非捕捉Ｘを除去し、遠心分離ペレットの形態のリポソーム製剤を回収する。このようにして得られたリポソームを、生理的溶液の１００〜２００容量に対して透析し、次いで、無菌ガラスバイアルに、無菌かつ無パイローゲン状態で分配し、凍結乾燥する。捕捉ジスタマイシンの収率は、原料サンプルの６５％より大である。
【００３１】
実施例１１
ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、コレステロール（Ｃ）をそれぞれ５０ｍｇ含有するクロロホルム溶液を、減圧下、ロータリーエバポレータで蒸発させ、溶媒のすべての超微量分を窒素流で除去する。得られた脂質層を、化合物Ｘの３０マイクロモルを含有する生理的溶液３ｍｌで、３０秒間隔で振動攪拌機にて攪拌し、続いて同じ時間６０℃の水浴で維持することを、合計１０分間繰り返して、水和する。得られたリポソーム懸濁液を、衛生浴中で、２分間、窒素下にて超音波処理し、次いで、１分間、氷水浴中で冷却する。このようにして得られたリポソームを２０分間１３００００ｘｇで超遠心分離し、次いで１０％（ｗ／ｗ）ラクトースを含有する水中で再懸濁し、標準的な無菌化フィルターでろ過し、無菌ガラスバイアルに、無菌かつ無パイローゲン状態で分配し、凍結乾燥する。捕捉Ｘの収率は、９０％である。
【００３２】
実施例１２
実施例１０及び１１で記載したようにして得られた多層膜リポソームを、多孔フィルターを通して押し出した後、非捕捉Ｘを除去し、超遠心分離工程の代わりに１０００〜５０００ダルトンの範囲のカットオフでの超遠心分離工程によって回収し、生理的溶液で採取し、無菌ガラスバイアル中で、無菌かつ無パイローゲン状態で凍結乾燥する。
【００３３】
実施例１３
小胞を形成する脂質として、モル比が０．１５：０．３：１．８５：１のＰＥＧ−ＰＥ：ＰＧ：ＰＨＥＰＣ：コレステロールを、最終総脂質濃度が２５マイクロモル（リン脂質／ｍｌ）で、クロロホルムに溶解する。溶媒を減圧下で除去し、得られた乾燥脂質層を、０．９％ＮａＣｌ水溶液中、化合物Ｘの塩酸塩１０ｍＭの温溶液（６０℃）で水和する。水和を、脂質５０マイクロモルの水溶液１ｍｌを用いて、液体窒素と温水浴を使用して１０サイクル凍結及び解凍を繰り返しながら行う。最適な大きさのリポソームを、２種類のポリカーボネート膜、つまり０．４ミクロンフィルターで３サイクル、０．２ミクロンのフィルターで２サイクルによって押し出すことによって得る。リポソームの最終径は、直径０．１ミクロンのオーダーである。このようにして得られたリポソームを、合計２４時間かけて、５％ラクトース水溶液で３回、５０〜１００容量に対して透析する。最後に、１時間持続した４回目の透析工程を、ｐＨ６．５〜７の範囲の５％ラクトース溶液に対して行う。レキトロプシンＸの非捕捉の画分を、酸及び塩基性イオン交換樹脂の混合床で処理し、その後の５分間の低速遠心分離によって除去する。次いで、リポソーム懸濁液を０．２２ミクロンの膜を通してろ過することにより無菌化し、凍結乾燥し、５℃で保存する。
【００３４】
実施例１４
上記化合物Ｘの代わりに化合物ＸＩを用いて、実施例１０で記載したように、多層膜リポソームを製造する。捕捉物の収率は、６５％より大である。
【００３５】
実施例１５
上記化合物Ｘの代わりに化合物ＸＩを用いて、実施例１１で記載したように、多層膜リポソームを製造する。捕捉物の収率は、９０％である。
【００３６】
実施例１６
上記化合物Ｘの代わりに化合物ＸＩを用いて、実施例１２で記載したように、多層膜リポソームを製造する。
【００３７】
実施例１７
上記化合物Ｘの代わりに化合物ＸＩを用いて、実施例１３で記載したように、多層膜リポソームを製造する。
【００３８】
実施例１８
実施例１〜１７で記載したようにして得られたレキトロプシン製剤を、連続５〜７日の期間、１日２〜３回、各１回塗布で活性成分５〜５０ｍｇ適用する量で、皮膚が冒された患者に、局所製剤の形態で投与する。
【００３９】
実施例１９
実施例４〜６及び１０〜１７で記載したようにして得られたレキトロプシン製剤を、連続２〜７日の期間、１日１回、５〜５００ｍｇの範囲の用量で、レキトロプシン治療に感受性のある疾患に冒された患者に、静脈内、筋肉内及び皮下注射によって、非経口経路で投与する。
【手続補正書】
【提出日】平成12年10月15日(2000.10.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】放出系に存在する一般式Ｉ
【化１】
2006505506.tif 000010
（式中、Ｒ1は官能基、好ましくは、単一の又は置換されたアミジン、第２又は第３アミン、第４アンモニウム基、単一の又は置換されたグアニジン等の塩基性基であり、
−Ｃ （ＮＨ）ＮＨ2、−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−ＮＨ2、−ＮＨＲ3、−Ｎ (Ｒ3)2、−ＮＲ3Ｒ4、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨ2、−ＮＨ−Ｃ(ＮＨ) ＮＨＲ3、−Ｎ (ＣＨ2) 4 、−Ｎ (Ｒ3) 3+から選択され、
Ｒ2は、脂肪族、芳香族又はアリール脂肪族アシル基を示し、これらは酸素、窒素原子等の１以上の異原子を含有する原子団で置換されていてもよい、あるいは、
Ｒ2は、１−メチル−４−アミノピロール−２−カルボン酸の１以上の残基配列、その配列は、Ｎ末端でアシル化されたもしくはアシル化されていない、また、１−メチル−４−カルボキサミドピロール−２−カルボン酸の残基で終端させられているか、または、フラン、イミダゾール、チオフェン、チアゾールから選択されるピロールとは異なった複素環から誘導された、もしくはベンゼン、ピリジン、ジアジン、ピリミダジンから誘導された類似アミノ酸の残基で終端させられており、末端アミノ基はアシル基で置換もしくは非置換であり、あるいは遊離もしくは置換アミノ基に代えてカルボキシアミド基を含んでいる、
Ｒ3又はＲ4は、同一又は異なってＣ1〜Ｃ4の低級アルキル基を示す。）
のレキトロプシンからなり、
前記放出系は、リポソーム、ミセル、ナノ粒子、リン脂質複合体又は安定にかつ可逆的に一般式Ｉの化合物に組み込むことができる超分子リン脂質構造をとるリン脂質製剤。
【請求項２】
多重膜リポソームの形態であって、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）及びコレステロール（Ｃ）から構成され、前記リポソームの質量の１から１０％の範囲の量で一般式Ｉのエントラップされたレキトロプシンを含有する請求項１の製剤。
【請求項３】
リン脂質小胞の形態であって、ポリエチレングリコール  エタノールアミン（ＰＥＧＰＥ）、ＰＧ及び部分的に水素化された卵ホスホチジルコリン（ＰＨＥＰＣ）から構成され、レキトロプシンを１から１０重量％含有する請求項１の製剤。
【請求項４】活性成分として、有機又は無機塩、好ましくは塩酸塩の形態のジスタマイシン（II）
【化２】
2006505506.tif 000011
を含む請求項１から３のいずれか１つの製剤。
【請求項５】有機又は無機塩、好ましくは塩酸塩の形態の化合物Ｘ
【化３】
2006505506.tif 000012
を含む１から３のいずれか１つの製剤。
【請求項６】活性成分を０．１〜１０％含む請求項１から５のいずれか１つの局所製剤。
【請求項７】一般式I、II又はXのレキトロプシンを０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で提供する請求項１から５のいずれか１つの注射可能製剤。
【請求項８】微生物、ウィルス又は原生生物感染症の治療用医薬製剤のための請求項１から７の製剤の使用。
【国際調査報告】
2006505506.tif 000013
2006505506.tif 000014
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