(57)【要約】癌を有する個人の治療方法を提供する。該方法には、細胞移動阻害剤および化学療法薬を該個人に投与して、癌細胞の移動を阻害することを含めることができる。細胞移動を阻害すると細胞分裂を増加させることができる。このようにして、細胞移動阻害剤および化学療法薬の組合せは、細胞分裂を増加させることによって、化学療法薬単独と比較して増大した効果を発揮することができる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した阻害剤のいずれかを含めることができる。たとえば、該細胞移動阻害剤は、分子量約７００未満の有機分子、モノクローナル抗体または天然産物であってよい。
2006505246.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞の誘導沈殿を使用して癌細胞を基材に沈着させ、
化学物質のライブラリーから選択した化学物質で前記癌細胞を処理し、
前記処理癌細胞の細胞移動速度および未処理癌細胞の細胞移動速度を測定し、
前記処理癌細胞の細胞移動速度が前記未処理癌細胞よりも遅ければ、様々な用量の前記化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定し、かつ
前記用量が増加するにつれて前記細胞移動速度が減少するならば、前記化学物質を細胞移動阻害化学物質として同定することを含む細胞移動を阻害する化学物質の同定方法。
【請求項２】
前記ライブラリーから選択した様々な化学物質で処理した前記癌細胞の複数試料の細胞移動速度を測定し、少なくとも前記未処理対照試料の前記癌細胞よりも細胞移動速度が遅い様々な前記化学物質の１種または複数を選択し、様々な用量の前記選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定し、前記用量が増加するにつれて前記様々な用量の１種または複数の選択した化学物質で処理した前記癌細胞の前記細胞移動速度が減少するならば、１種または複数の前記選択した化学物質を細胞移動阻害化学物質として同定することをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記沈着には前記癌細胞を前記基材上の予め決定した位置に沈着することが含まれる請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記細胞移動速度の測定には前記癌細胞の試料のほぼ中心から放射状に癌細胞が移動する距離を測定することが含まれる請求項１に記載の方法。
【請求項５】
化学物質の前記ライブラリーは有機分子を含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
化学物質の前記ライブラリーは分子量約７００未満の有機分子を含む請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ライブラリーの化学物質はすべて有機分子を含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
化学物質の前記ライブラリーはモノクローナル抗体を含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
化学物質の前記ライブラリーは天然産物を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記化学物質で処理した前記癌細胞および前記未処理対照試料の前記癌細胞の他の特性を測定することをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記化学物質と化学療法薬の組合せが前記癌細胞の相乗的殺滅を示すかどうかを測定することをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
細胞の誘導沈殿を使用して細胞を基材に沈着させ、
前記細胞を前記化学物質で処理し、
前記処理細胞の細胞移動速度および未処理細胞の細胞移動速度を測定し、
前記処理細胞が前記未処理細胞と異なる細胞移動速度であれば、様々な用量の前記化学物質で処理した細胞の細胞移動速度を測定し、かつ
前記細胞移動速度が前記用量に応じて変化するならば、前記化学物質を細胞移動改変化学物質として同定することを含む細胞移動を改変する化学物質の同定方法。
【請求項１３】
細胞の誘導沈殿装置、
癌細胞（前記癌細胞が基質上の予め決定された位置に沈着できるように前記装置が設計されている）、および
ライブラリーから選択された１種または複数の化学物質（前記１種または複数の化学物質は分子量約７００未満の有機分子、モノクローナル抗体または天然産物を含む）を含み、前記癌細胞を前記基材上の１種または複数の化学物質で処理することができ、前記癌細胞の細胞移動速度は前記基材上で測定することができるキット。
【請求項１４】
一般式
【化１】
2006505246.tif 000017
の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤が分子量約７００未満の有機分子を含む細胞移動の阻害方法。
【請求項１５】
ｎは１または２である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｒ1はメチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ｔｅｒｔ−ブチル、アセトキシ、フェニル、ビフェニル−４−イル、４−ヨード−フェニルおよび４−ペンチル−フェノキシカルボニルメチルから成る群から選択された請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
Ｒ2は、水素、４−アセチル−アミノ、４−（２−シアノ−エチル）−フェニル、４−プロペニル−フェニル、４−ペンチル−フェニル、４−ブロモ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３−クロロ−４−フルオロ−フェニル、４−アセチル−フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、４−オクチルオキシ−フェニル、２，３−ジシアノ−４−ヘキシルオキシ−フェニル、４−ブトキシ−２，３−ジクロロ−フェニル、４−ペンタノイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ビフェニル−４−イル、４’−メチル−ビフェニル−４−イル、４’−シアノ−ビフェニル−４−イル、２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチル、２−（４’−ブロモ−ビフェニル−４−イル）−２−オキソ−エチル、４−シクロヘキサンカルボニルオキシ−フェニルおよび４−安息香酸エチルエステルから成る群から選択された請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記阻害剤は、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
一般式、
【化２】
2006505246.tif 000018
の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤は分子量約７００未満の有機分子を含む細胞移動の阻害方法。
【請求項２０】
Ｒ1は水素、メチル、メトキシ、ブロモ、アミノ、２−ヒドロキシ−エチルアミノおよび３−ヒドロキシ−プロピルアミノから成る群から選択された請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ2は、水素およびアセチルアミノから成る群から選択された請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ1またはＲ2は水素である請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ1およびＲ2は非環式基である請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
Ｒ1およびＲ2はニトロ基ではない請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
一般式、
【化３】
2006505246.tif 000019
の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤は分子量約７００未満の有機分子を含む細胞移動の阻害方法。
【請求項２７】
Ｒ1はフェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、４−フルオロ−フェニルおよび４−メトキシ−フェニルから成る群から選択された請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ2は４−（２，２−ジシアノ−１−シクロプロピル−ビニル）およびジシアノから成る群から選択された請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ3は４−クロロフェニル、フェニルおよびシクロプロピルから成る群から選択された請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
一般式、
【化４】
2006505246.tif 000020
の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤は分子量約７００未満の有機分子を含む細胞移動の阻害方法。
【請求項３２】
Ｒ1は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、フェニル、ベンジル、ビフェニル−４−イル、２−メチル−フェニル、４メチル−フェニル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル、２−ブロモ−フェニル、３−ブロモ−フェニル、４−ブロモ−フェニル、２−クロロ−フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロ−フェニル、２，４−ジクロロ−フェニル、２，５−ジクロロ−フェニル、２−フルオロ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、２，６−ジフルオロフェニル、３，４−ジフルオロ−フェニル、３−トリフルオロメチル−フェニル、３−ヨード−フェニル、４−アセチル−フェニル、−２−ホルミル−フェニル、２−カルボキシフェニル、３−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、３−メトキシ−フェニル、４−メトキシ−フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、３，５ジメトキシ−フェニル、３，４，５−トリメトキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、３，４，５−トリエトキシ−フェニル、４−ブトキシ−フェニル、４フェノキシメチル、４−フェノキシ−フェニル、４−クロロ−フェノキシメチル、２−ニトロ−フェニル、３−ニトロ−フェニル、４−ニトロ−フェニル、３，５ジニトロ−フェニル、２−メチル−３−ニトロ−フェニル、２−クロロ−４−ニトロ−フェニル、４−クロロ−３−ニトロ−フェニル、２−カルボキシ−５−ニトロ−フェニル、４−ベンゾイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ナフタレン−１−イル、３−メトキシ−ナフタレン−２−イル、テトラヒドロ−フラン−２−イル、５−ブロモフラン−２−イル、２−クロロ−ピリジン−３−イル、３−カルボキシ−ピラジン−２−イル、２−フェニル−キノリン−４−イル、チオフェン−２−イル、フェニルフェニルスルファニル−メチル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、３−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−プロピル、８−アリル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル、４メチル−ピペラジン−１−イルメチル、５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イルメチル、４−クロロ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−４Ｈ−ピラゾール−１−イル−メチル、５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３−ニトロ［１，２，４］トリアゾール−１−イルメチル、４−ニトロ−イミダゾール−１−イルメチル、５，７−ジフェニル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル、６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３，６−ジブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−エトキシ−フェニル）−７−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−ブロモ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジ��−２−イル、５−（４−フルオロ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、３−ブロモ−５−チオフェン−２−イル−７トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−６−フルオロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル、４−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、４−メチル−３−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、２−クロロ−５−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、５−ジエチルスルファモイル−フェニル、４−ジプロピルスルファモイルフェニル、４−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル、ベンゾ［４，５］チアゾロ［２，３−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル、３−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−ブロモ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４クロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、および２，４−ジクロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニルから成る群から選択された請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ2は、水素、メチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび１，１−ジメチル−プロピルから成る群から選択された請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ3は水素およびメチルから成る群から選択された請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記阻害剤はＮ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
一般式、
【化５】
2006505246.tif 000021
の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤は分子量約７００未満の有機分子を含む細胞移動の阻害方法。
【請求項３７】
Ｒ1は４−ブロモ−ベンゾイルアミノ、（アダマンタン−２−イル−ヒドロキシ−メチル）−アミノおよびフェニルアミノから成る群から選択された請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ2はジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル、ｐ−クロロ−フェニル、ｐ−メチル−フェニル、フェニルおよびｐ−メトキシ−フェニルから成る群から選択された請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ3は水素、２−プロピルおよびフェニルから成る群から選択された請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ4は水素およびメチルから成る群から選択された請求項３６に記載の方法。
【請求項４１】
前記阻害剤は［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである請求項３６に記載の方法。
【請求項４２】
一般式、
【化６】
2006505246.tif 000022
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物。
【請求項４３】
ｎは１または２である請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】
Ｒ1はメチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ｔｅｒｔ−ブチル、アセトキシ、フェニル、ビフェニル−４−イル、４−ヨード−フェニルおよび４−ペンチル−フェノキシカルボニルメチルから成る群から選択された請求項４２に記載の組成物。
【請求項４５】
Ｒ2は、水素、４−アセチル−アミノ、４−（２−シアノ−エチル）−フェニル、４−プロペニル−フェニル、４−ペンチル−フェニル、４−ブロモ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３−クロロ−４−フルオロ−フェニル、４−アセチル−フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、４−オクチルオキシ−フェニル、２，３−ジシアノ−４−ヘキシルオキシ−フェニル、４−ブトキシ−２，３−ジクロロ−フェニル、４−ペンタノイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ビフェニル−４−イル、４’−メチル−ビフェニル−４−イル、４’−シアノ−ビフェニル−４−イル、２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチル、２−（４’−ブロモ−ビフェニル−４−イル）２−オキソ−エチル、４−シクロヘキサンカルボニルオキシ−フェニルおよび４−安息香酸エチルエステルから成る群から選択された請求項４２に記載の組成物。
【請求項４６】
前記阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である請求項４２に記載の組成物。
【請求項４７】
前記阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである請求項４２に記載の組成物。
【請求項４８】
前記化学療法薬は、アルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子から成る群から選択された請求項４２に記載の組成物。
【請求項４９】
一般式、
【化７】
2006505246.tif 000023
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物。
【請求項５０】
Ｒ1は水素、メチル、メトキシ、ブロモ、アミノ、２−ヒドロキシ−エチルアミノおよび３−ヒドロキシ−プロピルアミノから成る群から選択された請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】
Ｒ2は、水素およびアセチルアミノから成る群から選択された請求項４９に記載の組成物。
【請求項５２】
前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である請求項４９に記載の組成物。
【請求項５３】
Ｒ1またはＲ2は水素である請求項４９に記載の組成物。
【請求項５４】
Ｒ1およびＲ2は非環式基である請求項４９に記載の組成物。
【請求項５５】
Ｒ1およびＲ2はニトロ基ではない請求項４９に記載の組成物。
【請求項５６】
前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである請求項４９に記載の組成物。
【請求項５７】
前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬はパクリタキセルである請求項４９に記載の組成物。
【請求項５８】
前記化学療法薬はアルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子から成る群から選択された請求項４９に記載の組成物。
【請求項５９】
一般式、
【化８】
2006505246.tif 000024
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物。
【請求項６０】
Ｒ1はフェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、４−フルオロ−フェニルおよび４−メトキシ−フェニルから成る群から選択された請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
Ｒ2は４−（２，２−ジシアノ−１−シクロプロピル−ビニル）およびジシアノから成る群から選択された請求項５９に記載の組成物。
【請求項６２】
Ｒ3は４−クロロフェニル、フェニルおよびシクロプロピルから成る群から選択された請求項５９に記載の組成物。
【請求項６３】
前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである請求項５９に記載の組成物。
【請求項６４】
前記化学療法薬はアルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子から成る群から選択された請求項５９に記載の組成物。
【請求項６５】
一般式、
【化９】
2006505246.tif 000025
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物。
【請求項６６】
Ｒ1は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、フェニル、ベンジル、ビフェニル−４−イル、２−メチル−フェニル、４メチル−フェニル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル、２−ブロモ−フェニル、３−ブロモ−フェニル、４−ブロモ−フェニル、２−クロロ−フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロ−フェニル、２，４−ジクロロ−フェニル、２，５−ジクロロ−フェニル、２−フルオロ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、２，６−ジフルオロフェニル、３，４−ジフルオロ−フェニル、３−トリフルオロメチル−フェニル、３−ヨード−フェニル、４−アセチル−フェニル、−２−ホルミル−フェニル、２−カルボキシフェニル、３−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、３−メトキシ−フェニル、４−メトキシ−フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、３，５ジメトキシ−フェニル、３，４，５−トリメトキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、３，４，５−トリエトキシ−フェニル、４−ブトキシ−フェニル、４フェノキシメチル、４−フェノキシ−フェニル、４−クロロ−フェノキシメチル、２−ニトロ−フェニル、３−ニトロ−フェニル、４−ニトロ−フェニル、３，５ジニトロ−フェニル、２−メチル−３−ニトロ−フェニル、２−クロロ−４−ニトロ−フェニル、４−クロロ−３−ニトロ−フェニル、２−カルボキシ−５−ニトロ−フェニル、４−ベンゾイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ナフタレン−１−イル、３−メトキシ−ナフタレン−２−イル、テトラヒドロ−フラン−２−イル、５−ブロモフラン−２−イル、２−クロロ−ピリジン−３−イル、３−カルボキシ−ピラジン−２−イル、２−フェニル−キノリン−４−イル、チオフェン−２−イル、フェニルフェニルスルファニル−メチル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、３−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−プロピル、８−アリル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル、４メチル−ピペラジン−１−イルメチル、５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イルメチル、４−クロロ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−４Ｈ−ピラゾール−１−イル−メチル、５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３−ニトロ［１，２，４］トリアゾール−１−イルメチル、４−ニトロ−イミダゾール−１−イルメチル、５，７−ジフェニル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル、６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３，６−ジブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−エトキシ−フェニル）−７−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−ブロモ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジ��−２−イル、５−（４−フルオロ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、３−ブロモ−５−チオフェン−２−イル−７トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−６−フルオロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル、４−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、４−メチル−３−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、２−クロロ−５−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、５−ジエチルスルファモイル−フェニル、４−ジプロピルスルファモイルフェニル、４−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル、ベンゾ［４，５］チアゾロ［２，３−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル、３−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−ブロモ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４クロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、および２，４−ジクロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニルから成る群から選択された請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
Ｒ2は、水素、メチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび１，１−ジメチル−プロピルから成る群から選択された請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
Ｒ3は水素およびメチルから成る群から選択された請求項６５に記載の組成物。
【請求項６９】
前記阻害剤はＮ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである請求項６５に記載の組成物。
【請求項７０】
前記化学療法薬はアルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子から成る群から選択された請求項６５に記載の組成物。
【請求項７１】
一般式、
【化１０】
2006505246.tif 000026
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物。
【請求項７２】
Ｒ1は４−ブロモ−ベンゾイルアミノ、（アダマンタン−２−イル−ヒドロキシ−メチル）−アミノおよびフェニルアミノから成る群から選択された請求項７１に記載の組成物。
【請求項７３】
Ｒ2はジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル、ｐ−クロロ−フェニル、ｐ−メチル−フェニル、フェニルおよびｐ−メトキシ−フェニルから成る群から選択された請求項７１に記載の組成物。
【請求項７４】
Ｒ3は水素、２−プロピルおよびフェニルから成る群から選択された請求項７１に記載の組成物。
【請求項７５】
Ｒ4は水素およびメチルから成る群から選択された請求項７１に記載の組成物。
【請求項７６】
前記阻害剤は［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである請求項７１に記載の組成物。
【請求項７７】
前記化学療法薬はアルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子から成る群から選択された請求項７１に記載の組成物。
【請求項７８】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与して癌細胞の移動を阻害することを含み、細胞移動を阻害することによって細胞分裂を増加させ、前記細胞移動阻害剤および前記化学療法薬の組合せは細胞分裂を増加させることによって前記化学療法薬単独と比較して効果が増大する、癌を有する個人の治療方法。
【請求項７９】
前記細胞移動阻害剤は分子量約７００未満の有機分子を含む請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記細胞移動阻害剤はモノクローナル抗体を含む請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記細胞移動阻害剤は天然産物を含む請求項７８に記載の方法。
【請求項８２】
一般式、
【化１１】
2006505246.tif 000027
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法。
【請求項８３】
一般式、
【化１２】
2006505246.tif 000028
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法。
【請求項８４】
一般式、
【化１３】
2006505246.tif 000029
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法。
【請求項８５】
一般式、
【化１４】
2006505246.tif 000030
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法。
【請求項８６】
一般式、
【化１５】
2006505246.tif 000031
の細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法。
【請求項８７】
個人の癌の組織培養を確立し、
前記組織培養に基づいて癌の細胞移動阻害剤を同定し、かつ
前記細胞移動阻害剤と組み合わせて有効な化学療法薬を同定することを含む癌を有する個人の治療の同定方法。
【請求項８８】
前記細胞移動阻害剤および前記化学療法薬を前記個人に投与することをさらに含む請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
疾患が少なくとも部分的に異常な細胞移動に関与する疾患の治療方法であって、
前記疾患を有する個人に細胞移動阻害剤を投与
することによって前記異常な細胞移動を改変し、かつ
医薬品を前記個人に投与することによって前記疾患を治療することを含む治療方法。
【請求項９０】
前記疾患には自己免疫疾患が含まれる請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記疾患には心臓血管疾患が含まれる請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含み、前記阻害剤は分子量約７００未満の有機分子であり、前記阻害剤はアリール化剤である細胞移動の阻害方法。
【請求項９３】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤はアリール化剤である医薬組成物。
【請求項９４】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤はアリール化剤である癌を有する個人の治療方法。
【請求項９５】
細胞移動阻害剤で神経膠腫癌細胞を治療することを含み、前記阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である神経膠腫癌細胞移動の阻害方法。
【請求項９６】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアであり、神経膠腫癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項９７】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである脳癌を有する個人の治療方法。
【請求項９８】
細胞移動阻害剤で乳癌細胞を治療することを含み、前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である乳癌細胞移動の阻害方法。
【請求項９９】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアであり、乳癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項１００】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである乳癌を有する個人の治療方法。
【請求項１０１】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬はパクリタキシルであり、乳癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項１０２】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬はパクリタキシルである乳癌を有する個人の治療方法。
【請求項１０３】
細胞移動阻害剤でメラノーマ癌細胞を治療することを含み、前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であるメラノーマ癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１０４】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアであり、メラノーマ癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項１０５】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸であり、前記化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアであるメラノーマ癌を有する個人の治療方法。
【請求項１０６】
肺癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である肺癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１０７】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１０８】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は２−｛［１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−フェニル−１，２，３，３ａ−テトラヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３−イル］−シクロプロピル−メチレン｝−マロノニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１０９】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は１−ベンゾイル−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１１０】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は２−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−１−シクロプロパンカルボニル−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１１１】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−フルオロ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１１２】
膵臓癌細胞を細胞移動阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである膵臓癌細胞移動の阻害方法。
【請求項１１３】
細胞を血管形成阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである血管形成の阻害方法。
【請求項１１４】
細胞を血管形成阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤はＮ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである血管形成の阻害方法。
【請求項１１５】
細胞を血管形成阻害剤で処理することを含み、前記阻害剤は［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである血管形成の阻害方法。
【請求項１１６】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルであり、前記化学療法薬はゲムシタビンであり、膵臓癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項１１７】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルであり、前記化学療法薬はゲムシタビンである膵臓癌を有する個人の治療方法。
【請求項１１８】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含み、前記細胞移動阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルであり、前記化学療法薬はゲムシタビンであり、膵臓癌細胞の相乗的殺滅を示す医薬組成物。
【請求項１１９】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含み、前記細胞移動阻害剤は１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルであり、前記化学療法薬はゲムシタビンである膵臓癌を有する個人の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般的に、細胞移動阻害組成物および細胞移動阻害方法ならびに癌治療用組成物に関する。ある実施形態は、細胞移動を阻害する組成物の同定方法および化学療法剤と共に相乗作用を有する組成物の同定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生細胞の移動異常は、多くのヒト疾患の根底にある原因である。癌、心臓疾患、動脈硬化、創傷治癒、関節炎およびいくつかの自己免疫疾患はいずれも、細胞運動を混乱させる要素を共有している。この変化は、細胞運動を促進するか、または不十分にすることが可能である。
【０００３】
細胞運動の異常が原因の疾患の中で、癌は合衆国における死因の第２位である。１９９０年以来、約１６００万人が癌と診断され、５００万の命が癌で失われた。合衆国では４人に１人が癌で亡くなっていることになる。アメリカ癌学会は、２００２年には新たに１２２０１００件が癌と診断され、５５２２００人のアメリカ人、１日に１５００人を上回る人が癌で亡くなると推定している。これらの概算には非侵襲性癌は排除されており、基底細胞癌および扁平上皮癌は含まれていない。実際に、皮膚癌はその他のいずれの器官の癌よりも一般的で、今年基底細胞および扁平上皮細胞の皮膚癌と診断される症例は１３００万件を上回ることが予測される。合衆国における癌のための財政費用は１年当たり１０００億ドルを超える。
【０００４】
癌において細胞移動（浸潤および転移）は重要な役割を果たすことが認識されているが、細胞移動に対する化学物質の影響をスクリーニングする技術がなく、細胞移動についてはほとんど未調査のままである。細胞移動の研究方法の例には、たとえば、ボイデン・チャンバーアッセイおよびＳｃｒａｔｃｈ  Ｗｏｕｎｄアッセイが含まれる。ボイデン・チャンバーアッセイには一般的に、膜の片側に細胞を入れることが必要である。膜の孔径は調べる細胞の直径よりも小さい。細胞を該膜の片側に入れた後、容器を一定時間インキュベートする。細胞移動は、一定時間後膜のもう一方の側に存在する細胞の数を測定することによって評価することができる。Ｓｃｒａｔｃｈ  Ｗｏｕｎｄアッセイは一般的に、コンフルエントな単層細胞を引っ掻いて、それによって単層に「傷」を作り出す。細胞移動は、周辺の細胞による傷の修復をモニターすることによって評価することができる。もう１つの移動アッセイは、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．、テメキュラ、カリフォルニアから市販されている。このアッセイには一般的に、挿入膜の底部の移動性細胞の分離が関与する。分離した細胞を溶解して、細胞の核酸に結合したときに蛍光を示す色素を使用して検出する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、細胞移動を調べる前記方法にはいくつかの欠点がある。たとえば、細胞移動を調べるこれらの方法は扱いにくく、高価で、比較的大量の試薬が必要で、感受性が悪く、再現が困難である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の実施形態は細胞移動を阻害する化学物質の同定方法に関する。一実施形態では、該方法には基質上の予め決定した位置に癌細胞を沈着させ、該癌細胞を基質上で化学物質によって処理することを含めることができる。たとえば、該方法には、細胞の誘導沈殿法を使用して癌細胞を沈着させ、該癌細胞を沈着後化学物質で処理することを含めることができる。該方法には、化学物質のライブラリーから選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度および未処理癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。化学物質の該ライブラリーには、分子量約７００未満の有機分子を含めることができる。さらに、該ライブラリーの化学物質はすべて、有機分子を含むことができる。他の実施形態では、化学物質の該ライブラリーには、モノクローナル抗体および／または天然産物を含めることができる。細胞移動速度の測定には、癌細胞が癌細胞試料のほぼ中心から放射状に移動する距離を測定することを含めることができる。一実施形態では、該方法にはまた、化学物質で処理した癌細胞および未処理対照試料中の癌細胞の他の特性の測定を含めることができる。
【０００７】
処理した癌細胞の細胞移動速度が未処理癌細胞より遅ければ、該方法には異なる用量の化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。用量が増加するにつれて細胞移動速度が減少するならば、該方法にはまた、該化学物質を細胞移動速度阻害化学物質と同定することを含めることができる。他の実施形態では、該方法にはまた、該化学物質と化学療法薬との組合せが癌細胞の殺滅に相乗効果を示すかどうかを測定することを含めることができる。
【０００８】
他の実施形態では、該方法には、該ライブラリーから選択した様々な化学物質で処理した癌細胞の複数試料の細胞移動速度を測定することを含めることができる。このような方法にはまた、少なくとも未処理対照試料の細胞移動速度よりも遅い細胞移動速度の１種または複数の化学物質を選択することを含めることができる。さらに、該方法には、異なる用量の選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。異なる用量の選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度が用量を増加させるにつれて減少するならば、該方法にはさらに、１種または複数の選択した化学物質を細胞移動阻害化学物質と同定することを含めることができる。
【０００９】
他の実施形態は、細胞移動を改変する化学物質の同定方法に関する。該方法には、該化学物質で処理した細胞の細胞移動速度および未処理細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。該処理細胞が該未処理細胞とは異なる細胞移動速度であるならば、該方法には異なる用量の化学物質で処理した細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。該細胞移動速度が用量に依存して変化するならば、該方法にはまた、該化学物質を細胞移動速度改変化学物質と同定することが含まれる。
【００１０】
細胞移動阻害方法の一実施形態には、一般式
【００１１】
【化１】
2006505246.tif 000003
を有する細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。
【００１２】
該化学物質は、分子量が約７００未満の有機分子であってよい。前記一般式において、ｎは１または２であってよい。Ｒ1はメチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ｔｅｒｔ−ブチル、アセトキシ、フェニル、ビフェニル−４−イル、４−ヨード−フェニルおよび４−ペンチル−フェノキシカルボニルメチルから成る群から選択してよい。Ｒ2は、水素、４−アセチル−アミノ、４−（２−シアノ−エチル）−フェニル、４−プロペニル−フェニル、４−ペンチル−フェニル、４−ブロモ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３−クロロ−４−フルオロ−フェニル、４−アセチル−フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、４−オクチルオキシ−フェニル、２，３−ジシアノ−４−ヘキシルオキシ−フェニル、４−ブトキシ−２，３−ジクロロ−フェニル、４−ペンタノイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ビフェニル−４−イル、４’−メチル−ビフェニル−４−イル、４’−シアノ−ビフェニル−４−イル、２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチル、２−（４’−ブロモ−ビフェニル−４−イル）−２−オキソ−エチル、４−シクロヘキサンカルボニルオキシ−フェニルおよび４−安息香酸エチルエステルから成る群から選択してよい。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である。
【００１３】
細胞移動阻害方法の他の実施形態には、一般式
【００１４】
【化２】
2006505246.tif 000004
を有する細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。
【００１５】
この化学物質はまた、分子量が約７００未満の有機分子であってよい。Ｒ1は、水素、メチル、メトキシ、ブロモ、アミノ、２−ヒドロキシ−エチルアミノおよび３−ヒドロキシ−プロピルアミノから成る群から選択される。Ｒ2は、水素およびアセチルアミノから成る群から選択される。一実施形態では、Ｒ1またはＲ2は水素であってよい。他の実施形態では、Ｒ1およびＲ2は非環式基であってよい。他の実施形態では、Ｒ1およびＲ2はニトロ基であってはならない。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である。
【００１６】
細胞移動阻害方法の他の実施形態には、一般式
【００１７】
【化３】
2006505246.tif 000005
を有し、分子量が約７００未満の有機分子であってよい細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。Ｒ1はフェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、４−フルオロ−フェニルおよび４−メトキシ−フェニルから成る群から選択してよい。Ｒ2は、４−（２，２−ジシアノ−１−シクロプロピル−ビニル）およびジシアノから成る群から選択してよい。Ｒ3は、４−クロロフェニル、フェニルおよびシクロプロピルから成る群から選択してよい。細胞移動阻害を示す化学物質の一実施形態は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。細胞移動阻害を示す化学物質の他の実施形態は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。
【００１８】
細胞移動阻害方法のさらに他の実施形態には、一般式
【００１９】
【化４】
2006505246.tif 000006
を有し、分子量約７００未満の有機分子であってよい細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。Ｒ1は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、フェニル、ベンジル、ビフェニル−４−イル、２−メチル−フェニル、４メチル−フェニル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル、２−ブロモ−フェニル、３−ブロモ−フェニル、４−ブロモ−フェニル、２−クロロ−フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロ−フェニル、２，４−ジクロロ−フェニル、２，５−ジクロロ−フェニル、２−フルオロ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、２，６−ジフルオロフェニル、３，４−ジフルオロ−フェニル、３−トリフルオロメチル−フェニル、３−ヨード−フェニル、４−アセチル−フェニル、−２−ホルミル−フェニル、２−カルボキシフェニル、３−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、３−メトキシ−フェニル、４−メトキシ−フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、３，５ジメトキシ−フェニル、３，４，５−トリメトキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、３，４，５−トリエトキシ−フェニル、４−ブトキシ−フェニル、４フェノキシメチル、４−フェノキシ−フェニル、４−クロロ−フェノキシメチル、２−ニトロ−フェニル、３−ニトロ−フェニル、４−ニトロ−フェニル、３，５ジニトロ−フェニル、２−メチル−３−ニトロ−フェニル、２−クロロ−４−ニトロ−フェニル、４−クロロ−３−ニトロ−フェニル、２−カルボキシ−５−ニトロ−フェニル、４−ベンゾイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ナフタレン−１−イル、３−メトキシ−ナフタレン−２−イル、テトラヒドロ−フラン−２−イル、５−ブロモフラン−２−イル、２−クロロ−ピリジン−３−イル、３−カルボキシ−ピラジン−２−イル、２−フェニル−キノリン−４−イル、チオフェン−２−イル、フェニルフェニルスルファニル−メチル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、３−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−プロピル、８−アリル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル、４メチル−ピペラジン−１−イルメチル、５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イルメチル、４−クロロ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−４Ｈ−ピラゾール−１−イル−メチル、５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３−ニトロ［１，２，４］トリアゾール−１−イルメチル、４−ニトロ−イミダゾール−１−イルメチル、５，７−ジフェニル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル、６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３，６−ジブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−エトキシ−フェニル）−７−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピ��ミジン−２−イル、５−（４−ブロモ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、５−（４−フルオロ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、３−ブロモ−５−チオフェン−２−イル−７トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−６−フルオロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル、４−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、４−メチル−３−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、２−クロロ−５−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、５−ジエチルスルファモイル−フェニル、４−ジプロピルスルファモイルフェニル、４−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル、ベンゾ［４，５］チアゾロ［２，３−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル、３−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−ブロモ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４クロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、および２，４−ジクロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニルから成る群から選択してよい。
【００２０】
Ｒ2は、水素、メチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび１，１−ジメチル−プロピルから成る群から選択してよい。Ｒ3は、水素およびメチルから成る群から選択してよい。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである。
【００２１】
他の実施形態では、細胞移動の阻害方法には、一般式
【００２２】
【化５】
2006505246.tif 000007
を有し、分子量が約７００未満の有機分子であってよい細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。Ｒ1は、４−ブロモ−ベンゾイルアミノ、（アダマンタン−２−イル−ヒドロキシ−メチル）−アミノおよびフェニルアミノから成る群から選択してよい。Ｒ2は、ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル、ｐ−クロロ−フェニル、ｐ−メチル−フェニル、フェニルおよびｐ−メトキシ−フェニルから成る群から選択してよい。Ｒ3は、水素、２−プロペニルおよびフェニルから成る群から選択してよい。Ｒ4は、水素およびメチルから成る群から選択してよい。一実施形態では、該化学物質は［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである。
【００２３】
他の実施形態は、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれか１種を含む医薬組成物に関する。該医薬組成物はまた、化学療法薬を含む。該化学療法薬には、アルキル化剤、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子が含まれるが、それだけに限定されない。一実施形態では、該医薬組成物には、本明細書で記載した複数の細胞移動阻害剤および／または複数の前記化学療法薬を含めることができる。該医薬組成物にはまた、薬剤として許容される担体を含めることができる。
【００２４】
一実施形態では、該阻害剤は４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸で、該化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである。他の実施形態では、該阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で、該化学療法薬は１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレアである。他の実施形態では、該阻害剤は４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で、該化学療法薬はパクリタキセルである。医薬組成物の他の実施形態には、細胞移動阻害剤１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルおよび化学療法薬ゲムシタビンが含まれる。医薬組成物の他の実施形態には、細胞移動阻害剤１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルおよびゲムシタビンが含まれる。
【００２５】
他の実施形態は、癌を有する個人の治療方法に関する。該方法には、細胞移動阻害剤および化学療法薬を該個人に投与して癌細胞の移動を阻害することが含まれる。細胞移動を阻害することによって、細胞分裂を促進することができる。このように、該細胞移動阻害剤および該化学療法薬の組合せは、細胞分裂を増加させることによって該化学療法薬単独と比較して増大した効果を発揮することができる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した阻害剤のいずれかを含めてよい。たとえば、該細胞移動阻害剤は、分子量が約７００未満の有機分子であってよい。
【００２６】
他の実施形態は、癌を有する個人の治療方法に関する。該方法には、細胞移動阻害剤および化学療法薬を該個人に投与することを含めることができる。該細胞移動阻害剤は、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれか１種であってよい。該化学療法薬は、本明細書で説明した化学療法薬のいずれか１種であってよい。さらに、該方法には、複数の細胞移動阻害剤および／または複数の化学療法薬を該個人に投与することを含めることができる。該細胞移動阻害剤および該化学療法薬は、当業界で公知の任意の方法（すなわち、経口的、静脈内など）を使用して投与してよい。
【００２７】
他の実施形態は、癌を有する個人の治療の同定方法に関する。該方法には、該個人の癌の組織培養を確立することを含めることができる。該方法にはまた、該組織培養に基づいて該癌の細胞移動阻害剤を同定することを含めることができる。さらに、該方法には、細胞移動阻害剤と組み合わせて効果を発揮する化学療法薬を同定することを含めることができる。他の実施形態では、該方法には、該細胞移動阻害剤および該化学療法薬を該個人に投与することを含めることができる。
【００２８】
異常な細胞移動に少なくとも部分的に関与し得る疾患の治療方法もまた提供する。該疾患は、自己免疫疾患または心臓血管疾患であってよいが、それだけに限定されない。該方法には、該疾患を有する個人に細胞移動阻害剤を投与することによって疾患の異常な細胞移動を改変することを含めることができる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかを含めることができる。該方法にはまた、医薬品を該個人に投与することによって該疾患を治療することを含めることができる。該医薬品には、前述したような疾患の治療に適切な任意の医薬品を含めることができる。
【００２９】
本明細書で記載した化合物はアリール化剤である。したがって、アリール化剤であるその他の比較的小さな有機分子もまた、細胞移動を阻害することができる。細胞移動の阻害方法の一実施形態には、アリール化剤である細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。他の実施形態は、少なくとも１種はアリール化剤である１種または複数の細胞移動阻害剤および１種または複数の化学療法薬を含む医薬組成物に関する。該化学療法薬には、当業界で公知の任意の化学療法薬を含めることができる。該医薬組成物にはまた、薬剤として許容される担体を含めることができる。他の実施形態は、アリール化剤である細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む、癌を有する個人の治療方法に関する。該方法は、本明細書で説明したように実施することができる。
【００３０】
他の実施形態では、モノクローナル抗体および天然産物などのその他の化合物もまた、細胞移動を阻害することができる。細胞移動阻害方法の一実施形態には、モノクローナル抗体または天然産物である細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。他の実施形態は、少なくとも１種がモノクローナル抗体または天然産物である１種または複数の細胞移動阻害剤および１種または複数の化学療法薬を含む医薬組成物に関する。該化学療法薬には、当業界で公知の任意の化学療法薬を含めることができる。該医薬組成物にはまた、薬剤として許容される担体を含めることができる。他の実施形態は、モノクローナル抗体または天然産物である細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む、癌を有する個人の治療方法に関する。該方法は、本明細書で説明したように実施することができる。
【００３１】
本発明の他の目的および利点は、以下の詳細な説明を読み、添付の図面を参照にすると明らかになるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
本発明は様々な改変および変更形態を受け入れることができるが、その特定の実施形態を図面の実施例によって示し、本明細書で詳細に説明する。しかし、この図面およびそれらの詳細な説明は本明細書を開示した特定の形態に限定するものではなく、反対に、本発明は添付した請求の範囲によって定義された本発明の精神および範囲内にある改変、同等物および代替物すべてを含むことを理解されたい。
【００３３】
さて、図面に目を向けると、図１は細胞の誘導沈殿装置の底部透過図を示している。該装置には、マニホールド１０が含まれる。マニホールド１０の側面の長さは、細胞を沈着させる基材よりも大きい。マニホールド１０は、ステンレススチールなどの中実な材料の塊から形成することができる。該材料は、比較的低い温度を該マニホールドによって維持できるような熱吸収体であってよい。該マニホールドにはチャンネル１２が含まれる。該チャンネルは市販のテフロン（登録商標）保護スライドのために形成されている。該チャンネルは該マニホールドを予め決定された間隔で区切るように配置されている。図１には１０個のチャンネルが示されているが、該マニホールドには任意の数のこのようなチャンネルを含めることができることを理解されたい。たとえば、該マニホールドは、８×１２の２次元チャンネルアレイに配置された９６個のチャンネルを含めてよい。図１ａは、９６チャンネルマニホールドの一部の上面透過図を示し、図１ｂは９６チャンネルマニホールドの下面透過図を示す。図１ａおよび１ｂで示したマニホールドは本明細書で説明したように設計することができる。該チャンネルの半径は約１．０ｍｍであり、長さは該マニホールドの高さに等しくすることができる。該マニホールド全体の高さは２．５ｃｍ未満で、表面張力によって生理学的液体がチャンネルの上まで満たされる理論的限界距離である。該マニホールドの高さは１．２５ｃｍが好ましい。
【００３４】
図２は、基材１４に組み合わせた図１の細胞の誘導沈殿装置の断面図である。該基材は顕微鏡スライドである。図２に示したように、該マニホールドを該基材に組み合わせたとき、チャンネル１２は、マニホールドの上面から基材１４の上面より少し上まで達する。チャンネル１２の底部１６は、各チャンネルが他のチャンネルから隔離されるようにマニホールドの底面から突き出している。底部１６は、該チャンネルの最低外側辺近位に斜角面を含む。斜角面１８は、該チャンネルの出口近位の毛管引力を減少させる。
【００３５】
マニホールド１０は、該マニホールドの２個の底辺から横に突き出したツメ２０によって基材１４と組み合わされる。該突き出したツメは、マニホールドを切削することによって形成する。図１に示したように、該マニホールドはまた、該マニホールドの第３の底辺に形成した突き出したツメ２２を含む。該突き出したツメを使用して該マニホールドを該スライド上に配置し、マニホールドが基材上で２つの側面方向にずれるのを防ぐ。該装置はさらに、本明細書で完全に示すように参考として援用したＢｅｒｅｎｓの米国特許第５９９８１６０号に記載されたように構成することができる。適切な細胞沈殿マニホールドの一例がＣｒｅａｔｉｖｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｉｎｃ．、フェニックス、アリゾナから市販されている。
【００３６】
細胞の誘導沈殿装置を使用して、基材の予め決定した位置に細胞を沈着させることができる。前述したマニホールドおよび基材を加圧滅菌バッグに入れて保存し、約１時間加圧蒸気滅菌して該マニホールドを滅菌することができる。次に、試験を実施するまで該マニホールドを約４℃で保存することができる。図３は、基材１４の上部概略図である。沈着の前に、細胞を沈着させる基材１４の表面を実施する実験に応じて処理する。たとえば、表面コーティング剤約２０μｌを各ウェルに添加して、約３７℃で約１時間インキュベートする。細胞を沈着する直前に、基材上のテフロン加工したウェル２４を試験する細胞に適した培養培地になじませる。培地約５０μｌを各ウェルに入れる。図２に示したように、突き出したツメ２０および２２が該マニホールドを該基材に固定するように４℃に予備冷却したマニホールド１０を基材に組み合わせる。少量の培地（すなわち、約１μｌ）をマニホールドの各チャンネルから吸引して、チャンネル内の泡を除去する。
【００３７】
当業界で公知の任意の方法によって培地から細胞を収集する。細胞濃度は、約２０００細胞／μｌに調節する。適切な細胞濃度は、細胞の種類に応じて変更することができる。該細胞を約１μｌの量で各チャンネルに沈着させる。該基材上に沈着した細胞数は、研究する細胞の物理特性に応じて変化する。たとえば、約５００個から約３０００個の細胞を各位置に沈着させる。マニホールド、基材および細胞を、一定期間、たとえば、約３０分間静かに放置する。この間に、該細胞は沈殿する。沈殿とは一般的に、重力によって懸濁物中のより重い物体が系の最低部分に沈む過程として定義される。本明細書では、沈殿とは、細胞が重力によってマニホールド内のチャンネルに充填された培地の直立した円柱を沈む過程を意味する。細胞の損傷を防ぐために重力より大きい力をかけてはならない。
【００３８】
マニホールド、基材および細胞を、温度および雰囲気を制御した組織培養用インキュベーターに数時間から一晩移し、細胞を基材表面上に接着させる。インキュベーターの適切な条件は、約３７℃、二酸化炭素（ＣＯ2）約３７％および湿気のある空気である。該細胞は該チャンネル底部の決められた位置に沈殿する。したがって、該マニホールドを基材から取り外すと、図３に示したように、該細胞は基材の予め決定された位置に細胞のディスク２６として沈着する。このような細胞の沈殿にはさらに、Ｂｅｒｅｎｓによって記載された方法のその他の任意の段階を含めることができる。該細胞を接着させ、該マニホールドを取り外した後で、各ウェル中の細胞に適切な溶液を再度供給することができる。
【００３９】
該細胞の誘導沈殿装置は、細胞移動の研究にいくつかの利点をもたらす。たとえば、生細胞は、細胞の生存力および機能を完全に維持したままで基材の予め決定された領域に沈着させることができる。多くの様々な種類の細胞はまた容易に基材に沈着し、それによって細胞移動の研究が非常に容易になる。さらに、該装置を使用して、比較的少量で細胞移動に対する化学物質の効果を決定することができる。さらに、たとえば倒立顕微鏡を使用して、細胞移動時の該化学物質の細胞移動に対する効果を調べることができる。さらに、予め決定した、限定された位置に細胞を沈着させて、該細胞の一連の動きのビデオ顕微鏡分析を使用することができる。したがって、前述の細胞の誘導沈殿装置によって、細胞レベルおよび遺伝子発現レベル両方の分析で細胞移動を詳細な研究が可能となり、それによって医学研究の分野に新しい、未開拓の機会が広がる。さらに、該細胞の誘導沈殿装置を使用して得られた結果は、前記で詳細に説明したボイデン・チャンバーアッセイおよびＳｃｒａｔｃｈ  Ｗｏｕｎｄアッセイなどのその他の方法に匹敵する。
【００４０】
本明細書で説明した方法および系を使用して、様々な種類の癌細胞の細胞移動阻害を調べることができる。様々な種類の癌には、神経膠腫（脳腫瘍）、乳癌、脳に転移のある乳癌、肺／気管支癌、脳に転移のある肺癌、メラノーマ（皮膚癌）、脳に転移のあるメラノーマ、その他の中枢神経系癌、膵臓癌、胃癌、肝癌、結腸／直腸癌、子宮頚癌、子宮体癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、口腔／咽頭癌、食道癌、白血病および非ホジキンリンパ腫が含まれるが、それだけに限定はされない。
【００４１】
時間経過後の細胞移動は、時間経過後個々の細胞の位置をモニターするか、または時間経過後細胞円周の半径を測定するかによってモニターすることができる。細胞円周の半径の測定には、該円の外縁に対して全体的に垂直な方向に移動する周辺細胞を検出して、移動細胞の外縁を決定することを含めることができる。該周辺細胞は予め決定された領域内にコンフルエントな単層として沈着し得るので、該細胞は容易に検出される。時間の関数として該半径を測定するために、低倍率光学装置を使用して、該細胞によって占有される全領域を表すことができる。このような測定を行うためには、時間が経過すると細胞が占有する領域が増大するので、該細胞の最初の領域は、低倍率光学装置の視野よりも小さくしなくてはならない。あるいは、沈着した細胞試料内で細胞を計数し、特徴付けることができるように、数字などの識別を個々の細胞に割り当てることができる。たとえば、高倍率対物レンズを使用して、個々の細胞を確認、計数または特徴付けることができる。個々の細胞をモニターすることによって、細胞の最初の領域は限定されない。
【００４２】
一実施形態では、細胞移動阻害を測定するキットもまた提供する。該キットには、細胞の誘導沈殿装置、癌細胞、およびライブラリーの１種または複数の化学物質を含めることができる。該装置は、該癌細胞が基材上の予め決定された位置に沈着できるように設計することができる。該装置はさらに、本明細書で説明したように設計することができる。該癌細胞には、本明細書で記載した癌細胞のいずれかまたは当業界で公知の任意の癌細胞を含めることができる。該１種または複数の化学物質には、分子量約７００未満の有機分子、モノクローナル抗体および／または天然産物を含めることができる。該癌細胞は、基材上で１種または複数の化学物質で処理することができ、該癌細胞の細胞移動速度を該基材上で測定することができる。該キットはまた、１種または複数の化学物質および化学療法薬を組み合わせることによって、癌細胞の相乗的殺滅を評価するために使用することができる。１種または複数の化学療法薬を該キットに含めることができ、該化学療法薬には本明細書で説明したか、または当業界で公知の任意の化学療法薬を含めることができる。
【００４３】
図４は、細胞移動を阻害する化学物質の同定方法の一実施形態を示した流れ図である。該方法には、段階２８に示したように、癌細胞を基材上の予め決定した位置に沈着させることを含めることができる。細胞移動実験に適した細胞量は、培地約２５μｌ中約２０００個から約３０００個であってよい。該癌細胞には、神経膠腫癌細胞、メラノーマ癌細胞、乳癌細胞、膵臓癌細胞、肺癌細胞、または本明細書で記載した任意のその他の種類の癌の細胞を含めることができる。さらに、該細胞には、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を含めることができる。これらの細胞は、潜在的血管形成阻害剤の検出および血管内皮再狭窄阻害剤の検出のためのモデル系である。これらの細胞は、たとえば、Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．、サンディエゴ、カリフォルニアから市販されている。癌細胞の沈着は、細胞の誘導沈殿および前述の装置を使用して実施することができる。
【００４４】
該方法にはまた、段階３０で示したように沈殿後基材上の癌細胞を化学物質のライブラリーから選択された１化学物質で処理することを含めることができる。該癌細胞を処理するために使用する化学物質の量は、ピコグラムからナノグラムまで変化させてよい。化学物質の該ライブラリーは、新規または市販の化学物質のリストから無作為に選択してよい。化学物質の該ライブラリーには、分子量約７００未満の有機分子を含めることができる。化学物質の該ライブラリーには、分子量約５００未満の有機分子を含めることができる。一実施形態では、該ライブラリーの化学物質はすべて有機分子を含んでいてよい。しかし、本明細書で説明した方法を使用して、任意の分子量の当業界で公知の任意の分子で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定することができることを理解されたい。たとえば、化学物質の該ライブラリーには、モノクローナル抗体および／または天然産物を含めることができる。本明細書では、「天然産物」とは、天然に見いだすことができるか、または天然に見いだされた化学物質から半合成法を使用して形成することができる任意の化学物質を意味するために使用される。該ライブラリーの化学物質は、処理および対照細胞の両方に無毒な分子である。
【００４５】
段階３２で示したように、該方法には、化学物質のライブラリーから選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度および未処理癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。該細胞移動速度の測定は、該癌細胞の試料のほぼ中心から放射状に癌細胞が移動する距離を測定することによって実施することができる。たとえば、該癌細胞の測定には、前述のように時間経過後円周細胞の半径を測定することを含めることができる。移動速度は、前述のように測定し、μｍ／日の単位で表すことができる。該方法にはまた、化学物質で処理した癌細胞および未処理対照試料の癌細胞の他の特性を測定することを含めることができる。他の特性には、たとえば、走化性、走触性、走電性、化学向性および／またはケモキネシスを含めることができる。
【００４６】
段階３４に示したように、該方法には、処理癌細胞の細胞移動速度が未処理癌細胞よりも遅いかどうかを測定することを含めることができる。処理癌細胞の細胞移動速度が未処理癌細胞よりも遅ければ、該方法には、段階３６に示したように、様々な用量の該化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。異なる用量で処理した細胞株試料を使用して、用量応答曲線を作成することができる。さらに、該方法には、段階３８に示したように、用量が増加するにつれて該細胞移動速度が減少するならば、該化学物質を細胞移動阻害化学物質として同定することが含まれる。該処理癌細胞の細胞移動速度が未処理癌細胞よりも遅くなければ、該方法には段階４０で示したように該ライブラリーから異なる化学物質を選択し、該異なる化学物質について少なくとも段階２８〜３４を繰り返すことを含めることができる。
【００４７】
前述の細胞の誘導沈殿装置によって比較的低費用で細胞移動のハイスループットスクリーニングが行うことができるので、このような方法はまた、化学物質のライブラリーから選択した複数の化学物質で容易に実施することができる。たとえば、前述のように、細胞を基材上の予め決定した複数の位置に沈着させることができる。さらに、癌細胞の様々な試料を該ライブラリーから選択した様々な化学物質で処理することができ、各試料の細胞移動速度を測定することができる。該癌細胞の未処理試料の細胞移動速度もまた、測定することができる。該細胞移動速度を使用して、該化学物質が細胞移動を阻害する相対的能力を比較することができる。少なくとも未処理対照試料の癌細胞よりも細胞移動速度が遅い１種または複数の異なる化学物質を選択することができる。様々な化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度もまた比較することができる。たとえば、癌細胞の全試料の平均細胞移動速度を決定し、該平均よりも予め決定した値だけ遅い細胞移動速度の試料を選択することができる。任意のその他の比較もまた使用して、潜在的細胞移動阻害剤として化学物質を選択することができる。該方法にはまた、様々な用量の選択した化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。さらに、該方法には、用量が増加するにつれて癌細胞の細胞移動速度が減少するならば、１種または複数の選択した化学物質を細胞移動阻害化学物質として同定することを含めることができる。
【００４８】
本明細書で説明した方法はすべて、癌細胞またはその他の移動性細胞の移動に対する化学物質の効果を調べるために使用することができる。たとえば、細胞移動を改変する化学物質の同定方法には、化学物質で処理した細胞の細胞移動および未処理細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。該方法にはまた、処理した細胞の細胞移動速度が未処理細胞と異なるならば、異なる用量の化学物質で処理した細胞の細胞移動速度を測定することを含めることができる。さらに、該方法には、該細胞移動速度が用量に応じて変化するならば、細胞移動を改変する化学物質として該化学物質を同定することを含めることができる。このようにして、本明細書で説明した方法はまた、創傷治癒のために使用することができる。細胞移動を改変する化学物質はまた、細胞移動を増大させる化学物質を同定するために使用することができる。細胞移動を増大させる化学物質を使用して、疾患の少なくとも一部が細胞移動異常に関係する疾患を治療することができる。このような疾患の例には、自己免疫疾患および心臓血管疾患を含めることができるが、それだけには限定されない。
【００４９】
細胞移動阻害剤として同定した化学物質の一実施形態は、一般式
【００５０】
【化６】
2006505246.tif 000008
を有する。
該化学物質は、分子量が約７００未満の有機分子である。前記一般式では、ｎは１または２である。Ｒ1は、メチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ｔｅｒｔ−ブチル、アセトキシ、フェニル、ビフェニル−４−イル、４−ヨード−フェニルおよび４−ペンチル−フェノキシカルボニルメチルから成る群から選択される。Ｒ2は、水素、４−アセチル−アミノ、４−（２−シアノ−エチル）−フェニル、４−プロペニル−フェニル、４−ペンチル−フェニル、４−ブロモ−フェニル、４−クロロ−フェニル、３−クロロ−４−フルオロ−フェニル、４−アセチル−フェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、４−オクチルオキシ−フェニル、２，３−ジシアノ−４−ヘキシルオキシ−フェニル、４−ブトキシ−２，３−ジクロロ−フェニル、４−ペンタノイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ビフェニル−４−イル、４’−メチル−ビフェニル−４−イル、４’−シアノ−ビフェニル−４−イル、２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチル、２−（４’−ブロモ−ビフェニル−４−イル）−２−オキソ−エチル、４−シクロヘキサンカルボニルオキシ−フェニルおよび４−安息香酸エチルエステルから成る群から選択される。細胞移動阻害を示す化学物質の一実施形態は、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である。前記一般式を有する化学物質は、細胞膠腫癌細胞などの様々な種類の癌細胞の細胞移動を阻害することができる。
【００５１】
細胞移動を阻害することができる前記一般式を有する化学物質の他の実施例には、
１）４−プロピル−シクロヘキサンカルボン酸、
２）４−アセトキシ−シクロヘキサンカルボン酸、
３）４−ペンチル−シクロヘキサンカルボン酸、
４）４−フェニル−シクロヘキサンカルボン酸、
５）シクロヘキサンカルボン酸４−アセチル−フェニルエステル、
６）４−メチル−シクロヘキサンカルボン酸４−クロロ−フェニルエステル、
７）４’−ブチル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸、
８）４−ビフェニル−４−イル−シクロヘキサンカルボン酸、
９）４’−ペンチル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸、
１０）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸４−シアノ−フェニルエステル、
１１）４−ペンチル−シクロヘキサンカルボン酸４−ヒドロキシ−フェニルエステル、
１２）４−メチル−シクロヘキサンカルボン酸４−ペンタノイル−フェニルエステル、
１３）４−メチル−シクロヘキサンカルボン酸４’−メチル−ビフェニル−４−イルエステル、
１４）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸４−アセチルアミノ−フェニルエステル、
１５）４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボン酸４−プロペニル−フェニルエステル、
１６）４−（４−ヨード−フェニル）−シクロヘキサンカルボン酸、
１７）４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボン酸４−エトキシ−フェニルエステル、
１８）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸ビフェニル−４−イルエステル、
１９）４−ｔｅｒｔ−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸４−ブロモ−フェニルエステル、
２０）４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボン酸４−（２−シアノ−エチル）−フェニルエステル、
２１）４−ｔｅｒｔ−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸４’−メチル−ビフェニル−４−イルエステル、
２２）４−（４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボニルオキシ）−安息香酸エチルエステル、
２３）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸４’−シアノ−ビフェニル−４−イルエステル、
２４）４−ペンチル−シクロヘキサンカルボン酸４’−シアノ−ビフェニル−４−イルエステル、
２５）４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸３−クロロ−４−フルオロ−フェニルエステル、
２６）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチルエステル、
２７）４’−ペンチル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸３−クロロ−４−フルオロ−フェニルエステル、
２８）４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボン酸４−オクチルオキシ−フェニルエステル、
２９）４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸２−（４−ブロモ−フェニル）−２−オキソ−エチルエステル、
３０）４−ヘキシル−シクロヘキサンカルボン酸２，３−ジシアノ−４−ヘプチルオキシ−フェニルエステル、
３１）４−ブチル−シクロヘキサンカルボン酸２−（４’−ブロモ−ビフェニル−４−イル）−２−オキソ−エチルエステル、
３２）シクロヘキサン−１，３−ジカルボン酸ビス−（４−ペンチル−フェニル）エステル、
３３）４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸２，３−ジシアノ−４−ヘキシルオキシ−フェニルエステル、および
３４）４’−ペンチル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸４−ブトキシ−２，３−ジクロロ−フェニルエステル
が含まれるが、それだけに限定されない。
【００５２】
細胞移動阻害剤として同定した化学物質の他の実施形態は、一般式
【００５３】
【化７】
2006505246.tif 000009
を有する。
この化学物質はまた、分子量約７００未満の有機分子である。Ｒ1は、水素、メチル、メトキシ、ブロモ、アミノ、２−ヒドロキシ−エチルアミノおよび３−ヒドロキシ−プロピルアミノから成る群から選択される。Ｒ2は、水素およびアセチルアミノから成る群から選択される。一実施形態では、Ｒ1またはＲ2は水素である。他の実施形態では、Ｒ1およびＲ2は非環式基である。他の実施形態では、Ｒ1およびＲ2はニトロ基ではない。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である。前記一般式の化学物質は、乳癌細胞、メラノーマ癌細胞および肺癌細胞などの様々な種類の癌細胞の細胞移動を阻害することができる。
【００５４】
細胞移動阻害を示すことができる前記一般式の化学物質の他の例は、
１）４−（２−ヒドロキシ−エチルアミノ）−３−ニトロ−安息香酸、
２）４−クロロ−３−ニトロ−安息香酸、
３）２−アセチルアミノ−５−ニトロ−安息香酸、
４）３−ニトロ−安息香酸、
５）４−（３−ヒドロキシ−プロピルアミノ）−３ニトロ−安息香酸、
６）２−アミノ−５−ニトロ−安息香酸、
７）４−アミノ−３−ニトロ−安息香酸、
８）４−メトキシ−３−ニトロ−安息香酸、および
９）４−ブロモ−３−ニトロ−安息香酸
が含まれるがそれだけに限定はされない。
【００５５】
細胞移動阻害剤として同定された科学物質の他の実施形態は、一般式
【００５６】
【化８】
2006505246.tif 000010
を有し、分子量が約７００未満の有機分子である。Ｒ1は、フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、４−フルオロ−フェニルおよび４−メトキシ−フェニルから成る群から選択される。Ｒ2は、４−（２，２−ジシアノ−１−シクロプロピル−ビニル）およびジシアノから成る群から選択される。Ｒ3は、４−クロロフェニル、フェニルおよびシクロプロピルから成る群から選択される。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。細胞移動阻害を示した化学物質の他の実施形態は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。前記一般式を有する化学物質は、膵臓癌細胞などの様々な種類の癌細胞の細胞移動を阻害することができる。
【００５７】
細胞移動阻害を示すことができる前記一般式を有する化学物質の他の実施形態には、
１）２−｛［１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−フェニル−１，２，３，３ａ−テトラヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３−イル］−シクロプロピル−メチレン｝−マロノニトリル、
２）１−ベンゾイル−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリル、
３）２−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−１−シクロプロパンカルボニル−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリル、および
４）１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−フルオロ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリル
が含まれるが、これだけに限定されない。
【００５８】
細胞移動阻害剤として同定された化学物質のさらに他の実施形態は、一般式
【００５９】
【化９】
2006505246.tif 000011
を有し、分子量約７００未満の有機分子である。Ｒ1は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソブチル、フェニル、ベンジル、ビフェニル−４−イル、２−メチル−フェニル、４メチル−フェニル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル、２−ブロモ−フェニル、３−ブロモ−フェニル、４−ブロモ−フェニル、２−クロロ−フェニル、３−クロロフェニル、４−クロロ−フェニル、２，４−ジクロロ−フェニル、２，５−ジクロロ−フェニル、２−フルオロ−フェニル、３−フルオロ−フェニル、２，６−ジフルオロフェニル、３，４−ジフルオロ−フェニル、３−トリフルオロメチル−フェニル、３−ヨード−フェニル、４−アセチル−フェニル、−２−ホルミル−フェニル、２−カルボキシフェニル、３−カルボキシ−フェニル、２−メトキシ−フェニル、３−メトキシ−フェニル、４−メトキシ−フェニル、３，４−ジメトキシ−フェニル、３，５ジメトキシ−フェニル、３，４，５−トリメトキシ−フェニル、４−エトキシ−フェニル、３，４，５−トリエトキシ−フェニル、４−ブトキシ−フェニル、４フェノキシメチル、４−フェノキシ−フェニル、４−クロロ−フェノキシメチル、２−ニトロ−フェニル、３−ニトロ−フェニル、４−ニトロ−フェニル、３，５ジニトロ−フェニル、２−メチル−３−ニトロ−フェニル、２−クロロ−４−ニトロ−フェニル、４−クロロ−３−ニトロ−フェニル、２−カルボキシ−５−ニトロ−フェニル、４−ベンゾイル−フェニル、４−シアノ−フェニル、ナフタレン−１−イル、３−メトキシ−ナフタレン−２−イル、テトラヒドロ−フラン−２−イル、５−ブロモフラン−２−イル、２−クロロ−ピリジン−３−イル、３−カルボキシ−ピラジン−２−イル、２−フェニル−キノリン−４−イル、チオフェン−２−イル、フェニルフェニルスルファニル−メチル、ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル、３−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−プロピル、８−アリル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−イル、４メチル−ピペラジン−１−イルメチル、５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イルメチル、４−クロロ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−４Ｈ−ピラゾール−１−イル−メチル、５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イルメチル、３−ニトロ［１，２，４］トリアゾール−１−イルメチル、４−ニトロ−イミダゾール−１−イルメチル、５，７−ジフェニル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル、６−ブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３，６−ジブロモ−１Ｈ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−エトキシ−フェニル）−７−メチルピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−（４−ブロモ−フェニル）−７−トリフ��オロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、５−（４−フルオロ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピラミジン−２−イル、３−ブロモ−５−チオフェン−２−イル−７トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−イル、５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５ａ］ピリミジン−２−イル、３−クロロ−６−フルオロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル、４−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、４−メチル−３−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、２−クロロ−５−（ピペリジン−１−スルホニル）−フェニル、５−ジエチルスルファモイル−フェニル、４−ジプロピルスルファモイルフェニル、４−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル、ベンゾ［４，５］チアゾロ［２，３−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル、３−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４−ブロモ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、４クロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニル、および２，４−ジクロロ−５−（モルホリン−４−スルホニル）−フェニルから成る群から選択される。
【００６０】
Ｒ2は、水素、メチル、ｔｅｒｔ−ブチルおよび１，１−ジメチル−プロピルから成る群から選択される。Ｒ3は、水素およびメチルから成る群から選択される。細胞移動阻害を示した化学物質の一実施形態は、Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである。
【００６１】
細胞移動阻害を示すことができる前記一般式を有する化学物質の他の実施例には、
１）Ｎ−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−フタラミン酸、
２）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ブチルアミド、
３）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ニトロ−ベンズアミド、
４）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，５−ジニトロ−ベンズアミド、
５）３−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）−ピラジン−２−カルボン酸、
６）２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
７）３−メトキシ−ナフタレン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）アミド、
８）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−フルオロ−ベンズアミド、
９）ビフェニル−４−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
１０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−ピペリジン−１−スルホニル）−ベンズアミド、
１１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−ジプロピルスルファモイル−ベンズアミド、
１２）チオフェン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
１３）４−ベンゾイル−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
１４）４−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ニトロ−ベンズアミド、
１５）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−メチル−３−ニトロ−ベンズアミド、
１６）４−アセチル−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
１７）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メチル−３−（ピペリジン−１−スルホニル）ベンズアミド、
１８）２，４−ジクロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−（モルホリン−４−スルホニル）ベンズアミド、
１９）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（モルホリン−４−スルホニル）−ベンズアミド、
２０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，４，５−トリメトキシ−ベンズアミド、
２１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ジエチルスルホモイル−ベンズアミド、
２２）５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
２３）３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
２４）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−アセトアミド、
２５）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（３−ニトロ−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−アセトアミド、
２６）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（４−ニトロ−イミダゾール−１−イル）−アセトアミド、
２７）２−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−ニトロ−ベンズアミド、
２８）５−ブロモ−フラン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
２９）２−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−ニトロ−ベンズアミド、
３０）２−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ニコチンアミド、
３１）２，４−ジクロロ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
３２）Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−フェニル−２−フェニルスルファニル−アセトアミド、
３３）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニル）アセトアミド、
３４）２−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−５−（ピペリジン−１−スルホニル）ベンズアミド、
３５）６−ブロモ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
３６）３，６−ジブロモ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
３７）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
３８）３−クロロ−６−フルオロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
３９）ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
４０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−（２，４−ジクロロ−フェノキシ）−ブチルアミド、
４１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−アセトアミド、
４２）２−フェニル−キノリン−４−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
４３）ペンタン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
４４）３−クロロ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
４５）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−フルオロ−ベンズアミド、
４６）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，４，５−トリエトキシ−ベンズアミド、
４７）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
４８）２−ブロモ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
４９）２−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
５０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−ニトロ−ベンズアミド、
５１）８−アリル−２−オキソ−２Ｈ−クロメン−３−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
５２）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２，２−ジメチル−プロピオンアミド、
５３）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メチル−ベンズアミド、
５４）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−メトキシ−ベンズアミド、
５５）３−ブロモ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
５６）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
５７）ナフタレン−１−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
５８）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−フェノキシ−ベンズアミド、
５９）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−フェニル−アセトアミド、
６０）４−ブトキシ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
６１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−モルホリン−４−スルホニル）−ベンズアミド、
６２）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−メトキシ−ベンズアミド、
６３）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロ−ベンズアミド、
６４）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−メチル−ブチルアミド、
６５）２−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボニトリル、
６６）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
６７）４−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イルカルバモイル）−酪酸、
６８）４−ブロモ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
６９）４−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
７０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イル）アセトアミド、
７１）２−（４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
７２）５−（４−フルオロ−フェニル）−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７３）５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７４）５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７５）３−ブロモ−５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７６）５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７７）５−フラン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７８）３−ブロモ−５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
７９）５−チオフェン−２−イル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
８０）Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イル）−アセトアミド、
８１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イル）アセトアミド、
８２）２−（４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
８３）２−（４−ブロモ−５−メチル−３−ニトロ−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
８４）Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イル）−アセトアミド、
８５）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（３，５−ジメチル−４−ニトロ−ピラゾール−１−イル）アセトアミド、
８６）２−（４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
８７）２−（４−ブロモ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（３−シアノ−６−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
８８）Ｎ−（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イル）−アセトアミド、
８９）５−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（６−ｔｅｒｔ−ブチル−３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
９０）５−（４−ブロモ−フェニル−７−トリフルオロメチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
９１）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−メチル−ベンズアミド、
９２）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，４−ジフルオロ−ベンズアミド、
９３）４−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（モルホリン−４−スルホニル）ベンズアミド、
９４）４−ブロモ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−（モルホリン−４−スルホニルベンズアミド）、
９５）４−シアノ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
９６）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，４−ジメトキシ−ベンズアミド、
９７）２−（ベンゾ［４，５］チアゾロ［２，３−ｃ］［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
９８）テトラヒドロ−フラン−２−カルボン酸［３−シアノ−６−（１，１−ジメチル−プロピル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル］−アミド、
９９）２，５−ジクロロ−Ｎ−［３−シアノ−６−（１，１−ジメチル−プロピル）−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル］ベンズアミド、
１００）５−（４−エトキシ−フェニル）−７−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−２−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
１０１）Ｎ−（３−シアノ−６−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−（５−メチル−３−トリフルオロメチルピラゾール−１−イル）−アセトアミド、
１０２）５，７−ジフェニル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−カルボン酸（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アミド、
１０３）２−（４−クロロ−５−メチル−３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、
１０４）３−クロロ−Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−ベンズアミド、
１０５）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ニトロ−フタラミン酸、
１０６）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−プロピオンアミド、
１０７）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−メトキシ−ベンズアミド、
１０８）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−ニトロ−ベンズアミド、
１０９）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−４−エトキシ−ベンズアミド、
１１０）Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３，５−ジメトキシ−ベンズアミド、
１１１）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２，６−ジフルオロ−ベンズアミド、
１１２）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
１１３）２−（４−クロロ−フェノキシ）−Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−アセトアミド、および
１１４）Ｎ−（３−シアノ−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−２−フェノキシ−アセトアミド
が含まれるが、それだけには限定されない。
【００６２】
他の実施形態では、細胞移動阻害剤として同定された化学物質は、一般式
【００６３】
【化１０】
2006505246.tif 000012
を有し、分子量約７００未満の有機分子である。Ｒ1は、４−ブロモ−ベンゾイルアミノ、（アダマンタン−２−イル−ヒドロキシ−メチル）−アミノおよびフェニルアミノから成る群から選択される。Ｒ2は、ジヒドロキシ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル、ｐ−クロロ−フェニル、ｐ−メチル−フェニル、フェニルおよびｐ−メトキシ−フェニルから成る群から選択される。Ｒ3は、水素、２−プロペニルおよびフェニルから成る群から選択される。Ｒ4は、水素およびメチルから成る群から選択される。一実施形態では、該化学物質は、［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである。
【００６４】
細胞移動阻害を示すことができる前記一般式を有する化学物質の他の例には、
１）Ｎ−［４−アリル−５−（４−クロロ−フェニル）−６−メチル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−３−ブロモ−ベンズアミド、
２）アダマンタン−１−イル−（４−アリル−５−ｐ−トリル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イルアミノ）−メタノール、
３）Ｎ−（４−アリル−５−フェニル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル）−４−ブロモ−ベンズアミド、
４）Ｎ−［４−アリル−５−（４−クロロ−フェニル）−６−メチル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−４−ブロモ−ベンズアミド、
５）［５−（４−メトキシ−フェニル）−４−フェニル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミン、
６）Ｎ−［４−アリル−５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−３−ブロモ−ベンズアミド、および
７）Ｎ−（４−アリル−５−フェニル−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル）−３−ブロモ−ベンズアミド
が含まれるが、それだけに限定されない。
【００６５】
本明細書で記載した化合物は、アリール化剤である。したがって、アリール化剤であるその他の比較的小さな有機分子もまた細胞移動を阻害することができる。細胞移動を阻害する方法の一実施形態には、アリール化剤である１種または複数の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。他の実施形態では、モノクローナル抗体などのその他の化合物もまた、細胞移動を阻害することができる。このような一実施形態では、細胞移動を阻害する方法には、モノクローナル抗体である１種または複数の細胞移動阻害剤で細胞を処理することを含めることができる。
【００６６】
前述の化学物質はすべて市販されている。たとえば、該化学物質はＮａｎｏｓｃａｌｅ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｉｎｃ．、メンローパーク、カリフォルニアから市販されている。
【００６７】
本明細書で説明した方法はまた、血管形成を阻害する化合物を同定するために使用することができる。血管形成阻害には、新血管の発達を抑えることが関係する。癌腫瘍は、新血管の形成を誘導して、腫瘍の栄養学的要求に応え、したがって腫瘍増殖を起こすことができる。このようにして、腫瘍は新血管を発達させることによって増殖し、拡大していく。血管形成はまた、転移に関係する。たとえば、血管密度の高い腫瘍は一般的により転移しやすく、好ましくない結果をもたらしやすい。さらに、血管形成および転移には、マトリックス分解酵素が必要で、これは血管および腫瘍浸潤中に周囲組織（細胞外マトリックス）を分解する酵素である。したがって、血管形成を阻害することによって、体のその他の部分への腫瘍の増殖および拡大を阻害することができる。
【００６８】
血管形成阻害剤として同定された化学物質の一実施形態は、一般式
【００６９】
【化１１】
2006505246.tif 000013
を有し、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3にはこの一般式について本明細書で記載した基が含まれる。
【００７０】
血管形成阻害剤として同定された化学物質の一実施形態は、一般式
【００７１】
【化１２】
2006505246.tif 000014
を有し、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3にはこの一般式について本明細書で記載した基が含まれる。
【００７２】
血管形成阻害剤として同定された化学物質の一実施形態は、一般式
【００７３】
【化１３】
2006505246.tif 000015
を有し、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4にはこの一般式について本明細書で記載した基が含まれる。
【００７４】
一実施形態では、図４の段階４２で示したように、前述の方法には、細胞移動阻害を示す化学物質と化学療法薬の組合せが相乗的に癌細胞を殺滅するかどうかを決定することを含めることができる。化学物質と化学療法薬の組合せの相乗性の測定は、以下の方法によって実施することができる。当業界で公知の任意の方法を使用して単層の癌細胞を収集することができる。前述のような９６ウェルプレートを移動誘導基質でコーティングする。ウェル当たり約２００μｌ量、またはウェル当たり約１０００個の細胞を各ウェルに等分する。プレートの周囲のウェルは細胞用には使用しないが、プレートの湿度を調節するために滅菌水を満たす。該細胞は、数時間または一晩プレートを静置することによって沈殿させウェルに接着させることができる。該細胞に一定期間（すなわち、約３、４または５日間）化学療法薬と組み合わせて細胞移動阻害化学物質を投与して処理する。処理後、該細胞をアラマーブルー（約１０％量／量、または２００μｌ中２０μｌ）でインキュベートする。細胞を約３７℃で約４時間インキュベートする。細胞をインキュベートする時間の長さは、試験する細胞の種類に応じて変化させることができる。該プレートは、約５３０ｎｍで励起して、約５９０ｎｍで発光測定するマイクロプレートリーダー蛍光計で読み取ることができる。この結果は、薬剤処理の関数としての吸光度（細胞数）の変化に基づいている。図４ａは、癌細胞を様々な化学物質で処理し、一定期間移動させる９６ウェルプレートの１例の上面図である。図４ａで示したように、各ウェルで測定した吸光度は、薬剤処理に応じて変化する。細胞希釈プレートを測定して標準曲線を作成すべきである。データは、吸光度測定値すべてからブランクを差し引くことによって分析する。平均値は対照ウェルに対する処理ウェルの平均それぞれの部分吸光度として報告する。繰り返し測定を行って、統計学的試験を実施することができる。
【００７５】
化学物質と化学療法薬の組合せの相乗性の測定はまた、重度免疫複合不全（ｓｃｉｄ）マウスヒト腫瘍モデルにおいて、化学療法薬および細胞移動阻害剤の増殖阻害効果を評価することによって実施することができる。このような測定には、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）による免疫グロブリン（Ｉｇ）産生についてのマウスのスクリーニングが含まれる。数匹のマウスに、生理食塩水に溶かした癌細胞を皮下（ＳＣ）注射によって注射する。確立された腫瘍を有するマウスを選択し、対照群、化学療法薬単独で処理した群、細胞移動阻害剤単独で処理した群および化学療法薬と細胞移動阻害剤の様々な組合せで処理した１個または複数の群を含む群によって分類する。少なくとも化学療法薬で処理したことを示す群には、化学療法薬または化学療法薬希釈物を処理１日目に腹腔内（ＩＰ、腹腔内部）注射する。いくつかの癌モデルにおいて、これらの群にはまた、化学療法薬または化学療法薬希釈物を隔日（１日おき）約５回（１日おきに５回）注射することができる。少なくとも該細胞移動阻害剤で処理することを示した群には、細胞移動阻害剤または細胞移動阻害剤希釈液をＩＰ注射によって１日おきに５回注射する。腫瘍増殖は、実験中週約２回測定し、腫瘍の量を以下の式を使用して概算することができる。［（幅）2×奥行き］／２。実験開始前、その後は毒性の徴候を調べるために週１回マウスの体重を測定する。
【００７６】
前述の方法を使用して、浸潤抑制剤および転移抑制剤を同定することができる。言い換えると、該方法を使用して、体内の１個の元の部位から他の１個または複数の部位へ疾患が移行するのを抑える化学物質を同定することができる。さらに、化学療法薬は転移癌治療の標準的治療方法であるが、近年入手可能な化学療法薬にはいくつかの制限がある。たとえば、癌細胞が移動するとき、細胞は細胞プロセスをほとんど受けず、著しく細胞分裂を減少させる。このような細胞分裂の減少によって、癌細胞は分割細胞を攻撃して殺滅する化学療法薬に対して比較的に非感受性になる。したがって、細胞移動の阻害は、細胞死および化学療法薬に対する感受性の増大を誘導することができる。
【００７７】
したがって、細胞移動阻害は、最初に細胞移動を阻害し、次に化学療法薬で治療し、場合によっては照射することに基づく癌治療の一部として使用することができる。このようにして、癌を有する個人を治療する方法の一実施形態には、細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与して癌細胞の移動を阻害することが含まれる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかを含めることができる。たとえば、該細胞移動阻害剤には、分子量約７００未満の有機分子、モノクローナル抗体または天然産物を含めることができる。細胞移動を阻害すると、ほとんどの化学療法薬の標的である細胞分裂を増大させることを含む多くの細胞プロセスが開始する。したがって、該細胞移動阻害剤と該化学療法薬を組み合わせると、細胞分裂が増大するため、該化学療法薬単独と比較して効果が増大する。
【００７８】
さらに、癌治療のために細胞移動阻害剤と組み合わせて使用する化学療法薬の量および、場合によって照射量は、癌を治療するために単独で使用する化学療法薬の量または照射量よりも少なくてよい。さらに、癌治療のために使用する化学療法薬の量または照射量を減少させると、癌用の化学療法薬または照射で施療された個人が経験し得る副作用は減少するだろう。化学療法薬の副作用の例には、好中球減少、血小板減少、貧血、感染症、発熱性好中球減少、敗血症による死、敗血症以外による死、急性過敏症、体液貯留、神経感覚、筋痛、皮膚病、無力症、下痢、口内炎が含まれるが、これだけに限定されない。細胞移動阻害剤と化学療法薬の組合せの適切な用量は、当業界で公知の任意の方法によって決定することができる。たとえば、細胞移動阻害剤と化学療法薬を使用した動物実験の結果を使用して、ヒトの臨床試験、最終的には治療に適切な用量を決定することができる。
【００７９】
医薬組成物の一実施形態には、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかおよび化学療法薬が含まれる。該医薬組成物にはまた、複数の本明細書で記載した細胞移動阻害剤および／または複数の化学療法薬を含めることができる。該医薬組成物にはまた、薬剤として許容される担体が含まれる。該担体には、該細胞移動阻害剤、該化学療法薬および該組成物のその他の任意成分に適合する任意の公知の薬剤として許容される担体を含めることができる。該担体はまた、受容者に害を及ぼしてはならない。該医薬組成物が当業界で公知の任意の方法（すなわち、経口的、静脈内など）で個人に投与できるように、該医薬組成物を形成することができる。
【００８０】
他の実施形態は、少なくとも１つはアリール化剤である１種または複数の細胞移動阻害剤および１種または複数の化学療法薬を含む医薬組成物に関する。該化学療法薬には、当業界で公知の任意の化学療法薬を含めることができる。該医薬組成物にはまた、前述のような薬剤として許容される担体を含めることができる。
【００８１】
本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかと組み合わせることができる適切な化学療法薬の例には、アルキル化剤、抗腫瘍剤、代謝拮抗薬、抗新生物薬、微小管阻害剤、紡錘細管阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ホルモン剤、生物剤および顆粒球コロニー刺激因子が含まれるが、それだけに限定されない。適切な化学療法薬にはまた、当業界で公知のその他任意の化学療法薬または最近承認された化学療法薬および場合によっては照射を含めることができる。一実施形態では、医薬組成物には、細胞移動阻害剤４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸および化学療法薬１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）が含まれる。一実施形態では、医薬組成物には、細胞移動阻害剤４−メチル−３−ニトロ−安息香酸およびＢＣＮＵまたはパクリタキセルが含まれる。医薬組成物の他の実施形態には、細胞移動阻害剤１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルおよびゲムシタビンが含まれる。医薬組成物の他の実施形態には、細胞移動阻害剤１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルおよびゲムシタビンが含まれる。
【００８２】
本明細書では、化学療法薬とは一般的に細胞毒性剤のことである。細胞毒性剤は一般的に、正常細胞から悪性細胞を区別する特性に基づいて選択的に毒性を示す。細胞毒性剤は一般的にまた、細胞死、細胞増殖阻害および細胞分化などの抗新生物効果を示す。Ｈａｓｋｅｌｌ  ＣＭ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．４版、１９９５；３２。細胞周期における細胞毒性の機会は一般的に、Ｇ2期後または細胞分裂期、Ｇ1期または（染色体を複製する）ｓ期に生じる。それぞれの種類の化学療法薬には、数種の細胞毒性剤が含まれ、細胞を殺滅するために異なる機構を有する。
【００８３】
アルキル化剤にはいくつかの種類がある。たとえば、アルキル化剤には、ナイトロジェンマスタード（すなわち、シクロホスファミド、メルファラン）、アリジジン（たとえば、チオテパ）、アルキルアルコンスルホネート（すなわち、ブスルファン）、ニトロソウレア（すなわち、カルマスティン）、普通型アルキル化剤（すなわち、プロカルバジン）および白金化合物（すなわち、カルボプラチン、シスプラチン）が含まれる。市販のアルキル化剤の例には、たとえば、パラプラチン（登録商標）注射薬（カルボプラチン）およびプラチノール（登録商標）−ＡＱ注射薬（シスプラチン）が含まれ、いずれもＢｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ／Ａ  Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ、プリンストン、ニュージャージーから市販されている。アルキル化剤は一般的に、グアニンのアルキル化およびＤＮＡ複製／ＲＮＡへの転写の妨害によって細胞毒性を引き起こす多機能性化合物である。アルキル化剤は、細胞周期に非特異的である。Ｇｅｒｓｏｎ  ＳＬ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；１。
【００８４】
抗腫瘍抗生物質には、アントラサイクリン（すなわち、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン）、アントラセンジオン（すなわち、ミトキサントロン）、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシンおよびプリカマイシンが含まれる。Ｂｌｕｍ  ＲＨ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；３７〜４０。市販の抗腫瘍抗生物質の例には、Ｓｅｑｕｕｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、メンローパーク、カリフォルニアから市販されているドキシル（登録商標）が含まれる。抗腫瘍抗生物質は一般的に、ＤＮＡに直接結合し、それによってらせんをほどくか切断し、ＤＮＡおよびＲＮＡ合成を損なわせる多機能剤である。抗腫瘍抗生物質はまた、遊離基形成、重要な金属のキレート化およびトポイソメラーゼＩＩの阻害などのその他の細胞毒性機構を備えることができる。Ｂｌｕｍ  ＲＨ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；３５、３７。
【００８５】
代謝拮抗薬の種類には、アンチホール（すなわち、メソトレキセート）、プリン類縁体（すなわち、チオグアニン、ペントスタチンおよびクラドリビン）およびピリミジン類縁体（すなわち、フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン）が含まれる。Ｃｈｉａｏ  Ｊ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；５０〜６６。代謝拮抗薬は一般的に重要なＤＮＡ／ＲＮＡ複製分子において代謝物を置換し、それによって機能を弱め、重要な酵素の触媒部位において代謝物と拮抗し、かつ／または重要な酵素の調節部位において代謝物と拮抗することによって細胞毒性を引き起こす。Ｈａｓｋｅｌｌ  ＣＭ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；３６。市販の代謝拮抗薬の例には、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、インディアナポリス、インディアナから市販されているＧｅｍｚａｒ（登録商標）が含まれる。
【００８６】
紡錘細管阻害剤には、ビンカアルカロイド（すなわち、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン）およびタキサンが含まれる。Ａｇａｒｗａｌａ  ＳＳ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８、１０５〜１２２。トポイソメラーゼ阻害剤には、ポドフィロトキシン誘導体（すなわち、エトポシド、テニポシド）およびカンプトテシン誘導体（すなわち、トポテカン、イリノテカン）が含まれる。Ａｇａｒｗａｌａ  ＳＳ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８、１０５。
【００８７】
ホルモン剤の部類には、付加型（すなわち、エストロゲン、プロゲスティン、アンドロゲン）、切除型（すなわち、卵巣切除、睾丸切除）、競合型（すなわち抗エストロゲン、抗プロゲスティン、抗アンドロゲン）および阻害型（すなわち、アロマターゼ阻害剤、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨ−ＲＨ）類縁体）が含まれる。Ｋｉａｎｇ  ＤＴ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；８８〜９０。ホルモン剤は一般的に、核または細胞質受容体に対するホルモンの活性を変更し、その後細胞機能におけるｍＲＮＡ合成および／または蛋白質合成の変化を誘導することによって細胞毒性を引き起こす。Ｈａｓｋｅｌｌ  ＣＭ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．３版、１９９５；３１〜５１。ホルモン剤の例には、進行した乳癌および子宮内膜癌用のメゲストロール酢酸塩、乳癌用のタモキシフェンおよびメラノーマなどのその他の癌用の組合せ、前立腺癌においてアンドロゲンを遮断するためのフルタミドと組み合わせたＬＨ−ＲＨ作用薬、およびホジキン病、非ホジキンリンパ腫、骨髄腫および急性リンパ芽球性白血病用の併用療法の一部としてのプレドニゾンが含まれる。プレドニゾンはまた、乳癌および前立腺癌の対症療法として使用することができる。Ｋｉａｎ  ＤＴ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；８８〜１０４およびＨａｓｋｅｌｌ  ＣＭ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．４版、１９９５；８５〜１６５。市販のホルモン剤の例には、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｌ．Ｐ．、ウィルミントン、デェラウェアから市販されているＮｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）（タモキシフェン）が含まれる。ホルモン治療は乳癌、前立腺癌および子宮内膜癌などのホルモン依存性癌の対症療法のために使用されることが多い。ホルモン治療は、より毒性のある化学療法および放射線療法よりも好ましいことが多い。
【００８８】
その他の細胞毒性剤には、サイトカイン（すなわち、インターロイキン−２、インターフェロンアルファ、コロニー形成刺激因子）、免疫調節試薬（すなわち、カルメット−ゲラン桿菌、レバミソール）およびオクタペプチド（すなわち、オクトレオチド）などの生物剤が含まれる。Ｂａａｒ  Ｊ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；６７〜７６。さらに、細胞毒性剤には、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＳＣＦ）が含まれる。Ｇ−ＳＣＦは、通常単核食作用、内皮細胞、繊維芽細胞および好中球によって産生される。Ｇ−ＳＣＦは、循環する血液好中球の数を調節するように作用し、好中球減少を改善し、骨髄抑制治療を受けている充実性腫瘍患者の感染症を減少させる。Ｂａａｒ  Ｊ、ｅｔ  ａｌ．Ｃｕｒｒｅｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．３版、１９９８；７１〜７２。
【００８９】
微小管阻害剤は一般的に、微小管の集合を促進することよって細胞毒性を引き起こし、脱重合を阻害することによって微小管を安定化させる。微小管阻害剤の例には、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  ＳｑｕｉｂｂからＴａｘｏｌ（登録商標）として市販されているパクリタキセルおよびＡｖｅｎｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｉｎｃ．、ブリッジウォーター、ニュージャージーからタキソテール（登録商標）として市販されているドセタキセルが含まれる。
【００９０】
癌を有する個人を治療する方法もまた提供する。一実施形態では、癌を有する個人の治療には、細胞移動阻害剤および化学療法薬を該個人に投与することが含まれる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかが含まれ、該化学療法薬には、本明細書で記載した、または当業界で公知の任意の化学療法薬が含まれてよい。さらに、該細胞移動阻害剤および化学療法薬を前述のように設計することができる医薬組成物に入れて投与することができる。他の実施形態は、アリール化剤である細胞移動阻害剤および化学療法薬を個人に投与することを含む癌を有する個人の治療方法に関する。該方法は、本明細書で説明したように実施することができる。
【００９１】
本明細書で説明した方法を使用して治療できる癌の種類には、神経膠腫（脳腫瘍）、乳癌、脳に転移のある乳癌、肺／気管支癌、脳に転移のある肺癌、メラノーマ（皮膚癌）、脳に転移のあるメラノーマ、その他の中枢神経系癌、膵臓癌、胃癌、肝癌、結腸／直腸癌、子宮頚癌、子宮体癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、口腔／咽頭癌、食道癌、白血病および非ホジキンリンパ腫が含まれるが、それだけに限定されない。
【００９２】
少なくとも部分的に細胞移動異常に関与する疾患の治療方法もまた提供する。該疾患には、自己免疫疾患および心臓血管疾患が含まれるが、それだけに限定されない。該方法には、該疾患を有する個人に細胞移動阻害剤を投与することによって疾患の異常な細胞移動を改変することが含まれる。該細胞移動阻害剤には、本明細書で記載した細胞移動阻害剤のいずれかを含めることができる。該方法にはまた、薬剤を個人に投与することによって該疾患を治療することが含まれる。該薬剤には、該疾患の治療に適した任意の薬剤を含めることができる。
【００９３】
図５は、癌を有する個人の治療の同定方法を示した流れ図である。図４４に示したように、該方法には、該個人の癌の組織培養を確立することが含まれる。該組織培養は、当業界で公知の方法を使用して確立することができる。該方法にはまた、段階４６に示したように、組織培養に基づいた癌用の細胞移動阻害剤の同定が含まれる。前述の方法を使用して、比較的短時間で潜在的細胞移動阻害剤を大量にスクリーニングすることができる。したがって、組織培養から得られた細胞の細胞移動速度は、いくつかの潜在的細胞移動阻害剤で測定することができる。個人の治療に適した細胞移動阻害剤は、スクリーニングした化学物質から選択することができ、場合によっては用量応答曲線を作成することができる。さらに、該方法には、段階４８に示したように、細胞移動阻害剤と組み合わせて効果を発揮する化学療法薬の同定を含めることができる。このような同定は、同定した細胞移動阻害剤および本明細書で記載したいくつかの化学療法薬で処理した組織培養から得られた細胞のハイスループットスクリーニングを使用して実施することができる。該化学療法薬には、本明細書で記載した化学療法薬のいずれかを含めることができる。段階５０で示したように、該方法には、前述のように該細胞移動阻害剤および該化学療法薬を該個人に投与することを含めることができる。
【実施例１】
【００９４】
細胞移動阻害のための化学物質ライブラリーのスクリーニング
図６は、ライブラリーから選択した化学物質および癌細胞を使用したスクリーニング実験の結果を示した図である。該スクリーニング実験は、前述のように実施した。この実験で使用した癌細胞は、神経膠腫癌細胞である。癌細胞の細胞移動は、該ライブラリーから選択した化学物質の存在下で測定した。該細胞移動は、前述のように測定し、ｙ軸にμｍ／日の単位で示した。該試料はｘ軸状に示し、該化学物質または未処理対照試料はウェル番号によって示した。図６に示したように、ライブラリーの複数の化学物質をスクリーニングしたところ、いくつかの化学物質が癌細胞の未処理対照試料および処理ウェルのほとんどと比較して移動の著しい減少を示した。たとえば、１、８、５８および６６で標識したウェルの化学物質は、未処理およびその他の処理試料と比較して著しい移動の減少を示した。
【実施例２】
【００９５】
細胞移動阻害剤に対する神経膠腫細胞の用量応答曲線
図７は、単位μＭで表した４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の関数として細胞移動速度を単位μｍ／日で示したグラフである。該化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度は未処理癌細胞よりも遅かったので、該化学物質をライブラリーの複数の化学物質から選択した。したがって、神経膠腫癌細胞のいくつかの試料を様々な濃度の化学物質で処理した。該神経膠腫癌細胞株はＳＦ７６７である。４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の濃度は、０．０００μＭから２．００μＭまで変化させた。該癌細胞の各試料の細胞移動速度は、前述のように測定した。図７に示した用量応答曲線は測定結果を示す。図７で示したように、細胞移動速度は０．０００μＭの濃度でのほぼ４５０μｍ／日から、２．００μＭの濃度での約５０μｍ／日まで減少した。したがって、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸を神経膠腫癌細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例３】
【００９６】
細胞移動阻害剤と化学療法薬の相乗性
図８は、単位μｇ／ｍｌで表した化学療法薬および細胞移動阻害剤と組み合わせた化学療法薬の濃度の関数として癌細胞の殺滅％を死細胞％の単位で示した棒グラフである。該神経膠腫細胞株は、前述したＳＦ７６７である。化学療法薬は、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂから市販されている最近承認された化学療法薬１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）である。該細胞移動阻害剤は、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である。ＢＣＮＵおよびＢＣＮＵと４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の組合せを使用した神経膠腫癌細胞の殺滅は、最初の処理から５日目に測定した。図８で示したように、ＢＣＮＵと４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の組合せは、ＢＣＮＵ単独よりも高い殺滅割合を示す。したがって、ＢＣＮＵと４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の組合せは、相乗的な神経膠腫癌細胞の殺滅を示す。さらに、ＢＣＮＵと４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の組合せを使用した神経膠腫癌細胞の殺滅は、低濃度のＢＣＮＵで、ＢＣＮＵ単独よりも著しく高い。ＢＣＮＵと４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸を組み合わせた医薬組成物自体は、ＢＣＮＵは含むが４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸は含まない医薬組成物よりもＢＣＮＵの濃度は低くてよい。
【実施例４】
【００９７】
細胞移動阻害剤に対する乳癌細胞の用量応答曲線
図９は、単位μＭで表した４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の関数として細胞移動速度を単位μｍ／日で示した図である。該化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度は未処理癌細胞よりも遅かったので、該化学物質をライブラリーの複数の化学物質から選択した。したがって、乳癌細胞のいくつかの試料を様々な濃度の化学物質で処理した。乳癌細胞株はＭＤＡ−ＭＢ−２３１で、ヒト、白人系、乳房腺癌が特徴の細胞株である。このような細胞株は、いくつかの細胞株一覧および研究室、たとえばＣＡＭＲ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｚｉｏｎａｌｅ  ｐｅｒ  ｌａ  Ｒｉｃｅｒｃａ  Ｓｕｌ  Ｃａｎｃｒｏ、ＧｅｎｏｖａおよびＤｉｐ．Ｓｃｉｅｎｚｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｈｅ  ｅｄ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉａ  Ｕｍａｎａ、Ｔｏｒｉｏから入手可能である。４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の濃度は、０．０００μＭから２．００μＭまで変化させた。該癌細胞の各試料の細胞移動速度は、前述のように測定した。図９に示した用量応答曲線は測定結果を示す。図９で示したように、細胞移動速度は０．０００μＭの濃度でのほぼ３５０μｍ／日から、２．００μＭの濃度での約７５μｍ／日まで減少した。したがって、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸を乳癌細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例５】
【００９８】
細胞移動阻害剤と化学療法薬の相乗性
図１０は、単位μｇ／ｍｌで表した化学療法薬および細胞移動阻害剤と組み合わせた化学療法薬の濃度の関数として癌細胞の殺滅％を死細胞％の単位で示した棒グラフである。乳癌細胞株は、前述したＭＤＡ−ＭＢ−２３１である。該化学療法薬は、ＢＣＮＵである。該細胞移動阻害剤は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で、図ではＩＡＴＩとして標識した。ＢＣＮＵおよびＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せを使用した乳癌細胞の殺滅は、最初の処理から４日目に測定した。図１０で示したように、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せは、ＢＣＮＵ単独よりも高い殺滅割合を示す。したがって、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せは、相乗的な乳癌細胞の殺滅を示す。さらに、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せを使用した乳癌細胞の殺滅は、低濃度のＢＣＮＵでＢＣＮＵ単独よりも著しく高い。ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸を組み合わせた医薬組成物自体は、ＢＣＮＵは含むが４−メチル−３−ニトロ−安息香酸は含まない医薬組成物よりもＢＣＮＵの濃度は低くてよい。
【実施例６】
【００９９】
細胞移動阻害剤および化学療法薬を含む医薬組成物を使用した腫瘍増殖阻害
図１１は、日の単位で表した様々な医薬組成物注射後の時間の関数として平均腫瘍体積をｍｍ3の単位で示した図である。ｓｃｉｄマウスヒト乳癌腫瘍モデルを使用して様々な組成物で処理した細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−２３１の癌細胞を評価した。該様々な医薬組成物には、細胞移動阻害剤単独、化学療法薬単独、および細胞移動阻害剤と化学療法薬の様々な組合せが含まれる。該細胞移動阻害剤は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で、図ではＩＡＴＩとして標識した。化学療法薬は、Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ／Ａ  Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｃｏｍｐａｎｙ、プリンストン、ニュージャージーから市販されている最近承認された化学療法薬、タキソールである。
【０１００】
実験は前述のように実施した。４０匹のメスのｓｃｉｄマウスの免疫グロブリン産生をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。４０匹のｓｃｉｄマウスにＳＣ注射によってマトリゲルに溶かした１０×１０6ＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞を注射した。腫瘍（約６０ｍｍ3から約１００ｍｍ3）が確立した４０匹のマウスを選択して、６日目に分類した。処理群の動物それぞれに、医薬組成物の１つを６日目から１日おきに５回ＩＰ注射した。対照動物、または未処理動物には、ＤＭＳＯ溶液および生理食塩水を注射した。処理動物には、生理食塩水および４−メチル−３−ニトロ−安息香酸３０ｍｇ／ｋｇ、ＤＭＳＯおよびタキソール１０ｍｇ／ｋｇ、タキソール１５ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸３０ｍｇ／ｋｇの組合せ、またはタキソール１０ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸５０ｍｇ／ｋｇの組合せを注射した。
【０１０１】
図１１に示したように、１００日後、対照動物の平均腫瘍体積は約２５００ｍｍ3であった。タキソール単独または４−メチル−３−ニトロ−安息香酸単独で処理した動物の平均腫瘍体積は１０００ｍｍ3をわずかに下回った。対照的に、タキソール１０ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸５０ｍｇ／ｋｇの組合せを注射した動物の平均腫瘍体積は約６００ｍｍ3未満で、一方タキソール１５ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸３０ｍｇ／ｋｇの組合せを注射した動物の平均腫瘍体積は約３００ｍｍ3未満であった。したがって、タキソールと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せは、乳癌腫瘍増殖に有意な相乗阻害作用を示す。さらに、医薬組成物中のタキソールおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の濃度を変更して、平均腫瘍増殖を変化させることができる。
【０１０２】
図１２は、％の単位で表した前記の実験で使用したマウスの生存割合を細胞注射後の日数の関数として示した図である。図１２に示したように、タキソール１５ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸３０ｍｇ／ｋｇの組合せで処理したマウスは、実験期間を通して最高の生存割合を示した。さらに、注射後１００日経っても、これらのマウスの６０％以上がまだ生きていた。さらに、タキソール１０ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸５０ｍｇ／ｋｇの組合せまたはタキソール単独で処理したマウスは、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸単独で処理したマウスおよび対照マウスよりも良い生存割合を示した。表１は、前記研究で使用したマウスの処理１００日後の生存率をまとめた表である。
【０１０３】
【表１】
2006505246.tif 000016
【実施例７】
【０１０４】
細胞移動阻害剤に対するメラノーマ癌細胞の用量応答曲線
図１３は、単位μＭで表した４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の関数として細胞移動速度を単位μｍ／日で示した図である。該化学物質で処理した癌細胞の細胞移動速度は未処理癌細胞よりも遅かったので、この化学物質をライブラリーの複数の化学物質から選択した。したがって、メラノーマ細胞のいくつかの試料を様々な濃度の該化学物質で処理した。該メラノーマ癌細胞は、ＷＭ１７９１Ｃである。４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の濃度は、０．０００μＭから０．０２５μＭまで変化させた。該癌細胞の各試料の細胞移動速度を測定した。図１３に示した用量応答曲線は、測定結果を示す。図１３で示したように、細胞移動速度は０．０００μＭの濃度での３００μｍ／日を上回る速度から、０．０２５μＭの濃度での約５０μｍ／日未満まで減少した。したがって、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸をメラノーマ細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例８】
【０１０５】
細胞移動阻害剤と化学療法薬の相乗性
図１４は、単位μｇ／ｍｌで表した化学療法薬および細胞移動阻害剤と組み合わせた化学療法薬の濃度の関数として癌細胞の殺滅％を死細胞％の単位で示した棒グラフである。メラノーマ癌細胞は、ＷＭ１７９１Ｃである。該化学療法薬は、ＢＣＮＵである。該細胞移動阻害剤は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である。ＢＣＮＵおよびＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せを使用したメラノーマ細胞の殺滅は、最初の処理から４日目に測定した。図１４で示したように、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せは、ＢＣＮＵ単独よりも高い殺滅割合を示す。したがって、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せは、相乗的なメラノーマ癌細胞の殺滅を示す。さらに、ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せを使用したメラノーマ細胞の殺滅は、ＢＣＮＵの濃度が減少するにつれて増加する。ＢＣＮＵと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸を組み合わせた医薬組成物自体は、ＢＣＮＵは含むが４−メチル−３−ニトロ−安息香酸は含まない医薬組成物よりもＢＣＮＵの濃度は低くてよい。
【実施例９】
【０１０６】
細胞移動阻害剤および化学療法剤を含む医薬組成物を使用した腫瘍増殖阻害
図１５は、日の単位で表した様々な医薬組成物注射後の時間の関数として平均腫瘍体積をｍｍ3の単位で示した図である。このメラノーマ癌のｉｎ  ｖｉｔｒｏ動物モデルには、様々な医薬組成物ならびにＤＭＳＯおよび生理食塩水の対照組成物で細胞株ＷＭＩ１７９１−Ｃ（ＵＡＣＣ１７９１Ｃとも称する）の癌細胞を処理することが含まれる。様々な該医薬組成物には、細胞移動阻害剤単独、化学療法薬単独、および細胞移動阻害剤と化学療法薬の様々な組合せが含まれる。該細胞移動阻害剤は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で、図ではＩＡＴＩとして標識する。化学療法薬は、ＢＣＮＵである。
【０１０７】
該研究で使用した動物はｓｃｉｄマウスで、該実験は前述のように実施した。４０匹のｓｃｉｄマウスの免疫グロブリン（Ｉｇ）産生をＥＬＩＳＡによってスクリーニングした。４０匹のマウスにＳＣ注射によって生理食塩水に溶かした１０×１０6ＷＭＩ１７９１Ｃメラノーマ癌細胞を接種した。腫瘍の確立した動物を５５日目に分類した。別の群の動物を４−メチル−３−ニトロ−安息香酸５０ｍｇ／ｋｇおよび生理食塩水、ＢＣＮＵ２０ｍｇ／ｋｇおよびＤＭＳＯ、ＢＣＮＵ１５ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸５０ｍｇ／ｋｇの組合せ、またはＢＣＵＮ２０ｍｇ／ｋｇおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸３０ｍｇ／ｋｇの組合せで処理した。少なくともＢＣＮＵによる処理を指定した動物それぞれにはＢＣＮＵまたはＢＣＮＵ希釈物を５５日目にＩＰ注射した。少なくとも４−メチル−３−ニトロ−安息香酸による処理を指定した動物には該細胞移動阻害剤または該細胞移動阻害剤希釈物を１日おきに５回ＩＰ注射した。腫瘍増殖を測定し、前述のように腫瘍体積を概算した。実験開始前および週に１回、毒性の徴候を調査するためにマウスの体重もまた測定した。
【０１０８】
図１５で示したように、８０日経っても、ＢＣＵＮと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せのいずれか１つを注射した動物の腫瘍は約２５０ｍｍ3未満であったが、その他の動物の腫瘍は４００ｍｍ3を上回っていた。したがって、ＢＣＵＮと４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の組合せはメラノーマ癌腫瘍増殖の相乗的阻害を示す。
【実施例１０】
【０１０９】
肺癌細胞の細胞移動阻害
図１６は、肺癌細胞の未処理試料および肺癌細胞の処理試料の細胞移動速度をμｍ／日の単位で示した棒グラフである。該肺癌細胞株は、ＭＶ５２２である。対照試料は未処理癌細胞である。該処理試料は、化学物質のライブラリーから選択した式４−メチル−３−ニトロ−安息香酸を有する化学物質で処理した。図１６で示したように、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸で処理した肺癌細胞は、未処理対照試料と比較して著しい移動の抑制を示した。したがって、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸を細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例１１】
【０１１０】
膵臓癌細胞の細胞移動阻害
図１７は、膵臓癌細胞の未処理試料および膵臓癌細胞の処理試料の細胞移動速度をμｍ／日の単位で示した棒グラフである。該膵臓癌細胞株は、ＭｉａＰａＣａ−２である。対照試料は未処理癌細胞である。該処理試料は、ライブラリーから選択した式１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルを有する化学物質で処理した。図１７で示したように、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓癌細胞は、未処理対照試料と比較して著しい移動の抑制を示した。したがって、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルは細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例１２】
【０１１１】
膵臓癌細胞の細胞移動阻害
図１８は、膵臓癌細胞の未処理試料および膵臓癌細胞の様々な処理試料の細胞移動速度をμｍ／日の単位で示した棒グラフである。該膵臓癌細胞株は、ＭｉａＰａＣａ−２である。対照試料は未処理癌細胞である。試料３００は、式１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルを有する化学物質で処理した。試料Ａ、Ｂ、ＣおよびＤは試料３００を処理するために使用した化学物質とは実質的に異なる式を有する化学物質で処理した。図１８で示したように、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓癌細胞は、未処理対照試料およびその他の処理試料と比較して著しい移動の抑制を示した。したがって、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルを細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例１３】
【０１１２】
細胞移動阻害剤に対する膵臓癌細胞の用量応答曲線
図１９は、μＭの単位で表したいくつかの異なる化学物質の濃度の関数として、細胞移動速度をμｍ／日の単位で表した示した図である。ＮＳ２０４９４は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。該化学物質で処理した膵臓癌細胞の細胞移動速度は未処理細胞および前述のその他の化学物質で処理した癌細胞のその他数種の試料よりも遅いので、この化学物質をライブラリーの複数の化学物質から選択した。
【０１１３】
さらに、この化学物質に類似した式を有する化学物質は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルの細胞移動阻害に基づいて選択した。ＮＳ２０４９３は、２−｛［１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−フェニル−１，２，３，３ａ−テトラヒドロ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３−イル］−シクロプロピル−メチレン｝−マロノニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。ＮＳ２０４９５は、１−ベンゾイル−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。ＮＳ３０４３７は、２−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−イル−１−シクロプロパンカルボニル−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。ＮＳ３０７１５は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−フルオロ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。ＮＳ３０７１６は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した膵臓細胞の細胞移動速度を示す。
【０１１４】
膵臓癌細胞のいくつかの試料を様々な濃度の各化学物質で処理した。該膵臓癌細胞株は、ＭｉａＰａＣａ−２である。該化学物質の濃度は、０μＭから５μＭまで変化させた。該癌細胞の各試料の細胞移動速度を測定した。図１９で示したように、該細胞移動速度は、各化学物質の濃度０．０００μＭでの約５００μｍ／日から、各化学物質の濃度５．００μＭでの約４００μＭ／日未満、およびいくつかの化学物質では濃度５．００μＭでの約２００μＭ／日まで減少した。したがって、これらの化学物質は、膵臓癌細胞移動阻害化学物質として同定した。
【実施例１４】
【０１１５】
血管形成阻害０
図２０は、ＨＵＶＥＣ細胞の未処理試料およびＨＵＶＥＣ細胞の処理試料の細胞移動速度をμｍ／日で示した棒グラフである。対照試料は未処理癌細胞である。処理試料は、化学物質のライブラリーから選択した３種類の異なる化学物質で処理した。処理試料は、３００、３０１および３０２と標識する。３００で標識した試料は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルで処理した。３０１で標識した試料は、Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドで処理した。３０２で標識した試料は、［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ−［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンで処理した。図２０で示したように、前記化学物質のそれぞれで処理したＨＵＶＥＣ細胞が示した移動は、未処理対照試料と比較して著しく減少した。したがって、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリル、Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドおよび［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ−［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンを血管形成阻害化学物質として同定した。
【実施例１５】
【０１１６】
正常な繊維芽細胞への細胞移動阻害剤の効果
図２１は、正常な繊維芽細胞について様々な細胞移動阻害剤で処理した細胞および未処理細胞の対照試料の細胞移動速度をｍＭ／日の単位で示した棒グラフである。１００で識別した化学物質は、４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸である。２００で識別した化学物質は、４−メチル−３−ニトロ−安息香酸である。３００で識別した化学物質は、１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。３０１で識別した化学物質は、Ｎ−（３−シアノ−４，５，６，７−テトラヒドロ−ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）−３−ヨード−ベンズアミドである。３０２で識別した化学物質は、［５−（２，３−ジヒドロ−ベンゾ−［１，４］ジオキシン−６−イル）−４Ｈ−［１，３，４］チアジアジン−２−イル］−フェニル−アミンである。図２１で示したように、細胞移動阻害剤それぞれは、正常な繊維芽細胞の細胞移動に本質的に影響を及ぼさない。
【実施例１６】
【０１１７】
細胞移動阻害剤および化学療法薬の相乗性
図２２は、化学療法薬単独または様々な細胞移動阻害剤と組み合わせた化学療法薬の関数として様々な癌細胞の殺滅％を死細胞％の単位で示した棒グラフである。膵臓癌細胞株は、ＭｕｔＪおよびＢｘｐｃ．３である。このような癌細胞株は、米国菌培養収集所、マナッサス、バージニア、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＡＭＲ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、イギリスおよびＩｎｔｅｒｌａｂ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ  Ｎａｚｉｏｎａｌｅ  ｐｅｒ  ｌａ  Ｒｉｃｅｒｃａ  ｓｕｌ  Ｃａｎｃｒｏ）、ジェノバ、イタリアなどの細胞収集所から入手することができる。該化学療法薬はゲムシタビンで、Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、インディアナポリス、インディアナからＧｅｍｚａｒ（登録商標）として市販されている。該細胞移動阻害剤は、ＮＳ２０４９４として標識した１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリル、およびＮＳ３０７１６として標識した１−（４−クロロ−ベンゾイル）−２−（４−メトキシ−フェニル）−１，２−ジヒドロ−３ａＨ−ピロロ［１，２−ａ］キノリン−３，３−ジカルボニトリルである。グラフ下のプラスおよびマイナスは、異なる試料を処理するために使用した化学物質を示す。たとえば、ｘ軸の左から右へ、ＭｕｔＪの最初の試料はゲムシタビンのみで処理したもの、ＭｕｔＪの２番目の試料はゲムシタビンとＮＳ２０４９４の組合せで処理したものである。細胞移動阻害剤含有処理における細胞移動阻害剤の濃度は５μＭであった。
【０１１８】
図２２で示したデータは、ＭＴＳアッセイ法によって得た。このアッセイは、増殖中の生細胞の数を決定するための比色法または化学的感受性アッセイである。このようなアッセイ法は、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マジソン、ウィスコンシンからＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓＮｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙとして市販されている。このアッセイには、テトラゾリウム化合物、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内部塩（ＭＴＳ）および電子結合試薬、フェナジンメト硫酸塩（ＰＭＳ）が含まれる。ＭＴＳは、細胞によって組織培養培地に可溶性のホルマザンに生体還元される。ホルマザンの４９０ｎｍにおける吸収度はさらに処理することなく９６ウェルアッセイプレートから直接測定することができ、培養中の生細胞の数に直接比例している。
【０１１９】
所望する数の細胞を５％牛胎児血清（ＦＣＭ）、１％Ｌ−グルタミン（非必須アミノ酸）および１％ペニシリン−ストレプトマイシン（Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ）を入れたＲｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）培地を含有する溶液０．１０ｍｌに入れて９６ウェル平底マイクロタイタープレートに沈着させた。該プレートは、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ）、フランクリンレークス、ニュージャージーからＦａｌｃｏｎ（商標）３５３０７２ＢＤ  Ｆａｌｃｏｎ  Ｃｌｅａｒ  ９６ウェルマイクロテストプレートとして市販されている。該プレートは平底で、蒸発を抑える蓋がついており、増殖領域は０．３２ｃｍ2で、ウェルの量は３７０μｌである。該プレートは、表面の化学特性を均一にするために真空ガスプラズマ処理した組織培養用ポリスチレンで形成されている。シンチレーションカウンターを使用して細胞を計数した。たとえば、各試料がウェル当たり約８２２６個（８２２６／Ｓ）または約４０００個の細胞、光学密度４０倍当たり約８２２６個（８２２６／ＤＯＸ４０）またはウェル当たり約５０００個を含むように該細胞を沈着させ、計数した。１０×薬剤希釈液０．０１ｍｌを各ウェルに添加し、１０×とは、保存溶液を元の１００×保存溶液から１０倍希釈したことを示す。培地０．０１ｍｌもまた、対照ウェルに添加した。該プレートを３７℃、５％ＣＯ2、湿潤インキュベーターで４日間インキュベートした。
【０１２０】
ＭＴＳは、ＰｒｏｍｅｇａからＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）ＭＴＳ  Ｐｏｗｄｅｒとして市販されている。ＭＴＳは、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に２ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、−２０℃で保存した。ＰＭＳは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｐｏｒａｔｉｏｎ、セントルイス、ミズーリーから市販されている。濃度０．９２ｍｇ／ｍｌのＰＭＳのＰＢＳ溶液を調製し、−２０℃で保存した。ＭＴＳおよびＰＭＳを３７℃の水浴で使用前に約１０分間融解した。ＭＴＳおよびＰＭＳをウェルに添加する直前に２０：１の比（すなわち、ＭＴＳ２ｍｌおよびＰＭＳ１００μｌ）で混合した。ＭＴＳ／ＰＭＳ混合物２０μｌを各ウェルに添加した。該プレートを３７℃、５％ＣＯ2、湿潤インキュベーターで３時間から４時間インキュベートした。分光マイクロプレートリーダーを使用して４９０ｎｍの吸光度を記録した。さらに、吸光度を後で記録するならば、１０％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）２５μｌを各ウェルに添加して反応を停止することができる。該ＳＤＳ処理プレートは、湿潤室において室温で１８時間まで遮光することができる。吸光度は前述のように記録することができる。
【０１２１】
図２２に示したように、ゲムシタビンおよびＮＳ２０４９４またはＮＳ３０７１６の組合せは、それぞれの細胞株についてゲムシタビンより高い殺滅率を示す。したがって、ゲムシタビンおよびＮＳ２０４９４またはＮＳ３０７１６の組合せは、膵臓癌細胞の相乗的殺滅を示す。ゲムシタビンおよびＮＳ２０４９４またはＮＳ３０７１６を組み合わせた医薬組成物自体はゲムシタビン単独よりも高い効果を有することができる。
【０１２２】
この開示の恩恵を受ける当業者は、細胞移動を改変する組成物および細胞移動を阻害することによって癌を治療する方法を本発明は提供すると考えられることを理解するであろう。本発明の様々な形態のさらなる変更および他の実施形態は、この説明を見れば当業者には明らかであろう。したがって、この説明は例示するのみで、本発明を実施する一般的方法を当業者に教示するためのものである。本明細書で示して説明した本発明の形態は、現在好ましい実施形態と見なされることを理解されたい。本発明のこの説明の恩恵を得た後で当業者に明らかであるように、要素および材料は本明細書で例示し説明したものと交換することが可能で、部分および方法は逆にすることができ、本発明のある種の特性は独立して使用することができる。請求の範囲で記載した本発明の精神および範囲を逸脱することなく、本明細書で記載した要素に変更を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０１２３】
【図１】細胞の誘導沈殿装置の下面透視図である。
【図１ａ】９６チャンネルマニホールドの一部の上面透視図である。
【図１ｂ】該９６チャンネルマニホールドの一部の下面透視図である。
【図２】基材に組み合わせた細胞の誘導沈殿装置の断面図である。
【図３】細胞を沈着させる基材の部分上面図である。
【図４】細胞移動を阻害する化学物質の同定方法の一実施形態を示す流れ図である。
【図４ａ】癌細胞を異なる化学物質で処理し、一定期間移動させる９６ウェルプレートの一例の上部平面図である。
【図５】癌を有する個人の治療を同定する方法の一実施形態を示す流れ図である。
【図６】ライブラリーから選択した化学物質および癌細胞を使用したスクリーニング実験の結果を示した図である。
【図７】４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸の濃度の関数として神経膠腫癌細胞の細胞移動速度を示した図である。
【図８】ＢＣＮＵおよび４’−プロピル−ビシクロヘキシル−４−カルボン酸と組み合わせたＢＣＮＵの濃度の関数として神経膠腫癌細胞の殺滅％を示した棒グラフである。
【図９】４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の濃度の関数として乳癌細胞の細胞移動速度を示した図である。
【図１０】ＢＣＮＵおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸と組み合わせたＢＣＮＵの濃度の関数として乳癌細胞の殺滅％を示した棒グラフである。
【図１１】様々な医薬組成物を細胞に注射した後の時間の関数として乳癌腫瘍の平均腫瘍体積を示した図である。
【図１２】細胞注射後の日数の時間の関数として図１１の実験で使用したマウスの生存割合を示した図である。
【図１３】４−メチル−３−ニトロ−安息香酸の濃度の関数としてメラノーマ癌細胞の細胞移動速度を示した図である。
【図１４】ＢＣＮＵおよび４−メチル−３−ニトロ−安息香酸と組み合わせたＢＣＮＵの濃度の関数としてメラノーマ癌細胞の殺滅％を示した棒グラフである。
【図１５】様々な医薬組成物を細胞に注射した後の日数の時間の関数としてメラノーマ腫瘍の平均腫瘍体積を示した図である。
【図１６】肺癌細胞の未処理試料および肺癌細胞の処理試料の細胞移動速度を示した棒グラフである。
【図１７】膵臓癌細胞の未処理試料および膵臓癌細胞の処理試料の細胞移動速度を示した棒グラフである。
【図１８】膵臓癌細胞の未処理試料および膵臓癌細胞の様々な処理試料の細胞移動速度を示した棒グラフである。
【図１９】いくつかの異なる化学物質の濃度の関数として膵臓癌細胞の細胞移動速度を示した図である。
【図２０】ＨＵＶＥＣの未処理試料およびＨＵＶＥＣ細胞の処理試料の細胞移動速度を示した棒グラフである。
【図２１】正常繊維芽細胞で、様々な細胞移動阻害剤で処理した細胞および未処理細胞の対照試料の細胞移動速度を示した棒グラフである。
【図２２】化学療法薬単独および異なる細胞移動阻害剤との組合せの関数として異なる癌細胞の殺滅％を示した棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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