(57)【要約】本発明はインビボイメージングのための診断造影剤に関する。造影剤はインビボ画像診断に適した造影成分で５位を標識された合成バルビツール酸誘導体を含む。本発明はまた放射性医薬の製造用キットと共に造影剤を含む医薬及び放射性医薬組成物を提供する。更にまた、放射性又は常磁性金属イオンを含む造影剤の製造に適したバルビツール酸誘導体のキレーターコンジュゲートを記載する。造影剤はアテローム性動脈硬化症を含む種々の疾患状態のインビボ画像診断に有用である。
2006505550.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バルビツール酸の５位が造影成分で標識された合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む造影剤であって、造影成分が該標識合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の哺乳類生体内への投与後に検出できるものであり、該造影成分が以下の（ｉ）〜（vii）から選択される造影剤。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ii）常磁性金属イオン、
（iii）ガンマ線放出型放射性ハロゲン、
（iv）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核、
（vi）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（vii）血管内検出に適したβ放射体。
【請求項２】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤リガンドコンジュゲートが次の式Ｉのものである、請求項１記載の造影剤。
［｛阻害剤｝−（Ａ）ｎ］ｍ−［造影成分］  （Ｉ）
式中、｛阻害剤｝は合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤であり、
−（Ａ）ｎ−はリンカー基であって、Ａは独立に−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基又はＣ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成要素であり、
Ｒは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｎは０〜１０の整数であり、
ｍは１、２又は３である。
【請求項３】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤がリガンドとコンジュゲートしており、リガンドが放射性金属イオン又は常磁性金属イオンと金属鎖体を形成している、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
【請求項４】
リガンドがキレート剤である、請求項３記載の造影剤。
【請求項５】
放射性金属イオンがガンマ放射体又は陽電子放出体である、請求項３又は請求項４記載の造影剤。
【請求項６】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ又は６８Ｇａである、請求項５記載の造影剤。
【請求項７】
ガンマ線放出型放射性ハロゲン造影成分が１２３Ｉである、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
【請求項８】
陽電子放出型放射性非金属が１８Ｆ、１１Ｃ又は１３Ｎから選択される、請求項１又は請求項２記載の造影剤。
【請求項９】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が次の式IVのものである、請求項１乃至請求項８のいずれか１項記載の造影剤。
【化１】
2006505550.tif 000032
式中、Ｒ１はＲ″又はＺ基であり、
Ｒ２はＲ″、Ｙ又は−ＮＲ４Ｒ５であって、Ｒ４はＨ又はＲ″基であり、Ｒ５はＨ、Ｃ２−１４アシル、Ｃ２−１０アミノアルキル又は（Ｎ−Ｃ２−１４アシル）Ｃ２−１０アミノアルキル又はＲ″基であり、或いはＲ４とＲ５がそれらと結合したＮ原子と一体として適宜（Ｎ−Ｃ２−１４）アシル化Ｃ２−８シクロアミノアルキレン環を形成し、
Ｒ″は独立にＣ１−１４アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ２−１４アルケニル、Ｃ１−１４フルオロアルキル、Ｃ１−１４パーフルオロアルキル、Ｃ６−１４アリール、Ｃ２−１４ヘテロアリール又はＣ７−１６アルキルアリールであり、
Ｚは基−Ａ１Ｏ［Ａ２Ｏ］ｐＲ３であって、ｐは０又は１であり、Ａ１及びＡ２は独立にＣ１−１０アルキレン、Ｃ３−８シクロアルキレン、Ｃ１−１０パーフルオロアルキレン、Ｃ６−１０アリーレン又はＣ２−１０ヘテロアリーレンであり、Ｒ３はＲ基であって、Ｒは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
Ｙは次式の基である。
【化２】
2006505550.tif 000033
式中、ＥはＣＲ２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ６であり、Ｒ６はＣ２−１４アシル又はＲ″もしくはＺ基である。
【請求項１０】
Ｒ２がＹ又は−ＮＲ４Ｒ５である、請求項９記載の造影剤。
【請求項１１】
造影成分がＲ２置換基に結合している、請求項９又は請求項１０記載の造影剤。
【請求項１２】
次の式Ｖのものである、請求項９乃至請求項１１のいずれか１項記載の造影剤。
【化３】
2006505550.tif 000034
式中、ＥはＣＨＲ又はＮＲ６であり、Ｒ１はＣ６−１４ｎ−アルキル又はＣ６−１４アリールである。
【請求項１３】
ＥがＮＲ６であって、Ｒ６がＣ２−１４アシル、−（ＣＨ２）ｄＯＨ（式中、ｄは２、３、４又は５である。）又は−Ｃ６Ｈ４Ｘ（式中、ＸはＨ、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＯ２又はＳＯ２ＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７及びＲ８は独立にＲ基であり、Ｒは請求項９記載の通り定義される。）である、請求項１２記載の造影剤。
【請求項１４】
Ｒ１がｎ−オクチル、ｎ−デシル、ビフェニル、Ｃ６Ｈ５Ｘ又は−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−Ｃ６Ｈ４Ｘであって、Ｘが請求項１３記載の通り定義される、請求項１２又は請求項１３記載の造影剤。
【請求項１５】
請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤を哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に含んでなる医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤を哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に含んでなり、造影成分が放射性である、放射性医薬組成物。
【請求項１７】
造影成分が放射性金属イオンを含む請求項１６記載の放射性医薬組成物。
【請求項１８】
造影成分が陽電子放出型放射性非金属又はガンマ線放出型放射性ハロゲンを含む、請求項１６記載の放射性医薬組成物。
【請求項１９】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とリガンドのコンジュゲートであって、バルビツール酸が５位に置換基を含んでおり、５位置換基が放射性又は常磁性金属イオンと金属鎖体を形成できるリガンドを含む、コンジュゲート。
【請求項２０】
次の式Ｉｂのものである、請求項１９記載のコンジュゲート。
［｛阻害剤｝−（Ａ）ｎ］ｍ−［リガンド］  （Ｉｂ）
式中、｛阻害剤｝、Ａ、ｎ及びｍは請求項２記載の通り定義される。
【請求項２１】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤が請求項９乃至請求項１４記載の式IV又は式Ｖのものである、請求項１９又は請求項２０記載のコンジュゲート。
【請求項２２】
リガンドがキレート剤である、請求項１９乃至請求項２１のいずれか１項記載のコンジュゲート。
【請求項２３】
キレート剤がジアミンジオキシム、Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有する、請求項２２記載のコンジュゲート。
【請求項２４】
請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載のバルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の非放射性誘導体を含む請求項１８記載の放射性医薬組成物の製造のための前駆体であって、非放射性誘導体が陽電子放出型放射性非金属又はガンマ線放出型放射性ハロゲンの原料との反応によって所望の放射性医薬を形成できる前駆体。
【請求項２５】
陽電子放出型放射性非金属又はガンマ線放出型ハロゲンが以下の（ｉ）〜（iv）から選択される、請求項２４記載の前駆体。
（ｉ）ハライドイオン、
（ii）Ｆ＋又はＩ＋、又は、
（iii）アルキルハライド、フルオロアルキルハライド、トシレート、トリフレート又はメシレートから選択されるアルキル化剤、
（iv）ＨＳ（ＣＨ２）３１８Ｆ。
【請求項２６】
非放射性誘導体が以下の（ｉ）〜（ｖ）から選択される、請求項２４又は請求項２５記載の前駆体。
（ｉ）トリアルキルスタネート又はトリアルキルシランのような有機金属誘導体、
（ii）親核置換のためのアルキルもしくはアリールヨウ化物もしくは臭化物、アルキルトシレート又はアルキルメシレートを含む誘導体、
（iii）親核又は親電子置換のために活性化された芳香族環を含む誘導体、
（iv）容易にアルキル化を起こす官能基を含む誘導体、
（ｖ）アルキルチオールとのアルキル化によってチオエーテルを形成する誘導体。
【請求項２７】
請求項１９乃至請求項２３のいずれか１項記載のコンジュゲートを含む請求項１７記載の放射性医薬組成物の製造用キット。
【請求項２８】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃであり、当該キットが更に生体適合性還元剤を含む請求項２７記載のキット。
【請求項２９】
請求項２４乃至請求項２６のいずれか１項記載の前駆体を含む請求項１８記載の放射性医薬組成物の製造用キット。
【請求項３０】
前駆体が固相に結合している、請求項２９記載のキット。
【請求項３１】
アテローム性動脈硬化症の画像診断のための請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３２】
不安定プラークの画像診断のための請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【請求項３３】
アテローム性動脈硬化症の血管内検出のための請求項１乃至請求項１４のいずれか１項記載の造影剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインビボイメージング用の画像診断造影剤に関する。本造影剤は、５位がインビボ画像診断に適した造影成分で標識された合成バルビツール酸誘導体を含む。
【背景技術】
【０００２】
バルビツール酸つまりピリミジン−２，４，６−トリオンは公知の薬剤である。
【０００３】
【化１】
2006505550.tif 000003
【０００４】
その誘導体、特に５位（すなわちピリミジン環のＣＨ２）での置換基の導入で得られるものも知られている。その一例は、バルビタールつまり５，５−ジエチルバルビツール酸である。
【０００５】
Ｇｒｉｇｓｂｙ等［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２２（６），Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｐ１２（１９８１）］は、局所脳血流量の潜在的な放射性造影剤として、放射性同位体が５位のアラルキル置換基の一部である親油性７５Ｓｅ及び１２３ｍＴｅ標識バルビツレート誘導体を開示している。
【０００６】
米国特許第３９５２０９１号には、バルビツレート薬剤のインビトロラジオイムノアッセイに有用な化合物で、バルビツール酸の５位が放射性同位体１２５Ｉで標識されたものが開示されている。
【０００７】
米国特許第４２４４９３９号には、バルビツレート薬剤のインビトロラジオイムノアッセイに有用な化合物で、バルビツール酸の１位又は３位（すなわち環窒素）が適宜リンカー基を介して放射性同位体１２５Ｉ又は１３１Ｉで標識されたものが開示されている。
【０００８】
国際公開第０１／６０４１６号には、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤のキレーターコンジュゲート並びに診断用金属との金属鎖体の製造におけるそれらの使用が開示されている。具体的に記載されたＭＭＰ阻害剤の種類はヒドロキサメート、特にスクシニルヒドロキサメートである。
【特許文献１】米国特許第３９５２０９１号明細書
【特許文献２】米国特許第４２４４９３９号明細書
【特許文献３】国際公開第０１／６０４１６号パンフレット
【非特許文献１】Ｇｒｉｇｓｂｙ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，２２（６），Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｐ１２（１９８１）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
今回、５位が造影成分で標識された合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤が哺乳類体内のインビボイメージングに有用な診断造影剤であることが判明した。バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤（すなわちピリミジン−２，４，６−トリオン）は所定のＭＭＰ、特にゼラチナーゼ（ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９）及び膜結合ＭＴ−ＭＭＰ１（ＭＭＰ−１４）及び３（ＭＭＰ−１６）並びにＭＭＰ−８に対してヒドロキサム酸誘導体よりも高い選択性を示すことができる。造影剤に関しては、このことは不都合なバックグラウンド活性の低減をもたらし、向上したＳ／Ｎ比を与える。バルビツール酸誘導体はまたヒドロキサム酸やペプチド系ＭＭＰ阻害剤よりも高い親油性を有しているが、これは、本発明の造影剤がその親油性のため細胞膜又は血液脳関門の通過性に優れていることを意味する。従って、本発明の薬剤は脳腫瘍、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病又は脳内のＭＭＰ活性の他の部位のような脳疾患のイメージングにも有用であると期待される。
【００１０】
本発明の造影剤は、特定のマトリックスメタロプロテイナーゼが関与していることが判明している一群の疾患（炎症、悪性及び変性疾患）のインビボ画像診断に有用である。こうした疾患としては、以下のものが挙げられる。
（ａ）アテローム性動脈硬化症、すなわち、種々のＭＭＰが過剰発現されるもの。ヒトアテローム性動脈硬化症プラークには高濃度のＭＭＰ−１、３、７、９、１１、１２、１３及びＭＴ１−ＭＭＰが検出されている［Ｓ．Ｊ．Ｇｅｏｒｇｅ，  Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，９（５），９９３−１００７（２０００）及びその参考文献］。ヒトアテローム中のＭＭＰ−２［Ｚ．Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１４８，１２１−１２８（１９９６）］及びＭＭＰ−８［Ｍ．Ｐ．Ｈｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０４，１８９９−１９０４（２００１）］の発現もまた報告されている。
（ｂ）慢性心障害（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，  Ｊ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅａｒｔ  ｆａｉｌｕｒｅ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．（２００２），５５（１），２９−４４はＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−９、ＭＭＰ−１３及びＭＭＰ−１４が心障害においてアップレギュレートされることを報告している）、
（ｃ）癌［Ｖｉｈｉｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９９，ｐ１５７−１６６（２００２）は癌におけるＭＭＰの関与を検討しており、特に、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−７及びＭＭＰ−９に着目している］、
（ｄ）関節炎［Ｊａｃｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．５０（４），ｐ１８３−１８６（２００１）“Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ  Ａ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ”，ＭＭＰ−２が特に考察されている］、
（ｅ）筋萎縮性側索硬化症［Ｌｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６７，２５１−２５９（１９９６）；個々ではＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９が関与している］、
（ｆ）脳転移、すなわち、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１３の関与が報告されているもの［Ｓｐｉｎａｌｅ，  Ｃｉｒｃｕｌ．Ｒｅｓ．，９０，５２０−５３０（２００２）］、
（ｇ）心臓血管疾患、すなわち、ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９の関与が報告されている［Ｌｕｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．，１９，２６７−２８４（１９９９）］、
（ｈ）アルツハイマー病、すなわち、ＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９が患部組織に発見されている［Ｂａｃｋｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，５８，９８３−９９２（１９９２）］、
（ｉ）神経炎症疾患、すなわち、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３及びＭＭＰ−９が関与している［Ｍｕｎ−Ｂｒｙｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ．  Ｒｅｓ．，９３３，４２−４９（２００２）］、
（ｊ）ＣＯＰＤ（すなわち、慢性閉塞性肺疾患）、すなわち、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−８及びＭＭＰ−９がアップレギュレートされると報告されている［Ｓｅｇｕｒａ−Ｖａｌｄｅｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｓｔ，１１７，６８４−６９４（２０００）］、
（ｋ）眼病［Ｋｕｒｐａｋｕｓ−Ｗｈｅａｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｇ．Ｈｉｓｔｏ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．，３６（３），１７９−２５９（２００１）］、
（ｌ）皮膚疾患［Ｈｅｒｏｕｙ，Ｙ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７（１），３−１２（２００１）］。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
第１の態様において、本発明は、
バルビツール酸の５位が造影成分で標識された合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む造影剤であって、造影成分が該標識合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の哺乳類生体内への投与後に検出できるものであり、該造影成分が以下の（ｉ）〜（vii）から選択される造影剤を提供する。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ii）常磁性金属イオン、
（iii）ガンマ線放出型放射性ハロゲン、
（iv）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核、
（vi）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（vii）血管内検出に適したβ放射体。
【００１２】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は分子量１００〜２０００ダルトン、好ましくは分子量１５０〜６００ダルトン、最も好ましくは分子量２００〜５００ダルトンのものが適している。
【００１３】
造影成分は哺乳類の体外から検出できるものか又はインビボ使用のために設計された検出器の使用を介して検出され、例えば血管内照射又は光学的検出器、例えば内視鏡又は施術内使用のために設計された放射能検出器で検出し得る。好ましい造影成分はインビボ投与後に非侵襲的な方法で外部から検出できるものである。最も好ましい造影成分は放射性、特に放射性金属イオン、ガンマ線放出型放射性ハロゲン及び陽電子放出型放射性非金属、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いたイメージングに適したものである。
【００１４】
造影成分が放射性金属イオン、すなわち放射性金属である場合は、適当な放射性金属は、陽電子放出体、例えば６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃ又は６８Ｇａ、ガンマ放射体、例えば９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ又は６７Ｇａである。好ましい放射性金属は９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ及び１１１Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はガンマ放射体、特に９９ｍＴｃである。
【００１５】
造影成分が常磁性金属イオンである場合は、適当なかかる金属イオンとしてはＧｄ（III）、Ｍｎ（II）、Ｃｕ（II）、Ｃｒ（III）、Ｆｅ（III）、Ｃｏ（II）、Ｅｒ（II）、Ｎｉ（II）、Ｅｕ（III）又はＤｙ（III）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（III）、Ｍｎ（II）及びＦｅ（III）であり、Ｇｄ（III）が特に好ましい。
【００１６】
造影成分がガンマ線放出型放射性ハロゲンである場合は、放射性ハロゲンは１２３Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから適宜選択される。好ましいガンマ線放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。
【００１７】
造影成分が陽電子放出型放射性非金属である場合は、かかる陽電子放出体の適当なものとして、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ及び１８Ｆであり、特に好ましくは１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。
【００１８】
造影成分が過分極ＮＭＲ活性核種である場合は、かかるＮＭＲ活性核種は非ゼロ核スピンを有し、１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐが挙げられる。これらのうち、１３Ｃが好ましい、「過分極」という用語はＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。１３Ｃの天然の存在量（１２Ｃと比較して）は約１％であり、適当な１３Ｃ標識化合物は過分極される前に５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上の存在量となるように適宜濃縮される。本発明のバルビツール酸の５位の炭素含有置換基の１以上の炭素原子は１３Ｃで適宜濃縮され、これを次いで過分極させる。
【００１９】
造影成分がインビボ光学イメージングに適したレポーターである場合は、レポーターは光学イメージング操作法において直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は未着色粒子）、光吸収体又は光放射体とし得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような染料である。染料は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する染料とし得る。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００２０】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範囲に非局在化した電子系を有する基、シアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム染料、チアピリリアプ染料、スクアリリウム染料、クロコニウム染料、アズレニウム染料、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム染料、ベンゾチアフェノチアジニウム染料、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ染料、分子内及び分子間電荷移動染料及び染料鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン染料、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００２１】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、マリーナブルー、パシフィックブルー、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５１４、テトラメチルローダミン及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ３５０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４３０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５３２、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５４６、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５５５、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６３３、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６６０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６８０、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７００及びＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ７５０が挙げられる。
【００２２】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外域に吸収極大を有する染料である。
【００２３】
光学イメージングモダリティ及び測定手法としては、例えば、ルミネセンスイメージング、内視鏡、蛍光内視鏡、光学的密着断層撮影、透過率イメージング、時間分解透過率イメージング、共焦イメージング、非線形顕微鏡分析、光音響イメージング、音響光学イメージング、スペクトル分析、反射スペクトル分析、干渉分析、密着干渉計、拡散光学断層撮影及び蛍光媒介拡散光学断層撮影（連続波長、時間ドメイン及び周波数ドメインシステム）及び光の散乱、吸収、分極、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定などが挙げられる。
【００２４】
造影成分が血管内検出に適したβ放射体である場合は、かかるβ放射体として適当なものとして、放射性金属、６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ又は１９２Ｉｒ及び非金属３２Ｐ、３３Ｐ、３８Ｓ、３８Ｃｌ、３９Ｃｌ、８２Ｂｒ及び８３Ｂｒが挙げられる。
【００２５】
本発明の造影剤は好ましくは次の式Ｉのものである。
【００２６】
［｛阻害剤｝−（Ａ）ｎ］ｍ−［造影成分］  （Ｉ）
式中、｛阻害剤｝は合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤であり、
−（Ａ）ｎ−はリンカー基であって、Ａは独立に−ＣＲ２−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＲ２−、−ＮＲＣＯ−、−ＣＯＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ２ＮＲ−、−ＮＲＳＯ２−、−ＣＲ２ＯＣＲ２−、−ＣＲ２ＳＣＲ２−、−ＣＲ２ＮＲＣＲ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基又はＣ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成要素であり、
Ｒは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｎは０〜１０の整数であり、
ｍは１、２又は３である。
【００２７】
式Ｉのリンカー基−（Ａ）ｎ−の役割はバルビツレートメタロプロテイナーゼ阻害剤の活性部位からイメージング部位を隔てることである。これは、造影成分が比較的嵩高い（例えば金属鎖体）場合にＭＭＰ酵素への阻害剤の結合が損なわれないようにするため特に重要である。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル又はアリールのスペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。
【００２８】
リンカー基の性状は造影剤の生体分布を変化させるのにも使用できる。例えば、リンカーにエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限にすることが容易になる。−（Ａ）ｎ−が単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成要素又はアミノ酸残基１〜１０個のペプチド鎖を含むと、リンカー基はインビボの造影剤の薬物動態及び血中クリアランスを変化させる機能をもつことができる。かかる「バイオモディファイアー」のリンカー基はバックグランド組織、例えば筋肉又は肝臓及び／又は血液からの造影剤のクリアランスを加速し、バックグラウンドの干渉の低減による良好な診断画像がもたらされる。バイオモディファイアーリンカー基はまた肝臓を経る場合とは異なり、例えば腎臓を経る排出の特定の経路を優先するために使用し得る。
【００２９】
−（Ａ）ｎ−がアミノ酸残基１〜１０個のペプチド鎖を含む場合、アミノ酸残基は好ましくはグリシン、リジン、アスパラギン酸又はセリンから選択される。−（Ａ）ｎ−がＰＥＧ部分を含む場合、好ましくは、単分散ＰＥＧ様構造の重合により誘導される単位、すなわち次の式IIの１７−アミノ−５−オキソ−６−アザ−３，９，１２，１５−テトラオキサヘプタデカン酸を含む。
【００３０】
【化２】
2006505550.tif 000004
【００３１】
式中、ｎは１〜１０の整数であり、Ｃ末端単位（＊）は造影成分に連結している。
【００３２】
リンカー基がＰＥＧ又はペプチド鎖を含まない場合、好ましい−（Ａ）ｎ−基は２〜１０個の原子、最も好ましくは２〜５個の原子、特に２又は３個の原子の−（Ａ）ｎ−部分をなする連結原子の骨格鎖を有する。２原子の最小のリンカー基骨格鎖は如何なる相互作用も最小限とするために造影成分がバルビツール酸系メタロプロテイナーゼ阻害剤から十分隔離されているという利点を与える。
【００３３】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチドリンカー基は、それがコンジュゲートしたバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤と顕著な水素結合相互作用をもたず、バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤にリンカーが巻きつかないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは２〜５である。好ましいアリーレンスペーサーは次の式のものである。
【００３４】
【化３】
2006505550.tif 000005
【００３５】
式中、ａ及びｂは独立に０、１又は２である。リンカー基−（Ａ）ｎ−は好ましくはグルタミン酸、コハク酸、ポリエチレングリコール系単位又は式IIのＰＥＧ様単位から誘導される。
【００３６】
造影成分が金属イオンを含む場合、金属イオンは金属鎖体として存在する。かかるバルビツール酸系メタロプロテイナーゼ阻害剤の金属イオンとのコンジュゲートは好適には式Ｉａのものである。
【００３７】
［｛阻害剤｝−（Ａ）ｎ］ｍ−［金属鎖体］  （Ｉａ）
式中、Ａ、ｎ及びｍは上記の式Ｉの通り定義される。
【００３８】
「金属鎖体」という用語は、金属イオンと１個以上のリガンドとの配位鎖体を意味する。金属鎖体は「トランスキレート化に対して耐性」、すなわち、金属の配位部位に対する他の潜在的な競合リガンドとリガンド交換を容易に行わないことが極めて好ましい。潜在的な競合リガンドには、バルビツール酸部分自体及びインビトロ標品中の他の賦形剤（製剤に使用される例えば放射能保護物質又は抗微生物保存料）又はインビボの内因性化合物（例えばグルタチオン、トランスフェリン又は血症タンパク質）がある。
【００３９】
式Ｉの金属鎖体は次の式Ｉｂのリガンドのコンジュゲートから誘導される。
【００４０】
［｛阻害剤｝−（Ａ）ｎ］ｍ−［リガンド］    （Ｉｂ）
式Ｉ、Ｉａ及びＩｂ中、ｍは好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【００４１】
トランスキレート化に耐性である金属鎖体を形成する本発明の使用に適したリガンドとしては、（金属ドナー原子同士が炭素原子又は非配位複素環原子の非配位骨格で連結されていることによって）５又は６員キレート環が形成されるように２〜６個、好ましくは２〜４個の金属ドナー原子が配列したキレート剤、又はイソニトリル、ホスフィン又はジアゼニドなどの金属イオンに強力に結合するドナー原子を含む単座のリガンドが挙げられる。キレート剤の部分として金属に良好に結合するドナー原子の例はアミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は、単座又は２座のホスフィンであっても適当な金属鎖体を形成する程度に強力な金属鎖体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドの直線の幾何学的特徴は、それらがキレート剤に容易に取り込まれないようにするためであり、従って、典型的には単座リガンドとして使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル及びｍｉｂｉ（１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばとリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、リガンドのＨＹＮＩＣシリーズ、すなわちヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【００４２】
トランスキレート化に耐性の金属鎖体を形成するテクネチウムのための適当なキレート剤の例としては、例えば以下の（ｉ）〜（ｖ）が挙げられる。
（ｉ）次の式のジアミンジオキシム。
【００４３】
【化４】
2006505550.tif 000006
【００４４】
式中、Ｅ１〜Ｅ６は各々独立にＲ′基であり、
各Ｒ′基はＨ又はＣ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−１０フルオロアルキル、Ｃ２−１０カルボキシアルキル又はＣ１−１０アミノアルキルであるか、或いは２個以上のＲ′がそれらと結合した原子と一緒に炭素環、複素環、飽和又は不飽和の環を形成するもので、Ｒ′基の１以上はバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤にコンジュゲートしており、
Ｑは式−（Ｊ）ｆ−の結合基であり、ｆは３、４又は５であり、各Ｊは独立に−Ｏ−、−ＮＲ′−又は−Ｃ（Ｒ′）２−であるが、ただし−（Ｊ）ｆ−が−Ｏ−又は−ＮＲ′−であるＪ基最大１個含むことを条件とする。
【００４５】
好ましいＱ基は以下のものである。
Ｑ＝−（ＣＨ２）（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）−、すなわちプロピレンアミンオキシムつまりＰｎＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−、すなわちペンチレンアミンオキシムつまりＰｅｎｔＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２ＮＲ′（ＣＨ２）２−。
【００４６】
Ｅ１〜Ｅ６は、好ましくはＣ１−３アルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル又はアミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ｅ１〜Ｅ６基はＣＨ３である。
【００４７】
バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤は好ましくはＥ１又はＥ６のＲ′基、又はＱ部分のＲ′基のいずれかでコンジュゲートする。最も好ましくは、バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤はＱ部分のＲ′基にコンジュゲートする。バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤がＱ部分のＲ′基にコンジュゲートする場合は、Ｒ′基は好ましくはブリッジヘッド位置にある。かかる場合、Ｑは好ましくは−（ＣＨ２）（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−又は−（ＣＨ２）２ＮＲ′（ＣＨ２）２−、最も好ましくは−（ＣＨ２）２（ＣＨＲ′）（ＣＨ２）２−である。特に好ましい官能性ジアミンジオキシムキレーターは次の式IIIを有しており（キレーター１）、合成バルビツール酸系ＭＭＰ抑制剤はブリッジヘッド−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２基を介してコンジュゲートする。
【００４８】
【化５】
2006505550.tif 000007
【００４９】
（ii）チオールトリアミドドナーセットを有するＮ３Ｓリガンド、例えばＭＡＧ３（メルカプトアセチルトリグリシン）及び関連のリガンド、又はジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの、例えばＰｉｃａ。
（iii）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２リガンド、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ。
（iv）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状リガンドであるＮ４リガンド、例えばサイクラム、モノオキシサイクラム又はジオキシサイクラム。
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ２Ｏ２リガンド。
【００５０】
上記リガンドは特にテクネチウム、例えば９４ｍＴｃ又は９９ｍＴｃとの錯形成に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）］に更に詳細に説明されている。これらのリガンドは、他の金属、例えば銅（６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ）、バナジウム（例えば４８Ｖ）、鉄（例えば５２Ｆｅ）又はコバルト（例えば５５Ｃｏ）にも有用である。他の適当なリガンドとしては、Ｓａｎｄｏｚの国際公開第９１／０１１４４号に記載されたものがあり、インジウム、イットリウム及びガドリニウムに特に適したリガンド、特にマクロ環アミノカルボキシレート及びアミノホスホン酸リガンドが挙げられる。ガドリニウムの非イオン系（すなわち中性）の金属鎖体を形成するリガンドは公知であり、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。放射性金属イオンがテクネチウムである場合は、リガンドは好ましくは４座のキレート剤である。テクネチウムに対する好ましいキレート剤はジアミンジオキシム又は上記Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓのドナーセットを有するものである。テクネチウムに対する特に好ましいキレート剤はジアミンジオキシムである。
【００５１】
合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、結合が血中において容易に代謝されないような態様で金属鎖体に結合するのが極めて好ましい。かかる代謝が起これば標識メタロプロテイナーゼ阻害剤が所望のインビボの標的部位に到達するより前に金属鎖体が切断されるからである。従って合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は好ましくは容易に代謝されない結合を介して本発明の金属鎖体に共有結合する。
【００５２】
造影成分が放射性ハロゲン、例えばヨウ素である場合は、バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤は以下の要素、すなわち：非放射性ハロゲン原子、例えばアリールのヨウ化物又は臭化物（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化アリール環（例えばフェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えばトリアルキルスズ又はトリアルキルシリル）、又は有機前駆体、例えばトリアジンを含むように適宜選択される。放射性ハロゲン（例えば１２３Ｉ及び１８Ｆ）を取り込む方法はＢｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。放射性ハロゲン、特にヨウ素が結合することができる適当なアリール基を以下に示す。
【００５３】
【化６】
2006505550.tif 000008
【００５４】
両者共に芳香族環上への容易な放射性ヨウ素置換を可能とする置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を含む別の置換基は、以下に示すような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成できる。
【００５５】
【化７】
2006505550.tif 000009
【００５６】
造影成分がヨウ素の放射性同位体である場合は、放射性ヨウ素原子は好ましくは芳香族環、例えばベンゼン環又はビニル基に直接共有結合して結合する。飽和脂肪族系に結合しているヨウ素原子はインビボの代謝を受けやすく、放射性ヨウ素が消失しやすいことが知れれているからである。
【００５７】
造影成分がフッ素の放射性同位体（例えば１８Ｆ）である場合は、放射性ヨウ素原子は、アルキルブロミド、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する適当な前駆体との１８Ｆ−フロリドの反応を用いた直接標識によって実施し得る。１８Ｆはまた、Ｎ−（ＣＨ２）３１８Ｆを得るための１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ（Ｍｓはメシレート）のようなアルキル化剤を用いたアミン前駆体のＮ−アルキル化によるか、又は、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ又は１８Ｆ（ＣＨ２）３Ｂｒを用いたヒドロキシル基のＯ−アルキル化によって導入することもできる。アリール系の場合は、アリールジアゾニウム塩からの窒素の１８Ｆ−フロリド置換がアリール−１８Ｆ誘導体への良好な経路である。１８Ｆ−標識誘導体への経路を説明しているＢｏｌｔｏｎ，  Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）を参考にできる。
【００５８】
本発明の好ましい合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、次の式IVのものである。
【００５９】
【化８】
2006505550.tif 000010
【００６０】
式中、Ｒ１はＲ″又はＺ基であり、
Ｒ２はＲ″、Ｙ又は−ＮＲ４Ｒ５であって、Ｒ４はＨ又はＲ″基であり、Ｒ５はＨ、Ｃ２−１４アシル、Ｃ２−１０アミノアルキル又は（Ｎ−Ｃ２−１４アシル）Ｃ２−１０アミノアルキル又はＲ″基であり、或いはＲ４とＲ５がそれらと結合したＮ原子と一体として適宜（Ｎ−Ｃ２−１４）アシル化Ｃ２−８シクロアミノアルキレン環を形成し、
Ｒ″は独立にＣ１−１４アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ２−１４アルケニル、Ｃ１−１４フルオロアルキル、Ｃ１−１４パーフルオロアルキル、Ｃ６−１４アリール、Ｃ２−１４ヘテロアリール又はＣ７−１６アルキルアリールであり、
Ｚは基−Ａ１Ｏ［Ａ２Ｏ］ｐＲ３であって、ｐは０又は１であり、Ａ１及びＡ２は独立にＣ１−１０アルキレン、Ｃ３−８シクロアルキレン、Ｃ１−１０パーフルオロアルキレン、Ｃ６−１０アリーレン又はＣ２−１０ヘテロアリーレンであり、Ｒ３はＲ基であって、Ｒは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
Ｙは次式の基である。
【００６１】
【化９】
2006505550.tif 000011
【００６２】
式中、ＥはＣＲ２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ６であり、Ｒ６はＣ２−１４アシル又はＲ″もしくはＺ基である。
【００６３】
式IVにおいて、Ｒ２は好ましくはＹ又は−ＮＲ４Ｒ５である。造影剤が式IVのバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤を含み、造影成分がガンマ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属である場合は、造影成分はＲ１又はＲ２置換基のいずれかにおいて結合していてよい。造影成分が放射性又は常磁性金属イオンである場合は、式IVのＲ２置換基は好ましくは造影成分に結合するか、これを含んでいる。
【００６４】
特に好ましい本発明の合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、次の式Ｖのものである。
【００６５】
【化１０】
2006505550.tif 000012
【００６６】
式中、ＥはＣＨＲ又はＮＲ６であり、Ｒ１はＣ６−１４ｎ−アルキル又はＣ６−１４アリールである。式Ｖの好ましい合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤は、Ｅ＝ＮＲ６であって、Ｒ６＝Ｃ２−１４アシル、−（ＣＨ２）ｄＯＨ（式中、ｄは２、３、４又は５である。）又は−Ｃ６Ｈ４Ｘ（式中、ＸはＨ、Ｃ１−４アルキル、ハロゲン、ＯＲ、ＮＲ２、ＮＯ２又はＳＯ２ＮＲ７Ｒ８であり、Ｒ７及びＲ８は独立にＲ基であり、Ｒは式IV（上記）の通り定義される。）である。
【００６７】
式Ｖの特に好ましい合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤はＲ１がｎ−オクチル、ｎ−デシル、ビフェニル、Ｃ６Ｈ５Ｘ又は−Ｃ６Ｈ４−Ｏ−Ｃ６Ｈ４Ｘであって、Ｘが前記の通り定義されるものである。
【００６８】
本発明のバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤化合物は尿素とモノ又はジ置換マロン酸エステル誘導体との縮合によって調製される。詳細はＦｏｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１１，９６９−９７２（２００１）に記載されている。式ＶのＭＭＰ阻害剤はＧｒａｍｓ  ｅｔ  ａｌ［Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８２，１２７７−１２８５（２００１）］記載の方法によって調製できる。
【００６９】
本発明の造影剤が放射性又は常磁性金属イオンを含む場合は、金属イオンは適宜、金属鎖体として存在する。かかる金属鎖体は適宜、式Ｉｂのコンジュゲートと適当な金属イオンとの反応で調製される。式Ｉｂのバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤のリガンドコンジュゲート又はキレーターコンジュゲートは二官能性キレート法で調製できる。すなわち、官能基を結合したリガンド又はキレート剤の調製は周知である（それぞれ「二官能性リンカー」又は「二官能性キレート」）。結合させる官能基としては、アミン、チオシアネート、マレイミド及び活性エステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールが挙げられる。本発明のキレーター１はアミン官能性付与二官能性キレートの一例である。かかる二官能性キレートは所望のコンジュゲートを形成するためのバルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤上の適当な官能基と反応させることができる。バルビツール酸上のかかる適当な官能基としては、以下のもの：
カルボキシル類（アミン官能性付与二官能性キレーターとのアミド結合形成のため）、
アミン類（カルボキシ又は活性エステル官能性付与２官能セキレーターとのアミド結合形成のため）、
ハロゲン類、メシレート類及びトシレート類（アミン官能性付与二官能性キレーターとのアミド結合形成のため）、及び、
チオール類（マレイミド官能性付与二官能性キレーターとの反応のため）
が挙げられる。
【００７０】
本発明の特に好ましいバルビツレートＭＭＰ阻害剤の放射標識は「前駆体」を用いて好適に実施できる。造影成分が金属イオンを含む場合は、かかる前駆体は後記の第４の実施形態において説明する通り、リガンドとのバルビツレートＭＭＰ阻害剤の「コンジュゲート」を含むことが適している。造影成分が非金属放射性同位体、すなわちガンマ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子発行放射性非金属を含む場合は、かかる「前駆体」は、所望の非金属放射性同位体の好都合な化学形態との化学反応を最小限の工程数（理想的には１工程）で、所望の放射性生成物を得るために特に精製する必要なく（理想的にはそれ以上精製せずに）実施できるように設計された非放射性物質を含むのが適当である。かかる前駆体は好適には良好な化学純度で得ることができ、適宜滅菌形態で供給される。
【００７１】
本発明の特に好ましいバルビツレートＭＭＰ阻害剤の放射標識のための「前駆体」（リガンドコンジュゲートを含む）は以下の通り製造できると考えられる。
【００７２】
【化１１】
2006505550.tif 000013
【００７３】
式VIの化合物の末端−ＯＨ基はトシル又はメシル基又はブロモ誘導体に変換してよく、次にこれを用いてアミノ官能性付与キレーターをコンジュゲートすればよい（ｇ＝２についてスキーム１に記載）。
【００７４】
【化１２】
2006505550.tif 000014
【００７５】
上記の前駆体のトシレート、メシレート又はブロモ基は、別法として［１８Ｆ］フロリドで置き換えることにより、１８Ｆ標識ＰＥＴ造影剤としてもよい。
【００７６】
放射性誘導体は以下の対応フェノール前駆体から調製することができる。
【００７７】
【化１３】
2006505550.tif 000015
【００７８】
別の方法は、アミン官能性付与キレーターのＮアルキル化のための化合物２３［Ｇｒａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８２，１２７７−１２８５（２００１）］及び実施例５の工程（ｈ）］の使用である。
スキーム２
【００７９】
【化１４】
2006505550.tif 000016
【００８０】
化合物２３は、アミンとの反応によって以下のような放射性ヨウ素化に適した前駆体とすることができる。
【００８１】
【化１５】
2006505550.tif 000017
【００８２】
非放射性ヨウ素化類似化合物２４が調製されている。
【００８３】
【化１６】
2006505550.tif 000018
【００８４】
化合物２３はまた、放射性ヨウ素化のためのアリールトリメチルシリル（ＴＭＳ）前駆体に変換することができる。
【００８５】
【化１７】
2006505550.tif 000019
【００８６】
化合物２３はスキーム６に示す通り放射性フッ素化のためのアリールジアゾニウム前駆体に変換することができる。
【００８７】
【化１８】
2006505550.tif 000020
【００８８】
別の方法はＣ−５位においてアミノ基を用いることである。この方法においては、キレーターはリンカーを介してコンジュゲートすると予測される（スキーム３）。
スキーム３
【００８９】
【化１９】
2006505550.tif 000021
【００９０】
かかる第１アミン置換バルビツレートは、ベンジルアミンを用いた化合物２３のアルキル化、その後のＰｄ／Ｃ触媒を用いた水素化のような標準的条件下のベンジル保護基の除去によって調製できる。
【００９１】
別の方法はキレートを結合させるためのピペラジン誘導体（化合物６、実施例７）の使用である。これはカルボキシ又は活性エステル官能性付与二官能性キレーターとのピペラジン置換基第２アミンの直接のコンジュゲートによるか、又はリンカーを介して行う。後者はスキーム４において示される。ここで、アミン官能性付与キレータがリンカーのペンダントカルボキシル官能基に結合していてもよい。
スキーム４
【００９２】
【化２０】
2006505550.tif 000022
【００９３】
化合物６をアシル化して適当な放射性ヨウ素化に適した前駆体を得ることができる。
【００９４】
【化２１】
2006505550.tif 000023
【００９５】
化合物６はまた１８Ｆ（ＣＨ２）２ＯＴｓ（式中Ｔｓはトシレート基である）又は１８Ｆ（ＣＨ２）２ＯＭｓ（式中Ｍｓはメシレート基である）のような１８Ｆ標識に適したアルキル化剤と反応させることによりＮ（ＣＨ２）２１８Ｆ置換基を有する対応Ｎ官能性付与ピペラジン誘導体を得ることができる。或いは、化合物６をまずクロロアセチルクロリドと反応させてＮ（ＣＯ）ＣＨ２ＣｌＮ誘導ピペラジン（化合物１１）とし、その後ＨＳ（ＣＨ２）３１８Ｆと反応させることができる。
【００９６】
【化２２】
2006505550.tif 000024
【００９７】
本発明の造影剤が放射性又は常磁性金属イオンを含む場合は、金属イオンは適宜、金属鎖体として存在する。かかる金属鎖体は適宜、適当な金属イオンとの式Ｉｂのコンジュゲートの反応により調製する。式Ｉｂのバルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤のリガンドコンジュゲート又はキレーターコンジュゲートは二官能性キレート法を介して調製できる。すなわち、官能基が結合したリガンド又はキレート剤を調製することは周知である（それぞれ「二官能性リンカー」又は「二官能性キレート」）。結合させる官能基としては、アミン、チオシアネート、マレイミド及び活性エステル、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールが挙げられる。本発明のキレーター１はアミン官能性付与二官能性キレートの一例である。かかる二官能性キレートは所望のコンジュゲートを形成するためのバルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤上の適当な官能基と反応させることができる。バルビツール酸上のかかる適当な官能基としては、以下のもの：
カルボキシル類（アミン官能性付与二官能性キレーターとのアミド結合形成のため）、
アミン類（カルボキシ又は活性エステル官能性付与２官能セキレーターとのアミド結合形成のため）、
ハロゲン類、メシレート類及びトシレート類（アミン官能性付与二官能性キレーターとのＮ−アルキル化のため）、及び、
チオール類（マレイミド官能性付与二官能性キレーターとの反応のため）
が挙げられる。
【００９８】
本発明の放射性金属鎖体は適当なｐＨで式Ｉａのリガンドコンジュゲートに適当な酸化状態の放射性金属の溶液を反応させることにより調製してよい。溶液は好ましくは金属と弱く錯形成するリガンド（例えばグルコネート又はシトレート）を含み、すなわち放射性金属鎖体はリガンドの交換又はトランスキレート化により調製する。かかる条件は金属イオンの加水分解のような不都合な副反応を抑制するのに有用である。放射性金属イオンが９９ｍＴｃの場合は、通常の原料は９９Ｍｏ発生物質に由来のナトリウムパーテクネテートである。テクネチウムは比較的非反応性であるＴｃ（VII）酸化状態における９９ｍＴｃパーテクネテート中に存在する。従って、酸化状態の低いＴｃ（Ｉ）〜Ｔｃ（Ｖ）のテクネチウム鎖体の調製は通常は錯形成を促進するために、ナトリウムジチオナイト、ナトリウムビスルファイト、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズイオン、Ｆｅ（II）又はＣｕ（Ｉ）のような適当な薬学的に許容される還元剤の添加を必要とする。薬学的に許容される還元剤は好ましくはスズ塩、最も好ましくは塩化スズ、フッ化スズ又は酒石酸スズである。
【００９９】
造影成分が過分極ＮＭＲ活性核種、例えば過分極１３Ｃ原子である場合、所望の過分極化合物は適当な１３Ｃ過剰バルビツール酸誘導体への過分極ガス（例えば１２９Ｘｅ又は３Ｈｅ）からの分極交換により調製できる。
【０１００】
第２の態様において、本発明は哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体と共に上記造影剤を含む医薬組成物を提供する。「生体適合性担体」とは流体、特に液体であり、組成物が生理学的に耐容性を有し、すなわち、毒性又は予定外の不快感を伴うことなく哺乳類体内に投与できるように造影剤を懸濁又は溶解できるものである。生体適合性担体は適宜、注射用担体液体、例えば滅菌された発熱物質非含有の注射用水、水溶液、例えば生理食塩水（注射用の最終生成物が等張性又は非低張性であるように好都合に平衡されていてよい）、浸透圧調節物質（例えば生体適合性対イオンを有する血漿中カチオンの塩）、糖類（例えばグルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えばソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えばグリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えばポリエチレングリコール、プロピレングリコール等）の１種以上の水溶液である。
【０１０１】
第３の態様において、本発明は哺乳類への投与に適した形態の生体適合性担体（上記において定義）と共に造影成分が放射性である上記造影剤を含む医薬組成物を提供する。かかる放射性医薬組成物は滅菌性を維持しながら皮下注射用の針で単回又は複数回穿刺するのに適したシール（例えばクリンプドオンセプタムシール蓋）と共に提供される何れかの容器中において供給されるのが適している。かかる容器は単回又は多数回の患者用量を含有してよい。好ましい多用量の容器には、多数回の患者用量を含む単一の大型バイアル（例えば１０〜３０ｃｍ３容量）を含み、これにより単回分の患者用量を臨床用等級のシリンジ内に様々な時間間隔で臨床状況に適した製剤の有効期限内に取り出すことができる。充填済みシリンジはヒト用単回用量を含むように設計され、従って好ましくは使い捨て又は他の臨床用途に適したシリンジである。充填済みシリンジは適宜放射線量からオペレーターを保護するためにシリンジシールドと共に提供してよい。適当なかかる放射性薬品用シリンジシールドは当該分野で知られており、好ましくは鉛又はタングステンを含む。
【０１０２】
造影成分が９９ｍＴｃを含む場合、診断用イメージング放射性薬品に適した放射線の含量はインビボでイメージングされる部位、取り込み及び標的のバックグラウンドに対する比に応じて、９９ｍＴｃの１８０〜１５００ＭＢｑの範囲である。
【０１０３】
第４の態様において、本発明は合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とリガンドのコンジュゲートであって、バルビツール酸が５位に置換基を含んでおり、５位置換基がリガンドを含んでいるコンジュゲートを提供する。該リガンドコンジュゲートは放射性金属イオン又は常磁性金属イオンのいずれかにより標識された合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の製造に適している。好ましくは、リガンドコンジュゲートは上記の式Ｉｂのものである。最も好ましくは、リガンドコンジュゲートの合成バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤は上記の式IVのものである。理想的には、リガンドコンジュゲートの合成バルビツール酸系ＭＭＰ阻害剤は上記の式Ｖのものである。本発明の第４の態様のコンジュゲートのリガンドは好ましくはキレート剤である。好ましくは、キレート剤はジアミンジオキシム、Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓドナーセットを有する。
【０１０４】
第５の態様において、本発明は造影成分が非金属放射性同位体、すなわちガンマ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属を含む放射性医薬組成物の製造に有用な前駆体を提供する。かかる「前駆体」は、所望の非金属放射性同位体の好都合な化学形態との化学反応が最小限の回数の工程（理想的には１工程）において、所望の放射性生成物を得るために特に精製を必要とすることなく（理想的には更に精製を必要とすることなく）実施できるように設計された合成バルビツール酸系メタロプロテイナーゼ阻害剤物質の非放射性誘導体を含むことが適当である。かかる前駆体は好適には良好な化学的純度で得ることができる。適当な前駆体誘導体はＢｏｌｔｉｎ，  Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）に記載されている。
【０１０５】
本実施形態の好ましい前駆体は、親電子又は親核ハロゲン化の何れかを起こし、アルキル又はフルオロアルキルハライド、トシレート、トリフレート（すなわちトリフルオロメタンスルホネート）又はメシレートから選択されるアルキル化剤を用いて容易にアルキル化できる誘導体、又はチオエーテル結合を形成するアルキレートチオール部分を含む。第１のグループの例は、以下の（ａ）〜（ｃ）である。
（ａ）有機金属誘導体、例えばトリアルキルスタネート（例えばトリメチルスタニル又はトリブチルスタニル）又はトリアルキルシラン（例えばトリメチルシリル）、
（ｂ）ハロゲン交換のためのアルキル又はアリールヨウ化物又は臭化物及び親核ハロゲン化のためのアルキルトシレート又はメシレート、
（ｃ）親電子ハロゲン化のために活性化された芳香族環（例えばフェノール）及び親核ハロゲン化のために活性化された芳香族環（例えばアリールヨードニウム、アリールジアゾニウム又はニトロアリール化合物）。
【０１０６】
容易にアルキル化を起こす好ましい誘導体はアルコール、フェノール又はアミン基、特にフェノール及び立体未障害第１又は第２アミンである。
【０１０７】
チオール含有放射性同位体反応体をアルキル化する好ましい誘導体はＮ−ハロアセチル基、特にＮ−クロロアセチル及びＮ−ブロモアセチル誘導体である。
【０１０８】
所望の非金属放射性同位体の好ましい好適な化学形態としては、以下の（ａ）〜（ｃ）が挙げられる。
（ａ）その後の置換反応のための特に水性媒体中のハライドイオン（例えば１３２Ｉ−ヨウ素又は１８Ｆ−フッ素）、
（ｂ）臭素、メシレート又はトシレートのような良好な脱離基で官能性付与された１１Ｃ−メチルヨウ化物又は１８Ｆ−フルオロアルキレン化合物、
（ｃ）Ｎ−クロロアセチル又はＮ−ブロモアセチル誘導体のようなアルキル化前駆体とのＳ−アルキル化反応のためのＨＳ（ＣＨ２）３１８Ｆ。
【０１０９】
適当なかかる「前駆体」の例及びその調製方法は、第１の実施形態（上記）において記載する通りである。
【０１１０】
第６の態様において、本発明は合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤とのリガンドのコンジュゲートを含む上記放射性金属イオン放射性医薬組成物の製造のための非放射性キットを提供する。リガンドコンジュゲート及びその好ましい特徴は上記の第４の実施形態において記載する通りである。かかるキットは例えば血流中への直接の注射によるヒトへの投与に適した滅菌された放射性薬品を与えるように設計される。キットは好ましくは凍結乾燥され、放射性金属の好都合な滅菌原料［例えば９９ｍＴｃ放射性同位体発生物質由来の９９ｍＴｃ−パーテクネテート（ＴｃＯ４−）］と共に希釈再調製することによりヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計される。適当なキットは遊離の塩基又は酸の塩の形態のリガンド又はキレーターコンジュゲートを含む容器（例えばセプタム密封バイアル）を含む。或いは、キットは適宜放射性金属の添加により所望の生成物を与える金属転移反応（すなわち金属交換）を起こす金属鎖体を含有する。
【０１１１】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃである場合、キットは好ましくは更に生体適合性の還元剤、例えばナトリウムジチオナイト、ナトリウムビスルファイト、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、スズイオン、Ｆｅ（II）又はＣｕ（Ｉ）を含む。生体適合性の還元剤は好ましくは塩化スズ又は酒石酸スズのようなスズ塩である。
【０１１２】
非放射性キットは適宜更にトランスキレート剤、放射能保護剤、抗微生物保存料、ｐＨ調節剤又は充填剤のような別の成分を含んでよい。「トランスキレート剤」とは急速に反応して放射性金属と弱い鎖体を形成し、次いで「コンジュゲート」のリガンドにより置き換えられる化合物である。これにより放射性不純物、例えばテクネチウム錯形成と競合するパーテクネテートの急速な還元による還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）の形成の危険性が最小限となる。適当なかかるトランスキレート剤は、弱い有機酸、すなわち３〜７のｐＫａを有する有機酸と、生体適合性のカチオンの塩である。適当なかかる弱い有機酸は、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸である。従って適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノレート又はホスホン酸塩である。好ましいかかる塩は酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩であり、特にジホスホン酸塩である。好ましいかかるトランスキレート剤はＭＤＰ、すなわちメチレンジホスホン酸の生体適合性カチオンとの塩である。
【０１１３】
「放射能保護剤」という用語は水の放射線分解で生じる酸素含有フリーラジカルのような高度な反応性を有するフリーラジカルを捕獲することにより酸化還元過程のような分解反応を抑制する化合物を意味する。本発明の放射能保護剤はアスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（すなわち４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（すなわち２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及び上記生体適合性カチオンとのこれらの塩から適宜選択される。
【０１１４】
「抗微生物保存料」という用語は、細菌、酵母又はカビのような潜在的に有害な微生物の生育を抑制する薬剤を意味する。抗微生物保存料はまた用量に応じてある程度の殺菌作用も有する。本発明の抗微生物保存料の主な役割は希釈再調製後の放射性医薬組成物中、すなわち放射性診断用品自身中の何れかのかかる微生物の生育を抑制することである。しかしながら抗微生物保存料はまた適宜希釈再調製前の本発明の非放射性キットの成分１種以上中の潜在的に有害な微生物の生育を抑制するために使用し得る。適当な抗微生物保存料としては、パラベン類、すなわちメチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗微生物保存料はパラベン類である。
【０１１５】
「ｐＨ調節剤」という用語は、希釈再調製キットのｐＨがヒト又は哺乳類への投与のための許容限度（約ｐＨ４．０〜１０．５）内とするために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。かかるｐＨ調節剤として適当なものとしては、薬学的に許容される緩衝物質、例えばトリシン、ホスフェート又はＴＲＩＳ［すなわちトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン］及び薬学的に許容される塩基、例えば炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物が挙げられる。コンジュゲートが酸の塩の形態を用いる場合は、ｐＨ調節剤は適宜、キットのユーザーが多段階操作法の一部としてｐＨを調節できるように個別のバイアル又は容器内において提供してよい。
【０１１６】
「充填剤」という用語は、製造及び凍結乾燥の間の材料の取り扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩及び水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【０１１７】
第７の態様において、本発明は造影成分が非金属放射性同位体、すなわちガンマ線放出型放射性ハロゲン又は陽電子放出型放射性非金属を含む放射性医薬組成物の製造用キットを提供する。かかるキットは、放射性同位体の滅菌原料との反応により最小数の操作で所望の放射性薬品が得られるように、好ましくは滅菌非発熱物質形態で、第５の実施形態の「前駆体」を含む。かかる考え方は、放射性同位体が比較的短い半減期を有する放射性薬品に関して、取り扱いの容易さとこれによる放射線薬剤師に対する低減された放射線量の観点から、特に重要である。従って、かかるキットの希釈再調製のための反応媒体は好ましくは水性であり、哺乳類への投与に適した形態である。
【０１１８】
キットの「前駆体」は好ましくは固体支持体マトリックスに共有結合した状態で供給される。このようにすることにより、所望の放射性医薬品が溶液中に形成され、一方、原料及び不純物は固相に結合したままとなる。１８Ｆ−フッ化物を用いた固相親電子フッ素化のための前駆体は国際公開第０３／００２４８９号に記載されている。１８Ｆ−フッ化物による固相親核フッ素化のための前駆体は国際公開第０３／００２１５７号に記載されている。従って、キットは安定に適合された自動合成装置に装着することができるカートリッジを含んでよい。カートリッジは、固体支持体結合前駆体とは別に、望ましくないフッ化物イオンを除去するためのカラム、及び、反応混合物を蒸発させ生成物が所望の通りに製剤されるようにするために連結された適当な容器を含んでよい。合成に必要な試薬及び溶媒及び他の消耗品もまた、放射性物質の濃度、容量、デリバリー時間等に関する顧客の要望に合致するような方法で合成装置が操作できるようにするソフトウエアの入ったコンパクトディスクと共に組み込んでよい。好適には、キットの全ての要素を使い捨てとすることにより、試験相互間の混入の可能性を最小限にし、滅菌し、品質保証する。
【０１１９】
第８の態様において、本発明はアテローム性動脈硬化症、特に不安定な脆弱性のプラークの画像診断のための上記合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。
【０１２０】
別の態様において、本発明は他の炎症性疾患、癌又は変性疾患の画像診断のための上記合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。
【０１２１】
別の態様において、本発明はプロキシミティ検出を用いたアテローム性動脈硬化症、特に特に不安定な脆弱性のプラークの血管内検出のための上記合成バルビツール酸系マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤造影剤の使用を開示する。かかるプロキシミティ検出は、カテーテルのような血管内装置を用いるか、又は、ハンドヘルドの検出器（例えばガンマ線検出器）を用いて術中に行ってよい。かかる血管内検出は造影成分がインビボ光学イメージング又はβ放射体に適したレポーター基である場合には、かかる部分は哺乳類体外では容易に検出されないがプロキシミティ検出には適していることから、特に有用である。
【０１２２】
本発明を以下に記載する非限定的な実施例により説明する。実施例１は化合物１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの合成を記載する。実施例２は潜在的に有害なアジド中間体の使用を回避する１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの別の合成を示す。実施例３はクロロニトロソアルカン前駆体の合成を示す。実施例４は本発明の好ましいアミン置換二官能性ジアミンジオキシムの合成を示す（キレーター１）。実施例５は非放射性ヨウ素化バルビツレートの合成を示す（化合物４）。実施例６は化合物４の放射性ヨウ素化１２５Ｉ類似体の合成を示す（化合物５）。実施例７はピペラジン置換バルビツレート（化合物６）の合成を示し、ここでは別のコンジュゲーション（例えばキレート剤の）のためピペラジンアミンを用いることができる。実施例８はフルオロプロピル誘導体（化合物７）の合成を示し、実施例９は対応１８Ｆ類似体を示す。実施例１０はチオエーテル連結フルオロプロピル誘導体（化合物９）を示し、実施例１１は対応１８Ｆ誘導体を示す（化合物１０）。実施例１２はクロロアセチル中間体の合成を示す（化合物１１）。実施例１３及び１４は本発明のキレーターコンジュゲートの合成を示す（化合物１６及び１７）。実施例１５はトリブチルスタニル放射性ヨウ素化前駆体の合成を示す（化合物１８）。実施例１６は［１８Ｆ］フロリドを用いたフルオロ脱臭素化を介した対応１８Ｆ類似体の放射性合成のための前駆体として機能するブロモメチル誘導体（化合物１３）の合成を示す。実施例１７は種々のフェニルピペラジン誘導体の合成を示す（化合物１９〜２２）。実施例１８は化合物２４の合成を示す。実施例１９及び２０は本発明の化合物ｖｓ特定のメタロプロテイナーゼ酵素の抑制活性を評価するためのインビトロの試験を示す。表１及び表２はＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９及びＭＭＰ−１２に対する本発明の非放射性ヨウ素化、フッ素化及びキレート誘導体の例に関する抑制試験結果を示す。これは大部分の化合物が比較用の従来の化合物２及び３と同様の抑制活性を有することを示している。これはキレーター又は造影成分、例えばヨウ素原子又はフッ素原子をバルビツレートＭＭＰ阻害剤の生物学的活性を犠牲にすることなく導入することができることを示している。実施例２１は本発明のキレーターコンジュゲートの９９ｍＴｃ放射標識を示す。実施例２２は本発明の適当な非放射性前駆体の放射性ヨウ素化の一般的方法を示している。
【０１２３】
図１は本発明の数種の化合物の化学構造を示す。
【実施例１】
【０１２４】
１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの合成
工程１（ａ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル
トルエン（６００ｍｌ）中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン（１６７ｇ、０．５モル）をジメチル３−オキソグルタレート（８７ｇ、０．５モル）で処理し、反応混合物を３６時間窒素雰囲気下に１２０℃で油浴上に加熱した。次に反応混合物を真空下に濃縮し、油状の残存物を４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１：１、６００ｍｌで粉状にした。トリフェニルホスフィン酸化物を沈殿させ、上清をデカントし、濾去した。真空下に蒸発させた残存物を高真空Ｂｐｔ（０．２トルでオーブン温度１８０〜２００℃）下にクーゲルロール蒸留した。
【０１２５】
３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９．０８ｇ、５３％）
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）：δ３．３１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），３．７（９Ｈ，ｓ，３ｘＯＣＨ３），３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２），５．７９（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨ，）ｐｐｍ。
【０１２６】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ３６．５６，ＣＨ３，４８．７，２ｘＣＨ３，５２．０９及び５２．５（２ｘＣＨ２）；１２２．３及び１４６．１６  Ｃ＝ＣＨ；１６５．９，１７０．０及び１７０．５  ３ｘＣＯＯ  ｐｐｍ。
【０１２７】
工程１（ｂ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステルの水素化
メタノール（２００ｍｌ）中の３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ミリモル）を（３０時間）水素ガス（３．５バー）雰囲気下に（１０％Ｐｄ／Ｃ：５０％水）（９ｇ）とともに振盪した。溶液をケイソウ土を通して濾過し、真空下に濃縮して、油状物として３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを得た、収量（８４．９ｇ、９４％）。
【０１２８】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ２．４８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３ｘＣＨ２），２．７８（１Ｈ，６重線，Ｊ＝８Ｈｚ  ＣＨ，），３．７（９Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ３）。
【０１２９】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ２８．６，ＣＨ；３７．５０，３ｘＣＨ３；５１．６、３ｘＣＨ２；１７２．２８，３ｘＣＯＯ。
【０１３０】
工程１（ｃ）トリメチルエステルからトリアセテートへの還元及びエステル化
三首２Ｌ丸底フラスコ中に窒素雰囲気下に、テトラヒドロフラン（４００ｍｌ）中の水素化リチウムアルミニウム（２０ｇ、５８８ミリモル）をテトラヒドロフラン（２００ｍｌ）中のトリス（メトキシカルボニルメチル）メタン（４０ｇ、２１２ミリモル）で１時間慎重に処理した。激しい発熱反応が発生し、溶媒が激しく還流された。反応混合物を３日間還流下に９０℃で油浴上に加熱した。反応混合物を水素の放出が終了するまで酢酸（１００ｍｌ）を慎重に滴加してクエンチングした。攪拌した反応混合物を穏やかな還流が生じる程度の速度で無水酢酸溶液（５００ｍｌ）で慎重に処理した。フラスコに蒸留装置を付け、次に９０℃（油浴温度）で加熱し、テトラヒドロフランを留去した。無水酢酸（３００ｍｌ）をさらに添加し、反応混合物を還流配置に戻し、５時間１４０℃で油浴中に攪拌し、加熱した。反応混合物を放冷し、濾過した。酸化アルミニウム沈殿物を酢酸エチルで洗浄し、合わせた濾液を真空（５ｍｍＨｇ）下に５０℃のウォーターバス温度でロータリーエバポレーター上に濃縮し、油状物を得た。油状物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解し、飽和炭酸カリウム溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液を分離し、硫酸ナトリウム上に乾燥し、真空下に濃縮して油状物を得た。油状物を高真空下にクーゲルロール蒸留し、油状物としてトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、９６％）を得た。沸点０．１ｍｍＨｇで２２０℃。
【０１３１】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ１．６６（７Ｈ，ｍ，３ｘＣＨ２，ＣＨ），２．０８（１Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ３）；４．１（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ２Ｏ）。
【０１３２】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ２０．９，ＣＨ３；２９．３４，ＣＨ；３２．１７，ＣＨ２；６２．１５，ＣＨ２Ｏ；１７１，ＣＯ。
【０１３３】
工程１（ｄ）：トリアセテートからのアセテート基の除去
メタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、１６５ｍＭ）及び８８０アンモニア（１００ｍｌ）を２日間８０℃で油浴上に加熱した。反応混合物を８８０アンモニア（５０ｍｌ）でさらに処理し、２４時間油浴上に８０℃で加熱した。８８０アンモニア（５０ｍｌ）をさらに添加し、反応混合物を２４時間８０℃で加熱した。次に反応混合物を真空下に濃縮し、全溶媒を除去し、油状物を得た。これを８８０アンモニア（１５０ｍｌ）に溶解し、２４時間８０℃で加熱した。次に反応混合物を真空下に濃縮し、全溶媒を除去し、油状物を得た。クーゲルロール蒸留してアセトアミド沸点１７０〜１８０  ０．２ｍｍを得た。アセトアミドを含有するバルブを清浄し、蒸留を続行した。トリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（２２．５３ｇ、９２％）を沸点２２０℃  ０．２ｍｍで蒸留した。
【０１３４】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ１．４５（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ２），２．２（１Ｈ，５重線，ＣＨ）；３．７（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ２ＯＨ）；５．５（３Ｈ，ｂｒｓ，３ｘＯＨ）。
【０１３５】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ２２．１３，ＣＨ；３３．９５，３ｘＣＨ２；５７．８，３ｘＣＨ２ＯＨ。
【０１３６】
工程１（ｅ）：トリオールのトリス（メタンスルホネート）への変換
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のトリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（１０ｇ、０．０６７６モル）の攪拌氷冷溶液にジクロロメタン（５０ｍｌ）中の塩化メタンスルホニル（４０ｇ、０．３４９モル）の溶液を温度が１５℃を超えないような速度で窒素下にゆっくり滴下した。次にジクロロメタン（５０ｍｌ）に溶解したピリジン（２１．４ｇ、０．２７ミリモル、４当量）を発熱反応で温度が１５℃を超えないような速度で滴加した。反応混合物を２４時間室温で攪拌し続け、次に５Ｎ塩酸溶液（８０ｍｌ）で処理し、層を分離した。水層をジクロロメタン（５０ｍｌ）でさらに抽出し有機抽出物を合わせ、硫酸ナトリウム上に乾燥し、濾過し、真空下に濃縮して過剰の塩化メタンスルホニルを含有するトリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタンを得た。理論上の収量は２５．８ｇ。
【０１３７】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ４．３（６Ｈ，ｔ，２ｘＣＨ２），３．０（９Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ３）、２（１Ｈ，６重線，ＣＨ），１．８５（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ２）。
【０１３８】
工程１（ｆ）：１，１，１−トリス（２−アジドエチル）メタンの製造
乾燥ＤＭＦ（２５０ｍｌ）中のトリス［２−（メチルスルホニルオキシ）エチル］メタン［工程１（ｅ）から、過剰の塩化メチルスルホニルを含有する］（２５．８ｇ、６７ミリモル、理論上）の攪拌溶液をアジ化ナトリウム（３０．７ｇ、０．４７モル）で１５分かけて少しずつ処理した。発熱が観察され、反応混合物をアイスバス上に冷却した。３０分後、反応混合物を２４時間５０℃で油浴上に加熱した。反応混合物が茶色になった。反応混合物を放冷し、希炭酸カリウム溶液（２００ｍｌ）で処理し、４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１０：１（３ｘ１５０ｍｌ）で３回抽出した。有機抽出物を水（２ｘ１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥し、濾過した。石油／エーテル溶液にエタノール（２００ｍｌ）を添加し、トリアゾールを溶液に保持し、真空下に容量を２００ｍｌ以上に減量した。エタノール（２００ｍｌ）を添加し、真空下に再濃縮し、エタノール溶液が２００ｍｌ以上にして石油の痕跡を除去した。トリアゾールのエタノール溶液を工程１（ｇ）に直接使用した。
【０１３９】
注意：アジドは潜在的に爆発性があるので、全溶媒を除去してはいけないし、常に希溶液を保持すべきである。
溶液０．２ｍｌ未満を真空下に蒸発させてエタノールを除去し、この少量の試料でＮＭＲを実行する。
【０１４０】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ３．３５（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ２），１．８（１Ｈ、７重線，ＣＨ，），１．６（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ２）。
【０１４１】
工程１（ｇ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタン
エタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アジドエチル）メタン（１５．０６ｇ、０．０６７６モル）（前反応から１００％収率と推定）を１０％Ｐｄ／Ｃ（２ｇ、５０％水）で処理し、１２時間水素化した。反応容器を２時間ごとに排気し、反応混合物から放出される窒素を除去し、水素で補充した。ＮＭＲ分析のために試料を取り、トリアジドのトリアミンへの完全な変換を確認した。
警告：還元しないアジドは蒸留で爆発することがある。反応混合物をセライトパッドを通して濾過し、触媒を除去し、真空下に濃縮して油状物としてトリス（２−アミノエチル）メタンを得た。これを０．４ｍｍ／Ｈｇで沸点１８０〜２００℃のクーゲルロール蒸留によりさらに精製し無色の油状物（８．１ｇ、トリオールからの全体的収率８２．７％）を得た。
【０１４２】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），２．７２（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ２Ｎ），１．４１（Ｈ、７重線，ＣＨ），１．３９（６Ｈ，ｑ，３ｘＣＨ２）。
【０１４３】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ３９．８（ＣＨ２ＮＨ２），３８．２（ＣＨ２．），３１．０（ＣＨ）。
【実施例２】
【０１４４】
１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの別の製造法
工程２（ａ）：トリメチルエステルのｐ−メトキシ−ベンジルアミンによるアミノ酸化
トリス（メチルオキシカルボニルメチル）メタン［２ｇ、８．４ミリモル、上記工程１（ｂ）の通り製造］をｐ−メトキシ−ベンジルアミン（２５ｇ、１７８．６ミリモル）に溶解した。蒸留のために装置を設置し、窒素気流下に２４時間１２０℃で加熱した。反応の進行を収集されるメタノールの量でモニタリングした。反応混合物を周囲温度に冷却し、酢酸エチル３０ｍｌを添加し、次に沈殿したトリアミド生成物を３０分間攪拌した。トリアミドを濾過により単離し、フィルターケークを十分な量の酢酸エチルで数回洗浄し、過剰のｐ−メトキシ−ベンジルアミンを除去した。乾燥後、白色粉末４．６ｇ、１００％を得た。高度に不溶の生成物をさらに精製又は特性化することなく直接次の工程に使用した。
【０１４５】
工程２（ｂ）：１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタンの製造
アイスバス中に冷却した１０００ｍｌ三首丸底フラスコにおいて、工程２（ａ）からのトリアミド（１０ｇ、１７．８９ミリモル）をボラン（３．５ｇ、２４４．３ミリモル）の１Ｍボラン溶液２５０ｍｌに慎重に添加した。添加完了後、アイスバスを除去し、反応混合物をゆっくり６０℃に加熱した。反応混合物を２０時間６０℃で攪拌した。反応混合物の試料（１ｍｌ）を回収し、５ＮＨＣｌ０．５ｍｌと混合し、３０分間放置した。試料に５０ＮａＯＨ０．５ｍｌ、ついで水２ｍｌを添加し、白色沈殿が溶解するまで溶液を攪拌した。溶液をエーテル（５ｍｌ）で抽出し、蒸発させた。残存物を１ｍｇ／ｍｌの濃度でアセトニトリルに溶解し、ＭＳで分析した。ＭＳスペクトルにモノ−及びジアミド（Ｍ＋Ｈ／ｚ＝５２０及び５３４）が観察されたら、反応は完了していない。反応が完了したら、１ＭボランＴＨＦ１００ｍｌをさらに添加し、反応混合物を６０℃でさらに６時間攪拌し、以前の試料の操作法に従って新しい試料を回収した。トリアミンへの完全な変換が行われるまで、必要に応じてＴＨＦ溶液中の１Ｍボランをさらに添加し続けた。
【０１４６】
反応混合物を周囲温度に冷却し、５ＮＨＣＬをゆっくり添加した［注意：激しい泡沫形成が発生！］。ガス放出が観察されなくなるまでＨＣｌを添加した。混合物を３０分間攪拌し、次に蒸発させた。ケークをＮａＯＨ水溶液（２０〜４０％、１：２ｗ／ｖ）中に懸濁し、３０分間攪拌した。次に混合物を水で（３倍に）希釈した。次に混合物をジエチルエーテル（２ｘ１５０ｍｌ）で抽出した［注意：ハロゲン化溶媒を使用してはいけない］。次に合わせた有機層を水（１ｘ２００ｍｌ）、塩水（１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。蒸発後の収量：油状物として７．６ｇ、８４％。
【０１４７】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ：１．４５，（６Ｈ，ｍ，３ｘＣＨ２）；１．５４（１Ｈ、７重線，ＣＨ）；２．６０（６Ｈ，ｔ，３ｘＣＨ２Ｎ）；３．６８（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ２）；３．７８（９Ｈ，ｓ，３ｘＣＨ３Ｏ）；６．９４（６Ｈ，ｄ，６ｘＡｒ）。７．２０（６Ｈ，ｄ，６ｘＡｒ）。
【０１４８】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３），δ：３２．１７、ＣＨ；３４．４４、ＣＨ２；４７．００、ＣＨ２；５３．５６，ＡｒＣＨ２；５５．２５，ＣＨ３Ｏ；１１３．７８，Ａｒ；１２９．２９，Ａｒ；１３２．６１；Ａｒ；１５８．６０，Ａｒ；
工程２（ｃ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタン
１，１，１−トリス［２−（ｐ−メトキシベンジルアミノ）エチル］メタン（２０．０グラム、０．０３６モル）をメタノール（１００ｍｌ）に溶解し、Ｐｄ（ＯＨ）２（５．０グラム）を添加した。混合物を水素化し（３気圧、１００℃、オートクレーブ中）、５時間攪拌した。Ｐｄ（ＯＨ）２を２回に分けて（２×５グラム）それぞれ１０及び１５時間後に添加した。
【０１４９】
反応混合物を濾過し、濾液をメタノールで洗浄した。合わせた有機層を蒸発させ、残存物を真空（１ｘ１０−２、１１０℃）下に蒸留し、前述の実施例１と同様に１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタン２．６０グラム（５０％）を得た。
【実施例３】
【０１５０】
３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン
２−メチルブタ−２−エン（１４７ｍｌ、１．４モル）及び亜硝酸イソアミル（１５６ｍｌ、１．１６モル）の混合物をドライアイス及びメタノールのバス中に−３０℃で冷却し、オーバヘッドエア攪拌器で激しく攪拌し、温度をー２０℃より下に維持するような速度で、濃塩酸（１４０ｍｌ、１．６８モル）で滴下処理した。かなりの発熱があり、過熱を防ぐために注意を払う必要があるのでこれに１時間を要した。エタノール（１００ｍｌ）を添加し、添加の最後に形成されるスラリーの粘度を減少させ、反応混合物をさらに２時間−２０〜−１０℃で攪拌し、反応を完了した。沈殿物を真空下に濾取し、冷（−２０℃）エタノール４ｘ３０ｍｌ及び氷冷水１００ｍｌで洗浄し、真空下に乾燥し、白色固体として３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンを得た。エタノール濾液及び洗浄液をあわせ、水（２００ｍｌ）で希釈し、冷却し、−１０℃で１時間放置したところ、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンがさらに晶出した。沈殿物を濾取し、少量の水で洗浄し、真空下に乾燥し、３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタンの総収量（１１５ｇ  ０．８５モル、７３％）を得た。ＮＭＲで＞９８％純度。
【０１５１】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、異性体の混合物として（異性体１、９０％）１．５ｄ，（２Ｈ，ＣＨ３），１．６５ｄ，（４Ｈ，２ｘＣＨ３），５．８５，ｑ，及び５．９５，ｑ，ともに１Ｈ。（異性体２、１０％），１．７６ｓ（６Ｈ，２ｘＣＨ３），２．０７（３Ｈ，ＣＨ３）。
【実施例４】
【０１５２】
ビス［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン（キレート剤１）
乾燥エタノール（３０ｍｌ）中のトリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ミリモル）の溶液に、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ミリモル、２当量）を窒素雰囲気下に激しく攪拌しながら室温で添加した。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ミリモル、２当量）の溶液を乾燥エタノール（１００ｍｌ）に溶解し、この溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくり滴下した。次いで反応混合物をシリカ上のＴＬＣ［プレートをジクロロメタン、メタノール、濃（０．８８ｓｇ）アンモニア、１００／３０／５でランし、ニンヒドリンで噴霧し加熱することによりＴＬＣプレートを展開］に付した。モノ−、ジ−及びトリ−アルキル化生成物がその順番にＲＦの増加として観察された。３％アンモニア水中の７．５〜７５％アセトニトリル勾配中のＲＰＲ逆相カラムを使用し分析ＨＰＬＣを実行した。反応混合物を真空下に濃縮し、エタノールを除去し、水（１１０ｍｌ）に再懸濁した。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出し、いくつかのトリアルキル化化合物及び親油性不純物を除去し、水層にモノ及び所望のジアルキル化生成物を残存させた。良好なクロマトグラフィーを確保するため水溶液を酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ミリモル）で緩衝した。水溶液を自動プリペラティブＨＰＬＣで精製する前に１夜４℃で保管した。
【０１５３】
収量（２．２ｇ、６．４ミリモル、２３％）。
【０１５４】
マススペクトル；陽イオン１０Ｖｃｏｎｅ電圧。測定値：３４４；計算Ｍ＋Ｈ＝３４４。
【０１５５】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３），δ１．２４（６Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ３），１．３（６Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ３），１．２５−１．７５（７Ｈ，ｍ，３ｘＣＨ２，ＣＨ），（３Ｈ，ｓ，２ｘＣＨ２），２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．８８（２Ｈ，ｔ，ＣＨ２Ｎ２），５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ２，２ｘＮＨ，２ｘＯＨ）。
【０１５６】
ＮＭＲ  １Ｈ（（ＣＤ３）２ＳＯ）δ１．１  ４ｘＣＨ；１．２９，３ｘＣＨ２；２．１（４Ｈ，ｔ、２ｘＣＨ２）；
ＮＭＲ  １３Ｃ（（ＣＤ３）２ＳＯ），δ９．０（４ｘＣＨ３），２５．８（２ｘＣＨ３），３１．０  ２ｘＣＨ２，３４．６ＣＨ２，５６．８  ２ｘＣＨ２Ｎ；１６０．３，Ｃ＝Ｎ。
【０１５７】
ＨＰＬＣ条件：流量８ｍｌ／分２５ｍｍＰＲＰカラム使用
Ａ＝３％アンモニア溶液（ｓｐ．ｇｒ＝０．８８）／水；Ｂ＝アセトニトリル
時間        ％Ｂ
０        ７．５
１５      ７５．０
２０      ７５．０
２２        ７．５
３０        ７．５
ラン当り水溶液３ｍｌをローディングし、１２．５〜１３．５分の時間範囲で収集する。
【実施例５】
【０１５８】
非放射性バルビツール酸ヨウ素（化合物４）の合成
工程（ａ）：１−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］エタノン
４−フルオロアセトフェノン２５．０ｇ（１８１ミリモル）をＤＭＦ（１８０ｍｌ）に溶解し、次に４−ヨードフェノール（３９．８ｇ、１８１ミリモル）及び炭酸カリウム（３０．０ｇ、２１７ミリモル）を添加した。混合物を約７時間還流し、室温に戻し、水で希釈した。塩化メチレン又はクロロホルムで（３回）抽出した後、合わせた有機層を水で１回洗浄し乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。溶媒を真空下に除去し、粗生成物を得た。茶色味をおびた油状の残存物をヘキサン／酢酸エチル（７：３）から再結晶化し、ベージュ色の結晶性固体として純粋な生成物を得た。４８．８ｇ（８０％）、融点：９９〜１０１℃。
【０１５９】
工程（ｂ）：２−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−１−モルホリン−４−イル−エタンチオンの製造
１−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］エタノン（２３．０ｇ、６８．０ミリモル）、イオウ（５．４５ｇ、１７０ミリモル）及びモルホリン（１１．８ｇ、１３５ミリモル）の混合物を２．５時間１５０℃で加熱した。アイスバスで冷却後、混合物を３０〜６０分間エタノールで処理した。沈殿した明黄色固体を吸引濾取し、エタノールから再結晶化した。生成物は一定量のイオウを含有していた。マスタード黄色固体の収量２６．３ｇ（８８％）。融点：１２３〜１２７℃。
【０１６０】
工程（ｃ）：［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−酢酸
２−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−１−モルホリン−４−イル−エタンチオン（２６．９ｇ、６１．１ミリモル）を氷酢酸（５４ｍｌ）、水（１２ｍｌ）及び濃硫酸（８ｍｌ）の混合物とともに１２時間１５０℃で加熱した。室温に冷却後、反応混合物を水（約１０ｍｌ／ミリモル）で希釈し、酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。合わせた有機抽出物を水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を真空下に蒸発させて、ベージュ色固体（２０．１ｇ、９３％）を得た。融点：１４８〜１５０℃。
【０１６１】
工程（ｄ）［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−酢酸メチルエステル
メタノール（１２５ｍｌ）中の［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−酢酸１７．３ｇ（４８．９ミリモル）の溶液を−１０℃に冷却した。次に、塩化チオニル（１１．６ｇ、７．１ｍｌ、９７．８ミリモル）を添加し、反応混合物を１時間還流下に加熱した。濃縮後、残存物をエーテルに溶解した。エーテル層を水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を蒸発させて、粘性の茶赤色油状物（１３．６ｇ、７６％）を得た。
【０１６２】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳインターン）：δ［ｐｐｍ］：７．４９（ｄ、３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．１５（ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．８４（ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．６６（ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．５９（ｓ，３Ｈ，ＣＯＯＣＨ３），３．５０（ｓ，２Ｈ，ＣＨ２）。
【０１６３】
工程（ｅ）：４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−マロン酸ジメチルエステル
無水ジオキサン（７０ｍｌ）中のＮａＨ（６８０ｍｇ、２８．３ミリモル）及び炭酸ジメチル（８．１６ｇ、９０．６ミリモル）の懸濁液を１００〜１２０℃に加熱し、次に無水ジオキサン（３０ｍｌ）中の［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−酢酸メチルエステル（５．２１ｇ、１４．２ミリモル）を１時間かけて滴加した。３時間還流を続行し、次に反応混合物を１夜室温に戻した。混合物を氷水に注ぎ込み、次いで塩化メチレン（３ｘ）で抽出した。合わせた有機層を水（１ｘ）、塩水（１ｘ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濃縮して粘性の茶赤色油状物（５．２５ｇ、８７％）を得た。
【０１６４】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，ＴＭＳインターン）：δ［ｐｐｍ］：７．５３（ｄ、３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．２９（ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．８９（ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．７０（ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），４．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ），３．６８（ｓ，６Ｈ，ＣＯＯＣＨ３）。
【０１６５】
工程（ｆ）：５−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン
ナトリウム（２当量）をエタノール（約１０ｍｌ／ｍｇ）に溶解し、尿素（１．７当量）を溶液に添加した。エタノール中の２−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−マロン酸ジメチルエステル（２．２２ｇ、５．２１ミリモル）の溶液を滴加し、反応混合物を６時間還流下に加熱した。室温に冷却後、混合物を氷水に注ぎ込み、希塩酸を使用してｐＨ２に調整した。沈殿物を吸引濾取し、真空下に乾燥し、不定形固体を得た。メタノール／アセトニトリル（１：１）から再結晶化して茶黄色固体を得た。収量４８０ｍｇ（２２％）。融点：２８５〜２８６℃（分解）。
【０１６６】
工程（ｇ）：５−ブロモ−５−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン
四塩化炭素（５０ｍｌ）中の５−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン１．１０ｇ（２．６１ミリモル）、Ｎ−ブロモスクシンイミド（５５７ｍｇ、３．３１ミリモル）及び触媒量の過酸化ジベンゾイル（７７ｍｇ）の懸濁液を３時間還流した。室温に冷却後、混合物を濃縮し、残存物を水で処理し、次に酢酸エチル（３ｘ）で抽出した。合わせた抽出物を塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を蒸発させ、得られた粘性の茶色油状物をさらに精製することなく次工程に使用した（１．２６ｇ、９６％）。
【０１６７】
工程（ｈ）：５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物４）
メタノール（５ｍｌ）中の５−ブロモ−５−［４−（４−ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（１００ｍｇ、２００マイクロモル）の溶液をＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン５２．０ｍｇ（４００マイクロモル）で処理し、混合物を室温で２４時間攪拌した。約３０〜６０分後に沈殿物が形成し、最終的に吸引により収集し、真空下に乾燥し、無色の固体として生成物を得た（７３．０ｍｇ、６７％）。
【０１６８】
融点：２５５〜２５７℃。
【０１６９】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：１１．７８（ブロード、  ｓ，２Ｈ），７．９３（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．６３（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．２６（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．０９（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），４．５３（ブロード、ｓ，１Ｈ，ＯＨ），３．７０−３．６６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２），２．８０−２．５８（ｍ，１０Ｈ，ＣＨ２）。
【０１７０】
化合物２、すなわち５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン及び化合物３、すなわち５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−メトキシ−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオンを化合物２３、すなわち５−ブロモ−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン及び５−ブロモ−５−［４−（４−メトキシ−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオンからそれぞれ出発し、Ｇｒａｍｓ等［Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８２，１２７７−１２８５（２００１）］の方法により、同様にして製造した。
【実施例６】
【０１７１】
５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−（［１２５Ｉ］ヨード−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物５）の合成
２，５−ジヒドロキシ安息香酸（０．６ｍｇ、３．９マイクロモル）、アスコルビン酸（０．８ｍｇ、４．５マイクロモル）、注射用水（２０μｌ）及びＣｕＳＯ４５Ｈ２Ｏ溶液（ｃｏｎｃ．＝注射用水中３．２６ｇ／ｌ）５μｌ（６５．３ナノモル）を化合物２（５０μｌ、２０９ナノモル；濃＝２．１０ｇ／ｌＥｔＯＨ）を含有する円錐バイアルに添加した。
【０１７２】
氷冷した混合物をＨｅ気流を使用して１０分間脱ガス化し、次にＮａＯＨ溶液（１０．３９ＭＢｑ）中の［１２５Ｉ］ＮａＩ４μｌを添加し、混合物を渦動した。混合物を６０分間１１６℃で加熱した。室温に冷却後、注射用水５０μｌで希釈した。溶液をγ−及びＵＶ−検知及び対応する２０ｘ４．６ｍｍ２プレカラムとともにＮｕｃｌｅｏｓｉｌ１００Ｃ−１８５μ２５０ｘ４．６ｍｍ２カラムを有する勾配ＨＰＬＣ−クロマトグラフに注入した。
ＨＰＬＣ−条件
溶離剤Ａ：ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ    ９５０／５０／１
溶離剤Ｂ：ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ／ＴＦＡ    ５０／９５０／１
勾配：４５分かけて９２％から５０％、次に１０分間かけて５０％から９２％溶離剤Ｂ
流量：１．５ｍｌ／分
λ：２５４ｎｍ
Ｒｔ（生成物画分）：３２．８０−３３．９０分
この画分の一部（２００μｌ）を同様の条件（上記参照）を使用した勾配ＨＰＬＣに再注入した。
【０１７３】
Ｒｔ（化合物５）：３３．０８分
本生成物（ＨＰＬＣ、同条件）の品質管理はγ−チャンネルではいかなる不純物も示さなかった。ＵＶ−チャネルでは、恐らくは先駆化合物より生じたと思われる非常に僅かな不純物（３１．３３分）を検知した。２回目のＨＰＬＣ実行により画分から不純物を除去することができる。
【０１７４】
非放射性ヨウ素標準溶液（化合物４）の一部を２回目の品質管理注入に添加することによりＲｔパラメータを確立した。
放射性化合物収量：２０％
【実施例７】
【０１７５】
５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−５−ピペラジン−１−イル−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物６）
５−ブロモ−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン［化合物２３、実施例５工程（ｈ）］（２００ｍｇ、４４０マイクロモル）を無水メタノール（５ｍｌ）に溶解し、ピペラジン（７５．８ｍｇ、８８０マイクロモル）で処理した。約１０分後、無色の沈殿物が形成した。反応混合物を室温で２４時間攪拌し、次に沈殿を吸引下に収集し、メタノール中に１時間攪拌し、真空下に乾燥し、無色固体１６０ｍｇ（７９％）を得た。
【０１７６】
融点：２６５〜２６６℃（分解）
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：７．３４（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．２２（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．８２（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），６．７９（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），２．５５−２．２３（ブロード、ｍ，８Ｈ，ＣＨ２）。
【実施例８】
【０１７７】
５−［４−（４−ブロモフェノキシ）フェニル］−５−［４−（３−フルオロプロピル）−ピペラジン−１−イル）−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物７）
室温で窒素雰囲気下にピリジン（２ｍｌ）中の化合物６（１０ｍｇ、２．２ｘ１０−５モル）の溶液に３−フルオロプロピルトシレート（１．１当量）を添加した。反応混合物を１６時間攪拌した。混合物を濃縮し、メタノール（５ｍｌ）に溶解した。混合物をＨＰＬＣ（Ｃ１８、１５０ｘ１０ｍｍ）により精製し、生成物を約１３分後に溶離した。溶媒を除去し、オフホワイトの固体（収率３８％）を得た。マススペクトル［ＥＳ（＋ｖｅ）５２１．１］及び１ＨＮＭＲ分析により構造を確認した。
【実施例９】
【０１７８】
１８Ｆ−標識誘導体、化合物８の合成
工程（ａ）：３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートの合成
【０１７９】
【化２３】
2006505550.tif 000025
【０１８０】
二股コックを介して、バイアル中に製造したアセトニトリル（３００μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１０ｍｇ）及び水（３００μｌ）中の炭酸カリウム（４ｍｇ）をプラスチックシリンジ（１ｍｌ）を使用して真鍮加熱器中に設置したカーボンガラズ反応容器中に移送した。次に目標の水（０．５〜２ｍｌ）中の１８Ｆ−フッ素（１８５−３７０ＭＢｑ）を二股コックを通して添加した。加熱器を１２５℃に設定し、タイマーを開始した。１５分後、アセトニトリルの３等分（０．５ｍｌ）を１分間隔で添加した。１８Ｆ−フッ素を合わせて４０分間まで乾燥した。４０分後、加熱器を圧縮空気で冷却し、ビンの蓋を除去し、１，３−プロパンジオール−ジ−ｐ−トシレート（５〜１２ｍｇ）及びアセトニトリル（１ｍｌ）を添加した。ビンの蓋を戻し、ストッパーで通路を封鎖した。加熱器を１００℃に設定し、１００℃／１０分で標識した。標識後、３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートを以下の条件を使用したＧｉｌｓｏｎ  ＲＰ  ＨＰＬＣにより単離した。
【０１８１】
カラム        ｕ−ｂｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８  ７．８ｘ３００ｍｍ
溶離剤        水（ポンプＡ）：アセトニトリル（ポンプＢ）
ループ大きさ  １ｍｌ
ポンプ速度    ４ｍｌ／分
波長          ２５４ｎｍ
勾配          ２０分間かけて５〜９０％溶離剤Ｂ
生成物Ｒｔ    １２分。
【０１８２】
単離後、分割サンプル（約１０ｍｌ）を水（１０ｍｌ）に希釈し、調節したＣ１８ｓｅｐ  ｐａｋに設置した。ｓｅｐ  ｐａｋを１５分間窒素で乾燥し、有機溶媒、ピリジン（２ｍｌ）、アセトニトリル（２ｍｌ）又はＤＭＦ（２ｍｌ）で洗い流した。活性の約９９％が洗い流された。
【０１８３】
工程（ｂ）：化合物６のアルキル化
【０１８４】
【化２４】
2006505550.tif 000026
【０１８５】
３−［１８Ｆ］フルオロプロピルトシレートとともにピリジン中に還流することにより化合物６をアルキル化して化合物８を得ることができる。
【実施例１０】
【０１８６】
５−［４−（４−ブロモフェノキシ）フェニル］−５−｛４−（２−フルオロプロピルスルファニル）アセチル］−ピペラジン−１−イル｝−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物９）
工程（ａ）：３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オール［Ｐｈ３ＣＳ（ＣＨ２）３ＯＨ］
ＴＦＡ（１０ｍｌ）中のトリフェニルメタノール（３９０．６ｍｇ、１．５ミリモル）をＴＦＡ（１０ｍｌ）中の３−メルカプトプロパン−１−オール（１２９．６μｌ、１．５ミリモル）の攪拌溶液に滴加した。添加したＴＦＡを減圧下に蒸発させた後、粗生成物を直ちに逆相プリペラティブクロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｇ−４２５３−Ｖ０；溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、６０分間かけて勾配７０〜８０％Ｂ、流量５０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検知）により精製し、純粋な化合物３７２ｍｇ（７４％）を得た。（分析ＨＰＬＣ：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ５４：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、２０分間かけて勾配７０〜８０％Ｂ：流量１．０ｍｌ／分、保持時間５．４分で２１４及び２５４ｎｍで検知）。構造をＮＭＲで検証した。
【０１８７】
工程（ｂ）：メタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステル［Ｐｈ３ＣＳ（ＣＨ２）３ＯＭｓ］
ＴＨＦ（１０ｍｌ）中に溶解した３−トリチルスルファニル−プロパン−１−オール（３７２．０ｍｇ、１．１１ミリモル）にトリエチルアミン（１５１．７ｍｇ、２０９μｌ、１．５ミリモル）及び塩化メシル（１７１．９ｍｇ、１１６．６μｌ、１．５ミリモル）を添加した。１時間後、沈殿物を濾去し、ＴＨＦを減圧下に蒸発させ、粗生成物を逆相プリペラティブクロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｇ−４２５３−Ｖ０、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、６０分間かけて勾配８０〜１００％Ｂ、流量５０ｍｌ／分、２５４ｎｍで検知）により精製し、純粋な化合物３１８ｍｇ（６９％）を得た（分析ＨＰＬＣ：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ５４：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、２０分かけて勾配６０〜７０％Ｂ、流量１．０ｍｌ／分、保持時間１８．７分に２１４及び２５４ｎｍで検知）。構造をＮＭＲで検証した。
【０１８８】
工程（ｃ）：（３−フルオロプロピルスルファニル）トリフェニルメタン［Ｐｈ３ＣＳ（ＣＨ２）３Ｆ］
フッ化カリウム（１．４ｍｇ、０．０２４ミリモル）及びｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（９．０ｍｇ、０．０２４ミリモル）をアセトニトリル（０．２ｍｌ）に（加熱しながら）溶解した。アセトニトリル（０．２ｍｌ）中のメタンスルホン酸３−トリチルスルファニル−プロピルエステル（５ｍｇ、０．０１２ミリモル）を添加した。反応混合物を９０分間８０℃に加熱した。粗生成物を逆相プリペラティブクロマトグラフィー（Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ１０２２、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、４０分間かけて勾配４０〜９０％Ｂ、流量１０ｍｌ／分、２１４ｎｍで検知）により精製した。精製した物質２．５ｍｇの収量が得られた（分析ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｂ−４２５１−Ｅ０：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、１０分かけて勾配４０〜８０％Ｂ、流量２．０ｍｌ／分、保持時間８．２分に２１４及び２５４ｎｍで検知）。構造をＮＭＲにより検証した。
【０１８９】
工程（ｄ）：５−［４−（４−ブロモフェノキシ）フェニル］−５−｛４−（２−フルオロプロピルスルファニル）アセチル］−ピペラジン−１−イル｝−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物９）
３−フルオロ−トリチルスルファニル−プロパン（４．１ｍｇ、０．０２１ミリモル）をＴＦＡ（１００μｌ）、トリイソプロピルシラン（１０μｌ）及び水（１０μｌ）とともに攪拌した。水（３００μｌ）、次いで炭酸カリウム（水）２００μｌを添加した。ＣＨ３ＣＮ（５００μｌ）中の化合物１１（３．２５ｍｇ、０．００６１ミリモル）を添加した。ｐＨを炭酸カリウム（水）で１０に調整した。混合物を３０分間７５℃に加熱した。粗生成物を逆相プリペラティブクロマトグラフィー（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８カラム、００Ｇ−４２５３−Ｎ０、溶媒Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、３０分間かけて勾配２０〜７０％Ｂ、流量５ｍｌ／分、２５４ｎｍで検知）により精製した。精製した物質２ｍｇ（５５％）の収量を得た（分析ＨＰＬＣ：Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム、２１８ＴＰ５４：溶媒：Ａ＝水／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＣＨ３ＣＮ／０．１％ＴＦＡ、２０分かけて勾配２０〜７０％Ｂ、流量１．０ｍｌ／分、保持時間１７．４分に２１４及び２５４ｎｍで検知）。
【０１９０】
１ＨＮＭＲ（ＣＨＣｌ３−ｄｌ，ＴＭＳ基準）：δ２．０１（ｍ，２Ｈ），δ２．７２（ブロード、  ｔ，２Ｈ），δ２．７５（ｔ，２Ｈ），δ２．７９（ブロード、  ｔ，２Ｈ），δ３．３０（ｓ，２Ｈ），δ３，３０（ブロード、  ｔ，２Ｈ），δ３．５１（ｓ，２Ｈ），δ３．６４（ブロード、  ｔ，２Ｈ），δ４．５３（ｄｔ，２Ｈ），δ６．９３（コンプレックスｄ，２Ｈ），δ６．９９（コンプレックスｄ，２Ｈ），δ６．９３（コンプレックスｄ，２Ｈ），δ７．４６（コンプレックスｄ，２Ｈ），δ７．４８（コンプレックスｄ，２Ｈ），δ７．７７（コンプレックスｄ，２Ｈ）。
【実施例１１】
【０１９１】
５−［４−（４−ブロモフェノキシ）−フェニル］−５−｛４−（２−［１８Ｆ］−フルオロプロピルスルファニル）−アセチル］−ピペラジン−１−イル｝−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１０）
工程（ａ）：３−［１８Ｆ］フルオロ−トリチルスルファニル−プロパンの製造
【０１９２】
【化２５】
2006505550.tif 000027
【０１９３】
二股コックを介し、バイアル中に製造したアセトニトリル（８００μｌ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１０ｍｇ）及び水（５０μｌ）中の炭酸カリウム（１ｍｇ）をプラスチックシリンジ（１ｍｌ）を使用して真鍮加熱器に設置したカーボンガラス反応容器に移送した。次に目標の水（０．５〜２ｍｌ）中の１８Ｆ−フッ素（１８５−３７０ＭＢｑ）も二股コックを通して添加した。加熱器を１２５℃に設定し、タイマーを開始した。１５分後、アセトニトリルの３等分（０．５ｍｌ）を１分間隔で添加した。１８Ｆ−フッ素を合わせて４０分間まで乾燥した。４０分後、加熱器を圧縮空気で冷却し、ビンの蓋を除去し、トリメチル−（３−トリチルスルファニル−プロポキシ）シラン（１〜２ｍｇ）及びＤＭＳＯ（０．２ｍｌ）を添加した。ビンの蓋を戻し、ストッパーで通路を封鎖した。加熱器を８０℃に設定し、８０℃／５分で標識した。標識後、反応混合物を以下のＨＰＬＣ条件を使用したＲＰ  ＨＰＬＣにより分析した。
【０１９４】
カラム          ｕ−ｂｏｎｄａｐａｋ  Ｃ１８  ７．８ｘ３００ｍｍ
溶離剤          ０．１％ＴＦＡ／水（ポンプＡ）：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル（ポンプＢ）
ループの大きさ  １００ｕｌ
ポンプ速度      ４ｍｌ／分
波長            ２５４ｎｍ
勾配            １分  ４０％Ｂ
１５分  ４０〜８０％Ｂ
５分  ８０％Ｂ。
【０１９５】
反応混合物をＤＭＳＯ／水（１：１ｖ／ｖ、０．１５ｍｌ）に希釈し、調節したｔ−Ｃ１８ｓｅｐ−ｐａｋ上に装填した。カートリッジを水（１０ｍｌ）で洗浄し、窒素で乾燥し、３−［１８Ｆ］フルオロ−１−トリチルスルファニル−プロパンを４等分のアセトニトリル（等分あたり０．５ｍｌ）で溶離した。
【０１９６】
工程（ｂ）：３−［１８Ｆ］フルオロ−プロパン−１−チオール
【０１９７】
【化２６】
2006505550.tif 000028
【０１９８】
アセトニトリル（１〜２ｍｌ）中の３−［１８Ｆ］フルオロ−１−トリチルスルファニル−プロパンの溶液を１００℃／１０分で窒素気流を使用して蒸発乾固した。ＴＦＡ（０．０５ｍｌ）、トリイソプロピルシラン（０．０１ｍｌ）及び水（０．０１ｍｌ）の混合物を添加し、次いで８０℃／１０分で加熱して３−［１８Ｆ］フルオロ−プロパン−１−チオールを生成した。
【０１９９】
工程（ｃ）：化合物１１との反応
【０２００】
【化２７】
2006505550.tif 000029
【０２０１】
クロロアセチル前駆体を標識する一般的な操作法は工程（ｂ）からの３−［１８Ｆ］フルオロ−１−メルカプト−プロパンを含有する反応容器を圧縮空気で冷却し、次にアンモニア（水中２７％、０．１ｍｌ）及び水（０．０５ｍｌ）中の化合物１１前駆体を添加することである。混合物を８０℃／１０分で加熱する。
【実施例１２】
【０２０２】
５−［４−（４−ブロモフェノキシ）−フェニル］−５−［４−（２−クロロアセチル）−ピペラジン−１−イル）−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１１）
窒素及び化合物６（５０ｍｇ、１．１ｘ１０−４モル）を充填したフラスコにジクロロメタン（１５ｍｌ）を添加した。反応混合物を氷／水バス中に冷却した。塩化クロロアセチル（１４μｌ）及びトリエチルアミン（１４μｌ）を続けて添加した。１０分後、アイスバスを除去し、混合物を周囲温度に戻した。１８時間後、試料を濃縮した。メタノール（２ｍｌ）を添加し、混合物をＨＰＬＣ（Ｃ１８、１５０ｘ１０ｍｍ）により分離した。生成物が１７．５分で溶離した（収率５２％）。構造をマススペクトル［ＥＳ（−ｖｅ）５３５．１］及び１ＨＮＭＲ分析で確認した。
【実施例１３】
【０２０３】
３−（４−｛５−［４−（４−ブロモフェノキシ）−フェニル］−２，４，６−トリオキソヘキサヒドロピリミジン−５−イル｝−ピペラジン−１−イル）−Ｎ−｛５−（２−ヒドロキシリミノ−１，１−ジメチルプロピルアミノ）−３−［２−（２−ヒドロキシアミノ−１，１−ジメチルプロピルアミノ）−エチル］−ペンチル｝−プロピオンアミド（化合物１６）
工程（ａ）：５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）−フェニル］−５−［４−（２−カルボキシエチル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１４）
５−ブロモ−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２３、実施例５）２００ｍｇ（４４０マイクロモル）を無水メタノール２ｍｌに溶解し、３−（ピペラジン−１イル）プロピオン酸８３．５ｍｇ（５．２８ミリモル、１．２当量）で処理した。反応混合物を６時間還流下に加熱し、次に濃縮した。黄色の固体残存物を自ら再結晶化し、無色不定形固体１７０ｍｇ（３２０マイクロモル、７２％）を得た。
【０２０４】
融点：２０８〜２１０℃（分解）
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：７．６４（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．５０（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．１４（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．１０（ブロード、ｄ，３Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），２．７５−２．３９（ｍ，１２Ｈ，ＣＨ２）。
【０２０５】
工程（ｂ）
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の化合物１４（５３ｍｇ）の溶液に、窒素雰囲気下にＴＢＴＵ（８５ｍｇ）及びＮ−メチルモルホリン（０．０１ｍｌ）を続いて添加した。１０分後、キレート剤１（３５ｍｇ）を添加し、反応混合物を２４時間室温で攪拌した。溶媒を減圧で除去し、混合物をメタノール（５ｍｌ）中に溶解した。粗製の混合物をＨＰＬＣにより分離した。生成物は約１０分後に溶離した（収率７５％）。構造をマススペクトル［ＥＳ（＋ｖｅ）８５８．１］及び１ＨＮＭＲ分析により確認した。
【実施例１４】
【０２０６】
化合物１７の合成
工程（ａ）：５−［４−（２−アミノエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１２）
５−ブロモ−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２３、実施例５）２００ｍｇ（４４０マイクロモル）を無水メタノール２ｍｌに溶解し、Ｎ−（２−アミノエチル）ピペラジン１２５ｍｇ（１２７μｌ、９．６７マイクロモル）で処理した。反応混合物を室温で攪拌し、約３０分後、無色の沈殿物が形成した。１６時間攪拌を継続し、次に沈殿物を吸引により収集し、真空下に乾燥し、無色固体１００ｍｇ（２００マイクロモル、４５％）を得た。
【０２０７】
融点：２２０〜２２３℃（分解）
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：７．６７（ブロード、ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ，オルトからＣ−Ｂｒ），７．５５（ブロード、ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ，オルトからＣｑｕａｒｔ．Ｐｙｒ．−Ｃ５に付着），７．１５（ブロード、ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ，メタからＣｑｕａｒｔ．Ｐｙｒ．−Ｃ５に付着），７．１２（ブロード、ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ，メタからＣ−Ｂｒ），２．８９−２．７９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２−ＮＨ２），２．７７−２．６５（ｍ，４Ｈ，Ｎ１−ＣＨ２），２．３９−２．５８（ｍ，６Ｈ，Ｎ４−ＣＨ２）。
【０２０８】
工程（ｂ）：４−［２−（４−｛５−［４−（４−ブロモフェノキシ）フェニル］−２，４，６−トリオキソヘキサヒドロピリミジン−５−イル｝−ピペラジン−１−イル）−エチルカルバモイル］−酪酸（化合物１５）
窒素雰囲気下にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）中の化合物１２の溶液に無水グルタル酸（１１ｍｇ）及びトリエチルアミン（０．０１ｍｌ）を続いて添加した。２４時間後、溶媒を減圧下に除去した。粗製の混合物をメタノール（５ｍｌ）に溶解し、ＨＰＬＣにより分離した。生成物が１２分後に溶離した（収率５０％）。構造をマススペクトル［ＥＳ（＋ｖｅ）６１７．９］及び１ＨＮＭＲ分析により確認した。
【０２０９】
工程（ｃ）：４−［２−（４−｛５−［４−（４−ブロモフェノキシ）−フェニル］−２，４，６−トリオキソヘキサヒドロピリミジン−５−イル｝−ピペラジン−１−イル）−エチルカルバモイル］−酪酸のキレート剤１による結合
ジクロロメタン（５ｍｌ）中の化合物１５（１１ｍｇ）の溶液に窒素雰囲気下にＴＢＴＵ（８ｍｇ）及びＮ−メチルモルホリン（０．１ｍｌ）を添加した。５分後、キレート剤１（６ｍｇ）を添加し、混合物を２４時間攪拌した。溶媒を減圧で除去し、混合物をメタノール（５ｍｌ）中に溶解した。混合物をＨＰＬＣにより分離し、生成物が約１０分後に溶離した（収率５８％）。混合物をマススペクトル［ＥＳ（＋ｖｅ）９４３．２］及び１ＨＮＭＲ分析により確認した。
【実施例１５】
【０２１０】
５−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−トリブチルスタニルフェノキシ）−フェニル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１８）
窒素雰囲気下にトルエン中の化合物２（８０ｍｇ）の懸濁液にＰｄ（ＰＰｈ３）４（２００ｍｇ）及びヘキサブチルジチン（０．２ｍｌ）を添加した。黄色混合物を２４時間還流下に加熱した。この後、反応混合物は黒色になった。反応混合物を濾過し、溶媒を減圧で除去した。粗製の混合物をメタノールに溶解し、ＨＰＬＣにより精製した（収率４５％）。構造をマススペクトル［ＥＳ（＋ｖｅ）７１５．１］及び１ＨＮＭＲ分析により確認した。
【実施例１６】
【０２１１】
５−［４−（２−ブロモエチル）ピペラジン−１−イル］−５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェノル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１３）
アセトニトリル８０ｍｌ中の化合物２（１．４０ｇ、２．７８ミリモル）の懸濁液にトリフェニルホスフィン１．４６ｇ（５．５６ミリモル）及び四臭化炭素１．８４ｇ（５．５６ミリモル）を添加した。混合物を１８時間の間還流下に加熱し、室温に冷却し、−３０℃で１夜保管した。冷却で形成した固体沈殿物を吸引により収集し、ベージュ色固体９２０ｍｇ（５８％）を得た。
【０２１２】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：７．５６（ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．４０（ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．０９（ｄ，３Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），７．０２（ｄ，３Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．８３−２．７０（ｍ．１２Ｈ，ＣＨ２）。
【実施例１７】
【０２１３】
フェニル−ピペラジン誘導体（化合物１９から２２）の合成
（ａ）一般の操作法：化合物１９から２１
対応するフェニルピペラジン（２．０当量）を無水メタノール（約２〜３ｍｌ／ミリモル）中の化合物２３［実施例５工程（ｈ）］の溶液に少しずつ添加した。反応混合物を２０時間室温で攪拌した。沈殿物を吸引下に収集し、メタノールで洗浄した。
【０２１４】
かかる方法で製造：
５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）−フェニル］−５−［４−（４−ニトロフェニル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物１９）−メタノール４ｍｌ中の化合物２  ４００ｍｇ（８８０マイクロモル）及び１−（４−ニトロフェニル）ピペラジン３６５ｍｇ（１．７６ミリモル）の反応から２０時間後明黄色の反応生成物３２０ｍｇ（６３％）を得た。
【０２１５】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：８．２２−７．０４（ｍ，１２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．８０−２．７７（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２）。
【０２１６】
５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）フェニル］−５−［４−（４−フルオロフェニル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２０）−メタノール２．５ｍｌ中の化合物２  ４００ｍｇ（８８０マイクロモル）及び１−（４−フルオロフェニル）ピペラジン３１７ｍｇ（１．７６ミリモル）の反応から、クロロホルムからの再結晶後、無色の反応生成物２９０ｍｇ（６０％）を得た。
【０２１７】
融点２４７〜２４９．５℃。
【０２１８】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：１１．６６（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．５９−６．９２（ｍ，１２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．３３−２．７４（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２）。
【０２１９】
５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）−フェニル］−５−［４−（４−トリメチルシリル−フェニル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２１）−メタノール２．５ｍｌ中の化合物２  ４００ｍｇ（８８０マイクロモル）及び１−（４−トリメチルシリルフェニル）ピペラジン４１３ｍｇ（１．７６ミリモル）の反応から、無色の反応生成物４４０ｍｇ（８２％）を得た。
【０２２０】
融点２０５〜２１０℃。
【０２２１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：７．９３−６．７７（ｍ，１２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．６４−２．６６（ｍ，８Ｈ，ＣＨ２），０．２０（ｓ，９Ｈ，ＳｉＣＨ３）。
【０２２２】
（ｂ）５−［４−（４−ブロモ−フェノキシ）−フェニル］−５−［４−（４−ヨードフェニル）ピペラジン−１−イル］−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２２）
メタノール２５ｍｌ中の化合物２１  ２８０ｍｇ（４６０マイクロモル）の懸濁液にアルゴン雰囲気下に−７０℃で４０分間かけてメタノール５ｍｌ中のヨウ素１塩化物３００ｍｇ（１．８４ミリモル）の溶液を添加した。橙色溶液を１．５時間かけて室温に戻し、ジクロロメタンで希釈し、１０％チオ硫酸ナトリウム水で無色になるまで洗浄した。水層をジクロロメタン（３ｘ）で抽出し、塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。溶媒を蒸発させ、残存物を真空下に乾燥し、未精製の生成物２３０ｍｇを得た。
【０２２３】
メタノールから再結晶化し、無色の結晶性生成物６２ｍｇ（２０％）を得た。
【０２２４】
融点：２１０〜２１１℃。
【０２２５】
１Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−Ｄ６）：δ［ｐｐｍ］：１１．５５（ｓ，２Ｈ，ＮＨ），７．５０−６．６３（ｍ，１２Ｈ，ＨＡｒｙｌ），３．０３（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２），２．６３（ｓ，４Ｈ，ＣＨ２）。
【実施例１８】
【０２２６】
５−［４−（４−ブロモフェノキシ）−フェニル］−５−（４−ヨードフェニルアミノ）−ピリミジン−２，４，６−トリオン（化合物２４）
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中の化合物２３（実施例５、９０ｍｇ）の溶液に４−ヨードアニリン（５０ｍｇ）及びトリエチルアミン（０．２ｍｌ）の１．１当量を添加した。反応混合物を１６時間窒素雰囲気下に攪拌した。溶媒を減圧で除去した。残存物をメタノール（２ｍｌ）に溶解した。粗製の混合物をＨＰＬＣにより分離し、新規の化合物が約２０．５分後に溶離した。溶媒を減圧で除去し、オフホワイトの固体（収率８５％）を得た。構造をマススペクトル［ＥＳ（−ｖｅ）５９１．９］及び１ＨＮＭＲ分析で確認した。
【実施例１９】
【０２２７】
インビトロメタロプロテイナーゼ阻害試験
化合物２から４及び２０をＨｕａｎｇ  Ｗ．等［Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７２，２２０８６−２２０９１（１９９７）］の方法により検討した。
【０２２８】
このようにして、一定濃度の蛍光発生基質（１μＭ）及び各々のＭＭＰｓ（１ｎＭ）を漸増量のＭＭＰ−阻害剤（１００ｐＭ〜１００μＭ）とともにインキュベートし、そのＩＣ５０値を決定した。結果を表１に示す。
【０２２９】
【表１】
2006505550.tif 000030
【実施例２０】
【０２３０】
追加のインビトロメタロプロテイナーゼ阻害試験
化合物を以下の市販で入手可能なＢｉｏｍｏｌ試験キットを使用してスクリーニングした。
【０２３１】
ＭＭＰ−２比色分析試験キット−カタログ番号ＡＫ−４０８、
ＭＭＰ−９比色分析試験キット−カタログ番号ＡＫ−４１０、
ＭＭＰ−１２比色分析試験キット−カタログ番号ＡＫ−４０２。
これらは、Ａｆｆｉｎｉｔｉ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｔｄ．（Ｐａｌａｔｉｎｅ  Ｈｏｕｓｅ，Ｍａｔｆｏｒｄ  Ｃｏｕｒｔ，Ｅｘｅｔｅｒ，ＥＸ２  ８ＮＬ，ＵＫ）から入手可能である。
【０２３２】
（ａ）被験化合物製造
阻害剤を粉末形態で用意し、４℃で保管した。各阻害剤ごとに、ＤＭＳＯ中の１ｍＭ保存溶液を製造し、２０μｌ等分に分配し、これら等分を−２０℃で保管した。保存溶液を希釈し、８つの阻害剤濃度を得た（推奨：５０μＭ，５μＭ，５００ｎＭ，５０ｎＭ，５ｎＭ，５００ｐＭ，５０ｐＭ及び５ｐＭ）。キット試験緩衝液で希釈を行った。阻害剤保存溶液の５倍希釈を作成し、試験ウェルに加えたため、最終的な濃度範囲は１０μＭから１ｐＭになった。
【０２３３】
（ｂ）実験操作法
詳細は市販のキットで提供されているが、以下のように要約できる
−  上記のように被験化合物希釈を用意する
−  プレートに試験緩衝液を添加する
−  プレートに被験化合物を添加する
−  標準キット阻害剤ＮＮＧＨを製造する（希釈係数についてはキットを参照）
−  ＮＮＧＨを対照阻害剤ウェルに添加する
−  ＭＭＰ酵素を製造する（希釈係数についてはキットを参照）
−  ＭＭＰをプレートに添加する
−  〜１５分間３７℃でプレートをインキュベートする
−  チオペプトリド基質を製造する（希釈係数についてはキットを参照）
−  基質をプレートに添加する
−  ３７℃、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  ｉＥＭＳプレートリーダ上に４１４ｎｍで１時間２分毎にカウントする。
【０２３４】
（ｃ）結果
結果を表２に示す。
【０２３５】
【表２】
2006505550.tif 000031
【実施例２１】
【０２３６】
化合物１６及び１７の９９ｍＴｃ−放射線識別
９９ｍＴｃ鎖体を同様の方法で製造し、以下の窒素充填Ｐ４６バイアルに添加した。
【０２３７】
Ｎ２パージＭｅＯＨ１ｍｌ
１００μｌＭｅＯＨ中の化合物１６（又は１７）１００μｇ
Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＨＣＯ３緩衝液（ｐＨ９．２）０．５ｍｌ
Ｔｃ発生器からＴｃＯ４−０．５ｍｌ
ＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液０．１ｍｌ
（Ｎ２パージ塩水１００ｍｌ中のＳｎＣｌ２１０．２ｍｇ及びメチレンジホスホン酸１０１ｍｇを含有する溶液）。
【０２３８】
９９ｍＴｃ−化合物１６に対し溶液の放射能を測定したところ２１６ＭＢｑであり、溶液を３３分間３７℃で加熱した。ＳＧプレート及びＭｅＯＨ／（ＮＨ４ＯＡｃ０．１Ｍ）１：１を移動相に使用したＩＴＬＣ（即時薄層クロマトグラフィー）は原点で１％ＲＨＴ（還元加水分解Ｔｃ）を示した。ＨＰＬＣ分析は９９ｍＴｃ−化合物１６  ９３％を示し、ＲＣＰ９２％を得た。
【０２３９】
９９ｍＴｃ−化合物１７を同様の方法で製造した。鎖体溶液の活性を２０３ＭＢｑとして測定した。ＩＴＬＣにより４％コロイドを得て、ＨＰＬＣ分析は９ｍＴｃ−化合物１７  ９３％を示し、ＲＣＰ８９％を得た。
【０２４０】
ＸｔｅｒｒａＲＰ１８、３．５μｍ、４．６ｘ１５０ｍｍカラムを使用し、ＮＨ４ＯＨ０．０６％を水性移動相（溶媒Ａ）に、アセトニトリルを有機移動相（溶媒Ｂ）を使用し、流量１ｍｌ／分でＨＰＬＣ分析を実行した。使用した典型的な勾配は以下の通り：０〜５分（１０〜３０％Ｂ）、５〜１７分（３０％Ｂ）、１７〜１８分（３０〜１００％Ｂ）、１８〜２２分（１００％Ｂ）及び２２〜２４分（１００〜１０％Ｂ）。９９ｍＴｃ−化合物１６の保持時間は７．６分であり、一方９９ｍＴｃ−化合物１７の保持時間は７．５分であった。
【実施例２２】
【０２４１】
バルビツレート前駆体の親電子放射性ヨウ素化の一般操作法
新規に製造した水中の０．０１Ｍ過酢酸１０μＬ（１ｘ１０−７モル）を適当な溶媒中の前駆体基質（１ｘ１０−７モル）を含有するシラン化されたバイアルに、０．２ＭＮＨ４ＯＡｃ緩衝液（ｐＨ＝４）２００μＬ、Ｎａ１２７Ｉ１００μＬ（１ｘ１０−７モル）及びＮａ１２３Ｉとともに添加した。反応混合物を静かに攪拌し、生成物をＨＰＬＣにより精製した。
【図面の簡単な説明】
【０２４２】
【図１】は本発明の数種の化合物の化学構造を示す。
【図１】
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【国際調査報告】
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