(57)【要約】本発明は、ホルモン含有オイルエマルジョン（脂質エマルジョン）の製造方法、該方法によって得られる等張オイルエマルジョン、および静脈内投与用、特に、未熟児における出生後ホルモン置換および脳卒中後の神経損傷の治療用の医薬の製造のための該本発明エマルジョンの使用に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）エストロゲンおよびプロゲスターゲンの少なくとも１つを油相に溶解し；および
（Ｂ）乳化剤の存在下において、油相を水相に乳化させる；
というステップを含む、静脈内投与用のエストロゲンおよびプロゲスターゲンを含有する等張オイルエマルジョンの製造方法。
【請求項２】
請求項１に記載の製造方法によって得られるプロゲスターゲンおよびエストロゲンを含む静脈内投与用ホルモン含有等張オイルエマルジョン。
【請求項３】
プロゲスターゲンおよびエストロゲンを2:1〜200:1の比率で含む請求項２に記載の静脈内投与用ホルモン含有等張オイルエマルジョン。
【請求項４】
エマルジョンが、全組成物に対して、１〜６０重量％のエストロゲンおよび１〜５０重量％のプロゲスターゲンを含む請求項２または３に記載のオイルエマルジョン。
【請求項５】
エストロゲンがエストラジオールであり、プロゲスターゲンがプロゲステロンである請求項２〜４のいずれかに記載のオイルエマルジョン。
【請求項６】
油相が、６〜１２、好ましくは８〜１０個の炭素原子の鎖長を有する中鎖トリグリセリド（MCT）を含む請求項２〜５のいずれかに記載のオイルエマルジョン。
【請求項７】
全組成物に対して、1.5重量％以下の乳化剤を含む請求項２〜６のいずれかに記載のオイルエマルジョン。
【請求項８】
未熟児における出生後ホルモン置換のためのエストロゲンおよびプロゲスターゲンの静脈内投与用医薬の製造のための請求項２〜７のいずれかに記載の等張オイルエマルジョンの使用。
【請求項９】
脳卒中後の神経損傷の治療用医薬の製造のための請求項２〜７のいずれかに記載の等張オイルエマルジョンの使用。
【請求項１０】
請求項２〜７のいずれかに記載の等張オイルエマルジョンを用いることによる未熟児におけるホルモン置換方法。
【請求項１１】
請求項２〜７のいずれかに記載の等張オイルエマルジョンを用いることによる脳卒中後の神経損傷の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホルモン含有オイルエマルジョン（脂質エマルジョン）の製造方法、該方法によって得られる等張オイルエマルジョン、および静脈内投与用、特に、未熟児における出生後ホルモン置換および脳卒中後の神経損傷の治療用の医薬の製造のための該本発明エマルジョンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
妊娠中、１７β−エストラジオール（エストロゲン）およびプロゲステロン（プロゲスターゲン）の血漿濃度は、１００倍まで増加する。このエストロゲンおよびプロゲステロンの合成が増加は、特に、妊娠の維持に役立つ。妊娠中の様々な時期における臍帯血の検査から、胎児もこれらの高血漿濃度に曝される。肺、骨および脳などの胎児の種々の臓器の発達は、エストロゲンおよびプロゲステロンに依存するという事実が明示される。妊娠４０週間で正期産が起こり、その後、新生児および母親の両方において、エストラジオールおよびプロゲステロンの急激な減少が起こる。おそらく、このホルモン濃度の減少が共に、女性が出産後にしばしば苦しむ抑うつの原因である。
【０００３】
ドイツ連邦共和国では、全ての新生児の６〜７％が未熟児、すなわち、誕生日が妊娠の第３７週の終わりより前である。したがって、エストラジオールとプロゲステロンの血漿濃度の急激な減少が、胎児の成長中の早期に起こり、臓器がまだ成熟していないという結果をもたらす。今日でさえも、極小未熟児（出生体重１０００g以下）における未成熟の肺機能は、依然として、新生児死亡の原因となることが多い。先の未熟児におけるさらなる研究は、彼らの神経発達が長期的に悪影響を受けることを示す。
【０００４】
ウルム大学の小児科病院におけるTrotterらにより行われた３０人の未熟児における研究（J. Clin. Endocrinol. Metab. ８４，４５３１−４３５５（１９９９））は、未熟児が、エストラジオールおよびプロゲステロンの高血漿濃度を維持することから恩恵を受けることを明らかにしている。未熟児に、胎内での血漿濃度を維持するのに十分な量で１７β−エストラジオールおよびプロゲステロンホルモンを含む希釈した脂質エマルジョンを継続的に静脈内投与した。未熟児が、より良い平均骨石灰化を示すことがわかった。さらに、２８日齢のホルモン処置未熟児において、酸素の追加投与が必要である頻度が、より少なくなることが観察できた。この観察は、肺がより良く成熟することに起因しうるものである。性ホルモンの静脈内投与は、平均３週間にわたって有効であった。
【０００５】
上記研究においては、エストロゲンおよびプロゲステロンホルモンのアルコール溶液を、Pharmacia ＆ Upjohn社によって製造され、商品名Intralipid（登録商標）として販売される脂質エマルジョンに加え、この形態で投与した。Intralipidの油相は、長鎖トリグリセリドの形態の100％大豆油からなる。
より正確な化学的分析により、性ホルモンとIntralipidの混合において相当な不確定要素があることが示される。たとえば、いったい、Intralipid中のステロイドの混合物が物理的に安定であるかどうかが不明瞭である。しかし、放射標識したホルモンを用いる実験により、適用されるホルモンの相当な画分が、輸液システムおよび供給ダクトの表面において吸収されることが示される。これは、必然的に、乳児に静脈内投与されたホルモンのアベイラビリティに関する問題および不確実性をもたらす。
【０００６】
さらに、上記研究の過程において、相対的に大量のホルモン含有オイルエマリジョンの投与が、未熟児の血液において比較的低いホルモン濃度をもたらすことが見出された。したがって、今日まで、所望の血清濃度を達成するためには、未熟児に相対的に大量のオイルエマルジョンが投与されなければならなかった。このような用量が多いことは、未熟児において望ましくないオイルおよび液体の負荷をもたらした。さらに、未熟児にアルコール性組成物を投与することは、好ましい治療方法ではない。
さらに、予備実験において処置された修正月齢15ヶ月の未熟児における追跡調査から、神経発達における好ましい影響が示される(J．Clin．Endocrinol．Metab．86, 601-603 (2001)に掲載)。
対応するホルモンの経上皮処置は、原則的には可能であるが、発育上の理由から誕生後２〜３週間のみにしか始めることができない。
【０００７】
現在、入手しうる結果は、標的基準、すなわち肺の成熟および発育、神経の発育ならびに骨石灰化、言い換えれば、未熟児の成熟のすべての改善におけるホルモン治療の好ましい影響を示す。さらに、非経口投与された脂質エマルジョンは、経腸食物供給が困難であることが多い未熟器官への静脈内耐性剤形におけるオイルの供給による単なる栄養目的を果たす。
さらに、AlkayedらのStroke 31, 161 (2003)には、脳卒中患者の身体状態における、皮下投与されたエストロゲンおよびプロゲステロンの好ましい影響が記載されている。
【０００８】
したがって、本発明の目的は、未熟児の血液において、従来技術に記載のエマルジョンとは対照的に、最小量のオイルおよび容積負荷において、できるだけ高いホルモン富化（アベイラビリティ）をもたらす非経口投与しうるオイルエマルジョンを提供することである。
驚いたことに、乳化の前にホルモンが油相に溶解される製剤におけるエストラジオールおよびプロゲステロン含有オイルエマルジョンの非経口投与が、ホルモンを直接添加するエマルジョンの投与と比較すると、明らかに高い血清濃度をもたらすことが見出されている。
【発明の説明】
【０００９】
本発明は、
（Ａ）エストロゲンおよびプロゲスターゲンホルモンの少なくとも１つを油相に溶解し；および
（Ｂ）乳化剤の存在下において、油相を水相に乳化させる；
というステップを含む、非経口、好ましくは静脈内投与用のエストロゲンおよびプロゲスターゲンを含有する等張オイルエマルジョンの製造方法に関する。
本発明のもう１つの態様は、上記方法によって入手しうる静脈内適用のためのホルモン含有等張オイルエマルジョンに関する。好ましい具体例において、プロゲスターゲンおよびエストロゲンは、エマルジョン中、2:1〜200:1の比率である。
本発明のo/wエマルジョンは、非経口、特に静脈内投与に適している。したがって、本発明の第３の態様は、静脈内投与、特に、未熟児における出生後ホルモン置換のための上記等張オイルエマルジョンの使用に関する。
【００１０】
本発明に関連して、用語「オイル」および「脂質」は、同じ意味をもち、したがって、同義的に用いられる。このグループの物質として、特に、トリグリセリド、部分グリセリドおよび脂肪酸残基ならびにそれらの混合物が挙げられる。
特に、本発明オイルエマルジョンは、エストロゲンおよびプロゲスターゲンの非経口投与のため、好ましくは、未熟児における出生後ホルモン置換のための医薬の製造方法に適している。
本発明のさらなる態様は、従属請求項から理解することができる。
プロゲスターゲンおよびエストロゲンの出生後置換は、子宮内血漿濃度の維持を意図する。誕生後に子宮内血漿濃度からの逸脱をできるだけ低く維持するために、置換開始後にこのような濃度ができるだけ急速に達成されるのが望ましい。
【００１１】
ホルモン置換は、ヒト未熟児に限定されるものではなく、動物、好ましくは哺乳動物に適用することもできる。
本発明オイルエマルジョンは、従来技術のオイルエマルジョンのアベイラビリティと比べて、内包するホルモンについて明らかに改善されたアベイラビリティを有する。
本発明オイルエマルジョンは、従来技術のエマルジョンと比べて、容積およびオイル負荷をより低くしながら、ホルモン濃度のより速い増加およびより高いエストロゲン最終濃度をもたらす。
さらに、本発明オイルエマルジョンは、従来技術のアルコール性ホルモン溶液と比べて、改善された安定性を有する。
本発明オイルエマルジョンの製造方法の重大なステップは、油相を水相と乳化させる前に、油相にエストラジオールおよびプロゲステロンホルモンを溶解することである。基本的には、両方のホルモンが、油相に溶解する。本発明の別の態様においては、一方のホルモン、好ましくはエストロゲンのみを油相に溶解し、プロゲスターゲンを水相および／または完成したエマルジョンに加える。
【００１２】
本発明に関連して用いたホルモンは、子宮内にも生じるホルモンである。特に、卵胞ホルモン（エストロゲン）と黄体ホルモン（プロゲスターゲン）には違いがある。
本発明に関連して重要な卵胞ホルモンは、エストロン、１７β−エストラジオールおよびエストリオールならびにその誘導体である。その高いエストロゲン様活性により、本発明にとって１７β−エストラジオールが特に重要なホルモンである。
本発明に関連して用いるプロゲスターゲンは、プレグネロノン、プロゲステロン、メドロキシプロゲステロンおよびその医薬的に許容しうる誘導体であり、本発明にはプロゲステロンを用いるのが好ましい。
【００１３】
本発明の１つの態様は、エストロンとプレグネロノンおよび／またはプロゲステロンの組み合わせに関し、別の態様は、エストリオールとプレグネロノンおよび／またはプロゲステロンの組み合わせに関する。別の特に好ましい態様は、１７β−エストラジオールおよび／またはプレグネロノンおよび／またはプロゲステロン、特に好ましくはプロゲステロンの組み合わせに関する。両方の態様において、メドロキシプロゲステロンがさらに含まれてもよく、あるいは、メドロキシプロゲステロンをプレグネロノンおよび／またはプロゲステロンと置換してもよい。したがって、本発明にしたがって、２つ以上のホルモンを組み合わせてもよい。
【００１４】
本発明脂質エマルジョンは、使用したときに、未熟児において子宮内に予想されるような血漿濃度をもたらすホルモン濃度を有する。したがって、本発明脂質エマルジョンは、全組成物（親エマルジョン）に対して、0.005〜0.5重量％、好ましくは0.01〜0.2重量％、より好ましくは0.05〜0.1重量％の少なくとも１つのエストロゲンおよび0.05〜5重量％、好ましくは0.1〜2重量％、より好ましくは0.5〜1重量％の少なくとも１つのプロゲスターゲンを含む。
エマルジョン中のエストロゲンに対するプロゲスターゲンの比率は、2:1〜200:1好ましくは5:1〜50:1、より好ましくは10:1〜20:1である。
オイルエマルジョンのより良い投与のために、必要ならば、適当な量の水、好ましくは４倍量までの水で親エマルジョンを希釈することができる。
本発明脂質エマルジョンは、植物由来の油（ベニバナ油または大豆油など）および／または中鎖トリグリセリド（MCT）および／または動物由来の油から調製されるのが好ましい。したがって、それらは、植物油および／またはＭＣＴおよび／または海由来の油（魚油など）を含むことができる。このような脂質エマルジョンは、従来技術から当業者に公知である。
【００１５】
植物油ならびに特に大豆およびベニバナ油は、ω−６系のポリ不飽和脂肪酸（リノール酸優勢、18:2ω−６）含量が高く、ω−３脂肪酸（実質的にα−リノレン酸として単独で、18:3ω−３）含量が低いことを特徴とする。
中鎖トリグリセリド（MCT）は、C6〜C14の鎖長を有し、C8〜C10の鎖長が特に好ましい。
オイルエマルジョンとともに投与された中鎖トリグリセリド（MCT）は、優勢的にとしエネルギー源として役立つ。中鎖トリグリセリドは、不飽和脂肪酸を少しも含まず、したがって、ω−６脂肪酸もω−３脂肪酸も含まない。
【００１６】
冷水魚から得られた魚油は、ポリ不飽和脂肪酸（主としてエイコサペンタエン酸、EPA、20:5ω−３およびドコサヘキサエン酸、DHA、22:6ω−３）含量が高く、ω−６脂肪酸含量が低いことを特徴とする。適当な魚油は、たとえば、工業規模で大量に冷水魚から得られるものである。魚油は、一般に、12〜22個の炭素原子を有する脂肪酸のトリグリセリドを含む。たとえば、イワシ油、サケ油および／またはサバ油から得られる高精製濃縮魚油が特に好ましい。
したがって、本発明の１つの態様は、植物油および／またはMCTに基づくオイルエマルジョンに関する。このエマルジョンは、必要に応じて魚油を含む。
本発明オイル組成物中の植物油の含量は、オイル組成物に対して、少なくとも50〜100重量％、好ましくは70〜100重量％、より好ましくは90〜100重量％である。
【００１７】
不飽和脂肪酸、特にω−３系の有利な効果は、当業者に公知であり、たとえば、EP-A-0 311 091およびDE-A-19648566に記載されている。本発明に関しても、不飽和脂肪酸に富むオイルの使用は有利である。
親エマルジョンの総オイル含量は、水性オイルエマルジョンに対して、1重量％〜30重量％、好ましくは10重量％〜20重量％である。
蒸留水に加えて、等張オイルエマルジョンは、乳化剤、共乳化剤（co-emulsifier）、安定化剤、抗酸化剤および等張化添加剤などの通常の助剤および／または添加剤を含んでもよい。
動物または植物由来のリン脂質などの生理的に許容しうる乳化剤を乳化剤として用いる。精製レシチン、特に卵レシチンまたはそのフラクションまたは対応するリン脂質が、特に好ましい。乳化剤の含量は、総エマルジョンに対して、0.6〜1.5重量％、好ましくは1.2重量％である。
【００１８】
さらに、共乳化剤として、長鎖C16〜C20脂肪酸のアルカリ塩を用いてもよい。そのナトリウム塩が特に好ましい。共乳化剤は、総エマルジョンに対して、0.005〜0.1重量％、好ましくは0.01〜0.5重量％の濃度で用いる。
安定化および等張化のために、本発明エマルジョンは、たとえば、多価アルコールなどの1.0〜8重量％、好ましくは2.0〜6.0重量％、より好ましくは2.2〜2.6重量％の安定化または等張化添加剤を含んでもよい。この関連において、グリセロール、グルコースまたはキシリトールが好ましく、グリセロールが特に好ましい。
抗酸化剤として、したがって、過酸化物形成からの保護のために、本発明オイルエマルジョンは、トコフェロールまたはα−酢酸トコフェロールなどの生理的に許容しうるトコフェロールのエステルを、オイル100 gに対して、10〜1000 mg、好ましくは25〜200 mgの量で含んでもよい。
【００１９】
もちろん、望ましくない副作用があるか、または不耐性を引き起こす添加剤は使用しない。特に、フルクトースおよびソルビトールが、不耐性を引き起こすことが疑われており、したがって、本発明には不適当である。さらに、本発明オイルエマルジョンは、ベンジルアルコールなどの保存剤を含まない。
本発明オイルエマルジョンは、常に、外側の連続相が非経口用途に適した蒸留水からなる水中油型(o/w)エマルジョンである。
オイルエマルジョンは、6.0〜9.0、好ましくは6.5〜8.5のpHを有するのが都合がよい。
【００２０】
本発明の等張水性脂質エマルジョンは、公知の方法によっって製造することができる。通常のアプローチは、最初に、油、乳化剤およびその他の助剤ならびに添加剤を混合し、次いで、分散させながら水を加えることである。水は、必要に応じて、さらに水溶性成分（たとえば、グリセロールなど）を含んでもよい。このようにして得られたエマルジョンは、まだ、約10μmの液滴直径をもつ。エマルジョンの平均液滴直径は、高圧ホモジナイザーを用いることなどによるさらなる均質化によって、さらに縮小しなければならない。好ましい非経口適用、特に、静脈内適用には、平均粒子径0.5 μm〜150 μm、より好ましくは1 μm〜100 μmの液滴直径である。さらに、溶液は、滅菌されるべきであり、少なくとも１８ヶ月の保存性をもつ。
【００２１】
エストロゲンおよびプロゲスターゲンの非経口投与、特に静脈内投与のため、ならびに別の態様において、この目的用の医薬の製造のための本発明の等張オイルエマルジョンの使用に加えて、本発明オイルエマルジョンが、ヒトおよび動物、好ましくは動物の脳内の神経細胞の死を減少させることが見出されており、したがって、脳卒中後の神経損傷の治療のための医薬の製造に用いることができる。本発明オイルエマルジョンは、予防に適用することもできる。このような場合、オイルエマルジョンの経口投与が好ましい。
本発明の等張オイルエマルジョンは、未熟児におけるホルモン置換法ならびに脳卒中後の神経損傷の治療法に用いることができる。
本発明を以下の実施例によって説明するが、それらによって限定されるものではない。
【実施例】
【００２２】
ホルモン含有オイルエマルジョンの製造
エストラジオールおよびプロゲステロンホルモンを、必要に応じてトコフェロールを添加して、窒素不活性雰囲気下、約70℃に加熱した油に溶解する（＝溶液Ｉ）。乳化剤（＝卵からのリン脂質）をUltra-Terrux（登録商標）細胞ホモジナイザー(Jahnke & Kunkle)を用いて水性グリセロール溶液に分散させる（＝成分ＩＩ）。Ultra-Terrux（登録商標）細胞ホモジナイザーを用いて溶液Ｉを成分ＩＩに加える。オレイン酸ナトリウムを添加することにより、得られるo/wエマルジョンのpH値を約8.5に調節し、次いで、少なくとも400 kg/cm2にて、高圧ホモジナイザーで均質化する。
適当な品質のガラスアンプルに充填した後、公知の方法でエマルジョンを加熱滅菌する。平均油液滴直径0.5μm以下の脂質液滴を含み、少なくとも１８ヶ月の保存性をもつ滅菌安定o/wエマルジョンが生じる。
【００２３】
表１
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【００２４】
ホルモン含有オイルエマルジョンの適用
従来技術のホルモンエマルジョンで処置された患者のグループは、１２人の患者（＜２９週の妊娠の未熟児、出生体重１０００g以下）で構成された。等張食塩水で油含量5%に希釈し、結晶性１７β−エストラジオール0.15 mg/mlおよびプロゲステロン1.4 mg/mlのエタノール性溶液と混合した20重量％のIntralipid（登録商標）(Pharmacia & Upjohn, Germany)からなるホルモンエマルジョンで患者を処置した。
最初の供給は、15 ml/kg/日にて継続的に静脈内(i.v.)注射を行った。エマルジョンのホルモン含量と液体の量の両方を変化させることができた。この結果として、最大給液量25.8 ml/kg/日、メジアン18.8を示した。
【００２５】
標的基準として28日齢における追加の酸素が必要なホルモン置換の影響に関する現今行われたランダム二重盲検研究において、７８人の未熟児がすでに補充されている。この研究では、本発明ホルモンエマルジョン（製造例１にしたがって、注射用水で油含量5%に希釈）またはプラセボ（ホルモンフリーエマルジョン、油含量5%）を用いた。達成されたエストラジオールおよびプロゲステロン血漿濃度に関する５２人の患者からの結果が、すでに利用可能である。盲検でない場合、２５人の患者がホルモン含有溶液で治療されたことを血漿濃度から導くことができる(verum group)。すべての患者に本発明エマルジョンを15 ml/kg/日にて継続的に静脈内投与した。この値から、エストラジオール2.47 mg/kg/日およびプロゲステロン22.5 mg/kg/日という平均ホルモン投与量を導くことができる。
両方のグループにおいて、ホルモン供給継続下における第１（２４時間）、３、７および１４生存日におけるエストラジオールおよびプロゲステロンの血漿濃度を決定した。これらの研究の結果を下記表に示す。
【００２６】
表２
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＊)メジアン
【００２７】
表１は、両方のグループの未熟児に対する第１４生存日までのエストラジオールおよびプロゲステロンのメジアン投与量を示す。両方のエマルジョンから同様の高ホルモン供給がもたらされた。本発明エマルジョンを15 ml/kg/日で常時供給すると同時に、従来技術エマルジョンをメジアン18.8 ml/kg/日（最少−最多：11.4〜25.8 ml/kg/日）で投与した。
本発明エマルジョンにより、未熟児においてエストラジオールに対する有意に高い血漿濃度を達成することができた(p＝0.00038)。しかし、全１４日間を考慮すると、プロゲステロン血漿濃度には有意な差異は見出されなかった。異なるエマルジョンで処置された未熟児における血漿濃度を個々の測定時（第１、３、７および１４日）において互いに比較した（図１および図２）。本発明エマルジョンによって、２４時間後にエストラジオールおよびプロゲステロンの両方について有意に高い血漿濃度が達成されることが見出された。後者のエマルジョンによって第３、７および１４日に達成されたエストラジオールのメジアン血漿濃度は、常に、従来技術エマルジョンによって達成された値以上であった。追求されたエストラジオール(2000 pg/ml)およびプロゲステロン(300 ng/ml)の血漿濃度の下限は、本発明エマルジョンでは、全ケースのそれぞれ91%および46%において達成されるかまたは越えたが、一方、従来技術エマルジョンでは全ケースのそれぞれ64%および43%のみにおいて達成されるかまたは超えた。
２４時間後すでに、両方のホルモンの血漿濃度は、従来技術エマルジョンと比較すると、本発明エマルジョンによる置換について有意に高かったが、これは、できるだけ素早く子宮内に見出される血漿濃度に至るという目的に向かう進歩である。
結論として、未熟児において到達された血漿濃度を測定すると、利用可能なデータは、エストラジオールおよびプロゲステロンのアベイラビリティーが改善されたことを示す。したがって、本発明のエマルジョンは、ホルモンと完成したエマルジョンの混合によって製造された対応する従来技術エマルジョンと比較すると、未熟児への適用に、より適している。
【図面の簡単な説明】
【００２８】
【図１】異なるエマルジョンで処置された未熟児における個別の測定時（第1、3、7、14日）でのエストラジオール血漿濃度を示す。
【図２】異なるエマルジョンで処置された未熟児における個別の測定時（第1、3、7、14日）でのプロゲステロン血漿濃度を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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2006527736.tif 000008
2006527736.tif 000009
2006527736.tif 000010
2006527736.tif 000011
2006527736.tif 000012
2006527736.tif 000013
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