(57)【要約】本発明は、下記化学式１に示すイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩を提供する。【化１】2006504756.tif 000046  前記化学式１において、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンであり、Ｒ２はメチル又はアミノである。  本発明によれば、解熱、鎮痛、消炎作用を有し、副作用が改善されたイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩、これらの製造方法、及びこれらを含有した薬剤学的組成物を提供することができる。
2006504756.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式１に示すイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩：
【化１】
2006504756.tif 000039
前記化学式１において、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンであり、Ｒ２はメチル又はアミノである。
【請求項２】
４−(４−フルオロフェニル)−３−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
４−(５−メチル−３−フェニル−イソチアゾール−４−イル)−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−３−フェニル−イソチアゾールと、
３−(４−ブロモフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
３−(４−メトキシフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
３−(４−フルオロフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
からなる群より選択された請求項１に記載の化合物又はその無毒性塩。
【請求項３】
下記化学式７の化合物にアンモニア水を加えて反応させる段階を含む下記化学式１ａの化合物の製造方法：
【化２】
2006504756.tif 000040
【化３】
2006504756.tif 000041
前記式中、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンである。
【請求項４】
下記化学式７の化合物にヒドラジン及びヨードメチルを反応させる段階を含む下記化学式１ｂの化合物の製造方法：
【化４】
2006504756.tif 000042
【化５】
2006504756.tif 000043
前記式中、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンである。
【請求項５】
下記化学式１２の化合物に五硫化リン及び２, ３, ５, ６−テトラクロロ−１, ４−ベンゾキノンを反応させる段階を含む下記化学式１ｃの化合物の製造方法：
【化６】
2006504756.tif 000044
【化７】
2006504756.tif 000045
前記式中、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンである。
【請求項６】
治療学的に有効な量の請求項１又は２に記載のイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩を有効性分として含有し、薬剤学的に許容可能な担体を含む、解熱、鎮痛、消炎効果を有する薬剤学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、解熱、鎮痛、消炎効果を有するイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩、これらの製造方法、及びこれらを有効成分として含む薬剤学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
非ステロイド性抗炎症剤の大部分は、シクロオキシゲナーゼ又はプロスタグランジンＧ／Ｈシンターゼと呼ばれる酵素の阻害を通じて、抗炎症、鎮痛、解熱作用をし、且つ、ホルモンにより生じる子宮収縮を阻害し、いくつかの種類の癌の成長を阻害する。最初は、牛から発見された構成的酵素のシクロオキシゲナーゼ−１(ＣＯＸ−１)のみが知られていたが、最近、誘発性のシクロオキシゲナーゼ−２(ＣＯＸ−２)が明らかになった。シクロオキシゲナーゼ−２は、シクロオキシゲナーゼ−１とは確かに異なり、マイトゲン、内毒素、ホルモン、成長因子及びサイトカインなどにより容易に誘発される。
【０００３】
プロスタグランジンは、病理学的及び生理学的役割を果たすが、構成的酵素のシクロオキシゲナーゼ−１は、基本的な内因性プロスタグランジンの分泌に関与し、胃腸の状態維持及び腎臓の血液循環など、生理学的側面において重要な役割を果たす。反面、シクロオキシゲナーゼ−２は、炎症因子、ホルモン、成長因子及びサイトカインなどにより誘発され、よって、プロスタグランジンの病理学的効果に主な役割を果たす。そのため、シクロオキシゲナーゼ−２に選択的な阻害剤は、既存の非ステロイド性抗炎症剤に比べて、作用メカニズムによる副作用がないことで予想され、消炎、鎮痛、解熱作用をすることが予想され、且つ、ホルモンにより生じる子宮収縮の阻害と、いくつかの種類の癌の成長を阻害することで予想される。特に、胃腸毒性、腎臓毒性などの副作用が少ないことで予想される。また、収縮性プロスタノイド(prostanoid)の合成を防止して、プロスタノイドにより誘発される平滑筋の収縮を阻害することができ、よって、早産、月経不順、喘息及び好酸球に係る疾病に有用であることで予想される。他にも、骨粗鬆症、緑内障、大腸癌、前立腺癌及び痴呆の治療にも有用であることで予想されるが、シクロオキシゲナーゼ−２に選択的な阻害剤の有用性については、文献(参照：John Vane, “Towards a better aspirin” in Nature, Vol.367, p215-216, 1994; Bruno Battistini, Regina Botting and Y.S. Bakhle, "COX-1 and COX-2: Toward the Development of More Selective NSAIDs" in Drug News and Perspectives, Vol.7, p501-512, 1994; Urology, vol.58, p127, 2001; David B. Reitz and Karen Seibert, "Selective Cyclooxygenase Inhibitors" in Annual Reports in Medicinal Chemistry, James A. Bristol, Editor, Vol.30, p179-188, 1995)に詳しく記載されている。
【０００４】
シクロオキシゲナーゼ−２に選択的に作用する阻害剤として公知された既存の薬物は、その構造において非常に多様な形態をとっている。このうち、最も一般に研究され、よって、最も多い候補物質が設計された構造は、ジアリルへテロサイクル構造(diaryl heterocycle structure)、即ち、トリサイクリックシステムであって、該構造は、特徴的に一つのフェニルにスルホンアミド又はメチルスルホン基が必須的に存在する。
【０００５】
米国特許番号５,４６６,８２３には、下記化学式３６の化合物(セレコキシブ)が開示されている。下記のセレコキシブは、置換されたピラゾールベンゼンスルホンアミド誘導体である。
【化１】
2006504756.tif 000003
【０００６】
ＷＯ９５／００５０１には、下記化学式３７を有する化合物(ロフェコキシブ)が開示されている。ロフェコキシブは、セレコキシブのように、ジアリルへテロサイクル構造であるが、ヘテロ環としてフラノン構造(furanone structure)を有する。
【化２】
2006504756.tif 000004
【０００７】
米国特許番号５,６３３,２７２には、下記化学式３８のような化合物(バルデコキシブ)が開示されている。バルデコキシブは、セレコキシブのように、フェニルスルホンアミド構造を有するが、ヘテロ環としてイソキサゾール構造を有する。
【化３】
2006504756.tif 000005
【０００８】
前記化学式３６乃至３８の化合物は、全てＣＯＸ−２に対する選択的抑制剤として、既存の非ステロイド性抗炎症剤に比べて副作用のない消炎鎮痛治療効果を有する。
【発明の開示】
【０００９】
そこで、本発明者らは、シクロオキシゲナーゼ−２の阻害剤として選択性の優れた新規化合物を開発しようと持続的な研究を行い、その結果、イソチアゾール誘導体がＣＯＸ−２に対し優れた選択的抑制効果を有することを発見して、本発明を完成するに至った。
【００１０】
従って、本発明は、イソチアゾール誘導体又はその無毒性塩を提供することを目的とする。
【００１１】
また、本発明の目的は、前記イソチアゾール誘導体又はその無毒性塩の製造方法を提供することを含む。
【００１２】
さらに、本発明の目的は、前記イソチアゾール誘導体又はその無毒性塩を有効性分として含む、解熱、鎮痛、消炎効果を有する薬剤学的組成物を提供することを含む。
【００１３】
［発明の効果］
本発明による新規化合物は、既存の非ステロイド性抗炎症剤の副作用が改善された代用薬物であって、消化性潰瘍、胃炎、部分的な腸炎、潰瘍性大腸炎、憩室炎、胃腸内出血、低プロトロンビン血症などのある患者に有用であり、骨関節炎、関節リウマチなどの炎症疾患に対する治療剤としても有用であることで期待される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明は、下記化学式１に示すイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩に関するものである。
【００１５】
【化４】
2006504756.tif 000006
前記化学式１において、Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンであり、Ｒ２はメチル又はアミノである。
【００１６】
前記化合物は、無毒性塩の形態で存在することができる。ここで、無毒性塩とは、有機塩及び無機塩を含む薬剤学的に許容される非毒性塩をいう。
【００１７】
前記化合物は、薬剤学的に許容される有機酸又は無機酸との塩の形態で存在することができる。
【００１８】
前記化合物の有機酸又は無機酸塩としては、酢酸、アジピン酸、アスパルト酸、１, ５−ナフタレンジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンポスルホン酸(camphorsulfonic acid)、クエン酸、１, ２−エタンジスルホン酸、エタンスルホン酸、エチレンジアミン四酢酸(ethylendiaminetetraacetic acid)、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヨウ化水素酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸(manderic acid)、メタンスルホン酸、ミュシック酸(mucic acid)、２−ナフタレンジスルホン酸、硝酸、シュウ酸、パルノ酸(parnoic acid)、パントテン酸、リン酸、ピバリン酸、プロピオン酸、サリチル酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデカン酸、又は１０−ウンデセノイックアシド(10-undecenoic acid)との塩があるが、これらに限定されず、コハク酸 、臭化水素酸、塩酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、リン酸、硫酸、又は酒石酸との塩が好ましい。
【００１９】
本発明のイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩は、
４−(４−フルオロフェニル)−３−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
４−(５−メチル−３−フェニル−イソチアゾール−４−イル)−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−[３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミドと、
４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−３−フェニル−イソチアゾールと、
３−(４−ブロモフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
３−(４−メトキシフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
３−(４−フルオロフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾールと、
からなる群より選択された化合物又はその無毒性塩がより好ましい。
【００２０】
本発明は、下記化学式７の化合物にアンモニア水を加えて反応させる段階を含む下記化学式１ａの化合物の製造方法を含む。
【化５】
2006504756.tif 000007
【化６】
2006504756.tif 000008
前記Ｒ１は水素、アルコキシ又はハロゲンである。
【００２１】
前記反応において、溶媒としては、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン(ＴＨＦ)、ベンゼン、又はトルエンなどを使用することができるが、これらに限定されない。
【００２２】
前記反応は、化合物によって、常温で反応させるか、又は沸点まで加熱して還流させることにより、反応を完結させることができる。
【００２３】
また、本発明は、化学式７の化合物にヒドラジン及びヨードメチルを反応させる段階を含む下記化学式１ｂの化合物の製造方法を含む。
【化７】
2006504756.tif 000009
【化８】
2006504756.tif 000010
前記反応において、溶媒としては、ジクロロメタン、ＴＨＦ、又はベンゼンなどを使用することができるが、これらに限定されない。
【００２４】
前記反応は、化合物によって、常温で反応させるか、又は沸点まで加熱して還流させることにより、反応を完結させることができる。
【００２５】
前記化学式７の化合物は、下記の反応式１により製造することができる。  
【化９】
2006504756.tif 000011
【００２６】
出発物質であるジオキシベンゾイン(２)をヒドロキシルアミン塩酸塩と反応させることにより、オキシム化合物(３)を得ることができ、前述の製造方法で使用可能な塩基としては、酢酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、炭酸カリウムなどがあるが、これらに限定されない。このうち、水酸化カリウムが好ましい。使用される反応溶媒としては、通常有機合成に使用される有機溶媒を使用することができ、代表的な反応溶媒として、トルエン、エタノール、メタノール、ジメチルホルムアミド、ｎ−メチルピロリジノンなどを使用することができるが、これらに限定されない。このうち、エタノールを使用することがより好ましい。
【００２７】
得られたオキシム化合物(３)をｎ−ブチルリチウム及び無水酢酸と反応させて、イソキサゾール化合物(４)を得た。本反応に使用される反応溶媒としては、通常有機合成に使用される非反応性有機溶媒を使用することができ、このうち、ＴＨＦを使用することがより好ましい。
【００２８】
生成されたイソキサゾール化合物(４)に活性金属と共に水素ガスを加えることにより、イソキサゾール環が開環した化合物(５)を得ることができる。このとき、使用可能な金属としては、ラネーニッケル、１０％Ｐｄ／Ｃなどがあるが、これらに限定されない。このうち、ラネーニッケルを使用することが好ましい。反応溶媒としては、通常水素反応に使用される有機溶媒を使用することができ、ＴＨＦとメタノールとを混合して使用することが好ましい。前記反応は、常温で反応させて反応を完結させることがより好ましい。
【００２９】
イソチアゾール化合物(６)を得るために、化合物(５)に五硫化リン及び炭酸ナトリウムを加えて常温で反応させた後、２, ３, ５, ６−テトラクロロ−１, ４−ベンゾキノン(クロルアニル(chloranil))を加えて還流反応させることが好ましい。使用される反応溶媒としては、通常有機反応に使用される非反応性有機溶媒のうち、ＴＨＦを使用することがより好ましい。
【００３０】
前記イソチアゾール化合物(６)にクロロスルホン酸を加え、約−５℃に冷却させて反応を完結させることにより、前記化学式７の化合物を生成する。
【００３１】
また、本発明は、化学式１２の化合物に五硫化リン及び２, ３, ５, ６−テトラクロロ−１, ４−ベンゾキノンを反応させる段階を含む下記化学式１ｃの化合物の製造方法を含む。
【化１０】
2006504756.tif 000012
【化１１】
2006504756.tif 000013
【００３２】
前記反応において、溶媒としては、ＴＨＦ、酢酸エチル、ＤＭＦなどを使用することができるが、これらに限定されない。また、前記反応は、塩基存在下で行うことが好ましく、使用可能な塩基としては、炭酸ナトリウムなどがあるが、これに限定されない。
【００３３】
前記反応は、化合物によって、常温で反応させるか、又は沸点まで加熱して還流させることにより、反応を完結させることができる。
【００３４】
前記化学式１２の化合物は、下記反応式２により製造することができる。
【化１２】
2006504756.tif 000014
【００３５】
４−メタンスルホニル安息香酸(９)と１番の位置にベンゼン環が置換されたプロパン−２−オン化合物(８)とを反応させて、化学式(１０)の化合物を生成する。このとき、塩基を使用することが好ましく、使用可能な塩基としては、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムｔ−ブトキシドなどがあるが、これらに限定されない。このうち、水酸化ナトリウムがより好ましい。
【００３６】
反応溶媒としては、通常有機合成に使用される非反応性有機溶媒を使用することができ、代表的な反応溶媒としては、ベンゼン、トルエン、キシレン、ジメチルホルムアミド、ｎ−メチルピロリジノンなどがあるが、これらに限定されない。このうち、ジメチルホルムアミドを使用することがより好ましい。
【００３７】
化学式１１の化合物は、化学式１０の化合物にヒドロキシルアミン塩酸塩を反応させて製造することができ、前記反応式１においてイソキサゾール誘導体の製造方法と同じ条件で行うことができる。
【００３８】
化学式１１の化合物に活性金属と共に水素ガスを加えることにより、イソキサゾール環が開環した化合物(１２)を得ることができる。このとき、使用可能な活性金属としては、ラネーニッケル、１０％Ｐｄ／Ｃなどがあるが、これらに限定されない。このうち、ラネーニッケルを使用することが好ましい。反応溶媒としては、通常水素反応に使用される有機溶媒を使用することができ、ＴＨＦとメタノールとを混合して使用することが好ましい。前記反応は、常温で反応させて反応を完結させることがより好ましい。
【００３９】
前述の製造方法における全ての反応生成物の分離及び精製は、通常有機合成で行われる濃縮、抽出などの過程を通じて行うことができ、必要に応じて、シリカゲル相でカラムクロマトグラフィーにより行うこともできる。
【００４０】
本発明は、治療学的に有効な量のイソチアゾール誘導体又はその無毒性塩を有効性分として含有し、薬剤学的に許容可能な担体を含む、解熱、鎮痛、消炎効果を有する薬剤学的組成物を提供する。
【００４１】
このような薬剤学的組成物は、前記シクロオキシゲナーゼ−２に対する選択的な抑制活性を有する前記化学式１の化合物又はその薬学的に許容可能な塩を含んでおり、副作用を最小化した解熱、鎮痛、消炎剤として使用することができる。
【００４２】
従来の非ステロイド性消炎剤は、病理学的プロスタグランジンの合成に関与するＣＯＸ−２だけでなく、基本的な内因性プロスタグランジンの分泌に関与し、胃腸の状態維持及び腎臓の血液循環など、生理学的側面において重要な役割を果たすＣＯＸ−１まで無差別的に抑制するので、様々な副作用を有していた。
【００４３】
これに比べて、前記化学式１の化合物及びその薬学的に許容可能な塩は、シクロオキシゲナーゼ−２に対し選択的な阻害活性を有するので、ＣＯＸ−２まで無差別的に阻害する従来の非ステロイド性解熱、鎮痛、消炎剤が有する副作用を最小化することができる。
【００４４】
従って、化学式１の化合物又はその無毒性塩、及び薬剤学的に許容可能な担体又は賦形剤を含む薬剤学的組成物は、典型的な非ステロイド性抗炎症剤の代用薬として使用することができ、特に、既存の非ステロイド性解熱、鎮痛、消炎剤の副作用が改善された代用薬物であって、消化性潰瘍、胃炎、部分的な腸炎、潰瘍性大腸炎、憩室炎、胃腸内出血、低プロトロンビン血症などのある患者に有用である。
【００４５】
本発明の薬剤学的組成物は、病理学的プロスタグランジン関連の全ての炎症疾患に使用することができ、特に、高用量の投与を要する骨関節炎、関節リウマチに有用である。
【００４６】
前記薬剤学的組成物は、前記活性成分である化学式１の化合物又はその無毒性塩を基準に、成人に５mg／kg乃至４００mg／kgを投与することができ、疾病の深刻度によって増減することができる。
【００４７】
前記薬剤学的組成物は、錠剤、発泡性錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、徐放性錠剤、徐放性カプセル剤(単独及び複合単位製剤)、静脈内及び筋肉内注射用アンプル剤の形態で、注入液、懸濁液、坐剤の形態で、又はその他の適合した薬剤学的形態で投与することができる。
【００４８】
徐放性薬剤学的形態は、最初投与含有量を有する完全な徐放性形態で、又は最初投与含有量を有しない部分的な徐放性形態で活性化合物を含有することができる。
【００４９】
活性化合物は、共に存在するか、又は部分的に或いは完全に互いに分離された剤形として存在し、個別投与又は時間単位に段階化した投与が可能である。
【００５０】
前記完全に分離された剤形が存在する場合、これらは互いに協力し、これらが配合された混合物内で存在できる同一量及び相応する重量比で投与単位内にそれぞれの活性化合物を含有する。
【００５１】
指示された配合物が含有された経口投与可能な薬剤学的組成物が好ましい。  
前記配合物を含有する薬剤学的製剤を製造するために、活性化合物は、生理学的に耐性のある賦形剤及び／又は希釈剤及び／又は補助剤と共に、好ましい方式で指示された量に剤形化する。
【００５２】
賦形剤及び補助剤の例としては、ゼラチン、蔗糖又は乳糖のような天然糖、レシチン、ペクチン、澱粉(例えば、コーンスターチ又はアミロース)、シクロデキストリン及びシクロデキストリン誘導体、デキストラン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアセテート、アラビアゴム、アルギン酸、滑石、サリチル酸、リン酸水素カルシウム、セルロース、メトキシプロピルセルロースのようなセルロース誘導体、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、炭素原子数１２乃至２２個の脂肪酸、乳化剤、オイル及び脂肪、特に、飽和脂肪酸の植物性グリセロールエステル及びポリグリセロールエステル、１価又は多価アルコール及びポリエチレングリコールのようなポリグリコール、炭素原子数１乃至２０個の１価脂肪族アルコール、又はグリコール、グリセロール、ジエチレングリコール、１, ２−プロピレングリコール、ソルビトールのような多価アルコールを有する炭素原子数２乃至２２個の脂肪族飽和又は不飽和脂肪酸のエステルがある。
【００５３】
追加で、適合した補助剤としては、崩解を引き起こす物質(所謂崩解剤)、交差結合されたポリビニルピロリドン、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、微細結晶性セルロースがある。さらに、公知の被覆物質を使用することもできる。
【００５４】
アクリル酸及び／又はメタクリル酸及び／又はこれのエステルの重合体及び共重合体、ゼイン(zein)、エチルセルロース、エチルセルロースコハク酸(ethylcellulose succinate)、シェラックなどがある。
【００５５】
被覆物質として適合した可塑剤としては、クエン酸エステル、酒石酸エステル、グリセロール、グリセロールエステル、及び多様な鎖長のポリエチレングリコールがあり得る。水又は生理学的に許容される有機溶媒、例えば、アルコール及び脂肪アルコール利用液又は懸濁液の製造に適している。
【００５６】
液体剤形において、ソルビン酸カリウム、メチル４−ヒドロキシベンゾエート、又はプロピル４−ヒドロキシベンゾエートのような保存剤、アスコルビン酸のような抗酸化剤、及びペパーミントオイルのような芳香強化剤を使用する必要がある。
【００５７】
製剤の製造において、ポリビニルピロリドン及びポリソルベート８０のような公知された通常の溶解剤又は乳化剤を使用することができる。
【００５８】
適合した賦形剤及び補助剤の追加的な例は文献を参照することができる(Dr. H.P. Fiedler, “Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetik und angrenzende Gebiete” [Encyclopaedia of auxiliaries for pharmacy, cosmetics and related fields])。
【００５９】
以下、本発明を下記の実施例及び実験例によってより具体的に説明する。しかしながら、これらの実施例及び実験例は、本発明に関する理解を助けるためのもので、これらにより本発明の範囲が制限されることはない。
【００６０】
実験例１
１, ２−ジフェニル−エタノンオキシム
【化１３】
2006504756.tif 000015
ジオキシベンゾイン２０gを無水エタノール１００mlに溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸塩９.２１g及び水酸化カリウム７.４３gを加えて６時間還流した。反応液を常温に冷却した後、２００mlの水に入れて希釈し、酢酸エチルで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒は減圧蒸留した。得られた薄黄色の液体をエタノール及び水で再結晶して、白色の固体相表題化合物１７.７g(収率８２％)を得た。  
１Ｈ−ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
４.１２(ｓ, ２Ｈ), ７.１０−７.１５(ｍ, １Ｈ), ７.２０−７.３０(ｍ, ４Ｈ), ７.４０−７.５０(ｍ, ３Ｈ), ７.６０−７.６５(ｍ, ２Ｈ), ８.２０(ｂｓ, １Ｈ)
ｍｐ：８７−９０℃
【００６１】
実験例２
１−(４−ブロモフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム
【化１４】
2006504756.tif 000016
前記実験例１において、ジオキシベンゾインの代わりに、１−(４−ブロモフェニル)−２−フェニル−エタノン２.０gを使用したことを除いては、実験例１と同様に実施して、象牙色の固体相表題化合物１.５３g(収率７５％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
４.１２(ｓ, ２Ｈ), ７.０５−７.１０(ｍ, １Ｈ), ７.１９(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.２Ｈz), ７.３０−７.３８(ｍ, ４Ｈ), ７.５０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.２Ｈz), ８.２０(ｂｓ, １Ｈ) 
ｍｐ：１２２−１２５℃
【００６２】
実験例３
１−(４−メトキシフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム
【化１５】
2006504756.tif 000017
前記実験例１において、ジオキシベンゾインの代わりに、１−(４−メトキシフェニル)−２−フェニル−エタノン１.０gを使用したことを除いては、実験例１と同様に実施して、米色の固体相表題化合物０.５８g(収率５４％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
３.９０(ｓ, ３Ｈ), ４.１２(ｓ, ２Ｈ), ６.９０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ７.０５−７.１０(ｍ, １Ｈ), ７.３０−７.３８(ｍ, ４Ｈ), ７.５０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ８.１８(ｂｓ, １Ｈ)
ｍｐ：１３２−１３５℃
【００６３】
実験例４
１−(４−フルオロフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム
【化１６】
2006504756.tif 000018
前記実験例１において、ジオキシベンゾインの代わりに、１−(４−フルオロフェニル)−２−フェニル−エタノン２.０gを使用したことを除いては、実験例１と同様に実施して、米色の固体相表題化合物１.３５g(収率６３％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
４.１２(ｓ, ２Ｈ), ７.０５−７.１５(ｍ, ３Ｈ), ７.３０−７.３８(ｍ, ４Ｈ), ７.４０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ８.１５(ｂｓ, １Ｈ)
ｍｐ：１００−１０３℃
【００６４】
実験例５
５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソキサゾール
【化１７】
2006504756.tif 000019
前記実験例１で製造した１, ２−ジフェニル−エタノンオキシム４gを容器に入れた後、窒素気流下で無水ＴＨＦ２０mlを入れて−７８℃に冷却させた。ｎ−ブチルリチウム２.０５当量を徐々に加えた後、同一温度で１時間攪拌し、さらに常温まで温度を上げた後に１時間攪拌した。攪拌後に無水酢酸１.１当量を加え、常温で２時間攪拌させた。反応終結後に水５０mlを加え、酢酸エチルで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させた。得られたオイル相の液体を、濾過過程なしにジクロロメタン５０mlに溶かした後、濃い硫酸３mlを加えて３時間還流させた。反応終結後に水１００mlを加え、ジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させた。得られたオイル相の液体を、酢酸エチル／ノルマルヘキサンの１／３０混合溶液でカラムクロマトグラフィーして、液相表題化合物２.５０g(収率５６％)を得た。 
Ｍａｓｓ(ＬＯＷ ＥＩ)＝２３５.１１
【００６５】
実験例６
３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール
【化１８】
2006504756.tif 000020
前記実験例５において、１, ２−ジフェニル−エタノンオキシムの代わりに、前記実験例２の１−(４−ブロモフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム２gを使用したことを除いては、実験例５と同様に実施して、液相表題化合物１.０５g(収率５１％)を得た。
１Ｈ −ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５１(ｓ, ３Ｈ), ７.３２−７.３８(ｍ, ５Ｈ), ７.４５−７.５０(ｍ, ４Ｈ)
【００６６】
実験例７
３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール
【化１９】
2006504756.tif 000021
前記実験例５において、１, ２−ジフェニル−エタノンオキシムの代わりに、前記実験例３の１−(４−メトキシフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム０.５gを使用したことを除いては、実験例５と同様に実施して、液相表題化合物０.２６g(収率４８％)を得た。  
Ｍａｓｓ(ＬＯＷ ＥＩ)＝２６５.１
【００６７】
実験例８
３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール
【化２０】
2006504756.tif 000022
前記実験例５において、１, ２−ジフェニル−エタノンオキシムの代わりに、前記実験例４の１−(４−フルオロフェニル)−２−フェニル−エタノンオキシム１.５gを使用したことを除いては、実験例５と同様に実施して、液相表題化合物０.９９g(収率６０％)を得た。  
Ｍａｓｓ(ＬＯＷ ＥＩ)＝２５３.１
【００６８】
実験例９
２−(４−フルオロフェニル)−１−(４−メタンスルホニルフェニル)−ブタン−１, ３−ジオン
【化２１】
2006504756.tif 000023
１−(４−フルオロフェニル)−プロパン−２−オン２g、４−メタンスルホニル安息香酸２.０g、及びカルボニルジイミダゾール１.６７gを入れた後、ジメチルホルムアミド１０mlに溶かした。この溶液に水素化ナトリウム０.８gを徐々に加えた後に２時間攪拌した。反応終結後に水１００mlを加え、ジクロロメタンで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させて、液相表題化合物２.４６g(収率５６％)を得た。
【００６９】
実験例１０
４−(４−フルオロフェニル)−３−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソキサゾール
【化２２】
2006504756.tif 000024
実験例９の２−(４−フルオロフェニル)−１−(４−メタンスルホニルフェニル)−ブタン−１, ３−ジオン５００mgをエタノール１０mlに溶かした後、ヒドロキシルアミン塩酸塩１１５mg及び酢酸ナトリウム１３６mgを入れて８時間還流した。反応終結後に水２０mlを入れ、酢酸エチルで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させた。得られたオイル相の液体を酢酸エチル／ノルマルヘキサンの１／１０混合溶液でカラムクロマトグラフィーして、白色の固体相表題化合物３７０mg(収率７５％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.３４(ｓ, ３Ｈ), ３.００(ｓ, ３Ｈ), ７.１９(ｄｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.２, ２.２Ｈz), ７.７.２５(ｄｄ, ２Ｈ, ８.２, ２.２Ｈz), ７.７(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.３Ｈz), ７.８(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.３Ｈz)
ｍｐ＝１２０−１２３℃
【００７０】
実験例１１
５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾール
【化２３】
2006504756.tif 000025
５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソキサゾール５００mgをメタノール３０mlに溶かした後、ラネーニッケル２５０mg及び水酸化ナトリウム３００mgを順次加え、水素１気圧下で常温で６時間攪拌した。反応終結後、残った固体は濾過し、溶液は減圧蒸留させた。生成されたオイル相の液体を反応容器に入れた後、窒素気流下で無水ＴＨＦ１０mlを入れ、五硫化リン２２５mg及びＮａＨＣＯ３１２５mgを加えた後、常温で１２時間攪拌した。１２時間後にテトラクロロ−１, ４−ジキノロン３３０mgを加え、１２時間還流させた。反応終結後に水２０mlを入れ、酢酸エチルで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留した。得られたオイル相の液体を酢酸エチル／ノルマルヘキサンの１／１０混合溶液でカラムクロマトグラフィーして、黄色の液相表題化合物３０４mg（収率５７％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.４３(ｓ, ３Ｈ), ７.１２−７.１５(ｍ, ２Ｈ), ７.２０−７.２５(ｍ, ４Ｈ), ７.３０−７.３５(ｍ, ４Ｈ)
【００７１】
実験例１２
３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール
【化２４】
2006504756.tif 000026
前記実験例１１において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソキサゾールの代わりに、３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール５００mgを使用したことを除いては、実験例１１と同様に実施して、黄色の液相表題化合物２８９mg（収率５５％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.４３(ｓ, ３Ｈ), ７.１２−７.１５(ｍ, ２Ｈ), ７.２０−７.２５(ｍ, ４Ｈ), ７.４０−７.４８(ｍ, ３Ｈ)
【００７２】
実験例１３
３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール
【化２５】
2006504756.tif 000027
前記実験例１１において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソキサゾールの代わりに、３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール４００mgを使用したことを除いては、実験例１１と同様に実施して、黄色の液相表題化合物２３３mg（収率５５％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.４３(ｓ, ３Ｈ), ３.９０(ｓ, ３Ｈ), ６.９６(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ７.０５−７.１０(ｍ, １Ｈ), ７.３０−７.３８(ｍ, ４Ｈ), ７.４５(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz)
【００７３】
実験例１４
３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール
【化２６】
2006504756.tif 000028
前記実験例１１において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソキサゾールの代わりに、３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソキサゾール９００mgを使用したことを除いては、実験例１１と同様に実施して、黄色の液相表題化合物５７０mg（収率６０％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.４３(ｓ, ３Ｈ), ３.９５(ｓ, ３Ｈ), ７.０５−７.１５(ｍ, ３Ｈ), ７.３０−７.３８(ｍ, ４Ｈ), ７.４０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz)
【００７４】
実施例１
４−(４−フルオロフェニル)−３−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾール
【化２７】
2006504756.tif 000029
前記実験例１０の４−(４−フルオロフェニル)−３−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソキサゾール５００mgをメタノール３０mlに溶かした後、ラネーニッケル２５０mg及び水酸化ナトリウム３００mgを順次加え、水素１気圧下で常温で６時間攪拌した。反応終結後、残った固体は濾過し、溶液は減圧蒸留させた。生成されたオイル相の液体を反応容器に入れた後、窒素気流下で無水ＴＨＦ１０mlを入れ、五硫化リン２２５mg及びＮａＨＣＯ３１２５mgを加えた後、常温で１２時間攪拌した。１２時間後に２, ３, ５, ６−テトラクロロ−１, ４−ベンゾキノン３３０mgを加え、１２時間還流させた。反応終結後に水２０mlを入れ、酢酸エチルで抽出した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留した。得られたオイル相の液体を酢酸エチル／ノルマルヘキサンの１／１０混合溶液でカラムクロマトグラフィーして、黄色の液相表題化合物２３５mg（収率４５％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.３４(ｓ, ３Ｈ), ３.２０(ｓ, ３Ｈ), ７.１９(ｄｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.２, ２.２Ｈz), ７.２５(ｄｄ, ２Ｈ, ８.２, ２.２Ｈz), ７.７０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.３Ｈz), ７.８２(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.３Ｈz)
【００７５】
実施例２
４−(５−メチル−３−フェニル−イソチアゾール−４−イル)−ベンゼンスルホンアミド
【化２８】
2006504756.tif 000030
前記実験例１１の５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾール８００mgを０℃に下げた後、クロロスルホン酸５mlを徐々に加え、同一温度で２時間攪拌した。反応終結後に氷水１００mlを徐々に加え、ジクロロメタン５０mlで抽出した。アンモニア水５０mlを加え、常温で１時間激しく攪拌した。反応終結後に氷水１００mlを徐々に加え、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留した。得られたオイル相の液体を酢酸エチル／ノルマルヘキサン混合溶液で再結晶して、黄色の固体相表題化合物６３１mg（収率６０％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(３００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５０(ｓ, ３Ｈ), ７.２０−７.４５(ｍ, ９Ｈ), ７.７８(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.３Ｈz)
ｍｐ：１７３−１７５℃
【００７６】
実施例３
４−[３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミド
【化２９】
2006504756.tif 000031
前記実施例２において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１２の３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール８００mgを使用したことを除いては、実施例２と同様に実施して、黄色の固体表題化合物６３４mg（収率６４％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ−ｄ６)
２.４８(ｓ, ３Ｈ), ７.３０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.４２(ｓ, ２Ｈ), ７.５３(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.６２(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.８０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz)
ｍｐ：２１７−２２０℃
【００７７】
実施例４
４−[３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミド
【化３０】
2006504756.tif 000032
前記実施例２において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１３の３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール３００mgを使用したことを除いては、実施例２と同様に実施して、黄色の固体表題化合物３１０mg(収率７４％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ−ｄ６)
２.４８(ｓ, ３Ｈ), ３.９０(ｓ, ３Ｈ), ６.９４(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ７.４２(ｓ, ２Ｈ), ７.４６(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ７.５３(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.９５(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz)
【００７８】
実施例５
４−[３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−イソチアゾール−４−イル]−ベンゼンスルホンアミド
【化３１】
2006504756.tif 000033
前記実施例２において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１４の３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール９００mgを使用したことを除いては、実施例２と同様に実施して、黄色の固体表題化合物７２５mg（収率６６％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＤＭＳＯ−ｄ６)
２.４８(ｓ, ３Ｈ), ３.８０(ｓ, ３Ｈ), ７.３０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝７.０Ｈｚ), ７.４５−７.６０(ｍ, ６Ｈ), ８.００(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝７.０Ｈｚ)
【００７９】
実施例６
４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−３−フェニル−イソチアゾール
【化３２】
2006504756.tif 000034
実験例１１の５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾール７００mgを０℃に下げ、クロロスルホン酸５mlを徐々に加え、同一温度で２時間攪拌した。反応終結後に氷水１００mlを徐々に加え、ジクロロメタン５０mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させた。得られた液体を無水ＴＨＦ１０mlに溶かした後、ヒドラジン３mlを０℃で加えて１０分間攪拌した。ＴＨＦを減圧蒸留後にエタノール１０mlに溶かし、酢酸ナトリウム１.２g及びヨードメタン２.１gを加えた後、１２時間還流させた。反応終結後に水１００mlを加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を減圧蒸留させた。得られたオイル相の液体を酢酸エチル／ノルマルヘキサンで再結晶して、黄色の固体相表題化合物４６２mg(収得率５０％)を得た。
１Ｈ ＮＭＲ(３００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５０(ｓ, ３Ｈ), ３.１０(ｓ, ３Ｈ), ７.１５−７.２３(ｍ, ５Ｈ), ７.２７(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.７Ｈz), ７.８０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.７Ｈz)
ｍｐ：１６２−１６５℃
【００８０】
実施例７
３−(４−ブロモフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾール
【化３３】
2006504756.tif 000035
前記実施例６において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１２の３−(４−ブロモフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール６００mgを使用したことを除いては、実施例２と同様に実施して、黄色の固体相表題化合物４０７mg（収率５５％）を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５０(ｓ, ３Ｈ), ３.１２(ｓ, ３Ｈ), ７.３０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.５３(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.５Ｈz), ７.５２(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz), ７.７５(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.４Ｈz)
ｍｐ＝２００−２０５℃
【００８１】
実施例８
３−(４−メトキシフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾール
【化３４】
2006504756.tif 000036
前記実施例６において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１３の３−(４−メトキシフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール６００mgを使用したことを除いては、実施例６と同様に実施して、黄色の固体相表題化合物３８７mg(収率５０％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５０(ｓ, ３Ｈ), ３.１２(ｓ, ３Ｈ), ３.９８(ｓ, ３Ｈ), ７.００(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.９Ｈｚ), ７.３０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.９Ｈｚ), ７.６０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.６Ｈz), ７.９５(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.６Ｈz)
【００８２】
実施例９
３−(４−フルオロフェニル)−４−(４−メタンスルホニルフェニル)−５−メチル−イソチアゾール
【化３５】
2006504756.tif 000037
前記実施例６において、５−メチル−３, ４−ジフェニル−イソチアゾールの代わりに、実験例１４の３−(４−フルオロフェニル)−５−メチル−４−フェニル−イソチアゾール５００mgを使用したことを除いては、実施例６と同様に実施して、黄色の固体相表題化合物２８７mg(収率４５％)を得た。  
１Ｈ ＮＭＲ(４００ＭＨｚ, ＣＤＣｌ３)
２.５０(ｓ, ３Ｈ), ３.１２(ｓ, ３Ｈ), ７.２０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝７.０Ｈｚ), ７.４５(ｄｄ, ２Ｈ, Ｊ＝７.０, １０.２Ｈz), ７.６０(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.７Ｈz), ８.００(ｄ, ２Ｈ, Ｊ＝８.７Ｈz)
【００８３】
薬理学的実験例
シクロオキシゲナーゼ−２に対する選択的阻害活性の測定
１. 実験方法
本発明による化合物のシクロオキシゲナーゼ−２酵素に対する選択的阻害活性を薬理学的に検証するために、シクロオキシゲナーゼ−１及びシクロオキシゲナーゼ−２に対する酵素阻害作用をそれぞれ次のような方法で測定した。
【００８４】
１) Ｕ−９３７を利用したシクロオキシゲナーゼ−１の抑制効果の検索
培養されたＵ−９３７(Human lymphoma cell)(入手先：韓国細胞株銀行、寄託番号：２１５９３)を遠心分離して集めた後、１ｘＨＢＳＳ(Hank's balanced salt solution)を利用して１ｘ１０６cells／ml濃度に希釈して、１２−ウェルプレートの各ウェル当たり１mlずつ分株した。ここに、ＤＭＳＯに溶かして１μMに希釈した検索試料溶液及びＤＭＳＯを５μlずつ入れて混ぜた後、ＣＯ２培養器で３７℃で１５分間培養した。基質として使用されるアラキドン酸を１０mM濃度でエタノールに溶かして作った原液(stock solution)を、１ｘＨＢＳＳで１０倍希釈して、溶液１mMを用意した。物質を処理した各ウェルにアラキドン酸溶液１mMを１０μlずつ加えて混ぜた後、ＣＯ２培養器で３７℃で３０分間培養した。各ウェルの細胞溶液を遠心分離試験管に集めた後、４℃、１０, ０００rpmで５分間遠心分離した。遠心分離により集められた細胞と分離された上澄み液中に存在するＰＧＥ２の濃度を、モノクローナルキット(Cayman Chemicals社)を利用して定量し、実験物質処理群の濃度をＤＭＳＯ群の濃度と比較して各物質のＰＧＥ２生成抑制率を求めることにより、シクロオキシゲナーゼ−１酵素に対する物質の抑制効果を求めた。
【００８５】
２) Ｒａｗ２６４.７細胞株を利用したシクロオキシゲナーゼ−２抑制効果の検索
Ｒａｗ２６４.７細胞(入手先：韓国細胞株銀行、寄託番号：４００７１)を１２ウェルプレートの各ウェル当たり２ｘ１０６個ずつ接種した後、アスピリン２５０μMを処置し、３７℃で２時間培養した。新しい培地に取り替えた後、それぞれの検索試料(１０nM濃度)を処理して３０分間培養した。ここに、各ウェル当たりインターフェロンγ(１００ユニット／ml)及びリポ多糖(Lipopolysaccharide(LPS)、１００ng／ml)を処置した後、１８時間培養した。その後、培地を他の試験管に移した後、ＥＩＡキット(Cayman Chemicals)を利用してＰＧＥ２定量をした。
【００８６】
２. 実験結果
実験結果を下記表１に示す。  
％抑制＝(インターフェロンγ及びＬＰＳに対する補正されたＰＧＥ２の濃度−検索試料に対する補正されたＰＧＥ２の濃度)／(インターフェロンγ及びＬＰＳに対する補正されたＰＧＥ２の濃度)×１００
【表１】
2006504756.tif 000038
【００８７】
３. 評価
前記シクロオキシゲナーゼ−１及びシクロオキシゲナーゼ−２の阻害に関する試験管内(in vitro)の実験結果を考察してみると次のとおりである。  
前記実験結果によれば、実施例１乃至９において、シクロオキシゲナーゼ−１の抑制％に対するシクロオキシゲナーゼ−２の抑制％の比率が、基準物質(セレコキシブ)より顕著に優れていることが分かる。これは、シクロオキシゲナーゼ−１に対するシクロオキシゲナーゼ−２の選択的抑制効果が基準物質より優れていることを示す。
【国際調査報告】
2006504756.tif 000047
2006504756.tif 000048
2006504756.tif 000049
2006504756.tif 000050
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2006504756.tif 000052