(57)【要約】疾患を患っている哺乳動物に、ＸＩＩＩ因子と併せて治療的有効量のインターフェロンβを投与することによって、炎症性腸疾患を治療する方法が開示される。ＩＢＤ（炎症性腸疾患）は潰瘍性大腸炎かクローン病の何れかでありうる。使用されるＸＩＩＩ因子は組換え体であっても非組換え体であってもよい。使用されるインターフェロンβは、天然に生じるインターフェロンβ、インターフェロンβ-１ａ又はインターフェロンβ-１ｂでありうる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＸＩＩＩ因子と併せて治療的有効量のインターフェロンβを投与することを含んでなる、哺乳動物における炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を治療する方法。
【請求項２】
ＸＩＩＩ因子が組換えＸＩＩＩ因子である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＢＤが潰瘍性大腸炎である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ＩＢＤがクローン病である請求項１に記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物が、スルファサラジン、オルサラジン、メサラミン及びアズルフィジンを含むサリチル酸塩、コルチコステロイド、アザチオプリン及び６-メルカプトプリンのような免疫抑制剤、及び腫瘍壊死因子に対する抗体からなる群から選択される薬剤で更に治療される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
インターフェロンβがインターフェロンβ-１ａである請求項１に記載の方法。
【請求項７】
インターフェロンβがインターフェロンβ-１ｂである請求項１に記載の方法。
【請求項８】
哺乳動物がヒトである請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ＸＩＩＩ因子がインターフェロンβと同時に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ＸＩＩＩ因子がインターフェロンβの前に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ＸＩＩＩ因子がインターフェロンβの後に投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
ＸＩＩＩ因子が静脈内投与される請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
ＸＩＩＩ因子が内腔まで又は内腔に投与される請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の背景
ここに引用される文献全ての教唆の全体を出典明示によりここに取り込む。
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）は不明瞭な由来の慢性的で再発性の腸の炎症として定義される。ＩＢＤは二種の別個の疾患であるクローン病と潰瘍性大腸炎（ＩＣ）を意味する。これら疾患は双方とも腸内における炎症性応答の抑制できない活性化から生じるものと思われる。この炎症性カスケードは炎症誘発性サイトカインの作用とリンパ球分画の選択的活性化を通じて永続化されると考えられる。ＩＢＤの患者では、腸の内層の潰瘍と炎症が腹痛、下痢、及び直腸出血の症状を生じる。潰瘍性大腸炎は大腸で生じるが、クローン病では、疾患は胃腸（ＧＩ）管全体並びに小腸及び大腸を含みうる。殆どの患者では、ＩＢＤは何ヶ月から何年も続く症状を示す慢性病である。若い成人に最も一般的であるが、何歳でも生じうる。ＩＢＤは世界中に見られるが工業国において最も一般的である。
【０００２】
ＩＢＤの臨床的症状は断続的な直腸出血、急激な腹痛、体重減少及び下痢である。ＩＢＤの診断は臨床的症状とバリウム注腸の使用に基づくが、直接的な可視化（Ｓ状結腸鏡検査法又は結腸内視術）が最も精度の高い検査法である。遅延性ＩＢＤは大腸癌の危険因子であり、ＩＢＤの治療は医薬と手術を含みうる。
【０００３】
直腸に疾患（直腸炎）を有するだけのＵＣ患者もいる。直腸と隣接する左結腸に限られるＵＣ患者もいる（直腸Ｓ状結腸炎）。更に他の患者は結腸全体のＵＣ患者である。ＵＣの症状は一般的に疾患が広域になるほど（結腸のより多くの部分が疾患に罹っているほど）深刻になる。直腸に限られた疾患（直腸炎）又は左結腸の端に限られたＵＣ（直腸Ｓ状結腸炎）の患者の予後は大腸全体のＵＣのそれよりも良好である。経口薬又は浣腸を用いた簡単な定期的治療で十分であろう。より広がった疾患の場合には、炎症性腸からの失血が貧血を生じ得、鉄分補給又は輸血による治療さえも必要となる場合がある。希に、炎症が非常に深刻になると、大腸が大きなサイズに急に膨張する場合がある。この状態は中毒性巨大結腸症と呼ばれる。中毒性巨大結腸症の患者は極度に状態が悪く、熱、腹痛、膨張、脱水症状、栄養失調を伴う。患者の状態が医薬では直ぐには改善されない場合には、大腸破裂を避けるために通常手術が必要となる。
【０００４】
クローン病は胃腸管の全ての領域で生じうる。この疾患では、炎症と線維症による腸閉塞が多くの患者で起こりうる。肉芽腫及び瘻孔形成はクローン病のよく起こる合併症である。疾患の進行の結果は、点滴注入、外科手術及び結腸瘻造設術を含む。大腸癌は慢性ＩＢＤの既知の合併症である。長年にわたって広範なＩＢＤに罹っている患者では益々一般的である。癌のリスクはＩＢＤの８から１０年後に顕著に上昇し始める。
【０００５】
ＩＢＤは薬によって治療することができる。ＩＢＤを治療するために最も一般的に使用される医薬はサリチル酸塩のような抗炎症薬である。サリチル酸塩の製剤は軽度のものから中程度の疾患までを治療するのに効果的であった。それらはまた医薬を長期にわたって服用する場合、疾患発赤の頻度を減少させることができる。サリチル酸塩の例には、スルファサラジン、オルサラジン、メサラミン及びアズルフィジンが含まれる。これらの医薬の全てが最大の治療効果を達成するには高用量で経口的に投与される。これらの医薬に副作用がないわけではない。アズルフィジンは高用量で服用されると、胃のむかつきを生じる場合があり、軽い腎炎の希な事例がある種のサリチル酸塩製剤の場合に報告されている。コルチコステロイドはＩＢＤの治療においてサリチル酸塩よりもより強力で即効性があるが、潜在的に深刻な副作用のため、より重い疾患の患者へのコルチコステロイドの使用が制限される。コルチコステロイドの副作用は通常は長期使用の場合に生じる。副作用には、骨や皮膚の薄化、感染、糖尿病、筋肉疲労、顔の円形化、精神障害が、また希な場合には股関節破壊が含まれる。
【０００６】
サリチル酸塩又はコルチコステロイドに応答しないＩＢＤ患者では、免疫系を抑制する医薬が使用される。免疫抑制剤の例には、アザチオプリン及び６-メルカプトプリンが含まれる。この状況において使用される免疫抑制剤はＩＢＤを調節するのに役立ち、コルチコステロイドの漸次的な減少又は除去を可能にする。しかし、免疫抑制剤は患者を免疫無防備状態にし多くの他の疾患に罹りやすくする。
ＩＢＤを治療するための現在の治療法は明らかに不十分であった。従って、ＩＢＤを治療する新規のより効果的な治療法が必要とされている。
【０００７】
発明の説明
本発明は、炎症性腸疾患の患者に、ＸＩＩＩ因子と併せて治療的有効量のインターフェロンβを投与することを含んでなる、炎症性腸疾患を治療する方法を提供することによって、この必要性を満たす。
【０００８】
定義
「ＩＢＤの症状」という用語はここでは検知される症状、例えば腹痛、下痢、直腸出血、体重減少、熱、食欲不振、及び他の更に深刻な合併症、例えば脱水症、貧血及び栄養失調症として定義される。多くのこのような症状は定量分析にかけられる（例えば体重減少、熱、貧血等々）。幾つかの症状は血液検査（例えば貧血）又は血液の存在を検出する検査（例えば直腸出血）から即座に決定される。「上記症状が軽減される」という語句は、限定するものではないが疾患からの回復速度（例えば体重上昇割合）への検知可能なインパクトを含む、検知可能な症状の定性的又は定量的減少を意味する。
【０００９】
「ＩＢＤの危険性」という語句は、ＩＢＤに対して危険性が増大した世界の人口の一部を包含していると定義される。ＩＢＤは若い成人に最も一般的に見出されるが如何なる年齢でも生じうる。それは世界中で生じるが、合衆国、英国、及び北欧で最も一般的である。それは特にユダヤの家系の人々に一般的である。この症状の頻度の増加は最近は発展途上国に観察される。
「内腔まで又は内腔に投与される」という用語は、ここでは、腸の内部の空間までの送達として定義される。かかる送達は様々なビヒクルで（例えば錠剤、坐薬等々）様々な経路によって（例えば経口、直腸等々）達成することができる。
【００１０】
フィブリン安定因子とも知られているＸＩＩＩ因子は約２０ｍｇ／ｍｌの濃度で血漿中で循環している。そのタンパク質は２つのＡサブユニットと２つのＢサブユニットからなるテトラマーとして血漿中に存在する。各サブユニットは８３０００Ｄａの分子量を有し、完全なタンパク質はおよそ３３００００Ｄａの分子量を有している。ＸＩＩＩ因子は異なったフィブリンストランドのγ-グルタミル及びε-リジル間の架橋を触媒する。ＸＩＩＩ因子の触媒活性はＡサブユニットにある。Ｂサブユニットは血漿ＸＩＩＩ因子中においてＡサブユニットのキャリアとして作用する。組換えＸＩＩＩ因子は欧州特許第０２６８７７２Ｂ１号に記載された方法に従って製造することができる。血漿中のＸＩＩＩ因子のレベルは、ＦＩＢＲＯＧＡＭＭＩＮ(登録商標)（Aventis Corp.）と呼ばれるヒト血漿から誘導された、又はヒト胎盤から誘導されたＸＩＩＩ因子濃縮物を投与することによって、又は組換えＸＩＩＩ因子の投与によって、増大させることもまたできる。
【００１１】
ＸＩＩＩ因子を含有する製薬組成物は、治療用タンパク質を製薬的に許容可能な担体と混合して組み合わせる、製薬的に有用な組成物を調製するための既知の方法に従って製剤化することができる。組成物は、その投与がレシピエント患者によって許容され得る場合に「製薬的に許容可能な担体」であると言われる。ＸＩＩＩ因子の好適な製薬組成物は１ｍＭのＥＤＴＡ、１０ｍＭのグリシン、２％のスクロースを水中に含むであろう。他の製剤は２０ｍＭのヒスチジン、３ｗｔ／ｖｏｌ％のスクロース、２ｍＭのグリシン及び０．０１ｗｔ／ｖｏｌ％のポリソルベート、ｐＨ８を含むＸＩＩＩ因子組成物であろう。ＸＩＩＩ因子の濃度は好ましくは１−１０ｍｇ／ｍＬ、より好ましくは約５ｍｇ／ｍＬとしなければならない。
他の好適な担体は当業者によく知られている。例えばGennaro編, Remington's Pharmaceutical Science, １９版（Mack Publishing Company 1995）を参照のこと。
【００１２】
ＸＩＩＩ因子は、炎症性腸疾患を治療するために、静脈内、筋肉内又は皮下、浣腸又は洗浄による直腸的に投与することができる。個体中のＸＩＩＩ因子のレベルは、ＢＥＲＩＣＨＲＯＭ（登録商標）Ｆ ＸＩＩＩアッセイ（Dade Behring Marburg GmbH, Marburg, Germany）のような当該分野でよく知られたアッセイによって決定することができる。正常な成人はｋｇ体重当たり平均約４５ｍｌの血漿を有している。１リットルの血液は１０００単位（Ｕ）のＸＩＩＩ因子を持っている。０．４５Ｕ／ｋｇの用量は正常の場合に比較して約１％ＸＩＩＩ因子のレベルを上昇させるであろう。１単位のＸＩＩＩ因子は約１０マイクログラム（ｍｃｇ）の組換えＸＩＩＩ因子であり、二量体化された「Ａ」サブユニットのみを含んでいる。よって、ＸＩＩＩ因子のレベルを１％上昇させるために、個体のキログラム体重当たり約４．５ｍｃｇのＡ２サブユニットを投与するであろう。それで正常より３０％のレベルを上昇させるには、１３．５Ｕ／ｋｇを投与するであろう。７５ｋｇの個体では、これは約１０１２．５Ｕであろう。ある患者はＸＩＩＩ因子の消失を含む消費性凝固障害でありうる。そのような場合には、より高い投薬量（例えば１−２Ｕ／ｋｇ-％）又は複数回投薬量（例えば１−２Ｕ／ｋｇ-％-日）のＸＩＩＩ因子が必要となろう。
【００１３】
本発明によれば、ＸＩＩＩ因子は炎症性腸疾患を治療するためにインターフェロンβと併用して投与される。インターフェロンβは現在は二種の形態で市販されている。インターフェロンβ-１ａのＡＶＯＮＥＸ（登録商標）はバイオジェン・インク, Cambridge, MAによって製造され、インターフェロン-１ｂのＢＥＴＡＳＥＲＯＮはベルレックス・ラボラトリーズ, Richmond, CAによって製造されている。インターフェロンβ-１ａのＡＶＯＮＥＸ（登録商標）は毎週、一患者当たり３０ｍｃｇから７５ｍｃｇの範囲の用量まで投与できる。しかしながら、至適投薬用量は各個体で変わりうる。ＸＩＩＩ因子はインターフェロンβの投与と同時、投与前又は投与後に投与することができる。インターフェロンβ-１ａは組換えＤＮＡ技術によって製造される。それはおよそ２２．５ｋＤの予想分子量を持つ１６６アミノ酸の糖タンパク質である。それは、ヒトインターフェロンβ遺伝子を導入したチャイニーズハムスター卵巣細胞によって生産される。
世界保健機構（ＷＨＯ）の自然のインターフェロンβ規格のインターフェロン第二国際規格を用いると、インターフェロンβ-１ａ（ＡＶＯＮＥＸ（登録商標））はｍｇ当たりおよそ２億の抗ウイルス活性国際単位（ＩＵ）の特異的活性を有している。
【００１４】
現在市販されているインターフェロンβの他の形態はインターフェロンβ-１ｂ、ＢＥＳＴＡＳＥＲＯＮ（登録商標）である。インターフェロンβ-１ｂは組換えＤＮＡ技術によってもまた生産される精製され、滅菌、凍結乾燥タンパク質産物である。インターフェロンβ-１ｂは、ヒトインターフェロンβ ｓｅｒ１７の遺伝子を含む遺伝子操作プラスミドを有する大腸菌株の細菌発酵によって製造されている。天然遺伝子がヒト線維芽細胞から得られ、１７位に見出されるシステイン残基をセリンに置換する形で改変された。インターフェロンβ-１ｂは１６５のアミノ酸とおよそ１８．５ｋＤの分子量を有している。
インターフェロンβ-１ｂの特異的活性は３２００万ＩＵ／ｍｇである。インターフェロンβ-１ｂの推奨投薬用量は一日おきに０．０５から０．２５ｍｇである。好ましい投薬容量は症状が改善するまで一日おきに０．２５ｍｇ又はそれ以上である。インターフェロンβの投薬用量は、インフルエンザに似た症状のような不快な副作用が出るまで増加させうる。
【００１５】
本発明の方法を実施する場合、ＸＩＩＩ因子とインターフェロンβを、そのような治療を必要とする様々な哺乳動物種、例えばサル、ネコ、イヌ、ヒト等々に投与することができる。投与の正確な経路、投薬形態、投与される量及び投与方法は当業者により容易に決定することができる。
ＸＩＩＩ因子とインターフェロンβは、スルファサラジン、オルサラジン、メサラミン及びアズルフィジンのようなサリチル酸塩、コルチコステロイド、アザチオプリン及び６-メルカプトプリンのような免疫抑制剤、及び腫瘍壊死因子に対する抗体又は腫瘍壊死因子の可溶型レセプターを含む、炎症性腸疾患を治療するために過去に用いられてきている他の薬剤治療薬と併せて投与することがまたできる。
【００１６】
本発明の方法を評価するために使用することができる慢性潰瘍性大腸炎を部分的に模倣することができる幾つかの動物モデルがある。最も広く用いられているモデルは２,４,６-トリニトロベンスルホン酸／エタノール（ＴＮＢＳ）誘導大腸炎モデルであり、大腸に慢性的炎症と潰瘍形成を誘導する。ＴＮＢＳが直腸内浸潤を介して感受性マウスの大腸中に導入されると、それが大腸粘膜にＴ細胞媒介免疫応答を誘導し、この場合、大腸の壁全体に渡るＴ細胞とマクロファージの密な浸潤を特徴とする大きな粘膜炎症を生じる。更に、この組織病理学的画像には、進行性体重減少（消耗）、出血性下痢、直腸脱、及び大腸壁肥厚化を伴う（Neurath等, Intern. Rev. Immunol. 19:51-62, 2000）。
【００１７】
他の大腸炎モデルはデキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）を使用し、これが出血性下痢、体重減少、大腸短縮化及び好中球浸潤を伴う潰瘍形成によって明らかになる急性大腸炎を誘導する。ＤＳＳ誘導大腸炎は、固有層中への炎症性細胞の浸潤、リンパ過形成、局所腺窩損傷及び上皮潰瘍形成によって組織学的に特徴付けられる。これらの変化は内皮に対するＤＳＳの毒性作用のために、固有層細胞のファゴサイトーシス及びＴＮＦ-α及びＩＦＮ-γの産生により発現すると考えられる。ＤＳＳは、ＳＣＩＤマウスのようなＴ細胞欠損動物において観察されるのでＴ細胞独立モデルと見なされる。
【国際調査報告】
2006501242.tif 000002
2006501242.tif 000003
2006501242.tif 000004