(57)【要約】選択Ａ３アデノシン受容体のアンタゴニスト活性を有する下記の式2006510574.tif 000042で表される化合物（式中、Ｒ、Ｒ２、Ｒ３及びＡの意味は明細書中に示されている。）を提供する。これらの化合物は医薬組成物としてＡ３受容体の過剰な活性による疾患を治療するのに用いることができ、また、Ａ３受容体への他の化合物との相対的な結合を判断する診断剤にも適用され得る。この化合物は、例えば、蛍光、あるいは放射性標識で標識化され、この標識化合物を用いて生体内、又は生体外で高濃度のアデノシンＡ３受容体を持つ腫瘍細胞の有無を決定するのに使用され得る。
2006510574.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式、
【化１】
2006510574.tif 000036
（式中、
Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎ−Ｒ１、−ＳＯｎ−ＳＲ１、又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２ であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環基、低級アルケニル、低級アルカノイル、又は、窒素原子に結合している場合には、窒素原子と一緒になってアセチジン環若しくは、一個又はそれ以上のヘテロ原子を持つ５員〜６員の複素環を形成してもよく；
Ｒ２は水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、又はアリールであり；
Ｒ３は、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンゾピロール、ベンゾチオフェンであり、これらの基はヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルキリアリール、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロキシ、アミノアシルオキシ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２ −ヘテロアリール及びトリハロメチルからなる群から選択された一個又はそれ以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
ｎは、１又は２である。）
で表される化合物、及び、その薬学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−ＳＯｎ−Ｒ１ 又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり、ＸがＯ又はＳである請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が、フランである請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、Ｏである請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ａが、トリアゾロ環である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ａが、ピラゾロ環である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
一個以上のヘテロ原子を有する５員〜６員の複素環における、ヘテロ原子が、Ｎ、Ｏ、又はＳである請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
哺乳動物における、アデノシンＡ３受容体を調節する医薬を調製するための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
アデノシンＡ３受容体の調節が、高血圧、炎症、肥満細胞脱顆粒、及び心臓低酸素症の軽減、並びに脳虚血の保護である請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−ＳＯｎ−Ｒ１、又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり、ＸがＯ又はＳである請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
Ｒ１が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
Ｘが、Ｏである請求項１１に記載の使用。
【請求項１６】
Ａが、ピラゾロ環である請求項１１に記載の使用。
【請求項１７】
Ａが、トリアゾロ環である請求項１１に記載の使用。
【請求項１８】
アデノシンＡ３受容体の調節が、心臓低酸素症の軽減、又は脳虚血の保護である請求項１１に記載の使用。
【請求項１９】
アレルギー性鼻炎、アレルギー性花粉症、ツタウルシによる反応、じんましん、強皮症、関節炎、炎症性腸疾患、及びぜんそくからなる群から選択されたアレルギー性疾患の治療に用いる医薬を調製するための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項２０】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−ＳＯｎ−Ｒ１、又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり、ＸがＯ又はＳである請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
Ｒ１が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
Ｘが、Ｏである請求項１９に記載の使用。
【請求項２４】
Ａが、ピラゾロ環である請求項１９に記載の使用。
【請求項２５】
Ａが、トリアゾロ環である請求項１９に記載の使用。
【請求項２６】
アデノシンＡ３受容体の調節が、白血病、及びリンパ種からなる群から選択された、アデノシンＡ３受容体を高濃度で含有する癌の治療である請求項１０に記載の使用。
【請求項２７】
Ｒが、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−ＳＯｎ−Ｒ１、又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり、ＸがＯ又はＳである請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
Ｒ１が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項２６に記載の使用。
【請求項２９】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項２６に記載の使用。
【請求項３０】
Ｘが、Ｏである請求項２６に記載の使用。
【請求項３１】
Ａが、ピラゾロ環である請求項２６に記載の使用。
【請求項３２】
Ａが、トリアゾロ環である請求項２６に記載の使用。
【請求項３３】
下記の一般式、
【化２】
2006510574.tif 000037
（式中、Ａはイミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり；
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、又はアリールであり；
Ｒ３は、フランであり；及び
Ｒ４は、水素、アルキル、アミノ、置換されたアルキル、アルキルで置換されたアミノ、アルキルでジ−置換されたアミノ、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたへテルアリール、複素環式基、アリール、置換されたアリール、スルホニル、又は置換されたスルホニルである。）
で表される化合物、及びその薬学的に許容される塩。
【請求項３４】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
Ａが、トリアゾロ環である請求項３３に記載の化合物。
【請求項３６】
Ａが、ピラゾロ環である請求項３３に記載の化合物。
【請求項３７】
哺乳動物における、アデノシンＡ３受容体を調節する医薬を調製するための請求項３３に記載の化合物の使用。
【請求項３８】
アデノシンＡ３受容体の調節が、高血圧、炎症、肥満細胞脱顆粒、及び心臓低酸素症の軽減、並びに脳虚血の保護である請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
Ａが、ピラゾロ環である請求項３８に記載の使用。
【請求項４１】
Ａが、トリアゾロ環である請求項３８に記載の使用。
【請求項４２】
アデノシンＡ３受容体の調節が、心臓低酸素症の軽減、又は脳虚血の保護である請求項３８に記載の使用。
【請求項４３】
アデノシンＡ３受容体の調節が、白血病、及びリンパ種からなる群から選択された、アデノシンＡ３受容体を高濃度で含有する癌の治療である請求項３７に記載の使用。
【請求項４４】
Ｒ２が、水素、アルキル、アルケニル、及びアリールからなる群から選ばれた請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
Ａが、ピラゾロ環である請求項４３に記載の使用。
【請求項４６】
Ａが、トリアゾロ環である請求項４３に記載の使用。
【請求項４７】
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル）アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−e]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（３−クロロフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[（ベンジル）カルボニル]アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
５−[（ベンジル）カルボニル]アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
Ｎ−[４−（ジエチルアミノ）フェニル]−Ｎ´−[２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ][１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル]尿素、
Ｎ−[８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ][１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル]−Ｎ´−[４−（ジメチルアミノ）フェニル]尿素塩酸塩、
Ｎ−[８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ][１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル]−Ｎ´−[４−（ジメチルアミノ）フェニル]尿素塩酸塩、
Ｎ−（２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ］[１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル）−Ｎ´−[４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル]尿素、
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ］[１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル］−Ｎ´−{４−[４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル]−フェニル}尿素、
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ］[１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル］−Ｎ´−ピリジン−４−イル尿素、
Ｎ−[２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ[４，３−ｅ］[１，２，４]トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン−５−イル］−Ｎ´−ピリジン−４−イル尿素塩酸塩、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、及び、
５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４，３−ｅ]−１，２，４−トリアゾロ[１，５−ｃ]ピリミジン、
からなる化合物の群から選ばれた化合物。
【請求項４８】
哺乳動物における、アデノシンＡ３受容体を調節する医薬を調製するための請求項４７に記載の化合物の使用。
【請求項４９】
アデノシンＡ３受容体の調節が、高血圧、炎症、肥満細胞脱顆粒、及び心臓低酸素症の軽減、並びに脳虚血の保護である請求項４８に記載の使用。
【請求項５０】
アデノシンＡ３受容体の調節が、心臓低酸素症の軽減、又は脳虚血の保護である請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
アデノシンＡ３受容体の調節が、アレルギー性鼻炎、アレルギー性花粉症、ツタウルシによる反応、じんましん、強皮症、関節炎、炎症性腸疾患、及びぜんそくからなる群から選択されたアレルギー性疾患となるアレルギー応答の軽減である請求項４８に記載の使用。
【請求項５２】
アデノシンＡ３受容体の調節が、白血病、及びリンパ種からなる群から選択された、アデノシンＡ３受容体を高濃度で含有する癌の治療である請求項４８に記載の使用。
【請求項５３】
下記の一般式、
【化３】
2006510574.tif 000038
（式中、
Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又は、トリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎＲ１、−ＳＯｎＳＲ１、又は、ＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環、低級アルケニル、低級アルカノイルであり、又は、窒素原子と結合している場合には、窒素原子と一緒になってアゼチジン環若しくは、一個又はそれ以上のヘテロ原子をもつ５〜６員の複素環を形成してもよく；
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、アリール、又は置換されたアリールであり；
Ｒ３は、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンゾピロール、ベンゾチオフェンであり、これらの基はヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリール、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルからなる群から選択された一個又はそれ以上の置換基で置換されてもよく；
ＸはＯ、Ｓ、又は、ＮＲ１であり；
ｎは、１又は２であり；
その薬学的に許容される塩であり；
式中の水素原子の中の１つ以上が放射性同位体である）
で表される放射性標識化合物。
【請求項５４】
患者の中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５３に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）放射性標識の検出。
からなる請求項５３に記載の化合物の使用。
【請求項５５】
細胞サンプル中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）細胞培地における細胞の懸濁液の調製、
ｂ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５３に記載の化合物の細胞への投与、
ｃ）化合物の腫瘍細胞へ結合、及び、
ｄ）放射性標識の検出。
からなる請求項５３に記載の化合物の使用。
【請求項５６】
腫瘍の外科的切除後の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ残留腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）腫瘍の外科的切除前、切除後又は切除中の、化合物を残留腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５３に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の残留腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）放射性標識の検出
からなる請求項５３に記載の化合物の使用。
【請求項５７】
下記の一般式、
【化４】
2006510574.tif 000039
（式中、
Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又は、トリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎＲ１、−ＳＯｎＳＲ１、又は、−ＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環、低級アルケニル、低級アルカノイルであり、又は、窒素原子と結合している場合には、窒素原子と一緒になってアゼチジン環若しくは、一個又はそれ以上のヘテロ原子を有する５〜６員の複素環を形成してもよく；
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、アリール、又は置換されたアリールであり；
Ｒ３は、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンゾピロール、ベンゾチオフェンであり、これらの基はヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリール、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルからなる群から選択された一個又はそれ以上の置換基で置換されてもよく；
ＸはＯ、Ｓ、又は、ＮＲ１であり；
ｎは、１又は２であり；
その薬学的に許容される塩であり；
式中の１４Ｃは、炭素原子の放射性同位体である）
で表される放射性標識化合物。
【請求項５８】
患者の中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５７に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）放射性標識の検出
からなる請求項５７に記載の化合物の使用。
【請求項５９】
細胞サンプル中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）細胞培地における細胞の懸濁液の調製、
ｂ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５７に記載の化合物の細胞への投与、
ｃ）化合物の腫瘍細胞へ結合、及び、
ｄ）放射性標識の検出
からなる請求項５７に記載の化合物の使用。
【請求項６０】
腫瘍の外科的切除後の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ残留腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）腫瘍の外科的切除前、切除後又は切除中の、化合物を残留腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な放射性標識を有する、請求項５７に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の残留腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）放射性標識の検出
からなる請求項５７に記載の化合物の使用。
【請求項６１】
下記の一般式、
【化５】
2006510574.tif 000040
（式中、
Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又は、トリアゾールであり；
Ｒは、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎＲ１、−ＳＯｎＳＲ１、又は、−ＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２であり；
Ｒ１は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環、低級アルケニル、低級アルカノイルであり、又は、窒素原子と結合している場合には、窒素原子と一緒になってアゼチジン環若しくは、一個又はそれ以上のヘテロ原子を有する５〜６員の複素環を形成してもよく；
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、又はアリールであり；
Ｒ３は、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンゾピロール、ベンゾチオフェンであり、これらの基はヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリール、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルからなる基から選択された一個又はそれ以上の置換基で置換されてもよく；
ＸはＯ、Ｓ、又は、ＮＲ１であり；
ｎは、１又は２であり；
その薬学的に許容される塩であり；
さらに１つ以上の蛍光標識を含み；
式中の蛍光標識は、フルオレセイン、５，６−カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、２−［Ｎ−（７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾール−４−イル）アミノ］−２−デオキシ−Ｄ−グルコース、クマリン、塩化ダンシル、及び、ローダミンからなる蛍光標識基から選択されたものである）
で表される蛍光標識化合物。
【請求項６２】
患者の中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な蛍光標識を有する、請求項６１に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）蛍光標識の検出
からなる請求項６１に記載の化合物の使用。
【請求項６３】
細胞サンプル中の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）細胞培地における細胞の懸濁液の調製、
ｂ）化合物を腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な蛍光標識を含む、請求項６１に記載の化合物の細胞への投与、
ｃ）化合物の腫瘍細胞へ結合、及び、
ｄ）蛍光標識の検出
からなる請求項６１に記載の化合物の使用。
【請求項６４】
腫瘍の外科的切除後の高濃度のアデノシンＡ３受容体をもつ残留腫瘍細胞の有無を決定するための、
ａ）腫瘍の外科的切除前、切除後又は切除中の、化合物を残留腫瘍細胞へ結合させた後に検出可能な蛍光標識を有する、請求項６１に記載の化合物の患者への投与、
ｂ）化合物の残留腫瘍細胞への結合、及び、
ｃ）蛍光標識の検出
からなる請求項６１に記載の化合物の使用。
【請求項６５】
下記の一般式、
【化６】
2006510574.tif 000041
（式中、
Ａは、イミダゾール、ピラゾール、又は、トリアゾールであり；
Ｒ２は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール、又は、アリールであり；
Ｒ３は、フランであり；及び
Ｒ６は、ヘテロアリール又は置換されたヘテロアリールである）
で表される化合物、及び、その薬学的に許容される塩。
【請求項６６】
Ｒ２が水素、アルキル、アルケニル、及び、アリールから選択された、請求項６５に記載の化合物。
【請求項６７】
Ａがトリアゾロ環である、請求項６５に記載の化合物。
【請求項６８】
Ａがピラゾロ環である、請求項６５に記載の化合物。
【請求項６９】
ほ乳類における、アデノシンＡ３受容体を調節する医薬を調製するための、請求項６５に記載の化合物の使用。
【請求項７０】
Ｒ２が水素、アルキル、アルケニル、及び、アリールから選択された、請求項６９に記載の化合物の使用。
【請求項７１】
Ａがピラゾロ環である、請求項６９に記載の使用。
【請求項７２】
Ａがトリアゾロ環である、請求項６９に記載の使用。
【請求項７３】
アデノシンＡ３受容体の調節により、高血圧、炎症、肥満細胞脱顆粒、及び、心臓低酸素症の減少、及び、脳虚血の予防のための、請求項６９に記載の使用。
【請求項７４】
アデノシンＡ３受容体の調節により、心臓低酸素症の減少、及び、脳虚血の予防のための、請求項７３に記載の使用。
【請求項７５】
アデノシンＡ３受容体の調節により、アレルギー性鼻炎、アレルギー性花粉症、ツタウルシによる反応、じんましん、強皮症、関節炎、炎症性腸疾患、及び、ぜんそくからなるグループから選択されたアレルギー性疾患による、アレルギー反応の軽減のための、請求項６９に記載の使用。
【請求項７６】
アデノシンＡ３受容体の調節により、白血病及びリンパ腫から選択された、高濃度のアデノシンＡ３受容体を有する癌疾患の治療のための、請求項６９に記載の使用。
【請求項７７】
アデノシンＡ３受容体の調節により、白血病及びリンパ腫から選択された、高濃度のアデノシンＡ３受容体を有する癌疾患の治療のための、請求項６９に記載の使用。
【請求項７８】
Ｒ２が水素、アルキル、アルケニル、及び、アリールから選択された、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
Ａがピラゾロ環である、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
Ａがトリアゾロ環である、請求項７７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許の相互参照
本出願は、１９９８年９月１６日に出願された米国特許出願０９／１５４, ４３５の一部継続出願である１９９９年８月２３日に出願された米国特許出願０９／３７９,３００の更なる一部継続出願である。
【０００２】
背景技術
本発明は、アデノシンＡ３受容体のモジュレーターとしてのピラゾロ−トリアゾロ−ピリミジン、トリアゾロ−トリアゾロ−ピリミジン、及びイミダゾロ−トリアゾロ−ピリミジン誘導体及びその医薬分野における用途に関するものである。
【背景技術】
【０００３】
アデノシン受容体は、薬理学的な特徴によりＡ１、Ａ２、Ａ３の三つの大きな部類に分類されている。Ａ１受容体はＧｉ蛋白質を通じてアデニル酸シクラーゼの阻害剤と結合し、ホスホイノミトールのツモーバー（tumover)の阻害または、促進、及びイオンチャンネルの活性化を含むセカンドメッセンジャーシステムへ結合するとされている。Ａ２受容体は、さらに二つのサブタイプであるＡ２ＡとＡ２Ｂに分類され、Ａ２Ａは、アデノシンアゴニストによりアデニレートシクラーゼを高親和性で活性化し、Ａ２Ｂはそれを低親和性で活性化する。Ａ３受容体の配列はラットの精巣のｃＤＮＡライブラリーから初めて同定され、
その受容体の配列は、後にラットの脳のｃＤＮＡライブラリーからの他のＧ−蛋白質結合受容体との相同性に基づいてクローン化され、新規な機能を有するアデノシン受容体と対応して示された。
【０００４】
Ａ３の受容体の発見は、プリン体の領域における新しい治療法の展望を築いた。特に、Ａ３受容体は、炎症、低血圧及び肥満細胞の脱顆粒のプロセスを仲介する。この受容体が、中枢神経系にも作用することは明らかである。Ａ３の選択的なアゴニストであるＩＢ−ＭＥＣＡは、行動性鬱を引き起こし、これを長期投与することにより、脳虚血を防ぐことができる。高濃度のＡ３の選択的なアゴニストは、ＨＬ−６０ヒト白血病細胞のアポプトーシスを誘発することが発見されている。これらのことやその他の研究結果によれば、Ａ３受容体は前途有望な医薬における対象であるとされている。Ａ３受容体に対する選択的なアンタゴニストは、有用な抗炎症薬となり、脳における抗虚血剤にもなる可能性が有ることが見いだされている。
【０００５】
）
肥満細胞の脱顆粒は、心筋の再灌流傷害、超過敏反応（喘息、アレルギー性鼻炎、じんましん）、虚血性大腸炎、自己免疫炎症及びアトピー性皮膚炎の要因である。選択的なＡ３アデノシン受容体アンタゴニストは、肥満細胞の脱顆粒が原因となる疾患及び病的な作用の予防や治療に使用され得る。
例えば、Ａ３アンタゴニストは抗喘息、抗うつ剤、不整脈治療剤、腎臓保護剤、抗パーキンソン剤及び認識増強剤（cognitive enhancing drugs)として開発されつつある。
【０００６】
膵臓癌、大腸癌、乳癌、肺ガン及びヒト悪性黒色腫などのヒトの癌の多くにおいてＡ３受容体があることが更なる研究によってわかっている。驚くことに、Ａ３受容体は、正常で健康な組織に比べ癌細胞により高濃度で存在しているということが発見されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
Ａ３アゴニストのアプトーシス誘発作用が研究されているが、発明者はＡ３アンタゴニストを用いてヒトの癌におけるアプトーシスの誘発に成功した。選択的なＡ３アンタゴニストの使用により癌細胞を標的にしたアポトーシスの誘発ができれば、患者の治療において予期される副作用を軽減することができる。
従ってＡ３受容体のアンタゴニストまたは、部分アンタゴニストである化合物及びその製造法並びにその用途を提供することを本発明は目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
発明の簡単な説明
アデノシンＡ３受容体の強力で、しかも選択性のあるモジュレーターとして有用であり、この受容体のアンタゴニストとしての活性を有する化合物及びその化合物の薬学的に許容される塩、並びにその製造方法及び使用方法を開示する。
この化合物は次の一般式で表される。
【０００９】
【化７】
2006510574.tif 000003
【００１０】
式中、Ａはイミダゾール、ピラゾール、又はトリアゾールであり、
Ｒは−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）ＯＲ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎ−Ｒ１、−ＳＯｎＯＲ１、−ＳＯｎ−ＳＲ１、又はＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２；  Ｒ１  は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アルケニル、置換されたアルケニル、アルキニル、置換されたアルキニル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環基、低級アルケニル、低級アルカノイル、又は、窒素原子に結合している場合には、窒素原子と一緒になって、アセチジン環若しくは、一個又はそれ以上のヘテロ原子を持つ５員〜６員の複素環を形成してもよく；
Ｒ２は水素、アルキル、置換されたアルキル、アラルキル、置換されたアラルキル、ヘテロアリール、置換されたヘテロアリール又はアリールであり；
Ｒ３は、フラン、ピロール、チオフェン、ベンゾフラン、ベンゾピロール、ベンゾチオフェンであり、これらの基はヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニルからなる群から選ばれた、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルキリアリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロキシ、アミノアシルオキシ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオへテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２ −ヘテロアリール及びトリハロメチルからなる群から選択された一個又はそれ以上の置換基で置換されていてもよく；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＮＲ１であり；
ｎは、１又は２である。
【００１１】
好ましいＲ１としては、水素；Ｃ１〜Ｃ８アルキル；Ｃ２〜Ｃ７アルケニル、Ｃ２〜Ｃ７アルキニル；Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル；一個又はそれ以上のハロゲン原子で置換されているＣ１〜Ｃ５アルキル、ヒドロキシ基、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル、又は式−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１）２；アリール、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ニトロ、アミノ、シアノ、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルコキシ、カルボキシ、カルボキシアミドからなる群から選ばれる置換基で置換されたアリール；アリール部分が一個またはそれ以上の前述したアリール群について記述した置換基で置換されたＣ７〜Ｃ１０アラルキル；式−（ＣＨ２）ｍ−Ｈｅｔで表される基であって、式中のＨｅｔは、Ｎ、Ｏ及びＳからなる群から選択された一個以上のヘテロ原子を有する５〜６員の芳香族性、又は非芳香族性の複素環を示し、ｍは０〜５の整数を示す。；
などが挙げられる。
【００１２】
好ましいＣ１〜Ｃ８アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル及びイソペンチルである。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルが挙げられる。Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル基で置換されるＣ１〜Ｃ５アルキル基の例としては、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル及び２−シクロペンチルエチルである。置換されたＣ１〜Ｃ５アルキル基の例としては、２−ヒドロキシエチル、２−メトキシエチル、トリフルオロメチル、２−フルオロエチル、２−クロロエチル、３−アミノプロピル、２−（４−メチル−１−ピペラジン）エチル、２−（４−モルホリニル）エチル、２−アミノカルボニルエチル、２−ジメチルアミノエチル、３−ジメチルアミノプロピルが挙げられる。アリールとしては、好ましくは置換されていてもよいフェニルである。Ｎ、Ｏ及び／又はＳを含む５員〜６員の複素環の例としては、ピペラジニル、モルホリニル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジル、フリル、チエニル、ピロリル、チアゾリル、テトラゾリルが挙げられる。Ｃ７〜Ｃ１０アラルキル基の例としては、一個以上の置換基により置換されていてもよいベンジル又はフェネチルが挙げられる。好ましくは、Ｒ１は水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、アリール、又はＣ７〜Ｃ１０アラルキルであり、部分的にこれらの基は置換基、好ましくは、ハロゲン原子で置換されていてもよい。好ましくは、ＸはＯで、Ｒ２はＣ２〜３アルキル又は置換されたアルキルで、Ｒ３はフランである。
【００１３】
特に好ましい化合物は、Ｒ２がアルキルであるものである。
好ましいＡとしては次の下の式で表されるものが挙げられる。
【００１４】
【化８】
2006510574.tif 000004
【００１５】
本発明の化合物は、ヒトを含む哺乳類における、アデノシンＡ３受容体を調整する方法に使用される。この方法は、アデノシンＡ３を調節するに十分な有効量の式Ｉの化合物を哺乳類に投与することからなる。この化合物には次のような使用（use)がある。
・高血圧症の治療；
・間接リウマチ、及び乾癬等の炎症性疾患；
・花粉症、アレルギー性鼻炎等のアレルギー性疾患；
・肥満細胞の脱顆粒；
・抗がん剤；
・心臓低酸素症；及び、
・脳虚血の保護；
・例えば、一種又はそれ以上の上記に記載された病状の検定をするため、又は、ジャコブセン及びバンリーが記載しているように（Jacobson and Van Rhee「実験的治療のプリン作動性神経アプローチ」、Jacobson and Javis, ed., Wiley New York, 1997, pp. 101-128；Mathot et al., Brit. J. Pharmacol., 116:1957-1964(1995）; van der Wenden et al., J.Med. Chem., 38:4000-4006(1995); 及びvan Calenbergh J.Med. Chem., 40:3765-3772(1997)。これらの内容は参考として明細書の一部に組み込まれる。）他の化合物のアデノシンＡ３受容体への結合に対する有用性（例えば種々結合アッセイにより決定される競合的阻害を通して）の決定のためのスクリーニングアッセイなどの診断的利用。
【００１６】
これらの化合物は、ヒトを含む哺乳動物における、アデニレートシクラーゼ（Ａ３）を全体的に又は部分的に阻害する方法に用いることができる。この方法は、アデニレート  シクラーゼを全部に又は部分的に阻害するに十分な有効量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与することからなる。
【００１７】
これらの化合物は標識化することができ、この標識された化合物と細胞を接触させ、Ａ３受容体に結合させ、標識の存在を検出させることによって、患者や、細胞のサンプルにおけるアデノシンＡ３リガンドを含む癌細胞の存在を検出するための方法に用いられる。
【００１８】
これらの化合物は、式Ｉの化合物及び一種以上の賦形剤を含む医薬製剤にすることができる。化合物の調製には、種々の中間体を使用することができる。
【００１９】
発明の詳細な説明
本出願は、強力で、しかも選択性のあるアデノシン受容体のモジュレーターとして有用な化合物であり、アデノシンＡ３受容体のアンタゴニスト、そしてある場合には、Ａ３アゴニストとしての活性を有する化合物、並びにその製法及び使用を開示する。
【００２０】
これらの化合物は、人間を含む哺乳類における、アデノシンＡ３受容体を調節する方法に使用することができる。この方法は、アデノシンＡ３受容体を調節するのに十分な有効量の式Ｉの化合物を哺乳類に投与することからなる。
これらの化合物は、式Ｉの化合物及び一種以上の賦形剤を含む医薬製剤として使用することができる。これらの化合物の調製には、種々の中間体を使用することができる。
【００２１】
定義
ここで使用されるように、化合物が、アデニレートシクラーゼ（Ａ３）を完全に阻害でき、競合的結合アッセイにおいて  [１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡを置換することができるならば、その化合物はアデノシンＡ３受容体のアゴニストである。
ここで使用されるように、化合物が、アデニレート  シクラーゼ（Ａ３）を部分的に阻害でき、競合的結合アッセイにおいて  [１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡを置換することができるならば、その化合物はアデノシンＡ３受容体の部分アゴニストである。
ここで使用されるように、化合物が、アデニレート  シクラーゼ（Ａ３）を部分的にアゴニストによる阻害を防止でき、競合的結合アッセイにおいて  [１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡを置換することができるならば、アデノシンＡ３受容体の部分アンタゴニストである。
ここで使用されるように、化合物が、Ａ１／Ａ３、Ａ２Ａ／Ａ３ 及びＡ２Ｂ／Ａ３ 活性の比率が約５０より大きく、好ましくは、５０と１００の間、さらに好ましくは、およそ１００より大きい場合は、その化合物はアデノシンＡ３受容体に対し選択的である。
【００２２】
本明細書に使用される「アルキル」とは、一価の直鎖状、分枝状、又は環状のアルキル基を意味し、好ましくは１〜２０個の炭素原子、より好ましくは１〜１０の炭素原子（低級アルキル基）を有し、さらに好ましくは１〜６の炭素原子を有する。この用語は例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、−ブチル、イソ−ブチル、ｎ−ヘキシル等の基として例示される。
「アルキレン」及び「低級アルキレン基」とは、対応するアルカンの二価の基を意味する。さらに、本明細書において使用される、アルコキシ、アルカノイル、アルケニル、シクロアルケニル等のアルカンに基づいて命名される他の基に「低級」がつく場合には、１０個以下の炭素鎖を有するものを意味する。炭素原子の最低の数が２個以上の場合、例えば、アルケニル（最低２個の炭素原子）又はシクロアルキル（最低３個の炭素原子）等の場合には、「低級」は、少なくとも最低数の炭素原子を有するものと解される。
【００２３】
本明細書において使用される「置換されたアルキル」とは、アルキル基、好ましくは１〜１０個の炭素原子であるアルキル基（「置換された低級アルキル基」）であって、以下の群から選ばれた１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基を有する。それらの置換基は、アルコキシ、置換されたアルコキシ、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、シクロアルケニル、置換されたシクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、ケト、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、モノ−及びジ−アルキルアミノ、モノ−及びジ−（置換されたアルキル）アミノ、モノ−及びジ−アリールアミノ、モノ−及びジ−ヘテロアリールアミノ、モノ−及びジ−複素環式置換基アミノ、並びに、アルキル、アリール、ヘテロアリール、及び複素環式基からなる群から選ばれた異なる置換基を有する非対称ジ置換アミノ類である。本明細書において使用される「置換された」という接頭語がついたその他の基は、前記された置換基の少なくとも１つを有するものである。
【００２４】
本明細書において使用される「アルカリール」はアリール基の置換基を有するアルキル基を意味する。母体構造（core molecule）への結合はアルキル基を介してなされている。「アラルキル」はアルキル置換基を有するアリール基で、当該結合は、アリール基を介してなされている。
本明細書において使用される「アルコキシ」としては、アルキルが上記で定義されたアルキルである「アルキル−Ｏ−」基を意味する。好ましいアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシ等が例としてあげられる。
本明細書において使用される「アルケニル」としては、好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１箇所、好ましくは１〜２箇所がアルケニル性の不飽和結合であるアルケニル基を意味する。好ましいアルケニル基としては、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペニル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ｉｓｏ−プロペニル（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）などがあげられる。
本明細書において使用される「アルキニル」としては、好ましくは２〜１０個の炭素原子、より好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１箇所、好ましくは１〜２箇所がアルキニル性の不飽和結合であるアルキニル基を意味する。
【００２５】
本明細書において使用される「アシル」としては、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換されたシクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、及び複素環式−Ｃ（Ｏ）−であって、アルキル、置換されたアルキル、シクロアルキル、置換されたシクロアルキル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、複素環式基は本明細書において定義されているものである基を意味する。
本明細書において使用される「アシルアミノ」としては、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲであって、式中のＲはそれぞれ独立して水素、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、又は複素環式基であり、そして、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、ヘテロアリール、及び複素環式基は本明細書において定義されているものである基を意味する。
【００２６】
本明細書において使用される「アリール」としては、単環（例えばフェニル）又は多環縮合環（例えばナフチル、アントリル）を有する、６〜１４個の炭素原子をもつ不飽和芳香炭素環式基を意味する。好ましいアリールとしては、フェニル、ナフチル、などがあげられる。アリール置換基についての定義がない場合は、このようなアリール基は、以下の群から選択された１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で置換されてもよい。これらの置換基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルである。好ましい置換基としては、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルコキシがあげられる。
【００２７】
本明細書において使用される「シクロアルキル」としては、単環又は多環縮合環を有する、３〜１２個の炭素原子をもつ環状アルキル基を意味する。これらのシクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどの単環式、又は、アダマンチルなどの多環式が例としてあげられる。
本明細書において使用される「ハロ」又は「ハロゲン」としては、フルオロ、クロル、ブロモ、及びヨードを意味し、好ましくは、フルオロ又はクロルのいずれかを意味する。
【００２８】
本明細書において使用される「ヘテロアリール」としては、少なくとも１個の環（複数の環である場合を含む）が１〜１５個の炭素原子と、酸素原子、窒素原子、及び硫黄原子からなる群から選択された１〜４個のヘテロ原子を有する芳香炭素環式基からなるものを意味する。
ヘテロアリール置換基についての定義がない場合は、このようなヘテロアリール基は、以下の群から選択された１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基で置換されてもよい。これらの置換基は、ヒドロキシ、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、置換されたアルキル、置換されたアルコキシ、置換されたアルケニル、置換されたアルキニル、アミノ、置換されたアミノ、アミノアシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、複素環式基、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換されたアルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換されたアルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びトリハロメチルである。好ましい置換基としては、アルキル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、及びチオアルコキシがあげられる。このようなヘテロアリール基は、単環（例えばピリジル又はフリル等）又は多環縮合環（例えばインドリジニル又はベンゾチエニル）であってもよい。
【００２９】
「複素環基」又は「複素環式基」としては、単環式又は多環縮合環式の、環において１〜１５個の炭素原子と、窒素原子、硫黄原子又は酸素原子からなる群から選択された１〜４個のヘテロ原子を有する、飽和又は不飽和の炭素環式基からなるものを意味する。
複素環式基についての定義がない場合は、これらの複素環式基は、アルキル、置換されたアルキル、アルコキシ、置換されたアルコキシ、アリール、置換されたアリール、アリールオキシ、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、チオール、チオアルコキシ、置換されたチオアルコキシ、チオアリールオキシ、トリハロメチルなどからなる群から選択された、１〜５個の置換基で置換されてもよい。これらの複素環式基は、単環又は縮合環を有してもよい。
【００３０】
１つ以上の置換基を有する上記に記載のいずれの群においても、これらの群は、勿論、立体的に非現実的な及び／又は合成的に不可能な置換基又は置換パターンを含んでいないことが理解されるべきである。
【００３１】
本明細書で使用される「カルボン酸誘導体」及び「スルホン酸誘導体」としては、−Ｃ（Ｘ）−Ｎ（Ｒ１）２、−Ｃ（Ｘ）Ｒ１、−Ｃ（Ｘ）ＳＲ１、−ＳＯｎ−Ｒ１、−ＳＯｎＯＲ１、−ＳＯｎＳＲ１、又は−ＳＯｎ−Ｎ（Ｒ１）２を意味し、式中のＸはＯ，Ｓ又はＮＲ１を示し、Ｒ１  は、水素、アルキル、置換されたアルキル、アリール、又は、置換されたアリール、並びに、それらから誘導される無水物、エステル、及び塩素、臭素、ヨウ素等のハロゲン化合物等の活性化された誘導体であり、それは、カルボン酸及びスルホン酸誘導体を標準的なカップリング法を用いて５’−アミンに結合するのに使われる。
【００３２】
「薬学的に許容される塩」としては、式Ｉの化合物における薬学的に許容される塩を意味する。それらの塩は、種々の有機又は無機の対イオンに由来する周知のものであり、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどがその例としてあげられる。また、分子が塩基性を有する場合には、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシレート、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などの有機酸又は無機酸塩が、薬学的に許容される塩として使用できる。
【００３３】
「保護基」又は「ブロッキング基」としては、化合物中の１つ以上のヒドロキシル基、アミノ基、又はカルボキシル基（アミノラクタム、アミノラクトン、ラクトン等のそれらの中間体も含む）に結合して、これらの基が反応を起こすのを防ぐ基であって、そして通常の化学的又は酵素的方法によって除去されて、ヒドロキシル基、アミノ基、又はカルボキシル基を再生成することができる基を意味する。好ましい除去可能なアミノブロッキング基としては、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）などの、生成物の性質に応じた通常の条件で除去され得る慣用されている基があげられる。
【００３４】
省略記号について
本明細書には、次の省略記号が用いられている：
[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡは、[１２５Ｉ]Ｎ６−（４−アミノ−３−アイオドベンジル）アデノシン−５´−Ｎ−メチルウロンアミド；
（Ｒ）−ＰＩＡは、（Ｒ）−Ｎ６−（フェニルイソプロピル）アデノシン；
ＤＭＳＯは、ジメチルスルホキシド；
Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡは、Ｎ６−（４−アミノ−３−アイオドベンジル）アデノシン−５´−Ｎ−メチルウロンアミド；
ＩＢ−ＭＥＣＡは、Ｎ６−（３−アイオドベンジル）アデノシン−５´−Ｎ−メチルウロンアミド；
Ｋｉは、平衡阻害定数（equilibrium inhibition constant）；
ＮＥＣＡは、５´−Ｎ−エチルカルボキシアミド  アデノシン；
ＴＨＦは、テトラヒドロフラン；
Ｔｒｉｓ（トリス）は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである。
【００３５】
化合物の製造法
反応性で壊れやすい官能基は、特定の反応又は一連の反応を行う前に保護され、最後の反応が終了した後に元の官能基に戻されることは、有機化学の当業者には周知のことである。通常、官能基は比較的安定な誘導体に変換することで保護されている。例えば、ヒドロキシル基はエーテル基に変換してもよく、アミン基はアミド又はカルバミン酸塩に変換してもよい。「ブロッキング」及び「脱ブロッキング」とも呼ばれる、保護及び脱保護の方法は、この技術分野において広くしられていることであり、また広く実用化されている。例えば、ティーグリーン（T.Green）の「有機合成における保護基」（Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley, New York (1981)）、又は「有機化学における保護基」（Protective Groups in Organic Chemistry, Ed.J.F.W.McOmie, Plenum Press, London(1973)）などを参照のこと。
【００３６】
これらの化合物は、下記の式IIの化合物を適切なカルボン酸、スルホン酸誘導体、イソシアン酸塩の前駆体のイソシアン酸塩とを、公知の方法で反応させることにより調製するのが好ましい。
式IIの化合物において、Ｒ３がフランである化合物は、下記のスキームＩ及びIIにより調製することができる。
【００３７】
【化９】
2006510574.tif 000005
【００３８】
【化１０】
2006510574.tif 000006
【００３９】
スキームＩにおける試薬：Ａ）トリエチルオルト蟻酸エステル；Ｂ）２−フロ酸ヒドラジド、２−メトキシエタノール；Ｃ）ＰｈＯＰｈ、２６０ＥＣ（℃）；Ｄ）１０％ＨＣｌ、還流；Ｅ）シアンアミド、ｐＴＳＯＨ、Ｎ−メチルピロリドン
【００４０】
【化１１】
2006510574.tif 000007
【００４１】
スキームＩＩにおける試薬：Ｆ）フロ酸ヒドラジド、ジフェニルエーテル；Ｅ）シアンアミド、ｐＴＳＯＨ、Ｎ−メチルピロリドン
【００４２】
式IIの化合物は、スキームＩに表される間接方法又はスキームＩＩに表される直接方法で調製することができる。その両方のスキームにおける、好ましい原料は、式IIIの複素環式化合物のオルト−アミノ二トリル誘導体であり、この化合物は一般に、文献に記載の公知合成方法や、単行本のイーシーテイラー及びマックキロップ著「アドバンス  イン  オーガニックケミストリー」シリーズの第７巻（E.C.Taylor and A.McKillop（vol.7 of the series Advances in Organic Chemistry, Ed. Interscience, 1970））に記載の方法により調製することができる。
【００４３】
【化１２】
2006510574.tif 000008
【００４４】
オルト−アミノ−二トリル（式ＩＩＩ）を、過剰のオルト蟻酸エチルと還流温度で８〜１０時間反応させることにより、対応する式ＩＶのイミデートに変換される。過剰のオルトギ酸エチルを留去することにより、実質的に純粋な対応するイミデートＩＶを高収率で得ることができる。これは反応の粗生成物のＩＲ及び１Ｈ−ＮＭＲにより確認できる。
【００４５】
【化１３】
2006510574.tif 000009
【００４６】
式ＩＶのイミデートは、それに続く２つの反応により、高収率で式ＶＩの三環式構造の化合物とすることができる。
【００４７】
【化１４】
2006510574.tif 000010
【００４８】
反応は次の２つからなる：ａ)２−メトキシエタノール溶液中の２−フロ酸ヒドラジドと、還流温度で、８〜１０時間反応させて式Ｖの中間体を得る反応；ｂ）式ＶＩに対応する式Ｖの化合物をジフェニルエーテル中で２６０ＥＣ（℃）の温度で０．５〜１時間加熱して熱環化させる反応。
【００４９】
三環式化合物ＶＩを、塩酸と１〜３時間還流して加水分解し、トリアゾールＶＩＩを得る。次いで、式ＶＩＩの化合物をパラ−トルエンスルホン酸の存在下にＮ−メチルピロリドン中でシアンアミドと還流して、最後の環化を行い、所望の化合物ＩＩとする（スキームＩ）。
【００５０】
【化１５】
2006510574.tif 000011
【００５１】
【化１６】
2006510574.tif 000012
【００５２】
場合により、トリアゾールＶＩＩは、オルト−アミノ−ニトリルＩＩＩと２−フロ酸ヒドラジドとをジフェニルエーテル中で直接加熱することにより得ることもできる。次いでトリアゾールＶＩＩを、前記したスキームＩＩで示される方法で環化する。次のスキームＩＩＩ、ＩＶ及びＶでは、Ａがトリアゾール環である式ＩＩの化合物の合成法を更に詳しく示している。
【００５３】
スキームＩＩＩ
５−アミノ−７−置換−２−（２−フリル）−１,２,３−トリアゾロ[５，４−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン誘導体の合成
【００５４】
【化１７】
2006510574.tif 000013
【００５５】
スキームＩＶ
５−アミノ−８−置換−２−（２−フリル）−１,２,３−トリアゾロ[５，４−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン誘導体の合成
【００５６】
【化１８】
2006510574.tif 000014
【００５７】
スキームＩＶにおける試薬：Ａ）フロ酸ヒドラジド、ＰｈＯＰｈ、２６０ＥＣ（℃）、Ｂ）ＮＨ２ＣＮ、ｐＴｓＯＨ、Ｎ−メチルピロリドン
【００５８】
スキームＶ
５−アミノ−９−置換−２−（２−フリル）−１,２,３−トリアゾロ[５，４−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン誘導体の合成
【００５９】
【化１９】
2006510574.tif 000015
【００６０】
スキームＶにおける試薬：Ａ）フロ酸ヒドラジド、ＰｈＯＰｈ、２６０℃、Ｂ）ＮＨ２ＣＮ、ｐＴｓＯＨ、Ｎ−メチルピロリドン
【００６１】
最終的に、５−アミンを含有する化合物ＩＩを、カルボン酸類、スルホン酸類、活性化されたカルボン酸類、活性化されたスルホン酸類、チオカルボン酸類、活性化されたチオカルボン酸類、イソシアン酸塩類、イソチオシアン酸塩等と反応させて、所望の化合物を製造する。活性化されたカルボン酸類としては、酸ハロゲン化物、エステル、無水物、及びアミドを形成するためのアミンと反応することができる公知の他の誘導体などが挙げられる。活性化されたスルホン酸類としては、
塩化スルホニルのようなスルホニルハライドが挙げられる。
【００６２】
全ての場合に、活性化されたカルボン酸やスルホン酸誘導体を使う必要はない。酸はそれ自体、標準的なカップリング剤、例えば、ジシクロヘキシルジイミド（ＤＣＩ）や、その他の通常のカップリング剤などを使ってアミンとカップリングさせることができる。アミド結合の形成のための適切なカップリングの条件は、ペプタイド合成の当業者には周知のことである。
【００６３】
同様にして、全ての場合に所望のイソシアン酸塩又はイソチオシアン酸塩を直接使用する必要はない。所望のイソシアン酸塩や、イソチオシアン酸塩は、その場で対応のアシルアジドからクルチウス転位により製造できることは、当該分野の当業者には周知のことである。また、所望のイソシアン酸塩や、イソチオシアン酸塩はホフマン転位で対応のアミド又はチオアミドからも製造することができるが、そのことも当該分野の当業者には周知である。そしてまた、所望のイソシアン酸塩や、イソチオシアン酸塩は、その場で対応のＯ−アシルヒドロキサム酸又はＯ−チオアシルヒドロキサム酸のロッセン転位により製造することができる。
【００６４】
一般には、３−シアノ−２−アミノピラゾール類が出発原料として使用される場合には、上記した化学方法が、８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン類を製造するために使用される。当該３−シアノ−２−アミノピラゾール類を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の非プロトン性極性溶媒中で、ハロゲン化アルキル（ＲＸ）と反応させることにより、環の窒素原子の一つにＲ基を導入することができる。その結果として得られた化合物を、オルト蟻酸トリエチルと還流して、イミンエチルエステルを製造することができる。次いで、フロ酸ヒドラジドと反応させて、好ましくはディーンスタークトラップ（Dean-Stark trap）を用いて、反応で生成される水を共沸により除去して、８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン類を得る。この生成物は、例えば（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン１：１）のクロマトグラフィーで精製され、次の化学方法に使用される。
【００６５】
この反応の生成物を、ＨＣｌ等の適切な酸と還流下に反応させ、次いで触媒量のパラ−トルエンスルホン酸と、Ｎ−メチルピロリドン等の溶媒中で高温でシアンアミドと反応させて、５−アミノ−８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジンを得る。
【００６６】
これらのアミンにより置換された化合物を、適切なイソシアン酸塩と反応させて、尿素系化合物とし、酸ハロゲン化物等の活性化されたカルボン酸と反応させてアミドとし、スルホン酸ハロゲン化物などの活性化されたスルホン酸と反応させてスルホンアミドとし、また、他の反応性のカルボン酸又はスルホン酸誘導体と反応させて、他の所望な化合物とすることができる。アミンで置換された化合物と反応させるために使用されるイソシアン酸塩類は、市販されているもの、または当該分野で公知の手段により合成することができる。
【００６７】
例えば、イソシアン酸塩、４−（Ｎ−モルホリノ）−フェニルイソシアン酸塩は、市販の４−モルホリノアニリンとホスゲン又はジホスゲンを適当な溶媒中で反応させて合成することができる。同様にして、スルホニルアミン、スルホニルピペラジン、置換されたスルホニルアミンまたは置換されたスルホニルピペラジンのフェニル−イソシアン酸塩類は、ジホスゲン又はホスゲンをそれぞれのアミンと反応させることにより合成される。ベンゼン、酢酸エチルなどは、このような反応における溶媒として有用である。
【００６８】
他のイソシアン酸塩類も、まず、対応のアシルアジドを合成し、次いでこれを熱分解することによりイソシアン酸塩とすることができる。このような分解は、本来クルチウスにより報告されており、さらに他の研究者により報告されている（例えば、R.Lo Scalzo et al., Gazz. Chim. Ital. 118, 819(1988)を参照のこと）。アシルアジド類は、ヒドラジドと亜硝酸ナトリウム溶液とを塩酸中で接触させることで製造される。
【００６９】
トリアゾロ−トリアゾロ−ピリミジン化合物は、同じような化学的手段を用いて調製されるが、適切な機能化されたアジドを原料として用い、このアジドを２−シアノアセトアミドと反応させて最初の複素環を形成させ、そのアミド基をＰＯＣｌ３等の脱水剤と反応させ、ニトリルとする。結果として得られたシアノ−アミノトリアゾ−ルを上記で示された３−シアノ−２−アミノトリアゾールと同様な方法で反応させて、トリアゾロ−トリアゾロ−ピリミジンを調製することができる。
放射性物質でラベル化された化合物の調製
【００７０】
本化合物は、任意の適切な放射性標識を用いて標識化することが出来る。適切な放射性標識の例としては、３Ｈ及び１４Ｃなどが挙げられるが、薬物動態の研究において通常用いられる、任意の実質的に非毒性の放射性標識を用いることもできる。有機化合物中に放射性標識を導入する方法は、当該分野で周知である。
【００７１】
化合物が、５−[[置換フェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（ａｒ)アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン化合物類、又は５−アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン化合物類の場合には、トリチウム標識の導入はとりわけ簡単である。
【００７２】
一つの実施態様では、適切な出発原料は８位の（ａｒ）アルキル基が二重結合を含んでいる化合物である。この二重結合を、例えば、パラジウム炭素又は他の公知の水素化触媒などの適切な触媒の存在下に、トリチウムと反応させることができる。
【００７３】
例えば、５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（１,２−ジトリチオプロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン（化合物１０８の放射性リガンド）は、５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−（２−プロペン−１−イル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン（化合物１００）にトリチウムを加えることによって製造される。化合物１０８の放射性リガンドは、ＪＵＲＫＡＴ癌細胞での種々のバインディングアッセイの実験に関して以下で議論されるものである。
【００７４】
また、トリチウム標識は、アミドを形成するために５位アミノ基と反応させるために使われる化合物中に存在させることもできる。例えば、ここで示されている５−アミノカルボニルアミノ化合物類を調製するために使用されるイソシアン酸塩類は、トリチウムや、他の放射性標識を含むことができ、したがって最終生成物へ容易に導入することができる。
【００７５】
別の実施態様において、放射性標識は、環系が統合されている分子に導入することもできる。式IIの化合物の合成に関して上記したとおり、式ＶＩの種々の三環式化合物は、ＨＣｌで加水分解されて、式ＶIIのトリアゾール類とされ、これを、スキームＩに示されるとおり、パラトルエンスルホン酸の存在下に、シアナミドと共に還流することによって環化される。この合成工程において、１４Ｃ標識化されたシアナミドを用いて、１４Ｃ標識を組み込むことは比較的簡単である。
【００７６】
ヨウ化された化合物は、例えば、５-アミン基と反応させるために使用する芳香族化合物に放射性ヨウ素を導入することにより調製することができる。芳香環にヨウ素を導入する方法は、その分野の当業者には周知である。ここに示される化合物を調製するために５−アミン基と反応させるために使用される芳香族化合物にヨウ素原子を導入することは容易である。
したがって、通常の技術により適切な放射性標識アナログを容易に製造することができる。
【００７７】
蛍光標識した化合物の調製
放射性標識した化合物と同様に、蛍光標識した化合物の合成も、比較的簡単である。Ｒ３の位置の置換基でも実行可能であるが、蛍光基は、Ｒ２の位置に存在するのが好ましい。一つの実施態様では、蛍光基は、Ｒ３の位置に結合することができるフラン環に含有されている。また、その他の芳香環を用いることもできる。蛍光標識は、当該分野において周知であり、また、公知の化学的手段により簡単に本明細書に示す化合物に結合させることができる。
【００７８】
化合物の使用方法
この化合物は、Ａ３受容体のアゴニスト及びアンタゴニストを使用することができる全ての疾患の処置に適用することができる。それは、・高血圧症の治療・処置；
・間接リウマチ、及び乾癬等の炎症性疾患の治療・処置；
・花粉症、アレルギー性鼻炎等のアレルギー性疾患の治療・処置；
・肥満細胞の脱顆粒；
・抗がん剤；
・心臓低酸素症の治療・処置；及び、
・脳虚血の防止；
例えば、ジャコブソンの文献（Jacobson, TIPS May 1998, pp. 185-191,）に記載されているように、これらの内容は参考として明細書の一部に組み込まれる、
を包含している。
【００７９】
これらの化合物の好ましい使用としては、癌の検出及び／又は癌の治療・処置があげられる。以下に示されるように、Ａ３受容体は癌細胞に発現することが知られている。Ａ３受容体は、細胞が十分な血液供給をなされていない場合、細胞を虚血性損傷から保護すると信じられている。しかしながら、アデノシンＡ３受容体のアゴニズムは保護作用をもたらし、細胞に十分な血液供給がなされていない場合にも、癌細胞が死ぬのを防ぐことができる。これらの受容体の拮抗薬を処方することによって、Ａ３受容体の保護効果は無くなる。
【００８０】
化合物は、医学的に許容されるいかなる手段で患者に処方されてもよい。適切な投与形態として、経口投与、直腸投与、局所投与、非経口投与（皮下投与、筋肉投与、及び静脈投与を含む）などが挙げられるが、経口投与又は、非経口投与が好まれる。
【００８１】
アデノシン受容体の調節物質としての化合物の有効量は、治療される哺乳動物によって当然異なり、最終的には医者又は獣医の判断にまかされる。考慮すべき要素は、治療対象の状態、投与の方法、処方物の性質、哺乳動物の体重、表面積、年齢、通常の状態、及び投与される特定の化合物である。しかしながら、好ましい投与量は１日当たり体重１ｋｇに対し約０．１ｍｇ〜約１０ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約３ｍｇである。
【００８２】
１日の合計投与数は１回でも、複数回でも、例えば１日当たり２〜６回でも良く、一定期間、静脈内注射により投与しても良い。投与量は、上記に記載された量より多くても少なくても本発明の範囲内であり、それが望まれまた必要であれば患者に投与することできる。例えば、７５ｋｇの哺乳動物に対する投与量は、１日当たり約７５ｍｇ〜約２２０ｍｇで、一般的には１日当たり約１５０ｍｇである。別々に複数回投与する場合は、本発明の化合物５０ｍｇを１日当たり３回投与するのが一般的である。
【００８３】
その他の実施形態では、放射性化合物は、Ａ３受容体を持つ癌細胞の有無を検出するアッセイの目的のために、患者に処方できる。ここに示されている、Ａ３受容体のサブタイプに対する比較的高親和性を有する化合物は、有利に患者に処方され、その化合物が癌細胞中のＡ３受容体と結合した後、放射性標識された化合物の位置を確認することにより、癌細胞の位置が判定される。放射性化合物の位置や、濃度を検出するための装置は、当該分野の当業者には周知である。
【００８４】
癌細胞を、取り除く手術中で放射性標識及び／又は蛍光標識した化合物の使用も、有用である。しばしば、外科医は、癌組織を全て取り除かなければならない。放射性標識又は蛍光標識した化合物は、手術の前若しくは、手術中に用いられ、患者の癌細胞と結合する。処方の時間は、他の要因もあるが、特定の癌細胞に対する特定の化合物の取り込みにや、癌細胞のある位置などに依存している。次いで外科医は、癌を除いた後に残存する癌細胞を検出する比較的簡単なアッセイを施す。当該分野の当業者には周知の分析装置を用いて、手術を施した場所の蛍光又は、放射性を測定することで、残存している癌細胞を確認することができる。
【００８５】
インビトロでの癌細胞の検出は、培地の中の細胞の懸濁物中にこの化合物を添加し、癌細胞上のアデノシンＡ３受容体に化合物を結合させ、標識を検出することにより行われる。
処方物
【００８６】
上記に記載された化合物は、活性化合物、例えば式Ｉの化合物、と一緒に投与の形態で許容される担体を含む処方で投与されるのが好ましい。適切な製薬上好ましい担体としては、当該分野の当業者には公知のものが挙げられる。
【００８７】
この組成物は、他の医学上有効な成分、例えば、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤、抗菌剤、抗炎症剤、鎮痛剤、免疫抑制剤等をさらに含有していてもよい。担体は、処方物の他の成分と適合性があるという点で、薬学的に許容されるものでなくてはならず、患者にとって有害であってはならない。
【００８８】
この処方物は、経口投与、直腸投与、局所投与、非経口投与（皮下投与、筋肉投与、静脈内投与を含む）に対する適切な担体を含むことができる。好ましい担体としては、経口投与又は、非経口投与に適切なものが挙げられる。
【００８９】
非経口投与に適した処方物としては、好ましくは患者の血液と等張である活性化合物の無菌水溶性製剤が好のましい。そのため、これらの処方物は、蒸留水又は生理食塩水中の５％のデキストロース溶液、蒸留水を含有しているのが好ましい。有用な処方物は、適当な溶媒で希釈することにより非経口投与に適した溶液とすることができる、式Ｉの化合物を含有する濃縮された液体又は固体からなるものも、好ましい処方物の例である。
【００９０】
経腸投与では、化合物は、カプセル、カシュ剤、錠剤又はトローチ剤などの離散したユニットにおける不活性担体に組み込まれており、そのそれぞれが、粉体もしくは粒状、又は例えば、シロップ、エリキシル剤、乳剤又はドラフト（１回分の液剤の容量）などの水性若しくは非水性の懸濁液若しくは溶液として、活性化合物のあらかじめ決められた有効量を含有している。適切な担体としては、スターチ又は砂糖、並びに潤滑性の油脂、香味料、結合剤及び他の同じ性質を持つ他の物質などが挙げられる。
【００９１】
錠剤は、圧縮又は造粒によって製造され、その際一種以上の補助成分を使用してもよい。圧縮された錠剤は、粉末又は顆粒などの自由流動形態の活性化合物を適当な機械の中で圧縮することによって調製され、その際には結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、界面活性剤、又は分散剤などの補助成分を混合しても良い。造粒された錠剤は、粉状の活性化合物と適当な担体を含有する混合物を、適当な造粒機を用いて造粒することにより製造される。
【００９２】
シロップ又は懸濁液は、活性化合物を濃縮したスクロースなどの糖の水溶液に加えることによって作られ、その際補助成分を加えてもよい。これらの補助成分としては、香味料、糖の結晶化を遅らせるための薬剤、グリセロール又はソルビトールなどの多価アルコールからなる他の成分の溶解性を向上させるための薬剤などがあげられる。
【００９３】
この化合物は、水溶液、軟膏、クリーム、ジェル、ローション又は重合物質（例えば、PluronicＴＭ  、ＢＡＳＦ） などの局所適用によって局所的に処方することもでき、それらは、従来の薬学的に公知である従来の方法によって調製することができる。水溶液、軟膏、クリーム、ジェル、ローション又は重合体の塩基及び活性成分に加え、これらの局所処方物は、さらに、防腐剤、香料、及びその他の活性な薬剤を含んでいてもよい。
【００９４】
直腸投与の処方物は、座剤の基剤として、カカオ脂又はWitepsol S55（ドイツのDynamite Nobel Chemical社の製品）などの従来の担体を有する座剤であってもよい。
【００９５】
また、化合物はリポソームや、ミクロスフィア（又はミクロパーティクル）として処方することもできる。患者に処方するためのリポソーム及びミクロスフィア処方物の製造法は、当該分野の当業者に周知のものである。米国特許４,７８９,７３４には、リポソームに生体物質を閉じこめカプセル化する方法が開示されており、参考として本明細書にこの文献の記載を取り込む。原則としては、物質を水溶液に溶かし、適当なリン脂質及び脂質を加え、必要であれば界面活性剤とともに、さらに必要であれば、この物質を透析又は超音波で処理する。公知の方法の総説は、ジーグレゴリアディスの本（G.Gregoriadis，Chapter 14, "Limposomes," Drug Carrier in Biology and Medicine, pp. 287-341(Academic Press, 1979)）に記載されている。ポリマー又は蛋白質で形成されたミクロスフィアは、当業者には周知のことであり、消化管から直接血流に流れるように構成されている。また、ミクロスフィア又は、ミクロスフィアの組成物は、何日も何ヶ月にも渡って持続的に放出させるために（体内に）埋め込まれ、この化合物を取り込ませることができる。例えば、米国特許４,９０６,４７４、４,９２５,６７３及び３,６２５,２１４を参照のこと。それらに示される内容は、本明細書に参考として取り込まれる。
【００９６】
好ましいミクロパーティクルは、ポリグリコライド（polyglycolide)、ポリラクチド、及びこれらのコポリマーなどの生分解性ポリマーから調製される。当該分野の当業者は、所望の薬の放出の速度及び所望の投与量などの様々な要因に基づいて、適切な担体系を容易に決定することができる。
【００９７】
処方物は、単位投薬形態とするのが好ましく、薬学分野において周知のいかなる方法によって調製されてもよい。いずれの方法も活性化合物と一種以上の補助成分からなる担体とを混合させる過程を含んでいる。一般に、この処方物は、活性化合物を液体の担体や細粒状の担体に均一に且つ密接に混合させ、必要な場合は、この混合物を好ましい単位投薬形態の製品にすることによって調製される。
【００９８】
前記の成分に加え、これら処方物はさらに医薬組成物に使用される一種以上の補助成分を含んでいてもよい。これらの補助成分の例としては、希釈剤、緩衝液、香料、結合剤、界面活性剤、増粘剤、潤滑剤、懸濁化剤、防腐剤（酸化防止剤を含む）などがあげられる。
【００９９】
化合物の活性度の判定
化合物の活性は、従来からの実験手法により、以下のいずれかのアッセイで容易に判定できる。
ラットＡ１及びＡ２Ａアデノシン受容体結合アッセイ
【０１００】
細胞膜の調製：
雄のウィスターラット（２００〜２５０ｇ）の頭部を切断し、脳全体（脳幹、線条及び小脳）を氷の上で解剖する。脳の組織は、５０ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ７．４の２０容量（vols）中のポリトロン（セッティング５）中で分離することができる。次いで、ホモジネートを４８,０００ｇで１０分間遠心分離し、ペレットを、２ＩＵ／ｍＬアデノシンデアミナーゼ、タイプＶＩ（シグマ  ケミカル  カンパニー、Ｓｔ.Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．，ＵＳＡ）を含むトリス−ＨＣｌに再懸濁する。３７ＥＣ（℃）で３０分間インキュベーションした後、細胞膜を遠心分離し、ペレットを−７０ＥＣ（℃）で保存する。線条体の組織を、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２ を含有する５０ｍＭトリスＨＣｌのバッファー、ｐＨ７，４の２５容量（vol）中のポリトロンで、ホモジネートする。このホモジネートを、次いで４８,０００ｇで１０分間、４ＥＣ（℃）で遠心分離し、２ＩＵ／ｍｌアデノシンデアミナーゼを含むトリスＨＣｌバッファーに再懸濁する。３７ＥＣ（℃）で３０分間インキュベーションした後、細胞膜を遠心分離し、ペレットを−７０ＥＣ（℃）で保存した。
【０１０１】
放射性リガンドの結合アッセイ
[３Ｈ]−ＤＰＣＰＸ（１,３−ジプロピル−８−シクロペンチルキサンチン）のラットの脳の細胞膜への結合は、原則的には、ブルンスらによりすでに報告された方法（Bruns et al., Proc.Natl, Acad. Sci. 77, 5547-5551 1980）に従って行われる。置換実験（displacement experiments）は、１ｎＭ  [３Ｈ]−ＤＰＣＰＸ、ラットの脳の希釈した細胞膜１００ΦＬ（μＬ）（プロテイン／アッセイの１００Φｇ（μｇ））、及び少なくとも６−８の異なる濃度の試験化合物を含むバッファー０．２５ｍｌ中で行われる。非特異的結合は、ＣＨＡ（Ｎ６シクロヘキシルアデノシン）１０ΦＭ（μＭ）の存在下で決定される。通常これは全結合の＃１０％である。インキュベーションの時間は通常２５ＥＣ（℃）で１２０分である。
【０１０２】
[３Ｈ]−ＳＣＨ５８２６１（５-アミノ−７−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]−１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン）のラットの脳の線条体細胞膜（プロテイン／アッセイの１００Φｇ（μｇ））への結合は、ゾッチィーらに記載された方法（Zocchi et al.,J.Pharm. and Exper. Ther. 276:398-404(1996).）に従って方法で行われる。競合の研究では、少なくとも６〜８の異なる濃度で、試験化合物を用いる必要がある。非特異的結合は、５０ΦＭ（μＭ）のＮＥＣＡ（５´−（Ｎ−エチルカルボキサミド）アデノシン）の存在下で決定された。インキュベーションの時間は通常２５ＥＣ（℃）で６０分である。
【０１０３】
結合及び遊離の放射性活性は、ブランデルセルハーベスター（Gaithersburg, MD, USA）を用い、ワットマンＧＦ／Ｂグラスフィルターで、アッセイ混合物を濾過することにより分離される。インキュベーション混合液を、３ｍｌの氷冷したインキュベーションバッファーで希釈し、急速に減圧濾過し、フィルターを３ｍｌのインキュベーションバッファーで３回洗浄する。フィルターに結合した放射能を例えば、液体シンチレーションで計測する。蛋白質の濃度は、例えばウシアルブミンを対照標準として用いるバイオラッド（Bio-Rad）の方法（Bradford, Anal. Biochem. 72:248(1976))に従ってより判定される。
【０１０４】
ヒトクローンＡ３アデノシン受容体の結合アッセイ
受容体結合アッセイ
結合アッセイは、サルバトレら（Salvatore et al., Proc.Natl.Acad.Sci.90:10365-10369(1993)）に記載された方法に従って行われる。飽和の研究では、ヒト組み換え型Ａ３アデノシン受容体（Research Biochemmical International, Natick, MA, USA)で形質転換したＨＥＫ−２９３細胞からの細胞膜（８ｍｇ  蛋白質／ｍｌ）のアリコート（一部）を、０．１〜５ｎＭの[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡの１０〜１２の異なる濃度でインキュベートして行われる。競合試験は、０．３ｎＭ[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡ、５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４及び２０ΦＩ（μＩ）の希釈された細胞膜（１２．４ｍｇ蛋白質／ｍｌ）、並びに少なくとも６−８の異なる濃度の試験リガンドを含むテストチューブ中で、１００ΦＬ（μＬ）の最終容量で２回繰り返し行われる。
【０１０５】
予め行ったタイムコースの実験結果に基づいて、インキュベーションの時間は、３７ＥＣ（℃）で６０分とした。結合及び遊離の放射能は、ブランデルセルハーベスターを使用して、ワットマン（Whatman）ＧＦ／Ｂグラスファイバーフィルターでアッセイ混合物を濾過することによって分離した。非特異的結合は、５０ΦＭ（μＭ）Ｒ−ＰＩＡの存在下での結合として定義され、全結合の約３０％であった。インキュベーション混合液を、３ｍｌの氷冷したインキュベーションバッファーで希釈し、急速に減圧濾過し、フィルターを３ｍｌのインキュベーションバッファーで３回洗浄した。フィルターに結合した放射能は、ベックマンガンマ（Beckman gamma）５５００Ｂ（計測器）でカウントした。  蛋白質の濃度は、ウシアルブミンを対照標準としたバイオラッド（Bio-Rad）の方法（３）に従って判定される。
【０１０６】
データの分析
結合阻害定数（inhibitory binding constant）の値であるＫｉ は、チェング及びプルソッグ（Cheng & Prusoff）の式（Cheng and Prusoff Biochem. Pharmacol. 22:3099-3108(1973))であるＫｉ＝ＩＣ５０／（１＋[Ｃ＊]／ＫＤ＊）（ここに[Ｃ＊]は放射性リガンドの濃度であり、ＫＤ＊はその解離定数である。）に従ったＩＣ５０の値から計算される。
【０１０７】
飽和及び阻害実験のコンピューター分析のために、加重非線形最小二乗曲線フィッティングプログラムＬＩＧＡＮＤ（Ｍｕｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｄｂａｒｄ, Anal. Biochem. 107:220-239(1990))が、使用される。データは通常は幾何平均として、括弧内に９５％又は９９％の信頼限界を付して表される。
【０１０８】
ＣＨＯ細胞膜の調製
ＣＨＯ細胞でのヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡサブ３受容体の発現は、既に報告されている（Klotz et al.,1998)。この細胞を付着増殖させて、栄養混合物Ｆ１２を含み、ヌクレオシドを含まないダルベッコの改変イーグル培地中で、３７℃で、５％ＣＯ２／９５％空気の雰囲気下で培養した。細胞を週に２、３回分割し、次いで細胞膜を調製するために培養物を取り除く。リン酸緩衝生理食塩水を用いてこの細胞を洗浄して、氷冷した低張性緩衝液（５ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ＨＣｌ、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中でフラスコから剥がす。ポリトロンを用いて細胞懸濁液を均質化して、そのホモジネートを４８，０００ｇで３０分間遠心分離する。得られた細胞膜ペレットを、Ａ１アデノシン受容体に対しては、５０ｍＭ トリスＨＣｌバッファー、ｐＨ７．４中で、Ａ２Ａアデノシン受容体については、５０ｍＭ トリスＨＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４中で、Ａ３アデノシン受容体については、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４中にそれぞれ再懸濁して、それらを結合及びアデニレートシクラーゼアッセイに用いた。
【０１０９】
ヒトクローンＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３アデノシン受容体の結合アッセイ
ヒト組み換えＡ１アデノシン受容体で形質転換されたＣＨＯ細胞への［３Ｈ］−ＤＰＣＰＸの結合は、クロッツ及びその共同者により既に記載された方法（Klotz, K.N.; Cristalli, G.; Grifantini, M.; Vittori, S.; Lohse, M. J., "Photoaffinity labeling of A1 ademosine receptors," J.Biol. Chem., 260,14659-14664, 1985)に従って行う。
【０１１０】
１ｎＭの［３Ｈ］−ＤＰＣＰＸ、２０μＬの希釈された細胞膜（５０μｇのプロテイン／アッセイ）、及び少なくとも６〜８の異なる濃度の試験化合物を含有する、０．２０ｍＬのバッファー中で、２５℃で１２０分間で、置換実験を実施する。非特異的結合は、１０μＭのＣＨＡの存在下において決定されるが、これは常に、全結合の１０％である。ヒト組み換えＡ２Ａアデノシン受容体（５０μｇのタンパク質／アッセイ）を用いて形質転換したＣＨＯ細胞に対する［３Ｈ]−ＳＣＨ５８２６１の結合は、バラニらの方法（Varani, K; Cacciari, B.; Baraldi, P.G.; Dionisotti, S.; Ongini, E.; Borea, P.A., "Binding affinity of adenosine receptor agonist and antagonists at human cloned A３  adenosine receptors"”Life Sci., 63, 81-87, 1998) に従って行った。競合試験において、少なくとも６〜８の異なる濃度の化合物が用いられ、５０μＭのＮＥＣＡの存在下で、インキュベーション時間６０分として、２５℃で、非特異的結合を測定した。
【０１１１】
ヒト組み換えＡ２Ｂアデノシン受容体を用いて形質転換したＨＥＫ−２９３細胞（Receptor Biology, Inc., Beltsville, Md)に対する［３Ｈ］−ＤＰＣＰＸの結合は、実質的にバラニ及びその共同者による方法（Mol. Pharmacol.)に従って行う実施する。詳細には、アッセイは、０．１ｍＬの５０ｍＭトリスＨＣｌバッファー、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，１ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．１ｍＭ  ベンズアミジン（ｐＨ７．４）、４０ｎＭの［３Ｈ］−ＤＰＣＰＸを含む２ＩＵ／ｍｌのアデノシンデアミナーゼ、希釈された膜（２０μｇのタンパク質／アッセイ）、及び少なくとも６〜８の異なる濃度の試験化合物からなる溶液中で、２５℃で、６０分間でおこなわれる。１００μＭのＮＥＣＡの存在下で、非特異的結合を決定したが、これは常に、全結合の３０％であった。
【０１１２】
ヒト組み換えＡ３アデノシン受容体を用いて形質転換したＣＨＯ細胞に対する［３Ｈ］−ＭＲＥ３００８−Ｆ２０（化合物１０８の放射性リガンド）の結合は、バラニらの方法(Mol. Pharmacol.)に従って実施した。競合実験は、１ｎＭの［３Ｈ］ＭＲＥ３００８−Ｆ２０、５０ｍＭのトリスＨＣｌバッファー、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、及び１００μＬの希釈された膜（５０μｇのタンパク質／アッセイ）、並びに少なくとも６〜８の異なる濃度の試験リガンドを含有している試験管において、２５０μＬの最終容積で２回反復して行う。インキュベーションの時間は、予め行われたタイムコースの実験の結果(Mol. Pharmacol.)に基づいて、４℃で１２０分であった。非特異的結合は、１μＭＭＲＥ３００８−Ｆ２０の存在下での結合として定義され、これは、全結合の約２５％である。ミクロ−メタ（Micro-Mate）１９６セルハーベスター（Packard Instrument Company）を用いて、ホワットマン（Whatman）ＧＦ／Ｂガラスファイバーフィルターを通してアッセイ混合物を濾過することによって、結合した放射能部分及び遊離の放射能部分を分離する。このフィルターに結合した放射能を、ミクロ−サイント（Micro-Scint）２０でトップカウント（Top Count）（効率５７％）上でカウントした。対照標準としてウシアルブミンを用いるバイオラッド（BioRad）法（Bradford,M.M.,"A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye-binding," Anal. Biochem. 72, 248, 1976)に従って、タンパク質の濃度を決定する。
【０１１３】
アデニレートシクラーゼのアッセイ
膜の調製は、ＧＴＰ５μＭ，ホスホジエステラーゼ阻害剤として０．５ｍＭの４−（３−ブトキシ−４−メトキシベンジル）−２−イミダゾリジオン(Ｒｏ２０−１２７４）、２．０ＩＵ／ｍＬアデノシンデアミナーゼを含む０．５ｍＬのインキュベーション混合物（５０ｍＭトリスＨＣｌ、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、ＥＤＴＡ  １ｍＭ、ｐＨ７．４）中に懸濁し、３７℃の振盪浴中において１０分間プレインキュベートする。ＩＢ−ＭＥＣＡ（１００ｎＭ）、又はＡＴＰ（１ｍＭ）及びフォルスコリン１０μＭのプラスで試験されるアンタゴニストを、この混合物に加え、そして、インキュベーションをさらに１０分続ける。アンタゴニストの力価は、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）産生の阻害を誘導するＩＢ−ＭＥＣＡ（１００ｎＭ）の拮抗作用によって決定された。この反応は、沸騰水浴に移すことにより終結される。２分間沸騰させ、次いで試験管は室温まで冷やされ、４℃で１０分間、２０００ｇで遠心分離する。上清（１００μＬ）が、実質的にバラニらの方法(Mol.Pharmacol.2000)に従って行われる競合プロテイン結合アッセイで使用される。
【０１１４】
全容積０．５ｍｌ中に、インキュベーションバッファー（トリズマベース（ｔｒｉｚｍａ ｂａｓｅ）  ０．１Ｍ、アミノフィリン８．０ｍＭ；２−メルカプトエタノール６．０ｍＭ、ｐＨ７．４）、及び［３Ｈ］−ｃＡＭＰを含有する各々の試験管に、ｃＡＭＰ標準のサンプル（０〜１０ｐｍｏｌ）を添加する。ウシ副腎から事前に調製した結合タンパク質を、４℃で１５０分間事前にインキュベートさせたサンプルに添加して、活性炭の添加後、２０００ｇで１０分間、遠心分離する。透明な上清（０．２ｍＬ）を、ＬＳ−１８００ベックマンシンチレーションカウンター中のアトムライト（atomlight)４ｍＬと混合する。
【０１１５】
実施例
以下の実施例は、本発明の概要を説明するものであるが、本発明を限定するものではない。これらの実施例において使用される記号と仕様は、現代の国際的な化学ジャーナル、例えばジャーナル  オブ  ザ  アメリカン  ケミカル  ソサエティー  （”Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．”）及びテトラヘドロンなどで使用されているものと同様である。
【実施例１】
【０１１６】
８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−Ｃ］ピリミジンの調製（化合物１８−２５）
８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−Ｃ］ピリミジン類は、下記スキームＶＩに示される合成ストラテジーに従って調製された。
【０１１７】
【化２０】
2006510574.tif 000016
【０１１８】
スキームＶＩ：８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−Ｃ］ピリミジン調製の基本手順（１８−２５）
試薬：ａ）ＮａＨ、ＤＭＦ、Ｒ２Ｘ；ｂ）ＨＣ（ＯＥｔ）３、還流；ｃ）２−フロ酸ヒドラジド、ＭｅＯ（ＣＨ２）２ＯＨ；ｄ）Ｐｈ２Ｏ、２６０ＥＣ（℃）、フラッシュクロマトグラフィー
【０１１９】
化合物１８−２５を調製するために、ＤＭＦ４０ｍｌ中の化合物１（１０ｍｍｏｌ）の溶液を０ＥＣ（℃）まで冷却し、ＮａＨ（６０％オイル溶液、１２ｍｍｏｌ）と様々な割合で１０分間以上反応させた。４５分後、それぞれの（ａｒ）アルキルハライド（１２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２５ＥＣ（℃）まで暖め、３〜５時間攪拌した（ＴＬＣ：ＥｔＯＡｃ  １：１）。反応は、Ｈ２Ｏ（８０ｍｌ）を加えて冷却し、ＥｔＯＡｃ（５×２５ｍｌ）によって水層を抽出した。有機層を合体し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下で濃縮し、Ｎ１及びＮ２異性体を分離していない混合物（割合は約１：４）としてアルキル化ピラゾール（化合物２−９）を得た。その後、このＮ１及びＮ２−置換−４−シアノ−５−アミノピラゾール（化合物２−９）の混合物を、トリエチルオルト蟻酸エステル（６０ｍｌ）に溶解し、その溶液を窒素下で８時間還流した。その後、溶媒を減圧で留去し、油状のイミデートの混合物（化合物１０−１７）の残留物を２−メトキシエタノール（５０ｍｌ）に溶解し、２−フロ酸ヒドラジド（１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を５〜１０時間還流させ、冷却した後、溶媒を減圧下で留去し、暗黒色の油状の残留物をジフェニルエーテル（５０ｍｌ）中でさらに環化した。反応において発生した水分を共沸により除去するためにディーンスターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）の装置を使用した。１．５時間後、混合物を冷却し、ヘキサン（３００ｍｌ）に注いだ。沈殿物を濾過して集め、クロマトグラフィーによって精製した（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン  １：１）。このようにして、主な生成物（Ｎ８アルキル化物）（化合物１８−２５）を全体的に高い収率で得た。
【０１２０】
この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０１２１】
８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物１８）収率４５％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１５５−１５６ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６１５，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）４．１（ｓ，１Ｈ）；６．３２（ｍ，１Ｈ）；７．２５（ｍ，１Ｈ）；８．０６（ｍ，１Ｈ）；８．８６（ｓ，１Ｈ），９．３８（ｓ，１Ｈ）。
【０１２２】
８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物１９）収率５０％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１８８−１８９ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６２０，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）１．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．５３（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．５９（ｍ，１Ｈ）；７．２３（ｍ，１Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；８．３４（ｓ，１Ｈ）；９．１０（ｓ，１Ｈ）。
【０１２３】
８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２０）収率６０％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１８９−１９０ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６００，１５０５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）０．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；２．０３−２．１０（ｍ，  ２Ｈ）；４．４１（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；７．２４（ｍ，１Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；８．３２（ｓ，１Ｈ）；９．１０（ｓ，１Ｈ）。
【０１２４】
８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２１）収率５０％，黄白色の固体，ｍ．ｐ．２４５−２４７ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６１０，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）０．９（ｍ，３Ｈ）；１．３（ｍ，２Ｈ）；１．９（ｍ，２Ｈ）；４．５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２）；６．２（ｍ，１Ｈ）；７．３（ｍ，１Ｈ）；８．０（ｍ，１Ｈ）；８．９（ｓ，１Ｈ）；９．４（ｓ，１Ｈ）。
【０１２５】
８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２２）収率５４％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．２３５−２３７ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６３５，１５１０，１４５０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）１．０（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．２）；１．５−１．９（ｍ，３Ｈ）；４．６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．４）；６．６（ｍ，１Ｈ），７．３（ｍ，１Ｈ）；７．７（ｍ，１Ｈ）；８．８（ｓ，１Ｈ）；９．１（ｓ，１Ｈ）。
【０１２６】
８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２３）収率４８％；黄色の固体，ｍ．ｐ．２１０−２１２ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６２５，１５００，１４３０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）１．７９（ｓ，３Ｈ）；１．８７（ｓ，３Ｈ）；５．０５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６）；５．５５−５．６３（ｍ，１Ｈ）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；７．２４（ｍ，１Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）８．３４（ｓ，１Ｈ）；９．１０（ｓ，１Ｈ）。
【０１２７】
８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２４）収率５６％，ｍ．ｐ．２６８−２７０ＥＣ（℃）；（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：１６６０，１５１０，１４５０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）３．３２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７）；４．７２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．７）；６．７３（ｓ，１Ｈ）；７．２３（ｍ，５Ｈ）；７．９５（ｓ，１Ｈ）；８．８（ｓ，１Ｈ）；９．４１（ｓ，１Ｈ）．Ａｎａｌ．（Ｃ１８Ｈ１４Ｎ６Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。
【０１２８】
８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物２５）収率６３％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１６５−１６６ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）；１６３０，１５００，１４４０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）２．３４−２．４８（ｍ，２Ｈ）；２．６７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５）；４．４３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５），６．６１（ｍ，１Ｈ）；７．１６−７．３２（ｍ，６Ｈ）；７．６４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２）；８．２９（ｓ，１Ｈ）；９．０２（ｓ，１Ｈ）。
【実施例２】
【０１２９】
５−アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンの調製（化合物３３−４０）
５−アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンは、下記スキームＶＩＩに示される合成ストラテジーに従って調製された。
【０１３０】
【化２１】
2006510574.tif 000017
【０１３１】
スキームＶＩＩ：５−アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン調製の基本手順（化合物３４−４１）
試薬：ａ）ＨＣｌ，還流；ｂ）ＮＨ２ＣＮ，１−メチル−２−ピロリドン，ｐＴｓＯＨ，１４０ＥＣ（℃）
【０１３２】
化合物３４−４１を調製するために、１０％ＨＣｌ水溶液（５０ｍｌ）中のピラゾロ−トリアゾロ−ピリミジン混合物（化合物１８−２５）の溶液（１０ｍｍｏｌ）を３時間還流した。その後、溶液を冷却し、０ＥＣ（℃）でＮａＨＣＯ３飽和溶液で中和した。化合物（２６−３３）をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍｌ）で抽出し、有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧で留去した。得られた粗製アミン（化合物２６−３３）をＮ−メチルピロリドン（４０ｍｌ）に溶解し、シアンアミド（６０ｍｍｏｌ）とｐ−トルエンスルホン酸（１５ｍｍｏｌ）を加え、その混合物を１６０ＥＣ（℃）で４時間加熱した。冷却した後、再びシアンアミド（６０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を一晩加熱した。その後、溶液をＥｔＯＡｃ（８０ｍｌ）で希釈し、沈殿物（余分なシアンアミド）を濾過して集め、それを減圧下で濃縮し、水で洗浄した（３×３０ｍｌ）。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧で留去した。残留物をクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／軽油  ２：１）で精製し、固体の目的の生成物（化合物３４−４１）を得た。
【０１３３】
この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０１３４】
５−アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３４）収率５３％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１６７−１６８ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５００−２９５０，１６８０，１６４５，１６１０，１５６０，１４５５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳ−ｄ６）＊（δ）４．１２（ｓ，３Ｈ）；６．７０（ｍ，１Ｈ）；６．９９（ｂｓ，２Ｈ）；７．１８（ｍ，１Ｈ）；７．８１（ｓ，１Ｈ），８．４２（ｓ，１Ｈ）。
【０１３５】
５−アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３５）収率６５％；黄色の固体，ｍ．ｐ．２４９−２５０ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４３０−２９５０，１６８０，１６５５，１６２０，１５５０，１４５０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）１．４６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．３０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．７２（ｍ，１Ｈ）；７．１８（ｍ，１Ｈ）；７．９３（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．６２（ｓ，１Ｈ）。
【０１３６】
５−アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３６）収率５７％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．２０９−２１０ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４００−２９００，１６６０，１６４５，１６１０，１５４５，１４３０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）０．８３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；１．８１−１．９１（ｍ，２Ｈ）；４．２２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．７１（ｍ，１Ｈ）；７．１９（ｍ，１Ｈ）；７．６３（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．６１（ｓ，１Ｈ）。
【０１３７】
５−アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３７）収率４７％；白色の固体，ｍ．ｐ．２００−２０３ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５００−２９００，１６８５，１６４０，１６２０，１５５０，１４５０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）０．９（ｔ，３Ｈ）；１．２（ｍ，２Ｈ）；１．８（ｍ，２Ｈ）；４．２（ｔ，２Ｈ）；６．７（ｍ，１Ｈ）；７．２（ｍ，２Ｈ）；７．６（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｓ，１Ｈ）；８．６（ｓ，１Ｈ）。
【０１３８】
５−アミノｏ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３８）収率６０％；灰色の固体，ｍ．ｐ．２１２−２１３ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５００−２８５０，１６７０，１６５０，１６１５，１５６０，１４５５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）０．９６（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝６．４）；１．５９（ｍ，１Ｈ）；１．８６（ｍ，２Ｈ）；４．３２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４）；６．５８（ｍ，１Ｈ）；６．７２（ｂｓ，２Ｈ）；７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２）；７．６３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．２）；８．１０（ｓ，１Ｈ）。
【０１３９】
５−アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物３９）収率５８％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１７８−１７９ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５２０−２９５０，１６６５，１６４０，１６１０，１５５５，１４５０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．７４（ｓ，３Ｈ）；１．７７（ｓ，３Ｈ）；４．８７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７）；５．４３−５．４６（ｍ，１Ｈ）；６．７２（ｍ，１Ｈ）；７．１８（ｍ，１Ｈ）；７．６２（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．５５（ｓ，１Ｈ）。
【０１４０】
５−アミノ−８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４０）収率４５％；白色の固体，ｍ．ｐ．１８３−１８５ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５００−２９００，１６７０，１６４５，１６２０，１５３０，１４５５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）３．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４）；４．５３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４）；６．７（ｓ，１Ｈ）；７．１−７．４（ｍ，６Ｈ），７．６５（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．４５（ｓ，１Ｈ）。
【０１４１】
５−アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４１）収率５７％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１６８−１７０ＥＣ（℃）（ＥｔＯＡｃ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３５１０−２９５０，１６６５，１６４０，１６１５，１５２０，１４５５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）＊（δ）２．１４−２．２１（ｍ，２Ｈ）；２．５４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．４）；６．７１（ｓ，１Ｈ）；７．１４−７．３２（ｍ，６Ｈ），７．６４（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．６４（ｓ，１Ｈ）。
【実施例３】
【０１４２】
５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンの調製（化合物４２−５７）
５−［（置換されたフェニル）カルボニル］アミノ−８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンは、下記スキームＶＩＩＩに示される合成ストラテジーに従って調製された。
【０１４３】
【化２２】
2006510574.tif 000018
【０１４４】
スキームＶＩＩＩ：５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン調製の基本手順（化合物４２−５７）
【０１４５】
化合物４２−５７を調製するために、それぞれのアミノ化合物（化合物３４−４１）（１０ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解し、それぞれのイソシアン酸塩誘導体（１３ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を、アルゴン存在下で１８時間還流した。その後、溶媒を減圧下で留去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−軽油  ４−６）で精製し、目的の化合物４２−５７を得た。この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０１４６】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４２）収率９８％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１４２−１４５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１０−２９３０，１６６０，１６３０，１６１０，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）４．２１（ｓ，３Ｈ）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；７．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．１３−７．２８（ｍ，２Ｈ）：７．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６５（ｓ，１Ｈ）；７．７８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２）；８．２２（ｓ，１Ｈ）；８．６１（ｂｓ，１Ｈ）；１１．２４（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１４７】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４３）収率９９％；黄色の固体，ｍ．ｐ．１９３−１９５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２００−２９００，１６６４，１６２５，１６００，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）３．８１（ｓ，３Ｈ）；４．２０（ｓ，３Ｈ）；６．６１（ｍ，１Ｈ）；６．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２６（ｍ，１Ｈ）；７．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６５（ｓ，１Ｈ）；８．２１（ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９６（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１４８】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４４）収率９８％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．２０４−２０５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２２０−２９３０，１６６０，１６２０，１６００，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．７１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；４．５０（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６７（ｍ，１Ｈ）；７．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．３１（ｍ，１Ｈ）；７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．７０（ｓ，１Ｈ）；７．８４（ｓ，１Ｈ）；８．３０（ｓ，１Ｈ）；８．６７（ｂｓ，１Ｈ）；１１．３０（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１４９】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−エチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４５）収率９９％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．２００−２０１ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２５０−２９５０，１６６５，１６２０，１６１０，１５２０ｃｍ−１  ；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．７１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；３．８５（ｓ，３Ｈ）；４．４９（ｓ，３Ｈ）；６．６５（ｍ，１Ｈ）；６．８８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２６（ｍ，１Ｈ）；７．５８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６９（ｓ，１Ｈ）；８．２８（ｓ，１Ｈ）；８．６３（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９９（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５０】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４６）収率９５％；白色の固体，ｍ．ｐ．１３８−１３９ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）：ＩＲ（ＫＢｒ）：３２１０−２９２０，１６５５，１６１５，１６００，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．７１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；２．０４（ｍ，２Ｈ）；４．３６（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６２（ｍ，１Ｈ）；７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．２７（ｍ，１Ｈ）；７．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６６（ｓ，１Ｈ）；７．８０（ｓ，１Ｈ）；８．２４（ｓ，１Ｈ）；８．６２（ｂｓ，１Ｈ）；１１．０８（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５１】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−プロピル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４７）収率９８％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１４６−１４８ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２３０−２９５０，１６６０，１６２０，１６００，１５３０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；２．０４−２．０８（ｍ，２Ｈ）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；４．３５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６１（ｍ，１Ｈ）；６．８９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２５（ｍ，１Ｈ）；７．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６５（ｓ，１Ｈ）；８．２３（ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９５（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５２】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４８）収率９７％；白色の固体，ｍ．ｐ．２１０−２１２ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２４０−２９７０，１６５０，１６１０，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．００（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；１．３９−１．４１（ｍ，２Ｈ）；１．９９−２．０３（ｍ，２Ｈ）；４．４１（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６３（ｍ，１Ｈ）；７．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．２９（ｍ，１Ｈ）；７．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６７（ｓ，１Ｈ）；７．８０（ｓ，１Ｈ）；８．２５（ｓ，１Ｈ）；８．６３（ｂｓ，１Ｈ）；１１．２６（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５３】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３，ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物４９）収率９６％；白色の固体，ｍ．ｐ．１９７−１９８ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２５０−２９６０，１６６５，１６１０，１６００，１５２０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７）；１．３８−１．４２（ｍ，２Ｈ）；２．０２−２．０５（ｍ，２Ｈ）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；４．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６３（ｍ，１Ｈ）；６．９２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２５（ｍ，１Ｈ）；７．５７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６７（ｓ，１Ｈ）；８．２３（ｓ，１Ｈ）；８．６０（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９５（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５４】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５０）収率９７％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１９９−２００ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２３０−２９５０，１６５５，１６００，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．０１（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．５）；１．４９−１．５１（ｍ，１Ｈ）；１．８８−２．０３（ｍ，２Ｈ）；４．４２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６２（ｍ，１Ｈ）；７．１３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．３４（ｍ，１Ｈ）；７．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６７（ｓ，１Ｈ）；７．８０（ｓ，１Ｈ）；８．２４（ｓ，１Ｈ）；８．６３（ｂｓ，１Ｈ）；１１．２５（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５５】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５１）収率９８％；白色の固体，ｍ．ｐ．１９２−１９３ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２３０−２９７０，１６６０，１６１５，１６００，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）０．９９（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．５）；１．５８−１．２２（ｍ，１Ｈ）；１．８７−１．９７（ｍ，２Ｈ）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；４．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６２（ｍ，１Ｈ）；６．９１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２３（ｍ，１Ｈ）；７．５８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６６（ｓ，１Ｈ）；８．２３（ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９４（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５６】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５２）収率９９％；白色の固体，ｍ．ｐ．２０４−２０５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２４５−２９６０，１６５０，１６００，１５１０ｃｍ−１  ；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．８４（ｓ，３Ｈ）；１．８８（ｓ，３Ｈ）；５．０１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８）；５．５７（ｍ，１Ｈ）；６．６２（ｍ，１Ｈ）；７．１２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．２９（ｍ，１Ｈ）；７．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６６（ｓ，１Ｈ）；７．８０（ｓ，１Ｈ）；８．２６（ｓ，１Ｈ）；８．６０（ｂｓ，１Ｈ）；１１．２６（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５７】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（２−イソペンテニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５３）収率９６％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１９８−１９９ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２３５−２９５０，１６６５，１６２０，１６００，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）１．８３（ｓ，３Ｈ）；１．８７（ｓ，３Ｈ）；３．８１（ｓ，３Ｈ）；４．９７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７）；５．５７（ｍ，１Ｈ）；６．６１（ｍ，１Ｈ）；６．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２４（ｍ，１Ｈ）；７．５４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．６６（ｓ，１Ｈ）；８．２５（ｓ，１Ｈ）；８，５８（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９６（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５８】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５４）収率９８％；白色の固体，ｍ．ｐ．１８６−１８７ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２５０−２９７０，１６６０，１６１０，１５１５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）３．３３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．６２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；７．１９−７．３５（ｍ，７Ｈ）；７．５７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６１（ｓ，１Ｈ）；７．８１（ｓ，１Ｈ）；７．８９（ｓ，１Ｈ）；８．６３（ｂｓ，１Ｈ）；１１．２７（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１５９】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５５）収率９９％；白色の固体，ｍ．ｐ．１８０−１８１ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）；３２４５−２９６０，１６６０，１６１５，１６００，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）３．４２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；３．８２（ｓ，３Ｈ）；４．６０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；６．９３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．０９（ｍ，２Ｈ）；７．２０−７．２８（ｍ，４Ｈ）；７．５６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８）；７．６０（ｓ，１Ｈ）；７．８９（ｓ，１Ｈ）；８．５９（ｂｓ，１Ｈ）；１０．９６（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１６０】
５−［［（３−クロロフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５６）収率９９％；黄白色の固体，ｍ．ｐ．１８３−１８４ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）；３２４５−２９６０，１６６５，１６１０，１５１５ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）２．４６（ｍ，２Ｈ）；２．７３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．４３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６６（ｍ，１Ｈ）；７．１９−７．４０（ｍ，８Ｈ）；７．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；７．８５（ｍ，１Ｈ）；８．２５（ｓ，１Ｈ）；８．６７（ｂｓ，１Ｈ）；１１．３０（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１６１】
５−［［（４−メトキシフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５７）収率９８％；白色の固体，ｍ．ｐ．１７４−１７５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２４０−２９５０，１６６５，１６１５，１６００，１５１０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）２．４６（ｍ，２Ｈ）；２．７３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．４２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；６．６７（ｍ，１Ｈ）；６．９６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９）；７．２２−７．４１（ｍ，６Ｈ）；７．６０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；８．２５（ｓ，１Ｈ），８．６５（ｂｓ，１Ｈ）；１１．１６（ｂｓ，１Ｈ）。
【実施例４】
【０１６２】
５−［（ベンジル）カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５８−５９）
５−［（ベンジル）カルボニル］アミノ−８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンは、下記スキームＩＸに示される合成ストラテジーに従って調製される。
【０１６３】
【化２３】
2006510574.tif 000019
【０１６４】
スキームＩＸ：５−［（ベンジル）カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン調製の基本手順（化合物５８−５９）
【０１６５】
化合物５８−５９を調製するために、それぞれのアミノ化合物（化合物３８又は４１）（１０ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＴＨＦ（１５ｍｌ）に溶解し、それぞれの酸ハロゲン化物誘導体（１３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１３ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物をアルゴン雰囲気下１８時間還流させた。その後、溶媒を減圧下で留去し、残留物をＥｔＯＡｃ（３０ｍｌ）に溶解し、水（１５ｍｌ）で２回洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−軽油  ４：６）で精製し、目的の化合物５８及び５９を得た。
【０１６６】
この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０１６７】
５−［（ベンジル）カルボニル］アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５８）収率８５％，黄白色の固体，ｍ．ｐ．１４４−１４５ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３２５５−２９３０，１６７３，１６２０，１６１０，１５２０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）０．９８（ｄ，６Ｈ，Ｊ＝７．５）；１．６０（ｍ，１Ｈ）；１．９１（ｍ，１Ｈ）；４．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．５３（ｓ，２Ｈ）；６．６０（ｍ，１Ｈ）；７．１８（ｍ；１Ｈ）；７．２６−７．３９（ｍ，５Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；８．２２（ｓ，１Ｈ）；９．１１（ｂｓ，１Ｈ）。
【０１６８】
５−［（ベンジル）カルボニル］アミノ−８−（３−（フェニル）プロピル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン（化合物５９）収率９５％，黄白色の固体，ｍ．ｐ．１１６−１１７ＥＣ（℃）（Ｅｔ２Ｏ−軽油）；ＩＲ（ＫＢｒ）；３２５０−２９００，１６７５，１６２５，１６００，１５００ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）＊（δ）２．３９（ｍ，２Ｈ）；２．６７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７）；４．５３（ｓ，２Ｈ）；６．６１（ｍ，１Ｈ）；７．１６−７．４３（ｍ，１１Ｈ）；７．６５（ｓ，１Ｈ）；７．６４（ｓ，１Ｈ）；８．１９（ｓ，１Ｈ）；９．１２（ｂｓ，１Ｈ）。
【実施例５】
【０１６９】
１−置換−４−シアノ−５−アミノピラゾールの調製
市販されているエトキシ−メチレン  マロノジニトリル、及び、同様に市販されているＮ１−置換されたヒドラジンを用いて、ジャーナル  オブ  オーガニック  ケミストリー  （Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．）１９５６，２１，１２４０、ジャーナル  オブ  ザ  アメリカン  ケミカル  ソサエティー  （Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）１９５６，７８，７８４、及びこれらで引用されている文献に記載の手順に従って、以下の化合物を調製した。
１−メチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−ｎ−ブチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−イソペンチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−（２−シクロペンチル）エチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−ヒドロキシエチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−フェニル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−ｔｅｒｔ−ブチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−（フェニル）エチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール
１−（２−クロロフェニル）−４−シアノ−５−アミノピラゾール
【０１７０】
これらの化合物は、ここに記載されているピラゾロ−トリアゾロ−ピリミジン化合物を調製するための中間体として使用することができる。
【実施例６】
【０１７１】
１−置換−４−シアノ−３−アミノピラゾールの調製
４−シアノ−５−アミノピラゾールを原料として、ケミカル  アンド  ファーマスティカル  ブレティン（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．）１９７０，１８，２３５３、又は、ジャーナル  オブ  ヘテロサイクリック  ケミストリー（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍ．）１９７９，１６，１１１３で報告されている手順に従って、１−置換４−シアノ−３−アミノピラゾールを、無水炭酸カリウム存在下、８０ＥＣ（℃）で１〜２時間でジメチルホルムアミド中で対応するハロゲン化アルキルによる直接アルキル化法により調製する。約１：２の比率のＮ１及びＮ２アルキル化の２種の位置異性体を含む反応混合物から、Ｎ２異性体を単一の結晶化又はシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーで酢酸エチルと石油エーテルの混合物による溶出により単離される。これらの手順で以下の化合物を調製した。
１−メチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール
１−ブチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール
１−ベンジル−４−シアノ−３−アミノピラゾール
１−イソペンチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール
１−（フェニル）エチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール
【０１７２】
これらの化合物は、ここに記載されているピラゾロ−トリアゾロ−ピリミジン化合物を調製するための中間体として使用することができる。
【実施例７】
【０１７３】
フェニルエチル−４−シアノ−３−アミノピラゾールの調製
ａ）ＤＭＦ（５０ｍｌ）中の無水炭酸カリウム（３０ｍｍｏｌ）の懸濁液に３−アミノ−４−シアノピラゾール（２０ｍｍｏｌ）を加え、８０ＥＣ（℃）の温度で３０分間加熱した。その懸濁液に臭化フェネチル（２５ｍｍｏｌ）を加え、８０ＥＣ（℃）で２時間加熱した。室温まで冷却した後、その混合物を減圧で蒸発乾固し、得られた残留物を蒸留水（１００ｍｌ）に溶解し、酢酸エチル（３×５０ｍｌ）で抽出した。有機抽出液を併せて、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧で蒸発乾固した。得られた残留物は、１−フェニルエチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール（２０％）と１−フェニルエチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール（６０％）の１：３の混合物からなる。これらの混合物は、実施例９で使用されてもよく、又は、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィーにより、酢酸エチル／ヘキサン混合物で溶出して精製して、以下の化合物を得る。
１−フェニルエチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール  Ｍ．Ｐ．１７２−１７３ＥＣ（℃）；（２０％）；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．０４（ｔ，２Ｈ）；４．１２（ｔ，２Ｈ）；５．８５（ｂｓ，２Ｈ）；７．２１−７．３０（ｍ，５Ｈ）；７．４１（ｓ，１Ｈ）；１−２−フェニルエチル−４−シアノ−３−アミノピラゾール  Ｍ．Ｐ．９８−１００ＥＣ（℃）（６０％）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．０７（ｔ，２Ｈ）；４．１０（ｔ，２Ｈ）；４．２３（ｂｓ，２Ｈ）；７．１７（ｓ，１Ｈ）；７．００−７．２８（ｍ，５Ｈ）。
【０１７４】
ｂ）トリエチルオルト蟻酸エステル（４０ｍｌ）中の１−２−フェニルエチル−４−シアノ−５−アミノピラゾール（２０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で８時間還流させた。余分なオルト蟻酸エステルを減圧で蒸発留去し、残った黄色の油をエチルエーテルに溶解し、シリカゲルで処理して濾過し、対応するイミノエーテルを得た（収率８７％）。オルト蟻酸エステルを蒸発した後に得られた残留物は実質的に純粋で、すぐに次のステップで使用される。２−メトキシエタノール（５０ｍｌ）中のイミノエーテル（２０ｍｍｏｌ）及び２−フロ酸ヒドラジド（２．５ｇ，２２ｍｍｏｌ）の溶液を５〜１０時間還流した。冷却した後、溶液を留去して、油状の残留物を得た。その残留物を、反応中に発生した水分を共沸除去するために、ディーンスターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）装置を使用してジフェニルエーテル（５０ｍｌ）中で加熱環化した。１．５時間後、反応はＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル  ２：１）によって確認され、出発化合物が完全になくなった時に、混合物を冷却しヘキサンを加えた。得られた沈殿物を濾過、結晶化し、７−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］−ピリミジンを得た。Ｍ．Ｐ．１７４−１７５ＥＣ（℃）（２０％）１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．２３（ｔ，２Ｈ）４．７４（ｔ，２Ｈ）；６．７５；（ｓ，１Ｈ）；７．１４−７．１７（ｍ，５Ｈ）；７．２８（ｓ，１Ｈ）；７．９８（ｓ，１Ｈ）；８．５３（ｓ，１Ｅ）；９．５６（ｓ，１Ｈ）。
【０１７５】
同様に、１−２−フェニルエチル−４−シアノ−３−アミノピラゾールを用いて、８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ（１，５−ｃ）−ピリミジンを調製した。Ｍ．Ｐ．２６８−２７０ＥＣ（℃）（６００Ａ）１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．３２（ｔ，２Ｈ）；４．７２（ｔ，２Ｈ）；６．７３（ｓ，１Ｈ），７．２３（ｍ，５Ｈ）；７．９５（ｓ，１Ｈ）；８．８（ｓ，１Ｈ）；  ９．４１（ｓ，１Ｈ）。
【０１７６】
ｃ）１０％ＨＣｌ（５．０ｍｌ）中のステップｂ）の生成物（１０ｍｍｏｌ）の懸濁液を３時間攪拌し還流させた。冷却した後、溶液を０ＥＣ（℃）で濃縮水酸化アンモニウムで塩基性にし、得られた沈殿物を酢酸エチル（３×１００ｍｌ）で抽出、乾燥し、減圧で蒸発乾固し、対応する１−（２−フェニルエチル）−４−［３（２−フリル）−１，２，４−トリアゾール−５−イル］−５−アミノピラゾールを得た。ｍ．ｐ．１７５−１７６ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．１５（ｔ，２Ｈ）；４．４８（ｔ，２Ｈ）；５．７８（ｓ，１Ｈ）；６．３７（ｓ，１Ｈ）；６．６８（ｓ，１Ｈ）；７．１（ｓ，１Ｈ）；７．２７−７．２８（ｍ，５Ｈ）；７．８２（ｓ，１Ｈ）；１４．５１（ｂｓ，２Ｈ）；同様に、１−（２−フェニルエチル）−４−［３（２−フリル）−１，２，４−トリアゾール−５−イル）−３−アミノピラゾール（ｍ．ｐ．２０５−２０６ＥＣ（℃））；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．１２（ｔ，２Ｈ）；４．４６（ｔ，２Ｈ）；５．７５（ｓ，１Ｈ）；１４．４１（ｂｓ，２Ｈ）を得た。
【０１７７】
ｄ）Ｎ−メチルピロリドン（４０ｍｌ）中のステップｃ）のアミン（１０ｍｍｏｌ）の懸濁液にシアンアミド（６０ｍｍｏｌ）を加え、その後ｐ−トルエンスルホン酸（１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を攪拌しながら１６０ＥＣ（℃）まで加熱した。４時間後、２回目のシアンアミド（６０ｍｍｏｌ）を加え、一晩中加熱した。その後、混合物を冷却し、熱水（２００ｍｌ）で処理した。沈殿物を濾過し、水で洗浄し、エタノールで結晶化し、対応する５−アミノ−７−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンを得た。ｍ．ｐ．２２５−２２６ＥＣ（℃）．１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．２１（ｔ，２Ｈ）；４．５１（ｔ，２Ｈ）；６．６５（ｓ，１Ｈ）；７．１−７．４４（ｍ，６Ｈ）；７．７８（ｓ，１Ｈ）；７．８９（ｂｓ，２Ｈ）；８．０７（ｓ，１Ｈ）。
【０１７８】
同様に、５−アミノ−８−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンｍ．ｐ．２１２−２１３ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．２１（ｔ，２Ｈ）；４．５３（ｔ，２Ｈ）；６．７（ｓ，１Ｈ）；７．１−７．４（ｍ，５Ｈ，芳香環のＨ（ａｒｏｍ）及び１Ｈ）；７．６５（ｂｓ，２Ｈ）；７．９３（ｓ，１Ｈ）；８．４５（ｓ，１Ｈ）を得た。
【実施例８】
【０１７９】
４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールの調製
ＤＭＳＯ（７０ｍｌ）中の炭酸カリウム（０．２３モル）の懸濁液にシアノアセトアミド（７０ｍｍｏｌ）及びｐ−フルオロベンジルアジド（５４．５ｍｍｏｌ）を続けて加えた。得られた溶液を室温で１時間攪拌し、その後大量の水（１．５ｌ）を注入した。分離した固体を濾過し、水で洗浄し、７０ＥＣ（℃）のオーブンで乾燥させ、１−（ｐ−フルオロベンジル）−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール（収率９６．１％）を得た。Ｍ．Ｐ．：１９８−１９９ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５−７．１（ｍ，６Ｈ）；６．４（ｓ，２Ｈ）；５．４（ｓ，２Ｈ）。
【０１８０】
攪拌し０ＥＣ（℃）に冷却した、ＤＭＦ（５ｍｌ）中のアミド懸濁液（０．００５モル）にオキシ塩化リン（０．０１モル）を加えた。得られた溶液を０ＥＣ（℃）で５分間、２５ＥＣ（℃）で１０分間、８０ＥＣ（℃）で１５分間攪拌した。室温に冷却した後、５ｍｌの  Ｎ  ＨＣｌを加え、その混合物を５分間還流させた。１−（ｐ−フルオロベンジル）−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールが冷却した溶液から分離した（収率９０％）。Ｍ．Ｐ．１８５−１８６ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．３−７．０（ｍ，６Ｈ）；５．５（ｓ，２Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４００，３２２０，２２２０，１６５５ｃｍ−１。
【０１８１】
同様に、以下の化合物を調製した。
１−又は２−ベンジル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−（ｏ−フルオロベンジル）−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−（ｐ−フルオロベンジル）−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−ブチル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−イソペンチル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−（２−メトキシエチル）−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−２−ヘプチル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
１−又は２−オクチル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール
【０１８２】
これらの化合物は、ここに記載されているトリアゾロ−トリアゾロ−ピリミジン化合物を調製するための中間体として使用することができる。
【実施例９】
【０１８３】
エトキシメチレンアミノ複素環類の調製
化合物ＩＶのエトキシメチレンアミノ複素環類は、オルト−アミノニトリルをそれぞれエチルオルト蟻酸エステルと還流させて調製される。一例として、４−シアノ−５−（エトキシメチレンアミノ）−１−ブチルピラゾールの調製が報告されている。トリエチルオルト蟻酸エステル（４０ｍｌ）中の４−シアノ−５−アミノ−１−ブチルピラゾール（２０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で８時間、還流温度まで加熱する。余分なオルト蟻酸エステルを減圧で留去する。残った黄色の油をエチルエーテルに溶解し、シリカゲルを用いて溶出し、純粋な化合物を得た（収率８７％）。多くの場合、オルト蟻酸エステルの蒸発後に得られた残留物は実質的に純粋で、すぐに次のステップで使用される。ＩＲ（ヌジョール）：３１４０，２２４０，１６４０ｃｍ−１；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：８．４（ｓ，１Ｈ）；７．９（ｓ，１Ｈ）；４．５（ｔ，２Ｈ）；４．３（ｑ，２Ｈ）；１．８（ｍ，２Ｈ）；１．５（ｍ，２Ｈ）；１．４（ｔ，３Ｈ）；０．９（ｔ，Ｍ）。
【実施例１０】
【０１８４】
エトキシメチレンアミノ複素環の環化
２−メトキシエタノール（５０ｍｌ）中のエトキシメチレンアミノ複素環（２０ｍｍｏｌ）及び２−フロ酸ヒドラジド（２．５ｇ，２２ｍｍｏｌ）の溶液を５〜１０時間還流させた。冷却した後、その溶液を濃縮し、オイル状の残留物を得た。そのオイル状の残留物を、ジフェニルエーテル（５０ｍｌ）中で加熱環化した。反応中に発生した水分は、ディーンスターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）装置を取り付けた丸底フラスコを使って共沸除去した。種々の時間（３〜５時間）後、反応はＴＬＣ（酢酸エチル：石油エーテル  ２：１）によって確認され、すべての出発生成物がなくなった時、混合物を冷却し、ヘキサンを加えた。得られた沈殿物を濾過し、適当な溶媒で結晶化した。ある場合には、粘性のオイルが溶液から分離し、その後デカントされ抽出される。その後、油状の残留物はシリカゲルでクロマトグラフされ、酢酸エチル／石油エーテル混合物で溶出され、三環の化合物ＶＩを得た。
【０１８５】
一例として、これらの化合物によって調製されたいくつかの化合物の分析的、分光学的な性質を示す。
【０１８６】
７−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ−［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：９．６（ｓ，１Ｈ）；８．６（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｍ，１Ｈ）；７．４（ｍ，１Ｈ）；６．７（ｍ，１Ｈ）；４．５（ｔ，２Ｈ）；１．９（ｍ，２Ｈ）；１．３（ｍ，２Ｈ）；０．９（ｔ，３Ｈ）。
【０１８７】
８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：９．４（ｓ，１Ｈ）；８．９（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｍ，１Ｈ），７．３（ｍ，１Ｈ）；６．２（ｍ，１Ｈ）；４．５（ｔ，２Ｈ）；１．９（ｍ，２Ｈ）；  Ｉ．；（ｍ，２Ｈ）；０．９（ｍ，３Ｈ）。
２Ｄ−ＮＭＲ（ＮＯＥＳＹ）スペクトルにおいて、４．５で共鳴するＮ−ＣＨ２シグナルは８．９で共鳴するＣ９−Ｈシグナルとクロスピークを示した。
【０１８８】
７−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：９．１（ｓ，１Ｈ）；８．８（ｓ，１Ｈ）；７．７（ｍ，１Ｈ）；７．３（ｍ，１Ｈ）；６．６（ｍ，１Ｈ）；４．６（ｔ，２Ｈ）；１．１８−１．７（ｍ，３Ｈ）；１．０（ｄ，６Ｈ）。
【０１８９】
８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
９．１（ｓ，１Ｈ）；８．８（ｓ，１Ｈ）；７．７（ｍ，１Ｈ）；７．３（ｍ，１Ｈ）；６．６（ｍ，１Ｈ）；４．６（ｔ，２Ｈ）；１．９−１．５（ｍ，３Ｈ）；１．０（ｄ，６Ｈ）。
【０１９０】
この手順に従って、以下の化合物を調製した。
７−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−（２−クロロフェニル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−フェニルエチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−（２−（シクロペンチル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−ベンジル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−（２−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−（４−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−ブチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−イソペンチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−（２−メトキシ）エチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−ヘプチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
７−オクチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−（２−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−（４−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−ブチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−イソペンチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−ヘキシル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−ヘプチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
８−オクチル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
９−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
９−（２−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
９−（４−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン
【０１９１】
これらの化合物は、ここに記載されているトリアゾロ−トリアゾロ−ピリミジン及びピラゾロ−トリアゾロ−ピリミジンを調製するための中間体として使用することができる。
【実施例１１】
【０１９２】
５−アミノ−７−［アラルキル］−２−（２−フリル）−ピラゾール［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンの調製
Ｎ−メチル−ピロリドン（４０ｍｌ）中の式ＶＩＩのアミン（１０ｍｍｏｌ）の懸濁液にシアンアミド（６０ｍｍｏｌ）を加え、さらにｐ−トルエンスルホン酸（１５ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物を電磁攪拌しながら１６０ＥＣ（℃）まで熱した。４時間後、２回目のシアンアミド（６０ｍｍｏｌ）を加え、一晩中加熱した。その後、混合物を冷却し、熱水（２００ｍｌ）で処理した。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、エタノールで結晶化した。沈殿物がない場合は、溶液を酢酸エチル（４×１００ｍｌ）で抽出し、抽出物を塩水（２×５０ｍｌ）で洗浄し、減圧で乾燥し、留去した。その後、残留物はシリカゲルカラムでクロマトグラフされ、酢酸エチルで溶出した。
【０１９３】
以下に、この手順で調製されたいくつかの化合物の分析的、分光学的データを示す。
【０１９４】
５−アミノ−７−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン。Ｍ．Ｐ．１５７−１５８ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）８．１（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｓ，２Ｈ）；７．９（ｍ，１Ｈ）；７．２（ｍ，１Ｈ）；６．７（ｍ，１Ｈ）；４．２（ｔ，２Ｈ）；１．９（ｍ，２Ｈ）；１．５（ｍ，２Ｈ）；０．９（ｔ，３Ｈ）。５−アミノ−８−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン  ｍ．ｐ．１８３−１８５ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．６（ｓ，１Ｈ）；８．０（ｓ，１Ｈ）；７．６（ｓ，２Ｈ）；７．２（ｍ，１Ｈ）；６．７（ｍ，１Ｈ）；４．２（ｔ，２Ｈ）；１．８（ｍ，２Ｈ）；１．２（ｍ，２Ｈ）；０．９（ｔ，３Ｈ）。
【０１９５】
５−アミノ−７−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン。  Ｍ．ｐ．２９５−２９７ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．５（ｓ，２Ｈ）；８．０（ｓ，１Ｈ）；７．３（ｍ，６Ｈ）；６．７（ｍ，１Ｈ）；５．７（ｓ，２Ｈ）。
【０１９６】
５−アミノ−７−ｏ−フルオロ−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン  Ｍ．ｐ．３１０−３１２ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．５（ｓ，２Ｈ）；８．０（ｓ，１Ｈ）；７．３（ｍ，５Ｈ）；６．８（ｓ，１Ｈ）；５．７５（ｓ，２Ｈ）。
【０１９７】
５−アミノ−７−メチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２１０−２１３ＥＣ（℃）
【０１９８】
５−アミノ−７−ｔｅｒｔ−ブチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２３８−２４０ＥＣ（℃）
【０１９９】
５−アミノ−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２４８−２５０ＥＣ（℃）
【０２００】
５−アミノ−７−（２−ヒドロキシエチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２５８−２６０ＥＣ（℃）
【０２０１】
５−アミノ−７−フェニル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２９５−２９７ＥＣ（℃）
【０２０２】
５−アミノ−７−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｅ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２０８−２１０ＥＣ（℃）
【０２０３】
５−アミノ−８−イソペンチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２００−２０３ＥＣ（℃）
【０２０４】
５−アミノ−７−フェネチル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２２５ＥＣ（℃）
【０２０５】
５−アミノ−７−［２−（ベンジルオキシ）エチル］−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ−［１，５−ｃ］ピリミジン
【０２０６】
５−アミノ−７−［２−（４−イソブチルフェニル）エチル］−（２−フリル）−ピラゾール［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２０７−２１０ＥＣ（℃）
【０２０７】
これらの化合物は、適当な酸又はスルホン酸誘導体と反応させて、本明細書に開示されている式Ｉの化合物とすることができる。
【実施例１２】
【０２０８】
置換−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールの調製
ｐ−フルオロベンジルアジド（１５．１ｇ、０．１モル）及びシアンアセトアミド（１０．８ｇ、０．１３モル）を、この順番でジメチルスルホキシド（１５０ｍｌ）中の粉末炭酸カリウム（５７．５ｇ、０．４２モル）の懸濁液中に加えた。その混合物を室温で１時間攪拌した。その後、混合物に３リットルの水を注入し、分離した固体を濾過し、水で十分に洗浄し、２２．４７ｇ（９６％）の１−ｐ−フルオロベンジル−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールを得た。Ｍ．Ｐ．：１９８−１９９ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５−７．１（ｍ，６Ｈ）；６．４（ｓ，２Ｈ）；５．４（ｓ，２Ｈ）。
【０２０９】
同様に、以下の化合物を得た。
【０２１０】
２−フルオロ−６−クロロベンジル−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；ｍ．ｐ．２３０−２３１ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：５．４０（ｓ，２Ｈ）；６．５２（ｂｓ，２Ｈ）；７．１２−７．４５（ｍ，５Ｈ）。
【０２１１】
３−フルオロベンジル−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；ｍ．ｐ．２１１−２１１ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：５．４６（ｓ，２Ｈ）；６．４７（ｂｓ，２Ｈ）；７．００−７．５２（ｍ，６Ｈ）。
【０２１２】
２−フルオロベンジル−４−カルボキシアミド−５−アミノ−ｌ，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．１９５−１９７ＥＣ（℃）。
【０２１３】
１−（２−（フェニル）エチル）−４−カルボキシアミド−５−アミノ−ｌ，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．１８１−１８３ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．０４（ｔ，２Ｈ）；４．３５（ｔ，２Ｈ）；６．３０（ｂｓ，２Ｈ）；７．２０−７．４７（ｍ，７Ｈ）。
【実施例１３】
【０２１４】
置換−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールの調製
ＤＭＦ（１００ｍｌ（１００  １０ｍｌ））中の１−ｐ−フルオロベンジル−４−カルボキシアミド−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール（２３．４ｇ、０．１モル）の懸濁液を、０ＥＣ（℃）でマグネティックスターラーで攪拌し、２０．８ｍｌ（０．２モル）のＰＯＣｌ３を加えた。その溶液を０ＥＣ（℃）で５時間、室温で１０時間、最後に８０ＥＣ（℃）で１５時間攪拌した。冷却した後、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍｌ）を加え、得られた溶液を５時間還流させた。その後冷却し、以下の１，５ｐ−フルオロベンジル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール（１８．５４ｇ、９０％）沈殿物を得た。Ｍ．Ｐ．１８５−１８６ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．３−７．０（ｍ，６Ｈ）；５．５（ｓ，２Ｈ）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３４００，３２２０，２２２０，１６５５ｃｍ−１ 。
【０２１５】
同様に、以下の化合物を得た。
【０２１６】
２−フルオロ−６−クロロベンジル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．１８１−１８５ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：５．４０（ｓ，２Ｈ）；７．２６−７．５０（ｍ，５Ｈ）。
【０２１７】
３−フルオロベンジル−４−シアノ−５−アミノ−ｌ，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．１９５−１９７ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：５．４４（ｓ，２Ｈ）；７．００−７．４３（ｍ，６Ｈ）。
【０２１８】
２−フルオロベンジル−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．：１９５−１９７ＥＣ（℃）。
【０２１９】
１−（２−（フェニル）エチル）−４−シアノ−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；Ｍ．Ｐ．１４９−１５０ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．０４（ｔ，２Ｈ），４．３６（ｔ，２Ｈ）；７．０３（ｂｓ，２Ｈ）；７．２３−７．２８（ｍ，５Ｈ）。
【実施例１４】
【０２２０】
置換−４［３（２−フリル）−１，２，４−トリアゾール−５−イル］−５−アミノ−１，２，３−トリアゾールの調製
ジフェニルエーテル（３０ｍｌ）中の１−ｐ−フルオロベンジル−４−シアノ−５−アミノ−２，３−トリアゾール（２０ｍｍｏｌ）及び２−フロ酸ヒドラジド（２２ｍｍｏｌ）の懸濁液を、出発化合物がなくなるまで攪拌し、熱し、ディーンスターク装置で還流させた（２６０ＥＣ（℃））（ＴＬＣ，１〜２時間）。冷却した後、混合物を石油エーテルで希釈し、得られた沈殿物をデカンテーションによって濾過又は分離させた。シリカゲルカラムでクロマトグラフし、酢酸エチル及び石油エーテル２：１で溶出し、以下を得た。
【０２２１】
１−（ｐ−フルオロベンジル）−４−［３−（２−フリル）−ｌ，２，４−トリアゾール−５−イル］−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール；ｍ．ｐ．２６６−２６８ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１４．５（ｓ，１Ｈ）；７．８（ｓ，１Ｈ）；７．４−７．１（ｍ，５Ｈ）；６．６（ｓ，１Ｈ）；６．５（ｓ，２Ｈ）；５．５（ｓ，２Ｈ）。
【０２２２】
同様に、１−（２−（フェニル）エチル）−４［３（２−フリル）−１，２，４−トリアゾール−５−イル］−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール（５０％）；ｍ．ｐ．２００−２０２ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：３．０７（ｔ，２Ｈ）；４．１６（ｔ，２Ｈ）；５．５０（ｂｓ，２Ｈ）；６．６１（ｓ，１Ｈ）；６．９５（ｓ，１Ｈ）；７．２−７．４（ｍ，５Ｈ）；７．７８（ｓ，１Ｈ）；１３．８（ｂｓ，１Ｈ）を得た。
【実施例１５】
【０２２３】
５−アミノ−７−置換−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンの調製
Ｎ−メチル−ピロリドン（４ｍｌ）中の１−（ｐ−フルオロベンジル）−４−［３−（２−フリル）１，２，４−トリアゾル−５−イル］−５−アミノ−１，２，３−トリアゾール（０．３２５ｇ、１モル）の懸濁液にシアンアミド（６ｍｍｏｌ）を加え、ｐ−トルエンスルホン酸（１．５ｍｍｏｌ）を加えた。その混合物をマグネティックスターラーで攪拌しながら１６０ＥＣ（℃）に加熱した。４時間後、２回目のシアンアミド（６ｍｍｏｌ）を加え、一晩中加熱した。その後、その混合物を熱水（２０ｍｌ）で処理した。沈殿した固体を濾過し、水で洗浄し、エタノールで結晶化した。沈殿物がない場合は、溶液を酢酸エチル（４×１０ｍｌ）で抽出し、抽出物を塩水（２×５ｍｌ）で洗浄し、真空状態で乾燥、蒸発乾固した。その後、残留物はシリカゲルカラムでクロマトグラフされ、酢酸エチルで溶出し、以下の１０５ｍｇ（収率３０％）の５−アミノ−７−ｐ−フルオロ−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンを得た。Ｍ．Ｐ．：２６６−２６８ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．５（ｂｓ，２Ｈ）；７．９５（ｓ，１Ｈ）；７．４−７．１（ｍ，６Ｈ）；６．７（ｓ，１Ｈ）；５．７（ｓ，２Ｈ）。
【０２２４】
同様に、以下の化合物を得た。
【０２２５】
５−アミノ−７−（ｏ−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；Ｍ．Ｐ．３１０ＥＣ（℃）。
【０２２６】
５−アミノ−７−ベンジル−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；Ｍ．Ｐ．２９５−２９７ＥＣ（℃）。
【０２２７】
５−アミノ−７−（２−フルオロ−６−クロロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ−［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；Ｍ．Ｐ．２１８−２２０ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳ０−ｄ６）：８．５１（ｂｓ，２Ｈ）；７．９８（ｓ，１Ｈ）；７．５５−７．２８（ｍ，４Ｈ）；６．７７（ｍ，１Ｈ）；５．７３（ｓ，２Ｈ）。
【０２２８】
５−アミノ−７−（ｍ−フルオロベンジル）−２−（２−フリル）−１，２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；ｍ．ｐ．２８０−２８３ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．４５（ｂｓ，２Ｈ）；７．９８（ｓ，１Ｈ）；７．４−７．１（ｍ，５Ｈ）；６．７６（ｓ，ＩＨ）；５．７５（ｓ，２Ｈ）。
【０２２９】
５−アミノ−７−（２−フェニルエチル）−２−（２−フリル）−１．２，３−トリアゾロ［５，４−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン；Ｍ．Ｐ．２６９−２７１ＥＣ（℃）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：８．４（ｂｓ，２Ｈ）；７．９８（ｓ，１Ｈ）；７．３−７．１５（ｍ，６Ｈ）；６．８（ｓ，１Ｈ）；４．７１（ｔ，２Ｈ）；３．３１（ｔ，２Ｈ）。
【実施例１６】
【０２３０】
その他の化合物
上記記載の化学反応を利用して、以下の化合物を調製した。
【０２３１】
【化２４】
2006510574.tif 000020
2006510574.tif 000021
2006510574.tif 000022
【０２３２】
【実施例１７】
【０２３３】
イソシアン酸フェニルの調製
スルホニルイソシアン酸フェニルは下記スキームＸに示される合成ストラテジーに従って調製される。
【０２３４】
【化２５】
2006510574.tif 000023
【０２３５】
スキームＸ：イソシアン酸フェニル調製の基本手順
【０２３６】
市販されている適当なアミンの懸濁液を、酢酸エチルを溶媒としてジホスゲンで処理した。その後、得られたイソシアン酸は本発明の化合物を合成する際の中間体として使うことができる。
【０２３７】
スキームＸに従って、以下のイソシアン酸フェニルを調製することができるが、それらのほとんどが市販されている。
【０２３８】
４−（ジエチルアミノ）イソシアン酸フェニル（化合物１０１−１０２の調製の際、中間体として使用される）。
【０２３９】
４−（ジメチルアミノ）イソシアン酸フェニル（化合物１０３の調製の際、中間体として使用される）。
【０２４０】
４−（Ｎ−モルホリノ）イソシアン酸フェニル（化合物１０４の調製の際、中間体として使用される）。
【０２４１】
（実施例１７）
スルホニルイソシアン酸フェニルの調製
イソシアン酸フェニルは下記スキームＸＩに示される合成ストラテジーに従って調製される。
【０２４２】
【化２６】
2006510574.tif 000024
【０２４３】
スキームＸＩ：スルホニルイソシアン酸フェニル調製の基本手順
【０２４４】
アセトアニリド（２０ｇ，１４５ｍｍｏｌ）を、０〜５℃でクロロスルホン酸（４８ｍＬ，７２５ｍｍｏｌ）に徐々に加えた。加えた後、反応混合物を６０℃で２時間熱した。室温まで冷却し、その反応混合物を撹拌しながらゆっくりと氷３００ｇに注いだ。沈殿した塩化スルホニルを濾過して集め、水で洗浄し、その後３５℃／−１０℃でアセトンで再
【０２４５】
無水ＣＨ２Ｃｌ２中の４−アセチルアミノベンゼン塩化スルホニル（４．５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、室温で１−メチルピペラジン（４．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（４．５ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１時間撹拌し、水を加え、生成物をさらにＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機抽出液を併せて、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で留去させ、目的のＮ−［４−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）フェニル］アセトアミドを得た。Ｍｐ：１８４℃；収率４１％；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ２．０９（Ｓ，３Ｈ），２．１５（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｍ，４Ｈ），２．８５（ｍ，４Ｈ），７．６３−７．６８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），７．８０−７．８４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），１０．４１（ｓ，１Ｈ）。
【０２４６】
Ｎ−［４−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）フェニル］アセトアミド（２ｇ、６．７ｍｍｏｌ）を３Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）及び１，４−ジオキサン（１２ｍＬ）に溶解した。反応混合物を１時間還流させ、減圧で蒸発させ、得られた混合物を３０％ＮＨ４ＯＨで塩基性にした。目的の生成物をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、減圧下で留去させ、白色の固体の４−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）アニリンを得た。ＭＰ：２１０℃；収率５３％；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ２．２２（ｓ，３Ｈ），２．５０（ｍ，４Ｈ），２．８２（ｍ，４Ｈ），６．１０（ｂｓ，２Ｈ），６．６２−６．６７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０Ｈｚ），７．３２−７．３６（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ）。
【０２４７】
無水ベンゼン中に溶解した４−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）アニリン（０．５ｇ，１．９６ｍｍｏｌ）を、無水ベンゼン中のクロル蟻酸トリクロロメチル（０．３ｍＬ、２．３５ｍｍｏｌ）の溶液に−１０℃で滴下した。混合物を１０分間室温まで暖め、その後２時間９０℃まで熱した。混合物を減圧下で濃縮し、固体の４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］イソシアン酸フェニルを得た。これを、化合物１０５を調製する際、中間体として使用した。ＩＲ：１１６６，１３３９，２２６５ｃｍ−１
【０２４８】
スキームＸＩに従って、以下のスルホニルイソシアン酸フェニルを調製することができる。
【０２４９】
１−［（４−イソシアナトフェニル）スルホニル］−３−メチルピペラジン
【０２５０】
Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−４−イソシアナトベンゼンスルホンアミド
【０２５１】
Ｎ−［３−（ジエチルアミノ）プロピル］−４−イソシアナトベンゼンスルホンアミド
【実施例１８】
【０２５２】
５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素の調製（化合物１０１，１０４，１０５，１０３中間体）
５−［（置換されたフェニル）カルボニル］アミノ−８−（Ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジンは、下記スキームＸＩＩに記載の合成ストラテジーに従って調製される。
【０２５３】
【化２７】
2006510574.tif 000025
【０２５４】
スキームＸＩＩ：５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素類の調製の基本手順（化合物１０１，１０４，１０５、化合物１０３の中間体）
【０２５５】
化合物１０１，１０４，１０５、及び化合物１０３の中間体を調製するために、それぞれのアミノ化合物（化合物３４−４１）（１０ｍｍｏｌ）を新たに蒸留したＴＥＡ及びジオキサンに溶解し、その後それぞれのイソシアン酸（１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物はアルゴン雰囲気下、最低３時間環流させた。その後、溶媒を減圧下で除去し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−軽油  ４−６）で精製し、目的の化合物１０１，１０４，１０５、及び化合物１０３の中間体を得た。化合物１０１及び化合物１０３の中間体を調製する場合、Ｎ−メチルピロリドンもイソシアン酸に加えた。この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０２５６】
Ｎ−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素（化合物１０１）
【０２５７】
Ｎ−（２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル）−Ｎ’−［４−（モルホリン−４−イルスルホニル）フェニル］尿素（化合物１０４）
【０２５８】
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−｛４−［（４−メチルピペラジン−１−イル）スルホニル］−フェニル｝尿素（化合物１０５）
【０２５９】
Ｎ−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−Ｎ’−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］尿素（化合物１０３の中間体）
【実施例１９】
【０２６０】
５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素の医薬的塩の調製（化合物１０２，１０３）
本発明の医薬的塩は、下記スキームＸＩＩＩに記載の方法等、公知の方法によって調製することができる。
【０２６１】
【化２８】
2006510574.tif 000026
【０２６２】
スキームＸＩＩＩ：５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素の塩酸塩の調製の基本手順（化合物１０１，１０４，１０５及び化合物１０３の中間体）
【０２６３】
本発明のピリミジン尿素化合物１００ｍｇ（例えば化合物１０１及び化合物１０３の中間体）を、ＨＣｌガスを飽和させたメタノール１０ｍｌに接触させることによって、塩酸塩を調製した。温度を０℃に保ち、約１時間撹拌した。その後、溶媒を減圧で蒸発させ、固体の化合物を得た。その固体をエタノールで再度懸濁し、さらに減圧で溶媒を蒸発させ、精製した。この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０２６４】
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジエチルアミノ）フェニル］尿素塩酸塩（化合物１０２）
【０２６５】
Ｎ−［８−メチル−２−（２−フリル）−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−［４−（ジメチルアミノ）フェニル］尿素塩酸塩（化合物１０３）
【実施例２０】
【０２６６】
５−［（ピリジニル）アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素の調製（化合物１０６）
５−［（ピリジニル）アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素は下記スキームＸＩＶに記載の合成ストラテジーに従って調製される。
【０２６７】
【化２９】
2006510574.tif 000027
【０２６８】
スキームＸＩＶ：５−［（ピリジニル）アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン尿素調製の基本手順（化合物１０６）
【０２６９】
化合物１０６等を調製するために、アシルアジドのクルチウス転位を生起させた後、それぞれのアミノ化合物（例えば化合物３４−４１）を加えた。ＨＣｌ水溶液３０ｍｌ中の１３．８  （ｇ）の亜硝酸ナトリウム溶液に、温度を０℃から５℃の間に保ちながら、１３．７ｇのヒドラジドをゆっくり加えた。混合物を０℃で、
さらに０．５時間撹拌した。反応をＥｔＯＨ（エーテル）で抽出し、有機層をｐＨ８．０のＮａＣＯ３溶液で洗浄し、その後、水で洗浄した。その後、溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、ｒ．ｔ．（室温）で濃縮した。白色の固体を石油エーテルを用いて濾過し、ピリジンアシルアジドを得た（Ｍ．Ｐ．４５℃）。
【０２７０】
次に、１．５ｇのピリジンアシルアジド及びトルエン３０ｍｌを８０℃で２時間撹拌し、クルチウス転位を起こした。その後、０．５ｇの三環系アミン（化合物３４）を加え、混合物を１００℃で５時間撹拌した（ＴＬＣで９５℃〜１０５℃に調節）。（ＣＨ２Ｃｌ２−ＣＨ３ＯＨ）。溶媒を蒸発させ、生成物を沸騰している熱いＣＨ３ＯＨ（約６０℃に加熱）に溶解した。それをシリカゲルに吸着させ、クロマトグラフィーで精製し、０．９ｇの白色の固体を得た（Ｍ．Ｐ．１９５−１９７℃）。この基本手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０２７１】
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素（化合物１０６）Ｍ．Ｐ．１９５−１９７℃。
【０２７２】
尿素化合物１０６を用いて、対応する医薬的塩を以下のように得た。５０ｍｇの化合物１０６を、５ｍｌのジオキサン及びＨＣｌガスを飽和させた５ｍｌのメタノールに加え、０℃に保ち、約１時間撹拌した。その後、溶媒を減圧で蒸発させ、固体の化合物を得た。その後、その固体を濾過により分離させ、ＥｔＯＨで洗浄した。この手順に従って、以下の化合物を調製した。
【０２７３】
Ｎ−［２−（２−フリル）−８−メチル−８Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｅ］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン−５−イル］−Ｎ’−ピリジン−４−イル尿素塩酸塩（化合物１０７）Ｍ．Ｐ．＞３００℃；水溶性。
【実施例２１】
【０２７４】
化合物の生物活性の評価
上記に記載されているいくつかの化合物について、下記アッセイを使用して、ラットＡ１及びＡ２Ａ、及び、ヒトＡ３受容体に対する親和性をテストした。
【０２７５】
ラットＡ１及びＡ２Ａアデノシン受容体結合アッセイ
雄のウィスターラット（２００〜２５０ｇ）の首を切断し、脳全体と線条を氷の上で解剖した。この器官を、１０ｍＭのＭｇＣｌ２を含むｐＨ７．４の２５容量の５０ｍＭ  トリスＨＣｌ中、３０秒間、５のセッティングで、ポリトロンホモジナイザー中で分解した。ホモジネートを、１０分間４８，０００で遠心分離し、ペレットを、２ＩＵ／ｍＬアデノシンジアミナーゼを含む同じバッファーに再懸濁した。３７ＥＣ（℃）で３０分間インキュベートした後、細胞膜を遠心分離し、ペレットを８０ＥＣ（℃）で保存した。冷凍する前に、対照用の標準として、子ウシのアルブミンとのプロテインアッセイのために、ホモジネートの一部を分取した。結合アッセイは、２５ＥＣ（℃）の１０ｍＭのＭｇＣｌ２の存在下、ラット脳と線条膜のそれぞれで行われた。全てのバッファー溶液は常にｐＨが７．４に調節された。
【０２７６】
置換の実験（Displacement Experiments）は、１ｎＭの選択アデノシンＡ１受容体配位子［３Ｈ］ＣＨＡ（Ｎ６−シクロヘキシルアデノシン）及びラット脳の細胞膜を含む、５００Φ（μ）ＬのトリスＨＣｌバッファー中で行われた（１５０−２００Φ（μ）ｇのプロテイン／アッセイ）。
【０２７７】
置換の実験（Displacement Experiments）は、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、０．２ｎＭの選択アデノシンＡ２Ａ受容体配位子［３Ｈ］ＳＣＨ５８２６１（５−アミノ−７−（２−（フェニル）エチル）−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］−１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン）及びラットの線条膜を含む、５００Φ（μ）ＬのトリスＨＣｌバッファー中で行われた（８０−１００Φ（μ）ｇのプロテイン／アッセイ）。ＩＣ５０値（ＩＣ５０は標識配位子の５０％を置換した阻害濃度）を決定するために、３倍の試験化合物を、最低６種類の異なる濃度で結合アッセイサンプルに加えた。遊離の放射性配位子からの結合の分離は、氷冷のバッファーで３回洗浄したワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＧＦ／Ｂフィルターで急速濾過することによって行われた。フィルターに結合している放射能を、５ｍＬのアクアシュアー（Aquassure）を加えた後、シンチレーションカウンターによって計測した。１０Φ（μ）Ｍ  Ｒ−ＰＩＡ（Ｎ６−（フェニルイソプロピル）アデノシン）及び１０Φ（μ）Ｍ  ＮＥＣＡ（５’−（Ｎ−エチルカルボキシアミド）アデノシン）のそれぞれの存在下での結合では、特異的結合は明確にされず、常に全結合の１０％であった。インキュベーションの時間は、先に行ったタイムコースの実験の結果に基づき、０ＥＣ（℃）で１５０分間から３０ＥＣ（℃）で７５分間であった。Ｋｉ値はチェング−プルソフ（Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ）式で計算した。全ての結合データは、非線形回帰カーブフィッティングコンピュータープログラムＬＩＧＡＮＤを使用して分析した。
【０２７８】
ヒトクローンＡ３アデノシン受容体結合アッセイ
ヒト組み換え型Ａ３アデノシン受容体でトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３細胞から分取した細胞膜（８ｍｕのプロテイン／ｍＬ）を結合アッセイに使用した。図１は、［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ（Ｎ６−（４−アミノ−３−ヨードベンジル）−５’−（Ｎ−メチルカルバモイル）アデノシン）のＨＥＫ−２９３細胞に対する特有の飽和状態を示す。阻害実験は、０．３ｎＭの［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ、５０ｎＭのトリスＨＣｌバッファー、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４、２０Φ（μ）Ｌの希釈細胞膜（１２．４ｍｇのプロテイン／ｍＬ）、及び、少なくとも６〜８種類の異なる濃度の代表的なアデノシン受容体アンタゴニストを含む試験管の中で、最終容量の１００Φ（μ）Ｌ中で２回行われた。５０Φ（μ）Ｍ  Ｒ−ＰＩＡの存在下では特異的結合は明確にされず、全結合の約３０％であった。インキュベーションの時間は、先に行ったタイムコースの実験の結果に基づき、３７ＥＣ（℃）で６０分間であった。結合及び遊離放射能は、ブランデル（Ｂｒａｎｄｅｌ）セルハーベスターを使用して、ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＧＦ／Ｂグラスファイバーフィルターでアッセイ混合物を濾過することによって分離された。
【０２７９】
結果と考察
ラット脳Ａ１及びＡ２Ａ、及び、ヒトＡ３受容体に対する親和性のための放射性配位子の結合アッセイによって、化合物３４−５９をテストした。その結果を表１にまとめた。同様に、ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、及び、Ａ３受容体に対する親和性のための放射性配位子の結合アッセイによって、その他の化合物をテストした。その結果を表２にまとめた。
【０２８０】
データは、Ｎ５位置の容積が小さい化合物（化合物３８、４０及び４１）のグループが、Ａ２Ａ受容体に対する高い親和性とＡ１に対する低い選択性、及び、ヒトアデノシンＡ３受容体サブタイプに対する低い親和性を示すことを証明している。また、Ｎ５位置に置換されたフェニルカルバモイル鎖をもつ化合物が、ヒトＡ３受容体サブタイプに対するナノモル範囲の親和性をもち、Ａ１及びＡ２Ａ受容体サブタイプに対する種々の程度の選択性をもつことを証明している。特に、４−メトキシフェニルカルバモイル部分（化合物５１、５５及び５７）が、３−クロロフェニルカルバモイル部分（化合物５０、５４及び５６）よりも３倍程度高い親和性を有する。
【０２８１】
種々の立体的性質をもつ鎖をＮ８位置に導入することにより、ヒトＡ３アデノシン受容体に対する高い有効性とＡ１及びＡ２Ａ受容体サブタイプに対するより高度な選択性をもつ誘導体にデザインすることができる。
【０２８２】
図１は、アデノシンＡ３受容体に対する［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡの飽和曲線を示す。はめ込みのスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）プロットの直線性は、本発明者の実験条件における、ＫＤ値０．９±０．０１ｎＭ及びＢｍａｘ値６２±１ｆｍｏｌ／ｍｇプロテイン（ｎ＝３）との結合部位の単一クラスの存在を示す。
【０２８３】
図２は、ｃＡＭＰ産生の阻害を誘導するＣ１−ＩＢ−ＭＥＣＡに対する、化合物６６、６７、１０６、及び１０７の有効性を示す。アデノシンＡ３受容体拮抗作用の有効性は、化合物６６、１０６及び１０７は同程度であるが、化合物６７より約２倍弱程度低い。
【０２８４】
表１  化合物３４−５９のラットＡ１及びＡ２Ａ、及び、ヒトＡ３アデノシン受容体に対する結合親和性
2006510574.tif 000028
2006510574.tif 000029
値は「Kim et al., J. Med. Chem., 39:4142-4148(1996)」による。
【０２８５】
表２  化合物１０１−１０９のヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、及び、Ａ３アデノシン受容体に対する結合親和性
2006510574.tif 000030
【０２８６】
データは、本明細書に記載されている５−［［（置換されたフェニル）アミノ］カルボニル］アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン化合物の８位置における小さな鎖状（Ｃ１−３）置換基、特にメチル、エチル、及びプロピル基が、ペンチル及びヘキシル基などの大きな鎖状よりも好ましいことを証明している。特に、化合物４５及び４７、８−メチル、８−エチル及び８−プロピル、５−（４−メトキシフェニル）置換化合物は高い親和性と選択性を示している。
【０２８７】
メチル、エチル、及びプロピル鎖はフェニルまたは置換フェニル基と置換することができ、置換してもなお、Ａ３受容体サブタイプに対する高い親和性と選択性を示す。しかし、親和性は１０〜１００減少する。しかし、Ｎ８位置にフェニルエチル鎖、Ｎ５の位置に４−ＭｅＯ−フェニルカルバモイル鎖をもつ化合物（化合物５５）は親和性と選択性という点では比較的高い値を示した（ＫｉｈＡ３＝１．４７ｎＭ，ｒＡ１／ｈＡ３＝８７２，ｒＡ２Ａ／ｈＡ３＝９５１）。
【０２８８】
比較的大きなペンチル基をもつ化合物５０及び５１においても、化合物はＡ３受容体サブタイプに対する比較的高い親和性を示した（それぞれ８１．１０及び２９．５７ｎＭ）。しかしその選択性は約１０〜１００減少した。
【０２８９】
従来の研究では、５−アミノ−８−（ａｒ）アルキル−２−（２−フリル）−ピラゾロ［４，３−ｅ］１，２，４−トリアゾロ［１，５−ｃ］ピリミジン化合物のアデノシンＡ２受容体サブタイプに対する親和性は、８位置における基の大きさによって増加する傾向にあることを証明してきた。しかし、ここに記載されている化合物のＡ３受容体サブタイプに対する親和性については、反対の傾向が事実であるように思われる。Ｃ１−３置換基は、Ａ３受容体サブタイプに対する相互作用において理想的な立体的かつ親油性の性質を表しているようである。
【実施例２２】
【０２９０】
放射性標識化合物との結合実験
一連の結合実験は、０．５ｎＭ［１２５Ｉ］−ＡＢＭＥＣＡを使用して、細胞株の細胞膜上の５０：Ｍ  Ｒ−ＰＩＡ又は２００：Ｍ  ＮＥＣＡの存在下で決定された非特異的結合の種々の腫瘍細胞株において行われた。特異的結合は全結合から非特異的結合をひいて決定された。細胞株はＨＬ６０、ＮＢ４、ＳＫＮ−ＭＣ、ＳＫＮ−Ｂｅ２Ｃ、ＳＫＮ−ＳＨ、ＪＵＲＫＡＴ細胞株である。結合実験の結果を下記の表３に示す。
【０２９１】
表３
2006510574.tif 000031
【０２９２】
結果を図３にグラフで示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞株はテストした細胞株の中で一番良い結果を示している。飽和実験は、Ｊｕｒｋａｔ細胞株を使用して３７ＥＣ（℃）で１時間インキュベートし、［１２５Ｉ］−ＡＢＭＥＣＡ（０．１２５−１．５ｎＭ）を使用してＲＰＩＡ（５０：Ｍ）で測定した非特異的結合で行われた。Ｋｄ（ｎＭ）は４で、Ｂｍａｘ（ｆｍｏｌ／ｍｇプロテイン）は２９０だった。
【０２９３】
Ａ１受容体の存在の有無を決定するために、別のアッセイを行った。置換アッセイは、０ＥＣ（℃）で１５０分間Ｊｕｒｋａｔ細胞で、特異的Ａ１アンタゴニスト（０．５ｎＭ）である［３Ｈ］ＤＰＣＰＸを使用してＲ−ＰＩＡ（５０：Ｍ）で決定された非特異的結合で行われた。全結合は１３２０８、非特異的結合は２９９７、特異的結合は１０２１１（７７％）であった。その結果、非常に多くのＡ１結合が観察された。
【０２９４】
以下の実験によって、ここに記載された新規の選択アンタゴニスト（化合物１０８の放射性配位子）を使用することにより、いくつかのヒト腫瘍細胞株、例えばＨＬ６０、ｐｒｏミエロサイトヒト白血病及びＪｕｒｋａｔ、ヒトＴ−細胞白血病などにおけるＡ３受容体の性質が初めて示された。これらの研究において、Ｊｕｒｋａｔ及びＨＬ６０細胞の細胞膜（０．５ｍｇプロテイン／ｍｌ）は、Ｊｕｒｋａｔ及びＨＬ６０細胞においてそれぞれ０．２から１５ｎＭ及び０．１から１０ｎＭの１０〜１２種類の異なる濃度の化合物１０８でインキュベートした。図３は、Ｊｕｒｋａｔ細胞膜においてアデノシンＡ３受容体に結合する化合物１０８の飽和曲線を示し、はり込みのスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）プロットの直線はＫｄ値１．９±０．２ｎＭ及びＢｍａｘ値１．３０±０．０３ｐｍｏｌ／ｍｇプロテイン（ｎ＝３）での結合部位の単一のクラスの存在を示す。図５は、ＨＬ６０細胞膜においてアデノシンＡ３受容体に結合する化合物１０８の飽和曲線を示し、はり込みのスキャッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）プロットの直線はＫｄ値１．２±０．１ｎＭ及びＢｍａｘ値６２６±４２ｆｍｏｌ／ｍｇプロテイン（ｎ＝３）での結合部位の単一のクラスの存在を示す。
【０２９５】
これらの結果は、多くの細胞株が比較的多数のアデノシン受容体を有することを示している。化合物１０８はＡ３受容体に高い親和性と選択性で結合することが知られているため、腫瘍細胞にはＡ３受容体が比較的多数存在すると考えられる。
【実施例２３】
【０２９６】
製剤処方
（Ａ）１０００パッチに対する経皮吸収剤
2006510574.tif 000032
【０２９７】
（Ｂ）１０００錠に対する経口投与錠剤
2006510574.tif 000033
【０２９８】
活性化合物とスターチを水で造粒し、乾燥させる。ステアリン酸マグネシウムを乾燥した顆粒に加え、その混合物を十分に混ぜる。混ぜ合わせた混合物を打錠して錠剤にする。
【０２９９】
（Ｃ）１０００本の１ｍＬアンプルの注射剤
2006510574.tif 000034
【０３００】
活性化合物と緩衝化剤を約５０℃のプロピレングリコールに溶解する。その後、撹拌しながら注射用の水を加え、得られた溶液を濾過し、アンプルに注入し、シールし、オートクレーブで殺菌する。
【０３０１】
（Ｄ）１０００ｍＬに対する点滴液
2006510574.tif 000035
【０３０２】
本発明は、具体的な実施態様について記載されているが、物質や条件において種々の代用ができることは、当業者にとって明らかであろう。例えば、本発明の化合物から調製される薬剤は他の賦形剤や色識別法を取り入れたり、目的の効果や患者への投与法に応じて、修正することができる。その他の応用は、当業者には自明であり、本明細書に含まれるものである。本発明の範囲は以下の請求項によってのみ限定されるものである。
【図面の簡単な説明】
【０３０３】
【図１】[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡのモル濃度に対する、ＨＥＫ２９３細胞に発現するヒトのＡ３受容体と[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡとの結合の（ｆｍｏｌ／ｍｇ  プロテイン）の飽和を示すグラフである。
【図２】化合物６６、６７、１０６及び１０７による、Ｃ１−ＩＢ−ＭＥＣＡの、ｃＡＭＰ生産の阻害の誘発をブロックする能力を示すグラフである。
【図３】[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡのモル濃度に対する、ＪＵＲＫＡＴ細胞株（セルライン）に発現するヒトのＡ３受容体と[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡとの結合（ｆｍｏｌ／ｍｇ  プロテイン）の飽和を示すグラフである。図に示されているように、[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡを用いて検出されたＡ３受容体の濃度はＪｕｒｋａｔ細胞膜において、およそｆｍｏｌ／ｍｇ  プロテインであった。
【図４】化合物１０８の種々のモル濃度における、化合物４７のトリチウム化された類似体である５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−プロピル−２（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン（化合物１０８）の、ＪＵＲＫＡＴ細胞株（セルライン）に発現するＡ３受容体への結合（ｆｍｏｌ／ｍｇ  プロテイン）の飽和を示すグラフである。これらの図中のデータは、ヒトの癌細胞においてアデノシンＡ３受容体が高い濃度で存在していることを示している。例えば、およそ１３００ｆｍｏｌ／ｍｇのプロテインが、Ｊｕｒｋａｔ細胞で検出され、６５０ｆｍｏｌ／ｍｇのプロテインがＨＬ６０細胞で検出された。したがって、化合物１０８は、[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡよりもアデノシンＡ３受容体を検出するためのはるかに感度の良いツールである。これらの研究結果により、ヒトの様々な癌細胞の中にあるＡ３受容体を検出することが容易になされることになる。
【図５】化合物１０８の種々のモル濃度における、化合物４７のトリチウム化された類似体である５−[[（４−メトキシフェニル）アミノ]カルボニル]アミノ−８−プロピル−２（２−フリル）−ピラゾロ[４,３−ｅ]１,２,４−トリアゾロ[１,５−ｃ]ピリミジン（化合物１０８）の、ＪＵＲＫＡＴ細胞株（セルライン）に発現するＡ３受容体への結合（ｆｍｏｌ／ｍｇ  プロテイン）の飽和を示すグラフである。これらの図中のデータは、ヒトの癌細胞においてアデノシンＡ３受容体が高い濃度で存在していることを示している。例えば、およそ１３００ｆｍｏｌ／ｍｇのプロテインが、Ｊｕｒｋａｔ細胞で検出され、６５０ｆｍｏｌ／ｍｇのプロテインがＨＬ６０細胞で検出された。したがって、化合物１０８は、[１２５Ｉ]ＡＢ−ＭＥＣＡよりもアデノシンＡ３受容体を検出するためのはるかに感度の良いツールである。これらの研究結果により、ヒトの様々な癌細胞の中にあるＡ３受容体を検出することが容易になされることになる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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