(57)【要約】【化１】2006501140.tif 000016式（Ｉ）の化合物（式中、Ａは、ＮＨとＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２つの炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択されるか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基である。）を調製する。水溶液中に溶解すると、溶液のｐＨは５〜９である。この化合物は、−３．０（マイナス３．０）〜９．０のｐＫaを有する生理学的に許容される酸との塩の形態であることができる。
2006501140.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2006501140.tif 000014
（式中、Ａは、ＮＨとＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２個の炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択され、ここで、窒素原子に結合された炭素原子がヒドロキシ基をもたず、２つのヒドロキシ基で置換された炭素原子がないか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基であり、このＣ2-6アルキレン基が、Ｒ’およびＲ”が結合している窒素原子とともに、環中に３〜７個の原子を有する複素環式基を形成する。）の化合物であって、
水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが５〜９であるように配合されることを特徴とする化合物。
【請求項２】
水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが６〜８であるように調製されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
−３．０（マイナス３．０）〜９．０のｐＫaを有する生理学的に許容される酸との塩の形態で使用されることを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式（Ｉ）：
【化２】
2006501140.tif 000015
（式中、Ａは、ＮＨとＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２個の炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択され、ここで、窒素原子に結合された炭素原子がヒドロキシ基をもたず、２つのヒドロキシ基で置換された炭素原子がないか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基であり、このＣ2-6アルキレン基が、Ｒ’およびＲ”が結合している窒素原子とともに、環中に３〜７個の原子を有する複素環式基を形成する。）
の化合物であって、
−３．０（マイナス３．０）〜９．０のｐＫaを有する生理学的に許容される酸との塩の形態であることを特徴とする化合物。
【請求項５】
生理学的に許容される酸が２．０〜９．０のｐＫaを有することを特徴とする、請求項３または４に記載の化合物。
【請求項６】
生理学的に許容される酸が２．０〜６．０のｐＫaを有することを特徴とする、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
生理学的に許容される酸が３．０〜６．０のｐＫaを有することを特徴とする、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
生理学的に許容される酸が、有機モノ、ジまたはトリ酸であることを特徴とする、請求項３記載の化合物。
【請求項９】
生理学的に許容される酸が、酒石酸、マロン酸、ジクロロ酢酸、クエン酸、ベンゼンスルホン酸、ピメリン酸および酢酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項３または４に記載の化合物。
【請求項１０】
Ａが直鎖アルキレン基であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａがエチレンであることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ’およびＲ”が直鎖アルキル基またはヒドロキシ置換アルキル基であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ’およびＲ”が各々ＣＨ3またはＣＨ2ＣＨ3であることを特徴とする、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
式ＮＨ−Ａ−Ｎ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”の各々の基が式ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ3）2の基であることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
化合物が追加の成分を含有する混合物中に配合され、その結果、水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが５〜９であるように緩衝されることを特徴とする、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
溶液のｐＨが５〜９であることを特徴とする、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物の水溶液。
【請求項１７】
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物と共に生理学的に許容される希釈剤または担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１８】
治療に使用するための請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、ＡＱ４Ｎなどのアントラキノン誘導体であって、癌の治療において有用性のあるビス生体内還元物質（bis-bioreductive agent）の新規な調製に関する。本発明には、アントラキノン誘導体の新規な塩の形態も含まれる。
【０００２】
ＷＯ−Ａ−９１／０５８２４（ナショナル・リサーチ・デベロップメント・コーポレーション）は、式：
【０００３】
【化１】
2006501140.tif 000003
【０００４】
（式中、Ｒ1，Ｒ2，Ｒ3およびＲ4は、水素，Ｘ，ＮＨ−Ａ−ＮＨＲ及びＮＨ−Ａ−Ｎ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”から各々独立して選択され、ここでＸは、ヒドロキシ，ハロゲノ，アミノ，Ｃ1-4アルコキシまたはＣ2-8アルカノイルオキシであり、Ａは、ＮＨとＮＨＲまたはＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２個の炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、そしてＲ，Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択され、ここで窒素原子に結合された炭素原子がヒドロキシ基をもたず、２つのヒドロキシ基で置換された炭素原子がないか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基であり、このＣ2-6アルキレン基が、Ｒ’およびＲ”が結合している窒素原子とともに、環中に３〜７個の原子を有する複素環式基を形成する。）の化合物を開示している。この化合物は、場合により、生理学的に許容される塩の形態である。
【０００５】
この一般式の範囲内の好ましい化合物は、Ｎ−オキシドＡＱ４Ｎであり、これは通常ＡＱ４の酸化により合成される：
【０００６】
【化２】
2006501140.tif 000004
【０００７】
ＡＱ４は、事実上プロドラッグであり、生体内で逆反応を生じ、低酸素性癌細胞における還元的代謝により、プロトン化された形態の活性剤ＡＱ４を与える。このプロドラッグは、活性剤ＡＱ４と比べた場合、相対的に非毒性であり、このことは医薬としての投与について特に魅力あるものとしている。しかし、簡単には結晶の形態を与えないので、塩の形態で投与するため調製し配合することが望ましい。
【０００８】
ＡＱ４は、現在まで、二塩化水素化物塩であるＡＱ４Ｎ．２ＨＣｌの形態で報告されてきた。例えば、J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, 1999, 2755-2758 (Lee et al.)およびＷＯ−Ａ−００／０５１９４（BTG International Limited）を参照されたい。しかし、ＡＱ４Ｎ．２ＨＣｌ原材料に関する研究により、ＬＣＭＳで特性決定された不純物、１−アミノ−４−｛［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ｝−５，８−ジホドロキシアントラキノン（ＡＱＭＮと示す）が有意な量存在することが示されている：
【０００９】
【化３】
2006501140.tif 000005
【００１０】
この不純物は、ＡＱ４Ｎの分解により形成することができ、重要なことには不所望なレベルの細胞毒性を示し、これは一般的にはＡＱ４Ｎ自体の細胞毒性よりも高い。このレベルの細胞毒性は、相対的に非毒性なプロドラッグの形態で投与しようとする化合物においては避けなければならない。
【００１１】
ＡＱＭＮ分解は支配的な経路であるが、酸性および中性の水溶液条件下でのＡＱ４Ｎの更なる分解生成物は、モノ−Ｎ−オキシド，ＡＱ４Ｍである：
【００１２】
【化４】
2006501140.tif 000006
【００１３】
二塩化水素化物塩ＡＱ４Ｎは、水溶液中で、典型的にはおよそ２〜３のｐＨを与えることを我々は測定した。例えば、１．４ミリモル溶液のｐＨは２．４である。上記の不純物形成に関する問題は、溶液中に溶解すると溶液のｐＨが５〜９である化合物を調製し、配合し、投与することにより、減少しまたは回避できることを、現時点で我々は発見した。
【００１４】
したがって、本発明にしたがえば、式（Ｉ）：
【００１５】
【化５】
2006501140.tif 000007
【００１６】
（式中、Ａは、ＮＨとＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２個の炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択され、ここで、窒素原子に結合された炭素原子がヒドロキシ基をもたず、２つのヒドロキシ基で置換された炭素原子がないか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基であり、このＣ2-6アルキレン基が、Ｒ’およびＲ”が結合している窒素原子とともに、環中に３〜７個の原子を有する複素環式基を形成する。）の化合物であって、
水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが５〜９であるように配合されることを特徴とする化合物が提供される。
【００１７】
好ましくは、本化合物は、水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが６〜８であるように調製される。
好ましくは、本化合物は、０．１〜１００ｍｇ／ｍｌの濃度で水溶液中に溶解すると、溶液のｐＨが特定の範囲であるように調製される。
【００１８】
化合物（Ｉ）は、生理学的に許容される塩の形態で使用することができ、この塩は有機酸または無機酸との酸付加塩である。好ましくは、生理学的に許容される酸は、−３．０（マイナス３．０）〜９．０、より好ましくは２．０〜９．０のｐＫaを有する。更に好ましくは、生理学的に許容される酸は、２．０〜６．０のｐＫaを有する。
【００１９】
好ましくは、生理学的に許容される酸は、酒石酸、マロン酸、ジクロロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、ピメリン酸および酢酸からなる群から選択される。
より好ましくは、生理学的に許容される酸は、３．０〜６．０のｐＫaを有する。生理学的に許容される酸は、とりわけ有機酸であってもよく、特定的には有機モノ−、ジ−またはトリ−酸、とりわけ酒石酸、クエン酸、ピメリン酸および酢酸からなる群から選択されるものであってもよい。
【００２０】
式（Ｉ）中のＡは、分枝であってもよいが、都合の良いことには直鎖アルキレン基、すなわちテトラメチレン、とりわけトリメチレン、または特定的にはエチレンである。
また、Ｒ’およびＲ”は、分枝炭素鎖であってもよいが、都合の良いことには、アルキル基であろうとヒドロキシ置換アルキル基であろうと、直鎖である。Ｒ’またはＲ”がモノヒドロキシアルキル基である場合は、都合の良いことには末端で置換され、Ｒ’またはＲ”がジヒドロキシアルキル基である場合は、都合の良いことには末端でヒドロキシル基の一方により置換される。Ｒ’およびＲ”がアルキルである場合は、３個、あるいはとりわけ、２個または１個の炭素原子からなる基が好ましく、Ｒ’およびＲ”がヒドロキシ置換アルキルである場合は、アルキル基は３個の炭素原子からなることが好ましい。または、モノヒドロキシアルキル基の場合は、別の態様では、２個の炭素原子からなることが好ましい。好ましい個々のＲ’基およびＲ”基の例としては、ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＯＨおよびＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＨが挙げられる。
【００２１】
Ｒ’およびＲ”は通常同じである。
別の態様では、示したように、Ｒ’およびＲ”は、それらが結合している窒素原子とともに、複素環式基−Ｎ（ＣＨ2）ｎ（式中、ｎは２〜６である。すなわち、アジリジン−１−イル、アゼチジン−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびペルヒドロアゼピン−１−イル。アゼチジン−１−イルおよび、とりわけアジリジン−１−イルなどの小さい基が最も重要である。）であってもよい。
【００２２】
特に重要な具体的な基ＮＨ−Ａ−Ｎ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”は、ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（Ｃ2Ｈ5）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＨ）2およびとりわけＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ3）2である。
【００２３】
生理学的に許容される塩は、水溶液中に単に溶解した場合に、通常、所望の範囲より低いｐＨを有する溶液を与える。例えば、１．４ミリモル溶液中、ＡＱ４Ｎの酢酸塩の水溶液のｐＨは３．８である。したがって、好ましくは、この化合物は、追加成分を含有する混合物中に配合して、水溶液中に溶解すると溶液のｐＨが５〜９であるように緩衝する。
【００２４】
緩衝液は、溶媒和した塩および酸の混合物であり、酸および塩基を少量この溶液に添加してもｐＨは変化しない。適する緩衝液としては、酢酸ナトリウム緩衝液やオルトリン酸ナトリウム緩衝液が挙げられる。
【００２５】
本発明の更なる側面にしたがえば、溶液のｐＨが５〜９であることを特徴とする、式（Ｉ）の化合物の水溶液が提供される。
本発明においては、一定の新規な塩形態を使用することができる。塩形態が、塩化水素（およそ−６、すなわちマイナス６）よりも高いｐＫaを有する酸の塩である場合、水溶液中では、二塩化水素化物塩と比較して酸性が低いことから、その塩形態を、ｐＨを緩衝する追加の成分を含有する固体混合物として配合することは簡単となる。
【００２６】
このように本発明の更なる側面にしたがえば、式（Ｉ）：
【００２７】
【化６】
2006501140.tif 000008
【００２８】
（式中、Ａは、ＮＨとＮ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”との間に少なくとも２個の炭素原子からなる鎖長をもつＣアルキレン基であり、Ｒ’およびＲ”は、Ｃ1-4アルキル基、ならびにＣ2-4ヒドロキシアルキル基およびＣ2-4ジヒドロキシアルキル基から各々独立して選択され、ここで、窒素原子に結合された炭素原子がヒドロキシ基をもたず、２つのヒドロキシ基で置換された炭素原子がないか、またはＲ’およびＲ”はともにＣ2-6アルキレン基であり、このＣ2-6アルキレン基が、Ｒ’およびＲ”が結合している窒素原子とともに、環中に３〜７個の原子を有する複素環式基を形成する。）の化合物であって、
−３．０（マイナス３．０）〜９．０のｐＫaを有する生理学的に許容される酸との塩の形態であることを特徴とする化合物が提供される。
【００２９】
好ましくは、生理学的に許容される酸は２．０〜９．０のｐＫaを有する。より好ましくは、生理学的に許容される酸は２．０〜６．０のｐＫaを有する。
これら塩は、一般的には無水塩として形成することができ、結晶性固体として結晶水が存在する二塩化水素化物塩よりも安定であることができる。これら塩は、純粋な形態で得ることは容易である。
【００３０】
化合物（Ｉ）は、有機酸または無機酸との酸付加塩である、生理学的に許容される塩の形態で使用される。−３．０〜９．０のｐＫaを有する生理学的に許容される酸は、次の表１から引用することができる：
【００３１】
【表１】
2006501140.tif 000009
【００３２】
【表２】
2006501140.tif 000010
【００３３】
好ましくは、生理学的に許容される酸は、酒石酸、マロン酸、ジクロロ酢酸、クエン酸、マレイン酸、ベンゼンスルホン酸、ピメリン酸および酢酸からなる群から選択される。
より好ましくは、生理学的に許容される酸は、３．０〜６．０のｐＫaを有する。生理学的に許容される酸は、とりわけ有機酸であってもよく、特定的には有機モノ−、ジ−またはトリ−酸、とりわけ酒石酸、クエン酸、ピメリン酸および酢酸からなる群から選択されるものであってもよい。
【００３４】
式（Ｉ）中のＡは、分枝であってもよいが、都合の良いことには直鎖アルキレン基、すなわちテトラメチレン、とりわけトリメチレン、または特定的にはエチレンである。
また、Ｒ’およびＲ”は、分枝炭素鎖であってもよいが、都合の良いことには、アルキル基であろうとヒドロキシ置換アルキル基であろうと、直鎖である。Ｒ’またはＲ”がモノヒドロキシアルキル基である場合は、都合の良いことには末端で置換され、Ｒ’またはＲ”がジヒドロキシアルキル基である場合は、都合の良いことには末端でヒドロキシル基の一方により置換される。Ｒ’およびＲ”がアルキルである場合は、３個、あるいはとりわけ、２個または１個の炭素原子からなる基が好ましく、Ｒ’およびＲ”がヒドロキシ置換アルキルである場合は、アルキル基は３個の炭素原子からなることが好ましい。または、モノヒドロキシアルキル基の場合は、別の態様では、２個の炭素原子からなることが好ましい。好ましい個々のＲ’基およびＲ”基の例としては、ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3，ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ，ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＯＨおよびＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＨが挙げられる。
【００３５】
Ｒ’およびＲ”は通常同じである。
別の態様では、示したように、Ｒ’およびＲ”は、それらが結合している窒素原子とともに、複素環式基−Ｎ（ＣＨ2）ｎ（式中、ｎは２〜６である。すなわち、アジリジン−１−イル、アゼチジン−１−イル、ピロリジン−１−イル、ピペリジン−１−イルおよびペルヒドロアゼピン−１−イル。アゼチジン−１−イルおよび、とりわけアジリジン−１−イルなどの小さい基が最も重要である。）であってもよい。
【００３６】
特に重要な具体的な基ＮＨ−Ａ−Ｎ（Ｏ）Ｒ’Ｒ”は、ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（Ｃ2Ｈ5）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ2ＯＨ）2，ＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ2ＣＨＯＨＣＨ2ＯＨ）2およびとりわけＮＨ−（ＣＨ2）2−Ｎ（Ｏ）（ＣＨ3）2である。
【００３７】
生理学的に許容される酸との塩は、任意の慣用的な手段により、例えば、有機塩基（Ｉ）と適する無機酸または有機酸との反応により、通常は溶液中の単なる混合により調製することができる。酸付加塩は、一般的には、結晶性固体であり、水、メタノール、エタノールおよび類似の溶媒中に比較的溶解性である。一の塩の形態を、所望の生理学的に許容される酸により前処理したカラムを用いて、クロマトグラフィーにより別の形態へと転化してもよい。
【００３８】
化合物（Ｉ）は、獣医や特定的にはヒトの使用の両方の医薬として種々の方法により使用するため、生理学的に許容される希釈剤または担体と配合することができる。例えば、この化合物を、液体の希釈剤または担体を混合している組成物として、例えば、水溶液、懸濁液またまエマルションとして施用してもよい。この組成物は、非経口投与のための注入可能な形態で使用される場合が多いので、無菌であり発熱物質が存在しないことが都合がよい。また、口腔投与も使用することができ、この目的のための組成物は、液体の希釈剤または担体を混合してもよいが、通常は、固体、例えば、デンプン、ラクトース、デキストリンまたはステアリン酸マグネシウムなどの慣用的な固体担体材料を使用する。こうした固体組成物は、粉末の形態を採用してもよいが、例えば、タブレット、カシェ剤、またはカプセルなどの成形タイプであることがより都合がよい。別の態様では、処方の更に特別なタイプとしては、リポソームやナノ粒子が挙げられる。
【００３９】
ヒトおよび家畜の状況の両方に使用される注入または口腔経路とは異なる他の投与タイプとしては、坐剤またはペッサリーが挙げられる。医薬組成物の別の形態は、舌下または鼻腔投与のためのものであるか、または別の態様では、眼に投与するための滴剤であり、無菌の液体希釈剤または担体を含有することが都合がよい。局所投与のための他の処方としては、ローション、軟膏、ゲルおよびスプレーが挙げられる。
【００４０】
組成物は、単位用量形態、すなわち、単位用量または、単位用量の倍数もしくはそれ未満を含有する別々の部分の形態で処方することができる。
使用される化合物の用量は、特定の化合物の活性と処理される条件とにしたがって異なるが、手引きとして言えることは、用量を一日あたり２５〜５００ｍｇ／ｍ2、特定的には一日あたり５０〜３００ｍｇ／ｍ2の範囲で選択すると適当である場合が多い。化合物（Ｉ）に関して毒性の副作用のレベルが低いことを考慮して、これよりも高い用量、例えば、一日あたり２５〜７５０ｍｇ／ｍ2、または更に１２００ｍｇ／ｍ2までの用量を考慮してもよい。この用量レジメは当該患者に適していれば何日間であろうと継続してもよく、望ましければ、一日の用量は何回かの別々の投与に分けられる。したがって、例えば、進行した乳癌、非ホジキンリンパ腫および肝癌のような状況の場合は、一日の治療のあと２１日などの間隔をあけて繰返し投薬するのが適切であり、急性リンパ性白血病の治療のためには、続けて５日を超える治療をすることが適している。別の態様では、数日間ごとに１回投与、例えば、２、３週間ごとに一用量使用してもよい。
【００４１】
化合物（Ｉ）は、ヒトを含む温血動物における癌の治療に関して特に重要である。この化合物は、種々の形態の肉腫および癌腫などの固体腫瘍の治療に関して重要であり、また、白血病などの播種性の腫瘍に関しても重要である。特に重要な領域は、乳癌、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、および食道癌の治療、ならびに、非ホジキンリンパ腫および急性非リンパ性白血病の治療である。癌の治療においては、多くの場合、非経口投与と時折、局所投与とが重要である。また、化合物（Ｉ）を複合治療において使用して、有糸分裂阻害剤（例えば、ビンブラスチン）；アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチンおよびシクロホスファミド）；他の代謝拮抗物質（例えば、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシドおよびヒドロキシ尿素）；插入（intercalating）抗生物質（例えば、アドリアマイシンおよびブレオマイシン）；酵素（例えば、アスパラギナーゼ）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシド）および生体応答調整物質（例えば、インターフェロン）などの他の制癌剤とともに、別々にかまたは同じ組成物中で一緒に与えることが有利である。また、化合物（Ｉ）は、腫瘍の放射線治療との複合治療において使用してもよい。
【００４２】
したがって、本発明には、癌の症候の緩解および一次抑えを助ける方法であって、上文に定義した化合物（Ｉ）を患者に対して治療有効量投与することを含む方法が含まれる。
その制癌性用途に加えて、化合物（Ｉ）は、そのキレート剤としての活性を考慮した種々の他の医薬用途に関して重要である。
【００４３】
本発明を以下の実施例により説明する。
実施例
実施例１：ＡＱ４Ｎ二塩化水素化物の不安定性の実証−ＡＱ４Ｎの物理的・化学的特性
ＡＱ４Ｎ二塩化水素化物の溶液のｐＨ変化をモニターして、ＡＱ４ＮのＡＱＭＮへの分解を実証した。ｐＨ曲線を図１および図２に示す。図１は、ｐＨ７．７〜ｐＨ９．４での明瞭な解離を示しており、これは図２に示されるおよそ２モル当量での解離イベントに等しい。低いｐＨの解離イベントを観察することができ、これは４．１〜４．６のｐＨに対応し、モル当量は０．９５〜１．１５である。
【００４４】
実施例２：ＡＱＭＮの細胞毒性の実証
ＡＱ４ＮおよびＡＱＭＮのＰ３８８系における純粋なサンプル（９９．３％）の毒性を測定した。得られた結果を表２に示す。
【００４５】
【表３】
2006501140.tif 000011
【００４６】
これらのデータに基くと、ＡＱＭＮは、同じ系においてＡＱ４Ｎより少なくとも５倍大きい毒性を有している。ＡＱ４Ｎのすべてのサンプルが実質的なパーセントのＡＱＭＮを含有しており、毒性の結果に影響を与えることから、「（greater than）」改質剤が必要である。
【００４７】
実施例３：ＡＱ４Ｎ二塩化水素化物の溶液中における不安定性の実証−ＡＱＭＮの蓄積
ＡＱ４Ｎの５ｍｇ／ｍｌ溶液を用いて、それぞれ、水、２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液および２０ｍＭオルトリン酸ナトリウム緩衝液と等しくした２．４、４．５および６．８のｐＨで、ＡＱ４Ｎの分解を検討した。ＡＱ４Ｎの主たる分解経路は、ＡＱＭＮへの転化である。中期の時間間隔（１４日）にわたって４０℃でインキュベートした５ｍｇ／ｍｌ溶液中におけるＡＱＭＮ濃度の増加を、図３に示す。
【００４８】
これらの条件において、分解速度は、一日あたりのＡＱＭＮ含量の増加、０．８４％（ＡＱ４Ｎに関して）、０．１９％（ＡＱ４Ｎに関して）および０．０２％（ＡＱ４Ｎに関して）に等しい。
【００４９】
直線回帰と標準として使用した材料中既知の量のＡＱＭＮに関する相互相関とを用いると、これらのデータは、表３に示すＡＱＭＮの蓄積速度を示す。
【００５０】
【表４】
2006501140.tif 000012
【００５１】
図４に示すように、６３日後のデータにおいても同様の傾向が観察された。蓄積速度（上述と同じやり方で計算）は、リン酸緩衝液において一月あたりＡＱＭＮが０．６％増加することを示している。
【００５２】
実施例４：ＡＱ４Ｎ二塩化水素化物の溶液中における不安定性の実証−ＡＱ４Ｎの分解
異なる溶液中においてＡＱ４Ｎの分解を検討することにより、ＡＱ４Ｎの安定性に対するｐＨの効果を測定した。選択した溶液は、同様に、蒸留水、２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝４）および２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ＝７）であった。５ｍｇ／ｍｌのＡＱ４Ｎ緩衝溶液を調製した後、ｐＨを必要とされる緩衝液のｐＨに較正した。最終的なｐＨは、蒸留水、２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液および２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液について、それぞれ、２．４、４．５および６．８であった。サンプルを４０℃でインキュベートし、規則的な間隔でサンプリングした。サンプルを希釈してからＨＰＬＣ分析することにより、アッセイを行った。
【００５３】
１４日後に中間分析を行った。このデータを図５に示す。
溶液を更に４０℃で合計６３日間インキュベートした。最終的な図を図６に示す。ＡＱ４Ｎ含量について得られた値は、もとのサンプルについて測ったＡＱ４Ｎの量と一致している（実験誤差範囲内）。
【００５４】
実施例５：ＡＱ４Ｎの有機酸塩の合成
図７に形式的に示すように、ＡＱ４Ｎの有機酸付加塩のシリーズを調製し、ＡＱＭＮ形成に関するそれらの安定性を評価した。
【００５５】
ＡＱ４Ｎ塩の合成方法の選択は、極性溶媒におけるＡＱ４Ｎ遊離塩基の高い溶解性に制限された。ＡＱ４Ｎのマロン酸、クエン酸、酒石酸付加塩の合成は、最初に、選択した有機酸の水溶液（１Ｍ）を、Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ（１：１）または極微量のＤＭＳＯを含むＨ2Ｏなどの極性溶媒／水混合物において、ＡＱ４Ｎ遊離塩基の溶液に添加することにより試みられた。２時間撹拌後、反応混合物を４℃まで冷やして沈殿を促進させた。しかし、７日後に固体は観察されなかった。次の研究は、ＡＱ４Ｎとすべての有機酸の両方を容易に溶解するＭｅＯＨを溶媒として使用した。ベンゼンスルホン酸の調製を除くすべての場合において、ＡＱ４Ｎを有機酸の２０倍過剰となるまで添加し、これらの混合物を１４〜２４時間室温で放置してから、−１０℃で放置して沈殿させた。固体物質が殆ど観察されない、または全く観察されない場合は、混合物にジエチルエーテル添加して沈殿を促進させた。
【００５６】
実施例６：ＡＱ４Ｎ 二ベンゼンスルホン酸塩
ＡＱ４Ｎ（３６ｍｇ，０．０８１ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。１ｍＬＭｅＯＨ中に溶解したベンゼンスルホン酸（２５．６６ｍｇ，０．１６２ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を３０分撹拌して、沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより１６時間乾燥させた。収量：４５ｍｇ，７６％。Ｃ34Ｈ40Ｎ4Ｏ12Ｓの分析値：Ｃ，５６．０４；Ｈ，５．５３；Ｎ，７．６９。Found：Ｃ，５５．８０；Ｈ，５．３５；Ｎ，９．３０。
【００５７】
実施例７：ＡＱ４Ｎ 二ジクロロ酢酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ジクロロ酢酸（３８μｌ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１６時間−１０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより１６時間乾燥させた。収量：７．４ｍｇ，４６％。Ｃ26Ｈ32Ｎ4Ｏ10Ｃｌ4の分析値：Ｃ，４４．４６；Ｈ，４．５９；Ｎ，７．９８。Found：Ｃ，４４．５８；Ｈ，４．６１；Ｎ，７．９１。
【００５８】
実施例８：ＡＱ４Ｎ 二マレイン酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中のマレイン酸（５３．４ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１６時間−１０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより１６時間乾燥させた。収量：７ｍｇ，４７％。Ｃ30Ｈ36Ｎ4Ｏ14の分析値：Ｃ，５３．２４；Ｈ，５．３２；Ｎ，８．２８。Found：Ｃ，５３．１１；Ｈ，５．４６；Ｎ，８．２０。
【００５９】
実施例９：ＡＱ４Ｎ 二マロン酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中のマロン酸（４７．９ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、２４時間−１０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより１６時間乾燥させた。収量：８．２ｍｇ，５５％。Ｃ28Ｈ36Ｎ4Ｏ14の分析値：Ｃ，５１．５３；Ｈ，５．５６；Ｎ，８．５９。Found：Ｃ，５１．６７；Ｈ，５．５６；Ｎ，８．７４。
【００６０】
実施例１０：ＡＱ４Ｎ 二酒石酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の酒石酸（６９．１ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１６時間−１０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより２４時間乾燥させた。収量：８．５ｍｇ，５０％。Ｃ30Ｈ40Ｎ4Ｏ18の分析値：Ｃ，４８．３９；Ｈ，５．４１；Ｎ，７．５２。Found：Ｃ，４８．３４；Ｈ，５．４１；Ｎ，７．６７。
【００６１】
実施例１１：ＡＱ４Ｎ 二クエン酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中のクエン酸（８８．４ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１６時間−１０℃で撹拌した。反応混合物にエーテル（２ｍＬ）を添加し、さらに３時間−１０℃で放置した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより２４時間乾燥させた。収量：７．１ｍｇ，３７％。Ｃ34Ｈ44Ｎ4Ｏ20の分析値：Ｃ，４９．２８；Ｈ，５．１０；Ｎ，６．６５。Found：Ｃ，４９．５９；Ｈ，５．０９；Ｎ，６．６４。
【００６２】
実施例１２：ＡＱ４Ｎ 二乳酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。乳酸（３５μｌ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１６時間−１０℃で撹拌した。反応混合物にエーテル（２ｍＬ）を添加し、さらに３時間−１０℃で放置した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより２４時間乾燥させた。収量：４．５ｍｇ，３１％。Ｃ28Ｈ40Ｎ4Ｏ12の分析値：Ｃ，５３．８４；Ｈ，６．４５；Ｎ，８．９７。Found：Ｃ，５１．５４；Ｈ，６．２４；Ｎ，８．８９。
【００６３】
実施例１３：ＡＱ４Ｎ 二ピメリン酸塩
ＡＱ４Ｎ（１０ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中のピメリン酸（７３．７ｍｇ，０．４６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１４時間−１０℃で撹拌した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより２４時間乾燥させた。収量：８．２ｍｇ，４７％。Ｃ36Ｈ52Ｎ4Ｏ14の分析値：Ｃ，５６．８０；Ｈ，６．８０；Ｎ，７．３４。Found：Ｃ，５６．４９；Ｈ，６．４１；Ｎ，８．４６。
【００６４】
実施例１４：ＡＱ４Ｎ 二酢酸塩
ＡＱ４Ｎ（７０ｍｇ，０．１５８ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１ｍＬ）中に溶解し、５分間撹拌した。ＭｅＯＨ（１ｍＬ）中の酢酸（１８３μｌ，３．１６ｍｍｏｌ）を、撹拌したＡＱ４Ｎ溶液に添加した。反応混合物を１時間室温で撹拌した後、１８時間−１０℃で撹拌した。反応混合物にエーテル（３ｍＬ）を添加し、さらに３時間−１０℃で放置した。沈殿した固体を濾過により単離した。暗青色の固体をデシケータ中真空下で五酸化リンにより２４時間乾燥させた。収量：６８ｍｇ，７６％。Ｃ26Ｈ36Ｎ4Ｏ10の分析値：Ｃ，５５．３１；Ｈ，６．４３；Ｎ，９．９２。Found：Ｃ，５５．２８；Ｈ，６．５７；Ｎ，９．９１。
【００６５】
実施例１５：ＡＱ４Ｎの有機酸塩の水溶液中３７℃でのｐＨの測定
約１ｍｇを正確に測りとり、水で希釈して１．４ｍＭの溶液を得ることにより、個々のＡＱ４Ｎ塩の原液を調製した。この溶液を、Fiscons WhirlMixer（商標）（Loughborough, Leicestershire, UK）を用いて３分間ボルテックスした。すべてのＡＱ４Ｎ塩溶液は、溶液のｐＨ値を測定する同じ日に調製し、ｐＨ値の測定はデジタルｐＨメータ（BDH（UK）からのｐＨ７．００および４．００の標準緩衝液を用いて２１±１℃で較正）を用いて行った。
【００６６】
表４および図７は、ＡＱ４Ｎの塩を調製するために使用した９種の有機酸をｐＫa1値が増加する順番で示している。
【００６７】
【表５】
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【００６８】
ｐＫaデータは、"IUPAC Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, selection and Use", P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds) VHCA Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich & Wiley-VCH, Weinheim (joint publ.) 2002を出典とする。
【００６９】
比較のため、塩化水素のｐＫaも示してある。この検討においてＡＱ４Ｎを調製するために使用した有機酸は次のとおりであった：
・モノ−酸：  ベンゼンスルホン酸、ジクロロ酢酸、乳酸、酢酸
・ジ−酸：    マレイン酸、マロン酸、酒石酸、ピメリン酸
・トリ−酸：  クエン酸
これらの酸のｐＫaは、各々の酸残基のイオン化の程度を表す指標であり、これゆえ、ｐＨで測定したこれらの酸の活性を反映している。表４は、ＡＱ４Ｎ塩（１．４ｍＭ）溶液の測定ｐＨは、ベンゼンスルホン酸塩およびジクロロ酢酸塩それぞれについてｐＨ２．４および２．５と低く、酢酸塩およびピメリン酸塩についてｐＨ３．８と低いことを示している。
【００７０】
実施例１６：ＡＱ４Ｎの有機酸塩の水溶液中３７℃での純度の測定
勾配移動相とFlatron Column Heater systemに収容されたHiChrom HIRPB（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）カラムとを用いて、２４℃でＡＱ４Ｎ塩溶液のクロマトグラフィーによる分離を行った。ＡＱ４Ｎ塩の勾配分離のために使用した移動相は、溶媒系Ａ（５％アセトニトリル９５％ギ酸アンモニウム緩衝液（０．００５Ｍ，ｐＨ３．６））と溶媒系Ｂ（５０％アセトニトリル５０％ギ酸アンモニウム緩衝液（０．０５Ｍ，ｐＨ３．６））からなっていた。ｐＨをギ酸で３．６に調整した。勾配は、移動相Ａ２０％から移動相Ｂ９５％まで５５分間かけて適用した。流速はすべての分離について１．３ｍｌｍｉｎ-1を使用した。データは、λ＝６１２ｎＭを用いて集め、このデータをWaters Millennium32ソフトウェア（商標）を用いて処理した。
【００７１】
調製したＡＱ４Ｎ塩について新しく調製した溶液（１．４ｍＭ）を３０分の分離時間内でクロマトグラフ分析した。すべてのＡＱ４Ｎ塩が、主としてＡＱ４Ｎ（９９％を超える）であり、モノ−Ｎ−オキシドＡＱ４ＭまたはＡＱＭＮは１％未満であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、ＡＱ４Ｎ二塩化水素化物の溶液におけるｐＨの一次導関数対ｐＨを示す。
【図２】図２は、同じ条件下でのｐＨの一次導関数対ＮａＯＨモル当量を示す。
【図３】図３は、４０℃で１４日間インキュベートした５ｍｇ／ｍｌ溶液におけるインキュベーション時間に対するＡＱＭＮの増加を示す。
【図４】図４は、４０℃で６３日間インキュベートした５ｍｇ／ｍｌ溶液におけるインキュベーション時間に対するＡＱＭＮの増加を示す。
【図５】図５は、４０℃で１４日間インキュベートした５ｍｇ／ｍｌ溶液におけるインキュベーション時間に対するＡＱ４Ｎの増加を示す。
【図６】図６は、４０℃で６３日間インキュベートした５ｍｇ／ｍｌ溶液におけるインキュベーション時間に対するＡＱ４Ｎの増加を示す。
【図７】図７は、ＡＱ４Ｎの塩を調製するために使用した形式的方法を示す。
【図８】図８は、ＡＱ４Ｎの塩を調製するために使用した有機酸を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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