(57)【要約】哺乳動物の対象のインスリン抵抗性、成人発症型糖尿病、及び代謝性症候群Ｘ並びにそれに関係する合併症を治療する方法は、主にリン脂質を含むリポ蛋白の小さい単層小胞（ＳＵＶ）のリポソーム懸濁液を、哺乳動物の対象に静脈内投与することによって達成される。リポソーム懸濁液を、ある期間にわたって投与し、それで、血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、Ｈｂ−Ａ１ｃ、リポ蛋白（ａ）、ＳＧＯＴ及びＳＧＰＴのうちのいくつかのレベル又は全てのレベルが正常な範囲内に戻り、又は著しく減少する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
主にリン脂質を含むリポ蛋白の小さい単層小胞（ＳＵＶ）のリポソーム懸濁液を、治療上有効な量で、哺乳動物の対象に静脈内投与することを含む、前記哺乳動物の対象のインスリン抵抗性、成人発症型糖尿病及び代謝性症候群Ｘ及びそれに関係する合併症を治療するための方法。
【請求項２】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール及びホスファチジルセリンから成る群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ホスファチジルコリンが卵ホスファチジルコリンである請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ホスファチジルコリンが、１−パルミトイル，２−オレオイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル，２−リノレオイルホスファチジルコリン又はその混合物である請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記ホスファチジルコリンは、転移温度が約３７℃未満である、請求項２から４までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記転移温度が、約−１０〜２４℃の範囲である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記リポ蛋白ＳＵＶがさらに約４０モルパーセント未満の量でスフィンゴミエリン、コレステロール又は他のステロールを含んでいる、請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記リポ蛋白ＳＵＶが空である、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記リポソーム懸濁液を、前記哺乳動物の対象に１週に１〜３回、各投与毎に体重ｋｇ当たり脂質総量約５０ｍｇ〜１ｇの量で投与する、請求項１から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記用量は、体重ｋｇ当たり脂質総量約２００〜４５０ｍｇである請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記リポソーム懸濁液を、静脈内注射又は静脈内注入により投与する請求項１から１０までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物の対象におけるインスリン抵抗性、成人発症型糖尿病及び代謝性症候群Ｘ及びそれに関係する合併症を治療するための薬剤の調製における、主にリン脂質を含む、リポ蛋白の小さい単層小胞（ＳＵＶ）のリポソーム懸濁液の使用。
【請求項１３】
前記リン脂質が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール及びホスファチジルセリンから成る群から選択される請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記ホスファチジルコリンが、卵ホスファチジルコリンである請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記ホスファチジルコリンが、１−パルミトイル，２−オレオイルホスファチジルコリン、１−パルミトイル，２−リノレオイルホスファチジルコリン又はその混合物である請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
前記ホスファチジルコリンは、転移温度が約３７℃未満である請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
前記転移温度が、約−１０〜２４℃の範囲である請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記リポ蛋白ＳＵＶがさらに約４０モルパーセント未満の量でスフィンゴミエリン、コレステロール又は他のステロールを含んでいる、請求項１２から１７までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記リポ蛋白ＳＵＶが空である、請求項１２から１８までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記薬剤が、前記哺乳動物の対象に１週に１〜３回、各投与毎に体重ｋｇ当たり脂質総量約５０ｍｇ〜１ｇの量で投与するのに適している、請求項１２から１９までのいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
前記用量は、体重ｋｇ当たり脂質総量約２００〜４５０ｍｇである請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記薬剤が、静脈内注射又は静脈内注入によって投与するのに適している、請求項１２から２１までのいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物におけるインスリン抵抗性、成人発症型糖尿病、及び代謝性症候群Ｘ並びにそれらに関連のある合併症を、主にリン脂質を含む治療用リポソーム懸濁液を用いて治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ホメオスタシスを維持するには、血糖代謝異常及びそれに関係する代謝性平衡障害の発生を防ぐために細胞へのグルコースの供給が一定に保たれることが重要である。見過ごしたままにすると或いは治療せず放置しておくと、代謝性の血糖代謝異常は、肥満症、心疾患、高血圧症、糖尿病、慢性疲労、加速老化、変性疾患、並びに多くの精神的障害や情緒的障害を含めた、多数の代謝性疾患を招くことになるはずである。この理由から、クオリティオブライフを損なうと共に寿命を縮める恐れのある、犠牲が大きく身体に障害を引起す変性の病態が現れる前に、この病態を早期に確認し、同時に治療することが肝心である。
【０００３】
血糖代謝異常及び糖尿病は、極めてゆっくりと知らないうちに危険な病態となって現れる。米国糖尿病協会による開示の通り、糖尿病を患っている米国人成人の３分の１以上（５百万人以上）が、この疾患にかかっていることにさえ気付いていない。多くの人が、心疾患、脳卒中、視覚障害、腎臓疾患、神経障害、又は陰萎などの衰弱させる重篤な障害が発症した後で初めてそれらの病態を知るようになる。（米国糖尿病協会：  Ｆａｃｔｓ  ａｎｄ  Ｆｉｇｕｒｅｓ，２０００，ａｔ  ｗｗｗ．ｄｉａｂｅｔｅｓ．ｏｒｇ／ｉｎｆｏ／ｆａｃｔｓ／ｆａｃｔｓ＿ｎａｔｌ．ｊｓｐ．）
【０００４】
糖尿病又は真性糖尿病は、膵臓で十分なインスリンを作ることができないか利用可能なインスリンが有効ではない故に、体内で血中のグルコースをエネルギーに利用できない時に生じる疾患である。糖尿病の初期の徴候は、グルコース不耐症及びインスリン抵抗性である。真性糖尿病には、２つの主な型がある。すなわち、インスリン依存性（１型）及びインスリン非依存性（２型又は成人発症型糖尿病）である。
【０００５】
糖尿病の第３の型は、以前に糖尿病の病歴のない妊娠中の女性だけに発症する妊娠糖尿病である。毎年およそ１３５，０００人の米国人女性が妊娠糖尿病を発症している。一般に、妊娠糖尿病は、女性が子供を出産した後に自然に治る。しかし、調査により、妊娠糖尿病の女性の約４０％が１５年以内に２型糖尿病を発症していることが示されている（「日本国公開特許広報」ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．０２−３８７３，Ｍａｙ  ２００２）。
【０００６】
インスリン依存性糖尿病Ｉ（ＩＤＤＭ；Ｉ型糖尿病）では、インスリン産生β細胞が破壊されているために、膵臓ではインスリンを少ししか又は全く作れない。この疾患は、一般にどの年齢でも発生するが、最も典型的な例では小児期又は青年期、通例として乳児期から３０代後半の間に発生する。治療は、毎日のインスリン注射、又はインスリンポンプの使用、計画的な食事療法や定期的な運動、並びに毎日の血糖セルフモニタリングで構成されている。インスリンレベルが長期間あまりに低い場合、エネルギー用に貯蔵された脂肪が体内で分解され始める。このことにより、体内で脂肪酸が遊離され、次いで毒性が高レベルであるケトン体又はケト酸へ変換される。その結果、ケトアシドーシスと呼ばれる、すぐに治療を受けなければ患者を昏睡病態にする恐れのある重篤な病状になる。
【０００７】
インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ；ＩＩ型糖尿病又は成人発症型糖尿病（ＡＯＤ））では、膵臓で十分なインスリンを生成することができず、又は体組織がインスリン抵抗性となる。インスリンが有効ではないか、又は適当に使用されていないので、血糖値が安全なレベル以上に上昇する。患者の血糖値は、往々にして徐々に上昇し、危険なレベルに達して症状を引起すのに数年かかることがある。したがって、糖尿病の病態がまだ発生していない人々の一部では、インスリンの正常なレベル又は過度のレベルがこのような抵抗性を代償している。しかし、時間が経過するにつれて、インスリンの生成がしばしば低下し、抵抗性が一層ひどくなる。糖尿病患者全体の約９０〜９５％がＡＯＤにかかっている。これは、４０歳以上の患者では、より普通に見られる。
【０００８】
ＡＯＤは、遺伝子と環境とインスリン異常の複雑な相互作用（β細胞内のインスリン分泌の減少及び筋細胞内のインスリン抵抗性の低減）、肝臓内でのグルコース生成の増加、脂肪分解の増加、及び腸内のおそらくホルモン分泌不良によって起こる。この疾患の近年の著しい増加から、疾患を招く肥満や運動不足がちなライフスタイルなどの生活習慣要因が、遺伝的要素を表面化する有力な要因であり得ることが示唆される。
【０００９】
インスリン刺激によるグルコースの取り込みは、個体間で大きく変わる（Ｓｔｅｒｎ，Ｍ．Ｐ．及びＭｉｔｃｈｅｌｌ，Ｂ．Ｄ．「インスリン抵抗性の遺伝学（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）」Ｇ．Ｍ．Ｒｅａｖｅｎ及びＡ．Ｌａｗｓ（編）．Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｘ，ｐ．３−１８，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９９）。正常な個体に観察されるインスリン抵抗性の程度が、糖尿病の個体に見られるものと等しいこともある。したがって、インスリン抵抗性が成人発症型糖尿病の発症より前に起こることは、現在広く知られている。また、軽度又はさらに重度のインスリン抵抗性が、糖尿病を全く発症しない個体において発見される可能性があることを確認することも不可欠である。遺伝的要因が、インスリン抵抗性におけるこの通常のばらつきの一因となっている。インスリン抵抗性の一般の形には、骨格筋のインスリン抵抗性、肝臓のインスリン抵抗性、及び脂肪組織のインスリン抵抗性がある。（Ｇ．Ｍ．Ｒｅａｖｅｎ及びＡ．Ｌａｗｓ，（編），Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，Ｔｈｅ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｘ，ｐ．３−１８，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９９）の内容全体をそっくり参照により本明細書に組み込む。
【００１０】
インスリンに対する細胞の応答は、原形質膜の特異的インスリン受容体によって媒介される。インスリンがこの受容体を活性化させると、β−サブユニットが膜近傍領域、キナーゼ領域、及びＣ−末端領域で自己リン酸化される。その後、受容体全体の自己リン酸化により蛋白質チロシンキナーゼ受容体活性が促進され、このことは同時にインスリンに対する細胞の応答に不可欠である（Ｋａｈｎ，Ｃ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８２：８６２２−８６２６，１９８８）。
【００１１】
インスリン抵抗性は、細胞、組織、肝臓又は全身での、外因性又は内因性インスリンの正常なレベルに対する応答が損なわれていることである。これは、複数の要因、すなわち：（１）肥満に関する要因（遊離脂肪酸レベルの増加、及びインスリン抵抗性とサイトカインの関連など、例えばレジスチン及びレプチン（Ｍｏｏｒａｄｉａｎ  Ａ．Ｄ．，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｈｏｒｍ．ＩＧＦ  Ｒｅｓ．１１：Ｓｕｐｐｌ  Ａ：Ｓ７９−８３，２００１；  Ｒａｖｕｓｓｉｎ，Ｅ．及びＳｍｉｔｈ，Ｓ．Ｒ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９６７：３６３−７８，２００２））；（２）カルパインのような蛋白質（Ｂａｉｅｒ，Ｌ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０６：８１９−２１，２０００）；（３）循環系と神経系の両方に影響を与えるアミリン及びカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）の調節異常（Ｌｅｉｇｈｔｏｎ，Ｂ．及びＣｏｏｐｅｒ，Ｇ．Ｊ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３５：６３２−５，１９８８；  Ｈａｙｎｅｓ，Ｊ．Ｍ．ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４０：２５６−６１，１９９７）；（４）炎症マーカーや損傷マーカーとして働くインターロイキン６（ＩＬ−６）及びＣ反応性タンパク（ＣＲＰ）レベルの増加（Ｈａｋ，Ａ．Ｅ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８６：４３９８−４０５，２００１；  Ｐｉｃｋｕｐ，Ｊ．Ｃ．ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４０：１２８６−９２，１９９７）、及び（５）思春期の成長ホルモンレベルの増加（Ｄｕｎｇｅｒ，Ｄ．Ｂ．及びＣｈｅｅｔｈａｍ，Ｔ．Ｄ．，Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．４６：２−６，１９９６；  Ｈａｌｌｄｉｎ，Ｍ．Ｕ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．（Ｏｘｆ）４８：７８５−９４，１９９８）によって起こり得る。
【００１２】
ＡＯＤ患者の主な死因は、性別又は年齢にかかわらず、心疾患である。他の糖尿病関連の合併症として、神経障害（ニューロパシー）及び小血管と大血管の両方での血管異常が挙げられる。糖尿病患者全体のうち、心発作が死因の６０％を占め、脳卒中が死因の２５％を占めている。糖尿病患者は、高血圧症、高トリグリセリドレベル及び高比重リポタンパク減少、血液凝固障害、ニューロパシー、及び潜在性虚血を含めて心臓に危険な病態になるリスクがある。これら合併症のいずれかが発生するのを防ぐために、糖尿病患者をスタチン（例えば、プラバスタチン（プラバコール）、シンバスタチン（ゾコール）、フルバスタチン（レスコール）、アトルバスタチン（リピトール）、及びロスバスタチン（クレストール）で治療して患者のコレステロール及び脂質のレベルを改善させる。コレステロールの特徴を改善するためにナイアシンを投与することもできるが、これは血糖値も増加させる。
【００１３】
薬物療法は、成人発症型糖尿病を治療するための一般的な方法の１つである。インスリン代償療法の有無にかかわらず、単独で又は併用でスルホニル尿素（例えば、グリブリド、グリピジド、グリメピリド）、メグリチナイド、ビグアニド、チアゾリンジオン、及びα−グルコシダーゼ阻害剤などの経口薬剤が現在使用されている。
【００１４】
ある形のインスリン類似体は、成人発症型糖尿病の患者に有用である可能性がある。しかし、体重の増加及び心臓に対するインスリンの副作用が起こる可能性があり、それは厄介である。実際、薬物療法で、死亡率が低下した（インスリン治療（２８％）に対し、メトホルミン（８％）、スルホニル尿素（１６％）、チアゾリンジオン（１４％）低下）。
【００１５】
代謝性症候群Ｘ（ＭＳ−Ｘ）は、無関係の及び関係のある合併症又は障害の併発によって、アテローム性動脈硬化症が促進され、心血管内での諸現象のリスクが高まる病態である。この病態自体は、「シンドロームＸ」、「インスリン抵抗性症候群」（Ｌｉ，Ｃ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２４：  ２０３５−２０４２，２００１）、「Ｒｅａｖｅｎの症候群」（Ｈｏｍｅ，Ｐ．，Ｄｉａｂｅｔ．Ｍｅｄ．６：  ５５９−５６０，１９８９）、及び「代謝性心血管リスク症候群（ｔｈｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｉｓｋ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」（Ｈｊｅｒｍａｎｎ，Ｉ．，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０：  Ｓ５−Ｓ１０，１９９２）と様々に呼ばれている。関係するＭＳ−Ｘの合併症又は障害には、異脂肪血症（高トリグリセリド血症及び高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール減少）、プロトロンビン症、２型糖尿病（成人発症型糖尿病）、インスリン抵抗性／高インスリン血症、高血圧症、及び腹部脂胖症（Ｇｒｕｎｄｙ，Ｓ．Ｍ．Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ．８１：  １８Ｂ−２５Ｂ，１９９８）が含まれる。
【００１６】
患者には、どんなＭＸ−Ｘの症状もでないが、主治医が以下をその病態の徴候として同定できる。すなわち（１）インスリン抵抗性によるインスリンレベルの増加；（２）ＩＩ型糖尿病；（３）中心性肥満（腹部内体脂肪量の不均衡）；（４）高脂質血症（血中における高レベルの脂肪（脂質）、これには低比重リポタンパク（「悪玉」）コレステロール及びトリグリセリドが含まれている。加えて、ＬＤＬのサイズは通常よりも小さいことがあり、これはアテローム性動脈硬化症をさらに促進させやすい）；（５）低レベルのＨＤＬ（「善玉」）コレステロール；（６）高血圧症（高血圧）；（７）プラスミノゲンアクチベータインヒビタ−１（ＰＡＩ−１）やフィブリノーゲンなど血液凝固を促進させる血液因子レベルの増加；（８）高尿酸血症（血中尿酸レベルの増加）；及び（９）ミクロアルブミン尿症（尿検査で検出される少量の蛋白質アルブミン）（Ｇｒｕｎｄｙ  Ｓ．Ｍ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．８３：  ２５Ｆ−２９Ｆ，１９９９）である。
【００１７】
これら合併症又は障害のそれぞれが独立に、アテローム性動脈硬化症を促進する。しかし、それらが併発すると、ますますアテローム生成的になり、どんなＬＤＬコレステロールレベルでも循環器疾患（ＣＶＤ）のリスクが高まる。ＭＳ−Ｘは、患者のＣＶＤリスクを高めると共に、脳卒中、２型糖尿病（Ｌｅｂｏｖｉｔｚ，Ｈ．Ｅ．，Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ  １０９：  Ｓ  １３５−Ｓ  １４８，２００１）、糖尿病性腎症、網膜症、及び末梢神経障害（Ｉｓｏｍａａ，Ｂ．ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ  ４４：１１４８−１１５４，２００１）の発症をも高める可能性がある。
【００１８】
上述の特徴を用いると、ある推定では、５０００〜７５００万人もの米国人が２０１０年までに著しいＭＳ−Ｘ徴候を示す恐れがあることが示唆される（Ｈａｎｓｅｎ，Ｂ．Ｃ．，Ａｎｎ．Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８９２：  １−２４，１９９９）。
【００１９】
世界保健機構（ＷＨＯ）指針によれば、個体に以下の特徴が現れている場合、ＭＳ−Ｘであると診断される：ａ）高血圧症（収縮期＞１４０ｍｍ  Ｈｇ又は拡張期＞９０ｍｍ  Ｈｇ）；（ｂ）異脂肪血症；血漿トリグリセリド濃度の増加（１５０ｍｇ／ｄＬ）及び／又は高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール濃度の減少（男性＜３５ｍｇ／ｄＬ、女性＜３９ｍｇ／ｄＬ）と定義されている；３）肥満症；肥満度指数（ＢＭＩ）の増大（３０ｋｇ／ｍ２）及び／又は腰部と股関節部の比の増大（男性＞０．９０、女性＞０．８５）と定義されている；並びに４）ミクロアルブミン尿症（尿中アルブミン排泄率≧２０μｇ／分）。「高血圧症管理用の世界保健機構国際協会による高血圧症の指針（ＷＨＯ−Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）」Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｓｕｂｃｏｍｍｉｔｔｅｅ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．１７：１５１−１８３，１９９９を参照のこと。この基準によれば、ＭＳ−Ｘと診断されるには２型糖尿病の個体では、診断基準のうち２つだけ満たせばよい。
【００２０】
国立コレステロール教育プログラム（ＮＣＥＰ  ＡＴＰ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｙ）によって確立された同様の指針では、以下のリスク要因のうち３つ又はそれ以上が存在する場合、個体はＭＳ−Ｘであることになると定めている：（１）男性の場合、腰周囲＞１０２ｃｍ（４０インチ）、又は女性の場合＞８８ｃｍ（３７インチ）；（２）トリグリセリドレベル≧１５０ｍｇ／ｄＬ；（３）男性の場合ＨＤＬコレステロールレベル＜４０ｍｇ／ｄＬ、又は女性の場合＜５０ｍｇ／ｄＬ；（４）血圧≧１３０／≧８５ｍｍ  Ｈｇ；又は（５）空腹時グルコース≧１１０ｍｇ／ｄＬ（ＪＡＭＡ  ２８５：  ２４８６−２４９７，２００１参照）。
【００２１】
これらの指針は、ＢＭＩ（高肥満度指数）の増加よりはむしろ腹部肥満がＭＳ−Ｘとより深い関係があると主張しており、腹部肥満患者すべてをこの症候群の可能性について調べるべきだと提唱している。さらに、ある種の特徴（例えば、ＨＤＬコレステロール及び高血圧症）では、ＡＴＰＩＩＩ指針の方が、ＷＨＯ指針よりも診断上の限界レベルが低い。したがって、ＭＳ−Ｘ診断に対するＡＴＰＩＩＩ基準に適合する人の割合の方がより高くなる。
【００２２】
ＭＳ−Ｘの中心的な特徴は、すべてが互いに深く関係しており、多数の生理的な系が関与し、複雑な多因子的病因を現わしている。脂質の三徴候としても知られる異脂肪血症には、トリグリセリドの中程度（しばしば普通より高い）の増加、小さい高密度ＬＤＬ粒子の量の増加、及びＨＤＬコレステロールレベルの減少など他の脂質異常も含まれる（Ｇｒｕｎｄｙ，Ｓ．Ｍ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９５：  １−４，１９９７）。異脂肪血症及びインスリン抵抗性は、代謝性異常に関係している（Ｈａｆｆｎｅｒ，Ｓ．Ｍ．Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．８３：  １７Ｆ−２１Ｆ，１９９９  ａｎｄ  Ｇｉｎｓｂｅｒｇ，Ｈ．Ｎ．及びＨｕａｎｇ，Ｌ．Ｓ．，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｉｓｋ  ７：  ３２５−３３１，２０００）。
【００２３】
プロトロンビン症に関しては、インスリン抵抗性の患者は、往々にして動脈血栓症及び炎症を促進する恐れのある凝固因子の変化を経験する（Ｇｒｕｎｄｙ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １００：  １１３４−１１４６，１９９９）。凝血促進病態は、アテローム斑の形成及び斑破裂後の血栓サイズを増大させる恐れがある。ＭＳにおけるプロトロンビン症に関係する一般に認められている病態としては、内皮細胞の活性化、ＬＤＬ酸化の促進、血小板凝集の増強、第ＶＩＩ因子の活性化、第ＩＸ因子と第Ｘ因子とプロトロンビンのレベルの増加、並びにＰＡＩ−１濃度の増加がある。細胞内外脂質代謝の主要なレギュレーターであるペルオキシソーム増殖活性化受容体−α（ＰＰＡＲ−α）は、アテローム性動脈硬化症を起こす異脂肪血症及び炎症においてある役割を演じる可能性がある。Ｇｅｒｖｏｉｓ，Ｐ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．３８：  ３−１１，２０００。ＰＰＡＲ−αリガンド結合領域が活性化されると、脂肪酸結合蛋白質などある種の標的遺伝子の転写を促進させて、肝臓内の脂肪酸代謝を助けることができる。さらに、ＰＰＡＲは、ＨＤＬコレステロールとアポリポ蛋白（ａｐｏ）Ｂ含有リポ蛋白の相互作用を調節する際に中心的役割を果たしている可能性がある。Ｐｉｎｅｄａ，Ｔ．Ｉ．，ら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．１０：  １５１−１５９，１９９９。
【００２４】
インスリンが過剰産生されると、高血圧症が生じる。ＷＨＯ指針は、抗高血圧治療を受け且つ／又は血圧が高い（収縮期＞１４０ｍｍ  Ｈｇ又は拡張期＞９０ｍｍ  Ｈｇ）患者にはＭＳのリスクがあることを示している（Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．１７：  １５１−１８３，１９９９．）。高血圧症は、代謝性障害として十分に確立されており、インスリン抵抗性の前兆となるものである（Ｌｉｎｄ，Ｌ．及び  Ｌｉｔｈｅｌｌ，Ｈ．Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１２５：  １４９４−１４９７，１９９３．）。抗高血圧性患者では、インスリン抵抗性と高インスリン血症の同時罹患率は５０％ほどである（ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ，Ｔ．及び  Ｒｅａｖｅｎ，Ｇ．，Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ  ５５：  ２８−３５，２０００．）。血圧を低下させる適当な薬剤を使用すると、両方の病態を示す患者のインスリン抵抗性徴候が軽減する可能性がある。上昇した血圧を下げれば、患者の脂質プロフィールを改善することもできる（Ｗｅｉｄｍａｎｎ，Ｐ．ら、Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１２５：  １４９８−１５１３，１９９３．）。
【００２５】
上昇した血圧が、それ自体で、おそらくＬＤＬが内皮下腔へ入るのを促進させることによりアテローム性動脈硬化症のリスクを高め、他の代謝性異常を悪化させる可能性がある（Ｈｏｒｎｓｔｒａ，Ｇ．ら、．，Ｂｒ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．８０：  Ｓ  １１３−Ｓ１４６，１９９８．）。
【００２６】
ＭＳ−Ｘの診断では、様々な血液検査を使用してグルコース、インスリン、トリグリセリド、コレステロール、尿酸、フィブリノーゲン、及びＰＡＩ−１のレベルを測定する。加えて、血圧及び体重を測定し評価すべきである。
【００２７】
現在、ＭＳ−Ｘの要因すべてに対処する既知の治療戦略は、減量及び運動である。医師は、薬物療法を施すが、通常、ＭＳ−Ｘ患者に、食事の時に脂肪と油の量を減らすこと、濃厚な甘い物を食べないようにすること、喫煙をやめること、及び過度の飲酒を避けることなど生活習慣の変更を勧めるはずである。
【００２８】
上述の戦略に加えて、いくつかの団体が、ＭＳ−Ｘ及びそれに関係する合併症を治療するための特異的薬物の使用を開示している。以下の記述は、それらの開示を簡単に要約したものである。
【００２９】
米国特許第６１６６０４９号は、有効な非毒性の薬剤として有効な量のペルオキシソーム増殖活性化受容体−γ及び−α（ＰＰＡＲ−γ及びＰＰＡＲ−α）作用薬を投与することによって、ヒト又はヒト以外の哺乳動物の症候群Ｘを治療又は予防する方法を開示している。ＰＰＡＲ−γ抗高血糖症薬にＰＰＡＲ−αを含めると、脂質低下作用が増強されることにより症候群Ｘ病因の治療の可能性を高める試薬がもたらされる。本発明は、遺伝的に糖尿病であるマウスの血糖及び血漿脂質に対する化合物の効力に関係した予見的な例を提供するものである。
【００３０】
米国特許第６１９７７６５号は、インスリン及びプロインスリンの放出を阻害し、体重を減らし、循環するコレステロール及びトリグリセリドのレベルを減少させ、血圧を下げ、糖尿病合併症を予防し回復させる量のジアゾキシドを投与することにより、糖尿病合併症を含めて、ＭＳ−Ｘ及びそれに関係する合併症を治療する方法を開示している。
【００３１】
米国特許第６４１０３３９号は、老人性糖尿病、例えばＩＩ型糖尿病、高血中脂質及び高血圧を発症させるリスクを含めて、腹部肥満、インスリン抵抗性などのＭＳ及びそれに関係する病態を診断するための系を作成するために、糖質コルチコイド及び／又は鉱質コルチコイド効果を有する合成コルチゾール作用薬、例えばデキサメサゾンを使用することを開示している。コルチゾール作用薬の量に差があると、正常値と比べて、ＭＳ個体でのコルチゾール自動産生に対する阻害効果が変わる。
【００３２】
Ｆｒｙｂｕｒｇらの米国特許出願第２００２／０１６５２３７号は、インスリン抵抗性症候群（ＩＲＳ）を治療するためのシルデナフィルなどの選択的環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）特異的ホスホジエステラーゼ５型阻害剤の使用を教示している。シルデナフィルは、男性の勃起障害の治療に有効であることが示されている。シルデナフィルは、一酸化窒素（ＮＯ）によって誘導されるｃＧＭＰの細胞内濃度を増加させる。この蓄積により、有効な一酸化窒素及びインスリンの血管拡張、代謝性、及び抗アテローム生成効果を増大させるはずである。本発明者らによれば、このような治療が、血圧及び／又は血糖及び／又は脂質及び／又は尿酸、及び／又は凝血促進性因子における臨床上重要な改善をもたらす可能性がある。この治療は、単独で又はＩＲＳを改善する他の療法と併用して実施することができ、ある患者の循環器疾患、並びに個々の障害から成る他の合併症（糖尿病性神経症、ネフロパシー、及び網膜症を含むがこれに限らない）が発生するリスクを低減させるはずである。
【００３３】
Ｐｌａｔａ  Ｓａｌａｍａｎらの米国特許出願第２００２／００３７８６１号は、ＩＩ型糖尿病及び症候群Ｘの発生を防止するための抗痙攣薬の誘導体の使用を開示している。抗痙攣薬の誘導体の１つである、２，３：４，５−ビス−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−βＤ−フルクトピラノーススルファマート（トピラマートとして知られている）が、単純部分発作及び複雑部分発作並びに二次性全身発作を治療する上で、補助的療法として又は単独療法として有効であることがヒトの癲癇臨床試験で実証されている。ホモ接合性糖尿病マウスモデル（ｏｂ／ｏｂ）を用いて、トピラマートで処理すると、トピラマートを与えていない対照ｏｂ／ｏｂマウスよりも、血糖、トリグリセリド、及びインスリン及びグリコシル化ヘモグロビンのレベルが著しく減少した。本発明者らによれば、これらの知見は、トピラマートが症候群Ｘと関係する病態生理的な徴候を軽減させ、又は予防できることを実証するものである。加えて、トピラマートによる糖尿病の病態の改善は、体重の低減に関係しない。
【００３４】
薬物療法は、インスリン抵抗性、成人発症型糖尿病、及びＭＳ−Ｘ並びにそれに関係する合併症を低減し、治療するのに有効であることが証明されているが、体重増加、水分貯留、心臓病発生の軽度のリスク、低血糖症、及び悪心、膨満、下痢、乳酸アシドーシス、ビタミンＢ１２と葉酸の吸収の低減、鉄吸収の低減を含めた胃腸障害などの副作用を引起す。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３５】
したがって、それらの副作用を防ぎ又は最小限に抑える、上記病態を治療するための改善された方法を提供する必要がある。上述のような犠牲が大きく身体に障害を引起す変性病態が発生するのを防ぐために、これら病態の初期の治療方法を実現することが引き続き求められている。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
本発明は、本明細書中に記載するタイプのリポソームを哺乳動物の対象に静脈内投与して治療すると、インスリン抵抗性の低減、並びに成人発症型糖尿病、代謝性症候群Ｘ及びそれに関係する合併症の症候の改善がもたらされ、副作用がごくわずかであるか又は全くないという発見に基づいている。
【００３７】
ある一般的な実施形態では、この方法を使用して、哺乳動物の対象を１種又は複数の血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、Ｈｂ−Ａ１ｃ、リポ蛋白（ａ）、ＳＧＯＴ及びＳＧＰＴの減少によって証明されるような上記病態を治療する。ある好ましい実施形態では、上記方法は、治療上有効な量の、主にリン脂質を含むリポ蛋白小単層（単ラメラ）小胞（ＳＵＶ）のリポソーム懸濁液を哺乳動物の対象に静脈内投与することを含む。
【００３８】
一態様において、リポ蛋白ＳＵＶのリポソーム懸濁液は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール及びホスファチジルセリンから成る群から選択されたリン脂質を含む。もう１つの態様では、ホスファチジルコリンは、１−パルミトイル，２−オレオイルホスファチジルコリン及び１−パルミトイル，２−リノレオイルホスファチジルコリンであり、卵由来であってもよい。
【００３９】
別の実施形態では、リポ蛋白ＳＵＶは、転移温度が約３７℃未満、好ましくは約−１０〜２４℃であるホスファチジルコリンを主に含んでいる。リポ蛋白ＳＵＶのリポソーム懸濁液は、さらにスフィンゴミエリン、コレステロール又は他のステロールを約４０モルパーセント未満の量で含んでいる。さらに、他の実施形態では、リポ蛋白ＳＵＶは空（ｅｍｐｔｙ）である。
【００４０】
一実施形態では、リポソーム懸濁液を、上記病態の哺乳動物の対象に体重ｋｇ当たり脂質総量が約５０ｍｇ〜１ｇの量、好ましくは体重ｋｇ当たり脂質総量が約２００〜４５０ｍｇの量で、１週に１〜３回投与する。投与は、静脈内注射又は静脈内注入によって実施することができる。
【００４１】
本発明の特徴及び詳細は、本発明が属する分野の当業者なら理解し、以下の発明を実施するための最良の形態からさらに明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
Ｉ．定義
以下の説明では、いくつかの用語が、頻繁に使用されている。以下の定義は、発明の理解を高めるために提供するものである。
【００４３】
別段の指定がない限り、「ａ」又は「ａｎ」は、「１つ又は複数」を意味する。
「哺乳動物の対象」は、家畜動物とヒトの両方を指す。
「グリコシル化ヘモグロビン又は糖化ヘモグロビン（Ｈｂ−Ａ１ｃ）」とは、グルコース分子が非酵素的に付加された直鎖状のヘモグロビンを指す。糖化ヘモグロビンの百分率は、赤血球がグルコースに曝露されている時間、及びグルコース濃度に直接比例する。糖化ヘモグロビン分画を測定すると、細胞半減期中の平均血糖濃度の総合像（ｉｎｔｅｒｇｒａｔｅｄ  ｐｉｃｔｕｒｅ）が得られる−この半減期は、終わりの６０日を超えるものであった。Ｈｂ−Ａ１ｃは通常、総ヘモグロビン量の百分率として示される。正常なグルコース耐性を有する個体のＨｂ−Ａ１ｃレベルは、通常４．３％〜６．３％の範囲である（Ｐｅｔｅｒｓ、Ａ．Ｌ．ら、Ｊ．Ａｍ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．２７６：１２４６−５２，１９９６）。
【００４４】
「血清グルタミン酸−オキサロ酢酸トランスアミナーゼ」（「ＳＧＯＴ」）又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ」（「ＡＳＴ」）は、肝臓、心臓、腎臓、膵臓、及び筋肉内で主に見られる酵素である。筋疾患、心筋の損傷及び腎梗塞の患者では、この酵素が増加する。ビタミンＢの欠乏及び妊娠中では、そのレベルの減少が見られることがある。正常値の範囲は、０〜５０Ｕ／１である。成人の最適な測定値は、２１Ｕ／１である。
【００４５】
「血清グルタミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼ」（「ＳＧＰＴ」）又は「アラニンアミノトランスフェラーゼ」（「ＡＬＴ」）は、肝臓ばかりでなく、心臓及びその他の組織にも主に見られる酵素である。鬱血した肝臓の症例では、ＳＧＰＴの減少と共にコレステロールレベルの増加が認められる。単核球症、アルコール依存症、肝臓障害、腎感染症、化学的汚染又は心筋梗塞においても、このレベルの増加が認められる。正常値の範囲は、０〜４１Ｕ／１である。成人の最適な測定値は、２４Ｕ／１である。
【００４６】
「反応性蛋白」（「ＣＲＰ」）は、多くの急性炎病態に現れる蛋白質であり、循環器疾患の特異的危険因子でもある。より高いレベルのＣＲＰは、腹部肥満及びＩＩ型糖尿病又はＡＯＤの発症で、役割を果たす可能性がある。ＣＲＰの通常の範囲は、０〜０．５ｍｇ／ｄｌである。
【００４７】
「クレアチンキナーゼ（ＣＫ）」は、心臓、脳、及び骨格筋に見られる酵素である。筋肉又は心臓細胞が損傷すると、ＣＫの血中濃度が増加する。ＣＫは、アイソザイムと呼ばれる３つの主な形、すなわち：（１）ＣＫ−ＭＢ（主として心筋に見られる）；（２）ＣＫ−ＢＢ（主として脳に見られる）；及び（３）ＣＫ−ＭＭ（心臓及び他の筋肉に見られる）の形で存在する。胸痛のあるヒトのＣＫ−ＭＢレベル、並びにＣＫ総量を検査して心臓発作があったかどうかを確認する。ＣＫの総量は、心臓又は他の筋肉に対する損傷を示すので、高いＣＫ−ＭＢは、心筋に対する損傷があったことを示唆している。ＣＫ及びＣＫ−ＭＢの通常の範囲は、それぞれ０〜１９５Ｕ／１及び０〜２４Ｕ／１である。
【００４８】
「グルコース不耐性」とは、血液循環中のグルコースが体内で利用できないことを言う。グルコース不耐性は、糖尿病及び多嚢胞性卵巣症候群などの内分泌障害では増大する。
【００４９】
「インスリン」は、血液から細胞へのグルコースの往復を助けるホルモンを指す。インスリンは、一般にランゲルハンス島と称される膵臓部位のβ細胞で作られる。
【００５０】
「インスリン感受性」（又は「インスリン受容性」）は、体の細胞が依然としてインスリン作用に感受性（又は受容性）及び応答性である正常な好ましい状態を意味する。
【００５１】
「インスリン抵抗性」は、異常に高いグルコースレベルが引き金となって、血流から糖を取り除くためにインスリンが増大する病態を意味する。しばしば、体の細胞は、高インスリンレベルを無視し始めるようになり、したがって、ホルモン作用に対して抵抗性となる。インスリン抵抗性になると、グルコースレベルが増加し、高いままに保たれる。しかし、必ずしも糖尿病になるわけではない。
【００５２】
高血圧症は、血圧の上昇と定義される。
【００５３】
異脂肪血症は、血漿トリグリセリド濃度の増大及び／又は高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロール濃度の低減と定義される。
【００５４】
肥満症は、肥満度指数（ＢＭＩ）の増大及び／又は腰部と股関節部の比の増大と定義される。
【００５５】
「脂質補充療法」は、コレステロールとリン脂質のモル比並びにスフィンゴミエリンとホスファチジルコリンのモル比を低減させ、若い細胞又は若い生物体組織で見られる値まで戻すように、組織培養物及びすべての生物体、特に、それだけには限らないが、赤血球、血管、心臓細胞及び腎臓細胞の細胞膜の組成を改変する治療法を意味する。
【００５６】
「空の」リポソームは、包含又は被包された薬剤を含まないリポソームを意味する。
【００５７】
「小さい単層小胞（ＳＵＶ）」は、粒子サイズが主に２０〜１２０ｎｍの範囲である、小さい単一の二重層リポソームを意味する。本発明のＳＵＶは、中空であってよい。これらは、リン脂質、好ましくは、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジルセリンから成る群から選択されたリン脂質を含む。ホスファチジルコリンは、卵ホスファチジルコリンでよい。
【００５８】
「体重キログラム当たり、ミリグラム又はグラムの脂質総量」という句は、体重キログラム当たりの、リポ蛋白ＳＵＶを含む脂質の、ミリグラム又はグラム単位の総量を意味する。総量の脂質には、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、コレステロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、又は本発明に記載のどんな他の脂質を含めてもよい。
【００５９】
疾病状況の「著しい改善」は、臨床的又は生化学的指標によって示される、疾病状況改善の測定可能な程度である。一般に、疾病状況の著しい改善とは、疾病状況に対して既知の相関関係を持つパラメータの、少なくとも５％の改善をもたらすものである。
【００６０】
「血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及びトリグリセリドの増加」という本明細書中で使用する用語は、１週間にわたって様々な時間に測定したとき、平均して正常な平均濃度より高くなった、血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、及びトリグリセリドの濃度を意味する。グルコースの正常な範囲は、一般に５５〜１１５ｍｇ／ｄｌである。トリグリセリドでは０〜２００ｍｇ／ｄｌ；総コレステロールでは１００〜２００ｍｇ／ｄｌ；ＬＤＬコレステロールでは０〜１５５ｍｇ／ｄｌ。
【００６１】
「経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）」は、血糖レベルを２〜３時間にわたって４〜５回測定する２〜３時間のグルコース負荷試験を意味する。患者に、経口量のグルコース溶液（極度に甘い飲料７５〜１００グラム）を投与する。それにより、体内でインスリンを生成してグルコースレベルを正常化するように、最初の１時間にグルコースレベルが増大し、次いで２〜３時間以内に正常に戻るはずである。この試験は、糖尿病又は妊娠糖尿病の診断を確認（し、他の代謝性疾患を診断）するために使用される。
【００６２】
ＯＧＴＴは、空腹時血漿グルコース試験よりもさらに高感度の試験であり、インスリン生成を監視するための複数回の採血を必要とする。これで、しばしば、空腹時試験で見のがされることがある軽度の糖尿病の症例を検出することができる。最も一般に使用される試験プロトコルには、ウィルカーソンのポイントシステム（Ｗｉｌｋｅｒｓｏｎ  ｐｏｉｎｔ  ｓｙｓｔｅｍ）；  ファヤンス−コンのシステム（Ｆａｊａｎｓ−Ｃｏｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ）、又はアメリカ国立衛生研究所（ＮＩＨ）のシステムがある。平均して、正常なグルコースレベルは、典型的には、経口グルコース量の投与後３０分〜１時間で１６０〜１８０ｍｇ／ｄｌのピークに達し、次いで、２〜３時間以内に１４０ｍｇ／ｄｌ又はそれ以下の空腹時レベルに戻るはずである。年齢、体重、及び人種などの要因が、結果に影響を与える可能性があり、最近の疾病及びいくつかの薬物療法も同様である。例えば、高齢の個体では、５０歳を超えると毎年、グルコース負荷の上限が１ｍｇ／ｄｌ高くなることになる。グルコースレベルが、正常レベル（すなわち、２００ｍｇ／ｄｌ又はそれより高い）より速やかに高くなり、正常化するのにより長くかかると、糖尿病が示唆される。
【００６３】
インスリン抵抗性は、インスリンレベルを空腹時レベルだけ測定することによって、又はグルコース負荷試験プラスインスリン値（時折ＩＧＴＴと称される）を用いて診断するべきである。糖尿病は、血糖レベルだけに基づいて診断することができる。
【表１】
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【００６４】
特定の理論に拘泥するものではないが、本発明者らは、心疾患などの老化に関係する病態を治療するのに有効であると知られているリポソーム懸濁液が、インスリン抵抗性、成人発症型糖尿病及び代謝性症候群Ｘ並びにそれに関係する合併症の治療にも有用であることを発見した。この治療では、当技術分野で公知のプロトコルと類似のものを使用する。しかし、通常の知識を有する医師には明らかなように、この治療を、インスリン抵抗性、成人発症型糖尿病及び代謝性症候群Ｘ並びにそれに関係する合併症の治療に適合させなければならない。
【００６５】
ＩＩ．リポソーム組成物の調製
本発明は、インスリン抵抗性、成人発症型糖尿病及び代謝性症候群Ｘ並びにそれに関係する合併症のある対象に、治療上有効なリポソーム懸濁液を静脈内投与するものである。リポソーム懸濁液は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、及びホスファチジルセリンから成る群から選択されたリン脂質を主に含む、リポ蛋白の小さい単層小胞（ＳＵＶ）で構成される。ホスファチジルコリンは、卵ホスファチジルコリンでよい。本発明のリポ蛋白ＳＵＶの調製は、以下の実施例及び節で説明する。
【００６６】
Ａ．リポソーム組成物の調製
リポ蛋白は、血漿による脂質の運搬、すなわち、コレステリルエステル生成中にトリグリセリド及びコレステロールの運搬を主に担う高分子量の粒子である。自然に存在する主な５つのクラスのリポ蛋白は、血漿中で循環していることが知られており、それぞれ脂質組成、アポ蛋白組成、密度、サイズ、及び電気泳動易動度が異なる。
【００６７】
各リポ蛋白粒子は、非極性コア領域と、少量のコレステロールを含む、周囲のリン脂質表面被覆（コーティング）とで構成されており、表面が露出している。ｉｎ  ｖｉｖｏでは、リポ蛋白粒子は、細胞膜上の受容体との結合、及びリポ蛋白の担体のその所期の代謝部位への運搬を担うアポ蛋白、例えばアポ蛋白Ａ及びＣと結合することができる。
【００６８】
以下の実施例に記載し、そこで使用する好ましい実施形態では、リポ蛋白ＳＵＶは、相転移温度が約３７℃未満、好ましくは約−１０〜２４℃、例えば、約５℃以下である、ホスファチジルコリン（ＰＣ）を、主に（５０モルパーセント以上、好ましくは８０〜９０モルパーセント以上）含んでいる。
【００６９】
ＰＣリン脂質は、コリン部分を有するリン脂質を含み、リン脂質の脂肪酸の鎖部分は、長さ及び不飽和度が変わることがある。加えて、ＰＣリン脂質はまた、体温で結晶性ではなく（例えば、少なくとも１つの二重結合を含むもの）、しかも酸化に対して抵抗性である（例えば、１−パルミトイル，２−オレオイルＰＣ（ＰＯＰＣ）など二重結合を持たないもの）、合成のＰＣをも含む。ＰＣリン脂質はさらに、天然又は合成のリン脂質を、単独で、或いは依然としてリポソーム又はミセル構造を維持している、補充又は置換された疎水性又は両親媒性の物質を有する混合物の形で含んでもよい。
【００７０】
ある好ましい小胞組成物は、卵ＰＣを含み、転移温度が−５℃であり、主に１−パルミトイル，２−オレオイルＰＣ、及び１−パルミトイル，２−リノレオイルＰＣを含有する。或いは、ホスファチジルコリンを、ラット肝臓（Ｎｅｗｍａｎ、Ｈ．Ａ．Ｉ．ら、Ｊ．Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓ．（１９６１）２：４０３−１１）から単離し、アルミナ上で精製を行う（Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ、Ｍ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９７４）２４９：２６５２）。
【００７１】
リポ蛋白ＳＵＶは、全体的に卵ＰＣで構成されたものでよく、又は以下の他の脂質成分を含んでもよい。（ｉ）免疫原性ではない脂質成分、（ｉｉ）意味のある部分をもたらさない脂質成分、例えば、相転移温度が高い２５〜５０モルパーセント以下の脂質。追加の成分は、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）又はホスファチジルセリン（ＰＳ）などの負に荷電した脂質を含んでもよい。ＰＧを加えると、貯蔵中の凝集を防ぐために、ＳＵＶが負に帯電し、又はリポ蛋白ＳＵＶの他の成分が帯電するはずである。リポ蛋白ＳＵＶが、全体的にＰＣで構成されている場合、ＰＧ及びＰＳのモルパーセントは、ＰＣに対して１％未満である。しかし、ＰＣが、リポ蛋白ＳＵＶの主な成分ではない場合、ＰＧ及びＰＳのモルパーセンテージは、ＰＣと比較して１％以上になるはずである。リポ蛋白ＳＵＶは、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、コレステロール又は他のステロールを、好ましくは約４０モルパーセント未満の量で含んでもよい。他の成分には、ジアシルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、酸化脂質、リゾホスファチジルコリン、及びリン脂質トランスファー蛋白質（ＰＬＴＰ；「生体膜の構造面及び機能面（Ｂｉｏｍｅｍｂｒａｎｅｓ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ）」，Ｍ．Ｓｈｉｎｉｔｚｋｙ（ｅｄ．），１９９４，ａｔ  ｐａｇｅ  ４０参照）などの蛋白質、並びに羊膜脂質転写酵素（１１６−ｋｄ  Ｍｇ２＋  ＡＴＰ分解酵素として（Ｍｏｒｏｔ、Ｇ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２８：  ３４５６、１９８９；  Ｍｏｒｏｔ、Ｇ．ら、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２６６：  ２９、１９９０）、又は３２−ｋｄ蛋白質として（Ｓｃｈｒｏｉｔ、Ａ．Ｊ．ら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０７１：  ３１３、１９９１））が含まれ得る。
【００７２】
α−トコフェロール、α−酢酸トコフェロール、α−コハク酸トコフェロールなどの脂質保護剤を、遊離基による損傷から脂質成分を保護するために、リポ蛋白ＳＵＶ形成中の脂質に含めてもよい。通常、そうした薬剤は、モルパーセントで約０．５％〜２％の間で含まれる。リポ蛋白ＳＵＶ中のビタミンＥと多価不飽和脂質のバランスを保つために、トコフェロールをリポ蛋白ＳＵＶに加えると有利なことがある。或いは、リポ蛋白ＳＵＶを、例えば、窒素、アルゴンなどの不活性ガス雰囲気中で調製し、貯蔵することもできる。
【００７３】
Ｂ．サイズの整っていないリポソームの調製
リポ蛋白ＳＵＶを生成する種々の方法を利用することができ、その幅広い総説がある（Ｓｚｏｋａ、Ｆ．ら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．（１９８０）９：４６７）。一般に、これらの方法は、サイズが約０．０２〜１０ミクロン又はそれを超え、均一でないサイズのリポ蛋白ＳＵＶを生成するものである。以下に論ずる通り、サイズが比較的小さく明瞭なリポ蛋白ＳＵＶが、本発明の使用に好ましく、したがって、リポソーム懸濁液のサイズを小さくし及びサイズの不均一性を低減するための第２の処理ステップが通常必要になる。
【００７４】
実施例１に記載の最初のリポソーム懸濁液を生成するためのある好ましい方法では、小胞を形成する脂質を、好ましくはシリコーン処理したガラス容器内の適当な有機溶媒系に加え、減圧下又は不活性ガス中で乾燥させて、脂質フィルムを形成する。滅菌食塩水などの水性懸濁媒体を、そのフィルムに加え、脂質の水和が完了するまで、容器を通常約１〜２時間以内で攪拌する（例えば、振盪機、又は超音波処理器を使用）。加える水性媒体の量は、好ましくは、媒体１００ｍｌ当たり脂質総量約５〜３０ｇ、好ましくは媒体１００ｍｌ当たり脂質総量１０ｇを含む最終リポソーム懸濁液を生成するのに十分である。
【００７５】
水和段階中、脂質は、水和されて、サイズが約０．５ミクロン〜約１０ミクロン、又はそれより大きい範囲の、多重膜小胞（ＭＬＶｓ）を形成する。一般に、ＭＬＶのサイズ分布は、より激しい撹拌条件下で脂質を水和させることによって、わずかに小さいサイズへシフトさせることができる。
【００７６】
リポ蛋白ＳＵＶを形成するときに使用した水性媒体には、貯蔵の際に、リポソームの安定性を増強する水溶性薬剤を含めることができる。好ましい安定剤は、デスフェリオキサミンなどの鉄特異的トリヒドロキサミンキレート剤である。脂質過酸化反応、及び薬剤を含有するリポソームの遊離基による損傷を低減させる、この化合物の使用は、米国特許第４，７９７，２８５号に報告されている。簡単に言えば、それは、α−トコフェロールなどの親油性遊離基失活剤と水溶性キレート剤を組み合わせると、実質的に、保護剤だけで行った場合よりも、過酸化反応による脂質の損傷を保護する作用が高まったことを示している。水性媒体中の遊離鉄量を超過するモル濃度のキレート剤を水性媒体中に含める。通常、約１０〜２００のマイクロモル濃度のキレート剤が、脂質過酸化反応、及び遊離基による損傷を低減するのに十分である。
【００７７】
Ｃ．リポソームのサイズ調整：ＳＵＶの調製
上記の通り調製したリポ蛋白ＳＵＶの懸濁液をさらに処理し、所望のサイズ及びサイズの均一性を有するリポソームを生成することが好ましい。
【００７８】
リポソーム懸濁液を、一般に、サイズ範囲が約１．２ミクロン未満、好ましくは、約０．８ミクロン未満の小胞の選択的なサイズ分布が得られるように、サイズ調整する。リポソームがこのサイズ範囲であると、デプスフィルターを通して濾過することにより、容易に滅菌することができる。小胞がより小さいと、貯蔵の際に凝集する傾向が低減し、したがって、本発明の最終リポソーム組成物を静脈内投与すると、重篤な血管閉塞障害の可能性が低くなる。最後に、サブミクロン範囲にサイズを小さくしたリポ蛋白ＳＵＶは、より均一な体内分布及び薬物クリアランス特性を持つ。
【００７９】
好ましいリポ蛋白ＳＵＶ、すなわち、単一の二重層リポソームは、粒径が約０．０２〜０．１２ミクロンである。ＳＵＶは、１９９４年６月１０日出願の米国特許出願第６，２３５，３０８号に記載のように、静脈内投与した場合、血液循環の半減期が比較的長いことが示されている。簡単に言えば、そこに記載のように、血流リポソーム保持率のプロットを、ＩＶ注射後１，０００分まで測定し、１，０００分でさえ相当量のリポソームが依然として血流中に存在していることが明らかになった。
【００８０】
本発明のリポ蛋白ＳＵＶを調製するのに適した様式で、リポソームの粒径を小さくし、粒径の不均一性を低減するには、いくつかの技術が利用できる。溶液超音波処理又はプローブ超音波処理のいずれかでリポソーム懸濁液を超音波照射すると、粒径がＳＵＶにまで次第に小さくなる。
【００８１】
ホモジナイズとは、剪断エネルギーを利用して、より大きなリポソームをより小さいものに断片化する別の方法である。通常のホモジナイズ手順では、標準のエマルションホモジナイザーによって、ＭＬＶを、選択されたリポソーム粒径、通常０．１ミクロン未満が観察されるまで再循環させる。
【００８２】
リポソームを、微細孔ポリカーボネート膜を通して加圧濾過することは、リポソーム粒径を比較的明確に定義された粒径分布にする有効な方法である。平均の範囲は、約０．０３〜１ミクロンであり、実施例２に記載の、膜の細孔径に応じて変わる。通常、懸濁液を、所望のリポソーム粒径分布が得られるまで、膜を通して複数回循環させる。リポソーム粒径が次第に低減するように、次々に細孔が小さくなる膜を通して、リポ蛋白ＳＵＶを加圧濾過することもできる。
【００８３】
リポソームの粒径を、電子顕微鏡検査、比較クロマトグラフィー（Ｂｉｓｇａｉｅｒ、Ｃ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４（２）：８６２−８６６）、及び準弾性光散乱法を含めたいくつかの技術によって、求めることができる。
【００８４】
粒径処理を行ったリポソーム懸濁液を、通常デプス０．２２μの濾過膜など約０．２μの粒子を区別するサイズを持つ無菌の膜中を通過させることによって、容易に滅菌することができる。必要であれば、リポソーム懸濁液を、貯蔵用に凍結乾燥し、使用する少し前に溶解してもよい。
【００８５】
ＩＩＩ．インスリン抵抗性、成人発症型糖尿病疾患及び代謝性症候群Ｘ並びにそれに関係する合併症を治療する方法
本節には、上記リポソーム懸濁液を静脈内投与する治療法を記載する。これらのあらゆる方法では、かかる懸濁液を、治療された病態が望ましく改善するのに有効な用量及び投与回数で、静脈内投与する。
【００８６】
好ましい投与回数は、週当たり１回、２回又は３回である。投与期間、例えば２週間を、通常１〜４週のウオッシュアウト期間で中断してもよい。治療、例えば、投与及びウオッシュアウト期間を繰り返す治療を、数カ月又はそれ以上の長期間にわたって続けてよい。
【００８７】
好ましい実施形態では、リポソーム懸濁液を、１回用量体重１ｋｇ当たり総量脂質約５０ｍｇ〜１ｇの量で、好ましくは１回用量体重１ｋｇ当たり総量脂質約２００〜４５０ｍｇで、週毎に１〜３回投与する。投与は、静脈の（静脈内）注射、又は点滴静注（注入）によるものであってよい。リポ蛋白ＳＵＶを、リポソーム治療と他の注射療法を併用するために、無菌の生理食塩水、又はグルコース／塩の媒体など栄養性又は薬剤を含有するバッファー若しくは媒体中に懸濁させることができる。
【００８８】
リポソーム懸濁液の投与を、疾患の有意且つ測定可能な改善が認められるまで続け、これで、血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、Ｈｂ−Ａ１ｃ、リポ蛋白（ａ）、ＳＧＯＴ、及びＳＧＰＴのうちの１つ又は複数のレベルが、正常範囲内に戻り、又は著しく低減する。
【００８９】
投与した量が生理的に有意である場合、リポソーム懸濁液が「治療有効量」で投与されたということになる。それが存在するとレシピエントの対象の生理機能に検出可能な変化が生じる場合、それは生理的に有意である。特に、本発明に従って投与されたリポソーム懸濁液の量が、血糖、インスリン、総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、トリグリセリド、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、クレアチンキナーゼ−ＭＢ（ＣＫ−ＭＢ）、Ｈｂ−Ａｌｃ、リポ蛋白（ａ）、ＳＧＯＴ及びＳＧＰＴのうちの１つ又は複数のレベルを低減させると、それは生理的に有意である。
【００９０】
実施例
以下の実施例は、本発明の治療方法において、リポソーム組成物を調製し、且つこの組成物を使用するための様々な方法を例示する。実施例は、例示するためのものであり、本発明の範囲を限定するものではない。
【００９１】
材料
卵ホスファチジルコリン（卵ＰＣ）は、Ａｖａｎｔｉ  Ｐｏｌａｒ  Ｌｉｐｉｄｓ社（アラバスター、アラバマ州）又はＬｉｐｏｉｄ  ＫＧ社（ルートヴィヒスハーフェン、独国）から購入することができる。卵ＰＣは、９９％を超える純度であると決定された。卵ＰＣ脂肪酸組成物は、報告されている組成物（Ｈｅｒｔｚ、Ｒ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．Ｌｉｐｉｄ（１９７５）１５：１３８）と類似していた。調製物の主なＰＣには、１−パルミトイル、２−オレオイルＰＣ及び１−パルミトイル、２−リノレオイルＰＣが含まれていた。
【実施例１】
【００９２】
超音波処理による小さい単層小胞の調製
クロロホルム中に溶解させた卵ＰＣを１００ｍｌの容器に置いて、薄膜を窒素の不活性雰囲気中で乾燥させた。無菌の生理食塩水を、最終濃度が約１００ｍｇ／ｍｌになるように脂質薄膜に加え、この脂質薄膜を回旋しながら水和した。その結果得られる多重膜小胞（ＭＬＶ）懸濁液を、次いでヒートシステムソニケーター、モデル３７５Ｗを、最高値４０〜５０％のパワー設定で使用して、１時間溶液超音波処理した。超音波処理中、懸濁液の温度を、約４℃に保った。大きな小胞又はＭＬＶを、超遠心分離法により、１００，０００ｇで１時間超音波処理した懸濁液から（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ、Ｙ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９７７）１６：２８０６）分離させた。次いで、濃度が約１００ｍｇ／ｍｌの残りのＳＵＶ懸濁液を、濾過滅菌した。
【実施例２】
【００９３】
加圧濾過による小さい単層小胞の調製
粒径が平均直径６５ｎｍ±１０ｎｍであるヒト用の卵ＰＣの均一な小さい単層小胞（ＳＵＶ）を、０．１５ＭＮａＣｌ中、ＧＨ７６−４００プレッシャーセル（Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ社製）でポリカーボネートフィルターを通す連続濾過を用いて、加圧濾過で調製した（Ａｎｓｅｌｅｍ、Ｓ．、ら、Ｉｎ  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｇ．（ｐｄ）．ＬＩＰＯＳＯＭＥ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ、ｐｐ．５０１−５２４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ．（１９９３））。これらの小胞は、空のＳＵＶであった。
【００９４】
リポソームの粒子サイズを、Ｎｉｃｏｍｐサブミクロンレーザー粒子径測定装置によって、準弾性光散乱法又は同等の方法によって測定した。これは、粒度分布プロセッサーアナライザーを搭載したコールターモデルＮ４サブミクロン粒子分析計（コールター社製）を使用して定量することもできる（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  ら、Ｉｎ  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｇ．（ｅｄ）、ＬＩＰＯＳＯＭＥ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ、ｐｐ．５２４−６０７、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ．（１９９３））。最終の加圧濾過ステップでは、０．０５マイクロメートルの細孔径ポリカーボネートフィルターに通した。卵ＰＣのＳＵＶは、無菌及び発熱物質を含まない状態にする必要があり、無菌の０．２２マイクロメートルのミリポアフィルターを通し、濾過することにより滅菌した。これを、１００ｍｌの透明な加水分解クラスＩのボトルの成形品に詰め、テフロン（登録商標）加工した標準のストッパー（２０ｍｍ）と共に窒素（Ｎ）で排気し、ＰＥ−ディスクと共にＡｌｕ−ｃａｐ（水和アルミニウム）で塞いだ。
【００９５】
最終生成物は、９９％以上の純度であった。ＨＰＬＣ、ＧＣ／ＦＩＤ又は同等の手順で測定したとき、不純物の合計値は、ＮＭＴ１％であった。０．３％を超える不純物は、１つも存在しなかった。紫外／可視分光測定法によって２３４、２６８及び２７８ｎｍで測定したとき、酸化の合計値は、ＮＭＴ１％であった。
【００９６】
以下は、最終のＳＵＶリポソーム生成物に関係するいくつかの追加情報である。
脂質濃度：  ５〜２０％、好ましくは１０％．
化学安定性：加水分解及び過酸化＜１％
無菌性：食品医薬品局（ＦＤＡ）の要求する、滅菌溶液に対する基準に合格
試験試料当たりＮＭＴ１００ＣＦＵ  米国薬局方（ＵＳＰ）基準に準拠
【表２】
2006506403.tif 000003
投与計画：  体重ｋｇ当たり脂質総量５０ｍｇ〜１ｇ
剤形：  静脈内注入用、白く黄色みがかった半透明の分散剤
禁忌：  卵アレルギー；溶血性赤血球有り
副作用：  副作用は全く見られない
リポソームの濃度：  １００ｍｇ／ｍｌ
卵ＰＣの脂肪酸組成物（重量で）：
パルミチン酸                  ３５．６％
ステアリン酸                  １２．６％
オレイン酸                    ２７．８％
リノール酸                    １７．９％
アラキドン酸                    ９．５％
ドコサペンタエン酸              ０．７％
ドコサヘキサエン酸              ２．０％
完全なリポソーム懸濁液：
リン脂質１０ｇ、そのうち
卵ＰＣ                      ９．９ｇ
コレステロール              ０．２〜０．５０ｇ
スフィンゴミエリン          ０．０５〜２．０ｇ
デスフェラール（登録商標）０．０１２ｇ
塩化ナトリウム  ０．９ｇ
注射用の滅菌の発熱物質を含まない水、合計１００ｍｌにするまで
【実施例３】
【００９７】
小さい単層小胞の、加圧濾過による代替調製
粒径が平均直径６０ｎｍ±５ｎｍであるヒト用の卵ＰＣの均一な小さい単層小胞（ＳＵＶ）を、Ａｖｉｓｔｏｎ  ＥｍｕｌｓｉＦｌｅｘ−Ｃ５０ホモジナイザーをＳｕｐｏｒＣａｐ（商標）及びＳｕｐｏｒＤＣＦ（商標）連続層使い捨てフィルターと共に使用する、ポリカーボネートメンブランフィルターによる濾過を使用した加圧濾過によって調製した。（２２０ｎｍ、１８０ｎｍ及び８０ｎｍ）。これらの小胞は、空のＳＵＶであった。
【００９８】
リポソームの粒径を、サブミクロンレーザー粒子径測定装置（Ｓｏｌｖｉａｓ  ＡＧ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、準弾性光散乱法又は同等の方法によって測定した。これは、粒度分布プロセッサーアナライザーを搭載したコールターモデルＮ４サブミクロン粒子分析計（コールター社製）を使用して定量することもできる（Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ  ら、Ｉｎ  Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ、Ｇ．（ｅｄ）、ＬＩＰＯＳＯＭＥ  ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ、ｐｐ．５２４−６０７、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａ．（１９９３））。最終の加圧ステップでは、０．０８μｍの細孔径ポリカーボネートメンブランフィルターに通した。卵ＰＣのＳＵＶは、無菌、内毒素（ＬＡＬ）なし、発熱物質なしの状態にする必要があり、無菌の０．２２μｍの細孔径ポリカーボネートメンブランフィルターを通し、濾過することにより滅菌した。これを、１００ｍｌの透明な加水分解クラスＩＩのボトル成形品に詰め、テフロン（登録商標）加工した標準のストッパー（２０ｍｍ）を用いて窒素（Ｎ）で排気し、ＰＥ−ディスク付きのＡｌｕ−ｃａｐ（水和アルミニウム）で封止した。
【００９９】
最終生成物は、９９％以上の純度であった。ＨＰＬＣ、ＧＣ／ＦＩＤ又は同等の手順で測定したとき、不純物の合計値は、ＮＭＴ１％であった。０．３％を超える不純物は、たった１つも存在しなかった。紫外／可視分光測定によって２１５、２３３及び２７９ｎｍで測定したとき、酸化の合計値は、ＮＭＴ１％であった。
【０１００】
以下は、最終のＳＵＶリポソーム生成物に関係するいくつかの追加情報である。
脂質濃度：  ５〜３０％
化学安定性：  加水分解及び過酸化＜１％
剤形：静脈内注入用、白く黄色みがかった半透明の分散剤
無菌性：食品医薬品局（ＦＤＡ）の要求する、滅菌溶液に対する基準に合格
試験試料当たりＮＭＴ１００ＣＦＵ  米国薬局方（ＵＳＰ）基準に準拠
【表３】
2006506403.tif 000004
投与計画：体重ｋｇ当たり脂質総量５０ｍｇ〜１ｇ
禁忌：卵アレルギー；溶血性赤血球有り
副作用：副作用は全く見られない
卵ＰＣの脂肪酸組成物（重量で）：
パルミチン酸          ３５．６％
ステアリン酸          １２．６％
オレイン酸            ２７．８％
リノール酸            １７．９％
アラキドン酸            ９．５％
ドコサペンタエン酸      ０．７％
ドコサヘキサエン酸      ２．０％
完全なリポソーム懸濁液：
リン脂質１０ｇ、そのうち
卵ＰＣ（リポイド）          ９．０ｇ
コレステロール              ０．２〜０．５ｇ
スフィンゴミエリン          ０．０５〜２．０ｇ
デスフェラール（登録商標）０．０１８ｇ
塩化ナトリウム（メルク社製）０．７６５ｇ
Ｌ−ヒスチジン（Ｆｌｕｋａ社製）０．２７９ｇ
１Ｍ水和ナトリウム又は１Ｍ塩酸でｐＨを６．５に調整
注射用の
滅菌の発熱物質を含まない水  ８８．９９４５ｇ（最終体積：１００ｍｌ）、及び窒素適量
【実施例４】
【０１０１】
インスリン抵抗性、及び成人発症型糖尿病の患者に対するリポソーム治療の効果
患者１は、身長が１６０ｃｍで体重が４５ｋｇの６２歳の女性である。この女性患者は、脂質代謝の調節不全を以前に知らされており、１７年間インスリン抵抗性の代謝性患者と診断されていた。治療に当って、実施例３に記載の手順に従って調製された完全なリポソーム懸濁液、注入当たり２容積の９０ｍｌ（体重ｋｇ当たり脂質総量４００ｍｇ）で、３０日間以内に６回患者に静脈内注入した（２０〜５０滴／分）。
【０１０２】
患者１は、リポソーム治療に非常によい耐容性を示した。患者は、どんな望まれない副作用の徴候、又は症状も全く示さなかった。数週間にわたる治療の後でさえ、患者には、どんな自覚症状又は臨床的に有害な症状もなかった。患者の検査結果は、総コレステロールの増加を示したが、患者のＬＤＬ及びコレステロールレベルは減少し、患者のリポ蛋白（ａ）レベルは依然として正常な限界内に留まった。
【０１０３】
治療前、患者の糖化ヘモグロビン（Ｈｂ−Ａｌｃ）レベルは、わずかな増加、又はグルコース代謝障害が起こりうる兆候を示した。治療後、このレベルは、正常範囲内に低下した。
【表４】
2006506403.tif 000005
【０１０４】
リポソーム治療の数週間後、適切な量のグルコースを用いて、経口グルコース負荷試験を行った。グルコース負荷の２時間後、血清学的グルコースレベル及びインスリン分泌を測定した。結果は、グルコースレベルとインスリン分泌の両方が増加し、グルコース負荷の２時間後、正常レベルに達したことを示した。対照的に、リポソーム治療前の３年間に得た結果は、グルコースレベルとインスリン分泌の両方が、グルコース負荷の２時間後、正常レベルにまで低下しなかったことを示していた。
【０１０５】
治療前後の経口グルコース負荷試験の比較を下記に示す。
【表５】
2006506403.tif 000006
【０１０６】
したがって、治療により、患者のインスリン抵抗性が改善された。
【実施例５】
【０１０７】
代謝性症候群−Ｘ患者に対するリポソーム治療の効果
第２の患者は、高血圧症及び既知の脂質の代謝性疾患がある、５１歳の男性である。男性患者は、過体重であり、身長が１７５ｃｍで体重が９０ｋｇである。総コレステロール及びトリグリセリドの初期値は、非常に高かった。しかし、男性患者のＬＤＬコレステロール及びＨＤＬ−コレステロールは、正常な限界内であった。加えて、肝臓の酵素ＳＧＰＴに増加がみられた。
【０１０８】
治療では、実施例３に記載の手順に従って、調製された完全なリポソーム懸濁液、注入当たり３容積の９０ｍｌ（体重ｋｇ当たり脂質総量３００ｍｇ）で、１９日間以内に６回、第２の患者に静脈内注入した（２０〜５０滴／分）。
【０１０９】
治療期間中、患者の血圧、脈拍数及び酸素容量は、正常であった。望ましくない作用の自覚症状又は臨床症状は、全くなかった。
【０１１０】
治療後の検査値は、２００２年５月１０日に治療を始めて、総コレステロール及びトリグリセリドが減少し、加えてＳＧＯＴが部分的に正常化することを示した（表３参照）。
【表６】
2006506403.tif 000007
【０１１１】
本明細書中に記載又は引用した、論文、特許及び特許出願、並びに他の全ての文献及び電子的に入手可能な情報の内容は、参照により組み込むために個々の各出版物が具体的且つ個別に示される場合と同程度に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本出願人は、かかる論文、特許、特許出願、又は他の文献からのあらゆる資料及び情報を本願に物理的に組み込む権利を留保する。
【０１１２】
本明細書中に例示的に記載する本発明は、本明細書中に具体的に開示されていない、どんな１つ又は複数の要素、１つ又は複数の限定もないときに、適切に実施することができる。したがって、例えば、「備える」、「含む」、「含有する」などの用語は、限定なしに広く解釈されるものとする。さらに、本明細書中で使用する用語及び表現は、限定ではなく、説明の言葉として使用されている。かかる用語及び表現を使用する際、図示及び記載の特徴又はその部分のどんな等価物も除外する意図はないが、特許請求する本発明の範囲内で様々な変形が可能であることを理解されたい。したがって、本発明は、好ましい実施形態及び任意の特徴によって詳細に開示されているが、それにおいて実施され本明細書中に開示される本発明の変更形態及び変形形態は、当業者なら利用することができ、かかる変更形態及び変形形態が本発明の範囲内にあると見なされることを理解されたい。
【０１１３】
本発明は、本明細書中で広く一般的に記載されている。一般的開示の範囲に含まれるより狭い種及び属のグループはそれぞれ、本発明の一部をなす。これは、削除した材料が本明細書中で詳細に引用されているかどうかを問わず、どんな主題も属から排除されるという前提又は負の限定のもとで、本発明の一般的な記述を含むものとする。
【０１１４】
加えて、本発明の特徴又は態様が、マーカッシュのグループとして記載されている場合、本発明が、マーカッシュのグループの個々のメンバー、又はメンバーのサブグループによって記載されていることも当業者には理解されよう。
【国際調査報告】
2006506403.tif 000008