(57)【要約】式(Ｉ)：【化１】2006504655.tif 000017[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、Ｍ、Ｔ、Ｕ、Ｙ、Ｖ、およびＷは、本明細書で定義した通りである]の新規化合物およびその薬学的に許容される塩；それと共にその製造方法、それらを含む組成物、および治療におけるその使用を提供する。本化合物は、一酸化窒素合成酵素の阻害剤であり、そしてそれによって、炎症疾患および疼痛の処置もしくは予防に特に有用である。
2006504655.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)：
【化１】
2006504655.tif 000012
[式中、
Ｙは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＮＨ２、ＮＨＣＨＯ、ＮＨＣＯＣＨ３、またはＮＨＳＯ２ＣＨ３を表し；
該アルキルまたはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｔ、Ｕ、およびＷは、独立して、ＣＸ、Ｎ、ＮＲ１３、Ｏ、またはＳ(Ｏ)ｍを表し、
ただし、Ｔ、Ｕ、およびＷの少なくとも１個が、ヘテロ原子を表す必要があり；かつ
Ｔ、Ｕ、およびＷの１個以上が、ＮＲ１３、Ｏ、またはＳ(Ｏ)ｍを表すことはなく；
ｍは、整数０、１、または２を表し；そして
それぞれのＸは、独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、Ｎ(Ｒ１４)２、ＮＯ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルまたはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｖは、ＮＲ７、Ｏ、ＣＨ２、Ｓ(Ｏ)ｎ、ＯＣＨ２、ＣＨ２Ｏ、ＮＲ７ＣＨ２、ＣＨ２ＮＲ７、ＣＨ２Ｓ(Ｏ)ｎ、Ｓ(Ｏ)ｎＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＣＨ＝ＣＨを表し；
ｎは、整数０、１、または２を表し；
ＭはＣを表し、そしてＭがＶ中のＣＨ２部分に結合している場合、ＭはまたＮを表し得；
Ｒ１とＲ８は、独立して、ＨまたはＭｅを表し；
Ｒ２は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ３−６シクロアルキル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１個のヘテロ原子を含む４員環から８員環の飽和複素環式環を表し、
該基の何れも、所望により、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ３−６シクロアルキル、ハロゲン、またはフェニルによってさらに置換されており、
該フェニルは、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、またはＮＯ２から独立して選択される、１個以上の置換基によって、所望によりさらに置換されているか、または
Ｒ２は、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性複素環式環を表し；
該フェニルもしくは芳香族性複素環式環は、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはＮＲ９Ｒ１０から独立して選択される、１個以上の置換基によって、所望により置換されており；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルを表し；
該アルキルは、所望により、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＲ１１Ｒ１２、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の、芳香族性もしくは飽和複素環式環によって置換されており；
該フェニルまたは芳香族性複素環式環は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、またはＮＯ２によって、さらに置換されており；
Ｒ７とＲ１４は、独立して、ＨまたはＣ１−２アルキルを表し；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキルを表し；
Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、またはＣＦ３を表す]の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
ＶはＳ(Ｏ)ｎを表し、そしてｎは０を表す、請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項３】
ＹはＣＮを表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−２−チオフェンカルボニトリル；
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−５−メチル−２−チオフェンカルボニトリル；
またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体である、請求項１に記載の式(Ｉ)の化合物。
【請求項５】
医薬として使用するための、請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合した、請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物。
【請求項７】
一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である、ヒトの疾患もしくは状態の処置もしくは予防のための医薬の製造における、請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項８】
誘導型一酸化窒素合成酵素(inducible nitric oxide synthase)が優先的に阻害される、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
炎症性疾患の処置もしくは予防のための、医薬の製造における請求項１から４の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項１０】
該疾患が炎症性腸疾患である、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
該疾患がリウマチ性関節炎である、請求項９に記載の使用。
【請求項１２】
該疾患が骨関節炎である、請求項９に記載の使用。
【請求項１３】
疼痛の処置もしくは予防のための医薬の製造における、請求項１から４の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１４】
炎症性疾患の処置もしくは予防のための医薬の製造における、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた、請求項１から４の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物の使用。
【請求項１５】
一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である、ヒトの疾患もしくは状態を処置する もしくはそのリスクを軽減する方法であって、該疾患もしくは状態に罹患している もしくはそのリスクが増大しているヒトに、請求項１から４の何れか１項に記載の式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で投与することを含む方法。
【請求項１６】
炎症性疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、炎症性疾患を処置する もしくはそのリスクを軽減する方法であって、該ヒトに、請求項１から４の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはそのラセミ体を、治療上効果的な量で投与することを含む方法。
【請求項１７】
請求項１から４の何れか１項に定義した通りの式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体を製造する方法であって、該方法は、
(ａ) 式(II)：
【化２】
2006504655.tif 000013
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｙ、およびＭは、請求項１に定義した通りであり、そしてＬ１は脱離基を表す]の化合物を、式(III)：
【化３】
2006504655.tif 000014
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、およびＶは、請求項１に定義した通りである]の化合物と反応させること；または
(ｂ) 式(IV)：
【化４】
2006504655.tif 000015
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｍ、Ｙ、およびＶは、請求項１で定義した通りである]の化合物を、式(Ｖ)：
【化５】
2006504655.tif 000016
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、請求項１で定義した通りであり、そしてＬ２は脱離基である]の化合物と反応させること；
および、望ましい もしくは必要な場合は、得られた式(Ｉ)の化合物またはその別の塩を、その薬学的に許容される塩に変換すること；
または式(Ｉ)の化合物を別の式(Ｉ)の化合物に変換すること；
そして望ましい場合は、得られた式(Ｉ)の化合物をその光学異性体に変換すること；
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、新規ヘテロアリールアルキルアミン誘導体、その製造方法、それらを含む組成物、および治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の背景
一酸化窒素は、哺乳動物の細胞中で、特定の一酸化窒素合成酵素の作用によって、Ｌ−アルギニンから生成される。これらの酵素は、２つの別個のクラス、すなわち構成型ＮＯＳ(constitutive NOS)(ｃＮＯＳ)と、誘導型ＮＯＳ(inducible NOS)(ｉＮＯＳ)に分類される。現在、２つの構成型ＮＯＳと、１つの誘導型ＮＯＳが、同定されている。構成型ＮＯＳのうち、内皮型酵素(ｅＮＯＳ)は、平滑筋弛緩、および血圧と血流の制御に関するが、神経型酵素(ｎＮＯＳ)は、様々な生物学的機能に関係すると見られる。誘導型ＮＯＳは、特に炎症性疾患の病状に関与している。これらの酵素の制御は、広く様々な疾患状態の処置において、多くの可能性を提供する (J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 1996, 31, 221 - 230)。
【０００３】
多くの努力が、１個以上の一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの特異的阻害剤として作用する化合物を同定するための労力に費やされている。治療における該化合物の使用もまた、広く要請されている。
【発明の開示】
【０００４】
本発明の開示
本発明に従って、式(Ｉ)：
【化１】
2006504655.tif 000003
[式中、
Ｙは、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、ＮＯ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＮＨ２、ＮＨＣＨＯ、ＮＨＣＯＣＨ３、またはＮＨＳＯ２ＣＨ３を表し；
該アルキルまたはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｔ、Ｕ、およびＷは、独立して、ＣＸ、Ｎ、ＮＲ１３、Ｏ、またはＳ(Ｏ)ｍを表し、
ただし、Ｔ、Ｕ、およびＷの少なくとも１個が、ヘテロ原子を表す必要があり；かつ
Ｔ、Ｕ、およびＷの１個以上が、ＮＲ１３、Ｏ、またはＳ(Ｏ)ｍを表すことはなく；
ｍは、整数０、１、または２を表し；そして
それぞれのＸは、独立して、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＣＮ、Ｃ≡ＣＨ、Ｎ(Ｒ１４)２、ＮＯ２、ＣＨ２ＯＨ、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、またはＮＨＣＨＯを表し；
該アルキルまたはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｖは、ＮＲ７、Ｏ、ＣＨ２、Ｓ(Ｏ)ｎ、ＯＣＨ２、ＣＨ２Ｏ、ＮＲ７ＣＨ２、ＣＨ２ＮＲ７、ＣＨ２Ｓ(Ｏ)ｎ、Ｓ(Ｏ)ｎＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＣＨ＝ＣＨを表し；
ｎは、整数０、１、または２を表し；
ＭはＣを表し、そしてＭがＶ中のＣＨ２部分に結合している場合、ＭはまたＮを表し得；
Ｒ１とＲ８は、独立して、ＨまたはＭｅを表し；
Ｒ２は、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ３−６シクロアルキル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから選択される１個のヘテロ原子を含む４員環から８員環の飽和複素環式環を表し、
該基の何れも、所望により、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、Ｃ３−６シクロアルキル、ハロゲン、またはフェニルによってさらに置換されており、
該フェニルは、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、またはＮＯ２から独立して選択される、１個以上の置換基によって、所望によりさらに置換されているか、または
Ｒ２は、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性複素環式環を表し；
該フェニルもしくは芳香族性複素環式環は、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＯＨ、ＣＮ、ＮＯ２、またはＮＲ９Ｒ１０から独立して選択される、１個以上の置換基によって、所望により置換されており；
該アルキルもしくはアルコキシは、所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されており；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、またはＣ３−６シクロアルキルを表し；
該アルキルは、所望により、Ｃ１−４アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＲ１１Ｒ１２、フェニル、または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の、芳香族性もしくは飽和複素環式環によって置換されており；
該フェニルまたは芳香族性複素環式環は、所望により、ハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＣＮ、またはＮＯ２によって、さらに置換されており；
Ｒ７とＲ１４は、独立して、ＨまたはＣ１−２アルキルを表し；
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、独立して、Ｈ、またはＣ１−４アルキルを表し；
Ｒ１３は、Ｈ、Ｃ１−４アルキル、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、またはＣＦ３を表す]の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００５】
式(Ｉ)の化合物は、エナンチオマーの形態で存在し得る。全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびその混合物は、本発明の範囲内に含まれると解されるべきである。
【０００６】
Ｕ、Ｔ、またはＷはＣＸを表し、そしてＸはＯＨを表す式(Ｉ)の化合物は、別のケト互変異性体の形態で存在すると認識される。同様に、Ｕ、Ｔ、またはＷはＣＸを表し、そしてＸはＮＨを表す式(Ｉ)の化合物は、別のイミノ互変異性体の形態で存在し得る。そして、同様に、Ｕ、Ｔ、またはＷはＣＸを表し、そしてＸはＳＨを表す式(Ｉ)の化合物は、別のチオケト互変異性体の形態で存在し得る。このような可能な互変異性体の形態およびその混合物は、本発明の範囲内に含まれると解されるべきである。
【０００７】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、一酸化窒素合成酵素(ＮＯＳ)の阻害剤であるという利点を有する。特に、式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、誘導型一酸化窒素合成酵素のアイソフォーム(ｉＮＯＳ)であるという利点を有する。
【０００８】
本発明は、さらに、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体の製造方法を提供する。
本発明に従って、医薬として使用するための、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【０００９】
本発明の別の態様は、一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である疾患もしくは状態を処置する もしくは予防する医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１０】
本発明の別の態様は、誘導型一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である疾患もしくは状態を処置するもしくは予防する医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１１】
本発明のより特定的な態様は、炎症性疾患の処置 もしくは予防のための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
本発明の別の態様は、疼痛の処置もしくは予防のための医薬の製造における、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００１２】
本発明に従って、一酸化窒素合成酵素活性の阻害が有益である疾患もしくは状態を処置する もしくはそのリスクを軽減する方法であって、該疾患もしくは状態に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトに、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
より特定的には、炎症性疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、炎症性疾患を処置する もしくは軽減する方法であって、該ヒトに、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で投与することを含む方法を提供する。
【００１４】
本発明の化合物は、第２の薬学的に活性な物質；特にシクロオキシゲナーゼ阻害剤と組み合わせて；より特定的には誘導型(inducible)シクロオキシゲナーゼのアイソフォーム(ＣＯＸ−２)の選択的阻害剤と組み合わせて、有益に用いられ得る。従って、本発明のさらなる態様において、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患の処置のための、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。また、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患に罹患している もしくはそのリスクがあるヒトにおいて、炎症、炎症性疾患、および炎症関連疾患を処置する もしくはそのリスクを軽減する方法であって、ＣＯＸ−２阻害剤と組み合わせた式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩を、治療上効果的な量で投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
１つの具体的態様において、式(Ｉ)中のＶはＳ(Ｏ)ｎを表し、そしてｎは０を表す。
別の具体的態様において、式(Ｉ)中のＹはＣＮを表す。
１つの具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ１はＨを表す。
【００１６】
別の具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ２は、所望により置換されているフェニル または Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性複素環式環を表す。さらなる具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ２は、所望により置換されているフェニル、ピリジル、チエニル、イソオキサゾリル、イソチアゾリル、もしくはチアゾリルを表す。さらにさらなる具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ２は、所望により置換されているフェニルを表す。
【００１７】
１つの具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ３はＨを表す。
別の具体的態様において、式(Ｉ)中のＲ４、Ｒ５、およびＲ６は、それぞれＨを表す。
特定の具体的態様において、式(Ｉ)の化合物は、
【化２】
2006504655.tif 000004
として示される絶対配置を有する。
【００１８】
本発明の特定の化合物は、
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−２−チオフェンカルボニトリル；
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−５−メチル−２−チオフェンカルボニトリル；
およびその薬学的に許容される塩を含む。
【００１９】
別記しない限り、本明細書中で記載の“Ｃ１−４アルキル”という用語は、１から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルを表す。該基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルを含む。
【００２０】
別記しない限り、本明細書中で記載の“Ｃ３−６シクロアルキル”という用語は、３から６個の炭素原子を有するシクロアルキルを表す。該基の例は、シクロプロピル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルを含む。
【００２１】
別記しない限り、本明細書中で記載の“Ｃ２−４アルケニル”という用語は、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含む、２から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルを表す。該基の例は、エテニル、プロペニル、およびブテニルを含む。
【００２２】
別記しない限り、本明細書中で記載の“Ｃ２−４アルキニル”という用語は、少なくとも１個の炭素−炭素三重結合を含む、２から４個の炭素原子を有する、直鎖もしくは分枝鎖のアルキルを表す。該基の例は、エチニル、プロピニル、およびブチニルを含む。
【００２３】
別記しない限り、本明細書中で記載の“Ｃ１−４アルコキシ”という用語は、１から４個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルコキシを表す。該基の例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、およびｔ−ブトキシを含む。
“Ｃ１−４アルキルチオ”という用語を、同様に解釈する。
【００２４】
別記しない限り、本明細書中で記載の“ハロゲン”という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードを表す。
Ｏ、Ｓ、またはＮから選択される１個のヘテロ原子を含む４員環から８員環の飽和複素環式環の例は、ピロリジン、ピペリジン、テトラヒドロフラン、およびペルヒドロアゼピンを含む。
【００２５】
Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される、１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の芳香族性複素環式環の例は、フラン、チオフェン、ピリジン、チアゾール、イミダゾール、オキサゾール、トリアゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、およびピリミジンを含む。
【００２６】
Ｏ、Ｓ、およびＮから独立して選択される１から３個のヘテロ原子を含む５員環もしくは６員環の飽和複素環式環の例は、ピロリジン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、およびピペラジンを含む。
【００２７】
“所望により１個以上のフッ素原子によってさらに置換されているＣ１−４アルキルまたはＣ１−４アルコキシ”の例は、ＣＨ２Ｆ、ＣＨＦ２、ＣＦ３、ＣＦ３ＣＦ２、ＣＦ３ＣＨ２、ＣＨ２ＦＣＨ２、ＣＨ３ＣＦ２、ＣＦ３ＣＨ２ＣＨ２、ＯＣＦ３、およびＯＣＨ２ＣＦ３を含む。
【００２８】
本発明に従って、我々は、さらに、式(Ｉ)の化合物またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体を製造する方法であって、該方法は、
(ａ) 式(II)：
【化３】
2006504655.tif 000005
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｙ、およびＭは、式(Ｉ)に定義した通りであり、そしてＬ１は脱離基を表す]の化合物を、式(III)：
【化４】
2006504655.tif 000006
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ８、およびＶは、式(Ｉ)に定義した通りである]の化合物と反応させること；または
(ｂ) 式(IV)：
【化５】
2006504655.tif 000007
[式中、Ｔ、Ｕ、Ｗ、Ｍ、Ｙ、およびＶは、式(Ｉ)で定義した通りである]の化合物を、式(Ｖ)：
【化６】
2006504655.tif 000008
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、およびＲ８は、式(Ｉ)に定義した通りであり、そしてＬ２は脱離基である]の化合物と反応させること；
および、望ましい もしくは必要な場合は、得られた式(Ｉ)の化合物またはその別の塩を、その薬学的に許容される塩に変換すること；
または式(Ｉ)の化合物を別の式(Ｉ)の化合物に変換すること；
そして望ましい場合は、得られた式(Ｉ)の化合物をその光学異性体に変換すること；
を含む方法を提供する。
【００２９】
方法(ａ)において、反応は、不活性な溶媒中、式(III)の求核剤を式(II)の求電子剤で処理することによって行われる。適切な脱離基Ｌ１は、スルホネートおよびハライドを含み、特にフルオライドもしくはクロライドである。反応は、一般的に、非求核性塩基、例えば水素化ナトリウム もしくは炭酸セシウムの存在下で行われる。適切な有機溶媒は、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、およびジメチルスルホキシドである。反応は、一般的に、０℃から溶媒の沸点の間で行われる。
【００３０】
方法(ｂ)において、式(IV) および 式(Ｖ)の反応物を、適切な不活性溶媒中、例えばテトラヒドロフラン中で、例えば Mitsunobu 条件を用いてカップリングする。従って、例えば、反応物を、適切な温度で、一般的に０℃から溶媒の沸点の間の温度で、ホスフィン誘導体およびアゾ誘導体で処理する。適切なホスフィン誘導体は、トリフェニルホスフィンおよびトリブチルホスフィンを含む。適切なアゾ誘導体は、アゾジカルボン酸ジエチル、アゾジカルボン酸ジイソプロピル、および１,１'−(アゾジカルボニル)ジピペリジンを含む。適切な脱離基Ｌ２は、ヒドロキシを含む。
【００３１】
あるいは、方法(ｂ)において、反応は、不活性な溶媒中、式(IV)の求核剤を式(Ｖ)の求電子剤で処理することによって行われる。適切な脱離基Ｌ２は、スルホネートおよびハライドを含み、特にクロライドもしくはブロミドである。反応は、一般的に、非求核性塩基、例えば水素化ナトリウム もしくは炭酸セシウムの存在下で行われる。適切な有機溶媒は、例えばＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、テトラヒドロフラン、およびジメチルスルホキシドを含む。反応は、一般的に、０℃から溶媒の沸点の間の温度で行われる。
【００３２】
上記の方法において、アミンまたはヒドロキシルまたは他の可能性のある反応基を保護することが望ましい、または必要であることが、当業者に明らかである。適切な保護基および該基の付加および除去の方法の詳細は、標準的な教科書である“Protective Groups in Organic Synthesis”, 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts を参照することによって分かる。
【００３３】
１つの望ましい具体的態様において、アミン基は、カルバメート誘導体として、例えばｔ−ブチルオキシカルバメートとして保護される。
別の特に望ましい具体的態様において、Ｒ１が水素を表す化合物のアミンおよびヒドロキシル基は、例えば式(VI)において環状カルバメートとして、または式(VII)において環状ヘミ−アミナールとして、同様に保護される。
【化７】
2006504655.tif 000009
保護基の使用の特定の例は、実施例のセクションに記載されている。
【００３４】
本発明は、塩の形態の式(Ｉ)の化合物、特に酸付加塩を含む。適切な塩は、有機酸および無機酸の両方と形成される塩を含む。該酸付加塩は、通常、薬学的に許容されるが、薬学的に許容されない酸の塩は、問題の化合物の製造および精製に有用であり得る。従って、望ましい塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から形成される塩を含む。
【００３５】
式(Ｉ)の化合物の塩を、遊離塩基、またはその塩、エナンチオマー、もしくはラセミ体を、１当量以上の適切な酸と反応させることによって形成され得る。反応は、塩が不溶である溶媒もしくは媒体中で、または塩が可溶である溶媒中で、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフラン、またはジエチルエーテル、または溶媒の混合物中で行われ得、そしてそれを真空で、もしくは凍結乾燥によって除去され得る。反応はまた、複分解工程であるか、またはイオン交換樹脂で行われ得る。
【００３６】
Ｒ８がＨを表す式(III)の化合物は、式(VIII)：
【化８】
2006504655.tif 000010
[式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は式(Ｉ)で定義した通りである]の化合物を、
有機金属誘導体：Ｒ２−Ｍ
{ここで、Ｒ２は、式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＭは金属性の基、例えばリチウムもしくはマグネシウム−ハライドを表す}
との反応によって製造され得る。得られた Ｖが酸素を表す式(III)の化合物を、Ｖが硫黄を表す式(III)の化合物に変換され得る。
【００３７】
あるいは、式(III)の化合物は、式(IX)：
【化９】
2006504655.tif 000011
[式中、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は式(Ｉ)で定義した通りである]のアミドを、
有機金属誘導体：Ｒ２Ｍ
{式中、Ｒ２は、式(Ｉ)で定義した通りであり、そしてＭは金属性の基、例えばリチウムもしくはマグネシウム−ハライドを表す]の化合物と反応させ、次に得られたケトンを対応する式(III)のアルコールに還元することによって製造され得る。
【００３８】
式(II)、(IV)、(VIII)、および(IX)の化合物は、それぞれ既知であるか、当業者に直ちに明らかである慣用の方法によって製造され得る。
中間体化合物は、そのままで、または保護された形態で用いられ得る。保護基およびその除去方法の詳細は、標準的なテキスト“Protective Groups in Organic Synthesis”, 3rd Edition (1999) by Greene and Wuts の記載で見出され得る。
【００３９】
本発明の化合物およびその中間体は、反応混合物から単離され得、必要であれば、標準的な方法によって、さらに精製され得る。
式Ｉの化合物は、エナンチオマーの形態で存在し得る。従って、全てのエナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、およびその混合物が、本発明の範囲内に含まれる。様々な光学異性体は、慣用の方法、例えば分別結晶もしくはＨＰＬＣを用いて、本化合物のラセミ混合物の分離によって単離され得る。
【００４０】
中間体化合物はまた、エナンチオマーの形態で存在し得、そして精製エナンチオマー、ジアステレオマー、ラセミ体、または混合物として用いられ得る。
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、ラセミ体は、それらが動物において薬理学的活性を有することから、有用である。特に、本化合物は、一酸化窒素合成酵素の阻害剤として活性である。より特定的には、それらは、誘導型一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの阻害剤である。そしてそのことから、治療に、例えば抗炎症剤として有用であると予測される。それらはまた、神経型(neuronal)一酸化窒素合成酵素のアイソフォームの阻害剤として有用性を有し得る。一般的に、式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される塩は、ｉＮＯＳおよび／またはｎＮＯＳの阻害において、内皮型アイソフォームであるｅＮＯＳの阻害と比較して、良好な選択性を示すという利点を有する。
【００４１】
本化合物およびその薬学的に許容される塩は、一酸化窒素合成または過剰合成が寄与する部分のある疾患もしくは状態の処置もしくは予防における使用が示されている。特に、ヒトを含む哺乳動物において、炎症性状態の処置における使用が示されている。
【００４２】
特記され得る状態は、
骨関節炎、リウマチ性関節炎、リウマチ性脊椎炎、痛風性関節炎、および他の関節炎状態、炎症性関節；
湿疹、乾癬、皮膚炎、または他の炎症性皮膚状態、例えば日焼け；
ブドウ膜炎、緑内障、および結膜炎を含む炎症性眼状態；
炎症が、例えば、喘息、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、ハト飼育者疾患(pigeon fancier's disease)、農夫肺、急性呼吸窮迫症候群を伴う肺疾患；
菌血症、内毒血症(endotoxaemia) (敗血症ショック)、アフタ性潰瘍、歯肉炎、麻痺(pyresis)、疼痛、髄膜炎、および膵炎；
炎症性腸疾患を含む胃腸管の状態、クローン病、萎縮性胃炎、変形性胃炎(gastritis varialoforme)、潰瘍性大腸炎、セリアック病、限局性回腸炎(regional ileitis)、消化性潰瘍、過敏性腸症候群、逆流性食道炎、例えば Helicobacter pylori の感染に起因する、または非ステロイド性抗炎症剤での処置に起因する胃腸管の損傷；および
炎症を伴う他の状態；
である。
【００４３】
本化合物はまた、癌の処置に有用であり得る。
本化合物はまた、急性疼痛、または持続性炎症性疼痛、または神経因性疼痛、または中枢起源の痛みの、処置および緩和に有用である。
【００４４】
我々は、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎、骨関節炎、慢性閉塞性肺疾患、疼痛、および癌の状態に、特に関心がある。
【００４５】
式(Ｉ)の化合物 およびその薬学的に許容される塩はまた、上記に加えて、疾患もしくは状態の処置または予防に有用であり得る。例えば、本化合物は、アテローム硬化症、嚢胞性線維症、敗血症ショック および／または 毒素ショックを伴う低血圧の処置、免疫系機能障害の処置、臓器移植治療における短期免疫抑制に対するアジュバントとして、糖尿病の発症の制御、糖尿病における膵臓機能の維持、糖尿病に伴う血管性合併症の処置、およびサイトカイン、例えばＴＮＦ またはインターロイキンとの併用治療(co-therapy)において、有用であり得る。
【００４６】
式(Ｉ)の化合物はまた、例えば心停止や卒中の場合における低酸素症、例えば虚血、低酸素症、低血糖、癲癇などの疾患や 外傷(例えば脊髄損傷や頭部損傷)における 神経変性 および／または 神経壊死を含む神経変性疾患、高圧酸素痙攣および毒、痴呆、例えば初老期痴呆や アルツハイマー病や ＡＩＤＳ関連痴呆、シドナム舞踏病、パーキンソン病、トゥーレット症候群、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、筋ジストロフィー、コルサコフ病、大脳血管障害に関係する痴愚、睡眠障害、統合失調症、鬱病、疼痛、自閉症、季節性情動障害、時差ぼけ、鬱病、または 月経前症候群(ＰＭＳ)や不安や敗血症ショックを伴う別の症状の処置に有用であり得る。式(Ｉ)の化合物はまた、薬物中毒または薬物抵抗性、例えばアヘン剤やジアゼピンに対する抵抗性の予防や回復、薬物中毒の処置、偏頭痛や他の血管性頭痛、神経因性炎症の処置、胃腸運動障害、および分娩の誘発において、活性を示すと期待され得る。
【００４７】
我々は、特に卒中、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症、統合失調症、偏頭痛、敗血症ショック、および疼痛の状態に関心がある。
【００４８】
予防は、特に以前に発症したことのあるヒトか、またはそれ以外に問題の疾患もしくは状態に罹患するリスクが増大していると考えられるヒトの処置に関連すると期待される。特定の疾患もしくは状態の発症のリスクがあるヒトは、一般的に、その疾患もしくは状態の家族の病歴があるヒト、または特にその疾患もしくは状態にかかりやすいと、遺伝子試験もしくはスクリーニングによって特定されたヒトを含む。
【００４９】
上記の治療的適応において、投与される用量は、用いられた化合物、投与方法、および望ましい処置に応じて、当然に変化する。しかし、一般的に、本化合物を、１日当たり１mgから２０００mgの間で、固体の形態の投与形で投与した場合に、満足のいく結果が得られる。
【００５０】
式(Ｉ)の化合物 およびその薬学的に許容される誘導体は、それ自身で、または本化合物もしくは誘導体を、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合した適切な医薬組成物の形態で用いられ得る。投与は、経腸(経口、舌下、または直腸)、鼻腔内、吸入、静脈内、局所、または他の非経腸の経路(これらに制限されない)によって行われ得る。適切な医薬製剤の選択および製造のための慣用の手順は、例えば“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988 に記載されている。医薬組成物は、式(Ｉ)の化合物 またはその薬学的に許容される塩を、好ましくは８０％未満、より好ましくは５０％未満含む。
【００５１】
本発明によると、我々は、さらに、薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合した、式(Ｉ)の化合物 またはその薬学的に許容される塩を含む医薬組成物を提供する。
該成分を混合することを含む、該医薬組成物の製造方法もまた提供する。
【００５２】
式(Ｉ)の化合物およびその薬学的に許容される誘導体はまた、下記：ＮＳＡＩＤＳ、ＣＯＸ−２阻害剤、アセトアミノフェン、トラマドール、コルチコステロイド、グルコサミン、ドキシサイクリン、プラルナカサン(Pralnacasan)、ＭＭＰ阻害剤、またはＣｏｌｌ−３阻害剤の１つとの組み合わせで用いられ得る。式(Ｉ)の化合物および併用治療は、１回単位用量で投与するために 同じ医薬組成物に一緒に製剤化されるか、またはそれぞれの成分を個別に製剤化し、別個の投与形を同時にもしくは連続して投与するかの何れであってもよい。
【００５３】
本発明を下記の実施例によって説明するが、これは全く本発明を制限しない。
下記の略号：ＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド)、ＤＭＦ(Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド)、ＴＨＦ(テトラヒドロフラン)を用いる。
【実施例】
【００５４】
実施例１
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−２−チオフェンカルボニトリル オキサレート
ａ)フェニルメチル (３Ｓ)−３−[[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]アミノ]−４−ヒドロキシ−ブタノエート
ＴＨＦ(２００ml)中の、４−(フェニルメチル) Ｎ−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−１−(２,５−ジオキソ−１−ピロリジニル)) Ｌ−アスパルテート(７５.０ｇ)の溶液を、１時間に渡って、ＴＨＦ(６０ml)と水(９０ml)中の水素化ホウ素ナトリウム(６.８４ｇ)の懸濁液に、−５℃で加えた(内部の温度を１５℃以下に保った)。さらに水素化ホウ素ナトリウム(２バッチ中６.８ｇ)を加え、混合物を４５分間撹拌した。混合物を、撹拌しながら、冷却した半量の飽和塩化アンモニウム溶液(６００ml)に注ぎ、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、副題化合物をろう状固体として得た(５６.２４ｇ)。
MS APCI +ve m/z 210 [M+H-BOC]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.41-7.27 (5H, m), 5.24-5.10 (3H, m), 4.15-3.96 (1H, m), 3.71 (2H, d), 2.69 (2H, d), 1.44 (9H, s).
【００５５】
ｂ)フェニルメチル (４Ｓ)−３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−２,２−ジメチル−４−オキサゾリジン−アセテート
２−メトキシプロペン(４６ml)を、２０分に渡って、ジクロロメタン(３００ml)中の、段階(ａ)の生成物(７４.８８ｇ)、２,２−ジメトキシプロパン(３０ml)と、ｐ−トルエンスルホン酸(１.２１ｇ)の溶液に、０℃で加え、０℃で１時間、そして２０℃で１時間撹拌した。１Ｍ 炭酸水素ナトリウム溶液を加え、混合物をジクロロメタン(３×２００ml)で抽出した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、無色の油状物を得た。それをトルエン(３００ml)に溶解し、２,２−ジメトキシプロパン(４５ml)とｐ−トルエンスルホン酸(１.２ｇ)を加え、混合物を８０℃で２時間加熱した。冷却し、炭酸カリウムを加え、混合物を酢酸エチルで２回抽出した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、副題化合物を薄黄色の油状物として得た(８３.８ｇ)。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.36-7.28 (5H, m), 5.12 (2H, d), 4.38-3.97 (2H, m), 3.84 (1H, d), 3.05-2.48 (2H, m), 1.62-1.50 (6H, m), 1.46 (9H, s).
【００５６】
ｃ)(４Ｓ)−３−[(１,１−ジメチルエトキシ)カルボニル]−２,２−ジメチル−４−オキサゾリジン酢酸
エタノール(２５０ml)中の、１０％ パラジウム／炭素(３.８ｇ)と、段階(ｂ)の生成物(８３.８ｇ)の懸濁液を、水素下(４大気圧)、３.５時間(５.３Ｌの水素取り込み)撹拌した。混合物をセライトで濾過し、蒸発させた。酢酸エチル(１００ml)と、１Ｍ 炭酸カリウム溶液(２００ml)を加え、有機層を分離し、さらに１Ｍ 炭酸カリウム溶液(４０ml)で、そして１Ｍ 炭酸水素ナトリウム溶液(４０ml)で抽出した。水層を酢酸エチルで洗浄し、合わせ、そして、０℃で、４Ｍ 塩酸(１３０ml)を滴下することによって酸性にした。水層を酢酸エチル(３×２００ml)で抽出し、有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、副題化合物を薄橙色のゴム状物質として得て、それをゆっくりと結晶化した(５６.２４ｇ)。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 4.33-4.12 (1H, m), 4.09-4.00 (1H, m), 3.86 (1H, d), 3.02-2.77 (1H, m), 2.62-2.50 (1H, m), 1.62-1.54 (6H, m), 1.53 (9H, s).
【００５７】
ｄ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[２−(メトキシメチルアミノ)−２−オキソエチル]−２,２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
Ｎ,Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(２１.４ｇ)と、ＥＤＣＩ(４１.９４ｇ)と、Ｎ−メチルモルホリン(２４ml)と、ＤＭＡＰ(２６.４ｇ)を、ジクロロメタン(４００ml)中の段階(ｃ)の生成物(５９.２ｇ)の溶液に、０℃で、そして次に、２０℃で、１８時間撹拌した。２Ｍ 塩酸(２００ml)を加え、有機層を分離し、水層を、さらに２回抽出した。有機層を、２Ｍ 塩酸(５０ml)で、そして炭酸水素ナトリウム溶液(２×１００ml)で洗浄し、合わせ、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、副題化合物を得た(６０.２ｇ)。
MS APCI +ve  m/z 303 [M+H]+.
1H NMR 300MHz (CDCl3) 4.38-4.19 (1H, m), 4.08 (1H, dd), 3.87 (1H, t), 3.70 (3H, s), 3.17 (3H, s), 3.07-2.45 (2H, m), 1.63-1.42 (15H, m).
【００５８】
ｅ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−２,２−ジメチル−４−(２−オキソ−２−フェニルエチル)−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
臭化 フェニル マグネシウム(２３１ml,ＴＨＦ中１Ｍ)を、１５分に渡って、ＴＨＦ(３６０ml)中の段階(ｄ)の生成物(６０.１ｇ)の溶液に、−１０から−５℃で、次に２時間撹拌した。さらに臭化 フェニル マグネシウム(７ml, エーテル中３Ｍ)を加え、０℃で１時間撹拌し、次に飽和塩化アンモニウム溶液(２５０ml)と２Ｍ 塩酸(１５０ml)の添加によってクエンチした。混合物を酢酸エチルで３回抽出し、有機層を塩水で洗浄し、合わせ、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、副題化合物を灰白色の固体として得た(６４.８ｇ)。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.98 (2H, d), 7.64-7.40 (3H, m), 4.50-4.35 (1H, m), 4.15-4.05 (1H, m), 3.88-3.65 (2H, m), 3.49-3.36 and 3.25-3.01 (1H, m), 1.70-1.35 (15H, m).
【００５９】
ｆ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[(２Ｓ)−２−ヒドロキシ−２−フェニルエチル]−２,２−ジメチル ３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
ボラン(１７６ml, ＴＨＦ中１Ｍ)を、ＴＨＦ(２０ml)中の(Ｒ)−メチル−ＣＢＳ−オキサアザボロリジン(１６ml, トルエン中１Ｍ)の溶液に加え、−２０℃に冷却した。ＴＨＦ(２００ml)中の段階(ｅ)の生成物(６４.６ｇ)の溶液を、１.５時間に渡って加え、内部の温度を−１５℃以下に保って、そして次にこの温度で２２時間撹拌した。メタノール(４０ml)をゆっくりと加え、溶液を蒸発させ、メタノールと共に共沸し、薄黄色の油状物を得た(６９ｇ)。エーテルと１Ｍ 硫酸水素カリウム溶液(２０ml)を加え、混合物を濾過し、蒸発させた。クロマトグラフィー(シリカ, 溶出液として４０−６０  ｐｅｔｒｏｌ／エーテル)によって精製し、副題化合物を白色の固体として得た(３７.４ｇ)。
1H NMR 400MHz  (CDCl3) 7.4-7.2 (5H, m), 4.88 (1H, d), 4.65 (1H, m), 4.35 (1H, m), 4.0 (1H, m), 3.65 (1H, d), 2.1-2 (1H, m), 1.85-1.95 (1H, m), 1.6 (3H, s), 1.49 (12H, s).
【００６０】
さらに溶出し、(４Ｓ,２Ｒ)−異性体を白色の固体として得た(２０.０ｇ)。
1H NMR 400MHz  (CDCl3) 7.4-7.3 (5H, brs), 4.77-4.73 (1H, m), 4.3-3.7  (3H, m), 2.2-2 (2H, m), 1.6-1.4 (15H, m). 
【００６１】
ｇ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−(ベンゾイルチオ)−２−フェニルエチル]−２,２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
ＴＨＦ(２０ml)中のアゾジカルボン酸ジイソプロピル(２１.５ml)を、ＴＨＦ(２３０ml)中のトリフェニルホスフィン(２８.７３ｇ)の溶液に、−１０℃で滴下し、白色の懸濁液を３０分間撹拌した。ＴＨＦ(１００ml)中の(４Ｓ,２Ｓ)−段階(ｆ)の主要な生成物(１７.５８ｇ)とチオ安息香酸(１２.８ml)の溶液を、４５分に渡って−１０℃で加え、次に−１０℃から４℃で、１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、エーテルを加え、沈殿物が形成するまで撹拌した。混合物を濾過し、固体をイソヘキサン／エーテル(１：１)で洗浄した。溶液を炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、水層をエーテルで抽出した。合わせた有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ４)、蒸発させ、クロマトグラフィー(シリカ, 溶出液として４０−６０ ｐｅｔｒｏｌ／ジクロロメタン(１：１、次に０：１))によって精製し、固体を得た。これを−７８℃でイソヘキサンから結晶化し、副題化合物を白色の固体として得た(１４.７６ｇ)。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 7.93 (2H, d), 7.61-7.21 (8H, m), 4.79 (1H, dt), 4.18-3.83 (3H, m), 2.64-2.35 (1H, m), 2.23-2.09 (1H, m), 1.62-1.41 (15H, m).
【００６２】
ｈ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−メルカプト−２−フェニルエチル]−２,２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
段階(ｇ)の生成物(２０.０ｇ)を、メタノール中 ７Ｍ アンモニア(５００ml)に溶解し、室温で窒素下で６時間撹拌した。溶液を乾固するまで蒸発させ、残さをクロマトグラフィー(シリカ, ２０％ ジエチルエーテル／イソヘキサン)によって精製し、副題化合物を白色の固体として得た(１６.０ｇ)。
MS APCI +ve m/z 238 (M+H-BOC)+.
【００６３】
ｊ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−[(２−シアノ−３−チエニル)チオ]−２−フェニルエチル]−２,２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
段階(ｈ)の生成物(２８０mg)を、乾燥ＤＭＦ(１０ml)に溶解し、３−ブロモチオフェン−２−カルボニトリル(１５７mg)で処理し、次に水素化ナトリウム(油中６０％, ３５mg)で、窒素下で処理した。反応混合物を２４時間撹拌し、水に注ぎ、酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥した(ＭｇＳＯ４)。溶媒を蒸発させ、残さをクロマトグラフィー(シリカ, 溶出液として１０％ 酢酸エチル／イソヘキサン)によって精製し、副題化合物を油状物として得た(２５０mg)。ＮＭＲは本化合物が回転異性体の混合物であることを示し、スペクトルは非常に広いピークを示す。
1H NMR 300MHz (CDCl3)  7.20-7.45 (6H, m), 6.60-7.00 (1H, m), 4.10-4.50 (2H, m), 3.70-3.95 (1H, m), 3.40-3.70 (1H, m), 2.25-35 (1H, m), 2.05-2.20 (1H, m), 1.40-1.69 (15H, m).
【００６４】
ｋ)３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−２−チオフェンカルボニトリル オキサレート
メタノール(１０ml)中の、段階(ｊ)の生成物(２４０mg)の溶液に、４ＭのＨＣｌのジオキサン溶液(１０ml)を加えた。混合物を２０℃で２時間撹拌し、溶媒を真空で除去した。残さを重炭酸ナトリウム水溶液と酢酸エチルの層間に分配した。水相を酢酸エチル(２×５０ml)で抽出し、合わせた抽出物を塩水で洗浄し、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濾過し、真空で濃縮した。残さを酢酸エチルに溶解し、ジエチルエーテル中のシュウ酸溶液を加えた。溶液を濾過し、乾燥し、表題化合物を白色の固体として得た(１４０mg)。
MS (APCI+ve) m/z 305 [M(+H)]+.
1H  NMR 400MHz (DMSO-d6) 8.04 (1H, d), 7.24-7.34 (6H, m), 4.82 (1H, t), 3.52 (1H, m), 3.42 (1H, m), 2.99 (1H, m), 2.25 (1H, m), 2.10 (1H, m).
【００６５】
実施例２
３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−５−メチル−２−チオフェンカルボニトリル オキサレート
ａ)３−ブロモ−５−メチル−２−チオフェンカルボニトリル
水(１０ml)中の、３−ブロモ−５−メチル−２−チオフェンカルボアルデヒド(５００mg)の懸濁液に、ヒドロキシルアミン−Ｏ−スルホン酸(３３０mg)を加えた。混合物を５０℃で１２時間加熱し、冷却した。混合物を、次に酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた有機層を洗浄し(塩水)、乾燥し(ＭｇＳＯ４)、濾過し、蒸発させ、副題化合物を褐色の固体として得た(４１０mg)。
1H NMR 300MHz (CDCl3) 6.79 (1H, s), 2.54 (3H, s).
【００６６】
ｂ)１,１−ジメチルエチル (４Ｓ)−４−[(２Ｒ)−２−[(２−シアノ−５−メチル−３−チエニル)チオ]−２−フェニルエチル]−２,２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボン酸エステル
段階(ａ)の生成物(１７０mg)の生成物を、乾燥ＤＭＦ(１０ml)に溶解し、実施例１の段階(ｈ)の生成物(２８０mg)で、次に炭酸セシウム(２７０mg)で、窒素下で処理した。反応混合物を２４時間撹拌し、水に注ぎ、酢酸エチル(３×５０ml)で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥した(ＭｇＳＯ４)。溶媒を蒸留し、残さをクロマトグラフィー(シリカ, 溶出液として１０％ 酢酸エチル／イソヘキサン)によって精製し、副題化合物を油状物として得た(１００mg)。
MS (APCI+ve) m/z 359 [M+H-BOC]+.
【００６７】
ｃ)３−[[(１Ｒ,３Ｓ)−３−アミノ−４−ヒドロキシ−１−フェニルブチル]チオ]−５−メチル−２−チオフェンカルボニトリル オキサレート
表題化合物(６０mg)は、実施例１の段階(ｋ)の方法によって、上記の(ｂ)を用いて製造した(１００mg)。
MS (APCI+ve) m/z 319 [M(+H)]+.
1H  400MHz (DMSO-d6) 7.32 (5H, m), 7.03 (1H, s), 4.80 (1H, m), 3.51 (1H, m), 3.41 (1H, m), 2.96 (1H, m), 2.50 (3H, s), 2.25 (1H, m), 2.11 (1H, m).
【００６８】
スクリーン
本発明による化合物の薬理学的活性を、下記のスクリーンで試験した。
スクリーン１
式(Ｉ)の化合物、またはその薬学的に許容される塩、エナンチオマー、もしくは ラセミ体の活性を、一酸化窒素合成酵素阻害活性において、Foerstermann et al., Eur. J. Pharm., 1992, 225, 161-165 の手順に基づく手順によって、スクリーニングし得る。一酸化窒素合成酵素は、３Ｈ−Ｌ−アルギニンを３Ｈ−Ｌ−シトルリンに変える。３Ｈ−Ｌ−シトルリンは、カチオン交換クロマトグラフィーによって分離して液体シンチレーション計数によって定量化し得る。
【００６９】
誘発後に、酵素を、培養されたマウスのマクロファージ細胞株 J774A-1 (Imperial Cancer Research Fund の研究所から得た)から製造した。J774A-1 細胞を、１０％ ウシ胎児血清、４ｍＭ  Ｌ−グルタミン、および抗生物質(１００単位／ml ペニシリン Ｇ、１００mg/ml ストレプトマイシン、および０.２５mg/ml アンホテリシン Ｂ)を加えた ダルベッコ変法イーグル培地(ＤＭＥＭ)中で培養する。細胞を３５mlの培地を含む２２５ｃｍ３フラスコ中で、３７℃で、５％ ＣＯ２を含む加湿雰囲気下で普通に成長させる。
【００７０】
一酸化窒素合成酵素は、インターフェロン−ｇ(ＩＦＮｇ)およびリポポリサッカライド(ＬＰＳ)に対する応答で、細胞によって産生される。コンフルエントな培養フラスコの培地を除き、１mg/mlのＬＰＳと１０単位／mlのＩＦＮｇを含む２５ml(フラスコ当たり)の新しい培地に置き換える。培養１７〜２０時間後、培養培地のフラスコ表面から細胞のシートをかき取ることによって、細胞の収穫を行う。細胞を遠心分離(１０００Ｇ, １０分間)によって集め、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ ７.５, ２０℃)、１０％(v/v)のグリセロール、０.１％(v/v) Triton-X-100、０.１ｍＭのジチオトレイトール、およびロイペプチン(２mg/ml)、大豆トリプシン阻害剤(１０mg/ml)、アプロチニン(５mg/ml)、およびフッ化フェニルメチルスルホニル(５０mg/ml)を含むプロテアーゼ阻害剤のカクテルを含む溶液を、細胞のペレットに加えることによってライセートを製造した。
【００７１】
アッセイのために、２５μｌの基質カクテル(５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ(ｐＨ ７.５, ２０℃)、４００μＭのＮＡＤＰＨ、２０μＭのフラビン アデニン ジヌクレオチド、２０μＭのフラビン モノヌクレオチド、４μＭのテトラヒドロビオプテリン、１２μＭのＬ−アルギニン、および０.０２５ｍＣｉ  Ｌ−[３Ｈ]アルギニン)を、２５μｌの５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ中の試験化合物の溶液を含む９６ウェル フィルター プレート(孔のサイズ：０.４５μＭ)に加える。反応は、５０μｌの細胞ライセート(上記で製造)を添加することによって始め、１時間室温でインキュベートした後、３ｍＭ ニトロアルギニンと２１ｍＭのＥＤＴＡの水溶液５０μｌを添加することによって終わらせた。
【００７２】
ラベルされたＬ−シトルリンを、ラベルされたＬ−アルギニンから、Dowex AG-50W を用いて分離した。１５０μｌの２５％ Dowex 50W (Ｎａ＋型)の水性のスラリーをアッセイに加え、その後全体を９６ウェルプレートでろ過した。７５μｌのろ液をサンプリングし、固形シンチラント(scintillant)を含む９６ウェルプレートのウェルに加えた。試料を乾燥させた後、Ｌ−シトルリンをシンチレーション計数によって定量した。
【００７３】
典型的な実験において、基礎活性(basal activity)は、試料７５μｌ当たり３００ｄｐｍであり、試薬コントロールでは１９００ｄｐｍに増大する。化合物の活性は、ＩＣ５０(アッセイ中５０％酵素阻害を示す薬物の濃度)として表し、アミノグアニジン[ＩＣ５０(５０％阻害濃度)が１０μＭ]は、手順を確かめるための標準として試験された。化合物は、濃度の範囲で試験され、ＩＣ５０値を得る阻害から計算される。１００μＭで少なくとも２５％まで酵素を阻害する化合物は、活性があるとして分類され、少なくとも１回再試験にかけられる。
【００７４】
上記のスクリーンにおいて、実施例１から２の化合物を試験し、１０μＭ未満のＩＣ５０値を得た。このことは、これらが有用な治療活性を示すことが期待されることを示している。
【００７５】
スクリーン２
リコンビナントのヒトのＮＯ合成酵素(ｉＮＯＳ、ｅＮＯＳ、およびｎＮＯＳ)を、E. coli 中で発現し、補因子(ＦＡＤ、ＦＭＮ、Ｈ４Ｂ)、プロテアーゼ阻害剤、リゾチウム、および界面活性剤 CHAPS を含む、Hepes 緩衝液(ｐＨ ７.４)中でライセートを製造した。これらの調製物を、適切な希釈で、様々なアイソフォーム(isoform)の阻害を評価するために用いた。Foerstermann et al.9の方法の適応を用いて、ＮＯＳの阻害を、Ｌ−[３Ｈ]−アルギニンからのＬ−[３Ｈ]−シトルリンの形成を測定することによって決定した。酵素アッセイを、３μＭの[３Ｈ]−アルギニン、１ｍＭのＮＡＤＰＨ、およびＮＯＳ活性を維持するのに必要な他の補因子(ＦＡＤ、ＦＭＮ、Ｈ４Ｂ、カルモジュリン、Ｃａ２＋)の存在下で行った。様々なＮＯＳ阻害剤がゆっくりとした結合速度を示すか、または時間依存で酵素を不活性化することが報告されていることから、酵素と阻害剤を、アルギニンを添加して反応を始める前に、ＮＡＤＰＨの存在下で、６０分間プレインキュベートした。アッセイをクエンチする前に、インキュベーションをさらに６０分間続け、９６−ウェル形式での Dowex-50W 樹脂でのクロマトグラフィーによって、[３Ｈ]−シトルリンを未反応の基質から分離した。
【００７６】
上記のスクリーンで、実施例１から２の化合物を試験し、ｉＮＯＳ酵素に対して１０μＭ未満のＩＣ５０値を得た。このことは、これらが有用な治療活性を示すことが期待されることを示している。
【００７７】
スクリーン３
化合物はまた、下記のアッセイで示されるように、ヒト型の誘導型一酸化窒素合成酵素に対して活性を示す。
ヒトの結腸直腸癌細胞株ＤＬＤ−１(European Collection of Animal Cell Culture - cell line number 90102540 から得られる)を、１０%(v/v) ウシ胎児血清と、２ｍＭのＬ−グルタミンを加えたＲＰＭＩ １６４０中で、３７℃で、５％ ＣＯ２中で、決まった方法で成長させた。
【００７８】
一酸化窒素合成酵素を、ヒトのリコンビナント γ−ＩＦＮ(１０００単位／ml)、ＴＮＦ−α(２００Ｕ／ml)、ＩＬ−６(２００Ｕ／ml)、およびＩＬ−１β(２５０Ｕ／ml)を含む培地の添加によって、細胞中で誘発した。３７℃で１８時間インキュベートした後、培地を除去し、細胞を温リン酸緩衝生理食塩水で洗浄した。試験化合物の存在下 および非存在下で、１００μＭのＬ−アルギニンと １００μＭのベラパミル−ＨＣｌを含むＲＰＭＩ １６４０中で、３７℃／５％ ＣＯ２で、さらに５時間細胞をインキュベートした。
【００７９】
亜硝酸塩の蓄積を、Griess 試薬 (１mlの２.５%(v/v) リン酸中の １０mg/mlのスルファニルアミド、１mgのＮ−(１−ナフチル)エチレンジアミン)を伴う培養培地を等体積混合することによって決定した。化合物の存在下での阻害を、未処理の細胞によって生産される亜硝酸塩のレベルに関して計算した。ＩＣ５０値を、化合物の濃度に対する％阻害の片対数プロットから見積もった。
【００８０】
このスクリーンにおいて、実施例１から２の化合物は、１００μＭ未満のＩＣ５０値を与えた。このことは、これらが有用な治療活性を示すことが予期されることを示している。
【国際調査報告】
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