(57)【要約】異常細胞増殖をコントロールすることに効果的なカンプトテシンのラクトン型、またはそのラクトン型類似体；および患者への経口投与の際にカンプトテシンまたはその類似体の直接関連するカルボン酸塩型よりもラクトン型の経口バイオアベイラビリティを顕著に増加させる少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーを含む薬剤組成物が提供される。カンプトテシンまたはその類似体のラクトン型の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン構造を保護し、患者への経口投与の際、ＧＩ中でカンプトテシンのラクトン型またはそのラクトン型類似体をコントロールするように放出させる少なくとも一つの生体接着性ポリマーをさらに含む組成物もまた提供される。本発明の組成物の効果的な量を異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療が必要な患者に対して経口投与することを含む、異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療に対する方法が記載されている。
2006527760.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
異常細胞増殖をコントロールすることに効果的なカンプトテシンのラクトン型、またはそのラクトン型類似体；および患者への経口投与の際にカンプトテシンまたはその類似体の直接的に関連するカルボン酸塩型よりもラクトン型の経口バイオアベイラビリティを顕著に増加させる少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーを含む薬剤組成物。
【請求項２】
少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーは、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ−プロピレンオキシド；ポリ（エチレンオキシド）−アルファトコフェロール；ポリ−エチレンオキシドポリ−アルキル；および、ポリ−エチレンオキシドポリ−ラクチドからなる群から選ばれる請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
９−アミノカンプトテシン；７−エチルカンプトテシン；１０−ヒドロキシカンプトテシン；９−ニトロカンプトテシン；１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン；９−アミノ−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン；９−クロロ−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン；イリノテカン（ＣＰＴ−１１）；トポテカン；７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン；７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−メチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン；および、７−（２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−（２０Ｓ）−カンプトテシンからなる群から選ばれるカンプトテシンのラクトン型またはそのラクトン型類似体を含む請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ（プロピレンオキシド）である請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーが、疎水性ブロックコポリマーである請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
ポリ−エチレンオキシドポリ−プロピレンオキシドブロックコポリマーの少なくとも一つのポリ（オキシプロピレン）部分がブロックコポリマーの少なくとも５０重量％を含む請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも一つのポリ−エチレンオキシドポリ−プロピレンオキシドブロックコポリマーが、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ８５、Ｌ９２、Ｌ６１、Ｐ８４、Ｌ１０１、Ｌ１２１、Ｐ８３、およびＰ８１からなる群から選ばれる請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
ポリ−エチレンオキシドポリ−プロピレンオキシドブロックコポリマーが、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｐ８５であり、カンプトテシンの類似型がトポテカンまたは９−ニトロ−２０（Ｓ）−カンプトテシンである請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
異常細胞増殖をコントロールすることに効果的なカンプトテシンのラクトン型、またはそのラクトン型類似体と、カンプトテシンまたはその類似体のカルボン酸塩型よりも顕著にラクトン型の経口バイオアベイラビリティを増加させる両親媒性ブロックコポリマーと、およびカンプトテシンまたはその類似体のラクトン型の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン構造を保護し、患者への経口投与の際、ＧＩ中でカンプトテシンのラクトン型またはそのラクトン型類似体をコントロールするように放出させる少なくとも一つの生体接着性ポリマーとを含む薬剤組成物。
【請求項１０】
少なくとも一つの生体接着性ポリマーが、可溶性ポリマー、不溶性ポリマー、生分解性ポリマー、非生分解性ポリマー、ハイドロゲルポリマー、熱可塑性ポリマー、天然ポリマー、合成ポリマー、ホモポリマー、およびコポリマーからなる群から選ばれ、この際、生体接着性ポリマーが、哺乳類の腸の粘膜表面に適用したときにＧＩ中の薬物滞留時間を増加させる請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーが、ポリ−エチレンオキシドポリ−プロピレンオキシド；ポリ−エチレンオキシド−アルファトコフェロール；ポリ−エチレンオキシドポリ−アルキル；および、ポリ−エチレンオキシドポリ−ラクチドからなる群から選ばれ、持続的かつコントロールされた放出を与える請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
９−アミノカンプトテシン；７−エチルカンプトテシン；１０−ヒドロキシカンプトテシン；９−ニトロカンプトテシン；１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン；９−アミノ−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン；９−クロロ−１０，１ｌ−メチレンジオキシカンプトテシン；イリノテカン（ＣＰＴ−１１）；トポテカン；７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン；７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−メチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン；および、７−（２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−（２０Ｓ）−カンプトテシンからなる群から選ばれるカンプトテシンのラクトン型またはそのラクトン型類似体を含む請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
少なくとも一つの生体接着性ポリマーがコポリマーであり、コポリマーの少なくとも一つの生体接着部分がポリアクリル酸（ＰＡＡ）である請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
少なくとも一つの生体接着性ポリマーはポリアクリル酸（ＰＡＡ）およびＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックポロキサマー（ポリエーテル）のコポリマーである請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
コポリマーがＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７−ＰＡＡ、Ｌ９２−ＰＡＡ、Ｆ６８−ＰＡＡ、Ｆ８８−ＰＡＡ、Ｆ１０８−ＰＡＡ、Ｐ１０５−ＰＡＡ、Ｐ１０３−ＰＡＡ、Ｌ６１−ＰＡＡ、およびＦ３８−ＰＡＡからなる群から選ばれる請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
コポリマーがグラフトコポリマーであり、この際、ＰＡＡとポリエーテルとが互いに複数のＣ−Ｃ結合によって結合している請求項１４に記載の組成物。  
【請求項１７】
コポリマーが架橋しており、コポリマーがＦ１２７−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｌ９２−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｆ６８−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｆ８８−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｆ１０８−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｐ１０５−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｐ１０３−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、Ｌ６１−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡ、およびＦ３８−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡからなる群から選ばれる請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
請求項３に記載の組成物の効果的な量を異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療が必要な患者に対して経口投与することを含む、異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療に対する方法。
【請求項１９】
請求項１２に記載の組成物の効果的な量を異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療が必要な患者に対して経口投与することを含む、異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療に対する方法。
【請求項２０】
請求項１６に記載の組成物の効果的な量を異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療が必要な患者に対して経口投与することを含む、異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療に対する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、ガンのような異常細胞増殖と関連する状態や病気を治療する方法に加えて、カンプトテシンおよびトポテカンなどのようなその類似体を経口投与によって患者に運ぶための組成物および方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
カンプトテシンは、１９６０年代に植物であるＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａ  ａｃｕｍｉｎａｔａからもともと分離された（Ｗａｌｌ，Ｍ．ら（１９６６）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８８：３８８８−３８９０）。カンプトテシンは、２０（Ｓ）−立体配置でＥ環中にただ１つの不斉中心を持つ五環系を有する。五環系は、ピロールキノリン部分（環Ａ、ＢおよびＣ）、共役ピロリドン（環Ｄ）、およびアルファ−ヒドロキシル基を有する六員ラクトン環（環Ｅ）（すなわち、アルファ−ヒドロキシラクトン）を含む。
【０００３】
カンプトテシンは、親油性が高く、水溶性に乏しい化合物である。水酸化ナトリウムによって水中に可溶化されるカンプトテシンナトリウムが、７０年代の初期に臨床試験で使用され、抗ガン活性を有することが見出された。しかしながら、静脈注射によって投与されたこのカンプトテシン製剤は、骨髄抑制や出血性膀胱炎のような重度の副作用を引き起こした。
【０００４】
カンプトテシンのさらなる研究により、そのカルボン酸塩型が、閉環したアルファヒドロキシラクトン環を有する天然のカンプトテシンと比較して、ごく少量存在することが明らかとなった。（Ｇｉｏｖａｎｅｌｌａら（１９９１）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５１：３０５２）中性ｐＨにおいて、カンプトテシンおよびその誘導体は、ラクトン環のアルカリ加水分解を受け、結果としてその抗ガン治療効果に大いなる制限を課す、薬物の低活性カルボン酸塩型を生ずることも示された。
【０００５】
カンプトテシンおよびその誘導体は、酵素と切断鎖ＤＮＡとの共有結合複合体（「開裂複合体」（ｃｌｅａｖａｂｌｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ））を安定化することによってＤＮＡトポイソメラーゼＩを阻害することが示されてきた。カンプトテシンによるトポイソメラーゼＩの阻害は、セルサイクルのＳフェーズの間に起こる、タンパクが結合したＤＮＡ一本鎖の切断を引き起こす。Ｓフェーズは、セルサイクルの他のフェーズと比べて比較的短いため、カンプトテシンに長い時間曝すと、ガン細胞の毒性が高まる結果となる可能性が高い。研究は、薬物の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型のみが開裂複合体を安定化することを助け、セルサイクルの阻害、およびアポトーシスへと導くことを示す。
【０００６】
カンプトテシンのアルファ−ヒドロキシラクトン型を保持するために、カンプトテシンおよびその水不溶性誘導体が、酸存在下Ｎ−メチル−２−ピロリジノン中で溶解されてきた（米国特許第５，８５９，０２３号）。許容できる非経口の媒体で希釈した場合、カンプトテシンの安定溶液が得られた。カンプトテシンの濃縮溶液は、経口投与用のゲルカプセル中にも充填された。そのような剤形は、腫瘍細胞中の細胞膜および核膜に拡散するカンプトテシンの親油性アルフア−ヒドロキシラクトン型の量を増大させると考えられている。
【０００７】
Ｔ．Ｇ．Ｂｕｒｋｅ，Ａ．Ｅ．Ｓｔａｕｂｕｓ，Ａ．Ｋ．Ｍｉｓｈｒａ  ａｎｄ  Ｈ．Ｍａｌａｋ（「カンプトテシンのラクトン環のリポソーム安定化」（“Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｍｐｔｏｅｃｉｎ’ｓ  Ｌａｃｔｏｎｅ  Ｒｉｎｇ．”）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９２，１１４，８３１８）およびＴ．Ｇ．Ｂｕｒｋｅ，Ａ．Ｋ．Ｍｉｓｈｒａ，Ｍ．Ｃ．Ｗａｎｉ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｅ．  Ｗａｌｌ（「カンプトテシン薬物の脂質二分子層分配および安定性」（“Ｌｉｐｉｄ  ｂｉｌａｙｅｒ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ  ｄｒｕｇｓ．”）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９３年５月２５日；３２（２０）：５３５２−６４）は、リン脂質二分子膜へカンプトテシン薬物が隠れることによって、カンプトテシン薬物のアルファ−ヒドロキシラクトン部分が加水分解に対抗して安定化するということを示した。約１５から３０分であるＰＢＳ中の加水分解半減期と較べて、脂質二分子膜と結合したカンプトテシン薬物は、７２時間までもの間、安定であることが見出された。これらの著者は、水性接触面から離れた保護環境にある二分子膜のリン脂質アシル鎖間のカンプトテシン分子のインターカレーションを示すカンプトテシンの蛍光が消滅する挙動を誘導する、ヨウ素イオンを規定した。この環境でカンプトテシンのアルファ−ヒドロキシラクトン環構造の安定化が可能であるならば、脂質二分子膜インターカレーションによって、インビボで生物学的活性型が保存されうること、それにより生物学的ホスト中にリポソームの二分子膜を経て運搬されるための活性型が許容されることを予期させるものである（米国特許第５，５５２，１５６号公報）。
【０００８】
ｐＨ７．４でヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）が、選択的にカンプトテシンのカルボン酸塩型にアルファ−ヒドロキシラクトン型よりも１５０倍より高い親和性で結合することが報告されている（Ｚ  Ｍｉ  ａｎｄ  Ｔ．Ｇ．Ｂｕｒｋｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９４年８月３０日；３３（３４）：１０３２５−３６）。これらのＨＳＡ薬物相互作用により、タンパク質フリー培地と較べて、ＨＳＡ存在下でカンプトテシンのラクトン環がより速く、より完全に開環する。さらに、ヒト血漿中、ｐＨ７．４および３７℃で、カンプトテシンのラクトン環は、速やかにそして完全に開環し、薬物はカルボン酸塩型に転化する。血漿に比して全血中では、カンプトテシンのラクトンは、より高い安定性を示すことが見出されており、これは、赤血球中の脂質二分子膜への薬物の結合によるものであることが分かっている。とは言え、アルブミン存在下ではカンプトテシンラクトン型は熱力学的および動力学的に不安定なままであり、血漿中の活性アルファ−ヒドロキシラクトン型の濃度は不十分なままである。したがって、リポソームの二分子膜は、この薬物に対して十分な化学的安定性を与えることができないのである。
【０００９】
米国特許第５，５５２，１５６号、および５，７３６，１５６号は、カンプトテシンの静脈運搬のための界面活性剤分子のリポソームおよびミセルを記載している。リポソーム中で、カンプトテシンは、膜中間層に結合して、部分的には膜中間層中に存在しうる、あるいは加水分解に対してカンプトテシンラクトン環が安定ではない場合は、水と直接的に接触して内部に包含される水層中に解離しうる。界面活性剤分子のミセル中で、カンプトテシンは、ミセルの中心の炭化水素部分に存在するか、ミセル膜に結合するか、ミセルの外側に結合する。しかしながら、カンプトテシンはリポソーム中よりもミセル中、特にポリ（エチレンオキシド）含有ミセル中で、より安定ではない一方、リポソーム中の膜層に結合しうるカンプトテシン化合物の量は、膜の大きさによって、またリポソームの破裂を避けるため膜が損なわれないようなままでいるよう要求されることによって限定される。リポソーム中のカンプトテシンに対する脂質の比は、通常１５０より大きく、そして結合およびフリーのカンプトテシン間の報告されている平衡によってカンプトテシンのラクトンはゆっくりと加水分解する。
【００１０】
静脈運搬に適切な固体粒子の水性サスペンションを含む薬剤組成物の患者への注射、固体粒子はカンプトテシン、および膜形成両親媒性脂質の０．３ｎｍ〜３．０ｍｕ．ｍまでの厚い層を含むものであるが、その注射を含む患者へのカンプトテシン投与方法が、米国特許第６，５３４，０８０号に記載されている。この特許において、活性剤がミセルを形成しない条件下で膜形成脂質および／または界面活性剤でコートされたミクロンおよびサブミクロンサイズの粒子のサスペンションが、インビトロでの加水分解による、およびインビボでの血漿成分によるカンプトテシンの失活を大きく減少させることが示された。しかしながら、脂質成分の両親媒性の性質によりトポテカンのような水溶性薬物を十分に滞留できないため、上述の組成物は水不溶性カンプトテシン誘導体に主に適用できる。さらに、上記の組成物の限られた積載能力により最終薬物形態で線量制限が生ずる。
【００１１】
化学療法剤の経口投与は、治療的に重要な薬物レベルが達成されうると、ガン治療の好ましい手段である。しかしながら、経口の化学療法の効果を大幅に制限する多くの障害がある。カンプトテシンおよびその誘導体に直接的に関連する最も重要な要素は、消化管（ＧＩ）と相互作用する表面が減るような低い薬物溶解性、ＢＣＲＰの高い活性による低い薬物吸収、カンプトテシンに対する高い選択性を有する最近発見された排出ポンプ、さらにチトクロームＰ−４５０アイソザイムのような代謝酵素がＧＩ中で高い活性を持つことに加えて、おそらく、薬物活性型を速やかに不活性にさせる、まだ知られていない薬物トランスポーターの高い活性である（レヴューとして、Ｋｒｕｉｊｔｚｅｒ  ＣＭ，Ｂｅｉｊｕｅｎ  ＪＨ，Ｓｃｈｅｌｌｅｎｓ  ＪＨ．，Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ２００２；７（６）：５１６−３０参照）。
【００１２】
カンプトテシンの減じられた経口バイオアベイラビリティに加えて、発現レベルが等しいものではないこと、ならびに排出ポンプおよび代謝酵素の活性に関連する薬物吸収において、患者内部の、および患者間の顕著な多様性が、これらの薬物の経口投与をさらに限られたものとしている。これは、異なる患者間に対して、あるいは違うときに繰り返し治療を行う場合には同じ患者に対してでさえ、適用される同じ投与計画内で、薬物レベルをコントロールすることが困難であることによる。
【００１３】
カンプトテシンとの組み合わせ治療法を使用することによって、上述の問題を克服しようとする試みが最近行われてきた。この試みにおいて、これらの薬物は、ＧＦ１２０９１８（Ｍａｌｉｎｇｒｅ  ＭＭ．，Ｂｅｉｊｕｅｎ  ＪＨ，Ｒｏｓｉｎｇ  Ｈ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８４：４２−４７，２００１）、真菌毒素ｆｕｍｉｔｒｅｍｏｒｇｉｎＣの新しい類似体であるＫｏｌ４３（Ａｌｌｅｎ  ＪＤ，ｖａｎ  Ｌｏｅｖｅｚｉｊｎ  Ａ，Ｌａｋｈａｉ  ＪＭ，ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｖａｌｋ  Ｍ，ｖａｎ  Ｔｅｌｌｉｎｇｅｎ  Ｏ．Ｒｅｉｄ  Ｇ．Ｓｃｈｅｌｌｅｎｓ  ＪＨ，Ｋｏｏｍｅｎ  ＧＪ，Ｓｃｈｉｎｋｅｌ  ＡＨ．，Ｍｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  ２００２  Ａｐｒ；１（６）：４１７−２５）のようなＢＣＲＰインヒビター、および同じ特性を有する他の化合物とともに投与される。結果として、カンプトテシンの経口吸収の著しい増加、ならびに患者内、および患者間の多様性の減少が達成された。しかしながら、このアプローチは、化学的安定性が低いことを解決せず、カルボン酸塩へのラクトンの同様の転化が静脈組成物用と同様に、カンプトテシンの経口組成物用でも報告されている。
【００１４】
さらに、著しく高いレベルの拒絶反応が化学療法組成物について報告されており、その組成物中で循環中でこれらのインヒビターの相当量を吸収し、さらに正常組織と相互作用することにより、抗ガン剤が排出ポンプインヒビターと結合する。（Ｋｒｕｉｊｔｚｅｒ  ＣＭＦ，Ｂｅｉｊｕｅｎ  ＪＨ，Ｒｏｓｉｎｇ  Ｈ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：２９４３−２９５０，２００２）。
【００１５】
それ故、これらの閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型が生理的環境下、例えばインビボで、安定で、溶解性があり、そして治療化合物の高い経口バイオアベイラビリティ（例えば、胃腸管で吸収）が提供される薬剤組成物がカンプトテシンに対して必要とされている。
【発明の開示】
【００１６】
発明の概要
本発明は、上昇した経口バイオアベイラビリティを有し、血流中でこれらの化合物のラクトン型の度合いがより高いカンプトテシンおよびその類似体の水溶性製剤を提供する。本発明は、これらの製剤の製造方法、これらの製剤を含むキットおよびガンのような異常細胞増殖と関連する病気をもつ患者を治療するためのこれらの製剤を使用する方法をも提供するものである。本発明は、異常細胞増殖をコントロールすることに効果的なカンプトテシンのラクトン型、またはそのラクトン型類似体；および患者に経口投与する際に、カンプトテシンおよびその類似体の直接関連するカルボン酸塩型よりもラクトン型の経口バイオアベイラビリティを著しく増加させる少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーを含む薬剤組成物を特に対象としたものである。本発明は、少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ−プロピレンオキシド；ポリ（エチレンオキシド）−アルファトコフェロール；ポリ−エチレンオキシドポリ−アルキル；およびポリ−エチレンオキシドポリ−ラクチドからなる群から選ばれる組成物を含む。本発明は、さらに少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーが、ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ−プロピレンオキシドである組成物を対象としたものである。さらに、本発明は、異常細胞増殖をコントロールすることに効果的なカンプトテシンのラクトン型、あるいはそのラクトン型類似体；そしてカンプトテシンまたはその類似体のカルボン酸塩型よりもラクトン型の経口バイオアベイラビリティを著しく増加させる両親媒性ブロックコポリマー；およびカンプトテシンまたはその類似体のラクトン型の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン構造を保護し、患者に経口投与した際に、ＧＩ中でカンプトテシンのラクトン型あるいはその類似体のラクトン型の放出を制御させる少なくとも一つの生体接着性ポリマーを含む薬剤組成物を対象としたものである。本発明は、少なくとも一つの生体接着性ポリマーがコポリマーであり、コポリマーの少なくとも一つの生体接着部分がポリアクリル酸（ＰＡＡ）であり、例えば、この際少なくとも一つの生体接着性ポリマーがポリアクリル酸（ＰＡＡ）と、ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックポロキサマー（ポリエーテル）とのコポリマーである、これらの薬剤組成物に特に向けられたものである。これらのタイプの組成物は、コポリマーがグラフト−コポリマーで、複数のＣ−Ｃ結合によって互いにＰＡＡとポリエーテルがつながっているものとして記載される。本発明はさらに本発明の薬剤組成物の効果的な量を異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療を必要とする患者に対して経口で投与することを含む異常細胞増殖に関連する病気の予防および／または治療する方法を対象とするものである。
【００１７】
図の簡単な説明
図１は、ヒト血清中、平衡後の、ＣＰＴ−ｌｌ（イリノテカン）およびその代謝物であるＡＰＣおよびＳＮ３８の代表的なクロマトグラムを示す。図に示すように、ゲル中にカプセル化しない場合、相当量のＣＰＴ−ｌｌが代謝される。
【００１８】
図２は、１時間ヒト血清中でＣＰＴ−１１を取り込んだプルロニックＦ１２７−ＰＡＡに基づくゲルが平衡に達した後に得られたＣＰＴ−１１の代表的なクロマトグラムを示す。
【００１９】
図３は、ゲルなし（黒丸）、およびＬ９２−ＰＡＡゲルあり（黒菱形）またはＦ１２７−ＰＡＡゲルあり（白丸）でヒト血清中のＣＰＴ−１１に対してラクトン環が開環する割合の動力学的評価を示す。図からわかるように、ゲルによって保護されないＣＰＴ−１１はより速やかに加水分解され、さらにゲルが薬物分解に対して効果的なバリアーとなることが明らかとなった。
【００２０】
図４は、３７℃でラット空腸粘膜と接触させた粘膜接着性のＦ１２７−ＰＡＡゲル調製物に対して得られた力−距離図である。図からわかるように、プルロニックＰＡＡゲルは、粘膜接着性ポリマーの工業標準として本分野で知られるカーボポールＣ９３４Ｐの粘膜接着特性と、同等あるいは、多くの例でそれに勝った。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
発明の詳細な説明
特に定義されない限り、ここで使用される全ての技術的および科学的用語は、本発明の属する分野において当業者によって通常理解されるものと同じ意味を有する。ここで参照される全ての文献および特許は本明細書で参照によって引用される。
【００２２】
カンプトテシンおよびその類似体（カンプトテシン類）の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型（ラクトン型）は、ＤＮＡトポイソメラーゼＩの活性を阻害し、これによりインビボで腫瘍細胞のセルサイクルを阻害する。これらの化合物のラクトン型は、一般的に異常細胞増殖をコントロールすることに対して効果があることが知られ、薬剤効果を示すことがよく知られている。しかしながら、中性ｐＨでは、カンプトテシンおよびその誘導体がラクトン環のアルカリ加水分解を受け、その結果、薬理的効果が低い、あるいは全くない薬物であるカルボン酸塩型の不活性化を生ずる。したがって、カンプトテシンおよびその類似体のラクトン環の加水分解は、これらの化合物の抗ガン治療効果に対して大きな制限となる。
【００２３】
カンプトテシンの経口投与は、治療的に意義のある薬物レベルが達成されうることを提供するガン治療の好ましい手段である。しかしながら、カンプトテシンおよびその誘導体に固有の問題として、吸収性が低いことに加え、生理的条件下で薬物溶解性が低いことが挙げられ、薬物溶解性が低いことは、消化管（ＧＩ）と相互作用する表面を減少させるものである。
【００２４】
カンプトテシン類
本発明に用いられるカンプトテシン化合物は、好ましくは原型のラクトン環を含む。カンプトテシンとしては、例えば、限定されるものでないが、９−アミノカンプトテシン、７−エチルカンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−ニトロカンプトテシン、１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン、９−アミノ−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン、または９−クロロ−１０，１１−メチレンジオキシカンプトテシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、トポテカン、（７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−エチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシン、（７−（４−メチルピペラジノメチレン）−１０，１１−メチレンジオキシ−２０（Ｓ）−カンプトテシンまたは７−（２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル）−（２０Ｓ）−カンプトテシンが挙げられる。
【００２５】
１９９６年５月２９日に、ＦＤＡはトポテカンを例えば、他の化学療法薬に耐性がある進行性卵巣ガンの治療として承認した。トポテカンは臨床試験において、例えば、タキソールと少なくとも同程度の効果を表すことが示された。さらに、１９９６年６月１７日にイリノテカンが例えば転移性結腸または直腸ガンの治療として承認された。これらの化合物は、本発明で使用される「カンプトテシン化合物」に含まれる。本発明の組成物および方法で使用されるカンプトテシン化合物の投薬量は、医薬および薬理の分野における当業者によって容易に定められる。
【００２６】
特定の投薬量および投与期間は、被験者の体重および状態に特に依存するであろう。例えば、Ｏ’Ｌｅａｒｙら，カンプトテシン類：その投与スケジュールのレビュー（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ：Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｔｈｅｉｒ  Ｓｃｈｅｄｕｌｅｓ  Ｏｆ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．，３４（１０）：１５００（１９９８）；Ｍａｔｈｉｊｓｓｅｎ，ＲＨ．，トポイソメラーゼＩインヒビターイリノテカン（ＣＰＴ−ｌｌ）およびトノテカンの薬効薬理（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  Ｏｆ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  （Ｃｐｔ−ｌｌ）  Ａｎｄ  Ｔｏｎｏｔｅｃａｎ），Ｃｕｒｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ，２（２）：１０３（２００２）；Ｔａｋｉｍｏｔｏ，Ｃ．Ｈ．ら，カンプトテシン類の臨床適用（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｓ），Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１４００（１−３）：１０７（１９９８）；およびＲｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｇａｌｉｎｄｏ，Ｃ．ら，抗ガン治療におけるトポイソメラーゼＩインヒビターの臨床使用（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ  Ｉ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  Ｉｎ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ），Ｍｅｄ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｏｎｃｏｌ．，３５（４）：３８５（２０００）参照。
【００２７】
バイオアベイラビリティ
薬剤組成物は、カンプトテシン用に本明細書では提供され、その中で閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型は、生理的条件下、例えばインビボで、安定であり、溶解性がある。さらに、本明細書で記載された組成物は、カンプトテシン類の高い経口バイオアベイラビリティ（例えば、ＧＩ吸収）を与えるものである。特に、本発明の薬剤組成物は、治療が必要な患者に対する経口投与に際してカンプトテシンラクトン型化合物のバイオアベイラビリティを選択的に増加させる。
【００２８】
薬剤組成物
異常細胞増殖をコントロールすることに効果的な、カンプトテシンの閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型、またはその閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型類似体と、生理的条件下でラクトン型化合物の溶解性を増加させ、患者への経口投与に際して選択的にラクトン型化合物のバイオアベイラビリティを増加させる少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーとを含む、薬剤組成物が本明細書で提供される。
【００２９】
本発明の経口製剤の一つの類は、両親媒性ブロックコポリマーとカンプトテシンとを含む。これらの組成物中で、ブロックコポリマーは、代謝酵素に加えてＢＣＲＰおよび他のトランスポーターによるその阻害効果によって、カンプトテシンラクトン型の腸吸収を増加させる。同時に、カンプトテシンのカルボン酸塩型においてはブロックコポリマーの増強効果が、それほど顕著ではない、または全く見られない。結果として、薬物ラクトン型のＡＵＣおよびカルボン酸塩に対するラクトンＡＵＣ比は、非製剤化薬物が経口投与されたときに観察されるものと比較して、顕著に増加する。したがって、患者への経口投与に際して、ラクトン型の経口バイオアベイラビリティは、カンプトテシンまたはその類似体の直接関連するカルボン酸塩型より顕著に増加する。
【００３０】
本明細書に記載された製剤の各々に関して、カンプトテシン化合物は、好ましくはラクトン環を含む。これらの多様な実施の形態に従って、薬剤組成物は好ましくは、ｐＨが７以下であり、好ましくはｐＨが６以下であり、ある実施の形態では、ｐＨが５と６の間である。
【００３１】
両親媒性ブロックコポリマー
種々の実施の形態に従って、カンプトテシンのラクトン型の増加した腸吸収を与える両親媒性ブロックコポリマーは、限定されるものではないが、ポリ−エチレンオキシド、ポリ−プロピレンオキシド；ポリ−エチレンオキシド−アルファトコフェロール；ポリ−エチレンオキシド−ポリアルキル；ポリ−エチレンオキシドポリ−ラクチド；ポリ（アクリル酸）−ｇ−ポリ（エチレンオキシド）−ｂ−ポリ（プロピレンオキシド）−ｂ−ポリ（エチレンオキシド）などの群、同様に他の同様のブロックまたはグラフトコポリマーから選ばれる。好ましい組成物は、ポリ−エチレンオキシドおよびポリ−プロピレンオキシド群を含み、この際前記ブロックコポリマーのポリ（オキシプロピレン）部分は、ブロックコポリマーの少なくとも５０重量％含む。
【００３２】
異常細胞増殖をコントロールするのに効果的なカンプトテシンの閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型、またはその閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型類似体と、生理的条件下でラクトン型化合物の溶解性を高め、ラクトン型化合物のバイオアベイラビリティを選択的に増加させる両親媒性ブロックコポリマーと、カンプトテシンまたはその類似体の閉環したアルファ−ヒドロキシラクトン型のラクトン構造を保護し、ＧＩ中で薬物の放出を維持し、コントロールしまたは遅らせ、それによりより高い薬物循環時間が達成されることによってその血漿薬物動態を向上させる少なくとも一つの生体接着性ポリマーとを、含む薬剤組成物が提供される。
【００３３】
プルロニック
総称ポロキサマー（ポリエーテル）および商品名ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）（ＢＡＳＦ社，ノースマウントオリーブ、ニュージャージー）、またはＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＩＣＩ）として知られるＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックコポリマーのようなポリマー界面活性剤が、本発明の組成物の多数の実施形態における要素として用いられる。これらの実際の例が下記表１に示されている：
【００３４】
【表１−１】
2006527760.tif 000003
【００３５】
【表１−２】
2006527760.tif 000004
【００３６】
生体接着性ポリマー
本明細書で記載されている種々の組成物によれば、ＧＩ中で製剤の増加した粘膜接着を与える生体接着性ポリマー成分は、製剤の全体的な効果において重要な要素である。重要な要件は、腸の粘膜表面に適用されたときに、下で記載されているが、ポリマーが生体接着相互作用（「粘膜接着」）を生み出さなければならないということである。特記しない限り、本明細書で述べられた実施はラット腸粘膜上でなされた測定を指す。
【００３７】
粘膜接着性または生体接着性ポリマー（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ）は、口、胃、腸、鼻、眼、肺、あるいは尿生殖器組織上に存在する粘膜表面に接着することにより、薬物の局在的な運搬を高めうる。本発明の組成物の要素として生体接着性ポリマーは、溶解性および非溶解性、生体分解性および非生体分解性のポリマーを含む。ここで記載されている組成物中の生体接着性ポリマーは、加水分解または熱可塑性の、ホモポリマー、コポリマーまたは混合物、天然または合成でありうる。好ましいポリマーとしては、コントロールされた膨張、接着特性を有する合成ポリマーが挙げられる。最も好ましいポリマーはポリアクリル酸（ＰＡＡ）およびポリエーテルのコポリマーであり、例えば、消化管に投与されたときに、非常に良好な生体接着特性を有する。腸の粘膜表面に適用されたとき、ポリマーが生体接着相互作用を発揮することが要件である。
【００３８】
インビトロおよびインビボ実験において、プルロニック−ＰＡＡコポリマー（Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｓ．３１，１９７（１９９８），Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５３，１０９（２００１））がＰＡＡと少なくとも同等程度あるいはそれ以上に粘膜接着性であることも示されている。したがって、発明の生体接着成分のために本明細書で引用されている好ましい実施の形態である、プルロニック−ＰＡＡコポリマーが、粘膜表面上への製剤の維持時間を効果的に長くさせ、運搬される薬物のバイオアベイラビリティを高めうる。
【００３９】
ポリマーの２つの種類が有用な生体接着特性を示すようである：親水性ポリマーおよびハイドロゲル。親水性ポリマーの大きな類の中で、カルボキシル基を含むもの（例えば、ポリ（アクリル酸））が、最も良好な生体接着特性を示す。他の研究において、最も有望なポリマーは、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースおよびメチルセルロースであった。これらの材料のうち、水溶性のものもあるし、他方ハイドロゲルのものもある。
【００４０】
ＰＡＡとポリエーテルとがＣ−Ｃ結合を介して繋がれているところの、ＰＡＡとプルロニックとのグラフト−コポリマーは、本明細書では好ましい実施の形態として役割を果たす。プルロニック−ＰＡＡコポリマーの水溶液は、臨界ミセル濃度および温度以上で形成されるミセル凝集体が多量に存在するにもかかわらず、肉眼での相分離は全く示さない。実質的には、コポリマー中では、どんなプルロニックであっても使用できる。
【００４１】
ポリマーの平滑な表面が浸食するにしたがって、カルボキシル基が外の表面に露出してくる、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ無水物、およびポリオルトエステルのような速やかに生体内で分解するポリマーは、生体接着薬物運搬システムにもまた適している。加えて、ポリ無水物やポリエステルのような、不安定な結合を含むポリマーは、その加水分解反応性がよく知られている。
【００４２】
代表的な合成ポリマーとしては、ポリフォスファジン、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアミド、ポリカーボネート、ポリアルキレン、ポリアクリルアミド、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、ポリアルキレンテレフタラート、ポリビニルエーテル、ポリビニルエステル、ポリビニルハロゲン化物、ポリビニルピロリドン、ポリグリコリド、ポリシロキサン、ポリウレタンおよびそのコポリマーが挙げられる。有意な他のポリマーとしては、限定されるものではないが、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルセルロース、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸フタル酸セルロース、カルボキシメチルセルロース、トリ酢酸セルロース、セルロース硫酸ナトリウム塩、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリ（メタクリル酸エチル）、ポリ（メタクリル酸ブチル）、ポリ（メタクリル酸イソブチル）、ポリ（メタクリル酸ヘキシル）、ポリ（メタクリル酸イソデシル）、ポリ（メタクリル酸ラウリル）、ポリ（メタクリル酸フェニル）、ポリ（アクリル酸メチル）、ポリ（アクリル酸イソプロピル）、ポリ（アクリル酸イソブチル）、ポリ（アクリル酸オクタデシル）、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（酢酸ビニル）、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルピロリドン、およびポリビニルフェノールが挙げられる。代表的な生体分解性ポリマーとしては、ポリラクチド、ポリグリコリド、およびそのコポリマー、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（酪酸）、ポリ（吉草酸）、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリ無水物、ポリオルトエステル、その混合物およびコポリマーが挙げられる。
【００４３】
アルギン酸塩やカルボキシメチルセルロースのような表面上にカルボキシル基が露出していて負に帯電しているハイドロゲルが、キトサンのような正に帯電しているハイドロゲルと同様に、適切な生体接着性システムである。
【００４４】
方法
本発明の組成物は、悪性血液疾患および腫瘍と同様に、ガンのような異常細胞増殖に関係した病気の予防および／または治療を対象としたものである。したがって、本発明の組成物は治療を必要としているか、または異常細胞増殖に関係した病気にかかっている患者に有利に投与される。ここで使われる患者という語は、例えば、ヒトを含む哺乳類被験者を指す。一つの実施の形態では、方法は：本発明による薬剤組成物を提供する；およびそれらを必要とする患者に経口で薬剤組成物の治療に効果的な量を投与する：ことを含む。
【００４５】
実施の形態
ある実施の形態においては、本発明の薬剤組成物は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５のような少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーおよびトポテカンのようなカンプトテシンの水溶性誘導体を含む。この実施の形態において、（それぞれの以下の実施例で示されるように）Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５または他の類似のブロックコポリマーは薬物の化学的安定性を変化させない。しかしながら、それは、薬物のラクトン型の腸吸収を選択的に増加させ、その結果ラクトンの血漿ＡＵＣを増加させ、カルボン酸塩に対するラクトン比率を増加させる。
【００４６】
他の実施の形態において、薬剤組成物は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５のような少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーおよび９−ニトロ−２０（Ｓ）−カンプトテシンのような溶解性があまりよくないカンプトテシンを含む。溶解の際、薬物はブロックコポリマーミセル中に溶解され、好ましくはミセルの水非混和性疎水性コア中に局在される。この実施の形態では、薬物のラクトン型の腸吸収において選択的な増加がみられるのに加えて、ブロックコポリマーミセルはさらに、薬物の溶解性を増加させ、水性環境から分離する、すなわちラクトンの加水分解の割合を減ずることによってラクトンの安定性も増加させる。
【００４７】
さらに別の実施の形態において、薬剤組成物は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５のような少なくとも一つの両親媒性ブロックコポリマーと、カンプトテシンまたはその誘導体と、組成物に混合されるか、または両親媒性コポリマーに結合しているポリアクリル酸のような組成物の粘膜接着を増加させる成分とを含む、薬剤組成物を提供する。この実施の形態において、ラクトンの腸管吸収を選択的に増加させ、薬物の溶解性を増加させるのに加えて、組成物はさらに血漿薬物動態をさらに制御することを可能とする持続放出特性を与える。
【００４８】
さらに好ましい実施の形態において、粘膜接着性で、カンプトテシン薬（イリノテカン）の加水分解を阻害し、持続放出によって薬物のバイオアベイラビリティを高めるポリ（アクリル酸）−ｇ−ポリエーテル組成物が提供される。
【００４９】
粘膜接着
ポリマーの生体接着、すなわち、高分子が生物学的組織に接着することができるかどうか、は生物学的表面と合成表面との間のいかなる結合の形成をも指す現象である。［Ｄ．Ｅ．Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，生体接着ドラッグデリバリーシステム、基本となる、新規なアプローチおよび応用（ｉｎ  Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，  Ｎｏｖｅｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ），Ｅ．Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，Ｄ．Ｅ．Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ，ａｎｄ  Ｃ．−Ｍ．Ｌｅｈｒ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒによる編集，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９），ｐｐ．１−２３］。もし、生物学的基質が粘膜であるなら、生体接着は粘液層とポリマーとの間で起こり、この現象は粘膜接着と呼ばれる。粘膜は、局所の薬物運搬製剤（胃腸、口、眼、鼻、口腔、直腸、および膣）が接触するために投与される組織であるため、粘膜接着は薬物運搬を長くし、コントロールすることに有用である［Ｓ．Ｔａｍｂｕｒｉｃ  ａｎｄ  Ｄ．Ｑ．Ｍ．Ｃｒａｉｇ，ドラッグデリバリーシステムの化学的側面（ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ），Ｄ．Ｒ．  Ｋａｒｓａ，Ｒ．Ａ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎによる編集，Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（１９９６）ｐｐ．１１−４０］。
【００５０】
ある研究は、ポリマーによる粘液の湿潤それに続く相互浸透およびポリマーと粘液成分とのもつれおよびいろいろな度合いで粘膜接着に影響を与える初期過程としてポリマー−粘液結合形成について言及している［Ｄ．Ｅ．Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，生体接着ドラッグデリバリーシステム、基本となる、新規なアプローチおよび応用（ｉｎ  Ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，Ｎｏｖｅｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ），Ｅ．Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，Ｄ．Ｅ．Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ，ａｎｄ  Ｃ．−Ｍ．Ｌｅｈｒ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒによる編集，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  （１９９９），ｐｐ．１−２３；Ｄ．Ｄｕｃｈｅｎｅ，Ｆ．Ｔｏｕｃｈａｒｄ，ａｎｄ  Ｎ．Ａ．Ｐｅｐｐａｓ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｉｎｄ．Ｐｈａｒｍ．，１４，２８３（１９８８）］。粘膜接着性であるため、ポリマー溶液は、以下の特性を少なくとも一つ有することが必要であることが述べられている［Ｎ．Ａ．Ｐｏｐｐａｓ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｂｕｒｌ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，２，２５７（１９８５）］：水素結合を形成できること、アニオン帯電、高い分子量および粘液ネットワークを浸透させるほどに十分な柔軟性、および粘液上への拡散を引き起こす表面張力。多数の粘膜接着性ポリマーは、カルボキシル基を有するポリアニオンである［Ｓ．−Ｈ．Ｓ．Ｌｅｕｎｇ  ａｎｄ  Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，高分子電解質ゲル．特性、調製、および適用（Ｉｎ  Ｐｏｌｙｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ  Ｇｅｌｓ．Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ），Ｒ．Ｓ．Ｈａｒｌａｎｄ，Ｒ．Ｋ．Ｐｒｕｄ’ｈｏｍｍｅによる編集，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９９２）ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ４８０，ｐｐ．２６９−２８４；Ｈ．Ｓ．Ｌｅｕｎｇ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，水溶性ポリマー．合成、溶液特性、および適用（ｉｎ  Ｗａｔｅｒ−Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ），Ｓ．Ｗ．Ｓｈａｌａｂｙ，Ｃ．Ｌ．ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ，ａｎｄ  Ｇ．Ｂ．Ｂｕｔｌｅｒによる編集，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ（１９９１）ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ４６７，ｐｐ．３５０−３６６］。しかしながら、ノニオンの（セルロースエーテル、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（エチレンオキシド）、など）およびカチオンの（キトサン）粘膜接着性ポリマーが知られている［Ｓ．Ｔａｍｂｕｒｉｃ  ａｎｄ  Ｄ．Ｑ．Ｍ．Ｃｒａｉｇ，ドラッグデリバリーシステムの化学的適用（ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｓｐｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ），Ｄ．Ｒ．  Ｋａｒｓａ，Ｒ．Ａ．Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎによる編集，Ｔｈｅ  Ｒｏｙａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ（１９９６）ｐｐ．１１−４０］。静電相互作用に加えて、湿潤および拡���が生体接着において重要な要素として認識されており、疎水性相互作用の寄与も重要である。いくつかの文献は存在するが［Ｊ．Ｍ．Ｇｕ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．Ｌｅｕｎｇ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．，５，２１（１９８８）；Ｐ．Ｏ．Ｇｌａｎｔｚ，Ｔ．Ａｒｎｅｂｒａｎｔ，Ｔ．Ｎｙｌａｎｄｅｒ，ａｎｄ  Ｒ．Ｅ．Ｂａｉｅｒ，Ａｃｔａ  Ｏｄｏｎｔｏｌ．Ｓｃａｎｄ．，５７，２３８（ｌ９９９）；Ｒ．Ｂｏｓ，Ｈ．Ｃ．Ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｍｅｉ，ａｎｄ  Ｈ．Ｊ．Ｂｕｓｓｃｈｅｒ，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．，２３，１７９（１９９９）］、生体接着におけるポリマー疎水性の役割の一般に受け入れられたものは存在しない。これは、ムチン層の機構と物理化学的特性の機構的理解の欠如に起因しうる。
【００５１】
ムチンの骨格は、主としてセリンおよびスレオニン残基へのｏ−グリコシド結合を介してオリゴ糖で密に置換されているタンパクである。親水性側鎖のオリゴ糖の長さは１から２０糖残基まで変化する。糖タンパク鎖（サブユニット）は、大きな（Ｍｒ１０−４０百万Ｄａ）構造を含む、ジスルフィド結合によってしばしば互いに連結される［Ｃ．Ｗｉｃｋｓｔｒoｍ，Ｊ．Ｒ．Ｄａｖｉｅｓ，Ｇ．Ｖ．Ｅｒｉｋｓｅｎ，Ｅ．Ｃ．Ｖｅｅｒｍａｎ，ａｎｄ  Ｉ．Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３３４，６８５（１９９８）；Ｄ．Ｊ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｊ．Ｒ．Ｄａｖｉｅｓ，Ｍ．Ｋｒａａｙｅｎｂｒｉｎｋ，Ｐ．Ｓ．Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｊ．Ｋ．Ｓｈｅｅｈａｎａｎｄ  Ｉ．Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２６５，１７９（１９９０），Ｉ．Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ  ａｎｄ  Ｊ．Ｋ．Ｓｈｅｅｈａｎ，Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，２１，２２５（１９８４）］。ムチンのアポプロテイン骨格中で、オリゴ糖が非常に高い密度でグラフトしている親水性ドメインは、糖残基がないむきだしのドメインに入れ替わる［Ｉ．Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ  ａｎｄ  Ｊ．Ｋ．Ｓｈｅｅｈａｎ，Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，２１，２２５（１９８４）；  Ｊ．Ｋ．Ｓｈｅｅｈａｎ，Ｄ．Ｊ．Ｔｈｏｒｎｔｏｎ，Ｍ．Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ａｎｄ  Ｉ．Ｃａｒｌｓｔｅｄｔ，Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．，１４４，Ｓ４（１９９１）］。これらのむきだしのタンパク質部分は、イオン強度中で変化に対応するために折りたたみうるし、広がりうるが、加水分解攻撃をうけやすく、酵素、無機陽イオン、脂肪酸、アルブミン、およびバクテリアとムチンとの相互作用に少なくとも部分的には関与する［Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｄ．Ｐ．Ｂａｒｒ，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，１，３２５（２０００）］。
【００５２】
牛子宮頸部ムチンの構造のモデルとしてジスルフィド架橋を経た架橋と疎水性部分間の相互作用とを仮定している［Ｋ．Ｓ．Ｐ．Ｂｈｕｓｈａｎａ−Ｒａｏ  ａｎｄ  Ｐ．Ｌ．Ｍａｓｓｏｎ，健常時および疾病時の粘液（ｉｎ  Ｍｕｃｕｓ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ），Ｍ．Ｅｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｄ．Ｖ．Ｐａｓｋｅによる編集，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７７），ｐｐ．２７５−２８２］。低いｐＨでの胃のムチンのゾル−ゲル転移は、疎水性相互作用を通じたムチン高分子の架橋による［Ｘ．Ｃａｏ，Ｒ．Ｂａｎｓｉｌ，Ｋ．Ｒ．Ｂｈａｓｋａｒ，Ｓ．Ｔ．Ｂｒａｄｌｅｙ，Ｊ．Ｔ．ＬａＭｏｎｔ，Ｎ．Ｎｉｕ，ａｎｄ  Ｎ．Ｈ．Ａｆｄｈａｌ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．７６，１２５０（１９９９）］。低いｐＨで、ムチン高分子は、ムチン分子の疎水性部分を露出するように広がった構造を採用し、したがってこれらを鎖間集合体に利用可能にさせる。集合体は架橋として働く。
【００５３】
インビトロおよびインビボ実験から、プルロニック−ＰＡＡコポリマー［Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｓ．３１，１９７（１９９８），Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５３，１０９（２００１）］がＰＡＡと少なくとも同程度またはより高い粘膜接着性であることが示された。したがって、本発明の生体接着成分のために本明細書で好ましい実施の形態であるプルロニック−ＰＡＡコポリマーは、粘膜表面上の製剤の滞留時間を効果的に延ばし、運搬された薬物のバイオアベイラビリティを高めうる。
【００５４】
上述したように、粘膜接着性ポリマーは、口、胃、腸、鼻、眼、肺、および尿生殖器の組織上に存在する粘膜表面に接着することによって薬物の局所的運搬を高めうる。粘膜接着性未変性高分子電解質は、一般的には生理学的ｐＨでイオン化され、したがって投与部位から侵食して生物学的液体と接触して速やかに膨張し、溶解して、投与部位から分解する。高分子電解質がそのようなポリマーと結合している薬物の滞留時間を高めることができるかどうかがそれ故考慮されるであろう。構造アプローチの多様性は、薬物滞留時間を高めることに向けられて、また高分子電解質の粘膜接着性の特性を維持しつつ、放出割合を低下させるために開発されてきた。一般的には、高分子電解質は、より疎水的なポリマーと混合され、結果増強された薬物−ポリマー相互作用とより高い粘度とを得る。高い粘度製剤の投与は、扱いが難しいので、液状薬物−ポリマー製剤が投与部位でゲル化することがしばしば好まれる。そのようなｉｎ  ｓｉｔｕゲル化システムは、液体の温度、ｐＨ、またはイオン組成に反応して可逆的なゾル−ゲル転移を起こす［Ａ．Ｊｏｓｈｉ，Ｓ．Ｄｉｎｇ，Ｋ．Ｊ．Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ，米国特許第５，２５２，３１８号，１９９３年１０月１２日；Ｋ．Ｊ．Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃ．Ｌ．Ｂａｕｓｔｉａｎ，米国特許第５，５９９，５３４号，１９９７年２月４日；Ｓ．Ｋｕｍａｒ  ａｎｄ  Ｋ．Ｊ．Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，８４，３４４（１９９５）９３．Ｓ．Ｋｕｍａｒ，Ｂ．Ｏ．Ｈａｇｌｕｎｄ，ａｎｄ  Ｋ．Ｊ．Ｈｉｍｍｅｌｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｏｃｕｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１０，４７（１９９４）；Ａ．Ｒｏｚｉｅｒ，Ｃ．Ｍａｚｕｅｌ，Ｊ．Ｇｒｏｖｅ，ａｎｄ  Ｂ．Ｐｌａｚｏｎｎｅｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，５７，１６３（１９８９）；Ｓ．Ｃ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｄ．Ｄｏｎｏｖａｎ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１２，１４７（１９８２）；Ｊ．Ｌ．Ｈａｓｌａｍ，Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ，ａｎｄ  Ａ．Ｒ．Ｍｌｏｄｏｚｅｎｉｅｃ，米国特許第４，４７４，７５２号（１９８４）；Ｋ．Ｌｉｎｄｅｌｌ  ａｎｄ  Ｓ．Ｅｎｇｓｔｒoｍ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，９５，２１９（１９９３）；Ｈ．−Ｒ．Ｌｉｎ，Ｋ．Ｃ．Ｓｕｎｇ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ，６９，３７９（２０００）；Ｏ．Ｆｅｌｔ，Ｖ．Ｂａｅｙｅｎｓ，Ｍ．Ｚｉｇｎａｎｉ，Ｐ．Ｂｕｒｉ，ａｎｄ  Ｒ．Ｇｕｒｎｙ，コントロールされたドラッグデリバリーの専門辞典（Ｉｎ  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ），Ｅ．Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚによる編集，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９９），Ｖｏｌ．２，ｐｐ．６０５−６２９］。しかしながら、物理的な混合に基づく製剤では、コロイド的に不安定で、生理学的ｐＨで相分離か分離を起こしやすい。ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化システムの安定性は、害のない高分子電解質ブロック−コポリマーの利用により、解決されうる。界面活性剤−変性ポリ（アクリル酸）（ＰＡＡ）は、ｉｎ  ｓｉｔｕゲル化システムの選択肢の一つである［Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，材料の表面および界面のハンドブック（ｉｎ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｆ���ｃｅｓ  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ  ｏｆ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ），Ｈ．Ｓ．Ｎａｌｗａによる編集，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００１），Ｖｏｌ．４，Ｃｈａｐｔｅｒ７；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍａｇｎｅｒ，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１５，６７９２（１９９９）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍ．Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１５，８６２７（１９９９）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ  １０２，１０７４１（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１４，５８０６（１９９８）；Ａ．Ｋ．Ｈｏ，Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ａ．Ｊ．Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ，Ｊ．Ｍ．Ｐｅｒｅｒａ，Ｇ．Ｗ．Ｓｔｅｖｅｎｓ，ａｎｄ  Ｔ．Ａ．Ｈａｔｔｏｎ，Ｌａｎｇｍｎｉｒ，１７，３５３８（２００１）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｄ．Ｐ．Ｂａｒｒ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２，３６４９（１９９９）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５３，５４１（２００１）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５３，１０９（２００１）］。
【００５５】
ＰＡＡは、粘膜接着性ポリマーの工業標準である。［Ｈ．  Ｐａｒｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，４，４５７（１９８７）；Ｓ．Ａｎｌａｒ，Ｙ．Ｃａｐａｎ，ａｎｄ  Ａ．Ａ．Ｈｉｎｃａｌ，Ｐｈａｒｍａｚｉｅ，４８，２８５（１９９３）；Ｓ．Ｔａｍｂｕｒｉｃ  ａｎｄ  Ｄ．Ｑ．Ｃｒａｉｇ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１３，２７９（１９９６）］。一般名ポロキサマー、商品名プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（ＢＡＳＦ）またはＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃ（ＩＣＩ）として知られるＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯブロックコポリマーのような害のないポリマー界面活性剤と結合しているＰＡＡが、物理的混合では、安定性が欠如しているｉｎ  ｓｉｔｕゲル化システムで温度−およびｐＨ感受性をもたらす。プルロニックは、食品添加剤および薬剤成分として米国食品医薬品局によって承認された唯一の最新の合成熱粘着性ポリマーである［ＢＡＳＦ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ．ＦＤＡ  ａｎｄ  ＥＰＡ  ｓｔａｔｕｓ．ＢＡＳＦ社，ノースマウントオリーブ，ニュージャージー，１９９３］。一般的に局所製剤中で安全であると認められているＰＡＡ［カーボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）（登録商標）、医薬品中で証明されたポリマー、Ｂｕｌｌｅｔｉｎ１４．ＢＥ  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，クリーブランド，オハイオ州，１９９４］とプルロニックの組合せ、新規なポリマーをもたらすことになるが、はほとんどの他のｐＨ−および温度感受性ポリマーと比較して害がなく、良好な制御段階を有する。インビトロの放出研究で、３４〜３７℃で薬物−ポリマー溶液のゲル化が、ゲルからのポリマーおよび薬物の侵食（溶解）速度を低下させることに加えて、薬物放出速度を顕著に高めることにつながることが研究によって示された。ＰＡＡおよびプルロニックのグラフトコポリマー、そのためにＰＡＡとポリエーテルがＣ−Ｃ結合を介してつながっている［Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｔ．Ｈ．Ｅ．Ｍｅｎｄｕｍ，Ｍ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，ａｎｄ  Ｅ．Ｃ．Ｌｕｐｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｐｏｌｙｍ．Ｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｅｎｇ．，７６，２７３（１９９７）；Ｍ．Ｊ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｒ．Ｐｉｋｅ，Ｅ．Ｃ．Ｌｕｐｔｏｎ，ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｐｏｌｙｍ．Ｍａｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｅｎｇ．，７６，２７６（１９９７）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｅ．Ｒｏｏｓ，Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ  ａｎｄ  Ｍ．Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ，４８，３０５（１９９７）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｔ．Ｈ．Ｅ．Ｍｅｎｄｕｍ，Ｍ．Ｊ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｅ．Ｃ．Ｌｕｐｔｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｐｏｌｙｍ．Ｐｒｅｐｒ．，３８，６０２（１９９７）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｊ．Ｏｒｋｉｓｚ  ａｎｄ  Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｐｏｌｙｍ．Ｐｒｅｐｒ．，３８，６２６（１９９７）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ．１０２，１９５６（１９９８）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｍ．Ｇ．Ｇｏｌｄｆｅｌｄ，Ｐｏｌｙｍ．Ｐｒｅｐｒ．，３９，６８１（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌ���ｓ，３１，６１４８（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｉｎｄ．Ｅｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，３７，４２６７（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂ．１０２，１０７３６（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｌ．Ｓａｌｖａｔｉ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．，１０，６７８（１９９９）；Ｐ．Ｄ．Ｔ．Ｈｕｉｂｅｒｓ，Ｌ．Ｅ．；Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｂ．Ｈ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ａｎｄ  Ｔ．Ａ．Ｈａｔｔｏｎ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２，４８８９（１９９９）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｃｏｌｂｙ，Ｌａｎｇｍｎｉｒ，１６，２６０９（２０００）；Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｄ．Ｐ．Ｂａｒｒ，Ｐｏｌｙｍ．Ｐｒｅｐｒ．，４１，１７０９（２０００）；Ｎ．Ｐｌｕｃｋｔａｖｅｅｓａｋ，Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，ａｎｄ  Ｒ．Ｈ．Ｃｏｌｂｙ，Ｐｒｏｃ．ＸＩＩＩｔｈ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｇｒｅｓｓ  ｏｎ  Ｒｈｅｏｌｏｇｙ，  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ，２０００，Ｖｏｌ．３，ｐｐ．３０７−３０９；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｉｎｄ．Ｅｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，４０，２４３７（２００１）；Ｌ．Ｏｌｉｖｉｅｒｉ，Ｍ．Ｓｅｉｌｌｅｒ，Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｅ．Ｒｏｎ，Ｐ．Ｃｏｕｖｒｅｕｒ，ａｎｄ  Ｊ．−Ｌ．Ｇｒｏｓｓｉｏｒｄ，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，１８，６８９（２００１）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｅ．Ｃ．Ｌｕｐｔｏｎ，Ｍ．Ｅ．Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．Ｔｉｍｍ，Ｇ．Ｗ．ＭｃＫｉｎｎｅｙ，Ｍ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｂ．Ｈａｎｄ，Ｈ．Ｌ．Ｅｍｅｒｓｏｎ，  ａｎｄ  Ｈ．Ｈ．Ｄｏｙｌｅ，国際特許出願国際公開第９８／２９４８７号（１９９８）；Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｏｒｋｉｓｚ，Ｍ．Ｋｅａｒｎｅｙ，Ｓ．Ｌｕｃｚａｋ，Ｍ．Ｊ．Ｔｉｍｍ，Ｓ．Ｊ．Ｗｒｏｂｅｌ，国際特許出願国際公開第９８／０６４３８号（１９９８）；Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｂ．Ｊ．Ｈａｎｄ，Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｋｅａｒｎｅｙ，Ｍ．Ｅ．Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｐ．Ｍ．Ａｈｅａｒｎ，Ｓ．Ｌｕｃｚａｋ，ａｎｄ  Ｔ．Ｈ．Ｅ．Ｍｅｎｄｕｍ，国際特許出願国際公開第９８／５０００５号（１９９８）；Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｅ．Ｃ．Ｌｕｐｔｏｎ，Ｍ．Ｅ．Ｓｃｈｉｌｌｅｒ，Ｍ．Ｊ．Ｔｉｍｍ，  ａｎｄ  Ｇ．ＭｃＫｉｎｎｅｙ，米国特許第５，９３９，４８５号（１９９９）；Ｅ．Ｓ．Ｒｏｎ，Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｍ．Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，国際特許出願国際公開第００７６０３号Ａ２（２０００）］が、本明細書で好ましい実施の形態の役割を果たす。プルロニック−ＰＡＡコポリマーの水溶液は、臨界ミセル濃度および温度以上で形成されるミセル凝集物が多量に存在するにもかかわらず、肉眼で相分離を起こさない［Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｉｎｄ．Ｅｎｇ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，３７，４２６７（１９９８）；Ｐ．Ｄ．Ｔ．Ｈｕｉｂｅｒｓ，Ｌ．Ｅ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｂ．Ｈ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ａｎｄ  Ｔ．Ａ．Ｈａｔｔｏｎ，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，３２，４８８９（１９９９）］。いかなるプルロニックも実質的にはコポリマー中で利用されうるように、プルロニック−ＰＡＡ溶液中の凝集物は、もとのプルロニックのＬＣＳＴとは関係しない。
【実施例】
【００５６】
実施例
実施例１
プルロニックＦ１２７を含む製剤中のトポテカンの分配分析
分配係数Ｐは、キャリアによって形成されるミセルの中に滞留するトポテカンの分子傾向を示す：Ｐ＝［ｘ］ｍ／［ｘ］ｗ、式中［ｘ］ｍはミセルの中のトポテカンの実際の濃度であり、［ｘ］ｗは水相中のトポテカンの実際の濃度である。本実施例で調べたキャリアーは、ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７（ＢＡＳＦ）である。分配係数は、キャリアー濃度への蛍光依存を利用して、次式にトポテカンの測定した蛍光をあてはめることによって評価した（Ｋａｂａｎｏｖ  Ａ．ら（１９９５），Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ２８．２３０３  ２３１４）：（Ｉｍａｘ−Ｉ０）／（Ｉ−Ｉ０）−１＝１／（θＰ）−１／Ｐ
式中：
Ｉ−蛍光
Ｉｍａｘ−キャリアーの最大濃度での蛍光
Ｉ０−キャリアーの最小濃度での蛍光
Ｐ−分配定数
θ＝０．０１ｖ（［キャリアー］−ＣＭＣキャリアー），ミセル層の体積部分
ＣＭＣキャリアー＝０．０２％−プルロニック１２７の臨界ミセル濃度
ｖ−ミセルの部分比容、約ｖ＝０．８
［キャリアー］−キャリアーの濃度。
【００５７】
メタノール中トポテカン塩酸塩０．１ｍＭ（０．０４６ｇ／ｍＬ）溶液の３０ミクロリットルを９６ウェル石英プレート（Ｈｅｌｌｍａ）の各々のウェル中に入れ、窒素下溶媒を蒸発させた。プレートを真空で乾燥した。キャリアーの溶液をウェルに添加し、それぞれのウェルに３０ミクロリットル添加した。溶液中のキャリアーの濃度は０．００３％から１０％まで変化させた。トポテカンの最終濃度は０．０１０ｍＭであった。プレートを３７℃で２時間、インキュベートし、プレートリーダーＦＬ６００（ＢｉｏＴｅｋ）を使って溶液の蛍光（励起３６０ｎｍ、発光５３０ｎｍ）を測定した。
【００５８】
トポテカンの蛍光がキャリアー濃度に依存することに基づいて評価された分配係数は、ポリマーミセル中のトポテカンの好ましい蓄積がなかったことを示す約１であった。
【００５９】
実施例２
プルロニックＰ８５を含む製剤中のトポテカンの溶解分析
較正：Ｈｅｌｍａ石英プレート上３連で０．００００６〜０．００１ｍｇ／ｍＬメタノール中トポテカン溶液０．３００ｍＬサンプルの蛍光を、励起フィルター波長／バンド幅３６０／４０ｎｍ、発光フィルター５３０／２５ｎｍ、感度７０であるＢｉｏ−Ｔｅｋ  ＰＬ６００蛍光プレートリーダーを使用して測定した。平均蛍光は一次方程式にあてはめ、算出した：
［蛍光］＝２６９７６９７．１１Ｃ＋６１．２２
式中Ｃ＝トポテカン濃度［ｍｇ／ｍＬ］。
【００６０】
溶解性：３連で１ｍｇトポテカンサンプルと各バッファーまたはキャリアー溶液の１ｍＬとを室温で１時間、振とうしながらインキュベートした。その後、サンプルをアクロディスクＣＲ、ＰＴＦＥシリンジフィルター、直径４ｍｍ、孔径０．４５μｍＧｅｌｍａｎ部品Ｎｏ．４４７２でろ過した。ろ過液をメタノールで１００倍に希釈し、上述の較正を使用した蛍光測定によって、トポテカン最終濃度を決定した。
【００６１】
溶液                  トポテカン濃度［ｍｇ／ｍＬ］
ＰＢＳ                ０．０６２±０．００５
ＰＢＳ中１％Ｐ８５    ０．０９５±０．００５
ＰＢＳ中３％Ｐ８５    ０．１０５±０．００５
この際、ＰＢＳはリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２である。
【００６２】
実施例３
プルロニックＰ８５を含む製剤中のカンプトテシンの溶解分析
較正：Ｈｅｌｍａ石英プレート上３連で０．００００３〜０．０００５ｍｇ／ｍＬを含むメタノール中カンプトテシン溶液０．３００ｍＬの蛍光を、励起フィルター波長／バンド幅３６０／４０ｎｍ、発光フィルター５３０／２５ｎｍ、感度７０であるＢｉｏ−Ｔｅｋ  ＦＬ６００蛍光プレートリーダーを使用して測定した。平均蛍光は一次方程式にあてはめ、算出した：
［蛍光］＝１４９３４３８．２８Ｃ＋２８．７５
式中Ｃ＝カンプトテシン濃度［ｍｇ／ｍＬ］。
【００６３】
溶解性：３連で０．１ｍｇカンプトテシンサンプルと各バッファーまたはキャリアー溶液の１ｍＬとを室温で１時間、振とうしながらインキュベートした。その後、サンプルをアクロディスクＣＲ、ＰＴＦＥシリンジフィルター、直径４ｍｍ、孔径０．４５μｍＧｅｌｍａｎ部品Ｎｏ．４４７２でろ過した。ろ過液をメタノールで１００倍に希釈し、上述の較正を使用した蛍光測定によって、カンプトテシン最終濃度を決定した。
【００６４】
溶液                  カンプトテシン濃度［ｍｇ／ｍＬ］
ＰＢＳ                ０．００００±０．００１５
ＰＢＳ中１％Ｐ８５    ０．００３１±０．００１５
ＰＢＳ中３％Ｐ８５    ０．００４９±０．００１５
この際、ＰＢＳはリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．２である。
【００６５】
実施例４
プルロニック−ＰＡＡミクロゲルの合成
ノニオンコポリマーＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７  ＮＦおよびＬ９２はＢＡＳＦ社から購入し、さらなる処理をすることなく使用した。アクリル酸（９９％、ビニルモノマー）、エチレングリコールジメタクリレート（９８％、ジビニル架橋剤）、ドデカン（９９＋％、溶媒）、および４，４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）（７５＋％、アゾ開始剤）は、アルドリッチケミカル社から購入し、そのまま使用した。過酸化ラウロイル（９７％、レドックス開始剤）は、Ｆｌｕｋａ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＡＧ（スイス）から購入した。ポリ（ビニルピロリドン−ｃｏ−１−ヘキサデセン）（Ｇａｎｅｘ  Ｖ−２１６）（分散安定化剤）は、インターナショナルスペシャリティプロダクツ（ウェーン、ニュージャージー州）から購入した。ドキソルビシン塩酸塩およびタキソール、双方９９％純度、は、Ｙｕｎｎａｎ  Ｈａｎｄｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ社の子会社（クンミン、中華人民共和国）であるＨａｎｄｅ  Ｔｅｃｈ  ＵＳＡ（ヒューストン、テキサス州）から購入した。カンプトテシンおよびβ−エストラジオールは、シグマ−アルドリッチ社から購入し、そのまま使用した。
【００６６】
ゲル合成は、断熱した状態でラボスケールで行った。アクリル酸（４０ｍＬ）を、５ＭＮａＯＨ水溶液（０．５ｍＬ）の添加により部分的に中和した。プルロニック（２４ｇ）を、窒素下、得られた溶液に溶解し、エチレングリコールジメタクリレート（ＥＧＤＭＡ）（１．１ｍＬ）を添加した。過酸化ラウロイル（１００ｍｇ）および４、４’−アゾビス（４−シアノ吉草酸）（１００ｍｇ）をアクリル酸２ｍＬに溶解し、アクリル酸中プルロニックの溶液に添加した。得られた溶液を０．５時間、窒素バブリングにより脱気し、ドデカン（２００ｍＬ）中Ｇａｎｅｘ  Ｖ−２１６１重量％溶液を含む、０．５ｍＬ３つ口フラスコに添加した。メカニカルスターラーによって激しくフラスコを攪拌し、底から継続的に窒素でパージすることにより、脱気した。その後、オイルバスを使用して７０℃でフラスコを加熱し、攪拌と窒素パージしながらその温度を維持した。約１時間後、白い粒子の形成がフラスコの壁上に観察された。さらに３時間、７０℃で反応を継続した。その後、反応装置を分解し、反応装置の内容物をワットマンろ過紙（保持能１０μｍ）でろ過した。ミクロゲル粒子を十分にヘキサンで洗い、真空下で乾燥した。そのような手順で洗い出されたモノマーの割合は、コポリマー中にモノマーが非常に高い割合で結合するため、通常最初に負荷したアクリル酸のわずか１〜２％である。球形粒子は顕微鏡で観察した。ＺｅｔａＰｌｕｓゼータ電位分析装置（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社）を使用して、ヘキサン中で粒度測定を行った。ＸＬ＝１モル％を用いて典型的な粒子のバッチを測定したところ、１３μｍの有効メジアンと１．４の多分散性を有していいた。
【００６７】
実施例５
プルロニック−ＰＡＡミクロゲル中へのカンプトテシンおよび他の疎水性薬物のローディング
タキソール、カンプトテシン、およびエストラジオールのような疎水性溶質のミクロゲル中へのローディングを、ミクロゲルの１重量％懸濁液（ｐＨ７．０）を含むスチールビーズ上に吸着された媒質を平衡化することによって測定した。ステンレススチールビーズ（直径１〜３μｍ）を、アセトニトリル（タキソール）、ジメチルスルホキシド（カンプトテシン）、または無水エタノール（エストラジオール、プロゲステロン）中の溶質１０ｍＭ溶液中に浸し、続いて真空下溶媒を除いた。ビーズは、ミクロゲル懸濁液と薬物との間の接触面積を増加させるために使用した。ビーズをいくつかのフラクションに分けた。ミクロゲル懸濁液（０．５ｍＬ）を含むポリプロピレンバイアルに一つのフラクションを添加し、バイアルを２０または３７℃環境室中、水平で静かに振とうした。その後、マグネットを使用して、懸濁液からビーズを回収した。ビーズを真空下乾燥し、オーバーナイトで振とうした後に溶質を抽出した適切な溶媒（０．５ｍＬ）中に静置した。ＨＰＬＣを使用して、溶媒フラクションを溶質濃度に対して分析した。ロードされたビーズのコントロールフラクションは、ミクロゲル懸濁液で平衡化することなく抽出されたものを受けた。溶質濃度は、上述のＨＰＬＣシステムを使用して３連で測定した。タキソールのクロマトグラフィアッセイは、Ｃａｐｃｅｌｌ  Ｐａｋ  Ｃ１８  ＵＧ１２０（１５０×４．６ｍｍ内径，粒子径３μｍ）カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）、移動相として脱イオン化（ＤＩ）水中アセトニトリル−０．１％リン酸（５５：４５ｖ／ｖ，１．３ｍＬ／ｍｉｎ）、および２２７ｎｍでのＵＶ検出の使用を含む。標準的なタキソールピークの保持時間は、３．４６分であった。カンプトテシンアッセイ用に、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中の薬物溶液を前述のＣ１８カラム上に注入し、移動相として０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．６）およびアセトニトリルを使用して１ｍＬ／分の流速、４０℃で溶出した。４５％から８５％までの直線的な勾配のアセトニトリルを添加し、そして紫外／可視検出を２５４および３７０ｎｍで行った。カンプトテシンピークの保持時間は、７．５〜８．５分であった。ピーク領域を積分し、またピーク領域を標準較正曲線を使ってカンプトテシン濃度を算出するために使った。エタノール中エストラジオール溶液のＨＰＬＣアッセイは、［Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｌ．，Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，Ｍ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１９９９，１５，８６２７］に記載されているように行った。
【００６８】
結果
疎水性、水−不溶性薬物に対するプルロニック−ＰＡＡゲルの溶解性能力を下記表２に示した。Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ９２に基づくゲルがより疎水的になるに従って、疎水性薬物に対してより高い性能を有するようになる。タキソールおよび他の疎水性薬物は、ゲル中の疎水的ＰＰＯ鎖によって可溶化する。後者の考えは、研究されたタキソールおよび他の疎水性薬物の水中での平衡溶解度が、１重量％水性ゲル懸濁液中の平衡溶解度より少ない１６〜５０であるという事実によって支持される。タキソールとステロイドホルモンに対するミクロゲルの可溶化能は、プルロニック−ＰＡＡミセルのものと少なくとも同等である［Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｌ．，Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，Ｍ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１９９９，１５，８６２７］。臨界凝集温度以上のより高い温度での薬物のローディング能力の増加（２０℃および３７℃の結果を比較のこと）は、エントロピー相互作用を介したゲル内のミセル様集合体中に疎水性薬物が可溶化する機構に対して、さらなる証拠を与える。プルロニック−ＰＡＡ溶液中のミセルは、通常はプルロニック水溶液中のものと同等の溶解能力を有する［Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，Ｌ．，Ｔｅｍｃｈｅｎｋｏ，Ｍ．Ｌａｎｇｍｕｉｒ，１９９９，１５，８６２７］。４つの薬物のうち最も疎水的でない、カンプトテシン、が、ミクロゲルによってより高い取り込みを示した。これは、両親媒性溶質のローディングが集合体の疎水的ＰＰＯ核中への可溶化と、より親水的な核−膨張したゲル界面中への取り込みとを介して起こるという事実によって説明される。
【００６９】
【表２】
2006527760.tif 000005
【００７０】
実施例６
プルロニックＰ８５製剤中のトポテカンラクトンの安定性
１％Ｐ８５中０．３ｍｇ／ｍＬの薬物を含む最終組成物を得るために、０．１％酢酸水溶液中トポテカンを６ｍｇ／ｍＬを含むストック溶液とＰＢＳ中２．０５％Ｐ８５溶液とを１：２０（ｖ／ｖ）で混合して製剤を調製した。コントロール製剤は、トポテカンストック溶液をＰＢＳで１：２０（ｖ／ｖ）で単に希釈することによって調製した。インキュベーションの開始時間（０時間）は、それぞれのストック溶液の混合する時間である。サンプルを温度自動調節器中でインキュベートした。注入してから種々の時間間隔（１、２、３、６および１０時間）で、製剤のサンプルを得て、ＨＰＬＣ移動相で１０００倍に希釈し、ＨＰＬＣに注入した。ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである：
Ｃ１８逆相カラム２５０×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８（２）Ｌｕｎａ、５μｍ、カラム温度４０℃、流速１ｍＬ／分、注入量２０μＬ、蛍光検出波長λ励起＝３８１ｎｍ，λ発光＝５２５ｎｍ、移動相２％酢酸トリエタノールアミンｐＨ５．５を９４％／アセトニトリルを６％、ランタイム７分。
【００７１】
トポテカンラクトンの安定性は、０時間に対するパーセンテージとして表３中に示した。
【００７２】
【表３】
2006527760.tif 000006
【００７３】
実施例７
プルロニック−ＰＡＡミクロゲル中のイリノテカン（ＣＰＴ−１１）ラクトン安定性の増強
カンプトテシン誘導体、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）（ファルマシア、カラマズー、ミシガン州）のヒト血清中での安定性増強を評価するため、実験を行った。カンプトテシンおよびその類似体のラクトン環が、ヒト血清中に存在するヒト血清アルブミンおよび他のタンパク質および酵素に結合するとき、不安定であるということは本分野においてよく知られている［Ｔ．Ｇ．Ｂｕｒｋｅ，Ｚ．Ｍｉ，Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９９３，２２，２８５−２８７；Ｔ．Ｇ．Ｂｕｒｋｅ，Ａ．Ｋ．Ｍｉｓｈｒａ，Ｍ．Ｃ．Ｗａｎｉ，Ｍ．Ｅ．Ｗａｌｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３，３２，５３５２−５３６４］。従って、本実施例中で我々はプルロニック−ＰＡＡゲルを用いて安定性テストを行った。
【００７４】
実験
ゲルサンプルに、３７℃で実施例１に記載したようにＣＰＴ−１１を取り込ませた。Ｆ１２７−ＰＡＡおよびＬ９２−ＰＡＡゲルへの取り込みは、各々１９．６±３．２および２３．０±２．８μｍｏｌ／ｇゲルであった。ローディングの後、ゲルを液体窒素中で瞬間凍結し、凍結乾燥した。ゲルサンプルを−７０℃で貯蔵した。
【００７５】
液体クロマトグラフィ分析は、ＨＰ  １０４６Ａ蛍光検出器、温度自動調節の自動サンプリング、ポンプ、およびＣａｐｃｅｌｌ  Ｐａｋ  Ｃ１８  ＵＧ  １２０（１５０×４．６ｍｍ内径、粒径３μｍ）カラムを有するカラム区画を含む、ヒューレットパッカードシリーズ１１００ＨＰＬＣシステムを使用して行った。移動相は７５ｍＭ酢酸アンモニウムバッファ（ｐＨ  ６．４）−アセトニトリル（７８：２２、ｖ／ｖ）から成り、これに対して、リン酸二水素テトラブチルアンモニウムを、最終的に５ｍＭ濃度になるように添加した。カラムを流速１．４ｍＬ／分で溶出した。ゲルサンプルを凝固した男性の全血からのヒト血清（シグマケミカル社）の過剰量で継続して振とう（２００ｒｐｍ）しながら、３７℃で特定の時間、平衡化した。その後、ＣＰＴ−１１で予めロードされたゲルをろ紙（Ｗｈａｔｍａｎ、保持能１０μｍ）を使って血清からろ過し、氷水でフィルター上で洗い、凍結乾燥した。イリノテカン分析用に、ドライゲル１０ｍｇをＤＭＳＯ（１００μＬ）中に懸濁させ、継続して振とうしながら、室温で抽出した。ゲルを１５分間の超遠心（１５，０００×ｇ）によって懸濁液から除去した。上清を０．２２μｍ薄膜フィルターでろ過し、溶液の５０μＬをその後、ＨＰＬＣカラム上に注入した。蛍光検出は、励起波長３７５ｎｍ、発光波長４２０ｎｍで行った。コントロール実験において、１０ｍＭのＨＣｌ中ＣＰＴ−１１の１ｍｇ／ｍＬストック溶液を調製した。ストック溶液をヒト血清中で１：７５ｖ／ｖの割合で希釈し、時間を開始した。ＣＰＴ−１１で固定された血清は、継続して振とうしながら、３７℃を維持し、サンプル５０μＬを断続的に回収し、すぐに−７０℃に凍結した。解凍したサンプルを冷（−３０℃）メタノールで５倍に希釈し、２分間、１０，０００×ｇで遠心した。上清を上述したのと同様にしてＨＰＬＣによって分析した。イリノテカン代謝物ＳＮ−３８およびＡＰＣは、その物質だけをファルマシア（カラマズー、ミシガン州）から購入し、ピーク同定に用いた。
【００７６】
結果
ヒト血清中のＣＰＴ−１１の代謝（１５分間インキュベーション）を示すクロマトグラムを図１に示した。図でわかるように、ゲルをカプセル化しない場合、相当量のＣＰＴ−１１が代謝された。
【００７７】
図１にＣＰＴ−１１およびヒト血清中で１０分間ＣＰＴ−１１の平衡化の後得られたその代謝物ＡＰＣおよびＳＮ３８の代表的なクロマトグラムを示す。同定されないピークは、ＳＮ３８のグルクロニドおよび他の代謝物を示す［Ｅ．Ｇｕｐｔａ，Ｔ．Ｍ．Ｌｅｓｔｉｎｇｉ，Ｒ．Ｍｉｃｋ，Ｊ．Ｒａｍｉｒｅｚ，Ｅ．Ｅ．ｖｏｋｅｓ，Ｍ．Ｊ．Ｒａｔａｉｎ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，１９９４，５４，３７２３］。強調表示されているピークを、ＣＰＴ−１１のラクトンおよびカルボン酸塩の全濃度を得るために積分した。
【００７８】
上記の観察とは明らかに対照的に、ＣＰＴ−１１で予めロードし、続いてヒト血清中に維持したゲルのクロマトグラム中には、ＣＰＴ−１１の代謝物は何ら認められず（図２）、これは、ＣＰＴ−１１が酵素の加水分解をあまり受けないという証拠を与えるものである。プルロニック−ＰＡＡの保護的作用を介した、酵素による薬物加水分解のそのような有用な遅延はタンパク質でも同様に見られるものである［Ｌ．Ｂｒｏｍｂｅｒｇ，タンパク質と疎水性変性高分子電解質間の相互作用（Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｍｏｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ａｎｄ  ｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃａｌｌｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｐｏｌｙｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅｓ），Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５３（４）（２００１）５４１−５４７］。
【００７９】
我々は、ゲル保護のあり、なしでＣＰＴ−１１のラクトン加水分解の程度を評価する試みを行った。
【００８０】
図２は、ヒト血清中で１時間、ＣＰＴ−１１を取り込んだＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１２７−ＰＡＡに基づくゲルが平衡化した後得られたＣＰＴ−１１の代表的なクロマトグラムを示す。
【００８１】
ＨＰＬＣ分析の結果は、下記表４に示す：
【００８２】
【表４】
2006527760.tif 000007
【００８３】
上記表４は、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ−ＰＡＡゲル中へのカプセル化による薬物のラクトン型の劇的な安定化を示す。
【００８４】
ラクトン加水分解の効果的な半減期を、１次式ｔ１／２＝ｌｎ（２／ｋ）、この際ｋは速度定数、から算出した。時間ＦＬに対する媒質中の残余のＣＰＴ−１１ラクトンの画分を式にあてはめた。
【００８５】
【数１】
2006527760.tif 000008
【００８６】
反応速度の実験結果は、図３に示す。図からわかるように、ゲルによって保護されていないＣＰＴ−１１は、ずっと速く加水分解され、一方、ゲルは薬物分解に対する効果的なバリアーになることが明らかとなった。
【００８７】
図３は、ゲルなし（黒丸）、およびＬ９２−ＰＡＡゲルあり（黒菱形）またはＦ１２７−ＰＡＡゲルあり（白丸）で、ヒト血清中ＣＰＴ−１１に対するラクトン開環の割合の動力学的評価を示す。
【００８８】
【表５】
2006527760.tif 000009
【００８９】
パラメーターｔ１／２は、ゲルなし、Ｆ１２７−ＰＡＡ、およびＬ９２−ＰＡＡゲルありで、それぞれＣＰＴ−１１に対して０．１６、１．１、および１．７ｈであることが測定された。したがって、薬物はゲル中にカプセル化されるとき、約１０倍安定である。
【００９０】
実施例８
本実施例は、プルロニック−ＰＡＡコポリマーに基づくゲルの粘膜接着特性を示す
実験
動物を含む実験手順は、Ｓｕｐｒａｔｅｋ  Ｐｈａｒｍａ社の動物実験委員会によって再調査され、承認された。成体、病原体未感染のオスのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ，２８０−３２０ｇ）を実験の前５〜６日間、環境的にコントロールされた部屋（２５±１℃、および１２：１２時間の明−暗サイクル）に順応させた。動物は、実験に使用される１２時間前まで、実験用のげっ歯類用食事および水、ａｄ  ｌｉｂｉｔｕｍを自由に採ることができ、実験に使用される１２時間前に食事のみ下げた。実験の開始時間で、ラット（ｎ＝４）はイソフルラン麻酔の後、頚椎脱臼によって剖検した。ラットの消化管は速やかに動物から摘出した。胃、近位および遠位小腸および結腸をすぐに分離し、内腔の内容物を除去するために冷やした生理食塩水で洗い流した。小腸およびすべての他の組織から切除した空腸粘膜を液体窒素中で瞬間凍結し、−７０℃で貯蔵した。したがって、解剖の２４時間以内に利用される凍結組織は、動物から分離後すぐに使用される材料で観察されるものと同一の接着性パラメーターを有することがわかった。ラット腸を使用した生体接着についての類似の成功実験は、他で報告されている［Ｅ．Ｐ．Ｋａｋｏｕｌｉｄｅｓ，Ｊ．Ｄ．Ｓｍａｒｔ，Ｊ．Ｔｓｉｂｏｕｋｌｉｓ，結腸運搬および接着特異性に対するアゾ架橋されたポリ（アクリル酸）（Ａｚｏｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄ  ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）ｆｏｒ  ｃｏｌｏｎｉｃ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ａｎｄ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ）：インビトロでの低下および予備的生体外接着性研究（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｅｘ  ｖｉｖｏ  ｂｉｏａｄｈｅｓｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ），Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．，１９９８，５４（１）９５−１０９］。
【００９１】
５ｋｇのロードセルを備えたＴＡ．ＸＴ２ｉ  Ｔｅｘｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｔｅｘｔｕｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社，スカーズデール，ニューヨーク州）を引っ張り強度測定で使用した。セットアップは１ｍＮの強度測定精度および１μｍの距離分解能で行った。２つのタイプの測定を適用した。１つ目の実験のシリーズでは、ゲルと粘膜の間の生体接着を調査した［Ｈ．Ｈaｇｅｒｓｔｒｏｍ，Ｋ．Ｅｄｓｍａｎ，引っ張り強度法を用いたポリマーゲル調製の粘膜接着性特性の解説（Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｇｅｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｔｅｎｓｉｌｅ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ  ｍｅｔｈｏｄ），Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００１，５３，１５８９−１５９９］。平衡膨張ゲルサンプル（１５ｍＬ、膨張剤、生理食塩水、０．９％ＮａＣｌ、ｐＨ７．４；全ポリマー濃度、１重量％）を、４．０ｃｍ円形開口部を有する温度自動調節セル中に静置し、気泡がゲル中に取り込まれないようにセルを冷蔵庫に保存した。セルを器機の静止した表面上に取り付け、ゲルを３７℃にした。粘膜の切片を室温まで解凍し、Ｖｅｔｂｏｎｄ（登録商標）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｄｈｅｓｉｖｅ（３Ｍ  Ｃｏｍｐａｎｙ，セント．ポール，ミネソタ州）を使用して、上部の可動ステンレススチール円筒型プローブに取り付けた。生体外粘膜（全１．５４ｃｍ２面積）の平坦な表面が器機の表面およびゲルの表面に平行に露出するように注意を払った。１ｃｍ／分の速度でゲル表面に向かって粘膜を下げた。ゲル表面に接触する際、２ｍＮのトリガーフォースによって検出するように、粘膜は１．０ｍｍの深さまで０．１ｍｍ／ｓの速度でゲルを貫通した。２．０分の接触の後、粘膜を０．１ｍｍ／秒の速度で引き上げた。引き上げ速度と接触時間を０．１〜５ｍｍ／ｓと２〜１０分の幅で変化させた最初の実験により、より速い引き上げ速度およびより長い接触時間と比べてこれらの器機が高精度で、再現性があることが示された。粘膜それ自身の接着は、粘膜を器機表面およびプローブの双方に接着することによって測定した。侵入深さはわずか０．５ｍｍで、これは２つの粘膜表面間の完全な接着を保障するものである。粘膜接着のために、２５測定行い、使用された粘膜を少なくとも４つの異なるラットから得た。文献のデータは上記の条件がハイドロゲル研究において最適であることを示す［Ｈ．Ｈaｇｅｒｓｔｒoｍ，Ｋ．Ｅｄｓｍａｎ，引っ張り強度法を用いたポリマーゲル調製の粘膜接着性特性の解説（Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｇｅｌ  ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ｔｅｎｓｉｌｅ  ｓｔｒｅｎｇｔｈ  ｍｅｔｈｏｄ），Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２００１，５３，１５８９−１５９９；Ｃ．Ｍ．Ｃａｒａｍｅｌｌａ，Ｓ．Ｒｏｓｓｉ，ＭＣ．Ｂｏｎｆｅｒｏｎｉ，ポリマーハイドロゲルの粘膜接着特性挙動を説明するためのレオロジーアプローチ（Ａ  Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｅｘｐｌａｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ  Ｂｅｈａｖｉｏｒ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ），生体接着ドラッグデリバリーシステム、基本となる、新規なアプローチおよび応用（ｉｎ：Ｂｉｏａｄｈｅｓｖｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ，Ｎｏｖｅｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ，ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ），Ｅ．Ｍａｉｏｗｉｔｚ，Ｄ．Ｅ．Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ，Ｃ．−Ｍ．Ｌｅｈｒ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒによる編集，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９，ｐｐ．２５−６５］。
【００９２】
粘膜接着性研究の結果
引っ張り試験は下記図４中で説明した。
【００９３】
図４は、３７℃でラット空腸粘膜と接触させ、粘膜接着性Ｆ１２７−ＰＡＡゲル調製用に得られた力−距離ダイアグラムを示す。等張食塩水（０．９％ＮａＣｌ）中の全ポリマー濃度を１重量％で維持した。実線は、架橋されていないＦ１２７−ＰＡＡの結果を示し、一方破線は架橋されているＦ１２７−ＰＡＡ−ＥＧＤＭＡゲル（架橋度ＥＧＤＭＡ／ＡＡ１モル％）の挙動を示す。Ｆｐ、ｄ１、およびｄ２は、ピークでの力、ピークまでの変形（ｄｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｅａｋ）、および下がるまでの変形ピーク（ｄｅｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｐｅａｋ  ｔｏ  ｆａｉｌｕｒｅ）をそれぞれ表す。引っ張り仕事は、曲線の下の面積から算出し、下がるまでの全形はｄ１とｄ２の合計である。
【００９４】
結果の概要を、下記表６に集約した。表からわかるように、プルロニック−ＰＡＡゲルは、粘膜接着性ポリマーの工業標準として本分野で知られている、カーボポールＣ９３４Ｐの粘膜接着特性と同等、または多くの例においてはそれに勝るものであった。
【００９５】
【表６−１】
2006527760.tif 000010
【００９６】
【表６−２】
2006527760.tif 000011
【００９７】
実施例９
静脈投与のトポテカンの血漿薬物動態
トポテカン投与溶液は以下の通りに調製した：
トポテカンの約２８ｍｇを量り、７ｍＬの等張溶液に溶解した。
【００９８】
トポテカンは、１５ｍｇ／ｍＬの投与量で正常ラットに静脈投与した。
【００９９】
注射してから種々の時間間隔（１５、３０分、１、３、６、および１０時間）の後、血液サンプルを回収した。
【０１００】
血液サンプルは、ヘパリン化されたチューブで頸静脈から回収し、すぐに５から１０分間氷中に置いた。血液をすぐに遠心し、血漿を分離した。血漿サンプルを、ドライアイス中ですぐに凍結させ、さらに使用するまで−８０℃で貯蔵した。
【０１０１】
血漿サンプルのアリコート（１００μＬ）を冷メタノール４００μＬで抽出した。１００００ＲＰＭで１０分間遠心によって上清を分離し、ＨＰＬＣ分析前に−８０℃で保存した。ＨＰＬＣ条件は、以下の通りである：
Ｃ１８逆相カラム２５０×４．６ｍｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１８  （２）  Ｌｕｎａ、５μｍ、カラム温度４０℃、流速１ｍＬ／分、注入量２０μＬ，蛍光検出波長λ励起＝３８１ｎｍ、λ発光＝５２５ｎｍ、移動相２％酢酸トリエチルアミンｐＨ５．５を９４％／アセトニトリルを６％、ランタイム７分。
【０１０２】
トポテカンラクトンおよびトポテカンカルボン酸塩濃度は、較正曲線を使用することによってピーク下領域（ＡＵＰ）から算出した。曲線下の領域（ＡＵＣ）は、台形法により算出した。結果を表７中に示す。
【０１０３】
【表７】
2006527760.tif 000012
【０１０４】
実施例１０
Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｐ８５製剤化および非製剤化トポテカンの経口バイオアベイラビリティ
トポテカン投与溶液は、以下のように調製した：
約１５ｍｇのトポテカンを量り、コントロール用に水道水５ｍＬに溶解し、
そして、約１５ｍｇのトポテカンを製剤用に水道水中１％Ｐ８５溶液５ｍＬ中に溶解した；
双方のトポテカン投与溶液は、１５ｍｇ／ｋｇの投与量で正常ラットに強制飼養により経口投与した。各々の群で動物３匹を使用した。
【０１０５】
注入してから種々の時間間隔（１５、３０分、１、３、６および１０時間）の後、血液サンプルを回収した。
【０１０６】
イソフルラン（Ｂｉｍｅｔａ−ＭＴＣ、Ａｎｉｍａｌ  Ｈｅａｌｔｈ社ケンブリッジ、ＯＮ、カナダ）の一般的な吸入によってラットを麻酔した。
【０１０７】
血漿サンプル回収、抽出およびＨＰＬＣ分析は、実施例８で記載したものと同様の方法で行った。
【０１０８】
トポテカンラクトンおよびトポテカンカルボン酸塩濃度は、較正曲線を使用することによってピーク下領域（ＡＵＰ）から算出した。曲線下の領域（ＡＵＣ）は、台形法により算出した。結果を表８中に示す。
【０１０９】
【表８】
2006527760.tif 000013
【０１１０】
実施例１１
カプセル中のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｌ９２−ＰＡＡミクロゲルで製剤化されたトポテカン経口投与
製剤は、以下のように調製した：
トポテカン約３０ｍｇを量り、ミクロゲル１００ｍｇと混合した。混合物を、７０％エタノール５ｍＬで溶解し、室温で１６時間インキュベートした。その後、溶媒の半量を窒素流中で蒸発させた。３％酢酸を約１０ｍＬ混合物に添加した。最終混合物を乾燥するまで凍結乾燥し、ゼラチンカプセル中に取り込ませた。
【０１１１】
カプセル中のコントロールトポテカンが以下のように調製した：
トポテカンの約３０ｍｇを量り、ゼラチンカプセル中に取り込ませた（３．７５ｍｇ／カプセル）。
【０１１２】
カプセル中のコントロールおよび製剤化されたトポテカンを１５ｍｇ／ｋｇの投与量で正常ラットに経口投与した。血漿サンプル回収、抽出およびＨＰＬＣ分析は、実施例８で記載したものと同様の方法で行った。
【０１１３】
結果を以下の表９中に示す：
【０１１４】
【表９】
2006527760.tif 000014
【０１１５】
実施例１２
カプセル中にミクロゲルおよびＬ９２とともに製剤化されたトポテカンの経口投与
製剤を以下のように調製した：
トポテカン約３０ｍｇを量り、ミクロゲルＥＧＤＭＡの１００ｍｇおよびＬ９２の３０ｍｇと混合した。混合物を７０％エタノール５ｍＬに溶解し、室温で１６時間インキュベートした。その後、溶媒の半量を窒素流中で蒸発させた。３％酢酸を約１０ｍＬ混合物に添加した。最終混合物を乾燥するまで凍結乾燥し、ゼラチンカプセル中に取り込ませた。カプセル中のトポテカン製剤を１５ｍｇ／ｋｇの投与量で正常ラットに経口投与した。血漿サンプル回収、抽出およびＨＰＬＣ分析は、実施例８で記載したものと同様の方法で行った。
【０１１６】
結果を以下の表に示す：
【０１１７】
【表１０】
2006527760.tif 000015
【０１１８】
実施例１３
正常ラットの３Ｈ−Ｐ８５の静脈および経口投与
３Ｈ−Ｐ８５をＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（ボストン、マサチューセッツ州、米国）から購入した。
【０１１９】
３Ｈ−Ｐ８５（１６０μＣｉ）溶液をコールドＰ８５の０．５％溶液５．５％と混合し、１４ｍｇ／ｋｇ投与量で正常ラットに静脈または経口投与した。各群３匹の動物を使用した。
【０１２０】
注射をしてから種々の時間間隔（１５、３０分、１、３、６、１０および２４時間）の後、血液サンプルを回収した。血漿を３０００ＲＰＭで５分間遠心して分離し、ドライアイス中ですぐに凍結した。
【０１２１】
血漿サンプルを分析前に解凍し、過酸化水素（５μＬ）を血漿サンプルのそれぞれのアリコート（８０μＬ）に添加し、４℃、オーバーナイトでインキュベートした。血漿アリコートをシンチレーションバイアルに移し、シンチレーション液（４ｍＬ）を混合し、放射能計数器でカウントした。
【０１２２】
結果を表１０に示す：
【０１２３】
【表１１】
2006527760.tif 000016
【０１２４】
上記で詳述した全ての刊行物および特許は、本明細書に参照として引用されている。記載された発明の組成物および方法の多くの改良や変形は、発明の範囲および精神から離れることなく本分野の当業者に対して明らかであるであろう。特定の好ましい実施の形態と関連させて本発明を述べてきたが、請求された発明は、そのような特定の実施の形態に必要以上に限定されるものではないことを理解されねばならない。実際、本分野および関連する分野において当業者にとっては明らかである、記載された組成物および発明を実施するための方法は以下の請求項の範囲内であることを意図したものである。
【図面の簡単な説明】
【０１２５】
【図１】ヒト血清中、平衡後の、ＣＰＴ−ｌｌ（イリノテカン）およびその代謝物であるＡＰＣおよびＳＮ３８の代表的なクロマトグラムを示す図である。
【図２】１時間ヒト血清中でＣＰＴ−１１を取り込んだプルロニックＦ１２７−ＰＡＡに基づくゲルが平衡に達した後に得られたＣＰＴ−１１の代表的なクロマトグラムを示す図である。
【図３】ゲルなし（黒丸）、およびＬ９２−ＰＡＡゲルあり（黒菱形）またはＦ１２７−ＰＡＡゲルあり（白丸）でヒト血清中のＣＰＴ−１１に対してラクトン環が開環する割合の動力学的評価を示す図である。
【図４】３７℃でラット空腸粘膜と接触させた粘膜接着性のＦ１２７−ＰＡＡゲル調製物に対して得られた力−距離図である。
【図１】
2006527760.tif 000017
【図２】
2006527760.tif 000018
【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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