(57)【要約】本発明は、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７および他の病原菌の発生率および増殖を抑制するために動物を治療する方法および組成物を含む。治療方法は、治療上有効な量のアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)あるいは多くの他の機能性細菌の1つあるいは組合せを動物に与えることを含む。代替治療方法は、プロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)のような乳酸塩利用バクテリアとの組合せでアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)のような治療上有効な量の乳酸生成バクテリアを投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
反芻動物における腸内病原性感染症を治療しあるいは予防する方法であって、  該方法は、  前記反芻動物に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアを含む組成物を投与すること、および  前記反芻動物の腸内病原体の量を縮小させること、を含む。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記乳酸生成バクテリアは、枯草菌(Bacillus subtilis)、ビフィドバクテリウム-アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム-アニマリス(Bifidobacterium animalis)、ビフィドバクテリウム-ビフダム(Bifidobacterium bifudum)、ビフィドバクテリウム-インファンティス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム-ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム-サーモフィラム(Bifidobacterium thermophilum）、ラクトバチルス-アシッドフィラス(アシドフィルス菌：Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-アジリス(Lactobacillus agilis)、ラクトバチルス-アラクトサス(Lactobacillus alactosus)、ラクトバチルス-アリメンタリウス(Lactobacillus alimentarius)、ラクトバチルス-アミロフィラス(Lactobacillus amylophilus)、ラクトバチルス-アミロボランス(Lactobacillus amylovorans)、ラクトバチルス-アミロボルス(Lactobacillus amylovorus)、ラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)、ラクトバチルス-バタタス(Lactobacillus batatas)、ラクトバチルス-ババリカス(Lactobacillus bavaricus)、ラクトバチルス-ビファメンタス(Lactobacillus bifermentans)、ラクトバチルス-ビフィズス(ビフィズス菌：Lactobacillus bifidus)、ラクトバチルス-ブレビス(乳酸短杆菌：Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス-ブンチネリ(Lactobacillus buchnerii)、ラクトバチルス-ブルガリカス(ブルガリア菌：Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス-キャンテナフォルメ(Lactobacillus catenaforme)、ラクトバチルス-カセイ(カセイ菌：Lactobacillus casei）、ラクトバチルス-セロビオスス(Lactobacillus cellobiosus)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus collinoides)、ラクトバチルス-コンフスス(Lactobacillus confusus)、ラクトバチルス-コプロフィルス(Lactobacillus coprophilus)、ラクトバチルス-コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus corynoides)、ラクトバチルス-クリスパタス(乳酸桿菌：Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス-クルヴァトゥス(Lactobacillus curvatus)、デルブリュック-デルブルエキ(乳酸杆菌：Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス-デシデオサス(Lactobacillus desideosus)、ラクトバチルス-ダイバージェンス(Lactobacillus divergens)、ラクトバチルス-エンテリイ(Lactobacillus enterii)、ラクトバチルス-ファルシミニス(Lactobacillus farciminis)、ラクトバチルス-フェルメンタム(発酵乳酸杆菌：Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス-フリジダス(Lactobacillus frigidus)、ラクトバチルス-フルクティヴォランス(Lactobacillus fructivorans)、ラクトバチルス-ゲッセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス-ハロトレランス(Lactobacillus halotolerans)、ラクトバチルス-ヘルヴェティクス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス-ヘテロヒオキー(Lactobacillus heterohiochii)、ラクトバチルス-ヒルガルディ(ヒルガード乳酸杆菌：Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス-ホルドニアエ(Lactobacillus hordniae)、ラクトバチルス-イヌリヌス(Lactobacillus inulinus)、ラクトバチルス-イエンセニイ(イエンセン乳酸杆菌：Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルス-ユグリティ(Lactobacillus jugurti)、ラクトバチルス-カンドレリ(Lactobacillus kandleri)、ラクトバチルス-ケフィア(Lactobacillus kefir)、ラクトバチルス-ラクティス(乳酸杆菌：Lactobacillus lactis）ラクトバチルス-ライヒナマニ(ライヒマン乳酸杆菌：Lactobacillus leichmannii)、ラクトバチルス-リンドネリ(Lactobacillus lindneri)、ラクトバチルス-マレフェ��メンタンス(Lactobacillus malefermentans)、ラクトバチルス-マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス-マルタロミカス(Lactobacillus maltaromicus)、ラクトバチルス-マイナー(Lactobacillus minor)、ラクトバチルス-ミナタス(Lactobacillus minutus)、ラクトバチルス-ノビリス(Lactobacillus nobilis)、ラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)、ラクトバチルス-ペントサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス-プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス-プスエドプランタラム(Lactobacillus pseudoplantarum)、ラクトバチルス-レウテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトバチルス-ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス-ロゴサエ(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トレランス(Lactobacillus tolerance)、ラクトバチルス-トルクエンス(Lactobacillus torquens)、ラクトバチルス-ルミニス(Lactobacillus ruminis)、ラクトバシラス-サケ(Lactobacillus sake)、ラクトバチルス-サリヴァリゥス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルス-サンフランシスコ(Lactobacillus sanfrancisco)、ラクトバチルス-シャーペアエ(Lactobacillus sharpeae)、ラクトバチルス-トリコデス(毛状乳酸杆菌：Lactobacillus trichodes)、ラクトバチルス-バクチノステルカス(Lactobacillus vaccinostercus)、ラクトバチルス-ヴィリデセンス(Lactobacillus viridescens)、ラクトバチルス-ヴィトゥリニス(Lactobacillus vitulinus)、ラクトバチルス-キシロサス(Lactobacillus xylosus)、ラクトバチルス-ヤマナシエンシス(Lactobacillus yamanashiensis)、ラクトバチルス-ザアエ(Lactobacillus zeae)、ペジオコックス-アヂドラクティシ(Pediococcus acidlactici)、ペジオコックス-デントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ストレプトコッカス-クレモリス(クレモリス菌：Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス-ディセチラクティス(Streptococcus discetylactis)、ストレプトコッカス-ファエシウム(Streptococcus faecium)、ストレプトコッカス-インターメジウス(Streptococcus intermedius)、ストレプトコッカス-ラクティス(乳酸連鎖球菌：Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス-サーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものである。
【請求項３】
前記乳酸生成バクテリアは、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたものである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、ＬＡ５１菌株である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０８ CFU/日のレベルで投与する、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０８ CFU/日のレベルで投与する、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０８ CFU/日のレベルで投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０８ CFU/日のレベルで投与する、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０９ CFU/日のレベルで投与する、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記乳酸生成バクテリアを、少なくとも１×１０９ CFU/日のレベルで投与する、請求項５に記載の方法。
【請求項１２】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項３に記載の方法。  
【請求項１４】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項５に記載の方法。
【請求項１６】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）、サルモネラ菌株(Salmonella spp.)および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)からなる群から選択されたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項１９】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）、サルモネラ菌株(Salmonella spp.)および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)からなる群から選択されたものである、請求項４に記載の方法。
【請求項２０】
前記病原体は、大腸菌（E. coli）、サルモネラ菌株(Salmonella spp.)および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)からなる群から選択されたものである、請求項５に記載の方法。
【請求項２１】
動物飼料または水と配合された、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたアシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)を含む、反芻動物における病原性感染症を治療しあるいは予防するための組成物。
【請求項２２】
前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、ＬＡ４５またはＬＡ５１である、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、ＬＡ５１である、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０８CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２５】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０８CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２２に記載の組成物。  
【請求項２６】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０８CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２３に記載の組成物。  
【請求項２７】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０９CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２８】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０９CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２９】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の量に対して、１×１０９CFUを超える量で動物飼料に存在する、請求項２３に記載の組成物。
【請求項３０】
反芻動物における腸内病原性感染症を治療しあるいは予防する方法であって、  前記反芻動物に、治療上有効な量の乳酸生成バクテリアおよび乳酸塩利用バクテリアを含む組成物を投与すること、および  前記反芻動物の腸内の病原体の量を減少させること、を含む方法。
【請求項３１】
前記乳酸生成バクテリアは、枯草菌(Bacillus subtilis)、ビフィドバクテリウム-アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム-アニマリス(Bifidobacterium animalis)、ビフィドバクテリウム-ビフダム(Bifidobacterium bifudum)、ビフィドバクテリウム-インファンティス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム-ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム-サーモフィラム(Bifidobacterium thermophilum）、ラクトバチルス-アシッドフィラス(アシドフィルス菌：La
ctobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-アジリス(Lactobacillus agilis)、ラクトバチルス-アラクトサス(Lactobacillus alactosus)、ラクトバチルス-アリメンタリウス(Lactobacillus alimentarius)、ラクトバチルス-アミロフィラス(Lactobacillus amylophilus)、ラクトバチルス-アミロボランス(Lactobacillus amylovorans)、ラクトバチルス-アミロボルス(Lactobacillus amylovorus)、ラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)、ラクトバチルス-バタタス(Lactobacillus batatas)、ラクトバチルス-ババリカス(Lactobacillus bavaricus)、ラクトバチルス-ビファメンタス(Lactobacillus bifermentans)、ラクトバチルス-ビフィズス(ビフィズス菌：Lactobacillus bifidus)、ラクトバチルス-ブレビス(乳酸短杆菌：Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス-ブンチネリ(Lactobacillus buchnerii)、ラクトバチルス-ブルガリカス(ブルガリア菌：Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス-キャンテナフォルメ(Lactobacillus catenaforme)、ラクトバチルス-カセイ(カセイ菌：Lactobacillus casei）、ラクトバチルス-セロビオスス(Lactobacillus cellobiosus)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus collinoides)、ラクトバチルス-コンフスス(Lactobacillus confusus)、ラクトバチルス-コプロフィルス(Lactobacillus coprophilus)、ラクトバチルス-コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus corynoides)、ラクトバチルス-クリスパタス(乳酸桿菌：Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス-クルヴァトゥス(Lactobacillus curvatus)、デルブリュック-デルブルエキ(乳酸杆菌：Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス-デシデオサス(Lactobacillus desideosus)、ラクトバチルス-ダイバージェンス(Lactobacillus divergens)、ラクトバチルス-エンテリイ(Lactobacillus enterii)、ラクトバチルス-ファルシミニス(Lactobacillus farciminis)、ラクトバチルス-フェルメンタム(発酵乳酸杆菌：Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス-フリジダス(Lactobacillus frigidus)、ラクトバチルス-フルクティヴォランス(Lactobacillus fructivorans)、ラクトバチルス-ゲッセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス-ハロトレランス(Lactobacillus halotolerans)、ラクトバチルス-ヘルヴェティクス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス-ヘテロヒオキー(Lactobacillus heterohiochii)、ラクトバチルス-ヒルガルディ(ヒルガード乳酸杆菌：Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス-ホルドニアエ(Lactobacillus hordniae)、ラクトバチルス-イヌリヌス(Lactobacillus inulinus)、ラクトバチルス-イエンセニイ(イエンセン乳酸杆菌：Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルス-ユグリティ(Lactobacillus jugurti)、ラクトバチルス-カンドレリ(Lactobacillus kandleri)、ラクトバチルス-ケフィア(Lactobacillus kefir)、ラクトバチルス-ラクティス(乳酸杆菌：Lactobacillus lactis）ラクトバチルス-ライヒナマニ(ライヒマン乳酸杆菌：Lactobacillus leichmannii)、ラクトバチルス-リンドネリ(Lactobacillus lindneri)、ラクトバチルス-マレフェルメンタンス(Lactobacillus malefermentans)、ラクトバチルス-マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス-マルタロミカス(Lactobacillus maltaromicus)、ラクトバチルス-マイナー(Lactobacillus minor)、ラクトバチルス-ミナタス(Lactobacillus minutus)、ラクトバチルス-ノビリス(Lactobacillus nobilis)、ラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)、ラクトバチルス-ペントサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス-プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス-プスエドプランタラム(Lactobacillus pseudoplantarum)、ラクトバチルス-レウテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトバチルス-ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス-ロゴサエ(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トレランス(Lactobacillus tolerance)、ラクトバチルス-トルクエンス(Lactobacillus torquens)、ラクトバチルス-ルミニス(Lactobacillus ruminis)、ラクトバシラス-サケ(Lactobacillus sake)、ラクトバチルス-サリヴァリゥス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルス-サンフランシスコ(Lactobacillus sanfrancisco)、ラクトバチルス-シャーペアエ(Lactobacillus sharpeae)、ラクトバチルス-トリコデス(毛状乳酸杆菌：Lactobacillus trichodes)、ラクトバチルス-バクチノステルカス(Lactobacillus vaccinostercus)、ラクトバチルス-ヴィリデセンス(Lactobacillus viridescens)、ラクトバチルス-ヴィトゥリニス(Lactobacillus vitulinus)、ラクトバチルス-キシロサス(Lactobacillus xylosus)、ラクトバチルス-ヤマナシエンシス(Lactobacillus yamanashiensis)、ラクトバチルス-ザアエ(Lactobacillus zeae)、ペジオコックス-アヂドラクティシ(Pediococcus acidlactici)、ペジオコックス-デントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ストレプトコッカス-クレモリス(クレモリス菌：Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス-ディセチラクティス(Streptococcus discetylactis)、ストレプトコッカス-ファエシウム(Streptococcus faecium)、ストレプトコッカス-インターメジウス(Streptococcus intermedius)、ストレプトコッカス-ラクティス(乳酸連鎖球菌：Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス-サーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものである、請求項３０に記載の方法。  
【請求項３２】
前記乳酸塩利用バクテリアは、メガスフェアラエ-エイスルデニイ(Megasphaerae eilsdenii)、ペプトストレプトコッカス-アサッカロリティクス(Peptostreptococcus asaccharolyticus)、プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌酸性プロピオニシ(Propionibacterium acid-propionici)、プロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌グロボサム(Propionibacterium globosum)、プロピオン酸菌ジェンセンニ(Propionibacterium jensenii)、プロピオン酸菌シェルマンニ(Propionibacterium shermanii)、プロピオン酸菌株(Propionibacterium spp.)、セレノモナス属(Selenomonas ruminantium)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものである、請求項３０に記載の方法。    
【請求項３３】
前記乳酸塩利用バクテリアは、メガスフェアラエ-エイスルデニイ(Megasphaerae eilsdenii)、ペプトストレプトコッカス-アサッカロリティクス(Peptostreptococcus asaccharolyticus)、プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌酸性プロピオニシ(Propionibacterium acid-propionici)、プロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌グロボサム(Propionibacterium globosum)、プロピオン酸菌ジェンセンニ(Propionibacterium jensenii)、プロピオン酸菌シェルマンニ(Propionibacterium shermanii)、プロピオン酸菌株(Propionibacterium spp.)、セレノモナス属(Selenomonas ruminantium)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものである、請求項３１に記載の方法。    
【請求項３４】
前記乳酸生成バクテリアは、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたものである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)はＬＡ５１菌株である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記乳酸生成バクテリアは、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたものである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記アシドフィルス菌は、ＬＡ５１菌株である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記乳酸塩利用バクテリアは、プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
前記乳酸塩利用バクテリアは、プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記乳酸塩利用バクテリアは、プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
前記乳酸塩利用バクテリアは、プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３およびＰ９９からなる群から選択されたものである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】
前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３およびＰ９９からなる群から選択されたものである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４６】
前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３およびＰ９９からなる群から選択されたものである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４７】
前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３およびＰ９９からなる群から選択されたものである、請求項４３に記載の方法。
【請求項４８】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０８CFU/日を越える量を投与する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４９】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０８CFU/日を越える量を投与する、請求項４２に記載の方法。  
【請求項５０】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０８CFU/日を越える量を投与する、請求項４３に記載の方法。
【請求項５１】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０８CFU/日を越える量を投与する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０８CFU/日を越える量を投与する、請求項４７に記載の方法。  
【請求項５３】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０９CFU/日を越える量を投与する、請求項４８に記載の方法。  
【請求項５４】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０９CFU/日を越える量を投与する、請求項４９に記載の方法。  
【請求項５５】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０９CFU/日を越える量を投与する、請求項５０に記載の方法。  
【請求項５６】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０９CFU/日を越える量を投与する、請求項５１に記載の方法。  
【請求項５７】
前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアを、それぞれ１×１０９CFU/日を越える量を投与する、請求項５２に記載の方法。  
【請求項５８】
反芻動物における病原性感染症を治療しあるいは予防するための組成物であって、該組成物は、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１、Ｌ４１１およびこれらの組合せからなる群から選択されたアシドフィルス菌菌株と、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３、Ｐ９９およびこれらの組合せからなる群から選択されたプロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)との組合せを含み、前記組成物は、病原性感染症の排除あるいは予防が必要な動物に与えられる。
【請求項５９】
更に、動物飼料あるいは水を含む、請求項５８に記載の組成物。
【請求項６０】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)および前記プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)は、それぞれ１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の各量に対して１×１０８CFUを越える量で動物飼料あるいは水に存在する、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)および前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)は、それぞれ１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の各量に対して１×１０９CFUを越える量で動物飼料あるいは水に存在する、請求項６０に記載の組成物。
【請求項６２】
１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の各量に対して１×１０９CFUを越える量で動物飼料あるいは水に存在する、アシドフィルス菌菌株ＬＡ５１(Lactobacillus acidophilus strain ＬＡ５１)およびプロピオン酸菌-フリュデンレイチＰＦ２４(Propionibacterium freudenreichii ＰＦ２４)を含む、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６３】
１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の各量に対して１×１０６CFUを越える量で動物飼料あるいは水に存在する、前記アシドフィルス菌ＬＡ４５(Lactobacillus acidophilus ＬＡ４５)を含む、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
反芻動物における腸内病原性感染症を予防する方法であって、  該方法は、  反芻動物に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアを含む組成物を投与すること、および  反芻動物の腸内の病原体の成長を抑制すること、を含む。
【請求項６５】
反芻動物における腸内病原性感染症を予防する方法であって、  該方法は、  反芻動物に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアと治療上有効な量の乳酸塩利用バクテリアとを含む組成物を投与すること、および  前記反芻動物の腸内病原体の成長を抑制すること、を含む。
【請求項６６】
乳牛によって生成されたミルクの脂肪含有量を増加させる方法であって、  該方法は、  前記乳牛に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアを含む組成物を投与すること、および  前記乳牛からミルクを絞り出すこと、を含み、  前記絞り出されたミルクは豊富な脂肪成分を含んでいる。
【請求項６７】
乳牛によって生成されたミルクの脂肪含有量を増加させる方法であって、  該方法は、  前記乳牛に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアおよび治療上有効な量の乳酸塩利用バクテリアを含む組成物を投与すること、および  前記乳牛からミルクを絞り出すこと、を含み、前記絞り出されたミルクは豊富な脂肪成分を含んでいる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、病原性成長を抑制するための組成物および方法に関する。特に、本発明は、乳酸生成微生物および乳酸塩利用微生物をそれぞれ単独であるいはそれらの組合せを用いて病原性成長を抑制するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
病原菌、特に細菌性の病原菌であるがウイルスや他の病原微生物を含む病原菌の摂取は、ほとんどの動物における共通の問題である。病原菌が、体重減、下痢、腹部けいれんや腎不全を含む広範な有害な病気を動物に引き起こすものであることは知られている。免疫低下あるいは栄養不良の動物にとっては、たとえ単なる下痢の影響でも致命的になることさえある。病原菌は、衛生状態が悪いところでは動物間でしばしば移動し、十分注意していた場合でさえも伝染を予防することができないこともある。この問題に対する最も一般的な解決策は動物に抗生物質を投与することではあるが、この解決策は単に高価なだけではなく、微生物が抗生物質耐性を備えることもある。  
【０００３】
例えば、人間が芽キャベツ、レタス、食肉加工品、低温殺菌されていないミルクやジュースのような汚染された食品中の病原菌や、下水汚染水を摂取した場合、極端な健康のリスクに晒される。その問題は、牛肉と乳業において特に蔓延している。雌牛の乳房あるいは搾乳装置に存在する病原菌は、生乳へ入り込むことがある。肉は食肉処理時に汚染されることがあり、また、その粉砕時に病原体が大量の肉へ混合することがある。人間が肉、特に牛挽肉であって、その牛肉中の病原菌を殺菌するのに十分調理されていないものを食べた場合、重大で生命に危険のある感染症になることがある。これは解決し難い問題である。というのは、汚染された肉は見栄えも臭いもしばしば全く正常だからである。更に、疾病を引き起こすために必要とされる病原体の数は非常に少ないので、それを検出することは非常に困難である。  
【０００４】
腸管内で疾病を引き起こす病原菌は腸管病原体として知られている。病原細菌、すなわち腸内細菌には、例えば黄色ブドウ球菌、大腸菌(E. coli)の特別な菌株、およびサルモネラ菌株がある。何百もの大腸菌の殆どの菌株は無害であり、人間を含む動物の腸内で生きているが、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７、Ｏ１１８：Ｈ８やＯ１０４：Ｈ２１のようないくつかの菌株は、志賀(赤痢)菌が生成する毒素と密接に関係があるかあるいは同一の大量かつ強力な志賀-状の毒素を生成する。これらの毒素は、小腸に激しい苦痛を引き起こして、しばしば腸の内層へ損傷を与えたり、極端な下痢を起こしたりする。大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７は、重い腹部痙攣や腹部出血によって特徴づけられる、急性出血性大腸炎を引き起こす場合がある。子供の場合、これは、腎不全と溶血性貧血という特徴がある溶血尿毒症症候群(「HUS」)と呼ばれ、まれに致命的な障害へと発展することがある。成人の場合には、それは、HUS、熱および神経症候を含み、高齢者に50パーセントもの高い死亡率をもたらす血栓性血小板減少性紫斑病(「TTP」)と呼ばれる病気へ発展する場合がある。  
【０００５】
食物が持つ病原菌に起因する病気のリスクを低減するには、潜在的な汚染のポイントをコントロールすることにより達成することができる。牛肉産業は、食肉加工中に起こりうる潜在的な流出汚染、人間との接触および病原菌、特に 大腸菌（E. coli）Ｏ１５７：Ｈ７、の移動に起因する、病原菌のプリハーベストコントロールを研究する必要性を認識した。特に、よく料理されていないあるいは生のハンバーガー(牛挽肉)は、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７を含んでいるとして多数文書化されて騒動となった。  
【０００６】
従って、動物への健康上の利益のために大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７のような腸管病原体の成長を低下させあるいは停止させるための組成物および方法が必要であることが認識されている。更に、消費者の利益になるように収穫に先立って肉およびミルク生成動物中の腸管病原体の成長を低下させあるいは停止させることが重要である。食用動物におけるそのような低下あるいは停止によって、牛肉、乳製品および他の食品の消費者は、そのような病原菌を消費するリスクからより一層保護されるであろう。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
病原菌は動物の消化器官の多くの別々のエリアに住むことが知られているので、それらのエリアで自然に生じて、瘤胃、小腸および大腸のような消化器官の全体にわたって病原の成長を抑制することに有効な微生物を供給し強化することが非常に有益であることが分かった。本発明はこの目的を果たすのにふさわしいそのような自然に発生する微生物を識別し、それらの個体数と効能を増強する方法を実証する。本発明の製剤および方法における微生物は、動物の胃腸管(「GIT」)における病原菌の成長を抑制する組成物を個々に集団的に生成し得る。病原菌の成長を抑制することによって、本発明の方法および組成物は、処理された動物に起因する汚染食品が提供される可能性を低減する。  
【０００８】
本発明は、減少させあるいは撲滅させることが本発明の目的である病原体との特定の微生物の自然な競合を利用するものである。本発明の製剤中の微生物は多岐にわたる作用様式を示すかもしれない。これらのアクションには、殺菌剤として作用しあるいは殺菌剤を生成するような複雑な作用から、病原菌より多くの栄養素および付着スペースを使用して病原菌と単に競争することまであるので、病原菌が胃腸管（GIT）内に定着することが防止される。これらの有利な作用モードは、抗生物質等の物質を動物の動物飼料に追加する無菌畜産を使用するような効果を達成するために従来既知のそれほど有利でない技術と対比することができる。  
【０００９】
菌株３８１-ＩＬ-２８ (ＬＡ５１菌株およびＮＰＣ  ７４７としても知られ、呼ばれる)を含む特にアシドフィルス菌の競争率の高い作用様式において、それが微生物は大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７をアウトグローし、アウトポピュレートし、それによってその病原菌に対する抑制剤として作用する。大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７とアシドフィルス菌は、少なくとも部分的に、砂糖のような生体外の栄養素の同様な制限のある供給を利用すると考えられる。更に、これらの微生物は同一の付着スペースである胃腸管(GIT)のライニング上を得るために争う。アシドフィルス菌のような迅速な増殖の抑制剤で、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７に対する主要な作用様式は、利用可能な食品および適切な付着スペースを使用してそれを圧倒することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、反芻動物における腸の病原性感染症を治療しあるいは予防する方法を含むものであり、この方法は、前記反芻動物に対して治療上有効な量の乳酸生成バクテリアを含む組成物を投与することを含み、前記乳酸生成バクテリアが前記反芻動物の腸中の病原菌の量を減少させる。1つの実施例では、前記乳酸生成バクテリアは、枯草菌(Bacillus subtilis)、ビフィドバクテリウム-アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム-アニマリス(Bifidobacterium animalis)、ビフィドバクテリウム-ビフダム(Bifidobacterium bifudum)、ビフィドバクテリウム-インファンティス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム-ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム-サーモフィラム(Bifidobacterium thermophilum）、ラクトバチルス-アシッドフィラス(アシドフィルス菌：Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-アジリス(Lactobacillus agilis)、ラクトバチルス-アラクトサス(Lactobacillus alactosus)、ラクトバチルス-アリメンタリウス(Lactobacillus alimentarius)、ラクトバチルス-アミロフィラス(Lactobacillus amylophilus)、ラクトバチルス-アミロボランス(Lactobacillus amylovorans)、ラクトバチルス-アミロボルス(Lactobacillus amylovorus)、ラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)、ラクトバチルス-バタタス(Lactobacillus batatas)、ラクトバチルス-ババリカス(Lactobacillus bavaricus)、ラクトバチルス-ビファメンタス(Lactobacillus bifermentans)、ラクトバチルス-ビフィズス(ビフィズス菌：Lactobacillus bifidus)、ラクトバチルス-ブレビス(乳酸短杆菌：Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス-ブンチネリ(Lactobacillus buchnerii)、ラクトバチルス-ブルガリカス(ブルガリア菌：Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス-キャンテナフォルメ(Lactobacillus catenaforme)、ラクトバチルス-カセイ(カセイ菌：Lactobacillus casei）、ラクトバチルス-セロビオスス(Lactobacillus cellobiosus)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus collinoides)、ラクトバチルス-コンフスス(Lactobacillus confusus)、ラクトバチルス-コプロフィルス(Lactobacillus coprophilus)、ラクトバチルス-コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus corynoides)、ラクトバチルス-クリスパタス(乳酸桿菌：Lactobacillus crispatus)、ラクトバチルス-クルヴァトゥス(Lactobacillus curvatus)、デルブリュック-デルブルエキ(乳酸杆菌：Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス-デシデオサス(Lactobacillus desideosus)、ラクトバチルス-ダイバージェンス(Lactobacillus divergens)、ラクトバチルス-エンテリイ(Lactobacillus enterii)、ラクトバチルス-ファルシミニス(Lactobacillus farciminis)、ラクトバチルス-フェルメンタム(発酵乳酸杆菌：Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス-フリジダス(Lactobacillus frigidus)、ラクトバチルス-フルクティヴォランス(Lactobacillus fructivorans)、ラクトバチルス-ゲッセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス-ハロトレランス(Lactobacillus halotolerans)、ラクトバチルス-ヘルヴェティクス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス-ヘテロヒオキー(Lactobacillus heterohiochii)、ラクトバチルス-ヒルガルディ(ヒルガード乳酸杆菌：Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス-ホルドニアエ(Lactobacillus hordniae)、ラクトバチルス-イヌリヌス(Lactobacillus inulinus)、ラクトバチルス-イエンセニイ(イエンセン乳酸杆菌：Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルス-ユグリティ(Lactobacillus jugurti)、ラクトバチルス-カンドレリ(Lactobacillus kandleri)、ラクトバチルス-ケフィア(Lactobacillus kefir)、ラクトバチルス-ラクティス(乳酸杆菌：Lactobacillus lactis）ラクトバチルス-ライヒナマニ(ライヒマン乳酸杆菌：Lactobacillus leichmannii)、ラクトバチルス-リンドネリ(Lactobacillus lindneri)、ラクトバチルス-マレフェルメンタンス(Lactobacillus malefermentans)、ラクトバチルス-マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス-マルタロミカス(Lactobacillus maltaromicus)、ラクトバチルス-マイナー(Lactobacillus minor)、ラクトバチルス-ミナタス(Lactobacillus minutus)、ラクトバチルス-ノビリス(Lactobacillus nobilis)、ラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)、ラクトバチルス-ペントサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス-プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス-プスエドプランタラム(Lactobacillus pseudoplantarum)、ラクトバチルス-レウテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトバチルス-ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス-ロゴサエ(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トレランス(Lactobacillus tolerance)、ラクトバチルス-トルクエンス(Lactobacillus torquens)、ラクトバチルス-ルミニス(Lactobacillus ruminis)、ラクトバシラス-サケ(Lactobacillus sake)、ラクトバチルス-サリヴァリゥス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルス-サンフランシスコ(Lactobacillus sanfrancisco)、ラクトバチルス-シャーペアエ(Lactobacillus sharpeae)、ラクトバチルス-トリコデス(毛状乳酸杆菌：Lactobacillus trichodes)、ラクトバチルス-バクチノステルカス(Lactobacillus vaccinoster
cus)、ラクトバチルス-ヴィリデセンス(Lactobacillus viridescens)、ラクトバチルス-ヴィトゥリニス(Lactobacillus vitulinus)、ラクトバチルス-キシロサス(Lactobacillus xylosus)、ラクトバチルス-ヤマナシエンシス(Lactobacillus yamanashiensis)、ラクトバチルス-ザアエ(Lactobacillus zeae)、ペジオコックス-アヂドラクティシ(Pediococcus acidlactici)、ペジオコックス-デントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ストレプトコッカス-クレモリス(クレモリス菌：Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス-ディセチラクティス(Streptococcus discetylactis)、ストレプトコッカス-ファエシウム(Streptococcus faecium)、ストレプトコッカス-インターメジウス(Streptococcus intermedius)、ストレプトコッカス-ラクティス(乳酸連鎖球菌：Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス-サーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものである。1つの実施例では、前記乳酸生成バクテリアはアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)である。別の実施例では、前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strains)はＭ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１菌株を含んでいる。別の実施例では、前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)はＬＡ５１である。前記乳酸生成バクテリアは、少なくとも１×１０８ CFU/日のレベルで投与しても良い。あるいは、前記乳酸生成バクテリアは、約１×１０９ CFU/日のレベルで投与しても良い。前記病原菌は、大腸菌、サルモネラ-ティフィリウム(Salmonella typhirium)を含むサルモネラ菌株(Salmonella spp.)および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)からなる群から選択されたものであっても良い。あるいは、前記病原菌は 大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７であっても良い。  
【００１１】
発明の別の側面によると、反芻動物における病原性感染症を治療しあるいは予防するための組成物であって、該組成物は、動物飼料との組合せで、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたアシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)を含む。1つの実施例では、アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)はＬＡ４５またはＬＡ５１である。別の実施例では、アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)はＬＡ５１である。アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日で１匹の動物が食べる量と等しい食物の各量に対して１×１０８ＣＦＵを越える量で動物飼料中に存在するようにしても良く、あるいは、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)は、１日で１匹の動物が食べる量と等しい食物の各量に対して約１×１０９ CFUの量で動物飼料の中に存在しても良い。  
【００１２】
既に言及したとおり、菌株ＬＡ５１も３８１-ＩＬ-２８として知られており、オクラホマ州立大学収集からその受入番号で利用可能である。発明者はＬＡ５１をアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)であると見なしているが、キャラクタリゼーションの他の手段はそれをラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)とラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus）であると識別している。ＬＡ４５は、受入番号ＡＴＣＣ ５３５４５でアメリカンタイプ微生物収集で寄託されている。Ｍ３５とＬ４１１は、ネブラスカ州立大学から利用可能なそれらの細菌の受入番号である。  
【００１３】
発明の別の側面によると、反芻動物における腸内の病原性感染症を治療しあるいは予防する方法であって、該方法は、前記反芻動物に治療上有効な量の乳酸生成バクテリアおよび乳酸塩利用バクテリアを含む組成物を投与することを含み、前記乳酸生成バクテリアが前記反芻動物の腸中の病原菌の量を減少させる。  前記乳酸生成バクテリアは、枯草菌(Bacillus subtilis)、ビフィドバクテリウム-アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム-アニマリス(Bifidobacterium animalis)、ビフィドバクテリウム-ビフダム(Bifidobacterium bifudum)、ビフィドバクテリウム-インファンティス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム-ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム-サーモフィラム(Bifidobacterium thermophilum）、ラクトバチルス-アシッドフィラス(アシドフィルス菌：Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-アジリス(Lactobacillus agilis)、ラクトバチルス-アラクトサス(Lactobacillus alactosus)、ラクトバチルス-アリメンタリウス(Lactobacillus alimentarius)、ラクトバチルス-アミロフィラス(Lactobacillus amylophilus)、ラクトバチルス-アミロボランス(Lactobacillus amylovorans)、ラクトバチルス-アミロボルス(Lactobacillus amylovorus)、ラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)、ラクトバチルス-バタタス(Lactobacillus batatas)、ラクトバチルス-ババリカス(Lactobacillus bavaricus)、ラクトバチルス-ビファメンタス(Lactobacillus bifermentans)、ラクトバチルス-ビフィズス(ビフィズス菌：Lactobacillus bifidus)、ラクトバチルス-ブレビス(乳酸短杆菌：Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス-ブンチネリ(Lactobacillus bunchnerii)、ラクトバチルス-ブルガリカス(ブルガリア菌：Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス-キャンテナフォルメ(Lactobacillus cantenaforme)、ラクトバチルス-カセイ(カセイ菌：Lactobacillus casei）、ラクトバチルス-セロビオスス(Lactobacillus cellobiosus)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus collinoides)、ラクトバチルス-コンフスス(Lactobacillus confusus)、ラクトバチルス-コプロフィルス(Lactobacillus coprophilus)、ラクトバチルス-コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus corynoides)、ラクトバチルス-クリスパタス(乳酸桿菌：Lactobacillus cryspatus)、ラクトバチルス-クルヴァトゥス(Lactobacillus curvatus)、デルブリュック-デルブルエキ(乳酸杆菌：Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス-デシデオサス(Lactobacillus desideosus)、ラクトバチルス-ダイバージェンス(Lactobacillus divergens)、ラクトバチルス-エンテリイ(Lactobacillus enterii)、ラクトバチルス-ファルシミニス(Lactobacillus farciminis)、ラクトバチルス-フェルメンタム(発酵乳酸杆菌：Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス-フリジダス(Lactobacillus frigidus)、ラクトバチルス-フルクティヴォランス(Lactobacillus fructivorans)、ラクトバチルス-ゲッセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス-ハロトレランス(Lactobacillus halotolerans)、ラクトバチルス-ヘルヴェティクス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス-ヘテロヒオキー(Lactobacillus heterohiochii)、ラクトバチルス-ヒルガルディ(ヒルガード乳酸杆菌：Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス-ホルドニアエ(Lactobacillus hordniae)、ラクトバチルス-イヌリヌス(Lactobacillus inulinus)、ラクトバチルス-イエンセニイ(イエンセン乳酸杆菌：Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルス-ユグリティ(Lactobacillus jugurti)、ラクトバチ���ス-カンドレリ(Lactobacillus kandleri)、ラクトバチルス-ケフィア(Lactobacillus kefir)、ラクトバチルス-ラクティス(乳酸杆菌：Lactobacillus lactis）ラクトバチルス-ライヒナマニ(ライヒマン乳酸杆菌：Lactobacillus leichmannii)、ラクトバチルス-リンドネリ(Lactobacillus lindneri)、ラクトバチルス-マレフェルメンタンス(Lactobacillus malefermentans)、ラクトバチルス-マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス-マルタロミカス(Lactobacillus maltaromicus)、ラクトバチルス-マイナー(Lactobacillus minor)、ラクトバチルス-ミナタス(Lactobacillus minutus)、ラクトバチルス-ノビリス(Lactobacillus nobilis)、ラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)、ラクトバチルス-ペントサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス-プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス-プスエドプランタラム(Lactobacillus pseudoplantarum)、ラクトバチルス-レウテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトバチルス-ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス-ロゴサエ(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トレランス(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トルク(Lactobacillus torques)、ラクトバチルス-ルミニス(Lactobacillus ruminis)、ラクトバシラス-サケ(Lactobacillus sake)、ラクトバチルス-サリヴァリゥス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルス-サンフランシスコ(Lactobacillus sanfrancisco)、ラクトバチルス-シャーペアエ(Lactobacillus sharpeae)、ラクトバチルス-トリコデス(毛状乳酸杆菌：Lactobacillus trichodes)、ラクトバチルス-バクチノステルカス(Lactobacillus vaccinostercus)、ラクトバチルス-ヴィリデセンス(Lactobacillus viridescens)、ラクトバチルス-ヴィトゥリニス(Lactobacillus vitulinus)、ラクトバチルス-キシロサス(Lactobacillus xylosus)、ラクトバチルス-ヤマナシエンシス(Lactobacillus yamanashiensis)、ラクトバチルス-ザアエ(Lactobacillus zeae)、ペジオコックス-アヂドラクティシ(Pediococcus acidlactici)、ペジオコックス-デントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ストレプトコッカス-クレモリス(クレモリス菌：Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス-ディセチラクティス(Streptococcus discetylactis)、ストレプトコッカス-ファエシウム(Streptococcus faecium)、ストレプトコッカス-インターメジウス(Streptococcus intermedius)、ストレプトコッカス-ラクティス(乳酸連鎖球菌：Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス-サーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものであっても良い。  前記乳酸塩利用バクテリアは、メガスフェアラエ-エイスルデニイ(Megasphaerae eilsdenii)、ペプトストレプトコッカス-アサッカロリティクス(Peptostreptococcus asaccharolyticus)、プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌酸性プロピオニシ(Propionibacterium acid-propionici)、プロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌グロボサム(Propionibacterium globosum)、プロピオン酸菌ジェンセンニ(Propionibacterium jensenii)、プロピオン酸菌シェルマンニ(Propionibacterium shermanii)、プロピオン酸菌株(Propionibacterium spp.)、セレノモナス属(Selenomonas ruminantium)、およびこれらの組合せからなる群から選択されたものであっても良い。  1つの実施例では、前記乳酸生成バクテリアはアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)である。他の実施例では、前記アシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)は、Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１からなる群から選択されたものである。他の���施例では、前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)はＬＡ５１菌株である。他の実施例では、前記乳酸塩利用バクテリアは、プロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)である。他の実施例では、前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３およびＰ９９からなる群から選択されたものである。他の実施例では、前記プロピオン酸菌フリュデンレイチ菌株(Propionibacterium freudenreichii strain)は、受入番号ＡＴＣＣ９６１５としてＡＴＣＣから利用可能なＰＦ２４である。前記乳酸塩利用バクテリアおよび前記乳酸生成バクテリアは、それぞれ１×１０８を越えるCFU/日の量および約１×１０９CFU/日の量を与えても良い。これに代えて、前記乳酸生成バクテリアは、約１×１０６CFU/日の量を与えても良い。他の実施例では、前記乳酸生成バクテリアは、１×１０６CFU/日を越える量、好ましくは１×１０８を越え
るCFU/日の量、最も好ましくは約１×１０９CFU/日の量を投与する。  
【００１４】
本発明の別の側面は、反芻動物における病原性感染症を治療しあるいは予防するための組成であって、該組成は、 Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１、Ｌ４１１およびその組合せからなる群から選択されたアシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus strain)と、Ｐ９、ＰＦ２４、Ｐ４２、Ｐ９３、Ｐ９９およびその組合せからなる群から選択されたプロピオン酸菌フリュデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)との組合せを含む。ある実施例では、前記組成物は更に動物飼料を含む。他の実施例では、前記アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)および前記プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)は、それぞれ１日に１匹の動物が食べあるいは飲む量と等しい食物あるいは水の各量の１×１０８CFUを越える量で動物飼料あるいは水に存在する。他の実施例では、アシドフィルス菌菌株ＬＡ５１(Lactobacillus acidophilus strain ＬＡ５１)およびプロピオン酸菌-フリュデンレイチＰＦ２４(Propionibacterium freudenreichii ＰＦ２４)は、それぞれ１日に１匹の動物が食べる量と等しい食物の量に対して約１×１０９CFUの量で動物飼料に存在する。他の実施例では、前記組成物は、１日に１匹の動物が食べる量と等しい食物の量に対して約１×１０６CFUの量で動物飼料に存在する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、動物の内臓内における病原菌の増殖を減少させるあるいは除去するための方法および組成物を提供するものである。生体外および生体内のテストを、特定菌株の微生物を用い、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７を含む多くの病原菌の増殖の抑制に特に有効であることが判明した。ここに使用されるように、「病原菌」という用語は、宿主動物内で悪影響をもたらす全ての細菌、特に肉および酪農動物に感染し、続いて人間の食糧供給に感染し、それにより人体に疾病を引き起こす細菌に言及する。本発明は、大腸菌(E. coli)、サルモネラ-ティフィリウム(Salmonella typhirium)を含むサルモネラ菌株および黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)を含む病原菌の増殖の抑制を示すいくつかのテストによってここに実証されるように、種々様々な病原体の増殖を予防するのに役立つと考えられる。  
【００１６】
ここに記述された製剤と方法は、様々な動物種および商習慣に適用可能である。動物の胃腸管(GIT)における病原菌の抑制は、肉、ミルク、鶏肉および魚の営業生産において使用されるもののために考えられ得る。1つの側面によると、本発明は、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７の発生率および増殖を抑制するために動物を治療する方法を含む。その治療方法は、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７の生体内での増殖を抑制する動物に、治療上有効な量の選択されたアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)を投与することを含んでいる。ここに使用されるように、用語「治療上有効な量」は、病原菌のための不親切な環境を創ることにより治療効果を生じる、動物に与えられた細菌の量をいう。本発明の乳酸を生成する細菌は１×１０８CFU/日を超える量だけ投与することが望ましいが、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)の治療上有効な量は、他の成分と組合せて与えられたとき１×１０６CFU/日で十分であるということが発見された。その選択されたアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)が、約１×１０９CFU/日のレベルで与えられた場合、特に有効であることが判明した。  
【００１７】
大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７抑制剤として特に有効であると発見されたアシドフィルス菌菌株(Lactobacillus acidophilus)の中には、３８１-ＩＬ-２８、あるいはＬＡ５１菌株がある。1つの側面では、この発明は、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７抑制剤としての動物摂取用に所定濃度の製品として供給された時、上記方法において有効な組成物であるアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)菌株を含んでいる。本発明以前に、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)微生物は、例えば動物飼料材料のより良い利用のため等の異なる目的で動物飼料添加物として与えられていた。例えば米国特許第5,534,271号および5,529,793号(レファレンスとしてここに組込まれている)は、反芻動物によって動物飼料の利用を改善する方法において、乳酸生成バクテリアと乳酸塩利用バクテリアの特定の組合せを使用し得る、ことを教示している。本発明は、これとは異なり、動物内の病原性の増殖を抑制するためおよび乳製品の質および量を改善するための方法を規定するものである。しかしながら、本発明の1つの側面は、ここに開示された病原性の増殖を抑制するためのある斬新な製剤が動物飼料の利用を改善するのにも役立つという発見を含んでいる。これらの製剤形態が以前に動物飼料の利用の改善には知られていなかったという範囲で、それらはその目的のための本発明の一部を形成する。    
【特許文献１】米国特許第5,534,271号公報
【特許文献２】米国特許第5,529,793号公報
【００１８】
1つの実施例では、本発明は、動物内の大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７増殖の抑制剤としての製品を提供する方法を含んでいる。この方法は、動物内の大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７抑制剤としての治療上有効な微生物を選択すること、およびこの微生物を含む製品を製造することを含む。一般に、そのような製品は、病原菌抑制剤として認定されるための政府承認、特にアメリカ農務省(USDA)からの証明が典型的に必要である。もし製品が、例えば、人間中の大腸菌感染症を打ち消すために人間が消費するものである場合には、米国食品医薬品局(FDA)による承認が必要となる。  
【００１９】
治療上有効であると分かった微生物は、例えば、約１×１０９ CFU/日の供与量で動物に与えられた時、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７および他の病原微生物の生体内での増殖を抑制するアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)、好ましくはＬＡ５１菌株、である。あるいは、十分なレベルは１×１０８CFU/日であると考えられるかもしれない。正確な投与レベルは、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７のような病原菌の増殖と競争しかつ抑制するために、生存可能な微生物が腸管に配達されることを確認するために与えられる細菌に対する胆汁耐性を評価することによって当該技術分野に熟練している人々によって容易に決定することができる。  
【００２０】
本発明は、動物の胃腸管(GIT)内の病原菌増殖を抑制することができるいくつかの自然発生の微生物を明らかにする。多くの病原菌が耐酸性で、動物の消化器官の多くの別個のエリアに住むので、本発明の自然発生の微生物は、より低いpH値でかつ例えば瘤胃、小腸および大腸等の胃腸管(GIT)のいくつかのエリアで病原菌増殖を好適に抑制することができる。初期の研究は、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７個体数は干し草動物飼料を給餌することにより牛では減少することがあり、ルーメンpHが７．０まで増加する、ということを示している。しかしながら、生産プロセスのこの段階において動物がよりよいカーカス特性を得るために典型的には穀物の割合の大きな動物飼料を与えるため、仕上あるいは飼養場産業における応用範囲を狭めるものであった。  
【００２１】
本発明の製剤および方法に役立つ微生物は、胃腸管(GIT)内で乳酸を生成し得る。これらの微生物には、例えば、ラクトバチルス(Lactobacillus)あるいは腸球菌(Enterococcus)が含まれる。いずれか一方あるいは両方の種類を使用し得る。それらは、グルコースまたはラクトーゼのような糖類を利用し、あるいは腸球菌(Enterococcus)の場合にはデンプンを利用し、乳酸を生成してローカルpH(ペーハー)レベルを低減させる能力によって識別される。微生物の選択は、所要の効果が与えられるべき位置に依存することができる。例えば、ラクトバチルス属(genus Lactobacillus)は、腸球菌(Enterococcus)微生物以上にローカルpH(ペーハー)を減少させることができる。  
【００２２】
本発明の方法および組成物において使用し得る乳酸生成微生物には、以下のものに限定されるものではないが例えば次のものが含まれる:枯草菌(Bacillus subtilis)、ビフィドバクテリウム-アドレセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム-アニマリス(Bifidobacterium animalis)、ビフィドバクテリウム-ビフダム(Bifidobacterium bifudum)、ビフィドバクテリウム-インファンティス(Bifidobacterium infantis)、ビフィドバクテリウム-ロンガム(Bifidobacterium longum)、ビフィドバクテリウム-サーモフィラム(Bifidobacterium thermophilum）、ラクトバチルス-アシッドフィラス(アシドフィルス菌：Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-アジリス(Lactobacillus agilis)、ラクトバチルス-アラクトサス(Lactobacillus alactosus)、ラクトバチルス-アリメンタリウス(Lactobacillus alimentarius)、ラクトバチルス-アミロフィラス(Lactobacillus amylophilus)、ラクトバチルス-アミロボランス(Lactobacillus amylovorans)、ラクトバチルス-アミロボルス(Lactobacillus amylovorus)、ラクトバチルス-アニマリス(Lactobacillus animalis)、ラクトバチルス-バタタス(Lactobacillus batatas)、ラクトバチルス-ババリカス(Lactobacillus bavaricus)、ラクトバチルス-ビファメンタス(Lactobacillus bifermentans)、ラクトバチルス-ビフィズス(ビフィズス菌：Lactobacillus bifidus)、ラクトバチルス-ブレビス(乳酸短杆菌：Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス-ブンチネリ(Lactobacillus bunchnerii)、ラクトバチルス-ブルガリカス(ブルガリア菌：Lactobacillus bulgaricus)、ラクトバチルス-キャンテナフォルメ(Lactobacillus cantenaforme)、ラクトバチルス-カセイ(カセイ菌：Lactobacillus casei）、ラクトバチルス-セロビオスス(Lactobacillus cellobiosus)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus collinoides)、ラクトバチルス-コンフスス(Lactobacillus confusus)、ラクトバチルス-コプロフィルス(Lactobacillus coprophilus)、ラクトバチルス-コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス-コリノイデス(Lactobacillus corynoides)、ラクトバチルス-クリスパタス(乳酸桿菌：Lactobacillus cryspatus)、ラクトバチルス-クルヴァトゥス(Lactobacillus curvatus)、デルブリュック-デルブルエキ(乳酸杆菌：Lactobacillus delbrueckii）、ラクトバチルス-デシデオサス(Lactobacillus desideosus)、ラクトバチルス-ダイバージェンス(Lactobacillus divergens)、ラクトバチルス-エンテリイ(Lactobacillus enterii)、ラクトバチルス-ファルシミニス(Lactobacillus farciminis)、ラクトバチルス-フェルメンタム(発酵乳酸杆菌：Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス-フリジダス(Lactobacillus frigidus)、ラクトバチルス-フルクティヴォランス(Lactobacillus fructivorans)、ラクトバチルス-ゲッセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス-ハロトレランス(Lactobacillus halotolerans)、ラクトバチルス-ヘルヴェティクス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス-ヘテロヒオキー(Lactobacillus heterohiochii)、ラクトバチルス-ヒルガルディ(ヒルガード乳酸杆菌：Lactobacillus hilgardii）、ラクトバチルス-ホルドニアエ(Lactobacillus hordniae)、ラクトバチルス-イヌリヌス(Lactobacillus inulinus)、ラクトバチルス-イエンセニイ(イエンセン乳酸杆菌：Lactobacillus jensenii)、ラクトバチルス-ユグリティ(Lactobacillus jugurti)、ラクトバチルス-カンドレリ(Lactobacillus kandleri)、ラクトバチルス-ケフィア(Lactobacillus kefir)、ラクトバチルス-ラクティス(乳酸杆菌：Lactobacillus lactis）ラクトバチルス-ライヒナマニ(ライヒマン乳酸杆菌：Lactobacillus leichmannii)���ラクトバチルス-リンドネリ(Lactobacillus lindneri)、ラクトバチルス-マレフェルメンタンス(Lactobacillus malefermentans)、ラクトバチルス-マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス-マルタロミカス(Lactobacillus maltaromicus)、ラクトバチル
ス-マイナー(Lactobacillus minor)、ラクトバチルス-ミナタス(Lactobacillus minutus)、ラクトバチルス-ノビリス(Lactobacillus nobilis)、ラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)、ラクトバチルス-ペントサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス-プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス-プスエドプランタラム(Lactobacillus pseudoplantarum)、ラクトバチルス-レウテリ(Lactobacillus reuteri)、ラクトバチルス-ラムノサス(Lactobacillus rhamnosus)、ラクトバチルス-ロゴサエ(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トレランス(Lactobacillus rogosae)、ラクトバチルス-トルク(Lactobacillus torques)、ラクトバチルス-ルミニス(Lactobacillus ruminis)、ラクトバシラス-サケ(Lactobacillus sake)、ラクトバチルス-サリヴァリゥス(Lactobacillus salivarius)、ラクトバチルス-サンフランシスコ(Lactobacillus sanfrancisco)、ラクトバチルス-シャーペアエ(Lactobacillus sharpeae)、ラクトバチルス-トリコデス(毛状乳酸杆菌：Lactobacillus trichodes)、ラクトバチルス-バクチノステルカス(Lactobacillus vaccinostercus)、ラクトバチルス-ヴィリデセンス(Lactobacillus viridescens)、ラクトバチルス-ヴィトゥリニス(Lactobacillus vitulinus)、ラクトバチルス-キシロサス(Lactobacillus xylosus)、ラクトバチルス-ヤマナシエンシス(Lactobacillus yamanashiensis)、ラクトバチルス-ザアエ(Lactobacillus zeae)、ペジオコックス-アヂドラクティシ(Pediococcus acidlactici)、ペジオコックス-デントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ストレプトコッカス-クレモリス(クレモリス菌：Streptococcus cremoris)、ストレプトコッカス-ディセチラクティス(Streptococcus discetylactis)、ストレプトコッカス-ファエシウム(Streptococcus faecium)、ストレプトコッカス-インターメジウス(Streptococcus intermedius)、ストレプトコッカス-ラクティス(乳酸連鎖球菌：Streptococcus lactis)、ストレプトコッカス-サーモフィラス菌(Streptococcus thermophilus)。  
【００２３】
発明の1つの側面によれば、上記リストされた乳酸生成微生物はいずれも、病原菌、特に大腸菌(Escherichia coli)のような病原菌を含む細菌性病原菌、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、およびサルモネラ-ティフィリウム(Salmonella typhiri)を含むサルモネラ菌株(Salmonella spp.)の感染を抑制しあるいは治療するために使用し得る。これらの乳酸生成微生物は、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７の感染を抑制しあるいは治療するのに特に役立つ。これらの微生物は、屠殺重量、カーカス品質を増加させることによって食用動物のパフォーマンスを改善するため、カーカス病原菌を減少させるため、そして毎日の平均体重増加および動物飼料効率比を増加させるために、使用し得るということも判明した。これらの微生物のうちのいずれかの1つがこれらの目的のいずれかに使用することができ、あるいは、これら微生物のどんな組合せも使用し得る。  
【００２４】
別の側面では、本発明は、病原微生物と張り合う乳酸生成微生物の有効性を増強する別の微生物と共に、前節に記述されたもののような乳酸生成微生物の組合せの製剤を含む。本発明の製剤において使用し得る強化微生物は、好ましくは乳酸利用微生物である。本発明に有益な乳酸利用微生物は、例えば以下のものを例示し得る、但しこれらに制限されるものではない：メガスフェアラエ-エイスルデニイ(Megasphaerae eilsdenii)、ペプトストレプトコッカス-アサッカロリティクス(Peptostreptococcus asaccharolyticus)、プロピオン酸菌(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌酸性プロピオニシ(Propionibacterium acid-propionici)、プロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)、プロピオン酸菌グロボサム(Propionibacterium globosum)、プロピオン酸菌ジェンセンニ(Propionibacterium jensenii)、プロピオン酸菌シェルマンニ(Propionibacterium shermanii)、プロピオン酸菌株(Propionibacterium spp.)、およびセレノモナス属(Selenomonas ruminantium)。  微生物を強化する治療上有効な量は、動物に与えられて有益な治療効果をもたらす量であり、例えば微生物を強化する治療上有効な量は、１×１０６CFU/日、好ましくは１×１０８ CFU/日、更に好ましくは約１×１０９ CFU/日を超えるものであっても良い。  
【００２５】
特定の微生物を使用すると、所要の効果が部分的にもたらされる。製剤において使用される異なる微生物は、互いに互換性をもち、例えば共に成長し、好ましくは他方を強化することができるものであるべきである。さらに、それら微生物は、活動位置で速く成長することが好ましい。前記微生物は、胆汁酸および(または)商用抗生物質に対する抵抗力等の様々な特性で用途に適したものを選択することができる。  
【００２６】
好ましいモードでは、本発明の製剤は、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-クリスパタス(Lactobacillus crispatus)あるいはラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)を個々にあるいは任意の組合せで含む。別の好ましいモードにおいて、発明の製剤は、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス-クリスパタス(Lactobacillus crispatus)あるいはラクトバチルス-ムリナス(Lactobacillus murinus)を個々にあるいは任意の組合せで含み、また、これらに加えてプロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)あるいはプロピオン酸菌シェルマンニ(Propionibacterium shermanii)、あるいはそれら両方を含む。好ましくは、本発明の製剤は、ドライサプリメントで牛あるいは乳牛の毎日の動物飼料に、あるいは動物の毎日の動物飼料に適用される液体スプレーで適用される。その製剤は1つの粉末で、一日に一度、あるいは一日のうちに、一回の食事で、あるいは複数の食事に分けて、あるいは他の適切な方法で与えられる。  
【００２７】
生体外試験: 実施例1および2  
【００２８】
特定の細菌が大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７その他の病原菌の増殖と競争し、干渉する能力を実証するいくつかの生体外試験が行なわれた。  
【００２９】
実施例１  
【００３０】
乳酸生成および乳酸利用微生物の凍結乾燥された培養が、大腸菌(E. coli) Ｏ１５７：Ｈ７、ストレプトコッカス-アウレウス(Streptococcus aureus)およびサルモネラ菌のような病原菌の増殖を抑制する能力で選択された。乳酸生成および乳酸利用微生物の組合せは、様々な病原菌の増殖を最大限に抑制する能力でさらに選択された。  
【００３１】
本発明の方法および製剤において利用し得る微生物を特定するために、生体外試験を行って特に有効な単一の菌株を明らかにした。プロピオン酸菌(Propionibacterium)の7つの菌株およびラクトバチルス(Lactobacillus)の6つの菌株が、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７が成長した寒天平板上で抑制ゾーンを作ることができるバクテリオシンを生成する能力で選別された。それらのテストの結果を以下の表に示す。  
【００３２】
【表１】
2006501311.tif 000002
【００３３】
【表２】
2006501311.tif 000003
【００３４】
上記表から、ラクトバチルス(Lactobacillus)乳酸を生成する微生物の3つの菌株、すなわち３８１ＩＬ２８、Ｃ２８、ＦＲ３、およびプロピオン酸菌(Propionibacterium)乳酸利用微生物の4つの菌株、すなわちＰ９、Ｐ４２、Ｐ９３、およびＰ９９、は病原菌、特に大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７、の増殖を抑制する能力を実証するものであると認識することができる。様々な病原菌の増殖の抑制を最大限にする能力で乳酸生成および乳酸利用微生物の組合せを選択することができると認識されるべきである。  
【００３５】
実施例２  
【００３６】
アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)とプロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)菌の選択された菌株は、３８℃において豊富な半嫌気性媒体上で大腸菌との生体外比較において成長し、どの菌株が生体内増殖条件で大腸菌増殖と有効に競合することができるかを決定した。ＬＡ５１とＬＡ４５の菌株が本質的に大腸菌を追い出して成長することができたことが判明した。  
【００３７】
【表３】
2006501311.tif 000004
【００３８】
生体内実施例 ３〜９  次の生体内研究では、反芻動物は、必要な成長媒体成分と共にテストされた十分な量の菌株を正常な食物摂取によって反芻動物の腸へ提供することにより接種を受けた。大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７等の病原菌の抑制された増殖が、羊、ヤギおよび獲物(game)のような他の反芻動物のみならず、飼養場および乳牛においても観察された。様々な接種プロセスが利用された。これらの接種プロセスには例えば以下のものがある。  ＊水に凍結乾燥された培養を入れ、次いで、その組成物を動物の動物飼料上にスプレーしあるいは混合する。その組成物は、動物の動物飼料に加えられる追加のキャリアーと共に、ドライフォームであっても良い。前記動物飼料は、トウモロコシ、穀物、トウモロコシ副産物、穀物副産物、アルファルファ干し草、トウモロコシ・サイレージ、小粒サイレージ、牧乾草、プラント茎、脂肪種子副産物、蛋白質食品、尿素、鉱物、糖蜜および様々な油脂製品などの1またはそれ以上の成分を含むものであっても良い。  ＊供給すべき溶液を動物およびその動物の消化器官に直接提供するための、各種油、水および(または)組成物中に凍結乾燥された培養をサスペンドすること。  ＊凍結乾燥された培養を動物の飲料水に加えること。  
【００３９】
実施例３  
【００４０】
生体内試験は、病原菌大腸菌(E. coli) ＯＰ１５７:Ｈ７の抑制のための乳酸生成および乳酸利用微生物の組合せで行なわれた。それらのテスト結果は、表４および５において示される。  
【００４１】
【表４】
2006501311.tif 000005
【００４２】
【表５】
2006501311.tif 000006
【００４３】
データはｌｏｇ１０CFU大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７/mlで示されている。微生物ＰＦ２４、ＬＡ４５およびＬＡ５１はいずれも、約４．０から約５．０までのpH(ペーハー)、最大約７．０のpH(ペーハー)で、機能することができる。牛肉生産では、主要な関心事は、ルーメンpH(ペーハー)を約７．０から約５．０から約６．９までの範囲、本発明の製剤が好適に機能する範囲、まで減少させる傾向があるハイレベルの濃縮物を含む最終動物飼料上で牛の病原菌を抑制することである。上記生体内試験は乳酸利用微生物ＰＦ２４および乳酸生成微生物ＬＡ４５およびＬＡ５１の使用を例証しているが、本発明の製剤および方法に適応することができる多くの菌株があるので、本発明は上記微生物に限定されるものではないと理解されるべきである。  
【００４４】
生体内実験も、単一の菌株で、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７を含む病原菌増殖阻害の有効性を評価するための行われた。Ｍ３５およびＬＡ５１は各々、特に、対照動物のレベルの約５０パーセント以上で大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の拡散(shedding)を抑制する能力を実証している。  
【００４５】
実施例４  
【００４６】
１８０頭の牛が重量で分類され、1つの囲い場当たり５頭が囲い場に入れられた。重量測定中に、糞のサンプルが各動物の直腸から直接採取された。最初、１８０頭のうちの３頭だけに大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に対して陽性のテスト結果が出た。これら動物は、各囲い場の床の５つの新鮮な糞からコンポジット試料をとることにより、２週単位で拡散(shedding)がモニターされた。選別期間２週間後、３６の囲い場のうちの２５、すなわち６９%が大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に対して陽性であった。選別の４週間後、有症率は、陽性だった７つの囲い場に、すなわち１９．４％に低下した。    
【００４７】
給餌時期を約６０日残したまま、牛は重量を計測され、再び選別され、個々の動物が病原菌の拡散(shedding)のために再びテストされた。合計２６頭、すなわち１４．４％が病原菌を拡散(shedding)していた。それら動物は重量および拡散(shedding)パターンに基づいて再分類された。動物治療をこの時期から始めた。  
【００４８】
２つの異なるタイプの乳酸生成バクテリア(ＮＰＣ  ７４７およびＮＰＣ  ７５０)を利用する別個の２つの治療が、研究動物において大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７を減少させる能力をテストするために行われた。  
【００４９】
治療期間の初めに続く１週間の囲い場テストは、治療を受けない囲い場の２５％が大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に対して陽性であり、その一方、ＮＰＣ  ７５０治療を受けている囲い場の８％が陽性、ＮＰＣ  ７４７治療を受けている囲い場の０％が陽性だったことを示した。治療２週間後に、対照(治療していない)動物から得られたサンプルの５０％が陽性であり、その一方でＮＰＣ  ７５０およびＮＰＣ  ７４７治療を受けている動物からのサンプルの３０％および２０％だけが、それぞれ、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に対して陽性であった。テストは、ＮＰＣ  ７４７治療を受けている対照のほぼ半分だけ拡散率(shedding rate)が低下することを示しており、ＮＰＣ  ７５０治療を受けているものよりも大きく低減していた。ＮＰＣ  ７４７治療を受ける前に大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７を拡散(shedding)する全ての動物が、治療を受けた後に陰性のテスト結果が出た。更に、病原菌は同一の囲い場の他の動物に広がらなかった。治療を実施当初に陽性のテスト結果が出た大多数の対照動物は陽性のテスト結果が出続け、同一の囲い場の他の動物達は病原菌を拡散(shed)し始めた。  
【００５０】
４２日目に、個々の動物サンプルの治療法に著しい(Ｐ＜０．０５)違いがあった。ＮＰＣ  ７４７菌株が与えられた動物の１０パーセント(１０％)は陽性だったが、ＮＰＣ  ７５０が与えられた動物の２０％は陽性であった。これに対して、対照動物の５８％が陽性であった。  
【００５１】
動物は畜殺される前にサンプリングされた。ＮＰＣ  ７４７治療を受けている動物は、陽性の動物試験の３．３％だけ著しく低い(Ｐ＜０．０５)検知できない大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７を持っていた。ＮＰＣ  ７５０菌株を受け取る動物と対照群の動物は、それぞれ１５％および２０％拡散(shedding)と、さほど異なるものではなかった。  
【００５２】
屠殺工場において得られた糞のサンプルは、ＮＰＣ  ７４７治療動物の３．３％が陽性、ＮＰＣ  ７５０治療動物の６．６％が陽性、また対照動物の１０％が陽性であることを示していた。すべてのサンプリング時間にわたるサンプルをすべて平均すると、対照動物の６１．７％は給餌期間に病原菌を拡散し、ＮＰＣ  ７５０動物の５１．７％は病原菌を拡散し、ＮＰＣ  ７４７治療をした動物の３５％だけが病原菌を拡散した。  
【００５３】
実施例５  
【００５４】
１００頭の去勢牛が、1つの囲い場当たり１０頭の囲い場に入れられた。最初に、糞のサンプルは、1つの囲い場当たり２頭の去勢牛の直腸から直接採取した。別のサンプルを１７０日後に採取した。同一の牛がいずれのサンプリングでもサンプリングされた。治療を受けない対照群も、本研究に含まれていた。治療を受けた動物は、アシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)菌株ＬＡ５１(商標ＮＰＣ２０００として購入)で治療された。全ての群にルメンシン(Rumensin)とティラン(Tylan)を与えた。分析の結果を下の表に示す。  
【００５５】
【表６】
2006501311.tif 000007
【００５６】
【表７】
2006501311.tif 000008
【００５７】
実施例６  
【００５８】
食物等級の機能性細菌(probiotic bacteria)が実験的に感染され離乳した子牛中で大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の糞のシェディングを減少させることができるかどうか判定するための研究を行なった。この研究における機能性細菌(probiotic bacteria)は、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に対するハイ・レベルの生体外の有毒活動に基づいて選択された様々な牛糞ラクトバチルス(Lactobacillus)種アイソレイトを含むものであった。  
【００５９】
５頭の７か月の子牛がルーメン・カニューレ挿入手術を施され、生物学的安全性レベル３隔離室に収容されて回復させられた。これら子牛は、下記の表８にリストされた機能性細菌菌株(probiotic bacterial strains)のうちの1つの１ｘ１０９ CFUで、６０日の期間に１日に一回、イントラルミナリー(intra-ruminally)に接種を受けた。  
【００６０】
プロバイオテック管理(probiotic administration)開始後２週間、これら子牛に、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７(Ｃ１)を第一胃内に接種されて挑戦された。第１接種(Ｃ１)の数日後、１５(Ｃ２)および２７(Ｃ３)頭の子牛が再び挑戦された。第１接種Ｃ１は、菌株９２０、９２２、９４４および９６６の組合せからなる合計約１x１０９CFUであった。第２接種Ｃ２は、これら菌株の合計約１．６３×１０１１CFUであった。第３接収Ｃ３は、約１ｘ１０９CFUの約菌株８６−２４を含むものであった。  
【００６１】
各挑戦前および挑戦後、これら子牛は、接種材料菌株の糞の拡散(shedding)について毎日テストされた。２週毎に、動物は、ティアタンパク質(Tir protein)およびＯ１５７リポ多糖類(LPS)抗原に対する血清抗体タイターによって評価される免疫を示す証拠についてテストされた。それらの結果は、下の表８に示される。対照を含む子牛がみな第１Ｃ１および第２Ｃ２治療に続く１未満のS:C比を持っていたので、挑戦前の子牛はすべて、挑戦菌株に対する免疫の有意水準を子牛に提供した、比較的高い反ティア(anti-Tir)抗体価を持っていた。  
【００６２】
【表８】
2006501311.tif 000009
【００６３】
上記の表中の拡散/挑戦比は、接種の後に拡散された大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の合計値を示す。この数は、動物のより正確な比較を可能とし、牛が微生物を拡散した日の総数を単に調査するよりもっと意味のある情報を提供する値を標準化する。Ｍ３５、ＬＡ４５、ＬＡ５１およびＬ４１１は、様々なテストされたラクトバチルス(Lactobacillus)菌株を示す。ＰＢＳは対照動物を表わす。合計拡散は糞便時期における1グラム当たりのＣＦＵであり、拡散時期の陽性の日におけるグラムで糞の出力に拡散の陽性の日の総数の時間を掛けたものである。  
【００６４】
反ティア(anti-Tir)タイターが子牛の間で著しく異なるものではなかったので、４つのプロバイオティクス(probiotics)のうちの３つは、Ｍ３５を与えられた子牛の８０％、ＬＡ５１を与えられた子牛の８４％、４１１を与えられた子牛の５８％と比較して、Ｓ：Ｃ比の低減に基づく効力を持っている。さらに、Ｍ３５を与えられた動物は、対照Ｊ３と比較して、拡散の日数が２７％低減していた。しかしながら、ＬＡ５１を与えられた動物では、対照Ｊ３と比較して、拡散の日数が９％増加していた。従って、フィーディングプロバイオティクス(feeding probiotics)は、牛の大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の糞の拡散の低減に有効である。  
【００６５】
実施例７  
【００６６】
乳牛の動物飼料に加えられた乳酸塩利用および乳酸生成バクテリアの組合せが病原菌を減少させて乳牛のミルク生産を改善し得るかどうか判定するための研究が行なわれた。３セットの乳牛がテストされた。乳牛の第１セットは対照群であった(グループ１)。乳牛の第２のセットには、前のセクションにおいて述べられた方法に従って、乳酸生成バクテリアアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)菌株ＮＰＣ  ７４７と組合せて乳酸塩利用バクテリアプロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)菌株ＰＦ２４が与えられた（グループ２）。乳牛の第３のセットには、前セクションにおいて述べた方法に従って、乳酸生成バクテリアラクトバチルス乳酸菌(Lactobaciullus acidophilus)、ＬＡ５１(ＮＰＣ  ７４７)およびＬＡ４５の２つの菌株と組合せて乳酸塩利用バクテリアプロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)菌株ＰＦ２４が与えられた。(グループ３)。この研究の結果を表９に示す。  
【００６７】
表９は、乳牛のミルク生産、体重および原料消費量に関する治療体制のそれぞれの効果を示す。データは、乳牛に乳酸生成バクテリアに加えて乳酸塩利用バクテリアを給餌することを含む治療を行うことによって、生成されたミルクの量、生成された脂肪補正乳の量(つまり、より高い脂肪を含有するミルクにもっとウェートを与える)、消費された動物飼料の1つの量当たり生成された脂肪補正乳の比、生成されたエネルギー補正ミルクの量(つまり、より高いカロリーのミルクにもっとウェートを与える)、消費された動物飼料の1つの量当たり生成されたエネルギー補正ミルクの量、生成されたミルクにおいて乳脂肪の量、および雌牛の血清の尿素量が統計的に著しく改善されたこと、を実証している。グループ３中にＬＡ４５菌株を追加することによって、雌牛の血清量が増加した。  
【００６８】
【表９】
2006501311.tif 000010
【００６９】
表１０は、乳酸塩利用バクテリアおよび乳酸生成バクテリアの組合せが与えられた乳牛のセットのそれぞれからの糞のサンプルにける病原菌大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の発生が目立っ低減されていることを示す。効果は、Ｐ．フレイデムレオッチ（P. freidemreochii）のＰＦ２４菌株と組合せてL.乳酸菌のＬＡ５１(ＮＰＣ  ７４７)とＬＡ４５の両方の菌株を与えられた乳牛において特に著しいものであった。雌牛のこのセットでは、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７はいずれの糞のサンプルでも検知されなかった。  
【００７０】
【表１０】
2006501311.tif 000011
【００７１】
実施例８  
【００７２】
研究は細菌の特定の斬新な組合せが病原菌の発生を減少させるかどうかを判定するために研究を行なった。これらの組合せが牛の給餌効率を改善したことがさらに発見された。２４０頭の去勢牛が、５頭づつ４８の囲い場に割り当てられた。去勢牛の平均重量は７８０ポンドだった。各囲い場は、４つの治療のうちの1つが割り当てられた:（１）グループ１は、対照群であり、微生物を与えられなかった、（２）グループ２は、次の２つの菌株を与えられた:いずれも１×１０９ CFU/日の量のプロピオン酸菌フェルデンレイチ(Propionibacterium freudenreichii)菌株ＰＦ２４、およびアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)菌株ＬＡ５１(ＮＰＣ  ７４７)、（３）グループ３は、次の３つの菌株を与えられた:１×１０９CFU/日の量のＰＦ２４、１ｘ１０９CFU/日の量のＬＡ５１(ＮＰＣ  ７４７)、および１ｘ１０６CFU/日の量のアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)菌株ＬＡ４５、また、（４）グループ４は、次の３つの菌株を与えられた:１ｘ１０９CFU/日の量のＰＦ２４、１ｘ１０６CFU/日の量のＬＡ５１(ＮＰＣ  ７４７)、および１ｘ１０６CFU/日の量のアシドフィルス菌(Lactobacillus acidophilus)。  
【００７３】
表１１は、細菌の斬新な組合せが与えられたグループの給餌効率が向上したことを実証している。細菌の斬新な組合せを与えたグループはすべて、対照群に比べて、５６および１４０日でより大きな毎日の平均体重増加を示した。  
【００７４】
【表１１】
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【００７５】
表１２は、屠殺後の去勢牛の皮およびカーカスで見つかった大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の量が実質的に向上したことを実証した。顕著に、グループ２における去勢牛のカーカスは、対照群よりこの病原菌の半分未満を示した、また、他の２つのグループにおける去勢牛のカーカスも、この病原菌の量が実質的に低減することを示した。特に顕著なのは、本発明の製剤を与えられた去勢牛のすべてのハイド（皮：hide）において大腸菌(E. coli)の量が劇的に低減したことである。  
【００７６】
【表１２】
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【００７７】
実施例９  
【００７８】
牛のなかで病原性の増殖を抑制するいくつかの方法のいずれが良好であったかを決定するために研究を行った。第１の方法は、牛に細菌ＮＰＣ  ７４７およびＮＰＣ  ７５０(さらに、Ｍ３５(ネブラスカ州立大学にちなんだ名前でＭ３５としても知られる)を与えることを伴うものであった。第２の方法は、牛の動物飼料からデンプンを取り除くことを伴うものであった。第３番目の方法は、囲い場の洗浄を伴うものであった
。研究設計は、3H2H2階乗であった。フィニッシング動物飼料（３３％の高湿度トウモロコシ、２０％の乾燥ビタミン、４０％のウエット・トウモロコシ・グルテン動物飼料、７％のアルファルファ、およびビタミン、鉱物、ルメンシン(Rumensin)およびタイラン(Tylan））が、それぞれ８頭が入れられた５４の囲い場で、４３２頭の去勢牛（平均重量３４０kg）に与えられた。細菌ＮＰＣ  ７４７およびＮＰＣ  ７５０は、１８の囲い場の牛に毎日供給された。囲い場の半分は毎月清潔にされ、他方の半分は研究の終了時に清潔にされた。屠殺の２週間前に、動物飼料は、牛の動物飼料をトウモロコシからトウモロコシ糠に半分の牛で交換した。  
【００７９】
第１番目の方法も第３番目の方法も去勢牛パフォーマンス(Ｐ＞０．３９)に影響しなかったが、動物飼料変更は過去２週間でＤＭＩ(Ｐ＜０．００１;１２．８ｋｇ/ｄ対１１．５ｋｇ/d)を減少させて、全給餌期間(Ｐ＜０．００１)でＡＤＧおよび効率を減少させた。屠殺重量は、動物飼料変更によって８．４ｋｇ減少した。  
【００８０】
個々の糞のサンプルは、毎月および屠殺前０、１および２週間目に採取して、大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７を検査した。全囲い場は実験の探知装置だった。また、８頭の去勢牛のうちのどれかが陽性であると囲い場は大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７に陽性であると考えられた。大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７の全体の検出は低かった(１４５／３０２４動物週)。第２および第３の方法は。大腸菌(E. coli)Ｏ１５７：Ｈ７有症率に効果がなかった。第１の方法は、マーケティングの週に大腸菌(E. coli)Ｏ１５７陽性の囲い場を減少させた (４４％対１７％; Ｐ＝０．１０)。  
【００８１】
発明の様々な実施例が上に記述されているが、それらは実施例としてのみ示されたものであり、それらに限定されるものではない。したがって、本発明の幅および範囲は、上記の例示的実施例のうちのどれによっても制限されるべきでなく、次のクレームおよびそれらの均等物に従ってのみ定義されるべきである。 
【国際調査報告】
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