(57)【要約】本発明は、喘息および他のアレルギー性疾患のような過敏症の治療方法に関し、特に、G タンパク質結合レセプターの活性を修飾する能力を有する環状ペプチド化合物およびペプチド疑似化合物による、それらの病状の治療に関する。該化合物は、好ましくはC5aレセプターのアンタゴニストとして作用し、多形核白血球およびマクロファージのC5aレセプターに対し作用する。特に、本発明の方法での使用に好ましい化合物を開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
過敏症治療の必要のある対象に、G タンパク質-結合レセプターのインヒビターを有効量投与する工程を含む、該治療の方法。
【請求項２】
インヒビターは、
(a)G タンパク質-結合レセプターのアンタゴニストであり、
(b)実質的にアゴニスト活性はなく、そして
(c)式Iの環状ペプチドまたはペプチド疑似化合物である、
化合物である、
【化１】
2006505556.tif 000003
ここで、AはH、アルキル、アリール、NH2、NH-アルキル、N(アルキル)2、NH-アリール、NH-アシル、NH-ベンゾイル、NHSO3、NHSO2-アルキル、NHSO2-アリール、OH、O-アルキル、またはO-アリールであり;
Bは、アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ナフチルまたはインドール基またはD-またはL-アミノ酸の側鎖であるが、グリシン、D-フェニルアラニン、L-ホモフェニルアラニン、L-トリプトファン、L-ホモトリプトファン、L-チロシン、またはL-ホモチロシンの側鎖ではなく；
Cは、D-、L-またはホモ-アミノ酸の側鎖であるが、イソロイシン、フェニルアラニン、またはシクロヘキシルアラニンの側鎖ではなく；
Dは、中性D-アミノ酸の側鎖であるが、グリシンまたはD-アラニンの側鎖、大きな平面的側鎖、または大きな荷電性側鎖ではなく；
Eは大きな置換基であるが、D-トリプトファン、L-N-メチルトリプトファン、L-ホモフェニルアラニン、L-2-ナフチルL-テトラヒドロイソキノリン、L-シクロヘキシルアラニン、D-ロイシン、L-フルオレニルアラニン、またはL-ヒスチジンの側鎖ではなく；
FはL-アルギニン、L-ホモアルギニン、L-シトルリン、またはL-カナバニンの側鎖、またはそれらのバイオイソスターであり；および
Xは-(CH2)nNH-または(CH2)n-S-(ここで、nは1から4の整数である); -(CH2)2O-; -(CH2)3O-; -(CH2)3-; -(CH2)4-; -CH2COCHRNH-; またはCH2CHCOCHRNH-(ここで、Rは任意の通常または通常でないアミノ酸の側鎖である)である、
請求項１の方法。
【請求項３】
nが2または3である、請求項2の方法。
【請求項４】
Aはアセトアミド基、アミノメチル基、または置換または非置換のスルフォンアミド基である、請求項2または3の方法。
【請求項５】
Aは置換スルフォンアミドであり、その置換基は1から6炭素原子のアルキル鎖、またはフェニルまたはトルイル基である、請求項3の方法。
【請求項６】
置換基が1から4炭素原子のアルキル鎖である、請求項5の方法。
【請求項７】
BはL-フェニルアラニンまたはL-フェニルグリシンの側鎖である、請求項2から6の何れかの方法。
【請求項８】
Cはグリシン、アラニン、ロイシン、バリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、またはチオプロリンの側鎖である、請求項2から7の何れかの方法。
【請求項９】
DはD-ロイシン、D-ホモロイシン、D-シクロヘキシルアラニン、D-ホモシクロヘキシルアラニン、D-バリン、D-ノルロイシン、D-ホモ-ノルロイシン、D-フェニルアラニン、D-テトラヒドロイソキノリン、D-グルタミン、D-グルタミン酸、またはD-チロシンの側鎖である、請求項2から8の何れかの方法。
【請求項１０】
Eは、L-フェニルアラニン、L-トリプトファンおよびL-ホモトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸の側鎖であるか、またはL-1-ナフチルまたはL-3-ベンゾチエニルアラニンである、請求項2から9の何れかの方法。
【請求項１１】
インヒビターが、C5aRに対してはアンタゴニスト作用を有し、C5aアゴニスト活性は有していない化合物である、請求項1から10の何れかの方法。
【請求項１２】
インヒビターは、僅かなマイクロモル濃度で強力なアンタゴニスト作用を有する、請求項1から11の何れかの方法。
【請求項１３】
化合物がレセプター親和性IC50< 25μM、およびアンタゴニスト効力IC50<1μMを有する、請求項1から12の何れかの方法。
【請求項１４】
化合物が、PCT/AU02/01427に記載の化合物１から６、１０から１５、１７、１９、２０、２２、２５、２６、２８、３０、３１、３３から３７、３９から４５、４７から５０、５２から５８および６０から７０からなる群から選択される、請求項1から13の何れかの方法。
【請求項１５】
化合物が、PCT/AU02/01427に記載のPMX53(化合物1)、化合物33、化合物60または化合物45である、請求項14の方法。
【請求項１６】
インヒビターが、過敏症の治療用の１以上の他の薬剤と共に使用される、請求項1から15の何れかの方法。
【請求項１７】
他の薬剤が、インフリキシマブであるか、またはC3aのインヒビターである、請求項16の方法。
【請求項１８】
治療が、過敏症の急性の再発を予防または緩和である、請求項1から17の何れかの方法。
【請求項１９】
治療が、過敏症の原発性の発生の予防または緩和である、請求項1から17の何れかの方法。
【請求項２０】
過敏症が、II型即時型過敏性(細胞毒性)およびIII型(複合体仲介)即時型過敏性、喘息、湿疹、皮膚炎、アルチュス型反応、糸球体腎炎、過好酸球増加症症候群、および農夫肺からなる群から選択される、請求項1から18の何れかの方法。
【請求項２１】
過敏症が湿疹または皮膚炎である、請求項20の方法。
【請求項２２】
過敏症が毛嚢虫性疥癬またはノミアレルギーである、請求項21の方法。
【請求項２３】
インヒビターは、経口的にまたは局所的に投与される、請求項21の方法。
【請求項２４】
過敏症が喘息である、請求項20の方法。
【請求項２５】
インヒビターは、経口的に、鼻腔内的にまたは吸入により投与される、請求項23の方法。
【請求項２６】
インヒビターが、過敏症の治療用の１以上の他の薬剤と共に使用される、請求項1から24の何れかの方法。
【請求項２７】
過敏症の治療用の医薬の製造における、請求項1から15の何れかの化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明の分野
本発明は、喘息のような過敏症および他のアレルギー性疾患の治療、特に、G タンパク質結合レセプターの活性を修飾する能力を有する新規環状ペプチド化合物およびペプチド疑似(peptidomimetic)化合物による該疾患の治療に関する。該化合物は、好ましくは、C5aレセプターのアンタゴニストとして作用し、多形核白血球およびマクロファージ上のC5aレセプターに対し作用する。
【０００２】
発明の背景
本明細書で引用する引用文献(特許または特許出願を含む)は全て引用により本明細書に含める。何れかの引用文献が従来技術を構成するとは認めがたい。引用文献の考察には著者の主張が述べられており、出願人は、該引用文献の正確さおよび適切さを変更する権利を留保する。多くの従来技術の刊行物を本明細書で引用しているが、これらの引用文献が、オーストラリアまたは何れか他の国において通常の一般的な知識の一部を形成するとは認めがたいことは明かであろう。
【０００３】
G タンパク質結合レセプターは、人体全体にあり、それには既知の細胞性レセプター型がおよそ60%含まれ、非常に広範の内因性リガンドのため細胞膜を通した情報伝達を仲介する。それらは、以下に限らないが、心臓血管、中枢神経系および末梢神経系、生殖、代謝、消化、免疫、炎症、および成長異常、ならびに他の細胞調節および増殖異常に関係する多様で多くの生理学的および病態生理学的過程に関係する。G タンパク質結合レセプターの機能を選択的に修飾する薬剤は重要な治療に応用される。これらのレセプターは、情報伝達における重要な役割のため、ますます重要な薬物標的として認識されるようになってきている(G protein-coupled Receptors, IBC Biomedical Library Series, 1996)。
【０００４】
最も集中的に研究されたG タンパク質結合レセプターの１つに、C5aのレセプターが有る。C5aは、既知の、最もよく効く走化性薬剤の１つであり；創傷部位に好中球およびマクロファージを補充し；それらの形態を変え；顆粒消失を誘導し；カルシウム動員、血管透過(浮腫)および好中球接着を増加し；平滑筋と接触し；ヒスタミン、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、プロスタグランジンおよびロイコトリエンを含む炎症性仲介物、およびリソソーム酵素の放出を刺激し；酸素ラジカルの形成を促進し；そして抗体産生を促進する(Gerard and Gerard, 1994)。
【０００５】
C5aの炎症(pro-inflammatory)作用を制限する薬剤は、慢性炎症、およびそれに付随する痛みおよび組織傷害を抑制する可能性を有する。これらの理由のため、C5aをそのレセプターに結合させない分子は、補体活性化による生ずる慢性炎症性疾患の治療に有用である。その化合物はまた、補体仲介免疫の機構に、価値ある新たな見識を加えることとなる。
【０００６】
我々の先の出願、出願番号PCT/AU98/00490において、我々は、ヒトC5aのC末端の幾つかの類似体の三次元構造について記載しており、この情報を用い、ヒトC5aレセプター(C5aR)に結合し、C5aのアゴニストまたはアンタゴニストの何れかとして作用する、新規化合物を設計した。推定アンタゴニストは、レセプター結合およびアンタゴニスト活性のためにC末端アルギニンおよびC末端カルボン酸の両方を必要とし得る(Konteatis et al, 1994)。一般的に、末端のカルボン酸の基は、C5aRに対する高親和性結合またはアンタゴニスト活性の何れにも必要であるわけではないという事実を我々は示した。その代わりとして、従来の認識されていない構造的特長、ターンコンホメーションが、好中球におけるヒトC5aレセプターに対する高親和性結合で鍵となり認識される特徴であることが判った。２００２年１０月１７日出願の我々の国際出願、出願番号PCT/AU02/01427に記載のように、我々は、これらの発見に更に改良を加え、C5aレセプターとの相互作用のため疎水性アレイ中に疎水性基をアセンブルすることができる、より強固に束縛した構造鋳型を設計した。その後、我々は、このクラスの好ましい化合物が心臓および肺の繊維症を抑制し得ることを発見し、これは、２００３年４月７日出願の我々の国際出願、出願番号PCT/AU03/00415に記載している。これらの明細書の開示は全て、引用により本明細書に含める。
【０００７】
喘息は、気管支痙攣の発作(喘鳴を生ずる)、胸部の圧迫感、および呼吸困難が特徴の生死にかかわる可能性のある病状である。喘息性発作は、アレルゲン、感染、運動(exercise)、環境の温度または湿度の変化、煙草の煙、ストレス、または情緒不安のような種々の刺激にさらされることにより誘発され得る。発作は人生の何れかの段階で生じ得るが、喘息は、通常、小児期に始まる；それは、湿疹または枯草熱のような他の過敏症と関連し得る。喘息は、１６００万人ものアメリカ人に影響し、そのうち、約10-12%は１８歳未満の小児であり、その発病率は増加している。４０歳未満でより一般的であり、子供のときに学校を休み入院する最も多い理由である。喘息の家系の人やアレルギーを持っている人では、その疾患が進行する危険性が高い。
【０００８】
治療は、経口的に投与されるβ2-アドレナリン作動性アゴニストのような、または吸入されるエアロゾルのような気管支拡張薬によるのが有力であり、コルチコステロイドは酷い場合に用いられる。定量吸入器、ドライパウダー吸入器およびネブライザーは、吸入治療で広く使用されている。しかし、徹底した研究にもかかわらず、利用可能な治療であっても全患者の徴候をコントロールすることはできない。喘息は、非常に重要な病的状態と関連し、緊急治療室への入院の割合が高くなる原因であり、そして毎年の多数の死者を出す。これに加えて、喘息の経済的なコストは非常に高い。
【０００９】
湿疹または湿疹性皮膚炎は、かゆみおよび小水疱形成が生じ、その後、外傷による滲出および痂皮が生じる炎症性皮膚炎である。より慢性的な状態では、苔蘚化および／または肥大化、表皮剥離、または色素形成変化が生じ得る；外観を損ない得る。湿疹のアレルギーまたはアトピー型は、アレルゲンを吸飲、接触するかまたは食物アレルゲンであり得る種々のアレルゲンが原因であり得る；原因となるアレルゲンを同定することは非常に困難であり得る。アトピー性湿疹は小児期によくある。局所用のステロイドは、主要な一次治療である。手の皮膚炎はアトピー性皮膚炎型であり、それは、米国でおよそ１９０万人の人々に影響を与えている。慢性的な手の皮膚炎は繰り返し再発するかまたは突発する。手の25-90%で生じ得、片面または両面に影響し得る。治療は、通常、局所的コルチコステロイドによるが、その成功は限られており、皮膚萎縮症のような副作用を伴う。タルグレチン(targretin)、ビタミンA類似体は、最近、手の皮膚炎の治療として米国で認可された。
【００１０】
皮膚炎はまた、主要な獣医学的な問題であり、それは、ウマのような家畜、およびネコおよびイヌのようなコンパニオン・アニマルではよくある。例えば、現在の米国でのイヌの総数のおよそ5%から10%、すなわち４００から７００万のイヌが影響を受けている。影響を受けているイヌのアレルギー性皮膚炎の慢性的な特性により、年あたりの推定される治療数はおよそ８００万を超える。現在の治療では主に薬用シャンプーおよびコンディショナーが、グルココルチコイドによる治療が必要な酷い場合に使用される。
【００１１】
免疫グロブリンE(IgE)標的モノクローナル抗体、腫瘍壊死因子アンタゴニスト、タクロリムス(tacrolimus)およびピメクロリムス(pimecrolimus)のような免疫抑制剤を含む種々の薬剤、および光線療法が、過敏症の治療のための臨床試験の種々の段階にある。
【００１２】
しかしながら、注射による投与の必要はなく、手ごろなコストで作成され得る、喘息および他の過敏症の治療用の有効で非毒性の薬剤が当分野では非常に必要とされている。我々の知識では、これらC5aレセプターを標的とする承認されたかまたは実験中の薬剤、および特に小分子薬剤はない。
【００１３】
発明の要約
C5a レセプターの特異的インヒビターは哺乳類の喘息を改善することができることを我々は初めて開示する。これは、喘息の病状の調整に使用する補体系のインヒビターのケースについての最初の報告である。
【００１４】
第一の態様では、本発明は、過敏症治療の必要の有る対象に、G タンパク質-結合レセプターのインヒビターを有効量投与する工程を含む、該治療の方法を提供する。
【００１５】
好ましくは該インヒビターは、
(a)G タンパク質-結合レセプターのアンタゴニストであり、
(b)実質的にアゴニスト活性はなく、そして
(c)式Iの環状ペプチドまたはペプチド疑似化合物である、
化合物である、
【化１】
2006505556.tif 000002
ここで、AはH、アルキル、アリール、NH2、NH-アルキル、N(アルキル)2、NH-アリール、NH-アシル、NH-ベンゾイル、NHSO3、NHSO2-アルキル、NHSO2-アリール、OH、O-アルキル、またはO-アリールであり;
Bは、アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ナフチルまたはインドール基またはL-フェニルアラニンまたはL-フェニルグリシンのようなD-またはL-アミノ酸の側鎖であるが、グリシン、D-フェニルアラニン、L-ホモフェニルアラニン、L-トリプトファン、L-ホモトリプトファン、L-チロシン、またはL-ホモチロシンの側鎖ではなく；
Cは、グリシン、アラニン、ロイシン、バリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、またはチオプロリンのようなD-、L-またはホモ-アミノ酸の側鎖のような小さな置換基であるが、好ましくはイソロイシン、フェニルアラニン、またはシクロヘキシルアラニンのような大きな(bulky)置換基ではなく；
Dは、D-ロイシン、D-ホモロイシン、D-シクロヘキシルアラニン、D-ホモシクロヘキシルアラニン、D-バリン、D-ノルロイシン、D-ホモ-ノルロイシン、D-フェニルアラニン、D-テトラヒドロイソキノリン、D-グルタミン、D-グルタミン酸、またはD-チロシンのような中性D-アミノ酸の側鎖であるが、好ましくは、グリシンまたはD-アラニンの側鎖のような小さな置換基、D-トリプトファンのような大きな平面的(bulky planar)側鎖、またはD-アルギニンまたはD-リシンのような大きな荷電性(bulky charged)側鎖ではなく；
Eは、L-フェニルアラニン、L-トリプトファンおよびL-ホモトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸の側鎖のような大きな置換基であるか、またはL-1-ナフチルまたはL-3-ベンゾチエニルアラニンであるが、D-トリプトファン、L-N-メチルトリプトファン、L-ホモフェニルアラニン、L-2-ナフチルL-テトラヒドロイソキノリン、L-シクロヘキシルアラニン、D-ロイシン、L-フルオレニルアラニン、またはL-ヒスチジンの側鎖ではなく；
FはL-アルギニン、L-ホモアルギニン、L-シトルリン、またはL-カナバニンの側鎖、またはそれらのバイオイソスター(bioisostere)であり、すなわち、末端グアニジンまたは尿素基は保持されている側鎖であるが、炭素バックボーンは、異なる構造を有する基で置換され、それによって側鎖は、親基と同じ方法で標的タンパク質と全体的に反応し；および
Xは-(CH2)nNH-または(CH2)n-S-(ここで、nは1から4、好ましくは2または3の整数である); -(CH2)2O-; -(CH2)3O-; -(CH2)3-; -(CH2)4-; -CH2COCHRNH-; または-CH2CHCOCHRNH-(ここで、Rは任意の通常または通常でないアミノ酸の側鎖である)である。
【００１６】
Cでは、ヒドロキシプロリンおよびチオプロリンのシス型およびトランス型の両方を使用し得る。
【００１７】
好ましくは、Aは、アセトアミド基、アミノメチル基、または置換または非置換のスルフォンアミド基である。
【００１８】
好ましくは、Aは、置換スルフォンアミドである場合、置換基は、１から６、好ましくは１から４炭素原子のアルキル鎖、またはフェニルもしくはトルイル基である。
【００１９】
特に好ましい実施態様では、化合物はC5aRに対するアンタゴニスト活性を有しており、C5a アゴニスト活性は有していない。
【００２０】
化合物は、好ましくは、以下に限らないが、ヒト多形核白血球およびヒトマクロファージを含む、ヒトおよび哺乳類細胞上のC5aレセプターのアンタゴニストである。該化合物は、好ましくは、C5aレセプターに強力におよび選択的に結合し、より好ましくは僅かなマイクロモル(sub-micromolar)濃度で強力なアンタゴニスト活性を有する。またより好ましくは、該化合物は、レセプター親和性IC50<25μMおよびアンタゴニスト効力IC50<1μMを有する。
【００２１】
最も好ましくは、該化合物は、仮出願番号PCT/AU02/01427に記載の化合物1から6、10から15、17、19、20、22、25、26、28、30、31、33から37、39から45、47から50、52から58および60から70からなる群から選択される。特に好ましい実施態様では、該化合物は、本明細書に記載のPMX53(化合物1)、化合物33、化合物60または化合物45である。
【００２２】
第二の態様では、本発明は、過敏症の治療用の医薬の製造における、上記のような化合物の使用を提供する。
【００２３】
該過敏症は、個体を感作するかまたは免疫しその後抗原にさらすことにより生ずる免疫反応から補体仲介性組織損傷が生ずる状態であり得る。これらには、以下に限らないが、喘息、湿疹または皮膚炎のようなII型即時型過敏性(細胞毒性)およびIII型(複合体仲介)即時型過敏性、および血清病、糸球体腎炎、過好酸球増加症症候群および農夫肺のようなアルチュス型反応が含まれる。好ましい実施態様では、該過敏症は喘息、湿疹または皮膚炎である。
【００２４】
インヒビターが、過敏症の治療用の１以上の他の薬剤と共に使用され得る。喘息の場合、これらには、以下に限らないが、β2-アドレナリン作動性アゴニストのような気管支拡張薬、以下に限らないが、アルブテロール(ヴェントリン)を含む、クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミンまたはメピラミン(mepyramine)のような抗-ヒスタミン、ネドクロミルのようなマスト細胞スタビライザー、ジロイチン(zileutin)、モンテルカスト(montelukast)およびザフィルカスト(zaphirlukast)のようなロイコトリエンブロッカー、イプラトロピウム(ipratropium)のようなムスカリン性アンタゴニスト、およびプレドニゾロン、ブデソニド(budesonide)およびフルチカゾン(fluticasone)のようなコルチコステロイド、およびそれらの合成ステロイドまたは類似体が含まれる。湿疹の場合、これらには、以下に限らないが、局所用コルチコステロイドおよびその合成ステロイドまたは類似体、およびベキサロテン("Targretin")のようなビタミンA類似体が含まれる。該インヒビターは、他にまたは更に、エイコサペンタエン酸誘導体およびオメガ-3オイルのような抗炎症薬と共に使用され得る。
【００２５】
本発明の化合物は、経口的、非経口的、吸入的、鼻腔内的、局所的または経皮的な使用用に製剤され得る。任意の所望の経路による投与に適当な製剤は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Vol. II, 2000 (20th edition), A.R. Gennaro (ed), Williams & Wilkins, Pennsylvaniaのような既知のテキストブックを参照することにより、標準的な方法で調製し得る。
【００２６】
本発明は、何れかの特定の動物または種の治療に制限されるものでは全くないが、本発明の方法はヒトの治療に有用であり、また、獣医的な治療、特にネコおよびイヌのようなコンパニオン・アニマル、ウシ、ウマおよびヒツジのような家畜、ヒト以外の霊長類、広範なウシ科、ネコ科、有蹄動物、イヌ科を含む動物園の動物の治療に有用であろうと特に予想される。
【００２７】
該化合物は、任意の適当な用量で、任意の適当な経路により投与され得る。経口的、局所的または鼻腔内的投与が好ましい。これらの経路はより便利がよく受け入れやすいからである。経口製剤が特に好ましい。本発明の化合物の全てとは言えないまでもその殆どは、消化管、血液、肺または細胞内酵素のような代謝酵素の存在下で安定であろうと予想される。その安定性は、当業者に既知の通常の方法により容易に試験され得る。
【００２８】
有効な用量は、治療する病状の特性、および各治療において年齢、体重、および健康状態に依存する。これは、担当する医師または獣医師の考えしだいであろう。適当な用量レベルは、当分野に既知の方法を用い、トライアル・アンド・エラー実験により容易に決定し得る。
【００２９】
図面の簡単な説明
図 1は、静脈(A)、経口(B)および局所的(C) AcF-[OPdChaWR]、および適当なコントロール(D)による、皮膚のアルチュス反応と関連した血管漏出の抑制を示す。
【００３０】
図 2は、静脈(A)、経口(B)および局所的(C) AcF-[OPdChaWR]、および適当な局所用コントロール(D)による、皮膚のアルチュス反応に関連した循環TNFαの上昇の抑制を示す。
【００３１】
図 3は、静脈、経口および局所用AcF-[OPdChaWR]による、皮膚のアルチュス反応に関連した病理学的指標の減少を示す。
【００３２】
図 4は、PMX53で治療すべき毛嚢虫性疥癬をともなう、ノミの侵入に関連するアレルギー性皮膚炎を有するイヌの反応を示す。
【００３３】
本発明の詳細な説明
この発明は、本明細書に記載の特定の材料および方法に限られるものでないことは明らかに理解される。これらは、変化し得るためである。また、本明細書で使用する用語は特定の実施態様のみを記載することを意図していることが理解され、本発明の範囲を限定することを目的とするものではなく、それは、特許請求の範囲によってのみ制限される。
【００３４】
特許請求の範囲においておよび本発明の前述の記載において、用語または必要な意味を表すために文脈上、他が必要な場合を除き、「含む(comprise)」という語または「含む(comprises)」または「含んでいる(comprising)」のような変形型は、包括的な意味で使用し、すなわち、記載する特徴の存在を特定するために使用するが、本発明の種々の態様において更なる特徴の存在または付加を排除するものではない。
【００３５】
本明細書で使用するとき、単数形「ある(a)」、「ある(an)」、および「その(the)」は、文脈上、他を示さない限り、複数形をも示す。そのため、例えば、「酵素(an enzyme)」という言及には複数形のその酵素をも含まれ、「アミノ酸(an amino acid)」という言及は１以上のアミノ酸を示す。特記しない限り、本明細書で使用する技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が通常理解すると同じ意味を有する。本明細書に記載の材料および方法と類似または均等の任意の材料および方法を用い、本発明を実施または試験し得、その好ましい材料および方法は以下に記載する。
【００３６】
本明細書で使用する略語は以下の通りである：
D-Cha      D-シクロヘキシルアミン
LPS        リポ多糖類
PMN        多形核顆粒球
RMSD        標準偏差
rp-HPLC      逆相-高速液体クロマトグラフィー
TFA        トリフルオロ酢酸;
本明細書では、通常、一文字表記および三文字表記のコードを用い、アミノ酸を表す。
【００３７】
この明細書の目的のため、用語「アルキル」は、直鎖状、分枝状、または環状の、１から６、好ましくは１から４炭素の置換または非置換のアルキル鎖を意味する。最も好ましくは、アルキル基はメチル基である。用語「アシル」は、１から６、好ましくは１から４炭素原子の置換または非置換のアシルを意味する。最も好ましくは、アシル基はアセチルである。用語「アリール」は、置換または非置換のホモ環またはヘテロ環アリール基を意味すると理解され、その環は好ましくは５から６員環である。
【００３８】
「通常」アミノ酸は、グリシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、システイン、メチオニン、アルギニン、リジン、プロリン、セリン、トレオニンおよびヒスチジンからなる群から選択されるL-アミノ酸である。
【００３９】
「希な」アミノ酸には、以下に限らないが、D-アミノ酸、ホモ-アミノ酸、N-アルキル アミノ酸、デヒドロアミノ酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン以外の芳香族性 アミノ酸、オルト-、メタ-またはパラ-アミノ安息香酸、オルニチン、シトルリン、カナバニン、ノルロイシン、γ-グルタミン酸、アミノ酪酸、L-フルオレニルアラニン、L-3-ベンゾチエニルアラニン、およびα,α-二置換アミノ酸が含まれる。
【００４０】
一般的に、用語「治療する」、「治療」などは、対象、組織または細胞に影響し、望ましい薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味するのに使用する。その効果は、疾患またはその徴候または症状の完全なまたは部分的な阻止という点で予防であり得、および／または疾患の部分的または完全な治癒という点で治療であり得る。
【００４１】
本明細書で使用の「治療をする」とは、脊椎動物、哺乳類、特にヒトの疾患のあらゆる治療または予防を意味し、疾患にかかりやすいかもしれないが、まだその疾患を有するとは診断されていない患者において疾患が生ずるのを予防すること；疾患を抑制すること、すなわち、その進行を停止させること；または疾患の影響を緩和または改善すること、すなわち、疾患の影響を緩解すること、を含む。
【００４２】
本発明は、疾患の改善に有用な種々の医薬組成物の使用を含む。本発明のある実施態様による医薬組成物は、式 Iの化合物、類似体、それらの誘導体または塩、および１以上の医薬的作用剤(pharmaceutically-active agents)、または式 Iの化合物および１以上の医薬的作用剤を、対象への投与に適当な形態に組み合わせた混合物(combination)(担体、賦形剤および添加物または補助剤を用いる)を提供することにより調製される。
【００４３】
しばしば用いられる担体または補助剤には、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、デンプン、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物油および植物油、ポリエチレングリコール、および滅菌水、アルコール、グリセリンおよび多価アルコールのような溶媒が含まれる。静脈のビヒクルには、液体および栄養素の補充物が含まれる。保存料には、抗菌剤、抗酸化剤、キレート化剤および不活性ガスが含まれる。他の医薬的に許容される担体には、例えば、Remington's pharmaceutical Sciences, 20th ed. Williams & Wilkins (2000) and The British National Formulary 43rd ed. (British Medical Association and Royal pharmaceutical Society of Great Britain, 2002; http://bnf.rhn.net)に記載のような塩、保存料、緩衝剤などを含む水溶液、非毒性賦形剤が含まれる(その参考文献の内容は引用により本明細書に加える)。医薬組成物の種々のコンポーネントのpHおよび正確な濃度は、当分野に通常の技術により調整される。Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis for Therapeutics (7th ed., 1985)参照。
【００４４】
医薬組成物は、好ましくは、用量単位で調製および投与される。固体用量単位には、錠剤、カプセルおよび坐薬が含まれる。化合物の機能、投与方法、異常の性質および重篤度、対象の年齢および体重に依存する患者の治療の場合、種々の日用量が用いられ得る。しかしながら、特定の状況下では、より高いまたはより低い日用量が適当となり得る。その日用量の投与は、各用量単位あるいは幾種かのより少量の用量単位型での単回投与により、およびまた、特定の間隔での、細かく別けた用量の複数回投与(multiple administration)により、それら両方により行われ得る。
【００４５】
本発明による医薬組成物は、治療的に有効な量で局所的または全身的に投与され得る。この使用に有効な量は、もちろん、疾患の重篤度および患者の体重および全身状態に依存する。典型的に、インビトロで使用する用量により、医薬組成物のイン・シトゥ投与に有用な量での有用な教示(guidance)が得られ得、動物モデルを使用し、細胞毒性の副作用の処置に有効な用量を決定し得る。例えば、Langer, Science, 249: 1527, (1990)に、種々の検討が為されている。経口的使用用の製剤は、固いゼラチンカプセル型であり得、その有効成分は、不活性固体希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリンと混合する。それらはまた、柔らかいゼラチンカプセル型であり得、その有効成分は、水またはピーナッツ油、液体パラフィンまたはオリーブオイルのような油媒体と混合する。
【００４６】
水性懸濁液は、通常、水性懸濁液の製造に適する賦形剤との混合物中に有効物質を含む。その賦形剤は、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムのような懸濁剤；分散剤または湿潤剤であり得、それらは、(a)レシチンのような天然に生ずるホスファチド；(b)脂肪酸とアルキレン・オキシドとの縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン；(c)長鎖脂肪族アルコールとエチレン・オキシドとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール；(d)ポリオキシエチレン・ソルビトール・モノオレエートのような脂肪酸およびヘキシトールから得られる部分的なエステルとエチレン・オキシドとの縮合生成物、または(e)脂肪酸およびヘキシトール無水物、例えば、ポリオキシエチレン・ソルビタン・モノオレエートから得られる部分的なエステルとエチレン・オキシドとの縮合生成物であり得る。
【００４７】
医薬組成物は、滅菌した注射可能な水性または油性の懸濁液型であり得る。この懸濁液は、上記のような適当な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いる既知の方法により製剤し得る。滅菌注射可能製剤はまた、例えば、1,3-ブタンジオール中の溶液のような非毒性の非経口的に許容される希釈液または溶媒中の、滅菌注射可能溶液または懸濁液であり得る。用いられ得、許容されるビヒクルおよび溶媒は、水、リンゲル液、および等張性塩化ナトリウム溶液である。加えて、滅菌、固定油が、通常、溶媒または懸濁媒体として用いられる。この目的のため、合成モノ-またはジグリセリドを含む何れかの刺激性の低い固定油を用い得る。更に、オレイン酸のような脂肪酸は、注射可能な製剤中に使用し得る。
【００４８】
式Iの化合物はまた、小さな１枚膜ベシクル(small unilamellar vesicle)、大きな１枚膜ベシクル(large unilamellar vesicle)、および多重層ベシクル(multilamellar vesicle)のようなリポソーム輸送システム型で投与され得る。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンのような種々のリン脂質から形成され得る。
【００４９】
本発明の式 Iの化合物の用量レベルは、通常、体重ｋｇあたり約0.5mgから約20mgのオーダー、好ましくは１日あたり体重ｋｇあたり約0.5mgから約10mgの間の用量範囲である(１日あたり患者あたり約0.5gから約3g)。単一用量を作成するための担体物質と組合せ得る有効成分の量は、治療する宿主および特定の投与形態により変化する。例えば、ヒトへの経口投与を目的とする製剤は、担体物質を適当なおよび通常の量(その量は全組成物の約５から９５％の範囲で変わり得る)を含み、有効化合物を約5mgから1g含み得る。用量単位型は、一般的に、有効成分を約5mgから500mgの範囲で含むであろう。
【００５０】
しかし、任意の特定の患者での特定の用量レベルは、用いる特定化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、食習慣、投与時間、投与経路、排泄の速度、薬物の組合せおよび治療を行う特定の疾患の重篤度を含む種々の因子に依存するであろうと理解される。
【００５１】
加えて、幾つかの本発明の化合物は水または通常の有機溶媒とともに溶媒和化合物を形成し得る。その溶媒和化合物は、本発明の範囲内に含まれる。
【００５２】
本発明の化合物は、更に他の治療化合物と組み合わされて、効力のある組合せを提供し得る。その組合せには、本発明の式 Iの化合物の活性が喪失しない限り、医薬的に有効な製剤の、任意の化学的融和性の組合せが含まれることを意図する。
【００５３】
本発明の化合物の評価では、効力の通常の測定が使用され得る。例えば、喘息では、通常用いる主要な効力評価項目には、肺活量測定法または肺活量の測定のような肺機能試験、またはピーク・フロー・メーターを用いる自己監視が含まれる。湿疹では、効力の評価は、
(a)Physician's Static Assessment (PSA)、それは、United States food and Drug Administrationにより必要とされる主要な評価項目であり、徴候および症状の90%以上の改善が要求され、それは、21日離した少なくとも2回の診察において、治るか殆ど治っている状態に等しい、または
(b) Physician's Global Assessment (PGA)、それは、50%以上の改善が要求される、
に基づき得る。
【００５４】
本発明は、以下の一般的な方法および実験例のみに言及して記載する。
【００５５】
一般的な方法
式 Iの環状ペプチド化合物は、先の我々の出願、出願番号PCT/AU98/00490およびPCT/AU02/01427に詳細に記載する方法により調製される。他の合成方法は、オーストラリア仮出願番号2003902743に記載している。これらの明細書の開示は全て引用により本明細書に含める。本発明は、化合物 AcF-[OPdChaWR] (PMX53)(その相当する直鎖状ペプチドはAc-Phe-Orn-Pro-dCha-Trp-Argである)に関して特に開示しているが、本発明はその化合物に限定しないことが明らかに理解されるだろう。
【００５６】
国際特許出願、出願番号PCT/AU98/00490に開示の化合物1-6、17、20、28、30、31、36および44、およびオーストラリア仮出願、出願番号PCT/AU02/01427で最初に開示した化合物10-12、14、15、25、33、35、40、45、48、52、58、60、66および68-70は、ヒト好中球のC5aレセプターに対して測定できるほどのアンタゴニスト効力(IC50 < 1 μM)を有する。PMX53(PCT/AU98/00490の化合物17; また、PCT/AU02/01427では化合物 1として同定されている)およびPCT/AU02/01427の化合物33、45および60は最も好ましい。
【００５７】
今までのところ、試験した式 Iの化合物は全て、およそ同様の薬理学的活性を有しているが、各化合物の物理化学的性質、効力およびバイオアベイラビリティーは、特定の置換基によって幾分変化することが判った。
【００５８】
以下の一般的試験は、G タンパク質結合レセプター、および特にC5aレセプターの候補インヒビターの最初のスクリーニングに使用し得る。
【００５９】
レセプター-結合アッセイ
アッセイは、50 mM HEPES、1 mM CaCl2、5 mM MgCl2、0.5% ウシ血清アルブミン、0.1% バシトラシンおよび100 μM フェニルメチルスルホニルフルオリド(PMSF)の緩衝液を用い、先に記載した(Sanderson et al, 1995)ように単離した新しいヒトPMNで行った。4℃で行ったアッセイでは、緩衝液、非標識ヒト組み換えC5a (Sigma)またはペプチド、Hunter/Bolton標識125I-C5a(〜20pM)(New England Nuclear, MA)およびPMN(0.2 x 106)を、最終体積200μL/ウェルのMillipore Multiscreenアッセイプレート(HV 0.45)に連続的に加えた。4℃で60分間のインキュベーション後、サンプルを濾過し、プレートを緩衝液で一度洗浄した。フィルターを乾燥させ、穴を開け、LKBガンマカウンターでカウントした。非特異的な結合は、全結合の10-15%を典型的に生ずる1mM ペプチドまたは100 nM C5aの包含により評価した。
【００６０】
データは、非線形回帰およびDunnett事後試験による統計値を用い分析した。
【００６１】
アンタゴニスト作用のミエロペルオキシダーゼ放出アッセイ
細胞は、先に記載(Sanderson et al, 1995)のように単離し、サイトカラシン Bと共にインキュベーションした(5μg/mL、15分間、37℃)。0.15% ゼラチンおよびペプチドを含むハンクス平衡塩溶液を96ウェルプレートに追加し(全体積100 μL/ウェル)、その後、25μL 細胞(4x106/mL)を加えた。C5aに対抗する、それぞれのペプチドの能力を評価するために、それぞれのペプチドと共に細胞を5分間37℃でインキュベーションし、その後、C5a (100 nM)を添加し、更に5分間インキュベーションした。次いで、リン酸ナトリウム50 μL(0.1M、pH 6.8)を各ウェルに添加し、そのプレートを室温に冷却し、等量のジメトキシベンジジン (5.7 mg/mL)およびH2O2(0.51%)の新しい混合物25 μLを各ウェルに添加した。反応は、2%アジドナトリウムを加え10分で終了した。吸光度は、コントロール値(ペプチドなし)で校正したBioscan 450プレートリーダーで、450 nmで測定し、非線形回帰により分析した。
【実施例】
【００６２】
実施例 1
ラットの逆受身アルチュス反応(Reverse Passive Arthus Reaction)
腹膜の逆受身アルチュス反応は先に記載(Strachan et al., 2000)のように誘導し、そしてラットの一群を前処理し、その後、経口強制飼養(10% エタノール/90% 生理食塩水溶液に10mg kg-1を溶解し、最終体積200μlとした)によりAcF-[OPdChaWR](1)を有する抗体を腹膜に沈着させるか、または適当な経口ビヒクルを調節し、３０分後抗体に沈着させた。メスWistarラット(150-250g)をケタミン(80mg kg-1 腹腔内)およびキシラジン(xylazine)(12mg kg-1 腹腔内)で麻酔した。
【００６３】
ラットの側面表面の毛を注意深く剃り、各側面表面の５カ所をわかりやすいように輪郭を描いた。逆受身アルチュス反応は、Evans blue(15 mg kg-1 i.v.)、トリ卵白アルブミン(20mg kg-1 i.v.)を大腿深静脈に注射し、１０分後抗体を注射することにより皮膚部位で誘導させた。ウサギ抗トリ卵白アルブミン(最終注射体積30μL中、生理食塩水のみ、100、200、300または400μgの抗体)を、ラットの各側面表面上の皮膚部分２カ所に２度注射し、ラットあたり注射部位は合計１０とした。ラットをヒーティングパッド上に置き、４時間の治療期間を通して麻酔を持続させ、血液サンプルを定期的に回収した。血液は、氷上で自然にクロットとなり、血清サンプルを回収し、-20℃で保存した。皮膚のアルチュス反応の誘導から４時間後、麻酔したラットを安楽死させ、それぞれのアルチュス反応部位から皮膚10mm2を回収した。皮膚サンプルは、ヘマトキシリンおよびエオシン染色を用いる組織学的分析の前の少なくとも１０日間は10%緩衝性ホルマリン中に保存した。更に、皮膚サンプルの第二のセットは、ホルムアミド1mL中に一夜おき、皮膚中への血清漏洩の指標としてEvans blue抽出物の吸光度を650nmで測定した。図１は、静脈内に、経口的にまたは局所的にAcF-[OPdChaWR]で前処理後、0-400 μg部位-1でウサギ抗トリ卵白アルブミンを皮内注射後の皮膚パンチ抽出物の光学密度を示す。データは、血漿吸収の割合を650nmの吸光度で示す。平均値±SEM (n=3-6)である。*は、アルチュス反応の対照値と比べると、P値<0.05である。
【００６４】
ラットは、静脈的(皮膚アルチュスの開始１０分前、10% エタノールを含む200μL生理食塩水中、0.3-1mg kg-1)、経口的(先に１８時間、餌を与えなかったラットにおいて、皮膚アルチュスの開始３０分前、経口強制飼養により、10% エタノールを含む200 μL生理食塩水中、0.3-10mg kg-1)または局所的に(皮膚のアルチュス反応の開始１０分前、200-400μg 部位-1)の何れかで、TFA塩としてC5aR アンタゴニスト、AcF-[OPdChaWR] (1)で、または適当なビヒクル対照で前処置した。アンタゴニストの局所適用には、アルチュス反応の誘導１０分前の、10% ジメチルスルホキシド (DMSO)の10-20mg mL-1溶液20μlの適用、各部位で皮膚に直接塗りつける、が含まれていた。
【００６５】
Evans blueで処置したラットの生理食塩水のみの注射部位は抗原対照としての役割をするのみであり、Evans blue plus topical DMSOで処置したラットの生理食塩水のみの注射部位はビヒクルコントロールとしての役割をするのみであり、Evans blue plus、静脈、経口または局所用アンタゴニストの何れかで処置したラットの生理食塩水のみの注射部位はアンタゴニスト対照として役割をするのみであり、そしてEvans blue plus皮膚ウサギ抗ニワトリ卵白アルブミンは抗体対照として役割をする。AcF-[OPdChaWR] (1)と同様の化学組成物および溶解度を有するが、単離ヒトPMNにおいてIC50結合親和性が1mMを超える、ペプチドAcF-[OPGWR]の局所適用は不活性ペプチド対照としての役割をした。AcF-[OPGWR]はまた、10% DMSO中に溶解させ、400μg 部位-1で局所適用し、１０分後アルチュス反応を開始した。
【００６６】
TNFα測定
血清TNFα濃度は、酵素免疫測定法(ELISA)キット(Strachan et al., 2000)を用い測定した。使用する抗体の対は、ビオチン化マウス抗ラットTNFα抗体と結合したウサギ抗ラットTNFα抗体であった。図 2は、静脈内、経口的または局所的にAcF-[OPdChaWR]で前処理したラットの群における、皮膚のアルチュス反応の開始後、通常の間隔での血清TNFα濃度を示す。データは、平均値±SEM (n=3-6)で示す。*は、アルチュス対照値と比較して、P値<0.05である。
【００６７】
インターロイキン-6測定
前記のようなELISA法を用い、血清および腹膜洗浄液のインターロイキン-6 (IL-6)濃度を測定した(Strachan et al., 2000)。
【００６８】
病理学的評価
ラットの皮膚サンプルを、10%緩衝性ホルマリン中に少なくとも10日間固定化し、標準的な組織学的技術を用いヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。皮膚サンプルを、病理学的証明のためブラインド法で分析し、ラットPMN浸透の程度を0-4のスケールでスコアを付けた。皮膚のアルチュス反応の開始により、間質性好中球(interstitial neutrophil)が増加し、それは、以下の方法で定量した。異常が発見されない場合には切片はスコア0とした。スコア1では、血管でPMNの増加が見られたが、その管腔の外側の炎症性の細胞が移動することはなかった。スコア2および3では、間質組織中でPMN数は増加し、血管周辺で炎症性の細胞がより顕著に蓄積した。最大スコアの4では、重篤の病理学的異常が皮膚切片で存在し、組織中へPMNは過度に侵入し、これらの細胞は移動し血管から離れた。図3から、増加した抗体量の皮内注射により、皮膚サンプル(A)でスコアされる病理学的指標は用量に応答して増加することが判る。静脈内に(B)(n=3)、経口で(C)(n=3)および局所的に(D)(n=3) AcF-[OPdChaWR]で前処置したラットの部位(n=5)あたり400 μgの抗体または生理食塩水を皮内注射した皮膚サンプルのデータを示す。データは平均値±SEMとして示す。*非パラメトリックt-試験を用いるアルチュス値と比較するとP<0.05である。
【００６９】
実施例 2
トラの子供の喘息治療
呼吸の問題が、オーストラリア、ドリームワールドパークのメスのベンガルタイガーの子供、Kaasha(年齢10週齢および体重約10kg)で最初に発見された。観察された最初の臨床的徴候では、食後、呼吸努力の増大は、穏やかから中程度であったが、その後の数日間、連続的に呼吸努力は増大した。初期の臨床的徴候前では、Kaashaの飼育係は様子、食欲、活動レベル、または病気を示し得る他のパラメーターの変化には全く気がつかなかった。直腸の温度は、最初の獣医学的試験のときには正常であり、次の週に測定したときも正常であった。主な臨床的徴候には呼吸努力増加が含まれ、それは、長い二相の深呼息、特に背葉での典型的な(fine)肺の異常音、およびラジオグラフにおける気管支間質パターンおよび空気のトラップ化が特徴である。
【００７０】
確定診断中の最初の治療には、抗生物質、Clavulox(7 mg/kg 皮下投与)、ドキシサイクリン(5mg/kg 経口的投与)、およびenrofloxacin(5mg/kg 皮下投与)、およびテルブタリン(0.3 mg/kg 経口投与)が含まれていた。
【００７１】
臨床的徴候の最初の検出から２週間後、Kaashaは、口を開けての呼吸(open-mouthed breathing)をともなう重篤な呼吸困難を発現するという経験をした。その発現は20から30秒間続き、自然に治まった。
【００７２】
繰り返しの臨床試験、ラジオグラフィー、後、未知の病因の臨床的病理学的(血液: CBC, MBA)(血液生化学および血液学)および気管支肺胞洗浄細胞学的な、低下した気道炎症の診断を行った。微生物用の気管支肺胞洗浄サンプルの培養は細菌性感染を全く示さなかった。
【００７３】
好中球-優勢の低下した気道炎症の解剖学的診断は、胸腔鏡に導かれる(thoracoscopically-guided)肺バイオプシーにより組織学的に確認したが、病理医はまた、間質の入り交じった炎症に気がついた。更に、バイオプシーの培養およびFeline viral rhinotracheitis virusおよびFeline CalicivirusおよびChlamydiaのポリメラーゼ連鎖反応(PCR)では、病状の病因に関する確信的な情報を得ることはできなかった。
【００７４】
最初の臨床的徴候からおよそ三週間後、治療には、Clavulox(7 mg/kg 皮下投与)、ドキシサイクリン(5mg/kg 経口投与)、およびenrofloxacin(5mg/kg 皮下的投与)およびテルブタリン(0.3 mg/kg 経口投与)、噴霧化(生理食塩水)および打診、パファー吸入(puffer inhalation)によるヴェントリン100μgの使用および呼吸困難の調節に必要なテルブタリン(0.3 mg/kg 経口投与)が含まれていた。プレドニゾロンは単回の日用量2mg/kgとして与えられ、Seretide(Salmeterol 50μg＋フルチカゾン 250μg)は、マスクおよびスペーサーを用い与えられた。治療に対する応答をマークし、呼吸努力を改善し、聴診で聞こえる異常音を減少させた。治療のこの組合せは、翌月も続けた。
【００７５】
治療中の月の間、以下の点が観察された：
【００７６】
1. ラジオグラフィーで改善が見られ、それは、顕著な気管支間質パターンの減少およびエアー・エントラップメント(air entrapment)の減少が特徴的であった。
【００７７】
2. それぞれの日を通して、そして日ごとに、呼吸性の臨床的徴候の重篤度は顕著に変化したが、疾患の初期段階で観察される徴候の重篤度とは違った。猛獣の子供(cub)を運動中またはストレスのかかっているときに空調管理した飼育室に入れると、その環境下での呼吸性の刺激に自然に恐らくは反応して呼吸努力の増大がしばしば見られた。
【００７８】
3. 呼吸性の臨床的徴候は、経口的(0.3 mg/kg 経口)かまたは吸入(ヴェントリンパファーパファー 100μg)の何れかによりテルブタリンを与えると、気管支拡張薬に直ちに反応した。
【００７９】
4. 治療に対する反応が顕著であったが、呼吸パターンが正常であるときは無かった。
【００８０】
5. その猛獣の子供は、毛皮の脆弱化が始まり、筋肉は弱まり、成長速度は遅くなり、活動レベルは低下し、遊び好きとなり、そして同腹子と比べて食欲は比較的なくなった。
【００８１】
臨床的な発見および種々の治療に対する反応を再調査し、ネコ科の動物の喘息診断を行った。この決定は、気道の顕著な反応性、気管支拡張薬に対する顕著で迅速な反応、およびコルチコステロイド治療による呼吸性の臨床的徴候の一般的改善に基づく。
【００８２】
臨床的徴候が見られてから３ヶ月後、比較的積極的な経口コルチコステロイド治療、日に一度のプレドニゾロン治療 2mg/kgであるにもかかわらず、疾患のコントロールのレベルは安定していた。しかし、長期にわたる健康管理に関してはまだ十分ではなかった。それ故、全体積30 ml(40mg/ml 水溶液)中のコハク酸プレドニゾロン・ナトリウム 1200 mgの直接の注射を含む実験的技術を、一般的な麻酔のもと気管に行った。麻酔からの回復には問題はなく、24時間以内に、迅速で顕著な呼吸努力の改善があった。
【００８３】
Kaashaの飼育係たちは一様に、呼吸パターンは１週間で実質的に正常レベルに改善し、その期間の間では呼吸困難は発現しなかったと報告した。しかし、苦しい息づかいの臨床的パターンは、治療後７から９日で治療前のレベルに戻った。この時点で、治療には、2mg/kgの経口コルチコステロイド、Seretide (Salmeterol 50μg＋フルチカゾン 250μg/用量)を伴うか伴わない吸入Flixotide(フルチカゾン 250μg/用量)の使用、呼吸困難のコントロールに必要なヴェントリン パファー100μgの使用、および噴霧化によるPulmicort nebules (ブデソニド 400μg)の随時の使用が含まれる。
【００８４】
猛獣の子供での吸入医薬の使用は、その子の従順さ、飼育係の許容、飼育係の能力、および投与の日々の頻度の変化の結果として得られる、変化可能である有効な日用量により特徴付けられる点が重要である。
【００８５】
気道内ステロイド法(intra-airway steroid procedure)の３週間後、他の試験的治療を適用した。C5a補体レセプターアンタゴニスト AcF-[OPdChaWR] (1)の注入により、６日間、一日一度の皮下注射として用量率(dose rate)0.3mg/kgで投与し、その後、８週間の間、週に２回注射した。この時点で、経口コルチコステロイドの用量は１日あたり20mgに減らした(プレドニゾロンを約1mg/kgに減らした)。長期間の高用量の使用による副作用を懸念したためである。Kaashaの飼育係は、経口コルチコステロイド用量の減少を埋め合わせるべく、吸入医薬は最も有効な方法で適用することを徹底する点に特に注意を払うように求められた。
【００８６】
毎日AcF-[OPdChaWR](1)を注射した週の後の呼吸困難の発現後、緩和により呼吸および回復時間が顕著に改善されたことにKaashaの飼育係たちは一様に賛成した。しかし、一般的な呼吸パターンは週に２回の治療では以下の毎日の注射ほど良好ではなかったが、回復時間は匹敵していた。
【００８７】
経口コルチゾン用量の減少およびAcF-[OPdChaWR] (1)による治療は、トラの子供において、遊び好き、一般的な活動レベル、食欲および一般的な様子の顕著な改善と関連した。更なる医薬Singulaireの追加は、臨床的徴候の目立った改善とは関係しなかった。
【００８８】
2002年7月の時点では、Kaashaはおよそ32kgであり、7月齢であり、そして以下の投薬計画を続けた: 
Macrolone(プレドニゾロン): 20mg、経口、毎夜; 
Singulaire (モンテルカストナトリウム): 10mg、経口、毎夜; 
AcF-[OPdChaWR] (1): 3mg/10kg、皮下、週に二度;
Seretideパファー(Salmeterol 50μg ＋ フルチカゾン 250μg /用量:)、朝と夜、ヴェントリン100μgパファーの後;
Flixotideパファー(フルチカゾン): 250μg/用量、一日四回まで; および
Pulmicort噴霧(ブデソニド): 400μg、時間の許すときに一日一回。
【００８９】
治療投与計画の更なる改善を、喘息の長期間コントロールに関して試験した。その測定により、経口コルチコステロイド使用を少なくするか無くすための試みにおいてパファー医薬送達の効率は改善した。この時点で、Kaashaは睡眠中に僅かな呼吸困難が見られるが、緩和され、運動、活動またはストレスの後において穏やかから顕著な呼吸困難が見られた。しかし、この呼吸困難は明白な苦痛を伴わないものであった。挙動、成長速度および食欲は、同腹子のそれらよりも僅かに低いのみであるか、同腹子と同等であった。
【００９０】
現在の餌を種々のタンパク源、すなわち、ヒツジ(ラム/マトン)またはウサギの何れかのみに完全に取り換え、食事試験を行った。
【００９１】
Kaashaの病状は悪化し、2002年9月の初めに、脳スキャンを行っている際に麻酔下で死んだ。その病状報告から、過好酸球増加症(hyperoesinophilia)が肺から離れた他の器官に影響することが明らかであり、その動物は腸および腎臓での影響から次第に病気となったのだった。原因となる関係が全く導き出せない一方で、2002年8月のPMX53による治療は中止したことに注意すべきである。検死により、そのトラの子供は過好酸球増加症症候群であることが判った。その症候群は喘息様の肺の病気の原因であり、また腎臓および腸での損傷の要因となり得る。この病気はヒトでも生じる。
【００９２】
実施例 3
イヌにおけるアレルギー性皮膚炎
ケルピー犬において、長期間の運動後に目立つ断続的な跛行を、PMX53 (1mg/kg/day PO)で治療した。跛行の断続性のため、飼い主、獣医師がそれの改善を評価するのは困難であった。しかし、その飼い主は、イヌのアレルギー性皮膚炎をその薬物は顕著に改善し、明らかに完全に消散したと報告している。
【００９３】
実施例 4
イヌのアレルギー性皮膚炎の治療
皮膚炎を持つ2匹のイヌを、一日一回、皮膚注射で、PMX53(30% ポリエチレングリコール 400: 70% 0.9%生理食塩水中、0.3 mg/kg)で治療した。血液サンプルを治療後４週間後に回収した。次いで、イヌ一匹を4日間、皮下注射で、0.6 mg/kg PMX53で治療し、その後、安楽死させ、解剖した。同時に生化学的および血液学的検査を高用量のイヌで繰り返した。研究サンプルおよび死骸の肉眼的検査(gross examination)で異常は発見されなかった。注射部位での炎症の形跡はなかった。
【００９４】
二匹目のイヌでは、合計７週間の治療の後、血液学的および生物学的検査のため採血した。異常は見つからなかった。このイヌは重度のアレルギー性皮膚炎であり、それはノミアレルギーによるものであると推測された。しかし、この点を確認する抗原試験は行わなかった。図4に示すように、PMX53による治療後、皮膚炎は完全に消散された。何れのイヌも実験の間は健康であり、薬物毒性の徴候は見られなかった。
【００９５】
檻に入れた非常に老いたイヌ(だいたい13-16歳)では、皮膚の100%および耳の耳介(外耳炎)に影響する重度のアトピー性皮膚炎、および乾性角結膜炎(ドライアイ)を有すると診断された。そのイヌは、尻尾の背部の皮膚を痛めており、両目は黄色い滲出液で覆われていた。
【００９６】
PMX53による皮膚病の治療は、一日一回、尻尾、尻および右後ろ足を含む体の25%に適用する局所用製剤(50% プロピレングリコール: 50% 水中、5 mg/ml)を用い始めた。目は、点眼薬中のPMX53(30% ポリエチレングリコール: 70% 通常の生理食塩水中、5 mg/ml)で治療した。尻尾のただれは3日内に消散した。膝関節および特に坐骨結節全体の皮膚の肥大化が顕著に消散し、目は本質的に外見上正常となるまでに改善された。そのイヌには痒そうな様子は見られなかった。
【００９７】
そのイヌは、最初、非常に不自然な足取りで歩いていたが、PMX53による治療後は、自由に歩き、早足で歩くことができた。これは、先在する関節炎が改善したか、または皮膚の痛みが和らいだか、何れかによるものであり得る。
【００９８】
実施例 5
イヌのノミアレルギー皮膚炎および毛包虫皮膚炎の治療
毛嚢虫性疥癬または赤色疥癬(red mange)としても知られるDemodexは、皮膚炎、皮膚の肥大化および脱毛の原因となるダニDemodex canisによる皮膚の浸入によるものであり、イヌにはよくあることである。この病気は、宿主における免疫反応の欠陥が一部関連していると考えられている。それは、しばしばノミの侵入が関係し、その侵入自体がアレルギー皮膚炎の原因となり得る。感染した動物での皮膚の炎症は、時折、非常に広範囲となり、脱毛および重度の皮膚発疹を生ずる。
【００９９】
Demodex canisの侵入による感染が生ずると、コルチコステロイドは治療には適さない。それらは、局所的に免疫反応を抑制し、ダニが増殖し得ることより病気が悪化する。
【０１００】
(a)毛嚢虫性の皮膚炎を患う2匹のイヌを、皮下注射で、PMX53(30% ポリエチレングリコール 400: 70% 0.9% 生理食塩水中、0.3 mg/kg)で１３日間治療した。この製剤の注射の際に苦痛は見て取れなかった。両方のイヌで、攻撃剤(challenge agent)(fleasおよびdemodex)は除かれていないにも関わらず、皮膚の炎症性反応は顕著に減少した。
【０１０１】
(b)マスチフの子犬(だいたい6月齢)は、両まぶたを含む、頭部のdemodex感染(毛包炎)を有すると診断した。これにより、まぶたは膨れあがり、眼瞼縁は裏返り、角膜が毛で擦られることとなった(睫毛乱生症)。目は赤くなり、うみが出て、そのイヌは目の痛みのため目を細くして見ていた。
【０１０２】
頭のてっぺんの皮膚の傷は、毎日、局所的PMX53(30% ポリエチレングリコール: 70% 0.9% 生理食塩水中、10mg/ml)で治療した。これは、傷を濡らすために行ったものである；これにより得られた体積は記録していなかった。治療５日後、皮膚の炎症は小さくなったが、ダニはまだ、傷からとれた剥離物中に存在していた。このことは、この薬剤が、寄生生物を実際に死滅させることなく、病状に関連する炎症を緩和し得ることを示した。
【０１０３】
まぶたは、PMX53の目薬(30% ポリエチレングリコール: 70% 0.9% 生理食塩水中、10mg/ml)で一日に一度治療した。これは、まぶたの傷を濡らし、また目に滴下するために、まぶたの傷に行ったものである。睫毛乱生症は軽減し、イヌの目は苦痛がなくなり、機能するまでに、炎症は５日間で消散した。これは、非常に重要な臨床的な反応であると考えた。
【０１０４】
これらの結果が示すのは、PMX53は、寄生体の排除が必要である免疫反応の欠損をさせることなくダニ感染に関する炎症をコントロールする手段を提供し得ることである。これは、PMX53は、寄生体(infectious agent)が存在する場合、およびグルココルチコイドのような通常の獣医学的治療が、局所的免疫反応の抑制にため禁忌である場合の使用に適当な抗-炎症性薬剤であることを示す。
【０１０５】
実施例 6
ネコでの喘息の治療
ヒトの喘息には多くの原因がある。その原因には、アレルゲン、冷気または二酸化硫黄のような物理的な刺激、および免疫による病因が含まれる。ネコおよびウマの両方ともが、ヒトの喘息に似ている、認められている臨床症状を有する。「嘔吐」があると知られるその症状を有するウマでは、喘息-様の徴候は、「アレルギー喘息」と同様に吸い込んだアレルゲンが原因となる。ネコで、気道炎症の原因は不明であるが、その臨床的徴候はヒトで見られるのに似ており、呼吸困難をもたらす気管支収縮を伴う。
【０１０６】
ネコは、本発明のC5a アンタゴニストを試験するための、ヒトの疾患の好ましい臨床モデルとなる。PMX53は、ネコ科C5aレセプターに十分に結合することが判っているためである。PMX53は、ウマ科の動物のレセプターには非効率的に結合し、ウマは大きいことから、莫大な薬物の投与量が必要となることを意味する。しかしながら、ウマ科の動物のモデルは排除されるものではない。
【０１０７】
喘息-様の呼吸性の病状の見られるネコを動物から選択し、獣医学的診療を行う。その診断は、通常の血液生化学および血液学、胸部X線および気管支肺胞洗浄を含む標準的な評価基準により確認する。ネコは、経口的に1mg/kgの用量か、または皮下的に0.3mg/kgの用量のPMX53で治療する。治療への反応は、呼吸の緩和および末梢血液の好酸球増加症の緩和のような臨床的なパラメーターを用い評価する。気道炎症の緩和を確認するための気管支肺胞洗浄の反復もまた望ましい。
【０１０８】
喘息-様の徴候が特定の刺激により生じる、喘息のための他の動物モデルシステムが当分野では既知であり、また、本発明の化合物の臨床試験前に使用し得る。例えば、ヒツジのモデルがPCT/AU02/00715に記載されている。論評が多く発行されている；例えば、Tobin, 2003; Isenberg-Feig et al, 2003; Bice et al, 2000; Drazen et al, 1999; およびhttp://ajrccm.atsjournals.org/cgi/collection/asthma_airway_animalmodels参照。
【０１０９】
考察
環状ペプチドには、薬物候補としての環状ペプチドを超える幾つかの重要な利点がある(Fairlie et al 1995, Fairlie et al, 1998, Tyndall and Fairlie, 2001)。この明細書に記載の環状化合物は、ヒトの血液または血漿、ヒトまたはラットの胃液中、またはペプシン、トリプシンおよびキモトリプシンのような消化酵素の存在下での、37℃で少なくとも数時間のタンパク質分解に対して安定である。対照的に、L-アミノ酸からなる短い直鎖状ペプチドは、これらの条件下で直ちに分解され数分以内にコンポーネントのアミノ酸となる。第二の利点は環状および非ペプチド性分子により形成される束縛された単一のコンホメーションにあり、これは、レセプター結合に必要な構造以外に溶液中で複数の構造となるのに十分にフレキシブルである非環状または直鎖状のペプチドとは対照的である。第三に本発明で記載される化合物のような環状化合物は、通常、より脂質可溶性であり、あまり経口的に投与され得ない非環式ペプチドよりも、薬物として、より薬理学的に生物利用可能である。第四に、環状分子の血漿半減期は、通常、ペプチドよりも長くなる。
【０１１０】
本発明は、明らかとするため、および理解のために発明を詳細に記載しているが、明細書の開示の発明概念の範囲から出発することなく、本明細書に記載の実施態様および方法に種々の修飾および変化を加えることが可能であり得ることは、当業者には明かであろう。
【０１１１】
本明細書に引用の参考文献を以下のページに列挙する。それらは引用により本明細書に含める。
【０１１２】
引用文献
Bice D.E., Seagrave J, Green F.H. Inhal Toxicol. 2000 Sep;12(9):829-62. 
Drazen et al, Clin Exp Allergy 1999; 29 Suppl 2:37- -47.
Fairlie, D. P., Wong, A. K.; West, M. W. Curr. Med. Chem., 1998, 5, 29-62.
Fairlie, D.P., Abbenante, G., and March, D. Curr. Med. Chem., 1995 2 672-705.
Gerard, C and Gerard, N.P. Ann. Rev. Immunol., 1994 12 775-808.
Isenberg-Feig H., Justice, J.P., Keane-Myers, A. Current Allergy and Asthma Reports 2003 3:70-78.
Konteatis, Z.D., Siciliano, S.J., Van Riper, G., Molineaux, C.J., Pandya, S., Fischer, P., Rosen, H., Mumford, R.A., and Springer, M.S. J. Immunol., 1994 153 4200-4204.
Sanderson, S.D., Kirnarsky, L., Sherman, S.A., Vogen, S.M., Prakesh, O., Ember, J.A., Finch, A.M. and Taylor, S.M. J. Med. Chem., 1995 38 3669-3675.
Strachan, A.J., Haaima, G., Fairlie, D.P. and Taylor, S.M. J Immunol. 164: 6560-6565, 2000.
Tobin M.J. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 167 (3): 319
Tyndall, J. D. A. and Fairlie, D. P. Curr. Med. Chem. 2001, 8, 893-907.
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】図 1は、静脈(A)、経口(B)および局所的(C) AcF-[OPdChaWR]、および適当なコントロール(D)による、皮膚のアルチュス反応と関連した血管漏出の抑制を示す。
【図２】図 2は、静脈(A)、経口(B)および局所的(C) AcF-[OPdChaWR]、および適当な局所用コントロール(D)による、皮膚のアルチュス反応に関連した循環TNFαの上昇の抑制を示す。
【図３】図 3は、静脈、経口および局所用AcF-[OPdChaWR]による、皮膚のアルチュス反応に関連した病理学的指標の減少を示す。
【図４】図 4は、PMX53で治療すべき毛嚢虫性疥癬をともなう、ノミの侵入に関連するアレルギー性皮膚炎を有するイヌの反応を示す。
【図１】
2006505556.tif 000004
【図２】
2006505556.tif 000005
【図３】
2006505556.tif 000006
【図４】
2006505556.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成17年1月12日(2005.1.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過敏症治療の必要のある対象に、G タンパク質-結合レセプターのインヒビターを有効量投与する工程を含む、該治療の方法、ここで、該インヒビターは、
(a)G タンパク質-結合レセプターのアンタゴニストであり、
(b)実質的にアゴニスト活性はなく、そして
(c)式Iの環状ペプチドまたはペプチド疑似化合物である、
化合物である、
【化１】
2006505556.tif 000008
ここで、AはH、アルキル、アリール、NH2、NH-アルキル、N(アルキル)2、NH-アリール、NH-アシル、NH-ベンゾイル、NHSO3、NHSO2-アルキル、NHSO2-アリール、OH、O-アルキル、またはO-アリールであり;
Bは、アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ナフチルまたはインドール基またはD-またはL-アミノ酸の側鎖であるが、グリシン、D-フェニルアラニン、L-ホモフェニルアラニン、L-トリプトファン、L-ホモトリプトファン、L-チロシン、またはL-ホモチロシンの側鎖ではなく；
Cは、D-、L-またはホモ-アミノ酸の側鎖であるが、イソロイシン、フェニルアラニン、またはシクロヘキシルアラニンの側鎖ではなく；
Dは、中性D-アミノ酸の側鎖であるが、グリシンまたはD-アラニンの側鎖、大きな平面的側鎖、または大きな荷電性側鎖ではなく；
Eは大きな置換基であるが、D-トリプトファン、L-N-メチルトリプトファン、L-ホモフェニルアラニン、L-2-ナフチルL-テトラヒドロイソキノリン、L-シクロヘキシルアラニン、D-ロイシン、L-フルオレニルアラニン、またはL-ヒスチジンの側鎖ではなく；
FはL-アルギニン、L-ホモアルギニン、L-シトルリン、またはL-カナバニンの側鎖、またはそれらのバイオイソスターであり；および
Xは-(CH2)nNH-または(CH2)n-S-(ここで、nは1から4の整数である); -(CH2)2O-; -(CH2)3O-; -(CH2)3-; -(CH2)4-; -CH2COCHRNH-; またはCH2CHCOCHRNH-(ここで、Rは任意の通常または通常でないアミノ酸の側鎖である)である。
【請求項２】
nが2または3である、請求項１の方法。
【請求項３】
Aはアセトアミド基、アミノメチル基、または置換または非置換のスルフォンアミド基である、請求項１または２の方法。
【請求項４】
Aは置換スルフォンアミドであり、その置換基は1から6炭素原子のアルキル鎖、またはフェニルまたはトルイル基である、請求項３の方法。
【請求項５】
置換基が1から4炭素原子のアルキル鎖である、請求項４の方法。
【請求項６】
BはL-フェニルアラニンまたはL-フェニルグリシンの側鎖である、請求項１から５の何れかの方法。
【請求項７】
Cはグリシン、アラニン、ロイシン、バリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、またはチオプロリンの側鎖である、請求項１から６の何れかの方法。
【請求項８】
DはD-ロイシン、D-ホモロイシン、D-シクロヘキシルアラニン、D-ホモシクロヘキシルアラニン、D-バリン、D-ノルロイシン、D-ホモ-ノルロイシン、D-フェニルアラニン、D-テトラヒドロイソキノリン、D-グルタミン、D-グルタミン酸、またはD-チロシンの側鎖である、請求項１から７の何れかの方法。
【請求項９】
Eは、L-フェニルアラニン、L-トリプトファンおよびL-ホモトリプトファンからなる群から選択されるアミノ酸の側鎖であるか、またはL-1-ナフチルまたはL-3-ベンゾチエニルアラニンである、請求項１から８の何れかの方法。
【請求項１０】
インヒビターが、C5aRに対してはアンタゴニスト作用を有し、C5aアゴニスト活性は有していない化合物である、請求項１から９の何れかの方法。
【請求項１１】
インヒビターは、僅かなマイクロモル濃度で強力なアンタゴニスト作用を有する、請求項１から１０の何れかの方法。
【請求項１２】
化合物がレセプター親和性IC50< 25μM、およびアンタゴニスト効力IC50<1μMを有する、請求項１から１１の何れかの方法。
【請求項１３】
化合物が、PCT/AU02/01427に記載の化合物１から６、１０から１５、１７、１９、２０、２２、２５、２６、２８、３０、３１、３３から３７、３９から４５、４７から５０、５２から５８および６０から７０からなる群から選択される、請求項１から１２の何れかの方法。
【請求項１４】
化合物が、PCT/AU02/01427に記載のPMX53(化合物1)、化合物33、化合物60または化合物45である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
インヒビターが、過敏症の治療用の１以上の他の薬剤と共に使用される、請求項１から１４の何れかの方法。
【請求項１６】
他の薬剤が、インフリキシマブであるか、またはC3aのインヒビターである、請求項１５の方法。
【請求項１７】
治療が、過敏症の急性の再発を予防または緩和である、請求項１から１６の何れかの方法。
【請求項１８】
治療が、過敏症の原発性の発生の予防または緩和である、請求項１から１６の何れかの方法。
【請求項１９】
過敏症が、II型即時型過敏性(細胞毒性)およびIII型(複合体仲介)即時型過敏性、喘息、湿疹、皮膚炎、アルチュス型反応、糸球体腎炎、過好酸球増加症症候群、および農夫肺からなる群から選択される、請求項１から１７の何れかの方法。
【請求項２０】
過敏症が湿疹または皮膚炎である、請求項１９の方法。
【請求項２１】
過敏症が毛嚢虫性疥癬またはノミアレルギーである、請求項２０の方法。
【請求項２２】
インヒビターは、経口的にまたは局所的に投与される、請求項２０の方法。
【請求項２３】
過敏症が喘息である、請求項１９の方法。
【請求項２４】
インヒビターは、経口的に、鼻腔内的にまたは吸入により投与される、請求項２２の方法。
【請求項２５】
インヒビターが、過敏症の治療用の１以上の他の薬剤と共に使用される、請求項１から２３の何れかの方法。
【請求項２６】
過敏症の治療用の医薬の製造における、請求項１から１４の何れかの化合物の使用。
【国際調査報告】
2006505556.tif 000009
2006505556.tif 000010
2006505556.tif 000011