(57)【要約】本発明は、生体分子の放射性金属トリカルボニルによる標識化に使用できる新規ヒスチジン誘導体に関する。新しい誘導体は、Ｎεで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、Ｎαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、ＮεおよびＮαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、Ｎεで誘導体化されているか；または、Ｎαで誘導体化されているか；または、ＮεおよびＮαで誘導体化されているか；または、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されている、ヒスチジンを有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒスチジン誘導体であって、
ａ）Ｎεで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｂ）Ｎαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｃ）ＮεおよびＮαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｄ）Ｎεで誘導体化されているか；または、
ｅ）Ｎαで誘導体化されているか；または、
ｆ）ＮεおよびＮαで誘導体化されているか；または、
ｇ）少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されている、
のいずれかであるヒスチジンを含む、ヒスチジン誘導体。
【請求項２】
Ｎεおよび／またはＮαが、（ＣＨ２）ｎ−Ｒで誘導体化されている〔式中、ｎ＝０−１０、好ましくは１−５で、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２との、ＮＨ２とＣＯＯＨとの、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（但し、Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）との、またはＸと、生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミンとの反応、に由来する結合を有するカップリングブロック（coupling block）である〕、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項３】
Ｘが、ハロゲン化物、アジド化合物、疑似ハロゲン化物（pseudohalide）、ホスフェート、チオール、シリルから選択される、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項４】
Ｎεおよび／またはＮαが生体分子で誘導体化されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項５】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項６】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項４に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項７】
ＮαおよびＮδがカルボニルで保護され、かくして６員尿素環を形成している、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項８】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が、金属トリカルボニルで保護されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項９】
Ｎαが、アミン保護基、特にＦｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルで保護され、カルボキシル基がエステル化により保護されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１０】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１１】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１２】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項３に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１３】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１０に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１４】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１５】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１６】
Ｎεが、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルで誘導体化されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体（請求項１の代わりに、請求項２がより妥当ではないか）。
【請求項１７】
Ｎαおよびカルボキシルが保護されている、請求項１６に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１８】
以下の構造式：
【化１】
2006527167.tif 000026
【化２】
2006527167.tif 000027
【化３】
2006527167.tif 000028
の１つを有する、ヒスチジン誘導体。
【請求項１９】
請求項１に記載のヒスチジン誘導体にカップリングした生体分子。
【請求項２０】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項１９に記載の生体分子。
【請求項２１】
該生体分子が、放射性標識化金属トリカルボニルで標識化されている、請求項１９に記載の生体分子。
【請求項２２】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
請求項１に記載のヒスチジン誘導体の製造方法であって、
ａ）ヒスチジンを提供すること；
ｂ）少なくともＮαを、そして場合によりカルボキシルおよびＮδを保護すること；
ｃ）ＮεおよびＮαの少なくとも１つを誘導体化すること；および、
ｄ）保護基を脱保護すること、
を含む、方法。
【請求項２４】
段階ｅ）脱保護した化合物を標識化し、標識化化合物を得ることをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＮαおよびＮδをカルボニル基で保護し、かくして６員尿素環を形成する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
カルボキシル、ＮαおよびＮδが、金属、特に金属トリカルボニルに配位する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
カルボキシルがエステル化により保護され、Ｎαが、アミン保護基、特にＦｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルで保護される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
Ｎεおよび／またはＮαが、（ＣＨ２）ｎ−Ｒで誘導体化されている〔式中、ｎ＝０−１０、好ましくは１−５で、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２との、ＮＨ２とＣＯＯＨとの、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（但し、Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）との、またはＸと、生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミンとの反応、に由来する結合を有するカップリングブロックである〕、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
Ｎεおよび／またはＮαが生体分子で誘導体化される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
Ｎεが−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルで誘導体化される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
該化合物が放射性標識化金属トリカルボニルで標識される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項３１に記載のヒスチジン誘導体。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ｆａｃ配位により放射性金属トリカルボニル［Ｍ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋で標識化するための、アミノ酸やペプチドなどの生体分子にカップリングできる新しいヒスチジン誘導体に関する。
【０００２】
放射性医薬目的での生物学的に活性な分子の９９ｍＴｃによる標識化は、研究の激しい分野である。商業的に入手できる放射性イメージング用の灌流剤は、癌細胞上に高密度で発現される様々な受容体のより正確な標的化を可能にする標識化ベクターにより補完されなければならない。今まで、数種の化合物が予備治験（pre-clinical trial）中であるが、商業的に適用されたものはない。
【０００３】
多くの化学的および生物学的困難を克服しなければならない。化学的には、標的化ベクターは、ｉ）適切な９９ｍＴｃまたは他の放射性核種用のキレーターで誘導体化されなければならず、ｉｉ）高い比活性（低いベクター濃度）で標識化され、最終的に、その物理化学的特性およびその対応する受容体への親和性を保持するべきである。日常的な使用には、標識化過程は、好ましくは単一の段階で実施されなければならない。
【０００４】
様々な操作が文献から利用可能であり、ペプチド、特にｈｙｎｉｃのアプローチは有望に思われるが、臨床承認に必要とされる明確に定義された化合物が欠如しているという欠点を有する。
【０００５】
本発明者らは、最近、有機金属性アコイオン［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋のワンポット合成を提示し（Alberto et al., J. Am. Chem. Soc. 2001, 123, 3135）、様々な生体分子および特にペプチドの標識化について、この錯体フラグメントの使用の多用途性を示した。
【０００６】
このカルボニルのアプローチの主な利点の１つは、配位子のタイプのみで定まる非常に高い比活性を有する十分に確定した錯体を入手できることである。ペプチド鎖中のＮ−末端ヒスチジンなどの天然産生二座配位子は、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋で効率的に標識化できる。比活性に関する改良は、低配位子濃度での標識化を可能にする、α−アミノ基を介する末端ヒスチジンの導入であった。
【０００７】
しかしながら、このタイプの二官能性キレーターは、比較的高い新油性を有し、その合成は困難である。
【０００８】
従って、本発明の目的は、様々に誘導体化されたヒスチジンを提供することであり、それは、最小の合成作業と最大の標識化効率をもって、いかなる任意のペプチド内または上へのその導入を可能にするものである。
【０００９】
本発明者らは、錯体［９９ｍＴｃ（ｈｉｓ）（ＣＯ）３］は親水性であるので、ヒスチジンをイミダゾール環中のε−窒素で誘導体化するのが適切であると考えた。この官能化は、高い効率の三脚型（tripodal）配位部位をもとのまま残すが、依然として生体分子中のアミンまたはカルボキシル基へのカップリングを可能にする。最後に、［９９ｍＴｃ（ｈｉｓ）（ＣＯ）３］の合成は、［９９ｍＴｃＯ４］−から単一の段階で実施できるので、ヒスチジンはまた、配位子に影響を与えないワンポットの標識化操作の要件も満たす。
【００１０】
従って、本発明は、以下のいずれかであるヒスチジンを含む、ヒスチジン誘導体に関する：
ａ）Ｎεで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｂ）Ｎαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｃ）ＮεおよびＮαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｄ）Ｎεで誘導体化されているか；または、
ｅ）Ｎαで誘導体化されているか；または、
ｆ）ＮεおよびＮαで誘導体化されているか；または、
ｇ）少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されている。
【００１１】
Ｎεおよび／またはＮαは、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒで誘導体化されている。式中、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０、好ましくは、１、２、３、４または５で、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＲ１、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２との、ＮＨ２とＣＯＯＨとの、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）との、またはＸと生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミンとの反応、に由来する結合を有するカップリングブロック（coupling block）であり、Ｒ１は、Ｈ、ｔ−ブチルまたはペンタフルオロフェニルである。Ｘは、ハロゲン化物、アジド化合物、疑似ハロゲン化物（pseudohalide）、ホスフェート、チオール、シリルから適切に選択される。
【００１２】
ＮεおよびＮαのいずれかまたは両方は、生体分子で誘導体化できる。これは、いかなる生体分子でもよく、特に、抗体などのポリペプチド、ペプチド、アミノ酸、糖、ビタミンなどである。適する生体分子の例は、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート（octreotate）、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（pmsa）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体である。
【００１３】
該生体分子は、Ｎεおよび／またはＮαに直接カップリングさせることができるか、または、Ｎεおよび／またはＮαは、最初に式−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ（式中、Ｒは上記定義の通りである）の基で誘導体化することができる。
【００１４】
ＮαおよびＮδは、カルボニルで保護でき、かくして６員尿素環を形成させられる。あるいは、Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基を金属トリカルボニルで保護する。
【００１５】
これらの２つの保護形態は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒでの誘導体化を行うときに特に有用である。その後この基をさらに生体分子で誘導体化するときに、元の保護を、アミン保護基、特にＦｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルによるＮαの保護、およびエステル化によるカルボキシル基の保護で置き換えてもよい。
【００１６】
全誘導体化段階の完了後、ヒスチジン誘導体を脱保護し、その後、放射性標識化金属トリカルボニルに配位させ、標識化生体分子を得ることができる。
【００１７】
放射性標識化金属トリカルボニルは、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から適切に選択される。
【００１８】
本発明のさらなる態様によると、生体分子のカップリングは、Ｎε上の−（ＣＨ２）ｎ−Ｒが−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルエステルとして誘導体化される場合に大いに助長されることが判明した。この誘導体化は、Ｎε上のＣＯＯＨの活性化を導く。このことは、生体分子自体がカップリングを競合するかもしれない遊離カルボン酸を有する場合に、いかなる修飾もなく生体分子と直接コンジュゲート（conjugation）する可能性をもたらす。上記の状況では、Ｎαおよびカルボキシル部分を保護する。
【００１９】
本発明は、特に、以下の構造式の１つを有するヒスチジン誘導体に関する。
【化１】
2006527167.tif 000002
【００２０】
【化２】
2006527167.tif 000003
【００２１】
そのさらなる態様によると、本発明は、特許請求するヒスチジン誘導体にカップリングした生体分子に関する。該ヒスチジンは、生体分子の末端にあっても、その内部にあってもよい。あるいは、ＮεおよびＮαの両方を生体分子で誘導体化して、二量体または二官能性分子を導くことができる。二官能性分子の例は、生体分子の片側が抗体または受容体へのリガンドなどの標的化機能を有し、生体分子の他方の側がその毒性のために使用される分子である。他の組合せも本発明の一部である。そのような二官能性分子は、例えば、腫瘍の標的化処置に使用できる。腫瘍への標的化は、処置すべき腫瘍の近傍に、毒性の生体分子および放射性金属をもたらす。
【００２２】
適する生体分子は、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体である。
【００２３】
本発明に至る研究の中で、Ｎα、Ｎδおよび−ＣＯＯ保護ヒスチジン中のＮεにアセチル基を導入してモデル化合物Ｎε−（ＣＨ２ＣＯＯＨ）−ヒスチジン誘導体９を得るために、２つの異なる経路が見いだされた。本発明の化合物は、ヒスチジン誘導体９と同様に、ペプチドなどの生物活性分子中のアミノ基にカップリングできる。そのようなバイオコンジュゲートの完全な脱保護後、ヒスチジンは、効率的に［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋または［Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋に面幾何学的（facial geometry）に配位する３つの配位部位を提供する。
【００２４】
従って、本発明はまた、本発明のヒスチジン誘導体の製造方法も提供し、それは、
ａ）ヒスチジンを提供すること；
ｂ）少なくともＮαを、そして場合によりカルボキシルおよびＮδを保護すること；
ｃ）ＮεおよびＮαの少なくとも１つを誘導体化すること；および、
ｄ）保護基を脱保護すること、
を含む。
【００２５】
本方法はさらに、段階ｅ）脱保護化合物を標識化し、標識化化合物を得ること、を含み得る。
【００２６】
本方法では、ＮαおよびＮδをカルボニル基で保護し、かくして６員尿素環を形成し得るか、または、カルボキシル、ＮαおよびＮδを金属、特に金属トリカルボニルに配位させ得る。
【００２７】
Ｎεおよび／またはＮαの誘導体化は、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒで実施できる。式中、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０、好ましくは、１、２、３、４または５、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＲ１、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２、ＮＨ２とＣＯＯＨ、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）、またはＸと生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミン、の反応に由来する結合を有するカップリングブロックであり、Ｒ１は、Ｈ、ｔ−ブチルである。あるいは、Ｎεおよび／またはＮαは、生体分子で直接誘導体化できる。
【００２８】
尿素環を利用して保護を達成し、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒの誘導体化をＮａで行う場合、該環は、生体分子の導入に先立ち開環してもよい。その場合、カルボキシルをエステル化により保護し、Ｎαを、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メチルオキシカルボニルまたはエチルオキシカルボニル基などのアミン保護基で保護する。
【００２９】
誘導体化を助長するために、Ｎε上の−（ＣＨ２）ｎ−Ｒを、最初に−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルエステルとして誘導体化してもよい。
【００３０】
本方法が誘導体を標識化する段階を含む場合、これは、放射性標識化金属トリカルボニル、特に［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される放射性標識化金属トリカルボニルを用いて適切に行う。
【００３１】
Ｎε位での選択的誘導体化は、このように、ＮαおよびＮδをカルボニル基で同時に保護して６員尿素を形成することにより、好都合に達成された。環状尿素環のＦｍ−ＯＨによる開環、モデルとしての９へのフェニルアラニンの第一級アミンを介する９へのカップリング、および１段階での全保護基の除去は、フェニルアラニンのヒスチジン誘導体をもたらし、それは、１０−５Ｍで９９ｍＴｃにより非常に高い収率で、１０−６Ｍでも約５０％収率で標識化できる。アニリンが９にカップリングした［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋との錯体のＸ線構造は、ヒスチジンの面配置（facial arrangement）を裏付ける。
【００３２】
第２の経路は、下記のスキームに示す通り、［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋部分を保護基として直接適用する。
【化３】
2006527167.tif 000004
【００３３】
これは、金属フラグメントが有機官能基の保護基として使用されるまれな例の１つである。
【００３４】
ヒスチジンへの配位は、Ｎα、Ｎδおよび−ＣＯＯを単一の段階で保護し、その後のＢｒＣＨ２ＣＯＯＨ（Ｒ）によるＮεでのアルキル化、フェニルアラニンへのカップリングおよび［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋の［ＲｅＯ４］−への酸化的脱保護は、ヒスチジンがフェニルアラニンにアセチルアミドを介してＮεでカップリングしている、対応するバイオコンジュゲート（bioconjugate）をもたらす。
【００３５】
両方法とも、ヒスチジンを生体分子に、その３つの配位部位を保持したまま導入する便利な経路を与える。これらの操作は、垂れ下がった（pendant）アミンを有するいかなる生体分子にも適用可能であり、新規放射性医薬または逆転ペプチド（inversed peptide）の開発を可能にする。
【００３６】
従って、ヒスチジンがイミダゾール環のＮεを介して標的化分子に連結している場合、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋による生体分子の高収率の標識化がμＭの濃度で可能である。そのような誘導体を産生するための２つの好都合な戦略が実現化されており、一方は、［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋コアを、ヒスチジン中の３つの官能基のための有機金属保護基として用いる。この鍵となる化合物は、生体分子中のいかなるアミノ基にもカップリングさせることができ、水中で［９９ｍＴｃＯ４］−から単一の段階で標識化できる。このことは、新しい放射性医薬の開発を可能にする。
【００３７】
選ばれる誘導体化法は、カップリングさせようとする生体分子によって決まる。尿素環の開環は、酸性ｐＨおよび還元条件を必要とするが、一般的に、生体分子のカップリングに先立って実施される。この方法は、ビタミンなど、そのような条件に耐えられる生体分子に適する。あるいは、ポリペプチドは、金属カルボニルで保護されているヒスチジンにカップリングさせることができる。
【００３８】
下記の実施例では、非常に効率的かつ生物学的に安定な生体分子の標識化のための、様々なタイプのヒスチジン誘導体を挙げる。
【００３９】
ＮαおよびＮδは、単一の段階で保護でき、さらなる誘導体化のためにＮεを遊離のまま残す。Ｎαでの誘導体化は同様に可能である。
【００４０】
【化４】
2006527167.tif 000005
【００４１】
左の分子は、ＮαおよびＮδが保護されＮεが誘導体化（右側の分子で示す）のために残されたヒスチジンを示す。Ｎεでの誘導体化（アルキル化など）は、アミン、カルボキシレート、ハロゲン化物などであり得る垂れ下がった官能基を介して生体分子にカップリングできる様々な誘導体をもたらす。この種の合成は、本質的に文献公知である (R. Jain, et al, J. Chem. Soc., Dalton Trans, 1994, 2815）。脱保護後、Ｎαを介して［Ｍ（ＣＯ）３］＋に三脚型配位する可能性のあるヒスチジン誘導体が残る：
【化５】
2006527167.tif 000006
【００４２】
脱保護前に、分子１をいかなる種類の生体分子にカップリングさせることもできる。従って、Ｒは生体分子でもあり得る。次いで、脱保護により、再び三脚型ヒスチジン配位子を含有する生体分子を得る。この配位子は、９９ｍＴｃまたは１８８Ｒｅによる標識化に関して最高の効率のものであり、ほぼｎ.ｃ.ａ.レベルでの生体分子の標識化を可能にする。
【００４３】
以下は、モデルペプチド配列にカップリングした三脚型ヒスチジンの例である：
【化６】
2006527167.tif 000007
【００４４】
合成技法と生体分子標識の組合せは新規であり、高収率は予想外である。さらに、本発明によると、非常に強力なカルボニル配位子を、今や非常に容易に生体分子にカップリングさせることができる。上述のタイプの誘導体は、その物理化学的特性を保持したまま、本質的にいかなる生体分子にもカップリングできる。本発明によるやり方でカップリングしたヒスチジンは、天然の配位子である。
【００４５】
さらに、本発明のヒスチジン誘導体は、ペプチド鎖の向きを反転させるのに使用できる。通常のペプチド配列は、例えば以下の構造式を有する：
【化７】
2006527167.tif 000008
【００４６】
本発明のヒスチジン誘導体を利用して、反転配列を産生でき、２つのＮ末端および二座ｈｉｓ配位子を得ることができる：
【化８】
2006527167.tif 000009
【００４７】
あるいは、２つのＣ末端を有する反転配列および二座ｈｉｓ配位子を得ることができる：
【化９】
2006527167.tif 000010
【００４８】
ヒスチジン誘導体は、配列を反転させずにペプチド鎖に、例えば配列中に二座ヒスチジン配位子を有する以下の通常配列に、含まれることもできる：
【化１０】
2006527167.tif 000011
【００４９】
この場合、二座の天然配位子を通常のペプチド配列に含めることが可能である。このペプチド鎖への包含は、今まで実現しなかった新しい種類の標識化をもたらす。
【００５０】
構造中のＮαでの修飾は、準天然ヒスチジンをもたらす。ＮαまたはＮεのいずれかでの誘導体化は、以下の通りに選択的に可能である：
【化１１】
2006527167.tif 000012
【００５１】
ＮαとＮεの両方での誘導体化は、同時に可能である。様々な官能基（生体分子も含む）を導入し（左）、脱保護後に三官能性ヒスチジンを得、次いで、それにより三官能性三脚型ヒスチジン配位子を得る（右）：
【化１２】
2006527167.tif 000013
【００５２】
あるいは、ＲまたはＲ１のいずれかでのペプチド配列のカップリングは、通常（下）または反転（上）であり得るペプチド配列中に三座ヒスチジンを含めることを可能にする。
【化１３】
2006527167.tif 000014
【００５３】
両戦略は、高効率かつ強力なヒスチジン配位子を適用することにより、低分子の標識化も可能にする。これは、即ち、アミノ酸または低酸素造影剤などの他の低分子の標識化に使用できる。［Ｔｃ（ｈｉｓ−Ｒ）（ＣＯ）３］錯体は、その結果、親水性の高いものである。このことは一般に生体分子に有利である。
【００５４】
本願では、構造式ＩないしＸＶＩＩＩに記載の化合物は、一般化された構造であることに留意すべきである。以下の表１は、各一般式の特徴の組合せをまとめたものである。
【００５５】
【表１】
2006527167.tif 000015
１＝Ｎεで誘導体化
２＝Ｎαで誘導体化
３＝ＮεおよびＮαで誘導体化
４＝誘導体化せず
Ａ＝６員環を利用して保護
Ｂ＝金属トリカルボニルを利用して保護
Ｃ＝ＣＯＯＨ上のエステルおよびＮα上のアミン保護基により保護
Ｄ＝脱保護したＣＯＯＨおよび標識化用の列ＣからのＮαを有する式
太字＝生体分子のない式
イタリック＝生体分子のある式
ｎｐ＝あり得ない
【００５６】
出願人の意図は、本明細書において、ｎの値で表されるアルキル鎖長およびＮαおよび／またはＮε上の様々な置換基Ｒの全ての可能な組合せを開示することである。下記は、全ての可能なｎおよびＲの組合せを列挙した表２である。いくつかの化合物では、以下に列挙した組合せの２つのいかなる組合せも可能である。
【００５７】
【表２】
2006527167.tif 000016
【００５８】
生体分子を直接ヒスチジンにカップリングさせず、Ｎεおよび／またはＮαを最初に誘導体化する場合、以下のｎおよびＲの組合せが可能である。
【表３】
2006527167.tif 000017
【００５９】
ＮＨ−ＢＭは、ヒスチジン誘導体のＮεおよび／またはＮα上のＮＨ２を生体分子のＣＯＯＨにカップリングさせることを意味する。ＣＯ−ＢＭでは、ヒスチジン誘導体のＮεおよび／またはＮα上のＣＯＯＨを生体分子のＮＨ２にカップリングさせる。Ｏ−ＢＭは、ヒスチジン誘導体のＮεおよび／またはＮα上のＯＨを、生体分子のリン酸エステルまたはエーテル連結基の形成により、生体分子上のＰｈ−ＯＨまたはハロゲン化物にカップリングさせることを意味する。そしてＸ'−ＢＭは、ヒスチジン誘導体のＮεおよび／またはＮα上のハロゲン化物、アジド、疑似ハロゲン化物（pseudohalide）、ホスフェート、チオールまたはシリルを、生体分子上のＳ、ＯＨまたはアミンにカップリングさせることを意味する。
【００６０】
本発明を以下の本発明をいかようにも限定しないことを意図する実施例で、さらに例示説明する。実施例では、生体分子の標識化のモデル系を記載する。同じやり方で、アミノ酸やペプチドなどの他の生体分子を標識化できることに留意すべきである。実施例では、以下の図面を参照する：
図１：３のオルテップ（Ortep）プロット、５０％の確率で描かれた楕円体。
図２：６のオルテッププロット、５０％の確率で描かれた楕円体、不斉ユニットの２つの分子の一方を示す。
図３：１３のオルテッププロット、５０％の確率で描かれた楕円体、不斉ユニットの２つの分子の一方を示す。
【００６１】
実施例
実施例１
ＮαおよびＮδを保護した尿素−ヒスチジンの合成（スキーム１）
５−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロイミダゾ［１,５−ｃ］ピリミジン−７−カルボン酸メチルエステル（分子３）
文献に従い、僅かな改変を加えてこの化合物を製造した（R. Jain et al. Tetrahedron, 1996, 52, 5363）。ＤＭＦ（８０ｍｌ）中のＬ−ヒスチジンメチルエステル（２.７３ｇ、１１.２８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｉｍ２ＣＯ（１.８８ｇ、１１.６１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を７０℃に６時間加熱し、室温に冷却し、ゆっくりと１Ｍ ＮａＨＣＯ３水性溶液（２５０ｍｌ）に注いだ。いくらかの固体が水層から沈殿した。それをＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。抽出の間に、沈殿はＣＨ２Ｃｌ２に完全に溶解した。
【００６２】
合わせた有機抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、３を白色固体（１.３５ｇ、６１％）として得た。Rf = 0.2 (EtOAc 100%); 1H NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 8.01 (s, 1H; CHim), 6.77 (s, 1H; CHim), 6.61 (br.s, 1H; NH), 4.37-4.34 (m, 1H; CHCO), 3.67 (s, 3H; OCH3), 3.25-3.23 (m, 2H; CH2CH); 13C NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 172.1, 149.2, 135.4, 126.9, 125.9, 53.6, 53.5, 23.7; MS (ESI): m/z(%): 195.73 (100) [M+], 167.8 (35), 135.8 (24); C8H9N3O3 (195.18)の元素分析、計算値 (%): C 49.23, H 4.62, N 21.54; 実測値: C 49.32, H 4.77, N 21.24。
Ｘ線構造解析に適する結晶は、ＥｔＯＡｃからゆっくりと蒸発させることにより得られた。
【００６３】
実施例２
Ｎεへのカルボキシレート官能基の導入（スキーム１）
２−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）−７−メトキシカルボニル−５−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロイミダゾ［１,５−ｃ］ピリミジン−２−イウム；臭化物（分子４）
ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０.５７ｍｌ、３.８６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ３ＣＮ（２５ｍｌ）中の３（２５０ｍｇ、１.２８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を２４時間還流させ、室温に冷却し、真空で濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ（２ｘ１０ｍｌ）およびＴＨＦ（２ｘ５ｍｌ）で洗浄し、真空で乾燥させ、４を白色粘着性固体として得、さらなる精製をせずに次の段階で使用した。1H NMR (300 MHz, D2O, 20℃): δ = 9.39 (s, 1H; CHim), 7.40 (s, 1H; CHim), 5.05 (s, 2H; CH2Nim), 4.78-4.61 (m, 1H; CHCO), 3.63 (s, 3H; OCH3), 3.42-3.39 (m, 2H; CH2CH), 1.39 (s, 9H; tBu); MS (ESI): m/z (%): 309.40 (13) [M+-HBr], 253.80 (100) [M+-HBr-(CH2=C(CH3)2)]。
【００６４】
実施例３
Ｎε保護ヒスチジンの製造（スキーム１）
メチルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−オキソエチル）ヒスチジネート（分子６）
ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の粗製の４（３９０ｍｇ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０.５２ｍｌ、３.０１ｍｍｏｌ）およびＢｎＯＨ（２.１ｍｌ、２０.０８ｍｍｏｌ）を添加した。１６時間還流した後、反応溶液を室温に冷却し、減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、６を白色固体として得た（２６０ｍｇ、３から６２％）。Rf = 0.15 (CH2Cl2/MeOH 45:1); 1H NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 7.39-7.32 (m, 6H; 5 x CHph, CHim), 6.78 (s, 1H; CHim), 6.66 (br.d, J = 7.8 Hz, 1H; NH), 5.06 (s, 2H; CH2-Bn), 4.58 (s, 2H; CH2Nim), 4.42 (q, J = 2.6 Hz, 1H; CHCO), 3.62 (s, 3H; OCH3), 2.96 (t, J = 5.26 Hz, 2H; CH2CH); 13C NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 173.2, 168.3, 157.0, 139.1, 138.2, 137.8, 129.5, 129.0, 128.9, 119.2, 83.2, 67.2, 66.9, 55.2, 52.7, 49.3, 30.2, 28.2; MS (ESI): m/z (%): 417.53 (100) [M+]; C21H27N3O6 (417.48)の元素分析、計算値 (%): C 60.43, H 6.47, N 10.07; 実測値: C 60.43, H 6.57, N 9.97。
Ｘ線構造解析に適する結晶は、ＥｔＯＡｃへの１−ヘキセンの蒸気拡散法により得られた。
【００６５】
実施例４
脱保護された官能基を有するヒスチジン化合物の製造および生体分子へのカップリング（スキーム２）
メチルＮ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−１−｛２−［（１−エトキシカルボニル−２−フェニルエチル）アミノ］−２−オキソエチル｝ヒスチジネート（分子１０ａ）
ＣＨ２Ｃｌ２／ＴＦＡ（２：２ｍｌ）中の６（１４０ｍｇ、０.３４ｍｍｏｌ）の溶液を、２.５時間、室温で撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、真空でさらに乾燥させた。残渣、即ち粗製の化合物８を、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）に溶解し、Ｅｔ３Ｎを滴下して添加することにより中和した。ＢＯＰ（１４８ｍｇ、０.３４ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（４６μｌ、０.３４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。４５分後、ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍｌ）中のフェニルアラニン−エチルエステル（８４.６ｍｇ、０.３７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（５１μｌ、０.３７ｍｍｏｌ）の溶液をゆっくりとシリンジにより添加した。反応混合物を、さらに２.５日間室温で撹拌した。溶液をＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍｌ）で希釈し、１Ｎ ＨＣｌ溶液（２０ｍｌ）、１Ｎ ＮａＨＣＯ３（２０ｍｌ）、塩水（２０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、１０ａを無色油状物として得た（１６２ｍｇ、９０％）。Rf = 0.2 (CH2Cl2/MeOH 40:1); 1H NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 7.37-7.28 (m, 9H; 2 x 4H-CHph, CHim), 7.16 (d, J = 8.23 Hz, 2H; 2 x CHph), 6.77 (br.d, J = 7.65 Hz, 1H; NH), 6.69-6.66 (m, 2H; CHim, NH), 5.05 (s, 2H; CH2-Bn), 4.61 (dt, J = 7.86 Hz, 1H; CH-Phe), 4.52 (s, 2H; CH2Nim), 4.43-4.41 (m, 1H; CHCO), 4.11 (q, J = 7.15 Hz, 2H; CH2CH3), 3.62 (s, 3H; OCH3), 3.10 (dd, J = 8.19 Hz, 1H; CH2-Phe), 2.99-2.93 (m, 3H; CH2-Phe, CH2CH), 2.57 (s, N-CH3), 1.18 (t, J = 7.13 Hz, 3H; CH3); 13C NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 173.3, 172.0, 167.8, 157.0, 139.1, 138.3, 138.2, 137.8, 130.4, 129.5, 129.4, 129.0, 128.9, 127.9, 118.9, 67.2, 62.2, 55.2, 54.8, 52.8, 49.9, 38.0, 30.3, 14.5; MS (ESI): m/z (%): 537.53 (100) [M++H]; C28H32N4O7+0.5[N(CH3)2]3P=O+0.5H2O (634.5)の元素分析、計算値(%): C 58.63, H 6.62, N 12.14; 実測値: C 58.98, H 6.89, N 12.48。
【００６６】
【化１４】
2006527167.tif 000018
【００６７】
【化１５】
2006527167.tif 000019
【００６８】
実施例５
［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋保護ヒスチジン中のＮεでの官能基の導入（スキーム３）
Ｒｅ錯体（１６ａ）
アセトニトリル（２５ｍｌ）中の錯体１４（２５ｍｇ、０.０５９ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２０.４ｍｇ、０.０６５ｍｍｏｌ）の溶液に、アセトニトリル（５ｍｌ）中のエチルブロモアセテート（２９.５ｍｇ、０.１７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３５℃で１.５時間加熱した。氷酢酸を混合物に添加して中和した。標準的後処理の後、粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、錯体１６ａ（３０ｍｇ、９０％）を得た。Rf = 0.15 (EtOAc/EtOH 5:1); 1H NMR (300 MHz, CD3CN, 20℃): δ = 7.95 (s, 1H; CHim), 6.92 (s, 1H; CHim), 4.78 (s, 2H; CH2Nim), 4.23-4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2H; CH2CH3), 3.91-3.87 (m, 1H; CHCO), 3.21-2.98 (q, 2H; CH2CH), 1.28-1.23 (t, J = 7.5 Hz, 3H; CH3); 13C NMR (300 MHz, CD3CN, 20℃): δ = 199.5, 197.8, 197.8, 181.8, 168.8, 143.4, 135.7, 120.9, 63.0, 52.6, 49.4, 28.7, 14.4; MS (ESI): m/z (%): 511.8 (100) [M++H], 1020.7 (55) [2M+]; C15H18N3O7Re (510.5)の元素分析、計算値(%): C 30.59, H 2.76, N 8.23; 実測値: C 30.84, H 3.0, N 8.06。
【００６９】
Ｒｅ錯体（１６ｂ）
製造は、化合物１６ａと同様である。アセトニトリル（２５ｍｌ）中の化合物１４（２５ｍｇ、０.０５９ｍｍｏｌ）およびＣｓ２ＣＯ３（２０.４ｍｇ、０.０６５ｍｍｏｌ）に、ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート（３４.５ｍｇ、０.１７６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を３５℃で１.５時間撹拌した。反応混合物を濾過し、真空下で乾燥させ、シリカゲルクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ ５：１）により精製し、錯体１６ｂ（２９ｍｇ、９０％）を得た。1H NMR (300 MHz, CD3CN, 20℃) δ = 7.93 (s, 1H; CHim), 6.90 (s, CHim), 4.65(s, 2H; CH2Nim), 3.94-3.25 (m, 1H; CHCO), 3.27-3.23 (q, 2H; CH2CH), 1.45 (s, 9H; tBu); 13C NMR (CD3CN) δ = 181.3, 167.3, 143.1, 135.2, 120.6, 83.8, 52.3, 49.7, 28.5, 28.0, 27.8; MS (ESI): m/z (%): 539.9 (100) [M+], 1076.8 (50); C15H18N3O7Re (538.5)の元素分析、計算値 (%): C 33.43, H 3.34, N 7.80; 実測値: C 33.30, H 3.85, N 7.68。
【００７０】
Ｒｅ錯体１５
エステル基を加水分解するために、化合物１６ａ（３０ｍｇ、０.０５７ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）およびＬｉＯＨ（０.５Ｍ、２ｍｌ）の溶液中、終夜、室温で撹拌し、化合物１６ｂ（１５ｍｇ、０.０２８ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（２ｍｌ）の溶液中、２時間、室温で撹拌した。２つの粗製物質をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＨ／ＴＨＦ／ＡｃＯＨ １０：１：０.１）により精製し、錯体１５（各々９５％および９０％）を得た。
【００７１】
実施例６
［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋保護ヒスチジン中のカルボキシレート基への生体分子のカップリングおよび［Ｒｅ（ＣＯ）３］＋保護基の除去（スキーム４）
Ｒｅ錯体１７
ＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（３：０.２ｍｌ）の混合溶液中の錯体１５（８ｍｇ、０.０２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＯＰ（７.４ｍｇ、０.０２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２μｌ、０.０２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。３０分後、ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍｌ）中のフェニルアラニン−エチルエステル（４ｍｇ、０.０２ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２μｌ、０.０２ｍｍｏｌ）の溶液を、シリンジで滴下して錯体溶液に添加した。反応混合物を終夜撹拌した。反応溶液を真空で濃縮した。残渣をジエチルエーテル（２ｘ５ｍｌ）で処理した。白色固体をＴＨＦ（１０ｍｌ）に溶解し、不溶性固体を濾過した。濾液を真空で濃縮し、錯体１７のエチルエステルを得た（７５％）。1H NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ= 7.8 (s, 1H; CHim), 7.34-7.21 (m, 5H; CHph), 6.8 (s, 1H; CHim), 4.63-4.59 (m, 1H; CHCO), 4.53 (d, 2H; CH2Nim), 4.08 (q, 2H; CH2CH3), 3.92-3.88 (m, 1H; CH-His), 3.18-3.10 (2 x dd, 2H; CH2-His, CH2-Phe), 3.05-2.96 (2 x dd, 2H; CH2-His, CH2-Phe), 1.17 (t, 3H; CH3); 13C NMR (500 MHz, CD3CN, 25℃): δ = 198.1, 196.6, 196.5, 180.4, 170.8, 165.5, 142.0, 136.7, 134.3, 129.4, 128.4, 126.8, 124.9, 120.3, 119.6, 61.2, 54.1, 51.4, 49.2, 37.2, 27.7, 13.4; IR (KBr):ν = 2020, 1886, 1733, 1636 cm-1; MS (ESI): m/z (%): 659 (100) [M++H]; C22H24N4O8Re (658.6)の元素分析、計算値 (%): C 40.12, H 3.67, N 8.51; 実測値: C 39.31, H 3.83, N 8.25。
【００７２】
錯体のエチルエステル基を、上述の通り、錯体を０.５Ｍ ＬｉＯＨおよびＭｅＯＨ（１：２）の混合溶液中、終夜、室温で撹拌することにより加水分解し、錯体１７を定量的に得た。
【００７３】
錯体１７および１５からのレニウムの酸化の一般操作
化合物１７または１５（Ｈ２Ｏ中５ｍＭ、５００μｌ）の溶液および酸（ＨＣｌ、ＴＦＡまたは酢酸）溶液（Ｈ２Ｏ中、１.０、０.１または０.０１Ｍ、７０μｌ）を容器に入れ、密封し、窒素で脱気した（１０分間）。Ｈ２Ｏ２（Ｈ２Ｏ中、０.４３、０.８６または１.２９Ｍ、６０μｌ）を脱気した容器に添加し、続いてサンプルを５０℃で加熱した。反応混合物のモニタリングは、ＨＰＬＣにより２５０ｎｍで実行し、そこでは反応混合物（１０μＬ）をＨＰＬＣに、４、８、２４および４８時間、またはスペクトル中でレニウム錯体が見えなくなるまで注入した。反応条件の有効性を、過レニウム酸塩の形成に対してレニウム錯体のピーク面積比を測定することにより算出した。レニウム錯体がもはや観察されなくなったら、反応混合物を二酸化マンガンで処理して残留Ｈ２Ｏ２を反応混合物から除去し、ワットマン０.２μｍ濾紙で濾過し、９９ｍＴｃ標識化に使用する、溶液中の配位していない配位子を得た。
【００７４】
【化１６】
2006527167.tif 000020
【００７５】
【化１７】
2006527167.tif 000021
【００７６】
実施例７
Ｎεに垂れ下がった−ＮＨ２基を有するヒスチジンの製造（スキーム５）
３−｛１−［３−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−プロピル］−１Ｈ−イミダゾール−４−イル｝−２−（３−トリメチルシラニル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル（分子１８）
ＭｅＣＮ（４０ｍｌ）中の３（１９６ｍｇ；１.０ｍｍｏｌ）およびＮ−Ｆｍｏｃ−３−ヨードプロピルアミン（１.２２ｇ；３.０ｍｍｏｌ）の混合物を、還流で４.５日間加熱した。化合物３の尿素誘導体がＴＬＣで検出されなくなったら、反応混合物を真空で濃縮し、白色固体を得た。固体物質をＭｅＣＮ（４０ｍｌ）に再溶解し、２−トリメチルシリルエタノール（３５５ｍｇ；３.０ｍｍｏｌ）およびｄｉｐｅａ（２５９ｍｇ；２.０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を、室温、Ｎ２下で１６時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、続いてカラムクロマトグラフィー（シリカ；ＥｔＯＡｃ）により精製した。収量：３１６ｍｇ（２段階で５３％）の泡状無色固体。
実測値: C, 62.1; H, 6.2; N, 9.5; Calc. for C31H40N4O6Si: C, 62.8; H, 6.8; N 9.5; νmax (KBr)/cm-1 3329br NH, 1730s, 1698vs C=O; δH (300.8 MHz; CD3CN) 7.82 (2H, 疑似-d, 2 x ArH), 7.64 (2H, 疑似-d, 2 x ArH), 7.38 (3H, m, 2 x ArH + N2CHHis), 7.32 (2H, 疑似-t, 2 x ArH), 6.79 (1H, s, CHHis), 6.55 (1H, d, J 7.5, NH), 5.68 (1H, br s, NH), 4.35 (3H, 重複する m, OCH2-Fmoc + CαH), 4.22 (1H, t, J 6.6, OCH2CH-Fmoc), 4.07 (2H, m, CH2), 3.87 (2H, m, CH2), 3.60 (3H, s, OCH3), 2.99 (2H, m, CH2), 2.90 (2H, m, CβH2), 1.85 (2H, m, CH2), 0.93 (2H, m, CH2), 0.01 (s, 9H, Si-(CH3)3). δC (CD3CN; 75.47 MHz) 173.7 (C=Oエステル), 157.7, 157.6 (2x C=Oアミド), 145.5, 142.2 (2 x ArCq), 138.4 (CHis), 128.9, 128.3 (2 x ArCH), 126.4 (CHis), 121.2, 118.6 (2 x ArCH), 118.1 (CHis), 66.9, 63.7, 55.3, 52.7, 48.3, 44.9, 38.6, 32.1, 30.1, 18.3, 1.4 (Si(CH3)3); m/z (ESI-pos., MeOH) 343, 371, 533, 593 [M+H]+。
【００７７】
３−［１−（３−アミノ−プロピル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］−２−（３−トリメチルシラニル−プロピオニルアミノ）−プロピオン酸メチルエステル（分子１９）
化合物１８（２５５ｍｇ；０.４３ｍｍｏｌ）を１／１ＤＭＦ／ＮＥｔ２混合物（８ｍｌ）に溶解した。混合物を１時間室温で撹拌した後、溶媒を真空で除去した。分取ＨＰＬＣ（Ｃ−１８ｅｃカラム；ＴＦＡ緩衝液）により精製し、化合物１９を無色泡状固体として、そのトリフルオロアセテート塩として得た。収量：１９０ｍｇ（９１％）。
δH (300.08 MHz; CD3CN) 8.59 (1H, s, N2CHHis), 7.95 (3H, br, NH3+), 7.26 (1H, s, CHHis), 6.56 (1H, d, J 8.4 Hz, NH), 4.43 (1H, m, CαH), 4.24 (2H, t, J 6.9 Hz, CH2), 4.05 (2H, m, CH2), 3.68 (3H, s, OCH3), 3.22 (1H, m, CβH), 3.06 (1H, m, CβH), 2.95 (2H, t, J 6.9, CH2), 2.21 (2H, m, CH2), 0.89 (2H, m, CH2), 0.00 (9H, s, Si-(CH3)3); δC (75.47 MHz; CD3CN): 172.7 (C=Oエステル), 162.2 (q, JC, F 34.6, CF3), 157.7 (C=Oアミド), 135.9, 132.4, 120.7 (3 x CHis), 64.0, 54.6, 53.2, 47.0, 37.3, 28.6, 27.6, 18.2 (OCH3, Cα, Cβ + 5 x CH2), 1.5 (Si-(CH3)3); m/z (ESI-pos.; MeOH): 343.1, 370.8 ([M+H]+, C16H30N4O4Si は 371.2 を要する) 762 [2M+Na]+。
【００７８】
実施例８
ヒスチジン誘導体中のアミノ基への生体分子のカップリング（スキーム５）
ａ）ビオチン：Ｄ−（＋）−ビオチン（３５ｍｇ；０.１４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ／ＮＥｔ３（２.５ｍｌ）の４／１（ｖ／ｖ）混合物に溶解した。この混合物に、ＤＭＦ（２ｍｌ）中の化合物１９（９１ｍｇ；０.１９ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、続いてＴＢＴＵ（４６ｍｇ；０.１４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４５分間室温で撹拌した後、真空で蒸発乾固させた。残渣を２Ｍ ＮａＨＣＯ３（２０ｍｌ）に溶かし、ＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ２０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を０.５Ｍ ＨＣｌ（２０ｍｌ）、Ｈ２Ｏ（２０ｍｌ）および塩水（２ｘ２０ｍｌ）で洗浄した。溶媒の除去後、化合物２０を無色泡状固体として得た。収量：６７ｍｇ（７８％；ビオチンと比較して）。
【００７９】
δH (300.08 MHz; CD3OD) 7.60 (1H, s, N2CHHis), 6.95 (1H, s, CHHis), 4.48 (1H, m), 4.41 (1H, m), 4.29 (1H, m), 4.09 (2H, m), 3.98 (2H, m), 3.69 (3H, s, OCH3), 3.16 (3H, 重複する-m, CH2 + H), 2.95-2.78 (5H, 重複する-m, 2 x CH2 + H), 2.70 (1H, m), 2.19 (2H, m, CH2), 1.93 (2H, m, CH2), 1.63 (4H, m, 2 x CH2), 1.43 (2H, m, CH2), 0.94 (2H, m, CH2), 0.01 (9H, s, Si-(CH3)3; δC (75.47 MHz; CD3OD): 176.4, 174.3 (C=Oエステル + N2C=O), 166.3, 158.9 (C=Oアミド), 138.5, 138.3, 118.7 (ArCHis), 64.2, 64.4, 61.7, 57.1, 55.7, 52.8, 45.7, 41.1, 37.4, 36.8, 31.9, 31.1, 29.8, 29.5, 26.8, 18.6 (10 x CH2, Cα, Cβ, OCH3, 3 x CH), 1.5 (Si-(CH3)3; m/z (FAB+; NBA) 597.2898 (M+, C26H45N6O6SiS は 597.2891を要する)。
【００８０】
ｂ）エンケファリンに：ＤＭＦ（１.５ｍｌ）およびＮＥｔ３（０.５ｍｌ）中の精製した化合物１９（３９ｍｇ；０.０８ｍｍｏｌ）および保護エンケファリン（８５ｍｇ；０.０８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＴＵ（２５ｍｇ；０.０８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４５分間ＲＴで撹拌し、真空で乾燥するまで濃縮した。化合物をＨＰＬＣ（ラン１：Ｃ８−カラム；５０ｍＭ ＴＲＩＳ緩衝液；ラン２：Ｃ８−カラム；ＴＦＡ緩衝液）で精製した。収量：４２ｍｇ（４９％）の化合物２１、ガラス状固体として。
δH (500.25 MHz; CD3OD) 8.77 (1H, s, N2CHHis), 7.43 (1H, s, CHHis), 7.28 (4H, m, 4 x ArH), 7.20 (1H, m, ArH), 7.12 (2H, 疑似-d, 2 x ArH), 6.90 (2H, 疑似-d, 2 x ArH), 4.52 (1H, m, CαH), 4.49 (1H, m, CαH), 4.22-4.09 (7H, 重複する m, 2 x CαH + 2 x CH2), 3.85 (2H, m, CH2-Gly), 3.78 (2H, m, CH2-Gly), 3.73 (3H, s, OCH3), 3.25-3.02 (9H, 重複する m, 2 x CH2 + 3 x CβH), 2.84 (1H, m, CβH), 2.04 (1H, m, CH2-CH2-CH2), 1.71 (1H, m, CγH-Leu), 1,56 (2H, m, CβH2), 1.36 (9H, s, OC(CH3)3), 1.28 (9H, s, OC(CH3)3), 0.94 (3H, d, J 6.3, Leu-CH3), 0.89 (3H, d, J 6.3, Leu-CH3); δC (90.5 MHz; CD3OD) 175.5, 175.1, 174.2 172.9, 172.6, 158.7, 158.2 (C=O,), 155.4, 138.3, 136.4, 133.6, 130.9, 130.2, 129.6, 128.0, 125.2, 121.2 (all ArC), 81.0, 79.6 (Cq), 64.5, 58.0, 57.5, 54.4, 53.2, 47.6, 44.1, 41.0, 38.1, 38.0, 36.3, 30.8, 29.2, 28.7, 28.2, 25.9, 23.5, 21.7, 18.6, -1.5 (CH, CH2 および CH3;); m/z (FAB+ ; NBA)1064.5789 ([M+H]+, C53H82N9O12Si は 1064.5852 を要する）。
【００８１】
【化１８】
2006527167.tif 000022
【００８２】
実施例９
ＮεおよびＮαへの２つの官能基のカップリング（スキーム６）
２,６−Ｂｉｓ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル−７−メトキシカルボニル−５−オキソ−５,６,７,８−テトラヒドロ−イミダゾ［１,５−ｃ］ピリミジン−２−イウム；臭化物（分子２２）
ＮａＨ１３ｍｇ（０.３０７ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＭＦ（２ｍｌ）に０℃で懸濁した。ＤＭＦ（１ｍｌ）中の６０ｍｇ（０.３０７ｍｍｏｌ）の化合物３の溶液を、ゆっくりと滴下して添加した。反応混合物を、０℃で３０分間、室温でさらに１時間、気体が発生しなくなるまで撹拌した。反応溶液を再度０℃に冷却した。ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル０.０７ｍｌ（０.４６１ｍｍｏｌ）をシリンジで非常にゆっくりと冷却条件で添加した。溶液を０℃で３０分間、室温でさらに２時間撹拌した。化合物３がＴＬＣで検出されなくなったら、ブロモ酢酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル０.１４ｍｌ（０.９２１ｍｍｏｌ）をもう一度滴下して添加した。反応混合物を７０℃に終夜加熱した。反応をＴＬＣでモニターした。１５時間の加熱の後、溶液を室温に冷却し、真空で濃縮した。粗製残渣をジエチルエーテルで２回処理して過剰の臭化物を除去し、真空で乾燥させた。粗製化合物２２をさらに精製せずに次の段階に使用した。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ：４２４.５６［Ｍ−Ｂｒ］＋
【００８３】
２−［ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル−（９Ｈ−フルオレン−９−イル−メトキシカルボニル）−アミノ］−３−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−プロピオン酸メチルエステル（分子２３）
粗製の化合物２２をアセトニトリル（１０ｍｌ）に室温で溶解した。Ｆｍ−ＯＨ１８１ｍｇ（０.９２１ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ０.０８ｍｌ（０.４６１ｍｍｏｌ）を添加した。２４時間室温で撹拌した後、反応溶液を１Ｎ ＨＣｌ溶液の添加により中和し、減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、水で１回、１Ｎ ＨＣｌ溶液で１回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物２３を得た（収率：化合物３から４０−５０％）。
【００８４】
【化１９】
2006527167.tif 000023
【００８５】
実施例１０
活性化ヒスチジン誘導体の製造
２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−（１−ペンタフルオロフェニルオキシカルボニルメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）プロピオン酸メチルエステル（分子２４）：化合物９（０.１９８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍｌ）に溶解し、ピリジンを添加して溶液をｐＨ６−７に中和した。ピリジン０.０３ｍｌ（０.３９６ｍｍｏｌ）を添加した。その後、ＴＨＦ（２ｍｌ）中のトリフルオロ酢酸ペンタフルオロ−フェニルエステル（ＴＦＡ−Ｐｆｐ）１１１ｍｇ（０.３９６ｍｍｏｌ）の溶液をシリンジで滴下して非常にゆっくりと室温で添加した。反応混合物を室温で１９時間撹拌した後、溶液を真空で濃縮した。粗製残渣をジクロロメタンに溶解し、０.５Ｎ ＨＣｌで１回、０.５Ｎ Ｎａ２ＣＯ３で１回、そして塩水で１回抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空で濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、化合物２４を得た。（収率：５５％）；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ：６１５.７８［Ｍ＋Ｈ］＋
【化２０】
2006527167.tif 000024
【００８６】
実施例１１
ヒスチジン誘導体のペプチドへの一般的カップリング操作
カップリング：化合物９または２４をカップリング反応に使用した。これらの配位子の一方（通常０.０２−０.０８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦに溶解し、Ｅｔ３ＮまたはＤＩＰＥＡ（０.０３−０.１ｍｍｏｌ）を塩基として添加した。化合物９の場合、配位子のカルボン酸基が３０分以内に室温で活性化されるように、ＢＯＰまたはＴＢＴＵ（通常０.０２５−０.０９ｍｍｏｌ）をカップリング試薬として添加した。その後、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ＲＧＤまたはボンベシンなどのペプチド（通常０.０１−０.０２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液をシリンジで滴下して添加した。化合物２４の場合、カップリング試薬なしで、ペプチド溶液を塩基添加後すぐに添加した。化合物２４は、Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＯＨ、ガストリン（構造中に７個の遊離ＣＯＯＨ）またはＴＯＣＡ−ＯＨのように、ペプチドが遊離カルボン酸基を有する場合により安定である。ペプチドに応じて、反応混合物を２−１８時間撹拌した。反応をＨＰＬＣによりモニターした。ペプチドがＨＰＬＣで検出できなくなったら、反応溶液を真空で濃縮した。粗製残渣を分取ＨＰＬＣにより精製し、生成物をＭＳに付した。
【００８７】
脱保護：ヒスチジンをコンジュゲートしたペプチド（通常０.００３−０.００６ｍｍｏｌ）をピペリジン（１ｍｌ）に室温で溶解した。３０−４０分間撹拌した後、反応混合物を氷冷水（３ｍｌ）に注いだ。白色固体フルビン（fulvine）を濾過し、水（１ｍｌ）ですすいだ。水性溶液を真空で濃縮し、全ての、即ちＦｍｏｃおよびメチルエステルの脱保護生成物として白色固体を得、それをさらに精製せずに標識化に使用した。
【００８８】
標識化：コンジュゲートの溶液（水またはリン酸緩衝液（ｐＨ７.４）中、１０−３または１０−４Ｍ、１００μｌ）を容器に入れた。次いで、［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋（９００μｌ）の溶液をその容器に添加した（総濃度：１０−４または１０−５Ｍ）。溶液を９０℃に３０分間ないし１時間加熱した。通常、標識化は、定量的、３０分間以内、１０−４Ｍの濃度で、および、２０ないし５０％、３０分間以内、１０−５Ｍの濃度で行った。（ベータ）−ヘアピンループペプチドの場合、そのコンジュゲートは、１０−５Ｍの濃度でも３０分間以内に定量的標識化を示した。
【００８９】
実施例１２
一般的標識化操作
有機合成またはレニウム酸化経路を通して得られた配位子の溶液（Ｈ２Ｏ中１０−３または１０−４Ｍ、１００μｌ）を、容器に添加し、次いでそれを密封し、窒素ガス流で１０分間脱気した。［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３（Ｈ２Ｏ）３］＋（９００μｌ）の溶液を容器にシリンジを介して添加し、容器を７０−９０℃に３０分間加熱して対応する［９９ｍＴｃ（ＣＯ）３］＋錯体である［（５）９９ｍＴｃ（ＣＯ）３］および［（１１）９９ｍＴｃ（ＣＯ）３］を、放射性検出を伴うＨＰＬＣを介して高収率で得た。全結果を表４に記載する。
【００９０】
【表４】
2006527167.tif 000025
【００９１】
［ａ］：標識化は１時間以内に定量的に行われた。酸化由来の配位子５、７５℃、３０分間の収率は８５％であった。
［ｂ］：標識化は１.５時間後に６４％収率に達した。
［ｃ］：酸化由来の配位子１１は、９０℃、３０分間で、収率８８％を示した。
［ｄ］：酸化由来の配位子１１は、９０℃、３０分間で、収率７３％を示した。
［ｅ］：標識化は、１.５時間後に収率６５％以上に達した。
【図面の簡単な説明】
【００９２】
【図１】図１は、３のオルテッププロット、５０％の確率で描かれた楕円体である。
【図２】図２は、６のオルテッププロット、５０％の確率で描かれた楕円体、不斉ユニットの２つの分子の一方を示す。
【図３】図３は、１３のオルテッププロット、５０％の確率で描かれた楕円体、不斉ユニットの２つの分子の一方を示す。
【図１】
2006527167.tif 000029
【図２】
2006527167.tif 000030
【図３】
2006527167.tif 000031
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月2日(2005.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒスチジン誘導体であって、
ａ）Ｎεで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｂ）Ｎαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｃ）ＮεおよびＮαで誘導体化され、少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されているか；または、
ｄ）Ｎεで誘導体化されているか；または、
ｅ）Ｎαで誘導体化されているか；または、
ｆ）ＮεおよびＮαで誘導体化されているか；または、
ｇ）少なくともＮαで、場合によりＮδでも保護されている、
のいずれかであるヒスチジンを含む、ヒスチジン誘導体。
【請求項２】
Ｎεおよび／またはＮαが、（ＣＨ２）ｎ−Ｒで誘導体化されている〔式中、ｎ＝０−１０、好ましくは１−５で、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２との、ＮＨ２とＣＯＯＨとの、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（但し、Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）との、またはＸと、生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミンとの反応、に由来する結合を有するカップリングブロック（coupling block）である〕、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項３】
Ｘが、ハロゲン化物、アジド化合物、疑似ハロゲン化物（pseudohalide）、ホスフェート、チオール、シリルから選択される、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項４】
Ｎεおよび／またはＮαが生体分子で誘導体化されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項５】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項６】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項４に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項７】
ＮαおよびＮδがカルボニルで保護され、かくして６員尿素環を形成している、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項８】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が、金属トリカルボニルで保護されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項９】
Ｎαが、アミン保護基、特にＦｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルで保護され、カルボキシル基がエステル化により保護されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１０】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１１】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１２】
Ｎα、Ｎδおよびカルボキシル基が脱保護され、その代わりに放射性標識化金属トリカルボニルに配位している、請求項３に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１３】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１０に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１４】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１５】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項１２に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１６】
Ｎεが、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルで誘導体化されている、請求項１に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１７】
Ｎαおよびカルボキシルが保護されている、請求項１６に記載のヒスチジン誘導体。
【請求項１８】
以下の構造式：
【化１】
2006527167.tif 000032
【化２】
2006527167.tif 000033
【化３】
2006527167.tif 000034
の１つを有する、ヒスチジン誘導体。
【請求項１９】
請求項１に記載のヒスチジン誘導体にカップリングした生体分子。
【請求項２０】
該生体分子が、ボンベシン、メラノコルチンなどの（アルファ）−ＭＳＨペプチド、オクトレオテート、ソマトスタチン、インターロイキン−８（ＩＬ８）、ＣＣＫ、（ベータ）−ヘアピンループペプチド、ニューロテンシン、ビオチン、前立腺膜特異抗原（ｐｍｓａ）に対するモノクローナル抗体などのモノクローナル抗体から選択される、請求項１９に記載の生体分子。
【請求項２１】
該生体分子が、放射性標識化金属トリカルボニルで標識化されている、請求項１９に記載の生体分子。
【請求項２２】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項２１に記載の生体分子。
【請求項２３】
請求項１に記載のヒスチジン誘導体の製造方法であって、
ａ）ヒスチジンを提供すること；
ｂ）少なくともＮαを、そして場合によりカルボキシルおよびＮδを保護すること；
ｃ）ＮεおよびＮαの少なくとも１つを誘導体化すること；および、
ｄ）保護基を脱保護すること、
を含む、方法。
【請求項２４】
段階ｅ）脱保護した化合物を標識化し、標識化化合物を得ることをさらに含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
ＮαおよびＮδをカルボニル基で保護し、かくして６員尿素環を形成する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
カルボキシル、ＮαおよびＮδが、金属、特に金属トリカルボニルに配位する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
カルボキシルがエステル化により保護され、Ｎαが、アミン保護基、特にＦｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルで保護される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
Ｎεおよび／またはＮαが、（ＣＨ２）ｎ−Ｒで誘導体化されている〔式中、ｎ＝０−１０、好ましくは１−５で、Ｒは、−ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＯＨ、−Ｘまたは−Ｘ'−生体分子から選択される基であり、ここで、Ｘ'は、ＣＯＯＨとＮＨ２との、ＮＨ２とＣＯＯＨとの、ＯＨとＰｈ−ＯＨ（但し、Ｐｈは、リン酸化ペプチドまたはグリコシルホスフェートなどの生体分子上のリン酸基である）との、またはＸと、生体分子上の求電子性官能基、特にＳ、ＯＨまたはアミンとの反応、に由来する結合を有するカップリングブロックである〕、請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
Ｎεおよび／またはＮαが生体分子で誘導体化される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
Ｎεが−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯ−ペンタフルオロフェニルで誘導体化される、請求項２３に記載の方法。
【請求項３１】
該化合物が放射性標識化金属トリカルボニルで標識される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
該放射性標識化金属トリカルボニルが、［９９ｍＴｃ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋、［１８８Ｒｅ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］＋および［９７Ｒｕ（ＯＨ２）３（ＣＯ）３］２＋から選択される、請求項３１に記載のヒスチジン誘導体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
尿素環を利用して保護を達成し、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒの誘導体化をＮαで行う場合、該環は、生体分子の導入に先立ち開環してもよい。その場合、カルボキシルをエステル化により保護し、Ｎαを、Ｆｍｏｃ、Ｃｂｚ、ＢＯＣ、Ｔｅｏｃ、メチルオキシカルボニルまたはエチルオキシカルボニル基などのアミン保護基で保護する。
【国際調査報告】
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