(57)【要約】本発明は、溶解ポリエン系殺菌剤及び可溶化剤を含有する水性組成物であって、少なくとも１００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤が溶解ポリエン系殺菌剤として存在する水性組成物を提供する。本発明の水性組成物は、更にキレート化剤及び／又は抗酸化剤を含有していてもよい。本発明の組成物は、より安定な形態の溶解ポリエン系殺菌剤を提供する。本発明は更に、本発明の組成物の使用、及びこのような組成物の製造方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
溶解ポリエン系殺菌剤及び可溶化剤を含有する水性組成物であって、少なくとも１００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤が溶解ポリエン系殺菌剤として存在する水性組成物。
【請求項２】
前記可溶化剤が界面活性剤である、請求項１に記載の水性組成物。
【請求項３】
１００〜１００００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤が溶解ポリエン系殺菌剤として存在する、請求項１又は２に記載の水性組成物。
【請求項４】
２００〜１００００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤が溶解ポリエン系殺菌剤として存在する、請求項１又は２に記載の水性組成物。
【請求項５】
ｐＨが５〜８である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項６】
前記ポリエン系殺菌剤の１０％を超える損失なしに、少なくとも１週間保存することができる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項７】
キレート化剤及び／又は抗酸化剤を更に含有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項８】
前記キレート化剤及び／又は抗酸化剤が非酸性である、請求項７に記載の水性組成物。
【請求項９】
前記キレート化剤及び／又は抗酸化剤がＥＤＴＡ又はその塩である、請求項８に記載の水性組成物。
【請求項１０】
１０〜１００００ｐｐｍのキレート化剤及び／又は抗酸化剤が存在する、請求項７〜９のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項１１】
０．１〜５w/w％の界面活性剤が存在する、請求項２〜１０のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項１２】
前記ポリエン系殺菌剤がナタマイシンである、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の水性組成物。
【請求項１３】
飼料、食品又は農業製品の表面又はその内部における、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の水性組成物の使用。
【請求項１４】
少なくとも１００ｐｐｍのナタマイシンが溶解した水溶液中のナタマイシンの活性を保持する方法であって、前記溶液に可溶化剤を供給することを含む方法。
【請求項１５】
前記可溶化剤が界面活性剤である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
キレート化剤及び／又は抗酸化剤を前記溶液に加えることを更に含み、前記キレート化剤及び前記抗酸化剤が同一の物質でも異なる物質でもよい、請求項１４又は１５に記載の方法。
【請求項１７】
２００〜５００００ｐｐｍのナタマイシンを溶解する、請求項１４〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の分野】
【０００１】
本発明は、ポリエン系殺菌剤の水溶液に関する。
【発明の背景】
【０００２】
ポリエン系殺菌剤は、多種多様な用途において真菌及び酵母の成長を防止するために用いられている。特に、ナタマイシン等のポリエン系殺菌剤は、チーズ、ソーセージ、果物、飲料等の食品の腐敗を防止するために用いられている。ポリエン系殺菌剤の農業的用途、獣医学的用途及び医薬用途も知られている。
【０００３】
ポリエン系殺菌剤を含有する製剤の使い勝手を良くするには、製剤の取扱い、輸送及び／又は保存が可能なように、製剤中のポリエン系殺菌剤の活性を十分に安定化させる必要がある。製剤内のポリエン系殺菌剤の活性は、ポリエン系殺菌剤の種類及び製剤中の他の成分の特定の性質に応じて、多くの異なる既知の因子に左右される。例えば、光の遮蔽及び高濃度を適度な温度と組み合わせると、ナタマイシンの安定性に、またそれ故、ポリエン系殺菌剤の効力に好ましい影響があることが示されている。殺菌剤の大半が固体状態で存在すると考えられるので、高濃度がポリエン系殺菌剤の安定性に好ましい影響を及ぼすことは驚くべきことではない。クロロフィリン及び他の化合物を用いることによって、ナタマイシンを酸化及び紫外線から保護することができる（Antibiotics and Chemotherapy 9:327-332）。
【０００４】
ポリエン系殺菌剤製剤の効力は、一般に、殺菌剤の濃度、及び当該条件下でのポリエン系殺菌剤の安定性によって決まる。溶解部分だけが抗菌活性を有するので、殺菌力は主としてポリエン系殺菌剤の溶解部分の量に左右されるが、この量は、水系（大半の食品）及び大半の有機溶媒において少ない。
【０００５】
更に、安定性は、ポリエン系殺菌剤の溶解度にも直接関わっている。ポリエン系殺菌剤の溶解部分は、その安定性に影響を及ぼす因子によって劣化を受けやすい。
【０００６】
多くの用途においては、食品を腐敗させる菌類の大半は極めて低い濃度のナタマイシンの影響を受けるので、ナタマイシンの溶解度が低いことは欠点というよりむしろ利点である。従って、非溶解ナタマイシンは、例えば作用の発揮、分解及び／又は拡散によって消滅した殺菌剤の溶解部分を補填することによって、貯蔵所又は供給源を形成している。このことは、チーズ、ソーセージ等の食品をより長期間保存する目的で表面処理を行う場合に特に当てはまる。
【０００７】
他の多くの用途においては、溶解ナタマイシンの量が多いことは有利である可能性がある。例えば、短期的に高い抗菌活性が必要な場合である。このような事情は恐らく、食品製造プロセスのいくつかの段階において存在する。例えば、製品の包装を閉じる直前、或いはチーズ及びソーセージの製造の場合は、湿度が高く、製品が菌類による腐敗を受けやすい製造直後に、恐らくそのような事情が存在する。
【０００８】
溶解ナタマイシンの量が多いことはまた、殺菌剤に対する耐性のより高い菌種を取り扱わなければならない場合にも有利である。このような場合は、活性（溶解）形態の殺菌剤の量が多いことが、活性形態の安定性が高いことと併せて必要である。例えば、ペニシリウム・ディスカラー（Penicillium discolor）は、腐敗をもたらす通常の菌類よりナタマイシンに対する耐性が高い種であり、チーズの倉庫に存在する。そのような種による汚染レベルが高いと、腐敗問題が生じる可能性がある。これは、水系中の溶解ナタマイシンが４０ｐｐｍ未満では、溶解ナタマイシンが少なく、このかび種の成長を防ぐことができないからである。溶解ポリエン系殺菌剤の量は、例えば、低ｐＨ又は高ｐＨを用いることによって増加させることができる。しかし、特に低ｐＨ及び高ｐＨでは溶解ナタマイシンの安定性が低いので、そのような製剤の貯蔵寿命は極めて限られている。従って、これまで、そのような溶解ナタマイシンの製剤は使用直前に調製しなければならなかった。このような調製の特に不利な点は、製剤の調製のために特別な装置及び原料を常時用意しておく必要があることである。高ｐＨ又は低ｐＨの溶液の更に別の欠点は、そのｐＨが処理対象物のｐＨの影響を受けることである。例えば、チーズのｐＨは約５．０である。これは、溶解ナタマイシンの大半がチーズに対する使用直後に結晶化し、その結果、防かび力が弱まることを意味する。
【０００９】
米国特許第６３６９０３６号明細書には、殺菌剤の放出性が改善された、ポリエン系殺菌化合物の製剤が記載されている。これらの製剤の活性が高いのは、このポリエン系殺菌剤が溶解性の高い特別な結晶形態にあることによる。これらの化合物は、殺菌剤に対する耐性の高い菌種による食品の腐敗を防止するための組成物中で用いることができる。しかし、これらの組成物は依然として、使用直前に調製しなければならない。これは、水性環境に懸濁させると、上記化合物が、熱力学的に極めて安定な、それ故溶解性のより低い形態に変化するからである。このように、溶解ナタマイシンの速やかな放出を可能にするナタマイシンの結晶形態が知られている。しかし、実際には、これらのナタマイシンの結晶形態は、溶解ナタマイシンが、特に水性環境において、安定的で、且つ高濃度であるという要求を満たしていない。
【発明の概要】
【００１０】
本発明は、溶解ポリエン系殺菌剤（dissolved polyene fungicide）及び可溶化剤を含有する水性組成物であって、少なくとも１００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤が溶解ポリエン系殺菌剤として存在する水性組成物を提供する。
【００１１】
本発明はまた、飼料、食品又は農業製品の表面又はその内部における水性組成物の使用を提供する。
【００１２】
本発明は更に、少なくとも１００ｐｐｍのナタマイシンが溶解した水溶液中のナタマイシンの活性を保持する方法であって、前記溶液に可溶化剤を供給することを含む方法を提供する。
【発明の説明】
【００１３】
本発明は、直接及び／又は原液として用いることができる、ポリエン系殺菌剤の安定な水溶液の製造方法を提供する。
【００１４】
本発明者らは、可溶化剤、好ましくは界面活性剤を添加することによって、水系におけるポリエン系殺菌剤の溶解度を改善することができることを見出した。可溶化剤は、これがないと溶解しない物質を可溶化する化合物である。一般に、所望の効果を得るのに必要な可溶化剤は少量である。例えば０．０５〜８w/w％の可溶化剤により、ポリエン系殺菌剤の溶解度に対する有意なプラス効果が得られる。界面活性剤は、気体、液体及び固体間の境界における界面張力を低下させる化合物である。しかし、これらの溶液の安定性が低いことが予想されるので、ポリエン系殺菌剤と可溶化剤との混合は調製直後に行う必要があると考えられる。
【００１５】
本発明はまた、少なくとも１００ｐｐｍのナタマイシンが溶解した水溶液中のナタマイシンの活性を保持する方法であって、前記溶液に可溶化剤を供給することを含む方法を提供する。この方法は更に、前記溶液にキレート化剤及び／又は抗酸化剤を供給することを含んでいてもよく、前記キレート化剤及び前記抗酸化剤は同一の物質でも異なる物質でもよい。
【００１６】
従って、本発明はまた、溶解ポリエン系殺菌剤、及び可溶化剤、好ましくは界面活性剤を含有する水性組成物を提供する。溶解ポリエン系殺菌剤として存在するのは、１００ｐｐｍ以上、通常５００００ｐｐｍ未満、好ましくは１００〜１００００ｐｐｍのポリエン系殺菌剤である。ポリエン系殺菌剤としてはナタマイシンが好ましい。
【００１７】
意外なことに、１又は複数の可溶化剤により、水系におけるナタマイシン等のポリエン系殺菌剤の溶解性を著しく改善することができること、及び、このような溶液が予想より著しく安定であることが見出された。更に、混合物のｐＨを中性の値、好ましくは５〜９、より好ましくは６〜８に維持すると、安定性は更に良くなり、また、溶解性は保持される。本発明によれば、１００ｐｐｍ以上、好ましくは２００ｐｐｍ以上のポリエン系殺菌剤、好ましくはナタマイシンが水溶液中に存在する。一般に、本発明の水性組成物は、５００００ｐｐｍ未満、好ましくは１００００ｐｐｍ未満、より好ましくは１０００ｐｐｍ未満のポリエン系殺菌剤、好ましくはナタマイシンを含有する。
【００１８】
界面活性剤は、アニオン性、カチオン性、非イオン性及び両性のいずれであってもよい。アニオン性界面活性剤の例としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム及びドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。カチオン性界面活性剤の例としては、塩化ドデシルアンモニウム及び臭化ヘキサデシルトリアンモニウムが挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、親水性タイプ、疎水性タイプ、及びこれらの組合せのいずれも有用である。親水性の非イオン性界面活性剤の例としては、ポリエチレングリコール−２０ソルビタンモノラウレート（ＰＥＧ−２０ ソルビタンモノラウレート又はＴｗｅｅｎ２０としても知られている）、ＰＥＧ−２０ソルビタンモノステアレート（Ｔｗｅｅｎ６０としても知られている）、及びＰＥＧ−２０ソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０としても知られている。）が挙げられる。疎水性の非イオン性界面活性剤の例としては、ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ２０）及びソルビタンモノステアレート（Ｓｐａｎ６０）が挙げられる。両性界面活性剤の例としては、アルキルベタイン及びアルキルスルホベタインが挙げられる。界面活性剤としては、ＳＤＳを用いるのが好ましい。
【００１９】
本発明の組成物においては、一般に、０．１〜５．０w/w％の界面活性剤が用いられる。
【００２０】
既知の可溶化剤としては他に、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）又はレシチンがある。
【００２１】
可溶化されたナタマイシンの安定性は、キレート化剤及び／又は抗酸化剤を加えることにより更に改善することができる。キレート化剤は、１個の金属原子と配位結合を形成することができる２個以上の電子供与性原子を含有する化合物である。通常、これらの化合物は、カルシウム、その他の重金属等の金属原子を可溶化するのに用いる。キレート化剤の周知の例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が挙げられる。抗酸化剤は、有機物質と酸素との反応速度を低下させるのに用いられる物質である。抗酸化剤の例としては、ブチル化ヒドロキシアニソール、リボフラビン、アスコルビン酸及びトコフェロールが挙げられる。
【００２２】
ポリエン系殺菌剤の酸化的不活性化は、Ｆｅ（ＩＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）及びＣｒ（ＩＩＩ）等の数種の金属イオンによって促進される。これは、ＥＤＴＡ、ポリリン酸等のキレート化剤によって防止することができる。従って、溶液中にこれらの有害な重金属のいずれも存在しないのに、キレート化剤が可溶性ナタマイシンの安定性を保持することができるという知見は、極めて驚くべきものである。
【００２３】
キレート化剤は、アミノカルボン酸（例えば、エチレンジアミン四酢酸及びＮ−ジヒドロキシエチルグリシン）、ヒドロキシカルボン酸（例えば、クエン酸及び酒石酸）、又はポリリン酸（例えば、トリポリリン酸及びヘキサメタリン酸）を含有するのが好ましい。非酸性のキレート化剤を用いるのが好ましい。
【００２４】
前記キレート化剤は、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）又はその機能的等価物を含有するのがより好ましい。ＥＤＴＡの機能的等価物とは、ＥＤＴＡの機能的な部分、誘導体及び／又は類似物であって、必ずしも量ではなく性質において同一の殺菌剤保存活性を有するものである。ＥＤＴＡの最も一般的な機能的等価物は、ＥＤＴＡの種々の塩（例えば、ＥＤＴＡのナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩及び／又は銅塩）である。しかし、この分子の１又は複数の基を他の等価な基で置換したものも、ＥＤＴＡの等価物として好ましい。このような等価物の例としては、１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸及び１，３−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００２５】
前記水溶液中のキレート化剤の量は、好ましくは１０〜１００００ｐｐｍである。より好ましくは２０〜１０００ｐｐｍ、更に好ましくは３０〜３００ｐｐｍである。
【００２６】
本発明では、抗酸化剤を添加してもよい。抗酸化剤としては、非酸性の抗酸化剤が好ましい。前記抗酸化剤は、アスコルビン酸、クエン酸、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸塩／エステル（gallate）、トコフェロール、パルミチン酸アスコルビル及び／又はアスコルビン酸カルシウムを含有するのが好ましい。前記抗酸化剤は、ＢＨＡ、ＢＨＴ、トコフェロール及び／又は没食子酸塩／エステル（gallate）を含有するのがより好ましい。
【００２７】
前記水溶液中に存在する前記抗酸化剤の量は、好ましくは１０〜１００００ｐｐｍである。
【００２８】
他の態様においては、本発明は、溶解ポリエン系殺菌剤、キレート化剤及び／又は抗酸化剤を含有する水性組成物を提供する。ここで、前記キレート化剤及び前記抗酸化剤は同一の物質でも異なる物質でもよい。この溶液に溶解しているポリエン系殺菌剤は、好ましくは１００〜１００００ｐｐｍである。この組成物中には、ポリマー（ポリマービーズ等）が存在しないのが好ましい。
【００２９】
本発明の組成物としては、ポリエン系殺菌化合物の活性の１０％を超える損失なしに、１週間以上保存することができるものが有利である。本発明の組成物は、より好ましくは、ポリエン系殺菌化合物の１０％を超える損失なしに、２週間以上、更に好ましくは１ヶ月以上、特に好ましくは３ヶ月以上保存することができるものである。
【００３０】
保存温度は、一般に、４〜３０℃、好ましくは１５〜２５℃である。
【００３１】
別の実施形態においては、本発明の溶液は、前記溶液の保存及び／又は輸送に適した容器に収容する。前記溶液は、好ましくは１週間以上、より好ましくは２週間以上、更に好ましくは１ヶ月以上、特に好ましくは３ヶ月以上保存することができるものである。
【００３２】
一実施形態においては、本発明の水溶液は本発明の方法によって得られる。
【実施例】
【００３３】
（材料及び方法）
（材料）
−ＥＤＴＡジナトリウム、Chemolanda bv, 2596 BP Den Haag, The Netherlands より購入。
−アンモニア、Gaches Chimie France, 31750 Escalquens, France より購入。
−ＳＤＳ溶液２０％(w/w)、Bio-Rad Laboratories, Inc 2000 Alfred Nobel Drive Hercules, CA 94547 USA より購入。
−Delvocid（登録商標）、活性ナタマイシン５０％(w/w)及びラクトース５０％を含有、DSM Food Specialties, P.O.Box 1, 2600 ＭＡ, Delft, The Netherlands より購入。
−アンフォテリシンＢ コード A-4888、ロット 122K4013、Sigma Aldrich Chemie, GmbH, PO Box 1120 Steinheim Germany より購入。
−ナイスタチン コード N-6261、ロット 120K11351、Sigma Aldrich Chemie, GmbH, PO Box 1120 Steinheim Germany より購入。
【００３４】
（ナタマイシン量を測定するための分析方法）
次の方法を用いて、数種の成分の水性混合物中の活性ナタマイシンの量を分析した。
【００３５】
用いた方法は、Lichrosorb RP8 カラムを用いるＨＰＬＣをベースとするものであり、国際酪農連盟の基準（ＡＤＦ暫定基準１４０、１９８７年）に従ったものである。
検出は、注入量を２０μＬとして、０．１〜４ｍｇ／Ｌの範囲で３０３ｎｍのＵＶで行った。
試料の調製は、調製された製剤２ｇを１ｍｇの精度でメスフラスコに秤量することにより行った。
脱塩／脱イオン水（demineralized water, demiwater）４ｍＬを加え、混合物を１５分間撹拌して、均質の懸濁液を得た。
次いで、エタノール８０ｍＬを加え、混合物を１０分間撹拌した。
超音波処理を行った後、溶液に脱塩／脱イオン水を加えて１００ｍＬにした。そして、希釈及び／又は濾過（０．２μｍ）を行った後、注入した。
ナタマイシン濃度が既知である一連の標準品に照らし合わせて、活性ナタマイシンの量（ｐｐｍ）を計算した。
【００３６】
（実施例１）
この実施例では、高溶解性ナタマイシン製剤を用いるのに適した製剤であって、添加成分及び物理的パラメータに関して経時的な安定性を試験するために開発された製剤を調製する方法について説明する。
【００３７】
混合物は、Ruston型撹拌機を備えた Janke & Kunkel 製の電動撹拌機 RW20DZM型を用いて調製した。
混合物は、Delvocid（ナタマイシン）２ｇを２０％ＳＤＳ溶液５０ｇと共に加え、更に添加剤を加え、最後に脱塩／脱イオン水で最終重量を１０００ｇにすることにより調製した。
この粗混合物を５分間混合して均質の混合物を得、次いで、これをアンモニアでｐＨ４〜６に調整した。
活性ナタマイシンの添加量が１０００ｐｐｍである、得られた製剤を、暗所で、密閉したポット中に１８℃で保存した。
調製した混合物中の活性ナタマイシンの量を、上述の分析法を用いて経時的に測定した。
【００３８】
（実施例２）
実施例１に記載の混合物をｐＨ４．０又はｐＨ６．０に調整し、ナタマイシンの活性を経時的に測定した。
【００３９】
結果を表１に示す。
【表１】
2006521322.tif 000002
【００４０】
（実施例３）
実施例１に記載の混合物をＥＤＴＡジナトリウム１０００ｐｐｍと混合し、これをｐＨ６．０に調整し、ナタマイシンの活性を経時的に測定した。
【００４１】
結果を表２に示す。
【表２】
2006521322.tif 000003
【００４２】
（実施例４）
数種のポリエン系殺菌剤を用いて、数種の濃度の混合物を調製した。用いたポリエン系殺菌剤は、ナイスタチン、アンフォテリシン及びナタマイシンである。脱塩／脱イオン水中のポリエン系殺菌剤、又は最終ＳＤＳ濃度が１％(w/w)になるようにＳＤＳと混合した実施例１の脱塩／脱イオン水中のポリエン系殺菌剤について、溶解率を目視で測定した。室温で１分間撹拌した後、混合物が透明であれば溶解したものとした。
【００４３】
結果を表３に示す。
【表３】
2006521322.tif 000004
【国際調査報告】
2006521322.tif 000005
2006521322.tif 000006