(57)【要約】【課題】キナーゼ阻害剤としてのヘテロ二環式ピラゾール誘導体【解決手段】本明細書で定義される式（Ｉ）の二環式ピラゾール、及び薬学的に許容されるそれらの塩、それらの調製方法、及び、それらを含有する薬学的粗製物が開示される；本発明の化合物は、制御されないタンパク質キナーゼ活性に関する疾患、例えば癌の治療処置において有用である。  【化１】2006501191.tif 000035
2006501191.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物、及び薬学的に許容されるそれらの塩：
【化１】
2006501191.tif 000024
ここにおいて、
ＸはNR', O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは-R',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択され;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖の、C1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択される;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は、上記で定義されたものである。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であって、ＸがＳであり、ＲがCOR',-CONHR'であり; R1が-COR',-CONHR',-CONR'R",-SO2NHR'又は-SO2NR'R"であり、
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、請求項１で定義されたものであり；R2は水素原子である化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物であって、ＲがCOR'であり、R1が-CONHR'又は-CONR'R"である化合物。
【請求項４】
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物であって、ＸがＯであり;ＲがCOR',-CONHR'であり; R1が-COR',-CONHR',-CONR'R",-SO2NHR'又は-SO2NR'R"であり、
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、請求項１で定義されたものであり;R2は水素原子である化合物。
【請求項５】
請求項４に記載の式（Ｉ）の化合物であって、RがCOR'であり、R1が-CONHR'又は-CONR'R"である化合物。
【請求項６】
薬剤として使用するための、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩。
【請求項７】
変質した（制御されない）タンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患に罹患している患者を治療するための薬剤の製造における、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩の使用。
【請求項８】
変質した（制御されない）タンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患に罹患している、ヒトを含む哺乳類を治療する方法であって、式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩の治療的に有効な量を、それらを必要とする前記哺乳類に投与することによる方法：
【化２】
2006501191.tif 000025
ここにおいて、
Xは、NR',O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは-R',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択され;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択され;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は上記で定義されたものである。
【請求項９】
請求項８に記載の方法であって、前記変質したタンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患は、癌、細胞増殖性疾患、アルツハイマー病、ウイルス感染、自己免疫性疾患及び神経変性疾患から成る群から選択される方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であって、前記癌は、癌腫、扁平上皮癌、骨髄又はリンパ系統の造血性腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢神経系又は末梢神経系の腫瘍、黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫、甲状腺瀘胞状癌、及びカポジ肉腫から成る群から選択される癌である方法。
【請求項１１】
請求項９に記載の方法であって、前記細胞増殖性疾患は、良性の前立腺肥厚、家族性腺腫症ポリープ症（adenomatosis polyposis）、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、関節炎糸球体腎炎並びに術後狭窄及び再狭窄に関わる血管平滑細胞増殖から成る群から選択される方法。
【請求項１２】
請求項９に記載の方法であって、腫瘍脈管形成及び転移の阻害、並びに、臓器移植片拒絶及び宿主対移植片病の治療を提供する方法。
【請求項１３】
請求項９に記載の方法であって、放射線治療又は化学療法によって誘発された脱毛症の治療又は予防を提供する方法。
【請求項１４】
請求項９に記載の方法であって、放射線治療又は少なくとも一つの細胞分裂停止薬剤又は細胞毒性薬剤と組み合わせた化学療法措置を、それらを必要とする哺乳類に受けさせることをさらに含む方法。
【請求項１５】
請求項９に記載の方法であって、前記それらを必要とする哺乳類はヒトである方法。
【請求項１６】
タンパク質キナーゼ活性を阻害する方法であって、前記タンパク質キナーゼを、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物の有効量と接触させることを含む方法。
【請求項１７】
請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容される塩の治療的に有効な量、及び、少なくとも一つの薬学的に許容される賦形剤、担体及び／又は希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項１８】
一以上の化学療法剤をさらに含む、請求項１７に記載の薬学的組成物。
【請求項１９】
抗癌治療において、同時、別々、又は連続的に使用する組合せられた製剤として、請求項１で定義された式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩、並びに、一以上の化学療法剤を含む、製品又はキット。
【請求項２１】
複数の式（Ｉ）の化合物、及び薬学的に許容されるそれらの塩を含む、コンビナトリアル・ケミストリーのライブラリ：
【化３】
2006501191.tif 000026
ここにおいて、
Xは、NR', O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは-R',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択される;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択される;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は上記で定義されたものである。
【請求項２２】
生物学的試験例１〜４で報告された、請求項１で定義された式（Ｉ）の特定の化合物及び薬学的許容されるそれらの塩。
【請求項２３】
式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物、又は、薬学的に許容されるそれらの塩を調製する方法であって
【化４】
2006501191.tif 000027
（ここで、X、R及びR1及びR2は、請求項１で定義されたものである）：
以下を含む方法：
i)式（XXII）の化合物を、適切な反応によって対応するシアノ誘導体に転換する
【化５】
2006501191.tif 000028
（ここで、R1、R2及びXは上記で定義されたものであり、Halはハロゲン原子である）；任意に、上記の式（XXII）においてR1もＣＨＯ残基である場合、所望の異性体を分離する；
ii)得られた式（XXIII）の化合物を、
【化６】
2006501191.tif 000029
（ここにおいて、R1、R2、X及びHalは、上記で定義されたものである）；Ｐｄ触媒、リガンド及び塩基の存在下における不活性雰囲気下で、式（XXIV）：RaRbC=N-NH2（ここで、Ra及びRbは、直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルキル、アリール、アリール-C1-C6アルキル基であり、又は、それが結合している炭素原子と共に、任意に縮環した複素環又はC5-C7シクロアルキル基を形成する）のヒドラゾン誘導体と反応させる；
iii)結果として生じる式（XXV）の化合物を、
【化７】
2006501191.tif 000030
（ここにおいて、R1、R2、X、Ra及びRbは上記で定義されたものである）；適切な溶媒中で酸により処理し、式（Ｉ）の化合物（ここで、Rは水素原子であり、R1、R2及びXは上記定義のものである）を得る、及び、必要であれば、このようにして得られた式（Ｉ）の化合物を、他の式（Ｉ）の化合物（ここで、Rは水素原子以外である）に転換する；及び／又は、必要であれば、式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法であって、前記得られた式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒは水素原子である）の、他の式（Ｉ）の化合物（ここでＲは水素原子以外である）への転換、及び／又は、前記式（Ｉ）の化合物の他の式（Ｉ）の化合物への転換は、以下によって行われることを特徴とする方法；
k)請求項２３の工程iii)で得られた式（Ｉ）の化合物を、式（ＸＶ）のイソシアネートポリスチレン樹脂と反応させ、
【化８】
2006501191.tif 000031
式（ＸＶＩ）のポリスチレンメチルウレアを得る
【化９】
2006501191.tif 000032
（ここで、X、R1、及びR2は、請求項２３で定義されたものである）；
ｌ)このようにして得られた式（XVI）の化合物を、式（XVII）の化合物へ転換する
【化１０】
2006501191.tif 000033
（ここで、Rは水素原子以外である）；及び、
ｍ)アルカリ性条件下で、式（XVII）の化合物を切断して樹脂を除去し、所望の式（Ｉ）の化合物を得る、及び、必要であれば、
ｎ)該式（Ｉ）の化合物を、他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。
【請求項２５】
式（XXIII）又は(XXV)の化合物：
【化１１】
2006501191.tif 000034
（ここで、R1、R2、X、Hal、Ra及びRbは、請求項２３で定義されたものである）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の二環式ピラゾール誘導体、それらの調製方法、それらを含有する薬学的組成物、及び、治療薬、特に、制御されないタンパク質キナーゼに関連する疾患の治療における治療薬としてのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質キナーゼ（ＰＫｓ）の機能不全は、多くの疾患に特徴的である。ヒトの癌に関与する発癌遺伝子及び前発癌遺伝子はかなりの割合でＰＫｓをコードしている。また、ＰＫｓの活性亢進も多くの非悪性疾患、例えば良性の前立腺肥厚、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症に関わる血管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎糸球体腎炎、及び術後狭窄及び再狭窄のような疾患に関与する。
【０００３】
また、ＰＫｓは、炎症性の状態、並びに、ウイルス及び寄生虫の増殖に関与する。また、ＰＫｓは、病原及び神経変性疾患の発達において主要な役割を果たすこともある。
【０００４】
ＰＫｓの機能不全又は非制御に関する一般的な参考文献には、例えばカレント・オピニオン・イン・ケミカル・バイオロジー（1999, 3, 459-465）を参照されたい。
【０００５】
従って、制御されないタンパク質キナーゼ活性の調節において活性である化合物が、治療において必要である。
【発明の開示】
【０００６】
本発明者らは、本発明の新規の二環式ピラゾールが、制御されないタンパク質キナーゼ活性を調節する能力があり、それ故、制御されないタンパク質キナーゼによって引き起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患の治療における処置において有用であることを見出した。
【０００７】
当該分野において、幾つかの複素環式化合物がタンパク質キナーゼ阻害剤として知られている。例えば、2-カルボキサミド-ピラゾール及び2-ウレイド-ピラゾール、及びそれらの誘導体は、本出願人の国際特許出願WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114及びWO 02/70515にタンパク質キナーゼ阻害剤として開示されている。
【０００８】
ピラゾール部分を含み、キナーゼ阻害活性を有する縮環した二環式の化合物は、本出願人のWO 00/69846, WO 02/12242及びWO 03/028720、並びに米国特許出願60/381092 (２００２年５月１７日出願)に開示されている。
【０００９】
従って、本発明は、第一の目的として、式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩を提供する：
【化１２】
2006501191.tif 000003
【００１０】
ここにおいて、
ＸはNR', O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素、若しくは-R',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択される;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素、若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖の、C1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択される;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は、上記で定義されたものである。
【００１１】
式（Ｉ）の化合物は、本発明の目的であり、不斉炭素を有することができ、それ故、個々の光学異性体として、またそれらのラセミ混合物としての両方で存在し得る。従って、式（Ｉ）の化合物の光学異性体及び幾何異性体を含む可能な単一の異性体の全てと、それらの任意の混合物も本発明の範囲内である。
【００１２】
加えて、本発明はまた、式（Ｉ）の化合物の、代謝産物及び薬学的に許容される生物的前駆物質、或いはプロドラッグと呼ばれるものをも含む。
【００１３】
上記の全てから、本発明の化合物の縮環ピラゾール環における非置換窒素原子が、溶液中において下記の互変異性体の両方の混合物として速やかに平衡化し得ることが、当業者には明らかである。
【化１３】
2006501191.tif 000004
【００１４】
従って、本明細書において式（Ｉ）又は（Ｉａ）の互変異性体の一つだけが示される場合でも、他に指定して断らない限り、他方並びにそれらの混合物も本発明の範囲内に含まれるものとして意図される。
【００１５】
本明細書において用いられるときに、別に規定しなければ、直鎖又は分枝鎖のＣ1-Ｃ6アルキルという用語は、そのものか又はさらなる複合基部分（例えばアリール-アルキル）の何れかとして、例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、n-ペンチル、n-ヘキシル及びその他のような基が意図される。好ましくは、前記アルキルは、直鎖又は分枝鎖のC1-C4アルキル基から選択される。
【００１６】
アリールという用語は、そのものか又はさらなる複合基部分（例えばアリール-アルキル）の何れかとして、モノ-、ビ-、又はポリ-の何れかの炭素環並びに複素環の炭化水素が意図され、好ましくは、1〜4環部分を有し、縮環し又は互いに単結合で連結されたものであり、ここで少なくとも一つの炭素環又は複素環は芳香族である。
【００１７】
従って、本発明のアリール基の非限定的な例は、フェニル、インダニル（indanyl）、ビフェニル、α-又はβ-ナフチル、フルオレニル、9,10-ジヒドロアントラセニル（dihydroanthracenyl）、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリル、イミダゾリル、イミダゾピリジル、1,2-メチレンジオキシフェニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピロリル-フェニル、フリル、フェニル-フリル、ベンゾテトラヒドロフラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、ピラゾリル、クロメニル、チエニル、ベンゾチエニル、イソインドリニル、ベンゾイミダゾリル、テトラゾリル、テトラゾリルフェニル、ピロリジニルテトラゾリル、イソインドリニル-フェニル、キノリニル、イソキノリニル、2,6-ジフェニル-ピリジル、キノキサリニル、ピラジニル、フェニル-キノリニル、ベンゾフラザニル、1,2,3-トリアゾリル、1-フェニル-1,2,3-トリアゾリル及びその他である。
【００１８】
R、R1、R2、R'、R"に与えられた上記の意味に従って、上記の任意の基は、それらのフリーの位置で一以上の基、例えば下記から選択される1〜6の基によってさらに任意に置換されてよい：ハロゲン、窒素、オキソ基(=O)、カルボキシ、シアノ、アルキル、フッ化アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロシクリル、アミノ基及びそれらの誘導体、例えば、アルキルアミノ, ジアルキルアミノ, アリールアミノ, ジアリールアミノ, ウレイド, アルキルウレイド又はアリールウレイド; カルボニルアミノ基及びそれらの誘導体、例えば、ホルミルアミノ、アルキルカルボニルアミノ, アルケニルカルボニルアミノ, アリールカルボニルアミノ, アルコキシカルボニルアミノ, スルホンアミド, アルキルスルホンアミド 及びアリールスルホンアミド, ヒドロキシ基及びそれらの誘導体、例えば、アルコキシ, アリールオキシ, アルキルカルボニルオキシ, アリールカルボニルオキシ, シクロアルケニルオキシ又はアルキリデンアミノオキシ; カルボニル基及びそれらの誘導体、例えば、アルキルカルボニル, アリールカルボニル, アルコキシカルボニル, アリールオキシカルボニル, シクロアルキルオキシカルボニル, アミノカルボニル,アルキルアミノカルボニル, ジアルキルアミノカルボニル; 硫化物誘導体、例えばアルキルチオ, アリールチオ, アルキルスルフォニル,アリールスルフォニル, アルキルスルフィニル, アリールスルフィニル, アリールスルフォニルオキシ, アミノスルホニル、アルキルアミノスルフォニル又はジアルキルアミノスルフォニル。適切であれば何時でも、上記のそれぞれの置換基もまた、後述する基の一以上でさらに置換されて良い。他に規定しない限り、ハロゲン原子と言う用語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素が意図される。
【００１９】
フッ化アルキルという用語は、一以上のフッ素原子によってさらに置換された、後述する直鎖又は分枝鎖のＣ1-Ｃ6アルキル基、例えば、トリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、1,2-ジフルオロエチル、1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロプロピル-2-イル、及びその他が意図される。
【００２０】
アルケニル又はアルキニルという用語は、それぞれさらに二重結合又は三重結合を含む、上述した直鎖又は分枝鎖のＣ2-Ｃ6アルキル基の何れか一つが意図される。
【００２１】
アルケニル又はアルキニル基の非限定的な例は、例えば、ビニル, 1-プロペニル, アリル, イソプロペニル, ブテニル, ペンテニル, ヘキセニル, エチニル, プロピニル, ブチニル及びその他である。
【００２２】
アルコキシという用語は、直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルコキシ基、例えば、メトキシ,エトキシ、n-プロポキシ、イソプロポキシ、n-ブトキシ、イソブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシ、n-ペンチルオキシ、n-ヘキシルオキシ及びその他を含む。
【００２３】
シクロアルキル又はシクロアルケニルという用語は、炭素環式C3-C6基、例えばシクロプロピル, シクロブチル, シクロペンチル, シクロヘキシル及び対応する不飽和基、例えばシクロプロペニル, シクロブテニル, シクロペンテニル, シクロヘキセニル 及びその他である。
【００２４】
上記の全てから、アリール基という用語は、芳香族の炭素環及び芳香族の複素環をも包含することは当業者には明らかであり、後者は、さらに典型的には5〜7員の複素環である非芳香族複素環に縮環したか、或いは単結合を介してこれに連結した、ヘテロアリール基としても知られる。
【００２５】
5〜7員の複素環という用語は、先にアリール基として述べた芳香族複素環を包含するので、一以上の炭素原子、例えば1〜3の炭素原子が、例えば窒素、酸素、及び硫黄のような異種原子によって置換された飽和の又は部分的に不飽和の5〜7員の炭素環も意味するものである。
【００２６】
任意にベンゾ縮環したか又はさらに置換された5〜7員の複素環の非限定的な例は、1,3-ジオキソラン, ピラン, ピロリジン, ピロリン, イミダゾリジン, ピラゾリジン, ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、モルフォリン、テトラヒドロフラン、アザビシクロノナン及びその他である。
【００２７】
明らかに、複合名から同定可能な何れの基も、有機化学において従来採用されている命名法のシステムに従って、それが由来する複数の部分から解釈されなければならない。例えば、ハロ-ヘテロシクリル-アルキルは、ハロゲン原子で置換された複素環基によって置換されたアルキル基を意味し、ここで、アルキル、ヘテロシクリル及びハロゲンは、上記で定義されたものである。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容される塩とは、無機酸又は有機酸、例えば、硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸, リン酸, 酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸, グリコール酸, 乳酸, シュウ酸, マロン酸, リンゴ酸, マレイン酸, 酒石酸, クエン酸, 安息香酸, 桂皮酸, マンデル酸, メタンスルホン酸、イセチオン酸、及びサリチル酸との酸付加塩、並びに、無機塩基又は有機塩基による塩、例えばアルカリ金属又はアルカリ土類金属、特にはナトリウム、カリウム、カルシウム又はマグネシウムの水酸化物、炭酸塩又は重炭酸塩、非環式又は環式のアミン、好ましくは、メチルアミン、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン又はピペリジンとの塩である。
【００２９】
本発明の化合物の好ましいクラスは、式（Ｉ）の誘導体で表され、ここで、ＸはＳであり；Ｒは-COR',-CONHR'であり; R1は-COR',-CONHR',-CONR'R",-SO2NHR'又は-SO2NR'R"であり、ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、上記で定義されたものであり；R2は水素原子である。
【００３０】
上記クラス内でより好ましくは、Ｒが-COR'であり、R1が-CONHR'又は-CONR'R"であり、R'及びR"のそれぞれが、同一であるか又は異なって、上記で定義されたものである、式（Ｉ）の誘導体である。
【００３１】
本発明の好ましい化合物の他のクラスは、式（Ｉ）の誘導体で表され、ここで、XはOであり; Rは-COR',-CONHR'であり; R1は-COR',-CONHR',-CONR'R",-SO2NHR'又は-SO2NR'R"であり、ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、上記で定義されたものであり; R2は水素原子である。
【００３２】
上記のクラス内でより好ましくは、Rが-COR'であり、R1が-CONHR'又は-CONR'R"であり、R'及びR"のそれぞれが、同一であるか又は異なって、上記で定義されたものである、式（Ｉ）の誘導体である。
【００３３】
任意に薬学的に許容される塩の形体である、本発明の任意の具体的な式（Ｉ）の化合物の参照には、例えば、後述の実施例の項及び特許請求の範囲を参照されたい。
【００３４】
本発明のさらなる目的に従えば、式（Ｉ）の化合物、及び薬学的に許容されるそれらの塩の、薬剤としての使用が提供される。
【００３５】
本発明はまた、変質したか或いは制御されないと言及されるタンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患に罹患している患者を治療するための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩の使用を提供する。
【００３６】
また、本発明は、変質したか或いは制御されないと称されるタンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患に罹患しているヒトを含む哺乳類を治療する方法であって、式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩の治療的に有効な量を、それらを必要とする前記哺乳類に投与することを含む方法を提供する：
【化１４】
2006501191.tif 000005
【００３７】
ここにおいて、
Xは、NR',O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくはR',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択され;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択され;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は上記で定義されたものである。
【００３８】
上記の、哺乳類を治療するための方法の好ましい態様において、変質したタンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患は、癌、細胞増殖性疾患、アルツハイマー病、ウイルス感染、自己免疫性疾患及び神経変性疾患から成る群から選択される。
【００３９】
治療され得る癌の好ましい具体的な型は、癌腫、扁平上皮癌、骨髄又はリンパ系統の造血性腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢又は末梢神経系の腫瘍、黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫、甲状腺瀘胞状癌及びカポジ肉腫を含む。
【００４０】
上記の哺乳類の治療方法の、他の好ましい態様において、前記細胞増殖性疾患は、良性の前立腺肥厚、家族性腺腫症ポリープ症（adenomatosis polyposis）、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、肺線維症、関節炎糸球体腎炎並びに術後狭窄及び再狭窄に関わる血管平滑細胞増殖から成る群から選択される。
【００４１】
またさらに、本発明の、哺乳類対象を治療する方法は、腫瘍脈管形成及び転移の阻害を提供する。
【００４２】
本発明の化合物は、オーロラ（Aurora）キナーゼ阻害剤として有用であり、また、他のタンパク質キナーゼ、例えば、サイクリン依存性キナーゼ(cdk),異なるイソ型のタンパク質キナーゼC , Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, オーロラ1,オーロラ2, Bub-1, PLK, Chkl, Chk2, HER2, rafl, MEK1, MAPK, EGF-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, VEGF-R,PI3K, ウィール（weel）キナーゼ, Src, Abl, Akt, ILK, MK-2,IKK-2, Cdc7, Nek, の阻害剤としても有用であり、従って、他のタンパク質キナーゼに関係する疾患の治療に有効である。
【００４３】
本発明のさらなる目的に従って、これと共に、本発明の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩の調製方法が提供される。
【００４４】
よって、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩は、以下を含む方法によって得ることができる：
ａ）式（II）の化合物を、
【化１５】
2006501191.tif 000006
【００４５】
（ここで、R1、R2及びXは上記で定義されたものである）、
亜硝酸ナトリウムと反応させ、続いて、このようにして得られたジアゾニウム塩を、適切な還元剤と反応させ、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒは水素原子であり、R1、R2及びXは上記で定義されたものである）を得ること；及び、必要であれば、
ｂ）このようにして得られた式（Ｉ）の化合物を、他の式（Ｉ）の化合物（ここで、Rは水素原子以外である）に転換すること；及び／又は、必要であれば、
ｃ）式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換すること。
【００４６】
上記方法は、当該分野で周知の方法によって行うことができる。
【００４７】
上述したところから、上記方法によって調製された式（Ｉ）の化合物が、異性体の混合物として得られた場合、それらを式（Ｉ）の単一異性体への分離が、従来技術に従って実行されることは当該分野の技術者には明らかであり、それらも本発明の範囲内に含まれる。
【００４８】
前記方法の工程ａ）に従って、式（II）の化合物と亜硝酸ナトリウムの間の反応は、適切な溶媒、例えば水、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジオキサン、アセトン、メタノール又はエタノール中で、酸性条件下、例えば、塩酸、シュウ酸、硫酸、酢酸、フルオロホウ酸、又はトリフルオロ酢酸の存在下において行うことができる。その反応は、約-30℃〜約5℃の温度範囲で、約10分〜約6時間の変動時間で実行される。このように得られたジアゾニウム塩は、単離される必要がなく、適切な還元剤、例えば水素化アルミニウムリチウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化アルミニウムナトリウム、塩化亜鉛又は塩化スズのような還元剤で処理されて、所望の式（Ｉ）の化合物に転換される。
【００４９】
或いは、例えばラネーニッケル、又はリンドラー（Lindlar）触媒を含む従来の触媒の存在下で、接触水素化によって還元させてもよい。工程（ａ）における式（Ｉ）の化合物を産生する反応は、適切な溶媒中、例えば水、塩酸、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、メタノール又はエタノールのような溶媒中で、約-30℃〜約70℃の温度範囲で、約10分〜約48時間の変動時間で行われる。
【００５０】
前記方法の工程（ｂ）に従って得られ、またＲが水素である式（Ｉ）の化合物は、アルキル化、アシル化、スルホニル化剤等の手段による当該分野で周知の従来方法に従ってアミノ基の官能化を行うことによって、Ｒが水素原子以外である式（Ｉ）の種々の誘導体に転換されることができる。
【００５１】
例として、式（Ｉ）の化合物（ここでＲは水素以外であり、-R',-COR',-COOR',-SO2R',-SO2NHR'及び-SO2NR'R"から選択され、R'及びR"は上記で報告された意味である）は、Ｒが水素である式（Ｉ）の化合物を、対応する式（III）の化合物
Ｒ-Ｙ    （III）
（ここで、Ｒは、水素以外の上記で定義されたものであり、Ｙは適切な脱離基、好ましくは塩素又は臭素である）
と反応させることによって調製されることができる。
【００５２】
上記反応は、アミノ基をアシル化、スルホニル化、又はアルキル化する、当該分野で周知の従来方法に従って、例えば、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、又はピリジンのような三級塩基の存在下において、適切な溶媒、例えばトルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドのような溶媒中で、約-10℃から還流の温度範囲で、約30分〜約96時間の変動時間で実行されることができる。
【００５３】
上述のことから、Ｒが-SO2NR'R"である式（Ｉ）の化合物の調製は、上記で開示したように、或いは、Ｒとして-SO2NHR'を有する式（Ｉ）の化合物を、二置換スルホンアミドを調製するために適した反応成分と適切に反応させることによって、実際に行われることが可能であることも、当該分野の技術者には明らかである。
【００５４】
同様に、Ｒが-CONHR'基であり、R'が水素以外である式（Ｉ）の化合物は、Ｒとして水素を有する式（Ｉ）の化合物を、式（ＩＶ）の化合物
Ｒ’ＮＣＯ      （ＩＶ）
（ここで、Ｒ’は水素以外の上記で定義されたものである）
と反応させることによって調製されることができる。
【００５５】
この反応は、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン又はピリジンのような三級塩基の存在下において、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はN,N-ジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中で、約-10℃から還流の温度範囲で、約30分〜約72時間の変動時間で、実行されることができる。
【００５６】
さらに、Ｒが-CONHR'基である式（Ｉ）の化合物を、任意にさらに式（Ｖ）の化合物
Ｒ''-Ｙ      （Ｖ）
（ここで、Ｒ''は水素以外の上記で定義されたものであり、Ｙは適切な脱離基、好ましくは塩素又は臭素である）
と反応させて、Ｒが-CONR'R"であり、R'及びR"の両者が水素原子以外のものである、対応する式（Ｉ）の化合物を得ることもできる。
【００５７】
この反応は、当該分野では広く知られており、二置換されたウレイド誘導体（-CONR'R"）の、対応する一置換前駆対（-CONHR'）からの調製を可能にする。
【００５８】
或いは、非常によく知られた方法に従ってさらに操作（working）することによって、Rが-CONR'R"基であり、R'及びR"が水素以外の上記で報告された意味である式（Ｉ）の化合物は、Rとして水素を有する式（Ｉ）の化合物を、4-ニトロフェニルクロロホルメートと反応させ、続いて、式（ＶＩ）の化合物
Ｒ’Ｒ''ＮＨ      （ＶＩ）
と反応させることによっても調製することができる。
【００５９】
さらなる例として、水素と等しいＲを有する式（Ｉ）の化合物を、還元的な操作条件下で、式（VII）の化合物
Ｒ’-ＣＨＯ        （VII）
（ここで、Ｒ’は水素以外の上記で定義されたものである）と反応させ、対応する式（Ｉ）の化合物（ここでＲはＲ’ＣＨ2-基である）を得ることもできる。
【００６０】
この反応は、例えば、N,N-ジメチルホルムアミド、N,N-ジメチルアセトアミド、クロロホルム、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン又はアセトニトリルのような適切な溶媒中で、任意に共溶媒として酢酸、エタノール又はメタノールの存在下で、約-10℃から還流の温度範囲で、約30分〜約4日間の変動時間で実行される。
【００６１】
反応媒体中の従来の還元剤は、例えば、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム等である。
【００６２】
上述の記載から、任意の上記式（Ｉ）の化合物は、前記方法の工程（ｃ）に従って、従来の合成有機方法を行って適切に反応させることによって、Ｒ基以外の官能基を式（Ｉ）の他の誘導体に都合よく転換されることができることは、当該分野の技術者には明らかである。
【００６３】
従って、一例として、式（Ｉ）の化合物（ここでＲ1は、-COOMeである）は、従来方法に従って、例えば水酸化ナトリウム又はカリウムのような適切な塩基で処理されることによって、対応する式（Ｉ）のカルボキシ化合物（ここでＲ1は-COOHである）に加水分解されることができる。或いは、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1は-COOMeである）は、エステル交換反応によって、対応する式（Ｉ）のカルボキシ化合物（ここで、Ｒ1は-COOR'であり、R'は水素以外のもの又はメチルである）に転換されることができる。同様に、上記式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1はCOOH基である）は、カルボン酸基を適切に反応させることによって、他の誘導体（Ｉ）に容易に転換されることができる。
【００６４】
特に、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1は-CONR'R"基であり、Ｒは水素以外のものである）は、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1はカルボキシである）を、適切な縮環剤と反応させ、続いて、式（VIII）の化合物
Ｒ’Ｒ''ＮＨ        （VIII）
（ここで、Ｒ’及びＲ''は、上記で定義されたものである）と、周知のアミド調製方法に従って反応させることによって、調製することができる。
【００６５】
同様に、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1は-COR'であり、Ｒは水素以外のものである）は、対応する式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1はWeinrebアミドCONCH3OCH3基である）を式（IX）の化合物
Ｒ’Ｌｉ        （ＩＸ）
（ここで、Ｒ’は水素以外のものである）と、反応させることによって調製することができる。
【００６６】
この反応は、ケトンを調製するために用いられる従来の方法に従って、例えば、テトラヒドロフラン、トルエン、ジエチルエーテル又はヘキサンのような適切な溶媒の存在下において、約-78℃〜約10℃の温度範囲で、また、約10分〜約72時間の変動時間で、必要であれば標準的な官能基保護方法を適用して行われる。
【００６７】
或いは、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1は-COOR'基であり、R 及びR'は水素以外のものである）は、対応する式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｒ1は-COOH基である）を、式（Ｘ）の化合物
Ｒ’ＯＨ      （Ｘ）
（ここで、Ｒ’は水素以外のものである）と、エステルを調製するための従来方法に従って反応させることによって調製することができる。
【００６８】
さらなる例として、Ｒ1が- SO2NR'R"と等しい式（Ｉ）の化合物の調製は、Ｒ1として-SO2NHR'を有する式（Ｉ）の化合物を、適切な成分、例えば、アルキル化成分と、二置換スルホンアミドを調製するためのよく知られた方法論に従って適切に反応させることによって実際に行われることができる。
【００６９】
上記から、上記式（Ｉ）の化合物の何れも、上記Ｒ及びＲ1基以外の官能基を適切に反応させることによって、他の式（Ｉ）の誘導体に都合よく転換されうることは、当該分野の技術者には明らかである。
【００７０】
例として、R2が-CH2OH又は-OHと等しく、Ｒが水素以外の式（Ｉ）の化合物は、式（ＸＩ）の化合物
Ｒ’-Ｙ        （ＸＩ）
（ここで、Ｒ’は水素以外の上記で定義されたものであり、Ｙは適切な脱離基であり、好ましくは塩素又は臭素である）と反応させて、R2として-CH2OR'又はＯＲ’を有する対応する化合物を得ることができる。この後者の反応は、例えば水酸化ナトリウム、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン又はピリジンのような塩基の存在下において、例えばトルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で行われることができる。
【００７１】
さらなる例として、式（Ｉ）の化合物（ここでＸはＳＯであり、Ｒは水素以外のものである）は、対応する式（Ｉ）の化合物（ここでＸはＳである）から開始して、この後者を酸化剤と、従来方法に従って反応させることによって、都合よく調製されうる。この反応は、例えば、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラートのような酸化剤の存在下において、ＭＣＰＢＡ、過酸化水素の存在下において、ＴＦＡ等の存在下において、例えば、ジクロロメタン、水、メタノール又はエタノールのような適切な溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で、約30分〜約48時間の変動時間で、実行されることができる。
【００７２】
酸化的条件は、ＸとしてＳＯ2を有する式（Ｉ）の化合物を、対応するＸとしてＳを有する誘導体（Ｉ）から開始して調製する場合に適用される。この場合、該反応は、例えばＭＣＰＢＡ、ジメチルジオキシラン、オキソン（oxone）、Ｍｇモノペルオキシフタレートのような酸化剤の存在下において、例えばジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、アセトニトリル、水、メタノール又はエタノールのような適切な溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で、約30分〜約４８時間の変動時間で行われて良い。
【００７３】
さらなる例として、ＸがＮＲ’であり、Ｒ’及びＲがともに水素以外のものである式（Ｉ）の化合物は、対応する式（Ｉ）の化合物（ここで、ＸはＮＨである）から開始して、式（ＸＩ）の化合物
Ｒ’-Ｙ      （ＸＩ）
（ここで、Ｒ’は水素以外の上記で定義されたものであり、Ｙは、先に報告したような適切な脱離基である）との反応を介して、都合よく調製され得る。
【００７４】
この後者の反応は、例えば水素化ナトリウム、tert-酪酸カリウム、炭酸カリウム、水酸化カリウム等のような塩基の存在下において、例えば、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドのような適切な溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で、行われることができる。
【００７５】
最後に、工程（ｃ）において記載されたような、式（Ｉ）の化合物の塩化、また或いは、式（Ｉ）の遊離化合物への転換は、共に、周知の方法に従って行われることができ、これは本発明の範囲内に含まれるものである。
【００７６】
当該分野の技術者には実際に認識されるように、本発明の目的の式（Ｉ）の化合物を調製するときに、開始物質またはそれらの中間体の両方の任意の官能基、及び望ましくない副産物を生じ得るものは、従来技術によって適切に保護される必要がある。同様に、これら後者の、自由に脱保護された化合物への転換は、周知の方法に従って行われて良い。
【００７７】
この点において、例えば上記官能化反応によってアミノ基で生じる任意の副産物が、ピラゾール窒素原子で生じることは全く価値がない。それ故、所望の式（Ｉ）の化合物を単離するためのさらなる工程が、当該分野で周知の方法に従って必要である。
【００７８】
例として、アミノ誘導体（Ｉ）（ここで、Ｒは水素である）をアシル化剤と反応させて得られた化合物は、アシル化がアミノ基及びピラゾール窒素原子の両方で生じる化合物を導き得る。これらの化合物は、ピラゾール窒素原子が脱アシル化された対応する式（Ｉ）の誘導体に、その位置でのアシル基の選択的加水分解によって、容易に転換されることができる。
【００７９】
或いは、前記方法の工程（ａ）に従って得られた式（Ｉ）の化合物は、まず、従来方法に従って、ピラゾールの窒素原子を保護され、続いて、工程（ｂ）及び／又は（ｃ）により、式（Ｉ）の所望の誘導体に転換し、最後に脱保護されることができる。
【００８０】
よって、本発明のさらなる目的は、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩を調製する方法として表され、該方法は以下を具備する：
ｄ）工程（ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物を、式（XII）のクロロ炭酸アルキル誘導体
Ｒ3-Ｏ-ＣＯＣｌ      （XII）
（ここで、Ｒ3は低級アルキル基である）と反応させ、ピラゾール窒素原子が保護された式（XIII）の化合物を得る；
【化１６】
2006501191.tif 000007
【００８１】
ｅ）このようにして得られた式（XIII）の化合物を、Ｒが水素以外である式（XIII）の化合物に転換する
【化１７】
2006501191.tif 000008
【００８２】
ｆ）アルカリ性条件下で、式（XIII）の化合物を切断して、-ＣＯＯＲ3保護基を除去し、所望の式（Ｉ）の化合物を得る；及び／又は、必要であれば、
ｇ）式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。
【００８３】
該方法の工程（ｄ）に従って、式（XII）のクロロ炭酸アルキルとの反応は、例えば、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、トルエン、又はそれらの混合物のような適切な溶媒中で、例えばトリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンのような適切なプロトンスカベンジャーの存在下で、約-5℃〜約35℃の温度範囲で、約３０分〜約72時間の変動時間で、行われることができる。
【００８４】
好ましくは、式（XII）の化合物において、Ｒ3は、例えば直鎖又は分枝鎖のＣ1〜Ｃ6アルキル基のような低級アルキル基である。
【００８５】
式（XIII）の化合物の両方に関して、その保護基がピラゾール窒素原子の何れか一つに結合するよう意図されることは明らかであり、基本的に以下のようである：
【化１８】
2006501191.tif 000009
【００８６】
前記方法の工程（ｆ）に従って、式（XIII）の化合物は、従来方法に従って、例えば水酸化ナトリウム水溶液又は水酸化カリウム水溶液によるアルカリ性条件下で、適切な共溶媒、例えばメタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、又は1,4-ジオキサンのような共溶媒の存在下で、処理されることによって、或いは、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンのような三級アミンで、溶媒として低級アルコール、典型的にはメタノール又はエタノールの存在下において処理されることによって、ピラゾール窒素原子で脱保護される。
【００８７】
脱保護反応は、約18℃〜還流温度の温度範囲で、約30分〜約72時間の変動時間で生じ得る。
【００８８】
例えば、前記方法の工程（ｇ）において報告された、式（Ｉ）の化合物の他の式（Ｉ）の化合物への任意のさらなる転換は、前記方法の工程（ｃ）において報告された、上述した操作条件の類推に従うことは明らかである。
【００８９】
同様に、式（XIII）の化合物（ここでＲは水素である）の他の式（XIII）の化合物（ここでＲは水素以外である）への転換は、工程（ｅ）のとおりに、上記方法の工程（ｂ）で報告された上述の操作条件に従う。
【００９０】
或いは、本発明のさらなる目的に従って、本発明の式（Ｉ）の化合物（ここでＲは水素原子以外であり、例えば、-COR'又は-COOR'基である）、及び薬学的に許容されるそれらの塩は、以下を含む方法によって調製される：
ｈ）上述の工程（ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物を、過剰量の下式の適切なクロロ炭酸又は塩化アシル
Ｒ’-Ｏ-ＣＯ-Ｃｌ    （ＸＩＶａ）      Ｒ’-ＣＯ-Ｃｌ    （ＸＩＶｂ）
（ここで、Ｒ’は上記で定義されたものである）と反応させ、それぞれ式（ＸＶａ）又は（ＸＶｂ）の化合物を得る
【化１９】
2006501191.tif 000010
【００９１】
ｉ）アルカリ性条件下で、式（ＸＶａ）又は（ＸＶｂ）の化合物を切断して、ピラゾール窒素原子における保護基を除去し、よって、Ｒとして-ＣＯＲ’又は-ＣＯＯＲ’基を有する所望の式（Ｉ）の化合物を得る；及び、必要であれば、
ｊ）このように得られた式（Ｉ）の化合物を、他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。
【００９２】
該方法の工程（ｈ）に従って、式（Ｉ）の化合物と式（ＸＩＶａ）又は（ＸＩＶｂ）の化合物との反応は、例えば、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、トルエン、又はそれらの混合物のような適切な溶媒中で、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミンのような適切なプロトンスカベンジャーの存在下において、約-5℃〜約35℃の温度範囲で、約30分〜約72時間の変動時間で、行われることができる。
【００９３】
工程（ｉ）において、その後のピラゾール窒素原子における基の選択的加水分解は、工程（ｆ）で先述したようなアルカリ性条件下で行われる。
【００９４】
工程（ｊ）は、式（Ｉ）の化合物の、他の式（Ｉ）の化合物への転換に関するいずれの変異形も包括し、上述した工程（ｃ）での操作条件に従う。
【００９５】
さらに代替方法に従って、工程（ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物は、ピラゾール窒素原子において保護される代わりに、適切な樹脂上に担持されることもでき、続いて所望の化合物を産するために反応される。
【００９６】
従って、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩を調整するための、以下を含む方法も、本発明のさらなる目的である：
ｋ）工程（ａ）で得られた式（Ｉ）の化合物を、式（ＸＶ）のイソシアネートポリスチレン樹脂と反応させ、
【化２０】
2006501191.tif 000011
【００９７】
式（ＸＶＩ）のポリスチレンメチルウレアを得る
【化２１】
2006501191.tif 000012
【００９８】
（ここで、Ｘ、Ｒ1及びＲ2は、上記で定義されたものである）；
ｌ）このようにして得られた式（ＸＶＩ）の化合物を、式（ＸＶＩＩ）の化合物に転換する
【化２２】
2006501191.tif 000013
【００９９】
（ここで、Ｒは水素以外のものである）；及び
ｍ）式（ＸＶＩＩ）の化合物を、アルカリ性条件下で切断し、樹脂を除去して所望の式（Ｉ）の化合物を得る；及び、必要であれば、
ｎ）式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。
【０１００】
工程（ｋ）に従って、式（ＸＶ）のイソシアネートメチルポリスチレン樹脂と、式（Ｉ）の化合物との間の反応は、例えば、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトニトリル、トルエン又はそれらの混合物のような適切な溶媒中で、約5℃〜約35℃の温度範囲で、約30分〜約72時間の変動時間で、行われることができる。
【０１０１】
工程（ｌ）に従った、式（ＸＶＩ）の樹脂に担持された化合物の、式（ＸＶＩＩ）の対応する樹脂に担持された誘導体（ここで、Ｒは水素以外である）への転換は、上述した工程（ｂ）での指示のとおりに、穏やかな条件下、例えば、約5℃〜約60℃の温度範囲で、約2時間〜約7時間の変動時間で操作されることによって行われることができる。
【０１０２】
工程（ｍ）に従う、その後の樹脂の切断は、アルカリ条件下で、従来技術に従って、例えば水酸化ナトリウム水溶液又は水酸化カリウム水溶液の存在下で、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、1,4-ジオキサン又はアセトニトリルのような適切な共溶媒の存在下で行われることができる。
【０１０３】
工程（ｎ）による、式（Ｉ）の化合物の他の式（Ｉ）の化合物への転換は、先に述べた工程（ｃ）の条件に従う。
【０１０４】
本発明の方法に従った、式(II)〜(XII)、(XIVa)、(XIVb)及び（ＸＶ）の全ての化合物は既知であり、それ自体が商業的に入手できなくても、周知の方法によって得ることができる。
【０１０５】
特に、鍵となる式（ＩＩ）の中間体は、文献に記載された従来方法によって、式（ＸＶＩＩＩ）の化合物を還元して調製されることができる。
【化２３】
2006501191.tif 000014
【０１０６】
例として、この反応は、適切な還元剤、例えば鉄粉、スズ粉、塩化スズ、塩化チタニウムのような還元剤の存在下において、又は、ラネーニッケル又はリンドラー触媒の存在下での接触水素化を介して、適切な溶媒、例えばトルエン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、メタノール、エタノール、水、酢酸、又は塩酸のような溶剤中で、約-5℃〜90℃の温度範囲で、約10分〜約4日間の変動時間で、行われる。
【０１０７】
式（XVIII）の化合物は、エイ・キャスミー A.（El Kassmi A. et al. in Synth. Comm. 1994,24(1), 95-101）によって報告されたものと類似して操作して、式（ＸＩＸ）の化合物から開始して調製することができる。
【化２４】
2006501191.tif 000015
【０１０８】
式（ＸＩＸ）の化合物（ここで、Ｒ1は-ＣＯＯＥｔ基であり、ＸはＳであり、Ｒ2は水素である）は、デル’エルバ  Ｃ．ら（Dell'Erba C. etal. in Tetr. 1965,21, 1061-1066）によって開示された方法に従って調製することができる。
【０１０９】
類推して、この同様の方法は、式（ＸＸ）の化合物から開始することによって、対応する式（ＸＩＸ）の化合物（ここで、Ｒ1は-R',-COOR',-SO2R',-SO2NHR'又はSO2NR'R"基であり、R', R", R2 及びX は、上記で定義されたものである）を得ることを可能にする。
【化２５】
2006501191.tif 000016
【０１１０】
式（ＸＩＸ）の化合物は、ここでＲ1は-SO2NHR'であり、R', R2 及びX は上記で定義されたものであるが、対応する式（ＸＸ）の化合物（ここでＲ1は-ＳＯ2Ｃｌである）から、それを式（ＶＩ）の化合物
Ｒ’Ｒ''ＮＨ      （ＶＩ）
（ここで、Ｒ’及びＲ''は、上記で定義されたものであるが、両者は同時に水素であることはない）と反応させることによって、都合よく得ることができる。この後者の反応は、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン、又はピリジンのような三級塩基の存在下で、適切な溶媒、例えばトルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドのような溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で、約30分〜約96時間の変動時間で、行われることができる。
【０１１１】
上記から、Ｒ1が-ＳＯ2ＮＲ’Ｒ''と等しい式（ＸＸ）の化合物の調製は、上述したように、又或いは、Ｒ1として-ＳＯ2ＮＨＲ’を有する式（ＸＸ）の化合物を、二置換スルホンアミドの調製のための適切な成分（例えば、アルキル化成分）と適切に反応させることによって、実際に行われることができることは、当該分野の技術者には明らかである。
【０１１２】
式（ＸＸ）の化合物（ここで、Ｒ2及びＲ1の両者は水素以外のものである）は、式（ＸＸＩ）の化合物
【化２６】
2006501191.tif 000017
【０１１３】
から開始し、適切な試薬による臭素化を介して都合よく得ることができる。例として、この反応は、臭素、Ｎ-ブロモスクシンイミドなどのような臭素化薬剤の存在下で、トルエン、ジクロロメタン、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、又はＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中で、約-10℃〜還流の温度範囲で、約30分〜96時間の変動時間で、行われることができる。
【０１１４】
最後に、本発明のさらに好ましい態様に従って、式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩は、以下を含む方法によって調製されることができる：
i)適切な反応によって、式（XXII）の化合物を、対応するシアノ誘導体に転換する
【化２７】
2006501191.tif 000018
【０１１５】
（ここで、R1、R2及びXは上記で定義されたものであり、Halはハロゲン原子である）；任意に、上記の式（XXII）においてR1もＣＨＯ残基である場合、所望の異性体を分離する；
ii)得られた式（XXIII）の化合物を、
【化２８】
2006501191.tif 000019
【０１１６】
（ここにおいて、R1、R2、X及びHalは、上記で定義されたものである）；Ｐｄ触媒、リガンド及び塩基の存在下における不活性雰囲気下で、式（XXIV）：RaRbC=N-NH2（ここで、Ra及びRbは、直鎖又は分枝鎖のC1-C6アルキル、アリール、アリール-C1-C6アルキル基であり、又は、それが結合している炭素原子と共に、任意に融合した複素環又はC5-C7シクロアルキル基を形成する）のヒドラゾン誘導体と反応させる；
iii)結果として生じる式（XXV）の化合物を、
【化２９】
2006501191.tif 000020
【０１１７】
（ここにおいて、R1、R2、X、Ra及びRbは上記で定義されたものである）；適切な溶媒中で酸により処理し、式（Ｉ）の化合物（ここで、Rは水素原子であり、R1、R2及びXは上記定義のものである）を得る、及び、上記工程b)及びc): d)、e)、f)及びg); h)、i)、j)又はk)、l)、m)、n)で記載したように、必要であれば、このようにして得られた式（Ｉ）の化合物を、他の式（Ｉ）の化合物（ここで、Rは水素原子以外である）に転換する；及び／又は、必要であれば、式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩に転換する。例として、得られた加水分解性化合物（Ｒ1基はＣＯＯＨである）を、エステルを調製するための従来の方法に従って操作して、式（Ｘ）の化合物と上記のように反応させ、他の式（Ｉ）の化合物（Ｒ1はＣＯＯＲ’）を得ることができる。
【０１１８】
前記方法の工程ｉ）に従って、ＣＨＯ基のＣＮ残基への転換は、文献に記載された従来方法に従って行われる。例として、この反応は、ヒドロキシルアミン又はそれらの誘導体の存在下で、ピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ-ジイソプロピルエチルアミン、酢酸ナトリウムなどの塩基の存在下において；適切な溶媒、例えば水、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＭｅＣＮ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジオキサン、メタノール又はエタノールのような溶媒中で、行われることができる。この反応は、約0℃〜約40℃の温度範囲で、約10分〜約6時間の変動時間で行われる。このようにして得られたオキシムは、単離される必要がなく、例えばトリフルオロ酢酸無水物のような適切な脱水剤で処理されて、所望の式（XXIII）の化合物に転換される。前記方法の工程ｉｉ）については、ヒドラゾン誘導体との反応は、窒素又はアルゴン雰囲気のような不活性雰囲気下で、Pd(AcO)2 PdCl2, Pd2(dba)3のようなＰｄ触媒、Cs2CO3 , K2CO3 又はK3PO4のような塩基、及び2,2'-ビス(ジフェニルホスフィノ)-1,1'-ビナフチル (BINAP), 1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(DPPF), 10,11-ジヒドロ-4,5-ビス(ジフェニルホスフィノ)ジベンゾ[b,f]オキセピン（oxepine）(ホモキサントフォス（HomoXantphos）), ビス(2-(ジフェニルホスフィノ)フェニル)エーテル(DPEフォス), 9,9-ジメチル-4,6-ビス(ジフェニルホスフィン) キサンテン(キサントフォス（Xantphos）), (o-ビフェニル)P(tert-Bu)2, (o-ビフェニル)PCy2その他のようなジホスフィンリガンド、又は、2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2'-ジメチルアミノビフェニルその他のような、官能化されたジアルキルホスフィノビフェニルリガンド（J.又はg. Chem., 65 (17), pp. 5338-5341, 2000を参照されたい)の存在下で行われる。適切な溶媒は、例えば、トルエン、MeCN, DMF,又はジオキサンであり、反応は、約70℃〜約130℃の温度範囲で、約6時間〜約72時間の変動時間で行われる。式（ＸＸＩＶ）のヒドラゾン誘導体については、Ra 
及びRbが、それらが結合している炭素原子と共に任意に縮環した複素環を形成する場合、これは例えばキサンテン又はチオキサンテンなどであり；それらがＣ5〜Ｃ7シクロアルキル基を形成する場合、これは例えばシクロヘキサン環などである。この工程で用いられ得る他のヒドラゾン誘導体は、文献に開示されており、例えば、J. Am. Chem. Soc. , 120 (26), pp. 6621-6622,1998を参照されたい。式（Ｉ）の化合物を産する工程iii）の反応は、p-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、硫酸、塩酸、トリフルオロ酢酸、過塩素酸その他のような酸で、適切な溶媒、例えば、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、tert-ブタノールのようなアルコール等又はそれらの混合物のような溶媒中で、任意に、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジメトキシエタン、DMA、NMPのような他の溶媒と混合した溶媒中で、行われることができる。その反応は、約20℃〜約120℃の温度範囲で、約10分〜約12時間の変動時間で行われる。この工程iii）において、酸性の処理によってＲ1基を異なるものに転換することができ、例えば加水分解によってＣＯＯＲ’をＣＯＯＨに、また、エステル交換反応によってＣＯＯＲ’をＣＯＯＲ’に（ここで、得られたＲ’は、開始物質のものとは異なり、使用されたアルコール溶媒に依存する）転換することができる。
【０１１９】
本発明の方法に従った式(XXII)及び(XXIV)の全ての化合物は既知であるが、商業的に入手できない場合は周知の方法で得ることができる。
【０１２０】
特に、鍵となる式(XXII)の中間体は、式(XXVI)の化合物
【化３０】
2006501191.tif 000021
【０１２１】
（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ及びHalは、上記で定義されたものである）から開始されて、文献に開示されている従来方法に従って調製可能である。例えば、この反応は、リチウム誘導体の存在下で行われ、続いてジメチルホルムアミド中で、次いで酸によって、ケミカル＆ファーマシューティカル（Chemical & Pharmaceutical Bulletin (1997),45 (5), 799-806）又はJ. Org. Chem. , 67 (12), 4177-4185; 2002. によって報告されているものと同様に処理される。
【０１２２】
さらなる例として、この反応は、J. Org. Chem., 65 (15), 4618-4185; 2000に開示されているのと同様に、アルキルマグネシウム化合物で穏やかな条件下において行われてもよい。
【０１２３】
式（XXVI）の開始化合物は既知の化合物であるか、又は、上記で定義された式（XXI)の化合物をハロゲン化し、続いてＲ1がＣＯ2Ｈの場合にエステル化することによって、容易に調製される。
【０１２４】
式(XXIII)及び(XXV)の中間体化合物は、新規の化合物であり、それ故、本発明のさらなる目的である。
【０１２５】
上記から、本発明の式（Ｉ）の化合物は、好ましくはコンビナトリアルの様式（combinatorial fashion）で上記記載の反応を行うことによって調製可能であることは、当該分野の技術者には明らかである。
【０１２６】
例として、例えばポリスチレン樹脂及びさらに好ましくはメチルイソシアネートポリスチレン樹脂のような樹脂粒子上に担持され、また、上記のように調製された、式（ＸＶＩ）及び（ＸＶＩＩ）の化合物は、前述したような種々の方法で反応され、コンビナトリアル・ケミストリーの方法に従って、例えば数千の異なる式（Ｉ）の化合物から成る、種々の式（Ｉ）の化合物を誘導する。
【０１２７】
それ故、複数の式（Ｉ）の化合物及び薬学的に許容されるそれらの塩を含むコンビナトリアル・ケミストリーのライブラリは、本発明のさらなる目的である
【化３１】
2006501191.tif 000022
【０１２８】
ここにおいて、
ＸはNR', O, S, SO又はSO2から選択される基であり;
R及びR1のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくはR',-COR',-COOR',-CONHR',-CONR'R",-SO2R',-SO2NHR'又は-SO2NR'R"から選択される任意に置換された基から独立的に選択される;
ここで、R'及びR"のそれぞれは、同一であるか又は異なって、水素若しくは任意にさらに置換された直鎖又は分枝鎖の、C1-C6アルキル、C2-C6アルケニル、C2-C6アルキニル、アリール、ヘテロシクリル又はアリール-C1-C6アルキル基から独立的に選択される;
R2は、-R',-CH2OR'及びOR'から選択される任意に置換された基であり、ここでR'は、上記で定義されたものである。
【０１２９】
＜薬理学＞
式（Ｉ）の化合物は、タンパク質キナーゼ阻害剤としての活性を有し、それ故、例えば制御されない腫瘍細胞の増殖を制限するのに有用である。
【０１３０】
治療においては、上述したような種々の腫瘍の治療の他に、他の細胞増殖性疾患、例えば、乾癬、アテローム性動脈硬化症 及び術後狭窄及び最狭窄に関わる血管平滑細胞増殖の治療において、並びに、アルツハイマー病の治療において、有用である。
【０１３１】
推定上のcdk/サイクリン阻害剤の阻害活性、及び選択された化合物の効力は、ＳＰＡ技術（アマシャム・ファルマシア・バイオテック）の使用に基づいたアッセイ方法によって測定される。
【０１３２】
そのアッセイは、放射性標識されたリン酸部分が、キナーゼによってビオチン標識された基質に移動することから成る。得られた33Ｐ-標識化されたビオチン化産物は、ストレプトアビジンでコーティングしたＳＰＡビーズ（ビオチン容量130 pmol/mg）に結合され、シンチレーションカウンターで発光を測定した。
【０１３３】
＜cdk2/サイクリン活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積30 μｌのバッファー(トリスHCl 10 mM pH 7.5、MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA)中の4 μMの自社製ビオチン化ヒストンH1 (Sigma# H-5505)基質、10μM ATP (0.1マイクロCiP33γ-ATP), 1.1 nM サイクリン A/CDK2 複合体、阻害剤を、96 U底のそれぞれのウェルに添加した。室温で６０分インキュベーションした後、32 mM EDTA、500μM コールドATP、0.1% トリトンX100 及び10mg/mlの ストレプトアビジンでコーティングしたSPAビーズを含む100μｌのPBS バッファーを加えて反応を停止した。２０分のインキュベーションの後、110μＬの懸濁液を回収し、100μｌの5Ｍ CsClを含む96穴オプティプレートに移した。４時間後、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで該プレートを２分間読み取った。
【０１３４】
ＩＣ50の測定：阻害剤は、0.0015〜10μMの範囲の異なる濃度で試験した。実験データは、４つのパラメーターの論理計算式を用いたコンピューター・プログラムGraphPad Prizmで分析した：
ｙ  ＝  最低＋（最高−最低）/(1+10^((logIC50-x)＊傾き））
ここで、Ｘは阻害剤濃度の対数であり、ｙは応答であり；ｙは最低から開始してシグモイド形状で最高に達する。
【０１３５】
Ｋｉ算出：
実験方法：反応は、3.7 nM 酵素、ヒストン及びATP (コールド／標識ATPの一定割合 1/3000)を含むバッファー(10 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl2, 0.2 mg/ml BSA, 7.5 mM DTT)中で行った。反応をＥＤＴＡで停止し、基質をリン酸膜（ミリポア製マルチスクリーン96穴プレート）で捕捉した。広範に洗浄した後、マルチスクリーンプレートをトップカウンターで読み取った。ＡＴＰ及びヒストン濃度のそれぞれの対照（時間０）を測定した。
【０１３６】
実験設計：反応速度は、４つのＡＴＰ、基質（ヒストン）及び阻害剤濃度で測定する。それぞれのＡＴＰ及び基質Ｋｍ値、及び阻害剤ＩＣ50値（0.3, 1, 3, 9 倍のKm又はIC50値）について、80ポイントの濃度マトリクスを設計した。阻害剤の非存在下及び異なるＡＴＰ及び基質濃度での予備的な時間経過実験によって、Ｋｉ測定実験の反応の直線領域における単一終点（１０分）の選択が可能である。
【０１３７】
動態学的パラメーター推定：動態学的パラメーターは、［等式１］（ＡＴＰに関する競合的阻害、ランダムメカニズム）を用いた連立非線形最小二乗回帰によって、完全なデータセット（８０ポイント）を用いて推定した：
【化３２】
2006501191.tif 000023
【０１３８】
（ここで、A= [ATP], B= [基質],I= [阻害剤], Vm= 最大速度, Ka, Kb, Kiはそれぞれ、ATP、基質及び阻害剤の解離定数）。α及びβはそれぞれ、基質とＡＴＰ結合、及び基質と阻害剤結合の間の協同性因子である。
【０１３９】
さらに選択された化合物は、細胞サイクル（cdk2/サイクリン E, cdkl/サイクリンB1, cdk5/p25, cdk4/サイクリン D1）に厳密に関連するser/threキナーゼのパネル上で特徴付けられ、またMAPK, PKA, EGFR,IGF1-R, オーロラ-2 及びCdc 7についての特異性について特徴付けられる。
【０１４０】
＜cdk2/サイクリン E活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積30μｌのバッファー (トリスHCl 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA)中の、10μMの自社製のビオチン標識化ヒストンH1 (Sigma# H-5505) 基質, 30μMのATP (0.3マイクロCiP33γ-ATP), 4 ng GST-サイクリンE/CDK2複合体、阻害剤を、96 U 底の各ウェルに添加した。室温で60分インキュベーションした後、32 mM EDTA、500μMのコールドATP、0.1% トリトンX100 及び10mg/mlのストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100μｌのPBS バッファーを添加して反応を停止した。20分のインキュベーションの後、110μLの懸濁液を回収し、100μｌの5M CsClを含む、96-ウェルオプティプレート（OPTIPLATEs）に移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１４１】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１４２】
＜cdkl/サイクリンB1活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応: 最終容積が30μｌのバッファー(トリス HCl 10 mM pH 7.5、MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA) 中の、4μMの 自社製のビオチン標識化ヒストンH1 (Sigma# H-5505) 基質, 20μM ATP (0.2マイクロCiP33γ-ATP), 3 ng サイクリンB/CDK1複合体、阻害剤を、96 U 底の各ウェルに添加した。室温で20分インキュベーションした後、1 mgのSPAビーズを含む、100μl PBS + 32 mM EDTA + 0.1% トリトンX-100 + 500μM ATPを添加して反応を停止した。次いで、容積110μlをオプティプレートに移した。基質を捕捉するための20分のインキュベーションの後、100μlの5M CsCl を添加して、ビーズのスタティフィケーション（statification）をオプティプレートの最高（top）にし、そしてトップ−カウント装置で放射能をカウントする前に４時間静置した。
【０１４３】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１４４】
＜cdk5/p25活性の阻害アッセイ＞
cdk5/p25活性の阻害アッセイは、以下のプロトコルに従って行われる。
【０１４５】
キナーゼ反応：最終容積が30μlのバッファー (トリスHCl 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA)中の、10μMのビオチン標識化ヒストンH1 (Sigma# H-5505) 基質, 30μM ATP (0.3マイクロCiP33γ-ATP), 15 ng CDK5/p25 複合体、阻害剤を、96 U 底の各ウェルに添加した。室温で35分インキュベーションした後、32 mM EDTA, 500μMコールドATP, 0.1% トリトンX100 及び10 mg/ml ストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100μl PBS バッファーを加えて反応を停止した。20分のインキュベーションの後、110μLの懸濁液を回収し、100μlの５Ｍ  CsClを含む、96-穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１４６】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１４７】
＜cdk4/サイクリン D1活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積50μｌのバッファー（トリスHCl 10 mM pH 7.5, MgCl2 10mM, 7.5 mM DTT+0.2 mg/ml BSA）中の、0.4μＭのマウスＧＳＴ-Ｒｂ（769-921）（# sc-4112、Santa Cruz製）基質、10μＭ ＡＴＰ（0.5μＣｉ  Ｐ33γ-ＡＴＰ）、100 ngのバキュロウイルス発現ＧＳＴ-cdk4/GST-サイクリン D1、適切な濃度の阻害剤を、96Ｕ底ウェルプレートの各ウェルに添加した。37℃で40分間インキュベーションした後、20μｌのＥＤＴＡ  120 mMで反応を停止した。
【０１４８】
捕捉：各ウェルからマルチスクリーンプレートに60μｌを移し、基質をリン酸セルロースフィルターに結合させた。次いで、プレートを、150μｌ／ウェルのCa++/Mg++フリーのPBSで３回洗浄し、マルチスクリーン濾過システムで濾過した。
【０１４９】
検出：フィルターを37℃で乾燥させ、次いで、100μｌ／ウェルでシンチラントを添加し、33P標識化Ｒｂ断片を、トップ-カウント装置の放射能カウントにより検出した。
【０１５０】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１５１】
＜ＭＡＰＫ活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積が30μlのバッファー (トリスHCl 10 mM pH 7.5、MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA)中の、10 μMの自社製ビオチン標識化MBP (Sigma# M-1891) 基質, 15μM ATP (0.15 マイクロCiP33γ-ATP), 30 ng GST-MAPK (Upstate Biothecnology# 14-173)、阻害剤を、96 U 底の各ウェルに添加した。室温で35分間インキュベーションした後、32 mM EDTA, 500 μMコールドATP、0.1% トリトンX100 及びlOmg/ml ストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100 μlの PBS バッファーを加えて反応を停止した。２０分のインキュベーション後、110μｌの懸濁液を回収し、100μlの５Ｍ  CsClを含む、96-穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１５２】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１５３】
＜ＰＫＡ活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積が30 μｌのバッファー(トリスHCl 10 mM pH 7.5, MgCl2 10 mM, DTT 7.5 mM + 0.2 mg/ml BSA)中の、10μMの自社製のビオチン標識化ヒストンH1 (Sigma# H-5505) 基質、10μMのATP (0.2マイクロMP33γ-ATP)、0.45 UのPKA (Sigma# 2645)、阻害剤を、96 U底の各ウェルに添加した。室温で90分インキュベーションした後、32 mM EDTA, 500 μMコールドATP, 0.1% トリトンX100 及び10mg/ml ストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100μｌのPBSバッファーを添加して反応を停止した。２０分のインキュベーション後、110μｌの懸濁液を回収し、100μlの５Ｍ  CsClを含む、96-穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１５４】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１５５】
＜ＥＧＦＲ活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積30μlのバッファー (Hepes 50 mM pH 7.5, MgCl2 3 mM,MnCl2 3 mM, DTT 1 mM,NaVO3 3μM, + 0.2 mg/ml BSA)中の、10 μMの自社製ビオチン標識化MBP (Sigma# M-1891) 基質, 2μM ATP (0.04 マイクロCiP33γ-ATP), 36 ng 昆虫細胞発現GST-EGFR,阻害剤を、96 U 底の各ウェルに添加した。室温で２０分インキュベーションした後、32 mM EDTA, 500μM コールドATP, 0.1% トリトンX100 及び10mg/ml ストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む100 μl PBS バッファーを添加して反応を停止した。２０分インキュベーションした後、１１０μＬの懸濁液を回収し、100 μlの５Ｍ  CsClを含む96穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１５６】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１５７】
＜IGF1-R活性の阻害アッセイ＞
IGF1-R活性の阻害アッセイは、以下のプロトコルで行った。
【０１５８】
酵素活性：IGF1-Rは、実験開始前に自己リン酸化反応で活性化されなければならない。アッセイの直前に、濃縮酵素溶液（697 nM）を28℃で、100 μMのＡＴＰの存在下で30分間インキュベートし、次いで表示されたバッファーで作業希釈度にする。
【０１５９】
キナーゼ反応：最終容積30 μlのバッファー（50 mM HEPES pH 7.9, 3 mM MnCl2,1 mM DTT,3 μM NaVO3）中の、10μMビオチン標識化IRS 1ペプチド(PRIMM) 基質, 0-20μM 阻害剤, 6 μM ATP,1マイクロCi33P-ATP, 及び6 nM GST-IGF1-R (60 μM コールドATPと共に、室温で30分プレ-インキュベート)を、96Ｕ底ウェルプレートの各ウェルに添加した。室温で３５分インキュベーションした後、32 mM EDTA、500 μM コールドＡＴＰ、0.1％トリトンＸ100及び10 mg/mlストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100μlのPBSバッファーを加えて反応を停止した。２０分インキュベーションした後、１１０μＬの懸濁液を回収し、100 μlの５Ｍ  CsClを含む96穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１６０】
＜オーロラ-２活性の阻害アッセイ＞
キナーゼ反応：最終容積30μlのバッファー(HEPES 50 mM pH 7.0,MgCl2 10 mM,1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 3 μM  オルトバナデート)中の、8μM ビオチン標識化ペプチド (LRRWSLGの４回繰り返し), 10μM ATP (0.5 uCi P33γ-ATP), 7.5 ng オーロラ2, 阻害剤を、96Ｕ底ウェルプレートの各ウェルに添加した。室温で６０分インキュベーションした後、100 μlのビーズ懸濁液を加えて反応を停止し、ビオチン標識化ペプチドを捕捉した。
【０１６１】
層別化（stratification）：100 μlの  CsCl2  ５Ｍを各ウェルに添加し、４時間放置して、TOP-カウント装置で放射能をカウントした。
【０１６２】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１６３】
＜Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイ＞
Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイは、以下のプロトコルで行われる。
【０１６４】
ビオチン-MCM2 基質を、γ33-ＡＴＰで追跡されるＡＴＰの存在下で、Cdc7/Dbf4でトランス-リン酸化する。次いで、リン酸化ビオチン-ＭＣＭ２基質をストレプトアビジンコーティングされたＳＰＡで捕捉し、βカウンティングしてリン酸化の程度を評価した。
【０１６５】
Cdc7/dbf4活性の阻害アッセイを、以下のプロトコルに従って96穴プレートで行った。
【０１６６】
プレートの各ウェルに、以下を添加した：
−  10 μlの基質（ビオチン標識化ＭＣＭ２、6μＭ  最終濃度）
−  10 μlの酵素（Cdc7/Dbf4、17.9 nM  最終濃度）
−  10 μlの試験化合物（投与-応答曲線を作成するために、nM〜μＭの範囲で増加する12の濃度）
−  10 μlのコールドＡＴＰ（２μＭ  最終濃度）と放射能活性ＡＴＰ（コールドＡＴＰと1/5000モーラーの割合）の混合物を、３７℃で起こる反応を開始させるために用いた。
【０１６７】
基質、酵素及びＡＴＰを、15 mMのMgCl2, 2 mMのDTT, 3μMのNaVO3, 2mMのグリセロリン酸及び0.2mg/mlのBSAを含む50 mMのHEPES pH 7.9で希釈した。試験化合物のための溶媒は、10% DMSOも含んだ。
【０１６８】
６０分のインキュベーションの後、50 mM EDTA、1ｍM コールドＡＴＰ、0.1％トリトンＸ100及び10 mg/mlストレプトアビジンでコーティングされたSPAビーズを含む、100μlのPBS  ｐＨ7.4バッファーを各ウェルに加えて反応を停止した。
【０１６９】
２０分インキュベーションした後、１１０μＬの懸濁液を回収し、100 μlの５Ｍ  CsClを含む96穴オプティプレートに移した。４時間後、このプレートを、パッカードTOP-カウント放射能リーダーで２分間読み取った。
【０１７０】
ＩＣ50測定：上記を参照。
【０１７１】
本発明の化合物は、治療において有用であり、例えば、腫瘍細胞の制御されない増殖を制限するために有用であり得る。さらに具体的には、本発明の二環式ピラゾールは、さまざまな臓器、組織及び腺の癌腫、例えば 膀胱, 乳房, 大腸, 腎臓, 肝臓,小細胞肺癌を含む肺、食道, 胆嚢, 卵巣, 膵臓, 胃, 頚部, 甲状腺, 前立腺, 及び扁平上皮癌を含む肌等の癌腫;白血病, 急性リンパ性（acute lymphocitic）白血病, 急性リンパ球性白血病, B-細胞リンパ腫、T-細胞リンパ腫, ホジキン病リンパ腫, 非-ホジキン病リンパ腫, 毛様細胞リンパ腫 及びバーケットリンパ腫を含むリンパ系統の造血性腫瘍;急性及び慢性の骨髄性白血病, 脊髄形成異常の症候群及び前骨髄球性白血病を含む骨髄系統の造血性腫瘍;線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍;星細胞腫, 神経芽細胞腫, 神経膠腫及びシュワン細胞腫を含む中枢神経系及び末梢神経系の腫瘍;黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、骨肉腫,色素性乾皮症、角膜黄色腫、甲状腺瀘胞状癌 及びカポジ肉腫を含む他の腫瘍を含むがこれらに限定されない種々の癌の治療に有用であり得る。
【０１７２】
細胞増殖の制御における、ＰＫｓの鍵的な役割のために、本発明の二環式ピラゾールは、例えば、良性の前立腺肥厚, 家族性腺腫症, ポリープ症, 神経線維腫症, 乾癬,アテローム性動脈硬化症, 肺線維症, 関節炎 糸球体腎炎及び術後狭窄及び再狭窄に関わる血管平滑細胞増殖のような様々な細胞増殖性疾患の治療においても有用でありうる。本発明の化合物は、cdk5がタウタンパク質のリン酸化に関与しているという事実(J. Biochem. , 117,741-749, 1995)によって示唆されるように、アルツハイマー病の治療に有用であり得る。本発明の化合物は、アポトーシスのモジュレーターとして、癌、ウイルス感染、HIV-感染個体におけるAIDSの発症の予防,自己免疫性疾患及び神経変性疾患の治療においても有用である。本発明の化合物は、腫瘍脈管形成及び転移の阻害にも有用であり得る。
【０１７３】
本発明の化合物は、哺乳類、例えばヒトに、通常の経路で投与されるのに適している。投与量レベルは、通常、患者の年齢、体重、状態、及び投与経路に依存する。
【０１７４】
例えば、本発明の化合物の経口投与に適した適切な投与量は、例えば、N-ベンジル-3- {[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1 H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミドは、前投与量で約5〜約500 mgの範囲で１日当たり1〜5回である。
【０１７５】
本発明の化合物は、種々の投与形体で投与されることができ、例えば、錠剤、カプセル、糖又はフィルムコーティング錠剤、液体溶液又は懸濁液の形体において経口で；坐薬の形体で直腸に；静脈内及び/又は髄腔内注射又は注入で例えば筋肉内に非経口で；又は、経皮投与によって、投与されることができる。
【０１７６】
さらに、本発明の化合物は、単独の薬剤として投与されてもよく、或いは、放射線治療又は、細胞分裂停止又は細胞毒性薬剤、抗菌性薬剤、アルキル化薬剤、抗代謝性薬剤、ホルモン剤、免疫学的薬剤、インターフェロン型薬剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−２阻害剤、特に、セレコキシブ（celecoxib）、ロフェコキシブ（rofecoxib）、パレコキシブ（parecoxib）及びバルデコキシブ（valdecoxib））、メタロマトリクスプロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗成長因子受容体薬剤、抗-ＨＥＲ薬剤、抗-ＥＧＦＲ薬剤、抗-血管形成薬剤、ファルネシル転移酵素阻害剤、ras-rafシグナル伝達経路阻害剤、細胞サイクル阻害剤、他のcdks阻害剤、チューブリン結合薬剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、その他と組み合わせた化学治療療法のような、さらなる抗癌治療を含む治療方法と組み合わせて投与されてもよい。
【０１７７】
固定された用量で製剤化される場合、そのような組合せの製剤は、本発明の化合物を上記投与量の範囲内で使用し、他の薬学的活性薬剤を認可された投与量の範囲内で使用する。
【０１７８】
組合せ製剤が適切でない場合は、本発明の化合物は、既知の抗癌薬剤に引き続いて用いられてよい。
【０１７９】
本発明は、従って、変質した（制御されない）タンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患に罹患している、ヒトを含めた哺乳類の治療のための方法を提供し、該方法は、並行して、別々に、又は連続的な抗癌治療をすると同時に、式（Ｉ）の二環式ピラゾール化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩の治療的有効量を、それらを必要とする前記哺乳類に、投与することを含む。
【０１８０】
本発明のさらなる目的は、並列の、別々の、又は連続的な抗癌治療を受けている患者において、変質したタンパク質キナーゼ活性によって起こされる疾患、及び／又は前記キナーゼ活性に関係する疾患を治療するための薬剤の製造における、式（Ｉ）の化合物、又は薬学的に許容されるそれらの塩の使用である。
【０１８１】
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物又は薬学的に許容されるそれらの塩を、担体又は希釈剤であってよい薬学的に許容される賦形剤に付随して具備する、薬学的組成物を包含する。
【０１８２】
本発明の化合物を含む薬学的組成物は、通常以下の従来方法に従って調製され、薬学的に適切な形体で投与される。
【０１８３】
例えば、固体経口形体は、活性化合物と共に、希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、サッカロース、スクロース、セルロース、コーンスターチ又はポテトスターチ；潤滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン、マグネシウム又はカルシウムステアレート、及び/又はポリエチレングリコール；結合薬剤、例えば、スターチ、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース又はポリビニルピロリドン；脱凝集剤、例えば、スターチ、アルギン、アルギネート又はナトリウムスターチグリコレート；発泡混合物；色素；甘味料；レシチン、ポリソルベート、ラウリル硫酸塩のような湿潤剤；及び、一般に、薬学的製剤において用いられる、非毒性及び薬学的に不活性な物質、を含んでよい。前記薬学的製剤は、周知の方法で、例えば混合、顆粒化、錠剤化、糖コーティング、又はフィルムコーティング方法によって製造されることができる。
【０１８４】
経口投与のための液体分散系は、例えば、シロップ、乳濁液及び懸濁液であってよい。
【０１８５】
シロップは、担体として、例えば、サッカロース又はグリセリン及び／又はマンニトール及び／又はソルビトールと共にサッカリンを含んでもよい。
【０１８６】
懸濁液及び乳濁液は、担体として、例えば、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、又はポリビニルアルコールを含んでもよい。
【０１８７】
筋肉内注射のための懸濁液又は溶液は、活性化合物と共に、薬学的に許容される担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えばプロピレングリコール、及び、必要であれば、適切な量の塩酸リドカインを含んでよい。静脈内注射又は注入のための溶液は、担体として、例えば、滅菌水を含んでよく、又は好ましくはそれらは、滅菌の、水性の、等張性生理食塩水の形体であってよく、或いはそれらは担体としてプロピレングリコールを含んでもよい。
【０１８８】
坐薬は活性化合物と共に、薬学的に許容される担体、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤又はレシチンを含んでよい。
【０１８９】
以下の例は、本発明を説明することを意図されたもので、これらに限定されるものではない。
【実施例】
【０１９０】
［合成の例］
以下のＨＰＬＣ方法は、以下に述べる合成の例で特定される化合物の分析において使用した。ここで用いられるように、「Ｒｔ」という用語は、ＨＰＬＣ方法に特異的に用いられる化合物の保持時間を指す。
【０１９１】
＜方法Ａ＞
HPLC/MSは、996ウォーターズPDA検出器及びマイクロマス mod. ZQ シングル四極子質量分析器スペクトロメータを装備し、エレクトロスプレー(ESI)イオン源を装備した、ウォーターズ2790 HPLCシステムを用いて、ウォーターズXテラRP 18 (4.6 x 50 mm, 3. 5μm)カラムで行った。移動相Ａは、酢酸アンモニウム5 mM バッファー (pH 5.5 、酢酸/アセトニトリル95:5)であり、移動相Ｂは、H2O/アセトニトリル(5:95)であった。勾配は８分で10〜90％Ｂ、９０％Ｂを２分間保持。ＵＶ検出は220 nm及び254 nm。流速1 ml/分。注入容量10 μl。フルスキャン、質量範囲100〜800 amu。キャピラリ電位は2.5 KV；ソース温度は120℃；コーンは10Ｖ。保持時間（ＨＰＬＣ r.t.）は、220 nm又は254 nmで数分与えられる。質量は、m/z比で与えられる。
【０１９２】
＜方法Ｂ＞
HPLC/MSは、ポリマーLabs  PL1000 蒸発光散乱検出器及びマイクロマスZMD質量スペクトロメータを装備した、エレクトロスプレー(ESI)イオン源を装備した、ヒューレットパッカード1312A HPLC システムを用いて、ハイパーシルC18 BDS (2 x 50 mm, 5μｍ)カラムを用いて行った。移動相Ａは、トリフルオロ酢酸の水溶液（0.1% v/v）であり、移動相Ｂはトリフルオロ酢酸のアセトニトリル溶液（0.1% v/v)であった。勾配は0〜95％Ｂ、1.8分、９５％Ｂで0.3分保持。流速1 ml/分。注入容量3 μl。フルスキャン、質量範囲150〜800 amu。ソース温度は140℃；コーンは25Ｖ。保持時間（ＨＰＬＣ r.t.）は、数分与えられる。質量は、m/z比で与えられる。
【０１９３】
［例１］
メチル５-シアノ-４-ニトロ-チオフェン-２-カルボキシレート（１）の調製
アルゴン下で攪拌された、無水ジメチルホルムアミド(100 mL)中の5-ブロモ-4-ニトロ-チオフェン-2-カルボン酸メチルエステル(0.30 mol, 80.0 g)の溶液に、乾燥シアン化銅(0.36 mol, 32.2 g)を添加した。この混合物を、８０℃で３時間熱し、水(170 mL) 及び塩酸10 N (35 mL)中のFeCl3・6H2O (0.45 mol, 121.6. g)溶液中に注いだ。２０分間６０℃で熱した後、反応媒体を冷却してジクロロメタン(6x200 mL)で抽出した。有機層を塩酸6 N(2x200 mL)、水(2x250 mL) 及びNaHCO 3で飽和した水(150 mL)で洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥させた。濾液を蒸発乾固して赤い固体を得、フラッシュクロマトグラフィーで、シリカゲル上、ヘキサン／酢酸エチル（35：15）を溶出剤として用いて精製し、タイトルの化合物を白色固体として得た(36.3 g, 57%)。
【０１９４】
m.p.83-85℃。
【０１９５】
(M+H)+ =213
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 8.3 (s); 3.9 (s).
同様に、5-ブロモ-4-ニトロ-チオフェン-2-カルボン酸エチルエステル(2)を用いて調製した：
エチル5-シアノ-4-ニトロ-チオフェン-2-カルボキシレート、m.p.94-96℃。
【０１９６】
(M + H)+ = 227,
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 8.3 (s); 4.4 (q); 1.3 (t)。
【０１９７】
［例２］
メチル4-アミノ-5-シアノ-チオフェン-2-カルボキシレート(3)の調製。
【０１９８】
氷酢酸68 mL (1.2 mol)中の、メチル5-シアノ-4-ニトロ-チオフェン-2-カルボキシレート(0.17 mol, 36 g) 及び鉄粉(0.51 mol, 28.5 g)の懸濁液を、３時間還流した。粗製物を真空下で濃縮し、希釈アンモニアで中和した。水性層を酢酸エチル(3x250 mL)で抽出し、Na2SO4で乾燥した。濾液を蒸発固化して黄色固体を得、フラッシュクロマトグラフィーで、シリカゲル上、ヘキサン／酢酸エチル（38：12）を溶出剤として用いて精製し、タイトルの化合物を黄色固体として得た(21.4 g, 69%)。
【０１９９】
m.p.187-189℃
(M + H) + = 183
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 7.1 (s); 6.7 (s); 3.7 (s)。
【０２００】
同様に、例１で記載した適切なエチルエステルを用いて調製した:
エチル 4-アミノ-5-シアノ-チオフェン-2-カルボキシレート(4)。
【０２０１】
m.p.138-140℃
(M + H) + = 197。
【０２０２】
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 7.2 (s); 6.6(s); 4.3 (q); 1.3 (t)。
【０２０３】
［例３］
メチル3-アミノ-1H-チエノ［3, 2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート(5)の調製
120 mLの塩酸37%中の、メチル5-シアノ-4-ニトロ-チオフェン-2-カルボキシレート(0.10 mol, 21.0 g)の氷冷懸濁液に、12 mLの水中の、亜硝酸ナトリウム(0.12 mol, 8.3 g)の溶液を滴下した。1.5時間後、氷冷懸濁液を、120 mLの塩化水素37%中の塩化スズの予め形成した溶液(0.80 mol, 151.7 g)に５℃で滴下した。３時間後、冷却懸濁液を濾過し、湿性固体を350mLの沸騰水で30分処理した。熱い、曇った溶液を、布性フィルターを通して濾過して清澄させた。この水剤を氷冷し、180 mLの水酸化ナトリウム17%により、滴状処理した。得られた個体を濾過して５０℃の真空下で乾燥させ、7.3ｇのタイトルの化合物を黄色固体として得た（37％収率）。
【０２０４】
m.p.218-220℃
(M + H)+ = 198
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 11.7 (s); 7.6 (s); 5.2 (s); 3.8 (s)。
【０２０５】
同様に、例２で記載された適切なエチルエステルを用いて調製した：
エチル3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(6),
m.p.231-233℃
(M + H)+ = 212。
【０２０６】
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 11.8 (s); 7.5 (s); 5.2 (s); 4.3 (q); 1.3 (t)。
【０２０７】
［例４］
1-エチル 5-メチル 3-アミノ-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(7)の調製
71 mL のテトラヒドロフラン中の3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸メチルエステル(35.5 mmol, 7.0 g) 及びN,N'-ジイソプロピルエチルアミン(0.21 mol, 36.5 mL)の氷冷懸濁液に、3.5 mL のクロロギ酸エチル(36.6 mmol)を滴下した。1.5時間後、冷却懸濁液を真空下で濃縮し、ジクロロメタンで希釈した。有機相を、バッファーpH 4,水酸化ナトリウム 1 N, 鹹水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾液を蒸発乾固し、ジクロロメタンで倍散して6ｇの1-エチル 5-メチル3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(7)を得た。
【０２０８】
黄色固体、クロマトグラフィック法Ａ  Ｒｔ3.7 (M + H)+ = 270。  1H-NMR (DMSO- d6) d ppm 7.95 (ブロード  s 1H); 4.51 (q 2H); 3.93 (s 3H); 1.47 (d 3H)。
【０２０９】
同様に、例３で記載された適切なエチルエステルを用いて調製した：
ジエチル3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(8)
(M + H)+ = 284
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 7.7 (s); 6.3 (s); 4.4 (q); 4.2 (q); 1.3 (m)。
【０２１０】
［例５］
ジエチル3-［(4-フルオロベンゾイル)アミノ］-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(9)の調製
50 ml 無水ジクロロメタン中の、4-フルオロベンゾイルクロリド(0.106 mol, 12.7 mL)の溶液を、100 mLの無水ジクロロメタン及び114.0mLのピリジン(1.412 mol)中の、1-エチル 5-メチル 3- アミノ-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(0.071 mol, 19.1 g)の氷冷懸濁液に滴下した。得られた懸濁液を、５℃で５時間攪拌した。粗製物を真空下で濃縮し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を塩酸1 N、水酸化ナトリウム 1 N, 鹹水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。濾液を蒸発乾固し、黄色固体を得た。これはフラッシュクロマトグラフィーで、シリカゲル上、ヘキサン／酢酸エチル（4：1）を溶出液として用いて精製し、タイトルの化合物を淡黄色固体として得た(19.6 g, 68%)。
【０２１１】
クロマトグラフィー方法Ａ  Rt 6.59 (M + H)+ = 392
同様に、1-エチル 5-メチル  3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(7)を適切な塩化アシルと反応させて、以下の化合物が調製される：
(10)  1-エチル5-メチル3-[(3,5-ジフルオロベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート;
(11)  1-エチル5-メチル 3-[(4-tert-ブチルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(12)  1-エチル 5-メチル 3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(13)  1-エチル5-メチル3-[(4-トリフルオロメトキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(14)  1-エチル 5-メチル 3-[(チエン-2-イルカルボニル) アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1, 5- ジカルボキシレート; 
(15)  1-エチル 5-メチル 3- [2-フロイルアミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1, 5- ジカルボキシレート; 
(16)  1-エチル5-メチル3-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1, 5-ジカルボキシレート; 
(17)  1-エチル 5-メチル3-｛[5-(モルフォリン-4-イルメチル)-2-フロイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(18)  1-エチル 5-メチル 3-[(4-イソプロポキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール- 1,5-ジカルボキシレート; 
(19)  1-エチル 5-メチル 3-[(3-シアノベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1, 5- ジカルボキシレート; 
(20)  1-エチル5-メチル3- (ペンタノイルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1, 5- ジカルボキシレート;
(21)  1-エチル 5-メチル3-(シクロプロピルカルボニルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート;
(22)  1-エチル 5-メチル3-(シクロブチルカルボニルアミノ)-1 H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート。
【０２１２】
［例６］
1-エチル 5-メチル3-(｛[(4-フルオロベンジル)アミノ]カルボニル｝アミノ)-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(23)の調製
4-フルオロベンジルイソシアネート(0.130 ml, 1.02 mmol)を、無水ジクロロメタン(5 ml)中の1-エチル5- メチル3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(85 mg, 0.32 mmol)の溶液に添加した。室温で９６時間攪拌した後、溶媒を減圧下で除去し、残渣を、シリカゲルでのクロマトグラフィー（溶出液  ジクロロメタン 50;メチルアルコール 0.5 ; 6% 水溶性アンモニア0.1）で精製し、80mgのタイトル化合物を白色固体として得た。
【０２１３】
クロマトグラフィー方法A,   Rt 6.11, [M+H]+ 621.
同様に、1-エチル5-メチル3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレートを、適切なイソシアネートと反応させて、以下の化合物が調製される：
(24)  1-エチル5-メチル 3-{[(ベンジルアミノ)カルボニル] アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(25)  1-エチル5-メチル 3-{[(プロピルアミノ)カルボニル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(26)  1-エチル5-メチル 3-{[(tert-ブチルアミノ)カルボニル]アミノ}-1 H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート; 
(27)  1-エチル5-メチル3-[({[3-(ジメチルアミノ)プロピル]アミノ}カルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート。
【０２１４】
［例７］
メチル1-(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)-3-［(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ］-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート(28)の調製
塩化オキサリル(19.2.2 ml, 0.22 mol)を、DCM (210 ml) 及びDMF (0.34 ml)中の4-モルフォリン-4-イル安息香酸 (7.56 g, 36.5 mmol)の懸濁液に添加した。混合物を６．５時間還流した後、揮発分を減圧下で注意深く除去した（残渣をトルエンで三回取り出した）。得られた4-モルフォリン-4-イルベンゾイルクロリドハイドロクロリドを、乾燥DCM (240 ml) 及びピリジン(12.2 ml, 0.152 mmol)中の3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸メチルエステル(2 g, 10.1 mmol)に、５℃で攪拌しながら一部ずつ添加した(〜0.5時間)。得られた懸濁液は室温で７２時間攪拌した。
【０２１５】
次いで、200 mlの重炭酸ナトリウム水溶液を反応混合物に添加し、２時間攪拌した後、固体残渣を、濾過して分別した。有機層を分離し、鹹水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて茶色固体を得た。二つの固体部分を結合し、エチルエーテル及びジクロロメタンの混合物(1:5 v/v)で倍散し、濾過し、４０℃の真空下で乾燥し、4.45ｇの明るい黄色の粉末を得た。
【０２１６】
LC-MS クロマトグラフィー方法A, Rt 7.14, [M+H]+ 576.
同様に、3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸メチルエステルを、適切な塩化アシルと反応させて、以下の化合物が調製される:
(29)  メチル1-[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート;方法 A, Rt 3.69 ;
(30)  メチル1-[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]-3-{[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(31)  メチル1-[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]-3-{[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(32)  メチル1-{4-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]ベンゾイル}-3-(｛4-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]ベンゾイル}アミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート。
【０２１７】
［例８］
3-(4-フルオロベンゾイルアミノ)-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボン酸(33)の調製
40 mLのNaOH/H2O (1: 1) 及び100 mLのエタノール中の1-エチル5-メチル3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレート(46.9 mmol, 19 g)の懸濁液を、７０℃で３時間熱した。粗製物を濃縮し、得られた懸濁液のｐＨを、塩酸37％及びバッファーｐＨ４を用いてｐＨ＝４に調整した。水層を酢酸エチル（3x250 mL）で抽出した。収集した有機層を、鹹水で洗浄してNa2SO4で乾燥した。濾液を蒸発乾固させて13.5ｇの白色固体を得た。これは、さらに精製することなく次の工程に用いた（収率94％）。
【０２１８】
(M + H) + = 306 方法A, Rt 2.00 ;
同様に、例５及び６の、1-エチル5-メチル 3-(アシルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-1,5-ジカルボキシレートを用いて以下の化合物が調製される：
(34)  3-[(3,5-ジフルオロベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(35)  3-[(4-tertブチルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(36)  3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(37)  3-[(4-トリフルオロメトキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 方法 A, Rt 3. 61; 
(38)  3-[(チエン-2-イルカルボニル) アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(39)  3-[2-フロイルアミノ]-1H-チエノ[3, 2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(40)  3-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(41)  3-{[5-(モルフォリン-4-イルメチル)-2-フロイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール--5-カルボン酸;
(42)  3-[(4-イソプロポキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(43)  3-[(3-シアノベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(44)  3-(ペンタノイルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(45)  3-(シクロプロピルカルボニルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(46)  3-(シクロブチルカルボニルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(47)  3-({［(4-フルオロベンジル)アミノ]カルボニル}アミノ)-1 H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(48)  3-｛[(ベンジルアミノ) カルボニル]アミノ}-1 H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(49)  3-｛[(プロピルアミノ) カルボニル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(50)  3-{[(tert-ブチルアミノ)カルボニル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(51)  3-[({[3-(ジメチルアミノ)プロピル]アミノ}カルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸。
【０２１９】
［例９］
メチル3-［(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ］-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート(52)の調製
MeOH (200 ml)及びEt3N (20 ml)中の、メチル1-(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(4.3 g, 7.5 mmol)の混合物を、８時間還流した。冷却した後、沈殿物を濾過して分別し、熱メチル アルコールで倍散した。濾過した後、真空下の４０℃で乾燥させて、2.4ｇのタイトル化合物を得た。
【０２２０】
LC-MS, クロマトグラフィー方法A, Rt 4.52, [M+H]+ 387.
以下の化合物が同様に調製される：
(53)  メチル 3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 方法 A, Rt 6.37 ;[M+H] + 400; 
(54)  メチル3-{[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(55)  メチル3-{[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 方法 A, Rt 3.20 ; 
(56)  メチル3-({4-[(l-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-ベンゾイル}アミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; [M+H]+ 415。
【０２２１】
［例１０］
3-［(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ］-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボン酸(57)の調製
MeOH (50 ml)中の、メチル3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(2.3 g, 6 mmol) 及び水酸化ナトリウム水溶液(12.5 ml の2N溶液)の混合物を、５０℃で８時間熱した。冷却した後、減圧下で蒸発させてメタノールを除去し、水(5 ml)を加え、塩酸水溶液を加えてpHを7に調整した。沈殿物を濾過して分離し、水及びエチルエーテルで洗浄し、真空下の５０℃で乾燥させて2.2ｇのタイトル化合物を得た。
【０２２２】
LC-MS, クロマトグラフィー方法A, Rt 2.06, [M+H]+ 373.
以下の化合物が同様に調製される：
(58)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 方法 A, Rt 4.14 ; [M+H]+ 386; 
(59)  3-{[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(60)  3-{[3-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(61)  3-{4-[(1-メチルピペリジン-4-イル)オキシ]-ベンゾイル}アミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; [M+H]+ 401.
［例１１］
3-［(4-フルオロベンゾイル)アミノ］-N-イソプロピル-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキサミド(62)の調製
0.3 mLの乾燥ジクロロメタン中の、3-(4-フルオロ-ベンゾイルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸(50.0 mg, 0.164 mmol)及びN,N'-ジイソプロピルエチルアミン(1.476 mmol, 0.253 mL)の氷冷懸濁液に、0.078 mLのクロロギ酸エチル(0.492 mmol)を滴下した。２０分後、得られた溶液に0.083 mLのイソプロピルアミン(0.984 mmol)を添加し、反応混合物を室温まで温めさせた。３時間後、0.2 mLのメタノール及び0.1 mLのN,N'-ジイソプロピルエチルアミンを加え、反応混合物を４０℃に４時間熱した。粗製物を、真空下で濃縮し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、バッファー pH 4、水酸化ナトリウム 1 N、鹹水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濾液を蒸発乾固させ、黄色固体を得た。これは、フラッシュクロマトグラフィーで、シリカゲル上、ジクロロメタン/メタノール(48:2)を溶出液として用いて精製し、タイトル化合物を白色固体として得た(20.5 mg, 36%)。
【０２２３】
(M + H) + = 347
1H-NMR (DMSO-d6) d ppm 12.8 (s); 11.3 (s); 8.3 (d); 8.1 (m); 7.6 (s); 7.3 (m); 4.0 (m); 4.2 (q); 1. 1 (m).
同様に、以下の化合物を、適切な3-(アシルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸及び適切なアミンを用いて調製した：
(63)  4-フルオロ-N-｛5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル} ベンズアミド; 方法 A, Rt 3.10 ; [M+H]+ 388; 
(64)  N-ベンジル-3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 1.27 ; [M+H]+ 395;
(65)  N-ベンジル-3-[(3,5-ジフルオロベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 1.33 ; [M+H]+ 413; 
(66)  3-[(4-tert-ブチルベンゾイル)アミノ]-N-エチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; [M+H]+ 371; 
(67)  3-[(3-シアノベンゾイル)アミノ]-N-(2-メトキシエチル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 1.02 ; [M+H]+ 370; 
(68)  N-ベンジル-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.51 ; [M+H]+ 469; 
(69)  N-[(1R)-1-フェニルエチル]-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.27 ; [M+H]+ 475;
(70)  N-(2,6-ジエチルフェニル)-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 7.13 ; [M+H]+ 503; 
(71)  N-[(1R)-1-フェニルプロピル]-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.88 ; [M+H]+ 489;
(72)  N-(3,5-ジメトキシフェニル)-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.82 ; [M+H]+ 507; 
(73)  N-(3-イソプロポキシプロピル)-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.85 ; [M+H]+ 471; 
(74)  N-(2-モルフォリン-4-イル-1-フェニルエチル)-3-{[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.00 ; [M+H]+ 560; 
(75)  3-(2-フロイルアミノ)-N-2-フェニルエチル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.19 ; [M+H]+381 ; 
(76)  N-ブチル-3-(2-フロイルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B,Rt 1. 09; [M+H]+ 333 ; 
(77)  N-[5-(ピロリジン-1-イルカルボニル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル]-2-フルアミド; 方法 B, Rt 1.17 ; [M+H]+331 ; 
(78)  N-(4-メチルベンジル)-3-[(チエン-2-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.31 ; [M+H]+ 397; 
(79)  N-ブチル-3-[(チエン-2-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.19 ; [M+H]+ 349;
(80)  N,N-ジエチル-3-[(チエン-2-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.14 ; [M+H]+ 349; 
(81)  3-[(1,3-ベンゾジオキソール-5-イルカルボニル)アミノ]-N-[(lR)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.32 ; [M+H]+ 435; 
(82)  3-{[5-(モルフォリン-4-イルメチル)-2-フロイル]アミノ}-N-[(1R)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.01 ; [M+H]+ 480; 
(83)  3-[(4-イソプロポキシベンゾイル)アミノ]-N-[(1R)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.34 ; [M+H]+ 449; 
(84)  N-ブチル-3-(ペンタノイルアミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B,Rt 1. 19 ; [M+H]+ 323 ; 
(85)  N-ブチル-3-[(シクロプロピルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.05 ;[M+H] + 307; 
(86)  N-ブチル-3-[(シクロプロピルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 0.92 ; [M+H]+ 323;
(87)  N-アリル-3-{[(ベンジルアミノ)カルボニル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.09 ; [M+H]+ 356; 
(88)  N-(2-フェニルエチル)-3-{[(プロピルアミノ)カルボニル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 B, Rt 1.17 ; [M+H]+ 372; 
(89)  3-{[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-イソプロピル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; [M+H]+ 441;
(90)  N-エチル-3-{[4-(4-エチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 2.58 ; [M+H]+ 427; 
(91)  N-ベンジル-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.70 ; [M+H]+ 475;
(92)  N-イソプロピル-3-｛[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 2.90 ; [M+H]+ 427; 
(93)  N-エチル-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド二塩化水素化物; 方法 A, Rt 2.41 ; [M+H]+ 413; 
(94)  N-(3-フルオロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.07 ;[M+H] + 493 ;
(95)  N-(4-フルオロベンジル)-3-｛[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.04 ; [M+H]+ 493; 
(96)  N-(3-クロロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.26 ; [M+H]+510 ; 
(97)  N-(4-クロロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.27 ; [M+H]+510 ; 
(98)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-フェニル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.23 ; [M+H]+ 461; 
(99)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-(1-フェニルエチル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.22 ; [M+H]+ 489; 
(100)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-(1-フェニルプロピル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.43 ; [M+H]+ 503; 
(101)  N-(2-フルオロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.02 ; [M+H]+ 493; 
(102)  N-(2,4-ジフルオロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.36 ; [M+H]+ 511; 
(103)  N-(4-メトキシベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.06 ; [M+H]+ 505; 
(104)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[4-(トリフルオロメチル)ベンジル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.88 ; [M+H]+ 543; 
(105)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[4-(トリフルオロメトキシ)ベンジル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.98 ; [M+H]+ 559; 
(106)  N-(2-クロロベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.51 ; [M+H]+510 ; 
(107)  N-(2,6-ジエチルフェニル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.72 ; [M+H]+ 517; 
(108)  N-(2,6-ジメチルフェニル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.12 ; [M+H]+ 489; 
(109)  N-(2-クロロ-6-メチルフェニル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.30 ; [M+H]+ 510;
(110)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1S)-1-フェニルエチル]-1H- チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.25 ;[M+H] + 489 ; 
(111)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1R)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.25 ; [M+H]+ 489; 
(112)  N-ベンズヒドリル-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.07 ; [M+H]+551 ; 
(113)  N-ベンジル-N-メチル-3-｛[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.99 ; [M+H]+ 489; 
(114)  N-(2-フリルメチル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.60 ; [M+H]+ 465; 
(115)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-(チエン-2-イルメチル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.61 ; [M+H]+481 ; 
(116)  N-2,3-ジヒドロ-1H-インデン-1-イル-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.47 ; [M+H]+ 501; 
(117)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-1,2,3,4-テトラヒドロナフタレン-1-イル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.39 ; [M+H]+ 515; 
(118)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1S)-1-フェニルプロピル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.35 ; [M+H]+ 503; 
(119)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1R)-1-フェニルプロピル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.35 ; [M+H]+ 503; 
(120)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-(2-モルフォリン-4-イル-1-フェニルエチル)-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.64 ; [M+H]+ 574; 
(121)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1R)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[2,3-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.27 ; [M+H]+ 489; 
(122)  N-(2-クロロ-6-メチルベンジル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド  ビス(トリフルオロ酢酸); 方法 A, Rt 4.52 ; [M+H] + 523; 
(123)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1-メチル-1H-ピロール-2-イル)メチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.41 ; [M+H]+ 478;
(124)  N-(3-フリルメチル)-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.23 ; [M+H]+ 465; 
(125)  N-ベンジル-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5- カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.80 ; [M+H]+ 462; 
(126)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N-[(lR)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.06 ; [M+H]+ 476; 
(127)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N-[(1S)-1-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.04 ; [M+H]+ 476; 
(128)  N-ベンズヒドリル-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.03 ; [M+H]+ 538; 
(129)  N-[(1S)-2-メトキシ-1-フェニルエチル]-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.79 ; [M+H]+ 506; 
(130)  N-[l-(4-クロロフェニル)エチル]-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.61 ; [M+H]+ 511 ; 
(131)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N-[(lR)-1-フェニルプロピル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.38 ; [M+H]+ 489; 
(132)  N-(3-フルオロベンジル)-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.04 ; [M+H]+ 480; 
(133)  N-(4-フルオロベンジル)-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.01 ; [M+H]+ 480; 
(134)  N-(4-クロロベンジル)-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.43 ; [M+H]+ 496; 
(135)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N-[(1S)-2-モルフォリン-4-イル-l-フェニルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.42 ; [M+H]+ 561; 
(136)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N-[(1S)-l-フェニル-2-ピロリジン-1-イルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.68 ; [M+H]+ 545; 
(137)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-N-[(1S)-1-フェニル-2-ピロリジン-1-イルエチル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 2.46 ; [M+H]+ 558; 
(138)  N-イソプロピル-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5- カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.84 ; [M+H]+ 421;
(139)  N-エチル-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5- カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.47 ; [M+H]+ 407; 
(140)  N-{5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル}-3-フェノキシベンズアミド; 方法 A, Rt 4.45 ; [M+H]+ 462; 
(141)  4-フルオロ-N-(5-{[4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-イル]カルボニル}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル)ベンズアミド; 方法 A, Rt 3.00 ; [M+H]+ 418; 
(142)  3-(4-メチルピペラジン-1-イル)-N-{5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル} ベンズアミド ; 方法 A, Rt 2.04 ; [M+H]+ 468; 
(143)  N-(2-モルフォリン-4-イルベンジル)-3-｛[4-(トリフルオロメトキシ)ベンゾイル]アミノ}-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.11 ; [M+H]+ 546;
(144)  4-フルオロ-N-{6-メチル-5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル}ベンズアミド ; 方法 A, Rt 3.50 ; [M+H]+ 402; 
(145)  3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-N-(4-フルオロベンジル)-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.60 ;[M+H] + 427; 
(146)  N-(4-フルオロベンジル)-6-メチル-3-[(チエン-2-イルカルボニル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.40 ; [M+H]+ 415; 
(147)  N-{6-メチル-5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル}チオフェン-2-カルボキサミド;; 方法 A, 2.69 ; [M+H]+ 390; 
(148)  N-{6-メチル-5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-3-イル}-3-フェノキシベンズアミド ; 方法 A, Rt 4.76 ;[M+H] + 460; 
(149)  N-(4-フルオロベンジル)-6-メチル-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 6.40 ; [M+H]+ 501.
［例１２］
メチル3-アミノ-6-メチル-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート（50)の調製
＜工程１＞  メチル4,5-ジブロモ-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート
臭素(20 mL, 389 mmol)を、350 mLの酢酸中のメチル3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート(14.0 g, 89.6 mmol)に滴下して加えた。室温で16時間攪拌した後、反応混合物を10% (w/v)亜硫酸水素ナトリウム水溶液に滴下した。沈殿物を濾過して分離し、亜硫酸水素ナトリウム及び水で洗浄し、最後に、７０℃の真空下で乾燥させ、27.8ｇのタイトル化合物を得た。これは、続く工程で、さらなる精製なしに用いられる。
【０２２４】
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 2.55 (s, 3H), 3.84 (s, 3H)。
【０２２５】
＜工程２＞  メチル4-ブロモ-5-ホルミル-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート
イソプロピルマグネシウム塩化物(2M THF溶液, 41 mL)を、テトラヒドロフラン(250 mL)中のメチル4,5-ジブロモ-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート(23.5 gr, 74.8 mmol)に、窒素下、-４０℃で滴下した。
【０２２６】
-４０℃で３時間攪拌した後、ジメチルホルムアミド(17.5 mL, 224 mmol)を加え、そして溶液を室温にさせた。
【０２２７】
次いで、反応混合物を酢酸エチル及び塩酸水溶液に注いだ。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥して蒸発させた。得られた未精製の物質を、ｎ-ヘキサンで倍散し、17.6ｇのタイトル化合物を得た。これは、さらなる精製なしに続く工程で用いられる。
【０２２８】
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 2.54 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 10.01 (s, 1H)。
【０２２９】
＜工程３＞  メチル 4-ブロモ-5-シアノ-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート
塩酸ヒドロキシルアミン(5 g, 72 mmol)を、アセトニトリル(175 mL)及びピリジン(30 mL)中のメチル4-ブロモ-5-ホルミル-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート(16.5 g, 63 mmol)に添加した。得られた溶液を室温で２時間攪拌し、次いで、トリフルオロ無水酢酸(21.3 mL, 153 mmol)。３時間後、反応混合物を酢酸エチル及び塩酸水溶液に注いだ。有機層を分離し、塩酸及び水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ蒸発させた。得られた未精製の物質を、90 mLの水/エチルアルコール混合物(1:1)で倍散し、真空下で乾燥し、15 gのタイトル化合物を得た。これは、さらに精製することなく続く工程で用いられる。
【０２３０】
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 2.53 (s, 3H), 3.90 (s, 3H).
＜工程４＞  メチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ]-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート
トルエン(390 mL)中のメチル4-ブロモ-5-シアノ-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート(13 g, 50 mmol) 及びベンゾフェノンヒドラゾン(11.8 g, 60 mmol)の溶液を、トルエン(120 mL)中の炭酸セシウム(26 g, 80mmol), 酢酸パラジウム(365 mg, 1.6 mmol) 及び1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセンの懸濁液に、窒素下で加えた。
【０２３１】
得られた混合物を１１０℃で１６時間攪拌した。５０℃で冷却した後、混合物を濾過してトルエンを蒸発させた。得られた未精製の物質を酢酸エチルで倍散し、真空下で乾燥して13.2ｇのタイトル化合物を得た。これは、さらに精製することなく続く工程で用いられる。
【０２３２】
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 2.17 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 7.37-7. 70 (m, 10 H), 8.61 (s, 1H)。
【０２３３】
＜工程５＞  メチル3-アミノ-6-メチル-1H-チエノ［3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(150)。
【０２３４】
塩酸水溶液(180 mL, 37% 溶液), メチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ]-3-メチルチオフェン-2-カルボキシレート(13 g, 34.6 mmol),メチルアルコール(140 mL) 及びテトラヒドロフラン(100 mL)の混合物を、８０℃で１０時間攪拌した。その後、溶媒を減圧下で除去し、得られた懸濁液を濾過し、残渣をジメトキシエタンで洗浄した。
【０２３５】
固体をメチルアルコール(100 mL)に溶解し、96%  硫酸(2.5 mL)で処理した。得られた溶液を７５℃で１６時間攪拌した。
【０２３６】
溶液を冷却した後、減圧下で蒸発させて容積を小さくし、ジエチルエーテル／ｎ-ヘキサン（1：1）の混合物で抽出した。
【０２３７】
水層を５％  アンモニア水溶液で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー（溶出液  ジクロロメタン,メチルアルコール, 5% アンモニア水溶液 100: 75: 5）で精製して、4.4ｇのタイトル化合物を得た。
【０２３８】
クロマトグラフィー方法A, 2.77, [M+H]+ 212.
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 2.52 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 5.35 (bs, 2H), 12.0 (bs, 1H)。
【０２３９】
［例１３］
メチル1-アシル-3-［(アシル)アミノ］-6メチル-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレートの調製
例７に記載された方法に続き、先述の例で調製されたメチル3-アミノ-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを、適切な塩化アシルと反応させて以下の1-アシル-3-[(アシル)アミノ]-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを調製した：
(151)  メチル 1-(4-フルオロベンゾイル)-3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート;
(152)  メチル 6-メチル-1-(チエン-2-イルカルボニル)-3-[(チエン-2-イルカルボニル) アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(153)  メチル6-メチル-1- (3-フェノキシベンゾイル)-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート。
【０２４０】
［例１４］
3-［(アシル)アミノ］-6-メチル-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボン酸の調製
例８に記載された方法に続き、例１３の1-アシル-3-[(アシル)アミノ]-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを、対応する3-[(アシル)アミノ]-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸に転換した:
(154)  3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-6-メチル-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
(155)  6-メチル-3-[(チエン-2-イルカルボニル) アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 
(156)  6-メチル-3-[(3-フェノキシベンゾイル)アミノ]-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
方法 A, Rt 3.90 ; [M+H]+ 394。
【０２４１】
［例１５］
プロピル3-アミノ-1H-フロ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート(157)の調製
＜工程１＞  メチル 4,5-ジブロモ-2-フロン酸
700 mLのメタノール中の、69.91 g (0.259 mol)の4,5-ジブロモ-2-フロン酸の溶液に、 
室温で42.4 mL (0.777 mol) の98%  硫酸を注意深く添加した。混合物を７時間還流した。得られた溶液を、減圧下で濃縮してスラリーにし、0.5ＬのＭＴＢＥで希釈した。これに、0.5Ｌの30％  クエン酸三ナトリウム及び0.25Ｌの2Ｎ  ＮａＯＨの氷冷溶液を、激しく攪拌しながらゆっくり加えた。水層（ｐＨ＝６）を分離し、300ｍＬのＭＴＢＥで再度抽出した。不溶性固体（残留開始物質）を、濾過して有機抽出物から除去した。清澄抽出物を、Na2SO4で乾燥し、次いで、濃縮して乾燥させ、明るい茶色の固体を得た。これは、30ｍＬの熱ＭＴＢＥ及び60ｍＬのｎ-ヘプタンで結晶化して精製した。混合物を0/+4℃に冷却し、１時間を経て濾過し、57.13ｇのクリーム色の産物を得た。母液からさらに、12.65ｇの産物が、クロマトグラフィー（溶出液: 酢酸エチル/シクロヘキサン5:95）によって回収できた。従って、単離された産物の全量は69.78ｇであった。
【０２４２】
収率=94.8%
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.84 (s, 3H), 7.65 (s, 1H)
m.p. =56-57℃。
【０２４３】
＜工程２＞  メチル4-ブロモ-5-ホルミル-2-フロン酸
700 mLの乾燥THF中の、69.65 g (0.246 mol)のメチル4,5-ジブロモ-2-フロン酸の溶液を、アルゴン下で-45℃に冷却した。これに、141.5ｍＬ(0.282 mol)のイソプロピル マグネシウムクロリド2M (Aldrich)溶液を、-43/-48℃で45分かけてゆっくりと添加し、この混合物をさらに１時間攪拌した。得られた懸濁液を、56.8mL (0.737 mol)の無水DMF (Aldrich,H20 < 0.005%)で、30分かけて-45℃で滴下処理し、同じ温度で１５分間攪拌した。反応混合物を、ゆっくり+20℃に温め、１時間攪拌し、次いで、1.2 LのHCl 1M 及び1.0 L のMTBEの混合物にゆっくりと注いだ。水層を分離し、1.0 L 及び0.5 L のMTBEで二回抽出した。併せた有機抽出物を、濃縮して乾燥させ、57.81ｇの粗製物質を得た。これは、120 mL の熱トルエン及び230 mLのn-ヘプタンから結晶化した。得られたスラリーを、+4℃に冷却し、２時間を経て濾過して46.55ｇのベージュの固体を得た。
【０２４４】
収率= 81.3%
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.90 (s, 3H), 7.78 (s, 1H), 9.76 (s, 1H)
m.p. = 83-84℃。
【０２４５】
＜工程３＞  メチル4-ブロモ-5-シアノ-2-フロン酸
465 mLのアセトニトリル中の、46.55 g (0,20 mol)のメチル4-ブロモ-5-ホルミル-2-フロン酸の溶液に、15.28 g (0.22 mol)のヒドロキシルアミン塩酸塩を加えた。これに、96.6 mL (1.2 mol)のピリジン懸濁液を、20-25℃で、35分かけて滴下して加えた。90分間攪拌した後、ニート（neat）トリフルオロ酢酸無水物(67.72 mL, 0.48 mol)を室温で45分かけて滴下した。2.5時間攪拌した後、反応マスをHCl 1 M (0.75 L) 及び酢酸エチル(0.75 L)の混合物に注いだ；水層を、0.45 L の酢酸エチルで再び抽出した。有機抽出物を0.45 L の2 M HClで洗浄し、水層を0.3 L の酢酸エチルで逆抽出した。併せた有機抽出物を減圧下で濃縮して乾燥させた。この粗製物質を、100 mL のエタノール95°に溶解し、40°-45℃で効率的な攪拌下において、150ｍＬの水で滴下処理した。得られた懸濁液を0/+4℃で１時間冷却し、次いで濾過し、乾燥した後、44.2ｇの産物を明るいクリーム色の固体として得た。
【０２４６】
収率= 96.2%.
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.90 (s, 3H), 7.88 (s, 1H)
m. p. =75-78℃。
【０２４７】
＜工程４＞  メチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ-2-フロン酸
酢酸パラジウム(2.098 g; 9.347 mmol), DPPF(10.36 g; 18.69 mmol) 及び炭酸セシウム(85.27 g; 0.262 mmol)を、アルゴン下で乾燥した反応フラスコに入れた。予め調製された、1.2 L のトルエン中の乾燥メチル4-ブロモ-5-シアノ-2-フロン酸 (43.00 g, 0.187 mol) 及びベンゾフェノンヒドラゾン(44.02 g, 0.224 mol)の溶液を、カニューレを介して反応フラスコ内に移した。得られた懸濁液を、アルゴン下の100-104℃で４５時間、強力に攪拌した。反応混合物を約７０℃に冷却し、65 gのディカライト（Dicalite）(R)を加え、濾過した；パネルを熱トルエン（400 mL）で二回洗浄した。ろ液を真空下で濃縮して容積を小さくし、+4℃で１８時間維持した。固体を濾過して回収し、60ｍＬのトルエンで洗浄して53.52ｇの黄色がかった産物を得た。
【０２４８】
収率＝ 82.8%
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.84 (s, 3H), 7.09 (s, 1H), 7.34-7. 68 (m,10H), 9.60 (s, 1H)
m. p. =206-208℃  dec。
【０２４９】
＜工程５＞  プロピル 3-アミノ-1H-フロ［3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(157)
1.12 L のn-プロパノール中の、56.01 g (0.1624 mol)のメチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ]-2-フロン酸溶液に、115 mL (2.1 mol)の98% 硫酸をゆっくり加えた。得られた混合物を２時間還流して清澄な茶色の溶液を得た。反応マスを減圧下で濃縮して容積を小さくし、0/+4℃に冷却して、1.1 Lの25% クエン酸三ナトリウム二水和物溶液で90分かけて、効率的な攪拌下でゆっくりと希釈した。混合物（ｐＨ＝４）を、600ｍＬのシクロヘキサンで三回抽出した。有機抽出物を処分し、一方、水層を0/+4℃に冷却して、1 L の10% 重炭酸ナトリウム水溶液を、そして最後に、82 mLのN-メチルモルフォリンを注意深く加えてpH 6-7にした。得られた懸濁液を0/+2℃で４時間経過させ、次いで濾過して、水を通過させて洗浄し、乾燥した後、21.35ｇの産物を明るい茶色の固体として得た。
【０２５０】
収率＝ 62.8%.
クロマトグラフィー方法A  RT=3.6min  [M+H]+=210.
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 0.97 (t, 3H), 1.67-1. 76 (m, 2H), 4.24 (t, 2H), 5.13 (s, 2H), 7.31 (s, 1H), 11.34 (bs, 1H)
m. p. = 147-149 ℃  dec。
【０２５１】
［例１６］
プロピル  1-アシル-3-(アシルアミノ)-1H-フロ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレートの調製
例７に記載された方法と同様に、プロピル3-アミノ-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを適切な塩化アシルで処理して、以下の、プロピル1-アシル-3-(アシルアミノ)-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを調製した：
(158)  プロピル1-(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)-3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(159)  プロピル 1-[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]-3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート; 
(160)  プロピル l-(4-フルオロベンゾイル)-3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート。
【０２５２】
［例１７］
3-(アシルアミノ)-1H-フロ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボン酸の調製
上記例において調製された、プロピル1-アシル-3-(アシルアミノ)-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレートを、例８に記載された方法に続いて加水分解し、対応する3-(アシルアミノ)-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸を得た：
(161)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸;
[M+H] + 357; 
(162)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル]アミノ}-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5- カルボン酸; [M+H]+ 370; 
(163)  3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸; 方法 A, Rt 2. 18;[M+H] + 370。
【０２５３】
［例１８］
3-(アシルアミノ)-1H-フロ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキサミドの調製
例１１に記載された方法に続き、例１７の3-(アシルアミノ)-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボン酸を、適切なアミンと反応させて以下の化合物を得た：
(164)  3-[(4-モルフォリン-4-イルベンゾイル)アミノ]-N- [-1-フェニルプロピル]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.40 ; [M+H]+ 474; 
(165)  3-{[4-(4-メチルピペラジン-1-イル)ベンゾイル] アミノ}-N-[1-フェニルプロピル]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 3.48 ; [M+H]+ 487; 
(166)  3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-N-[(1-フェニルプロピル]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5- カルボキサミド; 方法 A, Rt 5.48 ; [M+H]+ 407; 
(167)  4-フルオロ-N-{5-[(4-メチルピペラジン-1-イル)カルボニル]-1H-フロ[3,2-c] ピラゾール-3-イル}ベンズアミド ; 方法 A, Rt 2.19 ; [M+H]+ 372; 
(168)  3-[(4-フルオロベンゾイル)アミノ]-N-[2-モルフォリン-4-イル-1-フェニルエチル]-1H-フロ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキサミド; 方法 A, Rt 4.43 ; [M+H]+ 372。
【０２５４】
［例１８］
メチル 3-アミノ-1H-チエノ［3,2-c］ピラゾール-5-カルボキシレート(5)の調製
＜工程１＞  メチル4,5-ジブロモ-2-チオフェンカルボキシレートの調製
235 mL のメタノール中の、23.75 g (83.06 mmol) の 4,5-ジブロモ-2-チオフェンカルボン酸の懸濁液に、室温で、15.5 mL (284 mol) の 98% 硫酸をゆっくり加えた。この混合物を２３時間還流した。得られた溶液を減圧下で濃いスラリーに濃縮し、240ｍＬのジクロロメタンで希釈した。これに、強力に攪拌しながら190 mLの17%  NaOHの氷冷溶液をゆっくり加えた。水層を分離し、120ｍＬのジクロロメタンで再び抽出した。併せた有機抽出物を、Na2SO4で乾燥させ、次いで濃縮して乾燥させ、24.02ｇの産物をオフホワイト固体として得た。
【０２５５】
収率=96.4%
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.81 (s, 3H), 7.79 (s, 1H)
m.p. =79-80℃。
【０２５６】
＜工程２＞  4-ブロモ-5-ホルミルチオフェン-2-カルボキシレートの調製
190mLの乾燥THF中の、23.45 g (78.17 mmol)のメチル4,5-ジブロモ-2-チオフェンカルボキシレートの溶液を、アルゴン下で-35/-40℃に冷却した。この溶液に、43 mL (86 mmol)のイソプロピルマグネシウムクロリド2M (Aldrich)を、-35/-40℃で１時間かけて滴下し、この混合物をさらに１時間攪拌した。得られた明るい茶色の溶液を、17.14 g (18.0 mL; 234.5 mol)の無水DMFで、-35/-40℃で３０分かけて滴下処理し、同じ温度で１５分攪拌した。次いで、反応混合物をゆっくり+20℃まで温め、さらに１時間同じ温度で攪拌した。反応マスを、強力に攪拌しながら、230 mLのHCl 1M及び230 mLのMTBEの混合物にゆっくり注いだ；水層を分離し、200 mLのMTBEで再び抽出した。併せた有機抽出物を、Na2SO4で乾燥させ、濃縮して乾燥させ、20.14ｇの未精製産物を得た。これを、３時間攪拌しながら80ｍＬのｎ-ヘキサンで処理した。精製産物(16.5 g)を吸引によって単離し、オフホワイト固体として得た。
【０２５７】
収率＝ 84.5%
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.86 (s, 3H), 7.98 (s, 1H), 9.90 (s, 1H)
m. p. =92-93 ℃
＜工程３＞  メチル4-ブロモ-5-シアノチオフェン-2-カルボキシレートの調製
165 mL のアセトニトリル中の、16.48 g (66.17 mmol)のメチル4-ブロモ-5-ホルミルチオフェン-2- カルボキシレート溶液に、5.06 g (72.78 mmol)のヒドロキシルアミン塩酸塩を加えた。これに、32.05 mL (397 mmol)のピリジン懸濁液を、20-25℃で２０分間かけて滴下した。９０分攪拌した後、ニートのトリフルオロ酢酸無水物(22.5 mL, 158.8 mmol)を室温で３０分かけて滴下した。２．５時間攪拌した後、反応マスを、HCl 0.5 M (200 mL) 及び酢酸エチル(150 mL)の混合物に注いだ；水層を、150 mLの酢酸エチルで再び抽出した。併せた有機抽出物を、減圧下で濃縮して、120 mLのHCl 1 Mで再び洗浄した。有機物を真空下で濃縮して、未精製産物を得た。この粗製物質は、75ｍＬのエタノール中に取り、効果的な攪拌下で、75ｍＬの水で処理した。得られた懸濁液を0/+4℃に冷却し、次いで、濾過して、15.4 gの産物を明るいクリーム色の固体として得た。
【０２５８】
収率＝ 94.8% ;
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.88 (s, 3H), 8.02 (s, 1H)
m.p.= 102-103℃。
【０２５９】
＜工程４＞  メチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ]チオフェン-2 カルボキシレートの調製
酢酸パラジウム(375 mg; 1.67 mmol), DPPF(1.85 g; 3.34 mmol) 及び炭酸セシウム(27.2 g; 83.5 mmol)を入れたフラスコを空にし、アルゴンで３倍に充填し（backfilled）、次いで７０ｍＬのトルエンを、攪拌しながらカニューレを介して加えた。１５分後、予め調製された470 mL のトルエン中の、メチル4-ブロモ-5-シアノチオフェン-2-カルボキシレート(13.70 g,55. 67 mmol)及びベンゾフェノンヒドラゾン(13.11 g, 66.8 mmol)の乾燥溶液を、フラスコ内にカニューレを介して移し、得られた懸濁液を、アルゴン下の100℃で16時間攪拌した。
【０２６０】
得られた混合物を、60℃に冷却し、濾過し、パネルを熱トルエンで２回洗浄した。濾液を真空下で濃縮して、黄茶固体を得た。この粗製物質を、70ｍＬの酢酸エチルと共に室温で１時間攪拌し、次いで、この固体を濾過して、16.78ｇのタイトル化合物を得た。
【０２６１】
収率＝ 83.4%,
1H-NMR (DMSO-d6): ppm 3.82 (s, 3H), 7.30-7. 65 (m, 11H), 10.02 (s, 1H), 
m. p. = 178-180℃
＜工程５＞  メチル 3-アミノ-1H-チエノ[3,2-c]ピラゾール-5-カルボキシレート(5)の調製
312 mlのTHF及び110 mLのメタノールの中の、18.41 g (50.94 mmol)のメチル5-シアノ-4-[2-(ジフェニルメチレン)ヒドラジノ]チオフェン-2-カルボキシレート溶液に、110 mLの37% 塩酸をゆっくり加えた。得られた混合物を１４時間還流し、清澄な黄色溶液を得た。産物の適切な部分は遊離酸として存在し、産物全体の約３０％である。
【０２６２】
反応マスを真空下で濃縮して有機溶媒を除去した；得られた懸濁液を+4℃で18時間維持し、次いで濾過して、メチルエステル及び遊離酸の混合物を含有する、10.10ｇの結晶産物を得た。
【０２６３】
この固体を、150ｍＬのメタノールに溶解し、3.5ｍＬの濃硫酸で処理し、２４時間還流した。混合物を濃縮して容積を小さくして懸濁液を得た。これは、130ｍＬの水で希釈し、強力に攪拌しながら、ｐＨ＝7〜8に達するまで、トリエチルアミン(14 mL)で慎重に処理した。反応混合物を+4℃で１８時間維持し、次いで、濾過して、パネルを水で洗浄し、7.63ｇの精製産物を、黄色がかった固体として得た。
【０２６４】
収率＝ 76.0%, クロマトグラフィー方法A, RT= 2.8 分  物理化学データは、例３の方法で調製された化合物と同じであった。
【０２６５】
［生物学的試験例１］
以下の化合物は、上記薬理学の節で記載された方法に従ってスクリーニングされたものであり、オーロラ-2阻害のＩＣ50値が100 nMより下のものを示した：
52; 57; 66; 79; 82; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 99; 100; 101; 102; 104; 106; 107; 108; 109; 110; 111; 112; 113; 114; 115; 116; 117; 118; 119; 120; 121; 122; 123; 124; 125; 126; 127; 128; 129; 130; 131; 132; 133; 134; 135; 136; 137; 146; 161; 162; 163; 164; 165。
【０２６６】
［生物学的試験例２］
以下の化合物は、上記薬理学の節で記載された方法に従ってスクリーニングされたものであり、cdk2/サイクリンA阻害のＩＣ50値が500 nMより下のものを示した：
57; 63; 65; 79; 84; 85; 86; 87; 93; 114; 119; 121; 124; 145; 146; 161; 164; 165; 167。
【０２６７】
［生物学的試験例３］
以下の化合物は、上記薬理学の節で記載された方法に従ってスクリーニングされたものであり、cdc 7阻害のＩＣ50値が1000 nMより下のものを示した：
52; 57; 92; 93; 95; 101; 102; 114; 115; 121; 123; 124; 137; 161; 162; 165.
［生物学的試験例４］
以下の化合物は、上記薬理学の節で記載された方法に従ってスクリーニングされたものであり、PAK4阻害のＩＣ50値が500 nMより下のものを示した：
52; 91; 93; 95; 96; 99; 100; 101; 102; 111; 114; 115; 119; 121; 125; 129; 131; 132; 133; 137; 163; 164。
【国際調査報告】
2006501191.tif 000036
2006501191.tif 000037
2006501191.tif 000038
2006501191.tif 000039
2006501191.tif 000040
2006501191.tif 000041