(57)【要約】本発明は、一般式Ｉ        Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１                    （Ｉ）（式中、Ｐ４は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換ベンジルスルホニル基であり、Ｐ３は、Ｄ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ２は、Ｌ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ１は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン基である）で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、血漿カリクレイン（ＰＫ）、第ＸＩａ因子および第ＸＩＩａ因子を阻害するための、特に合成表面での凝固の活性化を阻害するための、および抗凝固薬／抗血栓薬としての全身的投与のための、特に血栓塞栓性現象を防ぐ目的のために合成表面での凝固の活性化を防止するための使用。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉ
Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１                    （Ｉ）
（式中、Ｐ４は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換ベンジルスルホニル基であり、Ｐ３は、Ｄ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ２は、Ｌ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ１は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン基である）
で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、血漿カリクレインおよび／または第ＸＩａ因子および／または第ＸＩＩａ因子を阻害するための使用。
【請求項２】
血漿カリクレインを阻害するための、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
置換Ｐ４、Ｐ３、Ｐ２および／またはＰ１における置換基が
（ａ）水素、および／または
（ｂ）ハロゲン、好ましくはフッ素、塩素および／または臭素、および／または
（ｃ）１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アルキル基、特にメチル、または１〜１０個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アラルキル基、ここで、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルで適切にエステル化されている場合は、置換された分枝もしくは線状アルキル基またはアラルキル基の置換基は、好ましくはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノおよび／またはカルボキシル基である、
（ｄ）ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノ、メチルオキシカルボニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、アミノメチルまたはグルタリルまたはスクシニルアミドメチル基、および／または低級アルキル基、特にメチルまたはエチルで適切にエステル化されている場合は、オキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基、あるいは非置換アミドまたはアルキルまたはアリール基で置換されたアミドとして存在する、オキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基
であることを特徴とする、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
リンカー基がまたＰ４またはＰ２に結合し、リンカー基が、請求項３で定義したとおりの置換基によって、特に−ＮＨ−または−ＣＯ−基によって、Ｐ４に結合しているか、あるいはＰ２の官能基に直接結合し、リンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり、Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖であり、特にポリ−もしくはオリゴエチレン−またはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端で置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端において１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、特にメチル、で変性されており、リンカー基が置換基によってＰ４に結合しているとき、置換基は好ましくは−ＮＨ−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＮＨ−アルキル基、−ＣＯ−基、２〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−アルキル基、特に−ＣＯ−メチル基、１〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−Ｏ−アルキル基、特にメチル基、−Ｓ−基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｓ−アルキル基、特にメチル基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｏ−アルキル基、特にメチル基、−ＳＯ２−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＳＯ２−アルキル基、特にメチル基、であり、リンカー基がＰ２に結合しているとき、Ｐ２は、好ましくは、
（ａ）リシンまたは側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にオルニチン、ホモリシン、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸またはα−ジアミノグリシン、あるいは
（ｂ）グルタミン酸または側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にアスパラギン酸、グルタミン酸またはホモグルタミン酸、あるいは
（ｃ）システインまたはホモシステイン、あるいは
（ｄ）セリンまたはトレオニン
であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
リンカー基がＰ４に結合するために置換基と一緒になって、一般式ＩＩ
Ｕ−Ｚ−Ｙ−Ｘ−                    （ＩＩ）
（式中、
Ｕは、Ｈ２Ｎ−、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−、ＨＯＯＣ−、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−ＣＯ−またはＨＳ−基であり、Ｚは−（ＣＨ２）ｎ−であり、ｎ＝１〜１０、特にｎ＝１〜５であるか、あるいはＺは、一般式−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−または−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−のオリゴ−またはポリアルキレングリコールであり、ｄ＝１、２、３または４、ｖ＝１〜１０００の整数、好ましくは１〜５０、特に２〜１０、ｍ＝０、１、２、３または４、そしてｋ＝０または１であり、あるいは
ＵはＣＨ３−Ｏ−基であり、Ｚは、一般式−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−または−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−のオリゴ−またはポリアルキレングリコールであり、ｄ＝１、２、３または４、ｖ＝１〜１０００の整数、好ましくは１〜５０、特に２〜１０、ｍ＝０、１、２、３または４、そしてｋ＝０または１であり；
Ｙは、−ＣＯ−ＮＨ−基、−ＮＨ−ＣＯ−基、−ＳＯ２−ＮＨ−基、−ＮＨ−ＳＯ２−基、−Ｓ−Ｓ−基または−Ｓ−基であり、ＵおよびＺが存在しなければ、Ｈ２Ｎ−基、ＨＯＯＣ−基、ＨＳ−基、ＨＯ−基またはハロゲノアルキル基であり；
Ｘは、−（ＣＨ２）ｎ−であり、ｎ＝０、１、２、３または４、特にｎ＝１であるか、あるいは酸素によるベンジル基への結合を有する−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−基であり、ｎ＝０、１、２、３または４であり；
ベンジル基のフェニル環へのリンカー基の結合は、Ｘが存在するならば、Ｘから生じ、あるいはＸが存在しないならば、Ｙから生じる）
を表す、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
リンカー基がＰ４に結合しているならば、Ｐ２は、グリシン、アラニン、セリン、プロリン、ホモプロリンまたはアゼチジンカルボン酸であることを特徴とする、請求項４または５に記載の使用。
【請求項７】
リンカー基がＰ２に結合し、Ｐ２が式ＩＩＩ
【化１】
2006516277.tif 000041
［式中、ｑ＝１、２、３、４または５であり、Ｄは式ＩＶ
Ｕ−Ｚ−Ｙ−                    （ＩＶ）
（式中、Ｕ、ＺおよびＹは請求項５に記載の式ＩＩにおけるのと同じ意味を有する）
である］
を表すことを特徴とする、請求項４に記載の使用。
【請求項８】
アシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンが一般式ＶまたはＶＩ
【化２】
2006516277.tif 000042
（式中、
ｍ＝１〜３、ｑ＝０または１、特に０であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４は、
（ａ）水素、および／または
（ｂ）ハロゲン、好ましくはフッ素、塩素および／または臭素、および／または
（ｃ）１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アルキル基、特にメチル、ここで、置換、分枝または線状アルキル基の置換基は、好ましくは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノおよび／またはカルボキシル基であり、適切ならば、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルでエステル化される、および／または
（ｄ）ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノ、メチルオキシカルボニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、アミノメチルまたはグルタリルまたはスクシニルアミドメチル基、および／または、適切な場合、低級アルキル基、特にメチルもしくはエチルでエステル化されているオキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルもしくはカルボキシエチル基、または、非置換アミドまたはアルキルもしくはアリール基で置換されているアミドとして存在するオキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基
であり、および／または
Ｒ１および／またはＲ３はリンカー基でもよく、リンカー基は請求項３で定義したとおりの置換基によって、特に−ＮＨ−または−ＣＯ基によって、Ｐ４に結合しているか、あるいはＰ２の官能基に直接結合しており、リンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり、Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖、特にポリ−もしくはオリゴエチレンまたはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端においてＣＨ３で変性されている。
Ｒ１は請求項５で定義したとおりの式（ＩＩ）を表し、Ｐ２はＲ３と共に請求項７で定義したとおりの式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）を表し、
Ｒ４は特に好ましくはヒドロキシル、アミノおよびアルコキシカルボニルである）
で表されることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項９】
請求項５で定義したとおりの式ＩＩのＰ４にリンカー基を有する一般式Ｉで表される化合物が、次の構造：
【化３】
2006516277.tif 000043
（式中、ｎ＝１〜１０、ｍ＝１〜３およびｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項８に記載の意味を有する）
の１つを表すことを特徴とする、請求項１〜６または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
請求項５で定義したとおりの一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉの化合物が、次の構造：
【化４】
2006516277.tif 000044
（式中、ｎ＝１〜１０００、ｍ＝１〜３、ｒ＝０〜３およびｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項８に記載の意味を有する）
の１つを表すことを特徴とする、請求項１〜６または８の少なくとも１項に記載の使用。
【請求項１１】
請求項５で定義したとおりの一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉの化合物が、次の構造：
【化５】
2006516277.tif 000045
または
【化６】
2006516277.tif 000046
（式中、ｐ＝０、１、２または３、ｑ＝０または１、特に０であり、ｎ＝１〜１０００およびｍ＝１〜３であり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、請求項８に記載の意味を有する）
の１つを表すことを特徴とする、請求項１〜６または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
請求項７で定義したとおりの一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表される化合物が、次の構造：
【化７】
2006516277.tif 000047
（式中、ｎ＝０〜５、好ましくは１または２）
または
【化８】
2006516277.tif 000048
（式中、ｎ＝０〜１１）
または
【化９】
2006516277.tif 000049
（式中、ｎ＝１〜６）
または
【化１０】
2006516277.tif 000050
（式中、ｎ＝０〜３およびｍ＝０〜１０００）
または
【化１１】
2006516277.tif 000051
（式中、ｎ＝０〜１０００）
または
【化１２】
2006516277.tif 000052
（式中、ｎ＝１〜３およびｍ＝０〜１０００）
（いずれの場合も、ｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２およびＲ４は、請求項８に記載の意味を有する）
の１つを表すことを特徴とする、請求項１、２、３、４、７または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
請求項７で定義したとおりの一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表される化合物が、次の構造：
【化１３】
2006516277.tif 000053
（式中、ｎ＝０〜４およびｍ＝１０〜１０００）
または
【化１４】
2006516277.tif 000054
（式中、ｎ＝１〜４、ｐ＝２〜４およびｍ＝１〜１０００）
または
【化１５】
2006516277.tif 000055
または
【化１６】
2006516277.tif 000056
（式中、ｎ＝１〜３およびｍ＝１０〜１０００）
（ここで、ｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２およびＲ４は、いずれの場合も、請求項８に記載の意味を有する）
の１つを表すことを特徴とする、請求項１、２、３、４、７または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
Ｐ４における置換基がＨ、ハロゲン、アミノ基、ヒドロキシル基、または１〜６個の炭素原子を有する線状もしくは分枝アルキル基であることを特徴とする、合成表面への結合がＰ２によって行われる、請求項１、２、３、４、７、８、１２または１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
請求項５で定義したとおりの一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉの化合物が次の構造
【化１７】
2006516277.tif 000057
を表し、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｃｈａは、特に、さらにＤ−ＰｈｅまたはＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）でもよく、Ｐ４におけるグルタリルはスクシニルでもよいことを特徴とする、請求項４〜６または８〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
一般式Ｉの化合物が次の構造
【化１８】
2006516277.tif 000058
を表し、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）は、特に、Ｄ−ＣｈａまたはＤ−Ｐｈｅでもよく、Ｐ２におけるスクシニルはグルタリルでもよいことを特徴とする、請求項１、２、３、４、８、１２または１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
一般式Ｉの化合物が、次の構造：
【化１９】
2006516277.tif 000059
の１つを表し、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｃｈａは、特に、Ｄ−ＰｈｅまたはＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）でもよいことを特徴とする、請求項１、２、３、４、７、８、１２または１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
一般式Ｉにおいて、Ｐ４が芳香族基に基Ｒを有し、Ｐ３がＤ−Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｄ−ＰｈｅまたはＤ−Ｃｈａであり、そしてＰ２が天然または非天然アミノ酸Ａａａであり、ここで、Ｒは、Ｈ−、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＯＯＨ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＯＯＭｅ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＡＭｅ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−グルタリル−ＡＭｅ、または４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＮであり、ＡａａはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｈＧｌｕ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅまたはｈＰｈｅであることを特徴とする、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
Ｐ３がＤ−Ｓｅｒであるとき、Ａａａが好ましくは、Ｇｌｎ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅ、特にＬｙｓ（Ｚ）であり、ＲがＨであるか、またはＡａａがＡｌａもしくはＳｅｒであるとき、ＲがＨＯＯＣ−である；
あるいは、Ｐ３がＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）であるとき、ＡａａがＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅ、特にＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅであり、そしてＲがＨであるか、またはＡａａがＧｌｙもしくはＡｌａであるとき、ＲがＨＯＯＣ−であるか、またはＡａａがＰｒｏであるとき、ＲはＣＮ−である；
あるいは、Ｐ３がＤ−Ｃｈａであるとき、ＡａａがＬｙｓもしくはＧｌｕであり、そしてＲがＨであるか、またはＡａａがＰｒｏであるとき、Ｒがグルタリル−ＡＭｅであり、特に、Ａａａが−ＮＨ−ＣＨ−［ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）３−［Ｏ−（ＣＨ２）２］３−ＣＨ２−ＮＨ２］−ＣＯ−であるとき、ＲがＨである
ことを特徴とする、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンが塩の形、特に鉱酸、例えば硫酸または塩酸の塩として、あるいは適当な有機酸、例えば酢酸、ギ酸、メチルスルホン酸、コハク酸、マレイン酸またはトリフルオロ酢酸の塩、特に塩酸塩、硫酸塩または酢酸塩として存在することを特徴とする、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに結合しているリンカー基のＨ２Ｎ基が、ジカルボン酸無水物、好ましくはコハク酸またはグルタル酸の無水物と反応して、ＨＯＯＣ基を形成することができ、あるいはアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに結合しているリンカー基のＨＯＯＣ−基がジアミンと反応してＨ２Ｎ基を保持することができることを特徴とする、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
Ｐ４またはＰ２に共有結合しているリンカー基が、第２官能基、特に置換もしくは非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基の存在下で、合成表面に共有結合しているか、あるいはリンカー基がオリゴ−またはポリアルキレングリコールであるならば、式Ｉの第２分子に共有結合していることを特徴とする、請求項１〜１０、１２または１４〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２３】
Ｐ４またはＰ２に共有結合しているリンカー基が、Ｐ４またはＰ２に結合していない端で、１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、特にメチルで、または式Ｉの第２分子で、変性することができるオリゴ−またはポリアルキレングリコールであり、リンカー基はそれとの相互作用によって合成表面に非共有結合することができることを特徴とする、請求項１〜８、１１、１３または１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
合成表面が、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ポリ（エーテルスルホン）、ポリ（アリールエーテルスルホン）、再生セルロース、キュプロファン、ヘモファン、ポリ（スルホン）、ポリ（アクリロニトリル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（カーボネート）、ポリ（アミド）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチレン−コ−ビニルアルコール）、あるいは表面が血液と接触する透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜のような装置および／またはそれらの装置に付属するホース系および／またはエアートラップに用いられる別の材料で構成され、表面材料は、Ｐ４またはＰ２へ結合したリンカー基によって式Ｉの分子が共有結合するために、官能基、例えばアミノ基、アミノアルキル基、カルボキシル基、カルボキシアルキル基、メルカプト基、メルカプトアルキル基、ヒドロキシル基またはヒドロキシアルキル基で任意に変性されていることを特徴とする、請求項２２または２３に記載の使用。
【請求項２５】
例えば、透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜のような装置および／またはそれらの装置に付属するホース系および／またはエアートラップの、合成表面で血液が凝固するのを妨げる、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２６】
請求項４〜２３のいずれか１項で定義したとおりのリンカー基により合成表面を共有または非共有被覆することによって、合成表面で血液が凝固するのを妨げる、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
請求項１〜２３のいずれか１項で定義したとおりのアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、心筋梗塞、脳卒中、塞栓症、例えば股関節手術および／または膝関節交換後の深脚静脈血栓症、血管形成術、特に経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）の結果としての不安定アンギナまたは合併症を予防および／または治療する抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造への使用。
【請求項２８】
請求項１〜２３のいずれか１項で定義したとおりのアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、播種性静脈内凝固、敗血症性ショック、アレルギー、胃切除後症候群、関節炎およびＡＲＤＳ（成人の呼吸窮迫症候群）を予防および／または治療する抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造への使用。
【請求項２９】
請求項１〜２２のいずれか１項で定義したとおりのアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、非経口使用形での、特に動脈内、静脈内、筋肉内または皮下の形での、腸用形での、特に経口または直腸使用用の、または局所使用形の、特に皮膚治療薬としての、血漿カリクレインおよび／または第ＸＩＩａ因子および／または第ＸＩａ因子を阻害するための薬剤製造への使用。
【請求項３０】
血漿カリクレインを阻害するための請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
請求項１〜２１のいずれか１項で定義したとおりのアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、特に錠剤、糖衣錠、カプセル、ペレット、座薬、溶液、特に注射または注入溶液、点眼液、点鼻液、ジュース、カプセル、エマルジョンまたは懸濁液、丸薬、棒状薬、エーロゾル、粉剤、ペースト、クリーム、軟膏の形の、血漿カリクレインおよび／または第ＸＩＩａ因子および／または第ＸＩａ因子を阻害するための薬剤製造への使用。
【請求項３２】
血漿カリクレインを阻害するための請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
Ｒ４が、特に、ＨＯであり、そしてＲ１およびＲ３がオリゴ−またはポリアルキレン基ではない請求項８で定義したとおりの一般式ＶまたはＶＩで表されるアシル化アミジノベンジルアミンの、活性化合物が経口投与用のプロドラッグの形で存在する請求項２７〜３２のいずれか１項で定義したとおりの抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造への使用。
【請求項３４】
アシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミン、特に請求項４〜２３で定義したとおりのＰ４〜Ｐ２にリンカー基を有する一般式Ｉのアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンが、トロンビン、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＶＩＩａ因子、ウロキナーゼ、トリプターゼおよびプラスミンのような他のトリプシン様セリンプロテアーゼ並びに補体系のトリプシン様セリンプロテアーゼを阻害するために用いられることを特徴とする、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
リンカー基がやはりＰ４またはＰ２に結合しており、リンカー基は請求項３で定義したとおりの置換基によって、特に−ＮＨ−または−ＣＯ−基によって、Ｐ４に結合しているかあるいはＰ２の官能基に直接結合しており、リンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり、Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖であり、特にポリ−もしくはオリゴエチレン−またはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し他方の末端においてＣＨ３で変性されており、リンカー基が置換基によってＰ４に結合しているとき、置換基は好ましくは−ＮＨ−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＮＨ−アルキル基、−ＣＯ−基、２〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−アルキル基、特に−ＣＯ−メチル基、１〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−Ｏ−アルキル基、特にメチル基、−Ｓ−基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｓ−アルキル基、特にメチル基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｏ−アルキル基、特にメチル基、−ＳＯ２−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＳＯ２−アルキル基、特にメチル基、であり、リンカー基がＰ２に結合しているとき、Ｐ２は、好ましくは、
（ａ）リシンまたは側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にオルニチン、ホモリシン、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸またはα−ジアミノグリシン、あるいは
（ｂ）グルタミン酸または側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にアスパラギン酸、グルタミン酸またはホモグルタミン酸、あるいは
（ｃ）システインまたはホモシステイン、あるいは
（ｄ）セリンまたはトレオニン
であることを特徴とする、一般式Ｉ
Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１                    （Ｉ）
（式中、Ｐ４は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換ベンジルスルホニル基であり、Ｐ３は、Ｄ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ２は、Ｌ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ１は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミド基である）で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項３６】
Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基がオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖であり、特にポリ−もしくはオリゴエチレン−またはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端において１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、特にメチル、で変性されていることを特徴とする、請求項３５に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項３７】
請求項８で定義したとおりの一般式ＶまたはＶＩを示すことを特徴とする、請求項３５または３６に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン：
【化２０】
2006516277.tif 000060
（式中、
ｍ＝１〜３、ｑ＝０または１、特に０であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４は、
（ａ）水素、および／または
（ｂ）ハロゲン、好ましくはフッ素、塩素および／または臭素、および／または
（ｃ）１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アルキル基、特にメチル、ここで、置換、分枝または線状アルキル基またはアラルキル基の置換基は、好ましくは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノおよび／またはカルボキシル基であり、適切ならば、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルでエステル化される、および／または
（ｄ）ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノ、メチルオキシカルボニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、アミノメチルまたはグルタリルまたはスクシニルアミドメチル基、および／または、適切な場合、低級アルキル基、特にメチルもしくはエチルでエステル化されているオキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルもしくはカルボキシエチル基、または、非置換アミドまたはアルキルもしくはアリール基で置換されているアミドとして存在するオキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基
であり、および／または
Ｒ１および／またはＲ３はリンカー基でもよく、リンカー基は請求項２で定義したとおりの置換基によって、特に−ＮＨ−または−ＣＯ基によって、Ｐ４に結合しているか、あるいはＰ２の官能基に直接結合しており、リンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり、Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖、特にポリ−もしくはオリゴエチレンまたはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端において１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、特にメチル、で変性されており、および／または
Ｒ１は請求項５で定義したとおりの式（ＩＩ）を表し、Ｐ２はＲ３と共に請求項７で定義したとおりの式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）を表し、
Ｒ４は特に好ましくはヒドロキシル、アミノおよびアルコキシカルボニルである）。
【請求項３８】
Ｐ４のリンカー基を示し、請求項９、１０、１１または１５で定義したとおりの構造を示すことを特徴とする、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項３９】
Ｐ２のリンカー基を示し、請求項１２、１３または１７で定義したとおりの構造を示すことを特徴とする、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項４０】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンが合成表面に共有結合または非共有結合していることを特徴とする、一般式Ｉ
Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１                    （Ｉ）
（式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４は請求項１〜２３に記載の意味を有する）
で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項４１】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンが、アミドもしくはスルホンアミド結合、ジスルフィドブリッジまたはメルカプト基のアルキル化によって、特にアミド結合によって、合成表面に共有結合していることを特徴とする、請求項４０に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項４２】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンがオリゴ−またはポリアルキレングリコール基、特にオリゴ−またはポリエチレングリコール基、の相互作用によって合成表面に非共有結合していることを特徴とする、請求項４０に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン。
【請求項４３】
表面が、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンで、あるいは請求項１〜２３の少なくとも１項で定義したとおりのアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンで、共有または非共有被覆されていることを特徴とする、合成表面。
【請求項４４】
請求項４３に記載の合成表面を含む装置。
【請求項４５】
装置が、透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜であることを特徴とする、請求項４４に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、一般式Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１（Ｉ）（式中、Ｐ４は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換ベンジルスルホニル基であり、Ｐ３は、Ｄ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ２は、Ｌ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ１は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン基である）で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、血漿カリクレイン（ＰＫ）を阻害するための使用に関する。これに関連して、新規なＰＫ阻害剤は、血栓塞栓性現象を防ぐために、合成表面での凝固の活性化防止のため、および抗凝固薬／抗血栓薬としての全身的投与のため、特に合成表面での凝固の活性化防止のために用いられる。
【０００２】
本発明はさらに、それら自体新規なアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに関し、好ましいのは、特に、Ｐ２またはＰ４にリンカー基を有するものであり、これらのリンカー基は、好ましくは、特に、オリゴ−またはポリアルキレングリコールである。
【０００３】
本発明はまた、上記アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、第ＸＩａ因子および第ＸＩＩａ因子を阻害するための使用に関する。トロンビンおよびプロトロンビンを阻害するために上記化合物を使用することも本発明の文脈内で説明する。
【０００４】
ＰＫは、いくつかの生理学的物質が知られている多官能性チロシン様セリンプロテアーゼである。すなわち、ＰＫは、たんぱく分解性開裂によって、血管作動性ペプチドブラジキニンを高分子量キニノーゲンから解き放ち、プロテアーゼ凝固第ＸＩＩ因子、プロウロキナーゼ、プラスミノゲンおよびＰｒｏ−ＭＭＰ３を活性化する。従って、ＰＫ／キニン系は様々な症状、例えば、血栓塞栓状態、播種性静脈内凝固、敗血症性ショック、アレルギー、胃切除後症候群、関節炎およびＡＲＤＳ（成人の呼吸窮迫症候群）において重要な役割を演じていると思われる（Tada等, Biol. Pharm. Bull 24, 520-524, 2001）。
【０００５】
凝固第ＸＩＩ因子が活性化し、これによってそれが第ＸＩＩａ因子へ変換する結果、ＰＫは固有の凝固カスケードの活性化に特別な役割を演じる。腺外血液循環に存在する血液が合成表面と、例えば血液透析でまたは酸素発生器の使用で接触すると、固有の凝固カスケードは活性化することができる。第ＸＩＩ因子が、特に負に帯電した表面および合成表面に結合した結果、固有の凝固カスケードは、自己活性化によってまたは微量のＰＫによって誘発される（Kapkan, Prog. Hemostasis Thromb. 4,127-175, 1978）。活性化第ＸＩＩ因子（Ｆ  ＸＩＩａ）は血漿プレカリクレインのＰＫへの変換を触媒し、これは、正のフィードバックの意味で、第ＸＩＩａ因子のさらなる形成をもたらす（Griffin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75, 1998-2002, 1978）。固有の凝固カスケードの初期段階における第ＸＩＩａ因子およびＰＫの重要性と一致して、これらの酵素の阻害剤もまた凝固阻害効果を有するはずである。固有凝固の活性化におけるこの初期段階の間、第ＸＩＩａ因子は第ＸＩ因子を活性化し、これによって後者を第ＸＩａ因子に変換する。
【０００６】
ヘパリンタイプの抗凝固剤薬、ビタミンＫアンタゴニストまたはヒルジンは、固有および非固有凝固カスケードの阻害剤として用いられ、従って、上記症状、例えば血栓塞栓状態、播種性静脈内凝固、敗血症性ショック、アレルギー、胃切除後症候群、関節炎およびＡＲＤＳ（成人の呼吸窮迫症候群）の予防および治療に用いられる。しかしながら、現在の抗凝固薬は、例えば、特異性が低い、出血合併症が生じる、半減期が短いまたは経口利用に不適切等の理由で、「理想的な」抗血栓薬の全ての要件を満たしていないため、凝固プロテアーゼトロンビンおよび第Ｘａ因子の小分子阻害剤を用いる代替法の開発が試みられている。固有凝固経路における初期酵素である第ＶＩＩａ因子は、阻害剤を開発する目的の様々な方法において研究されている別の標的酵素である（RobinsonおよびSaiah, Ann. Rep. Med. Chem. 37, 85-94, 2002）。しかしながら、トロンビンおよびＦ  Ｘａの阻害剤、または非固有凝固カスケードの特定の阻害剤としてのＦ  ＶＩＩａの阻害剤は、例えば、血液と合成表面との接触によって、誘導される固有凝固カスケードの活性化にどのような阻害効果ももたない。
【０００７】
帯電した表面で活性化した後に固有凝固を始める第ＸＩＩａ因子およびＰＫ２つの酵素因子の阻害剤を調べる取り組みはいくつかあるのみである。グアニジノアルキルカルボン酸誘導体ＦＯＶ（Isobe, Blood & Vessel 12, 135-138, 1981）、ロイペプチン、トロンビン阻害剤Ｎａ−ダンシル−Ｌ−アルギニン−４−エチルピペリジド（Ratnoff, blood 57, 55-58, 1981）および各種トリペプチド（エステルおよびアミド）（Fareed等,Ann. N. York Acad. Sci. 370, 765-784, 1981; SilverbergおよびKaplan, Blood 60, 64-70, 1982 ）は、第ＸＩＩａ因子における阻害効果がある程度あることが報告されている。Ｎα−置換４−アミジノフェニル−α−アミノ酪酸のアミドはより活性な阻害剤であることが報告されている（Sturzebecher等, Zentralbl. Pharm. Pharmakother. Lab. Diagn. 122, 240-241, 1983）。
【０００８】
Ｋｉが約５０μＭであるペンタミジンおよび関連化合物は、活性なＰＫ阻害剤であることが分かった（Ashgar等, Biochim. Biophy.s Acta 438, 250-264, 1976）。ω−アミノ−およびω−グアニジノアルキルカルボン酸のエステルもミクロモルＫｉ値を有するＰＫ阻害剤であることが報告されている（MuramatuおよびFuji, Biochim. Biophys. Acta 242, 203-208, 1971; MuramatuおよびFuji, Biochim. Biophys. Acta 268, 221-224, 1072; Ohno等, Thromb. Res. 19, 579-588, 1980; Muramatu等, Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem. 363, 203-211, 1982; Satoh等, Chem. Pharm. Bull. 33, 647-654, 1985; Teno等, Chem. Pharm. Bull. 39, 2930-2936, 1991）。アルギニンまたはフェニルアラニンから誘導される最初の高度に選択性の拮抗阻害剤は岡本等によって開発され（Thromb. Res. Suppl. VIII, 131-141, 1988）、ＰＫを約１μＭのＫｉ値で阻害する。岡田のグループは、拮抗ＰＫ阻害剤の開発に関するいくつかの研究を公開しており、トランス−４−アミノメチルシクロヘキサンカルボニル−Ｐｈｅ−４−カルボキシメチルアニリドから誘導される最も活性な化合物は阻害定数が約０．５μＭである（岡田等, Biopolymers 51, 41-50, 1999; 岡田等, Bioorg. Med. Chem. Lett. 10, 2217-2221 2000; 津田等, Chem Pharm. Bull. 49, 1457-1463, 2001）。上記ＰＫ阻害剤に共通する特徴は比較的高いＫｉ値である。ＷＯ００／４１５３１には、阻害定数が約１ｎＭであり、Ｐ１基として４−アミジノアニリンを有する、有力なＰＫ阻害剤が記載されている。しかしながら、ＷＯ００／４１５３１に記載のこれらの阻害剤は合成表面に共有結合するのには適していない。ＰＫ阻害剤はまたＷＯ９４／２９３３６にも記載されている。本発明の化合物と比較したときの本質的な相違は、ＷＯ９４／２９３３６に記載の化合物が決定的なベンジルスルホニル基（Ｐ４）を含まないことである。さらに、ＷＯ９４／２９３３６には、化合物の例えば合成表面への結合について何も記載がない。
【０００９】
現在まで、Ｐ１基としてアルギナル（例えば、アダマンチルオキシカルボニル−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−アルギナル、Ｋｉ１２ｎＭ、Garrett等, J. Pept. Res. 52, 60-71, 1998）またはアルギニルトリフルオロメチルケトン（例えば、アダマンチルオキシカルボニル−Ｄ−ｔ−ブチルグリシン−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＦ３、Ｋｉ２ｎＭ、Garrett等, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9, 301-306, 1999）を有するいくつかの遷移状態−類似ＰＫ阻害剤も報告されている。トロンビン阻害剤として初めに開発されたボロアルギニン誘導体ＤｕＰ７１４（Ａｃ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ボロアルギニン）もＰＫ（Ｋｉ１．６ｎＭ）の強力な阻害剤であることが見出された（Kettner等, J. Biol. Chem. 265, 18289-18297）。しかしながら、これらの遷移状態−類似プロテアーゼ阻害剤は、複雑な合成によってのみ得ることができ、ラセミ化する傾向があり、そして非常に非特異的な阻害剤であるという欠点を有する。
【００１０】
ＰＫはまた、様々なクロロメチルケトンによって非可逆的に阻害される。Ｈ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＡｒｇＣＨ２ＣｌおよびＨ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＡｒｇＣＨ２Ｃｌは最も反応性の化合物であると報告されている（KettnerおよびShaw, Biochemistry 17, 4778-4784, 1978）。しかしながら、ペプチジルクロロメチルケトンは、生体内で数分間安定しているにすぎないため、研究目的のために適しているだけである（Lawson等, Folia Haematol. (ライプチヒ）109, 52-60, 1982; Collen等, J. Lab. Clin. Med. 99, 76-83, 1982)。
【００１１】
従って、本発明は、治療用途に安定しており、高度の活性および特異性で血漿カリクレインを阻害し、そして合成表面に結合した後または非経口、腸用もしくは局所投与、特に静脈内もしくは皮下投与後、凝固抑制効果を有する活性化合物を提供する目的に基づく。
【００１２】
意外なことに、一般式Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１（Ｉ）（式中、Ｐ４は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換ベンジルスルホニル基であり、Ｐ３は、Ｄ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ２は、Ｌ配置のモノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換、天然もしくは非天然α−アミノ酸またはα−イミノ酸であり、Ｐ１は、モノ置換もしくはポリ置換もしくは非置換４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン基である）（SchechterおよびBerger, Biochem. Biophys. Res. Comm. 27, 157-162の定義に従う）で表されるアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンが、非常に効率的に血漿カリクレインを不活性化し、合成表面へ結合した後でも凝固抑制効果を有し、そして非経口、腸用もしくは局所、特に静脈内もしくは皮下使用が可能であることを見出した。
【００１３】
本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体の特有な利点は、結果として、合成表面に結合した後でも高い活性でＰＫを不活性化する能力である。従って、本発明の化合物は高度に活性な、そして特に、結合性血漿カリクレイン阻害剤の新規なグループを構成する。
【００１４】
本発明の意味する合成表面は、例えば、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ポリ（エーテルスルホン）、ポリ（アリールエーテルスルホン）、再生セルロース、キュプロファン、ヘモファン、ポリ（スルホン）、ポリ（アクリロニトリル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（カーボネート）、ポリ（アミド）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチレン−コ−ビニルアルコール）、あるいは、特に腺外循環において、血液と接触する透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜のような装置および／またはそれらの装置に付属するホース系および／またはエアートラップに用いられる別の材料で構成されている表面であり、表面材料は、適切な場合、阻害剤の共有結合を可能にするために、官能基、例えばアミノ基、アミノアルキル基、カルボキシル基、カルボキシアルキル基、メルカプト基、メルカプトアルキル基、ヒドロキシル基またはヒドロキシアルキル基で変性されている。
【００１５】
好ましい態様では、置換されるＰ４、Ｐ３、Ｐ２および／またはＰ１における置換基は、水素、および／または、ハロゲン、好ましくはフッ素、塩素および／または臭素、および／または１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アルキル基、特にメチル、または１〜１０個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アラルキル基（ここで、置換された分枝もしくは線状アルキル基またはアラルキル基の置換基は、好ましくはハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノおよび／またはカルボキシル基であり、適切な場合、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルでエステル化されている）、および／またはヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノ、メチルオキシカルボニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、アミノメチルまたはグルタリルもしくはスクシニルアミドメチル基、および／または低級アルキル基、特にメチルまたはエチルで適切にエステル化されている場合は、オキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基（適切な場合、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルで適切にエステル化されている）、あるいは非置換アミドまたはアルキルまたはアリール基で置換されたアミドとして存在する、オキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシエチル基である。
【００１６】
特に断りがなければ、本発明では常に、アルキル基は１〜１２個の炭素原子を有するアルキル基であり、アリール基は６〜１０個の炭素原子を有し、アラルキル基は６〜１２個の炭素原子を有するものを意味する。
【００１７】
本発明では低級アルキル基は、１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有するアルキル基を意味する。
リンカー基はＰ４またはＰ２にさらに結合することができ、リンカー基は上記置換基の１つによってＰ４へ結合しても、または特に−ＮＨ−または−ＣＯ−基によって、Ｐ２の官能基へ直接結合してもよい。
【００１８】
本発明の意味するリンカー基は、Ｐ４またはＰ２によってアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに共有結合するための少なくとも１つの官能基を示し、そしてさらに、合成表面へ同時に共有結合するための、またはアシル化４−アミジノ−もしくは４−グアニジノベンジルアミンの第２分子へ同時結合するための、いずれかの少なくとも１つの第２官能基を示す、および／または相互作用によって合成表面に非共有結合することができるオリゴ−またはポリアルキレングリコール基を示す化学構造であると定義される。
【００１９】
従って、本発明のリンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり；Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖であり、特にポリ−もしくはオリゴエチレン−またはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端においてＣＨ３で変性されている。
【００２０】
リンカー基がＰ４に結合しているとき、リンカー基は、好ましくは−ＮＨ−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＮＨ−アルキル（特にメチル）基、−ＣＯ−基、２〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−アルキル基、特に−ＣＯ−メチル基、１〜６個の炭素原子を有する−ＣＯ−Ｏ−アルキル（特にメチル）基、−Ｓ−基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｓ−アルキル（特にメチル）基、１〜６個の炭素原子を有する−Ｏ−アルキル（特にメチル）基、−ＳＯ２−基、１〜６個の炭素原子を有する−ＳＯ２−アルキル（特にメチル）基によってＰ４に結合している。
【００２１】
Ｐ４に結合している代わりに、リンカー基はＰ２に結合してもよく、Ｐ２は、好ましくは、リシンまたは側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にオルニチン、ホモリシン、α，γ−ジアミノ酪酸、α，β−ジアミノプロピオン酸、α−ジアミノグリシン、あるいはグルタミン酸または側鎖に１〜５個の炭素原子を有するその同族体、特にアスパラギン酸、グルタミン酸またはホモグルタミン酸、あるいはシステインまたはホモシステイン、あるいはセリンまたはトレオニンである。
【００２２】
本発明の好ましい態様では、Ｐ４に結合しているリンカー基は、Ｐ４に結合するために置換基と一緒になって、一般式Ｕ−Ｚ−Ｙ−Ｘ−（ＩＩ）を表し、式中、Ｕは、Ｈ２Ｎ−、ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−、ＨＯＯＣ−、Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ−ＣＯ−またはＨＳ−基であり、Ｚは−（ＣＨ２）ｎ−であり、ここで、ｎ＝１〜１０、特にｎ＝１〜５である、あるいはＺは、一般式−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−または−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−のオリゴ−またはポリアルキレングリコールであり、ここで、ｄ＝１、２、３または４、ｖ＝１〜１０００の整数、好ましくは１〜５０、特に２〜１０、ｍ＝０、１、２、３または４、そしてｋ＝０または１である、あるいはＵはＣＨ３−Ｏ−基であり、Ｚは、一般式−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−または−（ＣＨ２）ｄ−［Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２］ｖＯ−（ＣＨ２）ｍ−（ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２）ｋ−のオリゴ−またはポリアルキレングリコールであり、ここで、ｄ＝１、２、３または４、ｖ＝１〜１０００の整数、好ましくは１〜５０、特に２〜１０、ｍ＝０、１、２、３または４、そしてｋ＝０または１である；Ｙは、−ＣＯ−ＮＨ−基、−ＮＨ−ＣＯ−基、−ＳＯ２−ＮＨ−基、−ＮＨ−ＳＯ２−基、−Ｓ−Ｓ−基または−Ｓ−基であり、あるいはＵおよびＺが存在しなければ、Ｈ２Ｎ−基、ＨＯＯＣ−基、ＨＳ−基、ＨＯ−基またはハロゲノアルキル基であり；Ｘは、−（ＣＨ２）ｎ−であり、ここで、ｎ＝０、１、２、３または４、特にｎ＝１であり、あるいは酸素によるベンジル基への結合を有する−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−基であり、ｎ＝０、１、２、３または４である。Ｘが存在するならば、ベンジル基へのリンカー基の結合はＸからであり、あるいはＸが存在しないならば、Ｙからである。
【００２３】
リンカー基がＰ４に結合しているならば、Ｐ２は、グリシン、アラニン、プロリン、ホモプロリンまたはアゼチジンカルボン酸である。
別の好ましい態様では、リンカー基はＰ２に結合し、Ｐ２は一般式ＩＩＩ
【００２４】
【化１】
2006516277.tif 000002
【００２５】
［式中、ｑ＝１、２、３、４または５であり、Ｄは式
Ｕ−Ｚ−Ｙ−                    （ＩＶ）
（式中、Ｕ、ＺおよびＹは式ＩＩにおけるのと同じ意味を有する）
である］
を表す。
【００２６】
特に好ましい態様では、アシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミドは一般式ＶまたはＶＩ
【００２７】
【化２】
2006516277.tif 000003
【００２８】
を表し、ここで、式中、ｍ＝１〜３、ｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３および／またはＲ４は、水素、および／またはハロゲン、好ましくはフッ素、塩素および／または臭素、および／または１〜６個、好ましくは１〜３個の炭素原子を有する置換もしくは非置換、分枝もしくは線状アルキル基、特にメチルであり、置換、分枝または線状アルキル基の置換基は、好ましくは、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノおよび／またはカルボキシル基であり、適切ならば、低級アルキル基、特にメチルまたはエチルでエステル化されている、および／またはヒドロキシル、アミノ、シアノ、アミジノ、グアニジノ、メチルオキシカルボニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル、アミノメチルまたはグルタリルまたはスクシニルアミドメチル基、および／または、適切な場合、低級アルキル基、特にメチルもしくはエチルでエステル化されている、または、非置換アミドまたはアルキルもしくはアリール基で置換されているアミドとして存在する、オキシアルキルカルボニル、カルボキシル、カルボキシメチルもしくはカルボキシエチル基である。
【００２９】
本発明において、ヒドロキシル基、アミノ基およびアルコキシカルボニル基、特に２〜１０個の炭素原子を有するアルコキシカルボニル基は、基Ｒ４として特に好ましい。
Ｒ１および／またはＲ３はさらにリンカー基でもよく、上記置換基の１つによって、特に−ＮＨ−または−ＣＯ基によって、Ｐ４に結合しているか、あるいはＰ２の官能基に直接結合しており、リンカー基は、好ましくは、アルキル、アリールまたはアラルキル骨格構造を有するジカルボン酸、アミノカルボン酸、ジアミン、ジスルホン酸またはアミノスルホン酸であり、ここで、アルキル骨格構造は１〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有し、アリール骨格構造は６〜１０個の炭素原子を有し、特にフェニルであり、そしてアラルキル骨格構造は６〜１２個の炭素原子を有し、特にベンジルである、あるいは２〜１２個、特に２〜６個の炭素原子を有するアミノアルキルまたはカルボキシアルキル基であり；Ｐ４またはＰ２におけるリンカー基はオリゴ−またはポリアルキレングリコール鎖、特にポリ−もしくはオリゴエチレンまたはポリ−もしくはオリゴプロピレングリコール鎖であり、オリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも両端が置換または非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基である官能基を有し、あるいはオリゴ−またはポリアルキレングリコールは官能基、特に、少なくとも１端が置換または非置換アミノ、カルボキシル、および／またはメルカプト基である官能基を有し、他方の末端において１〜４個の炭素原子を有するアルキル基、特にＣＨ３、で変性されており、および／またはＲ１はさらに上記定義どおりの式（ＩＩ）を表し、Ｐ２はＲ３と共に上記定義どおりの式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）を表す。
【００３０】
一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの他の好ましい代表的態様は、好ましくは、次の構造：
【００３１】
【化３】
2006516277.tif 000004
【００３２】
で表され、ここで、式中、ｎ＝１〜１０、ｍ＝１〜３およびｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２およびＲ３は、上記の意味を有する。Ｈ２Ｎ−またはＨＯＯＣ−のような第２官能基の存在によって、上に挙げた物質はＰ４への結合と同時に合成表面に共有結合することができる。
【００３３】
一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの他の好ましい代表的態様は、好ましくは、次の構造：
【００３４】
【化４】
2006516277.tif 000005
【００３５】
【化５】
2006516277.tif 000006
【００３６】
【化６】
2006516277.tif 000007
【００３７】
で表され、ここで、式中、ｐ＝０、１、２または３、ｑ＝０または１、特に０であり、ｎ＝１〜１０００およびｍ＝１〜３であり、Ｒ２およびＲ３は、それぞれの場合において上記の意味を有する。第２官能基がないため、上に挙げた物質はＰ４への共有結合は別にして、合成表面へもっぱら非共有結合する。これはリンカー基のオリゴ−またはポリアルキレン基が合成表面と相互作用することによって生じる。
【００３８】
本発明において、リンカー基、特にオリゴ−またはポリアルキレングリコール基を含むリンカー基と合成表面との相互作用は、例えば水仲介水素結合、疎水性相互作用またはファンデルワールスの相互作用による、このリンカー基と合成表面との非共有相互作用を意味する。
【００３９】
本発明において、式Ｉの２つの分子がオリゴ−またはポリアルキレングリコール基に結合している物質は、二重阻害剤−官能化オリゴ−またはポリアルキレングリコールと呼ぶ。
【００４０】
一端において純粋なモノメチルエーテルとして存在する、そして、従って、共有結合に適さない、オリゴ−またはポリアルキレン誘導体の別の利点は、全身的投与後の循環における半減期が延長されることにある。
【００４１】
一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの好ましい代表的態様は、好ましくは、次の構造：
【００４２】
【化７】
2006516277.tif 000008
【００４３】
（式中、ｎ＝０〜５、好ましくは１または２）
または
【００４４】
【化８】
2006516277.tif 000009
【００４５】
（式中、ｎ＝０〜１１）
または
【００４６】
【化９】
2006516277.tif 000010
【００４７】
（式中、ｎ＝１〜６）
または
【００４８】
【化１０】
2006516277.tif 000011
【００４９】
（式中、ｎ＝０〜３およびｍ＝０〜１０００）
または
【００５０】
【化１１】
2006516277.tif 000012
【００５１】
（式中、ｎ＝０〜１０００）
または
【００５２】
【化１２】
2006516277.tif 000013
【００５３】
（式中、ｎ＝１〜３およびｍ＝０〜１０００）
（いずれの場合も、ｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２およびＲ４は上記の意味を有する）
の１つで表される。第２官能基が存在するため、上に挙げた物質はＰ２への結合と同時に合成表面にまたは一般式Ｉの第２分子へ共有結合することができる。
【００５４】
一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの別の好ましい代表的態様は、次の構造：
【００５５】
【化１３】
2006516277.tif 000014
【００５６】
（式中、ｎ＝０〜４およびｍ＝１０〜１０００）
または
【００５７】
【化１４】
2006516277.tif 000015
【００５８】
（式中、ｎ＝１〜４、ｐ＝２〜４およびｍ＝１〜１０００）
または
【００５９】
【化１５】
2006516277.tif 000016
【００６０】
または
【００６１】
【化１６】
2006516277.tif 000017
【００６２】
（式中、ｎ＝１〜３およびｍ＝１０〜１０００）
（ここで、ｑ＝０または１、特に０であり、Ｒ２およびＲ４は、いずれの場合も、請求項８に記載の意味を有する）
の１つで表される。第２官能基がないため、上に挙げた物質はＰ２における共有結合は別にして、合成表面へもっぱら非共有結合する。これは、リンカー基のオリゴ−またはポリアルキレングリコール基が、例えば水素結合、疎水性相互作用またはファンデルワールスの相互作用の基づいて、合成表面と相互作用することによって生じる。本発明において、式Ｉの２つの分子が１つのオリゴ−またはポリアルキレングリコール基に結合している物質は、二重阻害剤−官能化オリゴ−またはポリアルキレングリコールと呼ぶ。
【００６３】
一端において純粋なモノメチルエーテルとして存在する、そして、従って、共有結合に適さない、これらオリゴ−またはポリアルキレン誘導体の別の利点は、リンカー基がＰ４に結合している誘導体の場合と同様に、全身的投与後の循環における半減期が延長されることにある。
【００６４】
合成表面への結合がＰ２によって生じるとき、Ｐ４における置換基は、特に、Ｈ、ハロゲン、アミノ基、ヒドロキシル基、または１〜６個の炭素原子を有する線状もしくは分枝アルキル基である。
【００６５】
一般式ＩＩで表されるＰ４におけるリンカー基を有する一般式Ｉのアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの特に好ましい態様は、次の構造
【００６６】
【化１７】
2006516277.tif 000018
【００６７】
で表され、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｃｈａは、特に、さらにＤ−ＰｈｅまたはＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）であり、Ｐ４におけるグルタリルはスクシニルでもよい。この化合物は合成表面への同時共有結合に適している。
【００６８】
一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの別の特に好ましい態様は、好ましくは、次の構造：
【００６９】
【化１８】
2006516277.tif 000019
【００７０】
で表され、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）は、特に、Ｄ−ＣｈａまたはＤ−Ｐｈｅでもよく、Ｐ２におけるスクシニルはグルタリルでもよい。この化合物は合成表面への同時共有結合に適している。
【００７１】
一般式ＩＩＩおよびＩＶで表されるＰ２におけるリンカー基を有する一般式Ｉで表されるアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの別の特に好ましい態様は、好ましくは、次の構造：
【００７２】
【化１９】
2006516277.tif 000020
【００７３】
で表され、ここで、位置Ｐ３におけるＤ−Ｃｈａは、特に、Ｄ−ＰｈｅまたはＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）でもでもよい。これらの化合物は合成表面への同時共有結合または一般式Ｉの第２分子への共有結合に適している。
【００７４】
ＰＫを高い活性および選択性で阻害するアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンのさらに可能性のある代表的態様は、一般式Ｉにおいて、Ｐ４が基Ｒを有し、Ｐ３がＤ−Ｓｅｒ、Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）、Ｄ−ＰｈｅまたはＤ−Ｃｈａであり、そしてＰ２が天然または非天然アミノ酸Ａａａであり、ここで、Ｒは、Ｈ−、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＯＯＨ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＯＯＭｅ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＡＭｅ、４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−グルタリル−ＡＭｅ、または４−、３−もしくは２−、好ましくは４−もしくは３−ＣＮであり、ＡａａはＧｌｙ、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ、ｈＧｌｕ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅまたはｈＰｈｅである化合物である。
【００７５】
これに関連して、特に好ましいのは、Ｐ３がＤ−Ｓｅｒであるとき、Ａａａが好ましくは、Ｇｌｎ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅ、特にＬｙｓ（Ｚ）であり、ＲがＨであり、またはＡａａがＡｌａもしくはＳｅｒであるとき、ＲがＨＯＯＣ−である；
あるいは、Ｐ３がＤ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）であるとき、ＡａａがＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ｄａｐ、Ｄａｐ（Ｚ）、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、Ａｒｇ、Ｔｈｒ、Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅ、特にＰｒｏ、Ｇｌｎ、Ｌｙｓ、Ｌｙｓ（Ｚ）、ｈＳｅｒ（Ｂｚｌ）、ＰｈｅもしくはｈＰｈｅであり、そしてＲがＨであり、またはＡａａがＧｌｙもしくはＡｌａであるとき、ＲがＨＯＯＣ−であり、またはＡａａがＰｒｏであるとき、ＲはＣＮ−である；
あるいは、Ｐ３がＤ−Ｃｈａであるとき、ＡａａがＬｙｓもしくはＧｌｕであり、そしてＲがＨであり、またはＡａａがＰｒｏであるとき、Ｒがグルタリル−ＡＭｅであり、特に、Ａａａが−ＮＨ−ＣＨ−［ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ２）３−［Ｏ−（ＣＨ２）２］３−ＣＨ２−ＮＨ２］−ＣＯ−であるとき、ＲがＨである
アシル化アミノベンジルアミンである。
【００７６】
一般に、本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体は塩の形、特に鉱酸、例えば硫酸または塩酸の塩、あるいは適当な有機酸、例えば酢酸、ギ酸、メチルスルホン酸、コハク酸、マレイン酸またはトリフルオロ酢酸の塩、特に塩酸塩、硫酸塩または酢酸塩の形で存在する。
【００７７】
本発明の別の好ましい態様は、アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに結合しているリンカー基のＨ２Ｎ基が、ジカルボン酸無水物、好ましくはコハク酸またはグルタル酸の無水物と反応して、ＨＯＯＣ−基を形成する反応、あるいはアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに結合しているリンカー基のＨＯＯＣ基がジアミンと反応してＨ２Ｎ基を形成する反応である。これらの反応は本技術分野における当業者に公知の標準的な方法を用いて実施される。
【００７８】
Ｈ２Ｎ基のＨＯＯＣ−基へのおよびＨＯＯＣ−基のＨ２Ｎ基への変換反応は、一般式Ｉの化合物の合成表面へのまたは一般式Ｉの第２分子への結合の機会を広げることを可能にする。
【００７９】
本発明の特に好ましい態様では、Ｐ４またはＰ２に共有結合しているリンカー基は、第２官能基、特に置換もしくは非置換アミノ、カルボキシルおよび／またはメルカプト基の存在下で、合成表面に同時共有結合することができるか、あるいはリンカー基がオリゴ−またはポリアルキレングリコールであるならば、式Ｉの第２分子に共有結合して二重阻害剤−官能化オリゴ−またはポリアルキレングリコール末端を形成する。
【００８０】
本発明の好ましい態様では、アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体が結合することができる合成表面は、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、ポリ（エーテルスルホン）、ポリ（アリールエーテルスルホン）、再生セルロース、キュプロファン、ヘモファン、ポリ（スルホン）、ポリ（アクリロニトリル）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリ（カーボネート）、ポリ（アミド）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチレン−コ−ビニルアルコール）、あるいは表面が血液と接触する透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜のような装置および／またはそれらの装置に付属するホース系および／またはエアートラップに用いられる別の材料で構成され、表面材料は、Ｐ４またはＰ２へ結合したリンカー基によって一般式Ｉの分子が共有結合するために、適切ならば、官能基、例えばアミノ基、アミノアルキル基、カルボキシル基、カルボキシアルキル基、メルカプト基、メルカプトアルキル基、ヒドロキシル基またはヒドロキシアルキル基で変性され、アルキル基は１〜１０個、特に１〜６個の炭素原子を有する。
【００８１】
本発明の別の好ましい態様では、アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体は、例えば、透析器、酸素発生器、カテーテルおよび／または膜のような装置の表面で、血液が凝固するのを防ぐために、これらの装置の合成表面に結合される。
【００８２】
アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体の結合は、Ｐ４の置換基に結合しているおよび／または、適切ならば、一般式ＩのＰ２の側鎖に直接結合している、上記リンカー基の１つによって合成表面を共有または非共有被覆することによって行われるのが好ましい。
【００８３】
本発明において、装置とは、血液と接触する装置およびその構成要素を意味する。
本発明の別の好ましい態様は、本発明の１種以上のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体を、心筋梗塞、脳卒中、塞栓症、例えば股関節手術および／または膝関節交換後の深脚静脈血栓症、血管形成術、特に経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）の結果としての不安定アンギナまたは合併症を予防および／または治療する抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造に用いることである。
【００８４】
本発明において、抗凝固薬とは、血液凝固を妨げるどのような物質も意味する。本発明において、抗血栓薬とは、血栓症予防に用いられる物質を意味する。本発明において血管形成術とは、血管の拡張、特にバルーンカテーテルのようなカテーテルを用いることを意味する。
【００８５】
別の態様は、１種以上の上記アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンの、播種性静脈内凝固、敗血症性ショック、アレルギー、胃切除後症候群、関節炎およびＡＲＤＳ（成人の呼吸窮迫症候群）を予防および／または治療する抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造への使用である。
【００８６】
本発明の好ましい態様では、アシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体は、非経口使用形での、特に動脈内、静脈内、筋肉内または皮下の形での、腸用形での、特に経口または直腸用の、または局所使用形の、特に皮膚治療薬としての、血漿カリクレインおよび／または第ＸＩＩａ因子および／または第ＸＩａ因子を阻害するための薬剤製造に用いられる。これについては、静脈内または皮下使用形が好ましい。例えば、血漿カリクレインの阻害が好ましい。
【００８７】
本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミン誘導体は、特に、血漿カリクレインを阻害するための薬剤の製造に用いることができ、この薬剤は、錠剤、糖衣錠、カプセル、ペレット、座薬、溶液、特に注射または注入溶液、点眼液、点鼻液、点耳薬、ジュース、カプセル、エマルジョンまたは懸濁液、丸薬、棒状薬、エーロゾル、粉剤、ペースト、クリーム、軟膏の形である。
【００８８】
本発明の阻害剤の他に、薬剤はさらに、薬学的に適した補助物質および／または添加剤を含んでいてもよい。例えば薬剤の安定化および／または保存に役立つ適当な補助物質および／または添加剤は、本技術分野における当業者によく知られている（例えば、Sucker等, (1991) Pharmazeutische Technologie [Pharmaceutical Technology], 第２版, Georg Thieme Verlag, シュツットガルト）。それらは例えば、生理学的塩化ナトリウム溶液、リンガーグルコース、リンガーラクテート、無機質除去水、安定剤、酸化防止剤、錯生成剤、抗菌化合物、たんぱく分解酵素阻害剤および／または不活性ガスである。
【００８９】
本発明の別の態様は、Ｒ４が、特に、ＨＯ−であり、そしてＲ１およびＲ３がオリゴ−またはポリアルキレン基ではない一般式ＶまたはＶＩのアシル化アミジノベンジルアミンの、活性化合物が経口投与用のプロドラッグの形で存在する上記抗凝固および／または抗血栓薬として用いるための薬剤製造への使用である。
【００９０】
本発明において、プロドラッグとは、相当する薬学的に活性な物質の薬学的に不活性な誘導体として存在し、経口投与後、自然にまたは酵素によって生体内変化が生じて、薬学的に活性な物質が放出される、一般式Ｉのアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンを意味する。
【００９１】
記載のアシル化アミジノ−またはグアニジノベンジルアミンの、血漿カリクレインの阻害への好ましい使用の他に、それらは、他のトリプシン様セリンプロテアーゼ、例えばトロンビン、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子、第Ｘａ因子、第ＩＸａ因子、第ＶＩＩａ因子、ウロキナーゼ、トリプターゼおよびプラスミン、並びに補体系のトリプシン様セリンプロテアーゼの阻害にも用いることができる。
【００９２】
本発明はまた、一般式Ｐ４−Ｐ３−Ｐ２−Ｐ１（Ｉ）のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンに関し、この物質は、Ｐ４および／またはＰ２で上記リンカー基によって合成表面へ共有または非共有結合している。物質は、好ましくは、アミドもしくはスルホンアミド結合、ジスルフィドブリッジまたはメルカプト基のアルキル化によって、特にアミド結合によって、合成表面へ共有結合している。この物質は、好ましくは合成表面と相互作用するオリゴ−またはポリアルキレングリコール基、特にオリゴ−もしくはポリエチレングリコール基によって、合成表面へ非共有結合する。
【００９３】
本発明はまた、表面が本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンで共有または非共有被覆されている合成表面に関する。本発明はまた、本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンで共有または非共有被覆されている合成表面を含む、透析器、酸素発生器、カテーテルまたは膜、および付属するホース系および／またはエアートラップのような装置に関する。
【００９４】
本発明のアシル化４−アミジノ−または４−グアニジノベンジルアミンは本技術分野における当業者に公知の方法を用いて合成される。例えば、本技術分野における当業者に公知の方法を用いて、商業的に入手しうる４−シアノベンジルアミン（昭和電工、日本）からＢｏｃ−保護４−（アセチルオキサミジノ）が得られる。別の可能性は、４−シアノベンジルアミンをＢｏｃ−またはＺ−保護Ｐ２アミノ酸に直接結合し、そしてこの段階でシアノ基をアセチルオキサミジンに変換することである。Ｂｏｃ−保護基を除いた後、標準的なカップリング法を用いて、ＢｏｃをＮ−末端保護基として用いて他のアミノ酸に結合する。Ｐ３アミノ酸はまた、Ｎ−アリールまたはＮ−アラルキルスルホニル保護アミノ酸として直接結合することもできる。たいていの中間体は十分に結晶化し、この方法で容易に精製することができる。阻害剤は最終段階で、好ましくは分取逆相ＨＰＬＣによって、最後に精製される。
【００９５】
以下の記載において、代表的態様および表で本発明をさらに詳しく説明するが、それは本発明を制限するものではない。
【００９６】
使用省略形
Ａａａ                  アミノ酸
Ａｃ                    アセチル
ＡｃＯＨ                酢酸
ＣＮＡ                  アセトニトリル
Ａｍｂａ                アミジノベンジルアミン
ＡＭｅ                  アミノメチル
ＡＲＤＳ                成人の呼吸窮迫症候群
Ｂｏｃ                  ｔ−ブチルオキシカルボニル
Ｂｚｌ                  ベンジル
Ｂｚｌｓ                ベンジルスルホニル
Ｃａｎ                  カナバニン
Ｃｈａ                  シクロヘキシルアラニン
ＩＢＣＣ                イソブチルクロロカ−ボネート
ＣＮＢｚｌｓ            シアノベンジルスルホニル
Ｄａｂ                  α，γ−ジアミノ酪酸
Ｄａｐ                  α，β−ジアミノプロピオン酸
Ｄａｐ（Ｚ）            ベンジルオキシカルボニル−α，γ−ジアミノ酪酸
ＤＣＭ                  ジクロロメタン
ＤＩＥＡ                ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ                  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
Ｄ−Ｓｅｒ              Ｄ−セリン、相当する他のアミノ酸
Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）    Ｄ−（ｔ−ブチルセリン）
Ｆ  ＸＩａ              第ＸＩａ因子
Ｆ  ＸＩＩａ            第ＸＩＩａ因子
Ｇｌｕｔ                グルタリル
ＧｕＭｅ                グアニジノメチレン
ｈＡｌａ（４−Ｐｙｒ）  ホモ−４−ピリジルアラニン
【００９７】
【化２０】
2006516277.tif 000021
【００９８】
ｈＧｌｕ                ベータ−ホモグルタミン酸
【００９９】
【化２１】
2006516277.tif 000022
【０１００】
ｈＰｈｅ                ホモフェニルアラニン
【０１０１】
【化２２】
2006516277.tif 000023
【０１０２】
ｈＳｅｒ                ベータ−ホモセリン
【０１０３】
【化２３】
2006516277.tif 000024
【０１０４】
ｈＴｙｒ                ホモチロシン
【０１０５】
【化２４】
2006516277.tif 000025
【０１０６】
ｎ．ｄ．                測定せず
ＰＥＧ                  ポリエチレングリコール
Ｐｈｅ                  フェニルアラニン
ＰＫ                    血漿カリクレイン
Ｐｒｏ−ＭＭＰ  ３      Ｐｒｏ−マトリックスメタロプロテアーゼ  ３
ＰｙＢｏｐ              ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＲＴ                    室温
Ｓｅｒ（Ｂｌｚ）        セリン（ベンジル）
Ｓｕｃ                  スクシニル
ＴＦＡ                  トリフルオロ酢酸
Ｔｆａ                  トリフルオロアセチル
Ｚ                      ベンジルオキシカルボニル
【０１０７】
分析法：
分析ＨＰＬＣ：  Shimdazu LC-10Aシステム、  カラム：Phenomenex Luna Ｃ１８、５μｍ（２５０×４ｍｍ）、  溶媒Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ；Ｂ：ＡＣＮ中の０．１％Ｂ、  勾配：６０分で１０％Ｂ〜７０％Ｂ、  １ｍｌ／分  流量、  ２２０ｎｍで検出。
【０１０８】
分取ＨＰＬＣ：  Shimdazu LC-8Aシステム、  カラム：Phenomenex Luna Ｃ１８、５μｍ（２５０×３０ｍｍ）、  溶媒Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ；Ｂ：ＡＣＮ中の０．１％Ｂ、  勾配：１２０分で１０％Ｂ〜５５％Ｂ、  １０ｍｌ／分  流量、  ２２０ｎｍで検出。
【０１０９】
質量分析法：  質量スペクトルは、フライト時間測定検出器およびマトリックスとしてのα−シアノヒドロキシ桂皮酸を用いるか、あるいはフィニガン社（ドイツ、ブレーメン）ＥＳＩ−ＭＳ  ＬＣＱを用いて、クラトス社（英国、マンチェスター）のKompactプローブで測定した。
【０１１０】
代表的態様１：
３−（グルタリルアミドメチル）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−アミジノベンジルアミド×ＴＦＡの合成
【０１１１】
【化２５】
2006516277.tif 000026
【０１１２】
１ａ）  ３−（シアノ）ベンジルスルホン酸ナトリウム塩
３０ｇ（１５３mmol）の臭化３−シアノベンジル（アルドリッチ社）を１５０ｍｌの水に懸濁し、２１．２ｇ（１６８．３mmol）のＮａ２ＳＯ３を加えた後、８時間還流沸騰させた。混合物を熱い状態で濾過し、水を真空中である程度蒸発させた。混合物を結晶化のために一晩冷蔵庫で貯蔵し、その後、結晶を吸引濾過し、再び水から再結晶した。結晶を吸引濾過し、真空乾燥した。
収量：１７．１ｇ（７８mmol）、ＨＰＬＣ：１８．２％Ｂ
【０１１３】
１ｂ）  塩化３−（シアノ）ベンジルスルホニル
５ｇ（２２．８３mmol）の３−シアノベンジルスルホン酸ナトリウム塩を約２０ｍｌの塩化ホスホリルで湿らせ、その後、５．２ｇ（２５．１１mmol）のＰＣｌ５を加え、氷で冷却しながら混合物を１５分間攪拌した。次に、混合物を８０℃で４時間加熱した。その後、混合物を氷上に注ぎ、３０分間激しく攪拌したところ、生成物が白色固体として氷の上に沈降した。氷が部分的に溶けた後、混合物をフリットに通して濾過し、残った生成物／氷混合物を水で数回洗浄した。残った結晶を真空乾燥し、合成の次の段階に直接用いた。
収量：３．４ｇ（１５．８mmol）
【０１１４】
１ｃ）  ３−（シアノ）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨ
３．７７５ｇ（２２mmol）のＨ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨを１００ｍｌの乾燥ＤＣＭに懸濁し、その後、６．３１６ｇ（５０mmol）の塩化トリメチルシリルおよび８．７ｍｌ（５０mmol）のＤＩＥＡを加えた。１時間還流沸騰させ、氷浴中で冷却した。３０分以内に５ｇ（２３．１８mmol）の塩化３−シアノベンジルスルホニルおよび５ｍｌ（２８．７５mmol）のＤＩＥＡを加えた。氷で冷却しながら、混合物をさらに３０分間攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌した。溶媒を真空除去し、その後、残留物を水（１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ８．５〜９にした）に溶解し、この溶液を酢酸エチルで抽出（２×）した。次に、酢酸エチル相をアルカリ性水（ｐＨ９、ＮａＯＨ）で再度抽出した。合わせたアルカリ性水を次にＨＣｌの濃縮溶液で酸性（ｐＨ約３）にし、酢酸エチルで抽出（３×）した。合わせた酢酸エチル相を、各場合３回、ＫＨＳＯ４の５％溶液、そしてＮａＣｌの飽和溶液で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去した。
収量：冷蔵庫内で徐々に結晶化する油状物６．９９ｇ、ＨＰＬＣ：５３．９％Ｂ
【０１１５】
１ｄ）  Ｈ−Ｐｒｏ−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＢｒ
７５ｍｌのＨＢｒ溶液（酢酸中３３％濃度）を、室温で、５ｇのＺ−Ｐｒｏ−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド（ＷＯ０２／０５９０６５に記載のように合成した）に加えた。時々振とうしながら、混合物を１時間放置した。その後、エーテルを混合物に加え、沈殿生成物を吸引濾過し、フリット上でエーテルで数回洗浄した。生成物を真空乾燥した。
収量：４．３ｇ（１１．１６mmol）、ＨＰＬＣ：１８．３％Ｂ
【０１１６】
１ｅ）  ３−（シアノ）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
２．５ｇ（７．１３mmol）の３−シアノベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨおよび２．７４ｍｌ（７．１３mmol）のＨ−Ｐｒｏ−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＢｒを５０ｍｌのＤＭＦに溶解した。氷で冷却しながら、３．７１ｇ（７．１３mmol）のＰｙＢｏｐおよび３．７ｍｌのＤＩＥＡを加えた。氷で冷却しながら、混合物を３０分間攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌した。溶媒を真空除去し、その後、混合物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄した。酢酸エチル相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、溶媒を真空除去した。粗生成物はさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：３．３ｇの油状物、５３．７７％ＢでのＨＰＬＣ
ＭＳ：  理論値５７８．２７（単一同位体）、実験値５７９．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１７】
１ｆ）  ３−（アミノメチル）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＨＣｌ
１ｇの３−シアノベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド粗生成物を５００ｍｌの酢酸に溶解し、その後、１５０ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを加えた。その後、２００ｍｇの触媒（１０％パラジウム担持活性炭）を加え、混合物を１５時間、５０℃にて水素で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を真空蒸発させた。トルエンを残留物に加え、溶媒を真空除去した。この手順をさらに２回繰り返した。残留物を少量のメタノールに溶解し、そして生成物を、エーテルを加えることによって沈殿させ、吸引濾過した。生成物をエーテルで洗浄し、真空乾燥した。粗生成物はさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：０．８ｇ、３４．２８％ＢでのＨＰＬＣ
ＭＳ：  理論値５８２．３０（単一同位体）、実験値５８３．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１８】
１ｇ）  ３−（グルタリルアミノメチル）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＴＦＡ
ＤＭＦ５ｍｌ中の無水グルタル酸３８ｍｇ（約０．３３mmol）およびＤＩＥＡ  １１５μｌ（０．６６mmol）を、氷で冷却しながら、２００ｍｇ（約０．３mmol）の３−（アミノメチル）ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｐｒｏ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＨＣｌ粗生成物に加えた。氷で冷却しながら、混合物を３０分間攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌した。溶媒を真空除去し、粗生成物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。
収量：１２５ｍｇ、４０．１％ＢでのＨＰＬＣ
ＭＳ：  理論値６９６．３３（単一同位体）、実験値６９７．８［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１１９】
代表的態様２：
ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｌｙｓ（スクシニル）−４−Ａｍｂａ×ＴＦＡの合成
【０１２０】
【化２６】
2006516277.tif 000027
【０１２１】
２ａ）  Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
５ｇ（１４．６１mmol）のＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−ＯＨを１００ｍｌのＴＨＦに溶解し、その後、１．７６７ｍｌ（１６．１０mmol）のＮＭＭおよび１．８９９ｍｌ（１４．６１mmol）のＩＢＣＣを−１５℃で加えた。混合物を−１５℃で１０分間攪拌した後、３．７４g（１５．３３mmol）の４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミン×ＨＣｌ（ＷＯ０１／９６２８６  Ａ２）および再び１．７６７ml（１６．１０mmol）のＮＭＭを加えた。混合物を、−１５℃でさらに１時間、次いで室温で一晩攪拌した。溶媒を真空除去し、混合物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去し、粗生成物を酢酸エチルから結晶化した。
収量：６．８２ｇ（１２．８３mmol）の白色結晶、ＨＰＬＣ：４３．８７％Ｂ
ＭＳ：  理論値５７８．２７（単一同位体）、実験値５７９．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２２】
２ｂ）  Ｈ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ
５ｇ（９．４１mmol）のＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミドを少量の氷酢酸に溶解し、その後、氷酢酸中の１Ｎ  ＨＣｌ  １００ｍｌを加えた。混合物を室温で４５分間放置した後、溶媒の一部を蒸発させ、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、再度ジエチルエーテルで洗浄した。生成物を真空乾燥した。
収量：４．６５ｇ（１０．７８mmol）の白色固体、ＨＰＬＣ：２５．５２％Ｂ
【０１２３】
２ｃ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
１．９３ｇ（６．１０７mmol）のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−ＯＨおよび３ｇ（６．４１２mmol）のＨ−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌを３０ｍｌのアセトニトリルに溶解し、その後、３．３３７ｇ（６．４１２mmol）のＰｙＢｏｐおよび３．１８７ｍｌ（１８．３２mmol）のＤＩＥＡを０℃で加えた。混合物を３０分間０℃で、さらに室温で４時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去した。わずかに黄色の非晶質粗生成物が残った。この生成物はさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：５．８８ｇ（粗生成物）、ＨＰＬＣ：５２．９３％Ｂ
【０１２４】
２ｄ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×アセテート
５．８８ｇの  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド（粗生成物）を１５０ｍｌの９０％酢酸に溶解し、その後、５００ｍｇの触媒（１０％Ｐｄ／Ｃ）を加えた。混合物を６時間、室温および標準圧にて水素で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を部分的に蒸発させ、ジエチルエーテルを加えることによって生成物をその後沈殿させ、吸引濾過し、再度ジエチルエーテルで洗浄した。白色結晶沈殿を真空乾燥した。
収量：４．３６ｇ（５．９６２mmol）、ＨＰＬＣ：４３．５０％Ｂ
【０１２５】
２ｅ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＴＦＡ
氷で冷却しながら、沈殿の１Ｍ水溶液５ｍｌを、０．２ｇのＢｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ（Ｔｆａ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×アセテート粗生成物に加え、混合物を３時間攪拌した。その後、溶媒を真空蒸発させ、残留物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。
収量：７２ｍｇ、ＨＰＬＣ：３０．９％Ｂ
ＭＳ：  理論値５７４．２９（単一同位体）、実験値５７５．７［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２６】
２ｆ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ（スクシニル）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＴＦＡ
氷で冷却しながら、２ｍｌのＤＭＦ、７．８ｍｇ（０．０７８mmol）の無水コハク酸および２７．１μｌ（０．１５６mmol）のＤＩＥＡを、６０ｍｇ（０．０７５mmol）のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢu）−Ｌｙｓ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＴＦＡに加えた。混合物を氷で冷却しながらさらに３０分間、次いで室温で３時間攪拌した。溶媒を真空除去し、生成物を分取逆相ＨＰＬＣによって精製した。
収量：４１ｍｇ、ＨＰＬＣ：３５．８％Ｂ
ＭＳ：  理論値６７４．３１（単一同位体）、実験値６７５．９［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１２７】
代表的態様３：
ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ（ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘキサエチレングリコール−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ２）−４−Ａｍｂａ×２ＴＦＡの合成
【０１２８】
【化２７】
2006516277.tif 000028
【０１２９】
３ａ）  ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨ
６ｇ（３５．１mmol）のＨ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨを１２０ｍｌの乾燥ＤＣＭに懸濁し、その後、９．７５ｍｌ（７７．２mmol）の塩化トリメチルシリルおよび１３．４ｍｌ（７７．２mmol）のＤＩＥＡを加えた。混合物を１時間還流沸騰させ、そして氷浴中で冷却した。３０分以内に、７．０２ｇ（３６．８５mmol）の塩化ベンジルスルホニルおよび７．８３ｍｌ（４５mmol）のＤＩＥＡを加えた。氷で冷却しながら、混合物をさらに３０分間攪拌し、次いで室温でさらに３時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残留物を水（１Ｎ  ＮａＯＨでｐＨ８．５〜９にした）に溶解し、この溶液を酢酸エチルで抽出（２×）した。次に、アルカリ性水性相を次にＨＣｌの濃縮溶液で酸性（ｐＨ約３）にし、酢酸エチルで抽出（３×）した。合わせた酢酸エチル相を、各場合３回、ＫＨＳＯ４の５％溶液、そしてＮａＣｌの飽和溶液で洗浄し、次にＮａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去した。
収量：９．２ｇの油状物（冷蔵庫内で徐々に結晶化する）、ＨＰＬＣ：５５．８％Ｂ
【０１３０】
３ｂ）  Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
４．４１ｇ（１１．５９mmol）のＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨを１２５ｍｌのＤＭＦに溶解し、その後、１．２７５ｍｌ（１１．５９mmol）のＮＭＭおよび１．５０６ｍｌ（１１．５９ mmol）のＩＢＣＣを−１５℃で加えた。混合物を−１５℃で１０分間攪拌し、その後、２．９７ｇ（１２．１７mmol）の４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミン×ＨＣｌ（ＷＯ０１／９６２８６  Ａ２に記載のように製造した）および再度１．３４ｍｌ（１２．１７mmol）のＮＭＭを加えた。混合物を−１５℃でさらに１時間、そして室温で一晩攪拌した。溶媒を真空除去し、混合物を酢酸エチルに取り、次に、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、そしてＮａＣｌ飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ飽和水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去し、残った非晶質物質を真空乾燥した。
収量：５．２ｇ、ＨＰＬＣ：５１．１２％Ｂ
【０１３１】
３ｃ）  Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ
氷酢酸中の１００ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを、５ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミドに加えた。混合物を室温で４５分間放置した後、溶媒を一部蒸発させ、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、再度ジエチルエーテルで洗浄した。生成物を真空乾燥した。
収量：４．２ｇ（８．３mmol）の白色固体、ＨＰＬＣ：３３．８１％Ｂ
【０１３２】
３ｄ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
２ｇ（６．１４６mmol）のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨおよび３．１３ｇ（６．１４６mmol）のＨ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌを５０ｍｌのＤＭＦに溶解し、その後、３．１９８ｇ（６．１４６mmol）のＰｙＢｏｐおよび３．２ｍｌ（１８．４３mmol）のＤＩＥＡを０℃で加えた。混合物を０℃で３０分間攪拌し、次いで室温でさらに５時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去した。粗生成物はさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：３．７ｇ（粗生成物）、ＨＰＬＣ：６１．８４％Ｂ
【０１３３】
３ｅ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＨＢｒ
３．５ｇのＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ（Ｚ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド（粗生成物）を１７５ｍｌの９０％酢酸に溶解し、その後、４００ｍｇの触媒（１０％Ｐｄ／Ｃ）を加えた。混合物を６時間、室温および標準圧にて水素で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、トルエンを残留物に加え、溶媒を真空中で再度蒸発させた。５０ｍｌの臭化水素溶液（酢酸中の３３％濃度）を残留物に加え、混合物を時々振とうした。１時間後、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、ジエチルエーテルで数回洗浄した。得られた固体（かすかに黄色）を真空乾燥した。粗生成物は合成の次の段階に用いた。
収量：２．３ｇの粗生成物、ＨＰＬＣ：３４．７７％Ｂ
粗生成物の一部は分取逆相ＨＰＣＬによって精製した。
ＭＳ：  理論値５８４．３１（単一同位体）、実験値５８５．４［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３４】
３ｆ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘキサエチレングリコール−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｂｏｃ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＨＢｒ
０．３１８ｇ（約０．４２７mmol）のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＨＢｒ粗生成物および２５０ｍｇ（０．４２７５mmol）のＯ−（Ｎ−Ｂｏｃ−２−アミノエチル）−Ｏ´−（Ｎ−ジグリコリル）−２−アミノエチル）−ヘキサエチレングリコール（ノババイオケム社、オーダー番号：０１−６３−０１０２）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解した。氷で冷却しながら、０．２２２ｇ（０．４２７５mmol）のＰｙＢｏｐおよび１４９μｌ（０．８５５mmol）のＤＩＥＡを加えた。氷で冷却しながら、混合物を１５分間攪拌し、そして室温でさらに４時間攪拌した。その後、溶媒を真空除去し、残留物を約３５０ｍｌの酢酸エチルおよび７５ｍｌのＮａＨＣＯ３飽和溶液に取った。酢酸エチル相を、ＮａＨＣＯ３飽和溶液で１回、次に、ＮａＣｌの飽和溶液で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去して、黄色油状物を得た。これはさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：４４６ｍｇ、ＨＰＬＣ：４７．０３％Ｂ
化合物の一部は分取逆相ＨＰＣＬによって精製した。
【０１３５】
３ｇ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘキサエチレングリコール−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＴＦＡ
酢酸中の１Ｎ  ＨＣｌ１０mlを、４００ｍｇの化合物３ｆ（Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｌｙｓ−（ＣＯ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２−ＣＨ２−ヘキサエチレングリコール−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−Ｂｏｃ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×粗生成物）に加えた。室温で１時間後、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、分取ＨＰＬＣによって精製した。
収量：２１０ｍｇ、ＨＰＬＣ：３７．２％Ｂ
ＭＳ：  理論値１０５０．５７（単一同位体）、実験値１０５１．６［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１３６】
代表的態様４：
ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＮＨ−［ＣＨ２］３−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］２−Ｏ−［ＣＨ２］３−ＮＨ２）−４−Ａｍｂａ×２ＴＦＡの合成
【０１３７】
【化２８】
2006516277.tif 000029
【０１３８】
４ａ）  Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
３．３７ｇ（１０mmol）のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−ＯＨを１００mlのＤＭＦに溶解し、その後、１．１ｍｌ（１０mmol）のＮＭＭおよび１．３ｍｌ（１０mmol）のＩＢＣＣを加えた。混合物を−１５℃で８分間攪拌し、その後、２．４４g（１０mmol）の４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミン×ＨＣｌ（ＷＯ０１／９６２８６  Ａ２）および再び１．１ml（１０mmol）のＮＭＭを加えた。混合物を、−１５℃でさらに１時間、次いで室温で一晩攪拌した。溶媒を真空除去し、混合物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去し、化合物を酢酸エチルから結晶化した。
収量：３．８ｇ（７．２mmol）、ＨＰＬＣ：５２．３４％Ｂ
【０１３９】
４ｂ）  Ｈ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ
氷酢酸中の１Ｎ  ＨＣｌ ８０ｍｌを３ｇ（６mmol）のＢｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミドに加えた。混合物を室温で４５分間放置した後、溶媒の一部を蒸発させ、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、再度ジエチルエーテルで洗浄した。生成物を真空乾燥した。
収量：２．５ｇ（５．４mmol）の白色固体、ＨＰＬＣ：３１．０７％Ｂ
【０１４０】
４ｃ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド
０．８４ｇ(２．５９mmol)のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−ＯＨおよび１．２ｇ(２．５９mmol)のＨ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌを４０ｍｌのＤＭＦに溶解し、その後、１．３５ｇ（２．５９mmol）のＰｙＢｏｐおよび１．３５ｍｌ（７．７７mmol）のＤＩＥＡを０℃で加えた。混合物を０℃で３０分間攪拌し、室温でさらに４時間攪拌した。溶媒を真空除去し、その後、残留物を酢酸エチルに取り、この溶液を、各場合３回、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＣｌ−飽和水、ＮａＨＣＯ３の飽和溶液、そして再度ＮａＣｌ−飽和水で洗浄し、その後、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。溶媒を真空除去した。
収量：１．３５ｇ（油状物）、ＨＰＬＣ：６３．１６％Ｂ
【０１４１】
４ｄ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ
１．２ｇのＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−４−（アセチルオキサミジノ）ベンジルアミドを２００ｍｌの９０％酢酸に溶解し、その後、２００ｍｇの触媒（１０％Ｐｄ／Ｃ）を加えた。混合物を２４時間、４５℃および標準圧にて水素で水素添加した。触媒を濾去し、溶媒を蒸発させ、トルエンを残留物に加え、溶媒を再度真空中で蒸発させた。残留物を氷酢酸中の１Ｎ  ＨＣｌ溶液２５ｍｌに溶解し、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過し、ジエチルエーテルで数回洗浄した。得られた固体を真空乾燥した。
収量：０．８２ｇ、ＨＰＬＣ：４０．５５％Ｂ
粗生成物の一部は分取逆相ＨＰＣＬによって精製した。
ＭＳ：  理論値５８５．２６（単一同位体）、実験値５８６．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４２】
４ｅ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＮＨ−［ＣＨ２］３−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］２−Ｏ−［ＣＨ２］３−ＮＨ−Ｂｏｃ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ
０．４ｇ（０．６４３mmol）のＢｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌおよび０．２１６ｇ（０．６７５mmol）のＢｏｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）３−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）３−ＮＨ２（クアンタ・バイオデザイン社、オハイオ州、ポウエル）を１０ｍｌのＤＭＦに溶解し、その後、０．３３５ｇ（０．６４３mmol）のＰｙＢｏｐおよび２２４μｌ（１．２９mmol）のＤＩＥＡを０℃で加えた。混合物を０℃で３０分間攪拌し、室温でさらに６時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残留物を酢酸エチルとＮａＨＣＯ３の飽和溶液との混合物に取った。混合物を分液漏斗中で振とうし、アルカリ性相を分離した。酢酸エチル相を再度ＮａＨＣＯ３の飽和溶液で洗浄した。酢酸エチルを真空除去し、残留物ははさらに精製することなく、合成の次の段階に用いた。
収量：０．３５ｇ（油状物）、ＨＰＬＣ：４９．１７％Ｂ
【０１４３】
４ｆ）  Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＮＨ−［ＣＨ２］３−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］２−Ｏ−［ＣＨ２］３−ＮＨ２）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×２ＴＦＡ
氷酢酸中の２０ｍｌの１Ｎ  ＨＣｌを、化合物４ｅの粗生成物（Ｂｚｌｓ−Ｄ−Ｃｈａ−Ｇｌｕ（ＮＨ−［ＣＨ２］３−［Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２］２−Ｏ−［ＣＨ２］３−ＮＨ−Ｂｏｃ）−４−（アミジノ）ベンジルアミド×ＨＣｌ）に加えた。混合物を４５分間放置した後、ジエチルエーテルを加えることによって生成物を沈殿させ、吸引濾過した。、得られた固体は分取逆相ＨＰＬＣによって精製し、生成物を凍結乾燥した。
収量：０．２１ｇの凍結乾燥物、ＨＰＬＣ：３６．３３％Ｂ
ＭＳ：  理論値７８７．４３（単一同位体）、実験値７８８．５［Ｍ＋Ｈ］＋
【０１４４】
代表的態様５：
阻害定数（μＭでのＫｉ値）の測定
個々の酵素に対する阻害効果は、すでに報告されている方法と類似の方法で測定した（Sturzebecher等, J. Med. Chem. 40, 3091-3099, 1997）。
【０１４５】
ＰＫの阻害の測定を以下に詳記する。２００μｌのトリス緩衝液（０．０５Ｍ、０．１５４Ｍ  ＮａＣｌ、５％エタノール、ｐＨ８．０；阻害剤を含む）、５０μｌの基質（Ｈ２Ｏ中のＢｚｌ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐＮＡ）および２５μｌのＰＫを２５℃でインキュベートした。３分後、２５μｌの酢酸（５０％）を加えることによって反応を停止し、マイクロプレートリーダー（Labsystems iEMS Reader MF）を用いて、４０５ｎｍでの吸収を測定した。Ｋｉ値は、線形回帰によって、そしてコンピュータープログラムを用いて、Dixon（Biochem. J. 55, 170-171, 1953）に従って測定した。Ｋｉ値は少なくとも３つの測定の平均である。
【０１４６】
第ＸＩａ因子および第ＸＩＩａ因子の阻害を同様な方法で測定した。ヒト第ＸＩａ因子（ヘモクロム・ダイアグノスティカ社、ドイツ、エッセン）の阻害定数を測定するとき、Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Chromozym PCa、ロシュ・ダイアグノスティクス社、ドイツ、マンハイム）を基質として用いた。
【０１４７】
Ｈ−Ｄ−ＨＨＴ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（Chromozym XII、ロシュ・ダイアグノスティクス社、ドイツ、マンハイム）は、ヒト第ＸＩＩａ因子（ヘモクロム・ダイアグノスティカ社、ドイツ、エッセン）の阻害定数の測定に基質として用いた。
【０１４８】
表１：  ＰＫ、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子およびトロンビンの（Ｒ）−ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｓｅｒ−Ａａａ−４−Ａｍｂａ型の化合物による阻害
【０１４９】
【表１】
2006516277.tif 000030
【０１５０】
表２：  ＰＫ、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子およびトロンビンの（Ｒ）−ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ａａａ−４−Ａｍｂａ型の化合物による阻害
【０１５１】
【表２】
2006516277.tif 000031
【０１５２】
表３：  ＰＫ、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子およびトロンビンの（Ｒ）−ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｃｈａ−Ａａａ−４−Ａｍｂａ型の化合物による阻害
【０１５３】
【表３】
2006516277.tif 000032
【０１５４】
μＭでのＰＥＧ−結合化合物の阻害定数：
阻害剤番号５８：
【０１５５】
【化２９】
2006516277.tif 000033
【０１５６】
ＰＫ  ０．０５９；Ｆ  ＸＩＩａ  ２．０、Ｆ  ＸＩａ  ０．２３、トロンビン  ０．００８０
阻害剤番号５９：
【０１５７】
【化３０】
2006516277.tif 000034
【０１５８】
ＰＫ  ０．０１５；Ｆ  ＸＩＩａ  ０．９８、Ｆ  ＸＩａ  ０．０４０、トロンビン  ０．０１５
【０１５９】
表４：  ＰＫ、第ＸＩＩａ因子、第ＸＩａ因子およびトロンビンの（４−Ｒ）−ベンジルスルホニル−Ｐ３−Ａａａ−４−Ａｍｂａ型の化合物による阻害（（４−Ｒ）は、ベンジルスルホニル基のフェニル環上の表４における基Ｒの４位置を示す）
【０１６０】
【表４】
2006516277.tif 000035
【０１６１】
阻害剤番号８７：
【０１６２】
【化３１】
2006516277.tif 000036
【０１６３】
μＭでのＫｉ値：ＰＫ  ０．４２；Ｆ  ＸＩＩａ  ０．１６、Ｆ  ＸＩａ  ０．３３、トロンビン  ３．６
阻害剤番号８８：
【０１６４】
【化３２】
2006516277.tif 000037
【０１６５】
μＭでのＫｉ値：ＰＫ  ０．２２；Ｆ  ＸＩＩａ  ２１、Ｆ  ＸＩａ  ０．４、トロンビン  １．２
阻害剤番号８９：
【０１６６】
【化３３】
2006516277.tif 000038
【０１６７】
μＭでのＫｉ値：ＰＫ  ０．１９；Ｆ  ＸＩＩａ  ７９、トロンビン  １．７２
ＰＥＧ５０００は、平均分子量が５０００ダルトンのポリエチレングリコールを示す。
【０１６８】
代表的態様６：
ヒルジン−抗凝固血漿におけるプロトロンビンの活性化の防止
健康なボランティアドナーからの静脈血液を、取り出した直後に、ヒルジン溶液（２０００ＡＴＵ／ｍｌ、０．９％ＮａＣｌ溶液）に１０：１の比率で混合し、この混合物を２５０×ｇで１０分間遠心分離した。９５０μｌの血漿を２０μｌの阻害剤溶液（５または０．５ｍＭ）と混合し、３７℃で５時間、ポリプロピレン管内でインキュベートした。３０μｌのカオリン（ＰＴＴ試薬、１：１０００で希釈、ロシュ・ダイアグノスティクス社、ドイツ、ペンズベルグ）を合成表面での活性化を高めるために加えた。
【０１６９】
サンドイッチ原理による酵素免疫検定法（Enzygnost-F 1+2、ダデベーリング社、ドイツ、マルブルグ）をプロトロンビンフラグメントＦ  １＋２の測定に用いた。プロトロンビンフラグメントはＦ  １＋２に対する固定抗体に結合する。プロトロンビンに対するペルオキシダーゼコンジュゲート抗体は第二段階で結合し、結合酵素活性は色素形成によって測定される。プロトロンビンフラグメントＦ  １＋２の濃度は検量線から確定した。
【０１７０】
表５：    加えたカオリンの存在下でのポリプロピレン管内におけるプロトリンビンの活性化への各種化合物の影響。カオリンの存在下、５時間後に検出されたプロトロンビンフラグメントＦ  １＋２（ｎＭ）の量は、１００％に設定した。
【０１７１】
【表５】
2006516277.tif 000039
【０１７２】
代表的態様７：
合成表面変性モデルとしてのアフィニティークロマトグラフィーへのＰＫ阻害剤の使用
アフィニティークロマトグラフィー用の材料は、阻害剤ベンジルスルホニル−Ｄ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−４−ＡｍｂａをＣＨ−セファロース４Ｂ（ファーマシア社）へ結合することによって製造した。このために、１６ｇの膨潤ＣＨ−セファロース４Ｂを全て６５ｍｌのＭＥＳ緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ４．７５）にまず懸濁し、その後、阻害剤（２ｍｌの緩衝液中の５０ｍｇ）を加えた。２．８３７ｇのＮ−シクロヘキシル−Ｎ´−（２−モルホリノ−エチル）カルボジイミドメト−ｐ−トルエンスルホネート（アクロス・オーガニックス社）を混合物に加え（混合物中の０．１Ｍに相当する）、全体を室温で２４時間インキュベートした。次に、セファロースをＭＥＳ緩衝液および水で洗浄し、トリス緩衝液（０．０５Ｍ、０．７５Ｍ  ＮａＣｌを含む、ｐＨ７．５）で平衡させた。カラム（１．４×１９ｃｍ）に詰め、平衡させた後、１００μｇのＰＫ（ヘモクロム・ダイアグノスティクス社、ドイツ、エッセン）を１μｌのバッファーに入れて投入した。次に、カラムをまずトリス緩衝液で、次いで３Ｍ  ＮａＣｌ溶液で洗浄した。ＰＫは溶出していない。４１％の活性ＰＫは次のベンズアミジン勾配（０．１〜２．５Ｍ）によって溶出された。
【０１７３】
同等の結果は、下記の阻害剤を共有結合したアフィニティークロマトグラフィーを使用したときに得ることができる。
【０１７４】
【化３４】
2006516277.tif 000040
【国際調査報告】
2006516277.tif 000061
2006516277.tif 000062
2006516277.tif 000063
2006516277.tif 000064
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2006516277.tif 000067
2006516277.tif 000068
2006516277.tif 000069
2006516277.tif 000070
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