(57)【要約】【課題】脂肪組織に対する抗体【解決手段】標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための非治療的方法であって、以下の工程：（a）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する；（b）抗体を生産させるために、抗原を産卵動物に投与する；及び（c）産卵動物の卵から抗体を得る、ここにおいて、原料動物と産卵動物は異なる種に属する；を含む方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための非治療的方法であって、以下の工程を含む方法：
（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する；
（ii）前記抗体を生産させるために、前記抗原を産卵動物に投与する；及び
（iii）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る、ここにおいて、前記原料動物と前記産卵動物は異なる種に属する。
【請求項２】
前記産卵動物の体内で前記抗体の生産を起こさせる工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体を、前記産卵動物の前記卵に沈積させる工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記得るための工程は、前記抗体を前記卵の卵黄から単離する工程を含む、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗原は、前記原料動物の前記脂肪組織の、原形質膜、脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体はポリクローナル抗体である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項７】
前記原料動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項８】
前記標的動物及び前記産卵動物は異なる種に属する、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項９】
前記標的動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記標的動物及び前記原料動物は同じ種に属する、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１１】
前記標的動物及び前記原料動物は近縁種に属する、請求項１〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記標的動物は家畜である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１３】
前記原料動物及び／又は前記標的はブタである、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１４】
前記標的動物は患者である、請求項１〜１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記鳥類動物における産卵動物、及び前記原料動物は非鳥類動物である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１６】
前記原料動物は哺乳類である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１７】
前記動物の一以上は、前記方法の後に屠殺される、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１８】
請求項１〜１７の何れか一項において定義された方法に従って得られる抗体。
【請求項１９】
治療方法又は診断方法において使用するための、請求項１８に記載の抗体。
【請求項２０】
過剰量の脂肪細胞によって引き起こされる状態の治療のための薬物を製造するための、請求項１８で定義された抗体の使用。
【請求項２１】
請求項１８において定義された抗体の有効量を含む、飼料添加剤。
【請求項２２】
前記標的動物の前記脂肪組織の含量を低下させるように適合される、請求項２１に記載の飼料添加剤。
【請求項２３】
前記組成物は、前記抗体を含有する前記卵の卵黄を含む、請求項２１又は２２に記載の飼料添加剤。
【請求項２４】
請求項１８で定義された抗体の薬剤的に有効な量を含む薬剤。
【請求項２５】
経口摂取で投与されるのに適する、請求項２４に記載の薬剤。
【請求項２６】
注射で投与されるのに適する、請求項２４に記載の薬剤。
【請求項２７】
抗体を必要とする標的動物の体における脂肪組織の含量を調節する方法であって、以下の工程を含む方法：
（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する；
（ii）前記抗原を産卵動物に投与する；
（iii）前記抗原に応答した前記産卵動物により、前記抗体を生産させる；
（iv）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る；及び
（v）前記抗体の薬剤的に有効な量を前記標的動物に投与する、ここにおいて、前記原料動物及び前記産卵動物は異なる種に属する。
【請求項２８】
前記得るための工程は、前記卵の卵黄から前記抗体を単離する工程を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗体を経口摂取で投与する工程を含む、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体を注射で投与する工程を含む、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の原形質膜の特徴成分に結合させる工程を含む、請求項２７〜３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質に結合させる工程を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の繊維状粘性タンパク質に結合させる工程を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗原は、前記原料動物の前記脂肪組織の、原形質膜、その脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む、請求項２７〜３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記抗体はポリクローナル抗体である、請求項２７〜３４の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記原料動物及び前記産卵動物は、明確に異なる種に属する、請求項２７〜３５の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記標的動物及び前記産卵動物は異なる種に属する、請求項２７〜３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記標的動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記標的動物及び前記原料動物は同じ種に属する、請求項２７〜３８の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記標的動物及び前記原料動物は近縁種に属する、請求項２７〜３８の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記方法は非治療的方法である、請求項２７〜４０の何れか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記標的動物は家畜である、請求項２７〜４１の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記原料動物及び／又は前記標的はブタである、請求項２７〜４２の何れか一項に記載の方法。
【請求項４４】
前記標的動物は患者である、請求項２７〜４１の何れか一項に記載の方法。
【請求項４５】
前記鳥類動物の産卵動物、及び前記原料動物は非鳥類動物である、請求項２７〜４４の何れか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記原料動物は哺乳類である、請求項２７〜４５の何れか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記動物の一以上は、前記方法の後に堵殺される、請求項２７〜４６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４８】
標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための方法であって、以下の工程を含む方法：
（iv）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する；
（v）前記抗体を生産させるために、前記抗原を産卵動物に投与する；及び、
（vi）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る、ここにおいて、前記原料動物と前記産卵動物は異なる種に属する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、脂肪組織に結合する抗体を生産する方法に関し、特に、動物（例えば家畜）及び／又はヒトの脂肪組織における原形質膜の特徴成分に結合するポリクローナル抗体を生産する方法に関する。また、本発明は、該方法によって得られる抗体、該抗体の使用、該抗体を含む飼料添加剤、該抗体を含む薬剤、及び、該抗体を必要とする標的動物の体における脂肪組織の含量を調節する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
家畜農（animal farming）における主要な目標の一つは、一般の同じ畜産条件下で、動物がより早く成長し、そのような家畜農の生産性が上昇し得るように、家畜の成長率を上昇させることである。過去、近代技術が家畜農に適用される以前において、農場主は、より高い飼料消費が動物をより早く成長させ、より早く体重を増加させることを期待して、普通は単純により多くの飼料を動物に与えようとした。しかしながら、そのような方法により動物の体重増加を促進し得ることには限界がある。その上、不利益なことに、この方法は動物飼料の総消費を増加させ、従って、経営費を高くするという望ましくない移行をもたらす。
【０００３】
他の家畜の成長を促進させる方法は、動物に成長ホルモンを投与することである。この方法は、しかしながら、多くの理由から望ましくない。第一に、異種動物からの成長ホルモンはめったに同種ではなく、異なる哺乳類動物は、例えばある種の特異的な成長ホルモンにしか反応しない。適切な外来性の成長ホルモンは、通常脳下垂体から抽出されるため、充分な量の適切な外来性成長ホルモンを大規模な施用のために用意することは、かなり困難であり非経済的である。現在、外来性成長ホルモンは、ＤＮＡ組換え技術を用いて調製可能であるとはいえ、そのような方法で製造された外来性成長ホルモンは未だかなり高価である。第二に、家畜への外来性成長ホルモンの投与は、通常直接注射によって行われ、これはむしろ必然的に、数万頭の動物を有する大規模の農場においては、高価であり投与が困難である。第三に、投与される用量を、正確に所望の効果を生じさせるように制御することはかなり困難であり、外来性の成長ホルモンの過量投与は、動物にとって有害であり得る。第四に、それらの外来性成長ホルモンの残留物が肉製品まで通過し、その後、それらの消費をとおして人まで通過する可能性がある。これらの外来性成長ホルモンの人への負の副作用に対する関心を持つ科学者もあるが、この点に関するさらなる研究が必要である。
【０００４】
それらの飼料を摂食した動物が早く成長するような、種々の飼料添加剤が、動物飼料に添加されるために提案されている。残念ながら、上記方法が用いられるかどうかに関わらず、体重増加の相対的に大きい割合が、脂肪のない筋肉含有量ではなくて脂肪含有量における増加の結果であるのは、しばしばおこるケースである。この問題は、他の家畜も同様の問題を経験するにも関わらず、特にブタで顕著である。現在、ヒトにおいて健康意識が高まっているように、高脂肪含量の肉の生産への要求はたとえあったとしてもほとんどない。それ故、可能な限り低脂肪含量を有する肉の生産に対する要求が高まっている（即ち、脂肪の少ない筋肉の高い含量）。
【０００５】
家畜が高い筋肉含量で発育するような多くの方法が提案されている。非常に古い方法は、動物が運動する機会をより多くもち、それらの体の脂肪含量が減少するような、野外又は半野外農場で動物を飼育するものである。しかしながら、この方法は、空間が貴重である近代の農場では、実際に実行するのはほとんど不可能である。そのうえこの方法は、かなり予測不可能である。この方法を受けた動物が、それでもその体にかなり高い脂肪含量を有することもあり得る。
【０００６】
それゆえ、家畜の脂肪含量を制御し減少させる物質に対する要求は存続している。好ましくは、その物質は、投与が容易で天然であり、人工物又は外来性成長ホルモンによって引き起こされるものと類似するいかなる副作用もあってはならない。言い換えれば、その物質は、安全に投与されるものであるべきである。家畜に作用するような物質は、改変されることで人においても好ましく作用するであろう。
【０００７】
従って、上記問題を解決すること、又は少なくとも有用な選択肢を公共に提供することが、本発明の目的である。
【発明の開示】
【発明の概要】
【０００８】
本発明の第一の側面から、標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための非治療的方法であって、以下の工程：（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する、（ii）該抗体を生産させるために、該抗原を産卵動物に投与する及び（iii）該産卵動物の卵から該抗体を得る、ここにおいて、該原料動物と該産卵動物は異なる種に属する、を含む方法が提供される。
【０００９】
抗体は、標的動物の脂肪組織の原形質膜の特徴成分に結合するために用いられる。特に、抗体は、標的動物の脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質及び／又は繊維状粘性タンパク質に結合し得る。抗体は、特徴成分に適切に特異的に結合する。特徴成分と特異的に結合することによって、抗体が、低いか又は目立たない交差反応性を有することを示す。
【００１０】
該方法は、該産卵動物の体内から該抗体の生産を起こさせる工程を含む。該方法は、有利には、該抗体を該産卵動物の該卵に（deposition）させる工程を含む。特に、抗体を卵から得る工程は、該抗体を該卵の卵黄から単離する工程を含む。
【００１１】
抗原は、適切には、原料動物の脂肪組織の、原形質膜、その脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む。
【００１２】
抗体は、好ましくはポリクローナル抗体である。
【００１３】
好ましくは、原料動物及び産卵動物は明確に異なる種に属する。産卵動物は好ましくは鳥類であり、原料動物は非鳥類動物であってよい。特に、産卵動物は雌鳥（hen）であってよく、原料動物はブタのような哺乳類であってよい。
【００１４】
好ましくは、標的動物及び産卵動物は異なる種に属する。さらに好ましくは、標的動物及び産卵動物は明確に異なる種に属する。明確に異なる種によって、それらが系統学的に異なることを示す。例えば、ブタは哺乳類であり、雌鳥は鳥類であり、それらは明確に異なる種である。
【００１５】
好ましくは、標的動物及び原料動物は同じ種に属する。或いは、標的動物及び原料動物は近縁種に属する。近縁種によって、それらが系統学的に近縁であることを示す。例えば、ブタとラットは近縁種であり、それらは共に哺乳類であり、ブタの脂肪組織から調製された抗原に応答して生産された抗体は、ラットの脂肪組織の含量を調節するために十分良く作用する。
【００１６】
一つの態様において、標的動物は家畜（farm animal）である。特に、原料動物及び／又は前記標的はブタであってよい。ブタの脂肪含量は他の家畜より高いことが多く、抗体を投与されたブタにおいて、脂肪組織が著しく減少し得る。しかしながら、標的動物は、その脂肪組織の調節が必要な他の任意の動物であってもよい。例えば、標的動物は、脂肪の少ない牛肉を生産するために、雌牛であってよい。
【００１７】
該方法の後、動物の一又は全ては屠殺される。
【００１８】
他の態様において、標的動物は患者である。
【００１９】
本発明の第２の側面に従って、上記で定義された方法に従って得られる抗体が提供される。本発明の第３の側面に従って、治療方法又は診断方法において使用するための抗体が提供される。
【００２０】
本発明の第４の側面に従って、過剰量の脂肪細胞によって引き起こされる状態の治療のための薬物を製造するための、上記で定義された抗体の使用が提供される。
【００２１】
本発明の第５の側面に従って、上記で定義された抗体の有効量を含む飼料添加剤が提供される。特に、該飼料添加剤は、標的動物の脂肪組織の含量を低下させるように適合されてよい。
【００２２】
一つの態様において、飼料添加剤は抗体を含む卵の卵黄を含んでよい。
【００２３】
本発明の第６の側面に従って、上記で定義された抗体の薬剤的に有効な量を含む薬剤が提供される。好ましくは、該薬剤は経口摂取で投与されるのに適する。或いは、該薬剤は注射で投与されるのに適する。
【００２４】
本発明の第７の側面に従って、抗体を必要とする標的動物の体における脂肪組織の含量を調節する方法であって、以下の工程：（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する、（ii）抗原を産卵動物に投与する、（iii）該抗原に応答した該産卵動物により、該抗体を生産させる、（iv）産卵動物の卵から抗体を得る、及び（v）抗体の薬剤的に有効な量を標的動物に投与する、ここにおいて、原料動物及び産卵動物は異なる種に属する、を含む方法が提供される。特に、得るための工程は、卵の卵黄から抗体を単離する工程を含む。
【００２５】
該方法は、好ましくは、該抗体を経口摂取で投与する工程を含む。或いは、該方法は、該抗体を注射で投与する工程を含む。
【００２６】
調節する方法は、標的動物の脂肪組織の原形質膜の特徴成分に抗体を結合させる工程を含む。該方法は、該抗体を、標的動物の脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質に結合させる工程を含んでよい。また、該方法は、該抗体を、標的動物の脂肪組織の繊維状粘性タンパク質に結合させる工程を含んでもよい。特に、該抗体は、該特徴成分に適切に特異的に結合する。特徴成分と特異的に結合することによって、抗体が、低いか又は目立たない交差反応性を有することを示す。
【００２７】
好ましくは、該抗原は、原料動物の脂肪組織の、原形質膜、その脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む。
【００２８】
該抗体は好ましくはポリクローナル抗体である。
【００２９】
好ましくは、原料動物と産卵動物は明確に異なる種に属する。産卵動物は好ましくは鳥類動物であり、原料動物は非鳥類動物であってよい。特に、産卵動物は雌鳥であってよく、原料動物はブタのような哺乳類であってよい。
【００３０】
好ましくは、標的動物と産卵動物は異なる種に属する。さらに好ましくは、標的動物と産卵動物は明確に異なる種に属する。明確に異なる種によって、それらが系統学的に異なることを示す。例えば、ブタは哺乳類であり、雌鳥は鳥類であり、それらは明確に異なる種である。
【００３１】
好ましくは、標的動物と原料動物は同じ種に属する。或いは、標的動物と原料動物は近縁種に属する。近縁種によって、それらが系統学的に近縁であることを示す。例えば、ブタとラットは近縁種であり、それらは共に哺乳類であり、ブタの脂肪組織から調製された抗原に応答して生産された抗体は、ラットの脂肪組織の含量を調節するために十分良く作用する。
【００３２】
該調節方法は、非治療的方法である。
【００３３】
一つの態様において、標的動物は家畜（farm animal）である。特に、原料動物及び／又は前記標的はブタであってよい。
【００３４】
産卵動物は好ましくは鳥類動物であり、原料動物は非鳥類動物であってよい。特に、産卵動物は雌鳥であってよく、原料動物はブタのような哺乳類であってよい。
【００３５】
該方法の後、一以上の動物は屠殺される。
【００３６】
他の態様において、標的動物は患者である。
【００３７】
本発明の第８の側面に従って、標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための方法であって、以下の工程：（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する、（ii）該抗体を生産させるために、該抗原を産卵動物に投与する、及び、（iii）産卵動物の卵から前記抗体を得る、ここにおいて、原料動物と産卵動物は異なる種に属する、を含む方法が提供される。
【００３８】
本発明のさらなる側面に従って、該抗体を必要とする家畜又は患者のような標的対象において、該標的対象中の脂肪組織含量を調節するために、脂肪組織と特異的に結合する抗体が提供される。抗体は、脂肪組織の原形質膜の特徴成分に結合する。特に、抗体は、脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質に結合し得る。抗体は、脂肪組織の繊維状粘性タンパク質に結合し得る。
【００３９】
該抗体は、産卵動物の卵から得られる、及び／又は、卵に含まれる。抗体は、産卵動物の卵に沈積される。抗体は、産卵動物の体内から生産される。抗体は、産卵動物に投与された抗原に応答して生産される。
【００４０】
抗原は、原料動物の脂肪組織から調製される。抗原は、原料動物の脂肪組織の原形質膜及び／又はその脂肪細胞原形質膜表面タンパク質を含む。
【００４１】
好ましくは、標的対象及び原料動物は同じ種に属する。或いは、標的対象と原料動物は近縁種に属する。
【００４２】
好ましくは、原料動物と産卵動物は明確に異なる種に属する。
【００４３】
好ましくは、抗体はポリクローナル抗体である。
【００４４】
本発明のさらなる側面に従って、上記で定義された抗体の有効量を含む飼料添加剤が提供される。該飼料添加剤は、標的対象の脂肪組織の含量を低下させるように適合される。
【００４５】
本発明のさらなる側面に従って、上記で定義された抗体の薬剤的に有効な量を含む薬剤が提供される。該薬剤は、経口摂取で投与されるのに適する。該薬剤は、注射で投与されるのに適する。
【００４６】
本発明のさらなる側面に従って、抗体を必要とする家畜又は患者である標的対象の体において、脂肪組織の含量を調節する方法が提供され、該方法は、該標的対象の脂肪組織に特異的に結合する抗体の薬剤的に有効な量を投与する工程を含む。
【００４７】
該方法は、抗体を、脂肪組織の原形質膜の特徴成分に結合させる工程を含む。特に、該方法は、抗体を、脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質に結合させる工程を含んでも良い。該方法は、抗体を、繊維状粘性タンパク質に結合させる工程を含んでも良い。
【００４８】
該方法は、前記組成物を経口摂取で投与する工程を含む。
【００４９】
該抗体はポリクローナル抗体である。
【００５０】
本発明のさらなる側面に従って、上記で定義された抗体の薬剤的に有効な量を含む組成物を製造するための方法が提供され、該方法は、産卵動物の卵から抗体を得る工程を含む該方法は好ましくは、抗体を産卵動物の卵に沈積させる工程を含む。
【００５１】
該方法は、好ましくは、産卵動物の体内から抗体を生産させる工程を含む。特に、該方法は、産卵動物の体内において、原料動物の脂肪組織から調製された抗原に応答して、抗体を生産させる工程を含む。該方法は、抗原を産卵動物に投与する工程を含む。
【００５２】
好ましくは、抗原は、原料動物の脂肪組織の、原形質膜、及び／又はその脂肪細胞原形質膜表面タンパク質を含む。
【００５３】
好ましくは、標的対象と原料動物は同じ種に属する。或いは、標的対象と原料動物は近縁種に属する。
【００５４】
好ましくは、原料動物と産卵動物は明確に異なる種に属する。
【００５５】
好ましくは、抗体はポリクローナル抗体である。
【００５６】
組成物は、前記抗体を含有する卵黄を含んでよい。
【発明の詳細な説明】
【００５７】
生物学的物質（例えば成長ホルモン）は、「生産」動物の脳下垂体から生産され抽出され得る。生産動物とは、所望の生物学的物質を生産するための機械として用いられる動物を意味する。生物学的物質のタイプ又は性質によって、異なる方法を用いて実際に獲得又は単離されうる。例えば、生物学的物質が、生産動物の乳牛乳の初乳に存在する成長ホルモンである場合、それらからの成長ホルモンの適切な単離方法が行われるべきである。或いは、成長ホルモンが、生産動物の血清中に存在する場合、それらからの成長ホルモンの適切な単離方法が行われるべきである。しかしながら、人工的な単離方法が用いられるかどうかに関わらず、動物源から商業的な使用のために関心のある生物学的物質の充分量を単離することは非常に困難であることが分かっている。その困難は、第一に、生産される生物学的物質の量が通常非常に小さいために生じる。第二に、動物からの生物学的物質の単離は、非常に費用がかかるためである。同じ困難は、関心のある特定の抗体を生産動物から抽出または単離する際にも同様に存在する。
【００５８】
本発明において、本発明に従って調製された抗体は、標的動物（これは家畜であってよい）に投与された時、その体の全体的な脂肪含量を減少させる、または少なくともより望ましいレベルへ調節し、これによってより脂肪のない肉を生産することが証明された。本発明が人における使用に適用される場合、標的動物は該抗体を必要とする患者を意味する。
【００５９】
通常、まず脂肪組織が原料動物から除去される。次いで、脂肪組織の原形質膜が、脂肪組織から単離される。単離された原形質膜は、その脂肪細胞原形質膜タンパク質及び顆粒状及び繊維状の粘性タンパク質のような認識サイトの全てを含む。単離された原形質膜は、抗原として用いられる物質を調製するために使用される。該物質は注射に適する形体であることが好ましく、また、生産動物において所望の免疫学的応答を誘発するのに適した該抗原の免疫学的に有効な濃度を持つように設計される。
【００６０】
本発明において、前記物質は、雌鳥のような産卵動物である生産動物に投与される。生産動物として雌鳥を使用することは、雌鳥が通常、他の産卵家禽よりもより多くの卵を生産するために、特に好ましい。例えば、商業的な農場における平均的な雌鳥は、年に２００〜３００程度の産卵が可能であることが多い。雌鳥によって生産された卵黄の量は、従って非常に著しい。しかしながら、カモ類のような他の産卵動物も用いることができる。
【００６１】
一旦、抗原を含む物質が注射などによって生産動物に投与されると、生産動物の体が反応し、抗体を生産して該抗原に対する免疫応答を開始する。上述したように、投与された物質の抗原は、実際は、原料動物からの脂肪組織の原形質膜、又はそれらの断片を含む。産卵動物によって生産された抗体は、従ってポリクローナルであり、種々の異なる特徴成分、即ち原形質膜の脂肪細胞原形質膜タンパク質との結合に適応される。
【００６２】
本発明の研究及び開発の間、生産動物の体内で生産された抗体の相対的に有意な量が、生産動物によってその後産卵される卵の中に蓄積されることが確認された。さらに、卵の卵黄が、卵白よりもかなり高濃度の抗体を有することが確認され、これは、卵黄で抗体の優先的な沈積が起こることを示している。言い換えれば、動物原料から生物学的に有用な物質を生産及び単離する問題は、本発明の状況によって処理される。該卵はとりわけ、関心のある抗体が比較的容易に回収され得るような貯蔵所のようにみえる。また、それらから生産され得る卵の数が比較的多きいために、雌鳥が生産動物として好ましく用いられるのも、この理由のためである。
【００６３】
次いで、生産された抗体は、卵黄から単離することができる。或いは、抗体を含む生の卵黄を、直接、またはそれを乾燥させて卵黄粉末に形成するなどのような処理の後に用いることができる。次に、単離された抗体、抗体を含む生又は処理された卵黄の有効量が、標的動物に投与される。本発明の一つの主な適用は、動物飼育におけるように意図され、この場合、標的動物は家畜である。しかしながら、上記で示したように、本発明は人における使用に適用される事もでき、従って、標的動物はその抗体を必要とする患者であってもよい。
【００６４】
標的動物に投与したとき、抗体は、原料動物の脂肪組織の脂肪細胞原形質膜タンパク質と類似する、特徴構造またはドメイン（例えば、標的動物の細胞の表面タンパク質）に結合する。例えば、原料動物がブタであり、標的動物がブタと同じ種に属する場合、投与された抗体は、標的動物の体内の脂肪組織の脂肪細胞原形質膜に結合し、その脂肪組織の生理学的発育に干渉する。本発明の研究開発の間に、そのような結合及び／又は干渉が、標的動物において、その体重割合及び絶対体重の両方の意味において脂肪組織の含量を著しく減少させることが確認された。
【００６５】
上記で示したように、原料動物及び標的動物は同じ動物種に属してもよい。原料動物と標的動物がより近縁であれば、標的動物の標的とされる脂肪組織のための抗体の生産がより効果的であり、最終的に、標的動物の体の脂肪含量を減少させる、または少なくとも調節する。しかしながら、原料動物及び標的動物は同一の種に属する必要はない。例えば、原料動物は乳牛で、標的動物はブタであってもよい。乳牛とブタは共に哺乳類なので、それらの脂肪組織及び特にそれらの原形質膜は、例えば鳥類と哺乳類の脂肪組織の間よりも類似している。要約すると、原料動物及び標的動物がより近縁であればあるほど、生産された抗体の、標的動物の体内における結合、干渉、脂肪含量の調節及び／又は減少がより効果的になる。
【００６６】
しかしながら、原料動物及び生産動物は好ましくは十分に異なるべきであることが注意されるべきである。さもなければ、生産動物に投与された抗原を含む物質は、有効な免疫応答を誘発せず、関心のある抗体の十分な量を生産しない。例えば、原料動物がカモ類である場合、カモ類と雌鳥が共に鳥類動物であり、それらの脂肪組織が比較的類似しているために、その脂肪組織から調製される抗原は、雌鳥において比較的低い免疫応答しか誘発しない。動物は、「自己」であるとみなされる抗原に対する抗体を容易に生産しないために、原料動物及び生産動物は異なるべきである。
【００６７】
本発明は以下の実施例によって、より詳細に説明される。
【実施例】
【００６８】
[実施例Ｉ]：ブタの脂肪組織に対する抗体を雌鳥で生成する方法
Ａ．原料動物の脂肪組織からの原形質膜の単離
原料動物の背から脂肪組織を取り除いた。実験では、原料動物にエルーラリアン（Erhualian）ブタを用いた。脂肪組織を、抽出培養液中、約３７℃、ワーリングブレンダーを2000 rpmで５分の処理及びホモジナイズに供し、次いで、超音波で１０分処理した。抽出培養液は、0.25Ｍのスクロース、0.01ＭのNa2HPO4、0.002ＭのＥＤＴＡ、0.2ｍＭのＰＭＳＦからなり、ｐＨ7.4、４０℃に調整した。次に、ホモジネートを5000 rpmで３０分間、３７℃で遠心分離し、トリグリセリドを他の成分から分離した。
【００６９】
次いで、トリグリセリドを含む上清を、遠心分離後に取り除き、残部、即ち下澄液を、10000 rpm、30分間、４℃の遠心分離に供した。次に、それらの上清を10000 rpm、30分間、４℃の遠心分離に供し、上清を保持した。次いで、その上清を38000 rpm、1時間、４℃の遠心分離に供した。脂肪組織からのその脂肪細胞膜タンパク質を含む原形質膜が得られた。該膜タンパク質は、使用時まで-20℃で保存した。
【００７０】
Ｂ．ブタ脂肪細胞原形質膜及びそのタンパク質に対する抗体の生産
上記方法で得られた原形質膜は、生産動物の免疫応答を誘発するための抗原を調製するために用いた。この実験では、産卵する雌鳥を生産動物として用いた。この実験では、抗原を含む最初の注射は、初めにフロイントの完全アジュバンド0.5ｍｌ中に懸濁された約80μｇの原形質膜及びそのタンパク質を含むよう調製した。免疫応答を追加免疫するために、フロイントの不完全なアジュバンドに懸濁した同じ抗原を含む二番目の注射を、引き続いて直接注射で投与した。各回の投与は、４週に一度の間隔で、雌鳥の少なくとも２０の異なる皮膚粘膜間サイトに行った。三回目及び四回目の追加免疫の注射後に、引き続いて雌鳥が産卵した卵から卵黄を得た。次いで、卵黄の抗体応答を評価した。
【００７１】
Ｃ．ブタ脂肪細胞の原形質膜に対する卵黄抗体の酵素免疫測定法
卵黄抗体を調製し、適切な脂肪細胞原形質膜に対する抗体の力価、及び、肝臓、腎臓、赤血球、及び骨格筋の交差反応性をＥＬＩＳＡによって検診（screened）した。炭酸バッファー溶液中の、0.25μｇの脂肪細胞原形質膜タンパク質を含む100μlの原形質膜を、96穴ポリスチレンプレートの各ウェルにコーティングした。そのプレートを、加湿したチャンバー内で４℃で一晩維持した。次いで、ウェルを空にし、0.05％Ｔｗｅｅｎ20を含むＰＢＳで３回ブロックした。ＰＢＳＴ中に希釈した100μlの卵黄を、各ウェルに添加した。プレートを、３７℃で１時間維持し、ＰＢＳＴで３回洗浄した。各ウェルに、ＰＢＳＴ中の1：5000に希釈した100μlのウサギの抗トリ1gG  HRP接合体を加えた。プレートを３７℃で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した。次いで、各ウェルに、100μlのＯ-フェニレンジアミン（ＯＰＤ）基質（1.5 mg/ml）を添加した。次に、プレートを３７℃で５〜１０分間インキュベートし、そして各ウェルの反応を、50μｌの２Ｍ  Ｈ2ＳＯ4で停止した。ＥＬＡプレートリーダーを用いて４９０nmでの吸光度を測定した。各アッセイは二重に行い、３回繰り返した。卵黄中の抗体の力価は、本発明の状況においてかなり高い力価値であると考えられる、1：12800以上であることがわかった。
【００７２】
[実施例ＩＩ]：標的動物の体重に及ぼす脂肪組織抗体の影響
Ａ．背景
実験用ラットを本実験の標的動物に用いた。平均体重が140ｇである９６匹の発育盛りの雌のラットを実験に用いた。ラットは４つのグループに等しく且つ無作為に分配した。ラットは、ケージ中で３つのサブグループにしておいた。ラットは、通常のラット用飼料で飼育した。実験は、２００１年９月３０日に開始し、２００１年１２月１４日に終了した。
【００７３】
Ｂ．方法
４つのグループのラットは、２つの試験グループと２つの比較対照グループから構成される。２つの試験グループには、それぞれのラットが脂肪組織抗体を含む生の卵黄を背中の皮下の異なる位置に注射される第一の試験グループが含まれる。抗体は、上記の実施例Ｉの方法に従って調製されたものである。特に、その抗体は、ブタの脂肪組織から調製された抗原の注射に応答して生産される。
【００７４】
卵黄脂肪組織抗体は、上記実施例Ｉの記載と類似した方法に基づいて得た。各注射の用量は、１日に１匹のラットにつき１ｍｌとした。それぞれの回の投与は、４日間連続の１日一回の注射を含む。卵黄は、実験の間、月に１回、再投与した。生の卵黄中の抗体の力価は、1：12800より大きかった。
【００７５】
第２の試験グループは、同じ用量、濃度及び頻度で卵黄脂肪組織抗体を投与されるが、注射の変わりに経口摂取によって投与された。
【００７６】
対照グループは、２つのラット試験グループのそれぞれに対応する。対照グループのラットは、通常の生の卵黄を投与された。
【００７７】
Ｃ．結果
以下の表は、実験の結果を示す。
【表１】
2006505504.tif 000002
【表２】
2006505504.tif 000003
【表３】
2006505504.tif 000004
【００７８】
Ｄ．結論と考察
表１において、第１のラット試験グループにおいて、注射による抗体の投与は、体重増加及び食物消費を、対応する対照グループと比較してそれぞれ5.8％及び1.7％増加させたことが示された。しかしながら、飼料変換率は0.32％減少した。また、第２のラット試験グループにおいて、経口摂取による抗体の投与は、対応する対照グループと比較したとき体重増加を3.9％減少させ、食物消費を0.14％上昇させたことが示された。飼料変換率は、約10％減少した。第１の試験グループと対照グループに関する実験データは、注射による抗体の投与が、飼料変換率を非常にわずか低下させたにも関わらず、体重をわずかに増加させたことを例証した。飼料変換率の低さは、１単位の体重を生じさせるのにより少ない量の飼料が必要である事を意味する。第２の試験グループと対照グループに関する実験データは、経口摂取による抗体の投与が、体重増加をわずかに減少させ、飼料変換効率を実質的に10％減少させたことを例証している。これは重要であり、経口摂取による抗体の投与が、全体的な体重をわずかに減少させること、及び飼料変換率を非常に著しく低下させることにおいて、より効率的であることを証明している。
【００７９】
表２に言及すると、注射による抗体の投与が、対応する対照グループと比較したとき、大網及び腸間膜、子宮傍組織、及び腎周囲組織の脂肪含量を、それぞれ3.7％、4.2％、及び6.4％減少させることを示している。しかしながら、腓腹筋の脂肪含量は5.2％増加した。これは、経口摂取による抗体の投与が、それらの大網及び腸間膜、子宮傍組織及び腎周囲組織の脂肪含量を、対応する対照グループと比較したとき、非常に著しく、それぞれ17.1％、24.2％及び2.16％減少させたことを示している。
【００８０】
この実験において明らかに示されたように、抗体の投与は、注射または経口摂取のどちらの方法であれ、動物の体内の種々の部分における脂肪含量を減少させるのに概ね有効である。特に、経口摂取の経路による投与は、動物の全身脂肪含量の減少においてより著しく有効である。
【００８１】
表３に言及すると、注射による抗体の投与は、トリグリセリドレベルを25.5％と著しく減少させることが示されている。コレステロール及び遊離脂肪酸のレベルは、それぞれ3.6％及び4.0％とわずかに上昇した。経口摂取による抗体の投与に関して、トリグリセリドレベルもまた、22.3％と著しく減少した。コレステロール及び遊離脂肪酸のレベルは、それぞれ12.3％または32.4％上昇した。３つの表の全てのデータを共に考慮するとき、動物への抗体の投与が、その体内の全体的な脂肪含量を減少させることが明らかに示され、これは表２に示された試験グループのラットの全体的な脂肪含量における減少と、表３に示されたトリグリセリドのレベルによって支持される。特に、経口投与手段による抗体の投与は、直接注射によるものと比較してより効果的であることが示されている。
【００８２】
上記の結果は、２つの方面において重要である。第一に、驚くべきことに、本発明に従って調製された抗体は、経口で投与された場合により効果的である。これは、動物飼育において抗体が原理的には標準飼料物質と混合可能であり、そのような投与は、非常に容易、効果的であり、それにもかかわらず脂肪含量の減少というその意図される機能を達成できる。第二に、動物において観察可能な副作用がない。例えば、全体的な体重が如何なる重要な方面において影響しないにもかかわらず、脂肪含量が減少される。また、飼料転換率もわずかに改善される。換言すれば、標的動物の体内の脂肪含量はより低く、脂肪の少ない肉含量はより高い。
【００８３】
表３において、遊離脂肪酸レベルが著しく増加したことが示されている。これは、次のように説明できる。トリグリセリドは脂肪酸とグリセロールで構成される。トリグリセリドのレベル（即ち、脂肪含量）が減少されたとき、下記に示したように平衡状態が右側に移行する。
【００８４】
トリグリセリド  ⇔  脂肪酸  ＋  グリセロール
→
この理由により、遊離脂肪酸レベルが上昇する。
【００８５】
[実施例III]：ラットの体重に及ぼす脂肪組織抗体の影響
Ａ．背景および方法
本実験では標的動物に実験用ラットを用いた。平均体重が110ｇである１５０匹の雌の成長途中のラットを実験で用いた。ラットは、無作為に、ケージ中に各ケージが３匹のラットになるように５つのグループに分配した（即ち、グループＩ〜Ｖ）。グループＩは対照グループとし、グループＩＩ〜Ｖは試験グループとした。実験に先立ち、ラットに通常の飼料を与えて１週間飼育した。通常の飼料の組成は以下の通りである。
【表４】
2006505504.tif 000005
【００８６】
実験の間、グループＩのラットは通常の食餌により飼育した。グループＩＩ〜Ｖのラットは、通常の食餌に、上記実施例Ｉに記載された方法に従って調製した脂肪組織抗体の異なる量を添加して飼育した。抗体は、上記の実施例Ｉの方法に従って調製される。特に、抗体は、ブタの脂肪組織から調製された抗原の注射に応答して生産される。
【００８７】
実験は、２００２年の１１月２８日に開始され、２００３年の１月１８日に終了した。
【００８８】
Ｂ．結果
【表５−１】
2006505504.tif 000006
【表５−２】
2006505504.tif 000007
Ｃ．考察と結論
上記の結果は、75ppmの抗体を添加した食餌で飼育されたラットは、対照ラットと比較して、子宮傍脂肪が16.89％減少し、腸間膜脂肪が7.76％減少し、腎周囲脂肪が11.88％減少し、さらに腹腔の脂肪が12.60ｇ減少したことを示している。75ppmの抗体を添加した食餌で飼育されたラットは、対照ラットと比較して、腓腹筋の筋肉重量における顕著な相違はなかった。
【００８９】
上記の結果は、6000ppmの抗体を添加した食餌で飼育されたラットは、対照ラットと比較して、子宮傍脂肪が14.90％減少し、腸間膜脂肪が10.56％減少し、腎周囲脂肪が20.21％減少し、さらに腹腔の脂肪が13.05ｇ減少したことを示した。6000ppmの抗体を添加した食餌で飼育されたラットは、対照ラットと比較して、腓腹筋の筋肉重量が1.08％上昇した。しかしながら上昇はわずかであった。
【００９０】
実験データから、異なるグループのラットによる食餌摂取の量は、統計学的にほとんど同一であることが示されている。
【００９１】
実験データから、本発明に従って調製及び投与された抗体は、標的動物における脂肪組織を調節するのに、特に減少させるのに有効であることが示されている。
【００９２】
上記の実験の所見に基づき、抗体は、動物飼育（例えば動物飼料を介して）中に投与されたとき、脂肪の少ない肉を持つ動物を生産することができる。ヒトが消費するための肉を生産するほとんどの家畜の中でも、ブタはかなり高い脂肪含量を有する傾向がある。従って、本発明は特に、ブタを飼育する際に適用されるのに適している。
【００９３】
ヒトにおける使用に適用される場合、抗体は、肥満症及び／又は関連する状態の治療又は予防のための薬剤または組成物の製造において使用されることができる。或いは、抗体は、ヒトに消費されるのに適した食物サプリメントに添加されることができる。また、そのような抗体を含む薬剤を生産してもよい。
【００９４】
上述したそれぞれの参考文献の内容及びＵＫ特許出願番号第0212876.7は、それらの全ての内容を参考として本明細書に援用される。多くの変異、改変、及びさらなる実施態様が可能であり、従って、そのような変異、改変及び実施態様の全てが本発明の範囲内にあると考慮されるべきであり、また、そのように当該分野の技術者に理解されるべきである。
【手続補正書】
【提出日】平成16年7月2日(2004.7.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための非治療的方法であって、以下の工程を含む方法：
（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する、ここにおいて、前記原料動物と前記標的動物は近縁種に属する；
（ii）前記抗体を生産させるために、前記抗原を産卵動物に投与する、ここにおいて、前記産卵動物と前記標的動物は異なる種に属する；及び
（iii）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る、ここで、前記産卵動物と前記原料動物は異なる種に属する。
【請求項２】
前記産卵動物の体内で前記抗体の生産を起こさせる工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体を、前記産卵動物の前記卵に沈積させる工程を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記得るための工程は、前記抗体を前記卵の卵黄から単離する工程を含む、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項５】
前記抗原は、前記原料動物の前記脂肪組織の、原形質膜、脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体はポリクローナル抗体である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項７】
前記原料動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項８】
前記標的動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項９】
前記標的動物は家畜である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１０】
前記原料動物及び／又は前記標的動物はブタである、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１１】
前記標的動物は患者である、請求項１〜８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記鳥類動物における産卵動物、及び前記原料動物は非鳥類動物である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１３】
前記原料動物は哺乳類である、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１４】
前記動物の一以上は、前記方法の後に屠殺される、任意の上記請求項に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４の何れか一項において定義された方法に従って得られる抗体。
【請求項１６】
治療方法又は診断方法において使用するための、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
過剰量の脂肪細胞によって引き起こされる状態の治療のための薬物を製造するための、請求項１５又は１６で定義された抗体の使用。
【請求項１８】
請求項１５又は１６において定義された抗体の有効量を含む、飼料添加剤。
【請求項１９】
前記標的動物の前記脂肪組織の含量を低下させるように適合される、請求項１８に記載の飼料添加剤。
【請求項２０】
前記組成物は、前記抗体を含有する前記卵の卵黄を含む、請求項１８又は１９に記載の飼料添加剤。
【請求項２１】
請求項１５又は１６で定義された抗体の薬剤的に有効な量を含む薬剤。
【請求項２２】
経口摂取で投与されるのに適する、請求項２１に記載の薬剤。
【請求項２３】
注射で投与されるのに適する、請求項２１に記載の薬剤。
【請求項２４】
抗体を必要とする標的動物の体における脂肪組織の含量を調節する方法であって、以下の工程を含む方法：
（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する；
（ii）前記抗原を産卵動物に投与する；
（iii）前記抗原に応答した前記産卵動物により、前記抗体を生産させる；
（iv）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る；及び
（v）前記抗体の薬剤的に有効な量を、前記標的動物に経口摂取によって投与する、ここで、前記原料動物及び前記産卵動物は異なる種に属する。
【請求項２５】
前記得るための工程は、前記卵の卵黄から前記抗体を単離する工程を含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の原形質膜の特徴成分に結合させる工程を含む、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の顆粒状粘性タンパク質に結合させる工程を含む、請求項２４，２５又は２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗体を、前記標的動物の前記脂肪組織の繊維状粘性タンパク質に結合させる工程を含む、請求項２４，２５又は２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗原は、前記原料動物の前記脂肪組織の、原形質膜、その脂肪細胞原形質膜表面タンパク質、またはそれらの断片を含む、請求項２４〜２８の何れか一項に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗体はポリクローナル抗体である、請求項２４〜２９の何れか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記原料動物及び前記産卵動物は、明確に異なる種に属する、請求項２４〜３０の何れか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記標的動物及び前記産卵動物は異なる種に属する、請求項２４〜３１の何れか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記標的動物及び前記産卵動物は明確に異なる種に属する、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記標的動物及び前記原料動物は同じ種に属する、請求項２４〜３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３５】
前記標的動物及び前記原料動物は近縁種に属する、請求項２４〜３３の何れか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記方法は非治療的方法である、請求項２４〜３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３７】
前記標的動物は家畜である、請求項２４〜３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項３８】
前記原料動物及び／又は前記標的はブタである、請求項２４〜３７何れか一項に記載の方法。
【請求項３９】
前記標的動物は患者である、請求項２４〜３６の何れか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記鳥類動物の産卵動物、及び前記原料動物は非鳥類動物である、請求項２４〜３９の何れか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記原料動物は哺乳類である、請求項２４〜４０の何れか一項に記載の方法。
【請求項４２】
前記動物の一以上は、前記方法の後に堵殺される、請求項２４〜４１の何れか一項に記載の方法。
【請求項４３】
標的動物の脂肪組織含量を調節するために前記標的動物において必要とされる、前記標的動物中の脂肪組織と結合する抗体を生産するための方法であって、以下の工程を含む方法：
（i）原料動物の脂肪組織から抗原を調製する、ここにおいて、前記原料動物と前記標的動物は、近縁種に属する；
（ii）前記抗体を生産させるために、前記抗原を産卵動物に投与する、ここにおいて、前記産卵動物と前記標的動物は異なる種に属する；及び、
（iii）前記産卵動物の卵から前記抗体を得る、ここにおいて、前記産卵動物と前記原料動物は異なる種に属する。
【国際調査報告】
2006505504.tif 000008
2006505504.tif 000009
2006505504.tif 000010
2006505504.tif 000011