(57)【要約】新規イソチアゾール化合物およびその誘導体、それを含む医薬組成物ならびにその医薬用途が記載されている。本発明の化合物は、トランスフォーミング増殖因子（“ＴＧＦ”）−βシグナル伝達経路の強力な阻害剤である。本化合物は、例えば増殖性疾患および線維性疾患を含む種々のＴＧＦ関連病状の治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、水和物若しくは溶媒和物を含む化合物：
【化１】
2006516603.tif 000013
［式中：Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル（ＣＨ２）ｔ−、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｔ−、または（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり、ここで前記Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；
ｔは０〜５の整数であり；
Ｒ３は（５〜１０員ヘテロアリール）（ＣＨ２）ｓ−、（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｓ−、であり、ここで前記Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；且つ、
ｓは０〜５の整数である］。
【請求項２】
Ｒ３が（２−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−、（３−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−または（４−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−であり；ｔが０〜４の整数であり；且つ、
ｓが１〜５の整数である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が（Ｃ１−Ｃ１０）アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル（ＣＨ２）ｔ−である。請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｔ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３が（２−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−、（３−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓまたは（４−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−であり；
ｔが０〜４の整数であり；且つ、
ｓが１〜５の整数である、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
ｔが０〜３の整数であり；且つ、
ｓが１〜３の整数である、請求項６の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ３が（２−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−、（３−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−または（４−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−であり；
ｔが０〜４の整数であり；且つ、
ｓが１〜５の整数である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
ｔが０〜３の整数であり；且つ、
ｓが１〜３の整数である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、水和物若しくは溶媒和物を含む化合物：
【化２】
2006516603.tif 000014
［式中：
Ｒ１はＣ１−Ｃ１０アルキル、（Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル）（ＣＨ２）ｔ−、（Ｃ６−Ｃ１０アリール）（ＣＨ２）ｔ−、または（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり、ここで前記Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；
ｔは０〜４の整数であり；
Ｒ４はＨまたは（Ｃ１−Ｃ１０）アルキルであり；
各Ｒ５は独立してＨ、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アジド、−ＯＲ６、−Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ６、−ＳＯ２ＮＲ６Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）ｊＲ８、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＲ６（ＣＲ７Ｒ８）ｐＯＲ７、−（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−ＳＯ２（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−Ｓ（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−Ｏ（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−（ＣＨ２）ｐ（５〜１０員複素環）、および−（ＣＲ７Ｒ８）ｍＯＲ７であり；
ｍは１〜５の整数であり；
ｐは０〜５の整数であり；
ｊは０〜２の整数であり；
各Ｒ６は独立してＨ、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｋ−、および（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｋ−から選択され；
ｋは０〜５の整数であり；
各Ｒ７およびＲ６は独立してＨまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；且つ、
ｎは１〜４の整数である］。
【請求項１２】
以下からなるグループから選択される、請求項１１の化合物：
５−［３−（２−シクロヘキサ−１−エニル−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジメチル−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３，５−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−エトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−エトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−フェネチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−エトキシ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−ブロモ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−エトキシ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−エトキシ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ジフルオロメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，６−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジクロロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ジエチルアミノ−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（１−メチル−ピロリジン−２−イル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［３−（２−メチル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
（Ｒ），（Ｒ）−５−［３−（２−ヒドロキシ−シクロヘプチルメチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
（Ｒ），（Ｒ）−５−［３−（２−ヒドロキシ−シクロオクチルメチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ヒドロキシ−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ヒドロキシ−ブチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［３−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−プロピル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−イミダゾール−１−イル−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−ベンジル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジフルオロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−５−（３−ピリジン−２−イルメチル−ウレイド）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，６−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−シクロプロピルメチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；および
５−［３−（３，５−ジクロロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１つの化合物および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項１４】
ＴＧＦ関連病状を患う哺乳動物に請求項１〜１２のいずれか１つの化合物の治療的有効量を投与するステップを含む、哺乳動物におけるＴＧＦ関連病状の治療方法。
【請求項１５】
前記ＴＧＦ関連病状が増殖性疾患および線維性疾患からなるグループから選択される、請求項８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は新規イソチアゾール誘導体およびその派生物、それを含む医薬組成物ならびにその医薬用途に関する。本発明の化合物は、トランスフォーミング増殖因子（“ＴＧＦ”）−βシグナル伝達経路の強力な阻害剤である。本化合物は、例えば、増殖性疾患（例えば腫瘍、癌）および線維性疾患を含むＴＧＦ−β関連病状の治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
抗癌剤として有用なイソチアゾール誘導体は、米国特許第６，２３５，７６４号、および国際公開番号ＷＯ９９／６２８９０に記載されている。
【０００３】
ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害する化合物の必要性が、当技術分野において依然として存在する。本発明は、以下に記載のように、かかる必要性に役立つ。
【発明の開示】
【０００４】
本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、水和物若しくは溶媒和物を含む化合物を提供する：
【化１】
2006516603.tif 000002
［式中：Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル（ＣＨ２）ｔ−、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｔ−、または（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり、ここで前記Ｒ１は、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびおよびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ１０）アルキルであり；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル（ＣＨ２）ｔ−であり；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｔ−であり；好ましくは、Ｒ１は（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり；
ｔは０〜５の整数であり；
Ｒ３は（５〜１０員ヘテロアリール）（ＣＨ２）ｓ−、（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｓ−、であり、ここで前記Ｒ３は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；且つ、
ｓは０〜５の整数である］。
【０００５】
本発明の他の実施態様は、前記の式（Ｉ）の化合物である［式中：
Ｒ１は前記に定義されたとおりであり；
Ｒ３は（２−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−、（３−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−または（４−ピリジニル）（ＣＨ２）ｓ−であり；
ｔは０〜４の整数であり；好ましくは、０〜３の整数であり；且つ、
ｓは１〜５の整数であり；好ましくは、１〜３の整数である］。
【０００６】
本発明はまた、式（ＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、水和物若しくは溶媒和物を含む化合物を提供する：
【化２】
2006516603.tif 000003
［式中：
Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル）（ＣＨ２）ｔ−、（Ｃ６−Ｃ１０アリール）（ＣＨ２）ｔ−、または（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり、ここで前記Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ハロ、ヒドロキシ、（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロ（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、オキソ、およびアミノからなるグループから選択される少なくとも１つの基により置換されていても良く；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ１−Ｃ１０）アルキルであり；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ３−Ｃ１０シクロアルキル）（ＣＨ２）ｔ−であり；好ましくは、Ｒ１は（Ｃ６−Ｃ１０アリール）（ＣＨ２）ｔ−であり；好ましくは、Ｒ１は（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｔ−であり；
ｔは０〜４の整数であり；
Ｒ４はＨまたは（Ｃ１−Ｃ１０）アルキルであり；
各Ｒ５は独立してＨ、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ１０）アルキニル、ハロ、シアノ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アジド、−ＯＲ６、−Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）ＯＲ６、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ６、−ＮＲ７ＳＯ２Ｒ６、−ＳＯ２ＮＲ６Ｒ７、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、−ＮＲ６Ｒ７、−Ｓ（Ｏ）ｊＲ８、−ＳＯ３Ｈ、−ＮＲ６（ＣＲ７Ｒ８）ｐＯＲ７、−（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０アリール）、−ＳＯ２（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−Ｓ（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−Ｏ（ＣＨ２）ｐ（Ｃ６−Ｃ１０）アリール、−（ＣＨ２）ｐ（５〜１０員複素環）、および−（ＣＲ７Ｒ８）ｍＯＲ７であり；
ｍは１〜５の整数であり；
ｐは０〜５の整数であり；
ｊは０〜２の整数であり；
各Ｒ６は独立してＨ、（Ｃ１−Ｃ１０）アルキル、（Ｃ６−Ｃ１０）アリール（ＣＨ２）ｋ−、および（５〜１０員複素環）（ＣＨ２）ｋ−から選択され；
ｋは０〜５の整数であり；
各Ｒ７およびＲ８は独立してＨまたは（Ｃ１−Ｃ６）アルキルであり；且つ、
ｎは１〜４の整数である］。
【０００７】
好ましい実施形態において、本発明は以下からなるグループから選択される、前記の式（ＩＩ）の化合物を提供する：
５−［３−（２−シクロヘキサ−１−エニル−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジメチル−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３，５−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−エトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−エトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３，４−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−フェネチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−エトキシ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−エトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−ブロモ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−ブロモ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−クロロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−フルオロ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（４−エトキシ−３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−エトキシ−４−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（２，５−ジメトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（３−メトキシ−フェニル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ジフルオロメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，６−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジクロロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−モルホリン−４−イル−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ジエチルアミノ−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［２−（１−メチル−ピロリジン−２−イル）−エチル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［３−（２−メチル−ピペリジン−１−イル）−プロピル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
（Ｒ），（Ｒ）−５−［３−（２−ヒドロキシ−シクロヘプチルメチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
（Ｒ），（Ｒ）−５−［３−（２−ヒドロキシ−シクロオクチルメチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ヒドロキシ−エチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２−ヒドロキシ−ブチル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−｛３−［３−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−プロピル］−ウレイド｝−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（３−イミダゾール−１−イル−プロピル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−ベンジル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，５−ジフルオロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−５−（３−ピリジン−２−イルメチル−ウレイド）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−［３−（２，６−ジメトキシ−ベンジル）−ウレイド］−３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−シクロプロピルメチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；
５−（３−メチル−ウレイド）−３−（１−ピリジン−３−イル−エトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド；および
５−［３−（３，５−ジクロロ−ベンジル）−ウレイド］−３−（ピリジン−３−イルメトキシ）−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド。
【０００８】
本発明は、それぞれ本明細書に記載の、本発明の化合物および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を提供する。
【０００９】
本発明は、それぞれ本明細書に記載の、ＴＧＦ関連病状を患っている哺乳動物に、本発明の化合物の治療的有効量を投与するステップを含む、哺乳動物におけるＴＧＦ関連病状の治療方法を提供する。本発明の好ましい実施形態において、ＴＧＦ関連病状は増殖性疾患および線維性疾患からなるグループから選択される。増殖性疾患の例としては、腫瘍および癌を含むが、これに限定されない。線維性疾患の例としては、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維症、肺線維症、内膜過形成および再狭窄、強皮症、および皮膚の瘢痕を含むが、これに限定されない。
【００１０】
本発明の化合物は、それぞれ本明細書に記載のように、哺乳動物におけるＴＧＦ関連病状の治療処置のための医薬の製造に使用できる。
【００１１】
（定義）
本明細書においては、“ａ”および“ａｎ”の冠詞は、特記しない限り、それが言及する対象の単数形および複数形の両方を言う。
【００１２】
本明細書においては、“アルキル”という用語は、本明細書に記載の他のアルキル部分（例えば、アルコキシ）と同様に、直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル）を言う。
【００１３】
本明細書においては、“シクロアルキル”という用語は、単環または二環式炭素環式環（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［３．２．１］オクタニルおよびビシクロ［５．２．０］ノナニル）を言う。
【００１４】
本明細書においては、“ハロゲン”または“ハロ”という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモもしくはヨードまたはフッ化物、塩化物、臭化物もしくはヨウ化物を言う。
【００１５】
本明細書においては、“ハロ置換アルキル”または“ハロアルキル”という用語は、前記の１以上のハロゲンで置換された前記のアルキル基を言う。例としては、クロロメチル、ジクロロメチル、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、および２，２，２−トリクロロエチルが含まれるが、これに限定されない。
【００１６】
本明細書においては、“アルケニル”という用語は、少なくとも２個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖基を言う。例としては、エテニル、１−プロペニル、２−プロペニル（アリル）、イソ−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、および２−ブテニルを含むが、これに限定されない。
【００１７】
本明細書においては、“アルキニル”という用語は、少なくとも１つの三重結合を含む直鎖または分枝鎖の炭化水素鎖基を言う。例としては、エチニル、プロピニル、およびブチニルを含むが、これに限定されない。
【００１８】
本明細書においては、“アルコキシ”という用語は、“アルキル”が上記で定義されたものである“−Ｏ−アルキル”基を言う。
【００１９】
本明細書においては、“カルボニル”という用語は“＞Ｃ＝Ｏ”部分を言う。アルコキシカルボニルアミノ（すなわち、アルコキシ（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ−）は、アルキルカルバメート基を言う。本明細書においては、カルボニル基はまた、同じ意味で（Ｃ＝Ｏ）としても定義される。
【００２０】
本明細書においては、“アリール”という用語は、例えばフェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、およびインダニルなどの芳香族基を言う。
【００２１】
本明細書においては、“ヘテロアリール”という用語は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族基を言う。好ましくは、“ヘテロアリール”という用語は、Ｏ、ＳおよびＮから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む５〜１０員芳香族基を言う。例えば、ヘテロアリール基は、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、チエニル、フリル、イミダゾリル、ピロリル、オキサゾリル（例えば、１，３−オキサゾリル、１，２−オキサゾリル）、チアゾリル（例えば、１，２−チアゾリル、１，３−チアゾリル）、ピラゾリル、テトラゾリル、トリアゾリル（例えば、１，２，３−トリアゾリル、１，２，４−トリアゾリル）、オキサジアゾリル（例えば、１，２，３−オキサジアゾリル）、チアジアゾリル（例えば、１，３，４−チアジアゾリル）、キノリル、イソキノリル、ベンゾチエニル、ベンゾフリル、およびインドリルを含むが、これに限定されない。
【００２２】
本明細書においては、“複素環（heterocycle、heterocyclic、heterocyclyl）”という用語は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む飽和、不飽和または芳香族のＣ３−Ｃ２０単環、二環、または多環式基を言う。好ましくは、“複素環（heterocycle、heterocyclic、heterocyclyl）”という用語は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む５〜１０員環系を言う。複素環基の例としては、アゼチジニル、テトラヒドロフラニル、イミダゾリジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、ピラゾリジニル、チオモルホリニル、テトラヒドロチアジニル、テトラヒドロチアジアジニル、モルホリニル、オキセタニル、テトラヒドロジアジニル、オキサジニル、オキシチアジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、クロマニル、イソクロマニルおよびベンゾカジニルなどを含むが、これに限定されない。飽和または不飽和の単環系の例は、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、イミダゾリジン−１−イル、イミダゾリジン−２−イル、イミダゾリジン−４−イル、ピロリジン−１−イル、ピロリジン−２−イル、ピロリジン−３−イル、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル、ピペリジン−３−イル、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イル、ピペラジン−３−イル、１，３−オキサゾリジン−３−イル、イソチアゾリジン、１，３−チアゾリジン−３−イル、１，２−ピラゾリジン−２−イル、１，３−ピラゾリジン−１−イル、チオモルホリン−イル、１，２−テトラヒドロチアジン−２−イル、１，３−テトラヒドロチアジン−３−イル、テトラヒドロチアジアジン−イル、モルホリン−イル、１，２−テトラヒドロジアジン−２−イル、１，３−テトラヒドロジアジン−１−イル、１，４−オキサジン−２−イル、および１，２，５−オキサチアジン−４−イルである。
【００２３】
“オキソ”という用語は、二重結合した酸素部分（すなわち＝Ｏ）を言う。
【００２４】
本明細書においては、“薬学的に許容できる酸付加塩”という用語は、無毒性の酸付加塩、すなわち塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、クエン酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、重酒石酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩［すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート）］などの薬理学的に許容されるアニオンから誘導される塩を言う。
【００２５】
本明細書においては、“薬学的に許容できる塩基付加塩”という用語は、無毒性の塩基付加塩、すなわち、アルカリ金属カチオン（例えば、カリウムおよびナトリウム）およびアルカリ土類金属カチオン（例えば、カルシウムおよびマグネシウム）などの薬理学的に許容されるカチオンから誘導される塩、アンモニウムまたはＮ−メチルグルカミン−（メグルミン）などの水溶性アミン付加塩、ならびに低級アルカノールアンモニウムおよび他の薬学的に許容できる有機アミンの塩基との塩を言う。
【００２６】
本明細書においては、“適切な置換基”、“置換基”または“置換された”という用語は、化学的および薬学的に許容できる官能基、すなわち、本発明化合物の治療活性を無効にしない基を言う。当業者は、かかる適切な置換基をごく普通にに選択することができる。適切な置換基の具体例は、カルボニル、ハロ、ハロアルキル、パーフルオロアルキル、パーフルオロアルコキシ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシ、オキソ、メルカプト、アルキルチオ、アルコキシ、アリールまたはヘテロアリール、アリールオキシまたはヘテロアリールオキシ、アラルキルまたはヘテロアラルキル、アラルコキシまたはヘテロアラルコキシ、ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−、エステル、アミド、エーテル、アミノ、アルキル−およびジアルキルアミノ、シアノ、ニトロ、カルバモイル、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニル、アリールカルボニル、アリールオキシカルボニル、アルキルスルホニルならびにアリールスルホニルなどを含むが、これに限定されない。当業者は、多くの置換基がさらなる置換基により置換されうることを理解するであろう。
【００２７】
本明細書においては、“ＴＧＦ関連病状”という用語は、ＴＧＦ−βの産生により介在されるあらゆる病状を言う。
【００２８】
本明細書においては、“増殖性疾患”と言う用語は、細胞の急速な増殖をもたらす、細胞分裂の異常に高い速度によって起こるあらゆる疾患を言う。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明の化合物は、以下に示すスキームに概説される手順および当業者に知られている標準的な合成手順に従って容易に製造できる。本発明の範囲は、以下の実施例および製造方法の範囲により何ら制限されるものではないことが理解されなければならない。
【化３】
2006516603.tif 000004
【化４】
2006516603.tif 000005
【化５】
2006516603.tif 000006
【００３０】
スキーム１に、化合物１の製造方法を示す。式４の出発化合物は、マロニトリル３およびイソシアネート２（Ｒ１およびＲ２はＨではなく、その他は上記で定義したものである）をアルコール（好ましくはエタノール）などのプロトン性溶媒中、−２０℃〜５０℃（好ましくは０°Ｃ〜２５℃）の範囲の温度で、約１２〜２４時間にわたって、アルコキシド塩基（好ましくはナトリウムエトキシド）などの適切な強い塩基で処理して製造した。次に、スキーム１のステップ１において、水を含む不活性溶媒（または、好ましくは水単独）中の式４の塩の溶液を、酸化剤（好ましくは過酸化水素）で処理した。混合物を、溶解および環化に十分な温度および時間（好ましくは還流条件下で約１５分間）で維持し、ついで冷却して式１２の化合物を得た。スキーム１のステップ２において、式１２の化合物を酸溶液（好ましくは濃硫酸）に加え、ついで水和反応を行うのに十分な水（好ましくは約１０当量）を加え、−２０℃〜１００℃の範囲の温度（好ましくは周囲温度）で水和反応を行うのに十分な時間（好ましくは終夜）撹拌した。ついで混合物を水（あるいは好ましくは氷）で処理して式１３の化合物を得た。スキーム１のステップ３において、式１３の化合物を、不活性溶媒（好ましくはＤＭＦ）中、−７８℃〜１００℃の範囲の温度（好ましくは周囲温度）で、塩基（好ましくはカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド）で処理した。この混合物に、Ｒ３を有するハロゲン化アルキルまたはスルホナート（好ましくは、かかる化合物のヨウ化物または臭化物）のようなＲ３を含む求電子剤を加えた。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析で判断して反応が完了するまで混合物を撹拌し、化合物１を得た。
【００３１】
スキーム２に、化合物１のもう１つの製造方法を示す。スキーム２のステップ１において、チオシアン酸塩（好ましくはチオシアン酸カリウム）の不活性溶媒（好ましくは酢酸エチル）中の混合物を、不活性雰囲気下で終夜撹拌（好ましくは激しく撹拌）してこの塩を粉末化した。ついで式１９（Ｐｈはフェニルを示す）のクロロギ酸アリールで混合物を処理し、得られた混合物を−４０℃〜周囲温度の範囲の温度（好ましくは約５°Ｃ）で、反応をもたらすのに十分な時間（好ましくは約８時間）撹拌した。固体副生成物を濾過で除き、生成物を低温（好ましくは周囲温度以下）に保った。生成物を適切な不活性溶媒（好ましくはエーテル）に再溶解し、さらなる不溶性副生成物を除去した。濃縮後、生成物を再度適切な不活性溶媒（好ましくはヘキサン）に再溶解し、さらなる不溶性副生成物を除去した。ついで式２０の化合物を単離した。スキーム２のステップ２において、酸性溶液（好ましくはエーテル性ＨＣｌ）を式３の化合物で処理した。溶解後、溶液を冷却（好ましくは１０℃まで）し、アルコール（好ましくはベンジルアルコール）で処理した。さらに撹拌した後、混合物を所定の温度（好ましくは約５℃）で、反応を完結するのに十分な時間（一般的に約４日）保って、式２１の化合物を得た。スキーム２のステップ３において、適切な不活性溶媒（好ましくはアセトニトリル）中の式２１の化合物の溶液を、−４０℃〜周囲温度（好ましくは０℃）の範囲の温度で、適切な不活性溶媒（好ましくはアセトニトリル）中の式２０の化合物の溶液で処理した。反応を達成するまで反応物を０℃〜周囲温度（好ましくは周囲温度）の範囲の温度に保持した。ついで混合物を、生成物の固化を促進するのに適切な温度（好ましくは約５℃）で、収量を最大にするために十分な時間（好ましくは約２日）維持した。ついで式２２の化合物（Ｂｎはベンジルを示す）を単離した。スキーム２のステップ４において、式２２の化合物を−４０℃〜４０℃の範囲の温度（好ましくは０℃）で、適切な不活性溶媒（好ましくはアセトニトリル）中に溶解し、塩基（好ましくはピリジン）および酸化剤（好ましくは適切な不活性溶媒（好ましくはアセトニトリル）中の臭素またはヨウ素の溶液）で処理した。ついで混合物を、反応を達成するのに十分な温度（好ましくは０℃）で約１時間撹拌し、次にさらに１時間周囲温度で撹拌した。ついで固化を促進するのに十分な温度（好ましくは５℃）で、十分な時間（好ましくは終夜）混合物を放置した。ついで式２３の化合物を単離した。スキーム２のステップ５において、式２３の化合物の水和反応および脱保護は、酸（好ましくは濃硫酸）で処理することにより達成した。式２３の化合物が事前のステップからの水分で十分に湿っている場合、水をさらには加えない。式２３の化合物が乾燥している場合は、追加の水（好ましくは約１０当量）を加えた。−２０℃〜１００℃（好ましくは周囲温度）の範囲の温度で、反応の完結を達成するために十分な時間（一般的に溶解の完了により確認され、好ましくは約３時間）反応を行った。反応が完了後、変換を完結するために硫酸をさらに加えた。ついで混合物を水（好ましくは、氷）で処理した。ついで式２４の化合物を単離した。ス���ーム２のステップ６において、式２４の化合物を三価のホスフィン（好ましくはトリフェニルホスフィン）およびアルコールを含むＲ３と混合し、アゾジカルボン酸エステル誘導体（好ましくはアゾジカルボン酸ジイソプロピルエステル）で処理し、撹拌を少なくとも１分間続けた。ついで式２５の化合物を単離した。スキーム２のステップ７において、式２５の化合物を適切な不活性溶媒（好ましくはＴＨＦ）中に混合し、式Ｒ１Ｒ２ＮＨの所望のアミンで処理し、一般的に０℃〜１００℃（好ましくは５０℃〜７０℃）の、反応を達成するために十分な温度を、１時間〜４８時間の範囲の時間（好ましくは終夜）保った。ついで化合物１を単離した。
【００３２】
本発明の化合物の全ての薬学的に許容できる塩、プロドラッグ、水和物および溶媒和物もまた本発明に含む。
【００３３】
性質上塩基性である本発明の化合物は、種々の無機酸および有機酸とさまざまな異なる塩を形成することができる。かかる塩は哺乳動物への投与のためには薬学的に許容できるものでなければならないが、実際上は、まず最初に薬学的に許容されない塩として本発明の化合物を反応混合物から単離し、次いで単に後者をアルカリ試薬で処理することにより遊離塩基化合物に変換し直し、ついで後者の遊離塩基を薬学的に許容できる酸付加塩に変換することが所望される場合がある。本発明の塩基化合物の酸付加塩は、水性溶媒またはメタノールもしくはエタノールなどの適切な有機溶媒中、実質的に当量の選択された無機酸または有機酸を用いて塩基化合物を処理することにより容易に製造できる。溶媒を注意深く溜去した後、所望の塩を容易に得ることができる。所望の酸の塩は、適切な無機酸または有機酸の溶液に加えることにより、有機溶媒中の遊離塩基の溶液から沈殿させることも出来る。
【００３４】
性質上酸性である本発明の化合物は、種々の薬理学的に許容されるカチオンと塩基との塩を形成することができる。かかる塩の例は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を含み、特にナトリウム塩およびカリウム塩を含む。これらの塩は全て慣用法を用いて製造される。本発明の薬学的に許容できる塩基との塩を製造するための試薬として用いられる塩基物質は、本発明の酸性化合物と無毒性の塩基との塩を形成するものである。かかる無毒性の塩基との塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウムおよびマグネシウムなどの薬理学的に許容されるようなカチオンから得られるものを含む。これらの塩は、対応する酸性化合物を所望の薬理学的に許容されるカチオンを含む水溶液で処理し、ついで得られる溶液を、好ましくは減圧下で、溶媒が無くなるまで溜去することにより容易に製造することができる。あるいはまた、これらの塩は酸性化合物の低級アルカノール溶液と所望のアルカリ金属アルコキシドを混合し、ついで前記と同様に、得られた溶液を溶媒が無くなるまで溜去することによっても製造することができる。いずれの場合においても、好ましくは、反応の完結と所望の最終生成物の最大収量を確実にするために化学量論量の試薬が用いられる。
【００３５】
本発明の化合物の同位体標識誘導体は本発明の範囲内である。本発明によれば、同位体標識誘導体は、１以上の原子が通常天然に見られる原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する原子により置き換えられている事以外は本発明の対応する化合物と一致する。本発明の化合物に含むことができる同位体の例は、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３５Ｓ、１８Ｆ、および３６Ｃｌなどの水素、炭素、窒素、酸素、リン、フッ素および塩素の同位体を含む。特定の本発明の同位体標識化合物（例えば、３Ｈおよび１４Ｃなどが含まれている放射性同位体）は、薬物および／または基質の組織分布アッセイにおいて有用である。トリチウム（すなわち、３Ｈ）および炭素−１４（すなわち、１４Ｃ）同位体は調整および検出性が容易なため特に好ましい。さらに、重水素（すなわち、２Ｈ）などの重い同位体での置換により、例えば、インビボにおける半減期の向上または必要な投与量の減少などの代謝的安定性がもたらす特定の治療上の利点を提供することができ、それにより特定の環境下で好ましい可能性がある。本発明の同位体標識化合物は、当該技術分野で知られている手段を用いて製造できる。一般に、本発明の同位体標識化合物は非同位体標識試薬を、容易に得られる同位体標識試薬に置換することにより製造できる。
【００３６】
本発明の化合物のプロドラッグもまた含まれる。例えば、遊離のカルボキシル基はアミドまたはアルキルエステルとして誘導体化できる。アミドおよびエステル部分は、エーテル、アミンおよびカルボン酸官能基を含むがこれに限定されない。遊離ヒドロキシ基は、ヘミコハク酸エステル、リン酸エステル、ジメチルアミノ酢酸エステル、およびホスホリルオキシメチルオキシ−カルボニル（これらに限定されない）を含む基を用いて誘導体化できる（D. Fleisher, R. Bong, B．H．Stewart，Advanced Drug Delivery Reviews
(1996) (I)9，115 に概説されている）。ヒドロキシ基およびアミノ基のカルバメートプロドラッグもまた、ヒドロキシ基のカーボネートプロドラッグおよび硫酸エステルと同様に含まれる。（アシルオキシ）メチルおよび（アシルオキシ）エチルエーテル（ここで、アシル基は、これらの基に限定されないが、エーテル、アミンおよびカルボン酸官能基を含む基により置換されていても良いアルキルエステルであることができる、あるいはアシル基は前述のアミノ酸エステルである。）のようなヒドロキシ基の誘導体化もまた含まれる。このタイプのプロドラッグは、R．P．Robinsonら、J．Medicinal  Chemistry（1996）39，10に記載されている。１つのアミノ酸残基、または２以上（例えば、２、３または４）のアミノ酸残基を有するポリペプチド鎖が、本発明の化合物の遊離のアミノ、ヒドロキシまたはカルボン酸基へアミド結合またはエステル結合を介して共有結合される。アミノ酸残基は、通常３文字記号によって表される、天然に存在する２０のアミノ酸と共に、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリンホモシステイン、ホモセリン、オルニチンおよびメチオニンスルホンも含まれるが、これに限定されない。
【００３７】
本発明の化合物は、不斉中心またはキラル中心を有することができ、したがって異なるエナンチオマー形またはジアステレオマー形で存在することができる。かかるジアステレオマー混合物は、たとえば、クロマトグラフィーまたは分別結晶などの当業者に公知の方法により、その物理化学的性質の差異に基づいて各ジアステレオマーに分離することができる。エナンチオマーは、適切な光学活性化合物（例えば、アルコール）と反応させることによりエナンチオマー混合物をジアステレオマー混合物に変換し、ジアステレオマーを分離し、各ジアステレオマーを対応する純粋なエナンチオマーに変換（例えば、加水分解）することにより分離できる。全てのかかる異性体は、ジアステレオマー混合物および純粋なエナンチオマーを含めて、本発明の部分と考えられる。
【００３８】
本発明は、本発明の化合物の全ての光学異性体および立体異性体およびそれらの混合物の使用に関する。本発明の化合物はまた、互変異性体として存在することができる。本発明は、全てのかかる互変異性体およびそれらの混合物の使用に関する。
【００３９】
本発明はまた、少なくとも１つの本発明の化合物および少なくとも１つの薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物を提供する。薬学的に許容される担体は、例えばRemington's  Pharmaceutical  Sciences，Mack  Publishing  Co．，（A．R．Gennaro編、1985）に記載されているものを含む当該技術分野で知られているいかなる担体であってもよい。本発明の医薬組成物は、必要に応じて、風味剤、結合剤および賦形剤などの追加の成分を含んでよい。したがって、経口投与のためには、クエン酸などの賦形剤を含む錠剤は、デンプン、アルギン酸および特定の複合ケイ酸塩などの種々の崩壊剤ならびにショ糖、ゼラチンおよびアラビアゴムなどの結合剤と共に使用することができる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクなどの滑沢剤が錠剤化目的にしばしば有用である。同様なタイプの固体組成物もまた、軟および硬質ゼラチンカプセル剤に使用することができる。したがって、好ましい物質は、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールを含む。経口投与のために水性サスペンジョンまたはエリキシル剤が所望される場合、それに含まれる本発明の化合物は、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、またはその組み合わせなどの希釈剤とともに、種々の甘味剤もしくは風味剤、着色剤もしくは染料および必要に応じ、乳化剤もしくは懸濁化剤と混合することができる。
【００４０】
本発明の医薬組成物は、例えば、本発明の化合物の少なくとも１つと薬学的に許容できる担体を混合することを含む、当該技術分野で知られている慣用法により製造できる。
【００４１】
本発明の医薬組成物は、哺乳動物におけるＴＧＦ関連病状または増殖性疾患（それぞれ、本明細書に記載の）の治療に使用できる。したがって、例えば、経口、局所、バッカル、経鼻、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、血管内、点滴または皮下）、十二指腸内もしくは直腸投与で、または吸入器または注入器（insufflation）による投与に適切な形で、作用部位への化合物の送達を可能にするあらゆる方法による投与のための医薬組成物として本発明の化合物を製剤化できる。
【００４２】
経口投与のためには、医薬組成物は、例えば、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶セルロースもしくはリン酸カルシウム）；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクもしくはシリカ）；崩壊剤（例えば、バレイショデンプンもしくはデンプングリコール酸ナトリウム）；または湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容できる添加剤を用いる慣用法により製造される錠剤、カプセル剤、または丸剤の形をとることができる。錠剤は、当業界に公知の方法によりコーティングすることができる。経口投与のための液体製剤は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形をとることができ、あるいは液体製剤は、使用前に水または他の適切な溶媒と共に構成するための乾燥製品として提供することができる。かかる液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、メチルセルロースまたは食用硬化油）；乳化剤（例えば、レシチンまたはアラビアゴム）；非水性溶媒（例えば、アーモンドオイル、油状エステルまたはエチルアルコール）；および防腐剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のメチルエステルもしくはプロピルエステルまたはソルビン酸）などの薬学的に許容できる添加剤を用いて慣用法により製造できる。
【００４３】
バッカル投与のためには、組成物は、通常法により製剤化される錠剤またはトローチ剤の形をとることができる。
【００４４】
本発明の化合物は、当業者に公知の方法にしたがって、徐放性送達のために製剤化できる。かかる製剤の例は、米国特許第３，５３８，２１４号、第４，０６０，５９８号、第４，１７３，６２６号、第３，１１９，７４２号、および第３，４９２，３９７号に見出すことができる（その全体を本明細書に引用して援用する）。
【００４５】
本発明の化合物は、従来のカテーテル挿入技術または点滴の使用を含む、注射による非経口投与のために製剤化できる。注射用製剤は、添加防腐剤と共に、単位製剤（例えばアンプルまたは複数回投与容器）で提供できる。かかる製剤は、所望により適切に緩衝化しても良い。組成物は、油性または水性ビヒクル中のサスペンジョン、溶液またはエマルジョンの形をとることができ、懸濁化剤、安定化剤および／または分散剤などの製剤用助剤を含むことができる。あるいはまた、活性成分は、例えば発熱物質を含まない滅菌水などの適切な溶媒で使用前に再構成するための粉末形態であることができる。
【００４６】
本発明の化合物は、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなどの通常の座剤基剤を含む、座剤または停留浣腸剤などの直腸用組成物に製剤化することもできる。
【００４７】
局所投与のためには、本発明の化合物は軟膏またはクリームとして製剤化できる。
【００４８】
経鼻投与または吸入投与のためには、本発明の化合物は、患者により圧迫またはポンプで空気を入れるポンプスプレー容器からの溶液または懸濁液の形で、あるいは適切な噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを用いて、加圧容器またはネブライザからのエアゾールスプレーとして便利に送達できる。加圧エアゾールの場合において、単位用量は所定量を送達するためのバルブを備えることにより測定できる。加圧容器またはネブライザは、本発明の化合物の溶液または懸濁液を含むことができる。吸入器または注入器における使用のためのカプセルおよびカートリッジ（例えばゼラチン製）は、本発明の化合物の粉末混合物およびラクトースまたはデンプンなどの適切な粉末基剤を含むように配合してもよい。
【００４９】
ＴＧＦ関連病状の治療のための、平均的な成人のヒトへの経口、非経口またはバッカル投与のための本発明の化合物の推奨用量は、約０．１ｍｇ〜約２０００ｍｇ、好ましくは、約０．１ｍｇ〜約２００ｍｇの活性成分／単位服用量であり、これらは例えば、１〜４回／日で投与できる。
【００５０】
平均的な成人のヒトにおける上記の疾患の治療のためのエアゾール製剤は、好ましくは、各所定量または“ひと吹き（ｐｕｆｆ）”のエアゾールが約２０μｇ〜約１０，０００μｇ、好ましくは、約２０μｇ〜約１０００μｇの本発明の化合物を含むように設定される。エアゾールに関する１日総量は、約１００μｇ〜約１００ｍｇの範囲、好ましくは、約１００μｇ〜約１０ｍｇの範囲である。投与は一日に数回（例えば、２、３、４または８回）とすることができ、各回について、１、２または３用量投与する。
【００５１】
平均的な成人のヒトにおける上記の疾患の治療のためのエアゾール組み合わせ製剤は、好ましくは、各所定量または“ひと吹き”のエアゾールが約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、好ましくは、約０．０１ｍｇ〜約１００ｍｇの本発明の化合物、さらに好ましくは約１ｍｇ〜約１０ｍｇの本発明の化合物を含むように設定される。投与は一日に数回（例えば、２、３、４または８回）とすることができ、各回について、１、２または３用量投与する。
【００５２】
平均的な成人のヒトにおける上記の疾患の治療のためのエアゾール製剤は、好ましくは、各所定量または“ひと吹き”のエアゾールが約０．０１ｍｇ〜約２０，０００ｍｇ、好ましくは、約０．０１ｍｇ〜約２０００ｍｇの本発明の化合物を含み、さらに好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇを含むように設定される。投与は一日に数回（例えば、２、３、４または８回）とすることができ、各回について、１、２または３用量投与する。
【００５３】
本発明はまた、本発明の化合物の少なくとも１つのプロドラッグを含む医薬組成物並びに、それを投与することを含む治療方法をも含む。本明細書においては、“プロドラッグ”という用語は、生物内で活性のある薬物を放出するために生体内変換（自然発生的または酵素的）することを必要とする、薬理学的に不活性な親薬剤分子の誘導体を言う。プロドラッグは、代謝条件下で切断可能な基を有する本発明の化合物の変形物または誘導体である。プロドラッグは、生理状態下で加溶媒分解を受けるかあるいは酵素分解を受けるかにより、インビボで薬学的に活性な本発明の化合物に変換される。本発明のプロドラッグ化合物は、生物内で活性薬物を放出するために必要な生体内変換の数によって、シングル、ダブル、トリプルなどと呼ぶことができ、前駆体型に存在する官能基の数を示す。プロドラッグ形は、多くの場合、哺乳動物において、溶解性、組織適合性または遅延放出の利点を提供する（Bundgard, Design of Prodrugs, pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam
1985およびSilverman, The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, pp.
352-401, Acadmemic Press, San Diego, Calif., 1992を参照のこと）。当該技術分野で公知のプロドラッグは、例えば、親の酸と適切なアルコールの反応により製造されるエステルまたは親の酸化合物とアミンとの反応により製造されるアミドなどの当業者に公知の酸誘導体あるいは反応によりアシル化された塩基誘導体を形成する塩基類を含む。その上、本発明のプロドラッグ誘導体は、生物学的利用率を向上させるために、本明細書で教示されている他の特徴と組み合わせることができる。例えば、遊離のアミノ、アミド、ヒドロキシまたはカルボキシル基を有する本発明の化合物は、プロドラッグに変換することができる。プロドラッグは、１つのアミノ酸残基、または２以上の（例えば、２、３または４）アミノ酸残基を有するポリペプチド鎖が、本発明の化合物の遊離のアミノ、ヒドロキシまたはカルボン酸基にペプチド結合を介して共有結合している化合物を含む。アミノ酸残基は、通常３文字記号によって表される、天然に存在する２０のアミノ酸と共に、４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、シトルリンホモシステイン、ホモセリン、オルニチンおよびメチオニンスルホンを含む。プロドラッグはまた、カルボナート、カルバメート、アミドおよびアルキルエステルが、プロドラッグ側鎖のカルボニル炭素を介して本発明の化合物の上記の置換基に共有結合している化合物を含む。
【００５４】
本発明の化合物は、トランスフォーミング増殖因子（“ＴＧＦ”）−βシグナル伝達経路の強力な阻害剤であり、そのため、治療に有用である。したがって、本発明は、ＴＧＦ関連病状を患う動物またはヒトへ本発明の化合物の少なくとも１つの治療的有効量を投与するステップを含む、哺乳動物（動物またはヒト）におけるＴＧＦ−関連疾患の治療方法を提供する。
【００５５】
本明細書においては、“治療的有効量”という用語は、ＴＧＦ−βシグナル伝達経路を阻害するために必要な本発明の化合物の量を言う。当業者には理解されるように、“治療的有効量”は患者によって異なり、個別的に決定される。考慮すべき要素は、治療患者、体重、健康状態、投与される薬剤、疾患または症状の重症度、投与頻度および処方医師の判断などが含まれるが、これに限定されない。
【００５６】
シグナル伝達経路を阻害することにより治療できる多くの病状がある。かかる病状は、全てのタイプの増殖性疾患（例えば、乳癌、肺癌、大腸癌、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、メラノーマ、全ての血液腫瘍など）並びに、全てのタイプの線維性疾患（線維性疾患の例は、糸球体腎炎、糖尿病性腎症、肝線維症、肺線維症、動脈過形成および再狭窄、強皮症、および皮膚の瘢痕）が含まれるが、これに限定されない。ＴＧＦ−βシグナル伝達経路の阻害により治療できる他の病状はまた、米国特許第６，２３５，７６４号に記載のものを含む。
【００５７】
本発明によれば、ＴＧＦ関連病状の治療において、本明細書に記載の本発明の化合物は、単独であれ、医薬組成物の部分としてであれ、本発明の他の化合物および／または他の治療剤と組み合わせることができる。適切な治療剤（単数または複数）の例は、標準的な非ステロイド性抗炎症剤（以後ＮＳＡＩＤ’ｓ）（例えば、ピロキシカム、ジクロフェナク）、プロピオン酸類（例えば、ナプロキセン、フルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェンおよびイブプロフェン）、フェナメート類（例えば、メフェナミン酸、インドメタシン、スリンダック、アパゾン）、ピラゾロン類（例えば、フェニルブタゾン）、サリチル酸塩（例えば、アスピリン）、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ、バルデコキシブ、ロフェコキシブおよびエトリコキシブ）、鎮痛剤および関節内治療剤（例えば、コルチコステロイド）およびヒアルロン酸類（例えば、ヒアルガン（ｈｙａｌｇａｎ）およびシンヴィスク（ｓｙｎｖｉｓｃ））、抗癌剤（例えば、エンドスタチンおよびアンギオスタチン）、細胞毒性薬（例えば、アドリアマイシン、ダウノマイシン、シスプラチン、エトポシド、タクソール、タキソテール）、アルカロイド類（例えば、ビンクリスチン）、および代謝拮抗剤（例えば、メトトレキセート）、循環器薬（例えば、カルシウムチャンネル遮断薬）、脂質低下薬（例えば、スタチン系薬剤）、フィブラート類、β遮断薬、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン−２受容体アンタゴニストおよび血小板凝集（能）阻害剤、ＣＮＳ剤（例えば、抗うつ薬（セルトラリンなど）として）、抗パーキンソン薬（例えば、デプレニル、Ｌ−ドーパ、レキップ、ミラペックス）、ＭＡＯＢ阻害剤（例えば、セレジンおよびラサジリン）、ｃｏｍＰ阻害剤（例えば、タスマール）、Ａ−２阻害剤、ドーパミン再取り込み阻害剤、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニストおよび神経性一酸化窒素合成酵素阻害剤）、抗アルツハイマー病薬（例えば、ドネペジル、タクリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリンまたはメトリフォネート）、骨粗しょう症薬（例えば、ロロキシフェン、ドロロキシフェン、ラソフォキシフェンまたはフォソマックス）、免疫抑制剤（例えば、ＦＫ−５０６およびラパマイシン）、抗腫瘍物質（例えば、有糸分裂阻害薬（例えばビンブラスチン））、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチンおよびシクロホスファミド）、代謝阻害剤（例えば、５−フルオロウラシル、シトシンアラビノシドおよびヒドロキシウレア、またはＮ−（５−［Ｎ−（３，４−ジヒドロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ］−２−テノイル）−Ｌ−グルタミン酸などのヨーロッパ特許出願第２３９３６２号に記載の好ましい代謝阻害剤の１つ）、増殖因子阻害剤、細胞周期阻害剤、インターカレート抗生物質（例えば、アドリアマイシンおよびブレオマイシン）、酵素（例えば、インターフェロン）、抗エストロゲン剤などの抗ホルモン剤（例えば、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）（タモキシフェン））または、抗アンドロゲン剤（例えば、Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標）（４’−シアノ−３−（４−フルオロフェニルスルホニル）−２−ヒド���キシ−２−メチル−３’−（トリフルオロメチル）プロピオンアニリド））を含むが、これに限定されない。かかる併用療法は、治療の各成分の同時、順次または分離投与により達成できる。
【００５８】
（生物活性）
本明細書に記載の種々のＴＧＦ関連病状のための本発明の化合物の活性は、以下のアッセイの１つ以上により測定できる。本発明によれば、本発明の化合物は約０．１ｎＭ−１０００ｎＭのインビトロＩＣ５０値を示す。
【００５９】
本発明の化合物はまた、ＴβＲＩおよびＴβＲＩＩＩと比較しＴβＲＩＩに差のある（すなわち選択的な）活性を有する。選択性は、各アッセイにおける阻害のＩＣ５０値として標準アッセイにおいて測定される。
【００６０】
（ＴＧＦ−βＩＩ型受容体（ＴβＲＩＩ）キナーゼアッセイプロトコル）
ＴβＲＩＩキナーゼによるミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）のリン酸化は、以下のように測定した：５０ｍＭ  ＭＯＰＳ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨ  ７．２を含むキナーゼ反応緩衝液（ＫＲＢ）に希釈して３μＭ  ＭＢＰの最終濃度にしたＭＢＰ（Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＃１３−１０４）の８０マイクロリットルを、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ９６−ウェルマルチスクリーン−ＤＰ  ０．６５ミクロン濾過プレート（＃ＭＡＤＰＮＯＢ５０）の各ウェルに加えた。ＫＲＢに希釈した阻害剤の２０マイクロリットルを、適切なウェルに加えて所望の最終濃度（１０〜０．０３μＭ）になるように加えた。ＫＲＢに希釈したＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ａ−５３９４）および３３Ｐ−ＡＴＰ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃ＮＥＧ／６０２Ｈ）の混合物の１０マイクロリットルを、１ウェルあたり、０．２５μＭのＡＴＰおよび０．０２マイクロキュリーの３３Ｐ−ＡＴＰの最終濃度になるように加えた。ＫＲＢに希釈したＧＳＴ−ＴβＲＩＩ融合タンパク質（ＴβＲＩＩの細胞質ドメイン（４３８位でＡがＶに置き換わったアミノ酸１９３〜５６７）のＮ末端にあるグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ）の１０マイクロリットルを、２７ｎＭのＧＳＴ−ＴβＲＩＩの最終濃度になるまで各ウェルに加えた。。プレートを９０分間、室温で混合およびインキュベートした。反応インキュベーション後、１００マイクロリットルの２０％冷トリクロロ酢酸（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃２５，１３９−９）を各ウェルに加え、プレートを４℃で６０分間混合およびインキュベートした。ついで、ミリポア真空マニホールドを用いて液体を除去した。プレートをウェルあたり２００マイクロリットルの１０％冷トリクロロ酢酸で一回洗浄し、ついでウェルあたり１００マイクロリットルの１０％冷トリクロロ酢酸で２回洗浄した。プレートを室温で終夜乾燥させた。各ウェルに、２０マイクロリットルのＷａｌｌａｃ  ＯｐｔｉＰｈａｓｅ  ＳｕｐｅｒＭｉｘシンチレーション反応液を加えた。プレートをシールして、Ｗａｌｌａｃ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ液体シンチレーションカウンターを用いてカウントした。阻害剤の効力を、ＴβＲＩＩに介在されるＭＢＰ基質のリン酸化を抑制する能力で測定した。
【００６１】
（ＡＬＫ−５（ＴbＲＩ）キナーゼアッセイプロトコル）
５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＣａＣｌ２、１ｍＭ  ジチオスレイトール、および３＿Ｍ  ＡＴＰ中の６５ｎＭ  ＧＳＴ−ＡＬＫ５および８４ｎＭ  ＧＳＴ−Ｓｍａｄ３を用いてキナーゼアッセイを行った。反応物を０．５＿Ｃｉの［３３Ｐ］＿ＡＴＰにより３０℃で３ｈインキュベートした。リン酸化タンパク質をＰ−８１濾紙（Ｗｈａｔｍａｎ、Ｍａｉｄｓｔｏｎｅ、Ｅｎｇｌａｎｄ）上に捕捉し、０．５％リン酸で洗浄し、液体シンチレーションでカウントした。一方、Ｓｍａｄ３またはＳｍａｄ１タンパク質を、ＦｌａｓｈＰｌａｔｅ  Ｓｔｅｒｉｌｅ  Ｂａｓｉｃ  Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅｓ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）上にコーティングした。ついでＳｍａｄ３を有するＡＬＫ５のキナーゼドメインまたはＳｍａｄ１を有するＡＬＫ６（ＢＭＰ受容体）のキナーゼドメインのいずれかを基質として用いて、同様なアッセイ条件でＦｌａｓｈ−Ｐｌａｔｅ中でキナーゼアッセイを行った。プレートをリン酸緩衝液で３回洗浄し、トップカウント（ＴｏｐＣｏｕｎｔ）（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏ−ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）でカウントした(Laping，N．J．ら、Molecular  Pharmacology  62：58-64（2002））。
【００６２】
（ＫＤＲ／ＶＥＧＦ受容体アッセイプロトコル）
ＫＤＲ／ＶＥＧＦ受容体を抑制する本発明の化合物のインビトロ活性は、以下の手順に従って測定できる。
【００６３】
チロシンキナーゼ活性を抑制する本発明の化合物の能力は、外来基質（ｐｏｌｙＧｌｕＴｙｒ（ＰＧＴ，Ｓｉｇｍａ（登録商標）、４：１））のリン酸化を抑制する化合物の能力を測定するアッセイにおいて、組換え酵素を用いて測定できる。ヒトＫＤＲ／ＶＥＧＦ受容体（アミノ酸８０５〜１３５０）のキナーゼドメインは、バキュロウイルス発現系を用いてグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）−融合タンパク質としてＳｆ９昆虫細胞中で発現する。グルタチオンアガロースアフィニティカラムを用いて、これらの細胞の溶解物からタンパク質を精製する。ＰＧＴ基質でコーティング（０．６２５μｇＰＧＴ／ウェル）された９６−ウェルプレート中で酵素アッセイを行う。試験化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に希釈し、ついで、アッセイ中でのＤＭＳＯの最終濃度が１．６％（ｖ／ｖ）となるようにＰＧＴプレートに加える。組換え酵素をリン酸化緩衝液（５０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ  ７．３，１２５ｍＭ  ＮａＣｌ，２４ｍＭ  ＭｇＣｌ２）中に希釈する。ＡＴＰを加えて、１０μＭの最終濃度にし、反応を開始する。室温で振盪しながら３０分間インキュベーションした後、反応物を吸引し、プレートを洗浄用緩衝液（０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ）で洗浄する。リン酸化ＰＧＴの量を、ＨＲＰ−結合（ＨＲＰは西洋ワサビペルオキシダーゼを意味する）ＰＹ−５４抗体（Ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  Ｌａｂｓ）でインキュベーションし、ＴＭＢペルオキシダーゼ（ＴＭＢは３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを意味する）で発色させ、反応を４５０ｎＭでＢｉｏＲａｄ（登録商標）マイクロプレートリーダー上で定量する。試験化合物によるキナーゼ酵素活性の抑制を、吸光度の減少として検出し、シグナルを５０％抑制するために必要な化合物の濃度を、試験化合物のＩＣ５０値として記録する。
【００６４】
細胞環境で存在する完全長のタンパク質のＫＤＲチロシンキナーゼ活性を抑制する化合物の能力を測定するために、ヒトＫＤＲでトランスフェクトされたブタ大動脈内皮（ＰＡＥ）細胞（Waltenbergerら、J．Biol．Chem．269：26988，1994）を使用することができる。細胞を平板培養し、１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を加えた同一の培地（Ｈａｍ’ｓ  Ｆ１２）中で９６ウェルシャーレに付着させた。ついで細胞を洗浄し、細胞を０．１％（ｖ／ｖ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む血清除去培地で再供給し、２４時間インキュベートする。化合物で処理する直前に細胞を血清除去培地（ＢＳＡ無し）で再供給する。ＤＭＳＯに溶解した試験化合物を培地中に希釈する（ＤＭＳＯ最終濃度０．５％（ｖ／ｖ））。２時間インキュベーションした時点で、培地にＶＥＧＦ１６５（最終濃度５０ｎｇ／ｍｌ）を加え、８分間インキュベーションする。細胞を洗浄し、ＨＮＴＧ緩衝液（２０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ，ｐＨ  ７．５，１５０ｍＭ  ＮａＣｌ，０．２％Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００，１０％グリセロール，０．２ｍＭ  ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル）、１μｇ／ｍｌペプスタチン，１μｇ／ｍｌロイペプチン，１μｇ／ｍｌアプロトニン，２ｍＭピロリン酸ナトリウム，２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム）中で溶解する。ＫＤＲのリン酸化の程度は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて測定する。９６−ウェルプレートを、１ウェルあたり１μｇのヤギ抗ウサギ抗体でコーティングする。非結合抗体をプレートから洗い落とし、抗−ｆｌｋ−１  Ｃ−２０抗体（０．５μｇ／プレート、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）の添加の前に、Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ）で残った部位をブロックする。細胞溶解物の添加の前に、プレートから全ての非結合抗体を洗い落とす。ｆｌｋ−１抗体で溶解物を２時間インキュベーションした後、ＫＤＲに結合したホスホチロシンを、前述のＨＲＰ−結合ＰＹ−５４抗体およびＴＭＢで発色させて定量する。ＶＥＧＦ−刺激対照と比較してＶＥＧＦ−刺激自己リン酸化反応を５０％抑制する化合物の能力を、試験化合物のＩＣ５０値として記録する。
【００６５】
ヒト内皮細胞における有糸分裂を抑制する化合物の能力は、ＨＵＶＥ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（登録商標）への３Ｈ−チミジン取り込みを抑制する化合物の能力により測定される。このアッセイは、文献（Waltenberger  Jら、J．Biol．Chem．269：26988，1994；Cao Yら、J．Biol．Chem．271：3154，1996）に詳述されている。簡潔に言えば、１０４個の細胞をコラーゲン−コート２４−ウェルプレート中に平板培養し、付着させる。血清除去培地に細胞を再供給し、２４時間後、種々の濃度の化合物（ＤＭＳＯ中で調整，アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度は０．２％ｖ／ｖである）および２〜３０ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦ１６５で処理する。２４時間の化合物処理の最後の３時間の間、細胞を３Ｈチミジン（ＮＥＮ，１μＣｉ／ウェル）でパルスする。ついで培地を除去し、細胞を氷冷したハンクス平衡塩類溶液でよく洗浄し、ついで氷冷したトリクロロ酢酸（１０％ｖ／ｖ）で２度洗浄する。０．２ｍｌの０．１Ｎ  ＮａＯＨを添加することにより細胞を溶解し、溶解物をシンチレーションバイアルに移す。ついでウェルを０．２ｍｌの０．１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、次にこの洗浄液をバイアルに移す。３Ｈ  チミジン取り込みの程度をシンチレーション計数により測定する。対照（ＤＭＳＯビヒクルのみでＶＥＧＦ処理）と比較して、取り込みを５０％抑制する化合物の能力を、試験化合物のＩＣ５０値として記録する。
【００６６】
インビボでの本発明の化合物の活性は、対照と比較した試験化合物による腫瘍増殖の抑制量により測定できる。種々の化合物の腫瘍増殖抑制作用は、Corbett  T．H．，ら、“発癌物質構造に関する注釈を含む、化学療法アッセイのための、マウスにおける移植可能な結腸癌の進行における腫瘍誘導の関係”Cancer  Res．，35，2434-2439（1975）およびCorbett，T．H．ら、“実験的治療のためのマウス結腸-腫瘍モデル”,Cancer  Chemother．Rep．（Part
2）”，5，169-186（1975）の方法にしたがって、少し変更を加えて測定する。０．１〜０．２ｍｌのＰＢＳに懸濁した１Ｘ１０６個の対数増殖期の培養腫瘍細胞の皮下注射により、側腹部に腫瘍を誘導する。腫瘍が触診可能（直径５〜６ｍｍ）になるまで十分な時間が過ぎた後、試験動物（胸腺欠損マウス）を本発明の化合物（例えば水または５％  Ｇｅｌｕｃｉｒｅ（登録商標）４４／１４  ｒｎ  ＰＢＳなどの適切な希釈剤中に溶解して製剤化）で、１日１〜２回、５〜１０連続日、腹腔内（ｉｐ）または経口（ｐｏ）投与経路で処理する。抗腫瘍効果を測定するために、腫瘍をＶｅｒｎｉｅｒキャリパーを用いて２つの直径をミリメートルで測定し、腫瘍容積（ｍｍ３）を式：腫瘍重量＝（長さｘ［幅］２）／２を用い、Geran，R．I．ら、“動物腫瘍および他の生物系に対する化学薬剤および天然物をスクリーニングするためのプロトコル”、第三版，Cancer  Chemother．Rep．，3，1-104（1972）の方法にしたがって算出する。腫瘍移植の側腹部位は、種々の化学療法剤に関する再現性のある用量／反応効果を提供し、前記測定方法（腫瘍直径）は、腫瘍増殖速度を評価するための信頼性のある方法である。
【実施例】
【００６７】
（実施例１）
【化６】
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火炎で乾燥したフラスコ中、窒素雰囲気下、無水ＴＨＦ中で、カルバメート（１）（１．０当量）を１．０当量のアルコールＲ３ＯＨ（Ｒ３は本明細書で定義されたとおりである）および１．５当量のトリフェニルホスフィンと混合した。次の添加の間のいずれの発熱も調節できるように、反応容器を室温の水浴で囲んだ。無水ＴＨＦ溶液中アゾジカルボン酸ジエチル１Ｍ溶液の１．５当量を、２０分かけてゆっくり滴下した。添加終了後、反応物を室温でさらに５分間撹拌した。少量のメタノールを加えて反応混合物をクエンチし、乾燥するまで濃縮した。粗製残渣をクロロホルムに溶解し、水にあけて、クロロホルムで３回抽出した。有機物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し濃縮した。物質をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、所望の生成物（２）を得た。
（実施例２）
【化７】
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【００６８】
３．７５％のＮ−メチルモルホリンを含むＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中０．２Ｍカルバメート（３）の一当量を３．７５％のＮ−メチルモルホリンを含むＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中の０．２ＭアミンＲ１ＮＨ２の１．５当量と混合した。Ｒ１およびＲ３は、それぞれ本明細書に定義したとおりである。反応混合物を８０℃で２時間振盪し、ついで室温に冷却した。１０．０当量の無水Ｎ−メチルイサトイン酸樹脂を反応物に加え、室温で終夜振盪した。樹脂を濾過により除去し、粗生成物を分取ＨＰＬＣにより精製し、所望の生成物（４）を得た。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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【００６９】
本願に記載の、発行された特許、特許出願、および学術雑誌記事（これに限らない）を含む全ての刊行物を、それぞれその全体を本明細書に引用して援用する。
【００７０】
本発明は、開示した実施形態に関連して前記に記載されているが、詳述した特定の実験は本発明を単に例示しているだけであることを、当業者は容易に理解するであろう。本発明の精神から離れることなく、種々の修飾が実施可能であることが理解されなければならない。したがって、本発明は、その特許請求の範囲によってのみ限定される。
【国際調査報告】
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