(57)【要約】ヒトおよび動物でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における、式（Ｉ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６は、同一または異なっていて、そして各々が水素またはＣ１−４アルキルであり；Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルまたはＣ２−４アルキニルであり；Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）（式中、Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜４の整数であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていて、そして、各々が水素またはＣ１−４アルキルである）の基であり；あるいはＲ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシ、またはプロピレンジオキシである）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。
2006523665.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトまたは動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における式（Ｉ）
【化１】
2006523665.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６は、同一または異なっていて、そして、各々は水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルまたはＣ２−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化２】
2006523665.tif 000012
（式中、Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜４の整数であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていて、そして、各々は水素またはＣ１−４アルキルである）
の基であり；
あるいはＲ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである）
の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ１が、水素またはメチルであり、および／またはＲ２が、水素またはメチルであり、および／またはＲ４が、ヒドロキシであり、またはＲ３およびＲ４が、一緒になって、オキソであり、および／またはＲ５およびＲ６が、メチルである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、トリロスタン、ケトトリロスタンまたはエポスタンである、請求項１記載の使用。
【請求項４】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、心臓血管疾患である、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
【請求項５】
心臓血管疾患が、鬱血性心不全、心筋梗塞後症候群、心筋症、糖尿病、腎不全、代謝症候群（症候群Ｘ）または不整脈である、請求項４記載の使用。
【請求項６】
心臓血管疾患が、心筋梗塞後症候群である、請求項４記載の使用。
【請求項７】
医薬品が、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用。
【請求項８】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、増殖性疾患である、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
【請求項９】
増殖性疾患が、末梢動脈疾患、脳血管疾患、アテローム、心線維症、心筋症、糖尿病性網膜症、糖尿病性壊疽、糖尿病性ネフロパチー、強皮症、動脈瘤、ぜんそくまたはアテロームである、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
増殖性疾患が、心線維症である、請求項８または請求項９記載の使用。
【請求項１１】
増殖性疾患が、梗塞後の心線維症である、請求項８〜１０のいずれか一項記載の使用。
【請求項１２】
医薬品が、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用。
【請求項１３】
医薬品が、請求項１〜３記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを微粒子形態で含む、請求項１〜１２のいずれか一項記載の使用。
【請求項１４】
微粒子形態化合物の粒子類が、１２μmまでの平均等球体積直径を有し、そして粒子の９５％以上が５０μmまでの粒径を有する、請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
粒子類が、５〜１２μmの平均等球体積直径を有する、請求項１３または請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
粒子類が、５μmまでの平均等球体積直径を有する、請求項１３〜１５のいずれか一項記載の使用。
【請求項１７】
微粒子化合物の比表面積が、２ｍ２ｇ−１以上または５ｍ２ｇ−１以上である、請求項１３〜１６のいずれか一項記載の使用。
【請求項１８】
医薬品が、錠剤、カプセル剤または液体分散剤のいずれかとして経口的に投与される、請求項１〜１７のいずれか一項記載の使用。
【請求項１９】
医薬品が、請求項１〜３記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの０．２５mg〜１０００mgの単位投薬量を含む、請求項１〜１８のいずれか一項記載の使用。
【請求項２０】
単位投薬量が、０．５mg〜２５mgである、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
単位投薬量が、２５〜１０００mgである、請求項１９記載の使用。
【請求項２２】
式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを用いるアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の治療が：
−アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくは体内のアルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター；
の１つ以上の更なる治療と組合せて実施される、請求項１〜２１のいずれか一項記載の使用。
【請求項２３】
アルドステロンレベルを低下させるために使用される、インヒビターまたは薬剤が、ＡＣＥインヒビターである、請求項２２記載の使用。
【請求項２４】
ＡＣＥインヒビターが、カプトプリル、エナロプリルまたはリシノプリルである、請求項２２または２３記載の使用。
【請求項２５】
アルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤が、スピロノラクトンまたはエプレレノンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２６】
アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカーが、ロサルタンまたはカンダサルタンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２７】
ステロイド合成インヒビターが、アミノグルテチミドおよびメチラポンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２８】
請求項４〜６または８〜１１のいずれか一項記載のアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療における、同時の、分離のまたは連続の使用のために、
（ａ）請求項１〜３および１３〜１７記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステル；および
（ｂ）請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断するために使用される、インヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上を含む医薬品。
【請求項２９】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、請求項１〜３または１３〜１７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを、前記疾患を治療するための有効な用量で投与することによる、治療方法。
【請求項３０】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、請求項１〜３または１３〜１７のいずれか記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルおよび
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上の、前記疾患を治療するのに有効な用量を投与することによる、治療方法。
【請求項３１】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、請求項４〜６または８〜１１記載の疾患である、請求項２９または３０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アンギオテンシンＩＩ関連疾患、特にアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の治療における、トリロスタンまたは関連化合物を活性成分として含む医薬組成物の使用に関するものである。
【０００２】
体内のアンギオテンシンＩＩレベルの調節は、心臓血管疾患の防止およびその影響の軽減の両方において重要な因子である。アンギオテンシンＩＩは、体内で複数の作用を生じさせ、その一部は、心臓血管疾患を直接引き起こす。他の作用は、各種のホルモン、例えば、アルドステロンなどのミネラロコルチコイドの生成を引き起し、ついで、疾患の原因となる。本発明は、心臓血管疾患を治療するために、体内でのアンギオテンシンＩＩレセプターの作用を調節することが見出されている、トリロスタンまたは関連化合物類の使用に関する。
【０００３】
心臓血管機能は、体内の各種臓器により全身循環に放出される相互関連および相互作用ホルモンの複雑な系の影響下にある。レニン−アンギオテンシン−アルドステロン（ＲＡＡＳ）系は、関与する主要なホルモン群の１つである。
【０００４】
この系において、腎臓は、血漿タンパクであるアンギオテンシノゲンに作用するタンパク質分解酵素レニンを分泌し、アンギオテンシンＩと呼ばれる、アミノ酸１０個を含有する断片を分離させる。アンギオテンシンＩは、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）と呼ばれる、血管によって分泌されるペプチダーゼ酵素によって開裂されて、アミノ酸８個を含有するアンギオテンシンＩＩを生成する。アンギオテンシンＩＩ（Ａｎｇ  ＩＩ）は、細動脈壁の収縮、毛細血管床の閉鎖、細動脈壁における、収縮を引き起こす平滑筋細胞増殖の刺激、ナトリウムイオンを再吸収するための腎尿細管の刺激およびアルドステロンを放出するための副腎皮質の刺激を含む、体内での一連の作用を有する。
【０００５】
アルドステロンは、腎臓に更に多くのナトリウムおよび、それゆえ水を再要求させ、心拍の強さを増し、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ、アルギニンバソプレシンとしても既知である）を放出するために下垂体を刺激する。
【０００６】
全身的な役割に加えて、現在では、これらのホルモンは、ある臓器の組織においても生成され、全身的レベルと同様に局所的に作用すると考えられている。局所的なレニン−アンギオテンシン系は、機能的に別個の系として説明されてきたが、最近の実験的研究は、これらの局所的レニン−アンギオテンシン系の機能亢進と心臓血管障害との関連を示唆している。例えば、一部の研究は、ヒト心臓レニン−アンギオテンシン系が、心疾患において活性化されることを示している。更にレニン−アンギオテンシン系をコード化する遺伝子の多形性が、高血圧および左心室肥大に関連しているように思われる（Ｃｌｉｎ  ＥｘｐＨｙｐｅｒｔｅｎｓ  １９９５  Ａｐｒ；１７（３）：４４１−６８）。
【０００７】
局所的な心臓血管レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）の存在は、心臓血管疾患におけるＲＡＳインヒビター類の長期の有用な効果を説明するために援用されることが多い。しかしながら、ＲＡＳのすべての成分が、そのままの位置で合成されるわけではないため、局所的なアンギオテンシンＩＩの生成は、循環ＲＡＳに依存せずに行われる場合がある。心臓および血管壁での局所的なアンギオテンシンの生成は行われるが、少なくとも正常な状況下では、循環からの腎臓レニンの摂取に依存する。組織は、レニンレセプターおよび／またはレニン結合タンパク質の数、ＡＣＥレベル、代謝酵素の量およびアンギオテンシンレセプター密度を変化させることによって、その局所的なアンギオテンシン濃度を調節する。したがって、レニンの心臓血管膜への結合は、レニンが血漿から摂取される機構の一部である。
【０００８】
心不全において、アルドステロンは、左心室リモデリングの原因となる適応不全である、反応性間質線維症の生成に関与してきた。最近の研究（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２００２  Ｄｅｃ；１４３（１２）：４８２８−３６）は、ラットモデルの心筋損傷におけるアルドステロンの役割を記載している。アンギオテンシンは、動脈フィブリノイド壊死、血管周囲炎（主にマクロファージ）および病巣性閉塞を含む、心臓を損傷することを引き起こした。血管病変は、冠状動脈の介在での炎症メディエーターのシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）およびオステオポンチンの発現に関連していた。心筋損傷、ＣＯＸ−２、およびオステオポンチン発現は、エプレレノン（新しいアルドステロンブロッカー）を用いた治療によって顕著に弱められた。研究は、アルドステロンが心臓でのＡｎｇ  ＩＩ誘発血管炎症において重要な役割を果たすと結論付け、ＣＯＸ−２およびオステオポンチンを、損傷の潜在的メディエーターとして示唆した。慢性心不全を有するイヌでのエプレレノンの効果の研究において、やや類似した研究成果がなされた（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２  Ｄｅｃ  ３；１０６（２３）：２９６７−７２）。この研究において、左心室（ＬＶ）駆出率（ＥＦ）が、３０％〜４０％であるときに中断される冠動脈内微小塞栓形成によって、イヌに心不全を発生させた。対照のイヌにおいて、ＬＶ拡張末期および収縮末期の容量が大きく増加した。これに対して、拡張末期容積、収縮末期容積、およびＥＦは、エプレレノンを用いた３ヶ月間の治療の間、不変のままであった。ＬＶ拡張末期壁応力は、対照イヌで著しく増加したが、エプレレノン処置イヌでは著しく減少した。対照と比較すると、エプレレノンは、心筋細胞(cardiomyocyte)断面積の２８％の縮小、反応性間質線維症の体積分率の３７％の低下、および置換線維症の体積分率の３４％の低下に関連していた。この研究は、エプレレノンを用いた長期治療が、進行性ＬＶ機能不全を防止し、慢性心不全を有するイヌにおけるＬＶリモデリングを弱めたと結論付けた。
【０００９】
ＡＣＥ阻害物質は、高血圧の治療における証明される役割に加えて、心不全の治療にも使用される。臨床試験は、これらの薬剤が、心機能を改善することに加えて、心不全での死亡率を低下させることを示している。それらが心不全を治療する１つの治療メカニズムは、循環するアンギオテンシンＩＩおよびアルドステロンの減少であると考えられている。しかしながら、レニン−アンギオテンシン−アルドステロン軸（ＲＡＡＳ）は、心不全の治療中に均一に抑制されない。この効果は、臨床的悪化を告げる「アンギオテンシンＩＩ再活性化」と呼ばれている。ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ  Ｉ試験と呼ばれる大規模臨床試験において、死亡率と、アンギオテンシンＩＩおよびアルドステロンとの間に相関が見られた。更に、良好にアンギオテンシンＩＩが抑制された患者では、死亡率はより低かった。したがって、十分な治療にも関わらず、神経ホルモンが上昇したのは、より不良な予後に関連することが示唆されている（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈｅａｒｔ  Ｆａｉｌ  １９９９  Ｄｅｃ；１（４）：４０１−６）。
【００１０】
無作為アルダクトン評価試験（ＲＡＬＥＳ）において、アルドステロンレセプターのアンタゴニストであるスピロノラクトンは、重篤な鬱血性心不全（ＣＨＦ）を有する患者の死亡率を著しく低下させた。スピロノラクトンは、ＡＣＥ阻害物質に加えて投与され、その効果は、これらの薬剤に相加的であった（Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ２００２  Ｎｏｖ  ６；４０（９）：１５９６−６０１）。
【００１１】
トリロスタン、（４α，５α−１７β）−４，５−エポキシ−３，１７−ジヒドロキシアンドロスト−２−エン−２カルボニトリルは、英国特許明細書第１，１２３．７７０号および米国特許明細書第３，２９６，２９５号に記載されている。
【００１２】
英国特許第２，１３０，５８８号は、トリロスタンおよび関連化合物類の製造についての改良された方法に関する。この方法は、これらの化合物類を、５〜１２mmの平均等球体積直径を有する粒子類に微粉化することを可能にし、粒子類の少なくとも９５％は、５０mm未満の粒径を有していた。粒径のより大きな特異性が、トリロスタンの生物学的利用能を改善し、生成される代謝産物の量を制御し、それにより臨床反応を改善し、変動を減少させる。
【００１３】
発明者らは驚くべきことに、トリロスタンおよび関連化合物類が、血漿中のミネラルコルチコイド、例えばアルドステロンのレベルを必ずしも低下させることなく、血管平滑筋細胞に関するアンギオテンシンＩＩの増殖効果を阻害し、これらのホルモンに関連する増殖性疾患の治療を可能にすることを見出した。血漿中で、ミネラルコルチコイド、例えばアルドステロンのレベルを必ずしも低下させることなく、血管平滑筋細胞に対するアンギオテンシンＩＩの増殖効果を阻害することが、アンギオテンシンＩＩレセプターの感受性の低下を通じて発生すると考えられている。アンギオテンシンＩＩレセプターの感受性の低下は、例えば、細胞内シグナル、例えばカルシウムシグナルの発生障害から、アンギオテンシンＩＩタイプ１（ＡＴ１）レセプターの発現を低下させることによって起こる。
【００１４】
トリロスタンは、副腎ステロイド分泌の抑制を目的とする治療で使用されてきた。副腎ステロイドの例は、コルチゾール、アルドステロンおよびコルチコステロンを含む。実際には、副腎の機能が正常な患者では、循環する副腎ステロイドは、８〜１０mg／kg／日当量以上の高レベルのトリロスタン投薬用量においてのみ低下し、これが、最も頻繁に使用される養生法(regime)である（Ｂｅａｒｄｗｅｌｌら．１９８５，Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ（Ｏｘｆ），２３，４１３−２１，Ｅｎｇｅｌｈａｒｄｔ  ａｎｄ  Ｗｅｂｅｒ  １９９４，Ｊ  Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，４０，２６１−７）。これらのデータは、完全な健常ラットで再現可能であり、そこでは、８mg／kg／日のトリロスタンが、循環血漿中でのアルドステロンの濃度を低下させる（図１ａ）。このことは、治療前または治療後に循環副腎ステロイドのレベルを試験して、副腎ステロイドの濃度が低下したかどうかを評価することによって示される。血漿中の循環副腎ステロイドのレベルは、静脈から循環血を採取することによって試験できる。血漿は、遠心分離によって得られ、そして血漿ステロイド（例えば、ヒトではコルチゾールおよびアルデステロン、ラットではコルチコステロンおよびアルドステロン）は、従来のラジオイムノアッセイを使用してアッセイされる。適切な、コルチコステロン−ラジオイムノアッセイキットは、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ＵＫ  Ｌｉｍｉｔｅｄから入手できる。適切な，アルドステロン−ラジオイムノアッセイキットは、Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手できる。
【００１５】
本発明者らは、より低い濃度、例えば、４mg／kg／日が、循環血漿中のアルドステロン濃度を低下させないことを見出した（図１ｂ）。いずれの用量（４mg／kg／日または８mg／kg／日）も循環コルチコステロンレベルに影響を及ぼさず、そのため、なお高い用量が必要である。
【００１６】
したがって、１つの実施態様において、本発明は、アンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療において、循環副腎ステロイド濃度が影響を受けないレベルの有効用量でのトリロスタンおよび関連化合物の使用に関する。
【００１７】
この養生法(regime)がもたらす１つの利点は、過度のトリロスタン投与の副作用、すなわち、コルチゾール低下およびアルドステロン低下が回避され、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、デキサメタゾンまたはベータメタゾンなどの糖質コルチコイドの併用投与が回避されることである。
【００１８】
したがって、本発明は：
ヒトまたは動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における式（Ｉ）
【００１９】
【化３】
2006523665.tif 000003
【００２０】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６は、同一または異なっていて、そして、各々が水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルまたはＣ２−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【００２１】
【化４】
2006523665.tif 000004
【００２２】
（式中、Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜４の整数であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていて、そして、各々が水素またはＣ１−４アルキルである）
の基であり；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである）
の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。
【００２３】
ヒトまたは動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の治療のための医薬品の製造における式（Ｉ）
【００２４】
【化５】
2006523665.tif 000005
【００２５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６は、同一または異なっていて、そして、各々が水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１(2)−４アルケニルまたはＣ１(2)−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【００２６】
【化６】
2006523665.tif 000006
【００２７】
（式中、Ｒ７は（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜４の整数であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていて、そして、各々が水素またはＣ１−４アルキルである）
の基であり；
あるいは、Ｒ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである）
の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用；
治療が：
−アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成(steroidogenesis)インヒビター；
の１つ以上の投与と組み合わせて実施される、ヒトおよび動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における、先に定義したような式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用；および
治療が：
−アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；あるいは
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；
の１つ以上の投与と組み合わせて実施される、ヒトおよび動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用；
を提供する。
【００２８】
好ましい実施態様において、本発明は、先に定義される医薬品の製造において、先に定義される式（Ｉ）の化合物または３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用に関し、ここで、該医薬品は、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与される、。
【００２９】
本発明は、更に：
医薬品であって：
（ａ）先に定義される式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステル；および
（ｂ）−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上；
を含む医薬品；
医薬品であって：
（ａ）先に定義されるな式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステル；および
（ｂ）−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；あるいは
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；
の１つ以上；
を含む医薬品；
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、先に定義される式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを、前記疾患を治療するための有効な用量で投与することによる治療方法；
アンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを、前記疾患を治療するための有効な用量で投与することによる、治療方法；
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、先に定義される式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルおよび：
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上の、前記疾患を治療するのに有効な用量を投与することによる、治療方法；および
アンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルおよび：
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；あるいは
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；
の１つ以上の、前記疾患を治療するのに有効な用量を投与することによる、治療方法；
を提供する。
【００３０】
代表的には、先に定義される、アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する本方法は、式（Ｉ）の化合物または３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを、前記疾患を有する患者に、非毒性であり、前記疾患を治療するのに有効な用量で投与することを含む。
【００３１】
本明細書で使用するように、Ｃ１−４アルキル基または部分は、１〜４個の炭素原子を含有する、直鎖または分岐鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチルおよびｔ−ブチルである。代表的には、前記アルキル基は、非置換基である。代表的には、Ｃ１−４アルキル基または部分は、直鎖アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピルおよびｎ−ブチルである。好ましくは、Ｃ１−４アルキル基または部分は、メチルである。
【００３２】
Ｃ１−４（Ｃ2−４）アケニル基は、２〜４個の炭素原子を含有するオレフィン基である。Ｃ２−４アルケニル基は、例えば、エテニル、ｎ−プロペニル、ｉ−プロペニル、ｎ−ブテニル(ｂｕｔｙｅｎｙｌ)、ｉ−ブテニル、ｓ−ブテニルおよびｔ−ブテニルである。アルケニル基は、代表的には、１個の二重結合を含有する。代表的には、前記アルケニル基は、非置換基である。
【００３３】
Ｃ１−４（Ｃ2−４）アルキニル基は、２〜４個の炭素原子を含有する直鎖または分岐アルキニル基である。Ｃ２−４アルキニルは、例えば、エチニル、ｎ−プロピニルまたはｎ−ブチニルである。代表的には、アルキニル基は、三重結合を１個のみ含有する。代表的には、前記アルキニル基は、非置換基である。
【００３４】
Ｃ１−４アルカノイルオキシ基は、代表的には、式ＲａＣ（Ｏ）Ｏ−の基であり、式中、Ｒａは、水素またはＣ１−３アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｉ−プロピルである。代表的には、前記Ｃ１−３アルキル基は、非置換基である。Ｃ１−３アルキル基は、好ましくは、直鎖アルキル基、例えば、メチル、エチルまたはｎ−プロピルである。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物の３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルは、式（Ｉａ）に示す構造を有し
【００３６】
【化７】
2006523665.tif 000007
【００３７】
式中、Ｒ１〜Ｒ６は、先に定義されるとおりであり、Ｒｂは、水素またはＣ１−３アルキル基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｉ−プロピルである。代表的には、前記Ｃ１−３アルキル基は、非置換基である。Ｃ１−３アルキル基は、好ましくは、直鎖アルキル基、例えば、メチル、エチルまたはｎ−プロピルである。
【００３８】
式（Ｉ）またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルによって定義されるトリロスタンおよび関連化合物類が本発明で使用できる。
【００３９】
式（Ｉ）の好ましい化合物は、Ｒ１が、水素またはメチルであり、Ｒ２が、水素またはメチルであり、そしてＲ５およびＲ６が、メチルである化合物である。Ｒ４は、ヒドロキシであるか、またはＲ３およびＲ４は、一緒に、オキソであることが更に好ましい。このような好ましい化合物の例は、トリロスタン（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、水素であり、Ｒ４は、ヒドロキシであり、そしてＲ５およびＲ６は、メチルである）、ケトトリロスタン（Ｒ１およびＲ２は、水素であり、Ｒ３およびＲ４は、一緒に、オキソであり、そしてＲ５およびＲ６は、メチルである）およびエポスタン（Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ６はメチルであり、Ｒ２は、水素であり、そしてＲ４は、ヒドロキシである）である。
【００４０】
本化合物は、ヒトおよび動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造で使用される。代表的には、本化合物は、ヒトおよび動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の治療のための医薬品の製造で使用される。治療される疾患は、これに限定されるわけではないが、鬱血性心不全などの増殖性および線維性変化に関連する心不全、心筋梗塞後症候群、心筋症、糖尿病、腎不全、代謝症候群（症候群Ｘ）および高アルドステロン症、例えば、原発性、二次性および三次性高アルドステロン症ならびに、アンギオテンシンＩＩのレベル上昇が血液または体組織中に存在する疾患または症状を含む。治療されるアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の更なる例は、不整脈である。カプトプリルおよびロサルタンを使用する、不整脈およびその治療は、Ｏｚｅｒら，２００２  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｒｅｓ  ４５：２５７−６３において論じられている。代表的には、アンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患は、鬱血性心不全、心筋梗塞後症候群、心筋症、糖尿病、腎不全または代謝症候群（症候群Ｘ）である。更に代表的には、アンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患は心筋梗塞後症候群である。
【００４１】
好ましくは、治療されるアンギオテンシンＩＩ関連疾患は、増殖性疾患である。代表的には、増殖性疾患は、平滑筋細胞増殖が示される疾患である。代表的には、増殖性疾患は、心臓血管増殖性疾患である。更に代表的には、増殖性疾患は、アンギオテンシンＩＩにより調節される平滑筋細胞増殖および／または平滑筋細胞移動が示される心臓血管増殖性疾患である。治療される増殖性疾患の好ましい例は、末梢動脈疾患、脳血管疾患、心線維症、心筋症、糖尿病性網膜症、糖尿病性壊疽、糖尿病性ネフロパチー、強皮症、ぜんそく、動脈瘤およびアテローム、特に、アテローム以外のこのような疾患を含む。
【００４２】
更に好ましくは、治療される増殖性疾患は、心線維症である。なお更に好ましくは、それは梗塞後の心線維症である。梗塞後の心線維症では、梗塞のサイズおよび好中球(neutrophil)浸潤の程度はいずれも、アンギオテンシンＩＩ依存性である。梗塞後の心線維症は、Ｓｕｎら，１９９４  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ２８：１４２３−３２  ａｎｄ  Ｗａｌｔｍａｎら，１９９５，Ｊ  Ｃａｒｄ  Ｆａｉｌ  １：２９３−３０２（梗塞サイズおよび好中球浸潤）、およびＷａｎｇら，  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｒｅｓ  ５５：２５−３７およびＭａｒｔｉｎｅｚら  ２００３  Ａｒｃｈ  Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  ３４：３５７−６１（梗塞後の心線維症でのカプトプリルおよびロサルタンの使用）で論じられている。
【００４３】
代表的には、治療される患者は、副腎ステロイドのレベル上昇に関連していないアンギオテンシンＩＩ関連疾患または副腎ステロイド分泌を抑制することによって治療できないアンギオテンシンＩＩ関連疾患に罹患している。
【００４４】
このような化合物類は、好ましくは、微粒子形態で使用される。特に、該化合物類は、望ましくは、１２μm以下の平均等球体積直径を有する粒子より成り、そして粒子の８０、８５、９０、９５％以上、好ましくは、９８％以上、９９％以上または９９．５％以上は、５０μm未満、好ましくは、４０μm未満、３０μm未満または２０μm未満、例えば、０．１μm〜１０、２０、３０、４０または５０μm、１μm〜１０、２０、３０、４０または５０μm、あるいは１０μm〜２０、３０、４０または５０μmの粒径を有する。粒子は、好ましくは、５〜１２μmまたは５μmまでの、例えば、０．１〜５μmまたは１〜５μmの平均等球体積直径を有する。式（Ｉ）の化合物の、累積オーバーサイズパーセンテージ対サイズ特性曲線は、１．５〜２．５μm、好ましくは、１．７５〜２．２５μm、更に好ましくは、約２μm、例えば、１．９〜２．１μmの標準偏差を示すことが更に好ましい。
【００４５】
治療は、医薬品の形態で投与され、医薬品は、好ましくは、本発明の化合物の、２５mg〜１０００mg、例えば、２５〜５０mg、５０〜１００mg、１００〜２００mg、２００〜３００mg、３００〜４００mg、４００〜５００mg、５００〜６００mg、６００〜７００mg、７００〜８００mg、８００〜９００mgまたは９００〜１０００mgの単位投薬量を含む。代表的な単位投薬量の更なる例は、０．２５mg〜１０００mg、例えば、０．５〜２５mg、１〜５mg、５〜１０mg、１０〜１５mg、１５〜２０または２０〜２５mgを含む。
【００４６】
先に記載される単位投薬量は、１単位投薬量が１ヶ月に１回、１週間に１回、１日に１回または１日に複数回投与されるような、定期的間隔で投与される。本治療は、１日から数週間、数ヶ月または数年間の全期間に渡って、例えば、被験者の余命期間を通じて実施される。
【００４７】
先に定義されるトリロスタンまたは関連化合物は、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与されることが更に好ましい。最も好ましくは、トリロスタンまたは関連化合物は、１〜３mg／kg／日、例えば、１〜１．５mg／kg／日、１．５〜２mg／kg／日、２〜２．５mg／kg／日または２．５〜３mg／kg／日の用量で投与される。
【００４８】
式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルは、薬理的に許容される塩の形態で存在できる。本明細書で使用されるように、薬理的に許容される塩は、薬理的に許容される酸または塩基との塩である。薬理的に許容される酸類は、無機酸類、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、ニリン酸、臭化水素酸または硝酸、および有機酸、例えば、クエン酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、コハク酸、酒石酸、安息香酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸の両方を含む。薬理的に許容される塩基類は、アルカリ金属（例えば、ナトリウムまたはカリウム）水酸化物類およびアルカリ土類金属（例えば、カルシウムまたはマグネシウム）水酸化物類、および有機塩基類、例えば、アルキルアミン、アラルキルアミンまたは複素環式アミン類を含む。
【００４９】
医薬品は、経静脈、筋肉内または皮下経路によって、あるいは軟膏、クリームまたはローションとして局所的に投与できる。好ましい経路は、例えば、錠剤、カプセル剤または液体分散剤としての経口である。
【００５０】
式（Ｉ）のトリロスタンおよび他の化合物、およびそのエステル類は、純粋な形態で投与されるが、通常、それらは１種以上の薬理的に許容される担体または希釈剤を用いて処方されることになる。例えば、固体経口形態は、活性化合物と一緒に、希釈剤類、例えば、ラクトース、デキストロース、サッカロース、セルロース、コーンスターチまたはポテトデンプン；潤滑剤、例えば、シリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール類；結合剤類；例えば、デンプン類、アラビアゴム類、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはポリビニルピロリドン；脱凝集剤類、例えば、デンプン、アルギン酸、アルギネート類またはデンプングリコール酸ナトリウム類；発泡混合物類；染料類；甘味料類；湿潤剤類、例えば、レシチン、ポリソルベート類、ラウリルサルフェート類；そして一般に、医薬処方物で使用される非毒性および薬理的に不活性物質を含有する。このような医薬製剤類は、既知の方法で、例えば、混合、造粒、打錠、糖コーティング、またはフィルムコーティング工程によって製造される。
【００５１】
経口投与用の液体分散剤類は、シロップ、乳剤および懸濁剤類である。シロップ類は、担体として、例えば、サッカロースまたはサッカロースと共にグリセリンおよび／またはマンニトールおよび／またはソルビトールを含有する。懸濁剤類および乳剤類は、担体として、例えば、天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはポリビニルアルコールを含有する。
【００５２】
筋肉内注射用の懸濁剤類または液剤類は、活性化合物と一緒に、薬理的に許容される担体、例えば、滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール類、例えば、プロピレングリコール、および、所望ならば、塩酸リドカインの適切な量を含有する。注射または点滴用液剤類は、担体として、例えば、滅菌水を含有するか、または、好ましくは、それらは、滅菌され、水溶性の、等張性の形態である。
【００５３】
投与(treatment)は、単独で、または以下のもの；ＡＣＥインヒビター、アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー、またはアルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断する、アルドステロンインヒビターもしくは薬剤からの１つ以上の化合物の治療と組み合わせて使用できる。アルドステロンレベルを低下させる、アルドステロンインヒビターもしくは薬剤は、ＡＣＥインヒビターであってもよいし、そうでなくてもよい。併用治療に使用するための適切なＡＣＥ阻害物質の例は、これに限定されるわけではないが、カプトプリル、エナロプリルおよびリシノプリルを含む。アルドステロンレベルを低下させるための、適切なアルドステロンインヒビター類または薬剤類は、これに限定されるわけではないが、スピロノラクトン、ロサルタンおよびエプレレノンを含む。これらのうち、スピロノラクトンおよびエプレレノンは、アルドステロンインヒビター類であり、アルドステロンレセプターでアンタゴニストとして作用する。ロサルタンは、タイプ１（ＡＴ１）レセプターでてアンギオテンシンＩＩレセプターブロッカーとして作用し、アルドステロン濃度を低下させることによって、その生理学的効果を部分的に発揮する。アンギオテンシンＩＩタイプ１レセプターブロッカーの別の例は、カンダサルタンである。先に定義されるトリロスタンまたは関連化合物と組み合わせて使用され得る化合物の更なる例は、ステロイド合成(steroidogenesis)インヒビター、例えば、アミノグルテチミドおよびメチラポンである。
【００５４】
好ましくは、治療(treatment)は単独で、またはカプトプリル、エナロプリル、リシノプリル、スピロノラクトン、エプレレノン、ロサルタン、カンダサルタン、アミノグルテチミドおよびメチラポンから選択される１つ以上の更なる治療剤と組み合わせて使用される。更に好ましくは、治療は単独で、またはロサルタンの更なる治療と併用して使用される。
【００５５】
治療および追加治療は、同時に、分離してまたは連続して、そして分離してまたは連続して行う場合にはいずれの順序でも行うことができる。治療および追加治療は、心臓血管疾患の治療で有効であると当技術分野において知られている用量の、前記更なる化合物の単位投薬量、および先に記載した用量の、式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの単位投薬量を好ましくは含む、単一の組合せ医薬品の形態で与えられる。医薬品は、先に記載した方式で投与される。あるいは２つの治療は、例えば同じ部位または異なる部位に投与される２つの異なる医薬品として、同一投与方式によってまたは異なる投与方式によって、分離してまたは連続して与えられ得る。
【実施例】
【００５６】
大動脈平滑筋細胞（ＡＳＭＣ）が、ラット胸部および腹部動脈（ＲＡＳＭＣ）ならびにウシ大動脈（ＢＡＳＭＣ）から培地外植法によって単離され、数継代に渡って培養された。
【００５７】
腹部および胸部大動脈の両方の切片がラットから、殺処分したラットにおいて慎重な切開により得られた。大動脈の切片が、麻酔(anaesthesia)下の仔牛から得られた。大動脈の断片が、組織培地を含有する凹スライドに置かれ、その後、各切片の外膜および外部分を解剖顕微鏡下で慎重に除去された。組織の残りの内部分および内膜が個別の切開皿に除去され、新しい培地で数回洗浄された。この時点で、各切片が約１mm２に切断され、２５cm２組織培養フラスコに入れられた。フラスコ、緩くキャップが付され、加湿ＣＯ２インキュベータに置かれた。２時間後、１００単位／ml  ペニシリン、１００mg／ml  ストレプトマイシン、４pmol／Ｌ  Ｌ−グルタミンおよび２０％  ＰＢＳが補われたＲＰＭＩ−１６４０培地４mlが、組織を除去することなく慎重にフラスコに添加された。１週間後にサンプルに新しい培地が供給された。外植片(explants)からの細胞は、約２週間の期間内に比較的コンフルエント(confluent)であった。それらが次にＰＢＳですすがれ、続いてＰＢＳ中の０．１２５％  トリプシンおよび０．０２％  ＥＤＴＡの溶液を用いて１〜２分間、３７℃にてトリプシン化された。細胞の得られた懸濁物が、培地１０mlを含有する、７５cm２  組織培養フラスコにピペットで取られ、先のように培養された。
【００５８】
実験は、継代３〜５からの細胞を用いて実施された。
【００５９】
実施例１
ラット大動脈平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）への３Ｈ−メチルチミジン抱合。Ｑｕｉｅｓｃｅｎｔ  ＲＡＳＭＣ（０．３×１０５／ml／ウェル）がＡｎｇ  ＩＩ（１０−７Ｍ）を含有する無血清培地（ＳＦＭ）によって、トリロスタンの異なる濃度を用いて、または用いずに、４８時間培養された。結果が表１に示される。ＲＡＳＭＣへの３Ｈ−メチルチミジン抱合は、Ａｎｇ  ＩＩ投与群で上昇した。Ａｎｇ  ＩＩによって誘発されたトリチウム抱合が、１０−６および１０−５Ｍにてトリロスタンによって阻害されたが、１０−９、１０−８、および１０−７Ｍでは阻害されなかった。
【００６０】
【表１】
2006523665.tif 000008
【００６１】
値は、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。グループ当たりＮ＝３。ＡＮＮＯＶＡ：Ｐ＜０．００１；スチューデントのｔ‐検定−対照と刺激されたアンギオテンシンとの比較、Ｐ＜０．０１、刺激されたアンギオテンシンと１０−６または１０−５Ｍで添加されたトリロスタンとの比較、Ｐ＜０．０５．
（ｄｐｍ：壊変毎分）
【００６２】
実施例２
ラット大動脈平滑筋細胞（ＲＡＳＭＣ）の細胞数。ＲＡＳＭＣ（０．５×１０５／ml／ウェル）がＡｎｇ  ＩＩ（１０−７Ｍ）を含有する２０％  ＦＢＳ  ＲＰＭＩ−１６４０培地によって、トリロスタンの異なる濃度を用いて、または用いずに、４８時間培養された。結果が表２に示される。Ａｎｇ  ＩＩ  １０−７Ｍで処理された群のＲＡＳＭＣの数は、対照と比較して著しく増加した。Ａｎｇ  ＩＩ刺激による細胞数の増加は、１０−６および１０−５Ｍにてトリロスタンによって阻害されたが、１０−９、１０−８および１０−７Ｍでは阻害されなかった。
【００６３】
【表２】
2006523665.tif 000009
【００６４】
値は、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。グループ当たりＮ＝３。ＡＮＮＯＶＡ：Ｐ＜０．００１；スチューデントのｔ‐検定−対照と刺激されたアンギオテンシンとの比較、Ｐ＜０．０１、刺激されたアンギオテンシンと１０−６または１０−５Ｍで添加されたトリロスタンとの比較、Ｐ＜０．０５．
実施例３
実施例１と同じトリチウム化チミジン取り込み方法を使用して、アンギオテンシンＩＩ刺激細胞増殖へのロサルタンの作用が、トリロスタンの存在下または非存在下で試験された。ロサルタンは、アンギオテンシンＩＩの刺激作用を著しく除去し、そしてロサルタンの単独群は対照群と異なっていなかった。トリロスタンの追加の存在は、細胞増殖を対照値よりもなお更に減少させた（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。結果が図２に示される。
【００６５】
実施例４
オスＷｉｓｔａｒラット（約５００ｇ）が綿実油中のエタノール０．１mlおよびトリロスタン  ４mg／kg／日と共に５日間に渡って処理された。対照動物は、ビヒクルのみが与えられた。次に、動物がヘパリンＩＰ  ０．１ml（５００ｕ）によって処理され、スタンニングおよび頚椎脱臼によって殺処分された。血液が頚部血管から採取され、遠心分離にかけられ、得られた血漿が、ステロイド分析で必要になるまで−２０℃にて貯蔵された。コルチコステロンおよびアルドステロン濃度が、市販のキット（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．，Ｗｅｂｓｔｅｒ，テキサス州、米国）を用いてアッセイされた。結果が図３に示される。コルチコステロン（図３（ａ））およびアルドステロン（図３（ｂ））の循環濃度が、対照動物およびトリロスタンの処理を受けた動物について示されている。対照とトリロスタン値との間に著しい相違はない。
【００６６】
確立された方法を使用して、トリロスタンの処理群および対照群の動物から得られたＲＡＳＭＣの一次培養が確立された。［Ｃａ２＋］ｉ測定では、細胞に、３０分間に渡って培地−改良Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ重炭酸溶液（３．６ｍＭ  Ｋ＋、１．２ｍＭ  Ｃａ２＋、０．５ｍＭ  Ｍｇ２＋、５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓおよび２０ｍＭ  ＨＣＯ−）中、３７℃にて、１Ｍ  ｆｕｒａ−２が装填された。ｆｕｒａ−２の蛍光を測定する同時測定のために、カバースリップ上にプレイトされた(plated)細胞が、改良Ｋｒｅｂｓ−Ｒｉｎｇｅｒ重炭酸溶液中で、倒立顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ）のステージに載せられた。励起波長は、３４０〜３８０nmであった、そして放射は５１０nmにて検知された。［Ｃａ２＋］ｉが、３４０および３８０nmの励起波長における蛍光強度の比から計算された。約１０細胞／野の細胞野が、対照およびトリロスタン処理動物から試験された。結果を表３ならびに図（ｃ）および（ｄ）に示され、ここで、矢印は、アンギオテンシンＩＩの適用時間を示す。特徴的なカルシウムシグナルが、対照動物（図３（ｄ））およびトリロスタン処理動物（図３（ｄ））から血管平滑筋細胞の刺激により、１０ｎmol／Ｌ  アンギオテンシンＩＩによって得られた。
【００６７】
【表３】
2006523665.tif 000010
【００６８】
表３  トリロスタンが処理された平滑筋細胞（ＴＴＳＭＣ）および対照細胞（ＮＳＭＣ）におけるアンギオテンシンＩＩ（１ｎmol／Ｌ）に対するカルシウムシグナル反応の閾値(threshold)濃度。＋＝カルシウム反応、−＝反応なし。
【００６９】
実施例５
ＡＴ１レセプターｍＲＮＡの発現が、アルドステロン１０−８mol／Ｌを用いて、または用いずに、４８時間に渡って培養されたＲＡＳＭＣにおいて、ＲＴ−ＰＣＲおよびリアルタイム定量ＲＴ−ＰＣＲによって検知された。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲが、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  ＱＲＴ−ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  Ｋｉｔ、累積蛍光のリアルタイム検知に基づく１ステップ（Ｍｘ３００Ｐ，Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，アムステルダム）を用いて実施された。結果は、平均的なものであり、ＳＥＭは小さすぎて示せない。＊＊＝Ｐ＜０．０１。この結果が図４に示される。アンギオテンシンＩＩ自体は、アンギオテンシンＩＩタイプ１レセプター（ＡＴ１）をコード化する遺伝子のｍＲＮＡ転写を減少させ、そして、これはトリロスタンの添加によってなお更に減少される。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１ａ】トリロスタン処理についての、アルドステロン量を示す。
【図１ｂ】トリロスタン処理についての、アルドステロン量を示す。
【図２】ロサルタン及びトリロスタン処理についての、アンギオテンシンＩＩ刺激細胞増殖量を示す。
【図３ａ】トリロスタン処理についての、コルチコステロンの循環濃度を示す。
【図３ｂ】トリロスタン処理についての、アルドステロンの循環濃度を示す。
【図３ｃ】トリロスタン処理についての、蛍光比（Ｆ３４０／Ｆ３８０）の経時変化を示す。
【図３ｄ】対照についての、蛍光比（Ｆ３４０／Ｆ３８０）を示す。
【図４】トリロスタン処理についての、ＡＴ１レセプターのｍＲＮＡ転写量を示す。
【図１ａ】
2006523665.tif 000013
【図１ｂ】
2006523665.tif 000014
【図２】
2006523665.tif 000015
【図３ａ】
2006523665.tif 000016
【図３ｂ】
2006523665.tif 000017
【図３ｃ】
2006523665.tif 000018
【図３ｄ】
2006523665.tif 000019
【図４】
2006523665.tif 000020
【手続補正書】
【提出日】平成17年2月16日(2005.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトまたは動物類でのアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療のための医薬品の製造における式（Ｉ）
【化１】
2006523665.tif 000021
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５、Ｒ６は、同一または異なっていて、そして、各々は水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ３は、水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルまたはＣ２−４アルキニルであり；
Ｒ４は、ヒドロキシル、Ｃ１−４アルカノイルオキシ、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）
【化２】
2006523665.tif 000022
（式中、Ｒ７は、（ＣＨ２）ｎであり、ここで、ｎは、０〜４の整数であり、Ｒ８は、水素、Ｃ１−４アルキル、ヒドロキシまたはＮＨ２であり、Ｒ９およびＲ１０は、同一または異なっていて、そして、各々は水素またはＣ１−４アルキルである）
の基であり；
あるいはＲ３およびＲ４は、一緒になって、オキソ、エチレンジオキシまたはプロピレンジオキシである）
の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの使用。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｒ１が、水素またはメチルであり、および／またはＲ２が、水素またはメチルであり、および／またはＲ４が、ヒドロキシであり、またはＲ３およびＲ４が、一緒になって、オキソであり、および／またはＲ５およびＲ６が、メチルである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
式（Ｉ）の化合物が、トリロスタン、ケトトリロスタンまたはエポスタンである、請求項１記載の使用。
【請求項４】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、心臓血管疾患である、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
【請求項５】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、鬱血性心不全、心筋梗塞後症候群、心筋症、糖尿病、腎不全、代謝症候群（症候群Ｘ）または不整脈である、請求項１〜４のいずれか一項記載の使用。
【請求項６】
心臓血管疾患が、心筋梗塞後症候群である、請求項４記載の使用。
【請求項７】
医薬品が、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与される、請求項１〜６のいずれか一項記載の使用。
【請求項８】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、増殖性疾患である、請求項１〜３のいずれか一項記載の使用。
【請求項９】
増殖性疾患が、末梢動脈疾患、脳血管疾患、心線維症、心筋症、糖尿病性網膜症、糖尿病性壊疽、糖尿病性ネフロパチー、強皮症、動脈瘤、ぜんそくまたはアテロームである、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
増殖性疾患が、心線維症である、請求項８または請求項９記載の使用。
【請求項１１】
増殖性疾患が、梗塞後の心線維症である、請求項８〜１０のいずれか一項記載の使用。
【請求項１２】
医薬品が、０．５〜４mg／kg／日の用量で投与される、請求項１〜１１のいずれか一項記載の使用。
【請求項１３】
医薬品が、請求項１〜３記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを微粒子形態で含む、請求項１〜１２のいずれか一項記載の使用。
【請求項１４】
微粒子形態化合物の粒子類が、１２μmまでの平均等球体積直径を有し、そして粒子の９５％以上が５０μmまでの粒径を有する、請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
粒子類が、５〜１２μmの平均等球体積直径を有する、請求項１３または請求項１４記載の使用。
【請求項１６】
粒子類が、５μmまでの平均等球体積直径を有する、請求項１３〜１５のいずれか一項記載の使用。
【請求項１７】
微粒子化合物の比表面積が、２ｍ２ｇ−１以上または５ｍ２ｇ−１以上である、請求項１３〜１６のいずれか一項記載の使用。
【請求項１８】
医薬品が、錠剤、カプセル剤または液体分散剤のいずれかとして経口的に投与される、請求項１〜１７のいずれか一項記載の使用。
【請求項１９】
医薬品が、請求項１〜３記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルの０．２５mg〜１０００mgの単位投薬量を含む、請求項１〜１８のいずれか一項記載の使用。
【請求項２０】
単位投薬量が、０．５mg〜２５mgである、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
単位投薬量が、２５〜１０００mgである、請求項１９記載の使用。
【請求項２２】
式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを用いるアンギオテンシンＩＩ関連心臓血管疾患の治療が：
−アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくは体内のアルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター；
の１つ以上の更なる治療と組合せて実施される、請求項１〜２１のいずれか一項記載の使用。
【請求項２３】
アルドステロンレベルを低下させるために使用される、インヒビターまたは薬剤が、ＡＣＥインヒビターである、請求項２２記載の使用。
【請求項２４】
ＡＣＥインヒビターが、カプトプリル、エナロプリルまたはリシノプリルである、請求項２２または２３記載の使用。
【請求項２５】
アルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤が、スピロノラクトンまたはエプレレノンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２６】
アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカーが、ロサルタンまたはカンダサルタンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２７】
ステロイド合成インヒビターが、アミノグルテチミドおよびメチラポンである、請求項２２記載の使用。
【請求項２８】
請求項４〜６または８〜１１のいずれか一項記載のアンギオテンシンＩＩ関連疾患の治療における、同時の、分離のまたは連続の使用のために、
（ａ）請求項１〜３および１３〜１７記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステル；および
（ｂ）請求項２２〜２７のいずれか一項に記載の
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断するために使用される、インヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上を含む医薬品。
【請求項２９】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、請求項１〜３または１３〜１７のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルを、前記疾患を治療するための有効な用量で投与することによる、治療方法。
【請求項３０】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患を治療する方法であって、前記疾患を有する患者に、請求項１〜３または１３〜１７のいずれか記載の式（Ｉ）の化合物またはその３−エノールＣ１−４アルカノエートエステルおよび
−ＡＣＥインヒビター；
−アンギオテンシンＩＩレセプターブロッカー；
−アルドステロンレベルを低下させるもしくはアルドステロンの効果を遮断するために使用される、アルドステロンインヒビターまたは薬剤；あるいは
−ステロイド合成インヒビター
の１つ以上の、前記疾患を治療するのに有効な用量を投与することによる、治療方法。
【請求項３１】
アンギオテンシンＩＩ関連疾患が、請求項４〜６または８〜１１記載の疾患である、請求項２９または３０記載の方法。
【国際調査報告】
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