(57)【要約】本発明は、癌治療用の薬剤の製造のための、小胞中に封入されたコルチコステロイドを含んでなる組成物の使用、例えばコルチコステロイドおよびリポソームを含んでなる組成物の使用に関する。該リポソームは、非帯電小胞形成脂質、ならびに所望により両親媒性の小胞形成脂質および／または負に帯電した小胞形成脂質を含んでなる。さらに、本発明は、癌、および特に固形の原発腫瘍および二次腫瘍の治療に好適な新規な医薬組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
非リンパ性癌、特に固形の原発腫瘍および／または二次腫瘍の治療に有用な薬剤の製造のための、長期循環微小小胞中に封入されたコルチコステロイドを含んでなる組成物の使用。
【請求項２】
前記微小小胞が、リポソーム、ナノカプセルまたは高分子ミセルであり、この微小小胞が生理的条件下で中性または負の電荷を有するものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記微小小胞が、非帯電小胞形成脂質、ポリエチレングリコールで誘導体化された０〜２０モルパーセントの両親媒性小胞形成脂質、０〜５０モルパーセントのステロール、および０〜１０モル％の負に帯電した小胞形成脂質を含んでなるリポソームであり、該リポソームが約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記微小小胞の循環半減期が少なくとも６時間である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記薬剤が、非経口適用または局所適用のための薬剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、血液凝固カスケードに作用する少なくとも一種の薬物を含んでなるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記組成物が、腫瘍上でコルチコステロイドと相互作用する成分、好ましくはヘパリンまたはヘパリン断片をさらに含んでなるものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、細胞増殖抑制剤および細胞傷害剤からなる群から選択される少なくとも一種の化合物、好ましくはアントラサイクリン、ドキソルビシン、タキソールトポイソメラーゼＩ阻害剤およびビンカアルカロイドからなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含んでなるものである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、免疫調節剤および免疫抑制剤からなる群から選択される少なくとも一種の成分を含んでなるものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記コルチコステロイドが水溶性であり、好ましくは血管新生抑制性コルチコステロイド、より好ましくはテトラヒドロコルチコステロンまたはその機能性類似体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、ならびにヘパリンおよびヘパリン誘導体からなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１２】
長期循環微小小胞、およびその中に含まれる水溶性コルチコステロイドを含んでなり、該コルチコステロイドが血管新生抑制性ステロイド、好ましくはテトラヒドロコルチコステロンである、医薬組成物。
【請求項１３】
長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、ならびにドキソルビシンおよびタキソールからなる群から選択される少なくとも一種の細胞増殖抑制剤および／または細胞傷害剤（コルチコステロイド以外）を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
前記長期循環微小小胞が、非帯電小胞形成脂質、０〜２０モルパーセントの高分子−脂質コンジュゲートおよび０〜１０モルパーセントの負に帯電した小胞形成脂質を含んでなるリポソームであり、該リポソームが約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
本発明は、癌の治療または癌増殖の阻害における、コルチコステロイドを含んでなる組成物の使用に関する。より具体的には、本発明は、コルチコステロイドを腫瘍組織へターゲティングする方法に関する。
【０００２】
さらに具体的には、本発明は、非リンパ性癌の治療、好ましくは固形の（非血液性の）悪性腫瘍および転移（固形の原発腫瘍および二次腫瘍）の治療におけるこのような組成物の使用を提供することを目的とするものであり、従って、腫瘍学の分野に属する。
【０００３】
グルココルチコイドなどのコルチコステロイドは、癌の治療に有効な成分として提案されている。例えば、ColemanはBiotherapy 4(1) (1992), 37-44には、腫瘍の治療において、その抗炎症性および抗嘔吐性のためにグルココルチコイドがしばしば用いられ、またリンパ起源の細胞での効率的な細胞溶解活性のために血液の悪性腫瘍の治療にも用いられることが記載されている。
【０００４】
リンパ性癌、例えば慢性および急性リンパ性白血病、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫の治療において、ステロイドは抗腫瘍活性を示している。リンパ起源の細胞がコルチコステロイド（免疫抑制活性）によって抑制され得るという事実を考慮すると、これは驚くことではない。
【０００５】
このような治療の一例がＵＳ−Ａ−６，０９０，８００公報に開示され、脂質可溶性ステロイドプロドラッグを含む小胞、リポソームおよびミセルが記載されている。この文献には「コルチゾンおよびデキサメタゾンなどのステロイドは有力な免疫抑制剤であり、自己免疫疾患、臓器移植拒絶、関節炎、皮膚、粘膜および眼の炎症などの症状、ならびにリンパ腫などの腫瘍性症状の治療に用いられる」と記載されている。さらに、この米国特許文献では、Ｔ細胞上のＩＬ−２受容体へのターゲティングが教示されている。
【０００６】
１９８０年代および１９９０年代のさらなる報告において、グルココルチコイドは固形腫瘍の増殖をも遅延させ得ることが実証された。いくつかの研究により、この効果が腫瘍細胞を直接目的としたものではなく、むしろ腫瘍の血管新生の干渉によって媒介されることが示された（この点については、例えば、Folkman et al. in Science 221 (4612) (1983), 719-723; Lee et al. in Cancer Res. 47(19) (1987), 5021-5024; McNatt et al. in J. Ocul. Pharmacol. Ther. 15(5) (1999) 413-423;およびCrowley et al. in Oncology 45(4) (1988), 331-335参照)。しかし、干渉の正確なメカニズムは明確となっていない。それは、内皮細胞の増殖および遊走の阻害によって(Cariou et al. in Cell. Biol. Int. Rep. 12(12) (1988), 1037-1047)、基底膜のターンオーバーによって(Folkman et al. (ibid); Ingber et al. in Endocrinology 119(4) (1986), 1768-1775)、および／または血管形成因子（プラスミノーゲンアクチベーターおよび血管内皮増殖因子など) の阻害によって(Blei et al. in J. Cell Physiol. 155(3) (1993), 568-578; Nauck et al. in Eur. J. Pharmacol. 341(2-3) (1998), 309-315)媒介されることが示唆されている。さらに、腫瘍内部および周辺部の炎症プロセスが血管形成カスケードに重要であるという仮説は、グルココルチコイドの免疫抑制活性もまた関与している可能性があることを示唆するものである(Bingle et al. in J. Pathol. 196(3) (2002), 254-265; O'Byrne & Dalgleish in Br. J. Cancer 85(4) (2001), 473-483)。
【０００７】
固形腫瘍の治療にコルチコステロイドを用いる手法の欠点の一つは、有意な腫瘍増殖の阻害を得るために長期間高用量の投薬（典型的には、一日あたり１００〜２００ｍｇ／ｋｇ）が必要となることである。この用量が重篤な副作用を引き起こすのは必至であり、実験動物では、重篤な免疫抑制の結果として病的状態および死亡例が生じることが示されている。
【０００８】
当技術分野の現状では、腫瘍組織へのグルココルチコイドの選択的送達が局所の薬物濃度を増加させる魅力的な手法であり得るとの提案がなされている。これにより総用量が少なくなり、従って、副作用が起こる可能性が減るものと思われる。例えば、ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報は、ポリアニオン、特にヘパリン（断片）とのコンジュゲーションを経て腫瘍内皮細胞へステロイドを選択的に送達することを目的としたものである。最大腫瘍阻害率は、一日あたり３５ｍｇ／ｋｇのコルチゾールを８日間という用量で、約６５％であることが示されている。
【０００９】
より具体的には、前記ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報に記載のコルチコステロイド−ヘパリンコンジュゲートは、コルチコステロイドをより選択的に血管内皮細胞へ送達することができるものとされている。マウスでのin vivo研究により、９日間の一日量１ｍｇのヘパリン−コルチゾールは、遊離コルチゾールおよび遊離ヘパリンで処置したマウスにおける４０％の腫瘍減少に対して、６５％の腫瘍減少をもたらすことが実証された。体重ｋｇあたりの用量は明記されていないが、マウスモデルおよびネズミモデルの双方において、８日間一日量３５ｍｇ／ｋｇで投与した場合、コルチゾール−ヘパリンコンジュゲートが６５％の腫瘍増殖率の減少をもたらすことが可能であることが見出されている。
【００１０】
このアプローチの欠点は、コルチコステロイドとポリアニオン、特にヘパリンとの結合に必要とされる化学的誘導体化である。コルチコステロイドとヘパリンとの間に得られた結合は腫瘍に達するまで十分に安定でなければならないが、コルチコステロイドが解離するのに十分な可逆性を有する。さらに、ヘパリンの抗凝固作用に関連する問題を克服するために、特定のヘパリンまたはその誘導体を選択しなければならない。
【００１１】
ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報では、コルチコステロイドが、ヘパリンによって腫瘍内部および周囲の内皮細胞へ特異的に送達されたために活性が向上したと述べられているが、このメカニズムは実証されてもいないし、データによる裏付けもない。提示されたデータに基づいて導き出せる結論といえば、ヘパリン−コルチコステロイドコンジュゲートが高い活性を有するということだけである。さらに、このコンジュゲートの薬物動態学的挙動は検討されていないことも注目される。用いられたヘパリンは分子量が低く、そのため腎臓により効率的にクリアランスされる。このことから、このコンジュゲートもおそらく腎臓によって排泄され、その結果としてコンジュゲートの腫瘍への特異的ターゲティングはあまり効果的でないことになる。
【００１２】
ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報に記載されているように、このコンジュゲートは、コルチコステロイドとヘパリンとの間の安定したカップリングおよび腫瘍部位でのこのカップリングの切断に依存している。結合の性質は重要であり、かつ、制御し難いものである。切断が早すぎたり、カップリングの分解が少なすぎたりすると、有効な活性の低下につながる。
【００１３】
前記ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報には、さらに、ａ．ｏ．癌の治療における過度に高用量のコルチコステロイドに関連する問題に触れつつ、以下のように記述されている：
「薬剤の薬理学的特性を変える他の手段には、生体分布の変更および毒性の減少がある。リポソーム封入は、通常、種々のリン脂質の一重および多重小胞からなる脂質材料の「カプセル」への薬剤分子の組み込みを伴う。残念ながら、リポソームの安定性は薬剤親油性およびその他の構造上の考慮点などの種々のパラメータの関数であるという点で、特定の薬剤が安定したリポソームを形成する能力は多少とも制限される。従って、リポソーム封入は広範囲の薬剤に適用可能であるとは実証されていない。さらに、リポソーム封入が生体分布を変え得ることはどう見ても予測できない。従って、このような封入は、均一で組織特異的な方法での、特に満足のいく広く適用可能な、選択薬剤のターゲティング手段を提供しているとは言えない。」
【００１４】
現在も、これに代わる治療法および治療組成物が必要とされている。
【発明の開示】
【００１５】
そして、本発明の目的の一つは、癌の治療、遅延または阻害のために、またはその際に、コルチコステロイドを腫瘍組織へターゲティングする方法を見出すことである。特に、これは固形および非リンパ性癌の治療、増殖の遅延または阻害を目的とする。
【００１６】
より具体的には、本発明は、微小小胞を用いてコルチコステロイドを封入する方法、および標的腫瘍への送達のためのこれらの系の使用にかかるものである。
【００１７】
本発明によれば、今般、特定の種類の微小小胞（microvesicles）中に封入されたコルチコステロイドを含んでなる組成物が、癌の治療に有用な薬剤の製造に使用できることが見出された。
【００１８】
従って、本発明は、癌の治療、特に腫瘍学分野において有用な薬剤の製造のための、長期循環微小小胞中に封入されたコルチコステロイドを含んでなる組成物の使用に関する。該組成物は、腫瘍の増殖、特に固形腫瘍の増殖を阻害することが見出されたことから、癌の治療、特に腫瘍学分野においてその効果のために使用できる。
【００１９】
長期循環微小小胞（long-circulating microvesicles）は、極めて好ましい薬物動態、好ましい組織分布挙動、および有効な半減期を有する。さらに、コルチコステロイドと担体系、すなわち微小小胞との間に安定した会合が見られ、その上、コルチコステロイドの付加も効率的である。さらに、活性が必要とされる部位での良好な生物学的有効性も認められる。いずれの理論にも拘束されるものではないが、微小小胞が腫瘍内でマクロファージと相互作用するものと推測される。このことは、この細胞種が腫瘍の治療においてダウンレギュレートされ得ること、または封入されたコルチコステロイドを遊離させて腫瘍内部およびその周囲のその他の細胞種と相互作用させ得ることを意味する。
【００２０】
好ましい実施態様では、長期循環微小小胞はリポソーム、ナノカプセルまたは高分子ミセルである。
【００２１】
その他の好適な長期循環微小小胞は、リポタンパク質、特に高密度リポタンパク質および低密度リポタンパク質、ならびにリポタンパク質ミメティクスまたはｎｅｏ−リポタンパク質（neo-lipoprotein）に基づくものとすることができる。
【００２２】
長期循環微小小胞、特に長期循環するリポソーム、ナノカプセルおよび高分子ミセルは、特定の部位、すなわち腫瘍へコルチコステロイド薬物を効果的に送達し得ることが見出されている。特に、本発明は、コルチコステロイド、特にグルココルチコイドを比較的低用量で投与するのに好適な、癌の治療のための、または癌の治療の際の薬剤を提供する。本発明によれば、腫瘍増殖の有効な阻害は、特定の実施態様において、週あたりわずか２０ｍｇ／体重ｋｇという比較的低用量で認められた。
【００２３】
さらに、本発明による微小小胞中に存在するコルチコステロイドの使用により、腫瘍の中心で、腫瘍への血液供給の低下に関連する可能性のある大量の腫瘍細胞のアポトーシスが認められることが見出されている。さらに、腫瘍が結合組織によって封入されていることが示されている。特に、マウスモデルでは、腫瘍とその下にある組織との結合の減少が認められる。顕微鏡による評価では、腫瘍を封入する結合組織の形成が示された。
【００２４】
いずれの理論にも拘束されるものではないが、本発明に用いられる微小小胞は、健康な内皮と比較して腫瘍の脈管構造の浸透性が増加した結果として腫瘍などの悪性組織部位に蓄積し、このような部位でのコルチコステロイドの局在性および保持率を向上させると考えられる。
【００２５】
本発明に従って用いられる長期循環微小小胞は、典型的には、Ｈｅ／Ｎｅレーザーを装備したＭａｌｖｅｒｎ  ４７００（商標）システムを用いる動的光散乱で測定した場合における４５０ｎｍ未満、好ましくは３００ｎｍ未満の平均粒径を有し、好ましくは約４０〜２００ｎｍの平均粒径を有する。さらに、実施例（下記参照）からも分かるように、本発明による微小小胞は多分散性が幾分小さく、これは粒子径の分布が狭いことを意味する。多分散性は、動的光散乱測定装置に属するソフトウェアにより算出されるが、０．２５未満が好ましく、０．２未満がより好ましい。
【００２６】
好ましくは、本発明による組成物に用いられる長期循環微小小胞は、長期循環リポソームである。このような種類の長期循環微小小胞を用いると、週あたりわずか２０ｍｇ／体重ｋｇの用量で、２〜３週間以内に、対照と比較して６５％を越えて、さらに９０％までといった程度で腫瘍増殖を減少させることができることが見出されている（下記参照）。
【００２７】
このような長期循環リポソームは当技術分野で既に公知であり、コルチコステロイド、特に水溶性のコルチコステロイドとの組み合わせも当技術分野で公知である。より詳細には、このような公知のリポソーム系は、炎症性疾患の部位特異的治療に有用であることが、ＷＯ−Ａ−０２／４５６８８公報に記載されている。本発明で用いられる好適な組成物の製造のための前記ＷＯ−Ａ−０２／４５６８８公報に記載の製造方法は、引用することにより本明細書の一部とされる。
【００２８】
このＷＯ−Ａ−０２／４５６８８公報においては、ＥＰ−Ａ−０  ６６２  ８２０公報に記載のリポソーム系が「長期循環型」となるようにされている。
【００２９】
ＥＰ−Ａ−１  ０４４  ６７９公報は、血液中での安定性が保証されているとされる薬物をその中に含むリポソームに関するものである。さらに、このようなリポソームは、プロテオグリカンに豊む領域に対して能動的な治療特性を有する。このような領域は、いくつかの疾病でプロテオグリカンの過剰産生が起こるために作り出され、つまり、前記プロテオグリカンが細胞表面を陰イオン性に保っている。リポソームをこのような陰イオン表面へターゲティングするため、リポソームは本質的に陽イオンである必要がある。それに加えて、前記リポソームは生理的なｐＨ範囲内で正の電荷をとる酸性化合物の存在を必要とする。
【００３０】
本発明によるリポソームは、ＥＰ−Ａ−１  ０４４  ６７９公報に記載の能動的なターゲティング特性を必要としない。つまり、微小小胞を腫瘍部位へ選択的に導くために特異的なホーミング基(homing groups)を必要としない。しかし、選択性をさらに高い程度に向上させるためには、腫瘍特異的抗体、受容体リガンドまたは食品化合物を微小小胞の外面に付着させるかまたは組み込んで、腫瘍細胞または腫瘍内部もしくは周囲の細胞との相互作用の起こる確率を高めることができる。
【００３１】
中性または所望により負に帯電した本発明によるリポソームの「ターゲティング」は、上記に示した腫瘍の脈管構造内の浸透性の増加によって支配される。つまり、本発明は、大部分は能動的ターゲティングよりも受動的蓄積に基づいている。
【００３２】
本発明に有用なリポソームは正電荷を有するべきではなく、従って、生理的ｐＨでリポソームに正の電荷を与える成分を含むべきではない。つまり、ｐＨ６〜８の間の生理的ｐＨでは、本発明に用いられるリポソームの全体の電荷は中性または負に帯電しているべきである。
【００３３】
好ましいリポソームは、非帯電小胞形成脂質を基にしたものである。中性または非帯電小胞形成脂質により、好適な長い循環時間がもたらされる。典型的には、負に帯電した脂質は５〜１０モル％存在してもよい。本発明に用いられる微小小胞の製造に用いられる好ましい脂質は、飽和リン脂質およびスフィンゴ脂質を、コレステロールおよび／またはエルゴステロールならびにそれらの誘導体と組み合わせて含んでなるものである。
【００３４】
血液循環系で好適な安定性を確保するためには、１０〜５０モル％のステロールが微小小胞材料中に存在しなければならない。好適なリポソーム構成要素は、上記のＷＯ−Ａ−０２／４５６８８公報およびＥＰ−Ａ−０  ６６２  ８２０公報に記載されている。
【００３５】
より好ましくは、前記リポソームは、ポリアルキレングリコール、好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化した脂質などの、少なくとも一種の高分子脂質コンジュゲートを含む。好適な高分子−脂質−コンジュゲートは、２００〜３０，０００ダルトンの分子量を有するものである。
【００３６】
これらの高分子−脂質−コンジュゲートまたは水溶性高分子に用いられるその他の好適な候補としては、ポリ（（誘導体化）炭水化物）、水溶性ビニルポリマー（例えばポリ（ビニルピロリドン））、ポリアクリルアミドおよびポリ（アクリロイルモルホリン）ならびにポリ（メチル／エチルオキサゾン）がある。これらの高分子は、従来のアンカー分子を介して脂質とカップリングされる。
【００３７】
高分子脂質コンジュゲートの濃度は、小胞形成脂質の総モル比に基づいて０〜２０モル％が適当であり、１〜１０モル％が好ましい。
【００３８】
このような高分子−脂質−コンジュゲートの存在は、循環時間に好ましい効果をおよぼす。しかし、特定の脂質組成物を注意深く選択することにより、高分子−脂質−コンジュゲートを用いずに長い循環時間に適した物理的特性を得ることができる。例えば、ジステアリルホスファチジルコリンとコレステロールおよび／またはスフィンゴミエリンなどのスフィンゴ脂質の５０〜１００ｎｍのリポソームである。
【００３９】
前記リポソームは、一種類以上の帯電した小胞形成脂質、例えばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルエタノールアミン、（ジ）ステアリールアミン、ホスファチジルセリン、ジオレオイルトリメチルアンモニウムプロパン、ホスファチジン酸およびコレステロールヘミスクシネートをさらに含んでもよい。
【００４０】
一般に、帯電した小胞形成脂質の濃度は、小胞形成脂質のモル比に基づいて０〜１５モル％であり、０〜１０モル％が好ましい。
【００４１】
本明細書中で、帯電した／非帯電／両親媒性の、などの記述がある場合、この記述は生理的条件に関するものである。
【００４２】
従って、好ましい実施態様では、本発明は組成物の使用に関し、その組成物中の微小小胞は、非帯電小胞形成脂質、０〜２０モル％の高分子−脂質−コンジュゲート、好ましくはポリエチレングリコール、０〜５０モル％のステロール、および０〜１０モル％の帯電した小胞形成脂質を含んでなるリポソームである。このリポソームは、約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである。
【００４３】
本発明に用いられる高分子ミセルは、上記のリポソームの製造方法に従って適合させたＥＰ−Ａ−１  ０７２  ６１７公報に記載の方法に従って製造することができる。
【００４４】
前記長期循環微小小胞の循環半減期は少なくとも３時間であり、特に少なくとも６時間である。循環半減期とは、当業者によって理解されるように、対数的な微小小胞（例えばリポソーム）のクリアランスプロフィールの２度目の直線相が、初期濃度（ｔ＝０での外挿血漿濃度）の５０％に達する時点と定義される。
【００４５】
好ましい実施態様では、癌の治療のために、または癌の治療において用いられる前記薬剤は、非経口適用または局所適用のための薬剤とされる。しかしながら、経口または肺からの適用も可能である。
【００４６】
例えば脂溶性ステロイドプロドラッグを必要とするＵＳ−Ａ−６，０９０，８００公報に示される系とは対照的に、コルチコステロイドは水溶性のコルチコステロイドであるのが最も好ましい。「水溶性の」とは、本明細書中では、２５℃の温度において、１Ｌの水または中性のｐＨで緩衝化された水に対して少なくとも１０ｇの溶解性があることと定義される。
【００４７】
本発明に従って有利に用いることのできる水溶性のコルチコステロイドは、遊離ヒドロキシル基を有するコルチコステロイド、ならびに（Ｃ２−Ｃ１２）脂肪族飽和および不飽和ジカルボン酸などの有機酸、およびリン酸および硫酸などの無機酸から製造したアルカリ金属塩およびアンモニウム塩である。また、コルチコステロイドの酸付加塩も、有利に小胞、好ましくはリポソーム、より好ましくは長期循環ＰＥＧ−リポソームの中に封入することができる。コルチコステロイド分子の中の１を超える基が塩形成に利用可能であるならば、一塩だけでなく、二塩も利用可能である。アルカリ金属塩としては、カリウム塩およびナトリウム塩が好ましい。また、その他の正または負に帯電したコルチコステロイドの誘導体も使用できる。水溶性コルチコステロイドの具体例としては、リン酸ベタメタゾンナトリウム、リン酸デソニドナトリウム、リン酸デキサメタゾンナトリウム、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、リン酸メチルプレドニゾロン二ナトリウム（methylprednisolone disodium phosphate）、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、リン酸プレドニゾロンナトリウム、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、塩酸プレドニゾロン（prednisolamate hydrochloride）、リン酸プレドニゾン二ナトリウム（prednisone disodium phosphate）、コハク酸プレドニゾンナトリウム、リン酸トリアムシノロンアセトニド二ナトリウム（triamcinolone acetonide disodium phosphate）およびリン酸トリアムシノロンアセトニド二ナトリウム（triamcinolone acetonide disodium phosphate）がある。水溶性のコルチコステロイドの他、１以上の遊離ヒドロキシル基を有するコルチコステロイドおよび親油性の脂肪族または芳香族の炭素酸から製造した親油性のコルチコステロイド誘導体もまた有利に使用できる。１０以上のＣ原子を含む、パルミチル酸およびステアリル酸などの１または２個のアルキル炭素酸でエステル化したコルチコステロイドが好ましい。
【００４８】
好適なコルチコステロイドとしては、例えば、二プロピオン酸アルクロメタゾン、アムシノニド、モノプロピオン酸ベクロメタゾン、１７−吉草酸ベタメタゾン、シクロメタゾン、プロピオン酸クロベタゾール、酪酸クロベタゾン、プロピオン酸デプロドン、デソニド、デソキシメタゾン、酢酸デキサメタゾン、吉草酸ジフルコルトロン、ジフロラゾンジアセテート、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、ピバル酸フルメタゾン、フルニソリド、酢酸フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、ピバル酸フルオコルトロン、酢酸フルオロメトロン、酢酸フルプレドニデン、ハルシノニド、ハロメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、メドリゾン、酢酸メチルプレドニゾロン、フランカルボン酸モメタゾン、酢酸パラメタゾン、プレドニカルベート、酢酸プレドニゾロン、プレドニリデン、リメキソロン、ピバル酸チクソコルトールおよびトリアムシノロンヘキサアセトニド（triamcinolone hexacetonide）が挙げられる。
【００４９】
これらのコルチコステロイドのうち、リン酸プレドニゾロン二ナトリウム、コハク酸プレドニゾロンナトリウム、リン酸メチルプレドニゾロン二ナトリウム、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、リン酸デキサメタゾン二ナトリウムおよびリン酸ベタメタゾン二ナトリウムが好ましい。
【００５０】
血管新生抑制性ステロイドと呼ばれる、グルココルチコイドまたは鉱質コルチコイドの作用を欠くステロイドは、グルココルチコイド／鉱質コルチコイドに関連する副作用が少なく、腫瘍増殖を阻害することが示されている。このような血管新生抑制性コルチコステロイド、好ましくはテトラヒドロコルチゾン、テトラヒドロコルチゾールおよびテトラヒドロＳまたはその機能性類似体などの、Ｃ２０ケトンを有するがＣ３ケトンを欠くステロイドを用いて、極めて良好な結果が達成されている。
【００５１】
全身循環中で利用可能となるや否や、迅速で効率的なクリアランスが起こる局所用のコルチコステロイドは、特に注目される。その例は、ブデソニド、フルニソリドおよびプロピオン酸フルチカゾン、リメキソロン、ブチキソコルトならびにベクロメタゾンおよびその誘導体である。上述の局所用ステロイドの水溶性形態または親油性の誘導体を製造すること、およびこれらを本発明に従って微小小胞、好ましくはＰＥＧリポソーム中へ封入することにより、腫瘍−部位特異的薬物送達を達成するためのこのようなコルチコステロイドの全身投与が可能となった。これによって全身治療に関連する副作用が回避され、迅速なクリアランスなど、コルチコステロイドに固有の問題を克服することができる。この点で、リン酸ブデソニド二ナトリウムが大いに注目される塩であると思われる。
【００５２】
既に述べたように、本発明に従って用いられる微小小胞は、例えばＥＰ−Ａ−０  ６６２  ８２０公報またはＷＯ０２／４５６８８公報に開示されるような、従来のリポソームおよびＰＥＧリポソームの製造に用いられる方法に従って製造することができる。できる限り高い封入に到達するためには、コルチコステロイドを水相に溶解することにより有効成分をリポソームへ受動的に付加することで十分であるが、その他の方法を用いてもよい。リポソームの形成に用いられる脂質成分は、リン脂質、スフィンゴ脂質およびステロールなどの種々の小胞形成脂質から選択してよい。例えば、スフィンゴミエリンおよびエルゴステロールによるこれらの基本成分の置換（完全または一部）も可能であると思われる。好ましくは水溶性の、コルチコステロイドを微小小胞中へ効率的に封入し、それによって微小小胞からの薬物の漏出を避けるためには、特に、飽和した硬化性のアシル鎖を有するリン脂質成分が有用であると思われる。本発明による水溶性コルチコステロイドを含有するＰＥＧリポソームの単回の注射後に認められる有益な効果は非常に好ましい。
【００５３】
さらに、本発明に従って用いられる組成物は、１以上の付加的成分を含んでもよい。
【００５４】
この点で、本発明はまた、その組成物がヘパリン(誘導体)をさらに含む本発明による組成物の使用に関する。該ヘパリン誘導体は血液凝固に影響しないものが好ましい。
【００５５】
他の好ましい実施態様では、本発明に用いられる組成物は、コルチコステロイドの腫瘍への送達を容易にする成分、好ましくはヘパリンまたはヘパリン断片をさらに含む。コルチコステロイドの送達を容易にするこれらの成分は、ＵＳ−Ａ−５，７６２，９１８公報においてより詳細に記載されている（同文献は、これらの成分の記載に関して、引用することにより本明細書の一部とされる）。
【００５６】
本発明に従って用いられる組成物はまた、細胞増殖抑制剤および細胞傷害剤からなる群から選択される少なくとも一種の化合物、好ましくはドキソルビシンおよびタキソールからなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含有するか、またはこれを含んでなるのが好適である。
【００５７】
さらに、免疫調節剤および免疫抑制剤からなる群から選択される少なくとも一種の成分を含んでなる組成物を好適に使用することができる。このような成分の例としては、メトトレキサート、シクロホスファミド、シクロスポリン、ムラミルペプチド、サイトカインおよびペニシラミンが挙げられる。
【００５８】
さらなる態様では、本発明は、新規な医薬組成物に関する。例えば、本発明は、長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、ならびにヘパリンおよびヘパリン誘導体からなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含んでなる医薬組成物に関する。
【００５９】
さらに、本発明は、長期循環微小小胞およびその中に含まれるコルチコステロイドを含んでなる医薬組成物を包含し、該コルチコステロイドはテトラヒドロコルチコステロンである。
【００６０】
さらに別の態様では、本発明は、長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、および好ましくはアントラサイクリン（誘導体）、トポイソメラーゼＩ阻害剤およびビンカアルカロイドからなる群から選択される、少なくとも一種の細胞増殖抑制剤および／または細胞傷害剤（コルチコステロイド以外）を含んでなる医薬組成物を対象とする。
【００６１】
いずれの理論にも拘束されるものではないが、微小小胞コルチコステロイドにより達成される腫瘍中心でのアポトーシスは、腫瘍からの細胞増殖抑制剤の放出の減少を引き起こすものと推測される。さらに、おそらく、微小小胞コルチコステロイドにより刺激された結合組織による上述の封入も関与している可能性がある。
【００６２】
好ましくは、本発明による医薬組成物は、非帯電小胞形成脂質、ポリエチレングリコールで誘導体化された０〜２０モルパーセントの両親媒性小胞形成脂質、および０〜１０モルパーセントの負に帯電した小胞形成脂質を含んでなる、リポソームの形態の長期循環微小小胞を含んでなり、このリポソームは、約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである。
【００６３】
以下、限定的でない実施例および図面により、本発明をさらに説明する。
【実施例】
【００６４】
材料および方法
リポソームの製造：
長期循環リポソームは、丸底フラスコ中で、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）(Lipoid GmbH, Ludwigshafen, Germany)、コレステロール（Ｃｈｏｌ）(Sigma, St. Louis, USA)、およびポリ（エチレン）グリコール２０００−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）(Lipoid GmbH)を、それぞれ１．８５：１．０：０．１５のモル比で、クロロホルム：メタノール（容量比２：１）に溶解することにより製造した。一般に、計１０００〜２０００μｍｏｌのバッチサイズの脂質を用いた。短期循環型リポソーム製剤には、ＰＥＧ−ＤＳＰＥを相当する量の卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）(Lipoid GmbH)に置き換えた。脂質膜をロータリーエバポレータにて減圧下で作製し、窒素気流下で乾燥させた。リン酸プレドニゾロン二ナトリウム（ＰＬＰ）(BUFA B. V. Uitgeest, The Netherlands)１００ｍｇ／ｍｌ水溶液を添加することによってリポソームを形成した。水溶性のプレドニゾロンのリン酸塩誘導体を用いてリポソーム内への安定した封入を確保した。リポソームを１１１Ｉｎ−オキシン(Mallinckrodt Medical, Petten, The Netherlands)で標識化する場合、Boerman et al. in J. Nucl. Med. 36(9) (1995), 1639-44に記載の手順に従って、ｐＨ７の５ｍＭ  ＤＴＰＡ／１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／１３５ｍＭ  ＮａＣｌバッファーを脂質膜に添加することによりリポソームを形成した。リポソームのサイズは、ポリカーボネート膜(Nuclepore, Pleasanton, USA)を通して何回か押出すことにより減少し、最終の孔径は５０ｎｍとなった。この孔は、短期循環型リポソームの製造では４００ｍｍであった。封入されなかった物質を、４℃にて、ｐＨ７の１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ／１３５ｍＭ  ＮａＣｌバッファーに対し、バッファーを繰り返し交換しながら透析することにより取り除いた。
【００６５】
長期循環リポソームの平均粒径を動的光分散法により測定し、多分散値〜０．１で０．１μｍとなった。これに対して短期循環型リポソームの粒子径は多分散値〜０．２で０．５μｍとなった。多分散値は０〜１の間で変動する。１という値は粒子径の変動が大きいことを示し、これに対して０という値は完全な単分散系を示す。従って、本製剤は粒子径の変動が狭いことを示す。リポソーム分散中の脂質の量を、Rouserに従うリン酸の比色定量により測定した(Lipids 5(1970), 494-496)。
【００６６】
リポソーム中のＰＬＰの濃度をＨＰＬＣにより測定した。ＰＬＰを酢酸エチルで抽出し、窒素気流下で濃縮した。この試料を適当な量のエタノール：水（モル比１：１）で希釈し、１００μｌの試料または標準物質を、１００ＲＰ−１８カラム（５μｍ、１２５ｘ４ｍｍ）を備えたＲＰ−ＨＰＬＣシステムに注入した。アセトニトリル：水（容量比７５％：２５％）ｐＨ２を、Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍソフトウェア(Waters Associates Inc.)を用いて計算した。リポソームは２５〜３５μｇＰＬＰ／μｍｏｌ脂質を含有していた。
【００６７】
細胞：
Ｂ１６ネズミ黒色腫およびＣ２６ネズミ大腸癌細胞を、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび０．２５μｇ／ｍｌアムホテリシンＢ(Gibco)を添加した１０％（容量比）ウシ胎児血清を含むＤＭＥＭ培地(Gibco, Breda, The Netherlands)中で、５％ＣＯ２を含有する加湿雰囲気中で３７℃にて培養した。
【００６８】
動物：
雄のＢａｌｂ／ｃおよびＣ５７Ｂｌ／６マウス（６〜８週齢）をCharles Riverより入手し、標準の齧歯類の固形飼料および水を自由に与え、１２時間の明暗サイクルで標準的に飼育した。実験は国内規制に従って実施し、現地の動物実験倫理委員会に承認されたものである。
【００６９】
腫瘍担持マウスにおける１１１Ｉｎ標識ＰＥＧリポソームの組織分布：
１×１０５のＢ１６またはＣ２６細胞を、それぞれＣ５７Ｂl／６またはＢａｌｂ／ｃマウスの脇腹へ皮下接種した。腫瘍体積が約１ｃｍ３となった時に、マウスに１１１Ｉｎ標識リポソーム２５μｍｏｌ脂質／ｋｇ（３０×１０６ｃｐｍ／マウスに相当）を静脈注射した。注射後６時間後および２４時間後に動物を殺し、血液サンプルを採取し、腫瘍、肺、肝臓、脾臓、および腎臓を摘出し、計量し、放射活性を計数した。これに関しては、図１の結果を参照されたい。
【００７０】
腫瘍増殖の阻害
用量の効果：
マウスに、腫瘍が明瞭となった時点で、示された用量の遊離ＰＬＰまたはリポソームＰＬＰの単回の静脈内注射を行った。処置後７日目に、腫瘍サイズを測定し、腫瘍の体積を、方程式Ｖ＝０．５２×ａ２×ｂ［式中、ａは最小表面直径、ｂは最大表面直径を表す］に従って計算した。
【００７１】
腫瘍の大きさの効果：
遊離ＰＬＰまたはリポソームＰＬＰを、腫瘍細胞接種後１日、７日および１４日に用量２０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与、あるいは７日または１４日に単回注射を行った。対照として、腫瘍細胞接種後、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍は７日頃に明瞭となり、Ｃ２６腫瘍は１１日頃に明瞭となった。腫瘍サイズを定期的に測定し、腫瘍の体積を上記のように計算した。
【００７２】
統計分析
ＧｒａｐｈＰａｄ  ＩｎＳｔａｔウィンドウズ用バージョン３．０５グラフパッドソフトウエア(San Diego, USA)を用いて、ダネットの多重比較を用いる一元配置分散分析によりデータを分析した。適切な場合は、バートレット検定に従って、データを対数変換し、群のＳＤ間の有意差を補正した。スピアマン順位相関係数を計算して用量−応答を特定した。
【００７３】
結果
長期循環リポソームの組織分布：
Ｃ２６腫瘍またはＢ１６腫瘍を有するマウスにおける静脈内注射後の長期循環リポソームの組織分布を図１に示す。放射性標識リポソームの注射された量の１５％が注射後２４時間に双方のマウスモデルで循環中になお存在した。
【００７４】
注射した量の約７〜１０％が、Ｃ２６およびＢ１６Ｆ１０モデルの双方において、腫瘍組織から回収できた。ほぼ同量が両実験群の肝臓に存在した。比較的少量のリポソームが、２種類のマウス系統で脾臓、腎臓および肺から回収された。
【００７５】
遊離またはリポソームＰＬＰの投与量の腫瘍増殖への効果：
異なる投与量の遊離ＰＬＰまたはリポソームＰＬＰの腫瘍増殖への効果を比較するため、腫瘍が明瞭となった時点でＢ１６腫瘍またはＣ２６腫瘍を有するマウスへいずれかの製剤の単回注射を行った。双方のマウスモデルにおいて、リポソームＰＬＰの用量の増加にともなって、注射後１週間での腫瘍体積が小さくなった（Ｂ１６：スピアマン順位相関係数ｒ＝−０．９２（ｐ＜０．００１）；Ｃ２６：スピアマン順位相関係数ｒ＝−０．８２（ｐ＜０．０１））。注射量を考慮すると、２０ｍｇ／ｋｇＰＬＰがリポソーム製剤を投与できる最大用量であった。Ｂ１６またはＣ２６の腫瘍を有するマウスを２０ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの遊離ＰＬＰで処置した結果は、バッファーで処置した対照動物と比較して、有意に異なる腫瘍体積とはならなかった。この点では、結果を示す図２を参照されたい。
【００７６】
腫瘍の大きさの効果：
遊離またはリポソームＰＬＰの注射回数の腫瘍増殖への効果を測定するため、製剤を、１日、７日および１４日に用量２０ｍｇ／ｋｇでの注射、あるいは７日または１４日に単回注射を行った。この点では、結果を示す図３を参照されたい。
【００７７】
Ｂ１６モデル
１日〜７日の間、Ｂ１６腫瘍を有するマウスにおいて、リポソームＰＬＰも遊離ＰＬＰも腫瘍増殖を阻害しなかった。全ての群において、この時点でちょうど腫瘍が明瞭となった。
【００７８】
７〜１４日の間、７日の２回目の注射後、リポソームＰＬＰは対照と比較して９２％の腫瘍増殖阻害となった（ｐ＜０．０５）のに対し、遊離ＰＬＰは腫瘍体積を減少させなかった。１４日にマウスへ３回目の注射を行った。１７日に、腫瘍の大きさが大きくなったため（＞２ｃｍ３）遊離ＰＬＰおよび対照群中のマウス数匹を処分せざるを得なかったが、リポソームＰＬＰ群の平均腫瘍のほうが約７９％小さかった（ｐ＜０．０１）。
【００７９】
７日の遊離ＰＬＰリポソームの単回注射の後、リポソームＰＬＰでの処置後にやっと腫瘍体積が有意に小さくなり、対照と比較した平均腫瘍増殖阻害は１４日に８９％および１７日に６７％であった（両時点でｐ＜０．０５）。１４日の単回注射も同様の画像を示し、１７日にリポソームＰＬＰで処置した腫瘍は対象よりも５８％小さかった（ｐ＜０．０５）。
【００８０】
Ｃ２６モデル
１日〜７日の間、Ｃ２６腫瘍を有するマウスにおいて、リポソームＰＬＰも遊離ＰＬＰも腫瘍増殖を阻害しなかった。７日にマウスへ２回目の注射を行った。１０日頃、腫瘍が明瞭になってきた。１４日および２１日の両日、リポソームＰＬＰで処置した動物における平均腫瘍体積は対照よりも８９％小さかったが、有意に小さかったのは２１日だけであった（ｐ＜０．０１）。遊離ＰＬＰは腫瘍増殖を阻害しなかった。７日の遊離ＰＬＰリポソームの単回注射の後、腫瘍体積は対照と比較してどの処置よりも有意に小さくはなかった。しかしながら、平均腫瘍体積は、対照と比較して、リポソームＰＬＰで処置したマウスについて１４日に６６％および２１日に６７％小さかった。１４日の単回注射の結果、リポソームＰＬＰで処置した動物について、２１日に腫瘍体積が７８％小さくなった（ｐ＜０．０５）。
【００８１】
リポソームの循環時間の効果
リポソーム製剤が治療効果の上で重要であるかどうかを決定するため、短期循環型および長期循環ＰＬＰリポソーム製剤を試験した。Ｃ２６腫瘍を有するマウスへ、腫瘍細胞の接種後１４日に双方を注射した。短期循環型リポソームの腫瘍阻害は、長期循環リポソームの腫瘍阻害ほど明白ではない上、長く続かず、生理食塩水で処置した動物と有意な違いがないように思われた。
【００８２】
組織におけるＰＬＰまたはＰＬの量の分析
リポソームＰＬＰの肝臓、脾臓および腫瘍組織への注射後２４時間のＰＬＰおよびプレドニゾロン（ＰＬ）濃度をＨＰＬＣ分析により測定した。図４は最高量のＰＬＰ（±５μｇ）が腫瘍に存在したことを示す。これはＰＬの形態で存在するものと類似した量であった。脾臓中のＰＬＰまたはＰＬレベルは相対的に低かった。肝組織では、ＰＬＰはほとんど検出できなかったが、高い量のＰＬが存在した。標準ラインも検出できないように準備するためＰＬＰを対照肝組織に加えたので、この組織のＰＬ含量は肝臓のホモジネートでの酵素活性が高い結果として実際以上に高く評価される可能性が高い。ＰＬＰおよびＰＬは遊離ＰＬＰの注射後２４時間の時点でこれらの組織のどこにも検出されなかった。
【００８３】
２０ｍｇ／ｋｇの単一用量後１週間のリポソームＰＬＰで処置した腫瘍組織の顕微鏡での評価は、腫瘍中心の腫瘍細胞の大量のアポトーシスを示した。さらに、大きな血管中で血塊の存在が腫瘍の血流を塞いでいることが示された。結果を図４に示す。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】Ｂ１６−腫瘍を有するＣ５７Ｂｌ／６マウスまたはＣ２６−腫瘍を有するＢａｌｂ／ｃマウスにおける、静脈内投与後２４時間の１１１Ｉｎ標識リポソームの組織分布。腫瘍は約１ｇの重さであった。平均±標準偏差、ｎ＝５動物／実験群。
【図２】Ｂ１６またはＣ２６を有するマウスにおける遊離またはリポソームＰＬＰの用量の腫瘍増殖への影響。腫瘍が明瞭となった日に、示した用量およびＰＬＰ製剤をマウスへ単回注射した。１週間後の腫瘍の体積が報告されている。平均±標準偏差、Ｎ＝５マウス／実験群。
【図３】Ｂ１６またはＣ２６を有するマウスにおける、遊離またはリポソームＰＬＰの抗腫瘍効果に対する腫瘍の大きさの影響。マウスに２０ｍｇ／ｋｇ  ＰＬＰの示した製剤を単回または複数回注射した。矢印は処置を示す。平均±標準偏差が報告されている。Ｎ＝５マウス／実験群。
【図４】２０ｍｇ／ｋｇリポソームＰＬＰでの処置後１週間の腫瘍組織の顕微鏡画像。腫瘍細胞接種後７日に、マウスにリポソームＰＬＰを単回注射した。Ａ：矢印は腫瘍中心での大量のアポトーシスの発生を示す。アスタリスクは血管を示す。Ｂ：Ａの矢印の拡大画像により、血管の破壊が示される。
【図１】
2006506344.tif 000002
【図２】
2006506344.tif 000003
【図３】
2006506344.tif 000004
【図４】
2006506344.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成16年10月25日(2004.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非リンパ性癌の固形の原発腫瘍および／または二次腫瘍の治療を目的とする薬剤の製造のための、長期循環微小小胞中に封入されたコルチコステロイドを含んでなる組成物の使用。
【請求項２】
前記微小小胞が、リポソーム、ナノカプセルまたは高分子ミセルであり、この微小小胞が生理的条件下で中性または負の電荷を有するものである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記微小小胞が、非帯電小胞形成脂質、ポリエチレングリコールで誘導体化された０〜２０モルパーセントの両親媒性小胞形成脂質、０〜５０モルパーセントのステロール、および０〜１０モル％の負に帯電した小胞形成脂質を含んでなるリポソームであり、該リポソームが約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項４】
前記微小小胞の循環半減期が少なくとも６時間である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記薬剤が、非経口適用または局所適用のための薬剤である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記組成物が、血液凝固カスケードに作用する少なくとも一種の薬物を含んでなるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記組成物が、腫瘍上でコルチコステロイドと相互作用する成分、好ましくはヘパリンまたはヘパリン断片をさらに含んでなるものである、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記組成物が、細胞増殖抑制剤および細胞傷害剤からなる群から選択される少なくとも一種の化合物、好ましくはアントラサイクリン、ドキソルビシン、タキソールトポイソメラーゼＩ阻害剤およびビンカアルカロイドからなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含んでなるものである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記組成物が、免疫調節剤および免疫抑制剤からなる群から選択される少なくとも一種の成分を含んでなるものである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記コルチコステロイドが水溶性であり、好ましくは血管新生抑制性コルチコステロイド、より好ましくはテトラヒドロコルチコステロンまたはその機能性類似体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、ならびにヘパリンおよびヘパリン誘導体からなる群から選択される少なくとも一種の化合物を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１２】
長期循環微小小胞、およびその中に含まれる水溶性コルチコステロイドを含んでなり、該コルチコステロイドが血管新生抑制性ステロイド、好ましくはテトラヒドロコルチコステロンである、医薬組成物。
【請求項１３】
長期循環微小小胞、その中に含まれるコルチコステロイド、ならびにドキソルビシンおよびタキソールからなる群から選択される少なくとも一種の細胞増殖抑制剤および／または細胞傷害剤（コルチコステロイド以外）を含んでなる、医薬組成物。
【請求項１４】
前記長期循環微小小胞が、非帯電小胞形成脂質、０〜２０モルパーセントの高分子−脂質コンジュゲートおよび０〜１０モルパーセントの負に帯電した小胞形成脂質を含んでなるリポソームであり、該リポソームが約４０〜２００ｎｍの範囲内で選択される平均粒径を有するものである、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2006506344.tif 000006
2006506344.tif 000007
2006506344.tif 000008