(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物を含有する、Ｃ型肝炎ウイルス感染を処置するためのヌクレオシド誘導体、これらの化合物を含む医薬組成物、及びＣ型肝炎ウイルスが媒介する疾患を、単一治療又は組み合わせ治療において、上記化合物を使用して処置又は予防するための方法に関する。
2006510645.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2006510645.tif 000026
〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル及びＣＯＲ４（ここで、ＣＯＲ４はアミノ酸又はジペプチドである）からなる群から選択される〕
の化合物、及び上記化合物の水和物、溶媒和物、包接化合物、及び酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうち１つがＣＯＲ４であり、Ｒ４は、ＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−又はピロリジン−２−イルであり、Ｒ５は、天然に生じる疎水性アミノ酸の側鎖又はＣ１〜６の直鎖又は分枝のアルキルであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうち他のものは独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、及びＣ１〜１０アルコキシカルボニルからなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４が、ＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−又はピロリジン−２−イルであり、Ｒ２及びＲ３が独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、及びＣ１〜１０アルコキシカルボニルからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４がＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−であり；Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２及びＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４がＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−であり、Ｒ５がＣＨ（ＣＨ３）２であり、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
化合物が、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−｛１，２，４｝トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル塩酸塩である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１、Ｒ２及びＲ３が独立して、Ｃ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
化合物が、プロピオン酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−プロピオニルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１がＣ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルであり、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、請求項１又は７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２及びＲ３が両方独立して、Ｃ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルである、請求項１又は７に記載の化合物。
【請求項１１】
化合物が、イソ酪酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−４Ｓ−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル；又は、２，２−ジメチルプロピオン酸  ４Ｓ−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステルである、請求項１又は７に記載の化合物。
【請求項１２】
式ＩＩ
【化２】
2006510645.tif 000027
〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル及びＣＯＲ４（ここで、ＣＯＲ４はアミノ酸又はジペプチドである）からなる群から選択され；Ｒ６はＣ１〜６アシルである〕
の化合物、及び上記化合物の水和物、溶媒和物、包接化合物、及び酸付加塩。
【請求項１３】
治療において使用するための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｃ型肝炎ウイルスによって媒介される疾患の治療において使用するための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
治療において使用するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１６】
Ｃ型肝炎ウイルスによって媒介される疾患の治療において使用するための医薬の製造のための、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１７】
治療的に有効量の請求項１〜１２に記載の化合物と、少なくとも１つの医薬的に受容可能な担体とを含み、場合により賦形剤を含有する、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ウイルス治療の分野に関し、特に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）で媒介される疾患を処置するためのヌクレオシド誘導体に関する。本発明は、新規な化学化合物、これらの化合物を含む医薬組成物、単一治療又は組み合わせ治療において上記化合物を使用してＨＣＶで媒介される疾患を処置又は予防するための方法に関する。
【０００２】
背景
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）は、世界的に、慢性肝臓疾患の大部分の原因となっており、先進工業国における慢性肝炎の症例の７０％を占める。全世界でＣ型肝炎の比率は平均３％（０．１〜５．０％の範囲）であると概算され；世界中に１億７０００万人の慢性キャリアが存在する。ＨＣＶに対する効果的な治療薬剤がなお必要とされている。
【０００３】
レボビリン（１−（３Ｓ，４Ｒ−ジヒドロキシ−５Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）（Ｉ）（Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ３＝Ｈ）は、ヌクレオシドアナログであり、抗ウイルス化合物リバビリンのエナンチオマーである。リバビリンと異なり、レボビリンは、検出可能な抗ウイルス活性を有していないが、
【０００４】
【化３】
2006510645.tif 000003
【０００５】
レボビリンは、抗ウイルス性Ｔｈ１サイトカイン発現を高めることによって免疫応答を刺激する。リバビリンと同様に、レボビリンは、マウス肝炎モデル中の血清アラニンアミノトランスフェラーゼのレベルを下げる（Ｒ．Ｔａｍら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００  ４４：１２７６〜１２８３；Ｍ．Ａｓｓｅｎｍａｃｈｅｒら  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９８  ２８：１５３４〜１５４３）。レボビリンは、リバビリンに関連する毒性を有していないと考えられる。
【０００６】
一方、ヌクレオシド誘導体は頻繁に高レベルの生物学的活性を保有し、これらの治療的有用性はしばしば、次善最適な物理的性質及び動的薬理学に乏しいこと、及び吸収されるヌクレオチドの量を限定するバイオアベイラビリティが妨げとなる。レボビリンの投薬量の約１５％しか、経口投与後に全身に吸収されない。改良されたバイオアベイラビリティを有する治療薬剤に対する必要性が存在する。吸収量が少ない生物学的に可逆的な化学誘導体である、化合物のプロドラッグは、薬物送達を改良するために物理的性質を最適化するアプローチの１つである（Ｗ．Ｎ．Ｃｈａｐｍａｎ及びＣ．Ｊ．Ｈ．Ｐｏｒｔｅｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．１９９６  １９：１４９〜１６９；Ｄ．Ｆｌｅｉｓｈｅｒら  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．１９９６  １９：１１５〜１３０）。プロドラッグ設計の１つのアプローチにおいて、化学誘導体が、粘膜を通る受動的輸送を高めるための油／水分配係数又は他の物理的性質を最適化するために調製される。誘導体は、細胞質、血液、又は血清中に存在する非特異的な酵素のための基質であり、化合物が吸収された後に、修飾された基を開裂し、生体活性な親分子に変換することができるように選択される。理想的な経口プロドラッグは、胃液及び腸のびじゅくに安定であり、腸膜を通って効率的に輸送され、胃腸管から吸収された後、迅速に親ドラッグに変換される。従って、「プロヌクレオチド」は、親ヌクレオチドの活性、バイオアベイラビリティ又は安定性のような問題を潜在的に回避することができる。
【０００７】
代替のアプローチは、膜を通ってプロドラッグを移動させる非特異的な能動的輸送システムを開発する。分子のプロドラッグ部分は、能動的輸送システムによる認識を付与し、輸送が完成した後に開裂する。非特異的なペプチドトランスポーターＰｅｐＴ１及びＰｅｐＴ２は、吸収量の少ない薬物のバイオアベイラビリティを高めるために有用であると示唆されている（Ｐ．Ｂａｌｉｍａｎｅら．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９８  ２５０：２４６〜２５１；Ｋ．Ｓａｗａｄａら  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９９  ２９１（２）：７０５〜７０９；Ｉ．Ｒｕｂｉｏ−Ａｌｉａｇａ及びＨ．Ｄａｎｉｅｌ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．２００２  ２３（９）：４３４〜４０）。
【０００８】
【化４】
2006510645.tif 000004
【０００９】
アシクロビル（バラシクロビル）ＩＩａのバリンエステルＩＩｂは、ペプチドトランスポーターを介する吸収の結果であると示唆される、改良された吸収特性を示す（Ｂａｌｉｍａｎｅ（前出）；Ｍ．Ｅ．Ｇａｎａｐａｔｈｙら  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１９９８  ２４６：４７０〜７５；Ｐ．Ｊ．Ｓｉｎｋｏ及びＰ．Ｖ．Ｂａｌｉｍａｎｅ，Ｂｉｏｐｈａｒｍ．Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｐｏｓ．１９９８  １９：２０９〜１７；Ｒ．Ｌ．ｄｅ  Ｖｒｕｅｈら  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．１９９８  ２８６：１１６６〜７０）。Ｍｉｔｓｕｒｕ  Ｓｕｇａｒａら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ，２０００  ８９（６）：７８１〜８９）は、バルガンシクロビルＩＩｄの改良された輸送を示唆し、ガンシクロビルのバリンエステルＩＩｃは、ＰｅｐＴ１及びＰｅｐＴ２輸送システムに関与する。ＷＯ０１／６８０３４Ａ２（Ｇ．Ｗａｎｇら）は、薬物バイオアベイラビリティを増加させ、感染、外寄生、新生物又は自己免疫疾患を処置するために、レボビリンの糖部分及びトリアゾール部分の生物学的に可逆的な改変を開示する。ＷＯ００／２３４５４（Ａ．Ｋ．Ｇａｎｇｕｌｙら）は、慢性Ｃ型肝炎感染を持つ患者に、インターフェロンαと共に共投与するためのリバビリン誘導体を開示する。
【００１０】
一方、効果的に吸収されたプロドラッグのアベイラビリティは、レボビリンのバイオアベイラビリティを高める経路を与え、さらに、これらの化合物の開拓は、活性成分の効果的な製造及び配合を可能にする物理的性質を有するレボビリン誘導体を必要とする。レボビリンプロドラッグは、十分な熱安定性、光安定性、非吸湿性を保有するべきである。配合物化学に関連する性質としては、粒径、多形形態、結晶特性、及び塩形態が挙げられる。これらの性質は水溶性、崩壊プロフィール、配合物中の他の成分との適合性、投与経路及び生体での医薬的性質に影響を与える。次いで、理想的なヌクレオシド薬物候補は、効果的に製造及び配合可能な物理的性質を保有し、吸収部位に送達可能な医薬的性質を保有し、輸送システムによって認識及び吸収可能な化学的性質を保有し、吸収が完結した後に、所望の親化合物に変換される。
【００１１】
発明の詳細な説明
驚くべきことに、いくつかの疎水性アミノ酸エステル塩酸塩、及びレボビリンの一連の中性モノ−、ジ−、及びトリアシル誘導体が、必要な物理的性質及び化学的性質を保有し、改良されたバイオアベイラビリティを示すことがわかった。
【００１２】
本発明は、式Ｉ
【００１３】
【化５】
2006510645.tif 000005
【００１４】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル及びＣＯＲ４（ここで、ＣＯＲ４はアミノ酸又はジペプチドである）からなる群から選択される〕
のヌクレオチド化合物、及び上記化合物の水和物、溶媒和物、包接化合物、及び酸付加塩、治療的に有効量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与する工程を含むＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によって媒介される疾患を処置する方法、及び治療的に有効量の式Ｉの化合物と、少なくとも１つの医薬的に受容可能な担体とを含み、場合により賦形剤を含有する医薬組成物に関する。
【００１５】
本発明の一実施態様は、式Ｉ（Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は上に定義されるとおりである）のヌクレオチド化合物である。
【００１６】
別の実施態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうち１つがＣＯＲ４であり、Ｒ４は、ＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−又はピロリジン−２−イルであり、Ｒ５は、天然に生じる疎水性アミノ酸の側鎖又はＣ１〜６の直鎖又は分枝のアルキルであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうち他のものは独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、及びＣ１〜１０アルコキシカルボニルからなる群から選択される、式Ｉの化合物が提供される。
【００１７】
別の実施態様では、Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４が、ＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−又はピロリジン−２−イルであり、Ｒ５は、天然に生じる疎水性アミノ酸の側鎖又はＣ１〜６の直鎖又は分枝のアルキルであり、Ｒ２及びＲ３が独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、及びＣ１〜１０アルコキシカルボニルからなる群から選択される、式Ｉの化合物が提供される。
【００１８】
別の実施態様では、Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４がＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−であり、Ｒ５が、ＣＨ（ＣＨ３）２及びＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３からなる群から選択され、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、式Ｉの化合物が提供される。
【００１９】
本発明の別の実施態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３のうち１つがＣＯＲ４であり、Ｒ４がＣＨ（Ｒ５）ＮＨ2であり、Ｒ５がバリンの側鎖であり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３の他のものは独立して水素からなる群から選択される、式Ｉの化合物の酸付加塩が提供される。
【００２０】
本発明の別の実施態様では、Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４がバリンの側鎖であり、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、式Ｉの化合物の酸付加塩が提供される。
【００２１】
本発明の好ましい実施態様では、Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４がＬ−バリンの側鎖であり、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、式Ｉの化合物の塩酸塩が提供される。
【００２２】
本発明の化合物の好ましい代表例は、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−｛１，２，４｝トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル塩酸塩である。
【００２３】
別の実施態様では、Ｒ１がＣＯＲ４であり、Ｒ４が、ＣＨ（Ｒ５）ＮＨ３＋Ｃｌ−であり、Ｒ５がＣＨ３であり、Ｒ２及びＲ３の両方が水素である、式Ｉの化合物が提供される。
【００２４】
別の実施態様では、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３がＣ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルである、式Ｉの化合物が提供される。
【００２５】
このような化合物の好ましい代表例は、プロピオン酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−プロピオニルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルである。
【００２６】
別の実施態様では、Ｒ１がＣ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルであり、Ｒ２及びＲ３が水素である、式Ｉの化合物が提供される。
【００２７】
別の実施態様では、Ｒ１が水素であり、Ｒ２及びＲ３が両方独立して、Ｃ１〜１０アシル又はＣ１〜１０アルコキシカルボニルである、式Ｉの化合物が提供される。
【００２８】
本発明の好ましい実施態様では、以下の化合物が提供される：
イソ酪酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−４Ｓ−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル；又は
２，２−ジメチルプロピオン酸  ４Ｓ−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル。
【００２９】
本発明の別の実施態様では、式ＩＩ
【００３０】
【化６】
2006510645.tif 000006
【００３１】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は独立して、水素、Ｃ１〜１０アシル、Ｃ１〜１０アルコキシカルボニル及びＣＯＲ４（ここで、ＣＯＲ４はアミノ酸又はジペプチドである）からなる群から選択され；Ｒ６はＣ１〜６アシルである〕
のヌクレオシド化合物、及び上記化合物の水和物、溶媒和物、包接化合物、及び酸付加塩である。
【００３２】
式Ｉ又はＩＩによって特徴付けられる本発明の化合物は、治療、特にＣ型肝炎ウイルスによって媒介される疾患に使用することができる。
【００３３】
式Ｉ又はＩＩによって特徴付けられる本発明の化合物は、治療的に有効量で、一般に、１日に患者の体重１kgあたり０．１〜３００mg／kgの用量で、好ましくは１日に患者の体重１kgあたり１〜１００mg／kgの用量で、さらに好ましくは１日に患者の体重１kgあたり１〜５０mg／kgの用量で、哺乳動物に投与することができる。
【００３４】
本発明の別の実施態様では、式Ｉ又はＩＩによって特徴付けられる本発明の化合物は、免疫システムモジュレーター又は抗ウイルス薬剤、例えば、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、コロニー刺激因子、抗炎症性薬剤と、又は逆転写酵素インヒビターと組み合わせて投与することができる。
【００３５】
上記インターフェロンは、化学誘導体化されたインターフェロン、例えば、ＰＥＧ−インターフェロン−α−２ａ（ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））又はＰＥＧ−インターフェロン−α−２ｂ（ＰＥＧ−ＩＮＴＲＯＮ（登録商標））であることができる。
【００３６】
タンパク質化学の当業者は、ポリマー及びタンパク質を結合させる新規な方法論の開発が継続中であり、ＨＣＶによって媒介される疾患を処置するためのレボビリンプロドラッグと共投与される場合、ポリマーをインターフェロンに結合する方法が、本発明の範囲内に入る化合物を製造することを認識する。
【００３７】
本発明の別の実施態様では、治療的に有効量の式Ｉ及びＩＩの化合物と、少なくとも１つの医薬的に受容可能な担体とを含み、場合により賦形剤を含有する、医薬組成物が提供される。
【００３８】
定義
句「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」構成要素は、本明細書中で使用される場合、その構成要素の１つ以上を指し、例えば、１つの（ａ）化合物は、1つ以上の化合物又は少なくとも１つの化合物を指す。同様に、用語「１つの（ａ）」（又は１つの（ａｎ））、「1つ以上の」及び「少なくとも１つの」は、本明細書中で互換可能に使用することができる。
【００３９】
句「本明細書中で上に定義されるとおり」は、発明の詳細な説明中に与えられる最初の定義を指す。
【００４０】
用語「アルキル」は、本明細書中で使用される場合、１〜１２個の炭素原子を含有する、分枝していないか又は分岐した炭化水素残基を示す。用語「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子を含有する、分枝していないか又は分岐した炭化水素残基を示す。代表的な低級アルキル基としては、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｔ−ブチル又はペンチルが挙げられる。
【００４１】
用語「アシル」は、形式的には有機酸からヒドロキシル基を除去することによって誘導される、式Ｒ−Ｃ（Ｏ）−の有機基を意味する。用語「Ｃ１〜１２アシル」は、Ｒが１〜１２個の炭素原子を有するアルキル又はアリールであるアシル基を指し、用語「低級アシル」は、本明細書中で使用される場合、ＲがＣ１〜６の直鎖、分枝又は環状アルキルであるアシル基を指す。用語「アロイル」は、本明細書中で使用される場合、Ｒがアリール基であるアシル基を指す。
【００４２】
用語「アルコキシ」は、本明細書中で使用される場合、式Ｒ−Ｏ−の有機基を示し、ここで、「アルキル」部分は、上に定義されるとおりであり、例えば、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、ｉ−プロピルオキシ、ｎ−ブチルオキシ、ｉ−ブチルオキシ、ｔ−ブチルオキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、ヘプチルオキシ（それらの異性体を含む）である。「低級アルコキシ」は、本明細書中で使用される場合、以前に定義されたような「低級アルキル」を有するアルコキシ基を示す。
【００４３】
用語「アルコキシカルボニル」は、本明細書中で使用される場合、式Ｒ−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−の有機基を意味し、ここで、Ｒ−Ｏ−は、本明細書中に定義されるようなアルコキシ基である。
【００４４】
用語「天然に生じるアミノ酸」は、本明細書中で使用される場合、天然に生じるアミノ酸のＬ−異性体を意味する。天然に生じるアミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、スレオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、プロリン、ヒスチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、γ−カルボキシグルタミン酸、アルギニン、オルニチン及びリシンである。特に示されない限り、本明細書中で示される全てのアミノ酸は、Ｌ−体である。用語「疎水性アミノ酸」は、本明細書中で使用される場合、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン及びプロリンである。
【００４５】
塩基性である式Ｉの化合物は、ハロゲン化水素酸（例えば、塩酸及び臭化水素酸）、硫酸、硝酸及びリン酸等のような無機酸と、及び有機酸（例えば、酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸、及びｐ−トルエンスルホン酸等）と医薬的に受容可能な塩を形成することができる。
【００４６】
用語「溶媒和物」は、本明細書中で使用される場合、非共有的な分子間力によって結合する化学量論的量又は非化学量論的量の溶媒をさらに含む、本発明の化合物又はそれらの塩を意味する。好ましい溶媒は、揮発性で、非毒性で、及び／又は痕跡量においてヒトに対する投与のために受容可能なものである。
【００４７】
用語「水和物」は、本明細書中で使用される場合、非共有的な分子間力によって結合する化学量論的量又は非化学量論的量の水をさらに含む、本発明の化合物又はそれらの塩を意味する。
【００４８】
用語「包接化合物」は、本明細書中で使用される場合、その中にトラップされたゲスト分子（例えば、溶媒又は水）を有する空間（例えば、チャネル）を含有する結晶格子の形態における、本発明の化合物又はそれらの塩を意味する。
【００４９】
用語「免疫調節剤」は、本明細書中で使用される場合、免疫機能を改変又は補助又は調節可能な治療薬剤を意味する。免疫学的な調節、制御又は増強を引き起こす薬剤。
【００５０】
用語「インターフェロン」は、本明細書中で使用される場合、細胞のウイルス感染を妨害可能な、及び正常細胞及び形質転換した細胞の増殖を阻害し、細胞分化を調節し、免疫システムを調節する、タンパク質のファミリーを意味する。インターフェロンの４つの主な抗原型（α、β、γ及びω）は、それらの産生の細胞源によって定義される。Ｉ型インターフェロン（インターフェロン（α、β及びω）は、Ｉ型インターフェロンレセプターに対して細胞結合について互いに競争し、このマルチサブユニット細胞表面レセプターの少なくともいくつかの成分を分け合い、一方、ＩＩ型インターフェロン（インターフェロンγ）についてのレセプターは全体的に別個のものである。天然に生じるインターフェロン及び組み換えインターフェロンの両方は、本発明の化合物と共に組み合わせ治療において投与されてもよい。インターフェロンについてのコンセンサス配列は、米国特許第４，８９７，４７１号（Ｙ．Ｓｔａｂｉｎｓｋｙ）に記載されている。
【００５１】
用語「化学的に誘導体化されたインターフェロン」は、本明細書中で使用される場合、インターフェロンの物理的性質及び／又は動的薬理学的性質を変えるポリマーに共有結合したインターフェロン分子を指す。このようなポリマーの非限定例としては、ポリアルキレンオキシドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー及びそれらのブロックコポリマーが挙げられ、但し、ブロックコポリマーの水溶性は維持されている。当業者は、ポリマー及びインターフェロンを結合する多くのアプローチに気づく（例えば、Ａ．Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ及びＪ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌｅａｓｅ  ２００１  ７２（１〜３）：２１７〜２４；Ｃ．Ｗ．Ｇｉｌｂｅｒｔ及びＭ．Ｐａｒｋ−Ｃｈｏ，米国特許第５，９５１，９７４を参照）。本発明において意図される化学的に誘導体化されたＩＦＮαの非限定的なリストとしては、ＰＥＧ−インターフェロン−α−２ａ（ＰＥＧＡＳＹＳ（登録商標））及びＰＥＧ−インターフェロン−α−２ｂ（ＰＥＧＩＮＴＲＯＮＴＭ）が挙げられる。
【００５２】
略語
以下の略語は、本明細書全体で使用され以下に列挙された意味を有する：
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＣＢＺ：ベンジルオキシカルボニル
ＰｙＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＩＰＡ：イソプロピルアルコール
ＤＭＡＰ：４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン
ＤＩＰＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＤＥＡＤ：ジエチルアゾジカルボキシレート
ＰＴＬＣ：分取薄層クロマトグラフィー
ＴｓＯＨ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物
【００５３】
命名法
概して、本明細書中で使用される命名法は、ＡＵＴＯＮＯＭＴＭ  ｖ４．０（ＩＵＰＡＣの系統的な命名の作製のためのＢｅｉｌｓｔｅｉｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅコンピューター化されたシステム）に基づく。
【００５４】
本発明の化合物の例
以下の実施例及び調製法は、当業者が本発明を明確に理解し、実施可能なように提供される。これらの例は、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではなく、単にそれらの説明及び例示としてみなされるべきである。表１の化合物は、レボビリンのモノ−、ジ−及びトリアシル誘導体の例である。表２の化合物は、Ｎ−アシルレボビリン誘導体を例示する。表３の化合物は、1つ以上のヒドロキシル基が保護され、２’，３’ヒドロキシ基とのケタール又はアセタールを含有するアシル化化合物である合成中間体を例示する。
【００５５】
【表１】
2006510645.tif 000007
2006510645.tif 000008
【００５６】
【表２】
2006510645.tif 000009
【００５７】
【表３】
2006510645.tif 000010
【００５８】
化合物の調製
式Ｉの化合物は、一般的には有機化学の分野における、特にヌクレオシドアナログ合成の分野における、種々の公知の方法によって調製されてもよい。合成のための出発物質は、商業的な供給源から容易に入手可能であるか、当該技術分野で公知の技術によって調製されたものであってもよい。以下の実施例（後出）は、当業者が本発明を明確に理解し、実施可能なように与えられる。これらの例は、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではなく、単にそれらの説明及び例示としてみなされるべきである。ヌクレオシドアナログの調製の一般的な概要は、以下の刊行物に含まれる：
Ａ  Ｍ  Ｍｉｃｈｅｌｓｏｎ  「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ  １９６３。
Ｌ  Ｇｏｏｄｍａｎ  「Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  Ｅｄ  Ｐ  Ｏ  Ｐ  Ｔｓ’Ｏ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９７４，Ｖｏｌ．１，ｃｈａｐｔｅｒ  ２。
「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｉｎ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」  Ｅｄ  Ｗ  Ｗ  Ｚｏｒｂａｃｈ及びＲ  Ｓ  Ｔｉｐｓｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９７３，Ｖｏｌ．１及び２。
Ｈ．Ｖｏｒｂｒｕｇｇｅｎ及びＣ．Ｒｕｈ−Ｐｏｈｌｅｎｚ（編）「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１。
【００５９】
使用される数（例えば、量、温度）に関して正確であるように努力がなされたが、較正値の違い、数の四捨五入等を含む、いくつかの実験的エラー及び偏差についての許容値は、意図される。
【００６０】
配合及び投与
式Ｉの化合物の配合物は、配合の分野において公知のプロセスによって調製されてもよい。以下の実施例（後出）は、当業者が本発明を明確に理解し、実施可能なように提供される。これらの例は、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではなく、単にそれらの説明及び例示としてみなされるべきである。
【００６１】
本発明のヌクレオシド誘導体は、胃腸粘膜を通って送達されるために最適化されるが、これらの化合物は、他の投与経路の中で、連続的な（静脈内点滴）局所的な非経口、筋肉内、静脈内、皮下、経皮（浸透向上剤を含んでもよい）、頬、鼻、及び座剤投与される場合にも、有効であることができる。経口投与は、錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、エマルション、シロップ、又は懸濁物の形態であることができる。
【００６２】
医薬調製物の製造のために、ヌクレオシド誘導体、及びそれらの医学的に使用可能な塩は、錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセル及び軟質ゼラチンカプセル、溶液、エマルション又は懸濁物を製造するための、治療的に不活性な、無機又は有機の賦形剤と共に配合することができる。式Ｉの化合物は、医薬的に受容可能な担体との混合物において配合することができる。例えば、本発明の化合物は、薬理学的に受容可能な塩として経口投与することができる。本発明の化合物はほとんど水溶性であるため、これらは生理食塩水溶液（例えば、ｐＨ約７．２〜７．５に緩衝化された）中で静脈内投与することができる。従来のバッファー、例えば、リン酸塩、炭酸水素塩、又はクエン酸塩は、本発明の組成物において使用することができる。錠剤、コーティングされた錠剤、糖衣錠、硬質ゼラチンカプセルのための好適な賦形剤は、例えば、ラクトース、トウモロコシデンプン及びそれらの誘導体、タルク、及びステアリン酸又はそれらの塩である。所望な場合、錠剤又はカプセルは、標準的な技術によって腸溶性コーティングされてもよいか、又は持続性放出されてもよい。軟質ゼラチンカプセルのための好適な賦形剤は、例えば、植物油、ワックス、脂肪、半固体ポリオール及び液体ポリオールである。注射溶液のための好適な賦形剤は、例えば、水、食塩水、アルコール、ポリオール、グリセリン又は植物油である。座剤のための好適な賦形剤は、例えば、天然油及び硬化油、ワックス、脂肪、半液体ポリオール又は液体ポリオールである。腸での使用のための溶液及びシロップのための好適な賦形剤は、例えば、水、ポリオール、サッカロース、転化糖及びグルコースである。医薬調製物はさらに、防腐剤、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香料、浸透圧の調節のための塩、バッファー、マスキング剤又は酸化防止剤を含有することができる。医薬調製物はさらに、当該技術分野で公知の他の治療的に活性な薬剤を含有してもよい。好適な医薬的キャリア、賦形剤及びそれらの配合物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １９９５、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、第１９編、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａに記載される。本発明の化合物を含有する代表的な医薬配合物は、実施例１３〜１５に記載される。
【００６３】
配合分野における当業者はさらに、本発明の化合物を患者又は宿主臓器内の標的部位に送達し、化合物の意図される効果を最大限にすることにおいて、プロドラッグ形態の有利な物理的パラメーター及び薬動力学パラメーターをうまく利用する。配合科学の当業者は、本発明の組成物の治療活性を不安定にするか又は妥協することなく、特定の投与形態のための多くの配合物を提供するために本明細書の教示内で配合物を改変し得る。
【００６４】
特に、本発明の化合物を水又は他のビヒクル中でより可溶にする改変は、例えば、当業者に周知であるマイナーな改変（塩配合、エステル化等）によって容易に達成し得る。さらに、患者における有利な効果を最大限にするために本発明の化合物の薬動力学を調節するために、投与経路を改変し、特定の化合物の投薬法を改変することは、当業者の常識の範囲内である。
【００６５】
投薬量は、広い限定内を変動することができ、もちろん、各々の特定の症例において、個々の要求に対して調節することができる。経口投与のために、１日の投薬量は、約０．０１〜約１００mg／kg体重／日が、単一治療及び／又は組み合わせ治療において適切であるべきである。好ましい１日の投薬量は、約０．１〜約３００mg／kg体重、さらに好ましくは、１〜約１００mg／kg体重、最も好ましくは１．０〜約５０mg／kg体重／日である。典型的な調製物は、約５％〜約９５％の活性化合物（ｗ／ｗ）を含有する。１日の投薬量は、単一投薬又は分割投薬として投与することができ、典型的には、１〜５回投薬／日である。
【００６６】
医薬調製物は、好ましくは、単一投薬形態である。このような形態において、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に分けられる。単位投薬形態は、パッケージ化調製物であることができ、このパッケージは別個の量の調製物を含有し、例えば、パケット化錠剤、カプセル、及びバイアル又はアンプル中の粉末である。また、単位投薬形態は、カプセル、錠剤、カシェ、又はロゼンジ自体であることができ、又はパッケージ化形態におけるこれらのいずれかの適切な数のものであることができる。
【００６７】
ヌクレオシド誘導体又はそれらの医薬は、単一治療又は組み合わせ治療において使用してもよく、すなわち、処置は、1つ以上の追加の治療的活性基質、例えば、免疫システム調節剤（例えば、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子又はコロニー刺激因子又は抗炎症薬剤及び／又は抗ウイルス剤）の投与と組み合わせてもよい。処置が組み合わせ治療である場合、このような投与は、ヌクレオシド誘導体の投与と同時又は連続してもよい。同時投与は、本明細書中で使用される場合、同時又は異なる時間での薬剤の投与を含む。
【００６８】
Ｃ型肝炎によって媒介される疾患を予防する程度の処置、及び既存の状態の処置、及び動物の処置についての本明細書中の参考文献は、ヒト及び他の哺乳動物の処置を含む。さらに、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染の処置は、本明細書中で使用される場合、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に関連する疾患又は状態、又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染によって媒介される疾患又は状態、又はそれらの臨床的症状の処置又は予防を含む。
【００６９】
（実施例１）
【００７０】
【化７】
2006510645.tif 000011
【００７１】
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−テトラヒドロ−３αＳ，６αＳ−フロ［３，４−ｄ ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（３，Ｒ’＝Ｒ”＝ＣＨ３）
レボビリン（１，１．０ｇ，４．１mmol，Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を、乾燥アセトン：２，２−ジメトキシプロパンの２：１混合物３２mlに懸濁させた。この溶液をＮ２下、氷浴中で攪拌し、濃過塩素酸７滴を滴下した。反応物を室温で４時間を超えて攪拌した。混合物を１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を添加して中和し、残渣が残るまで蒸発させた。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル；５％〜１０％メタノール／ジクロロメタン）を介して精製し、１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２，２−ジメチル−テトラヒドロ−３αＳ，６αＳ−フロ［３，４−ｄ ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（化合物４１（３，Ｒ’＝Ｒ”＝ＣＨ３）０．７２ｇ（６２％）を得た；
（Ｍ＋Ｈ）＋＝２８５；ｍｐ＝９５．１〜９８℃）。
【００７２】
（実施例２）
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３αＳ，６αＳ−フロ［３，４−ｄ ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（３；Ｒ’＝Ｈ，Ｒ”＝Ｐｈ）
レボビリン（６．００ｇ，２４．５mmol，Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を、ベンズアルデヒド６０mlに懸濁させた。塩化亜鉛（５．７０ｇ，４１．８mmol，Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）を攪拌した混合物に添加した。４時間後、反応混合物を、すばやく攪拌したジエチルエーテル１Ｌに添加した。形成した沈殿をろ過し、エーテルで洗浄し、次いで、酢酸エチル３５０ml及び冷２Ｍ水酸化ナトリウム溶液６５０mlに溶解した。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回以上抽出した。合わせた酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、固体になるまで蒸発させた。固体をエーテルで磨砕し、シリカゲルクロマトグラフィー（２％〜７％メタノール／ジクロロメタン）によって精製し、１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３αＳ，６αＳ−フロ［３，４−ｄ ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（化合物４２（３，Ｒ’＝Ｐｈ，Ｒ”＝Ｈ）４．４ｇ（５４％）を得た；
（Ｍ＋Ｈ）＋＝３３３；ｍｐ＝１５０〜１５３℃）。
【００７３】
（実施例３）
１−（３Ｒ−ヒドロキシ−５，５，７，７−テトライソプロピル−テトラヒドロ−１，４，６，８−テトラオキサ−５，７−ジシラ−３αＳ，９αＳ−シクロペンタシクロオクテン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド
【００７４】
【化８】
2006510645.tif 000012
【００７５】
ＤＭＦ３０ml中のレボビリン（３．７５ｇ，１５．４mmol）の攪拌したスラリーに、ピリジン３０ml、ＴＥＡ（５．３５ml，３８．４mmol）、及び１，３−ジクロロ−１，１，３，３−テトライソプロピル−ジシロキサン（６．１５ml，１９．２mmol）を０℃で添加した。反応物を室温まで加温して反応させ、２４時間攪拌した。得られた溶液を１Ｎ  ＨＣｌと酢酸エチルとに分配した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（２５％アセトン／クロロホルム）を介して精製し、１−（３Ｒ−ヒドロキシ−５，５，７，７−テトライソプロピル−テトラヒドロ−１，４，６，８−テトラオキサ−５，７−ジシラ−３αＳ，９αＳ−シクロペンタシクロオクテン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（化合物４３）３．９６ｇ（５３％）を得た。
【００７６】
（実施例４）
１−（３Ｓ，４Ｒ−ジヒドロキシ−５Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド
【００７７】
【化９】
2006510645.tif 000013
【００７８】
ＤＭＦ７５ml中のレボビリン（１，９．２２ｇ，３７．８mmol）の攪拌したスラリーに、室温で、イミダゾール（２．８０ｇ，４１．１mmol）及びトリイソプロピルシリルクロリド（８．１ml，３８mmol）を添加した。懸濁物を５０℃に加熱し、固体を溶解させ、この温度を６時間維持した。溶液を分液漏斗に移し、酢酸エチル４００mlと水５００mlとに分配した。有機層（スラリー）を水２００mlで３回洗浄し、沈殿をろ別した。有機層のろ液をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。ろ過した残渣を、メタノール１５０mlで再結晶させ；母液を合わせ、有機物を濃縮し、さらに再結晶させた。４つの結晶を集めて、１−（３Ｓ，４Ｓ）−ジヒドロキシ−５Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド１０．４７ｇ（６９％）を白色結晶性固体として得た（化合物４４；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝４２３；ｍｐ＝１７４．６〜１７５．７℃）。
【００７９】
方法Ａ−三置換アナログの調製
（実施例５）
イソ酪酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（２；Ｒ１＝ＣＨ（ＣＨ３）２）
【００８０】
【化１０】
2006510645.tif 000014
【００８１】
ＴＨＦ８ml中のレボビリン（０．４６ｇ，１．８８mmol）の攪拌したスラリーに、窒素下で、ＴＥＡ（１．３１ml，９．４０mmol）及び無水イソ酪酸（１．４１ml，８．４８mmol）を添加した。反応容器を冷フィンガーアタッチメントに取り付けて、６５℃で２４時間加熱した。反応物を酢酸エチルと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とに分配した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をシリカクロマトグラフィー（３％メタノール／ジクロロメタン）を介して精製し、０．２７８ｇ（３３％）イソ酪酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルをガム状固体として得た。ＭＳ：（化合物２６（２，Ｒ＝ＣＨ（ＣＨ３）２；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝４７７）。
【００８２】
適切な酸無水物と類似の様式で進め、以下を調製した：
２，２−ジメチルプロピオン酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物２７；１８％）；安息香酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−ベンゾイルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物２５；６６％）；酢酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−アセトキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物１；６５％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７１）；プロピオン酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−プロピオニルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルを透明油状物として（化合物２；５２％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１３）；酪酸  ３Ｓ，４Ｓ−ビス−ブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルを透明油状物として（化合物２０；２０％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４５５）。
【００８３】
（実施例６）
炭酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−エトキシカルボニルオキシ−５Ｓ−エトキシカルボニル−オキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステルエチルエステル
【００８４】
【化１１】
2006510645.tif 000015
【００８５】
レボビリン（１，０．５ｇ，２．０４mmol，Ｒｏｃｈｅ  Ｃａｒｏｌｉｎａ）を、ＤＭＦ３ml及びピリジン１．５mlに懸濁させた。混合物を氷浴中で攪拌し、クロロギ酸エチル（０．７８ml，８．１９mmol）を１５分かけて３回にわけてゆっくりと添加した。反応物を室温で２時間を超えて攪拌した。メタノールを添加し、反応物を１０分間攪拌した。蒸発させた後、残渣を酢酸エチル及び飽和塩化アンモニウム溶液に取った。層を分離し、水層を酢酸エチルで１回抽出した。合わせた酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで洗浄し、濃縮した。泡状の残渣をクロマトグラフィー（３〜４％メタノール／ジクロロメタン）を介して精製し、メタノール／水溶液の凍結乾燥によって、固体の炭酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−エトキシカルボニルオキシ−５Ｓ−エトキシカルボニルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステルエチルエステル（化合物２４，７４％，（Ｍ＋Ｈ）＋＝４６１）を得た。
【００８６】
適切なクロロギ酸アルキルを用いた類似の様式で進め、以下を調製した：炭酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−プロポキシカルボニルオキシ−５Ｓ−プロポキシカルボニル−オキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステルプロピルエステル（化合物３２，４７，（Ｍ＋Ｈ）＋＝５０３）。
【００８７】
方法Ｂ−５’−モノアシル誘導体の調製
【００８８】
【化１２】
2006510645.tif 000016
【００８９】
（実施例７）
２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（４：Ｒ１＝ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）２）
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．４９ｇ，１．４７mmol）を、乾燥ＤＭＦ５mlに溶解した。Ｎ−ＣＢＺ−Ｌ−バリン（０．４４ｇ，１．７７mmol，Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ＰｙＢＯＰ（０．８４ｇ，１．６２mmol，Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）及びＤＩＰＥＡ（０．５１ml，２．９４mmol）を順に添加した。１８時間攪拌した後、酢酸エチル及び飽和塩化アンモニウム溶液を添加した。層を分離し、水層を酢酸エチルで１回抽出した。合わせた酢酸エチル層を水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル；勾配２％〜５％メタノール／ジクロロメタン）を介して精製し、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステル５２０mg（６２％）を泡状物として得た。（Ｍ＋Ｈ）＋＝５６６。
【００９０】
２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステル（０．４９ｇ，０．８７mmol）を、２０％水酸化パラジウム炭素０．３６ｇ（水５０ｗｔ％）を含有するメタノール５mlに溶解した。ＴｓＯＨ（０．１６５ｇ，０．８７mmol）を添加し、反応容器を水素ガスを充填した風船に取り付けた。容器にＨ２ガスをパージし、３５℃で４．５時間攪拌した。次いで、混合物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）床を介してろ過し、さらにメタノールを通してすすいだ。溶媒を蒸発させた後、残渣を水に溶解し、凍結乾燥させて、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物０．４４ｇ（９８％）（化合物４；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４４；ｍ．ｐ．＝１１０〜１１４．５℃）を得た。
【００９１】
適切なカルボン酸を用いて、上に記載される２段階の順序を利用して、以下のものを得た：２Ｓ−アミノ−プロピオン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物７；９８％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１６；ｍ．ｐ＝１０８〜１２０℃）；２Ｓ−アミノ−３−フェニル−プロピオン酸  ５Ｓ（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物８；９１％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３９２；ｍ．ｐ．＝１１４〜１３６℃）；２Ｓ−アミノ−４−メチル−ペンタン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物９；９５％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８；ｍ．ｐ．＝１１２〜１２３℃）；２Ｓ−アミノ−３Ｓ−メチル−ペンタン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルエチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物１０；９１％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５８；ｍ．ｐ．＝１０１．８〜１１０．８℃）；２−メチル−プロピオン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルエチルエステル（化合物１２；９４％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１５；ｍ，ｐ．＝１６９〜１７１．２℃）；２−アミノ−酢酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ）４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物１３；９１％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３０２；ｍ．ｐ．＝８９．３〜９６．４℃）；２−メチル−アミノ−酢酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物１４；８３％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１６；ｍ．ｐ．＝６９．４〜８６．３℃）。
【００９２】
（実施例８）
２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル，塩酸塩（４：Ｒ１＝ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）２）
ＴＨＦ９．５ml中のレボビリン（１，３５０mg，１．４３mmol）の懸濁物を、Ｌ−Ｖａｌ−ＣＢＺ（３６０mg，１．４３mmol）及びトリフェニルホスフィン（６００mg，２．２９mmol）で処理した。反応物を室温で攪拌し、ＤＥＡＤ（０．２８ml，１．８mmol）を滴下した。反応物を室温で一晩攪拌し、得られた懸濁物を濃縮し、クロマトグラフィーにかけ（ＰＴＬＣ，７％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（１６％）を白色固体として得た。ＭＳ：ＭＨ＋＝４７８（他のヌクレオシドＭｉｔｓｕｎｏｂｕカップリングについての参考文献として、以下を参照：Ｗｅｉ，Ｙ．；Ｐｅｉ，Ｄ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ，Ｌｅｔｔ．２０００，
１０（１０），１０７３）。
【００９３】
メタノール（１０ml）及び１Ｍ  ＨＣ１（０．７ml）を、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（１７０mg，０．３５mmol）及び５０mgの１０％Ｐｄ／炭素との混合物に添加した。得られた懸濁物を水素雰囲気（約１atm、風船）下で３０分攪拌し、ＣＥＬＩＴＥ（登録商標）のパッドを通して反応物をろ過した。ろ液を濃縮し、水で希釈し、凍結乾燥して、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル塩酸塩を淡黄色吸湿性固体として得た（化合物５，７５％，（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４４）。希ＨＣｌ／ＩＰＡからの再結晶により、白色結晶性固体を得た；ｍｐ：１５４〜１５６℃。
【００９４】
適切なカルボン酸を用いて、上に記載される２段階の順序を利用して、以下のものを得た：２Ｒ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物６；９０％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３４４）。
【００９５】
（実施例９）
２，２−ジメチル−プロピオン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（４：Ｒ１＝Ｃ（ＣＨ３）３）
１：１ＤＭＦ／ピリジン３ml中の１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１ＳＨ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．２４ｇ，０．７２mmol）の溶液に、２，２−ジメチルプロピオン酸無水物（０．３６ml，１．８mmol）及びＤＭＡＰ（０．０４ｇ，０．３６mmol）を添加した。得られた溶液を室温で一晩攪拌し、５０mlの酢酸エチルと飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液との間で分配した。水層を酢酸エチルで２回抽出し、合わせた有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィーにかけ（ＰＴＬＣ，５％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステルを透明油状物として得た（９５％）。
【００９６】
メタノール（６ml）を、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステル（０．３７ｇ，０．８８mmol）及び５０％湿潤１０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（３００mg）の混合物に添加した。得られた懸濁物を、水素雰囲気（約１atm、風船）下で４０℃で６時間攪拌し、反応物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）のパッドを介してろ過した。ろ液を濃縮し、得られた油状物をＭｅＯＨ１．５ml及びＣＨ２Ｃｌ２１０mlに溶解し、次いで、溶液が曇り始めるまで、ヘキサン３mlを添加した。得られた沈殿した白色固体をろ過して、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物１１；７０％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３２９；ｍ．ｐ：１３９〜１４１．６℃）を得た。
【００９７】
適切な無水カルボン酸を用いて上に記載される２段階の順序を使用して、以下のものを得た：ヘプタン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物３１；７０％）；プロピオン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物３６；７０％）。
【００９８】
（実施例１０）
オクタン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステル（４：Ｒ１＝Ｃ７Ｈ１５）．
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．２５ｇ，０．７５mmol）を、ＤＭＦ１ml及びピリジン０．５mlに溶解した。反応溶液を氷浴中で攪拌し、塩化オクタノイル（０．１６ml，０．９４mmol）を滴下した。反応物を室温で２４時間攪拌した。濃縮後、残渣を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム溶液との間で分配した。層を分離し、水層を酢酸エチルで１回抽出した。合わせた酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させた後の残渣を５％メタノール／ジクロロメタン中のシリカゲルのクロマトグラフィーで精製し、オクタン酸，６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステル０．２ｇ（５８％）を得た；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４５９。ＴｓＯＨを添加する以外は、化合物４の調製（前出）において記載されるように、ベンジリデン基の加水分解を行い、オクタン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステル１０２mg（６４％）を結晶性固体として得た（酢酸エチル−メタノール）。（化合物３４；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３７１，ｍ．ｐ．＝１５４．４〜１５５．８℃）。
【００９９】
適切な酸塩化物を用いて上に記載されるように進め、以下のものを調製した：ノナン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステル（化合物３５；８２％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３８５；ｍ．ｐ．＝１５５〜１５７．１）；
【０１００】
（実施例１１）
炭酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステルイソプロピルエステル（４：Ｒ１＝Ｏ−ｉ−Ｃ３Ｈ７）
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．３ｇ，０．９０mmol）を、乾燥ＤＭＦ：ピリジンの１：１混合物２．４mlに溶解した。反応物を氷／塩浴中に置き、クロロギ酸イソプロピル（Ａｌｄｒｉｃｈ  １Ｍトルエン溶液）を２０分かけてゆっくりと添加した。浴をはずし、反応物を５時間攪拌した後、メタノール１mlを添加し、反応物をさらに５分間攪拌した。反応物を蒸発させ、残渣を酢酸エチル及び飽和塩化アンモニウム溶液に取った。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、残渣が残るまで蒸発させた。残渣を、５％メタノール／ジクロロメタン中のシリカゲルのクロマトグラフィーで精製し、炭酸，６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステルイソプロピルエステル１５０mg（４０％）（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１９を得た。炭酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステルイソ−プロピルエステルをＴｓＯＨの非存在下で化合物４について記載されるように脱保護し、炭酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステルイソプロピルエステル（化合物１６；９２％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３２９；ｍ．ｐ．＝４６〜５９℃）を得た。
【０１０１】
（実施例１２）
１−（２Ｓ−アミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２Ｓ−カルボン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］−トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル，塩酸塩（４：Ｒ１＝Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｈ）
１−（６Ｓ−ヒドロキシメチル−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．３５ｇ，１．０５mmol）を、乾燥ＤＭＦ３．５mlに溶解した。ＣＢＺ−ＮＨ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ（０．４５ｇ，１．３２mmol，Ｂａｃｈｅｍ）、ＰｙＢＯＰ（０．６８ｇ，１．３２mmol，Ｎｏｖａ  Ｂｉｏｃｈｅｍ）及びＤＩＰＥＡ（０．２７ml，１．５８mmol）を順に添加した。３５℃で１８時間攪拌した後、酢酸エチル及び飽和塩化アンモニウム溶液を添加した。層を分離し、水層を酢酸エチルで１回抽出した。合わせた酢酸エチル層を水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させ、残渣を２％メタノール／ジクロロメタンを用いたシリカゲルクロマトラフィーによって精製した。精製したフラクションを濃縮し、１−（２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリル−ピロリジン−２Ｓ−カルボン酸  ６Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−フェニル−テトラヒドロ−３ａＳ，６ａＳ−フロ［３，４−ｄ］［１，３］ジオキソール−４Ｓ−イルメチルエステル３７０mg（５３％）を、ガラス状物として得た。（Ｍ＋Ｈ）＋＝６６３．
【０１０２】
ベンジリデン保護基の加水分解を、ｐ−トルエンスルホン酸をＨＣｌ／エーテル（Ａｌｄｒｉｃｈ，１Ｍ溶液）に置き換えて、化合物４（前出）について記載されるように行い、１−（２Ｓ−アミノ−３−メチル−ブチリル）−ピロリジン−２Ｓ−カルボン酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｓ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル，塩酸塩（化合物１８；７９％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４１；ｍ．ｐ．＝１４６〜１４９℃）を得た。
【０１０３】
類似の様式で、２−（ピロリジン−２Ｓ−カルボキサアミジル）−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｒ，４Ｒ−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステルの２つの異性体；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物２３，異性体１；８８％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４１；ｍ．ｐ．＝７６〜９２℃；化合物３３，異性体２；９２％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４４１；
ｍ．ｐ．＝１２０〜１３６℃）を調製した。
【０１０４】
方法Ｃ−ジアシル誘導体の調製
【０１０５】
【化１３】
2006510645.tif 000017
【０１０６】
（実施例１３）
酪酸  ４Ｓ−ブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（７：Ｒ１＝Ｃ３Ｈ７）
ＴＨＦ３．３ml中の１−（３Ｓ，４Ｒ−ジヒドロオキシ−５Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．４０ｇ，１．００mmol）の攪拌したスラリーに、ＴＥＡ（０．４８ml，３．４６mmol）、ｎ−酪酸無水物（０．４９ml，２．９７mmol）を添加した。反応容器を冷フィンガーアタッチメントで取り付け、窒素下、６５℃まで１７時間加熱した。反応物を酢酸エチルと飽和炭酸水素ナトリウム水溶液との間で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（２０％アセトン／クロロホルム）によって精製し、酪酸  ４Ｓ−ブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルエステル４７ｇ（８８％）を透明油状物として得た。
【０１０７】
アセトニトリル５ml中の酪酸  ４Ｓ−ブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（０．４７ｇ，０．８８mmol）の攪拌した溶液に、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ２．５mlを室温で添加した。１６時間後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液３０mlを添加し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られた残渣をメタノールで溶解し、生成物をエチルエーテルで析出させ、酪酸  ４Ｓ−ブチリルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルエステル１８ｇ（５３％）を白色結晶性固体として得た（化合物３０；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝４０７；ｍ．ｐ．＝１３５．３〜１３５．９℃）。
【０１０８】
適切な酸無水物を用いて上に記載されるように進め、以下のものを得た：イソ酪酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−４Ｓ−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物１７；３８％；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝４０７；ｍ．ｐ．＝１７９．０〜１７９．６℃）；プロピオン酸  ４Ｓ−プロピオニルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物１９；２７％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝３５７；ｍ．ｐ．＝１５４．２〜１５５．６℃）；２，２−ジメチルプロピオン酸  ４Ｓ−（２，２−ジメチルプロピオニルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物１５；５７％）；安息香酸  ４Ｓ−ベンゾイルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物２８；６７％）。
【０１０９】
（実施例１４）
２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ４Ｓ−（２Ｓ−アミノ−３−メチル−ブチリルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルエステル二塩酸塩（７：Ｒ１＝ＣＨ（ＮＨ２）−ｉ−Ｃ３Ｈ７）
【０１１０】
ＴＨＦ６ml中の１−（３Ｓ，４Ｒ−ジヒドロキシ−５Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．４７ｇ，１．１６mmol）の攪拌したスラリーに、４Ｓ−イソプロピル−２，５−ジオキソオキサゾリジン−３−カルボン酸ベンジルエステル（０．７７ｇ，２．７９mmol）及びＴＥＡ８滴を室温で添加した。反応を１６時間攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１００mlを用いて停止し、酢酸エチル１００mlで３回抽出した。有機層を合わせ、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。得られたフィルムをシリカゲルクロマトグラフィー（１５％アセトン／クロロホルム）を介して精製し、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ４Ｓ−（２Ｓ−
ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−トリイソプロピルシラニルオキシメチル−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルエステル０．５３ｇ（５３％）を透明油状物として得た。
【０１１１】
エタノール１０ml中の２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ４−（２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−ブチリルオキシ）−５−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３−イルエステル（０．３２ｇ，０．４６mmol）のアルゴンパージした攪拌溶液に、塩酸（０．６ml，１．８１mmol）及び１０％Ｐｄ／Ｃ  ０．２０ｇを添加した。反応容器を排気し、水素ガス（約１atm）を３回パージし、６時間攪拌した。懸濁物をＣＥＬＩＴＥ（登録商標）を通してろ過し、ろ液を濃縮した。残渣をメタノール／ジクロロメタン（１：１０）溶液に溶解し、生成物をヘキサンで析出させて、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ４Ｓ−（２Ｓ−アミノ−３−メチル−ブチリルオキシ）−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロフラン−３Ｓ−イルエステルニ塩酸塩０．０９ｇ（３８％）を白色結晶性固体として得た（化合物３；（Ｍ＋Ｃｌ）−＝４７７；ｍ．ｐ＝２０２．０〜２０５．０℃）。
【０１１２】
（実施例１５）
２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル）−４Ｓ−ヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（９：Ｒ１＝Ｃ（ＣＨ３）３）
【０１１３】
【化１４】
2006510645.tif 000018
【０１１４】
１：１ＤＭＦ：ピリジン７ml中の１−（３Ｒ−ヒドロキシ−５，５，７，７−テトライソプロピル−テトラヒドロ−１，４，６，８−テトラオキサ−５，７−ジシラ−３ａＳ，９ａＳ−シクロペンタシクロオクテン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド（０．９２ｇ，１．８８mmol）の攪拌したスラリーに、ＤＭＡＰ（０．１２ｇ，０．９４mmol）、２，２−ジメチルプロピオン酸無水物（０．９５ml，４．６９mmol）を添加し、反応物を２４時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液との間で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル−５，５，７，７−テトライソプロピル−テトラヒドロ−３ａＳ，９ａＳ−１，４，６，８−テトラオキサ−５，７−ジシラ−シクロペンタシクロオクテン−３Ｓ−イルエステルを透明油状物として得た（９９％）。
【０１１５】
アセトニトリル５ml中の２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５，５，７，７−テトライソプロピル−テトラヒドロ−３ａＳ，９ａＳ−１，４，６，８−テトラオキサ−５，７−ジシラ−シクロペンタシクロオクテン−３Ｓ−イルエステル（０．４８ｇ，０．９２mmol）の攪拌溶液に１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ２．５mlを室温で添加した。２時間後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液３０mlを添加し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮して、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−（３−ヒドロキシ−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニルオキシ）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（７１％）を得た。
【０１１６】
１：１ＤＭＦ：ピリジン２．６ml中の２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−（３−ヒドロキシ−１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニルオキシ）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（０．３８ｇ，０．６５mmol）の攪拌したスラリーに、ＤＭＡＰ（０．４０ｇ，３３mmol）、２，２−ジメチルプロピオン酸無水物（０．３３ml，１．６３mmol）を添加し、反応物を２４時間攪拌した。反応物を酢酸エチルと飽和塩化アンモニウム水溶液との間で分配した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、得られた残渣をクロマトグラフィーを介して精製し（１５％アセトン／クロロホルム）、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−（３−ヒドロキシ−１，１，３，３−テトライソプロピル−１，３−ジシロキサニルオキシ）−５Ｓ−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル）−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（５４％）を得た。
【０１１７】
アセトニトリル５ml中の２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−（３−ヒドロキシ−１，１，３，３−テトライソプロピル−１，３−ジシロキサニルオキシ）−５Ｓ−（２，２−ジメチルシリル−プロピオニルオキシメチル）−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（０．２４ｇ，０．３５mmol）の攪拌溶液に、１Ｎ  Ｈ２ＳＯ４  ２．５mlを室温で添加した。７２時間後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液３０mlを添加し、生成物を酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮し、残渣を分取ＨＰＬＣを介して精製し、２，２−ジメチル−プロピオン酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシメチル）−４Ｓ−ヒドロキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物２９，１５％，（Ｍ＋Ｈ）＋＝４１３）を得た。
【０１１８】
方法Ｄ−混合アシル誘導体
（実施例１６）
【０１１９】
【化１５】
2006510645.tif 000019
【０１２０】
２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル：トルエン−４−スルホン酸との化合物（８：Ｒ１＝ｉ−Ｐｒ，Ｒ２＝ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ３）
ＴＨＦ６ml中のイソ酪酸  ２Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−５Ｓ−ヒドロキシメチル−４Ｓ−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（実施例１３（前出）、化合物１７，０．５０ｇ，１．２９mmol）の攪拌したスラリーに、４Ｓ−イソプロピル−２，５−ジオキソ−オキサゾリジン−３−カルボン酸ベンジルエステル（０．４３ｇ，１．５５mmol）及びＴＥＡ０．３mlを室温で添加した。反応を１２時間攪拌し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液１００mlで停止し、酢酸エチル１００mlで３回抽出した。合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（シリカゲル；３５％酢酸エチル／ヘキサン）を介して精製して、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル０．５２ｇ（６５％）；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４８４を得た。
【０１２１】
メタノール１０ml中の２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（０．５２ｇ，０．８４mmol）のアルゴンパージした攪拌溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸（０．１６ｇ，０．８４mmol）及び１０％Ｐｄ／Ｃ  ０．１５ｇを添加した。反応容器を排気し、水素ガス（約１atm）で３回パージし、３時間攪拌した。次いで、スラリーをＣＥＬＩＴＥ（登録商標）を通してろ過し、得られたろ液を濃縮し、メタノール／ジクロロメタン（１：１０）溶液に溶解し、ヘキサンで析出させて、トルエン−４−スルホン酸との２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビス−イソブチリルオキシ−テトラヒドロフラン−２Ｓ−イルメチルエステル化合物０．１８ｇ（３３％）を黄色固体として得た（化合物２２；（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５０６；ｍ，ｐ．＝７２．０〜７６．０℃）。
【０１２２】
プロピオン酸、４Ｓ−プロピオニルオキシ−５Ｓ−（３−カルバモイル−［１．２，４］トリアゾール−１−イル）−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステルを用いて上に記載されるように進め、２Ｓ−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビスプロピオニルオキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル（７７％；（Ｍ＋Ｈ）＋＝４５６）を得て、これを脱保護して、２Ｓ−アミノ−３−メチル−酪酸  ５Ｓ−（３−カルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−３Ｓ，４Ｓ−ビス−プロピオニルオキシ−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イルメチルエステル；トルエン−４−スルホン酸との化合物（化合物２１；４６％）を得た。
【０１２３】
方法Ｅ−Ｎ−アシルアナログの調製
（実施例１７）
【０１２４】
【化１６】
2006510645.tif 000020
【０１２５】
酪酸  ５Ｓ−（３−ブチリルカルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−ブチリルオキシ−２Ｓ−ブチリルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル
ＴＨＦ７ml中のレボビリン（１，０．４８ｇ，２．０mmol）の攪拌したスラリーに、ＴＥＡ（１．６５ml，１１．８mmol）、ｎ−酪酸無水物（１．９７ml，１０．８mmol）、及びＤＭＡＰ（０．２４ｇ，２．０mmol）を添加した。反応容器を６０℃で２４時間加熱した。溶液を酢酸エチルと飽和ＮａＣＯ３水溶液との間で分配し、有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濃縮した。残渣をクロマトグラフィー（３５％酢酸エチル／ヘキサン）を介して精製し、酪酸  ５Ｓ−（３−ブチリルカルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−ブチリルオキシ−２Ｓ−ブチリルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物３９，７１％，（Ｍ＋Ｎａ）＋＝５４７）を得た。
【０１２６】
上に記載されるように進め、以下のものも得た：プロピオン酸  ５Ｓ−（３−プロピオニルカルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−プロピオニルオキシ−２Ｓ−プロピオニルオキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物３７，９５％，（Ｍ＋Ｈ）＋＝４６９）。
【０１２７】
適切に保護された中間体を利用して、上に記載されるように進め、以下のものを調製した：酪酸  ５Ｓ−（３−ブチリルカルバモイル−［１，２，４］トリアゾール−１−イル）−４Ｓ−ブチリルオキシ−２Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−３Ｓ−イルエステル（化合物３８，３５％，（Ｍ＋Ｎａ）＋＝４７７）及び１−（３Ｓ，４Ｒ−ジヒドロキシ−５Ｓ−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２Ｓ−イル）−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸ブチリル−アミド（化合物４０，５８％，（Ｍ＋Ｈ）＋＝３１５）。
【０１２８】
（実施例１８）
Ｃａｃｏアッセイ
Ｃａｃｏアッセイの一般的な記載については、以下を参照：Ｓ．Ｙｅｅ，「Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  Ａｃｒｏｓｓ  Ｃａｃｏ−２  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｏｎｉｃ）  Ｃａｎ  Ｐｒｅｄｉｃｔ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  （Ｓｍａｌｌ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ）  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｍａｎ−  Ｆａｃｔ  ｏｒ  Ｍｙｔｈ」Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４（６）：７６３〜７６６（１９９７）及びＹａｍａｓｈｉｔａら，「Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ  Ａｃｒｏｓｓ  Ｃａｃｏ−２  Ｍｏｎｏｌａｙｅｒ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ」  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４（４）：４８６〜４９１（１９９７）。特定の技術的態様については、以下を参照：Ｇｒａｓｓ，Ｇ．Ｍ．及びＳｗｅｅｔａｎａ，Ｓ．Ａ．  「Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  Ｕｓｉｎｇ  ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  Ｃｅｌｌ」  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５（６）：３７２〜３７６（１９８８）；Ｒｕｂａｓら，「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ｏｆ  ａ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｌｏｎｉｃ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  （Ｃａｃｏ−２）  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  ｔｏ  Ｃｏｌｏｎ  ｏｆ  Ｒａｂｂｉｔ，Ｍｏｎｋｅｙ，  ａｎｄ  Ｄｏｇ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｒｕｇ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ」  Ｐｈａｒｍ．  Ｒｅｓ．  １０（１）：１１３〜１１７（１９９３）。
【０１２９】
インキュベーション培地及び培養条件：
高継代（１０８〜１２０）Ｃａｃｏ−２細胞を、１０％胎児牛血清、１×Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ＃２５０３０−０８１）、１×Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ  （Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ＃１５１４０−１２２）、１×非必須アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ＃１１１４０−０１９）を添加した、高グルコース及びＬ−グルタミンを有する、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉａ（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｔ＃１１９６５−０８４）中で培養した。細胞をＴ２２５ｃｍ２  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｆｌａｓｋ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｔｒｅａｔｅｄ（Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｔ＃３００１）中、３７℃及び５％ＣＯ２に維持した。輸送実験のために、インサート（Ｃｏｓｔａｒ＃３４９３，直径１２mm，０．４ｕｍ孔径、滅菌、組織培養処理された）で１２ウェルのコラーゲンコーティングされたＰＴＦＥ膜ポリスチレンプレート内の７．１×１０４細胞／ウェルに細胞を置いた。細胞に３日毎に栄養を供給し、３７℃及び５％ＣＯ２に２１日間維持し、強固に結合した分極した単一層を完全に形成させた。
【０１３０】
ストック溶液及び作業溶液：
Ｋｒｅｂ’ｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ炭酸水素塩バッファー，ｐＨ６．５及び７．４
試薬：
蒸留水（ガラス蒸留又はＮａｎｏｐｕｒｅ）
Ｋｒｅｂ’ｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ炭酸水素塩バッファーミックス（粉末，ＳＩＧＭＡ＃Ｋ−３７５３）
塩化カルシウムニ水和物（ＭＷ＝１４７．０）
炭酸水素ナトリウム（ＭＷ＝８４．０１）
【０１３１】
Ｋｒｅｂ’ｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ炭酸水素塩バッファーミックスを水約９００mlに溶解した。バッファーミックスを溶解し、塩化カルシウムニ水和物０．３７３ｇを添加した。塩化カルシウム二水和物を溶解した後、炭酸水素ナトリウム２．１ｇを添加し、炭酸水素ナトリウムを溶解した後、水ＱＳを１０００mlになるまで添加し、次いで、０．２μｍフィルターを通して滅菌ろ過し、冷蔵庫に保存した。
【０１３２】
試験／標準化合物溶液：
ＤＭＳＯ中の試験化合物のストック溶液５mg／mlを調製し、４℃で保存した。所望の量のストック５mg／mlをｐＨ６．５のＫｒｅｂ’ｓ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ炭酸水素塩バッファーで１０mlに希釈し、濃度１００μＭを得た。次いで、１００μＭの溶液１mlを、５mlまでさらに希釈し、２０μＭの濃度にした。この２０μＭの試験溶液を初期ドナー投与溶液（Ｄ０）として使用した。使用前に、薬物溶液を３７℃に加温した。
【０１３３】
アッセイ手法
１．バッファー、作業溶液、及び各プレートの１２インサートについてバッファーを含有する３つの１２ウェルプレートをあらかじめ加温した。「チョップスティック」電極を取り付けたｍｉｌｌｉｃｅｌｌ（登録商標）−ＥＲＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）でＴＥＥＲをチェックした。ＴＥＥＲは約３７℃で有効であるため、セルが約３７℃になったらこの手法を行うべきである。３００オームを超えるＴＥＥＲを有するこれらのインサートのみを使用した。
２．培地を移し、加温したＫｒｅｂ’ｓ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ炭酸水素塩バッファーで各インサートを洗浄した。
３．ｐＨ６．５のＫｒｅｂ’ｓ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔバッファー０．５mlをセル単一層の先端部分に添加し、ｐＨ７．４のＫｒｅｂ’ｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔバッファー１．２５mlを基底外側のチャンバーに添加した。セルを３７℃及び５％ＣＯ２のインキュベーターで少なくとも３０分、平衡状態にした。
４．先端部分のバッファーを除去し、２０μＭの試験溶液０．５mlと交換した。
５．次いで、セルを３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートした。
６．３０、６０及び９０分の時間点で、インサートを受け側に加温した新鮮なｐＨ７．４のＫｒｅｂ’ｓ  Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔバッファー１．２５mlを含有する新しいプレートに移した。
７．全てのプレートからの培地を受け側サンプルとして集めた。
８．輸送試験の６０分後に、Ｌｕｃｉｆｅｒ  Ｙｅｌｌｏｗ（０．０５ml×１０００μＭ）をウェルの先端部分に添加した。輸送試験（９０分）の終了時に、受け側サンプルの蛍光を測定した。
ドナー側からのサンプル溶液を、Ｄ９０サンプルとして実験の終了時に集めた。
試験基質のｄＣ／ｄｔを、３０分（０ｎｇ／mlと推定する）及び６０分に、サンプリングデータから計算した。見掛け透過係数（Ｐａｐｐ）を以下の式から計算した。
【０１３４】
【数１】
2006510645.tif 000021
【０１３５】
式中、ｄＱは受け側における化合物の量の変化であり、ｄＣは受け側における化合物の濃度における変化であり、Ｖは受け側の溶液の体積（ｃｍ３）であり、Ａはインサートの表面積（ｃｍ２）であり、Ｃ０は薬物基質の「初期」濃度であり、ｄＣ／ｄｔは９０分のインキュベーション時間にわたる薬物基質濃度の変化、すなわち、受け側溶液における薬物基質濃度の勾配（μｇ／ｃｍ３／ｓｅｃ）対時間である。
【０１３６】
【表４】
2006510645.tif 000022
【０１３７】
（実施例１９）
経口投与のための組成物
【０１３８】
【表５】
2006510645.tif 000023
【０１３９】
成分を混合し、各約１００mgを含有するカプセル内で分散させた。１個のカプセルがほぼ１日の全投薬量である。
【０１４０】
（実施例２０）
経口投与のための組成物
【０１４１】
【表６】
2006510645.tif 000024
【０１４２】
成分を合わせ、メタノールのような溶媒を用いて磨砕した。次いで、配合物を乾燥させ適切な錠剤作成機を用いて、錠剤（活性化合物約２０mgを含有する）を形成した。
【０１４３】
（実施例２１）
経口投与のための組成物
【０１４４】
【表７】
2006510645.tif 000025
【０１４５】
成分を混合して、経口投与のための懸濁物を形成した。
【０１４６】
上述の記載又は特許請求の範囲、又は添付の図面に開示される特徴、特定の形態又は開示される機能を実行するための意味において表現される特徴、又は開示される結果を付与するための方法又はプロセスは、適切な場合、別個に、又はこのような特徴の任意の組み合わせにおいて、それらの多様な形態において本発明を理解するために使用される。
【０１４７】
上述の発明は、明確にする目的及び理解する目的のために、例示及び実施例を用いて詳細に記載される。変更及び改変は添付の特許請求の範囲内で実施され得ることは、当業者にとって明らかである。それ故に、上述の記載は、例示として意図され、制限することは意図されないことが理解される。それ故に、本発明の範囲は、上述の記載を参照して決定されるのではなく、添付の特許請求の範囲とともに、このような請求項が包含する等価物の全ての範囲を参照して、決定されるべきである。
【０１４８】
本明細書中で引用される全ての特許、特許明細書、及び刊行物は、個々の特許、特許明細書又は刊行物が個々に示す場合、同様の程度までの目的で、その全体として本明細書中に参考として組み込まれる。
【国際調査報告】
2006510645.tif 000028
2006510645.tif 000029
2006510645.tif 000030
2006510645.tif 000031
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