(57)【要約】変形性関節炎および関節リウマチまたは任意の破壊性の関節炎における関節破壊の進行を追跡するために用いられ得る２つのコラーゲン由来ペプチドの比が本発明によって得られる。さらに、変形性関節炎および関節リウマチを処置する薬剤をスクリーニングするためにこの比を用いることができる。さらにこれを用いて、現在の治療計画の有効性をモニターして、関節炎（侵襲性対非侵襲性）を処置するために用いられるべき治療のタイプを決定することもできる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
変形性関節炎または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎の進行を予測する方法であって、Ｃ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の結果が高いことにより、関節炎の関節破壊の進行が大きいことが予期されるステップを有する方法。
【請求項２】
前記比の結果が高いことにより、変形性関節炎の進行が大きいことが予期される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
関節リウマチまたは関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎の進行を予測する方法であって、Ｃ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の結果が低いことにより、関節リウマチの進行が大きいことが予期されるステップを有する方法。
【請求項５】
被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは他の炎症性びらん性関節炎を示す請求項１または４に記載の方法。
【請求項６】
変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎の進行を予測する方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、前記レベルの結果が低いことにより、関節炎の関節破壊の進行が大きいことが予期されるステップを有する方法。
【請求項７】
Ｃ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルの結果が低いことにより、関節リウマチの進行が大きいことが予期される請求項６に記載の方法。
【請求項８】
変形性関節炎、関節リウマチ、または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の増大または変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の増大または変化が示唆されるステップを有する方法。
【請求項９】
前記比の増大により、変形性関節炎の進行が示唆される請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記比の減少により、関節リウマチの進行が示唆される請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは他の炎症性びらん性関節炎を示す請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、前記レベルの変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化が示唆されるステップを有する方法。
【請求項１４】
Ｃ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルの低下により、関節リウマチの進行の速度の増大が示唆される請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
変形性関節炎、関節リウマチ、または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎のための治療処置の有効性をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の低下または変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の低下または変化が示唆される、または前記比の低下または変化が、関節炎の関節破壊の進行の速度の低下または変化に関連付けられるステップを有する方法。
【請求項１６】
前記被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を示す請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記比の増大により、変形性関節炎の進行が示唆される請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記比の低下により、関節リウマチの進行が示唆される請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎のための治療処置の有効性をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、前記レベルの変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化が示唆される、または前記レベルの変化が、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化に関連付けられるステップを有する方法。
【請求項２１】
Ｃ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルの低下により、関節リウマチの進行の速度の増大が示唆される請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
変形性関節炎、関節リウマチ、または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎を処置するための薬剤を同定する方法であって、試験されるべき薬剤を被験体に投与するステップと、記被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の低下または変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の低下または変化が示唆される、または前記比の低下または変化が、関節炎の関節破壊の進行の速度の低下または変化に関連付けられるステップとを有する方法。
【請求項２３】
前記比の低下により、変形性関節炎の進行の低下が示唆される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記比の増大により、関節リウマチの進行の低下が示唆される請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を示す請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎を処置するための薬剤を同定する方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、前記レベルの変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化が示唆されるステップを有する方法。
【請求項２８】
Ｃ１、２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ２Ｃネオエピトープのレベルの低下により、関節リウマチの進行の速度の増大が示唆される請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
変形性関節炎、関節リウマチ、または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎のための医薬組成物であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を低下もしくは変化させるのに有効な量、または未処置の被験体に対して前記比の増大もしくは変化の量を低下もしくは変更させるのに有効な量の請求項２２または２７に記載の方法によって同定された薬剤を含む医薬組成物。
【請求項３０】
有効量の前記組成物により前記比が低下し、これによって変形性関節炎の進行が遅くなる請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
有効量の前記組成物により前記比が増大し、これによって関節リウマチの進行が遅くなる請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を示す請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
生物学的サンプルにおけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するためのキットであって、
（ａ）第一のペプチド配列：
Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃlong monoペプチド）
を有する前記Ｃ２Ｃネオエピトープに結合するモノクローナル抗体と、
（ｂ）第二のペプチド配列：
Ｃ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃshortペプチド）
を有する前記Ｃ１，２Ｃネオエピトープに結合するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体と、
（ｃ）前記第一および第二のペプチドの各々と結合するための２つの固体支持体と、
（ｄ）Ｃ２Ｃネオエピトープを含む前記第一のペプチドに対する前記モノクローナル抗体の結合を測定するための、第一の酵素に結合体化された第一の標識された抗体と、
（ｅ）Ｃ１，２Ｃネオエピトープを含む前記第二のペプチドに対する前記ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の結合を測定するための、第二の酵素に結合体化された第二の標識された抗体と
を備えるキット。
【請求項３５】
前記生物学的サンプルが、滑液、血清、血漿、尿、気管支肺胞洗浄液、培地抽出物および軟骨抽出物からなる群より選択される請求項３４に記載のキット。
【請求項３６】
前記生物学的サンプルが、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、モルモット、ヒツジ、ブタ、ウサギ、マウスまたはラット由来である請求項３４に記載のキット。
【請求項３７】
前記第一および第二の酵素が、同じである、または異なる請求項３４に記載のキット。
【請求項３８】
前記第一または第二の酵素が、アルカリホスファターゼまたはペルオキシダーゼである請求項３４に記載のキット。
【請求項３９】
前記比の増大または変化により、変形性関節炎の関節破壊の進行の速度の増大または変化が示唆される請求項３４に記載のキット。
【請求項４０】
前記変形性関節炎が膝の変形性関節炎である請求項３４に記載の方法。
【請求項４１】
前記比の低下または変化により、関節リウマチの関節破壊の進行の速度の増大または変化が示唆される請求項３４に記載のキット。
【請求項４２】
被験体由来の前記生物学的液体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を示す請求項３４に記載のキット。
【請求項４３】
前記比の結果が高いことにより、変形性関節炎の関節破壊の進行が大きいことが予期される請求項３４に記載のキット。
【請求項４４】
前記比の結果が低いことにより、関節リウマチの進行が大きいことが予期される請求項３４に記載のキット。
【請求項４５】
変形性関節炎、関節リウマチ、または関節の破壊に関連する他のタイプの関節炎を処置する方法であって、処置される被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、前記比の低下または変化が、関節炎の関節破壊の進行の速度の低下または変化に関連付けられるステップを有することを特徴とする方法。
【請求項４６】
前記比の低下により、変形性関節炎の進行の低下が示唆される請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記関節炎が膝の変形性関節炎である請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記比の増大が、関節リウマチの進行の低下に関連付けられる請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
前記被験体が、全身的な変形性関節炎を示さない、または、関節リウマチもしくは関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を示す請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎を処置する方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、前記レベルの変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化が示唆されるステップを有することを特徴とする方法。
【請求項５１】
Ｃ２Ｃネオエピトープおよび／またはＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルの増大により、関節リウマチの進行の速度の低下が示唆される請求項５０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［関連出願の相互参照］
本出願は、2002年9月30日提出、米国仮特許出願第60/414,324号に基づく。その明細書、特許請求の範囲および図面を含む本出願の全内容は、その全体が参考として本明細書に援用される。
【０００２】
［発明の分野］
本発明は、抗体によって認識されるコラーゲンペプチドエピトープの比、コラーゲンに関する疾患の活動および進行および状態の処置、診断、検出およびモニタリングにおけるそれらの使用、この比を決定するためのアッセイキット、薬剤がこの比に影響する能力を決定するためにこの比を使用するスクリーニング方法、ならびにこのようなスクリーニング方法によって同定される薬剤に関連する。
【背景技術】
【０００３】
衰弱させ、疼痛を伴う状態である変形性関節炎（ＯＡ:osteoarthritis）は、二次的な炎症性変化を伴い、軟骨および骨において相乗作用的な分解的および修復的な変性性プロセスの複合を示す。これによって、二関節的(diarthrodial)な関節の進行性の変性、特に関節軟骨の損失が生じ、関節機能の損失がもたらされる。最近の研究により、ヒトの関節軟骨において、最も特別には（ただし排他的ではないが）II型コラーゲンの切断および変性に関与する過剰な変性が変形性関節炎に関与するということが実証されている(Hollander,A.P.et al.,J.Clin.Invest.93:1722-1732(1994);Dodge,G.R.およびPoole,A.R.,J.Clin.Invest.83:647-61(1989);Hollander,A.P.et al.,J.Clin.Invest.96:2859-69(1995);Billinghurst,R.C.et al.,J.Clin.Invest.99:1534-45(1997);Dahlberg,L.et al.,Arthritis Rheum.43:673-82(2000);Wu,W.et al.,Arthritis Rheum.46:2087-2094(2002)。
【０００４】
原発性または特発性のＯＡは、指節間の関節、および他の小さい関節、ならびに大きい関節、例えば股関節または膝関節に影響する。手の近位指節間関節の関与によって、対照的にブシャール(Bouchard)結節の形成がもたらされ、遠位指節間関節の関与は、ヘバーデン(Heberden)結節に関わる。疾患は、１つの特定の関節に関与することもあるし、または疾患はさらに全身化されても複数の関節に関与することもある。ＯＡは、遺伝子的に伝達され得（例えば、II型コラーゲンＣＯＬ２Ａ１遺伝子における変異の結果など）、従って家族性ＯＡとしても公知である。ＯＡは、代謝性疾患、例えば血色素症、組織褐変症またはアルカプトン尿症、ウィルソン病およびゴーシェ病において見出された軟骨基質の異常な沈着をともなう軟骨細胞に対する外傷的な損傷または傷害後の患者に発生し得る。特発性ＯＡは、内分泌障害によって生じる軟骨代謝における障害から生じ得る(Poole A.R.,およびHowell D.S.,Etiopathogenesis of Osteoarthritis.:Diagnosis and Medical/Surgical Management(第3版),Moskowitz,R.W.ら(編),29-37頁,Philadelphia,Saunders Company(2001)。軟骨基質の鉱化は、ＯＡの特徴であり、軟骨細胞肥大に関連する。Poole,A.R.およびHowell,D.S.(2001)(前出)を参照のこと。
【０００５】
関節リウマチは、筋骨格系の疾患の別の例であり、関節軟骨は、関節腔を裏打ちする炎症性の滑膜に関与する炎症性状態の一部として破壊される。Henderson,B.、Edwards,J.C.W.、Pettipher,E.R.(編)、Mechanisms and Models in Rheumatoid Arthritis,London,Academic Press,1995を参照のこと。この炎症は、コラゲナーゼによる関節軟骨およびそのII型コラーゲンの侵食（びらん）性破壊、ならびにＩ型コラーゲンを含む骨の破壊に関与する（Henderson,Bら、前出を参照のこと）。関節リウマチは通常、複数の関節に関与する。
【０００６】
コラーゲンエピトープのアッセイは、骨の再吸収を検出するために、例えば、骨粗鬆症（Ｉ型コラーゲン架橋）(Delmas,P.およびGarnero,P.Biological markers of bone turnover in osteoporosis.J.C.Stevenson、RE.Lindsay(編)、Osteoporosis,117-136頁,London,Chapman and Hall,1998を参照のこと)および関節炎における硝子軟骨（II型コラーゲン分解産物）の代謝回転／再吸収(Garnero P.et al.,Arthritis Rheumatis 43:953-961,2000[チェックに対するRobin Poole])において用いられている。
【０００７】
現在では、通常、ｘ線解析によってｘ線撮影で決定された関節腔の狭小化に基づき、変形性関節炎もしくは関節リウマチにおける、または任意の他のタイプの関節炎における関節軟骨の損失を決定する。これには、集団研究において、例えば薬物有効性についての臨床研究において、変形性関節炎の疾患進行をともなう関節腔の損失を正確に測定するためには、何百もの患者および２〜３年の研究期間を要し得る。関節リウマチ（ＲＡ）のさらに急速なびらん性形質に起因して、ＲＡにおける関節腔の損失を決定するのには１〜１年半の期間が十分であり得る。たとえそうであってもこのような研究の費用は、潜在的な疾患を調整する薬物を評価する臨床研究において、このような研究に長期の時間および多数の患者が必要であるという観点から極めて費用がかさむ。従って、これは、結果の反射および予測である特定の時点で疾患進行（関節腔狭小化によって測定）だけでなく疾患の活性／過程を測定するために重要な意味がある。これは、生物学的マーカー、例えば軟骨コラーゲン分解のためのマーカーの組み合わせおよび単一での使用によって可能であり得る。このような情報はまた、患者に投与され得る治療のタイプの決定において重要である。例えば、関節リウマチでは、急速な進行の同定によって、さらに急速な関節破壊を制御するさらに積極的な治療の使用が支持される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、疾患活性を検出して、疾患進行を予測する必要がある。軟骨破壊を防止し得る関節剤の有効性をさらに迅速に決定するために、血液または関節液における軟骨コラーゲン分解産物の免疫アッセイのような手段を有する必要がある。従って、変形性関節炎、関節リウマチおよび関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を有する患者でのII型コラーゲンの相対的な切断および合成の検出におけるコラーゲンエピトープの比を得るために、単一のアッセイおよびアッセイの組み合わせを開発する必要が明白に存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の１つの側面によれば、コラーゲン関連疾患（好ましくは変形性関節炎、関節リウマチおよび関節破壊に関与する他のタイプの関節炎）をモニタリングする方法であって、被験体においてＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１，２Ｃネオエピトープの比を決定するステップを有する方法が提供される。比の結果が高いことにより、変形性関節炎の進行が大きいことが予期され、さらに結果が低いことにより、関節リウマチの進行が大きいことが予期される。同様に、この比の増大により、変形性関節炎の進行が示唆される、またはこの比の増大が、変形性関節炎の進行に関連付けられる。さらに、この比の低下により、関節リウマチの進行が示唆される。本発明の別の側面では、被験体は、全身的な変形性関節炎(generalized osteoarthritis)を示さない、または、関節リウマチもしくは他の炎症性びらん性関節炎(inflammatory erosive arthritis)を示す。
【００１０】
さらに別の実施形態によれば、本発明は、変形性関節炎以外の関節の破壊に関連する関節炎をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルを決定するステップであって、このレベルの変化により、関節炎の関節破壊の進行の速度の変化が示唆されるステップを有する方法を提供する。さらに、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープのレベルにおける低下により、関節リウマチが予期される方法が提供される。本発明のさらなる実施形態は、コラーゲン関連疾患（好ましくは、変形性関節炎または関節リウマチ）を処置するための治療計画の有効性をモニタリングする方法であって、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、この比の変化により、疾患の重篤度における変化が示唆されるステップを有する方法を包含する。同様に、本明細書の被験体は、全身的な変形性関節炎を示さない。
【００１１】
別の実施形態は、コラーゲン関連疾患（好ましくは、変形性関節炎または関節リウマチ）を処置するための薬剤を同定する方法であって、試験されるべき薬剤を被験体に投与するステップと、被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、この比の変化により、疾患の重篤度の変化が示唆されるステップとを有する方法を包含する。
【００１２】
さらなる実施形態は、コラーゲン関連疾患（好ましくは、変形性関節炎または関節リウマチ）のための医薬組成物であって、未処置の被験体に対して上記比を変化するのに有効な量、または上記比の変化を低下するのに有効な量の、上記の方法によって同定された薬剤を含む医薬組成物である。
【００１３】
さらに別の実施形態は、生物学的サンプルにおけるＣ２Ｃエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するためのキットであって、
（ａ）第一のペプチド配列：
Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃlong monoペプチド）
を有する前記Ｃ２Ｃエピトープに結合するモノクローナル抗体と；
（ｂ）第二のペプチド配列：
Ｃ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃshortペプチド）
を有する前記Ｃ１，２Ｃネオエピトープに結合するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体と；
（ｃ）前記第一および第二のペプチドの各々と結合するための２つの固体支持体と；
（ｄ）Ｃ２Ｃネオエピトープを含む前記第一のペプチドに対する前記モノクローナル抗体の結合を測定するための、第一の酵素に結合体化された第一の標識された抗体と；
（ｅ）Ｃ１，２Ｃネオエピトープを含むこの第二のペプチドに対するこのポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の結合を測定するための、第二の酵素に結合体化された第二の標識された抗体と；
を備えるキットである。
【００１４】
さらに別の実施形態は、コラーゲン関連疾患（好ましくは、変形性関節炎または関節リウマチ）を処置する方法の改良であり、処置される被験体におけるＣ２Ｃネオエピトープに対するＣ１、２Ｃネオエピトープの比を決定するステップであって、この比の変化が、疾患の進行の変化と関連付けられるステップを有することを特徴とする。
【００１５】
本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになる。詳細な説明および特定の実施例は、好ましい実施形態を示すが、例示のためにのみ示されている。なぜなら、この詳細な説明から、本発明の趣旨および範囲内の種々の変化および改変が当業者に明らかになるからである。さらに、本実施例は、本発明の原理を実証しているが、当業者に明らかに有用であるであろう影響の全ての例に対する本発明の適用を詳細に例示するとは期待されない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
変形性関節炎疾患の活性および／または進行を予測する軟骨代謝のバイオマーカーの同定は、疾患調整薬剤の開発を補助するはずである。膝の変形性関節炎の進行についての血清マーカーの予測値は、全身的な変形性関節炎がない場合の値に対してそれがある場合の値では異なり得る。
【００１７】
２つの血清バイオマーカーが、軟骨II型コラーゲンのコラゲナーゼによる切断の測定のために開発されている：II型コラーゲンに特異的なＣ２Ｃエピトープ、Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｅ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃlong monoペプチド）（その全体的内容がその全体が参考として本明細書に援用される、1998年1月22日に提出された米国特許第6,132,976号を参照のこと）、および主にII型だけでなくＩ型コラーゲン切断も測定するＣ１，２Ｃエピトープ、Ｃ−Ｇ−Ｐ−Ｐ（ＯＨ）−Ｇ−Ｐ−Ｑ−Ｇ（ＣＯＬ２−３／４Ｃshortペプチド）（Billinghurst,R.C.ら,J.Clin.Invest.99:1535-1545(1997)を参照のこと）。それらは、II型コラーゲン分解を検出するために一緒にまたは別のアッセイとして行なわれ得る。サンプルは、末梢血からシリンジを用いて取り出されてもよく、そして凝固させて解析のための血清を生成するか、またはヘパリンまたはエチレンジアミン四酢酸のような抗凝固剤によって凝固を妨げて血漿の解析を可能にすることができる。
【００１８】
従って、本発明は、変形性関節炎、関節リウマチおよび関節破壊に関与する他のタイプの関節炎を有する患者において、II型コラーゲンの相対的な切断および合成の検出におけるコラーゲンエピトープの比の決定に関連する。
【００１９】
他に特定しない限り、１つの（「a」または「an」）とは、「１つ以上(one or more)」を意味する。
【００２０】
「Ｃ２Ｃ」という用語は、コラーゲン（「C」ollagen）「２」型の切断（「C」leavage）をいい、II型コラーゲンに特異的なアッセイにおいて用いられる。
【００２１】
「Ｃ１，２Ｃ」という用語は、コラーゲン（「C」ollagen)「１」＆「２」型の切断（「C」leavage)をいい、Ｉ型およびII型コラーゲンの両方に特異的なアッセイにおいて用いられる。
【００２２】
「Col II」という用語は、II型コラーゲンを意味する。
【００２３】
「３／４」という用語は、II型コラーゲンの２つの小片、すなわち（１）コラーゲンの１／４長および（２）コラーゲンの３／４長への切断をいう。「Ｃ」は、３／４のコラーゲン小片の末端における「Ｃ末端(C-terminus)」をいう。「短い(short)」および「長い(long)」という用語は、検出されるネオエピトープをいう。上記のアッセイキットの両方とも、コラーゲンが切断された後に明らかになるネオエピトープを検出する。「短い」は、アミノ酸の「長い」配列の短い方の一部を検出する。
【００２４】
本明細書に記載される抗体は、免疫グロブリン分子またはその結合フラグメント（酵素的にまたは組み換え的に生成される）をいう。
【００２５】
抗体フラグメントは、抗体の一部、例えば、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆ（ａｂ）2、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｓＦｖなどである。構造にかかわらず、抗体フラグメントは、インタクトな抗体によって認識される同じ抗原と結合する。「抗体フラグメント(antibody fragment)」という用語はまた、特定の抗原に対して結合して複合体を形成することによって抗体のように機能する任意の合成的にまたは遺伝子的に操作されたタンパク質を包含する。例えば、抗体フラグメントは、種々の領域からなる単離されたフラグメント、例えば、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」フラグメント、軽鎖および重鎖可変領域がペプチドリンカーによって接続される組み換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）、および超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位を含む。
【００２６】
ネオエピトープは、天然のタンパク質（コラーゲン）において発現されず、かつ構造の変化によって修飾されているタンパク質においてのみ露出されているエピトープである。ネオエピトープを現す、構造におけるこのような変化は、タンパク質性の切断（コラゲナーゼ）、活性化後またはこのタンパク質の別のタンパク質への結合後の高次構造変化を伴い得る。
【００２７】
骨棘(osteophytes)（ヘバーデン結節およびブシャール結節）とは、身体により生成され、変形性関節症の関節に沈着した余分な骨であって、その動きを邪魔し得るものをいう。これらの骨ばった増殖は骨棘(bone spur)としても公知である。この骨棘は、軟骨が悪化している関節または椎間板の空隙のような関節炎の影響した領域で見出され得る。
【００２８】
変形性関節炎とは、関節軟骨の変性、辺縁での骨の肥大、およびしばしば滑膜での限定的な炎症性変化によって特徴づけられる、主に高齢者で生じる変性性関節疾患をいう。これは特に長期の活性後の、疼痛および硬さを伴う。これは、骨棘が１つ以上の関節に存在する関節炎の形態である。
【００２９】
全身的な変形性関節炎は、容易に検出可能な、原因のない、自然に発生し、かつ多くの関節に影響する変形性関節炎の変異型をいう。その主な症状は、疼痛および関節軟骨の変性であるが、これは骨組織のかなりの再構築をともなう指、膝、股、足の関節および脊柱の顕著な偏好を示す。これは、骨棘が１つ以上の関節に存在する関節炎の形態であり、また、少なくとも１つの手における２つ以上のヘバーデン結節によって示唆されるような手の変形性関節炎も存在する。ヘバーデン結節とは、指の遠位指節間関節で一般に形成され、関節軟骨の石灰性の刺激によって生成され、指節間変形性関節炎に関連する硬性小結節をいう。関節リウマチ（ＲＡ）は、複数の関節の主に滑膜および関節構造に関与する、未確認の病因の慢性の全身性炎症性疾患である。疾患はしばしば進行性であり、関節の疼痛、硬直および腫脹を生じる。後期段階では変形および強直が発症する。ＲＡの原因は未知である。ＲＡに関連する要因としては、感染性誘発、遺伝子素因および自己免疫応答の可能性が挙げられる。炎症の主な標的は、滑膜および関節の構造である。他の器官も同様に影響される。炎症、増殖および変性は滑膜関与を表している。関節の変形および不安定性が、滑膜および関節表面のびらんおよび破壊から生じる。
【００３０】
本発明によって規定されるように、生物学的サンプルは、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、モルモット、ヒツジ、ブタ、ウサギ、マウスまたはラット由来であってもよい。さらにこれは、滑液、血清、血漿、尿、気管支肺胞洗浄液(broncheoalveolar lavage)、培地抽出物および軟骨抽出物からなる群より選択されてもよい。
【００３１】
本発明はさらに、決して限定はされないが、以下の実施例によって例示される。
【実施例１】
【００３２】
膝の変形性関節炎（ＯＡ）を有する被験体を、１つまたは両方の膝における骨棘の存在によって規定されるように、２つの群、すなわち、（１）全身的なＯＡの証拠の有（膝のＯＡ＋手のＯＡ、１つ以上の手において２つ以上のヘバーデン結節を有する）または無（膝のＯＡあり、手のＯＡなし）に分割した。ＥＬＩＳＡ  Ｃ２ＣおよびＣ１，２Ｃアッセイならびに膝のｘ線（フルオロ確認によりセミフレックスさせた）をベースラインおよび１８ヶ月で行なった。ベースラインから１８ヶ月における関節腔狭小化程度の増大として進行を規定した。進行はまたＫ／Ｌ程度の増大として検査した。ベースラインで最高程度を有する膝を排除した。汎用推定式を用いてロジスティック回帰から進行についてのオッズ比を推定して、両方の膝からのデータを有効に用いた。
【００３３】
膝のＯＡを有する２０９例の被験体において、平均colratioは４．４０であった（標準偏差１１．００，範囲０．１７〜９４．０３）。全身的なＯＡを有する６３例の被験体では、進行型における平均colratioは、４．６０であり、非進行型では４．０８であった。全身的なＯＡの証拠なしの１４６例の被験体では、平均colratioはそれぞれ進行型および非進行型で６．７１および３．６４であった。ベースラインのcolratioによって、全身的ＯＡなしの群におけるベースラインから１８ヶ月への進行が予測されたが、全身的ＯＡのある群では予測されなかった。colratioにおける各々２０単位の増分は、関節腔進行の可能性における有意な１．４６倍の増大、そしてＫ／Ｌ進行の可能性における１．７８倍の増大と関連していた。Ｃ１，Ｃ２およびＣ２Ｃは別々には進行を予測しなかった。
【００３４】
まとめると、ベースライン血清colratio（Ｃ１，Ｃ２／Ｃ２Ｃ）によって、全身的なＯＡの証拠のないサブセットにおいてのみ、１８ヶ月後まで膝のＯＡ進行を予測した。この比は個々のアッセイ値よりも進行を予想し得る。なぜなら他の研究からの結果に基づいてII型コラーゲンの二次的な切断（より大きいＣ２Ｃエピトープの選択的切断により、Ｃ１，２Ｃエピトープを生じる）の増大を反映し得るからである。
【実施例２】
【００３５】
初期の関節リウマチ（通常複数の関節を含む）を有する被験体を診察１（０ヶ月を含む）、診察２（１８ヶ月）および引き続く診察３（３０ヶ月）で臨床的に検査した。各診察では、ＥＬＩＳＡ  Ｃ２ＣおよびＣ１，２Ｃアッセイによる解析のために血清を準備した。各診察時点で膝、手および足のｘ線撮影を行なった。関節の侵食（びらん）、関節腔狭小化および総関節損傷（総スコア）についてのｘ線の解析に基づいてSharpe/van der Heijdeの分類システムを用いて、関節の損傷を記録した。今日まで、診察の間の関節の侵食（びらん）、関節腔狭小化および総関節スコアにおける変化を用いて異なる診察時点で、Ｃ２ＣおよびＣ１，２Ｃエピトープとその比の間の相互関係についての相関解析を行なっている。
【００３６】
アッセイ（診察１の時点）について診察１（初期疾患提示）と診察２との間の臨床的なスコアの変化とは検出可能な相関はなかった。しかし、診察２におけるアッセイについて、診察２から診察３への臨床変化とは有意な相関があった。従ってｎが患者数であり、ｒが相関係数であり、ｐが有意な値（ｐ＝０．０５以下が有意）とした場合、スピアマン順位相関解析によって、手の侵食（びらん）における変化（ｎ＝２０）（診察２から３）は診察２におけるＣ２Ｃアッセイと逆相関し（r=-0.4554,p=0.0436）、診察２におけるＣ１，２Ｃは、手（n=20,r=-0.4523,p=0.0452）および足（n=20,r=-0.4358,p=0.0547）の関節腔狭小化において診察２から診察３の変化と、そして全ての関節における総スコア変化（n=20,r=-0.4564,p=0.0431）と逆相関したことが明らかになった。診察２におけるＣ２Ｃに対するＣ１，２Ｃの比は、足の侵食（びらん）（n=20,r=-0.5660,p=0.0093）について、および足の総スコアについて（n=20,r=-0.5700,p=0.0087）、診察２から診察３の臨床スコアにおける変化と逆相関した。
【００３７】
前述は、特に好ましい実施形態について言及しているが、本発明はそれに限定はされないことが理解される。種々の改変が開示された実施形態に対してなされ得ること、およびこのような改変が添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内で意図されることが当業者に理解される。
【００３８】
本明細書に引用される刊行物および特許出願および特許の全ては、その全体が参考として本明細書に援用される。
【国際調査報告】
2006501479.tif 000002
2006501479.tif 000003