(57)【要約】【解決手段】本発明は、甲状腺の腫瘍及び新生物の核酸及びタンパク質に関する。前記核酸は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される核酸配列を有する。また本発明は、甲状腺の腫瘍及び新生物に見られる融合タンパク質にも関する。前記融合タンパク質は、配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列を含む。
2006510344.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過形成及び／又は腫瘍において発現が変化する核酸であって、配列番号１、３、４、９、１１〜１６及びこれら配列の断片からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする核酸。
【請求項２】
腫瘍が、染色体アーム２ｐ内に何らかの変化を有する各種上皮腫瘍及び染色体バンド２ｐ２１−２２内に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の核酸。
【請求項３】
過形成が甲状腺の各種過形成からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の核酸。
【請求項４】
核酸は、配列番号１、９、１３、１４及び／又は１５の核酸から選択されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項５】
遺伝子コードの縮重がなければ請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸と同一のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸と、特に、ストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズする核酸。
【請求項７】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸を含むことを特徴とするベクター。
【請求項８】
プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含むことを特徴とする、請求項７に記載のベクター。
【請求項９】
ベクターが発現ベクターであることを特徴とする、請求項７又は８に記載のベクター。
【請求項１０】
少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分と共にｉｎ−ｆｒａｍｅで存在することを特徴とする、請求項７〜９に記載のベクター。
【請求項１１】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸によりコードされるポリペプチド、又は配列番号２、５〜８、１０又は１７に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項１２】
改変されていることを特徴とする、請求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
請求項７〜１０のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞（特に単離された細胞）。
【請求項１４】
請求項１１又は１２に記載のポリペプチドに対するものであることを特徴とする抗体。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とする、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とするリボザイム。
【請求項１７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分又はこれと実質的に相補的な核酸の少なくとも一部分を含むことを特徴とする、請求項１８に記載のリボザイム。
【請求項１８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の各種核酸配列の内の一配列と実質的に相補的な又は実質的に同一の配列を含むアンチセンス核酸。
【請求項１９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の各種核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である配列を含むＲＮＡｉであって、好ましくはこのＲＮＡｉが、実質的に相補的又は実質的に同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む、ＲＮＡｉ。
【請求項２０】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である核酸を含むプライマー又は核酸プローブであって、長さがヌクレオチド１２〜３２個、好ましくはヌクレオチド１４〜２８個、好ましくはヌクレオチド２０〜２８個であるプライマー及び／又は核酸プローブ。
【請求項２１】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２２】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２３】
系が、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２１又は２２に記載の方法。
【請求項２４】
過形成及び腫瘍の形成、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定する方法であって、次の各段階、
・過形成及び／又は腫瘍の染色体異常部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・染色体アーム２ｐ、好ましくは染色体バンド２ｐ２１−２２のブレークポイント領域の両側４００ｋｂｐ、好ましくは１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項２５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１６又は１７に記載のリボザイム及び／又は請求項１８に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項１９に記載のＲＮＡｉ及び／又は請求項２０に記載の核酸プローブの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２６】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１６又は１７に記載のリボザイム及び／又は請求項１８に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項１９に記載のＲＮＡｉ及び／又は請求項２０に記載の核酸プローブの、医薬を製造するため、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２７】
請求項１１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２８】
請求項１１〜１２のいずれか一項に記載のポリペプチドの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２９】
請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の抗体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項３０】
請求項１４〜１５のいずれか一項に記載の抗体の、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項３１】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットであって、該キットが、それぞれ先の請求項のいずれか一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム、プライマー及び／又は核酸プローブからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とするキット。
【請求項３２】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を検出するための方法であって、次の各段階、
・甲状腺材料を、それぞれ先の請求項のいずれか一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、
・甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項３３】
甲状腺材料が生体外に存在することを特徴とする、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
甲状腺材料が細胞学的調製物の一部であることを特徴とする、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸又はその一部の、プライマー及び／又はプローブとしての使用。
【請求項３６】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸配列の一部分に実質的に相補的である或いは実質的に同一であることを特徴とする、核酸を提示する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマー。
【請求項３７】
甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提示する方法であって、破壊ポイントを有する異常部が染色体バンド２ｐ２１−２２に存在し、前記配列が少なくとも部分的に染色体バンド２ｐ２１−２２内にあり、
該方法が次の各段階、
・ＰＣＲを実施するためのプライマー、特に請求項３５に記載のプライマーを調製する段階と、
・ヒト染色体２のバンド２ｐ２１−２２から採取した核酸配列又は請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸を調製する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３８】
医薬組成物であって、
それぞれ先の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム、プライマー及び／又は核酸プローブ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種の担体と
を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３９】
腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するための方法であって、先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現変化の作用を阻害する化合物が患者に投与されることを特徴とする方法。
【請求項４０】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現変化の作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用。
【請求項４１】
医薬が、腫瘍及び／又は過形成、特に甲状腺の腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものであることを特徴とする、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用。
【請求項４３】
ポリペプチドが、配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
核酸が、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６の内の一配列に係る核酸とハイブリダイズすることを特徴とする、請求項４２又は４３に記載の使用。
【請求項４５】
配列番号２、配列番号５〜８、１０及び１７からなる群から選択される配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用。
【請求項４６】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療するための手段、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を診断するための診断剤をスクリーニングするための方法であって、次の各段階、
・候補化合物を調製する段階と、
・発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
・候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
・候補化合物の影響下において、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項４７】
候補化合物が化合物ライブラリーに含まれることを特徴とする、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
候補化合物がペプチド、タンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物群から選択されることを特徴とする、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項４９】
機能的核酸が、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択されることを特徴とする、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸の特に天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらをコードする核酸、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断剤を開発及び／又は製造するためターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用。
【請求項５１】
医薬又は診断手段が、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含むことを特徴とする、請求項５０に記載の使用。
【請求項５２】
剤が、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に天然相互作用パートナーをコードする核酸と、特にｍＲＮＡ、ゲノム核酸又はｃＤＮＡと相互作用することを特徴とする、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５４】
ポリペプチドが、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５３に記載の使用。
【請求項５５】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又は特にこれらの天然相互作用パートナーと相互作用する核酸の、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断剤を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５６】
核酸が、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５５に記載の使用。
【請求項５７】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５８】
相互作用する第一の核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡｉであることを特徴とする、請求項５７に記載の使用。
【請求項５９】
第二の核酸がそのｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであることを特徴とする、請求項５７又は５８に記載の使用。
【請求項６０】
請求項５０〜５９のいずれか一項に記載の使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項６１】
請求項５０〜５９のいずれか一項に記載の使用に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態を特徴付けるためのキット。
【請求項６２】
配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列又はその機能的断片を含むポリペプチド。
【請求項６３】
先の請求項のいずれか一項に記載の使用に従った、請求項６２に記載のポリペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、過形成及び／又は腫瘍により発現が変化する核酸、ヒト遺伝子ＤＲＩＰ（ＴＨＡＤＡ（甲状腺腺腫関連：Thyroid Adenoma Associated）の類語として示すこともある）をコードする核酸、腫瘍に特異的な新規なこれらの組合せであって特にその相同体、これらを含むベクターや細胞、これらによってコードされるポリペプチド、これらに対する抗体、腫瘍治療剤として好適な化合物を決定する方法、甲状腺腫瘍の形成に関与する遺伝子を決定する方法、更にはこれら核酸の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
体の成長や発達をコントロールするホルモンを産生する甲状腺の重要性は、少なくともある一部の症例においてこの腺の機能障害がもたらす注目すべき変化と共に、この語の真の意味である「盾」という意義において、医学の分野では古くから知られている。
【０００３】
甲状腺腫或いは甲状腺腫瘍の病因については、一般に、包括的な説明を特に分子レベルで与えるには未だ至っていない。
【０００４】
現在、２種の考え方があり、第一の考え方では、組織の過形成は刺激ホルモンによる慢性的刺激の結果であり究極的にはポリクローナル結節の成長をもたらす、としている。これは、非新生物エンドクリン過形成（non-neoplastic endocrine hyperplasia；ＮＮＥＨ）と称される考え方である。他の考え方は、結節は真正なクローン性の腫瘍であるということに基づいている。
【０００５】
甲状腺の場合、他の腺に適用可能な非新生物エンドクリン過形成という単純な概念は適用できないことが判明した。この分野における現在の考え方については、スチューダーＨ．（Studer, H.）（１９９５）の「エンドクリン・レビューズ（Endocrine Reviews）」、Ｖｏｌ．１６、Ｎｏ．４、４１１−４２６ページ、及びダワールＭ（Derwahl M）スチューダーＨ．（Studer, H.）（2002）の「Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．」Ｖｏｌ．１３、Ｎｏ．１、２３−８ページに記載されている。
【０００６】
よって、甲状腺腫や甲状腺腫瘍の治療には、適切な治療コンセプトが採用できるよう早期の診断が必要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、甲状腺機能障害、甲状腺過形成及び甲状腺腫瘍を診断し、治療するための手段を分子レベルで提供することであって、特に病原性をもたらすメカニズムに関与する核酸配列であると共にこのメカニズムを研究するために好適な核酸配列を提供すること、及びこの病原性をもたらすメカニズムに作用する或いはこれに影響を与えることができる核酸配列を提供することである。
【０００８】
加えて、前記核酸配列に基づく薬剤、及び広く医薬組成物をも提供する。
【０００９】
更には、甲状腺機能障害、甲状腺過形成、及び甲状腺腫瘍の診断及び／又は治療のためのキット、並びにこれらを検出するための方法をも提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明においては、この課題を、過形成及び／又は腫瘍によって発現が変る核酸であって、配列番号１、３、４、９、１１〜１６及びこれら配列の一部或いは断片からなる群から選択される核酸配列を含む核酸により解決する。（ここで、配列番号１１〜１６とは、配列番号１１から配列番号１６までの全ての配列、即ち配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３〜配列番号１６を意味する。）本発明においては、本発明の核酸はエクソン或いは２個のエクソン間の移行領域を含む核酸も含む。移行領域の長さは、該領域の特定の検出が可能である限りにおいて、特に診断用途の場合にそうであるように非常に短いものであってもよい。
【００１１】
それぞれの長さは当業者に知られている。移行領域は、１個の遺伝子内の２個のエクソン間の移行領域とすることができるだけでなく、本明細書に記載の融合遺伝子（本明細書では融合転写産物と同義）等、異なる２個の遺伝子の２個のエクソン間の移行領域とすることができる。これら遺伝子や融合遺伝子と同様、特に、本明細書に記載のブレークポイント領域に存在する領域或いはエクソンは、本明細書に記載の甲状腺の腫瘍或いは新生物の存在の診断に好適に用いることができる。
【００１２】
一実施形態では、腫瘍が、染色体バンド２ｐ内に何らかの変化を有する各種上皮腫瘍及び染色体バンド２ｐ２１−２２内に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択される。
【００１３】
別の実施形態では、過形成が甲状腺の各種過形成からなる群から選択される。
【００１４】
更に別の実施形態においては、配列番号１１は、ＤＲＩＰ、特にヒトＤＲＩＰ又はその一部をコードする。
【００１５】
更に別の実施形態においては、配列番号１２は、ＤＲＩＰ、特にヒトＤＲＩＰ又はその一部をコードする。
【００１６】
更に別の実施形態においては、配列番号１６は、ＤＲＩＰ、特にヒトＤＲＩＰ又はその一部をコードする。
【００１７】
更に別の実施形態においては、配列番号１は、本発明の融合タンパク質又はその一部をコードする。
【００１８】
本発明の融合タンパク質は、本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉｂとして示すこともある。
【００１９】
更に別の実施形態においては、配列番号９は、本発明の融合タンパク質又はその一部をコードする。
【００２０】
本発明の融合タンパク質は、本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩａとして示すこともある。
【００２１】
更に別の実施形態においては、配列番号１３は、本発明の融合タンパク質又はその一部をコードする。
【００２２】
本発明の融合タンパク質は、本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉとして示すこともある。
【００２３】
更に別の実施形態においては、配列番号１４は、本発明の融合タンパク質又はその一部をコードする。
【００２４】
本発明の融合タンパク質は、本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉａとして示すこともある。
【００２５】
更に別の実施形態においては、配列番号１５は、本発明の融合タンパク質又はその一部をコードする。
【００２６】
本発明の融合タンパク質は、本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩとして示すこともある。
【００２７】
更に別の実施形態においては、配列番号３は、ＦＵＳ  Ｉ、特にヒトＦＵＳ  Ｉ又はその一部をコードする。
【００２８】
更に別の実施形態においては、配列番号４は、ＦＵＳ  ＩＩ、特にヒトＦＵＳ  ＩＩ又はその一部をコードする。
【００２９】
更に別の様相においては、本発明の課題は、遺伝子コードの縮重がなければ本発明の核酸の内の一核酸と同じアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸により解決される。
【００３０】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸と、特に、ストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズする核酸により解決する。
【００３１】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸を含むベクターにより解決する。
【００３２】
一実施形態においては、ベクターは、プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含む。
【００３３】
更に別の実施形態においては、ベクターが発現ベクターである。
【００３４】
更に別の実施形態においては、少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする本発明の核酸の少なくとも一部分と共にｉｎ−ｆｒａｍｅで存在する。
【００３５】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸がコードするポリペプチドにより解決する。
【００３６】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号２、５〜８、１０及び１７に記載の配列の内の一配列を有するアミノ酸を有するポリペプチドにより解決する。
【００３７】
一実施形態においては、ポリペプチドは改変されている。
【００３８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明のベクターを含む細胞、特に単離された細胞により解決する。
【００３９】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明のポリペプチドに対する抗体により解決する。
【００４０】
一実施形態においては、抗体は、本発明の核酸の内の一核酸に対するものである。
【００４１】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸に対するリボザイムにより解決する。
【００４２】
一実施形態においては、リボザイムは、本発明の核酸の内の一核酸又はこれと実質的に相補的な核酸の少なくとも一部分を含む。
【００４３】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の各種核酸配列の内の一配列と全体又は一部が実質的に対応する配列を含む、又は本発明の各種核酸配列の内の一配列と実質的に相補的な配列を含むアンチセンス核酸により解決する。本明細書では、「実質的」という用語は、使用されている文とは独立して、相同性が少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％であることを示す。
【００４４】
更に別の様相では、本発明の課題は、請求項１〜８のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である配列を含む干渉ＲＮＡ（本明細書ではＲＮＡｉともいう）、好ましくは小さな干渉ＲＮＡにより解決する。好ましくは、このＲＮＡｉは、実質的に相補的又は実質的に同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む。
【００４５】
更に別の様相では、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である核酸を含むプライマー又は核酸プローブにより解決される。このプライマー及び／又は核酸プローブは、長さがヌクレオチド１２〜３２個、好ましくはヌクレオチド１４〜２８個、好ましくはヌクレオチド２０〜２８個である。
【００４６】
更に別の様相においては、本発明の課題は、先の請求項の内の一項に記載の本発明の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定するプロセスであって、次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階とを含むプロセスにより解決する。
【００４７】
一実施形態においては、化合物は癌又は腫瘍のための剤である。
【００４８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定するプロセスであって、次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階とを含むプロセスにより解決する。
【００４９】
一実施形態においては、化合物は癌又は腫瘍のための手段である。
【００５０】
一実施形態においては、系が、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択される。
【００５１】
更に別の様相においては、本発明の課題は、過形成及び腫瘍の発生、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定するプロセスであって、次の各段階、
・過形成及び腫瘍の染色体転座部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・ブレークポイント領域の両側の約４００ｋｂｐ、好ましくは約３２０ｋｂｐ、好ましくは約１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含むプロセスにより解決する。
【００５２】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸、本発明のリボザイム、本発明のアンチセンス核酸、本発明のＲＮＡｉ、及び／又は本発明の核酸プローブの内の一の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用により解決する。
【００５３】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸、本発明のリボザイム、本発明のアンチセンス核酸、本発明のＲＮＡｉ、及び／又は本発明の核酸プローブの内の一の、医薬を製造するため、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用により解決する。
【００５４】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明のポリペプチドの内の一の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用により解決する。
【００５５】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明のポリペプチドの内の一の、医薬製造のための使用により解決する。
【００５６】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の抗体の内の一の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用により解決する。
【００５７】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の抗体の内の一の、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用により解決する。
【００５８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットであって、該キットが、それぞれ先の請求項のいずれか一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、リボザイム、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、プライマー及び／又は核酸プローブからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とするキットにより解決する。
【００５９】
更に別の様相においては、本発明の課題は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を検出するためのプロセスであって、次の各段階、
甲状腺材料を、それぞれ本発明に係る核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を含むプロセスにより解決する。
【００６０】
一実施形態においては、甲状腺材料が生体外に存在する。
【００６１】
一実施形態においては、甲状腺材料が細胞学的調製物の一部である。
【００６２】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸又はその一部の、プライマー及び／又はプローブとしての使用により解決する。
【００６３】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸を提示する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマーにより解決するが、このプライマー或いはプローブは、本発明の核酸配列の内の一核酸配列の一部分に実質的に相補的である或いは実質的に同一である。
【００６４】
更に別の様相においては、本発明の課題は、甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提示するプロセスであって、破壊ポイントを有する転座が染色体バンド２ｐ２１−２２に存在し、前記配列が染色体バンド２ｐ２１−２２内にあり、
該プロセスが次の各段階、
・ＰＣＲを実施するための本発明のプライマーを調製する段階と、
・ヒト染色体２のバンド２ｐ２１−２２から採取した核酸配列、又は本発明の核酸の内の一核酸を調製する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と
を含むプロセスにより解決する。
【００６５】
更に別の様相においては、本発明の課題は、医薬組成物であって、
それぞれ先の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、プライマー及び／又は核酸プローブ、及び／又はリボザイム、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種の担体とを含む医薬組成物により解決する。
【００６６】
更に別の様相においては、本発明の課題は、腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するためのプロセスであって、本発明の核酸の内の一核酸の変化した発現の作用を阻害する化合物が患者、特に腫瘍の患者、特に甲状腺腫瘍又は過形成の患者に投与されるプロセスにより解決する。
【００６７】
この場合、変化とは、発現上昇と発現低下の両方とすることができる。
【００６８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の核酸の内の一核酸の発現変化の作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用により解決する。
【００６９】
一実施形態においては、医薬は、腫瘍、特に甲状腺腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものである或いは治療及び／又は予防に用いられる。
【００７０】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用により解決する。
【００７１】
一実施形態においては、ポリペプチドは、配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列を有する。
【００７２】
一実施形態においては、核酸は、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６の内の一配列に係る核酸とハイブリダイズする。
【００７３】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号２、配列番号５〜８、１０及び１７からなる群から選択される配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用により解決する。
【００７４】
更に別の様相においては、本発明の課題は、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療するための剤、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を診断するための手段をスクリーニングするためのプロセスであって、次の各段階、
・候補化合物を調製する段階と、
・発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
・候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
・候補化合物の影響下において、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含むプロセスにより解決する。
【００７５】
一実施形態においては、候補化合物は化合物ライブラリーに含まれる。
【００７６】
一実施形態においては、候補化合物はペプチド、タンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物群から選択される。
【００７７】
一実施形態においては、機能的核酸は、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択される。
【００７８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は、特に、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸の天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらをコードする核酸、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用により解決する。
【００７９】
一実施形態においては、医薬又は診断剤は、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含む。
【００８０】
一実施形態においては、剤は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に、天然相互作用パートナーをコードする核酸と、特にｍＲＮＡ、ゲノム核酸又はｃＤＮＡと相互作用する。
【００８１】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又は特にこれらの天然相互作用パートナーと相互作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用により解決する。
【００８２】
一実施形態においては、ポリペプチドは、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択される。
【００８３】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの天然相互作用パートナーと相互作用する核酸の、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用により解決する。
【００８４】
一実施形態においては、核酸は、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択される。
【００８５】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用により解決する。
【００８６】
一実施形態においては、相互作用する第一の核酸は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡｉである。
【００８７】
上述の最後の二様相に係る一実施形態においては、第二の核酸は対応するｃＤＮＡ又はｍＲＮＡである。
【００８８】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の各使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物により解決する。
【００８９】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の各使用に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態を特徴付けるためのキットにより解決する。
【００９０】
更に別の様相においては、本発明の課題は、配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列又はその機能的断片を含むポリペプチドにより解決する。
【００９１】
更に別の様相においては、本発明の課題は、本発明の使用の内の一に従った、本発明のポリペプチドの使用により解決する。
【００９２】
本発明の更に別の様相及び実施形態は各請求項から得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００９３】
本発明は、正常な組織とは異なる発現をする一連の遺伝子又は核酸配列が存在し、その発現が腫瘍や過形成の発生と関連付けられ且つそれらが因果関係にあると考えられるという、驚くべき知見に基づいている。
【００９４】
本発明において、或る種の過形成や腫瘍の場合には、或る種の遺伝子或いは配列の発現において何らかの変化が起こることが確認された。この場合の変化とは、特に、発現上昇や発現低下をいう。また、本明細書では、過形成や腫瘍の細胞とは異なる細胞や組織における目的の遺伝子や配列の発現の程度を基準として使用する。
【００９５】
本発明において、特定の過形成や腫瘍の場合には、特定の遺伝子或いは配列の核酸配列が正常な組織に対して変化するということも確認された。
【００９６】
このような配列（本明細書では融合遺伝子、融合タンパク質或いは融合転写産物ともいう）としては、例えば、各スプライス変異体を有する本明細書に記載のＤＲＩＰ−ＦＵＳ  １やＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩ、これらをコードする核酸やアミノ酸配列が挙げられる。
【００９７】
最後に、本発明において、甲状腺腫瘍から得た細胞も甲状腺腫瘍からの細胞培養物も染色体２ｐ２１−２２にブレークを有することも確認された。このブレークポイント領域は３１６ｋｂｐと特定できた。このブレークポイント領域（ブレークポイントクラスタとも同義）にＤＲＩＰ遺伝子の２０６ｋｂｐが含まれている。より正確には、エクソン２７〜３８がこのブレークポイント領域にある。ＤＲＩＰ遺伝子の３’末端は染色体２ｐのテロメアにある。ＤＲＩＰ遺伝子のＤＮＡは、長さが３６５１８６ｂｐであり、全部で３８個のエクソンを有する。ｍＲＮＡ配列と各種スプライス変位体は異なる配列番号で示す。
【００９８】
本明細書に記載のＤＲＩＰ遺伝子の配列には、一連のコード配列（英語ではＣＤＳ：a series of coding sequence）が含まれている。本発明に係る全ての核酸配列やアミノ酸配列、ペプチド、タンパク質を示していると思われる数個のコード配列を決定できるが、特定のＤＲＩＰのｍＲＮＡの最初のＡＵＧは、翻訳開始部位として好適である。ＤＲＩＰ遺伝子或いは該遺伝子がコードするポリペプチドの相互作用パートナーは、所謂細胞死受容体（英語では death receptor）に代表される。
【００９９】
「ストリンジェントな条件」とは、本明細書特に実施例に記載の条件であり、特にＰＣＲ、ノーザンブロット、サザンブロットに関して用いる。
【０１００】
本発明においては、配列プロトコルにおいてｍＲＮＡ配列をＤＮＡ配列としても表すことができる。これに加え、コード配列（ＣＤＳ）は、翻訳したアミノ酸配列の形で表すこともできる。
【０１０１】
ゲノムＤＮＡの或る領域（５０６ｋｂｐ）を調べ、ブレークポイントクラスタのゲノム構造を決定した。この構造を決定することを目的として表１に示す各ＢＡＣクローンを用い分析した。
【０１０２】
【表１】
2006510344.tif 000003
【０１０３】
ここに記載したＤＲＩＰ遺伝子の２０６ｋｂｐはブレークポイント領域に含まれている。より正確には、エクソン２７〜３８がこのブレークポイント領域に含まれている。ＤＲＩＰ遺伝子の３’末端はそのテロメアにある。
【０１０４】
ブレークポイント領域を図１２に示す。
【０１０５】
ＤＲＩＰ遺伝子
ＤＲＩＰ遺伝子のゲノム構成
ＤＲＩＰ遺伝子のゲノムサイズ
ＤＲＩＰ遺伝子の大きさは３６５１８６ｂｐであり、全体を配列番号１２に示す。表２に、エクソン及びイントロンのサイズと、特定のクローンに対するそれらの相対位置とを示す。
【０１０６】
ここで、Ｓｅｑ．ＩＤ．Ｎｏ．とＳＥＱ．ＩＤ．Ｎｏ．は同義である。
【０１０７】
【表２−１】
2006510344.tif 000004
【表２−２】
2006510344.tif 000005
【表２−３】
2006510344.tif 000006
【表２−４】
2006510344.tif 000007
【表２−５】
2006510344.tif 000008
【表２−６】
2006510344.tif 000009
【０１０８】
ＤＲＩＰｍＲＮＡの構造
ＤＲＩＰ遺伝子はスプライス変異体を有する。最大の転写産物は６０９０ｂｐである。本明細書に記載の配列には、可能性の或るＣＤが全て含まれている。エクソンのサイズは表２に示す。
【０１０９】
ＤＲＩＰの転写産物
２種のＤＲＩＰ転写産物が存在する。配列番号１１は、エクソン１〜エクソン３８のｃＤＮＡ転写産物を示す。配列番号１６は、エクソン１〜２６及びエクソン２９〜３８のＤＲＩＰｃＤＮＡ転写産物のスプライス変異体を示す。図１３は、ＤＲＩＰｍＲＮＡ構造の概略図である。
【０１１０】
即ち、ＤＲＩＰ遺伝子の各転写産物は次の特徴を有する。
【０１１１】
ＤＲＩＰの標準的な転写産物は長さが６０９０ｂｐであり、３８個のエクソンを含む。
【０１１２】
ＤＲＩＰｍＲＮＡのスプライス変位体にはエクソン２７とエクソン２８がない。
【０１１３】
これに加え、ＤＲＩＰ相同ＥＳＴとｍＲＮＡがあり、これらを表３に示す。
【０１１４】
【表３】
2006510344.tif 000010
【０１１５】
ＤＲＩＰの発現
ＤＲＩＰ遺伝子は普遍的に発現する。発現に関するデータは、ＮＣＢＩのＵｎｉｇｅｎｅデータバンクにおいてクラスター番号Ｈｓ１６０６３ホモサピエンスとして記載されている。この結果、例えば、Ｓａｇｅノーザン解析において腫瘍細胞株ＭＣＦ７（乳腫細胞株）に強い発現が生じる。図１１に示すノーザンブロットから明らかなように、膵臓及び精巣において発現が増強している。
【０１１６】
ＤＲＩＰタンパク質
ＤＲＩＰ遺伝子のオープンリーディングフレーム
ＤＲＩＰ遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を図１３に示すが、これは配列番号１１及び配列番号１６の中に見出される。このＯＲＦの開始位置及び終了位置は両配列番号についての記載において確認される。
【０１１７】
甲状腺腫瘍からの本発明の融合遺伝子ＤＲＩＰＦＵＳ１の特徴付け
実施例１においてより詳細に述べるが、甲状腺細胞株Ｓ３２５ｔ／ｓｖ４０には、染色体３（３ｐから３テロメア）の小さな断片を有する融合染色体ｄｅｒ（２）が存在する。この融合染色体からＤＲＩＰ融合タンパク質が生じるが、これを本明細書ではＤＲＩＰＦＵＳ１と表す。ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉとそのスプライス変位体のｍＲＮＡの概略図を図１４に示す。このｍＲＮＡを配列番号１、配列番号１３、配列番号１４に示し、このアミノ酸配列を配列番号６、配列番号７、配列番号２に示す。
【０１１８】
ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ融合遺伝子のｃＤＮＡ及びそのスプライス変異体は標準的な３’ＲＡＣＥ技法により測定した。染色体３の前記更なる配列は、ＢＡＣクローンＲｐｌｌ−１６７Ｍ２２（受託番号ＡＣ０９３１７４）及びＲｐｌＩ−３３５１９（受託番号ＡＣ０９１４９２）由来のものである。この染色体３の配列の既知の遺伝子に対する相同性は明らかではない。これらは腫瘍にのみ発現する新規な遺伝子構造である。
【０１１９】
本発明者は、ＤＲＩＰ−ＦＵＳＩ遺伝子が過形成や腫瘍形成に明らかに関与していると仮定しているが、この仮定に拘束されるものではない。この遺伝子或いはこれをコードする配列は、本発明の核酸であると共に、本明細書に開示の使用においてそれぞれに応じて適用できる。更に、本発明の核酸は、染色体２由来の本発明の融合タンパク質をコードする核酸配列の一部でもある。染色体３由来の核酸配列の一部にも同様なことが言える。本発明に使用した配列、即ち部分的な配列は、配列番号１、配列番号１３、配列番号１４或いはその注釈に従った配列から直接的に得られる。ポリペプチド或いは対応するアミノ酸配列についても同様に言える。
【０１２０】
更なる融合遺伝子／融合タンパク質を図に示す。
【０１２１】
最後に、本発明においては、本明細書に記載のエクソン、転写物、ｃＤＮＡ、ＯＲＦ等は全て本発明の核酸として理解されるべきであると共に本発明に従って使用できるものと理解されたい。
【０１２２】
関連する腫瘍としては、とりわけ、第一の腫瘍グループとして各種上皮腫瘍、特に染色体バンド２ｐ２１−２２に変化を有する上皮腫瘍、第二の腫瘍グループとして染色体アーム２ｐに変化を有する各種腫瘍が挙げられる。
【０１２３】
この場合の変化とは、特に染色体転座や染色体欠失、染色体挿入、染色体逆位をいう。
【０１２４】
特に、第一のグループの腫瘍は甲状腺の各種腫瘍を含み、甲状腺の上皮腫瘍が好ましい。第二のグループの腫瘍としては、例えば、白血病（慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病等）やＢ細胞リンパ腫、神経膠腫、悪性線維性組織球腫、骨肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、卵巣腫瘍、乳腫、腎臓癌、膵臓癌、胆嚢癌等が挙げられる。
【０１２５】
ＷＨＯの分類によれば、甲状腺の腫瘍は殆どが上皮腫瘍由来であり、良性型と悪性型に分けられる。良性腫瘍においては、「真正の」腺腫と、「腫瘍様病変」とも言われる甲状腺過形成（良性腺腫様甲状腺腫結節）とが区別される。この過形成は、殆どがポリクローナル結節であり、包形成が不完全な様々な大濾胞性構造を有することが多い。一方、甲状腺腺腫は濾胞性上皮由来の被包型腫瘍である。これらの通常単発性の腫瘍の構造は類似しており、その構造は隣接する甲状腺組織とは異なる。これらは、顕微鏡的に（組織の細かさという点で）分化の程度に応じて、正常濾胞性（normofollicular）（シンプル／単純）、大濾胞性（macrofollicular）（コロイド）、小濾胞性（microfollicular）（胎児性）、小柱性（trabecular）或いは固形（solid）（胚性）の各線種に分類することができる。
【０１２６】
本明細書に使用されるＤＲＩＰという略語は、英語の「細胞死受容体相互作用タンパク質（death receptor interacting protein）（独語：death receptor interagierendes Protein）」を略したものである。このタンパク質は、細胞死受容体（英語では death receptor）、特に細胞死受容体５（ＤＲ５）のリガンド或いはアダプターであり、細胞のアポトーシス機能に関与している。ＤＲＩＰ遺伝子は、シグナル開始或いはシグナル転送における機能に意義がある。
【０１２７】
本発明の範囲においては、本発明の配列には、一般に、ワトソンクリック塩基対により生じる相補配列も含まれる。
【０１２８】
本発明の範囲においては、特に検出のためのノーザンブロットハイブリダイゼーションにおける標準的な条件下において、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号９及び／又は配列番号１１〜１６の配列を有するシングルコピー配列とハイブリダイズする核酸配列や、遺伝子コードの縮重がなければこれら配列とハイブリダイズしたであろう核酸配列も含まれる。適切なハイブリダイゼーションの条件は例えば次のようなものである。即ち、特異的な断片を分子プローブとして用いる。「ランダムプライマー伸長」の原理に従い３２Ｐにより放射性標識を行った。ｉｎＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイジング液メンブレン（クロンテック・ラボラトリーズ（Clontech Laboratories）、米国パロ・アルト）のプレハイブリダイゼーションを６８℃で３０分間行った後、１００ｎｇのプローブｉｎＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂハイブリダイジング液を用いてこのメンブレンのハイブリダイゼーションを６８℃で６０分間行った。次にメンブレンの洗浄を行った（２×ＳＳＣ／０．０５％ＳＤＳを用いて室温で２０分を２回、０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳを用いて５０℃で１０分を４回）。信号を、ＳＴＯＲＭホスホラスイメージャー（phosphorus imager）（モレキュラー・ダイナミクス（Molecular Dynamics）、米国サニーベール）等を用いて検出した。
【０１２９】
本発明に係る核酸には、遺伝子コードの縮重がなければ、本発明の核酸、本明細書に記載のポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸、及び特に配列番号１、配列番号９、配列番号１１及び／又は配列番号１３〜１６等により示す融合タンパク質の内の一とハイブリダイズしたであろう核酸も含まれる。
【０１３０】
本発明の各種核酸の内の一核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物を決定する本発明の方法は、化合物ライブラリーをスクリーニングする方法でもある。このような化合物ライブラリーとしては、低分子量化合物のライブラリーが好ましい。基本的には、この手続きは、或る系において本発明の各種核酸の内の一核酸の翻訳産物を化合物に接触させるものであるが、ここにおいて、この系は、前記翻訳産物の作用、ひいては翻訳産物に対する化合物の作用を示すか、或いはこの作用を検出可能な信号の形で出力するものである。この作用は、例えば、強度、基質特異性（認識、結合、輸送）及び／又は受容体特異性や受容体親和性や膜会合についての関数をモディファイして、例えば信号伝達として表すことができる。この作用は、細胞内外における酵素反応に対しても影響を及ぼすであろう。この作用は、無細胞系、細胞系、細胞培養物中、及び／又はトランスジェニック動物モデルにおいて、即ちｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ及びｉｎ  ｓｉｔｕで調べることができる。
【０１３１】
本明細書においては、本発明の方法及び適用において、腫瘍や過形成と言及する場合は、本発明の核酸に関係して示される全ての種類の腫瘍や過形成含むものと理解されたい。
【０１３２】
従って、本発明の核酸配列には、本明細書に記載の各疾患の診断や治療と、これら疾患、特に甲状腺腫、甲状腺腫瘍或いは甲状腺癌の発症に関する機序の調査との両方に用いられるという新しい可能性が開かれている。特に、配列を知ることにより、適切な診断手段或いは治療手段を直接的或いは間接的に、薬学的な組成物や医薬という意味において分子レベルで用いることができるようになる。
【０１３３】
本発明の核酸配列は、キットや方法と同様、上述の意味において診断や治療において使用される適切な手段を実現するために、当業者に知られた方法で使用できる。
【０１３４】
核酸とは、ＤＮＡ配列とＲＮＡ配列の両方をいう。これには、これらのハイブリッドや、異なるバックボーンを有するＰＮＡやＬＮＡ等の誘導体も含まれる。また、核酸は一本鎖構造、二本鎖構造或いはトリプル構造で存在することができる。
【０１３５】
ＤＮＡの鎖性、即ち例えば一本鎖であるか二本鎖であるかは、核酸配列の長さにより異なるものとすることもできる。
【０１３６】
更に、本発明の核酸配列は、完全でなくてもよく、断片とすることもできる。好ましくは、断片は、本発明の核酸の５’末端断片か３’末端断片である。
【０１３７】
更に、本発明に開示される核酸配列には、その変異体が含まれると共に、異なる母集団において対立遺伝子が存在することから、対立遺伝子も含む。本明細書において、変異とは、核酸配列内に起こり得るものとして当業者に知られている変異全てをいい、点変異と点変異以外の変異、即ち逆位、挿入、欠失を含む。
【０１３８】
中でも、核酸配列を取得する或いは失う及び／又は特に融合遺伝子を発生させる転座が挙げられる。
【０１３９】
更に、本発明の核酸とその他の核酸の相互作用に関して、本技術において一般に認識されているハイブリダイゼーションの基準を本発明においても用いる。適切なハイブリダイゼーションの条件を選択することにより、特定の領域におけるハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを変更することができ、従って、本発明の核酸配列は、完全ではないものの対応する配列、即ち相補配列、との差異の程度が様々な核酸配列とハイブリダイズすることができるようになる。
【０１４０】
本発明の核酸配列には、もし遺伝子コードの縮重がなければ本発明の各種配列の内の一配列とハイブリダイズしたであろう配列も含まれる。これは、本発明の核酸配列にあるオープンｉｎ−ｆｒａｍｅを見れば、これを遺伝コードを用いてアミノ酸配列に翻訳できることを意味する。しかしながら、遺伝子コードの縮重を鑑み、このようにして得たアミノ酸配列から出発し、遺伝コードを再び用いて、アミノ酸配列を決定するために用いた核酸配列に対してもはやハイブリダイズできない程異なっている核酸配列を得ることもできる。
【０１４１】
当業者であれば、本明細書に開示されている核酸に基づき、本発明の核酸配列と相互作用できる適切なアンチセンス核酸（特にアンチセンスＲＮＡ）を生成することができる。この相互作用により、この核酸配列が関与するプロセスに対して直接的な影響を及ぼすことができる。この相互作用は、翻訳レベルと同様、例えば転写レベルにおいても起り得る。
【０１４２】
本明細書においては一般に、核酸配列とは、前記組織から単離することにより、好ましくは前記組織からｉｎ  ｓｉｔｕやｅｘ  ｖｉｖｏで単離することにより、例えば対応する細胞や組織、器官の培養物から単離することにより得られる核酸配列をいう。
【０１４３】
しかしながら、本明細書においては、ジーンバンクから単離される核酸配列、特にヒトジーンバンクから、より好ましくはヒト染色体２、３、７のジーンバンクから単離される核酸配列も本発明の核酸配列に含まれ、本発明の核酸配列はこれらから得ることができる。更に、本発明の核酸配列には、適切な合成技法（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応や技術水準において知られているその他の生物化学的、化学的合成方法）により作成される核酸も含まれる。
【０１４４】
本発明の配列は、改変されていてもよい。
【０１４５】
改変には、例えば、本発明の核酸配列の（一部の）配列の断片化、挿入、欠失、逆変異も含まれる。これには、他の核酸配列が挿入されることも含まれる。これらの核酸配列は、例えば、特定の領域をコードすることができ、翻訳や転写を制御するためのスペーサー及び／又は要素として機能することができる。
【０１４６】
更に、本発明の核酸は、他の分子と相互作用し得る配列や分子を含むように改変することができる。これは、例えば、核酸結合タンパク質と結合する固体キャリアや配列に対する結合部位の形で達成できる。
【０１４７】
更に、本発明の核酸配列は標識されたものであることができる。ここで、標識とは、基本的には直接標識と間接標識の両方をいう。
【０１４８】
標識は、従来技術において知られている標識物質と標識方法を用いて達成することができ、例としては特に、放射性標識、非放射性標識、蛍光標識が挙げられる。非放射性標識に用いられる標識物質としては、とりわけ、ジゴキシゲニン、アビジン、ストレプトアビジン、ビオチンが挙げられる。
【０１４９】
本明細書におけるベクターとは、特に、当技術分野において知られている組換えベクターをいう。
【０１５０】
本明細書において使用されているベクターという用語に含まれるものとしては、とりわけ、ウィルスベクター（アデノウィルスベクター、レトロウィルスベクター等）、ファージシステム、プラスミドベクター（コスミドベクター等）、原核生物系及び／又は真核生物系に使用できる人工染色体等が挙げられる。
【０１５１】
本発明のベクターは、本発明の核酸配列に加え、従来技術において知られている従来の要素を更に含むことができる。各要素、例えばプロモーターやターミネーター、エンハンサー等は、当業者に知られている方法で各宿主細胞系に応じて選択される。特に、適切な真核生物プロモーターの使用と誘導プロモーターの使用が好ましい。前述の要素の単独での使用或いは組み合わせての使用に加え、これらの要素が、少なくとも本発明の核酸配列或いはその一部を宿主細胞系のゲノムに導入させるタイプのベクターに含まれることも本発明の範囲内である。
【０１５２】
ｉｎ−ｆｒａｍｅ（「ｉｎ−ｆｒａｍｅ」）にある前記要素の内の少なくとも一要素が、本発明の核酸配列の少なくとも一個のオープンｉｎ−ｆｒａｍｅに結合されることも本発明の範囲内であり、この特別なオープンｉｎ−ｆｒａｍｅの転写速度が、付加的に導入されたプロモーターにより制御される場合に特に有利となる。ここで、このプロモーターは通常、適切な距離に、このオープンｉｎ−ｆｒａｍｅに対し「ｉｎ−ｆｒａｍｅ」に配置される。
【０１５３】
従って、本発明の核酸配列のオープンｉｎ−ｆｒａｍｅは、好ましくは前述の条件においてシグナル配列を有することも提供でき、このシグナル配列は、このオープンｉｎ−ｆｒａｍｅによりコードされる遺伝子産物を細胞膜を通過させて転位させることができ、またその結果として必要に応じてこの遺伝子産物を更に改変させることができる。このようなシグナル配列としては、合成タンパク質を小胞体やゴルジ体、リソソーム、細胞小器官（ミトコンドリアや葉緑体等）、細胞コアに輸送するためのシグナル配列が挙げられる。このように、異なる細胞コンパートメントを通過できることにより翻訳後修飾をすることができるため、必要に応じて遺伝子産物を更に有利に形成することができる。
【０１５４】
シグナル配列に加え、このような構成に更に付加的な核酸配列を含ませることができる。この付加的な配列は、本発明の核酸配列のオープンｉｎ−ｆｒａｍｅの遺伝子産物に融合タンパク質に形成させる。ここで、ドメインの融合部分は、別のタンパク質に対応するものであることができ、例えば本発明の配列のオープンｉｎ−ｆｒａｍｅの遺伝子産物を検出するのに使用される。また、生物学的な系における他の分子や構造物との相互作用を検出するのに使用される。ここで生物学的な系とは、好ましくは細胞である。
【０１５５】
前述の利点と、当業者であれば本発明の核酸配列の記述から知得できる更なる利点に加え、これらのことも、前述の核酸配列から誘導することができる或いは該配列によりコードすることができるポリペプチドに固有のものである。これらのポリペプチドは、本発明の核酸配列のオープンｉｎ−ｆｒａｍｅから直接得ることができ、また宿主生物に発現させた本発明のベクターによって当業者によく知られている方法で生成することができる。後者の方法の場合、本発明のベクターによって宿主生物を通常は最初に形質転換し、この宿主生物を増幅し、宿主生物からポリペプチドを得る。または宿主生物からポリペプチドを培地に分泌させる場合は、この培地からポリペプチドを得る。
【０１５６】
本発明のポリペプチドやこれらポリペプチドをコードする核酸は、甲状腺の組織における「細胞の」イベントに影響を及ぼすように直接使用されるが、これに加え、アフィニティクロマトグラフィー等により細胞イベントに関与する他の成分の洗浄（cleaning）に使用することもできる。また、好適な抗体を作成するために使用することもでき、この抗体は、中でもその役目として治療及び／又は診断の目的で使用することができる。このような方法で、中でも本発明のポリペプチドの相互作用パートナーを検出し或いは単離することができる。
【０１５７】
翻訳後修飾や所望の純度等、各場合における必要性にもよるが、本発明のポリペプチドを宿主生物内で作成するときは、宿主生物としては原核生物か、或いは真核生物が有利である。
【０１５８】
本発明のポリペプチドは適切な方法で改変することができる。改変とは、中でも断片化のことであり、特に分子を短くすることと解釈すべきである。
【０１５９】
この場合の改変の意味には、ポリペプチドを標識することも含まれる。この標識は、高分子化合物と低分子化合物のどちらによってでも行うことができ、これらとしては放射性標識、非放射性標識、蛍光標識が挙げられる。
【０１６０】
また、標識は、例えばタンパク質のリン酸化やグリコシル化の形で存在することができる。
【０１６１】
対応する各標識方法や改変方法は当技術分野で知られており（例えば、「タンパク質を用いる各種方法」第二版、Ｄ．Ｍ．ボラグら、ウィリ・リス社、ニューヨーク、１９９６年（Protein Methods, 2nd ed., D. M. Bollag et al., Wiley Liss, Inc., New York, NY, 1996）参照）、その記載の全体を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【０１６２】
本発明における改変には、当業者に知られているいかなる形態の翻訳後修飾も含まれ、特に、ポリペプチドのタンパク質分解処理、Ｎ末端における残基の付加や分離、Ｎ末端のアセチル化、Ｎ末端のミリストイル化、グリコシルホスファチジル基やファルネシル基、ゲラニルゲラニル基のＣ末端への付加、Ｎグリコシル化、Ｏグリコシル化、グリコサミノグリカンの付加、ヒドロキシル化、リン酸化、ＡＤＰリボシル化、ジスルフィド架橋形成をいう。
【０１６３】
本発明のポリペプチドを変異させて、特にアミノ酸変異をさせて得られる或いは誘導される本発明のポリペプチドも本発明の範囲内である。アミノ酸変異とは次の両方の変異をいう。即ち、アミノ酸を側鎖が類似している別のアミノ酸で置換する変異（保存的変異、例えばＩからＬへ、ＤからＥへ）、及びアミノ酸を別のアミノ酸に置換してもコードされたポリペプチドの機能に好ましくない影響を与えないような変異（サイレント変異）の両方をいう。コードされたポリペプチドの機能は適切なアッセイにより確認できる。ＤＲＩＰのための、即ちアポトーシス性手続きのための適切な機能アッセイは当業者に知られている（例えば、リザード（Lizard）Ｇ．ら、Ａｎｎ  Ｐａｔｈｏｌ  １９９７年３月；１７（１）：６１−６、参照）。
【０１６４】
本発明の細胞を用いることにより、多くの利点が得られる。これら利点として、中でもとりわけ対応する核酸配列や該配列から得られる遺伝子産物を製造することが含まれる。
【０１６５】
特に、本発明の核酸配列を細胞のゲノムに挿入することは重要であるが、例えば、このような配列が及ぼす影響、特に細胞環境における影響を更に研究するためには特に重要である。この場合、遺伝子量効果等を診断及び／又は治療のために調べる或いは利用できる。非常に有利であるのは、二倍体細胞から開始したときに、一本の染色体のみが一以上の本発明の核酸配列を含み、好ましくはバンド２ｐ２１−２２の対応する位置に挿入されており、第二の染色体については染色体バンド２ｐ２１−２２を含む染色体転座は行われない、という状態であると思われる。このような細胞は、例えば診断用の調製物における陽性対照及び／又は陰性対照として使用することができる。
【０１６６】
本発明の範囲には、本発明の各翻訳産物或いはこれらをコードする核酸に加え、本明細書に記述するように、各翻訳産物或いはこれらをコードする核酸から生じる作用を得る或いは抑制する他の手段も使用できることも含まれる。このような手段は、例えば、所謂スクリーニング法の範囲内で確かめることができる。第一の段階において、一以上の所謂候補化合物が調製される。本発明の候補化合物は、本明細書に記載の疾患、特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の治療に対する適切性が何らかのテスト系にて確認されるべきであり、この適切性をこれらを診断するための診断手段として用いるべきである。或る候補化合物が、このテスト系において或る相応の作用を示す場合は、これは相応の手段、即ち、主にこれらの疾患の治療に適切な手段であることを示す。第二の段階では、候補化合物を(翻訳産物)発現系や(翻訳産物)活性系と接触させる。翻訳産物発現系は、翻訳産物の発現を体現する発現系であり、発現の程度は基本的に変えることができる。翻訳産物活性化系は本質的には発現系であるが、この系では焦点は翻訳産物の発現よりもその活性や活性状態、影響の受け易さに当てられている。このため、このような翻訳産物は実際の発現過程を経た結果得られるものである必要はなく、ポリペプチドやタンパク質として対応する活性系に事前に添加されることもできるということは注目に値する。具体的には、この場合、翻訳産物の活性が候補化合物の影響下において変化するか否かが確認される。この場合、それぞれの具体的な発現系や活性系の存在とは独立に、発現や活性が低下することも上昇することも基本的には起こり得る。
【０１６７】
発現系及び／又は活性系は通常、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの調製物である。例えば、細胞コア抽出物等の細胞抽出物や細胞抽出物の断片等である。しかしながら、この調製物は各成分に関して幾分厳密に規定される（生物学的）化学的な調製物であることもできる。しかしながら、本発明に係る翻訳産物発現系は細胞であることができ、好ましくは甲状腺細胞や甲状腺過形成細胞、甲状腺腫瘍を形成する細胞である。
【０１６８】
発現系において起こる増加や減少がどの程度であるのかは、発現の一レベルで決定することができる。即ち、例えば、翻訳産物をコードする核酸、特にｍＲＮＡの量の増加或いは減少させること、或いは候補化合物の影響下において発現系で生成される翻訳産物（即ち、各タンパク質）の量の増加或いは減少させることにより決定することができる。このために必要な技法、例えばｍＲＮＡを定量する方法は当業者に知られており、例えば、サンブルック（Sambrook）ら（サンブルック，ヨゼフ（Sambrook, Joseph）：分子クローニング（Molecular Cloning）：実験室マニュアル（A laboratory manual）／Ｊ．サンブルック（Sambrook）；Ｅ．Ｆ．フリッチ（Fritsch）；Ｔ．マニアティス（Maniatis）−コールド・スプリング・ハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク：コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー出版（Cold Spring Harbor Laboratory Press）、１９ＸＸ、第一版、Ｔ．マニアティス（Maniatis）、トーマス（Thomas）Ｐ．：「分子クローニング（Molecular Cloning）」；第三版:ヨゼフ・サンブルック（Joseph Sambrook）とデービッドＷ．ラッセル（David W. Russell）；国際標準図書番号ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−３０９−６  ＩＳＢＮ０−８７９６９−５７６−５  ＩＳＢＮ０−８７９６９−５７７−３  第１-２版、４［Ｄｒ．］−１９８９）に記載されている。更に、翻訳産物の量を決定する方法は、例えば、適切な抗体を用いること等が挙げられ、当業者には知られている。
【０１６９】
抗体は一般に知られている方法により製造することができ、方法は例えば「現行のプロトコル（Current Protocols）」(「タンパク質科学における現行のプロトコル（Current Protocols in Protein Science）」コリガン（Coligan）Ｊ．Ｅ．；ダン（Dunn）Ｂ．Ｍ．、ハイド（Hidde）Ｌ．Ｐ．、スパイチャー（Speicher）Ｄ．Ｗ．、ウィングフィールド（Wingfield）Ｐ．Ｔ．；ジョン・ウィリー＆サンズ（John Wiley & Sons）により出版)に記載されている。更に、発現系の範囲内において、得られた翻訳産物は標識されていることも可能である。このような適切な標識としては、例えばＨｉｓ６による標識（ジャンクネヒト（Janknecht）Ｒら（１９９１）、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、８８（２０）：８９７２−６）が挙げられる。
【０１７０】
翻訳産物活性系の場合は、翻訳産物の活性上昇や活性低下は通常、機能アッセイによってテストされる。これについては、改変翻訳産物の定義に関連して既に記載されており、より正確には本発明の改変ポリペプチドに関して既に記載されている。
【０１７１】
候補化合物と発現系或いは活性系との接触は、候補化合物の好ましい水溶液を、対応する反応系即ち発現系や活性系に加えることにより一般には行われる。発現系や活性系は、本明細書では纏めてテスト系としても記載されている。この場合、水溶液は好ましくは緩衝液であることができる。
【０１７２】
候補化合物の使用は、各テストにおいて各場合毎に一種の候補化合物のみが、対応するテスト系において使用されるような形で一般にはなされる。この場合、本発明の範囲には対応する各種テストが平行して高収量系で実施されることも含まれる。
【０１７３】
本発明のスクリーニング法の最後の段階においては、翻訳産物やこれをコードする核酸の発現や活性が、候補化合物の影響により変化したか否かを決定するが、候補化合物を添加しないテスト系の挙動と候補化合物を添加したテスト系の挙動を比較する形で一般には実施される。好ましくは、候補化合物は化合物ライブラリーに含まれる。化合物群に関わらず基本的には全ての化合物ライブラリーを化合物ライブラリーとして使用できる。適切な化合物ライブラリーは、例えば小分子のライブラリーである。しかしながら、他の化合物群、例えばペプチドやタンパク質、抗体、アンチカリン、核酸等、特に機能的核酸を小分子として使用することも本発明の範囲に含まれる。
【０１７４】
同時に、本発明の翻訳産物やこれをコードする核酸を、前述の化合物群、特にペプチドやタンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸等を生成するためのターゲット分子として使用できることも本発明の範囲に含まれる。対応する各種化合物、即ち、ペプチドやタンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸は本発明のスクリーニング法において利用できる。
【０１７５】
本発明の翻訳産物やこれをコードする核酸に対して生成されるこれらの化合物、即ち、ペプチドやタンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸が、本発明に係る手段、即ち、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための手段や対応する診断剤として使用されることも更に本発明の範囲に含まれる。
【０１７６】
本発明に係るペプチド及び特に結合ペプチドは、好ましくは生物学的系において、特に甲状腺又は甲状腺過形成又は甲状腺腫瘍やこれらを形成する細胞において、本発明の翻訳産物や本発明の翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナーに結合するタンパク質やペプチドであるのが好ましい。本発明の使用に関連して本明細書に記載される抗体やアンチカリン、機能的核酸、小分子についても同様なことが適用される。同時に、前述の化合物群の各メンバーは、好ましくは、本発明の翻訳産物やこれをコードする核酸と相互作用し、従って翻訳産物やこれをコードする核酸の対応する活性に影響を及ぼす。このような相互作用が起こる条件は、当業者にはよく知られており、実際に相互作用が起こるべき条件と一致する。好ましくは、この条件は生理学的な条件であり、好ましい条件は、本明細書に記載の疾病の生物学的系（biological system of the illness）において見られるものである。
【０１７７】
しかしながら、これらのメンバーのうち、本発明の翻訳産物やこれをコードする核酸の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナーと相互作用し、相互作用パートナーやこれをコードする核酸の発現や活性に影響を及ぼすものを製造或いは使用することや、それぞれに対応するスクリーニングプロセスに付すこと、ことも本発明の範囲に含まれる。「影響を及ぼす」という語は、本明細書において説明した発現や活性の程度の増加又は減少をいう。
【０１７８】
前記メンバーが本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸の相互作用パートナーと相互作用した結果、翻訳産物に伴う一連の反応が阻害され、本発明に係る翻訳産物又はこれをコードする核酸の通常見られる作用が阻害される。これは、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍に関連して本明細書に開示される治療又は診断の範囲において使用できる。
【０１７９】
これらペプチド（以下、本明細書では結合ペプチドや結合タンパク質ともいう）は、例えばファージ・ディスプレイ等の従来技術において既に知られている方法を用いてスクリーニングしたり製造したりすることができる。これらの技法は当業者に知られている。この場合、これらのペプチドの生成は通常、ペプチドライブラリーを例えばファージの形で構成し、このライブラリーをターゲット分子、即ち本発明の場合は例えば翻訳産物や本発明の核酸の翻訳産物の天然相互作用パートナーと接触させ行われる。その後、結合ペプチドは通常、ターゲット分子との複合体として、ライブラリーの非結合メンバーから分けられる。この場合、結合特性は少なくともある程度各場合における特定のテスト条件、例えば塩含有量等により異なることは当業者の知識の範囲内である。ターゲット分子とより高い或いはより強力な親和性を以って結合しているペプチドをライブラリーの非結合メンバーから分離した後、或いは本発明の場合は、例えばターゲット分子である本発明の翻訳産物から分離した後、これらの特徴付けを行うことができる。場合によっては、特徴付けの前に増幅ステップが必要とされることがある。増幅は、例えば、一以上のペプチド又はタンパク質をコードする対応するファージを増殖することにより行う。特徴付けは、ファージ・ディスプレイ・スクリーニング法において翻訳産物或いはその天然相互作用パートナーのどちらをターゲット分子として使用したかによって異なるが、これら２種の分子のいずれかと結合するタンパク質の配列を決定することを含むのが好ましい。これらのペプチドの長さは特に制限されない。しかしながら、典型的には、８〜２０個のアミノ酸を有するペプチドがこのような方法で得られ或いは使用される。ライブラリーに含まれるペプチドは、１０２〜１０１８種、好ましくは１０８〜１０１５種である。アンチカリンは、ターゲット分子に結合するペプチドの特定の形状を示すものであり、例えばドイツ特許出願ＤＥ１９７４２７０６に記載されている。
【０１８０】
本明細書に開示された技術思想により、遺伝子産物、特にポリペプチド等の本発明に係る翻訳産物や本発明の核酸配列に対する抗体を製造することもできる。従ってこの場合においても、当業者にはよく知られているように、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏとｉｎ  ｖｉｖｏにおけるアプリケーションにおいて、各種化学化合物に対する各種抗体が存在することによる各種利点が得られる。特に、これらの抗体を用いれば、例えば、本発明の化合物、即ち本発明の各種核酸及び／又は本発明のポリペプチドや翻訳産物を精製することが可能となり、またこれらを検出すること、更に、ｉｎ  ｓｉｔｕ且つｅｘ  ｖｉｖｏの両方、ｉｎ  ｖｉｖｏ及び／又はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて抗体が指向している化合物の生物学的利用可能性等の生物学的活性に影響を及ぼすことが可能である。より正確には、特にモノクローナル抗体を用いれば、遺伝子産物を特異的に検出することができ、或いは遺伝子産物や核酸配列と他の細胞成分との細胞レベルでの相互作用に影響を及ぼすことができ、従って細胞イベントにおける特異的な介入が達成され得る。抗体が指向する化合物次第、或いは研究下の系において抗体の作用が発現する化合物次第で、その化合物の作用により達成され得るのが原則的に促進作用となるか、阻害作用となるかが決まる。
【０１８１】
抗体は、本明細書においてはポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方をいう。しかしながら、特異性が高いためモノクローナル抗体の方が特に好ましい。しかしながら、ポリクローナル抗体の純度や特異性が十分である場合、或いはポリクローナル抗体により達成される複数の特異性や他の特性が有利な形で使用できる場合もある。
【０１８２】
抗体の製造や使用については、例えば、抗体：実験室マニュアル（Ｅ．ハーロー＆Ｄ．レーン、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー、ニューヨーク、１９８８年）（Antibodies：A Laboratory Manual （E. Harlow & D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 1988））に記載されており、その記述を本明細書の一部を構成するものとしてここに援用する。
【０１８３】
更に、抗体が一本鎖抗体であることができることも、本発明の範囲に含まれる。
【０１８４】
抗体が断片化されている、特に短縮化されていることも本発明の範囲に含まれる。これは、抗体の特異性が残っている、即ち所定のエピトープに結合し得る限り、抗体の大部分が断片化（Trunkiert）されていることを含む。断片化（Trunkierung）は、対応する抗体が細胞レベルで使用される場合に特に有利である。これは、このようにすることにより完全抗体に比べ、透過性や拡散性が向上するためである。
【０１８５】
更に、当業者に知られている他の形の改変も提供される。これらは、例えば「抗体：実験室マニュアル（Ｅ．ハーロー＆Ｄ．レーン、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー、ニューヨーク、１９８８）（Antibodies：A Laboratory Manual (E. Harlow & D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 1988））」に記載されている。一般に言えることであるが、原則的には抗体の改変はポリペプチドの改変と同様の方法で、またある程度は核酸と同様の方法で実施することができ、前述の方法は本発明に係る抗体にも適用できる。
【０１８６】
本発明に係るスクリーニング方法において使用でき且つ本発明に係る医薬や診断剤の製造に使用できる別の化合物群は、機能的核酸である。本明細書において機能的核酸とは、特にアプタマー、アプタザイム（aptazyme）、リボザイム、スピゲルマー（spiegelmer）、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉをいう。
【０１８７】
アプタマーは一本鎖又は二本鎖の、ＲＮＡベース又はＤＮＡベースの、ターゲット分子と特異的に結合するＤ−核酸である。アプタマーの製造については、例えば、ヨーロッパ特許ＥＰ第０５３３８３８号に記載されている。次の手続が用いられている。
【０１８８】
核酸の混合物、即ち潜在的アプタマーの混合物を調製する。各核酸は、少なくとも８個の連続的な任意のヌクレオチドセグメントから構成されている。この混合物をターゲットと接触させる。即ち、本発明の場合は、翻訳産物、特に本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸、翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナー、及び／又はこれらをコードする核酸と接触させる。ターゲットと結合する核酸は、候補を含むこの混合物の残りのものと分けられる。この時、必要に応じて、この候補混合物の中で親和性が高いことを利用して分ける。このようにして得た、ターゲットと結合している核酸を増幅する。これらのステップを何回も繰り返し、最終的に、各ターゲット（即ちターゲット分子）と特異的に結合する核酸を、正確に言えば所謂アプタマーを得る。これらのアプタマーは安定化され得ることも本発明の範囲に含まれる。安定化は、例えば、アプタマー開発の分野の当業者には知られている何らかの化学的な基を導入することにより行う。アプタマーは、既にこれまで治療において使用されている。このようにして得たアプタマーをターゲットの確認や、医薬特に小分子医薬の開発のための指示物質として使用することも、本発明の範囲に含まれる。
【０１８９】
スピゲルマーの製造や生産も基本的に同様の原則に基づいている。スピゲルマーは、本発明の範囲内において、本発明に係る翻訳産物やこれをコードする核酸、翻訳産物相互作用パートナー、特にその天然相互作用パートナー及び／又はこれをコードする核酸に基づき、ターゲット分子として開発することができる。
【０１９０】
スピゲルマーの製造については、例えば、国際特許出願ＷＯ９８／０８８５６に記載されている。スピゲルマーはＬ−核酸であり、即ち、Ｌ−ヌクレオチドから構成されており、その実質的な特徴は、スピゲルマーが生物学的な系において非常に高い安定性を有していること、また、アプタマーと同程度に、ターゲット分子と特異的に相互作用する或いは結合することである。スピゲルマーの製造において用いられる手続は次の通りである。Ｄ−核酸の不均質な系を作成し、この不均質系をターゲット分子の光学対掌体と接触させる。本発明の場合、例えば、翻訳産物の天然のＬ−鏡像異性体に対するＤ−鏡像異性体と接触させ、ターゲット分子の光学対掌体と相互作用しなかったＤ−核酸を分離する。このようにして、ターゲット分子の光学対掌体と相互作用したＤ−核酸を決定し、必要に応じて分離し配列決定する。これらの配列はＤ−核酸に対しては事前に決定されており、これらと同一の配列を有するＬ−核酸を合成する。ここにおいて、アプタマー製造方法と同様に、これらのステップを何回も繰り返すことにより、適切な核酸、即ち、スピゲルマーを富化する或いは生産することもできる。これら核酸即ちスピゲルマーは、本発明の翻訳産物と結合するもの、ターゲット分子として使用した上述の化合物に応じた特に天然的な翻訳産物相互作用パートナーの内の一以上のものと結合するもの、若しくは翻訳産物をコードする核酸と結合するものである。
【０１９１】
本発明において使用できる機能的核酸の別の形は、所謂アプタザイムである。アプタザイムは、例えば、ピガノー（Piganeau）Ｎ．ら（２０００）、Angew. Chem. Int.、第３９版、Ｎｏ．２９、４３６９-４３７３ページに記載されている。ここではアプタマーの特定の形が含まれており、ターゲット分子、本発明の場合、本発明の翻訳産物やその相互作用パートナーと特異的に結合するアプタマー部分に加え、リボザイム部分も含むことができ、その結果としてアプタマー部分のターゲット分子に結合した後、リボザイム部分のアプタザイムが活性化され、アプタザイムのリボザイム部分の基質として機能する核酸の切断を生じることを特徴とする。リボザイム基質の配置に対応して、蛍光アクセプターに対する蛍光ドナーの空間配置の変化に起因する蛍光の変化をリボザイム基質等において観察することができる。このため、アプタザイムは、特に、翻訳産物やその相互作用パートナーに関するターゲット確認の範囲における適用に適していると共に、本発明に係る診断剤として適している。本明細書に記載したリボザイムに関して開示した範囲内においては、治療における使用においても同様なことが可能である。
【０１９２】
前述の各化合物群に共通して言えることであるが、これらは、各タンパク質やポリペプチド、即ち、翻訳産物、好ましくは本発明の翻訳産物或いはその相互作用パートナーと結合するか、またはこれらに対するものとして作られるのが好ましい。しかしながら、これらの化合物群、特に機能的核酸のターゲット分子が、前述の本発明の好ましいタンパク質やポリペプチドをコードする核酸、或いは本発明の核酸であることも本発明の範囲に含まれる。
【０１９３】
翻訳産物、好ましくは本発明の翻訳産物及び／又はその相互作用パートナー、特にこれらをコードする核酸や本発明の核酸を用いて作成することができる或いは開発することができる別の化合物群は、リボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉである。
【０１９４】
これら化合物群の全てに共通することは、これらが翻訳産物のレベル、即ちタンパク質（翻訳産物やその相互作用パートナー）のレベルではこれらの作用を発現せず、各タンパク質をコードする核酸、特にｍＲＮＡ或いは翻訳産物をコードするｍＲＮＡのレベルや翻訳産物の相互作用パートナーをコードするｍＲＮＡのレベルで発現するということである。対応するゲノムＤＮＡや対応するｃＤＮＡもまた、ターゲット分子として適している。
【０１９５】
リボザイムは、触媒活性を有する核酸である。この核酸は、好ましくはＲＮＡで構成されており、２個の領域部分からなる。第一の領域部分は触媒活性を担う部分であり、第二の部分はターゲット核酸と特異的な相互作用を担う部分である。ターゲット核酸とリボザイムの第二の部分の間に相互作用が起こると、この相互作用は通常は互いに実質的に相補的な塩基領域同士のハイブリダイゼーションにより起こるものであるが、リボザイムの触媒部分はターゲット核酸を分子内的に或いは分子間的に加水分解することができる。リボザイムの触媒作用がホスホジエステラーゼ活性の場合は、後者の方が好ましい。その結果、コードしている核酸の必要とあれば更なる分解が起こる。ここで、核酸レベルとタンパク質レベルの両方において、また細胞内と細胞外の両方において、ターゲット分子の力価を下げることができる。このようにして、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための治療用調製物が提供される。使用や構成原則が当業者に知られているリボザイムは、例えば、ドハーティ（Doherty）とドナ（Doudna）「リボザイムの構造及びメカニズム（Ribozyme structures and mechanisms）」、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２００１；３０：４５７-７５や、レーウィン（Lewin）とハウスワース（Hauswirth）「リボザイム遺伝子治療：分子医薬への適用（Ribozyme gene therapy：applications for molecular medicine）」、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、２００１、７：２２１-８）に記載されている。
【０１９６】
医薬組成物が医薬的に許容される担体に加えリボザイムを含むこと、即ち本発明のリボザイムを医薬として特に甲状腺の機能障害や過形成、腫瘍を治療するための医薬として使用することを目的として、リボザイムの構成を、リボザイムが本発明の各種核酸配列の内一以上の配列に対し特異的に作用するように、またこれによりリボザイムが細胞レベルにおける発現や翻訳を制御するようにすることも可能である。これは、治療的観点から見て特に重要であるが、診断的観点からも重要である。この場合、リボザイムは分子間触媒作用と分子内触媒作用の両方を示すため、本発明の核酸配列を改変して、これら配列の各種領域自体が、改変された領域のリボザイム活性により切断されるようにするということも可能である。当業者であれば本明細書で入手可能となった配列情報を用いて特定の治療を開発することも可能である。
【０１９７】
本発明の核酸配列自体と同様、リボザイムも特に有利であるが、このことは、例えば遺伝子治療によりリボザイムがエフェクター細胞に導入されるときだけではない。対応する改変を生体外で行い、この改変細胞を同種再移植や自己再移植のために利用できるようにすることも考えられる。リボザイムの製造及び使用については、リボザイム・プロトコル（フィリップＣ．ターナー編、ヒューマン・プレス、トトワ、ニューヨーク、１９９７）（Ribozyme Protocols (Phillip C. Turner, Ed., Humana Press, Totowa, NY, 1997）に開示されており、ここに引用する。このことは基本的に、本明細書に記述の各機能的核酸に適用される。
【０１９８】
本発明に係る医薬や診断剤の製造におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドの使用は、基本的に同様の作用機序に基づいている。
【０１９９】
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的な塩基があるために、典型的にはターゲットＲＮＡと、通常はｍＲＮＡとハイブリダイズし、これによりＲＮａｓｅＨを活性化する。ＲＮａｓｅＨは、ホスホジエステルやホスホロチオエートと結合したＤＮＡによっても活性化される。しかしながら、ホスホロジエステル結合ＤＮＡは細胞ヌクレアーゼにより急速に分解される（但しホスホロチオエート結合ＤＮＡは除く）。これら抵抗性を有する非天然ＤＮＡ誘導体は、ＲＮＡとハイブリダイズするとＲＮａｓｅＨを阻害しなくなる。言い換えると、アンチセンスポリヌクレオチドは、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッド複合体となったときのみ有効である。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば米国特許第５８４９９０２号や第５９８９９１２号等に記載されている。元来、アンチセンスオリゴヌクレオチドの基本概念は、あるＲＮＡに対して相補的な核酸を提供することである。言い換えると、翻訳産物やその相互作用パートナーの核酸配列、特にそれらのｍＲＮＡの核酸配列に関する知見に基づき、核酸、好ましくはｈｎＲＮＡやｍＲＮＡ等、コードする核酸の分解を導く適切なアンチセンスオリゴヌクレオチドを塩基相補性を用いて生産することが可能である。この分解を、発現系や活性系において定性的、定量的に検出することができる。
【０２００】
本発明における医薬や診断手段として同定、製造、使用できる他の化合物群は、所謂ＲＮＡｉである。ＲＮＡｉは、ＲＮＡ干渉を仲介する二本鎖のＲＮＡであり、通常２１〜２３個のヌクレオチドの長さである。この場合、２本のＲＮＡ鎖の内の一本は、分解される遺伝子或いは対応するｍＲＮＡの配列に対応する。言い換えると、翻訳産物及び／又はその相互作用パートナーをコードする核酸、特にｍＲＮＡに関する知見に基づき、二本鎖のＲＮＡを製造することができる。ここで、二本のＲＮＡ鎖の内の一方は、翻訳産物及び／又はその相互作用パートナーをコードする前記核酸と、好ましくはｍＲＮＡと本質的に相補的であり、このため対応するコードする核酸の分解が導かれ、これをもって各翻訳産物、即ちタンパク質の力価の低下が導かれる。ＲＮＡｉの医薬や診断手段としての生産や使用は当業者には知られており、例えば、国際特許出願ＷＯ００／４４８９５やＷＯ０１／７５１６４に記載されている。
【０２０１】
これまで述べた化合物群、即ちリボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉの効果的な機構を鑑み、本発明に係る翻訳産物、即ち、これらのポリペプチドやタンパク質、特にその天然相互作用パートナーに加え、これらを各々の場合に完全に或いは部分的にコードする各種核酸、特に対応するｍＲＮＡやｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを、直接或いはターゲット分子として、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬の製造や、上述の疾患や機能障害を診断するための診断手段或いは疾患や使用されている治療の経過をモニターするための診断手段の製造に用いることも本発明の範囲に含まれる。
【０２０２】
本発明に係る翻訳産物、これをコードする核酸、翻訳産物の相互作用パートナー、特に天然相互作用パートナー及び／又はこれらをコードする核酸を、ターゲット分子として、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を処置或いは治療するための医薬の製造や開発に、またこれらを診断するための剤の製造及び／又は開発のために使用する場合は、小分子のライブラリーを使用することもできる。またこの場合、ターゲット分子をライブラリーに接触させ、ライブラリー内の該分子に結合したメンバーを、必要な場合はライブラリーに含まれる他のメンバー或いはターゲット分子から分離し、任意ではあるが更に特徴付けを行ってもよい。ここでもまた、小分子の特徴付けは、当業者に知られている方法を用いて実施される。例えば、化合物を同定し、分子構造を決定する。ライブラリーに含まれるメンバーの数は、２個〜数十万個である。
【０２０３】
本明細書に開示した、本発明の治療手段や診断手段として使用できる各種化合物群に関連して、本発明の一様相においては、或る化合物群は、翻訳産物やその相互作用パートナーと直接結合し、または後者と相互作用する。しかしながら、前記各種群化合物は、特にペプチドや抗体、アンチカリン、アプタマー、アプタザイム、スピゲルマーが存在する場合に、翻訳産物と何らかの特異的相互作用をするため、翻訳産物の相互作用パートナーを阻害する、ということも本発明の範囲に含まれる。
【０２０４】
このような観点から、本明細書における翻訳産物の使用という表現は、一以上の翻訳産物相互作用パートナー、例えば、受容体や転写因子、翻訳因子等の使用を含む範囲であるとも理解されよう。従って、本明細書に記載した方法は、翻訳産物タンパク質やこれをコードする核酸に代えてその相互作用パートナーを各種選択方法やアッセイ、スクリーニング方法、製造方法に使用する範囲において変更される。
【０２０５】
本発明の範囲においては、翻訳産物の相互作用パートナー、特に本発明の翻訳産物の相互作用パートナー、また特に本発明の翻訳産物の天然相互作用パートナーは、前記翻訳産物が相互作用する分子や構造であることが理解されよう。この場合は特に、これらに含まれるものとして、正常な状態及び／又は病的な状態の生物学的な系においてタンパク質と相互作用する分子や構造が挙げられる。ＤＲＩＰの好適な相互作用パートナーとしてはＤＲ５（death receptor ５）が挙げられ、例えば次の文献に記載されている。ハイモウィッツ  Ｓ．Ｇ．、クリスティンガー  Ｈ．Ｗ．、フー  Ｇ．、ウルシュ  Ｍ．、オッコネル  Ｍ．、ケリー  Ｒ．Ｆ．、アシュケナージ  Ａ．、ドフォス  Ａ．Ｍ．、ＯＭＩＭ、「細胞死を引き起こすタンパク質、構造：細胞死受容体を有する複合体内のＡｐｏ２Ｌ／ＴＲＡＩＬの結晶構造」Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ．１９９９年１０月；４（４）：５６３-７１（Hymowitz S. G., Christinger H. W., Fuh G., Ultsch M., O'Connell M., Kelley R. F., Ashkenazi A., de Vos A. M., OMIM, Protein, Structure Triggering cell death: the crystal structure of Apo２L／TRAIL in a complex with death receptors. Mol Cell. １９９９ Oct； ４ （４）: ５６３−７１）、アシュケナージ  Ａ．、ディクシット  ＶＭ．関連論文「細胞死受容体及び囮受容体による、ヌクレオチド、タンパク質アポトーシス制御」Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１９９９年４月１（２）：２５５-６０、レビュー、（Ashkenazi A, Dixit VM. Related Articles, Nucleotide, Protein Apoptosis control by death and decoy receptors. Curr. Opin. Cell Biol. １９９９ April １ （２）:２５５−６０. Review）、ミットシアデス  Ｎ、ポウラキ  Ｖ、ミットシアデス  Ｃ．Ｓ．、コートラス  Ｄ．Ａ．、クローソス  Ｇ．Ｐ．関連論文「甲状腺疾患の病状におけるＦａｓＬ及びＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２Ｌにより誘導されるアポトーシス」Ｔｒｅｎｄｓ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．２００１年１１月；１２（９）：３８４-９０、レビュー（Mitsiades N, Poulaki V, Mitsiades C. S., Koutras D. A., Chrousos G. P. Related Articles, Apoptosis induced by FasL and TRAIL／Apo２L in the pathogenesis of thyroid diseases. Trends Endocrinol. Metab. ２００１ Nov； １２ （９）:３８４−９０. Review.）。
【０２０６】
甲状腺の機能障害や過形成、腫瘍、即ち本明細書に記述される疾病全体を診断及び／又は治療するための本発明のキットの構成に関して特筆すべき点は、このようなキットの厳密な構成、即ちキットに明らかに含まれなければならない要素は、当業者に知られていることであり、特に、本明細書に開示されている本発明の核酸配列やこれらの翻訳産物の上述の作用や利用性に関して用いた理由付けに照らせば明らかである。本発明に係るキットは、いかなる場合にも本発明に係る要素の内の少なくとも一個を含む。この要素は、本明細書で特徴付けられた、本発明に係る核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、リボザイム及び各種化合物群の内の少なくとも一種からなる群から選択され、特に、抗体、ペプチド、タンパク質、アンチカリン、小分子、アプタマー、スピゲルマー、リボザイム、アプタザイム、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉから選択される。これらは、本発明の各種核酸或いは本発明に係る翻訳産物やこれらの相互作用パートナー、特にこれらの天然相互作用パートナーやこれらをコードする核酸に特異的なものである。好ましくは、これらはそれぞれ本発明に係る定義におけるものである。本発明に係るキットに含まれる更なる要素（個々に或いは組合せとしてキットに含まれることもできる）は、緩衝液、陰性対照、陽性対照及び使用指示書からなる群から選択される。
【０２０７】
通常、キットに含まれる各化合物や構成要素は乾燥しているか、液状であり、好ましくは使用１回分の量に分けられている。このキットは、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍であることを判断するために好ましく使用できる。本発明の細胞の使用に関しては、この細胞は本発明の範囲内で、特に再移植用の細胞として、或いは対応する診断的或いは治療的な試みにおける陽性対照及び／又は陰性対照として使用することができる。
【０２０８】
本発明の方法は、甲状腺の機能障害、過形成及び／又は腫瘍（癌腫や甲状腺腫を含む）を検出するものであるが、本発明の方法において、甲状腺材料はｉｎ  ｓｉｔｕ、ｅｘ  ｖｉｖｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏのものとすることができる。ここで使用する「甲状腺材料」という概念は、特に、正常な及び／又は病的な状態にある甲状腺の材料、好ましくは甲状腺の細胞材料をいう。従って、甲状腺材料という概念には、機能障害を有する甲状腺から得られる材料、甲状腺過形成から得られる材料、癌腫や甲状腺腫を含む甲状腺の腫瘍から得られる材料も含まれる。機能障害、過形成及び／又は腫瘍が存在するか否かは、本発明において使用される剤が対象の甲状腺材料に及ぼす作用と、「正常な」甲状腺組織に及ぼす作用とを比較することにより決定される。
【０２０９】
本発明の方法の更なる実施形態は、当業者であれば本明細書に記載された開示に基づき得られるであろう。
【０２１０】
各種実施形態やこれらにより達成し得る各種利点に関する上の実施形態は、本発明の医薬、特に、甲状腺の機能障害、過形成及び／又は腫瘍を診断及び／又は治療及び／又は予防するための手段にも同様に適用され、該医薬や該手段は、本明細書に開示される本発明の配列、本発明のベクターと、本発明のポリペプチド、本発明の細胞、本発明のリボザイム及びこれらの使用という形態をとる。本発明に従い製造される化合物や、結合ペプチド、アンチカリン及び機能的核酸からなる群から選択される化合物についても同様である。これら化合物に共通のファクターは、これら化合物が、本発明の核酸配列又はこれらにコードされるポリペプチド、これらの相互作用パートナー又はこれらをコードする核酸に対するものである、即ち、これら化合物はこれらに対してターゲット分子として製造される或いは選択されるということである。これら医薬は、一以上のこれらの剤や化合物を成分とすることもできる。
【０２１１】
本発明の医薬組成物も同様である。この場合、医薬組成物は、前述の化合物の内の一個のみを含むものであることができ、これに任意の医薬的に許容される担体を加えて作られる。或いは、医薬組成物が医薬的に許容される担体に加え複数の前述の化合物を含むものであることも、本発明の範囲に含まれる。
【０２１２】
医薬的に許容される担体は、本明細書においては、当業者に知られている担体全てと理解されるべきであり、これらは通常、使用される形態に応じて選択される。医薬的に許容される担体としては、例えば、水、緩衝液、アルコール溶液等が挙げられる。
【０２１３】
プライマーを製造するための本発明のプロセスに関して注目されることは、これらのプライマーは、本発明の各種核酸配列又はこれらの一部を具体的に記述せしめうるものであるということである。
【０２１４】
本発明の核酸配列を提供する本発明のプロセスにおいては、本発明の各種核酸配列、それに対応する各種配列、或いはポリメラ−ゼ連鎖反応のためのプライマーとして本発明のプライマーを用いたそれらの相補的配列を、どのソースから得られるものであっても、それらの各種設計物として用いることができる。適切なプライマーの設計やポリメラ−ゼ連鎖反応の実施については、例えば「ＰＣＲ＆ＰＣＲ２：実用アプローチ（Ｍ．Ｊ．マクファーソン、Ｐ．クアーク、Ｇ．Ｒ．テイラー編、ＩＲＬプレス、オックスフォード、イギリス、１９９１年；及びＭ．Ｊ．マクファーソン、Ｂ．Ｄ．ヘイムス編、ＩＲＬプレス、オックスフォード、イギリス、１９９５年）（PCR & PCR 2: A practical approach （M. J. McPherson, P. Quirke and G. R. Taylor, Eds., IRL Press, Oxford, England 1991, & M. J. McPherson and B. D. Hames, Eds., IRL Press, Oxford, England 1995））」に記載されており、これをここに引用する。
【０２１５】
本発明の核酸（本発明の核酸配列を含む）は、特に本明細書に開示されるＤＲＩＰ遺伝子を含むが、本発明のＤＲＩＰや本発明の融合タンパク質をコードするための核酸という特定の形態をもＤＲＩＰと称する。
【０２１６】
核酸、即ち本発明に係る核酸配列は、特に、本明細書においては「配列番号〜」と共に示される核酸配列を含む次の核酸でもある。本明細書において「配列番号〜」と共に示される核酸配列を部分的或いは完全に含み、特に、５’末端及び／又は３’末端に更なるヌクレオチドを含む核酸、即ち核酸配列；本発明のＤＲＩＰ配列或いはＢＡＣ  ＲＰ１１  ３３９Ｈ１２或いはＲＰ１１  ２０４Ｄ１９から更なるヌクレオチドが補われた遺伝子の場合は、本明細書において「配列番号〜」と共に示される配列に加えて更なるヌクレオチドを含む核酸。前述のクローンの相対的な配置を図１２に示す。
【０２１７】
本発明の核酸の部分或いは断片そのものを本発明の核酸と称する及び／又は本発明の核酸として使用することも本発明の範囲内である。このことは特に、ＲＮＡｉ（ｓｉＲＮＡとも称される）やリボザイム、アプタザイム（aptazyme）、アンチセンス分子に基づき医薬を製造或いは生成するための本発明の核酸の使用に適用される。このことは、本発明の核酸（特に配列プロトコルに記載された配列）と実質的に同一或いは相補的である前述の化合物群の構築原理の基礎となるものである。本発明の核酸と実質的に同一或いは相補的である領域の長さは、好ましくは１５〜４９、更に好ましくは１５〜３１、最も好ましくは２１〜２３個のヌクレオチドである。従って、本発明に係る核酸は、本発明に係る核酸の部分或いは断片でもあり、特に、配列プロトコルに記載された或いは含まれた、１５〜４９、好ましくは１５〜３０、最も好ましくは２１〜２３個のヌクレオチドを含む核酸でもある。このような配列、即ち核酸分子の開始点は、各核酸即ち核酸配列上の任意の位置であることができるが、好ましくは、配列の最末端に存在するヌクレオチドの数が十分であり、所望の長さ領域に必要とされるヌクレオチドが提供される位置である。
【０２１８】
本明細書で用いられるように、サイズオーダーの範囲Ｘ〜Ｙは、長さＸ、Ｙ及びこれらの間の全ての数の長さを示す。例えば、長さ領域が２１〜２３であるヌクレオチドは、長さが２１、２２及び２３個のヌクレオチドを含む。
【０２１９】
更に本発明の核酸は、本明細書に開示されるプライマーでもあり、特に、本明細書の配列に対して個別化（individualised）された、或いは個別化（individualised）できる別の断片でもある。
【０２２０】
更に本発明の核酸は、ポリペプチドをコードする核酸を含み、このポリペプチドは本明細書において一以上の「配列番号〜」で示される配列（特に配列番号２、１０、１７及び／又は５〜８）を有する或いは含む。最後に、本発明の核酸は、本明細書に開示される一以上の本発明の核酸（特に、配列番号１、３、４、９、１１〜１６で示される核酸）の一以上のエクソン及び／又は一以上のイントロンを含むものでもある。
【０２２１】
本発明のポリペプチド（本明細書においては短くポリペプチドとも称される）は、特に、一以上の本発明の核酸或いはそれらの断片の翻訳産物である。同時に、この翻訳産物は完全長のもの或いは短縮化されたものとして存在できる。一般に、これらの翻訳産物は本明細書においては、数に関わらず翻訳産物或いは本発明の翻訳産物と称される。翻訳産物、即ち本発明の趣旨においてはポリペプチドは、特に、細胞系の細胞外に存在するドメインのようなドメイン構造の部分に対応するポリペプチドの部分である。このことは、本発明に従い先の記述のように完全長のもの或いは短縮化されたものとして同様に用いることができる融合タンパク質に対しても適用される。
【０２２２】
本発明の核酸、特に本発明のＤＲＩＰのための本発明の核酸は、従来技術において既に断片的には記述されているが、次の核酸配列によって特徴付け或いは表すことができる。２ｐ２１−２２のゲノム配列、ＢＡＣ  ＲＰ１１  ３３９Ｈ１２−（ＡＣ０１０８８３）から開始され、ＢＡＣ  ＲＰ１１  １８３Ｆ１５（ＡＣ０９２８３８）或いはＢＡＣＲＰ１１  １０６９Ｅ２４を経由し、ＢＡＣＲｐｌｌ  ２０４Ｄ１９（ＡＣ９２６１５）の最後のｂｐで終了。これらの配列は、アクセス番号（ＧｅｎＢａｎｋデータバンクの受託番号）ＡＣ０１０８８３（ＲＰ１１  ３３９Ｈ１２）、ＡＣ０９２８３８（ＲＰ１１  １８３Ｆ１５）、ＡＣ９２６１５（Ｒｐｌｌ２０４Ｄ  １９）と共に公開されている。このゲノム配列の長さは５０６２９５塩基対である。
【０２２３】
本明細書に開示される配列はヒト配列を含み、詳細を次に示す。
配列番号１    ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉｂスプライス変異体ｍＲＮＡのｍＲＮＡ
配列番号２    ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉｂスプライス変異体、コード配列（ＣＤＳ）、ひいては第１の融合タンパク質のアミノ酸配列、ここでそのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む
配列番号３    ＦＵＳ  Ｉ要素が染色体３上に置かれているゲノム配列範囲
配列番号４    ＦＵＳ  ＩＩ要素が染色体７上に置かれているゲノム配列範囲
配列番号５    ＤＲＩＰのコード配列（ＣＤＳ）、ひいてはアミノ酸配列、ＤＲＩＰはエクソン１〜３８を含む
配列番号６    コード配列（ＣＤＳ）、ひいては第１の融合タンパク質ＦＵＳ  Ｉのアミノ酸配列、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む
配列番号７    コード配列（ＣＤＳ）、ひいては第１の融合タンパク質（ＦＵＳＩａ）のスプライス変異体のアミノ酸配列、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む
配列番号８    コード配列（ＣＤＳ）、ひいては第２の融合タンパク質（ＦＵＳ  ＩＩ）のアミノ酸配列、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む
配列番号９    甲状腺腫瘍からのＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩａ融合遺伝子のスプライス変異体ｍＲＮＡ
配列番号１０    ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩａタンパク質のスプライス変異体のアミノ酸配列、配列番号１〜２及び６〜１０で表されるＤＲＩＰに関しては、ＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含み、配列番号５のＤＲＩＰ部分はエクソン１〜３８を含む。
【０２２４】
更に、
配列番号１１    エクソン１〜３８を含むＤＲＩＰ−ｍＲＮＡ配列をここに示す
配列番号１２    エクソン１〜３８を含むＤＲＩＰのゲノム配列
配列番号１３    ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ遺伝子のｍＲＮＡ配列、この配列はＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８、また同様に染色体３ｐ２５範囲由来のＦＵＳ  ＩのエクソンＩ、Ｉａ、及びＩＩを含む
配列番号１４    ＤＲＩＰ−ＦＵＳＩ遺伝子のスプライス変異体のｍＲＮＡ配列、この配列はＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８、また同様に染色体３ｐ２５範囲由来のＦＵＳ  ＩのエクソンＩＩを含む
配列番号１５    ＤＲＩＰ−ＦＵＳＩＩ遺伝子のＦＵＳＩ遺伝子ｍＲＮＡ配列、この配列はＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と染色体７ｐ  １５範囲由来のＦＵＳ  ＩＩのエクソンＡとを含む
配列番号１６    ＤＲＩＰスプライス変異体のＦＵＳＩ遺伝子ｍＲＮＡ配列、この配列はＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２６、２９〜３８を含む
配列番号１７    ＦＵＳＩ遺伝子ＤＲＩＰスプライス変異体のＦＵＳＩ遺伝子コード配列（ＣＤＳ）、従ってＦＵＳＩ遺伝子アミノ酸配列、ＤＲＩＰはエクソン１〜２６、２９〜３８を含む
【０２２５】
本明細書に開示される一以上の本発明のポリペプチド、タンパク質、核酸、或いはこれらから導かれる化合物の使用は本発明の範囲に含まれ、特に、スクリ−ニング法の範囲内に含まれる本明細書に開示される小分子や結合ペプチド、抗体、アンチカリン、機能的核酸等の化合物の使用も本発明の範囲に含まれる。スクリ−ニング法においては、後者が個別に、組合わせて、或いは断片として用いられるが、上述の他の分子或いは化合物各々の場合についても基本的には開示される。
【０２２６】
以下、本発明を図面、実施例、配列プロトコルに従い説明する。これにより、本発明の更なる特徴や各種実施形態、利点が明らかになるであろう。
【０２２７】
配列プロトコルに記載の配列に加え、それらに関連するものとして次を開示する。
【０２２８】
配列番号１
配列番号１は融合遺伝子ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉｂ（スプライス変異体）を表す；ｔ（２；２０；３）（ｐ２１；ｑｌ  １．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０において検出。
【０２２９】
ｍＲＮＡ配列位置における次の各位置は、表に記載のエクソンに対応する。
【０２３０】
【表４−１】
2006510344.tif 000011
【表４−２】
2006510344.tif 000012
【０２３１】
配列番号３
配列番号３は染色体３ｐ２５のゲノム配列を表すが、これは配列番号１３と１４による核酸内のＤＲＩＰ配列に隣接して含まれている。この場合、ゲノム配列は染色体３ｐ２５のエクソンＩ及びエクソンＩＩの両者を含み、エクソンＩは配列番号３の８１１７４番目〜８１２９１番目のヌクレオチド位置までを占め、エクソンＩＩは配列番号３の８５６１６番目〜８５８７３番目のヌクレオチド位置を占める。ゲノム構造はＢＡＣクローンＲＰ１１−１６７Ｍ２２から選ばれた。
【０２３２】
配列番号４
配列番号４は、第２融合遺伝子の一部である染色体７ｐ１５のＦＵＳ  ＩＩエクソンＡとＡ１のゲノム配列範囲を表す。ゲノム配列はＢＡＣクローンＲＰ１１１−３７０Ｌ１６から得られた。エクソンＡは配列番号４によるゲノム配列の７６８６番目〜８９４９番目の位置に対応する。
【０２３３】
配列番号５
配列番号５はＤＲＩＰのコード配列（ＣＤＳ）、ひいては対応するペプチドを表し、ＤＲＩＰはエクソン１〜３８を含む。この配列は合計で１９５３個のアミノ酸を含む。
【０２３４】
配列番号６
配列番号６はコード配列（ｃｄｓ）、ひいては第１の融合タンパク質ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉのアミノ酸配列を表し、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む。この配列は合計で１３８７個のアミノ酸を含む。
【０２３５】
配列番号７
配列番号７はコード配列（ＣＤＳ）、ひいては第１の融合タンパク質のスプライス変異体のアミノ酸配列を表し、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む。この配列は合計で１３５３個のアミノ酸を含む。
【０２３６】
配列番号８
配列番号８はコード配列（ＣＤＳ）、ひいては第２の融合タンパク質のアミノ酸配列を表し、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む。この配列は合計で１３５３個のアミノ酸を含む。
【０２３７】
配列番号９
配列番号９は融合遺伝子ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩａ（スプライス変異体）を表す；ｔ（２；７）（ｐ２１；ｐl５）を有する細胞系Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０において検出。配列の長さは５５８０ｂｐである。
【０２３８】
エクソン（ここでは特徴）は次のように局在化している。
【表５−１】
2006510344.tif 000013
【表５−２】
2006510344.tif 000014
【０２３９】
配列番号１０
配列番号１０はコード配列（ＣＤＳ）、ひいては第２の融合タンパク質ＤＲＩＰ−ＦＵＳＩＩａのスプライス変異体のアミノ酸配列を表し、そのＤＲＩＰ部分はエクソン１〜２８を含む。この配列は合計で１３６６個のアミノ酸を含む。
【０２４０】
配列番号１１
配列番号１１はエクソン１〜３８を含むＤＲＩＰのｍＲＮＡを表す。ｍＲＮＡの長さは６０９０ｂｐである。オープンｉｎ−ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）は１３３番目から始まり５９９４番目の位置で終了する。ｍＲＮＡの異なる場所でハイブリダイズする次のプライマーをｍＲＮＡの検出に用いることができる。
【０２４１】
プライマー名  配列
DRIPVRU1      5'ATGGGAGAACCAAATCGTCATCCAAGCATG 3' 
DRIPVRL2      5'TCAACATGCCGCTTCTGTTCTTGGAAGAGTTAA 3' 
DRIPVRU3      5'TTTCCGGCAAAACCACATTCATGGGACACT 3' 
DRIPVRL4      5'TACTGGGGCAGGCCTGGCACCTTGAAG 3' 
DRIPVRU5      5'TGGCCGTCGTTGAAGTCCTCACCAGT 3' 
DRIPVRL6      5'GCCAGCCGGACTTTGAGAGGAGACAGAAG 3' 
DRIPVRU9      5'GCTTCAGGCAGCAGCAGCATTTCCA 3' 
DRIPVRL10     5'ATTGGGATGAGGCCTTCAGGGGATGA 3' 
DRIPVRL10     5'ATTGGGATGAGGCCTTCAGGGGATGA 3' 
DRIPVU11      5'CCTGCCCCAGTACCTCCAGAGCCTCAC 3' 
DRIPVL12      5'GAACTCCTTTGGGGTCAGATGGACACAGTG 3' 
DRIPVU13      5'ACTGCATGGACCCTGGTGAGTGGCT 3' 
DRIPVL14      5'GCATGTGGTGGGAAATGACTTTGGAAG 3' 
DRIPVU15      5'CTCAGCACAAGCACCAAACCATACGACTGT 3' 
DRIPVU16      5'AGAGTAAATCCAAACGTGAACCAGAGAATGAGT 3'
DRIPVRU17     5'GCCTGGGAGAAAATATTATTCCTTATGTTG 3' 
DRIPVU18      5'GTCTGGGCAGTGCGAAATTCATCCAC 3' 
DRIPVU19      5'AGACTCTACGCTTCCCCGATGGATGGT 3' 
DRIPL20       5'CAGGCGCGTATCTCTGAACAATGCTCTAAG 3' 
DRIPVL21      5'GAAGGGTGCTGTTTGGTTAACTCATTCTC 3' 
DRIPVU22      5'GCGAATAGCTAGAGCTCATGGACATCT 3' 
DRIPVU23      5'ATTTTTACCAAGGTTTTAAGCGATGATGA 3' 
DRIPVL24      5'AGTGAGCCGGTGCATTTGGAGAAG 3' 
DRIPVU25      5'CTCAGACGCCGACGTGCACGAGTGACTA 3' 
DRIPVL26      5'ACGAGAAGTAAAACGGTGCATAGCCTCAGGT 3' 
DRIPVU27      5'GGATATCTTAGCAGGCATTTATCTTTCTTTGAGTCT 3' 
DRIPVL28      5'ATATTTTGCCATATGGGAGAATCGGAAGTC 3' 
FOSTSWI14187      5'ATTTATGTTCAACATGTTTCCTGC 3' 
RVSTSWI14187      5'TGCAGAATCGAGGCAGTTAA 3' 
【０２４２】
配列番号１２
配列番号１２は染色体２ｐ２１−２２上のＤＲＩＰ遺伝子のゲノム配列を表す。
【０２４３】
エクソン１〜３８を含むＤＲＩＰのゲノムＤＮＡの長さは３６５１８６ｂｐである。
【０２４４】
次のエクソン位置をゲノムＤＮＡ内で特定することができる。
【０２４５】
【表６−１】
2006510344.tif 000015
【表６−２】
2006510344.tif 000016
【０２４６】
ｍＲＮＡの異なる場所でハイブリダイズする次のプライマーをｍＲＮＡの検出に用いることができる。
【０２４７】
プライマー名  配列
DRIPVRU1      5'ATGGGAGAACCAAATCGTCATCCAAGCATG 3' 
DRIPVRL2      5'TCAACATGCCGCTTCTGTTCTTGGAAGAGTTAA 3' 
DRIPVRU3      5'TTTCCGGCAAAACCACATTCATGGGACACT 3' 
DRIPVRL4      5'TACTGGGGCAGGCCTGGCACCTTGAAG 3' 
DRIPVRU5      5'TGGCCGTCGTTGAAGTCCTCACCAGT 3' 
DRIPVRL6      5'GCCAGCCGGACTTTGAGAGGAGACAGAAG 3' 
DRIPVRU7      5'CTGGCAAATTCCATGGTTCTGTCTTGAAGTGA 3'
DRIPVRL8      5'CAATGGAACCAGAACATGAAGCCAAGCAGTCT 3'
DRIPVRU9      5'GCTTCAGGCAGCAGCAGCATTTCCA 3' 
DRIPVRL10     5'ATTGGGATGAGGCCTTCAGGGGATGA 3' 
DRIPVU11      5'CCTGCCCCAGTACCTCCAGAGCCTCAC 3' 
DRIPVL12      5'GAACTCCTTTGGGGTCAGATGGACACAGTG 3' 
DRIPVU13      5'ACTGCATGGACCCTGGTGAGTGGCT 3' 
DRIPVL14      5'GCATGTGGTGGGAAATGACTTTGGAAG 3' 
DRIPVU15      5'CTCAGCACAAGCACCAAACCATACGACTGT 3' 
DRIPVU16      5'AGAGTAAATCCAAACGTGAACCAGAGAATGAGT 3' 
DRIPVRU17     5'GCCTGGGAGAAAATATTATTCCTTATGTTG 3' 
DRIPVU18      5'GTCTGGGCAGTGCGAAATTCATCCAC 3' 
DRIPVU19      5'AGACTCTACGCTTCCCCGATGGATGGT 3' 
DRIPL20       5'CAGGCGCGTATCTCTGAACAATGCTCTAAG 3' 
DRIPVL21      5'GAAGGGTGCTGTTTGGTTAACTCATTCTC 3' 
DRIPVU22      5'GCGAATAGCTAGAGCTCATGGACATCT 3' 
DRIPVU23      5'ATTTTTACCAAGGTTTTAAGCGATGATGA 3' 
DRIPVL24      5'AGTGAGCCGGTGCATTTGGAGAAG 3' 
DRIPVU25      5'CTCAGACGCCGACGTGCACGAGTGACTA 3' 
DRIPVL26      5'ACGAGAAGTAAAACGGTGCATAGCCTCAGGT 3' 
DRIPVU27      5'GGATATCTTAGCAGGCATTTATCTTTCTTTGAGTCT 3' 
DRIPVL28      5'ATATTTTGCCATATGGGAGAATCGGAAGTC 3' 
DRIPVU29      5'TAGCATCCTGGACTAATTCAGCCATACAAG 3' 
DRIPVU30      5'GACGGTGGAGCAGGTAAAAGAAATAGG 3' 
DRIPVL31      5'GCAGCTGGGGAGTGTGGACAAC 3'
DRTPVU32      5'TAATTCATCAGCATTGCCAAGTAAGGATAG 3' 
DRIPVL33      5'GGACATCAAA.AGGAGCTTCTCTACCAC 3' 
DRIPVU34      5'AGTGGAGAGCGGGAGACGAATG 3'
DRIPVL35      5'AAGAATAGGATGGGGGTTGGTGAG 3' 
DRIPVU36      5'AGCCTAACGGACAGCCTGAATGGGA 3' 
FOSTSWI14187      5'ATTTATGTTCAACATGTTTCCTGC 3' 
RVSTSWI14187      5'TGCAGAATCGAGGCAGTTAA 3'
【０２４８】
エクソン１〜３８の配列は配列番号１１から得ることができる。
【０２４９】
配列番号１３
配列番号１３はＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ遺伝子のｍＲＮＡ配列を含み、ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ遺伝子はＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と染色体３ｐ２５のエクソンＩ、Ｉａ、及びＩＩを含む。
【０２５０】
ｍＲＮＡの全長は４５５８塩基である。ｍＲＮＡのＤＲＩＰに由来する部分のエクソン１〜２８の配置は、ＤＲＩＰ内でのエクソン１〜２８の配置に対応し、配列番号１１及び１２にも示されている。染色体３ｐ２５のエクソンＩは配列番号１３による配列のヌクレオチド４１９１..４３０８を含み、染色体３ｐ２５のエクソンIIは配列番号１３による配列のヌクレオチド４３０９..４５６６を含む。融合遺伝子ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉは、ｔ（２；２０；３）（ｐ２１；ｑｌｌ．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０において検出された。次のプライマーが配列番号１３による核酸の検出に用いられた。
【０２５１】
プライマー  配列
DRIPVRU1    5'ATGGGAGAACCAAATCGTCATCCAAGCATG 3' 
DRIPVRU9    5'GCTTCAGGCAGCAGCAGCATTTCCA 3' 
DRIPVRL10   5'ATTGGGATGAGGCCTTCAGGGGATGA 3' 
DRIPVU15    5'CTCAGCACAAGCACCAAACCATACGACTGT 3' 
DRIPVU16    5'AGAGTAAATCCAAACGTGAACCAGAGAATGAGT 3'
DRIPVRU17   5'GCCTGGGAGAAAATATTATTCCTTATGTTG 3' 
DRIPVU18    5'GTCTGGGCAGTGCGAAATTCATCCAC 3' 
DRIPVU19    5'AGACTCTACGCTTCCCCGATGGATGGT 3' 
DRIPL20     5'CAGGCGCGTATCTCTGAACAATGCTCTAAG 3' 
DRIPVL21    5'GAAGGGTGCTGTTTGGTTAACTCATTCTC 3' 
DRIPVU22    5'GCGAATAGCTAGAGCTCATGGACATCT 3' 
DRIPVU23    5'ATTTTTACCAAGGTTTTAAGCGATGATGA 3' 
DRIPVL24    5'AGTGAGCCGGTGCATTTGGAGAAG 3' 
DRIPVU25    5'CTCAGACGCCGACGTGCACGAGTGACTA 3' 
DRIPVL26    5'ACGAGAAGTAAAACGGTGCATAGCCTCAGGT 3' 
DRIPVU27    5'GGATATCTTAGCAGGCATTTATCTTTCTTTGAGTCT 3' 
DRIPVL28    5'ATATTTTGCCATATGGGAGAATCGGAAGTC 3'
FUSVL01     5'TGCTTTGGGAGCCAGGTCACTGAGTTACTAC 
FUSVL02     5'ACTGCTTTGGGAGCCAGGTCACTGAGT 
FUSVL03     5'TCCAGGGAAATTCACTGCTTTGGGAGCCA
【０２５２】
配列番号１４
配列番号１４はＤＲＩＰ−ＦＵＳＩ遺伝子のスプライス変異体のｍＲＮＡ配列を示し、ｔ（２；２０；３）（ｐ２１；ｑｌｌ．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０において検出された。この配列は、染色体３ｐ２５のｍＲＮＡ配列の４１９１番目〜４４４８番目の位置と共にＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８とエクソンＩＩとを含む。このスプライス変異体は、配列番号１３に関して記載したものと同一の細胞系から得られた。この場合、ｍＲＮＡの長さは４４４８塩基である。配列番号１３及び１４による部分の核酸のゲノム配列は、ＤＲＩＰによって各融合遺伝子に与えられたものであり、配列番号１２に対して開示された範囲に対応する。
【０２５３】
配列番号１５
配列番号１５は第２の融合遺伝子（本明細書においてはＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩとも表示される）のｍＲＮＡ配列を示し、まずＤＲＩＰ遺伝子エクソン１〜２８を含み、次いで＃７ｐｌ５のエクソンＡを含む。ｍＲＮＡの長さは５４５４塩基であり、最初の４１９０塩基はＤＲＩＰのｍＲＮＡの最初の塩基に対応し、塩基４１９１〜５４５４は＃７ｐｌ５のエクソンＡに対応する。配列番号１３に関して記載されたように、対応するプライマーはＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８の検出のために好適である。次のプライマーを、次の配列番号１６のヌクレオチド位置において＃７ｐ１５に属する配列部分の検出のために用いることができる。
【０２５４】
プライマー名  配列
FUSIIL01      5'GGTAGCGGGAGCAATCACAAAACTGTAA 
FUSIIL02      5'CTCTTCTTTTGATAGGACAGCCCTTGTTCTGA 
FUSIIL03      5'GACCGCTTCTTGCAGAGGCTGAGAGTC 
【０２５５】
配列番号１６
配列番号１６はＤＲＩＰスプライス変異体のｍＲＮＡ配列を示す。オープンｉｎ−ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）は１３３番目の位置から開始され、５７７２番目の位置で終了する。
【０２５６】
後に記載される「図面の簡単な説明」を補うものとして、次に各々の図面に関して説明する。
【０２５７】
図１は、染色体７（より正確には＃７ｐｌ５）におけるブレ−クポイント領域のゲノム位置の概略図である。このブレ−クポイントは、染色体７に由来する融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの該当部分を提供するために重要である。この結果は細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０において決定された。このブレ−クポイント領域の長さはテロメアによっては規定されない。ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩ内のエクソンＡは、ＢＡＣクローンＲＰ  １１−３７９Ｌ１６（ＡＣ  ０７９７８０）から得ることができる。エクソンＡ及びＡ１は、図１ａ）に、ＢＡＣクローンに対して拡大したスケールで示されている。
【０２５８】
図２は、染色体３（より正確には＃３ｐ２５）におけるブレ−クポイント領域のゲノム位置の概略図である。このブレ−クポイントは染色体３に由来する融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉの該当部分を提供するために重要である。この結果は細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０において決定された。このブレ−クポイント領域の長さはテロメアによっては規定されない。融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉに含まれる染色体３のエクソン１、Ｉａ、及びＩＩは、ＢＡＣクローンＲＰ  １１−１６７Ｍ２２（ＡＣ０９３１７４）及びＲＰ１１−３３５Ｉ１９（ＡＣ０９１４９２）から得ることができる。エクソンＩ、Ｉａ、及びＩＩは、図２ａ)にＢＡＣクローンに対して拡大したスケールで示されている。
【０２５９】
図３は、融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉを有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０におけるｄｅｒ（２）上のブレ−クポイント領域のゲノム位置の概略図である。図３ａ）はｄｅｒ（２）上の染色体セクションの説明を示し、また同時に図３ｂ）はＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉのゲノム構造を示すが、ここでエクソンＩ（Ｅｘ  Ｉ）、エクソンＩａ、及びエクソンＩＩ（Ｅｘ  ＩＩ）は３’末端にあり、拡大スケールで表されている。図３ｃ）に示すように、エクソンＩ（＃３ｐ２５）とエクソン２８（＃２ｐ２１）との間に位置するブレ−クポイントのサイズは規定されておらず、従ってＢＡＣクローンに隣接する長さの詳細は得られない。ＢＡＣクローンはＢＡＣライブラリーＲＰ１１から得られ、識別番号と遺伝子バンクアクセス番号によって識別される。
【０２６０】
図４は、融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩを有する細胞系Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０におけるｄｅｒ（２）上のブレ−クポイント領域のゲノム位置の概略図である。図２ａ）はｄｅｒ（２）上の染色体セクションの説明を示し、また同時に図２ｂ）はＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩのゲノム構造を示すが、ここでエクソンＡ（Ｅｘ  Ａ）、及びエクソンＡＩ（ＥｘＡ１）は３’末端にあり、拡大スケールで表されている。図４ｃ）に示すように、エクソンＡ（＃７ｐ１５）或いはエクソンＡＩとエクソン２８（＃２ｐ２１）との間に位置するブレ−クポイントのサイズは規定されておらず、従ってＢＡＣクローンに隣接する長さの詳細は得られない。ＢＡＣクローンはＢＡＣライブラリーＲＰ１１から得られ、識別番号と遺伝子バンクアクセス番号によって識別される。
【０２６１】
図５に、標準的な方法で産生された、転座ｔ（２；７）（ｐ２１；ｐｌ５）を有する原発性腫瘍Ｓ５３３のカリオグラムを示す。転座は矢印で特徴付けられている。
【０２６２】
図６に、標準的な方法によって初代培養Ｓ５３３から産生された細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０のカリオグラムを示す。原発性腫瘍において確認された転座は、原発性腫瘍から樹立された細胞系においてもそのまま残っていることが分かる。
【０２６３】
図８に、細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０における、融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩを導くブレークポイントの検出の結果を示す。更に、この場合、細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０に対してＢＡＣクローンＲＰ  １１−３３９Ｈ１２とＲＰ  １１−２０４  Ｄ１９を用いた所謂２重ＦＩＳＨが行われる。結果を右図に示す。同時に、染色体のバンドパターンのＧＴＧ染色も行った。両図においてブレークポイントを矢印で示すように、２重ＦＩＳＨの結果はＧＴＧ染色の結果と一致する。
【０２６４】
図９に細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０のカリオグラムとＦＩＳＨ結果を示す。カリオグラムは当業者には知られた標準的な方法によって作成され、ＦＩＳＨは標準的なプロセスによって行った。図９ａ）に、ギムザ染色核型の一部と甲状腺腺腫細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０の適切なイデオグラムを示す。この細胞系は、転座ｔ（２；２０；３）（ｐ２１；ｑ１１．２；ｐ２５）を示す。各々の場合について、正常な状態を左に示し、誘導された染色体２、２０、及び３をその右に示す。図９ｂ）は、ギムザ染色後の転座ｔ（２；２０；３）（ｐ２１；ｑ１１．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０のメタフェーズを示す。染色体２、ｄｅｒ（２）、及びｄｅｒ（２０）を矢印で示す。図９ｃ）は、ＢＡＣ  １０６９Ｅ２４とのＦＩＳＨによる、同一のメタフェーズを示し、ハイブリダイゼーションシグナルは染色体２、ｄｅｒ（２）及びｄｅｒ（２０）に存在し、矢印で示されている。
【０２６５】
図１０はＲＴ−ＰＣＲの結果を示す。ここで第１の融合タンパク質ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉの融合転写は細胞系Ｓ３２５から得られ、第２の融合タンパク質ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの融合転写は細胞系Ｓ５３３から得られた。矢印は各転写の位置を示し、ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  １の場合は３種のスプライス変異体が得られ、ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの場合は２種のスプライス変異体が得られた。Ｍの印を付けたトレースは参照トレースであり、各種長さの標準試料を含む。
【０２６６】
図１１は、ＤＲＩＰ−特異的プローブを用いたノーザンブロット分析の結果を示す。図に記された各種組織から採取されたＲＮＡを表面に塗布し、ＤＲＩＰ−特異的プローブと共にハイブリダイズした。プローブは８８０ｐｂの長さを有し、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン２５〜３２に由来する。用いられたプローブはプライマーＤＲＩＰＶＲＵ１７／ＶＲＬ４に対応した。
【０２６７】
図１２は、２ｐ２１−２２に変化を有する各種良性甲状腺腫瘍及び過形成のブレ−クポイントクラスターに対するＤＲＩＰのゲノム位置を示す。ＤＲＩＰのゲノム配置は、次のオーバーラッピングＢＡＣクローン、３３９Ｈ１２（ＡＣ  ０１０８８３）、１８３Ｆ１５（ＡＣ  ０９２８３８）、１０６９Ｅ２４（ＡＱ６９４３８５；ＡＱ  ７０３７５６）、及び２０４Ｄ１９（ＡＣ  ０９２６１５）によって表すことができる。細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０及びＳ５３３／ＴＳＶ４０（本明細書においてはＳ５３３とも表示される）の転座ブレークがイントロン２８で起こっている。この領域におけるブレークは、融合タンパク質ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ及びＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの両者に生じている。
【０２６８】
図１３は、ＤＲＩＰ−ｍＲＮＡの概略図である。このＤＲＩＰ−ｍＲＮＡは合計６０９０ｂｐ（全３８エクソンを含む）を含み、そこから生じるオープンｉｎ−ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）は５８６２ｂｐの長さを有する。ＯＲＦは、エクソン２で開始され、３’末端方向にＤＲＩＰ遺伝子のエクソン３８まで伸長している。
【０２６９】
また、エクソン２７と２８が除去された、ＤＲＩＰ遺伝子のスプライス変異体も図１３に示す。またこのＤＲＩＰ遺伝子の変異体は本発明の核酸に相当し、或いはそれによりコードされるペプチドは本発明のペプチドに相当する。このスプライス変異体のＯＲＦは合計で５６４０ｂｐを含み、同様にエクソン２で開始されエクソン３８まで伸長している。
【０２７０】
図１４は、融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉの３種の形の概略図である。第１の形は、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と、染色体３のバンド２５（本明細書においては＃３ｐ２５、或いは染色体３ｐ２５とも表示される）のエクソンＩ及びＩＩとを含む。この形の長さは４５６６ｂｐである。
【０２７１】
ＯＲＦはエクソン２で開始され、＃３ｐ２５のエクソンＩまで伸長している。ＯＲＦ自身は、１３８８個のアミノ酸ラジカルにより合計４１６４ｂｐで形成される。
【０２７２】
第１の融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの第２の形は、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８を同様に含むが、＃３ｐ２５のエクソンＩＩのみを含む。この形の長さは４４４８ｂｐであり、ＯＲＦは同様にエクソン２で開始され、エクソンＩＩまで伸長している。このＯＲＦは、１３５４個のアミノ酸ラジカルによる４０６２ｂｐの長さを有する。
【０２７３】
第３の形は、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と、染色体３のバンド２５（本明細書においては３ｐ２５、或いは染色体３ｐ２５とも表示される）のエクソンＩ、Ｉａ、及びＩＩとを含む。
【０２７４】
この形の長さは４７３１ｂｐである。ＯＲＦはエクソン２で開始され、＃３ｐ２５のエクソンＩまで伸長している。ＯＲＦ自身は、１３８８個のアミノ酸ラジカルにより合計４１６４ｂｐで形成される。
【０２７５】
図１５は、細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０に見出される第２の融合遺伝子ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの概略図である。第１の融合遺伝子転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩは全体が５４５４ｂｐを含み、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と、融合転写の３’末端にある染色体７のバンドｐ１５のエクソンＡとにより形成される。ＯＲＦはエクソン２で開始され、エクソンＡ内の一部にまで伸長している。ＯＲＦは１３５４個のアミノ酸ラジカルによる合計で４０６２ｂｐを含む。
【０２７６】
スプライス変異体ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩａは全体が５５８０ｂｐを含み、ＤＲＩＰ遺伝子のエクソン１〜２８と、融合転写の３’末端にある染色体７のバンドｐ１５のエクソンＡＩ及びＡとにより形成される。ＯＲＦはエクソン２で開始され、エクソンＡ１内の一部にまで伸長している。ＯＲＦは１３６７個のアミノ酸ラジカルによる合計で４１０１ｂｐを含む。
【０２７７】
特段の明記のない限り、本明細書に記載の配列はヒト配列であり、単離された配列であるのが好ましく、単離されたヒト配列であるのが好ましい。
【０２７８】
本明細書に開示された配列は配列プロトコルにおいて再現されたものであって、その記述の重要な部分である。
【０２７９】
本発明を実施例により以下、詳細に説明する。これにより、本発明の更なる特徴や各種実施形態、利点が図面や配列プロトコルから明らかになるであろう。
【実施例１】
【０２８０】
実施例１：
２ｐ２１−異常を伴う甲状腺腺腫の分子遺伝学的検討
染色体領域２ｐ２１に関連した構造的異常は、良性甲状腺腫瘍の場合、細胞遺伝学的サブグループの特徴を示す。このブレ−クポイントを特定するために、２ｐ２１転座を有する良性甲状腺腫瘍から２種の細胞系を樹立した。ＦＩＳＨによる検討のため、これらの細胞系及び別の原発性腫瘍に対して１８種のＢＡＣクローンを加えた。ブレ−クポイントは全て、約４５０ｋｂの領域内にあることがわかった。
【０２８１】
樹立した細胞系のブレ−クポイント領域と原発性腫瘍のブレ−クポイント領域とが一致することにより、この細胞系から得られるデータを各種原発性腫瘍にも当てはめうるかどうかが確認される。
【０２８２】
材料及び方法
手術後、腫瘍組織片を２％抗生物質（２００ＩＵ／ｍＬペニシリン、２００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を含む滅菌Ｈａｎｋ’ｓ溶液中に固定せずに置いた。この腫瘍組織を機械的に細分化し、３〜４時間０.３５％コラゲナーゼ（ゼルバ（Serva）、ドイツ国ハイデルベルグ）に組織を曝露して処理し、細胞を培養した。細胞を酵素溶液に添加し、この細胞浮遊液を遠心分離し、この細胞ペレットを２０％ウシ胎仔血清及び２％抗生物質（２０％ウシ胎仔血清及び２％抗生物質を含むアール塩を含むＴＣ１９９、２００ＩＵ／ｍＬペニシリン、２００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を含む培地で培養した。「甲状腺の多形成腺腫」（pleomorphic adenoma of the thyroid gland）（ブラーディック（Bullerdiek）ら、１９８７）に記載の一方法により染色体調製を行った。核型はＩＳＣＮ（１９９５）に基づき記載した。
【０２８３】
細胞系の樹立は、ＳＶ４０プラスミド（ＳＶ４０「初期領域」）によるトランスフェクションにより行った（カツミエルチャク（Kazmierczak）ら、１９９０；ベルグ（Belge）ら、１９９２）。ＦＩＳＨによる検討には、２細胞系及び原発性腫瘍を用いた。原発性腫瘍の内の一種の核型は既に公開されている（ボル（Bol）ら、１９９９）。この実験に用いた腫瘍は全て、２ｐ２１にクローン性の異常があるという特徴を有している。
【０２８４】
ゲノムリサーチリソースセンター（the Resource Centre for Genome Research）（ドイツ国ベルリン）のＲＰＣＩ−１１ライブラリーから単離した１８種のＢＡＣクローンを用いてブレークポイントのクローニングを行った。この単離にはキアゲンプラスミドミディキット（QIAGEN Plasmid Midi kit、キアゲン社（QIAGEN）、ドイツ国ヒルデン）を用いた。
【０２８５】
蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）はメタフェーズにおいて行ったが、ＧＴＧ染色体を特定するため事前に結合させておいた。メタフェーズの分離及びＦＩＳＨは、ワンシューラ（Wanschura）ら（１９９５）によって修正されたキービッツ（Kievits）ら（１９９０）のプロトコルに従い行った。
【０２８６】
ＢＡＣ−ＤＮＡは、ニックトランスレーション（ギブコＢＲＬ（Gibco BRL）、ライフ・テクノロジーズ社（Life Technologies GmbH）、ドイツ国エッゲンシュタイン）によりビオチン−１４−ｄＵＴＰ及びジゴキシゲニン−１４−ｄＵＴＰで標識した。各ＢＡＣに対して、各細胞系及び原発性腫瘍の約１０のメタフェーズを分析した。ＤＡＰＩ又はヨウ化プロピジウムによるカウンター染色を行った後、ＦＩＴＣフィルター（ツァイス（Zeiss）、ドイツ国オーバーコヒェム）を備えたツァイス・アクシオフォト（Zeiss Axiophot）蛍光顕微鏡により染色体を分析した。
【０２８７】
結果は、パワージーン・カリオタイピング・システム（PowerGene Karyotyping System）（ＰＳＩ、英国ハラダール）により記録した。
【０２８８】
結果
まず、樹立した細胞系両方を蛍光ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検討した。ＦＩＳＨの分析には、染色体バンド２ｐ２１にある１８種のＢＡＣクローンを用いた。各ＢＡＣについて、１０種のＧＴＧ結合メタフェーズを分析した。両細胞系のブレークポイント領域をＢＡＣクローン３３９Ｈ１２と１０６９Ｅ２４間で狭めた後、これら細胞系の内の一の原発性腫瘍及び別の原発性腫瘍を試験した。ＦＩＳＨの分析結果から、実験した細胞系及び原発性腫瘍のブレークポイントはＢＡＣクローン３３９Ｈ１２と１０６９Ｅ２４の間にあることが分かる。
【０２８９】
検討
これまでの文献には、４５０の甲状腺過形成及び腺腫の細胞遺伝学的検討が報告されている。これら病変の約２０％が染色体変化を示しており、これらは種々のサブグループに分けられる。１９ｑ１３の変化は、構造的な染色体異常を伴う最大のサブグループを構成する（ベルグ（Belge）ら、１９９８）。染色体２のクローン性の異常も同様に頻繁に発見された。
【０２９０】
このグループでは、異常は染色体バンドｐ２１において最も頻繁に見られた（ボル（Bol）ら、１９９９）。
【０２９１】
染色体バンド２ｐ２１においてクローン性変化が頻繁であることから、このタイプの異常は、良性甲状腺腫瘍において独自の細胞遺伝学的サブグループを形成することが分かる。この異常の分子遺伝学的背景についてはこれまで知られていない。ブレークポイントを特定するため、良性甲状腺腫瘍から２ｐ２１転座を伴う２細胞系を樹立し、これらの細胞系と２原発性腫瘍とを、染色体バンド２ｐ２１からのＢＡＣクローンと共にＦＩＳＨでの検討に用いた。ＦＩＳＨの分析結果から、実験した腫瘍のブレ−クポイントはＢＡＣクローン３３９Ｈ１２と１０６９Ｅ２４の間に存在することが分かった。
【０２９２】
このＳ５３３Ｔ／ＳＶ４０の細胞系においては、誘導染色体に関するシグナルは２種のＢＡＣのいずれにおいても検出されなかった。これはおそらく、この染色体セグメントにおける欠失が起っていたため、或いは両ＢＡＣクローンの配列の重なりが非常に短く、検出可能なシグナルが十分に得られなかったためであろう。
【０２９３】
ＢＡＣクローン３３９Ｈ１２の長さは２１５５３２ｂｐであり、ＢＡＣ１０６９Ｅ２４の長さは、完全な配列ではなかったため推定ではあるが、制限分析により約２７０ｋｂと推定される。
【０２９４】
両ＢＡＣクローンの重複配列は約４５７２８ｂｐであることが分かっているため、ブレ−クポイント領域の最大サイズは約４５０ｋｂであると推定される。
【０２９５】
文献
Antonini P, Levy N, Caillou B, Venuat AM, Schlumberger M, Parmentier C, Bernheim A：「唯一の異常としての２２トリソミーを含む数的異常は濾胞性甲状腺腺腫において繰り返す」（Numerical aberrations, including trisomy 22 as the sole anomaly, are recurrent in follicular thyroid adenomas.）Genes Chromosome Cancer 8：63-66 (1993)。
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【０２９６】
Bol S, Belge G, Thode B, Bartnitzke S, Bullerdiek J：「良性甲状腺腫瘍における第２染色体の構造的異常。３つの新しい症例と文献レビュー」（Structural abnormalities of chromosome 2 in benign thyroid tumors. Three new cases and review of the literature.) Cancer Genet. Cytogenet 114：75-77 (1999)。
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【０２９７】
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Kievits T, Dauwerse JG, Wiegant J, Devilee P, Breuning MH, Cornelisse C. J., van Ommen GJB, Pearson PL：「非放射性ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによるコスミドの急速なサブ染色体局在化」（Rapid subchromosomal localization of cosmids by nonradioactive in situ hybridization.）Cytogenet. Cell Genet. 53：134-136 (1990)。
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【０２９８】
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【０２９９】
Teyssier J R, Ferre D：「ヒトの非悪性腫瘍における頻回クローン性染色体変化」（Frequent clonal chromosomal changes in human non-malignant tumors.）Int J Cancer 44: 828-832 (1989)。
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Wanschura S, Hennig Y, Deichert U, Schoenmakers EFPM, Van de Ven WJM, Bartnitzke S, Bullerdiek J：「子宮平滑筋腫に冒された１２ｑ１４→ｑ１５ブレークポイント領域の分子細胞遺伝学的精密化」（Molecular-cytogenetic refinement of the 12ql4(R)q15 breakpoint region affected in uterine leiomyomas.）Cytogenet Cell Genst 71：131-135 (1995)。
【実施例２】
【０３００】
実施例２：
各種原発性甲状腺腫瘍及び各種細胞系におけるＤＲＩＰ及びＤＲＩＰをコードする核酸の検出
本実施例においては、次に説明するプライマーやＲＮＡ単離に関するプロセスを用いて、各種原発性甲状腺腫瘍及び各種細胞系におけるｍＲＮＡの発現をＰＣＲにより確認し、これにより、データバンク配列の比較により見出されたイントロン／エクソンの境界を調べた。得られた配列の配列決定を行うことにより、驚くべきことに、各種融合遺伝子やそのスプライス変異体が見出された。これにより、対応する染色体転座の存在が判明した。
【０３０１】
標準ＰＣＲ条件（２０μＬ調製）
鋳型／マトリクス: ｃＤＮＡ（２μＬ）又はゲノムＤＮＡ（１μＬ）又はＢＡＣ−ＤＮＡ（１ｎｇ）
１０×ＰＣＲバッファー（−Ｍｇ）（ギブコＢＲＬ／インビトロジェン社（Invitrogen））:２μＬ
プライマー（ｕｐ／ｌｏｗ）:１μＬ（液量１０μｍｏｌ）
ｄＮＴＰ’ｓ:１μＬ
ＭｇＣ１２＋（ギブコＢＲＬ／インビトロジェン社）:０.６μＬ
ｔａｑポリメラーゼ（５Ｕ／μＬ）（ギブコＢＲＬ／インビトロジェン社）:０.２５μＬ
二回蒸留水:１２.１５μＬ添加（ｃＤＮＡの場合）又は１３.１５μＬ添加（ゲノムＤＮＡの場合）
サイクル：３５回
【０３０２】
【表７】
2006510344.tif 000017
【０３０３】
【表８】
2006510344.tif 000018
【０３０４】
【表９】
2006510344.tif 000019
【０３０５】
【表１０】
2006510344.tif 000020
【０３０６】
【表１１】
2006510344.tif 000021
【０３０７】
【表１２】
2006510344.tif 000022
【０３０８】
【表１３】
2006510344.tif 000023
【０３０９】
【表１４】
2006510344.tif 000024
【０３１０】
【表１５】
2006510344.tif 000025
【０３１１】
【表１６】
2006510344.tif 000026
【０３１２】
【表１７】
2006510344.tif 000027
【０３１３】
【表１８】
2006510344.tif 000028
【０３１４】
【表１９】
2006510344.tif 000029
【０３１５】
【表２０】
2006510344.tif 000030
【０３１６】
【表２１】
2006510344.tif 000031
【０３１７】
【表２２】
2006510344.tif 000032
【０３１８】
【表２３】
2006510344.tif 000033
【０３１９】
用いた細胞系
ＭＣＦ−７（ヒト乳腺癌）
Ｎｏ：ＤＳＭ  ＡＣＣ  １１５  
ＤＳＭＺ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen and Zellkulturen GmbH）［ドイツ微生物培養細胞保存有限会社（German Collection of Microorganisms and Cell Cultures GmbH）］
ＨＥＬＡ（ヒト子宮頚癌）
Ｎｏ：ＤＳＭ  ＡＣＣ  ５７  
ＤＳＭＺ（Deutsche Sammlung von Mikroorganismen and Zellkulturen GmbH）
ＷＲＯ
ＢＡＣ  ３３９Ｈ１２
ＢＡＣ  ２０４Ｄ１９
【０３２０】
ＲＮＡ単離のためのプロトコル
トリゾール処理（フード！；閉塞したピペット先端！）
Ｉ．細胞溶解
細胞培養瓶（Impfbank）から完全に培地を吸引する；フードをエタノール（７０％）でを拭き取る；１.５ｍＬの容器を準備する（滅菌容器、オートクレーブではない）；細胞培養瓶に直接トリゾールを１ｍＬ添加する；上下にピペッティング操作を行い、細胞を浮遊させる；細胞浮遊液をピペットにて容器に移す；−８０℃で細胞を保存する；使用済ピペットチップはオートクレーブ廃棄に処す；細胞培養瓶をフード下で風乾させる。
【０３２１】
ＩＩ．相分離
水浴を３０℃に予熱する；遠心分離機を４℃に冷却する；細胞浮遊液を溶解し（次いで）室温で５分間インキュベートする；１ｍＬのトリゾールに対しクロロホルムを２００μＬ添加する；浮遊液を強く振とうする；水浴中３０℃で２〜３分間インキュベートする；１２０００×ｇ、４℃で１５分間遠心する。
【０３２２】
ＩＩＩ．ＲＮＡ沈殿
上層（ＲＮＡ！）を滅菌した新しい１．５ｍＬ容器にピペットで移す；イソ−アミルアルコール（イソプロパノール）を５００μＬ添加する；注意深く撹拌する；３０℃の水浴で１０分間インキュベートする；１２０００×ｇ、４℃で１０分間遠心する；次いで直ちにピペットで上清を取り除く；フェノールを廃棄する（！）
【０３２３】
ＩＶ．ＲＮＡの洗浄
ペレットにエタノール（７５％）を１ｍＬ添加し、簡単にボルテックスにかける；７５００×ｇ、４℃で５分間遠心する；次いで直ちピペットでに上清を取り除く；フェノールを廃棄する（！）；フード下でペレットを室温で１０分以上風乾する；水浴を５５℃（又は６０℃）にセットする。
【０３２４】
Ｖ．ＲＮＡの溶解
ペレットのサイズによって、滅菌ｄＨ２０（滅菌）を３０〜５０μＬ添加する；５５℃、１０分間水浴でインキュベーションする；次いで直ちにサンプルを氷上に置く；−８０℃で保存する（又は濃度を測定する）。
【０３２５】
ＶＩ．濃度測定
プラスチックキュベットに滅菌ｄＨ２０（６０μＬ）を添加する；ブランク値を測定する；ＲＮＡを１μＬ加え混合する；濃度を測定する（２６０／２８０ｎｍ＋ｑｕｏｔｉｅｎｔ）；ＲＮＡを−８０℃で保存する。
【０３２６】
ＦＩＳＨ
ＦＩＳＨの実施方法については、キービッツら等により記載されている（キービッツＴ（Kievits T）、ドウワースＪ．Ｇ．（Dauwerse J.G.）、ヴィガンＪ．（Wiegant J.）、デウィリーＰ．（Devilee P.）、ブラウニングＭ．Ｈ．（Breuning M.H.）、コルネリゼＣ．Ｊ．（Cornelisse C.J.）、ファン・オメンＧ．Ｊ．Ｂ．（van Ommen G.J.B.）、ピアソンＰ．Ｌ．（Pearson P.L.）：「非放射性ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによるコスミドの迅速なサブ染色体位置特定（Rapid subchromosomal localization of cosmids by nonradioactive in situ hybridization.）」Cytogenet Cell Genet．５３：１３４−１３６（１９９０））。
【０３２７】
ＤＲＩＰ−ＦＵＳ２遺伝子の検出のためのＳ５３３／ＴＳＶ４０の３’−ＲＡＣＥ−ＲＴ−ＰＣＲ条件
鋳型名：ＡＰプライマー（ポリＴ＋ＵＡＰ−２部分配列）を用いた逆転写酵素反応後Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０細胞系の細胞の全ＲＮＡを精製して得られるｃＤＮＡ
【０３２８】
【表２４】
2006510344.tif 000034
【０３２９】
【表２５】
2006510344.tif 000035
【０３３０】
プローブ作成のためのＰＣＲ条件（ＤＲＩＰ−ＦＵＳ２）
鋳型の説明：ＥＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ：２０１ｂｐ
【表２６】
2006510344.tif 000036
【０３３１】
【表２７】
2006510344.tif 000037
【０３３２】
ＰＣＲ精製キット（キアゲン社）を用いたプローブＤＮＡの精製
ＤＲＩＰ−ＦＵＳ１遺伝子検出のためのＳ３２５／ＴＳＶ４０の３’−ＲＡＣＥ−ＲＴ−ＰＣＲ条件
鋳型の説明：Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
上流プライマー及び下流プライマーのタイプ並びに反応調製物は、Ｓ５３３／ＴＳＶ４０の３’−ＲＡＣＥ−ＲＴ−ＰＣＲと同じ
【０３３３】
【表２８】
2006510344.tif 000038
【０３３４】
プローブ作成のためのＰＣＲ条件（ＤＲＩＰ−ＦＵＳ１）
鋳型の説明：ＥＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ： ２０１ｂｐ
【表２９】
2006510344.tif 000039
【０３３５】
【表３０】
2006510344.tif 000040
【０３３６】
非放射性ハイブリダイゼーション用（サザンブロッティング）のプロトコル
（ＲＡＣＥ−ＰＣＲ  ＤＲＩＰ−ＦＵＳ１及びＤＲＩＰ−ＦＵＳ２）
Ｉ．
２×ＳＳＣ内で５分間
脱プリン化（depurining）緩衝液で２×１０分間
変性緩衝液で２×１５分間
中和緩衝液で３×１０分間
２０×ＳＳＣで５分間
【０３３７】
ＩＩ．
真空ポンプを少なくともブロッティング１５分前に起動（暖気運転）
ワットマンフィルターとＨｙｂｏｎｄ−Ｎメンブレン（アマシャムファルマシアバイオテック社（Amersham Pharmacia Biotech））とを切り取る（ゲルより幾分大きく）
ブロッティング装置を組み立てる（モデル７８５真空ブロッター；バイオラッド社（Biorad））
真空を引く（５インチ／ｍｍＨｇ）
ゲルが吸引されたら直ちに、２０×ＳＳＣをゆっくりと注ぐ
（ゲルのサイズ／密度により）１〜２時間ブロッティングする
１０分毎にゲルを２０×ＳＳＣで覆う
ブロット後：メンブレン上のゲルのポケットに鉛筆で印を付ける
メンブレン上にＤＮＡを固定：Ｆｌｕｏ−Ｌｉｎｋ（バイオメトラ社（Biometra））でＵＶクロスリンク（設定０．４＝４０秒）
【０３３８】
ＩＩＩ．ハイブリダイゼーション
水浴中６０℃で発現ハイブリダイジング溶液（クロンテック社（Clontech））を予熱
ハイブリダイジングオーブンを６０℃に予熱
ガーゼ上にメンブレンを載せ、底部から巻き上げ、ハイブリダイジングボトル内に置く
５ｍＬのＥｘｐ−Ｈｙｂ−溶液を添加
ハイブリダイジングオーブン内で６０℃、３０分間＊プレハイブリダイズ
２０分後＊にプローブを変性：９５℃、１０分間（ＰＣＲブロック（バイオメトラ社）中）、終了後直ちにプローブを氷上に置く！
ザルスタット（Sarstedt）チューブにピペッティング：Ｅｘｐ−Ｈｙｂ溶液５ｍＬ＋プローブ２μＬ（８０ｎｇ／μＬ）をボルテックスに付す
Ｅｘｐ−Ｈｙｂ溶液＋プローブをハイブリダイジングボトル中のメンブレンに置く
ハイブリダイジングオーブン内６０℃で一夜ハイブリダイズする
【０３３９】
ＩＶ．メンブレン洗浄
調製：１）０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳをハイブリダイジングオーブンで６０℃に予熱、２）緩衝液１  ９０ｍＬ＋１０％ブロッキング試薬１０ｍＬを混合して緩衝液１／１％ブロッキング試薬を作成、ザルスタットチューブ（ポイント２７用）に１０ｍＬをピペッティング
【０３４０】
次の溶液を用い、メンブレンを攪拌器にｘ分間付す：
２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳに室温で２×１５分間
０．１×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ（予熱済）で２×１５分間
緩衝液１／０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０で５分間
緩衝液１／１％ブロッキング試薬で３０分間
１０ｍＬの緩衝液１／１％ブロッキング試薬＋１μＬの抗ｄｉｇ−ＡＰ、ＦＡＢフラグメント（１５０Ｕ／２００μＬ；エンゾ（Ｅｎｚｏ））で３０分間
緩衝液１／０．３％Ｔｗｅｅｎ−２０で２×１５分間
緩衝液３で５分間
【０３４１】
Ｖ．検出
次の各成分を一緒に１．５ｍＬ容器にピペッティング
ミドルメンブレン：緩衝液３  １．５ｍＬ＋ＣＰＤ−Ｓｔａｒ  １５μＬ（２５ｍＭ；セルマークダイアグノースティクス社（Cellmark Diagnostics））
メンブレンをフィルムに載せ、３辺を接合
溶液をメンブレンに直接添加（ＤＮＡ側）
気泡を抜いてフィルムを接合し、ＤＮＡ側を上にしてオートラジオグラフィーカセットに載せる
【０３４２】
写真ラボラトリーで赤色光の下、更なる処理を行う！
メンブレンにＨｙｐｅｒｆｉｌｍ−ＥＣＬ（アマシャムファルマシアバイオテック社）を載せ、角をに印を付け、フィルムにメンブレンのポケットの印を付ける
１０分間感光する
フィルムが濃くなるまでフィルムを現像浴中に放置する
フィルムを１０分間定着浴中に放置する
水＋氷酢酸でフィルムを１０分間洗浄
乾燥キャビネットでフィルムを乾燥
【０３４３】
サザンブロット用緩衝液
脱プリン化緩衝液
０.２５Ｍ  ＨＣｌ［２０ｍＬ  ＨＣｌ（３７％）］
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
【０３４４】
変性緩衝液（２０００ｍＬ）
０.５  ＮａＯＨ［４０ｇ  ＮａＯＨ（Ｍｗ：４０ｇ／ｍｏｌ）］
１．５Ｍ  ＮａＣｌ［１７５．３２ｇ  ＮａＣｌ（Ｍｗ：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞２０００ｍＬ
ｐＨ７．４
【０３４５】
中和緩衝液（２０００ｍＬ）
１．５Ｍ  ＮａＣｌ［１７５．３２ｇ  ＮａＣｌ（Ｍｗ：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）］
０．５Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［１５７．６ｇ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（Ｍｗ：１５７．６ｇ／ｍｏｌ）］
ｐＨ７．４
【０３４６】
２０×ＳＳＣ （２０００ｍＬ）
３Ｍ  ＮａＣｌ［３５０．６４ｇ  ＮａＣｌ（Ｍｗ：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）］
０．３Ｍ  クエン酸ナトリウム（Ｎａ）［１７６．４６ｇ  クエン酸Ｎａ（Ｍｗ：２９４．１ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞２０００ｍＬ
ｐＨ７．０
【０３４７】
緩衝液１（２０００ｍＬ）
０．１Ｍ  マレイン酸［２３．２ｇ  マレイン酸（Ｍｗ：１１６．０７ｇ／ｍｏｌ）］
０．１５Ｍ  ＮａＣｌ［１７．４ｇ  ＮａＣｌ（Ｍｗ：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）］
１５．８ｇ  ＮａＯＨ［（Ｍｗ：４０ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞２０００ｍＬ
ｐＨ７．５
２×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ（１０００ｍＬ）
１００ｍＬ  ２０×ＳＳＣ
５ｍＬ  ２０％  ＳＤＳ
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
【０３４８】
０．１×ＳＳＣ／０．１％  ＳＤＳ（１０００  ｍＬ）
５ｍＬ  ２０×ＳＳＣ
５ｍＬ  ２０％  ＳＤＳ
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
【０３４９】
洗浄緩衝液（１０００ｍＬ）
緩衝液１［９９７ｍＬ  緩衝液１］
０．３％  Ｔｗｅｅｎ２０［３ｍＬ  Ｔｗｅｅｎ２０］
【０３５０】
ブロッキングストック溶液（２５０ｍＬ）
１０％（Ｗ／Ｖ）ブロッキング試薬［２５ｇ  ブロッキング試薬］
緩衝液１に［緩衝液１添加  ＞２５０ｍＬ］
【０３５１】
緩衝液３（１０００ｍＬ）
０．１Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［１５．７６ｇ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（Ｍｗ：１５７．６ｇ／ｍｏｌ）］
０．１Ｍ  ＮａＣｌ［５．８４ｇ  ＮａＣｌ（Ｍｗ：５８．４４ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
ｐＨ９．５
０．４Ｍ  ＮａＯＨ（１０００ｍＬ）
１６ｇ  ＮａＯＨ［（Ｍｗ：４０ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
【０３５２】
ストリップ緩衝液（１０００ｍＬ）
０．１×ＳＳＣ［５ｍＬ  ２０×ＳＳＣ］
０．１％  ＳＤＳ［５ｍＬ  ２０％  ＳＤＳ］  
０．２Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ［３１．５２ｇ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（Ｍｗ：１５７．６ｇ／ｍｏｌ）］
２回蒸留水添加  ＞１０００ｍＬ
【０３５３】
ＰＣＲ検出
ＤＲＩＰ−又はＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＰＣＲ結果
【０３５４】
【表３１−１】
2006510344.tif 000041
【表３１−２】
2006510344.tif 000042
【０３５５】
ＰＣＲ条件の詳細
【表３２】
2006510344.tif 000043
【０３５６】
鋳型の説明：ＤＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ：８８０ｂｐ
【０３５７】
【表３３】
2006510344.tif 000044
【０３５８】
標準ＰＣＲ混合物
【表３４】
2006510344.tif 000045
【０３５９】
次の結果が得られた：８８０ｂｐに主要なバンド；〜６５０ｂｐに弱いバンド；エクソン１４及びエクソン１５を有するクローンとエクソン１４及びエクソン１５を有しないクローン（スプライス変異体）との異種クローン混合物
【０３６０】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＭＣＦ−７（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１３０ｂｐ
【表３５】
2006510344.tif 000046
【０３６１】
標準ＰＣＲ混合物
【表３６】
2006510344.tif 000047
【０３６２】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＢＡＣ２０４Ｄ１９（ゲノムＤＮＡ）
産物の長さ：５０５ｂｐ
【表３７】
2006510344.tif 000048
【０３６３】
標準ＰＣＲ混合物
【表３８】
2006510344.tif 000049
【０３６４】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＨｅＬａ（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：５０５ｂｐ
【表３９】
2006510344.tif 000050
【０３６５】
標準ＰＣＲ混合物
【表４０】
2006510344.tif 000051
【０３６６】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＢＡＣ２０４Ｄ１９（ゲノムＤＮＡ）
産物の長さ：４７９ｂｐ
【表４１】
2006510344.tif 000052
【０３６７】
標準ＰＣＲ混合物
【表４２】
2006510344.tif 000053
【０３６８】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＤＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ： ２０１ｂｐ
【表４３】
2006510344.tif 000054
【０３６９】
標準ＰＣＲ混合物
【表４４】
2006510344.tif 000055
【０３７０】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＭＣＦ  ７（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：２０１ｂｐ
【表４５】
2006510344.tif 000056
【０３７１】
標準ＰＣＲ混合物
【表４６】
2006510344.tif 000057
【０３７２】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：２０１ｂｐ
【表４７】
2006510344.tif 000058
【０３７３】
標準ＰＣＲ混合物
【表４８】
2006510344.tif 000059
【０３７４】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：２０１ｂｐ
【表４９】
2006510344.tif 000060
【０３７５】
標準ＰＣＲ混合物
【表５０】
2006510344.tif 000061
【０３７６】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＢＡＣ  ３３９Ｈ１２（ゲノムＤＮＡ）
産物の長さ：９８１ｂｐ
【表５１】
2006510344.tif 000062
【０３７７】
標準ＰＣＲ混合物
【表５２】
2006510344.tif 000063
【０３７８】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＤＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ：３７０ｂｐ
【表５３】
2006510344.tif 000064
【０３７９】
標準ＰＣＲ混合物
【表５４】
2006510344.tif 000065
【０３８０】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＷＲＯ（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１０４９ｂｐ
【表５５】
2006510344.tif 000066
【０３８１】
標準ＰＣＲ混合物
【表５６】
2006510344.tif 000067
【０３８２】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＭＣＦ−７（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１６２ｂｐ
【表５７】
2006510344.tif 000068
【０３８３】
標準ＰＣＲ混合物
【表５８】
2006510344.tif 000069
【０３８４】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＤＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲから）
産物の長さ：８２０ｂｐ
【表５９】
2006510344.tif 000070
【０３８５】
標準ＰＣＲ混合物
【表６０】
2006510344.tif 000071
【０３８６】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＷＲＯ（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：〜３.５ｋｂｐ
注：増幅は次の２種のＰＣＲを順次行った
【表６１】
2006510344.tif 000072
【０３８７】
標準ＰＣＲ混合物
【表６２】
2006510344.tif 000073
【０３８８】
【表６３】
2006510344.tif 000074
【０３８９】
標準ＰＣＲ混合物
【表６４】
2006510344.tif 000075
【０３９０】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＤＩＬ３５００（ｃＤＮＡクローン；ＤＲＩＰＶＵ１６／ＤＲＩＰＶＲＬ２を用いたＰＣＲ）
産物の長さ：５６０ｂｐ
【表６５】
2006510344.tif 000076
【０３９１】
標準ＰＣＲ混合物
【表６６】
2006510344.tif 000077
【０３９２】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：６９９ｂｐ
【表６７】
2006510344.tif 000078
【０３９３】
標準ＰＣＲ混合物
【表６８】
2006510344.tif 000079
【０３９４】
ＰＣＲ条件  ＦＵＳ  ＩＩ融合転写
鋳型の詳細：Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１１４２ｂｐ
【表６９】
2006510344.tif 000080
【０３９５】
【表７０】
2006510344.tif 000081
【０３９６】
ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉ融合転写のためのＰＣＲ条件
鋳型の説明：Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
【表７１】
2006510344.tif 000082
【０３９７】
【表７２】
2006510344.tif 000083
【０３９８】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１６５ｂｐ（エクソンＩを有しない）；２８３ｂｐ（エクソンＩを含む）
【表７３】
2006510344.tif 000084
【０３９９】
【表７４】
2006510344.tif 000085
【０４００】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＢＡＣ  ３３９Ｈ１２（ゲノムＤＮＡ）
産物の長さ：１３０ｂｐ
【表７５】
2006510344.tif 000086
【０４０１】
標準ＰＣＲ混合物
【表７６】
2006510344.tif 000087
【０４０２】
ＰＣＲ条件
鋳型の詳細：ＨｅＬａ（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：１３０ｂｐ
【表７７】
2006510344.tif 000088
【０４０３】
標準ＰＣＲ混合物
【表７８】
2006510344.tif 000089
【０４０４】
ＰＣＲ条件
鋳型の説明：ＷＲＯ（ｃＤＮＡ）
産物の長さ：７６４ｂｐ
【表７９】
2006510344.tif 000090
【０４０５】
標準ＰＣＲ混合物
【表８０】
2006510344.tif 000091
【０４０６】
上の説明、配列プロトコル及び請求の範囲に開示した本発明の各様相、その各実施形態、及び本発明の各特徴は、個別にも組み合わせても、本発明の各種実施形態において本発明を実現するために重要である。請求の範囲に開示した内容をここに援用する。
【図面の簡単な説明】
【０４０７】
【図１】染色体７ｐ１５上のブレークポイント領域のゲノム位置の概略図である。
【図２】染色体３ｐ２５上のブレークポイント領域のゲノム位置の概略図である。
【図３】融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉを有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０内のｄｅｒ（２）上のブレークポイント領域のゲノム位置の概略図である。
【図４】融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩを有する細胞系Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０内のｄｅｒ（２）上のブレークポイント領域のゲノム位置の概略図である。
【図５】転座ｔ（２；７）（ｐ２１；ｐ１５）を有する原発性腫瘍Ｓ５３３のカリオグラムである。
【図６】初代培養Ｓ５３３から産生された細胞系Ｓ５３３Ｔ／ＳＶ４０のカリオグラムである。
【図７ａ】Ｇバンド法後の、ｔ（２；３；２０）（ｐ２１；ｑ１１．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０のメタフェーズである。
【図７ｂ】ＢＡＣ１０６９Ｅ２４を用いたＦＩＳＨ後の、ｔ（２；３；２０）（ｐ２１；ｑ１１．２；ｐ２５）を有する細胞系Ｓ３２５Ｔ／ＳＶ４０のメタフェーズである。ハイブリダイズ信号は染色体２、ｄｅｒ（２）及びｄｅｒ（２０）にあり、矢印で示す。
【図８】融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩを導く細胞系Ｓ５３３／ＴＳＶ４０のブレークポイントの検出の結果を示す。
【図９】細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０のＦＩＳＨ結果及びカリオグラムである。
【図１０】ＲＴ−ＰＣＲによる第１及び第２の融合タンパク質の検出である。
【図１１】ＤＲＩＰ特異的プローブを用いたノーザンブロット分析の結果である。
【図１２】２ｐ２１に変化を有する各種良性甲状腺腫瘍及び過形成のブレ−クポイントクラスターに対するＤＲＩＰのゲノム位置の概略図である。細胞系Ｓ３２５／ＴＳＶ４０及びＳ５３３／ＴＳＶ４０の転座ブレークはイントロン２８にあることがわかる。
【図１３】スプライス変異体を有するＤＲＩＰ−ｍＲＮＡの概略図である。
【図１４】融合転写ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  Ｉの３種の形態の概略図である。
【図１５】第２の融合遺伝子ＤＲＩＰ−ＦＵＳ  ＩＩの２種の形態の概略図である。
【図７】
2006510344.tif 000092
【図９】
2006510344.tif 000093
【図１４】
2006510344.tif 000094
【図１５】
2006510344.tif 000095
【図１】
2006510344.tif 000096
【図２】
2006510344.tif 000097
【図３】
2006510344.tif 000098
【図４】
2006510344.tif 000099
【図５】
2006510344.tif 000100
【図６】
2006510344.tif 000101
【図８】
2006510344.tif 000102
【図１０】
2006510344.tif 000103
【図１１】
2006510344.tif 000104
【図１２】
2006510344.tif 000105
【図１３】
2006510344.tif 000106
【配列表】
2006510344000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成16年8月5日(2004.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過形成及び／又は腫瘍において発現が変化する核酸であって、配列番号１、３、４、９、１１〜１６及びこれら配列の断片からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする核酸。
【請求項２】
過形成及び／又は腫瘍において発現が変化する核酸であって、配列番号１、３、４、９、１１〜１６からなる群から選択される核酸配列を含むことを特徴とする核酸。
【請求項３】
腫瘍が、染色体アーム２ｐ内に何らかの変化を有する各種上皮腫瘍及び染色体バンド２ｐ２１−２２内に何らかの変化を有する各種腫瘍からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の核酸。
【請求項４】
過形成が甲状腺の各種過形成からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項５】
核酸は、配列番号１、９、１３、１４及び／又は１５の核酸から選択されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項６】
遺伝子コードの縮重がなければ請求項１〜５のいずれか一項に記載の核酸と同一のアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む核酸。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸と、特に、ストリンジェントな条件下で、ハイブリダイズする核酸。
【請求項８】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸を含むことを特徴とするベクター。
【請求項９】
プロモーター、ターミネーター及びエンハンサーからなる群から選択される少なくとも一種の要素を更に含むことを特徴とする、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
ベクターが発現ベクターであることを特徴とする、請求項８又は９に記載のベクター。
【請求項１１】
少なくとも一個のプロモーターが、ポリペプチドをコードする請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分と共にｉｎ−ｆｒａｍｅで存在することを特徴とする、請求項８〜１０に記載のベクター。
【請求項１２】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸によりコードされるポリペプチド、又は配列番号２、５〜８、１０又は１７に記載のアミノ酸配列を有するポリペプチド。
【請求項１３】
改変されていることを特徴とする、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
請求項８〜１１のいずれか一項に記載のベクターを含む細胞（特に単離された細胞）。
【請求項１５】
請求項１２又は１３に記載のポリペプチドに対するものであることを特徴とする抗体。
【請求項１６】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とする、請求項１５に記載の抗体。
【請求項１７】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸に対するものであることを特徴とするリボザイム。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも一部分又はこれと実質的に相補的な核酸の少なくとも一部分を含むことを特徴とする、請求項１７に記載のリボザイム。
【請求項１９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の各種核酸配列の内の一配列と実質的に相補的な又は実質的に同一の配列を含むアンチセンス核酸。
【請求項２０】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の各種核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である配列を含むＲＮＡｉであって、好ましくはこのＲＮＡｉが、実質的に相補的又は実質的に同一である領域の長さが２１〜２３個のヌクレオチドである領域を含む、ＲＮＡｉ。
【請求項２１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸の内の一核酸又はその一部と実質的に相補的又はこれと実質的に同一である核酸を含むプライマー又は核酸プローブであって、長さがヌクレオチド１２〜３２個、好ましくはヌクレオチド１４〜２８個、好ましくはヌクレオチド２０〜２８個であるプライマー及び／又は核酸プローブ。
【請求項２２】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の翻訳産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・翻訳産物と化合物を調製する段階と、
・翻訳産物の作用を体現する系において、翻訳産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において翻訳産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２３】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の転写産物の作用に影響を及ぼす化合物、特に前記作用を阻害する化合物を決定する方法であって、次の各段階、
・転写産物と化合物を調製する段階と、
・転写産物の作用を体現する系において、転写産物と化合物とを接触させる段階と、
・化合物の影響下において転写産物の作用に何らかの変化が生じたか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項２４】
系が、細胞発現系、無細胞発現系、化合物と翻訳産物の間の相互作用を測定するアッセイ及び化合物と転写産物の間の相互作用を測定するアッセイからなる群から選択されることを特徴とする、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
過形成及び腫瘍の形成、特に甲状腺の過形成及び腫瘍の形成を担う遺伝子を決定する方法であって、次の各段階、
・過形成及び／又は腫瘍の染色体異常部におけるブレークポイントを決定する段階と、
・染色体アーム２ｐ、好ましくは染色体バンド２ｐ２１−２２のブレークポイント領域の両側４００ｋｂｐ、好ましくは１５０ｋｂｐの領域内にある遺伝子を決定する段階と、
・過形成細胞又は腫瘍細胞におけるこの遺伝子の翻訳／転写が、過形成でない細胞又は腫瘍でない細胞と比べて変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項２６】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１７又は１８に記載のリボザイム及び／又は請求項１９に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項２０に記載のＲＮＡｉ及び／又は請求項２１に記載の核酸プローブの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２７】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸及び／又は請求項１７又は１８に記載のリボザイム及び／又は請求項１９に記載のアンチセンス核酸及び／又は請求項２０に記載のＲＮＡｉ及び／又は請求項２１に記載の核酸プローブの、医薬を製造するため、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項２８】
請求項１２〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項２９】
請求項１２〜１３のいずれか一項に記載のポリペプチドの、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項３０】
請求項１５〜１６のいずれか一項に記載の抗体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍の診断、特にｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける診断及び／又は治療のための使用。
【請求項３１】
請求項１５〜１６のいずれか一項に記載の抗体の、医薬の製造、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療及び／又は予防するための医薬を製造するための使用。
【請求項３２】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のためのキットであって、該キットが、それぞれ先の請求項のいずれか一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム、プライマー及び／又は核酸プローブからなる群から選択される少なくとも一種の要素を含むことを特徴とするキット。
【請求項３３】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を検出するための方法であって、次の各段階、
・甲状腺材料を、それぞれ先の請求項のいずれか一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム及び細胞からなる群から選択される剤に接触させる段階と、
・甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍が存在するか否かを決定する段階と
を特徴とする方法。
【請求項３４】
甲状腺材料が生体外に存在することを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
甲状腺材料が細胞学的調製物の一部であることを特徴とする、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸又はその一部の、プライマー及び／又はプローブとしての使用。
【請求項３７】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸配列の一部分に実質的に相補的である或いは実質的に同一であることを特徴とする、核酸を提示する及び／又はスクリーニングする及び／又は検出するためのプライマー。
【請求項３８】
甲状腺腫瘍又は甲状腺腫において検出され得る配列を含む核酸を提示する方法であって、破壊ポイントを有する異常部が染色体バンド２ｐ２１−２２に存在し、前記配列が少なくとも部分的に染色体バンド２ｐ２１−２２内にあり、
該方法が次の各段階、
・ＰＣＲを実施するためのプライマー、特に請求項３７に記載のプライマーを調製する段階と、
・ヒト染色体２のバンド２ｐ２１−２２から採取した核酸配列又は請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸を調製する段階と、
・核酸配列又は核酸をプライマーと混合する段階と、
・ＰＣＲを実施する段階と
を含むことを特徴とする方法。
【請求項３９】
医薬組成物であって、
それぞれ先の請求項の一項に記載の核酸、ベクター、ポリペプチド、細胞、抗体、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ、リボザイム、プライマー及び／又は核酸プローブ、及びこれらの組み合わせからなる群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種の担体と
を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項４０】
腫瘍及び過形成を治療及び／又は予防するための方法であって、先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現変化の作用を阻害する化合物が患者に投与されることを特徴とする方法。
【請求項４１】
先の請求項のいずれか一項に記載の核酸の発現変化の作用を阻害する化合物の、医薬を製造するための使用。
【請求項４２】
医薬が、腫瘍及び／又は過形成、特に甲状腺の腫瘍及び／又は過形成を治療及び／又は予防するためのものであることを特徴とする、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用。
【請求項４４】
ポリペプチドが、配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列を有することを特徴とする、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
核酸が、遺伝子コードの縮重がなければ、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６の内の一配列に係る核酸とハイブリダイズすることを特徴とする、請求項４３又は４４に記載の使用。
【請求項４６】
配列番号２、配列番号５〜８、１０及び１７からなる群から選択される配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の、医薬（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を治療するための医薬）を製造するための及び／又は診断剤（特に甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍の診断のための診断剤）を製造するための使用。
【請求項４７】
甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を治療するための手段、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を診断するための診断剤をスクリーニングするための方法であって、次の各段階、
・候補化合物を調製する段階と、
・発現系及び／又は活性系を調製する段階と、
・候補化合物を発現系及び／又は活性系と接触させる段階と、
・候補化合物の影響下において、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体の発現及び／又は活性が変化しているか否かを決定する段階と
を含む方法。
【請求項４８】
候補化合物が化合物ライブラリーに含まれることを特徴とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
候補化合物がペプチド、タンパク質、抗体、アンチカリン、機能的核酸及び小分子からなる化合物群から選択されることを特徴とする、請求項４７又は４８に記載の方法。
【請求項５０】
機能的核酸が、アプタマー、アプタザイム、リボザイム、スピゲルマー、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びＲＮＡｉからなる群から選択されることを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又は配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸の特に天然相互作用パートナー又はこれらの誘導体、及び／又はこれらにコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体、及び／又はこれらをコードする核酸、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナー又はこれらの誘導体の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断剤を開発及び／又は製造するためターゲット分子としての、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発及び／又は製造するためのターゲット分子としての使用。
【請求項５２】
医薬又は診断手段が、抗体、ペプチド、アンチカリン、小分子、アンチセンス分子、アプタマー、スピゲルマー及びＲＮＡｉ分子からなる群から選択される剤を含むことを特徴とする、請求項５１に記載の使用。
【請求項５３】
剤が、配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は特に天然相互作用パートナーをコードする核酸と、特にｍＲＮＡ、ゲノム核酸又はｃＤＮＡと相互作用することを特徴とする、請求項５２に記載の使用。
【請求項５４】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又はこれらの特に天然相互作用パートナーと相互作用するポリペプチドの、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断手段を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５５】
ポリペプチドが、抗体及び結合ポリペプチドからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５４に記載の使用。
【請求項５６】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する核酸によりコードされるポリペプチド又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったポリペプチドと相互作用する、及び／又は特にこれらの天然相互作用パートナーと相互作用する核酸の、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は甲状腺腫瘍を診断するための診断剤を開発又は製造するための、及び／又は甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５７】
核酸が、アプタマー及びスピゲルマーからなる群から選択されることを特徴とする、請求項５６に記載の使用。
【請求項５８】
配列番号１、３、４、９及び配列番号１１〜１６からなる群から選択される配列を有する第二の核酸又はこれらの誘導体と相互作用する、及び／又は配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従った配列を有するポリペプチドの相互作用パートナーをコードする核酸と相互作用する第一の核酸の、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬を開発又は製造するための使用。
【請求項５９】
相互作用する第一の核酸が、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム及び／又はＲＮＡｉであることを特徴とする、請求項５８に記載の使用。
【請求項６０】
第二の核酸がそのｃＤＮＡ又はｍＲＮＡであることを特徴とする、請求項５８又は５９に記載の使用。
【請求項６１】
請求項５１〜６０のいずれか一項に記載の使用に係る群から選択される少なくとも一種の剤と、医薬的に許容される少なくとも一種類の担体とを含む、特に、甲状腺機能障害及び／又は甲状腺過形成及び／又は各種腫瘍、特に甲状腺腫瘍を予防及び／又は治療するための医薬組成物。
【請求項６２】
請求項５１〜６０のいずれか一項に記載の使用に係る少なくとも一種の剤を含む、甲状腺の状態を特徴付けるためのキット。
【請求項６３】
配列番号２、配列番号５〜８、１０或いは１７に従ったアミノ酸配列又はその機能的断片を含むポリペプチド。
【請求項６４】
先の請求項のいずれか一項に記載の使用に従った、請求項６３に記載のポリペプチドの使用。
【国際調査報告】
2006510344.tif 000107
2006510344.tif 000108
2006510344.tif 000109
2006510344.tif 000110
2006510344.tif 000111
2006510344.tif 000112
2006510344.tif 000113
2006510344.tif 000114