(57)【要約】ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンド（「ペルオキシソーム増殖活性化因子レセプターγ」または「ＰＰＡＲ−γ」としても公知である）の投与を使用して、哺乳動物における下垂体腫瘍を処置するための方法を、開示する。幾つかの実施形態において、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドは、チアゾリジンジオン化合物である。哺乳動物において下垂体腫瘍の形成を予防するための方法、および哺乳動物において下垂体腫瘍の再発を予防するための方法もまた、開示される。クッシング症候群の１つ以上の症状を示す哺乳動物を処置するための方法が、さらに開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍を処置するための方法であって、該方法は、以下：
非癌性下垂体腫瘍を有する哺乳動物に、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程、
を、包含する方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドが、チアゾリジンジオン化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記チアゾリジンジオン化合物が、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記下垂体腫瘍が、ＡＣＴＨ分泌性下垂体腫瘍、ＬＨ分泌性下垂体腫瘍、ＧＨ分泌性下垂体腫瘍、またはＰＲＬ分泌性下垂体腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記下垂体腫瘍が、非機能性下垂体腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍の形成を予防するための方法であって、該方法は、以下：
非癌性下垂体腫瘍を発症する危険性が通常より高い哺乳動物に、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程、
を、包含する方法。
【請求項７】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍の再発を予防するための方法であって、該方法は、以下：
以前に検出可能な非癌性下垂体腫瘍を有していて、該腫瘍が取り除かれた哺乳動物に、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与し、これによって該非癌性下垂体腫瘍の再発が予防される工程、
を、包含する方法。
【請求項８】
副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の過剰分泌から生じるクッシング症候群の１つ以上の症状を示す哺乳動物を処置するための方法であって、該方法は、以下：
該哺乳動物に、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程、
を、包含する方法。
【請求項９】
前記クッシング症候群の症状が、ステロイド過剰分泌である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記クッシング症候群の症状が、上昇した尿のコルチソル排出である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための方法であって、該方法は、以下：
非機能性非癌性下垂体腫瘍を有する哺乳動物に、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程、
を、包含する方法。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドが、チアゾリジンジオン化合物である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記チアゾリジンジオン化合物が、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための方法であって、該方法は、非機能性非癌性下垂体腫瘍を有する哺乳動物に、有効量のチアゾリジンジオン化合物を投与する工程を、包含する方法。
【請求項１５】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための方法であって、該方法は、非機能性非癌性下垂体腫瘍を有する哺乳動物に、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される有効量のチアゾリジンジオン化合物を投与する工程を、包含する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
本出願全体を通じて、種々の刊行物が挿入的に参照される。これらの刊行物の開示は、本発明に関連する分野の状態をより十分に記載するために、本明細書においてその全体が参考として援用される。
【０００２】
（１．発明の分野）
本発明は、医療分野、特に下垂体腫瘍の処置に関する。
【背景技術】
【０００３】
（２．関連技術の考察）
下垂体は、下垂体重量の８０％に相当する大きな前方領域（腺性下垂体）、および小さな後方領域（神経性下垂体）の主に２つの領域に分けられる。この腺は、下垂体柄付近の視床下部と呼ばれる脳の領域につながる。この腺は頭蓋内の神経および血管に近接し、そして下垂体は生体ホルモン制御を提供するので、下垂体の障害は、ホルモンと神経の両方に、広範な症状を起こす。たいていの場合、下垂体障害は、下垂体によって代表的に分泌される１つ以上のホルモンの分泌を過剰にするか、または過少にする。
【０００４】
下垂体の重要性は、下垂体が産生する多くの、例えば、以下のようなホルモンによって十分説明される：すなわち、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、成長ホルモン（ＧＨ）、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、抗利尿ホルモン（ＡＤＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、プロラクチン（ＰＲＬ）、濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、およびオキシトシン。
【０００５】
前葉の細胞は、正常な成長および発育に必須の、いくつかのタンパク質ホルモンを合成し、放出して、そしてまた、いくつかの標的腺の活性を刺激する。前葉によって産生されるホルモンの正常ホルモンレベルの上下の偏差は、多くの疾患状態のいずれか１つを生じ得る。例えば、過剰量のホルモンＡＣＴＨは、クッシング症候群を生じ得；ＴＳＨの過剰産生は、甲状腺機能亢進症を生じ；そしてＧＨの過剰分泌は、末端肥大症または巨人症のいずれかを生じ得る。逆に、減少量のＧＨは、成人および幼児における成長ホルモン欠損症候群（幼児における低身長によって特徴付けられる）を引き起こし得る。前葉によって制御される他のホルモンとしては、ＬＨおよびＦＳＨが挙げられ、これは、腫瘍に冒された場合、男性および女性において性的症状を起こし得る。プロラクチンの産生増加は、女性において、異常な乳産生、不規則な月経および不妊症を生じ得；男性に対して、増加したプロラクチンレベルは、不能症、不妊症、雌性化および乳汁分泌を生じ得る。後葉に罹患している腫瘍は、ＡＤＨの産生を崩壊して尿崩症を誘導し得る；ホルモンオキシトシンはまた、後葉から分泌される。
【０００６】
いくつかの下垂体障害は、家族性の素因（例えば、多発性内分泌新生物形成、カーニー複合疾患、およびマックキューン−オルブライト症候群が挙げられる）を示した（Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｃ．ら、Ｍ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ｔｙｐｅ  １  ｇｅｎｅ  ｍａｐｓ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １１  ａｎｄ  ｉｓ  ｌｏｓｔ  ｉｎ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：８５−８７［１９８８］；Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａｐｐａｋ，Ｓ．Ｃ．ら、Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ−ｔｙｐｅ  １，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：４０４−４０６［１９９７］；Ｓｔｒａｔａｋｉｓ，Ｃ．Ａ．ら、Ｃａｒｎｅｔ  ｃｏｍｐｌｅｘ，ｆａｍｉｌｉａｌ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｋｉｎｄｒｅｄｓ  ａｎｄ  ｌｉｎｋａｇｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｈｏｒｔ  ａｒｍ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ２，Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：６９９−７０５［１９９６］；Ｌｙｏｎｓ  Ｊ．ら、Ｔｗｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｒｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：６５５−６５９［１９９０］を参照のこと）。
【０００７】
下垂体障害の１つの分野は、下垂体腫瘍である。下垂体腫瘍（腺腫）は、概して、異なるホルモン産生領域に影響する、非腫瘍性増殖であり、特定の位置に依存する。下垂体腫瘍は、頭蓋内腫瘍の約１５％を占め、局所的な圧迫作用、ホルモン過剰分泌、または腫瘍関連内分泌欠損に起因する顕著な罹患率（ｍｏｒｂｉｂｉｔｙ）に関連する（Ｈｅａｎｅｙ  Ａ．Ｐ．ら：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒｓ．Ｉｎ：Ｏｘｆｏｒｄ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｓ  Ｊ．Ａ．Ｈ．およびＳｈａｌｅｔ  Ｓ．Ｍ．，（編），Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，２００２（印刷中））。下垂体腺腫の大部分は良性であり、悪性ではなく、そして比較的ゆっくりと増殖する。（ＵＣＬＡ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙウェブサイト＜ｗｗｗ．ｎｅｕｒｏｓｕｎ．ｍｅｄｓｃｈ．ｕｃｌａ．ｅｄｕ＞を参照のこと）。下垂体腫瘍は、下垂体ホルモンの１つ以上の過剰産生を誘導し得る。他の場合において、下垂体腫瘍は、非機能性であるか、または「内分泌不活性」であり、このことは、過剰なホルモンを産生しないことを意味する。
【０００８】
非機能性腺腫は、最も一般的な下垂体腫瘍である。ホルモンを分泌できないこれらの腫瘍は、通常、巨大腺腫（＞１ｃｍ）であり、そして高い罹患率を引き起こし、最終的に、視野の喪失、頭痛、および下垂体機能不全に起因して、死亡率を引き起こす（Ｓｈｉｍｏｎ，Ｉ．ら、Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒｓ，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１２９：４７２−４８３［１９９８］）。いくつかの非機能的下垂体腫瘍は、ドパミンレセプターおよび／またはソマトスタチンレセプターを発現するが、ドパミンアゴニストおよび／またはソマトスタチンを用いた処置に対する応答は乏しく、そしてこれらの使用は、ほとんど中止されおり（Ｎｏｂｅｌｓ，Ｆ．Ｒ．ら、Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｑｕｉｎａｇｏｌｉｄｅ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｎｏｎ−ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４３：６１５−２１［２０００］）、そして非機能性下垂体腫瘍にとって効果的な薬物治療は、現在存在しない。下垂体腫瘍が増大する場合、正常下垂体組織の圧迫が生じ、ホルモン産生の減少または異常が起こり得る。この状態は、下垂体機能低下（ｈｙｐｏｐｉｔｕｉｔａｒｉｓｍ）と呼ばれ、そして脳の外傷、手術、下垂体への出血、または下垂体に対する放射線治療によっても生じ得る。
【０００９】
下垂体ホルモン過剰分泌を誘導する下垂体腫瘍の例は、ＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍およびＧＨ分泌型下垂体腫瘍である。ドパミンアゴニストおよびソマトスタチンアナログは、ＰＲＬおよびＧＨそれぞれの過剰分泌を効果的に抑制し、そして腫瘍増殖を制御するか、または全てではないが、多くのＰＲＬ分泌型腫瘍およびＧＨ分泌型腫瘍の場合、腫瘍の縮小を誘導する（Ｓｈｉｍｏｎ，Ｉ．ら、Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒｓ，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１２９：４７２−８３［１９９８］；Ｇｉｕｓｔｉｎａ，Ａ．ら、Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｃｕｒｅ  ｏｆ  ａｃｒｏｍｅｇａｌｙ：ａ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８５：５２６−９［２０００］）を参照のこと）。ＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍およびＧＨ分泌型下垂体腫瘍を有する患者のサブセットは、このような薬物処置に応答しないか、またはこれらの薬物からの副作用に耐えられない。非応答性のＧＨ分泌型およびＰＲＬ分泌型、ならびに非機能性下垂体腫瘍について、手術（補助的放射線を伴っても、伴わなくてもよい）が処置の主流であり、そして専門施設における管理割合全体の５０〜６０％である。（Ｂｅｖａｎ，Ｊ．Ｓ．ら、Ｎｏｎ−ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａｓ  ｄｏ  ｎｏｔ  ｒｅｇｒｅｓｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｂｕｔ  ｐｏｓｓｅｓｓ  ｍｅｍｂｒａｎｅ−ｂｏｕｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｓ  ｗｈｉｃｈ  ｂｉｎｄ  ｂｒｏｍｏｃｒｉｐｔｉｎｅ，Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２５：５６１−７２［１９８６］；Ｃｏｌａｏ，Ａ．ら、Ｎｅｗ  ｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｉｎ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａｓ，Ｈｏｒｍ  Ｒｅｓ．５３：７６−８７［２００１］）。下垂体巨大腺腫の７０％は経蝶形骨性アプローチによって首尾よく切除されるが、ＰＲＬ分泌型腫瘍の２５％、およびＧＨ分泌型腫瘍の９０％、および非機能性腫瘍は直径が１ｃｍよりも大きく、そしてこれらの巨大腺腫についての外科的「治癒」率は、専門施設における患者の約１／３に達している。（Ｃｏｌａｏ，Ａ．ら、Ｎｅｗ  ｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｉｎ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｆａｏｍａｓ，Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．５３：７６−８７［２００１］）。腫瘍再発は、腫瘍増殖およびホルモンレベルを抑えるために、下垂体に対する放射線照射を必要とするが、放射線の効果は、数年の間、著しくないかもしれず、そしてほとんどの患者における下垂体の損傷および機能不全に決定的に関連する。（Ｋｒｅｕｔｚｅｒ  Ｊ．ら、Ｓｕｒｇｉｃａｌ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ＧＨ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａｓ：ａｎ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｓｔｕｄｙ  ｕｓｉｎｇ  ｍｏｄｅｒｎ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｃｒｉｔｅｒｉａ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．８６：４０７２−７［２００１］）。
【００１０】
下垂体ホルモン過剰分泌を誘発する、別のこのような下垂体腫瘍は、ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍である。ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍の９０％が、巨大腺腫（＜１ｃｍ、直径）であり、そして海綿静脈洞浸潤または視交差圧迫が極めて生じる。（Ｒｏｓｓ，Ｅ．Ｊ．ら、Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ−ｋｉｌｌｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｉｓｃｒｉｍａｔｏｒｙ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｓｉｇｎｓ  ａｎｄ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ａｉｄｉｎｇ  ｅａｒｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｌａｎｃｅｔ  ２：６４６−９［１９８２］；Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｅ．Ｗ．ら、Ｐｅｔｒｏｓａｌ  ｓｉｎｕｓ  ｓａｍｐｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：８９７−９０５［１９９１］）。ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍は、めったに浸潤しないが、過剰な糖質コルチコイド産生に起因して顕著な罹患率を生じる。ＡＣＴＨ分泌病巣は、増大し、抑制できないＡＣＴＨレベル、副腎皮質機能亢進症、クッシング症候群、および変化した臨床的兆候（糖尿病、高血圧、筋衰弱、および骨粗鬆症が挙げられる）を生じる（Ｒｏｓｓ  Ｅ．Ｊ．ら、Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ−ｋｉｌｌｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｉｓｃｒｉｍａｔｏｒｙ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｓｉｇｎｓ  ａｎｄ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ａｉｄｉｎｇ  ｅａｒｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｌａｎｃｅｔ；２：６４６−９［１９８２］）。処置されなければ、ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍は、高い罹病率、最終的には死亡率に関連する（Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｅ．Ｗ．ら、Ｐｅｔｒｏｓａｌ  ｓｉｎｕｓ  ｓａｍｐｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９９１；３２５：８９７−９０５）。
【００１１】
ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍に対して有効な薬物療法は、現在存在しない。手術（補助的放射線を伴っても、伴わなくてもよい）が処置の主流であり、そして専門施設における管理割合全体の５０〜６０％である。（Ｓｉｍｍｏｎｓ，Ｎ．Ｅ．ら、Ｓｅｒｕｍ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏｔｒａｎｓｐｈｅｎｏｉｄａｌ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｓｈｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．９５：１−８［２００１］；Ｍａｍｐａｌａｍ，Ｔ．Ｊ．ら、Ｔｒａｎｓｓｐｈｅｎｏｉｄａｌ  ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ２１６  ｃａｓｅｓ，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１０９：４８７−９３［１９８８］；Ｈｏｙｂｙｅ，Ｃ．ら、Ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｈｏｒｍｏｎｅ−ｐｒｏｄｕｃｉｙｔｇ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ｔｕｍｏｒｓ：１２  ｔｏ  ２２−ｙｅａｒ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ  ａｆｔｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｓｔｅｒｏｔａｃｔｉｃ  ｒａｄｉｏｓｕｒｇｅｒｙ，Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ４９：２８４−９１［２００１］）。
【００１２】
クッシング症候群は、哺乳動物の疾患状態であり、コルチソルの血中濃度上昇（副腎皮質機能亢進症）または糖質コルチコイドホルモンは、長期間にわたって存在する。クッシング症候群の最も一般的な症例は、下垂体によって産生される過剰なＡＣＴＨである。ＡＣＴＨは、副腎の成長を刺激し、そして他のコルチコイドの分泌を刺激する。このＡＣＴＨの、血流において上昇したレベルは、概して、下垂体線種（クッシング病）によって生じるが、まれな場合、異なる病因を有する。下垂体以外の位置でのＡＣＴＨの産生から生じるクッシング症候群は、異所性クッシング症候群として知られている。異所性部位の例としては、胸腺腫、甲状腺の髄様癌腫、褐色細胞腫、膵臓の島細胞腫瘍、および肺の燕麦細胞癌腫が挙げられる。しかし、ヒトにおけるクッシング症候群症例の圧倒的多数の病因は、下垂体腺腫である。クッシング症候群の症状としては、この疾患に罹患していない哺乳動物に比べて、体重増加、中心性肥満、ステロイド過剰分泌、尿コルチソル排出の増加、満月様顔貌、衰弱、疲労、頭痛、背痛、不能症、精神状態の変化、筋萎縮、ならびに増加した口渇および排尿が挙げられる。
【００１３】
クッシング症候群にとって利用可能な医療は現在ない。実験した専門施設において、ＡＣＴＨ分泌型下垂体巨大腺腫の外科的切除は、約７０〜８０％の全治癒率を示すが、巨大腺腫管理割合は、約３０％のみであり、そして必要とされる広範囲の外科的切除は、周囲の正常な下垂体組織に重大な危険性をもたらし、症例の約８０％において、部分的または全体的な下垂体機能低下症を引き起こす（Ｓｉｍｍｏｎｓ，Ｎ．Ｅ．ら、Ｓｅｒｕｍ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏｔｒａｎｓｐｈｅｎｏｉｄａｌ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｓｈｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．９５：１−８［２００１］；Ｍａｍｐａｌａｍ，Ｔ．Ｊ．ら、Ｔｒａｙｉｓｓｐｈｅｏｉｄａｌ  ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ２１６  ｃａｓｅｓ，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１０９：４８７−９３［１９８８］；Ｔｒａｉｎｅｒ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｔｒａｎｓｓｐｈｅｎｏｉｄａｌ  ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｕｎｄｅｔｅｅｔａｂｌｅ  ｓｅｒｕｍ  ｃｏｒｔｉｓｏｌ  ａｓ  ｔｈｅ  ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｈ  ｏｆ  ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．３８：７３−８［１９９３］）。
【００１４】
クッシング症候群の診断および処置は、未だに難問である（Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｅ．Ｗ．ら，Ｐｅｔｒｏｓａｌ  ｓｉｎｕｓ  ｓａｍｐｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｒｉｇ  ｈｏｎｍｏｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：８９７−９０５［１９９１］；Ｆｉｎｄｌｉｎｇ，Ｊ．Ｗ．ら，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．，３０：７２９−４７［２００１］；Ｏｒｔｈ，Ｄ．Ｎ．，Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３２：７９１−８０３［１９９５］）。ＡＣＴＨ分泌腺腫を有する患者の治療は、視床下部、下垂体、または副腎に対して向けられ得る。高分離能ＭＲ下垂体画像化、および下垂体誘導性ＡＣＴＨ過剰分泌を確立するための錐体静脈洞サンプリングにも拘わらず、手術前の下垂体腫瘍位置決めおよび側性成立は、困難であり得る（Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，Ｅ．Ｗ．ら，Ｐｅｔｒｏｓａｌ  ｓｉｎｕｓ  ｓａｍｐｌｉｎｇ  ｗｉｔｈ  ａｎｄ  ｗｉｔｈｏｕｔ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：８９７−９０５［１９９１］；Ｆｉｎｄｌｉｎｇ，Ｊ．Ｗ．ら，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．，３０：７２９−４７［２００１］）。下垂体ミクロアデノーマの７０％は、経蝶形骨アプローチにより首尾良く切除されるが、マクロアデノーマについての手術の「治癒」速度は、特定施設における患者の約３分の１で達成されるに過ぎない（Ｍａｍｐａｌａｍ，Ｔ．Ｊ．ら，Ｔｒａｎｓｓｐｈｅｎｏｉｄａｌ  ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ｆｏｒ  Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ａ  ｒｅｐｏｒｔ  ｏｆ  ２１６  ｃａｓｅｓ，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１０９：４８７−９３［１９８８］）。ＡＣＴＨ過剰分泌の術後の存続は、腫瘍増殖およびホルモンレベルを抑制するために下垂体指向性照射を要する。照射の効果は、数年間現れないこともあり、最終的には、大部分の患者において下垂体損傷および機能不全に関連する（Ｂｒａｄａ，Ｍ．ら，Ｔｈｅ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ  ｓｕｒｇｅｒｙ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  ａｄｅｎｏｍａｓ，Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．３８：５７１−８［１９９３］）。副腎皮質機能亢進症、コルチソル過剰分泌は、副腎摘出（副腎の一方または両方の外科的除去）によって完全に解決され得るが、このアプローチは、下垂体腫瘍増殖を抑制せず、他の共存症とも関連する（Ｔｒａｉｎｅｒ，Ｐ．Ｊ．ら，Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：Ｔｈｅｒａｐｙ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  ａｄｒｅｎａｌ  ｇｌａｎｄｓ，  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ．Ａｍ．，２３：５７１−５８４［１９９４］）。
【００１５】
シプロヘプタジン（抗セロトニン剤）での薬物療法は、ＡＣＴＨは分泌を抑制するために１９８０年代に使用されたが、最終的な効果は乏しく、かつその使用は、中止された（Ｋｒｉｅｇｅｒ，Ｄ．Ｔ．ら，Ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｒｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｕｓｈｉｎｇｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２９３：８９３−６［１９７５］）。抗真菌剤であるケトコナゾールは、副腎のコルチソル生合成を抑制するが、その薬物は、下垂体腫瘍増殖もＡＣＴＨ分泌も阻害せず、特異体質的肝臓障害は、その長期間の使用を制限する（Ｓｏｎｉｎｏ，Ｎ．，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｋｅｔｏｃｏｎａｚｏｌｅ  ａｓ  ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１７：８１２−８［１９８７］）。
【００１６】
下垂体腫瘍およびこれに関する多くの疾患状態は、これまで、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγ（ＰＰＡＲ−γ）と関連づけられてこなかった。ＰＰＡＲ−γは、核レセプタースーパーファミリーのメンバーであり（Ｉｓｓｅｍａｎｎ，Ｉ．ら，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｍｅｍｂｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ  ｂｙ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３４７：６４５−６６０［１９９０］；Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓ，Ｋら，Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｏｒｐｈａｎｓ  ｗｉｔｈ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．８：１５９−１６６［１９９７］）、リガンド依存性転写調節を媒介する転写因子として機能すると考えられる（Ｋｌｉｅｗｅｒ，Ｓ．Ａ．ら，Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ  ｏｆ  ９−ｃｉｓ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ａｎｄ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ  ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  ｐａｔｈｗａｙｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅｉｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５８：７７１−７７４［１９９２］；Ｐａｌｍｅｒ，Ｃ．Ａ．Ｎ．ら，Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｒｅｔｉｎｏｉｄ  Ｘ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｌｐｈａ  ｕｎｍａｓｋｓ  ａ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｔｈａｔ  ｏｖｅｒｌａｐｓ  ａｎ  ＡＲＰ−１−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＣＹＰ４Ａ６  ｐｒｏｍｏｔｅｒ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１６１１４−１６１２１［１９９５］；Ｔｏｎｔｏｎｏｚ，Ｐ．ら，ＭＰＰＡＲｙ２：ｔｉｓｓｕｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ａｎ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ  ｅｎｈａｎｃｅｒ，Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．８：１２２４−３４［１９９４］）。高親和性ＰＰＡＲ−γリガンドとしては、インスリン感作（ｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇ）チアゾリジンジオン化合物（ＴＺＤ）が挙げられる（Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ，Ｂ．Ｍ．，ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ：ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４７：５０７−５１４［１９９８］；Ｋｌｉｅｗｅｒ，Ｓ．Ａ．ら，Ａ  ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｊ２  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ  ｂｉｎｄｓ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，Ｃｅｌｌ  ８３：８１３−８１９［１９９５］；Ｆｏｒｍａｎ，Ｂ．Ｍ．，ら，１５−Ｄｅｏｘｙ−ｄｅｌｔａ  １２，１４−ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｊ１  ｉｓ  ａ  ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｄｉｐｏｃｙｔｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ＰＰＡＲ  ｇａｍｍａ，Ｃｅｌｌ  ８３：８０３−８１２［１９９��］）。ＰＰＡＲ−γ活性化は、脂肪細胞分化（Ｓｐｉｅｇｅｌｍａｎ，Ｂ．Ｍ．，ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ：ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ａｎｄ  ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４７：５０７−５１４［１９９８］）、グルコース調節（Ｓａｌｔｉｅｌ，Ａ．Ｒ．ら，Ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ａｎｄ  ｔｙｐｅ  ＩＩ  ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４５：１６６１−９［１９９６］）、ならびにマクロファージおよび単球活性化の阻害（Ｒｉｃｏｔｅ，Ｍ．ら，Ｔｈｅ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｇａｍｍａ  ｉｓ  ａ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：７９−８２［１９９８］；Ｊｉａｎｇ，Ｃ．ら，ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ  ａｇｏｎｉｓｔｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９１：８２−８６［１９９８］）をもたらす。ＰＰＡＲ−γは、乳房、前立腺、および結腸上皮において発現され、合成ＰＰＡＲ−γリガンドの投与は、前立腺、および結腸腫瘍細胞の増殖を阻害し（Ｓｔａｅｌｓ，Ｂ．ら，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｍｏｏｔｈ−ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ  ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７９０−７９３［１９９８］；Ｅｌｓｔｎｅｒ，Ｅ．ら，Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−γ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ＢＮＸ  ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８８０６−８８１１［１９９８］；Ｋｕｂｏｔａ，Ｔ．ら，Ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−γ（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）  ｈａｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｏｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：３３４４−３３５２［１９９８］；Ｓａｒｒａｆ，Ｐ．ら，Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ＰＰＡＲ  ｇａｍｍａ，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４：１０４６−１０５２［１９９８］）、これらのリガンドの抗脈管形成作用もまた、実証された（Ｘｉｎ，Ｘ．ら，Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  γ  ｌｉｇａｎｄｓ  ａｒｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７４：９１１６−２１［１９９９］）。米国特許第６，２０７，６９０号において、ＰＰＡＲ−γリガンドは、癌および更年期の処置に関連した（米国特許第５，８１４，６４７号もまた参照のこと）。
【００１７】
ホルモン分泌型下垂体腫瘍（例えば、クッシング症候群）のための有効な薬物療法を含め、下垂体腫瘍の非侵襲性処置が未だに必要である。この利点および他の利点は、本明細書中に記載されるように、本発明によって提供される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（発明の要旨）
本発明は、以下の発見に基づく：（１）下垂体ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγ（「ペルオキシソーム増殖活性化因子レセプターγ」または「ＰＰＡＲ−γ」としても公知）の発現は、主に、正常ヒト下垂体前葉のＡＣＴＨ分泌細胞に制限されること；（２）下垂体ＰＰＡＲ−γは、ヒトＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍、ＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍、ＬＨ分泌型下垂体腫瘍、ＧＨ分泌型下垂体腫瘍、およびＦＳＨ分泌型下垂体腫瘍において豊富に発現されること；（３）ＰＰＡＲ−γリガンドは、潜在的に、インビトロで、ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍、ＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍、ＬＨ分泌型下垂体腫瘍、ＧＨ分泌型下垂体腫瘍の増殖を阻害し、インビボで下垂体腫瘍増殖を阻害すること；ならびに（４）ロシグリタゾン（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）（公知のＰＰＡＲ−γリガンド）投与は、クッシング病において２４時間尿コルチソル排泄を抑制すること。これらの結果は、下垂体腫瘍またはクッシング症候群に罹患した哺乳動物被験体の処置における新規な分子標的としてのＰＰＡＲ−γの役割を支持する。
【００１９】
本発明は、哺乳動物における下垂体腫瘍（ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍を含む）を処置するための方法を提供する。本発明の方法は、下垂体腫瘍を有する哺乳動物に、治療的に有効な量のＰＰＡＲ−γリガンドを投与する工程を包含する。このようなＰＰＡＲ−γリガンドとしては、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）（例えば、トログリタゾン、ピオグリタゾン、およびロシグリタゾン）が挙げられる。
【００２０】
本発明の別の局面は、哺乳動物における下垂体腫瘍の形成を予防するための方法を包含し、この方法は、下垂体腫瘍を発生する危険性が通常より高い哺乳動物に、有効量の少なくとも１種のペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程を包含する。本発明のさらなる局面は、哺乳動物における下垂体腫瘍の再発を予防する方法を包含する。この方法は、哺乳動物（検出可能な下垂体腫瘍が以前に排除された哺乳動物）に、有効量の少なくとも１種のペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを投与する工程を包含する。
【００２１】
本発明のなお別の局面は、クッシング症候群の１以上の症状（ステロイド過剰分泌および／または上昇した尿コルチソル排泄）を示す哺乳動物（ヒトを含む）を処置するための方法であり、この方法は、この被験体に、治療的に有効な量の少なくとも１種のＰＰＡＲ−γリガンドを投与する工程を包含する。
【００２２】
本発明は、その種々の実施形態とともに、添付の図面および以下の好ましい実施形態の詳細な説明によってより十分に説明される。
【００２３】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
本発明は、哺乳動物における下垂体腫瘍を処置するため、哺乳動物におけるクッシング症候群を処置するため、または哺乳動物における下垂体腫瘍の形成を予防するための方法に関する。
【００２４】
本明細書中で使用される場合、用語「哺乳動物」とは、哺乳綱に属する、毛を保有し、それらの仔に授乳する全てを含む、温血脊椎動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、無尾猿（ａｐｅ）および有尾猿（ｍｏｎｋｅｙ）（例えば、ヒヒ））、ラット、マウス、ウサギ、サル、ヒヒ、ウシ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコなどをいう。
【００２５】
本明細書中で使用される場合、名称「下垂体腫瘍」または「下垂体腺腫」とは、−下垂体内のそれらの特定の位置に依存して−その腺の異なるホルモン生成領域に影響を及ぼし得る非癌性増殖をいう。下垂体腫瘍は、これらのホルモンのうちの１つの過剰生成（過剰分泌）または過少生成（過少分泌）をもたらし得る。ホルモン過剰分泌と関連する下垂体腫瘍のいくつかの例は、コルチソル分泌型腫瘍、ＡＴＣＨ分泌コルチコトロフ腫瘍、プロラクチノーマ、およびソマトトロフ腺腫である。他の場合において、下垂体腫瘍は、非機能性または「内分泌不活性」であり、これは、活性ホルモンを生成しないか、または臨床効果を生じるには不十分な量のホルモンしか生成しないことを意味する。代わりに、それらは、代表的には、正常な下垂体、ならびに下垂体付近の構造（例えば、視神経および視神経交叉）に対するサイズおよび圧力効果が増大することに起因する症状を引き起こす。これらの腫瘍が大きくなるにつれて、正常な下垂体腺組織の圧迫が生じ得、ホルモン生成の低下、下垂体機能不全（下垂体機能低下）、視覚の喪失、および頭痛を生じる。本明細書中で使用される場合、名称「下垂体腫瘍」または「下垂体腺腫」はまた、インビトロで成長または増殖した下垂体腫瘍細胞または組織を含み得る。これらの用語の意味内には、インビボで動物モデルに導入されるかまたはこのモデルにおける下垂体以外の部位に移植された下垂体腫瘍細胞または組織もまた含まれる。
【００２６】
本明細書中で使用される場合、用語「巨大腺腫（ｍａｃｒｏａｄｅｎｏｍａ）」とは、直径１センチメートル以上のヒトにおける下垂体腺腫をいう。下垂体巨大腺腫は、それらが決して拡がらず、よって非癌性であるという点で、ほぼ常に良性である。しかし、下垂体巨大腺腫は、ただそれらの位置に起因して害を及ぼし得る。
【００２７】
本明細書中で使用される場合、用語「微小腺腫（ｍｉｃｒｏａｄｅｎｏｍａ）」とは、直径１センチメートル未満の、ヒトにおける下垂体腺腫をいう。これらの腫瘍は、一般に、骨糜爛を引き起こすかまたは視神経交叉を圧迫するには小さすぎる。巨大腺腫とは異なり、微小腺腫は、圧迫関連症状（例えば、頭痛または視野の喪失）を引き起こすには小さすぎる。任意の病的状態は、過剰なホルモン分泌によって引き起こされる。
【００２８】
本明細書中で使用される場合、用語「コルチコトロフ腺腫」とは、代表的には、下垂体前葉において見いだされる、通常は直径約５ｍｍ未満寸法のＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍をいう。用語「コルチコトロフ腺腫」とはまた、ＡＣＴＨ分泌肺類癌腫、膵臓類癌腫、胸腺類癌腫をいう。コルチコトロフ腺腫は、クッシング症候群の認められた原因である。大部分の下垂体ＡＣＴＨ分泌腺腫（約９０％）は、サイズが小さい（すなわち、微小腺腫）。
【００２９】
哺乳動物被験体における下垂体腫瘍は、腫瘍の型に応じて、種々の手段を用いて検出され得る。ホルモン分泌型下垂体腫瘍は、代表的には、例えば、過剰なホルモン分泌によって引き起こされる種々の物理的異常性（例えば、高プロラクチン血症に起因する乳汁漏出、過剰な成長ホルモン分泌に起因する先端巨大症、ＡＣＴＨ媒介性クッシング病）を提示する被験体で検出される。プロラクチン分泌腺腫を有する患者は、例えば、不妊、乳汁漏出、無月経、および性欲の喪失を提示することがある。成長ホルモン分泌腺腫は、例えば、顔面の造作が粗野になり、手および足の軟組織腫脹が腫脹する先端巨大症を引き起こす。大部分の患者は、過剰な発汗および不快な体臭を訴える。いくつかの場合において、進行性の骨増殖が生じ、下顎が長くかつ厚くなり、不正咬合を生じる。ＡＣＴＨ分泌腺腫は、本明細書中以降で特徴づけられるクッシング病を引き起こす。クッシング症候群、先端巨大症、または他のホルモン過剰の臨床的な疑いがある場合、循環ホルモンレベルのスクリーニングパネル（例えば、プロラクチン）は、正常を超えるレベルについて測定され得る。さらに、ＭＲＩ研究により、分泌性腫瘍に対して約９０％の感度および特異性が示された。
【００３０】
非機能性腫瘍において、頭痛、視覚の喪失、複視、および／または下垂体不全のような症状は、明白であり得る。内分泌不活性腺腫はまた、別の問題（例えば、頭部傷害）の評価の間に偶然に検出され得る。内分泌不活性腺腫のほぼ半分は、αサブユニットといわれるホルモンの一部を分泌し、このαサブユニットは、ホルモンとしては活性ではないが、血液中で測定され得る。性腺刺激ホルモン（造影剤）があってもなくても、下垂体のＭＲＩは、下垂体腫瘍を可視化するための好ましい調査である。大部分の場合、造影剤があってもなくても、ＣＴスキャンは、腺腫もまた検出し得る。
【００３１】
本明細書中で使用される場合、用語「処置」は、本発明の方法に関するとき、治療有効量の少なくとも１種のＰＰＡＲ−γリガンドを、下垂体腫瘍を有する哺乳動物に投与する工程を包含する。用語「処置する」の意味の中には、下垂体に存在する腫瘍組織のサイズを減少するか、または腫瘍組織を全体的に排除し、その結果、下垂体腫瘍組織が本発明の処置法を受けた哺乳動物被験体内で全く検出されないことが包含される。本発明の方法に従うと、「腫瘍組織の「サイズを減少」させることは、腫瘍組織塊もしくは腫瘍組織重量、直径、長さ、幅、境界、および／または厚みもしくは高さを減少させることを包含し、下垂体から腫瘍組織を全体的に排除することを包含する。
【００３２】
また、単語「処置する」の意味の中には、腫瘍増殖またはサイズの阻害または停止が含まれる。単語「処置する」の意味の中には、正常な生理学的範囲内にステロイドレベルが戻ることがさらに包含される。単語「処置する」の意味の中には、下垂体腫瘍に付随する１以上の症状（例えば、健康な下垂体によって代表的に分泌されるホルモン（ＡＣＴＨ、ＰＲＬ、ＧＨおよびＬＨが挙げられる）の過剰分泌または過少分泌）の改善であることがなおさらに包含される。
【００３３】
単語「処置する」の意味の中には、治療有効量の少なくとも１種のＰＰＡＲ−γリガンドを、クッシング症候群の１つ以上の症状を示す哺乳動物に投与することがさらに含まれる。
【００３４】
「有効量」は、下垂体腫瘍が実際に検出されるか否かに拘わらず、下垂体腫瘍組織の増殖を阻害するか、下垂体腫瘍組織のサイズを減少させるか、／下垂体腫瘍組織を排除するか、または下垂体腫瘍組織の形成を予防するに十分な、あるいは付随する下垂体腫瘍の症状の他の検出可能な改善に十分な用量である。このような症状としては、下垂体ホルモンの過剰分泌または過少分泌、および上昇した尿コルチソル排泄が挙げられる。「有効量」はまた、下垂体ホルモン分泌レベルをコントロールマイナスＰＰＡＲ−γリガンドに対して、哺乳動物において正常な生理学的範囲内に戻すために有効な量を包含する。クッシング症候群の１以上の症状（例えば、ステロイド過剰分泌および／または上昇した尿コルチソル排泄）を示すヒト被験体を処置するための「有効量」は、この状態の症状の１以上を逆転するか、緩和するかまたは改善するに十分な量である。
【００３５】
各哺乳動物に対する有効量は、選択される特定のＰＰＡＲ−γリガンドに依存する。各哺乳動物に対する有効量はまた、被験体の特定のサイズおよび個々の生理状態に依存する。ＰＰＡＲ−γリガンドの投与される用量は、当業者による哺乳動物の状態の慎重な定期的モニタリングに基づいて、必要に応じて調節されなければならない。さらに、使用される活性成分の有効量は、投与様式、処置される状態、および処置される状態の重篤度に依存して変化し得る。従って、有効量は、慣用的なスクリーニング試験によって当業者によって容易に確認され得る。当業者は、有効量または用量を決定するために適切に使用されるそのスクリーニング試験が各患者の個々の臨床的必要性に依存することを容易に理解する。
【００３６】
下垂体腫瘍またはクッシング症候群に罹患した成人ヒトの処置において、ロシグリタゾンの投与の好ましい治療用量範囲は、本発明の方法に従うと、１日あたり約１ｍｇと約１００ｍｇとの間である。その有効量または用量は、１日１回の投与において被験体に投与されるか、または１日あたり２回以上の投与に分割される。より好ましくは、組成物は、１日あたり約４〜約２０ｍｇのＰＰＡＲ−γリガンドの用量を送達するように送達系に処方される。このより好ましい用量範囲は、本質的に毒性の危険性なく、有益な効果を提供する。この投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するように調節され得る。下垂体腫瘍またはクッシング症候群に罹患した成体の非ヒト哺乳動物の処置において、ロシグリタゾンの投与のための好ましい治療範囲は、本発明の方法に従うと、毎日、約１ｍｇと約３００ｍｇ／ｋｇ体重である。より好ましくは、組成物は、毎日、約５０〜約１５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量を送達するように送達系に処方される。各被験体についての有効量は、本発明の薬学的に受容可能な組成物が投与される被験体の生理学的反応に依存し、およびその被験体の反応は、処方する開業医または医師によりモニターされる。
【００３７】
下垂体腫瘍の形成を予防することは、検出可能な下垂体腫瘍が、実際に存在するかどうかに拘わらず、および具体的に何も検出されなくても、哺乳動物被験体の下垂体における腫瘍組織の発生を予防すること、および／または下垂体腫瘍に付随する症状の発生を予防することを包含する。下垂体腫瘍の形成を予防するための本発明の方法は、通常、一般的な集団と比較して、下垂体腫瘍を発生する危険性が通常よりも高い哺乳動物（ヒトを含む）に適用される。通常よりも危険性が高い哺乳動物の例としては、既に検出可能な下垂体腫瘍を（例えば、腫瘍切除、化学療法、または放射線療法による処置を受けたことにより）切除したことがある哺乳動物が挙げられ、その結果、この方法は、腫瘍増殖の再発を予防するために使用される。
【００３８】
一般的集団と比較して、下垂体腫瘍を発生させる危険性が通常よりも高い哺乳動物の別の例としては、下垂体腫瘍を発生させる家族的素因を有する哺乳動物が挙げられる。家族的素因を提示することが示された下垂体障害の例としては、例えば、多発性内分泌新生物形成、カーニー複合疾患（Ｃａｒｎｅｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ）、およびマックキューン−オールブライト症候群が挙げられる（Ｌａｒｓｓｏｎ，Ｃ．ら，Ｍ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ｔｙｐｅ  １  ｇｅｎｅ  ｍａｐｓ  ｔｏ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  １１  ａｎｄ  ｉｓ  ｌｏｓｔ  ｉｎ  ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：８５−８７［１９８８］；Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋｈａｒａｐｐａｋ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ−ｔｙｐｅ  １，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７６：４０４−４０６［１９９７］；Ｓｔｒａｔａｋｉｓ，Ｃ．Ａ．ら，Ｃａｎｚｅｙ  ｃｏｍｐｌｅｘ，ｆａｍｉｌｉａｌ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｎｅｏｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｌｅｎｔｉｇｉｎｏｓｉｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ．Ａｈａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｋｉｎｄｒｅｄｓ  ａｎｄ  ｌｉｎｋａｇｅ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｓｈｏｒｔ  ａｒｍ  ｏｆ  ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ  ２，Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９７：６９９−７０５［１９９６］；Ｌｙｏｎｓ  Ｊ．ら，Ｔｗｏ  Ｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  ｔｕｍｏｒｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：６５５−６５９［１９９０］を参照のこと）。
【００３９】
本発明の下垂体腫瘍を処置する方法および下垂体腫瘍を予防する方法は、腫瘍増殖を低下または排除するために実施され得るが、さらなる腫瘍の形成を同時に予防するためにも実施され得る。前述は、下垂体腫瘍を発症させる危険性が通常より高い哺乳動物に寄与し得る要因を例示したに過ぎず、網羅的に列挙するものではない。
【００４０】
本明細書中で使用される場合、用語「副腎皮質刺激ホルモン」（ＡＣＴＨ）とは、下垂体前葉によって生成され、副腎皮質を刺激して、グルココルチコイドホルモンを分泌するペプチドホルモンを意味し、これは、細胞がグルコースを合成し、タンパク質を異化し、遊離脂肪酸を移動させ、そしてアレルギー応答における炎症を阻害することの補助となる。１つのこのようなホルモンは、コルチソルであり、コルチソルは、炭水化物、脂肪の代謝、およびタンパク質代謝を調節する。
【００４１】
プロラクチン（ＰＲＬ）は、下垂体前葉から生成され、正常な雌性および雄性の血清中に見出される。プロラクチンは、性腺（精巣および卵巣）に影響を及ぼすので、性腺刺激ホルモンとして公知である。プロラクチンはまた、身体における他の器官に対して影響を有する。雄性において、プロラクチンは、テストステロンの生成に影響を及ぼし、精子生成に作用する。雌性におけるプロラクチンの主な生理学的作用は、乳汁分泌の開始および維持である。
【００４２】
成長ホルモン（ＧＨ）（ソマトトロピンとしても公知）は、約１９０アミノ酸のタンパク質ホルモンであり、下垂体前葉におけるソマトトロフ（ｓｏｍａｔｏｔｒｏｐｈ）といわれる細胞によって合成および分泌される。成長ホルモンは、いくつかの複雑な生理学的プロセス（成長および代謝が挙げられる）の制御に主に関与する。身体の成長を刺激するに際しての成長ホルモンの主要な役割は、肝臓および他の組織を刺激して、ＩＧＦ−１を分泌させることである。成長ホルモンはまた、タンパク質、脂質および炭水化物の代謝に重大な影響を有する。
【００４３】
本明細書中で使用される場合、「黄体形成ホルモン」（ＬＨ）とは、下垂体前葉における細胞（性腺刺激細胞といわれる）から分泌されるペプチドホルモンを意味する。ＬＨの効果はまた、性別に依存する。ＬＨは、雄性の性腺（精巣）および雌性における性腺（卵巣）を刺激するので、性腺刺激ホルモンとして公知である。性的に成熟した雌性において、ＬＨは、卵胞を刺激して、月経周期の最初の半分においてエストロゲンを分泌し、ＬＨサージがそのサイクルの中間で排卵を誘発し、その月経周期の最後の半分の間にプロゲステロン分泌を刺激する。雄性において、ＬＨは、精巣の間質細胞に対して作用し、これらを刺激して雄性ホルモンであるテストステロンを合成および分泌させる。
【００４４】
本発明の目的について、有用なペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγ（ＰＰＡＲ−γ）リガンドは、このような化合物が現在公知であろうと、または後に開発もしくは発見されようと、ＰＰＡＲ−γを活性化するか、他の方法でＰＰＡＲ−γアゴニストとして作用する化合物である。これらの公知の化合物のうちのいくつか、およびそれらを作製するための方法は、例えば、ＷＯ９１／０７１０７；ＷＯ９２／０２５２０；ＷＯ９４／０１４３３；ＷＯ８９／０８６５１；ＪＰ公開６９３８３／９２；米国特許第４，２８７，２００号；同第４，３４０，６０５号；同第４，４３８，１４１号；同第４，４４４，７７９号；同第４，４６１，９０２号；同第４，５７２，９１２号；同第４，６８７，７７７号；同第４，７０３，０５２号；同第４，７２５，６１０号；同第４，８７３，２５５号；同第４，８９７，３９３号；同第４，８９７，４０５号；同第４，９１８，０９１号；同第４，９４８，９００号；同第５，００２，９５３号；同第５，０６１，７１７号；同第５，１２０，７５４号；同第５，１３２，３１７号；同第５，１９４，４４３号；同第５，２２３，５２２号；同第５，２３２，９２５号；同第５，２６０，４４５号；同第５，８１４，６４７号および同第６，２００，９９８号において開示される。
【００４５】
ＰＰＡＲ−γリガンドは、商業的に得られ得る。あるいは、これらは、市販の前駆体から合成されるか、そして／または公知の生化学的手段によって、天然に存在する供給源から精製もしくは単離される（例えば、米国特許第６，２００，９９８号を参照のこと）。ＰＰＡＲ−γリガンドの合成もしくは半合成のバージョン、または誘導体はまた、本発明の方法において、種々のアニオンおよびカチオンと会合したＰＰＡＲ−γリガンド化合物の薬学的に受容可能な塩（例えば、コハク酸塩、グルタミン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、ナトリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、塩酸塩、塩化物、硫酸塩、炭酸塩、または炭酸水素酸塩が挙げられる）と同様に、有用である。本発明を実施するために有用な化合物としては、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）骨格の５位に結合したアリール基の分子モチーフを有するチアゾリジンジオンおよび他の化合物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４６】
有用なＰＰＡＲ−γリガンドは、チアゾリジンジオン化合物（ＴＺＤ）であり、このリガンドとしては、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンが挙げられる。１つの好ましい実施形態において、ＰＰＡＲ−γリガンドは、化学式Ｃ１８Ｈ１９Ｎ３Ｏ３Ｓ・Ｃ４Ｈ４Ｏ４を有する、（±）−５−［［４−［２−（メチル−２−ピリジニルアミノ）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−チアゾリジンジオン，（Ｚ）−２−ブテンジオエートとしても公知のロシグリタゾン（ロシグリタゾンマレイン酸塩の形態で市販されている）である。ロシグリタゾンは、強力なチアゾリジンジオン経口抗糖尿病剤であり、ヒト被験体への投与が米国でＦＤＡにより最近認可された。ロシグリタゾンは、ピオグリタゾンおよびトログリタゾン（他の認可されたチアゾリジンジオン）よりも大きなＰＰＡＲ−γ結合親和性および抗高血糖効力を有する。トログリタゾンは、分子式Ｃ２４Ｈ２７ＮＯ５Ｓを有する、（±）−５−［４−［（６−ヒドロキシ−２，５，７，８−テトラメチルクロマン−２−イル）メトキシ］−ベンジル］−２，４−チアゾリジンジオンとしても公知である。ピオグリタゾン（ピオグリタゾン塩酸塩として市販される）はまた、分子式Ｃ１９Ｈ２０Ｎ２Ｏ３Ｓ・ＨＣｌを有する、［（±）−５−［［４−［２−（５−エチル−２−ピリジニル）エトキシ］フェニル］メチル］−２，４−］チアゾリジンジオンモノヒドロクロリドとして公知である。
【００４７】
４５００名を超える患者の臨床的サーベイランスにより、ロシグリタゾンが、安全で、２型糖尿病を有するヒト患者の有効な単独療法または併用療法であることが示されている（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｂ．Ｊ．，Ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｐ．Ｐｒａｃｔ．５４：３３３−７［２０００］）。同様に、ピオグリタゾンは、２型糖尿病の処置として使用され、１９９９年７月１６日にＦＤＡの認可を受けた。トログリタゾンは、１９９７年１月に市場に出回り、ヒトにおける肝臓毒性の報告に起因して、２０００年３月に市場から回収された。その使用は、患者の応答に関して、開業医により特別に注意してモニターされるべきである。
【００４８】
本発明は、ＰＰＡＲ−γリガンドが、哺乳動物における下垂体腫瘍ののサイズを減少させるか、または哺乳動物における下垂体腫瘍の増殖もしくは発生を阻害もしくは予防するか、または哺乳動物における下垂体腫瘍の症状を処置するように機能する、任意の特定の機構に拘束されず、その機構に依存もしない。それとは無関係に、ＴＺＤ誘導性細胞周期停止についてのいくつかの機構が提唱されており、これらの機構は、サイクリンＤ１−キナーゼ活性、増大したｐ２１（ＣｉＰ）もしくはｐ２７（Ｋｉｐ）発現を阻害することによってＲｂリン酸化を妨げることを含む（Ｗａｋｉｎｏ，Ｓ．ら，Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  γ  ｌｉｇａｎｄｓ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ  ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｇ１→Ｓ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｓｍｏｏｔｈ  ｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２７５：２２４３５−４１［２０００］）；Ｓｕｇｉｍｕｒａ，Ａ．ら，Ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ  ｂｙ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１  ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２６１：８３３−７［１９９９］；Ｍｏｔｏｍｕｒａ，Ｗ．ら，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇａｍｍａ  ｂｙ  ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｉｎｃｒｅａｓｅ  ｏｆ  ｐ２７ＫｉＰｌ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐａｎｃｒｅａｓｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：５５５８−６４［２０００］）。
【００４９】
ＴＺＤ誘導性アポトーシスを媒介する候補分子としては、減少したＢｃｌ２、ならびに増大したＢａｘおよびＴＲＡＩＬが挙げられる（Ｇｏｋｅ，Ｒ．ら，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＴＲＡＩＬ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｂｙ  ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒｓ，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１：７７−８１［２０００］；Ｓｔａｅｌｓ，Ｂ．ら，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ａｏｒｔｉｃ  ｓｍｏｏｔｈ−ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｉｓ  ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ  ｂｙ  ＰＰＡＲ−ａｌｐｈａ  ｂｕｔ  ｆｉｏｔ  ＰＰＡＲ−ｇａｍｍａ  ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ，Ｎａｔｕｒｅ  ３９３：７９０−７９３［１９９８］）。
【００５０】
ＰＰＡＲ−γリガンドは、本発明の方法に従って、薬学的に受容可能な組成物中で投与され得る。「投与する」とは、薬学的に受容可能なＰＰＡＲ−γリガンド含有組成物を与えること、提供すること、食べさせること（給餌すること）、分配する（施す）こと、挿入すること、注射すること、注入すること、灌流すること、処方すること、供給すること、処置すること、摂取させること、噴霧すること、吸入させること、嚥下させること、飲み込むこと、または塗布することを包含する。
【００５１】
任意の適切な送達経路は、ＰＰＡＲ−γリガンドの有効投薬量を哺乳動物に提供するために使用され得る。ＰＰＡＲ−γリガンドの好ましい送達経路は、適切な作用部位または所望の作用部位に活性化合物を効率的に輸送する。このような送達系路は、当業者に周知であり、経口経路、眼内経路、肺経路、経皮経路、膜貫通経路（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎａｌ）、または非経口経路（例えば、直腸経路、局所的経路、皮下経路、静脈内経路、尿管内経路、筋肉内経路、経鼻経路（点鼻または噴霧）、吸入器、点眼剤または軟膏が挙げられるが、これらに限定されず、経口送達経路が好ましい。
【００５２】
ＰＰＡＲ−γリガンドは、哺乳動物への投与に適した任意の投薬形態であり得る。投薬形態としては、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、硬質カプセルもしくは軟質カプセル、カプレット剤、ミクロスフェア、分散液、懸濁液、溶液、エアロゾル、分散性散剤、または顆粒、シロップ、エリキシル、腸溶性処方物（ｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａ）、軟膏、または他の局所的塗布などが挙げられる。
【００５３】
ＰＰＡＲ−γリガンドと同様に、本発明の方法に従う薬学的に受容可能な組成物は、錠剤、ペレット、カプセル剤、溶液、エマルジョン、懸濁液、および使用に適した任意の他の形態の処方のために、当業者に公知の薬学的に受容可能な溶媒、アジュバント、および／または薬学的に受容可能な医薬でない、非毒性キャリア、結合剤、濃稠化剤、および／または充填剤物質）を含み得る。使用され得るキャリアとしては、グルコース、ラクトース、スクロース、アカシアガム、ゼラチン、マンニトール、デンプン、デンプンパスタ、三ケイ酸マグネシウム、タルク、トウモロコシデンプン、ケラチン、コロイド状シリカ、ジャガイモデンプン、尿素、中鎖長トリグリセリド、デキストラン、および固体、半固体、または液体形態の調製物を製造する際の使用に適した他のキャリアが挙げられるが、これらに限定されない。さらに、補助剤、安定化剤、濃稠化剤、ならびに着色剤および香料が使用され得る。開業医のより具体的な必要性に合わせることが所望される場合、少なくとも１種のＰＰＡＲ−γリガンドと合わせたさらなる医療的添加物または栄養添加物もまた企図される。
【００５４】
例示によって、固体キャリアが経口投与に使用される場合、その調製物は、錠剤にされ得るか、散剤もしくはペレット形態で硬質ゼラチンカプセル剤にされ得るか、またはトローチもしくはロゼンジの形態であり得る。液体キャリアが使用される場合、調製物は、シロップ、エマルジョン、軟質ゼラチンカプセルもしくは滅菌注射可能液体（例えば、水性もしくは非水性液体懸濁液もしくは溶液）の形態であり得る。組成物はまた、既知の技術（例えば、制御された放出のために浸透性治療的錠剤を形成するために、米国特許第４，２５６，１０８号；同第４，１６０，４５２号；および同第４，２６５，８７４号に記載される）によって被覆され得る。制御放出組成物のための他の例示的技術（例えば、米国特許第４，１９３，９８５号；および同第４，６９０，８２２号；同第４，５７２，８３３号に記載されるもの）はまた、本発明の方法の薬学的に受容可能な組成物の処方において使用され得る。
【００５５】
タルクおよび／または炭水化物キャリアまたは結合剤などを有する錠剤、糖衣剤、またはカプセル剤は、経口適用に特に適している。錠剤、糖衣剤、またはカプセル剤に好ましいキャリアとしては、ラクトース、トウモロコシデンプン、および／またはジャガイモデンプンが挙げられる。シロップまたはエリキシルは、甘味を添加したビヒクルが使用され得る場合において使用され得る。
【００５６】
鼻内投与または吸入投与に関して、調製物は、液体キャリア中に、特にエアロゾル適用のための水性キャリア中に、溶解または懸濁されたＰＰＡＲ−γリガンドを含み得る。そのキャリアは、溶解剤（例えば、プロピレングリコール、界面活性剤、吸収増強剤（例えば、レシチン（ホスファチジルコリン）またはシクロデキストラン）、または保存剤（例えば、パラベン）のような添加剤を含み得る。
【００５７】
非経口適用に関して、特に適切なのは、注射可能な溶液または懸濁液、好ましくは、ポリヒドロキシル化ヒマシ油に溶解された活性化合物を含有する水性溶液である。
【００５８】
薬学的に受容可能な組成物は、ＰＰＡＲ−γリガンドの１を超える濃度単位で処方または製造され得る。その結果、構成単位の増分量のＰＰＡＲ−γリガンドが容易に投与される。
【００５９】
本発明の方法に従って、薬学的に受容可能な組成物は、ＰＰＡＲ−γリガンドのモジュラー増分が特定の哺乳動物に対して好ましい用量範囲内で容易に投与され得るように、ＰＰＡＲ−γリガンドについて１種より多い濃度にて処方され得、かつ製造され得る。一般的には、ＰＰＡＲ−γリガンドの好ましい有効量の範囲は、好ましい方法によると、毒性レベルをはるかに下回る。
【００６０】
例えば、ＰＰＡＲ−γリガンドがロシグリタゾンまたはトログリタゾンのいずれかであり、ヒトにおける糖尿病関連状態の処置と関連して使用される場合、トログリタゾンは、好ましくは、ロシグリタゾンより１０倍多い用量で投与される。１日当たり約２０ミリグラムのロシグリタゾンが、副作用を伴わずに継続的な期間、ヒトに対して投与されている。
【００６１】
下垂体腫瘍またはクッシング症候群に苦しむ成人のヒトの処置において、ロシグリタゾンの投与について好ましい治療用量範囲は、本発明の方法によると、１日当たり約１ｍｇと約１００ｍｇとの間である。有効量または有効用量は、ヒト被験体に対して１日１回の投与か、または１日当たり２回以上の投与に分割されて提供される。より好ましくは、組成物は、送達系において処方されて、１日当たり約４ｍｇ〜約２０ｍｇのＰＰＡＲ−γリガンドの用量が送達される。このより好ましい用量範囲は、基本的に毒性の危険性を有さずに有益な効果を提供する。この投薬レジメンは、最適な治療応答を提供するために調整され得る。
【００６２】
下垂体腫瘍またはクッシング症候群に苦しむ成体の非ヒト哺乳動物の処置において、ロシグリタゾンの投与について好ましい治療範囲は、本発明の方法によると、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ体重と約３００ｍｇ／ｋｇ体重との間である。より好ましくは、組成物は、送達系において処方されて、１日当たり約５０ｍｇ／ｋｇ体重〜約１５０ｍｇ／ｋｇ体重の用量が送達される。
【００６３】
本発明の方法に従って、ＰＰＡＲ−γリガンドの投与は、短い継続時間であり得るか、または必要に応じて無制限に継続され得る。本発明の方法の投与の継続時間は、処置されるべきと考えられる特定の下垂体の状態によって変化する。例えば、下垂体腫瘍に苦しむ被験体において、治療は、代表的には、腫瘍が被験体においてもはや検出不可能であるまで継続する。一方で、被験体が下垂体腫瘍の再発について高い危険性にある場合、予防処置は、腫瘍が全く検出不可能である時期の後でさえも進め得る。他の事例では、ＰＰＡＲ−γリガンドは、被験体のステロイドレベルが正常な生理学的範囲内に戻るまで投与され得る。
【００６４】
本発明の方法に従って、ＰＰＡＲ−γリガンドは、単独でかまたは他の薬物と組み合わせて投与され得、これらの他の薬剤もまた、ＰＰＡＲ−γリガンドが有用な疾患または状態の処置、予防、抑制または回復において有用であり得る。このような他の薬物は、これらについて一般に使用される経路および量で、上記ＰＰＡＲ−γリガンドと同時にかまたは連続的に投与され得る。ＰＰＡＲ−γリガンドが１つ以上の他の薬物と共に連続的に使用される場合には、単位投薬形態中にこのような他の薬物およびＰＰＡＲ−γリガンドを含有する薬学的組成物が好ましい。１つ以上の他の活性成分と組み合わせて使用される場合には、ＰＰＡＲ−γリガンドおよび他の活性成分が、各々が個々に使用される場合よりも低い用量で使用され得ることもまた、企図される。
【００６５】
本発明に従ってＰＰＡＲ−γリガンドと組み合わされ得るか、別個に投与され得るかまたは同一の薬学的組成物中で投与され得る、このような他の薬物の例としては、ソマタスタチン、ソマトスタチンアナログ（例えば、オクトレオチド）、レチノイン酸、レチノイン酸レセプター（ＲＡＲ）およびＲＡＲ様リガンド、ケトコナゾール、メチラポン、ならびにドーパミンアンタゴニスト（例えば、ブロモクリプチン）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６６】
ここで、本発明は、以下の実施例の参照によってより詳細に記載される。これらの実施例は、いかなる方法においても本発明の範囲を限定するように構成されるべきではない。
【実施例】
【００６７】
（実施例１：材料および方法）
（患者および組織）  施設の指針に従って、外科的に切除したＡＣＴＨ分泌型下垂体腺腫サンプルを、外科的切除後に、６名の連続した非選択的患者から得た。初代ヒト下垂体培養物について、手術にて新たに得た下垂体腫瘍組織を、機械的に細かく切り刻み、そして１０ｍＬ  ＤＭＥＭ培地中で０．３５％コラゲナーゼおよび０．１％ヒアルロニダーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用いて４５分間３７℃にて消化した。細胞懸濁液を濾過し、そして１０％ＦＢＳ、２ｍＭグルタミンおよび抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびファンガゾン（ｆｕｎｇａｚｏｎｅ））を含有する低グルコースＤＭＥＭ中で２４時間再懸濁し、その後、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処理した。
【００６８】
（細胞培養）  サブコンフルエントなＡｔＴ２０マウス下垂体（ＡＣＴＨ分泌型）腫瘍細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および抗生物質を補充したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）中で、５％ＣＯ２中３７℃にて２４時間培養し、その後、場合に応じてトログリタゾンまたはロシグリタゾンで処理した。培地は、２日毎にリガンドを補充し、細胞は、血清含有培地または無血清培地中で９６時間まで維持した。
【００６９】
（細胞周期分布）  処理後、ＡｔＴ２０細胞をトリプシン処理し、遠心分離（１５００ｒｐｍ×２分）し、ＰＢＳで洗浄し、そして２０ｇ／ｍＬ  ＲＮａｓｅＡ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）で処理した。ＤＮＡを、１００μｇ／ｍＬヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で４０℃にて３０分間染色し、そして遮光し、その後、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）を用いて分析した。ＤＮＡヒストグラム分析を、ｍｏｄＦｉｔＬＴソフトウェアを使用して実施した。
【００７０】
（アポトーシスアッセイ）  フローサイトメトリーによるアネキシンＦＩＴＣ。ＡｔＴ２０細胞を処理し、ＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン処理し、遠心分離し、そして洗浄し、その後、製造業者の取扱説明書（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に従って、ＦＩＴＣ標識モノクローナルアネキシン抗体およびＰＩと共に室温にて３０分間インキュベーションした。約１×１０６個の細胞をフローサイトメトリーによって調製しかつ分析し、そして標識された核（ＰＩ）を光散乱でゲーティング（ｇａｔｅ）して細片を除去し、そしてアネキシン−ＦＩＴＣポジティブ細胞のパーセンテージを決定した。アネキシン−ＦＩＴＣポジティブ細胞はまた、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ２免疫蛍光顕微鏡を用いて可視化した。
【００７１】
（末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介性ｄＵＴＰニック末端標識化（ＴＵＮＥＬ））  アポトーシス誘導性核ＤＮＡフラグメンテーションを、製造業者のプロトコルに従って、インサイチュでの細胞死検出キットであるＴＭＲレッド（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）を使用して検出した。簡単に述べると、チアゾリジンジオン化合物（ＴＺＤ）での処理の４８時間後、ＡｔＴ２０細胞を、４％パラホルムアルデヒド中で固定し、０．１％クエン酸ナトリウム／０．６％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ７．４）を用いて４℃にて２分間透過処理し、その後、Ｔｕｎｅｌ反応混合物（ＴＭＲレッド／ｄＮＴＰ混合物、ＴｄＴ、および標識化緩衝液）中で３７℃にて６０分間インキュベーションした。スライドを、ＰＢＳ／トリトン／ＢＳＡ（０．３％）で洗浄し（３×５分間）、そしてＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ２免疫蛍光顕微鏡で可視化した。
【００７２】
（ＰＯＭＣプロモーターを用いるトランスフェクション）  ロシグリタゾン（１０−５Ｍ）を含む／含まない血清充填培地中で４８時間のインキュベーションの後、Ｄｒ．Ｍａｌｃｏｌｍ  Ｌｏｗ（Ｖｏｌｌｕｍ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｏｒｅｇｏｎ）によって快く提供されたＰＯＭＣプロモーターレポーター構築物（−７０６／＋６４ラットＰＯＭＣ−ｌｕｃ）（Ｈａｍｍｅｒ，Ｇ．Ｄ．ら、Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｄ  ｈｏｒｍｏｎａｌｌｙ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｐｒｏｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｒ  ｉｎ  ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ  ｍｉｃｅ、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４：１６８９−９７（１９９０））を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ）を使用して、ＡｔＴ２０細胞中に一過性にトランスフェクトした。次いで、細胞を、記載されるように（Ａｕｅｒｎｈａｍｍｅｒ，Ｃ．Ｊ．ら、Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１１  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｐｒｏｏｐｉｏｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈｉｎ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｉｎ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｈ  ｃｅｌｌｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ａ  ｒｅｄｕｎｄａｎｔ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｎｅｔｗｏｒｋ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｙｐｏｔｈａｌｍｏ−ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ａｄｒｅｎａｌ  ａｘｉｓ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １４０：１５５９−６６（１９９９））、ロシグリタゾンまたは副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ、５０ｎＭ）と共にインキュベートした。
【００７３】
（ノーザンブロット分析）  総ＲＮＡを、ＴＲＩｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて細胞培養物（約３×１０７細胞／群）または切除した組織から抽出した。ラットの精巣ＲＮＡは、ＰＴＴＧ発現についてのポジティブコントロールとして使用した。電気泳動したＲＮＡを、高結合ｎナイロン膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｒｉｏｎａｌ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）に転写し、以前に記載されたように（Ｈｅａｎｅｙ，Ａ．Ｐ．ら、Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｅｎｅ（ＰＴＴＧ）ａｎｄ  ｂＦＧＦ  ｉｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：１３１７−１３２１（１９９９））ハイブリダイズさせた。
【００７４】
（下垂体腺の免疫細胞化学的研究）  外科的に切除したヒト下垂体腫瘍および正常な下垂体の剖検組織を、施設内審査委員会の指針に従って得た。ビヒクル処理したマウスまたはＴＺＤ処理したマウス由来の下垂体組織を、施設の動物の取り扱いおよび使用の委員会の指針に従って得た。すべての組織を、４％パラホルムアルデヒド中で固定し、そしてパラフィンの包埋物用に加工した。切片を、ヒトまたはマウスのＡＣＴＨ（１：１０００）（ＤＡＫＯ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ）、ＰＰＡＲ−γ（１：５００）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）に対する抗体、（両方ともアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ法を使用する）、ならびに二重免疫染色についてのアビジン−ビオチン−ＦＩＴＣおよびＴＲＩＴＣを使用して免疫染色し、そしてヘマトキシリンで対比染色した。ネガティブコントロールを、吸収前血清または非免疫血清を使用して、各々のスライドについて実施した。
【００７５】
（ウェスタンブロット分析）  ＡｔＴ２０細胞を１ウェル当たり約１×１０６にて播種し、ヒト下垂体細胞培養物を６ウェルプレート中の１ウェル当たり約０．５×１０６にて２４時間播種し、その後、ＴＺＤで処理した。次いで、細胞をＰＢＳで洗浄し、そしてタンパク質サンプルをＲＩＰＡ緩衝液中で調製し、１２％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルでの還元条件下で、標準的な方法を使用して分離した（Ｅｌｓｔｎｅｒ，Ｅ．ら、Ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｅｒ−γ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｅｒ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ＢＮＸ  ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８８０６−８８１１（１９９８））。分離したタンパク質をニトロセルロース膜に転写し、そしてＢｃｌ−２（１：５００）、Ｂａｘ（１：１０００）、ＴＲＡＩＬ（１：５００）、ｐ５３（１：１０００）（すべてＳａｎｔａ−Ｃｒｕｚ、ＣＡから）、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ  ７９５）（１：１０００）、切断されたカスパーゼ−３および切断されていないカスパーゼ−３（１：５００）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）に対する抗体を用いて、４℃にて一晩プローブした。洗浄後、膜を適切なＩｇＧ−西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体と共にインキュベートし、そして免疫反応性タンパク質のバンドを、ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ、ＵＫ）を用いて可視化した。総タンパク質を、抗アクチン抗体（１：５０００、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）またはポンソーＳ染色を用いる再プローブによって正規化し、そしてタンパク質のバンドをデンシトメトリー（Ｖｉｄｅｏ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ  ｍｏｄｅｌ  ６２０、Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によって定量した。
【００７６】
（実施例２：結果）
（ＰＰＡＲ−γは、下垂体コルチコトロフ細胞において選択的に発現する）
アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ法あるいはＴＲＩＴＣ標識ＡＣＴＨおよびＦＩＴＣ標識ＰＰＡＲ−γ抗体を使用した、死誘導後の正常なヒト下垂体組織の免疫細胞化学分析は、細胞の約１５％において、下垂体前葉に全体に渡るＡＣＴＨ免疫反応性細胞の特徴的な拡散を示したが、下垂体前葉と下垂体後葉との間の中間領域に集中した（図１Ａおよび図１Ｂ）。ＰＰＡＲ−γ−ＦＩＴＣ免疫反応性は、下垂体の中間領域に位置する細胞にのみ独占的に存在した（図１Ｃおよび図１Ｄ）。ＴＲＩＴＣ標識抗体およびＦＩＴＣ標識抗体を使用する二重免疫蛍光研究は、すべてのＰＰＡＲ−γ免疫反応性細胞が、ＡＣＴＨ免疫反応性細胞と共に同時局在化したことを明らかにした（図１Ｅ、図１Ｆ、および図１Ｇ）。ＰＰＡＲ−γ／ＡＣＴＨ免疫反応性細胞集団の下垂体後葉への著しい好塩基球（コルチコトロフ）侵潤が、顕著であった（例えば、図１Ｃを参照のこと）。
【００７７】
（ＰＰＡＲ−γは、ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍において発現する）
正常なヒト下垂体前葉コルチコトロフ細胞において観察されたＰＰＡＲ−γおよびＡＣＴＨの同時局在化を考慮して、ＰＰＡＲ−γ発現を、６つの連続的に外科的切除したＡＣＴＨ分泌型ヒト下垂体腫瘍標本において評価した。下垂体腫瘍誘導性タンパク質抽出物のウェスタンブロット法は、２つの正常な下垂体誘導性抽出物における穏やかなＰＰＡＲ−γ発現と比較して、試験した６つすべてのＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍における豊富なＰＰＡＲ−γ発現を示した（図２Ａ）。切除した組織の免疫細胞化学分析は、これらの下垂体腺腫細胞に局在化した、豊富なＰＰＡＲ−γ免疫反応性を実証し、この細胞はＡＣＴＨもまた発現した（図２Ｂおよび図２Ｃ）。
【００７８】
（インビトロでの下垂体ＰＰＡＲ−γレセプターについての機能的役割）
下垂体コルチコトロフＰＰＡＲ−γ発現の機能的意義を決定するために、ＰＰＡＲ−γリガンドの効果を、ＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍細胞についてインビトロで試験した。細胞が無血清条件で維持された場合に４８時間までのトログリタゾン処理もしくはロシグリタゾン処理（１０−６〜１０−４Ｍ）、または細胞が血清充填条件で維持された場合に９６時間までのトログリタゾン処理もしくはロシグリタゾン処理（１０−６〜１０−４Ｍ）は、Ｇ０〜Ｇ１細胞周期の停止（コントロール、Ｇ１  ７５±４％  対  ロシグリタゾン（ｒｏｓ）、Ｇ１  ８５±２％、ｐ＝０．００９）を誘導し、そして減少したＳ期細胞（コントロール、１８±０．０５％  対  ロシグリタゾン、１２±０．５％、ｐ＝０．００１）をもたらした（図３Ａ）。ＴＺＤ処理したコルチコトロフ細胞由来のタンパク質抽出物のウェスタンブロット分析は、Ｓｅｒ７９５リン酸化網膜芽腫のタンパク質発現において約６０％の減少を示し（図３Ｂおよび図３Ｃ）、このことは、観察されたＧ０／Ｇ１細胞周期の停止についての機構を示し、観察されたコルチコトロフ腫瘍のＰＰＡＲ−γ発現の機能的意義を示す。
【００７９】
４８時間にわたるＡｔＴ２０細胞のロシグリタゾン（１０−５〜１０−４Ｍ）処理は、アネキシン−ＦＩＴＣ免疫反応性ＡｔＴ２０細胞における用量依存性増加、および促進されたアポトーシスを実証した（図３Ｄ、ｐ＜０．００１）。アネキシン−ＦＩＴＣ免疫反応性細胞における同様の増加が、ヒト下垂体クロチコトロフ腫瘍培養物のロシグリタゾン（１０−５Ｍ）での処理後に観察された（図３Ｅ）。ＴＵＮＥＬ分析は、ＴＺＤ誘導性細胞死、および約３倍増加したアポトーシスを確証した（図４および図４Ｂ、ａ〜ｄ）（アポトーシス％：コントロール、３３±３％  対  ロシグリタゾン、１０−６Ｍ  ４７±４％；ｒｏｓ、１０−５Ｍ  ６９±７％、ｐ＜０．００１）。副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）は、強力なコルチコトロフ増殖性因子である（図４Ｂ、ｅ＋ｇ）（Ｖａｌｅ  Ｗ．ら、Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ４１−ｒｅｓｉｄｕｅ  ｏｖｉｎｅ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｔｈａｔ  ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｏｒｔｉｃｏｔｒｏｐｉｎ  ａｎｄ  ｂｅｔａ−ｅｎｄｏｒｐｈｉｎ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１３：１３９４−７（１９８１））。ＣＲＨ（５０〜１００ｎＭ）の前の、ＴＺＤによるＡｔＴ２０細胞の前処理は、ＣＲＨ（５０ｎＭ、２４時間）の増殖促進効果をブロックし、そしてクロチコトロフ細胞のアポトーシスを誘導した（図４Ｂ、ｆ＋ｈ）（アポトーシス％；ＣＲＨ  ５０ｎＭ、４±０．５％  対  ＣＲＨ  ＆  ロシグリタゾン  １０−５Ｍ  １９±３％、ｐ＜０．０５）。
【００８０】
ＴＺＤ処理したマウスクロチコトロフ細胞由来のタンパク質抽出物のウェスタンブロット分析は、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２の減少した発現、ならびに増加したレベルのアポトーシス促進性Ｂａｘおよびｐ５３発現を示し、これは観察された増加したアポトーシスについての潜在的な機構を示唆する（図５Ａおよび図５Ｂ）。切断されたカスパーゼ−３の約４倍の増加、および総カスパーゼ−３の随伴的減少は、ＴＺＤ処理により生じ、そして促進されたアポトーシスと一致した（図５Ｃ）。カスパーゼ−３は、細胞のアポトーシスの後期に関わる酵素であり、その酵素活性は、切断された後に活性化される。
【００８１】
（ＰＰＡＲ−γリガンドは、ＡＣＴＨ発現およびＰＴＴＧ  ｍＲＮＡ発現、ならびにＰＯＭＣ転写を阻害する）
プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）遺伝子の選択的スプライシングおよび翻訳後プロセシングの後、コルチコトロフ細胞は、ＡＣＴＨを発現する（Ｗｈｉｔｅ，Ａ．ら、ＡＣＴＨ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ：ｂｉｌｏｇｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｌｅｖａｎｃｅ、Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４８：２５１−５（１９９８））。ＴＺＤ処理した細胞から抽出した総ＲＮＡのノーザンブロット分析は、リガンドが、ＡｔＴ２０細胞においてＰＯＭＣ  ｍＲＮＡ過多を約４分の１に阻害したことを明らかにした（図６Ａ）。さらに、増殖性マーカーである下垂体腫瘍トランスフォーミング遺伝子（ＰＴＴＧ）ｍＲＮＡ発現において、約３分の１の減少が観察されたことは、ＴＺＤ処理したコルチコトロフ下垂体腫瘍細胞の減少した増殖の割合を確証する（図６Ａ）。
【００８２】
ＰＯＭＣプロモーターを用いて一過性にトランスフェクトしたＡｔＴ２０細胞のＣＲＨ処理は、結果としてＰＯＭＣ転写において１．６倍の増加を生じた。ロシグリタゾン処理単独、またはＣＲＨ処理の前のロシグリタゾン処理は、基底の転写およびＣＲＨ誘導性ＰＯＭＣ転写を抑止した（図６Ｂ）。
【００８３】
（ＰＰＡＲ−γリガンドはインビボで下垂体腫瘍増殖を阻害する）
ＴＺＤは、インビトロで抗増殖性作用およびプロ−アポトーシス作用を示すので、コルチコトロフ下垂体腫瘍増殖に対するＴＺＤ処置の効果を、インビボで評価した。マウスコルチコトロフＡｔＴ２０下垂体腫瘍細胞（約２００，０００細胞）を、４週齢雌無胸腺ヌードマウスの皮下に接種（ｉｎｎｏｃｕｌａｔｅ）し、無作為化して、経口のロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルを動物に与えた。ベースライン血清ＡＣＴＨおよびコルチコステロンレベルは、コントロール群およびロシグリタゾン処置群において一致した（データは示さず、ｐ＝ｎｓ）。４週間後、５匹の未処理コントロール動物のうち４匹は、大きな可視のコルチコトロフ腫瘍（直径１〜２ｃｍ）を発現した。対照的に、５匹のロシグリタゾン処置動物のうち１匹だけが、小さな皮下のコルチコトロフ細胞腫瘍（直径０．１ｃｍ）を発現した（図７Ａおよび図７Ｂ）。図７Ｂに図示されるように、未処理マウス代表例は、ロシグリタゾン処置マウスには存在しない種々の表現型の徴候を発現した。例えば、未処理マウスは、可視の腫瘍（矢印で強調した）、弾性が低下した鱗状の皮膚、縮小した細い頭部、および筋萎縮を発現した。
【００８４】
血漿ＡＣＴＨレベルおよび血清コルチコステロンレベルは、ロシグリタゾン処置マウス（ＡＣＴＨ；平均±ＳＥＭ、９８±３３ｐｇ／ｍｌ；コルチコステロン；平均±ＳＥＭ、１１３±１７ｎｇ／ｍＬ）において、ビヒクル処理腫瘍保有動物（ＡＣＴＨ；平均±ＳＥＭ；２０８５±８４７ｐｇ／ｍｌ；コルチコステロン；平均±ＳＥＭ；７８５±３７４）と比較してかなり低かった（ｐ＜０．０５）（図７Ｃおよび図７Ｄ）。
【００８５】
ＴＺＤ処置は、インビボで実験的下垂体コルチコトロフ腫瘍発現を予防するが、確立した活発に増殖する下垂体腫瘍を有する患者は常に存在する。従って、ＴＺＤ処置の効果を、既に確立した下垂体コルチコトロフ腫瘍の増殖およびステロイドホルモンレベルに対してインビボで試験した。マウスコルチコトロフ下垂体腫瘍細胞（ＡｔＴ２０）を、無胸腺ヌードマウスの皮下に接種（ｉｎｎｏｃｕｌａｔｅ）し、腫瘍を発現させた。３週間以内に、注射した全ての動物は、大きな可視の腫瘍を発現した。これらを無作為化して、経口のロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを動物に与えた。ベースライン血清ＡＣＴＨレベルおよびコルチコステロンレベル、および腫瘍体積は、その後コントロール群または処置群に無作為化した群において異ならなかった（データは示さず、ｐ＝ｎｓ）。両群において、腫瘍増殖は続いたが、５匹のロシグリタゾン処置動物のうち３匹において顕著に抑制された（ｐ＜０．０５）（対の代表例を、図８Ｂに示す；図８Ａもまた参照のこと）。全ての動物を、６週目に安楽死させた。マウスの外観の表現型は著しく異なり、ビヒクル処置マウスは衰弱し、皮膚萎縮を発現し、そして副腎皮質機能亢進症の特徴である色素沈着を現した（図８Ｂ）。対照的に、ロシグリタゾン処置マウスは成長し続け、体重を増やし、そして皮膚の萎縮も色素沈着も示さなかった。さらに、ロシグリタゾン処置は、血漿ＡＣＴＨレベルの７５％の減少（図８Ｃ）（平均±ＳＥＭ；コントロール、３８４１±３０８  対  ｒｏｓ処理、９７８±４５２ｐｇ／ｍＬ、ｐ＝０．００２）、および血清コルチコステロンレベルにおける９６％の低下（図８Ｄ）（平均±ＳＥＭ；コントロール、４３０４±２５９３  対  ｒｏｓ処理、１８１±５６ｎｇ／ｍＬ、ｐ＜０．０５）をもたらした。
【００８６】
（正常マウスにおける長期ＰＰＡＲ−γリガンド処置後の下垂体−副腎機能の温存）
観察された下垂体コルチコトロフＰＰＡＲ−γ発現、インビボでの血漿中のＡＣＴＨレベルおよびコルチコステロンレベルにおけるＴＺＤ誘導性減少、およびクッシング症候群のための医学的治療としてのこれらの薬剤の使用の可能性があった場合、長期のロシグリタゾン投与の効果を正常マウス下垂体−副腎機能において評価した。非ストレス条件（静かな環境で一晩）およびストレス条件（１５分間拘束）の両方において、血漿ＡＣＴＨ（ｐｇ／ｍＬ）（図９Ｂ）および血清コルチコステロン（μｇ／ｍＬ）（示さず）は、ロシグリタゾン処置（１５０ｍｇ／ｋｇ、６週間）正常無胸腺Ｎｕ／Ｎｕマウスおよび未処置正常無胸腺Ｎｕ／Ｎｕマウスにおいて、同様であった（平均±ＳＥＭ  ＡＣＴＨ、コントロール；ベースライン４３４±４０、ストレス誘導、５２７８±３１２  対  ｒｏｓ；ベースライン、４７４±３３、ストレス誘導４７６４±２９２ｐｇ／ｍＬ、ｐ＝ｎｓ）（図９Ｂ）。
【００８７】
（ＰＰＡＲリガンドは、クッシング症候群において尿コルチソル排出を誘導する）
ロシグリタゾンは、ＩＩ型真性糖尿病を処置するために認可され、クッシング症候群を有する患者の約６０％に影響を及ぼす（Ｒｏｓｓ，Ｅ．Ｊ．ら，Ｃｕｓｈｉｎｇ’ｓ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ−ｋｉｌｌｉｎｇ  ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｉｓｃｒｉｍａｔｏｒｙ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ｓｉｇｎｓ  ａｎｄ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ａｉｄｉｎｇ  ｅａｒｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｌａｎｃｅｔ  ２：６４６−９［１９８２］）。ある２９歳の女性は、２年前に初めて紫斑、皮膚線条、７０ポンドの体重増加および高血圧を表した。評価したところ、経蝶形骨外科手術によって切除したＡＣＴＨ分泌下垂体腫瘍に起因するクッシング症候群の診断が確認された。この患者は、１年後に再び、体重増加、動揺性高血圧、糖尿病を表し、クッシング病の再発が確認された。二度目の下垂体外科手術の前に、ロシグリタゾンを毎日８ｍｇ、３週間にわたって投与し、高血糖を調節した。ベースライン２４時間遊離コルチソル尿排出（ＵＦＣ）は２４４μｇ／ｄＬと高く（通常２〜９０μｇ／ｄＬ）、そしてロシグリタゾン処置の２週間後および３週間後にそれぞれ３３％および５５％まで、段階的に減少した（図９Ａ、ｐ＜０．０２）。正常マウスにおいて、下垂体コルチコトロフ応答性が、長期のロシグリタゾン処置後に維持されることも示した（図９Ｂ）。ビヒクルまたはロシグリタゾンの６週間の経口処置（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）後、正常雌無胸腺Ｎｕ／Ｎｕマウスにおける血漿ＡＣＴＨ（１４００ｈ）、１５分間拘束ストレス。
【００８８】
さらに、上に示した発見に基づいて、クッシング症候群に罹患した被験体の処置は、下垂体以外の組織に対してその病因を追跡すると、本発明の処置方法から利益を得ると考えられる。具体的には、ロシグリタゾンの投与がＡＣＴＨプロモーター活性およびＡＣＴＨ  ｍＲＮＡ発現を阻害することを、上で示した。そして、ＡＣＴＨはクッシング症候群の異所性形態において、例えば、肺気管支カルチノイド腫瘍から転写および分泌されるため、本発明の処置方法はまた、異所性クッシング症候群に苦しむ被験体においてＡＣＴＨ分泌を阻害し、結果として副腎皮質亢進症を阻害すると考えられる。さらに、コルチコトロフ腫瘍を有するマウスに対するインビボのロシグリタゾン処置は、ＡＣＴＨ分泌の減少に加えて、コルチコステロン生成における劇的な減少をもたらすことが実証された。これらの結果は、ＰＰＡＲ−γリガンド処置はまた、副腎腫瘍に起因するクッシング症候群においても血清コルチソル分泌を低下させるように作用することを示す。
【００８９】
（実施例３：材料および方法）
患者および組織。施設ガイドラインに従って、外科切除した下垂体腺腫サンプルを、外科切除後に連続的な任意抽出患者から得た。初代ヒト下垂体培養物について、外科手術で新鮮に得られた下垂体腫瘍組織を機械的に刻み、そして１０ｍＬ  ＤＭＥＭ培地中０．３５％コラゲナーゼおよび０．１％ヒアルロニダーゼ（Ｓｉｇｍａ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、４５分間３７℃で消化した。細胞懸濁液を濾過し、１０％  ＦＢＳ、２ｍＭグルタミンおよび抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびフンガゾン（ｆｕｎｇａｚｏｎｅ））を含有する低グルコースＤＭＥＭ中に２４時間歳懸濁し、その後、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処理した。
【００９０】
細胞培養。コンフルーエント未満のラットＧＨ３下垂体（ＬＨ分泌）細胞およびマウスαＴ３下垂体（ＬＨ分泌）細胞を、それぞれ１５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および２．５％ウマ血清または１０％ＦＣＳ、ならびに抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン、およびフンガゾン）を補充したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）中で、５％  ＣＯ２下３７℃で２４時間培養し、その後トログリタゾンまたはロシグリタゾンで処理した。２日毎に培地をリガンドと共に補充し、そして血清含有培地または血清非含有培地中で細胞を９６時間まで維持した。
【００９１】
細胞周期分布。処理後、ＧＨ３細胞、αＴ３細胞またはヒト下垂体腫瘍細胞をトリプシン処理し、遠心分離し（１５００ｒｐｍ×２分間）、ＰＢＳで洗浄し、そして２０ｇ／ｍＬ  Ｒｎａｓｅ  Ａ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，  Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，  ＣＡ）で処理した。ＤＮＡを１００μｇ／ｍＬヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で３０分間４℃で染色し、遮光し、その後ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）で分析した。ｍｏｄＦｉｔＬＴソフトウェアを用いてＤＮＡ棒グラフ分析を行った。
【００９２】
アポトーシスアッセイ：フローサイトメトリによるアネキシンＦＩＴＣ。ＧＨ３細胞、αＴ３細胞およびヒト下垂体腫瘍細胞を処理し、ＰＢＳ中で洗浄し、トリプシン処理し、遠心分離し、洗浄して、その後、ＦＩＴＣ標識したモノクローナルアネキシン抗体およびＰＩと共に、製造業者の指示（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に従って３０分間室温でインキュベーションした。約１×１０６細胞を調製し、フローサイトメトリによって分析し、標識した核（ＰＩ）を光拡散器に通して残屑を除去し、そしてアネキシン−ＦＩＴＣ陽性細胞の百分率を測定した。また、アネキシンＦＩＴＣ陽性細胞を、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ２免疫蛍光顕微鏡で可視化した。
【００９３】
ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ媒介性ｄＵＴＰニックエンド標識（ＴＵＮＥＬ）。アポトーシス誘導性核ＤＮＡフラグメント化を、インサイチュ細胞死検出キットであるＴＭＲレッド（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を使用し、製造業者のプロトコールに従って検出した。簡潔に言うと、ＴＺＤ処理の４８時間後、ＧＨ３、αＴ３およびヒト下垂体腫瘍細胞を、４％重量／容量のパラホルムアルデヒドで固定し、０．１％クエン酸ナトリウム／０．６％  Ｔｗｅｅｎ  ２０（ｐＨ７．４）で４℃で２分間透過処理し、その後、Ｔｕｎｅｌ反応混合物（ＴＭＲレッド／ｄＮＴＰ混合物、ＴｄＴ、および標識化緩衝液）中で、６０分間３７℃でインキュベーションした。スライドを、ＰＢＳ／Ｔｒｉｔｏｎ／ＢＳＡ（０．３％）中で洗浄し（３回×５分間）、そしてＯｌｙｍｐｕｓ  ＢＨ２免疫蛍光顕微鏡で可視化した。
【００９４】
ノーザンブロット分析。ＴＲＩｚｏｌ（Ｇｉｂｃｏ）を用いて細胞培養物（約３×１０７細胞／群）または切除組織から全ＲＮＡを抽出した。ラット精巣ＲＮＡを、ＰＴＴＧ発現の陽性コントロールとして用いた。電気泳動したＲＮＡをＨｙｂｏｎｄ−ｎナイロン膜（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）に移し、そして以前に記載されたようにハイブリダイズした（Ｈｅａｎｅｙ，Ａ．Ｐ．ら，Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｅｎｅ（ＰＴＴＧ）ａｎｄ  ｂＦＧＦ  ｉｎ  Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ  Ｔｕｍｏｒ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５：１３１７−１３２１［１９９９］）。
【００９５】
下垂体の免疫細胞学的研究。外科的に切除したヒト下垂体腫瘍および正常下垂体剖検組織を、倫理調査委員会ガイドラインに従って得た。ビヒクル処置マウスまたはＴＺＤ処置マウスからの下垂体組織を、施設内動物管理および使用委員会ガイドライン（ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  ａｎｉｍａｌ  ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｕｓｅ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）に従って得た。全ての組織を、４％パラホルムアルデヒド中で固定し、パラフィン包埋した。ヒトまたはマウスのＧＨ、ＰＲＬ、ＦＳＨおよび／またはＬＨに対する抗体（１：１０００）（ＤＡＫＯ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）、ＰＰＡＲγ（１：５００）（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用い、アビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ方法およびヘマトキシリンでの対比染色の両方を使用して、切片を免疫染色した。各スライドにつき、ネガティブコントロールを、事前に吸収させた血清または非免疫血清を用いて行った。
【００９６】
ウエスタンブロット分析。ＧＨ３、αＴ３および下垂体腫瘍細胞を、６ウェルプレートに２４時間播種し（約１００，０００〜２００，０００細胞／ウェル）、その後ＴＺＤで処理した。次いで、細胞を、ＰＢＳで洗浄し、そしてタンパク質サンプルを、ＲＩＰＡ緩衝液中で調製し、そして標準的方法を使用し、還元条件下で１２％  ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで分離した（Ｅｌｓｔｎｅｒ，Ｅ．ら，Ｌｉｇａｎｄｓ  ｆｏｒ  ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−γ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｈｈｉｂｉｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ＢＮＸ  ｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：８８０６−８８１１［１９９８］）。分離したタンパク質を、ニトロセルロース膜に移し、そしてＢｃｌ−２（１：５００）、Ｂａｘ（１：１０００）、ＴＲＡＩＬ（１：５００）、ｐ５３（１：１０００）（全てＳａｎｔａ−Ｃｒｕｚ，ＣＡから）、ｐ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７９５）（１：１０００）、開裂カスパーゼ３および非開裂カスパーゼ３（１：５００）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）に対する抗体で、４℃で一晩プローブした。洗浄後、膜を適切なＩｇＧ−西洋ワサビペルオキシダーゼ結合体と共にインキュベートし、そして免疫応答性タンパク質のバンドをＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）で可視化した。全タンパク質を、抗アクチン抗体で再プローブする（１：５０００，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）か、またはポンソーＳ染色することによって基準化し、そしてタンパク質バンドを濃度測定法（Ｖｉｄｅｏ  Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ  ｍｏｄｅｌ  ６２０，Ｂｉｏ−Ｒａｄ）で定量した。
【００９７】
（実施例４：結果）
（ＰＰＡＲ−γは、下垂体腫瘍において豊富に発現する）
ＰＰＡＲ−γ発現を、４２の連続した外科的切除下垂体腫瘍標本において評価し、腫瘍免疫陽性に従って分類した（２０つのＦＳＨ免疫陽性かつ／またはＬＨ免疫陽性、５つのＰＲＬ免疫陽性、３つのＧＨ免疫陽性、および５つのＰＲＬ免疫陽性かつＧＨ免疫陽性、ならびに９つの非機能性（ホルモン免疫陽性非存在））。下垂体腫瘍由来タンパク質抽出物のウエスタンブロットによって、試験した４２の下垂体腫瘍全てにおける豊富なＰＰＡＲ−γ発現が明らかになったのに対し、９の正常腫瘍由来抽出物における中程度のＰＰＡＲ−γ発現が明らかになった（図１０Ａ）。免疫細胞化学分析は、ＧＨ分泌性腫瘍組織の下垂体腺腫細胞に局在する、豊富なＰＰＡＲ−γ免疫応答性を実証した（図１０Ｂ）。
【００９８】
（ＰＰＡＲ−γリガンドは下垂体腫瘍増殖を阻害する）
下垂体腫瘍ＰＰＡＲ−γ発現の機能的有意性を決定するため、下垂体腫瘍細胞に対するＰＰＡＲ−γリガンドの効果をインビトロで試験した。４８時間まで血清非含有条件下で、または９６時間まで血清再添加（ｒｅｐｌｅｔｅ）条件下で細胞を維持して、ＧＨ３（ＰＲＬおよびＧＨ分泌）およびαＴ３（性腺刺激細胞分泌）ならびにヒト下垂体腫瘍細胞のトログリタゾンまたはロシグリタゾン処理（１０−６〜１０−４Ｍ）により、Ｇ０−Ｇ１細胞周期の停止を誘導して（ＧＨ３：コントロール、Ｇ１  ７５±４％  対  ｒｏｓ、Ｇ１  ８５±２％、ｐ＝０．００９；αＴ３：コントロール、Ｇ１  ６７±０．５％  対  ｒｏｓ、Ｇ１  ７５±０．５％、ｐ＝０．０１）、そしてＳ期における細胞の数の減少をもたらした（ＧＨ３：コントロール、１８±０．０５％  対  ｒｏｓ、１２±０．５％、ｐ＝０．００１；αＴ３：コントロール、３１±０．５％  対  ｒｏｓ、１６±２．５％、ｐ＝０．０３）（図１１Ａ）。
【００９９】
ＴＺＤ処理ラットＧＨ３細胞およびマウスαＴ３細胞から抽出した全ＲＮＡのノーザンブロット分析により、リガンドが増殖性マーカーの約３倍の低下を誘導することを明らかにし、下垂体腫瘍形質転換遺伝子（ＰＴＴＧ）ｍＲＮＡ発現により、ＴＺＤ処理生鮮刺激腫瘍細胞の増殖速度の低下を確認した（図１１Ｂおよび図Ｃ）。ＴＺＤ処理ヒト非機能性下垂体腫瘍細胞由来のタンパク質抽出物のウエスタンブロット分析は、Ｓｅｒ７９５リン酸化網膜芽腫細胞タンパク質発現における約６０％の低下を示し（図１１Ｄ）、観察されたＧ０／Ｇ１細胞周期停止の潜在的な機構を示した。
【０１００】
（ＰＰＡＲ−γリガンドはインビトロで下垂体腫瘍アポトーシスを誘導する）
９６時間にわたるラットＧＨ３細胞、マウスαＴ３細胞、およびヒト下垂体腫瘍細胞のロシグリタゾン（１０−５〜１０−４Ｍ）処理は、アネキシン−ＦＩＴＣ免疫応答性細胞の増加およびアポトーシスの増大を実証した（ｐ＜０．００１）。ＦＡＣＳ分析およびＴＵＮＥＬ分析は、ＴＺＤが細胞死を誘導したこと、および約３倍アポトーシスを増大させたことを確認した（図１２Ａ、図１２Ｂ、および図１２Ｃ）（％アポトーシス：コントロール、３３±３  対  ｒｏｓ、１０−６Ｍ  ４７±４；ｒｏｓ、１０−５Ｍ  ６９±７％、ｐ＜０．０００２）。
【０１０１】
ＴＺＤ処理非機能性下垂体腫瘍細胞からのタンパク質抽出物のウエスタンブロット分析は、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２の発現の低下、およびプロ−アポトーシス性のＢａｘおよびｐ５３の発現レベルの上昇を示し、観察されたアポトーシス上昇についての潜在的機構を示唆した。開裂カスパーゼ３の約４倍の増加および同時の全カスパーゼ３の減少が、ＴＺＤ処理により生じ、そしてアポトーシスの増大と一致した。
【０１０２】
（ＰＰＡＲ−γリガンドは、インビボで、下垂体腫瘍増殖、ＧＨ分泌、ＰＲＬ分泌およびＬＨ分泌を阻害する）
ＴＺＤがインビトロで抗増殖性効果およびプロ−アポトーシス性効果を示す場合、ソマト−ラクトトロフ（ｓｏｍａｔｏ−ｌａｃｔｏｔｒｏｐｈ）下垂体腫瘍増殖に対するＴＺＤ処理の効果をインビボで評価した。ソマトラクトトロフ（ＧＨ３）（約２００，０００細胞）を、４週齢雌無胸腺ヌードマウスの皮下に接種し、そして無作為化して、経口のロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを動物に与えた。４週間後、４匹のビヒクル処置マウスのうち３匹は、大きな可視の腫瘍を発現し、安楽死を必要とした。対照的に、５匹のロシグリタゾン処置マウスのうち３匹は、可視の皮下腫瘍（直径１〜２ｃｍ）を発現したが、腫瘍重量はロシグリタゾン処置マウスにおいて顕著に低かった（コントロール、０．１３±０．０１  対  ｒｏｓ、０．０４±０．０１ｇ、ｐ＝０．００８）（図１３Ａおよび図１３Ｂ）。図１３Ａにおいて示されるように、代表的な未処置マウスは、ロシグリタゾン処置マウスには存在しない種々の表現型の徴候を発現した。例えば、未処置マウスは、可視の腫瘍（矢印で強調した）を発現した。
【０１０３】
さらに、血清ＰＲＬレベル（コントロール、６５６±２８９  対  ｒｏｓ、９５±５８ｎｇ／ｍＬ、ｐ＝ｎｓ）およびＧＨレベル（コントロール、５４５±１５３  対  ｒｏｓ、１１４±６６ｎｇ／ｍＬ、ｐ＝０．０３）は、ビヒクル処置マウスと比較してロシグリタゾン処置マウスにおいて低かった（図１３Ｃおよび図１３Ｄ）。
【０１０４】
別々に平行して同様に行った研究において、性腺刺激腫瘍細胞（ＬβＴ２）を、上述のようにマウスに接種した。腫瘍重量レベルおよび血漿ＬＨレベル（コントロール、６９±１９ｎｇ／ｍＬ  対  ｒｏｓ、６．８±１．０ｎｇ／ｍＬ、ｐ＝０．００４）は、ビヒクル処置腫瘍保有動物と比較して、６週間ロシグリタゾン処置マウスにおいて著しく低かった；（性腺刺激細胞：コントロール、３．４４±０．４２  対  ｒｏｓ、０．８１±０．１９ｇ、Ｐ＜０．００２）（図１４Ｂおよび図１４Ｃ）、これにより、インビボでの強力な抗腫瘍ＰＰＡＲリガンド効果を確認し、性腺刺激細胞および非機能性下垂体腫瘍における治療物としてのＰＰＡＲ−γリガンドの役割を実証した。
【０１０５】
既に確立した活発に増殖する下垂体腫瘍を有する患者は常に存在するため、ＴＺＤ処置の効果を、既に確立した下垂体性腺刺激細胞腫瘍の増殖に対してインビボで試験した。マウス性腺刺激下垂体腫瘍細胞（αＴ３）を、無胸腺ヌードマウスの皮下に接種し、そして腫瘍を発現させた。３週間以内に、注射した全ての動物は、大きな可視の腫瘍を発現し、次いで、無作為化して、経口のロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを６週間の処置にわたって動物に与えた。ベースライン腫瘍体積は、その後コントロール群または処置群に無作為化した群において異ならなかった（データは示さず、ｐ＝ｎｓ）。両群において腫瘍増殖は続いたが、最終腫瘍重量は、４匹全ての６週間処置したロシグリタゾン処置動物において、顕著に減少した（ビヒクル、３．２±０．７６  対  ｒｏｓ、０．７６±０．２９ｇ、ｐ＝０．００５）（図１５Ａおよび図１５Ｂ）。
【０１０６】
本発明は、その特定の好ましい実施形態に関連して詳細に記載されているが、当業者は、提供される実施形態および例示的開示に対する改変および変更は、本特許において記載されかつ請求される本発明の精神および範囲の範囲内であることを理解するべきである。
【図面の簡単な説明】
【０１０７】
【図１】図１は、剖検由来の正常ヒト下垂体組織の免疫組織化学的分析を示す。図１Ａおよび図１Ｂは、各々、免疫ペルオキシダーゼ法を使用する免疫組織化学的分析を例示する。Ｉｎ  ｂｏｔｈ  図１Ａおよび図１Ｂの両方において、ＡＣＴＨ免疫反応（濃い領域、倍率×１０）は、中間下垂体領域に集中していた。図１Ｃおよび図１Ｄはまた、免疫ペルオキシダーゼ法を使用する免疫組織化学的分析を例示する。ＰＰＡＲ−γ免疫反応性（濃い領域、倍率×１０）もまた、下垂体の中間領域において観察され、ＡＣＴＨ免疫反応性下垂体細胞に局在しているようであった。図１Ｅおよび図１Ｆは、ＴＲＩＴＣ標識ＡＣＴＨ（図１Ｅ）およびＦＩＴＣ標識ＰＰＡＲ−γ抗体（図１Ｆ）を用いる下垂体前葉二重免疫蛍光を例示する。図１Ｇは、図１Ｅおよび図１Ｆからの画像の重ね合わせを示し、ＰＰＡＲ−γおよびＡＣＴＨ免疫反応性（倍率×４０）の同時局在を示す。下垂体は、２つの部分、すなわち、下垂体前葉（「ＡＰ」といわれる）および下垂体後葉（「ＰＰ」といわれる）から構成される。
【図２】図２は、ウェスタンブロットおよび免疫組織化学的分析の結果を示す。これは、外科的に切除したヒトＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍における多量のＰＰＡＲ−γ発現を実証する。図２Ａ、上部パネルは、２つの正常な下垂体組織由来の抽出物（ＮＰ）におけるＰＰＡＲ−γ発現と比較して、６つの外科的に切除したＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍（Ｔ１〜６）のウェスタンブロットの結果を示す。β−アクチンイムノブロッティングにより、等価な総タンパク質ローディング（図２Ａ、下部パネル）が確認された。ＭＣＦ−７乳癌細胞を、ポジティブコントロールとして供し、Ｍをタンパク質マーカーとして供した（Ａｍｅｒｓｈａｍ分子量タンパク質マーカー）。図２Ｂは、外科的に切除したＡＣＴＨ分泌型下垂体腫瘍組織（倍率×１０）のＰＰＡＲ−γ免疫組織化学的分析の結果を示す。図２Ｃは、より高倍率（倍率×４０）の下での免疫組織化学的分析の結果をさらに示す。このことにより、コルチコトロフ細胞の細胞質領域に局在するＰＰＡＲ−γ免疫反応性が確認される。
【図３Ａ】図３は、インビトロでトログリタゾンまたはロシグリタゾン（１０−６〜１０−４Ｍ）で処理したマウスＡｔＴ２０細胞およびヒトＡＣＴＨ分泌コルチコトロフ下垂体腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析を使用する下垂体コルチコトロフ腫瘍における機能的ＰＰＡＲ−γを示す。図３Ａは、ビヒクル処理コントロール細胞と比較して、ロシグリタジン処理したマウスＡｔＴ２０細胞のより大きな割合が、Ｇ０〜Ｇ１期にあったことを示す。
【図３Ｂ】図３Ｂは、マウスＡｔＴ２０細胞がビヒクル処理細胞に対して、Ｓｅｒ７９４リン酸化網膜芽細胞腫タンパク質の減少した発現を示したことを例示する（ＪＥＧ−３絨毛癌細胞をポジティブコントロールとして供した。Ｍは、タンパク質マーカーを示す）。
【図３Ｃ】図３Ｃは、Ｇ１細胞周期停止の観察されたチアゾリジンジオン化合物（ＴＺＤ）媒介性誘導と調和して、インビトロでヒトＡＣＴＨ分泌下垂体コルチトロフ腫瘍細胞におけるリン酸化網膜芽細胞腫タンパク質が用量依存性で減少することを例示する。
【図３Ｄ】図３Ｄは、インビトロでのロシグリタゾン処理マウスＡｔＴ２０細胞が、アポトーシス細胞のマーカーであるアネキシン−ＦＩＴＣ免疫反応性の用量依存性増加を示したことを例示する。図３Ｄの上部部分は、アポトーシス細胞％  対  ロシグリタゾン濃度（０〜１０−４Ｍの範囲）として示した、観察された用量依存性増加のグラフ描写である。図３Ｄの下部部分（ａ〜ｆの印を付けたパネル）は、緑色免疫蛍光（パネルａ〜ｃ）を使用して、アネキシン−ＦＩＴＣに対する抗体で処理した細胞を示す。パネルｄ〜ｆは、パネルａがパネルｄと対応し、パネルｂがパネルｅと対応し、パネルｃがパネルｆと対応するようにした、その対応する明視野画像を示す。パネルａおよびパネルｄは、ビヒクルのみで処理した細胞を示す；パネルｂおよびパネルｅは、ロシグリタゾン２×１０−５Ｍで処理した細胞を示し；パネルｃおよびパネルｆは、ロシグリタゾン５×１０−５Ｍで処理した細胞を示す。
【図３Ｅ】同様に、図３Ｅは、ロシグリタゾン処理細胞  対  ビヒクル処理細胞において、インビトロでのヒトＡＣＴＨ分泌下垂体コルチコトロフ腫瘍細胞がアネキシン−ＦＩＴＣ免疫反応性の増加を示したことを例示する。
【図４】図４は、ＡｔＴ−２０細胞において、ＴＺＤでの処理が細胞死およびアポトーシスを誘導したことを例示する。図４Ａは、ＴＵＮＥＬ分析を使用するインビトロでのアポトーシス研究の結果のグラフによるまとめである。ここで、ロシグリタゾン誘導性アポトーシスにおける２倍の増加が示された。「ｒｏｓ−６」と示された棒は、ロシグリタゾン１０−６Ｍで処理した細胞を示し；「ｒｏｓ−５」と示された棒は、ロシグリタゾン１０−５Ｍで処理した細胞を示し；「ＣＲＨ」と示された棒は、コルチコトロピン放出ホルモン（５０ｎＭ）で処理した細胞を示し；「ＣＲＨ＆ｒｏｓ−５」と示された棒は、ロシグリタゾン（１０−５Ｍ）およびＣＲＨ（５０ｎＭ）の両方で処理した細胞を示す。図４Ｂは、ＴＵＮＥＬ分析を使用するインビトロでのアポトーシス研究を示す。ここで上部パネル（ａ、ｂ、ｅ，およびｆ）は、ＴＲＩＴＣ染色を使用したＡｔＴ−２０細胞を示し、下部パネル（ｃ、ｄ、ｇおよびｈ）は、それぞれ、パネルａ、パネルｂ、パネルｅおよびパネルｆで示した細胞の対応する明視野画像を示す。図４Ｂ（パネルａ＋パネルｃ＝コントロールｌ；パネルｂ＋パネルｄ＝ロシグリタゾン１０−６Ｍ，＊＝ｐ＝０．０００３）。ロシグリタゾンでのＡｔＴ２０細胞の前処理は、コルチコトロピン放出ホルモン（ＣＲＨ）５０ｎＭの抗アポトーシス効果をブロックし、コルチコトロフ細胞アポトーシスを誘導した（図４Ｂ、パネルｅ＋パネルｇ）、ＣＲＨ  ５０ｎＭ＆ｒｏｓ１０−５Ｍ（図１４Ｂ、パネルｆ＋パネルｈ）、＊＊，ｐ＝０．０００３）。各々の棒は、２回の別個の実験における３つの異なる１０×顕微鏡視野で視覚化したアポトーシス細胞数の平均±ＳＥＭを示す。
【図５】図５は、マウスコルチコトロフ腫瘍細胞のロシグリタゾン処理後の抗アポトーシスタンパク質の減少した発現およびプロアポートーシスタンパク質の増加した発現を示す、ウェスタンブロット分析を示す。図５Ａは、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ−２の減少した発現（上部パネル）およびプロアポートーシスタンパク質ＢＡＸの減少した発現（中央部パネル）を示す。β−アクチン（下部パネル）は、タンパク質ローディングの内部標準として供する。図５Ｂは、ビヒクル処理コントロール細胞に対する、ロシグリタゾン（ｒｏｓ）処理およびトログリタゾン（ｔｒｏｇ）処理（ともに１０−５Ｍ）におけるプロアポートーシスタンパク質ｐ５３の増加した発現を示す。ポンソーＳは、タンパク質色素である。図５Ｃは、カスパーゼ−３のＴＺＤ媒介性切断における用量依存性増加（「切断」；上部パネル）および非切断カスパーゼ−３における一致した減少（下部パネル）を例示する。ＪＥＧ−３絨毛癌細胞を、ポジティブコントロールとして供した。Ｍは、タンパク質マーカーを示す。
【図６】図６は、ＴＺＤ処理コルチコトロフ細胞由来の総ＲＮＡ抽出物、およびロシグリタゾン（ｒｏｓ）処理コルチコトロフ細胞由来の総ＲＮＡ抽出物およびトログリタゾン（ｔｒｏｇ）処理コルチコトロフ細胞由来の総ＲＮＡ抽出物のノーザンブロット分析、ならびにベースラインおよびＣＲＨ誘導性（５０ｎＭ）ＰＯＭＣ転写に対する効果を示す。図６Ａにおいて、ＴＺＤ処理ＡＴｔ−２０コルチコトロフ細胞由来の総ＲＮＡ抽出物のノーザンブロット分析により、ＰＯＭＣ  ｍＲＮＡレベルの阻害、および減少したＰＴＴＧ  ｍＲＮＡ発現が実証された。このことにより、ＴＺＤ処理コルチコトロフ下垂体腫瘍細胞における減少した増殖速度が確認された。１８ＳリボソームＲＮＡを、ＲＮＡローディングを正規化するために供した。ラット精巣を、ポジティブコントロールとして供した。Ｍ＝ＲＮＡマーカー。図６Ｂは、ベースラインおよびＣＲＨ誘導性（５０ｎＭ）ＰＯＭＣ転写に対するロシグリタゾン（ｒｏｓ）の効果を実証する。ＡｔＴ２０細胞を、ロシグリタゾン（１０−５Ｍ）で４８時間前処理した。ＰＯＭＣ−ｌｕｃを、リポフェクタミンを使用して、ＡｔＴ２０細胞にトランスフェクトした。結果を、コントロール（ビヒクル）に対するルシフェラーゼ活性（β−ガラクトシダーゼ活性に対して較正した）（３回の独立した実験の３ウェル平均±ＳＥＭ）の誘導倍数として表す。ＡＮＯＶＡおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ  多重比較検定（コントロールに対して比較、＊，ｐ＜０．０５；ＣＲＨに対して比較、＊＊，ｐ＜０．０５）による。
【図７】図７は、インビボでのコルチコトロフ下垂体腫瘍増殖のロシグリタゾン阻害を実証する。４週齡の雌性無胸腺ヌードマウスにコルチコトロフ下垂体腫瘍細胞（約２００，０００細胞）を皮下接種した後に、動物を無作為化して、経口ロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを与えた。図７Ａは、ビヒクル処理マウス  対  ロシグリタゾン処理マウスにおける腫瘍数をグラフで示す。図７Ｂは、コルチコトロフ下垂体腫瘍細胞の皮下接種後に、ロシグリタゾン処置したマウスおよび未処置（コントロール）マウスの代表的写真である。ここで未処置マウスは、目に見える腫瘍を発生させ（矢印で強調）、ロシグリタゾン処置マウスは、腫瘍を発生しなかった。図７Ｃは、ベースライン時およびビヒクルまたはロシグリタゾンで処置して４週間後の血清ＡＣＴＨレベルを例示する。図７Ｄは、ベースライン時、ビヒクルまたはロシグリタゾン（ｒｏｓ）で処置して４週間後の血清コルチコステロンレベルを例示する。１群あたりの動物数＝５。＊，ｐ＜０．０５。
【図８】図８は、ロシグリタゾン処置が、インビボで、確立した下垂体コルチコトロフ腫瘍の増殖を遅延させ、ステロイドホルモンレベルを抑制することを実証する。マウスに、コルチコトロフ下垂体腫瘍細胞を皮下接種し、腫瘍を発生させた。接種して３週間後までに、全ての動物が大きな目に見える腫瘍を発生させた。その動物を無作為化して、ロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを経口により与えた。さらに３週間処置した後の結果を示す。図８Ａは、腫瘍増殖がロシグリタゾン処置動物において停止した（ｐ＜０．０５）ことを例示する代表的な増殖曲線である。破線はロシグリタゾン処置動物を示し、実線はビヒクル処置動物を示す。図８Ｂは、接種後３週間のマウス（上部パネル）および処置後３週間のマウス（下部パネル）を示し、ロシグリタゾン処置を与えたマウスについてのクッシング表現型的な外観の改善を示す。図８Ｃは、ロシグリタゾン処置動物  対  ビヒクル処置動物における血清ＡＣＴＨの減少を実証する。図８Ｄは、ロシグリタゾン処置動物  対  ビヒクル処置動物におけるコルチコステロンの減少を示す。＊ｐ＜０．０５。
【図９】図９は、コルチソル排泄および下垂体コルチコトロフ応答性に対するロシグリタゾン処置の効果を示す。図９Ａは、クッシング症候群を有する患者における尿遊離コルチソル（ＵＦＣ）排泄のロシグリタゾン抑制を示す（ベースライン時、ならびにロシグリタゾン治療して２週間後および３週間後の２４時間  ＵＦＣ、ｐ＜０．０２）。図９Ｂは、下垂体コルチコトロフ応答性が正常マウスの長期間のロシグリタゾン処置後に保護されることを例示する。ビヒクルまたはロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）で６週間経口処置した後の正常の雌性無胸腺Ｎｕ／Ｎｕマウスにおいて非拘束および１５分間の拘束ストレスを与えて後の血漿ＡＣＴＨ（１４００ｈ）。陰を付けていない棒は、ストレスを与えていないことを示し、陰を付けた棒は、ストレスを与えたことを示す（ｐ＝有意ではない）。
【図１０】図１０は、ウェスタンブロットおよび免疫組織化学的分析の結果を示す。この結果は、外科的に切除したヒト非機能性ＧＨ分泌型下垂体腫瘍およびＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍における多量のＰＰＡＲ−γ発現を示す。図１０Ａ（上部パネル）は、２つの正常下垂体組織由来抽出物（ＮＰ）と比較して、３匹の外科的に切除した非機能性下垂体腫瘍（ＮＦ）、外科的に切除したＧＨ分泌型下垂体腫瘍（ＧＨ）、ならびに外科的に切除したＰＲＬ分泌型下垂体腫瘍（ＰＲＬ）のウェスタンブロットの結果を示す。β−アクチンイムノブロッティングにより、等しい総タンパク質ローディングが確認された（図１０Ａ、下部パネル）。ＭＣＦ−７乳癌細胞をポジティブコントロールとして供し、Ｍをタンパク質マーカーとして供した（Ａｍｅｒｓｈａｍ分子量タンパク質マーカー）。図１０Ｂは、外科的に切除したＧＨ分泌型下垂体腫瘍組織（倍率×１０）の、ＧＨ（上部パネル）およびＰＰＡＲ−γ（下部パネル）の免疫組織化学的分析のっけ亜を示し、これにより、ＰＰＡＲ−γ免疫反応性が確認された。
【図１１−１】図１１は、ロシグリタゾン（１０−５Ｍ）処理下垂体細胞のインビトロでのＦＡＣＳ分析ならびにロシグリタゾン処置後のノーザンブロットおよびウェスタンブロット分析を使用する、下垂体腫瘍における機能的ＰＰＡＲ−γを示す。図１１Ａは、ロシグリタゾン  ２×１０−５Ｍで処置したラットＧＨ３細胞およびマウスαＴ３性腺刺激細胞のＦＡＣＳ分析を示す。図１１Ｂは、インビトロでロシグリタゾン１０×１０−５Ｍで処置したヒト下垂体腫瘍細胞のＦＡＣＳ分析を示す。図１１Ａおよび１１Ｂは、ビヒクル処理コントロール細胞に対する、ロシグリタゾン処置細胞における増大したＧ０〜Ｇ１期および減少したＳ期を示す（＊、ｐ＝０．００１；＊＊、ｐ＝０．０３）。図１１Ｃは、  ロシグリタゾンで処理したαＴ３性腺刺激細胞  対  コントロールにおける増殖マーカーＰＴＴＧの減少した発現を明らかにする。
【図１１−２】図１１Ｄは、ラットＧＨ３細胞における減少した下垂体腫瘍トランスフォーミング遺伝子（ＰＴＴＧ）（上部パネル）およびＰＲＬ（中央部パネル）のｍＲＮＡ発現を明らかにする。図１１Ｅは、ヒト非機能性下垂体腫瘍におけるＳｅｒ７９４リン酸化網膜芽細胞腫タンパク質の減少した発現を明らかにする。ラット精巣をポジティブコントロールとして供した。１８ｓ（図１１Ｄ、下部パネル）およびβ−アクチン（図１１Ｅ、下部パネル）により、それぞれ、等しい総ＲＮＡおよびタンパク質ローディングが確認された；「Ｍ」はタンパク質マーカー（Ａｍｅｒｓｈａｍ分子量タンパク質マーカー）を示す。
【図１２】図１２は、ＴＺＤでの処置が、種々の細胞型における細胞死およびアポトーシスを誘導したことを例示する。図１２Ａ、図１２Ｂおよび図１２Ｃは、各々、ＴＺＤ処置およびコントロール（「ビヒクル」）を与えた細胞についての、ＴＵＮＥＬ分析を使用するインビトロでのアポトーシス研究の結果を例示する。ここで上部パネルは、細胞の明視野画像を使用した見た細胞を示し、下部パネルは、ＴＲＩＴＣ染色を使用してみた細胞を示す。図１２Ａにおいて、ＴＲＩＴＣ免疫反応性アポトーシスラットＧＨ３ソマト−ラクトトロフ（ｓｏｍａｔｏ−ｌａｃｔｏｔｒｏｐｈ）細胞を定量した。グラフにおいて、陰を付けていない棒は、ビヒクルで処理した細胞について観察されたアポトーシス細胞の％を示す一方で、陰を付けた棒は、トログリタゾンで処理した細胞について観察されたアポトーシス細胞の％を示す。図１２Ｂにおいて、ロシグリタゾン処置後のＴＲＩＴＣ免疫反応性アポトーシスマウス性腺刺激細胞を、示す。図１２Ｃにおいて、ロシグリタゾン処置の後のＴＲＩＴＣ免疫反応性アポトーシスヒト下垂体腫瘍細胞を、示す。ＴＵＮＥＬ分析の結果は、マウスの性腺刺激培養物（αＴ３）、ラットソマト−ラクトトロフ培養物（ＧＨ３）、およびヒト下垂体初代培養物におけるアポトーシスのＴＺＤ媒介性誘導を実証する（＊、ｐ＝０．０００２）。０．００５％  エタノールをビヒクルとして使用した。
【図１３】図１３は、インビボでのソマト−ラクトトロフ下垂体腫瘍増殖のロシグリタゾン（ｒｏｓ）阻害を実証する。４週齡の雌性無胸腺マウスにＧＨ３下垂体腫瘍細胞（約２００，０００細胞）を皮下接種をした後、動物を無作為化して、経口ロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを与えた。図１３Ａは、ＧＨ３下垂体腫瘍細胞を皮下接種して４週間後のロシグリタゾン処置マウス（右側）および未処置コントロールマウス（左側）の代表的写真である。ここで未処置マウスは、目に見える腫瘍を発生させた（矢印で強調）が、ロシグリタゾン処置マウスは、発生しなかった。図１３Ｂは、上記のように、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処置して４週間後のビヒクル処置マウス  対  ロシグリタゾン処置マウスの総腫瘍重量をグラフで示す。図１３Ｃは、投与４週間後のビヒクル処置マウスまたはロシグリタゾン処置マウスの血清ＧＨレベルを例示する。図１３Ｄは、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処置して４週間後の腫瘍保有マウスにおける血清ＰＲＬレベルを例示する。ｎ（１群あたりの動物数）＝５。＊、ｐ＝０．００８、＊＊、ｐ＝０．０３。
【図１４】図１４は、６週間にわたるロシグリタゾン処置は、下垂体性腺刺激腫瘍増殖を阻害し、インビボでＬＨホルモンレベルを抑制することを実証する（ｎ＝５）。ＬＢＴ２  ＬＨ分泌性腺刺激下垂体腫瘍細胞（約２００，０００細胞）をヌードマウスに皮下接種した後、動物を無作為化して、経口ロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）またはビヒクルのいずれかを与えた。図１４Ａは、処置の投与を始めてから４週間後のロシグリタゾン処置マウス（「Ｒｏｓ」）および未処置マウス（コントロール）の代表的写真である。その写真中の未処置（コントロール）マウスは、多くの大きな目に見える腫瘍を発生させた。対照的に、ロシグリタゾン処置マウス（Ｒｏｓ）は、確かに目に見える腫瘍を発生させたものの、有意により小さな腫瘍であった。図１４Ｂは、示されるように、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処置して６週間後のビヒクル処置マウス  対  ロシグリタゾン処置マウスにおける総腫瘍重量をグラフで示す。図１４Ｃは、ビヒクルまたはロシグリタゾンで処置して６週間後の血清ＬＨレベルを例示する。ｎ＝５。＊、ｐ＝０．０００２、＊＊、ｐ＝０．００４。
【図１５】図１５は、ロシグリタゾン処置が、インビボでの確立された下垂体性腺刺激腫瘍の増殖を遅延させることを実証する。ヌードマウスに、αＴ３性腺刺激下垂体腫瘍細胞（約２００，０００細胞）を皮下注射し、腫瘍を発生させた。接種して３週間までに、全ての動物が大きな目に見える腫瘍を発生させた。それにより、腫瘍容積を、ビヒクル処置群およびロシグリタゾン処置群において比較した。動物を無作為化して、ロシグリタゾン（１５０ｍｇ／ｋｇ／日）（ｎ＝５）またはビヒクル（ｎ＝５）のいずれかを経口的に与えた。無作為化した後の６週間の処置後の結果を、例示する。この重大時点において、ビヒクル処置コントロール動物は衰弱し、安楽死が必要であった。図１５Ａは、上記によるロシグリタゾン処置マウス（右側）および未処置コントロールマウス（左側）の代表的写真である。その写真の未処置（コントロール）マウスは、多くの大きな目に見える腫瘍を発生させた。対照的に、ロシグリタゾン処置マウス（ｒｏｓ）は、目に見える腫瘍を発生させたものの、有意により小さい腫瘍を発生させた。図１５Ｂは、上記のように、ビヒクルまたはロシグリタゾン（「ｒｏｓ」）で処置して６週間後の、ビヒクル処置マウス  対  ロシグリタゾン処置マウスにおける総腫瘍重量をグラフで示す。腫瘍重量は、ロシグリタゾン処置動物において、有意に減少した。＊、ｐ＝０．００５。
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【図３Ａ】
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【図９】
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【図１０】
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【図２】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図３Ｄ】
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【図３Ｅ】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図１１−１】
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【図１１−２】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年2月10日(2005.2.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを含む、組成物。
【請求項２】
前記少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドが、チアゾリジンジオン化合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記チアゾリジンジオン化合物が、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記下垂体腫瘍が、ＡＣＴＨ分泌性下垂体腫瘍、ＬＨ分泌性下垂体腫瘍、ＧＨ分泌性下垂体腫瘍、またはＰＲＬ分泌性下垂体腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記下垂体腫瘍が、非機能性下垂体腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍の形成を予防するための組成物であって、該組成物は、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを含む、組成物。
【請求項７】
哺乳動物において、非癌性下垂体腫瘍の再発を予防するための組成物であって、該組成物は、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを含み、これによって該非癌性下垂体腫瘍の再発が予防され、ここで該哺乳動物は、以前に検出可能な非癌性下垂体腫瘍を有していて、該腫瘍が取り除かれている、組成物。
【請求項８】
副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）の過剰分泌から生じるクッシング症候群の１つ以上の症状を示す哺乳動物を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを含む、組成物。
【請求項９】
前記クッシング症候群の症状が、ステロイド過剰分泌である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記クッシング症候群の症状が、上昇した尿のコルチソル排出である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量の少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドを含む、組成物。
【請求項１２】
前記少なくとも１つのペルオキシソーム増殖因子活性化レセプターγリガンドが、チアゾリジンジオン化合物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記チアゾリジンジオン化合物が、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための組成物であって、該組成物は、有効量のチアゾリジンジオン化合物を含む、組成物。
【請求項１５】
哺乳動物において、非機能性非癌性下垂体腫瘍を処置するための組成物であって、該組成物は、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、およびトログリタゾンからなる群から選択される有効量のチアゾリジンジオン化合物を含む、組成物。
【国際調査報告】
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