(57)【要約】本発明は、式（Ｉ）の２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシ−ピリジン−３−イル）−プロピル］−ベンズアミド、及びその製薬的に受容できる塩に関する。該発明はまた本発明の化合物又はその製薬的に受容できる塩の製造及び使用、特に心房性不整脈、例えば心耳性細動（心房性細動）又は心耳性粗動（心房性粗動）の治療と予防にも関している。  【化１】2006520343.tif 000008
2006520343.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2006520343.tif 000007
の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及びその製薬的に受容できる塩。
【請求項２】
請求項１記載の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド。
【請求項３】
請求項１又は２記載の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及び／又はその製薬的に受容できる塩の、医薬品としての使用。
【請求項４】
請求項１又は２記載の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及び／又はその製薬的に受容できる塩の、心臓性不整脈、上室性不整脈、心房性細動及び／又は心房性粗動の治療又は予防のための医薬品の製造における使用。
【請求項５】
請求項１及び／又は２記載の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及び／又はその製薬的に受容できる塩の有効量を、製薬的に受容可能なビヒクル及び添加物と共に含有する医薬製剤。
【請求項６】
請求項１又は２記載の、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及び／又はその製薬的に受容できる塩の有効量と、製薬的に受容可能なビヒクル及び添加物、並びに、場合によっては、さらに１又はそれ以上の薬理学的活性化合物を共に含有する医薬製剤。
【請求項７】
１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン。
【請求項８】
２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド及び／又はその製薬的に受容できる塩の製造のための、１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミンの、中間体としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（Ｉ）の２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド、及びその製薬的に受容できる塩、その製造、及び、特に医薬としての使用に関する。
【化１】
2006520343.tif 000003
【０００２】
式（Ｉ）の化合物及びその製薬的に受容できる塩は、心室への作用や他の副作用を生じさせることなく、心房性不整脈の発症を減少させることができる。そのために、本発明の化合物及びその製薬的に受容できる塩は、新規な抗不整脈活性を有する化合物として、特に、心房性不整脈、例えば、心房性細動（ＡＦ）又は心房性粗動の治療及び予防のために、特に適切である。
【背景技術】
【０００３】
心房性細動及び心房性粗動は、最も頻度が高く、長期にわたる心臓性不整脈である。その発症は、年齢が進むにつれて増加し、そして、しばしば、致死的な付随症状、例えば、脳梗塞をもたらす。ＡＦには、毎年約100万人のアメリカ人が罹患し、そして、米国で毎年８万人を超える卒中をもたらしている。現在慣用のクラスＩ及びIIIの抗不整脈剤はＡＦの再発の割合を減少させるが、それらに催不整脈性（proarrhythmic）の副作用の可能性があることから、ごく限定的に使用されているに過ぎない。それゆえに、心房性不整脈の治療のためのより優れた医薬品の開発に対する大きな医学上の必要性が存在している（S. Nattel, Am.Heart J. 130, 1995, 1094-1106; “Newer developments in the management of atrial fibrillation"）。
【０００４】
大部分の上室性不整脈は、「リエントリー（reentry）」興奮波の支配下にあることが示されてきた。そうしたリエントリーは、心臓組織が遅い伝導性を有し、そして同時に非常に短い不応期を有する場合に発生する。活動電位の延長による心筋不応期の増加は、不整脈を終結させ、又は、それらの発生を防止するための機構であると認識されている（T. J. Colatsky et al., Drug Dev. Res. 19, 1990, 129-140; “Potassium channels as targets for antiarrhythmic drug action"）。活動電位の長さは、本質的に、種々のK+チャネルを介して細胞から流出する再分極したK+電流の程度から決定される。ここで特に非常に重要なのは、「遅延整流体（delayed rectifier）」IKであり、これは三つの異なった成分：IKr、IKs及びIKurから構成されている。
【０００５】
最も良く知られたクラスIII抗不整脈剤（例えば、ドフェチリド（dofetilide）、E4031及びｄ−ソタロール（d-sotalol））は、ヒトの心室の細胞内及び心房内で検出できる、急速活性化型カリウムチャネルIKrを、主に又は排他的に、遮断する。しかしながら、それらの化合物は、低い又は正常の心拍数において増加した催不整脈性の危険性を有することが示されており、それは「トルサード・ド・ポアンツ（torsades de pointes）」と記載される不整脈であり、特に、D. M. Roden, Am. J. Cardiol. 72, 1993, 44B-49B; "Current status of class III antiarrhythmic drug therapy"にて観察されたものである。この低心拍数での高いそして場合によっては致死的な危険性の他にも、特にその作用が必要とされる頻脈の症状下での活性の減少が、IKr遮断剤について観察された（「使用依存性陰性（negative use dependence）」）。
【０００６】
遅延整流体IKur（＝超急速に活性化された遅延整流体）の「特に急速な」活性化及び非常に緩慢な不活性化を担う成分は、Kv1.5チャネルに対応し、ヒト心房の再分極化時間に関して特に大きな役割を担っている。したがって、IKurの外向きカリウム電流の阻害は、IKr及びIKsの阻害と比較したとき、心房の作用電位を延長させそして心房性不整脈を終結又は防止するための特に有効な方法を示している。
【０００７】
IKr及びIKsとは対照的に、これはヒト心室でも発生することであるが、IKurは実際に、心室ではなく、ヒト心房において、重要な役割を果たしている。このために、IKr及びIKsの遮断とは対照的に、IKurの電流の阻害の場合は、心室における催不整脈作用の危険性が、最初から除外されているはずである（Z. Wang et al, Circ.Res. 73, 1993, 1061-1076:“Sustained Depolarisation-Induced Outward Current in Human Atrial Myocytes”; G.-R. Li et al., Circ. Res. 78, 1996, 689-696:“Evidence for Two Components of Delayed Rectifier K+ Current in Human Ventricular Myocytes”; G. J. Amos et al., J. Physiol. 491, 1996, 31-50:“Differences between outward currents of human atrial and subepicardial ventricular myocytes”）。
【０００８】
しかしながら、IKurの電流又はKv1.5チャネルの選択的遮断を介して作用する抗不整脈剤は、現在までのところ、市場では利用できない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本願においてクレームされたエナンチオマーの２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドは、これまで記載されてはいない。この対応するラセミ体は、特許出願WO0288073において実施例として記載されている。式（Ｉ）の化合物は驚くべき利点によって区別される。
【００１０】
驚くべきことに、本発明の式（Ｉ）の２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドの抗不整脈作用が、麻酔されたブタのモデルにおいて顕著であり、その一方、対応する１（Ｓ）エナンチオマーがより弱い効果しか有していないことが見出された。さらに、式（Ｉ）の化合物がQTc間隔に対しては作用がなく、そして負の変力的（inotropic）又は血行動態的（hemodynamic）な副作用を有しないことが判明した。
【００１１】
実験により、化合物（Ｉ）が、特に有利な安全性プロフィルを有する新規な抗不整脈剤として使用できることが確かめられた。特に、この化合物は、上室性不整脈、例えば心房性細動又は心房性粗動の治療に適している。この化合物は、洞調律（電気的除細動）を回復するための、存在する心房性細動又は粗動を終結させるために用いることができる。さらに、新しい細動症状の発生しやすさに対する感受性を減少させる（洞調律の保持、予防）。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、式（Ｉ）の２−(ブチル−１−スルホニルアミノ)−Ｎ−[１（Ｒ）−(６−メトキシピリジン−３−イル)プロピル]ベンズアミド及びその製薬的に受容できる塩に関する。
【００１３】
化合物（Ｉ）は塩基性のピリジン基を含んでいるので、製薬的に受容できる、無機又は有機酸との酸付加塩、例えば、塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、グルコン酸塩等の形態で用いることもできる。スルホンアミド基の存在はさらにアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩の生成を可能にし、好ましくは、ナトリウム若しくはカリウム塩、又はアンモニウム塩、例えば有機アミン若しくはアミノ酸との塩が挙げられる。製薬的に受容できる塩は、式（Ｉ）の化合物から慣用の方法により得ることができ、例えば、溶媒若しくは分散媒中の酸若しくは塩基との組み合わせによって、又は、別法として他の塩からのアニオン若しくはカチオン交換によって、得ることができる。
【００１４】
遊離化合物である式（Ｉ）の２−(ブチル−１−スルホニルアミノ)−Ｎ−[１（Ｒ）−(６−メトキシピリジン−３−イル)プロピル]ベンズアミドが好ましい。
【００１５】
式（Ｉ）の化合物は、異なった化学的方法によって製造することができ、その内の２つの可能な製造方法をスキーム１に略述する。式（II）のスルホニルアミノ安息香酸と、式（III）のアミンのカップリング反応は、慣用のカップリング剤の存在下で酸から直接に行うか、又は、例えば、酸塩化物のような活性化酸誘導体から行われる。式（III）のラセミ体の１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミンを用いる場合は、エナンチオマーへの分離は最終段階で、例えば、キラルクロマトグラフィー又は慣用の分割方法で行われる。別法として、所望のエナンチオマーは、直接、式（IIIａ）の、１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミンを用いて行うことができる。式（II）のスルホニルアミノ安息香酸は、商業的に入手可能な物質、アミノ安息香酸及び塩化ブチルスルホニルから、当業者に知られた方法で製造される。
【００１６】
【化２】
2006520343.tif 000004
【００１７】
同様に、本出願は、中間体として用いられる、式（III）の化合物、１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン、及び、そのエナンチオマー、特に、式（IIIａ）の１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン、及び、その製薬的に活性な化合物、例えば、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド製造のためのその使用を包含している。
【００１８】
式（III）の１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミンは、市販で入手可能な化合物から、異なった化学的方法で製造することができ、２つの可能な製造法が例としてスキーム２に略記されている。一方では、５−ブロモ−２−メトキシピリジンが最初にブチルリチウムを用いて金属化され（metalate）、次にプロピオニトリルと反応し、続いてホウ化水素ナトリウムを用いて式（III）の化合物へと還元される。別法として、３−シアノ−６−メトキシピリジンを臭化エチルマグネシウムと反応させ、次いでホウ化水素ナトリウムを用いて還元する。エナンチオマーへの分離は、慣用法、例えば、キラル相上のクロマトグラフィー、キラル酸を用いた従来の分割法、又は酵素法によって行うことができる。
【００１９】
【化３】
2006520343.tif 000005
【００２０】
本発明の式（Ｉ）の化合物及びその生理学的に受容できる塩は、動物、好ましくは哺乳類、及び特にヒトにおいて、それ単独の医薬として又は医薬製剤の形態で、用いることができる。本発明はまた、式（Ｉ）の化合物及びその生理学的に受容できる塩の医薬品としての使用、その心臓性不整脈、上室性不整脈、心房性細動及び／又は心房性粗動の治療及び予防のための使用、並びに、そのための医薬品の製造における使用に関している。更に、本発明は活性成分として式（Ｉ）の化合物及び／又はその生理学的に受容できる塩の有効量に加えて、慣用の製薬上無害の媒体及び賦形剤を含む医薬製剤に関する。この医薬製剤は、式（Ｉ）の化合物及び／又はその生理学的に受容できる塩を、通常、0.1質量％〜90質量％を含んでいる。この医薬製剤は、当業者に知られた方法で製造される。このために、式（Ｉ）の化合物及び／又はその生理学的に受容できる塩は、１又はそれ以上の固形又は液体製薬用媒体及び／又は賦形剤と共に、必要ならば、他の製薬的に活性な化合物と組み合わせて、適切な投与形態又は剤形にされて、続いて、ヒトの医学分野又は獣医分野で医薬品として用いることができる。
【００２１】
本発明の式（Ｉ）の化合物及び／又は生理学的に受容できる塩を含有する医薬品は、例えば、経口、非経口（例えば、静脈内、直腸内、吸入又は局所的に）で投与でき、好ましい投与は、個別のケース、例えば、治療すべき疾患の特定の臨床上の特徴に基づいている。
【００２２】
当業者は、彼／彼女の専門知識に基づいて、所望の医薬製剤に適切な賦形剤には精通している。溶媒、ゲル形成剤、坐薬基材、錠剤用添加剤及び他の活性化合物担体に加えて、例えば、抗酸化剤、分散剤、乳濁剤、消泡剤、矯味剤、保存剤、可溶化剤、デポー（depot）効果を達成するための薬剤、緩衝剤又は着色剤を用いることができる。
【００２３】
有利な治療的効果を得るために、式（Ｉ）の化合物はまた他の製薬的に活性な化合物と組み合わせることができる。そうして、心血管系疾患の治療において、心血管系に活性を有する物質と有利に組み合わせることが可能である。心血管系疾患のための、このタイプの有利性を有する可能な組み合わせの相手は、例えば、他の抗不整脈剤、すなわち、クラス１、クラス２若しくはクラス３の抗不整脈剤（例えば、ドフェチリドのようなIKs若し
くはIKrチャンネル遮断剤、又は更に血圧降下物質、例えばACE阻害剤（例えば、エナラプリル、カプトプリル、ラミプリル）、アンジオテンシン拮抗剤及びK+チャンネル活性化剤、並びに、アルファー受容体遮断剤のみならず、交感神経興奮化合物及びアドレナリン作動活性を有する化合物、及びNa+／H+交換阻害剤、カルシウムチャンネル拮抗剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、並びに他の正の変力作用を有する物質、例えばジギタリスグリコシド、又は利尿剤である。
【００２４】
経口投与形態のためには、活性化合物をそのために適切な添加物、例えばビヒクル、安定化剤又は不活性希釈剤と混合し、常用の方法を用いて適切な投与形態、例えば、錠剤、被覆錠剤、硬質ゼラチンカプセル剤、水性、アルコール性若しくは油性溶液とする。使用できる不活性担体は、例えば、アラビアゴム、マグネシア、炭酸マグネシウム、リン酸カリウム、乳糖、グルコース又はデンプン、特にトウモロコシ澱粉である。製造は、ここでは、乾燥及び湿潤顆粒剤の両方で、行うことができる。
【００２５】
適切な油性ビヒクル又は溶媒は、例えば、植物又は動物油（例えばヒマワリ油またはタラ肝油）である。水性の、又は、アルコール液体のための適当な溶媒は、水、エタノールまたは糖溶液又はそれらの混合物である。他の投与形態のための更なる添加剤はまた、ポリエチレン及びポリプロピレングリコールである。
【００２６】
皮下、筋肉内又は静脈内の投与のためには、活性化合物から、必要ならば、例えば可溶化剤、乳化剤または更なる添加剤のような慣用の物質と共に、溶液、懸濁液又は乳濁液とする。式（Ｉ）の化合物及びその生理学的に受容できる塩は、また、凍結乾燥することができ、得られた凍結乾燥物は、注射、輸液製剤のために使用される。適切な溶媒は、例えば、水、生理食塩水又はアルコール（例えば、エタノール、プロパノール、グリセロール）、さらに、糖溶液（例えば、グルコース又はマンニトール溶液）、又は、別法として前述の種々の溶媒の混合物である。
【００２７】
エアロゾルまたはスプレーの形態の投与のための適当な医薬製剤は、例えば、製薬上無害の溶媒（例えば、特にエタノール若しくは水、又はそうした溶媒の混合物）中の式（Ｉ）の化合物及びその生理学的に受容できる塩の、溶液、懸濁液又は乳濁液である。必要ならば、この製剤は、追加的に他の製薬添加剤、例えば、界面活性剤、乳化剤及び安定剤、並びに噴射剤を含んでいる。そうした製剤は、慣用的に、約0.1質量％〜10質量％、特に約0.3質量％〜３質量％の活性化合物を含んでいる。
【００２８】
投与される式（Ｉ）の活性化合物又はその生理学的に受容できる塩の用量は、個別のケースに依存し、そして、適切な作用を得るための定法に従って、個別のケースの症状に適合させる。そのために、当然、投与の頻度だけでなく、治療される疾患の性質及び重症度、並びに、性別、年齢、体重及び治療されるヒト又は動物の個々の感受性、並びに、治療が急性若しくは慢性であるか、又は、予防が行われるのか、に依存している。慣習的に、式（Ｉ）の化合物の一日用量は、体重約75kgの患者に投与する場合、体重kg当たり0.01mg〜体重kg当たり100mgであり、好ましくは、体重kg当たり0.1mg〜体重kg当たり20mgである。投与は、個別の投与、又は、いくつかの、例えば２、３若しくは４の別々の投与の形態で投与することができる。特に、心臓性不整脈の急性のケースの治療（例えば、集中治療室）においては、注射又は輸液による（例えば、静脈内連続注入）非経口的投与が有利に行える。
【００２９】
実験部分：
２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドの製造
ａ）２−（ブチル−スルホニルアミノ）安息香酸
炭酸ナトリウム20ｇ（188mmol）を、水250ml中の２−アミノ安息香酸20ｇ（146mmol）の懸濁液に添加した。次に、塩化ブチルスルホニル11.4ｇ（72.8mmol）を滴下して加え、そして、反応混合液を室温で２日間撹拌した。濃塩酸で酸性化した後、室温で３時間撹拌し、沈殿生成物を吸引濾過した。減圧下で乾燥後、２−（ブチル−スルホニルアミノ）安息香酸9.6ｇを得た。
【００３０】
ｂ）１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン
方法１
５−ブロモ−２−メトキシピリジン３ml（23.2mmol）を、−70℃で、ジエチルエーテル50ml中のｎ−ブチルリチウム10.2ml（ヘキサン中2.5Ｍ溶液；25.5mmol）を含む溶液に加えた。10分後、プロピオニトリル1.4ml（19.5mmol）を加えた。−70℃で、２時間後、反応混合液をゆっくりと室温まで戻し、次に、硫酸ナトリウム10水和物2.2ｇを加え、混合液を１時間撹拌した。続いて硫酸マグネシウム５ｇを加えた後、簡単に撹拌し塩を濾過して除き、濾液を濃縮した。残留物をメタノール70mlに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム1.1ｇ（28mmol）を０℃で加えた。終夜撹拌の後、反応混合液は濃塩酸を用いてｐH２に調整し、ロータリーエバポレ−ターで濃縮した。残留物を水10mlで処理し、そして、ジエチルエーテルで一度抽出した。水相を炭酸水素ナトリウムで飽和させ、減圧下濃縮し、残留物を酢酸エチルで抽出した。ラセミ体の１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン1.4ｇを得た。
【００３１】
エナンチオマーを、ChiralpakADHカラム（250×4.6mm）を用いる分取HPLCで分離した；溶離液：ヘプタン／エタノール／メタノール50：１：１（0.1％ジエチルアミンを含む）；温度：30℃；流速１ml／分。最初に、１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン0.45ｇを保持時間18.4分で溶離した。次に、１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン0.42ｇを保持時間21.0分で得た。
【００３２】
方法２
テトラヒドロフラン中の臭化エチルマグネシウムの１Ｍ溶液170ml（170mmol）を、無水テトラヒドロフラン125ml中の６−メトキシニコチノニトリル20ｇ（150mmol）及びヨウ化銅（Ｉ） 0.62ｇ（3.3mmol）含む溶液に、アルゴン下、０℃で、３０分かけて、滴下して加えた。30分後、反応混合物を室温に戻し、さらに３時間撹拌した。次に、メタノール200mlを５〜10℃で滴下して加え、次に、水素化ホウ素ナトリウム11.3ｇ（299mmol）小分けにして加えた。終夜室温で撹拌後、水300mlを加え、混合液を各々酢酸エチル250mlで３回抽出した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、次いで濃縮し、残留物をクロマトグラフィーで精製した。ラセミ体の１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン5.5ｇを得た。
【００３３】
ｃ）２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド、及び、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド
方法１
１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール4.4ｇ (32.7mmol)及びＮ−エチル−Ｎ'−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩6.3ｇ（32.7mmol）を、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）安息香酸8.0ｇ (31.1mmol)をテトラヒドロフラン250mlに溶解した溶液に加え、反応混合物を90分間撹拌した。ラセミ体の１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン5.4ｇ (32.7mmol)をテトラヒドロフラン20mlに溶解した溶液を、次に、滴下して加え、混合液を終夜撹拌した。反応混合液を水250mlで処理し、そして酢酸エチル300mlで抽出した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液の各々100mlで５回抽出し、次に硫酸マグネシウム上で乾燥した。２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド9.0ｇを得た。
【００３４】
エナンチオマーを、ChiralpakADHカラム（250×4.6mm）を用いる分取HPLCで分離した；溶離液：ヘプタン／エタノール／メタノール10：１：１；温度：30℃；流速１ml／分。最初に、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド4.0ｇが保持時間5.9分で溶離した。混合物のフラクションの後で、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド3.0ｇを保持時間7.2分で得た。
【００３５】
方法２
２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド0.9ｇを、１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピルアミン0.41ｇ (2.46mmol）及び２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）安息香酸0.64ｇ（2.47mmol）から、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール及びＮ−エチル−Ｎ'−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩の存在下で、方法１と類似の方法でカップリング反応により得た。
【００３６】
ｄ）２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド
方法１又は方法２によって得られた、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド２ｇを加熱下、イソプロパノール９mlに溶解し、次に、温水８mlを加え、反応混合物を終夜ゆっくり冷却させた。０℃で吸引濾過した後、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド1.5ｇを無色の針状結晶として得た：融点97℃。絶対配位は、適当な単結晶から、Ｘ−線構造解析で確認した。
【００３７】
薬理学的実験
ヒトのKv1.5チャンネルをアフリカツメガエル卵母細胞で発現させた。このために、卵細胞は最初にアフリカツメガエルのlaevisから単離し、脱濾胞化（defolliculated）した。Kv1.5をコードし、インビトロで合成したRNAを次にそれらの卵細胞に注入した。Kv1.5タンパク質の発現後１〜７日間、Kv1.5の流れを、二個のミクロ電極電圧クランプ技法を用いて、卵細胞で測定した。このKv1.5チャネルは、この場合、通例の０ｍVから40mVへの500m秒続く電圧ジャンプを用いて活性化した。槽を下記の組成を有する溶液で洗浄した：NaCl 96mM、KCl ２mM、CaCl2 1.8mM、MgCl2 １mM、ヘペス ５mM（NaOHを用いてｐH7.4に調整した）。これらの実験は室温で行われた。以下のものを、データ集めおよび分析のために使用した：Geneclamp増幅器（Axon Instruments, Foster City, 米国）、並びに、MacLab Ｄ／Ａコンバーター及びソフトウェア（ADInstruments, Castle Hill, オーストラリア）。本発明による物質を、異なる濃度で、水槽の溶液に添加して実験した。この物質の効果は、物質を溶液に加えない時に得られたKv1.5対照電流に対する阻害％として算出された。データは次に、それぞれの物質の阻害濃度IC50を測定するためにHillの式により外挿された。
【００３８】
この方法で、以下のIC50値が以下の化合物について算出された。
２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド：IC50＝2.4μM
式（Ｉ）の２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド：IC50＝10μM
２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド：IC50＝2.4μM
【００３９】
ブタにおける不応期及び左心房の創傷治癒性（vulnerability）の実験
二つのエナンチオマー、式（Ｉ）の２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド、及び、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドを試験し、そして、不応期及び抗不整脈活性を、麻酔をかけたブタの心房で比較した。この間に、左心房の不応期を測定し、抗不整脈作用を文献に記載しているように記録した（Knobloch et al. 2002. Naunyn-Schmiedberg's Arch. Pharmacol. 366; 482-487）。ここで云う、抗不整脈作用は、左心房に期外（premature）で付された期外刺激（extra-stimulus）（Ｓ２）によって誘導された不整脈症状発現の抑制（＝左心房の創傷治癒性）に関している。２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド、及び、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｓ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドを３mg／kgのボーラス投与した後、麻酔ブタの左心房での不応期及び抗不整脈活性への効果の比較を表１に示す。不応期値は注射10分後の基礎値に対するパーセントで記載されている。不応期の平均値は３個の速度（150、200及び250／分）から示されている。表１にまとめられた結果から、Ｒエナンチオマーが、Ｓエナンチオマーに比べて著しく延長された不応期をもたらすことが示されている。Ｒエナンチオマーにより、誘導された不整脈の73.9％を防止することが可能であって、他方、Ｓエナンチオマーを用いた場合は不整脈の出現は27％しか阻害されなかった。
【００４０】
【表１】
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【００４１】
物質の投与後、繰り返し測定によって、不応期への物質の作用の持続期間がこの実験方法で測定できた。Ｒエナンチオマーは静脈内に、１mg／kgの投与量で100分かけて注入され、ついで、その薬理学的作用が280分かけて測定された。図１に示したように、２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドは、左心房の不応期への長期持続作用をもたらし、注入終了後180分間未変化のまま継続した。
【図面の簡単な説明】
【００４２】
【図１】２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミドを１mg/kgの投与量で100分かけて静脈内に注入した時の、左心房の不応期への作用の持続；  Ｙ軸：基礎不応期に対する％；  Ｘ軸：分で表す時間；  ２−（ブチル−１−スルホニルアミノ）−Ｎ−［１（Ｒ）−（６−メトキシピリジン−３−イル）プロピル］ベンズアミド：活性物質を含有しない対照
【図１】
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【国際調査報告】
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