(57)【要約】神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、ニューロンのニコチン性受容体（ＮＮＲ）に結合しうるが、血液脳関門を容易に横断しない作動薬の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、末梢のニューロンのニコチン性受容体に結合しうるが、血液脳関門を容易に横断しない作動薬の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
前記作動薬が患者に異痛症の軽減を与える、請求項１に記載の神経障害性疼痛を患う患者の治療方法。
【請求項３】
異痛症を患う患者の治療方法であって、少なくとも１種の末梢のニューロンのニコチン性受容体に結合しうるが、血液脳関門を容易に横断しない作動薬の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項４】
神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、第四級ニコチン性化合物の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項５】
脊髄神経節のレベルで末梢のニューロンのニコチン性受容体を作動させることによる、神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、血液脳関門を容易に横断しないニコチン性作動薬化合物の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項６】
中枢のニューロンのニコチン性受容体の作動薬活性化に伴なう副作用の減少方法であって、血液脳関門を容易に横断しないニコチン性作動薬化合物の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経障害性疼痛の新規治療に関する。具体的には本発明は、異痛症を包含する神経障害性疼痛を患う患者の治療方法、および中枢神経ニコチン性受容体の作動薬活性化に伴なう副作用の減少に関する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛は、複雑な一連のメカニズムから構成される感覚および知覚である。その最も単純な構成において、これは末梢における侵害受容（ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ）、接触、および圧力受容体の点火からの信号であり、これは、脊髄、および最終的には大脳の低部および高部中枢に伝達される。しかしながらこの信号は、疼痛経路の各レベルにおいて多数の方法で修飾されうる。（例えば深く掘り下げた総説については、例えばＭｉｌｌａｎ，Ｍ．Ｊ．（１９９９）、「疼痛の誘発：統合的総説（Ｔｈｅ  Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐａｉｎ：Ａｎ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｖｉｅｗ）」、Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、５７、１−１６４（Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ）参照）。
【０００３】
主として３つの型の疼痛がある。侵害受容と呼ばれる急性の疼痛は、有害刺激に応答した疼痛感覚の瞬間的発現である。これは適応的である（ａｄａｐｔｉｖｅ）と考えられるが、その理由は、これによって生体が損傷するのを防ぐことができるからである。例えば疼痛を感じると直ちに熱いストーブから手を取り除けば、重症の火傷を防ぐ。
【０００４】
第二の型の疼痛は、持続性疼痛である。急性疼痛とは異なって、これは通常、遅延化された発現を有するが、数時間から数日間続くことがある。これは大体は適応的であると考えられるが、その理由は、負傷後の持続性疼痛の発生は、組織へのそれ以上の損傷を防ぐことができるからである。例えば捻挫したくるぶしに伴なう疼痛は、患者がこの足を使うのを防ぎ、これによってさらなる外傷を防ぎ、治癒を助ける。
【０００５】
最後のカテゴリーの疼痛は、慢性疼痛である。これは遅延化された発現を有し、数ヶ月から数年続くことがある。急性および持続性の疼痛とは対照的に、慢性疼痛は、不適応的であると考えられ、例えば関節炎、神経損傷、ＡＩＤＳ、および糖尿病などの状態に伴なう。
【０００６】
慢性または神経障害性疼痛は、多様な形態で発生する。これには、自然痛（外部刺激を伴なわない疼痛感覚）、異痛症（正常な無害刺激に応答した疼痛感覚）、および痛覚過敏（軽い疼痛刺激に対する強い疼痛感覚）が含まれる。この状態の臨床的治療を難しくしたのは、症状のこの多様性である。実際、現在の治療は大部分、抗うつ剤および抗痙攣薬のラベル外（ｏｆｆ  ｌａｂｅｌ）使用である。しかしながら抗うつ剤および抗痙攣薬のどちらも、患者に対して問題を示す。
【０００７】
三環系抗うつ剤は、神経障害性疼痛の治療における使用の最も長い歴史を有する。このような薬品は一般的に、セロトニン作動性およびノルアドレナリン作動性系を標的とし、セロトニンおよびノルエピネフリンの両方の有効な細胞外レベルを増加させる。ノルエピネフリンによるα２−アドレナリン作動性受容体のシナプス後活性化は、これらの化合物が神経障害性疼痛を軽減するメカニズムになりうることが提案されている。しかしながら抗うつ剤は血液脳関門を容易に横断するので、セロトニンおよびノルエピネフリンのレベルを高めるこれらの能力は、ほかの受容体の望ましくない活性化を引起こすことがあり、これは中枢媒介性副作用の高いリスクにつながることがある。抗うつ剤の副作用は、軽いが刺激性の症状、例えば口渇および沈静から、重症の生命を脅かす副作用、例えば起立性低血圧および心臓不整脈まで幅広い。神経障害性疼痛患者の多数を占める高齢者は特に、抗うつ剤のより重大な副作用を受けやすい。
【０００８】
神経障害性疼痛を包含する様々な疼痛状態の治療における抗痙攣薬の有効性が、最近評価された（ＭｃＱｕａｙら、（１９９５）、「疼痛管理のための抗痙攣薬：体系的総説（Ａｎｔｉｃｏｎｖｕｌｓａｎｔ  Ｄｒｕｇｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐａｉｎ：Ａ  Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｒｅｖｉｅｗ）」、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ３１１、１０４７−５２）。抗うつ剤と同様に、これらの薬物療法に伴なって副作用が頻繁に発生する。
【０００９】
抗うつ剤および抗痙攣薬に伴なう副作用の通常の発生、およびこれらによってこれらの化合物の使用に課される制限によって、抗うつ剤または抗痙攣薬に頼らない、神経障害性疼痛の治療へのニーズがある。これに加えて、中枢媒介性副作用を避ける神経障害性疼痛の治療へのニーズがある。
【発明の開示】
【００１０】
（発明の概要）
本発明の１つの側面では、神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、末梢のニューロンのニコチン性受容体（ＮＮＲ）に結合しうるが、血液脳関門を容易に横断しないＮＮＲ作動薬の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することによる方法が提供される。
【００１１】
本発明のもう１つの側面では、異痛症を患う患者の治療方法であって、少なくとも１種の末梢ＮＮＲに結合しうるが、鎮痛効果が観察される用量では血液脳関門を容易に横断しない作動薬の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
【００１２】
本発明のさらにもう１つの側面では、神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、第四級ニコチン性化合物（ｑｕａｔｅｒｎａｒｙ  ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
【００１３】
本発明のさらにもう１つの側面では、脊髄神経節（ＤＲＧ）のレベルで末梢ＮＮＲを作動させる（ｅｆｆｅｃｔ）ことによる、神経障害性疼痛を患う患者の治療方法であって、血液脳関門を容易に横断しないニコチン性作動薬化合物の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することによる方法が提供される。
【００１４】
本発明のさらにもう１つの側面では、中枢ＮＮＲの作動薬活性化に伴なう副作用の減少方法であって、血液脳関門を容易に横断しないニコチン性作動薬化合物の有効量を、このような治療を必要とする患者に投与することを含む方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（詳細な説明）
疼痛減少を説明するために用いられている用語は、痛覚脱失（抗侵害受容、抗異痛症）であり、これは、疼痛の減少、およびこの発明の観点からは、神経障害性疼痛に関連した疼痛、ならびに神経障害性疼痛に関連することが多い異痛症の減少として記載されてもよい。
【００１６】
「作動薬」という用語は、内生リガンドアセチルコリンまたは外生リガンドニコチンと比較して、機能アッセイにおいて３０％以上の有効性を示す化合物として定義される。
【００１７】
「血液脳関門を実質的に横断することができない」および「血液脳関門を容易に横断することができない」という用語は、化合物が、末梢においてＮＮＲを十分に活性化することができる用量では、血液脳関門を横断して中枢ＮＮＲを活性化することができないことを言う。
【００１８】
本発明は、患者における中枢媒介性副作用のリスクを最小限にしつつ、このような治療を必要とする患者の神経障害性疼痛を治療する方法を提供する。本発明者らは、末梢ＮＮＲに結合する作動薬によって少なくとも一部、神経障害性疼痛を改善することができるという驚くべき発見を行なっている。この場合、作動薬は、血液脳関門を実質的に浸透することができず、これによって中枢媒介性中枢神経系（ＣＮＳ）副作用の誘発を避ける。本発明者らは、異痛症と関連することが多い神経障害性疼痛における末梢ＮＮＲについての実質的な役割を証明した最初の者である。血液脳関門を容易に横断することができないあらゆる適切なＮＮＲ作動薬を、本発明の方法に利用することができる。
【００１９】
本発明者らは、末梢ＮＮＲに結合する作動薬は、中枢に位置するＮＮＲに結合する作動薬なしで異痛症からの軽減を与えるという驚くべき発見を行なった。この新発見は、血液脳関門を実質的に横断することができないＮＮＲ作動薬を患者に投与することによって、異痛症からの軽減を必要とする患者を治療する新規方法を提供する。この新しい異痛症の治療方法は、中枢媒介性ＣＮＳ副作用の可能性を劇的に減少させる。このようにして、この新しい治療方法は、中枢媒介性副作用を受けずに異痛症のこのような治療を必要とする患者に対して特別な価値を有する。
【００２０】
本明細書に含まれているすべての引例は、本明細書中に参考として援用されている。
【００２１】
方法
動物
オスのスプラグ−ドーリー系ラット（神経結紮単独については８０から１００ｇ、または神経結紮＋ｉ．ｃ．ｖ．カニューレ挿入もしくはＤＲＧカテーテル法については２００から２２５ｇ）が、チャールズ・リバー（Ｃｈａｒｇｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）（ミシガン州ポーテッジ（Ｐｏｒｔａｇｅ，ＭＩ））から購入された。外科手術に先立って、動物はグループ収容され、温度調節された環境（午前７時から午後８時までの照明）に維持された。単独の神経結紮手術後に、動物はグループ収容された。外科手術の２週間後、実験が開始された。動物は、実験の間２５０から３５０ｇであった。神経結紮手術＋ｉ．ｃ．ｖ．カニューレ挿入もしくはＤＲＧカテーテル法後、動物は個別収容された。実験は、外科手術の１週間後に動物が２５０から３５０ｇになった時に開始された。ラットは餌および水に任意に近づくことができた。
【００２２】
外科処置
ハロセン麻酔下、以前にＣｈｕｎｇらによって記載されている方法で、Ｌ５およびＬ６脊髄神経がきつく結紮された（Ｋｉｍ  Ｓ．Ｈ．、Ｃｈｕｎｇ  Ｊ．Ｍ．、「ラットにおける分節脊髄神経結紮によって生成された末梢神経障害の実験モデル（Ａｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  Ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｎｅｒｖｅ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ）」、Ｐａｉｎ  １９９２；５０：３５５−３６３）。要約すれば、腰部の背部分に切開が行なわれ、脊髄突起を暴露するために、筋肉が鈍的剥離された。Ｌ６横断突起が除去され、左Ｌ５およびＬ６脊髄神経が、５．０ブレード絹縫合糸できつく結紮された。創傷が洗浄され、膜が４．０溶解性ビクリル（Ｖｉｃｒｙｌ）縫合糸で縫合され、皮膚が創傷クリップで閉鎖された。
【００２３】
神経結紮の直後にＤＲＧカテーテルの埋め込みが実施された。動物は処置全体の間（３５から４０分）ハロセン下に維持された。カテーテルは、外科手術の間、縫合固定点が得られるように、カテーテルに沿ってセメント固定されたタイゴン（ｔｙｇｏｎ）チュービングの小片を有するＰＥ２０から構成されていた。Ｌ５脊椎の後関節突起を除去して、左Ｌ５のＤＲＧが露出された。カテーテルが神経節を損傷するのを防ぐために、空洞部にゲルフォームが挿入された。カテーテルは、筋肉および筋膜に縫合され、ついで肩甲骨間で体外に出るように皮下的に通された。生理食塩水がカテーテル中に注入され、これは加熱シールされた。
【００２４】
ｉ．ｃ．ｖ．カニューレの埋め込みは、ナトリウムペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．ネムブタル）麻酔下に実施され、神経結紮は、埋め込みの直後に行なわれた。動物は、処置全体の間（４０から４５分）麻酔下に維持された。動物には、６ｍｍカットされた２２ゲージのガイドカニューレ（バージニア州ロアノークのプラスチックス・ワン（Ｐｌａｓｔｉｃｓ  Ｏｎｅ，Ｒｏａｎｏｋｅ，ＶＡ））が埋め込まれた。ブレグマからの定位固定座標は、１．０ｍｍ後面、１．６ｍｍ側面、および４．５腹面であった（Ｐａｘｉｎｏｓ  Ｇ．およびＷａｔｓｏｎ  Ｃ．、「定位固定座標におけるラット大脳（Ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ｓｔｅｒｅｏｔａｘｉｃ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓ）」、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９９７）。安定化のために３つの頭蓋ネジが取り付けられ、インプラントは頭蓋形成術用アクリル樹脂で覆われた。
【００２５】
注入および注射処置
ｉ．ｃ．ｖ．（脳室内）注入のために、クロルイソンダミン（１０μｇ）が、５μｌホスフェート緩衝生理食塩水中に溶解され、シリンジポンプによって５μｌ／分の率で注入された。この注入は、行動試験の直前に動物へのストレスを減少させるため、テストの２４時間前に実施された。
【００２６】
腹腔内（ｉ．ｐ．）、皮膚内（ｉ．ｄ．）、またはＤＲＧ上を含む他のすべての投与経路のために、クロルイソンダミンが生理食塩水に溶解された。ｉ．ｐ．注射のための最終容積は、１ｍｌ／ｋｇであった。ｉ．ｄ．については５０μｌ、およびＤＲＧ注射については１０μｌであった。すべての注射は、手持ち注射器で行なわれた。
【００２７】
行動評価
急性疼痛の評価について、急性熱刺激への侵害受容応答を評価するために足熱刺激器が用いられた（カリフォルニア州ラ・ホーヤ、カリフォルニア大学サンディエゴ校、麻酔学部、麻酔学研究所（Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ａｔ  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）。この器具および行動手順は以前に記載されている（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら、「皮膚痛覚過敏における熱侵害受容を測定するための新しい感受性方法（Ａ  Ｎｅｗ  ａｎｄ  Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ）」、Ｐａｉｎ  １９８８、３２：７７−８８；Ｄｉｒｉｇら、「放射性熱刺激によって誘引された後足の払いのけ時間を規定する変数の特徴決定（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖａｒｉａｂｌｅｓ  Ｄｅｆｉｎｉｎｇ  Ｈｉｎｄ  Ｐａｗ  Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  Ｌａｔｅｎｃｙ  Ｅｖｏｋｅｄ  ｂｙ  Ｒａｄｉａｎｔ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｓｔｉｍｕｌｉ）」、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．１９９７；７６：１８３−１９１）。要約すれば、ラットが、プレキシグラスボックスの３０℃に維持されたガラス表面上に載せられ、３０分間順化させておかれた。測定された侵害受容応答は、焦点を合わされたプロジェクターランプからの光によって加熱された時（電流は４．８Ａに設定された）、後足を払いのける潜伏時間であった。最終評点は、左足および右足についての潜伏時間の平均であった。組織損傷を避けるために、ランプの自動遮断に先立つ最大応答潜伏時間は、２０．５秒であった。
【００２８】
ホルマリンテストが、持続性疼痛の評価として用いられた。以前に記載された方法（Ｂａｎｎｏｎら、１９９８年）は、要約すれば次のとおりである。テスト環境への順化に続いて、５％ホルマリン溶液５０μｌが、後足の１つの背面に皮下注射された。ホルマリン注射の３０から５０分後の２０分間と規定された第二相のみが、しりごみする、なめる、噛む行動を包含する侵害防衛（ｎｏｃｉｆｅｎｓｉｖｅ）行動について評点された。
【００２９】
神経障害性疼痛の評価のために、脊髄神経結紮を受けた動物の冒された足における機械的異痛症が、フォン・フレイフィラメントを用いて評価された。以前に記載されたように（Ｃｈａｐｌａｎら、「ラットの足における触覚異痛症の定量的評価（Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｔａｃｔｉｌｅ  Ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ  Ｐａｗ）」、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈ，１９９４；５３：５５−６２）、外科手術の２週間後、ラットはテストボックスに順化させられた。このテストボックスは、後足の足底表面への接近を可能にするために、ワイヤメッシュの床を有するプレキシグラスから構成されていた。ディクソン（Ｄｉｘｏｎ）のアップダウン方法を用いた場合、異痛症のベースラインレベルは、払いのけ閾値＃４ｇと規定された異痛症を用いて選択された。ついでテスト化合物が投与され、その後の払いのけ閾値が決定された。
【００３０】
実験スケジュール
急性熱疼痛実験のために、ベースライン払いのけ閾値が決定され、ついでクロルイソンダミンまたはそのビヒクルが投与された。３０分後、Ａ−８５３８０またはそのビヒクルが投与され、作動薬注入の１５、３０、および４５分後に測定が行なわれた。
【００３１】
ホルマリン実験のために、クロルイソンダミンまたはそのビヒクルが、さらなる操作の２４時間前または４０から５０分前に注入された。ついでＡ−８５３８０が注射され、５分後にホルマリンが足に注射された。ホルマリン注射の３０分後と５０分後との間に測定が行なわれた。
【００３２】
脊髄神経結紮実験の場合、拮抗薬投与のタイミングは、投与経路に応じた。ｉ．ｃ．ｖ．投与を用いた場合、クロルイソンダミンまたはそのビヒクルが、さらなる操作の２４時間前に与えられた。実験当日、ベースライン異痛症評点が決定され、ついでＡ−８５３８０またはそのビヒクル対照が与えられ、作動薬注射の１５、３０、および６０分後に測定が行なわれた。ｉ．ｐ．、ｉ．ｄ．、およびＤＲＧ投与についての用量応答曲線も、このスケジュールを用いて決定された。これに対して、拮抗薬のｉ．ｐ．投与を用いた場合、ベースライン異痛症がまず決定され、拮抗薬またはそのビヒクルが注射され、ついで３０分後、Ａ−８５３８０またはそのビヒクルが注射され、作動薬注射の１５、３０、および６０分後に測定が行なわれた。
【００３３】
化合物
次の化合物が、ｉ．ｃ．ｖ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｄ．、またはＤＲＧ注射に適切なこれらのビヒクル中に溶解された。すなわち、Ａ−８５３８０（すなわち、３−（２（Ｓ）−アゼチジニルメトキシ）ピリジンジハイドロクロライド（マサチューセッツ州ナティック（Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）のＲＢＩから入手しうる；Ｓｕｌｌｉｖａｎら、１９９６年）；クロルイソンダミンジヨーダイド（ミズーリ州ボールウインのトクリス（Ｔｏｃｒｉｓ，Ｂａｌｌｗｉｎ，ＭＯ）から入手しうる；Ｃｌａｒｋｅら、１９９４年）；メカミルアミンハイドロクロライド（ミズーリ州セントルイスのシグマ（Ｓｉｇｍａ；Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，ＭＯ））；およびヘキサメトニウム（シグマ）である。
【００３４】
統計分析
反復測定を用いた実験、すなわち急性熱疼痛および機械的異痛症の場合、データがまず、２つの独立因子を有する二元（ｔｗｏ  ｗａｙ）反復測定分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて分析された。反復測定を用いない実験、すなわちホルマリンの場合、データはまず、２つの独立因子を有する二元ＡＮＯＶＡを用いて分析された。両方の因子の有意な相互作用または両方の因子と時間との有意な相互作用があるならば、これに続くその後の一元ＡＮＯＶＡは、各処理の組合わせを独立グループとして用いて実施された。急性熱疼痛においてテストされた神経障害性動物の冒された足と冒されていない足との間の足の払いのけ時間の差が、ペアｔ検定を用いて評価された。すべてのこの後の有意性は、フィッシャーズ（Ｆｉｓｈｅｒｓ）ＬＳＤを用いて決定された。
【００３５】
疼痛の調査のための予備臨床モデルの使用によって、様々な型の疼痛についての多重部位および作用機序の決定を包含する様々な疼痛状態のより深く掘り下げられた調査が可能になった。例えば調査は、急性疼痛および持続性疼痛が、脊髄のレベルで疼痛の伝達を制限する緊張下行性阻害成分（ｔｏｎｉｃ  ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）によって影響をうけることを示している（Ｐｒｏｕｄｆｉｔ  ＨＫ、およびＨａｍｍｏｎｄ  ＤＬ、「侵害受容閾値における変化および鞘内投与アミン拮抗薬によって生成されたモルヒネ誘発痛覚脱失（Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ａｎｄ  Ｍｏｒｐｈｉｎｅ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ａｎａｌｇｅｓｉａ  Ｐｒｏｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  Ａｍｉｎｅ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ）」、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９８１、２１８：３９３−３９９；Ｏｍｏｔｅら、１９９８；Ｋａｎｅｋｏ  Ｍ，Ｈａｍｍｏｎｄ  ＩＤ、「ラットにおけるホルマリン誘発侵害受容における脊髄γ−アミノ酪酸Ａ受容体の役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌ  γ−Ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ＡｃｉｄＡ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｆｏｒｍａｌｉｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｒａｔ）」、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９７、２８２：９２８−９３８）。
【００３６】
これに対して、神経障害性疼痛において、同様な下行性阻害影響が、機械的異痛症の発現を制限しうるが（Ｘｕら、「内生ノルアドレナリン作動性緊張が、神経障害性疼痛の脊髄神経結紮モデルにおける異痛症の症状を制御する（Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｎｏｒａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ  Ｔｏｎｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌｓ  Ｓｙｍｐｔｏｍｓ  ｏｆ  Ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｎｅｒｖｅ  Ｌｉｇａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  Ｐａｉｎ）」、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９９９、３６６：４１−４５）、研究者らは、触覚異痛症の重要な下行性緊張促通、ならびに追加の上行性促通についての証拠を特定した（Ｏｓｓｉｐｏｖら、「ラットの後外側索における下行性促通経路による脊髄神経損傷誘発触覚異痛症の媒介（Ｍｅｄｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｎｅｒｖｅ  Ｉｎｊｕｒｙ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｔａｃｔｉｌｅ  Ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｂｙ  Ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ  Ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒｙ  Ｐａｔｈｗａｙｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｄｏｒｓｏｌａｔｅｒａｌ  Ｆｕｎｉｃｕｌｕｓ  ｉｎ  Ｒａｔｓ）」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ、２０００、２９０：１２９−１３２；Ｓｕｎｇら、「ラットの脊髄損傷による機械的異痛症の生成への上脊髄の関与（Ｓｕｐｒａｓｐｉｎａｌ  Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ  Ａｌｌｏｄｙｎｉａ  ｂｙ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  Ｒａｔｓ）」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  １９９８、２４６：１１７−１１９；Ｓｈｅｅｎ  Ｋ．およびＣｈｕｎｇ  ＪＭ．「ラットモデルにおいて、神経障害性疼痛の徴候は、損傷神経線維からの信号による（Ｓｉｇｎｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  Ｐａｉｎ  Ｄｅｐｅｎｄ  ｏｎ  Ｓｉｇｎａｌ  ｆｒｏｍ  Ｉｎｊｕｒｅｄ  Ｎｅｒｖｅ  Ｆｉｂｅｒｓ  ｉｎ  ａ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ）」、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９９３、６１０：６２−６８）。疼痛状態のその他の差の実証において、機械的異痛症の発現に必要とされる下行性促通は、脊髄神経結紮によって引起こされた熱痛覚過敏においてある役割を果たすようには見えない（Ｂｉａｎら、「後肢の触覚異痛症は（熱痛覚過敏ではなく）、神経損傷を有するラットにおいて、脊髄横断面切断によって遮断される（Ｔａｃｔｉｌｅ  Ａｌｌｏｄｙｎｉａ，Ｂｕｔ  Ｎｏｔ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ，ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｉｎｄ  ｌｉｍｂｓ  ｉｓ  Ｂｌｏｃｋｅｄ  ｂｙ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｎｅｒｖｅ  Ｉｎｊｕｒｙ）」、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  １９９８、２４１：７９−８２；Ｋａｕｐｐｉｌａら、「脊髄払いのけ反射応答に対する脊髄化（ｓｐｉｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）の影響は、ラットにおいて、テスト刺激のサブモダリティーおよび実験病態生理学条件に応じて変わる（Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｓｐｉｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｎ  Ｓｐｉｎａｌ  Ｗｉｔｈｄｒａｗａｌ  Ｒｅｆｌｅｘ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  Ｖａｒｉｅｓ  Ｄｅｐｅｎｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｓｕｂｍｏｄａｌｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｔｅｓｔ  Ｓｔｉｍｕｌｕｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ）」、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  １９９８、７９７：２３４−２４２）。
【００３７】
急性疼痛モデルにおけるＮＮＲ作動薬によって誘発された抗侵害受容の基礎になる神経機序はまた、導き出された急性疼痛の型または用いられた特異的ＮＮＲ作動薬に基づいて異なることも証明された（Ｃｕｒｚｏｎら、「ラットにおけるコリン作動性チャネル活性化剤Ａ−８５３８０および（＋）−エピバチジンの抗侵害受容効果間の差（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ  Ａ−８５３８０  ａｎｄ  （＋）−Ｅｐｉｂａｔｉｄｉｎｅ  ｉｎ  Ｒａｔｓ）」、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９８；２８７：２８７：８４７−８５３）。ＮＮＲ作動薬はまた、持続性および神経障害性疼痛モデルにおいても有効であることが証明されたので（Ｂａｎｎｏｎら、「ニューロンニコチン性アセチルコリン受容体の選択的調節による広い範囲の非オピオイド鎮痛活性（Ｂｒｏａｄ−Ｓｐｅｃｔｒｕｍ，Ｎｏｎ−Ｏｐｉｏｉｄ  Ａｎａｌｇｅｓｉｃ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｎａｌ  Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ）」、Ｓｃｉｅｎｃｅ  １９９８、２７９：７７−８１；Ｋｅｓｉｎｇｌａｎｄら、「持続性炎症および神経障害性疼痛のモデルにおける、ニコチン性アセチルコリン受容体作動薬、（±）−エピバチジン、およびＡＢＴ−５９４の痛覚脱失プロフィール（Ａｎａｌｇｅｓｉａ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｇｏｎｉｓｔ，（±）−Ｅｐｉｂａｔｉｄｉｎｅ  ａｎｄ  ＡＢＴ−５９４  ｉｎ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ  Ｐａｉｎ）、Ｐａｉｎ  ２０００、８６：１１３−１１８）、ＮＮＲ作動薬誘発抗侵害受容、痛覚脱失、および抗異痛症の基礎にある、可能性のある様々な神経経路をさらに記載することは、本研究の１つの目的であった。様々な疼痛モデルの間の比較を容易にするために、ＮＮＲ作動薬Ａ−８５３８０が全体にわたって用いられた。
【実施例１】
【００３８】
急性熱疼痛のモデルにおける全身投与されたクロルイソンダミンの効果を調べた。クロルイソンダミン、すなわち血液脳関門を容易に横断しない第四級ＮＮＲ準不可逆性拮抗薬を用いて、Ａ−８５３８０の中枢および末梢作用を特定した。Ａ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）に対する、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の効果を評価した。図１に示されているように、ｉ．ｐ．クロルイソンダミンは、急性熱疼痛におけるＡ−８５３８０の抗侵害受容作用に対して効果を有していなかった（作動薬と拮抗薬との相互作用、ｐ＝０．４２、拮抗薬の効果、ｐ＝０．３５）。
【実施例２】
【００３９】
持続性疼痛モデルにおける中枢および全身投与されたクロルイソンダミンの効果を調べた。持続性疼痛のホルマリンモデルの第二相を用いて、Ａ−８５３８０の全身投与の２４時間前にクロルイソンダミン（１０μｇ）をｉ．ｃ．ｖ．投与した。このｉ．ｃ．ｖ．投与されたクロルイソンダミンは、全身投与されたＡ−８５３８０の鎮痛効果を完全に遮断した（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．；拮抗薬と作動薬との相互作用、ｐ＝０．０４８；拮抗薬／作動薬処理の組合わせの効果、ｐ＝０．０００２；図２Ａ）。これに対して、クロルイソンダミンをホルマリン注射の４０から５０分前に全身投与した時、ホルマリンテストの第二相においてＡ−８５３８０誘発された痛覚脱失に有意な弱化はなかった（作動薬と拮抗薬との相互作用、ｐ＝０．１２、拮抗薬の効果、ｐ＝０．１９；図２Ｂ）。
【実施例３】
【００４０】
神経障害性疼痛モデルにおけるＮＮＲ作動薬Ａ−８５３８０の効果を調べた。全身投与されたＡ−８５３８０は、脊髄神経Ｌ５およびＬ６のきつい結紮に副次的な神経障害を有するラットにおける用量依存性抗異痛症を誘発した（用量と時間との相互作用、ｐ＜０．０００１、１５、３０、および６０分の時点におけるＡ−８５３８０の効果、ｐ＜０．０００１）。図３参照。０．５から１．０μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．でのＡ−８５３８０は、注射の直後に、例えば衰弱および運動失調などの行動を誘発した。しかしながらこれらの効果は、１５分の時点までに弱まり、行動テストを妨げなかった。
【実施例４】
【００４１】
Ａ−８５３８０誘発された抗異痛症に対する、中枢および全身投与されたクロルイソンダミンＮＮＲ拮抗薬の効果を調べた。Ａ−８５３８０の抗異痛症作用がＮＮＲによって媒介されているかどうかを決定するために、Ａ−８５３８０誘発された抗異痛症を遮断するＮＮＲチャネルブロッカーであるメカミルアミンの能力を評価した。Ａ−８５３８０の３０分前に与えられたメカミルアミン、１μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．は、Ａ−８５３８０の抗異痛症を完全に遮断した（拮抗薬と作動薬との相互作用、ｐ＜０．０００１；拮抗薬／作動薬処理の組合わせの効果、ｐ＜０．０００１：図４）。これはまた、作動薬の注射にすぐ後に起こった衰弱および運動失調も遮断した。
【実施例５】
【００４２】
Ａ−８５３８０誘発抗異痛症の作用部位を調べた。Ａ−８５３８０誘発抗異痛症の作用部位を決定するために、第四級ＮＮＲ拮抗薬クロルイソンダミンを、Ａ−８５３８０投与に先立って、ｉ．ｃ．ｖ．またはｉ．ｐ．のどちらかで与えた。行動テストの２４時間前にｉ．ｃ．ｖ．で与えられた時、クロルイソンダミン（１０μｇ）は、全身投与されたＡ−８５３８０によって誘発された抗異痛症を完全に遮断した（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．；作動薬と拮抗薬との相互作用、ｐ＝０．０１；拮抗薬／作動薬処理の組合わせの効果、ｐ＝０．０００４；図５Ａ）。驚くべきことに、急性および持続性疼痛モデルにおける全身投与されたクロルイソンダミンの有意な効果の欠如とは対照的に、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は、神経障害性疼痛モデルにおいてＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）の抗異痛症効果を完全に遮断した（拮抗薬と作動薬との相互作用、ｐ＝０．０４、拮抗薬／作動薬処理の組合わせの効果、ｐ＝０．０００６；図５Ｂ）。
【実施例６】
【００４３】
Ａ−８５３８０の抗異痛症作用の全身部位の検証を行なった。神経障害性疼痛の脊髄神経結紮モデルにおけるＡ−８５３８０の抗異痛症効果を遮断する、全身投与されたクロルイソンダミンの能力を検証するために、別の第四級ＮＮＲ拮抗薬であるヘキサメトニウムの効果を評価した。作動薬投与の３０分前に与えられたヘキサメトニウム、１９μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．も、全身投与されたＡ−８５３８０の抗異痛症効果を遮断した（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．；拮抗薬と作動薬との相互作用、ｐ＝０．０２、拮抗薬／作動薬処理の組合わせの効果、ｐ＝０．０００３；図６）。
【実施例７】
【００４４】
脊髄神経結紮が脊髄および血液脳関門（「ＢＢＢ」）に近いので、Ａ−８５３８０誘発抗異痛症を遮断する、末梢投与されたクロルイソンダミンの能力が、実際には外科手術中に偶然に引起こされたＢＢＢ中の永久的な脆弱性によるＣＮＳ中へのクロルイソンダミンの浸透によるものであるという懸念があった。
【００４５】
この懸念に対処するために、神経障害ラットを、足の払いのけ急性熱モデルにおいて評価した。前記で実証されているように、末梢投与されたクロルイソンダミンは、Ａ−８５３８０誘発抗侵害受容を拮抗させることにおいてまったく効果がなく、これは、この疼痛モデルにおける作動薬の作用の完全な中枢的部位を示している。クロルイソンダミンが神経障害性動物のＢＢＢを横断しているならば、これらの動物に末梢投与されたクロルイソンダミンは、Ａ−８５３８０の抗侵害受容効果を一部または全部遮断する。このことは、図７に示されている事例にはあてはまらなかった。全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）は、急性熱疼痛の足の払いのけモデルにおける神経障害ラットを用いた時、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発される抗侵害受容を変えなかった（拮抗薬と作動薬との相互作用、ｐ＝０．４６、拮抗薬の効果、ｐ＝０．４１）。興味深いことに、ベースライン測定においてのみ、冒された足（７．２±０．３ｓ）対冒されていない足（８．５±０．３ｓ；ｐ＝０．００３；データは示されていない）について、小さいが有意により低い足の払いのけ閾値があった。
【実施例８】
【００４６】
神経障害性疼痛のモデルにおけるＡ−８５３８０の末梢効果についての作用部位を調べた。一次受容野に直接適用された時に抗異痛症作用を誘発するＡ−８５３８０の能力を、冒された（結紮に対して同側）または冒されていない（結紮に対して反対側）足のどちらかの足底表面にＡ−８５３８０を注射し、ついで冒された足の異痛症の程度を測定することによって評価した。１０、２０、および５０μｇ／ラット、ｉ．ｄ．の用量におけるＡ−８５３８０は、時間、足、および用量に応じた足の払いのけ閾値の変化を誘発した（相互作用、ｐ＝０．０１）。
【００４７】
したがって分析は、各足について個別に行なわれた。同側の足の注射の場合、Ａ−８５３８０の５０μｇ用量のみが、大部分は１５分の時点で抗異痛症効果を有した。ただし６０分の時点も、生理食塩水とは有意に異なった（時間と用量との相互作用、ｐ＜０．０００１、１５分における用量の効果、ｐ＜０．０００１、３０分においてｐ＝０．４７、６０分においてｐ＝０．００５、図８Ａ）。反対側の足の注射の場合、Ａ−８５３８０の３つの用量すべてが、有意な抗異痛症効果を有した。ここでもまた、大部分の効果は１５分の時点であったが、６０分の時点でのみ、１０μｇの非常に小さいが有意な効果を有した（時間と用量との相互作用、ｐ＜０．０００１、１５分における用量の効果、ｐ＜０．０００１、３０分においてｐ＝０．３６、６０分においてｐ＝０．０３、図８Ｂ）。
【実施例９】
【００４８】
ＤＲＧ上へ直接適用された時に抗異痛症作用を誘発するＡ−８５３８０の能力を調べた。Ａ−８５３８０を、結紮側のＬ５ＤＲＧ上へ注入（ｆｕｓｅ）した。ＤＲＧ上へ注入されたＡ−８５３８０の１０μｇおよび２０μｇのどちらも、有意な抗異痛症効果を誘発した。これはそれぞれ１５分および３０分持続した（時間と用量との相互作用、ｐ＜０．０００１、１５分における用量の効果、ｐ＜０．０００１、３０分においてｐ＝０．００７、６０分においてｐ＝０．３３、図９Ａ）。３０分前、クロルイソンダミン、０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．での予備処理は、ＤＲＧ上に注入された２０μｇのＡ−８５３８０によって誘発された抗異痛症を完全に遮断した（ｐ＜０．０００１；図９Ｂ）。
【実施例１０】
【００４９】
ついでＡ−８５３８０のｉ．ｐ．、ｉ．ｄ．およびＤＲＧ投与間で比較を行なった。より直接的な比較を可能にするために、ｉ．ｄ．およびＤＲＧ用量はまず、体重に応じて各ラットが受けた用量を決定し、ついで与えられた平均用量を計算することによって、これらの同等の全身用量、μモル／ｋｇに変換された。投与のｉ．ｐ．、同側ｉ．ｄ．およびＤＲＧ経路の１５分の時点を図１０に示す。足の払いのけ閾値を増加する可能性は、ｉ．ｐ．およびｉ．ｄ．投与間で類似であるが、Ａ−８５３８０は、ＤＲＧに直接投与された時の方が確かにより強力である。
【００５０】
考察
ＮＮＲアゴニストＡ−８５３８０によって誘発される疼痛応答性の減少の基礎になる作用部位は、用いられる疼痛モデルの型に応じて異なる。クロルイソンダミン、すなわち血液脳関門を容易に横断しない第四級ＮＮＲ準不可逆性拮抗薬を用いて、Ａ−８５３８０の中枢作用と末梢作用とを分離した（Ｃｌａｒｋｅら、「ラットの大脳および自律神経節において調査されたニコチン性拮抗薬、クロルイソンダミンの薬理学（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，Ｃｈｌｏｒｉｓｏｎｄａｍｉｎｅ，Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ  ｉｎ  Ｒａｔ  Ｂｒａｉｎ  ａｎｄ  Ａｕｔｏｎｏｍｉｃ  Ｇａｎｇｌｉｏｎ）」、Ｂｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９９４、１１１：３９７−４０５）。急性熱疼痛の場合、全身投与対中枢投与クロルイソンダミンを用いた研究は、抗侵害受容の部位が中枢性に媒介されることを示した（Ｃｕｒｚｏｎら、「ラットにおけるコリン作動性チャネル活性化剤Ａ−８５３８０および（±）−エピバチジンの抗侵害受容効果間の差（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ａｃｔｉｖａｔｏｒｓ  Ａ−８５３８０  ａｎｄ  （±）−Ｅｐｉｂａｔｉｄｉｎｅ  ｉｎ  Ｒａｔｓ）、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９８、２８７：８４７−８５３参照；同様に図１参照）。
【００５１】
急性熱疼痛と同様に、持続性疼痛モデルにおけるＡ−８５３８０の鎮痛作用もまた、Ａ−８５３８０誘発痛覚脱失を遮断する、中枢性に投与されたクロルイソンダミンの能力によって示されているように、ＣＮＳにおいて大部分媒介されることが証明されたが、一方で、拮抗薬の末梢投与は、有意な効果を有していなかった（図２）。
【００５２】
急性熱疼痛および持続性疼痛モデルとは対照的に、本研究は、ＮＮＲ作動薬Ａ−８５３８０によって誘発された抗異痛症における末梢ＮＮＲについての実質的な役割を実証した。Ａ−８５３８０は、神経障害性疼痛の脊髄神経結紮モデルにおいて用量依存性抗異痛症を誘発し、効果は、ＮＮＲ拮抗薬メカミルアミンでの抗異痛症の完全遮断によって実証されているように、ＮＮＲによって媒介された（図３および４）。さらにはＡ−８５３８０によって誘発される抗異痛症を拮抗させる、中枢投与および末梢投与した両方のクロルイソンダミンの能力は、抗異痛症作用の中枢および末梢部位の両方が存在することを実証した（図５参照）。
【００５３】
ＮＮＲ作動薬に対する抗異痛症作用の末梢部位は新規な発見であるので、この結果を検証することが必要であると考えられた。したがってＡ−８５３８０の末梢拮抗作用もまた、ＮＮＲ拮抗薬ヘキサメトニウムを用いて実証された（図６）。これに加えて、結紮外科手術によって引起こされた血液脳関門の欠陥は、末梢投与されたクロルイソンダミンが神経障害ラットにおける急性熱疼痛の足の払いのけアッセイにおいて抗侵害受容を変えないという発見によって、除外された（図７）。
【００５４】
Ａ−８５３８０の末梢作用の検証が確立されたので、末梢抗異痛症の正確な位置を調査した。同側の足の足底表面における感覚ニューロンの一次受容野中へのＡ−８５３８０の直接注入は、小さいが有意な抗異痛症を誘発した。しかしながらＡ−８５３８０が反対側の足の中に注射された時、同等またはそれ以上の抗異痛症が達成され、このことは、両方の効果がＡ−８５３８０の全身的効果によるものであって、一次受容野における局所的効果によるものでない可能性が最も高いことを示している（図８）。
【００５５】
一次受容野におけるＡ−８５３８０の選択的効果の欠如とは対照的に、Ａ−８５３８０は、Ｌ５ＤＲＧに直接注入された時、用量依存性抗異痛症効果を誘発した（図９）。Ａ−８５３８０のこの効果は、全身投与されたクロルイソンダミンでの予備処理によって遮断され、このことは、これがＮＮＲ媒介されていることを示す。一次受容野中、またはＤＲＧ上へ全身投与された時のＡ−８５３８０の効果の比較は、Ａ−８５３８０がＤＲＧ上に注入された時に最も強力であることを示しており、したがってこれは、神経障害性疼痛のラットモデルにおいてＮＮＲ作動薬誘発抗異痛症に対する作用の重要な末梢部位でありうることを示唆している（図１０）。
【００５６】
ＮＮＲリガンドならびに他の受容体リガンドに関わる予備臨床研究に記載された作用機序の点で、およびクリニックにおいて見られた治療薬理学の点で、抗侵害受容と痛覚脱失との間に多くの類似性があるように見えるが、調査は、神経障害性疼痛における抗異痛症がまったく異なることを示している（Ｃｕｒｚｏｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９８；２８７：８４７−８５３；Ｒｕｅｔｅｒら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２０００；８７２：９３−１０１；Ｒｏｇｅｒｓ  ａｎｄ  Ｉｗａｍｏｔｏ、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９３；２６７：３４１−３４９；Ｏｍｏｔｅら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９８；８１４：１９４−１９８；Ｓｕｇｉｍｏｔｏら、Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９８６；２５：４８１−４８５；ＫａｎｅｋｏおよびＨａｍｍｏｎｄ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  １９９７；２８２：９２８−９３８；Ｍｉｌｌａｎ，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  １９９９；５７：１−１６４）。具体的には、神経障害性疼痛は明らかに、末梢および中枢プロセスの両方の機能を変える。例えばそれぞれ感覚ニューロンへの異所性放出（ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）の誘発、および中枢感作の誘発である（Ｇｏｌｄ、Ｐａｉｎ  ２０００；８４：１１７−１２０；ＡｔｔａｌおよびＢｏｕｈａｓｓｉｒａ、Ａｃｔａ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃａｎｄ  １９９９；Ｓｕｐｐｌ．１７３：１２−２４；ＳｈｅｅｎおよびＣｈｕｎｇ、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９９３；６１０：６２−６８；Ｓｕｎｇら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  １９９８；２４６：１１７−１１９；Ｂｉａｎら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  １９９８；２４１：７９−８２；Ｏｓｓｉｐｏｖら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２０００；２９０：１２９−１３２；Ｌｅｅら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２０００；２９０：１２９−１３２）。したがって理論的には、疼痛伝達の阻害および機械的異痛症のその後の軽減は、末梢またはＣＮＳにおける治療薬の作用を通じて発生しうる。
【００５７】
本研究において発見された部位注射の差別的効果は、ＤＲＧであって一次受容野にあるのではない、ＮＮＲによって媒介される抗異痛症作用の末梢部位が存在することを示している（図８、９、１０）。本研究は、ＤＲＧレベル、および実際にＤＲＧにおけるＮＮＲ作動薬注入後の疼痛軽減レベルにおいて神経障害性疼痛を減少させるＮＮＲ作動薬の能力が、以前に報告されたあらゆるほかの種類の任意の化合物よりもはるかに大きいことを報告した最初の研究である（図９；Ｌｉｕら、２０００、Ｐａｉｎ  ２０００；８５：５０３−５２１；Ｌｙｕら、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．２０００；８７１：９８−１０３）。大部分のＮＮＲサブユニットは、ＤＲＧ中に存在することが報告されている。これには、α７、α３、およびα４が含まれるが、これらに限定されない（ＮｉｎｋｏｖｉｃおよびＨｕｎｔ、Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１９８３；２７２：５７−６０；Ｂｏｙｄら、１９９１、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  １９９１；２２：１−１４）。したがってＮＮＲは、ＤＲＧのレベルで疼痛伝達を変える位置にあり、本研究は、これらがこの部位での神経障害性疼痛伝達の減少に重要な役割を果たしうることを示唆している。
【実施例１１】
【００５８】
Ａ−４２５０３（ＩＲ，５Ｓ）５−（３，６−ジアザビシクロ［３．２．０］ヘプト−６−イル）−Ｎ−ヒドロキシ−ニコチンアミド）は、５００ｍｇで有意な抗異痛症を誘発（ｉｎｆｕｓｅｓ）する。これは、４．７７μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．と等量である。ＤＲＧでの効果は、ＮＭＲ拮抗薬での予備処理によって遮断された。ｉ．ｐ．注射された時、これは、顕著な副作用を伴なわずに、６２μモル／ｋｇで有意な抗異痛症を誘発する。
【００５９】
実施例１２
Ａ−８５３８０が全身的に（ｉ．ｐ．）与えられた時、これは血液脳関門を容易に横断し、末梢および中枢ＮＮＲの両方を刺激する。これはまた、神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける神経障害性疼痛症状（抗異痛症）の有意な用量依存性減少も誘発する。これは図１１において見ることができる（黒い正方形）。異痛症の減少とともに、多様な副作用、例えば衰弱、運動失調、ブレーシング、および呼吸困難があり、これは治療用量範囲を制限する。
【００６０】
クロルイソンダミンは、血液脳関門を容易に横断しない第四級ＮＮＲ拮抗薬である。少量がｉ．ｃ．ｖ．で与えられた時、これは中枢に位置するＮＮＲを単に遮断する。中枢ＮＮＲが、クロルイソンダミン（１０μｇ）で遮断された時、Ａ−８５３８０のその後の全身注射は、末梢ＮＮＲを活性化するのみである。同様に図１１に示されているように、これが神経障害ラットにおいてなされた時、Ａ−８５３８０はなおも、異痛症の有意な減少を誘発しうる。前記グラフにおいて見ることができるように（黒い円）、この効果を見るにはより高い用量が必要とされる（拮抗薬を伴なわずに与えられた時、３μモル／ｋｇ）。しかしながら用量の増加にもかかわらず、ほとんど副作用はなく、このことは、例えば衰弱、運動失調、およびブレーシングなどの副作用が、中枢に位置するＮＮＲによって媒介されることを示している。
【００６１】
少量のクロルイソンダミンがｉ．ｐ．で与えられた時、これは末梢に位置するＮＮＲを単に遮断する。末梢ＮＮＲがクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）で遮断された時、Ａ−８５３８０のその後の全身注射は、中枢ＮＮＲを活性化するのみである。同様に図１１に示されているように、これが神経障害ラットにおいてなされた時、Ａ−８５３８０はなおも、異痛症の有意な減少を誘発しうる。前記グラフにおいて見ることができるように（ブルーの三角形）、この効果を見るにはより高い用量が必要とされる（拮抗薬を伴なわずに与えられた時、１．５μモル／ｋｇ対０．７５μモル／ｋｇ）。しかしながら用量の増加とともに、ブレーシング、頭の振り、衰弱、および運動失調を包含する副作用の有意な増加があり、このことはさらに、Ａ−８５３８０の用量限定的副作用が中枢性に媒介されていることを示している。
【００６２】
総合してこれらのデータはさらに、ラット神経障害性疼痛モデルのＮＮＲ作動薬誘発抗異痛症における、末梢に位置するＮＮＲの役割を裏付ける。これに加えてこれらは、この抗異痛症が、ＮＮＲ作動薬の全身注射後、および中枢に位置するＮＮＲの刺激がなくても、達成することができることを初めて実証している。さらにはこれらは、この抗異痛症が、中枢に位置するＮＮＲが刺激された時に見られるものよりも少ない副作用を伴なって達成できることを実証している。
【００６３】
本発明は、好ましい実施態様または例証的実施態様とともに上に記載されているが、これらの実施態様は、本発明を網羅するためでも限定するためでもない。むしろ本発明は、添付の特許請求の範囲によって規定されているような本発明の精神および範囲内に含まれている、すべての代替方法、修正方法、および同等な方法をカバーするものとする。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
次のものは図面の説明であり、これらは、本発明を例証することを目的として示されているのであって、本発明を限定するために示されているわけではない。
【００６５】
【図１】正常ラットを用いた急性熱疼痛のラットの足の払いのけモデルにおいて、足の払いのけ時間（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗侵害受容に対する、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、用量の主な効果を示すために、１５、３０、および４５分の測定全体にわたって崩れた左右足の評点の平均を表わす。各グループにおいて５匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図２Ａ】持続性疼痛のホルマリンモデルにおけるしりごみ（ｆｌｉｎｃｈ）（平均±ｓｅｍ）の減少によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された痛覚脱失に対する、ｉ．ｃ．ｖ．（脳室内）クロルイソンダミン（１０μｇ、２４時間前）の予備処理の効果を示している。各グループにおいて５匹のラットが用いられた。
【図２Ｂ】持続性疼痛のホルマリンモデルにおけるしりごみ（平均±ｓｅｍ）の減少によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された痛覚脱失に対する、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．４５から５０分前）の予備処理の効果を示している。しりごみは、第二相の間２０分にわたって測定された。各グループにおいて６から７匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図３】神経障害性疼痛の脊髄神経結紮モデルにおける機械的異痛症のテストの足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）に対するＮＮＲ作動薬Ａ−８５３８０の多用量の効果を示している。足の払いのけ閾値（グラム力）は、フォン・フレイ（ｖｏｎ  Ｆｌｅｙ）フィラメント刺激およびディクソンアップダウン方法を用いて決定された。測定は、作動薬注射前（ベースライン）および作動薬注射の１５、３０、６０、および１２０分後に行なわれた。各用量において６匹のラットが用いられた。
【図４】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗異痛症に対する、全身投与されたメカミルアミン（１μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、処理の主な効果を示すために、１５、３０、および６０分の測定全体にわたって崩れた払いのけ閾値を表わす。各グループにおいて６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図５Ａ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗異痛症に対する、脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）クロルイソンダミン（１０μｇ２４時間前）の予備処理の効果を示している。
【図５Ｂ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗異痛症に対する、末梢投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、処理の主な効果を示すために、１５、３０、および６０分の測定全体にわたって崩れた払いのけ閾値を表わす。各グループにおいて４から６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図６】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗異痛症に対する、全身投与されたヘキサメトニウム（１９μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、処理の主な効果を示すために、１５、３０、および６０分の測定全体にわたって崩れた払いのけ閾値を表わす。各グループにおいて５匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図７】神経障害ラットを用いた急性熱疼痛のラットの足の払いのけモデルにおいて、足の払いのけ時間（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、全身投与されたＡ−８５３８０（０．７５μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．）によって誘発された抗侵害受容に対する、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、処理の主な効果を示すために、１５、３０、および４５分の測定全体にわたって崩れた左右足の評点の平均を表わす。各グループにおいて６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図８Ａ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける神経障害性の足の機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）に対する、冒された側（同側）の後足の足底表面に注射されたＡ−８５３８０の多用量の効果を示している。
【図８Ｂ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける神経障害性の足の機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）に対する、冒されていない側（反対側）の後足の足底表面に注射されたＡ−８５３８０の多用量の効果を示している。測定は、作動薬注射前（ベースライン）および作動薬注射の１５、３０、６０、および１２０分後に行なわれた。各用量／足の組合わせにおいて６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対同じ時点における生理食塩水。
【図９Ａ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）に対する、Ｌ５ＤＲＧ上に注入されたＡ−８５３８０の異なる用量の効果を示している。測定は、作動薬注射前（ベースライン）および作動薬注射の１５、３０、および６０分後に行なわれた。各用量／足の組合わせにおいて６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対同じ時点における生理食塩水。
【図９Ｂ】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）の増加によって測定された、ＤＲＧ上に注入されたＡ−８５３８０（２０μｇ）によって誘発された抗異痛症に対する、全身投与されたクロルイソンダミン（０．４μモル／ｋｇ、ｉ．ｐ．３０分前）の予備処理の効果を示している。平均は、処理の主な効果を示すために、１５、３０、および６０分の測定全体にわたって崩れた払いのけ閾値を表わす。各グループにおいて６匹のラットが用いられた。＊ｐ＜０．０５対生理食塩水／生理食塩水。
【図１０】神経障害性疼痛のラット脊髄神経結紮モデルにおける機械的刺激への足の払いのけ閾値（平均±ｓｅｍ）に対する、冒された足にｉ．ｐ．、ｉ．ｄ．投与されるか、またはＬ５ＤＲＧ上に投与されるかのどちらかのＡ−８５３８０の効果の比較を示している。ｉ．ｄ．またはＤＲＧ投与されたＡ−８５３８０の用量は、各ラットの体重に基づいて全身用量に変換され、全身用量との平均等量としてグラフに示された。足の払いのけ閾値平均は、１５分の時点のみを表わす。
【図１１】神経障害ラットの足の払いのけ閾値に対する、単独で投与されるか、またはｉ．ｐ．もしくはｉ．ｃ．ｖ．投与されたクロルイソンダミンとともに投与されたＡ−８５３８０の効果の比較を示している。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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