(57)【要約】女性個体の子宮の病的症状を克服する方法であって、ＩＰレセプターのアンタゴニストの少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを個体に投与することを含む方法。子宮の病的症状とは子宮癌、月経過多、月経困難症、あるいは子宮内膜又は子宮筋層病的症状である。
2006517576.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
女性個体の子宮の病的症状を克服する方法において、ＩＰレセプターのアンタゴニストの少なくとも一作用剤及び／又はプロスタグランジンＩ合成酵素（ＰＧＩＳ）インヒビターを個体に投与することを含む方法。
【請求項２】
子宮の病的症状が子宮筋層または子宮内膜の異常な細胞成長に関する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
子宮の病的症状が子宮癌、月経過多、月経困難症、あるいは子宮内膜又は子宮筋層病的症状から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
子宮内膜病的症状が子宮内膜症である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
子宮筋層病的症状が子宮筋腫である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ＩＰレセプターのアンタゴニストがＩＰレセプターに対するＰＧＩ２の結合を予防又は減少させる、請求項１ないし５の何れかに記載の方法。
【請求項７】
ＩＰレセプターのアンタゴニストがＰＧＩ２およびＩＰレセプター間の相互作用、又はＩＰレセプターおよび関連Ｇタンパク質間の相互作用に影響を及ぼし、よってＰＧＩ２−ＩＰ媒介シグナル伝達経路を阻害又は中断する、請求項１ないし６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
ＩＰレセプターアンタゴニストが、ＥＰ０９０２０ｌ８Ａ２に記載の２−（アリルフェニル）アミノ−イミダゾリン誘導体；ＵＳ６，１８４，２４２に記載の２−（置換されたフェニル）アミノ−イミダゾリン誘導体；ＷＯ０２／０７０５１４に記載のアルコキシカルボニルアミノ・ヘテロアリール・カルボン酸誘導体；ＷＯ０２／０７０５００に記載のアルコキシカルボニルアミノ安息香酸またはアルコキシカルボニルアミノ・テトラゾリル・フェニル誘導体；ＷＯ０２／４０４５３に記載の２−フェニルアミノイミダゾリン・フェニルケトン誘導体；ＷＯ０１／６８５９１に記載のカルボン酸誘導体；ＷＯ０１／１０４３３に記載のアミノ−又はアミド−プロスタサイクリン誘導体合成物；ＷＯ０１／１０４４５に記載の１５（Ｒ）イソカルバサイクリン又は１５−デオキシイソカルバサイクリン誘導体；ＷＯ７９／００７４４に記載の６,９-チアプロスタサイクリン類似体または誘導体；（５Ｚ）-カルバサイクリン；ＦＣＥ２２１７６（（５Ｚ）-１３,１４−ジデヒドロ-２０-メチル-カルボプロスタサイクリン）；及び、抗ＩＰレセプター抗体のうちの一以上の何れかである、請求項１ないし７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
作用剤がＰＧＩ２のアンタゴニストである、請求項１ないし７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
作用剤がＰＧＩＳのインヒビターである、請求項1に記載の方法。
【請求項１１】
ＰＧＩＳインヒビターが抗ＰＧＩＳ抗体、Ｕ−５１６０５、ペリオキシナイトライド、３−モルホリノシドノニミンＮ−エチルカルバミド又はトランス２−フェニルシクロプロピルアミンＨＣｌである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
また、ＰＧＥＳインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを個体に投与する、請求項１ないし１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
ＥＰ２またはＥＰ４のアンタゴニストが、ＡＨ６８０９、ＷＯ  ００／１５６０８（小野薬品工業）に記載のω置換プロスタグランジンＥ誘導体、ＡＨ２３８４８Ｂ、ＡＨ２２９２１Ｘ、ＩＦＴＳＹＬＥＣＬ、ＩＦＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＡＥＣＬ、ＩＦＴＳＹＥＡＬ、ＩＬＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＴＤＣＬ、ＴＳＹＥＡＬ（４-２フェニルアラニンと共に）、ＴＳＹＥＡＬ（ホモ・フェニルアラニンと共に）、ＷＯ  ００／０３９８０（小野薬品工業）に記載の5チア-プロスタグランジンE誘導体、5-ブチル-2,4-ジヒドロ-4-[[2'-[N（3-クロロ-2-チオフェンカルボニル）スルファモイル]2フェニル-4-イル]]-2メチル｛2-（トリフルオロメチル）フェニル]-1,2,4-トリアゾル-3-１カリウム塩、5-ブチル-2,4-ジヒドロ-4-[[2'-[Ｎ-（2-メチル-3-フロニル）スルファモイル]ビフェニル-4-イル]メチル]-2-｛2-(トリフルオロメチル)フェニル]-1,2,4-トリアゾル-3-１、5-ブチル-2,4-ジヒドロ-4-[[2'-[N-（3-メチル-2-チオフェンカルボニル）スルファモイル]ビフェニル-4-イル]メチル]-2-｛2（トリフルオロメチル）フェニル]-1,2,4-トリアゾル-3-１、5-ブチル-2,4-ジヒドロ-4-[[2'-[N-（2-チオフェンカルボニル）スルファモイル]ビフェニル-4-イル]メチル]-2-｛2（トリフルオロメチル）フェニル]-1,2,4-トリアゾル-3-１、及び、5-ブチル-2,4-ジヒドロ-4-[[2'-[N-[2-（メチルピルロル）カルボニル]スルファモイル]ビフェニル-4イル]メチル]-2-｛2-（トリフルオロメチル）フェニル]-1,2,4-トリアゾル-3-1のうちの一以上である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
また、FPレセプターのアンタゴニストを個体に投与する、請求項１ないし１３の何れか一項に記載の方法。
【請求項１５】
ＦＰレセプターアンタゴニストが、ＰＧＦ２αジメチルアミド；ＰＧＦ２αジメチルアミン；ＡＬ−８８１０（(5Z,13 E)-(9S,11S ,15R)-9,15-ジヒドロキシ-11-フルオロ-15-(2-インダニル)-16,17,18,19,20-ペンタノール-5,13-プロスタジエン酸）；ＡＬ−３１３８（11-デオキシ-16-フルオロPGF2α）；フロレチン；グリベンクラミド；リドグレル；ＰＨＧ１１３；ＰＣＰ−１(rvkfksqqhrqgrshhlem)；ＰＣＰ−２（rkavlknlyklasqccgvhvislhiwelssiknslkvaaisespvaeksast）；ＰＣＰ−３（clseeakearrindeierqlrrdkrdarre-NH2）；ＰＣＰ−４（kdtilqlnlkeynlv-NH2）；ＰＣＰ−８（ilghrdyk）；ＰＣＰ−１０（wedrfyll）；ＰＣＰ−１３（ILGHRDYK）；ＰＣＰ−１４（YQDRFYLL）；（ILAHRDYK）；ＰＣＰ−１３．７（ILAHRDYK）；ＰＣＰ−１３．８（ILaHRDYK）；ＰＣＰ−１３．１１（ILGFRDYK）；ＰＣＰ−１３．１３（ILGHKDYK）；ＰＣＰ−１３．１４（ILGHRNYK）；ＰＣＰ１３．１８（ILGHQDYK）；ＰＣＰ−１３．２０（ILGHRDY-アミド）；ＰＣＰ−１３．２１（ILGHRDYK-アミド）；ＰＣＰ−１３．２２（ILGWRDYK）；ＰＣＰ−１３．２４（ILGXRDYK）；及び、ＰＣＰ−１５（SNVLCSIF）のうちの一以上である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
作用剤がＰＧＦ２αのアンタゴニストである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＰＧＦ２αアンタゴニストが抗ＰＧＦ２α抗体である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）インヒビターが個体に投与される、請求項１ないし１７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１９】
ＣＯＸ−２インヒビターがニメスリド、4-ヒドロキシニメスリド、フロスリド、及びメロキシカムの何れか一つである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
女性個体の子宮の病的症状を克服するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストの少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターの使用。
【請求項２１】
アンタゴニストである少なくとも一作用剤、ＩＰレセプター及びＰＧＩＳインヒビターを個人に投与する、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
ＰＧＥＳインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニスト、ないしはＣＯＸ−２インヒビターのうちの何れか一以上を個体に投与する、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
女性個体の子宮の病的症状の治療又は予防をするための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストの組合せの使用。
【請求項２４】
ＦＰレセプターのアンタゴニストである一以上の作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターを個体に投与する、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の組合せの使用。
【請求項２６】
ＰＧＥＳインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、及びＣＯＸ−２インヒビターを個体に投与する、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＣＯＸ−２インヒビターの組合せの使用。
【請求項２８】
ＰＧＥＳのインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、及びＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤を個体に投与する、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストと、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の組合せの使用。
【請求項３０】
ＣＯＸ−２インヒビターを個体に投与する、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストと、ＣＯＸ−２インヒビターの組合せの使用。
【請求項３２】
ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤を個体に投与する、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤と、ＣＯＸ−２インヒビターとの組合せの使用。
【請求項３４】
ＰＧＥＳインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを個体に投与する、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、IPレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤と、ＣＯＸ−２インヒビターとの組合せの使用。
【請求項３６】
女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造における、ＰＧＥＳのインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターの使用であって、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを個体に投与する使用。
【請求項３７】
ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが請求項１３に定義したものである、請求項２２ないし２４、２６、２８ないし３２及び３４ないし３６の何れか一項に記載の使用。
【請求項３８】
ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤が請求項１５ないし１７の何れかに定義したものである、請求項２２、２４ないし２６、２８ないし３０及び３２ないし３６の何れか一項に記載の使用。
【請求項３９】
ＣＯＸ−２インヒビターが請求項１９に定義したものである、請求項２２、２４、２６ないし２８及び３０ないし３６の何れか一項に記載の使用。
【請求項４０】
ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳのインヒビターが請求項６ないし１１の何れかに定義したものである、請求項２０ないし３９の何れか一項に記載の使用。
【請求項４１】
子宮の病的症状が請求項２ないし５の何れかに定義したものである、請求項２０ないし４０の何れか一項に記載の使用。
【請求項４２】
膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具経由で投与するように形成された医薬である、請求項２０ないし４１の何れか一項に記載の使用。
【請求項４３】
ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビターの何れか一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターを含む組成物。
【請求項４４】
医薬への使用のための、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビターの何れか一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターを含む組成物。
【請求項４５】
ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビターの何れか一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターと、薬学的受容性のある担体を含む医薬組成物。
【請求項４６】
ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビターの何れか一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターを含む膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具。
【請求項４７】
ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターが請求項６ないし１１の何れか一項に定義のものである、請求項４３に記載の組成物又は請求項４５に記載の医薬組成物又は請求項４６に記載の膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具。
【請求項４８】
ＰＧＥＳインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが請求項１３に定義のものである、請求項４３に記載の組成物又は請求項４５に記載の医薬組成物又は請求項４６に記載の膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具。
【請求項４９】
ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤が請求項１５ないし１７の何れか一項に定義のものである、請求項４３に記載の組成物又は請求項４５に記載の医薬組成物又は請求項４６に記載の膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具。
【請求項５０】
ＣＯＸ−２インヒビターが請求項１９に定義のものである、請求項４３に記載の組成物又は請求項４５に記載の医薬組成物又は請求項４６に記載の膣リング又はタンポン又は子宮内避妊器具。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、治療法、特に子宮の病的症状を治療する方法に関するものである。
【０００２】
子宮の病的症状は、女性、特に西側世界の女性たちにとって深刻な健康問題である。このような病的症状には子宮癌、子宮内膜又は子宮筋層の病的症状、例として子宮内膜症（子宮内膜）及び子宮筋腫（子宮筋層）、月経過多および月経困難症などを含む。
【０００３】
ヒトの子宮内膜の上皮細胞は、悪性形質転換を非常に受けやすい。西側諸国において、子宮内膜癌は、最も普通の婦人科悪性腫瘍である。子宮内膜癌は、いくつかの細胞型に起因するが、腺上皮は、最も一般的な原始型である（腺癌は子宮腫瘍の８０〜９０％を占める）。子宮内膜癌は、主に、発病が４０歳以下でまれで、約７０歳にピークに達する閉経期後の疾患である。子宮内膜癌の発病は、この５０年の間に着実に西側諸国において増加しており、これは、主に寿命の延長と検出方法の改良に起因している（Gordon & Ireland, 1994;Mant & Vessey, 1994）。
【０００４】
子宮内膜症は、子宮外着床及び子宮内膜の成長であって、従って、子宮内膜の異常な細胞成長と考えられる。腺筋症は、異所性の子宮内膜が子宮筋に着床する子宮内膜症の形である。
【０００５】
月経過多は月経の過剰である。月経困難症は痛みを伴う月経を意味する。月経過多および月経困難症は、多くの女性、特に西側諸国の多くの女性に影響を及ぼし、重要な健康問題を起こす。３４から４９歳の英国女性の２０人に１人は、月経問題のために一般開業医にかかっている。これらの女性は、全ての婦人科受診のうちの１０の１以上を占めており、医薬処方だけで年間７００万ポンドを上回るNHSがかかっている。認められる異常な膣出血が年間行われる少なくとも７０，０００の子宮摘出の７０％にあると言われている。現時点では、月経過多の治療には、トラネキサム酸又はメフェナム酸が含まれる。重症症例での治療は、子宮摘出（膣又は腹部）であるが、これは、深刻な羅病率及び若干の死の危険度を有する大手術である。Stirrat (1999) The Lancet 353, 2175-2176は月経過多の治療の検討である。更なる代替治療の開発が望まれる。
【０００６】
プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ（ＰＧＨＳ）とも呼ばれる、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素は、プロスタグランジンＨ２（ＰＧＨ２）に、アラキドン酸の転換の律速段階を触媒する。次に、ＰＧＨ２は、天然のプロスタグランジンを合成する特定のプロスタグランジンシンターゼ酵素の基質として役立つ。これらは、プロスタグランジンＤ２がプロスタグランジンＤ−シンターゼにより、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）がプロスタグランジンＥ−シンターゼ（ＰＧＥＳ）により、プロスタグランジンＦ２α（ＰＧＦ２α）がプロスタグランジンＦ−シンターゼ（ＰＧＦＳ）により、及びプロスタサイクリン（プロスタグランジンＩ２、ＰＧＩ２）がプロスタグランジンＩ−シンターゼ（ＰＧＩＳ）により合成されるように、生成されるプロスタグランジンに従って称される。
【０００７】
現在まで、ＣＯＸ酵素にはＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２の２つのイソ型が同定されている(DeWitt, 1991)。ＣＯＸ−１は、多くの組織及び細胞型において本質的に発現され、正常な生理機能のためにプロスタグランジンを生成する（Herschman、1996）。対照的に、ＣＯＸ−２の発現は、成長因子、オンコジーン、発癌物質及び腫瘍を促進しているホルボールエステルによって静止細胞刺激後に急速に誘発される（Herschman, 1996; Subbaramaiah等、1996）。
【０００８】
プロスタサイクリン（ＰＧＩ２）は、血管拡張因子および血小板凝集の強力な阻害剤として特徴づけられており(Smyth & Fitzgerald, 2002)、このように脈管止血の持続において、必須的役割を果たす。脈管内皮によって合成される主なプロスタノイドであって、平滑筋弛緩物質として作用する。ＰＧＩ２はその典型的な７つの膜貫通構造を有するＧタンパク質結合レセプター（ＩＰ）との相互作用によって標的細胞に対してその効果を引き出す(Narumiya et al, 1999)。ＩＰレセプターは、Ｇタンパク質のＧｓ及びＧｑ種を刺激して、ｃＡＭＰ生成及びホスファチジルイノシトール応答の増加を引き起こしている。
【０００９】
ＰＧＩ２は性と生殖に関する健康の主な問題である月経過多の病因に関係しており、全ての婦人科受診の１１％を占めており、１９９５年には総計７００万ポンドにも達する薬費がかかっている(Cooper等,2001)。対照と比較して月経過多をもつ女性において、ＰＧＩ２ (Smith等, 1981)の増強した合成またはＰＧＩ２濃度の増加がトロンボキサンＡ２ (Makarainen & Ylikorkala 1986)と関連しているという証拠がある。しかしながら、月経周期を通じて子宮内膜においてＰＧＩＳ又はＩＰの一時的又は空間的発現に関する情報がほとんどない。
【００１０】
薬理学、分子生物学及び血小板プロスタサイクリン受容器の信号伝達は、Armstrong (1996, Pharmacol Ther. 72(3), p171-191)によって概説されている。
【００１１】
ヒトＩＰレセプターのクローニング及び配列については、ＥＰ０７５３５２８Ａｌ(小野薬品工業)；米国特許第５，７２８，８０８号及び第６，３６５，３６０ (Merck Frosst Canada & Co.に既存)； Boie 等"Cloning and expression of a cDNA for the human prostanoid IP receptor" J. Biol. Chem. 269 (16), 12173-12178 (1994)；Katsuyama 等, "Cloning and expression of a cDNA for the human prostacyclin receptor" FEBS Lett. 344 (1), 74-78 (1994)； Nakagawa 等, "Molecular cloning of human prostacyclin receptor cDNA and its gene expression in the cardiovascular system" Circulation 90 (4), 1643-1647 (1994), Duncan 等,"Chromosomal localization of the human prostanoid receptor gene family" Genomics 25 (3), 740-742 (1995)； 及びOgawa 等, "Structural organization and chromosomal assignment of the human prostacyclin receptor gene" Genomics 27 (1), 1,42-148 (1995)に報告されており、すべてが出典明示によりここに取り込まれる。
【００１２】
ヒトＩＰレセプターのｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００９６０であり、アミノ酸配列はＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００９５１である。ヒトＩＰレセプター遺伝子ではいくつかの配列変異が同定されており、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００９６０として示されている。
【００１３】
ヒトＰＧＩＳのクローニング及び配列については、Miyata等, "Molecular cloning and expression of human prostacyclin synthase" Biochem. Biophys. Res. Commun. 200 (3): 1728-1734 (1994)；Nakayama等, "Organization of the human prostacyclin synthase gene" Biochem. Biophys. Res. Commun. 221 (3): 803-806 (1996)；Yokoyama等, "Human gene encoding prostacyclin synthase (PTGIS): genomic organization, chromosomal localization, and promoter activity" Genomics 36 (2): 296-304 (1996)；Wang等, "Organization of the gene encoding human prostacyclin synthase" Biochem. Biophys. Res. Commun. 226 (3): 631-637 (1996)；及び Chevalier等, "Characterization of new mutations in the coding sequence and 5'-untranslated region of the human prostacyclin synthase gene (CYP8A1)" Hum. Genet. 108 (2): 148-155 (2001)に報告されている。
【００１４】
ヒトＰＧＩＳレセプターのｃＤＮＡ配列はＧｅｎｂａｎｋ  登録番号ＮＭ＿０００９６１，  及びアミノ酸配列はＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００９５２である。ヒトＰＧＩＳ遺伝子ではいくつかの配列変異が同定されており、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００９６１に示されている。
【００１５】
我々は、現在、ＰＧＩＳ及びＩＰは月経周期の増殖期の初期に上方制御され、この間、ｃＡＭＰ経路を介したＩＰレセプターシグナル伝達が増強されることを示した。
【００１６】
これらの所見により、発明者はＩＰレセプターをアンタゴナイズすることで子宮の病的症状を克服することができるという驚くべき予想外の確信を持った。
【００１７】
IPレセプタのアンタゴニストは、過剰出血、例として血友病及び出血に関する症状の予防、配血性ショックに関連した低血圧の緩和、浮腫形成の軽減を目的とした膀胱疾患の治療への使用が示唆されており、喘息などの呼吸器系アレルギー及び呼吸器症状、炎症、及び炎症性疼痛及び月経痛などの疼痛症状に（ＷＯ０２／４０４５３；ＷＯ０２／０７０５１４；ＷＯ０２／０７０５００；ＷＯ０１／６８５９１、ＥＰ０９０２０１８；ＵＳ６，１８４，２４２）、  心血管性疾患に（ＷＯ７９／００７４４）、神経障害性疾患の緩解に（ＷＯ０１／１０４３３）、及び神経変性疾患の治療に（ＷＯ０１／１０４５５）有用である。
【００１８】
しかしながら、子宮の病的症状、例として子宮癌、子宮内膜症、子宮筋腫、月経過多、及び月経困難症を克服するのに有用であることはこれまでに報告されていなかった。
【００１９】
子宮病変の現在の治療はＣＯＸ−インヒビターの使用を含む。ＣＯＸ−インヒビター類はある治療的可能性を示しているが、一方ではそれらは多数のプロスタグランジンの合成を阻害する；これらのプロスタグランジンのうちあるものは有害であり、あるものは有益な効果を有する。このため当業では、特定のプロスタグランジンの作用を特異的に阻止することによる子宮病変の治療法が求められている。
【００２０】
本発明の第一の態様は、女性における子宮の病的症状を克服する方法であって、その個体に、ＩＰレセプターのアンタゴニスト及び／又はＰＧＩＳのインヒビターである少なくとも一作用剤を投与することを含む方法を提供する。
ＩＰレセプターはプロスタグランジンＩ２（ＰＧＩ２）と結合するレセプターである。
【００２１】
本発明の方法によって治療できる子宮の病的症状は、限定するものではないが、ＩＰレセプターが増殖組織において上方制御されている任意の病的症状である。
【００２２】
一般的には子宮の病的症状は、子宮悪性腫瘍等の子宮癌、月経過多、月経困難症、腺筋症を含む子宮内膜症等の子宮内膜性病的症状、又は子宮筋腫（平滑筋腫）もしくは悪性になった子宮筋腫である平滑筋肉腫等の子宮筋病的症状のいずれかである。このように、一般的には子宮の病的症状は、子宮筋層又は子宮内膜の細胞の異常成長と関連するものである。
【００２３】
特定の子宮の病的症状は上皮の過剰増殖と関係していると思われる。
月経前疼痛が子宮の病的症状でないと思われている。月経前疼痛は一般的に月経の前日に起こり、月経の間に起こる子宮病的症状である月経困難症とは区別される。しかしながら、疑いの回避のために；ここで用いる「子宮の病的症状」または「子宮病的状態」という用語は、月経前疼痛を含まない。
【００２４】
ある特定の実施態様では、本発明は、女性個体の月経過多以外の子宮の病的症状を克服する方法であり、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を個体に投与することを含む方法を含む。
【００２５】
子宮の病的症状を克服することによって、我々は、症状を緩和する（緩解使用）、又は症状を治療する、または症状を予防する（予防用途）ことを含む。
したがって、本発明は、悪性腫瘍等の子宮癌、月経過多、月経困難症、子宮内膜症等の子宮内膜性病的症状、及び子宮筋腫等の子宮筋層病的症状の何れかをＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて治療することを含む。
【００２６】
又、本発明は、悪性腫瘍等の子宮癌、月経過多、月経困難症、子宮内膜症等の子宮内膜性病的症状、及び子宮筋腫等の子宮筋層病的症状の何れかをＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて症状を緩和することを含む。
【００２７】
さらに、本発明は、悪性腫瘍等の子宮癌、月経過多、月経困難症、子宮内膜症等の子宮内膜性病的症状、及び子宮筋腫等の子宮筋層病的症状の何れかをＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて症状を予防することを含む。
【００２８】
したがって、本発明は、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて子宮内膜性悪性腫瘍等の子宮癌を克服することを含む。
又、本発明は、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて月経過多を克服することを含む。
さらに、本発明は、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて月経困難症を克服することを含む。
【００２９】
又、本発明は、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて子宮内膜症等の子宮内膜性病的症状を克服することを含む。
さらに又、本発明は、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を用いて子宮筋腫等の子宮筋層病的症状を克服することを含む。
【００３０】
一個体が一以上の子宮の病的症状を持ちうることであり、症状を共に処置するために本発明の方法を用いることが可能である。例えば、女性はたびたび月経過多及び月経困難症を同時に持つので、この方法を同一患者の両症状を処置するために用いうるであろう。
【００３１】
患者は、子宮の病的症状を持つ者又はそのリスクを持つ者の何れでもよい。閉経前又は閉経が近い女性の何れにも月経過多症及び／又は月経困難症のリスクがある；しかし、月経過多は女性の生殖期間の始まりから終わりまで共通してあるものであり、概して、女性の月経が初めて始まるとき及び４０歳以上の女性により大きなリスクがある。
【００３２】
治療される患者は、このような処置により利益を得るいかなる女性であってもよい。概して、及び、好ましくは、治療される患者は、人間の女性である。しかしながら、本発明の方法は、雌の哺乳類、例えば以下の種の雌：ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ネコおよびイヌを治療するために用いてもよい。このように、方法は人間および獣医学の用途がある。
概して、ＩＰレセプターのアンタゴニストである剤は、ＩＰレセプターのＰＧＩ２媒介性シグナル伝達を阻害するかまたは崩壊させるものであり、及び患者への投与に適切であるものである。
【００３３】
好ましくは、ＩＰレセプターのアンタゴニストである剤は、ＩＰレセプターへのＰＧＩ２の結合を阻害するかまたは低下させる。あるいは、または加えて、アンタゴニストはＰＧ１２とＩＰレセプターの間の相互作用、又はＩＰレセプターと関連するＧｓ又はＧｑタンパク質の間の相互作用に影響を及ぼし、ＰＧＩ２−ＩＰ媒介性のシグナル伝達経路を阻害するかまたは崩壊させる。
ＩＰレセプターアンタゴニストは、概して、ＩＰレセプターに結合する分子であって、天然リガンドＰＧＩ２の結合に競合し、及びＰＧＩ２−ＩＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害または、崩壊する。
【００３４】
好ましい実施態様では、ＩＰレセプターに作用するＰＧＩ２を阻害することは、ＩＰレセプター上のＰＧＩ２結合部位を占めることを含み、それにより、結果として正常なシグナル伝達の様式が起こる様式での天然リガンド（ＰＧＩ２）の結合が阻害される。
あるいは、レセプターアンタゴニストは非競合的なＩＰレセプターアンタゴニストであってもよく、例としてＰＧＩ２の結合を阻害することなくＩＰレセプターへ結合し、ＰＧＩ２とＩＰレセプター間の相互作用を破壊することで、ＰＧＩ２−ＩＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害または、崩壊する分子でありうる。
【００３５】
あるいはさらに、非競合的ＩＰレセプターアンタゴニストは、ＩＰレセプターに結合して、ＩＰレセプターと関連Ｇタンパク質との相互作用を崩壊することによって、ＩＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は崩壊する。
あるいは好ましい実施態様では、薬剤はＰＧＩ２のアンタゴニストでありうる。一般的にＰＧＩ２アンタゴニストはＰＧＩ２に結合する分子であり、そのレセプターへのＰＧＩ２結合を防ぐ又は低下させ、ＰＧＩ２−ＩＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は崩壊する。時にこれは「可溶性レセプター」アプローチと称され、ここにおいて一般的にレセプターの一部がＰＧＩ２に結合する。
【００３６】
一般的にレセプターアンタゴニストは特定のレセプターに選択性があり、好ましくはＰＧＩ２よりもＩＰレセプターに対して同じか又はより高い親和性を持つ。アンタゴニストは天然のリガンドよりもレセプターに対してより高い親和性を持つことが好ましいが、低い親和性を持つアンタゴニストも用いてよく、より高い濃度で用いることが必要である。
好ましくは、ＩＰレセプターアンタゴニストはＩＰレセプターに対して可逆的に結合する。
好ましくは、ＩＰレセプターアンタゴニストはＩＰレセプターに選択性がある。よって、一般的にはＩＰレセプターアンタゴニストは任意の他のプロスタグランジンレセプターに対するよりもＩＰレセプターに対してより高い親和性を持って結合する。好ましくは、ＩＰレセプターアンタゴニストは任意の他のプロスタグランジンレセプターに対するよりもＩＰレセプターに対して少なくとも２倍の親和性を持って結合する。より好ましくは、ＩＰレセプターアンタゴニストは、任意の他のプロスタグランジンレセプターに対するよりも少なくとも３倍、又は少なくとも４倍、又は少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍の親和性を持ってＩＰレセプターに結合する。好ましくは、ＩＰレセプターアンタゴニストはＩＰレセプターに結合するが、実質的には任意の他のプロスタグランジンレセプターには結合しない。
【００３７】
ＥＰ０９０２０１８Ａ２ (F. Hoffman-La Roche AG)に、ＩＰレセプターアンタゴニストである2-(アリルフェニル)アミノ-イミダゾリン誘導体が開示されている。 ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＥＰ０９０２０１８Ａ２中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
米国特許第６，１８４，２４２号 (Syntex USAに既存)に、ＩＰレセプターアンタゴニストである2-(置換型フェニル)アミノ-イミダゾリン誘導体が開示されている。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連する米国特許第６，１８４，２４２号中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
ＷＯ０２／０７０５１４ (F. Hoffman-La Roche AG)に、ＩＰレセプターアンタゴニストであるアルコキシカルボニルアミノ・ヘテロアリール・カルボン酸誘導体が開示されている。これらのうち、１８頁の表に挙げた化合物が好ましい。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０２／０７０５１４中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
【００３８】
ＷＯ０２／０７０５００ (F. Hoffman-La Roche AG)に、ＩＰレセプターアンタゴニストであるアルコキシカルボニルアミノ安息香酸又はアルコキシカルボニルアミノ・テトラゾリル・フェニル誘導体が開示されている。これらのうち、２４頁の表に挙げた化合物が好ましい。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０２／０７０５００中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
ＷＯ０２／４０４５３ (F. Hoffman-La Roche AG)に、ＩＰレセプターアンタゴニストである置換型2フェニルアミノイミダゾリンフェニルケトン誘導体が開示されている。これらのうち、２６〜２８頁の表に挙げた化合物が好ましい。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０２／４０４５３中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
ＷＯ０１／６８５９１  (F. Hoffman-La Roche AG)に、ＩＰレセプターアンタゴニストであるカルボン酸誘導体が開示されている。これらのうち、４０頁の表に挙げた化合物が好ましい。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０１／６８５９１中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
【００３９】
ＷＯ０１／１０４３３ (Teijin, Inc.)に、ＩＰレセプターアンタゴニストでありうるα鎖の先端にアミノ又はアミド群を有するプロスタサイクリン誘導体が開示されている。 ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０１／１０４３３中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
ＷＯ０１／１０４４５ (Teijin, Inc.)に、ＩＰレセプターアンタゴニストでありうる15(R)-イソカルバサイクリン及び15-デオキシイソカルバサイクリン誘導体が開示されている。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ０１／１０４４５中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
ＷＯ７９／００７４４ (Research Corporation)に、天然プロスタサイクリンのアンタゴニストと述べられている6,9-チアプロスタサイクリン類似体及びそれらの誘導体が開示されている。ＩＰレセプターアンタゴニストに関連するＷＯ７９／００７４４中のすべての開示は、出典明記によりここに組み込まれる。
【００４０】
Corsini等(1987及び1998)は、アンタゴニストとしての特性も示しているＰＧＩ２レセプターの部分的アゴニストとしての(5Z)-カルバサイクリンを記載している(Corsini等(1987) Br. J. Pharmac. 90, p225-261; Corsini等(1988), Biomedica biochimica acta 1988, 47(10-11) pS104-7)。
また、Corsini等(1987)は、ＰＧＩ２類似体ＦＣＥ２２１７６ ((5Z)13,14-ジデヒドロ-20-メチル-カルボプロスタサイクリン)がモルモットの気管及び心房でのＰＧＩ２の競合的アンタゴニストであると示されたことにも言及している(Fassina等, (1985) Eur. J Pharmac. 113, p459-460)。
血小板プロスタノイドレセプターに関して、Armstrong (1996, Pharmacol. Ther. 72(3), p171-191)は、血小板ＩＰレセプターの部分的アゴニストである2-[3-[3-(4,5-ジフェニル-2オキサゾリル)エチル]フェノキシ]酢酸（2-[3-[3-(4,5-diphenyl-2oxazolyl)ethyl]phenoxy] acetic acid）(BMY42393)の合成がＩＰアンタゴニスト研究の最適なリードであったと述べている。(Seiler等. (1994), Thromb Res. 74, p115-123)。
【００４１】
疑問が生じないように、本発明にしたがって、インドメタシンはＩＰレセプターアンタゴニストではない。
一実施態様では、ＩＰアンタゴニストは抗体である。
抗体は、モノクローナル又はポリクローナルでよいが、好ましくはモノクローナルがよい。ヒトＩＰレセプターのｃＤＮＡ及びアミノ酸配列（それぞれＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００９６０及びＮＰ＿０００９５１）により、ヒト化抗体を含むモノクローナル抗体の調製を行うことは当分野の技術者に十分可能なことである。
抗体は公知技術、例として、"Monoclonal Antibodies: A manual of techniques", H Zola (CRC Press, 1988)及び"Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and applications", J. Hurrell (CRC Press, 1982)に開示されている技術により調製することができ、これらは出典明示によりここに組み込まれる。
【００４２】
本発明に用いるヒトＩＰレセプター抗体は、動物系（ウサギ又はマウス等）に対してアルブミンなどのキャリアタンパク質と共に、又はキャリアがないときは十分な長さ（少なくとも２５アミノ酸）で表出している無処理のＩＰタンパク質又はその抗原性ポリペプチドフラグメントに対して産生させることができる。一般的に、ＩＰレセプターの抗原性ポリペプチドフラグメントはＩＰレセプターの細胞外部位であるか又は細胞外部位を含んでいる。
ここで用いるように、用語「抗体」（Ａｂ）又は「モノクローナル抗体」（Ｍａｂ）は、ＩＰレセプタータンパク質に特異的に結合することができる抗体フラグメント（例として、Ｆａｂ及びＦ(ａｂ')２フラグメント）だけでなく無処理の分子も含むことを意味する。Ｆａｂ及びＦ(ａｂ')２フラグメントは無処理の抗体のＦｃフラグメントを欠いており、血液循環から迅速に消え、無処理の非特異的な組織結合を減らすことができる(Wahl等, J: Nucl. Med. 24:316325 (1983))。よって、これらフラグメントが好ましい。あるいは、ＩＰレセプター結合フラグメントは組み換えＤＮＡ技術又は合成化学法の使用により生成できる。さらに他の抗体様分子が本発明に利用可能なことが理解できる。この例として、抗原結合部位を持つ抗体誘導体、一本鎖Ｆｖフラグメント（ＳｃＦｖ）及びドメイン抗体（ｄＡｂｓ）等の合成抗体様分子、及び抗体様抗原結合モチーフを有する他の分子がある。
【００４３】
様々な方法の何れかを用いて抗体を調製しうる。例えば、ＩＰレセプター及びその抗原フラグメントを発現する細胞を動物に投与して、ポリクローナル抗体を含む血清を産生させる。好ましい方法では、ＩＰレセプタータンパク質を調製して、精製して、天然の混合物を実質的に取り除く。そうして、このような調製物を動物に導入して、より特異的活性を有するポリクローナル抗血清を生成する。
最も好ましい方法では、抗体はモノクローナル抗体（又はそのＩＰレセプター結合フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体はハイブリドーマ技術を用いて調製できる(Kohler等, Nature 256:495 (1975); Kohler等, Eur. J. Immunol 6:511 (1976); Kohler等, Eur. J. Immunol. 6:292 (1976); Hammerling等, in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, Elsevier, N.Y., (1981) pp. 563-681)。一般的にこのような手段はＩＰレセプター抗原又はより好ましくはＩＰレセプター発現細胞を用いて動物（好ましくはマウス）を免疫化することを含む。さらに、マウスが、ヒトＩｇ領域を組み込まれていることによりヒト化抗体を産生するトランスジェニックマウスであることが好ましい。
【００４４】
抗ＩＰ抗体がヒト化抗体であることが好ましく、これは、投与した免疫グロブリン（Ｉｇ）に対する免疫応答を起こさないヒトに投与するのに適している。抗体のヒト化型には、主にヒトＩｇの配列からなり、非ヒトＩｇ由来の最小配列を含むキメラＩｇ、Ｉｇ鎖又はそのフラグメント（例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の抗原結合配列）が含まれる。
キメラ抗体の生成方法は当分野において周知である。参考に、Morrison, Science 229:1202 (1985); Oi等, BioTechniques 4:214 (1986); Cabilly等, 米国特許第4,816,567号; Taniguchi等, EP 171496; Morrison等, EP 173494; Neuberger等, WO 8601533; Robinson等, WO 870267 1; Boulianne等, Nature 312:643 (1984); Neuberger等, Nature 314:268 (1985)を参照。
【００４５】
ヒト化は、ヒト抗体に齧歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を組み込むことによる以下に示すようなＷｉｎｔｅｒ及び共同者の方法を行う(Jones等, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmann等, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen等, Science, 239:1534-1536 (1988))。(米国特許第5,225,539号も参照)。ある場合では、ヒトＩｇのＦｖフレームワーク残基を一致する非ヒト残基に置き換える。また、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも組み込んだＣＤＲ又はフレームワーク配列にもみられない残基を含む。一般的に、ヒト化抗体は少なくとも一、及び一般的には二の可変領域すべてを実質的に含み、非ヒトＩｇのものと一致するすべて又は実質的にすべてのＣＤＲ領域はヒトＩｇコンセンサス配列のものである。また、ヒト化抗体は最適にはＩｇ定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般的にはヒトＩｇのものを含むであろう(Jones等, 1986；Riechmann等, 1988；及びPresta, Curr. Op. Struct. BioL, 2:593-596 (1992))。
【００４６】
また、ヒト化抗体は、本質的に軽鎖及び重鎖（ＣＤＲを含む）の全配列がヒト遺伝子から生じたものである抗体分子を含む。ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体を生成するためのトリオーマ技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術及びＥＢＶハイブリドーマ技術(Kozbor等, 1983 Immunol Today 4: 72を参照)により調製することができる(Cole等, 1985 In: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96を参照)。
加えてまた、ヒト化抗体はファージディスプレイライブラリー等の技術を用いて生成することができる(Hoogenboom及びWinter, J. Mol. Biol., 227.; 381 (1991); Marks等, J. Mol. Biol., 222:581 (1991))。
【００４７】
同様に、ヒト化抗体はマウスなどのトランスジェニック動物にヒトＩｇ座を導入することによって作製することができ、これにより内因性のＩｇ遺伝子は部分的又は完全に不活性化された。調べたところ、遺伝子再配列、構築及び抗体レパートリーを含むすべての態様においてヒトにおいてみられたのと非常に類似の抗体産生がみられた。このアプローチは例として、米国特許第５，５４５，８０７号；５，５４５，８０６；５，５６９，８２５；５，６２５，１２６；５，６３３，４２５；５，６６１，０１６、及びMarks等 (Bio/Technology 10, 779783 (1992)); Lonberg等(Nature 368 856-859 (1994)); Morrison (Nature 368, 812-13 (1994)); Fishwild等, (Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996)); Neuberger (Nature Blotechnology 14, 826 (1996));及びLonberg and Huszar (Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995))において記載されている。
非ヒト動物の好ましい実施態様はマウスであり、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９６／３３７３５及びＷＯ９６／３４０９６の記載のようにＸｅｎｏｍｏｕｓｅＴＭと称される。この動物は完全ヒトＩｇを分泌するＢ細胞を産生する。抗体は、対象の免疫原で免疫化した後の動物から直接得ることができる。例として、ポリクローナル抗体の調製、あるいは、モノクローナル抗体を生成するハイブリドーマ等の動物由来永久的Ｂ細胞から得ることができる。加えて、ヒト可変領域を有するＩｇをコードする遺伝子を回復させて、直接抗体を得るために発現させる、さらに又は修飾して、例として単鎖Ｆｖ分子等の抗体類似体を得ることができる。
ヒト化抗体を産生するための更なる方法は、米国特許第５，９１６，７７１号に開示されている。重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを培地の一哺乳動物宿主細胞に導入し、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを他の哺乳動物宿主細胞に導入し、ハイブリドーマ細胞を形成するように二つの細胞を融合させることを含んでなる。ハイブリドーマ細胞は重鎖と軽鎖を含む抗体を発現する。
【００４８】
付加的なＩＰレセプターアンタゴニストは、ＥＰ０７５３５２８Ａｌ(Ono Pharmaceutical Co.)及び米国特許第５，７２８，８０８号及び同第６，３６５，３６０号 (Merck Frosst Canada & Co.に既存)にきさいのようなスクリーニング法を用いて同定するであろう。このすべては出典明記によりここに組み込まれる。
疑問が生じないように、「ＩＰレセプターのアンタゴニスト」にはＰＧＩ２のアンタゴニストを含め、患者への投与に適する任意のＰＧＩ２アンタゴニストでもよい。好ましくは、ＰＧＩ２アンタゴニストはＰＧＩ２に対して選択性があり、一般的には他の分子に対する場合よりもＰＧＩ２に対する結合親和性が高い。他の分子よりＰＧＩ２に対する結合親和性が高いアンタゴニストが好ましいが、親和性が低いアンタゴニストでも使用可能で、高い濃度で用いる必要がある。好ましくは、ＰＧＩ２アンタゴニストは可逆的にＰＧＩ２に結合する。
好適なＰＧＩ２アンタゴニストはＩＰレセプターの細胞外フラグメントを含む。
【００４９】
ここで用いる「アンタゴニスト」という用語は、すべての型のアンタゴニズムをカバーする。プロスタグランジンレセプター等のＧタンパク質結合レセプター（ＧＰＣＲ）は所望の反応を遮断する結果となる逆性アゴニズムを示すことが知られている。よって、本発明に使用の好適なＩＰアンタゴニストは意図するアンタゴニストがある状態又はない状態下でＰＧＩ２に対する放射線標識ＩＰアゴニストの結合を測定することによって同定しうる。第二に、ＩＰアンタゴニストは機能的アッセイ、例として、Ｃａ２＋レベルでのＩＰアゴニストの効果がアンタゴニスト存在下で修飾されることを示すことによって同定されうる。第三に、ＩＰアンタゴニストは、細胞培養において上皮細胞の成長阻害により同定されうる。
【００５０】
ある実施態様では、ＰＧＩＳのインヒビターは抗ＰＧＩＳ抗体である。
好適な抗体は、抗ＰＧＩＳ抗体であり、カタログ番号CAY-160630、Alexis Corporation (Nottingham, UK)より入手可能である。これは、ヒトＰＧＩＳに８８％の配列相同性があるウシＰＧＩＳに対するモノクローナル抗体である。
好ましくは、抗ＰＧＩＳ抗体は前述のようにヒト化抗体である。ヒトＰＧＩＳのｃＤＮＡ及びタンパク質配列（ぞれぞれＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿  ０００９６１及びＮＰ＿０００９５２）によりヒト化抗体を含むモノクローナル抗体を調製することは、当分野の技術者に十分可能である。
【００５１】
化合物Ｕ−５１６０５はＰＧＩＳインヒビターとして報告されている(Bayorh等, ASGSB 2001 Annual Meeting Abstract No. 82)。
パーオキシナイトライド(PON)及びPON生成系3-モルホリノシドノニミンN-エチルカルバミド(3-morpholinosydnonimine N-ethylcarbamide)(SIN-1)は、活性部位のチロシンニトロ化によりＰＧＩＳを阻害することが報告されている(ZOU等, 1998, Biochem. J. 336: 507-512)。
トランス-2-フェニルシクロプロピラミンHClは、ＰＧＩＳインヒビターとして報告されている(Gryglewski等, Prostaglandins 1976, 12: 685; Hoyns & van Alphen, Doe. Ophthol. (Netherlands) 1981, 51: 225)。
ＩＰレセプター又はＰＧＩＳのアンタゴニスト及びインヒビターを記載しているここに挙げる特許及び非特許文書のすべては、その全体が出典明記によりここに組み込まれる。
【００５２】
ＥＰレセプターアンタゴニスト
ＰＧＥ２は、サーペンタインレセプターのロドプシンファミリーに属する７つの膜貫通型Ｇタンパク質結合レセプターの異なるイソ型との相互作用を介して標的細胞への効果を媒介する。選択的に利用可能で、ある時には細胞内シグナル伝達を阻害する４つの主なＰＧＥ２レセプターサブタイプ（ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、及びＥＰ４）が同定されている(Coleman等, 1994)。阻害作用を持つレセプターの多様性により、合成部位の近くに高い濃度で放出されるＰＧＥ２の作用は恒常的に制御される(Ashby, 1998)。今日のところ、正常細胞又は腫瘍性形質転換子宮内膜性上皮細胞におけるＰＧＥ２の効果媒介に関与する各標的遺伝子だけでなく、相反する細胞内シグナル伝達経路といった、異なるＰＧＥ２レセプターの役割は完全に明らかとなっている。
既に我々は、月経周期を通じてのＰＧＥ合成酵素と、ＥＰ２及びＥＰ４レセプターの発現を研究し、ＰＧＥＳ発現が分泌後期に減少し、ＥＰ４発現が増殖後期に著しく高くなることを発見した(Milne等, (2001) J. Clin. Endocrinol. 86(9): 4453-4459)。また、我々はＰＧＥＳ発現及びＰＧＥ２合成もヒトの子宮の病的症状において上方制御されることを発見した。例えば、線癌ではこれらの因子の発現が微小血管系の上皮細胞だけでなく子宮癌の腫瘍性上皮細胞に局在していた。これは癌組織におけるＥＰ２及びＥＰ４レセプターの過剰発現及びシグナル伝達に関連している。我々は既に、子宮の病的症状の治療又は予防においてＰＧＥＳのインヒビターないし、ＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストの使用を提言している(PCT/GB02/004845及びPCT/GB02/004549)。
【００５３】
本発明の更なる実施形態において、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくも一作用剤に加えて、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストも個体に投与される（誤解が生じないように、この用語はそれぞれＥＰ２レセプターのアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターのアンタゴニストを含む）。
本発明の一実施形態において、個体にＰＧＥＳのインヒビターを投与する。Thoren & Jakobsson (2000) Eur. J Biochem. 267, 6428-6434（出典明示によりここに組み込まれる）では、ＮＳ−３９８、スリンダクスルフィッド及びロイコトリエンＣ４が２０μＭ、８０μＭ及び５μＭのＩＣ５０においてそれぞれＰＧＥＳ活性を阻害することが報告されている。
本発明のまた更なる実施形態において、個体にＥＰ２レセプターのアンタゴニスト又はＥＰ４レセプターのアンタゴニストを与える。
【００５４】
プロスタグランジンＥＰ２レセプターアンタゴニストは任意の適切なＥＰ２レセプターアンタゴニストである。同様に、プロスタグランジンＥＰ４レセプターアンタゴニストは任意の適切なＥＰ４レセプターアンタゴニストである。「適切な」とは、上記アンタゴニストが患者に投与できるものであることを意味する。レセプターアンタゴニスト類はそれらそれぞれのレセプターに結合し、天然リガンド（ＰＧＥ２）と競合し、固有のレセプター媒介性シグナル伝達経路の開始を阻止する。レセプターアンタゴニスト類は一般的には特定のレセプターに選択的であり、天然リガンドよりも高い結合親和性をそのレセプターに対して有するのが普通である。天然リガンドより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できる。しかしその場合はより高い濃度でそれらを使うことが必要である。上記アンタゴニスト類はそれらの同系のレセプターに可逆的に結合するのが好ましい。一般的には、アンタゴニストは特定のレセプターに選択的であり、その他のレセプターには影響を与えない；すなわち、ＥＰ２レセプターアンタゴニストはＥＰ２レセプターには結合するが、ＥＰ４レセプターとは実質的に結合せず、その一方でＥＰ４レセプターアンタゴニストはＥＰ４レセプターには結合するがＥＰ２レセプターには実質的に結合しない。ＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストは特定のレセプターサブタイプに選択的であるのが好ましい。これは、そのアンタゴニストが特定のレセプターサブタイプに対し結合親和性を有する、すなわち少なくも１つのその他のＥＰレセプターサブタイプに対するよりも少なくも１０倍高い結合親和性を有することを意味する。すなわち、選択的ＥＰ４レセプターアンタゴニストは、任意のＥＰ１、ＥＰ２又はＥＰ３レセプターサブタイプよりも少なくも１０倍高い親和性をＥＰ４レセプターに対して有する。
【００５５】
ＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストはその同系のレセプターに対して選択性を有するのが特に好ましい。
ＥＰ２レセプターアンタゴニストはＡＨ６８０９を含む(Pelletier等 (2001) Br. J. Pharmacol. 132, 999-1008)。
【００５６】
ＥＰ４レセプターアンタゴニストはＡＨ２３８４８Ｂ（グラクソ社によって開発）及びＡＨ２２９２１Ｘ(Pelletier等(2001) Br. J Pharmacol. 132, 999-1008)を含む。ＡＨ２３８４８Ｂの化学名は（［１アルファ（ｚ）２ベータ５アルファ］−（＋／−）−７−［５−［［（１、１’−ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルフォリニル）−３−オキソ−シクロペンチル］−４−ヘプテン酸）である（Hillock & Crankshaw (1999) Eur. J. Pharmacol. 28, 99-108を参照）。ＥＰ４ＲＡ(Li (2000) Endocrinology 141, 2054-61)は、ＥＰ（４）選択的リガンドである（(Machwate等 (2001) Mol. Pharmacol. 60: 36-41)。ＷＯ００／１５６０８に記載されるオメガ置換プロスタグランジンＥ誘導体類（ＥＰ１１１４８１６）（小野薬品（Ono Pharm Co Ltd））はＥＰ４レセプター類に選択的に結合し、ＥＰ４レセプターアンタゴニスト類である。
【００５７】
ＷＯ０１／４２２８１に記載されるペプチド（ホピタル・セイント−ジャスティン（Hopital Sainte-Justine））例えば：ＩＦＴＳＹＬＥＣＬ（配列番号:７）、ＩＦＡＳＹＥＣＬ（配列番号：８）、ＩＦＴＳＡＥＣＬ（配列番号：９）、ＩＦＴＳＹＥＡＬ（配列番号：１０）、ＩＬＡＳＹＥＣＬ（配列番号：１１）、ＩＦＴＳＴＤＣＬ（配列番号：１２）、ＴＳＹＥＡＬ（４−ビフェニルアラニンを有する）（配列番号：１３）、ＴＳＹＥＡＬ（ホモフェニルアラニンを有する）（配列番号：１４）も、ＷＯ００／１８７４４に記載の化合物類の幾つかと同様にＥＰ４レセプターアンタゴニストとして記載されている（フジサワ薬品（Fujisawa Pharm Co Ltd））。ＷＯ００／０３９８０に記載される５−チア−プロスタグランジンＥ誘導体（ＥＰ１０９７９２２）（小野薬品）はＥＰ４レセプターアンタゴニストであるらしい。
【００５８】
ＥＰ４レセプターアンタゴニストはＷＯ０１／１０４２６（グラクソ）、ＷＯ００／２１５３２（メルク）及び英国特許第２３３０３０７号（グラクソ）にも記載されている。
【００５９】
ＷＯ００／２１５３２は下記のものをＥＰ４レセプターアンタゴニストとして記載している：
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−クロロ−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オンカリウム塩；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−メチル−３−フロイル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−メチル−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−［２−（メチルピロール）カルボニル］スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン。
【００６０】
英国特許第２３３０３０７号は、［１α（Ｚ），２β，５α］−（±）−７−［５−［［（１，１’−ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルホリニル）−３−オキソシクロペンチル］−４−ヘプテン酸及び［１Ｒ［１α（ｚ），２β，５α］］−（−）−７−［５−［［（１，１'-ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルホリニル）−３−オキソシクロペンチル］−４−ヘプテン酸を記載している。
【００６１】
ＷＯ００／１８４０５（ファルマジーン（Pharmagene））はＥＰ４アンタゴニストＡＨ２２９２１及びＡＨ２３８４８を記載している（これらは英国特許第２０２８８０５号及び米国特許第４３４２７５６号にも記載されている。）さらに、ＷＯ０１／７２３０２（ファルマジーン）は、例えば参考文献に記載され、８頁以下を参照して示される一般式（Ｉ）に含まれるものなど、その他のＥＰ４レセプターアンタゴニストを記載している。
【００６２】
一般的には、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくも１つの剤に加えて患者に投与する際、各化合物の用量は、他の化合物と関連なく個々人に投与される量である。或いは、好ましくはより少量を投与することもできる。
ＥＰ２又はＥＰ４及びＰＧＥＳのアンタゴニスト又はインヒビターを記載しているここに挙げる特許及び非特許文書のすべては、その全体が出典明記によりここに組み込まれる。
【００６３】
ＦＲレセプターアンタゴニスト
ＦＰプロスタグランジンレセプターは種々の組織、例えばウシ黄体(Sharif等 1998, J. Pharmacol. Exp. Ther. 286: 1094-1102)；ヒト子宮(Senior等 1992, Br. J Pharmacol. 108: 501-506)；ウサギ顎静脈(Chen等 1995, Br. J. Pharmacol. 116: 3 03 5-3 041)；種々のヒト眼組織(Davis & Sharif 1999, J. Ocular Pharmacol. Ther. 15: 323-336)；及びマウス スイス３Ｔ３線維芽細胞(Griffin等 1997, J. Pharmacol. Exp. Ther. 281: 845-854)；及びラット血管平滑筋細胞（Ａ７ｒ５）(Griffin等 1998, J. Pharmacol. Exp.Ther. 286: 411-418)を含む種々の組織で研究されてきた。
【００６４】
幾つかのプロスタグランジンレセプターにおける強力な選択的合成アゴニスト（作動物質）がインビトロ及びインビボモデルの両方で特徴づけられた(Coleman等 1994, Pharmacol. Rev. 46: 205-229)。例えばフルプロステノール又はそのエナンチオマー（例えばＡＬ−５８４８）（(Sharif等 1999, J. Pharm. Pharmacol. 51: 685-694)及びクロプロステノール(Coleman等 1994; Sharif et al 1998)は強力かつ選択的ＦＰレセプターアゴニストである。大部分の天然プロスタグランジンはこのレセプターファミリー中、それらの好ましいレセプターに対してむしろ制限された選択性を示すので、少数の報告された選択的プロスタグランジンレセプターアゴニスト類は、それらの個々のレセプターと関連するそれぞれの機能的応答を識別するための非常に貴重なツールであった。しかし、特定のレセプター媒介性プロスタグランジン刺激−機能性反応の最終的確認には強力かつ選択的アンタゴニストが必要である(Kenakin 1996, Pharmacol. Rev. 48: 413:463)。
【００６５】
眼内圧上昇を治療するための強力な非常に有効な薬剤としての選択的ＦＰレセプターアゴニストが最近同定され、これが商業的に展開された(Bito 1997, Surv. Ophthabnol. 41 (Suppl. 22): S1-S14; Hellberg等 1998, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39 (Suppl.): 1961)ことにより、ＦＰレセプター関連薬理作用に関する我々の知識はかなり深まった。しかしＦＰレセプターの機能は、一部には、このレセプターの組織分布に顕著な種間差があるために、完全には理解されていない(Ocklind等. 1996, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 37: 716-726; Davis&Sharif 1999; Sharif等 1999)。
【００６６】
Griffin等（J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 290: 1278-1284）はマイクロモル強度の選択的レセプターアゴニスト（ＡＬ−８８１０）を発見したと報告した。Sharif等(J. Pharm. Pharmacol. 2000, 52: 1529-1539)は、ＰＧＦ２αのまた別の類似体（ＡＬ−３１３８；Ｒｏ−２２−６６４１；１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ２α）を記載している：それは低効率の部分的アゴニストであり、これもＦＰレセプターアンタゴニストとして機能する。相対的に選択的作用物質であるＡＬ−３１３８は種々の生物学的系におけるＦＰレセプターの固有の機能を研究するための貴重なＦＰアンタゴニスト・ツールとなるかも知れない。
【００６７】
子宮におけるＰＧＦ２αレセプターの発現を月経周期全体を通して考察し、子宮内膜の増殖期の前記レセプターが、その他の段階に比較してより高レベルであることを我々は示した。子宮癌組織における発現は正常な子宮組織と比較して著しく高まる。我々は子宮内膜細胞系を使用して、ＰＧＦ２αが上皮細胞の増殖を誘発することを示した。この増殖はＰＬＣシグナル経路の特異的インヒビターの使用によって阻止できる。既に我々が示したように（ＧＢ０２０８７８５．６）、これらの考察は、子宮癌における上皮細胞の増殖を減らすなど、子宮の病的状態を克服するために、ＰＧＦ２α（ＦＰ）レセプターをアンタゴナイズする能性があることを示している。また、ＦＰレセプターのアンタゴニストは、平滑筋の弛緩メカニズムによって作用し、胎児の早産及び月経困難症を治療又は防止することが示唆された（ＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７３４８）。また、我々は月経過多の治療にＦＰレセプターのアンタゴニストを用いることも示した（ＧＢ０２０８７８３．１）。
さらに、本発明の実施態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤、及び場合によってはＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストに加えて、個体にＦＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤を投与する。
【００６８】
一般的には上記作用剤は、ＦＰレセプターのＰＧＦ２α−媒介性シグナルを阻害又は破壊するものである。ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤がＰＧＦ２αとＦＰレセプターとの結合を阻害又は低減することが好ましい。或いは、又はそれに加えて、その作用剤は、ＰＧＦ２αとＦＰレセプターとの相互作用、又はＦＰレセプターと関連Ｇαｑ蛋白との相互作用に影響を与えることができ、それによってＰＧＦ２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊する。
好ましい一実施形態において、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤はＦＰレセプターのアンタゴニストである。ＦＰレセプターアンタゴニストは、一般的にはＦＰレセプターに結合し、天然リガンドＰＧＦ２αの結合と競合し、ＰＧＦ２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊する分子類である。
【００６９】
好ましい一実施形態において、ＦＰレセプターをアンタゴナイズするということは、プロスタグランジンレセプター上のＰＧＦ２α結合部位が占有され、その結果、天然リガンド（ＰＧＦ２α）が、イノシチルホスフェートによってＧｑ／ＧｑＩＩを介して正常なシグナリングを起こし、その後細胞内カルシウムの移動を起こす、という様態では結合できないということを含む。
或いは、上記レセプターアンタゴニストは、ＰＧＦ２αの結合を阻害することなくＦＰレセプターに結合するが、ＰＧＦ２αとＦＰレセプターとの相互作用を破壊し、それによってＰＧＦ２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊する分子である。
さらに他には、ＦＰレセプターアンタゴニストはＦＰレセプターに結合する分子であって、ＦＰレセプターと関連Ｇαｑ蛋白との相互作用を破壊し、それによってＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊するという分子である。
【００７０】
誤解を生じないように、ここでの「ＦＰレセプターのアンタゴニスト」はＰＧＦ２αを含む。ＰＧＦ２αアンタゴニストは一般的には、ＰＧＦ２αに結合し、ＰＧＦ２αとそのレセプターとの結合を阻止又は低下させ、それによってＰＧＦ２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊する分子である。これは、一般的には上記レセプターの一部又は抗体のどちらかがＰＧＦ２αに結合する「可溶性レセプター」のアプローチである。
或いは、ＰＧＦ２αアンタゴニストは、ＰＧＦ２αとＦＰレセプターとの結合を阻害又は軽減することなくＰＧＦ２αに結合するが、ＰＧＦ２αとＦＰレセプターとの間の相互作用を破壊し、ＰＧＦ２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害もしくは破壊するような分子でありうる。これはＰＧＦ２αに共有融合で結合し、結合強度には影響を与えないがＧ−タンパク質／ＩＰ／Ｃａ２+メカニズムに影響を与える分子である。
【００７１】
そのレセプターアンタゴニストは一般的には特定のレセプターに選択的であり、好ましくはＰＧＦ２αに比べて同じか又はより高い結合親和性をＦＰレセプターに対して有する。天然リガンドに比べてレセプターに対してより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できるが、これらはより高濃度で使用することが必要である。アンタゴニストはＦＰレセプターに可逆的に結合することが好ましい。好ましくはアンタゴニストはある特定のレセプターに選択的であり、その他のレセプターには影響しない；このため一般的にはＦＰレセプターアンタゴニストはＦＰレセプターには結合するがその他の任意のレセプターには実質的に結合しない。
表１に挙げるペプチド類はＦＰレセプターと関連Ｇαｑタンパク質との相互作用を破壊するＦＰレセプターのアンタゴニストであると報告されている（ＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７４３８）。アミノ酸は標準ＩＵＰＡＣ一文字の習慣通り示され、Ｘはシクロヘキシルアラニンである。小文字はＬ-アミノ酸を示し、大文字はＤ−アミノ酸を示す（疑問を生じないように、この命名法で示されるペプチドのみを表１に挙げる。それと反対に、すべてのペプチドはＬ−アミノ酸を含む）。ＦＰレセプターアンタゴニストのような特定のペプチドに関するＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７４３８の開示の全ては出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００７２】
表１
2006517576.tif 000003
【００７３】
アンタゴニストが表１に記載されるようなペプチドを含む場合、アンタゴニストは蛋白融合体又はそのペプチド類似体も含む。
ケイマン・ケミカル社（Cayman Chemical）、アンアーボル（Ann Arbor）、米国ミシガン州、から提供されるＰＧＦ２αジメチルアミドはＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Arnould等, (2001) Am. J. Pathol., 159(1): 345-357)。
【００７４】
アルコン・リサーチ社から入手できるＡＬ−８８１０（（５Ｚ,１３Ｅ）−（９Ｓ,１１Ｓ,１５Ｒ）−９，１５−ジヒドロキシ−１１−フルオロ−１５−（２−インダニル）−１６，１７，１８，１９，２０−ペンタノール−５,１３−プロスタグランジエン酸）はＰＧＦ２αレセプターの、弱い部分的アゴニストであり、ＰＧＦ２αレセプターに高度に選択的なアンタゴニストである。ＡＬ−８８１０は１０μＭという高濃度ではプロスタグランジンレセプターＴＰ、ＤＰ、ＥＰ２又はＥＰ４の機能的反応を顕著には阻害しないことが報告された(Griffin等, (1999) J. Pharmacol. Exp. Ther., 260(3): 1278-1284)。
ＡＬ−３１３８（１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ２α）はＰＧＦ２αの弱い部分的アゴニストであり、ＰＧＦ２αレセプターの高度に選択的アンタゴニストであることが報告された(Sharif等, (2000) J. Pharm. Pharmacol., 52(12): 1529-1539)。
【００７５】
フロレチンはＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Kitanaka等 (1993) J Neurochem. 60(2): 704-708)。
スルホニル尿素グリベンクラミドはＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Delaey及びVan de Voorde (1995), Eur. J. Pharmacol. 280(2): 179-184)。スルホニル尿素トルブタミド及びトラミドはＦＰレセプターの非常に弱いアンタゴニストであることが報告された(Sharif等 (2000) J. Pharm. Pharmacol., 52(12): 1529-1539)。
ＰＧＦ２αジメチルアミンはＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Stinger等 (1992), J. Pharmacol. Exp. Ther., 220: 521-525)。
【００７６】
ジャンセン・ファーマシューテイカ（Jannsen.Pharmaceutica）から入手できる、（Ｅ）−５−［［［（３−ピリジニル）［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチレン］アミノ］オキシ］ペンタン酸（リドグレルとしても知られている）はＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Jannsens等, (1990), Thrombosis and Haemostasis, 64(1): 91-96)。
化合物ＰＨＧ１１３は選択的ＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された(Quiniou等, (2001) Pediatric Research, 49(2): 452A）。
ヨーロッパ特許第１２８４７９号は、報告によるとＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであるピラゾリルーメチルーエルゴリン誘導体類を記載している。ＰＧＦ２αレセプターインヒビターとしてのピラゾリル−メチル−エルゴリン誘導体に関するヨーロッパ特許第１２８４７９号の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００７７】
ＰＧＦ２αアンタゴニスト（上述のように、ＦＰレセプターアンタゴニストの用語に含む）はＰＧＦ２αに選択的であるのが好ましく、一般的にはＰＧＦ２αに対し、その他の分子類に対するよりも高い親和性を有する。他の分子類よりＰＧＦ２αに対してより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できる。しかしこれらはより高濃度で使用する必要がある。ＰＧＦ２αアンタゴニストはＰＧＦ２αに可逆的に結合するのが好ましい。
ＰＧＦ２αアンタゴニストは、オックスフォード・ビオメディカル・リサーチ社、オックスフォード、英国(Arnould等, Am. J. Pathol. 2001 159(I): 345-357)から提供されるウサギポリクローナル抗ＰＧＦ２α抗体などの抗−ＰＧＦ２αを含む。アーノルド等は、製造者によると上記抗体の特異性は非常に高く、その他のプロスタノイド誘導体との交差反応は１％未満であると述べている。
【００７８】
日本特許第０４０７７４８０号；日本特許第０８１７６１３４号；日本特許第０１１９９９５８号；日本特許第０１０５０８１８号；及び日本特許第６３０８３０８１号はそれぞれＰＧＦ２αインヒビターであると報告されたフタリド誘導体類を記載している。ＰＧＦ２αインヒビターとしてのフタリド誘導体に関連する日本特許第０４０７７４８０号；日本特許第０８１７６１３４号；日本特許０１１９９９５８号；日本特許第０１０５０８１８号；及び日本特許６３０８３０８１号中の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。
ＷＯ９１／１３８７５は、ＰＧＦ２αインヒビターであると報告された（イソ）キノリン スルホンアミド化合物を記載している。ＰＧＦ２αインヒビターとしての（イソ）キノリン スルホンアミドに関連するＷＯ９１／１３８７５中の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。
【００７９】
ＰＧＦ２αのインヒビター又はアンタゴニストであると報告された化合物類の幾つかは実際、ここに使用され定義されるＰＧＦ２α（ＦＰ）レセプターのアンタゴニストであり得る。したがってＰＧＦ２αのインヒビター又はアンタゴニストとしての、この種の化合物に関する参考文献はＦＰレセプターアンタゴニストに関する参考文献と考えなければならない。
ＦＰアンタゴニスト又はインヒビターを記載しているここに挙げる特許及び非特許文書のすべては、その全体が出典明記によりここに組み込まれる。
【００８０】
ＣＯＸ−２インヒビター
既に我々は、シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）合成がヒトの子宮の病的症状において上方制御されることを示した。例えば、ヒト子宮線癌では発現が微小血管系の上皮細胞だけでなく子宮癌の腫瘍性上皮細胞に局在していた。我々は既に、子宮の病的症状の治療又は予防において、一般的にＰＧＥＳ又はＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストと組み合わせてＣＯＸ−２インヒビターの使用を提言している（ＰＣＴ／ＧＢ０２／００４５４９）。
更なる本発明の実施態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤、及び場合によってはＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、又場合によってはＦＰレセプターのアンタゴニストである一作用剤に加えて、ＣＯＸ−２インヒビターを固体に投与する。
好ましくは、インヒビターはＣＯＸ−２に選択性がある。
化合物は何れのレベルででもＣＯＸ−２機能を選択的に阻害する。好適には、化合物はＣＯＸ−２酵素活性を選択的に阻害する。
【００８１】
「ＣＯＸ−２酵素活性を選択的に阻害する」とは、化合物が好ましくは他のシクロオキシゲナーゼ酵素、特にＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２を阻害することを意味する。ＣＯＸ−１遺伝子及びそのポリペプチド産物の配列は、Yokoyama及びTanabe (1989) Biochem. Biophys. Res. COMM. 165, 888-894に記載の通りであり、出典明記によりここに組み込まれる。ＣＯＸ−１はＰＧＨＳ−１とも呼ばれる。ＣＯＸ−２遺伝子及びそのポリペプチド産物の配列は、O'Banion等 (1991) J Biol. Chem. 266,23261-23267に記載の通りであり、出典明記によりここに組み込まれる。ＣＯＸ−２はＰＧＨＳ−２とも呼ばれる。
ＣＯＸ−２酵素活性を選択的に阻害する化合物は、ＣＯＸ−１よりもＣＯＸ−２を少なくとも１０倍阻害するのがよい；好ましくは少なくとも５０倍；好ましくは少なくとも１００倍；さらにより好ましくは少なくとも１０００倍及びより好ましくは少なくとも１００００倍である。
ＣＯＸ−２インヒビター化合物は実質的にＣＯＸ−１酵素に対して阻害活性を持たないことが好ましい。
【００８２】
ＣＯＸ−２酵素生成を選択的に阻害する化合物がよい。例えば、化合物はＣＯＸ−２の転写を選択的に阻害する、又はＣＯＸ−２メッセージの輸送を選択的に阻害する。
「ＣＯＸ−２酵素生成を選択的に阻害する」とは、化合物が好ましくは他のシクロオキシゲナーゼ酵素、特にＣＯＸ−１に優先してＣＯＸ−２の生成を阻害することを意味する。
ＣＯＸ−２酵素生成を選択的に阻害する化合物は、ＣＯＸ−１生成よりもＣＯＸ−２生成を少なくとも１０倍阻害するのがよい；好ましくは少なくとも５０倍；好ましくは少なくとも１００倍；さらにより好ましくは少なくとも１０００倍及びより好ましくは少なくとも１００００倍である。
化合物は実質的にＣＯＸ−１酵素生成に対して阻害活性を持たないことが好ましい。
【００８３】
特に好ましい実施態様では、ＣＯＸ−２インヒビター化合物がニメスリド(nimesulide)、４−ヒドロキシニメスリド(4-hydroxynimesulide)、フロスリド(flosulide)、メロキシカム(meloxicam)の何れか一つである。ニメスリドは、N-(4-ニトロ-2-フェノキシフェニル)メタンスルホン酸塩(4-ニトロ-2-フェノキシメタンスルホンアニリドとも称される)である。ニメスリドは、ＣＯＸ−１抑制よりもＣＯＸ−２抑制に対して１００倍の特異性を有する。ニメスリドはBoehringerより製造される。
フロスリドは、6-(2,4-ジフルオロフェノキシ)-5-メチルスルホニルアミノ-1-インダンオン(N-6-(2,4-ジフルオロフェノキシ)-1-オキソ-インダン-5-イルメタン-スルホンアミドとしても知られている)である。フロスリドは、ＣＯＸ−１抑制よりもＣＯＸ−２抑制に対して１０００倍の特異性を有する。フロスリドはCiba Geigyより製造される。
メロキシカムは、4-ヒドロキシ-2-メチル-N-(5-メチル-2-チアゾールイル)-2H-1,2ベンゾチアジン-3-カルボキシアミド1,1-ジオキシドである。メロキシカムは、ＣＯＸ−１抑制よりもＣＯＸ−２抑制に対して１０００倍の特異性を有する。メロキシカムはBoehringerより製造される。
【００８４】
ニメスリドの合成は周知であり、ＵＳ３，８４０，５９７に記載の通りである；フロスリドの合成は周知であり、ＧＢ２０９２１４４に記載の通りである；及びメロキシカムの合成は周知であり、ＵＳ４，２３３，２９９に記載の通りである。
本発明の実施に有用な他のＣＯＸ−２特異的インヒビターは以下を含む：
L 475 L337は、ＣＯＸ−１抑制よりもＣＯＸ−２抑制に対して５００倍の特異性を有する。これはMerck Frostより製造される。
また、Merckより市販されているビオックス(Vioxx)もＣＯＸ−２インヒビターに適する。
ＳＣ５８１２５セレコキシブ(Celecoxib)は、ＣＯＸ−１抑制よりもＣＯＸ−２抑制に対して１００倍の特異性を有する。セレコキシブはSearleより製造される。
ＮＳ３９８はTaishoにより製造されており、ＣＯＸ−２に対してとても高い選択性がある。
ＤｕＰ６９７はＣＯＸ−２選択性を有し、DuPontにより製造される。ニメスリド、フロスリド及びメロキシカムはＣＯＸ−２酵素インヒビターであり、おそらく競合的インヒビターである。
ＣＯＸ−２インヒビターを記載しているここに挙げる特許及び非特許文書のすべては、その全体が出典明記によりここに組み込まれる。
【００８５】
ＩＰレセプターのアンタゴニスト及び／又はＰＧＩＳインヒビターである一以上の作用剤を患者に投与するのが好ましい。
一般的に、ＩＰレセプターのアンタゴニスト及び／又はＰＧＩＳインヒビターである作用剤は、ＩＰレセプターの少なくとも９０％に効果的用量が運ばれるような（ＥＤ９０）量と頻度で投与される。分子の作用強度は用量、剤形及び投与方法を示すであろう。
場合によっては、他の治療薬もまた前述のように患者に投与できる。これらはまた、本発明の治療薬とみなしうる。また、一以上の治療薬が患者に投与されるとき、それらは連続的にまたは組み合わせて投与されるのが好ましい。
望ましくない子宮の病理学的症状を克服するために治療薬を有効量で投与する。よって、治療薬は症状を緩和するため（すなわち対症的に用いる）にも用いられ、または症状を治療するためにも用いられ、または症状を防ぐために予防的に用いられる。治療薬は任意の好適な投与方法及び任意の好適な剤形で投与する。
【００８６】
本発明に使用するための上記の治療薬又はその組成物は経口及び非経口（例えば皮下又は筋肉内）注射を含む一般的方法によって投与できる。治療は単一量の投与又はある期間にわたる複数回の投与からなる。投与すべき用量は年齢、体重、投与法、治療期間、及び治療薬（１種類又は複数種類）の薬物動態及び毒物学的特性を考慮して決められる。治療薬は患者に好ましい治療効果をもたらす量（又は複数回用量）が投与される。一般に、この治療薬は、別の医療適用に使用する量と同じか類似の用量が用いられる。とにかく、患者の治療に適した用量は医者によって決められるのがよい。
【００８７】
本発明の治療薬はそれだけで、又はその他の治療薬と組み合わせて使用することができるが、一方ではそれ（又はそれら）を１種類以上の容認できる担体と組み合わせて医薬製剤として提供するのが好ましい。担体は本発明の治療薬と適合し、またそれを受ける人にとって有害でない、という点で、「容認でき」なければならない。一般的にはそれら担体は、無菌性及び無発熱物質である水又は食塩液である。
【００８８】
上記製剤は単位投与型で提供されるのが都合がよく、薬学の当業者に公知の任意の方法によって作られる。このような方法は、１種類又は複数種類の治療薬を１種類以上の付属成分を構成する担体と組み合わせる工程を含む。概してこれら製剤は活性成分（すなわち１種類以上の治療薬）を液体担体又は微粉状固体担体又はそれら両方と均質によく混ぜ合わせ、必要ならばその生成物を形作ることによって作られる。
【００８９】
経口投与に適する本発明による製剤はカプセル、カシェ剤(cachet)又は錠剤などのあらかじめ決められた活性成分量を含む個々の単位として、粉末又は顆粒として；水性液又は非水性液中の溶液又は懸濁液として；又は水中油液体エマルション又は油中水液体エマルションとして提供される。活性成分は巨丸剤、舐剤、又はペーストとしても提供される。
錠剤は任意に１種類以上の付属成分と共に圧縮又は成形によって作られる。圧縮錠剤は、任意に結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、滑剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（グリコール酸ナトリウム澱粉、架橋ポビドン、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロースなど）、界面活性剤又は分散剤と混合した粉末又は顆粒などの流動性の形の活性成分を適切な機械で圧縮することによって作られる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作られる。錠剤は任意にコーティングしたり溝をつけたるすることができ、所望の放出プロフィールを得るためにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを種々の比率で使用して、活性成分を徐々に又はコントロールして放出させることができる。
【００９０】
口に適切に局所投与できる製剤には、通常はスクロース及びアカシア又はトラガントなどで風味を効かせた活性成分を含むトローチ剤；不活性ゼラチン及びグリセリンなど、又はスクロース及びアカシアをベースにした活性成分を含むパステル(pastille)；及び適切な液体担体中に活性成分を含むマウス-ウォッシュがある。バッカル投与も好ましい。
非経口投与に適する製剤には、抗酸化剤、緩衝液、殺菌剤及び、製剤投与予定患者の血液と等張にする溶質を含む水性及び非水性滅菌注射溶液；及び懸濁剤及び濃化剤を含むことができる水性及び非水性無菌懸濁液がある。これら製剤は単位用量又は多数回用量の容器、例えば密封アンプル及びバイアルで提供され、凍結乾燥（親液させる）状態で保存し、使用直前に注射用水などの無菌液体担体を添加するだけで使用できる。即座に使用する注射溶液及び懸濁液を、上に記載した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から作ることができる。
【００９１】
好ましい単位用量組成物は活性成分を１日量又は単位、１日分服量（サブ用量）又はそれらの適切な部分を含むものである。
上に詳細に記載した成分類に加えて、本発明の製剤は、問題の製剤の種類に関心のある当業者には一般的な、その他の作用物質も含むことができることは当然である。例えば経口投与に適する組成物は香味剤を含むことができる。
【００９２】
治療薬の幾つかは蛋白又はペプチドである。蛋白及びペプチドは、注射可能の持続的放出性ドラッグ・デリバリー・システムを使用して運搬できる。これらは特に注射回数を減らすために設計される。このようなシステムの一例は、組換えヒト成長ホルモン（rhＧＨ）を生体内分解性ミクロスフェアに包み込んだニュートロピン・デポ（Nutropin Depot）であり、これは注射されるとｒｈＧＨを長時間にわたってゆっくりと放出する。
蛋白及びペプチドは、その薬剤を必要な部位に直接放出する外科的に移植されたデバイスによって投与できる。例えばヴィトラサート（Vitrasert）はガンシクロヴィルを眼に直接放出し、ＣＭＶ網膜炎を治療する。この毒性作用物質の疾患部位への直接適応は、この薬の顕著な全身的副作用を起こさずに、効果的治療を可能とする。
【００９３】
エレクトロポレーション治療システムも蛋白及びペプチドの投与に使用できる。パルス電場を細胞に与えるデバイスはその薬に対する細胞膜の透過性を高め、細胞内ドラッグ・デリバリーを顕著に高める。
蛋白及びペプチドはエレクトロインコーポレーション（ＥＩ）によって運搬することができる。ＥＩは、皮膚表面の直径３０ミクロンまでの小粒子が、エレクトロポレーションに使用するものと同じか又は類似の電気的パルスを経験する際に起きる。エレクトロインコーポレーションにおいて、これらの粒子は角質層を通過して皮膚のより深い層に押し込まれる。これら粒子は薬剤又は遺伝子を担うことができ、又は薬剤又は遺伝子でコーティングすることもでき、又は単に、薬剤が入るための孔を皮膚にあける「銃弾」として作用することができる。
【００９４】
蛋白及びペプチドを運搬するための、また別の方法は、感熱性のＲｅＧｅｌ注射システムである。体温より低い温度では、ＲｅＧｅｌは注射可能の液体であるが、体温ではそれは直ちにゲルリザーバ（ゲル貯め）を形成する。これは徐々に侵食され、溶解して公知の安全な生体内分解性ポリマーになる。治療薬は生体ポリマーが溶解するにつれて、時間をかけて運搬される。
蛋白及びペプチド医薬品は経口的に運搬することもできる。そのプロセスは、体内にビタミンＢ１２を経口摂取するための自然のプロセスを利用し、蛋白及びペプチドを同時運搬する。ビタミンＢ１２摂取システムに乗ることによって、蛋白及びペプチドは腸壁を通過して移動することができる。ビタミンＢ１２類似体と、複合体のビタミンＢ１２部分の固有因子（ＩＦ）に対する顕著な親和性及び複合体の薬剤部分の顕著な生体内活性を両方保有する薬剤との間で複合体を合成する。
【００９５】
蛋白及びポリペプチドは「トロジャン（Trojan）ペプチド」によって細胞に導入される。これらはペネトラチンと呼ばれるポリペプチドのクラスに属し、移動特性を有し、親水性化合物を原形質膜を経て運ぶことができる。このシステムはオリゴヌクレオチド類を細胞質及び核に直接ターゲティングすることができ、非細胞型特異的で高度に効率的である。Derossi等(1998),Trebds Cell Biol 8,84-87ページを参照されたい。
上記の治療薬又は組成物は経皮的に、例えばパッチ、ゲル、ローション、クリーム又はオイルとして投与することもできる。
治療薬（１種類又は複数種類）は経口的に投与されるのが好ましい。
【００９６】
治療薬（１種類又は複数種類）が女性の生殖系に投与されるならばさらに好ましい。例えば１種類又は複数種類の治療薬は、例えばゲル又はクリーム又は膣リング又はタンポンを使用して膣内に適切に投与できる。その治療薬は例えば当業者には公知の、子宮内デバイスなどの方法を使用して、子宮内デリバリーによっても好都合に投与できる。
一般的には、上記ゲル又はクリームは膣に投与するために成形されるものである。それは油性でも水性でもよい。一般的には１種類又は複数種類の治療薬がクリーム又はゲル内に、１回の（又は反復）投与で有効量が十分に投与されるような濃度で含まれる。
【００９７】
一般的には、膣リングは膣にフィットする「ドーナツ」形に成形されたポリマーを含んでなる。１種類又は複数種類の治療薬がポリマー内に、一般的にはコアとして存在し、それはポリマーから放出され、コントロールされた仕方で膣及び／又は頸部に入る。膣リングは当業者には公知である。
一般的にはタンポンに１種類又は複数種類の治療薬をしみ込ませ、十分な量の治療薬（１種類又は複数種類）がタンポンに存在するようにする。
【００９８】
一般的には子宮内デバイスは子宮内に長期間、例えば１ないし５年間置くためのものである。一般的には子宮内デバイスはプラスチック製フレーム（「Ｔ」形であることが多い）を有し、使用期間中放出するのに十分な量の治療薬（類）を含む。一般的にその薬剤は、そのデバイスの部分を構成している除放性ポリマー内に存在し、又は前記除放性ポリマーに封入される。上記デバイスの部分は、普通は除放性膜で覆われている「Ｔ」字形の長い方のアームの周囲を包む「ソーセージ」形薬剤のような形に構成されている。子宮内デバイスは当業者には公知である。
【００９９】
本発明の第二の態様は女性個体の子宮の病的状態を克服するための医薬品の製造における、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターの使用を提供する。
本発明のこの態様の実施態様では、女性個体にＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを投与する。一般的にＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを医薬として同時に女性に投与する。あるいは、医薬を服用する前（又は後）にＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
この及び以降全ての本発明の態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の優先度、及びＰＧＩＳインヒビターの優先度は本発明の第一の態様に関する前述の記載のとおりであるのが好ましい。
【０１００】
また、この及び以降全ての本発明の態様では、克服すべき子宮の病的症状の優先度は本発明の第一の態様に関する前述の記載のとおりであるのが好ましい。
一実施態様では、女性個体にＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターのうちの何れか一以上を投与する。一般的にこれら付加的薬剤のうちの何れか一以上を医薬として同時に女性に投与する。あるいは、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを含む医薬を服用する前（又は後）にこれら付加的薬剤のうちの何れか一以上を女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
さらに任意で、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターのうちの何れか一以上を女性に投与する場合、別々に投与してもよい。よって、例えば、ＣＯＸ−２インヒビターを医薬服用前に投与してもよいし、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを医薬と一緒に投与してもよい。
【０１０１】
この及び以降全ての本発明の態様では、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストの優先度は本発明の第一の態様に関する前述の記載のとおりであるのが好ましい。
また、この及び以降全ての本発明の態様では、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の優先度は本発明の第一の態様に関する前述の記載のとおりであるのが好ましい。
さらに、この及び以降全ての本発明の態様では、ＣＯＸ−２インヒビターの優先度は本発明の第一の態様に関する前述の記載のとおりであるのが好ましい。
【０１０２】
本発明の第三の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は防止するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストの組合せ使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の一以上、及びＣＯＸ−２インヒビターが投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてこれら付加的薬剤の一以上を同時に投与し、他方、これら付加的薬剤の一以上を医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０３】
本発明の第四の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の組合せ使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＰＧＥＳのインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターが投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてこれら付加的薬剤の一以上を同時に投与し、他方、これら付加的薬剤の一以上を医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０４】
本発明の第五の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＣＯＸ−２インヒビターの組合せ使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＰＧＥＳのインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト及びＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤が投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてこれら付加的薬剤の一以上を同時に投与し、他方、これら付加的薬剤の一以上を医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０５】
本発明の第六の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト及びＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の組合せ使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＣＯＸ−２インヒビターが投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてＣＯＸ−２インヒビターを同時に投与し、他方、ＣＯＸ−２インヒビターを医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０６】
本発明の第七の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、及びＣＯＸ−２インヒビターの使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤が投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤を同時に投与し、他方、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤を医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０７】
本発明の第八の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、及びＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターの使用を提供する。
一実施態様では、その女性個体にはＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを同時に投与し、他方、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
【０１０８】
本発明の第九の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビター、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターの組合せ使用を提供する。
【０１０９】
本発明の第十の態様は、女性個体の子宮の病的症状を治療又は予防するための医薬の製造におけるＰＧＥＳのインヒビターの一以上及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤、及びＣＯＸ−２インヒビターの組合せ使用を提供し、その女性個体にはＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターが投与される。この場合一般的には、女性には薬剤としてＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを同時に投与し、他方、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターを医薬を服用する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。
本発明の第二から第十の態様の何れかの好ましい実施態様では、医薬は腟リングまたはタンポン又は子宮内デバイスを介して投与するように成形される。
【０１１０】
本発明の第十一の態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の何れか一以上と、ＣＯＸ−２インヒビターを含む組成物を提供する。
【０１１１】
本発明の第十二の態様では、医薬の使用のための、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の何れか一以上と、ＣＯＸ−２インヒビターを含む組成物を提供する。
【０１１２】
本発明の第十三の態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の何れか一以上と、ＣＯＸ−２インヒビター、及び薬学的容認性のある担体を含む医薬組成物を提供する。
【０１１３】
本発明の第十四の態様では、ＩＰレセプターのアンタゴニストである少なくとも一作用剤及び／又はＰＧＩＳインヒビターと、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、ＦＰレセプターのアンタゴニストである作用剤の何れか一以上と、ＣＯＸ−２インヒビターを含む腟リング又はタンポン又は子宮内デバイスを提供する。
【０１１４】
本発明は下記の図面及び実施例を参照してより詳細に説明される。
【実施例】
【０１１５】
実施例１：月経周期を通じてのヒト子宮内膜症におけるプロスタサイクリン（ＩＰ）レセプターの経時的発現、局在化、及びシグナル伝達
要約
我々は、月経周期を通じて妊娠していないヒト子宮におけるプロスタグランジンＩ合成酵素（ＰＧＩＳ）及びプロスタサイクリンレセプター（ＩＰ）の発現部位を研究した。量的ＲＴ−ＰＣＲ法を用いて、後期増殖期と比較して初期増殖期のＰＧＩＳ発現が著しく増加する（Ｐ＜０．０５）ことを示した。加えて、月経周期の後期増殖期及び初期ないし後期分泌期と比較して初期増殖期にＩＰ発現が著しく高かった（すべての時期ｐ＜０．０１）。さらに、完全な厚さのヒト子宮生検では、免疫組織化学により基底層及び機能的層の間質性細胞と共に腺性上皮細胞にＰＧＩＳが局在していた。また、子宮筋の内皮細胞、平滑筋細胞、及び血管平滑筋細胞にも染色がみられた。インサイツハイブリダイゼーションにより、主に増殖期の子宮の子宮筋、血管、及び子宮内膜上皮及び間質性細胞にＩＰレセプターｍＲＮＡが検出された。プロスタサイクリン類似体のイロプロストは子宮内膜組織にｃＡＭＰ生成を引き起こし、これは月経周期の分泌期と比較して増殖期から採取した試料で著しく増加する（ｐ＜０．０５）。我々は、月経周期の初期増殖期におけるｃＡＭＰ経路を介するレセプターのシグナル伝達の増加を有するＰＧＩＳ及びＩＰの上方制御を証明した。
【０１１６】
序文
プロスタサイクリン（ＰＧＩ２）は、血管拡張因子および血小板凝集の強力な阻害剤として特徴づけられており(Smyth & Fitzgerald, 2002)、このように血管止血の持続において、必須的役割を果たす。血管内皮によって合成される主なプロスタノイドであって、平滑筋弛緩物質として作用する。脂質メディエーターのエイコサノイドファミリーの他のメンバーのように、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）はプロスタグランジン合成の一般的中間体であるＰＧＨ２を介したアラキドン酸からのＰＧＩ２合成において重要な酵素である(Kniss,1999)。ＣＯＸ酵素には二つの主なイソ型があり、ＣＯＸ−１は多くの細胞型で恒常的に発現しており、ＣＯＸ−２はサイトカインや腫瘍プロモーターを含む多くの因子により誘導される。ＰＧＩ２の特異的なプロスタグランジン合成酵素ＰＧＩ合成酵素（ＰＧＩＳ）はＰＧＨ２からＰＧＩ２を生成する。ＰＧＩ２はその典型的な７つの膜貫通構造を有するＧタンパク質結合レセプター（ＩＰ）との相互作用によって標的細胞に対してその効果を引き出す(Narumiya et al, 1999)。ＩＰレセプターは、Ｇタンパク質のＧｓ及びＧｑ種を刺激して、ｃＡＭＰ生成及びホスファチジルイノシトール応答の増加を引き起こしている。ＰＧＩ２は女性の性と生殖に関する健康の主な問題である月経過多の病因に関係しており、全ての婦人科受診の１１％を占めており、１９９５年には総計７００万ポンドにも達する薬費がかかっている(Cooper等,2001)。対照と比較して月経過多をもつ女性において、ＰＧＩ２ (Smith等, 1981)の増強した合成またはＰＧＩ２濃度の増加がトロンボキサンＡ２ (Makarainen & Ylikorkala 1986)と関連しているという証拠がある。しかしながら、月経周期を通じて子宮内膜においてＰＧＩＳ又はＩＰの一時的又は空間的発現に関する情報がほとんどない。
【０１１７】
本研究では、量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）、インサイツハイブリダイゼーション及び免疫組織化学法により妊娠していない子宮内膜及び子宮筋におけるＰＧＩＳ及びＩＰの局在部位を研究した。加えて、子宮内膜組織試料におけるｃＡＭＰ生成に対するプロスタサイクリン類似体のイロプロストの影響を研究することにより、子宮内膜細胞のシグナル伝達機能におけるＰＧＩ２の役割を研究した。
【０１１８】
材料と方法
患者及び組織採集
月経周期の種々の段階の子宮内膜生検を、生検採取前の３ヶ月間にホルモン調製を受けていない月経周期が規則的な（２５−３５日）女性から集めた。試料は子宮内膜吸引キュレット（ピペット、ラボラトワレＣＣＤ（Laboratoire CCD）、フランス）を使って、又は婦人科的良性疾患のために子宮摘出を受けた女性から全厚の子宮内膜生検を採取した。採取後間もなく、組織をドライアイス中で急速に凍結し、−７０℃で保存し（ＲＮＡ抽出のため）、中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中で固定し、ワックスに埋め込むか（免疫組織化学的分析のため）、又はＲＰＭＩ１６４０（２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含む）中に置き、研究室に移してインビトロ培養を行った。
生検は申告された最終月経期（ＬＭＰ）に従って日付が入れられ、Noyes及び共同者の基準に従って組織検査によって確認された(Noyes等,1975)。さらに生検時の循環エストラジオール及びプロゲステロン濃度は、申告されたＬＭＰと月経周期段階の組織検査との両方で一致した。ロジアン・リサーチ倫理委員会（Lothian Research Ethics Committee）から倫理的承認を得、組織の採集前に全被験者から書面によるインフォームド・コンセントを得た。
【０１１９】
Ｔａｑｍａｎ量的ＲＴ−ＰＣＲ
製造者の指示書に従って、Ｔｒｉ−Ｒｅａｇｅｎｔ(Sigma, Poole, UK)を用いて月経周期を通して得た子宮内膜生検（ｎ＝３５）からＲＮＡを抽出した。ＲＮＡ試料を定量して、５．５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．５ｍＭの各デオキシ（ｄ）−ＮＴＰｓ、２．５μＭランダムヘキサマー、リボヌクレアーゼインヒビター（０．４Ｕ／μｌ）及び１．２５Ｕ／μｌマルチスクラブ逆転写酵素(すべてApplied Biosystems, Warrington, UKより)を用いて逆転写を行った。各逆転写反応液にＲＮＡ（４００ｎｇ）を加えて、２５℃で９０分、４８℃で４５分、及び９５℃で５分で試料をインキュベートした。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の反応混合液は、１×マスターミックス、リボソーム１８Ｓフォワード及びリバースプライマー、リボソーム１８Ｓプローブ（５０ｎＭ；すべてABIより)、ＰＧＩＳ又はＩＰ  （３００ｎＭ）のフォワード及びリバースプライマー、及びＰＧＩＳ又はＩＰプローブ（２００ｎＭ）(すべてBiosource UK Ltdより)からなる。反応混合液（４８μｌ）はチューブに等分割し、２μｌのｃＤＮＡを加えた。分割した２４μｌの試料と、ポジティブ及びネガティブコントロールをＰＣＲプレートに設置し、光学キャップでウェルを密閉した。ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ．７７００(Applied Biosystems)を用いてＰＣＲ反応を行った。すべてのプライマー及びプローブはＰＲＩＭＥＲエクスプレスプログラム（ＡＢＩ）により設定した。
【０１２０】
ＰＧＩＳプライマー及びプローブの配列は；フォワード、５’ＡＣＧＣＡＧＡＴＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＣＴ−３’（配列番号２７）；リバース、５’ＧＴＣＧＴＧＴＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡ−３’（配列番号２８）；及びプローブ（６−カルボキシ蛍光色素標識）５’−ＣＣＴＣＡＧＣＡＧＧＴＡＣＧＧＣＴＴＣＧＧＴＣＴＧ−３’（配列番号２９）である。
ＩＰプライマー及びプローブの配列は；フォワード、５’ＧＣＣＣＴＣＣＣＣＣＴＣＴＡＣＣＡＡ−３’（配列番号３０）；リバース、５’ＴＴＴＴＣＣＡＡＴＡＡＣＴＧＴＧＧＴＴＴＴＴＧＴＧ−３’（配列番号３１）；及びプローブ（６カルボキシ蛍光色素標識）５’−ＣＣＡＡＧＡＧＣＣＡＧＣＣＣＣＣＴＴＴＣＴＧＣ−３’（配列番号３２）である。
１８Ｓプライマー及びプローブの配列は以前に記載されている通りである(Milne等, 2001)。
製造者の指示書に従って、データはＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒバージョン１．６．３（ＡＢＩ）を用いて分析及び処理を行った。結果はすべての反応に含まれる内因性ポジティブ基準との相対で表す。
【０１２１】
非量的ＲＴ−ＰＣＲ
０．５ｍＭの各ｄＮＴＰ、５０ｎｇ／μｌオリゴ−ｄＴプライマー、及び１０ｎｇ／μｌランダムヘキサマーを含む１×反応バッファー２０μｌ中に１反応当たり４ＵのＯｍｎｉｓｃｒｉｐｔ逆転写酵素(Qiagen, Crawley, UK)を用いてRNA （１試料当たり１〜２μｇ）を逆転写した。９３℃で２分間の後、３７℃で１時間で逆転写を行った。製造者の指示書に従って、プライマー  フォワード、’ＣＡＡＣＧＧＣＴＣＧＧＴＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣ−３’（配列番号３３）及びリバース、５’ＡＡＧＧＧＧＴＧＴＣＴＧＣＧＡＧＴＣＴＣＣＧ−３’（配列番号３４）とＨｏｔＳｔａｒＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ(Qiagen, Crawley, UK)を用いて、ヒトＩＰレセプターｍＲＮＡの６７２〜１０３５塩基の３６４ｂｐフラグメントが増幅された。２．５Ｕの酵素、２００μＭの各ｄＮＴＰ、及び各プライマー１００ｎｇを含む５０ｍｌの１×反応バッファーに５μｌの各ｃＤＮＡを加えた。９５℃で１５分を１サイクル、９５℃で１分の変性、６６℃で３０秒のアニーリング、及び７２℃で４５秒の伸展を４０サイクルの増幅反応とした。最終の伸展に続いて、７２℃で１０分間おいた。反応液を１％アガロースゲルにて分解し、エチジウムブロマイド透照により可視化した。産物ごとに代表の配列をカスタムシークエンス(MWG-Biotech AG, Ebersberg, Germany)によって確認した。
【０１２２】
インサイツハイブリダイゼーション
ＩＰのために特別に合成されたオリゴヌクレオチド二重フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）標識ｃＤＮＡプローブをＢｉｏｇｎｏｓｔｉｋ(Gottingen、ドイツ)から入手した。切片（５μＭ）をゼラチン被覆スライド上で、月経周期全体から集めた全厚ヒト子宮生検（ｎ＝１２）から切り取った。切片のワックス除去を行い、再水和した後、プロテイナーゼＫ処理（５０ｍＭ  ＥＤＴＡを含む１００ｍＭトリス−ＨＣｌｐＨ７.６中５０μｇ／ｍｌ）を３７℃で１５分間行い、ｃＤＮＡプローブのアクセスを高めた。切片をジエチルピロカルボネート処理水中で洗浄後、あらかじめ９５℃で熱処理したプローブを加えたハイブリダイゼーションバッファー２５μｌを用いて３０℃で４時間プレハイブリを行った。その後、６Ｕ／ｍｌのｃＤＮＡプローブを含むハイブリダイゼーションバッファー中で３０℃で一昼夜ハイブリダイズを行った。ハイブリダイゼーション後、３９℃で１×標準的クエン酸生理食塩水（ＳＳＣ）で５分間（２回）及び０.１×ＳＳＣで１５分間（２回）の洗浄を行った。付加的増幅工程を有する標準的免疫組織化学的試薬を使用してＦＩＴＣ標的プローブを検出した（ＴＳＡビオチン系、ＮＥＮライフ・サイエンシス、ＵＫ）。切片を３０分間ブロッキングバッファーを用いてインキュベートした。共役抗−ＦＩＴＣ−西洋わさびペルオキシダーゼ(Roche, Diagnostics Ltd.,Lewes, UK)を１／２００の希釈率でブロッキング緩衝液に加え、切片を６０分間インキュベートした。洗浄後、ビオチニルチラミド増幅試薬（１／５０）を各スライドに加え、１５分間インキュベートした。洗浄後ストレプトアビジン−西洋わさびペルオキシダーゼ（１／１００）を加え、３０分間インキュベートし、プローブの局在を３，３’−ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）基質で可視化した。バックグラウンドハイブリダイゼーションを評価するために同じ比率のシステイン（Ｃ）及びグアニン（Ｇ）塩基をＩＰプローブとして含む二重ＦＩＴＣ標識オリゴヌクレオチドプローブで対照を処理した。全処理は特に記載のない限り室温で行った。
【０１２３】
免疫組織化学
月経周期を通して採取した子宮内膜切片（ｎ＝１２）（５μｍ）はキシレンでワックスを除去し、漸増濃度のエタノールを使用して再水和した。煮沸した０．１％クエン酸バッファー（ｐＨ  ３．０）中で圧力機で５分間、切片を処理することによって抗原検索を行った。ＰＢＳ中ですすいだ後、室温の１０％Ｈ２Ｏ２を含むメタノールにより内在性のペルオキシダーゼ活性を失活した。ウサギ抗ウシＰＧＩＳと共に４℃で一昼夜インキュベーションする前に、非免疫のブタ血清（２０％血清ＰＢＳ）を用いた。そして、色素原としてＤＡＢを用いてアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ検出システムを適用した(DAKO Ltd.,Cambridge, UK)。Alexis Corporation (Nottingham, UK)より抗ＰＧＩＳ抗体を入手した。
そして、色素原としてＤＡＢを用いてアビジン−ビオチンペルオキシダーゼ検出システムを適用した(DAKO Ltd.,Cambridge, UK)。ＩＰレセプターに対する抗体は以前に記載されている(Fortier等(2001) Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 65, 79-83)。非免疫ウサギ血清及びＩＰレセプターペプチドで前吸収させた抗体をＩＰレセプターのコントロールとして用い、非免疫ウサギ血清をＰＧＩＳのコントロールとして用いた。上皮腺及び内皮にわたってまれに薄茶色の交差反応が見られる前吸収させた抗体及び非免疫ウサギ血清を用いた免疫反応は無視できた。
【０１２４】
全組織サイクリックＡＭＰアッセイ
月経周期を通して得た子宮内膜生検（ｎ＝８）を最終的にはさみで刻み、３つに分けた。２  ｍｍｏｌ／ｌ  Ｌ−グルタミン、１００ＩＵペニシリン、及び１００μｇストレプトマイシン及び３μｇ／ｍｌインドメタシン(Sigma, Poole, UK)を含む２ｍｌ  ＲＰＭＩ(Sigma, UK)培地中で加湿した５％  ＣＯ２培養槽で３７℃一昼夜、組織をインキュベートした。一昼夜のインキュベーションの後、１−メチル−３−イソブチルキサンシン(Sigma)を含む同様の培地中で３７℃３０分間組織をインキュベーションした。そして、コントロール培地又は１００ｎＭイロプロスト(Schering Health Care, Burgess Hill, UKより入手)にて３７℃で１０分間処理し、０．１Ｍ  ＨＣｌですすぎ、分析まで凍結させた。製造者の指示書に従って、ＥＬＩＳＡ (Biomol, Affiniti, Exeter, UK)によりｃＡＭＰ濃度を測定し、Ｌｏｗｒｙ(Bio-Rad, Hemel Hempstead, UK)の法則を修飾して決定したタンパク質濃度に正規化した。 
【０１２５】
細胞系のサイクリックＡＭＰ及び増殖アッセイ
イシカワ子宮内膜上皮細胞系（イシカワ細胞）及び子宮内膜間質性（ＥＳ）細胞を、１０％胎仔ウシ血清(PAA Laboratories Ltd., Yeovil, UK)を添加したｇｌｕｔａｍａｘ(Invitrogen Ltd., Paisley, UK)を含むＤＭＥＭ  Ｆ１２培養液中で増やした。子宮内膜間質性細胞はR W Kelly教授より快くいただいたもので、以前に記載されているように(Dunn等 (2002) J Clin Endocrinol Metab 87, 1898-1901)、ヒト子宮内膜生検由来のものであった。サイクリックＡＭＰアッセイのために、細胞を６ウェルプレートに７０％集密度まで生育した。それらをインドメタシン（３μｇ／ｍｌ）存在下の無血清培地にて一昼夜飢えさせた。そして、１−メチル−３−イソブチルキサンシンを含む同様の培地中で３７℃３０分間細胞をインキュベートし、コントロール培地又は１００ｎＭイロプロストにて３７℃で１０分間処理した。処理後、０．１Ｍ  ＨＣｌですすぎ、分析まで凍結させた。組織試料のようにサイクリックＡＭＰアッセイを行った。データは、コントロール試料に対して相対的増加が予測されるイロプロスト処理後に増加したｃＡＭＰの割合を平均値±ＳＥＭとして表した。増殖に対するイロプロストの影響を評価するために、細胞を９６ウェルプレートに密閉し、７０％集密度まで生育させた。それらをインドメタシン（３μｇ／ｍｌ）存在下の無血清培地にて一昼夜飢えさせた。コントロール培地又は１００ｎＭの濃度のイロプロストで３７℃２４時間細胞を処理した（各処理６ウェル；データは５又は６実験の平均として表した）。製造者の指示書に従って、比色定量法CellTiter 96 Aqueous One Solution細胞増殖アッセイ(Promega, Southampton, UK)を用いて増殖を評価した。２０μｌのアッセイ試薬（テトラゾリウム化合物、インナーソルト(inner salt)及び電子結合試薬を含む）を各ウェルに加え、試料を３７℃で２時間インキュベートして、プレートを４９２ｎｍで計測した。増殖を、無処理の細胞に対する相対的増殖割合として表し、平均値±ＳＥＭとしてプロットした。
【０１２６】
統計
適切な場合は、データをＡＮＯＶＡ統計分析及びフィッシャーＰＬＳＤ検定にかけ（Statview 4.0；Abacus Concepts Inc.,USA）、ｐ＜０.０５の際に統計的に有意であるとした。
【０１２７】
結果
月経周期を通じてヒト子宮内膜におけるＰＧＩＳｍＲＮＡ発現のパターンを量的ＲＴ−ＰＣＲ法により分析した。ＰＧＩＳ  ｍＲＮＡは実験したヒト子宮内膜のすべての試料において検出された（図１ａ）。月経周期の後期増殖期（１．７４±０．５１；ｎ＝７）より初期増殖期（１０．３６±４．５８；ｎ＝６）において発現が相対的に高かった（ｐ＜０．０５）。月経周期の初期分泌期（３．５６＋１．８９；ｎ＝１７）又は後期分泌期（１．４２＋０．２９；ｎ＝４）ではＰＧＩＳ発現が低かった。
また、月経周期を通じてＩＰレセプターｍＲＮＡ発現の経時的パターンも量的ＲＴ−ＰＣＲ法により評価した。ＩＰｍＲＮＡはＲＴ−ＰＣＲを行ったすべてのヒト子宮内膜試料において検出された（図１ｂ）。しかし、月経周期の後期増殖期（２．０９±０．５７；ｎ＝７；ｐ＜０．０１）、初期分泌期（３．１６±０．５６；ｎ＝１７；ｐ＜０．０１）又は後期分泌期（２．０８＋０．５５；ｎ＝５；ｐ＜０．０１）と比較して、初期増殖期（２３．２８±１２．８；ｎ＝６）において相対的発現が著しく高かった。
【０１２８】
月経周期を通して採取した十分な厚さのヒト子宮生検についてＰＧＩＳの免疫組織化学染色を行った。基質層（図２ｂ）及び機能的層（図２ｃ）の腺上皮細胞に細胞質及び核染色がみられた。間質性細胞反応も、微小血管系の内皮細胞染色と共に両層においてみられた（図２の矢印）。子宮筋平滑筋細胞は細胞質及び核反応の両方を示した（図２ａ挿入図）。
ＩＰ  ｍＲＮＡの発現部位についてインサイツハイブリダイゼーションにより分析した。月経周期の増殖期に採取した子宮試料にＩＰ反応が検出され、子宮筋平滑筋細胞（図３ａ及びｂ）及び全子宮層の血管に並ぶ内皮細胞に局在していた（図３ａ及びｃ）。また、基底層及び機能的層の腺上皮細胞の主には細胞質だけでなく核にも非常に発現がみられた（図３ｂ−ｄ）。間質性細胞発現は基底層及び機能的領域にみられた（図３ｂ−ｄ）。
【０１２９】
全月経周期にわたって、基底層及び機能的層の両方の腺上皮細胞の細胞質及び核にＩＰレセプタータンパク質の免疫組織化学染色が検出された（図５ａ−ｃ）。ＰＧＩＳ免疫反応と同様に、基底層（図５ｂ）と比較して機能的層（図５ｃ）においてＩＰレセプター間質性細胞染色がより強く、広範にみられた。また、ＩＰレセプタータンパク質の発現は、全微小血管系の内皮細胞に局在し、子宮筋平滑筋細胞に存在した。
ＩＰレセプターを介したシグナル伝達の研究のために、子宮内膜生検組織におけるイロプロスト処理に応答するｃＡＭＰ生成を評価した（図４）。生検試料では、分泌期（４．８３±０．７４対２．０７±０．３９；各群ｎ＝４；ｐ＜０．０５）と比較して、増殖期に採取した子宮内膜試料においてイロプロスト応答性のｃＡＭＰ生成が著しく高かった。
【０１３０】
子宮内膜の上皮及び間質性細胞の増殖におけるＩＰレセプターの潜在的役割を研究するために、イシカワ細胞及びＥＳ細胞をＩＰレセプター発現及びシグナル伝達について評価し、そして、更なる機能的研究に利用した。従来技術を用いたＩＰレセプターの３６４ｂｐフラグメントの増幅及び配列決定により両細胞型でのＩＰレセプターの発現が確認された（図６ａ）。さらに、イシカワ細胞及びＥＳ細胞でのｃＡＭＰ生成は１００ｎＭイロプロスト処理後に著しく上昇した(コントロール値のそれぞれ１６６％±２７．６％及び３７，９３６％±１８，４６４％；ｎ＝３；ｐ＜０．０５）  (図６b)。
最終的に、増殖に対するイロプロストの影響はイシカワ細胞及びＥＳ細胞で評価した（図７）。イロプロスト処理によりイシカワ細胞及びＥＳ細胞両方の増殖は著しく増加した(コントロール値のそれぞれ１０９．４％±２．４％及び１１２％±３．８％；ｐ＜０．０５）。
【０１３１】
検討
この研究により、ヒト子宮内膜におけるＰＧＩＳ及びＩＰレセプター遺伝子の発現が明らかとなり、月経中に両者が著しく上方制御されることが示された。ＰＧＩＳは標的組織でのＰＧＩ２合成を引き起こす終末酵素である(Kniss, D.A. (1999) J Soc Gynecol Investig 6, 285-292)。月経中のＰＧＩＳ発現レベルの上昇により、今回の所見が月経周期を通じてヒト子宮内膜によりＰＧＩ２分泌に経時的パターンがあることを示すことが証明される；ＰＧＩ２濃度は月経中の子宮静脈血中で最大となる(Goodfellow 等(1952) Thromb Haemost 48, 9-12)。月経中のＩＰレセプター発現の上昇によりＰＧＩ２合成及びＩＰレセプターが経時的に制御されて標的細胞にその効果を誘導することが示唆される。これは月経／増殖期に採取した子宮内膜にみられた最大イロプロスト誘導性ｃＡＭＰ応答により立証される。ＩＰレセプターはＧＳタンパク質に結合してｃＡＭＰ生成の増加に関連していることが示されている(Narumiya等 (1999) Physiol Rev 79, 11931226)。この研究でプロテインキナーゼＡのみが研究されているにもかかわらず、近年他のプロスタグランジンレセプターで示されているように、ＩＰレセプターがヒト子宮内膜での他のシグナル伝達経路を活性化していると予測される(Milne等 (2003) J Clin Endocrinol Metab 88, 1825-1832；Jabbour等 (2003) J Soc Gynaecol Invest (Supplement) 10, 75)。このような多様なシグナル伝達経路が、標的細胞に様々な表現形質変化をもたらす標的遺伝子の異なる活性化を引き起こすのであろう。
【０１３２】
ヒト子宮内膜において月経中にＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの発現を調節する因子は明らかでない。他のプロスタノイド及びそれらのレセプターで推論されているように、この経時的発現はステロイドホルモンにより調節されているようである(Milne等 (2001) J Clin Endocrinol Metab 86, 4453-4459；Milne等 (2003) J Clin Endocrinol Metab 88, 1825-1832)。エストラジオール−１７βは子宮内膜間質性細胞においてＰＧＩ２の分泌を刺激することが示されている(Levin等 (1992) Fertil Steril 58, 530-536)。これがＩＰレセプターの発現の上方制御に関与しているかどうかは不明である。また、ＩＰレセプターの発現はＰＧＩ２又は他のプロスタグランジンにより調節されうる。ＰＧＩＳの発現とＰＧＩ２の合成はＣＯＸ−２により引き起こされており(Caughey等 (2001) J lmmunol 167, 2831-2838)、月経期間中上方制御される(Jones等 (1997) Hum Reprod 12, 1300-1306)。また、子宮内膜内の局所メディエーターがＰＧＩ２合成の調節及び／又はそのレセプターの発現に関与しうることはもっとものように思われる。例えば、プロスタサイクリンは脈管構造に対してＶＥＧＦの保護的効果を示すメディエーターであり(Zachary, I. (2001) Am J Physiol Cell Physiol 280, C1375-1386)、ＰＧＩ２生合成はＥＲＫ媒介性ｃＰＬＡ２活性及びアラキドン酸流動化を介したＶＥＧＦにより上方制御される(Zachary & Gliki (2001) Cardiovasc Res 49, 568-581)。
【０１３３】
ＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの発現は共にヒト子宮内膜の多細胞区画に局在していた。これらは、間質性、腺上皮性、内皮性及び平滑筋細胞を含む。このことは、プロスタサイクリンがヒト子宮内膜内の自己分泌／傍分必様式に作用してその細胞内効果を誘導していることを示す。妊娠中及び妊娠していないヒト子宮筋の筋細胞、血管平滑筋細胞及び内皮細胞におけるＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの免疫反応は既に証明されている(Moonen等 (1986) Br J Obstet Gynaecol 93, 255-259；Chegini & Rao (1988) J Clin Endocrinol Metab 66, 76-87；Giannoulias等 (2002) J Clin Endocrinol Metab 87, 5274-5282)。我々の知る限り、これがヒト子宮内膜内の腺上皮性及び間質性細胞におけるＰＧＩＳ及びＩＰレセプター局在化についての初めての報告である。３［Ｈ］ＰＧＩ２を用いたオートラジオグラフィーによるヒト子宮組織についての以前の研究では、子宮筋平滑筋内のＰＧＩ２結合部位を明らかにしたものの、上皮細胞内のＰＧＩ２結合部位を明らかにできなかった(Chegini & Rao (1988) J Clin Endocrinol Metab 66, 76-87)。ここで示された所見の矛盾は用いた方法の感度における差異を反映している。興味深いことに、ＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの間質性発現は子宮内膜の機能的層で最も高い。閉経前の女性では、連続的月経周期の間にヒト子宮内膜に増殖とアポトーシスの期間が生じる。この期間は子宮内膜の機能的層に優先的にみられ、続く月経周期の増殖期の間に再生成される前の月経期で減少する。ゆえに、このＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの空間的-経時的発現は、調和を保つ際に月経中のその予測される役割にとって重要である。
【０１３４】
Baird等 ((1996) Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol 70, 15-17)は、子宮筋平滑筋と血管弛緩効果と血小板凝集阻害に基づいた月経期のＰＧＩ２の役割を仮定している。これはＰＧＦ２α等の他のプロスタグランジンの効果を弱め、血管収縮及び子宮筋平滑筋収縮を引き起こす(Crankshaw & Dyal (1994) Can J Physiol Pharmacol 72, 870-874)。また、ＰＧＩ２は血管平滑筋増殖の抑制及び内皮細胞生存亢進により内皮細胞に対して保護的効果を有するため、血管床の修復にも関与しているようである(Zachary, I. (2001) Am J Physiol Cell Physiol 280, C1375-1386)。また、月経中のＰＧＩＳ及びＩＰレセプター発現の増加は、月経過多の原因におけるＰＧＩ２の役割と一致している。月経出血機能不全の研究により既にこのことが証明され、コントロールに対して相対的に過剰出血欠損を示す女性の子宮組織において、ＰＧＩ２合成の増加(Smith等 (1981) Lancet 1, 522-524)、又はスロンボキサンＡ２に対してＰＧＩ２の相対的な合成増加(Makarainen & Ylikorkala (1986) Br J Obstet Gynaecol 93, 974-978)が明らかとなった。ＩＰレセプター発現及びシグナル伝達もまた月経機能不全女性の子宮内膜において亢進しているかどうかは確立されていない。
【０１３５】
子宮内膜間質性及び上皮性細胞におけるプロスタサイクリンの役割は不明である。これらの細胞は機能的ＩＰレセプターを発現することが示され、イロプロストで両細胞を処理するとわずかに細胞増殖が増加した。プロスタサイクリンは細胞の種類に応じて増殖抑制及び増殖刺激の両方の効果を有することが示されている(Clapp等 (2002) Am J Respir Cell Mol Biol 26, 194-201；Murphy & Fitzgerald (2001) Faseb J 15, 1667-1669)。しかし、子宮内膜上皮及び間質性細胞にみられたイロプロスト誘導性増殖は、他のプロスタグランジンで既に報告されているもの、例としてＰＧＥ２（２５％増加) (Jabbour & Boddy (2003) J Soc Gynaecol Invest (Supplement) 10, 75)及びＰＧＦ２α（３１％増加) (Milne & Jabbour (2003) J Clin Endocrinol Metab 88, 1825-1832)よりはるかに低い。この違いはＥＰ及びＦＰレセプターと比較してＩＰレセプター発現の経時的パターンに反映される。ＩＰレセプターの発現は月経期に最も高くなるのに対して、ＰＧＥ２（すなわちＥＰ４）及びＰＧＦ２α（ＦＰ）のレセプターの発現は中−後期増殖期に最大に検出される(Milne等 (2001) J Clin ,Endocrinol Metab 88, 4453-4459；Milne & Jabbour (2003) J Clin .Endocrinol Metab 88, 18251832)。間質性及び上皮性細胞におけるＩＰレセプターの発現により月経期に子宮内膜の血管機能に関与する遺伝子が誘導されると推測できる。ヒト子宮内膜の腺性及び／又は間質性細胞においてこれら遺伝子の多く、例としてＶＥＧＦ、アンギオポイエチン、ｂＦＧＦ、又は一酸化窒素が発現している(Gargett & Rogers (2001) Reproduction 121, 181-186；Hewett等 (2002) Am J Pathol 160, 773-780)。
【０１３６】
要約すれば、この研究により月経周期を通して妊娠していないヒト子宮内膜においてＰＧＩＳ及びＩＰレセプターの経時的発現が明らかとなった。両遺伝子の発現は、月経期に最も高くなり、子宮内膜及び子宮筋内の多細胞区画に局在している。ヒト子宮内膜のプロスタサイクリンの機能は月経中のプロテインキナーゼＡに関連している。さらに、子宮内膜間質性及び上皮性細胞をプロスタサイクリン類似体で処理すると増殖がわずかに増加する。将来的研究により、月経におけるプロスタサイクリンの役割とヒト子宮内膜におけるそのシグナル伝達機構が明らかにされるであろう。
【０１３７】
実施例２：月経過多のない女性と比較した月経過多女性の子宮組織におけるＩＰレセプターの発現。
月経周期の増殖期に正常な子宮機能を有する女性及び月経過多である女性からの生検から内皮組織を採取した。ＩＰレセプター抗体を用いて実施例１に記載の方法による免疫組織化学により１／５００の希釈率で組織を測定した(Fortier等(2001) Prostaglandins Leukol Essent Fatty Acids 65, 79-83)。
図８に示すように、正常な血液欠損の女性（Ｂ）と比較して月経過多の病歴を持つ女性（Ａ）の内皮組織でＩＰレセプターの発現が上昇した。
子宮内膜の血管及び腺性上皮性細胞の両方に染色がみられた。血管での染色により、プロスタサイクリンは血管機能への直接的影響、例として血液漏出の増加を引き起こす脈管構造の透過性増加があることを示唆した。
ゆえに、月経過多女性では、血管機能／機能欠損及び過剰出血を介するシグナル伝達及び標的遺伝子の最終的転写を遮断するためにＩＰレセプターアンタゴニストを用いて治療することの有用性が証明された。
【０１３８】
実施例３：ＩＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮癌の治療
子宮癌にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１３９】
実施例４：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストを用いた子宮癌の治療
子宮癌にかかった患者に、4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステル又は2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリンと、AH6809を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４０】
実施例５：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストを用いた子宮癌の治療
子宮癌にかかった患者に、(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸又は3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸と、AH23848Bを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４１】
実施例６：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＦＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮癌の治療
子宮癌にかかった患者に、2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-l-カルボキシル酸エチルエステルと、AL-313 S又はAL-8810を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４２】
実施例７：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターを用いた子宮癌の治療
子宮癌にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸と、ニメスリドを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４３】
実施例８：ＩＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮筋腫の治療
子宮筋腫にかかった患者に、4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステル又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４４】
実施例９：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストを用いた子宮筋腫の治療
子宮筋腫にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリンと、AH6809を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４５】
実施例１０：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストを用いた子宮筋腫の治療
子宮筋腫にかかった患者に、(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸又は3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸と、AH22921を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４６】
実施例１１：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＦＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮筋腫の治療
子宮筋腫にかかった患者に、2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸と、AL-3138又はAL-8810を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４７】
実施例１２：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターを用いた子宮筋腫の治療
子宮筋腫にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸と、ニメスリドを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４８】
実施例１３：ＩＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮内膜症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステルを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１４９】
実施例１４：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストを用いた子宮内膜症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステル又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸と、AH6809を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５０】
実施例１５：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストを用いた子宮内膜症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸と、AH2291を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５１】
実施例１６：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＦＰレセプターアンタゴニストを用いた子宮内膜症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリンと、AL-3138又はAL-8810を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５２】
実施例１７：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターを用いた子宮内膜症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステル又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸と、ニメスリドを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５３】
実施例１８：ＩＰレセプターアンタゴニストを用いた月経過多の治療
子宮内膜症にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５４】
実施例１９：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストを用いた月経過多の治療
子宮内膜症にかかった患者に、4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステル又は2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリンと、AH6809を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５５】
実施例２０：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストを用いた月経過多の治療
子宮内膜症にかかった患者に、(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸又は3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸と、AH2291を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５６】
実施例２１：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＦＰレセプターアンタゴニストを用いた月経過多の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-l-カルボキシル酸エチルエステルと、AL-3138又はAL-8810を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５７】
実施例２２：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターを用いた月経過多の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸と、ニメスリドを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５８】
実施例２３：ＩＰレセプターアンタゴニストを用いた月経困難症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１５９】
実施例２４：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストを用いた月経困難症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[5-(4-フルオロ-フェニル)ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-1-カルボキシル酸エチルエステルと、AH6809を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１６０】
実施例２５：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストを用いた月経困難症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオニン酸と、AH2291を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１６１】
実施例２６：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＦＰレセプターアンタゴニストを用いた月経困難症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、3-(5-フェニル-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニル-アミノ)-イソニコチン酸又は2-[5-(4-フルオロ-フェニル)-ベンゾフラン-2-イルメトキシカルボニルアミノ]-5-メタンスルホニルアミノ-安息香酸又は4-(4-{3-[4-(4,5-ジヒドロ-1H-イミダゾール-2-イルアミノ)-フェニル]-プロピオニル}-3-フルオロ-フェニル)-ピペラジン-l-カルボキシル酸エチルエステルと、AL-3138又はAL-8810を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１６２】
実施例２７：ＩＰレセプターアンタゴニスト及びＣＯＸ−２インヒビターを用いた月経困難症の治療
子宮内膜症にかかった患者に、2-[4-(4-イソプロキシベンゾイル)フェニル]アミノ-イミダゾリン又は(R)-3-(1H-ベンゾイミダゾール-2-イル)-2-(ビフェニル-4-イルメトキシカルボニルアミノ)-プロピオン酸と、ニメスリドを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。
【０１６３】
参考文献
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【図面の簡単な説明】
【０１６４】
【図１】図１ａ；月経周期を通じて得た子宮内膜生検でのＰＧＩ合成酵素ｍＲＮＡ発現の変化。相対的発現は、周期の増殖初期(10.36±4.58; n=6)と比較して、増殖後期(1.74±0.51; n=7; p<0.05)において著しく低かった。分泌初期(3.56±1.89; n=17; p=0.06)及び分泌後期(1.42±0.29;n=4; p=0.068)においては発現が低かった。図１ｂ；月経周期を通じて得た子宮内膜生検でのＩＰレセプターｍＲＮＡ発現の経時的変化。相対的発現は、増殖初期(23.28±12.8; n=6)と比較して、増殖後期(2.09±0.57; n=7; p<0.01)、分泌初期(3.16±0.56; n=17; p<0.005)及び分泌後期(2.08±0.55; n=5; p<0.01)において著しく低かった。
【図２】月経周期の増殖初期、増殖後期（ｂ）、及び分泌初期（ａ）に採取した十分な厚さを有した子宮内膜組織におけるＰＧＩ合成酵素の免疫組織学的局在。線上皮性細胞(G)、基底部(B)、機能性部分(F)層、及び表面上皮(SE)において強い染色がみられた。機能的層(c)及び基底層(b)に間質性染色がみられた。Strong staining was present in smooth muscle cells in the 子宮筋層(Myo)の平滑筋細胞に強い染色がみられ、全ての層の血管に内皮性反応がみられた(a、b及びc挿入図の矢印)。
【図３】月経周期の増殖中期に採取したヒト子宮内膜組織部位に対するＩＰレセプタープローブを用いたインサイツハイブリダイゼーション。（ａ）平滑筋細胞及び血管の反応が見られる子宮筋層にＩＰレセプターが発現した（矢印）。基底層（ｂ）及び機能的層（ｃおよびｄ）の上皮細胞（Ｇ）及び間質細胞ではいくらかの染色がみられたが、その染色は子宮筋層（Ｍ）よりも弱かった。また、基底層及び機能的層の間質性細胞及び子宮内膜中の血管（ＢＶ）の上皮細胞にもＩＰレセプター発現がみられた（矢印）。
【図４】１００ｎＭのイロプロストに対する子宮内膜生検組織でのサイクリックＡＭＰ生成。月経周期の増殖期に採取した試料にイロプロストを加えて１０分間インキュベーションした結果、ｃＡＭＰの生成は、分泌期に採取した試料(各群n=4 ; p<0.05)が2.07±0.38倍に対して、4.83±0.74倍であった。
【図５】月経周期の増殖期に採取したヒト子宮内膜組織（機能的層及び基底-子宮筋層結合）におけるＩＰレセプターの免疫組織学的局在。基底層（Ｂ）及び機能的層（Ｆ）の両方に腺性上皮性染色（Ｇ）がみられ、子宮筋層（Ｍ）の平滑筋細胞に反応が検出された(図５ａ−ｃ)。子宮内膜中の間質性細胞に染色がみられたが、基底層(図５ｂ)と比較して機能的層におけるものが強かった(図５ｃ)。子宮内膜中及び基底層−子宮筋層結合部の内皮細胞にもＩＰレセプターに対するポジティブな反応を示した（図４ｂ及びｃに矢印で示す）。NEG=ネガティブコントロール;大きさの基準＝50 μEm。
【図６】イシカワ及びＥＳ細胞におけるＩＰレセプターの発現及びシグナル伝達。図６ａ；子宮内膜組織(レーンA)、ES細胞(レーンB)、及びイシカワ細胞(レーンC)におけるヒトＩＰレセプターの３６４ｂｐフラグメントのＰＣＲ増幅。レーンDはwater blank及びＭはＤＮＡマーカーである。図６ｂ；１００ｎＭのイロプロストに対するイシカワ及びＥＳ細胞におけるサイクリックＡＭＰ生成(n=3)。結果をｃＡＭＰ誘発での増加割合を平均値±ＳＥＭとして表す。
【図７】２４時間の１００ｎＭのイロプロストに反応するイシカワ細胞(n=5)及びＥＳ細胞(n=6)での増殖。結果を増殖での増加割合を平均値±ＳＥＭとして表す。
【図８】過剰な血液欠損（Ａ）または正常な血液欠損（Ｂ）の女性から回収したヒト子宮内膜でのＩＰレセプター発現の免疫組織化学。切片ＣはＤＡＢ染色した組織のネガティブコントロールである。矢印は血管を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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