(57)【要約】  本発明はHIVとSIVを含めた霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原を使用してネコ科動物をFIV感染から防御するための方法と組成物に関する。本発明のワクチン組成物をネコ科動物に接種するための方法が開示される。本発明の方法と組成物によりワクチン接種したネコ科動物はFIVチャレンジ接種を受けるとFIVに対する防御的な体液性および細胞性免疫反応を示す。【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の有効量をネコ科動物に投与するステップを含む、該動物のネコ免疫不全ウイルス感染を抑制または予防するための方法。
【請求項２】
霊長類免疫不全ウイルスはヒト免疫不全ウイルス(HIV)またはサル免疫不全ウイルス(SIV)である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
HIV-1はHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
免疫原はウイルス感染細胞または無細胞全粒子ウイルスである、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
ウイルスは不活化または弱毒化のための処理を受けるかまたは非複製型である、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
ウイルスはパラホルムアルデヒド、ホルマリン、フェノール、UV光または熱による処理で不活化または弱毒化される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリペプチドまたはその免疫原性断片である、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
ポリペプチドは霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子によってコードされる、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
ポリペプチドはgp120およびgp160からなる群より選択されるエンベロープタンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１１】
ポリペプチドはSEQ ID NO: 1またはSEQ ID NO: 5で示されるアミノ酸配列を含むHIVエンベロープタンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１２】
ポリペプチドはHIVのp24タンパク質またはその免疫原性断片、もしくはSIVのp27タンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１３】
p24タンパク質はHIV-1UCD1のp24タンパク質である、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリヌクレオチド配列を含む組み換えウイルスまたは組み換え発現コンストラクトである、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
ポリヌクレオチド配列はHIV-1、HIV-2またはSIV配列である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
ポリヌクレオチド配列は霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子もしくはその免疫原性断片を1つまたは複数含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１７】
ポリヌクレオチド配列はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片をコードする、請求項14に記載の方法。
【請求項１８】
方法は霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の投与に続いてネコ免疫不全ウイルス(FIV)に由来する免疫原を有効量投与するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１９】
免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備または投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２０】
免疫原は該免疫原に対する動物の免疫反応を増進する1つまたは複数のアジュバントと共に準備または投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２１】
免疫原は皮下、腹腔内、筋内、経口または経鼻投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２２】
アジュバントはトレオニル・ムラミルジペプチド(MDP)、細胞壁骨格(CWS)成分を含むRibiアジュバントシステム成分、フロインド完全アジュバント、フロインド不完全アジュバント、ミョウバン、水酸化アルミニウムおよびサポニンからなる群より選択される、請求項20に記載の方法。
【請求項２３】
免疫原はサイトカインまたはリンホカインと組み合せて投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２４】
サイトカインまたはリンホカインはネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインである、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
免疫原はインターロイキン-12、インターロイキン-15またはインターロイキン-18と組み合せて投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２６】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスの免疫原性または抗原性ペプチドを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２７】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原を有効量ネコ科動物に投与するステップを含む、該動物のFIVに対する免疫反応を抑制または生成するための方法。
【請求項２８】
霊長類免疫不全ウイルスはヒト免疫不全ウイルス(HIV)またはサル免疫不全ウイルス(SIV)である、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
HIV-1はHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
免疫原はウイルス感染細胞または無細胞全粒子ウイルスである、請求項27に記載の方法。
【請求項３２】
ウイルスは不活化または弱毒化のための処理を受けるかまたは非複製型である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
ウイルスはパラホルムアルデヒド、ホルマリン、フェノール、UV光または熱による処理で不活化または弱毒化される、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリペプチドまたはその免疫原性断片である、請求項27に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドは霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子によってコードされる、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
ポリペプチドはgp120およびgp160からなる群より選択されるエンベロープタンパク質またはそれら免疫原性断片である、請求項34に記載の方法。
【請求項３７】
ポリペプチドはHIVのp24タンパク質またはその免疫原性断片、もしくはSIVのp27タンパク質またはその免疫原性断片である、請求項34に記載の方法。
【請求項３８】
p24タンパク質はHIV-1UCD1のp24タンパク質である、請求項37に記載の方法。
【請求項３９】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリヌクレオチド配列を含む組み換えウイルスまたは組み換え発現コンストラクトである、請求項27に記載の方法。
【請求項４０】
ポリヌクレオチド配列はHIV-1、HIV-2またはSIV配列である、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
ポリヌクレオチド配列は霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子もしくはその免疫原性断片を1つまたは複数含む、請求項39に記載の方法。
【請求項４２】
ポリヌクレオチド配列はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片をコードする、請求項39に記載の方法。
【請求項４３】
方法は霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の投与に続いてネコ免疫不全ウイルス(FIV)に由来する免疫原を有効量投与するステップをさらに含む、請求項27に記載の方法。
【請求項４４】
免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備または投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４５】
免疫原は該免疫原に対する動物の免疫反応を増進する1つまたは複数のアジュバントと共に準備または投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４６】
免疫原は皮下、腹腔内、筋内、経口または経鼻投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４７】
アジュバントはトレオニル・ムラミルジペプチド(MDP)、細胞壁骨格(CWS)成分を含むRibiアジュバントシステム成分、フロインド完全アジュバント、フロインド不完全アジュバント、ミョウバン、水酸化アルミニウムおよびサポニンからなる群より選択される、請求項45に記載の方法。
【請求項４８】
免疫原はサイトカインまたはリンホカインと組み合せて投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４９】
サイトカインまたはリンホカインはネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインである、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
免疫原はインターロイキン-12、インターロイキン-15またはインターロイキン-18と組み合せて投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項５１】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスの免疫原性または抗原性ペプチドを含む、請求項27に記載の方法。
【請求項５２】
免疫反応は細胞性免疫反応である、請求項27に記載の方法。
【請求項５３】
免疫反応は体液性免疫反応である、請求項27に記載の方法。
【請求項５４】
免疫原はヘルパーTサイトカインおよび細胞傷害性Tリンパ球(CTL)細胞毒素の産生を誘導する、請求項27に記載の方法。
【請求項５５】
HIVとFIVの間で進化的に保存されているウイルスタンパク質のエピトープを選別するための方法であって、
a)  HIVを該HIVに感染している長期未発症者から分離するステップ;
b)  該HIVに由来する免疫原をネコ科動物に予防接種するステップ;
c)  該ネコ科動物に感染性FIVをチャレンジ接種するステップ; および
d)  該ネコ科動物が該FIVの感染から防御されているかどうかを判定するステップ;
を含み、該ネコ科動物を感染防御する免疫原は該HIVと該FIVの間で進化的に保存されているエピトープを含む免疫原の指標であることを特徴とする方法。
【請求項５６】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原とネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインとを含む組成物。
【請求項５７】
ネコ・リンホカインはインターロイキンである、請求項56に記載の組成物。
【請求項５８】
インターロイキンはIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21およびIL-22からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項５９】
インターロイキンはIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項６０】
霊長類免疫不全ウイルスはHIVまたはSIVである、請求項57に記載の組成物。
【請求項６１】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項60に記載の組成物。
【請求項６２】
HIV-1ウイルスはHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項61に記載の組成物。
【請求項６３】
免疫原はHIVのenv, pol, gag, tat, rev, vif, vpr, vpu, vpxまたはnef遺伝子のポリヌクレオチド配列を含む、請求項57に記載の組成物。
【請求項６４】
免疫原はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片を含む、請求項57に記載の組成物。
【請求項６５】
免疫原はHIV p24ポリペプチドまたはその免疫原性断片であり、またインターロイキンはネコIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項６６】
1つまたは複数の容器に
a)  霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原; および
b)  ネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカイン
を含むキット。
【請求項６７】
ネコ・リンホカインはインターロイキンである、請求項66に記載のキット。
【請求項６８】
インターロイキンはIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21およびIL-22からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項６９】
インターロイキンはIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項７０】
霊長類免疫不全ウイルスはHIVまたはSIVである、請求項66に記載のキット。
【請求項７１】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項70に記載のキット。
【請求項７２】
HIV-1ウイルスはHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項71に記載のキット。
【請求項７３】
免疫原はHIVのenv, pol, gag, tat, rev, vif, vpr, vpu, vpxまたはnef遺伝子のポリヌクレオチド配列を含む、請求項66に記載のキット。
【請求項７４】
免疫原はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片を含む、請求項66に記載のキット。
【請求項７５】
免疫原はHIV p24ポリペプチドまたはその免疫原性断片であり、またインターロイキンはネコIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項７６】
免疫原はヘルパーTサイトカインおよび細胞傷害性Tリンパ球(CTL)細胞毒素の産生を誘導する、請求項1に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明には米国政府の、国立衛生研究所助成第NIH AI30904号による研究プロジェクト支援があった。米国政府は本発明に対し一定の種の権利を有する。
関連出願の相互参照
本願は2003年5月12日提出の米国仮出願第60/470,066号の利益を主張しており、同願は諸々の図面、核酸配列、アミノ酸配列および表を含めてその全体が本願に援用される。
【背景技術】
【０００２】
飼いネコはネコ白血病ウイルス(FeLV)やネコ肉腫ウイルス(FeSV)、内在性C型オンコルナウイルス(RD-114)、ネコ合胞体形成ウイルス(FeSFV)などを含む数種のウイルスに感染しやすい。なかでもFeLVは最重要の病原体であり、リンパ細網系および骨髄性腫瘍や貧血症、免疫性疾患、およびヒト後天性免疫不全症候群(AIDS)に似た免疫不全症候群などを含む多様な病状を引き起こす。最近、FeLV-AIDSという特殊な非複製型FeLV変異体が特に免疫抑制性とますます関連付けられるようになってきた。
【０００３】
ネコT細胞白血病レンチウイルス(今日でいうネコ免疫不全ウイルス、FIV)の発見はPedersen et al. (1987)で最初に報告された。FIVの特性はYamamoto et al.(1988a); Yamamoto et al.  (1988b); およびAckley et al.(1990)で報告されている。血清疫学データによれば、FIV感染は世界中の飼育および野生ネコ科動物に特有である。FIV感染には流産、脱毛症、貧血症、結膜炎、慢性鼻炎、腸炎、歯肉炎、血便、神経障害、歯周炎および脂漏性皮膚炎などを含む多種多様な病状が伴う。FIVに感染した飼いネコの免疫学的特徴はCD4陽性末梢血リンパ球の慢性進行性減少、CD4/CD8細胞比の低下、および場合によってはCD8陽性リンパ球の増加である。ネコのFIV感染は今日では分子的、生化学的、免疫病理学的な特性から、FeLV-FAIDSよりも優れたネコAIDSモデルであるとみなされる。
【０００４】
FIVのクローニングおよび配列解析はOlmsted et al.(1989a); Olmsted et al.(1989b); およびTalbott et al.(1989)で報告されている。Hosie and Jarrett (1990)はFIV感染ネコの血清反応を報告している。FIVのサブタイプは、各株によって誘導される交差中和抗体のレベルに基づく免疫型に従って分類することができる(Murphy and Kingsbury, 1990)。最近では、ウイルスのサブタイプへの分類がヌクレオチド配列の相同性に基づく遺伝子型に従って行われる(Sodora et al., 1994; Rigby et al., 1993; およびLouwagie et al, 1993)が、サブタイプの遺伝子型と免疫型の間の相関についてはあまり分かっていない。FIVウイルス分離株は4つのFIVサブタイプ(A、B、C、D)に分類されてきた(Kakinuma et al., 1995)。サブタイプCを除くすべてのFIVサブタイプについて感染性分離株と感染性分子クローンが開示されている(Sodora et al., 1994)。サブタイプC FIVはカナダ産ネコの細胞DNAからしか同定されていない(Sodora et al., 1994; Rigby et al., 1993; およびKakinuma et al., 1995)。公知FIV株の例は次のとおり(括弧内はサブタイプ名): Petaluma (A), Dixon (A), UK8 (A), Dutch113 (A), Dutch19K (A), UK2 (A), SwissZ2 (A), Sendai-1 (A), USCAzepy01A (A), USCAhnky11A (A), USCAtt-10A (A), USCAlemy01 (A), USCAsam-01A (A), PPR (A), FranceWo, Netherlands, Bangston (A/B), Aomori-1 (B), Aomori-2 (B), USILbrny03B (B), TM2 (B), Sendai-2 (B), USCKlgri02B (B), Yokohama (B), USMAsboy03B (B), USTXmtex03B (B), USMCglwd03B (B), CABCpbar03C (C), CABCpbar07C (C), CABCpady02C (C), Shizuoka (D)およびFukuoka (D)。
【０００５】
FIV由来免疫原のワクチンへの使用に対する1つの懸念は、ネコがFIVまたはFIVタンパク質に対する抗体試験で陽性となったとき、その結果がFIV感染のせいなのか、それともFIV由来免疫原を使用したFIV予防ワクチン接種の結果なのか、獣医師には判断しかねるのではないかという問題である。
【発明の開示】
【０００６】
発明の要約
本発明はHIVとSIVを含めた霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原を使用してネコ科動物をFIV感染から防御するための方法と組成物に関する。本発明のワクチン組成物をネコ科動物に接種するための方法と組成物を開示する。本発明の方法と組成物によりワクチン接種したネコ科動物はFIVチャレンジ接種を受けてもFIVに対する防御免疫反応を示す。
本発明はまた、免疫不全ウイルス間で進化的に保存されているエピトープの選別方法に関する。本発明の方法を使用して同定される免疫不全ウイルスの進化的保存エピトープもまた本発明の一部を構成する。本発明はさらに、HIVやSIVなどのような免疫不全ウイルスから人間および他動物を防御するための方法に関する。
【０００７】
配列の簡単な説明
SEQ ID. NO:1はHIV-1UCD1エンベロープタンパク質のアミノ酸配列である。
SEQ ID. NO:2はHIV-1UCD1 gagタンパク質のアミノ酸配列である。
SEQ ID. NO:3はエンベロープタンパク質をコードするHIV-1UCD1ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
SEQ ID. NO:4はgagタンパク質をコードするHIV-1UCD1ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
SEQ ID. NO:5はHIV-1IIIBエンベロープタンパク質のアミノ酸配列である。
SEQ ID. NO:6はHIV-1IIIB gagタンパク質のアミノ酸配列である。
SEQ ID. NO:7はエンベロープタンパク質をコードするHIV-1IIIBポリヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
SEQ ID. NO:8はgagタンパク質をコードするHIV-1IIIBポリヌクレオチドのヌクレオチド配列である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
発明の詳細な説明
本発明はヒト免疫不全ウイルス(HIV)やサル免疫不全ウイルス(SIV)などのような霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原をネコ科動物に投与することにより該動物をFIV感染から防御するための方法と組成物に関する。一実施態様では、霊長類免疫不全ウイルスに由来する単数または複数の免疫原を含む有効量の組成物をネコ科動物に投与する。加えて、本明細書で開示する種々の免疫原組成物は互いに別々に、または組み合せて、使用することができる。
【０００９】
本発明はFIV感染に対する防御を見込むが、その場合にFIVまたはFIV免疫原または抗原に対する動物の免疫反応がFIV感染に対する防御免疫の結果なのかそれともFIV感染の結果なのかを、獣医または他の当業者は動物体内における免疫反応の生成から判断しうるのが有利である。一実施態様では、本発明のワクチン組成物を予防ワクチンとして接種した動物はFIV gp95と交差反応する抗体を産生しない。FIVにすでに感染している動物またはFIV由来の免疫原または抗原を含むワクチンの投与をすでに受けている可能性のある動物はFIV gp95に結合する抗体を産生する。本発明の範囲内に包摂されるネコ科動物の例は飼いネコ、野生ネコおよび他の野生のネコ科動物(ボブキャット、クーガー、マウンテンライオン、トラ、ジャガー、ヒョウ、ピューマ、チーター、ライオンなど)である。
【００１０】
本発明ではまた、HIVやSIVなどのような霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原を使用してネコ科動物にFIVに対する細胞性および/体液性免疫反応を引き起こすようにすることもできる。一実施態様では、FIVに対する免疫反応を誘導するに足る量の免疫原をネコ科動物に投与する。HIVに感染していない健康なヒトに由来するPBMC(末梢血単核細胞)を指標細胞として使用して予防接種ネコに由来する血清抗体を検査すれば、HIVに対するウイルス中和抗体活性の有無が判別できる。予防接種ネコに由来するリンパ球の検査ではHIV特異的ヘルパーT(Th)、細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の両活性の有無がわかる。Th活性とCTL活性は、免疫原株と同じ(同種)であるかまたは異なる(異種)不活化全粒子ウイルスによるin vitro刺激に応答して非予防接種ネコと予防接種ネコによって産生されるThサイトカインとCTL細胞毒素のレベルによって測定することができる。in vitro刺激に使用する不活化異種株は免疫原株と同じサブタイプ、異なるサブタイプのいずれに由来してもよい。好ましい免疫原は予防接種ネコに由来するCD4陽性Tリンパ球を加えた培地中で高レベルのThサイトカインを産生し、また指標的である。同様に、好ましい免疫原は予防接種ネコに由来するCD8陽性Tリンパ球による高レベルのCTL細胞毒素の産生をもたらす。
【００１１】
本発明の範囲内に包摂される霊長類免疫不全ウイルスの例はHIVとSIVである。HIVはHIV-1、HIV-2いずれでもよい。HIV-1はHIV-1IIIB、HIV-1UCD1、HIV-1LAVおよびHIV-1BRUなど数種の株が公知である。本明細書に盛り込んだ例示の実施態様では、本発明の免疫原はHIV-1IIIBおよび/またはHIV-1UCD1という名称のHIV-1株に由来する。本発明の範囲内に含まれるSIVはSIVsyk、SIVsmm、SIVmac、SIVmnd、SIVl’hoest、SIVagmおよびSIVcpzである(Whetter et al., 1999)。多数のHIVおよびSIV遺伝子のヌクレオチド配列が学術文献に記載され、NCBI Genbankなどのような配列データバンクに寄託され、また公開特許出願および発行特許の明細書で開示されている。たとえばHIV-1およびHIV-2分離株の完全ゲノム配列はGenbankアクセッションナンバーNC 001802およびNC 001722で開示されている。同様に、HIVおよびSIV遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列もすでに開示されており、技術上周知である。HIVの配列もまた、ウェブサイトで閲覧可能なデータベースで開示されている(http://www.hiv.lanl.gov/content/index)。霊長類免疫不全ウイルスのタンパク質コード遺伝子はenv, gag, polおよびnefなどである。
【００１２】
霊長類免疫不全ウイルス由来の免疫原は単離体でもよいし、任意好適の組成物の形で準備してもよい。好ましくは、霊長類免疫不全ウイルス由来の免疫原は組成物の形で準備し、ネコ科動物に該免疫原に対する強い細胞性および体液性免疫反応を誘発するような形態で投与する。一実施態様では、免疫原はウイルス感染細胞または無細胞全粒子ウイルスの形で準備する。ウイルス感染細胞中のウイルスと無細胞ウイルスは不活化または弱毒化処理することができる。ウイルスを不活化または弱毒化する方法は技術上周知であり、たとえばパラホルムアルデヒド、ホルマリン、フェノール、UV光、熱よる処理などがある。米国特許第6,503,753号明細書はHIV逆転写酵素の光不活化によるHIVウイルス不活化方法を開示している。非複製型の霊長類免疫不全ウイルスを準備する方法もある。米国特許第6,500,623号明細書はHIV非複製型ウイルス粒子とその生産手段を開示している。不活化、弱毒化および非複製型の各ウイルスを生産する他の手法は技術上周知である。
【００１３】
別の実施態様では、本発明の免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのウイルスタンパク質またはその免疫原性断片または変異体に由来する。本発明に免疫原として使用しうるタンパク質の非限定的な例はenv, gag, pol, tat, revおよび/またはnef遺伝子がコードするタンパク質である。一実施態様では、本発明に使用しうる、env遺伝子がコードするエンベロープタンパク質の例はエンベロープタンパク質gp120およびgp160とその断片、gp120およびgp160の融合体、それにgp120およびgp160の変異体(gp120およびgp160の糖鎖形成変異体を、非糖鎖形成体を含めて、含む)である。ある細胞タンパク質はgp160をgp41部分とgp120部分に開裂させる。gp41部分はエンベロープタンパク質の膜貫通領域を含むのに対して、gp120は感染細胞またはビリオンの表面に位置する。gp120分子は約60kDのポリペプチドコアからなるが、N結合型糖鎖形成によりタンパク質分子量を約120kDに増大させることができる。本発明に使用するウイルスエンベロープタンパク質は非短縮形、短縮形のいずれでもよい(米国特許第5,849,533号明細書などを参照)。エンベロープタンパク質の変異体は米国特許第5,846,546号明細書で開示されている。免疫学的にHIV gp120および/またはgp160エンベロープタンパク質に類似する合成ペプチドもまた、本発明に使用することができる(米国特許第5,763,160号明細書などを参照)。例示の実施態様では、HIV-1IIIB由来のgp120、gp160エンベロープタンパク質の組み合わせを免疫原として使用する。一実施態様では、HIV-1UCD-1のエンベロープポリペプチドはSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含む。一実施態様では、HIV-1IIIBのエンベロープポリペプチドはSEQ ID NO: 5のアミノ酸配列を含む。
【００１４】
霊長類免疫不全ウイルスgag遺伝子がコードするタンパク質たとえばHIVのp17マトリックスタンパク質、p24キャプシドタンパク質およびp7ヌクレオキャプシドタンパク質; SIVのp27タンパク質; それらの断片および変異体もまた本発明に使用することができる。例示の実施態様では、HIV-1UCD-1のp24タンパク質を免疫原として使用する。一実施態様では、HIV-1UCD-1のp24ポリペプチドはSEQ ID NO: 2のアミノ酸132〜362を含む。一実施態様では、HIV-1IIIBのp24ポリペプチドはSEQ ID NO: 6のアミノ酸132〜363を含む。p24タンパク質の免疫ペプチド断片は米国特許第5,700,469号明細書で開示されている。霊長類免疫不全ウイルスpol遺伝子がコードするタンパク質たとえばHIVの逆転写酵素(RT)、プロテアーゼ(PR)、およびリボヌクレアーゼ(Rnase)、それらの断片および変異体もまた本発明に使用することができる。HIV pol遺伝子の3’末端でコードされるタンパク質であるHIVエンドヌクレアーゼタンパク質p31、その断片および変異体もまた本発明に使用することができる。HIV p31タンパク質の免疫ペプチド断片は米国特許第5,401,628号明細書で開示されている。霊長類免疫不全ウイルスのtatおよびrev遺伝子がコードする調節タンパク質、霊長類免疫不全ウイルスのnef, vif, vpr, vpuおよびvpx遺伝子がコードする付属タンパク質、これらのタンパク質の断片および変異体もまた本発明に使用することができる。
霊長類免疫不全ウイルスの免疫原または抗原領域に対応するペプチドは組み換え法で合成または調製し、本発明の方法に使用することができる。一実施態様では、霊長類免疫不全ウイルスタンパク質の重複断片に対応するペプチドを調製し、本発明の方法に使用することができる。本発明の方法による動物への予防接種には、ペプチド断片の任意好適の組み合わせを使用することができる。たとえばウイルスタンパク質のカルボキシル末端領域に対応するペプチド断片を該タンパク質のアミノ末端領域または膜貫通領域に対応するペプチド断片と併用することができる。
【００１５】
霊長類免疫不全ウイルスのヌクレオチド配列たとえばHIVまたはSIVのenv, gag, pol, tat, rev, nef, vif, vpu, vpr, gag/polまたはenv-gag/pol配列、またはそれらの断片または変異体を含む組み換えウイルスまたはウイルスベクター系発現コンストラクトもまた本発明への使用が見込まれる。本発明との併用が見込まれるのは組み換えベクター/HIVまたは組み換えベクター/SIVコンストラクトの調製に使用することができる任意好適のウイルスベクターである。たとえばアデノウイルス、アビポックスウイルス、ネコ・ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、カナリア痘ウイルス、エントモ(昆虫)ポックスウイルス、豚痘ウイルスなど技術上周知のウイルスに由来するウイルスベクターは本発明の組成物および方法と併用することができる。HIVまたはSIV構成要素をコードし適当な宿主細胞中で発現することができる組み換えポリヌクレオチドベクターは技術上周知の標準遺伝子工学手法を用いて構築することができる。
【００１６】
1つまたは複数の霊長類免疫不全ウイルスタンパク質、またはその断片または変異体をコードする核酸を含むDNAまたはRNAワクチンもまた、本発明への使用が見込まれる。該核酸はプラスミドまたは真核生物発現コンストラクトの形で準備してもよい。DNAワクチンおよび組成物はたとえば公開特許出願第20040076632号、第20040047878号、第20040009941号、第20020156037号、第20020032165号および第20010004531号の各明細書で開示されている。
【００１７】
用語「発現コンストラクト」は本明細書では作動可能に連結された核酸配列の転写をもたらすような核酸配列の組み合せをいう。用語「作動可能に連結された」は本明細書では、開示の構成要素の並列であって、各構成要素がその本来の機能を果たせるような関係にあることを特徴とする並列をいう。一般に作動可能に連結された構成要素は隣接関係にある。
【００１８】
本発明の発現コンストラクトはまた一般に、該発現コンストラクトの発現の場となる所期の宿主細胞中で作動する調節配列を含む。従って当業者は、たとえば細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、植物宿主細胞、昆虫宿主細胞、哺乳動物宿主細胞およびヒト宿主細胞に使用するための調節配列を選定することができる。調節配列の例はプロモーター、転写終結配列、翻訳終結配列、エンハンサー、およびポリアデニル化配列などである。
【００１９】
本発明の発現コンストラクトは随意に、本発明のペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含む。プロモーターは技術上周知の標準手法を用いてポリヌクレオチド中に組み込むことができる。本発明の発現コンストラクトには複数コピーのプロモーターまたは複数プロモーターを使用することができる。好ましい実施態様では、プロモーターの転写開始部位からの位置は天然遺伝子環境の場合とほぼ同じ距離にすることができる。この距離は多少の増減があっても許容され、それによるプロモーター活性の著しい低減はない。転写開始部位は発現コンストラクトに含めるのが一般的である。
【００２０】
動物細胞中での発現なら、本発明の発現コンストラクトはポリヌクレオチド配列の転写を促進しうるような好適なプロモーターを含むことができる。該細胞が哺乳動物細胞なら、発現コンストラクトに使用しうるプロモーターはたとえばアクチン・プロモーター、メタロチオネイン・プロモーター、NF-κBプロモーター、EGRプロモーター、SREプロモーター、IL-2プロモーター、NFATプロモーター、オステオカルシン・プロモーター、SV40初期プロモーターおよびSV40後期プロモーター、Lckプロモーター、BMP5プロモーター、TRP-1プロモーター、マウス乳腺がんウイルスLTR(末端反復配列)プロモーター、STATプロモーター、または免疫グロブリン・プロモーターである。
【００２１】
本発明の発現コンストラクトは随意に、転写終結配列、翻訳終結配列、シグナルペプチド配列、および/またはエンハンサー配列を含む。転写終結配列は一般に真核生物またはウイルス遺伝子の3’非翻訳領域から得ることができる。転写終結配列は、効率的な終結をもたらすために、コード配列の下流に配置させることができる。シグナルペプチドは一群の短いアミノ酸配列であり、作動可能に連結されたペプチドの、(特定の細胞小器官からタンパク質作用部位および細胞外環境に至るまでの)多種多様な翻訳後行き先への移行を引き起こす情報をコードしている。作動可能に連結されたシグナルペプチド配列を使用してペプチドを細胞内および/または細胞外の所期の行き先へと誘導する方法は、本発明の免疫原との併用が見込まれる。遺伝子の転写を増進するシス調節配列である化学エンハンサーもまた発現コンストラクトに含めることができる。化学エンハンサー配列は技術上周知であり、その非限定的な例はサイトメガロウィルス(SMV)初期プロモーターエンハンサー配列やSV40エンハンサー配列である。構造遺伝子によってコードされるmRNAのポリアデニル化を導くDNA配列もまた発現コンストラクトに含めることができる。
【００２２】
発現コンストラクトの5’末端と3’末端には制限部位を設けて、ポリヌクレオチドベクターへの挿入を可能にすることができる。用語「ベクター」は本明細書では、適正な制御要素と結び付けば複製が可能でありかつ細胞間でポリヌクレオチド配列を転移しうるような任意の遺伝要素たとえばプラスミド、コスミド、染色体、ファージ、ウイルスなどをいう。ベクターは特定宿主細胞中で自己複製を可能にするようなヌクレオチド配列を含む。多数のベクターが発現用および/またはクローニング用として入手可能であり、その非限定的な例はpBR322、pUCシリーズ、M13シリーズ、およびpBLUESCRIPTベクター(Stratagene, La Jolla, CA)などである。
【００２３】
本発明のポリヌクレオチド、ベクターおよび発現コンストラクトはリポフェクション法(合成カチオン性脂質から調製したリポソームによるDNAトランスフェクション)でin vivo導入することもできる(Felgner et al., 1987)。本発明のポリヌクレオチド、ベクターまたは発現コンストラクトを封入するためのリポソームの調製には合成カチオン性脂質(LIPOFECTIN; Invitrogen Corp., La Jolla, CA)を使用することができる。本発明のポリヌクレオチド、ベクターまたは発現コンストラクトはまた、技術上周知の方法たとえばトランスフェクション法、マイクロインジェクション法、エレクトロポレーション法、リン酸カルシウム沈殿法、バイオリスティック法などにより、裸DNAとして導入することもできる。
【００２４】
用語「核酸」および「ポリヌクレオチド配列」は本明細書では、一本鎖または二本鎖のデオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド高分子をいい、特に断らない限り天然ヌクレオチドと似たように機能しうる天然ヌクレオチドの公知のアナログを包含する。該ポリヌクレオチド配列はRNAへと転写されるDNA配列とタンパク質へと翻訳されるRNAの両方を含む。該ポリヌクレオチド配列は完全長配列と完全長配列に由来する短縮配列の両方を含む。特定のポリヌクレオチド配列は当然、特定宿主細胞にコドン選好をもたらすために導入される場合がある天然配列の縮重コドンを含む。本発明の範囲内のポリヌクレオチド配列はさらに、例示の配列と特異的にハイブリダイズする配列を含む。該ポリヌクレオチドはセンス鎖とアンチセンス鎖のどちらも、一本鎖または二本鎖として含む。
【００２５】
本発明の方法は本発明のワクチン組成物による一次免疫を見込む。後続の免疫または二次免疫もまた該方法の範囲内に見込まれる。二次免疫に使用するワクチン組成物は一次免疫に使用する組成物と同じでも異なってもよい。たとえば、ある動物の一次免疫には単数または複数の株構成要素をもつ組み換えベクター系HIVまたはSIVコンストラクトを使用し、二次免疫にはHIVまたはSIV感染細胞株、またはHIVまたはSIVポリペプチド、または無細胞HIVまたはSIVウイルスを含み、またやはり単数または複数の株構成要素をもつワクチン組成物を使用してもよい。一次免疫にはHIVおよび/またはSIV DNAワクチンを使用してもよい。一実施態様では、組み換えベクターコンストラクトを一次免疫に使用し、タンパク質(またはタンパク質+組換えベクターコンストラクト)サブユニットワクチン組成物を二次免疫に使用する。さらに本発明は、一次免疫に使用する免疫原がHIVまたはSIV由来の免疫原たとえばHIV p24タンパク質であり、また二次免疫に使用する免疫原がFIVに由来する(たとえばFIV gp95および/またはgp36タンパク質)かまたは全粒子FIVウイルスであるような方法を見込む。本発明のワクチン組成物による他の免疫プロトコールは当業者には自明であり、また本発明の範囲内に見込まれる。
【００２６】
一実施態様では、種々の霊長類免疫不全ウイルスタンパク質に由来する免疫原を組み合せて動物に投与する。例示の実施態様では、HIV-1 p24の免疫原とHIV-1 gp120およびgp160の免疫原とを含む組成物をネコ科動物に投与する。別の例示の実施態様では、HIV-1 p24を唯一の免疫原として含む組成物をネコ科動物に投与する。
【００２７】
本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原とFIVに由来する免疫原とを含む組成物をネコ科動物に投与することにより、該動物をFIV感染から防御するための、またFIVに対する免疫反応を生成させるための、材料と方法に関する。FIV由来の免疫原は公知である。たとえば米国特許第5,118,602号、第5,565,319号、第5,510,106号、第5,275,813号、第5,037,753号および第4,861,720号の各明細書を参照。本発明の方法に従って使用することができるFIV免疫原は単一のFIVサブタイプまたは株に由来してもよいし、複数のFIVサブタイプに由来してもよい。複数サブタイプ型FIV免疫原は米国特許第5,846,825号、第6,254,872号および第6,447,993号の各明細書で開示されている。
【００２８】
本方法の一実施態様では、ネコ科動物に投与する免疫原は霊長類免疫不全ウイルスとFIVの間で保存されているエピトープを含む。別の実施態様では、該保存エピトープは霊長類免疫不全ウイルスのエンベロープタンパク質中に存在する。本発明の範囲内には、本発明の保存エピトープとトポロジー的に等価である高次構造を有し、かつ該保存エピトープに結合する抗体の同じ抗原結合領域に結合するような分子(ミモトープ)もまた見込まれる。一般にミモトープはペプチド分子であるが、他の非ペプチド分子から調製することもできる。
【００２９】
本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原に関するが、該免疫原はタンパク質またはペプチドであり、また霊長類免疫不全ウイルスとFIVの間で保存されているエピトープを含む。例示の実施態様では、該免疫原はHIV-1IIIB由来のgp120およびgp160タンパク質を、また随意にHIV-1UCD1由来のp24タンパク質を、含む。別の実施態様では、該免疫原はHIV-1UCD1由来のp24タンパク質を含む。本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルス由来の免疫原の保存エピトープを含むタンパク質またはペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。
【００３０】
本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルスおよびFIVに由来する免疫原のエピトープと交差反応する抗体に関する。該抗体はポリクローナル型、モノクローナル型のいずれでもよい。該抗体は該エピトープに対する抗体の産生能を有する任意の動物に由来してよい。たとえばヒト、エープ、モンキー、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、およびネコ科動物などである。本発明の範囲内には、霊長類免疫不全ウイルスおよびFIVに由来する免疫原のエピトープと交差反応する非ヒト抗体であって、米国特許第5,530,101号、第5,585,089号、第5,693,762号、第6,180,370号および第6,407,213号の各明細書で開示されているような技術上周知の標準手法を使用して「ヒト化」されている非ヒト抗体もまた見込まれる。
【００３１】
本発明のペプチドおよび/またはポリペプチド免疫原はまた、多抗原性ペプチド(MAP)コンストラクトの形で準備してもよい。MAPコンストラクトの調製はTam(1988)で開示されている。MAPコンストラクトは、その表面上で多数の免疫原コピーが合成されるリシン残基のコアマトリックスを利用する(Posnett et al., 1988)。各々同じまたは異なる免疫原を含む複数のMAPコンストラクトは本発明の方法に従って調製し、ワクチン組成物として投与することができる。一実施態様では、MAPコンストラクトは1つまたは複数のアジュバントと共に準備し、該アジュバント共に投与する。
【００３２】
霊長類免疫不全ウイルスタンパク質の天然、組み換えまたは合成ポリペプチド、およびそのペプチド断片もまた本発明の方法に従いワクチン組成物として使用することができる。一実施態様では、異なるポリペプチドを複合製剤としてネコ科動物に投与する。例示の実施態様では、HIV-1 gp120/gp160およびHIV-1 p24ポリペプチドをネコ科動物に投与する。別の実施態様では、複数HIV株に由来するHIVポリペプチドを合わせて1つのワクチン組成物とし、宿主動物に接種する。たとえば2株以上のHIV-1に由来するHIVエンベロープ糖タンパク質をベースにしたポリペプチドを合わせて1つのワクチンとすることができる。該ポリペプチドは、そのアミノ酸配列が2種類以上のHIV株に由来するポリペプチドの接合または連結に由来する「ハイブリッド」または「キメラ」ポリペプチドを含んでもよい。HIVポリペプチドの調製方法は技術上周知である。HIVポリペプチドはたとえば固相合成法(Merrifield, 1963)で合成することができる。遺伝子組み換え技術を使用してHIVタンパク質またはペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を細菌、酵母または哺乳動物細胞株などのような宿主細胞中で発現させることによりHIVポリペプチドを産生させ、公知の標準手法により精製することもできる。
【００３３】
本発明の方法では、開示の免疫原組成物は感染しやすい宿主(一般に飼いネコ)に、その後の該宿主へのFIVチャレンジ接種または感染に対して防御免疫を誘導するのに有効な量を有効な形態で、投与する。免疫原の投与は一般に非経口で、たとえば皮下、腹腔内または筋内注射により、または経口または経鼻で、あるいはそうした投与経路の任意の組み合わせで、行う。通常、免疫原は宿主動物に少なくとも2回、1週(または2週以上の)間隔で、投与する。しかし免疫原の初回およびブースター投与は他の方式も見込まれるので、専門医の判断や特定の治療対象動物に依存しよう。
【００３４】
本発明に従って使用することができる免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備することができる。本発明に有用な化合物および組成物は製薬上有用な組成物を調製するための公知の方法に従って調剤することができる。調剤については、周知の、当業者が容易に閲覧できる多数の文献に詳しく記載されている。たとえばRemington’s Pharmaceutical Science by E.W. Martin, Easton Pennsylvania, Mack Publishing Company, 19th ed., 1995は本発明との関連で使用することができる。一般に、本発明の組成物の調製では、該組成物の効果的な投与が促進されるように有効量の免疫原を好適な担体と合わせることになろう。本発明の方法に使用する組成物はたとえば錠剤、丸剤、散剤、溶液または懸濁液、座剤、注射剤および輸液、噴霧剤などのような固形剤、半固形剤、液剤など多種多様な剤形が可能である。好ましい剤形は所期の投与形態および薬剤用途に依存しよう。該組成物はまた、技術上周知の通常の製薬上許容しうる担体/賦形剤を含むのが好ましい。本発明のペプチドミメティクスとの併用が見込まれる担体および賦形剤の非限定的な例は水、生理食塩水、鉱油を含む油類、エタノール、ジメチルスルホキシド、ゼラチン、シクロデキストラン、ステアリン酸マグネシウム、デキストロース、セルロース、糖類、炭酸カルシウム、グリセロール、アルミナ、でんぷん、および同等の担体/賦形剤、またはこれらのうちの任意の組み合わせである。本発明の免疫原組成物はまた懸濁化剤や保護剤、潤滑剤、緩衝剤、防腐剤、安定剤を含んでもよい。それが投与されて所期の治療上の処置が実現されるようにするには、本発明の製剤組成物は担体または賦形剤を含めた全組成物の重量を基準にして約0.1〜45重量%の、特に1〜15重量%の、免疫原を含むのが有利であろう。
【００３５】
本発明の免疫原組成物は技術上周知の方法で調製することができる。たとえば該免疫原は一般に注射剤たとえば溶液または懸濁液として調製する。該免疫原は製剤組成物に対応した形態で、また被投与者に治療効果と免疫原性を示すような量を、投与する。特定の免疫原組成物に応じた最適の分量と投与形態の決定は当業者には容易に可能である。
【００３６】
前述のように、免疫原組成物中のウイルスおよび細胞は技術上周知の方法を使用して不活化または弱毒化してもよい。ワクチン分量に含まれる無細胞全粒子または部分粒子ウイルスの量は一般的には約0.1mg〜約5mgの範囲、さらに一般的には約0.2mg〜約2mgの範囲であろう。ウイルス感染細胞株を含む製剤の分量当たりの含有細胞数は一般的には約106〜約108であり、さらに一般的には約5×106〜約7.5×107であろう。ネコ科動物用ワクチン分量に含まれるタンパク質またはペプチド免疫原の量は投与を受ける動物の体重、年齢等に応じて約0.1μg〜10000μg、または約1μg〜5000μg、または約10μg〜1000μg、または約25μg〜750μg、または約50μg〜500μg、または約100μg〜250μgの範囲内とすることができる。
【００３７】
一実施態様では、本発明の免疫原は該免疫原に対するネコ科動物の免疫反応を増進するような1つまたは複数のアジュバントと共に準備する。該免疫原は技術上周知の任意好適のアジュバント共に準備するおよび/または投与することができる。本発明の免疫原組成物に使用することができるアジュバントの例はトレオニル・ムラミルジペプチド(MDP)(Byars et al., 1987)、細胞壁骨格(CWS)成分などを含めたRibiアジュバントシステム成分(Corixa Corp., Seattle, WA)、フロインド完全および不完全アジュバント、またはそれらの組み合わせなどである。本発明の方法およびワクチンとの併用に適した他の様々なアジュバントたとえばミョウバンや水酸化アルミニウム、サポニンなどは技術上周知であり、また本発明との併用が見込まれる。サイトカイン類(γ-IFN、GM-CSF、CSFなど)やリンホカイン類(IL-1、IL-2など)もまたワクチン組成物のアジュバントおよび/または補助剤として使用されてきたが、それらもまた本発明の範囲内に見込まれる。本発明の免疫原を含む組成物には1種類また複数種類のサイトカインやリンホカインを含めることができる。一実施態様では、本発明の免疫原はリンホカインのインターロイキン-12(IL-12)およびさらに別のアジュバントと組み合せて、動物に投与する。アジュバント組成物の成分としてのリンホカイン、インターロイキン-18(IL-18)の使用もまた明確に本発明の範囲内に見込まれる。一実施態様では、本発明に使用されるアジュバント組成物はIL-12とIL-15の、またはIL-15とIL-18の、またはIL-12とIL-18の、またはIL-12、IL-15、IL-18の、組み合わせを含む。該サイトカインはネコ科動物体内で生体活性を有するような種のサイトカインであるのが好ましい。該サイトカインはネコ・サイトカインたとえばネコIL-12、ネコIL-15、ネコIL-18などであればさらに好ましい。例示の実施態様では、霊長類由来の免疫原がCWSとIL-12および/またはIL-18を含むRibiアジュバントシステム成分と組み合せて投与される。
【００３８】
本明細書で使用するFIV株の略語は次のとおりである:
株(サブタイプ) 略語
Petaluma (A)                      FIVPet
Dixon (A)                         FIVDix
UK8 (A)                           FIVUK8
Bangston (A/B)                    FIVBang
Aomori-1 (B)                      FIVAom1
Aomori-2 (B)                      FIVAom2
Fc1 (B)                           FIVFC1
Shizuoka (D)                      FIVShi
Dutch113 (A)                      FIVDut113
Dutch19K (A)                      FIVDut19K
UK2 (A)                           FIVUK2
【００３９】
SwissZ2 (A)                       FIVSwiZ2
Sendai-1 (A)                      FIVSen1
Sendai-2 (B)                      FIVSen2
USCAzepy01A (A)                   FIV
USCAhnky11A (A)                   FIVUSC11
USCAtt-10A (A)                    FIVUSC10
USCAlemy01 (A)                    FIV
USCAsam-01A (A)                   FIV
PPR (A)                           FIVPPR
【００４０】
FranceWo                          FIVFra
Netherlands                       FIVNet
USILbrny03B (B)                   FIVUSI03
TM2 (B)                           FIVTM2
USCKlgri02B (B)                   FIVUSC02
Yokohama (B)                      FIVYok
USMAAsboy03B (B)                  FIVUSMA03
USTXmtex03B (B)                   FIVUST03
USMCglwd03B (B)                   FIVUSMC03
CABCpbar03C (C)                   FIVCAB03
CABCpbar07C (C)                   FIVCAB07
CABCpady02C (C)                   FIVCAB02
Fukuoka (D)                       FIVFuku
【００４１】
本発明はまた、HIVやSIVなどの免疫不全ウイルス間で保存されていて、人間または動物に免疫不全ウイルス感染への免疫を与えるために使用することができるエピトープを選別するための動物モデルの使用方法に関する。この方法の一実施態様ではHIVをHIV感染後長期未発症者から分離する。用語「長期未発症者」はHIV感染者のうち、10年以上にわたって安定したCD4陽性細胞数を示し、低ウイルス負荷を示し(すなわち血漿ウイルスレベルが低くてRT-PCRでも検出不能であり)、また一般に病徴をほとんどまたはまったく示さない患者をいう。分離HIVに由来する免疫原は調製し、ネコ科動物たとえば飼いネコに予防接種する。この方法の一実施態様では、HIVタンパク質のペプチド断片を免疫原として使用する。完全長のHIVタンパク質に相当する重複断片を調製して、免疫原として使用するのが好ましい。一実施態様では、FIV感染からの予防的防御に最も有効なエピトープを含む断片を特定するために、種々の組み合わせのペプチド断片を種々のネコに投与する。その後、それらの予防接種ネコにFIVをチャレンジ接種する。FIVのチャレンジ接種を受けたときに感染からネコを防御する免疫原は進化的保存エピトープを含み、また人間、ネコ科動物、および他の哺乳動物を免疫不全ウイルス感染から防御する免疫原として使用することができる。好ましくは、該免疫原は複数サブタイプのFIVによる感染からネコを防御する。進化的保存エピトープをさらに分離するために、本発明の方法を用いて該エピトープを含む免疫原の断片を調製し試験することもできる。該エピトープのアミノ酸配列を決定するには断片の配列解析を行うことができる。好ましい実施態様では、本発明の方法を用いて選別した進化的保存エピトープを含む免疫原を使用して、人間をHIV感染から防御することができる。一実施態様では、ネコの予防接種に使用する免疫原はHIV p24タンパク質、またはその免疫原性断片である。本発明はまた、本発明の方法を使用して同定された免疫不全ウイルスの進化的保存エピトープに関する。
【００４２】
本発明はまた、人間または他の動物にいて免疫原、抗原、またはHIVやSIVなどの免疫不全ウイルス間で保存されているエピトープに対する免疫反応を誘導する方法に関する。一実施態様では、本明細書で開示する方法により同定される免疫不全ウイルス由来の1つまたは複数の進化的保存エピトープを含む免疫原または抗原は、人間または動物に、免疫原または抗原および免疫原または抗原を提示する任意のウイルスまたは細胞に対する免疫反応を誘導するに足る量を、そうした反応を誘導するに足る期間だけ、投与する。誘導される免疫反応は体液性または細胞性またはその両方のいずれでもよい。HIVに対する免疫反応を誘導するための一実施態様では、同定されたHIV由来の進化的保存エピトープを含む免疫原が人間に投与される。本発明の範囲内に見込まれる免疫原の非限定的な例はHIV p24タンパク質またはその免疫原性断片である。一実施態様では、この方法に使用する免疫原はHIV-1UCD1 p24タンパク質またはその免疫原性断片を含む。
【００４３】
本発明はまた、人間または他の動物たとえばネコをHIV、SIVなどの免疫不全ウイルスによる感染から防御する方法に関する。この方法の一実施態様では、本明細書で開示する方法により同定される免疫不全ウイルス由来の1つまたは複数の進化的保存エピトープを含む免疫原または抗原を有効量、人間または動物に、その人間または動物に免疫を与え以って免疫不全ウイルスによる感染からその人間または動物を防御するに足る期間にわたり、投与する。HIV感染からの防御のための一実施態様では、同定されたHIV由来の進化的保存エピトープを含む免疫原で人間を免疫にする。本発明の範囲内に見込まれる免疫原の非限定的な例はHIV p24タンパク質、またはその免疫原性断片である。一実施態様では、この方法に使用する免疫原はHIV-1UCD1 p24タンパク質またはその免疫原性断片を含む。
【００４４】
免疫原は一般に非経口で注射(たとえば皮下、腹腔内または筋内注射)により投与する。他の好適な投与形態は経口または経鼻投与である。通常、免疫原は人間または他の動物に少なくとも2回、1週(または2週以上の)間隔で、投与する。しかし、免疫原の初回およびブースター投与は他の方式も見込まれるので、専門医の判断や特定の治療対象患者に依存しよう。
【００４５】
本発明の免疫原組成物は技術上周知の方法で調製することができる。たとえば該免疫原は一般に注射剤たとえば溶液または懸濁液として調製する。該免疫原は製剤組成物に対応した形態で、また被投与者に治療効果と免疫原性を示すような量を、投与する。特定の免疫原組成物に応じた最適の分量と投与形態の決定は当業者には容易に可能である。
【００４６】
本発明に従って使用することができる免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備することができる。一実施態様では、本発明の範囲内に見込まれる免疫原は、該免疫原に対する人間または動物の免疫反応を増進するような1つまたは複数のアジュバント共に準備する。本発明の免疫原は技術上周知の任意好適のアジュバントと共に準備するおよび/または該アジュバント共に投与することができる。
【００４７】
本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルスに由来する本発明の免疫原とネコ・サイトカインまたはリンホカインとを含む組成物に関する。該免疫原はHIV-1(HIV-1IIIB、HIV-1UCD1、HIV-1BRUなど)とHIV-2とを含むHIVに由来することができる。該組成物のHIV免疫原の非限定的な例はHIV gp160、gp120、gp41、p24、p31、p17、p7、またはHIV gag, pol, env, tat, rev, nef, vif, vpr, vpuまたはvpx遺伝子によってコードされるタンパク質、またはその断片または変異体である。一実施態様では、該リンホカインはネコIL-12、IL-15および/またはIL-18である。例示の実施態様では、該免疫原はHIV-1 p24であり、該リンホカインはネコIL-18である。組成物にはアジュバントを、たとえば本明細書で開示のアジュバントのうちの1つを含めることができる。
【００４８】
本発明はまた、霊長類免疫不全ウイルスに由来する本発明の免疫原とネコ・サイトカインまたはリンホカインとを含む組成物および製剤組成物に関する。該免疫原はHIV-1(HIV-1IIIB、HIV-1UCD1、HIV-1BRUなど)とHIV-2とを含むHIVに由来することができる。該組成物のHIV免疫原の非限定的な例はHIV gp160、gp120、gp41、p24、p31、またはHIV gag, pol, env, tat, rev, nef, vif, vpr, vpuまたはvpx遺伝子によってコードされるタンパク質、またはその断片または変異体である。一実施態様では、該リンホカインはネコIL12、IL-15および/またはIL-18である。例示の実施態様では、該免疫原はHIV-1 p24であり、該リンホカインはネコIL-18である。組成物および製剤組成物にはアジュバントを、たとえば本明細書で開示のアジュバントのうちの1つを含めることができる。
【００４９】
本明細書で参照または引用した特許、特許出願、暫定出願の各明細書および出版物はいずれも、本明細書の明示の教示と矛盾しない限りで、それらの全体を本明細書に援用する。
以下は実施例であり、本発明の実施手順を説明しており、本発明を限定するものではない。百分率はすべて重量百分率であり、溶媒混合比率は特に断らない限り容量比率である。
【実施例】
【００５０】
実施例１
SPF(特定病原体不在の、清浄な)ネコ4頭(n=4)にそれぞれ4回、HIV-1ワクチン組成物AまたはHIV-1ワクチン組成物Bを、3週間隔で投与し、最終ブースター投与の3週後に15×ネコ感染量(CID50)のin vivo由来FIVBangston接種原をチャレンジ接種した。ワクチン接種をしない追加のSPFネコ4頭(対照群)にも同様にFIVをチャレンジ接種した。HIV-1ワクチン組成物Aは組み換えヒト・インターロイキン-12(rHuIL-12) 5μg添加の細胞壁骨格(CWS)成分(25μg-CWS/ワクチン分量)(Corixa Corp., Seattle, WA)を含むRibiアジュバントシステム0.5mlと混ぜた、200μgのHIV-1UCD1 p24、25μgのHIV-1IIIB gp120 (ImmunoDiagnostics Inc., Woburn, MA)および25μgのHIV-1IIIB gp160 (ImmunoDiagnostics Inc., Woburn, MA) からなった。HIV-1ワクチン組成物BはrHuIL-12 5μg添加のRibiアジュバントシステム0.5mlと混ぜた200μgのHIV-1UCD1 p24からなった。組み換えHIV-1UCD1 p24はQIAexpress pQEベクター(Qiagen Inc., Valencia, CA)を使用してE. coli発現システム中で産生させ、発現産物の6xHisタグ付きp24をNi-NTAアフィニティークロマトグラフィー(Qiagen Inc.)で精製した。in-vivo由来FIV接種原は2頭のFIVBangston感染ネコに由来するプール血漿からなり、その力価は対数希釈あたり3〜4頭SPFネコ群を使用して求めた(Pu et al., 2001。
【００５１】
表1はこの実験の結果である。感染の有無を判定するもう1つの方法として、逆転写酵素PCRとウイルス検出システムとしてのプロウイルスPCRとを使用してウイルス分離を行った。HIV-1ワクチン組成物Aを接種した後にFIVをチャレンジ接種したネコ4頭中1頭(1/4)とHIV-1ワクチン組成物Bを接種した後にFIVをチャレンジ接種したネコ4頭中2頭(2/4)はチャレンジ接種の16週後、ウイルス分離株がFIV陰性であり、FIV p24に対する抗体を失い、またFIV gp95に対する抗体を作らなかったのに対して、残りのネコはFIV gp95に対する抗体を作り、またFIV p24に対する抗体を一貫して強化した。対照ネコ4頭はいずれもチャレンジ接種の16週後、FIV p24、gp95の両方に対する抗体を作り、またチャレンジ接種13週後のウイルス分離株はFIV陽性(ポジティブ)であった。従って、FIVチャレンジ感染からネコを防御する効果の点ではHIV-1ワクチン組成物B(HIV-1 p24単味)はHIV-1ワクチン組成物Aと比べて優るまたは同等のように見受けられた。これはHIV-1UCD1 p24がFIVチャレンジ感染に対する防御免疫を誘導しうるワクチン成分であることを示唆する。HIV-1ワクチン組成物Aを接種した全4頭のネコとHIV-1ワクチン組成物Bを接種したネコでは4頭中3頭で4回目のワクチン接種後にFIV p24に対する交差反応抗体ができた。
【００５２】
FIVに対する防御免疫反応を示したHIV-1ワクチン接種ネコではFIV gp95に対する交差反応抗体ができなかったので、FIV gp95に対する交差反応抗体の存在または不存在は動物がHIVワクチン接種を受けているのかそれともFIVに感染しているのかをそれぞれ示した。さらに実験終了までにワクチン接種ネコでFIV p24に対する交差反応抗体が失われたこともまたワクチン接種動物がFIVチャレンジ感染から防御されたことを示した。
【００５３】
実施例２
後続の実験では、SPFネコ4頭にそれぞれ、HIV-1/UCD1(HIV-1UCD1) p24またはHIV-1/LAV(HIV-1LAV) p24ワクチン250μg/分量を、0.5mlのRibiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]+組み換えヒト・インターロイキン-12 (rHuIL-12) 5μg/分量と混ぜて接種した。アジュバントの重要性を評価するために、SPFネコ3頭からなる追加の1群にはRibiアジュバントまたはrHuIL-12を加えずにHIV-1UCD1 p24を接種した。対照群のネコにはRibiアジュバントかPBSのいずれかを投与した。どのネコにも3週間隔で3回ワクチン接種し、最終ワクチン接種の3週後に15×CID50のin vivo由来FIVBangston接種原をチャレンジ接種した。表2に示すように、HIV-1UCD1 p24+アジュバントを接種したネコは4頭中4頭(4/4)が、対照ネコ全4頭がFIVに感染した分量のチャレンジ接種でも、FIV感染を免れた。感染を免れたHIV-1UCD1 p24接種ネコはチャレンジ接種の54週後でもFIV陰性(ネガティブ)であり、従ってその防御免疫は完全であった。表2の結果が示すように、HIV-1UCD1 p24ワクチン(4頭中4頭すなわち100%の防御)のほうがHIV-1LAV p24ワクチン(4頭中2頭すなわち50%の防御)よりも効果的であるように見受けられる。無アジュバントのHIV-1UCD1 p24を接種した群はFIVチャレンジ接種時の感染防御効果が低かった(3頭中1頭すなわち33%の防御)。
【００５４】
実施例３
HIV-1LAV p24ワクチンによって誘導される防御免疫の再現性を評価するために、さらに別の実験を行った。この実験ではSPFネコ3頭に、HIV-1LAV p24ワクチン200μg/分量を、1mlのRibiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]+rHuIL-12 5μg/分量と混ぜて接種した。さらに、SPFネコ3頭それぞれに、FIVBang p24またはFIV-Petaluma+Shizuoka(FIVPet/Shi) p24ワクチン200μg/分量を、Ribiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]+rHuIL-12 5μg/分量と混ぜて接種した。FIVPet/Shi p24ワクチンは130μgのFIVPet p24と70μgのFIVShi p24をRibiアジュバント+rHuIL-12と混ぜてなった。対照ネコ3頭にはアジュバントを投与した。ワクチン接種とチャレンジ接種のスケジュールはチャレンジ接種原や接種分量を含めて実施例2に記載したとおりである。表3に示すように、HIV-1LAV p24ワクチンを接種したネコは3頭中3頭が、対照ネコ全3頭が感染した分量のチャレンジ接種でも、感染を免れた。FIVBang p24ワクチンを接種したネコでは3頭中1頭だけが、またFIVPet/Shi p24ワクチンを接種したネコでは3頭中2頭が、感染を免れた。これらの結果は、HIV-1LAV p24ワクチンがFIVワクチンとしても有効であることを確認する。さらに、HIV-1LAV p24ワクチンはFIVBangチャレンジ接種に対してはFIVPet/Shi p24ワクチンと同様に有効であり、またFIVBang p24ワクチンよりも有効であるという可能性もある。
【００５５】
実施例４
p24ワクチンの分量引下げとアジュバントへのサイトカイン添加の有無が及ぼす効果を評価するための試験をさらに行った。SPFネコ3頭にHIV-1LAV p24ワクチン200μg/分量を、1mlのRibiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]+(rHuIL-12に代わる)組み換えネコIL-18(rFeIL-18; 5μg/分量)と混ぜて接種した。アジュバントへのサイトカイン添加の効果を評価するために、さらに3頭のSPFネコにHIV-1LAV p24ワクチン200μg/分量を、サイトカイン無添加のRibiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]と混ぜて接種した。対照として、SPFネコ2頭にそれぞれrFeIL-18添加のRibiアジュバント、単味Ribiアジュバント、またはPBSを投与した。ワクチン接種とチャレンジ接種のスケジュールは、チャレンジ接種分量を25×CID50とやや多めにした点を除けば、実施例2および3に記載したとおりである。表4に示すように、HIV-1LAV p24ワクチンをrFeIL-18添加のRibiアジュバントと混ぜて接種したネコは3頭中2頭(2/3)が感染を免れたが、HIV-1LAV p24ワクチンを単味Ribiアジュバントと混ぜて接種したネコは3頭中1頭(1/3)だけが感染を免れた。対照ネコは全頭がチャレンジ接種の5〜9週後に感染した。従って、HIV-1LAV p24ワクチン+Ribi/rFeIL-18の感染防御効果が実証された。さらに、HIV-1LAV p24ワクチン+Ribi/rFeIL-18はHIV-1LAV p24ワクチン+単味Ribi (rFeIL-18無添加)よりも感染防御効果が高そうに見受けられた(3頭中2頭の防御vs. 3頭中1頭の防御)。
【００５６】
実施例５
別の試験では、チャレンジ接種株を(サブタイプA/Bである) FIVBangから(サブタイプBである) FIVFC1に変えて、HIV-1 p24ワクチンが他FIVチャレンジ株からもネコを防御するかどうかを調べた。FIVBangはサブタイプAに属する群特異抗原(gag)、ポリメラーゼ(pol)、およびエンベロープ(env)の小部分(V1-V3領域)の各遺伝子配列をもつのに対して、env遺伝子の大部分(V4-V9領域)はサブタイプBに属する。従ってFIVBangはサブタイプAおよびBの組み換え体である。他方、FIVFC1はgag、polおよびenvにサブタイプB遺伝子配列をもっており、完全にサブタイプB株である。gagはマトリックス-コア-ヌクレオキャプシドからなり、またコア遺伝子はp24に対応する遺伝子である。従って、FIV-1UCD1およびFIV-1LAV p24ワクチンは、サブタイプAのp24をもつFIVBangからネコを防御する。
【００５７】
SPFネコ4頭にHIV-1UCD1 p24ワクチン200mg/分量を、1mlのRibiアジュバント[細胞壁骨格(CWS)成分25μg/分量]+rHuIL-12 5μg/分量と混ぜて接種した。比較のために、追加のSPFネコ4頭に市販のデュアル・サブタイプFIV Pet/Shiワクチン(FEL-O-VAX FIV; Forth Dodge Animal Health, Overland Park, Kansas)を該ワクチンの付属アジュバント共に接種した。対照ネコ3頭にはPBSを投与した。ワクチン接種とチャレンジ接種のスケジュールは、チャレンジ接種分量を15×CID50とした点を除けば、実施例2および3に記載したとおりである。表5に示すように、HIV-1UCD1 p24ワクチンを接種した4頭中3頭(3/4)のネコとFEL-O-VAX FIVを接種した全4頭のネコは、対照ネコ全3頭が感染した分量のチャレンジ接種でも、感染を免れた。従ってHIV-1 p24ワクチンは、サブタイプBのp24をもちFIVBangチャレンジ接種株とは著しく異なるチャレンジ接種株(FIVFC1)からネコを防御した。
【００５８】
実施例６
実施例1〜5で開示した結果を表6にまとめる。総じて、HIV-1UCD1 p24ワクチン+Ribi/rHuIL-12またはRibi/rFeIL-18アジュバントを接種したネコは15頭中11頭(73.3%)が感染を免れた。同様に、HIV-1LAV p24ワクチン+Ribi/rHuIL-12アジュバントを接種したネコは全7頭中5頭(71.4%)が感染を免れた。HIV-1 p24を Ribi/rHuIL-12とだけ混ぜて接種した場合の当初分析は、HIV-1UCD1 p24ワクチン[8頭中7頭の感染を防御すなわち防御(保護)率87%]のほうがHIV-1LAV p24ワクチン[7頭中5頭の感染を防御すなわち防御(保護)率71%]よりも効果的であるかもしれないことを示唆した。それにもかかわらず、HIV-1 p24ワクチン+Ribi/rHuIL-12またはRibi/rFeIL-18を接種した合計22頭のうち16頭(72.7%)のネコでは完全排除防御が観測されたが、それはFIV p24接種後のネコ6頭中3頭(50%)の感染防御よりも著しく高い防御率であった。
【００５９】
言うまでもなく、本明細書で開示した実施例および実施態様はもっぱら説明が目的であり、当業者にはそれらに照らして種々の態様変更や変化が想起されようが、そうした種々の変更態様や変化は本願の本質と範囲に、また添付の特許請求の範囲に、包含される。
【００６０】
【表１】
2006528244.tif 000002
【００６１】
【表２】
2006528244.tif 000003
【００６２】
【表３】
2006528244.tif 000004
【００６３】
【表４】
2006528244.tif 000005
【００６４】
【表５】
2006528244.tif 000006
【００６５】
【表６】
2006528244.tif 000007
【００６６】
参考文献
米国特許第6,503,753号
米国特許第6,500,623号
米国特許第5,846,825号
米国特許第6,254,872号
米国特許第6,447,993号
米国特許第5,530,101号
米国特許第5,763,160号
米国特許第5,585,089号
米国特許第5,693,762号
米国特許第6,180,370号
米国特許第6,407,213号
米国特許第5,700,469号
米国特許第5,401,628号
米国特許第5,849,533号
米国特許第5,846,546号
米国特許第5,118,602号
米国特許第5,565,319号
米国特許第5,510,106号
米国特許第5,275,813号
米国特許第5,037,753号
米国特許第4,861,720号
米国公開特許出願第20040076632号
米国公開特許出願第20040047878号
米国公開特許出願第20040009941号
米国公開特許出願第20020156037号
米国公開特許出願第20020032165号
米国公開特許出願第20010004531号
【００６７】
【化１】
2006528244.tif 000008
【００６８】
【化２】
2006528244.tif 000009
【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年1月12日(2006.1.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の有効量をネコ科動物に投与するステップを含む、該動物のネコ免疫不全ウイルス感染を抑制または予防するための方法。
【請求項２】
霊長類免疫不全ウイルスはヒト免疫不全ウイルス(HIV)またはサル免疫不全ウイルス(SIV)である、請求項1に記載の方法。
【請求項３】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項2に記載の方法。
【請求項４】
HIV-1はHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項3に記載の方法。
【請求項５】
免疫原はウイルス感染細胞または無細胞全粒子ウイルスである、請求項1に記載の方法。
【請求項６】
ウイルスは不活化または弱毒化のための処理を受けるかまたは非複製型である、請求項5に記載の方法。
【請求項７】
ウイルスはパラホルムアルデヒド、ホルマリン、フェノール、UV光または熱による処理で不活化または弱毒化される、請求項6に記載の方法。
【請求項８】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリペプチドまたはその免疫原性断片である、請求項1に記載の方法。
【請求項９】
ポリペプチドは霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子によってコードされる、請求項8に記載の方法。
【請求項１０】
ポリペプチドはgp120およびgp160からなる群より選択されるエンベロープタンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１１】
ポリペプチドはSEQ ID NO: 1またはSEQ ID NO: 5で示されるアミノ酸配列を含むHIVエンベロープタンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１２】
ポリペプチドはHIVのp24タンパク質またはその免疫原性断片、もしくはSIVのp27タンパク質またはその免疫原性断片である、請求項8に記載の方法。
【請求項１３】
p24タンパク質はHIV-1UCD1のp24タンパク質である、請求項12に記載の方法。
【請求項１４】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリヌクレオチド配列を含む組み換えウイルスまたは組み換え発現コンストラクトである、請求項1に記載の方法。
【請求項１５】
ポリヌクレオチド配列はHIV-1、HIV-2またはSIV配列である、請求項14に記載の方法。
【請求項１６】
ポリヌクレオチド配列は霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子もしくはその免疫原性断片を1つまたは複数含む、請求項14に記載の方法。
【請求項１７】
ポリヌクレオチド配列はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片をコードする、請求項14に記載の方法。
【請求項１８】
方法は霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の投与に続いてネコ免疫不全ウイルス(FIV)に由来する免疫原を有効量投与するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
【請求項１９】
免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備または投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２０】
免疫原は該免疫原に対する動物の免疫反応を増進する1つまたは複数のアジュバントと共に準備または投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２１】
免疫原は皮下、腹腔内、筋内、経口または経鼻投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２２】
アジュバントはトレオニル・ムラミルジペプチド(MDP)、細胞壁骨格(CWS)成分を含むRibiアジュバントシステム成分、フロインド完全アジュバント、フロインド不完全アジュバント、ミョウバン、水酸化アルミニウムおよびサポニンからなる群より選択される、請求項20に記載の方法。
【請求項２３】
免疫原はサイトカインまたはリンホカインと組み合せて投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２４】
サイトカインまたはリンホカインはネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインである、請求項23に記載の方法。
【請求項２５】
免疫原はインターロイキン-12、インターロイキン-15またはインターロイキン-18と組み合せて投与する、請求項1に記載の方法。
【請求項２６】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスの免疫原性または抗原性ペプチドを含む、請求項1に記載の方法。
【請求項２７】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原を有効量ネコ科動物に投与するステップを含む、該動物のFIVに対する免疫反応を抑制または生成するための方法。
【請求項２８】
霊長類免疫不全ウイルスはヒト免疫不全ウイルス(HIV)またはサル免疫不全ウイルス(SIV)である、請求項27に記載の方法。
【請求項２９】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項28記載の方法。
【請求項３０】
HIV-1はHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項29に記載の方法。
【請求項３１】
免疫原はウイルス感染細胞または無細胞全粒子ウイルスである、請求項27に記載の方法。
【請求項３２】
ウイルスは不活化または弱毒化のための処理を受けるかまたは非複製型である、請求項31に記載の方法。
【請求項３３】
ウイルスはパラホルムアルデヒド、ホルマリン、フェノール、UV光または熱による処理で不活化または弱毒化される、請求項32に記載の方法。
【請求項３４】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリペプチドまたはその免疫原性断片である、請求項27に記載の方法。
【請求項３５】
ポリペプチドは霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子によってコードされる、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
ポリペプチドはgp120およびgp160からなる群より選択されるエンベロープタンパク質またはそれら免疫原性断片である、請求項34に記載の方法。
【請求項３７】
ポリペプチドはHIVのp24タンパク質またはその免疫原性断片、もしくはSIVのp27タンパク質またはその免疫原性断片である、請求項34に記載の方法。
【請求項３８】
p24タンパク質はHIV-1UCD1のp24タンパク質である、請求項37に記載の方法。
【請求項３９】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスのポリヌクレオチド配列を含む組み換えウイルスまたは組み換え発現コンストラクトである、請求項27に記載の方法。
【請求項４０】
ポリヌクレオチド配列はHIV-1、HIV-2またはSIV配列である、請求項39に記載の方法。
【請求項４１】
ポリヌクレオチド配列は霊長類免疫不全ウイルスのenv, gag, pol, tat, rev, vif, vpr, vpuまたはnef遺伝子もしくはその免疫原性断片を1つまたは複数含む、請求項39に記載の方法。
【請求項４２】
ポリヌクレオチド配列はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片をコードする、請求項39に記載の方法。
【請求項４３】
方法は霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原の投与に続いてネコ免疫不全ウイルス(FIV)に由来する免疫原を有効量投与するステップをさらに含む、請求項27に記載の方法。
【請求項４４】
免疫原は製薬上許容しうる担体または賦形剤と共に準備または投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４５】
免疫原は該免疫原に対する動物の免疫反応を増進する1つまたは複数のアジュバントと共に準備または投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４６】
免疫原は皮下、腹腔内、筋内、経口または経鼻投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４７】
アジュバントはトレオニル・ムラミルジペプチド(MDP)、細胞壁骨格(CWS)成分を含むRibiアジュバントシステム成分、フロインド完全アジュバント、フロインド不完全アジュバント、ミョウバン、水酸化アルミニウムおよびサポニンからなる群より選択される、請求項45に記載の方法。
【請求項４８】
免疫原はサイトカインまたはリンホカインと組み合せて投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項４９】
サイトカインまたはリンホカインはネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインである、請求項48に記載の方法。
【請求項５０】
免疫原はインターロイキン-12、インターロイキン-15またはインターロイキン-18と組み合せて投与する、請求項27に記載の方法。
【請求項５１】
免疫原は霊長類免疫不全ウイルスの免疫原性または抗原性ペプチドを含む、請求項27に記載の方法。
【請求項５２】
免疫反応は細胞性免疫反応である、請求項27に記載の方法。
【請求項５３】
免疫反応は体液性免疫反応である、請求項27に記載の方法。
【請求項５４】
免疫原はヘルパーTサイトカインおよび細胞傷害性Tリンパ球(CTL)細胞毒素の産生を誘導する、請求項27に記載の方法。
【請求項５５】
HIVとFIVの間で進化的に保存されているウイルスタンパク質のエピトープを選別するための方法であって、
a)  HIVを該HIVに感染している長期未発症者から分離するステップ;
b)  該HIVに由来する免疫原をネコ科動物に予防接種するステップ;
c)  該ネコ科動物に感染性FIVをチャレンジ接種するステップ; および
d)  該ネコ科動物が該FIVの感染から防御されているかどうかを判定するステップ;を含み、該ネコ科動物を感染防御する免疫原は該HIVと該FIVの間で進化的に保存されているエピトープを含む免疫原の指標であることを特徴とする方法。
【請求項５６】
霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原とネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインとを含む組成物。
【請求項５７】
ネコ・リンホカインはインターロイキンである、請求項56に記載の組成物。
【請求項５８】
インターロイキンはIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21およびIL-22からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項５９】
インターロイキンはIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項６０】
霊長類免疫不全ウイルスはHIVまたはSIVである、請求項57に記載の組成物。
【請求項６１】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項60に記載の組成物。
【請求項６２】
HIV-1ウイルスはHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項61に記載の組成物。
【請求項６３】
免疫原はHIVのenv, pol, gag, tat, rev, vif, vpr, vpu, vpxまたはnef遺伝子のポリヌクレオチド配列を含む、請求項57に記載の組成物。
【請求項６４】
免疫原はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片を含む、請求項57に記載の組成物。
【請求項６５】
免疫原はHIV p24ポリペプチドまたはその免疫原性断片であり、またインターロイキンはネコIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項57に記載の組成物。
【請求項６６】
1つまたは複数の容器に
a)  霊長類免疫不全ウイルスに由来する免疫原; および
b)  ネコ・サイトカインまたはネコ・リンホカインを含むキット。
【請求項６７】
ネコ・リンホカインはインターロイキンである、請求項66に記載のキット。
【請求項６８】
インターロイキンはIL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21およびIL-22からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項６９】
インターロイキンはIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項７０】
霊長類免疫不全ウイルスはHIVまたはSIVである、請求項66に記載のキット。
【請求項７１】
HIVはHIV-1またはHIV-2である、請求項70に記載のキット。
【請求項７２】
HIV-1ウイルスはHIV-1IIIB、HIV-1UCD1およびHIV-1BRUからなる群より選択される、請求項71に記載のキット。
【請求項７３】
免疫原はHIVのenv, pol, gag, tat, rev, vif, vpr, vpu, vpxまたはnef遺伝子のポリヌクレオチド配列を含む、請求項66に記載のキット。
【請求項７４】
免疫原はHIVのgp160、gp120、gp41、p31、p24、p17またはp7ポリペプチドもしくはその免疫原性断片を含む、請求項66に記載のキット。
【請求項７５】
免疫原はHIV p24ポリペプチドまたはその免疫原性断片であり、またインターロイキンはネコIL-12、IL-15およびIL-18からなる群より選択される、請求項66に記載のキット。
【請求項７６】
免疫原はヘルパーTサイトカインおよび細胞傷害性Tリンパ球(CTL)細胞毒素の産生を誘導する、請求項1に記載の方法。
【請求項７７】
ヒト免疫不全ウイルス(HIV)による感染に対する保護をヒトに提供するための医薬組成物であって、当該組成物は、有効量の、免疫原若しくは抗原、又は当該免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチド若しくは組換え発現構築物を含み、ここで、上記免疫原若しくは抗原は、霊長類免疫不全ウイルスとネコ免疫不全ウイルス(FIV)の間に進化的に保存されている1以上のエピトープを含む、前記医薬組成物。
【請求項７８】
前記霊長類免疫不全ウイルスがHIV又はSIVである、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項７９】
前記HIVがHIV-1である、請求項78に記載の医薬組成物。
【請求項８０】
前記HIV-1がHIV-1IIIB、HIV-1UCD1、HIV-1LAV、又はHIV-1BRUである、請求項79に記載の医薬組成物。
【請求項８１】
前記免疫原若しくは抗原は、免疫不全ウイルス・キャプシドタンパク質を含み、又はそれに由来する、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項８２】
前記キャプシド・タンパク質は、HIV p24タンパク質、FIV p24タンパク質、又はSIV p27タンパク質、又はその免疫原断片である、請求項81に記載の医薬組成物。
【請求項８３】
前記HIV p24タンパク質は、HIV-1UCD1 p24タンパク質又はその断片である、請求項82に記載の医薬組成物。
【請求項８４】
前記HIV-1UCD1 p24タンパク質は、配列番号2に示すアミノ酸配列のアミノ酸132〜362を含む、請求項83に記載の医薬組成物。
【請求項８５】
前記免疫原若しくは抗原は、医薬として許容される担体又は希釈剤とともに提供され又は投与される、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項８６】
前記免疫原若しくは抗原は、当該免疫原若しくは抗原に対するヒトの免疫応答を高める1以上のアジュバントとともに提供され又は投与される、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項８７】
前記免疫原若しくは抗原は、皮下、腹膜内、筋肉中、経口、又は鼻腔投与を介して投与される、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項８８】
前記アジュバントは、トレオニル・ムラミル・ジペプチド(MDP)、細胞壁骨格(CWS)を含むRibiアジュバント系、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、アルム(alum)、水酸化アルミニウム、及びサポニンから成る群から選ばれる、請求項86に記載の医薬組成物。
【請求項８９】
前記免疫原若しくは抗原は、サイトカイン又はリンホカインとともに投与される、請求項77に記載の医薬組成物。
【請求項９０】
前記免疫原若しくは抗原は、インターロイキン-12、インターロイキン-15、又はインターロイキン-18とともに投与される、請求項77に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
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