(57)【要約】本発明は、疼痛を処置または予防するための方法を特徴とし、この方法は、神経成長因子アンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤを、これらが一緒になって有効な疼痛軽減を提供するような量で投与する工程を包含する。さらなる実施形態において、本発明はまた、神経成長因子アンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを含有する組成物、ならびにこれらを含むキットを特徴とする。このような治療は、結果として疼痛処置を予想外に増強した。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における疼痛を処置する方法であって、該方法は、有効量の抗神経増殖因子（ＮＧＦ）抗体およびＮＳＡＩＤを該個体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、該ＮＳＡＩＤは、イブフロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、ケトプロフェン、トルメチン、スリンダク、メフェナム酸、メクロフェナム酸、ジフルニサル、フルフェニサール、ピロキシム、スドキシカム、イソキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ＤＵＰ−６９７、フロスリド、メロキシカム（Ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、６−メトキシ−２ナフチル酸、ＭＫ−９６６、ナブメトン、ニメスリド、ＮＳ−３９８、ＳＣ−５７６６、ＳＣ−５８２１５、Ｔ−６１４からなる群より選択される、方法。
【請求項３】
前記ＮＳＡＩＤが、イブプロフェンである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記抗ＮＧＦ抗体が、ヒトＮＧＦに結合する、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗ＮＧＦ抗体が、約１０ｎＭ以下の結合親和性で、ヒトＮＧＦと結合する、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＮＧＦ抗体が、ヒト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＮＧＦ抗体が、ヒト化抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ヒト化抗体は、配列番号１に示される重鎖可変領域および配列番号２に示される軽鎖可変領域を含む抗体である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記疼痛が、手術後の疼痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記疼痛が、手術後の疼痛である、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
前記疼痛が、手術後の疼痛である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
疼痛を処置するための薬学的組成物であって、該組成物は、有効量の抗ＮＧＦ抗体およびＮＳＡＩＤ、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
疼痛を処置するためのキットであって、該キットは、
抗ＮＧＦ抗体、ＮＳＡＩＤ、ならびに疼痛を処置するために該ＮＳＡＩＤと併用して該抗ＮＧＦ抗体を投与するための指示書
を備える、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、米国仮出願番号６０／４４８，８２３（２００３年２月１９日出願）および同６０／４４８，８５３（２００３年２月１９日出願）の優先の利益を主張する。これらの内容は、その全体を参考として援用する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、神経成長因子アンタゴニストとＮＳＡＩＤとの組み合わせを投与することによって患者の疼痛を予防および処置するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）の投与に関する多数の処置が、現在疼痛軽減のために推奨されている。ＮＳＡＩＤの投与は、疼痛緩和特性を表すことが示されている。しかし、ＮＳＡＩＤニヨル処置は、公知の欠点を有する。この欠点としては、望ましくない副作用（例えば、消化管および腎臓の過敏および肝毒性）が挙げられる。さらに、ＮＳＡＩＤは、ある疼痛の状態においては、その治療的に認可された最大用量においてでさえも、適切な疼痛緩和を達成し得ない。
【０００４】
神経成長因子（ＮＧＦ）は、最初に同定された神経栄養因子であり、末梢神経系および中枢神経系の両方の発生および生存におけるその役割は、よく特徴付けられている。ＮＧＦは、末梢自律神経および胚性感覚神経ならびに前脳コリン作動性ニューロンの発生における重要な生存因子および維持因子であることが示されている（Ｓｍｅｙｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：２４６−２４９（１９９４）；Ｃｒｏｗｌｅｙら、Ｃｅｌｌ  ７６：１００１−１０１１（１９９４））。ＮＧＦは、感覚神経における神経ペプチドの発現をアップレギュレートし（Ｌｉｎｄｓａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：３６２−３６４（１９８９））、そしてその活性は、２つの異なる膜結合レセプター、ＴｒｋＡチロシンキナーゼレセプターおよびｐ７５レセプターを通じて媒介される。これらのレセプターは、構造的に、腫瘍壊死因子レセプターファミリーの他の膜に関係する（Ｃｈａｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３２：５１８−５２１（１９８６））。
【０００５】
神経系におけるその効果に加えて、ＮＧＦは、神経系以外のプロセスにおいて示されるようになってきた。例えば、外因性に投与されたＮＧＦは、管の透過性を増強すること（Ｏｔｔｅｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０６：１９９−２０１（１９８４））、Ｔ細胞およびＢ細胞免疫応答を増強すること（Ｏｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００５９−１００６３（１９８９））、リンパ球分化および肥満細胞増殖を誘導すること、ならびに肥満細胞からの可溶性生物シグナルの放出を引き起こすこと（Ｍａｔｓｕｄａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：６５０８−６５１２（１９８８）；Ｐｅａｒｃｅら、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７２：３７９−３９３（１９８６）；Ｂｉｓｃｈｏｆｆら、Ｂｌｏｏｄ  ７９：２６６２−２６６９（１９９２）；Ｈｏｒｉｇｏｍｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１４８８１−１４８８７（１９９３））を示した。
【０００６】
ＮＧＦは、多くの細胞型で産生される。これらの細胞型としては、肥満細胞（Ｌｅｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３７３９−３７４３（１９９４））、Ｂリンパ球（Ｔｏｒｃｉａら、Ｃｅｌｌ  ８５：３４５−３５６（１９９６））、ケラチノサイト（Ｄｉ  Ｍａｒｃｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２８３８−２２８４６）、平滑筋細胞（Ｕｅｙａｍａら、Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．１１：１０６１−１０６５（１９９３））、線維芽細胞（Ｌｉｎｄｈｏｌｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｉｒｏｓｃｉ．２：７９５−８０１（１９９０））、気管支上皮細胞（Ｋａｓｓｅｌら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ  ３１：１４３２−４０（２００１））、腎臓メサンギウム細胞（Ｓｔｅｉｎｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６１：Ｆ７９２−７９８（１９９１））、および骨格筋筋管（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ６６：１９５−２００（２００２））が挙げられる。ＮＧＦレセプターは、神経系以外の種々の細胞型で見出されている。例えば、ＴｒｋＡは、ヒトの単球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球および肥満細胞に見出されている。
【０００７】
ＮＧＦレベルの増加と種々の炎症状態との間の関係は、ヒト患者およびいくつかの動物モデルにおいて観察されている。これらには、全身性エリテマトーデス（Ｂｒａｃｃｉ−Ｌａｕｄｉｅｒｏら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ４：５６３−５６５（１９９３））、多発性硬化症（Ｂｒａｃｃｉ−Ｌａｕｄｉｅｒｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．１４７：９−１２（１９９２））、乾癬（Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉら、Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ．ｌ’ｅｎｅｒｅｏｌ．７８：８４−８６（１９９８））、関節炎（Ｆａｌｃｉｍｉら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ，Ｄｉｓ．５５：７４５−７４８（１９９６））、間質性膀胱炎（Ｏｋｒａｇｌｙら、Ｊ．Ｕｒｏｌｏｇｙ  １６１：４３８−４４１（１９９９））、および喘息（Ｂｒａｕｎら、Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：３２４０−３２５１（１９９８））が挙げられる。
【０００８】
一貫して、末梢組織におけるＮＧＦのレベルの上昇は、痛覚過敏および炎症に関連し、種々の関節炎の形態において観察されている。慢性関節リューマチに罹患する患者の滑膜は、高レベルのＮＧＦを発現する一方、非炎症性滑膜においては、ＮＧＦは検出できないことが報告されている（Ａｌｏｅら、Ａｒｃｈ．Ｒｈｅｕｍ．  ３５：３５１−３５５（１９９２））。同様の結果が、実験的に誘導された慢性関節リューマチを有するラットにおいて見られた（Ａｌｏｅら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ。１０：２０３−２０４（１９９２））。ＮＧＦのレベルの上昇は、トランスジェニック関節炎マウスにおいて、肥満細胞の数の増加とともに報告されている（Ａｌｏｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ−Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ａｓｐｅｃｔｓ  １５：１３９−１４３（１９９３））。
【０００９】
疼痛の処置のための医薬の２つの一般的なカテゴリーがある。各々は、異なる機構を介して作用し、そして異なる効果を有するが、両方とも欠点を有する。第一のカテゴリーは、軽い疼痛を処置するために使用される非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を含むが、この治療への使用は、望ましくない消化管への影響（例えば、胃粘膜糜爛、消化性潰瘍または十二指腸および結腸の炎症の形成）ならびに長期使用による腎毒性によって制限される。第二のカテゴリーは、モルフィンのようなオピオイド系鎮痛剤を含む。これらは強い疼痛を緩和処置するために使用されるが、この治療への使用は、望ましくない影響（例えば、便秘、吐き気および嘔吐、呼吸抑制、精神混濁、腎疝痛、長期使用による耐性、および中毒の危険性）のため、限定される。
【００１０】
治療的利益（例えば、疼痛の重症度および／または頻度の減少）の改善を提供し、そして／または現行のレジメンの多くによって引き起こされる望ましくない副作用の発生を減少する、疼痛処置の改善に対する必要性が存在することは明らかである。
【００１１】
本明細書において引用される全ての参考文献（特許出願および特許公開を含む）は、その全体が参考として援用される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、ＮＧＦのアンタゴニストが、ＮＳＡＩＤと組み合わせて、疼痛を処置するのに有効であるという発見に基づく。このような治療は、結果として疼痛処置を予想外に増強した。さらに、このような治療は、一般的に、減少した投薬量のＮＳＡＩＤが、同じ量の疼痛の減少および／またはＮＳＡＩＤ疼痛処置の増強の他の形態をもたらすことを可能にする。
【００１３】
第一の局面において、本発明は、疼痛を処置する（または、他の実施形態においては、予防する）ための方法を特徴とし、この方法は、ある量の神経成長因子アンタゴニストおよびある量のＮＳＡＩＤを投与する工程を包含し、これによって、それらは組み合わせて、有効な疼痛の軽減を提供する。ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの相対的な量および比率は、変動し得る。いくつかの実施形態では、十分なＮＧＦアンタゴニストが投与されて、同程度の疼痛の改善をもたらすのに必要とされる、ＮＳＡＩＤの通常量を減少させる。いくつかの実施形態では、十分なＮＧＦアンタゴニストが投与されて、同程度の疼痛の改善をもたらすのに必要とされる、ＮＳＡＩＤの通常量を、少なくとも約５％まで、少なくとも約１０％まで、少なくとも約２０％まで、少なくとも約３０％まで、少なくとも約４０％まで、少なくとも約５０％まで、少なくとも約６０％まで、少なくとも約７０％まで、少なくとも約８０％まで、少なくとも約９０％まで、またはそれ以上、減少させる。この減少は、所定の投与で投与される量、および／または所定の期間にわたって投与される量（頻度の減少）に反映され得る。
【００１４】
別の局面において、本発明は、ＮＳＡＩＤ疼痛処置を増強するための方法を提供する。この方法は、有効量のＮＳＡＩＤを、有効量のＮＧＦアンタゴニストと組み合わせて投与する工程を包含する。本明細書中で使用される場合、組み合わせ投与は、同時投与および／または異なる時間での投与を包含する。組み合わせ投与はまた、同時処方（すなわち、同じ組成物中にＮＧＦアンタゴニストとＮＳＡＩＤとが（組み合わせて）存在する）としての投与、および／または別個の組成物としての投与を包含する。本明細書中で使用される場合、「組み合わせ投与」とは、ＮＳＡＩＤとＮＧＦアンタゴニストとが、個々の有効量で投与される任意の環境を含むことを意味する。本明細書においてさらに考察されるように、ＮＧＦアンタゴニストとＮＳＡＩＤとが、異なる投薬頻度および／または投薬間隔で投与されうることが、理解される。例えば、抗ＮＧＦ抗体は、毎週投与され得、一方ＮＳＡＩＤは、より頻繁に投与され得る。ＮＧＦアンタゴニストとＮＳＡＩＤとが、同じ投与経路または異なる投与経路を用いて投与され得ること、そして種々の投薬レジメンが、投与の経過にわたって変更され得ることが、理解される。投与は、疼痛の開始の前であり得る。
【００１５】
別の局面において、本発明は、疼痛の発生を減少し、疼痛を改善し、疼痛を緩和し、および／または固体の疼痛の発生および進行を遅延させるための方法を提供する。この方法は、有効量のＮＧＦアンタゴニストを有効量のＮＳＡＩＤと組み合わせて投与する工程を包含する。
【００１６】
本発明の方法は、あらゆる疼痛のあらゆる病因を処置または予防するのに適切である。これらは、ＮＳＡＩＤの使用が一般的に処方されている疼痛を含む。いくつかの実施形態においては、疼痛は、術後の疼痛である。いくつかの実施形態においては、疼痛は、火傷に関連する疼痛である。他の実施形態においては、疼痛は、慢性関節リューマチに関連する疼痛である。他の実施形態においては、疼痛は、骨関節炎に関する疼痛である。本発明の方法における使用に適切なＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦの生物学的活性を直接的または間接的に減少させる、任意の薬剤である。いくつかの実施形態においては、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦに結合（物理的に相互作用）し（例えば、抗体）、ＮＧＦレセプター（例えば、ｔｒｋＡレセプターおよび／もしくはｐ７５）に結合し、ならびに／または下流のＮＧＦレセプターのシグナル伝達を減少（妨害および／もしくはブロック）する（例えば、標的細胞におけるＮＧＦにより誘導されるキナーゼシグナル伝達もしくは他の下流のシグナル伝達のインヒビター）。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ合成および／または放出を阻害（減少）する。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦレセプターＴｒｋＡおよび／もしくはｐ７５の発現または機能を減少させる。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡイムノアドヘシンでないＮＧＦアンタゴニスト（すなわち、ＴｒｋＡイムノアドヘシン以外）である。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、以下のいずれか一以上から選択される：抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦをコードする核酸に指向するアンチセンス分子（ＮＧＦをコードする核酸に指向するアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦレセプターに指向するアンチセンス分子（例えば、ＴｒｋＡおよび／もしくはｐ７５）、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦの構造アナログ、ＮＧＦに結合する、ＴｒｋＡレセプターおよび／もしくはｐ７５レセプターの顕性不活性突然変異体、抗ＴｒｋＡ抗体、抗ｐ７５抗体、ならびにキナーゼインヒビター。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）は、ＮＧＦ（例えば、ｈＮＧＦ）に結合し、そして関連する神経栄養因子（例えば、ＮＴ−３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦ）には結合しない。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体である。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦに特異的に結合する。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒトＮＧＦを認識する。なお他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒトＮＧＦに特異的に結合する。なおさらなる実施形態において、この抗体は、以下のいずれか一以上から選択される抗体と本質的に同一のＮＧＦエピトープ６に結合する：ＭＡｂ９１１、ＭＡｂ９１２、およびＭＡｂ９３８（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）を参照のこと）。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒト化される（本明細書において記載される抗体Ｅ３のような、ヒト化Ｍａｂ９１１を含む）。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、（本明細書において記載されるよう���）抗体Ｅ３である。他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の一以上のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または他の実施形態においては、Ｅ３由来の６つ全てのＣＤＲ）を含む。他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒトである、さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）および表２に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）を含む。さらに他の実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、表２に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。さらに他の実施形態において、この抗体は、改変された定常領域（例えば、免疫学的に不活性な定常領域）を含み、例えば、補体に媒介される溶解を誘発しないか、または抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を刺激しない。他の実施形態において、この定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３−２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願番号９８０９９５１．８に記載されるように改変される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ分子に結合する。さらに他の実施形態において、このＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦに特異的に結合する抗体である。しかし、このＮＧＦアンタゴニストは、代替的にｔｒｋＡレセプターに結合する。このＮＧＦアンタゴニストは、ｈＮＧＦに結合し得、そしてヒトＴｒｋＡ（ｈＴｒｋＡ）へのｈＮＧＦの結合を有効に阻害し得る、抗ヒトＮＧＦ（抗ｈＮＧＦ）モノクローナル抗体であり得る。
【００１８】
ＮＧＦ（例えば、ｈＮＧＦ）への抗ヒトＮＧＦの結合親和性は、約０．１０ｎＭ〜約０．８０ｎＭ、約０．１５ｎＭ〜約０．７５ｎＭ、および約０．１８ｎＭ〜約０．７２ｎＭであり得る。一実施形態において、この結合親和性は、約２ｐＭと約２２ｐＭとの間である。いくつかの実施形態において、この結合親和性は、約１０ｎＭである。他の実施形態において、この結合親和性は、約１０ｎＭ未満である。他の実施形態において、この結合親和性は、約０．１ｎＭであるか、または約０．０７ｎＭである他の実施形態において、この結合親和性は、約０．１ｎＭ未満であるか、または約０．０７ｎＭ未満である。他の実施形態において、この結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれか〜約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかである。いくつかの実施形態において、この結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、もしくは約５０ｐＭ、または約５０ｐＭ未満のいずれかである。いくつかの実施形態において、この結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかに満たない。さらに他の実施形態において、この結合親和性は、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、または約４０ｐＭより大きい。当該分野で周知のように、結合親和性は、ＫＤまたは解離定数として表現され得、そして結合親和性の上昇は、ＫＤの減少に相当する。抗ＮＧＦマウスモノクローナル抗体９１１（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００））のヒトＮＧＦに対する結合親和性は、約１０ｎＭであり、ヒト化抗ＮＧＦ抗体Ｅ３（本明細書において記載される）のヒトＮＧＦに対する結合親和性は、約０．０７ｎＭである。
【００１９】
例えば、ＮＧＦアンタゴニストが抗体である場合、この抗体は、抗体フラグメントであり得る。この抗体フラグメントとしては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、単鎖抗体分子および抗体フラグメントから形成された他特異性抗体、ならびに単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子からなる群より選択される抗体フラグメントが挙げられる。
【００２０】
ＮＳＡＩＤは、任意の非ステロイド系抗炎症化合物であり得る。ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼを阻害するそれらの能力によってカテゴライズされる。シクロオキシゲナーゼ１およびシクロオキシゲナーゼ２は、シクロオキシゲナーゼの２つの主なアイソフォームであり、最も標準的なＮＳＡＩＤは、この２つのアイソフォームの混合インヒビターである。最も標準的なＮＳＡＩＤは、以下の５つの構造カテゴリーの一つに入る：（１）プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、およびケトプロフェン）；（２）酢酸誘導体（例えば、トルメチンおよびスリンダック）；（３）フェナム酸誘導体（例えば、メフェナム酸およびメクロフェナム酸）；（４）ビフェニルカルボン酸誘導体（例えば、ジフルニサルおよびフルフェニサール）；および（５）オキシカム（ｏｘｉｃａｍ）（例えば、ピロキシム、スドキシカム、およびイソキシカム）。
【００２１】
ＮＳＡＩＤの別の分類が記載されており、これは、シクロオキシゲナーゼ２を選択的に阻害する。Ｃｏｘ−２インヒビターは、例えば、米国特許第５，６１６，６０１号；同第５，６０４，２６０号；同第５，５９３，９９４号；同第５，５５０，１４２号；同第５，５３６，７５２号；同第５，５２１，２１３号；同第５，４７５，９９５号；同第５，６３９，７８０号；同第５，６０４，２５３号；同第５，５５２，４２２号；同第５，５１０，３６８号；同第５，４３６，２６５号；同第５，４０９，９４４号；および同第５，１３０，３１１号に記載されている（これらの全ては、本明細書において参考として援用される）。特定の例示的ＣＯＸ−２インヒビターとしては、セレコキシブ（ＳＣ−５８６３５）、ロフェコキシブ、ＤＵＰ−６９７、フロスリド（ＣＧＰ−２８２３８）、メロキシカム、６−メトキシ−２ナフチル酢酸（６−ＭＮＡ）、ＭＫ−９６６、ナブメトン（６−ＭＮＡのプロドラッグ）、ニメスリド、ＮＳ−３９８、ＳＣ−５７６６、ＳＣ−５８２１５、Ｔ−６１４；またはこれらの組み合わせが挙げられる。
【００２２】
いくつかの実施形態において、本発明は、アスピリンおよび／またはアセトアミノフェンがＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）と組み合わせて使用される方法を提供する。
【００２３】
ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはＮＳＡＩＤは、任意の適切な経路を介して個体に投与され得る。例えば、それらは、一緒にもしくは別々に、および／または同時におよび／または順次、経口的に、静脈内に、舌下に、皮下に、動脈内に、筋肉内に、直腸に、脊髄内に、気管内に、腹腔内に、脳室内に、舌下に、経皮的に、または吸入によって、投与され得る。投与は、全身性（例えば、静脈内）でも局所的でもよい。
【００２４】
第二の局面において、本発明は、神経成長因子アンタゴニストとＮＳＡＩＤとを含有する組成物を特徴とする。神経成長因子アンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、一種以上の薬学的に受容可能なキャリアまたは薬学的に受容可能な賦形剤と一緒に存在し得るか、またはそれらは別々の組成物中に存在し得る。別の局面において、本発明は、神経成長因子アンタゴニストとＮＳＡＩＤとの相乗作用性組成物を提供する。
【００２５】
第三の局面において、本発明は、本明細書において開示される任意の方法で使用するためのキットを特徴とする。このキットは、神経成長因子アンタゴニストとＮＳＡＩＤとを含む。このキットは、本明細書において開示される任意の方法のための使用説明書をさらに含む。この使用説明書は、ＮＳＡＩＤと組み合わせたＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）の投与（すなわち、同時投与および／または異なる時間での投与）を含み得る。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストとＮＳＡＩＤとは、一緒に包装されるが、それらは、同じ容器に入っていても入っていなくともよい。したがって、いくつかの実施形態において、このキットは、同じ容器内に存在するＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤ、ならびに本明細書において開示される任意の方法における使用のための説明書を含む。他の実施形態において、このキットは、別々の容器内に存在するＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを含む。
【００２６】
いくつかの実施形態において、本発明は、個体における疼痛を処置するための方法を提供する。この方法は、個体に有効量の抗神経成長因子（ＮＧＦ）抗体およびＮＳＡＩＤを投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、このＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナク、ケトプロフェン、トルメチン、スリンダク（ｓｌｉｎｄａｃ）、メフェナム酸、メクロフェナム酸、ジフルニサル、フルフェニサール、ピロキシム（ｐｉｒｏｘｉｍ）、スドキシカム、イソキシカム、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ）、ロフェコキシブ（ｒｏｆｅｃｏｘｉｂ）、ＤＵＰ−６９７、フロスリド（ｆｌｏｓｕｌｉｄｅ）、メロキシカム（Ｍｅｌｏｘｉｃａｍ）、６−メトキシ−２ナフチル酢酸、ＭＫ−９６６、ナブメトン、ニメスリド、ＮＳ−３９８、ＳＣ−５７６６、ＳＣ−５８２１５、Ｔ−６１４からなる群より選択される。いくつかの実施形態において、このＮＳＡＩＤは、イブプロフェンである。いくつかの実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒトＮＧＦに結合する。いくつかの実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、約１０ｎＭまたは約１０ｎＭ未満の結合親和性でヒトＮＧＦに結合する。いくつかの実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、この抗ＮＧＦ抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、このヒト化抗体は、配列番号１で示される重鎖可変領域および配列番号２で示される軽鎖可変領域を含む抗体である。いくつかの実施形態において、疼痛は、術後の疼痛である。
【００２７】
いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛を処置するための薬学的組成物を提供する。この薬学的組成物は、有効量の抗ＮＧＦ抗体およびＮＳＡＩＤ、ならびに薬学的に受容可能なキャリアを含有する。
【００２８】
いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛を処置するためのキットを提供する。このキットは、抗ＮＧＦ抗体、ＮＳＡＩＤ、および抗ＮＧＦ抗体をＮＳＡＩＤと組み合わせて投与して疼痛を処置するための、使用説明書を含む。
【００２９】
（発明の詳細な記述）
本発明者らは、有効量のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）をＮＳＡＩＤと合わせて投与することによって、疼痛が予防され得るか、または処置され得ることを発見した。本発明の方法および組成物は、疼痛の処置または予防に有用であり、その疼痛としては、ＮＳＡＩＤの使用が一般に処方される任意の疼痛が挙げられる。神経発育因子アンタゴニストの、本発明に従ったＮＳＡＩＤと組み合わせての使用によって、低用量のＮＳＡＩＤによる疼痛の処置が可能になり、それによって、ＮＳＡＩＤ処置と関連する副作用の可能性を低減する。いくつかの実施形態において、十分なＮＧＦアンタゴニストは、少なくとも約５％まで、少なくとも約１０％まで、少なくとも約２０％まで、少なくとも約３０％まで、少なくとも約５０％まで、少なくとも約６０％まで、少なくとも約７０％まで、もしくは少なくとも約９０％まで、またはそれより高い程度の疼痛の回復と同程度の効果に必要な通常のＮＳＡＩＤの投薬量の低減を可能にするように投与される。
【００３０】
ＮＳＡＩＤによる疼痛の処置はまた、本明細書中に記載されるように、ＮＧＦアンタゴニストと組み合わせたＮＳＡＩＤの投与により増強され得る。
【００３１】
一局面において、本発明は、有効量のＮＳＡＩＤと組み合わせた有効量のＮＧＦアンタゴニストを投与する工程を包含する、個体（例えば、哺乳動物、ヒトおよび非ヒトの両方）の疼痛を処置するか、または予防する方法を提供する。別の局面において、本発明は、有効量のＮＳＡＩＤと組み合わせた有効量のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）を投与する工程を包含する、個体における疼痛のＮＳＡＩＤ処置またはＮＳＡＩＤ予防を増強する方法を提供する。別の局面において、本発明は、疼痛の発生または進行を予防、改善、および／または予防する方法を提供する。
【００３２】
いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦに結合し得、そしてＮＧＦのインビボにおけるそのＴｒｋＡまたはｐ７５レセプターへの結合を有効に阻害し得るか、またはＮＧＦが、そのＴｒｋＡまたはｐ７５レセプターを活性化する工程有効に阻害し得る。いくつかの実施形態において、抗体のＮＧＦに対する結合親和性は、約０．０１〜約１．００ｎＭ、または約０．０５〜約０．２５ｎＭである。他の実施形態において、結合親和性は、約１ｐＭ、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約５０ｐＭ、約１００ｐＭ、またはそれより高い結合親和性である。一実施形態において、結合親和性は、約２ｐＭと２２ｐＭとの間である。いくつかの実施形態において、その抗体は、以下の任意の１つ以上から選択される抗体と本質的に同じＮＧＦエピトープ６に結合する：ＭＡｂ９１１、ＭＡｂ９１２およびＭＡｂ９３８。Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５〜２２７（２０００）を参照のこと。
【００３３】
その抗体はまた、抗体フラグメント（例えば、以下：Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、二重特異性抗体、単鎖抗体分子および抗体フラグメントから形成された複数特異性抗体、および単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子の１つ以上から選択される抗体フラグメント）であり得る。その抗体はまた、キメラ抗体であり得、そして、ヒト化抗体またはヒト抗体であり得る。その抗体はまた、二重特異性であり得る。
【００３４】
本発明に有用な例示的なＮＳＡＩＤとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（１）プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナクおよびケトプロフェン）；（２）酢酸誘導体（例えば、トルメチンおよびスリンダク）；（３）フェナム酸誘導体（例えば、メフェナム酸およびメクロフェナム酸）；（４）ビフェニルカルボン酸誘導体（例えば、ジフルニサルおよびフルフェニサール）；ならびに、（５）オキシカム（例えば、ピロキシム、スドキシカムおよびイソキシカム）。シクロオキシゲナーゼ２を選択的に阻害する別のクラスのＮＳＡＩＤが記載されている。Ｃｏｘ−２インヒビターは、例えば、米国特許第５，６１６，６０１号；同第５，６０４，２６０号；同第５，５９３，９９４号；同第５，５５０，１４２号；同第５，５３６，７５２号；同第５，５２１，２１３号；同第５，４７５，９９５号；同第５，６３９，７８０号；同第５，６０４，２５３号；同第５，５５２，４２２号；同第５，５１０，３６８号；同第５，４３６，２６５号；同第５，４０９，９４４号；および同第５，１３０，３１１号に記載され、これらは全て、本明細書中に参考として援用される。特定の例示的なＣＯＸ−２インヒビターとしては、セレコキシブ（ＳＣ−５８６３５）、ロフェコキシブ、ＤＵＰ−６９７、フロスリド（ＣＧＰ−２８２３８）、メロキシカム、６−メトキシ−２−ナフチル酢酸（６−ＭＮＡ）、ＭＫ−９６６、ナブメトン（６−ＭＮＡに対するプロドラッグ）、ニメスリド、ＮＳ−３９８、ＳＣ−５７６６、ＳＣ−５８２１５、Ｔ−６１４またはこれらの組合せが挙げられる。いくつかの実施形態において、アスピリンおよび／またはアセトミノフェンは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）と組み合わせて使用される。
【００３５】
本発明の方法および組成物は、任意の病因の疼痛の処置に有用であって、その疼痛としては、急性疼痛および慢性疼痛、炎症性構成要素を有する任意の疼痛、およびＮＳＡＩＤが通常処方される任意の疼痛が挙げられる。疼痛の例としては、外科手術後の疼痛、手術後の疼痛（歯痛を含む）、偏頭痛、頭痛および三叉神経神経痛、火傷と関連する疼痛、創傷または腎結石、外傷と関連する疼痛（外傷性頭部損傷を含む）、ニューロパシー性疼痛、筋骨格障害（例えば、慢性関節リウマチ）、変形性関節症、内臓疼痛、大腸炎、膵炎、胃炎、強直性脊髄炎、セロネガティブ（非リウマチ性）関節症、非関節性リウマチおよび関節周囲障害、ならびに癌と関連する疼痛（「ブレークスルー疼痛（ｂｒｅａｋ−ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐａｉｎ）」および末期癌と関連する疼痛）、末梢ニューロパシー、ヘルペス後神経痛、ならびに鎌状赤血球発症と関連する疼痛が挙げられる。炎症性構成要素を有する疼痛の例としては（上記の疼痛のいくつかに加えて）、リウマチ性疼痛、粘膜炎および月経困難症と関連する疼痛が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の方法および組成物は、外科手術後疼痛および／または癌性疼痛の処置または予防のために使用される。他の実施形態において、疼痛は、ＮＳＡＩＤが一般に処方される疼痛徴候（例えば、ニューロパシー性疼痛）である。他の実施形態において、本明細書中に記載される方法および組成物は、火傷と関連する疼痛の処置および／または予防のために使用される。他の実施形態において、本明細書中に記載される方法および組成物は、慢性関節リウマチに関連する疼痛の処置および／または予防のために使用される。他の実施形態において、本明細書中に記載される方法および組成物は、変形性関節症に関連する疼痛の処置および／または予防のために使用される。
【００３６】
別の局面において、本発明は、本明細書中に記載される任意の方法に使用するために適切なＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤを含む、疼痛を処置するための組成物およびキットを提供する。
【００３７】
（一般的技術）
本発明の実施は、他に示さない限り、分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来技術を使用し、それらは、当業者の範囲内である。このような技術は、文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第二版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４９；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ  ａｎｄ  Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｒｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）中に十分に説明されている。
【００３８】
（定義）
「抗体」（複数形態で相互変換可能に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して標的（例えば、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなど）に特異的に結合し得る免疫グロブリン分子である。本明細書中で使用される場合、この用語は、インタクトなポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体だけでなく、それらのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、二重特異性直鎖抗体単鎖抗体、複数特異的抗体（例えば、二重特異性抗体）、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の改変構造もまた含む。抗体としては、任意のクラスの抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ（もしくはこれらのサブクラス）が挙げられ、そしてその抗体は、任意の特定のクラスである必要はない。抗体の重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンは、種々のクラスに割り当てられ得る。５つの主要なクラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在し、これらの内のいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けられ得る。種々のクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμを称される。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は周知である。
【００３９】
「モノクローナル抗体」は、同種の抗体集団をいい、ここで、このモノクローナル抗体は、抗原の選択的結合に関与するアミノ酸（天然に存在する、天然には存在しない）からなる。モノクローナル抗体は、特異性が高く、単独抗原部位に対して指向される。用語「モノクローナル抗体」は、インタクトなモノクローナル抗体および全長モノクローナル抗体のみならず、それらのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、単鎖（ＳｃＦｖ）、これらの改変体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、および必要な特異性の抗原認識部位および抗原に結合する能力を有する免疫グロブリン分子の任意の他の改変された構造も含む。抗体の取得源、または抗体が作製される様式（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現トランスジェニック動物など）に関しては、限定されることは意図されない。
【００４０】
「ヒト化」抗体は、非ヒト種の免疫グロブリン、およびヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく分子の残存する免疫グロブリン構造に実質的に由来する抗原結合部位を有する分子をいう。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した完全可変ドメインまたは可変ドメイン中の適切なフレームワーク領域上に移植された相補性決定領域（ＣＤＲ）のみを含み得る。抗原結合部位は、野生型であり得るか、または１つ以上のアミノ酸置換基により改変（例えば、ヒト免疫グロブリンにより近く類似するように改変）され得る。ヒト化抗体のいくつかの型は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体由来の全ての６個のＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存する。ヒト化抗体の他の形態は、１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６つ）を有し、それらは、元の抗体に関して改変される。いくつかの例において、フレームワーク領域（ＦＲ）残基、またはヒト免疫グロブリンの他の残基は、対応する非ヒト残基により置換され得る。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見出されない残基を含み得る。
【００４１】
本明細書中で使用される場合、用語「神経発育因子」および「ＮＧＦ」は、神経発育因子およびＮＧＦの活性の少なくとも一部を保持するその改変体（例えば、スプライシング改変体およびタンパク質プロセシング改変体が挙げられる）をいう。本明細書中で使用される場合、ＮＧＦは、すべての哺乳動物種（ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマまたはウシ）のネイティブな配列ＮＧＦを含む。
【００４２】
「ＮＧＦレセプター」とは、ＮＧＦによって結合されるか、またはＮＧＦによって活性化されるポリペプチドをいう。ＮＧＦレセプターとしては、任意の哺乳動物種のＴｒｋＡレセプターおよびｐ７５レセプターが挙げられ、この任意の哺乳動物種としては、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、霊長類、またはウシが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４３】
「ＮＧＦアンタゴニスト」とは、ＮＧＦ生物学的活性をブロックするか、抑制するかまたは低減させる任意の分子をいい、このＮＧＦ生物学的活性としては、ＮＧＦシグナル伝達により媒介される下流の経路（例えば、レセプター結合および／またはＮＧＦに対する細胞応答の誘発）が挙げられる。用語「アンタゴニスト」とは、どんなものであれ、生物学的作用の非特異的な機構を意味し、直接的であるか、間接的であるか、またはＮＧＦ、そのレセプターと相互作用するか、または別の機構を介したＮＧＦとの全ての可能な薬理学的、生理学的、および生化学的な相互作用を含み、そして種々の異なる、かつ化学的に相違する組成物によって達成され得るその結果を含むことが明白に判断される。例示的なＮＧＦアンタゴニストとしては、抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦに関するアンチセンス分子（ＮＧＦをコードする核酸に関するアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦ構造アナログ、ＮＧＦに結合するＴｒｋＡレセプターのドミナントネガティブな変異、ＴｒｋＡイムノアドヘシン、抗ＴｒｋＡ抗体、抗ｐ７５抗体、ＴｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターのいずれか、または両方に関するアンチセンス分子（ＴｒｋＡまたはｐ７５をコードする核酸分子に関するアンチセンス分子を含む）、ならびに、キナーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的のために、用語「アンタゴニスト」が、全てのこれまでに同定した用語、表題および機能状態ならびに特徴を含むことが明白に理解され、それによって、ＮＧＦそれ自体、ＮＧＦの生物学的活性（疼痛の任意の局面を媒介するその能力が挙げられるが、これに限定されない）または生物学的活性の結果が、実質的に無効化されるか、低減されるか、または任意の意味のある程度に中和されることが明白に理解される。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ（例えば、抗体）に結合する（物理的に相互作用する）か、ＮＧＦレセプター（例えば、ｔｒｋＡレセプターまたはｐ７５レセプター）に結合するか、下流のＮＧＦレセプターシグナル伝達を低減する（妨げる、および／またはブロックする）か、そして／またはＮＧＦ合成、産生または放出を阻害する（低減する）。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ（例えば、抗体）に結合する（物理的に相互作用する）か、ＮＧＦレセプター（例えば、Ｔｒｋレセプターまたはｐ７５レセプター）に結合するか、そして／または下流のＮＧＦレセプターシグナル伝達を低減する（妨げる、および／またはブロックする）。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストじゃ、ＮＧＦに結合し、そして、Ｔｒｋレセプターの二量体化を防止し、そして／またはＴｒｋＡ自己リン酸化を防止する。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ合成および／または産生（放出）を阻害するか、または低減する。ＮＧＦアンタゴニストの型の例は、本明細書中に提供される。
【００４４】
本明細書中で使用される場合、「抗ＮＧＦ抗体」とは、ＮＧＦに結合し、ＮＧＦの生物学的活性および／またはＮＧＦシグナル伝達によって媒介される下流の経路を阻害し得る。
【００４５】
「ＴｒｋＡイムノアドヘシン」とは、ＴｒｋＡレセプターのフラグメント（例えば、ＴｒｋＡレセプターの結合特異性を保持するＴｒｋＡレセプターの細胞外ドメインおよび免疫グロブリン配列）を含む可溶性キメラ分子をいう。
【００４６】
ＮＧＦの「生物学的活性」とは、一般に、ＮＧＦレセプターに結合し、そして／またはＮＧＦレセプターシグナル伝達経路を活性化する能力をいう。生物学的活性は、限定されることなく、以下の任意の１つ以上を含む：ＮＧＦレセプター（例えば、ｐ７５および／もしくはＴｒｋＡ）に結合する能力；ＴｒｋＡレセプター二量体化を促進する能力、および／または自己リン酸化を促進する能力；ＮＧＦレセプターシグナル伝達経路を活性化する能力；細胞分化、増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、生存、増殖（ｇｒｏｗｔｈ）および他の細胞生理における変化（（ニューロンの場合には、末梢ニューロンおよび中枢ニューロンを含む）ニューロン形態、シナプス形成、シナプス機能、神経伝達物における変化および／または神経ペプチド放出ならびに損傷後の再生）を促進する能力；ならびに疼痛を媒介する能力。
【００４７】
用語「エピトープ」は、（モノクローナルまたはポリクローナル）抗体のための、抗原（例えば、タンパク質抗原）上の結合部位をいうために使用される。
【００４８】
本明細書中で使用される場合、「処置」は、有益であるか、または所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益であるか、または所望の臨床結果としては、以下：疼痛（急性、慢性、炎症性、神経障害性、または外科手術後の疼痛）の任意の局面の改善または軽減の１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的のために、有益であるか、または所望の臨床結果としては、以下：重篤度の軽減、任意の局面の疼痛を含む疼痛と関連する１つ以上の症状の軽減（例えば、疼痛の期間の短縮および／または疼痛の感度または知覚の軽減）の１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４９】
疼痛の「発生率の減少」は、任意の重篤度の軽減（この状態に対して一般に使用される他の薬物および／または治療（例えば、それらに曝露する）、期間および／または頻度（例えば、個体において、疼痛までの時間を遅らせるか、または疼痛までの時間を増加させる工程が挙げられる）に対する必要性および／またはそれらの量の低減を含み得る）を意味する。当業者に理解されるように、個体は、処置に対する反応に関して変動し得、従って、例えば、「個体における疼痛の発生率を低減させる方法」は、本明細書中に記載されるＮＳＡＩＤと組み合わせた本明細書中に記載されるＮＧＦアンタゴニストの投与が特定の個体における発生率における低減を引き起こし得るという適切な予測に基づいて、このように投与する工程を示す。
【００５０】
疼痛または１つ以上の疼痛の症状の「改善」は、ＮＳＡＩＤと組み合わせたＮＧＦアンタゴニストを投与しない工程に比較して、疼痛の１つ以上の症状が軽減または改善する工程を意味する。「改善」はまた、症状の期間における短縮および減少を含む。
【００５１】
疼痛または１つ以上の疼痛の症状の「緩和」は、本発明に従って、ＮＳＡＩＤと組み合わせたＮＧＦアンタゴニストで処置した個体または個体の集団における疼痛の１つ以上の望ましくない臨床的発現の程度を減少させる工程を意味する。
【００５２】
本明細書中で使用される場合、疼痛の発生の「遅延」は、疼痛の進行を延期し、阻害し、緩慢にし、遅延させ、安定させ、そして／または遅らせることを意味する。この遅延は、病歴および／または処置される個体に依存して時間の長さが変動し得る。当業者には明らかでるように、十分または顕著な遅延は、事実上、個体が疼痛を発現しないという点で予防を含み得る。症状の発症を遅延する方法は、この方法を使用しない場合と比較して、所定の時間枠内で、症状を発現する可能性を減少させる方法、および／または所定の時間内で症状の程度を軽減する方法である。このような比較は、代表的に、統計的に有意な数の被験体を使用する臨床研究に基づいている。
【００５３】
疼痛の「発生」または「進行」は、初期の徴候および／または障害の進行を確実にする工程を意味する。疼痛の発生は、検出可能であり得、そして、当該分野で周知である標準的な臨床技術を使用して評価され得る。しかし、発生はまた、検出可能ではあり得ない進行もまたいう。本発明の目的のために、発生または進行は、症状の生物学的過程をいう。「発生」とは、出現、再発および開始を含む。本明細書中で使用される場合、疼痛の「開始」または「出現」は、初期の開始および／または再発を含む。
【００５４】
「有効量」は、疼痛の知覚における緩和または減少を含む有益または所望の臨床結果を達成するのに十分な量である。本発明の目的のために、有効量のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤは、任意の種類の疼痛（急逝、慢性、炎症性、神経障害性、または外科手術後の疼痛を含む）を処置するか、改善するか、その疼痛の強度を低減させるか、または予防するために十分な量を含む。いくつかの実施形態において、有効量のＮＳＡＩＤおよびＮＧＦアンタゴニストは、外部刺激に対する感受性の閾値を、健康な被験体に観察されるレベルと同等のレベルまで調節し得るＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの量である。他の実施形態において、このレベルは、健康な被験体に観察されるレベルと同等ではない場合もあるが、組合せ治療を受けない場合と比較して低減される。有効量のＮＧＦアンタゴニストはまた、本明細書中に記載されるとおり、疼痛のＮＳＡＩＤ処置を増強するため、または、本明細書中で記載されるとおり、疼痛の処置または予防に必要なＮＳＡＩＤの用量を減少させるために、十分な量のＮＧＦアンタゴニストを含む。当該分野で理解されるように、ＮＳＡＩＤと組み合わせた有効量のＮＧＦアンタゴニストは、とりわけ、疼痛の型（および患者の病歴ならびに他の因子（例えば、使用されたＮＧＦアンタゴニストおよび／もしくはＮＳＡＩＤの型（ならびに／または投薬量）））に依存して変動し得る。本発明の文脈における有効量はまた、相乗効果が達成されるようなＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤアンタゴニストの量であり得る。本発明の文脈における有効量のアンタゴニストは一般に、疼痛に対するＮＳＡＩＤの治療効果の増強を生じる（言い換えると、それは、その投薬量が減少する、そして／またはいくつかの他の有益な効果が観察されることを意味する）ため、そして／またはＮＳＡＩＤ処置のみと比較して有益な効果を生じるために十分な量を意味する。「有効量」のＮＧＦアンタゴニストはまた、ＮＧＦアンタゴニストのみ、またはＮＳＡＩＤのみを投与する場合と比較する場合に相乗効果を生じ得る。
【００５５】
「個体」は、脊椎動物、好ましくは、哺乳動物、より好ましくは、ヒトである。哺乳動物としては、家畜、娯楽動物（ｓｐｏｒｔ  ａｎｉｍａｌ）、ペット、霊長類、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、マウスおよびラットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５６】
用語「ＮＳＡＩＤ」とは、非ステロイド性抗炎症性化合物をいう。ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼを阻害し得る能力によって分類される。シクロオキシゲナーゼ１およびシクロオキシゲナーゼ２は、シクロオキシゲナーゼの二つの主要なアイソフォームであり、最も標準的なＮＳＡＩＤは、この二つのアイソフォームの混合されたインヒビターである。最も標準的なＮＳＡＩＤは、以下の５つの構造分類の一つに含まれる：（１）プロピオン酸誘導体（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナクおよびケトプロフェン）；（２）酢酸誘導体（例えば、トルメチンおよびスリンダク）；（３）フェナム酸誘導体（例えば、メフェナム酸およびメクロフェナム酸）；（４）ビフェニルカルボン酸誘導体（例えば、ジフルニサルおよびフルフェニサール）；ならびに、（５）オキシカム（例えば、ピロキシム、スドキシカムおよびイソキシカム）。
【００５７】
シクロオキシゲナーゼ２を選択的に阻害する別のクラスのＮＳＡＩＤが記載されている。Ｃｏｘ−２インヒビターは、例えば、米国特許第５，６１６，６０１号；同第５，６０４，２６０号；同第５，５９３，９９４号；同第５，５５０，１４２号；同第５，５３６，７５２号；同第５，５２１，２１３号；同第５，４７５，９９５号；同第５，６３９，７８０号；同第５，６０４，２５３号；同第５，５５２，４２２号；同第５，５１０，３６８号；同第５，４３６，２６５号；同第５，４０９，９４４号；および同第５，１３０，３１１号に記載され、これらは全て、本明細書中に参考として援用される。特定の例示的なＣＯＸ−２インヒビターとしては、セレコキシブ（ＳＣ−５８６３５）、ＤＵＰ−６９７、フロスリド（ＣＧＰ−２８２３８）、メロキシカム、６−メトキシ−２−ナフチル酢酸（６−ＭＮＡ）、ロフェコキシブ、ＭＫ−９６６、ナブメトン（６−ＭＮＡに対するプロドラッグ）、ニメスリド、ＮＳ−３９８、ＳＣ−５７６６、ＳＣ−５８２１５、Ｔ−６１４またはこれらの組合せが挙げられる。
【００５８】
いくつかの実施形態において、アスピリンおよび／またはアセトミノフェンは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）と組み合わせて摂取される。アスピリンは、別の型の非ステロイド性抗炎症性化合物である。
【００５９】
本明細書中に使用される場合、「組み合わせた」投与は、同時投与および／または異なる時点での投与を包含する。組み合わせた投与はまた、共処方物（すなわち、ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤが、同じ組成物中に存在する）としての投与、または別個の組成物としての投与を包含する。本明細書中で使用される場合、組み合わせた投与は、ＮＳＡＩＤとＮＧＦアンタゴニストとが個体に投与される（これは、同時および／または別個に行われ得る）任意の環境を包含する。本明細書中でさらに考察されるように、ＮＧＦアンタゴニストとＮＳＡＩＤとは、種々の投与頻度または投与間隔で投与され得ることが理解される。例えば、抗ＮＧＦ抗体は、１週間当たり１回投与され得、一方、ＮＳＡＩＤは、同じ投与経路または異なる投与経路を使用して、投与され得る。
【００６０】
「外科手術後の疼痛」（互換可能に、「切開後の疼痛」または「外傷後の疼痛」ともいわれる）は、個体の組織中への切断、穿刺、切開、裂傷、または創傷（侵襲的であるかまたは非侵襲的であるかにはかかわらず、全ての外科手術手順によって生じるものを含む）のような、外傷によって生じる疼痛または外傷の結果である疼痛をいう。本明細書中で使用される場合、外科手術後の疼痛には、外部からの物理的な外傷を伴わずに起こる（外部からの物理的な外傷を伴わずに生じる、または外部からの物理的な外傷が原因ではない）疼痛は含まれない。いくつかの実施形態においては、外科手術後の疼痛は、内部または外部（周辺を含む）の疼痛であり、創傷、切断、外傷、裂傷、または切開が、偶然に（外傷性創傷のように）または意図的に（外科手術による切開のように）生じ得る。本明細書中で使用される場合は、「疼痛」には、侵害受容および疼痛の感覚が含まれ、疼痛は、当該分野で周知の疼痛のスコアおよび他の方法を使用して、客観的および主観的に評価され得る。外科手術後の疼痛には、本明細書中で使用される場合には、異痛症（すなわち、通常は毒性のない刺激に対する増加した反応（有害な知覚））および痛覚過敏（すなわち、通常は有害であるかまたは不愉快である刺激に対する増加した反応）が含まれ、これらは言い換えると、熱または機械的な（触感）の性質のものであり得る。いくつかの実施形態においては、疼痛は、温度感受性、機械的感受性、および／または安静時の疼痛によって特徴付けられる。いくつかの実施形態においては、外科手術後の疼痛には、無意識に生じた疼痛または安静時の疼痛が含まれる。他の実施形態においては、外科手術後の疼痛には、安静時の疼痛が含まれる。
【００６１】
疼痛のＮＳＡＩＤ処置は、ＮＳＡＩＤ処置の一局面が（ＮＧＦアンタゴニストを投与せずにＮＳＡＩＤを投与するのと比較して）改善された場合に、「増強される」。例えば、疼痛のＮＳＡＩＤ処置の効力は、ＮＧＤアンタゴニストの非存在下でのＮＳＡＩＤの効力と比較して、ＮＧＦアンタゴニストの存在下では増加され得る。別の例として、ＮＳＡＩＤを用いる疼痛の処置または予防は、ＮＳＡＩＤと組み合わせてＮＧＦアンタゴニストを使用することによって、その使用が良好な疼痛の軽減を可能にする場合（例えば、疼痛の有効な処置も予防も可能にしない用量のＮＳＡＩＤが使用される場合）には、「増強され得る」。
【００６２】
（本発明の方法）
本明細書中で記載される方法すべてに関して、ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤに対する言及はまた、１種以上のこれらの薬剤を含む組成物を包含する。本発明は、個体（すべての動物（ヒト動物および非ヒト動物の両方）を含む）における疼痛を処置するために有用である。
【００６３】
一局面において、本発明は、個体において疼痛を処置する方法を提供し、この方法は、有効量のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）を有効量のＮＳＡＩＤと組み合わせて個体に投与する工程を包含する。いくつかの実施形態において、充分なＮＧＦアンタゴニストが、同程度の疼痛軽減をもたらすために必要とされるＮＳＡＩＤの通常量を、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％以上減少させるのを可能にするために、投与される。
【００６４】
別の局面において、本発明は、個体における疼痛のＮＳＡＩＤによる処置を増強する方法を提供し、この方法は、有効量のＮＧＦアンタゴニストを有効量のＮＳＡＩＤと組み合わせて個体に投与する工程を包含する。
【００６５】
いくつかの実施形態において、疼痛は、以下のうちの任意の１つ以上を包含する：急性疼痛および／もしくは慢性疼痛、炎症成分を伴う任意の疼痛、手術後の疼痛（歯痛を含む）、偏頭痛、頭痛および三叉神経痛、火傷に関連する疼痛、創傷に関連する疼痛もしくは腎結石に関連する疼痛、外傷（外傷性頭部損傷を含む）に関連する疼痛、神経障害性疼痛、鎌状赤血球に関連する疼痛、月経困難症に関連する疼痛もしくは腸機能不全に関連する疼痛、および癌に関連する疼痛（「抑えきれない痛み（ｂｒｅａｋ−ｔｈｒｏｕｇｈ  ｐａｉｎ）」および末期癌に関連する疼痛）。他の実施形態において、上記疼痛は、ＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）を用いて通常処置される任意の疼痛である。他の実施形態において、上記疼痛は、火傷に関連する疼痛である。他の実施形態において、上記疼痛は、慢性関節リウマチに関連する疼痛である。他の実施形態において、上記疼痛は、変形性関節症に関連する疼痛である。
【００６６】
別の局面において、本発明は、疼痛の発症もしくは進行を、予防、軽減および／または防止する方法を提供する。従って、いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、ＮＧＦ抗体）および／またはＮＳＡＩＤが、有痛事象（例えば、手術）の前に投与される。例えば、ＮＧＦアンタゴニストは、疼痛を生じる可能性がある活動または疼痛を生じる危険性がある活動（例えば、外傷もしくは手術）の３０分間前、１時間前、５時間前、１０時間前、１５時間前、２４時間前、またはそれ以上（例えば、１日間、数日間、もしくは１週間、２週間、３週間、またはそれ以上）前に、投与される。
【００６７】
疼痛の処置または予防は、当該分野で周知の方法を使用して評価される。評価は、客観的尺度（例えば、挙動（例えば、刺激に対する反応、顔の表情など）の観察）に基づいて実施され得る。評価はまた、主観的尺度（例えば、種々の疼痛の尺度を使用しての疼痛の患者の特徴付け）に基づいてなされ得る。例えば、Ｋａｔｚら、Ｓｕｒｇ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（１９９９）７９（２）：２３１〜５２；Ｃａｒａｃｅｎｉら、Ｊ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｎ  Ｍａｎａｇｅ（２００２）２３（３）：２３９〜５５参照）。
【００６８】
慢性関節リウマチの疼痛の診断または評価は、当該分野で充分に確立されている。評価は、当該分野で公知の尺度（例えば、種々の疼痛の尺度を使用する疼痛の患者の特徴づけ）に基づいて実施され得る。例えば、Ｋａｔｚら、Ｓｕｒｇ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（１９９９）７９（２）：２３１〜５２；Ｃａｒａｃｅｎｉら、Ｊ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｎ  Ｍａｎａｇｅ（２００２）２３（３）：２３９〜５５参照。疾患状態を測定するために、これもまた一般的に使用されている尺度が存在する。例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）（Ｆｅｌｓｏｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）３６（６）：７２９〜７４０）、Ｈｅａｌｔｈ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＨＡＱ）（Ｆｒｉｅｓら（１９８２）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．９：７８９〜７９３）、Ｐａｕｌｕｓ  Ｓｃａｌｅ（Ｐａｕｌｕｓら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９０）３３：４７７〜４８４）、およびＡｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｉｍｐａｃｔ  Ｍｅａｓｕｒｅ  Ｓｃａｌｅ（ＡＩＭＳ）（Ｍｅｅｎａｍら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ａｎｄ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（１９８２）２５：１０４８〜１０５３）である。
【００６９】
変形性関節症疼痛の診断または評価は、当該分野で充分に確立されている。評価は、当該分野で公知の尺度（例えば、種々の疼痛の尺度を使用する疼痛の患者の特徴づけ）に基づいて実施され得る。例えば、Ｋａｔｚら、Ｓｕｒｇ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（１９９９）７９（２）：２３１〜５２；Ｃａｒａｃｅｎｉら、Ｊ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｎ  Ｍａｎａｇｅ（２００２）２３（３）：２３９〜５５参照。例えば、ＷＯＭＡＣ  Ａｍｂｕｌａｔｉｏｎ  Ｐａｉｎ  Ｓｃａｌｅ（疼痛、硬さ、身体機能を含む）および１００ｍｍ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ  Ｓｃａｌｅ（ＶＡＳ）が、疼痛を評価するため、およびその処置に対する応答を評価するために、使用され得る。
【００７０】
ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤが、単一組成物または別個の組成物のいずれかとして、併用して投与される場合に、その神経成長因子アンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、望ましい効果の発現と一致する比率で提示されることが理解される。いくつかの実施形態において、神経成長因子アンタゴニスト：ＮＳＡＩＤの重量比は、１：１である。いくつかの実施形態において、この比は、約０．００１：約１と、約１０００：約１との間、約０．０１：約１と約１００：約１との間、または約０．１：約１と約１０：約１との間であり得る。他の比も企図される。
【００７１】
疼痛の処置または予防において使用するために必要な神経成長因子アンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの量は、選択する特定の化合物または組成物によってのみならず、投与経路、処置される状態の性質、ならびに患者の年齢および状態によっても変動し、最終的には主治医の判断によることが認識される。
【００７２】
（ＮＧＦアンタゴニスト）
本発明の方法は、ＮＧＦアンタゴニストを使用する。ＮＧＦアンタゴニストとは、ＮＧＦの生物学的活性（ＮＧＦシグナル伝達により媒介される下流経路（レセプター結合および／またはＮＧＦに対する細胞応答の惹起を含む）を含む）をブロック（有意にブロックすることを含む）、抑制（有意に抑制することを含む）、または減少（有意に減少することを含む）する任意の分子を指す。用語「アンタゴニスト」とは、生物学的作用の特定の機構を一切示さず、この用語は、種々の異なりかつ化学的に多用な組成物によって達成され得る、ＮＧＦと生じ得るすべての薬理学的相互作用、生理学的相互作用、および生化学的相互作用、ならびにその結果を明示的に包含するとみなされる。例示的なＮＧＦアンタゴニストとしては、抗ＮＧＦ抗体、ポリペプチド（抗ＮＧＦ抗体に由来するＮＧＦ結合ドメイン（例えば、ＮＧＦに結合するために充分なＣＤＲ領域を含む結合ドメイン）を含むポリペプチドを含む）、ＮＧＦに対するアンチセンス分子（ＮＧＦをコードする核酸に対するアンチセンス分子を含む）、ＴｒｋＡレセプターおよび／もしくはｐ７５レセプターのうちのいずれかまたは両方に対するアンチセンス分子（ｔｒｋＡもしくはｐ７５をコードする核酸分子に対するアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦ構造アナログ、ＮＧＦに結合するＴｒｋＡレセプターのドミナントネガティブ変異、ＴｒｋＡイムノアドヘシン、抗ＴｒｋＡ抗体、抗ｐ７５抗体、およびキナーゼインヒビターが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の目的のためには、用語「アンタゴニスト」とは、ＮＧＦ自体、ＮＧＦの生物学的活性（それが疼痛のなんらかの局面を媒介する能力が挙げられ得るが、これに限定されない）、またはその生物学的活性の結果が、有意義な何らかの手以後で実質的に無効になるか、減少するか、または中和される、以前に同定された用語、表題、および機能的な状態および特徴を包含することが明示的に理解される。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）は、ＮＧＦに結合（ＮＧＦと物理的に相互作用）し、ＮＧＦレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプターおよび／もしくはｐ７５レセプター）に結合し、そして／または下流のＮＧＦレセプターシグナル伝達を減少（妨害および／もしくはブロック）する。従って、いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）は、ＮＧＦに結合（ＮＧＦと物理的に相互作用）する。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプターもしくはｐ７５レセプター）に結合する。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、下流のＮＧＦレセプターシグナル伝達を減少（妨害および／もしくはブロック）する（例えば、キナーゼシグナル伝達のインヒビター）。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦの合成および／または放出を阻害（減少）する。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡイムノアドヘシンである。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体以外である。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ（例えば、ｈＮＧＦ）に結合し、関連するニューロトロフィン（例えば、ＮＴ−３、ＮＴ４／５、および／もしくはＢＤＮＦ）には有意には結合しない。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ヒトＮＧＦに結合し、別の脊椎動物種（いくつかの実施形態においては、哺乳動物）に由来するＮＧＦには有意には結合しない。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ヒトＮＧＦおよび別の脊椎動物種由来の１種以上のＮＧＦに結合する。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦおよび少なくとも１種の他のニューロトロフィンに結合する。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ある哺乳動物（例えば、ウマもしくはイヌ）種のＮＧＦに結合するが、別の哺乳動物種に由来するＮＧＦには有意には結合しない。
【００７３】
（抗ＮＧＦ抗体）
本発明のいくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体を包含する。抗ＮＧＦ抗体は、以下の特徴のうちのいずれか１つ以上の示す：（ａ）ＮＧＦに結合し、ＮＧＦの生物学的機能および／またはＮＧＦシグナル伝達機能により媒介される下流経路を阻害する；（ｂ）特にＮＳＡＩＤと組み合わせて、疼痛の何らかの局面を処置または予防する；（ｃ）ＮＧＦレセプターの活性化（ｔｒｋＡレセプターの二量体化および／もしくは自己リン酸化を含む）をブロックもしくは減少する；（ｄ）ＮＧＦのクリアランスを増加する；（ｅ）疼痛のＮＳＡＩＤによる処置を増強する。
【００７４】
抗ＮＧＦ抗体は、当該分野で公知である。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ０２０９６４５８；ＷＯ０１／７８６９８、ＷＯ０１／６４２４７、米国特許第５，８４４，０９２号、同第５，８７７，０１６号；および同第６，１５３，１８９号；Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５〜２２７（２０００）；Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．１３：５５９〜５６８（１９９３）；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ３９６０８、Ｕ３９６０９、Ｌ１７０７８、もしくはＬ１７０７７を参照のこと。
【００７５】
いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦに特異的に結合する。なお他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、ヒト化抗体（例えば、本明細書中に記載される抗体Ｅ３）である。いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３（本明細書中に記載される）である。他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、Ｅ３に由来する１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、３つのＣＤＲ、４つのＣＤＲ、５つのＣＤＲ、またはいくつかの実施形態においては、６つすべてのＣＤＲ）を含む。他の実施形態において、上記抗体は、ヒト抗体である。なお他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）および表２に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。なお他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号１）を含む。なお他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、表２に示される軽鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号２）を含む。なお他の実施形態において、上記抗体は、改変型定常領域（例えば、免疫学的に不活性である（例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激しない）定常領域）を含む。他の実施形態において、上記定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願番号９８０９９５１．８に記載されるように、改変される。他の実施形態において、上記ＮＧＦ抗体は、米国特許出願番号１０／７４５，７７５に記載される任意の抗体である。
【００７６】
いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体「Ｅ３」と呼ばれるヒト化マウス抗ＮＧＦモノクローナル抗体であり、これは、変異Ａ３３０Ｐ３３１→Ｓ３３０Ｓ３３１（アミノ酸の番号付けは、野生型ＩｇＧ２ａの配列を参照する；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３〜２６２４参照）を含むヒト重鎖ＩｇＧ２ａ定常領域；ヒト軽鎖κ定常領域；ならびに表１および表２に示される重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む。
【００７７】
（表１：重鎖可変領域）
【００７８】
【表１】
2006525960.tif 000002
（配列番号１）。
【００７９】
（表２：軽鎖可変領域）
【００８０】
【表２】
2006525960.tif 000003
（配列番号２）。
【００８１】
上記Ｅ３重鎖可変領域をコードする以下のポリペプチドまたは上記Ｅ３軽鎖可変領域をコードする以下のポリペプチドは、２００３年１月８日にＡＴＣＣに寄託された：
【００８２】
【表３】
2006525960.tif 000004
ベクターＥｂ．９１１．３Ｅは、表２に示される軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。ベクターＥｂ．ｐｕｒ．９１１．３Ｅは、表２に示される軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。ベクターＤｂ．９１１．３Ｅは、表１に示される重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドである。これらのポリヌクレオチドはまた、定常ドメインもコードする。
【００８３】
ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術（（１）交差種配列変動性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（第５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ））；および（２）高原−抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７７；Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７〜９４８））が、存在する。本明細書中で使用される場合、ＣＤＲは、いずれかのアプローチによってか、または両方のアプローチの組み合わせによって規定される、ＣＤＲを指し得る。
【００８４】
別の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、Ｅ３に由来する１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、３つのＣＤＲ、４つのＣＤＲ、５つのＣＤＲ、またはいくつかの実施形態においては、６つすべてのＣＤＲ）を含む。ＣＤＲ領域の決定は、充分に当業者の技術範囲内にある。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの組み合わせであり得る。
【００８５】
本発明において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、へテロ結合体抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、それらの変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、ならびに必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変構成（抗体のグリコシル化改変体、抗体のアミノ酸配列改変体、および共有結合改変抗体を包含する）を包含し得る。上記抗体は、マウス抗体、ラット抗体、ヒト抗体、または他の任意の起源（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含む）であり得る。本発明の目的のために、上記抗体は、ＮＧＦを阻害する様式、および／またはＮＧＦシグナル伝達機能により媒介される下流経路を阻害する様式で、ＮＧＦと反応する。一実施形態において、上記抗体は、ヒトＮＧＦ上の１つ以上のエピトープを認識する抗体である。別の実施形態において、上記抗体は、ヒトＮＧＦ上の１つ以上のエピトープを認識する、マウス抗体またはラット抗体である。別の実施形態において、上記抗体は、霊長類、げっ歯類、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシからなる群より選択されるＮＧＦ上の１つ以上のエピトープを認識する。別の実施形態において、上記抗体は、改変型定常領域（例えば、免疫学的に不活性である（例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を刺激しない）定常領域）を含む。ＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号に開示される方法を使用して評価され得る。他の実施形態において、上記定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／または英国特許出願番号９８０９９５１．８に記載されるように、改変される。
【００８６】
ＮＧＦ（例えば、ｈＮＧＦ）に対する抗ＮＧＦ抗体の結合親和性は、約０．０１〜約１ｎＭ、約０．０５〜約０．２５ｎＭ、約０．１０〜約０．８０ｎＭ、約０．１５〜約０．７５ｎＭ、および約０．１８〜約０．２５ｎＭであり得る。いくつかの実施形態において、上記結合親和性は、約１ｐＭ、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、または約４０ｐＭより大きい。一実施形態において、上記結合親和性は、約２ｐＭと２２ｐＭとの間である。他の実施形態において、上記結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約１０ｐＭ未満である。いくつかの実施形態において、上記結合親和性は、約１０ｎＭである。他の実施形態において、上記結合親和性は、約１０ｎＭ未満である。他の実施形態において、上記結合親和性は、約０．１ｎＭ〜約０．０７ｎＭである。他の実施形態において、上記結合親和性は、約０．１ｎＭ未満または約０．０７ｎＭ未満である。他の実施形態において、上記結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのうちのいずれかから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのうちのいずれかまでである。いくつかの実施形態において、上記結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約１００ｐＭ、もしくは約ｐ５０Ｍ、または約５０ｐＭ未満のうちのいずれかである。なお他の実施形態において、上記結合親和性は、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、または約４０ｐＭよりも大きい。
【００８７】
ＮＧＦに対する抗体の結合親和性を決定する１つの方法は、抗体の単官能性Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによる。単官能性Ｆａｂ断片を得るためには、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで切断することができ、また、組み換えによって発現させることもできる。抗体の抗ＮＧＦ  Ｆａｂ断片の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００ＴＭ表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、ＢＩＡｃｏｒｅ，ＩＮＣ，Ｐｉｓｃａｗａｙ  ＮＪ）によって決定することができる。ＣＭ５チップは、供給業者の説明書にしたがって、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化させることができる。ヒトＮＧＦ（または任意の他のＮＧＦ）は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．０）で希釈して、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化したチップ上に注入することができる。個々のチップチャンネルを通過させるフロー時間を変化させることにより、２つの抗原密度の範囲に達するようにできる：詳細な速度論の研究については１００〜２００反応単位（ＲＵ）、そしてスクリーニングアッセイについては５００〜６００ＲＵ。チップは、エタノールアミンでブロックすることができる。再生の研究は、Ｐｉｅｒｃｅ溶出緩衝液（製品番号２１００４、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ）と４ＭのＮａＣｌの混合物（２：１）により２００回の注入全てについてチップ上でｈＮＧＦの活性を維持したまま、結合したＦａｂが効率よく除去されたことを示した。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５  ＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％のＳｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２９）は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイの泳動緩衝液として使用される。精製されたＦａｂ試料の段階希釈物（０．１〜１０×概算のＫＤ）を、１００μＬ／分で１分間かけて注入し、２時間までの解離時間とした。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知の濃度（アミノ酸分析によって決定される）Ｆａｂを使用して、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動によって決定される。動的会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡｅｖａｌｕｔｉｏｎプログラムを使用して１：１  Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．Ｒｏｓｓ，Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６．９９−１１０）にデータをフィットさせることによって同時に得られる。平衡解離定数（ＫＤ）の値は、ｋｏｎ／ｋｏｆｆとして計算される。このプロトコルは、ヒトＮＧＦ、別の脊椎動物のＮＧＦ（いくかの実施形態においては、哺乳動物）を含むあらゆるＮＧＦ（例えば、マウスＮＧＦ、ラットＮＧＦ、霊長類ＮＧＦ）に対する抗体の結合親和性を決定することにおける使用に、さらには、関連するニュートロフィンＮＴ３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦのような他のニュートロフィンを伴う使用に適している。
【００８８】
いくつかの実施形態においては、抗体はヒトＮＧＦに結合し、別の脊椎動物種（いくつかの実施形態においては、哺乳動物）に由来するＮＧＦには有意には結合しない。いくつかの実施形態においては、抗体はヒトＮＧＦに結合し、さらに別の脊椎動物種（いくつかの実施形態においては、哺乳動物）に由来する１つ以上のＮＧＦにも結合する。さらに他の実施形態においては、抗体はＮＧＦに結合し、他のニュートロフィン（例えば、関連するニュートロフィン、ＮＴ３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦ）とは有意には交差反応しない。いくつかの実施形態においては、抗体はＮＧＦに結合し、さらに少なくとも１つの他のニュートロフィンにも結合する。いくつかの実施形態においては、抗体は哺乳動物種（例えば、ウマまたはイヌ）のＮＧＦに結合するが、別の哺乳動物種に由来するＮＧＦには有意には結合しない。
【００８９】
エピトープ（単数または複数）は、連続的であっても、連続的ではなくてもよい。１つの実施形態においては、抗体は、本質的に、Ｈｏｎｇｏ等，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）に記載されているような、Ｍａｂ  ９１１、Ｍａｂ  ９１２、およびＭＡｂ  ９３８からなる群より選択される抗体と同じｈＮＧＦピトープに結合する。別の実施形態においては、抗体は、本質的に、Ｍａｂ  ９１１と同じエピトープに結合する。さらに別の実施形態においては、抗体は、本質的に、ＭＡｂ  ９０９と同じエピトープに結合する。Ｈｏｎｇｏ等，前出。例えば、エピトープには、以下の１つ以上が含まれる場合もある：ｈＮＧＦの可変領域１（アミノ酸２３〜３５）内の残基Ｋ３２、Ｋ３４、およびＥ３５；ｈＮＧＦの可変領域４（アミノ酸８１〜８８）内の残基Ｆ７９およびＴ８１；可変領域４内の残基Ｈ８４およびＫ８８；ｈＮＧＦの可変領域５（アミノ酸９４〜９８）とｈＮＧＦのＣ末端（アミノ酸１１１〜１１８）との間の残基Ｒ１０３；ｈＮＧＦの前可変領域１（アミノ酸１０〜２３）内の残基Ｅ１１；ｈＮＧＦの可変領域２（アミノ酸４０〜４９）とｈＮＧＦの可変領域３（アミノ酸５９〜６６）との間のＹ５２；ｈＮＧＦのＣ末端内の残基Ｌ１１２およびＳ１１３；ｈＮＧＦの可変領域３内の残基Ｒ５９およびＲ６９；あるいはｈＮＧＦの前可変領域１内の残基Ｖ１８、Ｖ２０、およびＧ２３。さらに、エピトープは、ｈＮＧＦの可変領域１、可変領域３、可変領域４、可変領域５、Ｎ末端領域、および／またはＣ末端領域の１つ以上を含むことができる。さらに別の実施形態においては、抗体は、ｈＮＧＦの残基Ｒ１０３の溶媒露出度を有意に低下させる。上記のエピトープはヒトＮＧＦに関して記載したが、当業者であれば、ヒトＮＧＦを他の種のＮＧＦの構造と並べることができ、これらのエピトープにおそらく対応する部分を同定することができる。
【００９０】
１つの局面においては、ＮＧＦを阻害することができる抗体（例えば、ヒト抗体、ヒト化抗体、マウス抗体、キメラ抗体）を、ＮＧＦの全長または部分的な配列を発現する免疫原を使用して作成することができる。別の態様においては、ＮＧＦを過剰発現する、免疫原を含む細胞を使用することができる。使用することができる別の免疫原の例は、全長のＮＧＦを含むＮＧＦタンパク質またはＮＧＦタンパク質の一部である。
【００９１】
抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体は、当該分野で公知の任意の方法によって作製することができる。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは、一般に、本明細書中にさらに記載されるように、抗体の刺激および生産のための確立された従来技術と一致する。ヒトおよびマウス抗体の生産のための一般的な技術は当該分野で公知であり、本明細書中に記載されている。
【００９２】
ヒトを含む任意の哺乳動物被験体またはそれらに由来する抗体を生産する細胞は、ヒト
ハイブリドーマ細胞株を含む、哺乳動物の生産についての基準となるように操作することができることが企図される。通常は、宿主動物には、本明細書中に記載されているものを含む一定量の免疫原が、腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底、および／または皮内から接種される。
【００９３】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ  Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．等，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１（１９８２）によって変更が加えられた体細胞ハイブリダイゼーション技術を使用して、リンパ球および固定化された骨髄腫細胞から調製することができる。利用できる骨髄腫細胞株としては、Ｘ−６３−Ａｇ８．６５３が挙げられるがこれらに限定されず、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡによるものを、ハイブリダイゼーションに使用することもできる。一般的には、この技術には、ポリエチレングリコールのような融合誘導因子を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって骨髄腫細胞とリンパ球とを融合させる段階が含まれる。融合後、細胞は融合培地から分離され、選択的な増殖培地、例えば、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地中で増殖させられて、ハイブリダイズしていないもとの細胞が除かれる。血清を含むかまたは含まない、本明細書中に記載される任意の培地を、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用することができる。細胞融合技術の別の代替えとしては、ＥＢＶ固定化Ｂ細胞を、本発明の抗ＮＧＦモノクローナル抗体を生産させるために使用することもできる。ハイブリドーマは、所望される場合には、増殖させられ、サブクローニングされ、上清が、従来の免疫アッセイ手順（例えば、放射免疫法、酵素免疫法、または蛍光免疫法）によって抗免疫原活性についてアッセイされる。
【００９４】
抗体の供給源として使用することができるハイブリドーマには、ＮＧＦに特異的なモノクローナル抗体またはその一部を生産する、もとのハイブリドーマの全ての誘導体、子孫細胞が含まれる。
【００９５】
このような抗体を生産するハイブリドーマは、生体外または生体内で、公知の手順を使用して増殖させることができる。モノクローナル抗体は、所望される場合には、培養培地または体液から、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過のような従来の免疫グロブリン精製手順によって単離することができる。存在する場合には、望ましくない活性を、例えば、固相に結合させた免疫原により構成される吸着剤の上に調製物を流し、免疫原から所望される抗体を溶出または解離させることによって除去することができる。ヒトＮＧＦ、または免疫化される種において免疫原性であるタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、またはダイズトリプシン阻害因子）に結合させられた標的アミノ酸配列を含む断片での、二官能性試薬または誘導試薬（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、コハク酸無水物、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ここでは、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である））を用いる宿主動物の免疫化により、抗体（例えば、モノクローナル抗体）の集団を得ることができる。
【００９６】
所望される場合は、目的の抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列決定することができ、その後、ポリヌクレオチド配列を発現または増殖のためのベクター中にクローニングすることができる。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞中でベクターの中に維持することができ、次いで、宿主細胞を増殖させて、後で使用するために凍結することができる。あるいは、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するため、または親和性もしくは抗体の他の特性を改善するための、遺伝子操作に使用することもできる。例えば、定常領域を、抗体が臨床試験およびヒトの処置に使用される場合には、免疫応答を回避するために、より似ているヒト定常領域になるように操作することができる。ＮＧＦに対するより高い親和性、およびＮＧＦを阻害することにおけるより高い効率を得るためには、抗体配列を遺伝子操作することが望まれる場合もある。１つ以上のポリヌクレオチドの変化によって、抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体とし、なおそのＮＧＦに対する結合能力を維持することができることは、当業者に明らかである。
【００９７】
モノクローナル抗体をヒト化するためには、４つの一般的な段階が存在する。これらは（１）出発抗体の軽鎖および重鎖可変ドメインのヌクレオチドおよび推定されるアミノ酸配列を決定する段階、（２）ヒト化抗体を設計する段階、すなわち、ヒト化プロセスの間に使用するための抗体フレームワーク領域を推定する段階、（３）実際のヒト化方法／技術、ならびに（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，８０７，７１５号；同第５，８６６，６９２号；同第６，３３１，４１５号；同第５，５３０，１０１号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，５８５，０８９号；および同第６，１８０，３７０号を参照のこと。
【００９８】
ヒト以外の免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む多数の「ヒト化」抗体分子が記載されており、これには、齧歯類の、または修飾された齧歯類のＶ領域と、ヒト定常ドメインに融合されたそれに関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体が含まれる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒ等，Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９（１９９１），Ｌｏｂｕｇｌｉｏ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：４２２０−４２２４（１９８９），Ｓｈａｗ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎ等，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７）を参照のこと。他の参考文献には、適切なヒト抗体の定常ドメインと融合させる前に、ヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）に接続された齧歯類のＣＤＲが記載されている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓ等，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）を参照のこと。別の参考文献には、組み換えにより貼り付けられた齧歯類のフレームワーク領域によって支持されている齧歯類のＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公開番号５１９，５９６を参照のこと。これらの「ヒト化」分子は、ヒトレシピエント中のそのような部分の治療的適用の期間および有効性を制限する、齧歯類抗ヒト抗体分子に対する所望されない免疫学的応答を最小にするように設計されている。例えば、抗体の定常領域は、それが免疫学的に不活性である（例えば、補体媒介性溶解を誘発しない）ように操作することができる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；英国特許出願番号９８０９９５１．８を参照のこと。抗体（それらもまた利用することができる）をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１−２４７６（１９９１）、ならびに米国特許第６，１８０，３７７号；同第６，０５４，２９７号；同第５，９９７，８６７号；同第５，８６６，６９２号；同第６，２１０，６７１号；および同第６，３５０，８６１号、ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／２７１６０に開示されている。他の方法は、米国シリアル番号１０／７４５，７７５に記載される。
【００９９】
なお別に、完全なヒト抗体は、特異的なヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作されている、市販により入手することができるマウスを使用して得ることができる。より所望される（例えば、完全なヒト抗体）またはより強い免疫応答を生じるように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化抗体またはヒト抗体の作成に使用することができる。このような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）のＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）、ならびに、Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ  ＭｏｕｓｅＴＭである。
【０１００】
上記の議論はヒト化抗体に関して行ったが、議論された一般的な原理を、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシでの使用のために抗体をカスタマイズするために適応できることは、明らかである。さらに、本明細書中に記載される抗体のヒト化の１つ以上の態様を、例えば、ＣＤＲの接続、フレームワークの変異、およびＣＤＲの変異と組み合わせることもできることが明らかである。
【０１０１】
あるいは、抗体は、当該分野で公知の任意の方法を使用して組み換えによって作成し、発現させることができる。別の方法では、抗体は、ファージディスプレイ技術によって組み換えにより作成することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；同第５，５８０，７１７号；同第５，７３３，７４３号；および同第６，２６５，１５０号；ならびにＷｉｎｔｅｒ等，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）を参照のこと。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ等，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して、免疫化されていないドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子のレパートリーにより、ヒト抗体および抗体断片を生体外で生産させることができる。この技術により、抗体Ｖドメイン遺伝子は、繊維状バクテリオファージ、例えば、Ｍ１３またはｆｄの主要なまたは主要ではないコートタンパク質遺伝子のいずれかにインフレームでクローニングされ、ファージ粒子の表面上の機能性抗体断片として提示される。繊維状粒子にはファージゲノムの一本鎖ＤＮＡのコピーが含まれるので、抗体の機能的特性に基づく選択により、これらの特性を示す抗体をコードする遺伝子の選択もまたできる。したがって、ファージは、Ｂ細胞の特性のいくつかに類似した特性を示す。ファージディスプレイは、種々の形式で行うことができる。概要については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）を参照のこと。Ｖ遺伝子断片のいくつかの供給源は、ファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎ等，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）は、免疫化したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さいランダムな組み合わせライブラリーから、多数の異なるオキサゾロン抗体を単離した。免疫化されていないヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多数の異なる抗原（自己抗原を含む）に対する抗体を、原則としてＭａｒｋ等，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈ等，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されている技術にしたがって単離することができる。自然な免疫応答においては、抗体遺伝子は、高い割合で変異を重ねている（体細胞超変異）。導入されている変異のいくつかは、高い親和性を与え、親和性の高い表面免疫グロブリンを提示するＢ細胞が優先的に複製され、その後の抗原でのチャレンジの間に差が出てくる。この自然界に存在しているこのプロセスは、「鎖シャッフリング」として知られている技術を使用して真似ることができる。Ｍａｒｋｓ等，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３（１９９２））。この方法においては、ファージディスプレイによって得られた「最初の」ヒト抗体の親和性を、免疫化されていないドナーから得られたＶドメイン遺伝子の自然界に存在している変異体のレパートリー（レパートリー）で、重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子を連続して置換することによって改��することができる。この技術により、ｐＭ〜ｎＭの範囲の親和性を有している抗体、および抗体断片の生産が可能になる。極めて大きなファージ抗体のレパートリー（「全てのライブラリーのもと（ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」としても知られている）を作成するための方法は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅ等，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３）に記載されている。遺伝子シャッフリングもまた、齧歯類の抗体からヒト抗体へと誘導するために使用することができる。ここでは、ヒト抗体は、出発齧歯類抗体に対して同様の親和性と特異性を有している。「エピトープ刷り込み（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」とも呼ばれるこの方法により、ファージディスプレイ技術によって得られた齧歯類抗体の重鎖および軽鎖Ｖドメイン遺伝子が、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーで置き換えられ、これにより齧歯類−ヒトキメラが作成される。抗原の選択により、機能的な抗原結合部位を回復することができるヒト可変領域の単離ができる、すなわち、エピトープがパートナーの選択を支配する（刷り込む）。このプロセスが齧歯類のＶドメインを置き換えるために繰り返されると、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ公開番号ＷＯ９３／０６２１３を参照のこと）。ＣＤＲの接続による齧歯類抗体の従来のヒト化とは異なり、この技術により、齧歯類に起源するフレームワークまたはＣＤＲ残基を有さない完全なヒト抗体が提供される。上記の議論はヒト化抗体に関して行ったが、議論された一般的な原理を、例えば、イヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシでの使用のために抗体をカスタマイズするために適応できることは、明らかである。
【０１０２】
抗体は、最初に、宿主動物から抗体と抗体を生産する細胞を単離すること、遺伝子配列を得ること、そして宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）中で抗体を組み換えによって発現させるように遺伝子を使用することによって、組み換えにより作成することができる。使用することができる別の方法は、植物（例えば、タバコ）またはトランスジェニック乳中で抗体配列を発現させることである。植物または乳中で抗体を組み換えにより発現させるための方法は、開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓ等，Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６（２００１）；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ  Ｄ．Ｈｕｓｚａｒ  Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３：６５（１９９５）；およびＰｏｌｌｏｃｋ等，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７（１９９９）を参照のこと。抗体の誘導体（例えば、ヒト化抗体、単鎖抗体など）を作成するための方法は当該分野で公知である。
【０１０３】
免疫アッセイおよびフローサイトメトリー選別技術（例えば、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ））もまた、ＮＧＦに特異的な抗体を単離するために使用することができる。
【０１０４】
抗体は、多くの異なるキャリアに結合させることができる。キャリアは、活性であっても、また不活性であってもよい。周知のキャリアの例として、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然のおよび修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、およびマグネタイトが挙げられる。キャリアの性質は、本発明の目的については、可溶性であっても不溶性であってもいずれでもよい。当業者であれば、抗体を結合させるための他の適切なキャリアを認識しており、また、日常的に行われる実験を使用してそれを確認することができる。いくつかの実施形態においては、キャリアには、心筋を標的とする部分が含まれる。
【０１０５】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクター中に置かれ、次いでこれは、そうでなければ免疫グロブリンタンパク質を生産しない大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、骨髄腫細胞のような宿主細胞にトランスフェクトされ、組み換え宿主細胞中でモノクローナル抗体の合成が得られる。ＤＮＡはまた、例えば、相同であるマウスの配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインのコード配列で置換することによって（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ等，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４））、または免疫グロブリンではないポリペプチドのコード配列全体またはその一部に、免疫グロブリンコード配列を共有結合させることによって、修飾することもできる。そのような様式で、本明細書中に記載される抗ＮＧＦモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。抗ＮＧＦ抗体（例えば、ヒト化抗ヒトＮＧＦアンタゴニスト抗体）をコードするＤＮＡは、本明細書中に記載されるように、所望の細胞によって、アンタゴニスト抗ＮＧＦ抗体の送達および発現のために使用され得る。ＤＮＡ送達技術は、さらに本明細書中に記載される。
【０１０６】
抗ＮＧＦ抗体は、当該分野で周知の方法を使用して特徴付けることができる。例えば、１つの方法は、それに結合するエピトープを同定すること、すなわち、「エピトープマッピング」である。タンパク質のエピトープの位置をマップし、特徴付けるための多くの方法が当該分野で公知であり、これには、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９のＣｈａｐｔｅｒ  １１に記載されているような、抗体−抗原複合体の結晶構造の解析、競合アッセイ、遺伝子断片発現アッセイ、および合成ペプチドに基づくアッセイが含まれる。さらなる例においては、エピトープマッピングを使用して、抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体が結合する配列を決定することができる。エピトープマッピングは、種々の業者、例えば、Ｐｅｐｓｃａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５，８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ，Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から市販されている。エピトープは、直鎖状のエピトープ、すなわち、アミノ酸の１つのストレッチに含まれる）であっても、また、必ずしも単一のストレッチに含まれる必要のないアミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体構造を有するエピトープであってもよい。種々の長さ（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸の長さ）のペプチドを単離または合成（例えば、組み換えによって）することができ、そして抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体との結合アッセイに使用することができる。別の例においては、抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体が結合するエピトープを、ＮＧＦ配列から導いた重複ペプチドを使用し、抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体による結合を決定することによって、系統的スクリーニングにおいて決定することができる。遺伝子断片の発現アッセイにより、ＮＧＦをコードするオープンリーディングフレームは、ランダムに、または特異的な遺伝子構造によってのいずれかで断片化され、発現させられたＮＧＦの断片の、試験される抗体との反応性が決定される。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって生産することができ、これは次いで、放射性アミノ酸の存在下で、生体内で転写されてタンパク質に翻訳される。その後、放射標識されたＮＧＦ断片に対する抗体の結合が、免疫沈降およびゲル電気泳動によって決定される。特定のエピトープはまた、ファージ粒子（ファージライブラリー）の表面上に提示されるランダムなペプチド配列の大きなライブラリーを使用して同定することができる。あるいは、重複しているペプチド断片の定義されたライブラリーを、単純な結合アッセイにおいて試験抗体への結合について試験することができる。さらなる例においては、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメイン交換実験、およびアラニンスキャン突然変異誘発を行って、エピトープの結合に必要とされる、十分な、および／または必須の残基を同定することができる。例えば、ドメイン交換実験は、近縁関係にあるが抗原性が異なるタンパク質（例えば、ニューロトロフィンタンパク質ファミリーの別のメンバー）に由来する配列で、種々のＮＧＦポリペプチドの断片が置き換えられている（交換されている）、変異体ＮＧＦを使用して行うことができる。変異体ＮＧＦに対する抗体の結合を評価することにより、抗体結合に関する特定のＮＧＦ断片の重要性を評価できる。
【０１０７】
抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体を特徴付けるために使用することができるなお別の方法は、抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するための、同じ抗原に結合すること、すなわち、ＮＧＦ上の種々の断片に結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを使用することである。競合アッセイは当業者に周知である。本発明の競合アッセイに使用することができる抗体の例として、Ｈｏｎｇｏ等，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）に記載されているＭａｂ  ９１１、Ｍａｂ  ９１２、Ｍａｂ  ９３８が挙げられる。
【０１０８】
（他のＮＧＦアンタゴニスト）
抗ＮＧＦ抗体以外のＮＧＦアンタゴニストが用いられ得る。本発明のいくつかの実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、機能的ＮＧＦの発現または機能的ｔｒｋＡおよび／もしくはｐ７５レセプターの発現をブロックまたは低減し得る、少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。ＮＧＦ、ｔｒｋＡおよびｐ７５のヌクレオチド配列は公知であり、公に利用可能なデータベースから容易に入手され得る。例えば、Ｂｏｒｓａｎｉら，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９０，１８，４０２０；登録番号ＮＭ  ００２５０６；Ｕｌｌｒｉｃｈら，Ｎａｔｕｒｅ  ３０３：８２１−８２５（１９８３）を参照のこと。他のポリヌクレオチドと交叉反応することなく、ＮＧＦ、ｔｒｋＡまたはｐ７５のｍＲＮＡを特異的に結合するアンチセンスオリゴヌクレオチド分子を調製することは慣用的である。標的化の例示的な部位としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：開始コドン、５’調節領域、コード配列および３’非翻訳領域。いくつかの実施形態では、このオリゴヌクレオチドは、約１０〜１００ヌクレオチド長、約１５〜５０ヌクレオチド長、約１８〜２５ヌクレオチド長、またはそれより長い。このオリゴヌクレオチドは、骨格修飾（例えば、ホスホロチオエート結合、および当該分野で周知の２’−Ｏ糖修飾）を含み得る。例えば、ＡｇｒａｗａｌおよびＺｈａｏ（１９９８），Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  ＆  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ８，１３５−１３９を参照のこと。例示的なアンチセンス分子としては、米国公開番号２００１００４６９５９に記載のＮＧＦアンチセンス分子が挙げられる；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｎａ−ｔｅｃ．ｃｏｍ／ｒｅｐａｉｒ．ｈｔｍ．も参照のこと。
【０１０９】
あるいは、ＮＧＦの発現および／または放出は、当該分野で周知の方法である、遺伝子のノックダウン、モルホリノオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉまたはリボザイムを用いて低減され得る。例えば、Ｒｏｓｓｉ，Ｊ．Ｊ．ら編，「Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｒｉｂｏｚｙｍｅ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」，Ｈｏｒｉｚｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（Ｄｕａｒｔｅ，ＣＡ，１９９９）；米国特許６，５０６，５５９；ＷＯ  ０２／２４４３２１；ＷＯ  ０１／１９２５１３；ＷＯ  ０１／２９０５８を参照のこと。
【０１１０】
他の実施形態では、このＮＧＦアンタゴニストは、少なくとも１つのＮＧＦ阻害性化合物を含む。本明細書中で用いられる場合、「ＮＧＦ阻害性化合物」とは、ＮＧＦの生物学的活性を直接的または間接的に、低減、阻害、中和または無効にする抗ＮＧＦ抗体以外の化合物をいう。ＮＧＦ阻害性化合物は、以下の特徴のうちの任意の１以上を示すはずである：（ａ）ＮＧＦに結合して、ＮＧＦシグナル伝達機能によって媒介されるＮＧＦの生物学的活性および／もしくは下流の経路を阻害すること；（ｂ）疼痛（特に、ＮＳＡＩＤに関連した疼痛）の任意の局面を処置または予防すること；（ｃ）ＮＧＦレセプター活性化（ｔｒｋＡレセプター二量体化および／または自己リン酸化を含む）をブロックまたは減少させること；（ｄ）ＮＧＦのクリアランスを増大させること；（ｅ）ＮＧＦ合成、産生または放出を阻害する（低減する）こと；（ｆ）疼痛のＮＳＡＩＤ処置を増強すること。例示的なＮＧＦ阻害性化合物としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：米国公開番号２００１００４６９５９に記載される低分子ＮＧＦインヒビター；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ００／６９８２９に記載されるとおりの、ｐ７５へのＮＧＦの結合を阻害する化合物；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９８／１７２７８に記載されるとおりのＴｒｋＡ／ｐ７５へのＮＧＦの結合を阻害する化合物。ＮＧＦ阻害性化合物のさらなる例としては、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ０２／１７９１４、同ＷＯ  ０２／２０４７９、米国特許第５，３４２，９４２号、同第６，１２７，４０１号および同第６，３５９，１３０号に記載の化合物が挙げられる。さらなる例示的なＮＧＦ阻害化合物は、ＮＧＦの競合的インヒビターである化合物である。米国特許第６，２９１，２４７号を参照のこと。さらに、当業者は、他の低分子ＮＧＦ阻害性化合物を調製し得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、ＮＧＦ阻害性化合物はＮＧＦを結合する。例示的な標的化（結合）部位としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＮＧＦのうちの、ＴｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターに結合する部分、ならびにＮＧＦのうちの、レセプター結合領域に隣接しかつレセプター結合タンパク質の正確な三次元形状を部分的に担う部分。他の実施形態では、ＮＧＦ阻害性化合物は、ＮＧＦレセプター（例えば、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５）を結合し、そしてＮＧＦの生物学的活性を阻害する。例示的な標的化部位としては、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５のうちの、ＮＧＦに結合する部分が挙げられる。
【０１１２】
低分子を含む実施形態では、低分子は、１００〜２０，０００ダルトン、５００〜１５，０００ダルトン、または１０００〜１０，０００ダルトンのほぼいずれかの分子量を有し得る。低分子のライブラリーは、市販される。この低分子は、吸入、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、心室内、経口的、腸内、非経口、鼻腔内、または皮膚を含めた、当該分野で公知の任意の手段を用いて投与され得る。いくつかの実施形態では、ＮＧＦ−アンタゴニストが低分子である場合、これは、患者の体重１ｋｇあたり０．１〜３００ｍｇの割合で、１〜３以上の用量に分けて投与される。通常の体重の成体患者に関しては、用量あたりの１ｍｇ〜５ｇの範囲の用量が投与され得る。
【０１１３】
他の実施形態では、このＮＧＦアンタゴニストは、少なくとも１つのＮＧＦ構造アナログを含む。本発明における「ＮＧＦ構造アナログ」とは、ＮＧＦの３次元構造の一部と類似の３次元構造を有しかつ生理学的状態の下でインビトロまたはインビボでＮＧＦレセプターに結合する化合物をいう。１つの実施形態では、このＮＧＦ構造アナログは、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターに結合する。例示的なＮＧＦ構造アナログとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ＰＣＴ公開番号ＷＯ９７／１５５９３に記載される二環式ペプチド；米国特許第６，２９１，２４７号に記載される二環式ペプチド；米国特許第６，０１７，８７８号に記載される環式化合物；およびＰＣＴ公報番号ＷＯ８９／０９２２５に記載されるＮＧＦ由来ペプチド。適切なＮＧＦ構造アナログもまた、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／０６０４８に記載される方法による、ＮＧＦレセプター結合の分子モデリングによって設計および合成され得る。このＮＧＦ構造アナログは、改善された親和性および生物学的効果を得るための、同じかまたは異なる構造の任意の所望の組み合わせの、モノマーおよび／またはダイマー／オリゴマーであり得る。
【０１１４】
他の実施形態では、本発明は、ＴｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターの少なくとも１つのドミナントネガティブ変異体を含むＮＧＦアンタゴニストを提供する。当業者は、例えば、ＴｒｋＡレセプターのドミナントネガティブ変異体を調製し得、その結果、このレセプターはＮＧＦを結合し、それゆえ、ＮＧＦを捕捉する「シンク」として作用する。しかし、ドミナントネガティブ変異体は、ＮＧＦに結合した際に、このレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプター）の正常な生物活性を有さない。例示的なドミナントネガティブ変異体としては、以下の参考文献に記載される変異体が挙げられるがこれらに限定されない：Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １９９８，９５，１０８８４；Ｅｉｄｅら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９６，１６，３１２３；Ｌｉｕら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １９９７，１７，８７４９；Ｋｌｅｉｎら，Ｃｅｌｌ  １９９０，６１，６４７；Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら，Ｎｅｕｒｏｎ  １９９３，１０，９６３；Ｔｓｏｕｌｆａｓら，Ｎｅｕｒｏｎ  １９９３，１０，９７５；およびＬａｍｂａｌｌｅら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１９９３，１２，３０８３（これらの各々は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。このドミナントネガティブ変異体は、タンパク質形態で、または発現ベクターの形態で、投与され得、その結果、ドミナントネガティブ変異体（例えば、変異体ＴｒｋＡレセプター）は、インビボで発現される。このタンパク質または発現ベクターは、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内、心室内、経口的、腸内、非経口、鼻腔内、皮膚、または吸入によるような、当該分野で公知の任意の手段を用いて投与され得る。例えば、発現ベクターの投与としては、注射、経口投与、パーティクルガンまたはカテーテル法投与、および局所投与を含めた、局所投与または全身投与が挙げられる。他の実施形態では、このタンパク質または発現ベクターは、交感神経または知覚神経の体幹または節へと直接的に投与される。当業者は、インビボでの外因性タンパク質の発現を得るための、発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号；同第６，４１３，９４２号；同第６，３７６，４７１号を参照のこと。
【０１１５】
アンチセンスポリヌクレオチド、発現ベクター、またはサブゲノムポリヌクレオチドを含む治療用組成物の標的化送達もまた用いられ得る。レセプター媒介ＤＮＡ送達技術は、例えば、以下に記載される：Ｆｉｎｄｅｉｓら，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３）１１：２０２；Ｃｈｉｏｕら，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編）（１９９４）；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８）２６３：６２１；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４）２６９：５４２；Ｚｅｎｋｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）（１９９０）８７：３６５５；Ｗｕら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１）２６６：３３８。ポリヌクレオチドを含む治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルにおいて局所投与について、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇ（またはそれより多く）の範囲のＤＮＡで投与される。いくつかの実施形態では、約５００ｎｇ、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、そして約２０μｇ〜約１００μｇまたはそれより多くの濃度範囲のＤＮＡもまた、遺伝子治療プロトコルの間に用いられ得る。本発明の治療用ポリヌクレオチドおよび治療用ポリペプチドは、遺伝子送達ビヒクルを用いて送達され得る。この遺伝子送達ビヒクルは、ウイルス起源または非ウイルス起源のものであり得る（一般的に、Ｊｏｌｌｙ，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）１：５１；Ｋｉｍｕｒａ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４）５：８４５；Ｃｏｎｎｅｌｌｙ，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９５）１：１８５；およびＫａｐｌｉｔｔ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４）６：１４８を参照のこと）。このようなコード配列の発現は、内因性哺乳動物または異種プロモーターおよび／またはエンハンサーを用いて誘導され得る。コード配列の発現は、構成的または調節性のいずれかであり得る。
【０１１６】
所望のポリヌクレオチドの送達および所望の細胞での発現のための、ウイルスベースのベクターは、当該分野で周知である。例示的なウイルスベースのビヒクルとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：組換えレトロウイルス（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９０／０７９３６；ＷＯ  ９４／０３６２２；ＷＯ  ９３／２５６９８；ＷＯ  ９３／２５２３４；ＷＯ  ９３／１１２３０；ＷＯ  ９３／１０２１８；ＷＯ  ９１／０２８０５；米国特許第５，２１９，７４０号；同第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；および欧州特許第０３４５  ２４２号を参照のこと）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣＶＲ−１２４７）、ロス川ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣＶＲ−１２４６）およびベネズエラ馬脳炎ウイルス（ＡＴＣＣＶＲ−９２３；ＡＴＣＣＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９；ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２））、ならびにアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９４／１２６４９、ＷＯ  ９３／０３７６９；ＷＯ  ９３／１９１９１；ＷＯ  ９４／２８９３８；ＷＯ  ９５／１１９８４およびＷＯ  ９５／００６５５を参照のこと）。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７に記載されるとおりの、殺傷したアデノウイルスに連結したＤＮＡの投与もまた用いられ得る。
【０１１７】
以下を含むがこれらに限定されない、非ウイルス性の送達ビヒクルおよび方法もまた用いられ得る：殺傷したアデノウイルス単独に連結したかまたは連結していないポリカチオン性凝縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７を参照のこと）；リガンドに連結したＤＮＡ（例えば、Ｗｕ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４：１６９８５を参照のこと）；真核生物細胞送達ビヒクル細胞（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９５／０７９９４；ＷＯ  ９６／１７０７２；ＷＯ  ９５／３０７６３；およびＷＯ  ９７／４２３３８を参照のこと）および核酸電荷中和または細胞膜との融合。裸のＤＮＡもまた用いられ得る。例示的な裸のＤＮＡの導入方法は、ＰＣＲ公開番号ＷＯ  ９０／１１０９２および米国特許第５，５８０，８５９号に記載される。遺伝子送達ビヒクルとして作用し得るリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣＴ公開番号ＷＯ  ９５／１３７９６；ＷＯ  ９４／２３６９７；ＷＯ  ９１／１４４４５；および欧州特許第０５２４９６８号に記載される。さらなるアプローチは、Ｐｈｉｌｉｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（１９９４）１４：２４１１およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４）９１：１５８１に記載される。
【０１１８】
発現ベクターを用いて、本明細書中に記載の任意のタンパク質ベースのＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体、ＴｒｋＡ免疫接着など）の発現を指向することもまた明らかである。例えば、アンタゴニスト抗ＮＧＦ抗体をコードするポリヌクレオチドはまた、所望の細胞でのアンタゴニスト抗ＮＧＦ抗体の送達および発現のために用いられ得る。発現ベクターを用いてアンタゴニスト抗ＮＧＦ抗体の発現を指向し得ることは明らかである。この発現ベクターは、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、腔内、脳室内、経口、腸内、非経口、鼻腔内、皮膚または吸入によって投与され得る。例えば、発現ベクターの投与は、注射、経口投与、パーティクルガンまたはカテーテル法による投与および局所投与を含め、局所または全身での投与を包含する。本明細書中でさらに考察するように、当業者は、インビボでの外因性タンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号；同第６，４１３，９４２号；および同第６，３７６，４７１号を参照のこと。ＮＧＦおよび／またはＮＧＦの生物学的活性をブロックし得る（部分的から、完全までのブロッキング）他のＴｒｋＡレセプターフラグメントは、当該分野で公知である。
【０１１９】
別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、少なくとも１つのＴｒｋＡ免疫付着因子を含む。本明細書中で用いられる通りのＴｒｋＡ免疫付着因子とは、ＴｒｋＡレセプターの細胞外ドメイン（またはその一部）および免疫グロブリン配列を含み、ＴｒｋＡレセプターの結合特異性を保持し（いくつかの実施形態では、結合特異性を実質的に保持し）、そしてＮＧＦに結合し得る、可溶性キメラ分子をいう。ＴｒｋＡ免疫付着因子は、本明細書中に記載の通り、ＮＧＦの生物学的活性をブロック（低減および／または抑制）し得る。
【０１２０】
ＴｒｋＡ免疫付着因子は当該分野で公知であり、そしてＴｒｋＡレセプターに対するＮＧＦの結合をブロック（低減または抑制）することが見出されている。例えば、米国特許第６，１５３，１８９号を参照のこと。１つの実施形態では、ＴｒｋＡ免疫付着因子は、ＮＧＦを結合し得るＴｒｋＡレセプターアミノ酸配列（またはｔｒｋＡレセプターの結合特異性を実質的に保持するアミノ酸配列）および免疫グロブリン配列（またはＴｒｋＡレセプターの結合特異性を実質的に保持するアミノ酸）の融合体を含む。いくつかの実施形態では、ＴｒｋＡレセプターは、ヒトＴｒｋＡレセプター配列であり、そしてこの融合体は、免疫グロブリン定常ドメイン配列とのものである。他の実施形態では、この免疫グロブリン定常ドメイン配列は、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン配列である。他の実施形態では、（例えば、ジスルフィド結合による共有結合を介する）２つのＴｒｋＡレセプター−免疫グロブリン重鎖融合体の会合は、ホモダイマー免疫グロブリン様構造をもたらす。免疫グロブリン軽鎖は、ジスルフィド結合ダイマーにおけるＴｒｋＡレセプター免疫グロブリンキメラの一方または両方とさらに会合されて、ホモトリマー構造またはホモテトラマー構造を生じ得る。適切なＴｒｋＡ免疫付着因子の例としては、米国特許第６，１５３，１８９号に記載のものが挙げられる。
【０１２１】
別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡレセプターとのＮＧＦの物理的相互作用および／または下流のシグナル伝達をブロック、抑制、変更および／または低減し得、それにより、ＮＧＦの生物学的活性が低減および／またはブロックされる、少なくとも１つの抗ＴｒｋＡ抗体を含む。抗ＴｒｋＡ抗体は当該分野で公知である。例示的な抗ＴｒｋＡ抗体としては、ＰＣＴ公開番号Ｗｏ  ９７／２１７３２、ＷＯ００／７３３４４、ＷＯ０２／１５９２４、および米国公開番号２００１００４６９５９に記載のものが挙げられる。別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、ｐ７５レセプターとのＮＧＦの物理的相互作用および／または下流のシグナル伝達をブロック、抑制および／または低減し得、それにより、ＮＧＦの生物学的活性が低減および／またはブロックされる、少なくとも１つの抗ｐ７５抗体を包含する。
【０１２２】
別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプター活性に関連した下流のキナーゼシグナル伝達を阻害し得る少なくとも１つのキナーゼインヒビターを含む。例示的なキナーゼインヒビターは、Ｋ２５２ａまたはＫ２５２ｂであり、これらは当該分野で公知であり、以下に記載される：Ｋｎｕｓｅｌら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．５９：７１５−７２２（１９９２）；Ｋｎｕｓｅｌら，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５７：９５５−９６２（１９９１）；Ｋｏｉｚｕｍｉら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ８：７１５−７２１（１９８８）；Ｈｉｒａｔａら，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ  １１１：７２８，ＸＰ００２０４１３５、要約およびを参照のこと、および１２ｔｈ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｉｎｄｅｘ，ｐ．３４２３７，ｃ．３（５−７），５５−６０，６６−６９），ｐ．３４２３８，ｃ．１（４１−４４），ｃ．２（２５−２７，３２−３３），ｐ．３４２３，ｃ．３（４８−５０，５２−５３）；米国特許第６，３０６，８４９号。
【０１２３】
臨床医が希望すれば多数の他のカテゴリーのＮＧＦアンタゴニストが同定されることが予想される。
【０１２４】
（ＮＧＦアンタゴニスト抗体の同定）
抗ＮＧＦ抗体および他のＮＧＦアンタゴニストは、当該分野で公知の方法を使用して同定または特徴付けられ得、それにより、ＮＧＦの生物学的活性の低下、向上または中和が検出および／または測定される。例えば、米国特許第５，７６６，８６３号および同第５，８９１，６５０号に記載されているキナーゼレセプター活性化（ＫＩＲＡ）アッセイは、抗ＮＧＦ薬剤を同定するために使用され得る。このＥＬＩＳＡ型アッセイは、レセプタータンパク質チロシンキナーゼ（本明細書中以後、「ｒＰＴＫ」とする）（例えば、ＴｒｋＡレセプター）のキナーゼドメインの自己リン酸化を測定することによるキナーゼの活性化の定量的または定性的な測定に、ならびに、選択されたｒＰＴＫ（例えば、ＴｒｋＡ）についての可能性のあるアンタゴニストの同定および特徴付けに適切である。アッセイの最初の段階には、キナーゼレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプター）のキナーゼドメインのリン酸化が含まれ、ここで、このレセプターは、真核生物細胞の細胞膜中に存在する。このレセプターは、内因性レセプターであっても、このレセプターをコードする核酸であっても、またはレセプター構築物であってもよく、細胞中に形質転換され得る。代表的には、第１の固相（例えば、第１のアッセイプレートのウェル）が、実質的に均質なこのような細胞の集団（通常は、哺乳動物細胞株）でコーティングされ、それにより、細胞が固相に付着させられる。しばしば、これらの細胞は付着性であり、それによって第１の固相に対して自然に付着する。「レセプター構築物」が使用される場合、これには通常、キナーゼレセプターとｆｌａｇポリペプチドとの融合体が含まれる。ｆｌａｇポリペプチドは、アッセイのＥＬＩＳＡ部分において、捕捉薬剤（しばしば、捕捉抗体）によって認識される。候補の抗ＮＧＦ抗体または他のＮＧＦアンタゴニストのような分析物が、次いで、細胞が付着しているウェルに対してＮＧＦと共に添加され、その結果、チロシンキナーゼレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプター）がＮＧＦおよび分析物に曝露される（またはそれらと接触させられる）。このアッセイにより、そのリガンドであるＮＧＦによるＴｒｋＡの活性化を阻害する抗体（または他のＮＧＦアンタゴニスト）を同定することができる。ＮＧＦおよび分析物に曝露された後、付着している細胞は、溶解緩衝液（これは、その中に可溶化界面活性剤を含む）および穏やかな攪拌を使用して溶解させられ、それによって細胞溶解物が遊離し、この細胞溶解物を、細胞溶解物の濃縮または明澄化の必要なく、直接、アッセイのＥＬＩＳＡ部分に供することができる。
【０１２５】
次いで、このように調製された細胞溶解物は、アッセイのＥＬＩＳＡ段階に供される準備ができている。ＥＬＩＳＡ段階の第１の工程として、第２の固相（通常は、ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートのウェル）は、チロシンキナーゼレセプターに特異的に結合するか、またはレセプター構築物の場合はｆｌａｇポリペプチドに特異的に結合する捕捉薬剤（しばしば、捕捉抗体）でコーティングされる。第２の固相のコーティングは、捕捉薬剤が第２の固相に付着するように行われる。捕捉薬剤は、一般に、モノクローナル抗体であるが、本明細書中の実施例に記載されるように、ポリクローナル抗体を使用できる場合もある。次いで、得られた細胞溶解物は、付着している捕捉薬剤に曝露されるかまたは付着している捕捉薬剤と接触させられ、その結果、レセプターまたはレセプター構築物が第２の固相に付着させられる（あるいは、第２の固相中に捕捉される）。次いで、結合していない細胞溶解物をとり除くための洗浄工程が行われ、それによって、捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物が残される。次いで、付着しているかまたは捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物は、チロシンキナーゼレセプター中のリン酸化されたチロシン残基を同定する抗ホスホチロシン抗体に曝露されるか、またはこの抗体と接触させられる。１つの実施形態においては、抗ホスホチロシン抗体は、放射性のない発色試薬の色の変化を触媒する酵素に（直接的または間接的に）結合体化させられる。したがって、このレセプターのリン酸化は、その後の試薬の色の変化によって測定され得る。この酵素は、抗ホスホチロシン抗体に直接結合させてもよく、または結合体化分子（例えば、ビオチン）を、抗ホスホチロシン抗体に結合させて、その後、この酵素を、結合体化分子を介して抗ホスホチロシン抗体に結合させてもよい。最後に、捕捉されたレセプターまたはレセプター構築物への抗ホスホチロシン抗体の結合は、例えば、発色試薬の色の変化によって測定され得る。
【０１２６】
このＮＧＦアンタゴニストは、候補因子をＮＧＦとともにインキュベートし、以下の特徴のうちのいずれか１つ以上をモニタリングすることによって同定され得る：（ａ）ＮＧＦに結合し、そしてＮＧＦの生物学的活性および／またはＮＧＦシグナル伝達機能によって媒介される下流の経路を阻害すること；（ｂ）ＮＧＦレセプターの活性化をブロックするかまたは低下させること；（ｃ）ＮＧＦのクリアランスを増大させること；（ｄ）ＮＧＦレセプターの活性化を阻害すること（ＴｒｋＡの二量体化および／または自己リン酸化を阻害すること）；（ｅ）（特に、ＮＳＡＩＤに関連した）疼痛の任意の局面を処置、改善または予防すること；（ｆ）ＮＧＦの合成、産生または放出を阻害（低減）すること；（ｇ）疼痛のＮＳＡＩＤ処置を高めること。いくつかの実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、候補因子をＮＧＦとともにインキュベートし、そして結合および／またはそれに伴うＮＧＦの生物学的活性の低下もしくは中和をモニターすることによって同定される。結合アッセイは、精製されたＮＧＦポリペプチドを用いて、またはＮＧＦポリペプチドをもともと発現する細胞もしくはＮＧＦポリペプチドを発現するようにトランスフェクトされた細胞を用いて、行われ得る。１つの実施形態においては、結合アッセイは競合結合アッセイであり、ここでは、候補抗体がＮＧＦ結合について既知の抗ＮＧＦアンタゴニストと競合する能力が評価される。このアッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含め、種々の形式で行われ得る。他の実施形態においては、ＮＧＦアンタゴニストは、候補因子をＮＧＦと共にインキュベートし、そして結合、ならびにそれに付随するＴｒｋＡレセプターの二量体化および／または自己リン酸化の阻害をモニターすることによって同定される。
【０１２７】
最初の同定の後、候補抗ＮＧＦアンタゴニストの活性を、標的とされた生物学的活性を試験することが公知のバイオアッセイによってさらに確認して絞り込み得る。あるいは、バイオアッセイは、候補を直接スクリーニングするために使用することができる。例えば、ＮＧＦは、応答細胞中の多数の形態学的に認識され得る変化を促進する。これらとしては、ＰＣ１２細胞の分化の促進、およびこれらの細胞からの軸索突起の成長の増強（Ｕｒｆｅｒら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３６：４７７５−４７８１（１９９７）；Ｔｓｏｕｌｆａｓら，Ｎｅｕｒｏｎ  １０：９７５−９９０（１９９３））、応答性の知覚神経節および交感神経節の外植片からの軸索突起の伸長の促進（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ，Ｒ．およびＡｎｇｅｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．４８：５３４−５６９，１９６８）、ならびにＮＧＦ依存性ニューロン（例えば、胚性後根神経節、三叉神経節、または交感神経節のニューロン）の生存の促進（例えば、ＣｈｕｎおよびＰａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．７５：７０５−７１１（１９９７）；ＢｕｃｈｍａｎおよびＤａｖｉｅｓ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １１８：９８９−１００１（１９９３））が挙げられるがこれらに限定されない。したがって、ＮＧＦの生物学的活性の阻害についてのアッセイには、ＮＧＦおよび分析物（例えば、候補抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体および候補ＮＧＦアンタゴニスト）と共にＮＧＦ応答性細胞を培養することが必然的に伴う。適切な時間の後、細胞応答（細胞の分化、軸索突起の伸長、または細胞の生存）がアッセイされる。
【０１２８】
候補ＮＧＦアンタゴニストが、ＮＧＦの生物学的活性をブロックまたは中和する能力はまた、Ｈｏｎｇｏら，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）に記載されているような、胚性ラットの後根神経節の生存についてのバイオアッセイにおいて、この候補因子がＮＧＦ媒介性生存を阻害する能力をモニタリングすることによって実施され得る。ＮＧＦ活性のモジュレーターを同定する方法は、ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１６０９に記載される。
【０１２９】
（組成物）
本発明の組成物は、本明細書中の種々の実施形態に記載されるように、有効量のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤを含む。いくつかの実施形態において、これらの組成物は、薬学的に受容可能な賦形剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、その組成物は、本明細書中で記載される方法のいずれかの用途のために（例えば、術後の疼痛）のいずれかにおける用途のためのものである。このような組成物、ならびに処方の方法もまた、これまでの節および以下に記載される。上述のＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、単一の組成物中に存在するか、または、別個の組成物として存在する。したがって、いくつかの実施形態において、このＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、同じ組成物中に存在する。他の実施形態において、このＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、別個の組成物中に存在する。
【０１３０】
別の局面において、本発明は、ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの相乗的な組成物を提供する。
【０１３１】
いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛の処置の用途のため（例えば、手術後の疼痛）のＮＧＦアンタゴニストを含む薬学的組成物を提供する。ここで、この用途は、ＮＳＡＩＤの同時および／または連続的な投与を包含する。いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛の処置の用途のためのＮＡＳＩＤを含む薬学的組成物を提供して、ここで、この用途は、ＮＧＦアンタゴニストの同時および／または連続的な投与を包含する。いくつの実施形態において、本発明は、疼痛の処置のための別個、同時および／または連続した用途のための、ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを含む薬学的組成を提供する。幾つかの実施形態において、このＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体（例えば、本明細書中に記載されるような抗体Ｅ３）である。他の実施形態において、このＮＳＡＩＤは、イブプロフェンである。さらに他の実施形態において、このＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体であり、そして、このＮＳＡＩＤは、イブプロフェンである。
【０１３２】
組成物は１よりも多いＮＧＦアンタゴニストを含み得ることが理解される。例えば、組成物は、ＮＧＦアンタゴニストのあるクラスにおける１よりも多いメンバー（例えば、ＮＧＦの異なるエピトープを認識する抗ＮＧＦ抗体の混合物）、ならびに異なるクラスのＮＧＦアンタゴニストのメンバー（例えば、抗ＮＧＦ抗体およびＮＧＦ阻害性化合物）を含み得る。他の例示的な組成物は、同じエピトープを認識する１より多い抗体、様々な種のエピトープを結合する様々な種の抗ＮＧＦ抗体、または異なるＮＧＦ阻害性化合物を含む。他の実施形態において、この組成物は、１以上のＮＧＦアンタゴニストを含む。このアンタゴニストは、ＮＧＦ（例えば、抗体）に結合する（これらと物理的に相互作用する）アンタゴニスト、ＮＧＦレセプターに結合するアンタゴニスト（例えば、ＴｒｋＡレセプターまたはｐ７５レセプター）、および下流のＮＧＦレセプターシグナル伝達を低減（妨害および／またはブロック）するアンタゴニストからなる群より選択される。
【０１３３】
本発明で使用される組成物は、さらに、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ編、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ）を、凍結乾燥された処方物の形態または水溶液の形態で含み得る。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用される投薬量および濃度においてレシピエントに対して無毒性であり、そして以下のものを含み得る：リン酸、クエン酸、および他の有機酸のような緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクダデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール、アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；単糖類、二糖類、および他の糖質（グルコース、マンノース、またはデキストランが挙げられる）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。薬学的に受容可能な賦形剤は、本明細書中にさらに記載される。
【０１３４】
本明細書中に記載される組成物は、疼痛の処置に有用であることが公知のさらなる化合物を含み得る。ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤ、ならびにその組成物はまた、その薬剤の有効性を増強し、そして／または補完する他の薬剤と併用して使用され得る。
【０１３５】
他の実施形態において、本発明は、医薬としての使用および／または医薬の製造ための使用の文脈であるかを問わず、本明細書中に記載される方法のうちのいずれかで使用するための組成物（本明細書中に記載される）を提供する。
【０１３６】
（キット）
本発明はまた、即時的な方法での使用のためのキットを提供する。本発明のキットは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）、ＮＳＡＩＤを含む１以上の容器を備え、いくつかの実施形態では、本明細書中に記載される方法のうちのいずれかに従う使用のための指示書をさらに備える。いくつかの実施形態において、キットは、抗ＮＧＦ抗体（例えば、本明細書中に記載される抗体Ｅ３）を含む。他の実施形態において、キットは、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、あるいはいくつかの実施形態では、Ｅ３に由来する６つすべてのＣＤＲ）を含む抗ＮＧＦ抗体を含む。キットは、個体が疼痛を有するかどうか、または個体が疼痛の危険性があるかどうかを同定することに基づき、処置に適切な個体を選択することの説明書をさらに備え得る。いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に記載される方法のうちのいずれかに伴う使用のためのキットを提供し、そのキットは、ＮＧＦアンタゴニストを含む。さらに他の実施形態において、キットは、抗ＮＧＦ抗体を含む。さらに他の実施形態において、キットは、ヒト化抗ＮＧＦ抗体（例えば、本明細書中に記載される抗体Ｅ３）を含む。さらに他の実施形態において、指示書は、任意の疼痛（例えば、術後の疼痛、熱傷に関係する疼痛、関節リウマチ、または骨関節炎）を処置、予防および／または改善するために、ＮＳＡＩＤと併用してＮＧＦアンタゴニストを投与することの説明書を含む。
【０１３７】
いくつかの実施形態において、キットは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）、ＮＳＡＩＤ、および疼痛の有効な処置のためにＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを同時投与および／または連続投与するための指示書を含む。他の実施形態において、キットは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）、および疼痛の有効な処置のためにＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤを互いに併用して投与するための指示書を含む。他の実施形態において、キットは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）、およびＮＳＡＩＤ（例えば、イブプロフェン）、ならびに疼痛の有効な処置のためにＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを互いに併用して投与するための指示書を含む。従って、本明細書中に記載される方法のうちのいずれかが、指示書に反映され得る。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、キットは、抗ＮＧＦ抗体を含む。他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域、および表２に示される軽鎖可変領域を含む抗体である。さらに他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、本明細書中に記載されるような抗体Ｅ３である。
【０１３９】
ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）およびＮＳＡＩＤは、別個の容器中に存在し得るか、または単一の容器中に存在し得る。キットが、１つの特徴的な組成物を含んでいても、２つ以上の組成物を含んでいてもよく、ここで、１つの組成物がＮＧＦアンタゴニストを含み、また１つの組成物がＮＳＡＩＤを含むことが理解される。
【０１４０】
本発明のキットは、包装するのに適切である。適切な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性の包装（例えば、シールされたマイラーまたはビニール袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、必要に応じて、さらなる成分（例えば、緩衝液および説明用情報）を提供し得る。
【０１４１】
ＮＧＦアンタゴニストの使用に関する指示書は、一般的には、投薬量、投薬スケジュール、および意図される処置のための投与経路についての情報を含む。容器は、単位用量であっても、バルク包装（例えば、複数回投与包装）であっても、副次単位用量であってもよい。本発明のキットに提供される指示書は、代表的には、ラベル上の文書による指示であるか、または包装の挿入物（例えば、キットに備えられる書類）であるが、機械読み取り可能な指示書（例えば、磁気保存ディスクまたは光学保存ディスクで持ち運ばれる指示書）もまた、利用可能である。
【０１４２】
ラベルまたは包装の挿入物は、組成物が、疼痛（術後の疼痛を含む）を処置、改善および／または予防するために使用されることを示す。指示書は、本明細書中に記載される方法のいずれかを実施するために提供され得る。
【０１４３】
本発明のキットは、包装するのに適切である。適切な包装としては、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性の包装（例えば、シールされたマイラーまたはビニール袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。また、特定のデバイス（例えば、吸入器、鼻投与デバイス（例えば、噴霧器）またはミニポンプのような注入デバイス）を組み合わせて使用するための包装も、意図される。キットは、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈溶液バッグもしくはバイアルであり得る）。容器はまた、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈溶液バッグもしくはバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）である。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに備え得る。
【０１４４】
キットは、必要に応じて、さらなる成分（例えば、緩衝液および説明用の情報）を提供し得る。通常は、キットは、容器およびその容器におけるラベルもしくは容器に添付される包装の挿入物を備える。
【０１４５】
いくつかの実施形態において、本発明は、上記のキットの内容物を含む製造物品を提供する。いくつかの実施形態において、キットは、疼痛を処置するための使用を指示する情報と共に、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）および／またはＮＳＡＩＤを含む。
【０１４６】
（ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの投与、ならびに処置の評価）
ＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、任意の適切な経路を介して個体に投与され得る。例えば、それらは、経口的に、静脈内に、胸腔内に、腹腔内に、脳室内に、舌下に、経皮的にかまたは吸入によって、一緒にかまたは別個に投与され得る。それらは、例えば、当該分野で調製される錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラート、チューインガム、ロリポップ（ｌｏｌｌｉｏｐｏｐ）、座剤などの形態で、経口投与され得る。本明細書中に記載される実施例が、利用可能な技術を限定するものではなく例示であることが意図されることが、当業者に明らかである。
【０１４７】
従って、いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト抗体（例えば、抗ＮＧＦ抗体）は、例えば、ボーラスとしてかまたは一定期間にわたる連続注入により、筋肉内経路、腹腔内経路、脳室内経路、皮下経路、関節内経路、滑液嚢内経路、髄腔内経路、経口経路、吸入経路または局所的経路によって、静脈内投与のような公知の方法に従って、個体に投与される。液体処方物のための市販の噴霧器（ジェット噴霧器および超音波噴霧器が挙げられる）が、投与のために有用である。液体処方物は、直接噴霧され得、そして凍結乾燥された粉末は、再構築後に噴霧され得る。あるいは、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）は、フルオロカーボン処方物および測定用量吸入器を使用してエアロゾル化され得るか、または凍結乾燥され粉砕された粉末として吸入され得る。
【０１４８】
部位特異的送達技術または標的化局所送達技術もまた、投与のために有効である。部位特異的送達技術または標的化局所送達技術の例としては、ＮＧＦアンタゴニストおよび／もしくはＮＳＡＩＤの種々の移植可能なデポー供給源、または局所送達用カテーテル（例えば、注入カテーテル、留置カテーテル、または針状カテーテル）、人工血管移植、外膜ラップ（ａｄｖｅｎｔｉｔｉａｌ  ｗｒａｐｓ）、シャントおよびステント、あるいは他の移植可能デバイス）、部位特異的キャリア、直接注射、患者管理無痛法（ＰＣＡ）技術もしくはデバイス、ならびに／あるいは直接適用が挙げられる。例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ００／５３２１１、および米国特許第５，９８１，５６８号を参照のこと。
【０１４９】
抗ＮＧＦ抗体またはそのフラグメントのような薬剤の種々の処方物（ＮＧＦアンタゴニスト）が投与のために使用され得る。いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体またはそのフラグメントのような薬剤は、ニートで投与される。いくつかの実施形態において、薬剤は、種々の処方物中（薬学的に受容可能な賦形剤を含む処方物）に含まれ得る抗ＮＧＦ抗体を含む。薬学的に受容可能な賦形剤は、当該分野で公知であり、これらは、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする比較的不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態もしくは一貫性を与え得るか、または希釈剤として作用し得る。適切な賦形剤としては、安定剤、湿潤剤および乳化剤、浸透圧を変化させるための塩、カプセル化剤、緩衝液、および皮膚浸透促進剤が挙げられるが、これらに限定されない。経口薬物送達および非経口薬物送達のための賦形剤ならびに処方物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版、  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ編（２０００）に記載されている。
【０１５０】
いくつかの実施形態において、これらの試薬（ＮＧＦアンタゴニス）は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために処方される。したがって、これらの試薬を、生理食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液などのような薬学的に許容されるビヒクルと混合することができる。特定の投与レジメン（すなわち、用量、タイミング、および繰り返し）は、特定の固体、および個体の病歴に依存する。投薬レジメン（使用されるＮＧＦアンタゴニスト）は、時間が経つとともに変化し得る。
【０１５１】
抗ＮＧＦ抗体は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）を含む任意の適切な方法を使用して投与され得る。抗ＮＧＦ抗体はまた、本明細書中に記載されているように、吸入によって投与され得る。一般的には、抗ＮＧＦ抗体の投与について、最初の候補投与量は、約０．２ｍｇ／ｋｇまたは約２ｍｇである。いくつかの実施形態において、典型的な１日の投薬量は、上記の因子に依存して、３μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇから３００μｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、あるいはそれ以上の範囲である。数日間もしくはそれ以上にわたる反復投与について、その状態に依存して、処置は、疾患症状の所望の抑制が生じるまでかまたは十分な治療レベルが疼痛を軽減することを達成するまで持続される。例示的な投薬レジメンは、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、次いで、抗ＮＧＦ抗体の約１ｍｇ／ｋｇの週間持続用量か、または隔週の約１ｍｇ／ｋｇの持続用量を投与する工程を包含する。しかし、他の投薬レジメンが、実施者が達成されることを望む薬理動力学的減衰のパターンに依存して有用であり得る。例えば、１週間に１〜４回の投与が意図される。他の投薬レジメンとしては、１日当たり１回まで、１週間当たり１〜４回、またはそれ以下の頻度のレジメンが挙げられる。いくつかの実施形態において、化合物は、１週間に約１回、１ヶ月当たり約１〜４回投与される。抗ＮＧＦ抗体の投薬量が本明細書中に記載される。この治療の経過は、従来の技術およびアッセイによって容易にモニタリングされる。
【０１５２】
いくつかの実施形態において、抗体ではない場合、本発明に従うＮＧＦアンタゴニストは、患者の体重１ｋｇ当たり０．１〜３００ｍｇの割合で１回〜３回の用量に分けるか、または本明細書中に開示されるように投与され得る。正常な体重の数名の成人患者では、約０．３〜５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が投与され得る。特定の投薬レジメン（すなわち、用量、タイミングおよび反復）は、特定の個体およびその個体の病歴、ならびに個々の薬剤の特性（例えば、その薬剤の半減期、および当該分野で周知の他の考慮すべき事項）に依存する。
【０１５３】
ＮＳＡＩＤは、そのような鎮痛剤についての従来の投薬量レベルまでの投薬レベルで投与され得る。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、減少されたレベルで投与される。適切な投薬レベルは、選択されたＮＳＡＩＤの鎮痛効果に依存するが、代表的には、適切なレベルは、１日当たり約０．００１〜２５ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ、または１日当たり０．０５〜１ｍｇ／ｋｇであるか、あるいはそれ未満である。化合物は、１日当たり６回まで（またはそれ以上）、１日当たり１〜４回のレジメンで投与され得るか、あるいはそれ以下の頻度で投与され得る。いくつかの実施形態において、ＮＳＡＩＤは、（例えば、ＰＣＡと同様に）連続的にか、または間をあけずに投与される。
【０１５４】
単一の組成物としてかまたは別個の組成物としてかのいずれかで、組み合わせて投与される場合、神経成長因子アンタゴニストおよびＮＳＡＩＤは、所望の効果の発現と一致する比で提示される。いくつかの実施形態において、重量でのＮＳＡＩＤに対する神経成長因子は、およそ１：１である。いくつかの実施形態において、この比は、約０．００１：約１と約１０００：約１との間、約０．０１：約１と約１００：約１との間、または約１と約１０：約１との間であり得る。他の比が、意図される。
【０１５５】
疼痛の処置または予防における使用のために必要とされる神経成長因子およびＮＳＡＩＤの量が、選択される特定の化合物もしくは組成物だけでなく、投与経路、処置されるべき状態の性質、ならびに患者の年齢および状態、処置の経過もしくは段階によって変化し、そして最終的に担当医の裁量で変化することが理解される。例えば、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）の適切な投薬量は、使用されるＮＧＦアンタゴニスト（またはその組成物）、処置されるべき疼痛の型および重篤度、薬剤が予防目的または治療目的で投与されたのかどうか、以前の治療、患者の病歴および薬剤への応答性、ならびに担当医の裁量に依存する。代表的には、臨床家は、投薬量が所望を達成する投薬量に達するまで、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）を投与する。
【０１５６】
半減期のような経験的な考慮が、一般的には、投与量の決定の一因となる。例えば、ヒトの免疫系と適合する抗体（例えば、ヒト化抗体または完全なヒト抗体）が、抗体の半減期を長くするために、宿主免疫系による攻撃から抗体を防ぐために、使用され得る。投与の頻度は、治療の経過全体を通じて決定し、調整され得、一般的には、疼痛の処置、および／または抑制、および／または緩和、および／または遅延に基づくが、必ずしもそうであるとは限らない。あるいは、ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはＮＳＡＩＤの徐放性の連続的放出処方物が適切であり得る。徐放性放出を達成するための種々の処方物およびデバイスは当該分野で公知である。
【０１５７】
１つの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト抗体についての投薬量は、疼痛を処置するためにＮＧＦ活性を阻害する薬剤の１回以上の投与がなされた個体において、経験的に決定され得る。個体は、ＮＧＦを阻害する薬剤（例えば、抗ＮＧＦ抗体）の増分投薬量が、ＮＳＡＩＤと併用して与えられる。処置の効力を評価するために、疼痛の指標が追跡され得る。
【０１５８】
本発明の方法に従うＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤの投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるかまたは予防的であるか、および熟練した実施者に公知の他の因子に依存して、連続的であり得るかまたは断続的であり得る。ＮＧＦアンタゴニストの投与は、本質的には、あらかじめ選択された期間にわたって連続的に行われても、間隔のあいた用量（例えば、痛みが発生する前、間、もしくは後のいずれか）で順次行われてもよい。例えば、投与は、創傷、切開、外傷、手術、および疼痛を生じる可能性を有する任意の他の事象の前、間および／または後であり得る。
【０１５９】
いくつかの実施形態において、１つより多くのＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）が存在し得る。アンタゴニストは、互いに同じであっても、異なっていてもよい。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つの異なるＮＧＦアンタゴニスト、あるいはそれ以上の異なるＮＧＦアンタゴニストが存在し得る。一般的には、これらのＮＧＦアンタゴニストは、互いに悪影響を与えない相補的な活性を有する。ＮＧＦアンタゴニストはまた、薬剤の有効性を増強および／または補完する役割を果たす他の薬剤と併用して使用され得る。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、１つ以上のＮＳＡＩＤが存在し得る。少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つの異なるＮＳＡＩＤ、あるいはそれ以上の抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体が存在し得る。通常は、これらのＮＳＡＩＤは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有する。ＮＳＡＩＤはまた、薬剤の有効性を増強および／または補完する役割を果たす他の薬剤と併用して使用され得る。
【０１６１】
本発明に従って使用されるＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）およびＮＳＡＩＤの治療用処方物は、所望される純度を有する抗体を、任意の薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  第２０版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００））と混合することによって、凍結乾燥処方物または水溶液の形態で、保存用に調製される。受容可能なキャリア、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度ではレシピエントに対して無毒性であり、そして以下のものを含み得る：緩衝液（例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸）；塩（例えば、塩化ナトリウム；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質）；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンズエトニウム；フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；単糖類、ニ糖類、および他の糖質（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／あるいは非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。
【０１６２】
上述のＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）を含むリポソームは、当該分野で公知の方法によって調製される。このような方法は、以下：に記載される：Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ  ８２：３６３３（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号。循環時間が増大されたリポソームは、米国特許番号５，０１３，５５６に記載される。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いる逆相エバポレーション法によって生成され得る。リポソームは、所望の直径を有するリポソームを産生するための、細かいポアサイズのフィルターを通して押し出し成形される。
【０１６３】
それらの活性成分もまた、例えば、コアセルベーション技術または界面重合によって調製されるマイクロカプセル（例えば、それぞれにおいて、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセル、およびポリ（メチルメタクリエート）マイクロカプセル）中、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフィア、またはミクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中に、閉じ込められ得る。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２０ｔｈ  Ｅｄ．Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に記載される。
【０１６４】
徐放性調製物が、調製され得る。徐放性調製物の適切な例としては、その抗体を含む固相疎水性ポリマーの半透過性マトリクス（このマトリクスは、成形されたもの（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル）の形態である。徐放性マトリクスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチルーメタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール）（ｐｏｌｙ（ｖ  ｎｙｌａｌｃｈｏｌ））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸と７エチル−Ｌ−グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（例えば、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドとからなる注射可能な微小球））、酢酸イソ酪酸スクロース、ならびにポリ−Ｄ−（−）−３ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０１６５】
インビボで使用される処方物は滅菌でなければならない。これは、例えば、滅菌の濾過膜を通過させる濾過によって容易に達成される。治療用の抗ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体）組成物は、通常、滅菌アクセスポートを有する容器（例えば、静脈内溶液バッグ、または皮下注射用の注射針によって孔を空けることができるストッパーを有しているバイアル）に入れられる。
【０１６６】
本発明による組成物は、経口投与、非経口投与、または直腸投与、あるいは吸入または送気による投与のための、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、液剤もしくは懸濁剤、または坐剤のような単位投薬形態であり得る。
【０１６７】
錠剤のような固形の組成物を調製するためには、主要な活性成分が薬学的キャリア、例えば、従来の錠剤形成成分（例えば、トウモロコシ澱粉、乳糖、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、またはガム）および他の薬学的希釈剤（例えば、水）と混合され、本発明の化合物またはその非毒性の薬学的に受容可能な塩の均質な混合物の均質な混合物を含む固形の予備処方組成物が形成される。これらの予備処方組成物を均質であるという場合には、活性成分が組成物全体に均一に分散させられており、その結果、組成物を錠剤、丸剤、およびカプセル剤のような等しい有効単位投薬形態に容易に分割することができることを意味する。その後、この固形の予備処方組成物は、０．０１ｍｇ〜０．１ｍｇから約５００ｍｇまでの本発明の活性成分を含む上記の型の単位投薬形態へと分割される。新規の組成物の錠剤または丸剤は、コーティングされ得るか、または別の方法で、持続性の作用の利点を与える投薬形態を生じるように調合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬成分と外部投薬成分とを含み得、後者は、前者を覆う外皮の形態である。これらの２つの成分を、胃での分解には抵抗性があり、内部性分を完全なまま十二指腸へと通過させるか、または放出を遅らせるように作用する腸溶層によって分離され得る。種々の材料を、このような腸溶層およびコーティングに使用し得、このような材料としては、多数の重合性の酸、およびシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料との重合性の酸の混合物のメンバーが挙げられる。
【０１６８】
本発明の組成物が、経口的にかまたは注射によって投与されるために組み込まれ得る、液体形態としては、水溶液、適切に矯味矯臭されたアジュバント、水性懸濁液もしくは油性懸濁液、ならびに食用油（例えば、綿実油、ゴマ油、ヤシ油、または落花生油）との矯味矯臭されたエマルジョン、ならびにエリキシルおよび類似の薬学的ビヒクルが挙げられる。水性懸濁液のために適切な分散剤または懸濁剤としては、合成ゴムおよび天然ゴム（例えば、トラガカント、アカシア、アルギネート、デキストラン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチン）が挙げられる。活性成分はまた、非常に粘性の制御放出製品（例えば、酢酸イソブチル酸スクロースなど）に組み込まれ得る。これらの処方物は、経口投薬または注射のいずれかのために使用され得る。注射は、薬物の局所デポーを生じ得、これは、１日〜３ヶ月の期間にわたって、局所的に放出される。
【０１６９】
注射によって投与するための組成物としては、活性成分としてＮＧＦアンタゴニストおよびＮＳＡＩＤを、表面活性剤（または湿潤剤もしくは界面活性剤）と組み合わせて、またはエマルジョンの形態（油中水エマルジョンまたは水中油エマルジョンとして）で含有する組成物が挙げられる。
【０１７０】
適切な界面活性剤として、具体的に、非イオン性薬剤（例えば、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、ＴｗｅｅｎＴＭ２０、４０、６０、８０、または８５）、および他のソルビタン（例えば、ＳｐａｎＴＭ２０、４０、６０、８０、または８５）が挙げられる。界面活性剤を含む組成物は、好都合には、０．０５％と５％との間、または０．１％と２．５％との間の界面活性剤を含み得る。必要である場合には、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の薬学的に受容可能なビヒクルを添加し得ることは明らかである。
【０１７１】
適切なエマルジョンは、ＩｎｔｒａｐｉｄＴＭ、ＬｉｐｏｓｙｎＴＭ、ＩｎｆｏｎｕｔｒｏｌＴＭ、ＬｉｐｏｆｕｎｄｉｎＴＭ、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｍＴＭのような、市販されている脂肪エマルジョンを使用して調製され得る。活性成分は、予め混合したエマルジョン組成物中に溶解され得るか、あるいは、活性成分は、油（例えば、大豆油、ベニバナ油、菜種油、胡麻油、コーン油、またはアーモンド油）およびリン脂質（例えば、卵のリン脂質、大豆リン脂質、または大豆レシチン）と水の混合の際に形成されるエマルジョン中に溶解され得るかのいずれかである。エマルジョンの張度を調節するために他の成分（例えば、グリセロールまたはグルコース）が添加され得ることは明らかである。適切なエマルジョンは、代表的に、２０％までの油、例えば、５％と２０％との間の油を含む。脂質エマルジョンは、０．１μｍと１．０μｍとの間、具体的には、０．１μｍと０．５μｍとの間の脂質の液滴を含み得、５．５から８．０までの範囲のｐＨを有し得る。
【０１７２】
いくつかの実施形態においては、エマルジョン組成物は、神経成長因子アンタゴニストを、ＩｎｔｒａｌｉｐｉｄＴＭまたはその成分（大豆油、卵のリン脂質、グリセロール、および水）と混合することによって調製されたものである。
【０１７３】
吸入または送気のための組成物としては、薬学的に受容可能な水性溶媒または有機溶媒中の溶液および懸濁液、またはそれらの混合物、ならびに粉末が挙げられる。液体または固体の組成物は、上記に示されたような適切な薬学的に受容可能な賦形剤を含み得る。組成物は、局所または全身的な効果のために、経口または鼻腔の呼吸経路によって投与される。好ましくは、滅菌の薬学的に受容可能な溶媒中のものである、組成物は、気体を使用することによって噴霧することができる。噴霧された溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込むことができるか、または噴霧デバイスを、フェイスマスク、テント、もしくは間欠型陽圧呼吸器に取り付け得る。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、適切な様式で処方物を送達するデバイスから、に投与され得る（経口または鼻腔内が挙げられる）。
【０１７４】
処置効果は、当該分野で周知の方法によって評価され得る。
【０１７５】
以下の実施例は、本発明を説明するために提供されるが、本発明を限定しない。
【実施例】
【０１７６】
（実施例１）
（手術後の疼痛を処置するための、ＮＳＡＩＤと組み合わせた抗ＮＧＦモノクローナル抗体での処置）
本発明者らは、手術後の疼痛を模倣する疼痛モデルを使用して、ＮＳＡＩＤ（イブプロフェン）と組み合わせた抗ＮＧＦ抗体の効力を評価した。各実験について、２００ｇと２２０ｇとの間の体重の１６匹の雄性成体Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（Ｈａｒｌａｎ；Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を、使用前に、通常な光条件下で、食物および水が随意に摂取できる状態で、少なくとも１週間閉じ込めた。手術前日の、試験チャンバ内での２時間の順化期間の後に、これらのラットを２つの群に分割した：１つは、手術の１５時間前に抗体を受け、他方はこの時点でビヒクル（５％ブドウ糖／０．４５％生理食塩水ＵＳＰ）を受けた。抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体９１１（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）を参照のこと）を、体重１ｋｇあたり１ｍｇで与えた。イブプロフェンを、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）の範囲の種々の濃度で、手術の２４時間後に全ての動物に与えた。
【０１７７】
手術は、Ｂｒｅｎｎａｎら、Ｐａｉｎ  ６４：４９３−５０１（１９９６）によって記載された手順に基づいた。動物を、２％イソフルランと空気との混合物で麻酔し、この麻酔を、ノーズコーンを介して、手術の間維持した。右側の肢の足底表面を、ポビドン−ヨウ素パッドで準備し、そして１ｃｍの中心長手軸方向切開を、皮膚および筋膜を通して、踵の縁部から０．５ｃｍの位置から足先の方へと延びるように作製した。足を固定位置に保持して物差しを用いて、測定を行った。足底筋を、湾曲したピンセットを用いて持ち上げ、そして長手軸方向に切開した。この筋肉を、その全深さを通して、起点と停止との間で切開した。ガーゼパッドを介して適用される圧力によって、手術の間中、出血を制御した。この創傷を、２針のさし縫い縫合（５−０エチコンブラックモノフィラメント）で閉鎖した。これらの縫合糸を５〜６回結び、１回目の結び目を緩く締めた。この創傷部位を、バシトラシン溶液で擦った。動物を、きれいなケージ内で回復させ、そして２２時間休ませ、その後、行動試験を開始した。
【０１７８】
各実験について、動物を２つの群（コントロールおよび抗体処置）に分割した。抗ＮＧＦ抗体を、手術の１５時間前に与えた。安静時の疼痛を、両方の群において、手術の２２時間後に評価した（以下のグラフにおける「ベースライン」）。手術後２４時間において、全ての動物を、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇ（ｓ．ｃ．）のイブプロフェンで処置した。安静時の疼痛を、イブプロフェン処置の１時間後から開始して評価した。
【０１７９】
安静時の疼痛を、手術後の種々の時点で、累積疼痛スコアを使用して評価した。ラットを、透明なプラスチックケージ内のプラスチックメッシュ（格子：８ｍｍ２）の上に置き、そして１５分〜２０分間順化させた。行動を、０〜２の目盛で評価した。足が白くなるかまたはメッシュに押し付けられるかに注目することによって評価されるように、動物が切開された足に体重をかけている場合に、０のスコアを与えた。皮膚が白くもならずへこみもせずに、前足の皮膚がメッシュにちょうど接触する場合に、１のスコアを与えた。足がメッシュから完全に離れて保持される場合に、２のスコアを与えた。各動物を、１０分間にわたって５分おきに、１分間観察した。０．５時間の間に得られた６つのスコアの合計（合計０〜１２）を使用して、切開された足における疼痛を評価した。
【０１８０】
これらの実験の結果を、表１および図１に示す。
【０１８１】
表１：手術の１日後の、１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体および０、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇまたは３００ｍｇ／ｋｇのイブプロフェンでの処置後の、動物における累積疼痛スコア。データは、平均（ＳＥＭ）として示される。データを、分散の一方向分析によって分析し、次いで、個々の対を、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ補正を使用して、Ｐｒｉｚｍソフトウェアを用いる複数の比較のために分析した。
【０１８２】
【表４】
2006525960.tif 000005
表１に示されるように、Ｍａｂ９１１（１ｍｇ／ｋｇ）処置についての安静時疼痛スコアは、イブプロフェンなしのコントロールより有意に低かった（ｐ＜０．００１）。同様に、１ｍｇ／ｋｇのＭａｂ９１１および１０ｍｇ／ｋｇのイブプロフェンでの処置についての、安静時疼痛スコアは、１０ｍｇ／ｋｇのイブプロフェン単独での処置より有意に低かった（ｐ＜０．００１）；そして１ｍｇ／ｋｇのＭａｂ９１１および３０ｍｇ／ｋｇのイブプロフェンでの処置についての安静時疼痛スコアは、３０ｍｇ／ｋｇのイブプロフェン単独での処置より有意に低かった（ｐ＜０．０５）。図１は、１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体での処置ありまたはなし、および種々の用量のイブプロフェンでの処置ありまたはなしの動物において測定された、安静時疼痛スコアを記載する。抗ＮＧＦ抗体およびイブプロフェンでの、手術前の処置は、安静時疼痛を低下させる際に、イブプロフェン単独または抗体単独での処置よりも有効である。１０ｍｇ／ｋｇのイブプロフェンと組み合わせたＭａｂ９１１（１ｍｇ／ｋｇ）処置は、３００ｍｇ／ｋｇのイブプロフェン単独と少なくとも同程度に有効であることが理解される。
【０１８３】
手術後の疼痛についての、ジクロフェナクと組み合わせた抗ＮＧＦモノクローナル抗体９１１での処置の効果を試験するために、動物にイブプロフェンの代わりにビヒクルまたは５ｍｇ／ｋｇのジクロフェナクを投与したことを除いて、上記のように実験を実施した。その結果を図２に示す。疼痛スコアの減少が、５ｍｇ／ｋｇのジクロフェナク単独での処置と比較して、１ｍｇ／ｋｇの９１１と５ｍｇ／ｋｇのジクロフェナクとの両方での処置について、平均して、観察された。
【０１８４】
上記発明は、理解を明瞭にする目的で、説明および例示によっていくらか詳細に記載されたが、これらの記載および実施例は、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０１８５】
【図１】図１は、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦアンタゴニストＭａｂ９１１；Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）を参照のこと）と組み合わせて、１０ｍｇ／ｋｇまたは３０ｍｇ／ｋｇのＳ［＋］イブプロフェンで処置された動物において、累積的な疼痛の点数が減少したことを示す。動物は、２つの群（コントロール群および抗体処置群）に由来する。ＮＧＦアンタゴニストを、外科手術の１５時間前に、腹腔内に（時間＝−１５時間）、１ｍｇ／ｋｇの用量で与えた。外科手術は、時間０で記載されるときに行った。安静時の疼痛を、外科手術の２４時間後に評価した（グラフ中「０」）。次いで、全ての動物を、１０ｍｇ／体重１ｋｇまたは３０ｍｇ／体重１ｋｇのイブプロフェン（４５％のβシクロデキストリン液中３００ｍｇ／ｍｌ）で処置した。抗体処置されないコントロール動物もまた、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇおよび３００ｍｇ／ｋｇのイブプロフェンで処置した。イブプロフェンを、首筋において、皮下に送達した。イブプロフェン投薬の１時間後、安静時の疼痛を試験した。抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体＋イブプロフェンによる処置は、イブプロフェン単独または抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体単独のいずれかによる処置よりも、安静時の疼痛を減少するのに有効である。
【図２】図２は、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦアンタゴニストＭａｂ９１１；Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  １９：２１５−２２７（２０００）を参照のこと）と組み合わせて、５ｍｇ／ｋｇのジクロフェナクで処置した動物における、累積的な疼痛の点数を示すグラフである。動物を２つの群（コントロール群および抗体処置群）に分けた。ＮＧＦアンタゴニストを、外科手術の１５時間前に、腹腔内に（時間＝−１５時間）、１ｍｇ／ｋｇの用量で与えた。外科手術は、時間０で記載されるときに行った。安静時の疼痛を、外科手術の２４時間後に評価した（グラフ中「０」）。次いで、全ての動物を、５ｍｇ／体重１ｋｇのジクロフェナクで処置した。抗体処置されないコントロール動物もまた、５ｍｇ／ｋｇのジクロフェナクで処置した。ジクロフェナクを、首筋において、皮下に送達した。ジクロフェナク投薬の１時間後、安静時の疼痛を試験した。
【図１】
2006525960.tif 000006
【図２】
2006525960.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成17年12月26日(2005.12.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2006525960000001.app