(57)【要約】本発明は、心臓血管疾患の病理状態に関連した炎症および免疫調節の応答を変調させることによって心臓血管疾患を治療する方法に関する。本発明の態様は、１以上のＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニスト、ＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の有効量を単独またはあらゆる組合せで投与することを含んでなる、心臓血管疾患を有する被検者における心臓血管疾患の治療の方法を提供する。本要約は、読者が本技術開示の主題を速やかに把握することを可能にするためだけのものであり、特許請求項の範囲または意味を解釈または限定するために使用することを企図していない。３７  ＣＦＲ  １．７２（ｂ）。【特許請求の範囲】
【請求項１】
心臓血管疾患を有する被検者において心臓血管疾患を治療する方法であって、治療有効量のアンタゴニストを被検者へ投与することを含んでなり、ここでアンタゴニストは、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよびＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択される、前記方法。
【請求項２】
ＩＬ−１７アンタゴニストが可溶性ＩＬ−１７受容体である、請求項１の方法。
【請求項３】
可溶性ＩＬ−１７受容体が融合タンパク質である、請求項２の方法。
【請求項４】
ＩＬ−１７アンタゴニストが抗体である、請求項１の方法。
【請求項５】
抗体がＩＬ−１７受容体へ特異的に結合する、請求項４の方法。
【請求項６】
抗体がＩＬ−１７へ特異的に結合する、請求項４の方法。
【請求項７】
抗体がヒト化抗体である、請求項４の方法。
【請求項８】
抗体が単鎖抗体である、請求項４の方法。
【請求項９】
ＩＬ−１７アンタゴニストを週に１以上の回数投与する、請求項１の方法。
【請求項１０】
ＩＬ−１７アンタゴニストを皮下注射により投与する、請求項１の方法。
【請求項１１】
非ステロイド性抗炎症薬；鎮痛薬；全身性ステロイド；炎症性サイトカインのアンタゴニスト；抗炎症性サイトカイン；化学療法剤；脂質低下薬；血圧調節薬；アンジオテンシン変換酵素阻害剤および／またはペルオキシソーム増殖因子活性化受容体リガンドからなる群より選択される１以上の化合物との組合せにおいてＩＬ−１７アンタゴニストを投与する、請求項１の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、米国特許法（Ｕ．Ｓ．Ｃ．）３５条１１９項の下で、２００３年８月１２日出願の米国仮特許出願第６０／４９４，４５７号と２００２年８月２８日出願の米国仮特許出願第６０／４０６，４１８号の利益を主張する。
【０００２】
発明の分野
本発明の態様は、心臓血管疾患に関連した炎症および免疫調節の応答を変調させることによって心臓血管疾患を治療するための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術
心臓血管疾患には、心臓、末梢血管、筋肉、および様々な臓器の筋肉および／または血管に影響を及ぼすいくつかの障害が含まれる。当該技術分野においては、様々な形態の心臓血管疾患の病理発生に炎症および免疫調節のプロセスが関与していることが定説となっている。
【０００４】
例えば、炎症免疫応答は、アテローム性動脈硬化症の病理発生に貢献することが示されている。Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）の上昇レベルは、症候性アテローム性動脈硬化症の相対リスクの８．６倍までの増加に関連していた（Ｂｉａｓｕｃｃｉ，Ｌ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９９，９９：８５５−８６０）。ＣＲＰの上昇レベルより、心筋梗塞（ＭＩ）または卒中の上昇リスク状態にある患者も予測され、それはまた、不安定型狭心症の予後不良にも関連していた（Ｖｏｒｃｈｈｅｉｍｅｒ，Ｄ．ら，ＪＡＭＡ  ２００１，２８６：２１５４−２１５６）。Ｃ１ｑへ結合すると、ＣＲＰは、古典的な補体経路を活性化して、直接的な心筋損傷、冠平滑筋または内皮細胞の死、そして後続のアテローム硬化斑の破裂をもたらす可能性がある（Ａｇｒａｗａｌ，Ａ．ら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００１，１６６：３９９８−４００４）。さらに、最近の研究は、上昇レベルのＣＲＰにより、突然の心臓死で死亡する患者をそのイベントの９年前に同定することが可能であることを証明した（Ａｌｂｅｒｔ，Ｃ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０５：２５９５−９）。これらの研究はまた、長期の炎症曝露と上昇ＣＲＰレベルが急性冠症候群の進行に貢献し得ることを示唆する（Ｂｕｆｆｏｎ，Ａ．ら，ＮＥＪＭ  ２００２，３４７：５５−７）。アテローム硬化斑の内部に常在する炎症細胞の活性化により、細胞外マトリックスを破壊することの可能な酵素が複雑に合成され、斑破壊をもたらす可能性がある。あるいは、これらの炎症細胞は、内皮および平滑筋の細胞を直接殺傷する場合がある。いくつかの研究は、不安定型狭心症の患者が、安定型狭心症の患者に比較して、インターフェロン−γのレベルを高める末梢Ｔ細胞を有することを証明した。さらに、これらの患者においては、ＣＤ４＋ＣＤ２８ヌルＴ細胞集団のクローン膨張が存在するようであり、これは細胞傷害性であるらしく、内皮細胞を殺傷することができて、ＣＲＰにより亢進される効果である（Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｔ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０５：５７０−５）。
【０００５】
サイトカインは、１型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１）およびＴｈ２のＴ細胞応答の重要な調節因子である。Ｔｈ１応答は、マクロファージ活性化を特徴とする好炎症性サイトカインの放出をもたらし、対処しなければ、組織損傷をもたらす場合がある。Ｔｈ２応答は、体液性免疫応答、Ｂ細胞活性化、およびアレルギー反応をもたらす（Ｎｅｕｒａｔｈ，Ｍ．ら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ  ２００２，８：５６７−７３）。不安定型狭心症においては、ＴＮＦ、ＩＬ−６およびケモカインＭＣＰ−１が含まれるいくつかのＴｈ１型サイトカインが上昇している（ＡＪＣ  ２００１，８８（８Ａ）：１０Ｋ−１５Ｋ）。最近、ＩＬ−１８が急性冠症候群と診断された患者の不都合なアウトカムの独立したマーカーであることが見出された（Ｂｌａｎｋｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００２，１０６：２４−３０）。上昇レベルのＩＬ−１８は、潰瘍化した症候性頚動脈病変に相関することも見出された（Ｍａｌｌａｔ，Ｚ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１，１０４：１５９８−６０３）。アテローム硬化斑進展のマウスモデルのＡｐｏＥ欠乏マウスにおいて、ＩＬ−１８は、プラーク形成を加速して亢進させ、ＩＬ−１８結合タンパク質が平滑筋増殖を高めることが示され、それが冠の厚さを増すことによってプラーク安定性を促進し、浸潤性マクロファージおよびＴ細胞の数を低下させた（Ｍａｌｌａｔ，Ｚ．ら，Ｃｉｒｃ  Ｒｅｓ．２００１，８９：Ｅ４１−５）。このような研究成果は、炎症および免疫調節応答が心臓血管疾患に関連していることを示唆する十分な論拠となっている。
【０００６】
当該技術分野には、心臓血管疾患の免疫病理に標的指向することによってこの疾患を治療することへの未充足ニーズが存在する。本発明の態様は、心臓血管疾患に関連した炎症および免疫調節応答を変調させることによって心臓血管疾患を治療するための組成物および方法を提供することによってこのようなニーズに対処する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
発明の概要
本発明の態様は、ＩＬ−１７のＩＬ−１７受容体への結合を阻害するＩＬ−１７アンタゴニスト、並びにＩＬ−１７受容体の活性化を予防するかまたは減少させるアンタゴニスト；ＩＬ−１８のＩＬ−１８受容体への結合を阻害するＩＬ−１８アンタゴニスト、並びにＩＬ−１８受容体の活性化を予防するかまたは減少させるアンタゴニスト；４−１ＢＢリガンドの４−１ＢＢへの結合を阻害する４−１ＢＢアンタゴニスト、並びに４−１ＢＢリガンドまたは４−１ＢＢの活性化を予防するかまたは減少させるアンタゴニスト；ＣＤ３０リガンドのＣＤ３０への結合を阻害するＣＤ３０アンタゴニスト、並びにＣＤ３０の活性化を予防するかまたは減少させるアンタゴニスト；ＯＸ４０リガンドのＯＸ４０への結合を阻害するＯＸ４０アンタゴニスト、並びにＯＸ４０の活性化を予防するかまたは減少させるアンタゴニスト；および／または、単独またはあらゆる組合せのＣＤ３９といった、１以上のアンタゴニストの有効量を投与することを含んでなる、心臓血管疾患を有する被検者における心臓血管疾患の治療の組成物および方法を提供する。
【０００８】
追加の態様は、以下に詳しく記載する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
発明の詳細な説明
本発明の態様は、１以上のＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニスト、ＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の有効量を単独またはあらゆる組合せで投与することを含んでなる、心臓血管疾患を有する被検者において心臓血管疾患を治療するための組成物および方法を提供する。
【００１０】
本明細書に定義される心臓血管疾患には、心臓の筋肉および／または血管の疾患および障害、血管系の疾患および障害、および／または、心臓および／または脈管構造の病的状態により引き起こされる臓器および解剖系の疾患および障害が含まれる。例には、限定されないが、心筋炎、慢性自己免疫心筋炎、細菌性およびウイルス性心筋炎、並びに感染性心内膜炎のような心臓および／または脈管構造の炎症；心不全；鬱血性心不全；慢性心不全；心不全の悪液質；非虚血性（拡張性心筋症；突発性拡張性心筋症；心原性ショック、体外循環支援に続発する心不全（「ポンプ後症候群」）、虚血／再灌流損傷に続く心不全、脳死関連心不全（Ｏｗｅｎら，１９９９（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９９  Ｍａｙ  １８；９９（１９）２５６５−７０）に記載のような）；肥大性心筋症；拘束性心筋症；非虚血性全身高血圧；弁疾患；不整脈起因性右心室心筋症）および虚血性（じゅく腫形成；アテローム硬化症；動脈硬化症；末梢血管疾患；冠動脈疾患；卒中、一過性虚血発作および心筋梗塞が含まれる梗塞）が含まれる心筋症が網羅される。心臓血管疾患の定義に網羅される追加の病態には、動脈瘤；動脈炎；狭心症；塞栓症；血小板関連虚血障害；虚血／再灌流損傷；再狭窄；僧房弁および／または三尖弁逆流；僧房弁狭窄；無症候性心筋虚血；レイノー現象；血栓症；深在性静脈血栓症；肺塞栓症；血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）および溶血性尿毒症性症候群（ＨＵＳ）が含まれる血栓性微小血管症、本態性血小板血症、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、および、外来または損傷組織への曝露に関連した血栓症および凝固障害、表面血栓性静脈炎；川崎脈管炎が含まれる脈管炎；高安動脈炎；静脈閉塞性疾患、巨細胞動脈炎、ウェジナー肉芽腫症；シェーンライン−ヘノッホ紫斑病、並びに細菌のような１以上の口内病原体による歯周感染症より生じる心臓血管疾患が網羅される。上記に提供する心臓血管疾患の例は単に例示であって、本明細書に記載の組成物および方法を使用して治療可能である心臓血管疾患の範囲を当業者が理解することに役立つために提供する。当然ながら、本発明の組成物および方法を使用して治療可能である他の心臓血管の疾患状態も存在し得る。心臓血管疾患に関連した心臓血管の疾患および障害の追加例、並びに心臓血管疾患の治療より生じる合併症は、治療適応症に関連して以下のセクションに提供する。
【００１１】
本明細書に定義される「アンタゴニスト」は、２つのコグネイトの結合を一部または完全に遮断して、それによりコグネイトの相互作用の下流の生物学的効果を阻害する分子である。例えば、アンタゴニストは、リガンドのその受容体への結合を遮断することが可能であり、次いで、その受容体の活性化を介した細胞内シグナル伝達が抑制および／または防止され、次いで、限定されないが、細胞活性化、増殖、分化、サイトカイン放出、遺伝子のアップレギュレーション、タンパク質の細胞表面発現、などといった、その受容体の活性化の下流の生物学的効果が抑制および／または防止される。
【００１２】
受容体を活性化することまたはその活性化は、本明細書において、限定されないが、受容体：リガンド相互作用のような、膜結合性受容体への分子結合に応答した、１以上の細胞内シグナル伝達経路の参画と細胞内シグナル伝達の導入（即ち、シグナル伝達）として定義される。
【００１３】
本明細書に使用する「シグナル伝達」は、ある物理または化学形態から別のものへの変換によるシグナルのリレーである。細胞生物学においては、細胞が細胞外シグナルを応答へ変換するプロセスのことである。
【００１４】
本明細書に提示するアンタゴニストは、可溶性の受容体分子、リガンドおよび／または結合タンパク質を含み、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒ）、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）およびＣＤ３９が含まれる。本明細書に提示するアンタゴニストは、さらに、以下の１以上に対して向けられる抗体、融合タンパク質およびペプチド体（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）を含む：ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０および／またはＯＸ４０−Ｌ。本明細書に提示するアンタゴニストは、さらに、ＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８とＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢと４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０とＣＤ３０−Ｌおよび／またはＯＸ４０とＯＸ４０−Ｌの間の相互作用に拮抗する、ペプチド模倣体およびミモトープ、などのような低分子を含む。追加のアンタゴニストは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０および／またはＯＸ４０−ＬのｍＲＮＡに特異的に標的指向してそれへハイブリダイズし、それによってそのそれぞれのタンパク質の遺伝子翻訳を妨げるアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。さらなる態様は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０および／またはＯＸ４０−Ｌのサイレンス発現用に設計したＲＮＡ干渉分子による遺伝子沈黙化（ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ）を含む。特別なアンタゴニストのより特定の定義および例は、以下のセクションにおいて提供する。
【００１５】
「ペプチド体」は、Ｆｃドメインと少なくとも１つのペプチドを含んでなる分子を意味する。そうしたペプチド体は、その多量体でも二量体でも断片でもよく、それらは誘導化されてもよい。ペプチド体は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、ＷＯ９９／２５０４４およびＷＯ００／２４７８２により詳しく記載されている。このペプチドは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒ）、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）および／またはＣＤ３９のアミノ酸配列に由来してよい。
【００１６】
本明細書に使用する「ペプチド」は、１〜４０のアミノ酸の分子を意味する。代わりの態様は、５〜２０のアミノ酸の分子を含む。例示のペプチドは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒ）、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）および／またはＣＤ３９の天然に存在する分子の細胞外ドメインの部分を含んでも、その無作為化配列を含んでもよい。
【００１７】
ペプチド配列に言及するために使用する用語「無作為化」は、完全にランダムな配列（例えば、ファージディスプレイ法またはＲＮＡ−ペプチドスクリーニングにより選択される）と、天然に存在する分子の１以上の残基が天然に存在する分子中のその位置に出現しないアミノ酸残基に置き換わっている配列を意味する。ペプチド配列を同定するための例示の方法には、ファージディスプレイ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ＲＮＡ−ペプチドスクリーニング、化学スクリーニング、などが含まれる。
【００１８】
用語「Ｆｃドメイン」には、ネイティブＦｃおよびＦｃ変異分子と以下に定義するような配列が含まれる。Ｆｃ変異体およびネイティブＦｃと同様に、用語「Ｆｃドメイン」には、抗体全体より消化されるか、または他の手段により産生される、単量体または多量体の形態の分子が含まれる。
【００１９】
用語「ネイティブＦｃ」は、抗体全体の消化より生じる非抗原結合断片の配列を含んでなる、単量体または多量体のいずれかの形態の分子または配列を意味する。ネイティブＦｃの元の免疫グロブリン源は、好ましくはヒト起源であり、いずれの免疫グロブリンでもよいが、ＩｇＧ１およびＩｇＧ２が好ましい。ネイティブＦｃは、単量体のポリペプチドから構成され、それは、共有性（即ち、ジスルフィド結合）および非共有性の会合により二量体または多量体へ連結可能である。ネイティブＦｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数は、クラス（例、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）またはサブクラス（例、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２）によって１〜４に及ぶ。ネイティブＦｃの１例は、ＩｇＧのパパイン消化より生じるジスルフィド結合性の二量体である（Ｅｌｌｉｓｏｎら（１９８２），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１０：４０７１−９を参照のこと）。本明細書に使用する用語「ネイティブＦｃ」は、単量体、二量体、および多量体の形態に一般的である。
【００２０】
用語「Ｆｃ変異体」は、ネイティブＦｃより修飾されるが、それでもサルベージ受容体、ＦｃＲｎの結合部位を含む、分子または配列を意味する。国際特許出願ＷＯ９７／３４６３１（１９９７年９月２５日公開）およびＷＯ９６／３２４７８は、例示のＦｃ変異体、並びにサルベージ受容体との相互作用について記載し、参照により本明細書にそのまま組み込まれる。このように、用語「Ｆｃ変異体」は、非ヒトのネイティブＦｃよりヒト化する分子または配列を含む。さらに、ネイティブＦｃは、本発明の融合分子には必要とされない構造特性または生物学的活性を提供するので除去してよい部位を含む。このように、用語「Ｆｃ変異体」は、（１）ジスルフィド結合形成、（２）選択宿主細胞との非適合性、（３）選択宿主細胞における発現時のＮ末端不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、（７）抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすかまたはそれに関与する１以上のネイティブＦｃ部位または残基を欠く分子または配列を含む。Ｆｃ変異体は以下でより詳細に記述される。
【００２１】
「ペプチド模倣体」は、ａ）代謝安定性、ｂ）良好なバイオアベイラビリティ、ｃ）高い受容体アフィニティーおよび受容体選択性、並びにｄ）最小の副作用といった、その原型のネイティブペプチドより好ましい薬理特性を表示するペプチド類似体である。ペプチド模倣体を設計することとそれを産生する方法は当該技術分野で知られている（例えば、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．６，４０７，０５９および６，４２０，１１８を参照のこと）。ペプチド模倣体は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒ）、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）および／またはＣＤ３９の細胞外ドメインの結合部位より誘導可能である。代わりの態様において、ペプチド模倣体は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体（ＩＬ−１８Ｒ）、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、ＣＤ３０、ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）、ＯＸ４０、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）および／またはＣＤ３９より誘導されるペプチドと同じ三次元構造を有する非ペプチド化合物、または上記に列挙する分子由来のペプチドの一部が同じ三次元構造を有する非ペプチド部分に置き換わっている化合物を含む。
【００２２】
「ミモトープ」は、本明細書において、タンパク質上の結合部位を模倣するペプチド配列として定義される（Ｐａｒｔｉｄｏｓ，ＣＤ，ら，Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ｃｈｅｍ  ＆  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，２００２  ５：１５−２７を参照のこと）。ミモトープは、タンパク質のコンホメーション依存性結合部位を模倣する能力を有する場合がある。これらミモトープの配列は、連続した線状のネイティブ配列を同定しないし、必ずしも天然に存在するタンパク質に出現しない。ミモトープと産生の方法は、参照によりそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，８７７，１５５およびＵ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，９９８，５７７に教示される。
【００２３】
用語「酸性残基」は、酸性基を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の酸性残基には、ＤおよびＥが含まれる。
用語「アミド残基」は、酸性基のアミド誘導体を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸を意味する。例示の残基には、ＮおよびＱが含まれる。
【００２４】
用語「芳香族残基」は、芳香族基を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の芳香族残基には、Ｆ、Ｙ、およびＷが含まれる。
用語「塩基性残基」は、塩基性基を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の塩基性残基には、Ｈ、Ｋ、およびＲが含まれる。
【００２５】
用語「親水性残基」は、極性基を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸を意味する。例示の親水性残基には、Ｃ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、およびＱが含まれる。
用語「非機能性残基」は、酸性、塩基性、または芳香族の基を欠く側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の非機能性アミノ酸残基には、Ｍ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌおよびノルロイシン（Ｎｌｅ）が含まれる。
【００２６】
用語「中性疎水性残基」は、塩基性、酸性、または極性の基を欠く側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の中性疎水性アミノ酸残基には、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｍ、およびＦが含まれる。
【００２７】
用語「極性疎水性残基」は、極性基を含んでなる側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の極性疎水性アミノ酸残基には、Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｙ、Ｃ、Ｑ、およびＮが含まれる。
【００２８】
用語「疎水性残基」は、塩基性または酸性の基を欠く側鎖を有するＤ若しくはＬ型のアミノ酸残基を意味する。例示の疎水性アミノ酸残基には、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｗ、Ｍ、Ｆ、Ｔ、Ｇ、Ｓ、Ｙ、Ｃ、Ｑ、およびＮが含まれる。
【００２９】
本明細書において使用する用語「被検者」は、哺乳動物を意味する。例えば、本発明により考慮される哺乳動物には、ヒト；霊長動物；イヌ、ネコ、などのようなあらゆる種類のペット；ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ、ウマ、などのような家畜動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモット、などのような一般実験動物；並びに、動物園にいるような捕囚動物、または自由な野生動物が含まれる。本明細書全体で、用語「宿主」は、被検者と交換可能的に使用する。
【００３０】
本明細書に使用するように、単数形（「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」）には、文脈が明らかに別のことを指定する以外は、複数の指示物が含まれる。したがって、例えば、「免疫化（ａｎ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）」への言及には複数のそうした免疫化が含まれ、「細胞（ｔｈｅ  ｃｅｌｌ）」への言及には１以上の細胞と当業者に知られているその同等物への言及が含まれる、といった具合である。本明細書に使用するすべての技術および科学用語は、明らかに他に指定しなければ、本発明が属する技術分野の当業者が普通に理解するのと同じ意味を有する。
【００３１】
本発明の様々な態様は、記載される特別な方法論、プロトコル、細胞系、動物の種または属、構築体、および試薬に限定されず、それは変動する場合があると理解される。また、本明細書に使用する用語は特別な態様を記載する目的のためだけのものであり、付帯の特許請求項によってのみ限定される、本発明の範囲を限定することを企図していないと理解される。
【００３２】
Ｉ．ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニスト
Ａ．ＩＬ−１７アンタゴニスト
本発明の態様は、ＩＬ−１７アンタゴニストを含んでなる、心臓血管疾患の治療用の組成物および方法を提供する。本明細書に提示する試験は、心臓血管疾患の様々な形態および重症度を有するヒト患者においてＩＬ−１７とＩＬ−１８が上昇していることを証明する。これらの試験は、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８の循環レベルが心臓血管疾患の重症度と相関することを証明する。さらに、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８の血漿レベルは、心臓ミオシン誘発性心筋炎モデルにおいて上昇していて、疾患重症度と相関する。故に、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８は心臓血管疾患に関連があり、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８アンタゴニストを単独または組み合わせて投与することによって心臓血管疾患を治療することへの合理的根拠を提供する。さらに、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８は、心臓血管疾患および疾患重症度の予後指標である。ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８はまた、ドナー適合および移植後アウトカムの予後指標である。故に、本発明のさらなる態様には、心臓血管疾患、心臓血管疾患重症度、ドナー適合および移植後アウトカムをスクリーニングする被検者中のＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８レベルを測定するためのアッセイが含まれる。
【００３３】
ＩＬ−１７アンタゴニストは、本明細書において、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の相互作用を一部または完全に遮断すること、そしてそれにより膜結合性ＩＬ−１７受容体を介したＩＬ−１７仲介性シグナル伝達を阻害することによって、並びにＩＬ−１７を活性化する後続の生物学的効果を一部または完全に阻害することによって、被検者中の内因性ＩＬ−１７の有効量を低下させることが可能である実体として定義される。ＩＬ−１７アンタゴニストは、ＩＬ−１７へ結合しても、ＩＬ−１７受容体へ結合してもよい。
【００３４】
こうしたＩＬ−１７アンタゴニストには、限定されないが、ＩＬ−１７受容体の可溶型；ＩＬ−１７へ特異的に結合してＩＬ−１７のＩＬ−１７受容体への結合を一部または完全に阻害する、ＩＬ−１７に対して向けられる抗体；ＩＬ−１７受容体へ特異的に結合してそれ自身はＩＬ−１７受容体を活性化せずにＩＬ−１７の結合を阻害する、ＩＬ−１７受容体に対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体へ結合してその相互作用を阻害する、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１７受容体ペプチド模倣体および／またはミモトープのような分子が含まれる。本明細書に使用するように、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体に基づいてＩＬ−１７アンタゴニストを作製することへ言及するときには、用語ＩＬ−１７およびＩＬ−１７受容体には、以下に詳しく記載するように、その断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質も含まれると理解される。
【００３５】
ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｒの生物学的活性は、本明細書において、ＩＬ−１７のＩＬ−１７Ｒへの結合とＩＬ−１７Ｒの活性化；好炎症効果；限定されないが、ＩＬ−６、ＩＬ−８、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＭＣＰ−１、Ｇｒｏα、ＰＧＥ２のようなサイトカインおよびケモカインの増加産生、並びに副刺激分子ＩＣＡＭの誘導を含んでなると定義される。ＩＬ−１７：ＩＬ−１７Ｒ相互作用はまた、単球および好中球を動員すること；ｉＮＯＳ、ＮＯおよびＣＯＸ−２のアップレギュレーション；全３つのサブクラスのＭＡＰＫ（ｐ４４およびｐ４２細胞外シグナル調節性キナーゼ、ＥＲＫ１およびＥＲＫ２）、ＮＦκＢ、ストレス誘発性Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼ（ＪＮＫ１およびＪＮＫ２）およびｐ３８の活性化という生物学的活性を有する。当然ながら、そうした生物学的活性に達する中間経路もＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｒの生物学的活性の定義に含まれると理解される。
【００３６】
ＩＬ−１７アンタゴニストは、ＩＬ−１７受容体のポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド配列、並びにその断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質を含んでも、それより開発してもよい。ヒトＩＬ−１７受容体（交換可能的にＩＬ−１７ＲまたはｈｕＩＬ−１７Ｒと呼ばれる）の単離、クローニング、調製および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，８６９，２８６およびＵ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．６，０７２，０３３に記載されている。ヒトＩＬ−１７Ｒの全長ｃＤＮＡ配列を配列番号３に提供し、対応するアミノ酸配列を配列番号４に提供する。
【００３７】
ヒトＩＬ−１７受容体は、予測切断部位がアミノ酸２７と２８の間にあるＮ末端シグナルペプチドを有する。このシグナルペプチドに２９３アミノ酸の細胞外ドメイン、２１アミノ酸の膜貫通ドメイン、および５２５アミノ酸の細胞質テールが続く。可溶性ポリペプチドは、発現される細胞より分泌されることが可能であるポリペプチドである。分泌される可溶性ポリペプチドは、望ましいポリペプチドを発現するインタクト細胞を、例えば遠心分離により培養基より分離して、その培地（上清）について望ましいポリペプチドの存在をアッセイすることによって同定可能である（および、その非可溶性の膜結合性対照物から識別可能である）。望ましいポリペプチドが培地中に存在すれば、このポリペプチドが細胞から分泌され、したがってこのポリペプチドの可溶型であることが示される。ＩＬ−１７受容体の可溶型の使用は、多くの応用に有利である。可溶性ポリペプチドが細胞から分泌されるので、このポリペプチドの組換え宿主細胞からの精製が促進される。さらに、可溶性ポリペプチドは、非経口投与や多くの酵素法のために膜結合型より概して適している。心臓血管疾患を治療する方法に有用であるＩＬ−１７Ｒの可溶型には、ＩＬ−１７の内因性ＩＬ−１７Ｒへの結合に拮抗するかまたはそれを防止する特性を有する細胞外ドメイン（配列番号４の残基１〜３２０またはシグナルペプチドを除く残基２８〜３２０）またはその細胞外ドメインの断片が含まれる。可溶性ＩＬ−１７Ｒには、膜貫通領域の一部が含まれるポリペプチドも含まれるが、但し、この可溶性ＩＬ−１７Ｒが、細胞から分泌されることが可能であり、好ましくは、ＩＬ−１７へ結合してその生物学的効果を発揮させる能力を保持することが条件である。
【００３８】
本発明に有用であるＩＬ−１７の他の型には、配列番号４のネイティブＩＬ−１７Ｒに実質的に相同であり、米国特許第６，０７２，０３３号に記載のように、ＩＬ−１７Ｒの生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のようなムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。
【００３９】
さらに本発明には、ＩＬ−１７Ｒポリヌクレオチド配列より誘導されるＩＬ−１７アンタゴニストが含まれる。本発明の態様には、可溶性ＩＬ−１７Ｒをコードする全長核酸分子、並びに配列番号３のヌクレオチド配列より誘導される単離断片およびオリゴヌクレオチドが含まれる。こうした核酸配列には、配列番号３のヌクレオチド１７８〜１４９４またはその断片、そして配列番号３のヌクレオチド配列のコード領域へ中位ストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズして、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードするＤＮＡおよび／またはＲＮＡ配列、またはその相補体を含めてよい。
【００４０】
他の態様において、ＩＬ−１７アンタゴニストは、ＩＬ−１７ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒトＩＬ−１７の全長ｃＤＮＡ配列を配列番号１に提供し、対応するアミノ酸配列を配列番号２に提供する。市販の組換えヒトＩＬ−１７も、例えばＲ＆Ｄシステムズ（ミネソタ州ミネアポリス）より入手可能である。ＩＬ−１７ポリペプチド、並びに生物学的に活性なその断片または誘導体は、ＩＬ−１７へ特異的に結合して、ＩＬ−１７のＩＬ−１７受容体への結合を一部または完全に遮断する能力を有する抗体を産生するために使用可能である。
【００４１】
さらなる態様において、ＩＬ−１７アンタゴニストは、限定されないが、ＩＬ−１７（配列番号２）および／またはＩＬ−１７Ｒ（配列番号４）のポリペプチド配列より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのような低分子およびポリペプチド模倣体である。ペプチド模倣体およびミモトープのようなポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。
【００４２】
ＩＬ−１７のアミノ酸配列に基づいたＩＬ−１７ポリペプチド模倣体は、ＩＬ−１７Ｒを活性化せずにＩＬ−１７Ｒへ結合して、内因性ＩＬ−１７の結合を立体的に妨害するだろう。逆に、ＩＬ−１７Ｒのアミノ酸配列に基づいたＩＬ−１７Ｒポリペプチド模倣体は、ＩＬ−１７へ結合して、ＩＬ−１７が内因性ＩＬ−１７Ｒへ結合することを立体的に妨害するだろう。ＩＬ−１７ペプチド模倣体は、被検者においてＩＬ−１７に拮抗して、それによってＩＬ−１７の好炎症効果を抑えるために使用可能である。ＩＬ−１７ポリペプチド模倣体は、そのものとして、心臓血管疾患に関連した炎症および／または免疫調節プロセスを治療するために使用可能である。
【００４３】
本発明に有用であるＩＬ−１７の他の型には、配列番号２のネイティブＩＬ−１７に実質的に相同であり、ＩＬ−１７の生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。例えば、ＩＬ−１７相同体Ｂ、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＦである。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造におけるＩＬ−１７アンタゴニストの使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、ＩＬ−１７アンタゴニストをコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【００４４】
Ｂ．ＩＬ−１８アンタゴニスト
本発明の態様は、ＩＬ−１８アンタゴニストを含んでなる、心臓血管疾患の治療用の組成物および方法を提供する。ＩＬ−１８アンタゴニストは、本明細書において、ＩＬ−１８とＩＬ−１８受容体の相互作用を一部または完全に遮断すること、そしてそれにより膜結合性ＩＬ−１８受容体を介したＩＬ−１８仲介性シグナル伝達を阻害することによって、並びにＩＬ−１８を活性化する後続の生物学的効果を一部または完全に阻害することによって、内因性ＩＬ−１８の有効量を低下させることが可能である実体として定義される。ＩＬ−１８アンタゴニストは、ＩＬ−１８へ結合しても、ＩＬ−１８受容体へ結合してもよい。ＩＬ−１８ＲおよびＩＬ−１８結合タンパク質より誘導されるアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１８へ結合する可溶型）は、細胞表面でＩＬ−１８ＲとＩＬ−１８について競合し、それによりＩＬ−１８が細胞へ結合することを阻害し、それによってＩＬ−１８がその生物学的活性を発現することを妨げる。
【００４５】
ＩＬ−１８：ＩＬ−１８Ｒの生物学的活性は、本明細書において、限定されないが、ＩＬ−１８のＩＬ−１８Ｒへの結合とＩＬ−１８Ｒの活性化；先天性および後天性免疫応答の調節；好炎症効果；Ｔリンパ球ヘルパー細胞の１型応答（Ｔｈ１）の誘導；細胞仲介性の細胞傷害の亢進；ＩＦＮ−γ誘導；ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−２の亢進産生；抗ＣＤ３誘発性Ｔ細胞増殖の増強；ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）およびＣＤ４＋Ｔｈ１細胞によるＦａｓ仲介性殺傷の増加；Ｆａｓ−ＦａｓＬ経路を介したアポトーシス死の増加；ＦａｓＬ発現のアップレギュレーション；Ｔ細胞およびＮＫ細胞におけるＴリンパ球ヘルパー細胞２型応答（Ｔｈ２）の誘導；好塩基球および肥満細胞の刺激によるＴｈ２サイトカインおよびヒスタミンの産生；ＩｇＥ産生の誘導が含まれると定義される。
【００４６】
こうしたＩＬ−１８アンタゴニストには、限定されないが、ＩＬ−１８Ｒの可溶型；ＩＬ−１８結合タンパク質；ＩＬ−１８へ特異的に結合してＩＬ−１８のＩＬ−１８Ｒへの結合を一部または完全に阻害する、ＩＬ−１８に対して向けられる抗体；ＩＬ−１８Ｒへ特異的に結合してそれ自身はＩＬ−１８Ｒを介したシグナルを伝達せずにＩＬ−１８の受容体結合を阻害する、ＩＬ−１８Ｒに対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＩＬ−１８またはＩＬ−１８Ｒへ結合してその相互作用を阻害する、ＩＬ−１８および／またはＩＬ−１８Ｒペプチド模倣体および／またはミモトープのような低分子が含まれる。本明細書に使用するように、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８結合タンパク質またはＩＬ−１８受容体に基づいてＩＬ−１８アンタゴニストを作製することへ言及するときには、用語ＩＬ−１８、ＩＬ−１８結合タンパク質およびＩＬ−１８受容体には、以下に詳しく記載するように、その断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質も含まれると理解される。
【００４７】
ヒトＩＬ−１８受容体（交換可能的にＩＬ−１８ＲまたはｈｕＩＬ−１８Ｒと呼ばれる）の単離、クローニング、調製および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．６，０８７，１１６および米国特許出願番号０９／６２１，５０２（ＰＣＴ公開公報ＷＯ９９／３７７７２）に記載されている。ＩＬ−１８受容体は、ＩＬ−１Ｒｒｐ１と呼ばれるＩＬ−１８結合サブユニットとＡｃＰＬと呼ばれる補助サブユニットを含有するヘテロ二量体タンパク質である。ＩＬ−１Ｒｒｐ１サブユニットは、単独でＩＬ−１８へ結合するが、ＩＬ−１８へのそのアフィニティーは、ＡｃＰＬサブユニットとのヘテロ二量体複合体において存在するときに劇的に増加する。
【００４８】
ＩＬ−１Ｒｒｐ１ポリヌクレオチド配列とそれがコードする対応のアミノ酸配列をそれぞれ配列番号５と配列番号６として提供する。ＩＬ−１８へ結合する、ＩＬ−１Ｒｒｐ１サブユニットの可溶性細胞外部分は、配列番号６のアミノ酸２０〜３２９により表され、シグナル配列の切断は、配列番号６のアミノ酸残基１９の直後で起こる。しかしながら、配列番号６のアミノ酸残基２０〜１２３とアミノ酸残基２０〜２２６と同じほど小さな断片も、ＩＬ−１８へ結合することが報告されていて、それも使用可能である。ＩＬ−１Ｒｒｐ１ポリペプチドはまた、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、米国特許番号５，７７６，７３１に記載されている。
【００４９】
ＡｃＰＬポリヌクレオチド配列とそれがコードするアミノ酸配列を本明細書においてそれぞれ配列番号７と配列番号８として提供する。ＡｃＰＬの成熟した細胞外ドメインは配列番号８のアミノ酸１５〜３５６からなり、シグナル配列の切断は、配列番号８のアミノ酸残基１４の直後で起こる。ＡｃＰＬポリペプチドとその可溶性細胞外断片も、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、米国特許出願番号０９／６２１，５０２（ＰＣＴ公開公報ＷＯ９９／３７７７２）に記載されている。
【００５０】
本発明の方法に使用のＩＬ−１８受容体の可溶型の１つの態様は、配列番号６のアミノ酸１〜３２９配列を含み、ＩＬ−１８受容体の可溶型の代わりの態様は、配列番号６のシグナル配列の切断後のアミノ酸２０〜３２９を含む。ＩＬ−１８受容体の可溶型のさらなる態様は、配列番号６の少なくともアミノ酸残基２０〜１２３、２０〜２２６または２０〜３２９（ＩＬ−１Ｒｒｐ１サブユニット）と配列番号８の少なくともアミノ酸１５〜３４０（ＡｃＰＬサブユニット）が共有性または非共有性の会合において含まれるヘテロ二量体受容体である。
【００５１】
追加のＩＬ−１８アンタゴニストは、ＩＬ−１８結合タンパク質を含む。ＰＣＴ公開公報ＷＯ９９／０９０６３は、ＩＬ−１８結合タンパク質について記載し、その有用な可溶性断片が含まれる。ヒトＩＬ−１８結合タンパク質の１つの態様は、配列番号９のポリヌクレオチド配列と配列番号１０の対応するアミノ酸配列を有する「ａ」アイソフォームである。当然ながら、ｂ、ｃおよびｄアイソフォームのような、ＩＬ−１８のＩＬ−１８Ｒへの結合に拮抗的である他のＩＬ−１８結合タンパク質のアイソフォームも使用可能である。ｂ、ｃおよびｄアイソフォームのポリヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当該技術分野で知られていて、容易に利用可能である（例えば、Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら，ＰＮＡＳ  ９７：３  １１９０−１１９５（２０００）を参照のこと）。ＩＬ−１８結合タンパク質の特別に有用な型は、抗体のＦｃドメインとの融合物である。本明細書においてＩＬ−１８ＢＰ−Ｆｃと呼ぶ、そのような融合タンパク質の例のアミノ酸配列を配列番号１１に提示する。この４２２アミノ酸のタンパク質は、哺乳動物細胞において発現されるときに分泌されるが、このタンパク質の成熟した分泌型は、アミ残基２９〜４２２を含有する。これら残基のうち、アミノ酸残基２９〜１９２はこの分子のＩＬ−１８結合タンパク質部分を表し、アミノ酸残基１９３〜４２２はこの分子のＦｃ部分を表す。Ｆｃ領域により、この融合ポリペプチドの精製および二量体化が促進される。
【００５２】
ＩＬ−１８アンタゴニストはまた、ＩＬ−１８ポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドの配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒトＩＬ−１８は、米国特許第５，８９１，６６３号に記載のようにクローニングされたｃＤＮＡより、そして米国特許第６，０６０，２８３号に開示されるようにクローニングされたゲノムＤＮＡより組換え的に産生し、これらは参照により本明細書にそのまま組み込まれる。全長ｃＤＮＡ配列を配列番号１２に提供し、対応するアミノ酸配列を配列番号１３に提供する。ＩＣＥプロセス処理したヒトＩＬ−１８のアミノ酸配列を配列番号１４に提供する。市販の組換えヒトＩＬ−１８も、例えばＲ＆Ｄシステムズ（ミネソタ州ミネアポリス）より入手可能である。ＩＬ−１８ポリペプチド、並びに生物学的に活性なその断片または誘導体は、ＩＬ−１８へ特異的に結合して、ＩＬ−１８のＩＬ−１８受容体への結合を一部または完全に遮断する能力を有する抗体を産生するために使用可能である。
【００５３】
１つの態様において、ＩＬ−１８アンタゴニストは、限定されないが、ＩＬ−１８のポリペプチド配列（配列番号１３および／または１４）より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのようなポリペプチド模倣体である。ポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。ポリペプチド模倣体は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。ＩＬ−１８のアミノ酸配列に基づいたＩＬ−１８ポリペプチド模倣体は、ＩＬ−１８受容体を活性化せずにＩＬ−１８受容体へ結合して、内因性ＩＬ−１８の結合を立体的に妨害するだろう。ＩＬ−１８ペプチド模倣体は、被検者においてＩＬ−１８に拮抗して、それによってＩＬ−１８の好炎症効果を抑えるために使用可能である。ＩＬ−１８ポリペプチド模倣体は、そのものとして、心臓血管疾患に関連した炎症および／または免疫調節プロセスを治療するために使用可能である。
【００５４】
ＩＬ−１８アンタゴニストとして使用可能であるＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体およびＩＬ−１８結合タンパク質の他の態様には、配列番号１３および／または１４のネイティブＩＬ−１８、配列番号６および８のＩＬ−１８受容体、および配列番号１０のＩＬ−１８結合タンパク質に実質的に相同であり、生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（以下により詳しく記載する）が含まれる。生物学的活性は、この事例において、そのコグネイトパートナーへ結合する能力のことである。
【００５５】
本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造におけるＩＬ−１８アンタゴニストの使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、ＩＬ−１８アンタゴニストをコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【００５６】
Ｃ．４−１ＢＢアンタゴニスト
本発明のさらなる態様は、４−１ＢＢアンタゴニストを含んでなる、心臓血管疾患の治療用の組成物および方法を提供する。
【００５７】
実施例７および８は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症における４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ免疫副刺激経路の役割を証明する、並びに４−１ＢＢの新規な心臓発現パターンを証明して、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症に対する副刺激貢献の機序としてアポトーシスを示唆する試験について記載する。より具体的に言うと、４−１ＢＢ欠損マウスと４−１ＢＢＬデコイ受容体処置マウスでは、アドリアマイシン誘発性心臓損傷に対する部分的な抵抗性が得られたが、４−１ＢＢ活性化抗体は損傷の発症を加速して、心臓におけるＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）効果に対する４−１ＢＢの貢献を示唆した。ＴＵＮＥＬ、ｓｕｂ−Ｇ１  ＤＮＡおよび活性化カスパーゼ−３を尺度とするアポトーシスは、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置野生型心筋において増加したが、４−１ＢＢＬ−／−では減少した。Ａｋｔのリン酸化は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）により選択的に抑制されたが、４−１ＢＢＬの欠失により維持されて、心臓中の副刺激経路によるアポトーシスの変調がおそらくはＡｋｔを介していて、Ｊｎｋおよびｐ３８のシグナル伝達を介さないことを示唆した。４−１ＢＢＬ−／−におけるアポトーシス指標の一貫した減少と心機能の改善は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性の心不全にアポトーシスが不可欠な役割を担うことを示唆する。
【００５８】
アドリアマイシン（２２．５ｍｇ／ｋｇ）の単回後眼窩（ＲＯ）注射は、炎症性浸潤の証拠がない進行性心不全をもたらす。この非炎症性の薬物誘発性心筋症モデルにおいて、４−１ＢＢＬ−／−マウスは、超音波心臓動態検査法によると実質的に改善した心機能を有する。さらに、４−１ＢＢ（Ｍ６）に対する作動性抗体が心機能不全を加速して増悪させるのに対し、ｍ４−１ＢＢ  Ｆｃ（４−１ＢＢＬの可溶性デコイ受容体）は、ＡＤＲ−心機能不全を抑制した。このＡｄｒ−心筋症には炎症性浸潤液を観察しないものの、我々は、Ａｄｒ投与から２日以内に４−１ＢＢの発現が心臓間質細胞の１〜５％に誘導されることを見出した。ＴＵＮＥＬおよびｓｕｂ−Ｇ１  ＤＮＡを尺度とする心臓のアポトーシスは、ＡＤＲ（４５ｍｇ／ｋｇ）投与から３日間増加し、４−１ＢＢの間質細胞上での発現の増加に一致していた。Ａｄｒチャレンジから５週間後（このとき、心機能不全は、野生型で最大であるが、４−１ＢＢＬ−／−マウスにはほとんど存在していない）に判定した、慢性の進行性アポトーシスは、ＷＴマウス（ベースラインに対して４倍）に比較して、４−１ＢＢＬ−／−マウス（ベースラインに対して１．５倍）においてより低かった。別の試験において、ウェスタンブロットにより判定するカスパーゼ３活性化は、ＡＤＲ（４５ｍｇ／ｋｇ）投与後４８〜７２時間で増加した。対照的に、４−１ＢＢＬ−／−心筋においては、ＡＤＲがカスパーゼ３の切断を誘導しなかった。ウェスタンブロットにより判定すると、アドリアマイシンは、野生型においてＡｋｔのリン酸化を抑えたが、４−１ＢＢＬ−／−の心臓では抑えなかった。ＪＮＫおよびｐ３８のリン酸化は、Ａｄｒにより影響を受けなかった。要約すると、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ免疫副刺激経路は、おそらくはアポトーシスを心臓において調節するＡｋｔシグナル伝達の変調を介して、ＡＤＲ誘発性心筋症に貢献する。
【００５９】
４−１ＢＢアンタゴニストは、本明細書において、４−１ＢＢと４−１ＢＢ−Ｌの相互作用を一部または完全に遮断すること、そしてそれにより４−１ＢＢ−Ｌを介した４−１ＢＢ仲介性シグナル伝達と４−１ＢＢを介した４−１ＢＢ−Ｌ仲介性シグナル伝達、並びに４−１ＢＢおよび／または４−１ＢＢ−Ｌを活性化する後続の生物学的効果を阻害することによって、利用可能な内因性４−１ＢＢおよび／または４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）の有効量を低下させることが可能である実体として定義される。換言すると、４−１ＢＢ：４−１ＢＢ−Ｌ相互作用は双方向のシグナル伝達を明示するので、４−１ＢＢアンタゴニストは、そのアンタゴニストがそれ自身で４−１ＢＢと４−１ＢＢ−Ｌを活性化しない限りにおいて、４−１ＢＢまたは４−１ＢＢ−Ｌのいずれに結合してもよい。こうした４−１ＢＢアンタゴニストには、限定されないが、４−１ＢＢの可溶型；４−１ＢＢへ特異的に結合して４−１ＢＢの４−１ＢＢ−Ｌへの結合を一部または完全に阻害する、４−１ＢＢに対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；４−１ＢＢへ特異的に結合してそれ自身は４−１ＢＢを介したシグナルを伝達せずに４−１ＢＢ−Ｌの結合を阻害する、４−１ＢＢに対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；４−１ＢＢまたは４−１ＢＢ−Ｌへ結合してその相互作用を阻害する、４−１ＢＢおよび／または４−１ＢＢ−Ｌ低分子、ペプチド模倣体および／またはミモトープのような分子、および／または、４−１ＢＢまたは４−１ＢＢ−Ｌの全部または部分を含んでなるポリペプチドまたはその修飾変異体が含まれ、遺伝子修飾ムテイン、その多重体型および持続放出製剤も含まれる。
【００６０】
４−１ＢＢ：４−１ＢＢ−Ｌの生物学的活性は、本明細書において、限定されないが、４−１ＢＢ−Ｌの４−１ＢＢへの結合と４−１ＢＢおよび４−１ＢＢ−Ｌの一方または両方の活性化；Ｔリンパ球に対する副刺激活性；ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞の活性化および分化；ＴＲＡＦ経路（ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２およびＴＲＡＦ３）を介したシグナル伝達とＮＦκＢおよびＡＰ−１の活性化；活性化誘導性細胞死の阻害；Ｂ細胞増殖および単球活性化の促進；限定されないが、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＴＮＦ−αが含まれるサイトカインのアップレギュレーション；ＩＣＡＭのような接着分子のアップレギュレーション；ＦｃγＲＩＩＩのダウンレギュレーション；単球におけるＭ−ＣＳＦの産生；単球増殖；および、抗ＣＤ３抗体により誘導されるＴ細胞増殖の阻害が含まれると定義される。
【００６１】
４−１ＢＢアンタゴニストは、４−１ＢＢ−Ｌのポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒト４−１ＢＢ−Ｌ（交換可能的にｈｕ４−１ＢＢ−Ｌと呼ばれる）の単離、クローニング、調製および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，６７４，７０４に記載されている。４−１ＢＢ−Ｌは、４−１ＢＢへ結合することが可能である哺乳動物のポリペプチドの種属（ｇｅｎｕｓ）を意味する。４−１ＢＢ−Ｌは、ＩＩ型細胞外膜ポリペプチドであり、このポリペプチドのＮ末端に細胞内（細胞質）ドメイン（配列番号１５のアミノ酸１〜２５）を有し、膜貫通領域ポリペプチド（配列番号１５のアミノ酸２６〜４８）とこのポリペプチドのＣ末端にある細胞外（受容体結合性）ドメイン（配列番号１５のアミノ酸４９〜２５４）がそれに続く。可溶性４−１ＢＢ−Ｌポリペプチドは、以下に記載のように、細胞外ドメインより誘導可能である。ヒト４−１ＢＢ−Ｌの全長ｃＤＮＡ配列を配列番号１４に提供し、対応するアミノ酸配列を配列番号１５に提供する。ヒト４−１ＢＢ−Ｌタンパク質は、細胞質ドメイン（配列番号１５のアミノ酸１〜２５）、膜貫通ドメイン（アミノ酸２６〜４８）、および細胞外ドメイン（アミノ酸４９〜２５４）を含む。
【００６２】
さらに、４−１ＢＢアンタゴニストは、４−１ＢＢのポリペプチドおよびポリヌクレオチド配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒト４−１ＢＢ  ｃＤＮＡのポリヌクレオチド配列とそれによりコードされるアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１７と配列番号１８に提示する。ヒト４−１ＢＢタンパク質は、Ｎ末端シグナル配列（配列番号１８のアミノ酸−２３〜−１）、アミノ酸１〜１６３を含んでなる細胞外ドメイン、アミノ酸１６４〜１９０を含んでなる膜貫通領域、およびアミノ酸１９１〜２３２を含んでなる細胞質ドメインを含む。
【００６３】
４−１ＢＢ−Ｌおよび４−１ＢＢタンパク質の可溶型を本明細書に提供する。可溶性４−１ＢＢ−Ｌまたは４−１ＢＢポリペプチドは、細胞外ドメインの全部または一部を含むが、該ポリペプチドの細胞膜上での保持を引き起こす可能性がある膜貫通領域を欠く。４−１ＢＢ−Ｌタンパク質がシグナルペプチドを欠くので、その分泌を促進するために可溶性４−１ＢＢ−ＬポリペプチドのＮ末端へ異種シグナルペプチドを融合してよい。シグナルペプチドは、宿主細胞からの分泌時に該タンパク質より切断される。可溶性４−１ＢＢ−Ｌポリペプチドには、４−１ＢＢへ結合する能力を保持する、細胞外ドメインの先端切断ポリペプチドのような断片が含まれ、可溶性４−１ＢＢポリペプチドには、４−１ＢＢ−Ｌへ結合する能力を保持する、４−１ＢＢの細胞外ドメインの先端切断ポリペプチドのような断片が含まれる。代わりの態様において、可溶性タンパク質には、膜貫通領域の一部も、細胞質ドメインの一部も含めてよいが、但し、該タンパク質が細胞表面に保持されるのではなく、分泌されることが可能であることが条件である。可溶性ポリペプチドの例には、細胞外ドメイン全体を含んでなるものが含まれる。特定の例には、限定されないが、配列番号１６のアミノ酸４９〜２５４を含んでなる可溶性のヒト４−１ＢＢ−Ｌポリペプチドと配列番号１８のアミノ酸１〜１６３を含んでなる可溶性のヒト４−１ＢＢポリペプチドが含まれる。
【００６４】
１つの態様において、４−１ＢＢアンタゴニストは、限定されないが、４−１ＢＢ−Ｌ（配列番号１６）および４−１ＢＢ（配列番号１８）のポリペプチド配列より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのようなポリペプチド模倣体である。ポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。ポリペプチド模倣体は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。４−１ＢＢのアミノ酸配列に基づいた４−１ＢＢポリペプチド模倣体は、４−１ＢＢ−Ｌを活性化せずに４−１ＢＢ−Ｌへ結合して、内因性４−１ＢＢの結合を立体的に妨害するだろう。同様に、４−１ＢＢ−Ｌのアミノ酸配列に基づいた４−１ＢＢ−Ｌポリペプチド模倣体は、４−１ＢＢを活性化せずに４−１ＢＢへ結合して、内因性４−１ＢＢ−Ｌの結合を立体的に妨害するだろう。４−１ＢＢおよび４−１ＢＢ−Ｌペプチド模倣体は、被検者においてそのそれぞれのコグネイトに拮抗して、それによって４−１ＢＢ／４−１ＢＢ−Ｌ相互作用の好炎症効果を抑えるために使用可能である。ポリペプチド模倣体の形態の４−１ＢＢアンタゴニストは、そのものとして、心臓血管疾患に関連した炎症および／または免疫調節プロセスを治療するために使用可能である。
【００６５】
４−１ＢＢアンタゴニストとして使用可能である４−１ＢＢおよび４−１ＢＢ−Ｌの他の態様には、ネイティブ４−１ＢＢ−Ｌ（配列番号１６）および４−１ＢＢ（配列番号１８）のポリペプチド配列に実質的に相同であり、生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（以下により詳しく記載するような）が含まれる。生物学的活性は、この事例において、そのコグネイトパートナーへ結合する能力である。
【００６６】
本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における４−１ＢＢアンタゴニストの使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、４−１ＢＢアンタゴニストをコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【００６７】
Ｄ．ＣＤ３０アンタゴニスト
本発明のさらなる態様は、１以上のＣＤ３０アンタゴニストを含んでなる、心臓血管疾患の治療用の組成物および方法を提供する。ＣＤ３０アンタゴニストは、本明細書において、ＣＤ３０−ＬとＣＤ３０の相互作用を一部または完全に遮断すること、そしてそれにより膜結合性ＣＤ３０を介したＣＤ３０仲介性シグナル伝達を阻害することによって、並びにＣＤ３０を活性化する後続の生物学的活性を一部または完全に阻害することによって、内因性ＣＤ３０リガンド（ＣＤ３０−Ｌ）の有効量を低下させることが可能である実体として定義される。ＣＤ３０アンタゴニストは、ＣＤ３０−ＬまたはＣＤ３０のいずれへ結合してもよい。
【００６８】
ＣＤ３０：ＣＤ３０−Ｌの生物学的活性には、本明細書において、限定されないが、ＣＤ３０−ＬのＣＤ３０への結合とＣＤ３０の活性化；ＮＦκＢの細胞内活性化、サイトカイン放出および／またはＣＤ３０＋細胞の増殖；抗ＣＤ３副刺激の存在下でのＴ細胞の増殖が含まれる。
【００６９】
こうしたＣＤ３０アンタゴニストには、限定されないが、ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３０の可溶型；ＣＤ３０へ結合して膜結合性ＣＤ３０を活性化せずにＣＤ３０−Ｌの結合を阻害するＣＤ３０−Ｌの断片；ＣＤ３０−Ｌへ結合してＣＤ３０−ＬのＣＤ３０への結合を阻害するＣＤ３０の断片；ＣＤ３０−Ｌへ特異的に結合してＣＤ３０−ＬのＣＤ３０への結合を一部または完全に阻害する、ＣＤ３０−Ｌに対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＣＤ３０へ特異的に結合してそれ自身はＣＤ３０を活性化せずにＣＤ３０−Ｌの結合を阻害する、ＣＤ−３０に対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＣＤ３０−ＬまたはＣＤ３０へ結合してその相互作用を阻害する、ＣＤ３０−Ｌおよび／またはＣＤ３０ペプチド模倣体および／またはミモトープのような低分子が含まれる。本明細書に使用するように、ＣＤ３０−ＬまたはＣＤ３０に基づいてＣＤ３０アンタゴニストへ言及するときには、用語ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３０には、以下に詳しく記載するように、その断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質も含まれると理解される。
【００７０】
ＣＤ３０アンタゴニストは、ＣＤ３０−Ｌのポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒトＣＤ３０−Ｌの単離、クローニング、調製および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，４８０，９８１に記載されている。上述のように、本発明の態様には、ＣＤ３０アンタゴニストとしての抗ＣＤ３０−Ｌ抗体が含まれる。心臓血管疾患を治療するために使用可能である、ＣＤ３０−Ｌに対して向けられる抗体の例は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，６７７，４３０に記載されている。
【００７１】
本明細書に使用する用語「ＣＤ３０−Ｌ」は、ＣＤ３０へ結合することが可能であるポリペプチドの属を意味する。本明細書に使用する、用語「ＣＤ３０−Ｌ」には、膜結合型タンパク質（細胞質ドメイン、膜貫通領域、および細胞外ドメインを含んでなる）、並びにＣＤ３０結合特性を保持する先端切断タンパク質が含まれる。こうした先端切断タンパク質には、例えば、細胞外（受容体結合）ドメインだけを含んでなる可溶性ＣＤ３０−Ｌが含まれる。ＣＤ３０−Ｌは、単球／マクロファージ、顆粒球、Ｂ細胞のサブセット上と、活性化されているが休止していないＴ細胞上で発現される。細胞表面のＣＤ３０と結合することによって、ＣＤ３０−Ｌは、マウスのＢ細胞分化を誘導して、抗ＣＤ３副刺激の存在下に活性化Ｔ細胞の増殖を誘導することができる（例えば、Ｓｍｉｔｈら，Ｃｅｌｌ  ７３：１３４９−１３６０（１９９３）を参照のこと）。さらに、ＣＤ３０−Ｌは、「逆シグナル伝達」を明示する、即ち、好中球および末梢血Ｔ細胞上で発現される細胞表面ＣＤ３０−Ｌは、架橋連結によって活性化されて、これらの細胞における代謝活性を刺激することができる（Ｗｉｌｅｙら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７：３２３５−３９（１９９６））。
【００７２】
本発明のＣＤ３０−Ｌタンパク質には、限定されないが、配列番号２０のアミノ酸１〜２１５または配列番号２２のアミノ酸１〜２３４を含んでなるヒトＣＤ３０−Ｌ；および、上記配列のＮ末端、Ｃ末端、または内部の先端切断型を含むが、望ましい生物学的活性を保持するタンパク質が含まれる。例には、配列番号２２のアミノ酸ｙ〜２３４を含んでなるヒトＣＤ３０−Ｌタンパク質が含まれ、ここでｙは１〜１９である（即ち、Ｎ末端アミノ酸は、配列番号２２のアミノ酸１〜１９のいずれかであり、Ｃ末端アミノ酸は、アミノ酸２３４である。Ｎ末端で先端切断されている、こうしたタンパク質は、ＣＤ３０へ結合することが可能である）。
【００７３】
代わりの態様は、可溶性ＣＤ３０−Ｌポリペプチドを提供する。可溶性ＣＤ３０−Ｌポリペプチドは、ネイティブＣＤ３０−Ｌの細胞外ドメインの全部または一部を含むが、該ポリペプチドの細胞膜上での保持を引き起こす可能性がある膜貫通領域を欠く。ＣＤ３０−Ｌタンパク質がシグナルペプチドを欠くので、その分泌を促進するために可溶性ＣＤ３０−Ｌタンパク質のＮ末端へ異種シグナルペプチドを融合してよい。シグナルペプチドは、宿主細胞からの分泌時にＣＤ３０−Ｌタンパク質より切断される。可溶性ＣＤ３０−Ｌポリペプチドは、ＣＤ３０受容体へ結合する能力を保持する。可溶性ＣＤ３０−Ｌには、膜貫通領域の一部または細胞質ドメインや他の配列の一部も含めてよいが、但し、可溶性ＣＤ３０−Ｌタンパク質が分泌されることが可能であることが条件である。
【００７４】
可溶性ＣＤ３０−Ｌポリペプチドの例には、ネイティブＣＤ３０−Ｌタンパク質の細胞外ドメイン全体、またはＣＤ３０へ結合することが可能である前記細胞外ドメインの断片を含んでなるものが含まれる。１つのそうした可溶性ＣＤ３０−Ｌポリペプチドは、配列番号２０のヒトＣＤ３０−Ｌ配列のアミノ酸ｚ〜２１５（Ａｓｐ）を含み、ここでｚは、４４、４５、４６、または４７である。換言すると、可溶性ヒトＣＤ３０−ＬのＮ末端アミノ酸は、配列番号２０の４４〜４７位のアミノ酸より選択される。そうした可溶性ヒトＣＤ３０−ＬポリペプチドをコードするＤＮＡ配列には、限定されないが、配列番号１９のヌクレオチド１３０〜６４５、１３３〜６４５、１３６〜６４５、および１３９〜６４５からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなるＤＮＡ配列が含まれる。こうした配列は、配列番号２０のアミノ酸４４〜２１５、４５〜２１５、４６〜２１５、および４７〜２１５をそれぞれ含んでなるポリペプチドをコードする。配列番号２０のアミノ酸４７〜２１５と抗体Ｆｃポリペプチドを含んでなる融合タンパク質の形態の、１つのそうした可溶性ヒトＣＤ３０−Ｌタンパク質の産生がＵ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，４８０，９８１の実施例１１に例示されている。
【００７５】
ＣＤ３０アンタゴニストは、ＣＤ３０のポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチド配列を含んでも、それより開発してもよい。ＣＤ３０をコードする遺伝子のクローニングおよび発現がすでに報告され、ＣＤ３０は、神経成長因子受容体スーパーファミリーに対する実質的な相同性を保有する膜貫通タンパク質として特性決定されている（Ｄｕｒｋｏｐら，Ｃｅｌｌ  １９９２，６８：４２１）。Ｄｕｒｋｏｐら，同上に報告されたＣＤ３０のポリヌクレオチド配列を配列番号２３に提示し、それによりコードされるアミノ酸配列を配列番号２４に提示する。ヒトＣＤ３０の細胞外部分は、アミノ酸１〜３９０に対応するか、またはシグナルペプチドが除去されていれば、配列番号２４のアミノ酸１９〜３９０に対応する。膜貫通領域は、配列番号２４のアミノ酸３９１〜４０７を含む。句「可溶性ＣＤ３０」（ｓＣＤ３０）は、ＣＤ３０タンパク質の細胞外ドメインの全部または一部を含み、ＣＤ３０−Ｌと特異的に結合する能力を保持する可溶性分子を意味する。心臓血管疾患の治療用ＣＤ３０アンタゴニストとして役立つ可能性がある、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列、並びにＣＤ３０−Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法に関する記載は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，４８０，９８１に詳しく記載されている。
【００７６】
さらなる態様において、ＣＤ３０アンタゴニストは、限定されないが、ＣＤ３０−Ｌ（配列番号２０および／または２２）および／またはＣＤ３０（配列番号２４）のポリペプチド配列より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのようなポリペプチド模倣体である。ポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。ポリペプチド模倣体は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。ＣＤ３０−Ｌのアミノ酸配列に基づいたＣＤ３０−Ｌポリペプチド模倣体は、ＣＤ３０を活性化せずにＣＤ３０へ結合して、内因性ＣＤ３０−Ｌの結合を立体的に妨害するだろう。ＣＤ３０受容体のアミノ酸配列に基づいたＣＤ３０受容体ポリペプチド模倣体は、ＣＤ３０−Ｌへ結合して、内因性ＣＤ３０−ＬのＣＤ３０への結合を立体的に妨害するだろう。ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３０ペプチド模倣体は、被検者においてＣＤ３０−ＬがＣＤ３０へ結合することに拮抗して、それによってＣＤ３０−Ｌの好炎症効果を抑えるために使用可能である。ポリペプチド模倣体の形態のＣＤ３０アンタゴニストは、そのものとして、心臓血管疾患に関連した炎症および／または免疫調節プロセスを治療するために使用可能である。
【００７７】
本発明に有用であるＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３０の他の型には、ネイティブＣＤ３０−Ｌ（配列番号２０および／または２２）またはＣＤ３０（配列番号２４）のポリペプチド配列に実質的に相同であり、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，４８０，９８１に記載のように生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。
【００７８】
本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造におけるＣＤ３０アンタゴニストの使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、ＣＤ３０アンタゴニストをコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【００７９】
Ｅ．ＯＸ４０アンタゴニスト
本発明のさらなる態様は、１以上のＯＸ４０アンタゴニストを含んでなる、心臓血管疾患の治療用の組成物および方法を提供する。ＯＸ４０アンタゴニストは、本明細書において、ＯＸ４０−ＬとＯＸ４０の相互作用を一部または完全に遮断すること、そしてそれにより膜結合性ＯＸ４０を介したＯＸ４０仲介性シグナル伝達を阻害することによって、並びにＯＸ４０を活性化する後続の生物学的活性を一部または完全に阻害することによって、内因性ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０−Ｌ）の有効量を低下させることが可能である実体として定義される。ＯＸ４０アンタゴニストは、ＯＸ−４０ＬまたはＯＸ４０のいずれへ結合してもよい。
【００８０】
ＯＸ４０：ＯＸ４０−Ｌの生物学的活性には、本明細書において、限定されないが、ＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合とＯＸ４０の活性化；Ｔリンパ球に対する副刺激活性；ＩＬ−４が含まれるサイトカインの産生；ＣＤ４＋Ｔ細胞の生存および増殖を促進すること；免疫応答の延長化；ＩＬ−２産生をアップレギュレートすること、およびエフェクターＴ細胞の寿命を増加させることによってエフェクターおよび記憶エフェクターＴ細胞の機能を亢進させること；並びに、腫瘍特異免疫の亢進が含まれるとして定義される。
【００８１】
こうしたＯＸ４０アンタゴニストには、限定されないが、ＯＸ４０−ＬおよびＯＸ４０の可溶型；ＯＸ４０へ結合して膜結合性ＯＸ４０を活性化せずにＯＸ４０−Ｌの結合を阻害するＯＸ４０−Ｌの断片；ＯＸ４０−Ｌへ結合してＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を阻害するＯＸ４０の断片；ＯＸ４０−Ｌへ特異的に結合してＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を一部または完全に阻害する、ＯＸ４０−Ｌに対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＯＸ４０へ特異的に結合してそれ自身はＯＸ４０を活性化せずにＯＸ４０−Ｌの結合を阻害する、ＯＸ４０に対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体；ＯＸ４０−ＬまたはＯＸ４０へ結合してその相互作用を阻害する、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＯＸ４０ペプチド模倣体および／またはミモトープのような低分子が含まれる。本明細書に使用するように、ＯＸ４０−ＬまたはＯＸ４０に基づいてＯＸ４０アンタゴニストへ言及するときには、用語ＯＸ４０−ＬおよびＯＸ４０には、以下に詳しく記載するように、その断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質も含まれると理解される。
【００８２】
ＯＸ４０アンタゴニストは、ＯＸ４０のポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列を含んでも、それより開発してもよい。ＯＸ４０、ＡＣＴ−４およびＡＣＴ３５とも呼ばれる、ＯＸ−４０受容体は、抗原活性化された哺乳動物のＣＤ４＋Ｔ細胞の表面に発現されるタンパク質である。マウス、ラットおよびヒトのＯＸ−４０受容体の相同体をコードするＤＮＡ配列がクローニングされて、配列決定されている（Ｍａｌｌｅｔら，ＥＭＢＯ，９：１０６３−１０６８（１９９０）；Ｃａｌｄｅｒｈｅａｄら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５１：５２６１−５２７１（１９９３）；Ｌａｔｚａら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：６７３−６８３（１９９４）；およびＷＯ９５／１２６７３を参照のこと）。ヒトＯＸ４０の単離、クローニング、および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，８２１，３３２および６，２７７，９６２  Ｂ１に記載されている。上述のように、本発明の態様には、ＯＸ４０アンタゴニストとしての抗ＯＸ４０抗体が含まれる。ＯＸ４０に対して向けられる抗体の例は、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．５，８２１，３３２および６，２７７，９６２  Ｂ１に記載されている。
【００８３】
本発明のＯＸ４０タンパク質には、限定されないが、配列番号２８のアミノ酸１〜２７７を含んでなるヒトＯＸ４０；および、上記配列のＮ末端、Ｃ末端、または内部の先端切断型を含むが、望ましい生物学的活性を保持するタンパク質が含まれる。そうしたヒトＯＸ４０ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列には、限定されないが、配列番号２７のヌクレオチド配列を含んでなるＤＮＡ配列が含まれる。
【００８４】
代わりの態様は、可溶性ＯＸ４０ポリペプチドを提供する。可溶性ＯＸ４０ポリペプチドは、ネイティブＯＸ４０の細胞外ドメインの全部または一部を含むが、該ポリペプチドの細胞膜上での保持を引き起こす可能性がある膜貫通領域を欠く。可溶性ＯＸ４０ポリペプチドは、ＯＸ４０−Ｌへ結合する能力を保持する。可溶性ＯＸ４０ポリペプチドには、膜貫通領域の一部または細胞質ドメインや他の配列の一部を含めてよいが、但し、可溶性ＯＸ４０タンパク質が分泌されることが可能であることが条件である。推定シグナル配列は、配列番号２８のアミノ酸１〜２２または１〜２４に由来し、細胞外ドメインはアミノ酸２３〜２１２または２４〜２１２に及び、膜貫通配列は、アミノ酸２１３〜２４０に及ぶ。
【００８５】
可溶性ＯＸ４０ポリペプチドの例には、ネイティブＯＸ４０タンパク質の細胞外ドメイン全体、またはＯＸ４０−Ｌへ結合することが可能である前記細胞外ドメインの断片を含んでなるものが含まれる。１つのそうした可溶性ＯＸ４０−Ｌポリペプチドは、配列番号２８のアミノ酸ｚ〜２１３を含み、ここでｚは、２２、２３、２４、または２５である。換言すると、可溶性ヒトＯＸ４０−ＬのＮ末端アミノ酸は、配列番号２８の２２〜２５位のアミノ酸より選択される。
【００８６】
ＯＸ４０アンタゴニストは、ＯＸ４０−Ｌのポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列を含んでも、それより開発してもよい。ヒトＯＸ４０−Ｌの単離、クローニング、調製および特性決定は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．６，１５６，８７８および６，２４２，５６６  Ｂ１、並びに米国特許出願番号：ＵＳ２００１／００４４５２３  Ａ１およびＵＳ２００２／００７７４６０  Ａ１に記載されている。上述のように、本発明の態様には、ＯＸ４０アンタゴニストとしての抗ＯＸ４０−Ｌ抗体が含まれる。ＯＸ４０−Ｌに対して向けられる抗体の例は、Ｕ．Ｓ．Ｐ．Ｎ．６，１５６，８７８および６，２４２，５６６  Ｂ１、並びに米国特許出願番号：ＵＳ  ２００１／００４４５２３  Ａ１およびＵＳ  ２００２／００７７４６０  Ａ１に記載されている。
【００８７】
ＯＸ４０−Ｌは、ｇｐ３４またはＡＣＴ−４−Ｌとも呼ばれ、抗原提示細胞のような、選択される哺乳動物細胞の表面で発現される。ヒトＯＸ４０−Ｌは、Ｍｉｕｒａら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  １１（３）：１３１３−１３２５（１９９１）においてはじめて単離されて記載された。参照により本明細書にそのまま組み込まれる、米国特許第５，４５７，号は、ＯＸ４０−Ｌのマウス相同体について記載する。
【００８８】
本発明のＯＸ４０−Ｌタンパク質には、限定されないが、配列番号２６のアミノ酸１〜１８３を含んでなるヒトＯＸ４０−Ｌポリペプチドと、上記配列のＮ末端、Ｃ末端、または内部の先端切断型を含むが、望ましい生物学的活性を保持するポリペプチドが含まれる。そうしたヒトＯＸ４０ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列には、限定されないが、配列番号２５のヌクレオチド配列を含んでなるＤＮＡ配列が含まれる。
【００８９】
代わりの態様は、可溶性ＯＸ４０−Ｌポリペプチドを提供する。可溶性ＯＸ４０−Ｌポリペプチドは、ネイティブＯＸ４０−Ｌの細胞外ドメインの全部または一部を含むが、該ポリペプチドの細胞膜上での保持を引き起こす可能性がある膜貫通領域を欠く。可溶性ＯＸ４０−Ｌポリペプチドは、ＯＸ４０へ結合する能力を保持する。可溶性ＯＸ４０−Ｌポリペプチドには、膜貫通領域の一部も、細胞質ドメインや他の配列の一部も含めてよいが、但し、可溶性ＯＸ４０−Ｌタンパク質が分泌されることが可能であることが条件である。
【００９０】
さらなる態様において、ＯＸ４０アンタゴニストは、限定されないが、ＯＸ４０−Ｌ（配列番号２６）および／またはＯＸ４０（配列番号２８）のポリペプチド配列より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのようなポリペプチド模倣体である。ポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。ポリペプチド模倣体は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。ＯＸ４０−Ｌのアミノ酸配列に基づいたＯＸ４０−Ｌポリペプチド模倣体は、ＯＸ４０を活性化せずにＯＸ４０へ結合して、内因性ＯＸ４０−Ｌの結合を立体的に妨害するだろう。ＯＸ４０受容体のアミノ酸配列に基づいたＯＸ４０受容体ポリペプチド模倣体は、ＯＸ４０−Ｌへ結合して、内因性ＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を立体的に妨害するだろう。ＯＸ４０−ＬおよびＯＸ４０ペプチド模倣体は、被検者においてＯＸ４０−ＬがＯＸ４０へ結合することに拮抗して、それによってＯＸ４０−Ｌの好炎症効果を抑えるために使用可能である。ポリペプチド模倣体の形態のＯＸ４０アンタゴニストは、そのものとして、心臓血管疾患に関連した炎症および／または免疫調節プロセスを治療するために使用可能である。
【００９１】
本発明に有用であるＯＸ４０−ＬおよびＯＸ４０の他の型には、ネイティブＯＸ４０−Ｌ（配列番号２６）またはＯＸ４０（配列番号２８）のポリペプチド配列に実質的に相同であり、生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。
【００９２】
本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造におけるＯＸ４０アンタゴニストの使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、ＯＸ４０アンタゴニストをコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【００９３】
Ｆ．ＣＤ３９
本発明の代わりの態様は、１以上のＩＬ−１７アンタゴニスト、Ｉｌ−１８アンタゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストと組み合わせて可溶性ＣＤ３９ポリペプチドを投与することを含んでなる、心臓血管疾患を有する被検者において心臓血管疾患を治療することへ向けられる。
【００９４】
ＣＤ３９の分子クローニングと構造上の特性決定は、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉら，（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３５７４，１９９４）に提示されている。細胞表面分子のＣＤ３９をコードするｃＤＮＡは、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、米国特許出願番号０９／８３５，１４７、並びにＷＯ００／２３４５９に記載のように、単離、クローニング、そして配列決定された。核酸配列と予測されるアミノ酸配列をそれぞれ配列番号２９と配列番号３０に示す。
【００９５】
本発明は、心臓血管疾患を治療するためにＣＤ３９の可溶型を使用する方法を提供し、これは、アミノおよびカルボキシ末端の膜貫通ドメインを除去することによって構築した。可溶性ＣＤ３９は、ＡＴＰおよびＡＤＰを生理学的に関連した濃度で代謝する野生型ＣＤ３９の能力、並びにＡＤＰ誘発性血小板活性化および動員（血小板凝集が含まれる）を阻止して逆転させる能力を保持する。ＣＤ３９の可溶型の使用は、該ポリペプチドの組換え宿主細胞からの精製が促進されるために、そして可溶性ポリペプチドが膜結合型より臨床投与に概して適しているために有利である。ＣＤ３９が血小板の活性化および動員、そしてそれ故に血小板凝集を阻害するので、本発明は、血小板が不適切に活性化される哺乳動物中の部位での血栓の形成を阻害するための方法および組成物、血小板反応性を制御して、それによって止血および血栓形成プロセスを調節することに使用の方法、並びに血小板凝集を阻害する、および／または逆転させる方法を提供する。
【００９６】
ＣＤ３９は、２つの推定される膜貫通領域をアミノおよびカルボキシの末端近くに含有し、これは、そのネイティブタンパク質を細胞膜に留めることに役立つ可能性がある。膜貫通領域間の分子の部分は、細胞の外側にある。本明細書に使用する用語「ＣＤ３９ポリペプチド」には、ＣＤ３９、ＣＤ３９の相同体、ＣＤ３９の変異体、断片、および誘導体、ＣＤ３９を含んでなる融合ポリペプチド、およびＣＤ３９ポリペプチドの可溶型が含まれる。ＣＤ３９遺伝子ファミリーは、少なくとも４つのヒトメンバー：ＣＤ３９、ＣＤ３９Ｌ２、ＣＤ３９Ｌ３、およびＣＤ３９Ｌ４を含有すると報告されている（ＣｈａｄｗｉｃｋおよびＦｒｉｓｃｈａｕｆ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５０：３５７，１９９８）。ＣＤ３９−Ｌ４は、分泌アピラーゼであると報告されている（Ｍｕｌｅｒｏら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４（２９）：２００６４，１９９９）。追加のｓｏｌ（可溶性）ＣＤ３９変異体は、米国特許出願番号０９／８３５，１４７に詳しく記載されるように、ＣＤ３９Ｌ２、ＣＤ３９Ｌ３、またはＣＤ３９Ｌ４からのＮ末端配列をＣＤ３９の可溶性部分へ融合することによって構築した。
【００９７】
ＣＤ３９は、内皮細胞の表面に位置するエクト（ｅｃｔｏ）−ＡＤＰアーゼ（アピラーゼ）である。この酵素は、主として血液流動性の維持に与っているので、血小板をベースライン（安定）状態に維持する。このことは、主要な血小板アゴニストであるアデノシン二リン酸を、アゴニストではないアデノシン一リン酸へ代謝することによって達成される。ＡＤＰが血小板凝集の最も重要なアゴニストであり、そして血小板放出液（ｒｅｌｅａｓａｔｅ）に存在するので、ＡＤＰを異化する物質は、不適切な血小板の凝集が関与する病態を治療するかまたは予防するのに有用である。
【００９８】
アピラーゼ活性は、ＣＤ３９の細胞外ドメインに存在する。したがって、ＣＤ３９ポリペプチドには、配列番号３０のアミノ酸３６〜４４からなる群より選択されるアミノ末端と配列番号３０のアミノ酸４７１〜４７８からなる群より選択されるカルボキシ末端を有してＣＤ３９生物学的活性を明示するもののような、ＣＤ３９の可溶型が含まれる。可溶性ＣＤ３９ポリペプチドには、膜貫通領域の片方または両方の部分が含まれるポリペプチドも含まれるが、但し、その可溶性ＣＤ３９ポリペプチドが細胞から分泌されることが可能であり、ＣＤ３９生物学的活性を保持することが条件である。さらに、可溶性ＣＤ３９ポリペプチドには、ＣＤ３９の細胞外部分を含んでなるオリゴマーまたは融合ポリペプチドと、生物学的活性を有するこれらポリペプチドのいずれかの断片が含まれる。
【００９９】
ＣＤ３９に関する用語「生物学的活性」には、アピラーゼ酵素活性、並びにＣＤ３９のｅｘ  ｖｉｖｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ活性が含まれる。アピラーゼは、ヌクレオシド三および／または二リン酸の加水分解を触媒するが、所与のアピラーゼは、ヌクレオシド三リン酸かヌクレオシド二リン酸のいずれか一方へ異なる相対特異性を表示する場合がある。ＣＤ３９の可溶型の生物学的活性は、例えば、エクトヌクレオチダーゼまたはアピラーゼアッセイ（例えば、ＡＴＰアーゼまたはＡＤＰアーゼアッセイ）において、または血小板凝集の阻害を測定するアッセイにおいて定量可能である。例示のアッセイを本明細書に開示するが、当業者は、他の類似の種類のアッセイが生物学的活性を測定するために使用可能であることを理解されよう。
【０１００】
さらなる態様において、心臓血管疾患の治療用のＣＤ３９組成物は、限定されないが、ＣＤ３９のポリペプチド配列（配列番号３０）より開発されるペプチド模倣体、ペプチド体および／またはミモトープのようなポリペプチド模倣体を含む。ポリペプチド模倣体は、コンビナトリアルペプチドライブラリーのような、当該技術分野で知られた技術を介して開発可能である。ポリペプチド模倣体は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。ＣＤ３９のアミノ酸配列に基づいたＣＤ３９ポリペプチド模倣体は、ヌクレオシド三および／または二リン酸の加水分解を触媒するだろう。ポリペプチド模倣体の形態のＣＤ３９アンタゴニストは、そのものとして、心臓血管疾患を治療するために使用可能である。
【０１０１】
本発明に有用であるＣＤ３９の他の型には、ネイティブＣＤ３９（配列番号３０）のポリペプチド配列に実質的に相同であり、米国特許出願番号０９／８３５，１４７に記載のように生物学的活性を保持する、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。
【０１０２】
本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造におけるＣＤ３９の使用を追加的に提供する。本発明は、心臓血管疾患の治療用医薬品の製造における、ＣＤ３９をコードするポリヌクレオチドの使用をさらに提供する。
【０１０３】
ＣＤ３９は、本明細書と米国特許出願番号０９／８３５，１４７に記載のどの型でも、心臓血管疾患の治療において１以上のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストと組み合わせて使用可能である。
【０１０４】
Ｇ．ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストとＣＤ３９のさらなる態様
本発明に有用であるＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の他の型には、本明細書に提供されるネイティブ配列、並びに参照により組み込まれる特許において提供される配列に実質的に相同である、天然に存在する変異体のような、ムテインおよび変異体（類似体とも呼ばれる）が含まれる。
【０１０５】
「実質的に相同」は、上記に開示されるように、ネイティブアミノ酸に対して少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一である変異アミノ酸配列を意味する。２つのアミノ酸または２つの核酸配列のパーセント同一性は、目視検査と数学的計算により決定可能であり、またはより好ましくは、この比較はコンピュータプログラムを使用して配列情報を比較することによってなされる。代表的な、好ましいコンピュータプログラムは、遺伝学コンピュータグループ（ＧＣＧ；ウィスコンシン州マジソン）のウィスコンシン・パッケージ、バージョン１０．０プログラム、「ＧＡＰ」である（Ｄｅｖｅｒｅｕｘら，１９８４，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１２：３８７）。「ＧＡＰ」プログラムの好ましいデフォルト変数には：（１）ヌクレオチドについての一元比較マトリックス（同一物について１、非同一物について０の値を含有する）のＧＣＧ実行と、ＳｃｈｗａｒｔｚおよびＤａｙｈｏｆｆ監修「ポリペプチドの配列および構造のアトラス（Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」国立バイオ医学研究財団、３５３−３５８頁、１９７９により記載されるような、ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＢｕｒｇｅｓｓ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：６７４５，１９８６の加重アミノ酸比較マトリックス；または他の比較可能な比較マトリックス；（２）アミノ酸配列の各ギャップについて３０のペナルティと各ギャップ中の各記号について１の追加ペナルティ、または、ヌクレオチド配列の各ギャップについて５０のペナルティと各ギャップ中の各記号について３の追加ペナルティ；（３）エンドギャップへのノーペナルティ；および（４）長いギャップへは最大ペナルティがないこと、が含まれる。例えば、国立医学ライブラリーのウェブサイト：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｗｂｌａｓｔ２．ｃｇｉ．による使用に利用可能なＢＬＡＳＴＮプログラム、バージョン２．０．９またはＵＷ−ＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムのような、配列比較の技術分野において当業者により使用される他のプログラムも使用可能である。ＵＷ−ＢＬＡＳＴ２．０の標準デフォルト変数設定については、以下のインターネットサイトに記載されている：ｓａｐｉｅｎｓ．ｗｕｓｔｌ．ｅｄｕ／ｂｌａｓｔ／ｂｌａｓｔ／＃Ｆｅａｔｕｒｅｓ。さらに、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸スコアリングマトリックスを使用し、使用可能である選択変数は以下の通りである：（Ａ）低い組成複雑性を有するクエリー配列のセグメント（ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎのＳＥＧプログラム（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３）により決定される；ＷｏｏｔｔｏｎおよびＦｅｄｅｒｈｅｎ，１９９６「配列データベースにおける組成偏重領域の解析（Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｌｙ  ｂｉａｓｅｄ  ｒｅｇｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｄａｔａｂａｓｅｓ）」Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：５５４−７１も参照のこと）��または、短周期性の内部リピートからなるセグメント（ＣｌａｖｅｒｉｅおよびＳｔａｔｅｓ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９３）のＸＮＵプログラムにより決定される）をマスクするためのフィルターを含むこと、および（Ｂ）データベース配列に対する適合を報告するための統計学的有意差の閾値、またはＥ−スコア（ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９０）の推計学的モデルにしたがって、単に偶然により見出される適合の期待確率；ある適合に起因する統計学的有意差がこのＥ−スコア閾値より大きい場合、この適合は報告されない）；好ましいＥ−スコア閾値の数値は０．５であるか、または好ましさが増える順に、０．２５、０．１、０．０５、０．０１、０．００１、０．０００１、１ｅ−５、１ｅ−１０、１ｅ−１５、１ｅ−２０、１ｅ−２５、１ｅ−３０、１ｅ−４０、１ｅ−５０、１ｅ−７５、または１ｅ−１００である。
【０１０６】
こうした変異体には、ネイティブなＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９配列に実質的に相同であるが、１以上の欠失、挿入または置換のためにネイティブＩＬ−１７受容体のものとは異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドが含まれる。特別な態様には、限定されないが、少なくとも１つの保守的アミノ酸置換を含むＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のポリペプチドが含まれる。代わりの態様は、ネイティブ配列と比較したときに、アミノ酸残基の１〜１０の欠失、挿入または置換を含んでなる、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のポリペプチドを含む。本発明のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９をコードするポリヌクレオチドには、１以上の欠失、挿入または置換のためにネイティブなＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のポリヌクレオチド配列とは異なるが、生物学的に活性なポリペプチドをコードする変異体が含まれる。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドの変異体として含まれるのは、対立遺伝子型および選択スプライス型のような天然に存在する変異体、並びにＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドのアミノ酸配列またはＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドをコードする核酸のヌクレオチド配列を修飾することによって構築した変異体である。
【０１０７】
上述のように、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の変異体は、少なくとも１つの保守的置換アミノ酸を有する配列を含む場合があり、所与のアミノ酸残基を類似の物理化学特性を有する残基に置き換えることを意味する。代わりの態様は、１〜１０、１〜２０または１〜３０の間の保守的置換配列を含むＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の変異体を含む。一般に、ネイティブポリペプチドに存在する１以上のアミノ酸の置換は、保守的になされるべきである。保守的置換の例には、活性ドメインの外側でのアミノ酸の置換と、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の二次および／または三次構造を改変しないアミノ酸の置換が含まれる。保守的置換の例には、ある脂肪族残基をＩｌｅ、Ｖａｌ、ＬｅｕまたはＡｌａのような別の残基に互いに置換すること、またはＬｙｓとＡｒｇ；ＧｌｕとＡｓｐ；またはＧｌｎとＡｓｎの間のように、ある極性残基を別のものに置換することが含まれる。他のそうした保守的置換、例えば、類似の疎水性特性を有する領域全体の置換もよく知られている。天然に存在する変異体も本発明に含まれる。そうした変異体の例は、選択的ｍＲＮＡスプライシング事象より、またはネイティブタンパク質のタンパク分解的な切断より生じ、ネイティブな生物学的特性は保持される、タンパク質である。
【０１０８】
例えば、「保守的アミノ酸置換」は、その位置でのアミノ酸残基の極性や電荷にほとんどまたはまったく影響がないように、ネイティブなアミノ酸残基を非ネイティブな残基に置換することを伴う場合がある。さらに、「アラニンスキャニング突然変異誘発」についてすでに記載されたように（例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発について論じた、ＭａｃＬｅｎｎａｎら，１９９８，Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．補遺６４３：５５−６７；Ｓａｋａｉら，１９９８，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１−２４を参照のこと）、ポリペプチド中のどのネイティブ残基もアラニンで置換してよい。
【０１０９】
望まれるアミノ酸置換（保守的でも非保守的でも）は、そうした置換が望まれる時機に当業者により決定可能である。例えば、アミノ酸置換は、ペプチド配列の重要な残基を同定するために、または本明細書に記載のペプチドまたは担体−ペプチド分子（先述の式を参照のこと）のアフィニティーを増加または減少させるために使用可能である。例示のアミノ酸置換を表１に示す。
【０１１０】
【表１】
2006508056.tif 000002
【０１１１】
ある態様において、保守的アミノ酸置換には、生物系における合成によるよりは化学ペプチド合成により典型的には取り込まれる、非天然に存在するアミノ酸残基も含まれる。
上記に注目したように、天然に存在する残基は、配列の修飾に有用であり得る共通の側鎖の特性に基づいていくつかのクラスへ分類可能である。例えば、非保守的な置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスのメンバーに交換することを伴う場合がある。こうした置換残基は、非ヒトオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇｓ）と相同であるペプチドの領域へ導入しても、該分子の非相同領域へ導入してもよい。さらに、鎖配向性に影響を及ぼす目的で、ＰまたはＧを使用して修飾を行ってもよい。
【０１１２】
こうした修飾を行うとき、アミノ酸のヒドロパシー指数（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ  ｉｎｄｅｘ）を考慮する場合がある。その疎水性と電荷特性に基づいて、各アミノ酸にヒドロパシー指数が割り当てられている。これらは：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；およびアルギニン（−４．５）である。
【０１１３】
タンパク質に相互反応的な生物学的機能を与えるときにアミノ酸のヒドロパシー指数が重要であることは、当該技術分野で理解されている（Ｋｙｔｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２））。あるアミノ酸を類似のヒドロパシー指数若しくはスコアを有する他のアミノ酸に置換しても類似の生物学的活性を保持し得ることが知られている。ヒドロパシー指数に基づいて変化させるときは、そのヒドロパシー指数が±２以内にあるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内にあるものが特に好ましく、そして±０．５以内にあるものがさらにより特別に好ましい。
【０１１４】
疎水性を基にした類似のアミノ酸の置換が有効に実施可能であることも当該技術分野で理解されている。その近接アミノ酸の疎水性により支配されるような、タンパク質の最大の局部平均疎水性は、その免疫原性および抗原性に、即ち、該タンパク質の生物学的特性に相関する。
【０１１５】
以下の疎水性値がアミノ酸残基へ割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）；トリプトファン（−３．４）。類似の疎水性値に基づいて変化させるときは、その疎水性値が±２以内にあるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内にあるものが特に好ましく、そして±０．５以内にあるものがさらにより特別に好ましい。一次アミノ酸配列から疎水性に基づいてエピトープを同定することも可能である。これらの領域は、「エピトープコア領域」とも呼ばれる。
【０１１６】
当業者は、よく知られた技術を使用して、先の配列に示すようなポリペプチドの好適な変異体を決定することができよう。活性を損なわずに変化させることができる分子の好適な領域を同定するために、当業者は、活性に重要であるとは考えられていない領域に標的指向することができる。例えば、類似の活性がある、同一種からかまたは他の種からの類似のポリペプチドが知られているとき、当業者は、ペプチドのアミノ酸配列を類似のペプチドへ比較することができる。そのような比較により、類似のポリペプチドの間で保存されている分子の残基および部分を同定することができる。そのような類似のペプチドに比較して保存されていないペプチドの領域における変化がペプチドの生物学的活性および／または構造に不都合に影響を及ぼす可能性はより少ないと理解されよう。当業者はまた、相対的に保存されている領域中でも、活性を保持しながら、天然に存在する残基を化学的に類似したアミノ酸に置換すること（保守的アミノ酸残基置換）が可能であるとも知っていよう。故に、生物学的活性または構造に重要であり得る領域でも、生物学的活性を損なわなければ、またはペプチド構造に不都合に影響を及ぼさなければ、保守的アミノ酸置換へ処してよい。
【０１１７】
追加的に、当業者は、類似のペプチドにおいて、活性または構造に重要である残基を同定する構造−機能試験を検討することができる。そのような比較に照らして、類似のペプチド中で活性または構造に重要であるアミノ酸残基に対応する、あるペプチド中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者は、該ペプチドのそうした予測される重要なアミノ酸残基について、化学的に類似したアミノ酸の置換を選ぶことができる。
【０１１８】
当業者はまた、類似のポリペプチドの構造に関連して、三次元構造とアミノ酸配列を解析することができる。その情報に照らして、当業者は、その三次元構造に関するペプチドのアミノ酸残基のアライメントを予測することができる。当業者は、タンパク質の表面にあると予測されたアミノ酸残基に対しては、そのような残基が他の分子との重要な相互作用に関与している可能性があるので、極端に変化させないことを選択することができる。さらに、当業者は、単一アミノ酸置換をそれぞれの望ましいアミノ酸残基で含有するテスト変異体を産生可能である。次いで、この変異体について、当業者に知られた活性アッセイを使用してスクリーニングすることができる。そうしたデータは、好適な変異体についての情報を収集するために使用可能である。例えば、特別なアミノ酸残基への変化により、損なわれるか、望まれないほどに低下するか、または不適切な活性がもたらされると判明すれば、そのような変化を伴う変異体を回避することができる。換言すると、そうしたルーチン実験より収集される情報に基づいて、当業者は、単独でも、他の突然変異と組み合わせても、さらなる置換を回避すべきアミノ酸を容易に決定可能である。
【０１１９】
いくつかの科学出版物が二次構造の予測を扱ってきた。例えば、Ｍｏｕｌｔ  Ｊ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９６），Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６およびＣｈｏｕら，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２６：３６７−３８４（１９７９）を参照のこと。さらに、二次構造を予測することに役立つコンピュータプログラムが現在利用可能である。二次構造を予測する１つの方法は、相同性モデリングに基づく。例えば、３０％より高い配列同一性、または４０％より高い類似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、類似の構造トポロジーをしばしば有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の最近の拡充により、ポリペプチドまたはタンパク質の構造の内部にあるフォールドの潜在数が含まれる、亢進した二次構造の予測可能性がもたらされている。Ｈｏｌｍら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：２４４−２４７（１９９９）を参照のこと。所与のポリペプチドまたはタンパク質中には限定数のフォールドがあること、そして臨界数の構造が解明されたなら、構造予測の精度が劇的に増すことが示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７））。
【０１２０】
二次構造を予測する追加の方法には、「スレッディング法（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１９９７）；Ｓｉｐｐｌら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４（１）：１５−９（１９９６））、「プロファイル解析法」（Ｂｏｗｉｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４−１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８３：１４６−１５９（１９９０）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８４（１３）：４３５５−８（１９８７））、および「進化系列法」（Ｈｏｌｍ，同上，およびＢｒｅｎｎｅｒ，同上を参照のこと）が含まれる。
【０１２１】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の変異体の態様には、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の変異体が含まれ、上記のように、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のそれぞれのアミノ酸配列に対してアミノ酸配列が少なくとも約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド配列が含まれる。
【０１２２】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドまたはＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリヌクレオチド配列におけるさらなる修飾は、既知の技術を使用して当業者により行うことが可能である。ポリペプチド配列中での目的の修飾には、選択されたアミノ酸の改変、置換、置き換え、挿入、または欠失が含まれる場合がある。例えば、１以上のシステイン残基を欠失させるか、または別のアミノ酸で置き換えて、分子のコンホメーションを改変させることが可能であり、これは、折り畳みまたは再生のときに不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防ぐことを伴う場合がある改変である。こうした改変、置換、置き換え、挿入、または欠失の技術は当業者によく知られている（例えば、米国特許第４，５１８，５８４号を参照のこと）。別の例として、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の細胞外ドメイン中のＮ−グリコシル化部位を、グリコシル化を排除するように修飾することが可能であり、哺乳動物および酵母の発現系において、炭水化物が低減した類似体の発現を可能にする。真核ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位は、アミノ酸の三つ組、Ａｓｎ−Ｘ−Ｙ（ここで、ＸはＰｒｏ以外の任意アミノ酸であり、ＹはＳｅｒまたはＴｈｒである）を特徴とする。これらの三つ組をコードするヌクレオチド配列への適切な置換、追加、または欠失は、Ａｓｎ側鎖での炭水化物残基の付加の防止をもたらす。例えば、Ａｓｎを異なるアミノ酸に置き換えるように選択される、単一ヌクレオチドの改変は、Ｎ−グリコシル化部位を不活性化するのに十分である。あるいは、ＳｅｒまたはＴｈｒを、Ａｌａのような別のアミノ酸に置き換えてもよい。ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位を不活性化するための手順が当該技術分野で知られていて、例えば、米国特許第５，０７１，９７２号に記載されるものが含まれる。本発明の範囲内にある追加の変異体には、グリコシル基、脂質、リン酸、アセチル基、などのような他の化学部分との共有または集合コンジュゲートを形成することによってその誘導体を創出するように修飾可能であるＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のポリペプチドが含まれる。共有誘導体は、ポリペプチドのアミノ酸側鎖上の官能基へ、またはそのＮ末端またはＣ末端へ化学部分を連結させることによって製造可能である。好ましくは、こうした改変、置換、置き換え、挿入、または欠失は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の生物学的活性を減少させない。１つの例は、ネイティブ型と本質的に同じ結合アフィニティーで結合する変異体である。結合アフィニティーは、例えば米国特許第５，５１２，４５７号に記載され、本明細書に説明されるような、慣用手順により測定可能である。さらに、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の分子は、限定されないが、ポリエチレングリコールのような１以上の水溶性ポリマーの付加によりバイオアベイラビリティおよび／または薬物動態半減期を高めるように修飾可能である。
【０１２３】
バイオアベイラビリティおよび／または薬物動態半減期を高めるのに有用な化学部分を付加する様々な手段が現在利用可能である。例えば、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、「Ｎ末端を化学修飾したタンパク質組成物と方法（Ｎ−Ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」と題した、特許協力条約（「ＰＣＴ」）国際公開公報番号ＷＯ９６／１１９５３を参照のこと。このＰＣＴ公開公報は、とりわけ、タンパク質のＮ末端への水溶性ポリマーの選択付加について開示する。
【０１２４】
好ましいポリマー担体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧ基は、どんな簡便な分子量のものでもよく、直鎖でも分岐鎖でもよい。ＰＥＧの平均分子量は、好ましくは約２キロダルトン（「ｋＤ」）〜約１００ｋＤ、より好ましくは約５ｋＤ〜約５０ｋＤ、最も好ましくは約５ｋＤ〜約１０ｋＤに及ぶだろう。一般に、ＰＥＧ基は、ＰＥＧ部分上の反応基（例、アルデヒド、アミノ、チオール、またはエステル基）から本発明の化合物上の反応基（例、アルデヒド、アミノ、またはエステル基）へのアシル化または還元アルキル化により本発明の化合物へ付加する。
【０１２５】
合成ペプチドのＰＥＧ化（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）に有用な戦略は、溶液中でコンジュゲート連結を形成させることにより、他方に対して相互に反応的である特定の官能基をそれぞれ担うペプチドおよびＰＥＧ部分を組み合わせることからなる。ペプチドは、慣用の固相合成で容易に製造可能である。ペプチドを特定部位の適切な官能基で「プレ活性化」する。この前駆体を精製し、完全に特性決定した後で、ＰＥＧ部分と反応させる。ペプチドのＰＥＧとの連結は、通常水相で起こり、逆相分析用ＨＰＬＣにより容易にモニターすることができる。ＰＥＧ化ペプチドは、分取用ＨＰＬＣにより容易に精製可能であり、分析用ＨＰＬＣ、アミノ酸分析およびレーザーデソープション質量分析法により特性決定可能である。
【０１２６】
多糖ポリマーは、タンパク質修飾に使用可能である別の種類の水溶性ポリマーである。デキストランは、主にα１−６連結により連結したグルコースの個別サブユニットを含む多糖ポリマーである。デキストランそのものは、多くの分子量範囲において利用可能であり、約１ｋＤ〜約７０ｋＤの分子量において容易に利用可能である。デキストランは、それ自身でも、別の担体（例、Ｆｃ）との組合せでも、本発明における担体としての使用に適した水溶性ポリマーである。例えば、ＷＯ９６／１１９５３およびＷＯ９６／０５３０９を参照のこと。治療薬または診断薬の免疫グロブリンへコンジュゲートしたデキストランの使用が報告されている；例えば、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、ヨーロッパ特許公開公報番号０３１５４５６を参照のこと。デキストランを本発明による担体として使用するときは、約１ｋＤ〜約２０ｋＤのデキストランが好ましい。
【０１２７】
追加のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９誘導体には、組換え培養における合成によるＮ末端またはＣ末端融合物のような、上記ポリペプチドと他のポリペプチドまたはポリペプチドとの共有または集合コンジュゲートが含まれる。融合ポリペプチドの例は、オリゴマーに関連して以下に論じる。さらに、融合ポリペプチドは、精製および同定を促進するために加えられるペプチドを含んでよい。こうしたペプチドには、例えば、米国特許第５，０１１，９１２号とＨｏｐｐら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１２０４，１９８８に記載される、ポリ−Ｈｉｓまたは抗原同定ペプチドが含まれる。１つのこうしたペプチドはＦＬＡＧ（登録商標）オクタペプチド（配列番号３１）であり、これは、きわめて抗原性であり、特異モノクローナル抗体により可逆的に結合されるエピトープを提供し、発現される組換えポリペプチドの迅速なアッセイと容易な精製を可能にする。４Ｅ１１と命名されたマウスハイブリドーマは、米国特許第５，０１１，９１２号に記載されるように、特定の二価金属カチオンの存在下にＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドへ結合するモノクローナル抗体を産生する。４Ｅ１１ハイブリドーマ細胞系は、寄託番号ＨＢ９２５９の下でアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されている。ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドへ結合するモノクローナル抗体は、イーストマンコダック社、科学造影システム部門、コネティカット州ニューヘーヴンより入手可能である。
【０１２８】
本明細書に記載の方法に使用可能であるＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の追加の態様には、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドを含有するオリゴマーまたは融合ポリペプチド、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９の１以上の断片、または、本明細書、並びに上記に収載する米国特許に開示するようなＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９の任意の誘導体または変異型が含まれる。特別な態様において、オリゴマーは、可溶性のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドを含む。オリゴマーは、共有結合しているか、または非共有結合している多量体の型であってよく、二量体、三量体またはより高次のオリゴマーが含まれる。代わりの態様において、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のオリゴマーは、ポリペプチドへ融合したペプチド部分間の共有または非共有性の相互作用を介して連結した、多数のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドを含み、こうしたペプチドは、オリゴマー化を促進する特性を有する。ロイシンジッパーと抗体から誘導される特定のポリペプチドは、以下により詳しく記載されるように、それに付いたポリペプチドのオリゴマー化を促進することが可能であるペプチドの１つである。
【０１２９】
免疫グロブリンをベースとするオリゴマー。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９アンタゴニストの好適な型にはキメラタンパク質が含まれ、それには、そのそれぞれのコグネイトへ結合することが可能であり、それによって炎症の効果と心臓血管疾患の症状を阻害するかまたは抑制する、二量体、三量体またはより高次の多量体のキメラタンパク質による自発形成を促進することが可能である第二のポリペプチドが含まれる。アンタゴニストとして使用するキメラタンパク質は、抗体分子の部分とＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９からの可溶性ポリペプチドを含有するタンパク質であり得る。好適な融合タンパク質には、免疫グロブリンＦｃ領域へ連結した、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のポリペプチド、例えば細胞外ドメイン、または細胞外ドメインの断片が含まれる。Ｆｃ領域の断片、並びにＦｃ受容体への低下したアフィニティーを示すＦｃムテインも使用可能である。可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９、並びにその断片は、免疫グロブリンのＦｃ部分へ直接融合しても、リンカー配列を介して融合してもよい。
【０１３０】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９アンタゴニストの１つの態様は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドを、抗体から誘導されるＦｃポリペプチドへ融合することによって創出される２つの融合ポリペプチドを含んでなる二量体へ向けられる。そうした融合ポリペプチドをコードする融合遺伝子を適切な発現ベクターへ挿入する。組換え発現ベクターで形質転換された宿主細胞においてＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９−Ｆｃ融合ポリペプチドが発現され、抗体分子とまったく同様に組立てられ、そのときに、鎖間ジスルフィド結合がＦｃ部分間で形成され、二価分子を産生する。ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１０１５１に記載される、１つの好適なＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域のＮ末端ヒンジ領域からネイティブＣ末端へ伸びる単鎖ポリペプチドである。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の二価型では、そうした融合がＩｇＧ分子のＦｃ部分へなされる。他の免疫グロブリンのアイソタイプもこうした融合物を産生するために使用可能である。例えば、ポリペプチド−ＩｇＭ融合は、本発明のポリペプチドの１０価型を産生するだろう。
【０１３１】
本明細書に使用する用語「Ｆｃポリペプチド」には、Ｆｃ領域のＣＨドメインのいくつかまたは全部を含んでなる、抗体のＦｃ領域から構成される、ネイティブおよびムテイン型のポリペプチドが含まれる。二量体化を促進するヒンジ領域を含有する、こうしたポリペプチドの先端切断型も含まれる。好ましいＦｃポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体から誘導されるＦｃポリペプチドを含む。１つの代替物として、免疫グロブリンから誘導されるポリペプチドを使用して、オリゴマーを製造する。抗体から誘導されるポリペプチド（Ｆｃドメインが含まれる）の様々な部分へ融合した特定の異種ポリペプチドを含んでなる融合ポリペプチドの製造は、当該技術分野で知られていて、例えば、Ａｓｈｋｅｎａｚｉら，（ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：１０５３５，１９９１）；Ｂｙｒｎら，（Ｎａｔｕｒｅ  ３４４：６７７，１９９０）；および、ＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈおよびＡｒｕｆｆｏ（「免疫グロブリン融合ポリペプチドの構築（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）」Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ中，補遺４、１０．１９．１−１０．１９．１１頁、１９９２）に記載されている。別の有用なＦｃポリペプチドは、米国特許第５，４５７，０３５号とＢａｕｍら，（ＥＭＢＯ  Ｊ．１３：３９９２−４００１，１９９４）に記載のＦｃムテインである。このムテインのアミノ酸配列は、アミノ酸１９がＬｅｕからＡｌａへ変化し、アミノ酸２０がＬｅｕからＧｌｕへ変化し、そしてアミノ酸２２がＧｌｙからＡｌａへ変化したことを除けば、ＷＯ９３／１０１５１に提示されるネイティブＦｃ配列のそれと同一である。このムテインは、Ｆｃ受容体への低下したアフィニティーを示す。Ｆｃ部分（およびそれから形成されるオリゴマー）を含んでなる上記の融合ポリペプチドは、ポリペプチドＡまたはポリペプチドＧのカラムでのアフィニティークロマトグラフィーによる容易な精製の利点を提供する。他の態様において、本発明のポリペプチドを、抗体重鎖または軽鎖の可変部分に代用してもよい。抗体の重鎖と軽鎖の両方で融合ポリペプチドを作製すれば、４つものＩＬ−１７Ｒ細胞外領域があるオリゴマーを形成することが可能である。
【０１３２】
ペプチドリンカーをベースとするオリゴマー。あるいは、オリゴマーは、多数のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドを含んでなり、ペプチドリンカー（スペーサーペプチド）を有するかまたは有さない融合ポリペプチドである。好適なペプチドリンカーには、米国特許第４，７５１，１８０号および４，９３５，２３３号に記載されるものがある。望ましいペプチドリンカーをコードするＤＮＡ配列を、適切な慣用技術を使用して、本発明のＤＮＡ配列の間に、そしてそれと同じ読み枠で挿入することが可能である。例えば、このリンカーをコードする化学合成オリゴヌクレオチドをこの配列の間に連結してもよい。特別な態様において、融合ポリペプチドは、ペプチドリンカーにより分離された、２〜４の可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドを含む。好適なペプチドリンカー、他のポリペプチドとのその組合せ、およびその使用については当業者によく知られている。
【０１３３】
心臓血管疾患を治療する使用に適したＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０、ＯＸ４０およびＣＤ３９アンタゴニストのオリゴマー型には、その開示が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第５，７１６，８０５号に記載のジッパータンパク質のような、ジッパードメインで会合した、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチド、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドの細胞外ドメイン、または細胞外ドメインのＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９アンタゴニストの断片も含まれる。ジッパードメインの他の例は、酵母転写因子ＧＣＮ４とラット肝臓に見出される熱安定性ＤＮＡ結合タンパク質（Ｃ／ＥＢＰ；Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１６８１，１９８９）、ヘテロ二量体を選好的に形成する、核のトランスフォーミングタンパク質、ｆｏｓおよびｊｕｎ（Ｏ’Ｓｈｅａら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４５：６４６，１９８９；ＴｕｒｎｅｒおよびＴｊｉａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３：１６８９，１９８９）、およびマウス癌原遺伝子、ｃ−ｍｙｃの遺伝子産物（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｚら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１７５９，１９８８）に見出されるものである。パラミクソウイルス、コロナウイルス、麻疹ウイルス、および多くのレトロウイルスが含まれるいくつかの異なるウイルスの融合産生（ｆｕｓｏｇｅｎｉｃ）タンパク質もロイシンジッパードメインを保有する（ＢｕｃｋｌａｎｄおよびＷｉｌｄ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３８：５４７，１９８９；Ｂｒｉｔｔｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ  ３５３：３９４，１９９１；ＤｅｌｗａｒｔおよびＭｏｓｉａｌｏｓ，ＡＩＤＳ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ  ６：７０３，１９９０）。ロイシンジッパードメインは、それが見出されるポリペプチドのオリゴマー化を促進するペプチドである。ロイシンジッパーは、当初いくつかのＤＮＡ結合ポリペプチドにおいて同定され、以来、多様な異なるポリペプチドに見出されてきた。既知のロイシンジッパーには、二量体化するかまたは三量体化する、天然に存在するペプチドとその誘導体がある。ジッパードメイン（本明細書では、オリゴマー化ドメイン、またはオリゴマー形成ドメインとも呼ぶ）は、反復性の七個のリピートを含み、しばしば４または５のロイシン残基が他のアミノ酸で分散されている。ロイシンジッパーの使用とロイシンジッパーを使用するオリゴマーの製造は、当該技術分野でよく知られている。
【０１３４】
本発明は、スペーサーアミノ酸の連結基を有するかまたは有さない融合ポリペプチドを含む。例えば、２つの可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ドメインは、（Ｇｌｙ）４Ｓｅｒ（Ｇｌｙ）５Ｓｅｒ（配列番号３２）のように、米国特許第５，０７３，６２７号に記載されるリンカー配列で連結可能である。他のリンカー配列には、例えば、ＧｌｙＡｌａＧｌｙＧｌｙＡｌａＧｌｙＳｅｒ（Ｇｌｙ）５Ｓｅｒ（配列番号３３）、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）２（配列番号３４）、（ＧｌｙＴｈｒＰｒｏ）３（配列番号３５）、および（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３Ｇｌｙ４ＳｅｒＧｌｙ５Ｓｅｒ（配列番号３６）が含まれる。
【０１３５】
改変したグリコシル化部位、欠失または置換されたＣｙｓ残基、または修飾されたタンパク分解切断部位を有する可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドをコードする核酸配列、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９ポリペプチドのサブユニット、またはＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の他のペプチドとの融合ポリペプチド、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の対立遺伝子変異体、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９の哺乳動物相同体をコードする核酸配列、並びに、選択的ｍＲＮＡ構築体より誘導されるＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９をコードする核酸配列、または、置換または追加のアミノ酸を有するペプチドをコードするものは、本発明による核酸配列の例である。
【０１３６】
遺伝暗号の縮重性により、同じアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列にはかなりの変異があり得る。態様には、中程度にストリンジェントな条件の下でハイブリダイズすることが可能な配列が含まれる。ハイブリダイゼーション条件の選択に影響を及ぼす基本変数と適切な条件を考案するための手引きについては、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ，およびＭａｎｉａｔｉｓ（１９８９，「分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー、９章および１１章；および「分子生物学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」１９９５，Ａｕｓｕｂｅｌら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ社、セクション２．１０および６．３−６．４）に示されていて、例えば、ＤＮＡの長さおよび／または塩基組成に基づいて、当業者により容易に決定可能である。中程度にストリンジェントな条件を達成する１つの方法は、５ｘＳＳＣ，０．５％  ＳＤＳ，１．０ｍＭ  ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を含有する前洗浄溶液、約５０％のホルムアミド、６ｘＳＳＣのハイブリダイゼーション緩衝液、および約５５℃のハイブリダイゼーション温度（または、約４２℃のハイブリダイゼーション温度を伴う、約５０％のホルムアミドを含有するものなどの、他の類似のハイブリダイゼーション溶液）、並びに約６０℃、０．５ｘＳＳＣ，０．１％  ＳＤＳ中の洗浄条件の使用を伴う。一般的に、高ストリンジェント条件は、上記のようなハイブリダイゼーション条件として、およそ６８℃、０．２ｘＳＳＣ，０．１％  ＳＤＳでの洗浄を伴うと定義される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄の緩衝液では、ＳＳＣ（１ｘＳＳＣは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）にＳＳＰＥ（１ｘＳＳＰＥは、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４、および１．２５ｍＭ  ＥＤＴＡ，ｐＨ７．４である）を代用してよく、洗浄は、ハイブリダイゼーションが完了した後で１５分間行う。当業者に知られていて、以下にさらに記載するように、ハイブリダイゼーション反応と二本鎖安定性を支配する基本原理を適用することによって望ましい度合いのストリンジェンシーを達成するために洗浄温度と洗浄塩濃度を必要に応じて調整してよいと理解されるべきである（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９を参照のこと）。核酸を未知配列の標的核酸へハイブリダイズさせる場合、ハイブリッドの長さは、ハイブリダイズする核酸のそれであると仮定される。既知配列の核酸がハイブリダイズする場合、ハイブリッドの長さは、核酸の配列を並列し、最適な配列相補性のある単数または複数の領域を同定することによって決定可能である。５０塩基対未満の長さであると予測されるハイブリッドのハイブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔｍ）より５〜１０℃低くなければならず、ここでＴｍは、以下の等式により決定される。長さが１８塩基対未満のハイブリッドでは、Ｔｍ（℃）＝２（Ａ＋Ｔ塩基数）＋４（Ｇ＋Ｃ塩基数）。長さが１８塩基対を超え���ハイブリッドでは、Ｔｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ１０［Ｎａ＋］）＋０．４１（Ｇ＋Ｃ％）−（６００／Ｎ）であり、ここで、Ｎはハイブリッド中の塩基数であり、そして［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼーション緩衝液中のナトリウムイオン濃度である（１ｘＳＳＣの［Ｎａ＋］＝０．１６５Ｍ）。好ましくは、こうしたハイブリダイズする核酸は各々、少なくとも１５ヌクレオチド（または、より好ましくは、少なくとも１８ヌクレオチド、または少なくとも２０ヌクレオチド、または少なくとも２５ヌクレオチド、または少なくとも３０ヌクレオチド、または少なくとも４０ヌクレオチド、または最も好ましくは少なくとも５０ヌクレオチド）、またはそれがハイブリダイズする本発明の核酸の長さの少なくとも２５％（より好ましくは少なくとも５０％、または少なくとも６０％、または少なくとも７０％、そして最も好ましくは少なくとも８０％）である長さを有し、それがハイブリダイズする本発明の核酸と少なくとも６０％（より好ましくは少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７．５％、または少なくとも９９％、そして最も好ましくは少なくとも９９．５％）の配列同一性を有し、ここで配列同一性は、上記により詳しく記載されるように、配列ギャップを最小化しながら重複部分と同一性を最大化するように並列したときにハイブリダイズする核酸の配列を比較することによって決定される。
【０１３７】
代わりの態様において、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９のポリヌクレオチドには、上記と配列リストに示すネイティブまたは少なくとも８０％のポリペプチド配列のアミノ酸配列に対してアミノ酸配列が少なくとも７５％、または少なくとも８０％、または少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または少なくとも９６％、または少なくとも９７％、または少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一であるポリペプチドをコードするものが含まれる。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９の断片をコードするポリヌクレオチドについて、断片のパーセント同一性は、全長のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９のポリペプチドの対応部分に対するパーセント同一性にそれぞれ基づく。
【０１３８】
ネイティブ配列の断片への連結を可能にする制限部位が隣接する突然変異配列を含有するオリゴヌクレオチドを合成することによって、突然変異を核酸へ導入可能である。連結の後で、生じる再構築配列は、望ましいアミノ酸挿入、置換、または欠失を有する変異体をコードする。
【０１３９】
あるいは、オリゴヌクレオチド指定の部位特異的な突然変異誘発法を利用して、要求される置換、欠失、または挿入にしたがって改変される特別なコドンを有する改変遺伝子を提供してよい。上記に示す改変を作製する例示の方法は、Ｗａｌｄｅｒら（Ｇｅｎｅ  ４２：１３３，１９８６）；Ｂａｕｅｒら（Ｇｅｎｅ  ３７：７３，１９８５）；Ｃｒａｉｋ（ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９８５年１月，１２−１９）；Ｓｍｉｔｈら（「遺伝子工学：原理と方法（Ｇｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）」，プレナム・プレス、１９８１）に開示され；そして米国特許第４，５１８，５８４号および４，７３７，４６２号は好適な技術を開示し、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１４０】
アミノ酸残基または配列の様々な付加または置換、または生物学的活性に必要とされない末端または内部の残基または配列の欠失を含んでなるＩＬ−１７受容体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が調製可能である。例えば、Ｎ−グリコシル化部位を、グリコシル化を排除するように修飾することが可能であり、酵母発現系を使用して、均質な、炭水化物が低減した変異体の発現を可能にする。真核ポリペプチド中のＮ−グリコシル化部位は、アミノ酸の三つ組、Ａｓｎ−Ｘ−Ｙ（ここで、ＸはＰｒｏ以外の任意アミノ酸であり、ＹはＳｅｒまたはＴｈｒである）を特徴とする。この三つ組をコードするヌクレオチド配列への適切な修飾は、Ａｓｎ側鎖での炭水化物残基の付加を妨げる置換、付加または欠失をもたらすだろう。
【０１４１】
別の例において、Ｃｙｓ残基をコードする配列を改変して、Ｃｙｓ残基を欠失させるかまたは他のアミノ酸に置き換えて、再生時に不正確な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。このように、Ｃｙｓ残基は、ポリペプチドの三次構造またはジスルフィド結合形成に影響を及ぼすことなく、別のアミノ酸で置き換えても欠失させてもよい。
【０１４２】
突然変異誘発の他のアプローチは、ＫＥＸ２プロテアーゼ活性が存在する酵母系における発現を高めるために、二塩基性アミノ酸残基をコードする配列を修飾することを伴う。ＫＥＸ２プロテアーゼ活性が存在する酵母系における発現を高めるために、隣接する二塩基性アミノ酸残基の修飾により他の変異体を調製する。ＥＰ２１２，９１４は、ポリペプチド中のＫＥＸ２プロテアーゼプロセシング部位を不活性化するための部位特異的突然変異誘発の使用を開示する。残基を欠失、付加または置換することによってＫＥＸ２プロテアーゼプロセシング部位を不活性化して、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｌｙｓ、およびＬｙｓ−Ａｒｇ対を改変してこれら隣接塩基性残基の出現を消失させる。他のタンパク分解酵素により認識されて切断される部位をコードする配列に対して同様の修飾を行ってよい。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドのサブユニットは、生物学的活性に必要でない末端または内部の残基または配列をコードする配列を欠失させることによって構築可能である。以下に記載のような融合ポリペプチドをコードする配列は、追加のアミノ酸残基をコードする配列を本発明の配列へ生物学的活性に影響を及ぼすことなく連結することによって構築可能である。
【０１４３】
可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９の発現のために構築されるヌクレオチド配列における突然変異は、当然ながら、コード配列の読み枠フェーズを保存しなければならず、好ましくは、ハイブリダイズして、受容体ｍＲＮＡの翻訳に不都合に影響を及ぼすループまたはヘアピンのようなｍＲＮＡの二次構造をもたらし得る相補領域を創出しない。突然変異部位は予め決定可能であるが、突然変異の種類そのものを予め決定することは必要でない。例えば、所与の部位での突然変異体の最適特性を選択するには、標的コドンでランダム突然変異誘発を行って、発現された突然変異ポリペプチドについて望ましい活性をスクリーニングすればよい。
【０１４４】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列における突然変異がすべて最終産物において発現されるわけではなく、例えば、主として、転写されるｍＲＮＡにおいて二次構造ループを回避するために、または選択宿主によってより容易に翻訳されるコドン（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）発現でのよく知られた大腸菌選好コドン）を提供するために、ヌクレオチド置換を行って、発現を高めることが可能である。
【０１４５】
ゲノムにおいて、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−Ｌおよび／またはＣＤ３９ポリペプチドは、マルチエクソン遺伝子によりコードされる。さらに本発明には、転写に続く様々なｍＲＮＡスプライシングイベントに起因し得て、本明細書に開示されるｃＤＮＡと上記に定義されるような中程度のストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする選択的ｍＲＮＡ構築体が含まれる。
【０１４６】
Ｈ．ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストとしての抗体
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０のアンタゴニストには、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０またはＯＸ４０−Ｌへ特異的に結合する抗体が含まれる。より具体的には、ＩＬ−１７アンタゴニストには、ＩＬ−１７へ特異的に結合して、ＩＬ−１７のＩＬ−１７受容体への結合を一部または完全に阻害する、ＩＬ−１７に対して向けられる抗体、そしてＩＬ−１７受容体へ特異的に結合してそれ自身はＩＬ−１７受容体を活性化せずにＩＬ−１７の結合を阻害する、ＩＬ−１７受容体に対して向けられる抗体が含まれ；ＩＬ−１８アンタゴニストには、ＩＬ−１８へ特異的に結合して、ＩＬ−１８のＩＬ−１８Ｒへの結合を一部または完全に阻害する、ＩＬ−１８に対して向けられる抗体；ＩＬ−１８Ｒへ特異的に結合してそれ自身はＩＬ−１８Ｒを介したシグナルを伝達せずにＩＬ−１８の受容体結合を阻害する、ＩＬ−１８Ｒに対して向けられる抗体が含まれ；４−１ＢＢアンタゴニストには、４−１ＢＢへ特異的に結合して、４−１ＢＢの４−１ＢＢ−Ｌへの結合を一部または完全に阻害する、４−１ＢＢに対して向けられる抗体；４−１ＢＢへ特異的に結合してそれ自身は４−１ＢＢを介したシグナルを伝達せずに４−１ＢＢ−Ｌの結合を阻害する、４−１ＢＢに対して向けられる抗体が含まれ；ＣＤ３０アンタゴニストには、ＣＤ３０−Ｌへ特異的に結合して、ＣＤ３０−ＬのＣＤ３０への結合を一部または完全に阻害する、ＣＤ３０−Ｌに対して向けられる抗体；ＣＤ３０へ特異的に結合してそれ自身はＣＤ３０を活性化せずにＣＤ３０−Ｌの結合を阻害する、ＣＤ３０に対して向けられる抗体が含まれ；そして、ＯＸ４０アンタゴニストには、ＯＸ４０−Ｌへ特異的に結合して、ＯＸ４０−ＬのＯＸ４０への結合を一部または完全に阻害する、ＯＸ４０−Ｌに対して向けられる抗体；ＯＸ４０へ特異的に結合してそれ自身はＯＸ４０を活性化せずにＯＸ４０−Ｌの結合を阻害する、ＯＸ４０に対して向けられる抗体が含まれる。
【０１４７】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０またはＯＸ４０−Ｌ、並びに、上記に示すようなその断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質は、心臓血管疾患の診断および治療に使用可能である抗体を産生する場合の「免疫原」として利用可能である。ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０のアンタゴニストを抗体の形式で作製する場合、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０またはＯＸ４０−Ｌへ言及されるときは、その断片、変異体、ムテイン、誘導体および融合タンパク質も含まれると理解されたい。実施例６の表３に示すように、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３９に対していくつかの抗体を作製した。
【０１４８】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９は、抗体の形成を誘発する抗原決定基またはエピトープを含有する。これらの抗原決定基またはエピトープは、直鎖でも、配座的（断続的）でもよい。直鎖エピトープがポリペプチドのアミノ酸の単一部分から構成されるのに対し、配座的または断続的エピトープは、ポリペプチドの折り畳みと同時に近傍へ集められる、ポリペプチド鎖の様々な領域からのアミノ酸部分からなる。エピトープは、当該技術分野で知られているいずれの方法によっても同定可能である。さらに、本発明のポリペプチド由来のエピトープは、研究試薬として、アッセイにおいて、そしてポリクローナル血清や培養ハイブリドーマ由来の上清のような物質から特異結合抗体を精製するために使用可能である。こうしたエピトープまたはその変異体は、固相合成、ポリペプチドの化学的または酵素的切断のような当該技術分野で知られた技術を使用するか、または組換えＤＮＡ技術を使用して産生可能である。
【０１４９】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９に対する抗体は、簡便には、上記に記載のタンパク質の組換え産生型に対して産生して、それぞれの配列同定子数において提供することができる。抗体であるＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストには、限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ヒト化またはキメラ抗体、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ発現ライブラリーにより産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体と、上記のいずれかのエピトープ結合断片が含まれる。こうした抗体は、心臓血管疾患を治療する方法に利用可能である。
【０１５０】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９に対するポリクローナルとモノクローナル抗体のいずれもが慣用技術により調製可能である。例えば、「モノクローナル抗体、ハイブリドーマ：生物学的解析の新次元（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ：Ａ  Ｎｅｗ  Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｅｓ）」Ｋｅｎｎｅｔら（監修），プレナム・プレス、ニューヨーク（１９８０）；および、「抗体：実験マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（監修），コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８８）；ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，（米国特許第４，３７６，１１０号）；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２，１９８３；Ｃｏｌｅら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２０２６，１９８３）；および、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら，１９８５，「モノクローナル抗体と癌療法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ）」アラン・Ｒ．リス社、７７−９６頁）を参照のこと。
【０１５１】
ヒト化モノクローナル抗体を作製する方法はよく知られていて、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号（タンパク設計：Ｃ  Ｌ  Ｑｕｅｅｎら；「ヒト化免疫グロブリン（Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ）」、米国特許第５，５６５，３３２号（「キメラ抗体の産生−コンビナトリアルアプローチ（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）」）、米国特許第５，２２５，５３９号（Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｃｏｕｎｃｉｌ：Ｇ  Ｐ  Ｗｉｎｔｅｒ；「組換え改変抗体と改変抗体の作製法（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｏｆ  Ｍａｋｉｎｇ  Ａｌｔｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」）、米国特許第５，６９３，７６１〜７６２号（タンパク設計：Ｃ  Ｌ  Ｑｕｅｅｎら；「改善ヒト化免疫グロブリンをコードするポリヌクレオチド（Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  Ｅｎｃｏｄｉｎｇ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ）」、および「ヒト化免疫グロブリン」）、および米国特許第５，３３０，１０１号（タンパク設計：Ｃ  Ｌ  Ｑｕｅｅｎら；「ヒト化免疫グロブリン」）とこれらの引用文献に記載のものが含まれる。
【０１５２】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９に特異的なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系も本明細書で考慮される。こうしたハイブリドーマは、慣用技術により産生して同定することが可能である。抗体の産生のために、様々な宿主動物を、免疫原性のあるＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のポリペプチドを用いた注射により免疫化することができる。こうした宿主動物には、限定されないが、いくつか挙げれば、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ウシ、ウサギ、マウス、およびラットを含めてよい。免疫学的応答を高めるために様々なアジュバントが使用可能である。宿主の種に依存して、こうしたアジュバントには、限定されないが、フロイント（完全および不完全）アジュバント、水酸化アルミニウムのような鉱質ゲル、リゾレシチンのような界面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、アオガイヘモシアニン、ジニトロフェノール、並びにＢＣＧ（カルメットゲラン桿菌）および坐瘡プロピオンバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ）のような潜在的に有用なヒトアジュバントが含まれる。モノクローナル抗体は、慣用技術により回収可能である。こうしたモノクローナル抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびそのどのサブクラスも含まれる、いかなる免疫グロブリンのクラスであってもよい。ｍＡｂを産生するハイブリドーマは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでもｉｎ  ｖｉｖｏでも培養可能である。または、抗体遺伝子をクローニングして、随意に他のやり方で改変して、例えばＣＨＯ細胞のように、タンパク医薬品の組換え産生が承認されている別の細胞系において発現させてよい。
【０１５３】
あるいは、抗体断片のライブラリーについてスクリーニングして、組換え技術によりヒト抗体を開発するために使用してよい。こうしたライブラリーは、例えば、ケンブリッジ抗体テクノロジー（メルボルン、イギリス）、およびＭｏｒｐｈｏｓｙｓ（ミュンヘン、ドイツ）より市販されている。
【０１５４】
さらに、適切な抗原特異性のあるマウス抗体分子由来の遺伝子を、適切な生物学的活性のあるヒト抗体分子由来の遺伝子と一緒にスプライシングすることによる「キメラ抗体」（Ｔａｋｅｄａら，Ｎａｔｕｒｅ，３１４：４５２，１９８５）の産生のために開発された技術も使用可能である。キメラ抗体は、ブタｍＡｂ由来の可変領域とヒト免疫グロブリン定常領域を有するもののように、異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。本発明のモノクローナル抗体にはまた、マウスモノクローナル抗体のヒト化バージョンも含まれる。こうしたヒト化抗体は既知の技術により調製可能であり、該抗体をヒトへ投与するときに、低減した免疫原性という利点を提供し得る。例えば、１以上のヒト免疫グロブリン鎖をコードする遺伝物質を導入したトランスジェニックマウスが利用可能である。こうしたマウスは、様々なやり方で遺伝的に改変可能である。この遺伝子操作により、免疫化のときに動物が産生する少なくともいくつかの（好ましくはほとんどすべての）抗体中の内因性免疫グロブリン鎖に置き換わる、ヒト免疫グロブリンポリペプチド鎖をもたらすことができる。キメラ抗体とさらに工学処理されるモノクローナル抗体の産生の方法には、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３，１９８８）、Ｌｉｕら（ＰＮＡＳ  ８４：３４３９，１９８７）、Ｌａｒｒｉｃｋら（Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ７：９３４，１９８９）および、ＷｉｎｔｅｒおよびＨａｒｒｉｓ（ＴＩＰＳ  １４：１３９，Ｃａｎ，１９９３）に記載されるものが含まれる。抗体をトランスジェニックに生成する方法は、ＧＢ２，２７２，４４０、米国特許第５，５６９，８２５号および５，５４５，８０６号と、それより優先権を主張する関連特許に見出すことが可能であり、これらはいずれも参照により本明細書に組み込まれる。ヒトでの使用では、抗体は、典型的にはヒトであるかまたはヒト化され、こうしたヒト抗体を創出する技術も知られている。ヒト抗体を作製するためのトランスジェニック動物は、例えば、メダレクス（Ｍｅｄａｒｅｘ）社（ニュージャージー州プリンストン）、プロテイン・デザイン・ラボ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ）社（カリフォルニア州フレモント）およびアブジェニクス（Ａｂｇｅｎｉｘ）社（カリフォルニア州フレモント）より市販されている。
【０１５５】
ヒト化免疫グロブリン配列の細菌宿主における発現を使用して、ＣＤＲ領域を突然変異誘発させること、そしてＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９へ結合する高いアフィニティーおよび／または高い特異性を保有するヒト化免疫グロブリンＣＤＲ変異体をスクリーニングすることができる。バクテリオファージのディスプレイライブラリーを産生することによって、より高いアフィニティーのヒト化免疫グロブリン配列を選択することができる。そのようなアフィニティー鋭敏化の１つの潜在的な利点は、改善された結合アフィニティー、および／またはそれらに対して産生した分子以外の分子との低下した交差反応性を有するヒト化免疫グロブリンＣＤＲ変異体の生成である。免疫グロブリン可変領域配列を有するファージディスプレイライブラリーを産生する方法が当該技術分野において提供される（例えば、Ｃｅｓａｒｅｎｉ，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ３０７：６６，１９９２；Ｓｗｉｍｍｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３７５６，１９９２；Ｇｒａｍら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：３５７６，１９９２；Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４，１９９１；ＳｃｏｔｔおよびＳｍｉｔｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：３８６，１９９０；Ｇａｒｒａｒｄら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ９：１３７３，１９９１を参照のこと；これらは、すべての目的のために、参照により本明細書にそのまま組み込まれる）。生じるアフィニティー鋭敏化ＣＤＲ変異体のヒト化免疫グロブリン配列を好適な宿主において引き続き発現させる。
【０１５６】
特異エピトープを認識する抗体断片は、既知の技術により生成可能である。例えば、こうした断片には、限定されないが、抗体分子のペプシン消化により産生可能であるＦ（ａｂ’）２断片と、このＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成可能であるＦａｂ断片が含まれる。あるいは、Ｆａｂ発現ライブラリーを構築し（Ｈｕｓｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１２７５，１９８９）、望ましい特異性をもったモノクローナルＦａｂ断片の迅速かつ容易な同定を可能にしてよい。単鎖抗体の産生について記載される技術（米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３，１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９，１９８８；およびＷａｒｄら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４，１９８９）も、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のアミノ酸配列を含有するポリペプチドに対する単鎖抗体を産生するために適用可能である。さらに、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９ポリペプチドへの抗体はまた、当業者によく知られた技術を使用して、抗イディオ種類抗体を生成するために利用可能である（例えば、ＧｒｅｅｎｓｐａｎおよびＢｏｎａ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ７（５）：４３７，１９９３；およびＮｉｓｓｉｎｏｆｆ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（８）：２４２９，１９９１を参照のこと）。
【０１５７】
Ｉ．核酸をベースとするＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニスト
代わりの態様において、例えば、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のｍＲＮＡ転写物の翻訳を阻害するかまたは防止するためのアンチセンスまたはリボザイムアプローチ；ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の遺伝子の転写を阻害するための三重らせんアプローチ；またはＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の遺伝子またはその内因性プロモーターを不活性化するかまたは「ノックアウト」するための標的指向性相同的組換えを使用して、内因性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の遺伝子発現のレベルを低下させるように、核酸をベースとする免疫療法を設計することができる。
【０１５８】
アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡ分子は、標的化ｍＲＮＡへハイブリダイズしてポリペプチド翻訳を妨げることによってｍＲＮＡの翻訳を直接遮断するように作用する。アンチセンスアプローチは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のポリヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡへ相補的であるオリゴヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）の設計を伴う。絶対的な相補性は、好ましいものの、必須ではない。本明細書に言及されるような、ＲＮＡの一部へ「相補的な」配列は、ＲＮＡとハイブリダイズして、それにより安定的な二本鎖を形成することが可能であるほどに十分な相補性を有する配列を意味する。メッセージの５’末端、例えば、ＡＵＧ開始コドンまで、およびそれが含まれる５’非翻訳配列に相補的であるオリゴヌクレオチドは、翻訳を阻害するのに最も効率的に作用するはずである。しかしながら、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９遺伝子転写物の５’または３’−非翻訳、非コード領域のいずれかへ相補的なオリゴヌクレオチドも、内因性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用可能である。ｍＲＮＡの５’非翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドには、ＡＵＧ開始コドンの相補体が含まれるはずである。アンチセンス核酸は、少なくとも６つのヌクレオチドの長さであるべきであり、好ましくは、６〜約５０のヌクレオチドの長さに及ぶオリゴヌクレオチドである。該オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡ、またはそのキメラ混合物、または誘導体、または修飾バージョンであってよく、一本鎖または二本鎖であってよい。オリゴヌクレオチドは、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、などを向上させるために、塩基部分、糖部分、またはリン酸骨格で修飾可能である。オリゴヌクレオチドには、ペプチド（例えば、宿主細胞受容体をｉｎ  ｖｉｖｏで標的指向するための）、または細胞膜を通過する輸送を促進する薬剤（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒｅら，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２；ＰＣＴ公開公報番号ＷＯ８８／０９８１０，１９８８年１２月１５日公開を参照のこと）、またはハイブリダイゼーション誘発切断剤、または挿入剤（例えば、Ｚｏｎ，１９８８，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３９−５４９を参照のこと）のような、他の付随基が含まれる場合がある。
【０１５９】
アンチセンス分子は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のポリヌクレオチド配列を有する転写物をｉｎ  ｖｉｖｏで発現する細胞へ、例えば、組織または細胞の誘導部位へ直接注射することによるか、または望ましい細胞へ標的指向するように設計された修飾アンチセンス分子（例えば、標的細胞表面上で発現される受容体または抗原へ特異的に結合するペプチドまたは抗体へ連結したアンチセンス）の使用により送達され、全身的に投与可能である。別のアプローチは、組換えＤＮＡ構築体を活用し、ここでは、該アンチセンスオリゴヌクレオチドを強いｐｏｌＩＩＩまたはｐｏｌＩＩプロモーターの制御下に置く。こうした構築体を使用して被検者の標的細胞をトランスフェクトすると、十分な量の一本鎖ＲＮＡの転写を生じ、これが内因性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９転写物と相補的な塩基対を形成し、それによりＩＬ−１７  ｍＲＮＡの翻訳を妨げる。例えば、あるベクターを、細胞に取り込まれ、アンチセンスＲＮＡの転写を指令するようにｉｎ  ｖｉｖｏで導入することが可能である。こうしたベクターは、転写されて望ましいアンチセンスＲＮＡを産生することが可能である間は、エピソームで留るか、または染色体に組み込まれる場合がある。ベクターは、プラスミド、ウイルス、または当該技術分野で知られた他のものであってよく、哺乳動物細胞における複製および発現に使用可能である。
【０１６０】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のポリヌクレオチド配列を有するｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断するように設計されたリボザイム分子は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９  ｍＲＮＡの翻訳を妨げる（例えば、ＰＣＴ国際公開公報ＷＯ９０／１１３６４、１９９０年１０月４日公開；米国特許第５，８２４，５１９号を参照のこと）。リボザイムは、ＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼに類似したやり方で他の一本鎖ＲＮＡを特異的に切断する能力を保有するＲＮＡ分子である。このアプローチの主要な利点は、それらが配列特異的であるので、特別な配列のあるｍＲＮＡだけが不活性化されることである。リボザイムの２つの基本型、即ち、テトラヒメナ型（Ｈａｓｓｅｌｈｏｆｆ，Ｎａｔｕｒｅ，３３４：５８５−５９１，１９８８）と「ハンマーヘッド」型がある。テトラヒメナ型リボザイムが４つの塩基の長さである配列を認識するのに対し、「ハンマーヘッド」型リボザイムは、１１〜１８塩基の長さの塩基配列を認識する。認識配列が長いほど、その配列が標的ｍＲＮＡ種においてのみ出現する可能性が高くなる。必然的に、ハンマーヘッド型リボザイムはテトラヒメナ型リボザイムより好ましい。
【０１６１】
アンチセンスアプローチと同じように、リボザイムは（例えば、安定性の向上、標的指向性、などのために）修飾オリゴヌクレオチドから構成される可能性がある。典型的な送達の方法は、強い構成的ｐｏｌＩＩＩまたはｐｏｌＩＩプロモーターの制御下にリボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築体を使用することを伴う。そうすると、トランスフェクトされた細胞は、内因性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のメッセージを壊し、翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生するだろう。リボザイムは、アンチセンス分子と違って触媒的なので、より低い細胞内濃度が効率のために必要とされる。
【０１６２】
あるいは、標的遺伝子の調節領域（即ち、標的遺伝子のプロモーター、および／またはエンハンサー）に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列に標的指向して、標的ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９遺伝子の転写を妨げる三重らせん構造を形成することによって、内因性ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の発現が抑制可能である（一般的には、Ｈｅｌｅｎｅ，１９９１，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓ．，６（６），５６９−５８４；Ｈｅｌｅｎｅら，１９９２，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ，１９９２，Ｂｉｏａｓｓａｙｓ  １４（１２），８０７−８１５を参照のこと）。
【０１６３】
本発明のアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡ、リボザイム、および三重らせんの分子は、ＤＮＡおよびＲＮＡ分子の合成について当該技術分野で知られているどの方法によって製造してもよく、これらには、例えば、固相ホスホロアミダイト化学合成（例えば、バイオリサーチ、アプライド・バイオシステムズ、などより市販されているような自動化ＤＮＡ合成機の使用による）のような、オリゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチドを化学合成する技術が含まれる。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Ｓｔｅｉｎら，１９８８，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９の方法により合成可能である。メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、制御孔ガラスポリマー支持体の使用により製造可能である（Ｓａｒｉｎら，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１）。あるいは、ＲＮＡ分子は、アンチセンスＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏ転写により生成可能である。こうしたＤＮＡ配列は、Ｔ７またはＳＰ６ポリメラーゼプロモーターのような好適なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを取り込む多種多様なベクターへ取り込むことが可能である。あるいは、使用するプロモーターに依存してアンチセンスＲＮＡを構成的または誘導的に合成するアンチセンスｃＤＮＡ構築体を細胞系へ安定的に導入してよい。
【０１６４】
代わりの態様において、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の発現は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）としても知られる、二本鎖ＲＮＡ誘導性の遺伝子沈黙化のような翻訳後遺伝子沈黙化によって阻止可能である。ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のＲＮＡ配列は、療法使用のために二本鎖配列または短いヘアピンＲＮＡを提供するように修飾可能である。
【０１６５】
Ｊ．ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストのスクリーニング
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストは、ハイスループット試験系のような、当該技術分野で知られたスクリーニングアッセイを使用して評価可能である。アッセイは、タンパク質−タンパク質結合アッセイ、競合結合アッセイ、生化学スクリーニングアッセイ、イムノアッセイ、細胞をベースとするアッセイ、などが含まれる多様なフォーマットにおいて実施可能である。明快さのために、以下の例は、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ｒに関連した例示のアッセイについて記載し、それ故に例示的であって、限定的ではない。同じアッセイフォーマットと根底のラショナルは、それぞれのアンタゴニストをスクリーニングするためのＩＬ−１８：ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ−Ｌ：４−１ＢＢ、ＣＤ３０−Ｌ：ＣＤ３０およびＯＸ−４０Ｌ：ＯＸ４０相互作用へ等しく適用可能である。
【０１６６】
様々な結合アッセイにおけるＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用や、機能試験と細胞をベースとするスクリーニングにおけるＩＬ−１７／ＩＬ−１７受容体仲介性活性に及ぼすＩＬ−１７アンタゴニストの効果を観察することによって、ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用を阻害するので潜在的な治療薬となる分子を同定する。ＩＬ−１７がＩＬ−１７受容体へ結合すること、したがって、ＩＬ−１７の活性化を一部または完全に阻害するＩＬ−１７アンタゴニストは、心臓血管疾患の治療において免疫抑制薬または抗炎症剤として有用であり得る。
【０１６７】
ＩＬ−１７およびＩＬ−１７受容体の相互作用を阻害するその能力をＩＬ−１７アンタゴニストについてスクリーニングするために使用可能であるスクリーニングアッセイの１つの態様は、ＩＬ−１７タンパク質、ＩＬ−１７受容体タンパク質、および試験化合物（即ち、推定ＩＬ−１７アンタゴニスト）を含んでなる組成物を形成する工程；ＩＬ−１７タンパク質、ＩＬ−１７受容体タンパク質の相互作用のレベルをアッセイする工程；並びに、試験化合物の存在下で得られるレベルを試験化合物の非存在下で得られるレベルと比較する工程を含み、そのようにして、得られるレベルが異なれば、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７受容体の相互作用に影響を及ぼす化合物を同定する。代わりの態様において、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体の少なくとも１つを検出可能な部分で標識可能である。代わりの態様において、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体の一方は可溶性であり、他方は結合性であり得るが、代替のアッセイフォーマットも可能であり、よく知られている。試験化合物を組成物へ加えるのは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７受容体を加えた後でも、両タンパク質を加える前でも、一方のタンパク質を加えた後で他方を加える前でもよい。
【０１６８】
別の側面において、スクリーニング方法は、試験化合物、ＩＬ−１７タンパク質、およびＩＬ−１７受容体を発現する細胞を含んでなる組成物を形成すること；組成物中のＩＬ−１７受容体に対するＩＬ−１７の生物学的活性のレベルを決定すること；並びに、この生物学的活性のレベルを試験化合物の非存在下に生じるものと比較することを含み、ここで生物学的活性のレベルにおける差異は、試験化合物がＩＬ−１７／ＩＬ−１７受容体複合体の生物学的活性に影響を及ぼすことを示す。ＩＬ−１７受容体に対するＩＬ−１７の生物学的活性は、幾通りのやり方でアッセイしてもよく、例えば、限定されないが、細胞内タンパク質のリン酸化状態（即ち、ＩＬ−１７によるＩＬ−１７受容体の活性化）を判定すること；ＩＬ−６、ＩＬ−８、単球化学誘引タンパク質−１およびＧｒｏαのような好炎症因子の産生を判定すること；Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−８のような造血性サイトカインの産生を判定すること；および、ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αの増加した発現を判定すること、並びにマクロファージにおけるｉＮＯＳの誘導を測定することが含まれる。
【０１６９】
潜在的なＩＬ−１７アンタゴニストの同定用アッセイの特別な例は競合アッセイであり、これは、競合アッセイに適した条件の下でＩＬ−１７受容体とＩＬ−１７およびＩＬ−１７受容体特異的アンタゴニストを組み合わせる。結合を測定してアンタゴニストの有効性を判定することができるように、ＩＬ−１７またはＩＬ−１７受容体特異的アンタゴニストのいずれか一方を標識してよい。標識は、直接または間接の手段による検出を可能にする。直接手段には、限定されないが、蛍光、放射活性、光学、または電子密度が含まれる。間接手段には、限定されないが、酵素またはエピトープタグが含まれる。
【０１７０】
ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用を阻害するＩＬ−１７アンタゴニストを同定可能である別の方法は固相法であり、ここでは、ＩＬ−１７受容体が結合型であり、標識化ＩＬ−１７のある媒体に入れる。ＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用により産生されるシグナルの量を試験化合物の存在下と非存在下で測定する。対照に比較したシグナルのレベルの減少は、試験化合物がＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用を阻害したことを示す。対照に比較したシグナルのレベルの増加は、候補分子がＩＬ−１７とＩＬ−１７受容体の間の相互作用を促進することを示す。代わりの態様において、ＩＬ−１７が結合型であり、ＩＬ−１７受容体を標識してよい。ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１７受容体および／またはＩＬ−１７タンパク質は、直接的または間接的に標識してよい。例えば、タンパク質が組換え的に産生されるならば、可溶性、標識化、固定化および／または検出を促進することができる融合タンパク質を工学処理してよい。これらの方法を促進する融合タンパク質には、限定されないが、可溶性Ｉｇテール融合タンパク質とＨｉｓタグ付きタンパク質を含めてよい。こうした可溶性Ｉｇテール融合タンパク質を工学処理する方法は、当業者によく知られている。例えば、米国特許第５，１１６，９６４号と以下に記載の例示の態様を参照のこと。間接的な標識化は、アッセイの成分へ特異的に結合する、標識抗体のようなタンパク質の使用を伴う。
【０１７１】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストは、心臓および血管組織より誘導される細胞および／または細胞系を使用して、同定および評価可能である。例えば、心筋細胞とその細胞系は、本明細書に記載の好適なアッセイのいずれにおいてもＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストを評価するために使用可能である。細胞生存；肥大性の応答；および／または低酸素または環境ストレスに応答したＡＮＰおよび／またはＢＮＰの産生のような、心筋細胞（または他の細胞）をベースとするアッセイにおける生物学的に関連した読出し情報は、潜在的なアンタゴニストを評価するために使用可能である。
【０１７２】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストはまた、シンチレーション近似アッセイ（Ｕｄｅｎｆｒｉｅｎｄら，１９８５，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８２：８６７２−８６７６）、酵母ツーハイブリッドまたは相互作用トラップアッセイ、均一時間分割蛍光法（Ｐａｒｋら，１９９９，Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２６９：９４−１０４）、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）法（Ｃｌｅｇｇ  ＲＭ，１９９５，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ６：  １０３−１１０）、または、例えばバイアコアＡＢ（ウプサラ、スウェーデン）により供給されるようなバイオセンサーを使用して、結合したポリペプチドが潜在的な結合パートナーへ曝露されるときの表面プラスモン共鳴の変化を測定する方法といった、ハイスループットスクリーニング法によく適している方法を使用して、同定可能である。
【０１７３】
アッセイ可能であり、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストでもあり得る化合物には、限定されないが、シグマ−アルドリッチ（ミズーリ州セントルイス）、Ａｒｑｕｌｅ（マサチューセッツ州ウォバーン）、Ｅｎｚｙｍｅｄ（アイオワ州アイオワシティ）、メイブリッジケミカル社（トレヴィレット、コーンウォール、イギリス）、ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓ（ワシントン州ボセル）、Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ニュージャージー州プリンストン）、およびＴｒｅｇａ（カリフォルニア州サンディエゴ）のような企業から、多量のコンビナトリアルケミストリー化合物「ライブラリー」の一部としてよく市販されているような、低有機分子が含まれる。これらのアッセイを使用するスクリーニングに好ましい低有機分子は、通常１０Ｋ未満の分子量であり、細胞浸透を高め、分解に抵抗し、および／またはその生理学的半減期を延長させるいくつかの物理化学的および薬理学的特性を保有する場合がある（Ｇｉｂｂｓ，Ｊ．，１９９４，「分子腫瘍学における製薬研究（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）」Ｃｅｌｌ  ７９（２）：１９３−１９８）。天然産物、無機化学品、および、タンパク質および毒素のような生物学的活性物質が含まれる化合物についても、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストとして役立つための結合する能力について上記の方法を使用してアッセイ可能である。
【０１７４】
ＩＬ−１７：ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８：ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ−Ｌ：４−１ＢＢ、ＣＤ３０−Ｌ：ＣＤ３０および／またはＯＸ−４０Ｌ：ＯＸ４０相互作用、それ故に細胞間情報伝達、細胞刺激、または免疫細胞活性に拮抗することは、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストによって操作して、これらの活性を標的細胞において制御することが可能である。例えば、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニスト、またはＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストをコードする核酸を細胞または細胞の集団へ投与して、ＩＬ−１７：ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８：ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ−Ｌ：４−１ＢＢ、ＣＤ３０−Ｌ：ＣＤ３０および／またはＯＸ−４０Ｌ：ＯＸ４０の結合を阻止して、それにより標的細胞における細胞情報伝達、細胞刺激、または活性を抑制または停止させることが可能である。こうしたアッセイにおいて、ＩＬ−１７：ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８：ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ−Ｌ：４−１ＢＢ、ＣＤ３０−Ｌ：ＣＤ３０および／またはＯＸ−４０Ｌ：ＯＸ４０結合の存在下での情報伝達または細胞刺激の割合を決定してから、こうした情報伝達または細胞刺激がＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの存在下で改変するかどうかを決定可能である。本発明のこの側面の代表的なアッセイには、サイトカイン分泌アッセイ、Ｔ細胞副刺激アッセイ、および、抗原提示細胞およびＴ細胞が関与する混合リンパ球反応が含まれる。これらのアッセイは、当業者によく知られている。
【０１７５】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストは、サイトカイン、細胞増殖（誘導するかまたは阻害する）、または細胞分化（誘導するかまたは阻害する）の活性を調節可能であるか、またはある細胞集団では他のサイトカインの産生を誘導可能である。今日までに発見された多くのポリペプチド因子が１以上の因子依存型細胞増殖アッセイにおいてこうした活性を示したので、このアッセイは、細胞刺激活性の簡便な確認法として役立つ。ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの活性は、限定なしに、ＮＦκＢ、３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ  Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅ、およびＣＭＫが含まれる細胞系についての、いくつかのルーチン因子依存型細胞増殖アッセイのいずれか１つにより裏付けることができる。
【０１７６】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの活性は、とりわけ、以下の方法により測定可能である：
受容体−リガンド活性のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第７．２８章、静的条件下での細胞接着の測定、７．２８．１−７．２８．２２）；Ｔａｋａｉら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８４：６８６４−６８６８，１９８７；Ｂｉｅｒｅｒら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６８：１１４５−１１５６，１９８８；Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：１４９−１６０，１９８９；Ｓｔｏｌｔｅｎｂｏｒｇら，．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １７５：５９−６８，１９９４；Ｓｔｉｔｔら，Ｃｅｌｌ  ８０：６６１−６７０，１９９５に記載されるものが含まれる。
【０１７７】
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（３．１−３．１９頁：マウス白血球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１７８】
脾臓細胞、リンパ節細胞、または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、ＫｒｕｉｓｂｅｅｋおよびＳｈｅｖａｃｈ，１９９４「ポリクローナルＴ細胞刺激（Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）」第１巻、３．１２．１−３．１２．１４頁；および「免疫学の最新プロトコル」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，１９９４「マウスおよびヒトのγ−インターフェロンの測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  γ）」第１巻、６．８．１−６．８．８頁に記載されるものが含まれる。
【０１７９】
造血細胞およびリンパ生成細胞の増殖および分化についてのアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｂｏｔｔｏｍｌｙら，１９９１「ヒトおよびマウスのインターロイキン−２およびインターロイキン−４の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  ａｎｄ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ２  ａｎｄ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ４）」第１巻、６．３．１−６．３．１２頁；ｄｅＶｒｉｅｓら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０：２９３１−２９３８，１９８３；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｎｏｒｄａｎ，１９９１「マウスおよびヒトのインターロイキン−６の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ６）」第１巻、６．６．１−６．６．５頁；Ｓｍｉｔｈら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８３：１８５７−１８６１，１９８６；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｂｅｎｎｅｔｔら，１９９１「ヒトインターロイキン−１１の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  １１）」第１巻、６．１５．１頁；「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、Ｃｉａｒｌｅｔｔａら，１９９１「マウスおよびヒトのヒトインターロイキン−９の測定（Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｏｕｓｅ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  ９」第１巻、６．１３．１頁に記載されるものが含まれる。
【０１８０】
抗原に対するＴ細胞クローン応答のアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞の効果を指令するだけでなくＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすポリペプチドを、増殖とサイトカイン産生を測定することによって同定するもの）には、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウス白血球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ；第６章、サイトカインとその細胞受容体；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されるものが含まれる。
【０１８１】
胸腺細胞または脾臓細胞の細胞傷害性のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウス白血球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、３．１−３．１９；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１８２】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングについてのアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を変調させて、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；および「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ、トロント中、ＭｏｎｄおよびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，１９９４「Ｂ細胞機能のアッセイ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ抗体産生（Ａｓｓａｙｓ  ｆｏｒ  Ｂ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ：ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）」第１巻、３．８．１−３．８．１６頁に記載されるものが含まれる。
【０１８３】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）のアッセイ（とりわけ、Ｔｈ１およびＣＴＬの応答を主に産生するポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第３章、マウス白血球機能のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ、３．１−３．１９；第７章、ヒトの免疫学的試験）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００；１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１８４】
樹状細胞依存性アッセイ（とりわけ、ネイティブＴ細胞を活性化する樹状細胞により発現されるポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されるものが含まれる。
【０１８５】
リンパ球生存／アポトーシスのアッセイ（とりわけ、超抗原誘導後のアポトーシスを防止するポリペプチドとリンパ球のホメオスタシスを調節するポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏら，Ｃｅｌｌ  ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ  １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １：６３９−６４８，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１８６】
Ｔ細胞の拘束および発生の初期段階に影響を及ぼすポリペプチドのアッセイには、限定なしに、Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ  ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ  ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されるものが含まれる。
【０１８７】
胚性幹細胞分化のアッセイ（とりわけ、胚分化造血作用に影響を及ぼすポリペプチドを同定するもの）には、限定なしに、Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １５：１４１−１５１，１９９５；Ｋｅｌｌｅｒら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３：４７３−４８６，１９９３；ＭｃＣｌａｎａｈａｎら，Ｂｌｏｏｄ  ８１：２９０３−２９１５，１９９３に記載されるものが含まれる。
【０１８８】
細胞の運動および接着のアッセイには、限定なしに、「免疫学の最新プロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」Ｃｏｌｉｇａｎら，監修、グリーン・パブリッシング・アソシエーツおよびウィリー・インターサイエンス（第６．１２章、αおよびβ−ケモカインの測定、６．１２．１−６．１２．２８）；Ｔａｕｂら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１３７０−１３７６，１９９５；Ｌｉｎｄら，ＡＰＭＩＳ  １０３：１４０−１４６，１９９５；Ｍｕｌｌｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４４−１７４８；Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５８６０−５８６７，１９９４；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら，Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：１７６２−１７６８，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１８９】
止血および血栓溶解活性に関するアッセイには、限定なしに、Ｌｉｎｅｔら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２６：１３１−１４０，１９８６；Ｂｕｒｄｉｃｋら，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．４５：４１３−４１９，１９８７；Ｈｕｍｐｈｒｅｙら，Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ  ５：７１−７９（１９９１）；Ｓｃｈａｕｂ，Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ３５：４６７−４７４，１９８８に記載されるものが含まれる。
【０１９０】
ＩＩ．療法組成物とその投与
本発明は、心臓血管疾患に罹患している被検者、好ましくはヒト患者を治療するための化合物、組成物、および方法を提供する。本明細書に使用する用語「治療する」、「治療すること」、および「治療」には、治癒的、防御的（例えば、予防的）、および緩和的または寛解的な治療が含まれる。故に、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の療法組成物は、症状の発現の前、その間、またはその後で投与することが必要となる場合がある。療法的使用には、可溶性のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を、その適応症に適切なやり方での治療のために被検者へ投与する。
【０１９１】
本発明の態様には、１以上の可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を含んでなる療法組成物（医薬組成物とも呼ばれる）が含まれる。本明細書に使用する「療法組成物」は、１以上の可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９と製剤的に許容される希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体を含む。本明細書に使用する用語「製剤的に」許容されると「生理学的に」許容されるは、交換可能的に使用する。用語「製剤的に許容される」は、有効成分の生物学的活性の有効性に干渉しない、無毒の材料を意味する。
【０１９２】
故に、療法組成物は、上記のセクションに記載のアンタゴニストのすべて、例えば、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９のような可溶性の受容体分子、リガンドおよび／または結合タンパク質、並びに、その生物学的に活性な断片、ムテイン、変異体、誘導体、融合物、など；以下の１以上に対して向けられる抗体、融合タンパク質および／またはペプチド体：ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ）、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬおよびＣＤ３９；ＩＬ−１７とＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８とＩＬ−１８Ｒ、ＣＤ３０−ＬとＣＤ３０、４−１ＢＢ−Ｌと４−１ＢＢおよび／またはＯＸ４０−ＬとＯＸ４０の間の相互作用に拮抗するペプチド模倣体、ミモトープ、などのような低分子；内因性のＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のｍＲＮＡに特異的に標的指向してそれへハイブリダイズして、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９のｍＲＮＡ転写物の翻訳を阻害するかまたは妨げるアンチセンスオリゴヌクレオチド；並びに、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、ＩＬ−１８ＢＰ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０−ＬまたはＣＤ３９の発現を沈黙させるように設計したＲＮＡ干渉分子を含む。
【０１９３】
生理学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤は、利用する投与量および濃度でレシピエントにとって無害である。通常、そうした組成物を調製することは、緩衝剤、アスコルビン酸のような抗酸化剤、低分子量ポリペプチド（１０未満のアミノ酸を有するもののような）、タンパク質、アミノ酸、ブドウ糖、ショ糖またはデキストリンのような炭水化物、ＥＤＴＡのようなキレート剤、グルタチオンや他の安定化剤および賦形剤とＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を組み合わせることを伴う。中性の緩衝化生理食塩水または非特異的な血清アルブミンと混合した生理食塩水は、例示の適切な希釈剤である。ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９は、好ましくは、好適な賦形剤溶液（例、ショ糖）を希釈剤として使用して、凍結乾燥品として製剤化する。適切な投与量は、標準投薬試験において決定可能であり、選択する投与経路に応じて変動してよい。適切な業界の標準に準じて、ベンジルアルコールのような保存剤も加えてよい。投与の量および頻度は、当然ながら、治療する適応症の性質および重症度、望まれる応答、患者の年齢および状態、などのような要因に左右されるものである。
【０１９４】
１つの態様において、本明細書に記載の可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の持続放出型が使用される。開示される方法での使用に適した持続放出型には、限定されないが、こうしたポリマーと混合される遅溶解性の生体適合性ポリマーに被包化されるか、または生体適合性半透性インプラントに封入されるＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９が含まれる。さらに、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９は、（上記に詳しく記載したように）その血清半減期を延長させるかまたはタンパク質送達を高めるためにポリエチレングリコールとコンジュゲート（ＰＥＧ化）してよい。
【０１９５】
可溶性ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の療法組成物を投与するのに使用可能である持続放出技術の１つの種類は、ヒドロゲル材料、例えば、光重合可能ヒドロゲルを利用することである（Ｓａｗｈｎｅｙら，Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２６：５８１；１９９３）。術後の癒着形成を防止するために（Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ．８３：５９，１９９４）、そして血管損傷に続く血栓症および血管狭小化を防止するために（Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：５９６７，１９９４）同様のヒドロゲルが使用されている。そうしたヒドロゲル中へポリペプチドを取り込ませて、有効薬剤の持続した局在化放出をもたらすことができる（ＷｅｓｔとＨｕｂｂｅｌ，Ｒｅａｃｔｉｖｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ２５：１３９，１９９５；Ｈｉｌｌ−Ｗｅｓｔら，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．５８：７５９，１９９５）。ヒドロゲルへ取り込まれたときのＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の持続した局在化放出は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の長い半減期によって増幅されるだろう。
【０１９６】
療法組成物は、注射用、または経口、肺、経鼻、経皮の投与用でも、他の投与形式用でもよい。一般に、本発明には、１以上のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の有効量を製剤的に許容される希釈剤、保存剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と一緒に含んでなる療法組成物が含まれる。こうした組成物には、様々な緩衝剤内容（例、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨおよびイオン強度の希釈剤；界面活性剤および可溶化剤（例、Ｔｗｅｅｎ８０，ポリソルベート８０）、抗酸化剤（例、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、保存剤（例、Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ，ベンジルアルコール）および賦形剤（例、乳糖、マンニトール）のような添加剤が含まれ、この材料は、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、などのようなポリマー化合物の微粒子調製物またはリポソームへ取り込まれる。ヒアルロン酸も使用可能であり、これは、循環中の持続期間を促進する効果を有する場合がある。こうした組成物は、本発明のタンパク質および誘導体の物理状態、安定性、ｉｎ  ｖｉｖｏ放出速度、およびｉｎ  ｖｉｖｏクリアランス速度に影響を及ぼす可能性がある。例えば、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、「レミントン製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」第１８版（１９９０，マック・パブリッシング社、ペンシルヴェニア州イーストン、１８０４２）１４３５−１７１２頁を参照のこと。本組成物は、液体型で調製しても、凍結乾燥型のような乾燥粉末で調製してもよい。経皮製剤のように、埋込み可能な持続放出製剤も考慮される。
【０１９７】
本明細書における使用に考慮されるのは経口固体剤形であり、これについては、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、「レミントン製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」（１９９０）、第１８版、マック・パブリッシング社、ペンシルヴェニア州イーストン、１８０４２）の第８９章に概して記載されている。固体剤形には、錠剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤または甘味入り錠剤、カシェ剤またはペレット剤が含まれる。また、本組成物を製剤化するためにリポソームまたはタンパク様の被包化が使用可能である（例えば、米国特許第４，９２５，６７３号に報告されるタンパク様ミクロスフェアのような）。リポソーム被包化が使用可能であり、リポソームは、様々なポリマーで誘導化してよい（例えば、米国特許第５，０１３，５５６）。治療薬に可能な固体剤形の記載は、参照により本明細書にそのまま組み込まれる、Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．，「最新の医薬品（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ）」（１９７９）、Ｇ．Ｓ．ＢａｎｋｅｒおよびＣ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ監修の第１０章に示される。一般に、この製剤には、１以上のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９と、胃環境に対する保護と生物学的に活性な材料の腸での放出を可能にする不活性成分が含まれるものである。
【０１９８】
また、具体的に考慮されるのは、上記の本化合物の経口剤形である。必要ならば、経口送達が有効になるように、本化合物を化学修飾してよい。一般に、考慮される化学修飾は、化合物分子そのものへ少なくとも１つの部分を付けることであり、ここで前記部分は、（ａ）タンパク分解の阻害；および（ｂ）胃または腸から血流への取込みを可能にする。また望まれるのは、化合物の全体的な安定性の増加と体内での循環時間の増加である。本発明において共有付加運搬体として有用な部分は、この目的にも使用可能である。そうした部分の例には、ＰＥＧ、エチレングリコールおよびプロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドンおよびポリプロリンが含まれる。例えば、ＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉおよびＤａｖｉｓ「可溶性ポリマー−酵素付加物、薬物としての酵素（Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ，Ｅｎｚｙｍｅ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ）」（１９８１），ＨｏｃｅｎｂｅｒｇおよびＲｏｂｅｒｔｓ（監修）、ウィリー・インターサイエンス、ニューヨーク州ニューヨーク、３６７−８３頁；Ｎｅｗｍａｒｋら，（１９８２），Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−９を参照のこと。使用可能である他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−チオキソケインである。医薬使用に好ましいのは、上記に示したように，ＰＥＧ部分である。経口送達剤形では、Ｎ−（８−［２−ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリル酸ナトリウム（ＳＮＡＣ）のような修飾脂肪族アミノ酸の塩を本発明の療法化合物の吸収を高めるための担体として使用することも可能である。ＳＮＡＣを使用するヘパリン製剤の臨床効果がＥｍｉｓｐｈｅｒｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓの実施したフェーズＩＩ試験において証明されている。米国特許第５，７９２，４５１号「経口医薬送達組成物と方法（Ｏｒａｌ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ）」を参照のこと。
【０１９９】
本発明の化合物は、約１ｍｍの粒子径の顆粒剤またはペレット剤の形態の微細な多粒子製剤としての製剤に含めることができる。カプセル投与用材料の製剤は、散剤、軽圧縮プラグ、または錠剤でもよい。治療薬は、圧縮により調製可能である。
【０２００】
着色剤と芳香剤をいずれも含めてよい。例えば、タンパク質（または誘導体）を（リポソームによるかまたはミクロスフェア被包化によるように）製剤化してから、着色剤および芳香剤を含有する冷却飲料のような食用製品内にさらに含有してよい。
【０２０１】
本発明の化合物の容量を不活性材料で希釈または増加させてよい。これらの希釈剤には、炭水化物、特にマンニトール、α−乳糖、無水乳糖、セルロース、ショ糖、修飾デキストランおよびデンプンを含めてよい。ある種の無機塩も充填剤として使用可能であり、三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウムおよび塩化ナトリウムが含まれる。いくつかの市販の希釈剤は、Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、ＥｍｃｏｍｐｒｅｓｓおよびＡｖｉｃｅｌｌである。
【０２０２】
治療薬の固体剤形への製剤化には、崩壊剤が含まれる場合がある。崩壊剤として使用する材料には、限定されないが、デンプンが含まれ、デンプン、Ｅｘｐｌｏｔａｂを基にした市販の崩壊剤が含まれる。ナトリウムデンプングリコラート、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ウルトラアミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸性カルボキシメチルセルロース、天然スポンジおよびベントナイトがいずれも使用可能である。崩壊剤の別の型は、不溶性のカチオン交換樹脂である。粉末ゴムは崩壊剤としても結合剤としても使用可能であり、これらには、寒天、カラヤまたはトラガカントのような粉末ゴムを含めることができる。アルギン酸とそのナトリウム塩も崩壊剤として有用である。
【０２０３】
療法剤を一緒に保持して硬い錠剤を成形するために結合剤が使用可能であり、アカシア、トラガカント、デンプンおよびゼラチンのような天然産物由来の材料が含まれる。他には、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）とヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は、治療薬を造粒するためにアルコール溶液中でともに使用可能である。
【０２０４】
製剤化プロセスの間の粘着を防止するために治療薬の製剤に抗摩擦剤を含めてよい。治療薬とダイ壁の間の層として滑沢剤が使用可能であり、これらには、限定されないが、ステアリン酸（そのマグネシウム塩およびカルシウム塩が含まれる）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物油およびワックスが含まれる。ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、様々な分子量のポリエチレングリコール、Ｃａｒｂｏｗａｘ  ４０００および６０００のような可溶性滑沢剤も使用可能である。
【０２０５】
製剤化の間の薬物のフロー特性を向上させることが可能であり、圧縮の間の再配置に役立つ滑り剤（ｇｌｉｄａｎｔ）も加えてよい。滑り剤には、デンプン、タルク、発熱シリカおよび水和シリコアルミネートが含まれる場合がある。
【０２０６】
本発明の化合物の水性環境への溶解を促進するために、界面活性剤を湿潤剤として加えてよい。界面活性剤には、ラウリル硫酸ナトリウム、ジオクチルナトリウムスルホスクシネートおよびジオクチルナトリウムスルホネートのようなアニオン界面活性剤が含まれる場合がある。カチオン界面活性剤も使用可能であり、塩化ベンズアルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが含まれる場合がある。界面活性剤として製剤に含めてよい潜在的な非イオン性界面活性剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート４０、６０、６５および８０、ショ糖脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、タンパク質または誘導体の製剤中に単独で存在しても、異なる比率の混合物として存在してもよい。
【０２０７】
化合物の取込みを高めるために製剤に添加剤を加えてもよい。この特性を潜在的に有する添加剤は、例えば、脂肪酸のオレイン酸、リノール酸およびリノレン酸である。
制御放出製剤も望ましい場合がある。本発明の化合物は、拡散または浸出の機序のいずれかによる放出を可能にする不活性マトリックス（例えば、ゴム）へ取り込んでよい。ゆっくり変性するマトリックスも製剤に取り込んでよい（例えば、アルギン酸塩、多糖類）。本発明の化合物の制御放出の別の型は、Ｏｒｏｓ治療システム（Ａｌｚａ社）に基づいた方法による。即ち、浸透効果により単一の小さな開口部を介して水を入れるが薬物は押し出すことを可能にする半透膜に薬物を取り囲むものである。腸溶コーティング剤の中にも、遅延放出効果を有するものがある。
【０２０８】
他のコーティング剤も本製剤に使用可能である。これらには、コーティングパン中で適用可能である、多様な糖が含まれる。療法剤はまた、フィルムコート錠剤において提供してもよく、この事例に使用する材料は、２つの群に分けられる。第一は、非腸溶材料であり、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシ−エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、カルボキシ−メチルセルロースナトリウム、プロビドンおよびポリエチレングリコールが含まれる。第二の群は、一般にフタル酸のエステルである腸溶材料からなる。
【０２０９】
材料の混合物を使用して、最適のフィルムコーティングを提供することが可能である。フィルムコーティングは、パン容器において、流動床において、または圧縮コーティングにより行ってよい。
【０２１０】
本明細書にまた考慮されるのは、本タンパク質（またはその誘導体）の肺送達である。本タンパク質（または誘導体）は、吸入の間に哺乳動物の肺へ送達され、肺の上皮支持層（ｌｉｎｉｎｇ）より血流へ横断する。このことに関する他の報告には、Ａｄｊｅｉら，Ｐｈａｒｍａ．Ｒｅｓ．（１９９０）７：５６５−９；Ａｄｊｅｉら（１９９０），Ｉｎｔｅｒｎａｔｌ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  ６３：１３５−４４（酢酸リュープロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔら（１９８９），Ｊ．Ｃａｒｄｉｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３（補遺５）：ｓ．１４３−１４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら（１９８９），Ａｎｎａｌｓ  Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．３：２０６−１２（α１−抗トリプシン）；Ｓｍｉｔｈら（１９８９），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−６（α１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら（１９９０年３月），「タンパク質のエアゾール化（Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」，Ｐｒｏｃ．Ｓｙｍｐ．Ｒｅｓｐ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＩＩ，コロラド州キーストン（組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら（１９８８），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３４８２−８（インターフェロン−γおよび腫瘍壊死因子α）、およびＰｌａｔｚら，米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる。
【０２１１】
本発明の実施における使用に考慮されるのは、治療製品の肺送達用に設計される広範囲の機械デバイスであり、限定されないが、ネブライザー、目盛り量吸入器、および粉末吸入器が含まれ、これらのいずれも当業者には馴染みがある。本発明の実施に適した市販デバイスのある具体例は、マリンクロット社（ミズーリ州セントルイス）製のＵｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー；Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（コロラド州エングルウッド）製のＡｃｏｒｎ  ＩＩネブライザー；グラクソ社（ノースカロライナ州リサーチ・トライアングル・パーク）製のＶｅｎｔｏｌｉｎ目盛り量吸入器；および、ファイソンズ社（マサチューセッツ州ベドフォード）製のＳｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器である。
【０２１２】
こうしたデバイスは、いずれも本発明の化合物の調合に適した製剤の使用を必要とする。典型的には、各製剤は利用するデバイスの種類に特異的であり、療法に有用な希釈剤、アジュバントおよび／または担体に加えて、適切な推進材料（ｐｒｏｐｅｌｌａｎｔ  ｍａｔｅｒｉａｌ）の使用を伴う場合がある。
【０２１３】
本発明の化合物は、遠い肺への最も有効な送達のためには、最も有利には、１０μｍ（ミクロン）未満、最も好ましくは０．５〜５μｍの平均粒子径の粒子型において調製すべきである。
【０２１４】
製剤的に許容される担体には、トレハロース、マンニトール，キシリトール、ショ糖、乳糖、およびソルビトールのような炭水化物が含まれる。製剤に使用の他の成分には、ＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣおよびＤＯＰＣが含まれる場合がある。天然または合成の界面活性剤が使用可能である。ＰＥＧが使用可能である（タンパク質または類似体を誘導化することにおけるその使用とは別に）。シクロデキストリンのようなデキストランが使用可能である。胆汁酸塩と他の関連エンハンサーが使用可能である。セルロースとセルロース誘導体が使用可能である。緩衝製剤における使用のように、アミノ酸が使用可能である。
【０２１５】
また、リポソーム、ミクロカプセルまたはミクロスフェア、封入複合体、または他の種類の担体の使用が考慮される。
ジェット式または超音波式のネブライザーでの使用に適した製剤は、典型的には、１ｍＬの溶液につき約０．１〜２５ｍｇの生物学的に活性なタンパク質の濃度で水に溶けた本発明の化合物を含むものである。この製剤には、緩衝剤と単糖も含めてよい（例えば、タンパク質の安定化と浸透圧の調節のために）。ネブライザー製剤は、エアゾール形成時の溶液の微粉化により引き起こされるタンパク質の界面誘発凝集を抑えるかまたは妨げるために、界面活性剤を含有してよい。
【０２１６】
一般に、目盛り量吸入器デバイスで使用の製剤は、界面活性剤の支援により推進剤に懸濁した本発明の化合物を含有する微細化粉末を含む。推進剤は、クロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、またはヒドロカーボンのような、この目的に利用するどの慣用材料であってもよく、トリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、またはこれらの組合せが含まれる。好適な界面活性剤には、トリオレイン酸ソルビタンと大豆レシチンが含まれる。オレイン酸も界面活性剤として有用であり得る。
【０２１７】
粉末吸入デバイスより調合する製剤は、本発明の化合物を含有する微細化した乾燥粉末を含み、粉末のデバイスからの拡散を促進する量の乳糖、ソルビトール、ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはキシリトールのような賦形剤も、例えば製剤の５０〜９０重量％で含んでよい。
【０２１８】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の経鼻送達も考慮される。経鼻送達は、治療生成物を鼻へ投与した後に、該生成物の肺における沈積の必要なしに、該タンパク質の血流への直接通過を可能にする。経鼻送達用の製剤には、デキストランまたはシクロデキストランのあるものが含まれる。他の粘膜を通過する輸送を介した送達も考慮される。
【０２１９】
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の治療または使用の方法を実施する場合、治療有効量を被検者へ投与する。本明細書に使用する用語「治療有効量」は、患者の有意義な利益、即ち、関連する医学的状態の治療、治癒、予防、または寛解、またはこうした状態の治療、治癒、予防、または寛解の率の増加を示すのに十分であるそれぞれの療法組成物の全体量を意味する。単独で投与される、個別の療法組成物へ適用される場合、この用語は、その成分だけを意味する。組合せ物へ適用される場合、この用語は、組み合せても、連続的または同時に投与されても、治療効果をもたらす成分の組み合せた量を意味する。本明細書に使用する療法剤の句「治療有効量を投与する」は、障害の重症度を反映する少なくとも１つの指標において、改善、および好ましくは持続した改善を誘導するのに十分な量で、および時間の間、患者が前記療法組成物で治療されることを意味する。改善が「持続している」とみなされるのは、１日以上、またはより好ましくは、１週間以上離れた少なくとも２つの機会で患者が改善を示す場合である。改善の度合いは、徴候または症状に基づいて決定され、決定には、「生活の質」質問表のような、患者へ渡される質問表も利用可能である。治療の量および時間が十分であるかどうかを判定するために、患者の疾病の程度を反映する様々な指標が評価可能である。選択される指標（群）のベースライン値を、療法剤の初回用量の投与に先立つ患者の検査により確定する。好ましくは、ベースライン検査は、初回用量を投与する約６０日以内に行う。急性症状を治療するために療法剤を投与するならば、初回用量は、損傷が起こってから現実に可能な限りすぐに投与する。ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９のような療法組成剤を投与することによって改善が誘導され、そのとき患者は、選択された指標（群）についてベースラインを上回る改善を示す。慢性状態を治療する場合、少なくとも１ヶ月以上、例えば１、２、または３ヶ月、またはそれより長いか、際限ない期間にわたり、この医薬品を反復的に投与することによってこの改善の度合いが得られる。損傷または他の急性状態を治療するには、１〜６週の期間、または単回用量でさえしばしば十分である。治療後の患者の疾病の程度が１以上の指標により改善されたように見える場合もあるが、同一レベルでかまたは低減された用量または頻度で、治療を際限なく継続してもよい。治療は、いったん低減されるかまたは中止されても、症状が再び現れたならば、元のレベルで再開してよい。
【０２２０】
当業者は、治療される障害の性質および重症度、患者の体重、年齢、一般状態、および以前の疾病および／または治療、並びに投与経路のような要因に依存して、適切な投与量が変化するものであることを認識されよう。予備用量は動物試験にしたがって決定可能であり、ヒト投与への投与量のスケーリングは、標準投薬試験のような当該技術分野で受け入れられた方法にしたがって実施する。例えば、治療有効量は、はじめは細胞培養アッセイから推定可能である。投与量は化合物の比活性に依存し、ルーチン実験法により容易に決定可能である。用量は、毒性を最小化する一方で、細胞培養において決定されるようなＩＣ５０（即ち、症状の半最大阻害を達成する試験化合物の濃度）が含まれる、循環血漿濃度範囲を達成する動物モデルにおいて定式化することが可能である。こうした情報は、ヒトにおいて有用な用量をより正確に決定するために使用可能である。最終的には、担当医が、それぞれの個別患者を治療するのに用いる本発明のポリペプチドの量を決定するものである。最初、担当医は、本発明のポリペプチドの低用量を投与し、患者の応答を観察する。患者にとって最適な治療効果が得られるまで、本発明のポリペプチドのより高い用量を投与してよく、その時点で投与量はそれ以上増加されない。本発明の方法を実施するために使用される様々な療法組成物は、ｋｇ体重あたり、約０．０１ｎｇ〜約１００ｍｇ（好ましくは約０．１ｎｇ〜約１０ｍｇ、より好ましくは約０．１マイクログラム〜約１ｍｇ）の本発明のポリペプチドを含有すると考慮される。本発明の１つの態様において、本明細書に開示される様々な医学的障害を治療するために、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を週に１回投与し、別の態様において、週に少なくとも２回投与し、そして別の態様において、週に少なくとも３回投与する。注射するならば、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の成人用量での有効量は１〜２０ｍｇ／ｍ２の範囲であり、好ましくは、約５〜１２ｍｇ／ｍ２である。あるいは、均一量を投与してもよく、その量は５〜１００ｍｇ／用量の範囲に及ぶ場合がある。皮下注射により投与される均一量の代表的な用量範囲は、５〜２５ｍｇ／用量、２５〜５０ｍｇ／用量、および５０〜１００ｍｇ／用量である。本発明の１つの態様において、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を２５ｍｇ／用量で含有するか、またはあるいは、５０ｍｇ／用量で含有する、注射に許容される調製物を投与することによって、以下に記載される様々な適応症を治療する。２５ｍｇまたは５０ｍｇの用量は、特に慢性状態では、反復的に投与してよい。注射以外の投与の経路を使用する場合、用量は、標準的な医療行為にしたがって適正に調整する。多くの場合、約２５ｍｇ用量のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を少なくとも３週の期間にわたり週に１〜３回、または約５０ｍｇ用量のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９を少なくとも３週の期間にわたり週に１または２回注射することによって、患者の状態の改善が得られるだろうが、望ましい度合いの改善を誘導するにはより長い期間の治療が必要となる場合もある。治癒不能の慢性状態では、この治療方式を際限なく続けてもよく、そうしたことが患者の医師により必要とみなされた場合は、用量や頻度に対して調整がなされる。上記の用量は、１８歳以上の人である成人患者についての例である。小児患者（４〜１７歳）では、適切な治療方式は、週１回以上の皮下注射により投与される、０．４ｍｇ／ｋｇ、最大用量２５ｍｇまでのＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の皮下注射を伴う。ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストが抗体の型であるならば、好ましい用量範囲は０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであり、より好ましくは１〜１０ｍｇ／ｋｇである。用量範囲の別の態様は、０．７５〜７．５ｍｇ／ｋｇ体重である。ヒト化抗体、即ち、抗体分子の抗原結合部分だけが非ヒト供給源に由来する抗体が好ましい。こうした抗体は、静脈内で注射または投与することが可能である。
【０２２１】
ＩＩＩ．療法上の応用
ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０およびＯＸ４０アンタゴニストは、心臓血管疾患を治療するために使用可能である。本発明の態様には、１以上のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９の有効量を単独またはあらゆる組合せで投与することを含んでなる、心臓血管疾患を有する被検者において心臓血管疾患を治療する方法が含まれる。
【０２２２】
心臓血管疾患には、心臓および脈管系の病態生理を有する病態、並びに心臓および脈管系の病態により危険状態にある臓器および系が含まれる。例には、限定されないが、心筋炎、慢性自己免疫心筋炎、細菌性およびウイルス性心筋炎、並びに感染性心内膜炎のような心臓および／または脈管構造の炎症；心不全；鬱血性心不全；慢性心不全；心不全の悪液質；非虚血性（拡張性心筋症；突発性拡張性心筋症；心原性ショック、体外循環支援に続発する心不全（「ポンプ後症候群」）、虚血／再灌流損傷に続く心不全、脳死関連心不全（Ｏｗｅｎら，１９９９（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９９  Ｍａｙ  １８；９９（１９）２５６５−７０）に記載のような）；肥大性心筋症；拘束性心筋症；非虚血性全身高血圧；弁疾患；不整脈起因性右心室心筋症）および虚血性（じゅく腫形成；アテローム硬化症；動脈硬化症；末梢血管疾患；冠動脈疾患；卒中、一過性虚血発作および心筋梗塞が含まれる梗塞）が含まれる心筋症が網羅される。心臓血管疾患の定義に網羅される追加の病態には、動脈瘤；動脈炎；狭心症；塞栓症；血小板関連虚血障害；虚血／再灌流損傷；再狭窄；僧房弁および／または三尖弁逆流；僧房弁狭窄；無症候性心筋虚血；レイノー現象；血栓症；深在性静脈血栓症；肺塞栓症；血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）および溶血性尿毒症性症候群（ＨＵＳ）が含まれる血栓性微小血管症、本態性血小板血症、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、および、外来または損傷組織への曝露に関連した血栓症および凝固障害、表面血栓性静脈炎；川崎脈管炎が含まれる脈管炎；高安動脈炎；静脈閉塞性疾患、巨細胞動脈炎、ウェジナー肉芽腫症；シェーンライン−ヘノッホ紫斑病、並びに細菌のような１以上の口内病原体による歯周感染症より生じる心臓血管疾患が網羅される。
【０２２３】
１以上のＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの単独またはＣＤ３９との組合せの療法使用の追加例には、肺虚血、冠虚血および脳虚血が含まれる血小板関連の虚血障害に続く冠動脈疾患または損傷を罹患する個人の治療と、血栓症、血栓障害（冠動脈血栓症、脳動脈血栓症、心臓内血栓症、末梢動脈血栓症、静脈血栓症が含まれる）、血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）および溶血性尿毒症性症候群（ＨＵＳ）が含まれる血栓性微小血管症、本態性血小板血症、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、および、外来または損傷組織への曝露に関連した血栓症および凝固障害に続く再閉塞の予防が、血管形成術、頚動脈内膜切除術、血管移植片の吻合、および留置カテーテルまたはシャントのような慢性の心臓血管デバイスと組み合わせて含まれる。
【０２２４】
さらなる適応には、血管形成術（即ち、バルーン血管形成術、レーザー血管形成術、冠アテローマ切除術、および類似の技術）、頚動脈、冠動脈、末梢動脈や他の血管内ステントのような血管内補綴デバイス、透析アクセスデバイスの置換、または末梢血管疾患を治療する方法を受けているかまたは受ける予定の被検者；血栓形成の高いリスクがある手術（即ち、冠バイパス手術、人工弁または血管、などの挿入）を受けている個人が含まれる。
【０２２５】
さらに、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８は、心臓血管疾患および疾患重症度の予後指標である。ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８は、ドナー適合および移植後アウトカムの予後指標でもある。故に、本発明のさらなる態様には、心臓血管疾患、心臓血管疾患重症度、ドナー適合および移植後アウトカムをスクリーニングする被検者中のＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８レベルを測定するためのアッセイが含まれる。
【０２２６】
患者の疾病の程度を反映する様々な指標を、治療の量および時間が十分であるかどうかを決定するために評価することが可能である。選択される指標（群）のベースライン値を、単独または可溶性ＣＤ３９と組み合わせたＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの初回用量の投与に先立つ患者の検査により確定する。好ましくは、ベースライン検査は、初回用量を投与する約６０日以内に行う。
【０２２７】
単独または可溶性ＣＤ３９と組み合わせたＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストの用量を反復的に投与することによって改善が誘導され、そのとき患者は、選択される指標（群）についてベースラインを上回る改善を表出する。慢性状態を治療する場合、少なくとも１ヶ月以上、例えば１、２、または３ヶ月、またはそれより長いか、際限ない期間にわたり、この医薬品を反復的に投与することによってこの改善の度合い得られる。急性状態を治療するには、１〜６週の期間、または単回用量でさえしばしば十分である。
【０２２８】
患者の疾病の治療後の程度が１以上の指標により改善されたように見える場合でも、同一レベルでかまたは低減された用量または頻度で、治療を際限なく継続してもよい。治療は、いったん低減されるかまたは中止されても、症状が再び現れたならば、元のレベルで再開してよい。
【０２２９】
本発明の療法組成物は、単独で投与しても、治療有効量の他の薬物と組み合わせて投与してもよい。本発明には、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／またはＣＤ３９と組み合わせて同じ患者へ投与される１以上の他の薬物と同時に、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストを単独で、または可溶性ＣＤ３９と組み合わせて投与することが含まれ、各薬物は、その医薬品に適した治療方式にしたがって投与される。「同時投与」には、組合せの成分での同時または連続の治療、並びに薬物が交互に投与される方式、または一方の成分が長期間投与されて、他方が間欠的に投与される方式が含まれる。成分は、同じ組成物でも別個の組成物でも、そして同じ投与経路でも異なる投与経路でも投与可能である。
【０２３０】
単独または可溶性ＣＤ３９と組み合わせたＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストと組み合わせて使用可能である他の薬物または療法組成物の例には、鎮痛剤、疾患改善抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、およびあらゆる免疫および／または炎症変調剤が含まれる。非ステロイド性抗炎症薬には、限定されないが、サリチル酸（アスピリン）；イブプロフェン；インドメタシン；セレコキシブ；ロフェコキシブ；ケトロラク；ナンブメトン；ピロキシカム；ナプロキセン；オキサプロジン；スリンダク；ケトプロフェン；ジクロフェナク；他のＣＯＸ−１および／またはＣＯＸ−２阻害剤、サリチル酸誘導体、プロピオン酸誘導体、酢酸誘導体、フマル酸誘導体、カルボン酸誘導体、酪酸誘導体、オキシカム、ピラゾールおよびピラゾロンが含まれ、新たに開発される抗炎症薬が含まれる。
【０２３１】
本発明の療法組成物は、以下の１以上とともに投与可能である；エタネルセプト（ＥｎｂｒｅｌＴＭ）、ｓＴＮＦ−ＲＩ、オネルセプト、Ｄ２Ｅ７、およびＲｅｍｉｃａｄｅＴＭのようなＴＮＦアンタゴニストが含まれる、ＴＮＦ／ＴＮＦ受容体ファミリーの他のメンバーの変調剤；アナキンラのようなＩＬ−１ｒａ分子とＩＬ−１Ｈｙ１およびＩＬ−１Ｈｙ２のようなより最近発見されたＩＬ−ｒａ様分子が含まれるＩＬ−１阻害剤；米国特許第５，８４４，０９９号に記載されるようなＩＬ−１「トラップ」分子；ＩＬ−１抗体；可溶化ＩＬ−１受容体、など；ＩＬ−６阻害剤（例、ＩＬ−６への抗体）；ＩＬ−８阻害剤（例、ＩＬ−８への抗体）；インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）変調剤；インスリン様増殖因子（ＩＧＦ−１，ＩＧＦ−２）とその変調剤；トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β）、ＴＧＦ−βファミリーメンバー、およびＴＧＦ−β変調剤；線維芽細胞増殖因子ＦＧＦ−１〜ＦＧＦ−１０とＦＧＦ変調剤；ＣｅｒｅｂｒｅｘＴＭおよびＶｉｏｘｘＴＭのようなＣＯＸ−２阻害剤；プロスタグランジン類似体（例、Ｅ系列のプロスタグランジン）；マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）変調剤；誘導性ＮＯＳの変調剤が含まれる、一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）変調剤；グルココルチコイド受容体の変調剤；グルタメート受容体の変調剤；リポ多糖（ＬＰＳ）レベルの変調剤；腫瘍遺伝子（例、ｆｏｓ，ｊｕｎ）の阻害剤およびインターフェロンが含まれる、抗癌剤；ノルアドレナリンとその変調剤および模倣体。
【０２３２】
本発明の医薬組成物と同時に投与可能である組成物の追加の態様は、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｆｌｔ３−リガンド、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＦＮ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、トロンボポエチン、幹細胞因子、およびエリスロポエチンのようなサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子、またはこれら因子のいずれかの阻害剤またはアンタゴニストである。本医薬組成物は、ポリペプチドの活性を高めるか、または治療におけるその活性または使用を補填する他の薬剤もさらに含有してよい。そうした追加の因子および／または薬剤は、本発明のポリペプチドとの相乗効果をもたらすか、または副作用を最小化するために医薬組成物に含めてよい。逆に、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／または可溶性ＣＤ３９は、特別なサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化するために、そのサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の製剤に含めてよい。
【０２３３】
同時に投与することができる薬物のさらなる態様には、限定されないが、抗ウイルス薬、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド、炎症性サイトカインのアンタゴニスト、非ステロイド性抗炎症薬、ペントキシフィリン、サリドマイド、およびアザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、硫酸ヒドロキシクロロキン、メトトレキセート、レフルノミド、ミノサイクリン、ペニシラミン、スルファサラジンのような疾患改善抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、および経口金、チオマレイン酸金ナトリウム、およびオーロチオグルコースのような金化合物が含まれる。
【０２３４】
当然ながら、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストおよび／または可溶性ＣＤ３９、並びに上記に記載の他の療法組成物は、心臓および脈管構造が関与する外科的処置（冠バイパス、心臓移植、弁置換術、血管形成術、ステント導入、アテローマ切除法、大動脈瘤修復、弁ヒダ形成、心室補助デバイス挿入、心室量減少手術、バイパス、血管の再管腔形成または再構築が含まれるあらゆる形式の末梢動脈手術、先天性複雑病巣の修復および矯正が含まれる小児心臓血管外科手術）；脂質低下薬（限定されないが、リピトール、シンバスタチン、プラバスタチン、アトルバスタチン、非ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤のような）；血圧調節薬（限定されないが、カルシウムチャネルアンタゴニスト、ＡＣＥ阻害剤、β−ブロッカー、ＧＴＮのような経口および全身で利用可能な一酸化窒素ドナーが含まれる）；アンジオテンシン変換酵素阻害剤、およびペルオキシソーム増殖因子活性化受容体リガンドのような、他の認知された療法または治療と組み合わせて投与可能である。
【０２３５】
本発明の他の態様において、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストは、化学療法剤の心毒性を予防、抑制、および／または寛解するために使用可能である。薬物毒性は、治癒量の癌化学療法剤の送達にとって依然として重大な障壁である。多くの化学療法薬は、心筋組織の損傷またはリズム障害の形式で急性的に、または鬱血性心不全に関連した慢性の形式のいずれかで心臓への直接の損傷を引き起こす。急性心毒性の例には、ＳＴ−Ｔセグメント変化、電圧減少、Ｔ波平坦化のような、ＥＣＧ変化に関連し得る上室性頻拍性不整脈、並びに心房および心室の転位症が含まれる。急性効果は、ボーラスのドキソルビシンを受けている患者の４０％以内で起こり、通常一過性である。慢性のアントラサイクリン心毒性は、不整脈、心筋炎、心膜炎、心筋梗塞および心筋症として発露される場合があり、これは用量およびスケジュール依存性である。５５０ｍｇ／ｍ２の累積ボーラス用量を超えると、鬱血性心不全のリスクが急速に増加する。４５０ｍｇ／ｍ２未満の用量では、１０％未満のリスクに留まる。アントラサイクリンを服用している患者は、ドキソルビシンへの曝露から５年以後に起こる、後期出現性の心毒性を示すこともある。心機能不全は、鬱血性心不全またはリズム障害として発露され、かつて無症候性だった患者に起こる場合がある。ドキソルビシンへの曝露後１０年生存する患者のおよそ５％がこの毒性を経験すると推定されている（Ｐａｇｅ，Ｒ．「癌の管理：学際的アプローチ（Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ：Ａ  Ｍｕｌｔｉｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）」，ＰＲＲ社、第５版（２００１）を参照のこと）。
【０２３６】
強心剤の中で主要であるのは、アントラサイクリンクラスの細胞増殖抑制性抗生物質である。このアントラサイクリンのクラスには、限定されないが、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ダウノルビシン、エレンス（エピルビシン）、イダルビシン、ミトザントロン、などが含まれる。故に、本発明の態様は、有効量の４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストを投与することを含んでなる、アントラサイクリンの心毒性効果を予防、抑制および／または寛解する方法を提供する。本発明の態様はまた、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを含んでなる、アントラサイクリンの心毒性効果を予防、抑制および／または寛解するための組成物を提供する。
【０２３７】
本発明の態様は、有効量の４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストを投与することを含んでなる、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ダウノルビシン、エレンス（エピルビシン）、イダルビシンおよびミトザントロンからなる群より選択されるアントラサイクリンの心毒性効果を予防、抑制および／または寛解する方法を提供する。本発明の態様はまた、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを含んでなる、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ダウノルビシン、エレンス（エピルビシン）、イダルビシンおよびミトザントロンからなる群より選択されるアントラサイクリンの心毒性効果を予防、抑制および／または寛解するための組成物を提供する。
【０２３８】
４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストは、限定されないが、アムサクリン、ブスルファン、シスプラチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（および、他のＨｅｒ２／ｎｅｕ標的指向モダリティ）、イホスファミド、インターフェロン、インターロイキン−２、マイトマイシン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびＸｅｌｏｄａ（カペシタビン）のような心毒性を有する他の化学療法剤の心毒性効果を予防、抑制および／または寛解するために使用可能である。
【０２３９】
故に、本発明の態様は、有効量の４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストを投与することを含んでなる、心毒性の副作用を有する化学療法剤の心毒性効果を予防、抑制および／または寛解する方法を提供する。本発明の態様はまた、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを含んでなる、心毒性の副作用を有する化学療法剤の心毒性効果を予防、抑制および／または寛解するための組成物を提供する。
【０２４０】
本発明の態様は、有効量の４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストを投与することを含んでなる、アムサクリン、ブスルファン、シスプラチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（および、他のＨｅｒ２／ｎｅｕ標的指向モダリティ）、イホスファミド、インターフェロン、インターロイキン−２、マイトマイシン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびＸｅｌｏｄａ（カペシタビン）からなる群より選択される化学療法剤の心毒性効果を予防、抑制および／または寛解する方法を提供する。本発明の態様はまた、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを含んでなる、アムサクリン、ブスルファン、シスプラチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（および、他のＨｅｒ２／ｎｅｕ標的指向モダリティ）、イホスファミド、インターフェロン、インターロイキン−２、マイトマイシン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびＸｅｌｏｄａ（カペシタビン）からなる群より選択される化学療法剤の心毒性効果を予防、抑制および／または寛解するための組成物を提供する。
【０２４１】
本発明の態様は、癌を治療する方法をその必要な被検者に提供し、ここで、心毒性を有する化学療法剤の投与量は、癌をより有効に治療するまで増加されるが、化学療法剤の心毒性効果は、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを投与することによって、予防、抑制および／または寛解される。本発明の態様は、癌を治療する方法をその必要な被検者に提供し、ここで、アントラサイクリンの投与量は、癌をより有効に治療するまで増加されるが、アントラサイクリンの心毒性効果は、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを投与することによって、予防、抑制および／または寛解される。本発明の態様は、癌を治療する方法をその必要な被検者に提供し、ここで、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ダウノルビシン、エレンス（エピルビシン）、イダルビシンおよびミトザントロンからなる群より選択されるアントラサイクリンの投与量は、癌をより有効に治療するまで増加されるが、このアントラサイクリンの心毒性効果は、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを投与することによって、予防、抑制および／または寛解される。本発明の態様は、癌を治療する方法をその必要な被検者に提供し、ここで、アムサクリン、ブスルファン、シスプラチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（および、他のＨｅｒ２／ｎｅｕ標的指向モダリティ）、イホスファミド、インターフェロン、インターロイキン−２、マイトマイシン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびＸｅｌｏｄａ（カペシタビン）からなる群より選択される化学療法剤の投与量は、癌をより有効に治療するまで増加されるが、この化学療法剤の心毒性効果は、４−１ＢＢアンタゴニスト、ＣＤ３０アンタゴニストおよび／またはＯＸ４０アンタゴニストからなる群より選択されるアンタゴニストを投与することによって、予防、抑制および／または寛解される。
【０２４２】
本発明は、本発明の個々の側面の単なる例示として企図される、本明細書に記載の特定の態様により範囲を限定されず、機能的に同等な方法および成分は、本発明の範囲内にある。実際、本発明の様々な修飾は、本明細書に示して記載されるものに加えて、先の記載と付帯の図面より当業者に明らかになろう。そのような修飾も付帯の特許請求項の範囲内に含まれると企図される。
【０２４３】
本発明について記載してきたが、以下の実施例を、限定ではなく、例示のために提供する。
配列同定番号と関連分子
【０２４４】
【表２】
2006508056.tif 000003
【実施例】
【０２４５】
実施例１
ＩＬ−１７およびＩＬ−１８の血漿レベルは、心筋症患者において上昇している
これまでの試験は、様々な型および重症度の心臓血管疾患を有するヒト患者においてＩＬ−１７およびＩＬ−１８が上昇していることを証明する。
【０２４６】
一連の試験において、急性および慢性の心不全を有する患者においてＩＬ−１７およびＩＬ−１８の血漿レベルが上昇していることが見出された。脳死臓器ドナーからの血漿を心臓除去のときに入手して、保存した。様々な臓器を受けたレシピエントの臨床アウトカムに注目した。生存して経過が良好であったレシピエントの群を、最高の医学的サポートに対しても抵抗性である心不全により移植後７２時間以内に死亡した群とともに採取した。元のドナー、レシピエント、および３０％未満の駆出率（ＥＦ）を有する非使用ドナーからの血漿について、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８をアッセイした。市販のＥＬＩＳＡキットに提供されるプロトコルの記載とほとんど同じやり方で血漿試料中のサイトカインレベルを測定した（例えば、ヒトＩＬ−１７とヒトＩＬ−１８の定量決定のアッセイを提供する、ＱＵＡＮＴＫＩＮＥ（登録商標）Ｒ＆Ｄシステムズ、ミネソタ州ミネアポリスを参照のこと）
図１Ａおよび１Ｂに示すように、移植後まもなく死亡した患者では、生存した患者と対照的に、ＩＬ−１７とＩＬ−１８が上昇していた。ＩＬ−１７とＩＬ−１８は、３０％未満の駆出率（ＥＦ）を有する非使用ドナーにおいても上昇していて、循環ＩＬ−１７およびＩＬ−１８のレベルと疾患重症度の間の相関性を示唆した。さらに、この試験は、心臓患者においてＩＬ−１７およびＩＬ−１８のサイトカインレベルをアッセイすることの、移植後生存の評価といった診断および予後上の価値を示す。
【０２４７】
上記の試料を使用して、ＩＬ−１８受容体の発現を評価した。心臓の試料を氷冷した溶解緩衝液（ニューイングランド・バイオラブズ、マサチューセッツ州ベヴェリー）にホモジェナイズした。このホモジェネートを４℃（１２０００ｘ５分）で遠心分離して、上清についてタンパク含量をアッセイした（ピアスＢＣＡキット）。同じ全体量のタンパク質（２０ｍｇ／レーン）を、５％ゲルを使用するＳＤＳ−ＰＡＧＥへ処した。次いで、タンパク質をニトロセルロース膜へ移し、ＩＬ−１８Ｒαに抗して産生したポリクローナル抗体（ＡＦ８４０−Ｒ＆Ｄシステムズ、ミネソタ州ミネアポリス）とＥＣＬキットを使用してＩＬ−１８受容体を視覚化した。
【０２４８】
図２に示すように、ＩＬ−１８受容体の相対量は、終末期心不全−ＥＳＦ（即ち、ＮＹＨＡのステージ４心筋症）の患者と６０％より高い駆出率を有する患者に比較して、３０％未満の駆出率（ＥＦ）を有する患者においてより高い。上記のデータは、ＩＬ−１８受容体発現の上昇が心筋機能の損傷と関連していることを証明する。ＩＬ−１８がＴｏｌ１−ＩＬ−１受容体経路（ＴＩＲ）を介してシグナルを伝達し、リポ多糖とＩＬ−１の両方が負変力性であると仮定すれば、上記の患者に見られる心筋機能不全の一部がＩＬ−１８受容体の上昇発現で説明できる。
【０２４９】
多施設「ルネサンス・トライアル」に参画した心臓患者からの試料を評価した。この患者は、ニューヨーク心臓学会の判定委員会（「心臓および大血管の疾患の命名法と診断基準」第９版、マサチューセッツ州ボストン、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ  ＆  ｃｏ；１９９４：２５３−２５６）により分類される、連続した機能キャパシティと心臓血管疾患の客観証拠を明示した。上記のアッセイを使用して、試料についてサイトカインレベルを評価した。
【０２５０】
図３Ａ〜３Ｄは、ＮＹＨＡクラス１、２、３ａ、３ｂおよび４と診断された心筋症患者におけるＩＬ−１７およびＩＬ−１８の血漿濃度（ｐｇ／ｍｌ）を図示する。このデータは、ＮＹＨＡクラス２、３ａおよび３ｂにおいて循環ＩＬ−１７の量が劇的かつ予想外に増加していることを示す（図１Ａ）。上昇ＩＬ−１７レベルは、同じクラスの非虚血および虚血の両方の心筋症で見出された（図１Ｂ）。ＩＬ−１７レベルは、虚血心筋症のＮＹＨＡクラス３ａにおいて有意により高かった。有意にも、このデータは、ＩＬ−１７レベルとＮＹＨＡクラス３ｂまでの疾患の進行とＮＹＨＡクラス４におけるＩＬ−１７の減少との間の直接的な相関性を示す。
【０２５１】
ＩＬ−１８の血漿レベルも、ＮＹＨＡクラス２、３ａ、３ｂおよび４で上昇していた（図３Ｃ）。ＩＬ−１７と同様に、このデータは、ＩＬ−１８レベルとＮＹＨＡクラス３ｂまでの疾患の進行とＮＹＨＡクラス４におけるＩＬ−１８の減少との間の直接的な相関性を示す（図３Ｃ）。非虚血および虚血の心筋症へ細分すると、ＩＬ−１８レベルは、同じＮＹＨＡクラスの非虚血および虚血の両方の心筋症で上昇していた（図３Ｄ）。ＮＹＨＡクラス２、３ａおよび３ｂでは、非虚血心筋症患者が比較的高いレベルのＩＬ−１８を有した。
【０２５２】
上記のデータは、ＩＬ−１７血漿レベルが心臓血管疾患および疾患重症度の予後指標として使用可能であることを証明する。理論に束縛されなければ、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８の相対的な発現により、心筋症が非虚血性か虚血性かを診断できるかもしれない（図３Ｂおよび３Ｄを比較されたい）。故に、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８の循環レベルを検出するアッセイは、心臓血管疾患を診断して疾患重症度を定量的に評価するために使用可能である。総合すると、上記のデータは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８が心臓血管疾患に関連していることを示し、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８アンタゴニストを単独または組み合わせて投与することによって心臓血管疾患を治療することの根拠を提供する。
【０２５３】
実施例２
心臓移植レシピエントのサイトカインプロフィール
この試験は、特に、移植後７２時間以内に死亡した心臓移植レシピエントにおいて、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８および可溶性４−１ＢＢが上昇していることを示す。このデータは、有意に上昇したレベルのＩＬ−１７、ＩＬ−１８および可溶性４−１ＢＢと心筋機能不全が関連していることを示す。
【０２５４】
心臓移植は、終末期心不全の患者にとって依然として重要な治療モダリティであるが、ドナー臓器の数によりその利用可能性は著しく制限されている。この状況は，臓器ドナーのほぼ２０％が脳死に関連した重篤な急性の心筋機能不全を有するので、その心臓を移植に使用することができないという事実によりさらに悪化している（Ｈｏｓｅｎｐｕｄ  ＪＤら，Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２００１，２０（８）：８０５−１１）。脳死は、免疫系の顕著な活性化とＴＮＦαおよびＩＬ６のようなサイトカインの上昇した血漿レベルに関連した破滅的なイベントである（Ｔａｋａｄａ，Ｍら，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  １９９８，６５（１２）：１５３３−４２とＢｉｒｋｓ，ＥＪら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．２００１；３３（５）：２７４９−５１）。サイトカインは、ヘルパーＴ１（Ｔｈ１）およびＴｈ２のＴ細胞応答の必須調節因子である（Ｎｅｕｒａｔｈ，ＭＦら，Ｎａｔ  Ｍｅｄ．２００２，８（６）：５６７−７３）。Ｔｈ１応答は、マクロファージ活性化を特徴とする好炎症性サイトカインの放出をもたらし、そして妨害されなければ、組織障害をもたらす場合がある。Ｔｈ２応答は、概してＴｈ１応答を妨害する体液性の免疫応答をもたらす。
【０２５５】
我々は、心臓移植後早期の死が、例えば、急性の拒絶エピソードを始動させ、最終的には心筋機能不全をもたらすことによって、直接的または間接的に心臓機能に影響を及ぼすドナー由来の因子によるのではないかと仮定した。この仮説を検証するために、我々は、心臓移植ドナーの２つの群より血漿を入手した（上記の記載のように）。Ａ群は、レシピエントが平穏無事な術後経過をたどり、１年より長く生存した１６の臓器ドナー由来の試料を含んだ。Ｂ群の試料は、最高の医学療法にも抵抗性である心筋機能不全により移植後７２時間以内にレシピエントが死亡した１４のドナーより入手した。Ｔｈ１（好炎症性）サイトカインのインターフェロンγ（ＩＦＮγ）、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８とともに、Ｔｈ２（抗炎症性）サイトカインのＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３の循環レベルを測定した。サイトカインレベルは、ＬＵＮＩＭＥＸ（登録商標）技術（アップステート、マサチューセッツ州ウォルサム）、ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄシステムズ）または可溶性４−１ＢＢ用のカスタムメイドＥＬＩＳＡ（やはりＲ＆Ｄシステムズからの捕捉および検出抗体を使用する）を使用して決定した。対照群は、ルーチンの冠動脈バイパス移植片手術を受けた、超音波心臓動態検査では正常な心筋機能を有する２１名の健常患者からなった。Ｔｈ２サイトカインの合計をＴｈ１サイトカインの合計（いずれもｐｇ／ｍｌ）で割ることによって循環Ｔｈ２／Ｔｈ１比を得た。さらに、抗原提示細胞とＴ細胞の相互作用の潜在的なマーカーとして、我々は、可溶性受容体４−１ＢＢのレベルも測定した。４−１ＢＢは、活性化Ｔ細胞上に存在し、４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢ−Ｌ）は、抗原提示細胞上に存在し、４−１ＢＢ−Ｌによる４−１ＢＢの動員（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）は、副刺激シグナルとして作用する（Ｋｗｏｎ，Ｂ．ら，Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌｓ．２０００；１０（２）：１１９−２６）。Ａ群およびＢ群の炎症性メディエーターレベルを２１名の非脳死対照被検者のそれと比較した。
【０２５６】
図９は、４−１ＢＢレベルが、正常被検者に比較して心不全の患者において有意に上昇していたことを示し、慢性関節リウマチ患者と共通して、ヒト心不全におけるこの系の活性化を示唆する（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８  Ｊａｎ；２８（１）：２９０−５）。
【０２５７】
表２に示すように、レシピエントが移植後に平穏無事なアウトカムを有した脳死臓器ドナーからの血漿試料（Ａ群）は、対照被検者に比較して、有意に上昇したレベルのＴｈ２サイトカイン、ＩＬ−４、１０および１３と、並びにＴｈ１サイトカイン、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２、１７および１８を含有した。しかしながら、全体的には、前者は０．３２の循環Ｔｈ２／Ｔｈ１比を維持し、これは対照被検者に見られた０．４５と有意に異なってはいなかった。レシピエントが移植後７２時間以内に死亡したＢ群では、Ｔｈ２サイトカイン、ＩＬ−４および１３は対照レベルから変化せず、ＩＬ−１０は対照被検者に比較して上昇していたが、Ａ群試料に比較すると有意に低下していた。ＩＦＮγは対照試料に比較して上昇していて、ＩＬ−１２は不変であった。しかしながら、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８のレベルの顕著な上昇が確認され、Ｔｈ２／Ｔｈ１比の０．０２８への低下をもたらした（Ｐ＜０．０５）。可溶性４−１ＢＢレベルは対照とＡ群の患者で同様であったが、Ｂ群患者の血漿では有意に上昇したレベルが見出された（図４を参照のこと）。
【０２５８】
上記のデータから、移植後早期のレシピエント死に関連するドナーの血漿における、循環サイトカインバランスの好炎症（Ｔｈ１）環境へ向かう変化が確認される。これは、主として、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８のレベルの上昇によるものである。ＩＬ−１８は、ＩＬ−１およびリポ多糖と同じシグナル伝達経路を利用する（Ｓｉｍｓ，ＪＥ，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；１４（１）：１１７−２２）が、これらはいずれも負変力性である。ＩＬ−１７は、多様な細胞からの一酸化窒素産生を誘発し、多様な細胞種からのいくつかのサイトカインおよびプロスタグランジンの産生も刺激する。特に、Ｂ群患者に見られたＩＬ−１７およびＩＬ−１８の上昇レベルは、移植後早期の不都合なレシピエントアウトカムに十分貢献する可能性がある。Ｂ群のドナーの血漿試料では、可溶性４−１ＢＢの有意に上昇したレベルも観察され、これらの患者では、亢進した抗原提示細胞：Ｔ細胞の相互作用が起こり得ることを示唆した。
【０２５９】
ドナーサイトカインの発現とＩＬ−１７、ＩＬ−１８および４−１ＢＢのような分子のレベルの分析は、移植後に集中的な支持療法が必要となり得るか、または本当は移植に使用すべきではないドナーからの心臓を同定するのに貴重である。上記のデータは、脳死における免疫活性化の重要性、移植後アウトカムに対するその潜在的な影響と、ドナーサイトカインバランスを改変させることを目的とした療法には改善されたレシピエントアウトカムをもたらす可能性があるという着想を明確にする。上記の結果は、上昇した４−１ＢＢ、並びにＩＬ−１７およびＩＬ−１８のような他のサイトカインが移植直後のレシピエントにおける拒絶へ心臓を準備させること、またはこれらの４−１ＢＢ、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８が心筋機能の損傷に直接仲介する可能性があることを示唆する。したがって、本明細書に提示する試験は、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８および４−１ＢＢが心臓血管疾患に関与している可能性があることを証明し、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８および／または４−１ＢＢアンタゴニストを単独または組み合わせて投与することによって心臓血管疾患を治療することの根拠を提供する。
【０２６０】
【表３】
2006508056.tif 000004
【０２６１】
実施例３
ＩＬ−１７レベルと心室の寸法
これらの試験は、ＩＬ−１７への曝露が左心室の寸法の低下をもたらすことを証明する。
【０２６２】
雌性Ｃ５７／Ｂｌａｃｋ６マウスをアベルチンで麻酔した。中線開腹術を実施して、下大静脈へカニューレを挿入した。次いで、ベースラインの心エコー図測定を実施した。次いで、ヒトＩＬ−１７（２００ｎｇ）を２００ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．４）のボーラスで投与した。指定の時点で心エコー図測定を繰り返し、左心室の内径を拡張期と収縮期で定量した。
【０２６３】
図４に示すように、これらのデータは、ＩＬ−１７が、急激な投与に続き、持続した駆出率を伴う心室寸法の減衰をもたらすことを証明する。拡張期寸法の低下は、ＩＬ−１７が拡張期機能不全に仲介するのにある役割を担うことを示唆するかもしれないが、それは収縮期心不全にも関与しているかもしれない。このデータは、ＩＬ−１７が心臓血管疾患に関与している可能性があることを示唆し、ＩＬ−１７アンタゴニストを投与することによって心臓血管疾患を治療することの根拠を提供する。
【０２６４】
実施例４
ＩＬ−１７およびＩＬ−１８のレベルは、マウスのミオシン誘発性心筋炎モデルにおいて上昇している
この試験は、ヒトに見られるのと同様の疾患経過を示す、実験自己免疫心筋炎（ＥＡＭ）モデルにおいてＩＬ−１７およびＩＬ−１８が上昇していることを示す。用語「ＥＡＭ」および「心臓ミオシン誘発性心筋炎」は、同様のモデルを記載するために交換可能的に使用する。
【０２６５】
当該技術分野では、心臓ミオシンが主要な自己抗原である自己免疫プロセスに心筋炎が関連していることがよく知られている。心臓ミオシン誘発性心筋炎は、組織学的にはウイルス誘発性心筋炎に似ている。心筋炎のような炎症性の心臓疾患には抗体とＴ細胞の両方が関連している可能性があると概ね合意されている。ヒトのこの疾患を模倣する実験自己免疫心筋炎モデルが多様な齧歯動物モデルにおいて開発されて、当該技術分野においてよく知られている（例えば、Ａ／Ｊマウスでは：Ｎｅｕ，Ｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８７，１３９：３６３０−３６３６とＳｍｉｔｈ，ＳＣ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１，１４７：２１４１−２１４７；ＢＡＬＢ／ｃマウスでは：Ｐｕｍｍａｒｅｒ，ＣＬ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６，９７：２０５７−２０６２とＬｉａｏ，Ｌ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１９９３，９２：２８７７−２８８２；および、Ｌｅｗｉｓラットでは：Ｋｏｄａｍａ，Ｍ，ら，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈ．１９９１，５７：２５０−２６２とＷｅｇｍａｎｎ，ＫＷ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４，１５３：８９２−９００を参照のこと）。
【０２６６】
Ａ／ＪマウスＥＡＭモデルにおいては、抗ＩＬ−４モノクローナル抗体でＩＬ−４を遮断することが、免疫応答をＴｈ２様応答からＴｈ１様応答へシフトさせることによってＥＡＭの重篤性を低下させて、ＩＦＮ−γ産生の同時増加を伴うことが示され、このことは、ＩＦＮ−γがこの疾患を制限することを示唆した。ＩＦＮ−γの遮断が疾患を増悪させることが示され、それによって、ＥＡＭモデルにＩＦＮ−γノックアウト（ＩＦＮ−γ−／−）を使用することの基礎が確立された（Ａｆａｎａｓｙｅｖａ，Ｍ，ら，Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００１，１５９：１９３−２０３）。
【０２６７】
ＢＡＬＢ／ｃとＩＦＮ−γ−／−ノックアウトマウスを、２００μｇのα−ミオシン重鎖＋ＭＴＢ（結核菌は１ｍｌ  Ｈ３７Ｒａにつき５ｍｇで含めた；ディフコ／ベクトンディキンソン、ニュージャージー州フランクリンレイクス）と５００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔバイオロジカル・ラボラトリーズ、カリフォルニア州キャンベル）を４００μｌの容量中で腹腔内に投与して、免疫化した。インターフェロンγ欠損マウスは、ジャクソンラボラトリーズ（メイン州バーハーバー）より入手した。ＢＡＬＢ／ｃとＩＦＮ−γ−／−を、百日咳毒素のない完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中に製剤化したミオシンでの免疫化により、７日目に追加免疫した。３５、５５または８５日目に動物を犠牲にし、以下の分析を実施した：組織学、抗ミオシン抗体力価、血清サイトカインプロフィールおよび抗原特異的Ｔ細胞増殖アッセイ。数匹の動物で超音波心臓動態診断を行った。
【０２６８】
α−ミオシン重鎖で免疫したＢＡＬＢ／ｃおよびＩＦＮ−γ−／−マウスは、標準ＥＬＩＳＡ技術により測定されるように、ミオシンペプチドに対する抗体を発現した。ミオシン免疫化ＢＡＬＢ／ｃおよびＩＦＮ−γ−／−マウスは心筋病変を発症したが、ノックアウトマウスは、陰性対照およびＢＡＬＢ／ｃマウスに比較して、病変数および重症度の増加を示した。さらに、ＩＦＮ−γノックアウトマウスは、陰性対照およびＢＡＬＢ／ｃマウスに比較して、より大きな度合いの心筋炎症および線維症、並びに心臓／体重比のより大きなパーセント増加を示した。ミオシン免疫化ＩＦＮ−γノックアウトおよびＢＡＬＢ／ｃのマウスでは、標準チミジン取込みアッセイにより測定されるように、ミオシン特異的Ｔ細胞増殖応答が示された。
【０２６９】
さらに、心臓ミオシン誘発心筋炎モデルでは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８の血漿レベルが上昇していた。実施例１に記載のような市販のＥＬＩＳＡキットを使用して、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８をアッセイした。図５Ａに示すように、ＩＦＮ−γ−／−マウスでは、免疫化から２８および３５日目にＩＬ−１７のレベルが顕著に増加していた。ＩＬ−１８の血漿レベルは、免疫化から９日目に急激に上昇し、２８日目まで上昇したままであった（図５Ｂ）。このデータは、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８の循環血漿レベルがミオシン誘発モデルにおいて上昇することと、ＩＬ−１７およびＩＬ−１８が心筋炎の免疫病理に関連していることを明らかに示す。このデータは、ＩＬ−１７および／またはＩＬ−１８アンタゴニストを単独または組み合わせて投与することによって心臓血管疾患を治療することの根拠を提供する。
【０２７０】
実施例５
ミオシン誘発心筋炎モデルのＴ細胞におけるＩＬ−１７発現
これらの実験は、ＥＡＭマウスより単離されるＴ細胞集団においてＩＬ−１７が高いレベルで発現されていることを証明する。ＥＡＭモデルの詳細は、先の実施例に提供する。
【０２７１】
標準技術を使用してＥＡＭマウスよりＴ細胞を単離し、抗ＣＤ３抗体で刺激した。図６Ａに示すように、心臓ミオシンで免疫化され、組織学的に証明された心臓病理を有する動物（動物Ｂ）は、陰性対照（動物ＣおよびＤ）、並びに心臓ミオシンで免疫化されたが心臓病理の徴候は明示しない動物（動物Ａ）に比較して、ＩＬ−１７の有意により高い発現レベルを有した。
【０２７２】
ＥＡＭマウスにおけるＩＬ−１７発現は、ミオシン特異的なＴ細胞応答であることが示された。平均すると、ＩＬ−１７レベルは、心臓ミオシンで免疫化した動物より単離してミオシンを与えた抗原提示細胞へ曝露したＴ細胞では、ミオシンへ曝露していない抗原提示細胞に比較して、ほぼ２５倍高かった（図６Ｂ）。
【０２７３】
関連した試験において、抗原提示細胞を、α−ミオシンタンパク質全体を与えるのではなく、α−ミオシンペプチドへ曝露した。先の試験と同じように、心臓ミオシンで免疫化して、心臓病理の組織学的証拠を有する動物（動物Ｂ）からのＴ細胞は、ペプチドをパルスされた抗原提示細胞による抗原特異的な刺激へ応答して、驚くほど高いレベルのＩＬ−１７を放出した（図６Ｃ）。理論に束縛されなければ、この試験は、活性化（おそらくはＣＤ４＋）Ｔ細胞が、心臓抗原を担う抗原提示細胞に遭遇すると、増殖してＩＬ−１７を放出することを示唆する。放出されたＩＬ−１７は、炎症細胞の心臓への浸潤、直接的な心筋損傷へ貢献する可能性があるか、または心臓機能に対する直接的な抑圧効果を及ぼす可能性がある。
【０２７４】
実施例６
急性冠症候群患者におけるＩＬ−１８およびＩＬ−１８結合タンパク質の血漿レベル
上記の試験は、急性冠症候群を有する患者においてＩＬ−１８が上昇していることと、主要不都合心臓イベント（ＭＡＣＥ）のリスク増加とＩＬ−１８が相関することを示す。
【０２７５】
患者を３つの患者群：安定型冠動脈疾患（ＣＡＤ）、心臓トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）血漿レベルが０．４ｎｇ／ｍｌ未満の急性冠症候群（ＡＣＳ）、または心臓トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）血漿レベルが０．４ｎｇ／ｍｌより高い急性冠症候群（ＡＣＳ）へ層別した。ＣＡＤ群には、安定型狭心症を有する患者が含まれ、ＡＣＳ群には、不安定型狭心症、非ＳＴ上昇心筋梗塞、ＳＴ上昇心筋梗塞および突然虚血死を有する患者が含まれた。
【０２７６】
心臓トロポニンＩは、虚血より生じる心筋壊死のような心筋損傷の診断の信頼し得る生化学マーカーとして認知されている。上昇した心臓トロポニンＩは、短期および長期の不都合な心臓イベントの高リスクプロフィールと強く関連している。心臓トロポニンＩの相対レベルを測定することは、急性冠症候群患者のリスクおよびアウトカム予測の信頼し得る層別化を提供する。この試験において、０．４ｎｇ／ｍｌより高い心臓トロポニンＩレベルを有する患者は、重篤で不都合な心臓イベントを蒙り、しばしば、１０日以内の死を生じた。
【０２７７】
市販のＥＬＩＳＡキットに提供されるプロトコル（例えば、ヒトＩＬ−１８の定量決定のアッセイを提供する、ＱＵＡＮＴＫＩＮＥ（登録商標）Ｒ＆Ｄシステムズ、ミネソタ州ミネアポリスを参照のこと）にほとんど記載のようにして、３群のそれぞれからの患者由来の血漿試料においてサイトカインレベルを測定した。ＩＬ−１８結合タンパク質Ａ（ＩＬ−１８Ｂｐａ）は、Ｒ＆Ｄからの市販の抗体を使用して測定した。捕捉抗体でプレートをコートした。次いで、試料をウェルへ加え、室温で２時間インキュベートした。次いで、ウェルを洗浄し、ビオチニル化検出抗体とともにインキュベートし、標準技術と色素原としてのＴＭＢを使用して、免疫反応を検出した。自社で産生したＩＬ−１８結合タンパク質を標準品として使用した。
【０２７８】
図８Ａに示すように、ＩＬ−１８の血漿レベルは、０．４ｎｇ／ｍｌ未満のｃＴｎＩレベルを有するＡＣＳ群において上昇し、そしてより有意には、ＩＬ−１８レベルは、０．４ｎｇ／ｍｌより高いｃＴｎＩレベルを有するＡＣＳ群の患者において一層高かった。図８Ｂは、３群間のＩＬ−１８：ＩＬ−１８ＢＰａ比を示し、ＩＬ−１８結合タンパク質レベルがいずれのＡＣＳ群でも上昇していないことを例示し、そのことは、上昇したＩＬ−１８レベルがこの免疫機構によって抵抗されないことを証明する。
【０２７９】
上記のデータは、後続の主要不都合心臓イベントの高リスク状態にあるＡＣＳ患者においてＩＬ−１８の循環レベルが上昇していることと、ＩＬ−１８結合タンパク質レベルがこの免疫応答に対処するために同時に上昇しないことを示す。このように、ＩＬ−１８は心臓血管疾患に関与している可能性があり、ＩＬ−１８アンタゴニストを単独で、または本明細書に記載の他のアンタゴニストと組み合わせて投与することによって心臓血管疾患を治療することの根拠を提供する。
【０２８０】
さらに、上昇ＩＬ−１８レベルは、上昇ｃＴｎレベルと疾患進行または疾患重症度と相関する。故に、ＩＬ−１８は、重篤で不都合な心臓イベントの増加リスクについての代替マーカーとしても役立つかもしれない。本発明の態様には、疾患の進行または重症度を評価する目的で、心臓血管疾患を有する患者のＩＬ−１８のレベルを決定するための診断アッセイが含まれる。
【０２８１】
実施例７
４−１ＢＢノックアウトマウスは、拡張性心筋症のＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発マウスモデルにおいて保護される
上記の実験は、４−１ＢＢ−Ｌノックアウトマウス（４−１ＢＢ−Ｌ−／−または４−１ＢＢ−Ｌ  ＫＯ）が拡張性心筋症のＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発マウスモデルにおいて死亡を示さず、心臓機能不全の発症が遅延したことを証明する。
【０２８２】
Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（塩酸ドキソルビシン、アントラサイクリン抗生物質、ファルマシア、ミラノ、イタリア）は、鬱血性心不全をもたらす心筋毒性、即ち虚血性または拡張性の心筋症を明示することが示されている。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）を使用してこの数年にわたり多くの動物モデルが開発されて、当該技術分野においてよく知られている。
【０２８３】
この試験には雄性４−１ＢＢ−Ｌ−／−（５３日齢）およびＣ５７Ｂ１／６（５９日齢、Ｔａｃｏｎｉｃ，ニューヨーク州ジャーマンタウン）を使用した。１００〜１５０μｌのケタミン−キシラジンでマウスを麻酔して、体重測定し、耳タグを付けた。マウスを１ｃｍ厚のアガロースゲルパッド（Ｓｏｎｏｓ５５００−フィリップス社、Ｓ１２プローブ付きと、１ｃｍ厚の１％アガロースゲルパッドの付いたＩｎｓｔｅｃ加熱顕微鏡載物台）上で平伏させたまま、傍胸骨長軸図よりベースラインの超音波心臓動態診断（エコー）測定を撮った。測定項目には以下が含まれる：ＡｏＲ径、ＬＡ寸法、ＡＣＳ、ＲＶｄ、ＩＶＳｄ、ＬＶＩＤｄ、ＬＶＰＷｄ、ＩＶＳｓ、ＬＶＩＤｓ、ＬＶＰＷｓ、およびＨＲ。０、２．５、５および７週目にエコー評価を実施して、週ごとのエコー測定に基づいて各マウスへ表現型を割り当てた。エコー機器により分割短縮（ＦＳ）を算出した。ＡｏＲおよびＬＡの寸法が１：１の比を有するＰＳＬＡ画像を入手することによって、マウス間の測定値を正規化した。追加的に、僧房弁の弁膜尖の遠位先端まで、ＬＶをＰＷ全体で垂直的に切開することによって入手するＭモード画像よりＬＶ寸法を採取した（掃引速度：１００）。拡張期測定値はＥＫＧのＱＲＳコンプレックスのピークで採取し、収縮期測定値は、ＰＷの最大収縮の時点で記録した。すべての測定値を光学ディスクに記録し、ビデオテープに撮り、印字した。
【０２８４】
すべてのエコー測定値を入手した後で、２２．５ｍｇ／ｋｇのＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（シグマ−アルドリッチ／フルカ、ミズーリ州セントルイス）をマウスの後眼窩に注射し、麻酔より開腹させた。アドリアマイシンは、１０ｍｇ／ｍｌのストック濃度用に粉末ストックより１０ｍｇを１ｍｌの滅菌水に溶かすことによって調製した。滅菌生理食塩水を用いてさらなる希釈を行った。溶液は注射の当日に作製した。２２．５ｍｇ／ｋｇの用量を受けるマウスには、全量０．５６２５ｍｇのために３．７５ｍｇ／ｍｌの調製希釈液の１５０μｌを注射した。体重は毎日記録した。
【０２８５】
１５％より大きい体重損失によるか、または試験の最後に動物を犠牲にしたならば、心臓を採取し、１０％  ＮＢＦ（中性緩衝化ホルマリン）に固定した。簡潔に言うと、胸部切開を行って心臓を曝露した。２７ｇ針を使用して、１Ｍ  ＫＣｌ（最終濃度＝５０ｍＭ）を心臓へ直接注射して、心臓を拡張状態で停止させた。次いで、ＰＢＳを心臓へ直接注射して、血液を房室より流した。心臓を慎重に取り出し、ＰＢＳで濯ぎ、１０％  ＮＢＦへ入れた。
【０２８６】
上記に述べたように、エコー結果に基づいて各マウスへ表現型を割り当て、各マウスを心毒性の度合いにしたがって、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶへ分類した。マウスの表現型を決定するには、以下の判定基準を使用した：拡張期機能不全：ＬＶＩＤｄ％ΔおよびＬＶＩＤｓ％Δが＞１０％低下、ＦＳは同じまたは増加；収縮期機能不全：ＬＶＩＤｄ％Δ＋ＬＶＩＤｓ％Δが＞２５％増加、ＦＳは＞１２％低下；拡張期および収縮期機能不全：ＬＶＩＤｄ％Δ＋ＬＶＩＤｓ％Δが＞２０％低下、ＦＳは＞１２％低下；拡張性：ＬＶＩＤｄ％Δ＞１２％、ＬＶＩＤｓ％Δ＞１２％。
【０２８７】
１０匹の野生型マウスのうち４匹がＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）注射後８〜１０日の間に死亡した。これらの死は、慢性心不全の死とみなされた。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）でチャレンジした野生型マウスは、およそ２週間の５０％死亡率を示し、およそ６６％のマウスがＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジ後２〜２．５週で心機能不全の証拠を明示した。野生型生存個体は、概して２つの表現型を示した：（ａ）ＬＶ房室拡張と駆出率（ＥＦ）減少を伴う収縮期機能不全、および（ｂ）房室寸法の進行性の低下と心室充填の減少を伴うが、ＥＦは維持されている拡張期機能不全。
【０２８８】
対照的に、４−１ＢＢ−Ｌ  ＫＯマウスでは死亡が観察されず、４−１ＢＢ−Ｌ  ＫＯマウスのいずれも、野生型マウスの５９〜７１％に比較して、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジに続くどんな重篤な心毒性の徴候も示さなかった。
【０２８９】
【表４】
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【０２９０】
上記の結果は、４−１ＢＢおよび４−１ＢＢ−Ｌ受容体：リガンド対が心臓血管疾患に関連した免疫応答に関与する可能性があり、特に、虚血心筋症にある役割を担うことを証明する。これらのデータは、４−１ＢＢおよび４−１ＢＢ−Ｌの相互作用に拮抗することによって、心臓血管疾患、特に虚血心筋症の症状を予防、治療または緩和することの信頼できる基礎を確立させる。さらに、これらの結果は、４−１ＢＢ−Ｌ：４−１ＢＢ相互作用に拮抗することによってＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発心毒性が抑制されることを証明する。故に、４−１ＢＢ、ＣＤ３０および／またはＯＸ４０アンタゴニストは、そうした化学療法剤の心毒性の副作用を抑制するために、化学療法組成物に先立って、またはそれと組み合わせて使用可能である。
【０２９１】
実施例８
４−１ＢＢは、損傷した心臓間質細胞により発現されて、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬシグナル伝達は、マウスのＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症へ貢献する
マウスおよびヒトの心筋炎および拡張性心筋症には、副刺激経路の関与が示唆されてきた。副刺激リガンドの発現が心筋細胞上で増加している一方で、その受容体は浸潤性免疫／炎症細胞上で発現されている（Ｓｅｋｏら，２００２；Ｓｅｋｏら，２００１；Ｓｅｋｏら，１９９８）。これらの試験の目的は、他の型の拡張性心筋症で見られる広汎な炎症浸潤物とは関連していない、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症の発症および進行における４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ副刺激経路の役割を決定することであった。これらの試験は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症における４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ免疫副刺激経路の役割を証明するものであり、４−１ＢＢの新規な心発現様式を証明し、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症への副刺激貢献の機序としてアポトーシスとの関連を示唆した。
【０２９２】
１．「４−１ＢＢおよび４−１ＢＢＬの発現は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置心筋においてアップレギュレートされる」
６週齢のＣ５７Ｂ１／６マウスに４５ｍｇ／ｋｇのＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）を後眼窩より注射し、心臓を処置後０、２４、４８、７２、および９６時間目に採取した。冷凍切片でＣＤ４５の免疫組織化学染色を実施して炎症浸潤物を検出し、並びに４−１ＢＢについても染色した。ＣＤ４５の免疫組織化学は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置心筋において陽性細胞を認識しなかった。陽性対照として、ＣＤ４５陽性細胞を脾臓に検出した。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）心筋症においては炎症浸潤物を観察しなかったが、我々は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）投与後２日以内に、１〜５％の心臓間質細胞上で４−１ＢＢの発現が誘発されていることを見出した。４−１ＢＢ陽性細胞を明示する動物の比率としては、心筋において４−１ＢＢが陽性であったのは、４８時間で５０％のマウス、７２時間で７５％であった。免疫組織化学分析において、４−１ＢＢＬは、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置の後で陽性が増加した。野生型および４−１ＢＢＬ−／−における白血球数は、末梢血において好中球、単球およびリンパ球が同様のレベルにあることを明示し、４−１ＢＢＬの損失による心機能の改善が造血および炎症性の変化に無関係であることを示した。
【０２９３】
２．「作動性抗４−１ＢＢ抗体（Ｍ６）での処置は心機能不全を促進し、ｍ４−１ＢＢ−Ｆｃは、心機能不全を遅延および抑制した」
４−１ＢＢ（Ｍ６）に対する作動性抗体は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジモデルにおいて心機能不全を促進して増悪させた。対照的に、４−１ＢＢＬの可溶性デコイ受容体であるｍ４−１ＢＢ−Ｆｃは、心機能不全を遅延および抑制した。
【０２９４】
４−１ＢＢに対する作動性抗体（Ｍ６，アムジェン・ハイブリドーマグループのロット９１５９−０６９）の１００μｇ／マウスを０、３および６日目に腹腔内投与した。０日目は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジの日である。各処置方式にＮａＣｌ対照を含めた。野生型（ＷＴ）、４−１ＢＢＬ  ＫＯ、または４−１ＢＢへの活性化抗体（Ｍ６）で処置したＷＴマウスを２２．５〜４５ｍｇ／ｋｇに及ぶ用量のＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）で後眼窩注射によりチャレンジして、その直後に心機能の超音波心臓動態（ＥＣＨＯ）解析を行った。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジ後１、２．５および／または５週目に連続ＥＣＨＯ解析を実施した。１つの試験では、ＷＴおよび４−１ＢＢＬ  ＫＯマウスをＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（４５ｍｇ／ｋｇ）でチャレンジし、２４、４８および７２時間目に心臓を採取した。ＩＨＣによるＴＵＮＥＬ陽性とウェスタンブロットによるカスパーゼ３活性化をアポトーシスの指標として判定した。４−１ＢＢＬ  ＫＯマウスは、Ｍモード超音波心臓動態診断法により評価すると、ＷＴ対照に比較して心血管機能が改善し、心筋症の浸透度が減少した（以下の表４と図１０を参照のこと）。表４では、心拍血液量、収縮終期および拡張終期容量の組合せを使用して、機能表現型を分類した。４−１ＢＢＬ  ＫＯマウスでは、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）投与後の心毒性が抑制され、機能が改善した。ＷＴ  Ｃ５７Ｂ１／６マウスの４−１ＢＢ活性化抗体（Ｍ６）での処置は、ＡＤＲ誘発性心筋症の発症を促進した（図１１）。
【０２９５】
【表５】
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【０２９６】
３．「アドリアマイシン心筋ではアポトーシスが増加した」
Ｃ５７Ｂ１／６マウスを４５ｍｇ／ｋｇのアドリアマイシンで処置した。心臓組織を様々な時点で採取し、ＴＵＮＥＬ陽性核を分析した。ＴＵＮＥＬ陽性は４８時間で増加して、７２時間でピークになった。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置マウスより心臓の全消化物を採取し、トロポニン−Ｉ（ＴｎＩ）抗体およびＦＩＴＣ共役二次抗体とヨウ化プロピジウムで染色した。ＴｎＩ陽性細胞についてサブＧ１  ＤＮＡ断片を解析した。ＷＴマウスでは、心臓のＴＵＮＥＬ陽性がＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）注射後４８および７２時間で増加した。
【０２９７】
ＴＵＮＥＬおよびサブＧ１  ＤＮＡにより測定される心臓アポトーシスは、間質細胞での４−１ＢＢの発現の増加に一致して、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）投与後３日間増加した。Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）チャレンジ後５週目（このとき、心機能不全は野生型において最大であるが、４−１ＢＢＬ−／−マウスではほとんど存在していない）に判定した慢性の進行性アポトーシスは、ＷＴマウス（４倍）に比較して、４−１ＢＢＬ−／−マウスでより低かった（ベースラインの１．５倍）。別の試験において、ウェスタンブロットにより判定するカスパーゼ３活性化は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）（４５ｍｇ／ｋｇ）投与後４８〜７２時間で増加した。対照的に、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）は、カスパーゼ３切断を４−１ＢＢＬ−／−心筋において誘発しなかった。ウェスタンブロットにより判定すると、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）は野生型においてＡｋｔのリン酸化を抑制したが、４−１ＢＢＬ−／−の心臓では抑制しなかった。ＪＮＫおよびｐ３８のリン酸化は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）により影響されなかった。故に、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬの免疫副刺激経路がＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心筋症に貢献するのは、おそらくはＡｋｔシグナル伝達の変調を介してであろう。
【０２９８】
結論として、４−１ＢＢＬ欠損マウスと４−１ＢＢＬデコイ受容体処置マウスにはアドリアマイシン誘発性心臓障害への部分抵抗性が与えられた一方で、４−１ＢＢ活性化抗体は障害の発症を促進し、心臓におけるＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）効果へ４−１ＢＢが貢献することを示唆した。ＴＵＮＥＬ、サブＧ１  ＤＮＡおよび活性化カスパーゼ３により測定されるアポトーシスは、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置された野生型心筋において増加したが、４−１ＢＢＬ−／−においては抑制された。Ａｋｔのリン酸化はＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）により選択的に抑圧されたが、４−１ＢＢＬの損失により維持され、心臓中の副刺激経路によるアポトーシスの変調がおそらくは、Ｊｎｋやｐ３８のシグナル伝達ではなく、Ａｋｔを介することを示唆した。４−１ＢＢＬ−／−におけるアポトーシス指標の減少と心機能の改善の一致は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性の心不全にアポトーシスが必須の役割を担うことを示唆する。
【０２９９】
実施例９
ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３９に対して産生する抗体
標準技術を使用して、ＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ３０−ＬおよびＣＤ３９に対してモノクローナルおよび／またはポリクローナル抗体を産生した。これらの抗体の１以上、またはＩＬ−１７、ＩＬ−１７Ｒ、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８Ｒ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０−ＬまたはＣＤ３９へ抗して向けられる他の抗体は、心臓血管疾患の治療のためにアンタゴニストとして使用可能である。抗体を産生するために使用する免疫原には、精製ポリペプチド、細胞外ドメインのようなその断片、細胞外ドメインのＦｃ融合タンパク質、並びに細胞外ドメインのロイシンジッパー誘導体が含まれる（以下の表３を参照のこと）。当然ながら、任意の免疫原性断片のような他の型のタンパク質も、単独または他のタンパク質と融合して、抗体を産生するために使用可能である。さらに、ポリペプチドをコードするＤＮＡも免疫原として使用可能であり、例えば、ＤＮＡを皮内（Ｒａｚら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９５１９）または筋肉内（Ｗａｎｇら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：４１５６）に投与することが可能であり（生理食塩水がＤＮＡをベースとする抗原に適した希釈剤であることがわかっている）、ＰａｒｄｏｌｌおよびＢｅｃｋｅｒｌｅｇ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３：１６５，１９９５により概説されるように、他の同様に技術によってもよい。
【０３００】
一般に、抗体は以下の方法により産生した：アジュバント（完全または不完全フロイントアジュバント、ミョウバン、またはＲｉｂｉアジュバント  Ｒ７００（Ｒｉｂｉ，マサチューセッツ州ハミルトン）のような別のアジュバントのような）に乳化したポリペプチド免疫原で齧歯動物（例えば、ＢＡＬＢ／ｃマウスまたはＬｅｗｉｓラット）を免疫化して、１０〜１００マイクログラムに及ぶ量で皮下または腹腔内に注射した。１０日〜３週日の後で、免疫化した動物を追加の免疫原で追加免疫し、その後１週、２週または３週ごとの免疫化スケジュールで定期的に追加免疫した。
【０３０１】
後眼窩出血または尾先端切除により血清試料を定期的に採取して、ドットブロットアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定）、免疫沈降法、または元の免疫原への抗体結合のＦＡＣＳ解析のような他の好適なアッセイにより、ポリペプチド特異抗体を試験した。適切な抗体力価の検出に続き、陽性動物に対して各免疫原の生理食塩水溶液を最後に１回静脈内注射した。３〜４日後、動物を犠牲にし、脾臓細胞を採取し、マウス骨髄腫細胞系、例えばＮＳ１または、好ましくはＰ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８０）へ融合した。このハイブリドーマ細胞を、非融合細胞、骨髄腫ハイブリッド、および脾臓細胞ハイブリッドの増殖を阻害するＨＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジン）選択培地においてマルチプルマイクロタイタープレート中でプレート培養した。
【０３０２】
陽性ハイブリドーマ細胞を同系の齧歯動物へ腹腔内注射して、高濃度のモノクローナル抗体を含有する腹水を産生させた。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、様々な技術によって、フラスコまたはローラーボトルにおいてｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させた。硫酸アンモニウム沈殿法に続くゲル排除クロマトグラフィーによりモノクローナル抗体を精製した。あるいは、プロテインＡまたはプロテインＧへの抗体の結合に基づくアフィニティークロマトグラフィーも使用した。
【０３０３】
当然ながら、米国特許第４，４１１，９９３号に記載されるような他の慣用技術も使用可能である。例えば、免疫原の調製、アジュバントの選択および免疫化プロトコルは、当該技術分野においてよく知られていて、例えば、「抗体：実験マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ）」ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｄ（監修）、コールドスプリングハーバーラボラトリープレス、ニューヨーク州コールドスプリングハーバー（１９８８）に見出すことができる。
【０３０４】
【表６】
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【０３０５】
【表７】
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【図面の簡単な説明】
【０３０６】
【図１】図１Ａおよび１Ｂは、３つの異なる群（生存ドナーレシピエント、４８時間未満に死亡したドナーレシピエント、および３０％未満の駆出率（ＥＦ）の非使用ドナー）に関する、心臓ドナー血漿中のＩＬ−１７およびＩＬ−１８のレベルをそれぞれ図示する。
【図２】図２は、３０％未満の駆出率（ＥＦ）を有する患者、終末期不全（ＥＳＦ）状態にある患者、および６０％より高い駆出率（即ち、正常心筋）を有する患者におけるＩＬ−１８受容体の相対量（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ａｂｕｎｄａｎｃｅ）を示す。
【図３】図３Ａ〜図３Ｄは、様々な段階の心筋症にある患者間のＩＬ−１７およびＩＬ−１８血漿レベルの比較レベルを示す。図３Ｂおよび３Ｄは、この患者集団を非虚血群と虚血群へさらに分割する。
【図４】図４は、移植後に好ましいレシピエントアウトカム（Ａ群）または不都合なレシピエントアウトカム（Ｂ群）を有する対照被検者またはドナーのＩＬ−１７（白棒）およびＩＬ−１８（黒棒）および４−１ＢＢ（斜線棒）の血漿レベルを例示する。
【図５】図５は、ＩＬ−１７を投与することの心室の大きさに対する経時的な効果を例示する。
【図６】図６Ａおよび６Ｂは、炎症性心筋炎および心筋症を誘発する心臓ミオシンペプチドで免疫したＩＦＮ−γ−／−マウスにおけるＩＬ−１７およびＩＬ−１８の血漿レベルを図示する。
【図７】図７Ａ〜図７Ｃ：図７Ａは、実験自己免疫心筋炎（ＥＡＭ）モデルからのマウスにおけるＩＬ−１７レベルを示し、ここで、組織学的に証明された心臓病理を有するマウス（動物Ｂ）は、陰性対照（動物ＣおよびＤ）より高い発現レベルのＩＬ−１７を有した。図７Ｂは、ＥＡＭを有するマウスより入手したＴ細胞からのＩＬ−１７放出が対照マウスに比較しておよそ２５倍高かったことを示す。心臓ミオシンで免疫した動物よりＴ細胞を単離し、ミオシンを与えた抗原提示細胞かまたはミオシンへ曝露していない抗原提示細胞へ曝露した。図７Ｃは、心臓ミオシンで免疫して心臓病理の組織学的な証拠を有する動物（動物Ｂ）からのＴ細胞がペプチドでパルスした抗原提示細胞による抗原特異刺激に応答して高レベルのＩＬ−１７を放出したことを例示する。
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、３つの患者群（安定型冠動脈疾患（ＣＡＤ）、心臓トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）血漿レベルが０．４ｎｇ／ｍｌ未満の急性冠症候群（ＡＣＳ）、または心臓トロポニンＩ（ｃＴｎＩ）血漿レベルが０．４ｎｇ／ｍｌより高い急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する群）へ層別した患者におけるＩＬ−１８レベルとＩＬ−１８のＩＬ−１８結合タンパク質に対する比をそれぞれ示す。
【図９】図９は、４−１ＢＢ血漿レベルが、正常被検者に比較して心不全の患者において有意に上昇していたことを例示し、それによりヒト心不全におけるこの系の活性化を示唆する。
【図１０】図１０は、野生型および４−１ＢＢＬ−／−ノックアウトマウスにおけるＡｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）の用量応答を表す。２２．５ｍｇ／ｋｇと２５ｍｇ／ｋｇで、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）誘発性心機能不全の比率は、４−１ＢＢＬ−／−において減少した。高い投与量（３０ｍｇ／ｋｇ）でも、野生型と４−１ＢＢＬ−／−群の間に差を観測しなかった。
【図１１】図１１は、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）処置から３、６、９日後に投与した４−１ＢＢ活性化抗体（Ｍ６）を示すグラフである。Ｍ６抗体により機能不全の発症が加速されたが、最終浸透率は対照群に類似していた。
【配列表】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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