(57)【要約】動脈微血管系の緊張力を調節するための方法およびキットであって、ＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド受容体アゴニストが対象に共投与される。
2006528681.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象の脊椎動物に有効量のカンナビノイド受容体アゴニストとＣＯＸ−２阻害剤を共投与することを含む、動脈微血管系の収縮を起こす方法。
【請求項２】
対象が哺乳動物である、請求項１の方法。
【請求項３】
哺乳動物がヒトである、請求項２の方法。
【請求項４】
ＣＯＸ−２阻害剤がＣＯＸ−１阻害剤でもある、請求項１の方法。
【請求項５】
ＣＯＸ−２阻害剤がカンナビノイド受容体アゴニストでもある、請求項１の方法。
【請求項６】
ＣＯＸ−２阻害剤とカンナビノイド受容体アゴニストの共投与が、カンナビノイド受容体アゴニスト活性とＣＯＸ−２阻害剤活性との両方を有する単一の化合物を投与することによる、請求項１の方法。
【請求項７】
ＣＯＸ−２阻害剤を、ロフェコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、パラコキシブ、エトリコキシブおよびＮＳ−３９８よりなる群から選ぶ、請求項１の方法。
【請求項８】
カンナビノイド受容体アゴニストを、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、アナンダミド、２−アラキドニルグリセロールおよびメタアナンダミドよりなる群から選ぶ、請求項１の方法。
【請求項９】
カンナビノイド受容体アゴニストが合成のカンナビノイド受容体アゴニストである、請求項１の方法。
【請求項１０】
カンナビノイド受容体アゴニストとＣＯＸ−２阻害剤の共投与が全身的である、請求項１の方法。
【請求項１１】
微血管系が横紋筋微血管系である、請求項１の方法。
【請求項１２】
有効量のカンナビノイド受容体アゴニストとＣＯＸ−２阻害剤を、対象において血圧を増加するのに有効な量で、共投与することを含む、対象において血圧を増加する方法。
【請求項１３】
対象が哺乳動物である、請求項１２の方法。
【請求項１４】
哺乳動物がヒトである、請求項１３の方法。
【請求項１５】
共投与時に、対象が血圧の急激な低下に罹っている、請求項１２の方法。
【請求項１６】
共投与が、カンナビノイド受容体アゴニストとしての活性およびＣＯＸ−２阻害剤としての活性を有する化合物を投与することによる、請求項１２の方法。
【請求項１７】
ショックに対する処置を必要とする対象の脊椎動物に、カンナビノイド受容体アゴニストとＣＯＸ−２阻害剤を共投与することを含む、ショックに罹っているか、またはショックの危険性をもつ対象を処置する方法。
【請求項１８】
ＣＯＸ−２阻害剤がＣＯＸ−１阻害剤でもある、請求項１７の方法。
【請求項１９】
共投与が、カンナビノイド受容体アゴニストとしての活性およびＣＯＸ−２阻害剤としての活性を有する化合物を投与することによる、請求項１７の方法。
【請求項２０】
ＣＯＸ−２阻害剤を、ロフェコキシブ、セレコキシブ、バルデコキシブ、パラコキシブ、エトリコキシブおよびＮＳ−３９８よりなる群から選ぶ、請求項１７の方法。
【請求項２１】
カンナビノイド受容体アゴニストを、Δ９−テトラヒドロカンナビノール、Δ８−テトラヒドロカンナビノール、アナンダミド、２−アラキドニルグリセロールおよびメタアナンダミドよりなる群から選ぶ、請求項１７の方法。
【請求項２２】
カンナビノイド受容体アゴニストが合成のカンナビノイド受容体アゴニストである、請求項１７の方法。
【請求項２３】
カンナビノイド受容体アゴニストとＣＯＸ−２阻害剤の共投与が全身的である、請求項１７の方法。
【請求項２４】
対象が哺乳動物である、請求項１７の方法。
【請求項２５】
哺乳動物がヒトである、請求項２４の方法。
【請求項２６】
ショックが出血性ショックである、請求項２６の方法。
【請求項２７】
共投与が、麻酔薬に関連する低血圧を制御するためである、請求項１７の方法。
【請求項２８】
対象にＣＯＸ−２阻害剤をカンナビノイド受容体アゴニストと共投与することを含む、対象において動脈微血管系の弛緩を起こす投与のカンナビノイド受容体アゴニストの素質に拮抗する方法。
【請求項２９】
対象が哺乳動物である、請求項２８の方法。
【請求項３０】
対象がヒトである、請求項２９の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、小血管の緊張力を調節するために薬理学的化合物の投与についての分野に関する。
【０００２】
発明の背景
ヒトなどの脊椎動物における循環系は、体内に血液を駆動する心臓、および体のすべての領域に血液を供給する一連の管である血液系を含む。血液は心臓から動脈を介して出て、高圧で血液が体の組織に輸送される。血液は静脈を経て組織から心臓に戻る。動脈は繰り返し分かれて順次さらに細い管となり、最後に細動脈となる。細動脈は薄い壁構造をもつ毛細管となり、この壁を介して酸素の交換が組織中でおこなわれる。ついで毛細管から血液が細静脈とよばれる小さい静脈構造に入り、これが繰り返し集まって静脈を形成し、静脈が血液を心臓に戻す。集合的に、細動脈、毛細血管および細静脈を、「微血管系」という。
【０００３】
細動脈は、微血管系の他の部分と異なり、その壁に平滑筋繊維を有する。これらの繊維は、必要に応じ収縮および弛緩することにより、微血管系へのまたはそれを介する血流を調節する。その場合、細動脈は、体内における血液の分布を調整し、生理的限界内における全身的血液量および動脈血圧を保持する。
【０００４】
ショックは、組織の灌流における進行性の広範な低下であって、血液量の効果的な循環の減少から生じ、毛細血管での酸素運搬および交換の減少をもたらす。処置しないと、ショックはしばしば致命的となる。
【０００５】
ショックはいくつかの原因で生じ、ショックをいくつかのカテゴリーに分類できる。すなわち、出血や細血管での血液停滞などによる血液量の喪失によるショックを低量ショックという。心臓が体内に血液を適切に駆動しないことによるショックを心原性ショックという。ショックをまた血管原性にも分類できる。これは、血管内量の付随的増加のない急性の弛緩など、血液の組織への悪運搬によるもので、不適当な組織灌流となる。血管原性ショックは、敗血症、アナフィラキシーおよび神経損傷によるショックとともにみられる。しかし、ショックの原因がなにであれ、ショックを処置しないと、心筋低下、急性呼吸障害、腎不全、播種性静脈内凝固および死を含む重篤な合併症になり得る。
【０００６】
ショックは、その主要な原因を診断し、可能なら是正することにより処置する。例えば、血流を制御するか心臓を再起動することにより、酸素を供給し酸塩基の不均衡を是正してショックの作用を処置することにより、血圧および心臓機能を保持するための液体を供給するなどで生体機能を支持することにより行う。ショックの処置に有用な薬物療法には、心臓収縮の強さを増す変力性薬、膜を安定化するコルチコステロイド、血管の収縮を起こし、動脈血圧を保持する血管収縮薬、およびショックにともなう痛みおよび不安を和らげる麻酔薬がある。
【０００７】
しかし、かかる処置でもってしても、いかなる原因またはその組合せによる重いショックは、進行し、永久的な合併症または死となることがある。このように、ショックを処置し予防するための新しい追加の方法を開発する必要がある。
【０００８】
カンナビノイドは、動植物で天然的につくられる１クラスの化合物である。植物がつくるカンナビノイドは、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）およびΔ８−テトラヒドロカンナビノールを含み、前者は、マリハナの向神経性成分である。動物で内因的につくられるカンナビノイドは、エンドカンナビノイドといい、アラキドニルエタノールアミド（アナンダミド）および２−アラキドニルグリセロール（２−ＡＧ）を含む。さらに、多数の合成カンナビノイドアナログが存在し、シンヘキシル、ナビロンおよび非クラシカル・カンナビノイド、例えば、ＣＰ５５９４０、アミノアリキルインドール（ＷＩＮ５５２１２）、ジアリールピラゾールなどがある。
【０００９】
Kunos, et al. の米国特許 5,939,429（出典明示により本明細書の一部とする）は、カンナビノイドが低血圧または高血圧などの血液動態異常の処置に有用であることを開示している。Kunos の開示のように、アナンダミドなどのカンナビノイド受容体アゴニストの投与は低血圧を起こす。逆に、ＳＲ１４１７６Ａなどのカンナビノイド受容体アンタゴニストの投与はアナンダミドによる低血圧を防止する。すなわち、Kunos は、カンナビノイド受容体を選択的にブロックする薬物の使用がエンドトキシンによる低血圧を防止または緩解することにより医療的価値があると結論している。さらに、カンナビノイド受容体アゴニストが血圧を下げるので、Kunos は、かかる薬物が、高血圧、末梢血管障害および狭心症などの過剰な血管収縮にともなう状態を処置するのに有用であり得ると結論している。
【００１０】
カンナビノイドの血圧降下作用については、科学文献に広く報告されている。下記の科学文献（出典明示により本明細書の一部とする）は、カンナビノイドが動物に投与されたときに低血圧を起こすことを開示している。(1) Kunos, G. , et al., Prostaglandins & other Lipid Mediators, 61: 71-84 (2000); (2) Lake, KD, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 281 (3): 1030-1037 (1997); (3) Hilliard, CJ, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 294(1) : 27-32 (2000); (4) Brown, DJ, et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 188 (3): 624-629 (1974); (5) Adams, MD, Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 196 (3): 649-656 (1976); (6) Kunos, G, et al., Chemistry and Physics of Lipids,108 : 159-168 (2000); (7) Wagner, JA, et al., Journal of Molecular Medicine,76: 824-836 (1998); (8) Siqueira, SW, et al. , European Journal of Pharmacology, 58: 351-357 (1979); および (9) Wagner, JA, et al. , Nature, 390: 518-521 (1997)。Adams、上記（５）は、Δ９−テトラヒドロカンナビノールまたはΔ８−テトラヒドロカンナビノールの静脈投与が血圧の減少を起こすが、Δ９−テトラヒドロカンナビノールまたはΔ８−テトラヒドロカンナビノールの動脈投与は血管収縮を示す血圧の増加を起こしたことを開示している。静脈内に投与したとき、Adams によると、ＴＨＣは、約１分間しか続かないで、さらに長い低血圧応答がおきる一過性の血圧上昇をもたらす。Wagner、上記（８）は、カンナビノイドＴＨＣまたはＨＵ−２１０の投与が、その後に出血したラットにおいて生存時間を３０分から６０分と２倍にすることを開示している。Wagner によると、この生存の改善についてのメカニズムは不明であり、局所的な血管収縮による心臓排出の好ましい再分布または細循環の改善によるのではないかと推定している。
【００１１】
Kunos, et al. の米国特許 5,939,429 はさらに、カンナビノイド受容体の活性化が出血ショックにおける生存に有益であり、おそらくカンナビノイド・アゴニストによる低血圧が、出血後の過剰の代償的高血圧に拮抗することによるのであろうとしている。カンナビノイド受容体アゴニストが、出血性ショックの処置および過剰な血管収縮にともなう他の状態、例えば、高血圧、末梢血管障害およびある種の狭心症における処置に有用と示唆されているのは、この血管収縮作用による。
【００１２】
ＣＯＸ−２阻害剤の血圧作用についての情報は決定的でない。Johnson, DL, The Annals of Pharmacotherapy, 37: 442-446 (March 2003) は、ＣＯＸ−２阻害剤の血圧に対する作用についてのいくつかの研究およびＣＯＸ−２阻害剤の有害作用としての血圧上昇を報告している。Johnson の開示は結論的でない。短期間の試験によると、ＣＯＸ−２阻害剤は正常血圧の患者で血圧に対する作用がないが、試験対象者が低ナトリウム食に限定されていることから、これらの試験には欠点がある。患者にロフェコキシブまたはセレコキシブが６週間投与された別の試験において、ロフェコキシブは血圧を上昇し、セレコキシブについての結果は結論的でなかった。さらに、Johnson の報告によると、ある限定的なデータが、ＣＯＸ−２阻害剤での治療開始後に血圧が上昇することを示唆する。Johnson は、提供された情報にもかかわらず、ＣＯＸ−２阻害剤治療と血圧の上昇とに関連があるかどうかは、現在わかっていないと結論する。Johnson はＣＯＸ−２阻害剤の動脈微血管系に対するいかなる作用も示唆していない。
【００１３】
Dilger K., et al., Journal of Clinical Pharmacology, 42: 985-994 (2002) は、特異的ＣＯＸ−２阻害剤であるセレコキシブおよび非特異的ＣＯＸ−２阻害剤であるジクロフェナックの、血圧、腎機能および血管活性プロスタノイドに対する作用を、若年および高齢の両患者で評定した。Dilger の結論によると、この研究は、治療量で１５日間与えられたセレコキシブおよびジクロフェナックが血圧または腎機能の顕著な変化に、若年および高齢の正常対象において明らかに関連しないとの証拠を提供した。Dilger は、ＣＯＸ−２阻害剤の動脈微血管系に対するいかなる作用も開示または示唆していない。
【００１４】
Burstein の米国特許 4,847,290 および 6,162,829 ならびに Mechoulam の米国特許 5,538,993 および 5,635,530 は、テトラヒドロカンナビノールおよびそのいくつかの誘導体が鎮痛および抗炎症性を有することを開示する。特許 4,847,290 は、テトラヒドロカンナビノールの代謝体が、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害性を有する化合物であるナプロキサンの作用と等価の疼痛緩解作用を生じることを開示する。
【００１５】
現在のところ、ＴＨＣの動脈内投与を開示する Adams 引用文献（５）以外に、動脈微血管系の収縮を起こすためにカンナビノイド受容体アゴニストまたはＣＯＸ−２阻害剤を使用することについての公表報告はない。
【００１６】
図面についての説明
図１Ａ−Ｃは、一連の生体内の顕微鏡像であって、それぞれ、処置前の細動脈、細動脈の弛緩を起こす薬物の投与後の細動脈、およびカンナビノイドとＣＯＸ−２阻害剤との共投与後の細動脈を示す。
【００１７】
図２は、ＣＯＸ−２阻害剤に対する細動脈の血管活性応答を対照と比較して示すグラフである。
【００１８】
図３Ａ−Ｃは、一連のグラフであって、それぞれ、カンナビノイド投与後の細動脈の血管活性応答、ＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド投与後の最初の１００秒における細動脈の血管活性応答、ならびにＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド投与後の１２．５分間におけるこの細動脈の血管活性応答を示す。
【００１９】
図４は、カンナビノイドに対する腸間膜細動脈の応答を示すグラフである。
【００２０】
図５ＡおよびＢは、対のグラフであって、それぞれ、ＣＯＸ−２阻害剤の有無での、局所的および全身的投与のカンナビノイドに対する細動脈の血管活性応答を示す。
【００２１】
図６は、非処置のラットおよびカンナビノイドとＣＯＸ−２阻害剤の併用での処置のラットにおける、段階的出血の開始後の血圧の変化を示すグラフである。矢印１は４０ｍＨｇに達した時点を、矢印２は薬物またはビヒクル注入時点を表す。
【００２２】
発明の説明
微血管系の緊張力、特に横紋筋の緊張力が、ＣＯＸ−２阻害剤とカンナビノイド受容体アゴニスト（ＣＲＡ）との組合せの使用により調節し得ることを、予想を超えて発見した。この組合せは、脊椎動物に投与されたときに、動脈微血管系の明白な長い収縮を、特に横紋筋の動脈微血管系において起こす。理論に縛られる意図でないが、ＣＯＸ−２阻害剤とＣＲＡとの組合せが、横紋筋の動脈微血管系の収縮を起こす優越的な作用を有し、一方、内臓の血管系に僅かな作用しか有さないと思われる。この結果は、骨格および他の横紋筋から血流を転換し、脳や腹部などの生体臓器に利用される血液量を大きくする。
【００２３】
ひとつの実施態様において、本発明は脊椎動物対象における動脈微血管系の収縮を起こす方法である。この実施態様によると、カンナビノイド受容体アゴニスト、以下ではカンナビノイドまたはＣＲＡという、をＣＯＸ−２阻害剤とともに、対象において動脈微血管系の収縮を起こすのに効果的な併用量で、共投与する。
【００２４】
別の実施態様において、本発明は脊椎動物対象における動脈微血管系の弛緩を起こす投与のＣＲＡの素質に拮抗する方法である。この実施態様によると、ＣＯＸ−２阻害剤をＣＲＡとともに対象に、ＣＲＡをＣＯＸ−２阻害剤なしで投与したときに生じるであろう弛緩を低減またはブロックするのに効果的な量で、共投与する。すなわち、本発明のこの実施態様によると、ＣＯＸ−２阻害剤とＣＲＡとの共投与が、ＣＲＡ単独投与後に生じるであろう血圧の低下に比して、少ない低下をもたらす。
【００２５】
別の実施態様において、本発明は脊椎動物対象において血圧を増加する方法である。この実施態様によると、ＣＲＡをＣＯＸ−２阻害剤とともに対象に、対象の血圧の増加を起こすのに効果的な併用量で、共投与する。好ましい実施態様において、共投与のときに、対象は血圧の急激な低下に罹っている。
【００２６】
別の実施態様において、本発明は、低血圧に関連する身体障害を処置する方法である。この実施態様によると、ＣＲＡをＣＯＸ−２阻害剤とともに、かかる障害に罹っている対象またはその危険性のある対象に、対象の血圧の増加を起こすのに、または対象の血圧の低下を防止するのに効果的な併用量で、共投与する。
【００２７】
別の実施態様において、本発明は、微血管系の緊張力を調節するキットである。この実施態様によると、キットは、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡを含有するパッケイジを、別個の容器中に、または単一の容器中に組合されて、含む。好ましくは、キットはさらに、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡを必要とする患者に共投与することについての説明書を、上記の方法のいずれかまたはすべてを達成するために、含有する。
【００２８】
本発明は、その実施態様のいずれかまたはすべてにおいて、医療的および実験的の両方の状態について有用である。例えば、本発明は、ショックなどの障害に関連する低血圧などの急性低血圧を制御するのに使用し得る。本発明はまた、全身、脊椎または硬膜外の麻酔薬投与に対する特異体質反応に関連する急性の低血圧を制御するのに使用し得る。
【００２９】
本発明の方法は、内臓および横紋筋の動脈微血管系を含有する循環系をもつ動物において有用である。すなわち、本発明は、魚類、両生類、爬虫類および鳥類などの非哺乳動物を含む脊椎動物において有用である。本発明は、家畜または非家畜の、ネコ、イヌ、有蹄の反芻動物および非反芻動物、無蹄の反芻動物、ネズミ、ウサギ、ヒレアシ類、ならびにヒトおよび非ヒトの霊長類などの哺乳動物において有用である。さらに、ＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド受容体アゴニストに対する種間の応答を保存するので、これらの化合物のいずれかおよび両方に対する応答に関する動物試験のデータをヒトに適用できる。
【００３０】
本明細書で使用するように、用語「ＣＯＸ−２阻害剤」は、プロスタグランジンＨシンターゼの誘発性イソ型のシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）活性を阻害する化学物質を意味する。本明細書での目的にとって、ＣＯＸ−２阻害剤は、シクロオキシゲナーゼ−２の阻害以外の作用を有し得る。例えば、本発明に適したＣＯＸ−２阻害剤は、ＣＯＸ−１イソエンチームも阻害し得、シクロオキシゲナーゼ−１またはシクロオキシゲナーゼ−２に関連しない追加の薬理学的作用を有し得る。このように例えば、ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２酵素の両方に結合する化合物であるインドメタシンは、本発明のＣＯＸ−２阻害剤として適当であるが、好ましくない。同様に、非特異的なＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２阻害剤である他の化合物、例えば、ピロキシカム、商標名 FELDENE (Pfizer, New York, NY, USA) およびテノキシカムは本発明に適当であると思われる。
【００３１】
本発明に適当であるＣＯＸ−２阻害剤の例には、ロフェコキシブ、商標名 VIOXX (Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, NJ, USA)、セレコキシブ、商標名 CELEBREX (Pfizer)、バルデコキシブ、商標名 BEXTRA (Pharmacia Corp., Peapack, NJ, USA)、パラコキシブ、商標名 DYNASTAT (Pharmacia Corp.)、エトリコキシブ、商標名 ARCOXIA (Merck & Co., Inc.)およびＮＳ−３９８（Ｎ−（２−シクロヘキシルオキシ−４−ニトロフェニル）メタンスルホンアミド）がある。他のＣＯＸ−２阻害剤、現在知られているものおよび将来見つかるであろうものも同様である。
【００３２】
本明細書で使用するように、用語「カンナビノイド」と「カンナビノイド受容体アゴニスト」は、「ＣＲＡ」と略号し、同義語である。ＣＲＡは、カンナビノイド受容体、カンナビノイドＣＢ−１またはＣＢ−２のいずれかまたは両方の受容体のアゴニストリガンドである化合物である。好ましくは、ＣＲＡは、ＣＢ−１受容体に結合し、ＣＢ−１受容体のアゴニストである。本発明に適当なカンナビノイドには、Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）やΔ８−テトラヒドロカンナビノールなどの植物カンナビノイド、アナンダミド（ＡＮＡ）や２−アラキドニルグリセロール（２−ＡＧ）などのエンドカンナビノイドとして知られる内因性カンナビノイド、クラシカル・カンナビノイドおよび非クラシカル・カンナビノイドを含む合成カンナビノイド、および現在知られているまたは将来みつかるカンナビノイド受容体リガンドがある。好ましいＣＲＡの例はメタアナンダミドである。本発明に適当な別のＣＲＡには、カンナビノール、カンナビジオール、およびサブ最大身体応答を起こす化合物である部分的カンナビノイド受容体アゴニストがある。
【００３３】
本明細書で使用のように、用語「共投与」は、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡに関して、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡを対象に、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡの組合せが相乗的効果を提供できるように、同時にまたは十分接近した時間で、投与することを意味する。すなわち、ＣＯＸ−２阻害剤およびＣＲＡを同時的に投与するのが好ましい。かかる同時的投与は、ＣＯＸ−２阻害剤とＣＲＡをシリンジなどの同じ投与器具中に組合せること、または異なる投与器具から同時的に投与することでできる。あるいは、共投与は、ＣＯＸ−２阻害剤投与後のＣＲＡの投与、またはＣＲＡ投与後のＣＯＸ−２阻害剤の投与による。
【００３４】
カンナビノイド受容体アゴニストとしての活性を有する化合物は追加的にＣＯＸ−２阻害剤としての活性を有することがある。上記の Burstein および Mechoulam 特許を、テトラヒドロカンナビノールおよびその代謝物の鎮痛、消炎および増殖の性質についての開示のために、出典明示により本明細書の一部とする。かかる性質はＣＯＸ−２阻害と一致する。すなわち、本明細書で使用される用語「共投与」は、カンナビノイド受容体アゴニスムおよびＣＯＸ−２阻害の性質をもつ単一の化合物の投与を含む。この化合物は、例えば、テトラヒドロカンナビノールおよびその代謝物、他のエンドカンナビノイドまたはアジュレミック酸などの合成カンナビノイドを含み得る。
【００３５】
ＣＲＡ、ＣＯＸ−２阻害剤、またはＣＲＡとＣＯＸ−２阻害剤の組合せの投与作用についての使用において、急性血管活性作用は、投与の直接の結果として生じる動脈微血管系に対する作用である。これは、ＣＲＡおよびＣＯＸ−２阻害剤のいずれかまたは両方の投与の、血圧に対する慢性的または長期の作用と対照的であり、糸球体ろ過の変化およびナトリウム停留によるものであり、処置の長い期間を通じて典型的に起きる血圧の変化を起こす。
【００３６】
本発明の方法に関して、ＣＲＡとＣＯＸ−２阻害剤を、その必要な患者に、横紋筋動脈微血管系の収縮を起こすのに効果的な併用量で共投与する。共投与は、対象で血圧が下がる前、例えば、麻酔の前、または傷害後であるが、かなりの血液が失われて血圧が顕著に低下する前に、あるいは、出血などの原因によるショックになった患者において血圧の低下後になし得る。
【００３７】
これらの２薬理学的物質、ＣＲＡおよびＣＯＸ−２阻害剤の各量は、いくつかの因子によって変わる。それは、対象の大きさ、血圧の低下開始後のためまたは危険性のある対象で血圧の低下を防ぐために投与するのか、使用する特定のＣＲＡおよびＣＯＸ−２阻害剤である。
【００３８】
一般的に、投与するＣＲＡの好ましい量は、ＣＯＸ−２阻害剤なしで横紋筋の微血管系において応答を起こす量である。すなわち、投与される△８−ＴＨＣの好ましい量は、約８ｍｇ／ｋｇ以上、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ以上、最も好ましくは１２ｍｇ／ｋｇ以上である。しかし、△８−ＴＨＣのさらに低い量を、所望なら、例えば、単独でまたはＣＯＸ−２阻害剤との共投与で、かかる低量が動脈微血管系の収縮を生じるなら、本発明に応じて使用できる。
【００３９】
一般的に、投与されるＣＯＸ−２阻害剤の好ましい量は、文献に記載されている量である。例えば、Physicians Desk Reference, Medical Economics Company, Inc., Montvale NJ, USA (2001) に開示されているセレコキシブの好ましい量は、約１００−２００ｍｇであって、約１−２ｍｇ／ｋｇとなる。しかし、セレコキシブのさらに低い量を、所望なら、例えば、ＣＲＡとの共投与で、かかる低量が相乗作用を提供するなら、本発明に応じて使用できる。
【００４０】
本発明において、投与されるＣＲＡおよびＣＯＸ−２阻害剤のいずれについても最大量はない。しかし、投与の最大用量は、高量で望ましくない薬理学的作用の発生の可能性により制限される。
【００４１】
動脈微血管系の収縮は、知られている、または見つかるべきすべての手段により測定できる。例えば、動脈微血管系の収縮を、全動物における血液動態作用、灌流血管床、動脈の分離セグメントについての試験で測定し得る。かかる試験は、血液動態作用が細動脈の血管収縮により生じることが明白でないので、あるいは得られる応答が無傷の全動物で得られる応答であることが明白でないので、好ましくない。
【００４２】
このように、動脈微血管系の収縮を、直接的にその場で見られる技法およびインビボでの微血管系の検査によって測定するのが好ましい。この技法のひとつは生体内顕微鏡である。参照、Koller, A. and Johnson, PC, Methods for in vivo mapping and classifying microvascular networks in skeletal muscle, eds. Popel, AS and Johnson PC, Karger, New York (1986),（出典明示により本明細書の一部とする）。
本発明を下記の非限定的実施例によりさらに説明する。
【００４３】
実施例１−精巣挙筋プロトコール
雄Ｃ５７−ＢＬマウス、７−８週齢、体重約２０ｇを、個々のマウスの体重当たりケタミンとキシラジンの混合物（８７ｍｇケタミンおよび１３ｍｇキシラジン、ｍｌにつき）１００−１５０ｍｌの筋肉内注入で麻酔する。体温を約３７℃に対流熱で保持する。動物を仰臥位にし、中心線切開を腹側脳領域で行い、下側の組織を縦に切開して気道を暴露する。気管開口形成を行って、呼吸しやすいように動物にＰＥ５０管を直接入れ込み、ついで傷を塞ぐ。
【００４４】
左後脚を切開し、大腿神経血管束を暴露し、大腿静脈を単離し、通常の塩類液を含有するシリンジに連結したＰＥ１０管で導く。ついで、動物を特別に設計された外科ボードに置き、陰嚢中の右睾丸を外科ボードに含有された透過光観察窓の上に向ける。陰嚢を熱い（約３７℃）生理食塩水（４．３ｍＭのＮａＨＣＯ３、１２６．４ｍＭのＮａＣｌ、０．９ｍＭのＫＣｌ、０．４ｍＭのＣａＣｌ２、０．２ｍＭのＭｇＳＯ４）で洗浄する。陰嚢を真ん中で切開し、下側の面を開いて睾丸を暴露する。精巣挙筋の頂点部分を外科ボード上に遠位でピン止めし、精巣挙筋をその長い軸にそって切開し、睾丸を暴露する。ついで睾丸を鼠径管に押し戻し、透過光窓の周りに等しく精巣挙筋がピン止めできるようにする。
【００４５】
実施例２−腸間膜プロトコール
実施例１記載の動物を実施例１記載の外科処理のために準備する。動物を外科ボードに仰臥位にして動物の腹部を観察窓に向ける。熱生理食塩水で洗いながら、中心線切開を、白色線を介して行う。下部十二指腸セグメントから切断環をとりだし、観察窓のあたりに、近位腸間膜を通り、腸を通らないピンでピン止めする。
【００４６】
実施例３−生体内顕微鏡
すべての試験を、２光源、明るい場（OptiQuip 75 W xenon)および蛍光（Nikon 150 W Mercury)をもつ工業規格（Nikon MM-11）を用いて行う。第１カメラ集合は冷却チャージ・カップル・デバイス（ＣＣＤ）およびコントローラー（Hamamastu C5985）を有する。第２カメラ集合は、インテンシファイアー（MTI GENIISYS）に合わせてＣＣＤカメラ（MTI CCD72）を有する。試験をビデオモニターで観測し、デジタルビデオレコーダーよりオフラインで記録する。
【００４７】
実施例１および２に上記したように、準備した動物を、透過光窓をもつ外科ボード上の顕微鏡の場におく。暴露の組織を熱生理食塩水で、Ｎ２／ＣＯ２（９５％／５％）混合物を泡立てながら洗う。正常の血流が観測されるか、灌流血が安定するまで、組織を平衡に保ち、その間に組織をＡ１−Ａ４細動脈について１−Ｘでスキャンする。細動脈を生理的緊張力について０．１ｍＭアデノシン（ポジチブ対照）の局所投与により試験する。直径の少なくとも２０％増加を示さなかった血管は試験に適さない。
【００４８】
細動脈が一定の直径に戻った後（約１０分）、組織を試験薬物で局所的に処置するか、薬物を全身的に投与し、細動脈の応答を２０ｘ倍で観察する。局所処理は、ビヒクル溶液（１：１：１８のステファンテックス：エタノール：塩類溶液）または薬物＋ビヒクル溶液を直接適用する。全動物における全身的処置は大腿部静脈カテーテルによる投与である。細動脈を全処理中、オフライン解析のためにビデオ記録する。血圧を全工程中、大動脈を介して左心室に挿入された１．４Ｆ（０．５６ｍｍ）Ｍｉｌｌｅｒカテーテル圧トランスデューサーを用いて、モニターする。弛緩期および収縮期の血圧ならびに心拍数を記録する。動物についての薬物用量範囲は、文献値およびｍｇ／ｋｇベースでの薬滴定曲線で実験的に決定された値を基にする。
【００４９】
実施例４−データ解析
実施例３のビデオ像のオフライン解析は、最初にデジタルＡＶＩファイルをデジタルイメージファイルに転換し、ついで MetaMorph ソフトウエアー（Universal Imaging Co.）を Dell Optiplex GX-1 上で用いて行う。ソフトウエアーの校正をマイクロメータースライドで行い、測定をマイクロメーター／ピクセルで定義する。時間当たり５−６測定の平均を、最初の５０秒間では５秒の間隔で、ついで間隔を長くし得る。この方法を、１８０秒の対照注入および続くカンナビノイド注入の両方について一定に保つ。
【００５０】
データ解析を GraphPad Prism ソフトウエアーで行う。時点、試験および条件の間における血管直径変化の有意性を、分散検定を介して決定する。直径または％変化の統計的有意の変動をＰ＜０．０５としてｎ＝５以上で定義する。時間経過曲線を非直線回帰で定め、それから血管の収縮および弛緩の速度を計算する。
【００５１】
実施例５−薬物投与プロトコール
ステパンテクス：エタノール：等張塩液（１：１：１８）のビヒクル溶液を用いて薬物溶液を調製する。親油性薬物をまずステパンテクス：エタノール（１：１）に溶解し、ついで等張塩液に合わせる。親水性薬物はステパンテクス：エタノール：等張塩液に直接溶解する。
【００５２】
試験薬物（ＣＲＡ、ＣＯＸ−２阻害剤、またはその組合せ物）を投与する前に、ＣＲＡと酵素阻害剤またはカンナビノイド受容体アゴニストとから構成されるプローブを投与した３分後に、試験薬物を全身的または局所的に投与する。これにより、組織特異的応答の同定および全身作用の相関に対する局所作用の相関を行う。下記の実施例において全身的に投与されるＴＨＣおよびＮＳ−３９８の用量は１２ｍｇ／ｋｇＴＨＣおよび２ｍｇ／ｋｇＮＳ−３９８である。
【００５３】
実施例６−細動脈の生体内顕微鏡
図１Ａ−Ｃは、上記実施例に記載のように実施した精巣挙筋細動脈に対する生体内顕微鏡試験から得られたフレームを示す。化合物の投与前の静止状態における細動脈の影像を、図１Ａに示す。細動脈の弛緩を、細動脈弛緩を起こす薬物であるアデノシンの局所投与後に、図１Ｂで認める。細動脈の収縮を、カンナビノイドＴＨＣとＣＯＸ−２阻害剤との組合せ投与後に、図１Ｃで認める。
【００５４】
実施例７−ＣＯＸ−２阻害剤に対する細動脈応答
精巣挙筋細動脈の応答を図２にグラフにする。細動脈直径の秒単位％変化をプロットする。全身的投与のビヒクルに暴露された精巣挙筋細動脈は、投与後３分間で直径に基本的に変化がない。ＮＳ−３９８をビヒクルとともにマウスに投与したとき、細動脈直径に最初緩和な弛緩が８％上昇するが、約３分間で元に戻る。
【００５５】
実施例８−ＣＯＸ−２阻害剤の有無でのＣＲＡに対する細動脈の応答
ＣＲＡの精巣挙筋細動脈に対する作用を、その単独およびＣＯＸ−２阻害剤との併用で調べ、図３にグラフとする。図３は、秒単位での細動脈直径の％変化についての３グラフである。図３Ｃは、△８−ＴＨＣ（「ＴＨＣ」と実施例ではいう）およびＴＨＣのＮＳ−３９８との組合せの全身的投与後における細動脈直径の変化を示す。図３Ｃに示すように、ＣＲＡ（ＴＨＣ）とＣＯＸ−２阻害剤（ＮＳ−３９８）との組合せは、精巣挙筋細動脈の長い収縮を表し、細動脈直径の４５％減少が試験の全期間７５０秒（１２．５分）続く。
【００５６】
図３Ｃは、最初の１００秒のグラフ、図３Ｂの伸張図である。このグラフによると、ＣＲＡと、ＣＲＡのＣＯＸ−２阻害剤組合せ物の両者が約１５％の細動脈の最初の緩和な収縮を起こす。しかし、投与約３０秒後に、精巣挙筋細動脈の直径が、ＣＲＡのみを投与されたマウスにおいて元の直径に戻る。一方、ＣＲＡとＣＯＸ−２阻害剤の両者が投与されたマウスにおいては、精巣挙筋細動脈の直径は減少したままである。
【００５７】
微血管系の直径に対する全身的作用を除外するために、ＴＨＣを精巣挙筋細動脈に局所的に用いる。図３Ａに示すように、局所ＴＨＣの精巣挙筋細動脈に対する応答は、図３Ｂに示すＴＨＣ全身的投与に対する応答を反映する。
【００５８】
実施例９−ＣＲＡに対する腸間膜細動脈の応答
実施例２に記載のプロトコールに続いて、ＴＨＣを腸間膜細動脈に局所的に投与する。図４に示すように、ＣＲＡの局所的投与は、腸間膜細動脈においては精巣挙筋細動脈におけるのと異なる応答を起こす。腸間膜細動脈に対するＣＲＡ投与は、５秒以内の最初の短い収縮、ついで弛緩し、投与約１００秒後に元に戻る２相性応答を生じる。ＣＲＡ投与に対する腸間膜細動脈の応答は、科学文献に前に報告されているのと一致する。
【００５９】
実施例１０−ＮＳ３９８の有無でのアマンダミンの細動脈応答
図５Ａは、ＮＳ−３９８の有無でのアマンダミン（ＡＮＡ）の局所的投与に対する精巣挙筋細動脈の時間的％変化を示すグラフである。図５Ｂは、ＮＳ−３９８の有無でのアマンダミン（ＡＮＡ）の全身的投与に対する精巣挙筋細動脈の時間的％変化を示すグラフである。図５に示すように、ＡＮＡは、局所的または全身的のいずれの投与でも、投与２００秒後まで精巣挙筋細動脈の弛緩を起こす。図５はさらに、ＮＳ−３９８のＡＮＡとの共投与がＡＮＡにより起こされた細動脈弛緩をブロックすることを示す。
【００６０】
実施例１１−出血ショック
体重３００−３５０ｇの１４月齢 Sorague-Dawley マウスを標準化し、Collins, JA, Arch. Surg., 99:484-487 (1967)により開発されたラット出血ショックモデルに従い、Wagner, JA, Nature, 390:518-521 (1997) の改変に従い、出血せしめた。ラットをイソフルラン（０．７ｇ／ｋｇ腹腔内）で動なくし、ついでウレタン（０．３ｇ／ｋｇ腹腔内）または３００−３５０μｌのケタミン（８７ｍｇ／ｍｌ）とキシラジン（１３ｍｇ／ｍｌ）の筋肉注で麻酔する。体温を対流加温で約３７℃に保持する。
【００６１】
ラットを仰臥位に、脚を縛って処理ボードに保持する。左脚の鼠径部を剃り、切開して大腿神経血管束を表した。左大腿の静脈および動脈にＰ５０のカニューレを挿入し、その場に４−０絹糸で堅く縛る。腹側脳領域で中心切開を行い、下側組織を縦に開いて、頸動脈を露出した。その場に４−０絹糸で堅く縛ったＡ１．４Ｆ（０．５６ｍｍ）Miller カテーテル圧トランスデューサーを動脈に挿入し、血圧と心拍数をモニターする。左大腿静脈を薬物注射に用い、左大腿動脈を出血およびサンプリングに用いる。
【００６２】
平均血圧が４０ｍｍＨｇに安定するまで（約２−２．５ｍｌ血液の除去）、ラットから出血せしめる。この圧で５−１０分後、動物に、ビヒクル（対照動物）または１２ｍｇ／ｋｇＣＲＡ（ＴＨＣ）および２ｍｇ／ｋｇＣＯＸ−２阻害剤（ＮＳ−３９８）を提供する薬物の同じビヒクル溶液を注射する。血圧および心拍を試験中モニターする。試験の終了時を、不整脈または無呼吸が生じた時、あるいは血圧が２０ｍｍＨｇ以下に低下した時とする。この時点で、動物は重い障害の状態にあり、飽和ＫＣｌの心臓内注射で安楽死せしめる。
【００６３】
この試験の結果を図６にグラフとする。これは、上記の出血ショックにかけたラットの動脈血圧について、ＣＯＸ−２阻害剤とＣＲＡとの共投与による本発明の処置と、非処置とを比較する。図６における矢印１は、血圧が４０ｍｍＨｇに低下した時点を表示する。矢印２は、ビヒクルまたは本発明の薬物組合せ物を注射した時点を表示する。
【００６４】
図６に示すように、本発明に従って処置されないで、ビヒクルが投与されたラットにおける血圧は、２０ｍｍＨｇ以下に、徐々の出血の開始後約４０−５０分まで低下し続ける。一方、本発明に従って処置されたラットにおける血圧は、ＣＯＸ−２阻害剤とＣＲＡとの組合せ注射時の血圧（４０ｍｍＨｇ）以下に下がらない。事実、血圧は、この注射後に上昇し、少なくとも６時間上昇のままである。この時点で試験を終了する。
【００６５】
本明細書に記載された本発明の改変、利用および適用は、当業者に明らかであろう。かかる改変も本発明の請求項に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】図１Ａ−Ｃは、一連の生体内の顕微鏡像であって、それぞれ、処置前の細動脈、細動脈の弛緩を起こす薬物の投与後の細動脈、およびカンナビノイドとＣＯＸ−２阻害剤との共投与後の細動脈を示す。
【図２】図２は、ＣＯＸ−２阻害剤に対する細動脈の血管活性応答を対照と比較して示すグラフである。
【図３】図３Ａ−Ｃは、一連のグラフであって、それぞれ、カンナビノイド投与後の細動脈の血管活性応答、ＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド投与後の最初の１００秒における細動脈の血管活性応答、ならびにＣＯＸ−２阻害剤およびカンナビノイド投与後の１２．５分間におけるこの細動脈の血管活性応答を示す。
【図４】図４は、カンナビノイドに対する腸間膜細動脈の応答を示すグラフである。
【図５】図５ＡおよびＢは、対のグラフであって、それぞれ、ＣＯＸ−２阻害剤の有無での、局所的および全身的投与のカンナビノイドに対する細動脈の血管活性応答を示す。
【図６】図６は、非処置のラットおよびカンナビノイドとＣＯＸ−２阻害剤の併用での処置のラットにおける、段階的出血の開始後の血圧の変化を示すグラフである。矢印１は４０ｍＨｇに達した時点を、矢印２は薬物またはビヒクル注入時点を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【国際調査報告】
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