(57)【要約】化学式（Ｉ）のナフタレンスルホン酸又はキノリンスルホン酸であって、式中、Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり、ここでＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、ＮＲ10Ｒ11であり、ここでＲ10及びＲ11は、Ｈ、又はＣ1−Ｃ6アルキル又は化学式ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基を表し、ここでＲ12はＣ1−Ｃ6アルキル又はＣ6−Ｃ10アリールであり；Ｒ1及びＲ2は、互いに独立して、Ｈ、又はＳＯ3Ｒ9であり、ここでＲ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；Ｒ3は、Ｈ、又はＯＨであり；そして、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、及びＲ7は、互いに独立して、Ｈ、ＮＲ10Ｒ11、又はＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基を表し；但し、（ｉ）Ｒ1又はＲ2の少なくとも１つがＳＯ3Ｒ9であり、そして（ii）Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、又はＲ7の少なくとも１つは、ＮＲ10Ｒ11、又はＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基である、あるいはこれらの医薬組成物的に受容可能な塩；及び医薬的に受容可能な賦形剤。
2006522073.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）少なくとも１つの化学式（Ｉ）の化合物
【化１】
2006522073.tif 000005
式中：
Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＳＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表わし；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は、前述の意味を有する；
又は、これらの医薬的に受容可能な塩若しくはプロドラッグ；及び、
（ii）少なくとも１つの医薬的に受容可能な賦形剤、
を含んで成る医薬組成物。
【請求項２】
化学式（Ｉ）の化合物、
式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、Ｈ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ2は、ＳＯ3Ｒ9であり；
Ｒ3は、Ｈ、ＯＨ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールであり；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12であり、ここでＲ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する、
を含んで成る、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
化学式（Ｉ）の化合物、
式中：
Ａは、ＣＲ8であり、ここでＲ8はＨ又はＯＨである；
Ｒ1は、Ｈであり；
Ｒ2は、ＳＯ3Ｒ9であり、ここでＲ9がＨ又はナトリウムである；
Ｒ3は、Ｈであり；そして、
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、及びＲ7は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2を表し；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、又はＲ7の少なくとも１つは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2である、
を含んで成る、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−ベンゾイルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、８−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、８−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、４−ヒドロキシ−６−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及びこれらの混合体により形成される群から選択される化学式（Ｉ）の化合物から成る、請求項２又は３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
化学式（Ｉ）に記載の化合物、
式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、ＳＯ3Ｒ9であり；
Ｒ2は、Ｈ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ3は、Ｈ、ＯＨ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールであり；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12であり、ここでＲ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する、
を含んで成る、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
化学式（Ｉ）の化合物、
式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、ＳＯ3Ｒ9であり、ここでＲ9はＨ又はナトリウムである；
Ｒ2は、Ｈであり；
Ｒ3は、Ｈであり；そして、
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2を表し；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2である、
を含んで成る、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
４−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、４−アセチルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、４−ベンゾイルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、４−アミノ−３−ヒドロキシ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及びこれらの混合体により形成される群から選択される、化学式（Ｉ）の化合物を含んで成る、請求項５又は６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
化学式（Ｉ）の化合物、
式中：
Ａは、Ｎであり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＣＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する、
を含んで成る、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
１又は複数の化学式（Ｉ）の化合物を含んで成る、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
化学式（Ｉ）のナフタレンスルホン酸誘導体
【化２】
2006522073.tif 000006
式中：
Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＳＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表わし；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は、前述の意味を有する；
又は、これらの医薬的に受容可能な塩若しくはプロドラッグ、
の使用であって、ＦＧＦ生物活性が関係する疾患又は状態の予防又は治療のための医薬製品の調製における使用。
【請求項１１】
上記疾患又は状態が、関節リウマチ、子宮内膜症、肥満症、動脈硬化、再狭窄、乾癬から選択される血管形成依存性疾患である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
上記疾患又は状態がいずれかの種類の癌である、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
化学式（Ｉ）の化合物
【化３】
2006522073.tif 000007
式中：
Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＳＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表わし；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は、前述の意味を有する；
又は、１つのこれらの医薬的に受容可能な塩若しくはプロドラッグ、
の使用であって、化学療法又は放射線治療に対する癌細胞の感受性を増加させるための、医薬製品の調製における使用。
【請求項１４】
化学式（Ｉ）の化合物
【化４】
2006522073.tif 000008
式中：
Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＳＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表わし；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は、前述の意味を有する；
又は、１つのこれらの医薬的に受容可能な塩若しくはプロドラッグ、
の使用であって、ＦＧＦ生物活性に関係する疾患又は状態のための診断キットの調製における使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１つのナフタレンスルホン酸又はキノリンスルホン酸誘導体を含んで成る医薬組成物、並びにこれらの治療的及び／又は診断的適用に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸性及び塩基性線維芽細胞成長因子（それぞれ、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ）は、生化学及び生物学特性が極めて類似し、全ての分裂促進因子ファミリー（ＦＧＦｓ）の系列であると考えられる２つのポリペプチドである。ＦＧＦは、一般的に、ヘパリン及びヘパラン硫酸のグリコシド部位に強力な親和性を示し、細胞表面上のこれらの特異的なチロシンキナーゼレセプターを認識するため、及び細胞分裂シグナルにおけるこれらの存在を伝達するために、いずれかのこれらのポリスルフェートに対する結合がＦＧＦに必要とされることが示されている。
【０００３】
ＦＧＦｓは極めて重要な血管形成プロモータであり、そして不適当なＦＧＦ発現は癌及び他の種類の症状の発達に寄与し得る。血管形成は、ある正常な生理状態、例えば、創傷治癒、胎児及び胚の発達、並びに子宮内膜及び胎盤における黄体の形成において起こる組織又は器官中の新しい血管の形成により特徴づけられるプロセスである。更に血管形成はある病理状態、例えば、癌、糖尿病性網膜症、関節リウマチ等の病原的な基礎を構成する。従って、血管形成、特に、ＦＧＦ阻害活性は、これらの疾患、特に、癌、そして特には固形腫瘍の薬理的治療を形成することができると信じられる。固形腫瘍が悪性になると、これらは成長に必要な供給物を受け取ることにより高密度な血管ネートワークを誘導し、そしてこれらの異化反応生成物を除去する。当該腫瘍の崩壊は、栄養素の不足及び自家中毒症の原因となる、当該血管ネットワークの形成を阻害することにより起こる。
【０００４】
血管形成の影響に追加して、ＦＧＦ活性化阻害は、抗腫瘍治療において他の潜在的に正の影響を有する。これらの血管形成活性に関わらず、ＦＧＦは直接的に多くの種類の腫瘍細胞の増殖を誘導する[例えば、Bieker R., et al (2003) Cancer Res. 63, 7241-7246; Polnaszek N et al, (2003) Cancer Res. 63, 5754-5760 ; Kono K., et al (2003) J Neuroocol 63,163-171, Rosini P., et al (2002) Prostate"53, 310-321, Yura Y., (2001) J. Oral. Pathol. Med. 30,159-167] 。また、ＦＧＦ活性は抗癌剤に対する腫瘍細胞の耐性に関係し、ＦＧＦの不活性化により、上記耐性を戻すことが可能であることが示されている[Song S. Et al., (2000) PNAS 97, 8658- 8663, Pardo OE., et al, (2003) Mol. Cell. Biol., 23,7600-7610, Zhang Y et al., (2001) J Pharmacol. Exp. Ther. 299, 426-433, Song S et al., (2001) Cancer Res. 61, 6145-6150 ] 。
【０００５】
臨床的な開発の異なる段階における腫瘍学のための多くの抗血管形成剤 [Krueger et al. (2001) Seminars in Oncology 28,570-576]、正の血管制御因子の影響に対抗するために生物が使用する、考慮すべき数のポリペプチドが存在する[Hagedorn, M. & Bikfalvi, A. (2000) Crit. Rev. Onc. Hemat. 34,89-110]。しかしながら、上記ポリペプチドを、考慮すべき低分子量を有する他の化合物と比較した場合、これらの薬理的な弱点が明らかにされる。
【０００６】
スラミンとして知られるポリスルホン酸化ビナフチル尿素は、潜在的な抗血管形成及び抗癌剤として考えられ[Manetti, F., et al. (2000) Curr. Pharm. Des. 6,1897-1924]、これは、少なくともある程度、ＦＧＦ及びこれらのチロシンキナーゼレセプターの場合のように、多くの成長因子とこれらの膜レセプターの相互作用を中断するこれらの能力によるものである。ヘパリンはａＦＧＦ／スラミン複合体を破壊し、そしてこれらのポリスルホン酸化尿素の影響に対抗することが示されてきたが、スラミンはＦＧＦヘパリン結合部位を遮断することにより作用すると考えられる。
【０００７】
抗血管形成及び抗癌化合物の他の群は、スルホン酸ビナフタレンジスタマイシンＡの合成誘導体型である、スラジスタ（suradista)により形成される。これらの化合物は、ＦＧＦと密接に相互作用し、これらのポリペプチドの細胞膜チロシンキナーゼレセプターの結合を阻害し、そして、生体内においてＦＧＦ誘導血管形成及び新血管新生を抑制する。
【０００８】
言い換えると、１，３，６−ナフタレントリスルホン酸（１，３，６−ＮＴＳ）が、スラミン及びスラジスタにより、ａＦＧＦ分裂促進活性阻害の最小モデルを構成することが発見されている[Lozano, R. M., et al. (1998) J. Mol. Biol. 281, 899-915] 。上記化合物（１，３，６−ＮＴＳ）は、正の結果を伴い試験管内及び生体内の両方において、ａＦＧＦ誘導血管形成及びグリア細胞腫増殖阻害因子として試験されおり[Lozano, R. M., et al. (1998) J. Mol. Biol. 281,899-915 ; Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21, 191-194; Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21, 481-487 ; Cuevas, P., et al. (1999) Neurosci. Lett. 275,149-151]、新しい抗血管形成化合物の開発の新規な潜在的な経路を示唆する。Lozanoらの研究（上述）もまた、芳香環当たり、減少した数のスルホン酸基を含むあるナフタレン誘導体、特には、１，５−ナフタレンジスルホン酸（１，５−ＮＤＳ）及びナフタレンスルホン酸（１−ＮＭＳ）が、ＮＴＳよりもａＦＧＦ分裂促進活性阻害因子として作用したことを明らかに示した。しかしながら、これらの化合物は、これらがａＦＧＦ分裂促進活性を阻害する濃度において明らかな毒性を示した。
【０００９】
従って、ＦＧＦ活性阻害化合物、好ましくは上記阻害能を有し、且つ低い細胞毒性しか有さない化合物を発見する必要性が未だ存在する。
【発明の開示】
【００１０】
本発明発明の発明者は、化学式（Ｉ）のあるスルホン酸誘導体、特に、スルホ基／スルホン酸基、及び任意的に水素結合を形成できる極性基（このような極性基は、例えば、芳香環のある位置に存在するアミン基である）を含んで成るあるナフタレンスルホン酸又はキノリンスルホン酸誘導体が、培養中の線維芽細胞におけるａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子並びに血管形成阻害因子であることを観察し、そしてこれらは更に試験動物中で毒性の兆候を示すことなく、動物試験において腫瘍形成を阻害する。従って、上記化合物は、癌の治療において、特に、固形腫瘍の治療において潜在的に有用である。また、同様に、上記スルホン酸誘導体は、他の非腫瘍血管形成依存型疾患、例えば、関節リウマチ、子宮内膜症、肥満症、動脈硬化、再狭窄、乾癬等の治療において潜在的に有用である。
【００１１】
従って、本発明のある観点は、少なくとも１つの上記ナフタレンスルホン酸又はキノリンスルホン酸誘導体と一緒に医薬的に受容可能な賦形剤を含んで成る医薬組成物に関する。
【００１２】
他の観点において、本発明は、癌の治療、非腫瘍血管形成依存型疾患、例えば、関節リウマチ、子宮内膜症、肥満症、動脈硬化、再狭窄、乾癬等の治療のための医薬製品の調製における上記ナフタレンスルホン酸又はキノリンスルホン酸誘導体の使用に関する。
【００１３】
他の追加的な観点において、本発明は、化学療法又は放射線治療に対する癌細胞の感受性を増大させるための医薬製品の調製における化学式（Ｉ）の誘導体の使用、並びに、ＦＧＦ生物活性に関係する疾患又は状態の診断キットの調製におけるこれらの使用に関する。
【００１４】
いくつかの２−ナフタレンスルホン酸誘導体が知られており、例えば、５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸（Aldrich)は、染色産業において使用される。上記５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸のナトリウム塩 [J. Chem. Soc. 3172 (1959) ; Helv. Chim. Acta 45, 1608 y 1611 (1962)]、並びに５−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム [J. Med. Chem. 38 (8), 1344-1354 (1995) ; J. Med. Chem. 40 (6), 920-929 (1997)] も知られている。
【００１５】
発明の詳細な説明
ある観点において、本発明は以下を含んで成る医薬組成物に関する：
（ｉ）少なくとも１つの化学式（Ｉ）の化合物
【化１】
2006522073.tif 000003
式中：
Ａは、Ｎ、又はＣＲ8の化学式群であり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＳＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表わし；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は、前述の意味を有する；
又は、これらの医薬的に受容可能な塩若しくはプロドラッグ；及び、
（ii）少なくとも１つの医薬的に受容可能な賦形剤。
【００１６】
本明細書において使用される「Ｃ1−Ｃ6アルキル」の語は、飽和した、直鎖又は分岐鎖の炭素原子が１〜６の炭化水素由来のラジカル、例えば、メチル、エチル、イソプロピル等を意味する。
【００１７】
本明細書において使用される「Ｃ6−Ｃ10アリール」の語は、炭素原子が６〜１０の芳香族炭化水素由来のラジカル、例えば、フェニル、ナフチル等を意味する。
【００１８】
「医薬的に受容可能な塩又はプロドラッグ」の語は、医薬形態において使用でき、そして生体内において、化学式（Ｉ）の化合物を直接的又は間接的に供することができるいずれかの塩、エステル、アミド、溶媒和化合物、水和物、多形形態等を含む。当該塩の性質は、医薬的に受容可能である限り重大な意味を持たない。
【００１９】
化学式（Ｉ）の化合物の塩は、当業者に周知な慣習的な方法により、適当な酸又は塩基と化学式（Ｉ）の化合物を反応させることにより、有機若しくは無機酸、又は塩基から得ることができる。
【００２０】
上記プロドラッグは、当業者に周知な方法により、塩基又は触媒の存在下において、化学式（Ｉ）の化合物とカルボン酸、無水物又はハロゲン化アシルを反応させることにより、例えば、エステルに変換した遊離ヒドロキシル基、又はアミドに変換したアミノ基から得ることができる。
【００２１】
化学式（Ｉ）の化合物中に含まれるものは、ナフタレンスルホン酸誘導体[ＡがＣＲ8である化学式（Ｉ）の化合物]及びキノリンスルホン酸誘導体[Ａが窒素である化学式（Ｉ）の化合物]である。
【００２２】
特別の態様において、化学式（Ｉ）の化合物は、２−ＮＭＳ系（２−ナフタレンスルホン酸誘導体）に属するナフタレンスルホン酸誘導体であり、式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、Ｈ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ2は、ＳＯ3Ｒ9であり；
Ｒ3は、Ｈ、ＯＨ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9はＨ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールであり；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12であり、ここでＲ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する。
【００２３】
２−ＮＭＳ系の好ましい化合物は、化学式（Ｉ）の化合物を含み、式中：
Ａは、ＣＲ8であり、ここでＲ8はＨ又はＯＨである；
Ｒ1は、Ｈであり；
Ｒ2は、ＳＯ3Ｒ9であり、ここでＲ9はＨ又はナトリウムである；
Ｒ3は、Ｈであり；そして、
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、及びＲ7は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2を表し；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、又はＲ7の少なくとも１つは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2である。
【００２４】
２−ＮＭＳ系の化合物の説明例は以下を含む：
５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム
５−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム
５−ベンゾイルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム
８−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム
８−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及び、
４−ヒドロキシ−６−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム。
【００２５】
当該２−ＮＭＳ系中、５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及び４−ヒドロキシ−６−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム化合物が特に好ましく、そして特に５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウムが好ましく、これらが強力なａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子、ａＦＧＦ誘導血管形成活性阻害因子であること、更にこれらは培養中の線維芽細胞に毒性がないことが示された。
【００２６】
他の特別な態様において、化学式（Ｉ）の化合物は、１−ＮＭＳ系（１−ナフタレンスルホン酸誘導体）に属するナフタレンスルホン酸誘導体であり、式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、ＳＯ3Ｒ9であり；
Ｒ2は、Ｈ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ3は、Ｈ、ＯＨ、又はＣ1−Ｃ6アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールであり；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12であり、ここでＲ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する。
【００２７】
１−ＮＭＳ系の好ましい化合物は、化学式（Ｉ）の化合物を含み、式中：
Ａは、ＣＲ8であり；
Ｒ1は、ＳＯ3Ｒ9であり、ここでＲ9はＨ又はナトリウムである；
Ｒ2は、Ｈであり；
Ｒ3は、Ｈであり；そして、
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2を表し；
但し、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7又はＲ8の少なくとも１つは、ＯＨ、ＯＣＨ3、ＣＯＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＨＣＯＣ6Ｈ5、ＮＨＣＨ3、又はＮ（ＣＨ3）2である。
【００２８】
１−ＮＭＳ系の化合物の説明例は以下を含む：
４−アミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、
４−アセチルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、
４−ベンゾイルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、
５−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及び、
４−アミノ−３−ヒドロキシ−１−ナフタレンスルホン酸ナトリウム。
【００２９】
他の特別な態様において、化学式（Ｉ）の化合物は、キノリンスルホン酸誘導体であり、式中：
Ａは、Ｎであり；
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、及びＲ8は、互いに独立して、Ｈ、ＣＯ3Ｒ9、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12、又はＣ1−Ｃ6アルキルを表し；
Ｒ9は、Ｈ、アンモニウム、又はアルカリ若しくはアルカリ土類金属のカチオンであり；
Ｒ10及びＲ11は、互いに独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールを表し；
Ｒ12は、ＯＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、又はＣ6−Ｃ10アリールである；
但し：
（ａ）Ｒ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＳＯ3Ｒ9であり、そして、
（ｂ）残りのＲ1〜Ｒ8の少なくとも１つが、ＯＲ10、ＣＯ2Ｒ10、ＮＲ10Ｒ11、ＮＨ−ＣＯ−Ｒ12基であり、
ここで、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、及びＲ12は前述の意味を有する。
【００３０】
本発明の組成物は１又は複数の化学式（Ｉ）の化合物を含んでよい。本発明の医薬組成物は、好ましくは、５−アミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−アセチルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、５−ベンゾイルアミノ−２−ナフタレンスルホン酸ナトリウム、及びこれらの混合体から選択される化学式（Ｉ）の化合物を含んで成る。
【００３１】
化学式（Ｉ）の化合物は、商業的に、又は慣習的な方法（実施例４）のいずれかにより得ることができる既知の生成物である。
【００３２】
化学式（Ｉ）の化合物は、試験管内及び生体内の両方においてＦＧＦ活性を阻害する能力を有し、ＦＧＦは、血管ネットワーク形成を誘導するための、並びに移植された腫瘍により誘導される血管形成を阻害するための重要な物質である。上記化学式（Ｉ）の化合物は、動物の試験において、腫瘍形成を阻害する能力を有する。特に、ある化学式（Ｉ）の化合物は、抗血管形成活性と一緒に低い細胞毒性を有し、このため癌の治療、特に固形腫瘍の治療の候補として、及び非腫瘍性血管形成依存型疾患の候補として極めて適当である。いずれかの理論に結びつけることを意図するわけではないが、化学式（Ｉ）の化合物の化合物は、固形腫瘍が悪性になると誘導される血管ネットワークの形成を防止し、これにより、栄養分の不足及び自家中毒、更に腫瘍細胞の増殖を直接阻害することが原因で腫瘍の崩壊を引き起こすと信じられる。
【００３３】
いくつかの試験は、培養中の線維芽細胞においてａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害するための（実施例１）、並びに生体内においてａＦＧＦ及びｂＦＧＦ誘導血管形成を阻害するための（実施例２）、そして腫瘍細胞の移植により動物中で誘導される血管形成を阻害するための（実施例３）化学式（Ｉ）の化合物の能力を明らかに示す。
【００３４】
本発明により供される医薬組成物は、治療的有効量の少なくとも１つの化学式（Ｉ）の化合物と、一緒に少なくとも１つの医薬的に受容可能な賦形剤を含んで成る。上記医薬組成物は、動物、好ましくは人の体の内部又は表面において投与及び／適用するために有用である。
【００３５】
上記医薬組成物の調製における化学式（Ｉ）の化合物の使用は、本発明の更なる観点である。
【００３６】
化学式（Ｉ）の化合物は、化学式（Ｉ）の化合物と動物の体のその作用部位とを接触させるいずれかの方法により、癌、特に、固形腫瘍、あるいは、非腫瘍血管形成依存型疾患、例えば、関節リウマチ、子宮内膜症、肥満症、動脈硬化、再狭窄、乾癬の治療のために投与することができる。投与しなければならない化学式（Ｉ）の化合物の治療的有効量、並びに、上記化学式（Ｉ）の化合物及び／又は本発明の医薬組成物での病理状態の治療のための投与量は、治療する疾患、年齢、患者の状態、疾患の重篤度、使用される化学式（Ｉ）の化合物の投与方法及び頻度等を含むいくつかの因子に依存するであろう。
【００３７】
本発明により供される化学式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物は、適当であると考えられるいずれかの投与形態、例えば、固体又は液体として提供することができ、そして、これらはいずれかの適当な方法、例えば、経口的、非経口的、直腸的、又は局所的に投与することができ、いずれにしろ、これらは所望される投与形態の形成のために必要である医薬的に受容可能な賦形剤を含むであろう。医薬製品及びこれらを得るために必要な賦形剤を投与するための異なる投与形態の概説は、例えば、"Tratado de Farmacia Galenica", C. Fauli i Trillo, 1993, Luzan 5, S. A. Ediciones, Madrid において見つけることができる。
【００３８】
上記化学式（Ｉ）の化合物は、癌、特に固形腫瘍、例えば、乳癌、前立腺癌等の治療のための医薬製品の調製において使用することができる[Rosti G., et al. (2002) Crit. Rev. Oncol. Hemato. 41, 129-240]。あるいは、化学式（Ｉ）の化合物は、他の血管形成依存型疾患、例えば、皮膚病、関節リウマチ、子宮内膜症、肥満症、動脈硬化、再狭窄、乾癬等の治療のための医薬製品の調製において使用することができる。
【００３９】
他の活性剤、例えば、抗癌剤は、化学式（Ｉ）の化合物と一緒に使用することができる。異なる活性剤は、単一の製剤若しくは複数の製剤において同時に、又は継続的に投与することができる。
【００４０】
化学療法、又は放射線治療に対する癌細胞の感受性を増大するための医薬製品の調製における化学式（Ｉ）の誘導体の使用、並びにＦＧＦ生物活性に関係する疾患又は状態の診断するためのキットの調製におけるこれらの使用は、本発明の他の更なる観点である。
【００４１】
以下の実施例は本発明を説明し、そしてその範囲を制限するものとして考慮してはならない。
【実施例】
【００４２】
実施例１
ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害
Lozanoらの研究[Lozano, R. M., et al. (1998) J. Mol. Biol. 281,899-915] は、あるナフタレンスルホン酸化合物、例えば、１，３，６−ナフタレントリスルホン酸（１，３，６−ＮＴＳ）、１，５−ナフタレンジスルホン酸（１，５−ＮＤＳ）、及び１−ナフタレンスルホン酸（１−ＮＭＳ）が、ａＦＧＦ誘導性分裂促進阻害因子であることを明らかに示した。１−ＮＭＳは１，３，６−ＮＴＳ及び１，５−ＮＤＳよりもより潜在的な阻害因子である。しかしながら、１−ＮＭＳ及び１，５−ＮＤＳは、これらがａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する濃度においては毒性である。
【００４３】
このたび、より潜在的な薬理的特性を伴う他のアリールスルホン酸化合物を発見する目的のため、異なる立体的容積又は負荷を伴う一定の官能基を異なる芳香族化合物の異なる位置に置くことによる反復性の試験誤差プロセスに従い、ａＦＧＦ活性化因子の存在下における培養中の線維芽細胞において、これらのａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発阻害活性を試験した。ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する上記アリールスルホン酸化合物の検索において、出発物質として使用された物質は、１−ＮＭＳと称される系を生じた１−ナフタレンスルホン酸（１−ＮＭＳ）及び２−ＮＭＳと称される系を生じた２−ナフタレンスルホン酸（２−ＮＭＳ）であった。１−ＮＭＳ、２−ＮＭＳ等は、ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害し（より低い濃度においてそのように行うが）、そしてａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する濃度範囲において静止状態の線維芽細胞に毒性である。また、他のアリールスルホン酸化合物も試験した（表１を参照のこと）。
【００４４】
１．１  試験化合物
表１は全ての試験した化合物を挙げ、一方これらの調製は実施例４において説明する。
表１
試験化合物
【表１】
2006522073.tif 000004
【００４５】
１．２  ａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発阻害試験
上記ａＦＧＦタンパク質の分裂促進活性を評価するために通常使用される細胞である、Ｂａｌｂ／ｃ  ３Ｔ３  線維芽細胞［ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１６５８］の細胞培養におけるａＦＧＦの分裂促進応答を慣習的な方法により評価した[Lozano, R. M., et al. (1998) J. Mol. Biol. 281, 899-915]、手短には、ａＦＧＦ（０．３２ｎｇ／ｍＬ）の不存在下又は存在下のミオイノシトールヘキサスルフェート（ＭＩＨＳ）（２０μｇ／ｍＬ）を補充した最小培地で６０時間培養中の線維芽細胞と接触する試験化合物の濃度を上昇させることからなる[Zazo M., Lozano, R. M., Ortega S., Varela J., Diaz-Orejas R., Ramirez J. M., Gimenez-Gallego G., in Gene (1992) 113,231-238により開示された１３９アミノ酸残基のａＦＧＦが使用された]。
【００４６】
１．３  結果
得られた結果は図１において示され、全ての試験化合物のための培養中の線維芽細胞におけるａＦＧＦ誘導性分裂促進阻害試験の結果（○）、それと一緒に静止状態の線維芽細胞のための上記化合物の毒性分析（□）を要約する。
【００４７】
手短には、上記結果は、実質的に全ての試験化合物が、１ｍＭ強の濃度において進行的にａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発を阻害することを明らかに示す（試験化合物の濃度の増加として示差吸光度ユニット（○）の減少を参考のこと）。また、上記分裂促進試験において、浮遊細胞又は他の細胞の破裂の兆候の不存在は、多くの試験化合物がａＦＧＦの不存在下又は存在下において線維芽細胞に毒性ではないことを示す。言い換えると、試験化合物によるａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発阻害は、ヘパリン濃度を上昇させることにより補償することができ（ａＦＧＦ分裂促進活性化因子）（データは示さない）、上記化合物が、タンパク質とその活性化因子間の結合を遮断することにより作用するａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であることが断定できる。
【００４８】
より特別には、１−ＮＭＳ系に関して、Ｃ−１、Ｃ−２、Ｃ−４、Ｃ−６、及びＣ−７化合物は、ａＦＧＦ分裂促進活性を阻害する濃度範囲において、これらは静止状態の線維芽細胞において一定の毒性効果を示すが、ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であることを観察することができる。化合物Ｃ−７は最も低いＩＣ50を示すものであるあるが、０．２ｍＭ以上の濃度において逆の効果が観察される（これは、ａＦＧＦの不存在下において培養した静止状態の線維芽細胞の増殖が優位に増加することである）。化合物Ｃ−３及びＣ−５は、試験した濃度範囲中で、低いａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発阻害因子活性を示すが、上記濃度範囲中で静止状態の線維芽細胞に毒性ではない。
【００４９】
２−ＮＭＳ系に関して、化合物Ｃ−８が、化合物Ｃ−１よりも低い濃度においてａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害することが観察される；しかしながら、また、ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する濃度範囲において静止状態の線維芽細胞に毒性である。また、化合物Ｃ−１２及びＣ−１３は、有効なａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発活性阻害因子であるが、これらは、ａＦＧＦの不存在下ですら高い有糸分裂誘発因子活性を有する。しかしながら、当該最後の効果は、２番目に優れたＩＣ50値を有する化合物Ｃ−９において生じず、少なくともａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する濃度範囲において観察された静止状態の線維芽細胞に対する化合物Ｃ−１及びＣ−８に説明した毒性効果もない。Ｃ−９よりもやや低い阻害因子活性を有する他の２つの化合物が更に明らかにされ、具体的には化合物Ｃ−１０及びＣ−１７であり、Ｃ−９同様、静止状態の線維芽細胞に非侵害性であった。化合物Ｃ−１５及びＣ−１６はａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であり、試験濃度範囲中では静止状態の線維芽細胞に非侵害性である。化合物Ｃ−１１、Ｃ−１４及びＣ−１８もまた、ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であるが、化合物Ｃ−１４は、試験濃度範囲中で静止状態の線維芽細胞において一定の毒性効果を示す。化合物Ｃ−１９は、静止状態の線維芽細胞において一定の腫瘍化効果を示す。化合物Ｃ−９の阻害因子活性ＩＣ50は、２６５μＭであり、１，３，６−ＮＴＳの２オーダー以上優り [Lozano, R. M., et al. (1998) J. Mol. Biol. 281, 899-915] 、そして、マウス中の慣習的な血管形成試験により（実施例２）、そして動物の腫瘍形成の阻害因子として（実施例３）、生体内における血管形成阻害因子としての使用を評価するために選択された。
【００５０】
化合物Ｃ−２０、Ｃ−２２、及びＣ−２４は、試験濃度においてａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発阻害因子活性をほとんど示さなかったが、これらは、静止状態の線維芽細胞に非侵害性であった。化合物Ｃ−２３は潜在的なａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であるが、ａＦＧＦ誘導性分裂促進活性を阻害する濃度範囲中で静止状態の線維芽細胞において毒性効果を示す。化合物Ｃ−２１及びＣ−２５は、静止状態の線維芽細胞において一定の腫瘍化効果を示す。
【００５１】
得られた結果は、血管形成において、アリールスルホン酸誘導体、好ましくはナフタレンスルホン酸誘導体の潜在的な薬理的な適用可能性を改善する立体化学ガイドライン系を確立することを許容し、特に：
ａ）２−ＮＭＳ系誘導体は一般的に１−ＮＭＳ系誘導体よりも潜在的なａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子であるため、スルホン酸基は、好ましくは、ナフタレンの２位に位置しなければならない。
ｂ）２−ＮＭＳ系誘導体中、ナフタレン環の５又は６位にアミノ酸を含むものは、より優れたａＦＧＦ誘導性分裂促進活性阻害因子である（それぞれ、Ｃ−１４及びＣ−１８に対するＣ−９及びＣ−１７を参照のこと）；そして、
ｃ）小アミドによるアミノ基の置換は、実質的に阻害因子活性を変化しないため（Ｃ−１０に対するＣ−９を参照のこと）、５位に存在する官能基の大きさは、一定の関連性を有するようである；しかしながら、かさ高いアミドを導入すると、有意な減少が観察される（Ｃ−１１及びＣ−１３に対するＣ−９を参照のこと）。
【００５２】
ナフタレン環は、ほとんどの適当な阻害因子の核を構成するようであるが、２位においてスルホン酸基を有し、そして５又は６位にアミン基を有するキノリンもまた使用できることが予想される。
【００５３】
化合物Ｃ−７は、最も優れたａＦＧＦ誘導性分裂促進阻害因子活性を示すが、静止状態の線維芽細胞に毒性であるため、前述のルールに対して例外を構成する。
【００５４】
実施例２
マウスにおける血管形成阻害試験
血管形成阻害因子としてＣ−９化合物を評価するために、マウスにより標準的な血管形成試験を行った。
【００５５】
重さ２５±４ｇの病原体除去  Ｃ５７／ＢＩ／６  マウス（Charles River, Spain)が使用された。当該動物は、調節された温度及び湿度状態下においてプラスチックケージ中で飼育した；これらは水及び食物を自由に摂取し、そして１２時間の明るさと暗さの日程が保たれた。ＮＩＨ及び欧州連合の動物福祉におけるガイドラインは細心に従った。
【００５６】
１０ｍｍ長の無菌ゼラチンスポンジキューブ（Curaspon Dental, Clinimed Holding, Zwanenburg, Holland)を、腹腔内麻痺を誘導した後（Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21, 191-194）、マウスの背中の皮下に移植した。当該動物を２グループに分けた：グループＡ（ｎ＝１０）：２９μｇ／ｍＬのヘパリンを含む２００μＬのリン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ）を装填したスポンジを移植された動物により形成される；及び、グループＢ（ｎ＝４０）：１０μｇ／ｍＬのａＦＧＦを含むグループＡと同じ溶液で浸漬したスポンジを移植された動物により形成される。皮下嚢にスポンジを移植した後、皮膚を縫合した。グループＢのマウスは、外科的処置から２４時間後に２００μＬのＰＢＤの腹腔内注射により、それぞれ０．００８、０．０８、０．８、及び８ｍｇ／ｋｇの化合物Ｃ−９を与えた４つのグループ（ｎ＝１０）にランダムに分けた[Pesenti, E., et al. (1992) Brit. J. Cancer 66, 367-372 ; Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21,191-194]。全ての手順は無菌条件下で行った。
【００５７】
血管形成を評価するために、移植から７日後にマウスを再び上述のように麻痺させ、そして上記のスポンジを摘出し、慣習的方法[Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21,191-194] により、組織実験を行うために処置した。顕微鏡に接続した形態計測コンピュータープログラムにより新血管新生を定量化した。スポンジ中の新たな血管の成長を、赤血球を含む表面積の測定により評価した。新血管新生は、１０倍の拡大率で３つの異なるセクションの４つの予定した視野において分析した。統計学的分析は生徒のｔ−試験を使用して行った。
【００５８】
図２及び３は、Ｃ−９で処置したマウスに皮下的に移植したゼラチンスポンジ中のａＦＧＦにより誘導された新血管新生阻害を示す。Ｃ−９化合物の異なる投与量での面積単位当たりの新たな血管の数の算出は、新血管新生阻害がすでに、０．００８、０．０８ｍｇ／ｋｇを受けたマウスにおいて評価可能であり、そして０．８ｍｇ／ｋｇ以上の投与量では実質的に完全であることを明らかに示した。最後の当該データは、Ｃ−９が、スラミン及び１，３，６−ＮＴＳよりも考慮すべき有効な新血管新生阻害因子であることを明らかに示す。なぜなら、これらの最後２つの場合、約２００ｍｇ／ｋｇの濃度が、実質的に新血管新生阻害に達するために必要とされるようであるからである[Pesenti, E., et al. (1992) Brit. J. Cancer 66, 367-372 ; Cuevas, P., et al. (1999) Neurol. Res. 21,191-194]。ａＦＧＦをｂＦＧＦで置き替えた場合、同等の結果が得られた（データ無し）。試験された最も高いＣ−９濃度は、上記動物中いずれかの毒性死、又は変化の兆候を生じず、体重の変化も起こさなかった。
【００５９】
実施例３
移植腫瘍での動物中の血管形成及び腫瘍成長阻害
３．１  アルビノラビットでの試験
アルビノニュージーランドラビット（３±０．５ｋｇ、雄及び雌同数）を使用し、そして、５μＬのグリア細胞腫Ｃ６細胞懸濁液[ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−１０７]を手術用顕微鏡を使用して１０μＬのハミルトンシリンジで上皮下的に角膜に注射して移植した。当該注射は、角膜の角膜縁から２ｍｍにおいて行った。同時に、試験する化合物（Ｃ−９）、又は生理食塩溶液（コントロール）の継続的な注入を保証するために、浸透圧ミニポンプを頚部中に皮下移植した。カテーテルは、当該溶液を０．２ｍｇ／ｈの一定速度で強膜へと誘導した。このように、約０．００３ｍｇ／ｍＬの試験化合物又は生理食塩水溶液の濃度が角膜に維持されることが計算される。処置は１４日間維持された。当該角膜を、各処置後、各実験の最後、及び各処置後の定時において除去し、そして組織実験のために処置した。
【００６０】
極めて正のアポトーシス指数（アポトーシスは処置の日数で増加する）、及び極めて減少した角膜の血管新生面積（処置していない動物との比較において）が観察された。顕微鏡観察により、以下を明らかとすることができた：より少ない数のグリア細胞腫Ｃ６細胞、より多い数のアポトーシス体、処置動物での破壊された血管の存在及びアポトーシスの内皮核の存在。
【００６１】
３．２  ラットでの試験
実施例３．１において説明したものと同様の試験をラットで行い、脳の下部中にＣ６グリア細胞腫を、そして浸透圧性マイクロポンプをラットの背中に移植した。カテーテルは、Ｃ−９化合物又は生理食塩水を含む処置溶液をグリア細胞腫移植片に誘導した。このように処置したラットの脳の冠状切片を得て、そして未処置のラットの脳の冠状切片と比較した。ＮＭＲ分光イメージングにより当該分析を行った。
【００６２】
この場合において、腫瘍量が有意に減少したことが理解される。また、腫瘍内の血管新生阻害も確認された（６倍）。また「アポトーシス指標」も得られ、実験のグリア細胞腫においてＣ−９化合物が潜在的なアポトーシス阻害因子であることを明らかに示した。
【００６３】
実施例４
試験化合物の調製
他に示さない限り、試験化合物は商業的に入手可能な原料から得られ、そして更に精製することなく使用した。調製した化合物の構造及び純度はＮＭＲにより確認した。溶媒は慣習的な方法を使用して乾燥させ、そして精製した。特に、化合物Ｃ−１及びＣ−３、並びに化合物Ｃ−６、Ｃ−７、Ｃ−９、Ｃ−１４、Ｃ−１７、Ｃ−１８、Ｃ−２０、Ｃ−２１及びＣ−２２の酸前駆体は商業的生成物である。残る試験化合物は、以下に簡単に説明するように慣習的な方法により得られた。
【００６４】
一般的に、他に示さない限り、全ての反応は、正のアルゴン圧下においてガラスストッパー又はラバー隔壁を装着した乾燥フラスコ中で行った。空気及び湿度に感応性の液体及び溶液は、シリンジ又はステンレススチールカニューレに移した。２３０〜４００メッシュ径のシリカゲルを使用してフラッシュクロマトグラフィーカラムを調製した。Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ  ６０  Ｆ254（Merck)中で薄層クロマトグラフィーを行った。酢酸（８００ｍＬ）中、２０％硫酸水溶液（２００ｍＬ）で処理した後、それから検出をまずＵＶ（２４５ｍｍ）により行った。有機溶媒を乾燥させるために、無水ＭｇＳＯ4又はＮａ2ＳＯ4を使用した。上記溶媒の除去は、真空条件下においてロータリーエバポレータで行った。
【００６５】
ナトリウム塩
当該ナトリウム塩は、所望量の０．１Ｎの水酸化ナトリウムを水中の対応する硫酸誘導体の懸濁液に添加することにより調製した。溶媒の留去は、当該ナトリウム塩を供した。
【００６６】
アセチルアミド誘導体（Ｃ−４、Ｃ−１０、Ｃ−１５、Ｃ−１９）
アセチルアミド誘導体は、無水酢酸中で対応するナトリウム塩（Ｃ−３、Ｃ−９、Ｃ−１４、及びＣ−１８）の懸濁液を９０℃で４時間加熱することにより調製した。当該溶媒を留去し、アセチルアミド誘導体を産出した。
【００６７】
ベンゾイルアミド誘導体（Ｃ−５、Ｃ−１１、Ｃ−１６）
僅かに過剰量の塩化ベンゾイル（１．２当量）を、ピリジン中の対応する硫酸溶液に添加した。３０分後、溶媒を留去し、そして残渣をシリカゲルカラム（１：９  ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2  ｖ／ｖ）においてクロマトグラフにかけた。精製した生成物をその対応するナトリウム塩に変換した。
【００６８】
化合物Ｃ−２
濃Ｈ2ＳＯ4（０．３２ｍｌ）を２−メチル−ナフタレン（２．８ｍｍｏｌ）に添加した。当該混合物をオイルバス中、８０℃で３時間加熱した。当該溶液を冷却し、氷上に注ぎ、そして１ＮのＮａＯＨを添加することにより塩基性にした。当該生成物を冷却条件下において分離し、そしてろ過により単離した。
【００６９】
化合物Ｃ−８
イオン交換樹脂（アンバーライト）（Ｈ+型）をメタノール中の２−ナフタレンスルホン酸ナトリウムに添加した。当該混合物を一昼夜撹拌し、そしてろ過し、そして溶媒を留去した。当該残渣を凍結乾燥させ、２−ナフタレンスルホン酸を産出した。
【００７０】
化合物Ｃ−１２
過剰量の無水フタル酸（１．３当量）をメタノール中のＣ−９溶液（０．６ｍｍｏｌ）に添加した。当該混合物を一昼夜撹拌し、そして留去した。当該残渣をシリカゲルカラム（３：７  ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2  ｖ／ｖ）においてクロマトグラフにかけ、所望の生成物を産出した。
【００７１】
化合物Ｃ−１３
塩化アジポイル（０．５当量）をピリジン中のＣ−９の懸濁液（０．１ｍｍｏｌ）に添加した。撹拌を４８時間続け、そして溶媒を留去した。残渣を少量のメタノールで溶かし、そして分離した固形物を収集し、そして特徴づけた。
【００７２】
化合物Ｃ−２３
濃硫酸（６１ｍＬ）を、スルファニル酸（７５ｇ、３９０ｍｍｏｌ）、グリセロール（１０３ｍＬ、１．４１ｍｏｌ）及びニトロベンゼン（２０ｍＬ、１９５ｍｍｏｌ）の混合物に添加し、それから当該反応混合物を注意深く約８０℃に過熱する。当該発熱プロセスが引き金となり、自然に１２０〜１４０℃になる。それから外部加熱を停止し、そして一度当該反応を安定化させる（約３０分後）、再び外部加熱し、１４０〜１４５℃まで４時間加熱する。当該時間が経過後、当該混合物を冷却し、そして５００ｍｌの水−氷混合体上に注ぎ、これを冷蔵庫で＋４℃で４日間保つ。当該期間が経過してから、産出した少量の固形物を除去し、そしてろ過水をそれ自身の容量の６倍に水で希釈し、そしてＢａＣＯ3で処理し、再度、産出した固形残渣をろ過する。当該ろ液を２０％ＮａＯＨでｐＨ１１に処理する。これらのアルカリ水の一定分量の溶媒を真空条件下において除去し、そしてシリカゲル（ Merck, Kieselgel,  Ｈ  Ｆ254，  ７：３  ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ）においてクロマトグラフィーカラムにより精製し、分析的に純粋なナトリウム塩の試料を単離する。
【００７３】
化合物Ｃ−２４
キノリン（９ｍＬ、７６．２ｍｍｏｌ）を、Ｈ2ＳＯ4  ＳＯ3（２０％ＳＯ3、３０ｍＬ）を含むフラスコに滴下した。当該温度を全プロセスを通して５０℃以下に保つ。添加が完了してから、当該混合物を１４０℃で２時間過熱する。冷却した原生成物をそれから水−氷混合体上に注ぎ、水で大量に洗浄した後、白色固形物として８−スルホキノリンを単離する。真空条件下において乾燥させてから、８．２５ｇの酸（＞５０％）が定量される。当該酸は前に示した対応するナトリウム塩を調製するために使用した。
【００７４】
化合物Ｃ−２５
６．４５ｍｍｏｌのグラミンを１０ｍＬの濃Ｈ2ＳＯ4に溶解させ、そして５分間０℃で撹拌した。当該溶液を氷上に注ぎ、そして１ＮのＮａＯＨを添加することにより塩基性にした。当該水溶液をジクロロメタンで抽出し、１ＮのＨ2ＳＯ4を添加することにより中和し、そして留去した。当該残渣を熱エタノールで溶かし、そして当該固形物をろ過により分離した。当該エタノール溶液を留去し、そして所望の化合物を産出するために、当該残渣をカラムクロマトグラフィー（エタノール）にかけた。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１Ａ】図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃは、アッセイした化合物の濃度（ｘ軸）に対する示差吸光度（ｙ軸）を示すグラフの組であり、これらは、ａＦＧＦの不存在下（□）及びａＦＧＦの存在下（○）の両方におけるミオイノシトールで補助した最小培地で培養中の線維芽細胞のａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発における、Ｃ−１〜Ｃ−２５化合物の濃度の増加の影響を示す：（Ａ）Ｃ−１〜Ｃ−７；（Ｂ）Ｃ−８〜Ｃ−１９；（Ｃ）Ｃ−２０〜Ｃ−２５；（実施例１及び表１を参照のこと）。
【図１Ｂ】図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃは、アッセイした化合物の濃度（ｘ軸）に対する示差吸光度（ｙ軸）を示すグラフの組であり、これらは、ａＦＧＦの不存在下（□）及びａＦＧＦの存在下（○）の両方におけるミオイノシトールで補助した最小培地で培養中の線維芽細胞のａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発における、Ｃ−１〜Ｃ−２５化合物の濃度の増加の影響を示す：（Ａ）Ｃ−１〜Ｃ−７；（Ｂ）Ｃ−８〜Ｃ−１９；（Ｃ）Ｃ−２０〜Ｃ−２５；（実施例１及び表１を参照のこと）。
【図１Ｃ】図１Ａ、図１Ｂ、及び図１Ｃは、アッセイした化合物の濃度（ｘ軸）に対する示差吸光度（ｙ軸）を示すグラフの組であり、これらは、ａＦＧＦの不存在下（□）及びａＦＧＦの存在下（○）の両方におけるミオイノシトールで補助した最小培地で培養中の線維芽細胞のａＦＧＦ誘導有糸分裂誘発における、Ｃ−１〜Ｃ−２５化合物の濃度の増加の影響を示す：（Ａ）Ｃ−１〜Ｃ−７；（Ｂ）Ｃ−８〜Ｃ−１９；（Ｃ）Ｃ−２０〜Ｃ−２５；（実施例１及び表１を参照のこと）。
【００７６】
【図２】図２は、Ｃ−９化合物の抗血管形成効果の図解写真を示し（実施例２を参照のこと）、ＰＢＳ（Ａ）中、及びＰＢＳ＋ａＦＧＦ（Ｂ及びＣ）中に浸漬したスポンジ移植片の代表的な組織切片を示す。写真（Ｃ）において示された組織切片は、８ｍｇ／ｋｇのＣ−９化合物で腹腔内的に処置されたマウスに移植したスポンジに相当する。（Ｃ）中の矢印は、赤血球及び白血球を含む血管を示す。（Ｂ）中に示された過剰増殖性の細胞浸潤は、ａＦＧＦに浸漬し且つＣ−９化合物で腹腔内的に処置したスポンジ移植片中で消滅したことを述べている。当該写真は、元の５０倍の拡大率（５０×）で示される。
【００７７】
【図３】図３は、異なる濃度におけるＣ−９化合物により血管新生阻害を示す棒グラフを示す（実施例２を参照のこと）。当該阻害因子（Ｃ−９）濃度は、ｘ軸において示され、一方、赤血球（血管新生）を含む表面積の測定値はｙ軸において表される。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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