(57)【要約】本発明は、患者の軽度認知障害（ＭＣＩ）を診断する方法及びＭＣＩの患者における認識力低下を予測する方法を提供する。本発明はまた、ＭＣＩ患者がアルツハイマー病（ＡＤ）を発症するか否かを予測する方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料中のリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定すること、
ｂ）少なくとも１人の対照患者から得られたｐ−タウのＣＳＦ濃度を測定すること、
ｃ）前記患者のｐ−タウのＣＳＦ濃度を少なくとも１人の対照患者から得られたｐ−タウのＣＳＦ濃度と比較すること（前記患者のｐ−タウのＣＳＦ濃度と対照患者のｐ−タウのＣＳＦ濃度との間の差が大きければ大きいほど、ＡＤを発症する危険性が大きい）
を含む患者がアルツハイマー病を発症するか否かを予測する方法。
【請求項２】
前記患者は軽度認知障害（ＭＣＩ）を有する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項１に記載の方法。
【請求項４】
患者のＣＳＦ中のｐ−タウの濃度を測定することを含み、前記患者のＣＳＦｐ−タウの濃度が少なくとも約２１５ｐｇ／ｍｌであればアルツハイマー病（ＡＤ）に変化する可能性があることが示唆される、ＡＤを発症する可能性がある患者を診断する方法。
【請求項５】
前記患者は軽度認知障害（ＭＣＩ）を有する請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ｐ−タウの濃度が少なくとも約２５０ｐｇ／ｍｌである請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ｐ−タウの濃度が少なくとも約３００ｐｇ／ｍｌである請求項４に記載の方法。
【請求項８】
ｐ−タウの濃度が少なくとも約３５０ｐｇ／ｍｌである請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記ｐ−タウはトレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
ａ）患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料中のリン酸化タウ蛋白質の濃度を測定すること、
ｂ）少なくとも１人の対照患者から得られたｐ−タウのＣＳＦ濃度を測定すること、
ｃ）前記患者のｐ−タウのＣＳＦ濃度を少なくとも１人の対照患者から得られたｐ−タウのＣＳＦ濃度と比較すること（前記患者のｐ−タウのＣＳＦ濃度が少なくとも１人の対照患者よりも大きければ前記患者はＭＣＩを有すると診断される）を含む、患者が軽度認知障害（ＭＣＩ）を有することを診断する方法。
【請求項１１】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
アルツハイマー病である患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料におけるリン酸化タウ蛋白質の濃度を測定することを含む、前記患者の神経変性割合を予測する方法。
【請求項１３】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）患者から生体試料を得ること、
（ｂ）前記生体試料中のリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定すること、
（ｃ）前記生体試料中のｐ−タウの濃度が約６１７ｐｇ／ｍｌ以上であれば、その患者がアルツハイマー病を発症する可能性があると同定することを含む、アルツハイマー病を発症する可能性がある患者を同定する方法。
【請求項１５】
前記患者は軽度認知障害（ＭＣＩ）である請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６、又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ｐ−タウの濃度を免疫測定法を使用して測定する請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
（ａ）患者から生体試料を得る段階、
（ｂ）前記生体試料中のリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定する段階、
（ｃ）前記生体試料中のｐ−タウの濃度が約１４３ｐｇ／ｍｌ以上であれば、前記患者は認識力が低下する可能性があると同定する段階
を含む、患者の認識力低下を予測する方法。
【請求項２２】
前記患者は軽度認知障害（ＭＣＩ）を有する請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６、又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ｐ−タウの濃度を免疫測定法を使用して測定する請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）患者から生体試料を得る段階、
（ｂ）前記生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、及び
（ｃ）前記生体試料中のｐ−タウの濃度が約２１５ｐｇ／ｍｌ以上であれば、前記患者はアルツハイマー病であると診断する段階
を含む、患者のアルツハイマー病を診断する方法。
【請求項２９】
前記ｐ−タウの濃度が約２５０ｐｇ／ｍｌ以上であれば、前記患者はアルツハイマー病であると診断する請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記ｐ−タウの濃度が約３００ｐｇ／ｍｌ以上であれば、前記患者はアルツハイマー病であると診断する請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記ｐ−タウの濃度が約３５０ｐｇ／ｍｌ以上であれば、前記患者はアルツハイマー病であると診断する請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６、又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項２８に記載の方法。
【請求項３６】
前記ｐ−タウの濃度を免疫測定法を使用して測定する請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
（ａ）患者から得られた生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、
（ｂ）脳室容積補正を使用してｐ−タウの濃度を調節することによって前記試料中のｐ−タウ負荷を測定する段階、
（ｃ）前記患者からその後収集した生体試料を使用して段階（ａ）及び（ｂ）を繰り返す段階、及び
（ｄ）段階（ｂ）で測定した前記ｐ−タウ負荷を段階（ｃ）で測定した前記ｐ−タウ負荷の量と比較して、それによって患者の認識力低下をモニターする段階を含む、患者の認識力低下をモニターする方法。
【請求項３８】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６、又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記ｐ−タウの濃度を免疫測定法を使用して測定する請求項３７に記載の方法。
【請求項４３】
（ａ）患者から得られた生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、
（ｂ）前記患者にある量の医薬組成物を投与する段階、
（ｃ）前記患者から得られたその後収集した生体試料を使用して段階（ａ）を繰り返す段階、
（ｄ）段階（ａ）で測定した前記ｐ−タウ蛋白質の濃度を段階（ｃ）で測定した前記ｐ−タウ蛋白質の濃度と比較する段階であって、段階（ａ）から得られた生体試料と比較して前記その後収集した生体試料中の前記ｐ−タウの濃度が変化していないか、又はｐ−タウの濃度が減少したことを検出することによって前記医薬組成物の効果をモニターする段階
を含む、認知症に関連した状態を有する患者を治療するための薬剤としての医薬組成物の効果を測定する方法。
【請求項４４】
前記状態はアルツハイマー病又は軽度認知障害である請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６、又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項４３に記載の方法。
【請求項４９】
前記ｐ−タウの濃度を免疫測定法を使用して測定する請求項４３に記載の方法。
【請求項５０】
アルツハイマー病である患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料におけるリン酸化タウ（ｐ−タウ）蛋白質の濃度を測定することを含む、前記患者の神経変性割合を予測する方法。
【請求項５１】
前記ｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記ｐ−タウは、アミノ酸２３１、１８１、３９６又は４０４でリン酸化されたタウ蛋白質である請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記ｐ−タウは、トレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）である請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記生体試料は脳脊髄液（ＣＳＦ）である請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記ｐ−タウの濃度は免疫測定法を使用して測定する請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
請求項２８に記載の前記方法を使用して患者を診断すること、及びアルツハイマー治療を前記患者に施すことを含むアルツハイマー病患者の治療方法。
【請求項５７】
前記アルツハイマー治療は抗認知症薬を前記患者に投与することを含む請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記アルツハイマー治療はコリンエステラーゼ阻害剤を前記患者に投与することを含む請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
段階（ｃ）で同定された患者を抗認知症薬で治療することをさらに含む請求項２８に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗認知症薬はコリンエステラーゼ阻害剤である請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
段階（ｃ）で同定された患者を抗認知症薬で治療することをさらに含む請求項１４に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗認知症薬はコリンエステラーゼ阻害剤である請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
段階（ｃ）で同定された患者を抗認知症薬で治療することをさらに含む請求項２１に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗認知症薬はコリンエステラーゼ阻害剤である請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
請求項２１に記載の前記方法による診断及び抗認知症薬を前記患者に投与することを含む患者の認識力低下を治療する方法。
【請求項６６】
前記抗認知症薬はコリンエステラーゼ阻害剤である請求項６５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その開示を本明細書に参考として援用した、２００２年１１月７日出願米国特許仮出願第６０／４２４６２８号に関し、その特典を請求するものである。
【０００２】
本発明は、患者の軽度認知障害（ＭＣＩ）を診断し、かつＭＣＩ患者の認識力低下割合を予測する方法に関する。具体的に、本発明は、ＭＣＩ患者がアルツハイマー病（ＡＤ）を発症するか否かを予測する方法に関する。より具体的には、本発明は、患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中のトレオニン２３１でリン酸化されたタウ（ｐ−タウ２３１）の濃度を測定することを含む、ＭＣＩ患者がＡＤを発症する可能性があるか否かを決定することに関する。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）の比較研究によって、一般的に、微小管関連蛋白質であるタウの脳脊髄液（ＣＳＦ）濃度が上昇していることが示された（Ｖａｎｍｅｃｈｅｌｅｎ他、２００１、Ｍｅｃｈ．Ａｇｉｎｇ  Ｄｅｖ．１２２：２００５〜２０１１）。驚いたことに、進行性臨床的低下はよく特徴付けられており、脳関連の局所解剖はますます増加しているにもかかわらず、ＡＤにおいてＣＳＦタウの濃度が上昇することを示す研究（Ａｒａｉ他、１９９７、ＪＡＧＳ  ４５：１２２８〜１２３１、Ｂｌｏｍｂｅｒｇ他、１９９６、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２１４：１６３〜１６６、Ｈａｍｐｅｌ他、２００１、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．４９：５４５〜５４６、Ｋａｎａｉ他、１９９９、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２６７：６５〜６８）と示さない研究（Ａｎｄｒｅａｓｅｎ他、１９９９、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５３：１４８８〜１４９４、Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ他、１９９８、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０：２２７〜２３５、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ他、１９９９、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ４６：７５０〜７５５、Ｔａｐｉｏｌａ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８０：１１９〜１２２）の数は同じである。したがって、ＣＳＦタウの濃度が神経障害を反映するか否かは、これらの研究では不明である。
【０００４】
タウのトレオニン２３１のリン酸化は、ＡＤに特異的で、ヒト脳生検組織において対螺旋状繊維（ｐａｉｒｅｄ  ｈｅｌｉｃａｌ  ｆｉｌａｍｅｎｔ）の構成に先だって生じることが示された（Ｖｉｎｃｅｎｔ  他、１９９８、Ｎｅｕｒｏｂｉｏ．Ａｇｉｎｇ  １９：８７〜９７）。ＡＤは、認知症の主要な原因であり、ＡＤ患者は、対照患者と比較してＣＳＦｐ−タウ２３１濃度が高い（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０）。
【０００５】
軽度認知障害（ＭＣＩ）は、認知症、又は年齢的、教育背景的な正常範囲を逸脱したその他の認知機能の著しい障害がない、軽度の近接記憶の喪失を特徴とする状態である。ＭＣＩ患者の多くがＡＤに進行する。過リン酸化タウ（ｐ−タウ）を診断上より特異的に測定した最近の２つの軽度認知障害（ＭＣＩ）研究によって、比較（ｃｒｏｓｓ−ｓｅｃｔｉｏｎａｌ）評価では上昇が報告されたが、長期的な変化は認められなかった。（Ａｒａｉ他、２０００、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．１６６：２０１〜２０３、Ｂｕｅｒｇｅｒ他、２００２、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５９：６２７〜６２９）。ＭＣＩはアルツハイマー病（ＡＤ）の主要な危険因子なので（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ他、１９９５、ＪＡＭＡ  ２７３：１２７４〜１２７８）、ＭＣＩ患者における認識力低下の予測は、どの患者が疾患を軽減する、抗認知症薬の恩恵をこうむるかを効果的に決定するために強く望まれる。本発明は、ＣＳＦ中のｐ−タウ２３１濃度を測定することによって、どの患者がＡＤを発症する可能性があるかを予測する方法を提供する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、患者の軽度認知障害（ＭＣＩ）を診断し、かつ認識力が衰退し、認知症を発症する可能性がある患者を確認する方法を提供する。具体的に、本発明は患者、特にＭＣＩを有する患者がアルツハイマー病（ＡＤ）を発症するか否かを予測する方法を提供する。本発明はまた、ＡＤ患者のＣＳＦ中のｐ−タウ２３１濃度を測定することを含むＡＤ患者の神経変性段階を測定する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
ある態様では、本発明には、患者から脳脊髄液（ＣＳＦ）試料を採取し、ＣＳＦ中のリン酸化タウ（ｐ−タウ）の濃度を測定することが含まれ、ｐ−タウの濃度が少なくとも約２１５ｐｇ／ｍｌであればその患者はＡＤを発症するか、発症していることを示す。該濃度は、少なくとも約２５０ｐｇ／ｍｌであることが好ましい。該濃度は、少なくとも約３００ｐｇ／ｍｌであることがより好ましい。該濃度は、少なくとも約３５０ｐｇ／ｍｌであることが最も好ましい。
【０００８】
他の態様では、該方法はさらに、ＣＳＦｐ−タウの濃度を少なくとも１人の対照患者から得られたＣＳＦｐ−タウの濃度と比較することによって患者の認識力衰退の段階を測定することを含み、患者のＣＳＦｐ−タウの濃度と対照患者のＣＳＦｐ−タウの濃度の差が大きければ大きいほど、ＡＤを発症する危険性が大きい。
【０００９】
いくつかの態様では、ｐ−タウはアミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、及び４２２のいずれかでリン酸化されたタウ蛋白質であってよい。本発明の方法では、トレオニン２３１（ｐ−タウ２３１）、１８１、３９６又は４０４でリン酸化されたタウの濃度を測定することが好ましい。本発明の方法では、ｐ−タウ２３１の濃度を測定することが最も好ましい。
【００１０】
本発明はまた、アルツハイマー病である患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料におけるトレオニン２３１でリン酸化されたタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）の濃度を測定する段階を含む、患者の神経変性割合を予測する方法を提供する。
【００１１】
本発明はまた、（ａ）患者から生体試料を得ること、（ｂ）該生体試料中のリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定すること、（ｃ）該生体試料中のｐ−タウの濃度が約６１７ｐｇ／ｍｌ以上であれば、その患者はアルツハイマー病を発症する可能性があると同定することを含む、アルツハイマー病を発症する可能性がある患者を確認する方法を提供する。
【００１２】
さらに、本発明は、（ａ）患者から生体試料を得る段階、（ｂ）該生体試料中のリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定する段階、（ｃ）該生体試料中のｐ−タウの濃度が約１４３ｐｇ／ｍｌ以上であれば、その患者は認識力が低下する可能性があると同定する段階を含む、患者の認識力低下を予測する方法を提供する。
【００１３】
さらに、本発明は、（ａ）患者から生体試料を得る段階、（ｂ）該生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、及び（ｃ）該生体試料中のｐ−タウの濃度が約２１５ｐｇ／ｍｌ以上であれば、その患者はアルツハイマー病であると診断する段階を含む、患者のアルツハイマー病を診断する方法を提供する。
【００１４】
本発明はまた、（ａ）患者から得られた生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、（ｂ）脳室容積補正（ａ  ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｖｏｌｕｍｅ  ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用してｐ−タウの濃度を調節することによって試料中のｐ−タウ負荷を測定する段階、（ｃ）患者からその後収集した生体試料を使用して段階（ａ）及び（ｂ）を繰り返す段階、及び（ｄ）段階（ｂ）で測定したｐ−タウ負荷を段階（ｃ）で測定したｐ−タウ負荷の量と比較して、それによって患者の認識力低下をモニターする段階を含む、患者の認識力低下をモニターする方法を提供する。
【００１５】
本発明はまた、（ａ）患者から得られた生体試料中のｐ−タウ蛋白質の濃度を測定する段階、（ｂ）該患者にある量の医薬組成物を投与する段階、（ｃ）患者からその後収集した生体試料を使用して段階（ａ）を繰り返す段階、（ｄ）段階（ａ）で測定したｐ−タウ蛋白質の濃度を段階（ｃ）で測定したｐ−タウ蛋白質の濃度と比較し、段階（ａ）から得られた生体試料と比較してその後収集した生体試料中のｐ−タウの濃度が変化していないか、又はｐ−タウの濃度が減少したことを検出することによって、該医薬組成物の効果をモニターする段階を含む、認知症に関連した状態を有する患者を治療するための薬剤としての医薬組成物の効果を測定する方法を提供する。
【００１６】
ある態様では、本発明の方法を使用してアルツハイマー治療の必要な患者を確認することができる。たとえば、本発明の方法によって、一旦患者がアルツハイマー病を発症する可能性があると同定されたか、又はＭＣＩを有すると同定されたか、又は認識力低下の可能性があると同定されたら、その患者にアルツハイマー又はその他の認知症を治療するための治療計画を実施することができる。アルツハイマー治療には、たとえば、患者に抗認知症薬を投与することが含まれる。抗認知症薬の非限定的な例は、抗コリンエステラーゼ阻害剤（本明細書では抗コリンエステラーゼ薬とも称する）である。
【００１７】
また、本発明は、アルツハイマー病である患者から採取した脳脊髄液（ＣＳＦ）試料におけるリン酸化タウ（ｐ−タウ）蛋白質の濃度を測定することを含む、患者の神経変性割合を予測する方法を提供する。
【００１８】
ある態様では、本明細書で使用したｐ−タウは、アミノ酸１７５、１８１、１８５、１９９、２０２、２１４、２３１、２３５、２６２、３９６、４０４、４０９、又は４２２でリン酸化されたタウ蛋白質を意味する。
【００１９】
その他の態様では、本発明の方法で使用した生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）である。
【００２０】
具体的な本発明の好ましい実施形態は、以下のいくつかの好ましい実施形態のより詳細な説明及び請求の範囲によって明らかになるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
Ｋｏｈｎｋｅｎ他は、ＡＤ患者と対照患者を高い精度で区別することができる、トレオニン２３１でリン酸化したタウ蛋白質（ｐ−タウ２３１）の特異的な検出のために設計した免疫測定法を開発した（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０）。該グループはまた、該免疫測定法を使用して、脳脊髄液（ＣＳＦ）中のｐ−タウの濃度が個々の患者の疾患進行と相関することを示し（Ｈａｍｐｅｌ他、２００１、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．４９：５４５〜５４６）、ｐ−タウ２３１はＡＤ進行の有望なバイオマーカーであることを示唆した。神経病理学的証拠によって、トレオニン２３１におけるタウのリン酸化は、ＡＤの病態生理の極めて初期に起こることが示された（Ｖｉｎｃｅｎｔ他、１９９８、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １９：２８７〜２９６）。本明細書で説明したように、ｐ−タウ２３１濃度を使用してまた、アルツハイマー病を発症する可能性がある患者を、特に既に軽度認知障害（ＭＣＩ）であることが診断された患者で確認することができる。
【００２２】
実施例で示したように、軽度認知障害（ＭＣＩ）患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）におけるｐ−タウ２３１濃度は、健常な対照患者（ＨＣ）と比較して上昇している。基準点のｐ−タウ２３１濃度（すなわち、調査開始時のｐ−タウ２３１濃度）は、ＭＣＩの患者のミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコアにおける毎年の得点低下と相関したが、一方ＭＭＳＥにおける毎年の得点低下と神経変性の非特異的マーカーである総タウ（ｔ−タウ）の濃度には相関は認められなかった（Ｂｌｅｎｎｏｗ他、２００１、Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  ２４：８７〜９７）。実施例で説明したこの研究のＭＣＩ患者の一部の群は、アルツハイマー病（ＡＤ）に変化した。認識力低下割合の分析と一致して、ｐ−タウ２３１濃度の増加はＡＤへの変化と相関したが、ｔ−タウの濃度は相関しなかった。
【００２３】
文献によって、ＡＤ及びＭＣＩの進行中にタウの濃度の変化を検出することはかなり困難であることがわかっている（Ａｒａｉ他、２０００、Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒａｌ．１６６：２０１〜２０３、Ｂｕｅｒｇｅｒ他、２００２、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５９：６２７〜６２９）。Ｒｅｉｂｅｒは、ＣＳＦ蛋白質に関する総説で、脳由来蛋白質は腰椎濃度に対する脳室濃度の比が高く（たとえば、タウは１．５：１及びＳ−１００Ｂは１８：１）、全身由来蛋白質ではこの比は低いことを観察した（たとえば、アルブミンは１：２０５）（Ｒｅｉｂｅｒ、２００１、Ｃ１ｉｎ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．３１０：１７３〜１８６）。アミロイドベータ（Ａβ）濃度は、脳室ＣＳＦよりも腰椎ＣＳＦの方が高く（１：２）、おそらく中枢及び末梢由来であることを反映しているのであろう。一実施形態では、本発明は、様々な時点でのリン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度を測定する段階及び脳室容積に基づいて各時点でのｐ−タウの濃度を調整する段階を含む、ＣＳＦｐ−タウの濃度を長期的に（すなわち、時間をかけて）モニターする方法を提供する。本明細書では、濃度調整は、「脳室容積補正」と称する。
【００２４】
脳室容積補正は、患者のＣＳＦ中のｐ−タウの濃度を測定し、該ｐ−タウの濃度（ｐｇ／ｍｌ）に脳室容積（ｍｌ）を乗じて、１０００で除することによって実施する。脳室容積は、たとえば、患者の核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）画像を入手し、Ｆｏｘ及びＦｒｅｅｂｏｒｏｕｇｈによって報告された自動化プロトコール（１９９７、Ｊ．Ｍａｇ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇ．７：１０６９〜１０７５）を使用してＭＲＩ信号強度を脳室容積に変換することによって測定した。本明細書では、調整ｐ−タウの濃度とは、ｐ−タウ負荷のことである。以下の実施例３で示すように、脳室容積の調整を行うとき、ｐ−タウ２３１負荷は長期間にわたって有意な群対時間の相互作用を示した。追跡試験によって、ＭＣＩ患者ではｐ−タウ２３１負荷は増加するが、対照群では変化しないことが示された。さらに、長期間データを回帰分析すると、ｐ−タウ２３１負荷変化を測定することによってｐ−タウ２３１濃度変化の測定よりも群の構成要素の予測が著しく改善されたことが示された。
【００２５】
脳室容積補正を使用する理由は、タウの濃度は腰椎ＣＳＦよりも脳室ＣＳＦの方が高いという見解に基づく。本明細書で示したように、脳室容積補正はｐ−タウ２３１測定にのみ有用である。したがって、Ａβ４０及びｐ−タウ２３１両方の濃度がＭＣＩで上昇していても、脳室容積補正を適用した後は、ＭＣＩ群のｐ−タウ負荷でのみ長期的変化（すなわち、経時的変化）が認められる。
【００２６】
一実施形態では、本発明は患者の認識力低下をモニターするために脳室容積補正を使用することを含む方法を提供する。本発明には、前述及び実施例で説明したように、様々な時点で患者から得られた生体試料（好ましくはＣＳＦ）中のｐ−タウ負荷を測定する段階を含む。たとえば、軽度認知障害（ＭＣＩ）又はアルツハイマー病（ＡＤ）などの神経疾患の診断時、及び診断後の様々な時点、たとえば、６ヶ月毎、又は１年毎に試料を採取することができる。認識力低下をモニターすることによって、医療提供者が患者がある治療によく応答するか否かを決定することが可能になる。
【００２７】
他の実施形態では、ＭＣＩ又は認知症に関連する状態を治療する間の様々な時点で、患者のｐ−タウの濃度を測定することができる。たとえば、ｐ−タウ、好ましくはｐ−タウ２３１の濃度は、抗認知症薬、たとえば抗コリンエステラーゼ薬による治療開始時に測定することができる。抗コリンエステラーゼ薬の非限定的な例には、タクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンが含まれる。次に、該薬剤が有効か否かを決定するために、治療期間中の様々な時点、たとえば、毎週、毎月、隔月、又はその他の選択した時点で、ｐ−タウの濃度をモニターすることができる。有効な薬剤は、時間と共にｐ−タウの濃度の減少を引き起こす。或いは、ｐ−タウの濃度が時間と共に増加しなければ、有効な薬剤として同定する。認知症に関連した状態の非限定的な例には、アルツハイマー病（ＡＤ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、レビー小体認知症、又はその他の神経障害が含まれるが、それらだけには限定されない。
【００２８】
一実施形態では、本発明はＡＤを発症しているか、発症する可能性がある患者を確認する方法を提供する。具体的な実施形態では、該方法には患者から生体試料（好ましくはＣＳＦ試料）を採取する段階、該生体試料中のｐ−タウ（好ましくはｐ−タウ２３１）濃度を測定する段階、及び該ｐ−タウの濃度が約２１５ｐｇ／ｍｌ以上であればＡＤ患者であると診断する段階が含まれる。患者は、軽度認知障害（ＭＣＩ）又は任意の型の認知症、たとえば、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、レビー小体認知症、又はその他の神経障害であることが診断された個人であることができる。或いは、患者は、ＡＤ検診を所望するか、又は必要とするが、いままでいかなる神経障害、認知症、又はＭＣＩである診断されたことのない個人であることが可能である。
【００２９】
他の実施形態では、本発明の方法には患者から生体試料（好ましくはＣＳＦ試料）を採取する段階、該生体試料中のｐ−タウ（好ましくはｐ−タウ２３１）濃度を測定する段階、及びｐ−タウの濃度が約６１７ｐｇ／ｍｌ以上であればＡＤを発症する可能性がある患者であると同定する段階が含まれる。この実施形態では、ｐ−タウの濃度によって、より軽度の神経障害からＡＤに変化する可能性がある患者が示される。たとえば、患者は本発明の方法を行う前に、ＭＣＩと診断されていることができる。
【００３０】
他の実施形態では、本発明は患者から生体試料（好ましくはＣＳＦ試料）を採取する段階、該生体試料中のｐ−タウ（好ましくはｐ−タウ２３１）濃度を測定する段階、及び該試料中のｐ−タウの濃度が約１４３ｐｇ／ｍｌ以上であればＡＤを発症する可能性があると同定する段階を含む患者の認識力低下を予測する方法を提供する。該患者はＭＣＩであると診断されていることが好ましい。
【００３１】
他の実施形態では、本発明の方法には患者から生体試料（好ましくはＣＳＦ試料）を採取する段階、該生体試料中のｐ−タウ２３１濃度を測定する段階、及び該ｐ−タウ２３１濃度と認識力低下の特定段階とを関連づける段階が含まれる。他の実施形態では、ＣＳＦ脳室容積で濃度を補正することによって、ｐ−タウ２３１濃度を調整してｐ−タウ２３１脳室負荷を測定することができ、ｐ−タウ２３１負荷を認識力低下の特定段階に関連づけることができる。
【００３２】
試料がリン酸化タウ（ｐ−タウ）蛋白質を含んでいれば、組織、細胞、又は体液などの任意の生体試料を本発明の方法で使用することができる。好ましい態様では、本発明の任意の方法で使用した生体試料は、脳脊髄液（ＣＳＦ）である。ＣＳＦの試料は、当業者によって通常使用される任意の手段で収集することができる。たとえば、クモ膜下腔に斜端ＬＰ針（ａ  ｂｅｖｅｌｅｄ  ＬＰ  ｎｅｅｄｌｅ）を導くために蛍光透視法を使用した腰椎穿刺によってＣＳＦを収集することができる。
【００３３】
リン酸化タウ蛋白質（ｐ−タウ）の濃度は、たとえば、免疫測定法又は蛋白質結合測定法を使用して本発明の方法で測定することができる。好ましくは、ｐ−タウ２３１濃度は、本明細書で説明したように、タウ蛋白質を捕捉するサンドイッチ型酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、次にリン酸化タウ特異的抗体（たとえば、ｐ−タウ２３１に特異的な抗体であるＣＰ９）でタウのリン酸化を検出して測定する（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０参照）。
【００３４】
脳室容積補正は前述のように実施して、ｐ−タウ２３１負荷を測定することができる。脳室容積は、たとえば、以下の実施例３で説明したように測定することができる。
【００３５】
一実施形態では、本発明の方法を使用して、脳室ｐ−タウ２３１負荷をベースとして、患者がＭＣＩ又はＡＤであるかを決定することができる。患者が既にＭＣＩと診断されており、本発明の方法を使用してＡＤに進行する状態の可能性を決定することができる場合もある。他の実施形態では、患者を追跡調査によって定期的に試験して、ＭＣＩの進行を評価することができる。
【００３６】
本発明の方法を単独で、又は、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）、全体的退化スケール（ｇｌｏｂａｌ  ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  ｓｃａｌｅ、ＧＤＳ）スコア、年齢、アミロイドベータ、心理測定検査バッテリー（Ｋｌｕｇｅｒ他、１９９９、Ｊ．Ｇｅｒｉａｔ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｎｅｕｒｏｌ．１２：１６８〜１７９）、ギルド記憶検査、ウェクスラー成人知能検査、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）及びＡＰＯＥ遺伝子型を含めるがそれだけには限定されない公知の診断検査及び／又はＡＤ若しくはＭＣＩを診断するためのマーカー、又は認識力低下を確認するか、若しくはモニターするためのマーカーと組み合わせて使用することができる。本発明の方法を組み合わせることによって、ＡＤ、ＭＣＩ及び認識力低下に関する公知の検査及びマーカーの感度を高め、擬陽性の数を減少させることができる。
【００３７】
一実施形態では、本発明はアルツハイマー病（ＡＤ）患者の神経変性を調べる方法を提供する。ＡＤの特徴は、特異的な神経集団の進行性損失である。局部的な神経損失の時間的順序はまだ、よくわかっていない。しかし、神経病理及び構造画像化の証拠により、嗅内皮質、海馬及び扁桃体を含めた古皮質領域は、ＡＤにおいて最も早期に影響を受ける脳領域であることが示唆された。
【００３８】
臨床病理学的研究において、核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）をベースとして海馬容積を測定することによって、ＡＤにおける海馬神経密度の変異は約８０％を占めた。これらの発見によって、ｉｎ  ｖｉｖｏで海馬容積を測定して、ＡＤにおける古皮質神経変性の程度の間接的な測定として役立てることができるという知見が裏付けられる。核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）の研究によって、ＡＤの症状発現前の段階においても海馬の著しい萎縮が示された。海馬萎縮は、長期的ＭＲＩ研究におけるＡＤの個人内の構造的疾患進行の最も広範に研究されたマーカーである。
【００３９】
一実施形態では、本発明はＡＤ患者のＣＳＦ中のｐ−タウ２３１濃度を測定することを含めたＡＤ関連神経破壊のｉｎ  ｖｉｖｏ代用測定法を提供する。以下の実施例４で説明するように、基準点の海馬容積は、対照と比較してＡＤ患者では有意に減少していた（ｐ＜０．００５）。基準点におけるＣＳＦｐ−タウ２３１濃度は、左右海馬の萎縮速度と相関していたが、ｔ−タウでは相関していなかった（ｐ＜０．０２）。さらに、タウ蛋白質と基準点の海馬容積の間には有意な正の相関があった（ｐ＜０．０３）。認識力低下割合は、海馬萎縮速度と有意な相関があった（ｐ＜０．０５）。
【００４０】
以下の実施例は、本発明の範囲を例示するために提供されたものであり、限定するものではない。本発明は、本発明の個々の態様を例示するものである実施形態例によって範囲を限定されることはない。実際に、前述の説明及び添付した図面から、本明細書で示して説明したものに加えて、本発明の様々な変更が当業者には明らかであろう。このような変更は、添付した請求の範囲の範囲内であるものとする。
【実施例１】
【００４１】
軽度認知障害（ＭＣＩ）患者において、ＣＳＦｐ−タウ２３１は認識力低下と相関する
ＭＣＩの様々なバイオマーカーを分析する長期研究のために、軽度認知障害（ＭＣＩ）の徴候がある７７人の患者を選択した。追跡調査の間に、ＭＣＩ患者３９人の認識力が衰退した（ＭＣＩ悪化患者、ミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）スコアの毎年の得点低下＜０）。ＭＭＳＥは、Ｆｏｌｓｔｅｉｎ他、１９７５、Ｊ．Ｐｓｙｓｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ．１２：１８９〜１９８に説明されている通りに評価した。ＭＣＩ悪化患者のうち２６人が可能性のあるアルツハイマー病（ＡＤ）に変化した。（ＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ基準、ＭｃＫｈａｎｎ他、１９８４、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３４：９３９〜４４）。群を比較する場合は、可能性のあるＡＤの患者５５人及び健常な対照患者（ＨＣ）３０人もまた分析した。ＡＤ及びＨＣの患者のデータは、基準点で収集した。
【００４２】
患者を一晩絶食させ、２２ゲージの斜端ＬＰ針を導入するために蛍光透視法を使用して脳脊髄液（ＣＳＦ）の試料を各患者から収集した。リン酸化タウ（ｐ−タウ）蛋白質の濃度は、Ｋｏｈｎｋｅｎ他が記載した通りに抗ｐ−タウ２３１抗体（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｖｅｒｎｏｎ  Ｈｉｌｌｓ、ＩＬ、ＵＳＡ）を使用した酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定した（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０）。ｔ−タウの濃度は、Ｉｎｎｏｔｅｓｔ  ｈＴａｕキット（技術番号Ｋ−１０３２、Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ、Ｚｗｊｉｎｄｒｅｃｈｔ、Ｂｅｌｇｉｕｍ）を使用したＥＬＩＳＡによって測定した。データは平均±ＳＤで表した。ＡＰＯＥ遺伝子型は、標準方法にしたがって測定した。
【００４３】
多重回帰モデルを作製するために、ＭＭＳＥスコアの毎年の得点減少をステップワイズ多重線形回帰でモデル化した（図１）。独立変数は、基準点ｐ−タウ２３１濃度、ＭＭＳＥスコア、年齢、並びに性別、２段階変数としてのＡＰＯＥ遺伝子型（０対１／２ε４対立遺伝子）、施設、認知機能改善薬による治療、及び追跡検査の期間である。第２の多重線形回帰モデルでは、ｐ−タウ２３１をｔ−タウに置き換えた。タウ蛋白質のカットオフ濃度を確立して、ＭＣＩ衰退者とＨＣとの間を区別するために、Ｒｏｎａｌｄ  ａｎｄ  Ｎａｎｃｙ  Ｒｅａｇａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＡｇｉｎｇ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐの意見報告書によって推奨されたように、感度及び特異濃度を≧８０％に設定した。（１９９８、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １９：１０９〜１１６）。
【００４４】
患者及びＨＣの特徴を表１に挙げる。ｐ−タウ２３１及びｔ−タウの濃度は、ＨＣよりもＭＣＩの患者の方が高かった（ｐ＜０．００１）（表１参照）。年齢が同等（ｐ＝０．２７）のＭＣＩ患者（年齢６３．６±４．４歳）３０人及びＨＣ３０人の亜群では、基準点でのｐ−タウ２３１濃度（年齢が同じＭＣＩ患者、４３０±４３６ｐｇ／ｍＬ、ＨＣ、７８±１１４ｐｇ／ｍＬ）とｔ−タウの濃度の違いは変動しなかった（年齢が同じＭＣＩ患者、５０８±２４３ｐｇ／ｍＬ、ＨＣ、２４７±１３７ｐｇ／ｍＬ）（ｐ＜０．００１）。
【００４５】
【表１】
2006517650.tif 000002
【００４６】
ＭＣＩ患者３９人は、時間が経過すると認識力が低下し（ＭＣＩ衰退者、ｐ−タウ２３１濃度、５９０±４１４ｐｇ／ｍＬ、ｔ−タウの濃度、６１１±２６０ｐｇ／ｍＬ）、ＭＣＩ患者３８人は認識力が低下しなかった（ｐ−タウ２３１濃度、４０９±３６８ｐｇ／ｍＬ、ｔ−タウの濃度、５４４±２５４ｐｇ／ｍＬ）。ｐ−タウ２３１濃度は、追跡期間中にＡＤに変化したＭＣＩ患者（ＭＣＩ変化者、６１７±３７８ｐｇ／ｍＬ）の方が変化しなかった患者（４４２±４１２ｐｇ／ｍＬ）よりも高かった（ｐ＝０．０３７）。ＭＣＩ変化者（６１５±２１２ｐｇ／ｍＬ）と非変化者（５５９±２７８ｐｇ／ｍＬ）の間には、ｔ−タウの濃度の差（ｐ＝０．２０）は無いことが認められた。
【００４７】
タウ蛋白質の濃度は、ＡＤ患者よりもＭＣＩ群の方が低かった（ｐ−タウ２３１濃度、ｐ＜０．００１、ｔ−タウの濃度、ｐ＝０．０３７）。ｐ−タウ２３１濃度（ｐ＝０．１３）及びｔ−タウの濃度（ｐ＝０．２６）については、ＡＤ患者とＭＣＩ衰退者の間では差は認められなかった。群差の９５％ＣＩの限界は、ｐ−タウ２３１濃度では−４３ｐｇ／ｍＬから２８１ｐｇ／ｍＬの範囲で、ｔ−タウの濃度では−２２ｐｇ／ｍＬから２４２ｐｇ／ｍＬであった。
【００４８】
長期間追跡したＭＣＩ患者７７人について、ＭＭＳＥスコアの得点低下によって測定した平均認識力低下±ＳＤは１年当たり−１．７±４．０点であった。
【００４９】
基準点のＣＳＦｐ−タウ２３１濃度とＭＣＩ群のＭＭＳＥスコアの毎年の得点低下の間には、単一効果分析（スピアマンρ＝−０．３０、ｐ＜０．０１、図１）において、及び多重回帰モデルにおける共変量の制御後（β＝−０．２３、ｐ＝０．０４９）において、有意な相関が認められた。毎年のＭＭＳＥスコアの非常に大幅な得点低下の３個の外れ値を除いて、統計学的結果は変化しなかった（スピアマンρ＝−０．２３、ｐ＝０．０４９）。基準点におけるＣＳＦｔ−タウの濃度の高さは、ＭＭＳＥスコアの毎年の得点低下の大きさとは相関しなかった（スピアマンρ＝−０．１９、ｐ＝０．１０）。
【００５０】
さらに、多重回帰モデルにおいて、基準点の年齢の高さ（β＝−０．３１、ｐ＜０．０１）及びＡＰＯＥ−ε４保持状態（β＝−０．３９、ｐ＜０．０１）は、認識力低下の予測変数であった。基準点のＭＭＳＥ得点、性別、治療法、追跡調査の期間、又は施設は、有意量の説明力を与えなかった。ｐ−タウ２３１、ＡＰＯＥ−ε４保持状態、及び年齢のモデルによって、ＭＭＳＥスコアの毎年の得点低下の分散の２７％が説明された。多重回帰モデルにおいて、ｐ−タウ２３１をｔ−タウで置き換えたとき、基準点の年齢（ｐ＜０．０１）及びＡＰＯＥ−ε４保持状態（ｐ＜０．００１）のみが、認識力低下の予測変数であった。
【００５１】
Ｒｏｎａｌｄ  ａｎｄ  Ｎａｎｃｙ  Ｒｅａｇａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＡｇｉｎｇ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐは、公表した意見報告書（１９９８、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １９：１０９〜１１６）において、ＡＤの理想的なバイオマーカーは、ＡＤ検出の感度が≧８０％で、その他の認知症と区別する特異性が≧８０％であるべきであるとしている。（Ｒｏｎａｌｄ  ａｎｄ  Ｎａｎｃｙ  Ｒｅａｇａｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＩｎｓｔｉｔｕｔｅのＡｇｉｎｇ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ、１９９８、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ  １９：１０９〜１１６に従って設定した）これらの「事前に」選択された≧８０％の感度及び特異性で、ｐ−タウ２３１（ｔ−タウ）はＭＣＩ衰退者とＨＣを、感度８２％（８２％）及び特異性８７％（８０％）で区別した。ｐ−タウ２３１（ｔ−タウ）のカットオフ濃度は、１４３ｐｇ／ｍＬ（３７６ｐｇ／ｍＬ）であった。
【００５２】
データから、ＣＳＦｐ−タウ２３１濃度は、ＨＣと比較してＭＣＩ患者で上昇していることが示された。基準点におけるｐ−タウ２３１濃度の高さはＭＣＩ患者のＭＭＳＥスコアの毎年の得点低下と相関したが、ｔ−タウは相関しなかった。認識力が衰退し、認知症を発症する患者を同定することが目的なので、その結果、認識力低下を変数として選択した。この研究のＭＣＩ患者の一部の群は、ＡＤに変化した。認識力低下割合の分析と一致して、ｐ−タウ２３１濃度の増加はＡＤへの変化と相関したが、ｔ−タウの濃度は相関しなかった。したがって、基準点のＣＳＦｐ−タウ２３１が高いと、ＭＣＩ患者における認識力低下が予測される。ＭＣＩ患者のＭＭＳＥスコアの得点低下の危険性に対するｐ−タウ２３１濃度の関与は、認識力低下のその他の確立された危険因子とは独立している。
【実施例２】
【００５３】
ｐ−タウ２３１のＣＳＦ濃度によって、ＡＤをその他の認知症から区別することができる
ＡＤ、前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）、血管性認知症、レビー小体認知症、又はその他の神経障害と臨床的に診断された患者及び健常対照１９２人（１９２）を選択して、前述のようにＣＳＦ中のｔ−タウ及びｐ−タウ２３１濃度を測定した。ＣＳＦｐ−タウ２３１の平均濃度は、その他全ての群と比較してＡＤ群で有意に上昇していた。ｐ−タウ２３１の濃度によって、感度９０．２％及び特異性８０．０％で、ＡＤとその他の非ＡＤ障害が区別された。さらに、ｐ−タウ２３１濃度はｔ−タウの濃度と比較してＡＤ患者を健常対照（Ｐ＝０．０３）及び認知症患者（Ｐ＜０．００１）、特にＦＴＤ患者（Ｐ＜０．００１）と区別する診断上の精度を改善したが、血管性認知症及びレビー小体認知症では改善しなかった。ＡＤ患者を非ＡＤ疾患及び健常対照から区別するために最良の感度及び特異性をもたらすｐ−タウ２３１のカットオフ濃度は、約２１５ｐｇ／ｍｌであった。したがって、ｐ−タウ２３１ＣＳＦ濃度は約２１５ｐｇ／ｍｌ以上でＡＤを非ＡＤ認知症から区別することができる。
【実施例３】
【００５４】
ｐ−タウ２３１の脳室量は、軽度認知障害患者で増加する
正常な高齢者ボランティア１０人及び患者８人（ＭＣＩ７人及び非常に軽度のＡＤ１人）に対して、基準点及び１年毎に検診を行い、内科的検査（病歴、身体検査及び臨床検査）、神経学的検査、精神医学的検査、及び神経心理学的検査、ＭＲＩ、並びに腰椎穿刺（ＬＰ）を含めた診断評価を行った。毎年の評価は、２ヶ月間の猶予の間に完了した。
【００５５】
全てボランティアである正常な高齢患者の全体的退化スケール（ＧＤＳ）スコア（Ｒｅｉｓｂｅｒｇ他、１９８２、Ａｍ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  １３９：１１３６〜１１３９に記載されているように評価した）は、１又は２であった（年齢に関係した記憶変化の主観的報告によってのみ区別された）。ＭＣＩ患者は全てＧＤＳ＝３で、認知症ではないが、近親の情報提供者によって認識力低下が確認され、臨床的に識別可能な記憶障害があることが示された。非常に軽度のＡＤ患者はＧＤＳ＝４であり、Ｆｏｌｓｔｅｉｎ他、１９７５、Ｊ．Ｐｓｙｓｈｉａｔｒ．Ｒｅｓ．１２：１８９〜１９８に記載された方法を使用して測定したミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）＝２７であった。基準点における参加者全てのＭＭＳＥスコア≧２７であった。脳の構造又は機能に影響を及ぼす病状（たとえば、脳卒中、糖尿病、頭部外傷、鬱病）の患者は除外した。
【００５６】
心理測定検査バッテリー（Ｋｌｕｇｅｒ他、１９９９、Ｊ．Ｇｅｒｉａｔ．Ｐｓｙｃｈｉａｔ．Ｎｅｕｒｏｌ．１２：１６８〜１７９）には、記憶の評価（ひとまとまりの文章を直後及び１０分後に思い出すこと、及びギルド記憶検査の対連合下位検査）及び注意／精神運度速度の評価（改訂ウェクスラー成人知能検査の数字記号置換検査）が含まれる。
【００５７】
核磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）画像は、１．５Ｔ  ＧＥシグナ装置を使用して撮影した。臨床ＭＲＩ検査は、３ｍｍ連続アキシャルＴ２−強調画像で脳全体を調べた。検査画像は、１．２ｍｍ厚断面として矢状方向で取得した１２４枚のスライスＴ１強調高速勾配エコーであった（ＦＯＶ＝２５ｃｍ、ＮＥＸ＝１、マトリックス＝２５６ｘ１２８、ＴＲ＝３５ｍｓ、ＴＥ＝９ｍｓ及びＦＡ＝６０°）。画像シグナル強度は、白質強度を参照して正規化した。基準点及び追跡点の画像は、一緒に記録して、ｓｉｎｃ内挿段階で標準面方向に厚さ１．５ｍｍで再フォーマットした。
【００５８】
クモ膜下ＣＳＦを除いた脳室ＣＳＦの基準点及び追跡点を包含するように３次元領域を構築した。Ｆｏｘ及びＦｒｅｅｂｏｒｏｕｇｈ（１９９７、Ｊ．Ｍａｇ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇ．７：１０６９〜１０７５）の技法にしたがって、自動化プロトコールを該領域に適用し、基準点及び追跡点において周辺の脳組織からＣＳＦを分割した。ＭＲＩシグナル強度は、部分体積分解法を使用してＣＳＦ量に変換した。
【００５９】
患者を一晩絶食させ、静脈血３０ｃｃ及び透明なＣＳＦ１５ｃｃを２２ゲージの斜端ＬＰ針を導入するために蛍光透視法を使用して収集した。試料を４℃で１５００ｒｐｍで１０分間遠心して、０．２５ｃｃポリプロピレン管に分注し、−８０℃で保存した。測定はいずれも臨床データを隠して行い、バッチ処理した。
【００６０】
サンドイッチ型酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して、ＣＳＦ中のトレオニン２３１でリン酸化されたタウ（ｐ−タウ２３１）を検出した。この測定法では、タウは主鎖に対する２種類の抗体、タウ−１及びＣＰ−２７で捕捉された。捕捉されたタウは、次にｐ−タウ２３１に特異的なＣＰ９で検出した（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０）。この測定法の検出限界は９ｐｇ／ｍｌであった。変動係数の範囲は、６．０〜１０．３％（アッセイ内）及び１１．６〜１４．４％（アッセイ外）であった。
【００６１】
ＣＳＦ  Ａβ濃度は、（Ａβ−１６に存在する抗原決定基に特異的な）モノクローナル抗体６Ｅ１０並びにＡβ４０及びＡβ４２に対するウサギ抗血清を使用して、それぞれ２抗体サンドイッチＥＬＩＳＡで測定した（Ｋｏｈｎｋｅｎ他、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２８７：１８７〜１９０）。Ａβ４０及びＡβ４２の検出限界は１０ｐｇ／ｍｌであった。再現性の範囲は、８から１４％（アッセイ内）及び１０〜１８％（アッセイ外）の範囲であった。
【００６２】
ＣＳＦ中のｐ−タウ２３１の負荷（ｎｇ）は、ｐ−タウ２３１濃度（ｐｇ／ｍｌ）に脳室容積（ｍｌ）を乗じ、１０００で除することによって概算した。
【００６３】
ＣＳＦ測定値の患者間変動が大きいので、マン・ホイットニーのＵ検定を使用して比較差及び長期群相互作用を検査した。群内変化を調べるウィルコクソン符号順位検定を使用して有意な長期効果を追跡した。その他の測定としては、独立した平均用のｔ検定を使用して比較データを調べた。長期的影響は、追跡測定値と基準測定値の間の平均群差を使用して評価した（ｄｅｌｔａｓ）。徴候を示す群を予測するステップワイズ線形回帰モデルを使用して、長期的希釈補正の特有の関与を評価した。
【００６４】
正常群とＭＩＣ群との間には、年齢、教育、性別、ＡＰＯＥ遺伝子型、又は追跡調査時間の差はなかった（表２参照）。
【００６５】
【表２】
2006517650.tif 000003
【００６６】
基準点及び追跡点の両方において、文章の直後及び経過後両方の思い出しがＭＣＩでは減少していた（Ｐ＜０．０５）。長期的変化はいずれの神経心理学測定でも認められなかった（Ｐ＞０．０５）。ＭＣＩ患者１人が、非常に軽度のＡＤに変化した（ＧＤＳ＝４、ＭＭＳＥ＝３０）。
【００６７】
脳室容積は、基準点（ｔ（１６）＝−２．１、ｐ≦０．０５）及び追跡点（ｔ（１６）＝−２．２、Ｐ≦０．０５）の両方において、ＭＣＩで約４０％多かった。長期的には脳室の変化は認められなかった（表３参照）。
【００６８】
【表３】
2006517650.tif 000004
【００６９】
ＭＣＩ群におけるｐ−タウ２３１濃度は、基準点（Ｕ＝１４．０、Ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）及び追跡点（Ｕ＝６．０、ｐ＜０．０１、ｎ＝１８、表３参照）とも増加していた。ＭＣＩにおけるＡβ４０濃度はまた、基準点（Ｕ＝１３．０、Ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）及び追跡点（Ｕ＝１７．０、ｐ＜０．０１、ｎ＝１８）とも有意に増加していた。Ａβ４２濃度は、群間で差はなかった。長期的変化はいずれのＣＳＦ濃度測定値でも認められなかった（Ｐ＞０．０５）。
【００７０】
ＭＣＩ群におけるｐ−タウ２３１負荷は、基準点（Ｕ＝１１、Ｐ＜０．０１、ｎ＝１８）及び追跡点（Ｕ＝６、ｐ＝０．００１、ｎ＝１８）とも増加していた。ＭＣＩ群におけるＡβ４０負荷は、基準点（Ｕ＝１５、Ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）及び追跡点（Ｕ＝９、ｐ＜０．０１、ｎ＝１８）とも有意に増加していたが、Ａβ４２負荷は増加していなかった。長期的計画では、ｐ−タウ２３１負荷のみ時間の相互作用による有意な群が認められた（Ｕ＝１４．０、Ｐ＜０．０５、ｎ＝１８）。追跡検査では、ＭＣＩ群で有意なｐ−タウ２３１負荷増加が示された（Ｚ＝−２．１、ｐ＜０．０５、ｎ＝８）。対照群では、長期的な負荷の影響は認められなかった。
【００７１】
長期的なｐ−タウ負荷及びｐ−タウの濃度の変化は、２階層的線形回帰モデルを使用して直接比較し、徴候のある群を予測した（逆順の入力）。第１の入力段階と比較して、ｄｅｌｔａ  ｐ−タウ負荷は群の構成に関係した（Ｒ２＝０．３７、（Ｆ［１，１６］＝９．５、Ｐ＜０．０１）。第２段階と比較して、ｄｅｌｔａ  ｐ−タウ負荷は、ｄｅｌｔａ  ｐ−タウの濃度によって説明される分散を固有に増大させた（Ｒ２変化＝０．２８、（Ｆ［１，１５］＝７．３、Ｐ＜０．０５）。
【００７２】
比較データによって、ＡＤ病理の２つのマーカー（ｐ−タウ２３１及びＡβ４０）はＭＣＩで上昇していることが示された。脳室の大きさにおける変化を修正して検出すると、長期的に、ｐ−タウ２３１のみがＭＣＩで増加する。
【実施例４】
【００７３】
ＡＤ患者のＣＳＦ中のｐ−タウ２３１
ＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ基準によって可能性のあるＡＤであると臨床的に診断された患者２２人を選択した。基準点ＭＲＩ測定値を比較するために、健康なボランティア２１人を選択した。患者は、ドイツ、ミュンヘンのＬｕｄｗｉｇ−Ｍａｘｉｍｉｌｉａｎ大学アルツハイマー記念センター及び老年精神医学部認知症及び画像研究科から採用した。患者の特徴を表４に挙げる。
【００７４】
【表４】
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【００７５】
ＡＤ患者における認知障害は、ミニメンタルステート検定（ＭＭＳＥ）を使用して評価した。３人の患者が中等度（１０＜＝ＭＭＳＥ＜２０）の認知症で、１９人の患者が軽度（ＭＭＳＥ＞＝２０）の認知症であった。ＡＤ患者２０人をＭＲＩで２回調べ、ＡＤ患者２人は３回ＭＲＩスキャンを行った。ＡＤ患者では、観察期間の長さは、１１．３ヶ月から４１．０ヶ月の範囲であった（平均１８．４ヶ月、ＳＤ９．４）。スキャンの平均間隔は、１７．８ヶ月（ＳＤ９，２）で、１１．０ヶ月と４１．０ヶ月の間の範囲であった。
【００７６】
ＡＤ患者及び対照における著しい併病は、病歴、身体検査及び神経学的検査、心理学的検査、胸部Ｘ線、ＥＣＧ、ＥＥＧ、脳ＭＲＩ、及び臨床検査（全血球数、沈降速度、電解質、グルコース、血中尿素窒素、クレアチニン、肝臓関連酵素、コレステロール、ＨＤＬ、トリグリセリド、抗核抗体、リュウマチ因子、ＶＤＲＬ、ＨＩＶ、血清Ｂ１２、葉酸、甲状腺機能試験及び尿検査）によって除外した。ＡＤ患者２人が軽度の高血圧であったが、糖尿病の患者はいなかった。１人の患者を除いて、ＡＤ患者全ては臨床的追跡期間中、従来技術の抗認知症治療を受けた。治療を受けた２１人の患者の中で、１５人はアセチルコリン−エステラーゼ阻害剤で治療を受け、残りの６人の患者は、アカチノール、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ  ｂｉｌｏｂａ）又はその他の対症性向知性物質を含めたその他の薬剤で治療を受けた。患者又は委任状保持者は全て、臨床研究及び調査のためにＭＲＩ、腰椎穿刺及び神経心理学的評価を受ける同意書に署名した。プロトコールは、ドイツ、ミュンヘン、Ｌｕｄｗｉｇ−Ｍａｘｉｍｉｌｉａｎ大学医学部倫理評議委員会によって承認された。
【００７７】
ＭＲＩ検査は、１．５Ｔ  Ｓｉｅｍｅｎｓ  Ｍａｇｎｅｔｏｍ  Ｖｉｓｉｏｎ  ＭＲＩスキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ、Ｅｒｌａｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で実施した。患者は全て、容積Ｔ１強調矢状方向ＭＲＩ操作（ａ  ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ  ＴＩ  ｗｅｉｇｈｔｅｄ  ｓａｇｉｔｔａｌ  ｏｒｉｅｎｔｅｄ  ＭＲＩ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）で検査した（ＴＲ＝１１．６ｍｓ、ＴＥ＝４．９ｍｓ、解像度＝０．９４ｘ０．９４ｘ１．２ｍｍ）。
【００７８】
画像の前処理及び分割は、カナダ、ケベック州、モントリオールのＭｏｎｔｒｅａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＭｃＣｏｎｎｅｌｌ  Ｂｒａｉｎ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒで実施した。画像は全て、Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ作業所（Ｓｉｌｉｃｏｎ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）に送った。容積測定を行う前に、ＭＲＩ量全ての画像強度不均一性を補正し、Ｔａｌａｉｒａｃｈ  ａｔｌａｓをベースにして定位線形変換によって座標に変換し、１ｍｍのボクセルグリッドに再度抽出した。画像強度を補正して、ＭＲ画像に存在するノイズのほとんどを回復した。この前処理によって、容積測定の評価者間及び評価者自身の信頼性が高まり、全体的脳萎縮の影響が修正される。これは、長期的な一連のデータを分析する場合、より全体的な萎縮によって追跡時に測定値信頼性が減少すると、系統的で非生物学的な個体内の影響が引き起こされるので、特に重要である。
【００７９】
容積分析は、Ｂｒａｉｎ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒで開発された双方向ソフトウェアパッケージＤＩＳＰＬＡＹで実施した。このプログラムによって、冠状方向、矢状方向及び水平方向の容積の視覚化及び分割が可能である。
【００８０】
ＨＣ分割のために使用した解剖学的境界は、以前に詳細に説明されている。図２は、海馬の位置及び形態を示す。簡単に言うと、以下の方法を使用した。
【００８１】
ＨＣの最後部は、ＨＣの尾側から吻側に及ぶ側脳室（ＴＬＶ）の三角部の下内側の灰質が初めて出現するところとして定義される。ＨＣ尾部の側面境界は、ＴＬＶであった。内側については、ＨＣの境界は白質によって同定された。さらに前部に移動すると、Ａｎｄｒｅａｓ  Ｒｅｔｚｉｕｓ回、小帯回、及び脳弓脚の灰質からＨＣ灰質を区別するために、ＨＣの上部及び内側の境界を任意境界で定義した。この点のＨＣの下部境界は、再度白質によって同定された。
【００８２】
ＨＣの尾部及び体部の両方には、ＨＣの上側部の白質帯、海馬采が含まれた。海馬体における４個のＣＡ領域の間に位置する歯状回は、ＣＡ領域及び海馬台と共に含まれる。この点の側部境界は、側脳室の下角によって同定された。四丘体槽は、ＨＣの上内側境界を定義する。
【００８３】
側部を同定する最も重要な構造、ＨＣ頭部の前部及び上部の境界は、側脳室及び槽の下角の鉤溝である。ＨＣ頭部の前部境界を同定するために、冠状断の他に、矢状断及び水平断を使用した。
【００８４】
評価者間信頼性は、５種類の同じＭＲＩ画像を独立して測定した４種類の評価を使用して評価した。評価間の変動係数は、左右海馬について、１．８％と２．２％との間であった。級内相関係数は、左右海馬について、０．９４と０．８６との間であった。評価者内信頼性は、１評価者が今までに評価を行っていない５種類のＭＲＩ画像内で５種類の同じＭＲＩ画像を４回測定することによって決定した。評価間の変動係数は、左右海馬について、２．２％と２．４％との間であった。級内相関係数は、左右海馬について、０．９１と０．９４との間であった。
【００８５】
ＣＳＦ試料は、腰椎穿刺によって採取し、すぐに処理した。さらに検討するまで、一定量を−８０℃で保存した。詳細なＣＳＦプロトコールは、既に記載した。
【００８６】
タウ蛋白質の濃度は、前述のように酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）を使用して測定した。
【００８７】
海馬及び扁桃体容積の差を、スチューデントｔ検定を使用して群間（ＡＤ及び対照）で比較した。年齢の潜在的影響を制御するために、群間の海馬容積の差は、従属変数として容積を、予測変数として年齢及び徴候を用いて多重回帰分析を使用して評価した。
【００８８】
左右海馬萎縮の程度は、ＳＡＳ  ８．０２Ｐｒｏｃ  Ｍｉｘｅｄソフトウェア（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．、Ｃａｒｙ、ＮＣ、ＵＳＡ）を使用して、混合効果回帰モデルで測定した。第１段階では、それぞれの容積（左右海馬）は、混合効果回帰条件によって予測し、時間による患者と患者の量の違いを説明するためにランダム効果ターム（ｒａｎｄｏｍ  ｅｆｆｅｃｔ  ｔｅｒｍ）を取り入れたランダムトレンドモデル（ｒａｎｄｏｍ  ｔｒｅｎｄ  ｍｏｄｅｌ）。ｒａｎｄｏｍ  ｔｒｅｎｄモデルは、各患者の容積変化を以下のように傾斜及び中断によってパラメータ化された直線に概念化する。傾斜は、患者の萎縮速度を示し、中断は患者の基準点容積を示す。個々の傾斜及び中断は、平均及び分散が分かっていない正規母集団の無作為標本と見なす。個々の傾斜は、逐次制限付き最尤法によって決定し、個々の変化割合を決定するために標本全体の情報を考慮した。これらのモデルから、海馬容積の時間関連変化の個々の変量回帰係数を得た。第２の段階では、他の条件をランダム効果モデルに含めて、基準点容積及び個々の容積の変化割合に対するｐ−タウ２３１濃度の影響を明らかにした。他のｒａｎｄｏｍ  ｔｒｅｎｄモデルを使用して、ＭＭＳＥスコアにおける個々の低下割合を測定した。
【００８９】
スピアマン順位相関及びピアソンの積率相関係数を相関分析のために使用した。
【００９０】
海馬容積は、対照と比較してＡＤ患者では有意に減少していた（比較全てについてｐ＜０．００３）。これらの効果は、多重回帰モデルを使用して群間の年齢差を調整した後も有意なままであった（ｐ＜０．０５）。海馬容積を表５に示す。ＡＤ群では、ｐ−タウ２３１濃度は７２９．６（ＳＤ４０４．３）ｐｇ／ｍｌで、ｔ−タウの濃度は６０８．１（ＳＤ３１４．６）ｐｇ／ｍｌであった。ＡＤ患者の年間萎縮速度は、左右海馬とも約１４％であった（表６）。
【００９１】
【表５】
2006517650.tif 000006
【００９２】
【表６】
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【００９３】
左海馬（ｐ−タウ２３１：ベータ＝０．６５、ｐ＜０．００２、ｔ−タウ：ベータ＝０．５０、ｐ＜０．０１）及び右海馬（ｐ−タウ２３１：ベータ＝０．６３、ｐ＜０．００１、ｔ−タウ：ベータ＝０．４６、ｐ＜０．０３）の基準容積に対して、ｐ−タウ２３１及びｔ−タウの有意な影響が見られ、基準点海馬容積の高さに対応してタウ蛋白質の濃度が高くなった（図３）。ｐ−タウ２３１濃度の増加は、左海馬（ベータ＝−０．３６、ｐ＜０．００１）及び右海馬（ベータ＝−０．３１、ｐ＜０．０２）の萎縮速度の高さと有意に相関した（図４）。ｔ−タウの濃度は、萎縮速度とは相関しなかった。ＭＭＳＥスコアの平均低下割合は、ＡＤでは１年当たり−１．３２（ＳＤ１．０５）であった。ＭＭＳＥスコアの低下割合の大きさは、左右海馬容積の萎縮速度の高さと有意に相関した（ｒｈｏ＝０．５２及び０．４７、ｐ＜０．０５）。タウ蛋白質は、基準ＭＭＳＥスコア又はＡＤ患者のＭＭＳＥスコアの低下割合には影響を及ぼさなかった。
【００９４】
年齢はＡＤにおける萎縮速度又はＡＤ及び健常対照における基準容積に影響を及ぼさなかった。基準ＭＭＳＥスコア、開始時の年齢及び疾患期間は、ＡＤ患者における基準容積又は容積低下割合に影響を及ぼさなかった。治療（「治療無し」、「アセチルコリンエステラーゼ阻害剤」、「その他の薬剤」として識別）は、ＡＤにおけるＭＭＳＥスコア低下又は萎縮速度に影響を及ぼさなかった。年齢、開始時の年齢又は疾患期間又は基準時のＭＭＳＥスコアは、ＡＤのｔ−タウ及びｐ−タウ２３１ＣＳＦ濃度に影響を及ぼさなかった。
【００９５】
患者及び対照群の性別分布は一致させたが、年齢は異なった（表４）。
【００９６】
データから、タウ蛋白質の基準点濃度は海馬の基準点の容積に有意な影響を及ぼし、ｐ−タウ２３１は時間が経過すると海馬萎縮の進行に有意に影響を及ぼすことが示される。これらの結果は、ＣＳＦ中のタウ蛋白質の濃度は、構造ＭＲＩで視覚化したその後の形態学的疾患進行の主要な決定要素であるＡＤの軸索破壊及びニューロン破壊の程度に影響を及ぼし得るという仮説と合致する。
【００９７】
ｐ−タウ２３１濃度によって、その後の海馬萎縮速度が予測され、個々の萎縮速度における約２０％の変動を説明することができる。ｔ−タウの濃度ではその後の萎縮速度は予測できなかった。所与の期間の神経変性程度によって、その後の期間における神経損失割合を高く予測することができる。しかし、ＭＲＩにおける海馬萎縮によってＡＤにおける海馬の神経細胞数変動の８０％が明らかになったので、ＡＤにおける神経損失割合はＭＲＩに基づいた萎縮測定によってｉｎ  ｖｉｖｏで評価することができる。このことに基づいて、ｐ−タウ２３１濃度と海馬萎縮速度の間の有意な相関によって、ｐ−タウ２３１のＣＳＦ濃度は、次に、その後の神経損失及び部分的萎縮の割合を決定するＡＤにおける神経破壊程度の状態マーカーとして使用できることが示唆される。
【００９８】
前記の開示は本発明のある具体的な実施形態を強調しており、それらに相当する変更及び改変は全て、添付の請求の範囲で説明したように、本発明の精神及び範囲内であることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】長期的研究で認められた軽度認知障害（ＭＣＩ）患者７７人の基準点のＣＳＦ中のｐ−タウ２３１の濃度とＭＭＳＥスコアの毎年の得点減少の関係を示した図である。
【図２】左のパネルは、右海馬（ｈｃ）及び扁桃体（ａｇ）の両方の位置がわかる矢状方向の定量ＭＲＩにおいて、両構造を線で囲って示した図である。右のパネルは、線で囲った右海馬及び扁桃体を右前上部から見た図である。示されたＭＲＩ画像は、ＡＤ患者から得られたものである。したがって、海馬頭部及び扁桃体、特に図の右側は、重度の萎縮が見られる。
【図３】ＣＳＦタウ蛋白質の濃度（ｐｇ／ｍｌ）の高さはＡＤ患者の左右海馬の基準点容積（ｍｍ３）の大きさと相関することを示した図である。
【図４】基準点のＣＳＦｐ−タウ２３１濃度（ｐｇ／ｍｌ）の高さがＡＤ患者の混合効果回帰モデルから得られた右海馬の毎年の萎縮速度（ｍｍ３／年）の高さと相関することを示した図である。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図２】
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