(57)【要約】胎便吸引症候群（ＭＡＳ）予防または治療量の１以上の補体阻害剤を、ＭＡＳを発症する可能性の高い患者またはＭＡＳに罹患している患者に投与することを特徴とする胎便吸引症候群の予防または治療方法。補体阻害剤は、好ましくは、膜結合複合体の形成に関与する補体蛋白に結合し、阻害する抗体、好ましくは、抗−Ｄ因子または抗−Ｃ５抗体である。ＭＡＳによって引き起こされる罹患率および死亡率を減少させるために、補体阻害剤は、単独または、他のＭＡＳ療法と共に使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
胎便吸引症候群予防または治療量の１以上の補体阻害剤を、胎便吸引症候群を発症する可能性が高い患者または胎便吸引症候群に罹患している患者に投与することを特徴とする胎便吸引症候群の予防または治療方法。
【請求項２】
補体阻害剤がコンプスタチン（compstatin）およびその機能的アナログ、Ｃ１阻害剤、Ｃ１ｑ阻害剤、Ｃ１ｓ阻害剤、ｓＣＲ１およびそのアナログ、抗−Ｃ５抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５ａ受容体抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ３ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ３ａ受容体抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ６抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ７抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ８抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ９抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−プロペルジン（properdin）抗体およびその機能的に等価なフラグメント、融合蛋白メンブランコファクタープロテイン、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、Ｃ４ｂｐ、Ｈ因子、Ｉ因子、カルボキシペプチダーゼＮ、ビトロネクチン（Ｓ蛋白）、クルステリン（clusterin）およびＣＤ５９からなる群から選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】
補体阻害剤が抗体またはその機能的に等価なフラグメントである請求項１記載の方法。
【請求項４】
抗体が抗−Ｄ因子抗体である請求項３記載の方法。
【請求項５】
抗体が抗−プロペルジン抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５抗体およびその機能的に等価なフラグメント、および抗−Ｃ５ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメントからなる群から選択される請求項３記載の方法。
【請求項６】
補体阻害剤が第２補体経路の成分を阻害する請求項１記載の方法。
【請求項７】
補体阻害剤を１日につき体重１ｋｇあたり約３〜５０ｍｇの投与量で患者に投与する請求項１記載の方法。
【請求項８】
補体阻害剤を患者の肺に投与する請求項１記載の方法。
【請求項９】
吸入および気管注入からなる群から選択される方法を用いて、補体阻害剤を患者の肺に投与する請求項１記載の方法。
【請求項１０】
１以上の補体阻害剤および１以上の医薬上許容されるアジュバント、担体、賦形剤および希釈剤を含んでなる胎便吸引症候群の予防および治療のために有用な組成物。
【請求項１１】
２以上の補体阻害剤を含む請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
胎便吸引症候群予防または治療量の１以上の補体阻害剤を、胎便吸引症候群を発症する可能性の高い患者または胎便吸引症候群に罹患している患者に投与し、同時に、患者中に誘導される胎便の量を減少させる１以上の従来の療法で該患者を治療することを特徴とする、胎便吸引症候群の予防または治療方法。
【請求項１３】
従来の療法が吸引、羊水注入、サーファクタント注入、およびサーファクタント洗浄からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
補体阻害剤がコンプスタチンおよびその機能的アナログ、Ｃ１阻害剤、Ｃ１ｑ阻害剤、Ｃ１ｓ阻害剤、ｓＣＲ１およびそのアナログ、抗−Ｃ５抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５ａ受容体抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ３ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ３ａ受容体抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ６抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ７抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ８抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ９抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−プロペルジン（properdin）抗体およびその機能的に等価なフラグメント、融合蛋白メンブランコファクタープロテイン、崩壊促進因子（ＤＡＦ）、Ｃ４ｂｐ、Ｈ因子、Ｉ因子、カルボキシペプチダーゼＮ、ビトロネクチン（Ｓ蛋白）、クルステリンおよびＣＤ５９からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
補体阻害剤が抗体またはその機能的に等価なフラグメントである請求項１１記載の方法。
【請求項１６】
抗体が抗−Ｄ因子抗体である請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
抗体が抗−プロペルジン抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−Ｃ５抗体およびその機能的に等価なフラグメント、および抗−Ｃ５ａ抗体およびその機能的に等価なフラグメントからなる群から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
補体阻害剤が第２補体経路の成分を阻害する請求項１１記載の方法。
【請求項１９】
補体阻害剤を１日につき体重１ｋｇあたり約３〜５０ｍｇの投与量で患者に投与する請求項１１記載の方法。
【請求項２０】
補体阻害剤を患者の肺に投与する請求項１１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
本出願は、２００３年２月２１日に出願された米国仮出願番号第６０／４４９，０４５号（その開示は、出典明示により、本明細書の一部とされる）に対する優先権を主張する。
【０００２】
発明の背景
発明の分野
本発明は、概して、疾患の予防および治療のための方法および組成物に関し、特に、胎便吸引症候群の治療のための方法および組成物に関する。
【０００３】
先行技術の記載
免疫系−補体
免疫系は、病原性細菌、ウイルス、寄生虫および他の有害生物から体を保護する。免疫系は、２つの成分、体液系および細胞系に分けられる。一般に、体液系は、補体系および抗体の産生を誘導して病原体に対して防御する。補体系、または単なる補体は、宿主防御において抗体を補助する蛋白質の産生を含む。補体は、少なくとも３０種の表面結合性の可溶性蛋白からなる群である。該可溶性蛋白の活性は、血清を５６℃で３０分間加熱することによって破壊される。補体蛋白は、食菌作用のための微生物のオプソニン作用、溶菌による微生物の直接的な致死、白血球の炎症部位への走化性、白血球の活性化、および免疫複合体のプロセッシングに関与する。
【０００４】
補体蛋白は、カスケードで作用し、該カスケードにおいて、１の蛋白の結合が別の蛋白の結合を促進する。該カスケードの活性化は、免疫反応に寄与し、最終的に標的細胞を溶解しうる膜侵襲性複合体（Ｃ５ｂ−９）の形成に寄与するアナフィラトキシン（Ｃ３ａ、Ｃ４ａおよび最も強力なＣ５ａ）と呼ばれる生物学的に活性な小型ペプチドの放出を導く。異なる補体分子は、異なる細胞型、例えば、繊維芽細胞および腸上皮細胞Ｃ１型によって合成されるが、ほとんどの補体は、肝臓において合成される。
【０００５】
補体および補体系のメカニズムは、よく知られている。基本的に、３つの補体経路、古典的経路、レクチン経路および第２経路が存在する。古典的経路は、主に、抗原およびＩｇＧまたはＩｇＭを含有する免疫複合体だけではなく、Ｃ反応性蛋白のような他の因子によっても引き起こされる。レクチン経路は、マンノース結合性レクチン（ＭＢＬ）またはフィコリン（ficolin）の外来表面上の炭水化物構造（例えば、マンノース）への結合によって引き起こされる。第２経路は、主として、多糖類および細菌上に見出されるような他のポリマー構造の繰り返しによって活性化される。
【０００６】
古典的経路は、Ｃ１ｑ（Ｃ１ｑｒｓ複合体の一部）の球形ドメインがＩｇＭのＦｃフラグメントまたはＩｇＧの複数の分子に結合したときに活性化する。カルシウムイオンの存在下で、該結合が２つのＣ１ｒ分子の自触媒的活性化を引き起こす。Ｃ１ｒ分子は、Ｃ１ｓの２つの分子を活性化する。Ｃ１ｓは、Ｃ４ｂからＣ４ａを切断するセリンプロテアーゼである。Ｃ４ｂは、直ちに、標的細胞の表面にある隣接する蛋白または炭水化物に結合し、次いで、マグネシウムイオンの存在下でＣ２に結合する。Ｃ１ｓは、該複合体からＣ２ｂを切断し、それにより、古典的経路Ｃ３転換酵素、Ｃ４ｂ２ａを生じる。Ｃ３転換酵素は、何百個ものＣ３分子をＣ３ａおよびＣ３ｂに切断する。いくつかのＣ３ｂ分子は、Ｃ４ｂ２ａに再び結合して、古典的経路Ｃ５転換酵素、Ｃ４ｂ２ａ３ｂを生じるであろう。Ｃ５転換酵素は、Ｃ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。Ｃ５ｂは、細胞表面に結合し、それにより、膜侵襲性複合体（ＭＡＣ）の形成を開始する。「レクチン経路」は、細菌表面にある末端マンノース基に結合するカルシウム依存性レクチンＭＢＬによって開始されることを除き、古典的経路に似ている。ＭＢＬは、Ｃ１ｑに類似している。ＭＢＬがその標的に結合するとき、それは、Ｃ１ｒおよびＣ１ｓに類似するＭＡＳＰ１およびＭＡＳＰ２（マンノース結合性レクチン関連セリンプロテアーゼ）として知られる２つのセリンプロテアーゼと相互作用することができる。該セリンプロテアーゼは、Ｃ４をＣ４ｂおよびＣ４ａに切断し、該時点から先において、レクチン経路は古典的経路と同一である。
【０００７】
第２補体経路は、古典的経路によって生産されたＣ３ｂを用いる増幅ループを含む。古典的経路Ｃ３転換酵素によって生じたＣ３ｂ分子のいくつかが第２経路に注ぎ込まれる。表面結合性Ｃ３ｂは、Ｂ因子に結合してＣ３ｂＢを生じ、それがＤ因子の基質になる。Ｄ因子は、Ｂａフラグメントを切断し、それにより、標的細胞表面に結合したＣ３ｂＢｂを残すセリンエステラーゼである。Ｃ３ｂＢｂは、プロペルジン（properdin）（Ｐ）によって安定化されて複合体Ｃ３ｂＢｂＰを形成し、それが第２経路Ｃ３転換酵素として作用する。古典的経路におけるように、Ｃ３転換酵素は、増幅ループに関係して多くのＣ３分子を切断し、それにより、標的細胞上にＣ３ｂ分子の沈着をもたらす。これらのＣ３ｂ分子のいくつかは、再びＣ３ｂＢｂに結合してＣ３ｂＢｂ３ｂ、第２経路Ｃ５転換酵素を形成する。Ｃ５転換酵素は、Ｃ５をＣ５ａおよびＣ５ｂに切断する。Ｃ５ｂは、細胞表面に結合して、膜侵襲性複合体の形成を開始する。
【０００８】
古典的、レクチンおよび第２補体経路は全て、Ｃ５転換酵素の形成で終結する。Ｃ５転換酵素は、溶解経路を経て膜侵襲性複合体（Ｃ５ｂ６７８９ｎ）の構築を導く。Ｃ５−Ｃ８成分は、互いに縦に結合し、標的細胞の脂質二重層中への１以上のＣ９モノマーの挿入を促進する。該挿入は、カルシウム流入およびそれに続く有核細胞の細胞活性化、または膜侵襲性複合体が十分に強い場合、細胞溶解および死を引き起こす孔の形成を導く。
【０００９】
補体活性化は、局所性または全身性炎症に関連するいくつかの疾患の病因における１つの因子であることが示されている。Kyriakidesらは、補体第２経路が酸吸引傷害において重要な役割を果たすことを明らかにした（補体の膜侵襲性複合体および好中球は酸吸引の傷害の媒介となる（Membrane attack complex of complement and neutrophils mediate the injury of acid aspiration） J. Appl. Physiol. 87(6): 23572361, 1999 およびシアリル・ルイスでハイブリダイズした補体受容体１型は酸吸引傷害を緩和する（Sialyl Lewisx hybridized complement receptor type 1 moderates acid aspiration injury.） Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 281: L1494L1499, 2001）。米国特許第６，４９２，４０３号は、フラニルおよびチエニルアミジンおよびグアニジン類を用いて、補体カスケードの古典的経路によって媒介される急性または慢性障害の症状を治療する方法を開示する。米国特許第６，４５８，３６０号は、標的分子のための認識部位、例えば、補体受容体部位を含有し、哺乳動物における補体活性化または補体依存性細胞活性化を阻害するのに有用な免疫グロブリン鎖のＮ−末端に結合したポリペプチドを含んでなる可溶性組み換え型融合蛋白を開示する。
【００１０】
胎便吸引症候群
胎便は、７５％水分であり、胃液分泌物、粘液、胆汁酸塩、上皮細胞、遊離脂肪酸、蛋白、酵素、および胎児の胃腸管に蓄積するその他の生産物を含有する。胎便は、通常、出生後１または２日以内に排出される。しかしながら、妊娠中の低酸素症、感染症および他の因子などのストレスにより、出産前または出産中に、胎児が周囲の羊水中に胎便を排出することがある。羊水中の胎便の存在は、出産前または出産中に胎児が胎便をその肺中に吸引する場合があるので、危険であり、胎便吸引症候群（ＭＡＳ）を導きうる状態である。胎便は、アメリカ合衆国における全出産の約１２％（５〜１２％）の羊水中に存在する。米国には年間約４，０００，０００件の出産があり、胎便で濁った羊水を伴う出産の約４％がＭＡＳを発症し、その少なくとも５％が死に至る。したがって、米国において年間約２０，０００人の新生児がＭＡＳを発症し、そのうち約１０００人が死に至るであろう。概算で、世界中で年間約８００，０００人の新生児がＭＡＳを発症する。
【００１１】
ＭＡＳは、死亡率および罹患率を増加させる重篤な肺炎を伴う。胎便で濁った羊水を伴って生まれた乳児は、特に彼らがＭＡＳを発症している場合、脳性麻痺および肺機能異常を発症する危険性が高い。脳性麻痺は一生涯続き、現在、肺異常が大人になっても持続するかどうかは不明である。ＭＡＳは、進行性の呼吸障害、低酸素症、炭酸過剰症、およびアシドーシスを伴い、その結果、２５−６０％のケースにおいて、長期間の換気装置による治療が必要とされる（Wiswell TE Semin Neonatol 2001: 6:225）。低酸素症は、血液による組織の十分な潅流にもかかわらず、組織への酸素供給が生理学的レベル以下に減少することによって引き起こされるが、炭酸過剰症は、血中に過剰な二酸化炭素が存在する状態をいう。ＭＡＳの重篤なケースでは、生存のために体外膜型人工肺（extracorporeal membrane oxygenation:：ＥＣＭＯ）が必要とされる。ＭＡＳはまた、低酸素血症、脈管シャント、および肺コンプライアンスの減少をもたらすことがある。胎便吸引はまた、浮腫、白血球蓄積および肺の出血によって特徴付けられる炎症反応を引き起こすことが知られている。かかる反応は、通常、胎便が肺内に吸引された後、２〜５時間以内に発症し、数日間持続しうる。炎症応答を開始する胎便の成分および炎症を引き起こす分子メカニズムは、明確に理解されていない。ＭＡＳは、トロンバキソン（thrombaxone）Ａ２およびプロスタサイクリンの産生を増加し、ホスホリパーゼＡ２の活性を増加しうる。
【００１２】
ＭＡＳの既知の治療法は、サーファクタント注入、羊水注入、およびサーファクタント洗浄を包含する。例えば、ＵＳ５５６２０７７は、換気および胎便の吸引のための方法および装置を開示する。ＵＳ６０１３６２９は、肺サーファクタントおよび肺洗浄を包含する治療的使用を開示し、ＵＳ５５１４５９８は、胎便の出生前検出法を開示し、ＵＳ６０４４２８４は、羊水中の胎便濃度を測定するための装置および方法を開示する。これらの方法（そのいくつかは今だ実験的であると考えられるが）は、侵入的で、ＭＡＳを効果的に予防または治療することができないので、少ししか成功していない。したがって、ＭＡＳの予防および治療のための新規な方法および組成物に対する要望がある。
【００１３】
発明の概要
したがって、本発明の目的は、胎便吸引症候群（ＭＡＳ）を予防および治療するための方法および組成物を提供することにある。
【００１４】
本発明の別の目的は、ＭＡＳによって引き起こされる罹患率および死亡率を減少させることにある。
【００１５】
これらおよび他の目的は、ＭＡＳ予防または治療量の補体阻害剤を、ＭＡＳを発症する可能性の高い患者またはＭＡＳに罹患している患者に投与することを特徴とするＭＡＳの予防または治療方法を用いて達成される。補体阻害剤は、いずれかの既知の補体阻害剤であることができるが、好ましくは、第２補体経路において補体蛋白に結合し、阻害する抗体またはその機能的に等価なフラグメントである。該抗体または抗体フラグメントは、Ｃ３およびＣ５の活性化に関与する蛋白、例えば、Ｄ因子の作用を阻害し、患者における胎便の存在に応答して補体が活性化されるとき、細胞に対する損傷を阻害または予防する。
【００１６】
本発明のその他およびさらなる目的、特徴および利益は、当業者に容易に明らかになるであろう。
【００１７】
発明の詳細な記載
定義
「患者」なる語は、胎便吸引症候群（ＭＡＳ）を発症する可能性が高いか、またはＭＡＳに罹患しているヒトまたは他の動物を意味し、ウシ、ブタ、イヌ、ネコ、ウマ、トリ、およびヒツジを包含する。好ましくは、患者はヒトの新生児である。
【００１８】
「非経口的」なる語は、静脈内、皮下、筋内、気管内、または腹腔内注射による投与を意味する。
【００１９】
「共に（in conjunction）」なる語は、異なる補体阻害剤を患者に、（１）同じまたは異なる投与経路を用いて同じまたは異なる頻度で別々に、または（２）医薬上許容される組成物中において一緒に投与することを意味する。
【００２０】
「同時に治療する」なる語は、補体阻害剤および他の治療剤を患者に、ほとんど同じ時に、例えば、補体阻害剤の投与前後、約７２時間以内に投与することを意味する。
【００２１】
「機能的に等価なフラグメント」なる語は、補体系の成分に結合し、補体抗体と実質的に同じ方法で、補体活性化を阻害する抗体フラグメントを意味する。
【００２２】
方法、プロトコール、および試薬は変更しうるので、本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコール、および試薬に限定されない。さらに、本明細書で使用される用語は、特定の具体例を描写する目的のためだけにあり、本発明の範囲を限定しようとするものではない。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、文脈が明らかに別のものを示さないかぎり、単数形「ａ」、「ａｎ」および［ｔｈｅ」は、複数形を包含する。例えば、「宿主細胞（a host cell）」に対する言及は、複数の係る宿主細胞を包含する。
【００２３】
別に定義しないかぎり、本明細書で使用される全ての技術および科学用語およびいずれかの頭字語は、本発明の分野における通常の技術者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または等価のいずれの方法および材料も、本発明の実施において使用することができるが、好ましい方法、装置および材料を本明細書中に記載する。
【００２４】
本明細書において引用される全ての特許および出版物は、出典明示により、そこに報告された本発明と共に使用してもよい化合物および方法を記載および開示する目的で、法によって許された範囲まで、本明細書の一部とされる。しかしながら、本明細書中には、本願発明の開示が先発明に先行する資格を失ったということを認めるものと解釈されるべきものは何もない。
【００２５】
本発明
一の態様において、本発明は、胎便吸引症候群（ＭＡＳ）の予防および治療法を提供する。該方法は、胎便吸引症候群予防または治療量の１以上の補体阻害剤を患者に投与することを特徴とする。本発明は、免疫系の補体成分がＭＡＳの発症において決定的な役割を果たし、補体活性化を阻害または防ぐための方法および組成物を用いてＭＡＳを予防または治療することができるという知見に基づく。該方法および組成物は、ＭＡＳを発症する可能性の高い患者またはＭＡＳに罹患している患者に関する罹患率および死亡率を減少させるのに有用である。
【００２６】
本発明の補体阻害剤は、患者において補体活性化を阻害することが知られているいずれかの分子である。一般に、補体阻害剤は、小型有機分子、ペプチド、蛋白、抗体、抗体フラグメント、または補体阻害剤として機能する他の分子である。有用な補体阻害剤は、コンプスタチン（compstatin）およびその機能的アナログ（Ｃ３を阻害する）、Ｃ１阻害剤（Ｃ１ｒおよびＣ１ｓに共有結合する）、Ｃ１ｑ阻害剤、Ｃ１ｓ阻害剤、ｓＣＲ１およびそのアナログ（全てのＣ３転換酵素を解離する）、抗−Ｃ５抗体（Ｃ５活性化を遮断する）、抗−Ｃ５ａおよび抗−Ｃ５ａ受容体抗体および小型分子薬（Ｃ５ａシグナリング経路を阻害する）、抗−Ｃ３ａおよび抗−Ｃ３ａ受容体抗体および小型分子薬（Ｃ３ａシグナリング経路を阻害する）、抗−Ｃ６、７、８または９抗体（ＭＡＣの形成または機能を阻害する）、抗−プロペルジン抗体（第２経路においてＣ３およびＣ５転換酵素を不安定化する）、および融合蛋白メンブランコファクタープロテイン（Ｉ因子媒介性Ｃ３ｂおよびＣ４ｂ開裂のための共因子）、および崩壊促進因子（ＤＡＦ）（全てのＣ３転換酵素の分解を促進する）を包含する。他の有用な阻害剤は、Ｃ４ｂｐ（古典的経路Ｃ３転換酵素（Ｃ４ｂ２ａ）の分解を促進する）、Ｈ因子（第２経路Ｃ３転換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）の分解を促進する）、Ｉ因子（Ｃ４ｂおよびＣ３ｂを蛋白分解的に開裂し、不活化する（共因子が必要とされる））、カルボキシペプチダーゼＮ（末端アルギニン残基をＣ３ａ、Ｃ４ａおよびＣ５ａから除去する）、ビトロネクチン（Ｓ蛋白）、およびクルステリン（clusterin）（Ｃ５ｂ−７複合体を結合し、膜挿入を防ぐ）、およびＣＤ５９（バイスタンダー細胞の溶解を阻害する）を包含する。
【００２７】
好ましくは、補体阻害剤は、補体カスケードにおいて機能する１以上の蛋白、例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ４、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｄ因子、Ｂ因子、プロペルジン、ＭＢＬまたはその成分、プロテアーゼ開裂産物および受容体に結合し、阻害する抗体または機能的に等価なフラグメントである。抗体は、補体カスケードにおいて選択された補体蛋白に結合し、患者が胎便に曝されたときに補体活性化を阻害または予防する。一の具体例において、補体阻害剤は、Ｃ５に結合し、補体カスケードにおいてＣ５ａおよびＣ５ｂの形成を阻害する抗−Ｃ５抗体またはその機能的に等価なフラグメントである。抗体はまた、これらの蛋白に結合し、補体カスケードにおけるその作用を阻害する抗−Ｃ５ａまたは抗−Ｃ５ｂ抗体であることもできる。最も好ましくは、補体阻害剤は、Ｄ因子に結合し、補体カスケードにおけるその作用を阻害する抗−Ｄ因子抗体またはその機能的に等価なフラグメントである。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であることができるが、好ましくは、モノクローナル抗体である。
【００２８】
好ましい具体例において、補体阻害剤は、第２または終末の補体経路を阻害する化合物である。かかる阻害剤は、抗−Ｄ因子抗体およびその機能的に等価なフラグメント、抗−プロペルジン抗体およびその機能的に等価なフラグメント、および抗−Ｃ５抗体およびその機能的に等価なフラグメントを包含する。
【００２９】
ポリクローナル、モノクローナル、一価、ヒト化、ヒト、二重特異性、およびヘテロコンジュゲート抗体を包含する抗体およびその機能的に等価なフラグメントを生産するための方法は、当業者によく知られている。
【００３０】
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、免疫原を単独またはアジュバントと共に注射することによって、哺乳動物中で産生させることができる。典型的には、免疫原は、１回以上の皮下または腹腔内注射を用いて哺乳動物に注射される。免疫原は、目的のポリペプチドまたは該ポリペプチドと免疫する哺乳動物において免疫原性であることが知られている別のポリペプチドとからなる融合蛋白を包含しうる。免疫原は、また、組み換え受容体または受容体遺伝子を含有するＤＮＡ発現ベクターを発現している細胞を包含しうる。かかる免疫原蛋白の例は、限定するものではないが、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、およびダイズトリプシン阻害剤を包含する。アジュバントの例は、限定するものではないが、フロイントの完全アジュバントおよびＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリルリピッドＡ，合成トレハロースジコリノミコレート（trehalose dicorynomycolate））を包含する。免疫化プロトコールは、実験することなく、当業者によって選択されうる。
【００３１】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、例えば、KohlerおよびMilstein, Nature, 256:495 (1975)によって記載される方法を用いて生産できる。ハイブリドーマ法において、マウス、ハムスター、または他の適当な宿主哺乳動物を免疫原で免疫化して、該免疫原に特異的に結合するであろう抗体を産生するか、または産生することができるリンパ球を導く。別法では、リンパ球をイン・ビトロで免疫してもよい。免疫原は、典型的には、目的のポリペプチドまたはかかるポリペプチドを含有する融合蛋白を包含するであろう。一般に、ヒト起源の細胞が望ましい場合、末梢血リンパ（ＰＢＬ）細胞を用いる。非ヒト哺乳動物起源の細胞が望ましい場合、脾臓細胞またはリンパ節細胞を用いる。次いで、適当な融合剤、例えば、ポリエチレングリコールを用いて、リンパ球を不死化細胞系統と融合して、ハイブリドーマ細胞を形成させる（Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp 59-103 (Academic Press, 1986)）。不死化細胞系統は、通常、形質転換した哺乳動物細胞、特に、齧歯類、ウシ、またはヒトのミエローマ細胞である。通常、ラットまたはマウスミエローマ細胞系統を用いる。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは融合していない不死化細胞の生育または生存を阻害する１以上の物質を含有する適当な培養培地中で培養すればよい。例えば、親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）を欠如する場合、ハイブリドーマ用培養培地は、典型的には、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含むであろう（ＨＡＴ培地）。ＨＡＴ培地は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の生育を妨害する。
【００３２】
好ましい不死化細胞系統は、効率良く融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定な高レベル発現を支持し、かつ、ＨＡＴ培地などの培地に感受性の細胞系統である。より好ましい不死化細胞系統は、ネズミミエローマ系統、例えば、Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, Calif. USAから入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来の細胞系統、およびAmerican Type Culture Collection, Rockville, Md. USAから入手可能なＳＰ２／０またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞である。ヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系統もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生における使用のために記載された（Kozbor, J. Immunol. 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)）。マウスミエローマ細胞系統ＮＳ０もまた、使用してもよい（European Collection of Cell Cultures, Salisbury, Wiltshire UK）。当該分野でよく知られたヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞系統もまた、ヒトモノクローナル抗体の産生のために使用できる。
【００３３】
ハイブリドーマ細胞を培養するために使用された培養培地を、次いで、目的のポリペプチドに対して向けられたモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降によって、またはイン・ビトロ結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって測定する。かかる技術およびアッセイは、当該分野で知られている。モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、例えば、Munson and Pollard, Anal. Biochem., 107:220 (1980)のスキャッチャード（Scatchard）分析によって測定できる。
【００３４】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、限定希釈法を用いてクローンをサブクローン化し、標準的な方法によって生育させてもよい。該目的のための適当な培養培地は、ダルベッコ（Dulbecco）修飾イーグル（Eagle）培地およびＲＰＭＩ−１６４０培地を包含する。別法では、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中の腹水としてイン・ビボで増殖させてもよい。
【００３５】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体を、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーによって、培養培地または腹水から単離または精製する。
【００３６】
モノクローナル抗体は、また、組み換えＤＮＡ法、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載の方法によって生産してもよい。本発明のモノクローナル抗体をコードしているＤＮＡは、従来の方法、例えば、ネズミ抗体のＨ鎖およびＬ鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって、容易に単離および配列決定できる（Innis M. et al. In "PCR Protocols. A Guide to Methods and Applications", Academic, San Diego, CA (1990), Sanger, F.S, et al. Proc. Nat. Acad. Sci. 74:5463-5467 (1977)）。本明細書に記載のハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源として働く。いったん単離したならば、該ＤＮＡを発現ベクター中に入れてもよい。次いで、該ベクターを宿主細胞、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別法で免疫グロブリン蛋白を産生しないミエローマ細胞中にトランスフェクトする。該組み換え宿主細胞を用いて、所望のモノクローナル抗体を生産する。該ＤＮＡはまた、例えば、ヒトＨ鎖およびＬ鎖定常ドメインのコーディング配列をネズミ相同配列の代わりに用いることによって、または免疫グロブリンコーディング配列を非免疫グロブリンポリペプチドのコーディング配列の全てまたは一部に共有結合することによって、修飾してもよい。かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに用いることができ、またはキメラ二価抗体を作成するために、抗体の１の抗原結合部位の可変ドメインの代わりに用いることができる。
【００３７】
一価抗体は、免疫グロブリンＬ鎖および修飾されたＨ鎖の組み替え発現を用いて生産することができる。Ｈ鎖は、一般に、Ｈ鎖架橋結合を防ぐようにＦｃ領域中のいずれかの点で切断される。別法では、架橋結合を防ぐように関連するシステイン残基を別のアミノ酸残基で置換するか、または欠失させる。同様に、イン・ビトロ法を一価抗体の生産に用いることができる。既知の方法を用いる抗体消化を用いて、抗体フラグメント、好ましくは、Ｆａｂフラグメントを生産することができる。
【００３８】
抗体および抗体フラグメントは、McCaffertyら, Nature 348:552-554 (1990)に記載の技術を用いて作製された抗体ファージライブラリーを用いて生産できる。Clacksonら, Nature 352:624-628 (1991)およびMarksら, J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)は、ファージライブラリーを用いるネズミおよびヒト抗体の単離を各々、記載する。続く出版物は、鎖シャッフリング（Marks, et al., Bio/Technology 10:779-783 (1992)）ならびに非常に巨大なファージライブラリーを構築する手法としてのコンビナトリアル感染およびイン・ビボ組み換え（Waterhouse, et al., Nuc. Acids. Res. 21:2265-2266 (1993)）による高アフィニティー（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生産を記載する。かくして、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代わる実行可能な技術である。また、ＤＮＡは、例えば、ヒトＨ鎖およびＬ鎖定常ドメインのコーディング配列をその相同性ネズミ配列の代わりに用いることによって（米国特許第４，８１６，５６７号；Morrison, et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 81:6851 (1984)）、または非免疫グロブリンポリペプチドのコーディング配列の全てまたは一部を免疫グロブリンコーディング配列に共有結合することによって、修飾してもよい。典型的には、かかる非免疫グロブリンポリペプチドは、抗体の定常ドメインの代わりに用いられるか、またはそれらは、抗原特異性を有する１の抗原結合部位と異なる抗原に対する特異性を有する別の抗原結合部位とを含むキメラ二価抗体を作成するために、抗体の１の抗原結合部位の可変ドメインの代わりに用いられる。
【００３９】
抗体は、また、ハイブリドーマを形成させるために、化学的融合よりもむしろ電気的融合を用いて生産できる。該技術はよく確立されている。融合の代わりに、Ｂ細胞を例えば、エプスタイン・バーウイルスまたは形質転換遺伝子を用いて形質転換して不死化させることもできる（"Continuously Proliferating Human Cell Lines Synthesizing Antibody of Predetermined Specificity", Zurawaki, V. R. et al, in "Monoclonal Antibodies", ed. by Kennett R. H. et al, Plenum Press, N.Y. 1980, pp 19-33）。
【００４０】
ヒト化抗体
ヒト化抗体は、Winter in Jones ら, Nature, 321:522-525 (1986); Riechmannら、Nature, 332:323-327 (1988); および Verhoeyen ら、Science, 239:1 534-1536 (1988)によって記載される方法を用いて生産できる。ヒト化は、齧歯類ＣＤＲｓまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに用いることによって達成される。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された１以上のアミノ酸を有する。かかる「ヒト化」抗体は、実質的に無傷ヒト可変ドメインより少ない部分が非ヒト種由来の対応配列によって置換されたキメラ抗体である。実際、ヒト化抗体は、典型的に、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が齧歯類抗体中の類似部位由来の残基によって置換されているヒト抗体である。非ヒト（例えば、ネズミまたはウシ）抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、または免疫グロブリンフラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、あるいは非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有する抗体の他の抗原結合性サブシークエンスである。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が所望の特異性、アフィニティーおよびキャパシティーを有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラットまたはウサギのＣＤＲ由来の残基で置き換わっているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を包含する。時折、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が対応する非ヒト残基によって置き換わっている。ヒト化抗体は、また、レシピエント抗体にも、挿入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見出されない残基を含む。一般に、ヒト化抗体は、全てまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのそれに相当し、全てまたは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそれを含む。
【００４１】
ヒト抗体
ヒト抗体は、当該分野で知られる種々の技術、例えば、HoogenboomおよびWinter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991) および Marksら, J. Mol. Biol., 222:581 (1991)に記載されるようなファージディスプレイライブラリーを用いて生産できる。ヒトモノクローナル抗体は、Coleら, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) および Boemerら, J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)に記載の技術を用いて生産できる。別法では、免疫化において、内在性免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物、例えば、マウスを利用することができる。かかるトランスジェニックマウスは、Abgenix, Inc., Fremont, California, および Medarex, Inc., Annandale, New Jerseyから入手可能である。キメラおよび胚細胞変異マウスにおける抗体Ｈ鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合体欠失が、内在性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載された。かかる胚細胞変異マウスにおけるヒト胚細胞免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原攻撃においてヒト抗体の産生をもたらすであろう（例えば、Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); Duchosal et al. Nature 355:258 (1992)参照）。ヒト抗体は、また、ファージディスプレイライブラリーから得ることもできる（Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991); Vaughan, et al., Nature Biotech 14:309 (1996)）。
【００４２】
二重特異性抗体
二重特異性抗体は、２つのＨ鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリンＨ鎖／Ｌ鎖対の組み換え同時発現によって生産できる。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有するモノクローナル抗体、好ましくは、ヒトまたはヒト化抗体である。本発明において、結合特異性の１つは、補体成分に対してであり、他方は、いずれか他の抗原、好ましくは、細胞表面受容体または受容体サブユニットに対してである。免疫グロブリンＨおよびＬ鎖のランダムな組み合わせのために、これらのハイブリドーマは、１０種の異なる抗体の可能性のある組み合わせを生じる。しかしながら、これらの抗体のうちたった１つだけが正しい二重特異性構造を有する。正しい分子の回収および精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィーによって達成される。
【００４３】
所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合することができる。該融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリンＨ鎖定常ドメインとである。好ましくは、Ｌ鎖結合に必要な部位を含有する第１Ｈ鎖定常領域（ＣＨ１）が、該融合の少なくとも１つに存在する。免疫グロブリンＨ鎖、および所望により、免疫グロブリンＬ鎖をコードしているＤＮＡを、別々の発現ベクター中に挿入し、適当な宿主生物中に同時トランスフェクトする。二重特異性抗体の産生に適当な技術は、Sureshら, Methods in Enzymology, 121:210 (1986)に記載されている。
【００４４】
ヘテロコンジュゲート抗体
ヘテロコンジュゲート抗体は、既知の蛋白融合法を用いて、例えば、１の抗体のアミン基を別の抗体のチオール基または他のポリペプチドに結合させることによって生産できる。所望により、チオール基を既知の方法で導入することができる。例えば、抗体または抗体フラグメントおよびポリペプチド毒素を含んでなる免疫毒素は、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成することによって生産することができる。この目的のための適当な試薬の例は、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデートを包含する。かかる抗体は、免疫補体成分を標的とし、ＭＡＳを予防または治療するために使用することができる。
【００４５】
補体阻害剤は、該阻害剤が標的細胞に到達することを可能にするいずれかの手段によって、患者に投与することができる。これらの方法は、限定するものではないが、経口、直腸、鼻腔、局所、皮内、皮下、静脈内、筋内、気管内、および腹腔内投与様式を包含する。一の具体例において、阻害剤は、該阻害剤を肺に直接入れることによって、典型的には、吸入または気管注入によって投与される。投与のタイミングおよび投与に用いられる投与量レベルの正確な調節を可能にするので、非経口注射が好ましい。非経口投与のために、補体阻害剤は、例えば、生理学的に許容される非経口ビヒクルを用いて、溶液、懸濁液、エマルジョンまたは凍結乾燥粉末として処方することができる。かかるビヒクルの例は、水、セーライン、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清アルブミンである。リポソームおよび非水性ビヒクル、例えば、固定油もまた使用してもよい。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）および化学的安定性（例えば、バッファーおよび保存料）を維持する添加剤を含有していてもよい。該処方は、一般的に使用される技術によって滅菌される。例えば、注射による投与に適当な非経口組成物は、１．５重量％の活性成分を０．９％塩化ナトリウム溶液中に溶解することによって調製される。
【００４６】
別の態様において、本発明は、１以上の補体阻害剤および１以上の医薬上許容されるアジュバント、担体、賦形剤、および／または希釈剤を含んでなるＭＡＳを予防および治療するために有用な組成物を提供する。医薬組成物を製造するための許容されるアジュバント、担体、賦形剤、および／または希釈剤は、当業者によく知られている（例えば、Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975）。薬剤処方の別の議論は、Liberman, H. A. および Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980において見ることができる。最も好ましくは、該阻害剤を医薬上許容される担体と混合して、容易な投与量調整および投与が可能な組成物を形成する。非揮発性ピロゲンを含有しない水、滅菌水および殺菌水から調製された、少なくとも０．０２５Ｍバッファー塩、例えば、リン酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなどを含有する水性ビヒクルもまた、注射可能な補体阻害剤溶液の調製に適当である。これらのバッファーのほかに、いくつかの他の水性ビヒクルを使用できる。これらは、滅菌することができる等張性注射組成物、例えば、塩化ナトリウム、リンゲル液、デキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、および乳酸加リンゲル液を包含する。水混和性溶媒、例えば、メタノール、エタノール、またはプロピレングリコールの添加は、一般に、これらのビヒクル中における該阻害剤の溶解性および安定性を増加する。非水性ビヒクル、例えば、綿実油、ゴマ油またはピーナツ油、およびエステル、例えば、ミリスチン酸イソプロピルもまた、該阻害剤のための懸濁ビヒクルとして使用してもよい。さらに、該組成物の安定性、滅菌性および等張性を増加する種々の添加剤を加えることができ、抗微生物保存料、抗酸化剤、キレート剤およびバッファーを包含する。しかしながら、使用されるいずれのビヒクル、希釈剤または添加剤も、本発明にしたがう阻害剤と生体適合性および適合性でなければならない。
【００４７】
補体阻害剤が抗体または抗体フラグメントである場合、処方は、患者へ抗体を投与するのに適当ないずれか既知の処方、例えば、米国特許出願第２００２０１３６７１９号に開示されるような固体抗体処方、ＵＳ６，２６７，９５８に開示されるような復元された凍結乾燥処方、またはＵＳ６，１７１，５８６に開示されるような水性処方である。
【００４８】
患者に投与される補体阻害剤の投与量は、患者の種類、患者の年齢、患者の大きさ、阻害剤の種類、適用頻度、投与目的（治療または予防）、およびＭＡＳの重篤度によって変化する。一般に、補体阻害剤は、１日につき、体重１ｋｇにつき約３〜５０ミリグラム（ｍｇ／ｋｇ）、好ましくは約５〜３０ｍｇ／ｋｇ／日の量で患者に投与される。吸入または気管注入によって投与される場合、補体阻害剤は、約０．５−２０ｍｇ／ｋｇの量で１日２回患者に投与される。補体阻害剤は一度に投与することができ、または該投与量を少量に分けて、より多くの頻度で投与することができる。補体阻害剤は、ＭＡＳに対抗するために、単独または併用して投与することができる。
【００４９】
別の態様において、本発明は、１以上の補体阻害剤を、患者中に誘導される胎便の量を減らす他の療法と共に用いるＭＡＳの予防および治療法を提供する。該方法は、１以上の補体阻害剤を患者に投与し、患者中に誘導される胎便の量を減らす１以上の療法で該患者を治療することを特徴とする。かかる治療の組み合わせの使用は、ＭＡＳを予防または治療するのに必要な補体阻害剤の投与量を減らし、かつ、ＭＡＳを予防または治療するために補体阻害剤を使用する方法の効果を増加するなどの利点を有する。補体阻害剤は、吸引、羊水注入、サーファクタント注入、サーファクタント洗浄、およびＭＡＳに対抗するための他の既知の方法と組み合わせて使用できる。かかる方法は、ＭＡＳによって引き起こされる罹患率および死亡率を減少させるので、有益である。
【実施例】
【００５０】
本発明は、さらに、下記の好ましい具体例によって説明できるが、これらの実施例は単に例示目的で記載するのであって、特記しないかぎり、本発明の範囲を制限しようとするものではないと理解されよう。
【００５１】
材料および方法
血清および試薬
成人および臍帯血清を調製し、４℃でプールした。成人血清は、健康な人々から得られ、臍帯血清は、出産直後の胎盤（健康な母親および新生児）から得られた。ザイモサン（zymosan）Ａ（Ｚ−４２５０）および低分子量硫酸デキストラン（平均ＭＷ：５，０００；Ｄ−７０３７）をSIGMA (St. Louis, USA)から購入し、ヒト血清アルブミン（２００ｍｇ／ｍＬ、 Vnr. 478172) をOctapharma (Vienna, Austria)から購入した。Ｃ１阻害剤（BerinertＲ（登録商標））は、Aventis (Marburg, Germany)から入手した。
【００５２】
抗体
Ｃ２（クローン１７５−６２，ＩｇＧ１）およびＤ因子（クローン１６６−３２，ＩｇＧ１）を阻害するマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）ならびにイソ型に合致する対照ｍＡｂ（クローンＧ３−５１９，抗ＨＩＶ１ｇｐ１２０，ＩｇＧ１）を、ハイブリドーマを培養し、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによってモノクローナル抗体を精製することによって生産した。抗−マンノース−結合性レクチン（ＭＢＬ）（ｍＡｂ ＨＹＢ １３１−０１）は、Antibody Shop (Copenhagen, Denmark)から購入した。
【００５３】
酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）
補体活性化産物を異なる経路の活性化産物に対するｍＡｂｓに基づいてＥＩＡｓにおいて測定した。Ｃ１ｒｓ−Ｃ１阻害剤複合体（Ｃ１ｒｓ−Ｃ１ ｉｎｈ） 古典的経路活性化、Ｃ４ｂｃ 古典的経路およびレクチン経路の両方の活性化、Ｃ３ｂＢｂＰ 第２経路活性化、Ｃ３ｂｃ 最終的な共通の活性化、およびＴＣＣ 終末経路活性化。
【００５４】
Ｃ１ｒｓ−Ｃ１阻害剤複合体：サンドイッチ酵素イムノアッセイにおいて、保証されたMaxisorp NUNC-イムノプレート（NUNC A/S, Roskilde, Denmark）のウェルを０．１Ｍ炭酸バッファーｐＨ９．６中２μｇ／ｍＬの濃度の５０μｌの精製マウスｍＡｂ Ｋｏｋ １２を用いて、４℃で一晩インキュベートすることによってコーティングした。Ｋｏｋ１２は、プロテアーゼと複合体形成するときに、Ｃ１−阻害剤において露出されたネオエピトープと反応する。全てのその後のインキュベーション工程は、３７℃で行った。各インキュベーション後、ウェルを０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（SIGMA, St. Louis, MO）を含有する２００μｌＰＢＳ中で３回洗浄した。試料および標準物質を、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に希釈し、３連で試験し、１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１％ドライミルク（Molico, Nestle, Vevey, Switzerland）を含有するＰＢＳ中に希釈したヤギ抗−ヒトＣ１ｒ（Nordic Immunological Laboratories, Tilburg, The Netherlands）およびヤギ抗−ヒトＣ１ｓ（Quidel, San Diego, CA）のカクテルと共に、さらに４５分間インキュベートした。最後に、ペルオキシダーゼ結合型抗−ヤギＩｇＧ（Jackson Immuno Research Laboratories, Inc., West Grove, PA）を、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１％ドライミルクを含有するＰＢＳ中に希釈した。基質は、０．１５Ｍ酢酸バッファーｐＨ４．０および最終濃度２．４ｘ１０−３％までのＨ２Ｏ２中における０．３ｍＭ２，２’−アジノ−ジ−（３−エチル）−ベンゾチアゾリンスルホン酸（ＡＢＴＳ，Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany）であった。光学密度は、参照として４９０ｎｍを用いて、Dynatech MR7000リーダー上、４０５ｎｍにて２０−３０分後に測定された。
【００５５】
Ｃ４ｂｃ：Maxisorp NUNC-イムノプレート（NUNC A/S, Roskilde, Denmark）を、０．１Ｍ炭酸バッファーｐＨ９．６中において１：５００倍希釈した５０μｌの精製マウスｍＡｂ Ｃ４−１を用いて、４℃で一晩インキュベートすることによってコーティングした。ｍＡｂ Ｃ４−１は、活性化されたＣ４（Ｃ４ｂおよびＣ４ｃ）において露出されたネオエピトープと反応する。全てのその後のインキュベーション工程は、３７℃で行った。各インキュベーション後、ウェルを０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（SIGMA, St. Louis, MO）を含有する２００μｌＰＢＳ中で３回洗浄した。試料および標準物質を、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中に希釈し、３連で試験し、１時間インキュベートした。洗浄後、プレートを、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１％ドライミルク（Molico, Nestle, Vevey, Switzerland）を含有するＰＢＳ中で１／３５０希釈したビオチン化抗−ヒトＣ４（A305; Quidel, San Diego, CA）と共に、さらに４５分間インキュベートした。最後に、ペルオキシダーゼ結合型ストレプトアビジン（Amersham, Buckinghamshire, UK）を、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１％ドライミルクを含有するＰＢＳ中に１：１０００希釈した。基質は、０．１５Ｍ酢酸バッファーｐＨ４．０および最終濃度２．４ｘ１０−３％までのＨ２Ｏ２中における０．３ｍＭ２，２’−アジノ−ジ−（３−エチル）−ベンゾチアゾリンスルホン酸（ＡＢＴＳ，Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany）であった。光学密度は、参照として４９０ｎｍを用いて、Dynatech MR7000リーダー上、４０５ｎｍにて２０−３０分後に測定された。
【００５６】
Ｃ３ｂＢｂ−プロペルジン複合体（Ｃ３ｂＢｂＰ）：第２経路の活性化は、ＥＩＡにおいて第２経路転換酵素Ｃ３ｂＢｂＰを定量することによって検出した。ミクロタイタープレート（Maxisorp, NUNC, Roskilde, Denmark）を、０．０５Ｍ炭酸バッファーｐＨ９．６中で１／１０００倍希釈したマウス抗−ヒトＰ因子、クローン＃２（Quidel, San Diego, CA）と共に、４℃で一晩インキュベートした。さらなる各インキュベーションの間に、プレートを、０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳで３回洗浄した。全インキュベーションは、基質（１００μＬ）を除き、１ウェルにつき５０μＬで行った。０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１０ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ中において、標準試料（下記参照）は、１／１００から１／３２００に２倍希釈し、試験試料（最終濃度で１０ｍＭ ＥＤＴＡを含有する）は１／２５希釈した。プレートを室温で６０分間インキュベートした。検出抗体は、０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中で１／１０００希釈した抗−Ｃ３ｃ（Behringwerke AG, Marburg, Germany）であった。３７℃で４５分インキュベーション後、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中で１／１０００希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ結合型ロバ抗−ウサギＩｇ（NA9349, Amersham International, Little Chalfont, UK）を加えた。３７℃で４５分インキュベーション後、基質：０．１５Ｍ酢酸ナトリウムバッファーｐＨ４．０中で希釈したＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ジ−（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸）１８０ｍｇ／Ｌを加えた。Ｈ２Ｏ２（３％，１０μＬ）を１２．５ｍＬ基質溶液に使用直前に加えた。標準試料は、血清を１０ｍｇ／ｍＬザイモサン（Sigma Chemical Co., St. Louis, MO）と共に３７℃で６０分間インキュベートすることによって作製されたザイモサン−活性化ヒト血清プールであった。遠心分離後、上清を分離し、アリコートにおいて−７０℃で保存した。ＺＡＳは、１０００ＡＵ／ｍＬのＣ３ｂＢｂＰを含有すると決定された。光学密度は、参照として４９０ｎｍを用いて、４０５ｎｍで読み取られた。
【００５７】
Ｃ３ｂｃ：Ｃ３の活性化は、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｃ上の共通のネオエピトープに特異的なｍＡｂ ｂＨ６（捕獲抗体として、発明者らの実験室で作製された）を用いるサンドイッチＥＬＩＳＡによって検出した。ミクロタイタープレート（NUNC Immunoplate II）は、NUNC, Copenhagen, Denmarkから入手した。ｍＡｂ ｂＨ６は、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）中１：１０，０００希釈し、コーティングは、４℃で少なくとも１６時間行った。抗原（標準および試料）は、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する冷ＰＢＳ中で希釈し、４℃で１時間インキュベートした。検出抗体は、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中で１：１０，０００希釈し、３７℃で４５分間インキュベートしたポリクローナルウサギ抗−Ｃ３ｃ（Behringwerke AG, Marburg, Germany）であった。最終的に、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中で１：２０００希釈したペルオキシダーゼ標識された抗−ウサギＩｇ（Amersham International, Buckinghamshire, UK）を加え、３７℃で４５分間インキュベートした。プレートを各インキュベーション間に、Dynawasher（Dynatech Laboratories, Alexandria, Virginia, U.S.A.）中、０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳを用いて４回洗浄した。最終的に、基質：０．１５Ｍ酢酸ナトリウムバッファーｐＨ４．０中で希釈したＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ジ−（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸）１８０ｍｇ／Ｌを加えた。Ｈ２Ｏ２（３％，１０μＬ）を１２．５ｍＬ基質溶液に使用直前に加えた。色彩構成は、参照として４９０ｎｍを用いて、４０５ｎｍにて分光側光法によって測定した（Dynatech Model MR 7000）。
【００５８】
ＴＣＣ：可溶性終末ＳＣ５ｂ−９補体複合体は、捕獲抗体として、活性化されたＣ９において露出されたネオエピトープに特異的なｍＡｂ ａＥ１１（発明者らの研究室で作製された）に基づくサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて検出した。ミクロタイタープレート（NUNC Immunoplate II）は、NUNC, Copenhagen, Denmarkから入手した。ｍＡｂ ａＥ１１は、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）中１：１０，０００希釈し、コーティングは、４℃で少なくとも１６時間行った。抗原（標準および試料）は、０．２％Ｔｗｅｅｎ２０および１０ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有する冷ＰＢＳ中で希釈し、４℃で１時間インキュベートした。検出抗体は、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ中で１：５０００希釈し、３７℃で４５分間インキュベートしたビオチン化ｍＡｂ抗−Ｃ６（クローン９Ｃ４；発明者らの研究室で作製された）であった。プレートを各インキュベーション間に、Dynawasher（Dynatech Laboratories, Alexandria, Virginia, U.S.A.）中、０．０５％Ｔｗｅｅｎを含有するＰＢＳを用いて４回洗浄した。最終的に、基質：０．１５Ｍ酢酸ナトリウムバッファーｐＨ４．０中で希釈したＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ジ−（３−エチルベンゾチアゾリンスルホン酸）１８０ｍｇ／Ｌを加えた。Ｈ２Ｏ２（３％，１０μＬ）を１２．５ｍＬ基質溶液に使用直前に加えた。色彩構成は、参照として４９０ｎｍを用いて、４０５ｎｍにて分光側光法によって測定した（Dynatech Model MR 7000）。
【００５９】
Ｃ１ｒｓ−Ｃ１阻害剤およびＣ４ｂｃアッセイのための標準試料の調製：１０人の健康な血液ドナー由来の正常ヒト血清プール（ＮＨＳ）の古典的経路による活性化は、熱凝集性ＩｇＧ（ＨＡＩＧＧ）を加えることによって行った。リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）ｐＨ７．２中におけるヒトＩｇＧ（Gammaglobulin Kabi, Uppsala, Sweden）の１０ｍｇ／ｍＬ溶液を水浴中、６０℃で１５分間インキュベートした。得られたＨＡＩＧＧ−調製物をすぐに冷却し、−２０℃で保存した。予め温めた血清プール１ｍｌにつき１ｍｇのＨＡＩＧＧを３７℃で３０分間インキュベートし、次いで、６０００ｘｇで３０分間遠心分離した。上清を取り、小さなアリコートに分けて−７０℃で保存し、アッセイにおいて標準試料として用いた。標準試料は、１ｍｌにつき１０００任意単位（ＡＵ）のＣ１ｒｓ−Ｃ１ｉｎｈおよびＣ４ｂｃを含有すると決定された。
【００６０】
Ｃ３ｂｃ、Ｃ３ｂＢｂＰおよびＴＣＣアッセイのための標準試料の調製：第２経路活性化を、最終濃度１０ｍｇ／ｍＬのザイモサンＡ（SIGMA, St.Louis, Missouri, USA）と共に３７℃で１時間インキュベートすることによって、正常ヒト血清において誘導した。試料を１．５ｍＬエッペンドルフチューブ中、エッペンドルフ遠心分離器５４１７Ｒ（Eppendorf-Netheler-Hinz GmbH, Hamburg, Germany）において、２０，２００Ｇにて４℃で３０分間遠心分離した。上清を−７０℃で保存し、アッセイにおける標準試料として用いた。該標準試料は、１０００任意単位（ＡＵ）のＣ３ｂｃ、Ｃ３ｂＢｂＰおよびＴＣＣを含有すると決定された。
【００６１】
胎便
胎便は、下記のように得て、調製した。個人の胎便部分を収集し、冷凍した。解凍後、それらをプールし、ホモジナイズし、凍結乾燥し、滅菌のために照射し、アリコートに分けて−２０℃で保存した。イン・ビボ実験の前に、該調製物を滅菌セーラインを用いて、最終濃度１３５ｍｇ／ｍｌに希釈した。イン・ビボ実験の前に、それを滅菌ＰＢＳでさらに、１００ｍｇ／ｍＬのストック濃度まで希釈した。
【００６２】
胎便の分画：胎便を水および脂質フラクションに分画した。胆汁酸は、水フラクション中に見られ、遊離脂肪酸は脂質フラクション中に見られる。これら２つのフラクションは、全胎便中に異なる量で存在する。一般に、脂質フラクションの重量は、全胎便の元々の量の１４％であり、水フラクションの重量は６３％であった。各フラクションの相対的寄与率を比べるために、等しい濃度の胎便およびそのフラクションを用いた（それは、１４ｍｇ／ｍＬ濃度の脂質フラクションおよび６３ｍｇ／ｍｌ濃度の水フラクションが全胎便の１００ｍｇ／ｍＬに等しいことを示した）。
【００６３】
イン・ビトロ実験モデル
成人または臍帯血清を胎便またはその等価量のフラクションと共に、３７℃で１時間インキュベートした。阻害実験は、阻害剤および対照と血清の３７℃で５分間のプレインキュベーションを用いて行った。胎便を加え、上記のように１時間インキュベートした。血清中でのインキュベーション前に胎便をヒト血清アルブミンと混合した実験において、異なる濃度のヒト血清アルブミンを用いて、血清インキュベーション前の異なる時間、プレインキュベーションを行った。補体活性化は、常に、インキュベーション期間の最後に、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を最終濃度２０ｍＭまで加えることによって停止させた。
【００６４】
胎便吸引症候群のイン・ビボ仔ブタモデル
仔ブタに麻酔をかけ、気管切開し、呼吸装置につなげた。次いで、点滴のための管アクセス、血液試料および侵襲性モニタリングを得るための手術を行った。肺機能変数は、呼吸装置によって記録された。吸入酸素濃度（ＦｉＯ２）および呼吸終期ＣＯ２を連続的に別々にモニターした。手術後、仔ブタをまず、安定化し、次いで、塩基過剰が−２０ｍＭに達するまで、Ｎ２中８％Ｏ２のガス混合物中において低酸素血症期間に付した。試験仔ブタに、気管内チューブを介して胎便（１３５ｍｇ／ｍＬを含有する調製物を４ｍＬ／ｋｇ）を与え、５分後に気管支肺胞洗浄を行った。対照仔ブタに、同じ容量の生理学的セーラインを与えた。気管注入後すぐに、仔ブタを再酸素化し、再酸素化後、５時間観察した。血液試料を規則的に採取した。酸素飽和指数（ＯＩ)（平均気道内圧 Ｘ ＦｉＯ２ Ｘ １００／ＰａＯ２）を算出して、肺傷害の重篤度を算出した。
【００６５】
実施例１
胎便は、イン・ビボで補体活性化を誘導する。
上記の方法を用いて、胎便吸引症候群を生まれたばかりの仔ブタにおいて誘導した。試験動物（ｎ＝１２）の気管内に胎便を与え、対照動物（ｎ＝６）にセーラインを与えた。観察時間は５時間であった。補体活性化（ＴＣＣ）は、ＥＩＡを用いることによって測定した。結果を表１に示す。また、心−肺パラメーターを測定し、酸素飽和指数（ＯＩ）、換気指数（ＶＩ）および肺コンプライアンス（ＰＣ）によって、疾患の進行を評価した。血液試料は、気管切開後（１）、手術後（２）、低酸素症の２０分後（３）、次いで、再酸素化の２０分（４）、６０分（５）、１２０分（６）、１８０分（７）、２４０分（８）および３００分（９）後に得た。結果を表２に示す。
【表１−１】
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【表１−２】
2006518750.tif 000003
【表１−３】
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【表１−４】
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【表１−５】
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【表２】
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【００６６】
表１を参照すると、血漿ＴＣＣは、対照と比べて、胎便群において有意に増加した。ＴＣＣは、生き残った胎便動物よりも、致死した胎便動物において有意に増加した（ｐ＜０．０００５）。表２を参照すると、全観察期間において、ＴＣＣとＯＩおよびＶＩとの間に、観察期間の最後に、ＴＣＣとＰＣの間に、密接かつ大いに有意な相関関係が存在した（肺コンプライアンスにおける変化は、ＯＩおよびＶＩと比べて遅く起こる）。結果は、（１）ＭＡＳにおいて全身的に補体が活性化されること、（２）全観察期間において、生存した動物よりも致死した動物において、ＴＣＣが顕著かつ有意に高いこと、（３）酸素飽和指数、換気指数および肺コンプライアンスによって測定される場合、ＴＣＣが罹患率と密接に相関すること、および（４）ＴＣＣがＭＡＳにおける全身性炎症および臨床的結果の重要な引き金であることを示す。したがって、ＴＣＣがＭＡＳにおける罹患率および死亡率と相関することに疑いはない。
【００６７】
実施例２
胎便をヒト臍帯血清中、３７℃で６０分間インキュベートし、用量応答法において可溶性終末ＳＣ５ｂ−９補体複合体のいずれかの増加を検出することによって、ＴＣＣを測定した。３回の実験の結果を表３に示す。
【表３】
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2006518750.tif 000009
* TCC（AU/mL）
【００６８】
表３を参照すると、結果は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と対照的に、胎便は実質的に補体を活性化し、ＨＳＡは補体活性化に対して影響を及ぼさなかったことを示す。したがって、胎便は、臍帯血清において補体活性化を誘導する。
【００６９】
実施例３
新生児は成人より低い濃度の補体成分を有するので、ヒト臍帯血清および成人血清を、胎便およびザイモサン（よく知られた強力な補体アクチベーター）のＴＣＣ形成能に関して比較した。結果を表４に示す。
【表４】
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* TCC（AU/mL）
【００７０】
表４を参照すると、臍帯血清中においてザイモサンによって形成されたＴＣＣの最大レベルは、成人血清で達成されたレベルの約２５％であり、前者における補体成分のより低い量と矛盾のない結果となった。同様に、胎便は、臍帯血清におけるよりも成人において大きい程度まで補体を活性化したが、実質的な活性化は、臍帯血清において見られた。３つの実験のうち１つの代表例を示す。臍帯血清は、胎便吸引症候群の生理学的関連媒体であるので、その後の実験は臍帯血清を用いて行われた。
【００７１】
実施例４
ヒト胎便を脂質フラクション（例えば、遊離脂肪酸を含有する）および水フラクション（例えば、胆汁酸を含有する）に分画し、ＴＣＣ形成に対するフラクションの影響を、３７℃で６０分間のヒト血清中におけるインキュベーションによって試験した。結果を表５に示す。
【表５】
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* TCC（AU/mL）
【００７２】
表５を参照すると、全胎便およびフラクションの同等濃度ならびに再構築したフラクションは、脂質および水フラクションが等しくＴＣＣ形成に寄与し、これらのフラクションの混合が全胎便の活性を復元したことを示した。３つの実験のうち１の代表例を示す。
【００７３】
実施例５
アルブミンの遊離脂肪酸に結合する能力は、肺へのアルブミン注入による胎便吸引症候群のための可能な治療的アプローチとして仮定された。胎便をヒトアルブミンとプレインキュベーションすることによる補体活性化能力に対する影響を調べた。３７℃で６０分間の血清中におけるインキュベーションの１５分前に、増加濃度のアルブミンを胎便に加えた。結果を表６に示す。３つの別々の実験の中央値および範囲を示す。
【表６】
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* TCC（AU/mL）
【００７４】
表６を参照すると、結果は、アルブミンがＴＣＣ形成を阻害しなかったことを示す。
【００７５】
実施例６
補体系の古典的およびレクチン経路の阻害剤としてのＣ１−阻害剤の役割は、よく知られている。近年、Ｃ１−阻害剤の第２経路に対する阻害効果も同様に記載された。したがって、Ｃ１−阻害剤の胎便誘導性補体活性化に対する効果が、上記の技術を用いて調べられた。低分子量硫酸デキストランは、Ｃ１−阻害剤機能のよく知られた増強剤である。胎便をＣ１阻害剤、デキストランまたはＨＳＡの存在下、血清中でインキュベートした。結果を表７に示す。３つの実験のうち１の代表例を示す。
【表７】
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* TCC（AU/mL）
【００７６】
表７を参照すると、ＴＣＣ形成におけるわずかな減少のみが、生理学的濃度の４倍濃度（４Ｕ／ｍＬ）までのＣ１−阻害剤において観察された。低分子量デキストランは、外来的に加えられたＣ１−阻害剤の非常に限られた効果と結びついて、ＴＣＣ形成を用量依存的に阻止した。硫酸デキストランの効果は、血清中に存在する内在性Ｃ１−阻害剤の増強作用に帰因するか、または第２経路Ｈ因子を包含する他の補体成分に対する効果に帰因するかもしれない。ヒト血清アルブミンは対照として使用され、補体活性化に対する阻害効果はなかった。かくして、胎便誘導性補体活性化は、Ｃ１−阻害剤によってわずかに阻害され、低分子量硫酸デキストランによって阻止される。
【００７７】
実施例７
胎便ならびにその脂質および水フラクションをヒト臍帯血清中、３７℃で６０分間インキュベートし、古典的（Ｃ１ｒｓ−Ｃ１−阻害剤複合体）、古典的およびレクチン（Ｃ４ｂｃ）および第２（Ｃ３ｂＢｂＰ）経路由来の活性化産物を測定した。分画していない胎便における結果を表８に示し、ベースラインからの増加倍として表した。
【表８】
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【００７８】
表８を参照すると、胎便はＣ３ｂＢｂＰにおいて顕著な増加を誘導したが、Ｃ１ｒｓ−Ｃ１ｉｎｈ複合体またはＣ４ｂｃにおいて誘導しなかった。このことは、活性化の第２経路メカニズムを示す。３つの分離した実験の中央値および範囲を示し、ベースラインからの増加倍を示す。脂質フラクションおよび水フラクションの両方が、全胎便と同じパターンの活性化を示した。かくして、胎便は第２経路を介して補体系を活性化する。
【００７９】
実施例８
胎便をヒト臍帯血清中、Ｃ２（古典的／レクチン経路）、マンノース結合性レクチン（ＭＢＬ、レクチン経路）、Ｄ因子（第２経路）に対する阻害性モノクローナル抗体またはイソ型対照抗体Ｇ３−５１９（ＩｇＧ１サブクラスの全抗体）の存在下、３７℃で６０分間インキュベートした。ＴＣＣ形成の結果を表９に示す。
【表９】
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ベースライン: 9.7
【００８０】
表９を参照すると、抗−Ｄ因子はＴＣＣ形成を完全に妨害したが、他の抗体は効果がなかった。
【００８１】
実施例９
本明細書に記載のイン・ビボモデルを用いて、２匹の仔ブタに胎便を与え（Ｐ１およびＰ２）、１の対照にセーラインを与えた。結果を表１０に示す。
【表１０】
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【００８２】
表１０を参照すると、酸素飽和指数およびＴＣＣは、試験した両方の仔ブタにおいて増加したが、対照において増加しなかった。試験仔ブタＰ２は、酸素飽和指数およびＴＣＣにおいて急速な増加を示し、３時間後に死亡したが、他方の試験仔ブタは、実験の終了間際（５時間）に死亡し、ＴＣＣにおいて遅く、あまりはっきりしない増加を示した。これらの結果は、補体阻害剤をＭＡＳの予防または治療に使用できることを示す。
【００８３】
本明細書において、本発明の典型的な好ましい具体例を開示し、特定の用語を用いるが、それらは、一般的かつ説明的な意味において使用されるだけであって、限定目的ではなく、本発明の範囲は不随の請求の範囲に示されている。明らかに、上記の教示の観点から、本発明の多くの修飾および変更が可能である。したがって、特記しないかぎり、不随の請求の範囲内で本発明が実施可能であることが理解されるべきである。
【国際調査報告】
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