(57)【要約】経口／歯科処置を含む一般的な外科的処置から生じる創傷部における腫瘍細胞の接着ならびに様々な痛みプロセスおよび炎症プロセスを周術期に阻害するための方法および溶液。本発明の溶液は、好ましくは、少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤ならびに多数の痛みインヒビターおよび炎症インヒビターを、生理的食塩水または乳酸加リンゲル液などの生理学的キャリアにおいて希濃度で含む。本発明の溶液は、痛みを予防的に阻害するために、また、薬剤のより大きな用量の経口適用、筋肉内適用、皮下適用または静脈内適用に伴う望ましくない副作用を避けながら、外科的処置の期間中における創傷部の継続した灌注によって適用される。腫瘍細胞の接着、痛みおよび炎症を阻害するための１つの好ましい溶液は、少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤、ならびに、セロトニン２アンタゴニスト、セロトニン３アンタゴニスト、などを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
組成物を手術部位に対して局所的に周術期に適用することによって外科的処置時の創傷部における腫瘍細胞接着、痛みおよび炎症を阻害するための医薬品を製造することにおける組成物の使用であって、該組成物は治療有効量の少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤および少なくとも１つの痛み／炎症インヒビターを液体キャリアにおける溶液に含み、該薬剤は、異なる分子標的に対して作用するように選択され、少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤は、代謝的変換を伴うことなく治療的な接着防止効果をもたらすために手術部位に対して局所的に送達可能であるように選択される、使用。
【請求項２】
組成物を体腔に対して局所的に周術期に適用することによってそのような処置を必要としている患者の体腔内における外科的処置時の腫瘍細胞の付着および移植を阻害するための医薬品を製造することにおける組成物の使用であって、該組成物は治療有効量の少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤および少なくとも１つの痛み／炎症インヒビターを液体キャリアにおける溶液に含み、該薬剤は、異なる分子標的に対して作用するように選択され、少なくとも１つの腫瘍細胞接着防止剤は、代謝的変換を伴うことなく治療的な腫瘍細胞付着防止効果および腫瘍細胞移植防止効果をもたらすために該体腔に対して局所的に送達可能であるように選択される、使用。
【請求項３】
組成物を手術部位に対して局所的に周術期に適用することによって外科的処置時の創傷部における腫瘍細胞接着を阻害するための医薬品を製造することにおける組成物の使用であって、該組成物は治療有効量の第１の腫瘍細胞接着防止剤および第２の腫瘍細胞接着防止剤を液体キャリアにおける溶液に含み、該薬剤は、異なる分子標的に対して作用するように選択され、該薬剤の少なくとも１つが、代謝的変換を伴うことなく治療的な接着防止効果をもたらすために手術部位に対して局所的に送達可能であるように選択される、使用。
【請求項４】
組成物を体腔に対して局所的に周術期に適用することによってそのような処置を必要としている患者の体腔内における外科的処置時の腫瘍細胞の付着および移植を阻害するための医薬品を製造することにおける組成物の使用であって、該組成物は治療有効量の第１の腫瘍細胞接着防止剤および第２の腫瘍細胞接着防止剤を液体キャリアにおける溶液に含み、該薬剤は、異なる分子標的に対して作用するように選択され、該薬剤の少なくとも１つが、代謝的変換を伴うことなく治療的な腫瘍細胞付着防止効果および腫瘍細胞移植防止効果をもたらすために該体腔に対して局所的に送達可能であるように選択される、使用。
【請求項５】
前記溶液の周術期適用は、前記溶液の処置前または処置後での適用と一緒になった処置中での適用を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記溶液の周術期適用は、前記溶液の処置前、処置中および処置後での適用を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記溶液を手術部位または体腔に継続して適用することを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記液体キャリアが液体灌注キャリアであり、前記溶液が手術部位または体腔の灌注によって送達される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記液体キャリアが徐放性キャリアを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記液体キャリアがゲルを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記接着防止剤が、ＣＤ４４レセプターアンタゴニスト、インテグリンレセプターアンタゴニストおよびセレクチンレセプターアンタゴニストからなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記接着防止剤の少なくとも１つがマトリックスメタロプロテイナーゼのインヒビターを含む、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
複数の痛み／炎症インヒビターをさらに含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１４】
少なくとも１つの痛み／炎症インヒビターをさらに含む、請求項３または４記載の使用。
【請求項１５】
前記痛み／炎症インヒビターが、セロトニンレセプターアンタゴニスト、セロトニンレセプターアゴニスト、ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、ブラジキニンレセプターアンタゴニスト、カリクレインインヒビター、タキキニンレセプターアンタゴニスト（ニューロキニン１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびニューロキニン２レセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、カルシトニン遺伝子関連ペプチドレセプターアンタゴニスト、インターロイキンレセプターアンタゴニスト、ホスホリパーゼインヒビター（ＰＬＡ２アイソフォームインヒビターおよびＰＬＣγアイソフォームインヒビターを含む）、シクロオキシゲナーゼインヒビター、リポオキシゲナーゼインヒビター、プロスタノイドレセプターアンタゴニスト（エイコサノイドＥＰ−１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびエイコサノイドＥＰ−４レセプターサブタイプアンタゴニストならびにトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト（ロイコトリエンＢ４レセプターサブタイプアンタゴニストおよびロイコトリエンＤ４レセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、オピオイドレセプターアゴニスト（μ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニスト、δ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストおよびκ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストを含む）、プリンレセプターアゴニストおよびプリンレセプターアンタゴニスト（Ｐ２ＹレセプターアゴニストおよびＰ２Ｘレセプターアンタゴニストを含む）、ならびにＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤からなる群から選択される、請求項１、２、１３または１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
前記痛み／炎症インヒビターが、セロトニンレセプターアンタゴニスト、セロトニンレセプターアゴニスト、ヒスタミンレセプターアンタゴニスト、ブラジキニンレセプターアンタゴニスト、カリクレインインヒビター、タキキニンレセプターアンタゴニスト（ニューロキニン１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびニューロキニン２レセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、カルシトニン遺伝子関連ペプチドレセプターアンタゴニスト、ホスホリパーゼインヒビター（ＰＬＡ２アイソフォームインヒビターおよびＰＬＣγアイソフォームインヒビターを含む）、リポオキシゲナーゼインヒビター、プロスタノイドレセプターアンタゴニスト（エイコサノイドＥＰ−１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびエイコサノイドＥＰ−４レセプターサブタイプアンタゴニストならびにトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト（ロイコトリエンＢ４レセプターサブタイプアンタゴニストおよびロイコトリエンＤ４レセプターサブタイプアンタゴニストを含む）、オピオイドレセプターアゴニスト（μ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニスト、δ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストおよびκ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストを含む）、プリンレセプターアゴニストおよびプリンレセプターアンタゴニスト（Ｐ２ＹレセプターアゴニストおよびＰ２Ｘレセプターアンタゴニストを含む）、ならびにＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤からなる群から選択される、請求項１、２、１３または１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
適用される前記溶液における前記薬剤のそれぞれが、局所適用されたときに手術部位において所定のレベルの阻害効果を提供するために十分であり、かつ、全身適用された場合には手術部位において同じレベルの阻害効果を提供するために要求される血漿濃度よりも小さい血漿濃度をもたらす濃度または投薬量で含まれる、請求項１から１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
前記溶液における前記薬剤のそれぞれが、１００，０００ナノモル濃度未満の濃度で局所送達される、請求項１から１６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１９】
前記溶液における前記薬剤のそれぞれが、１０，０００ナノモル濃度未満の濃度で局所送達される、請求項１から１６のいずれか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療剤の組合せの周術期での局所的な送達を使用して、外科的処置時における痛み、ならびに／あるいは炎症、ならびに／あるいは平滑筋の痙攣および／または再狭窄を同時に処置しながら、腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的な腫瘍細胞転移を阻害する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
内視鏡検査は、離れた光源およびビデオモニターに付けられたカメラが、覆っている皮膚および体壁における小さい入口切開部を介して体腔（例えば、関節、腹膜腔、膀胱、胸腔など）の中に挿入される外科的処置である。類似する入口切開部を介して、様々な手術用装置を体腔内に設置することができ、それらの使用は関節鏡による視覚化によって誘導され得る。内視鏡検査医の技能が向上してきているので、増大しつつある多数の手術手法が、かつては「開放」的外科技術によって行われていたが、今では内視鏡的に達成され得る。そのような手法には、例えば、虫垂切除術、胆嚢切除術および心臓手術が含まれる。手術適応が拡大し、小直径の内視鏡が開発された結果として、小児科での内視鏡検査が日常的になってきている。
【０００３】
それぞれの内視鏡処置の期間中を通して、生理学的な灌注液（例えば、規定生理的食塩水または乳酸加リンゲル）が関節から継続して流され、これにより体腔を膨らませ、手術片を除き、従って、より明瞭な視覚化をもたらしている。米国特許第４，５０４，４９３号（Ｍａｒｓｈａｌｌ）には、関節鏡検査用の非伝導性で、光学的に透明な灌注溶液のための、グリセロールの等モル水溶液が開示される。
【０００４】
灌注はまた、心臓血管および一般的血管の診断的処置および治療的処置、泌尿器科学的処置、ならびに、火傷および任意の手術創傷の処置などの他の処置においても使用される。それぞれの場合において、生理学的流体が、創傷部または体腔または通路を灌注するために使用される。従来の生理学的灌注液は、腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的な腫瘍細胞転移を阻害せず、また、鎮痛効果、抗炎症効果、抗痙攣効果および再狭窄防止効果を提供していない。
【０００５】
様々な細胞接着分子が、細胞−細胞の相互作用において、また、細胞と細胞外マトリックスの成分との間での相互作用において重要である。このような接着分子は多様な生物学的プロセスにとって必須であり、細胞内のシグナル伝達事象を調節する一方で、これらの分子は、腫瘍細胞の接着および／または侵入を必要とする腫瘍転移の非常に初期の段階では特に重要である。特異的な細胞接着分子およびプロテイナーゼが、乳ガン、前立腺ガン、肝臓ガン、卵巣ガンおよび膀胱ガンを含む広範囲の様々なヒト悪性腫瘍における転移の時に存在する遊離した腫瘍細胞の付着および移植に関連している。そのような多様な接着分子（これらは接着相互作用を媒介する）は細胞表面レセプター−リガンドの対から構成される。細胞表面レセプターは、相同的構造および共に有する機能的特徴に基づいて、関連した生物学的なファミリーまたはスーパーファミリーのメンバーとして分類され得る膜貫通タンパク質の一群を構成する。二次的な部位におけるガン細胞の接着は、ＣＤ４４プロテオグリカン類、インテグリン類およびセレクチン類を含むいくつかのファミリーの接着タンパク質によって調節されることが知られている。これらのレセプターの主な機能は、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を構成する特定の構造タンパク質に対する細胞結合を媒介することであり、また、細胞−細胞接着を媒介する膜結合リガンドを認識することである。細胞の接着および侵入はまた、プロテイナーゼ（例えば、メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）など）およびその天然のインヒビター（メタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ））によっても促進され得る。
【０００６】
手術外傷は、外科傷害および創傷が治癒する部位における腫瘍移植頻度を増大させることが見出されている。悪性組織に対する手術外傷の結果の１つは、手術部位における局所的な遊離した腫瘍細胞のばらまきである。例えば、膵臓ガン患者は、多くの場合、手術を受けた後に腹膜散在および肝臓転移を示す。自由に漂う腫瘍細胞の付着、ならびに、手術部位および創傷治癒部位における移植を媒介する様々な接着分子およびレセプターが、しばしば、多数の他の正常な細胞タイプにおいて存在する。手術外傷はまた、腫瘍細胞からのプロテイナーゼ、炎症性細胞、および細胞外マトリックスの成分の産生および放出を刺激および増強する。従って、腫瘍細胞の接着を低下させ、また、プロテイナーゼの産生および活性化を阻害するために細胞接着分子の機能を妨害することを目指した薬学的方法は、局所的な腫瘍転移について危険性のある組織に対してだけ治療剤を送達することである。遊離した腫瘍細胞が手術時に付着し、細胞外マトリックスまたは他の細胞に侵入するプロセスは、手術外傷に時間的に関係づけられる特異的な相互作用を伴う動的プロセスであるので、薬学的介入のための最適な時期は手術の時である。ガンの転移拡大における多数の接着タンパク質、接着レセプターおよびプロテイナーゼの役割の発見により、細胞外マトリックスタンパク質に対する腫瘍細胞の付着を阻止し、かつ／または、外科的処置時における腫瘍細胞の侵入を阻害する医薬組成物の開発が可能になっている。
【０００７】
手術後の患者における痛みおよび苦悩を緩和することは、特に、増え続ける数の外来手術が毎年行われているので、臨床医療において特に注力される領域である。最も広範囲に使用されている薬剤、すなわち、シクロオキシゲナーゼインヒビター（例えば、イブプロフェン）およびオピオイド（例えば、モルヒネ、フェンタニル）は、胃腸過敏／出血および呼吸抑制を含む著しい副作用を有している。オピオイドに関連した悪心および嘔吐の発生率が高いことは、手術後の期間においては特に問題である。手術後の痛みを、有害な副作用を避けながら処置することを目的とする治療剤は、これらの薬剤に対する分子標的が身体中に広く分布し、かつ、多様な生理学的作用を媒介しているので、容易には開発されない。痛みおよび炎症、ならびに、血管痙攣、平滑筋痙攣および再狭窄を阻害することが臨床的に大きく求められているにもかからわず、有害な全身的副作用を最小限に抑えながら、痛み、炎症、痙攣および再狭窄のインヒビターを効果的な投薬量で送達するための方法は開発されていない。一例として、オピエートを治療的用量で投与する従来の方法（すなわち、静脈内投与、経口投与、皮下投与または筋肉内投与）では、重篤な呼吸抑制、気分の変化、意識混濁、顕著な悪心および嘔吐を含む著しい有害な副作用をしばしば伴う。
【０００８】
以前の研究では、痛みおよび炎症を生じさせる内因性の因子、例えば、セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン、これは本明細書中では「５−ＨＴ」として示されることがある）、ブラジキニンおよびヒスタミンなどの能力が明らかにされている。Ｓｉｃｕｔｅｒｉ，Ｆ．他、“Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ−Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｐａｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｍａｎ”、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．４：３０９〜３１６（１９６５）；Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，Ｓ．Ｒ．、“Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ａｓ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｆｏｒ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｐａｉｎ”、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔ．６９：９８〜１０５（１９７７）；Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｂ．Ｐ．他、“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  Ｍ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｓｕｂｔｙｐｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｂｙ  ａ  Ｎｅｗ  Ｃｌａｓｓ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ”、Ｎａｔｕｒｅ  ３１６：１２６〜１３１（１９８５）；Ｗｈａｌｌｅｙ，Ｅ．Ｔ．他、“Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｋｉｎｉｎ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”、Ｎａｕｎｙｎ−Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂ  Ａｒｃｈ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３６：６５２〜５７（１９８７）；Ｌａｎｇ，Ｅ．他、“Ｃｈｅｍｏ−Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｆｉｎｅ  Ａｆｆｅｒｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｒａｔ  Ｓｋｉｎ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ”、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．６３：８８７〜９０１（１９９０）。
【０００９】
例えば、ヒト水疱基底部（露出した皮膚）に適用された５−ＨＴは、５−ＨＴ３レセプターアンタゴニストによって阻害され得る痛みを引き起こすことが明らかにされている。Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ他（１９８５）。同様に、末梢に適用されたブラジキニンは、ブラジキニンレセプターアンタゴニストによって阻止され得る痛みを生じさせる。Ｓｉｃｕｔｅｒｉ他、１９６５；Ｗｈａｌｌｅｙ他、１９８７；Ｄｒａｙ，Ａ．他、“Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｉｎ”、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：９９〜１０４（１９９３）。末梢に適用されたヒスタミンは、ヒスタミンレセプターアンタゴニストによって阻害され得る血管拡張、掻痒および痛みを生じさせる。Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ、１９７７；Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｗ．Ｗ．、“Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ５−Ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ（Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ）ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”［Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｌ．Ｓ．他編、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、６０５頁〜６３８頁（１９８５）］；Ｒｕｍｏｒｅ，Ｍ．Ｍ．他、“Ａｎａｌｇｅｓｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｉｃｓ”、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．３６：４０３〜４１６（１９８５）。一緒に適用されたこれら３つのアゴニスト（５−ＨＴ、ブラジキニンおよびヒスタミン）の組合せは、痛みを引き起こす相乗的な作用を示し、これにより、長く持続する激しい痛みのシグナルをもたらすことが明らかにされている。Ｓｉｃｕｔｅｒｉ他、１９６５；Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ他、１９８５；Ｋｅｓｓｌｅｒ，Ｗ．他、“Ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ａｆｆｅｒｅｎｔ  Ｎｅｒｖｅ  Ｅｎｄｉｎｇｓ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ｂｙ  ａ  Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｐ”、Ｅｘｐ．Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．９１：４６７〜４７６（１９９２）。
【００１０】
身体において、５−ＨＴは血小板および中枢神経ニューロンに存在し、ヒスタミンはマスト細胞において見出され、ブラジキニンは、組織外傷、ｐＨ変化および温度変化のときに、より大きな前駆体分子から産生される。５−ＨＴは組織傷害部位において血小板から大量に放出され、安静時レベルよりも２０倍大きい血漿レベルをもたらし得る（Ａｓｈｔｏｎ，Ｊ．Ｈ．他、“Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ａｓ  ａ  Ｍｅｄｉａｔｏｒ  ｏｆ  Ｃｙｃｌｉｃ  Ｆｌｏｗ  Ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｓｔｅｎｏｓｅｄ  Ｃａｎｉｎｅ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉｅｓ”、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ７３：５７２〜５７８（１９８６））ので、内因性５−ＨＴは、手術後の痛み、痛覚過敏および炎症を生じさせる際に役割を果たしている可能性がある。実際、活性化された血小板は、末梢の侵害レセプターをインビトロで興奮させることが示されている。Ｒｉｎｇｋａｍｐ，Ｍ．他、“Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ  ｉｎ  Ｐｌａｓｍａ  Ｅｘｃｉｔｅ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｒａｔ  Ｓｋｉｎ，Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ”、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．１７０：１０３〜１０６（１９９４）。同様に、ヒスタミンおよびブラジキニンもまた外傷時に組織内に放出される。Ｋｉｍｕｒａ，Ｅ．他、“Ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ｌｅｖｅｌ  ｉｎ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｓｉｎｕｓ  Ｂｌｏｏｄ  Ａｆｔｅｒ  ｔｈｅ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｙ”、Ａｍ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．８５：６３５〜６４７（１９７３）；Ｄｏｕｇｌａｓ、１９８５；Ｄｒａｙ他、（１９９３）。
【００１１】
また、プロスタグランジン類もまた、痛みおよび炎症を引き起こすことが知られている。シクロオキシゲナーゼインヒビター（例えば、イブプロフェン）は、プロスタグランジン類の産生を阻止し、それによりプロスタグランジン媒介の痛みおよび炎症を減少させるために非外科的状況および手術後の状況において一般的に使用されている。Ｆｌｏｗｅｒ，Ｒ．Ｊ．他、“Ａｎａｌｇｅｓｉｃ−Ａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ａｇｅｎｔｓ；Ｄｒｕｇｓ  Ｅｍｐｌｏｙｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｇｏｕｔ”［Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｌ．Ｓ．他編、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、６７４頁〜７１５頁（１９８５）］。シクロオキシゲナーゼインヒビターは、従来的に適用されたとき、いくつかの有害な全身的副作用が伴う。例えば、インドメタシンまたはケトロラックは、胃腸および腎臓の有害な副作用が広く認められている。
【００１２】
議論されたように、５−ＨＴ、ヒスタミン、ブラジキニンおよびプロスタグランジン類により、痛みおよび炎症が引き起こされる。これらの因子が末梢組織に対するその作用を媒介する様々なレセプターがこの２０年間の間に知られ、かつ／または議論されている。ほとんどの研究はラットまたは他の動物のモデルにおいて行われている。しかしながら、ヒトと動物種との間には、薬理学およびレセプター配列の違いがある。ヒトにおいて手術後の痛みを生じさせることにおける５−ＨＴ、ブラジキニンまたはヒスタミンの重要性を結論的に明らかにする研究は１つも行われていない。
【００１３】
さらに、これらの媒介因子のアンタゴニストは、現在、手術後の痛みを処置するために使用されていない。５−ＨＴおよびノルエピネフリンの取り込みアンタゴニストと呼ばれる一群の薬物（これには、アミトリプチリンが含まれる）が経口使用されており、慢性的な痛みの状態について中程度の成功が得られている。しかしながら、急性に対する慢性的な痛みの状態の機構はかなり異なっていると考えられる。実際、アミトリプチリンを周術期に使用した、急性の痛みの状況における２つの研究では、アミトリプチリンの痛み軽減効果が全く示されていない。Ｌｅｖｉｎｅ，Ｊ．Ｄ．他、“Ｄｅｓｉｐｒａｍｉｎｅ  Ｅｎｈａｎｃｅｓ  Ｏｐｉａｔｅ  Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ａｎａｌｇｅｓｉａ”、Ｐａｉｎ  ２７：４５〜４９（１９８６）；Ｋｅｒｒｉｃｋ，Ｊ．Ｍ．他、“Ｌｏｗ−Ｄｏｓｅ  Ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｅ  ａｓ  ａｎ  Ａｄｊｕｎｃｔ  ｔｏ  Ｏｐｉｏｉｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｒｔｈｏｐｅｄｉｃ  Ｐａｉｎ：ａ  Ｐｌａｃｅｂｏ−Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｔｒｉａｌ  Ｐｅｒｉｏｄ”、Ｐａｉｎ  ５２：３２５〜３０（１９９３）。両方の研究において、薬物は経口投与された。２番目の研究では、経口投与されたアミトリプチリンは、実際には、手術後の患者において、満足すべき状態であるという全体的な感覚が低下したことが認められた。これは、脳内の多数のアミンレセプターに対する薬物の親和性のためであり得る。
【００１４】
アミトリプチリンは、５−ＨＴおよびノルエピネフリンの取り込みを阻止することに加えて、強力な５−ＨＴレセプターアンタゴニストである。従って、前述の研究において手術後の痛みを減少させることにおいて効力がないことは、急性の痛みにおける内因性５−ＨＴについての役割の提案と矛盾するようである。これら２つの研究においてアミトリプチリンを用いて見出された、急性痛の軽減がないことについては多数の理由がある。（１）最初の研究（Ｌｅｖｉｎｅ他、１９８６）では、アミトリプチリンが手術前夜までの１週間にわたって術前に使用され、これに対して、２番目の研究（Ｋｅｒｒｉｃｋ他、１９９３）では、アミトリプチリンが術後に使用されただけであった。従って、アミトリプチリンは、急性組織傷害期の期間中、すなわち、５−ＨＴが放出されると主張される期間の間、手術部位組織には存在していなかった。（２）アミトリプチリンは、肝臓によって多くが代謝されることが知られている。経口投与の場合、手術部位組織におけるアミトリプチリンの濃度は、２番目の研究では、手術後に放出された５−ＨＴの活性を阻害するために長い十分な期間にわたって十分に高くなっていないと考えられる。（３）多数の炎症性媒介因子が存在し、また、研究では、炎症性媒介因子の間での相乗作用が明らかにされているので、１つだけの因子（５−ＨＴ）を阻止することは、組織傷害に対する炎症応答を十分に阻害しないと考えられる。
【００１５】
外科的処置のための局所麻酔剤として作用する極めて高い濃度（１％〜３％の溶液、すなわち、１０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌ）のヒスタミン１（Ｈ１）レセプターアンタゴニストの能力を明らかにする研究は少ない。この麻酔効果は、Ｈ１レセプターを介して媒介されるとは考えられず、むしろ、ニューロンの膜ナトリウムチャネルとの非特異的な相互作用（これはリドカインの作用と類似する）のためであると考えられる。ヒスタミンレセプターアンタゴニストのこのような高い「麻酔剤」濃度に伴う副作用（例えば、鎮静）を考えれば、ヒスタミンレセプターアンタゴニストの局所投与は、現在、周術期の状況では使用されない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１６】
（発明の要旨）
１つの局面において、本発明は、外科的処置を受けている患者における腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的転移を防止および処置することに関する。本発明は、外科的処置時における腫瘍細胞の付着および／または侵入ならびに／あるいは局所的転移を阻害し、かつ同時に、手術に伴う痛み、ならびに／あるいは炎症、ならびに／あるいは平滑筋痙攣および／または再狭窄を阻害する薬剤の組合せに基づく方法および医薬組成物を記載する。本発明の１つの局面によれば、腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的転移を減少または防止するための方法が提供され、この方法、少なくとも１つが腫瘍接着防止剤または侵入防止剤または局所的転移防止剤である２つ以上の代謝的に活性な薬剤の組合せを、灌注液における送達のための医薬的に効果的なキャリアにおいて含む組成物を手術部位に対して直接、投与することを含む。代謝的に活性な薬剤には、限定されないが、細胞の生物学的状態または生化学的状態または生物物理学的状態を調節するか、または変化させるために直接的または間接的に作用するすべての化合物が含まれる。例えば、形質膜の電位、レセプターに対するリガンドの結合、細胞レセプターの酵素活性または発現レベルを変化させる薬剤、酵素インヒビターまたは酵素活性化因子、タンパク質−タンパク質相互作用またはＲＮＡ−タンパク質相互作用またはＤＮＡ−タンパク質相互作用のインヒビターが含まれる。例えば、機能的なレセプターアンタゴニストには、レセプター結合部位を競合的に阻害するモノクローナル抗体、レセプターを活性化するために利用され得る遊離リガンドの濃度を減少させる可溶性レセプター、レセプターシグナル伝達経路のインヒビター、細胞内酵素または細胞外酵素の活性化因子およびインヒビター、ならびに、ＤＮＡに対する転写因子の結合を調節する薬剤が含まれ得る。
【００１７】
具体的には、本発明は、腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的転移を、最大限の治療的利益を達成するために局所的かつ周術期に送達される薬剤の組合せを使用して処置する薬理学的方法を提供する。薬剤の組合せの使用により、外科的処置から生じる炎症応答に関係づけられる数多くの前炎症性サイトカインおよびレセプターによって調節される腫瘍細胞の接着および侵入の多因子的プロセスを阻止するために１つだけの薬剤を使用することに依拠する既存の治療的取り組みの制限が克服される。前炎症性サイトカインは、腫瘍細胞および正常な細胞の両方に存在する接着レセプターおよびメタロプロテイナーゼの発現を刺激し、それにより、それらの接着特性および侵入特性を増大させることが報告されている。例えば、接着防止剤および抗炎症剤の組合せは、医薬組成物に対する付加的または相乗的な利益をもたらし得る。
【００１８】
本発明では、腫瘍細胞の接着、および／または腫瘍細胞の侵入、および／または転移、および／または炎症、および／または痛み、および／または平滑筋痙攣、および／または再狭窄に関連する分子標的に対して同時に作用する薬剤を組み合わせ、かつ、これらの薬剤を外科的処置の期間中を通して手術部位に送達するという方法が利用される。薬剤のこのような組合せは、腫瘍細胞の接着および／または侵入の予防的な阻害を、外科的処置の期間中を通して達成することができ、一方でまた、痛み、および／または炎症、および／または平滑筋痙攣および／または再狭窄を予防的に阻害することができる。全身送達による１つだけの接着レセプター−リガンド相互作用の阻害は有害な反応を生じさせる可能性がある。これは、これらの分子はまた、シグナルを正常な細胞に送達するために機能しているからである。例えば、ＣＤ４４レセプターの結合は、正常なＴ細胞および他の造血系細胞の免疫応答における生理学的役割を果たしており、従って、ＣＤ４４結合の阻害は、免疫系に対する望ましくない作用を生じさせ得る。
【００１９】
具体的には、本発明は、異なった分子標的に対して同時に作用する少なくとも２つの薬剤の組合せに基づく代謝的に活性な薬剤の医薬組成物を提供する。少なくとも１つの薬剤は、細胞外マトリックスまたは他の細胞（正常および腫瘍の両方）のいずれかに対する腫瘍細胞の付着を直接的に減少させるか、または直接的に防止する腫瘍細胞接着防止剤または侵入防止剤または局所的転移防止剤である。医薬組成物に含められる好適な薬剤は、１つだけのファミリー（またはクラス）のレセプターあるいは１つだけの酵素ファミリー（例えば、ＣＤ４４、インテグリン類、セレクチン類、プロテインチロシンキナーゼ類、ＭＭＰ類およびＭＡＰキナーゼ類）に対する薬剤の相互作用を制限する薬理学的な選択性および特異性に対する要求によってさらに特徴づけられる。特定の好適な薬剤は、１つまたは複数のレセプターサブタイプ（またはアイソフォーム）と特異的に相互作用することができ、同時に、そのレセプターファミリーに対する特異性を示す。それぞれの好適な薬剤は、リガンド−レセプター（またはインヒビター−酵素）の複合体について規定された化学量論（典型的には１：１）によって特徴づけることができ、かつ、その平衡結合定数または平衡速度論定数によって特徴づけることができる特異的な分子機構によってその分子標的と会合する。
【００２０】
少なくとも１つの第２の薬剤は、痛み防止活性、抗炎症活性、抗痙攣活性および／または再狭窄防止活性を有する、レセプターアンタゴニスト、酵素インヒビターまたはサイトカインのクラスに属する。最適な薬物組合せは、細胞接着レセプター分子標的の活性または発現を阻害または低下させるように作用するレセプターアンタゴニスト（例えば、インテグリンレセプターアンタゴニスト、ＣＤ４４レセプターアンタゴニストおよびセレクチンレセプターアンタゴニスト）を含む腫瘍細胞接着防止剤および／または侵入防止剤のクラスから選ばれる少なくとも１つの薬剤、またはプロテイナーゼインヒビターを含む。
【００２１】
また、機能的な腫瘍細胞接着防止剤である、最適な薬物組合せにおいて含まれる他の好適な薬剤は、細胞接着レセプターによって活性化される細胞のシグナル伝達経路を阻害するように作用する。これらの経路を構成する分子標的には、活性化された細胞表面接着レセプターにより生じたシグナルを伝達および統合する膜結合酵素および細胞内局在化酵素が含まれる。例として、これらの薬剤には、下記のファミリーに属する酵素のインヒビターが含まれる：プロテインチロシンキナーゼ、プロテインキナーゼＣおよびマイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）。そのような酵素インヒビターは、酵素−インヒビター複合体の規定された化学量論（典型的には１：１）によって特徴づけることができ、かつ、その平衡結合定数によって特徴づけることができる特異的な機構によってキナーゼファミリーの特定のメンバー（１つまたは複数）と相互作用し得る。
【００２２】
数多くの実験的研究にもかかわらず、外科的処置時における腫瘍細胞の接着および／または侵入を防止するための効果的な処置は以前には開発されていない。外科的処置時における腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的転移を、治療剤の継続した送達のための灌注液を用いて予防的に処置するための方法を提供することが本発明の目的である。既存の送達方法では、手術部位に対する直接的な薬学的薬剤の送達を開始させ、かつ、薬物レベルを、治療効果的な濃度またはそれ以上で外科的処置の期間中を通して維持するための手段が提供されない。特定の外科的処置（例えば、腹腔鏡下手術）の時には大量の灌注液が使用されるため、灌注液に薬剤を含ませることにより、薬剤の希釈を防止し、かつ、治療的レベルを維持するための方法が提供される。潜在的な腫瘍細胞接着／侵入防止剤および転移防止剤としての治療ペプチド、タンパク質および小分子の全身送達に伴う様々な問題（これらには、毒性、薬学的安定性および不良な薬物動態学的プロフィルが含まれる）が、手術部位に対する直接的な、灌注液におけるこれらの治療剤の局所送達によって軽減または回避され得る。
【００２３】
多数の薬物の組合せが灌注によって局所的かつ周術期に送達され得る（すなわち、術中送達単独、あるいは、術前送達および／または術後送達と一緒での術中送達）。本発明はまた、腫瘍接着防止剤および／または侵入防止剤および／または局所的転移防止剤を、１つまたは複数の鎮痛剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤との組合せで送達することを提供する。
【００２４】
本発明の著しい利点が薬理学的作用の迅速な開始から得られる。外科的処置の最初のときから開始され、外科的処置の期間中（すなわち、周術期に）継続される腫瘍接着防止剤の直接的かつ局所的な送達は、転移の非常に初期の段階の１つ、すなわち、最初の接着プロセスを阻害する潜在的可能性を有する。接着防止剤および／または侵入防止剤の治療効果的な濃度の即時的かつ一定した送達は、細胞外マトリックスおよび他の細胞の両方に対する腫瘍細胞の最初の付着、および、これらの組織へのその後の侵入を予防的に阻害することが予想される。研究では、腫瘍細胞が手術直後に注射されたとき、腫瘍移植の最大速度が生じたことが見出されている。このことは、手術直後が、接着プロセスを治療的に阻害するために決定的な時期であるを示している。
【００２５】
本発明の送達方法および医薬組成物では、様々な異なった利点が提供される。そのような利点には、１）外科的処置時における腫瘍細胞の接着／侵入／局所的転移、炎症、痛み、平滑筋痙攣および再狭窄の多因子的原因に向けられた混合薬物療法、２）薬物組合せの局所送達により、手術部位における腫瘍接着防止剤の瞬間的な治療的濃度が達成されること、３）灌注溶液における治療剤の継続した送達により、手術部位における治療効果的な範囲での一定した薬物濃度が外科的処置時に提供されること、４）局所送達は、全身送達と比較した場合、全体的な薬物用量および投薬頻度の減少を可能にすること、そして、５）手術部位に対する直接的かつ局所的な送達により、全身送達することができない新規な医薬的に活性な薬剤（例えば、ある種のペプチドおよび抗体）の使用が可能になることが含まれる。
【００２６】
本発明はさらに、生理学的な電解質キャリア流体において、痛み、炎症、痙攣および再狭窄の媒介因子を局所的に阻害することに向けられた、低濃度での多数の薬剤の混合物を構成する溶液を提供する。本発明はまた、痛み、炎症、痙攣および再狭窄をその部位において予防的に制限するために、灌注溶液がレセプターレベルおよび酵素レベルにおいて局所的に機能する手術部位に対して直接、これらの薬剤を含有する灌注溶液を周術期に送達するための方法を提供する。本発明の局所的な周術期での送達方法により、所望される治療効果が、他の送達方法（すなわち、静脈内、筋肉内、皮下および経口）を用いたときに必要である薬剤のより低い用量で達成され得る。溶液における痛み防止剤／抗炎症剤には、レセプターアンタゴニストおよびレセプターアゴニストならびに酵素活性化因子および酵素インヒビターの下記のクラスから選択される薬剤が含まれる（それぞれのクラスは、痛みおよび炎症の阻害について異なる分子的作用機構を介して作用する）：（１）セロトニンレセプターアンタゴニスト；（２）セロトニンレセプターアゴニスト；（３）ヒスタミンレセプターアンタゴニスト；（４）ブラジキニンレセプターアンタゴニスト；（５）カリクレインインヒビター；（６）タキキニンレセプターアンタゴニスト、これには、ニューロキニン１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびニューロキニン２レセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる；（７）カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）レセプターアンタゴニスト；（８）インターロイキンレセプターアンタゴニスト；（９）アラキドン酸代謝物のための合成経路において活性な酵素のインヒビター、これには、（ａ）ホスホリパーゼインヒビター（ＰＬＡ２アイソフォームインヒビターおよびＰＬＣγアイソフォームインヒビターを含む）、（ｂ）シクロオキシゲナーゼインヒビター、および（ｃ）リポオキシゲナーゼインヒビターが含まれる；（１０）プロスタノイドレセプターアンタゴニスト、これには、エイコサノイドＥＰ−１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびエイコサノイドＥＰ−４レセプターサブタイプアンタゴニストならびにトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる）；（１１）ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト、これには、ロイコトリエンＢ４レセプターサブタイプアンタゴニストおよびロイコトリエンＤ４レセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる；（１２）オピオイドレセプターアゴニスト、これには、μ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニスト、δ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストおよびκ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストが含まれる；（１３）プリンレセプターアゴニストおよびプリンレセプターアンタゴニスト、これらには、Ｐ２ＸレセプターアンタゴニストおよびＰ２Ｙレセプターアゴニストが含まれる；ならびに（１４）アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）感受性カリウムチャネル開口剤。上記薬剤はそれぞれが、抗炎症剤として、かつ／または抗侵害受容剤（すなわち、痛み防止剤もしくは鎮痛剤）として、そのいずれでも機能する。これらの化合物クラスからの薬剤の選択は特定の適用のために合わせられる。
【００２７】
本発明の溶液のいくつかの好ましい実施形態ではまた、抗痙攣剤が特定の適用のために含まれる。例えば、抗痙攣剤は、血管痙攣を制限するために血管処置のために使用される溶液において単独で、または痛み防止剤／抗炎症剤との組合せで含むことができ、また、抗痙攣剤は、尿路および膀胱壁における痙攣を制限するために泌尿器学的処置のために含むことができる。そのような適用の場合、抗痙攣剤は溶液で利用される。例えば、抗痙攣剤としてもまた作用する痛み防止剤／抗炎症剤を含むことができる。抗痙攣剤としてもまた作用する好適な痛み防止剤／抗炎症剤には、セロトニンレセプターアンタゴニスト、タキキニンレセプターアンタゴニストおよびＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤が含まれる。特にその抗痙攣特性のために溶液において利用され得る他の薬剤には、カルシウムチャネルアンタゴニスト、エンドセリンレセプターアンタゴニストおよび一酸化窒素供与体（酵素活性化因子）が含まれる。
【００２８】
心臓血管処置および一般的血管処置において使用される本発明の溶液の特定の好ましい実施形態では、抗痙攣剤との組合せで最も好ましくは使用される再狭窄防止剤が含まれる。好適な再狭窄防止剤には下記が含まれる：（１）抗血小板剤、これには、（ａ）トロンビンインヒビターおよびトロンビンレセプターアンタゴニスト、（ｂ）アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）レセプターアンタゴニスト（これはまた、プリンレセプター１のレセプターアンタゴニストとして知られている）、（ｃ）トロンボキサンインヒビターおよびトロンボキサンレセプターアンタゴニスト、ならびに（ｄ）血小板膜糖タンパク質レセプターアンタゴニストが含まれる；（２）細胞接着分子のインヒビター、これには、（ａ）セレクチンインヒビターおよび（ｂ）インテグリンインヒビターが含まれる；（３）抗走化性剤；（４）インターロイキンレセプターアンタゴニスト（これはまた、痛み防止剤／抗炎症剤として役立つ）；ならびに（５）細胞内シグナル伝達インヒビター、これには、（ａ）プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）インヒビターおよびプロテインチロシンキナーゼインヒビター、（ｂ）細胞内プロテインチロシンホスファターゼの調節因子、（ｃ）ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインのインヒビター、および（ｄ）カルシウムチャネルアンタゴニストが含まれる。そのような薬剤は、血管形成術、回転アテローム切除術、または、心臓血管もしくは一般的血管の他の治療的処置もしくは診断的処置によって処置された動脈の再狭窄を防止することにおいて有用である。
【００２９】
本発明はまた、手術処置時に手術部位または創傷部を継続して灌注する際に使用される希灌注溶液として配合される医薬品を製造するための方法を提供する。この方法では、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移の少なくとも１つのインヒビターと、好ましくは、痛み防止剤／抗炎症剤と、そして、一部の適用のためには、抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤とを生理学的電解質キャリア流体に溶解することを伴い、この場合、それぞれの薬剤は、好ましくは最大でも１００，０００ナノモル（ｎａｎｏｍｏｌａｒ）の濃度で含まれ、より好ましくは最大でも１０，０００ナノモルの濃度で含まれる。
【００３０】
本発明の方法では、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移の少なくとも１つのインヒビターと、好ましくは、多数のレセプターアンタゴニストおよびレセプターアゴニストならびに酵素インヒビターおよび酵素活性因子との希釈された組合せ物を、痛み、炎症、痙攣および再狭窄を阻害するために、治療的処置または診断的処置の期間中、創傷部位または手術部位に対して直接、送達することが提供される。溶液における有効成分は、継続した様式で手術組織に対して直接的に局所適用されているので、薬物は、同じ薬物が経口送達、筋肉内送達、皮下送達または静脈内送達されたときに治療効果のために要求されるそのような用量と比較して、極めて低い用量で有効に使用され得る。本明細書中で使用される用語「局所的」は、創傷部位もしくは他の手術部位またはその周囲における薬物の適用を包含し、経口投与、皮下投与、静脈内投与および筋肉内投与は含まれない。本明細書中で使用される用語「継続した」は、中断されない適用、頻繁な間隔での反復適用（例えば、頻繁な間隔で処置中に繰り返される血管内ボーラス）、および、実質的に一定した所定の濃度が創傷部位または手術部位において局所的に維持されるように、他の薬物もしくは薬剤または処置用装置の導入を可能にすることなどの短期間の停止を除いて中断されない適用を包含する。
【００３１】
薬剤の低用量適用の利点は３つの点からなる。最も重要なことは、これらの薬剤の有用性を多くの場合には制限する全身的な副作用がないということである。また、本発明の溶液において特定の適用のために選択された薬剤は、それらが機能する媒介因子に関して非常に特異的である。この特異性は、利用される低い投薬量によって維持される。最後に、手術処置あたりのこれらの活性な薬剤の費用は低い。
【００３２】
内腔灌注または他の流体適用による薬剤の局所投与の利点は下記の通りである：（１）局所投与により、代謝、血流などにおける患者間の変動にもかかわらず、標的部位における既知の濃度が保証される；（２）直接的な送達様式のために、治療的濃度が瞬間的に得られ、従って、改善された投薬量制御がもたらされる；そして、（３）創傷部位または手術部位に対する直接的な、活性な薬剤の局所投与はまた、そうでなければ、薬剤が経口的、静脈内、皮下または筋肉内に投与された場合に生じる細胞外プロセス（例えば、初回通過代謝および２回通過代謝）による薬剤の分解を実質的に減少させる。このことは、迅速に代謝されるペプチドであるそのような活性な薬剤については特に当てはまる。従って、局所投与では、他の場合には治療的に用いられ得ない化合物または薬剤の使用が可能になる。例えば、下記のクラスにおけるいくつかの薬剤はペプチド性である：ブラジキニンレセプターアンタゴニスト；タキキニンレセプターアンタゴニスト；オピオイドレセプターアゴニスト；ＣＧＲＰレセプターアンタゴニスト；およびインターロイキンレセプターアンタゴニスト。創傷部位または手術部位に対する局所的かつ継続した送達では、薬物の分解または代謝が最小限に抑えられ、一方でまた、分解され得る薬剤のそのような部分の継続した交換が提供されて、局所的な治療的濃度（これは、レセプターの占拠を維持するために十分である）が手術処置の継続期間中を通して確実に維持される。
【００３３】
本発明による、外科的処置の期間中を通した周術期での溶液の局所投与は、予防的な鎮痛効果、抗炎症効果、抗痙攣効果または再狭窄防止効果をもたらす。本明細書中で使用される用語「周術期（での）」は、処置中、処置前および処置中、処置前および処置後、ならびに、処置前、処置中および処置後での適用を包含する。予防的な抗炎症効果、鎮痛効果（特定の適用の場合）、抗痙攣効果（特定の適用の場合）および再狭窄防止効果（特定の適用の場合）を最大にするために、本発明の溶液は、最も好ましくは、術前、術中および術後に適用される。著しい手術外傷の開始に先立って、標的レセプターを局所的に占拠するか、または、標的化された酵素を局所的に不活性化もしくは活性化することによって、本発明の溶液の薬剤は特定の経路を調節して、標的化された病理学的プロセスを予防的に阻害する。炎症性の媒介因子およびプロセスが、組織損傷を及ぼし得る前に、本発明に従って予防的に阻害される場合、その利益は、損傷が開始された後で得られる場合よりも実質的である。
【００３４】
本発明の多剤溶液を適用することによって腫瘍細胞接着、侵入および／または転移、炎症または痙攣または再狭窄の２つ以上の媒介因子を阻害することは、細胞の接着、侵入および／または転移、炎症、痛みおよび痙攣の程度を劇的に低下させるために有用であり、そして理論的には、再狭窄を減少させるはずである。本発明の灌注溶液は薬物の組合せを含み、それぞれの溶液が多数のレセプターまたは酵素に対して作用する。従って、薬物の薬剤は、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移、痛みおよび炎症、血管痙攣、平滑筋痙攣および再狭窄を含む様々な病理学的プロセスの組合せに対して同時に効果的である。本発明の多数のレセプターアンタゴニストおよび阻害アゴニストは、個々の薬剤の効力に対する組合せでの比例的でない増大した効力をもたらすという点で、これらの薬剤の作用は相乗的であると考えられる。本発明の薬剤のいくつかの相乗的な作用が、下記ではそのような薬剤の詳細な説明において、例として議論される。
【００３５】
関節鏡検査に加えて、本発明の溶液はまた、任意のヒト体腔もしくは通路、手術創傷部、外傷的創傷部（例えば、火傷）に対して、あるいは、灌注が行われ得る任意の手術／介入処置において局所的に適用することができる。これらの処置には、泌尿器学的処置、心臓血管および一般的血管の診断的処置および治療的処置、内視鏡的処置、ならびに、経口的処置、歯科的処置および歯周処置が含まれるが、これらに限定されない。本明細書中下記において使用される用語「創傷」は、別途示されない限り、手術創傷、手術／介入部位、外傷的創傷および火傷を包含することが意図される。
【００３６】
周術期に使用される場合、本発明の溶液は、現在使用されている灌注液と比較して、手術部位の痛みおよび炎症の臨床的に著しい低下をもたらし、それにより、患者の手術後の鎮痛剤（すなわち、オピエート）の要求を低下させ、また、適する場合には、手術部位のより早い可動化を可能にするはずである。外科医および手術室職員の部局に対するさらなる労力は、従来の灌注液と比較して、本発明の溶液を使用するためには要求されない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
（好適な実施形態の詳細な説明）
本発明によれば、様々な方法および溶液が、腫瘍細胞の接着および／または侵入および／または局所的転移を低下または防止するために提供され、これらは、２つ以上の代謝的に活性な薬剤（そのうちの少なくとも１つが腫瘍接着防止剤または侵入防止剤または局所的転移防止剤である）の組合せを灌注液における送達のための医薬的に効果的なキャリアにおいて含む組成物を手術部位に対して直接、投与することを含む。
【００３８】
Ｉ．細胞接着分子および細胞侵入分子のインヒビター
Ａ．メタロプロテイナーゼアンタゴニストおよびメタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）
マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は一群の亜鉛依存性の中性エンドペプチダーゼのファミリーであり、その酵素活性は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の制御された分解が可能である。この活性は、腫瘍の接着、侵入能力、転移、成長および血管形成において重要な制御因子として使用される。ヒトにおいて、クローニングおよび配列決定により、このファミリーの１７個のメンバーが同定されている。これらのメンバーは、コラゲナーゼ、ゼラチナーゼ、ストロメライシンおよびストロメライシン様ＭＭＰ、膜型ＭＭＰ、ならびに新規ＭＭＰのサブグループに分けられる。
【００３９】
これらのＭＭＰは、共通した構造的特徴および機能的特徴をともに有する。今日までのすべてのファミリーは下記の少なくとも３つのドメインを有する：保存されたシステイン残基を含有し、酵素の活性化のときに失われるプロドメイン；保存された構造的な金属結合部位を含有する１０６残基〜１１９残基の触媒作用ドメイン；および、５２アミノ酸〜５８アミノ酸の高度に保存された亜鉛結合活性部位ドメイン。
【００４０】
細胞は、一般にはＭＭＰを構成的に発現せず、むしろ、それらの発現は、外因性シグナル、サイトカインまたは増殖因子、ならびに、変化した細胞−マトリックスの相互作用および細胞−細胞の相互作用に応答して迅速に誘導される。この規則の例外が、好中球および好酸球の分泌顆粒に貯蔵されるＭＭＰ−８およびＭＭＰ−９であり、分泌性の上皮細胞に貯蔵されるＭＭＰ−７である。
【００４１】
ＭＭＰの発現は主に転写レベルで調節されており、そのタンパク質分解活性はチモーゲンの活性化および活性の阻害によって調節されている。細胞外シグナル、例えば、サイトカイン（ＩＬ−１、腫瘍壊死因子など）などにより、Ｊｕｎタンパク質およびＦｏｓタンパク質のメンバーから構成されるＡＰ−１転写因子複合体が活性化され、この場合、Ｊｕｎタンパク質およびＦｏｓタンパク質がＡＰ−１のシスエレメントに結合し、対応するＭＭＰ遺伝子の転写を活性化する。ほとんどのＭＭＰは、細胞外空間においてタンパク質分解的に活性化される潜在性の前駆体（チモーゲン）として分泌される。しかし、例外として、ＭＭＰ−１１およびＭＴ１−ＭＭＰは、ゴルジに結合したフリン様プロテアーゼによってその分泌前に活性化される。
【００４２】
細胞外空間におけるＭＭＰの活性は、マトリックスプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）（天然のインヒビターのファミリー）によって制御されている。これまで、このファミリーの４つのメンバーが同定され（ＴＩＭＰ−１、２、３、４）、十分に特徴づけられている。これらのＴＩＭＰは、ＭＭＰのほとんどに対して類似した阻害活性を有しており、しかし、プロＭＭＰとのその相互作用、溶解性、発現の調節、および組織特異的な発現に関して異なる。ＴＩＭＰ−３は、他のＴＩＭＰとは異なり、ＴＮＦ−α変換酵素（ＴＡＣＥ）の活性を阻害し、このことは、炎症を調節する際の役割を示唆している。ＴＧＦ−β、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＥＧＦおよびグルココルチコイド類はＴＩＭＰ−１を転写レベルで調節する。ＴＩＭＰ−２は構成的に発現し、ＴＩＭＰ−４の発現は限定的である。ＴＩＭＰ−３の発現は、有糸分裂促進因子、ホルボールエステルおよびＴＧＦ−βによってアップレギュレーションされる。
【００４３】
ＭＭＰは、少なくとも３つの機構によって腫瘍細胞の侵入および転移を促進させることが示されている。生理学的な意味において、最初に、ＭＭＰは腫瘍細胞の接着を調節することができる。このプロセスは、細胞が付着し、ＥＣＭを通り抜けるために必要である。ＭＭＰ−２対ＴＩＭＰ−２の比率を変化させた細胞トランスフェクション研究では、腫瘍細胞の接着表現型における変化が明らかにされている。次に、ＭＭＰのプロテイナーゼ作用は、コラーゲン類、ラミニン類およびプロテオグリカン類などのＥＣＭの高分子を分解することができ、これにより腫瘍細胞の侵入を可能にする。最後に、ＭＭＰは、生物学的機能性を活性化するためにＥＣＭ成分または他のタンパク質に対して作用することができる。例えば、ラミニン−５はＭＭＰ−２によって分解されて、可溶性の走化性フラグメントをもたらす。
【００４４】
ＥＣＭ成分および特に基底膜を分解するためのＭＭＰの古典的な役割が、腫瘍細胞の侵入のためには非常に重要であると考えられている。実験的には、腫瘍細胞の侵入におけるプロテアーゼ作用が必要であることが、ケモインベイジョンアッセイを使用して明らかにされている。異なったＭＭＰの多量の発現が侵入性の原発腫瘍またはその転移物において生じている。ＭＭＰ−１の発現レベルは結腸直腸ガンおよび食道ガンの不良な予後と相関し、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−３の発現はリンパ節転移に密接に関係づけられている。ＭＭＰ−２、ＴＩＭＰ−２およびＭＴ１−ＭＭＰの発現は膀胱ガンにおける不良な予後と相関する。ＭＭＰ−７ノックアウトマウスは腸での腫瘍発生の低下を示し、ＭＭＰ−２欠損マウスは、低下した血管形成および腫瘍進行を示している。炎症性細胞の浸潤もまた、多くの悪性腫瘍の顕著な特徴であり、炎症性細胞は、腫瘍細胞の侵入に寄与するＭＭＰの供給源であり得る。これらの炎症性細胞はまたサイトカインを産生し、そのサイトカインによって、腫瘍細胞および間質細胞によるＭＭＰの発現が増強され、さらなる腫瘍細胞の侵入がもたらされ得る。
【００４５】
ＴＩＭＰ類もまた、腫瘍細胞の侵入において役割を果たしている。腫瘍成長を阻害するＴＩＭＰ−１、２、３および４の能力が、様々なヒトモデルおよび齧歯類モデルにおいてそれらを過剰発現させることによって示されている。メラノーマ細胞において、ＴＩＭＰ−２の過剰発現は、ＳＣＩＤマウスの皮膚に移植された腫瘍の成長を阻害する。この成長阻害は、血管形成には依存しないようであるが、コラーゲンマトリックスには依存するようである。ガンにおけるＴＩＭＰの役割に対する現在受け入れられている考え方は、現在、腫瘍の侵入、転移、およびＥＣＭ恒常性の調節の阻害に集中している。
【００４６】
インビトロ研究、インビボ研究、インシトゥー研究および臨床研究に基づいて、ＭＭＰ活性の阻害は、新生物細胞の接着、侵入および転移を阻害することができ、また、腫瘍の成長および転移が効果的に抑制することができる。腫瘍成長の防止が、ＭＭＰの発現または活性をＭＭＰの合成経路における多数の段階において阻害することによって達成され得る。
【００４７】
ＭＭＰ転写の阻害が、ＭＭＰの転写を調節するシグナル伝達経路を直接的に遮断することによって、または、ＭＭＰ遺伝子の転写を活性化することに関係する転写因子を阻害することによりそのようなシグナル伝達経路を遮断することによって達成され得る。ＡＰ−１の活性化に関与するシグナル伝達の阻害、すなわち、ＭＡＰＫ（ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＳＡＰＫ／ＪＮＫまたはｐ３８）の阻害により、ＭＭＰの発現および悪性細胞の侵入がインビトロでは著しく阻害され得る。優性ネガティブな転写因子の発現（これには、インビボでの遺伝子治療の効果的な方法が要求される）が、ＭＭＰの産生を阻害するために使用され得る。例えば、優性ネガティブなｃ−Ｊｕｎの発現は、ＭＭＰ−１、２、３、１０および１４の誘導を、角化細胞のインビトロ侵入と同様に阻害することが示されている。ＡＰ−１活性のインヒビターとしてのレチノイドもまた、選択されたヒトガン腫におけるＭＭＰ遺伝子の発現を妨げるために使用され得る。
【００４８】
特異的なＭＭＰの発現を阻害するための別の方法は、アンチセンスＲＮＡを使用することである。ＭＭＰ−７に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、結腸ガン腫細胞の侵入をインビトロおよびインビボで阻害することが示されている。ＭＭＰ−９のアンチセンス−リボザイムの発現構築物は、ＭＭＰ−９の発現およびラット骨ガン細胞の侵入を阻害することが示されている。
【００４９】
ＭＭＰの阻害により腫瘍細胞の侵入を阻害することの最も広範囲に研究されている領域は、これまで、ＭＭＰ活性を阻止するための化合物の開発である。合成されたＭＭＰインヒビター（ＭＭＰＩ）、例えば、ヒドロキシマート系インヒビターなどは、繊維コラーゲンの小ペプチドアナログであり、これらはＭＭＰの触媒作用部位において亜鉛と特異的に相互作用し、ＭＭＰの活性を阻害する。現在、これらの薬剤のいくつかが、侵入性腫瘍を処置するための臨床試験にある。開発される第１のクラスは、多数のＭＭＰを非特異的に阻害する広スペクトＭＭＰＩであった。例には、経口による生物学的利用能が低く、局所投与を必要とするバチマスタット（ＢＢ−９４）、および、経口投与が可能であるマリマスタット（ＢＢ−２５１６）がある。前臨床研究の結果は、これらの薬剤が腫瘍の侵入、転移および成長を阻害することを示している。次に、特定のＭＭＰを標的化するための選択的薬剤の開発が行われた。ペプチドに基づくＭＭＰインヒビターは、製造に費用がかかり、また、一般には生物学的利用能が悪いので、非ペプチド系インヒビターが、ＭＭＰ活性部位のＸ線結晶学の情報に基づく合理的な設計によって開発されている。非ペプチド系インヒビターの例には、ＣＧＳ２７０２３Ａ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＧ３３４０（Ａｇｏｕｒｏｎ）、およびフェンブフェン誘導体のＢＡＹ１２−９５６６（Ｂａｙｅｒ）がある。また、その抗菌作用を有しないテトラサイクリン系化合物が、ホスト由来のＭＭＰを阻止するために開発されている。このクラスの化学修飾された非抗菌性テトラサイクリン系化合物（ＣＭＴ）は、多数の機構によってＭＭＰ−２、３および８の発現を阻止することが示されており、また、悪性細胞のアポトーシスを誘導することも示されている。最も最近では、ビスホスホナート系化合物がＭＭＰインヒビターおよびアグレカナーゼ−１インヒビターとして同定されており、ＳＥ２０６、ＢＢ−１６およびＸＳ３０９が良好な効力を有することが示されている。最後に、ＭＭＰ活性を強力かつ特異的に阻害するＴＩＭＰの能力は、その使用において関心が高まっている。ＴＩＭＰ−１、２、３および４は、悪性細胞の侵入をインビトロおよびインビボで阻害することができる。
【００５０】
１つの局面において、本発明は、腫瘍細胞の接着、侵入および転移を防止または阻害することにおいて効果的である１つまたは複数のＭＭＰインヒビターを、少なくとも１つのさらなる痛み防止剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤との組合せで、灌注溶液によって手術部位に対して直接的に投与することを提供する。様々なインヒビターおよびアンタゴニストが、ＭＭＰの転写、翻訳、分泌、活性化または分解のレベルで作用し得る。
【００５１】
当業者は、患者のための治療剤としてのＭＭＰインヒビターの選択により、部分的には、何らかの特定の処置プロトコルのために投与されるインヒビターの量が決定されること、および、これらの量は容易に決定され得ることを理解する。
【００５２】
本発明における使用のために好適なＭＭＰインヒビターが下記の表に示される。
【００５３】
【表１】
2006508961.tif 000002
【００５４】
Ｂ．ＣＤ４４レセプターアンタゴニストおよびＣＤ４４シグナル伝達のインヒビター
ＣＤ４４は、数多くの変化体アイソフォームから構成される表面レセプターのファミリーを構成する膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ４４レセプターは、中枢神経系、肺、上皮、肝臓、結腸および膵臓を含む広範囲の様々な組織において見出される。このファミリーの関連した細胞表面接着分子は、正常な組織および悪性の組織の両方において発現する多機能性のタンパク質である。ＣＤ４４は、２０個のエキソンを含有する単一の遺伝子によってコードされ、そのうちの１０個（ｖ１〜ｖ１０）が、選択的スプライシングにより挿入される変化体エキソンである。ＣＤ４４の標準的アイソフォーム（ＣＤ４４ｓ）は、普遍的に発現しており、これらの変化体エキソンによってコードされる配列を含有しない。細胞外ドメインの中に挿入されたエキソン（ｖ１〜ｖ１０）の種々の組合せを含有するＣＤ４４の数多くの変化体アイソフォーム（ＣＤ４４ｖ）は、それらの発現が、増殖中の上皮細胞、活性化されたリンパ球、および悪性の細胞に限定されている。
【００５５】
最近の研究では、ＣＤ４４タンパク質がヒトにおけるヒアルロン酸に対する一次レセプターであることが明らかにされている。ＣＤ４４はこの細胞外マトリックスのグリコサミノグリカンに対する主要な膜貫通レセプターであるので、ＣＤ４４はまた、ヒアルロン酸レセプターとも呼ばれている。ＣＤ４４はまた、いくつかの他の細胞外マトリックスリガンド（コンドロロイチン硫酸、ヘパリン硫酸およびフィブロネクチン）と、より低い親和性で結合し得る。
【００５６】
ＣＤ４４レセプター−リガンドの相互作用は、細胞接着（凝集および遊走）、ヒアルロン酸分解、リンパ球活性化、炎症部位へのリンパ球呼び寄せ、およびサイトカインの放出を含む多くの正常な細胞プロセスのために必要である。さらなる特殊化された機能には、軟骨形成時および創傷治癒時における細胞周囲マトリックスの組み立てが含まれる。ＣＤ４４レセプターとヒアルロン酸（ＨＡ）との相互作用により、重要なシグナルが正常なＣＤ４４保有細胞および形質転換されたＣＤ４４保有細胞に送達される。多くの他の細胞表面レセプターと共通して、ＣＤ４４を発現する細胞では、このレセプターの発現が、リガンドが結合することに応答して調節される。
【００５７】
ＣＤ４４分子は、軟骨結合タンパク質に対するＮ末端の配列相同性を有する８５ｋＤのグリコシル化された分子である。様々なサイズを有するＣＤ４４のアイソフォームが多くの細胞タイプについて記載されている。ＣＤ４４アイソフォームのサイズの様々な変化は、グリコシル化の違い、および、ＣＤ４４に対するコンドロイチン硫酸分子の付加のために生じている。８５ｋＤの形態が、血清、血漿および滑液において同定されている。選択的スプライシングにより、この分子の造血系形態（ＣＤ４４Ｈ）、およびさらなるサブタイプが生じている。選択的スプライシングは、タンパク質のグリコシル化の変化をもたらし、ＣＤ４４の結合活性を調節するための機構を提供している。従って、ＣＤ４４分子は、いくつかのアイソフォームで存在することによって、また、その広い細胞分布および他の接着分子との機能的関連性のために、免疫細胞の活性化ならびにある種の腫瘍細胞タイプの転移に関与する多機能性の前炎症性分子である。
【００５８】
ヒト白血球において見出される優勢なアイソフォームはＣＤ４４Ｈである。単球に対するヒアルロン酸結合およびＣＤ４４ｍＡｂ結合はともにＩＬ−１の放出を増大させる。Ｔ細胞では、ＣＤ４４のヒアルロン酸およびＣＤ４４ｍＡｂの結合は本質的に異なる効果を有する：ＣＤ４４ｍＡｂはＴ細胞のトリガー機能を強化し、一方、ヒアルロン酸はＴ細胞のトリガー機能を抑制する。最後に、ＣＤ４４ｍＡｂおよびポリクローナル抗ＣＤ４４血清は、滑膜などの炎症部位において内皮細静脈に対するリンパ球の結合を阻害することが示されている。
【００５９】
ＣＤ４４の生理学的機能は、ＣＤ４４が腫瘍の転移拡大において役割を果たしていることを示している。ＣＤ４４の様々な性質、例えば、ヒアルロン酸媒介の接着、細胞の自発運動性、およびリンパ組織への接着などは、侵入性および転移性の腫瘍細胞によって要求されるいくつかの性質の一部である。インビボ実験では、特定のＣＤ４４アイソフォームを過剰発現するようにトランスフェクションされた腫瘍細胞は、高まった転移能力を呈することが示される。数多くのＣＤ４４アイソフォームの中で、特定のアイソフォームが腫瘍細胞の転移を他のアイソフォームよりも効率的に高める。転移能力は、ＣＤ４４の変化体によるトランスフェクションによって非転移性の細胞株に付与され得る。高レベルのＣＤ４４がいくつかのタイプの悪性腫瘍と関連する。
【００６０】
多数の研究により、ヒト腫瘍はＣＤ４４アイソフォームの発現において特異的な変化を呈することが報告されており、また、特定の腫瘍における臨床的疾患の程度がＣＤ４４アイソフォームの発現パターンと相関することがさらに示されている。一例として、ＣＤ４４のスプライス変化体の発現が、腺ガン細胞が転移するために要求され、この特定のＣＤ４４変化体に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）により転移が防止されたたことが見出された。また、広範囲の様々な上皮悪性腫瘍および間葉系悪性腫瘍は高レベルのＣＤ４４Ｈおよび様々な変化体アイソフォームのＣＤ４４を発現する。具体的には、報告では、ＣＤ４４変化体の発現が、上皮卵巣ガンの共通する特徴として報告されている。
【００６１】
多くの研究では、腫瘍におけるＣＤ４４分布パターンが調べられている。胃ガン細胞の表面におけるＣＤ４４標準型およびＣＤ４４−９ｖアイソフォームの存在が、患者について、腫瘍により誘導されるより大きい死亡率と、より短い生存期間とに著しく関係づけられることが見出された。腸タイプの胃ガン腫は、これらの腫瘍細胞に転移する能力をもたらすＣＤ４４−６ｖアイソフォームを多量に発現している。インテグリンレセプター、およびＣＤ４４アイソフォームの種々のレセプターが、腺腫および侵入性ガン腫への結腸粘膜の悪性形質転換の後で変化し、それらの転移能力と相関するという確実な証拠がある。ＣＤ４４−６ｖアイソフォームの発現は、腫瘍転移および接着の発達のために、結腸直腸ガンの有害な予後と関連している。これらのデータは、ＣＤ４４が腫瘍転移において重要な役割を果たしていること、および、ＣＤ４４レセプターのその天然リガンドとの相互作用を阻害する様々な分子は治療のために使用され得ることを示唆している。
【００６２】
細胞レベルにおいて、最近の研究により、チロシンキナーゼを伴う、活性化された内皮細胞におけるＣＤ４４についての細胞質シグナル伝達経路が特徴づけられている。ＣＤ４４のＨＡ結合活性は一部の細胞タイプにおける細胞活性化に結びつけられている。ヒアルロナンの分解産物（３個〜１０個の二糖）が細胞に付加されることにより、持続する多数のタンパク質の迅速なチロシンリン酸化が誘導される。ＣＤ４４レセプターの増大したリン酸化もまた観測された。抗ＣＤ４４レセプター抗体、またはチロシンキナーゼ活性の非選択的インヒビターのいずれかによる細胞の前処理は、誘導されたタンパク質チロシンリン酸化と、増殖応答との両方を阻害した。プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）活性が、処理された細胞の膜において２倍〜３倍増大した。さらに、ＰＫＣの活性化が、Ｒａｆ−１キナーゼ、ＭＡＰキナーゼ（ＭＥＫ−１）、および細胞外シグナルにより調節されるキナーゼ（ＥＲＫ−１）を伴う細胞質キナーゼカスケードを開始させたことが示された。ＥＲＫは、腫瘍細胞の増殖だけでなく、腫瘍形成に関係したタンパク質の発現、および自発運動性を制御する二重特異性のキナーゼである。
【００６３】
まとめると、ＣＤ４４レセプターのリン酸化はチロシンリン酸化の増大をもたらし、これは、細胞質カスケードの活性化、初期応答遺伝子の活性化、および細胞増殖を生じさせる。従って、ＣＤ４４の活性化およびシグナル伝達を阻害するための代わりの間接的な方法は、直接的なＣＤ４４レセプターアンタゴニストを利用するのではなく、ＣＤ４４により活性化される細胞シグナル伝達経路のインヒビターを用いることであると考えられる。チロシンキナーゼインヒビター、ＰＫＣインヒビター（例えば、カルホスチン）またはＥＲＫインヒビターを、ＣＤ４４により媒介されるシグナル伝達タンパク質を阻止し、新規な標的を治療剤に提供する薬剤として用いることができる。
【００６４】
腫瘍の成長および転移における非常に重要な事象の１つが、異なる腫瘍細胞タイプにおける様々な接着レセプターの種々の組合せにより媒介される、腫瘍細胞と宿主組織間質との間での相互作用である。いくつかの一連の証拠は、腫瘍細胞に発現したＣＤ４４レセプターと、組織間質ＨＡとの間での相互作用により、ある種の腫瘍の成長および侵入性が増強され得ることを示している。ガン腫への結腸粘膜の形質転換はいくつかのＣＤ４４選択的スプライス変化体の過剰発現と関連している。腫瘍の発達におけるＣＤ４４−ヒアルロン酸の相互作用の重要性が、リンパ腫、および、ＣＤ４４でトランスフェクションされたメラノーマ細胞による腫瘍形成を阻害することが示された可溶性の組換えＣＤ４４によりＣＤ４４−ヒアルロン酸の相互作用を破壊することによって明らかにされている。インビボでのメラノーマの成長に対する可溶性の野生型および変異型のＣＤ４４−Ｉｇ融合タンパク質の示差的な阻害効果が、マウスにおける皮下メラノーマ成長に対する影響を全く有しなかった変異型のヒアルロン酸非結合性ＣＤ４４−Ｉｇ融合タンパク質の局所投与によって明らかにされ、その一方で、野生型ＣＤ４４−Ｉｇの注入により、腫瘍の発達が阻止された。
【００６５】
本発明は、腫瘍細胞の接着および転移を防止または阻害し、その一方で、外科的処置に関連するそれ以外の望ましくないプロセスの１つまたは複数を阻害することにおいて効果的であるＣＤ４４インヒビターまたはＣＤ４４レセプターアンタゴニストを、少なくとも１つのさらなる痛み防止剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤との組合せで投与することを提供する。様々なインヒビターおよびアンタゴニストが、リガンドを活性化する結合を妨げるために、細胞表面レセプターに対する物理的な会合または結合によって直接的に作用し得るか、あるいは、ＣＤ４４シグナル伝達に関連する異なった分子を阻害することによって間接的なインヒビターとして作用し得る。
【００６６】
直接的なレセプターアンタゴニストには、ＣＤ４４の変化体またはそのフラグメントに対して作製されたモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が含まれ、これらは、ＣＤ４４に対するＨＡ結合のインヒビターとして使用することができ、また、治療剤として用いることができる。用いられ得る抗ＣＤ４４モノクローナル抗体には、ＣＤ４４のすべてのアイソフォームに存在するエピトープを認識するｍＡｂ、または、ＣＤ４４の翻訳後修飾された形態のみを認識する好適なｍＡｂが含まれる。アイソフォーム（変化体）特異的な抗ＣＤ４４ｍＡｂが米国特許第５，８６３，５４０号において以前に記載されており（Ｆ１２、Ａ１Ｇ３、Ａ３Ｄ８）、また、ＩＭ７およびＢＵ５２のｍＡｂが記載されている。本発明のために好適な他のモノクローナル抗体には、１０個の可変エキソンとの選択的スプライシングの結果として産生される特有のＣＤ４４アイソフォームに向けられた抗ＣＤ４４ｍＡｂが含まれる。
【００６７】
本発明は、抗腫瘍剤、細胞接着防止剤および転移防止剤として使用され得る、ＣＤ４４レセプターの細胞外ドメインまたはその一部分がＩｇＧ分子の定常ドメインに共有結合的に結合している組換え製造されたキメラな可溶性ＣＤ４４（ＣＳＣＤ４４）タンパク質の使用を開示する。具体的には、そして第１の例として、マウスのＩｇＧ１重鎖ポリペプチドのＣＨ２領域およびＣＨ３領域にカップリングされたＣＤ４４レセプター細胞外ポリペプチドの細胞外ドメインを含むキメラなポリペプチド（組換えキメラ体）が用いられ得る。第２の例は、ＣＤ４４レセプターについて作製されたＦｃ抗体の一部分（これはＦｃ融合の可溶性レセプターと名付けられる）とともにＣＤ４４レセプターのＨＡリガンド結合ドメインから構成されるキメラ融合構築物である。活性な可溶性ＣＤ４４レセプターの分子形態は単量体または二量体のいずれも可能である。様々な方法が、細胞表面に発現しているＣＤ４４の変化体アイソフォームに対する可溶性ＣＤ４４抗体の結合を試験するために確立されている。
【００６８】
ＣＤ４４−ヒアルロナンレセプター−リガンドの結合を阻害するための別の方法は、規定されたサイズのヒアルロナンオリゴ糖（ヒアルロナンオリゴマー）を用いて、ＣＤ４４レセプターを過剰なリガンドで飽和させることにより腫瘍形成を阻害することである。１つの研究により、１ｍｇ／ｍｌもの低い濃度で注射されたヒアルロナンオリゴマーがメラノーマの成長を阻害したことが見出された。従って、このようなオリゴマーの局所送達は、ＣＤ４４のその天然基質との相互作用を阻害することができ、従って、局所的な腫瘍発達を抑制するための好適な方法を提供し得る。
【００６９】
当業者は、患者のための治療剤としての特異的な抗ＣＤ４４モノクローナル抗体またはＣＤ４４ペプチド配列の選択により、部分的には、何らかの特定の処置プロトコルのために投与される薬剤の量が決定されること、および、これらの量は容易に決定され得ることを理解する。当業者は、特定の処置プロトコルのために投与されるペプチド、タンパク質または抗体の量が、病理学的な臨床状態に関連する特定のＣＤ４４ドメインの関数であり得ること、また、転移を媒介する特定の細胞タイプの関数であり得ることを理解する。
【００７０】
本発明の外科的適用において接着防止剤および／または侵入防止剤および／または転移防止剤として使用される好適なＣＤ４４レセプターアンタゴニストで、痛み防止剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤との組合せで送達されるＣＤ４４レセプターアンタゴニストが下記の表に示される。
【００７１】
【表２】
2006508961.tif 000003
【００７２】
Ｃ．インテグリンレセプターアンタゴニストおよびインテグリンシグナル伝達のインヒビター
インテグリン類は、細胞−細胞の接着および細胞−マトリックスの接着に関与する細胞表面レセプターのスーパーファミリーである。これらのレセプターは、細胞の分化および遊走、組織構造の維持、凝血塊の形成および撤回、ならびにプログラム化された細胞死などの数多くの細胞機能の調節において基本的な役割を果たしている。また、インテグリン類は、細胞外マトリックスおよび内皮細胞との腫瘍細胞の相互作用を媒介することにおけるそれらの重要な役割のために、ガン細胞の分化、腫瘍の進行および転移に関係している。インテグリンの発現および機能は多くの悪性細胞において変化しており、しかし、インテグリンの発現における変化は、異なる細胞タイプの間では異なる。腫瘍細胞における特異的なインテグリンレセプターサブタイプが、細胞外マトリックスの構成成分である多くの接着性タンパク質、活性化された血小板および内皮細胞に対する手術的外傷部位における付着を媒介し得る。
【００７３】
インテグリン類は、広範囲の様々な細胞において発現するヘテロ二量体の膜貫通αβレセプターのファミリーである。このレセプターファミリーには、少なくとも１４個の知られているαサブユニットおよび８個のβサブユニットが含まれ、これらのサブユニットは互いに結合して、異なるリガンド特異性を明らかにする数多くのサブタイプ組合せを形成する。αサブユニットはリガンド特異性の非常に重要な決定基であるようであり、αｖを含有するインテグリンはビトロネクチンに対する特異性を明らかにし、α５を含有するインテグリンはフィブロネクチンに対する特異性を明らかにし、α３を含有するインテグリンはコラーゲン／ラミニンに対する特異性を明らかにする。数多くのインテグリンヘテロ二量体サブユニットの組合せが様々な腫瘍細胞において見出されており、それらは、フィブロネクチン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノーゲン、コラーゲンおよびトロンボスポンジンに対するそれらの結合を促進している。血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）は、２つの白血球インテグリン（α４β１およびα４β７）に対する内皮細胞リガンドである。粘膜アドレシン細胞接着分子１（ＭａｄＣＡＭ−１）もまた、α４β７インテグリンに対するリガンドとして認識される。
【００７４】
フィブロネクチンと、それに結合するインテグリンレセプターのいくつかのサブタイプとの間での相互作用は、腫瘍発達のいくいつかの段階において特に重要な役割を果たし、悪性転移のプロセスに影響を及ぼしている。フィブロネクチンは、アミノ酸の反復ユニットからなる細胞外糖タンパク質である。単一の遺伝子がフィブロネクチンをコードし、選択的スプライシングにより、多数のアイソフォームの形成が可能である。特異的なタンパク質ドメインにより、分子がインテグリンレセプターおよび非インテグリンレセプターの両方を介して様々な細胞と相互作用することが可能である。フィブロネクチンは、レセプター特異性が異なる少なくとも２つの独立した細胞接着領域を有する。フィブロネクチンの中央部分における細胞接着ドメインは、少なくとも２つの最少数のアミノ酸配列（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）配列およびＰｒｏ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ａｓｎ（ＰＨＳＲＮ）配列）から構成される。α５β１のフィブロネクチン特異的インテグリンは中央のＲＧＤ／ＰＨＳＲＮ部位に結合する。α４β１インテグリンはＩＩＩＣＳ部位に結合する。フィブロネクチンおよびインテグリンの機能のペプチドインヒビターおよび抗体インヒビターは、転移の効果的なインヒビターであることが示されており、腫瘍細胞の接着を抑制するための潜在的に重要な薬剤である。
【００７５】
細胞内キナーゼおよびアダプタータンパク質によって媒介されるインテグリン活性化による経路は、インテグリンレセプターにより媒介されるアンカー依存性のためには特に重要である。最近、様々な細胞タイプにおけるシグナル伝達研究により、細胞外マトリックスタンパク質に対するインテグリンレセプターの結合は、高まったチロシンリン酸化を介して細胞内シグナルを迅速に生じさせることが明らかにされ、また、インテグリンレセプターを細胞内シグナル伝達経路に結びつけることにおけるフォーカルアドヒージョンキナーゼ（ＦＡＫ）プロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）の役割が明らかにされている。ＦＡＫは、いくつかの異なる細胞質シグナル伝達タンパク質、例えば、ＳｒｃファミリーのＰＴＫ類およびいくつかのＳＨ２ドメインタンパク質（Ｓｈｃ、Ｇｒｂ２およびＰＩ３−キナーゼ）などと会合する。これにより、ＦＡＫは、ＥＲＫ経路およびＪＮＫ／マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ経路などの標的の活性化を生じさせるインテグリン刺激のシグナル伝達経路のネットワークの内部で機能することができる。これらのシグナル伝達機構が、シグナル伝達カスケードにおいてレセプターに近いところにおけるインテグリンレセプター媒介によるシグナル伝達の直接的なインヒビターに基づく接着防止剤としてのチロシンキナーゼインヒビターの治療的可能性に対する理論的根拠となっている。
【００７６】
インテグリンレセプターに対するフィブロネクチンリガンドにおける細胞付着に関係するペプチド配列モチーフ（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸）は、接着タンパク質のインテグリン結合活性が、ＲＧＤ配列を含有する短い合成ペプチドによって再現され得るので、治療剤開発のための基礎となっている。ＲＧＤ配列を含有するペプチドは、腫瘍細胞の付着をインビトロで阻害することが示されている。ＲＧＤ指向インテグリンの１つのみまたは少数に対して選択的に結合する薬剤が、ＲＧＤモチーフに隣接する選択された配列を有するペプチドを環化することによって、また、ＲＧＤ模倣体を合成することによって調製されている。フィブロネクチンのＲＧＤ配列の一連のペプチドアナログの開発が合成されており、マウスにおけるそれらの転移防止効果、およびインビトロでの腫瘍細胞侵入に対するそれらの阻害効果が調べられている。
【００７７】
細胞研究および動物研究により、接着防止性のペプチドおよびポリペプチドが、ガンのある種の形態の腹膜散在を防止するために有用であることが示されている。例えば、ペプチド系インテグリンアンタゴニストのチロシルイソロイシルグリシルセリルアルギニン（ＹＩＧＳＲ）、アセチルアルギニルグリシルアスパルチルセリンアミド（Ａｃ−ＲＧＤＳ−ＮＨ２）およびアルギニルグリシルアスパラギン酸（ＲＧＤ）を使用した研究では、腹膜播種性細胞株のＯＣＵＭ−２ＭＤ３を使用して胃ガン細胞株の接着および侵入に対する影響が調べられた。α２β１インテグリンおよびα３β１インテグリンの両方の発現がＯＣＵＭ−２ＭＤ３細胞では顕著に増大していること、そして、細胞外マトリックスに結合するこれらの細胞の能力もまた、コントロール細胞の能力よりも著しく高いことが報告された。接着ポリペプチドのＹＩＧＳＲおよびＲＧＤ、ならびに２つのＲＧＤ誘導体は、細胞特異的なな様式で中皮下ＥＣＭに対するＯＣＵＭ−２ＭＤ３細胞の接着および侵入性を著しく阻害した。腹膜散在を有するヌードマウスの生存は、ＹＩＧＳＲ配列またはＲＧＤ配列が腹膜内に与えられた場合、非処置マウスの生存よりも長かった。インテグリン結合性のペプチドを用いて腫瘍細胞の付着を妨害することに基づく治療法が、動物実験において効果的な転移防止法であることが示されており、そして、細胞が、フィブリノーゲン、ラミニン、またはＲＧＤＳモチーフを含有するペプチドに事前にさらされた場合、手術外傷部位における腫瘍移植の頻度もまた減少している。
【００７８】
これらの研究および他の研究により、ＲＧＤ配列を含有する合成されたフィブロネクチンフラグメント、ペプチドアナログおよびペプチド模倣物、または抗体の使用による特異的なインテグリンレセプター−リガンド相互作用の阻害は、サブタイプ特異的なインテグリンレセプターに対する臨床的に有用なアンタゴニストを開発するための有用な方法を表していることが示唆される。多数のこれらのペプチド、例えば、米国特許第５，６２７，２６３号に開示されるペプチドなどは、腫瘍細胞の接着および腫瘍の転移を阻害することにおいて元のＲＧＤＳペプチドよりも効果的であることが見出されており、他の薬剤との組合せで本発明における使用のために開示される。特に、本発明は、フィブロネクチン結合性のインテグリン類（特にα５β１インテグリン）に対して特異的であるペプチドおよびペプチドアナログの使用を提供する。また、β１インテグリンヘテロ二量体の一部としての、α２、α６およびαｖのインテグリンサブユニットに対する結合を阻害するための特異的な薬剤もまた提供される。
【００７９】
さらなるクラスのインヒビターは、天然に存在するディシンテグリン類であり、これらには、ＲＧＤ配列を含有する、ヘビ毒液から精製された小さい非常に相同的なシステインリッチポリペプチドのファミリーが含まれる。ディシンテグリン類はインテグリン−リガンドの相互作用を競合的に阻害することができ、様々なシステムにおける細胞接着相互作用を阻害することが示されている。特異的なヘビ毒液由来のディシンテグリン類は、フィブリノーゲン依存性の血小板凝集を阻止することにおいて、短い合成された線状ＲＧＤ含有ペプチドよりも２０００倍以上強力であることが示されている。ディシンテグリン分子のこのより大きい効力は、ＲＧＤ配列の周囲のアミノ酸配列、および、ＲＧＤ配列を適切な立体配座に強制する鎖間ジスルフィド架橋に由来する。特異的なディシンテグリン類は、インテグリン細胞表面レセプターの接着機能を阻止し、それにより、様々な細胞タイプおよび組織におけるインテグリン依存性の細胞反応を阻害する。ディシンテグリンのキストリンは、α５β１または他の量の多いインテグリン類に対してではなく、αＶβ３に対して大きい親和性で特異的に結合することが親和性クロスカップリングによって示された。関連したディシンテグリンのエキスタチンは、αＶβ３に対する１２５Ｉ標識キストリンの結合を特異的に阻害し、一方では、構造的に異なったディシンテグリンのデコルシンは１０００分の１の親和性を有していた。
【００８０】
中国マムシ（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ  ｕｓｓｕｒｉｅｎｓｉｓ）の毒液から最近単離された２つのディシンテグリン、すなわち、ウスリスタチン１（ＵＳ−１）およびウスリスタチン２（ＵＳ−２）が、細胞接着の強力なインヒビターとして特徴づけられている。２つのポリペプチドは７１アミノ酸から構成され、他のディシンテグリン類に対する強い類似性を示す配列によって特徴づけられる。ＵＳ−１は、レセプターに対するフィブリノーゲンの結合を阻止することに関係する典型的なＡｒｇ−Ｇｌｙ―Ａｓｐ（ＲＧＤ）配列を有した。ＵＳ−２では、対応する配列はＬｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＫＧＤ）であった。ＵＳ−２はまた、血小板凝集を阻害したが、ＩＣ５０は約１０倍大きかった。ＵＳ−１はまた、ＩＣ５０＝１７〜３３ｎＭで、フィブリノーゲンおよびフィブロネクチンに対するヒトメラノーマ細胞の接着を用量依存的に阻害し、一方、ＵＳ−２はフィブロネクチンに対する細胞接着を阻害しなかった。
【００８１】
さらなるヘテロ二量体ディシンテグリンのＥＣ３（Ｍｒ＝１４，７６２）がサメハダクサリヘビ（Ｅｃｈｉｓ  ｃａｒｉｎａｔｕｓ）の毒液から単離され、これはα４インテグリン類の強力なアンタゴニストである。各サブユニットは６７残基を含有し、他のディシンテグリン類に対して高度の相同性を示している。ＥＣ３は、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）および粘膜アドレシン細胞接着分子１（ＭａｄＣＡＭ−１）などの天然のリガンドに対する、α４β１インテグリンおよびα４β７インテグリンを発現する細胞の接着をＩＣ５０＝６〜３０ｎＭで阻害し、フィブロネクチンに対するＫ５６２細胞（α５β１）の接着をＩＣ５０＝１５０ｎＭで阻害し、フィブリノーゲンに対するαＩＩｂβ３チャイニーズハムスター卵巣細胞の接着をＩＣ５０＝５００ｎＭで阻害した。
【００８２】
本発明のための好適なインテグリンアンタゴニストの例が下記に示される。一例として、示された薬剤のそれぞれについて、示された薬剤を含有する灌注溶液の好ましい濃度および最も好ましい濃度が示され、そのような濃度は治療効果的であることが予想される。
【００８３】
【表３】
2006508961.tif 000004
【００８４】
Ｄ．セレクチンレセプターアンタゴニストおよびセレクチンシグナル伝達のインヒビター
血管内皮表面に対する悪性細胞の接着には、組織部位に対する炎症性細胞の呼び寄せに関与するレセプターに類似する接着レセプターのファミリーを伴う。セレクチン類が、内皮細胞（ＥＣ）の活性化の後における逐次的な分子段階のカスケードに関与している。セレクチンファミリーは、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）、Ｐ−セレクチン（ＧＭＰ−１４０）およびＬ−セレクチン（ＬＥＣＡＭ−１）からなる。炭水化物決定基であるシアリルルイスＡ（ＳＬｅａ）およびシアリルルイスＸ（ＳＬｅｘ）がヒトガン細胞において頻繁に発現しており、これらは、血管内皮細胞において発現するＥ−セレクチンに対するリガンドとして作用している。これらの炭水化物決定基は血管内皮に対するガン細胞の接着に関与しており、従って、ガンの転移に寄与している。セレクチン類は、白血球の呼び寄せに関与する誘導性の内皮発現の接着分子である。これらの分子によって媒介される最初の接着により、いくつかのサイトカインの作用によるインテグリン分子の活性化が開始される。ガン細胞の表面における炭水化物リガンドの発現の程度は転移の頻度とよく相関している。ＳｌｅａまたはＳｌｅｘに対するモノクローナル抗体により、ＥＣおよび血小板に対する腫瘍細胞（白血病細胞、結腸ガン細胞、および組織球性リンパ腫細胞）の接着が阻止された。また、セレクチンの発現は乳ガン内皮において頻繁にアップレギュレーションされている。
【００８５】
Ｐ−セレクチンは、ＧＭＰ−１４０またはＰＡＤＧＥＭとしてもまた知られているが、休止状態（非刺激）の血小板および内皮の分泌顆粒に存在する膜糖タンパク質である。様々な媒介因子によりこれらの細胞が活性化されたとき、Ｐ−セレクチンが形質膜に迅速に再分布される。セレクチン類は、構造的および機能的に関連した分子のファミリーを構成する。これらの分子のそれぞれに共通する構造的モチーフは、Ｎ末端のレクチン様ドメイン、それにに続くＥＧＦ様領域、補体結合タンパク質における反復に関連づけられる一連のコンセンサス反復、膜貫通ドメイン、および短い細胞質テールを含む。Ｐ−セレクチンは、活性化された血小板および内皮において発現したとき、好中球および単球に対するレセプターである。この性質により、組織傷害の領域における内皮に対する白血球の迅速な接着、ならびに、炎症部位および出血部位における血小板−白血球の相互作用が促進される。研究ではまた、Ｐ−セレクチンが様々な組織切片において腫瘍細胞に結合すること、および、Ｐ−セレクチンが、ガン腫に由来する多数の細胞株の細胞表面に結合することが見出されている。他の接着分子と協奏して作用することにより、Ｐ−セレクチンは腫瘍の転移に関係しており、従って、接着レセプター機能を阻止する薬物のための標的である。
【００８６】
転移におけるセレクチン類に対する役割を裏付ける研究は、インビトロでのフローモデルを使用したセレクチン類に対するヒト結腸ガン細胞株の接着に基づいている。組換え形態のＰ−セレクチンおよびチャイニーズハムスター卵巣細胞発現のＰ−セレクチンはＫＭ１２−Ｌ４結腸ガン細胞の付着およびローリングを助けた。この効果は、ＫＭ１２−Ｌ４細胞をノイラミニダーゼで前処理することによって失われた。ＫＭ１２−Ｌ４細胞は、ＰＳＧＬ−１に依存しない接着経路を介してＰ−セレクチンと相互作用する。Ｅ−セレクチン−ＩｇＧのキメラ体もまた、流体流のもとでの結腸ガン細胞のシアリル化成分依存性の接着を助けることが見出された。従って、様々なシアリル化成分が、流動条件のもとでのＩＬ−１刺激された内皮に対するヒトガン細胞のセレクチン媒介による接着に関与している。さらに、ヒトおよびマウスのＥＣに対する結腸ガン細胞に対するＥ−セレクチン媒介の結合の効率が、これらのガン細胞の転移能力と相関することが見出されている。
【００８７】
最近の研究では、ヒト臍帯内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）に対する２つのヒト結腸ガン細胞株（ＨＴ−２９およびＣＯＬＯ２０１）のインビトロ接着を媒介することにおけるＥ−セレクチン−シアリルルイスｘ（Ｓｌｅｘ）／シアリルルイスａ（Ｓｌｅａ）の相互作用の役割が評価された。結腸ガン細胞株は炭水化物エピトープの強い発現を有していた。ＩＬ−１で刺激されたＨＵＶＥＣに対するＨＴ−２９細胞およびＣＯＬＯ２０１細胞の接着が、Ｅ−セレクチンに対するモノクローナル抗体によって阻害され得ることが明らかにされた。Ｓｌｅｘに対する２つの異なる抗体、および関連したルイスエピトープ（ＬｅｘおよびＬｅａ）に対する抗体を用いた細胞の事前のインキュベーションは、接着に対する大きな影響を有していなかった。Ｓｌｅａに対する３つの抗体は、ＨＴ−２９細胞およびＣＯＬＯ２０１細胞の接着を阻害するそれらの能力が異なっていた。従って、Ｓｌｅａエピトープは、Ｅ−セレクチンによって主に媒介される結腸ガン細胞の接着のために重要である。
【００８８】
さらなる研究では、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を用いたＨＵＶＥＣの前処理はＣＯＬＯ２０５ガン腫細胞株の結合を増強したことが明らかにされている。増大した接着は濃度および時間の両方に依存しており、最大の腫瘍細胞付着が４時間において見出された。この結果は、内皮における接着分子Ｅ−セレクチンの増大した発現と一致していた。ＴＮＦで刺激されたＨＵＶＥＣのＢＢ１１（抗Ｅ−セレクチンｍＡｂ）とのインキュベーションは、ＣＯＬＯ２０５の添加の前では、腫瘍細胞の接着の完全な阻害をもたらした。これらの研究により、内皮細胞の標的に対する腫瘍細胞の付着を阻害するための、Ｅ−セレクチンに対する特異的な抗体の有用性が確認される。他の研究では、抗Ｐ−セレクチンモノクローナル抗体もしくは抗Ｌ−セレクチンモノクローナル抗体（すなわち、ＭＡｂＰＢ１．３およびＭＡｂＤＲＥＧ−２００）またはシアリルルイスｘ含有オリゴ糖（Ｓｌｅｘ−ＯＳ）のいずれかによる前処理は、細胞接着を阻害することにおいて効果的であることが見出されている。
【００８９】
類似するインビトロ研究およびインビボ研究では、転移プロセスにおけるセレクチン類の役割が、ヒト膵臓悪性腫瘍に由来するＳＷ１９９０細胞を使用して明らかにされている。ＳＷ１９９０細胞はまた、Ｓｌｅａ抗原およびＳｌｅｘ抗原、ＣＤ４４Ｈ、ならびにβ１インテグリンを強く発現する。この細胞は、ＩＬ−１で活性化されたＨＵＶＥＣ細胞およびヒト腹膜中皮細胞に対する結合活性を示す。内皮細胞に対するガン細胞の移植をもたらす接着が、Ｓｌｅａに対する抗体およびβ１インテグリンに対する抗体による処理によって阻害された。動物研究において、Ｓｌｅａに対する抗体およびβ１インテグリンに対する抗体による処理はそれぞれが、ＳＷ１９９０細胞を有するヌードマウスにおける肝臓転移の発達を阻害し、ヌードマウスの生存を延ばした。
【００９０】
セレクチン類のシグナル伝達特性の評価により、他の細胞接着レセプターにより共有される共通した機構が解明されている。Ｅ−セレクチン−ＩｇＧのキメラ体に特異的に接着するＨＴ−２９ヒト結腸ガン細胞を使用した研究では、Ｅ−セレクチンに接着したとき、ＨＴ−２９細胞溶解物におけるいくつかのタンパク質のチロシンリン酸化の量が増大することが示されている。この効果は、Ｅ−セレクチン阻止モノクローナル抗体の添加により、Ｅ−セレクチン単独と比較して、チロシンリン酸化の著しい低下が引き起こされたので、Ｅ−セレクチンに対する接着について特異的である。キナーゼアッセイは、Ｅ−セレクチンに接着したとき、ｃ−ｓｒｃ活性の用量依存的かつ著しい低下を示した。これはＴｙｒ５２７（負の調節チロシン）のリン酸化と相関している。これらの研究により、ＨＴ−２９細胞およびｃ−ｓｒｃにおけるＥ−セレクチンリガンドを伴うシグナル伝達経路が同定される。
【００９１】
他の研究では、Ｐ−セレクチンに対するリンパ球の結合が、異なったタンパク質のチロシンリン酸化を誘導することが明らかにされている。活性化は、表面接着分子と最初に接触したときに生じるようである。Ｐ−セレクチンの影響は時間依存的であり、初期応答が１０分後に明らかにされ、最大の影響が３０分において明らかにされた。同定されたタンパク質には、ｐｐ１２５フォーカルアドヒージョンキナーゼ（ＦＡＫ）およびパキシリンが含まれた。チロシンキナーゼインヒビターのゲニステインによる処理、またはプロテインキナーゼＣインヒビターのスタウロスポリンによる処理は、低下したｐｐ１２５ＦＡＫリン酸化をもたらした。これらのシグナル伝達機構が、セレクチンレセプター媒介によるシグナル伝達の直接的なインヒビターとしてそれらの作用に基づく接着防止剤としてのチロシンキナーゼインヒビターの治療的可能性のための理論的根拠となっている。セレクチンレセプターの迅速なシグナル伝達特性は、外科的処置の開始時における治療剤の送達が予防的な阻害効果を提供するために必要であることを強調している。
【００９２】
本発明は、治療有効量の抗Ｅ−セレクチン特異的ｍＡｂもしくは抗体フラグメントおよび／または抗Ｐ−セレクチン特異的ｍＡｂもしくは抗体フラグメントおよび／または抗Ｌ−セレクチン特異的ｍＡｂもしくは抗体フラグメントおよび／または抗シアリルルイスａ（Ｓｌｅａ）ｍＡｂを、１つまたは複数の抗炎症剤および／または痛み防止剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤のいずれかとの組合せで含有する医薬組成物を患者に投与することによって転移性腫瘍細胞の拡大を阻害するための方法を提供する。
【００９３】
研究ではまた、ヘパリンが、セレクチン類のそれらの炭水化物リガンドに対する結合を阻害したことが見出されている。セレクチン相互作用のヘパリン（エノキサパリン）阻害は、セレクチンに関連した腫瘍細胞接着を低下させることが予想される。
【００９４】
本発明のための好適なセレクチンアンタゴニストの例が下記に示される。示された薬剤のそれぞれについての、示された薬剤を含有する灌注溶液の好ましい濃度および最も好ましい濃度が示され、そのような濃度は治療効果的であることが予想される。
【００９５】
【表４】
2006508961.tif 000005
【００９６】
本発明において同定される薬剤のクラスについて規定された分子的作用機構および細胞的作用機構から、これらの薬剤は、灌注溶液において周術期に適用されたとき、腫瘍細胞の接着防止効果、侵入防止効果および／または転移防止効果を示すことが予想される。これらの薬剤は、確認された悪性腫瘍または潜在性の悪性腫瘍を伴う外科的処置の時に灌注溶液において送達されたとき、効果的な薬物であることが予想される。送達方法および灌注に含まれる組成物は、卵巣ガン、胃ガン、膵臓ガンおよび結腸ガンの腫瘍学的処置のために適応される手術（これに限定されない）を含む、腹膜腔、腹腔、胸腔、胸膜腔、縦隔腔、泌尿生殖器腔、硬膜外腔、くも膜下腔および関節腔を伴う処置において有用であることが予想される。それぞれの代謝的に活性な腫瘍接着防止剤は、１つまた複数の他の痛み防止剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤との組合せで送達され得る。医薬組成物に含められる好適な抗腫瘍剤は、１つだけのファミリー（クラス）のレセプターまたは１つだけの酵素ファミリー（例えば、ＣＤ４４、インテグリン類、セレクチン類、プロテインチロシンキナーゼ類、ＭＭＰ類およびＭＡＰキナーゼ類）に対する薬剤の相互作用を制限する薬理学的な選択性および特異性に対する要件によってさらに特徴づけられる。特定の好適な薬剤は、レセプターファミリーに対する特異性を示しながら、１つまたは複数のレセプターサブタイプ（またはアイソフォーム）と特異的に相互作用し得る。それぞれの好適な薬剤は、リガンド−レセプター（またはインヒビター−酵素）の複合体について規定された化学量論（典型的には１：１）によって特徴づけることができ、かつ、その平衡結合定数または平衡速度論定数によって特徴づけることができる特異的な機構を介してその分子標的と会合する。これらの薬剤には、小分子薬物、天然または合成のペプチドまたはペプトイド、ポリペプチド、タンパク質、組換えキメラタンパク質、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体、オリゴヌクレオチドまたは遺伝子治療ベクター（ウイルス型および非ウイルス型）が含まれ得る。
【００９７】
例えば、インテグリンレセプターアンタゴニストなどの薬剤は、その作用を、腹膜腔の流体空間に関連する任意の細胞、および、正常な機能に関与するか、または病理学的状態のために存在する、体腔を構成する構造体に対して発揮することができる。これらの細胞および構造体には、限定されないが、上皮細胞；中皮細胞；炎症性細胞（これには、リンパ球、マクロファージ、マスト細胞、単球、好酸球が含まれる）；ならびに、内皮細胞、平滑筋細胞および繊維が細胞を含む他の細胞；ならびに、上記の組合せすべてが含まれる。
【００９８】
本発明はまた、接着防止剤、侵入防止剤および／または転移防止剤ならびに他の薬剤の組合せの送達、取り込み、安定性または薬物動態学を高める、手術部位への導入および投与のために有用な配合物で送達され得る活性な治療剤の配合物を提供する。そのような配合物は、タンパク質、炭水化物、合成有機化合物または無機化合物から構成されるマイクロ粒子、マイクロ球体またはナノ粒子（これらに限定されない）を含むことができる。配合分子の例には、リポソームまたは他の整列した脂質構造体を形成することができる脂質、カチオン性脂質、親水性ポリマー、ポリカチオン（例えば、プロタミン、スペルミジンおよびポリリシン）、物質を特定の細胞タイプに標的化することができるペプチドまたは合成リガンドおよび抗体、ゲル、徐放性マトリックス、可溶性粒子および不溶性粒子、ならびに、当業者に知られている他の配合要素が含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
本発明は、均一な混合物（例えば、単一のカプセル化されたミクロ球体）に含まれる多数の薬学的に活性な物質として、または個々の送達ビヒクルの別個の混合物（例えば、１つまたは複数の薬剤をカプセル化するミクロ球体群）として、そのいずれでも存在する、腫瘍接着防止薬物および／または侵入防止薬物および／または局所的転移防止薬物の組合せの送達を提供する。配合分子の例には、親水性ポリマー、ポリカチオン（例えば、プロタミン、スペルミジン、ポリリシンおよびキトサン）、物質を特定の細胞タイプに標的化することができるペプチドまたは合成リガンドおよび抗体、ゲル、徐放性マトリックス、可溶性粒子および不溶性粒子、ならびに、示されていない配合要素が含まれるが、これらに限定されない。
【０１００】
本発明は、腫瘍細胞接着防止薬物（１つまたは複数）の組合せの灌注溶液による局所送達を提供する。この場合、そのような灌注溶液は、治療効果的な低い濃度で存在する腫瘍細胞接着防止薬物を含有し、薬物が所望の組織に直接的に送達されることを可能にする。薬物含有灌注溶液は、外科的処置と一緒に、術中に、または術中および術前に、または術前および術後に、または術前、術中および術後に用いることができる。
【０１０１】
薬物送達のために使用される従来の方法では、病理学的に冒された組織において有意な治療的濃度を達成するために患者に投与される薬物のより大きい濃度（およびより大きい総用量）を余儀なくする全身的（例えば、経口、筋肉内、静脈内、皮下）投与が要求される。全身投与ではまた、高い濃度が、望ましくない標的化組織以外の組織において生じ、また、用量に依存して、有害な副作用が生じる場合がある。これらの全身的方法は、薬物を２回通過代謝および迅速な分解にさらし、それにより、効果的な治療的濃度の持続期間を制限する。腫瘍細胞の接着防止剤、侵入防止剤および転移防止剤の組合せ（これは、１つまたは複数の痛み防止剤および／または抗炎症剤および／または抗痙攣剤および／または再狭窄防止剤を伴うか、または伴わない）が、灌注によって手術部位に対して直接的に投与されるので、血管灌流は、薬物を標的化された部位に運ぶために要求されない。この顕著な利点により、様々な腫瘍細胞接着防止薬物、局所的転移防止薬物について、そうでない場合には他の投与経路によって可能であるよりも低い治療効果的な総用量の局所送達が可能になる。
【０１０２】
他の局面において、本発明の灌注溶液は、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移の少なくとも１つのインヒビターと、好ましくは、複数の痛み／炎症インヒビター、抗痙攣剤および再狭窄防止剤との生理学的キャリアにおける希溶液を含む。キャリアは液体であり、キャリアは、本明細書中で使用される場合、生体適合性の溶媒、懸濁物、重合可能なゲルおよび非重合性ゲル、ペーストおよび膏薬を包含することが意図される。好ましくは、キャリアは、生理学的電解質を含み得る水溶液（例えば、規定生理的食塩水または乳酸加リンゲル溶液など）である。
【０１０３】
抗炎症剤／痛み防止剤は、（１）セロトニンレセプターアンタゴニスト；（２）セロトニンレセプターアゴニスト；（３）ヒスタミンレセプターアンタゴニスト；（４）ブラジキニンレセプターアンタゴニスト；（５）カリクレインインヒビター；（６）タキキニンレセプターアンタゴニスト、これには、ニューロキニン１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびニューロキニン２レセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる；（７）カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）レセプターアンタゴニスト；（８）インターロイキンレセプターアンタゴニスト；（９）アラキドン酸代謝物の合成経路において活性な酵素のインヒビター、これには、（ａ）ホスホリパーゼインヒビター（ＰＬＡ２アイソフォームインヒビターおよびＰＬＣγアイソフォームインヒビター）、（ｂ）シクロオキシゲナーゼインヒビター、および（ｃ）リポオキシゲナーゼインヒビターがまれる；（１０）プロスタノイドレセプターアンタゴニスト、これには、エイコサノイドＥＰ−１レセプターサブタイプアンタゴニストおよびエイコサノイドＥＰ−４レセプターサブタイプアンタゴニストならびにトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる；（１１）ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト、これには、ロイコトリエンＢ４レセプターサブタイプアンタゴニストおよびロイコトリエンＤ４レセプターサブタイプアンタゴニストが含まれる；（１２）オピオイドレセプターアゴニスト、これには、μ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニスト、δ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストおよびκ−オピオイドレセプターサブタイプアゴニストが含まれる；（１３）プリンレセプターアゴニストおよびプリンレセプターアンタゴニスト、これには、Ｐ２ＸレセプターアンタゴニストおよびＰ２Ｙレセプターアゴニストが含まれる；および（１４）アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）感受性カリウムチャンネル開口剤からなる群から選択される。
【０１０４】
抗痙攣剤としてもまた作用する好適な抗炎症剤／痛み防止剤には、セロトニンレセプターアンタゴニスト、タキキニンレセプターアンタゴニスト、ＡＴＰ感受性カリウムチャンネル開口剤およびカルシウムチャネルアンタゴニストが含まれる。特にその抗痙攣特性のために溶液において利用され得る他の薬剤には、エンドセリンレセプターアンタゴニスト、カルシウムチャネルアンタゴニストおよび一酸化窒素供与体（酵素活性化因子）が含まれる。
【０１０５】
心臓血管処置および一般的血管処置において使用される本発明の溶液の具体的な好ましい実施形態は再狭窄防止剤を含み、再狭窄防止剤は、最も好ましくは、抗痙攣剤との組合せで使用される。好適な再狭窄防止剤には、（１）抗血小板剤、これには、（ａ）トロンビンインヒビターおよびトロンビンレセプターアンタゴニスト、（ｂ）アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）レセプターアンタゴニスト（これはまた、プリンレセプター１のレセプターアンタゴニストとして知られている）、（ｃ）トロンボキサンインヒビターおよびトロンボキサンレセプターアンタゴニスト、および（ｄ）血小板膜糖タンパク質レセプターアンタゴニストが含まれる；（２）細胞接着分子のインヒビター、これには、（ａ）セレクチンインヒビターおよび（ｂ）インテグリンインヒビターが含まれる；（３）抗走化性剤；（４）インターロイキンレセプターアンタゴニスト（これはまた、痛み防止剤／抗炎症剤としても役立つ）；および（５）細胞内シグナル伝達インヒビター、これには、（ａ）プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）インヒビターおよびプロテインチロシンホスファターゼ、（ｂ）細胞内プロテインチロシンキナーゼインヒビターの調節因子、（ｃ）ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインのインヒビター、および（ｄ）カルシウムチャネルアンタゴニストが含まれる。そのような薬剤は、血管形成術、回転アテローム切除術、または心臓血管もしくは一般的血管の他の治療的処置によって処置された動脈の再狭窄を防止することにおいて有用である。
【０１０６】
本発明の外科用溶液のそれぞれにおいて、薬剤は、所望される治療効果を達成するために薬物投与の従来の方法を用いて要求される濃度および用量に対して低い濃度で含まれ、かつ少ない用量で局所的に送達される。全身投与された薬物は初回通過代謝および２回通過代謝にさらされるので、同等の治療効果を、同様に投薬された薬剤を薬物投与の他の経路（すなわち、静脈内経路、皮下経路、筋肉内経路または経口経路）により送達することによって得ることはできない。各薬物の濃度は、部分的には、その解離定数Ｋｄに基づいて決定される。本明細書中で使用される場合、解離定数の用語は、そのそれぞれのアゴニスト−レセプターまたはアンタゴニスト−レセプターの相互作用についての平衡解離定数、およびそのそれぞれの活性化因子−酵素またはインヒビター−酵素の相互作用についての平衡阻害定数の両方を包含することが意図される。各薬剤は、選択された特定のインヒビターに依存してより大きい濃度で要求され得るシクロオキシゲナーゼインヒビターを除き、好ましくは、０．１倍〜１０，０００倍のＫｄナノモルの低い濃度で含まれる。好ましくは、各薬剤は、１．０倍〜１，０００倍のＫｄナノモルの濃度で含まれ、最も好ましくは約１００倍のＫｄナノモルの濃度で含まれる。これらの濃度は、局所送達部位における代謝的変換がない場合の希釈を補うために必要に応じて調節される。溶液において使用される選択された的確な薬剤、およびその薬剤の濃度は、下記に記載されるように、特定の適用に従って変化する。
【０１０７】
本発明による溶液は、列挙されたクラスに由来する、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移の１つだけまたは複数のインヒビター、痛み／炎症インヒビター（１つまたは複数）、１つだけまたは複数の抗痙攣剤、腫瘍細胞の接着、侵入および／または転移のインヒビターと、抗痙攣剤および痛み／炎症インヒビターまたは再狭窄防止剤との組合せを低い濃度で含み得るだけである。しかしながら、複数の薬剤の上記の相乗的な効果のために、また、痛みおよび炎症、痙攣および再狭窄を広範囲に阻止したい願望のために、複数の薬剤を利用することが好ましい。
【０１０８】
本発明の外科用溶液は、レセプターおよび酵素の異なった分子標的に対して作用する複数の薬理学的薬剤を組み合わせることによる新規な治療的方法を構成する。今日まで、様々な薬理学的取り組みは、個々のシグナル伝達する神経伝達物質およびホルモンに対する応答を媒介する個々のレセプターサブタイプおよび酵素アイソフォームについて選択的である非常に特異的な薬物の開発に集中している。一例として、エンドセリンペプチドは、知られている最も強力な血管収縮剤の１つである。エンドセリン（ＥＴ）レセプターのサブタイプについて特異的な選択的アンタゴニストが、身体における上昇したエンドセリンレベルを伴う数多くの障害の処置における使用のためにいくつかの製薬企業によって探し求められている。高血圧におけるレセプターサブタイプＥＴＡの潜在的な役割を認識することにより、これらの製薬企業は、具体的には、冠状動脈の血管痙攣の予期される処置のためのＥＴＡレセプターサブタイプに対する選択的なアンタゴニストの開発を目的としている。このような標準的な薬理学的取り組みは、広く受け入れられているが、最適ではない。これは、多くの他の血管収縮剤因子（例えば、セロトニン、プロスタグランジン、エイコサノイド他）が、血管痙攣エピソードを開始および維持することに同時に関係し得るからである（図２および図４を参照のこと）。さらに、１つだけのレセプターサブタイプまたは酵素の不活性化にもかかわらず、他のレセプターサブタイプまたは酵素の活性化、およびその結果のシグナル伝達が、多くの場合、カスケード効果を開始させ得る。これにより、複数の伝達物質が役割を果たしている病態生理学的プロセスを阻止するために１つだけのレセプター特異的な薬物を用いることが著しく困難であることが説明される。従って、特異的な個々のレセプターサブタイプ（例えば、ＥＴＡなど）のみを標的化することは効果的でない可能性がある。
【０１０９】
薬理学的治療に対する標準的な方法とは対照的に、本発明の外科用溶液の治療的方法は、異なった分子標的に同時に作用する薬物の組合せが、病態生理学的状態の発達の基礎となっている事象の全範囲を阻害するために要求されるという理論的根拠に基づいている。さらに、特異的なレセプターサブタイプを単独で標的化する代わりに、本発明の外科用溶液は、痛み、炎症、血管痙攣、平滑筋痙攣および再狭窄の発症に関与する異なる生理学的細胞プロセス（図１を参照のこと）において作動する共通した分子機構を標的化する薬物から構成される。この方法では、侵害受容経路、炎症経路、痙攣性経路および再狭窄経路におけるさらなるレセプターおよび酵素のカスケード化が、本発明の外科用溶液によって最小限に抑えられる。これらの病態生理学的経路において、外科用溶液は「上流側」および「下流側」の両方でカスケード効果を阻害する。
【０１１０】
「上流側」阻害の一例が、痛みおよび炎症の状況におけるシクロオキシゲナーゼアンタゴニストである。シクロオキシゲナーゼ酵素（ＣＯＸ１およびＣＯＸ２）は、プロスタグランジン類、ロイコトリエン類およびトロンボキサン類を含む炎症性および侵害受容性の媒介因子の生合成における中間体であるプラスタグランジンＨへのアラキドン酸の変換を触媒する。シクロオキシゲナーゼインヒビターはこれらの炎症性および侵害受容性の媒介因子の形成を「上流側」で遮断する。この方法では、プロスタノイドレセプターの７つの記載されたサブタイプとそれらの天然リガンドとの相互作用を阻止する必要はない。外科用溶液に含まれる類似する「上流側」インヒビターには、アプロチニン（カリクレインインヒビター）がある。酵素カリクレインはセリンプロテアーゼであり、血漿中において高分子量のキニノーゲン類を切断して、痛みおよび炎症の重要な媒介因子であるブラジキニン類をもたらす。カリクレインの阻害により、アプロチニンはブラジキニン類の合成を効果的に阻害し、それにより、これらの炎症性媒介因子の効果的な「上流側」阻害をもたらす。
【０１１１】
外科用溶液ではまた、病態生理学的経路を制御するために「下流側の」インヒビターが使用される。冠状動脈の血管痙攣に関係する様々な神経伝達物質（例えば、セロトニン、ヒスタミン、エンドセリンおよびトロンボキサン）で予備収縮させられた血管平滑筋調製物において、ＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤（ＫＣＯ）は、濃度依存的である平滑筋弛緩をもたらしている（Ｑｕａｓｔ他、１９９４；Ｋａｓｈｉｗａｂａｒａ他、１９９４）。従って、ＫＣＯは、痙攣事象を開始させるアゴニスト（図２および図４を参照のこと）の生理学的組合せに関係しない「下流側の」抗痙攣性効果を提供することによって、血管痙攣および平滑筋痙攣の状況において本発明の外科用溶液に対する顕著な利点を提供する。同様に、ＮＯ供与体および電位依存性カルシウムチャネルアンタゴニストは、痙攣性経路においてより早期に作用することが知られている複数の媒介因子により開始される血管痙攣および平滑筋痙攣を制限し得る。
【０１１２】
ＩＩ．抗炎症剤／痛み防止剤
下記は、本発明の抗炎症剤／痛み防止剤の上記クラスに含まれる好適な薬物、ならびに本発明の溶液におい使用される好適な濃度の記述である。理論によって限定されることを望まないが、様々なクラスの薬剤の選択を裏付け、これらの薬剤を効果のあるものすると考えられる根拠もまた示される。
【０１１３】
Ａ．セロトニンレセプターアンタゴニスト
セロトニン（５−ＨＴ）は、末梢での侵害受容性ニューロンにおけるセロトニン２（５−ＨＴ２）レセプターおよび／またはセロトニン３（５−ＨＴ３）レセプターを刺激することによって痛みを生じさせていると考えられる。ほとんどの研究者は、末梢の侵害レセプターにおける５−ＨＴ３レセプターが、５−ＨＴによってもたらされる即時的な痛み感覚を媒介していることで一致している（Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ他、１９８５）。５−ＨＴにより誘導される痛みを阻害することに加えて、５−ＨＴ３レセプターアンタゴニストはまた、侵害レセプターの活性化を阻害することによって神経原性の痛みを阻害し得る。Ｂａｒｎｅｓ  Ｐ．Ｊ．他、“Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｇｅｎｉｃ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｎｏｖｅｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｉｓｅａｓｅ”、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １１：１８５〜１８９（１９９０）。しかしながら、ラットの足関節における研究では、５−ＨＴ２レセプターが５−ＨＴによる侵害レセプターに関わっていることが主張される。Ｇｒｕｂｂ、Ｂ．Ｄ．他、“Ａ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ５−ＨＴ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  Ａｆｆｅｒｅｎｔ  Ｎｅｒｖｅｓ  Ｌｏｃａｔｅｄ  ｉｎ  Ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｅｄ  Ｒａｔ  Ａｎｋｌｅ  Ｊｏｉｎｔｓ”、Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ２５：２１６〜１８（１９８８）。従って、５−ＨＴ２レセプターの活性化はまた、末梢の痛みおよび神経原性の炎症において役割を果たしているかもしれない。
【０１１４】
本発明の溶液の目的の１つは、痛み、および多数の炎症プロセスを阻止することである。従って、５−ＨＴ２レセプターおよび５−ＨＴ３レセプターのアンタゴニストはともに、下記に記載されるように、本発明の溶液において、個々に、または一緒のいずれでも好適に使用される。アミトリプチリン（Ｅｌａｖｉｌ（商標））は、本発明において使用される好適な５−ＨＴ２レセプターアンタゴニストである。アミトリプチリンは、抗うつ剤として長年にわたって臨床的に使用されてきており、ある種の慢性痛患者において有益な効果を有することが見出されている。メトクロプラミド（Ｒｅｇｌａｎ（商標））は制吐薬として臨床的に使用されているが、５−ＨＴ３レセプターについて中程度の親和性を示し、このレセプターにおける５−ＨＴの作用を阻害することができ、これにより、血小板からの５−ＨＴ放出による痛みをおそらくは阻害する。従って、これもまた、本発明における使用のために好適である。
【０１１５】
他の好適な５−ＨＴ２レセプターアンタゴニストには、イミプラミン、トラゾドン、デシプラミンおよびケタンセリンが含まれる。ケタンセリンはその抗高血圧効果のために臨床的に使用されている。Ｈｅｄｎｅｒ，Ｔ．他、“Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  Ｎｅｗ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ，ｉｎ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ”、Ａｍ．Ｊ．ｏｆ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｔｉｏｎ、３１７ｓ〜２３ｓ頁（１９８８年７月）。他の好適な５−ＨＴ３レセプターアンタゴニストには、シサプリドおよびオンダンセトロンが含まれる。心臓血管溶液および一般的血管溶液はまた、セロトニン１Ｂ（これはまたセロトニン１Ｄβとして知られている）アンタゴニストを含有し得る。これは、セロトニンが、ヒトにおいてセロトニン１Ｂレセプターの活性化により著しい血管痙攣を生じさせることが知られているからである。Ｋａｕｍａｎｎ，Ａ．Ｊ．他、“Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎ  ｏｆ  ５−ＨＴ１−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ５−ＨＴ２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｓｏｌａｔｅｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉｅｓ”、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９０：１１４１〜５３（１９９４）。好適なセロトニン１Ｂレセプターアンタゴニストには、ヨヒンビン、Ｎ−［−メトキシ−３−（４−メチル−１−ピペラジニル）フェニル）−２’−メチル−４’−（５−メチル−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）［１，１−ビフェニル］−４−カルボキサミド（「ＧＲ１２７９３５」）およびメチオテピンが含まれる。本発明の溶液においてこれらの薬物を使用するための治療的濃度および好適な濃度が表５に示される。
【０１１６】
【表５】
2006508961.tif 000006
【０１１７】
Ｂ．セロトニンレセプターアゴニスト
５−ＨＴ１Ａレセプター、５−ＨＴ１Ｂレセプターおよび５−ＨＴ１Ｄレセプターは、アデニル酸シクラーゼ活性を阻害することが知られている。従って、これらのセロトニン１Ａレセプター、セロトニン１Ｂレセプターおよびセロトニン１Ｄレセプターのアゴニストの低い用量を溶液に含むことにより、痛みおよび炎症を媒介するニューロンが阻害されるはずである。同じ作用がセロトニン１Ｅレセプターおよびセロトニン１Ｆレセプターのアゴニストから予想される。これらのレセプターもまたアデニル酸シクラーゼを阻害するからである。
【０１１８】
ブスピロンは、本発明において使用される好適な１Ａレセプターアゴニストである。スマトリプタンは、１Ａ、１Ｂ、１Ｄおよび１Ｆの好適なレセプターアゴニストである。１Ｂおよび１Ｄの好適なレセプターアゴニストはジヒドロエルゴタミンである。好適な１Ｅレセプターアゴニストはエルゴノビンである。これらのレセプターアゴニストについての治療的濃度および好適な濃度が表６に示される。
【０１１９】
【表６】
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【０１２０】
Ｃ．ヒスタミンレセプターアンタゴニスト
ヒスタミンレセプターは、一般には、ヒスタミン１（Ｈ１）サブタイプおよびヒスタミン２（Ｈ２）サブタイプに分けられる。ヒスタミンの末梢投与に対する古典的な炎症応答はＨ１レセプターによって媒介される（Ｄｏｕｇｌａｓ、１９８５）。従って、本発明の溶液は、好ましくは、ヒスタミンＨ１レセプターアンタゴニストを含む。プロメタジン（Ｐｈｅｎｅｒｇａｎ（商標））は、Ｈ１レセプターを強力に阻止する一般的に使用されている制吐薬であり、本発明における使用のために好適である。興味深いことに、この薬物はまた、局所的な麻酔効果を有することが示されている。しかし、この効果のために必要な濃度は、Ｈ１レセプターを阻止するために必要な濃度よりも数桁も大きく、従って、その効果は異なる機構によって生じていると考えられる。溶液におけるヒスタミンレセプターアンタゴニストの濃度は、侵害レセプターの活性化に関与するＨ１レセプターを阻害するために十分であり、しかし、「局所的麻酔」効果を達成し、それにより、全身的副作用に関する問題を除くためには十分ではない。
【０１２１】
ヒスタミンレセプターはまた、冠状動脈の血管運動緊張を媒介することが知られている。ヒト心臓におけるインビトロ研究では、ヒスタミン１レセプターサブタイプが冠状動脈平滑筋の収縮を媒介することが明らかにされている。Ｇｉｎｓｂｕｒｇ，Ｒ．他、“Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  Ｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｙ  Ｓｐａｓｍ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇ  Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｖａｒｉａｎｔ  Ａｎｇｉｎａ  Ｐｅｃｔｏｒｉｓ”、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１０２：８１９〜８２２（１９８０）。いくつかの研究により、ヒト冠状動脈系におけるヒスタミン誘導による過収縮性が、アテローム性動脈硬化の状況および動脈内皮の関連した表皮剥脱では近位側動脈において最も顕著であることが示唆される。Ｋｅｉｔｏｋｕ，Ｍ．他、“Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  Ａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｘｉｍａｌ  ａｎｄ  Ｄｉｓｔａｌ  Ｈｕｍａｎ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ”、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２４：６１４〜６２２（１９９０）。従って、ヒスタミンレセプターアンタゴニストを心臓血管灌注溶液に含めることができる。
【０１２２】
他の好適なＨ１レセプターアンタゴニストには、テルフェナジン、ジフェンヒドラミン、アミトリプチリン、メピラミンおよびトリポリジンが含まれる。アミトリプチリンは、セロトニン２レセプターアンタゴニストとしてもまた効果的であるので、本発明において使用されたときには二重の機能を有する。これらのＨ１レセプターアンタゴニストのそれぞれについての好適な治療的濃度および好ましい濃度が表７に示される。
【０１２３】
【表７】
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【０１２４】
Ｄ．ブラジキニンレセプターアンタゴニスト
ブラジキニンレセプターは、一般には、ブラジキニン１（Ｂ１）サブタイプおよびブラジキニン２（Ｂ２）サブタイプに分けられる。研究では、ブラジキニンによりもたらされる急性の末梢の痛みおよび炎症がＢ２サブタイプによって媒介され、これに対して、慢性的炎症の状況におけるブラジキニン誘導による痛みがＢ１サブタイプによって媒介されることが示されている。Ｐｅｒｋｉｎｓ，Ｍ．Ｎ．他、“Ａｎｔｉｎｏｃｉｃｅｐｔｉｖｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  Ｂ１  ａｎｄ  Ｂ２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ，ｄｅｓ−Ａｒｇ９，［Ｌｅｕ８］−ＢＫ  ａｎｄ  ＨＯＥ  １４０，ｉｎ  Ｔｗｏ  Ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｒａｔ”、Ｐａｉｎ  ５３：１９１〜９７（１９９３）；Ｄｒａｙ，Ａ．他、“Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｐａｉｎ”、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：９９〜１０４（１９９３）、これらはそれぞれが本明細書により参考として特に組み込まれる。
【０１２５】
現在、ブラジキニンレセプターアンタゴニストは臨床的には使用されていない。これらの薬物はペプチド（小さいタンパク質）であり、従って、それらは消化されるので経口摂取することができない。Ｂ２レセプターに対するアンタゴニストは、ブラジキニンにより誘導される急性の痛みおよび炎症を阻止する（Ｄｒａｙ他、１９９３）。Ｂ１レセプターアンタゴニストは慢性の炎症状態における痛みを阻害する（Ｐｅｒｋｉｎｓ他、１９９３；Ｄｒａｙ他、１９９３）。従って、適用に依存して、本発明の溶液は、好ましくは、ブラジキニンＢ１レセプターアンタゴニストおよびブラジキニンＢ２レセプターアンタゴニストのいずれかまたは両方を含む。例えば、関節鏡検査が急性および慢性の両方の痛み症状のために行われ、従って、関節鏡検査のための灌注溶液はＢ１レセプターアンタゴニストおよびＢ２レセプターアンタゴニストの両方を含むことができる。
【０１２６】
本発明において使用される好適なブラジキニンレセプターアンタゴニストには、下記のブラジキニン１レセプターアンタゴニストが含まれる：Ｄ−Ａｒｇ−（Ｈｙｐ３−Ｔｈｉ５−Ｄ−Ｔｉｃ７−Ｏｉｃ８）−ＢＫの［ｄｅｓ−Ａｒｇ１０］誘導体（「ＨＯＥ１４０の［ｄｅｓ−Ａｒｇ１０］誘導体」、これはＨｏｅｃｈｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能である）；および［Ｌｅｕ８］ｄｅｓ−Ａｒｇ９−ＢＫ。好適なブラジキニン２レセプターアンタゴニストには、［Ｄ−Ｐｈｅ７］−ＢＫ；Ｄ−Ａｒｇ−（Ｈｙｐ３−Ｔｈｉ５，８−Ｄ−Ｐｈｅ７）−ＢＫ（「ＮＰＣ３４９」）；Ｄ−Ａｒｇ−（Ｈｙｐ３−Ｄ−Ｐｈｅ７）−ＢＫ（「ＮＰＣ５６７」）；およびＤ−Ａｒｇ−（Ｈｙｐ３−Ｔｈｉ５−Ｄ−Ｔｉｃ７−Ｏｉｃ８）−ＢＫ（「ＨＯＥ１４０」）。これらの化合物は、以前に組み込まれたＰｅｒｋｉｎｓ他（１９９３）およびＤｒａｙ他（１９９３）の参考文献においてより詳しく記載される。好適な治療的濃度および好ましい濃度が表８に示される。
【０１２７】
【表８】
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【０１２８】
Ｅ．カリクレインインヒビター
ペプチドのブラジキニンは、以前に記されたように、痛みおよび炎症の重要な媒介因子である。ブラジキニンは、血漿中における高分子量のキニノーゲン類に対するカリクレインの作用による切断産物として産生される。従って、カリクレインインヒビターは、ブラジキニンの産生、そしてその結果の痛みおよび炎症を阻害することにおいて治療的であると考えられる。本発明において使用される好適なカリクレインインヒビターはアプロチニンである。本発明の溶液において使用される好適な濃度が下記の表９に示される。
【０１２９】
【表９】
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【０１３０】
Ｆ．タキキニンレセプターアンタゴニスト
タキキニン（ＴＫ）類は、サブスタンスＰ、ニューロキニンＡ（ＮＫＡ）およびニューロキニンＢ（ＮＫＢ）を含む構造的に関連したペプチドのファミリーである。ニューロンは末梢におけるＴＫ類の主要な供給源である。ＴＫ類の重要な一般的な作用はニューロンの刺激であり、しかし、他の作用には、内皮依存的な血管拡張、血漿タンパク質の管外遊出、マスト細胞の呼び寄せ、ならびに炎症性細胞の脱顆粒化および刺激が含まれる。Ｍａｇｇｉ，Ｃ．Ａ．、Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：１〜２４（１９９１）。ＴＫレセプターの活性化により媒介される生理学的作用の上記組合せのために、ＴＫレセプターを標的化することは痛覚消失の促進および神経原性炎症の処置のための妥当な方法である。
【０１３１】
１．ニューロキニン１レセプターサブタイプアンタゴニスト
サブスタンスＰは、ＮＫ１と呼ばれるニューロキニンレセプターサブタイプを活性化する。サブスタンスＰは、感覚神経の終端に存在するウンデカペプチドである。サブスタンスＰは、Ｃ線維活性化の後、末梢において炎症および痛みを生じさせる多数の作用（これらには、血管拡張、血漿管外遊出、およびマスト細胞の脱顆粒化が含まれる）を有することが知られている。Ｌｅｖｉｎｅ，Ｊ．Ｄ．他、“Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｒｉｍａｒｙ  Ａｆｆｅｒｅｎｔ  Ｎｏｃｉｃｅｐｔｏｒ”、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１３：２２７３（１９９３）。好適なサブスタンスＰアンタゴニストは（［Ｄ−Ｐｒｏ９［スピロ−γ−ラクタム］Ｌｅｕ１０，Ｔｒｐ１１］フィザレミン−（１−１１）（「ＧＲ８２３３４」）である。ＮＫ１レセプターに対して作用する本発明において使用される他の好適なアンタゴニストには、１−イミノ−２−（２−メトキシ−フェニル）エチル）−７，７−ジフェニル−４−ペルヒドロイソインドロン（３ａＲ，７ａＲ）（「ＲＰ６７５８０」）および２Ｓ，３Ｓ−ｃｉｓ−３−（２−メトキシベンジルアミノ）−２−ベンズヒドリルキヌクリジン（「ＣＰ９６，３４５」）がある。これらの薬剤についての好適な濃度が表１０に示される。
【０１３２】
【表１０】
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【０１３３】
２．ニューロキニン２レセプターサブタイプアンタゴニスト
ニューロキニンＡは、感覚ニューロンにおいてサブスタンスＰと同時局在化するペプチドであり、このペプチドもまた炎症および痛みを促進させる。ニューロキニンＡは、ＮＫ２と呼ばれる特異的なニューロキニンレセプターを活性化する。Ｅｄｍｏｎｄｓ−Ａｌｔ，Ｓ．他、“Ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎ  Ａ（ＮＫ２）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ”、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．５０：ＰＬ１０１（１９９２）。尿路において、ＴＫ類は、ヒトの尿道および尿管だけでなく、ヒト膀胱においてＮＫ２レセプターのみを介して作用する強力な痙攣原物質である。Ｍａｇｇｉ，Ｃ．Ａ．、Ｇｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：１〜２４（１９９１）。従って、泌尿器学的処置において使用される外科用溶液に含まれる所望の薬物は、痙攣を低下させるために、ＮＫ２レセプターに対するアンタゴニストを含有する。好適なＮＫ２アンタゴニストの例には、（（Ｓ）−Ｎ−メチル−Ｎ−［４−（４−アセチルアミノ−４−フェニルピペリジノ）−２−（３，４−ジクロロフェニル）ブチル］ベンゾアミド（「（±）−ＳＲ４８９６８」）；Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ（「Ｍｅｎ１０，６２７」）；およびｃｙｃ（Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ）（「Ｌ６５９，８７７」）が含まれる。これらの薬剤の好適な濃度が表１１に示される。
【０１３４】
【表１１】
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【０１３５】
Ｇ．ＣＧＲＰレセプターアンタゴニスト
カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）は、これもまた感覚ニューロンにおいてサブスタンスＰと同時局在化するペプチドであり、このペプチドは血管拡張剤として作用し、また、サブスタンスＰの作用を強化する。Ｂｒａｉｎ，Ｓ．Ｄ．他、“Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｏｅｄｅｍａ  Ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  Ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ  Ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ  Ｇｅｎｅ−Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ（ＣＧＲＰ）ａｎｄ  Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ”、Ｂｒ．Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．９９：２０２（１９８５）。好適なＣＧＲＰレセプターアンタゴニストの一例がα−ＣＧＲＰ−（８−３７）（ＣＧＲＰの短縮型形態）である。このポリペプチドはＣＧＲＰレセプターの活性化を阻害する。この薬剤についての好適な濃度が表１２に示される。
【０１３６】
【表１２】
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【０１３７】
Ｈ．インターロイキンレセプターアンタゴニスト
インターロイキン類は、炎症性媒介因子に応答して白血球および他の細胞によって産生される、サイトカインとして分類されるペプチドのファミリーである。インターロイキン（ＩＬ）類は末梢的には強力な感覚過敏性因子であり得る。Ｆｅｒｒｉｅｒａ，Ｓ．Ｈ．他、“Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１β  ａｓ  ａ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉｃ  Ａｇｅｎｔ  Ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｄ  ｂｙ  ａ  Ｔｒｉｐｅｐｔｉｄｅ  Ａｎａｌｏｇｕｅ”、Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：６９８（１９８８）。好適なＩＬ−１βレセプターアンタゴニストの一例がＬｙｓ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒであり、これはＩＬ−１βの短縮型形態である。このトリペプチドはＩＬ−１βレセプターの活性化を阻害する。この薬剤についての好適な濃度が表１３に示される。
【０１３８】
【表１３】
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【０１３９】
Ｉ．アラキドン酸代謝産物についての合成経路において活性な酵素のインヒビター
１．ホスホリパーゼインヒビター
ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）によるアラキドン酸の産生は、エイコサノイドとして知られている数多くの炎症媒介因子を産生する一連の反応において生じる。阻害することができ、それにより、これらの炎症性媒介因子の産生を減少させることができる数多くの段階がこの経路全体には存在する。これらの様々な段階における阻害の例が下記に示される。
【０１４０】
酵素ＰＬＡ２アイソフォームの阻害により、細胞膜からのアラキドン酸の放出が阻害され、従って、プロスタグランジン類およびロイコトリエン類の産生が阻害され、これにより、低下した炎症および痛みがもたらされる。Ｇｌａｓｅｒ，Ｋ．Ｂ．他、“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ  Ａ２  Ｅｎｚｙｍｅｓ：Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ”、Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２：３１（１９９５）。好適なＰＬＡ２アイソフォームインヒビターの一例がマノアリドである。この薬剤についての好適な濃度が表１４に示される。ホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）アイソフォームの阻害もまた、プロスタノイド類およびロイコトリエン類の低下した産生をもたらし、従って、低下した痛みおよび炎症をもたらす。ＰＬＣγアイソフォームインヒビターの一例が１−［６−（（１７β−３−メトキシエストラ−１，３，５（１０）−トリエン−１７−イル）アミノ）ヘキシル］−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオンである。
【０１４１】
【表１４】
2006508961.tif 000015
【０１４２】
２．シクロオキシゲナーゼインヒビター
様々な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、抗炎症剤、解熱剤、抗血栓剤および鎮痛剤として広く使用されている。Ｌｅｗｉｓ，Ｒ．Ａ．他、“Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ａｎｄ  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ”、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、第３版（Ｋｅｌｌｅｙ  Ｗ．Ｎ．他編）、２５８頁（１９８９）。これらの薬物に対する分子標的はＩ型およびＩＩ型のシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−１およびＣＯＸ−２）である。これらの酵素は、プロスタグランジンＨ合成酵素（ＰＧＨＳ）−１（構成的）およびプロスタグランジンＨ合成酵素（ＰＧＨＳ）−２（誘導型）としてもまた知られており、プロスタグランジン類およびトロンボキサン類の生合成における中間体であるプロスタグランジンＨへのアラキドン酸の変換を触媒する。ＣＯＸ−２酵素が、内皮細胞、マクロファージおよび線維芽細胞において同定されている。この酵素はＩＬ−１およびエンドトキシンによって誘導され、その発現は炎症部位においてアップレギュレーションされる。ＣＯＸ−１の構成的活性およびＣＯＸ−２の誘導された活性はともに、痛みおよび炎症に寄与するプロスタグランジン類の合成を生じさせる。
【０１４３】
現在市場にあるＮＳＡＩＤ（ジクロフェナク、ナプロキセン、インドメタシン、イブプロフェンなど）は、一般にはＣＯＸの両方のアイソフォームの非選択的なインヒビターであり、しかし、その比率は化合物毎に異なるが、ＣＯＸ−１について、ＣＯＸ−２よりも大きな選択性を示し得る。プロスタグランジン類の形成を阻止するための、ＣＯＸ−１インヒビターおよびＣＯＸ−２インヒビターの使用は、プロスタノイドレセプターの７つの記載されたサブタイプとの天然リガンドの相互作用を阻止しようとする試みよりも良好な治療的取り組みを表している。エイコサノイドレセプター（ＥＰ−１、ＥＰ−２およびＥＰ−３）の報告されたアンタゴニストは極めて希であり、トロンボキサンＡ２レセプターの特異的な高親和性アンタゴニストのみが報告されているにすぎない。Ｗａｌｌａｃｅ，Ｊ．およびＣｉｒｉｎｏ，Ｇ．、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１５：４０５〜４０６（１９９４）。
【０１４４】
シクロオキシゲナーゼインヒビターの経口使用、静脈内使用または筋肉内使用は、潰瘍疾患、胃炎または腎臓障害を有する患者では禁忌である。米国では、このクラスの薬物の唯一利用可能な形態は、Ｓｙｎｔｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なケトロラック（Ｔｏｒａｄｏｌ（商標））であり、これは、従来、手術後の患者において筋肉内または静脈内で使用されており、しかし、再度ではあるが、上記カテゴリーの患者については禁忌である。周術期に現在使用されているよりも実質的に低い投薬量での溶液におけるケトロラックまたは任意の他のシクロオキシゲナーゼインヒビターの使用は、他の場合には禁忌である患者におけるこの薬物の使用を可能にし得る。シクロオキシゲナーゼインヒビターを本発明の溶液に添加することにより、関節鏡検査または他の治療的処置もしくは診断的処置の時における痛みおよび炎症の発生を阻害するための異なった機構が加えられる。
【０１４５】
本発明において使用される好ましいシクロオキシゲナーゼインヒビターはケトロラックおよびインドメタシンである。これら２つの薬剤のうち、インドメタシンは、比較的大きい投薬量が要求されるのであまり好ましくない。溶液において使用される治療的濃度および好ましい濃度が表１５に示される。
【０１４６】
【表１５】
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【０１４７】
３．リポオキシゲナーゼインヒビター
酵素リポキシゲナーゼの阻害により、炎症および痛みの重要な媒介因子であることが知られているロイコトリエンＢ４などのロイコトリエン類の産生が阻害される。Ｌｅｗｉｓ，Ｒ．Ａ．、“Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ａｎｄ  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ”、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、第３版（Ｋｅｌｌｅｙ  Ｗ．Ｎ．他編）、２５８頁（１９８９）。５−リポオキシゲナーゼアンタゴニストの一例が２，３，５−トリメチル−６−（１２−ヒドロキシ−５，１０−ドデカジイニル）−１，４−ベンゾキノン（「ＡＡ８６１」）であり、それについての好適な濃度が表１６に示される。
【０１４８】
【表１６】
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【０１４９】
Ｊ．プロスタノイドレセプターアンタゴニスト
アラキドン酸の代謝産物として産生される特異的なプロスタノイド類は、プロスタノイドレセプターの活性化を介してそれらの炎症性作用を媒介する。特異的なプロスタノイドアンタゴニストの様々なクラスの例には、エイコサノイドＥＰ−１レセプターサブタイプアンタゴニスト、エイコサノイドＥＰ−４レセプターサブタイプアンタゴニスト、およびトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストがある。好適なプロスタグランジンＥ２レセプターアンタゴニストは８−クロロジベンゾ［ｂ，ｆ］［１，４］オキサゼピン−１０（１１Ｈ）−カルボン酸の２−アセチルヒドラジド（「ＳＣ１９２２０」）である。好適なトロンボキサンレセプターサブタイプアンタゴニストは［１５−［１α，２β（５Ｚ），３β，４α］−７−［３−［２−（フェニルアミノ）カルボニル］ヒドラジノ］メチル］−７−オキソビシクロ−２，２，１］−ヘプタ−２−イル］−５−ヘプタン酸（「ＳＱ２９５４８」）である。これらの薬剤についての好適な濃度が表１７に示される。
【０１５０】
【表１７】
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【０１５１】
Ｋ．ロイコトリエンレセプターアンタゴニスト
ロイコトリエン類（ＬＴＢ４、ＬＴＣ４およびＬＴＤ４）は、酵素的に生じ、重要な生物学的性質を有する、アラキドン酸代謝の５−リポオキシゲナーゼ経路の産物である。ロイコトリエン類は、炎症を含む数多くの病理学的状態に関係している。特異的なアンタゴニストが、現在、これらの病理における潜在的な治療的介入のために多くの製薬企業によって探し求められている。Ｈａｌｕｓｈｋａ，Ｐ．Ｖ．他、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２９：２１３〜２３９（１９８９）；Ｆｏｒｄ−Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ，Ａ．、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：１〜１２（１９９０）。ＬＴＢ４レセプターが、好酸球および好中球を含むある種の免疫細胞において見出されている。これらのレセプターに対するＬＴＢ４の結合は、走化性およびリソソーム酵素の放出をもたらし、それにより、炎症プロセスに寄与している。ＬＴＢ４レセプターの活性化に関連するこのシグナル伝達プロセスは、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）代謝のＧタンパク質媒介による刺激、および細胞内カルシウムの上昇を伴う（図２を参照のこと）。
【０１５２】
好適なロイコトリエンＢ４レセプターアンタゴニストの一例がＳＣ（＋）−（Ｓ）−７−（３−（２−（シクロプロピルメチル）−３−メトキシ−４−［（メチルアミノ）カルボニル］フェノキシ（プロポキシ）−３，４−ジヒドロ−８−プロピル−２Ｈ−１−ベンゾピラン−２−プロパン酸（「ＳＣ５３２２８」）である。本発明の実施のために好適であるこの薬剤についての濃度が表１８に示される。他の好適なロイコトリエンＢ４レセプターアンタゴニストには、［３−［−２（７−クロロ−２−キノリニル）エテニル］フェニル］［［３−（ジメチルアミノ−３−オキソプロピル）チオ］メチル］チオプロパン酸（「ＭＫ０５７１」）、ならびにＬＹ６６，０７１およびＩＣＩ２０，３２１９の薬物が含まれる。ＭＫ０５７１はＬＴＤ４レセプターサブタイプアンタゴニストとしてもまた作用する。
【０１５３】
【表１８】
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【０１５４】
Ｌ．オピオイドレセプターアゴニスト
オピオイドレセプターの活性化は侵害受容防止効果をもたらし、従って、これらのレセプターに対するアゴニストは望ましい。オピオイドレセプターには、μ、δおよびκのオピオイドレセプターサブタイプが含まれる。μ−レセプターが末梢における感覚ニューロン終端に存在し、このレセプターの活性化により、感覚ニューロンの活性が阻害される。Ｂａｓｂａｕｍ，Ａ．Ｉ．他、“Ｏｐｉａｔｅ  Ａｎａｌｇｅｓｉａ：Ｈｏｗ  Ｃｅｎｔｒａｌ  ｉｓ  ａ  Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  Ｔａｒｇｅｔ？”、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：１１６８（１９９１）。δ−レセプターおよびκ−レセプターが交感神経の遠心性終端に存在し、これらはプロスタグランジン類の放出を阻害し、それにより痛みおよび炎症を阻害する。Ｔａｉｗｏ，Ｙ．Ｏ．他、“Ｋａｐｐａ−  ａｎｄ  Ｄｅｌｔａ−Ｏｐｉｏｉｄｓ  Ｂｌｏｃｋ  Ｓｙｍｐａｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ  Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  Ｈｙｐｅｒａｌｇｅｓｉａ”、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１：９２８（１９９１）。これらのオピオイドレセプターサブタイプはＧタンパク質共役レセプタースーパーファミリーのメンバーである。従って、すべてのオピオイドレセプターアゴニストは相互作用し、それらの同族Ｇタンパク質共役レセプターを介するシグナル伝達を開始させる（図３および図７を参照のこと）。好適なμ−レセプターアゴニストの例には、フェンタニルおよびＴｒｙ−Ｄ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−［Ｎ−ＭｅＰｈｅ］−ＮＨ（ＣＨ２）−ＯＨ（「ＤＡＭＧＯ」）がある。好適なδ−レセプターアゴニストの一例が［Ｄ−Ｐｅｎ２，Ｄ−Ｐｅｎ５］エンケファリン（「ＤＰＤＰＥ」）である。好適なκ−レセプターアゴニストの一例が例は（ｔｒａｎｓ）−３，４−ジクロロ−Ｎ−メチル−Ｎ−［２−（１−プロリジニル）シクロヘキシル］ベンゼンアセトアミド（［Ｕ５０，４８８］）である。これらの薬剤のそれぞれについての好適な濃度が表１９に示される。
【０１５５】
【表１９】
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【０１５６】
Ｍ．プリンレセプターのアンタゴニストおよびアゴニスト
細胞外のＡＴＰは、Ｐ２プリンレセプターとの相互作用を介してシグナル伝達分子として作用する。プリンレセプターの主要なクラスの１つがＰ２Ｘプリンレセプターであり、これは、Ｎａ＋、Ｋ＋およびＣａ２＋に対して透過性である固有的なイオンチャネルを備えるリガンド依存性イオンチャネルである。感覚ニューロンにおいて記載されるＰ２Ｘプリンレセプターは、一次の求心性の神経伝達および侵害受容のために重要である。ＡＴＰは、感覚ニューロンを脱分極することが知られており、また、損傷を受けた細胞から放出されたＡＴＰがＰ２Ｘプリンレセプターを刺激し、これにより侵害受容性の神経線維終端の脱分極を生じさせるので、侵害レセプターの活性化において役割を果たしている。Ｐ２Ｘ３レセプターは、非常に限定された分布を有する（Ｃｈｅｎ，Ｃ．Ｃ．他、Ｎａｔｕｒｅ  ３７７：４２８〜４３１（１９９５））。これは、Ｐ２Ｘ３レセプターが、脊髄に至る感覚Ｃ線維神経において選択的に発現し、また、これらのＣ線維の多くが、有痛性の刺激に対するレセプターを有することが知られているからである。従って、Ｐ２Ｘ３レセプターサブユニットについての発現の非常に限定された局在化は、これらのサブタイプを、痛覚消失作用のための優れた標的とする（図３および図７を参照のこと）。
【０１５７】
本発明において使用される、Ｐ２Ｘ／ＡＴＰプリンレセプターの好適なアンタゴニストには、例として、スラミンおよびピリドキシルホスファート−６−アゾフェニル−２，４−ジスルホン酸（「ＰＰＡＤＳ」）がある。これらの薬剤についての好適な濃度が表２０に示される。
【０１５８】
Ｐ２Ｙレセプター（Ｇタンパク質共役レセプター）のアゴニストは、細胞内カルシウムのその後の増大を伴って、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）レベルの上昇により平滑筋の弛緩を生じさせることが知られている。Ｐ２Ｙレセプターアゴニストの一例が２−ｍｅ−Ｓ−ＡＴＰである。
【０１５９】
【表２０】
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【０１６０】
Ｎ．アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）感受性カリウムチャネル開口剤
様々なＡＴＰ感受性カリウムチャネルが、血管および血管以外の平滑筋ならびに脳を含む数多くの組織において発見されている。放射能標識リガンドを使用した研究により、その存在が確認されている。これらのチャネルが開くことにより、カリウム（Ｋ＋）の流出が引き起こされ、細胞膜は過分極する（図２を参照のこと）。この過分極は、電位依存性カルシウム（Ｃａ２＋）チャネルおよびレセプター作動型Ｃａ２＋チャネルの阻害により細胞内の遊離カルシウムの低下を誘導する。これらの組み合わさった作用により、細胞（例えば、平滑筋細胞）は、弛緩した状態、または、活性化に対してより抵抗性である、血管平滑筋細胞の場合には血管弛緩を生じさせる状態にさせられる。様々なＫ＋チャネル開口剤（ＫＣＯ）が、強力な抗高血圧活性をインビボで有し、かつ、血管弛緩活性をインビトロで有するとして特徴づけられている（図４を参照のこと）。Ｋ＋チャネル開口剤（ＫＣＯ）はまた、刺激に共役した分泌を妨げることが示されており、接合部前のニューロンレセプターに対して作用すると考えられ、従って、神経刺激および炎症性媒介因子の放出による様々な作用を阻害する。Ｑｕａｓｔ，Ｕ．他、“Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ  Ｃｈａｎｎｅｌ  Ｏｐｅｎｅｒｓ  ｉｎ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｍｏｏｔｈ  Ｍｕｓｃｌｅ”、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２８：８０５〜８１０（１９９４）。
【０１６１】
エンドセリン（ＥＴＡ）アンタゴニストとＡＴＰ感受性カリウムチャネルの開口剤（ＫＣＯ）との間での相乗的な相互作用が、血管弛緩または平滑筋弛緩を達成する際に予想される。二重使用のための理論的根拠が、これらの薬物は、平滑筋の弛緩および血管痙攣の防止を促進することにおいて異なる分子的作用機構を有するという事実に基づいている。ＥＴＡレセプターにより誘導される平滑筋細胞における最初の細胞内カルシウム上昇は、続いて、電位依存性チャネルの活性化、および、収縮のために要求される細胞外カルシウムの進入を開始させる。ＥＴＡレセプターのアンタゴニストはこのレセプター媒介の作用を特異的に阻止するが、筋肉細胞における他のＧタンパク質共役レセプターの活性化により開始されたカルシウムの増大は阻止しない。
【０１６２】
カリウムチャネル開口剤薬物（例えば、ピナシジルなど）はこれらのチャネルを開口させ、Ｋ＋流入および細胞膜の過分極を生じさせる。この過分極は、他のレセプターにより媒介される収縮を下記の機構によって低下させるように作用する：（１）過分極は、Ｌ型またはＴ型のカルシウムチャネルを開口させる可能性を低下させることによる電位依存性Ｃａ２＋チャネルの阻害により細胞内の遊離カルシウムの低下を誘導する；（２）過分極は、イノシトール三リン酸（ＩＰ３）形成の阻害によって、細胞内の供給源からのアゴニスト誘導による（レセプター作動型チャネル）Ｃａ２＋放出を抑制する；および（３）過分極は、収縮タンパク質の活性化因子としてのカルシウムの効率を低下させる。その結果として、これら２つのクラスの薬物の組み合わさった作用により、標的細胞は、弛緩した状態、または、活性化に対してより抵抗性である状態にさせられる。
【０１６３】
本発明の実施のための好適なＡＴＰ感受性Ｋ＋チャネル開口剤には、（−）ピナシジル；クロマカリム；ニコランジル；ミノキシジル；Ｎ−シアノ−Ｎ’−［１，１−ジメチル−［２，２，３，３−３Ｈ］プロピル］−Ｎ”−（３−ピリジニル）グアニジン（「Ｐ１０７５」）；およびＮ−シアノ−Ｎ’−（２−ニトロキシエチル）−３−ピリジンカルボキシミドアミド・モノメタンスルホナート（「ＫＲＮ２３９１」）が含まれる。これらの薬剤についての濃度が表２１に示される。
【０１６４】
【表２１】
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【０１６５】
ＩＩＩ．抗痙攣剤
Ａ．多機能性薬剤
上記で記載された痛み防止剤／抗炎症剤のいくつかは、血管収縮または平滑筋痙攣を阻害するためにもまた役立つ。そのため、これらの薬剤はまた、抗痙攣剤の機能を果たし、従って、血管適用および泌尿器学的適用において有益に使用される。抗痙攣剤としてもまた役立つ抗炎症剤／痛み防止剤には、セロトニンレセプターアンタゴニスト（特にセロトニン２アンタゴニスト）、タキキニンレセプターアンタゴニスト、およびＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤が含まれる。
【０１６６】
Ｂ．一酸化窒素供与体
一酸化窒素供与体を、特にその抗痙攣活性のために、本発明の溶液に含めることができる。一酸化窒素（ＮＯ）は、血管拡張および正常な血管緊張の調節を含む多くの生理学的プロセスの分子状媒介因子として非常に重要な役割を果たしている。内皮細胞内では、ＮＯ合成酵素（ＮＯＳ）として知られている酵素により、Ｌ−アルギニンからＮＯへの変換が触媒され、このＮＯが拡散性の二次メッセンジャーとして作用し、隣接する平滑筋細胞における応答を媒介する（図８を参照のこと）。ＮＯは、基礎的な状態のもとでは血管内皮細胞によって継続的に形成および放出され、収縮を阻害し、また、基礎的な冠状動脈緊張を制御し、様々なアゴニスト（例えば、アセチルコリンなど）および他の内皮依存性の血管拡張剤に応答して内皮において産生される。従って、ＮＯ合成酵素活性の調節およびその結果のＮＯレベルは、血管緊張を制御する重要な分子標的である（図８を参照のこと）。Ｍｕｒａｍａｔｓｕ，Ｋ．他、Ｃｏｒｏｎ．Ａｒｔｅｒｙ  Ｄｉｓ．５：８１５〜８２０（１９９４）。
【０１６７】
ＮＯ供与体と、ＡＴＰ感受性カリウムチャネルの開口剤（ＫＣＯ）との間での相乗的な相互作用が、血管弛緩または平滑筋弛緩を達成するために予想される。二重使用のための理論的根拠が、これらの薬物は、平滑筋の弛緩および血管痙攣の防止を促進することにおいて異なる分子的作用機構を有するという事実に基づいている。バソプレシン、アンギオテンシンＩＩおよびエンドセリンの血管収縮剤はすべてがプロテインキナーゼＡの阻害によりＫＡＴＰ電流を阻害するという証拠が、培養された冠状動脈平滑筋細胞から得られている。また、膀胱平滑筋におけるＫＡＴＰ電流がムスカリン様アゴニストによって阻害されることが報告されている。平滑筋の弛緩を媒介する際のＮＯの作用が、プロテインキナーゼＧを伴う（上記の）独立した分子経路を介して生じる（図８を参照のこと）。このことは、これら２つのクラスの薬剤の組合せは、平滑筋を弛緩させることにおいて、１つだけのクラスの薬剤を単独で用いることよりも大きい効力を有することを示唆している。
【０１６８】
本発明の実施のための好適な一酸化窒素供与体には、ニトログリセリン、ナトリウムニトロプルシド、薬物ＦＫ４０９、ＦＲ１４４４２０、３−モルホリノシドノンイミンまたはリンシドミンクロロヒドラート（「ＳＩＮ−１」）、およびＳ−ニトロソ−Ｎ−アセチルペニシラミン（「ＳＮＡＰ」）が含まれる。これらの薬剤についての濃度が表２２に示される。
【０１６９】
【表２２】
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【０１７０】
Ｃ．エンドセリンレセプターアンタゴニスト
エンドセリンは、知られている最も強力な血管収縮剤の１つである２１アミノ酸ペプチドである。３つの異なるヒトエンドセリンペプチド（これらは、ＥＴ−１、ＥＴ−２およびＥＴ−３と名付けられている）が記載されており、これらは、ＥＴＡレセプターおよびＥＴＢレセプターと呼ばれる少なくとも２つのレセプターサブタイプを介してその生理学的作用を媒介している。心臓および血管の平滑筋は主にＥＴＡレセプターを含有し、このサブタイプはこれらの組織における収縮に関係している。さらに、ＥＴＡレセプターは、多くの場合、単離された平滑筋調製物における収縮応答を媒介することが見出されている。ＥＴＡレセプターのアンタゴニストは、ヒト冠状動脈収縮の強力なアンタゴニストであることが見出されている。従って、ＥＴＡレセプターに対するアンタゴニストは、冠状動脈の血管痙攣の周術期阻害において治療的に有益であるはずであり、さらには、泌尿器学的適用における平滑筋収縮の阻害において有用であり得る。Ｍｉｌｌｅｒ，Ｒ．Ｃ．他、Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１４：５４〜６０（１９９３）。
【０１７１】
好適なエンドセリンレセプターアンタゴニストには、ｃｙｃｌｏ（Ｄ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ）（「ＢＱ１２３」）；（Ｎ，Ｎ−ヘキサメチレン）−カルバモイル−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ−（ＣＨＯ）−Ｄ−Ｔｒｐ−ＯＨ（「ＢＱ６１０」）；（Ｒ）２−（［Ｒ−２−［（ｓ）−２−（［１−ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピニル］カルボニル］アミノ−４−メチルペンタノイル］アミノ−３−（３［１−メチル−１Ｈ−インドリル］）プロピオニルアミノ−３（２−ピリジル）プロピオン酸（「ＦＲ１３９３１７」）；ｃｙｃｌｏ（Ｄ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ）（「ＪＫＣ３０１」）；ｃｙｃｌｏ（Ｄ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ｔｒｐ）（「ＪＫ３０２」）；５−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（３，４−ジメチル−５−イソオキサゾリル）−１−ナフタレンスルホンアミド（「ＢＭＳ１８２８７４」）；およびＮ−［１−ホルミル−Ｎ−［Ｎ−［（ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−１−イル）カルボニル］−Ｌ−ロイシル］−Ｄ−トリプトフフィル］−Ｄ−トリプトファン（「ＢＱ６１０」）が含まれる。これらの薬剤の代表的な３つについての濃度が表２３に示される。
【０１７２】
【表２３】
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【０１７３】
Ｄ．ＣＡ２＋チャネルアンタゴニスト
カルシウムチャネルアンタゴニストは、神経炎症を媒介する細胞応答の活性化のために要求されるカルシウムイオンの膜横断流束を妨害する薬物の異なった一群である。血小板内および白血球内へのカルシウム進入は、これらの細胞における応答の活性化を媒介する重要な事象である。さらに、神経炎症シグナル伝達経路を媒介することにおけるブラジキニンレセプターおよびニューロキニンレセプター（ＮＫ１およびＮＫ２）の役割には、細胞内カルシウムの増大が含まれ、従って、形質膜におけるカルシウムチャネルの活性化がもたらされる。多くの組織において、カルシウムチャネルアンタゴニスト（例えば、ニフェジピンなど）は、様々な刺激によって誘発されるアラキドン酸、プロスタグランジン類およびロイコトリエン類の放出を低下させ得る。Ｍｏｎｃａｄａ，Ｓ．、Ｆｌｏｗｅｒ，Ｒ．およびＶａｎｅ，Ｊ．、Ｇｏｏｄｍａｎ’ｓ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第７版）、ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌ．Ｉｎｃ．、６６０〜５頁（１９９５）。
【０１７４】
カルシウムチャネルアンタゴニストはまた、収縮のために血管平滑筋によって要求されるカルシウムイオンの膜横断流束を妨害する。この作用が、処置時の周術期におけるカルシウムチャネルアンタゴニストの使用のための理論的根拠となっており、この場合、その目標は、血管痙攣を緩和することであり、また、平滑筋の弛緩を促進することである。ニソルジピンを含むジヒドロピリジン系化合物は、カルシウムチャネルのＬ型サブタイプの電位依存性ゲート開閉の特異的なインヒビター（アンタゴニスト）として作用する。心臓手術時におけるカルシウムチャネルアンタゴニストのニフェジピンの全身投与が、以前には、冠状動脈の血管痙攣を防止または最小限にするために利用されている。Ｓｅｉｔｅｌｂｅｒｇｅｒ，Ｒ．他、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８３：４６０〜４６８（１９９１）。
【０１７５】
カルシウムチャネルアンタゴニストは、本発明において有用な抗痙攣剤の１つあり、本発明の他の薬剤と組み合わせられたとき、相乗的な効果を示す。カルシウム（Ｃａ２＋）チャネルアンタゴニストおよび一酸化窒素（ＮＯ）供与体は、血管弛緩または平滑筋弛緩を達成する際に、すなわち、痙攣活性を阻害する際に相互作用する。二重使用のための理論的根拠が、これら２つのクラスの薬物は異なる分子的作用機構を有し、単独で使用されたとき、弛緩を達成することにおいて完全に効果的でないことがあり、また、有効性の期間が異なり得るという事実に基づいている。実際、カルシウムチャネルアンタゴニストは単独では、レセプターアゴニストで事前に収縮させられた血管筋肉の完全な弛緩を達成することができないことを示す数多くの研究が存在する。
【０１７６】
内胸動脈（ＩＭＡ）の痙攣に対するニソルジピンの作用は、単独で使用された場合、および、ニトログリセリンとの組合せで使用された場合において、これら２つの薬物の組合せにより、収縮の防止において大きい正の相乗的な効果がもたらされたことを示した（Ｌｉｕ他、１９９４）。これらの研究が、効き目のある血管痙攣防止および平滑筋弛緩のためにカルシウムチャネルアンタゴニストおよび一酸化窒素（ＮＯ）供与体を組み合わせるための科学的基礎となっている。心筋虚血または冠状動脈血管痙攣を防止および処置するための心臓手術時におけるニトログリセリンおよびニフェジピンの全身投与の様々な例が報告されている（Ｃｏｈｅｎ他、１９８３；Ｓｅｉｔｅｌｂｅｒｇｅｒ他、１９９１）。
【０１７７】
カルシウムチャネルアンタゴニストはまた、エンドセリンレセプターサブタイプＡ（ＥＴＡ）アンタゴニストとの相乗的な効果を示す。Ｙａｎａｇｉｓａｗａおよび共同研究者らは、ジヒドロピリジン系アンタゴニストがＥＴ−１（冠状動脈平滑筋におけるＥＴＡレセプターでの内因性アゴニスト）の作用を阻止したことを観測し、従って、ＥＴ−１は電位感受性カルシウムチャネルの内因性アゴニストであることを推測した。ＥＴＡレセプターの活性化により誘導される平滑筋細胞における細胞内カルシウム上昇の持続期は細胞外のカルシウムを要求し、また、ニカルジピンによって少なくとも部分的に阻止されることが見出されている。従って、カルシウムチャネルアンタゴニストを含めることは、外科用溶液において組み合わせられたとき、ＥＴＡアンタゴニストの作用を相乗的に高めることが予想される。
【０１７８】
カルシウムチャネルアンタゴニストおよびＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤は同様に相乗的な効果を示す。ＡＴＰ感受性であるカリウムチャネル（ＫＡＴＰ）は、細胞の膜電位をアデノシンヌクレオチドに対する感受性によって細胞の代謝状態に結合させている。ＫＡＴＰチャネルは細胞内ＡＴＰによって阻害され、しかし、細胞内のヌクレオチド二リン酸によって刺激される。これらのチャネルの活性は、カリウムおよび細胞内シグナル（例えば、ＡＴＰまたはＧタンパク質）に対する電気化学的駆動力によって制御され、しかし、膜電位自体によってゲート制御されない。ＫＡＴＰチャネルは膜を過分極させ、従って、カリウムおよび細胞内シグナルにより細胞の静止電位が制御されることを可能にする。ＡＴＰ感受性カリウム電流が、骨格筋、脳、ならびに心臓および心臓以外の平滑筋において発見されている。放射能標識されたリガンドを用いた研究により、ピナシジルなどのカリウムチャネル開口剤薬物に対するレセプター標的であるＡＴＰ感受性カリウムチャネルの存在が確認されている。これらのチャネルが開くことにより、カリウム流出が引き起こされ、細胞膜は過分極する。この過分極は、（１）Ｌ型またはＴ型のカルシウムチャネルを開口させる可能性を低下させることによる電位依存性Ｃａ２＋チャネルの阻害により細胞内の遊離カルシウムの低下を誘導し、（２）イノシトール三リン酸（ＩＰ３）形成の阻害によって、細胞内の供給源からのアゴニスト誘導による（レセプター作動型チャネル）Ｃａ２＋放出を抑制し、また、（３）収縮タンパク質の活性化因子としてのカルシウムの効率を低下させる。これら２つのクラスの薬物（ＡＴＰ感受性カリウムチャネル開口剤およびカルシウムチャネルアンタゴニスト）の組み合わさった作用により、標的細胞は、弛緩した状態、または、活性化に対してより抵抗性である状態にさせられる。
【０１７９】
最後に、カルシウムチャネルアンタゴニストならびにタキキニンアンタゴニストおよびブラジキニンアンタゴニストは、神経炎症を媒介することにおいて相乗的な効果を示す。神経炎症を媒介することにおけるニューロキニンレセプターの役割が明らかにされている。ニューロキニン１（ＮＫ１）レセプターおよびニューロキニン２（ＮＫ２）レセプター（これらはＧタンパク質共役スーパーファミリーのメンバーである）のシグナル伝達経路には、細胞内カルシウムの増大が含まれ、従って、形質膜におけるカルシウムチャネルの活性化がもたらされる。同様に、ブラジキニン２（ＢＫ２）レセプターの活性化は細胞内カルシウムの増大に共役している。従って、カルシウムチャネルアンタゴニストは、一部がＬ型チャネルを介して進入する細胞内カルシウムの上昇を伴う共通の機構を妨害する。これが、カルシウムチャネルアンタゴニストと、ニューロキニンレセプターおよびブラジキニン２レセプターとの間での相乗的な相互作用のための基礎である。
【０１８０】
本発明の実施のための好適なカルシウムチャネルアンタゴニストには、ニソルジピン、ニフェジピン、ニモジピン、ラシジピン、イスラジピンおよびアムロジピンが含まれる。これらの薬剤についての好適な濃度が表２４に示される。
【０１８１】
【表２４】
2006508961.tif 000025
【０１８２】
ＩＶ．再狭窄防止剤
心臓血管処置および一般的血管処置のために利用される本発明の溶液はまた、場合により、特に血管形成術、回転アテローム切除術および他の介入的血管使用のために、再狭窄防止剤を含むことができる。下記の薬物が、再狭窄の制限が指示されたとき、前記の心臓血管灌注溶液および一般的血管灌注溶液に含めるために好適である。下記の再狭窄防止剤は、本発明の溶液において、好ましくは、抗痙攣剤と、そしてまた、さらにより好ましくは、痛み防止剤／抗炎症剤と組み合わせられる。
【０１８３】
Ａ．抗血小板剤
動脈傷害部位において、血小板は、特異的な細胞表面レセプターを介してコラーゲンおよびフィブリノーゲンに接着し、その後、いくつかの独立した媒介因子によって活性化される。様々なアゴニストが血小板を活性化することができ、このようなアゴニストには、コラーゲン、ＡＤＰ、トロンボキサンＡ２、エピネフリンおよびトロンビンが含まれる。コラーゲンおよびトロンビンは血管傷害部位において一次の活性化因子として使用され、その一方で、ＡＤＰおよびトロンボキサンＡ２は、さらなる血小板を成長中の血小板栓の中に呼び寄せるように作用する。活性化された血小板は脱顆粒化し、化学誘因物質および血管収縮剤として使用される他の因子を放出し、従って血管痙攣および血小板蓄積を促進させる。従って、抗血小板剤は、上記のアゴニスト−レセプター標的のいずれかから得られるアンタゴニストであり得る。
【０１８４】
血小板は凝固カスケードにおいてそのような重要な役割を果たしているので、経口抗血小板剤は、血管処置を受けている患者に対して日常的に投与されている。実際、活性化因子のこの多様性のために、また、１つだけの抗血小板剤は効果的でないという観測結果のために、一部の研究者は、混合処置プロトコルが有効性のためには必要であると結論している。最近、Ｗｉｌｌｅｒｓｏｎおよび共同研究者らは、リドグレル（トロンボキサンＡ２のアンタゴニスト）、ケタンセリン（セロトニンアンタゴニスト）およびクロピドグレル（ＡＤＰアンタゴニスト）の３つの混合された薬剤の静脈内使用を報告した。彼らは、３つのアンタゴニストの組合せは、イヌの冠状動脈血管形成術モデルにおいて、いくつかの関連した血小板機能を阻害し、新内膜増殖を低下させたことを見出した（ＪＡＣＣ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ、１９９５年２月）。冠状動脈血栓症を処置するための方法はどれが最も成功しているかは依然として明らかではない。１つの可能性は、本発明の心臓血管溶液および一般的血管溶液において抗血小板剤および抗血栓剤を含むことである。
【０１８５】
１．トロンビンインヒビターおよびトロンビンレセプターアンタゴニスト
トロンビンは、血管損傷形成において中心的な役割を果たしており、血栓形成の主たる媒介因子であると考えられている。従って、ＰＴＣＡ（経皮経管冠動脈血管形成術）または他の血管処置の時およびその後における血管損傷部位における血栓の形成は急性の再閉塞および慢性的な再狭窄の中心である。このプロセスは、ヒルジンおよびその合成ペプチドアナログならびにトロンビンレセプターアンタゴニストペプチドを含む直接的な抗トロンビン剤の適用によって中断され得る（Ｈａｒｋｅｒ他、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．７５：１２Ｂ（１９９５））。トロンビンはまた、平滑筋細胞の増殖を血管傷害部位において開始させる強力な増殖因子である。また、トロンビンはまた、ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）などの他の増殖因子の作用を調節することにおいて役割を果たしており、そして、トロンビンインヒビターが、バルーン血管形成術により誘導される血管傷害の後においてＰＤＧＦのｍＲＮＡの発現を低下させることが示されている。
【０１８６】
ヒルジンは、トロンビンの触媒作用部位および基質認識部位（エキソサイト）に結合するので、原型となる直接的な抗トロンビン薬である。ヒヒを使用した動物研究では、この増殖応答が、組換えヒルジン（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）を使用して８０％低下し得ることが示されている。ヒルログ（Ｂｉｏｇｅｎ）は、ヒルジンの後でモデル化されたドデカペプチドであり、Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇのリンカー分子を介してトロンビンの活性部位に結合する。ヒルジンおよびヒルログの大規模な臨床試験が、ＰＴＣＡ後の血管損傷を低下させることにおけるそれらの効力を調べるために進行中であり、これまでのこれらのインヒビターについての第ＩＩ相データは肯定的であり、両方の薬物は本発明の溶液において好適であると考えられる。再狭窄を検出するために６ヶ月目における反復した血管造影法評価を用いた１，２００名の患者での試験の予備的な結果は、ヘパリンに対して、ヒルジンを用いた場合、虚血性事象の優れた短期抑制を示していた。この方法の利点は、著しい出血合併症が報告されなかったということである。持続した放出による局所的ヒルログ療法は、ブタにおける動脈ステント設置の後、新内膜の肥厚ではなく、早期の血栓症を減少させることが見出された。Ｍｕｌｌｅｒ，Ｄ．他、“Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｌｏｃａｌ  Ｈｉｒｕｌｏｇ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  Ｅａｒｌｙ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  Ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ  Ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ  Ａｆｔｅｒ  Ａｒｔｅｒｉａｌ  Ｓｔｅｎｔｉｎｇ”、Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１３３（２）：２１１〜２１８（１９９６）。この研究では、ヒルログが、動脈の周りに設置された含浸ポリマーから放出された。
【０１８７】
本発明のために好適であると理論上想定される試験中の他の活性な抗トロンビン剤には、アルガトロバン（Ｔｅｘａｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）およびエフェガトラン（Ｌｉｌｌｙ）がある。
【０１８８】
【表２５】
2006508961.tif 000026
【０１８９】
２．ＡＤＰレセプターアンタゴニスト（プリンレセプターアンタゴニスト）
チクロピジンはＡＤＰのアナログであり、トロンボキサンおよびＡＤＰ誘導の血小板凝集の両方を阻害する。チクロピジンは、ＡＤＰとそのレセプターとの相互作用を阻止し、それにより、血小板膜の表面におけるこのＧタンパク質共役レセプターによるシグナル伝達を阻害すると考えられている。予備的な研究では、チクロピジンが、ジピリダモールとの組合せでのアスピリンよりも効果的であることが示された。しかしながら、チクロピジンの臨床的使用は、好中球減少症を引き起こすので制限されている。クロピドグレル（チクロピジンのアナログ）は、有害な副作用がチクロピジンよりも少ないと考えられ、現在、虚血性事象の防止のために研究が行われている。これらの薬剤は本発明の溶液における使用のために好適であり得ることが理論上想定される。
【０１９０】
３．トロンボキサンインヒビターおよびトロンボキサンレセプターアンタゴニスト
血栓症の従来の処置方法のために現在利用されている薬剤は、アスピリン、ヘパリンおよびプラスミノーゲン活性化因子に頼っている。アスピリンはシクロオキシゲナーゼを不可逆的にアセチル化し、トロンボキサンＡ２およびプロスタサイクリンの合成を阻害する。データはＰＴＣＡについてのアスピリンの利点を裏付けているが、アスピリンの根本的な効き目は部分的または適度でしかないと考えられる。これは、シクロオキシゲナーゼのアスピリン誘導によるアセチル化によって阻止されないトロンボキサンＡ２非依存経路による血小板の活性化のためであり得る。血小板凝集および血栓症は、アスピリン処置にかかわらず生じ得る。ジピリダモールとの組合せでのアスピリンはまた、再狭窄の発生ではなく、ＰＴＣＡ時の急性合併症の発生を減少させることが示されている。
【０１９１】
２つのトロンボキサンレセプターアンタゴニストが、アスピリンよりも効き目があるようであり、本発明の溶液および方法における使用のために好適であると考えられる。チクロピジンは、トロンボキサンおよびＡＤＰ誘導の血小板凝集の両方を阻害する。リドグレル（Ｒ６８０６０）はトロンボキサンＢ２合成酵素インヒビターおよびトロンボキサン−プロスタグランジンエンドペルオキシドレセプター遮断剤の混合型である。リドグレルは、ＰＴＣＡを受けている、ヘパリンとの組合せで投与された患者のオープンパイロット研究においてサリチラート療法と比較されている。Ｔｉｍｍｅｒｍａｎｓ，Ｃ．他、“Ｒｉｄｏｇｒｅｌ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｓｅｔｔｉｎｇ  ｏｆ  Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ”、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．６８：４６３〜４６６（１９９１）。処置は、ＰＴＣＡ処置の開始直前における３００ｍｇの緩速静脈内注射を投与することからなり、３００ｍｇの用量を毎日２回用いて１２時間後に経口投与により継続された。この研究から、リドグレルは、早期の急性再閉塞が３０名の患者において生じなかったので、おおむね成功していることが見出された。出血の合併症が有意な数（３４％）の患者で生じたが、これは、特別な注意を必要とする複雑化要因であるようである。この研究では、リドグレルがトロンボキサンＢ２合成酵素の強力な長く持続するインヒビターであることが確認された。
【０１９２】
Ｂ．細胞接着分子のインヒビター
１．セレクチンインヒビター
セレクチンインヒビターは、特定のセレクチンとその同族のリガンドまたはレセプターとの相互作用を阻止する。これらのインヒビターが作用するセレクチン標的の代表的な例には、Ｅ−セレクチンレセプターおよびＰ−セレクチンレセプターが含まれるが、これらに限定されない。Ｕｐｊｏｈｎ  Ｃｏ．が、Ｐ−セレクチンの活性を阻害する、Ｃｙｔｅｌ  Ｃｏｒｐｓにより開発されたモノクローナル抗体に対する許諾された権利を有している。製造物ＣＹ１７４８は前臨床での開発中であり、潜在的な適応が再狭窄である。
【０１９３】
２．インテグリンインヒビター
血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ複合体は休止状態の血小板ならびに活性化された血小板の表面に存在する。この複合体は、この複合体がフィブリノーゲンおよび他の接着タンパク質に対する結合部位として使用されることを可能にする血小板活性化時の変換を受けるようである。非常に有望な新しい抗血小板剤は、血小板凝集に対する最後の共通する経路を表すこのインテグリン細胞表面レセプターに向けられている。
【０１９４】
数タイプの薬剤がＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａインテグリンアンタゴニストのクラスに適合する。モノクローナル抗体のｃ７Ｅ３（ＣｅｎｔｏＲｘ；Ｃｅｎｔｏｃｏｒ、Ｍａｌｖｅｒｎ、ＰＡ）は、今日まで、３，０００名の患者のＰＴＣＡ研究において集中的に研究されている。ｃ７Ｅ３はキメラなヒト／マウスのハイブリッド体である。ｃ７Ｅ３の０．２５ｍｇ／ｋｇのボーラス、その後での１２時間にわたる１０μｇ／分の静脈内注入は、注入の継続期間中においてＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａレセプターの８０％を超える遮断を生じさせた。これは、８０％を超える血小板凝集阻害と相関した。この抗体はヘパリンと同時投与され、出血の増大した危険性が認められた。さらなる情報が、一次エンドポイント、死亡率の合成、致命的でない心筋梗塞の発生、および、冠状動脈血管再生術に対する必要性において著しい減少を示したＥＰＩＣ治験から得られ、その情報は長期間にわたる利点を示唆した。Ｔｃｈｅｎｇ、Ａｍ．Ｈｅａｒｔ  Ｊ．１３０：６７３〜６７８（１９９５）。ｃ７Ｅ３Ｆａｂを用いた安全性および効力の問題を検討するために設計された第ＩＶ相研究（ＥＰＩＬＯＧ）が計画され、または進行中である。このモノクローナル抗体はまた、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａレセプターに対して向けられた血小板膜糖タンパク質レセプターアンタゴニストとして分類することができる。
【０１９５】
血小板糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａレセプター遮断剤のインテグレリンは、この分子標的に対して非常に特異的な環状ヘプタペプチドである。抗体とは対照的に、インテグレリンは短い生物学的半減期（約１０分）を有する。インテグレリンの安全性および効力が、第ＩＩ相Ｉｍｐａｃｔ試験において最初に評価された。インテグレリンの１．０μｇ／ｋｇ／分の４時間または１２時間のいずれかでの静脈内注入が利用された（Ｔｏｐｏｌ，Ｅ．、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ、２７Ｂ〜３３Ｂ（１９９５））。インテグレリンは他の薬剤（ヘパリン、アスピリン）との組合せで与えられ、強力な抗血小板凝集性（＞８０％）を呈することが示された。４０００名の患者からなる第ＩＩＩ相研究（ＩＭＰＡＣＴ  ＩＩ試験）では、インテグレリンが、Ｒｏｔａｂｌａｔｏｒアテローム切除術を受けた患者における虚血性事象を顕著に減少させたことが示された（ＪＡＣＣ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ、１９９６）。本発明において使用されるこれらの薬物（ｃ７Ｅ３およびインテグレリン）の好適な濃度が下記に示される。
【０１９６】
また、２つのペプチド模倣体、ＭＫ−３８３（Ｍｅｒｃｋ）およびＲＯ４４８３（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅ）が第ＩＩ相臨床試験で研究されている。これらは、ともに小分子であるので、短い半減期および大きい効能を有する。しかしながら、これらはまた、特異性があまり大きくないようであり、そのため、他の近縁のインテグリン類と相互作用する。これらのペプチド模倣体もまた本発明における使用のために好適であり得ることが理論上想定される。
【０１９７】
【表２６】
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【０１９８】
Ｃ．抗走化性薬剤
抗走化性薬剤は炎症性細胞の走化性を妨げる。これらの薬剤が作用する抗走化性標的の代表的な例には、Ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅレセプター、ＩＬ−８レセプター、ＭＣＰ−１レセプターおよびＭＩＰ−１−α／ＲＡＮＴＥＳレセプターが含まれるが、これらに限定されない。このクラスの薬剤に含まれる薬物は開発段階の初期にある。しかし、それらが本発明における使用のために好適であり得ることが理論上想定される。
【０１９９】
Ｄ．インターロイキンレセプターアンタゴニスト
インターロイキンレセプターアンタゴニストは、特定のインターロイキンとその同族のリガンドまたはレセプターとの相互作用を阻止する薬剤である。数多くのインターロイキンレセプターのいずれかについての特異的なレセプターアンタゴニストが開発段階の初期にある。これに対する例外が、ＩＬ−１レセプターの分泌型形態の天然に存在する実在物であり、これはＩＬ−１アンタゴニストタンパク質（ＩＬ−１ＡＰ）と呼ばれている。このアンタゴニストはＩＬ−１と結合し、ＩＬ−１の生物学的作用を抑制することが示されており、従って、本発明の実施のために好適であり得ることが理論上想定される。
【０２００】
Ｅ．細胞内シグナル伝達インヒビター
１．プロテインキナーゼインヒビター
Ａ．プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）インヒビター
プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）は、多数の生理学的プロセスのための細胞−表面のシグナル伝達において極めて重要な役割を果たしている。様々なＰＫＣイソ酵素が、Ｇタンパク質共役レセプターの最初の活性化から生じる下流側の標的（例えば、セロトニン、エンドセリンなど）として、または増殖因子レセプターの最初の活性化から生じる下流側の標的（例えば、ＰＤＧＦなど）として活性化され得る。これらのレセプタークラスはともに、冠状動脈バルーン血管形成術の処置の後での血管の痙攣および再狭窄を媒介することにおいて重要な役割を果たしている。
【０２０１】
分子クローニング分析により、ＰＫＣが、少なくとも８個の亜種（イソ酵素）からなる大きなファミリーとして存在することが解明されている。これらのイソ酵素は、レセプターの活性化を特定の細胞の増殖応答の変化に結びつけるための構造および機構において実質的に異なる。特異的なイソ酵素の発現が、血小板、好中球、骨髄性細胞および平滑筋細胞を含む広範囲の様々な細胞タイプにおいて見出されている。従って、ＰＫＣのインヒビターは、インヒビターがイソ酵素特異性を示さない限り、いくつかの細胞タイプにおいてシグナル伝達経路に影響を及ぼし得る。従って、ＰＫＣのインヒビターは、平滑筋細胞の増殖応答を阻止することにおいて効果的であることを予測することができ、そしてまた、好中球の活性化およびそれに続く付着を阻止することにおいて抗炎症効果を有し得る。いくつかのインヒビターが記載されており、最初の報告では、カルホスチンＣの阻害活性について５０μＭのＩＣ５０が示されている。Ｇ−６２０３（これはまたＧｏ６９７６として知られている）は新しい強力なＰＫＣインヒビターであり、大きい選択性をある種のＰＫＣアイソフォームに対して有し、ＩＣ５０値が２μＭ〜１０μＭの範囲にある。本発明における使用のために好適であると考えられるこれらの薬物および別の薬物（ＧＦ１０９２０３Ｘ、これはまたＧｏ６８５０またはビスインドイルマレイミドＩ（Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔから入手可能）として知られている）の濃度が下記に示される。
【０２０２】
【表２７】
2006508961.tif 000028
【０２０３】
Ｂ．プロテインチロシンキナーゼインヒビター
レセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーの数多くのメンバーの間には極めて大きい多様性が存在するが、これらのレセプターによって使用されるシグナル伝達機構は多くの共通する特徴を互いに有する。生化学的および分子遺伝学的な研究により、ＲＴＫの細胞外ドメインに対するリガンドの結合が細胞内ドメインの固有的なチロシンキナーゼ触媒活性を迅速に活性化することが示されている（図５を参照のこと）。増大した活性は、共通した配列モチーフを含有する数多くの細胞内基質のチロシン特異的なリン酸化をもたらす。その結果、これにより、リン脂質代謝、アラキドン酸代謝、タンパク質リン酸化（これはプロテインキナーゼ以外の機構を伴う）、カルシウム可動化および転写活性化を調節する数多くの「下流側の」シグナル伝達分子および一連の細胞内経路の活性化を引き起こされる（図２を参照のこと）。ＲＴＫ細胞質ドメインの増殖因子依存性のチロシンキナーゼ活性は、細胞増殖をもたらす細胞内シグナルを生成させるための一次機構である。従って、様々なインヒビターが、このシグナル伝達を遮断し、それにより増殖応答を妨げる潜在的可能性を有している（図５を参照のこと）。
【０２０４】
血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターは、アテローム性動脈硬化および再狭窄の両方において著しい役割を果たすと考えられるので、心臓血管分野における阻害のための標的として非常に注目されている。血管内の内皮の損傷表面における血小板によるＰＤＧＦの放出は、血管平滑筋細胞におけるＰＤＧＦレセプターの刺激をもたらす。上記で記載されたように、これは、高まった増殖および新内膜肥厚を生じさせる一連の細胞内事象を開始させる。ＰＤＧＦキナーゼ活性のインヒビターは、増殖を妨げ、心臓血管処置および一般的血管処置の後における成功の可能性を高めることが予想される。いくつかの関連したチルホスチン化合物はどれも、他のプロテインキナーゼおよび他のシグナル伝達系に対する影響をほとんど有していないので、ＰＤＧＦレセプターチロシンキナーゼ活性の特異的なインヒビターとしての潜在的可能性を有する（インビトロでのＩＣ５０は０．５μＭ〜１．０μＭの範囲にある）。今日まで、多くのチルホスチン化合物のうちの少数のみが市販されているにすぎない。本発明において使用されるときのこれらの薬剤についての好適な濃度が下記に示される。また、スタウロスポリンは、ｓｒｃサブファミリーのいくつかのプロテインチロシンキナーゼに対する強力な阻害効果を示すことが報告されている。本発明において使用されるときのこの薬剤についての好適な濃度が下記に示される。
【０２０５】
【表２８】
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【０２０６】
２．細胞内プロテインチロシンホスファターゼのインヒビター
ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインを含有する非膜貫通型プロテインチロシンホスファターゼ（ＰＴＰａｓｅ）が知られており、命名法により、それらはＳＨ−ＰＴＰ１およびＳＨ−ＰＴＰ２として示される。また、ＳＨ−ＰＴＰ１は、ＰＴＰ１Ｃ、ＨＣＰまたはＳＨＰとしてもまた知られている。ＳＨ−ＰＴＰ２は、ＰＴＰ１ＤまたはＰＴＰ２Ｃとしてもまた知られている。同様に、ＳＨ−ＰＴＰ１は、すべての系譜およびすべての分化段階の造血系細胞において高レベルで発現し、ＳＨ−ＰＴＰ１遺伝子は、ｍｏｔｈｅａｔｅｎ（ｍｅ）マウス表現型に関係するとして同定されている。このことが、その細胞基質とのその相互作用を阻止するインヒビターの作用を予測するための基礎となっている。走化性ペプチドによる好中球の刺激は、好中球の応答を媒介するチロシンキナーゼの活性化をもたらすことが知られている（Ｃｕｉ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９４））。また、ＰＴＰａｓｅ活性は、細胞刺激の初期段階で活性化されたチロシンキナーゼの作用を逆転させることによってアゴニスト誘導の活性を調節する。ＰＴＰａｓｅ活性を刺激し得る薬剤は、抗炎症性媒介因子としての潜在的な治療的用途を有し得る。
【０２０７】
これらの同じＰＴＰａｓｅはまた、ある種のＲＴＫの活性を調節することが示されている。それらは、活性化されたレセプターキナーゼの作用を平衡させるようであり、従って、重要な薬物標的を表し得る。インビトロ実験では、ＰＴＰａｓｅの注射は内因性タンパク質におけるチロシル残基のインスリン刺激によるリン酸化を阻止することが示されている。従って、ＰＴＰａｓｅ活性の活性化因子は、再狭窄におけるＰＤＧＦレセプターの作用の活性化を逆転させるために使用することができ、従って、本発明の溶液において有用であると考えられる。また、レセプターに連結したＰＴＰａｓｅはまた、細胞接着分子の細胞外リガンドと同様な細胞外リガンドとして機能する。リガンドが細胞外ドメインに結合することの機能的結果は未だ明らかにされておらず、しかし、結合が、細胞内のホスファターゼ活性を調節するために役立つと推測することは妥当である（ＦａｓｈｅｎａおよびＺｉｎｎ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、５：１３６７〜１３６９（１９９５））。そのような作用は、他の細胞表面接着分子（ＮＣＡＭ）により媒介される接着を阻止し、抗炎症効果を提供し得る。これらの適用のための薬物は未だ開発されていない。
【０２０８】
３．ＳＨ２ドメイン（ＳＲＣ相同性２ドメイン）のインヒビター
ＳＨ２ドメイン（これは、最初はｓｒｃサブファミリーのプロテインチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）において同定された）は、非触媒性のタンパク質配列であり、様々なシグナル伝達タンパク質の間で保存されている約１００アミノ酸からなる（Ｃｏｈｅｎ他、１９９５）。ＳＨ２ドメインはホスホチロシン結合モジュールとして機能し、それにより、細胞内でのシグナル伝達経路における非常に重要なタンパク質−タンパク質会合を媒介している（Ｐａｗｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、５７３〜５８０、１９９５）。特に、ＳＨ２ドメインの役割が、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターの場合などのレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）媒介のシグナル変換のために非常に重要であるとして明瞭に明らかにされている。自己リン酸化されたＲＴＫにおけるホスホチロシン含有部位は、ＳＨ２−タンパク質に対する結合部位として役立ち、それにより、生化学的なシグナル伝達経路の活性化を媒介している（図２を参照のこと）（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ，Ｇ．、ＦＡＳＥＢ  Ｊ．６：３２８３〜３２８９（１９９２）；Ｓｉｅｒｋｅ，Ｓ．およびＫｏｌａｎｄ、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１０１０２〜１０１０８（１９９３））。ＳＨ２ドメインは、活性化された増殖因子レセプターを、遺伝子発現の変化および究極的には細胞増殖を含む細胞応答に共役させることに関係している（図５を参照のこと）。従って、血管平滑筋細胞の表面に発現した特異的なＲＴＫの活性化の作用を選択的に阻止するインヒビターは、ＰＴＣＡまたは他の血管処置の後における増殖および再狭窄プロセスを阻止することにおいて効果的であることが予測される。現在注目されている１つのＲＴＫ標的はＰＤＧＦレセプターである。
【０２０９】
ＳＨ２ドメインを含有し、細胞内のシグナル伝達において機能する少なくとも２０個の細胞質ゾルタンパク質が同定されている。ＳＨ２ドメインの分布は特定のタンパク質ファミリーに限定されておらず、しかし、いくつかのクラスのタンパク質、プロテインキナーゼ、脂質キナーゼ、タンパク質ホスファターゼ、ホスホリパーゼ、Ｒａｓ制御タンパク質および一部の転写因子において見出される。ＳＨ２含有タンパク質の多くは既知の酵素活性を有しており、その一方で、他のＳＨ２含有タンパク質（Ｇｒｂ２およびＣｒｋ）は細胞表面レセプターと「下流側」のエフェクター分子との間での「リンカー」および「アダプター」として機能している（Ｍａｒｅｎｇｅｒｅ，Ｌ．他、Ｎａｔｕｒｅ  ３６９：５０２〜５０５（１９９４））。シグナル伝達において活性化される、酵素活性を有するＳＨ２ドメイン含有タンパク質の例には、限定されないが、ｓｒｃサブファミリーのプロテインチロシンキナーゼ（ｓｒｃ（ｐｐ６０ｃ−ｓｒｃ）、ａｂｌ、ｌｃｋ、ｆｙｎ、ｆｇｒ他）、ホスホリパーゼＣγ（ＰＬＣγ）、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ−３−キナーゼ）、ｐ２１−ｒａｓＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＧＡＰ）、およびＳＨ２含有プロテインチロシンホスファターゼ（ＳＨ−ＰＴＰａｓｅ）が含まれる（Ｓｏｎｇｙａｎｇ他、Ｃｅｌｌ  ７２：７６７〜７７８（１９９３））。これらの様々なＳＨ２−タンパク質が、シグナルを、活性化された細胞表面レセプターから、究極的には細胞の応答を規定する一連のさらなる分子相互作用の中に伝えることにおいて占める中心的な役割のために、特異的なＳＨ２タンパク質の結合を阻止するインヒビターが、様々な潜在的な治療的適用のための薬剤として望ましい。
【０２１０】
また、多くの免疫／炎症応答の調節が、ＳＨ２ドメインを含有する非レセプターチロシンキナーゼを介してシグナルを伝えるレセプターを介して媒介されている。抗原特異的なＴ細胞レセプター（ＴＣＲ）を介するＴ細胞の活性化は、リンホカインの分泌およびＴ細胞の増殖を生じさせるシグナル伝達カスケードを開始させる。ＴＣＲ活性化後の最も初期の生化学的応答の１つが、チロシンキナーゼ活性の増大である。特に、好中球の活性化は一部が、細胞表面の免疫グロブリンＧレセプターの応答によって制御されている。これらのレセプターの活性化により、ＳＨ２ドメインを有することが知られている未同定のチロシンキナーゼの活性化が媒介される。さらなる証拠により、ｓｒｃファミリーのいくつかのキナーゼ（ｌｃｋ、ｂｌｋ、ｆｙｎ）が、サイトカインレセプターおよびインテグリンレセプターから通じるシグナル伝達経路に関係しており、従って、いくつかの独立したレセプター構造から受け取る刺激を統合するために使用され得ることが示されている。従って、特異的なＳＨ２ドメインのインヒビターは、多くの好中球機能を阻止する潜在的可能性を有しており、抗炎症性媒介因子として役立つ。
【０２１１】
ＳＨ２ドメインに対して標的化された薬物を開発する努力が、現在、生化学的なインビトロおよび細胞的なレベルで行われている。そのような努力が成功したならば、得られる薬物は本発明の実施において有用であることが理論上想定される。
【０２１２】
４．カルシウムチャネルアンタゴニスト
カルシウムチャネルアンタゴニストは痙攣阻害機能に関連して以前に記載されており、これもまた、本発明の心臓血管溶液および一般的血管溶液における再狭窄防止剤として使用することができる。ＰＤＧＦなどの増殖因子レセプターの活性化が、細胞内カルシウムの増大をもたらすことが知られている（図２を参照のこと）。細胞レベルでの研究により、カルシウムチャネルアンタゴニストの作用は、血管平滑筋細胞の有糸分裂誘発を阻害することにおいて効果的であることが示されている。
【０２１３】
Ｆ．心臓血管溶液および一般的血管溶液において使用される再狭窄防止剤および他の薬剤の治療的組合せから得られる相乗的相互作用
ＰＴＣＡまたは他の心臓血管治療的処置もしくは一般的血管治療的処置の後における再狭窄に関連する疾患プロセスの複雑性、および、関与する分子標的の多様性を考えると、１つだけの分子標的の遮断または阻害は、血管痙攣および再狭窄を防止することにおいて十分な効力をもたらすとは考えられない（図２を参照のこと）。実際、異なる個々の分子レセプターおよび／または酵素を標的化する数多くの動物研究により、動物モデルにおいて効果的でないことが判明しているか、または、今日までの臨床試験において両方の病理について効力をもたらしていない。（Ｆｒｅｅｄ，Ｍ．他、“Ａｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ  Ｐｏｌｙ−ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ：ｔｈｅ  Ｍｅｖａｃｏｒ，Ａｃｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｃｏｌｃｈｉｃｉｎｅ（ＢＩＧ−ＭＡＣ）Ｐｉｌｏｔ  Ｔｒｉａｌ”、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２１：３３Ａ（１９９３）；Ｓｅｒｒｕｙｓ，Ｐ．他、“ＰＡＲＫ：ｔｈｅ  Ｐｏｓｔ  Ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ  Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ  Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ  Ｔｒｉａｌ”、Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２１：３２２Ａ（１９９３））。従って、異なった分子標的に対して作用し、局所送達された薬物の治療的組合せは、血管痙攣および再狭窄に対する治療的取り組みにおける臨床的有効性のためには必要であるようである。下記で議論されるように、この相乗的な分子的標的化治療のための理論的根拠が、血管壁における血管平滑筋細胞が、ＰＴＣＡ時または他の血管介入処置の時に細胞がさらされる刺激を伝え、かつその刺激を統合する根本的な生化学的機構を理解することにおける最近の発達から導き出される。
【０２１４】
１．主要なシグナル伝達経路における「クロストーク」および収斂
細胞のシグナル伝達を担う分子的スイッチは、従来的には、２つの大きな異なったシグナル伝達経路に分けられており、そのそれぞれが、特定の１組の細胞外刺激に対する変換物質として作用する異なった１組のタンパク質ファミリーを含み、異なった細胞応答を媒介している。１つのそのような経路により、神経伝達物質およびホルモンからのシグナルが、Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）を介して変換されて、三量体Ｇタンパク質の細胞内標的およびＣａ２＋を使用する収縮応答を生じさせる（図２を参照のこと）。これらの刺激およびそれらのそれぞれのレセプターにより、平滑筋の収縮が媒介され、血管痙攣がＰＴＣＡまたは心臓血管もしくは一般的血管の他の治療的処置もしくは診断的処置の状況において誘導され得る。ＧＰＣＲ経路を介して痙攣を媒介することに関与するシグナル伝達分子の例には、それらのそれぞれのＧタンパク質共役レセプターを介して作用する、それらに対するアンタゴニストが含まれている５−ＨＴおよびエンドセリンがある。
【０２１５】
別の主要な経路により、増殖因子（例えば、ＰＤＧＦなど）からのシグナルが、チロシンキナーゼ、アダプタータンパク質およびＲａｓタンパク質を介して細胞増殖および細胞分化の調節の中に変換される（図２および図５を参照のこと）。この経路はまた、血管平滑筋細胞の増殖を高い発生率で生じさせるＰＴＣＡまたは他の心臓血管処置もしくは一般的血管処置の時に活性化され得る。再狭窄薬物標的の一例がＰＤＧＦレセプターである。
【０２１６】
神経伝達物質およびホルモンから伝えられたシグナルは、２つのクラスのレセプター（７回らせんの膜貫通領域から構成されるＧタンパク質共役レセプター、またはリガンド依存性イオンチャネル）のいずれかを刺激する。両方の種類のレセプターからの「下流側の」シグナルは、平滑筋細胞における収縮を開始させる細胞質Ｃａ２＋の濃度を制御するときに収斂する（図２を参照のこと）。それぞれのＧＰＣＲ膜貫通レセプターにより、Ｇｑ、Ｇｉまたは多くの他のＧタンパク質を含む特定のクラスの三量体Ｇタンパク質が活性化される。Ｇαサブユニットおよび／またはＧβγサブユニットはホスホリパーゼＣβを活性化し、細胞内の貯蔵部からのカルシウムの放出によるプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）の活性化および細胞質カルシウムのレベルの増大を生じさせる。
【０２１７】
増殖因子のシグナル伝達（例えば、ＰＤＧＦにより媒介されるシグナル伝達など）は細胞成長の調節のときに収斂する。この経路は、レセプターチロシンキナーゼおよび「下流側の」酵素（チロシンキナーゼに関して上記で議論されたホスホリパーゼＣγ）におけるチロシン残基のリン酸化に依存している。ＰＤＧＦレセプターの活性化はまた、ＰＫＣの刺激および細胞内カルシウムの上昇（様々なＧＰＣＲによって共有される共通した段階）を生じさせる（図２を参照のこと）。現在では、リガンドに依存しない「クロストーク」が、ＧＰＣＲが刺激されることに応答してチロシンキナーゼレセプター経路をトランス活性化し得ることが認識されている。近年の研究では、Ｓｈｃ（チロシンキナーゼ／Ｒａｓ経路におけるアダプタータンパク質）が、上記のＧＰＣＲ経路からのメッセージをチロシンキナーゼ経路に中継する重要な仲介タンパク質として同定されている（図２を参照のこと）（Ｌｅｖ他、Ｎａｔｕｒｅ  ３７６：７３７（１９９５））。Ｓｈｃの活性化はカルシウム依存性である。従って、血管平滑筋細胞の増殖を生じさせる共通したシグナル伝達経路のトランス活性化を遮断する選択的インヒビターの組合せは、ＰＴＣＡまたは他の心臓血管処置もしくは一般的血管処置の後における痙攣および再狭窄を防止するために相乗的に作用する。具体的な例が下記において簡単に記載される。
【０２１８】
２．ＰＫＣインヒビターとカルシウムチャネルアンタゴニストとの間での相乗的相互作用
この場合、血管弛緩および増殖阻害を達成することにおけるＰＫＣインヒビターとカルシウムチャネルアンタゴニストとの間での相乗的相互作用が、ＧＰＣＲシグナル伝達経路とチロシンキナーゼシグナル伝達経路との間での「クロストーク」のために生じる（図２を参照のこと）。二重使用のための理論的根拠が、これらの薬物は異なる分子的作用機構を有するという事実に基づいている。上記で記載されたように、ＧＰＣＲの刺激は、細胞内貯蔵部からのカルシウムの放出によるプロテインキナーゼＣの活性化および細胞質カルシウムのレベルの増大をもたらす。カルシウムにより活性化されたＰＫＣは、細胞外応答を伝えることにおける中心的な制御点である。ＰＫＣを介するＧＰＣＲ刺激された経路からの「クロストーク」は血管平滑筋細胞の有糸分裂誘発を生じさせることができ、従って、カルシウムチャネルアンタゴニストは、Ｓｈｃの活性化を阻害することによって、痙攣を直接的に阻止し、さらには増殖の活性化を防止するという二重の作用を有する。逆に、ＰＫＣインヒビターは、収縮をもたらす経路の一部に対して作用する。
【０２１９】
３．ＰＫＣインヒビター、５−ＨＴ２アンタゴニストおよびＥＴＡアンタゴニストの相乗的な効果
５−ＨＴ２レセプターファミリーは、５−ＨＴ２Ａ、５−ＨＴ２Ｂおよび５−ＨＴ２Ｃと名付けられた３つのメンバーを含み、これらはすべてが、ホスホチジルイノシトールの代謝回転および細胞内カルシウムの増大に共役しているという共通した性質をともに有する（Ｈｏｙｅｒ他、１９８８；Ｈａｒｔｉｇ他、１９８９）。これらのレセプターの分布には、血管平滑筋および血小板が含まれており、それらの局在化のために、これらの５−ＨＴレセプターは、痙攣、血栓症および再狭窄を媒介することにおいて重要である。ＥＴＡレセプターの活性化により誘導される平滑筋細胞における細胞内カルシウム上昇の持続期は、細胞外のカルシウムを必要とし、また、ニカルジピンによって少なくとも部分的に阻止されることが見出されている。５−ＨＴ２レセプターおよびＥＴＡレセプターの両方の活性化はカルシウムによって媒介されるので、ＰＫＣインヒビターを含むことは、外科用溶液において組み合わせられたときにはこれらのレセプターの両方に対するアンタゴニストの作用を相乗的に高めることが予想される（図２および図４を参照のこと）。
【０２２０】
４．プロテインチロシンキナーゼインヒビターおよびカルシウムチャネルアンタゴニストの相乗的な効果
ＰＤＧＦ（または塩基性繊維芽細胞増殖因子またはインスリン様増殖因子−１）の有糸分裂促進効果は、固有的なプロテインチロシンキナーゼ活性を有するレセプターを介して媒介される。ＰＤＧＦリン酸化のための基質は多く、マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化および究極的には増殖を生じさせる（図５を参照のこと）。エンドセリンレセプター、５−ＨＴレセプターおよびトロンビンレセプターは、Ｇタンパク質共役型スーパーファミリーのメンバーであり、細胞内カルシウムの増大を含むシグナル伝達経路を開始させ、形質膜におけるカルシウムチャネルの活性化を生じさせる。従って、カルシウムチャネルアンタゴニストは、これらのＧＰＣＲによって用いられる共通した機構を妨害する。最近、エンドセリンおよびブラジキニンを含めて、ある種のＧＰＣＲの活性化は数多くの細胞内タンパク質のチロシンリン酸化の迅速な増大をもたらすことが示されている。リン酸化されたタンパク質の一部は、有糸分裂誘発の刺激のために必要であることが知られているタンパク質に匹敵する。そのプロセスの迅速性は、変化が数秒で検出可能であるほどであった。作用した標的は、おそらくは、有糸分裂誘発において役割を果たしている。これらのチロシンリン酸化事象は、選択的なＰＫＣインヒビターによって阻止されず、または、増大した細胞内カルシウムによって明らかに媒介されなかった。従って、２つの独立した経路（ＧＰＣＲ経路およびチロシンリン酸化経路）が血管平滑筋細胞を増殖状態に促進させ得るので、両方の独立したシグナル伝達部門を遮断することが必要である。これが、外科用溶液におけるカルシウムチャネルアンタゴニストおよびチロシンキナーゼインヒビターの間での相乗的な相互作用のための基礎である。血管平滑筋細胞の増殖を防止することにおけるプロテインチロシンキナーゼインヒビターの作用は、カルシウムおよびプロテインキナーゼＣを伴う経路から（上記の）独立した分子機構を介して生じているので、これら２つのクラスの薬剤（カルシウムチャネルアンタゴニストおよびプロテインチロシンキナーゼインヒビター）の組合せは、痙攣および再狭窄を阻害することにおいて、いずれか１つだけのクラスの薬物を単独で用いる場合よりも効力があることが予想される。
【０２２１】
５．プロテインチロシンキナーゼインヒビターおよびトロンビンレセプターアンタゴニストの相乗的な効果
トロンビンは、その作用を、トロンビンレセプター（ＧＰＣＲスーパーファミリーの別のメンバー）を介して媒介している。レセプターに結合することにより、血小板凝集、平滑筋細胞の収縮、および有糸分裂誘発が刺激される。シグナル伝達は多数の経路を介して生じている：Ｇタンパク質によるホスホリパーゼ（ＰＬＣ）の活性化、およびチロシンキナーゼの活性化。チロシンキナーゼ活性の活性化はまた、血管平滑筋細胞の有糸分裂誘発のためには不可欠である。実験により、特異的なチロシンキナーゼインヒビターを用いた阻害は、トロンビン誘導による有糸分裂を阻止することにおいて効果的であり、しかし、細胞内カルシウムの測定によってモニターされたとき、ＰＬＣ経路に対する影響は何も認められなかったことが示されている（ＷｅｉｓｓおよびＮｕｃｉｔｅｌｌｉ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：５６０８〜５６１３（１９９２））。血管平滑筋細胞の増殖を防止することにおけるプロテインチロシンキナーゼインヒビターの作用は、カルシウムおよびプロテインキナーゼＣを伴う経路から（上記の）独立した分子機構を介して生じているので、プロテインチロシンキナーゼインヒビターおよびトロンビンレセプターアンタゴニストの組合せは、血小板凝集、痙攣および再狭窄を阻害することにおいて、いずれかのクラスの薬剤を単独で用いる場合よりも効力があることが予期される。
【０２２２】
Ｇ．シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）インヒビター
様々な非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）が、抗炎症剤、解熱剤、抗血栓剤および鎮痛剤として広く使用されている（Ｌｅｗｉｓ，Ｒ．Ａ．、“Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ａｎｄ  Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ”、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、第３版（Ｋｅｌｌｅｙ  Ｗ．他編）、２５８頁（１９８９））。これらの薬物に対する分子標的は、プロスタグランジン合成経路における最初の酵素（これはプロスタグランジンエンドペルオキシド合成酵素と呼ばれる）、または脂肪酸シクロオキシゲナーゼである。現在、２つの形態のシクロオキシゲナーゼが存在することが理解されており、それらは、シクロオキシゲナーゼ−１または１型（ＣＯＸ−１）およびシクロオキシゲナーゼ−２または２型（ＣＯＸ−２）と名付けられている。これらのイソ酵素はまた、プロスタグランジンＨ合成酵素（ＰＧＨＳ）−１およびＰＧＨＳ−２としてそれぞれ知られている。両酵素は、プロスタグランジン類およびトロンボキサン類の生合成における中間体である不安定な中間体（ＰＧＧ２およびＰＧＨ２）へのアラキドン酸の変換を触媒する。ＣＯＸ−１は血小板および内皮細胞に存在し、構成的な活性を示す。ＣＯＸ−２は、サイトカインを用いた処置（誘導）の後の滑液細胞を含めて、内皮細胞、マクロファージおよび線維芽細胞において同定されている。
【０２２３】
ＣＯＸ−２イソ酵素は、サイトカインおよび炎症性媒介因子（例えば、ＩＬ−１、ＴＮＦ−αおよびエンドトキシンなど）による炎症の状況で誘導され、その発現は炎症部位においてアップレギュレーションされる。そのアップレギュレーションと同時に生じる、基礎的ＣＯＸ−１活性を上回るＣＯＸ−２の活性の大きな増大により、痛みおよび炎症に寄与するプロスタグランジン類の合成がもたらされる。ＣＯＸ−２は、通常、炎症組織において、または炎症の媒介因子にさらされた後において発現するだけであるので、選択的なインヒビターは、非選択的なＮＳＡＩＤ薬の使用に伴う望ましくない副作用（例えば、凝固時間、出血、腎臓および胃腸の副作用）の原因であると考えられる、血小板および他の細胞タイプに存在する構成的に発現しているＣＯＸ−１活性に対する同時の影響を伴わない抗炎症活性を示し得る。
【０２２４】
２つのＣＯＸイソ酵素は薬理学的には別個であることが明らかにされており、従って、抗炎症治療のために有用であるイソ酵素特異的（選択的）なシクロオキシゲナーゼインヒビターを開発することが可能になっている。様々な生化学的アッセイ、細胞アッセイおよび動物アッセイが、ＣＯＸ−１アイソフォームおよびＣＯＸ−２アイソフォームについてのインヒビターの相対的な選択性を評価するために開発されている。これらのアッセイでは、様々な細胞タイプから調製されたミクロソームにおけるプロスタグランジンＥ２の産生を測定すること、および、無傷なヒト細胞を使用するバイオアッセイシステムが含まれる。任意の所与の薬物について、アッセイシステム間および生物学的供給源の間で認められる選択性の程度における実験的変動にもかかわらず、ＣＯＸ−２に対する選択的なインヒビターである化合物が同定されている。一般に、選択性を規定するための判断基準は、所与の生化学的アッセイシステムまたは細胞アッセイシステムについて得られたＣＯＸ−１／ＣＯＸ−２阻害定数（またはＣＯＸ−２／ＣＯＸ−１）の比率である。この選択性比率により、ミクロソームアッセイシステムおよび細胞アッセイシステム（例えば、血小板およびマクロファージ、組換えヒトＣＯＸイソ酵素を安定的に発現する細胞株）の間で得られる、酵素活性の阻害についての異なる絶対的なＩＣ５０値が説明される。
【０２２５】
現在市場にある従来的なＮＳＡＩＤの多く（ナプロキセン、インドメタシン、イブプロフェン）は、一般にはＣＯＸの両方のアイソフォームの非選択的なインヒビターであり、しかし、その比率は化合物毎に異なるが、ＣＯＸ−１について、ＣＯＸ−２よりも大きな選択性を示し得る。プロスタグランジン類の形成を阻止するためのＣＯＸ−２インヒビターの使用は、炎症部位においてＣＯＸ−２により産生される内因性のプロスタノイドリガンド（例えば、ＰＧＥ２）と、プロスタノイドレセプターの８個の記載されたサブタイプのいずれかとの相互作用を阻止しようと試みることよりも、好ましい治療方針である。この方法は、プロスタノイドレセプター（ＥＰ−１、ＥＰ−２、ＥＰ−３、ＥＰ−４、ＤＰ、ＦＰ、ＩＰおよびＴＰ）のすべてについての選択的かつ強力なアンタゴニストが存在していないので、現在は実施することができない。
【０２２６】
Ｒｉｅｎｄｅａｕおよび共同研究者らによる研究では、４５個を超えるＮＳＡＩＤ類および選択的ＣＯＸ−２インヒビターの選択性が、ミクロソームによるプロスタグランジンＥ２の産生に基づくヒトＣＯＸ−１の阻害についての高感度なミクロソームアッセイおよび血小板アッセイを使用して比較された（Ｃａｎ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７５：１０８８〜９５（１９９７））。この研究では、ＣＯＸ−１に対してＣＯＸ−２について選択性を示すことが報告されていた化合物の中で、効能のランク順位は、ＤｕＰ６９７＞ＳＣ−５８４５１、セレコキシブ＞ニメスリド＝メロキシカム＝ピロキシカム＝ＮＳ−３９８＝ＲＳ−５７０６７＞ＳＣ−５７６６６＞ＳＣ−５８１２５＞フロスリド＞エトドラック＞Ｌ−７４５，３３７＞ＤＦＵ−Ｔ−６１４であり、ＩＣ５０値は７μＭ〜１７μＭの範囲であった。良好な相関が、ミクロソームＣＯＸ−１の阻害に対するＩＣ５０値と、Ｃａ２＋イオノホア刺激の血小板によるＴＸＢ２産生の阻害、および、ヒトＣＯＸ−１を安定的に発現するＣＨＯによるプロスタグランジンＥ２産生の阻害の両方との間で得られた。ミクロソームアッセイは、細胞に基づくアッセイよりも阻害に対して高感度であり、調べられたすべてのＮＳＡＩＤ類および選択的ＣＯＸ−２インヒビターのすべてについてＣＯＸ−１に対する阻害効果の検出を、アラキドン酸の限定された利用能の条件のもとでのそれらの効能の識別とともに可能にした。
【０２２７】
選択的なＣＯＸ−２インヒビター（例えば、セレコキシブなど）について明らかにされた分子的および細胞的な作用機構から、そしてまた動物研究から、これらの化合物は、組織または関節に対して直接的に灌注溶液において術中に適用されたとき、抗炎症作用を示すことが予想される。特に、関節鏡検査処置、泌尿器学的処置、心臓血管処置または全身手術処置の時（処置時）に灌注溶液によって送達される効果的な薬物であることが予想される。例えば、選択的なＣＯＸ−２インヒビターが、実施例ＩＶ、実施例Ｖおよび実施例ＶＩでは、ケトロラック（比較的非選択的なシクロオキシゲナーゼインヒビター）に取って代えられ得る。選択的なＣＯＸ−２インヒビターは、関節の空間、泌尿生殖路、心臓血管系または身体の任意の空洞に対して、単独で、または、他の小分子薬物、ペプチド、タンパク質、組換えキメラタンパク質、抗体もしくは遺伝子治療ベクター（ウイルス型および非ウイルス型）との組合せで送達することができる。例えば、選択的なＣＯＸ−２インヒビターは、関節の流体空間および関節を含む構造に関連する任意の細胞に対してその作用を発揮し得る。この場合、そのような細胞は、関節の正常な機能に関与するか、または、病理学的状態のために存在する。これらの細胞および構造には、Ａ型繊維芽細胞およびＢ型マクロファージの両方の細胞を滑液細胞；関節の軟骨性成分、例えば、軟骨細胞など；骨に関連する細胞、これには、骨膜細胞、骨芽細胞、破骨細胞が含まれる；免疫学的成分、例えば、リンパ球、マスト細胞、単球、好酸球を含む炎症性細胞など；および、繊維芽細胞にような他の細胞；ならびに上記細胞タイプの組合せが含まれるが、これらに限定されない。
【０２２８】
選択的なＣＯＸ−２インヒビターは、標的化された組織または関節への薬物の導入および投与のために有用で、インヒビター薬物の送達、取り込み、安定性または薬物動態学を高める配合物において送達され得る。処方には、脂質、タンパク質、炭水化物、合成有機化合物または無機化合物から構成されるマイクロ粒子、マイクロ球体またはナノ粒子を使用する投与が含まれ得るが、これに限定されない。配合分子の例には、リポソームまたは他の整列した脂質構造体を形成することができる脂質、カチオン性脂質、親水性ポリマー、ポリカチオン（例えば、プロタミン、スペルミジンおよびポリリシン）、物質を特定の細胞タイプに標的化することができるペプチドまたは合成リガンドおよび抗体、ゲル、徐放性マトリックス、可溶性粒子および不溶性粒子、ならびに、示されていない配合要素が含まれるが、これらに限定されない。
【０２２９】
本発明では、低濃度で存在する薬物を含有し、かつ、薬物を罹患した組織または関節に直接的に送達することを可能にする灌注溶液を使用する選択的ＣＯＸ−２インヒビター薬物の局所送達が記載される。薬物含有灌注溶液は外科的処置時の周術期に用いられる。薬物送達のために使用される他の従来の方法では、標的化された組織または関節において有意な治療的濃度を達成するために投与されることになる、より高濃度のＣＯＸ−２薬物（およびより大きい総用量）を余儀なくする全身投与（例えば、筋肉内、静脈内、皮下、経口）が要求される。全身投与ではまた、標的化された組織でない組織において高い濃度がもたらされ、これは望ましくなく、また、用量に依存して、有害な副作用（例えば、出血、潰瘍形成）がもたらされ得る。これらの全身送達方法ではまた、薬物が２回通過代謝および急速な分解にさらされ、それにより、効果的な治療的濃度の持続期間が制限される。灌注溶液における薬物は、所望される組織に対して直接的に投与され、このことは、他の投与経路によるよりも治療効果的な低い濃度および治療効果的な低い総用量での選択的ＣＯＸ−２インヒビター薬物の送達を可能にすることによって著しい利点を提供する。さらに、周術期に現在使用されているよりも実質的に少ない投薬量での溶液におけるＣＯＸ−２インヒビターの使用は、他の場合では禁忌である患者におけるこの薬物の使用を可能にし得る。
【０２３０】
本発明のために好適な化合物が下記の表に示される。
【０２３１】
【表２９】
2006508961.tif 000030
【０２３２】
Ｖ．適用方法
本発明の溶液は、外科的技術、診断的技術および治療的技術を含む様々な手術的／介入的処置のための用途を有している。灌注溶液は、解剖学的関節の関節鏡手術、泌尿器学的処置、心臓血管および一般的血管の診断的処置および治療的処置の時に、また、全身手術のために周術期に適用される。本明細書中で使用される用語「周術期」は、処置中、処置前および処置中、処置中および処置後、ならびに、処置前、処置中および処置後での適用を包含する。好ましくは、溶液は、処置中だけでなく、処置前および／または処置後に適用される。そのような処置では、従来、様々な生理学的な灌注液（例えば、規定生理的食塩水または乳酸加リンゲルなど）が利用され、これらは、当業者には広く知られている技術によって手術部位に適用される。本発明の方法では、本発明の痛み防止／抗炎症／抗痙攣／再狭窄防止の灌注溶液を、従来から適用されている灌注液の代わりに使用することを伴う。灌注溶液は、痛みおよび炎症、痙攣および再狭窄を予防的に阻止するために、処置の開始前に、好ましくは組織外傷の前に、かつ、処置の継続期間中を通して継続して創傷部または手術部位に適用される。本明細書中を通して使用される用語「灌注」は、創傷構造部または解剖学的構造部を液体の流れで流すことを意味することが意図される。用語「適用」は、本発明の溶液を局所的に送達する灌注および他の方法（例えば、ゲル化した溶液が、その後、処置期間中を通してその部位に留まる溶液のゲル化可能な形態の手術部位への導入など）を包含することが意図される。本明細書中を通して使用される用語「継続して」は、適用された薬剤の所定の治療的な局所濃度を維持するために十分な頻度での創傷部の反復した頻繁な灌注が存在する状況、および、操作技術によって余儀なくされる灌注液の流れの間断的中断が存在し得る適用もまた含むことが意図される。
【０２３３】
本発明の溶液における薬剤のそれぞれについて示された濃度は、手術部位において所定の効果レベルを達成するために手術部位に局所送達される薬剤の、代謝的変換がない場合の濃度である。所与の溶液における薬物濃度は、送達時における局所的な希釈を補償するために調節される必要があり得ることが理解される。例えば、心臓血管適用では、平均的なヒト冠状動脈血液流速が８０ｃｃ／分であり、溶液についての平均送達速度が局所送達カテーテルにより５ｃｃ／分であること（すなわち、１６対１の血流対溶液送達比）を仮定すると、溶液における薬物濃度は、所望されるインビボ薬物濃度よりも１６倍大きくすることが要求される。溶液の濃度は、経口適用、静脈内適用、皮下適用または筋肉内適用とは対照的に、全身分布による代謝的変換または希釈を補償するために調節されない。これらの状況は局所的送達によって回避されるからである。
【０２３４】
本発明の溶液が用いられ得る関節鏡技術には、非限定的な例として、膝における部分的半月板切除術および靱帯再建術、肩の肩峰形成術、回旋筋蓋創面切除術、肘の滑膜切除術、ならびに手首および足首の関節鏡検査が含まれる。灌注溶液は、関節包を膨張させるために、手術破片を除くために、また、邪魔のない関節内可視化を可能にするために十分な流速で関節に手術中に継続して供給される。
【０２３５】
そのような関節鏡技術の時の痛みおよび水腫を抑制するための好適な灌注溶液が本明細書中下記の実施例Ｉに提供される。関節鏡検査の場合、溶液は、下記の組合せ、および好ましくは下記のすべて、または下記のいずれかを含むことが好ましい：セロトニン２レセプターアンタゴニスト、セロトニン３レセプターアンタゴニスト、ヒスタミン１レセプターアンタゴニスト、１Ａ、１Ｂ、１Ｄ、１Ｆおよび／または１Ｅのレセプターに対して作用するセロトニンレセプターアゴニスト、ブラジキニン１レセプターアンタゴニスト、ブラジキニン２レセプターアンタゴニスト、ならびにシクロオキシゲナーゼインヒビター。
【０２３６】
本発明の溶液では、これらの痛みインヒビターおよび炎症インヒビターの極めて低い用量が、処置期間中における手術部位への直接的な薬剤の局所適用のために利用される。例えば、０．０５ｍｇ未満のアミトリプチリン（セロトニン２およびヒスタミン１の好適な「二重」レセプターアンタゴニスト）が、５−ＨＴ２レセプターおよびＨ１レセプターを阻害する所望の効果的な局所的組織濃度を提供するために灌注液１リットルについて必要とされる。この投薬量は、この薬物についての通常的な開始用量である経口アミトリプチリンの１０ｍｇ〜２５ｍｇに対して極めて低い。この同じ理論的根拠が、泌尿器学的処置、心臓血管処置および一般的血管処置に関連する痙攣を減少させるために、また、心臓血管処置および一般的血管処置に関連する再狭窄を阻害するために本発明の溶液において利用される抗痙攣剤および再狭窄防止剤について当てはまる。例えば、０．２ｍｇ未満のニソルジピン（好適なカルシウムチャネルアンタゴニスト）が、Ｌ型サブタイプのカルシウムチャネルの電位依存のゲート開閉を阻害する所望の効果的な局所的組織濃度を提供するために灌注液１リットルについて要求される。この用量は、２０ｍｇ〜４０ｍｇであるニソルジピンの単回経口用量と比較して極めて低い。
【０２３７】
本発明の外科用溶液のそれぞれにおいて、薬剤は、所望される効果を達成するための薬物投与の従来の方法を用いて要求される濃度および用量に対して低い濃度で含まれ、かつ少ない用量で局所送達される。同等の治療的効果を、同様に投薬された薬剤を薬物投与の他の経路（すなわち、静脈内経路、皮下経路、筋肉内経路または経口経路）により送達することによって得ることはできない。全身投与された薬物は初回通過代謝および２回通過代謝を受けるからである。
【０２３８】
例えば、関節鏡検査のラットモデルを使用して、本発明者らは、本発明に従って、ラット膝における５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出を阻害するアミトリプチリン（５−ＨＴ２アンタゴニスト）の能力を調べた。この研究（より詳細には下記の実施例ＸＩＩに記載される）では、膝における局所的（すなわち、関節内）に送達されたアミトリプチリンと、静脈内に送達されたアミトリプチリンとの治療的投薬が比較された。結果から、アミトリプチリンの関節内投与では、同じ治療的効果を得るために、静脈内経路により要求されるレベルの約１／２００の総投薬レベルが要求されたことが明らかにされた。関節内に送達された薬物のほんの小さい割合が局所的な滑液組織によって吸収されることを考えると、これら２つの投与経路の間での血漿薬物レベルの差は、全体的なアミトリプチリン投薬レベルにおける差よりもはるかに大きい。
【０２３９】
本発明の実施は、関節鏡検査処置または「開放された」関節（例えば、膝、肩など）処置が完了したときのオピエートおよび／または局所麻酔剤の従来の関節内注射とは区別しければならない。本発明の溶液は、痛みおよび炎症の予防的阻害をもたらすための、外科的処置の全期間中の継続した注入のために使用される。対照的に、リドカインなど局所麻酔剤の一定した注入を用いて治療的効力を達成するために必要な大きい濃度（０．５％〜２％の溶液）では、深刻な全身毒性がもたらされる。
【０２４０】
本発明の処置が完了したとき、オピエートに対する代替または補充として、手術部位において灌注溶液で使用されたのと同じ痛みインヒビターおよび炎症インヒビターのより大きい濃度を注射するか、または、そうでない場合には適用することが望ましい場合がある。
【０２４１】
本発明の溶液はまた、血管の増殖によってもたらされる血管壁の痙攣、血小板凝集、血管平滑筋細胞の増殖、および侵害レセプターの活性化を潜在的に減少させるために、心臓血管および一般的血管の診断的処置および治療的処置において適用される。動脈処置に対する本明細書中での参照は、動脈系において採取および設置される静脈移植片の処置を包含することが意図される。そのような技術のための好適な溶液が本明細書中下記の実施例ＩＩに開示される。心臓血管溶液および一般的血管溶液は、好ましくは、下記の任意の組合せ、および好ましくは下記のすべてを含む：５−ＨＴ２レセプターアンタゴニスト（Ｓａｘｅｎａ，Ｐ．Ｒ．他、“Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ａｇｏｎｉｓｔｓ  ａｎｄ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”、Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１５（Ｓｕｐｐｌ．７）：Ｓ１７〜Ｓ３４（１９９０）；Ｄｏｕｇｌａｓ、１９８５）；交感神経ニューロンおよび血管壁でのＣ線維侵害受容ニューロンにおけるこれらのレセプターの活性化を阻止するための５−ＨＴ３レセプターアンタゴニスト、そのような活性化は徐脈および頻脈を生じさせることが示されている（Ｓａｘｅｎａ他、１９９０）；ブラジキニン１レセプターアンタゴニスト；および、組織傷害部位におけるプロスタグランジン類の産生を妨げ、それにより、痛みおよび炎症を低下させるためのシクロオキシゲナーゼインヒビター。また、心臓血管溶液および一般的血管溶液はまた、好ましくは、セロトニン１Ｂ（これはまたセロトニン１Ｄβとして知られている）アンタゴニストを含有する。これは、セロトニンが、ヒトにおけるセロトニン１Ｂレセプターの活性化によって著しい血管痙攣を生じさせることが示されているからである。Ｋａｕｍａｎｎ，Ａ．Ｊ．他、“Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｏｎ  ｏｆ  ５−ＨＴ１−Ｌｉｋｅ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ５−ＨＴ２  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ｉｎ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｓｏｌａｔｅｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉｅｓ”、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ９０：１１４１〜５３（１９９４）。血管壁におけるセロトニン１Ｂレセプターのこの興奮作用は、血管収縮を生じさせるが、ニューロンにおけるセロトニン１Ｂレセプターの以前に議論された阻害作用とは対照的である。本発明の心臓血管溶液および一般的血管溶液はまた、好適には、例えば、血管形成術または回転アテローム切除術から生じる処置後の再狭窄の発生および重篤度を減少させる本明細書中に開示される再狭窄防止剤の１つまたは複数を含むことができる。
【０２４２】
本発明の溶液はまた、経尿道前立腺切除および類似する泌尿器学的処置などの泌尿器学的処置に関連する痛みおよび炎症を軽減させることについて有用である。尿路または泌尿器学的構造への溶液の適用に対する本明細書中での参照は、尿路その自体、膀胱および前立腺、ならびに関連した構造への適用を包含することが意図される。様々な研究により、セロトニン、ヒスタミンおよびブラジキニンは下部尿路組織において炎症を生じさせることが明らかにされている。Ｓｃｈｗａｒｔｚ、Ｍ．Ｍ．他、“Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｌｅａｋａｇｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｋｉｄｎｅｙ  ａｎｄ  Ｌｏｗｅｒ  Ｕｒｉｎａｒｙ  Ｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ，Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ”、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１４０：５３５〜５３９（１９７２）。泌尿器学的処置のための好適な灌注溶液が本明細書中下記において実施例ＩＩＩに開示される。この溶液は、好ましくは、下記の組合せ、および好ましくは下記のすべてを含む：ヒスタミンにより誘導される痛みおよび炎症を阻害するためのヒスタミン１レセプターアンタゴニスト；末梢のＣ線維侵害受容ニューロンにおけるこれらのレセプターの活性化を阻止するための５−ＨＴ３レセプターアンタゴニスト；ブラジキニン１アンタゴニスト；ブラジキニン２アンタゴニスト；および、組織傷害部位においてプロスタグランジン類によってもたらされる痛み／炎症を低下させるためのシクロオキシゲナーゼインヒビター。好ましくは、抗痙攣剤もまた、尿道および膀胱壁において痙攣を防止するために含まれる。
【０２４３】
本発明の溶液の一部はまた、好適には、希薄なゲルを生じさせるためにゲル化剤を含むことができる。このようなゲル化可能な溶液は、薬剤の継続した薄い局所的な所定の濃度を送達するために、例えば、尿路内または動脈壁内に適用され得る。
【０２４４】
本発明の溶液はまた、手術創傷部における痛みおよび炎症を阻害するために、そして同様に、火傷に伴う痛みおよび炎症を減少させるために周術期に用いられ得る。火傷は著量の生体アミンの放出をもたらし、そのようなアミンは痛みおよび炎症を生じさせるだけでなく、深刻な血漿管外遊出（流体損失）をもたらし、多くの場合、重篤な火傷の、生死にかかわる要素である。Ｈｏｌｌｉｍａｎ，Ｃ．Ｊ．他、“Ｔｈｅ  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｋｅｔａｎｓｅｒｉｎ，ａ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ，ｏｎ  Ｂｕｒｎ  Ｓｈｏｃｋ  Ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃ  Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｉｎ  ａ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｂｕｒｎ  Ｍｏｄｅｌ”、Ｊ．Ｔｒａｕｍａ  ２３：８６７〜８７１（１９８３）。関節鏡検査のための実施例Ｉに開示される溶液はまた、痛みおよび炎症を抑制するために創傷部または火傷部に対して、また、関節鏡検査などの外科的処置のために好適に適用され得る。あるいは、実施例Ｉの溶液の薬剤は、火傷部または創傷部への適用のために、ペースト基剤または膏薬基剤に含めることができる。
【０２４５】
ＶＩ．実施例
下記には、特定の手術的処置のために好適である本発明によるいくつかの配合物が示され、その後には、本発明の薬剤を利用する３つの臨床研究のまとめが示される。
【０２４６】
Ａ．実施例Ｉ
関節鏡検査のための灌注溶液
下記の組成物は、関節鏡検査処置時の解剖学的関節の灌注における使用のために好適である。その後の実施例において記載される残りの溶液がそうであるように、それぞれの薬物が、生理学的電解質を含有するキャリア流体（例えば、規定生理的食塩水または乳酸加リンゲル溶液など）において可溶化される。
【０２４７】
【表２９−１】
2006508961.tif 000031
【０２４８】
Ｂ．実施例ＩＩ
心臓血管および一般的血管の治療的処置および診断的処置のための灌注溶液
生理学的キャリア流体における溶液での下記の薬物および濃度範囲は、心臓血管処置および一般的血管処置の時において手術部位を灌注する際の使用のために好適である。
【０２４９】
【表２９−２】
2006508961.tif 000032
【０２５０】
Ｃ．実施例ＩＩＩ
泌尿器学的処置のための灌注溶液
生理学的キャリア流体における溶液での下記の薬物および濃度範囲は、泌尿器学的処置の時において手術部位を灌注する際の使用のために好適である。
【０２５１】
【表２９−３】
2006508961.tif 000033
【０２５２】
Ｄ．実施例ＩＶ
関節鏡検査、火傷部、一般的手術創傷部および経口／歯科適用のための灌注溶液
下記の組成は、関節鏡検査処置および経口／歯科処置の時における解剖学的灌注、ならびに火傷部および一般的手術創傷部の管理における使用のために好ましい。実施例Ｉに示される溶液は、本発明とともに使用されるために好適である一方で、下記の溶液は、より大きい効力が予想されるので、さらにより好ましい。
【０２５３】
【表２９−４】
2006508961.tif 000034
【０２５４】
Ｅ．実施例Ｖ
心臓血管および一般的血管の治療的処置および診断的処置のための代わりの灌注溶液
生理学的キャリア流体における溶液での下記の薬物および濃度範囲は、心臓血管処置および一般的血管処置の時において手術部位を灌注する際の使用のために好ましい。再度ではあるが、この溶液は、効力がより大きいために、上記の実施例ＩＩに示される溶液と比較して好ましい。
【０２５５】
【表２９−５】
2006508961.tif 000035
【０２５６】
Ｆ．実施例ＶＩ
泌尿器学的処置のための代わりの灌注溶液
生理学的キャリア流体における溶液での下記の薬物および濃度範囲は、泌尿器学的処置の時において手術部位を灌注する際の使用のために好ましい。この溶液は、前記の実施例ＩＩＩに示される溶液よりもさらに大きい効力を有すると考えられる。
【０２５７】
【表２９−６】
2006508961.tif 000036
【０２５８】
Ｇ．実施例ＶＩＩ
心臓血管および一般的血管の再狭窄防止灌注溶液
生理学的キャリア流体における溶液での下記の薬物および濃度範囲は、心臓血管および一般的血管の治療的処置および診断的処置の時の灌注における使用のために好ましい。この好ましい溶液における薬物はまた、抗痙攣性で、再狭窄防止で、かつ痛み防止／抗炎症性の好ましい溶液について記載された上記の実施例ＩＩおよび実施例Ｖまたは下記の実施例ＶＩＩＩの心臓血管灌注溶液および一般的血管灌注溶液に同じ濃度で添加され得る。
【０２５９】
【表２９−７】
2006508961.tif 000037
【０２６０】
Ｈ．実施例ＶＩＩＩ
心臓血管および一般的血管の治療的処置および診断的処置のための代わりの灌注溶液
心臓血管および一般的血管の治療的処置および診断的処置における使用のためのさらなる好ましい溶液が、一酸化窒素（ＮＯ供与体）ＳＩＮ−１が、下記に示される濃度で、ＦＫ４０９（ＮＯＲ−３）およびＦＲ１４４４２０（ＮＯＲ−４）の２つの薬剤によって置き換えられることを除いて、実施例Ｖの前記で記載された配合と同じに配合される。
【０２６１】
【表２９−８】
2006508961.tif 000038
【０２６２】
Ｉ．実施例ＩＸ
関節鏡検査、火傷部、一般的手術創傷部および経口／歯科適用のための代わりの灌注溶液
関節鏡検査、火傷部、一般的手術創傷部および経口／歯科適用の灌注における使用のための代わりの好ましい溶液が、下記に示される濃度での下記の置き換え、削除および付加を用いて、前記で記載された実施例ＩＶの場合と同じに配合される。
１）アミトリプチリンがＨ１アンタゴニストとしてのメピラミンによって置換される；
２）カリクレインインヒビターのアプロチニンが削除される；
３）ブラジキニン１アンタゴニストの［ｌｅｕ９］［ｄｅｓ−Ａｒｇ１０］カリデンが付加される；
４）ブラジキニン２アンタゴニストのＨＯＥ１４０が付加される；かつ
５）μ−オピオイドアゴニストのフェンタニルが付加される。
【０２６３】
【表２９−９】
2006508961.tif 000039
【０２６４】
Ｊ．実施例Ｘ
泌尿器学的処置のための代わりの灌注溶液
泌尿器学的処置時の灌注における使用のための代わりの好ましい溶液が、下記に示される濃度での下記の置き換え、削除および付加を用いて、前記で記載された実施例ＶＩの場合と同じに配合される。
１）ＳＩＮ−１が、
ａ）ＦＫ４０９（ＮＯＲ−３）、および
ｂ）ＦＲ１４４４２０（ＮＯＲ−４）
の２つの薬剤の組合せによってＮＯ供与体として置換される；
２）カリクレインインヒビターのアプロチニンが削除される；
３）ブラジキニン１アンタゴニストの［ｌｅｕ９］［ｄｅｓ−Ａｒｇ１０］カリデンが付加される；かつ
４）ブラジキニン２アンタゴニストのＨＯＥ１４０が付加される。
【０２６５】
【表２９−１０】
2006508961.tif 000040
【０２６６】
Ｋ．実施例ＸＩ
ニュージーランド白ウサギにおける正常な腸骨動脈のバルーン拡張およびその応答に対するヒスタミン／セロトニンレセプター遮断の影響
本研究の目的は２つであった。第１に、動脈緊張の研究のための新しいインビボモデルが用いられた。バルーン血管形成術の前および後における動脈の大きさの変化の時間経過が下記に記載される。第２に、この状況での動脈緊張の制御における一緒になったヒスタミンおよびセロトニンの役割が、次いで、ヒスタミンレセプター遮断剤およびセロトニンレセプター遮断剤を血管形成術傷害の前および後において動脈に選択的に注入することによって研究された。
【０２６７】
１．設計上の検討事項
本研究は、１つの動脈群における動脈内腔の大きさの変化の時間経過を記載すること、および、別の類似する動脈群におけるこれらの変化に対するヒスタミン／セロトニンレセプター遮断の影響を評価することが意図された。２つの異なる群の比較を容易にするために、両方の群は、実験時に行われた注入の内容物を除いて同一の様式で処置された。コントロール動物（動脈）では、注入物は規定生理的食塩水（試験溶液のためのビヒクル）であった。ヒスタミン／セロトニンレセプター遮断の処理された動脈には、レセプターアンタゴニストを含有する生理的食塩水が、コントロール動物と同じ速度で、プロトコルの同じ部分において与えられた。具体的には、試験溶液は、すべてが規定生理的食塩水において、（ａ）１６．０μＭの濃度でのセロトニン３アンタゴニスト（メトクロプラミド）；（ｂ）１．６μＭの濃度でのセロトニン２アンタゴニスト（トラゾドン）；および（ｃ）１．０μＭの濃度でのヒスタミンアンタゴニスト（プロメタジン）を含んだ。試験溶液における薬物濃度は、腸骨動脈（８０ｃｃ／分）と溶液送達カテーテル（５ｃｃ／分）との間での１６対１の流速比のために、手術部位において送達される薬物濃度よりも１６倍大きかった。本研究は前方視的な無作為化盲検様式で行われた。特定の群への割り当てはランダムであり、試験者には、注入溶液の内容物（生理的食塩水単独、またはヒスタミン／セロトニンレセプターアンタゴニストを含有する生理的食塩水単独）について、血管造影分析が完了するまで知らされなかった。
【０２６８】
２．動物プロトコル
本プロトコルはシアトル在郷軍人医療センターの動物使用委員会によって承認された。施設はアメリカ実験動物管理認定協会によって全面的に認定されている。通常のウサギ餌で飼育された３ｋｇ〜４ｋｇのオスのニュージーランド白ウサギの腸骨動脈が調べられた。動物を、効果を生じさせるために投薬されたキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与により使用して鎮静させ、切開を首の腹側中線において行い、頸動脈を単離した。動脈を遠位側で結紮し、動脈切開を行い、５フレンチのシースを下行大動脈の中に導入した。基準状態での血圧および心拍数を記録し、その後、遠位大動脈および両側の腸骨動脈の血管造影図が、下行大動脈へのイオパミドール７６％（Ｓｑｕｉｂｂ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）の手による注射を使用して３５ｍｍ映画フィルムに記録された（フレーム速度、１秒あたり１５）。それぞれの血管造影図について、校正対象物が、直径測定が行われたときの倍率についての補正を可能にするためにＸ線撮影視野に置かれた。２．５フレンチの注入カテーテル（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ、ＣＡ）が、頸動脈シースを通して置かれ、大動脈分岐点の１ｃｍ〜２ｃｍ上方に設置された。試験溶液（生理的食塩水単独、またはヒスタミン／セロトニンレセプターアンタゴニストを含有する生理的食塩水のいずれか）の注入が５ｃｃ／分の速度で開始され、１５分間継続された。注入して５分後に、第２の血管造影図が、以前に記載された技術を使用して行われ、その後、２．５ｍｍのバルーン血管形成術用カテーテル（ｔｈｅ  Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ、Ｃｏｒｄｉｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）を、Ｘ線透視による誘導のもとで、左腸骨動脈に、次いで右腸骨動脈に素早く進めた。それぞれの腸骨動脈において、バルーンカテーテルを、骨性視認点を使用して近位側および遠位側の深部大腿分岐の間に注意深く設置し、バルーンを１２気圧の圧力にまで３０秒間膨張させた。バルーンカテーテルを、膨張したバルーンの直径が映画フィルムに記録され得るようにＸ線撮影用造影剤の薄い溶液を使用して膨張させた。血管形成術用カテーテルを素早く除き、別の血管造影図を注入開始後の平均して８分後に映画フィルムに記録した。注入は１５分の時点まで継続され、別の血管造影図（４番目）が行われた。その後、注入を停止し（合計で７５ｃｃの溶液が注入された）、注入カテーテルを除いた。３０分の時点（注入停止後１５分）で、最後の血管造影図が以前のように記録された。血圧および心拍数が１５分および３０分の時点で血管造影図の直前に記録された。最後の血管造影図の後、動物を、静脈内投与された過剰用量の麻酔剤で安楽死させ、腸骨動脈を取り出し、組織学的分析のためにホルマリン中で浸漬固定した。
【０２６９】
３．血管造影分析
血管造影図が１秒あたり１５のフレーム速度で３５ｍｍ映画フィルムに記録された。分析のために、血管造影図は５．５フィートの距離でＶａｎｇｕａｒｄプロジェクターから投影された。バルーン血管形成術部位に対して事前に定められた位置における腸骨動脈の直径が、校正対象物の測定による倍率についての補正の後に携帯型カリパス測定に基づいて記録された。測定は、基準状態（試験溶液の注入が開始される前）、注入して５分、バルーン血管形成術直後（試験溶液が開始された後の平均して８分後）、１５分（注入が停止される直前）、および３０分（注入停止後１５分）において行われた。直径の測定は、それぞれの腸骨動脈において３カ所で行われた：バルーン拡張部位の近位側、バルーン拡張部位、およびバルーン拡張部位のすぐ遠位側。
【０２７０】
直径の測定値は、その後、下記の式によって面積測定値に変換された：
面積＝（Ｐｉ）（直径２）／４
血管収縮の計算の場合、基準状態での値が、動脈の最大面積を表すために使用され、パーセント血管収縮が、
％血管収縮＝｛（基準状態での面積−その後の時点での面積）／基準状態での面積｝×１００
として計算された。
【０２７１】
４．統計学的方法
すべての値は、平均値±１［平均値の標準誤差］として表される。コントロール動脈における血管運動応答の経時変化が、反復測定に対する補正を伴う一元配置分散分析を使用して評価された。特定の時点の間でのデータの事後比較が、Ｓｃｈｅｆｆｅの検定を使用して行われた。有意な血管収縮が生じた時点がコントロール動脈において決定されると、コントロール動脈、およびヒスタミン／セロトニンレセプターアンタゴニストで処置された動脈が、独立変数として同定された処置群に関する多重分散分析を使用して、有意な血管収縮がコントロール動脈において生じた場合のそれらの時点において比較された。演繹的な規定された仮説が１つもない場合を補うために、０．０１未満のｐ値が有意であると見なされた。統計学は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ(登録商標)（バージョン４．５）（Ｓｔａｔｓｏｆｔ、Ｔｕｌｓａ、ＯＫ）を使用して行われた。
【０２７２】
５．結果
生理的食塩水の注入が与えられた正常な動脈におけるバルーン血管形成術の前および後での動脈直径の変化の時間経過が、８匹の動物から得られた１６個の動脈において評価された（表３０）。各動脈の３つのセグメントが調べられた：バルーン拡張セグメントのすぐ上流側の近位側セグメント、バルーン拡張セグメント、およびバルーン拡張セグメントのすぐ下流側の遠位側セグメント。近位側セグメントおよび遠位側セグメントでは、動脈の大きさにおける類似した変化パターンが明らかにされた。すなわち、それぞれにおいて、すべての時点が比較されたとき、動脈直径の有意な変化が認められた（近位側セグメント、ｐ＝０．０００２、および遠位側セグメント、ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ）。事後検定では、血管形成術直後の時点での直径が、これらのセグメントのそれぞれにおいて、基準状態での直径または３０分の時点での直径よりも著しく小さいことが示された。他方で、５分、１５分および３０分の時点でのそれぞれのセグメントにおける動脈直径は、基準状態での直径と類似していた。バルーン拡張セグメントは、動脈の大きさにおいて、近位側セグメントおよび遠位側セグメントよりも小さい変化を示した。このセグメントの基準状態での直径は１．８２±０．０５ｍｍであった；血管形成術のために使用されたバルーンの公称膨張直径は２．５ｍｍであり、バルーンの実際の測定された膨張直径は２．２０±０．０３ｍｍであった（ｐ＜０．０００１、バルーンで処置されたセグメントの基準状態での直径に対して）。従って、膨張したバルーンは、バルーン拡張セグメントの円周方向の拡がりを生じさせた。しかし、基準状態から３０分の時点までの内腔直径における増大はわずかでしかなかった（１．８２±０．０５ｍｍから１．９４±０．０７ｍｍ、事後検定によりｐ＝ＮＳ）。
【０２７３】
【表３０】
2006508961.tif 000041
【０２７４】
動脈の内腔直径を使用して、内腔面積を計算し、次いで、この面積測定値を使用して、パーセント血管収縮を、５分、血管形成術直後、１５分および３０分のデータを基準状態での測定値に対して比較することによって計算した。パーセント血管収縮として表された近位側セグメントおよび遠位側セグメントのデータが図９に示される；経時的な血管収縮量の変化は顕著である（近位側セグメントにおいて、ｐ＝０．０００８；遠位側セグメントにおいて、ｐ＝０．０００１、ＡＮＯＶＡ）。事後検定により、血管形成術直後の時点での血管収縮は、３０分の時点で存在する血管収縮と著しく異なることが確認された（両方のセグメントにおいて、Ｐ＜０．００１）。遠位側セグメントでは、血管形成術直後の血管収縮はまた、５分の時点での血管収縮よりも著しく小さかった（ｐ＜０．０１）；時点間の比較において他の差はどれも、事後検定により、有意ではなかった。
【０２７５】
コントロール動脈における内腔変化は下記のようにまとめることができる：１）基準状態での内腔面積の約３０％の喪失を伴う血管収縮がバルーン拡張の直後にバルーン拡張セグメントの近位側および遠位側の動脈セグメントにおいて生じている。より小さい量の血管収縮が拡張前および１５分の時点（拡張後の約７分）での近位側セグメントおよび遠位側セグメントにおいて生じる傾向があり、しかし、また、３０分の時点（拡張後の約２２分）までに、血管拡張に向かう傾向が以前の血管収縮に取って代わっている；２）バルーン拡張セグメントにおいて、内腔の大きさにおける軽微な変化が存在するだけであり、そして、基準状態でのこのセグメントに存在するよりも著しく大きい膨張した直径を有するバルーンの使用にもかかわらず、拡張セグメントの内腔直径には有意な増大は認められなかった。これらの知見により、想定されたヒスタミン／セロトニン処置の何らかの影響は、血管収縮が存在した場合の時点での近位側セグメントおよび遠位側セグメントにおいて検出可能であるにすぎないという結論に至った。
【０２７６】
ヒスタミン／セロトニンレセプター遮断溶液が１６個の動脈（８匹の動物）に注入された。血管造影データを１２個の動脈においてすべての時点で得ることができた。心拍数および収縮期血圧の測定値を一部の動物において得ることができた（表３１）。２つの動物群が特定の時点で比較されたとき、心拍数または収縮期血圧において差は認められなかった。ヒスタミン／セロトニンで処置された動物は、基準状態から３０分まで収縮期血圧における減少傾向（−１４±５ｍｍＨｇ、ｐ＝０．０４）および心拍数の低下傾向（−２６±１０、ｐ＝０．０５）を示した。コントロール動物では、実験の継続期間中を通して心拍数または収縮期血圧において変化は認められなかった。
【０２７７】
【表３１】
2006508961.tif 000042
【０２７８】
ヒスタミン／セロトニンで処置された動脈の近位側セグメントおよび遠位側セグメントが、パーセント血管収縮測定値を使用してコントロール動脈と比較された。図１０Ａには、コントロール動脈に存在する血管収縮と比較して、近位側セグメントの血管収縮に対するヒスタミン／セロトニン注入の影響が示される。２つの処置群における知見が、基準状態、血管形成術直後および１５分の時点で比較されたとき、ヒスタミン／セロトニン注入は、コントロールの生理的食塩水注入と比較して、著しく小さい血管収縮をもたらしていた（ｐ＝０．００３、二元配置ＡＮＯＶＡ）。遠位側セグメントにおける２つの処置群の比較が図１０Ｂに例示される。遠位側セグメントにおいて平均直径測定値の差が観測されたにもかかわらず、溶液で処置された血管は、基準状態、血管形成術直後および１５分の時点で、生理的食塩水で処置されたコントロール血管よりも少ない血管収縮を示したが、このパターンは統計学的有意性を達成しなかった（ｐ＝０．３２、二元配置ＡＮＯＶＡ）。統計学的有意性がないことは、コントロール血管における予想されたよりも小さい血管収縮が原因であると考えられ得る。
【０２７９】
Ｌ．実施例ＸＩＩ
５−ヒドロキシトリプタミン誘導による膝関節血漿管外遊出のアミトリプチリン阻害−関節内投与経路対静脈内投与経路の比較
下記の研究は、炎症のラット膝滑膜モデルにおいて５−ＨＴ２レセプターアンタゴニストのアミトリプチリンの２つの投与経路を比較するために着手された：１）継続した関節内注入対２）静脈内注射。５−ＨＴにより誘導される関節血漿管外遊出を阻害するアミトリプチリンの能力が、それぞれの経路によって送達されたアミトリプチリンの効力および総薬物用量の両方を比較することによって明らかにされた。
【０２８０】
１．動物
カリフォルニア大学（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）の施設動物管理委員会からの承認がこれらの研究のために得られた。体重が３００ｇ〜４５０ｇのオスＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｂａｎｔｉｎ  ａｎｄ  Ｋｉｎｇｍａｎ、Ｆｒｅｍｏｎｔ、ＣＡ）がこれらの研究において使用された。ラットは、食料および水を自由に摂取させながら、制御された照明条件（午前６時〜午後６時までの照明）のもとで飼育された。
【０２８１】
２．血漿管外遊出
ラットをナトリウムペントバルビタール（６５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、その後、ラットには、血漿管外遊出のためのマーカーとして使用されるエバンスブルー色素の尾静脈注射（２．５ｍｌ／ｋｇの体積での５０ｍｇ／ｋｇ）が与えられた。膝関節包を、覆っている皮膚を切開することによって露出させ、３０ゲージの注射針を関節内に挿入し、流体の注入のために使用した。注入速度（２５０μｌ／分）は、Ｓａｇｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｓｙｒｉｎｇｅポンプ（モデル３４１Ｂ、Ｏｒｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．、Ｂｏｓｔｏｎ、ＭＡ）によって制御された。２５ゲージの注射針もまた、関節空間の中に挿入され、灌流液が、Ｓａｇｅ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｓｙｒｉｎｇｅポンプ（モデル３５１）によって制御されて２５０μｌ／分で取り出された。
【０２８２】
ラットをランダムに３つの群に割り当てた：１）関節内（ＩＡ）５−ＨＴ（１μＭ）のみを受けるラット、２）静脈内（ＩＶ）投与によるアミトリプチリン（０．０１ｍｇ／ｋｇから１．０ｍｇ／ｋｇに及ぶ用量）、その後、ＩＡの５−ＨＴ（１ｍＭ）を受けるラット、および、３）関節内（ＩＡ）投与によるアミトリプチリン（１μＭから１００μＭに及ぶ用量）、その後、ＩＡの５−ＨＴ（１μＭ）＋ＩＡのアミトリプチリンを受けるラット。すべての群において、基準状態での血漿管外遊出レベルが、０．９％の生理的食塩水を関節内に灌流し、３つの灌流液サンプルを１５分の期間にわたって（５分毎に１つ）集めることによって、それぞれの実験の開示時に得られた。その後、第１の群には、合計で２５分間にわたって５−ＨＴがＩＡ投与された。灌流液サンプルが合計で２５分間にわたって５分毎に集められた。その後、サンプルは、エバンスブルー色素の濃度について、その濃度に正比例する６２０ｎｍにおける吸光度の分光光度法による測定によって分析された（ＣａｒｒおよびＷｉｌｈｅｌｍ、１９６４）。ＩＶアミトリプチリン群には、薬物がエバンスブルー色素の尾静脈注射時に投与された。その後、膝関節が生理的食塩水で１５分間にわたって灌流され（基準状態）、その後、５−ＨＴ（１μＭ）による２５分間の灌流が行われた。灌流液サンプルが合計で２５分間にわたって５分毎に集められた。その後、サンプルは、分光光度計を使用して分析された。ＩＡアミトリプチリン群では、アミトリプチリンが１５分間の生理的食塩水の灌流の後１０分間にわたって関節内に灌流され、その後、アミトリプチリンが、さらに２５分間、５−ＨＴとの組合せで灌流された。灌流液サンプルが５分毎に集められ、上記のように分析された。
【０２８３】
一部のラット膝は、膝関節の物理的損傷、ならびに流入および流出の不一致（これらは、灌流液における血液の存在、および基準状態での大きい血漿管外遊出レベル、または不適切な注射針設置による膝関節の膨大によって検出可能である）のために、研究から除外された。
【０２８４】
Ａ．５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出
基準状態での血漿管外遊出が、調べられたすべての膝関節において測定された（総ｎ＝２２）。基準状態での血漿管外遊出レベルは低く、平均値は６２０ｎｍにおいて０．０２２±０．００３吸光度ユニット（平均値±平均値の標準誤差）であった。この基準状態での管外遊出レベルが図１１および図１２において破線として示される。
【０２８５】
ラット膝関節に灌流された５−ＨＴ（１μＭ）は、基準状態でのレベルを上回る血漿管外遊出の時間依存的な増大を生じさせている。５−ＨＴの関節内での２５分間の灌流のとき、血漿管外遊出の最大レベルが１５分までに達成され、灌流が２５分で停止されるまで継続した（データは示されず）。従って、報告された５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出レベルは、それぞれの実験期間中の１５分、２０分および２５分の時点の平均値である。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出は平均して０．１９２±０．０１１であり、これは、基準状態を上回る約８倍の刺激であった。このデータは図１１および図１２に図示され、ＩＶアミトリプチリンの「０」用量およびＩＡアミトリプチリンの「０」濃度にそれぞれ対応する。
【０２８６】
Ｂ．５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出に対する静脈内アミトリプチリンの影響
尾静脈注射により投与されたアミトリプチリンは、図１１に示されるように、５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出の用量依存的な減少をもたらした。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出のＩＶアミトリプチリン阻害に対するＩＣ５０は約０．０２５ｍｇ／ｋｇである。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出は１ｍｇ／ｋｇのＩＶアミトリプチリン用量によって完全に阻害され、血漿管外遊出は平均して０．０３４±０．０１０である。
【０２８７】
Ｃ．５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出に対する関節内アミトリプチリンの影響
濃度を増大させながら単独で関節内投与されたアミトリプチリンは、基準状態に対して血漿管外遊出レベルに影響を及ぼさず、血漿管外遊出は平均して０．０１８±０．００２であった（データは示されず）。濃度を増大させながら５−ＨＴと同時投与されたアミトリプチリンは、図１２に示されるように、５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出の濃度依存的な低下をもたらした。３μＭのＩＡアミトリプチリンの存在下での５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出は、５−ＨＴ単独によってもたらされる血漿管外遊出との差は大きくなく、しかしながら、５−ＨＴと同時灌流された３０μＭのアミトリプチリンは５０％を超える阻害をもたらし、一方、１００μＭのアミトリプチリンは、５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出の完全な阻害をもたらした。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出のＩＡアミトリプチリン阻害に対するＩＣ５０は約２０μＭである。
【０２８８】
本研究の主要な知見は、ラット膝関節において関節内灌流された５−ＨＴ（１μＭ）は、基準状態でのレベルを約８倍上回る血漿管外遊出の刺激をもたらすということであり、５−ＨＴ２レセプターアンタゴニストのアミトリプチリンの静脈内投与または関節内投与はいずれでも、５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出を阻害し得るということである。しかしながら、投与されたアミトリプチリンの総投薬量は、これら２つの薬物送達方法の間では劇的に異なっている。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出のＩＶアミトリプチリン阻害に対するＩＣ５０は０．０２５ｍｇ／ｋｇであり、すなわち、３００ｇの成体ラットにおいて７．５×１０−３ｍｇである。５−ＨＴ誘導による血漿管外遊出のＩＡアミトリプチリン阻害に対するＩＣ５０は約２０μＭでありる。この溶液の１ｍｌが、実験期間中、合計で３５分間にわたって５分毎に送達されたので、膝内に灌流された総投薬量は、膝に灌流された４．４×１０−５ｍｇの総投薬量について、７ｍｌであった。このＩＡアミトリプチリン用量はＩＶアミトリプチリン用量の約１／２００である。さらに、ＩＡ灌流された薬物の小さい割合のみが全身的に吸収され、それにより、薬物の総送達用量におけるさらにより大きい差を生じさせていることが考えられる。
【０２８９】
５−ＨＴは、前記で議論されたように、手術による痛みおよび炎症において重要な役割を果たしているので、アミトリプチリンなどの５−ＨＴアンタゴニストは、周術期の期間中に使用された場合、有益であり得る。最近の研究では、整形外科手術後の痛みに対する経口アミトリプチリンの効果を明らかにすることが試みられた（Ｋｅｒｒｉｃｋ他、１９９３）。５０ｍｇもの低い経口用量は、「満足感の低下」などの望ましくない中枢神経系副作用を生じさせた。また、Ｋｅｒｒｉｃｋ他の研究ではまた、経口アミトリプチリンは手術後の患者において偽薬よりも大きい痛み尺度スコア（Ｐ＜０．０５）を生じさせたことが示された。これが、経口アミトリプチリンによってもたらされる全体的な不快のためであったかどうかは不明である。対照的に、関節内投与経路は、薬物の極めて低い濃度を炎症部位に局所送達することを可能にし、最小限の副作用を伴う最大限の利益をもたらし得る。
【０２９０】
Ｍ．実施例ＸＩＩＩ
ウサギ動脈における回転アテローム切除誘導による血管痙攣に対する心臓血管・一般的血管溶液の効果
１．試験された溶液
本研究では、下記の点を除いて、上記の実施例Ｖに示された薬剤からなる灌注溶液が用いられた。ニトロプルシドが一酸化窒素供与体としてのＳＩＮ−１に取って代えられ、ニカルジピンがＣａ２＋チャネルアンタゴニストとしてのニソルジピンに取って代えられた。
【０２９１】
ニトロプルシドの濃度は、その以前に規定された薬理学的活性（ＥＣ５０）に基づいて選択された。この試験溶液におけるそれ以外の薬剤の濃度は、それらの同族レセプターに関する薬剤の結合定数に基づいて決定された。さらに、すべての濃度は、ウサギの遠位大動脈における１分あたり８０ｃｃの血液流速および溶液送達カテーテルにおける１分あたり５ｃｃの流速に基づいて調節された。３つの成分が１ｃｃ以下のＤＭＳＯに混合され、その後、これらの成分および残る３つの成分が規定生理的食塩水におけるそれらの最終濃度に混合された。規定生理的食塩水からなるコントロール溶液が利用された。試験溶液またはコントロール溶液は、５ｃｃ／分の速度で２０分間、注入された。注入における短時間の中断が、血圧測定が行われた時に必要であった。従って、各動物には、約９５ｃｃの溶液が２０分間の処置期間において与えられた。
【０２９２】
２．動物プロトコル
本プロトコルはシアトル在郷軍人医療センターの動物使用委員会によって承認され、医療センターはアメリカ実験動物管理認定協会によって認定されている。２％コレステロールのウサギ餌で３週間〜４週間飼育された３ｋｇ〜４ｋｇのオスのニュージーランド白ウサギの腸骨動脈が調べられた。動物を、効果を生じさせるために投薬されたキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（３５ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与により使用して鎮静させ、切開を首の腹側中線において行い、頸動脈を単離した。動脈を遠位側で結紮し、動脈切開を行い、５フレンチのシースを下行大動脈の中に導入し、腎動脈のレベルに配置した。基準状態での血圧および心拍数を記録した。遠位大動脈および両側の腸骨動脈の血管造影図を、下行大動脈へのイオパミドール７６％（Ｓｑｕｉｂｂ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）の手による注射を使用して３５ｍｍ映画フィルムに記録した（フレーム速度、１秒あたり１５）。
【０２９３】
それぞれの血管造影図について、校正対象物が、直径測定が行われたときの倍率についての補正を可能にするためにＸ線撮影視野に置かれた。上記試験溶液または生理的食塩水コントロールのいずれかの注入が５ｃｃ／分の速度で５フレンチのシースの側方アームから開始され（遠位大動脈に送達され）、２０分間継続された。注入して５分後に、第２の血管造影図が、以前に記載された技術を使用して行われた。その後、１．２５ｍｍまたは１．５０ｍｍの回転アテローム切除術用バー（Ｈｅａｒｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｂｏｓｔｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｉｎｃ．）を腸骨動脈に進めた。回転アテローム切除術用バーを、１５０，０００ＲＰＭ〜２００，０００ＲＰＭの回転速度で腸骨動脈のそれぞれにおいてガイドワイヤの上を３回進めた。それぞれの腸骨動脈において、回転アテローム切除術用バーを、遠位大動脈から、第１および第２の深部大腿分岐の間における腸骨動脈の中間部分まで進めた。回転アテローム切除術用バーを素早く除き、別の血管造影図を注入開始後の平均して８分後に映画フィルムに記録した。
【０２９４】
注入が２０分の時点まで継続され、別の血管造影図（４番目）が行われた。その後、注入を停止した。合計で約９５ｃｃのコントロール溶液または試験溶液が注入された。３０分の時点（注入停止後１５分）で、最後の血管造影図が以前のように記録された。血圧および心拍数が１５分および３０分の時点で血管造影図の直前に記録された。最後の血管造影図の後、動物を、静脈内投与された過剰用量の麻酔剤で安楽死させた。
【０２９５】
３．血管造影分析
血管造影図が１秒あたり１５のフレーム速度で３５ｍｍ映画フィルムに記録された。血管造影図は、処置評価を知ることなく、ランダムな順序で検討された。分析のために、血管造影図は５．５フィートの距離でＶａｎｇｕａｒｄプロジェクターから投影された。それぞれの動物についての血管造影図全体が、腸骨動脈の解剖学的構造を同定するために、また、腸骨動脈における最大の痙攣部位を同定するために検討された。腸骨の解剖学的構造のマップが、測定のための部位を一貫して同定することを助けるために調製された。測定が、最初に回転アテローム切除術後１５分の血管造影図について行われ、次いで、ランダムな順序で、その動物から得られた残りの血管造影図について行われた。測定は、電子的な携帯型カリパス（Ｂｒｏｗｎ＆Ｓｈａｒｐｅ  Ｉｎｃ．、Ｎ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ、ＲＩ）を使用して行われた。腸骨動脈の直径が３カ所で測定された：腸骨動脈の第１の深部大腿分岐の近位側；最も重篤な痙攣部位において（これは、すべての場合において、第１および第２の深部大腿動脈分岐の間に生じていた）；および、遠位側部位（腸骨動脈の第２の深部大腿動脈分岐の起点の近くまたは遠位側）において。測定は、基準状態（試験溶液の注入が開始される前）、注入して５分、回転アテローム切除術直後（試験溶液が開始された後の平均して８分後）、注入が停止された直後の２０分（これは回転アテローム切除術開始後１５分であった）、および注入停止後１５分（回転アテローム切除術開始後３０分）において行われた。校正対象物がそれぞれの血管造影図において測定された。
【０２９６】
直径の測定値は、その後、下記の式によって面積測定値に変換された：
面積＝（Ｐｉ）（直径２）／４
血管収縮の計算の場合、基準状態での値が、動脈の最大面積を表すために使用され、パーセント血管収縮が、
％血管収縮＝｛（基準状態での面積−その後の時点での面積）／基準状態での面積｝×１００
として計算された。
【０２９７】
４．統計学的方法
すべての値は、平均値±１［平均値の標準誤差］として表される。コントロール動脈における血管運動応答の経時変化が、反復測定に対する補正を伴う一元配置分散分析を使用して評価された。特定の時点の間でのデータの事後比較が、Ｓｃｈｅｆｆｅの検定を使用して行われた。試験溶液で処置された動脈は、多重分散分析（ＭＡＮＯＶＡ）を使用して、腸骨動脈における指定された位置および指定された時点で、生理的食塩水で処理された動脈に対して比較された。演繹的な規定された仮説が１つもない場合を補うために、０．０１未満のｐ値が有意であると見なされた。統計学は、Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ  ｆｏｒ  Ｗｉｎｄｏｗｓ(登録商標)（バージョン４．５）（Ｓｔａｔｓｏｆｔ、Ｔｕｌｓａ、ＯＫ）を使用して行われた。
【０２９８】
５．結果
４匹の動物における８個の動脈には、生理的食塩水溶液が与えられ、７匹の動物における１３個の動脈には、試験溶液が与えられた。それぞれの動脈において、試験された溶液にもかかわらず、回転アテローム切除術が、回転するバーを遠位大動脈から腸骨動脈の中間部分まで通すことによって行われた。従って、近位側の腸骨動脈セグメント、および最大血管収縮部位と称されるセグメントが回転バーにさらされた。回転アテローム切除術用カテーテルのためのガイドワイヤは遠位側セグメントを通り抜けたが、回転アテローム切除カテーテル自体の回転バーは遠位側セグメントの中には入らなかった。
【０２９９】
３つの指定されたセグメントにおける生理的食塩水処置動脈での腸骨動脈直径が表３２にまとめられる。近位側セグメントにおいて、実験の時間経過中にわたって動脈の直径には大きな変化は認められなかった（ｐ＝０．８８、ＡＮＯＶＡ）。最大血管収縮部位における中間の腸骨動脈において、直径の大きな低下が認められ、最大の低下が回転アテローム切除術後１５分の時点で生じていた（ｐ＜０．０００１、５つのすべての時点での測定値を比較するＡＮＯＶＡ）。遠位側セグメントの直径は、実験の時間経過中を通して大きく変化していなかった（ｐ＝０．１９、すべての時点を比較するＡＮＯＶＡ）。だが、回転アテローム切除術直後および回転アテローム切除術後１５分の時点では、直径の減少傾向が認められた。
【０３００】
【表３２−１】
2006508961.tif 000043
【０３０１】
【表３２−２】
2006508961.tif 000044
【０３０２】
試験溶液で処置された腸骨動脈の直径が表３３に示される。血管造影図は、注入開始後５分の時点においてこれらの動脈のうちの３つで記録されず、血管造影データは、回転アテローム切除術後３０分の時点において２つの動脈（１匹の動物）から除外された。これは、その動物は、血行力学的不安性を生じさせる空気塞栓を１５分の血管造成図で受けたからである。５つの時点での観測結果の数が一定していないので、ＡＮＯＶＡ統計学はこのデータに対して適用されなかった。それでもなお、実験の時間経過中を通した試験溶液による処置動脈におけるセグメント内の直径測定値の変化の大きさは、生理的食塩水により処置された動脈において認められたよりも小さいことが明らかである。
【０３０３】
【表３３】
2006508961.tif 000045
【０３０４】
様々な時点での観測結果の数が異なるので、特定のセグメントでの直径における統計学的な類似性／差を明らかにするためのＡＮＯＶＡは行われなかった。
【０３０５】
本研究に対する主要な終点は、生理的食塩水で処置された動脈および試験溶液で処置された動脈における血管収縮量の比較であった。血管収縮は、動脈直径測定値から得られる動脈内腔面積に基づいていた。５分、回転アテローム切除術直後およびその後の時点における面積値が基準状態での面積値と比較されて、相対的な面積変化が計算された。結果は、内腔面積が、その後の時点において基準状態の場合よりも小さいならば、「血管収縮」と称され、そして、内腔面積が、基準状態での面積と比較して、その後の時点において大きくなったならば、「血管拡張」と称された（表２７および表２８）。両方の処置群においてできる限り多数の観測結果を用いた統計学的分析を容易にするために、試験溶液で処置された動脈および生理的食塩水で処置された動脈のデータが、回転アテローム切除術直後および回転アテローム切除術後１５分の時点で比較された。
【０３０６】
近位側セグメント（図１３）において、回転アテローム切除術直後の時点では、いずれの処置でも内腔面積には本質的な変化は認められず、しかし、回転アテローム切除術後１５分の時点までにこのセグメントにおいて若干の血管拡張が認められた。試験溶液は、このセグメントにおいて、生理的食塩水による処置と比較して、回転アテローム切除術の結果を変化させなかった。しかしながら、最大血管収縮部位における中間の血管（図１４）では、試験溶液は、生理的食塩水で処置された動脈において回転アテローム切除術によって引き起こされた血管収縮を著しく弱めた（ｐ＝０．０００４、反復測定について補正されたＭＡＮＯＶＡ）。遠位側セグメント（図１５）では、生理的食塩水で処置された動脈において血管収縮はほとんど認められず、また、試験溶液は、回転アテローム切除術に対する応答を大きく変化させなかった。
【０３０７】
【表３４】
2006508961.tif 000046
【０３０８】
【表３５】
2006508961.tif 000047
【０３０９】
生理的食塩水で処置された動脈および試験溶液で処置された動脈における血行力学的応答が表３６にまとめられる。生理的食塩水で処置された動物と比較した場合、試験溶液で処置された動物は、溶液注入の期間中、実質的な低血圧および顕著な頻脈を持続した。注入完了後１５分までに（または回転アテローム切除術後３０分の時点で）、試験溶液で処置された動物は、基準状態に向かう血圧の、完全ではないが、ある程度の部分的な回復を示した。
【０３１０】
【表３６】
2006508961.tif 000048
【０３１１】
６．研究のまとめ
１．高コレステロール血症のニュージーランド白ウサギにおける回転アテローム切除術は、回転バーにさらされた腸骨動脈の中間部分において顕著な血管痙攣を生じさせる。この血管痙攣は、回転アテローム切除術処置後１５分で最も明らかであり、回転アテローム切除術後３０分までに、薬理学的介入を用いることなくほぼ完全に消失している。
【０３１２】
２．本プロトコルで調べられた回転アテローム切除術処置のもとでは、本発明に従った試験溶液処置は、中間腸骨動脈が回転バーにさらされた後で見られる血管痙攣をほぼ完全に阻害している。
【０３１３】
３．本プロトコルで使用された成分の濃度が与えられた本発明の試験溶液による処置は、深刻な低血圧を溶液の注入時に生じさせる。試験溶液による回転アテローム切除術後での血管痙攣の弱化が重篤な低血圧の存在下で生じた。
【０３１４】
本発明の好ましい実施形態が例示および記載されているが、開示された溶液および方法に対する様々な変化が、本発明の精神および範囲から逸脱することなく本発明の実施形態においてなされ得ることが理解される。例えば、本明細書中に含まれる開示に従って、開示された薬剤を増強し得るか、または開示された薬剤に取って代わり得る代わりの痛みインヒビターおよび抗炎症剤および抗痙攣剤および再狭窄防止剤が発見され得る。従って、付与される特許証の範囲は、添付された請求項の定義によってのみ限定されることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０３１５】
次に、本発明は、例として、添付されている図面に関連して、より詳細に記載される。
【図１】図１は、収縮、分泌および／または増殖を生じさせるシグナル伝達情報の分子標的および流れを示す一般的な血管細胞の概略図を提供する。レセプター、イオンチャネルおよび他の膜タンパク質を介する外部シグナルの統合が、血小板、好中球、内皮細胞および平滑筋細胞に対して共通である。分子標的の代表的な例が、本発明の溶液に含まれる薬物の治療的標的である分子の主要な群について含まれる。
【図２】図２は、血管平滑筋細胞におけるＧタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）経路とレセプターチロシンキナーゼ（ＲＴＫ）経路との間での「クロストーク」を例示するシグナル伝達経路の詳細な線図を提供する。それぞれの経路における代表的なタンパク質のみが、情報の流れを簡略化するために示されている。ＧＰＣＲの活性化は、細胞内カルシウムの増大および増大したプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）活性、そしてその後の平滑筋の収縮または痙攣をもたらす。また、ＲＴＫシグナル伝達経路への「クロストーク」が、ＰＹＫ２（新しく発見されたプロテインチロシンキナーゼ）およびＰＴＫ−Ｘ（明らかにされていないプロテインチロシンキナーゼ）の活性化によって生じ、これにより増殖が開始させられる。逆に、ＲＴＫの活性化は直接的に増殖を開始させる一方で、ＧＰＣＲ経路への「クロストーク」がＰＫＣ活性のレベルおよびカルシウムレベルにおいて生じる。ＬＧＲはリガンド依存性レセプターを表し、ＭＡＰＫはマイトジェン活性化タンパク質キナーゼを表す。これらの相互作用により、痙攣および再狭窄を媒介する分子標的の間での相乗的な相互作用に対する基礎が規定される。ＧＰＣＲシグナル伝達経路はまた、他の細胞タイプ（例えば、ニューロン）における痛み伝達をもたらすシグナル伝達（図３および図７）をも媒介する。
【図３】図３はＧタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）経路の線図を提供する。本発明の好ましい関節鏡検査溶液におけるいくつかの薬物についての作用の特定の分子部位が同定されている。
【図４】図４は、増殖因子レセプターシグナル伝達経路との「クロストーク」に関わるシグナル伝達タンパク質を含むＧタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）経路の線図を提供する。本発明の好ましい心臓血管／一般的血管溶液におけるいくつかの薬物についての作用の特定の分子部位が同定されている（図５もまた参照のこと）。
【図５】図５は、Ｇタンパク質共役レセプターシグナル伝達経路との「クロストーク」に関わるシグナル伝達タンパク質を含む増殖因子レセプターシグナル伝達経路の線図を提供する。本発明の好ましい心臓血管／一般的血管溶液におけるいくつかの薬物についての作用の特定の分子部位が同定されている（図４もまた参照のこと）。
【図６】図６は、増殖因子レセプターシグナル伝達経路との「クロストーク」に関わるシグナル伝達タンパク質を含むＧタンパク質共役レセプター経路の線図を提供する。好ましい泌尿器学的溶液におけるいくつかの薬物についての作用の特定の分子部位が同定されている。
【図７】図７はＧタンパク質共役レセプター経路の線図を提供する。本発明の好ましい一般的な手術創傷溶液におけるいくつかの薬物についての作用の特定の分子部位が同定されている。
【図８】図８は、血管平滑筋の弛緩を引き起こす、一酸化窒素（ＮＯ）供与体薬物およびＮＯの作用機構の線図を提供する。生理学的には、ある種のホルモンおよび伝達物質により、内皮細胞内におけるある形態のＮＯ合成酵素が、ＮＯの増大した合成をもたらす上昇した細胞内カルシウムによって活性化され得る。ＮＯ供与体はＮＯを細胞外で生じさせ得るか、または、平滑筋細胞の内部でＮＯに代謝され得る。細胞外のＮＯは内皮細胞中に拡散し得るか、または、直接、平滑筋細胞の中に進入し得る。ＮＯの主な標的は、ｃＧＭＰ依存性プロテインキナーゼ（ＰＫＧ）の活性化、および、続く、膜ポンプによる平滑筋細胞からのカルシウムの排出をもたらす可溶性グアニル酸シクラーゼ（ＧＣ）である。ＮＯはまた、電位感受性カルシウムチャネルの閉鎖を次に引き起こすカリウムチャネルを開口させることによって細胞を過分極させる。従って、カルシウムチャネルアンタゴニストと、カリウムチャネル開口剤と、ＮＯ供与体との相乗的な相互作用が、上記のシグナル伝達経路から明白である。
【図９】図９、図１０Ａおよび図１０Ｂは、バルーン血管形成術時における、本発明の溶液で使用されたヒスタミンアンタゴニストおよびセロトニンアンタゴニストを用いた注入の血管収縮に対する影響を明らかにする本明細書中の実施例ＶＩＩに記載される動物研究について、コントロール動脈、被験体動脈の近位側セグメントおよび被験体動脈の遠位側セグメントにおける時間に対する血管収縮の割合の図をそれぞれ提供する。
【図１０Ａ】図９、図１０Ａおよび図１０Ｂは、バルーン血管形成術時における、本発明の溶液で使用されたヒスタミンアンタゴニストおよびセロトニンアンタゴニストを用いた注入の血管収縮に対する影響を明らかにする本明細書中の実施例ＶＩＩに記載される動物研究について、コントロール動脈、被験体動脈の近位側セグメントおよび被験体動脈の遠位側セグメントにおける時間に対する血管収縮の割合の図をそれぞれ提供する。
【図１０Ｂ】図９、図１０Ａおよび図１０Ｂは、バルーン血管形成術時における、本発明の溶液で使用されたヒスタミンアンタゴニストおよびセロトニンアンタゴニストを用いた注入の血管収縮に対する影響を明らかにする本明細書中の実施例ＶＩＩに記載される動物研究について、コントロール動脈、被験体動脈の近位側セグメントおよび被験体動脈の遠位側セグメントにおける時間に対する血管収縮の割合の図をそれぞれ提供する。
【図１１】図１１および図１２は、本発明の溶液で使用され、膝関節に対して静脈内および関節内でそれぞれ送達されたアミトリプチリンの投薬量に対する血漿管外遊出の図を提供する。この場合、管外遊出は、本明細書中の実施例ＶＩＩＩに記載される動物研究において５−ヒドロキシトリプタミンの導入によって誘導されている。
【図１２】図１１および図１２は、本発明の溶液で使用され、膝関節に対して静脈内および関節内でそれぞれ送達されたアミトリプチリンの投薬量に対する血漿管外遊出の図を提供する。この場合、管外遊出は、本明細書中の実施例ＶＩＩＩに記載される動物研究において５−ヒドロキシトリプタミンの導入によって誘導されている。
【図１３】図１３、図１４および図１５は、本明細書中に記載される実施例ＸＩＩＩの動物研究において回転アテローム切除術直後および回転アテローム切除術後１５分の時点での、生理的食塩水で処置された動脈（Ｎ＝４）または本発明に従って処方された溶液で処置された動脈（Ｎ＝７）の近位側セグメント（図１３）、中間セグメント（図１４）および遠位側セグメント（図１５）についての、血管収縮（負の値）または血管拡張（正の値）の平均値±１［平均値の標準誤差］の図を提供する。
【図１４】図１３、図１４および図１５は、本明細書中に記載される実施例ＸＩＩＩの動物研究において回転アテローム切除術直後および回転アテローム切除術後１５分の時点での、生理的食塩水で処置された動脈（Ｎ＝４）または本発明に従って処方された溶液で処置された動脈（Ｎ＝７）の近位側セグメント（図１３）、中間セグメント（図１４）および遠位側セグメント（図１５）についての、血管収縮（負の値）または血管拡張（正の値）の平均値±１［平均値の標準誤差］の図を提供する。
【図１５】図１３、図１４および図１５は、本明細書中に記載される実施例ＸＩＩＩの動物研究において回転アテローム切除術直後および回転アテローム切除術後１５分の時点での、生理的食塩水で処置された動脈（Ｎ＝４）または本発明に従って処方された溶液で処置された動脈（Ｎ＝７）の近位側セグメント（図１３）、中間セグメント（図１４）および遠位側セグメント（図１５）についての、血管収縮（負の値）または血管拡張（正の値）の平均値±１［平均値の標準誤差］の図を提供する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【国際調査報告】
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