(57)【要約】本発明は、式(Ｉ)【化１】2006519807.tif 000052(式中、可変置換基は明細書に定義の通りである。)の化合物を、処置を必要とする患者に投与することによる、異常なＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を特徴とする疾患の処置法である。本発明の方法は、特に、変異ＲＡＦキナーゼを有する癌、とりわけ黒色腫の治療に有用である。
2006519807.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患を有する患者の処置法であり、該患者に有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の式(Ｉ)
【化１】
2006519807.tif 000048
〔式中、
ｒは０から２であり；
ｎは０から２であり；
ｍは０から４であり；
Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴは互いに独立してＮまたはＣＨである。ただし、Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴの３個を超えないが少なくとも１個がＮであり；
Ｇは低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＳＯ２−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)または−ＮＲ−であるか、またはアシルオキシ、オキソ、ハロゲンもしくはヒドロキシで置換された低級アルキレンであり；
Ｑは低級アルキル、とりわけメチルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
ＸはＹ、−Ｎ(Ｒ)−、オキサまたはチオ；好ましくは−ＮＨ−であり；
ＹはＨ、非置換または置換低級アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは非置換または置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニルであり、かつ、２個以上のＺが存在するとき(ｍ＞２)、該置換基Ｚは同一または異なる。〕
の化合物またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。
【請求項２】
式(Ｉ)
【化２】
2006519807.tif 000049
〔式中、
ｒは０から２であり；
ｎは０から２であり；
ｍは０から４であり；
Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴは互いに独立してＮまたはＣＨである。ただし、Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴの３個を超えないが少なくとも１個がＮであり；
Ｇは低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＳＯ２−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)または−ＮＲ−であるか、またはアシルオキシ、オキソ、ハロゲンもしくはヒドロキシで置換された低級アルキレンであり；
Ｑは低級アルキル、とりわけメチルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
ＸはＹ、−Ｎ(Ｒ)−、オキサまたはチオ；好ましくは−ＮＨ−であり；
ＹはＨ、非置換または置換低級アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは非置換または置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニルであり、かつ、２個以上のＺが存在するとき(ｍ＞２)、置換基Ｚは同一または異なる。〕
の化合物、またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩の、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患の処置用薬剤の製造における使用。
【請求項３】
ｒが０から２であり；
ｎが０または１であり；
ｍが０または１であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＥおよびＴがＣＨであり、そしてＤがＮであるか、またはＡ、Ｔ、ＤおよびＥがＣＨであり、そしてＢがＮである；特に、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレン、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｏ−、ヒドロキシメチレンまたはベンゾイルオキシ−メチレンであり；
Ｑがメチルであり；
ＲがＨまたは低級アルキルであり；
Ｘが−ＮＲ−、オキサまたはチアであり；
Ｙが非置換であるか、またはアミノ；低級アルカノイルアミノ；ハロゲン；非置換または置換低級アルキル；ヒドロキシ；低級アルコキシ；フェニル−低級アルコキシ；シアノ、低級アルケニル、Ｃ８−Ｃ１２アルコキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、低級アルキルカルバモイル、低級アルカノイル、フェニルオキシ、ハロ−低級アルキルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルメルカプト、ハロ−低級アルキルメルカプト、ヒドロキシ−低級アルキル、低級アルカンスルホニル、ハロ−低級アルカンスルホニル、フェニルスルホニルおよび２個の隣接炭素原子に結合している低級アルキレンジオキシからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているか、または、フェニル環に縮合した５から７員環を形成するように隣接位置がアルキレンまたはアルケニレンで置換されているフェニルであり；
Ｚがアミノ；Ｎ−低級アルキルアミノ；ヒドロキシ−低級アルキルアミノ；フェニル−低級アルキルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ；Ｎ−フェニル−低級アルキル−Ｎ−低級アルキルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルフェニルアミノ；低級アルカノイルアミノ；ベンゾイルアミノおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルアミノであり、いずれの場合にもフェニル基は非置換またはニトロ、アミノ、ハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイル、カルバモイル、２−ヒドロキシエチルアミノ、ベンジルオキシカルボニルアミノまたは臭素で置換されている、
請求項１に記載の方法または請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴがＣＨである、ＡがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；
Ｙが非置換であるか、またはハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである、
請求項１に記載の方法または請求項２に記載の使用。
【請求項５】
ｒが０であり；
ｎは０から２であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
ＲがＨであり；
Ｘが−ＮＲであり；そして
Ｙが、非置換であるか、または、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはシクロヘキシル(非置換であるか、または低級アルキルで置換されている)で置換されているフェニルである、
請求項１に記載の方法または請求項２に記載の使用。
【請求項６】
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；そして
Ｙが非置換であるか、または、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである、
請求項１に記載の方法または請求項２に記載の使用。
【請求項７】
Ｙが、４位をｔ−ブチルで置換されているフェニルである、請求項６記載の方法または使用。
【請求項８】
Ｙが、４位をトリフルオロメチルで置換されているフェニルである、請求項６記載の方法または使用。
【請求項９】
ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患が癌である、請求項１に記載の方法または請求項２に記載の使用。
【請求項１０】
癌が黒色腫、結腸直腸癌、卵巣癌、神経膠腫、腺癌、肉腫、乳癌および肝臓癌である、請求項９記載の方法または使用。
【請求項１１】
癌が黒色腫である、請求項１０記載の方法または使用。
【請求項１２】
患者における黒色腫を処置する方法であり、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織が変異体ＲＡＦキナーゼを発現するかまたは野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織が野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかまたは活性化変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現することが判明したとき、患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の式(Ｉ)
【化３】
2006519807.tif 000050
〔式中、
ｒは０から２であり；
ｎは０から２であり；
ｍは０から４であり；
Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴは互いに独立してＮまたはＣＨである。ただし、Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴの３個を超えないが少なくとも１個がＮであり；
Ｇは低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＳＯ２−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)または−ＮＲ−であるか、またはアシルオキシ、オキソ、ハロゲンもしくはヒドロキシで置換された低級アルキレンであり；
Ｑは低級アルキル、とりわけメチルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
ＸはＹ、−Ｎ(Ｒ)−、オキサまたはチオ；好ましくは−ＮＨ−であり；
ＹはＨ、非置換または置換低級アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは非置換または置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニルであり、２個以上のＺが存在するとき(ｍ＞２)、該置換基Ｚは同一または異なる。〕
の化合物またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩で処置することを含む、方法。
【請求項１３】
式(Ｉ)
【化４】
2006519807.tif 000051
〔式中、
ｒは０から２であり；
ｎは０から２であり；
ｍは０から４であり；
Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴは互いに独立してＮまたはＣＨである。ただし、Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴの３個を超えないが少なくとも１個がＮであり；
Ｇは低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＳＯ２−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)または−ＮＲ−であるか、またはアシルオキシ、オキソ、ハロゲンもしくはヒドロキシで置換された低級アルキレンであり；
Ｑは低級アルキル、とりわけメチルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
ＸはＹ、−Ｎ(Ｒ)−、オキサまたはチオ；好ましくは−ＮＨ−であり；
ＹはＨ、非置換または置換低級アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは非置換または置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニル、２個以上のＺが存在するとき(ｍ＞２)、該置換基Ｚは同一または異なる。〕
またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩の、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織が変異体ＲＡＦキナーゼを発現するかまたは野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織が野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかまたは活性化変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現することが判明したとき、該患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の式(Ｉ)の化合物で処置することを含む、黒色腫を処置するための薬剤の製造における使用。
【請求項１４】
ｒが０から２であり；
ｎが０または１であり；
ｍが０または１であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＥおよびＴがＣＨであり、そしてＤがＮであるか、またはＡ、Ｔ、ＤおよびＥがＣＨであり、そしてＢがＮである；特にＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレン、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｏ−、ヒドロキシメチレンまたはベンゾイルオキシ−メチレンであり；
Ｑがメチルであり；
ＲがＨまたは低級アルキルであり；
Ｘが−ＮＲ−、オキサまたはチアであり；
Ｙが、非置換であるかアミノ；低級アルカノイルアミノ；ハロゲン；非置換または置換低級アルキル；ヒドロキシ；低級アルコキシ；フェニル−低級アルコキシ；シアノ、低級アルケニル、Ｃ８−Ｃ１２アルコキシ、低級アルコキシカルボニル、カルバモイル、低級アルキルカルバモイル、低級アルカノイル、フェニルオキシ、ハロ−低級アルキルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルメルカプト、ハロ−低級アルキルメルカプト、ヒドロキシ−低級アルキル、２個の隣接炭素原子に結合している低級アルカンスルホニル、ハロ−低級アルカンスルホニル、フェニルスルホニルおよび低級アルキレンジオキシからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているか、または、フェニル環に縮合した５から７員環を形成するように隣接位置がアルキレンまたはアルケニレンで置換されているフェニルであり；
Ｚがアミノ；Ｎ−低級アルキルアミノ；ヒドロキシ−低級アルキルアミノ；フェニル−低級アルキルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ；Ｎ−フェニル−低級アルキル−Ｎ−低級アルキルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルフェニルアミノ；低級アルカノイルアミノ；ベンゾイルアミノおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルアミノ、いずれの場合にもフェニル基は非置換またはニトロ、アミノ、ハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイル、カルバモイル、２−ヒドロキシエチルアミノ、ベンジルオキシカルボニルアミノまたは臭素で置換されている、
請求項１２記載の方法または請求項１３記載の使用。
【請求項１５】
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴがＣＨである、ＡがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；
Ｙが、非置換であるか、またはハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである、
請求項１２記載の方法または請求項１３記載の使用。
【請求項１６】
ｒが０であり；
ｎは０から２であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
ＲがＨであり；
Ｘが−ＮＲであり；そして
Ｙが、非置換であるか、または、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはシクロヘキシル(非置換であるか、または低級アルキルで置換されている)で置換されているフェニルである、
請求項１２記載の方法または請求項１３記載の使用。
【請求項１７】
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；そして
Ｙが非置換であるか、または、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである、
請求項１２記載の方法または請求項１３記載の使用。
【請求項１８】
Ｙが、４位をｔ−ブチルで置換されているフェニルである、請求項１７記載の方法または使用。
【請求項１９】
黒色腫が変異体ＲＡＦキナーゼを発現する、請求項１２記載の方法または請求項１３記載の使用。
【請求項２０】
変異体ＲＡＦキナーゼが、Ｇ１３８８Ａ、Ｇ１３８８Ｔ、Ｇ１３９４Ｃ、Ｇ１３９４Ａ、Ｇ１３９４Ｔ、Ｇ１４０３Ｃ、Ｇ１４０３Ａ、Ｇ１７５３Ａ、Ｔ１７８２Ｇ、Ｇ１７８３Ｃ、Ｃ１７８６Ｇ、Ｔ１７８７Ｇ、Ｔ１７９６ＡおよびＴＧ１７９６−９７ＡＴからなる群から選択されるＢ−ＲＡＦキナーゼ遺伝子における変異に対応する、請求項１９記載の方法または使用。
【請求項２１】
黒色腫が変異体ＲＡＦキナーゼを発現する、請求項１８記載の方法または使用。
【請求項２２】
変異体ＲＡＦキナーゼがＶ５９９Ｅ変異である、請求項２１記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
要約
本発明は、ある化合物がＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路において機能するセリン／スレオニンキナーゼであるＲＡＦキナーゼを阻害するという発見、およびＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路における過剰なシグナル伝達により特徴付けられる疾患、例えば、ある種の癌のような増殖性疾患の処置のための該化合物の使用に関する。
【０００２】
背景技術
細胞は、種々のシグナル伝達経路を使用して、その細胞外環境の種々の状況から核と交信している。これらのシグナルの多くは、リン酸基の移動を介して種々の因子を活性化するタンパク質キナーゼにより伝達されている。適切なキナーゼ活性の阻害によるシグナル伝達の混乱は、ｂｃｒ−ａｂｌキナーゼの阻害剤であり、そのメシル酸塩としてＧＬＥＥＶＥＣ(米国で)またはグリベック(GLIVEC)として販売されているイマチニブにより証明されているように、臨床的利点を有することがある。
【０００３】
ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路は、細胞外環境から細胞核に増殖するためのシグナルを送る増殖因子のための経路の一つとして当業者に既知である。増殖因子は細胞表面に位置する経膜レセプターを活性化し、それはカスケードを開始し、それによりＲＡＳが活性化し、ＲＡＦキナーゼを膜に集め、そこでそれが活性化し、次にＭＥＫキナーゼを活性化し、それが続いてＥＲＫキナーゼを活性化する。活性化ＥＲＫキナーゼは核に移動でき、そこでそれは種々の遺伝子転写因子を活性化する。この経路における異常が遺伝子転写、細胞増殖を変え、アポトーシスを負に調節し、増殖性および血管形成シグナルを伝達することにより腫瘍原性(tumorogenicity)に関与し得る。ＲＡＦキナーゼの阻害がＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介したシグナル伝達を遮断することが示されている。
【０００４】
ＲＡＦキナーゼファミリーは、Ｃ−ＲＡＦ(ＲＡＦ−１としても既知)、Ｂ−ＲＡＦおよびＡ−ＲＡＦと名付けられた３種のメンバーを含むことが既知である。Ｂ−ＲＡＦキナーゼが、ヒト癌における数個の体細胞点変異の１個により広く活性化されていることが報告されており、試験した黒色腫細胞系の５９％を含む。Davies, H. et al, Nature 417, 949-954 (2002)参照。驚くべきことに、本明細書に記載の方法において有用な化合物が、ＲＡＦキナーゼ、特にＣ−ＲＡＦキナーゼならびに野生型および変異Ｂ−ＲＡＦキナーゼ、特にＶ５９９Ｅ変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼの優れた阻害剤であることが判明した。
【０００５】
本発明の処置法に有用な化合物は、例えば、その全体を出典明示により本明細書に包含させるＷＯ００／９４４９５、米国公開出願２００２−００１０１９１およびＷＯ０１／５８８９９において、血管内皮細胞増殖因子を阻害する能力のために、抗血管形成剤として記載されている。しかしながら、これらの刊行物は、イソキノリン化合物がＲＡＦキナーゼ阻害特性を有することを示唆せず、同化合物がＲＡＦキナーゼ阻害特性に関連する治療的利点を有するであろうことを示唆していない。
【０００６】
本化合物のＲＡＦキナーゼ阻害特性により、それらは、異常なＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路により特徴付けられる増殖性疾患、特にＲＡＦキナーゼの過剰発現またはＲＡＦキナーゼの活性化変異体により特徴付けられる多くの癌、例えば、変異したＢ−ＲＡＦを有する黒色腫、とりわけ変異Ｂ−ＲＡＦがＶ５９９Ｅ変異体であるものの処置のための治療剤として有用である。本発明はまた、異常なＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路により特徴付けられる他の状態、特にＢ−ＲＡＦが変異したもの、例えば変異Ｂ−ＲＡＦを有する良性のほくろ(Nevi mole)の、該化合物での処置法も提供する。
【０００７】
発明の開示
本発明は、ＭＡＰキナーゼ経路を介した過剰なシグナル伝達により特徴付けられる疾患を有する患者の処置法であり、該患者に、有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の式(Ｉ)
【化１】
2006519807.tif 000003
〔式中、
ｒは０から２であり；
ｎは０から２であり；
ｍは０から４であり；
Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴは互いに独立してＮまたはＣＨである。ただし、Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴの３個を超えないが少なくとも１個がＮであり；
Ｇは低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＳＯ２−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)または−ＮＲ−であるか、またはアシルオキシ、オキソ、ハロゲンもしくはヒドロキシで置換された低級アルキレンであり；
Ｑは低級アルキル、とりわけメチルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
ＸはＹ、−Ｎ(Ｒ)−、オキサまたはチオ；好ましくは−ＮＨ−であり；
ＹはＨ、非置換または置換低級アルキル、アリール、ヘテロアリールまたは非置換または置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニルまたはアルキルフェニルスルホニル、２個以上のＺが存在するとき(ｍ＞２)、該置換基Ｚは同一または異なる。〕
の化合物またはそのＮ−オキシドもしくは薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法に関する。
【０００８】
本発明はまたＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患の処置用薬剤の製造のための式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【０００９】
該患者は、ＭＡＰキナーゼ経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患を有する哺乳類、一般にヒトである。これは、ウェスタン・ブロット分析または免疫組織化学のような方法による、経路のメンバーの活性化状態特異的抗体により測定できる。このような方法は当業者に既知である。
【００１０】
一般に、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を介した過剰なシグナル伝達を特徴とする疾患は、増殖性疾患、特に増加したＲＡＦキナーゼ活性により特徴付けられる癌、例えば野生型Ｂ−またはＣ−ＲＡＦキナーゼを過剰発現する、または活性化変異体ＲＡＦキナーゼ、例えば変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現するものである。変異ＲＡＦキナーゼが検出されている癌は、黒色腫、結腸直腸癌、卵巣癌、神経膠腫、腺癌、肉腫、乳癌および肝臓癌を含む。変異Ｂ−ＲＡＦキナーゼは、とりわけ多くの黒色腫において優勢である。
【００１１】
本発明によると、罹患組織サンプルを患者から、例えば、生検または切除術の結果として採り、試験して、同組織が変異体ＲＡＦキナーゼ、例えば変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを産生するか、または、野生型ＲＡＦキナーゼ、例えば野生型Ｂ−またはＣ−ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかを決定する。試験が、罹患組織において、変異体ＲＡＦキナーゼが産生されるか、または、ＲＡＦキナーゼが過剰発現していることを示唆するとき、該患者を、本明細書に記載のＲＡＦ阻害剤の有効なＲＡＦ阻害量を投与することにより処置する。
【００１２】
さらに、本発明によるものは、本明細書に記載の式(Ｉ)の化合物の、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織が変異体ＲＡＦキナーゼを発現するかまたは野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織が野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかまたは活性化変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現することが判明したとき、該患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の式(Ｉ)の化合物で処置することを含む、黒色腫を処置するための薬剤の製造における使用である。
【００１３】
しかしながら、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を、カスケードにおける他のキナーゼが同経路における過剰なシグナル伝達の原因であるとき、ＲＡＦキナーゼ阻害化合物で下方制御することも可能である。故に、本発明は、さらに、ＲＡＦキナーゼの活性化変異または過剰発現以外が原因である、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路における過剰なシグナル伝達により特徴付けられる疾患の処置法にも関する。
【００１４】
組織サンプルを、当業者に一般的に既知の方法により試験する。例えば、Ｂ−ＲＡＦ変異は対立遺伝子特異的ＰＣＲ、ＤＨＰＬＣ、質量分析により検出し、そして野生型Ｂ−またはＣ−ＲＡＦの過剰発現は免疫組織化学、免疫蛍光検査、またはウェスタン・ブロット分析により検出する。Ｂ−ＲＡＦ変異の検出に特に有用な方法は、実施例Ｄ１に記載のポリメラーゼ連鎖反応に基づいた方法である。類似の方法を使用して、カスケードにおける他のキナーゼが変異体であるかまたは過剰発現しているかを決定する。
【００１５】
ｓｔｏｐｔ
本発明の特に重要な局面は黒色腫の処置法であり、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織が変異体ＲＡＦキナーゼを発現するかまたは野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織が野生型ＲＡＦキナーゼを過剰発現するかまたは活性化変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現することが判明したとき、該患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の本明細書に記載のＲＡＦ阻害化合物で処置することを含む、方法に関する。
【００１６】
この態様の重要な局面は黒色腫の処置法であり、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織がＢ−ＲＡＦキナーゼまたはＣ−ＲＡＦキナーゼ活性を過剰発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織がＢ−ＲＡＦキナーゼまたはＣ−ＲＡＦキナーゼ活性を過剰発現することが判明したとき、該患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の本明細書に記載のＲＡＦ阻害化合物で処置することを含む、方法である。
【００１７】
この態様の他の重要な局面は黒色腫の処置法であり、(ａ)患者からの黒色腫組織を試験し、該黒色腫組織が変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現するかを決定し、そして(ｂ)該黒色腫組織が変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼを発現することが判明したとき、該患者を有効なＲＡＦキナーゼ阻害量の本明細書に記載のＲＡＦ阻害化合物で処置することを含む、方法である。
【００１８】
一般に、Ｂ−ＲＡＦキナーゼ変異は引用したDavies et alの文献に記載されているものの一つである。これらの変異を表１に要約する。
【表１】
2006519807.tif 000004
【００１９】
故に、本発明は、特に活性化変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼにより特徴付けられる疾患の処置法であり、患者からの組織サンプルにおけるＢ−ＲＡＦキナーゼ遺伝子またはタンパク質の変異を検出し、該患者を有効なＢ−ＲＡＦキナーゼ阻害化合物、とりわけ本明細書に記載の化合物で処置することを含む、方法に関する。
【００２０】
本発明の重要な局面は、変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼが表１に記載の変異、とりわけＶ５９９Ｅ変異を示す症例を含む。
【００２１】
本発明の特に重要な局面は、疾患が黒色腫であり、かつ変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼが表１に記載の変異、とりわけＶ５９９Ｅ変異を示す症例を含む。
【００２２】
したがって、本発明は変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼにより特徴付けられる疾患の処置法であり、患者からの組織サンプルにおけるＧ１３８８Ａ、Ｇ１３８８Ｔ、Ｇ１３９４Ｃ、Ｇ１３９４Ａ、Ｇ１３９４Ｔ、Ｇ１４０３Ｃ、Ｇ１４０３Ａ、Ｇ１７５３Ａ、Ｔ１７８２Ｇ、Ｇ１７８３Ｃ、Ｃ１７８６Ｇ、Ｔ１７８７Ｇ、Ｔ１７９６ＡおよびＴＧ１７９６−９７ＡＴからなる群から選択されるＢ−ＲＡＦキナーゼ遺伝子における変異、またはＲＡＦキナーゼタンパク質における対応する変異を検出し、該患者を本明細書に記載の有効なＢ−ＲＡＦキナーゼ阻害化合物で処置することを含む、方法を含む。
【００２３】
本明細書における内容の範囲内で、式(Ｉ)の化合物を記載するためにここで使用する一般的用語は、特記しない限り、下記の意味を有する。
【００２４】
“低級”なる用語は、最大７個まで(７個を含む)、とりわけ最大４個まで(４個を含む)の炭素原子を含む基を意味し、該基は非分枝であるかまたは１箇所以上分枝している。
【００２５】
複数形での化合物、塩などの言及はすべて常に１個の化合物、１個の塩などを含むと理解すべきである。
【００２６】
(例えばｎ＝１であり、そしてＲが低級アルキルである式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)において)存在し得る不斉炭素原子は、(Ｒ)、(Ｓ)または(Ｒ,Ｓ)立体配置、好ましくは(Ｒ)または(Ｓ)立体配置を有してよい。二重結合または環の置換基は、ｃｉｓ(＝Ｚ)またはｔｒａｎｓ(＝Ｅ)形であってよい。したがって、本化合物は異性体混合物の形であるか、純粋異性体の形、好ましくは、エナンチオマー的に純粋なジアステレオマーの形であってよい。
【００２７】
指数ｒは好ましくは０または１である。
指数ｎは好ましくは０または１、とりわけ０である。また２であってもよい。
指数ｍは好ましくは０、１または２、とりわけ０、または１である。
【００２８】
式(Ｉ)における環員Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴのうち、Ｎであるのは３個を超えてはならず、他はＣＨまたはＣＱである。好ましくは、環員Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは各々ＣＨまたはＣＱであり、そしてＴはＮである。
【００２９】
Ｇが２価基−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２−ＮＨ−であるとき、メチレン基はいずれの場合の環員Ａ、Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴを有する環に結合し、一方ヘテロ原子(Ｏ、ＳまたはＮＨ)は式(Ｉ)におけるイソキノリン環に結合する。
【００３０】
低級アルキレンＧは分枝鎖であるか、好ましくは、非分枝鎖であってよく、特に、分枝、好ましくは、非分枝Ｃ１−Ｃ４アルキレン、とりわけメチレン(−ＣＨ２−)、エチレン(−ＣＨ２−ＣＨ２−)、トリメチレン(−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−)またはテトラメチレン(−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ２−)である。Ｇは好ましくはメチレンである。低級アルキレンＧは好ましくは非置換であるが、アシルオキシ、オキソ、ハロゲンまたはヒドロキシで置換されていてよい。
【００３１】
アシルオキシ−置換低級アルキレンＧ置換基におけるアシルは、好ましくはアリールカルボニルオキシ(ここで、アリールは下記で定義の通り、とりわけベンゾイルオキシまたは低級アルカノイルオキシ、より特にはベンゾイルオキシである)である；アシルオキシ−置換低級アルキレンはとりわけベンゾイルオキシ−置換メチレンである。
【００３２】
ヒドロキシ−置換低級アルキレンとしてのＧは好ましくはヒドロキシメチレン(−ＣＨ(ＯＨ)−)である。
好ましいオキソ−置換低級アルキレンＧ置換基はカルボニル(−Ｃ(Ｏ)−)である。
ハロゲン−置換低級アルキレンＧ置換基は、モノハロ置換から過ハロ置換アルキレン、例えば、ジフルオロメチレンである。
【００３３】
低級アルキルはとりわけＣ１−Ｃ４アルキル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたは、とりわけ、メチルまたはエチルでもあり、または、低級アルキルとしてのＹの場合、それはとりわけイソペンチルであり得る。
【００３４】
アリールは好ましくは６から１４炭素原子を有する芳香族性基、例えば、フェニル、ビフェニル、ナフチル、フルオレニルまたはフェナントレニル、とりわけフェニルであり、該アリール基は非置換であるか、とりわけアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルカンスルホニル、アルキルフェニルスルホニル、低級アルケニル、例えばエテニル、フェニル、アリールアルキル、例えばベンジルまたは１−メチル−１−フェニル−エチル、低級アルキルチオ、例えばメチルチオ、低級アルキルシリル、例えばトリメチルシリル、低級アルカノイル、例えばアセチル、非置換または置換シクロアルキル、低級アルキルメルカプト、例えばメチルメルカプト(−Ｓ−ＣＨ３)、ハロ−低級アルキルメルカプト、例えばトリフルオロメチルメルカプト(−Ｓ−ＣＦ３)、低級アルカンスルホニル、ハロ−低級アルカンスルホニル、例えば、とりわけ、トリフルオロメタンスルホニル、ジヒドロキシボラ(−Ｂ(ＯＨ)２)、ヘテロシクリル、および環の隣接炭素原子に結合した低級アルキレンジオキシ、例えば、メチレンジオキシから選択される１個またはそれ以上の、好ましくは３個まで、とりわけ１個または２個の置換基で置換されているか、または、アリール環に縮合した５から７員環を形成するように隣接位置がアルキレンまたはアルケニレンで置換されている；アリールは、好ましくは、非置換であるか、または、上記の群から、とりわけハロゲン、とりわけフッ素または塩素；低級アルキル、とりわけメチル、エチル、プロピルまたはｔ−ブチル；ハロ−低級アルキル、とりわけトリフルオロメチル；ヒドロキシ；低級アルコキシ、とりわけメトキシまたはエトキシ；フェニル−低級アルコキシ；低級アルカノイル、例えばアセチル、フェニルオキシ、ハロ−低級アルキルオキシ、例えばトリフルオロメトキシまたは１,１,２,２−テトラフルオロエチルオキシ、低級アルコキシカルボニル、例えばエトキシカルボニル、低級アルキルメルカプト、例えばメチルメルカプト、ハロ−低級アルキルメルカプト、例えばトリフルオロメチルメルカプト、ヒドロキシ−低級アルキル、例えばヒドロキシメチル、低級アルカンスルホニル、例えばメタンスルホニル、ハロ−低級アルカンスルホニル、例えばトリフルオロメタンスルホニル、フェニルスルホニルから選択された１個または２個の同一または異なる置換基で；より特には非置換または置換低級アルキル、とりわけメチル、ｔ−ブチルまたはトリフルオロメチルおよびハロゲン、とりわけフッ素または塩素から選択された１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである。
【００３５】
ヘテロアリールは、好ましくは、結合している環における不飽和ヘテロ環式基であり、好ましくは単または二または三環であり；ここで、少なくとも、式(Ｉ)の分子の基に結合している環において、対応するアリール基の１個またはそれ以上、好ましくは１個から４個、とりわけ１個または２個の炭素原子が、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択されるヘテロ原子により置換され、結合している環は好ましくは４個から１２個、とりわけ５個から７個の環原子を有し；ここで、ヘテロアリールは非置換であるか、アリールの置換基として上記の置換基からなる群から選択される１個またはそれ以上の解くに１個から３個の、同一または異なる置換基で置換されており；そして、とりわけイミダゾリル、チエニル、フリル、ピラニル、チアンスレニル、イソベンゾフラニル、ベンゾフラニル、クロメニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、低級アルキル−置換イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、インドリル、インダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、シノリニル、プテリジニル、カルバゾリル、フェナンスリジニル、アクリジニル、ペリミジニル、フェナンスロリニルおよびフラザニルからなる群から選択されるヘテロアリール基であり、これらの環の各々は、少なくとも１個のヘテロ原子を有する環を介して、式(Ｉ)の分子の基に結合しており；ピリジルがとりわけ好ましい。
【００３６】
モノ−またはジ−置換アミノはとりわけ低級アルキル、例えばメチル；ヒドロキシ−低級アルキル、例えば２−ヒドロキシエチル；フェニル−低級アルキル；低級アルカノイル、例えばアセチル；ベンゾイル；フェニル基が非置換であるか、または、とりわけ、ニトロおよびアミノから、またはハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイルおよびカルバモイルから選択される１個またはそれ以上、好ましくは１個または２個の置換基で置換されている置換ベンゾイル；およびフェニル基が非置換であるか、または、とりわけ、ニトロおよびアミノから、またはハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイルおよびカルバモイルから選択される１個またはそれ以上、好ましくは１個または２個の置換基で置換されているフェニル−低級アルコキシカルボニルから選択される１個または２個の同一または異なる基で置換されているアミノであり；好ましくはＮ−低級アルキルアミノ、例えばＮ−メチルアミノ、ヒドロキシ−低級アルキルアミノ、例えば２−ヒドロキシエチルアミノ、フェニル−低級アルキルアミノ、例えばベンジルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、Ｎ−フェニル−低級アルキル−Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルフェニルアミノ、低級アルカノイルアミノ、例えばアセチルアミノであるか、またはベンゾイルアミノおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルアミノ(ここで、フェニル基はいずれの場合も非置換であるか、または、とりわけ、ニトロまたはアミノで、またはハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイルでまたはカルバモイルで、または前記の基の群に変えてまたはそれに加えて、アミノカルボニルアミノで置換されている)から選択される置換基である。
【００３７】
ハロゲンはとりわけフッ素、塩素、臭素またはヨウ素、より特にはフッ素、塩素または臭素、特にフッ素および塩素である。
【００３８】
アルキルは好ましくは最大１２個の炭素原子を有し、とりわけ低級アルキル、より特にはメチル、またはエチル、ｎ−プロピル、イソプロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【００３９】
置換アルキルはとりわけ、１個またはそれ以上、とりわけ、３個までの、とりわけハロゲン、とりわけフッ素、例えばトリフルオロメチルまたはペルフルオロアルキル全般、およびまたアミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、Ｎ−低級アルカノイルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニルおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルからなる群から選択される置換基を含んでいてよい、低級アルキル、好ましくはメチルである。トリフルオロメチルが重要な置換アルキルである。
【００４０】
エーテル化ヒドロキシはとりわけＣ８−Ｃ２０アルキルオキシ、例えばｎ−デシルオキシ、低級アルコキシ(好ましい)、例えばメトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシまたはｎ−ペンチルオキシ、フェニル−低級アルコキシ、例えばベンジルオキシ、またはフェニルオキシ、または、前記の基に変えてまたはそれに加えて、Ｃ８−Ｃ２０アルキルオキシ、例えばｎ−デシルオキシ、ハロ−低級アルコキシ、例えばトリフルオロメチルオキシまたは１,１,２,２−テトラフルオロエトキシである。
【００４１】
エステル化ヒドロキシはとりわけ低級アルカノイルオキシ、ベンゾイルオキシ、低級アルコキシカルボニルオキシ、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルオキシ、またはフェニル−低級アルコキシカルボニルオキシ、例えばベンジルオキシカルボニルオキシである。
【００４２】
エステル化カルボキシはとりわけ低級アルコキシカルボニル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルまたはエトキシカルボニル、フェニル−低級アルコキシカルボニルまたはフェニルオキシカルボニルである。
アルカノイルはとりわけアルキル−カルボニル、より特には低級アルカノイル、例えばアセチルである。
【００４３】
Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ−置換カルバモイルは、とりわけ末端窒素を、１個または２個の置換基低級アルキル、フェニル−低級アルキルまたはヒドロキシ−低級アルキルで置換されている。
アルキルフェニルチオはとりわけ低級アルキルフェニルチオである。
アルキルフェニルスルフィニルはとりわけ低級アルキルフェニルスルフィニルである。
【００４４】
アルキルフェニルスルホニルはとりわけ低級アルキルフェニルスルホニルである。
ピリジルＹは好ましくは３−または４−ピリジルである。
【００４５】
非置換または置換シクロアルキルは、好ましくは、非置換であるか、または、アリール、とりわけフェニルに関して定義したのと同様に置換されているＣ３−Ｃ８シクロアルキルである。好ましいのはシクロヘキシル、またはシクロペンチルまたはシクロプロピルである。また４−低級アルキル−シクロヘキシル、例えば４−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシルも好ましい。
【００４６】
存在するとき、Ｚは好ましくはアミノ、ヒドロキシ−低級アルキルアミノ、例えば２−ヒドロキシエチルアミノ、低級アルカノイルアミノ、例えばアセチルアミノ、ニトロベンゾイルアミノ、例えば３−ニトロベンゾイルアミノ、アミノベンゾイルアミノ、例えば４−アミノベンゾイルアミノ、フェニル−低級アルコキシカルボニルアミノ、例えばベンジルオキシカルボニルアミノ、またはハロゲン、例えば臭素である；好ましくは１個のみの置換基が、とりわけ直前に記載の置換基、とりわけハロゲンが存在する(ｍ＝１)。Ｚが存在しない(ｍ＝０)式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)が非常に特に好ましい。
【００４７】
ヘテロシクリルはとりわけ、窒素、酸素および硫黄からなる群から選択される１個または２個のヘテロ原子を有する５または６員ヘテロ環であり、そのヘテロ環は不飽和または完全または部分飽和であってよく、および非置換であるか、または、とりわけ、低級アルキル、例えばメチルで置換されている；２−メチル−ピリミジン−４−イル、オキサゾール−５−イル、２−メチル−１,３−ジオキソラン−２−イル、１Ｈ−ピラゾール−３−イルおよび１−メチル−ピラゾール−３−イルから選択される基が好ましい。
【００４８】
２個の隣接炭素原子に結合した低級アルキレンジオキシ、例えばメチレンジオキシで置換されているフェニルの形のアリールは、好ましくは３,４−メチレンジオキシフェニルである。
【００４９】
式(Ｉ)の化合物のＮ−オキシドは、好ましくは、イソキノリン環窒素または環員Ａ、Ｂ、ＤおよびＥを有する環の窒素が酸素原子を有するか、または、記載の窒素原子の１個以上が酸素原子を有する。
【００５０】
塩はとりわけ式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)の薬学的に許容される塩である。
【００５１】
このような塩は、例えば、塩基性窒素を有する式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)により、好ましくは有機または無機酸との酸付加塩として、とりわけ薬学的に許容される塩として形成される。適当な無機酸は、例えば、塩酸のようなハロゲン化水素酸、例えば；硫酸；またはリン酸である。適当な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、２−ヒドロキシ酪酸、グルコン酸、グルコースモノカルボン酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、グルカル酸、ガラクタル酸、アミノ酸、例えばグルタミン酸、アスパラギン酸、Ｎ−メチルグリシン、アセチルアミノ酢酸、Ｎ−アセチルアスパラギン、Ｎ−アセチルシステイン、ピルビン酸、アセト酢酸、ホスホセリン、２−または３−グリセロリン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、１−または３−ヒドロキシナフチル−２−カルボン酸、３,４,５−トリメトキシ安息香酸、２−フェノキシ安息香酸、２−アセトキシ安息香酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、メタン−またはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレンスルホン酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−またはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸、例えばアスコルビン酸である。
【００５２】
カルボキシまたはスルホのような負に荷電した基が存在するとき、塩基との塩、例えばアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウムまたはカルシウム塩、またはアンモニアもしくは適当な有機アミン、例えば３級モノアミン、例えばトリエチルアミンまたはトリ(２−ヒドロキシエチル)アミンとのアンモニウム塩、またはヘテロ環塩基、例えばＮ−エチルピペリジンまたはＮ,Ｎ'−ジメチル−ピペラジンのような、例えば金属またはアンモニウム塩がまた形成できる。
【００５３】
塩基性基および酸性基が同じ分子内に存在するとき、式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)は分子内塩も形成できる。
【００５４】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸または過塩素酸を使用することも可能である。(所望により医薬組成物の形の)薬学的に許容される塩または遊離化合物のみが治療に使用でき、したがって、これらが好ましい。
【００５５】
遊離形の新規化合物および、例えば、新規化合物の精製またはその同定のために中間体として使用できる塩も含むその塩形の密接な関係の観点から、前記および後記で、遊離化合物に関する言及はまた適当であり、予期される限り、その対応する塩も含むと理解すべきである。
【００５６】
本発明はさらにＲＡＦキナーゼの阻害法であり、ＲＡＦキナーゼと式(Ｉ)の化合物を接触させることを含む、方法に関する。好ましくは、ＲＡＦキナーゼはＢ−またはＣ−ＲＡＦキナーゼ、または変異体ＲＡＦキナーゼ、とりわけ変異体Ｂ−ＲＡＦキナーゼ、特にＶ５９９Ｅ変異体である。ＲＡＦキナーゼは単離されるか、または細胞環境中にある。
【００５７】
式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)は、上記のような価値のある薬理学的特性を有する。
【００５８】
式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)をそれ自体、または、１個またはそれ以上の他の治療剤と組み合わせて投与でき、固定された組み合わせを使用するか、または、本発明の化合物と１個またはそれ以上の他の治療剤を時間的に交互に投与するか、または、固定された組み合わせと１個またはそれ以上の他の治療剤の組み合わせ投与も可能である。特に、腫瘍処置のための式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)の投与は、化学療法剤(１個またはそれ以上の化学療法剤、とりわけ細胞増殖抑制剤との、またはホルモンまたはホルモン様活性を有する化合物との組み合わせ)、放射線療法、免疫療法、外科的処置またはこれらの組み合わせと組み合わせて、同時にまたはそれに加えて、行うことができる。長期治療は、直前に記載のような他の治療法と組み合わせたアジュバント療法であるため、同様に可能である。腫瘍緩解後の患者の状態を維持するための処置、または、例えば、危険な状態にある患者の場合における予防的化学療法も可能である。
【００５９】
本発明の化合物を組み合わせることができる治療剤として、特に１個またはそれ以上の抗増殖性、細胞増殖抑制性または細胞毒性化合物、例えばポリアミン生合成の阻害剤、異なるタンパク質キナーゼの、とりわけタンパク質キナーゼＣの、またはチロシンタンパク質キナーゼの、例えば、表皮成長因子レセプタータンパク質チロシンキナーゼの阻害剤、増殖因子の、例えば、血管内皮細胞増殖因子の阻害剤、サイトカイン、負の増殖調節剤、例えばＴＧＦ−βまたはＩＦＮ−β、アロマターゼ阻害剤、ホルモンまたはホルモン・アナログ、および慣用の細胞増殖抑制剤を考慮する。
【００６０】
本発明の化合物は、ヒトの(予防的および、好ましくは、治療的)処置のみを意図するものではなく、また、他の温血動物、例えば、商品として有用な動物、例えば齧歯類、例えば、マウス、ウサギまたはラット、またはモルモットの処置も意図する。
【００６１】
一般に、本発明は、ＲＡＦキナーゼ活性の阻害における、式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)の使用にも関する。
【００６２】
式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)は、例えば、元の“宿主”として例えば温血動物、特に、ヒトから得て、マウスに移植した腫瘍を、このような化合物の添加後の増殖の減少に関して試験でき、したがって、当該化合物に対するそれらの感受性を試験でき、故に、基の宿主における腫瘍疾患の可能性のある治療法のよりよい確認および決定を可能にするための、診断目的で使用できる。
【００６３】
下記に記載の好ましい式(Ｉ)の化合物のグループにおいて、例えば、より一般的な定義を、より具体的なまたはとりわけ、好ましいとして示す定義で置き換えるために、上記の一般的定義由来の置換基の定義を便宜的に使用できる；いずれの場合も、好ましいとして上記のまたは実施例の方法で記載のものが優先である。
【００６４】
ｒが０から２、好ましくは０であり；
ｎが０または１であり；
ｍが１または、とりわけ、０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＥおよびＴがＣＨであり、そしてＤがＮであるか、またはＡ、Ｔ、ＤおよびＥがＣＨであり、そしてＢがＮである；特にＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであるか、またはＡ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＢおよびＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレン、とりわけメチレンまたはエチレン(−ＣＨ２−ＣＨ２−)、−ＣＨ２−ＮＨ−、−ＣＨ２−Ｏ−、ヒドロキシメチレンまたはベンゾイルオキシ−メチレンであり；
Ｑが、Ａに、ＤにまたはＡとＤに結合したメチルであり；
ＲがＨまたは低級アルキル、とりわけＨまたはメチルであり；
Ｘが−ＮＲ−、オキサまたはチア、特に−ＮＨ−であり；
【００６５】
Ｙが、アミノ；低級アルカノイルアミノ、とりわけアセチルアミノ；ハロゲン、とりわけフッ素、塩素または臭素；非置換または置換低級アルキル、とりわけメチル、エチル、プロピル、ｔ−ブチルまたはハロ−低級アルキル、とりわけトリフルオロメチル；ヒドロキシ；低級アルコキシ、とりわけメトキシまたはエトキシ；フェニル−低級アルコキシ、とりわけベンジルオキシ；シアノ、低級アルケニル、例えばエテニル、Ｃ８−Ｃ１２アルコキシ、とりわけｎ−デシルオキシ、低級アルコキシカルボニル、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、カルバモイル、低級アルキルカルバモイル、例えばＮ−メチル−またはＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−カルバモイル、低級アルカノイル、例えばアセチル、フェニルオキシ、ハロ−低級アルキルオキシ、例えばトリフルオロメトキシまたは１,１,２,２−テトラフルオロエチルオキシ、低級アルコキシカルボニル、例えばエトキシカルボニル、低級アルキルメルカプト、例えばメチルメルカプト、ハロ−低級アルキルメルカプト、例えばトリフルオロメチルメルカプト、ヒドロキシ−低級アルキル、例えばヒドロキシメチルまたは１−ヒドロキシメチル、低級アルカンスルホニル、例えばメタンスルホニル、ハロ−低級アルカンスルホニル、例えばトリフルオロメタンスルホニル、フェニルスルホニルおよび２個の隣接炭素原子に結合した低級アルキレンジオキシ、例えばメチレンジオキシからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されている、または、フェニル環に縮合した５から７員環を形成するように２個の隣接位置がアルキレンまたはアルケニレンで置換されているフェニル、とりわけハロゲン、例えば塩素または臭素、非置換低級アルキル、例えばメチル、およびハロ−置換低級アルキル、例えばトリフルオロメチルからなる群から選択される１個または２個の置換基で置換されているフェニルであり、Ｙは、とりわけフェニルまたは、とりわけハロゲン、とりわけフルオロまたはクロロ、および／または非置換もしくは置換低級アルキルである１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルであり；
Ｚがアミノ；Ｎ−低級アルキルアミノ、例えばＮ−メチルアミノ；ヒドロキシ−低級アルキルアミノ、例えば２−ヒドロキシエチルアミノ；フェニル−低級アルキルアミノ、例えばベンジルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ；Ｎ−フェニル−低級アルキル−Ｎ−低級アルキルアミノ；Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルフェニルアミノ；低級アルカノイルアミノ、例えばアセチルアミノ；またはベンゾイルアミノおよびフェニル−低級アルコキシカルボニルアミノ(いずれの場合にもフェニル基は非置換であるか、または、とりわけ、ニトロまたはアミノで、またはハロゲン、アミノ、Ｎ−低級アルキルアミノ、Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミノ、ヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルカノイルでまたはカルバモイルで置換されている)からなる群から選択される置換基であるか；またはＺはハロゲン、とりわけ臭素；より特にはアミノ、アセチルアミノ、ニトロベンゾイルアミノ、アミノベンゾイルアミノ、２−ヒドロキシエチルアミノ、ベンジルオキシカルボニルアミノまたは臭素である、
式(Ｉ)の化合物またはその塩もしくはＮ−オキシドが好ましい。
【００６６】
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴがＣＨでああり、そしてＡがＮ(３−ピリジル)であるか、またはとりわけＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮ(４−ピリジル)であり；
Ｇが低級アルキレン、とりわけメチレンであり；
Ｘが−ＮＲ−、とりわけ−ＮＨ−であり；
Ｙが、非置換であるか、またはハロゲン、とりわけフッ素、または、より特には、塩素または臭素；低級アルキル、とりわけメチル；およびハロ−低級アルキル、とりわけトリフルオロメチルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニル；とりわけ４−クロロフェニル、２−、３−または４−メチルフェニル、４−クロロ−５−トリフルオロメチルフェニル、３−ブロモ−５−トリフルオロメチルフェニル、またはより特には３,５−ジメチルフェニル；または４−メチル−３−ヨードフェニル、３,４−ビス(トリフルオロメチル)フェニルまたは３−ブロモ−４−エチル−フェニルである、
式(Ｉ)の化合物またはその塩が特に好ましい。
【００６７】
ｒが０であり；
ｎは０から２であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
ＲがＨであり；
Ｘが−ＮＲ−、とりわけ−ＮＨ−であり；そして
Ｙが、非置換であるか、またはハロゲン、とりわけフッ素または塩素で、または低級アルキル、例えばメチルまたはトリフルオロメチル、低級アルコキシ、とりわけメトキシで置換されているフェニル、例えば４−クロロフェニル、４−メトキシフェニルまたは４−トリフルオロメトキシフェニル；ナフチル；非置換であるか、または低級アルキル、とりわけｔｅｒｔ−ブチルで置換されているシクロヘキシル、例えば４−ｔｅｒｔ−ブチル−シクロヘキシル；非置換であるか、またはハロゲン、とりわけフッ素で置換されているインドリル、とりわけ６−フルオロインドール−３−イル；または低級アルキル、とりわけイソペンチルである、
式(Ｉ)の化合物、または、塩形成基が存在するときその塩が特に好ましい。
【００６８】
特に、
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ｂ、Ｄ、ＥおよびＴがＣＨである、ＡがＮであるか、またはＡ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇが低級アルキレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；
Ｙが、非置換であるか、またはハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルである、
式(Ｉ)の化合物も好ましい。
【００６９】
ｒが０であり；
ｎは０から２であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
ＲがＨであり；
Ｘが−ＮＲであり；そして
Ｙが、非置換であるか、または、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシまたはシクロヘキシル(非置換であるか、または低級アルキルで置換されている)で置換されているフェニルである、
式(Ｉ)の化合物も好ましい。
【００７０】
特に、とりわけ有用な化合物は、
ｒが０であり；
ｎが０であり；
ｍが０であり；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが各々ＣＨであり、そしてＴがＮであり；
Ｇがメチレンであり；
Ｘが−ＮＨ−であり；そして
Ｙが非置換であるか、または、ハロゲンおよび低級アルキルからなる群から選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているフェニルであるものを含む。特に好ましいのは、Ｙが、４位をｔ−ブチルで置換されているフェニルであるまたはトリフルオロメチルである、このような化合物を含む。
【００７１】
本発明の方法は、それ自体他の化合物について既知の方法で、特に、
ａ)式II
【化２】
2006519807.tif 000005
(式中、ｒ、ｍ、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｔ、Ｇ、ＱおよびＺは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りであり、そしてＬは、親核性（nucleofugal）脱離基である。)
の化合物と、式III
【化３】
2006519807.tif 000006
(式中、ｎ、Ｒ、ＸおよびＹは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである。)
の化合物を反応させ、反応に参加しない式IIおよび式IIIの化合物の官能基は、必要であれば、保護された形であり、そして、存在するすべての保護基を除去し、ここで、方法ａ)に記載の出発化合物はまた塩形成基が存在し、塩形での反応が可能であるとき、塩の形であってもよく；
そして、所望により、得られた式(Ｉ)の化合物、またはそのＮ−オキシドを異なる式(Ｉ)の化合物またはそのＮ−オキシドに変換し、遊離の式(Ｉ)の化合物、またはそのＮ−オキシドを塩に変換し、得られた式(Ｉ)の化合物またはそのＮ−オキシドの塩を遊離化合物または異なる塩に変換し、および／または式(Ｉ)の化合物またはそのＮ−オキシドの異性体の混合物を個々の異性体に分離することにより製造できる。
【００７２】
変法の詳細な記載：
下記の製造法のより詳細な記載において、ｒ、ｎ、ｍ、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｑ、Ｒ、Ｘ、ＹおよびＺは、特記しない限り、式(Ｉ)の化合物について定義の通りである。
【００７３】
方法ａ)
式IIの化合物において、親核性脱離基Ｌはとりわけハロゲン、より特には臭素、ヨウ素または、非常に特には塩素である。
【００７４】
式IIの化合物と式IIIの化合物の反応は、適当な不活性極性溶媒、とりわけアルコール、例えば低級アルカノール、例えばメタノール、プロパノール、または、とりわけ、エタノールまたはｎ−ブタノール中で行うか、または特に反応物の一方が液体系であるとき、溶媒の添加なしに融解して行う。反応は高温で、好ましくは約６０℃から還流温度、例えば還流条件下に、または約９０から約１１０℃の温度で行う。式IIIの化合物はまた塩の形で、例えばハロゲン化水素のような強酸との酸付加塩の形で、例えば塩酸塩の形で使用でき、または対応する酸、例えば塩酸を、適当な溶媒、例えばエーテル、例えばジオキサンに添加できる。
【００７５】
式IIおよび／または式IIIの化合物中の１個またはそれ以上の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシ、アミノまたはメルカプトが保護形で存在するか、反応に参加すべきでないために保護された形で存在すべきであるとき、該保護基は、ペプチド合成において、また、セファロスポリンおよびペニシリン、ならびに核酸誘導体および糖の合成において一般的に使用される基である。該保護基は前駆体にすでに存在していてよく、望ましくない副次反応、例えばアシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解などに対して当該官能基を保護するためである。その反応を避けるべき、出発物質における官能基、とりわけカルボキシ、アミノ、ヒドロキシおよびメルカプト基のための保護基は、ペプチド化合物、セファロスポリン、ペニシリンまたは核酸誘導体および糖の合成において通常使用される保護基(慣用の保護基)を含む。保護基は前駆体にすでに存在してよく、当該官能基を望ましくない副次反応、例えばアシル化、エーテル化、エステル化、酸化、加溶媒分解などに対して当該反応基を保護するためである。ある場合、保護基は反応の選択的な、例えば立体選択的な進行をもたらし得る。容易に除去でき、すなわち、望ましくない副次反応なしに、例えば、加溶媒分解により、還元により、光分解により、または、酵素的に、例えば、生理学的条件に準じた条件下で除去でき、最終産物に存在しないのが保護基の特徴である。当業者は、どの保護基が前記および後記の反応に適しているか知っており、または容易に見つけることができる。
【００７６】
保護基による官能基の保護、保護基自体、およびその除去のための反応は、例えば、J. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, Th. W. Greene, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Wiley, New York 1981, “The Peptides”;Volume 3 (E. Gross and J. Meienhofer, eds.), Academic Press, London and New York 1981, “Methoden der organischen Chemie”, Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, H.-D. Jakubke and H. Jescheit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine”, Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach and Basle 1982, およびJochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate”, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974のような標準参考書に記載されている。
【００７７】
実施例に記載の保護基を好ましくは導入し、必要であれば、記載の方法に準じて除去する。
【００７８】
付加的工程
所望により行う付加的工程において、反応に参加しない出発化合物における官能基は保護されていないまたは保護された形で、例えば、方法ａ)の下に上記の保護基の１個またはそれ以上で保護されている。このような保護基のすべてまたはいくつかを次いで方法ａ)の下に記載の方法の１個で除去する。
【００７９】
塩形成基を有する式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)の塩は、それ自体既知の方法で製造できる。例えば、式(Ｉ)の化合物またはそのＮ−オキシドの酸付加塩は、例えば、酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得ることができる。２個の酸分子を有する塩(例えば式(Ｉ)の化合物の(またはそのＮ−オキシドの)ジハライド)を式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)あたり１個の酸分子を有する塩(例えばモノハライド)に変換することも可能である；これは、例えば、融解状態に加熱することにより、または、例えば、固体形を高真空下で高温、例えば１３０から１７０℃に加熱することにより、式(Ｉ)の化合物の(またはそのＮ−オキシドの)分子あたり１個の酸の分子が放出することにより、達成できる。
【００８０】
塩は、遊離化合物に、慣用法で、例えば適当な塩基性試薬で、例えばアルカリ金属炭酸塩、炭酸水素塩または水酸化物、例えば炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより変換できる。
【００８１】
立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物を、それ自体既知の方法で、適当な分離法の手段により対応する異性体に分離できる。例えば、ジアステレオマー混合物を個々のジアステレオマーに、分画結晶化、クロマトグラフィー、溶媒分配などにより分離できる。該分離は、出発物質の一つの段階または式(Ｉ)の化合物それ自体の場合のいずれかで行うことができる。エナンチオマーは、ジアステレオマー塩の形成により、例えばエナンチオマー的に純粋なキラル酸との塩の形成により、またはクロマトグラフ的方法により、例えばキラルリガンドのクロマトグラフ担体物質上のクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣにより分離できる。
【００８２】
式(Ｉ)の化合物は、対応するＮ−オキシドに変換できる。反応は適当な酸化剤、好ましくは過酸化物、例えばｍ−クロロ過安息香酸で、適当な溶媒、例えばハロゲン化炭化水素、例えばクロロホルムまたは塩化メチレン中、または低級アルカンカルボン酸、例えば酢酸中、好ましくは０℃から反応混合物の沸点の温度、とりわけほぼ室温で行う。
【００８３】
Ｚが低級アルカノイルアミノである式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)を、例えば無機酸、とりわけ塩酸(ＨＣｌ)での、水溶液(さらなる溶媒の添加も可能である)中での、好ましくは高温、例えば還流下での加水分解により、対応するアミノ化合物(Ｚ＝アミノ)に加水分解できる。
【００８４】
Ｚが低級アルキル、ヒドロキシ−低級アルキルおよびフェニル−低級アルキルから選択される１個または２個の同一または異なる置換基で置換されているアミノである式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)を、例えば、低級アルキルハライド、ヒドロキシ−低級アルキルハライド(必要であればヒドロキシ−保護されている(方法ａ)参照))、またはフェニル−低級アルキルハライドとの、方法ａ)の下に記載のものに準じた反応条件下での反応により、アミノ基が対応して置換されている化合物に変換できる。アミノ基Ｚでの２−ヒドロキシ−低級アルキル置換基の挿入のために、エポキシド(例えばエチレンオキシド)から出発した添加も可能である。該添加は、とりわけ水溶液中および／または極性溶媒、例えば、アルコール、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノールまたはエチレングリコール、エーテル、例えばジオキサン、アミド、例えばジメチルホルムアミド、またはフェノール、例えばフェノールの存在下、または、無水条件下、非極性溶媒、例えばベンゼンおよびトルエン中、またはベンゼン／水エマルジョン中、所望により酸性または塩基性触媒の、例えばアルカリ溶液、例えば水酸化ナトリウム溶液の存在下、またはヒドラジンに浸した固相触媒、例えば酸化アルミニウムの存在下、エーテル、例えばジエチルエーテル中、一般に約０℃から当該反応混合物の沸点までの温度、好ましくは２０℃から還流温度で、適当であれば加圧下、例えばボンベ管中で(それにより沸点も超えてよい)、および／または不活性ガス、例えば窒素またはアルゴンの存在下に行う。アミノ基Ｚの低級アルカンアルデヒド、フェニル−低級アルカンアルデヒドまたはヒドロキシ−低級アルカンアルデヒド(必要であればヒドロキシ−保護されている)での還元的アルキル化も可能である。該還元的アルキル化は、好ましくは炭素、または重金属触媒、例えばラネイニッケルのような支持体に結合した、好ましくは触媒、とりわけ貴金属触媒、例えばプラチナまたは、とりわけ、パラジウムの存在下、常圧または０.１から１０メガパスカル(ＭＰａ)の加圧下の水素化と共に、または錯体ハイドライド、ボロンハイドライド、とりわけアルカリ金属シアノボロハイドライド、例えばナトリウムシアノボロハイドライドの手段による、適当な酸、好ましくは相対的に弱い酸、例えば低級アルカンカルボン酸または、とりわけ、スルホン酸、例えばｐ−トルエンスルホン酸中；慣用の溶媒、例えばアルコール、例えばメタノールまたはエタノール、またはエーテル、例えば環状エーテル、例えばテトラヒドロフラン中、水の存在下または非存在下の還元と共に行う。
【００８５】
式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)において、アミノ基Ｚを、アシル化により、低級アルカノイル、ベンゾイル、置換ベンゾイルでまたはフェニル−低級アルコキシカルボニル(ここで、フェニル基は非置換または置換されている)で置換されているアミノ基に変換できる。対応する酸は遊離カルボキシ基を含むか、その反応性誘導体の形、例えば誘導体化活性化エステルまたは反応性無水物の形、また反応性環状アミドの形である。反応性酸誘導体もインサイチュで形成できる。活性化エステルは、とりわけエステル化すべき基の結合炭素原子が不飽和であるエステル、例えばビニルエステルタイプ、例えばビニルエステル(例えば、対応するエステルの酢酸ビニルによるエステル交換により得ることができる；活性化ビニルエステル法)、カルバモイルエステル(例えば、対応する酸をイソキサゾリウム試薬で処理することにより得ることができる；１,２−オキサゾリウムまたはWoodward法)、または１−低級アルコキシビニルエステル(例えば、対応する酸を低級アルコキシアセチレンで処理することにより得ることができる；エトキシアセチレン法)、またはアミジノタイプのエステル、例えばＮ,Ｎ'−ジ置換アミジノエステル(例えば、対応する酸を適当なＮ,Ｎ'−ジ置換カルボジイミド、例えばＮ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは、とりわけ、Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミドで処理することにより得ることができる；カルボジイミド法)またはＮ,Ｎ−ジ置換アミジノエステル(例えば、対応する酸をＮ,Ｎ−ジ置換シアナミドで処理することにより得ることができる；シアナミド法)、求電子置換基で適切に置換された適当なアリールエステル、とりわけフェニルエステル(例えば、対応する酸を適当に置換されたフェノール、例えば４−ニトロフェノール、４−メチルスルホニルフェノール、２,４,５−トリクロロフェノール、２,３,４,５,６−ペンタクロロフェノールまたは４−フェニルジアゾフェノールで、縮合剤、例えばＮ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミドの存在下に処理することにより得ることができる；活性化アリールエステル法)、シアノメチルエステル(例えば、対応する酸を、クロロアセトニトリルで、塩基の存在下に処理することにより得ることができる；シアノメチルエステル法)、チオエステル、とりわけ非置換または置換された、例えばニトロ−置換された、フェニルチオエステル(例えば、対応する酸を、非置換または置換された、例えばニトロ−置換された、チオフェノールで処理することにより、とりわけ無水物またはカルボジイミド法により得ることができる；活性化チオールエステル法)、または、とりわけ、アミノまたはアミドエステル(例えば、対応する酸を、Ｎ−ヒドロキシアミノまたはＮ−ヒドロキシアミド化合物、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒドロキシピペリジン、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２,３−ジカルボン酸イミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは３−ヒドロキシ−３,４−ジヒドロ−１,２,３−ベンズトリアジン−４−オンで処理することにより、例えば無水物またはカルボジイミド法により得ることができる；活性化Ｎ−ヒドロキシエステル法)である。
【００８６】
分子内エステル、例えばγ−ラクトンも使用できる。酸の無水物は対称であるか、好ましくは、これらの酸無水物の混合物、例えば無機酸、例えば酸ハライド、とりわけ酸クロライド(例えば、対応する酸を塩化チオニル、五塩化リン、ホスゲンまたは塩化オキサリルで処理することにより得ることができる；酸クロライド法)、アジド(例えば、対応する酸エステルから対応するヒドラジドを介し、その含窒素酸での処理により得ることができる；アジド法)との無水物、炭酸セミエステル、例えば炭酸低級アルキルセミエステル(とりわけクロロホルム酸メチルエステル)(例えば、対応する酸をクロロホルム酸低級アルキルエステルでまたは１−低級アルコキシカルボニル−２−低級アルコキシ−１,２−ジヒドロキノリンで処理することにより得ることができる；混合Ｏ−アルキル炭酸無水物法)との無水物、または二ハロゲン化、とりわけ二塩素化、リン酸(例えば、対応する酸をオキシ塩化リンで処理することにより得ることができる；オキシ塩化リン法)との無水物、他のリン酸誘導体(例えばフェニルＮ−フェニルホスホロアミドクロリデートで、または、またはアルキルリン酸アミドをスルホン酸無水物および／またはラセミ化−減少添加剤、例えばＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下、またはシアノホスホン酸ジエチルエステルの存在下反応させることにより得られるもの)とのまたは亜リン酸誘導体との無水物、または有機酸との無水物、例えば、有機カルボン酸(例えば、対応する酸を非置換または置換低級アルカン−またはフェニル−低級アルカン−カルボン酸ハライド、例えばフェニル酢酸、ピバリン酸またはトリフルオロ酢酸クロライドで処理することにより得ることができる；混合カルボン酸無水物法)または有機スルホン酸(例えば、対応する酸の塩、例えばアルカリ金属塩を適当な有機スルホン酸ハライド、例えば低級アルカン−またはアリール−、例えばメタン−またはｐ−トルエン−スルホン酸クロライドで処理することにより得ることができる；混合スルホン酸無水物法)との無水物、ならびに、対称無水物(例えば、対応する酸を、カルボジイミドまたは１−ジエチルアミノプロピンの存在下に縮合することにより得ることができる；対称性無水物法)であってよい。
【００８７】
適当な環状アミドは、とりわけ芳香族性性質の５員ジアザ環を有するアミド、例えば、イミダゾールを有するアミド、例えばイミダゾール(例えば、対応する酸をＮ,Ｎ'−カルボニルジイミダゾールで処理することにより得ることができる；イミダゾール法)、またはピラゾール、例えば３,５−ジメチルピラゾール(例えば、酸ヒドラジドを介して、アセチルアセトンでの処理により得ることができる；ピラゾリド法)とのアミドである。記載のように、アシル化剤として使用するカルボン酸の誘導体はインサイチュでも形成できる。例えば、Ｎ,Ｎ'−ジ置換アミジノエステルは、インサイチュで、式(Ｉ)の出発物質の混合物と、アシル化剤として使用する酸を、適当な適当なＮ,Ｎ'−ジ置換カルボジイミド、例えばＮ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは、とりわけ、Ｎ−(３−ジメチルアミノプロピル)−Ｎ'−エチルカルボジイミドの存在下に反応させることにより、インサイチュで形成できる。さらに、アシル化剤として使用する酸のアミノまたはアミドエステルは、アシル化する式(Ｉ)の出発物質の存在下、対応する酸と、アミノ出発物質を、Ｎ,Ｎ'−ジ置換カルボジイミド、例えばＮ,Ｎ'−ジシクロヘキシルカルボジイミド、およびＮ−ヒドロキシアミンまたはＮ−ヒドロキシアミド、例えばＮ−ヒドロキシスクシンイミドの存在下、所望により、適当な塩基、例えば４−ジメチルアミノピリジンの存在下に反応させることにより形成できる。その上、活性化も、Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラアルキルウロニウム化合物、例えばＯ−ベンズトリアゾール−１−イル−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラ−メチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−(１,２−ジヒドロ−２−オキソ−１−ピリジル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート(１,８−ジアザビシクロ[５.４.０]ウンデカ−７−エン−(１,５,５))またはＯ−(３,４−ジヒドロ−４−オキソ−１,２,３−ベンズトリアゾリン−３−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートとの反応により達成できる。
【００８８】
最後に、カルボン酸のリン酸無水物は、アルキルリン酸アミド、例えばヘキサメチルリン酸トリアミドを、スルホン酸無水物、例えば４−トルエンスルホン酸無水物の存在下、塩、例えばテトラフルオロボレート、例えばナトリウムテトラフルオロボレートと、またはヘキサメチルリン酸トリアミドの異なる誘導体、例えばベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオリドと、好ましくはラセミ化−減少添加剤、例えばＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下に反応させることにより、インサイチュで製造できる。所望により、有機塩基、好ましくは３級アミン、例えばトリ−低級アルキルアミン、とりわけエチルジイソプロピルアミンまたは、より特には、トリエチルアミン、および／またはヘテロ環式塩基、例えば４−ジメチルアミノピリジンまたは、好ましくは、Ｎ−メチルモルホリンまたはピリジンを添加する。縮合は、好ましくは不活性、非プロトン性、好ましくは無水溶媒または溶媒混合物中、例えばカルボン酸アミド、例えばホルムアミドまたはジメチルホルムアミド、ハロゲン化炭化水素、例えば塩化メチレン、炭素テトラクロライドまたはクロロベンゼン、ケトン、例えばアセトン、環状エーテル、例えばテトラヒドロフランまたはジオキサン、エステル、例えば酢酸エチル、またはニトリル、例えばアセトニトリル中、またはそれらの混合物中、適当であれば低温または高温で、例えば約−４０℃から約＋１００℃、好ましくは約−１０℃から約＋７０℃の温度で、アリールスルホニルエステルを使用するときはまた約＋１００℃から＋２００℃の温度で、とりわけ１０から３０℃の温度で、および、適当であれば、不活性ガス雰囲気、例えば窒素またはアルゴン雰囲気下、行う。水性、例えばアルコール性、溶媒、例えばエタノール、または芳香族性溶媒、例えばベンゼンまたはトルエンも可能である。
【００８９】
式(Ｉ)の化合物中のニトロ基Ｚは、例えば金属または選択的水素化により；例えばマグネシウム／硫酸アンモニウムの水／アルコール混合物、例えばメタノール／水中の溶液との、高温、例えば３０から６０℃での反応により(Synth. Commun. 25(2), 4025-4028 (1995)参照)；亜鉛／ボロハイドライドの酸アミド、例えばジメチルホルムアミド溶液との、室温より低い温度、例えば約０℃での反応により；、例えば水／塩化メチレン混合物中、高温、例えば２５から３５℃での１,１'−ジオクチル−４,４'−ビピリジニウムジブロミド／四チオン酸ナトリウム／炭酸カリウムの水／ハロゲン化炭化水素混合物により(Tetrahedron Lett. 34(46), 7445 7446 (1993)参照)；アルコール、例えばメタノール／水中、０から４０℃の好ましい温度でのクロライド形のAmberlyte IRA-400イオン交換体上の水素化ホウ素ナトリウムにより(Synthetic Commun. 19(5/6), 805-811 (1989))；ハロゲン化炭化水素／アルコール混合物、例えば塩化メチレン／メタノール中、１０から３５℃の好ましい温度でのカリウムボロハイドライドにより(Synthetic Commun. 19(17), 3047-3050 (1989)参照)；ジオキサン中、水素化ホウ素ナトリウムにより；テトラヒドロフラン中、ボランにより；Ｐｄ／Ｃの存在下、アルコール中、０から３５℃の好ましい温度およびギ酸アンモニウムの存在下、水素化により(Tetrahedron Lett. 25(32), 3415-3418 (1989))；エーテル、例えばテトラヒドロフラン中、四塩化チタン／水素化リチウムアルミニウムまたは四塩化チタン／マグネシウムにより(Bull. Chem. Soc. Belg. 97(1), 51-53 (1988)参照)；または高温、好ましくは還流下の塩化鉄アンモニウム／水により(Synth. Commun. 22, 3189-3195 (1992))、アミノ基に還元できる。
【００９０】
Ｇがアシルオキシ−置換低級アルキルであり、他の基が式(Ｉ)について定義の通りである式(Ｉ)の化合物において、アシル基を加水分解により除去し、Ｇがヒドロキシ−置換低級アルキレンである対応する式(Ｉ)の化合物を産生できる。該加水分解は、好ましくは慣用の条件下、例えば酸または塩基、例えば、ＨＣｌまたはＮａＯＨの存在下、水溶液または適当な溶媒または溶媒混合物中で行う。
【００９１】
Ｇがアシルオキシ−置換低級アルキルである式(Ｉ)の化合物から、Ｇが低級アルキレンである式(Ｉ)の化合物を製造することも可能である。この場合の反応は、慣用の溶媒または溶媒混合物中の、好ましくは触媒的水素化(適当な触媒の存在下の水素)により行う。
【００９２】
一般法条件
本明細書に記載のすべての方法は、それ自体既知の、好ましくは具体的に記載の条件下、溶媒または希釈剤(好ましくは使用する試薬に不活性であり、そのための溶媒である)の非存在下、または、通常存在下、触媒、縮合剤または中和剤、例えばイオン交換体、例えばＨ＋形の、例えばカチオン交換体の非存在下または存在下、反応の性質および／または試薬に依存して、低温、常温または高温で、例えば約−１００℃から約１９０℃、好ましくは約−８０℃から約１５０℃、例えば−８０℃から−６０℃、室温、−２０℃から４０℃または使用する溶媒の還流温度で、常圧または密封容器中、適当であれば加圧下、および／または不活性雰囲気下、例えばアルゴンまたは窒素雰囲気下に行う。
【００９３】
すべての出発物質および中間体化合物において、塩形成基が存在するとき、塩が存在できる。塩はまたこのような化合物の反応中にも、反応がそれにより妨害されない限り、存在できる。
【００９４】
反応の全段階中、形成される異性体混合物を個々の異性体に、例えば、ジアステレオマーまたはエナンチオマーに、または、異性体の任意の所望の混合物に、例えば、ラセミ体またはジアステレオマー混合物に、例えば、“付加的工程”の下に記載の方法に準じて分離できる。
【００９５】
ある場合、例えば水素化の場合、個々の異性体を容易に得るために、立体選択的反応を達成することが可能である。
【００９６】
特定の反応に適当な溶媒は、方法の記載において別の指示がない限り、例えば、水、エステル、例えば低級アルキル低級アルカノエート、例えばジ酢酸エチル、エーテル、例えば脂肪族エーテル、例えばジエチルエーテル、または環状エーテル、例えばテトラヒドロフラン、液体芳香族性炭化水素、例えばベンゼンまたはトルエン、アルコール、例えばメタノール、エタノールまたは１−または２−プロパノール、ニトリル、例えばアセトニトリル、ハロゲン化炭化水素、例えば塩化メチレン、酸アミド、例えばジメチルホルムアミド、塩基、例えばヘテロ環式窒素塩基、例えばピリジン、カルボン酸、例えば低級アルカンカルボン酸、例えば酢酸、カルボン酸無水物、例えば低級アルカン酸無水物、例えば酢酸無水物、環状、直鎖状または分枝鎖状炭化水素、例えばシクロヘキサン、ヘキサンまたはイソペンタン、またはこれらの溶媒の混合物、例えば水溶液から選択できる。このような溶媒混合物はまた、例えばクロマトグラフィーまたは分配による後処理に使用できる。
【００９７】
本発明はまた任意の段階で中間体として得られる化合物を出発物質として使用して残りの工程を行うか、または、任意の段階で工程を中断するか、または、出発物質を反応条件下で製造するか、または、反応性誘導体もしくは塩の形で使用するか、または、本発明の方法により得られる化合物を、該方法の条件下で製造し、さらにインサイチュで処理する形のものにも関する。上記で好ましいと、特に、とりわけ好ましいと、より特に好ましいおよび／または非常に特に好ましいと定義の化合物をもたらす出発物質を使用することが好ましい。
【００９８】
式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)の製造は、好ましくは実施例に記載の工程および段階に準じて行う。
【００９９】
その塩を含む式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)はまた水和物の形で得ることができ、または、それらの結晶は、例えば、結晶化に使用した溶媒を含み得る(溶媒和物の形の存在)。
【０１００】
医薬組成物、方法および使用
本発明はまた活性成分として式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)を含み、とりわけ最初に記載の疾患の処置に使用できる医薬組成物にも関する。温血動物、とりわけヒトに経腸、例えば経鼻、バッカル、直腸、または、とりわけ、経口、および非経腸、例えば静脈内、筋肉内または皮下投与するための組成物が特に好ましい。該組成物は活性成分をそのまま、または、好ましくは、薬学的に許容される担体と共に含む。活性成分の投与量は処置すべき疾患および種、その年齢、体重、個々の状態、個々の薬物動態データおよび投与の形態に依存する。
【０１０１】
本発明は、ヒトまたは動物を予防的に、または、とりわけ、治療的に処置するための方法に使用するための医薬組成物、その製造法(とりわけ腫瘍処置用組成物の形への)および上記疾患、とりわけ腫瘍疾患、より特には上記のものを処置する方法にも関する。
【０１０２】
本発明はまた、式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)を活性要素(活性成分)として含む、医薬組成物の製造法および式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)のそのための使用にも関する。
【０１０３】
異常なＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路、とりわけ腫瘍疾患、最も特には黒色腫を有する温血動物または特にヒトもしくは商品として有用な哺乳類に投与するのに適した、式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)、または塩形成基が存在するときその薬学的に許容される塩を、ＲＡＦキナーゼ、特に変異体ＲＡＦキナーゼの阻害に有効な量、少なくとも１個の薬学的に許容される担体と共に含む、医薬組成物が好ましい。
【０１０４】
活性成分として新規式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)またはその薬学的に許容される塩を、記載の疾患に対する予防的またはとりわけ治療的有効量で含む、このような処置を必要とする、とりわけこのような疾患を有する、温血動物、とりわけヒトまたは商品として有用な哺乳類の腫瘍疾患および他の増殖性疾患の予防的、とりわけ治療的処置用医薬組成物も好ましい。
【０１０５】
医薬組成物は約１％から約９５％活性成分を含み、１回投与形である投与形は好ましくは約２０％から約９０％活性成分を含み、１回投与形ではない投与形は好ましくは約５％から約２０％活性成分を含む。単位投与形は、例えば、糖衣錠、錠剤、アンプル、バイアル、坐薬またはカプセルである。他の投与形は、例えば、軟膏、クリーム、泥膏、フォーム、チンキ、口紅型、ドロップ、スプレー、分散剤などである。例は、約０.０５ｇから約１.０ｇの活性成分を含む、カプセルである。
【０１０６】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で、例えば、慣用の混合、造粒、糖衣、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。
【０１０７】
活性成分の溶液を好ましくは使用し、それに加えて、懸濁液または分散剤、とりわけ等張性水溶液、分散剤または懸濁液も使用し、これは、例えば、活性物質を単独でまたは担体、例えばマンニトールを含む凍結乾燥組成物の場合、使用前に調製できる。該医薬組成物は滅菌されていてよく、および／または、賦形剤、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または緩衝剤を含んでいてよく、それ自体既知の方法で、例えば慣用の溶解または凍結乾燥工程の手段により製造できる。記載の溶液または懸濁液は増粘性物質、たとえばナトリウムカルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチン、または可溶化剤、例えばＴｗｅｅｎ  ８０[ポリオキシエチレン(２０)ソルビタンモノオレエート；ICI Americas, Inc, USAの商標]を含んでよい。
【０１０８】
油状成分として植物油、合成油または半合成油を含む油中の懸濁液は、注射目的で慣用である。特に記載し得るのは、とりわけ酸部分として、８個から２２個、とりわけ１２個から２２個の炭素原子を含む長鎖脂肪酸、例えばラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラッシジン酸またはリノレイン酸を、所望により、抗酸化剤、例えばビタミンＥ、β−カロテンまたは３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンと共に含む、液体脂肪酸エステルである。これらの脂肪酸エステルのアルコール部分は、最大６個の炭素原子を含み、モノ−またはポリ−ハイドリック(hydric)、例えばモノ−、ジ−またはトリ−ハイドリック、アルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールまたはそれらの異性体であるが、また、特にとりわけグリコールおよびグリセロールである。特記し得る脂肪酸エステルの例は、したがって：エチルオレエート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、“Labrafil M 2375”(Gattefosse, Parisのポリオキシエチレングリセロールトリオレエート)、“Labrafil M 1944 CS”(杏仁油のアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る不飽和ポリグリコール化グリセリド；Gattefosse, France)、“Labrasol”(ＴＣＭのアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る飽和ポリグリコール化グリセリド；Gattefosse, France)および／または“Miglyol 812”(Huels AG, GermanyのＣ８からＣ１２の鎖長を有する飽和脂肪酸のトリグリセリド)であるが、また、とりわけ植物油、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油および、より特には、ピーナッツ油である。
【０１０９】
注射用組成物の製造は、慣用の方法で、滅菌条件下に行い、またその例えばアンプルまたはバイアルへの注入およびその容器の密封にも当てはまる。
【０１１０】
経口投与用医薬組成物は、例えば、活性成分と１個またはそれ以上の固体担体を合わせ、適当であれば、得られた混合物を造粒し、該混合物または顆粒を、望むとき、必要に応じてさらなる賦形剤を添加し、錠剤または糖衣錠コアに加工することにより得ることができる。
【０１１１】
適当な担体は、とりわけ充填剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤および／またはリン酸カルシウム、例えば三リン酸カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、また結合剤、例えばデンプン、例えばトウモロコシ、小麦、コメまたはジャガイモデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン、および／または、所望により、崩壊剤、例えば上記のデンプン、またカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムである。さらなる賦形剤はとりわけ流動調節剤および滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール、またはその誘導体である。
【０１１２】
糖衣錠は、適当な、所望により腸溶性のコーティングを施してよく、それは、とりわけアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含む濃縮糖溶液、または、適当な有機溶媒または溶媒混合物中のコーティング溶液、または、腸溶性コーティングの調製のために、適当なセルロース製剤、例えば酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液を使用する。着色剤または色素を、例えば、同定目的で、または、活性成分の異なる投与量を示すために錠剤または糖衣錠コーティングに添加してよい。
【０１１３】
経口投与用医薬組成物はまた硬ゼラチンカプセルおよび、ゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールから成る軟密封カプセルでもある。硬ゼラチンカプセルは、例えば充填剤、例えばトウモロコシデンプン、結合剤および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤と混合された、顆粒の形の活性成分を含み得る。軟カプセルにおいて、活性成分は好ましくは適当な液体賦形剤、例えば脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールまたはエチレングリコールもしくはプロピレングリコールの脂肪酸エステルに溶解または懸濁し、同様に安定化剤および界面活性剤、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルタイプのものを添加することが可能である。
【０１１４】
適当な直腸投与可能医薬組成物は、例えば、活性成分と坐薬基剤の組み合わせから成る坐薬である。適当な坐薬基剤は、例えば、天然または合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。
【０１１５】
非経腸投与に関して、とりわけ水溶性形、例えば、水溶性塩の形の活性成分の水性溶液、または、増粘性物質、例えばナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および、所望により、安定化剤を含む、水性注射懸濁剤の形がある。活性成分は、所望により、賦形剤と共に、また、凍結乾燥物の形であり、適当な溶媒の添加により非経腸投与の前に溶液にしてよい。
【０１１６】
例えば、非経腸投与に使用する溶液はまた輸液として使用できる。
【０１１７】
好ましい防腐剤は、例えば、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、または殺菌剤、例えばソルビン酸または安息香酸である。
【０１１８】
本発明はとりわけ異常なＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路を特徴とする病理学的状態、とりわけＲＡＦキナーゼの阻害に応答する疾患、とりわけ対応する腫瘍疾患の処置過程または方法に関する。式(Ｉ)の化合物(またはそのＮ−オキシド)はそのままでまたは医薬組成物の形で、好ましくは記載の疾患に対して有効な量で、このような処置を必要とする温血動物、例えばヒトに予防的にまたは治療的に投与でき、該化合物はとりわけ医薬組成物の形で投与する。体重約７０kgの場合、約０.１ｇから約５ｇ、好ましくは約０.５ｇから約２ｇの本発明の化合物を投与する。
【０１１９】
それぞれの特定の場合に使用すべき好ましい投与量、組成物および医薬製剤(薬剤)は上記である。
【０１２０】
出発物質
使用する出発物質および選択する反応条件は、好ましくは、好ましいと記載した化合物を得るものである。
【０１２１】
式IIおよびIIIの出発物質は既知であり、それ自体既知の方法で製造できるか、または、商品として入手可能である；特に、それらは実施例に記載の方法に準じて製造できる。
【０１２２】
出発物質の製造において、反応に参加すべきでないすべての官能基は、必要であれば保護された形であってよい。好ましい保護基、それらの挿入およびそれらの除去は、方法ａ)の下にまたは実施例に記載されている。当該出発物質および中間体の代わりに、塩形成基が存在し、当該反応がまた塩を使用して可能であるとき、塩を反応させることも可能である。したがって、出発物質に関する前記および後記の言及は、また、予期され、可能であるとき、塩も包含することを意図する。
【０１２３】
Ｇが−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、オキサ、チアまたは−ＮＲ−であり、他の記号が式(Ｉ)に関して記載の通りである式IIの化合物は、例えば、式IV
【化４】
2006519807.tif 000007
〔式中、Ｌ＊は、親核性脱離基、とりわけハロ、例えばブロモであり、ｍおよびＺならびに波線で示される結合は式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである(とりわけｍ＝０、すなわちＺは存在しない−Ｌ＊がブロモである対応する式IVの化合物はSPECS & BIOSPECS, Rijskwijk, Hollandから市販されている)。〕
の化合物と、式Ｖ
【化５】
2006519807.tif 000008
(式中、Ｇが−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２−ＮＨ−であるか、またはオキサ、チアもしくは−ＮＲ−であり、そしてＡ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｔ、Ｑおよびｒが式(Ｉ)の化合物について定義の通りである。)
の化合物を、好ましくは式IIの化合物と式IIIの化合物の反応に関して方法ａ)で記載したものに準じた条件下で反応させることにより、またはＰｄ０のパラジウム錯体触媒、例えば、キレート化ビス(ホスフィン)(例えば、J. Org. Chem. 61, 7240-7241 (1996)参照)などとのテトラキス(トリフェニルホスフィニル)パラジウム錯体、パラジウム(０)−Ｐ(ｏ−トリル)３錯体、パラジウム(０)錯体と、好ましくはアルカリ金属炭酸塩、例えばＫ２ＣＯ３の存在下、適当な溶媒、例えばトルエン中のＰｄ０と、高温で、好ましくは還流下に反応させることにより製造できる。次いで、式II＊
【化６】
2006519807.tif 000009
(式中、ｍおよびＺならびに波線で示される結合、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｔ、Ｑおよびｒは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りであり、そしてＧが−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−または−ＣＨ２−ＮＨ−、またはオキサ、チアまたは−ＮＲ−である。〕
の化合物を得る。
【０１２４】
対応する式IIの化合物を、そこから、式IIで定義した通りの親核性基Ｌを、対応する酸無水物、例えばＬ＝Ｃｌの挿入のためにホスホリルクロライド(ＰＯＣｌ３)を、または、式XIIの化合物の式IIの化合物への変換に関して下記に記載の異なる試薬を使用して挿入することにより製造できる。
【０１２５】
式IVおよびＶの出発物質は既知であり、それ自体既知の方法で製造でき、または市販されている。
【０１２６】
Ｇがメチレンであり、他の記号が式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである式IIの化合物は、例えば、式VI
【化７】
2006519807.tif 000010
(式中、Ｚおよびｍは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである。)
の化合物と、アルカリ金属シアン化物、とりわけシアン化カリウムを、高温で、例えば１００℃から２００℃で反応させ(Org. Synthesis, Coll. Vol. 3, 174参照)、式VII
【化８】
2006519807.tif 000011
(式中、記号は式VIの化合物について定義の通りである。)
のシアノメチル安息香酸を産生する；式VIIの化合物を、次いで、例えば適当なジ−低級アルキルホルムアミドジ−低級アルキルアセチル、例えばジメチルホルムアミドジメチルアセチルを、適当な溶媒、例えばハロ−低級アルカン、例えばジクロロメタン中の式VIIの化合物に添加し、該混合物を、好ましくは０から６０℃の温度、例えばほぼ室温で攪拌して反応を完了させることにより、低級アルキルエステルに変換する。
【０１２７】
式VIII
【化９】
2006519807.tif 000012
(式中、Ａｌｋは低級アルキル、とりわけメチルであり、そして他の記号は式VIについて定義の通りである。)
である対応する低級アルキルエステルを得る。
【０１２８】
該エステルを、次いで、適当な溶媒、例えばエーテル、例えばテトラヒドロフラン、またはエステル、例えばプロピオン酸エチル、またはこれらの混合物中で、式IX
【化１０】
2006519807.tif 000013
(式中、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｑおよびｒは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである)
のアルデヒドと、アルコール、例えばメタノール、および対応するアルコラート、例えばアルカリ金属メタノラート、例えばナトリウムメタノラートの存在下、好ましくは０℃から還流温度、好ましくは約５℃から３０℃の温度で反応させ、式Ｘ
【化１１】
2006519807.tif 000014
(式中、基Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、ＱおよびＺおよび指数ｒおよびｍは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである)
の化合物を得る；その化合物を、(式VIIIの低級アルキルエステルの製造に準じた条件下)式XI
【化１２】
2006519807.tif 000015
(式中、Ａｌｋは低級アルキル、とりわけメチルであり、そして他の記号は式Ｘについて定義の通りである。)
の対応する低級アルキルエステルに変換する。
【０１２９】
続いて、適当な触媒、とりわけフレームワーク触媒、例えばラネイコバルトまたは、とりわけ、ラネイニッケルの存在下、適当な溶媒、例えばエーテル、例えばテトラヒドロフラン、またはアルコール、例えばメタノール、またはこれらの混合物中、１０℃から８０℃の好ましい温度で、０.５から１００バールの圧力、とりわけほぼ常圧で水素化し、式XII
【化１３】
2006519807.tif 000016
(式中、基Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、ＱおよびＺおよび指数ｒおよびｍは式(Ｉ)の化合物について上記で定義の通りである。)
のイソキノリン化合物を得る。
【０１３０】
式XIIの化合物を、次いで、対応する式IIの化合物またはその塩に、溶媒なしでまたは適当な溶媒、例えばアセトニトリル中、対応する酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸の非存在下、または好ましくは存在下、４０℃から還流温度の好ましい温度で、好ましくは約４０℃から６０℃で、親核性脱離基の挿入に適した試薬、例えばホスホリルハライドまたは五ハロゲン化リン、とりわけホスホリルクロライド(ＰＯＣｌ３)または五塩化リンの手段により変換する。
【０１３１】
類似の方法で、式IXに類似しているが、−ＣＨＯ−基の場所が対応する低級アルカンアルデヒド基に代わっている化合物を使用して、メチリデン基(式Ｘ、XI)またはメチレン基(式XII)の場所が対応する低級アルキリデンまたは低級アルキレン基に代わっている式ＸからXIIに類似した化合物を経由し、Ｇが低級アルキレンである対応する式IIの化合物を製造することが可能である。
【０１３２】
他の出発物質は既知であり、それ自体既知の方法で製造でき、または、市販されているか、または、特に、実施例に記載の方法に準じた方法で製造できる。
【０１３３】
下記の実施例は、本発明を、その範囲を限定することなく説明するために提供する。
【０１３４】
合成実施例
実施例Ｓ１：１−(３,５−ジメチルアニリノ)−４−[(ピリジン−４−イル)−メチル]−イソキノリン(＝Ｎ−(３,５−ジメチル−フェニル)−[４−(ピリジン−４−イル−メチル)−イソキノリン−１−イル]−アミン)
除湿しながら、１００mg(０.８２５mmol)の３,５−ジメチル−アニリンを、４mlのエタノールに溶解し、１９６μl(０.７８４mmol)のＨＣｌ(ジオキサン中４Ｎ)を添加する。さらに２００mg(０.７８５mmol)の１−クロロ−４−[(ピリジン−４−イル)−メチル]−イソキノリンを添加後、混合物を８時間、９０℃で加熱する。次に蒸発により濃縮する；残渣を４mlの水、１mlの飽和アンモニア溶液および２０mlのＣＨ２Ｃｌ２に取り込み、有機相を分取し、Ｎａ２ＳＯ４(無水)で乾燥させ、再び蒸発により乾燥させる。カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；酢酸エチル／ヘキサン３：１)および酢酸エチル／ヘキサンからの結晶化により、表題化合物を得る：ｍ.ｐ. １５６−１５８℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝３４０；分析計算値(Ｃ２３Ｈ２１Ｎ３・０.１Ｈ２Ｏ)  Ｃ  ８０.９５％、Ｈ  ６.２６％、Ｎ  １２.３１％；実測値Ｃ  ８０.９％、Ｈ  ６.２％、Ｎ  １２.４％。
【０１３５】
出発物質は下記の通り製造する：
Ｓ１ａ)２−シアノメチル−安息香酸メチルエステル
穏やかに加熱しながら、１７５ｇ(１.０８mol)の２−シアノメチル−安息香酸(製造に関しては：Org. Synthesis, Coll, Vol. 3, 174参照)を１.７リットルのＣＨ２Ｃｌ２；２４２ml(≒９０％、１.６mol)のジメチルホルムアミドジメチルアセタールを室温で滴下し、攪拌を３８時間続けて反応を完了させる。反応混合物を２回、１.２リットルの飽和ＮａＨＣＯ３溶液および塩水で洗浄する。水性相を２回分のＣＨ２Ｃｌ２を使用して抽出し、有機相を乾燥(Ｎａ２ＳＯ４)させ、蒸発により濃縮する。カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；酢酸エチル／ヘキサン１：４、酢酸エチル／ヘキサン／ＣＨ２Ｃｌ２に溶解して適用)により表題化合物を得る：ｍ.ｐ. ４９−５０℃  分析計算値(Ｃ１０Ｈ９ＮＯ２)  Ｃ  ６８.５６％、Ｈ  ５.１８％、Ｎ  ８.００％；実測値Ｃ  ６８.５％、Ｈ  ５.１％、Ｎ  ７.９％。
【０１３６】
Ｓ１ｂ)２−[(１−シアノ−２−(ピリジン−４−イル)−ビニル]−安息香酸
脱気しながら、１２７.７ml(１.３５mol)のピリジン−４−カルボアルデヒド(Fluka, Buchs, Switzerland)を、２１５.６ｇ(１.２３mol)の２−シアノメチル−安息香酸メチルエステルの１.８リットルのＴＨＦ溶液に添加する。混合物を８−９℃に冷却し、２９７ml(１.６mol)のメタノール中のナトリウムメタノラートの５.４Ｍ溶液を２０分にわたり滴下し、混合物を１.５時間、１０から１５℃で攪拌する。次いで、混合物のｐＨを、約３５０mlの４Ｎ  ＨＣｌを使用して６.０に調節し、１時間、５℃で攪拌する。表題化合物が晶出し、吸引しながら濾取し、ＴＨＦ／水  ２：１およびＴＨＦで徹底的に洗浄する：ｍ.ｐ. ２１８−２１９℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２５１；；分析計算値(Ｃ１５Ｈ１０Ｎ２Ｏ２)  Ｃ  ７１.９９％、Ｈ  ４.０３％、Ｎ  １１.１９％；実測値Ｃ  ７１.９％、Ｈ  ４.１％、Ｎ  １１.１％。
【０１３７】
Ｓ１ｃ)２−[(１−シアノ−２−(ピリジン−４−イル)−ビニル]−安息香酸メチルエステル
除湿しながら、２１１ｇ(０.８４３mol)の２−[(１−シアノ−２−(ピリジン−４−イル)−ビニル]−安息香酸を３.３リットルのＣＨ２Ｃｌ２に懸濁する；１６９ml(≒９０％、１.１mol)のジメチルホルムアミドジメチルアセタール(Fluka, Buchs, Switzerland)を室温で添加し、２２時間攪拌を行い、反応を完了させる。反応混合物を濾過し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２で徹底的に洗浄し、廃棄する。濾液の蒸発により濃縮、クロマトグラフィー(ＳｉＯ２；酢酸エチル)および酢酸エチル／ヘキサンからの結晶化により、表題化合物を得る：ｍ.ｐ. １０２−１０４℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２６５；分析計算値(Ｃ１６Ｈ１２Ｎ２Ｏ２)  Ｃ  ７２.７２％、Ｈ  ４.５８％、Ｎ  １０.６０％；実測値Ｃ  ７２.７％、Ｈ  ４.８％、Ｎ  １０.５％。
【０１３８】
Ｓ１ｄ)４−(ピリジン−４−イル−メチル)−２Ｈ−イソキノリン−１−オン
５×４０ｇのラネイニッケル(間隔を空けて添加)、１６３ｇ(６１７mmol)の２−[(１−シアノ−２−(ピリジン−４−イル)−ビニル)−安息香酸メチルエステルを、３リットルのＴＨＦ中、４０℃で９０時間水素化する。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発により濃縮し、アセトニトリル／酢酸エチルから結晶化させる(→表題化合物)。さらなる生産物を、母液からクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；酢酸エチル→アセトン)により得ることができる：ｍ.ｐ. １８９−１９０℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２３７；分析計算値(Ｃ１５Ｈ１２Ｎ２Ｏ  ・  ０.０５  Ｈ２Ｏ)  Ｃ  ７５.９６％、Ｈ  ５.１４％、Ｎ  １１.８１％；実測値Ｃ  ７５.８％、Ｈ  ５.２％、Ｎ  １１.９％。
【０１３９】
Ｓ１ｅ)１−クロロ−４−(ピリジン−４−イルメチル)−イソキノリン
脱気しながら、３２.７ｇ(１３９mmol)の４−(ピリジン−４−イル−メチル)−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを、５６０mlのアセトニトリル中のスラリーとし、６９.２ml(２７７mmol)の４Ｎ  ＨＣｌのジオキサン溶液および３１.７ml(３４６mmol)のＰＯＣｌ３を添加する。混合物を２２時間、５０℃で攪拌し、氷浴で冷却し、１２８.６ｇのＮａＨＣＯ３の１.６４リットルの水溶液を３０分にわたり添加する。添加中、最初に透明溶液が形成し、次いで表題化合物が沈殿し、１５分後、濾取してよく、水およびエーテルで徹底的に洗浄し、高真空下、６０℃で乾燥させる：ｍ.ｐ. １１９−１２０℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２５５。
【０１４０】
実施例Ｓ２：１−(３−クロロベンジルアミノ)−４−[(ピリジン−４−イル)−メチル]−イソキノリン
除湿しながら、１.６ml(１３.１mmol)の３−クロロベンジルアミンおよび８００mg(３.１４mmol)の１−クロロ−４−(ピリジン−４−イルメチル)−イソキノリン(実施例１ｅ)を、２時間、１５０℃で攪拌する。混合物を酢酸エチルに懸濁し、１mlの濃アンモニア溶液を添加し、水および塩水で洗浄し、有機相を乾燥(Ｎａ２ＳＯ４)させ、蒸発により濃縮する。カラムクロマトグラフィー(ＳｉＯ２；酢酸エチル)により表題化合物を得る：ｍ.ｐ. １４１−１４２℃；ＦＡＢ−ＭＳ：(Ｍ＋Ｈ)＋＝３６０；分析計算値(Ｃ２２Ｈ１８Ｎ３Ｃｌ)  Ｃ  ７３.４３％、Ｈ  ５.０４％、Ｎ  １１.６８％、Ｃｌ  ９.８５％；実測値Ｃ  ７３.２％、Ｈ  ５.１％、Ｎ  １１.６％、Ｃｌ  ９.９％。
【０１４１】
実施例Ｓ３：１−(４−ｔ−ブチルアニリノ)−４−[(ピリジン−４−イル)−メチル]−イソキノリン
除湿しながら、２７.５ml(１７２.７mmol)の４−ｔ−ブチル−アニリンおよび７.０ｇ(２７.５mmol)の１−クロロ−４−(ピリジン−４−イルメチル)−イソキノリン(実施例１ｅ)を３時間、８０℃で窒素ブランケット下に攪拌する。次いで、混合物を冷却し、５％(ｗ／ｖ)ＮａＨＣＯ３(水性)と酢酸エチルに分配する。酢酸エチル相をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発する。フラッシュクロマトグラフィー(シリカゲル、５０％(ｖ／ｖ)酢酸エチル／ヘキサン)、続くドライアイス／イソプロピルアルコール浴中のヘキサンからの再結晶により、８.６ｇの明黄色粉末を得る、ｍ.ｐ. １５７−１５９℃；分析計算値Ｃ  ８１.７１％、Ｈ  ６.８６％、Ｎ  １１.４３％、％；実測値Ｃ  ８１.８８％、Ｈ  ６.８５％、Ｎ  １１.４３％。
【０１４２】
生物学的実施例
ヒトの配列である活性Ｂ−Ｒａｆ、Ｃ−Ｒａｆ、およびＶ５９９Ｅ  Ｂ−Ｒａｆタンパク質を、バキュロウイルス発現系を使用して、昆虫細胞から精製する。Ｒａｆ阻害を、ＩκＢ−αで被覆し、Superblockで遮断した、９６−ウェルマイクロタイタープレートで試験する。ＩκＢ−αのセリン３６でのリン酸化を、ホスホ−ＩκＢ−α特異的抗体(Cell Signaling #9246)、抗マウスＩｇＧアルカリホスファターゼ結合二次抗体(Pierce # 31320)、およびアルカリホスファターゼ基質であるＡＴＴＯＰＨＯＳ(Promega, #S101)を使用して検出する。
【０１４３】
下記の化合物の各々が、野生型Ｃ−ＲＡＦを、０.０１から３.５マイクロモル／リットルのＩＣ５０でおよび／または野生型Ｂ−ＲＡＦを、０.０３から３.７マイクロモル／リットルのＩＣ５０で、および／または変異体Ｂ−ＲＡＦ(Ｖ５９９Ｅ)を、０.０１から３.４マイクロモル／リットルのＩＣ５０で阻害する。
【０１４４】
【表２】
2006519807.tif 000017
【表３】
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【表４】
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【表５】
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【表６】
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【表７】
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【表８】
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【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【表１２】
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【表１３】
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【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【表１７】
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【表１８】
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【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【表２３】
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【表２４】
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【表２５】
2006519807.tif 000040
【０１４５】
実施例Ｄ１
ヒトＢ−Ｒａｆ遺伝子におけるＴ１７９６Ａ変異の検出
検出プライマー：ＧＡＴＴＴＴＧＧＴＣＴＡＧＣＴＡＣＡＧＡ
二次プライマー：ＧＡＣＴＴＴＣＴＡＧＴＡＡＣＴＣＡＧＣＡＧ
ゲノムＤＮＡを、黒色腫細胞系のヒト細胞から、GENELUTE哺乳類ゲノムＤＮＡキット(Sigma cat # G1N 350)を使用して単離する。ＰＣＲ反応をＰＣＲ機(MJ Research, Model PTC100)上で、総量５０μＬ中、RocheのPCR Coreキット(cat # 1578 553)を使用して行う。ＰＣＲ反応混合物は５μＬの１０Ｘ反応緩衝液、１μＬの１０mM  ｄＮＴＰ、１００−１０００ngの鋳型ＤＮＡ、０.５μＬ  Ｔａｑポリメラーゼ(２.５−５単位)、１μＬの各プライマーの３１μＭストックを含む。
【０１４６】
ＰＣＲ条件は下記の通りである：
【表２６】
2006519807.tif 000041
【０１４７】
増幅後、８μＬのＰＣＲ反応混合物を２μＬの核酸サンプルローディングバッファー[BioRad cat #161-0767]と混合する。１０μＬのサンプルを、０.３μｇ／mlのエチジウムブロミド[Pierce cat #17898]を含む１.５％アガロース[GIBCO-BRL cat # 15510-027]ゲル上に負荷する。分子量標準[Invitrogen cat # 10380-012からの１００ｂｐ  ＤＮＡラダー]を隣のレーンに負荷する。ＤＮＡを、ＴＡＥ緩衝液(０.０４Ｍ  Ｔｒｉｓ−アセテート、０.０１Ｍ  ＥＤＴＡ。０.０２Ｍ氷酢酸ｐＨ８.４)[Roche cat #1666690]中の電気泳動により分離する。電気泳動条件は１２０ボルトで３０−４０分である。分離後、ゲルをＵＶ光にさらし、写真をAlphaImager2000ドキュメンテーションシステムで撮る。
【０１４８】
一般に、ゲル中に２個のバンドが検出される。速く移動するバンドは１００ｂｐマーカーの先を流れ、プライマーを表す。Ｔ１７９６Ａ変異体特異的ＰＣＲ増幅由来のＤＮＡは、予測されるサイズが１５２ｂｐであり、１００ｂｐ標準と２００ｂｐ標準の間を予測されるように移動する。ＰＣＲ増幅産物を配列決定により確認する。ＰＣＲ増幅産物の存在は、Ｔ１７９６Ａ変異が鋳型ＤＮＡに存在することを証明する。ＰＣＲ増幅産物が存在しないことは、その変異がその組織サンプルにないことの証拠である。
【０１４９】
他のＢ−ＲＡＦ変異を、下記の表に変異について示すような検出プライマーと二次プライマーを使用して、この方法で検出する：
【表２７】
2006519807.tif 000042
【表２８】
2006519807.tif 000043
【０１５０】
本実施例は、本発明の詳細な記載を意図し、限定のためではない。
【配列表】
2006519807.tif 000044
2006519807.tif 000045
2006519807.tif 000046
2006519807.tif 000047
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月1日(2005.11.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2006519807000001.app
【国際調査報告】
2006519807.tif 000053
2006519807.tif 000054
2006519807.tif 000055
2006519807.tif 000056