(57)【要約】【課題】  優れた美白作用を有する美白用化粧品組成物を提供する。【解決手段】  プルサティラの根の抽出物を主成分として含有する美白用化粧品組成物であり；必要に応じて、それぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択される成分と；補助成分として、チョウセンニレの樹皮の抽出物および甘草の根の抽出物から群から選択される抽出物とを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
プルサティラの根の抽出物を活性成分として含有することを特徴とする美白用化粧品組成物。
【請求項２】
プルサティラの根の抽出物を主要成分として含有し；更に、それぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択されることを特徴とする1又はそれ以上の成分を含む美白用化粧品組成物。
【請求項３】
更に、補助成分として、チョウセンニレの樹皮の抽出物、ナタネニンジンの根（Ginseng Radix）の抽出物および甘草の根（Glycyrrhizae Radix）の抽出物から群から選択される１又はそれ以上の抽出物を含む請求項１又は２記載の美白用化粧品組成物。
【請求項４】
更に、公知の佐剤を混合してなり、公知の製剤として製造された請求項１ないし３のいずれかに記載の美白用化粧品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はプルサティラの根の抽出物を主成分として含む化粧品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの皮膚は表皮と、真皮とからなっている。爪および毛髪は表皮中に形成されており、汗腺もそこに存在する。真皮には神経網、血管および汗腺が存在する。メラミン形成メラノサイトは表皮中に存在する。メラニンを生じさせる出発物質はチロシン、必須アミノ酸であり、チロシンはチロシンヒドロキシラーゼ（TH）により酸化されて、3,4‐ジヒドロキシフェニルアラニン（DOPA）に変換され、このDOPAは幾つかの反応過程を経てメラニン、黒色ポリマーに変化する。もし、このTH機能が先天的に不足すると、白化が生じることになる。
【０００３】
従って、メラニンの生合成機構において白化物質の発生のための最も重要な目標は、チロシンヒドロキシラーゼの活性を防止する何らかの物質を発見することである。
【０００４】
天然物からチロシンヒドロキシラーゼ阻害剤を見出すため、多くの研究がなされてきた。韓国特許公開公報No.2002-0023168には、ガーデニア・フラクタス（Gardeniae fructus、アカネ科の薬用植物）の抽出物が比較例のアルブチンよりも3倍もの高いチロシンヒドロキシラーゼに対する抑制作用を有することが開示されている。しかし、この特許公報にはガーデニア・フラクタスの抽出物のどの成分がチロシンヒドロキシラーゼに対する抑制作用を有するのかについては開示がなされていないので、ガーデニア・フラクタスの抽出物がヒトの皮膚に対し毒性作用を有するか否かについては評価することができない。今までは、ジヒドロキシベンゼン誘導体、レチノイド列およびステロイドホルモンなどの物質がチロシンヒドロキシラーゼ阻害剤として使用されてきた。しかし、これらの物質は皮膚に対し副作用を有することが判明しており、従って、これら物質の使用は制限される。
【特許文献１】韓国特許公開公報No.2002-0023168
【特許文献２】韓国特許No.315,200
【非特許文献１】Oriental Materia Medica, H-Y Hsuら、Oriental Healing Arts Institute,pp749
【非特許文献２】Vonderbank, Pharmazie 5,21(1950)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明はプルサティラの根の抽出物を主成分として含む美白用化粧品組成物に関する。
本発明は、主成分として、プルサティラの根の抽出物と；およびそれぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン（ranunculin、ウマノアシガタ属キンボウゲ科の植物）、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択される1又はそれ以上の成分と；を具備してなる美白用化粧品組成物に関する。
本発明は、主成分として、プルサティラの根の抽出物およびチョウセンニレ（ニレ科の薬用植物）の樹皮の抽出物を具備してなる美白用化粧品組成物に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の1つの目的は、プルサティラの根の抽出物を主成分として含む化粧品組成物を提供することである。
本発明の他の目的は、プルサティラの根の抽出物およびチョウセンニレの樹皮の抽出物を主成分として含む化粧品組成物を提供することである。
【０００７】
本発明の他の目的は、主成分として、プルサティラの根の抽出物と；およびそれぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択される1又はそれ以上の成分と；を含む美白用化粧品組成物を提供することである。
【０００８】
本発明の更に他の目的は、主成分としてのプルサティラの根の抽出物と；補助成分としてのチョウセンニレ（ニレ科の薬用植物）の樹皮の抽出物、ナタネニンジンの根（Ginseng Radix）の抽出物および甘草の根（Glycyrrhizae Radix）の抽出物から群から選択される１又はそれ以上の抽出物とを含む美白用化粧品組成物を提供することである。
【０００９】
本発明の更に他の目的は、主成分として、プルサティラの根の抽出物と、およびそれぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択される1又はそれ以上の成分と；補助成分として、チョウセンニレの樹皮の抽出物、ナタネニンジンの根（Ginseng Radix）の抽出物および甘草の根（Glycyrrhizae Radix）の抽出物から群から選択される１又はそれ以上の抽出物とを含む美白用化粧品組成物を提供することである。
【００１０】
プルサティラの根は、プルサティラ・コレアーナ、プルサティラ・セルナ、プルサティラ・キネンシスなどの根である。プルサティラの根は漢方薬として産床熱、解毒剤、下痢止め、殺菌剤、抗アメーバ薬、殺真菌薬などとして使用されてきた。最近、プルサティラの根は抗腫瘍活性を有することが報告され、現在、臨床実験中である。
【００１１】
チョウセンニレの樹皮は、種々の寄生虫、種々の表皮糸状菌症の治療のための漢方薬として使用されてきた（Oriental Materia Medica, H-Y Hsuら、Oriental Healing Arts Institute,pp749）。従って、チョウセンニレの樹皮は皮膚の保護作用を有するものと見られている。
【００１２】
プルサティラの根の抽出物から分離されたデオキシポドフィロトキシンは公知であり、以下のような構造式を有している。
【００１３】
【化１】
2006517180.tif 000002
【００１４】
プルサティラの根の抽出物から分離されたラナンキュリンは公知であり、以下のような構造式を有している。
【００１５】
【化２】
2006517180.tif 000003
【００１６】
プルサティラの根の抽出物から分離された一般名、ヘデラゲニンと呼ばれている
3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）は公知であり、以下のような構造式を有している。
【００１７】
【化３】
2006517180.tif 000004
【００１８】
これらの化合物は本発明により優れた美白作用を有することが本発明により確認された。
【００１９】
本発明の美白用組成物は従来のビヒクルを添加することにより従来の製造法で、クリーム、注射液、カプセル、錠剤などに処方することができる。
抽出用溶媒として、例えば水、低級アルカノール（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール）、メチレンクロリド、アセトン、これらの混合物を本発明で使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明を以下の実施例および実験例を参照して更に詳述する。
【実施例１】
【００２１】
プルサティラの根の抽出物の一般的製造方法：
プルサティラの根を粉砕して40−100メッシュの粉体を得た。この粉体の適当量を抽出機に投入し、低級アルコール-水混合溶媒を用いて抽出を行った。この場合、低級アルコールはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールから選択することができる。これらの内、エタノール-水混合溶媒は抽出において最も好ましい。50％（v/v）のエタノール-水混合溶媒を使用した場合、極性が非常に大きい物質、高分子量の物質、ポリマーなどは抽出されなかった。抽出は15ないし35℃の温度、最も好ましくは20ないし25℃の温度で行われた。抽出時間は1時間単位から徐々に増大させた。なお、抽出時間は3時間が好ましい。50％の水性エタノール溶媒を用い、25℃の温度で3時間、プルサティラ根を抽出したものを、ET画分として表す。このET画分を美白効果を測定するのに用いた。
【実施例２】
【００２２】
１. 美白効果を有する物質の分離：
以下の実験例で、1グループのヒトでの臨床実験で美白効果が確認された。美白効果を有する物質の分離を、一般に使用されているチロシナーゼ抑制作用の測定方法により行った。
低分子量極性物質をアセトンから抽出し、このアセトン抽出物をPA画分として表し、残りの部分をPT画分として表した。
PT画分およびPA画分は、チロシナーゼに対し、それぞれ10％および73％の抑制作用を示した。
【００２３】
２. PT画分の活性物質：
PT画分の再分別をセファデックスを用いて行うことにより得た画分３を精製し、活性成分を得、これが一般名、ヘデラゲニンで知られている
3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）であることが確認された。この化合物は抗腫瘍活性を有することが確認された（特許出願中）。この物質はチロシナーゼに対する作用を示すことがなかったが、臨床実験において優れた美白効果を示した。従って、この物質は他の機構を介して美白効果を有することは確かである。サポニン誘導体と皮膚細胞表面との間の関係を考慮したとき、この化合物がメラノソームの移行を妨害し、メラニンがケラチン生成細胞に蓄積するのを防止するものと推測される。
【００２４】
３. PT画分の美白化物質２：
セファデックスによるPT画分の分別により得られたSPX2画分はチロシナーゼに対し48％の抑制を示した。SPX2画分をシリカゲルカラム（溶離液：メチレンクロリド/メタノール＝４：１）に通過させて得た物質が、Rf＝0.3を示すことが確認された。このRf値はラナンキュリンのものと識別された。公知の方法により分離されたこの物質のNMRデータはラナンキュリンのものと同一であった。ラナンキュリンはキンポウゲ科の植物に広く存在し、ミト毒性（mitotoxicity）を有することが知られている（Vonderbank, Pharmazie 5,21(1950)）。純粋なラナンキュリンはチロシナーゼに対し51％の抑制を示した。
【００２５】
４. PA画分の活性物質：
デオキシポドフィロトキシンはアンツリスクス・シルベストリス・ホフム（Anthriscus sylvestris Hoffm）を含む種々の植物に広く存在し、ミト毒性を有することが知られている（Byung-Zun Ahn, Song-Bae Kim, Yong Kimら；デオキシポドフィロトキシンの抗腫瘍剤としての使用、韓国特許No.315,200)。この物質はヒトのへその内皮細胞の形成を抑制することが報告されている（Yong Kim, Song-Bae Kim, Byung-Zum Ahnら、デオキシポドフィロトキシン；プルサティラ・コレアーナ・ナカイからの細胞毒性および腫瘍起因性血管形成成分（antiangiogenic component）、Planta Medica, 68, 271-274(2002)）。この物質は0.03μg/mLでチロシナーゼに対し、38％の抑制作用を示す。この物質は水溶性が低いため、より高い濃度で実験することは困難であった。
【実施例３】
【００２６】
プルサティラの根の乾燥微粉50gと、50％エタノールの500mLとを抽出機に添加した。この混合物を室温で3時間攪拌し、ろ過した。この濾液を貯蔵し、残渣についてもこの手法を2回行った。これら濾液を組合せ、減圧下で濃縮し、乾燥し、抽出物23gを得た。
【実施例４】
【００２７】
チロシナーゼに対する抑制作用を有するPT画分およびPA画分の製造：
実施例３で得た抽出物20gを200mLのアセトンに添加した。この混合物を10分間攪拌し、懸濁液を得た。この懸濁液をろ過し、溶液および残渣を得た。この残渣を200mLのアセトンに懸濁させ、10分間攪拌し、ろ過した。残渣を乾燥させPT画分(17.4g)を得た。溶液を組合せ、濃縮し、乾燥させてPA画分(3.5g)を得た。
【実施例５】
【００２８】
PT画分からのPTpur、チロシナーゼに対する抑制物質の分離：
PT画分560mgを溶離し、セファデックスLH20カラム（200g, 60x40cm）(溶離速度：1mL/1分)を介して分別した。分別を行い、試験管を用い、一本当り精留物を0.5mL充填した。これらの画分をシリカゲルの薄層上に順次、スポットを付し、分別すべき画分について現像させた（現像液＝ブタノール：酢酸：水＝4：1：1、着色：硫酸のスプレーおよび加熱）。結果を図１に示した。
【００２９】
図１において、PT1画分（139mg, 24.8%）は試験管No.26-66から集めた。主スポットは４である。下方部分は硫酸と反応させ黄色を生じさせた。
PT2画分（344mg, 61.4%）は試験管No.66-91から集めた。主スポットは２である。
【００３０】
PT3画分（61mg, 10.9%）は試験管No.91-111から集めた。硫酸でスプレーし、加熱したとき、最初に、赤色が現れ、しばらくして、青色が現れた。この画分はRf値が平均0.48−0.50間に存在するスポットの主要物質である。
【００３１】
PT4画分（15.7mg, 2.8％）は試験管No.111-138から集めた。
SPX3画分およびSPX4画分は薄層上にそれぞれ１スポットで現れ、比較的純粋な画分であった。これらの画分を図1に示した。
【００３２】
SPX1、SPX2、SPX3およびSPX4画分はセファデックスLH20カラムクロマトグラフィを介して得た。
SPX3画分は比較的純粋な画分であり、白色析出物から得た。この画分は水0.5mLに溶解させ、貯蔵し析出させたもの（PTpur）である。
【実施例６】
【００３３】
PTpur構造の識別：
上記の分離した物質、PTpurは識別データを有するから、すなわち、融点＝239−241℃、「α」D＝+23.6゜(c, 0.2, MeOH)、白色無定形、リベルマン・ブカルト（Riberman-Bucart）反応で陽性であるから、それによりグリコシドとして識別される。更に、この物質はIR(cm-1)データ、すなわち、3400（br,-OH）,2940（br,C-H）,1695（C=O）,1455,1040(C-O)および1000-1100,3000-3400以上の吸収バンドを有するから、この物質はグリコシドの可能性が大きいものと思われる。
【００３４】
この物質の1H-NMRはサポニンのものの典型的パターンに従ったものであり、6-CH3基は0.91,0.92, 0.98, 1.00, 1.07および1.21ppmで観察され、他の-CH3基はダブレットとして1.64ppmで観察された。これらから、構成糖類中の1つの糖はラムノースであると推定される。アノマープロトンが6.25(br.),5.11(1H,J=7.80Hz)および4.97ppm(1H,J=6.66Hz)に観察された。従って、PTpurは３つのサッカリドに結合されたグリコシドとして識別された。
【００３５】
13C-NMRから、ヒドロキシメチル基が65.4ppm(C-23)で観察され；３つのアノマー炭素信号がそれぞれ、140.2(C-1'), 106.7（C-1'''),101,7(C-13)で観察され；２つのオレフィン炭素がそれぞれ122.5ppm(C-12)および144.8ppm(C-13) で観察され；カルボキシル炭素が180.2ppm(C-28) で観察された。従来、サッカリドがC-28で結合したとき、約4Hzのグリコシル化アップフィールドシフト（upfield shift）が観察される。しかし、このようなシフトはこの化合物については観察されなかった。従って、この化合物はサッカリドがC-28で結合されていないグリコシルドでないことが確認される。
【００３６】
次に、アグリコンの構造を同定するため、この化合物をエタノール/硫酸により加水分解した。この加水分解された製品の物理的および化学的データ、すなわち、13C-NMRおよび1H-NMRデータを比較することにより、PTpurがヘデラゲニンであることが確認された。この加水分解されたサッカリドが、比較TLCによりラムノース、アラビノースおよびグルコースとして確認された。
【００３７】
上記結果および公知のデータを広く分析することにより、PTpurが、プルサティラの根から既に分離されたサポニン、すなわち、一般名ヘデラゲニンして知られている
3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）であることが確認された。
PTpurの1H-NMRおよび13H-NMRデータを下記表に示す。
【００３８】
[表１]
2006517180.tif 000005
【実施例７】
【００３９】
PT画分からのPTculin、すなわちチロシナーゼに対する抑制物質の分離：
PT画分および純粋なラナンキュリンがシリカゲルの薄層上に現像されたとき、同じスポットがRf=0.3で観察された。
（溶媒：塩化メチレン/メタノール＝4：1）
【実施例８】
【００４０】
PA画分からのPApur、すなわちチロシナーゼに対する抑制物質の分離：
30mgのPA画分をメタノール2mLに溶解させ、これにヘキサン3mLを添加し、その混合物を攪拌した。しばらくの間、静置後、ヘキサン層をデカントさせた。このような抽出を2回行った。ヘキサン溶液を一緒にし、これを乾燥させ、シリカゲルの薄層上にてデオキシポドフィロトキシンを用いて比較クロマトグラフィを行った。このヘキサン溶液からデオキシポドフィロトキシンと同じスポットが確認された。このスポットをシリカゲル薄層を分別することにより分離し、3mgのデオキシポドフィロトキシン、すなわち、NMRを測定したときのデオキシポドフィロトキシンの標準液と同じものを得た。
【００４１】
本発明を以下の製造例により、更に詳述する。
【００４２】
[製造例１]
エマルジョン
エマルジョンベースの組成（ｇ）
セチルオクタノエート            4.0
シクロメチコン                  3.0
液体パラフィン                  4.0
ポリソルベート                  5.0
ソルビタン・ステアレート        3.0
各ベース（それぞれ19g）に対し、それぞれ100mg、400mg、600mg、800mg  および1000mgのET画分を添加し、均一に混合し、それぞれP100mg、P400mg、P600mg、P800mg  およびP1000mgの製剤を得た。
【００４３】
[製造例２]
注射剤
主成分としてのプルサティラの根、補助成分としてのチョウセンニレの樹皮、ナタネニンジンの根、甘草の根を、それぞれ50％のエタノールで抽出した。抽出液を製造した後、バイアル中に充填し、従来の注射剤製造法により凍結乾燥させ、注射剤を得た。
【００４４】
[製造例３]
実施例３の組成                100mg
でん粉                        100mg
ラクトース                     50mg
マグネシウム・ステアレート     q.s.
上記成分を用意し、従来のカプセル製造法によりカプセルを得た。
【００４５】
[製造例４]
実施例３の組成                100mg
ラクトース                     50mg
マグネシウム・ステアレート     q.s.
タルク                         q.s.
上記成分を用意し、従来の錠剤製造法により錠剤を得た。
【００４６】
[製造例５]
実施例３の組成                 3.0g
異性化サッカリド              50.0g
アルギン酸ナトリウム          50.0mg
安息香酸ナトリウム             q.s.
精製水                         q.s.ないし100mL
上記成分を用意し、100mLの褐色ビン中に充填し、従来の溶液製造法により溶液を得た。
【００４７】
[製造例６]
注射剤
実施例３の組成                100mg
ラナンキュリン                 10mg
注射用水                      q.s.ないし100mL
上記成分を用意し、1mLのアンプル中に充填し、従来の注射剤製造法により凍結乾燥させ、注射剤を得た。
【００４８】
[製造例７]
実施例３の組成                100mg
デオキシポドフィロトキシン     10mg
SB 365                         10mg
でん粉                        100mg
ラクトース                     50mg
マグネシウム・ステアレート     q.s.
上記成分を用意し、従来のカプセル製造法によりカプセルを得た。
【００４９】
[製造例８]
実施例３の組成                100mg
デオキシポドフィロトキシン     10mg
ラクトース                     50mg
マグネシウム・ステアレート     q.s.
タルク                         q.s.
上記成分を用意し、従来の錠剤製造法により錠剤を得た。
【００５０】
[製造例９]
実施例３の組成                 3.0g
SB 365                        100mg
異性化サッカリド              50.0g
アルギン酸ナトリウム          50.0mg
安息香酸ナトリウム             q.s.
精製水                         q.s.ないし100mL
上記成分を用意し、100mLの褐色ビン中に充填し、従来の溶液製造法により溶液を得た。
【００５１】
[実験例１]
臨床実験例でのプルサティラの根の抽出物の美白効果：
20人の女性で美白効果の実験を行った。これらの女性の内、10人は顔にしみがあり、残りの10人の女性の顔には肝斑が見られた。
しみを有する女性を、A,A'(A群)、B,B'(B群)、C,C'(C群)、D,D'(D群)、E,E'(E群)に分けた。P100をA群に；P400をB群に；P800をC群に；P1000をD群にそれぞれ投与し；E群にはベースのみを投与した。この投与方法は顔面のしみ部分に擦りつけた。
【００５２】
同じ方法を肝斑の女性にも適用した。この場合、女性を、G,G'(G群)、H,H'(H群)、I,I'(I群)、J,J'(J群)、K,L'(K群)、L,L'(L群)に分けた。
この組成物およびベースの量は、それぞれ5x5cm2当り500mgとした。投与回数は1日3回とした。投与の前に、顔を洗った。この投与は3週間継続した。
【００５３】
この臨床試験の最初から3人を比較、観察した。美白効果を完治、有効、若干有効、効果なしの基準のもとに考察、判断した。
結果を表２に示す。
【００５４】
[表２]
女性のしみ、肝斑に対するプルサティラの根の抽出物の美白効果：
2006517180.tif 000006
備考：
完治：しみ、肝斑のスポットが消失した。
有効：しみ、肝斑のスポットの大部分が消失した。
若干有効：しみ、肝斑のスポットが多少、消失した。
【００５５】
表2に示すように、P100はしみグループのA,A'(100mg)又は肝斑グループのG,G'(100mg)に対しては効果がなく；P400はしみグループのB,B'(400mg)又は肝斑グループのH,H'(400mg)に対しては若干有効であり；400mgよりも多い投与グループでは有効であった。600mgよりも多い投与グループでは肝斑グループに対し全て有効であった。800mgよりも多い投与グループではしみグループに対し全て有効であった。
【００５６】
[実験例２]
臨床試験における注射の美白効果：
肝斑を有する5人の女性がA, B, C, DおよびEとして選択され、マークされた。これら女性に対し、それぞれ1日当り5.0mLの注射を3日間連続的に行い、その後、同じ処方と、軟膏投与を同時に行った。3人の女性、A, B, Cは注射と軟膏投与とを5日間行ったところ完治し、女性、DおよびEについては有効であった。
注射と軟膏投与との組合せ治療は、注射なしで皮膚に軟膏投与を行った場合よりもより即効的であった。
【００５７】
この臨床試験によりこの組成物が有効であることが確認された。この有効性は同時に、当該分野で一般に実施されているチロシナーゼに対する抑制作用測定方法に行われた。
PTおよびPA画分は、それぞれ5mg/mLでチロシナーゼの活性の10％および73%を抑制した。
純粋なラナンキュリンはチロシナーゼの活性の51%を抑制した。
デオキシポドフィロトキシンは0.03μg/mLでチロシナーゼの活性の38%を抑制した。より高い濃度での実験は、この物質の非常に低い水溶性のため困難であった。
【００５８】
[実験例３]
ラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシンおよびSB365からなる製剤の臨床試験における美白効果：
薬剤組成物：10mgのラナンキュリン、50mgのデオキシポドフィロトキシンおよび15mgのSB365をベース（19g）と共に十分に混合し、薬剤組成物を得た。この薬剤組成物を完治するまで1日3回、肝斑部分に擦り付けた。
【００５９】
5人の女性（A, B, C, DおよびE）の内、AおよびBは10日後に完治し；Cは17日後に完治し；Dは27日後に完治し；Eは若干有効であったが完治はしなかった。
【００６０】
チロシナーゼに対し有効でなかったSB365を削除した組成物を使用した。この組成物を、肝斑を有する5人の女性（F,G,H,L,K）に投与した。FおよびGは26日後に完治し；Iは35日後に完治し；JおよびKは有効のレベルであった。
【００６１】
この臨床試験の結果から、SB365はチロシナーゼの活性を抑制しなかったが、美白効果を有することが確認された。SB365はメラノサイトに対し作用を有しないがメラニンの角化細胞への移行を妨害する可能性が或る。正確な機構については科学的に開示することができるであろう。
【００６２】
チョウセンニレの樹皮の抽出物、ナタネニンジンの根の抽出物および/又は甘草の根の抽出物を補助成分として美白効果を有するプルサティラの根の製剤へ添加することにより、この組合わせた組成物が美容技術上のメリット、例えば美白作用、サポニンの殺菌作用を介しての皮膚保護、皮膚洗浄（elutriation）および皮膚浸透作用などの相乗作用を有することが予想される。
【００６３】
[実験例４]
チロシナーゼに対する抑制作用の測定：
シグマ社からチロシナーゼを購入した。この酵素を3,4-ジヒドロフェニルアラニンに溶解させた。燐酸ナトリウム緩衝液（0.1M， pH6.0）、酵素基質で、濃度を1.6mg/mLに調整することにより酵素溶液を得た。サンプルは燐酸ナトリウム緩衝液中に溶解させ、不溶残渣を濾別した。緩衝液0.7mL、サンプル0.2mLおよび上記酵素溶液0.1mL(15.7単位/mL)を混合し、60秒後に、分光光度計を用いて475nmで吸光度を測定した。
【００６４】
以下の等式を用いて、チロシナーゼ抑制率（%）を計算した。
チロシナーゼ抑制率（%）＝[1-(S-B)/C] x 100
ここで、S:  酵素およびサンプルを有する試験管
B:  サンプルを有する試験管
C:  酵素を有する試験管
【００６５】
[実験例５]
メスウシの胎児血清を10%含むEAGLE MEM培養基に対し、下記表3に挙げた実施例3の組成物の各濃度のものを添加し、マウスメラノーマからのB-16細胞を各培養基に接種し、37℃、5%CO2の条件下で5日間培養した。この細胞をトリプシンを用いて分散し、1,000rpmで5分間遠心分離し、収集し、メラノイド度を肉眼で測定した。
【００６６】
判断基準を以下の通りであった。
−：実施例3の組成物を添加しないものとほぼ同程度；
＋：若干の美白作用
＋＋：可なりの美白作用
＋＋＋：十分な美白作用
【００６７】
[表３]
2006517180.tif 000007
【００６８】
上記結果から明らかなように、本発明の組成物はマウスメラノーマからのメラニンに対する優れた美白作用を有する。
【００６９】
[実験例６]
ボランテア（健康な男性および女性、それぞれ15人、合計30人）の右上腕の内側で、2x2cm2の大きさの領域を選択し、この領域部を温水で洗浄し、それ以外の部分をアルミニウムホイルでマスキングし、選択された領域のみ紫外線が当るようにし、２つのランプ、すなわち、FL20SBLBランプ（株式会社東芝）およびFL20SE-30ランプ（株式会社東芝）を同時に用い、紫外線を0.8x10erg/cm3/時間/日の線量で連続的に3回照射した。この照射の後、照射部分に対し、下記表4のサンプルを1日当り3回（朝、昼、晩）適用した。3週間後、メラノイドの程度を肉眼的に評価した。改善の度合いは、非常に効果的、効果的および効果なし、の3つの基準で評価した。
【００７０】
[表４]
2006517180.tif 000008
【００７１】
1,3-ブチレングリコールおよび精製水以外の成分は加熱することにより溶解させた（油状）。これとは別に、1,3-ブチレングリコールおよび精製水を混合し、加温し溶液を得た。この溶液を上記油状物に添加し、その混合物を攪拌させ、乳化させ、冷却してバニシングクリームを得た（プルサティラの根の抽出物のバニシングクリーム）。
これとは別に、プルサティラの根の抽出物を除いたバニシングクリームを製造し、対照として使用した。
結果を以下に示す。
【００７２】
[表５]
2006517180.tif 000009
【００７３】
上記実験結果から明らかなように、本発明のプルサティラの根の抽出物を含む化粧用組成物はメラニン形成に対し優れた抑制効果を有することが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明は、プルサティラの根の抽出物を含有する美白用化粧品組成物に関するものであり；必要に応じて、それぞれプルサティラの根から抽出、分離されたラナンキュリン、デオキシポドフィロトキシン、および3-O-α-L-ラムノピラノシル（1→2）-[β-D-グルコピラノシル（1→4）-α-L-アラビノピラノシド（SB365）から選択される1又はそれ以上の成分と；更に必要に応じて、補助成分として、チョウセンニレの樹皮の抽出物、ナタネニンジンの根（Ginseng Radix）の抽出物および甘草の根（Glycyrrhizae Radix）の抽出物から群から選択される１又はそれ以上の抽出物とを含む。本組成物は優れた美白効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】セパデックスLH20カラムクロマトグラフィを介してのPT留分のクロマトグラムの結果を示す図。
【図１】
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【国際調査報告】
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