(57)【要約】多数の化学的実体をこれらの化学的実体の生物学的プロセスを促進又は阻害する能力について試験する方法。１つの実施態様において、この方法は、（ａ）少なくとも２つの主要表面を有するブランクマトリックスを提供し（但し、前記少なくとも２つの主要表面はアッセイ成分と化学的実体とを受け入れることができるものである）；（ｂ）前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに少なくとも１種の化学的実体を加え、それによって含浸マトリックスを形成し；（ｃ）前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに生物学的プロセスに必要とされる少なくとも１種のアッセイ成分を加え；及び（ｄ）前記少なくとも１種の化学的実体の、前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進又は阻害する能力を評価する工程からなる。好ましい実施態様においては、前記の生物学的プロセスの促進又は阻害を示す応答は、含浸マトリックスにアッセイ成分として導入することができるトレーサーによって検出できる。このようにして検出される応答は、含浸マトリックスの２つの主要表面の少なくとも１つの画像の形で保存することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）少なくとも２つの主要表面を有するブランクマトリックスを提供し（但し、前記少なくとも２つの主要表面はアッセイ成分と化学的実体とを受け入れることができるものである）；
（ｂ）前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに少なくとも１種の化学的実体を加え、それによって含浸マトリックスを形成し；
（ｃ）前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに、生物学的プロセスに必要な少なくとも１種のアッセイ成分を加え；及び
（ｄ）前記少なくとも１種の化学的実体の、前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進又は阻害する能力を評価する
工程からなる、少なくとも１種の化学的実体を該化学的実体の生物学的プロセスを促進又は阻害する能力について試験する方法。
【請求項２】
工程（ｄ）が、前記少なくとも１種の化学的実体が前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進するか又は阻害するかを示す応答を検出する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
さらに、前記の検出された応答の画像を作成する工程を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに転写シートを用いて加える、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに液体分配装置を用いて加える、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに固体の形で加える、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに転写シートを用いて加える、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに液体分配装置を用いて加える、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに固体の形で加える、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも２種類の異ったアッセイ成分を前記含浸マトリックスに加える、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも２種類の異った化学的実体を前記ブランクマトリックスに加える、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
１種又はそれ以上の追加の化学的実体あるいは１種又はそれ以上の追加のアッセイ成分を前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに加えることができる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ブランクマトリックス又は前記含浸マトリックスを分離されかつ独立した領域に区分する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）少なくとも２つの主要表面を有するブランクマトリックスを提供し（但し、前記少なくとも２つの主要表面はアッセイ成分と化学的実体とを受け入れることができるものである）；
（ｂ）前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに生物学的プロセスに必要な少なくとも１種のアッセイ成分を加え、それによって含浸マトリックスを形成し；
（ｃ）前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに少なくとも１種の化学的実体を加え；及び
（ｄ）前記少なくとも１種の化学的実体の、前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進又は阻害する能力を評価する
工程からなる、少なくとも１種の化学的実体を該化学的実体の生物学的プロセスを促進又は阻害する能力について試験する方法。
【請求項１５】
工程（ｄ）が、前記少なくとも１種の化学的実体が前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進するか又は阻害するかを示す応答を検出する工程を含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
さらに、前記の検出された応答の画像を作成する工程を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに転写シートを用いて加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに液体分配装置を用いて加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
前記少なくとも１種のアッセイ成分を、前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに固体の形で加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに転写シートを用いて加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに液体分配装置を用いて加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１種の化学的実体を、前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに固体の形で加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
少なくとも２種類の異ったアッセイ成分を前記ブランクマトリックスに加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも２種類の異った化学的実体を前記含浸マトリックスに加える、請求項１４に記載の方法。
【請求項２５】
１種又はそれ以上の追加の化学的実体あるいは１種又はそれ以上の追加のアッセイ成分を前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに加えることができる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ブランクマトリックス又は前記含浸マトリックスを分離されかつ独立した領域に区分する、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、多数の化学的実体（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）を種々様々な生物学性又は生化学活性についてスクリーニングする方法に関し、さらに詳しくはこのようなスクリーニングにおけるブランクマトリックスの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
高処理能力スクリーニング法は、多数の化学的実体の試料を、所望の応答を導き出すと思われる化学的実体を特定することを目的として、特定の薬物標的に対して試験する方法である。
【０００３】
米国特許第５，９７６，８１３号公報には、多数の化学的実体を、典型的には１種又はそれ以上のアッセイ成分を含有している多孔質マトリックスの中に又は表面に導入するアッセイ（本明細書では連続フォーマット高処理能力スクリーニング又はＣＦ−ＨＴＳという）が記載されている。この特許公報に記載されているアッセイに適した多孔質マトリックスは、これらのアッセイ成分（１種又は複数）を多孔質マトリックスに加えるか、混合するか、注入するか、分配するか又は浸すことによって調製することができる。また、このアッセイに適した多孔質マトリックスは、アッセイ成分をマトリックスの中に又は表面にカップリングするか、塗布するか、結合するか、固定するか、連結するか、複合するか又は付着させることによっても調製することができる。アッセイ成分としては、生物学的試薬及び化学的試薬が挙げられる。
【０００４】
米国特許第５，９７６，８１３号公報に記載されているアッセイは、複数の成分が不透過性障壁によって個々のウエルに分けられているアッセイよりも多くの利点を提供する。ＣＦ−ＨＴＳは、化学的実体の極めて高密度のスクリーニングを日常的に可能にする。現在、８，６４０個の個々の化学的実体を、９６ウエルマイクロタイタープレートと同じフットプリントを有するプラスチックシートに加えることができる。要するに、小型化は、多孔質マトリックス中で反応に利用できる化学的実体の容量を制限することによって簡単に達成される。化学的実体をプラスチックシートなどの表面に個々に分けられた配置及び高度に詰められた配列で、分配し、乾燥し、次いで該化学的実体を多孔質マトリックスに転送することによって、高密度（１５３６ウエル）マイクロタイタープレートに付随する重要な小型化の問題の全てを処理することができる。例えば、乾燥した化学的実体を、後に多孔質マトリックス中に再構成するために表面に支持させると、高密度マイクロタイタープレートにはよくあるようなアッセイ成分と化学的実体の添加中及びその後の反応時間中の蒸発による物質の損失に関する問題が取り除かれる。
【０００５】
ＣＦ−ＨＴＳアッセイにおいて観測される所望の効果が重なり合うことも在り得るが、所望の効果が観測されるマトリックスの位置の近くに配置された化合物を再試験することが必要なだけである。すなわち、８，６４０個の化学的実体を、観測された効果のそれぞれの最も近くにある２５個の候補化合物に減らし、それぞれの観測された効果に最も近いこれらの２５個の候補化合物を再試験することによって所望の化学的実体を特定することが可能である（慣用の９６ウエルマイクロタイタープレート技術を用いた場合でも可能である）。さらにまた、アッセイ成分をＣＦ−ＨＴＳフォーマットに分配するためにはマイクロ液体工学は、必要としない。なぜならアッセイ成分はバルクで分配され、混合されるからである。化学的実体のみは、マイクロ液体工学によって分配し、次いでアッセイフォーマットに応じて、その後に使用するために乾燥することが必要である。
【０００６】
アッセイ成分はマトリックスに含有させるために均質なバルク溶液の形で提供されることから、分配容量の変動による試料間の相違はごくわずかである。比較すると、慣用の９６ウエルフォーマットにおけるウエルの存在は、典型的には顕著な試料間の変動を招く。反応マトリックスの単一のカメラ画像が必要であるだけであることから、多数のウエルの読み取り、比較及び定量において時間と労力が節約される。小型化により生ずる利点（例えば、経費、処理量、アッセイ成分の使用、化学的実体の使用）の他に、ＣＦ−ＨＴＳはまた、アッセイの大部分の工程をバルクで取り扱うことができるなどの意外な利点を提供する。
【０００７】
米国特許第５，９７６，８１３号公報に記載されているアッセイは、アッセイ成分を多孔質マトリックス全体に均一に分布させることを必要とする。典型的には、アッセイ成分の分配は、固化する前のマトリックスの流動又は可変形性状態の中でアッセイ成分をバルク溶解又は懸濁することによって行われる。実際には、高度の時間内にマトリックス中に容易に拡散させることができないアッセイ成分は、多孔質マトリックスにバルク溶解又はバルク懸濁によって含有させなければならない。これらのアッセイ成分としては、高分子量タンパク質、細胞膜及び細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０００８】
バルク溶解又は懸濁によるアッセイ成分の多孔質マトリックスへの導入は、次の主な４つの理由により、問題があり得る
（１）多孔質マトリックスの材料を流動又は可変形性状態に保つのに必要な条件は、幾つかのアッセイ成分に悪影響を及ぼすかもしれない；例えば、幾つかの酵素の活性は、温度に依存し；幾つかのマトリックスを流動又は可変形性状態に維持するのに必要な高い温度は、アッセイに必要な酵素を不活性化させるかもしれない；
（２）珍しくかつ高価なアッセイ成分を保存しておくことの必要性により、多孔質マトリックスのかなりの部分が最終アッセイで利用されないかも知れないことから大きな多孔質マトリックスを製造することは効率が悪い；
（３）アッセイの性能は多孔質マトリックスの厚みに依存する；すなわち、多孔質マトリックスが厚ければ厚いほど、アッセイ成分を混合するのに必要な時間が長くなり、それによって一組のアッセイを終えるのに必要な時間の長さが大きくなる；
（４）不溶性アッセイ成分、例えば細胞を均一に分配する必要性により、流動性又は可変形性物質の粘度が高いこと及び固化時のマトリックス材料の混合は非現実的であることから、大きな多孔質マトリックスの製造は困難である。
多孔質マトリックスのゲル状材料にアッセイ成分を加える現存の方法、例えばマトリックスをバルク溶液と接触させる、浸透させる、注入する、浸漬する、別のゲルをマトリックス上に積層する、別の基質をマトリックス上に積層するなどの方法は、多孔質マトリックスから自由に拡散することができる任意の物質の分布に著しい変化をもたらし得る。例えば、別のアッセイ成分をマトリックスに導入するためにマトリックス全体を長時間浸漬する場合には、化学的実体がマトリックスからバルク溶液中へと拡散する。
【発明の開示】
【０００９】
本発明は、多数の化学的実体をこれらの化学的実体の生物学的プロセスを促進又は阻害する能力について試験する方法を提供する。１つの実施態様において、本発明の方法は、
（ａ）少なくとも２つの主要表面を有するブランクマトリックスを提供し（但し、前記少なくとも２つの主要表面はアッセイ成分と化学的実体とを受け入れることができるものである）；
（ｂ）前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに少なくとも１種の化学的実体を加え、それによって含浸マトリックスを形成し；
（ｃ）前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに、生物学的プロセスに必要な少なくとも１種のアッセイ成分を加え；及び
（ｄ）前記少なくとも１種の化学的実体の、前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進又は阻害する能力を評価する
工程からなる。
【００１０】
１種又はそれ以上の追加の化学的実体あるいは１種又はそれ以上の追加のアッセイ成分を、含浸マトリックスの少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに加えることができる。好ましい実施態様において、前記の生物学的プロセスの促進又は阻害を示す応答は、含浸マトリックスにアッセイ成分として導入することができるトレーサーにより検出できる。このようにして検出される応答は、含浸マトリックスの２つの主要表面の少なくとも１つの画像の形で保存することができる。
【００１１】
前記の実施態様の変形は、
（ａ）少なくとも２つの主要表面を有するブランクマトリックスを提供し（但し、前記少なくとも２つの主要表面はアッセイ成分と化学的実体とを受け入れることができるものである）；
（ｂ）前記ブランクマトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに生物学的プロセスに必要な少なくとも１種のアッセイ成分を加え、それによって含浸マトリックスを形成し；
（ｃ）前記含浸マトリックスの前記少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに少なくとも１種の化学的実体を加え；及び
（ｄ）前記少なくとも１種の化学的実体の、前記少なくとも１種のアッセイ成分を含む前記生物学的プロセスを促進又は阻害する能力を評価する
工程からなる。
【００１２】
１種又はそれ以上の追加の化学的実体あるいは１種又はそれ以上の追加のアッセイ成分を、含浸マトリックスの少なくとも２つの主要表面の少なくとも１つに加えることができる。前記の実施態様におけるように、前記の生物学的プロセスの促進又は阻害を示す応答は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスにアッセイ成分として導入することができるトレーサーにより検出できる。前記の実施態様におけるように、このようにして検出される応答は、含浸マトリックスの２つの主要表面の少なくとも１つの画像の形で保存することができる。
【００１３】
ブランクマトリックスは、多孔質又は非多孔質マトリックスであることができる。ブランクマトリックスは多孔質マトリックスであることが好ましい。ブランクマトリックスは、生物学的反応又は化学的反応に適応する（ａｃｃｏｍｍｏｄａｔｅ）ことができる。ブランクマトリックスは、（１）所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を含む応答について試験される化学的実体と、（２）化学的実体の存在下で検出可能な応答を生じさせるという特定の目的で生物学的プロセスにおいて使用されるアッセイ成分と、を欠いている。
【００１４】
ブランクマトリックスは、アガロースゲル、濾紙又は吸い取り紙から形成されることが好ましい。化学的実体は、低分子量を有する分子、ペプチド又は抗体であることが好ましい。生物学的試薬と呼ばれるアッセイ成分は、酵素、酵素用基質又は細胞であることが好ましい。化学的試薬と呼ばれるアッセイ成分は、低分子量の有機化合物又は無機化合物であることが好ましい。化学的実体はブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に幾つかの方法で加えることができるが、好ましい方法としては噴霧、滴加、ピントランスファー（ｐｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ）、転写面からマトリックスへの転写、例えばマトリックス−マトリックス転写、紙−マトリックス転写、及び乾燥又は凍結スポットからの再構成が挙げられるが、これらに限定されない。アッセイ成分はブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に幾つかの方法で加えることができるが、好ましい方法としては、転写面からマトリックスへの転写、例えばマトリックス−マトリックス転写、紙−マトリックス転写、噴霧、ピントランスファー、及び乾燥又は凍結スポットからの再構成が挙げられるが、これらに限定されない。また、化学的実体とアッセイ成分は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスに、注加することによって又は該マトリックスを液体に短時間浸すことによって加えることもできる。分配された後に、アッセイ成分と化学的実体は、マトリックスの中心部、すなわちマトリックスの主要表面の下に適当な時間内に拡散し、それによって生物学的活性又は化学的活性及びこれらの首尾よい検出を可能にし得る。含浸マトリックスの主要表面に少なくとも１種のアッセイ成分を加える前にブランクマトリックスの主要表面に少なくとも１種の化学的実体を加えることが好ましい。しかし、含浸マトリックスの主要表面に少なくとも１種の化学的実体を加える前にブランクマトリックスの主要表面に少なくとも１種のアッセイ成分を加えることは、本発明の方法の範囲に入る。
【００１５】
本発明の方法は、連続フォーマット高処理能力スクリーニングを行う従来の公知の方法に比べて多数の利点を提供する。これらの利点としては、次のものが挙げられる。
（ａ）アッセイ成分の消費量の減少；
（ｂ）処理量の増大；
（ｃ）マトリックスの製造の単純化；
（ｄ）同じマトリックス中で、複数の化学的実体を複数の濃度で及び複数のアッセイ成分を複数の濃度で含む多数のアッセイを行うことができること；及び
（ｅ）自動化を促進できること。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本明細書で使用する「化学的実体（ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｙ）」という表現は、公知又は未知の生物学的効果及び化学的効果を有する公知又は未知の有機又は無機組成の生物学的物質又は化学的物質を意味する。本明細書に記載のスクリーニング方法の目的は、生物学的プロセスに対する所定の化学的実体の効果を決定することにある。「アッセイ成分」という表現は、所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を含む応答について試験するアッセイに含まれる化学的試薬又は生物学的試薬を意味する。「生物学的試薬」という表現は、生物学的供給源から誘導される反応性物質を意味し、アッセイにおいて検出可能なシグナルを生じることができる生物学的プロセスに含まれるものである。生物学的試薬は、その供給源から誘導した後に修飾されてもされなくてもよい。生物学的試薬の代表例としては、核酸、タンパク質、及びその他の合成又は天然の巨大分子；細胞；細胞溶解物；細胞膜；生物学的抽出物；細胞小器官；並びにその他の複雑な生物学的実体（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｅｎｔｉｔｉｅｓ）及び混合物；並びに小分子、例えば阻害剤、基質、ペプチド、色素、ヌクレオチド、補因子が挙げられる。「化学的試薬」という表現は、化学的供給源から誘導される反応性物質を意味し、アッセイにおいて検出可能なシグナルを生じることができる生物学的プロセスに含まれるものである。化学的試薬は、その供給源から誘導した後に修飾されてもされなくてもよい。化学的試薬の代表例としては、重合体、有機分子及び無機分子が挙げられる。「ブランクマトリックス」という表現は、（１）所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を含む応答について試験される化学的実体と、（２）化学的実体の存在下で検出可能な応答を生じさせるという特定の目的で生物学的プロセスにおいて使用されるアッセイ成分とを欠いているマトリックスを意味する。「ブランクマトリックス」という表現、すなわち「ブランクマトリックス」の定義は、所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を含む応答について試験を行うのに適した環境を提供するためだけにあるアッセイ成分、例えば水、緩衝液及び塩を除外することを意図するものではない。「含浸マトリックス」という表現は、化学的実体又はアッセイ成分の少なくとも１種が本発明の方法の工程の１つによってすでに導入されているブランクマトリックスを意味する。「応答」という用語は、少なくとも１種の化学的実体と少なくとも１種のアッセイ成分を含む相互作用を示す検出可能な結果を意味する。
【００１７】
ここで図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、１Ｄ、１Ｅ、１Ｆ及び１Ｇを参照して、化学的実体がブランクマトリックスに導入される実施態様を説明する。アッセイ成分がブランクマトリックスに導入される実施態様は、ブランクマトリックスに導入される物質の性質を主たる除外点として実質的に同様である。図１Ａを参照すると、本発明の方法で使用するのに適したブランクマトリックス１０が示される。ブランクマトリックス１０は、第一の主要表面１２と第二の主要表面１４を有する。図１Ｂは、ブランクマトリックス１０の少なくとも１つの主要表面に化学的実体を加えるのに適した転写面１６を表す。図１Ｃは、図１Ｂの転写面１６に加えられる化学的実体１８を表す。化学的実体をブランクマトリックス１０の主要表面に加えるために転写面１６は、その表面にある化学的実体１８が転写面１６からブランクマトリックス１０の少なくとも１つの主要表面１４に拡散することによって転写するように配置される。図１Ｄは、化学的実体１８を有する転写面１６と接触させられるブランクマトリックス１０の主要表面１４を表す。化学的実体をブランクマトリックス１０に転写された後の、化学的実体１８を含浸させてあるブランクマトリックス１０は含浸マトリックス１０’という。本発明の方法の１つの実施態様においては、転写面１６は、含浸マトリックス１０’から分離される。図１Ｅに示すような別の実施態様では、アッセイでのその後の工程のために転写面１６を含浸マトリックス１０’の主要表面１４から分離する必要はない。化学的実体をブランクマトリックス１０の主要表面に転写面１６を用いて加えることが好ましいが、化学的実体１８はブランクマトリックス１０の主要表面に、別の方法、例えばピペットによる移動、噴霧などの方法によって加えることができることが認められるべきである。ブランクマトリックス１０が十分に薄い、例えば約１ｍｍ未満の厚みを有する場合には、化学的実体又はアッセイ成分は、ブランクマトリックス１０の主要表面１２又は主要表面１４のいずれかに加えることができる。図１Ｆは、１種又はそれ以上のアッセイ成分を含浸マトリックス１０’の主要表面に加えるのに適した分配装置２０、例えば噴霧器を表す。また、図１Ｆは、１種又はそれ以上のアッセイ成分を主要表面１２に加えた後の含浸マトリックス１０’を表す。図１Ｇは、生物学的反応及び化学反応を生じるのに十分な時間が経過した後に含浸マトリックス１０’の主要表面１２の画像を作成し、それによって化学的実体の効果の程度を測定できるのに適する装置２２を表す。このような装置としては、画像作成装置、読み取り装置、走査装置又は検出装置が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１８】
本発明の方法は、ブランクマトリックスを調製するために種々様々な物質を用いることができる。本発明で使用するのに適したブランクマトリックスを調製するのに適した物質としては、ゲル、好ましくはヒドロゲル、例えばアガロース、ポリアクリルアミドなど、又は膜材料、濾過材料、例えば濾紙、紙製物質、例えば吸い取り紙、紙繊維及び重合体物質が挙げられるが、これらに限定されない。ブランクマトリックスを調製するのに適した重合体物質としては、天然重合体物質、合成重合体物質、半合成重合体物質が挙げられるが、これらに限定されない。前記の物質の代表例としては、タンパク質、炭水化物、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリ塩化ビニリデン及びポリエチレンが挙げられるが、これらに限定されない。ブランクマトリックスを形成できるその他の物質としては、繊維質物質例えば、紙繊維、ガラス繊維が挙げられるが、これらに限定されない。鉱物系物質、例えばシリカも、ブランクマトリックスを調製するのに使用できる。
【００１９】
ブランクマトリックスは、例えばアガロースなどのゲルを形成できる物質を型に注入し、注型することによって調製できる。ブランクマトリックスは、成形、例えば押出し成形により調製できる。ブランクマトリックス調製用の物質は、流動性であるか又は非流動性であることができる。型に注入し、注型される物質は、環境条件、生物学的条件又は化学的条件の１つ又はそれ以上の変化、例えば温度の変化、ｐＨ又は放射線照射、例えば光照射によってブランクマトリックスに変換される。ブランクマトリックスは、重合体物質を水性媒体などの液状媒体に分散、懸濁又は溶解し、液相が所定の時間内に非流動性になる、すなわちゲルになるように環境条件、生物学的条件又は化学的条件の１つ又はそれ以上を変化させることによって調製できる。別法として、本発明で使用するのに適したブランクマトリックスは、繊維質物質、例えば濾紙、重合体物質、タンパク質系物質及び鉱物系物質を供給する業者から商業的に入手できる。ブランクマトリックスは、バイオ・ラド・ラボラトリーズ社（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）（カリフォルニア州ハーキュリーズ所在）、パーキンエルマー・コーポレーション、ライフサイエンス（マサチューセッツ州ボストン所在）及びプロメガ・コーポレーション（ウイスコンシン州マディソン所在）のような製造業者から入手できる。
【００２０】
マトリックス、好ましくは非多孔質マトリックスは、化学的実体、生物学的試薬又は化学試薬、あるいはこれらの任意の組合せをブランクマトリックス又は含浸マトリックス上に空間的に固定するための転写面として使用できる。転写面は、アッセイ成分又は化学的実体を、マトリックス、好ましくは非多孔質マトリックスの表面にカップリング、塗布、結合、固定、連結、複合又は付着させることにより調製できる。本発明におけるこの目的にマトリックスを使用することにより、１種又はそれ以上のアッセイ成分の位置が固定される。非多孔質マトリックスを用いて転写面を調製するのに適した重合体物質としては、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリ塩化ビニリデン及びポリエチレンが挙げられるが、これらに限定されない。非多孔質マトリックスを形成することができるその他の物質としては、紙、繊維質物質、例えば紙繊維、ガラス繊維、及び鉱物系材料、例えばシリカが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
前記の転写面は、重合体物質製シートの主要表面であることが好ましい。化学的実体は転写面上で混じり合いも重なり合いもしないこと、及びそれぞれの化学的実体が転写面の特定の位置にあることが好ましい。しかし、複数の化学的実体を転写面にでたらめに加えることができ、その場合に所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を示す応答を提供するこれらの化学的実体を、その最初の位置を特定する方法以外の方法で特定できることもまた本発明の範囲に入る。このような方法としては、例えば、コード化されたコンビナトリアル化学ライブラリーの使用が挙げられる。コード化されたコンビナトリアル化学ライブラリーにおいて、それぞれの化学的実体は合成して特異標識を含有させ得、該標識は物理的手段（例えばＮＭＲ、質量分析）又は化学的手段（蛍光分析、放射分析）によって検出できる。特異標識のその後の特定は、標識がその一部である化学的実体を特定する。従って、化学的実体がその標識の特定によって特定できる場合には、転写面上の化学的実体の最初の位置を知ることは必要がない。転写面がブランクマトリックスの主要表面と向かい合わせで接触して配置される場合には、化学的実体はブランクマトリックス、好ましくは多孔質マトリックス中に、転写面上の最初の配列の特定された配置に対応する位置で溶解し且つ拡散する。転写面は、アッセイ成分をブランクマトリックスに導入するのにも使用できる。
【００２２】
化学的実体とアッセイ成分をブランクマトリックス又は含浸マトリックスに導入する場合には、化学的実体とアッセイ成分は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスに、共有結合又は非共有結合によるか、マトリックスとの特異的又は非特異的結合性相互作用により付着させる（ａｔｔａｃｈ）ことができる。ブランクマトリックス又は含浸マトリックスは、これらに対する化学的実体及びアッセイ成分の付着を促進させるために、誘導体化しなくても、誘導体化しても又は他の方法で前処理することができる。ブランクマトリックス又は含浸マトリクッスに付着させた後に、化学的実体又はアッセイ成分は空間的に固定され、それによって化学的実体又はアッセイ成分の拡散がアッセイのために制限される。化学的実体がマトリックスに付着されたアッセイ成分に向かって拡散するか、又はアッセイ成分がマトリックスに付着された化学的実体に向かって拡散するかすることができなければならないことが注意されるべきである。
【００２３】
本発明で使用するのに適したアッセイ成分（すなわち、生物学的試薬及び化学的試薬）としては、例えば核酸、タンパク質などの巨大分子、及びその他の合成又は天然巨大分子；細胞；細胞溶解物；生物学的抽出物；細胞小器官及びその他の複雑な生物学的実体及び混合物；並びに小分子、例えば塩類、阻害剤、基質、ペプチド、色素、ヌクレオチド、補因子、イオン及び溶媒が挙げられる。
【００２４】
操作
本発明の好ましい実施態様において、化学的実体は、高充填の配列で及び離散した配置で転写面に分配され、乾燥された後にブランクマトリックス、好ましくはブランク多孔質マトリックスに転写により加えられる。典型的な適用においては、化学的実体を含有する転写面は、化学的実体の全部が拡散によって転写面からブランクマトリックスの主要表面に移行するように、ブランクマトリックスの主要表面と向かい合わせて接触して配置される。前述のように、化学的実体又はアッセイ成分、あるいは化学的実体とアッセイ成分の両方が適用されているブランクマトリックスを含浸マトリックスという。次いで、高処理能力スクリーニング操作に必要なアッセイ成分を含有する別のマトリックスを、含浸マトリックスと向かい合わせて接触させることができる。化学的実体とアッセイ成分は、含浸マトリックス内で拡散し、相互作用する。含浸マトリックス中でのアッセイ成分同士の間の相互作用に対する化学的実体の効果は、典型的にはアッセイ成分として含有される比色分析トレーサー、放射分析トレーサー、蛍光分析トレーサー又はこれらの組合せの測定によって定性的に及び定量的に測定することができる。例えば、酵素と酵素用基質との間の反応又はリガンドとリガンド用受容体との間の相互作用に対する所定の化学的実体の効果は、前記のトレーサーを用いて測定できる。トレーサー又はその均等物により得られるシグナルは、画像作成、読み取り、スキャニング、検出などのための装置によって保存することができる。このような装置としては、ゲルドキュメンテーション及び画像作成システム、分光光度スキャナー、ＣＣＤカメラ、フィルム、リン光イメージャー、及びシンチレーション検出装置が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２５】
別の実施態様においては、化学的実体は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に、化学的実体をブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に直接に分配することを含むことができるマイクロ液体工学によって、例えば噴霧、滴加、ピペット移送、ピントランスファー、ビーズ移送、凍結又は乾燥スポットからの再構成、あるいはマトリックの面の液体との接触によって直接に配列として加えることができる。この場合、分配されるそれぞれの化学的実体の容量は、該化学的実体同士がマトリックス内で実質的に重ならないように十分に少なくする。
【００２６】
化学的実体を複数の濃度でブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に導入するのに好ましい方法は、少量の液体を分注することができるピペットの使用又はピントランスファーツールの使用を含む。ある状況では、化学的実体は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に固体の形で導入することができる。
【００２７】
化学的実体が既に加えられている含浸マトリックスは、該マトリックスの表面又は中にある種の重要なアッセイ成分を含有していない。これらの特定の重要なアッセイ成分は、含浸マトリックスの主要表面に、幾つかの方法、例えば注入、噴霧、面と面の接触による転写又は浸漬によって加えることができるが、これらに限定されない。これらの重要なアッセイ成分としては、例えば細胞、酵素、酵素基質等の化学的実体による生物学的プロセスの促進又は阻害に関係する応答が求められる生物学的プロセスに関与する成分が挙げられる；しかし、これらの重要なアッセイ成分は、所定の生物学的プロセスの促進又は阻害に関係する応答についての試験を行うのに適した環境を提供するために存在するだけのアッセイ成分、例えば、水、緩衝液及び塩類を除外する。ある状況においては、アッセイ成分は、含浸マトリックスの主要表面に固体の形で導入することができる。
【００２８】
そのような化学的実体をビーズに結合されたコンビナトリアル化合物として、これらの化合物を含有するそのようなビーズをでたらめに又は規則正しい配列で転写面、例えば重合体シート又はフィルター材料の表面に分配することによって、ブランクマトリックス又は含浸マトリックスに導入することができる。次いでビーズは、前記化合物が不安定なリンカーによりビーズに共有結合的に付着されている場合には、光開裂法又は気相酸開裂法（これらの方法は当該技術において周知である）を用いて処理して該化合物を放出（開裂）させることができる。この場合に、それぞれの化合物は、それを付着していたビーズによってもともと占有されていた領域と非共有結合的に会合され、次いで乾燥化合物は、ブランクマトリックス又は含浸マトリックス内に又は上に、該マトリックスの主要表面をビーズ担持重合体シート又はフィルター材料と接触させることによって導入することができる。ビーズは、ビーズを重合体シート表面に分配する場合のように、アッセイの残りの工程においてブランクマトリックス又は含浸マトリックスと接触させたままであってもよい。あるいは、ビーズは、化学的実体がマトリックス中に拡散するのに十分な時間が経過した後に、マトリックスから重合体シートを単に取り除くことによってブランクマトリックス又は含浸マトリックスから取り除いてもよい。
【００２９】
個々の離散化合物のような化学的実体をブランクマトリックス又は含浸マトリックス中に導入する別の方法は、それぞれの化合物をビーズ中に又はビーズ上に付着させるか又は非共有結合的に付着させ、次いで該化学的実体が一のビーズから他のビーズに移動できないような方法で、重合体シート又はフィルターの主要表面にビーズをでたらめに又は規則正しい配列で分配することを含む。次いで、ビーズを有する表面はマトリックスの主要表面と接触させて化学的実体を分配することができる。この方法により、小容量で少量存在する液体を取り扱う必要性が完全に排除される。
【００３０】
化学的実体又はアッセイ成分を含浸マトリックスの主要表面に配列状に分配する別の方法は、化学的実体又はアッセイ成分を、第二のマトリックス、好ましくは多孔質マトリックス、例えばフィルター上に分配する方法であり、この場合に分配されるそれぞれの化学的実体又はアッセイ成分の容量は、そのように分配される化学的実体又はアッセイ成分同士が第二のマトリックス内で重ならないように十分に少なくする。第二のマトリックスを、第二のマトリックスよりも液体含有量の多い含浸マトリックスと向かい合わせて接触させると、化学的実体又はアッセイ成分は拡散してアッセイを開始する。
【００３１】
ブランクマトリックス又は含浸マトリックスの主要表面に導入される化学的実体が高密度で導入されると、１種又はそれ以上の化学的実体とアッセイ成分との相互作用により生じる陽性応答がブランクマトリックス又は含浸マトリックス中に導入される１種又はそれ以上の別の化学的実体の最初の位置（すなわち、拡散する前の位置）と重なり得るような方法で化学的実体の拡散がマトリックス中で生じると思われる。その結果、多数の化学的実体が活性の帯域に最初から存在するので、陽性応答の領域内に２種以上の候補化学的実体が存在することとなる。複数の化学的実体がアッセイの期間中に一緒に拡散し得るが、それぞれの化学的実体はそれ自体の対称的な空間勾配を有するであろうし、またいかなる１つの位置でも定量的に混合されることはない。従って、所定の化学的実体の活性帯域の中心は、なお、所定の化学的実体の正確な最初の位置と関連付けられ得る：実際には、応答は、十分に稀であるので活性のそれぞれの帯域について活性化学的実体の特定を確実に行うために多数の化学的実体を再試験することは大したことではない。前述のように、化学的実体、例えばコード化されたコンビナトリアル化学ライブラリーを転写面にでたらめに加えることができ、その場合に所定の生物学的プロセスの促進又は阻害を示す応答を提供するこれらの化学的実体をその最初の位置を特定する以外の方法で特定できることは、本発明の範囲内にある。
【００３２】
本発明の別の実施態様は、化学的実体が拡散できる距離を限定するためにブランクマトリックス内に物理的障壁を導入することを含む。このフォーマットは、実質的に、部分的に不連続である。例えば、ブランクマトリックス、好ましくは多孔質マトリックスは、ブランクマトリックスが多数の分離された独立した領域に区分されるように微細なメッシュ又はスクリーンの周りに成形し得る。この場合、化学的実体とアッセイ成分は、分割されたマトリックスの分離された独立した領域に加えることができる。別法として、含浸マトリックス、好ましくは多孔質マトリックスは、微細スクリーンをマトリックスに挿入してマトリックスの個々の部分を隔離させることによって多数の分離された独立した領域に区分することができる。必要ならば、化学的実体とアッセイ成分は、ついで区分されたマトリックスの分離された独立した領域に加えることができる。この分割法により、それぞれの分離された独立した領域において、アッセイはマトリックス内の他のアッセイから完全に独立している。さらにまた、一つの分離された独立した領域から他の領域への化学的実体又はアッセイ成分の拡散はない。この実施態様は、（１）アッセイ同士の間の統計的に有意な偏差を導入することによって及び（２）容量を固定し、それによって高密度配列についてのシグナルを限定することによって、連続フォーマット高処理能力スクリーニングの利点の幾つかが消される。しかし、この実施態様は、連続方式で分配されるこれらのアッセイ成分について連続フォーマット高処理能力スクリーニングの利点の幾つかを未だ保持している。また、マトリックス内での化学的実体の混合が解消される。
【００３３】
１種又はそれ以上のアッセイ成分をブランクマトリックスに加えて含浸マトリックスを形成することができ、そしてついで含浸マトリックスに１種又はそれ以上の化学的実体を加えることができることが注目されるべきである。導入の方法は、アッセイ成分を含浸マトリックスに導入し且つ化学的実体をブランクマトリックスに導入するのに用いられる方法と同じ方法であることができる。化学的実体とアッセイ成分がこのようにして導入されている含浸マトリックスは、化学的実体の導入がアッセイ成分の導入に先立っている含浸マトリックスを観察し、画像化し且つ分析できるような方法と同じ方法で、観察し、画像化し且つ分析できる。
【００３４】
本発明の方法によってもたらされる多数の利点が存在する。本発明の方法は、アッセイ成分の消費量の減少をもたらす。アッセイ成分がマトリックス中に流し込まれる前記アッセイとは著しく異なって、アッセイ成分をブランクマトリックス又は含浸マトリックスの表面に噴霧することができる。第二のマトリックスを除外すると、事実上、単一のマトリックス中のアッセイ成分の濃度が増大する。スプレーを使用してアッセイ成分をマトリックスに加えることによって、拡散に必要な距離が縮小され、それによって反応速度が増大され、最終的な結果としてより高い処理能力が得られる。アッセイ成分をマトリックスに流し込む場合には、マトリックスを液状状態に維持するのに必要な高められた温度が、幾つかのアッセイ成分の安定性を損なう。さらにまた、例えば細胞のようなアッセイ成分の均一な分布は、マトリックスの溶融物質の粘度により、困難であり得る。（ａ）種々の化学的実体又は（ｂ）化学的実体の種々の濃度、あるいは（ｃ）種々の化学的実体の種々の濃度を含む多数のアッセイを、単一のマトリックスで行うことができる。同様に、（ａ）種々のアッセイ成分又は（ｂ）アッセイ成分の種々の濃度、あるいは（ｃ）種々のアッセイ成分の種々の濃度を含む多数のアッセイを、単一のマトリックス中で行うことができる。例えば、典型的なマトリックスでは、（ａ）９６種類の化学的実体を試験できるし又は（ｂ）同じ化学的実体の９６種類の濃度を試験できるし、あるいは（ｃ）４種類の化学的実体の２４種類の濃度を試験できる。同様に、４種類の化学的実体の８種類の濃度を、アッセイ成分の３種類の配置において試験できる。本発明の方法は、予め形成されたブランクマトリックスが高再現性及び高均一性であることから、容易に自動化できる。さらにまた、多数の配置のアッセイ成分を同時に評価して最もよいシグナルを提供するアッセイ成分の濃度を決定できることから、アッセイの最適化が単純化される。さらにまた、ブランクマトリックスは購入できるし又は調製して行うべきアッセイに先立って長く保存できる。ブランクマトリックスは、比較的短い貯蔵寿命を有し得るアッセイ成分を欠いていることから、該マトリックスが長期保存後に使用するのに適していないという可能性が著しく減少する。さらにまた、貯蔵してある保存されたマトリックスは、これらを必要とするアッセイでの使用にすぐに利用できる。
【００３５】
以下の非限定的実施例により本発明をさらに例示する。
(実施例)
【実施例１】
【００３６】
約１２７ｍｍ×１００ｍｍ×０．７５ｍｍの外形寸法を有するブランクマトリックスを準備する。本実施例については、ブランクマトリックスは水に溶解した１％アガロースを含有する。同様の特徴を有するブランクマトリックスは、バイオ・ラド・ラボラトリーズ社（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）から商業的に入手できる。このブランクマトリックスをアッセイに必要な水性緩衝液中で、該マトリックスをある量の水性緩衝液に浸すことによって平衡化させる。この水性緩衝液は、
２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ８．０
１３７ｍＭ  ＮａＣｌ
２．７ｍＭ  ＫＣｌ
１ｍＭ  ＭｇＣｌ２
２％グリセロール
を含有する。前記マトリックスを前記緩衝液から取り出し、室温で１０分間乾燥する。化学的実体を転写するためのシートを提供する。このシートは、典型的には約８．５ｃｍ×１２．５ｃｍの主要表面寸法を有するポリスチレンの薄いシート（０．５ｍｍ）からなる。このシートは、シートの主要表面全体に少なくとも１ｍｍ離してスポットされている９６個以上の化学的実体を含有する。ブランクマトリックスの一方の主要表面を、化学的実体を転写するためのシートの主要表面と向かい合わせで接触させて配置する。このように接触させたマトリックスを室温で１０分間インキュベートする。酵素の調剤（ヒストンデアセチラーゼ、前記の水性緩衝液２ｍｌに溶解した有核細胞抽出液８０μｌ）を含浸マトリックスの主要表面に噴霧によって加え、次いでこの含浸マトリックスを室温で１０分間インキュベートする。基質の調剤（前記の水性緩衝液２ｍｌ中に１００μＭ）を含浸マトリックスの主要表面に噴霧によって加え、次いでこの含浸マトリックスを室温で３０分間インキュベートする。反応顕色剤の調剤（前記の水性緩衝液に溶解した保存溶液の１：５０希釈液）を含浸マトリックスの主要表面に噴霧によって加え、次いでこの含浸マトリックスを周囲温度で５〜１０分間インキュベートする。基質と反応顕色剤は、ＢｉｏＭｏｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ（ペンシルバニア州プリマスミーティング所在）から市販されている専売品（登録商標Ｆｌｕｏｒ  ｄｅ  Ｌｙｓを有する蛍光リシン）であることができる。含浸マトリックスをＥａｇｌｅ  ＥｙｅＩＩ画像作成装置（励起波長は３６０ｎｍである；発光波長は４６０ｎｍである）を用いて画像化する。
【００３７】
本発明の方法の噴霧工程のパラメーターは、実験的に確定することができ且つ個々のアッセイの必要条件に依存する。本実施例では、市販モデルのエアブラシからスプレーを作成するのに必要な空気圧は、約５ｐｓｉに維持される。噴霧される溶液の容量（２ｍｌ）は、含浸マトリックスに３０秒以内に加えることができる。含浸マトリックスからの距離及び適用角度もまた、噴霧圧による該マトリックスの裂け又は浮きを回避するために及びマトリックスに対するアッセイ成分の不均一な適用を回避するために実験に基づいて決定できる。平坦な噴霧パターンは、液体を平坦型又はシート型スプレーとして分配する。平坦噴霧パターンは、楕円形オリフィスを使用することによって又はデフレクター表面に対して接線方向にある丸型オリフィスにより形成される。楕円形オリフィスのデザインにおいて、噴霧パターンの軸は吸気管接続の軸の延長である。デフレクターのデザインにおいて、デフレクター面は噴霧パターンを吸気管接続の軸からそらせる。（デフレクターのデザインにおいて、デフレクター面は噴霧パターンを吸気管接続の軸からそらせる。）ストレート楕円形オリフィス噴霧ノズルは、標準的にテーパーエッジを有する平坦噴霧パターンを生成する。この特徴は、マルチノズルスプレーヘッド上の隣接スプレー同士の間で重複パターンを確立するのに有用である。例えば、４個の同じスプレーノズルを有する噴霧器の場合に、もしもそれぞれのノズルからのスプレーの濃度が噴霧パターンの一方の端から他方の端まで同じであり、またそれぞれのノズルからの噴霧パターンが重なり合う場合には、隣り合ったノズルからの隣り合った噴霧パターン同士の間の領域は、それぞれの噴霧パターンの中心領域の２倍ほどの噴霧物質を含有することとなる。しかし、それぞれのノズルからの噴霧パターンが、噴霧面積ではなく噴霧濃度がパターンのいずれかの端に向かって小さくなるように「先細りの」場合には、隣り合った噴霧パターン同士の間の重複領域がそれぞれの噴霧パターンの中心領域と同じ量の噴霧物質を有するような距離に、隣り合ったスプレーノズルを分離することができる。従って、噴霧表面全体にわたって得られる分布は均一であることができる。
【実施例２】
【００３８】
本実施例の目的は、ブランクマトリックスを用いて１種又はそれ以上のキナーゼのアッセイを行う可能性を立証することにある。
【００３９】
本実施例では、アッセイ成分は、放射活性標識アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、目的とするキナーゼ酵素、及び目的とするキナーゼ酵素用の基質を含有する。前記基質はビオチンでアフィニティ標識される。また、本実施例では、ストレプトアビジンで被覆されている膜も使用する。非阻害反応では、前記酵素はリン酸化の仕事を行う、すなわち触媒として作用し、ＡＴＰ分子から放射性リン酸を開裂し且つ該放射性リン酸をビオチンル化基質に付着させる。試験すべき化学的実体は、前記酵素をある程度まで阻害するか又は全く影響を及ぼさない。
【００４０】
ストレプトアビジンは、小分子ビオチンに極めて強く結合する四量体タンパク質である。この強い結合は、膜に基質を捕捉する能力を付与し、それによって放射能の量を測定することを可能にする。放射性シグナルの量は、酵素のリン酸化の仕事を行う能力に対する種々の化学的実体の効果と相関させ得る。
【００４１】
約１２７ｍｍ×１００ｍｍ×０．５ｍｍの外形寸法をもつブランクマトリックスを準備する。このマトリックスを、単層ストレプトアビジン被覆した膜の上に置く。次いで、得られたマトリックス／膜複合体を、アッセイで使用する物質を分配するためのＣａｒｔｅｓｉａｎ  ｓｙｎＱｕａｄ（商標）装置の棚板（ｄｅｃｋ）の上に置く。この装置は、カリフォルニア州アーヴァイン市のＣａｒｔｅｓｉａｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄが製造している。種々の濃度の化学的実体を調製し、９６ウエルプレートに入れる。放射活性標識ＡＴＰを含有する溶液と、種々の濃度の酵素用基質を調製し、９６ウエルプレートに入れる。これらの９６ウエルプレートのそれぞれを、分配用のＣａｒｔｅｓｉａｎ  ｓｙｎＱｕａｄ（商標）装置の棚板の上に置いた。Ｃａｒｔｅｓｉａｎ  ｓｙｎＱｕａｄ（商標）装置は、９６ウエルプレートから化学的実体を吸引し、これらを液滴としてブランクマトリックスの表面に特定の配列で直接に分配する。化学的実体がブランクマトリックスに拡散した（約５分を要する）後に、次いで前記酵素を吸引し、含浸マトリックスの表面に特定の配列で直接に分配する。ほとんど又は全く遅れずに、ＡＴＰの溶液と基質とを吸引し、含浸マトリックスの表面に特定の配列で直接に分配する。全てのアッセイ成分を分配した後に、含浸マトリックスを前記棚板から取り出し、それを２時間のインキュベーション時間中に乾燥しきらないように被覆した。インキュベーション時間が経過した後に、マトリックスの物質をストレプトアビジン被覆膜から洗い落とし、得られた洗浄膜を、もしあるならば、生じる画像の発現のためにホスホイメージャーに取り付ける。
【００４２】
前記の方法の典型的なパラメーターとしては、下記のものが挙げられるがこれらに限定されない：
（１）５種類の濃度の阻害剤（化学的実体）を試験できる：１．８ｍＭ、３ｍＭ、４．５ｍＭ、６ｍＭ及び９ｍＭ。阻害剤なし（対照例）も試験する。
【００４３】
（２）分配された液体（化学的実体及びアッセイ成分）のそれぞれの液滴は、典型的には約２５ナノリットルから約３５ナノリットルの容量からなり、マトリックスの表面におけるそれぞれの液滴の中心の間の距離は約２．５ｍｍ〜約３．０ｍｍである。
【００４４】
本発明の種々の変更及び改変は、当業者には本発明の範囲及び精神から逸脱することなく明らかになるであろうし、本発明が本明細書に挙げた具体例に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１Ａ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｂ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｃ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｄ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｅ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｆ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ｇ】本発明の方法の１つの実施態様を例示する一組の概略図を構成する。
【図１Ａ】
2006500562.tif 000002
【図１Ｂ】
2006500562.tif 000003
【図１Ｃ】
2006500562.tif 000004
【図１Ｄ】
2006500562.tif 000005
【図１Ｅ】
2006500562.tif 000006
【図１Ｆ】
2006500562.tif 000007
【図１Ｇ】
2006500562.tif 000008
【国際調査報告】
2006500562.tif 000009
2006500562.tif 000010
2006500562.tif 000011