(57)【要約】本発明は、悪液質の治療のためのＰＤＥ４又はＰＤＥ３／４インヒビターの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用。
【請求項２】
悪液質が、癌、ＡＩＤＳ、年齢に関連した悪液質、急性及び慢性感染症、熱傷、慢性心不全、肝硬変、ＣＯＰＤ又は慢性腎不全の結果である、請求項１記載の使用。
【請求項３】
悪液質が癌の結果である、請求項１又は２記載の使用。
【請求項４】
癌が、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌及び膀胱癌から成る群から選択されている、請求項３記載の使用。
【請求項５】
ＰＤＥ４又はＰＤＥ３／４インヒビターが、ＣＤＣ−９９８、ＳＨ−６３６、Ｄ−４３９６、ＳＣＨ−３５１５９１、ＩＣ−４８５、ＣＣ−１０８８、ＫＷ−４４９０及び３−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシベンジル］−６−（エチルアミノ）−８−イソプロピル−３Ｈ−プリン［リサーチコード：Ｖ−１１２９４Ａ］、Ｎ−［９−メチル−４−オキソ−１−フェニル−３，４，６，７−テトラヒドロピロロ［３，２，１−ｊｋ］［１，４］−ベンゾ−ジアゼピン−３（Ｒ）−イル］ピリジン−４−カルボキサミド［リサーチコード：ＣＩ−１０１８］、４−（３，４−ジメトキシフェニル）チアゾール−２−カルボキサミドオキシム［リサーチコード：ＯＲＧ−２０２４１］、３，７−ジヒドロ−３−（４−クロロフェニル）−１−プロピル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン［ＩＮＮ  ＡＲＯＦＹＬＬＩＮＥ］、３−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシベンジルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−メタノール、（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］、Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジニル）−２−［１−（４−フルオロベンジル）−５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル］−２−オキソアセトアミド［リサーチコード：ＡＷＤ−１２−２８１］、Ｎ−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−２−［５−フルオロ−１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−２−オキソアセトアミド［リサーチコード：ＡＷＤ−１２−３４３］、８−アミノ−１，３−ビス（シクロプロピルメチル）キサンチン［ＩＮＮ：ＣＩＰＡＭＦＹＬＬＩＮＥ］、テトラヒドロ−５−［４−メトキシ−３−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−２−ノルボルニルオキシ］フェニル］−２（１Ｈ）−ピリミドン［ＩＮＮ：ＡＴＩＺＯＲＡＭ］、β−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシフェニル］−１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−プロパンアミド［リサーチコード：ＣＤＣ−８０１］、メタンスルホン酸２−（２，４−ジクロロフェニルカルボニル）−３−ウレイドベンゾ−フラン−６−イルエステル［リサーチコード：ＢＡＹ−１９−８００４］、（Ｚ）−５−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン）−２−イミダゾチアゾリジン−４−オン［ＩＮＮ：ＤＡＲＢＵＦＥＬＯＮＥ］、シス−［４−シアノ−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸［ＩＮＮ：ＣＩＬＯＭＩＬＡＳＴ］及び３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］からなる群から選択されている、請求項１から４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターが、（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］又は３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］である、請求項１から４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項７】
ＰＤＥ３／４インヒビターが、（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］又はその製薬学的に認容性の誘導体である、請求項１から４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項８】
ＰＤＥ４インヒビターが、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］又はその製薬学的に認容性の誘導体である、請求項１から４までのいずれか１項記載の使用。
【請求項９】
ＰＤＥ４インヒビターが、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］又はその製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物、又はその製薬学的に認容性のＮ−オキシド、又はその製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物である、請求項８記載の使用。
【請求項１０】
悪液質に罹患したヒトを治療するための方法において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体を含有する医薬組成物を投与することを特徴とする、悪液質に罹患したヒトを治療するための方法。
【請求項１１】
ＰＤＥ４インヒビターが、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］又はその製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物、又はその製薬学的に認容性のＮ−オキシド、又はその製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
悪液質が、癌、ＡＩＤＳ、年齢に関連した悪液質、急性及び慢性感染症、熱傷、慢性心不全、肝硬変、ＣＯＰＤ又は慢性腎不全の結果である、請求項１０及び１１記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体が、悪液質の症状の誘発に関連するサイトカインの抑制に効果的である、請求項１０及び１１記載の方法。
【請求項１４】
ガンに罹患したヒトにおける悪液質を治療するための方法において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の有効量を投与する工程を含むことを特徴とする、ガンに罹患したヒトにおける悪液質を治療するための方法。
【請求項１５】
悪液質に罹患した癌患者の生存期間を延長させる、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
ガン及び悪液質に罹患したヒトにおける、化学療法及び／又は放射線療法に対する応答を改善するための方法において、化学療法薬及び／又は放射線の有効量及びＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の有効量を投与する工程を含むことを特徴とする、ガン及び悪液質に罹患したヒトにおける、化学療法及び／又は放射線療法に対する応答を改善するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の適用分野
本発明は、悪液質の治療における使用のためのＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビターに関する。本発明により使用される物質は、ＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビタークラスからの公知の活性化合物である。
【０００２】
背景技術
WO9923076、WO0009504、WO0147914、WO0157036、WO02060898、US20020156105、US6313156、US5728844、EP1229034には、ＰＤＥ４インヒビターのように有効な治療学的活性化合物及び多数の疾患を治療するための該化合物の使用が列挙されている。
【０００３】
発明の開示
悪液質とは、種々の形の癌及び慢性疾患、例えば肝硬変、慢性腎不全、ＣＯＰＤ（慢性閉塞性肺疾患）又は慢性心不全と関連する消耗症候群である。悪液質の臨床像には、体重減少、食欲不振（即ち食欲及び食事能力の減少）、タンパク質量の減少及び脂肪量の減少、筋萎縮、体内水分の割合の増加、及び代謝変化の多様性が含まれる。一般に、癌に関連した悪液質は、腫瘍の局所的効果ではなく、遠い代謝効果から生じるものであると考えられており、即ち、パラネオプラスチック症候群の一種である。エネルギー摂取の増加に向けられた臨床実験は、悪液質の症状を転換させることに失敗した。癌悪液質患者における体重減少のパターンは標準的な飢餓とは異なる。栄養欠乏に対する標準的な適応応答は、エネルギーの密な脂質を引き寄せ、その一方でタンパク質を節約することであり、その結果、脂肪が減少し、かつ貧弱な身体組織が相対的に保存される。それとは対照的に、悪液質患者は、脂肪組織の相対的な節約と共に、激しくかつ無能力化する筋肉消耗を受ける。
【０００４】
当然のことながら、殊に癌の結果としての悪液質に罹患した患者において、悪液質のより良い治療オプションが医学的に必要である。悪液質は６０％を上回る癌患者に認められ、癌治療の有効性は極めてしばしば悪液質症状の存在又は不在に依存する。比較的短い生存期間、及び、化学療法及び放射線療法に対する比較的劣悪な応答が、悪液質の症状を有する患者に認められる[De Wys et al., Am. J. Med 69:491-497 (1980);Kern et al., J. Parenter. Enter. Nutr. 12: 286-298 (1988)]。悪液質は、癌患者における生命の質の損失及びマネージド・ケアへの依存及び死亡へと導く最も重要な誘因の１つである。
【０００５】
一般に、悪液質の症状を管理及び治療するために、２つの異なるアプローチが行われてきた。第一に、改善された節食を伴う栄養補助品が、又は第二には、食欲を増進させるための医薬品が患者に適用されてきた。しかしながら、  −酢酸メゲストロールのように−  食欲を増進させるための医薬品は一般に、脂肪体重を復元し得るに過ぎない酢酸メゲストロールに失望されてきた。
【０００６】
悪液質の厳密な機序に関してはほとんど公知ではないが、最近の研究により、サイトカイン、例えばＴＮＦ−α、インターロイキン−１、インターロイキン−６及びインターフェロン−γの不適当な生成及び放出が悪液質の誘発と関連することが示されている。Knappら(1991)は、増悪期ＩＶの乳癌患者において、体重減少と同時に、高められたＴＮＦレベルを認めた[Knappら、Ann Clin. Bio-chem., 28:480-486 (1991)]。Sherryらは、ＴＮＦに対する抗体が、マウス肉腫モデルにおいてカーカスタンパク質の減少及び脂肪減少を著しく低下させ得ることを報告した[Sherryら, FASEB J. 3:1956-1962 (1989)]。Fongらは、ＩＬ−１がラットにおける食欲不振及び悪液質の誘導物質としてのＴＮＦ−α及びＬＰＳに匹敵し得ることを見出した[Fongら, Am. J. Physiol. 256:R659 (1989)]。Matthys及びBilliauは、他のサイトカイン、例えば白血病阻止因子（LIF）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）及びインターフェロン−γが悪液質と関連していることを概説した[Mattys and Billiau, Nutrition 13, 763-770 (1997)]。
【０００７】
前記データは、単独で又は組み合わせて腫瘍及び宿主組織から分泌された多サイトカインが悪液質に関連する代謝変化を引き起こし、かつ最終的に消耗を誘発し得ることを示す。
【０００８】
本発明の対象は、以下の条件を満たす悪液質の治療を可能にすることである。（１）悪液質の症状の誘発に関連するサイトカインの抑制又は無効化、及び（２）数種の、かつ単一のみでないサイトカインの生体活性の感化
驚異的にも、ＰＤＥ４又はＰＤＥ３／４インヒビターの使用が上記の条件を満たすことが判明した。
【０００９】
本発明の第一の態様において、悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００１０】
本発明によれば、「ＰＤＥ４インヒビター」とは、他の公知の型のホスホジエステラーゼ、例えば１型、２型、３型、５型等（ＰＤＥ１、ＰＤＥ２、ＰＤＥ３、ＰＤＥ５等）と比較した場合に優先的に４型のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ４）を阻害する、選択的なホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）インヒビターを指す。本発明によれば、優先的にＰＤＥ４を阻害する選択的なＰＤＥ４インヒビターとは、ＰＤＥ４に関するより低いＩＣ５０を有し（即ち、ＰＤＥ４阻害に関するＩＣ５０は他の公知の型のホスホジエステラーゼ、例えば１型、２型、３型、５型等の阻害に関するＩＣ５０の約１０分の１であり）、従ってＰＤＥ４を阻害する能力がより高い化合物を指す。同様に、用語「ＰＤＥ３／４インヒビター」は、３／４型のホスホジエステラーゼに関して比較的低いＩＣ５０を有する化合物として定義され、従ってＰＤＥ３／４インヒビターはＰＤＥ３／４を阻害する能力が比較的高い。
【００１１】
ホスホジエステラーゼインヒビターの活性及び選択性を測定するための方法は当業者に公知である。これに関連して、例えば、Thompsonら（Adv Cycl Nucl Res 10: 69-92, 1979）、Giembyczら（Br J Pharmacol 118: 1945-1958, 1996）によって記載された方法及びAmerscham Pharmacia Biothechのホスホジエステラーゼ  シンチレーション近接アッセイが挙げられる。
【００１２】
本発明の意義の範囲内での可能なＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターは、以下の特許出願及び特許に例として明確に記載されているか、又は包括的に記載もしくは特許請求されているＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターである：DE1545687、DE2028869、DE2123328、DE2315801、DE2402908、DE2413935、DE3900233、EP0103497、EP0139464、EP0158380、EP0163965、EP0335386、EP0389282、EP0393500、EP0428302、EP0435811、EP0449216、EP0459505、EP0470805、EP0490823、EP0506194、EP0510562、EP0511865、EP0527117、EP0553174、EP0557016、EP0626939、EP0664289、EP0671389、EP0685474、EP0685475、EP0685479、EP0731099、EP0736532、EP0738715、EP0748805、EP0763534、EP0816357、EP0819688、EP0819689、EP0832886、EP0834508、EP0848000、JP92234389、JP94329652、JP95010875、JP98072415、JP98147585、US5703098、US5739144、WO9117991、WO9200968、WO9212961、WO9307146、WO9315044、WO9315045、WO9318024、WO9319068、WO9319720、WO9319747、WO9319749、WO9319751、WO9325517、WO9402465、WO9412461、WO9420455、WO9422852、WO9427947、WO9500516、WO9501338、WO9501980、WO9503794、WO9504045、WO9504046、WO9505386、WO9508534、WO9509623、WO9509624、WO9509627、WO9509836、WO9514667、WO9514680、WO9514681、WO9517392、WO9517399、WO9519362、WO9520578、WO9522520、WO9524381、WO9527692、WO9535281、WO9535283、WO9535284、WO9600218、WO9601825、WO9606843、WO9603399、WO9611690、WO9611917、WO9612720、WO9631486、WO9631487、WO9635683、WO9636595、WO9636596、WO9636611、WO9636625、WO9636626、WO9636638、WO9638150、WO9639408、WO9640636、WO9703967、WO9704779、WO9705105、WO9708143、WO9709345、WO9712895、WO9718208、WO9719078、WO9720833、WO9722585、WO9722586、WO9723457、WO9723460、WO9723461、WO9724117、WO9724355、WO9725312、WO9728131、WO9730999、WO9731000、WO9732853、WO9735854、WO9736905、WO9740032、WO9743288、WO9744036、WO9744322、WO9747604、WO9748697、WO9804534、WO9805327、WO9806692、WO9806704、WO9807715、WO9808828、WO9808830、WO9808841、WO9808844、WO9809946、WO9809961、WO9811113、WO9814448、WO9818796、WO9821207、WO9821208、WO9821209、WO9822453、WO9831674、WO9840382、WO9845268、WO9855481、WO9856756、WO9905111、WO9905112、WO9505113、WO9906404、WO9918095、WO9931071、WO9931090、WO9947505、WO9957115、WO9957118、WO9964414、WO0001695、WO0012501、WO0042017、WO0042018、WO0042019、WO0042020、WO0042034、WO0119818、WO0130766、WO0130777、WO0151470、WO0206239、WO0206270、WO0205616及びWO0206238。
【００１３】
更に、ＰＤＥ４及びＰＤＥ３／４インヒビターは以下の式を用いて以下の頁に例示的に示される：
【００１４】
【化１】
2006508996.tif 000002
【００１５】
【化２】
2006508996.tif 000003
【００１６】
【化３】
2006508996.tif 000004
【００１７】
【化４】
2006508996.tif 000005
【００１８】
【化５】
2006508996.tif 000006
【００１９】
【化６】
2006508996.tif 000007
【００２０】
【化７】
2006508996.tif 000008
【００２１】
【化８】
2006508996.tif 000009
【００２２】
【化９】
2006508996.tif 000010
【００２３】
【化１０】
2006508996.tif 000011
【００２４】
【化１１】
2006508996.tif 000012
【００２５】
【化１２】
2006508996.tif 000013
【００２６】
【化１３】
2006508996.tif 000014
【００２７】
上に示した式には、立体化学的情報も水素原子もどちらも示されていない［従って−Ｏは−ＯＨであり、−ＮはＮＨであり、−ＮはＮＨ２であり、例えば酸素原子上のメチル基は線により示されている］。
【００２８】
更に、特許出願又は特許EP0163965、EP0389282、EP0393500、EP0435811、EP0482302、EP0499216、EP0506194、EP0510562、EP0528922、EP0553174、EP0731099、WO9319749、WO9500516、WO9501338、WO9600218、WO9603399、WO9611690、WO9636625、WO9636626、WO9723457、WO9728131、WO9735854、WO9740032、WO9743288、WO9809946、WO9807715、WO9808841、WO9821207、WO9821208、WO9821209、WO9822453、WO9831674、WO9840382、WO9855481、WO9905111、WO9905112、WO9905113、WO9931071、WO9931090、WO9947505、WO9957115、WO9957118、WO9964414、WO0001695、WO0012501、WO0042017、WO0042018、WO0042019、WO0042020、WO0042034、WO0119818、WO0130766、WO0130777、WO0151470、WO0206239、WO0206270、WO0205616及びWO0206238に例として明確に記載されており、かつ／又は包括的に特許請求されているＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビター、及び以下のリサーチコード：CDC-998、D-4396、SCH-351591、IC-485、CC-1088及びKW-4490を有する化合物は有利である。ここでは良好な経口利用可能性を有する物質が有利である。
【００２９】
更に殊に有利なＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターは、リサーチコードＣＤＣ−９９８、ＳＨ−６３６、Ｄ−４３９６、ＳＣＨ−３５１５９１、ＩＣ−４８５、ＣＣ−１０８８、ＫＷ−４４９０を有する化合物、及び、３−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシベンジル］−６−（エチルアミノ）−８−イソプロピル−３Ｈ−プリン［リサーチコード：Ｖ−１１２９４Ａ］、Ｎ−［９−メチル−４−オキソ−１−フェニル−３，４，６，７−テトラヒドロピロロ［３，２，１−ｊｋ］［１，４］−ベンゾ−ジアゼピン−３（Ｒ）−イル］ピリジン−４−カルボキサミド［リサーチコード：ＣＩ−１０１８］、４−（３，４−ジメトキシフェニル）チアゾール−２−カルボキサミドオキシム［リサーチコード：ＯＲＧ−２０２４１］、３，７−ジヒドロ−３−（４−クロロフェニル）−１−プロピル−１Ｈ−プリン−２，６−ジオン［ＩＮＮ：ＡＲＯＦＹＬＬＩＮＥ］、３−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシベンジルアミノ］−１Ｈ−ピラゾール−４−メタノール、（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］、Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジニル）−２−［１−（４−フルオロベンジル）−５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル］−２−オキソアセトアミド［リサーチコード：ＡＷＤ−１２−２８１］、Ｎ−（３，５−ジクロロピリジン−４−イル）−２−［５−フルオロ−１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−インドール−３−イル］−２−オキソアセトアミド［リサーチコード：ＡＷＤ−１２−３４３］、８−アミノ−１，３−ビス（シクロプロピルメチル）キサンチン［ＩＮＮ：ＣＩＰＡＭＦＹＬＬＩＮＥ］、テトラヒドロ−５−［４−メトキシ−３−［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）−２−ノルボルニルオキシ］フェニル］−２（１Ｈ）−ピリミドン［ＩＮＮ：ＡＴＩＺＯＲＡＭ］、β−［３−（シクロペンチルオキシ）−４−メトキシフェニル］−１，３−ジヒドロ−１，３−ジオキソ−２Ｈ−イソインドール−２−プロパンアミド［リサーチコード：ＣＤＣ−８０１］、メタンスルホン酸２−（２，４−ジクロロフェニルカルボニル）−３−ウレイドベンゾ−フラン−６−イルエステル［リサーチコード：ＢＡＹ−１９−８００４］、（Ｚ）−５−（３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシベンジリデン）−２−イミダゾチアゾリジン−４−オン［ＩＮＮ：ＤＡＲＢＵＦＥＬＯＮＥ］、シス−［４−シアノ−４−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）シクロヘキサン−１−カルボン酸［ＩＮＮ：ＣＩＬＯＭＩＬＡＳＴ］及び３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］である。
【００３０】
最も殊に有利なＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターは、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）−ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］及び（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］である。ＰＤＥ４インヒビターＮ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）−３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシベンズアミド（ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ）及びそのＮ−オキシドはWO95/01338に記載されている。
【００３１】
本発明の他の実施態様において、悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、（−）−シス−９−エトキシ−８−メトキシ−２−メチル−１，２，３，４，４ａ，１０ｂ−ヘキサヒドロ−６−（４−ジイソプロピルアミノカルボニルフェニル）−ベンゾ−［ｃ］［１，６］ナフチリジン［ＩＮＮ：ＰＵＭＡＦＥＮＴＲＩＮＥ］又は該化合物の製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００３２】
本発明の他の実施態様において、悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］又は該化合物の製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００３３】
本発明の明細書において、他に記載がない限り、活性成分の製薬学的に認容性の誘導体とは、製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物（例えば水和物）、そのような塩の製薬学的に認容性の溶媒和物、その製薬学的に認容性のＮ−オキシド又は製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物を意味する。
【００３４】
本発明によれば、適当な製薬学的に認容性の塩は、酸、例えば塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、クエン酸、Ｄ−グルコン酸、安息香酸、２−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸、酪酸、スルホサリチル酸、マレイン酸、ラウリン酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、シュウ酸、酒石酸、エンボン酸、ステアリン酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸又は１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸との水溶性又は非水溶性の酸付加塩であり、前記酸は、この酸が一塩基酸であるか又は多塩基酸であるかに依存して、及びどの塩が所望であるかに依存して、塩の製造において等モル量比又は等モルではない量比で使用される。更に、前記の活性化合物は、純粋な鏡像異性体として、又は任意の混合比での鏡像異性体混合物として存在してよい。
【００３５】
更に、適当な製薬学的に認容性の塩とは、塩基、例えばアルカリ金属（リチウム、ナトリウム、カリウム）又はカルシウム、アルミニウム、マグネシウム、チタン、アンモニウム、メグルミン又はグアニジウムとの塩をも指し、前記塩では、塩基が、塩の製造において等モル量比又はその偏差でも使用される。
【００３６】
本発明において使用されるＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビターは、立体異性体形で存在することができる。本発明はＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビター及びラセミ体を含むそれらの混合物の全ての立体異性体を包含する。ＰＤＥ４インヒビター及びＰＤＥ３／４インヒビター及びそれらの混合物の互変異性体も本発明の一部である。
【００３７】
本発明の他の実施態様において、悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド［ＩＮＮ：ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ］又は該化合物の製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物（例えば水和物）、又はそのような塩の製薬学的に認容性の溶媒和物、又はその製薬学的に認容性のＮ−オキシド、又はその製薬学的に認容性の塩又は溶媒和物の使用が提供される。
【００３８】
本発明によれば、治療とは、ヒトへのＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体を投与し、それによって、前記のＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の活性が、悪液質の症状の誘発又は数種のサイトカインの生体活性の感化に関連するサイトカインの抑圧又は無効化をもたらすことを指す。本発明によれば、治療とは、それ自体が疾患の発症又はその伝播を防ぐために設計された処置を指すものである予防をも指す。
【００３９】
本発明の他の実施態様において、癌、慢性心不全、肝硬変、ＡＩＤＳ、年齢に関連した悪液質、急性及び慢性感染症、熱傷、ＣＯＰＤ、慢性腎不全、マラリア、下垂体性悪液質、副腎悪液質又はアジソン病の結果としての悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００４０】
殊に、癌の結果としての悪液質を治療するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用は有利である。
【００４１】
本発明によれば、癌とは、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌及び膀胱癌から成る群から選択された癌を指す。
【００４２】
本発明の他の実施態様において、悪液質の症状の誘発に関連するサイトカインを抑制するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００４３】
本発明によれば、サイトカインの抑制とは、悪液質に罹患した患者におけるサイトカイン（即ち、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、ＬＩＦ又はＣＮＴＦ）の高められた血清濃度が、健康なヒトにおいて測定可能な前記のサイトカインの濃度に向かって低減することを指す。
【００４４】
本発明によれば、悪液質の症状とは、体重減少、食欲不振、タンパク質量の減少、脂肪量の減少、筋萎縮、及び体内水分の割合の増加からなる群から選択された症状を指す。
【００４５】
本発明によれば、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体は、医薬組成物を製造するために使用される。従って、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターは、医薬組成物、医薬品又は調剤の一部であってもよいし、１種以上の製薬学的に認容性の助剤及び／又は賦形剤と混合して使用することもできる。
【００４６】
当業者は医薬組成物、医薬品又は調剤に精通しているため、その専門知識に基づいて、当業者は、どの賦形剤又は助剤が所望の医薬組成物、医薬品又は調剤に適当であるかに精通している。液剤、ゲル形成剤、錠剤賦形剤及び他の活性化合物担体の他に、例えば、酸化防止剤、分散剤、乳化剤、消泡剤、矯臭剤、保存剤、可溶化剤、着色剤又は浸透促進剤及び錯化剤（例えばシクロデキストリン）を使用することは、当業者に公知である。
【００４７】
本発明によれば、悪液質を治療するためのＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターを含有する医薬組成物は、経口的、非経口的、静脈内、又は経皮的に投与される。殊に、経口投与及び静脈内投与が有利である。
【００４８】
経口投与のために意図された医薬組成物（用語「医薬組成物」とは、ここでは医薬調剤と同義である）の場合、自体公知でありかつ当業者に公知である方法に従って医薬品を与えるために治療薬が処方される。治療薬は、医薬品として、有利に適当な医薬担体と組み合わせて、錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、乳剤、懸濁剤又は液剤の形で使用され、その際、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターの含量は有利に０．１〜９５％、有利に１〜８０％、殊に有利に５〜５０％である。賦形剤及び助剤を適切に選択する場合、活性成分に厳密に適合された、及び／又は作用の所望の開始に厳密に適合された医薬品投与形（例えば遅延放出形又は腸溶形）を達成することができる。
【００４９】
適当な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を用いて、公知の方法により、注射可能な調剤、例えば無菌の注射可能な水性又は油性の溶液／懸濁液を処方することができる。無菌の注射可能な調剤は、非毒性の非経口的に認容性の希釈液又は溶剤中の、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液としての、無菌の注射可能な溶液又は懸濁液であってもよい。使用可能な認容性のビヒクル及び溶剤は、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム溶液である。更に、無菌の不揮発性油が慣用的に溶剤又は懸濁媒体として使用される。この目的のために、合成モノ−又はジグリセリドを含む全ての無刺激不揮発性油を使用することができる。更に、脂肪酸、例えばオレイン酸が注射可能物質の製造に使用される。ジメチルアセトアミド、イオン性及び非イオン性の界面活性剤を含む界面活性剤、ポリエチレングリコールを使用することができる。
【００５０】
一般に、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターを経口投与又は静脈内投与した場合にＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビターの全日用量が１〜２０００μｇ／体重ｋｇの範囲内である場合に満足のいく結果が得られる。殊に有利なＰＤＥ４インヒビターであるROFLUMILASTの場合、日用量は１〜２０μｇ／体重ｋｇの範囲内である。殊に有利なＰＤＥ３／４インヒビターであるPUMAFEN-TRINEのための日用量は３００〜１５００μｇ／体重ｋｇの範囲内である。
【００５１】
３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド（ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ）を経口投与する場合、成人の日用量は、有利に１回の１日投与につき、５０〜１０００μｇの範囲内、有利に２５０〜５００μｇの範囲内である。
【００５２】
３−シクロプロピルメトキシ−４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−（３，５−ジクロロピリド−４−イル）ベンズアミド（ＲＯＦＬＵＭＩＬＡＳＴ）を静脈内投与する場合、成人の日用量は、５０〜６００μｇの範囲内、有利に１５０〜３００μｇの範囲内である。
【００５３】
本発明の他の態様において、悪液質に罹患した癌患者の生存期間を延長するための医薬組成物を製造するための、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の使用が提供される。
【００５４】
本発明の他の態様において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体を含有する医薬組成物の投与により特徴付けられる、悪液質に罹患したヒトを治療するための方法が提供される。
【００５５】
本発明の他の態様において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体を含有する医薬組成物の投与により特徴付けられる、悪液質に罹患したヒトを治療するための方法が提供され、その際、悪液質は、癌、ＡＩＤＳ、年齢に関連した悪液質、急性及び慢性感染症、熱傷、慢性心不全、肝硬変、ＣＯＰＤ又は慢性腎不全の結果である。
【００５６】
本発明の他の態様において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体を含有する医薬組成物の投与により特徴付けられる、悪液質に罹患したヒトを治療するための方法が提供され、その際、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体は、悪液質の症状の誘発に関連するサイトカインを抑制するのに効果的である。
【００５７】
本発明の他の態様において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の有効量を投与する工程を含む、ガンに罹患したヒトにおける悪液質を治療するための方法が提供される。
【００５８】
本発明の他の態様において、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の有効量を投与する工程を含み、それによって、悪液質に罹患した癌患者の生存期間を延長させる、ガンに罹患したヒトにおける悪液質を治療するための方法が提供される。
【００５９】
本発明の他の態様において、化学療法薬及び／又は放射線の有効量及びＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体の有効量を投与する工程を含む、ガン及び悪液質に罹患したヒトにおける、化学療法及び／又は放射線療法に対する応答を改善するための方法が提供される。
【００６０】
本発明によれば、ガン及び悪液質に罹患したヒトにおける、化学療法及び／又は放射線療法に対する応答の改善とは、前記のヒトの生存期間の延長を指す。これは殊に、ガン及び悪液質に罹患したヒトが化学療法及び／又は放射線療法を受けた後に生存する時間を増加させることを指す。
【００６１】
本発明によれば、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体は、放射線の前、間及び／又は後に投与されてよい。これは、放射線の前及び間、間及び後、前及び後、又は前、間及び後に投与されてもよい。
【００６２】
本発明によれば、放射線の源は治療されるヒトに対して外部又は内部であってよい。放射線は、当業者に公知である、公知の技術、例えば外部ビーム放射線療法又は近接照射療法、即ち放射線の源をヒトの内部に設置することにより実施する治療によって施与される。当業者に公知の通り、放射線の線量は多数の因子に依存している。そのような因子には、治療すべき器官、不利に作用する可能性のある放射線の進路における健康な器官、放射線療法に対する患者の耐性、及び治療が必要な身体の領域が含まれる。線量は典型的には１〜１００Ｇｙ、更に殊には２〜８０Ｇｙであろう。
【００６３】
本発明によれば、化学療法とは化学療法薬を用いた治療を指す。従って、及び本発明によれば、ＰＤＥ４インヒビター又はＰＤＥ３／４インヒビター又はその製薬学的に認容性の誘導体は、化学療法薬を用いた治療の前、間、後、前及び間、間及び後、前及び後、又は前、間及び後に投与されてよい。
【００６４】
本発明によれば、化学療法剤は、5 FU、アクチノマイシン D、ABARELIX、ABCIXIMAB、ACLARUBICIN、ADAPALENE、ALEMTUZUMAB、ALTRETAMINE、AMINOGLUTETHIMIDE、AMIPRILOSE、AMRUBICIN、ANASTROZOLE、ANCITABINE、ARTEMISININ、AZATHIOPRINE、BASILIXIMAB、BENDAMUSTINE、BICALUTAMIDE、BLEOMYCIN、BROXURIDINE、BUSULFAN、CAPECITABINE、CARBOPLATIN、CARBOQUONE、CARMUSTINE、CETRORELIX、CHLORAMBUCIL、CHLORMETHINE、CISPLATIN、CLADRIBINE、CLOMIFENE、CYCLOPHOSPHAMIDE、DACARBAZINE、DACLIZUMAB、DACTINOMYCIN、DAUNORUBICIN、DESLORELIN、DEXRAZOXANE、DOCETAXEL、DOXIFLURIDINE、DOXORUBICIN、DROLOXIFENE、DROSTANOLONE、EDELFOSINE、EFLORNITHINE、EMITEFUR、EPIRUBICIN、EPITIOSTANOL、EPTAPLATIN、ERBITUX、ESTRAMUSTINE、ETOPOSIDE、EXEMESTANE、FADROZOLE、FINASTERIDE、FLOXURIDINE、FLUCYTOSINE、FLUDARABINE、FLUOROURACIL、FLUTAMIDE、FORMESTANE、FOSCARNET、FOSFESTROL、FOTEMUSTINE、FULVESTRANT、GEFITINIB、GEMCITABINE、GLIVEC、GOSERELIN、GUSPERIMUS、HERCEPTIN、IDARUBICIN、IDOXURIDINE、IFOSFAMIDE、IMATINIB、IMPROSULFAN、INFLIXIMAB、IRINOTECAN、LANREOTIDE、LETROZOLE、LEUPRORELIN、LOBAPLATIN、LOMUSTINE、MELPHALAN、MERCAPTOPURINE、METHOTREXATE、METUREDEPA、MIBOPLATIN、MIFEPRISTONE、MILTEFOSINE、MIRIMOSTIM、MITOGUAZONE、MITOLACTOL、MITOMYCIN、MITOXANTRONE、MIZORIBINE、MOTEXAFIN、NARTOGRASTIM、NEBAZUMAB、NEDAPLATIN、NILUTAMIDE、NIMUSTINE、OCTREOTIDE、ORMELOXIFENE、OXALIPLATIN、PACLITAXEL、PALIVIZUMAB、PEGASPARGASE、PEGFILGRASTIM、PENTETREOTIDE、PENTOSTATIN、PERFOSFAMIDE、PIPOSULFAN、PIRARUBICIN、PLICAMYCIN、PREDNIMUSTINE、PROCARBAZINE、PROPAGERMANIUM、PROSPIDIUM CHLORIDE、RALTITREXED、RANIMUSTINE、RANPIRNASE、RASBURICASE、RAZOXANE、RlTUXIMAB、RIFAMPICIN、RITROSULFAN、ROMURTIDE、RUBOXISTAURIN、SARGRAMOSTIM、SATRAPLATIN、SIROLIMUS、SOBUZOXANE、SPIROMUSTINE、STREPTOZOCIN、TAMOXIFEN、TASONERMIN、TEGAFUR、TEMOPORFIN、TEMOZOLOMIDE、TENIPOSIDE、TESTOLACTONE、THIOTEPA、THYMALFASIN、TIAMIPRINE、TOPOTECAN、TOREMIFENE、TRASTUZUMAB、TREOSULFAN、TRIAZIQUONE、TRIMETREXATE、TRIPTORELIN、TROFOSFAMIDE、UREDEPA、VALRUBICIN、VERTEPORFIN、VINBLASTINE、VINCRISTINE、VINDESINE、VINORELBINE及びVOROZOLEからなる群から選択された化学療法薬である。
【００６５】
図
図１：
ＬＸＦＡ  ５２６肺腺癌異種移植外植片からのＩＬ−１の分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果
ＬＸＦＡ  ５２６異種移植片を保有するマウスからの腫瘍断片を切除し、細胞浮遊液を２４ウェルプレートに接種した。細胞の接種後、ザルダベリンをそれぞれ１００、３及び０．１μＭの濃度で添加し、ピクラミラストをそれぞれ１、０．３及び０．００１μＭの濃度で添加し、上澄みを２４時間後に回収した。上澄みのＩＬ−１含量をR&D Quantikine ELISAキットを用いて製造者の推奨に従って定量した。ザルダベリン（左グラフ）は、ＩＬ−１の分泌を、それぞれ１００、３及び０．１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける８５．３ｐｇ／ｍｌから、６４．５、６７．９及び７７．１ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。ピクラミラスト（右グラフ）は、ＩＬ−１の分泌を、それぞれ１、０．３及び０．００１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける８５．３ｐｇ／ｍｌから、６８．９、６４．４及び８１．９ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。
【００６６】
図２：
ＲＸＦ  ３９３腎細胞腫異種移植外植片からのＩＬ−１の分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果
ＲＸＦ  ３９３異種移植片を保有するマウスからの腫瘍断片を切除し、細胞浮遊液を２４ウェルプレートに接種した。細胞の接種後、ザルダベリンをそれぞれ１００及び０．１μＭの濃度で添加し、ピクラミラストをそれぞれ１、０．０１及び０．００１μＭの濃度で添加し、上澄みを２４時間後に回収した。上澄みのＩＬ−１含量をR&D Quantikine ELISAキットを用いて製造者の推奨に従って定量した。ザルダベリン（左グラフ）は、ＩＬ−１の分泌を、それぞれ１００及び０．１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける４６．９ｐｇ／ｍｌから、３２．１及び４８．１ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。ピクラミラスト（右グラフ）は、ＩＬ−１の分泌を、それぞれ１、０．０１及び０．００１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける４６．９ｐｇ／ｍｌから、３７．８、４３．９及び４３．２ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。
【００６７】
図３：
ＬＸＦＡ  ５２６肺腺癌異種移植外植片からのＴＮＦαの分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果
ＬＸＦＡ  ５２６異種移植片を保有するマウスからの腫瘍断片を切除し、細胞浮遊液を２４ウェルプレートに接種した。細胞の接種後、ザルダベリンをそれぞれ１００、３及び０．１μＭの濃度で添加し、ピクラミラストをそれぞれ１、０．３及び０．００１μＭの濃度で添加し、上澄みを２４時間後に回収した。上澄みのＴＮＦα含量をR&D Quantikine ELISAキットを用いて製造者の推奨に従って定量した。ザルダベリン（左グラフ）は、ＴＮＦαの分泌を、それぞれ１００、３及び０．１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける１６．８ｐｇ／ｍｌから、１２．６、１２．９及び１３．８ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。ピクラミラスト（右グラフ）は、ＩＬ−１の分泌を、それぞれ１、０．３及び０．００１μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける１６．８ｐｇ／ｍｌから、１３．９、１５．１及び１７．２ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。
【００６８】
図４：
ＬＸＦＥ  ３９７類表皮腫異種移植外植片からのＴＮＦαの分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果
ＬＸＦＥ  ３９７異種移植片を保有するマウスからの腫瘍断片を切除し、細胞浮遊液を２４ウェルプレートに接種した。細胞の接種後、ザルダベリンをそれぞれ３０、１０及び３μＭの濃度で添加し、ピクラミラストをそれぞれ０．３、０．１及び０．０３μＭの濃度で添加し、上澄みを２４時間後に回収した。上澄みのＴＮＦα含量をR&D Quantikine ELISAキットを用いて製造者の推奨に従って定量した。ザルダベリン（左グラフ）は、ＴＮＦαの分泌を、それぞれ３０、１０及び３μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける３０．３ｐｇ／ｍｌから、２０．１、２８．２及び２７．７ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。ピクラミラスト（右グラフ）は、ＴＮＦαの分泌を、それぞれ０．３、０．１及び０．０３μＭの濃度で、（各量のＤＭＳＯで処理した）対照標準の上澄みにおける２１．５ｐｇ／ｍｌから、１０、１２．１及び１４．１ｐｇ／ｍｌへと抑制することができた。
【実施例】
【００６９】
実施例：
悪液質の発症に関連するサイトカインの抑制におけるＰＤＥ３／４及びＰＤＥ４インヒビターの効果
ＰＤＥ３／４インヒビターであるザルダベリン及びＰＤＥ４インヒビターであるピクラミラストを、悪液質を誘発するサイトカインの抑制におけるＰＤＥ４及び／又はＰＤＥ３／４インヒビターの適性を一般に例証するために利用した。
【００７０】
このために、腫瘍細胞の一次培養を、ヌードマウス内で皮下で成長した、悪液質を誘発するヒトの異種移植片から誘導した。異種移植片細胞誘導体及びその測定可能なサイトカイン分泌を第１表にまとめる。
【００７１】
【表１】
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【００７２】
５〜１０体のＮＭＲＩヌードマウスに上記の異種移植片から誘導された腫瘍断片を移植し、腫瘍が約０．５ｇに達するまで成長させ、これは悪液質の発症と十分に相関関係にあった。その後、動物を犠牲にし、腫瘍を切除した。引き続き、細胞を無菌条件下で、機械的砕解機、プロテアーゼ、ヒアルロニダーゼ及びＤＮＡｓｅ  Ｉを用いて単離する。粗懸濁液を、２回、それぞれ２００及び５０μＭの直径を有する無菌篩に通した。
【００７３】
洗浄した細胞ペレットをイスコフ改変ダルベッコ培地＋２０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）中に再懸濁させ、０．２４〜１×１０６腫瘍細胞を２４ウェルプレート中に接種した。細胞は、含まれる腫瘍細胞のみならず、ラット源の血球及び間質性因子をも単離した。細胞系ＲＸＦ  ４８６Ｌを直接利用し、１×１０６細胞を各ウェルに接種した。
【００７４】
ピクラミラスト及びザルダベリンを１００％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中に溶解させ、１μＭ〜０．００１μＭ（ピクラミラスト）又は１００μＭ〜０．１μＭ（ザルダベリン）の最終濃度で施与した。薬剤と細胞を同時に培養した。接種の２４時間後、上澄みを回収し、遠心分離し、−８０℃で保存した。
【００７５】
それぞれＩＬ−１、ＩＬ−６及びＴＮＦαの定量的測定のために、R&D SystemsからのQuantikine ELISAキットを用いて製造者の推奨に従って上澄みを分析した。
【００７６】
ＩＬ−１発現の変質を、２つの細胞系：ＬＸＦＡ  ５２６及びＲＸＦ  ３９３において調査した。ザルダベリン及びピクラミラストの双方とも、２つの細胞系においてＩＬ−１レベルを抑制することができ、その際、ザルダベリンはピクラミラストよりもわずかにより活性であった（結果を図１及び２に示す）。
【００７７】
図３及び４に示すように、ザルダベリン及びピクラミラストによるＴＮＦαレベルの変質を、ＬＸＦＡ  ５２６細胞及びＬＸＦＥ  ３９７モデルにおいて調査した。双方の細胞系において、ザルダベリン及びピクラミラストは、培地へのそれぞれの細胞単離により、ＴＮＦαの分泌を阻害することができた。
【００７８】
前記データは、ＰＤＥ４及びＰＤＥ３／４インヒビターが、悪液質を誘発する異種移植片に由来する腫瘍細胞単離からの悪液質に関連するサイトカインの分泌を抑制する能力を有することを示す。調査したモデル系に依ってはある程度抗悪液質活性を示すＣＯＸ−２インヒビターは、この系においては、上記の系におけるいかなる示差的な程度で、ＩＬ−１の分泌のみならずＴＮＦαの分泌をも抑制することができなかったことに注目しなければならない。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】ＬＸＦＡ  ５２６肺腺癌異種移植外植片からのＩＬ−１の分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果を示す図。
【図２】ＲＸＦ  ３９３腎細胞腫異種移植外植片からのＩＬ−１の分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果を示す図。
【図３】ＬＸＦＡ  ５２６肺腺癌異種移植外植片からのＴＮＦαの分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果を示す図。
【図４】ＬＸＦＥ  ３９７類表皮腫異種移植外植片からのＴＮＦαの分泌に対する、ザルダベリン（左グラフ）及びピクラミラスト（右グラフ）の効果を示す図。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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