(57)【要約】患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する方法であって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上昇させる薬剤またはその誘導体を患者に投与することを含む方法である。好ましくは、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上昇させる薬剤は単球におけるｃＡＭＰ産生を刺激するプロスタグランジンまたはそのアゴニストである。場合によっては、寛容性を誘発することが望まれる抗原、またはその誘導体もまた投与することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する方法において、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）又はその誘導体を患者に投与することを含む方法。
【請求項２】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が、プロスタグランジン又はそのアゴニスト、βアドレナリン作動薬、細胞からのｃＡＭＰ放出遮断薬、フォルスコリン又はその誘導体、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、ｃＡＭＰ類似体、又はコレラ毒又はその誘導体又は断片のうちのいずれか又は複数である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
細胞からのｃＡＭＰ放出遮断薬がプロベネシド又はプロゲステロンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ｃＡＭＰ類似体が、Ｓｐ-アデノシン３',５'-環状モノホスホロチオエート又は８-ブロモアデノシン３',５'環状モノホスフェート又はジブトリリルｃＡＭＰである、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
プロスタグランジン又はそのアゴニストが単球におけるｃＡＭＰ産生を刺激する、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
プロスタグランジン又はそのアゴニストが、プロスタグランジンＥ、例えば、プロスタグランジンＥ２又はその類似体、ジノプロストン、ゲメプロスト、ミソプロストール、アルプロスタジル、リマプロスト、ブタプロスト、１１-デオキシＰＧＥ１、ＡＨ２３８４８、ＡＨ１３２０５、又は、１９-ヒドロキシＰＧＥのいずれか一つである、請求項２又は５に記載の方法。
【請求項７】
ＧＭＣＳＦが図１に示すアミノ酸配列又はその天然に生じる変異型を持つヒトＧＭＣＳＦである、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
ＧＭＣＳＦがサルグラモスチムである、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
患者に単球走化性薬剤を投与することを更に含む、請求項１ないし６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
単球走化性薬剤がＭＣＰ-１又はＭＩＰ-１αである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
患者にＰＤＥ阻害剤を投与することを含む、請求項１ないし１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＰＤＥ阻害剤が、３-イソブチル-１-メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、ペントキシフィリン（３,７-ジヒドロ-３,７-ジメチル-１-（５-オキソヘキシル)-１Ｈ-プリン-２,６-ジオン）、ロリプラム（４-[３-シクロペンチルオキシ-４-メトキシフェニル]-２-ピロリジノン）、ＣＰ８０  ６３３、ＣＰ１０２  ９９５、ＣＰ７６  ５９３、Ｒo-２０-１７２４  (４-[３-ブトキシ-４-メトキシベンジル]-２-イミダゾリジノン)、テオフィリン、または、デンブフィリン(１,３-ジ-ｎ-ブチル-７-（２-オキソプロピル)-キサンチン)のいずれか一つである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＰＤＥ阻害剤がＩＶ型ＰＤＥに対して選択的である、請求項１１又は１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＩＶ型ＰＤＥに対して選択的なＰＤＥ阻害剤が、ロリプラム（４-[３-シクロペンチルオキシ-４−メトキシフェニル]-２-ピロリジノン）、ＣＰ８０  ６３３、ＣＰ１０２  ９９５、ＣＰ７６  ５９３、Ｒo-２０-１７２４（４-[３-ブトキシ-４-メトキシベンジル]-２-イミダゾリジノン)、デンブフィリン(１,３-ジ-ｎ-ブチル-７-（２-オキソプロピル)-キサンチン)、又は、ＣＤＰ８４０、ＲＰ７３４０１またはＲＳ３３７９３のいずれか一つである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
患者に抗原又はその誘導体を投与することを含む、請求項１ないし１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか又は複数を、寛容性を必要とする部位に局所的に投与する、請求項１ないし１５に記載の方法。
【請求項１７】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか又は複数を、全身投与する、請求項１ないし１６に記載の方法。
【請求項１８】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか又は複数を、経口投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
単球におけるｃ有効ＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか又は複数を、坐剤又はカプセル剤として投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
坐剤又はカプセル剤は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか又は複数が患者の腸管において放出されるために腸溶コーティングしたものである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
少なくともＧＭＣＳＦ又はその誘導体が皮下注射又は静脈注射される、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体のいずれか二つ以上が同時に投与される、請求項１ないし２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
移植拒絶反応に関する疾患又は病態に抗するための、請求項１ないし２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
移植拒絶反応に関する疾患又は症状が移植片対宿主病又は宿主対移植片病を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体の一又は複数が移植前に投与される、請求項２３又は２４に記載の方法。
【請求項２６】
抗原がＨＬＡ-Ａ２である、請求項２３ないし２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
自己免疫疾患又は病態の治療を目的とする、請求項１ないし２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
自己免疫疾患が、原発性粘液性浮腫、甲状腺中毒症、悪性貧血、自己免疫性萎縮性胃炎、アディソン病、インスリン依存性糖尿病(ＩＤＤＭ)、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、交感性眼炎、多発性硬化症(ＭＳ)、自己免疫性溶血性貧血、特発性白血球減少症、潰瘍性大腸炎、皮膚筋炎、強皮症、混合結合組織病、関節リウマチ、過敏性腸症候群、全身性エリテマトーデス(ＳＬＥ)、橋本病、甲状腺炎、ベーチェット病、セリアック病／疱疹状皮膚炎、腎脈管炎、及び、脱随疾患から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
抗原が自己抗原である、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
自己免疫疾患が悪性貧血であるならば抗原はビタミンＢ１２であり、疾患がアディソン病ならば抗原は副腎抗原であり、疾患がＩＤＤＭならば抗原はグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、インスリンまたはＩＡ−２であり、疾患がグッドパスチャー症候群または腎脈管炎ならば抗原は腎臓抗原または内皮抗原であり、疾患が重症筋無力症ならば抗原はアセチルコリン受容体であり、疾患が交感性眼炎ならば抗原は眼球抗原であり、疾患が多発性硬化症（ＭＳ）ならば抗原はミエリン塩基性蛋白（ＭＢＰ）、プロテオリピド蛋白（ＰＬＰ）またはミエリン・オリゴデンドロサイト糖蛋白（ＭＯＧ）であり、疾患が自己免疫性溶血性貧血ならば抗原は赤血球抗原であり、疾患が特発性白血球減少症ならば抗原は白血球抗原であり、疾患が潰瘍性大腸炎ならば抗原は食物抗原またはウイルス抗原であり、疾患が皮膚筋炎ならば抗原は平滑筋抗原であり、疾患が強皮症ならば抗原は結合組織抗原であり、疾患が混合結合組織病ならば抗原は結合組織抗原であり、疾患が過敏性腸症候群ならば抗原は食物抗原であり、疾患が全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）ならば抗原はヒストン蛋白または免疫グロブリン重鎖であり、疾患が橋本病、原発性粘液性浮腫または甲状腺中毒症ならば抗原は甲状腺抗原であり、疾患が関節リウマチならば抗原はＩＩ型コラーゲンまたは熱ショック蛋白（ＨＳＰ）であり、疾患が甲状腺炎ならば抗原はサイログロブリンであり、疾患がベーチェット病ならば抗原はＳａｇ、ＨＬＡ−Ｂ４４、Ｂ５１またはＨＳＰ６５であり、疾患がセリアック病／疱疹状皮膚炎ならば抗原はグリアジンまたはそのα分画であり、かつ、疾患が脱髄疾患ならば抗原はミエリンである、請求項２７ないし２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
患者のアレルギー疾患または病態を治療するための、請求項１ないし２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
アレルギー疾患または病態はアレルギー性喘息である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
抗原は、ダニ・アレルゲン、埃アレルゲン、ネコ・アレルゲン、イヌ・アレルゲン、または、ウマ・アレルゲンである、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
抗原に対する寛容性は、抗原に対する患者の異常な、または望まれない免疫または炎症反応を治療することである、請求項１ないし３３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３５】
異常な、または望まれない免疫または炎症反応は、ＩＬ-１０生産の欠乏が関与する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭＣＳＦ)又はその誘導体を含む組成物。
【請求項３７】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が、プロスタグランジン又はそのアゴニスト、βアドレナリン作動薬、細胞からのｃＡＭＰ放出遮断薬、フォルスコリン又はその誘導体、ｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤、ｃＡＭＰ類似体、又はコレラ毒又はその誘導体又はその断片のうちのいずれか又は複数である、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
細胞からのｃＡＭＰ放出遮断薬がプロベネシド又はプロゲステロンである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
ｃＡＭＰ類似体が、Ｓｐ-アデノシン３',５'-環状モノホスホロチオエート、又は８-ブロモアデノシン３',５'環状モノホスフェートである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
プロスタグランジン又はそのアゴニストが単球におけるｃＡＭＰ産生を刺激する、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
プロスタグランジン又はそのアゴニストが、プロスタグランジンＥ、例えば、プロスタグランジンＥ２またはその類似体、ジノプロストン、ゲメプロスト、ミソプロストール、アルプロスタジル、リマプロスト、ブタプロスト、１１-デオキシＰＧＥ１、ＡＨ２３８４８、ＡＨ１３２０５、又は、１９-ヒドロキシＰＧＥである、請求項３７又は４０に記載の組成物。
【請求項４２】
ＧＭＣＳＦが図１に示すアミノ酸配列又はその自然発生的な変異型を持つヒトＧＭＣＳＦである、請求項３６ないし４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４３】
ＧＭＣＳＦがサルグラモスチムである、請求項３６ないし４１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４４】
単球走化性薬剤を含む、請求項３６ないし４３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４５】
単球走化性薬剤がＭＣＰ-１又はＭＩＰ-１αである、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
ホスホジエステラーゼ(ＰＤＥ)阻害剤を含む、請求項３６ないし４５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４７】
ＰＤＥ阻害剤が、３-イソブチル-１-メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、ペントキシフィリン（３,７-ジヒドロ-３,７-ジメチル-１-（５-オキソヘキシル)-１Ｈ-プリン-２,６-ジオン）、ロリプラム（４-[３-シクロペンチルオキシ-４-メトキシフェニル]-２-ピロリジノン）、ＣＰ８０  ６３３、ＣＰ１０２  ９９５、ＣＰ７６  ５９３、Ｒo-２０-１７２４  (４-[３-ブトキシ-４-メトキシベンジル]-２-イミダゾリジノン)、テオフィリン、または、デンブフィリン(１,３-ジ-ｎ-ブチル-７-（２-オキソプロピル)-キサンチン)のいずれか一つである、請求項４６に記載の組成物。
【請求項４８】
ＰＤＥ阻害剤がＩＶ型ＰＤＥに対して選択的である、請求項４６又は４７に記載の組成物。
【請求項４９】
ＩＶ型ＰＤＥに対して選択的なＰＤＥ阻害剤が、ロリプラム（４-[３-シクロペンチルオキシ-４−メトキシフェニル]-２-ピロリジノン）、ＣＰ８０  ６３３、ＣＰ１０２  ９９５、ＣＰ７６  ５９３、Ｒo-２０-１７２４（４-[３-ブトキシ-４-メトキシベンジル]-２-イミダゾリジノン)、デンブフィリン(１,３-ジ-ｎ-ブチル-７-（２-オキソプロピル)-キサンチン)、または、ＣＤＰ８４０、ＲＰ７３４０１またはＲＳ３３７９３のいずれか一つである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
患者において抗原に対する寛容性を誘発するためのものであり、寛容性を誘発すると思われる抗原又はその誘導体をさらに含む、請求項３６ないし４９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５１】
請求項３６ないし５０のいずれか一項に記載の組成物と製薬的に受容可能な単体、希釈剤又は賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項５２】
医学での使用を目的とした、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を含む組成物。
【請求項５３】
医学での使用を目的とした、患者における寛容性を誘導すると思われる抗原、又はその誘導体をさらに含む、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
医学での使用を目的とした、単球走化性薬剤を含む、請求項５２又は５３に記載の組成物。
【請求項５５】
医学での使用を目的とした、ＰＤＥ阻害剤を含む、請求項５２ないし５４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５６】
ＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤の使用。
【請求項５７】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用。
【請求項５８】
患者において抗原に対する寛容性を誘発する薬剤製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用。
【請求項５９】
ＧＭＣＳＦ又はその誘導体と抗原又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤の使用。
【請求項６０】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と抗原又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用。
【請求項６１】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、抗原又はその誘導体の使用。
【請求項６２】
抗原又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用。
【請求項６３】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体と抗原又はその誘導体の使用。
【請求項６４】
ＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と抗原又はその誘導体の使用。
【請求項６５】
患者において抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体と、抗原又はその誘導体の使用。
【請求項６６】
患者において抗原に対する寛容性を誘発する治療システムにおいて、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を含む治療システム。
【請求項６７】
寛容性の誘発を望む抗原をさらに含む、請求項６６に記載の治療システム。
【請求項６８】
単球走化性薬剤、及び／又はＰＤＥ阻害剤をさらに含む、請求項６６又は６７に記載の治療システム。
【請求項６９】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体の一又は複数は、寛容性を必要とする部位に局所的に投与することを目的として調製される、請求項６６ないし６８のいずれか一項に記載の治療システム。
【請求項７０】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体の一又は複数は、全身投与を目的として調製される、請求項６６ないし６８のいずれか一項に記載の治療システム。
【請求項７１】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体の一又は複数は、経口投与を目的として調製される、請求項６６ないし６８のいずれか一項に記載の治療システム。
【請求項７２】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体、単球走化性薬剤、ＰＤＥ阻害剤と、抗原又はその誘導体の一又は複数は、坐剤又はカプセル剤として調製される、請求項６６ないし６８のいずれか一項に記載の治療システム。
【請求項７３】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を細胞に投与することを含む、マクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシン発現を刺激又は亢進する方法。
【請求項７４】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を患者に投与することを含む、ウイルス感染治療方法。
【請求項７５】
ウイルス感染が単純ヘルペスウイルス感染又はヒトパピローマウイルス感染である、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
単純ヘルペスウイルス感染が単純疱疹である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
ヒトパピローマウイルス感染が疣である、請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を細胞に投与することを含む、マクロファージ／単球系細胞でのＩＬ-１０発現と分泌を刺激又は亢進する方法。
【請求項７９】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を患者に投与することを含む、患者の腫瘍治療方法。
【請求項８０】
単球走化性薬剤を投与することをさらに含む、請求項７３ないし７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
ＰＤＥ阻害剤を投与することをさらに含む、請求項７３ないし８０のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、治療的組成物、方法および使用に関する。特に、患者に抗原に対する寛容性を誘発するための方法に関する。
【０００２】
抗原に対する生物の免疫は、先ず抗原と遭遇し、その後、その抗原に選択的に結合することが可能な免疫グロブリン分子、例えば、抗体の生産の結果生じる。さらに、免疫反応は、抗原特異的な可能性もあるＴ細胞によって制御される。免疫は、通常炎症反応を刺激することによって、外来抗原の処分を可能とする細胞の急速な招集を可能とする。ある状況下では、免疫系は、「寛容性」と呼ばれるメカニズムによって抗原に対して免疫反応を起こさない。例えば、免疫系は、外来の抗原と、生物体そのものの構成成分とを正常に識別することが可能である。これは、生物体そのものの構成成分（「自己抗原」）に対して抗体を生産する可能性のあるＢ型リンパ球を全て成育時に破壊し、そうすることによって自己抗原に向けられる抗体を生産する生体の能力を除去するメカニズムがあるためである。
【０００３】
寛容性は積極的な作用であると考えられる。このことは、末梢性寛容は、特定の寛容性付与環境（例えば、インターロイキン１０（ＩＬ-１０）が高レベル）において抗原がＴ細胞に提示された場合に獲得されることを意味する。次に、このＴ細胞は循環し、その特定の抗原に再び出会っても、免疫反応を惹起しないか（アネルギーＴ細胞）、または、抑制反応を惹起する（調整Ｔ細胞）。従来から、調整Ｔ細胞の役割は寛容性にあることが提起されていた。調整Ｔ細胞は、抗原提示細胞の環境によって、同系抗原に反応して「下方制御」サイトカインを放出するようにプログラムされている。このような調整細胞として初めて報告された細胞はＩＬ-１０によって誘発されたものである（Grouxら(1997)Nature389:737-742）。
寛容性が崩壊すると、生物体は、その生物体の正常な構成成分に対して、細胞性免疫反応（細胞傷害性Ｔ細胞を含む）を起こして、「自己免疫疾患」を生ずる。自己免疫疾患としては、関節リウマチ（ＲＡ）、多発性硬化症（ＭＳ）および全身エリテマトーデス（ＳＬＥ）が挙げられる。
いくつかの状況では、外来抗原に対する免疫系の正常反応は有害な結果をもたらすことがある。例えば、移植組織片または移植器官片、または、臓器移植がそれであって、この場合、組織または器官のレシピエントの免疫系は、この移植組織片また器官片または臓器移植を外来性のものと認識し、これを拒絶するように作動する。
【０００４】
しかしながら、免疫性または炎症性病態または疾患に対する既存の治療方法の欠点の一つは、選択の範囲が限られており、その治療に不十分な点が見られることである。例えば、炎症性呼吸器疾患を治療するための糖質コルチコステロイドは、多くの患者に有毒作用をもたらし、代替治療薬、例えば、シクロスポリンＡまたはインターフェロンγは、危険度が高く、高価で、かつ、一般に効力は不十分である。
思いがけず、発明者は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えば、プロスタグランジンと、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）を混合して用いるとき、免疫系の細胞においてＩＬ-１０が顕著に刺激されることを見出した。更に、発明者は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えば、プロスタグランジンと、ＧＭＣＳＦには免疫系の細胞からのＩＬ-１０放出に対して相乗効果があり、ＧＭＣＳＦ存在下で、プロスタグランジンＥ（ＰＧＥ）と１９-ヒドロキシＰＧＥの両方によりＩＬ-１０が著しく刺激され、寛容性付与環境になることを見出した。言い換えれば、ＧＭＣＳＦと、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えば、プロスタグランジンはＩＬ-１０放出増加で特徴づけられる表現型に単球を二極化すると考えられる。同様に、フォルスコリン又はＧＭＣＳＦ単独と比較して、ＧＭＣＳＦ存在下において、フォルスコリンにより相乗的にＩＬ-１０発現が著しく刺激された。この細胞は、前寛容性表現型へと方向付けられるだけでなく、また、抗細菌薬であるグラヌリシンの生産をも亢進する。加えてこれらの薬剤を除去した後ＰＧＥやＧＭＣＳＦの効果は延長及び継続し、そして細胞は選択的に分化する。
【０００５】
ＧＭＣＳＦは顆粒球およびマクロファージ系成熟に重要な役割を持つ。ＧＭＣＳＦは治療薬剤としても治療の標的としても提案されている。組換えヒトＧＭＣＳＦはある種の癌を治療し、骨髄移植後に造血再構成を促進するために使用されている（Leukine(登録商標) Package Insert Approved Text, Feb. 1998, およびBuchselら (2002) Clin. J. Oncol. Nurs. 6(4): 198-205）。これに対して、他の最近の報告では、ＧＭＣＳＦは炎症および免疫疾患（Hamilton, (2002) Trends Immunol 23 (8):403-8）および喘息（Ritzら (2002) Trends Immunol 23 (8):396-402）の治療の潜在的な標的であると記載されている。
異常なまたは有害な免疫反応によってもたらされる疾患では、ＩＬ−１０が欠乏することがよくある。このＩＬ−１０の欠乏は、有用なＴヘルパー細胞、特に２型Ｔヘルパー細胞の発達にとって有害な場合がある；自己免疫疾患では、２型Ｔヘルパー細胞よりも１型Ｔヘルパー細胞の方が優勢であることが特徴的と考えられている。従って、ＩＬ−１０生産の刺激は、Ｔ細胞活性化において寛容性付加環境をもたらすものと考えられている。さらに、ＩＬ−１０高レベル環境は、抗原提示細胞（典型的には樹状細胞）に作用して、調節Ｔ細胞形成を確実にし、提示された抗原に対して特異的な調節Ｔ細胞が形成される。
しかして、本発明者は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と組み合わせて、ＧＭＣＳＦを使用して、患者に寛容性付与環境を誘発することによって、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発することを提案する。よって、本発明者は、この組み合わせが患者において抗原の寛容性又は抗原に対する寛容性を誘発することを提案する。
【０００６】
理論に拘束されるものではないが、本発明者は、ＧＭＣＳＦと単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上昇させる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはフォルスコリンの組み合わせがＩＬ-１２レベルをまた減少させ、これが本発明の効果を高めることは期待されると考える。本発明者は、プロスタグランジンとＧＭＣＳＦの組み合わせがＩＬ-１０とＣＯＸ-２の双方の発現を増大させ、フォルスコリンとＧＭＣＳＦの組み合わせが単球におけるＩＬ-１０のレベルを相乗的に増大させることを示した。従って、ＩＬ-１２レベルの減少はＩＬ-１０によってＩＬ-１２を直接阻害することによって（Hariziら, 2002）またはＣＯＸ-２誘導に依存するＩＬ-１０の独立経路によって（Schwachaら, 2002）生じうる。
ＧＭＣＳＦと単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストとの併用が、有用な程度の治療効果を達成するのに必要とされる、薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、またはＧＭＣＳＦの量を低減させ、よってプロスタグランジンまたはそのアゴニストまたはＧＭＣＳＦの投与の副作用を低減させるという所望の効果を達成するために本発明者によってまた考えられる。
本発明者の知る限り、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦの併用を、ＩＬ−１０生産刺激のために使用できることを示唆したものはこれまでなかったし、ＩＬ−１０を刺激するためにこの併用を用いた治療方法を示唆したものもなかった。さらに、この併用が、Ｔ細胞活性化のための寛容性付与環境を誘発し、または、患者に抗原に対する寛容性を誘発するために使用できることを示唆したものも全くなかった。さらに、寛容性誘発に伴う抗微生物効果または確かに如何なる用途であれ単球の抗微生物効果について言及したものはなかった。
【０００７】
本発明者は、ＧＭＣＳＦと寛容性の誘発が望まれる特異的抗原またはその誘導体と組み合わせて、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上昇させる薬剤を使用することによって患者における特異的抗原に対する寛容性を誘発することをさらに提案する。
本発明者の知る限り、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストまたはフォスコリンのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦとの患者への投与が、患者におけるその抗原に対する寛容性を誘発するために使用できることについては何ら示唆されていない。
また、本発明者は、ＰＧＥとＧＭＣＳＦがクラスＩＩトランス活性化因子（ＣＩＩＴＡ）およびＭＨＣクラスＩＩのような抗原提示への関与体のレベルを減少させることをまた示した（実施例１に示す）。この表現型の変化には、抗ウイルスを含む抗微生物特性を有しており（Krensky 2000）感染した細胞を溶解する抗微生物活性を媒介する活性化Ｔ細胞の産物と通常は考えられる（Hataら 2001；Ochoaら 2001；Smythら 2001）グラヌリシンの発現の増加が伴う。グラヌリシンの発現の増加は本発明の重要な結果であると考えられるが、それは、生得的防御分子における増加が寛容性誘発に伴う適応免疫系の無防備状態を補う可能性があるからである。
【０００８】
また、本発明者は、ＰＧＥとＧＭＣＳＦの組み合わせがＣＯＸ-２、ＣＤ８６、ＣＤ１４の発現を増加させることを示した。ＣＯＸ-２はプロスタグランジンとＧＭＣＳＦの除去後の寛容性表現型の維持に関与していると考えられ（実施例２および３に示す）、ＣＤ１４とＣＤ８６の双方とも分化マーカーであり、より分化した状態の証拠である。さらに、本発明者は、フォルスコリンとＧＭＣＳＦでの分化は単球におけるＴＮＦαを明白には上昇させないことを示した（ＴＮＦαは炎症誘発性および抗寛容原性剤である）。
この明細書における先に公開された文献の列挙または検討は、その文献が先行技術の一部であるかまたは技術常識であることを認めているものと必ずしも解釈してはならない。
【０００９】
本発明の第１の態様は単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体を含有する組成物を提供する。
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤は幾つかの別であるが関連している生化学的方法でそのように機能しうる。よって、その薬剤は、例えばｃＡＭＰの産生に関連している受容体を刺激することによってｃＡＭＰの産生を増大させるものでありうる。そのような薬剤には、以下にさらに詳細に記載するプロスタグランジンおよびそのアゴニストが含まれる。Braunら (1999) J. Exp. Med. 189, 541-552に記載されているように、コレラ毒素もまたｃＡＭＰレベルを細胞内的に増大させるために使用することができ、それが、望ましいと思われる上皮にわたる抗原輸送を増大させうる証拠もある。同様に、βアドレナリン受容体を介して細胞内のｃＡＭＰレベルを上昇させるβアドレナリン作動薬も使用することができる。そのようなβアドレナリン作動薬は喘息治療の場合におけるように当該分野でよく知られている。好適なβアドレナリン作動薬にはイソプロテレノールが含まれる。
【００１０】
上記薬剤は、ｃＡＭＰの分解を阻害するものであってもよく、よってｃＡＭＰホスホジエステラーゼ阻害剤であってもよく、これを以下にさらに詳細に記載する。その薬剤は、細胞からのｃＡＭＰの輸出を阻害するものでありうる。細胞からのｃＡＭＰの輸出は、例えばプロベネシド（プロベニシド）（痛風に対して現在用いられている薬剤）またはプロゲステロンまたはそのアゴニストまたはアンタゴニスト、例えばメドロキシプロゲステロンアセテートまたはＲＵ４８６（これはまたｃＡＭＰ輸送体に対して阻害効果を有していると思われる）でブロックされうる特異的輸送体（一般的に多種薬剤抵抗性タンパク質であるＭＲＰ-４）を介してなされる。
上記薬剤はまた寛容誘発状態の発生に関連して細胞におけるｃＡＭＰの効果を模倣するが、分解や輸出を受け難いと思われる化合物であってもよい。そのような化合物は細胞中に存在しているとｃＡＭＰ濃度を上昇させると考えることができる。そのような化合物には、Ｓｐ-アデノシン３',５'-サイクリックモノホスホロチオエートおよび８-ブロモアデノシン３',５'-サイクリックモノホスフェートおよびジブチリルｃＡＭＰが含まれる。十分なこれら化合物を投与したことは単球中でＩＬ-１０の発現の増加があったことを測定することによって評価することができる。好ましくは、最大の応答をもたらす濃度で使用されると、ＩＬ-１０の発現を少なくとも１．２倍、または１．５倍、または２倍、または５倍、または１０倍上昇させる。典型的には、約１から１００μｍｏｌのｃＡＭＰ類似体を患者に投与することができる。
【００１１】
フォルスコリン（ホルスコリン）は７β-アセトキシ-８,１３-エポキシ-１α,６β,９α-トリヒドロキシラブダ-１４-エン-１１-オン、７β-アセトキシ-１α,６β,９α-トリヒドロキシ-８,１３-エポキシ-ラブダ-１４-エン-１１-オンである。それはまたコレオノールおよびコルフォルシンとも呼ばれ、４１０のＭｒを有している。それは血圧降下、陽性変力およびアデニルシクラーゼ活性化特性を有する細胞透過性ジテルペノイドである。その生物学的効果の多くはそのアデニル酸シクラーゼの活性化とその結果の細胞内ｃＡＭＰ濃度の増大による。フォルスコリンはカルシウム流に影響を及ぼし、ＭＡＰキナーゼを阻害する。コルホルシンはダロパートとして使用される（Ann Thoracic Surgery (2001) 71, 1931-1938）。それは塩酸塩として投与して水溶性を確保することができるが、より速やかに細胞膜を透過することができる可能性のある遊離塩基として使用することもまたできる。
Ｓｐ-アデノシン３',５'-サイクリックモノホスフェート（ＳｐｃＡＭＰ）は４４６のＭｒを有しており、アデノシン-３',５'-サイクリックモノホスホチオエートのＳｐ-ジアステレオマーである。それはサイクリックヌクレオチドホスホジエステラーゼに対して耐性がありながら数多くの系において第二メッセンジャーとしてｃＡＭＰの効果を模倣するｃＡＭＰ依存プロテインキナーゼＩおよびＩＩの強力な膜透過性活性因子である。それはフォルスコリンやジブチリル-ｃＡＭＰのようなｃＡＭＰ類似体よりも大きな特異性と親和性を示す。
８-ブロモアデノシン３',５'-サイクリックモノホスフェート（８-ＢｒｃＡＭＰ）は４３０のＭｒを有している。それはｃＡＭＰよりもホスホジエステラーゼによる加水分解に対してより大なる耐性を有している細胞透過性ｃＡＭＰ類似体である。それはプロテインキナーゼＡを活性化させる。
【００１２】
コレラ毒素は約１０００００のＭｒを有している。それは細胞表面上でガングリオシドＧＭ１に毒素を結合させる５つのＢサブユニット（それぞれおよそ１２ｋＤａ）によって囲まれたＡサブユニット（２７ｋＤａ）からなる毒素である。ＡサブユニットはＧＴＰ加水分解酵素活性を低減させαサブユニットを活性化させる刺激性Ｇプロテインのαサブユニット（Ｇαｓ）のＡＤＰリボシル化を触媒する。Ｇαｓのこの活性化はｃＡＭＰのレベル増加を生じるアデニル酸シクラーゼの活性の増大に至る。それはまた眼の桿体外節中でトランスデューシンをＡＤＰリボシル化し、そのＧＴＰ加水分解酵素活性を不活性化する。コレラ毒素はまたチューブリンをＡＤＰリボシル化することが報告されている。それは強力な粘膜ワクチンアジュバントで、インターロイキン-１２の産生を阻害することによってＴヘルパー細胞２型の応答を誘導することが示されている（上掲のBraunら(1999)）。単球におけるｃＡＭＰレベルを増加させることができるコレラ毒素の断片は使用することができるが、完全なコレラ毒素を使用するのが好ましい。 
コレラ毒素はある条件下では過敏症（過剰感作）を誘導するので、好ましさは低い。
ＳｐｃＡＭＰおよび８-ＢｒｃＡＭＰ、および場合によってはフォスコリンはｃＡＭＰ輸出ポンプを阻害し得、これは有効ｃＡＭＰ濃度を上昇させるその能力に寄与しうる。
【００１３】
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を測定するのが簡便である（つまり、単球への薬剤の効果を評価することによる）。好適な単球はよく知られた単球細胞株Ｕ９３７である。薬剤は他の単球および単球関連細胞、例えばマクロファージにおける有効ｃＡＭＰ濃度をまた上昇させ、本発明の意味での有用性はこれら細胞に対する効果による場合があることが理解されるであろう。上に述べたように、十分な量のｃＡＭＰ類似体が存在しているかどうかは単球中のＩＬ-１０を測定することによって決定することができる。好ましくは、最大の応答をもたらす濃度で使用される場合、薬剤は少なくとも１．２倍、または１．５倍または２倍または５倍または１０倍のｃＡＭＰ濃度を上昇させる。
図５はｃＡＭＰレベルの上昇に導く細胞中または細胞上の様々な介入場所を模式的に示している。
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤はプロスタグランジンであることが好ましい。
本発明のこの態様および他の全ての態様に対してプロスタグランジンまたはそのアゴニストは単球におけるｃＡＭＰ産生を刺激することが好ましい。
プロスタグランジンまたはそのアゴニストは、単球におけるｃＡＭＰ産生を刺激し、特にＧＭＣＳＦの存在下で単球にＩＬ-１０を発現させる任意の好適なプロスタグランジンまたはそのアゴニストでありうる。本発明での使用に好適なプロスタグランジンまたはそのアゴニストは当業者によって直ぐに決定することができる。単球中でのｃＡＭＰ産生を評価する方法はBurzynら(2000)および実施例３に見出すことができ、単球におけるＩＬ-１０の発現と放出を検出する方法は実施例１および３のものを含む。
【００１４】
「プロスタグランジンまたはアゴニスト」とは、プロスタグランジン受容体にプロスタグランジンアゴニストとして作用する全ての化合物を意味する。プロスタグランジンアゴニストはプロスタノイドでありうるがそうである必要はない。典型的には、プロスタグランジンまたはアゴニストは、ＥＰ２またはＥＰ４受容体に結合するものである。プロスタグランジンはＰＧＥ、ＰＧＤまたはＰＧＩまたはそのアゴニストでありうる。好ましくは、プロスタグランジンは、ＰＧＥまたはそのアゴニストである。ＰＧＩは余りに不安定であるので薬剤として有用ではないが、ＰＧＩ２およびＰＧＩの安定な類似体が好適である。好ましくは、プロスタグランジンはＰＧＦまたはそのアゴニストではない。
プロスタグランジンまたはそのアゴニストは、ＰＧＥ２か、またはその合成類似体であることが好ましい。合成類似体としては、１５または１６位においてメチル基を添加して修飾したもの、またはヒドロキシルが１５位から１６位に転位したものが挙げられる。プロスタグランジン類似体の好ましい例としては、ブタプロスト（ＥＰ２受容体アゴニスト）および１１-デオキシＰＧＥ１（ＥＰ４受容体アゴニスト）、および１９-ヒドロキシＰＧＥが挙げられる。疑問を避けるために、「プロスタグランジン」という用語は、天然に生じるプロスタグランジン類並びに合成プロスタグランジン類似体を含む。
【００１５】
適切なプロスタグランジンまたはそのアゴニストとしては、ジノプロストン（プロペスの名前で、ヨーロッパではFerringによって、米国ではForestによって販売され、また、プロスティンＥ２の名前でPharmaciaによって販売されている）、ゲメプロスト（Farillonによって販売）、ミソプロストール（サイトテックの名前でSearleとPharmaciaによって販売）、アルプロスタジル（カベルジェクトの名前でPharmaciaによって、ビリダルの名前でSchwarzによって、ムセの名前でアストラゼネカによって販売されている）、および、リマプロストが挙げられる。
ミソプロストールは、ＥＰ２およびＥＰ３アゴニスト作用を有するＰＧＥ類似体である。その化学構造は、(±)メチル１１α,１６-ジヒドロキシ-１６-メチル-９-オキソプロスト-１３-エノアートである。
プロスタグランジンアゴニストとして作用する非プロスタノイド化合物の例として、ＥＰ４受容体アゴニストであるＡＨ２３８４８がある。
本発明を実施するのに有用と考えられるＥＰ２アゴニストはＡＨ１３２０５を含む。
好適なプロスタグランジンはまた１９-ヒドロキシＰＧＥ１および１９-ヒドロキシＰＧＥ２を含む。プロスタグランジンＥアゴニストは、出典明示によりここに取り込まれる欧州特許第１０９７９２２号および同第１１１４８１６号に記載されている。
好適なプロスタグランジンまたはアゴニストはまた米国特許第４１２７６１２号に記述されている１９-ヒドロキシプロスタグランジン類似体の任意のものを含む。
プロスタグランジンは、プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）または１９-ヒドロキシＰＧＥであることが好ましい。ＰＧＥ２を含む、プロスタグランジンおよびそのアゴニストは、例えば、PharmaciaおよびUpjohnからプロスチンＥ２の名前で市販されている。
【００１６】
「ＧＭＣＳＦ」には、ヒトＧＭＣＳＦ遺伝子およびその天然に生じる変異体の遺伝子産物を含む。ヒトＧＭＣＳＦのヌクレオチドおよびアミノ酸配列はＧｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ ０００７５８および図１に見出される。ＧＭＣＳＦの幾つかの天然に生じる変異体はまたＮＭ ０００７５８に列挙されている。ＧＭＣＳＦはコロニー刺激因子２（ＣＳＦ２）としても知られている。
本発明は、野生型ＧＭＣＳＦの生物学的活性を保持する、つまりその前駆細胞から顆粒球およびマクロファージの産生を刺激し、プロスタグランジンＥの存在下で単球にＩＬ-１０を発現させるＧＭＣＳＦの誘導体の使用を含む。
ＧＭＣＳＦの「誘導体」には、その断片、融合体または修飾体または類似体、あるいはその断片の融合体または修飾体を含む。
ＧＭＣＳＦの「断片」とは、その前駆細胞から顆粒球およびマクロファージの産生を刺激し、プロスタグランジンＥの存在下で単球にＩＬ-１０を発現させる糖タンパク質の任意の部分を意味する。典型的には、断片は完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも３０％を有する。断片は完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも９０％を有していることがより好ましい。最も好ましくは、断片は完全長ＧＭＣＳＦの活性の１００％またはそれ以上を有する。
【００１７】
誘導体は、部分的タンパク質分解法（外因性溶解または内因性溶解の何れか）を使用するタンパク化学法を用いて、または新規合成法によって作製することができる。あるいは、誘導体は組換えＤＮＡ法によって作製してもよい。核酸のクローニング、操作、修飾および発現、および発現されたタンパク質の精製のための好適な方法は当該分野でよく知られており、例えば出典明示によりここに取り込まれるSambrookら (2001) "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", 第３版, Sambrookら編, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USAに記載されている。
本発明はまたその前駆細胞から顆粒球およびマクロファージの産生を刺激し、プロスタグランジンＥの存在下で単球にＩＬ-１０を発現させる完全長ＧＭＣＳＦの修飾またはその断片を含む。
そのような修飾には、完全なまたは部分的な糖タンパク質の脱グリコシル化が含まれる。他の修飾には、天然に生じるヒトＧＭＣＳＦに見出されるものとは異なったグリコシル化パターンを有する完全長ＧＭＣＳＦまたはその断片が含まれる。
【００１８】
完全長ＧＭＣＳＦまたはその断片の他の修飾には、一または複数の位置においての、保存的であれ非保存的であれ、アミノ酸挿入、欠失および置換が含まれる。そのような修飾はＧＭＣＳＦの類似体とも呼ぶことができる。「保存的置換」とは、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒのような組み合わせを意図する。そのような修飾は、上掲のSambrookら 2001 に記載されたように、タンパク工学および部位特異的突然変異誘発の方法を使用して行うことができる。好ましくは、修飾されたＧＭＣＳＦまたは修飾されたＧＭＣＳＦ断片は完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも３０％を保持する。修飾されたＧＭＣＳＦまたはＧＭＣＳＦ誘導体が完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも９０％を有するならばさらに好ましい。より好ましくは、修飾されたＧＭＣＳＦまたは修飾されたＧＭＣＳＦ断片は完全長ＧＭＣＳＦの活性の１００％またはそれ以上を有する。
本発明はまた他の化合物への完全長ＧＭＣＳＦまたはその断片の融合体を含む。好ましくは、融合体は完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも３０％を保持する。融合体は完全長ＧＭＣＳＦの活性の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも９０％を有するならばさらに好ましい。最も好ましくは、融合体は完全長ＧＭＣＳＦの活性の１００％またはそれ以上を有する。
【００１９】
ＧＭＣＳＦとその類似体は、それぞれを出典明示によりここに取り込む次の刊行物に記載されている：米国特許第５２２９４９６号（Deeleyら）；米国特許第５３９１４８５号（Deeleyら）；米国特許第５３９３８７０号（Deeleyら）；米国特許第５６０２００７号（Dunnら）；Wongら, "Human GM-CSF: molecular cloning of the complementary DNA and purification of the natural and recombinant proteins", Science 228 (4701), 810-815 (1985)；Leeら, "Isolation of cDNA for a human granulocyte-macropharge colony-stimulating factor by functional expression in mammalian cells", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82(13), 4360-4364 (1985)；Cantrellら, "Cloning, sequence, and expression of a human granulocyte/macrophage colony-stimulating factor", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82(18), 6250-6254 (1985)；およびMiyatakeら, "Structure of the chromosomal gene for granulocyte-macrophage colony stimulating factor: comparison of the mouse and human genes", EMBO J. 4(10), 2561-2568 (1985)。
ＧＭＣＳＦは上述のようにヒトＧＭＣＳＦであるのが好ましいが、ＧＭＣＳＦには他の種のＧＭＣＳＦもまた含める。しかしながら、ＧＭＣＳＦが患者に投与される用途に対しては、ＧＭＣＳＦは患者と同じ種由来であることが好ましいことが理解される。よって、ＧＭＣＳＦがヒト患者に投与されるならば、ＧＭＣＳＦは好ましくはヒトＧＭＣＳＦである。
【００２０】
この発明の実施に適したＧＭＣＳＦは、Peprotech EC Ltd., 29 Margravine Road, London, W6 8LL（カタログ番号３００-０３）から取得できる。
この発明の実施に好適なＧＭＣＳＦは、Immunex, Inc.によって生産され、商品名Leukine(登録商標)で販売されている酵母由来組換えヒトＧＭＣＳＦの正式名であるサルグラモスチムである。Leukine(登録商標)はパン酵母系で産生された組換えヒトＧＭＣＳＦである。Leukine(登録商標)は１９５００、１６８００および１５５００ダルトンの分子量を有する３つの主要分子種を特徴とする１２７のアミノ酸の糖タンパク質である。Leukine(登録商標)のアミノ酸配列は２３位のロイシンの置換が天然のヒトＧＭＣＳＦとは異なり、糖鎖部分は天然タンパク質とは異なっている場合がある。Leukine(登録商標)は皮下または静脈内投与に適している（Leukine(登録商標) Package Insert Approved Text, Feb. 1998）。
文脈が別のことを示していない限り、「ＧＭＣＳＦ」という用語が使用される場合は常にここに定義された誘導体が含まれる。
【００２１】
好適な実施態様では、組成物は単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦと、製薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤（その組み合わせを含む）を含有する薬学的組成物である。
担体、賦形剤または希釈剤は本発明の組成物と適合性があり、その賦形剤に対して有害ではないという意味で「許容可能」でなければならない。典型的には、担体は無菌でピロゲン不含有の水または生理食塩水である。
治療用途に許容可能な担体または希釈剤は製薬分野でよく知られており、RemingtonのPharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R. Gennaro編 1985)に記載されている。製薬的に許容可能な担体、賦形剤または希釈剤の選択は意図される投与経路と標準的な製薬実務に関して選択することができる。薬学的組成物は、担体、賦形剤または希釈剤として、またはそれに加えて、任意の適切なバインダー、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤または可溶化剤を含有しうる。
【００２２】
保存料、安定化剤、染料およびさらには香料添加剤を薬学的組成物中に提供することができる。保存料の例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ-ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。酸化防止剤と懸濁化剤もまた使用することができる。
一実施態様では、組成物は患者に対して寛容性を誘発するのが望まれる抗原またはその誘導体をさらに含有する。本発明の実施に使用して好適な抗原の詳細は以下に記載する。よって、本発明は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体と、それに対して寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体を含有する組成物を含む。本発明は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、およびそれに対して寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体と、製薬的に許容可能な担体、希釈剤または賦形剤（その組み合わせを含む）を含有する薬学的組成物をまた含む。
【００２３】
抗原に対して寛容性を誘発するためには、抗原それ自体ではなく、抗原の誘導体を患者に投与してもよいことが理解される。抗原の「誘導体」とは、例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上のクラスＩまたはクラスＩＩのＭＨＣ分子によって提示が可能であって、抗原そのものに対して寛容性を誘発する抗原の任意の部分を含む。典型的には、抗原の誘導体は、例えばＴ細胞受容体を介して提示された場合に、Ｔ細胞によってもまた認識が可能である。
抗原がタンパク質である場合、抗原の誘導体は、典型的には、ＭＨＣ結合可能な抗原のアミノ酸の連続配列からなる抗原のペプチド断片である。好ましくは、断片は、その長さが６から１００アミノ酸長である。さらに好ましくは、断片の長さは、６から５０アミノ酸長である。最も好ましくは、断片の長さは、６、または７、または８、または９、または１０、または１１、または１２、または１３、または１４、または１５、または１６、または１７、または１８、または１９、または２０、または２１、または２２、または２３、または２４、または２５アミノ酸長である。
【００２４】
抗原の誘導体は、抗原と他の化合物との融合体、または抗原の断片と他の化合物との融合体であって、提示された場合、クラスＩまたはクラスＩＩＭＨＣ分子のいずれかによって認識が可能で、その抗原そのものに対する寛容性を誘発する融合体を含む。典型的には、その融合体は、その抗原そのものに対する寛容性を誘発することが可能な一部分となるように、ＡＰＣによって処理されることが可能なものである。
文脈が別の意味を示していない限り、「抗原」という用語が抗原の文脈で使用される場合は常にここで定義される誘導体も含まれる。
理論に拘束されるものではないが、本発明者は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストとＧＭＣＳＦが単球におけるＩＬ-１０の産生および分泌を相乗的に刺激することによって抗原に対する寛容性を誘発すると信じる。本発明の効果は、プロスタグランジンのような薬剤とＧＭＣＳＦと場合によっては抗原が投与される組織中に単球を誘発し、新たに到達された単球がついで寛容な表現型に向けられる走化剤を使用することによってさらに増加しうる。
【００２５】
よって、一実施態様では、組成物は単球求引走化剤をさらに含みうる。この発明の実施に好適な走化剤には、ＭＩＰ-１αおよびＭＣＰ-１が含まれ、これは、Peprotech EC Ltd., 29 Margravine Road, London, W6 8LLから（カタログ番号３００-０４）得ることができる。他の好適な走化剤は、出典明示によりここに取り込まれるKellyの米国特許第５９０８８２９に記載されている。
本発明者は、組成物中にホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤を含有せしめるのが有益である場合があるとさらに信じる。プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）の主要な受容体はＥＰ２およびＥＰ４サブタイプである。しかしながら、他の受容体サブタイプが存在する（つまり、ＥＰ１およびＥＰ３）。ＥＰ２およびＥＰ４受容体はアデニルシクラーゼと結合し、メッセンジャー系として増加したｃＡＭＰを用いる。組織中のｃＡＭＰのレベルは、特異的なＰＤＥ阻害剤によってブロックされ得るＰＤＥによるその合成とその異化作用の双方に支配されている。よって、本発明者は、そのＥＰ２およびＥＰ４受容体に作用するプロスタグランジンまたはそのアゴニスト（例えばＰＧＥ）の効果はｃＡＭＰを刺激することにあり、ＰＤＥ阻害剤の添加は単球とマクロファージへの相乗作用をもたらし、単独で投与される同量のプロスタグランジンまたはそのアゴニストとＧＭＣＳＦ、またはＰＤＥ阻害剤の相加効果より大きい免疫および／または炎症反応の減少を生じると信じる。
【００２６】
さらに、本発明者は、プロスタグランジンとＰＤＥ阻害剤の組み合わせが免疫系の細胞におけるＩＬ-１０の発現とそれからの分泌を顕著に刺激しＩＬ-１２の発現とそれからの分泌を阻害し、寛容化環境を生じることを以前に見出した。よって、一実施態様では、組成物はＰＤＥ阻害剤をさらに含有しうる。
ＰＤＥ阻害剤は、適当なものであればいずれのＰＤＥ阻害剤であってもよい。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ｃＡＭＰ分解に活性を示すＰＤＥを抑制するものである。ｃＡＭＰ分解に活性を示すことが知られるＰＤＥは、ＩＶ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ型のものである。好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＩＶまたはＶＩＩまたはＶＩＩＩ型に対して選択的である。
もっとも好ましくは、ＰＤＥ阻害剤は、ＩＶ型ＰＤＥに対して選択的である。「選択的」とは、その阻害剤が、それに対して選択的なＰＤＥ阻害剤の特定の型を、別の型に対するよりも強力に抑制することを意味する。好ましくは、ＩＶ型選択的阻害剤は、他のＰＤＥ型に対してよりも、ＩＶ型ＰＤＥに対して少なくとも２倍強力な抑制剤である。より好ましくは、ＩＶ型選択的阻害剤は、他のＰＤＥ型に対してより、ＩＶ型ＰＤＥに対して、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または、１０００倍強力な阻害剤である。
典型的には、選択的阻害剤は、他のＰＤＥ型に対してより、選択されたＰＤＥ型に対して、約５から５０倍強力な阻害剤である。典型的には、選択的阻害剤は、非選択的とされる阻害剤、例えば、テオフィリンよりも、選択されたＰＤＥ型に対して５から５０倍強力な阻害剤である。よって、テオフィリンは、ロリプラムよりも３０倍効力が低いことになる。
【００２７】
好ましくは、選択的抑制は、ＩＣ５０レベルの比較によって確定される（Dousa (1999) Kidney International 55: 29-62）。
非特異的ＰＤＥ阻害剤としては、カフェイン、テオフィリン、３-イソブチル-１-メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）およびペントキシフィリン（３,７-ジヒドロ-３,７-ジメチル-１-(５-オキソヘキシル)-１Ｈ-プリン-２,６-ジオン）が挙げられる。もっともカフェインは、他のものほど活性はないのでそれほど好ましくはない。ＩＢＭＸのＩＣ５０値は２−５０μＭである。
出典明示により本明細書に含める米国特許第６１２７３７８号は、選択的ＰＤＥ阻害剤（主にＩＶ型の）と記述される、６位が置換されたフェナンスリジンを開示し、これは、本発明の方法で用いるのに好適である可能性がある。
ＩＶ型特異的（または選択的）ＰＤＥ阻害剤としては、ロリプラム（４-[３-シクロペンチルオキシ-４-メトキシフェニル]-２-ピロリジノン）、および、Ｒo-２０-１７２４（４-[３-ブトキシ-４-メトキシベンジル]-２-イミダゾリジノン）が挙げられる。ロリプラムのＩＣ５０は８００ｎＭであり、Ｒｏ-２０-１７２４のＩＣ５０は２μＭである。
【００２８】
もう一つの好適なＩＶ型選択的ＰＤＥ阻害剤は、デンブフィリン（１,３-ジ-ｎ-ブチル-７-(２-オキソプロピル)-キサンチン）である。
ＣＰ８０６３３（Hanifinら (1996) J. Invest. Dermatol. 107, 51-56）、ＣＰ１０２９９５およびＣＰ７６５９３は皆強力なＩＶ型阻害剤である（コネティカット州グロトンのファイザー社、中央研究部から市販）。
その他の高親和性ＩＶ型選択的阻害剤としては、ＣＰＤ８４０、ＲＰ７３４０１およびＲＳ３３７９３（Dousa, 1999）が挙げられる。高親和性ＩＶ型選択的ＰＤＥ阻害剤は約１ｎＭのＫｉを有する一方、低親和性阻害剤は約１μＭのＫｉを有する。
ＩＶ型ＰＤＥ選択的阻害剤に関するDousa (1999)；Muellerら(1996, Trends Pharmacol.Sci.17:294-298)；PalfreymanおよびSouness (1996, Prog Med Chem 33:1-52)；StaffordおよびFeldman (1996, Annual Reports in Medical Chemistry (vol 31) pp71-80；Bristol編, Academic Press, NY, USA)；およびTeixeiraら (1997, Trends Pharmacol.  Sci.18:164-171)の開示を出典明示により本明細書に含める。
典型的には、ＩＶ型ＰＤＥ選択的阻害剤を経口投与する場合、約１から３０ｍｇが使用される。従って、ロリプラムまたはデンブフィリンの典型的経口用量は、１ｍｇまたは５ｍｇまたは１０ｍｇまたは３０ｍｇである。非選択的ＰＤＥ阻害剤、例えばテオフィリンを用い、しかも経口投与する場合は、用量は５と５０ｍｇの間、例えば、５または１０または２０または３０または４０または５０ｍｇである。
【００２９】
組成物がプロゲステロンを含む場合、プロゲステロンの用量は１００ｎＭと５０μＭの間のレベルをもたらすのに十分ならば好適である。
ＧＭＣＳＦとの好適な組み合わせは次の通りである：
ＰＧＥ
ＰＧＥ＋ロリプラム
ＰＧＥ＋プロベネシド
ＰＧＥ＋ロリプラム＋プロベネシド
フォルスコリン
フォルスコリン＋ロリプラム
フォルスコリン＋ロリプラム＋プロベネシド
８-ブロモｃＡＭＰ＋プロベネシド
８-ブロモｃＡＭＰ＋ロリプラム＋プロベネシド
Ｓｐ-アデノシン３,５-サイクリックモノホスホチオエート（ＳｐｃＡＭＰ）
ＳｐｃＡＭＰ＋プロベネシド
ＳｐｃＡＭＰ＋ロリプラム＋プロベネシド
コレラ毒素
コレラ毒素＋プロベネシド。
本発明者は、これらの（およびその他の）組み合わせが相乗的に作用して、単球における有効ｃＡＭＰレベルを所望されるように上昇させうると信じる。ｃＡＭＰに対する全ての代謝点を操作することによって、単一の成分だけと比較して同じ効果をもたらすために、混合物の成分のより低い用量が可能になることがまた理解される（図５参照）。
【００３０】
本発明の第２の態様は、患者における抗原に対する寛容性を誘発する方法を提供し、該方法は単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体を患者に投与することを含む。
抗原に対する寛容性を誘発するとは、患者の免疫系が、以前は非寛容的であった抗原に対して寛容的となること、あるいは免疫系が、その抗原に対して低下した反応を呈すること、またはまったく無反応（すなわち、検出不能反応）を呈することという意味を含める。
本発明は、患者における抗原に対する寛容性を誘発する方法をまた提供し、該方法は単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体を患者に投与することを含む。
投与される抗原またはその誘導体は、典型的には、それに対して寛容性を誘発することが望ましい抗原またはその誘導体である。
単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体は好ましくは本発明の第１の態様に関して上述したものである。
薬剤がプロスタグランジンまたはそのアゴニストである場合が特に好ましい。
【００３１】
よって、本発明は、本発明の第１の態様に記載されたような組成物を患者に投与することを含む、患者において抗原に対する寛容性を誘発する方法を含む。
該方法は単球走化剤、例えば上述したものを投与することをさらに含んでもよい。
ＧＭＣＳＦまたはその誘導体と組み合わされる単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤の量は、患者に投与されたときに、患者に寛容性状態を誘発しおよび／または免疫系または炎症反応を抑制する所望の治療効果を示すのに十分なものであることが理解される。
該方法は、上述のもののようなＰＤＥ阻害剤を投与することを含みうる。
本発明は、患者の免疫反応または炎症反応を抑制することを含む。「抑制する」には、免疫系または炎症反応が、炎症反応の場合には、刺激に対する炎症反応が低下させられ、または、その反応が検出不能となる程度にまで炎症反応が回避されるよう変更されるという意味を含める。
【００３２】
従って、本発明は、患者において抗原に対する寛容性を誘発し、それによって、患者の異常なまたは有害な免疫または炎症反応を治療することを含む。これは、有害な炎症反応または免疫反応が見られる疾患または病態の治療に特に有用である可能性がある。従って、本発明は、患者における免疫反応または炎症反応を抑制する方法であって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦを患者に投与することを含む方法を含む。本発明は患者における免疫反応または炎症反応を抑制する方法であって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦと、それに対して寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体を患者に投与することを含む方法をさらに含む。
「異常なまたは有害な免疫反応または炎症反応」とは、ある個体または患者の組織中に、目視が可能な、または測定可能な炎症の存在を誘発する疾患または病態を含む。例えば、外来移植片の一部を形成する組織、または外来移植片を受容した宿主の組織、あるいはＭＳを持つ個体の中枢神経系、あるいは１型糖尿病患者の膵島炎、あるいは関節リューマチ患者の腫脹関節である。
本発明は、患者において抗原に対する寛容性を誘発し、それによって、例えば、臓器移植拒絶に関連する反応のような、患者の中の異常なまたは有害な免疫または炎症反応を抑制する方法を含む。
従って、一実施態様では、本発明は、例えば臓器または皮膚移植における、移植対宿主疾患または宿主対移植疾患のような移植拒絶と関連する疾患または病態の治療を含む。これらの場合、免疫または炎症反応を阻害しまたはその勢いを弱めることが必要とされうる。よって、本発明は移植拒絶を克服することを含む。
【００３３】
本発明は、患者において、移植拒絶反応、または移植拒絶と関連する疾患または病態を克服する方法を含み、その方法は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦ、および場合によってはそれに対して寛容性を誘発することが望ましいとされる抗原、またはその誘導体をその患者に対して投与することを含む。
移植拒絶と関連する疾患または病態が宿主に対する移植片の疾患である場合、典型的には、抗原は宿主の抗原、すなわち移植受容者に存在する抗原である。あるいは、移植拒絶と関連する疾患または病態が移植片に対する宿主の疾患である場合、典型的には、抗原は、移植された臓器または材料に存在する抗原である。これらの場合、移植における抗原特異的Ｔ調節細胞の増加に関連する免疫または炎症反応の抑制または沈静が必要とされる場合がある。好ましくは、抗原はクラスＩのＭＨＣ分子である。最も好ましくは、このＭＨＣ分子はＨＬＡ-Ａ２である。
異常なまたは有害な免疫または炎症反応である疾患または病態は、有害な反応がアレルギー反応であるアレルギー症も含む。このような病態または疾患では、それに対して寛容性が誘発される抗原はアレルゲンであろう。
従って、本発明の方法は、有害なアレルギー性炎症または免疫反応の見られる、アレルギー性病態または疾患の治療には特に有用である可能性がある。
よって、他の実施態様では、本発明は、患者におけるアレルギー反応を治療、予防または抑制する方法であって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦを患者に投与することを含む方法を含む。場合によっては、寛容性を誘発するのが望ましい抗原またはその誘導体がまた患者に投与される。典型的には、アレルギー病態または疾患において、それに対して寛容性が誘発される抗原はアレルゲンであろう。アレルギーは、例えばネコ鱗屑、家埃ダニ、草や木の花粉、カビ、菌類、食物、刺す昆虫等々に対するアレルギーのような任意のアレルギーであってよい。
【００３４】
好ましい一実施態様では、アレルギー病態または疾患はアレルギー性喘息である。好ましくは、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤および／またはＧＭＣＳＦおよび／または抗原またはその誘導体は、エアロゾルを介して肺または気管支に投与される。好ましくは、薬剤はプロスタグランジンまたはそのアゴニストである。この実施態様は特に好ましいと考えられるが、それは、出典明示によりここに取り込まれる米国特許第４１２７６１２号に記述されるように、いくつかの１９−ヒドロキシプロスタグランジン類似体は、気管支拡張剤として機能することが報告されているからである。プロスタグランジンが、喘息治療に広く使用されない理由は、プロスタグランジンが患者に咳を引き起こすためである。ＧＭＣＳＦを投与すれば、これはプロスタグランジンの低濃度投与を可能とするから、副作用を最小にしながら治療効果を挙げることが可能となる。
従って、本発明は、１９-ヒドロキシＰＧＥ、ＧＭＣＳＦ、および場合によってはアレルギー性喘息の吸入治療のためにそれに対して寛容性を誘発するのが好ましいとされるアレルゲンまたはその誘導体の使用を含む。
好ましい一実施態様では、疾患または病態が、アレルギー性疾患または病態、例えば、アレルギー性喘息である場合、抗原は、ダニ・アレルゲン、埃アレルゲン、哺乳類アレルゲン、例えば、ネコ、イヌ、または、ウマ・アレルゲン、好ましくはネコ・アレルゲンでありうる。
【００３５】
他の実施態様では、抗原（アレルゲン）は、下記の内のいずれかである。すなわち、Ｆｅｌ  ｄ１（飼養ネコFelis domesticusの皮膚・唾液腺アレルゲンで、そのアミノ酸配列はＷＯ９１／０６５７１に開示されている）、Ｄｅｒ  ｐＩ、Ｄｅｒ  ｐＩＩ、Ｄｅｒ  ｆＩ、またはＤｅｒ  ｆＩＩ（家埃ダニdermatophagoidesから生じる主要蛋白アレルゲンで、そのアミノ酸配列はＷＯ９４／２４２８１に開示されている），および下記のいずれかに存在するアレルゲン、すなわち、草、木および雑草（ブタクサを含む）の花粉；キノコ類およびカビ類；食物例えば魚；貝類；蟹・海老；ピーナッツ；ナッツ類；小麦グルテン；卵とミルク；刺す昆虫、例えば、蜂、黄蜂と熊蜂、および、蚋類（刺さない蚋）；蜘蛛・ダニ、家埃ダニを含む；哺乳類、例えば、猫、犬、牛、豚、羊、馬、兎、鼠、モルモット、マウス、および、ジャービル等の鱗屑、尿、唾液、血液、または、その他の体液の中に見られるアレルゲン；空中に浮遊する一般の粒子；ラテックス、および洗剤のタンパク質添加剤である。
抗原（アレルゲン）は、また、家蝿、ショウジョウバエ、羊クロバエ、蝿蛆虫、穀ゾウムシ、蚕、蜜蜂、刺さない蚋の幼虫、蜂蜜蛾幼虫、ミルワーム、ゴキブリおよびゴミムシダマシ（Tenibrio molitor）の幼虫を含む昆虫群から選ばれる昆虫抗原であってもよい。
さらに別の実施態様では、本発明は、患者の自己免疫疾患の治療方法であって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦを患者に投与することを含む方法を含む。自己免疫疾患の治療は、有害な免疫反応が生じる自己抗原に寛容性を誘発することを含みうる。
【００３６】
本発明の方法を使用して治療することができる自己免疫疾患には、一次粘液水腫、甲状腺中毒症、悪性貧血、自己免疫萎縮性胃炎、アディソン病、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、グッドパスチャー症候群、重症筋無力症、交感性眼炎、ＭＳ、自己免疫性溶血性貧血、特発性白血球減少症、潰瘍性大腸炎、皮膚筋炎、強皮症、混合結合組織病、関節リウマチ、過敏性腸症候群、ＳＬＥ、橋本病、甲状腺炎、ベーチェット病、セリアック病／疱疹状皮膚炎および脱髄疾患が含まれる。
例えば、関節炎を治療するためには、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体を滑液に投与して、免疫学的に寛容性環境を確保することができる。
一実施態様では、患者の自己免疫疾患の治療方法は、寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体を患者に投与することをさらに含む。典型的には、抗原は、それに対して有害な免疫反応が生じる自己抗原である。
好ましくは、疾患または病態が悪性貧血ならば、抗原はビタミンＢ１２であってもよい。
好ましくは、疾患または病態がアディソン病ならば、抗原は副腎抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態がインスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）ならば、抗原は、グルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）、インスリン、またはＩＡ−２（プロテインチロシンフォスファターゼ様分子）であってもよい。
好ましくは、疾患または病態がグッドパスチャー症候群または腎臓脈管炎ならば、抗原は腎臓抗原または内皮抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が重症筋無力症ならば、抗原はアセチルコリン受容体であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が交感性眼炎ならば、抗原は眼球抗原であってもよい。
【００３７】
好ましくは、疾患または病態がＭＳのようなミエリン消耗疾患ならば、抗原は、ミエリン、ＭＢＰ（ミエリン塩基性蛋白）、ＰＬＰ（プロテオリピド蛋白）、またはＭＯＧ（ミエリン・オリゴデンドロサイト糖タンパク質）であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が自己免疫性溶血性貧血ならば、抗原は赤血球抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が特発性白血球減少症ならば、抗原は白血球抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が潰瘍性大腸炎ならば、抗原は、食物抗原またはウィルス抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が皮膚筋炎ならば、抗原は平滑筋抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が強皮症ならば、抗原は結合組織抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が混合結合組織病ならば、抗原は結合組織抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が過敏性腸症候群ならば、抗原は食物抗原であってもよい。
好ましくは、疾患または病態がＳＬＥならば、抗原は、ヒストンタンパク質または免疫グロブリン重鎖であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が、橋本病、一次粘液水腫または甲状腺中毒症ならば、抗原は甲状腺抗原であってもよい。
【００３８】
好ましくは、疾患または病態が、甲状腺自己免疫疾患または甲状腺炎ならば、抗原は、サイログロブリンのような甲状腺ホルモンであってもよい。
好ましくは、疾患または病態がベーチェット病ならば、抗原は、Ｓａｇ（眼球由来のＳ抗原）、ＨＬＡ-Ｂ４４、Ｂ５１またはＨＳＰ６５であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が、セリアック病／疱疹状皮膚炎ならば、抗原はグリアジンであってもよい。全グリアジンを使用するよりは、グリアジン特異的Ｔ細胞の増殖を下方調節することが可能なグリアジン分画を使用する方が有用である可能性がある。適当な分画は、出典明示によりここに取り込まれるMauranoら (2001) Scand. J. Immunol. 53, 290-295に開示されるα分画であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が関節リューマチならば、抗原は、ＩＩ型コラーゲンまたはＨＳＰ（熱ショックタンパク質）であってもよい。
好ましくは、疾患または病態が脱髄疾患ならば、抗原はミエリンであってもよい。
本発明の方法は、患者に対し、ある抗原に対する寛容性を再度付与するのに使用することが可能である。例えば、ウィルス感染の結果である自己免疫疾患または病態では、抗原は、ウィルスＨＳＰ類似の自己ＨＳＰである可能性がある。
本治療法は、Ｔ細胞を炎症誘発機能から逸らせることによって症状を治療するばかりでなく、有害な自己免疫反応を克服するものと考えられる。
【００３９】
如何なる理論にも縛られるものではないが、本発明者は、本発明の方法が、Ｔ細胞のプログラミングに影響を及ぼし、それらの細胞を、炎症誘発性Ｔ細胞にではなく、調節的または抑制的Ｔ細胞となるように仕向けると考える。プロスタグランジンのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦと抗原の存在下で抗原提示細胞によって改変されたＴ細胞がさらにその同じ抗原と遭遇すると、Ｔ細胞はＩＬ−１０のような抑制性サイトカインを放出する。従って、プロスタグランジンのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦによる治療は、その抗原に対する炎症反応が生ずるのを阻止するか、または極小化すると考えられる。従って、プロスタグランジンのような上記薬剤、およびＧＭＣＳＦおよび場合によっては抗原、例えば自己抗原、またはその誘導体による治療は、予防的に使用が可能であるし、あるいは例えば自己免疫疾患の最初の兆候が現れたら直ちに使用することも可能である。
さらに、Ｔ細胞は全身中に存在するのであるから、それらの細胞は、最終的な活動部位から遠く離れた部位でプログラムされる、あるいは成熟すると考えられる。従って、本発明の一実施態様では、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体の内のいずれか一つまたは全てを、疾患部位から離れた部位に投与してもよい。
同様に、ある種の自己免疫疾患に対する他の形態の治療と異なり、本方法は、免疫反応を、それが始まる前に予防するのに役立つ可能性がある。従って、本方法は、例えば年齢や遺伝的素因によって、自己免疫疾患にかかり易い素質を持つ患者を、炎症症状が現れる前に治療するのに有用である可能性がある。
本発明はまた患者における免疫反応または炎症反応を抑制または沈静するために、患者において抗原に対する寛容性を誘発することを含む。「抑制または沈静」とは、Ｔｈ２反応の増加、Ｔｈ１反応の減少、またはＴ調節細胞の増加を生じるＩＬ−１０レベルを増加させることを含む。
【００４０】
ある特定の患者が、治療による効果を期待できる者か否かは医師によって判定が可能である。
患者を、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体によって治療した場合に得られる効果は、その抗原に対する寛容性の促進または改善である。抗原は、その患者にとって外来のものであっても自己抗原であってもよく、患者に投与される抗原であってもよい。
プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を投与することによって患者においてある抗原に対する寛容性を誘発することは、非特異的免疫抑制をもたらす可能性があることが理解される。従って、本発明は、患者において抗原に対する寛容性を誘発し、その患者に免疫抑制状態を作り出す方法を含み、その方法は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、およびＧＭＣＳＦまたはその誘導体を患者に投与することを含む。このような免疫抑制状態は、任意の抗原性刺激に対する細胞媒介性免疫反応の閾値を高めるという特徴を持つ。
従って本発明はまた単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体の組み合わせの免疫抑制剤としての使用を提供することが分かる。
【００４１】
プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体を投与することによって患者においてある抗原に対する寛容性を誘発することは、抗原特異的免疫抑制をもたらす可能性があることがまた理解される。従って、本発明は、患者において抗原に対する寛容性を誘発し、その患者に抗原特異的免疫抑制状態を作り出す方法を含み、その方法は、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体を患者に投与することを含む。このような抗原特異的免疫抑制状態は、特異的抗原に対する細胞媒介性免疫反応の閾値を高めるという特徴を持つ。
従って本発明はまた単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体の組み合わせの、その抗原に対する免疫抑制剤としての使用も提供する。
上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体は、どのような順序で投与してもよい。好ましくはこれらは同時投与される。しかしながら、それらは、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤と抗原の投与前に、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体がアクセサリー細胞中に効果を示すことが可能となるように投与されてもよい。例えば、プロスタグランジンおよびそのアゴニストのような上記薬剤と、抗原またはその誘導体は、実質的に同時に、例えば同じ組成物において投与され、ＧＭＣＳＦは別に投与されてもよい。ＧＭＣＳＦは、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤と抗原またはその誘導体の前に、後に、または、実質的に同時に投与されてよい。投与の順序とタイミングは、抗原、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤およびＧＭＣＳＦの性質に関する知識を用いて医師によって決められてよい。例えば、プロスタグランジン（例えばミソプロストール）は、投与後４時間にわたって活性を保ちうる。従って、投与の適切なタイミングは、この情報から容易に案出することができる。
【００４２】
抗原に対する寛容性が、特定の器官に、例えば、皮膚または気管支および肺に局在することが望ましい場合、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体は、その病態部位に局所的に投与されることが好ましい。上記薬剤は、ゲルまたはクリームまたはベーパーまたはスプレーとして、あるいは、病態が皮膚に局在している場合には「パッチ」として、あるいは、病態部位が肺または気管支である場合には吸入蒸気またはスプレーとして投与することができる。
プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤および／または抗原またはその誘導体は、全身的に投与してもよい。例えば、粘膜性免疫系に対して局所的に、例えば、坐剤を介して提示される抗原は、投与部位から離れた粘膜部位で作用することが予想される。
本発明は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体を、炎症部位から離れた粘膜部位に投与することを含み、例えば、関節炎の場合に、これらを坐剤として同時投与することも可能である。この実施態様は、消化管の病的変化は、筋骨格系（AlghafeerおよびSigal, Bulletin on the Rheumatic Diseases, 51(2):   http://www.arthritis.org/research/bulletin/vol51no2/51_2_printable.asp、この文献は出典明示により本明細書に含める）を含む多数の器官の臨床的問題と関連する可能性があるので、特に効果的である。ある種の反応性関節炎は炎症性腸炎によって引き起こされ、腸疾患性関節炎では、腸管粘膜からの白血球が関節組織に移動することが報告されている（サルミとヤーカネン（SalmiおよびJalkanen (2001) J Immunol., 166(7): 4650-7、この文献は出典明示により本明細書に含める）。
【００４３】
従って、抗原またはその誘導体は、様々な手段を通じて患者に投与することが可能であることが理解される。例えば、それは、患者の粘膜表面、例えば、直腸粘膜表面を通じて、例えば、坐剤として投与することが可能であり、膣を通じて、例えば、ペッサリーとして投与してもよいし、皮膚を通じて、例えば、ゲルまたはクリームまたはパッチとして投与してもよいし、肺に、例えば、エアロゾルとして（典型的には、肺の障害に対して）投与してもよいし、または経口的に、例えば、錠剤またはカプセルとして（通常、腸管における徐放のために）投与してもよい。
理論によって縛られるものではないが、投与された抗原またはその誘導体は、リンパ組織、例えば、リンパ系のリンパ節、または小腸粘膜下のパイヤー斑に輸送されると考えられる。従って、これらの組織に対してあらゆる輸送形態が考えられる。抗原またはその誘導体は、プロスタグランジンおよびＧＭＣＳＦによって作られたＩＬ−１０上昇の寛容性付与環境において、ＡＰＣによって循環するＴ細胞に提示される。さらに、プロスタグランジンとＧＭＣＳＦの投与は、循環性Ｔ細胞が調節Ｔ細胞となる可能性を増大させる。
【００４４】
ＧＭＣＳＦまたはその誘導体は、任意の適当な経路を通じて投与することができる。ＧＭＣＳＦまたはその誘導体は、多くの異なった投与経路を用いて、典型的には本発明に関しては単球である所望の作用部位に達することが可能である。典型的には、一実施態様では、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体は全身的に投与される。全身投与の適切な形態は、経口、経皮、皮下または静脈内投与を含み、または坐剤による。
ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を局所的に投与するのも簡便である。従って、ＧＭＣＳＦは、皮膚上のような局所的に、例えば、プロスタグランジンまたはそのアゴニストの投与に関連して前述したように、ゲルまたはクリームまたはベーパーまたはスプレーを用いて、あるいは「パッチ」として送達してもよい。同様に、気管支または肺投与の場合には、スプレーまたはベーパーとして投与してもよい。
本発明の好ましい実施態様では、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体を、同時送達のために、同一の製剤中に組み合わせてもよい。従って、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原は、ゲルまたはクリームまたはベーパーまたはスプレーまたは「パッチ」または坐剤の中で組み合わされて、一緒に患者に投与されてもよい。
【００４５】
好ましくは、坐剤は、ｐＨが上昇した時にのみ腸内に活性剤を放出する腸溶性コーティングを有する。この種の調剤は、グルココルチコイドを腸管に送達するのに成功している（エントコートＣＲのデータシート）。
別態様として、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体は、カプセルまたは、その他の適当な嚥下される形態の下に投与されてもよい。カプセルまたはその他の適当な剤形は、ｐＨ感受性を持つ腸溶性コーティングを持ち、そのために、消化管における所望の地点、典型的には、回腸遠位部または結腸における放出を実現する。
別態様として、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体は、例えば、Egaletで生産されるもののような非溶解性チューブまたはパイプシステムを用いて、結腸または回腸遠位部に直接投与してもよい。
上記薬剤および／またはＧＭＣＳＦおよび／または抗原は、同じまたは異なる部位に、かつ、同じまたは異なる投与方式によって投与してよいことが理解される。
【００４６】
一実施態様では、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストは経口投与される。特に、プロスタグランジンまたはそのアゴニストは、その分解性を低減するように修飾され、かつ経口的に利用可能な（例えばミソプロストール）プロスタグランジン類似体である。
よって、好ましい実施態様では、本発明の方法は、その分解性を低減するように修飾され、かつ経口的に利用可能な（例えばミソプロストール）プロスタグランジン類似体の経口投与を移用し、抗原またはその誘導体もまた経口投与される。経口投与の利点は、他の投与方式と比べると一般に適応性が優れていることである。
本発明者は、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を、経口投与可能なプロスタグランジンまたはそのアゴニストと併用することは、ＧＭＣＳＦを用いない場合よりも、プロスタグランジンの経口用量が低減されることになることを意味すると考える。さらに、プロスタグランジンとＧＭＣＳＦのこの組み合わせは、それが無くなった後でさえ持続する効果をもたらすことが示されており（実施例２および３を参照）、これは分化誘導薬であるＧＭＣＳＦの存在によると思われる。これは、プロスタグランジンまたはそのアゴニストの経口投与によって引き起こされる副作用、例えば、筋痙攣を低減させるという利点を持つと本発明者は考える。
【００４７】
好ましくは、ＧＭＣＳＦとプロスタグランジンまたはそのアゴニストの組み合わせは、ＧＭＣＳＦとＰＧＥを含む。典型的には、５ｍｌの生理食塩水中、０．１−１００μｇのＰＧＥと１−２５０μｇのＧＭＣＳＦが投与されうる。
あるいは、ＧＭＣＳＦとプロスタグランジンまたはそのアゴニストの組み合わせは、ＧＭＣＳＦと１９-ヒドロキシＰＧＥを含む。典型的には、５ｍｌの生理食塩水中、０．１−１００μｇの１９ヒドロキシＰＧＥと１−２５０μｇのＧＭＣＳＦが投与されうる。
サルグラモスチムの好適な用量は一日当たり２５０μｇ／ｍ２である。
典型的には、１００から８００μｇ、より好ましくは１００から４００μｇのミソプロストールが毎日経口投与される。
典型的には、抗原またはその誘導体は、約１００ｎｇと約１００ｍｇ、より典型的には約１００μｇの間の用量で投与される。
【００４８】
本発明の第３の態様は、医薬に使用される、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体を含有する組成物を提供する。本発明はまた医薬に使用される、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体と、患者に寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体を含有する組成物を含む。従って、組成物は医薬への使用のために包装され、提供される。組成物はヒトまたは獣医薬に使用することができる。好ましくはヒトの医薬に使用される。
好ましくは、第３の態様に係る使用は、上述のように、患者における異常なまたは望まれない免疫または炎症反応を治療することにある。
上述の薬剤（例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト）、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および、抗原またはその誘導体に対して好ましいものは本発明の第１の態様のものと同じである。
一実施態様では、組成物は、上述のもののような、単球走化剤をさらに含有してもよい。
付加的なまたは別の実施態様では、組成物は、上述のもののような、ＰＤＥ阻害剤をさらに含有してもよい。
【００４９】
本発明の第４の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤の使用を提供し、ここで、患者にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与されるか、または上記薬剤の投与後にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与される。
本発明の第５の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体の使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与後に上記薬剤が投与される。
本発明の第６の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤とＧＭＣＳＦは患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
【００５０】
本発明の第７の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤の使用を提供し、ここで、患者にＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体が既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体が投与されるか、または上記薬剤の投与後にＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体が投与される。
本発明の第８の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と抗原またはその誘導体が投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与前に上記薬剤と抗原またはその誘導体が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と同時に上記薬剤と抗原またはその誘導体が投与されるか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与後に上記薬剤と抗原またはその誘導体が投与される。
本発明の第９の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、抗原またはその誘導体の使用であり、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記抗原またはその誘導体の投与前に上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体が既に投与されているか、または抗原またはその誘導体と同時に上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与されるか、または抗原またはその誘導体の投与後に上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与される。
【００５１】
本発明の第１０の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の使用であり、ここで、患者には、抗原またはその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与前に上記抗原またはその誘導体が既に投与されているか、または上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体と同時に抗原またはその誘導体が投与されるか、または上記薬剤とＧＭＣＳＦまたはその誘導体の投与後に抗原またはその誘導体が投与される。
本発明の第１１の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体と抗原またはその誘導体との使用であり、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤が投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体の投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体と同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と抗原またはその誘導体の投与後に上記薬剤が投与される。
本発明の第１２の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と抗原またはその誘導体との使用であり、ここで、患者には、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤と抗原またはその誘導体の投与前にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が既に投与されているか、または上記薬剤と抗原またはその誘導体と同時にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与されるか、または上記薬剤と抗原またはその誘導体の投与後にＧＭＣＳＦまたはその誘導体が投与される。
本発明の第１３の態様は、患者に対し抗原に対する寛容性を誘発する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体および抗原またはその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体および抗原またはその誘導体は患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
【００５２】
好ましくは、第４ないし１３の態様に係る使用は、上述のようにして、患者の異常なまたは望まれない免疫又は炎症反応を治療することにある。
発明の第４ないし１３の態様に対して好ましい単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、抗原またはその誘導体、投与経路、用量等々は発明の第１の態様のものと同じである。
発明の第４ないし１３の態様に記載された医薬はまた単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤を含有することもできることが理解される。発明の第４ないし１３の態様に記載された医薬は、単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤が投与された患者において抗原に対して寛容性を誘発するためのものでありうることがさらに理解される。単球走化剤およびＰＤＥ阻害剤の好適なものは発明の第１の態様のものと同じである。
本発明の第１４の態様は、抗原に対する寛容性を誘発するための治療システムであって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を含むシステムを提供する。該治療システムは「キット・オブ・パーツ」と呼ぶこともできる。
本発明は、抗原に対する寛容性を誘発するための治療システムであって、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体と、寛容性を誘発することが望まれる抗原またはその誘導体とを含むシステムを含む。
【００５３】
好ましくは、該治療システムは、本発明の第１の態様に記載されたような、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような好適な薬剤を含む。さらに好ましくは、治療システムは、本発明の第１の態様に記載されたような、好適なＧＭＣＳＦまたはその誘導体を含む。該治療システムは好ましくは本発明の第１の態様に記載したような抗原またはその誘導体を含む。
該治療システムまたはキット・オブ・パーツは、好適には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤と、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体と、抗原またはその誘導体を、同時投与かまたは時間的に別々の投与かのいずれかの併用に適した製剤に包装され提供せしめられて含む。従って、例えば、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および、抗原またはその誘導体が、皮膚に対する同時局所投与用である場合の一実施態様では、治療システムは、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体の組み合わせを含む、ゲルまたはクリームまたはスプレーまたはベーパーまたは「パッチ」を含んでもよい。また別に、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および抗原またはその誘導体が、特定の治療処方において別々の投与用とされる他の実施態様では、それらの成分は別々に包装または製剤化される。例えば、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤は、クリームまたはゲルまたはスプレーまたはベーパーまたは「パッチ」を用いた局所投与用に製剤化され、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体および抗原またはその誘導体は、静脈内または経口投与用に包装または製剤されてもよい。
治療システムは本発明の第１の態様に関して上述したもののような、単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤をまた含んでいてもよいことが理解される。
【００５４】
プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤単独、または、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体単独、または抗原またはその誘導体単独、またはそれらの任意の２種またはそれら３種全ての組み合わせの製剤は、簡便には単位剤形で提供することが可能であり、製薬学の分野でよく知られた任意の方法によって調製することができる。このような方法は、本発明において使用される活性成分を、一または複数の補助成分を構成する担体と関連させる工程を含む。一般に、製剤は、活性成分を、液性の担体または微細に分割した固相担体、またはその両方に、均一にかつ緊密に関連させ、かつ必要に応じて、その生成物を成形することによって調製される。
経口投与に好適な本発明に係る製剤（例えば、ＧＭＣＳＦまたは単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる適切な薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストまたは抗原の）は、それぞれが予め定まった量の活性成分を含む、カプセル、カシェ剤または錠剤のような別々の単位として提供されてもよいし、散剤または顆粒として、水性液体または非水性液体の溶液または懸濁液として、あるいは、水中油液体エマルションまたは油中水液体エマルションとして提供されてもよい。活性成分はまたボーラス、舐剤またはペーストとして提供されてもよい。
【００５５】
錠剤は、場合によっては一または複数の補助成分と共に、圧縮または成形によって製造することができる。圧縮錠剤は、粉末または顆粒状の流動形の活性成分を、場合によっては結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性な希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、グリコール酸澱粉ナトリウム、架橋結合ポビドン、架橋結合カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性または分散剤と混合し、適当な装置で圧縮することによって調製することが可能である。成形錠剤は、不活性な液性希釈剤によって湿らした粉末状化合物の混合体を適当な装置で成形することによって製造が可能である。錠剤は場合によってはコート被覆し、または、割線をつけ、所望の放出プロフィールが得られるように、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを様々な比率で用いて、活性成分の緩徐なまたは制御された放出を実現するように製剤化されてもよい。
好ましい単位剤形製剤は、活性成分の、１日用量または単位、１日のサブ用量またはその適当な分画量を含むものである。
【００５６】
特に前述した成分の他に、本発明の製剤は、問題の製剤タイプに関して当該分野で一般的な他の薬剤を含んでもよく、例えば経口投与に適した製剤であれば香料添加剤を含んでもよいということを理解しなければならない。
皮膚に対する局所投与のためには、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体および／または抗原またはその誘導体を、分散剤または経皮的または経粘膜的移送または浸透を可能とする薬剤、例えば、ジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）等と組み合わせて製剤するのが簡便である。適当な薬剤とは、プロスタグランジンまたはそのアゴニストのような上記薬剤、および／またはＧＭＣＳＦまたはその誘導体と適合性があるもの（例えば、その溶媒）である。
本方法または医薬が使用される患者は、例えば、猫、犬、馬、牛、羊、馬、豚等いずれの哺乳動物であってもよいが、好ましくはヒトである。
本方法または医薬は、抗原に対する寛容性を誘発する必要性を示す兆候が、治療される患者に明らかになる前に使用されてもよく、またそれとは別に、または、それに加えて、本方法または医薬は、症状または兆候が明白になってから使用されてもよいことが理解されよう。従って、臓器または組織移植を受ける予定の患者の場合、移植手術を開始する前に、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および場合によっては抗原またはその誘導体を投与することは有利であろう。さらに、移植(transplant)または移植(graft)手術の間にまたは完了後にも投与を続行することは有利であろう。必要な用量は、要求される寛容性の程度に応じて医師によって決められてよい。
【００５７】
さらに、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニスト、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体、および場合によっては抗原またはその誘導体は、それぞれ、単一用量として、または、同じ治療効果を挙げる複数のより少量の用量として投与されてもよいことが理解されよう。投与頻度は、用量を投与する医師または患者の都合によって変動させてもよい。
それに対して寛容性を誘発するのが望ましいとされる抗原以外の抗原への患者の暴露は最小限とするのが好ましいことが理解される。ある場合、このことは、免疫抑制処置患者に対して当該分野で知られている隔離「バブル」の中に患者を閉じ込めることを含みうる。
一を越える抗原に対して寛容性を持たせることが望ましいことがあることが理解される。従って、それに対して寛容性を誘発することが望ましいとされる一つの抗原を含む、複数の方法、使用および、組成物について言えば、それは、それに対して寛容性を誘発することが望ましいとされる２種または３種または４種または５種またはそれ以上の抗原を含むことになる。
妊娠は、本発明に対して不適応であるようである。事実、妊娠は、ミソプロストールを含む数種類のプロスタグランジンに対して不適応である。サイトテック（ミソプロストール）は低血圧を起こさないが、低血圧は、本発明の方法において考えられるリスクである。
【００５８】
本発明者は、プロスタグランジンＥおよびＧＭＣＳＦがマクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０、グラヌリシン、ＣＯＸ−２、ＣＤ８６およびＣＤ１４の発現を亢進させることを示した。「マクロファージ／単球系の細胞」には、単球前駆体から誘導される細胞を含み、マクロファージ、単球および樹状細胞を含む。
本発明はまたマクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０の発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する方法において、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を投与することを含む方法を含む。刺激は、インビトロまたはインビボでありうる。
マクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０の発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する方法は単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。
ＩＬ−１０のインビボでの分泌の刺激又は亢進は、本発明の第一の態様に関して既に記載したような移植、自己免疫疾患及びアレルギーのような症状において有益でありうる。
【００５９】
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０の発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストの使用を提供し、ここで、患者にはＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦが既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦが投与されるか、またはプロスタグランジンまたはそのアゴニストの投与後にＧＭＣＳＦが投与される。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０の発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造におけるＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストが投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦの投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦと同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦの投与後に上記薬剤が投与される。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＩＬ−１０の発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤とＧＭＣＳＦは患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
【００６０】
本発明はまたマクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシンの発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する方法において、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦまたはその誘導体を投与することを含む方法を含む。刺激は、例えばグラヌリシンの抗ウイルス活性の増大を必要とする患者においてのインビトロまたはインビボ刺激でありうる。
マクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシンの発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する方法は単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤を投与することをさらに含んでもよい。
グラヌリシンのインビボでの分泌の刺激又は亢進は、本発明の第一の態様に関して既に記載したような移植、自己免疫疾患及びアレルギーのような症状において有益でありうる。
【００６１】
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシンの発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストの使用を提供し、ここで、患者にはＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦが既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦが投与されるか、または上記薬剤の投与後にＧＭＣＳＦが投与される。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシンの発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造におけるＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストが投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦの投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦと同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦの投与後に上記薬剤が投与される。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるグラヌリシンの発現および同細胞からの分泌を刺激しまたは亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤とＧＭＣＳＦは患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
【００６２】
さらに、グラヌリシンのインビボでの分泌の刺激又は亢進は、例えば単純ヘルペスウイルスまたはヒトパピローマウイルスに対する抗ウイルス治療法として有益でありうる。よって、場合によっては例えばＭＣＰ−１またはＭＩＰ−１αのような単球走化剤と共に、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体との組み合わせを皮膚に局所的に適用して、ヘルペスまたはいぼの発生を予防しまたはそれを治療することができる。
従って、本発明は、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を患者に投与することを含む、患者のウイルス感染の治療方法を含む。該方法は単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤を患者に投与することを更に含んでもよい。
本発明はまた単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体をヘルペスまたはいぼに投与することを含む、ヘルペスまたはいぼの治療方法を含む。該方法は単球走化剤および／またはＰＤＥ阻害剤をヘルペスまたはいぼに投与することを更に含んでもよい。
【００６３】
本発明はまた患者のウイルス感染を治療する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストの使用を提供し、ここで、患者にはＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦが既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦが投与されるか、または上記薬剤の投与後にＧＭＣＳＦが投与される。
本発明はまた患者のウイルス感染を治療する医薬の製造におけるＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストが投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦの投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦと同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦの投与後に上記薬剤が投与される。
本発明はまた患者のウイルス感染を治療する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤とＧＭＣＳＦは患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
【００６４】
また、グラヌリシンのインビボでの分泌の刺激又は亢進は、特にグラヌリシンの抗ウイルス活性のために、抗腫瘍治療法として有益でありうる。例えば、グラヌリシン分泌の刺激又は亢進は初期段階の皮膚癌または子宮頚癌の治療に有益でありうる。
本発明はまた単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体を投与することを含む、患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＣＯＸ−２の発現を刺激又は亢進する方法を含む。
ＣＯＸ−２のインビボでの発現の刺激又は亢進は、プロスタグランジンとＧＭＣＳＦによって誘発される寛容化及び抗微生物表現型の維持に関与しているものと信じられているので、本発明の第一の態様に関して既に記載したような移植、自己免疫疾患及びアレルギーのような症状において有益でありうる。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＣＯＸ−２の発現を刺激又は亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストの使用を提供し、ここで、患者にはＧＭＣＳＦ又はその誘導体が投与される。よって、患者には上記薬剤の投与前にＧＭＣＳＦが既に投与されているか、または上記薬剤と同時にＧＭＣＳＦが投与されるか、または上記薬剤の投与後にＧＭＣＳＦが投与される。
【００６５】
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＣＯＸ−２の発現を刺激又は亢進する医薬の製造におけるＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供し、ここで、患者には、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストが投与される。よって、患者にはＧＭＣＳＦの投与前に上記薬剤が既に投与されているか、またはＧＭＣＳＦと同時に上記薬剤が投与されるか、またはＧＭＣＳＦの投与後に上記薬剤が投与される。
本発明はまた患者のマクロファージ／単球系の細胞におけるＣＯＸ−２の発現を刺激又は亢進する医薬の製造における、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤、例えばプロスタグランジンまたはそのアゴニストと、ＧＭＣＳＦ又はその誘導体の組み合わせの使用を提供する。よって、上記薬剤とＧＭＣＳＦは患者への投与前に同じ医薬に併用されうる。
本発明のあらゆる側面及び実施態様において、単球における有効ｃＡＭＰ濃度を上げる薬剤はプロスタグランジンまたはそのアゴニストが好ましいことが理解される。
ここで言及される文献の全ては、出典明示によりその全体がここに取り込まれる。
以下、本発明を次の図面と実施例を参照しながらさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００６６】
実施例１：免疫学的な寛容性を誘導するためのプロスタグランジンＥ／ＧＭＣＳＦ相乗効果
プロスタグランジンのＥシリーズは免疫学的な寛容性に関与することが証明されつつある。これは、経口寛容性(病原性及び共生生物に対する免疫系能力)、サイトカイン割合を調節する能力、精子に対する寛容性が必須であるヒト精漿中の高濃縮における役割に由来する。
プロスタグランジンは有益又は有害な細菌に適応して更に病原体に対する反応を高めるべき身体の多くの粘膜表面で生産される。Newberryら(１９９９)は、エッグ-ホワイトライソザイムを特異的に認識するＴ細胞受容体を発現している３Ａ９ＴＣＲα−／−マウスが、プロスタグランジン合成が阻害、この場合、誘発性シクロオキシゲナーゼアイソフォームＣＯＸ-２により阻害されない限り、この抗原に対する炎症性反応を高めることはないことを示した。プロスタグランジンが除去され、特異的抗原にさらされるとマウスは炎症性腸疾患類似の疾患を発達させる(Newberry ら、１９９９)。これらの実験は、プロスタグランジン合成を阻害する主要効果を持つ、インドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症薬が寛容性を破壊するという先の研究を確信させるものである(Scheuerら,1987; Louisら, 1996)。
【００６７】
正常固有層の単球はＣＤ８０ではなくＣＤ８６を発現するので、明確な表現型を持つ。炎症性病態(例えば、炎症性腸疾患)が持続する時、単球はＣＤ８０を発現する(Rugtveitら, 1997)。それゆえ、常在性のマクロファージ(ＣＤ８０−ｖｅＣＤ８６＋ｖｅ)は、最近補充したマクロファージ、ＣＤ８０＋ｖｅ、ＣＤ８６＋ｖｅと区別される。
単球は多くの免疫学的媒介物の主要源であり、プロスタグランジンを含めて、それ自体が抗原提示のためにサイトカイン環境を変化させる。ＰＧＥは寛容性に関連するサイトカインに主要に影響し、寛容原であるサイトカインＩＬ-１０(Strassmannら,1994)を刺激し、寛容性を破壊するＩＬ-１２(Kraanら,1995)を阻害する。ＰＧＥは又、抗原提示樹状細胞の成熟に直接作用し、ＩＬ-１０の分泌を増加し、ＩＬ-１２の分泌を減少させる細胞の生産を刺激するであろう(Kalinskiら,1997)。
ヒト精漿におけるＰＧＥ及び１９-ヒドロキシＰＧＥの濃度がいずれもとても高い(およそミリモル)ことが、必須寛容性を確実にする際のプロスタグランジンの重要性をさらに示す。明らかに、精子が免疫学的にコンピテントで感染可能な雌性生殖器に侵入するための免疫学的な寛容性は種の継続に必須であり、プロスタグランジンレベルは多くの内皮、さらにはリンパ節細胞が影響を受ける値であろう。このようにして精子は確実に免疫学的な保護を受けるように進化している。
【００６８】
本実験(Strassmannら.,1994; Kraanら.,1995)では、ＰＧＥがＩＬ-１０産生を刺激するためにリポ多糖類(ＬＰＳ)を必要とした。加えてＩＬ-１０への伝達はおよそ１２時間遅れて伝わり、これらの因子が難題となる。本発明の観察により、ＬＰＳはＧＭＣＳＦの発現を刺激し、このことが遅延及びその後のＩＬ-１０発現の原因となっているであろうことが示唆される。
今回我々は、プロスタグランジンとＧＭＣＳＦ間の相乗効果により、単球への寛容性誘導における主要なプロスタグランジン効果が媒介されうることを示す。この併用の短期曝露により、ＩＬ-１０の発現は非常に増加し、ＣＩＩＴＡ及びＭＨＣＩＩのような抗原提示関係細胞のレベルは現象するという表現型となる。更に、この表現型の変化はグラヌリシンによる発現亢進にも付随する。この分子は、抗微生物特性があり(Krensky 2000)、活性化Ｔ細胞(感染した細胞を溶解する抗ウイルス活性を媒介する(Hataら. 2001; Ochoaら. 2001; Smythら. 2001))の産物と通常考えられている。このような先天的防御分子の増加は、寛容性誘発を必然的に伴う適応免疫系の妥協を補うであろう。更に、この表現型は、ＣＤ８０への中和効果だけでなくＣＤ８６の刺激により特徴づけられる。
【００６９】
実験の詳細
Ｕ９３７(ヒト単球細胞系)細胞を、１０％ウシ胎仔血清(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)を添加したＲＰＭＩ(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)培地中で生育した。５ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦを含む又は含まない１０−６モルのプロスタグランジンＥ２で、細胞を４時間処理した。処理を除去して、細胞を更に２０時間培養した。細胞はペレット状にしてＴｒｉ試薬(英国、プール、Ｓｉｇｍａ社)を用いてｍＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡはクロロホルムの添加に続くイソプロパノール沈殿によって得た。ＲＮＡは逆転写酵素(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社)とランダムヘキサマー(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社)で逆転写合成した。増幅とＩＬ-１０及び多くの他の分子の検出のためのプローブとプライマーはＰｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社)を用いて以下のように設定した。
【００７０】
ＩＬ-１０プライマー  
ＣＴＡＣＧＧＣＧＣＴＧＴＣＡＴＣＧＡＴ  
ＴＧＧＡＧＣＴＴＡＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＴＣＴＴＣＡ  
ＩＬ-１０プローブ
ＣＴＴＣＣＣＴＧＴＧＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣ  
ＢＡＸプライマー
ＣＡＴＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＧＧＡＴＧＡ
ＣＴＧＣＣＡＣＴＣＧＧＡＡＡＡＡＧＡＣＣＴ  
Ｂａｘプローブ
ＴＧＣＣＧＣＣＧＴＧＧＡＣＡＣＡＧＡＣＴＣＣ  
ＢＣＬ２プライマー
ＣＣＧＧＧＡＧＧＣＧＡＣＣＧＴＡＧＴ  
ＧＧＧＣＴＧＣＧＣＡＣＣＣＴＴＴＣ  
ＢＣＬ２プローブ
ＣＧＣＣＧＣＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡ  
ＣＤ８０プライマー
ＴＣＣＡＣＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＡＧＴＧ
ＣＣＡＧＣＴＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＡＡＣＡＴＴＧＴ
ＣＤ８０プローブ
ＡＡＧＡＡＧＴＧＧＣＡＡＣＧＣＴＧＴＣＣＴＧＴＧＧ  
ＣＤ８６プライマー
ＣＡＧＡＣＣＴＧＣＣＡＴＧＣＣＡＡＴＴ  
ＴＴＣＣＴＧＧＴＣＣＴＧＣＣＡＡＡＡＴＡＣＴＡ  
ＣＤ８６プローブ
ＣＡＡＡＣＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＡＡＡＧＣＣＴＧＡＧＴＧＡＧＣ  
【００７１】
ＣＯＸ-１プライマー
ＴＧＴＴＣＧＧＴＧＴＣＣＡＧＴＴＣＣＡＡＴＡ  
ＡＣＣＴＴＧＡＡＧＧＡＧＴＣＡＧＧＣＡＴＧＡＧ
ＣＯＸ-１プローブ
ＣＧＣＡＡＣＣＧＣＡＴＴＧＣＣＡＴＧＧＡＧＴ  
ＣＯＸ-２プライマー
ＧＴＧＴＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＣＡＣＡＴＴＴＧＡ  
ＧＡＧＡＡＧＧＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＴＧＴＡ  
ＣＯＸ-２プローブ
ＴＧＡＣＡＧＴＣＣＡＣＣＡＡＣＴＴＡＣＡＡＴＧＣＴＧＡＣＴＡＴＧＧ  
ＥＰ２プライマー
ＧＡＣ  ＣＧＣ  ＴＴＡ  ＣＣＴ  ＧＣＡ  ＧＣＴ  ＧＴＡ  Ｃ  
ＴＧＡ  ＡＧＴ  ＴＧＣ  ＡＧＧ  ＣＧＡ  ＧＣＡ  
ＥＰ２プローブ
ＣＣＡ  ＣＣＣ  ＴＧＣ  ＴＧＣ  ＴＧＣ  ＴＴＣ  ＴＣＡ  ＴＴＧ  ＴＣＴ  
ＥＰ４プライマー
ＡＣＧＣＣＧＣＣＴＡＣＴＣＣＴＡＣＡＴＧ  
ＡＧＡＧＧＡＣＧＧＴＧＧＣＧＡＧＡＡＴ  
ＥＰ４プローブ
ＡＣＧ  ＣＧＧ  ＧＣＴ  ＴＣＡ  ＧＣＴ  ＣＣＴ  ＴＣＣ  Ｔ  
ＰＤＥ４ｂプライマー
ＣＣＴＴＣＡＧＴＡＧＣＡＣＣＧＧＡＡＴＣＡ  
ＣＡＡＡＣＡＡＡＣＡＣＡＣＡＧＧＣＡＴＧＴＡＧＴＴ  
ＰＤＥ４ｂプローブ
ＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧＣＴＣＣＡＧＣＣ  
【００７２】
グラヌリシンプライマー
ＣＡＧＧＧＴＧＴＧＡＡＡＧＧＣＡＴＣＴＣＡ  
ＧＧＡＧＣＡＴＧＧＣＴＧＣＡＡＧＧＡ  
グラヌリシンプローブ
ＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣ  
ＣＤ  １４プライマー
ＧＣＧＣＴＣＣＧＡＧＡＴＧＣＡＴＧＴ  
ＡＧＣＣＣＡＧＣＧＡＡＣＧＡＣＡＧＡ  
ＣＤ  １４プローブ
ＴＣＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＡＡＣＴＣＣＣＴＣＡ  
Ｅ合成酵素プライマー
ＣＧＧＡＧＧＣＣＣＣＣＡＧＴＡＴＴＧ  
ＧＧＧＴＡＧＡＴＧＧＴＣＴＣＣＡＴＧＴＣＧＴＴ  
Ｅ合成酵素プローブ
ＣＧＡＣＣＣＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＣＧＣＴ  
ＩＲＡＫＭプライマー
ＣＣＴ  ＧＣＣ  ＣＴＣ  ＧＧＡ  ＡＴＴ  ＴＣＴ  ＣＴ
ＣＴＴ  ＴＧＣ  ＣＣＧ  ＣＧＴ  ＴＧＣ  Ａ  
ＩＲＡＫＭプローブ
ＣＡＣ  ＡＣＣ  ＧＧＣ  ＣＴＧ  ＣＣＡ  ＡＡＣ  ＡＧＡ  Ａ  
ＣＩＩＴＡプライマー
ＧＣＴＧＴＴＧＴＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡＡＧＧＴ  
ＲＴＧＧＧＡＧＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＣＡＴＡＣＴＧ  
ＣＩＩＴＡプローブ
ＣＣＧＣＧＡＴＡＴＴＧＧＣＡＴＡＡＧＣＣＴＣＣＣＴ  
ＣｌａｓｓＩＩプライマー
ＡＧＣＣＣＡＡＣＧＴＣＣＴＣＡＴＣＴＧＴ
ＴＣＧＡＡＧＣＣＡＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡ  
ＣｌａｓｓＩＩプローブ
ＴＣＡＴＣＧＡＣＡＡＧＴＴＣＡＣＣＣＣＡＣＣＡＧＴＧ
【００７３】
Ｔａｑｍａｎ７７００機にてプローブにＦＡＭ／ＴＡＭＲＡ色素を用いて鋳型を４０サイクル増幅した。Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓキットを用いて増幅し、リボゾーム(１８Ｓ)ＲＮＡをコントロールとして検出した。４０サイクル後、ＦＡＭと１８Ｓ(ＶＩＣ)を表すＣｔ(サイクル数に関連して信号が見られる)を記録し、式２−ΔΔＣｔを用いて確実な量を得る。
実験の結果は図２に示す。免疫系の細胞からのＩＬ-１０、ＣＤ-１４、ＣＤ８６、ＣＯＸ-２、及びグラヌリシンの放出に対してプロスタグランジン(ＰＧＥ２)とＧＭＣＳＦ間に相乗効果が見られる。
【００７４】
実施例２：ＩＬ-１０を誘導するためのプロスタグランジンＥ／ＧＭＣＳＦ相乗効果
実施例１に示すように細胞を培養したが、４時間後培地を除去し、細胞を洗浄し、単独培地にて更に４８時間培養する。実施例１に示すように細胞からＲＮＡを抽出した。
この実験の結果を図３に示す。ＩＬ-１０発現に対してプロスタグランジン(ＰＧＥ２)とＧＭＣＳＦ間に相乗効果が見られ、表現型が処理除去後４８時間維持されることを示す。
【００７５】
実施例３：ＰＧＥ及びＧＭＣＳＦに応答する際の単球からのＩＬ-１０放出
Ｕ９３７細胞を、１０％ウシ胎仔血清(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)を添加したＲＰＭＩ(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)培地中で生育した。５ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦを含む及び含まない１０−６モルのプロスタグランジンＥ２で、細胞を４時間処理した。処理を除去して、細胞を更に２０時間培養した。培地を除去し、対応したモノクローナル抗体対(Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ)又は市販のＥＬＩＳＡ(オックスフォード州、アビンドン、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍ社、カタログ番号Ｄ１０００)を用いてＩＬ-１０の分析を行った。図４はＰＧＥとＧＭＣＳＦに応答した単球から放出されるＩＬ-１０を示す。
サイクリックＡＭＰレベルを分析するために、細胞が生育しているウェルを０．０１Ｎ塩酸で処理して細胞内ｃＡＭＰを抽出する。この抽出物はｐＨ６に中和し、競合的酵素免疫測定法(オックスフォード州、アビンドン、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍ社、カタログ番号ＤＥ０４５０)にてサイクリックＡＭＰを分析する。
【００７６】
実施例４：ＩＬ-１０誘導の際の単球におけるｃＡＭＰレベルを上げる様々な薬剤の相対的効力
実験の詳細
Ｕ９３７(ヒト単球細胞系)細胞を、１０％ウシ胎仔血清(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)を添加したＲＰＭＩ(ＰＡＡ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社)培地中で生育した。５ｎｇ／ｍｌのＧＭＣＳＦを含む又は含まない１０−６モルのプロスタグランジンＥ２、１０−６モルのロリプラム、５０×１０−６モルのフォルスコリンで、細胞を４８時間処理した。細胞はペレット状にしてＴｒｉ試薬(英国、プール、Ｓｉｇｍａ社)を用いてｍＲＮＡを抽出した。全ＲＮＡはクロロホルムの添加に続くイソプロパノール沈殿によって得た。ＲＮＡは逆転写酵素(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社)とランダムヘキサマー(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社)で逆転写合成する。増幅とＩＬ-１０の検出のためのプローブとプライマーはＰｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ(Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ社)を用いて以下のように設定する。
ＩＬ-１０プライマー
ＣＴＡＣＧＧＣＧＣＴＧＴＣＡＴＣＧＡＴ  
ＴＧＧＡＧＣＴＴＡＴＴＡＡＡＧＧＣＡＴＴＣＴＴＣＡ  
ＩＬ-１０プローブ
ＣＴＴＣＣＣＴＧＴＧＡＡＡＡＣＡＡＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣ
図６を参照。
【００７７】
実施例５：ＴＮＦαと比較してＩＬ-１０を誘導する際の単球におけるｃＡＭＰレベルを上げる様々な薬剤の相対的効力
実施例４のとおりであるが、ＴＮＦαのｍＲＮＡをも含む。
ＰＭＡ(２×１０−７Ｍ)は選択的分化薬剤として用いた。ＩＬ-１０はＰＭＡ分化により増加するが、ＴＮＦα(前起炎性及び抗寛容性薬剤)も増加した。フォルスコリンとＧＭＣＳＦによる分化によりＴＮＦαを認められるほど上昇しなかった。データはＩＬ-１０ｍＲＮＡ／ＴＮＦαｍＲＮＡの割合で示す。Ｐはホルボールミリストイルアセテート（ＰＭＡ）、Ｆはフォルスコリン（Ｆｓｋ）、ｇはＧＭＣＳＦ、Ｃは溶媒コントロール。
ＴＮＦαプライマー
ＧＧＡＧＡＡＧＧＧＴＧＡＣＣＧＡＣＴＣＡ  
ＴＧＣＣＣＡＧＡＣＴＣＧＧＣＡＡＡＧ  
ＴＮＦαプローブ
ＣＧＣＴＧＡＧＡＴＣＡＡＴＣＧＧＣＣＣＧＡＣＴＡ 
図７を参照。
【００７８】
実施例６：グラヌリシンを誘導する際の単球におけるｃＡＭＰレベルを上げる様々な薬剤の相対的効力
実施例４に示すとおりであるが、グラヌリシンのｍＲＮＡを実施例１に記載したプライマーを用いて測定した(図８を参照)。
ＧはＧＭＣＳＦ、ＦＳＫはフォルスコリン。
【００７９】
実施例７：ＩＬ-１０を誘導するためのプロスタグランジンＥ／ＧＭＣＳＦ／プロベネシド相乗効果
細胞は実施例１に示すように培養し、２０時間後に培地を除去して、洗浄し、実施例１に示すように細胞からＲＮＡを抽出した。
この実験の結果を図９に示す。ＩＬ-１０の発現に対して、プロスタグランジン(ＰＧＥ２)及びＧＭＣＳＦ及びプロベネシド間に相乗効果が見られる。
ＥはＰＧＥ２。
【００８０】
実施例８：脱髄疾患の治療
脱髄疾患患者に、２００μｇのミエリンとともに、１日当たり８００μｇのミソプロストールを経口的に、及び２５０μｇ／ｍ２のロイキン(登録商標)を静脈注射で、投与する。
【００８１】
実施例９：関節リウマチの治療
関節リウマチ患者に、２００μｇのＩＩ型コラーゲンとともに、１日当たり８００μｇのミソプロストールを経口的に、及び２５０μｇ／ｍ２のロイキン(登録商標)を皮下注射で、投与する。
【００８２】
実施例１０
関節リウマチ患者に、１日に２回坐薬として、２００μｇのコラーゲンＩＩ型、１００μｇのフォルスコリン、及び１００μｇのロイキンを投与する。
【００８３】
実施例１１
関節リウマチ患者に、１日に２回坐薬として、２００μｇのコラーゲンＩＩ型、１００μｇのＰＧＥ、４ｍｇのプロベネシド、及び１００μｇのロイキンを投与する。
【００８４】
実施例１２
関節リウマチ患者に、１日に２回坐薬として、２００μｇのコラーゲンＩＩ型、１０μｇのコレラ毒素、及び１００μｇのロイキンを投与する。
【００８５】
実施例１３
関節リウマチ患者に、１日に２回坐薬として、２００μｇのコラーゲンＩＩ型、１００μｇの８-ｂｒｃＡＭＰ、及び１００μｇのロイキン(登録商標)を投与する。
【００８６】
実施例１４
多発性硬化症の女性患者に、１ｍｇのミエリン、５００μｇのロリプラム、１００μｇのＰＧＥ２、４ｍｇのプロベネシド、及び１００μｇのロイキンのゲル懸濁液を経膣的に投与する。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿０００７５８より得たヒトＧＭＣＳＦのｃＤＮＡ及びアミノ酸配列(それぞれ、図１Ａ及び１Ｂ)。
【図２】Ｕ９３７細胞における遺伝子発現へのＰＧＥとＧＭＣＳＦの影響を示すグラフである。細胞はペレット状にしてＲＮＡを抽出する前に、４時間、ＧＭＣＳＦを含む又は含まないでＰＧＥ２を処理し、洗浄して処理を除去し、更に２０時間培養する。ＣＤ１４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＢＣＬ-２、ＢＡＸ，  ＣＯＸ-１（シクロオイゲナーゼ１）、ＣＯＸ-２、ＰＧＥＳ（プロスタグランジンシンターゼ）、ＥＰ２（あるプロスタグランジン受容体）、ＥＰ４（あるプロスタグランジン受容体）、ＰＤＥ４Ｂ（あるホスホジエステラーゼ）、ＩＲＡＫ-ＩＶ、ＣＩＩＴＡ（ＭＨＣクラスＩＩトランス活性化因子）、MＨＣ-ＩＩ、ＩＬ-１０、及びグラヌリシン（グランリンに省略）のｍＲＮＡレベルを測定した。グラフはＧＭＣＳＦ及びＰＧＥ２存在下での発現レベルの割合の変化を示す。
【図３】処置を除去した後４８時間表現型を維持するＵ９３７細胞におけるＩＬ-１０のｍＲＮＡ生産へのＰＧＥ及びＧＭＣＳＦの相乗的効果を示す。細胞はグラフの下に表示した薬剤で４時間処理し、洗浄して処理を除去し、ペレット状にしてＲＮＡを抽出する前に更に４８時間培養する。PGE2、E2、及びEはすべてプロスタグランジンE2を表し、ＧＭはＧＭＣＳＦ、及びＭはＭＣＳＦを表す。
【図４】処置を除去した後表現型を維持するＵ９３７細胞におけるＩＬ-１０のタンパク質放出へのＰＧＥ及びＧＭＣＳＦの相乗的効果を示す。細胞はグラフの下に表示した薬剤で４時間処理し、洗浄して処理を除去し、培地をＩＬ-１０の測定をする前に更に２０時間培養する。ＰＧＥはすべてプロスタグランジンＥ２を表し、ＧＭはＧＭＣＳＦを表す。
【図５】細胞内ｃＡＭＰを制御する薬剤を図示する。白抜き矢印は細胞内ｃＡＭＰレベルを有効に下げている。実線矢印は刺激している。併用は相乗効果を意図する。
【図６】ＩＬ-１０発現誘発における様々な薬剤の相対的効力を示す。詳細は実施例４を参照。
【図７】ＩＬ-１０発現誘発における様々な薬剤の相対的効力を、ＴＮＦαｍＲＮＡ発現に対するＩＬ-１０の割合として表す。詳細は実施例５を参照。
【図８】グラヌリシンｍＲＮＡ発現誘導における様々な薬剤と薬剤の混合の相対的効力を示す。詳細は実施例６を参照。
【図９】ＩＬ-１０発現におけるプロスタグランジン（ＰＧＥ２）とＧＭＣＳＦとプロベネシド間の相乗的効果を示す。
【００８８】
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【図１】
2006508936.tif 000002
【図２】
2006508936.tif 000003
【図３】
2006508936.tif 000004
【図４】
2006508936.tif 000005
【図５】
2006508936.tif 000006
【図６】
2006508936.tif 000007
【図７】
2006508936.tif 000008
【図８】
2006508936.tif 000009
【図９】
2006508936.tif 000010
【国際調査報告】
2006508936.tif 000011
2006508936.tif 000012
2006508936.tif 000013
2006508936.tif 000014
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