(57)【要約】心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントのような、血管を拡張するためのデバイスが開示されている。該デバイスは、一定量のタンパクチロシンキナーゼインヒビターを、その上に被覆させるか、その中に含浸させるか、それに吸着させるか、あるいは共有結合的にまたはイオン的に結合させた。タンパクチロシンキナーゼインヒビターは、該デバイスの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を抑制するが、同時に、血管の内膜細胞の増殖は抑制しない。対応する、血管を拡張するデバイスを使用する方法もまた、開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管を拡張するためのデバイスであって、前記デバイスは、ある量のタンパクチロシンキナーゼインヒビターをその上に被覆させるか、その中に含浸させるか、それに吸着させるか、あるいはそれに共有結合的にまたはイオン的に結合させた心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントを含み、前記量が心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分であって、同時に、血管内膜細胞の増殖を抑制しないことを特徴とする、デバイス。
【請求項２】
心血管ステントを含む請求項１のデバイス。
【請求項３】
自家静脈／動脈グラフトを含む請求項１のデバイス。
【請求項４】
補綴静脈／動脈グラフトを含む請求項１のデバイス。
【請求項５】
血管カテーテルを含む請求項１のデバイス。
【請求項６】
血管シャントを含む請求項１のデバイス。
【請求項７】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターが血小板由来の増殖因子インヒビターである請求項１のデバイス。
【請求項８】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターがＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼインヒビターでもある請求項７のデバイス。
【請求項９】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターがＳＴＩ−５７１である請求項１のデバイス。
【請求項１０】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターが４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な塩であり、その量が、心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分な量である、請求項１のデバイス。
【請求項１１】
血管を拡張するデバイスであって、前記デバイスが４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な好適塩を、その上に被覆させるか、その中に含浸させるか、それに吸着させるか、またはそれに共有結合的にもしくはイオン的に結合させた心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントを含み、その量が、心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分な量である、デバイス。
【請求項１２】
心血管ステントを含む請求項１１のデバイス。
【請求項１３】
自家静脈／動脈グラフトを含む請求項１１のデバイス。
【請求項１４】
補綴静脈／動脈グラフトを含む請求項１１のデバイス。
【請求項１５】
血管のカテーテルを含む請求項１１のデバイス。
【請求項１６】
血管シャントを含む請求項１１のデバイス。
【請求項１７】
血管内インターベンションに続く再狭窄を防ぐ方法であって、前記方法が、血管内インターベンションに使用される心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントに一定量のタンパクチロシンキナーゼインヒビターを被覆させること、吸着させること、または共有結合的にまたはイオン結合的に結合させることを含み、その量が、心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分であって、同時に、血管内膜細胞の増殖を抑制しない量である、方法。
【請求項１８】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントが血小板由来増殖因子インヒビターで被覆されている、請求項１７の方法。
【請求項１９】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントがＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼインヒビターで被覆されている請求項１７の方法。
【請求項２０】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントがＳＴＩ−５７１で被覆されている請求項１７のデバイス。
【請求項２１】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントが４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な塩で被覆されている請求項１７のデバイス。
【請求項２２】
血管内インターベンションに続く再狭窄を防ぐ方法であって、該方法が、血管内インターベンションに使用される心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントに４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な塩を被覆させること、吸着させること、または共有結合的にまたはイオン的に結合させることを含み、前記量が、心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分であって、同時に、血管内膜細胞の増殖を抑制しない量である、方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願
本願は２００１年１０月２５日に出願された仮出願明細書シリアルナンバー第６０／３４３,７３２号の優先権を主張するものであり、その仮出願明細書を、引用により本明細書の一部とする。
【０００２】
発明の分野
本発明は、内皮細胞の増殖を抑制することなく、血管損傷または経皮的血管再生のような外科的治療に続く、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の増殖を選択的に抑制する方法に向けられている。特に、本発明は、内皮細胞の増殖に悪影響を与えることなく、ＶＳＭＣの増殖を選択的に防ぐために、血管ステント、自家（native）グラフトまたは補綴血管グラフト（prosthetic vascular graft）の上に被覆されたタンパクチロシンキナーゼインヒビター、望ましくはＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼを抑制するインヒビター、および最も望ましくは４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛４−（３−ピリミジニル｝アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドメタンスルホン酸エステルの使用に向けられている。
【０００３】
背景
動脈硬化は、血管の動脈壁の肥厚および硬化によって特徴づけられる病気の一部類である。全ての血管はこの重大な変性症状にかかりやすいが、心臓のために働いている大動脈および冠状動脈が最も多く冒される。動脈硬化は、それが心臓麻痺、心筋梗塞、発作および動脈瘤の危険性を増加させる可能性があるので、臨床に非常に重要である。
【０００４】
動脈硬化症の血管の伝統的な処置には、一般に、比較的重篤でない閉塞に対しては、血管の再疎通処置、そして重大な閉塞に対しては冠状血管バイパス手術が挙げられる。可能な場合には、はるかに非侵襲的であるという理由から、血管の再疎通よりも冠状動脈バイパス処置がはるかに好ましい。血管の再疎通処置は、たとえば経皮的経血管的冠動脈バルーン血管形成術（ＰＴＣＡ）（バルーン血管形成術としても知られている）を含む、血管を通して閉塞部位に装着される血管内デバイスを使用することを含む。バルーン血管形成術は、その先端に緊密に折りたたまれたバルーンの付いたカテーテルを使用する。該カテーテルが閉塞部にたどり着くと、バルーンはふくらまされ、アテローム硬化型プラークは血管壁に対して圧縮される。しかしながら、このおよび他の血管内処置の重大な欠点は、治療を受けたかなりの数の人において、治療された血管のいくつかまたは全てが再狭窄する（すなわち、血管が再び狭くなる）ということである。これは、一般的に比較的短期間（およそ処置後６ヵ月未満）のうちに起こる。再狭窄は、一部は、バルーンカテーテルまたは他の血管内デバイスによって起こされた血管の内壁への機械的外傷によると考えられる。
【０００５】
大部分の血管の内壁は、中央の管状開口部、すなわち血管内腔を囲む３つの異なった層または膜を含む。血管内腔を内張する最内層は、内膜と呼ばれる。中間層、すなわち中膜は、大部分は円形に配置された平滑筋細胞および結合組織線維を含む。無傷の血管では、平滑筋細胞は一般的に活動区分を示さない。血管壁の最外層、すなわち外膜は、主に内部の層を保護し、血管に構造上の保全性を与えるコラーゲン繊維を含む。内膜への損傷を結果する機械的外傷は、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）のような化学物質の放出を含む、イベントのカスケード（a cascade of events）を開始する。このカスケードは、外傷の部位での血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の移動および増殖を促す。外傷部位でのＶＳＭＣの蓄積は、血管内腔の直径を狭くし、それによって再び患者を心臓麻痺、脳卒中などを起こす危険にさらす。
【０００６】
血管内デバイスの使用に続く平滑筋細胞の増殖を抑制するいくつかの方法が特許文献に報告されている。これらは、細胞周期インヒビターのような抗増殖剤および抗血液凝固剤（局所的または全身的送達システムのいずれかによる）を投与することを含む。しかし、これらの薬剤の全身的送達は、受け入れがたい副作用を引き起こすか、または法外に高価になるような投与量を必要として来た。米国特許第４,８２４,４３６号に記載されている薬剤、たとえばヘパリンの局所的送達は、一部は外傷の部位での活性薬剤の不適当な滞流時間によって、再狭窄を抑制するのに効果がないと判明した。タキソールのような細胞周期インヒビターは、共有結合的に反応しない、したがって効果を出すために長い滞流時間を必要とするので、類似した問題をきたす。さらに、そのような処置の効果を増すために滞流時間を長くすることもまた、毒性を増大させる危険性をもたらしかねない。
【０００７】
ＶＳＭＣ増殖を抑制すると報告された他の方法は、徐放性製剤に含まれる活性薬剤の局所的送達を含む。たとえば、米国特許第５,１７１,２１７号は、生理学的に適合する生分解性ポリマーの微小粒子内に包含された薬剤を記載している。この剤形は、薬剤が７２時間以上の間、動脈壁から放出されるように、外傷の部位に局所的に投与される。対照的に、米国特許第６,２８１,２２５号は、ＶＳＭＣ増殖を抑制するＤＮＡアルキル化剤の、局所的であるが、非徐放性の投与を記載している。
【０００８】
平滑筋細胞増殖を抑制する別の方法は、局所的送達システムによって光化学的に活性化された薬剤を投与することを含む。たとえば、米国特許第５,３５４,７７４号は、外傷の部位に局所的に８−メトキシソラレンを投与し、ついで可視光源を使用して光力学反応を起こさせることを記載している。
【０００９】
ＶＳＭＣの増殖を抑制するさらにもう一つのアプローチは、放射線を出すカテーテルまたはガイドワイヤーの使用である。これらの放射性デバイスは、核酸に損傷を引き起こして、複製を抑制し、それによって平滑筋細胞増殖を阻止する。
【００１０】
上記の方法の全ては、ある種の欠点を持っている。たとえば、徐放性製剤は、付加レベルの複雑度、すなわち、徐放性製剤またはその中に薬剤を導入することを必要とする。光力学的治療は、光活性剤の局所的送達および複雑な血管内光源の使用を必要とする。放射線量の送達は、放射線科医の存在を必要とし、付添い人への曝露障害、ならびに物質貯蔵、取扱いおよび廃棄の問題をもたらす。
【００１１】
現在市場にある、または臨床試験に用いられている処理された冠動脈ステントは、また、それらが内皮細胞の増殖を抑制するという明白な欠点を有する。これは、配置されたステントの近傍での血栓症の原因となる。タキソールまたはラパマイシンのいずれかで被覆されたステントを使用した場合、ヒトの臨床試験で血栓症が確認された。そのような血栓症を防ぐために、臨床患者は、２、３ヵ月の継続的な抗凝血処置を受けなければならなかった。
【００１２】
したがって、内皮細胞の増殖を抑制することなく、血管の再疎通処置または他の血管損傷に続く、外傷の部位でのＶＳＭＣ増殖を抑制するための安全で、簡単で、直接的な方法に対する必要性が存在する。理想的な解決策は、非放射性であって、医療行為者が実行するのにほとんどまたは全く再教育を必要としないものであるべきである。
【００１３】
細胞のシグナリングは、過去２０年以上にわたって生物学と医学における主要な研究テーマになっていた。シグナル伝達における複雑な経路およびタンパク質成分は、ゆっくりではあるが、明瞭さを増しつつ、分かり始めている。過去１５年にわたって、タンパクチロシンキナーゼは、細胞制御において主要な役割を果たすことが確認されてきた。それらは、免疫、内分泌、および神経システムの生理学と病理学に関与し、多くの癌、最も顕著には慢性骨髄性白血病の発病に重要であると考えられている。このように、それらは、多くの異なる病気に対する薬品標的として役立つ。多数のタンパクチロシンキナーゼが業界において知られている。添付した配列表は、数多くのそのようなキナーゼのアミノ酸配列の非排他的なサンプリング（non-exclusive sampling)を含む。
【００１４】
本明細書で使用される場合、タンパクチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）なる用語は、制限されることなく、酵素分類ＥＣ ２.１.７.１１２の範囲内の任意かつすべての酵素を意味する。ＰＴＫの種々の例に関しては、本明細書添付の配列表を参照のこと。これらの酵素は、ＡＴＰからタンパク基質のチロシンヒドロキシル部分への、γ−ホスホリル基の転移を触媒する。このグループのキナーゼは、セリン／トレオニンキナーゼ群とアミノ酸配列相同性を共有する。発見されるチロシンキナーゼの数は、指数関数的に大きくなっているが、それらの基質認識に関する分子詳細、触媒機構、および、分子内および分子間調節は、なお解明の途上である。
【００１５】
以下に詳しく記載するが、本発明者らは、ＰＴＫの作用を抑制することがＶＳＭＣの増殖を選択的に抑制することを発見した。
【００１６】
発明の詳細な記載
略号および定義：
以下の略号および定義を、明細書と請求項の全体を通して使用する。本明細書において特に定義されていない用語は、心血管の医学および生理学の分野内においてそれらの通常、かつ認められた意味を有する。
【００１７】
「ＢｒｄＵ」＝５−ブロモ−２'−デオキシウリジン三リン酸。
「ＤＭＥ」＝ダルベッコ修飾イーグル培地。
「ＦＢ」＝ウシ胎児血清。
「ＪＡＫ−２」＝ヤヌス活性化チロシンキナーゼ。
「ＭＡＰＫ」＝マイトジェン活性化プロテインキナーゼ。
「ＰＤＧＦ」＝血小板由来増殖因子。
「薬学的に好適な塩」＝遊離塩基または遊離酸のＰＴＫインヒビターに固有の有益な抑制効果が対イオンに起因する副作用によって損なわれないように、その対イオンが塩の薬学的投与において患者に無毒である、酸または塩基付加塩。多数の薬学的に好適な塩が医薬の分野で周知である。塩基である有効成分に関しては、特定の塩自体が、たとえば、塩が精製および同定の目的のためだけに形成される場合、またはそれがイオン交換処理によって薬学的に好適な塩を調製する際の中間物として使用される場合のような中間産物としてだけに望まれるとしても、全ての酸付加塩は遊離塩基体の供給源として有用である。薬学的に好適な酸付加塩は、限定はされないが、鉱酸および有機酸から誘導された塩を含み、明確にハロゲン化水素酸塩を含み、たとえば、塩化水素酸塩および臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、メチレン−ビス−ｂ−ヒドロキシナフト酸塩、ゲンチシン酸塩、イセチオン酸塩、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、キナ酸塩等である。同様に、酸である活性成分に対しては、薬学的に好適な塩基付加塩が使用される。塩基付加塩は、限定されないが、アルカリまたはアルカリ土類金属塩基から誘導された塩、またはたとえばトリエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン等のような通常の有機酸塩を含む。
【００１８】
「ＰＴＣＡ」＝経皮的経血管的冠動脈バルーン血管形成術。
「ＰＴＫ」＝タンパクチロシンキナーゼ、限定されないが、酵素分類ＥＣ ２.１.７.１１２の範囲内の任意かつすべての酵素として本明細書において明示的に定義される。
【００１９】
「ＰＴＫインヒビター」＝１個以上のタンパクチロシンキナーゼインヒビターの触媒活性を選択的に抑制する化合物または組成物。
【００２０】
「ＳＴＩ−５７１」＝４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミド、およびその薬学的に好適な塩。メタンスルホン酸塩が好ましい。この化合物は、「イマチニブ（imatinib）」という通称が与えられてきた。本明細書において使用されるように、「ＳＴＩ−５７１」は、遊離塩基またはその薬学的に好適な塩としてのイマチニブを指し、メシラート塩が好ましい。アメリカ合衆国では、それは、登録商標「Ｇｌｉｖｅｃ」（米国登録商標登録番号第２,４７８,１９６号）の下で、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＡＧ（スイス国バーゼル）によって市販されている、それは、また、商標「Ｇｌｉｖｅｃ」の下で世界中の他の場所でも販売されている。
【００２１】
「ＶＥＧＦ」＝血管内皮増殖因子。
「ＶＳＭＣ」＝血管平滑筋細胞。
【００２２】
概要：
たとえば、切除処置、バルーンカテーテルまたは血管ステントを含む、血管内デバイスによって動脈硬化を治療することは、血管内デバイスに関連した技術が進歩し続けているために、ますます普及しつつある。全世界において年間ベースで約百万件のバルーン血管形成術処置が単独で実行されている。しかし、これらの処置は重大な欠点を持っている。かなりの数の事例において、処置された血管は、６ヶ月の後処置によって再閉塞するか、または再狭窄し、それは患者がさらなる処置を受けることを必要とする。「再狭窄」は、血管内腔が、血管再疎通処置の直後の血管内腔の直径と比較して、直径において約５０％以上減少する段階を意味する。
【００２３】
再狭窄の病因はよくは分かっていない。それは、一つには、治療された血管の内壁の反跳によると思われている。さらに、動脈硬化のような病気を治療するために使用される血管再疎通処置が再疎通の部位で機械的外傷を引き起こすことがあると仮定される。いかなる特定の作用機構にも限定されることなく、一旦内膜破裂が血管で起こるならば、多くの事象が起こり始めると仮定され、その事象は、単核細胞の内膜の内皮下層への移動およびたとえば血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、マクロファージ由来の増殖因子（ＭＤＧＦ）および血管内皮細胞から派生した増殖因子（ＥＤＧＦ）を含む、マイトジェン性増殖因子の放出を含む。これらの化学物質、特にＰＤＧＦは、ＶＳＭＣ増殖を誘発することにおいて明らかに役割を果たしている。これは、順に、血管内腔内に蓄積する相当量の細胞間基質を生じ、それによってその直径を狭くする。
【００２４】
本発明の第一の実施態様は、したがって、血管損傷の部位のすぐ隣のまたは近傍の場所におけるＶＳＭＣの増殖を選択的に抑制する１種以上の化合物を塗布した、血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャント（本明細書において、まとめて「血管デバイス」と呼ぶ）に向けられている。具体的には、本発明は、ある量のタンパクチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）インヒビターを、その上に被覆させるか、その中に吸収させるか、その中に含浸させるか、またはそれに共有結合的もしくはイオン的に結合させた、血管デバイスを含む。その化合物は、特に、Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ、すなわち慢性骨髄性白血病で発見されたフィラデルフィア染色体異常によって作られた構成性異常チロシンキナーゼを抑制することが好ましい。本発明に用いられる好ましいＰＴＫインヒビターは、また、血小板由来増殖因子と幹細胞因子（ＳＣＦ）から成る群から選択される一種以上のＰＴＫおよびｃ−Ｋｉｔの活性を特異的にまたは非特異的に抑制するものである。血管デバイスと関連して使用されるＰＴＫの量は、血管デバイスの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域における血管平滑筋細胞の増殖を妨げるかまたは抑制するのに十分な量である。好ましい実施態様では、血管デバイスは、４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な塩（望ましくはメタンスルホン酸塩）で被覆される。
【００２５】
発明の第二の実施態様は、ＶＳＭＣの増殖を特異的に妨げるか抑制するための対応する方法に向けられている。ここで、該方法は、血管デバイスに、ある量のＰＴＫインヒビターを、被覆させること、吸収させること、含浸させること、または共有結合的にまたはイオン的に結合させることを含む。その量は、該デバイスが血管の内腔内に配置される時、血管デバイスの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域におけるＶＳＭＣの増殖を妨げるか抑制するのに十分な量である。好ましいＰＴＫインヒビターは、４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよびその薬学的に好適な塩である。
【００２６】
発明の第三の実施態様は、血管内インターベンション（vascular intervention）に続く血管の再狭窄を妨げるまたは抑制する全身的方法に向けられる。該方法は、かなりの量のＰＴＫインヒビターを全身的に（望ましくは経口で）投与することを含み、その量は、血管内インターベンションが行われた領域の直ぐ隣のまたは／および近傍の血管の中の部位におけるＰＴＫインヒビターの増殖を妨げるか抑制するのに十分である。また、本発明のこの実施態様に用いられる好ましいＰＴＫインヒビターは、４−｛（４−メチル−１−ピペリジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはそれの薬学的に好適な塩である。
【００２７】
本発明において使用される化合物
ＰＴＫの作用を抑制する化合物で、現在知られている、または将来発見されるすべての化合物は、本発明において使用することができる。抗ＰＴＫ活性が文書に記録されていて、したがって本発明に使用することができる特定の化合物は、下記を含む（限定はされない）：ピリドピリミジン類、フタルイミド類、キノリン類、キナゾリン類、フラボノイド類、およびベンゾチアゾール類。
【００２８】
最も広範囲に研究されたＰＴＫインヒビターの中には、チロホスチン類およびキナゾリン誘導体がある。これらの化合物は、可能性のある抗癌剤として現在研究されている。たとえば、チロホスチン類およびキナゾリンは、（それぞれ）インビボで扁平上皮癌の成長を抑制するため、および発現するＨＥＲ２−ＥｒｂＢ２の上でのヒト癌細胞の成長を阻止するために、ＥＧＦＲに対する、およびシスプラチンのような確立された抗癌剤に対する抗体と相乗作用をすることが示された。チロホスチン類は、ベンジリデンマロニトリル構造に基づいている。この構造のわずかな置換は、ＥＧＦＲ、ＥｒＢ−２およびｖ−Ａｂｌを選択的にターゲットとする一組の強力なインヒビターを提供した。こうして、チロホスチン類は、血管の内腔へのＶＳＭＣ増殖を抑制するために、単独かまたは他のＰＴＫインヒビターとの組み合わせにおいて使用することができる。
【００２９】
キナゾリン群の化合物は、記載された他のどのようなチロシンキナーゼインヒビター（２９ｐＭのＩＣ５０をもつ）よりも３倍以上強力であると判明した初期のＥＧＦＲインヒビターである、臭素化キナゾリン誘導体を含む。さらに、それは、マイクロモル濃度においてでさえ、ＰＤＧＦＲ、ＦＧＦＲ、インシュリン受容体、ＣＳＦレセプターおよびＳｒｃに対してあまり親和性を持たない。この並外れた阻害力と特異性のため、キナゾリン誘導体は、抗癌剤としてキナーゼインヒビターを開発することを目的とする研究の主な焦点である。したがって、これらの化合物もまた、本発明において、単独でまたは他のＰＴＫインヒビターと組み合わせて使用することができる。
【００３０】
ＰＴＫ抑制性化合物のもう一つのグループ、ジアニリノフタルイミド類は、天然物のＰＴＫインヒビター、スタウロスポリンアグリコン（補足Ｃ参照）から合理的に設計された。これらの化合物は、ＡＴＰの競合阻害剤であることが示され、現在までに、２５０種以上のジアニリノフタルイミド誘導体が合成され、それらの生物学的活性度に関して評価されてきた。誘導体ＣＧＰ５２１１は、ＥＧＦＲ（ＩＣ５０＝３ｍＭ）に対してかなり大きな特異性を示したが、ＰＫＣに対する若干の阻害力をも示す。この知見がＣＧＰ５３３５３誘導体のデザインへと導いた。それはＰＫＣアイソザイムに対して比較的低い特異性を示した。したがって、ジアニリノフタルイミド類もまた、本発明においてＰＴＫインヒビターとして使用することができる。
【００３１】
多数の他の化合物がＰＴＫインヒビターであると知られている。これらの化合物は、その全てが本発明で使用されうるのであるが、ブリオスタチン類、デフェンシン類、ゲニステイン、Ｈ８、ハービマイシンＡ、チロホスチン類、Ｋ−２５２ａ、ラベンダスチンＡ、ホルボールエステル類、スタウロスポリン類およびスラミンを含む。
【００３２】
本発明に用いられる好ましいＰＴＫインヒビターは、４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよびその薬学的に好適な塩（望ましくはメシル塩）である：
【００３３】
【化１】
2006519623.tif 000002
【００３４】
この化合物は、最初ＳＴＩ−５７１と呼ばれたが、アメリカ合衆国では商標「Ｇｌｉｖｅｃ」の下でＮｏｖａｒｔｉｓによって市販されている。それは、慢性骨髄性白血病の治療用にアメリカ食品医薬品局によって承認されている。英国特許第０５６４４０９Ａ号および国際特許ＷＯ第９９／０３８５４号を参照のこと。
【００３５】
投与様式
本発明の１つの実施態様は、１つまたは複数のＰＴＫインヒビターを全身的に投与することによって、血管損傷または血管干渉に続く血管の再狭窄を防ぐ方法である。好ましい経路は、経口である。ＰＴＫインヒビターはまた、静脈内、動脈内、筋内、経皮的、腸管外、または直腸に投与することができる。
【００３６】
具体的には、全身的または局所的投与は、許容される担体と組み合わせた、かつ、任意に他の治療上活性な成分または不活性の補助的成分と組み合わせた、活性化合物、すなわちＰＴＫインヒビターまたはそれの薬学的に許容される塩からなる薬剤組成物により達成される。該担体は、製剤の他の成分と適合することおよびレシピエントに有害でないことという意味において薬学的に許容できるものでなければならない。適当な薬剤組成物は、経口的、局所的（すなわち管腔内的）、経直腸的または腸管外（皮下、筋肉内および静脈内を含む）投与に適した組成物を含む。
【００３７】
該製剤は、単位投薬剤形で便利に提供することができ、製剤技術において周知の方法によって調製することができる。「単位投薬量（unit dosageまたはunit dose）」という用語は、示された機能または状態を治療するために有効であるのに十分な有効成分の所定量を意味する表現である。薬剤組成物の各タイプを作成することは、活性化合物を担体および１つ以上の任意の補助成分との集合へともたらす段階を含む。一般に、該製剤は、活性化合物を一様かつ緊密な状態で液体担体または固体担体との集合へもたらすこと、ついで、必要ならば、その薬物を望ましい単位投薬剤形に形成することによって調製される。
【００３８】
本発明の内服に好適な製剤は、カプセル、カシェ剤、錠剤、ボラス剤またはトローチ剤のような個別の単位として提供され、各単位は、粉末または顆粒として、または、たとえば水溶液、懸濁液、シロップ、エリキシル、エマルション、分散液等々のような液体状態での所定量の活性化合物を含む。
【００３９】
錠剤は、所望により１またはそれ以上の補助成分とともに、圧縮または成形によって作成される。圧縮錠剤は、自由に流れる形態（free-flowing form）、たとえば粉末または顆粒を、所望により補助成分（たとえば結合剤、潤滑剤、不活性の希釈剤、界面活性剤または分散剤）を混ぜ合わせて、好適な装置で圧縮することによって調製される。成形錠は、粉末状の活性化合物となんらかの適当な担体との混合物を適当な装置で成形することによって作成される。
【００４０】
非経口投与に適した製剤は、簡便には活性化合物の、望ましくは、レシピエントの血液と等張にある、たとえば注射用水、塩類溶液、ポリエチレングリコール溶液などに溶かした滅菌製剤を含む。
【００４１】
有用な製剤はまた、ＰＴＫ抑制化合物（これは適当な溶媒での希釈で、非経口投与に適した溶液を与える）を含む濃縮溶液または固体を含む。
【００４２】
局所的または局部的適用のための製剤は、エアロゾル噴霧剤、ローション、ゲル、軟膏、坐薬など、および水、食塩水、低脂肪族アルコール類、グリセリンなどのポリグリセリン類、ポリエチレングリセリン、脂肪酸エステル、油脂、シリコーンおよび、他の通常の局所的担体を含む。局所的製剤においては、ＰＴＫインヒビターは、望ましくは、約０.１〜５.０重量％の濃度で使用される。
【００４３】
直腸内投与に適した組成物は、望ましくは弾丸形で、有効成分、およびそのための薬学的に許容される賦形剤、たとえば固い脂肪、水素化ココ−グリセリド、ポリエチレングリコールなどを含む坐薬を含む。坐薬製剤においては、ＰＴＫインヒビターは、望ましくは、約０.１〜１０重量％の濃度で使用される。
【００４４】
直腸内投与に適した組成物はまた、有効成分およびそのための薬学上許容できる賦形剤、たとえば、直腸または大腸に生理的に適合する５０％エタノール水または食塩水を含むこともできる。直腸浣腸ユニットは、望ましくは、ポリエチレンから成り、白色ワセリンのような潤滑剤で滑らかにされ、そして望ましくは、製剤化された製剤のもどりを防ぐために一方向のバルブによって保護されている、かつ肛門を通して結腸に装入されるのに十分な長さ、望ましくは２インチの、不活性のカバーで保護されているアプリケータチップを含む。直腸用製剤では、ＰＴＫインヒビターは、望ましくは約５.０〜１０重量％の濃度で使用される。
【００４５】
有用な製剤はまた、有効成分を含む濃縮溶液または固体から成り、それは適当な溶媒、望ましくは食塩水による希釈で、直腸への投与に適した溶液を与える。直腸用組成物は、通常のアジュバント、たとえば緩衝液、静菌剤、糖、増粘剤などを含むことが可能な水性製剤および非水製剤を含む。組成物は、直腸用一回量容器または多重投与量容器、たとえば直腸浣腸ユニットで提供される。
【００４６】
血管の処置をその内腔の中でするための局所的または局部的外科適用のための調製物は、そのような目的に適したスワブまたはカテーテルを含む。局所的または局部的両方の外科適用においては、ＰＴＫインヒビターの滅菌製剤は、医療材料に塗布して、望ましくは約０.１〜５.０重量％の濃度で使用される。
【００４７】
吸入による投与に適した組成物は、有効成分が約５ミクロンまたはそれ以下ないし約５００ミクロンの範囲にある粒子径をもつ超微粉化粉末に混合した固体または液体である製剤、または適当な希釈剤中の液体製剤を含む。これらの製剤は、吸入器、計量吸入器、噴霧器などのような通常の送達システムから口腔経路を通っての急速吸入用に設計されている。適当な液状鼻腔用組成物は、有効成分（複数）の水溶液の、通常の鼻内噴霧剤、点鼻剤等々を含む。
【００４８】
前記の成分に加えて、本発明の製剤は、さらに薬剤製剤の技術で利用される１個以上の補助成分、すなわち希釈液、緩衝液、香料、着色剤、結合剤、表面活性剤、増粘剤、潤滑剤、沈澱防止剤、防腐剤（抗酸化剤を含む）等々を含むことができる。
【００４９】
ＶＳＭＣ増殖を抑制するのに有効であるために要求されるＰＴＫインヒビターの量は、もちろん、治療される個々の哺乳動物で異なるし、最終的には医師または獣医師の判断にまかされる。考慮すべき因子は、治療される病状、投与の経路、製剤の性質、哺乳類の体重、表面積、年齢および全身状態、ならびに投与される特定のＰＴＫインヒビターを含む。一般に、適当な有効量は、選択されたＰＴＫインヒビターの、約０.０１〜約５００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲にある。全１日量は、１回投与量として、多重投与として（たとえば１日当り２〜６回）、または選択された持続期間の静脈内注入として、与えることができる。上述の範囲の上かまたは下の投与量は、本発明の範囲内にあり、望まれてかつ必要ならば、個々の患者に投与される。
【００５０】
ＰＴＫインヒビターは、予防的に（好ましい実施態様では、手術直後に）、慢性的に、または、急性的に投与することができる。
【００５１】
具体的に好ましい実施態様に取り組んで、Ｎｏｖａｒｔｉｓは、ＳＴＩ−５７１の遊離塩基体１００ｍｇの相当物を提供するカプセルでＳＴＩ−５７１を販売している。経口（好ましい経路）により投与される場合、本発明に用いられるＳＴＩ−５７１の好ましい量は、毎日１００〜８００ｍｇの範囲であり、１〜４回の同一投与量で服用される。１,２００ｍｇ／ｍ２／日までのかなり大量の投与量もまた、与えられることがある。１,２００ｍｇ／ｍ２／日以上の投与量は、勧められない。
【００５２】
本発明の方法は、ＰＴＫ活性を抑制する能力を持つ化合物の外傷部位への局所的送達による投与を含む。本発明に用いられる局所的送達システムの非制限的実施例は、血管内用薬物送達カテーテル、針金、薬理学的ステントおよび管腔内ペービング（endoluminal paving）を含む。
【００５３】
局所的送達を使用する好ましい実施態様において、本発明に用いられる化合物は、血管内のカテーテルを使用する直接的血管内付着によって、再疎通の部位に投与される。本発明に用いられるカテーテルシステムは、たとえば、圧送カテーテル、拡散カテーテルおよび機械的カテーテルを含む。本発明で使用することができる圧送カテーテルシステムは、多孔性カテーテル、微孔性カテーテル（たとえば、Cordis Corporationによって作られたもの）、マクロポーラスカテーテル、輸送カテーテル（たとえば、Cardiovascular Dynamics／Boston Scientificによって作られたもの）、溝のあるバルーンカテーテル（たとえばBoston Scientificによって作られたもの）、および注入スリーブカテーテル（たとえばLocalMedによって作られたもの）を含む。たとえば、米国特許第５,２７９,５６５号明細書参照。
【００５４】
ＰＴＫインヒビターはまた、たとえば、二重バルーン、急送、ヒドロゲル、被覆ステントカテーテルを含む、拡散に基づいたカテーテルシステムを通して局所的に投与することができる。本発明の方法はまた、イオン泳動バルーンカテーテルのような、機械的装置に基づいたカテーテルシステムによる、本発明の方法で使用される化合物の局所的投与を含む。
本発明に用いられる化合物は、再疎通処置に近い時点で、または、再疎通処置後の一時点で局所的送達によって投与されることがある。本発明に用いられる化合物は、単一用量で送達されるか、または反複用量で送達される。
【００５５】
本発明で使用されるＰＴＫ抑制性化合物を送達する能力は、実施例に記載するブタ冠状血管モデルを含む既知の動物モデルを用いて生体内で評価することができる。したがって、たとえば、本発明の方法で使用されるＰＴＫインヒビターは、ブタへの局所的送達によって血管損傷の部位に投与される。該ブタは屠殺され、ついで、たとえば蛍光顕微鏡法を含む既知の細胞学的、組織学的および他の方法によって調べられる。
【００５６】
本発明の方法に用いられるＰＴＫ抑制性化合物の送達のための最適条件は、使用する異なる局所的送達システム、ならびに使用する化合物の性質と濃度によって異なる可能性がある。再狭窄による顕著な動脈の閉塞を、たとえば、ＶＳＭＣの増殖の能力によってまたは血管抵抗性または内腔直径の変化によって測る場合、それが起こらないように、外傷の部位でのＶＳＭＣ増殖の抑制に対して状態を最適化することができる。最適化することのできる状態は、たとえば、化合物、送達量、送達速度、血管壁の浸透の深さ、近辺のインフレーション圧力、穿孔の量および大きさならびに薬物送達カテーテルバルーンの適合を含む。
【００５７】
投与の特に好ましい経路においては、血管ステント、補綴静脈／動脈グラフトまたは自家血管グラフトの上にＰＴＫ抑制性化合物を被覆させるか、または吸着させることができる。または、ＰＴＫインヒビターを、それらの中に含浸させる、または共有結合的にまたはイオン的にそれらに結合させることもできる。
【００５８】
ステント、グラフトまたは人工器官へのＰＴＫインヒビターの好ましい適用は、当業者に公知の通常の方法による。これらの方法は、目的物をＰＴＫインヒビターで浸すこと、浸み込ますこと、および塗布することを含むが、これに限定されるものではない。被着体の割れ目に被覆物を押し込むために圧力を使用する更なる被覆および含浸技術も考慮される。生物活性被膜の多重層が目的物に適用されることもある。何日、何週または何ヶ月にわたってのＰＴＫインヒビターの徐放を提供するために、ステント、グラフトまたは人工器官をまずポリマー被膜で被覆することが可能である。望ましくは、約１〜約１０層のＰＴＫ抑制性薬剤がステント、グラフトまたは補綴具の表面に適用される。
【００５９】
本発明によるデバイスおよび自家グラフト
前の段落に記載したように、ＰＴＫ抑制化合物を投与する１つの好ましい経路は、それをステント、自家グラフトまたは人工血管の上に付着させることである。本発明では、カテーテル、ステント、シート、管、バルーン等々を含む、あらゆるそのような血管の医療デバイスを使用することができる。ここで使用する「医療デバイス」という用語は、それが人工の、半人工の、または自家組織のグラフトまたは材料であれ、あらゆるそのような血管の医療デバイスを総称的に指す。
【００６０】
望ましくは、本発明の医療デバイスは、ＰＴＫ活性を抑制する化合物を少なくとも表面に被覆するために、処理され、被覆され、または別法で処理された血管グラフト、体内補綴物またはステントのような移植可能なデバイスである。本発明の目的に関しては、「血管グラフト」という用語は、カテーテルを通して一般に導入される全ての体内補綴物を含むことが意図されている。好ましい実施態様では、該医療デバイスはＳＴＩ−５７１で被覆されている。最小限に侵襲性であるカテーテルのような、他の医療デバイスもまた、被覆されることがある。血管グラフトは、内外の疎水性界面をもつ窪んだ管状体を含むことができ、その外面または両面は、ＰＴＫ抑制性化合物で被覆されている。
【００６１】
最も望ましくは、本発明のデバイスは、金属またはポリ（テトラフルオロエチレン）のようなポリマー物質から作られた小口径の血管ステントまたはグラフトである。これは、ポリマー物質から作られ、米国特許第６,３０６,１６５号明細書に記載されている四フッ化エチレン樹脂ステントのような別の物質で被覆されているステントを含む。
【００６２】
本件発明の好ましい医療デバイスである血管ステントは、血管形成処置の後、閉塞部分を開いたままに保持するために動脈に移植されるミニチュアメッシュ管である。処置された動脈の支持体として機能していて、ステントは、可撓性であるが極めて強く、カテーテルを通して（熟練した医師にとっては）一般に送達しやすく、かつフルオロスコープで容易に見ることができる。ステントは、該ステントを治療場所に送達し、ついで、閉塞が解かれたのち、該ステントを所定場所に膨張させるために使用されるバルーンカテーテルに予め備え付けられる。
【００６３】
現在知られているか、将来開発されるあらゆるステントは、本発明にしたがってＰＴＫインヒビターで被覆することができる。血管ステントの最大手の商業的供給会社は、おそらくＭｅｄｔｒｏｎｉｃ（７１０ メドトロニック・パークウェイ、ミネアポリス、ミネソタ州）である。Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃはまた、スイスのトロケナズ、カナダのオンタリオ、香港のコースウエイ・ベイ、およびオーストラリアのＮＳＷ、グレィズヴィルに設備を持っている。Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃのステント、カテーテル、バルーン、ガイドカテーテル、ガイドワイヤー等々の全ては、本発明で使用することができる。現在、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃは「Ｄｉｓｃｒｅｔｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、「Ｓ７」、「Ｓ６７０」、「Ｓ６６０」および「ＢｅＳｔｅｎｔ」という商標の下で非常に広い範囲のステントおよび他の血管用医療デバイスを市場に出している。
【００６４】
血管ステントは、米国に基盤を置いていないメーカーからも同様に入手可能である。たとえば、英国ファーナムのＢｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒは、「ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ」という商標の下で一連の心血管ステントを製造し、販売している。
【００６５】
ＰＴＫインヒビターを医療デバイス上に固着または被覆させることができるし、または、それを医療デバイスに共有結合的にまたはイオン的に結合させることができる。ＰＴＫインヒビターは、医療デバイスに直接結合させるか、またはスペーサー基またはリンカーを通して結合させることができる。共有結合的結合に関しては、ポリマーの医療デバイスまたはポリマー被覆の医療デバイスを使用すること、およびＰＴＫインヒビターは、１〜２５０個の原子の鎖長を持つスペーサー基またはリンカーを通して医療デバイスに共有結合的に結合させることが好ましい。たとえば、スペーサー基は、アルキル類、アルキルアミン類、酸素添加ポリオレフィン、脂肪族ポリエステル類、ポリアミノ酸、ポリアミン、親水性ポリシロキサン、親水性ポリシラザン、親水性アクリル酸塩、親水性メタクリル酸塩、線状および少し枝分かれした多糖類などを含むことができる。
【００６６】
本発明のさらにもう１つの実施態様では、血管の内層に触れると、その処置された表面が長期間にわたって抗ＶＳＭＣ増殖活性を示す、表面修飾された移植可能シート物質が提供される。この移植可能なシート物質は、それにＰＴＫ活性を抑制する化合物（好ましい化合物はＳＴＩ−５７１である）を付着したまたは結合した疎水性基質物質を含む。該シートを、血管の欠損および外傷を修復するための外科用メッシュのパッチまたは管にすることができる。
【実施例】
【００６７】
以下の実施例は、本明細書において特許請求する発明の、さらに詳細な開示を提供するためにのみ記載される。実施例は、いかなる形においても本発明を制限するものではない。
【００６８】
実施例１  血管の平滑筋細胞増殖
ブタ冠状血管ＶＳＭＣを、３〜５日間３７℃で１０％ＦＢＳを含むＤＭＥ培地の９６ウェルプレート中で近集密状態まで増殖させた。無血清ＤＭＥ培地での４８時間の同期化の後、ＳＴＩ−５７１（０.０１〜１０Ｍ）の存在下で、細胞を２４時間ＰＤＧＦ（２０ng／mＬ）で刺激した。その刺激期間の最後の５時間、ウェルにＢrdＵを添加した。その後、細胞を６０℃で２４時間乾燥させ、固定させ、変性させ、そしてＲｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販されている比色アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（カタログ番号Ｎo.１,６４７,２２９）を用いてメーカーのプロトコルにしたがって、ＢrdＵ取込みを定量した。Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓから入手可能な「細胞増殖ＥＬＩＳＡ、ＢｒｄＵ（比色測定）取扱い説明書」第３版（２０００年９月）参照。簡単に言えば、ＢｒｄＵ ＥＬＩＳＡは、細胞増殖の定量のための比色イムノアッセイである。それはＤＮＡ合成の間のＢrdＵ取込みの測定に基づく。比色測定アプローチは、相当する３Ｈ−チミジン取込みアッセイに対する非放射性代替法である。実施例４も参照のこと。
【００６９】
この実施例の結果を図１に図示する。ＳＴＩ−５７１の存在または不在（陽性対照）において、４８時間の血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ββ、２０ｎｇ／ｍｌ）による細胞の刺激の後に（実施例４に記載するのと同じやり方で）ＢｒｄＵの取込みによって、ＤＮＡ合成を測定した。各データ点は、５〜７個のウェルを代表し、平均値＋／−標準偏差として表す。
【００７０】
図から分かるように、ＳＴＩ−５７１の投与は、ＶＳＭＣの増殖を用量依存的に抑制した。この実施例は、ＶＳＭＣの増殖を抑制する本発明の効用を示す。
【００７１】
実施例２  血管内皮細胞増殖
ブタ大動脈血管内皮細胞を、３７℃で３〜５日間１０％ＦＢＳを含むＤＭＥ培地の９６ウェルプレート中で近集密状態まで増殖させた。無血清ＤＭＥ培地における４８時間の同期化の後、ＳＴＩ−５７１（０.０１〜１０Ｍ）の存在下で、細胞をＶＥＧＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。刺激期間の最後の５時間、ＢｒｄＵをウェルに添加した。その後、細胞を６０℃で２４時間乾燥し、固定し、変性した。そしてＢrdＵ取込みを、実施例１に記載したＲｏｃｈｅのＥＬ１ＳＡを使用して測定した。
【００７２】
本実施例の結果を図２に図示する。この図から分かるように、ＳＴＩ−５７１は、大動脈の血管内皮細胞の増殖に極めてわずかな抑制効果を示した。
【００７３】
実施例１の結果と結びつけると、この実施例は、大動脈の血管内皮細胞の増殖には感知可能な抑制効果を持っていないのに、ＶＳＭＣの増殖を選択的に抑制する本発明の効用を示す。
【００７４】
実施例３  ＳＴＩ−５７１の濃度増加によるヒト冠状動脈の血管平滑筋細胞の増殖の抑制
本実施例は、冠状動脈の血管平滑筋細胞が用量依存的にＳＴＩ−５７１によって抑制されることを示す。
【００７５】
凍結保存したヒト冠状動脈の血管平滑筋細胞（ＣＣ−２５８３）は、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ（現在はCambrex Bio Science Walkersvile, Inc（メリーランド州、ウォーカースヴィル）の完全所有子会社）から商業的に購入した。
【００７６】
１ｃｍ２当り２５００個の細胞という初期播種密度で、細胞を、傾斜ネック・濾過キャップの２５ｃｍ２培養フラスコで増殖させた。
【００７７】
湿らせた、３７℃、ＣＯ２５％のインキュベーターの中で、１０％ＰＢＳを追加した「ＳｍＧＭ−２」ブランドの平滑筋細胞増殖培地（Cambrex、メーカーから配達されたままで使用）で細胞を増殖させた。培地は、最初２４時間後に替え、ついでその後は４８時間ごとに替えた。細胞は、約８０％の集密度で通過させた（約４〜６日）。増殖アッセイは、２４ウェル培養プレートで行った。
【００７８】
培養５日目に、成長培地を試験培地（成長培地＋ＳＴＩ−５７１）、成長培地（陽性対照、培地＋ＦＢＳ）および無血清培地（陰性対照、添加ＰＢＳの全くない「ＳmＧＭ−２」ブランド培地）と交換した。
【００７９】
各状態（３個のウェル）を１本のミクロ遠心管に集めて、７日目に細胞をトリプシン化しながら、手動で細胞を数えた。該細胞を１.５gで１０分間遠心し、ついで６０μlトリプシン中和溶液中に再懸濁させた。ついで、血球計算板上で４回繰り返して該細胞を計数した。
【００８０】
結果を図３に示す。図では、細胞は、１０％ＦＢＳで４８時間刺激した後に計数した。各実験に対するデータは、ＰＢＳを含み、ＳＴＩ−５７１を含まない陽性対照に対し正規化した。各点は、８個の別個の実験からの１８〜２１ウェルを代表する。各データ点の中心は、ＳＴＩ−５７１の各濃度での平均値であり、エラーバー（error bar）は、各濃度レベルでの標準偏差である。
【００８１】
このグラフの意義は、ＳＴＩ−５７１が、用量依存的に、ヒト冠状動脈血管平滑筋細胞の増殖を抑制することをグラフが明確に示していることである。これらの細胞が再狭窄の原因となっているので、このグラフは、そのような再狭窄を抑制するための本発明の効果を示している。
【００８２】
実施例４  ＳＴＩ−５７１によるヒト冠状動脈における血管平滑筋細胞のＤＮＡ合成の抑制
本実施例は、ＳＴＩ−５７１がヒト冠状動脈の血管平滑筋細胞におけるＤＮＡ合成を抑制することを証明する。
【００８３】
実施例３に記載したのと同じ細胞を使用した。ＳＴＩ−５７１の、種々の試験濃度への暴露および培養条件もまた、実施例３と同じであった。
【００８４】
ＤＮＡ取込みは、市販のＢｒｄＵアッセイ（Roche Molecular Biochemicals、カタログ番号Ｎo.１,６４７,２２９）を使用して測定した。ＢｒＤｕ標識溶液を６日目に添加し、ついで、さらに２４時間（７日目の間中）細胞が増殖するままにした。ついで、標識溶液を除去し、細胞を６０℃で１時間乾燥させた。ついで、細胞を室温で１時間「ＦｉｘＤｅｎａｔ」固定液を使用して固定させた。ついで、固定液を除去し、抗ＢｒｄＵ抗体溶液を細胞に添加した。ついで、細胞を３７℃で２時間培養した。
【００８５】
ついで、抗体溶液を除去し、ウェルに基質を添加した。十分な発色現像が起こるまでプレートを室温で培養した。ウェルに１Ｍ−Ｈ２ＳＯ４を添加することによって反応を停止させた。ついで、４５０nm（対照、６９０ｎｍ）の吸光度を測定した。
【００８６】
結果を図４に示す。各データ点は、２つの独立した実験からの１４〜２８個のウェルを代表し、平均値＋／−標準偏差として表わす。この実施例の意味は、ＳＴＩ−５７１がヒト冠状動脈血管平滑筋細胞におけるＤＮＡ合成を抑制することを実施例が示しているということである。前の実施例におけるように、このことは注目に値する。なぜなら、これらのタイプの細胞はステントを入れた血管の再狭窄を引き起こすからである。そのような細胞の成長を抑制することによって、再狭窄が抑制されている。
【００８７】
実施例５  ＳＴＩ−５７１によるヒト冠状動脈における血管平滑筋細胞の移動の抑制
本実施例は、ＳＴＩ−５７１がヒト冠動脈の血管平滑筋細胞の移動に何らかの影響を及ぼすかどうかを決定するために行った。
【００８８】
実施例３に記載した細胞を使用した。初期の播種密度は、ＢＳＡ１％およびＰＤＧＦ−ββ２０ｎｇ／ｍｌの入った試験培地中でフィルタ（０.３ｃｍ２）当り４０００個の細胞であった。ついで、細胞を３７℃、ＣＯ２５％の湿った環境で２４時間培養した。ついで、フィルタの上面の細胞をかき取った。ついで、フィルタの底面の細胞を氷冷したメタノールで１０分間固定した。フィルタをＰＢＳですすぎ、ついでハリスのヘマトキシリン染色液で５分間着色し、再度ＰＢＳですすいだ。
【００８９】
ついで、高倍率（４００×）で手動により４回繰り返して細胞を計数した。
【００９０】
結果を図５に示す。データ棒は６個のメンブレンを代表し、データは対照メンブレン（ＳＴＩ−５７１なし）に対し正規化した平均値＋／−標準偏差として表す。
【００９１】
本実施例の意義は、ＳＴＩ−５７１がヒト冠動脈の血管平滑筋細胞の移動を用量依存的に抑制することをこれが示していることである。これらの細胞の移動がステントの配置後の再狭窄の主な要因であるので、この実施例は、本発明がこの移動を抑制する、したがって、再狭窄を抑制するために使用することができることを証明する。
【００９２】
実施例６  ヒト冠状動脈の内皮細胞の増殖に対するＳＴＩ−５７１の抑制効果の欠如
本実施例は、ヒト冠状動脈の内皮細胞の増殖がＳＴＩ−５７１によってはいかなる方式においても抑制されないことを証明する。
【００９３】
市販の凍結保存したヒト冠状動脈内皮細胞をＣｌｏｎｅｔｉｃｓ（現在は、Cambrex Bio Science Walkersvile, Inc.（メリーランド州ウォーカーズヴィル）の完全所有子会社）から購入した。
【００９４】
１ｃｍ２当り２５００個の細胞という初期播種密度で、傾斜ネック、フィルターキャップの２５ｃｍ２培養びん中で該細胞を増殖させた。湿らせた、３７℃、ＣＯ２５％のインキュベーター中で、１０％ＰＢＳを追加した「ＥＧＷ−ＭＶ」ブランドの平滑筋細胞増殖培地（Cambrex、メーカーから配達されたままで使用）中で該細胞を増殖させた。培地は、最初２４時間後に替え、その後は４８時間ごとに替えた。該細胞は、約８０％の集密度で通過させた（約４〜６日）。増殖アッセイは、２４ウェル培養プレートで行った。
【００９５】
５日目に、成長培地を試験培地（成長培地＋ＳＴＩ−５７１）、成長培地（陽性対照、培地＋ＦＢＳ）および無血清培地（陰性対照、添加ＰＢＳの全くない「ＥＧＷ−ＭＶ」ブランド培地）と交換した。
【００９６】
各状態（３個のウェル）を１本のミクロ遠心管に集め、７日目に細胞をトリプシン化しながら、手動で細胞を数えた。該細胞を１.５ｇで１０分間遠心し、ついで６０μｌトリプシン中和溶液中に再懸濁させた。ついで、該細胞を血球計算板上で４回繰り返して計数した。
【００９７】
結果を図６に示す。図から分かるように、ＳＴＩ−５７１は、試験を行ったいかなるＳＴＩ−５７１の濃度でも、ヒト冠状動脈の内皮細胞の増殖に対して顕著な影響を示さなかった。この実施例は、実施例３〜５とともに、重要である。なぜなら、これらの実施例は、ＳＴＩ−５７１がヒト血管平滑筋細胞に対し強い抑制効果を持っている（増殖、ＤＮＡ合成および細胞移動を抑制する）が、内皮細胞の増殖を抑制しないことを示しているからである。これは、ステントが確実に血管壁に移植されるようになるために、挿入した血管ステントの周りの内皮細胞の増殖が望ましいので、これは注目に値する。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】増加する濃度のＳＴＩ−５７１の存在下での血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）による刺激作用に続くブタ冠状血管の平滑筋細胞増殖を示すグラフである。
【図２】増加する濃度のＳＴＩ−５７１の存在下での血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）による刺激作用に続く、ブタ大動脈の内皮細胞増殖を示すグラフである。
【図３】増加する濃度のＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）によるヒト冠状動脈の血管平滑筋細胞（ｈＣＡＳＭＣ）増殖の阻害を示すグラフである。４８時間の、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）による刺激作用の後、細胞を計数し、各実験のデータを、ＦＢＳを含有するが、ＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）を含有しない陽性対照ウェルに対して正規化した。各点は、８個の独立した実験からの１８〜２１個のウェルを表し、平均値＋／−標準偏差として提示されている。
【図４】ＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）によるヒト冠状動脈血管平滑筋細胞（ＨＣＡＶＳＭＣ）におけるＤＮＡ合成の阻害を示すグラフである。ＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）の存在または不在（陽性対照）において、４８時間１０％のＦＢＳによる冠状動脈血管平滑筋細胞の刺激作用の後にＢｒｄＵの導入によってＤＮＡ合成を定量した。データ点は、２つの独立した実験からの１４〜２８個のウェルを表し、平均値＋／−標準偏差として提示されている。
【図５】ＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）に応答してのヒト冠状動脈の血管平滑筋細胞移動の阻害を示すグラフである。血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ−ββ）による刺激作用に応答して２４時間で多孔性膜（直径２０μmの細孔）を通って移動した細胞を数えることによって、移動を定量した。データ棒は６個の膜を代表し、対照膜（ＳＴＩ−５７１不在）に対し正規化した平均値＋／−標準偏差として提示されている。
【図６】ヒト冠状動脈の血管内皮細胞（hＣＡＥＣ）の増殖に対してＳＴＩ−５７１（「Ｇｌｉｖｅｃ」）のいかなる影響もないことを示すグラフである。
【配列表】
2006519623.tif 000003
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【図１】
2006519623.tif 000078
【図２】
2006519623.tif 000079
【図３】
2006519623.tif 000080
【図４】
2006519623.tif 000081
【図５】
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【図６】
2006519623.tif 000083
【手続補正書】
【提出日】平成17年10月20日(2005.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管を拡張するためのデバイスであって、前記デバイスは、ある量のタンパクチロシンキナーゼインヒビターをその上に被覆させるか、その中に含浸させるか、それに吸着させるか、あるいはそれに共有結合的にまたはイオン的に結合させた心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントを含み、前記量が心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分であって、同時に、血管内膜細胞の増殖を抑制しないことを特徴とする、デバイス。
【請求項２】
心血管ステントを含む請求項１のデバイス。
【請求項３】
自家静脈／動脈グラフトを含む請求項１のデバイス。
【請求項４】
補綴静脈／動脈グラフトを含む請求項１のデバイス。
【請求項５】
血管カテーテルを含む請求項１のデバイス。
【請求項６】
血管シャントを含む請求項１のデバイス。
【請求項７】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターが血小板由来の増殖因子インヒビターである請求項１のデバイス。
【請求項８】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターがＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼインヒビターでもある請求項７のデバイス。
【請求項９】
タンパクチロシンキナーゼインヒビターがＳＴＩ−５７１である請求項１のデバイス。
【請求項１０】
血管内インターベンションに続く再狭窄を防ぐ方法であって、前記方法が、血管内インターベンションに使用される心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテル、または血管シャントに一定量のタンパクチロシンキナーゼインヒビターを被覆させること、吸着させること、含浸させること、または共有結合的にまたはイオン結合的に結合させることを含み、その量が、心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域にある血管平滑筋細胞の増殖を妨げるまたは抑制するのに十分であって、同時に、血管内膜細胞の増殖を抑制しない量である、方法。
【請求項１１】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントが血小板由来増殖因子インヒビターで被覆されている、請求項１０の方法。
【請求項１２】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントがＢｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼインヒビターで被覆されている請求項１０の方法。
【請求項１３】
心血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャントがＳＴＩ−５７１で被覆されている請求項１０のデバイス。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
動脈硬化症の血管の伝統的な処置には、一般に、比較的重篤でない閉塞に対しては、血管の再疎通処置、そして重大な閉塞に対しては冠状血管バイパス手術が挙げられる。可能な場合には、はるかに非侵襲的処置であるという理由から、血管の再疎通の方が冠状動脈バイパス処置よりもはるかに好まれる。血管の再疎通処置は、たとえば経皮的経血管的冠動脈バルーン血管形成術（ＰＴＣＡ）（バルーン血管形成術としても知られている）を含む、血管を通して閉塞部位に装着される血管内デバイスを使用することを含む。バルーン血管形成術は、その先端に緊密に折りたたまれたバルーンの付いたカテーテルを使用する。該カテーテルが閉塞部にたどり着くと、バルーンはふくらまされ、アテローム斑は血管壁に対して圧縮される。しかしながら、このおよび他の血管内処置の重大な欠点は、治療を受けたかなりの数の人において、治療された血管のいくつかまたは全てが再狭窄する（すなわち、血管が再び狭くなる）ということである。これは、一般的に処置後比較的短期間（およそ６ヵ月未満）のうちに起こる。再狭窄は、一部は、バルーンカテーテルまたは他の血管内デバイスによって起こされた血管の内壁への機械的外傷（injury）によると考えられる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
大部分の血管の壁は、中央の管状開口部、すなわち血管内腔を囲む３つの異なった層または膜を含む。血管内腔を内張する最内層は、内膜と呼ばれる。中間層、すなわち中膜は、大部分は円形に配置された平滑筋細胞および結合組織線維を含む。無傷の血管では、平滑筋細胞は一般的に活発には分裂しない。血管壁の最外層、すなわち外膜は、主に内部の層を保護し、血管に構造上の保全性を与えるコラーゲン繊維を含む。機械的外傷は、結果として内膜への損傷を生じ、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）のような化学物質の放出を含む、イベントのカスケード（a cascade of events）を開始する。このカスケードは、外傷の部位での血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の移動および増殖を促す。外傷部位でのＶＳＭＣの蓄積は、血管内腔の直径を狭くし、それによって再び患者を心臓麻痺、脳卒中などを起こす危険にさらす。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
血管内デバイスの使用に続く平滑筋細胞の増殖を抑制するいくつかの方法が特許文献に報告されている。これらは、細胞周期インヒビターのような抗増殖剤および抗血液凝固剤（局所的または全身的送達システムのいずれかによる）を投与することを含む。しかし、これらの薬剤の全身的送達は、受け入れがたい副作用を引き起こすか、または法外に高価になるような投与量を必要として来た。米国特許第４,８２４,４３６号に記載されている薬剤、たとえばヘパリンの局所的送達は、一部は外傷の部位での活性薬剤の不適当な滞留時間によって、再狭窄を抑制するのに効果がないと判明した。タキソールのような細胞周期インヒビターは、共有結合的に反応しない、したがって効果を出すために長い滞留時間を必要とするので、類似した問題をきたす。さらに、そのような処置の効果を増すために滞留時間を長くすることもまた、毒性を増大させる危険性をもたらしかねない。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
上記の方法の全ては、ある種の欠点を持っている。たとえば、徐放性製剤は、付加レベルの複雑度、すなわち、徐放性製剤の上またはその中に薬剤を導入することを必要とする。光力学的治療は、光活性剤の局所的送達および複雑な血管内光源の使用を必要とする。放射線量の送達は、放射線科医の存在を必要とし、付添い人への曝露障害、ならびに物質貯蔵、取扱いおよび廃棄の問題をもたらす。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
「ＢｒｄＵ」＝５−ブロモ−２'−デオキシウリジン三リン酸。
「ＤＭＥ」＝ダルベッコ修飾イーグル培地。
「ＦＢＳ」＝ウシ胎児血清。
「ＪＡＫ−２」＝ヤヌス活性化チロシンキナーゼ。
「ＭＡＰＫ」＝マイトジェン活性化プロテインキナーゼ。
「ＰＤＧＦ」＝血小板由来増殖因子。
「薬学的に好適な塩」＝遊離塩基または遊離酸のＰＴＫインヒビターに固有の有益な抑制効果が対イオンに起因する副作用によって損なわれないように、その対イオンが塩の薬学的投与において患者に無毒である、酸または塩基付加塩。多数の薬学的に好適な塩が医薬の分野で周知である。塩基である有効成分に関しては、特定の塩自体が、たとえば、塩が精製および同定の目的のためだけに形成される場合、またはそれがイオン交換処理によって薬学的に好適な塩を調製する際の中間物として使用される場合のような中間産物としてだけに望まれるとしても、全ての酸付加塩は遊離塩基体の供給源として有用である。薬学的に好適な酸付加塩は、限定はされないが、鉱酸および有機酸から誘導された塩を含み、明確にハロゲン化水素酸塩を含み、たとえば、塩化水素酸塩および臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、マロン酸塩、シュウ酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、メチレン−ビス−ｂ−ヒドロキシナフト酸塩、ゲンチシン酸塩、イセチオン酸塩、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩、キナ酸塩等である。同様に、酸である活性成分に対しては、薬学的に好適な塩基付加塩が使用される。塩基付加塩は、限定されないが、アルカリまたはアルカリ土類金属塩基から誘導された塩、またはたとえばトリエチルアミン、ピリジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−メチルモルホリン等のような通常の有機酸塩を含む。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
「ＳＴＩ−５７１」＝４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミド、およびその薬学的に好適な塩。メタンスルホン酸塩が好ましい。この化合物は、「イマチニブ（imatinib）」という一般名が与えられてきた。本明細書において使用されるように、「ＳＴＩ−５７１」は、遊離塩基またはその薬学的に好適な塩としてのイマチニブを指し、メシラート塩が好ましい。アメリカ合衆国では、それは、登録商標「Ｇｌｉｖｅｃ」（米国登録商標登録番号第２,４７８,１９６号）の下で、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＡＧ（スイス国バーゼル）によって市販されている、それは、また、商標「Ｇｌｅｅｖｅｃ」の下で世界中の他の場所でも販売されている。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
再狭窄の病因はよくは分かっていない。それは、一つには、治療された血管の内壁の反跳によると思われている。さらに、動脈硬化のような病気を治療するために使用される血管再疎通処置が再疎通の部位で機械的外傷を引き起こすことがあると仮定される。いかなる特定の作用機構にも限定されることなく、一旦内膜破裂が血管で起こるならば、多くの事象が起こり始めると仮定され、その事象は、単核細胞の内膜の内皮下層への移動およびたとえば血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、マクロファージ由来の増殖因子（ＭＤＧＦ）および血管内皮細胞由来増殖因子（ＥＤＧＦ）を含む、マイトジェン性増殖因子の放出を含む。これらの化学物質、特にＰＤＧＦは、ＶＳＭＣ増殖を誘発することにおいて明らかに役割を果たしている。これは、順に、血管内腔内に蓄積する相当量の細胞間基質を生じ、それによってその直径を狭くする。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明の第一の実施態様は、したがって、血管損傷の部位のすぐ隣のまたは近傍の場所におけるＶＳＭＣの増殖を選択的に抑制する１種以上の化合物を塗布した、血管ステント、自家静脈／動脈グラフト、補綴静脈／動脈グラフト、血管カテーテルまたは血管シャント（本明細書において、まとめて「血管デバイス」と呼ぶ）に向けられている。具体的には、本発明は、ある量のタンパクチロシンキナーゼ（ＰＴＫ）インヒビターを、その上に被覆させるか、その中に吸収させるか、その中に含浸させるか、またはそれに共有結合的もしくはイオン的に結合させた、血管デバイスを含む。その化合物は、特に、Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ、すなわち慢性骨髄性白血病で発見されたフィラデルフィア染色体異常によって作られた構成性異常チロシンキナーゼを抑制することが好ましい。本発明に用いられる好ましいＰＴＫインヒビターは、また、血小板由来増殖因子と幹細胞因子（ＳＣＦ）に対する受容体チロシンキナーゼから成る群から選択される一種以上のＰＴＫおよびｃ−Ｋｉｔの活性を特異的にまたは非特異的に抑制するものである。血管デバイスと関連して使用されるＰＴＫの量は、血管デバイスの直ぐ隣のおよび／または近傍の血管内の領域における血管平滑筋細胞の増殖を妨げるかまたは抑制するのに十分な量である。好ましい実施態様では、血管デバイスは、４−｛（４−メチル−１−ピペラジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはその薬学的に好適な塩（望ましくはメタンスルホン酸塩）で被覆される。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
発明の第三の実施態様は、血管内インターベンション（vascular intervention）に続く血管の再狭窄を妨げるまたは抑制する全身的方法に向けられる。該方法は、ある量のＰＴＫインヒビターを全身的に（望ましくは経口で）投与することを含み、その量は、血管内インターベンションが行われた領域の直ぐ隣のまたは／および近傍の血管の中の部位におけるＰＴＫインヒビターの増殖を妨げるか抑制するのに十分である。また、本発明のこの実施態様に用いられる好ましいＰＴＫインヒビターは、４−｛（４−メチル−１−ピペリジニル）メチル｝−Ｎ−｛４−メチル−３−｛｛４−（３−ピリミジニル）アミノ｝−フェニル｝ベンズアミドおよび／またはそれの薬学的に好適な塩である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
最も広範囲に研究されたＰＴＫインヒビターの中には、チロホスチン類およびキナゾリン誘導体がある。これらの化合物は、可能性のある抗癌剤として現在研究されている。たとえば、チロホスチン類およびキナゾリンは、ＥＧＦＲに対する抗体、およびシスプラチンのような確立された抗癌剤とともに用いて、相乗的に、インビボでヒト扁平上皮癌の成長を抑制し、そしてＨＥＲ２−ＥｒｂＢ２を強制発現させたヒト癌細胞の成長を阻止することが示された（それぞれ）。チロホスチン類は、ベンジリデンマロニトリル構造に基づいている。この構造のわずかな置換は、ＥＧＦＲ、ＥｒＢ−２およびｖ−Ａｂｌを選択的にターゲットとする一組の強力なインヒビターを提供した。こうして、チロホスチン類は、血管の内腔へのＶＳＭＣ増殖を抑制するために、単独かまたは他のＰＴＫインヒビターとの組み合わせにおいて使用することができる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
この化合物は、最初ＳＴＩ−５７１と呼ばれたが、アメリカ合衆国では商標「Ｇｌｉｖｅｃ」の下でＮｏｖａｒｔｉｓによって市販されている。それは、慢性骨髄性白血病の治療用にアメリカ食品医薬品局によって承認されている。欧州第０５６４４０９Ａ号および国際特許ＷＯ第９９／０３８５４号を参照のこと。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
該製剤は、単位投薬剤形で便利に提供することができ、製薬学において周知の方法によって調製することができる。「単位投薬量（unit dosageまたはunit dose）」という用語は、示された活性または状態を治療するために有効であるのに十分な有効成分の所定量を意味する表現である。薬剤組成物の各タイプを作成することは、活性化合物を担体および１つ以上の任意の補助成分との集合へともたらす段階を含む。一般に、該製剤は、活性化合物を一様かつ緊密な状態で液体担体または固体担体との集合へもたらすこと、ついで、必要ならば、その薬物を望ましい単位投薬剤形に形成することによって調製される。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
直腸内投与に適した組成物はまた、有効成分およびそのための薬学上許容できる賦形剤、たとえば、直腸または大腸に生理的に適合する５０％エタノール水または食塩水を含む直腸エネマユニットからなることもできる。直腸エネマユニットは、望ましくは、ポリエチレンから成り、白色ワセリンのような潤滑剤で滑らかにされ、そして望ましくは、製剤化された製剤のもどりを防ぐために一方向のバルブによって保護されている、かつ肛門を通して結腸に挿入されるのに十分な長さ、望ましくは２インチの、不活性のカバーで保護されているアプリケータチップを含む。直腸用製剤では、ＰＴＫインヒビターは、望ましくは約５.０〜１０重量％の濃度で使用される。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
有用な製剤はまた、有効成分を含む濃縮溶液または固体から成り、それは適当な溶媒、望ましくは食塩水による希釈で、直腸への投与に適した溶液を与える。直腸用組成物は、通常のアジュバント、たとえば緩衝液、静菌剤、糖、増粘剤などを含むことが可能な水性製剤および非水製剤を含む。組成物は、直腸用一回量容器または多回投与量容器、たとえば直腸浣腸ユニットで提供される。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
本発明の方法に用いられるＰＴＫ抑制性化合物の送達のための最適条件は、使用する異なる局所的送達システム、ならびに使用する化合物の性質と濃度によって異なる可能性がある。再狭窄による顕著な動脈の閉塞を、たとえば、ＶＳＭＣの増殖の能力によってまたは血管抵抗性または内腔直径の変化によって測る場合、それが起こらないように、外傷の部位でのＶＳＭＣ増殖の抑制に対して状態を最適化することができる。最適化することのできる条件は、たとえば、化合物、送達量、送達速度、血管壁の浸透の深さ、近辺のインフレーション圧力、穿孔の量および大きさならびに薬物送達カテーテルバルーンの適合を含む。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
湿らせた、３７℃、ＣＯ２５％のインキュベーターの中で、１０％ＰＢＳを追加した「ＳｍＧＭ−２」ブランドの平滑筋細胞増殖培地（Cambrex、メーカーから配達されたままで使用）で細胞を増殖させた。培地は、最初２４時間後に替え、ついでその後は４８時間ごとに替えた。細胞は、約８０％の集密度で経代させた（約４〜６日）。増殖アッセイは、２４ウェル培養プレートで行った。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
１ｃｍ２当り２５００個の細胞という初期播種密度で、傾斜ネック、フィルターキャップの２５ｃｍ２培養びん中で該細胞を増殖させた。湿らせた、３７℃、ＣＯ２５％のインキュベーター中で、１０％ＰＢＳを追加した「ＥＧＷ−ＭＶ」ブランドの平滑筋細胞増殖培地（Cambrex、メーカーから配達されたままで使用）中で該細胞を増殖させた。培地は、最初２４時間後に替え、その後は４８時間ごとに替えた。該細胞は、約８０％の集密度で経代させた（約４〜６日）。増殖アッセイは、２４ウェル培養プレートで行った。
【国際調査報告】
2006519623.tif 000084