(57)【要約】心筋梗塞(ＭＩ)と染色体13q12の遺伝子座との関連が開示されている。  特に、遺伝子学的関連性分析によって、この遺伝子座内にあるＦＬＡＰ遺伝子が、心筋梗塞感受性遺伝子であることが示されている。  具体的には、処置の対象となる経路、それに心筋梗塞または心筋梗塞に変化する危険要素を同定するための診断方法が、記載されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体での心筋梗塞または心筋梗塞感受性の治療剤を製造するためのロイコトリエン合成阻害剤の使用。
【請求項２】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項１に記載の使用。
【請求項７】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記個体が、アテローム性動脈硬化症を有しており、または動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１に記載の使用。
【請求項１３】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１に記載の使用。
【請求項１４】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項１に記載の使用。
【請求項１５】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項１に記載の使用。
【請求項１６】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項１に記載の使用。
【請求項１８】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
治療有効量のロイコトリエン合成阻害剤を個体に投与することを含む、個体での急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の治療方法。
【請求項２０】
前記急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)が、非持続性狭心症、非ＳＴ増大性心筋梗塞(ＮＳＴＥＭＩ)およびＳＴ増大性心筋梗塞(ＳＴＥＭＩ)からなるグループから選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
前記個体が、アテローム性動脈硬化症を有しており、または動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１９に記載の方法。
【請求項３２】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１９に記載の方法。
【請求項３３】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項１９に記載の方法。
【請求項３４】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項１９に記載の方法。
【請求項３５】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項１９に記載の方法。
【請求項３７】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
治療有効量のロイコトリエン合成阻害剤を個体に投与することを含む、少なくとも一度の心筋梗塞の既往歴を有する個体での心筋梗塞の再発危険度を低減する方法。
【請求項３９】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性タイプからなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項３８に記載の方法。
【請求項４４】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
前記個体が、アテローム性動脈硬化症を有しており、または動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項３８に記載の方法。
【請求項４７】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項３８に記載の方法。
【請求項４８】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項３８に記載の方法。
【請求項４９】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項３８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項３８に記載の方法。
【請求項５１】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項３８に記載の方法。
【請求項５２】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項３８に記載の方法。
【請求項５３】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項３８に記載の方法。
【請求項５５】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
治療有効量のロイコトリエン合成阻害剤を個体に投与することを含む、個体でのアテローム性動脈硬化症の治療方法。
【請求項５７】
前記個体が、動脈内での血流を回復するための処置を同時に受ける請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項５６に記載の方法。
【請求項６４】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項５６に記載の方法。
【請求項６５】
前記個体が、動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項５６に記載の方法。
【請求項６６】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項５６に記載の方法。
【請求項６７】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項５６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項５６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項５６に記載の方法。
【請求項７０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項５６に記載の方法。
【請求項７１】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項５６に記載の方法。
【請求項７２】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項５６に記載の方法。
【請求項７４】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項７３に記載の方法。
【請求項７５】
治療有効量のロイコトリエン合成阻害剤を個体に投与することを含む、個体でのロイコトリエン合成を低減する方法。
【請求項７６】
前記個体が、動脈内での血流を回復するための処置を同時に受ける請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項７５に記載の方法。
【請求項７９】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項７５に記載の方法。
【請求項８２】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項７５に記載の方法。
【請求項８３】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
前記個体が、アテローム性動脈硬化症を有しており、または動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項７５に記載の方法。
【請求項８５】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項７５に記載の方法。
【請求項８６】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項７５に記載の方法。
【請求項８７】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項７５に記載の方法。
【請求項８８】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項７５に記載の方法。
【請求項８９】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項７５に記載の方法。
【請求項９０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項７５に記載の方法。
【請求項９１】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項９０に記載の方法。
【請求項９２】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項７５に記載の方法。
【請求項９３】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、本願明細書の薬剤一覧表に記載された薬剤である請求項１乃至９３のいずれかに記載の方法。
【請求項９５】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン経路の構成要素をコードする核酸の補体、ロイコトリエン経路の構成要素の結合剤、ロイコトリエン経路の構成要素をコードする核酸の発現を改変する薬剤、ロイコトリエン経路の構成要素の翻訳後のプロセシングを改変する薬剤、ロイコトリエン経路のポリペプチド要素の活性を改変する薬剤、ロイコトリエンの活性を改変する薬剤、ロイコトリエンに対する抗体、およびロイコトリエン経路の二つ以上の構成要素間での相互作用を改変する薬剤からなるグループから選択される請求項１乃至９３のいずれかに記載の方法。
【請求項９６】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ核酸結合剤、５-リポキシゲナーゼ結合剤、ロイコトリエンシンターゼ結合剤、ＦＬＡＰ核酸結合剤、５-リポキシゲナーゼ核酸結合剤、ロイコトリエンシンターゼ核酸結合剤、疑似ペプチド、融合タンパク質、プロドラッグ、抗体、ＦＬＡＰ核酸発現を改変する薬剤、ＦＬＡＰ核酸、５-リポキシゲナーゼ核酸またはロイコトリエンシンターゼ核酸によってコードされたポリペプチドの活性を改変する薬剤、ＦＬＡＰ核酸、５-リポキシゲナーゼ核酸またはロイコトリエンシンターゼ核酸によってコードされたポリペプチドの翻訳後のプロセシングを改変する薬剤、ＦＬＡＰ核酸結合剤でＦＬＡＰ核酸の相互作用性を改変する薬剤、５-リポキシゲナーゼ核酸結合剤で５-リポキシゲナーゼ核酸の相互作用性を改変する薬剤、ロイコトリエンシンターゼ核酸結合剤でロイコトリエンシンターゼ核酸の相互作用性を改変する薬剤、ＦＬＡＰ核酸、５-リポキシゲナーゼ核酸またはロイコトリエンシンターゼ核酸によってコードされたスプライシング変異体の転写を改変する薬剤、およびリボザイムからなるグループから選択される請求項１乃至９３のいずれかに記載の方法。
【請求項９７】
ロイコトリエン代謝産物レベルの増大が心筋梗塞の危険度の増大を示す系で、個体でのロイコトリエン代謝産物レベルを決定することを含む、個体での心筋梗塞の危険度を決定する方法。
【請求項９８】
前記ロイコトリエン代謝産物が、ＬＴＥ４である請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
前記ロイコトリエン代謝産物のレベルが、血清、血漿または尿において決定される請求項９７に記載の方法。
【請求項１００】
ロイコトリエン代謝産物レベルの増大が急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の危険度の増大を示す系で、個体でのロイコトリエン代謝産物レベルを決定することを含む、個体での急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の危険度を決定する方法。
【請求項１０１】
前記ロイコトリエン代謝産物が、ＬＴＥ４である請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
前記ロイコトリエン代謝産物のレベルが、血清、血漿または尿において決定される請求項１００に記載の方法。
【請求項１０３】
ロイコトリエン代謝産物レベルの増大がアテローム性動脈硬化症の危険度の増大を示す系で、個体でのロイコトリエン代謝産物レベルを決定することを含む、個体でのアテローム性動脈硬化症の危険度を決定する方法。
【請求項１０４】
前記ロイコトリエン代謝産物が、ＬＴＥ４である請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記ロイコトリエン代謝産物のレベルが、血清、血漿または尿において決定される請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置に対する標的集団内の個体での応答度を決定する方法であって、
ａ) ロイコトリエン合成阻害剤で処置する以前の個体でのロイコトリエンレベルを決定し、
ｂ) ロイコトリエン合成阻害剤で処置している期間または処置した後の個体でのロイコトリエンレベルを決定し、
ｃ) 処置前のロイコトリエンレベルに対する、処置中または処置後のロイコトリエンレベルの顕著な低減が、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置効力を示す系で、処置前のロイコトリエンレベルを、処置中または処置後のロイコトリエンレベルと比較する、ことを含む方法。
【請求項１０７】
前記工程(ａ)および(ｂ)でのロイコトリエンのレベルが、血清、血漿および尿からなるグループから選択される試料でのロイコトリエンについて決定される請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０８】
前記工程(ａ)および(ｂ)でのロイコトリエンのレベルが、個体由来の試料でのロイコトリエンの ex vivo 産物を測定することによって決定される請求項１０６に記載の方法。
【請求項１０９】
ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置に対する標的集団内の個体での応答度を決定する方法であって、
ａ) ロイコトリエン合成阻害剤で処置する以前の個体での炎症性マーカーレベルを決定し、
ｂ) ロイコトリエン合成阻害剤で処置している期間または処置した後の個体での炎症性マーカーレベルを決定し、
ｃ) 処置前の炎症性マーカーレベルに対する、処置中または処置後の炎症性マーカーレベルの顕著な低減が、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置効力を示す系で、処置前の炎症性マーカーレベルを、処置中または処置後の炎症性マーカーレベルと比較する、ことを含む方法。
【請求項１１０】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物（例えば、システィニルロイコトリエン１）、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
治療を必要とする個体に治療有効量のロイコトリエン合成阻害剤を投与することを含む、個体での心筋梗塞または心筋梗塞感受性の治療方法。
【請求項１１２】
前記個体が、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、および５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記個体が、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および喫煙歴または喫煙者からなるグループから選択される少なくとも一つの危険因子を保有する請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
前記個体が、炎症性マーカーの増大を示す請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１５】
前記炎症性マーカーが、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼからなるグループから選択される請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
前記個体が、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの減少を示す請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１７】
前記個体が、ロイコトリエン合成の増大を示す請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１８】
前記個体が、少なくとも一度の心筋梗塞または急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)の発症を経験し、または持続性の狭心症を有している請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１９】
前記個体が、アテローム性動脈硬化症を有しており、または動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）が必要である請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２０】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、任意の純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２１】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、任意のこれらの純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体からなるグループから選択される請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２２】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ＦＬＡＰ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２３】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、５-ＬＯ阻害剤またはアンタゴニストである請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２４】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン阻害剤またはアンタゴニスト、あるいはロイコトリエンに対する抗体である請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２５】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストである請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２６】
前記ロイコトリエン受容体阻害剤またはアンタゴニストが、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２からなるグループから選択される受容体を阻害または拮抗する請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記ロイコトリエン合成阻害剤が、ロイコトリエン生合成経路の構成要素の阻害剤である請求項１１１に記載の方法。
【請求項１２８】
前記ロイコトリエン生合成経路の構成要素が、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨからなるグループから選択される請求項１２７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、2003年２月21日に出願された米国仮出願第60/449,331号の優先権を主張し、また、2002年10月17日に出願された米国仮出願第60/419,433号の優先権を主張する。  これら出願での教示事項は、本願明細書に参考までにそのすべてが取り込まれている。
【背景技術】
【０００２】
心筋梗塞(ＭＩ)および急性冠状動脈症候群(ＡＣＳ)、例えば、非持続性狭心症、非ＳＴ増大性心筋梗塞(ＮＳＴＥＭＩ)またはＳＴ増大性心筋梗塞(ＳＴＥＭＩ)などは、先進工業国において、入院を要するする病因として増加している。  心臓血管の疾患は、米国、欧州および日本での主要な死亡原因としての地位を長らく維持している。  罹患率および死亡率の双方、それに、健康医療制度に要する財政的負担の観点から、これら疾患に伴う損失は大きなものになっている。
【０００３】
一般的に、冠状動脈での血流が突然に減少し、次いで、アテローム性動脈硬化症に伴って生じた冠状動脈内の血栓閉塞によって、心筋梗塞が生じる。  大抵の場合、アテロームプラークが破裂、破壊または腫瘍化し、そして、血餅が形成しやすい条件下であれば、梗塞が形成される。  稀に、梗塞の形成は、冠状動脈栓、先天性異常、冠状動脈痙攣および種々の全身的疾患、特に、炎症性疾患に起因する冠状動脈閉塞が原因の場合がある。  心筋梗塞の医学的危険因子として、喫煙、肥満、高血圧、それに２００mg/dLを超える血清全コレステロールレベル、血清ＬＤＬコレステロールの上昇、および血清ＨＤＬコレステロールが低いこと、などがあげられる。  心臓血管に関する疾患の既往歴が無い個体での発病率は、約１％である。  心筋梗塞または急性急性冠状動脈症候群を経験した個体が、血管形成術およびステント移植を含む最高度の医学管理を行わない場合には、次の年に心筋梗塞を再発する危険度は、１０〜１４％になる。
【０００４】
アテローム性動脈硬化症は、多くの大動脈および中度の血管の血管床に対して影響を及ぼす。  心筋梗塞および非持続性狭心症(急性冠状動脈症候群)は、冠状動脈アテローム性動脈硬化症から始まるが、虚血性発作は、そのほとんどが頚動脈または大脳の動脈アテローム性動脈硬化症に起因している。  抹消動脈閉塞疾患(ＰＡＯＤ)を原因とする肢部の虚血は、腸骨、大腿および膝窩の動脈アテローム性動脈硬化症に起因している。  血栓症を阻害する薬物(アスピリン)の普及、または血中コレステロールレベルの上昇などの医学的危険因子の治療(スタチン）、糖尿病または高血圧のような医学的危険因子の治療法(利尿薬および抗高血圧剤)があるにもかかわらず、アテローム硬化性疾患の発生は、未だによく認められる。
【０００５】
アテローム硬化性疾患は、脂質、特に、低密度のリポタンパク質(ＬＤＬ)コレステロールが動脈の壁内部に蓄積に起因している。  捕捉されたＬＤＬは、マクロファージによって酸化されて取り込まれる。  これにより、コレステロールを飽食してなる、泡沫細胞とも称されるマクロファージが蓄積されて、アテローム硬化性病変が形成される。  疾患が進行するにつれて、平滑筋細胞が増殖し、そして、脂質に富んだ壊死した中心部を囲む細胞外マトリックスの「繊維状帽(繊維状キャップ)」が動脈壁に成長する。  繊維状アテローム硬化性プラークは、大抵の個体において、その生存期間内は、動脈壁に比較的安定に存在している。  このような繊維状の病変は、内径を減少したり、または心臓への酸素運搬に対して重篤な影響を与えずに、弾性膜を外方向に移動させて、動脈の壁を広範囲に再建する。  したがって、疾患が後期に至るまでに、患者の内管が塞らずして、大きな繊維性のアテローム硬化性病変が進行する場合がある。  しかし、冠状動脈の内管は、時間をかけて徐々に狭くなる場合があり、症例によっては、特に運動時のような流動の要求が高まる状態では、心臓への血流を鈍らせることになる。  これにより、持続性狭心症と称される、安静によって緩和される胸痛を招く可逆性の虚血を生じる場合がある。
【０００６】
繊維性アテローム硬化性病変が比較的に持続性であるのとは対照的に、(いずれもが急性冠状症候群に属する)心筋梗塞および非持続性狭心症に関連する病因は、薄い繊維状帽、大きな脂質核および炎症性細胞(例えば、Ｔリンパ球および単核細胞／マクロファージ)の浸潤によって特徴付けられる。  非侵襲性の撮像技術は、ほとんどの心筋梗塞が、軽度または中度の狭窄症を伴う部位で生じていることを示しており、このことは、冠状動脈閉塞が、そのほとんどが、病因が除去された後に形成された血栓または血餅に起因しており、狭窄症による内管閉塞だけに起因するものでないことを示している。  プラークの破壊は、マクロファージが侵入および蓄積して、局所的な炎症性プロセスによって活性化される場合には、通常、繊維状帽、病変部の周縁での腐食または不均一な薄層化に起因する場合がある。  繊維状帽の薄層化は、活性化されたマクロファージから放出されるプロテアーゼによって崩壊した細胞外マトリックスが原因の場合がある。  これらの変化がプラークを不安定化せしめ、そして、組織因子の凝血促進および血栓症の発生確率を高める他の因子の出現とも相俟って、心筋梗塞の危険度を高める場合がある。
【０００７】
急性冠状動脈症候群において、局所的な血栓症と同時に組織の破壊または腐食作用を示す病因は、通常、血管形成術、または内腔の開通性を維持するためのバルーン拡張、およびステントの配置によって除去される。  急性冠状動脈症候群を経験した患者は、冠状動脈疾患の多血管性に起因して、二次的な冠状動脈疾患を招く確率が高く、最初の疾患のから１２ヶ月以内の再発率は、１０〜１４％に達する。
【０００８】
心筋梗塞の再発とは、既存の慢性アテローム硬化性病変部位の動脈血管壁での炎症性疾患の発症であり、時として病因を除去する場合もあるが、局所的な血栓症とそれに続いて心筋梗塞を招く。  プラーク不安定性を招く動脈壁炎症を発症する持続的プロセスは知られてはいないが、循環系への腫瘍壊死因子αやインターロイキン-６の放出が始まる。  損傷した血管壁から放出された、前述したサイトカインまたは生物学的媒介物、それにその他のサイトカインまたは生物学的媒介物は、肝臓での炎症性応答を刺激し、いくつかの非特異的遺伝子炎症性マーカー（Ｃ反応性タンパク質を含む）を増加させる。  アテローム性動脈硬化症に対して特異的ではないけれども、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)および血清アミロイドＡの増加は、おそらくは血管壁の炎症というよりは、心筋梗塞の危険度を予測するものと考えられる。
【０００９】
喫煙、高脂質血症、高血圧および糖尿病のような古典的な危険因子は、冠状動脈心臓疾患(ＣＨＤ)や心筋梗塞などの多くの症例に関連しているが、多くの患者は、これら危険因子との関連性を有していない。  実際に、これら危険因子の一つ以上を保有する多くの患者では、心筋梗塞が進行していない。  家族歴は、主要な危険因子の一つとして長年認識されてきた。  心筋梗塞のいくつかの家族集団では、その他の従来の危険因子に対する遺伝的関与が認められてはいるが、数多くの研究は、これらの危険因子以外にも、重大な遺伝的感受性因子があることを示している（Friedlander Y. et al., Br. Heart J. 1985;53:382-7, Shea S. et al., J. Am. Coll. Cardiol. 1984;4:793-801、および Hopkins P.N. et al., Am. J. Cardiol. 1988;62:703-7）。  主要な遺伝的感受性因子は、家族性の高コレステロール過剰血症などの、稀な高脂質血症のメンデル形態についてのみ同定されている。
【００１０】
遺伝的な危険度は、集団内の個体間相互における遺伝子上のわずかな差異によって比較されている。  個体間の遺伝子の差異は、そのほとんどが、高頻度で発生する単一ヌクレオチド多型(ＳＮＰ)に起因するものであるが、その他の変化もまた重要である。  単一ヌクレオチド多型は、ヒトゲノムでは、平均で1,000塩基対ごとに配置される。  それ故に、250,000塩基対を含む典型的なヒト遺伝子では、２５０の異なる単一ヌクレオチド多型性を含有していることになる。  ごく少数の単一ヌクレオチド多型性が、エキソン内に配置されて、遺伝子によってコードされるタンパク質のアミノ酸配列を変更する。  ほとんどの単一ヌクレオチド多型性は、遺伝子機能に何らの影響も与えないが、その他のものは、転写、スプライシング、翻訳、あるいは遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの安定性を変更する場合がある。  ヒトゲノムでのさらなる遺伝的多型性は、長鎖または短鎖のＤＮＡでの挿入、欠失、転座または逆位に起因する。  それ故に、疾患の危険度に関与する遺伝的多型性は、タンパク質のアミノ酸配列を直接的に変更するか、遺伝子から産生されるタンパク質の量を増加させるか、または遺伝子によって産生されるタンパク質の量を減少させる。
【００１１】
疾患の危険度に関与する遺伝的多型性は完全には解明されていないため、このような危険因子についての遺伝子試験は、臨床用医薬のために重要となる。  例えば、痴呆患者でのapoE4多型性の遺伝子キャリアを同定して、アルツハイマー病を判別診断するためのアポリタンパク質Ｅ試験、そして、深部の静脈性血栓症の疾病素質を突き止めるためのFactor Ｖ Leiden試験がある。  重要なことに、癌の治療にあっては、個々の癌患者について最も適切な治療法を選択するために、腫瘍細胞での遺伝子変異体の診断が行われている。      
【００１２】
乳癌では、抗-エストロゲン性薬剤(タモキシフェン)または抗-Her２抗体(ハーセプチン)を治療計画に組み込む場合、エストロゲン受容体またはヘレグリン２型(Her２)受容体チロシンキナーゼ発現での遺伝子変形を決定する。  BcrおよびAbl受容体チロシンキナーゼをコードする遺伝子を融合するフィラデルフィア染色体遺伝子転座を利用する慢性骨髄性白血病(ＣＭＬ)診断は、Bcr-Ablキナーゼの特異的な阻害剤であるGleevec(STI571)が、癌の治療のために用いられるべきである。  このような遺伝子改変を有する慢性骨髄性白血病患者は、Bcr-Ablキナーゼを阻害することにより、腫瘍細胞が迅速に消失して、白血病を緩解せしめる。
【００１３】
多くの一般的な炎症性マーカーは、冠状心臓疾患の危険性を予測するが、これらのマーカーは、アテローム性動脈硬化症には特異的ではない。  例えば、Stein（Stein, S., Am J Cardiol, 87(suppl):21A-26A（2001))は、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼなどの冠状心臓疾患の危険性を予測するための代替手段として、以下の血清炎症性マーカー内の任意の一つを使用することを開示している。  これらの血清炎症性マーカー内の一つ以上のマーカー値の上昇は、冠状心臓疾患に特異的でないのみならず、加齢と共に、また、脳血管疾患、抹消血管疾患、非インスリン依存性糖尿病、変形性関節症、細菌性感染および敗血症にも関連して認められる。
【００１４】
血清Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)は、全身性炎症に対する簡便な感受性マーカーであると考えられている。  一般的に、ＣＲＰは、市販の酵素に結合した免疫吸着剤アッセイ(ＥＩＡ)を用いて、血清試料に関して測定される。  これまでに報告された複数の研究において一致していることは、冠状動脈疾患の危険度の増大と、血清ＣＲＰの増加との間で相関が見出されていることである。  例えば、Women's Health Studyによれば、27,939人の健康な米国人女性でＣＲＰが測定されている。  女性の血清ＣＲＰにおける五分位点でのカットオフ値は、１リットルあたりのＣＲＰが、0.49mg以下、0.49mgを超えて1.08mgまで、1.08mgを超えて2.09mgまで、2.09mgを超えて4.19mgまで、および4.19mgを超える範囲となっている。  Ridker, P. M. et al., New England. J Med., 347:1557-1565(2001)を参照されたい。  最も低い五分位点において、年齢調整を加えた場合でさえ、１リットルあたり0.49mgを超えるすべての五分位点が、冠状心臓疾患の危険度の増加と関連しており、また、これらの女性での(１リットルあたりＣＲＰが4.19mgを越える)血清ＣＲＰに関する最も高い五分位点において、最高値の4.5の相対的危険度が認められた。  女性における血清ＣＲＰの増加と冠状心臓疾患との間に同様の相関が報告されている(Ridker, P. M. et al., New Engld. J. Med., 342:836-843(2000)およびBermudez, E. A. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 22: 1668-1673(2002))。  また、男性では、血清炎症性マーカー(例えば、ＣＲ)の増加と、冠状心臓疾患の危険度の増加との間での相関が報告されている(Doggen, C. J. M. et al., J. Internal Med, 248:406-414(2000)およびRidker, P.M. et al., New England. J. Med., 336:973-979(1997))。  血清ＣＲＰについての五分位点は、Doggen et alによって報告されているように、１リットルあたり、ＣＲＰが、0.65mg未満、0.65mgを超えて1.18mgまで、1.18mgを超えて2.07mgまで、2.07mgを超えて4.23mgまで、4.23mgを超える範囲となっている。  女性の場合とは異なり、血清ＣＲＰの増加は、ＣＲＰでの４番目および５番目の五分位点においてのみ、冠状心臓疾患にとの間で、相対危険度の増加と相関関係にあった（各々の相対危険度は、１.７倍および１.９倍であった）。
【００１５】
また、女性での血清ＣＲＰは、脂質マーカー、例えば、血清低密度リポタンパク質-コレステロール(ＬＤＬ-Ｃ)のレベルと組み合わせて測定された。  Ridker, P. M. et al.,(2002)による研究によると、血清ＣＲＰとＬＤＬ-Ｃとの間での相関は最小限のものであるが、両血清マーカーについてのスクリーニングは、一方だけを用いた場合よりも良好な徴候を示した。  したがって、中央値を越える(１リットルあたりのＣＲＰが1.52mgを超える)血清ＣＲＰ、そして、中央値を超える(１リットルあたりＬＤＬ-Ｃが123.7mgを超える)血清ＬＤＬ-Ｃを保有する女性は、冠状心臓疾患に関して最も高い危険度を有していた。
【００１６】
さらに、ＣＲＰ値または他の血清炎症性マーカー値が高いことは、心筋梗塞の既往歴を有する患者において、二次的な心筋梗塞の危険度が高いことを示すものである（Retterstol, L. et al., Atheroscler., 160:433-440 (2002))。
【００１７】
ＣＲＰが肝臓で産生されるため、ＣＲＰおよび他の血清炎症性マーカーの増加が冠状動脈疾患の徴候である理由を解明する具体的な根拠は、未だ経験的にも存在していない。  Doggen, C. J. M. et al.,によって議論されるように、以下の因子の一つ以上が、観察された相関の機序を解明するものと推測されている：(１)動脈性病変内の内因性炎症および組織損傷、(２)ヘリコバクターピロリまたはクラミジア肺炎菌による前炎症、(３)インターロイキン-６を含むペプチドサイトカインの放出、または(４)相補系の活性化。
【００１８】
ロイコトリエン経路の最終産物は、アラキドン酸から誘導される強力な炎症性脂質媒介物である。  これらは、脂質酸化および／または前炎症性効果を介して、アテローム性動脈硬化症の進行およびアテローム硬化性プラークの不安定化に密接に関与することができる。  ＬＴＣ４、ＬＴＤ４およびＬＴＥ４は、血管狭窄を誘発することが知られている。      
【００１９】
Allen et al., Circulation, 97:2406-2413(1998)は、ＬＴＣ４およびＬＴＤ４に応答して、アテローム性動脈硬化症が、ヒト心外膜冠状動脈の過剰活性を誘発できるロイコトリエン受容体の出現と関連する、という新たな機構を紹介している。  一方で、ＬＴＢ４は、強力な前炎症性薬剤である。  それ故に、ロイコトリエン経路でのこれら最終生成物の産生の増大は、心筋梗塞およびアテローム性動脈硬化症の危険因子とされ、一方で、炎症および炎症および血管狭窄／血管痙攣の双方は、心筋梗塞およびアテローム性動脈硬化症の病原論において、すでに周知の役割を果たす。  ノックアウトマウスにおける５-ＬＯ酵素のヘテロ接合での欠陥は、ＬＤＬＲ-/-マウスでのアテローム硬化性病変の大きさを、約９５％にまで減少させることが報告されている(Mehrabian et al., Circulation Research. 91:120(2002))。  しかしながら、ヒトの心筋梗塞またはアテローム性動脈硬化症におけるロイコトリエンの関与に関しては、このような遺伝学的証拠は、未だ報告されていない。  Mehrabian et al.,は、正常な個体での５-ＬＯプロモーター多型性と頚動脈内膜の肥厚との間の相関を突き止めるために行った非常に小規模の遺伝子相関試験を報告している。  しかし、そこで示されたデータは、小さなロイコトリエン産生量が、頚動脈アテローム性動脈硬化症と相関する、という矛盾した結果を示すに止まっている。
【発明の開示】
【００２０】
本願明細書に記載の染色体13q12での遺伝子は、心筋梗塞(ＭＩ)において主要な役割を果たすものとして同定されている。  本願明細書で、以下にＭＩ遺伝子と称する、この遺伝子は、本願明細書で、以下にＦＬＡＰと称する、タンパク質(ＡＬＯＸ５ＡＰまたはＦＬＡＰ)を活性化する５-リポオキシゲナーゼをコードする核酸を含む。
【００２１】
本願発明は、ＦＬＡＰまたはロイコトリエン経路の他の構成要素(例えば、ＦＬＡＰ、アラキドネート４-リポオキシゲナーゼ(５-ＬＯ)、ロイコトリエンＣ４シンセターゼ(ＬＴＣ４Ｓ)、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ(ＬＴＡ４Ｈ)、ロイコトリエンＢ４ １２-ヒドロキシデヒドロゲナーゼ(ＬＴＢ４ＤＨ)などの生合成酵素；受容体および／または酵素の結合剤；およびロイコトリエンＢ４受容体１(ＢＬＴ１)、ロイコトリエンＢ４受容体２(ＢＬＴ２)、システイニルロイコトリエン受容体１(ＣｙｓＬＴＲ１)、システイニルロイコトリエン受容体２(ＣｙｓＬＴＲ２)を含む、ロイコトリエンＬＴＡ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＣｙｓＬＴＲ１、ＣｙｓＬＴＲ２のための受容体)が関連する特定の疾患および状態(例えば、ＭＩ、ＡＣＳ、アテローム性動脈硬化症)のための治療(予防および／または治療)の方法に関する。 この方法は、次の方法、すなわち、心筋梗塞または心筋梗塞に対する感受性のための治療方法、急性冠状動脈症候群(例えば、非持続性狭心症、非ＳＴ増大性心筋梗塞(ＮＳＴＥＭＩ)およびＳＴ増大性心筋梗塞(ＳＴＥＭＩ))のための治療方法、二次心筋梗塞の発症危険度を減少させるための治療方法、動脈(例えば、冠状動脈)の血流を再生させるためのアテローム性動脈硬化症のための治療(例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植)を必要とする患者のための治療方法、および／またはロイコトリエン合成を抑制するための(例えば、心筋梗塞を治療するための)治療方法を含む。
【００２２】
本願発明の方法では、ロイコトリエン合成阻害剤は、その治療有効量で個体に投与される。  ロイコトリエン合成阻害剤として、ロイコトリエン合成経路の構成要素(例えば、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４ＨおよびＬＴＢ４ＤＨ)を、阻害または拮抗する薬剤が使用できる。  例えば、ロイコトリエン合成阻害剤として、本明細書に記載したように、ＦＬＡＰポリペプチド活性を阻害または拮抗する薬剤(例えば、ＦＬＡＰ阻害剤)および／またはＦＬＡＰ核酸発現を阻害または拮抗する薬剤(例えば、ＦＬＡＰ核酸アンタゴニスト)とすることができる。  その他の実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤として、ロイコトリエン生合成経路の他の構成要素(例えば、ＬＴＣ４Ｓ、ＬＴＡ４Ｈ、ＬＴＢ４ＤＨ)のポリペプチド活性および／または核酸発現を阻害または拮抗する薬剤とすることができる。  好ましい実施態様によれば、これら薬剤は、ＦＬＡＰまたは５-ＬＯの活性および／または核酸発現を改変する。  好ましい薬剤として、本明細書の薬剤一覧に挙げたものがある。  その他の実施態様によれば、好ましい薬剤として、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((1,1-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロパン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、光学的に純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体および類似体；または、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、これらの光学的に純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体および類似体などがある。  その他の実施態様によれば、このような薬剤として、ロイコトリエン(例えば、ＬＴＡ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４、ＣｙｓＬＴＲ１、ＣｙｓＬＴＲ２)の代謝または活性を改変し、例えば、ロイコトリエンアンタゴニストまたはロイコトリエンに対する抗体、およびロイコトリエン受容体(例えば、ＢＬＴ１、ＢＬＴ２、ＣｙｓＬＴＲ１およびＣｙｓＬＴＲ２)の活性を改変する薬剤がある。
【００２３】
本願発明のある実施態様によれば、対象となる個体とは、例えば、心筋梗塞の危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ遺伝子での危険要素ハプロタイプ、ＦＬＡＰ核酸での多型性、５-ＬＯ遺伝子プロモーターでの危険要素多型性、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、喫煙歴または喫煙者、炎症性マーカー値(例えば、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン、ロイコトリエン代謝産物、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼなどのマーカー値)の上昇、ＬＤＬコレステロールの増大および／またはＨＤＬコレステロールの低減、ロイコトリエン合成の増大の少なくとも一つの危険因子を保有する個体であり、および／または心筋梗塞、ＡＣＳ、持続性狭心症、アテローム性動脈硬化症を少なくとも一度は経験した個体は、冠状動脈内での血流を回復するための処置（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）を必要とする。
【００２４】
本願発明は、本願明細書に記載した通り、ＭＩ、ＡＣＳおよび／またはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬の製造のためのロイコトリエン合成阻害剤の使用、そして、ロイコトリエン合成を抑制させる医薬の製造のためのロイコトリエン合成阻害剤の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
多様な系統情報を、心筋梗塞に関連する染色体13q12での遺伝子をマッピングする強力な遺伝子シェアリング方法に取り込んだ。  1,000マイクロサテライトマーカーのフレームワークマップを用いたＭＩに関する感受性遺伝子についてのゲノム規模の調査によって、13q12に対する関連性が示唆される遺伝子座が明らかになった。  連鎖解析には、６度の減数分裂を経た、６０家族、１５９名の女性ＭＩ患者が参加した。  まず、ＭＩの危険度に密接に関与する遺伝子因子を有する多数の患者を集めるために、女性ＭＩ患者だけを連鎖解析の対象とした。  アイスランドのＭＩ患者の集団から得た試料を用いた以前の疫学的研究によれば、女性ＭＩ患者の同胞での相対危険度は、男性発端者の同胞での相対危険度よりも顕著に高かった(1.59(CI 1.47-1.73)対1.35(CI 1.28-1.42))(未公開データ)ため、ＭＩについての遺伝子因子は、男性よりも女性で強いことが示された。  マーカーＤ１３Ｓ２８９が、最高のＬＯＤスコア(２.５)を示した。  家族に関するＬＯＤスコアは、候補領域に１４個のマイクロサテライトマーカーを添加した後も同じであった。  さらに他のマーカーが介在することで、最高のＬＯＤスコアを示したマーカーの近辺において、０.７〜０.８の分散度で共有可能な情報が付加された。  この連鎖解析では、ＭＩに寄与する遺伝子を、染色体13q12においてマッピングした。
【００２６】
次いで、染色体13q12での候補ＭＩ遺伝子座を、マイクロサテライトマーカーを併用して最後にマッピングした。  心筋梗塞の患者および対照者は、100Kb未満のマーカー間の平均間隔を有するマイクロサテライトマーカーを用いて、まずは、１２Mbの候補領域が遺伝子決定された。  ＭＩ候補遺伝子座での遺伝子型が決定されたすべてのマイクロサテライトマーカーを利用した最初のハプロタイプ連鎖解析は、女性ＭＩと顕著に関連した４つおよび５つのマイクロサテライトマーカーで構成されるいくつかの二次的なハプロタイプをもたらした（例えば、以下の表４および表５を参照）。  これらの二次的ハプロタイプのすべてに共通の領域は、マーカーＤＧ１３Ｓ１６６およびＤ１３Ｓ１２３８によって規定される。  この領域は、唯一の遺伝子(ＦＬＡＰ核酸配列)を含む。  マーカーＤＧ１３Ｓ１６６およびＤ１３Ｓ１２３８に対応する対立遺伝子０および-２のそれぞれに関与する二つのマーカーハプロタイプは、患者で過剰量が認められる。  これらの遺伝子についての特定の変異体が、ＭＩとの関連の観点から検索された。
【００２７】
ＦＬＡＰ遺伝子でのＳＮＰについてスクリーニングを行うために、エキソンおよびイントロンの両方について、遺伝子全体を配列決定した。  最初に、遺伝子内の９つのＳＮＰを、患者および対照者において遺伝子決定した。  ＦＬＡＰ遺伝子の近傍またはＦＬＡＰ遺伝子内での他のマイクロサテライトマーカーを、すべての患者および対照者に関して、遺伝子決定した。  さらに、ＦＬＡＰ遺伝子に対して５'から200Kb以内に位置する５つの公知のＳＮＰを、患者および対照者に関して、遺伝子決定した。  これらのマーカーをも含む患者と対照者の研究におけるハプロタイプ連鎖解析は、女性ＭＩに有意に関連する同じハプロタイプの異種変異体の幾つかを示した(例えば、表６を参照）。  表７は、本明細書において、女性ＭＩ「危険要素」ハプロタイプと称する、これら女性ＭＩ危険度ハロタイプの代表例である二つのハプロタイプを示している。  女性ＭＩ「危険要素」ハプロタイプを保有する男性ＭＩ患者の相対的危険度は増大しており(例えば、表７を参照)、このことは、女性ＭＩ「危険要素」ハプロタイプが、ＭＩを保有する男性での危険度を高めることを示唆している。  さらに、これらの結果は、ＦＬＡＰ遺伝子が、ＭＩ感受性遺伝子であるという仮説を支持するものである。
【００２８】
ＭＩに関連するＳＮＰハプロタイプ
ＭＩに関連するＳＮＰマーカーだけを保有するハプロタイプを同定する過程で、ＦＬＡＰ遺伝子の配列決定および遺伝子の領域フランキングによって、その他のＳＮＰを同定した。  現時点で、１３４３名の患者および関連性の認められない６２４名の対照者において、４５個のＳＮＰをすべて遺伝子決定した。  患者で認められた相関する二つのシリーズのＳＮＰハプロタイプを入念に検討して、それらを表９Ａおよび表９Ｂに示した。  これらのハプロタイプの長さは、３３kb〜６９kbの範囲で変化し、これらのハプロタイプは、連鎖性が不平衡な１つまたは二つのブロックをカバーする。  双方のシリーズのハプロタイプは、ＳＮＰ ＳＧ１３Ｓ２５の共通の対立遺伝子２を含む。  Ａシリーズでのすべてのハプロタイプは、ＳＮＰ ＤＧ００ＡＡＨＩＤを含み、一方で、Ｂシリーズでのすべてのハプロタイプは、ＳＮＰ ＤＧ００ＡＡＨＩＩを含む。  Ｂシリーズにおいて、ハプロタイプＢ４、Ｂ５およびＢ６は、２を超える相対危険度(ＲＲ)を有しており、10％を超える対立遺伝子頻度を有する。  Ａシリーズでのハプロタイプは、わずかに低いＲＲと、さらに低いｐ値を有しているが、高い頻度(１５〜１６％)を有している。  シリーズＢおよびＡでのハプロタイプは、非常に強く相関しており、すなわち、Ｂでのハプロタイプは、Ａでのハプロタイプのサブセットを規定する。  したがって、シリーズＢでのハプロタイプは、Ａよりもさらに特異的である。  しかし、シリーズＡでのハプロタイプは、より感受性であるので、すなわち、ＡよりもＢにおいて、集団性危険度が少ないことが認められているので、複数の変異を保有する個体を得ることになる。  さらに、これらのハプロタイプは、(５５歳以前に最初のＭＩを発病したと定義される)初期に発病した患者について、両性において、類似の危険度比および対立遺伝子頻度を示す。  それに加えて、既知の危険因子(例えば、高血圧、高コレステロール、喫煙および糖尿病)を保有する種々の患者グループを分析しても、これらのハプロタイプとの有意な相関は認められず、このことは、ＦＬＡＰ遺伝子のハプロタイプが、ＭＩに対する固有の遺伝子感受性因子であることを示唆するものである。
【００２９】
ＦＬＡＰ核酸は、５-リポオキシゲナーゼを活性化するタンパク質をコードし、５-リポオキシゲナーゼ(５-ＬＯ)との組み合わせが、ロイコトリエン合成に必要とされている。ＦＬＡＰは、５-ＬＯと協同して作用し、アラキドン酸からロイコトリエンを合成する最初の工程を触媒する。  ＦＬＡＰは、アラキドン酸の５(Ｓ)-ヒドロペルオキシ-６-トランス-８、11、14-シス-エイコサテトラエン酸(５-HPETE)への変換、および、アリル性エポキシド５(Ｓ)-トランス-７、９-トランス-11、14-シス-エイコサテトラエン酸（ロイコトリエンＡ４、ＬＴＡ４)への変換を触媒する。
【００３０】
ロイコトリエンは、単核細胞、マクロファージおよび好中球のような、白血球を誘導する骨髄によって主に産生される炎症性プロセスでの非常に強力な生物学的媒介体のファミリーに属する。  ＦＬＡＰおよび５-ＬＯの双方は、アテローム性動脈硬化症病変内に検出され、血管自身がロイコトリエンの供給源にもなりうる。  ＭＩ-危険度ＦＬＡＰハプロタイプが、高い血清ロイコトリエンレベルと関連することが、本願明細書に記載されている。  かつてアテローム性動脈硬化症病変を保有した個体でのロイコトリエン産生力の改善は、局所的に血栓を形成するプラークの不安定化または繊維状帽の脆砕性を招く場合がある。  このような現象が、冠状動脈内で発生すると、ＭＩまたは非持続性狭心症を招く。  脳血管内でこのような現象が発生すると、発作または一過性の虚血性発作を引き起こす。  体肢に通じる大動脈でこのような現象が発生すると、抹消動脈性の閉塞性疾患を有する患者において、肢部虚血を引き起こしたり、悪化させたりする。  それ故に、高いロイコトリエンレベルをもたらす遺伝子的影響素因を有する個体は、以前に経験したＭＩのようなアテローム性動脈硬化症に起因する現象の発症危険度が高くなる。
【００３１】
ＦＬＡＰ機能の阻害剤は、細胞質から細胞膜への５-ＬＯの転座を妨げ、５-ＬＯの活性化を阻害し、ロイコトリエン合成を減少させる。
【００３２】
これら発見に基づいて、ロイコトリエン阻害剤(例えば、ロイコトリエンの生合成を阻害するか、またはロイコトリエン受容体を介したシグナル伝達を拮抗する薬剤)を用いて、心筋梗塞(ＭＩ)および急性冠動脈症候群(ＡＣＳ)を治療する方法が利用できるようになる。  本願明細書で使用される「治療」の語は、疾患または状態に関連する症状を改善するだけでなく、疾患または状態の発症の防止または遅延；疾患または状態の二次的症状の発生の防止または遅延；および／または、疾患または状態の重篤度または頻度を減らすことを指す。  アテローム性動脈硬化症の場合には、「治療」はさらに、プラークの成長の最小化または減退を指す。  さらに、ＭＩまたはＡＣＳの個体の危険度を評価するための方法も利用可能である。  好ましい実施態様によれば、治療される個体は、ＭＩまたはＡＣＳに感受性である(危険度が増加している)個体であり、例えば、本願明細書に記載される代表的な標的集団の一つに属する個体である。
【００３３】
代表的な標的集合
本願発明の実施態様でのＭＩまたはＡＣＳの危険性を有する個体とは、本願明細書では、ＦＬＡＰにおける危険要素ハプロタイプを有する個体を指す。  ある実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAJFF、DGOOAAHII、SG13S32およびSG13S35を含む。  その他の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  第三の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーSG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  第四の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32を含む。  第五の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーSG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32を含む。  ＦＬＡＰ危険要素ハプロタイプを有する個体におけるＭＩまたはＡＣＳの危険度の増加は、血液および／または動脈血管壁内での、動脈血管壁または骨髄で誘導される炎症性細胞によるロイコトリエン産生の上昇とも論理的にも符合する。  ＦＬＡＰ危険要素ハプロタイプは、高い血清ロイコトリエンＥ４レベルとも関連することが、本願明細書において示されている。  血清ロイコトリエンレベル(特に、ロイコトリエンＥ４)が、心筋梗塞の患者における血清ＣＲＰレベルと相関することも、本願明細書において示されている。  それ故に、ＦＬＡＰ遺伝子の変異は、(血管内および／または全身での)ロイコトリエンレベルの増大を招き、ＭＩの危険因子として示されたＣＲＰレベルも高くなる。  それ故に、ＦＬＡＰ危険要素ハプロタイプを有する個体は、高い血清Ｃ反応性タンパク質を有すると考えられる。  血清Ｃ反応性タンパク質のレベルは、危険要素ＦＬＡＰハプロタイプの存在に起因する脂質蓄積とアテローム発生によって引き起こされる動脈壁の炎症レベルとしても使用することができる。
【００３４】
本願発明のその他の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳの危険性を有する個体とは、ＦＬＡＰ遺伝子の多型性を有する個体であって、また、本願明細書でいう多型性とは、ＭＩまたはＡＣＳに対する感受性の指標でもある。  本願明細書で使用する「遺伝子」の語は、ポリペプチドをコードする核酸のみならず、プロモーター領域、転写改善要素、スプライシングドナー／アクセプター部位、および他の非転写核酸要素をも指す。  代表的な多型性としては、以下の表３に挙げたものがある。
【００３５】
本願発明のさらにその他の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳの危険性を有する個体とは、本願明細書では、プロモーター領域内の５-ＬＯ遺伝子に危険要素多型性を有する個体のことを指す。
【００３６】
第四の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳの危険性を有する個体とは、炎症性マーカー値が増大した個体を指す。  本願明細書で使用する「増大した炎症性マーカー値」とは、統計学的に有意な量よりも多く、対照の個体において通常認められる量よりも多いか、または、最低測定値(例えば、平均または中央値より低い値、四分位点または五分位点の最低値)に関連する集合における疾患危険度を、高測定値(例えば、平均または中央値より高い値、第２、第３または第４の四分位点；第２、第３、第４または第５の五分位点)のそれと比較して得られる炎症性マーカーの量である。  「炎症性マーカー」とは、個体での炎症の存在の指標となる分子、例えば、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエンレベル（例えば、ロイコトリエンＥ４）、ロイコトリエン代謝産物(システイニルロイコトリエン１)、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼ、または他のマーカー（例えば、Doggen, C. J. M. et al., J. Internal Med., 248:406-414（2000）; Ridker, P. M. et al., New England. J. Med. 1997:336:973-979, Rettersol, L.et al., 2002: 160:433-440; Ridker, P. M. et al., New England, J. Med., 2002: 347:1557-1565; Bermudez, E. A. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2002: 22:1668-1673）、などの分子を指す。  ある特定の実施態様によれば、このような炎症性マーカーの存在は、血清中または尿中で測定することができる。
【００３７】
第五の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体では、ＬＤＬコレステロールが多く、および／または、ＨＤＬコレステロールレベルが低い。  例えば、米国心臓協会は、100mg/dl未満のＬＤＬコレステロールレベルが最適であり；100〜129mg/dlのレベルは最適値に近く／最適値より上であり；130〜159mg/dlがボーダーラインより上であり；160〜189mg/dlは高い値域であり；190mg/dlを超えると非常に高い、との見解を示している。  従って、ＬＤＬレベルの高さが故にＭＩまたはＡＣＳの危険性が認められる個体は、例えば、最適値に近い／最適値より上のレベル、ボーダーラインよりも高いレベル、高いレベルまたは非常に高いレベルという表現が用いられる、100mg/dlを超えるコレステロールを有する。  同様に、米国心臓協会は、40mg/dl未満のＨＤＬコレステロールレベルは、心臓疾患の危険性が大きいことを示しており、60mg/dl以上のＨＤＬコレステロールレベルは、心臓疾患に対して予防的である、との見解を示している。  それ故に、ＨＤＬレベルが低いためにＭＩまたはＡＣＳの危険性が認められる個体とは、例えば、40mg/dl未満のＨＤＬコレステロールといった、60mg/dl未満のＨＤＬコレステロールを保有する個体である。
【００３８】
第六の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体では、ロイコトリエン合成が増加している個体である。  本願明細書で用いる「ロイコトリエン合成の増加」の表現は、統計学的に有意な量よりも多く、対照の個体において通常認められるロイコトリエン産生量よりも多いか、または、最低測定値(例えば、平均または中央値より低い値、四分位点または五分位点の最低値)ににおける疾患危険度を、高測定値(例えば、平均または中央値より高い値、第２、第３または第４の四分位点；第２、第３、第４または第５の五分位点)のそれと比較して得られるロイコトリエン産生量である。  例えば、ＦＬＡＰ危険要素ハプロタイプは、高い血清ロイコトリエン合成レベルと相関する。  個体でのロイコトリエン合成の増加は、種々の方法によって評価することができる。  例えば、個体から得た試料(例えば、血清、血漿または尿)に含まれるロイコトリエン代謝物(例えば、ＬＴＥ４)を評価することで、ＭＩ、ＡＣＳまたはアテローム性動脈硬化症の危険度の増大について評価できる。  ロイコトリエン代謝物レベルの増大は、ロイコトリエンの産生が増加していること、ＭＩ、ＡＣＳまたはアテローム性動脈硬化症の危険度が増大していることを示す。
【００３９】
さらにその他の実施態様でのＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体とは、ＭＩまたはＡＣＳの少なくとも一方を経験しているか、または持続性狭心症を患っており、それ故に、二次的なＭＩまたはＡＣＳの危険性がある個体である。  その他の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体とは、アテローム性動脈硬化症を患った個体、または動脈血流を再生するための処置(例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植)を必要とする個体である。
【００４０】
さらにその他の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体とは、糖尿病、高血圧、高コレステロール血症、lp(a)増大、肥満、および／または喫煙歴または喫煙者である個体である。
【００４１】
ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体は、これらに典型的な標的集団の一つ以上の集団に属する場合がある。  例えば、ＭＩおよびＡＣＳの少なくとも一方を経験しており、かつ炎症性マーカーレベルが高い個体などである。  本願明細書で使用する「標的集団内の個体」は、前述した典型的な標的集団代表的な標的集合の一つ以上の集団に属するＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体を指す。
【００４２】
危険要素ハプロタイプの評価
本願明細書で使用する「ハプロタイプ」の語は、表３に記載したような遺伝子マーカーの組み合わせ(「対立遺伝子」)を指す。  ある実施態様によれば、ハプロタイプは、一つ以上の対立遺伝子、二つ以上の対立遺伝子、三つ以上の対立遺伝子、四つ以上の対立遺伝子、または五つ以上の対立遺伝子を含む。  遺伝子マーカーとは、ＦＬＡＰに関連する「多型性部位」に位置する特定の「対立遺伝子」である。  集団(天然集団、または合成分子などの合成集団)内での一つ以上の配列が存在可能なヌクレオチド位置を、本願明細書では、「多型性部位」と称している。  多型性部位が、単一のヌクレオチド長である場合、上記部位は、単一ヌクレオチド多型性(「ＳＮＰ」)と称する。  例えば、特定の染色体位置で、アデニンを有する集団の構成要素、それに、チミンを有する別集団の構成要素が同じ位置に存在する場合、この位置は多型性部位と言え、具体的には、この多型性部位は、ＳＮＰである。  多型性部位は、置換、挿入または欠失に基づいて配列内で変化することができる。  多型性部位での配列の変更態様を、本願明細書では、多型性部位の「対立遺伝子」と称する。  したがって、前記した例のＳＮＰでは、アデニン対立遺伝子およびチミン対立遺伝子の両方が可能となる。
【００４３】
通常、参照配列は、特定の配列に対して参照される。  参照配列と異なる対立遺伝子は、「変異体」対立遺伝子と称する。  例えば、参照ＦＬＡＰ配列を、本願明細書の配列番号：１に記載している。  本願明細書で使用する「変異体ＦＬＡＰ」の用語は、配列番号：１とは異なるが、その他の部分は実質的に同じである配列を指す。  本願明細書に記載のハプロタイプを生成する遺伝子マーカーは、ＦＬＡＰ変異体である。
【００４４】
その他の変異体として、例えば、ＦＬＡＰポリペプチドに影響を与える変化を付与するポリペプチドがある。  参照ヌクレオチド配列と比較した場合に、先述したように、これら配列での相違点として、フレームシフトを引き起こす一個または一つ以上のヌクレオチドの挿入；コードしたアミノ酸に変化を付与する少なくとも一つのヌクレオチドの変化；未成熟の停止コドンを生成する少なくとも一つのヌクレオチドの変化；ヌクレオチドによってコードされる一つ以上のアミノ酸を欠失する幾つかのヌクレオチドの欠失；読取枠のコード配列を中断する非等価の組換えまたは遺伝子変換のような一つ以上のヌクレオチドの挿入；配列のすべてまたは一部の複製；転座；またはヌクレオチド配列の転位などがある。  このような配列変化は、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドを改変する。  例えば、核酸配列内の変化がフレームシフトを生じさせる場合、フレームシフトは、コードされるアミノ酸を改変したり、および／または切断されたポリペプチドを生成する未成熟の停止コドンを生成する場合がある。  あるいは、ＭＩまたはＭＩ感受性に関連する多型性が、一つ以上のヌクレオチドでの同様の改変(すなわち、アミノ酸配列に変化を及ぼさない改変)である場合がある。  このような多型性は、例えば、スプライシング部位を改変し、ｍＲＮＡの安定性または移動性に影響を及ぼすか、さもなければ、ポリペプチドの転写または翻訳に影響を与える場合がある。  参照ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドは、特定の参照アミノ酸配列を有する「参照」ポリペプチドであり、また、変異体対立遺伝子によってコードされるポリペプチドは、変異体アミノ酸配列を有する「変異体」ポリペプチドと称される。
【００４５】
ハプロタイプとは、遺伝子マーカーの組み合わせ、例えば、多型性部位での特定の対立遺伝子の組み合わせである。  本願明細書に記載のハプロタイプ、例えば、表３に記載のマーカーを有するハプロタイプは、ＭＩを保有しない個体よりも、ＭＩを保有する個体においてより頻繁に認められる。  したがって、これらのハプロタイプは、個体でのＭＩまたはＭＩ感受性を検出するための予測値をもたらす。  ある事例において、本願明細書に記載のハプロタイプは、種々の遺伝子マーカーの組み合わせ、例えば、ＳＮＰおよびマイクロサテライトである。  それ故に、ハプロタイプの検出は、上記したような方法に従って、多型性部位で配列を検出するための当該技術分野で公知の方法によって実現することができる。
【００４６】
本願明細書に記載の特定の方法において、ＭＩまたはＡＣＳについての危険性がある個体とは、危険要素ハプロタイプが同定される個体である。  ある実施態様によれば、危険要素ハプロタイプは、ＭＩの有意な危険度を示す。  ある実施態様によれば、ハプロタイプに関連する有意性は、見込値によって測定される。  その他の実施態様によれば、有意性は年齢％によって測定される。  ある実施態様によれば、有意な危険度は、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６、１.７、１.８および１.９を含むが、これらに限定されず、少なくとも約１.２の見込値で測定される。  さらにその他の実施態様によれば、少なくとも１.２の見込値が有意である。  さらにその他の実施態様によれば、少なくとも約１.５の見込値が有意である。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加は、少なくとも約１.７で有意である。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加とは、約25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、および98％を含むが、これらに限定されず、少なくとも約20％である。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加は、少なくとも約50％である。  しかしながら、危険度が医薬的に有意であるか否かを同定することは、特定の疾患、ハプロタイプおよび環境因子を含む種々の因子に依存する場合がよくあるものと考えられる。
【００４７】
ＦＬＡＰ遺伝子またはＦＬＡＰ遺伝子の一部を含む危険要素ハプロタイプは、健康な個体(対照者)に存在する頻度と比較して、ＭＩまたはＡＣＳに罹患した個体(患者)での危険要素においてハプロタイプがさらに頻繁に認められる場合、ハプロタイプの存在が、ＭＩまたはＡＣＳあるいはそれらへの感受性を示す。  ＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトマーカーの存在に関する遺伝子決定のための標準的な技術、例えば、蛍光を利用した技術(Chen et al., Genome Res. 9, 492（1999））、ＰＣＲ、ＬＣＲ、Nested ＰＣＲ(プライマーシフトＰＣＲ)および核酸増幅のためのその他の技術を使用することができる。      
【００４８】
好ましい実施態様によれば、この方法は、個体でのＦＬＡＰ遺伝子またはＦＬＡＰ遺伝子の一部を含むＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトの存在または頻度を評価する工程を含み、この工程において、健康な対照者と比較して、ＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトが過剰または高頻度であることは、個体がＭＩまたはＡＣＳを有するか、またはそれらに感受性であることを示唆する。  例えば、スクリーニング手段として使用可能なハプロタイプを形成可能なＳＮＰおよびマーカーについては、表３(後出)を参照されたい。  これらのマーカーおよびＳＮＰは、危険要素ハプロタイプにおいて同定することができる。  例えば、危険要素ハプロタイプは、マイクロサテライトマーカーおよび／またはＳＮＰ(例えば、表３に記載のもの)を含むことができる。  ハプロタイプの存在によって、ＭＩまたはＡＣＳ、またはそれらに対する感受性が示されるので、そのものが、本願明細書に記載の治療方法での標的集団に属する個体であることが明らかとなる。
【００４９】
ハプロタイプ分析は、ＬＯＤスコアによって候補と定められる感受性遺伝子座をも特定する。  次いで、特定された領域を、１００Kb未満の平均マーカー間隔を有するマイクロサテライトマーカーを用いて、超微細にマッピングする。  公的なデータベースに認められ、この領域内でもマッピングされる、すべての使用可能なマイクロサテライトマーカーを使用することができる。  加えて、ヒトゲノムのdeCODE遺伝子配列アセンブリにおいて同定されたマイクロサテライトマーカーを使用することができる。  期待値-最大化アルゴリズムを用いて、患者および対照者でのハプロタイプの頻度を、概算することが可能である(Dempster A. et al., 1977. J. R. Stat. Soc. B, 39: １-389）。  欠失した遺伝子型に対応して、段階の不確実性に対処可能な、アルゴリズムを実施することができる。      
【００５０】
帰無仮説下で、患者および対照者が、同一の頻度を有すると想定する。  同様の方法を用いて、本願明細書に記載のマーカーを含むことができる候補危険要素ハプロタイプが、対照者よりも患者において高頻度に認められる一方で、他のハプロタイプの頻度は双方のグループで同じであるという別の仮説が試される。  両仮説の下で個別に確度が最大化され、対応する統計学的ｌ-df確度比を、統計学的な有意性を評価するために用いる。
【００５１】
ｌ-lodドロップでの危険要素ハプロタイプを検索するために、例えば、現実的な領域を具備したマーカースパンを実現ならしめるために、遺伝子決定されたマーカーのすべての可能な組み合わせについて関連性が試験される。  患者グループおよび対照者グループを一旦合わせて後、元来の患者グループおよび対照者グループと同じ規模の任意の二つの集団に分割することができる。  次いで、ハプロタイプ分析を繰り返して、登録された最も有意なｐ値を決定する。  このランダム化スキームを、ｐ値の経験的分布を構築するために、例えば、１００回超の回数で繰り返すことができる。
【００５２】
ある実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAJFF、DGOOAAHII、SG13S32およびSG13S35を含む。  その他の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  第三の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーSG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  第四の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32を含む。
【００５３】
治療の方法
本願発明は、個体、例えば、上記した標準集団内の個体でのＭＩまたはＡＣＳを(予防的および／または治療的に)処置する方法、ならびにＦＬＡＰまたはロイコトリエン経路の他の構成要素に関連するその他の疾患および状態(例えば、アテローム性動脈硬化症)を治療する方法を包む。  本願明細書に記載の「ロイコトリエン経路」の構成要素は、ポリペプチド(例えば、酵素、受容体)、およびロイコトリエン産生に関連する他の分子：例えば、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、その他のロイコトリエン生合成酵素(例えば、ロイコトリエンＣ４シンセターゼ、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ)などの酵素；受容体または酵素の結合剤；例えば、LTA4、LTB4、LTC4、LTD4、LTE4、CysLT1およびCysLT2などのロイコトリエン；および、ロイコトリエンの受容体（例えば、ロイコトリエンＢ４受容体１(BLT1)、ロイコトリエンＢ４受容体２(BLT2)、システイニルロイコトリエン受容体１(CysLTR1)、システイニルロイコトリエン受容体２(CysLTR2))を含む。
【００５４】
特に、本願発明は、(例えば、上述したような危険要素集団での個体に認められる)心筋梗塞または心筋梗塞感受性を治療する方法；および、急性冠症候群(例えば、非持続性狭心症、非ＳＴ増大性心筋梗塞(ＮＳＴＥＭＩ)またはＳＴ増大性心筋梗塞(ＳＴＥＭＩ)の治療方法；二次的心筋梗塞の危険性を低減するための治療方法；アテローム性動脈硬化症のための、例えば、動脈(例えば、冠状動脈)の血流を再生するための治療（例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植）を必要とする患者のための治療方法；および／またはロイコトリエン合成を減少させるための(例えば、ＭＩまたはＡＣＳを治療するための)治療方法に関する。
【００５５】
また、本願発明は、例えば、本願明細書に記載の方法を用いて、ＭＩ、ＡＣＳ、および／またはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬の製造のための、本願明細書に記載の一つ以上のロイコトリエン合成阻害剤の使用に関する。
【００５６】
本願発明の方法では、「ロイコトリエン合成阻害剤」が使用される。  ある実施態様によれば、「ロイコトリエン合成阻害剤」として、本願明細書に記載のＦＬＡＰポリペプチド活性および／またはＦＬＡＰ核酸発現を阻害する薬剤(例えば、核酸アンタゴニスト)がある。  その他の実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤は、ロイコトリエン生合成経路の他の構成要素(例えば、５-ＬＯ；LTC4S；LTA4H；LTB4DH)のポリペプチド活性および／または核酸発現を阻害する薬剤である。  さらにその他の実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤は、ロイコトリエンの活性または代謝を改変する薬剤(例えば、ロイコトリエンのアンタゴニスト；ロイコトリエン受容体のアンタゴニスト)である。  好ましい実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤は、ＦＬＡＰまたは５-ＬＯの活性および／または核酸発現を改変するか、または、ＦＬＡＰと５-ＬＯとの間の相互作用を改変する。
【００５７】
ロイコトリエン合成阻害剤は、種々の手段、例えば、触媒的分解、調節抑制、またはロイコトリエン経路の構成要素をコードする核酸の発現、転写または翻訳への干渉；ポリペプチドの後翻訳加工による改変；スプライシング変異体の転写の改変；または、ポリペプチド活性への干渉(例えば、ポリペプチドへの結合、またはロイコトリエン経路の構成要素と相互作用する他のポリペプチド(例えば、本願明細書に記載のＦＬＡＰ結合剤またはロイコトリエン経路を構成するその他の結合剤)への結合；ロイコトリエン経路の二つ以上の構成要素間での相互作用(例えば、ＦＬＡＰと５-ＬＯとの間の相互作用)の改変；または、ロイコトリエン経路の構成要素の活性への拮抗などによって、ロイコトリエンの構成要素のポリペプチド活性または核酸発現を改変することができる。
【００５８】
代表的なロイコトリエン合成阻害剤として、以下のものがある：
ロイコトリエン生合成経路の構成要素(例えば、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ)の活性を阻害する、以下の薬剤一覧表に示した薬剤、LTC4S、LTA4H、LTB4DH。
【００５９】
ロイコトリエンの構成要素の受容体(例えば、ＦＬＡＰ受容体、LTA4受容体、LTB4受容体、LTC4受容体、LTD4受容体、TLE4受容体、CysLT1受容体、CysLT2受容体、５-ＬＯ受容体)の活性を阻害する薬剤；BLT1；BLT2；CysLTR1；CysLTR2；ロイコトリエン経路の構成要素に結合する薬剤、例えば、ＦＬＡＰ結合剤(例えば、５-ＬＯ)、ロイコトリエン経路の構成要素の受容体に結合する薬剤(例えば、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト）；または、ロイコトリエンに結合する薬剤(例えば、LTA4、LTB4、LTC4、LTD4、LTE4、CysLT1、CysLT2)またはロイコトリエンの活性に影響を与える(例えば、活性を増大または減少させる)薬剤；
ロイコトリエンに対する抗体；
二本鎖アンチセンス核酸または短い二本鎖を妨げるＲＮＡ、ＦＬＡＰ、５-ＬＯまたはロイコトリエンシンセターゼポリペプチドをコードする核酸に対するアンチセンス核酸を含む、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ、またはロイコトリエンシンセターゼ、またはその他のロイコトリエンの構成要素、またはこそれらの断片または誘導体をコードする核酸に対する抗体、およびこのようなアンチセンス核酸を含むベクター(例えば、核酸、ｃＤＮＡ、および／またはｍＲＮＡ、二本鎖を妨げるＲＮＡ、またはそれらの活性断片または誘導体をコードする核酸、またはオリゴヌクレオチド；例えば、配列番号：１または３に記載の一つの相補体、または配列番号：２をコードする核酸に対する核酸相補体、またはそれらの断片または誘導体）；疑似ペプチド；融合タンパク質またはそれらのプロドラッグ；リボザイム；その他の低分子；および
ロイコトリエン経路の構成要素(例えば、ＦＬＡＰまたは５-ＬＯ核酸またはポリペプチド活性)の発現を改変する(例えば、阻害または拮抗する)他の薬剤、またはＦＬＡＰスプライシング変異体または５-ＬＯスプライシング変異体の転写を制御する薬剤(例えば、スプライシング変異体の発現に影響を与える薬剤、または各スプライシング変異体の発現量に影響を与える薬剤）。
【００６０】
一個を超えるロイコトリエン合成阻害剤を、必要に応じて、併用することができる。
【００６１】
治療は、個体での活性を阻害または拮抗することで、ＦＬＡＰポリペプチド、５-ＬＯポリペプチド、またはロイコトリエン経路のその他の構成要素の活性を改変するように設計される。  例えば、ロイコトリエン合成阻害剤は、個体内でロイコトリエンの合成を減少させるために、またはＦＬＡＰ核酸またはＦＬＡＰ核酸の特定のスプライシング変異体の発現または利用可能性を低減または減少させるために投与することができる。  天然のＦＬＡＰ核酸または特定のスプライシング変異体の発現または活性を最小限にする発現または利用可能性の低減は、欠陥核酸または特定のスプライシング変異体の発現または活性を最小限にし、それにより、欠陥核酸または特定のスプライシング変異体の生成を最小限にする。  同様に、例えば、ロイコトリエン合成阻害剤は、５-ＬＯをコードする核酸または５-ＬＯをコードする核酸による、特定のスプライシング変異体の発現または利用可能性の低減または減少させるために投与することができる。
【００６２】
ロイコトリエン合成阻害剤は、治療的有効量(すなわち、疾患または状態に関連する症状を軽減し、疾患または状態の発症の防止または遅延によって、および／または、疾患または状態の症状の重篤度または頻度を少なくすることによって、疾患または状態を治療するのに十分な量)で投与される。  個体での特定の疾患または状態の治療における治療的有効量は、症状および疾患の重篤度に依存しており、標準的な臨床技術によって決定することができる。  加えて、最適な投薬範囲の同定を補助すべく、in vitroまたはin vivoアッセイを任意に使用することができる。  さらに、配合物に用いられる正確な投薬量は、投与経路、疾患または障害の重篤度に応じて、医師の判断および患者個々の状態に従って決定されるべきである。  効果的な投薬は、in vitro試験系または動物モデル試験系で得られる投薬-応答曲線から推定してもよい。
【００６３】
本願発明の好ましい実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤薬剤は、ＦＬＡＰおよび／または５-ＬＯの活性を阻害する薬剤である。  好ましい薬剤を、以下の薬剤一覧表に示した。
【００６４】
【表１Ａ】
2006508180.tif 000002
【００６５】
【表１Ｂ】
2006508180.tif 000003
本願発明の好ましい方法によれば、薬剤一覧表に示した薬剤は、ＦＬＡＰ、またはロイコトリエン経路のその他の構成要素、またはロイコトリエン合成の増大に関連する疾患および状態を予防的および／または治療的に治療するために使用可能である。  特に、これら薬剤は、上述したような危険要素集団に属する個体での(例えば、コレステロールの増大、Ｃ反応性タンパク質の増加、および／または遺伝子型のような同定された危険因子に基づく)心筋梗塞または心筋梗塞感受性；急性冠状症候群、例えば、非持続性狭心症、非ＳＴ増大性心筋梗塞(ＮＳＴＥＭＩ)またはＳＴ増大性心筋梗塞(ＳＴＥＭＩ)を治療するために；心筋梗塞を一度以上経験した個体での二次的心筋梗塞の危険度を低減するために；動脈(例えば、冠状動脈)の血流を再生するための処置(例えば、血管形成術、ステント、冠状動脈バイパス移植)を必要とする患者でのアテローム性動脈硬化症を治療するために；および／または、ロイコトリエン合成を減少させる(例えば、心筋梗塞を治療する)ために、使用することができる。
【００６６】
本願発明の好ましい実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤として、ＦＬＡＰの阻害剤、例えば、ＭＫ-０５９１とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１-ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＢＡＹ-ｘ-１００５とも称される(Ｒ)-(＋)-α-シクロペンチル-４-(２-キノリニルメトキシ)-ベンゼン酢酸、Ａ-８１８３４とも称される３-(３-(１、１-ジメチルエチルチオ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロメチルフェニル)インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-０-２-酢酸、それらの光学的に純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体、および類似体、それに、ヒトへの投与によってロイコトリエン生合成を効果的に減少せいめるＦＬＡＰを阻害するその他の化合物がある。
【００６７】
本願発明のその他の好ましい実施態様によれば、ロイコトリエン合成阻害剤として、５ＬＯの阻害剤、例えば、ジロイトン、アトレロイトン、ＺＤ-２１３８とも称される６-((３-フルオロ-５-(テトラヒドロ-４-メトキシ-２Ｈ-ピラン-４イル)フェノキシ)メチル)-１-メチル-２(１Ｈ)-キノリノン、ＭＫ-８８６とも称される１-((４-クロロフェニル)メチル)-３-((１、１ジメチルエチル)チオ)-α、α-ジメチル-５-(２-キノリニルメトキシ)-１Ｈ-インドール-２-プロピオン酸、ＣＪ-１３６１０とも称される４-(３-(４-(２-メチル-イミダゾール-１-イル)-フェニルスルファニル)-フェニル)-テトラヒドロ-ピラン-４-カルボン酸アミド、これらの光学的に純粋な鏡像異性体、塩類、化学的誘導体および類似体、それに、ヒトへの投与によってロイコトリエン生合成を効果的に減少せいめる５-ＬＯを阻害するその他の化合物がある。
【００６８】
上記化合物は、以下の式；
【００６９】
【化１】
2006508180.tif 000004
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｍは、水素、薬学的に許容されるカチオン、薬学的に許容される代謝的に開裂可能な基からなるグループから選択され；Ｂは、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の二価アルキレンであり；Ｚは、１〜６個の炭素原子を有するアルキルまたは１〜６個の炭素原子を有するハロアルキルで任意に置換された、チアゾリルであり；Ｌは、(ａ)１〜６個の炭素原子を有するアルキレン、(ｂ)２〜６個の炭素原子を有するアルケニレン、(ｃ)２〜６個の炭素原子を有するアルキニレン、(ｄ)１〜６個の炭素原子を有するヒドロキシアルキル、(ｅ)＞Ｃ＝Ｏ、(ｆ)＞Ｃ=Ｎ-ＯＲ1（Ｒ1は、水素またはＣ1〜Ｃ6アルキルである）、(ｇ)-(ＣＨＲ1)n(ＣＯ)(ＣＨＲ2)m（ｎおよびｍは、独立して、１〜６の整数から選択され、Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素およびＣ1〜Ｃ6-アルキルから選択される)からなるグループから選択され、(ｈ)-(ＣＨＲ1)nＣ=ＮＯＲ2（Ｒ1、Ｒ2およびｎは、先に定義した通りである)；(ｉ)-(ＣＨＲ1)nＯＮ=ＣＲ2（Ｒ1、Ｒ2およびｎは、先に定義した通りである)；(ｊ)-(ＣＨＲ1)n-Ｏ-(ＣＨＲ2)m-（Ｒ1、Ｒ2、ｎおよびｍは、先に定義した通りである)、(ｋ)-(ＣＨＲ1)n-ＮＲ2(ＣＨＲ3)m-（Ｒ1、Ｒ2、ｎおよびｍは、先に定義した通りであり、Ｒ3は水素およびＣ1〜Ｃ6-アルキルから選択される）；(ｌ)-(ＣＨＲ1)n-Ｓ-ＣＨＲ2)m-（Ｒ1、Ｒ2、ｎおよびｍは、先に定義した通りである）；および(ｍ)-(ＣＨＲ1)n-(ＳＯ2)-(ＣＨＲ2)m-（Ｒ1、Ｒ2、ｎおよびｍは、先に定義した通りである）からなるグループから選択され；Ａは、１〜６個の炭素原子を有するアルキルで任意に置換された炭素環アリール、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するヒドロキシアルキル、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ、２個のアルコキシ部分が、各々独立して、１〜６個の炭素原子、１〜６個の炭素原子を有するアルキルチオ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、１〜６個の炭素原子を有するアルキルアミノ、ジアルキルアミノを含有してもよいアルコキシアルコキシル、２個のアルキル基が独立して、１〜６個の炭素原子、２〜８個の炭素原子を有するアルカノイルアミノを含有していてもよいジアルキルアミノ、アルカノイルが２〜８個の炭素原子を有し、アルキル基が１〜６個の炭素原子を有し、アルキルアミノカルボニルが２〜８個の炭素原子を有しているＮ-アルカノイル-Ｎ-アルキルアミノ、２個のアルキル基が独立して１〜６個の炭素原子を有するカルボキシル、アルコキシカルボニルを有するか、または２〜８個の炭素原子を有し、場合により１〜６個の炭素原子、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲン、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換されるフェノキシで置換されるフェニル、または、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換されるフェニルチオを有するジアルキルアミノアルボニルである。  好���しくは、この化合物は、(Ｒ)-Ｎ-[３-[-５-(４-フルオロフェニルメチル)チアゾ-２-イル]-１メチル-２-プロピニル]-Ｎ-ヒドロキシウレアと命名された化合物またはそれらの薬学的に許容される塩である。  本願明細書に参考までに取り込んだ米国特許第4,615,596号を参照されたい。
【００７０】
上記化合物は、以下の式；
【００７１】
【化２】
2006508180.tif 000005
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ａは、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の二価アルキレン、および３〜８個の炭素原子を有する二価シクロアルキレンからなるグループから選択され；Ｒ1は、水素、１〜６個の炭素原子を有するアルキルチオ、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、またはハロゲンによって任意に置換された１〜６個の炭素原子を有するフェニルチオ、アルキル部分が１〜６個の炭素原子を含有し、フェニル基が、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されるフェニルアルキルチオからなるグループから選択され、Ｒ2は、-COOBからなるグループから選択され、ここで、Ｂは、水素、薬学的に許容されるカチオン、または代謝的に開裂可能な基、すなわち、１〜６個の炭素原子を有するアルキル部分を含む-COOアルキル、アルキル部分が、１〜６個の炭素原子を有するアルキルで任意に置換され、およびアリール部分が、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、またはハロゲンで任意に置換される-COOアルキル炭素環式アリール、-CONR5R6の式で表され、Ｒ5は、水素、ヒドロキシル、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、および１〜６個の炭素原子を有するアルコキシから選択され、Ｒ6は、水素および１〜６個の炭素原子を有するアルキル、-COR6、および-OHからなるグループから選択され；Ｒ3は、アルキル部分が、１〜６個の炭素原子を含有し、フェニル基が、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、またはハロゲンで任意に置換されるフェニルアルキルであり、Ｒ4は、アルキル部分が、１〜６個の炭素原子を含有し、ヘテロアリール部分が、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、またはハロゲンで任意に置換され、チアゾリルオキシが、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシまたはハロゲンで任意に置換されるチアゾリルアルキルオキシからなるグループから選択される。  本願明細書に参考までに取り込んだ米国特許第5,288,743号を参照されたい。
【００７２】
上記化合物は、以下の式；
【００７３】
【化３】
2006508180.tif 000006
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｍは、水素、薬学的に許容されるカチオンからなるグループから選択され；Ｂは、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の二価アルキレンであり；Ｚは、(ａ)１〜６個の炭素原子を有するアルキル、または１〜６個の炭素原子を有するハロアルキルで任意に置換されたフリル、および(ｂ)１〜６個の炭素原子を有するアルキル、または１〜６個の炭素原子を有するハロアルキルで任意に置換されたチエニルからなるグループから選択され；および、Ｌは、１〜６個の炭素原子を有するアルキレンであり；Ａは、１〜６個の炭素原子を有するアルキルで任意に置換されたフェニル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するヒドロキシアルキル、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ、２個のアルコキシ部分が各々独立して、１〜６個の炭素原子、１〜６個の炭素原子を有するアルキルチオ、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、アミノ、１〜６個の炭素原子を有するアルキルアミノを含有してもよいアルコキシアルコキシル、２個のアルキル基が独立して、１〜６個の炭素原子、２〜８個の炭素原子を有するアルカノイルアミノを含有していてもよいジアルキルアミノ、アルカノイルが２〜８個の炭素原子を有し、アルキル基が１〜６個の炭素原子を有し、アルキルアミノカルボニルが２〜８個の炭素原子を有しているＮ-アルカノイル-Ｎ-アルキルアミノ、２個のアルキル基が独立して１〜６個の炭素原子を有するカルボキシル、２〜８個の炭素原子を有するアルコキシカルボニルを有し、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換されるフェニル、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換されるフェノキシ、または、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ、ヒドロキシまたはハロゲンで任意に置換されるフェニルチオを有するジアルキルアミノカルボニルである。  好ましくは、上記化合物は、Ｎ-[３-(５-４-フルオロフェニルメチル)フル-２-イル]-３-ブチン-２-イル]-Ｎ-ヒドロキシウレア；Ｎ-[３-(５-４-フルオロフェニルメチル)-２-チエニル)-１-メチル-２-プロピニル]-Ｎ-ヒドロキシウレア；(Ｒ)-Ｎ-[３-(５-４-フルオロフェニルメチル)-２-チエニル)-１-メチル-２-プロピニル]-Ｎ-ヒドロキシウレア；および、(Ｒ)-Ｎ-[３-(５-４-クロロフェニルメチル)-２-チエニル)-１-メチル-２-プロピニル]-Ｎ-ヒドロキシウレア；(Ｓ)-Ｎ-[３-(５-４-フルオロフェニルメチル)-２-チエニル)-１-メチル-２-プロピニル]-Ｎ-ヒドロキシウレアからなるグループから選択される化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩類である。  本願明細書に参考までに取り込んだ米国特許第5,288,751号を参照されたい。
【００７４】
上記化合物は、以下の式；
【００７５】
【化４】
2006508180.tif 000007
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ａは、１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の二価アルキレン、２〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝の二価アルケニレン、および３〜８個の炭素原子を有する二価シクロアルキレンからなるグループから選択され；Ｒ1は、１〜６個の炭素原子を有するアルキルチオであり；Ｒ6は、水素および１〜６個の炭素原子を有するアルキルからなるグループから選択され；Ｒ7は、アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する（カルボキシル）アルキル、アルコキシカルボニル部分が２〜６個の炭素原子を有し、アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する（アルコキシカルボニル）アルキルを有し、アルキル部分が１〜６個の炭素原子を有する（アミノカルボニル）アルキル、アルキル部分がそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する((アルキルアミノ)カルボニル)アルキル、アルキル部分がそれぞれ独立して、１〜６個の炭素原子を有する((ジアルキルアミノ)カルボニル)アルキルからなるグループから選択され；Ｒ3は、フェニルアルキルであり、ここで、アルキル部分は１〜６個の炭素原子を有し；Ｒ4は、１〜６個の炭素原子を有するアルキル、１〜６個の炭素原子を有するハロアルキル、１〜１２個の炭素原子を有するアルコキシ、ハロゲン、またはヒドロキシで任意に置換された、２-、３-または６-キノリルメトキシである。  好ましくは、上記化合物は、３-(３-１、１-ジメチルエチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ-１-(４-クロロフェニルメチル)-インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-Ｏ-２酢酸；３-(３-１、１-ジメチルエチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ-１-(４-クロロフェニルメチル)-インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-Ｏ-２-(３-メチル)ブチル酸；３-(３-１、１-ジメチルエチルチオ)-５-(６、７-ジクロロキノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロフェニルメチル)-インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-Ｏ-２酢酸；および３-(３-１、１-ジメチルエチルチオ)-５-(６−フルオロキノリン-２-イルメトキシ)-１-(４-クロロフェニルメチル)-インドール-２-イル)-２、２-ジメチルプロピオンアルデヒドオキシム-Ｏ-２-プロピオン酸からなるグループから選択される化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩類である。  本願明細書に参考までに取り込んだ米国特許第5,459,150号を参照されたい。
【００７６】
上記化合物は、以下の式；
【００７７】
【化５】
2006508180.tif 000008
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｑは、１個または２個の窒素ヘテロ原子を含有し、窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子を任意に含有する、９-、10-または11-員環の二環式ヘテロ環部分であり、Ｑは、ハロゲノ、ヒドロキシ、シアノ、ホルミル、オキソ、チオキソ、(１〜４Ｃ)アルキル、(３〜４Ｃ)アルケニル、(３〜４Ｃ)アルキニル、(１〜４Ｃ)アルコキシ、フルオロ-(１〜４Ｃ)アルキル、ヒドロキシ-(１〜４Ｃ)アルキル、(２〜５Ｃ)アルカノイル、フェニル、ベンゾイルおよびベンジルから選択される４個までの置換基を任意に有してもよく、これらフェニル、ベンゾイルおよびベンジル置換基は、ハロゲノ、(１〜４Ｃ)アルキルおよび(１〜４Ｃ)アルコキシから選択される１個または２個の置換基を任意に有してもよく；Ｘは、オキシ、チオ、スルフィニルまたはスルホニルであり；Ａｒは、ハロゲノ、シアノ、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、アミノ、(１〜４Ｃ)アルキル、(１〜４Ｃ)アルコキシ、(１〜４Ｃ)アルキルアミノおよびジ-(１〜４Ｃ)アルキルアミノから選択される１個または２個の置換基を任意に有する、フェニレン、ピリジンジイル、ピリミジンジイル、チオフェンジイル、フランジイル、チアゾールジイル、オキサゾールジイル、チアジアゾールジイルまたはオキサジアゾールジイルであり；および、Ｑは、以下の式IIおよびIIIの基：
【００７８】
【化６】
2006508180.tif 000009
から選択され、式中、Ｒは、水素、(２〜５Ｃ)アルカノイルまたはベンゾイルであり、ベンゾイル基は、ハロゲノ、(１〜４Ｃ)アルキルおよび(１〜４Ｃ)アルコキシから選択される１個または２個の置換基を有してもよく；Ｒは、(１〜４Ｃ)アルキルであり；Ｒは、水素または(１〜４Ｃ)アルキルであるか；またはＲとＲは結合して、メチレン、ビニレン、エチレンまたはトリメチレン基を形成する。  好ましくは、上記化合物は、(2S、4R)-４-[５-フルオロ-３-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]-４-ヒドロキシ-２-エチルテトラヒドロピラン、(2S、4R)-４-[５-フルオロ-３-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルスルホニル)フェニル]-４-ヒドロキシ-２-エチルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チアゾール-５-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルスルホニル)チアゾール-５-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-[２-(７-フルオロ-１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チアゾール-５-イル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソインドリン-５-イルチオ)チアゾール-５-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-４-イル］テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルスルホニル)チエン-４-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-５-イルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソ-１、２-ジヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-４-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１、８-ジメチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-４-イル]テトラヒドロピラン、４-[２-(８-フルオロ-１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-４-イル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、４-[２-(７-フルオロ-１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)チエン-４-イル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[２-(１-メチル-２-オキソインドリン-５-イルチオ)チエン-４-イル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[３-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[３-(１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルスルホニル)フェニル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-(３-(１-エチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-[３-(７-フルオロ−１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[３-(１-メチル-２-オキソ-１，２-ジヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]テトラヒドロピラン、（2S、4R)-４-[３-(８-クロロ-１-メチル-２-オキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]-４-ヒドロキシ-２-メチルテトラヒドロピラン、および（2S、4R)-４-ヒドロキシ-２-メチル-４-[３-(１-メチル-２-オキソインドリン-５-イルチオ)フェニル］テトラヒドロピランからなるグループから選択される。  本願明細書に参考までに取り込んだ欧州特許第623614号を参照されたい。
【００７９】
上記化合物は、以下の式；
【００８０】
【化７】
2006508180.tif 000010
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｑは、１個または２個のチオキソ置換基を有し、ヘテロ環部分が、ハロゲノ、ヒドロキシ、シアノ、アミノ、(１〜４Ｃ)アルキル、(１〜４Ｃ)アルコキシ、フルオロ-(１〜４Ｃ)アルキル、(１〜４Ｃ)アルキルアミノ、ジ-[(１〜４Ｃ)アルキル]アミノ、アミノ-(１〜４Ｃ)アルキル、(１〜４Ｃ)アルキルアミノ-(１〜４Ｃ)アルキル、ジ-[１〜４Ｃ)アルキル]アミノ-(１〜４Ｃ)アルキル、フェニルおよびフェニル-(１〜４Ｃ)アルキルからなるグループから選択される１個、２個または３個の置換基を任意にさらに有してもよい、１個または２個の窒素ヘテロ原子を含有する10員環の二環式ヘテロ環部分であり、上記フェニルまたはフェニル-(１〜４Ｃ)アルキル置換基は、ハロゲノ、(１〜４Ｃ)アルキルおよび(１〜４Ｃ)アルコキシから選択される置換基を有してもよく；Ａは、Ｘに直接結合するか、または(１〜３Ｃ)アルキレンであり；Ｘは、オキシ、チオ、スルフィニル、スルホニルまたはイミノであり；Ａｒは、ハロゲノ、ヒドロキシ、アミノ、ニトロ、シアノ、カルバモイル、ウレイド、(１〜４Ｃ)アルキル、(１〜４Ｃ)アルコキシ、(１〜４Ｃ)アルキルアミノ、ジ-[(１〜４Ｃ)アルキル]アミノ、フルオロ-(１〜４Ｃ)アルキルおよび(２〜４Ｃ)アルカノイルアミノから選択される１個または２個の置換基を任意に有してもよいフェニレンであるか；または、Ａｒは、ピリジレンであり；Ｒは、(１〜４Ｃ)アルキル、(３〜４Ｃ)アルケニルまたは(３〜４Ｃ)アルキニルであり；ＲおよびＲは共に、式-Ａ-Ｘ-Ａ-の基を形成し、ＡおよびＡが結合する炭素原子と共に、５〜７員環を有する環を規定し、また、ＡおよびＡは、同一でも相違していてもよく、それぞれが(１〜３Ｃ)アルキレンであり、Ｘは、オキシ、チオ、スルフィニルまたはスルホニルであり、環は１個、２個または３個の置換基を有してもよく、同一でも相違していてもよく、ヒドロキシ、(１〜４Ｃ)アルキルおよび(１〜４Ｃ)アルコキシから選択されるか；または、ＲおよびＲは共に、式-Ａ-Ｘ-Ａ-の基を形成し、Ａが結合する酸素原子と、Ａが結合する炭素原子と共に、５〜７環原子を有する環を形成し、また、ＡおよびＡは、同一でも相違していてもよく、それぞれが(１〜３Ｃ)アルキレンであり、Ｘは、オキシ、チオ、スルフィニルまたはスルホニルであり、環は、１個、２個または３個の(１〜４Ｃ)アルキル置換基を有してもよく、Ｒは、(１〜４Ｃ)アルキル、(２〜４Ｃ)アルケニルまたは(２〜４Ｃ)アルキニルであり；または、それらの薬学的に許容される塩である。  好ましくは、上記化合物は、４-(５-フルオロ-３-(１-メチル-２-チオキソ-１、２-ジヒドロキノリン-６-イルメトキシ)フェニル]-４-エトキシテトラヒドロピラン、および４-(５-フルオロ-３-(１-メチル-２-チオキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-１メトキシ)フェニル]-４-メトキシテトラヒドロピラン、４-(５-フルオロ-３-(１-メチル-２-チオキソ-１、２、３、４-テトラヒドロキノリン-６-イルチオ)フェニル]-４-メトキシテトラヒドロピラン、およびそれらの薬学的に許容される塩からなるグループから選択される。  本願明細書に参考までに取り込んだ欧州特許第466452号を参照されたい。
【００８１】
上記化合物は、以下の式；
【００８２】
【化８】
2006508180.tif 000011
で表される置換４-(キノリン-２-61-メトキシ)フェニル酢酸誘導体または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｒ1は、以下の式；
【００８３】
【化９】
2006508180.tif 000012
で表される基であって、Ｒ2およびＲ3は、同一でも相違していてもよく、水素、低級アルキル、フェニル、ベンジル、または、以下の式；
【００８４】
【化１０】
2006508180.tif 000013
で表される基であって、Ｒ4は、水素、低級アルキル、フェニルまたはベンジルであり、これらは、ヒドロキシル、カルボキシル、低級アルコキシカルボニル、低級アルキルチオ、ヘテロアリールまたはカルバモイルで任意に置換されることができ、Ｒ5は、水素、低級アルキル、フェニルまたはベンジルであり、Ｒ6は、式-ＣＯＲ5または-ＣＯ2Ｒ5の基であり、Ｒ7は、水素、低級アルキルまたはフェニルを表し、Ｙは、以下の式；
【００８５】
【化１１】
2006508180.tif 000014
で表される基であって、式中、Ｒ8は、水素、低級アルキルまたはフェニルを表し、ｎは、０〜５の数を示し、Ｚは、ノルボルニルであるか、または、以下の式；
【００８６】
【化１２】
2006508180.tif 000015
で表される基であって、式中、Ｒ9およびＲ10は、同一でも相違していてもよく、水素、低級アルキルまたはフェニルを示し、また、Ｒ9およびＲ10は、共に６個までの炭素原子を有する飽和炭素環式環を形成することができ、ｍは１〜６の数を示し、ＡおよびＢは、同一でも相違していてもよく、水素、低級アルキルまたはハロゲンまたはそれらの薬学的に許容される塩を示す。  好ましくは、上記化合物は、２-[４-(キノリン-２-イル-メトキシ)フェニル]-２-シクロペンチル酢酸、２-[４-(キノリン-２-イル-メトキシ)フェニル]-２-シクロヘキシル酢酸、および２-[４-(キノリン-２-イル-メトキシ)フェニル]-２-シクロヘプチル酢酸、２-[４-(キノリン-２-イル-メトキシ)フェニル]-２-シクロペンチル酢酸の(＋)-鏡像異性体、２-[４-(キノリン-２-イル-メトキシ)フェニル]-２-シクロペンチル酢酸の(−)-鏡像異性体、およびそれらの薬学的に許容される塩からなるグループから選択される。  本願明細書に参考までに取り込んだ米国特許第4,970,215号を参照されたい。
【００８７】
上記化合物は、以下の式；
【００８８】
【化１３】
2006508180.tif 000016
で表される化合物または薬学的に許容されるその塩類であって、式中、Ｒ、Ｒ、Ｒ、ＲおよびＲは、独立して、水素、ハロゲン、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、-ＣＦ3、-ＣＮ、-ＮＯ2、-Ｎ3、-Ｃ(ＯＨ)ＲＲ、-ＣＯ2Ｒ、-ＳＲ、-Ｓ(Ｏ)Ｒ、-Ｓ(Ｏ)2Ｒ、-Ｓ(Ｏ)2ＮＲＲ、-ＯＲ、-ＮＲＲ、-Ｃ(Ｏ)Ｒまたは-(ＣＨ2)tＲであり；Ｒは、水素、-ＣＨ3、-ＣＦ3、-Ｃ(Ｏ)Ｈ、Ｘ-ＲまたはＸ-Ｒであり；ＲおよびＲは、独立して、アルキル、-(ＣＨ2)uＰｈ(Ｒ)2または-(ＣＨ2)uＴｈ(Ｒ)2であり；Ｒは、-ＣＦ3またはＲであり；Ｒは、水素またはＸ-Ｒであり；Ｒは、それぞれ独立して、水素または低級アルキルであるか、または同じ炭素原子上の２個のＲが結合して３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキル環を形成し；Ｒは、水素、低級アルキルまたは-ＣＨ2Ｒであり；Ｒは、低級アルキルまたは-(ＣＨ2)rＲであり；Ｒは、-ＣＦ3またはＲであり；Ｒは、水素、-Ｃ(Ｏ)Ｒ、Ｒであるか、または同じ窒素上の２個のＲが結合して、Ｏ、ＳまたはＮから選択される２個までのヘテロ原子を含有する４〜６個の原子を有する単環式ヘテロ環式環を形成し；Ｒは、水素、-ＣＦ3、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニルまたは-(ＣＨ2)rＲであり；Ｒは、-(ＣＨ2)s-Ｃ(ＲＲ)-(ＣＨ2)s-Ｒまたは-ＣＨ2Ｃ(Ｏ)ＮＲＲであり；Ｒは、水素または低級アルキルであり；Ｒは、(ａ)核となる３〜９個の炭素原子と、Ｎ、ＳまたはＯから選択される１個〜２個の核となるヘテロ原子とを含有し、ヘテロ環式基での各々の環が５個または６個の原子で形成されている単環式または二環式のヘテロ環式環、または(ｂ)Ｗ-Ｒの基であり；Ｒは、アルキルまたはＣ(Ｏ)Ｒであり；Ｒは、１個または２個のＲで置換されたフェニルであり；Ｒは、水素、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、低級アルキルスルホニル、低級アルキルカルボニル、-ＣＦ3、ＣＮ、-ＮＯ2または-Ｎ3であり；Ｒは、アルキル、シクロアルキル、単環式モノヘテロ環式環であり；Ｒは、標準的なアミノ酸の残基構造であるか、または同じ窒素に結合するＲおよびＲは環化してプロリン残基を形成することができ；ｍは、０〜１であり；ｎは、０〜３であり；ｍが１の場合、ｐは１〜３であり；ｍが０の場合、ｐは０〜３であり；ｒは、０〜２であり；ｓは、０〜３であり；ｔは、０〜２であり；ｕは、０〜３であり；ｖは、０または１であり；Ｗは、Ｏ、ＳまたはＮＲであり；Ｘは、ＯまたはＮＲであり；Ｘは、Ｃ(Ｏ)、ＣＲＲ、Ｓ、Ｓ(Ｏ)またはＳ(Ｏ)2であり；Ｘは、Ｃ(Ｏ)、ＣＲＲ、Ｓ(Ｏ)2または結合であり；Ｙは、ＸまたはＸであり；Ｑは、-ＣＯ2Ｒ、-Ｃ(Ｏ)ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒ、-ＮＨＳ(Ｏ)2Ｒ、-Ｓ(Ｏ)2ＮＨＲ-Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ、-ＣＯ2Ｒ、-Ｃ(Ｏ)ＮＲＲ、-ＣＨ2ＯＨ、あるいは１Ｈ-または２Ｈ-テトラゾール-５-イルである化合物；および、これらの薬学的に許容される塩類である。  これら化合物の好ましい実施態様は、以下の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩類から選択される：
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-メチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-ｔ-ブチルチオベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(フェニルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(フェニルスルホニル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、Ｎ-オキシド、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(フェニルスルホニル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(フェニルスルフィニル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-ベンゾイル-５-(キノリン２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-ベンジル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
２-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]エトキシエタン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロフェニル)-３-(３、３-ジメチル-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２-メチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-メチル-５-(６、７-ジクロロキノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-メチル-５-(７-クロロキノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-ジクロロベンジル)-４-アリル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)-３-(ｔ-ブチルチオ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-４-アルキル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)-３-(ｔ-ブチルチオ)インドール-２-イル-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-４-(キノリン-２-イルメトキシ)-３-(ｔ-ブチルチオ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-７-(キノリン-２-イルメトキシ)-３-(ｔ-ブチルチオ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
２-[２-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]エトキシ]プロパン酸、
３-[Ｎ-(ｐ-クロロベンジル)-４-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-メチル-３-(ｐ-クロロベンゾイル)-６-(キノリン-２-イルエトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-メチル-３-(ｐ-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-ｉ-プロポキシ-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルチオ)-５-(キノリン-２-イル-メトキシ)インドール-２-イル]-２-エチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-トリフルオロアセチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２-メチルプロパン酸、
３-[３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-トリフルオロメチルベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-ベンジル-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(３-メトキシベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-アリル-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-メトキシベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-メチル-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-３-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(フェニルスルホニル)-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-ベンジル-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(フェニルスルホニル)-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルスルホニル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-アリル-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(ｎ-プロピル)-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-エチル-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(ｔ-ブチルベンゾイル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(４-クロロベンゾイル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(1,1-ジメチルエチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-アセチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-シクロプロパンカルボニル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(３-シクロペンチルプロパノイル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(３-メチルブタノイル)-５-(キノリン-２-イル-メトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-プロパノイル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(２-メチルプロパノイル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-トリメチルアセチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-フェニルアセチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-フルオロベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-ブロモベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-ヨードベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(１、１-ジメチルブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(１、１-ジメチルプロピル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(３-フルオロベンジル)-３-(１、１-ジメチルエチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(３-メチルエチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-シクロプロピル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(１-メチル-１-シクロプロピル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-シクロペンチル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-シクロヘキシル-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(α,α-ジメチルベンジル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(２-｛４-クロロ-α,α-ジメチルベンジル｝-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(１-アダマンチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-((１-アダマンチル)メチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(１、１-ジメチルエチル)-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(１、１-ジメチルプロピル)-３-(４-クロロベンジル)-６-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-３-(３、３-ジメチル-１-オキソ-１-ブチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパン酸、
メチル３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-3,6-ビス(アセチル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパノエート、または
メチル３-[Ｎ-(４-クロロベンジル)-3,6-ビス(シクロプロパンカルボニル)-５-(キノリン-２-イルメトキシ)インドール-２-イル]-２、２-ジメチルプロパノエート。
【００８９】
本願明細書に参考までに取り込んだ欧州特許第419049号を参照されたい。
【００９０】
「アルキル」の語は、１個の水素原子を除去することで、直鎖または分枝の飽和炭化水素から誘導される一価の基を指す。  アルキル基として、メチル、エチル、ｎ-およびiso-プロピル、ｎ-、sec-、iso-およびtert-ブチルなどがある。  「ヒドロキシアルキル」の語は、先に定義したような、１個〜３個のヒドロキシル基によって置換されているが、１個より多いヒドロキシ基が、アルキル基の１個の炭素原子に結合していないアルキル基を指す。  「アルキルアミノ」の語は、構造-ＮＨＲ’(Ｒ’は、先に定義したような、アルキルである)を有する基を指し、アルキルアミノの例として、メチルアミノ、エチルアミノ、iso-プロピルアミノなどがある。  「アルキルアミノカルボニル」の語は、由来分子部分にカルボニル基を介して結合する、先に定義したような、アルキルアミノ基を指すものである。  アルキルアミノカルボニルの例として、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、iso-プロピルアミノカルボニルなどがある。  「アルキルチオ」の語は、由来分子部分に硫黄原子を介して結合する、先に定義したような、アルキル基を指すものであり、このような例として、メチルチオ、エチルチオ、プロピルチオ、ｎ-、sec-およびtert-ブチルチオなどがある。  「アルカノイル」の語は、由来分子部分にカルボニル基を介して結合する、先に定義したような、アルキル基を表す。  アルカノイル基としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブタノイルなどがある。  「アルカノイルアミノ」の語は、由来分子部分に窒素原子を介して結合する、先に定義したような、アルカノイル基を指す。  アルカノイルアミノとして、ホルムアミド、アセトアミドなどがある。  「Ｎ-アルカノイル-Ｎ-アルキルアミノ」の語は、由来分子部分にアミノアルキル基を介して結合する、先に定義したような、アルカノイル基を指す。  Ｎ-アルカノイル-Ｎ-アルキルアミノとして、Ｎ-メチルホルムアミド、Ｎ-メチル-アセトアミドなどがある。  「アルコキシ」または「アルコキシル」の語は、由来分子部分に酸素原子を介して結合する、先に定義したような、アルキル基を示す。  代表的なアルコキシ基として、メトキシル、エトキシル、プロポキシル、ブトキシルなどがある。  「アルコキシアルコキシル」の語は、先に定義したような、アルキル基に酸素を介して結合し、由来分子部分に順番に酸素を介して結合する、先に定義したような、アルキル基を指す。  アルコキシアルコキシルとして、メトキシメトキシル、メトキシエチルオキシル、エトキシエトキシルなどがある。  「アルコキシアルキル」の語は、由来分子部分にアルキレン基を介して結合する、先に定義したような、アルコキシ基を指す。  「アルコキシカルボニル」の語は、エステル基；すなわち、由来分子部分にカルボニル基を介して結合するアルコキシ基を表し、例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニルなどがある。  「アルケニル」の語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を含有する炭化水素から１個の水素原子を除去することによって誘導される一価の基を示す。  アルケニル基として、例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、１-メチル-２-ブテン-１-イルなどがある。  「アルキレン」の語は、直鎖または分枝の飽和炭化水素から２個の水��原子を除去することによって誘導される二価の基を示し、例えば、メチレン、１、２-エチレン、１、１-エチレン、１、３-プロピレン、２、２-ジメチルプロピレンなどがある。  「アルケニレン」の語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を含有する直鎖または分枝鎖の炭化水素から誘導される二価の基を示す。  アルケニレンの例として、-CH=CH-、-CH2CH=CH-、-C(CH3)=CH-、-CH2CH=CHCH2-などがある。  「シクロアルキレン」の語は、飽和炭素環式炭化水素から２個の水素原子を除去することにより誘導される二価の基を指し、例えば、シクロペンチレン、シクロヘキシレンなどがある。  「シクロアルキル」の語は、単環式または二環式の飽和炭素環式環化合物から１個の水素原子を除去することによって誘導される一価の基を示すものである。  その例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、ビシクロ[2.2.1]ヘプタニル、およびビシクロ[2.2.2]オクタニルがなどがある。  「アルキニレン」の語は、炭素-炭素三重結合を含有する直鎖または分枝鎖の非環式炭化水素基から２個の水素原子を除去することによって誘導される二価の基を指す。      
【００９１】
アルキニレンの例として、-CH≡CH-、-CH≡CH-CH2-、-CH≡CH-CH(CH3)-などがある。  「炭素環式アリール」の語は、「４ｎ＋２π原子」の語、またはHuckel芳香族ルールに従った単環式または二環式の縮合環または非縮合環から１個の水素原子を除去することによって誘導される一価の炭素環式環基を指す。  炭素環式アリール基の例として、フェニル、１-および２-ナフチル、ビフェニルイル、フルオレニルなどがある。  「(炭素環式アリール)アルキル」の語は、由来分子部分にアルキレン基を介して結合する、先に定義したような、炭素環式アリール環基を指す。  代表的な(炭素環式アリール)アルキル基としては、フェニルメチル、フェニルエチル、フェニルプロピル、１-ナフチルメチルなどがある。  「炭素環式アリールアルコキシ」の語は、由来分子部分に酸素原子を介して結合する、先に定義したような、炭素環式アリールアルキル基を指す。  「炭素環式アリールオキシアルキル」の語は、由来分子部分に酸素原子を介して結合し、アルキレン基を介して結合する、先に定義したような、炭素環式アリール基を指す。  このような基として、フェノキシメチル、１-および２-ナフチルオキシメチル、フェノキシエチルなどがある。      
【００９２】
「(炭素環式アリール)アルコキシアルキル」の語は、由来分子部分にアルコキシアルキル基を介して結合する、先に定義したような、炭素環式アリール基を指す。  代表的な(炭素環式アリール)アルコキシアルキル基として、フェニルメトキシメチル、フェニルエトキシメチル、１-および２-ナフチルメトキシエチルなどがある。  「炭素環式アリールチオアルキル」の語は、由来分子部分に硫黄原子を介して結合し、アルキレン基を介して結合する、先に定義したような、炭素環式アリール基を指し、その典型例は、フェニルチオメチル、１-および２-ナフチルチオエチルなどがある。  「ジアルキルアミノ」の語は、構造-ＮＲ'Ｒ”を指し、Ｒ'およびＲ”は独立して、先に定義したような、アルキルから選択される構造を有する基を指す。  さらに、Ｒ'およびＲ”は、任意に、-(CH2)kk-の構造、式中、kkは２〜６の整数である構造としてもよい。  ジアルキルアミノの例として、ジメチルアミノ、ジエチルアミノカルボニル、メチルエチルアミノ、ピペリジノなどがある。  「ハロまたはハロゲン」の語は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。  「ハロアルキル」の語は、それらに結合する１個、２個または３個のハロゲン原子を有する、先に定義したような、アルキル基を指し、クロロメチル、ブロモエチル、トリフルオロメチルなどの基がある。  「ヒドロキシアルキル」の語は、１個〜３個のヒドロキシル基で置換されるが、１個を越えるヒドロキシ基が、アルキル基の１個の炭素原子に結合していない、先に定義したような、アルキル基を指す。  「フェノキシ」の語は、由来分子部分に酸素原子を介して結合するフェニル基を指す。  「フェニルチオ」の語は、由来分子部分に硫黄原子を介して結合するフェニル基を指す。  「ピリジルオキシ」の語は、由来分子部分に酸素原子を介して結合するピリジル基を指す。  本願明細書に記載の「ヘテロアリール」または「ヘテロ環状アリール」の語は、１個の酸素原子、１個、２個、３個または４個の窒素原子、１個の窒素原子および１個の硫黄原子、または１個の窒素原子および１個の酸素原子を含有する、置換または未置換の５-または６-員環の芳香族基を指す。      
【００９３】
さらに、「ヘテロアリール」の語は、芳香族ヘテロ環式環が１個または２個のベンゼン環と縮合している、二環式または三環式基を含む。  代表的なヘテロアリール基として、ピリジル、チエニル、インドリル、ピラジニル、イソキノリル、ピローリル、ピリミジル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾ[ｂ]フリル、イミダゾリル、チアゾリル、カルバゾリルなどがある。  「ヘテロアリールアルキル」の語は、先に定義したような、由来分子部分にアルキレン基を介して結合するヘテロアリール基を指す。  「ヘテロアリールオキシ」の語は、先に定義したような、由来分子部分に酸素原子を介して結合するヘテロアリール基を指す。  「ヘテロアリールアルコキシ」の語は、先に定義したような、由来分子部分に酸素原子を介して結合する、ヘテロアリールアルキル基を指す。
【００９４】
核酸治療薬
その他の実施態様によれば、本願発明の核酸；本願発明の核酸に相補的な核酸；またはこのような核酸の一部(例えば、以下に記載したオリゴヌクレオチド)；またはロイコトリエン経路の構成要素(例えば、５-ＬＯ)をコードする核酸は、「アンチセンス」治療に使用することができ、ここで、ｍＲＮＡおよび／または核酸のゲノミックＤＮＡ核酸に特異的にハイブリダイズする核酸(例えば、オリゴヌクレオチド)は、in situで投与または産生される。  ｍＲＮＡおよび／またはＤＮＡに特異的にハイブリダイズするアンチセンス核酸は、例えば、翻訳および／または転写を阻害することによって、ｍＲＮＡおよび／またはＤＮＡによってコードされるポリペプチドの発現を阻害する。  アンチセンス核酸の結合は、従来の塩基対相補性、または、例えば、ＤＮＡ二本鎖に結合する場合には、二重螺旋の主要な溝に対する特異的な相互作用を介して実現することができる。
【００９５】
アンチセンス構築物は、例えば、上述したような発現プラスミドとして、送達可能である。  プラスミドが、細胞内に転写される場合、ロイコトリエン経路の構成要素(例えば、ＦＬＡＰまたは５-ＬＯ)のためのポリペプチドをコードするｍＲＮＡおよび／またはＤＮＡの一部に相補性であるＲＮＡを産生する。  あるいは、アンチセンス構築物は、オリゴヌクレオチドプローブとすることができる。  ex vivoで産生され、細胞内に導入され；次いで、ポリペプチドのｍＲＮＡおよび／またはゲノミックＤＮＡとともにハイブリダイズすることによって発現を阻害する。  ある実施態様によれば、オリゴヌクレオチドプローブは、エンドヌクレアーゼ(例えば、エキソヌクレアーゼおよび／またはエンドヌクレアーゼ)に耐性であり、in vivoでそれらを安定にする、修飾されたオリゴヌクレオチドである。  アンチセンスオリゴヌクレオチドとして使用するための核酸分子の例として、ＤＮＡのホスホルアミデート、ホスホチオエートおよびメチルホスホネート類似体がある（米国特許第5,176,996号、第5,264,564号および第5,256,775号も参照されたい）。  さらに、アンチセンス治療において有用なオリゴマーを構築する遺伝子的アプローチは、例えば、Vander Krol et al.,(Bio Techniques 6:958-976（1988))；およびStein et al., (Cancer Res. 48:2659-2668（1988))にも記載されている。  アンチセンスＤＮＡに関しては、翻訳開始部位から誘導されるオリゴデオキシリボヌクレオチドが好ましい。
【００９６】
アンチセンス治療を行うために、オリゴヌクレオチド(ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたはＤＮＡ)は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡに相補的であるように設計される。  アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡ転写物に結合し、翻訳を防ぐ。  完全に相補的であることが好ましいが、必要ではない。  本願明細書で言及した、ＲＮＡの一部に対する配列「相補性」の語は、ＲＮＡとハイブリダイズ可能な配列が十分な相補性を有し、安定な二本鎖を形成することを指し；二本鎖のアンチセンス核酸の場合、二本鎖ＤＮＡの一本の鎖を試験してもよく、または、三本鎖形成を分析してもよい。  ハイブリダイズする能力は、上述したように、アンチセンス核酸の相補性の程度および長さに依存する。  一般的に、ハイブリダイズする核酸が長くなればなるほど、より多くの塩基が含有されることとなり、安定な二本鎖(または、場合によっては三本鎖)を形成するＲＮＡとミスマッチを起こす。  当業者は、標準的な手法によって、ミスマッチの許容度を確認することができる。
【００９７】
アンチセンス治療において使用されるオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮＡまたはキメラ混合物または誘導体、またはそれらの改変体、一本鎖または二本鎖とすることができる。  オリゴヌクレオチドは、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーションなどを改良するために、塩基部分、糖部分またはホスフェート骨格で改変可能である。  オリゴヌクレオチドは、併用する他の基、例えば、ペプチド(例えば、in vivoでの標的宿主細胞受容体)、または細胞膜を通って容易に移動する薬剤(例えば、Letsinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6553-6556 (1989);Lemaitre et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:648-652（1987);PCT国際公開番号WO88/09810を参照)または血液脳関門（例えば、PCT国際公開番号WO89/10134を参照）、またはハイブリダイゼーションの起点となる開裂薬剤(例えば、Krol et al., Bio Techniques 6:958-976（1988))または挿入剤(Zon, Pharm. Res. 5:539-549（1988))を含むことができる。  この目的を達成するために、オリゴヌクレオチドは、他の分子(例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーションの起点となる架橋薬剤、移動薬剤、ハイブリダイゼーションの起点となる開裂薬剤）に接合してもよい。
【００９８】
アンチセンス分子は、ロイコトリエン経路の構成要素をin vivoで発現する細胞に送達される。  アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡを脂肪に送達するために、多くの方法を使用することができる。  例えば、アンチセンス分子は、組織部位に直接注入されるか、または所望の細胞を標的化するように設計された、改変されたアンチセンス分子(例えば、標的細胞表面上で発現する受容体または抗原に特異的に結合するペプチドまたは抗体に結合するアンチセンス)は、全身的に投与可能である。  あるいは、好ましい実施態様によれば、組換えＤＮＡ構築物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドが、強力なプロモーター（例えば、pol IIIまたはpol II)の制御下で使用される。  患者での標的細胞をトランスフェクトする目的でこれら構築物を使用すると、内因性転写物と相補的な塩基対が形成され、ｍＲＮＡの翻訳を防ぐ上で十分な量の一本鎖ＲＮＡの転写を実現する。  例えば、ベクターは、細胞によって吸収され、アンチセンスＲＮＡの転写物を導くようにin vivoで導入できる。  このようなベクターは、所望のアンチセンスＲＮＡを産生するための転写が可能である限りは、エピソームのままでもよく、または、染色体へ組み込むこともできる。  このようなベクターは、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術や、上述した方法によって構築することができる。  例えば、プラスミド、コスミド、ＹＡＣまたはウイルスベクターは、組織部位に直接導入可能な組換えＤＮＡ構築物を産生するために使用することができる。  あるいは、ウイルスベクターは、所望の組織を選択的に感染させるように使用することもでき、この場合、別の経路によって、例えば、全身的に投与されてもよい。
【００９９】
本願発明のその他の実施態様によれば、小さな二本鎖の干渉ＲＮＡ(ＲＮＡ干渉(ＲＮＡi))を使用することができる。  ＲＮＡｉは、転写後プロセスであり、ここに二本鎖ＲＮＡが導入されると、標的ｍＲＮＡの触媒的分解を介して、配列特異的な遺伝子のサイレンシングが生じる。  例えば、その全開示を参考までに本明細書に取り込んだ、Elbashir, S. M. et al., Nature 411:494-498（2001);Lee, N. S., Nature Biotech.19:500-505（2002）; Lee, S-K et al., Nature Medicine 8（7):681-686（2002）を参照されたい。
【０１００】
さらに、ロイコトリエン経路(例えば、ＦＬＡＰ、５-ＬＯ)の構成要素の内因性発現は、標的化された同種組換えによって、遺伝子またはそのプロモーターを不活化または「ノックアウト」することによって減らすことができる(例えば、Smithies et al., Nature 317:230-234 (1985); Thomas & Capecchi, Cell 51:503-512 (1987); Thomson et al., Cell 5:313-321 (1989)を参照）。  例えば、選択可能なマーカーおよび／または陰性に選択可能なマーカーの存在または非存在下で、ロイコトリエン経路の構成要素(または完全に関連しないＤＮＡ配列)での改変された内因性遺伝子に対して(遺伝子のコード領域または制御領域のいずれかで)同種のＤＮＡによってフランキングされた非官能性遺伝子を使用して、遺伝子をin vivoで発現する細胞をトランスフェクトすることができる。  標的化された同種組換えを介するＤＮＡ構築物の挿入により、遺伝子の不活化が生じる。  組換えＤＮＡ構築物は、適切なベクターを用いてin vivoで必要とされる部位に直接的に投与または標的化可能である。  あるいは、未改変遺伝子の発現は、類似の方法を用いて高めることができる。  標的化された同種組換えは、上述したように、細胞中の遺伝子の代わりに、未改変の機能性遺伝子、またはそれらの相補体を含むＤＮＡ構築物を挿入するために使用することができる。  その他の実施態様によれば、標的化された同種組換えは、細胞内に存在するものとは異なるポリペプチド変異体をコードする核酸を含むＤＮＡ構築物を挿入するために使用することができる。
【０１０１】
あるいは、ロイコトリエン経路の構成要素の内因性発現は、ロイコトリエン経路の構成要素の制御領域(すなわち、プロモーターおよび／またはエンハンサー)に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列を標的化して身体内の標的細胞中の遺伝子の転写を防ぐ三重らせん構造を形成することによって減らすことができる。  （一般論として、Helene, C., Anticancer Drug Des., 6 (6):569-84 (1991); Helene, C. et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 660:27-36 (1992);および Maher, L. J., Bioassays 14 (12):807-15 (1992)を参照）。  同様に、本願明細書に記載のアンチセンス構築物は、ロイコトリエン経路の構成要素の一つの通常の生物学的活性を拮抗することによって、例えば、in vivoにおける組織の分化およびex vivoの組織培養物の双方での組織操作において使用可能である。  さらに、アンチセンス技術(例えば、アンチセンス分子のマイクロインジェクション、または転写物が核酸ＲＮＡまたは核酸配列に関してアンチセンスであるプラスミドを用いたトランスフェクション)が、疾患に関連する状態の進行における、ロイコトリエン経路の一つ以上の構成要素の役割を観察するために使用可能である。  このような技術は、細胞培養物内でも使用可能であるが、トランスジェニック動物においても使用可能である。
【０１０２】
本願明細書に記載の治療薬剤は、上述したように、組成物として、またはそれら自身で送達可能である。  これら薬剤は、全身的に投与されるか、または特定の組織に標的化することができる。  治療薬剤は、化学合成；組換え産生；in vivo産生（例えば、トランスジェニック動物、例えば、Meade et alの米国特許第4,873,316号)を含む種々の方法によって製造可能であり、例えば、本願明細書に記載の標準的な手段を用いて単離可能である。  加えて、上述した治療方法のいずれかの組み合わせ(例えば、ロイコトリエン経路の構成要素のための改変ｍＲＮＡを標的化するアンチセンス治療を併用した未改変ポリペプチドの投与；第二のスプライシング変異体を標的化するアンチセンス治療を併用した第一のスプライシング変異体の投与)を使用することもできる。
【０１０３】
本願発明はさらに、例えば、本願明細書に記載の方法を用いて、ＭＩ、ＡＣＳ、および／またはアテローム性動脈硬化症を治療するための医薬の製造のために、このような治療薬剤を使用することにも関する。
【０１０４】
治療のモニタリングプロセス
本願発明はさらに、例えば、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置における、上述した標的集団の一つにおける個体での応答をモニタリングする方法に関する。  炎症性マーカーのレベルは、上述した標的集団での個体において上昇可能であるため、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた治療前および治療中の個体の炎症性マーカーのレベルの評価は、治療が動脈血管壁または炎症性細胞を誘発する骨髄におけるロイコトリエンの産生の効率的な減少を示す。
【０１０５】
例えば、本願発明の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳの危険性を保有する個体についての標的集団に属する個体(例えば、ＦＬＡＰ ＭＩ-ハプロタイプに起因する危険性を保有する個体など、上述した標的集団に属する個体)は、個体のロイコトリエンレベルを試験することで、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた治療に対する応答について評価することができる。  血清、血漿または尿でのロイコトリエン(例えば、ロイコトリエンＥ４、システイニルロイコトリエン１)、またはロイコトリエンのex vivo産物(例えば、ロイコトリエンを産生するためにカルシウムイオノフォアで刺激された血液試料)は、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた処置前、および処置中または処置後において測定することができる。  治療前のロイコトリエンレベルは、治療中または治療後のロイコトリエンレベルと比較される。  治療の効力は、ロイコトリエン産生の減少によって示される。  治療前のロイコトリエンのレベルよりも、治療中または治療後のロイコトリエンのレベルが顕著に減少することは、効果があることを示す。  治療中または治療後の低いレベルは、例えば、血清または尿でのロイコトリエンの減少、またはロイコトリエンのex vivo産生の減少と見ることができる。  本願明細書に記載の「顕著に低い」レベルとは、対照の個体において通常認められる量よりも少ないレベルであるか、またはさらに低い測定値域（例えば、平均または中央値、他の四分位点；他の五分位点)と比較される他の測定値域（例えば、平均値または中央値、最も高い四分位点または最も高い五分位点)と関連する集団における疾患危険度と比較して少ないレベルである。
【０１０６】
本願発明のその他の実施態様によれば、ＭＩまたはＡＣＳの危険性を保有する個体についての標的集団に属する個体(例えば、Ｃ反応性タンパク質の上昇に起因する危険性を保有する個体など、上述した標的集団に属する個体)は、個体での炎症性マーカーのレベルを試験することによって、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた治療に対する応答について評価することができる。  例えば、適切な被験試料(例えば、血清、血漿または尿)での炎症性マーカーのレベルは、ロイコトリエン合成阻害剤を用いた治療前、および治療中または治療後に測定することができる。  治療前の炎症性マーカーのレベルは、治療中または治療後の炎症性マーカーのレベルと比較される。  治療の効果は、炎症性マーカーのレベルの減少によって示される。  すなわち、治療中または治療後の炎症性のレベルが、治療前の炎症性マーカーのレベルよりも顕著に低い(例えば、顕著に低い)ことは、効果があることを示すものである。  代表的な炎症性マーカーとして、Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)、血清アミロイドＡ、フィブリノーゲン、ロイコトリエン代謝産物(例えば、システイニルロイコトリエン１)、インターロイキン-６、組織壊死因子-α、可溶性脈管細胞接着性分子(ｓＶＣＡＭ)、可溶性脈管間接着性分子(ｓＩＣＡＭ)、Ｅ-セレクチン、１型マトリックスメタロプロテアーゼ、２型マトリックスメタロプロテアーゼ、３型マトリックスメタロプロテアーゼ、および９型マトリックスメタロプロテアーゼなどがある。  好ましい実施態様によれば、炎症性マーカーは、ＣＲＰである。
【０１０７】
薬学的組成物
本願発明はさらに、本願明細書に記載の薬剤、例えば、本願明細書に記載されたロイコトリエン合成阻害剤である薬剤を含む薬学的組成物に関する。  例えば、ロイコトリエン合成阻害剤は、生理学的に許容可能な担体または賦形剤と共に処方して、薬学的組成物を調製することができる。  担体および組成物は、滅菌することができる。  調製物は、投与形態に適合させるべきである。
【０１０８】
好適な薬学的に許容される担体として、水、塩溶液(例えば、塩化ナトリウム)、生理食塩水、緩衝化食塩水、アルコール、グリセロール、エタノール、アラビアゴム、植物油、ベンジルアルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、炭水化物、例えば、ラクトース、アミロースまたはデンプン、デキストロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘稠性パラフィン、香油、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなど、それに、これらの組み合わせなどがあるが、これらに限定されない。  薬学的調製物は、必要に応じて、補助剤、例えば、滑沢剤、防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩類、緩衝剤、着色剤、香料および／または活性薬剤との間で有害な反応を起こさない芳香族基質などと混合することができる。
【０１０９】
組成物は、必要に応じて、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤をさらに含むことができる。  組成物は、液体溶液、懸濁物、乳濁物、錠剤、ピル、カプセル、持続性放出配合物、または粉末とすることができる。  組成物は、従来の結合剤および担体(例えば、トリグリセリド)を用いて、座剤とすることができる。  経口組成物は、標準的な担体、例えば、薬用マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ナトリウムサッカリン、セルロース、炭酸マグネシウムなどを含むことができる。
【０１１０】
これらの化合物を導入する方法として、皮内、筋肉内、腹腔内、眼球内、静脈内、皮下、局所的、経口および鼻腔内などがあるが、これらに限定されない。  また、その他の好適な導入方法として、(後述の)遺伝子治療、充電式または生分解可能な装置、粒子加速装置(「遺伝子銃」)および徐放性ポリマー製装置を用いることができる。  さらに、本願発明の薬学的組成物は、他の薬剤を併用する組み合わせ治療の一部において、投与することもできる。
【０１１１】
この組成物は、ヒトへの投与に適した薬学的組成物として、通常の手順に従って調製することができる。  例えば、静脈内投与用組成物は、通常は、滅菌等張性の水性緩衝剤で溶解した溶液である。  必要に応じて、この組成物は、可溶化剤および注射部位での痛みを緩和するための局所麻酔剤をさらに含んでいてもよい。  一般的に、これらの成分は、その単位投薬用量を、凍結乾燥粉末または水不含濃縮物の形態で、個別または混合して、活性薬剤の量を示すアンプルや小袋のような密閉容器内に入れて提供される。  点滴で投与する場合には、組成物を、薬用滅菌水、生理食塩水またはデキストロース／水を入れた注入用瓶を用いて投与することができる。  注射で投与する場合には、注射用滅菌水または生理食塩水の入ったアンプルは、組成物成分が投与前に混合できるようにする。
【０１１２】
局所投与に適した担体を含み、好ましくは、水よりも大きな動的粘度を有する、スプレー不可能な、粘稠性固体から半固体または固体の組成物を塗布することができる。  好適な調製物は、溶液、懸濁物、乳濁物、クリーム、軟膏、粉末、浣腸、ローション、ゾル、擦剤、軟膏剤、エアロゾルなどを含むことができ、必要に応じて、滅菌済のもの、防腐剤、滅菌剤、湿潤剤、緩衝剤または浸透圧などの補助剤に影響を与える塩類と混合したものをさらに含むことができるが、これらに限定されない。  薬剤は、化粧品調製物に取り込んでもよい。  活性成分を、固体または液体の不活性担体物質と組み合わせて、または、通常は、ガス性噴射剤、例えば、圧縮空気などの圧縮揮発物と共に絞出型容器に封入してなる、スプレー可能なエアロゾル調製物も局所投与用として好ましい。
【０１１３】
本願明細書に記載の薬剤は、中性形態または塩形態として配合できる。  薬学的に許容される塩類としては、遊離アミノ基と、例えば、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来する誘導物とから形成される塩類、および遊離カルボキシルと、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２-エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来する誘導物とから形成される塩類がある。
【０１１４】
薬剤は、治療的有効量で投与される。  特定の障害または状態の治療における治療的有効な薬剤の量は、障害または状態の性質に応じて、標準的な臨床技術によって決定することができる。  加えて、in vitroまたはin vivo分析を、最適な投薬範囲を同定する際に役立てるべく、任意に使用することができる。  また、調製物で用いる正確な投薬量は、投与経路、症状の重篤度に応じて、医師の判断および患者個々の状況に従って決定されるべきである。  効果的な用量は、in vitroモデルまたは動物モデルを用いた試験系から導かれる投薬−応答曲線から推定してもよい。
【０１１５】
さらに、本願発明は、本願発明の薬学的組成物での一つ以上の成分で満たされた、一つ以上の容器を含む薬学的製品またはキットを提供する。  ヒトへの投与のための製造、使用または販売に関する政府認可に関する、薬学的製品または生物学的製品の製造、使用または販売についての政府当局の規制を伝える注意書を、任意に、容器に添付することができる。  これら製品またはキットに、投与、薬物投与の順序(例えば、個別、連続または並行)に関する情報などを含んだラベルを付けることができる。  さらに、これら製品またはキットは、患者に治療を促すための手段を含むことができる。  これら製品またはキットでは、組み合わせ療法での単一の単位用量でも、または、単位用量を複数回にわたって投与することもできる。  特に、薬剤は、個別に、任意の組み合わせで混合されて、単一のガラス瓶または錠剤中に存在せしめることができる。  ブリスターパックまたはその他の分配手段にて、利用できる薬剤が好ましい。  本願発明の目的のために、単位投薬とは、各薬剤の個体での薬力学に応じて、標準的な時間で、ＦＤＡで承認された用量で、投与することを意図するものである。
【０１１６】
本願発明の核酸
ＦＬＡＰ核酸、その一部および変異体
加えて、本願発明は、ヒトのＦＬＡＰ核酸を含む、単離された核酸分子に関する。  本願明細書で使用する「ＦＬＡＰ核酸」の語は、ＦＬＡＰポリペプチドをコードする単離された核酸分子を指す。  本願発明のＦＬＡＰ核酸分子として、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ、またはＤＮＡ、例えば、ｃＤＮＡおよびゲノミックＤＮＡがある。  ＤＮＡ分子として、二本鎖または一本鎖があり、また、一本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡとして、コード鎖、すなわちセンス鎖、または非コード鎖、すなわちアンチセンス鎖がある。  核酸分子は、遺伝子または核酸のコード配列のすべてまたは一部を含むことができ、他の非コード配列、例えば、イントロンおよび非コード３'および５'配列(制御配列、例えば、プロモーター、転写改善因子、スプライシングドナー／アクセプター部位を含む)をさらに含む。
【０１１７】
例えば、ＦＬＡＰ核酸は、配列番号：１または３、またはそれらの相補体、またはＦＬＡＰポリペプチド(例えば、配列番号：２に記載したようなポリペプチド)をコードする、単離された核酸分子(例えば、ｃＤＮＡまたは核酸)の一部または断片から構成することができる。  好ましい実施態様によれば、単離された核酸分子は、配列番号：１または３、またはそれらの相補体からなるグループから選択される核酸分子を含む。
【０１１８】
さらに、本願発明の核酸分子は、マーカー配列、例えば、ポリペプチドの単離または精製を助けるポリペプチドをコードする配列に融合することができる。  このような配列として、グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ(ＧＳＴ)融合タンパク質をコードする配列、およびインフルエンザ由来のヘマグルチニンＡ(ＨＡ)ポリペプチドマーカーをコードする配列があるが、これらに限定されない。
【０１１９】
本願明細書で使用する「単離された」核酸分子とは、遺伝子または核酸配列を(ゲノム配列におけるように)普通にフランキングし、および／または、その他の転写した配列から完全または部分的に精製した(例えば、ＲＮＡライブラリーにおけるように)核酸から分離されるものである。  例えば、本願発明の単離された核酸は、天然由来か、または、組換え技術によって産生される場合の培地、または化学的に合成される場合の化学前駆体またはその他の化学物質のような、複雑な細胞環境に応じて、実質的に単離されていてもよい。  ある事例によれば、単離された物質は、組成物(例えば、他の基質を含有する粗抽出物)、緩衝系または試薬混合物の一部を形成する。  他の条件下では、このような物質は、例えば、ＰＡＧＥまたはカラムクロマトグラフィー(例えば、ＨＰＬＣ)によって決定されるべく、本質的に均一になるように精製されていてもよい。  ある実施態様によれば、単離された核酸分子は、存在するすべての巨大分子種の(モル基準で)少なくとも50％、80％または90％含む。  ゲノミックＤＮＡの観点から、「単離された」の語は、ゲノミックＤＮＡが天然に付随している染色体から分離されている核酸分子を指すこともできる。      
【０１２０】
例えば、単離された核酸分子は、核酸分子が誘導される細胞のゲノミックＤＮＡにおいて、核酸分子をフランキングする４kb、３kb、２kb、１kb、０.５kbまたは０.１kbのヌクレオチドを含む、約５kb未満を含有することができるが、これらに限定されない。
【０１２１】
核酸分子は、他のコード配列または制御配列に融合することができ、これは単離されているとみなされる。  従って、ベクター内に取り込まれる組換えＤＮＡは、本願明細書で使用する「単離された」の定義に含まれる。  さらに、単離された核酸分子は、異種宿主細胞内の組換えＤＮＡ分子を含み、また、溶液中に部分的または実質的に精製されたＤＮＡ分子を含む。  さらに、「単離された」核酸分子は、in vivoおよびin vitroでの、本願発明のＤＮＡ分子のＲＮＡ転写物を含む。  単離された核酸分子または核酸配列は、化学的または組換え手段によって合成される核酸分子または核酸配列を含む。  それ故に、ベクター内に含まれる組換えＤＮＡは、本願明細書で使用される「単離された」の定義に含まれる。  さらに、単離されたヌクレオチド配列として、異種有機体中の組換えＤＮＡ分子、および溶液中の部分的または実質的に精製されたＤＮＡ分子がある。  さらに、in vivoおよび in vitroでの、本願発明のＤＮＡ分子のＲＮＡ転写物は、「単離された」ヌクレオチド配列に含まれる。  このように単離されたヌクレオチド配列は、同種配列を単離するための(例えば、他の哺乳動物種由来の)プローブ、(例えば、染色体を用いたin situハイブリダイゼーションによって)遺伝子のマッピング、または組織(例えば、ヒト組織)内での核酸の発現をNorthernブロット分析などで検出などに利用できるので、コードされたポリペプチドの製造において有用である。
【０１２２】
さらに、本願発明は、自然界では必ずしも見出されない、ＦＬＡＰポリペプチド(例えば、配列番号：２に記載のアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有するポリペプチド)またはＦＬＡＰポリペプチドの他のスプライシング変異体またはそれらの多型性変異体をコードする核酸分子に関する。  従って、例えば、自然界の核酸配列とは異なるが、遺伝コードの縮重に起因して、本願発明のＦＬＡＰポリペプチドをコードするＤＮＡ分子も、本願発明は意図している。  さらに、本願発明は、その一部(断片)をコードするヌクレオチド配列、またはＦＬＡＰポリペプチドの類似体または誘導体のような変異体ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列も含む。  このような変異体は、例えば、対立遺伝子変異または単一ヌクレオチド多型性のように、自然発生のものであっても、または種々の突然変異原および突然変異原性プロセスによる誘発など、非自然発生のものであってもよい。  意図される変異として、付加および欠失を含む、保存性または非保存性のアミノ酸変化を生じ得る一つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、および置換があるが、これらに限定されない。  好ましくは、ヌクレオチド(および／または得られるアミノ酸)の変化は、目立たず、または保存されている。  すなわち、それら変化は、ＦＬＡＰポリペプチドの特徴または活性を変えるものではない。  ある好ましい実施態様によれば、ヌクレオチド配列は、一つ以上の多型性マイクロサテライトマーカーを含む断片である。  他の好ましい実施態様によれば、ヌクレオチド配列は、ＦＬＡＰ核酸中に一つ以上の単一ヌクレオチド多型性(例えば、以下の表３に記載の単一ヌクレオチド多型性)を含む断片である。
【０１２３】
本願発明の核酸分子のその他の改変として、例えば、同位体標識、メチル化、ヌクレオチド間修飾、例えば、無電荷結合(例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート）、有電荷結合(例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート)、未決定部分(例えば、ポリペプチド）、インターカレーター(例えば、アクリジン、ソラレン)、キレート化剤、アルキレート化剤、および修飾結合(例えば、α-アノマー性核酸)などがある。  さらに、水素結合および他の化学的相互作用を介して指定の配列に結合する能力をもつ、核酸分子を模倣する合成分子も含む。  このような分子として、分子骨格中にホスフェート結合に代わるペプチド結合代替物を有するものがある。
【０１２４】
さらに、本願発明は、(例えば、選択的なハイブリダイゼーションのような)高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸分子、本願明細書に記載の核酸配列(例えば、本願明細書に記載のポリペプチドをコードする核酸配列に特異的にハイブリダイズし、かつ、任意に、ポリペプチドの活性を保有する核酸分子)に関する。  ある実施態様によれば、本願発明は、(例えば、選択的なハイブリダイゼーションのような)高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号：１または３、またはそれらの相補体からなるグループから選択される核酸配列を含む核酸配列にハイブリダイズする、本願明細書に記載の変異体を含む。  その他の実施態様によれば、本願発明は、(例えば、選択的なハイブリダイゼーションのような)高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、配列番号：２、またはそれらの多型性変異体のアミノ酸配列をコードする核酸配列にハイブリダイズする、本願明細書に記載の変異体を含む。  好ましい実施態様によれば、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする変異体は、ＦＬＡＰの活性を有する。
【０１２５】
このような核酸分子は、特定のハイブリダイゼーション(例えば、高度にストリンジェントな条件)によって検出および／または単離することができる。  本願明細書で使用する「特定のハイブリダイゼーション」の語は、第一の核酸が、第二の核酸以外の任意の核酸にハイブリダイズしないような方法において(例えば、第一の核酸が、ハイブリダイゼーションが行われる試料での任意の他の核酸よりも、第二の核酸と高い類似性を有する場合に）、第一の核酸が第二の核酸にハイブリダイズする能力を指す。  ハイブリダイゼーションのための「ストリンジェンシー条件」の語は、特定の核酸が、第二の核酸にハイブリダイゼーション可能なインキュベーションおよび洗浄条件、例えば、温度および緩衝剤濃度の条件を指す当該技術分野の用語であり；第一の核酸は、第二の核酸と完全に(すなわち１００％)相補性であってもよく、または、第一および第二の核酸は、完全よりは小さい相補性の程度を共有していてもよい(例えば、70％、75％、85％、95％）。  例えば、特定の高度にストリンジェンシーな条件は、完全に相補性の核酸を、相補性の低いものと区別するために使用することができる。  核酸ハイブリダイゼーションのための「高度にストリンジェンシーな条件」の語、「中度にストリンジェンシーな条件」の語および「低度にストリンジェンシーな条件」の語は、Current Protocols in Molecular Biology（その全開示を参考までに本明細書に取り込んだ、Ausubel, F. M. et al., 「Current Protocols in Molecular Biology」, John Wiley & Sons,(1998) pp.2.10.1-2.10.16 および pp.6.3.1-6.3.6)で説明されている。  ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを決定する際の条件は、イオン強度(例えば、０.２×ＳＳＣ、０.１×ＳＳＣ）、温度(例えば、室温、４２℃、６８℃)、および脱安定化剤(例えば、ホルムアミド)または変性剤(例えば、ＳＤＳ)の濃度のみならず、核酸配列の長さ、塩基組成、ハイブリダイゼーション配列間のミスマッチ率、および非同一の配列内での配列のサブセットの発生頻度にも依存している。  従って、等価な条件は、２個の核酸分子間の同一性または類似性の類似度を維持しながら、これらのパラメーターの一つ以上を変動させることによって決定することができる。  通常は、互いに少なくとも約60％、少なくとも約70％、少なくとも約80％、少なくとも約90％または少なくとも約95％またはそれ以上の同一性が、互いにハイブリダイズされるような条件が使用される。  ハイブリダイゼーション条件を、ハイブリダイゼーションが起こらないストリンジェンシーレベルからハイブリダイゼーションが最初に観察されるレベルまで変動させることによって、対象とした配列が、試料内で最も類似した配列とハイブリダイズ可能である条件を決定することができる。
【０１２６】
ハイブリダイゼーション条件の例として、中度または低度にストリンジェンシーな条件のための洗浄条件に関する記載が、Krause, M. H.およびS. A. Aaronson, Methods in Enzymology 200:546-556(1991)、およびAusubel et al., 「Current Protocols in Molecular Biology」, John Wiley & Sons,(1998)に記載されている。  洗浄工程では、通常、条件がハイブリッドの相補性の最小レベルを決定するように設定されている。  一般的に、同種ハイブリダイゼーションのみが起こる最も低い温度から出発し、（ＳＳＣ濃度定数を保持しつつ）最終洗浄温度が１℃下げられるごとに、ハイブリダイズする配列間のミスマッチ度の最大が１％増加する。  一般的に、ＳＳＣの濃度が二倍になると、Ｔmが１７℃上昇する。  これらのガイドラインを用いて、高度、中度または低度なストリンジェンシーの洗浄温度は、ミスマッチレベルに応じて、経験的に決定することができる。
【０１２７】
例えば、低度なストリンジェンシー洗浄は、０.２×ＳＳＣ/０.１％ＳＤＳを含有する溶液中で、室温で、１０分間の洗浄を含むことができ；中度なストリンジェンシー洗浄は、あらかじめ加温した(４２℃)、０.２×ＳＳＣ/０.１％ＳＤＳを含有する溶液中で、４２℃で、１５分間の洗浄を含むことができ；および、高度なストリンジェンシー洗浄は、あらかじめ加温した(６８℃)、０.１×ＳＳＣ/０.１％ＳＤＳを含有する溶液中で、６８℃で、１５分間の洗浄を含むことができる。  さらに、洗浄は、繰り返しまたは連続的に行うことができ、当該技術分野で周知の所望の結果が得られる。  等価な条件は、標的核酸分子および使用されるプライマーまたはプローブ間の同様の同一性または類似性を維持しながら、当該技術分野で周知の、実施例に記載の変数の一つ以上を変動させることによって決定することができる。
【０１２８】
二つのヌクレオチドまたはアミノ酸配列の相同率または同一性は、的確な比較を容易ならしめるために配列を整列させて対比することで(例えば、的確な比較のために、第一の配列の配列内にギャップを導入することができる)、決定することができる。  次いで、対応する位置でのヌクレオチドまたはアミノ酸を比較し、二つの配列間で一致している位置の数の関数から、一致率を求める（すなわち、一致率＝同じ位置の数／位置全体の数×１００）。  一方の配列での位置が、他方の配列での対応する位置と同じヌクレオチドまたはアミノ酸残基によって占められている場合、これらの分子はその位置で相同である。      
【０１２９】
本願明細書で使用されている核酸またはアミノ酸「ホモロジー」の語は、核酸またはアミノ酸「同一性」の語と等価である。  ある実施態様によれば、比較の目的で整列される配列の長さは、参照配列の少なくとも30％、例えば、少なくとも40％、また、ある実施態様によれば、少なくとも60％、およびその他の実施態様によれば、少なくとも70％、80％、90％または95％である。  二つの配列の実際的な比較は、周知の方法で、例えば、数学的アルゴリズムを用いて行うことができる。  このような数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877 (1993) に記載されている。  このようなアルゴリズムは、Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:389-3402 (1997)に記載されているような、NBLASTおよびXBLASTプログラム(バージョン2.0)に組み込まれる。  BLASTおよびGapped BLASTプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーター(例えば、NBLAST)を使用することができる。  ある実施態様によれば、配列比較のためのパラメーターは、スコア=１００、ワード長=１２に設定するか、または変動させることができる（例えば、Ｗ=５またはＷ=２０）。
【０１３０】
配列を比較するために使用される数学的アルゴリズムのその他の好ましい例として、Myers and Miller,CABIOS 4（1）:11-17 (1988)のアルゴリズムがあるが、これに限定されない。  このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アラインメントソフトウェアパッケージ(Accelrys、ケンブリッジ、英国)の一部である、ALIGNプログラム(バージョン2.0)に組み込まれる。  アミノ酸配列を比較するためにALIGNプログラムを使用する場合、PAM120残存重量表、ギャップ長ペナルティー１２、およびギャップペナルティー４を使用することができる。  配列分析のための他のアルゴリズムは、当該技術分野で周知であり、Torellis and Robotti, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5 (1994)に記載されているADVANCEやADAM；それに、Pearson and Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8 (1988)に記載されているFASTAがある。
【０１３１】
その他の実施態様によれば、二つのアミノ酸配列間の一致率は、BLOSUM63マトリックスまたはPAM250マトリックスのいずれかを利用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて、ギャップ長12、10、８、６または４、および、長さ重量２、３または４の条件で行うことができる。  さらにその他の実施態様によれば、二つの核酸配列間の一致率は、ギャップ長50および長さ重量３の条件で、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを用いて行うことができる。
【０１３２】
さらに、本願発明は、配列番号：１または３、または配列番号：１または３の相補体を含む核酸配列に高度にストリンジェントな条件でハイブリダイズする断片またはその一部を含有する単離された核酸分子、ならびに、本願発明のアミノ酸配列またはそれらの多型性変異体をコードする核酸配列に高度にストリンジェントな条件でハイブリダイズする断片または部分を含む単離された核酸分子を提供する。  本願発明の核酸断片は、少なくとも、約15個、例えば、少なくとも約18、20、23または25個のヌクレオチドであり、また、30、40、50、100、200またはそれよりも大きな長さのヌクレオチドとすることもできる。      
【０１３３】
さらに長い断片、例えば、本願明細書に記載の抗原性ポリペプチドをコードする30個以上のヌクレオチドを含む断片は、例えば、後述する抗体を生成する上で特に有用である。
【０１３４】
プローブおよびプライマー
関連する態様によれば、本願発明の核酸断片は、本願明細書に記載のアッセイにおいて、プローブまたはプライマーとして使用される。  「プローブ」または「プライマー」の語は、核酸分子の相補的な鎖に塩基特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを指すものである。  このようなプローブおよびプライマーとして、Nielsen et al., (Science 254:1497-1500 (1991))に記載されたポリペプチド核酸がある。
【０１３５】
プローブまたはプライマーは、少なくとも約15個、例えば、約20〜25個、ある実施態様によれば、約40、50または75個の、本願発明の連続したヌクレオチド、例えば、配列番号：１または３、または配列番号：１または３の相補体の連続核酸配列を含む核酸、または配列番号：２のアミノ酸配列またはそれらの多型性変異体をコードする核酸配列にハイブリダイズする核酸領域を含む。  好ましい実施態様によれば、プローブまたはプライマーは、１００個以下のヌクレオチド、ある実施態様によれば、６〜５０個のヌクレオチド、例えば、１２〜３０個のヌクレオチドを含む。  その他の実施態様によれば、プローブまたはプライマーは、連続核酸配列または連続ヌクレオチド配列の相補体に対して少なくとも70％同一であり、例えば、少なくとも80％同一であり、ある実施態様によれば、少なくとも90％同一であり、その他の実施態様によれば、少なくとも95％同一であるか、または隣接する核酸配列または隣接するヌクレオチド配列に選択的にハイブリダイズ可能でさえある。  さらに、プローブまたはプライマーは、しばしば、標識、例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素または酵素共因子を含む。
【０１３６】
上述したような本願発明の核酸分子は、標準的な分子生物学的技術を用いて同定および単離することができ、配列情報は、本願明細書に記載してある。  例えば、核酸分子は、ポリメラーゼ連鎖反応、および配列番号：１または３またはそれらの相補体の一つ以上、または本願明細書に記載の一つ以上のアミノ酸配列をコードする配列に基づくヌクレオチドに基づいて設計される合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅および単離することができる。  一般論として、PCR Technology: Principles and Applications for ＤＮＡ Amplifcation (H. A. Erlich eds., Freeman Press, NY, NY, 1992); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications (Innis et al., eds. Academic Press, San Diego, CA, 1990); Mattila et al., Nucl. Acids Res. 19: 4967 (1991); Eckert et al., PCR Methods and Applications 1:17 (1991); PCR (McPherson et al., eds., IRL Press,Oxford);および、米国特許第4,683,202号を参照されたい。  核酸分子は、ｃＤＮＡ、ｍＲＮＡまたはゲノミックＤＮＡを鋳型として用いて増幅することができ、適切なベクター内でクローン化され、ＤＮＡ配列分析によって配列決定される。
【０１３７】
その他の好適な増幅方法として、リガーゼ連鎖反応(ＬＣＲ)(Wu and Wallace, Genomics 4:560 (1989), Landegren et al., Science 241:1077 (1988)、転写増幅(Kwoh et al.,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173（1989））、および自己持続性配列複製（Guatelli et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 87:1874 (1990))および核酸に基づく配列増幅(NASBA)がある。  後者の二つの増幅方法は、等温転写に基づく等温反応を含み、増幅産物として、一本鎖ＲＮＡ(ssＲＮＡ)および二本鎖ＤＮＡ(dsＤＮＡ)を、約30または100：１でそれぞれ含む。
【０１３８】
増幅されたＤＮＡは(例えば、放射性同位体で)標識することができ、そして、ヒト細胞から誘導されるｃＤＮＡライブラリー、zapエクスプレス内のｍＲＮＡ、ZIPLOXまたはその他の好適なベクターをスクリーニングするためのプローブとして使用することができる。  対応するクローンを単離することができ、ＤＮＡを得た後にin vivoで切断し、クローン化した挿入物を、適切な分子量のポリペプチドをコードする正しい読取枠を同定するための当該技術分野で周知の方法によって、一方向または双方向から配列決定することができる。  例えば、本願発明の核酸分子の直接分析は、市販の周知の方法を用いて行うことができる。  例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual（第２編、CSHP, New York 1989); Zyskind et al., Recombinant ＤＮＡ Laboratory Manual, (Acad. Press, 1988))を参照されたい。  これら方法や類似の方法を用いて、ペプチドおよびポリペプチドをコードするＤＮＡを単離し、配列決定して、さらに特徴の決定をすることができる。
【０１３９】
本願発明のアンチセンス核酸分子は、配列番号：１または３のヌクレオチド配列および／または配列番号：１または３の一つ以上の相補体および／または配列番号：１または３または配列番号：１または３の一つ以上の相補体の一つ以上の部分および／または配列番号：２のアミノ酸配列をコードする配列または配列番号：１または３またはそれらの相補体の一つ以上の部分をコードする配列を用いて設計することができる。  それらは、当該技術分野で周知の手順に従い、化学合成および酵素連結反応を用いて構築することができる。  例えば、アンチセンス核酸分子(例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド)は、天然のヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を改善せしめる目的で、または、アンチセンスおよびセンス核酸の間に形成される二本鎖の物理的安定性を改善せしめる目的で、種々の改変が施されたヌクレオチドを用いて化学的に合成することができる。  例えば、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換されたヌクレオチドを使用することができる。  あるいは、アンチセンス核酸分子は、核酸分子がアンチセンス方向にサブクローン化される発現ベクターを用いて生物学的に産生することができる(すなわち、挿入された核酸分子から転写されたＲＮＡは、目的の標的核酸に対してアンチセンス方向である）。
【０１４０】
さらに、患者の内因性ＤＮＡ配列と比較してＦＬＡＰに関連する一つ以上の障害を同定するために、およびプローブとして、例えば、関連するＤＮＡ配列をハイブリダイズして開発するために、または試料から既知の配列を取り出すために、この核酸配列を使用することができる。  また、ＤＮＡ免疫技術を用いて抗ポリペプチド抗体を取得する目的で、および抗ＤＮＡ抗体の取得または免疫応答の誘発のための抗原として、遺伝子指紋のためのプライマーを取得するために、この核酸配列を使用することができる。  本願明細書で同定されるヌクレオチド配列の一部または断片(および対応する完全な遺伝子配列)は、ポリヌクレオチド試薬として多くの局面で使用することができる。  例えば、これらの配列は、(ｉ)染色体上の各遺伝子のマッピング、および遺伝子疾患に関連する遺伝子領域または核酸領域の位置決定、(ii)微小な生物学的試料からの個体を同定(組織タイピング)、および(iii)生物学的試料の法医学的同定への利用など、に用いることができる。  さらに、分析、特徴決定または治療のために使用される組換えポリペプチド、または、その対応するポリペプチドが、組織分化中または疾患状態のいずれかにおいて構成的に発現する組織用マーカーを同定および発現するために、本願発明のヌクレオチド配列を使用することができる。  さらに、核酸配列は、本願明細書に記載のスクリーニングおよび／または診断アッセイでの試薬として使用でき、本願明細書に記載のスクリーニングおよび／または診断アッセイにおいて使用するキット(例えば、試薬キット)の構成要素として使用できる。
【０１４１】
ベクター
本願発明の他の態様は、配列番号：１または３またはそれらの相補体(またはそれらの一部)の核酸分子を含む核酸構築物に関する。  本願発明のさらに他の態様は、配列番号：２またはそれらの多型性変異体のアミノ酸をコードする核酸分子を含む核酸構築物に関する。  この構築物は、ベクター(例えば、発現ベクター)を含み、このベクター内に、本願発明の配列が、センス配向またはアンチセンス配向で挿入される。  本願明細書で使用する「ベクター」の語は、それに結合した他の核酸を移動することができる核酸分子を指す。  あるタイプのベクターは「プラスミド」とも称されており、その内部に他のＤＮＡセグメントが結合可能な環状二本鎖ＤＮＡループを指す。  他のタイプのベクターとして、ウイルスゲノムへの他のＤＮＡセグメントの結合を可能ならしめる、ウイルスベクターがある。  あるベクターは、宿主細胞内で自律複製可能であり、宿主細胞内にベクターが導入される(例えば、細菌の複製起源を有する細菌性ベクターおよびエピソーム哺乳動物ベクター)。  その他のベクター(例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター)は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞のゲノム内に組み込まれて、宿主ゲノムに沿って複製される。      
【０１４２】
さらに、特定のベクター(例えば、発現ベクター)は、それらが結合する遺伝子または核酸の発現を導くことができる。  一般的に、組換えＤＮＡ技術におけるベクターの実用性は、プラスミドの形態でよく認められる。  しかしながら、本願発明では、このような他の形態の発現ベクター、例えば、等価機能を付与するウイルスベクター(例えば、複製欠陥レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス)をも意図している。
【０１４３】
本願発明の好ましい組換え発現ベクターは、宿主細胞内で核酸分子を発現するのに好適な形態で、本願発明の核酸分子を含む。  このことは、組換え発現ベクターが、発現に使用される宿主細胞に基づいて選択的に発現される核酸配列に作動可能に結合する一つ以上の制御配列を含むことを意味する。  組換え発現ベクター内で、「作動可能に結合する」または「作動可能的に結合する」の語は、目的の核酸配列が、核酸配列の発現を可能にする様式で(例えば、in vitro転写／翻訳系、またはベクターが宿主細胞内に導入される場合の宿主細胞において)制御配列に結合することをも意図している。  「制御配列」の語は、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現制御要素(例えば、ポリアデニル化シグナル)を含むことを意図している。  このような制御配列は、例えば、Goeddel、''Gene Expression Technology'', Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)に記載されている。  制御配列として、多様なタイプの宿主細胞内での核酸配列の構成的発現を導くもの、および特定の宿主細胞内でのみ核酸配列の発現を導くもの(例えば、組織特異的な制御配列)などがある。  当業者であれば、発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択および所望なポリペプチドの発現レベルなどの因子に依存することを理解するであろう。  本願発明の発現ベクターは、宿主細胞内に導入され、また、本願明細書に記載の核酸分子によってコードされる融合ポリペプチドを含む、ポリペプチドを産生することができる。
【０１４４】
本願発明の組換え発現ベクターは、原核細胞または真核細胞、例えば、大腸菌、(バキュロウイルス発現ベクターを用いる)昆虫細胞、酵母細胞または哺乳動物細胞のような微生物細胞内で本願発明のポリペプチドを発現するために設計することができる。  好適な宿主細胞は、Goeddelの文献で詳細に議論されている。  あるいは、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター制御配列およびＴ７ポリマーゼを用いて、in vitroで転写および翻訳される。
【０１４５】
本願発明の他の態様は、本願発明の組換え発現ベクターが導入された宿主細胞に関する。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本願明細書で交互に代替的に使用することができる。  これら用語は、特定の対象細胞を指すのみならず、このような細胞の後代または潜在的後代をも指すものと理解される。  特定の改変は、突然変異または環境的影響のいずれかに起因して、連続して生成途中で発生してもよく、実際のところ、後代とは、親細胞と同一でないものまでもがが、本願明細書で使用される用語の範囲内に含まれる。
【０１４６】
宿主細胞は、任意の原核細胞または真核細胞である。  例えば、本願発明の核酸分子は、微生物細胞(例えば、大腸菌)、昆虫細胞、酵母細胞または哺乳動物細胞(例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞(ＣＨＯ)またはＣＯＳ細胞)内で発現可能である。  他の好適な宿主細胞は、当業者に周知のものである。
【０１４７】
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換技術またはトランスフェクション技術によって、原核細胞または真核細胞に導入可能である。  本願明細書で使用する「形質転換」および「トランスフェクション」の語は、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共析出、ＤＥＡＥ-デキストランで媒介されるトランスフェクション、リポフェクションまたは電気穿孔を含む、外来核酸分子(例えば、ＤＮＡ)を宿主細胞に導入するための当該技術分野で周知の種々の技術をも意図している。  宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするための好適な方法は、Sambrook et al(前出)、およびその他の実験マニュアルにおいて見出すことができる。
【０１４８】
哺乳動物細胞を安定的にトランスフェクションするために、使用する発現ベクターおよびトランスフェクション技術に従って、細胞の小画分だけが、そのゲノム内に外来ＤＮＡを組み込む手法が知られている。  これら成分を同定および選択するために、(例えば、抗生物質に対する耐性のための)選択可能なマーカーをコードする遺伝子または核酸は、一般的に、目的の遺伝子または核酸と共に宿主細胞に導入される。  好ましい選択可能なマーカーとして、薬剤に耐性を付与するもの、例えば、Ｇ418、ハイグロマイシンおよびメトトレキセートなどがある。  選択可能なマーカーをコードする核酸分子は、本願発明の核酸分子と同じベクターで宿主細胞内に導入可能であるか、または他のベクターで導入可能である。  導入された核酸分子で安定にトランスフェクトする細胞は、薬物選択によって同定することができる(例えば、選択可能なマーカー遺伝子または核酸を組み込まれた細胞は生存しているが、他の細胞は死滅する)。
【０１４９】
本願発明の宿主細胞、例えば、培地内の原核宿主細胞または真核宿主細胞は、本願発明のポリペプチドを産生(すなわち、発現)するために使用することができる。  それ故に、本願発明はさらに、本願発明の宿主細胞を用いてポリペプチドを産生するための方法も提供する。  ある実施態様によれば、本願発明の方法は、ポリペプチドが産生されるように、本願発明の宿主細胞(ここに、本願発明のポリペプチドをコードする組換え発現ベクターが導入される)を、好適な培地で培養する工程を含む。  その他の実施態様によれば、本願発明の方法は、培地または宿主細胞からポリペプチドを単離する工程をさらに含む。
【０１５０】
また、本願発明の宿主細胞は、非ヒト-トランスジェニック動物を作製するために使用することができる。 例えば、ある実施態様によれば、本願発明の宿主細胞として、本願発明の核酸分子(例えば、外因性ＦＬＡＰ核酸、またはＦＬＡＰポリペプチドをコードする外因性核酸)が導入された、受精済卵母細胞または胚幹細胞がある。  次いで、このような宿主細胞は、内因性ヌクレオチド配列が改変されたゲノムまたは相同組換え動物内に外因性ヌクレオチド配列が導入された非ヒト-トランスジェニック動物を作製するために使用することができる。  このような動物は、核酸配列およびこの配列によってコードされるポリペプチドの機能および／または活性の研究、および、それら活性の修飾物質を同定および／または評価する上で有用である。  本願明細書に記載の「トランスジェニック動物」の語は、非ヒト動物、好ましくは、哺乳動物、さらに好ましくは、ラットまたはマウスのような齧歯類であり、これら動物細胞の一つ以上が、導入遺伝子を含む。  トランスジェニック動物の他の例として、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリおよび両生類がある。  導入遺伝子とは、細胞のゲノム内に組み込まれる外因性ＤＮＡであって、作製されたトランスジェニック動物の成熟体のゲノム内に保持され、かつ一つ以上のタイプの細胞またはトランスジェニック動物の組織内での遺伝子産物の発現を指示する遺伝子である。  本願明細書に記載の「相同組換え動物」の語は、非ヒト動物、好ましくは、哺乳動物、さらに好ましくは、マウスであって、その内因性遺伝子は、動物が成長する以前に、動物細胞、例えば、未成熟動物細胞内に導入される内因性遺伝子と外因性ＤＮＡ遺伝子との間の相同組換えによって改変されている。
【０１５１】
受精卵操作および微量注射を利用してトランスジェニック動物、特に、マウスのような動物を生成するための方法は、当該技術分野で周知であり、例えば、米国特許第4,736,866号および第4,870,009号、米国特許第4,873,191号およびHogan, Manipulatingtlze Mouse Embryo (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986) に記載されている。  相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築するための方法は、Bradley, Current Opinion in BioTechniques ２: 823-829 (1991)およびＰＣＴ国際公開WO90/11354、WO91/01140、WO92/0968およびWO93/04169に記載されている。  本願明細書に記載の非ヒト-トランスジェニック動物のクローンは、Wilmut et al., Nature 385: 810-813 (1997)およびＰＣＴ国際公開WO97/07668およびWO97/07669に記載の方法に従って製造することができる。
【０１５２】
本願発明のポリペプチド
さらに、本願発明は、ＦＬＡＰ核酸(「ＦＬＡＰポリペプチド」)によってコードされる単離されたポリペプチド、およびそれらの断片および変異体、ならびに本願明細書に記載のヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド(例えば、他のスプライシング変異体)に関する。  「ポリペプチド」の語は、非特定の長さのアミノ酸のポリマー；ペプチド、オリゴペプチドを指し、タンパク質は、ポリペプチドの定義に含まれる。  本願明細書では、ポリペプチドが、組換え細胞および非組換え細胞から単離されるときに細胞物質を実質的に伴わず、または、化学的合成されるときに化学前駆体または他の化学物質を実質的に伴わない場合に、「単離された」または「精製された」の語を用いている。  しかしながら、ポリペプチドは、細胞内(例えば「融合タンパク質」)では通常は関連しない他のポリペプチドと結合することができ、この場合も「単離されて」または「精製されて」の語を用いる。
【０１５３】
本願発明のポリペプチドは、均一になるまで精製することができる。  しかしながら、ポリペプチドが均一になるまで精製されない調製物が有用な場合があることも理解される。  他の成分が著量に存在する場合であっても、調製物がポリペプチドの所望な機能を有していることが肝要である。  従って、本願発明は、種々の精製度を包含する。  ある実施態様によれば、「細胞物質を実質的に含まない」の語は、約30％(乾燥重量％)未満の他のタンパク質(すなわち、汚染タンパク質)、約20％未満の他のタンパク質、約10％未満の他のタンパク質、または約５％未満の他のタンパク質を有するポリペプチドの調製物を含む。
【０１５４】
ポリペプチドが組換えにより産生される場合、培地を実質的に含んでなくてもよく、すなわち、ポリペプチド調製物の体積の約20％未満、約10％未満、または約５％未満で培地を含む。  「実質的に化学前駆体または他の化学物質を含まない」の語は、合成に関与する化学前駆体または他の化学物質から分離されるポリペプチドの調製物を含む。  ある実施態様によれば、「実質的に化学前駆体または他の化学物質を含まない」の語は、約30％(乾燥重量％)未満の化学前駆体または他の化学物質、約20％未満の化学前駆体または他の化学物質、約10％未満の化学前駆体または他の化学物質、または約５％未満の化学前駆体または他の化学物質を有するポリペプチドの調製物を含む。
【０１５５】
ある実施態様によれば、本願発明のポリペプチドは、配列番号：１または３、または配列番号：１または３の相補体、またはそれらの一部、またはそれらの多型性変異体からなるグループから選択される核酸配列を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を含む。  しかしながら、本願発明のポリペプチドは、断片および配列変異体を含む。  変異体には、生物内の同じ遺伝子座、すなわち、対立遺伝子変異体、および他のスプライシング変異体によってコードされる実質的に同種のポリペプチドが含まれる。  変異体は、生物内の他の遺伝子座から誘導されるが、配列番号：１または３またはそれらの相補体、またはそれらの一部からなるグループから選択される核酸配列を含む核酸分子によってコードされるポリペプチドに対して実質的な相同性を有するか、または、配列番号：２をコードするヌクレオチド配列またはそれらの多型性変異体からなるグループから選択される核酸配列を含む核酸分子によってコードされるポリペプチドに対して実質的なホモロジーを有するポリペプチドをさらに包む。  また、変異体は、他の生物から誘導されるが、これらのポリペプチドと実質的に同種または同一のポリペプチド、すなわち、オルソログを含む。  また、変異体は、化学合成によって製造されるこれらのポリペプチドに対して実質的に同種または同一のポリペプチドを含む。  また、変異体は、組換え方法によって産生されるこれらのポリペプチドに対して実質的に同種または同一のポリペプチドを含む。
【０１５６】
本願明細書によれば、二つのポリペプチド(またはこれらポリペプチドの領域)は、アミノ酸配列が、少なくとも約45〜55％、ある実施態様によれば、少なくとも約70〜75％、およびその他の実施態様によれば、少なくとも約80〜85％、およびその他の場合において、約90％以上同種であるかまたは同一である場合、実質的に同種または同一である。  実質的に同種のアミノ酸配列は、本願発明に従って、ストリンジェントな条件、具体的には上記した条件下で、配列番号：１または３またはそれらの一部にハイブリダイズする核酸分子によってコードされるか、またはストリンジェントな条件、具体的には上記した条件下で、配列番号：２をコードする核酸配列またはそれらの一部またはそれらの多型性変異体にハイブリダイズする核酸分子によってコードされる。
【０１５７】
さらに、本願発明は、同一性のレベルは低いが、本願発明の核酸分子によってコードされるポリペプチドの機能の一つ以上を保有するとの十分な類似性を有する、ポリペプチドを含む。  類似性は、保存的なアミノ酸置換によって決定される。  この置換とは、ポリペプチド内の所定のアミノ酸が、同じ特徴を持つ他のアミノ酸で置換されていることを指す。  保存的置換は、表現型に目立った変化を付与しない。  通常、保存的置換として、脂肪族アミノ酸Ala、Val、Leuなどで相互置換；ヒドロキシル残基SerおよびThrの置換、酸性残基AspおよびGluの置換、アミド残基AsnとGlnとの間の置換、塩基性残基LysおよびArgの置換、芳香族残基PheおよびTyrの間の置換がある。  アミノ酸の変化が、表現型に目立った変化を付与しないことは、Bowie et al., Science 247:1306-1310 (1990)のガイダンスにも記載されている。
【０１５８】
変異体ポリペプチドのアミノ酸配列での一つ以上のアミノ酸の置換、欠失、挿入、移動、融合および切断またはこれらの任意の組み合わせによって、構成上の差異が設けられている。  さらに、変異体ポリペプチドは、完全に機能性であるか、または一つ以上の活性において機能を喪失している場合がある。  完全に機能性の変異体は、通常は、重要でない残基または領域内て保存的な変異または変異のみを含む。  機能的な変異体はさらに、機能面に変化を全くまたは顕著に付与しない類似のアミノ酸の置換を含む。  あるいは、このような置換は、ある程度までは、良好または不都合な影響を与える場合がある。  機能的でない変異体は、通常は、非保存的な一つ以上のアミノ酸の置換、欠失、挿入、移動、または切断、または重要な残基または重要な領域内での置換、挿入、移動、または欠失を含む。
【０１５９】
機能面で必須のアミノ酸は、部位特異的突然変異誘発またはアラニンスキャニング突然変異誘発のような、当該技術分野で周知の方法によって同定することができる(Cunningham et al., Science 244: 1081-1085 (1989））。  後者の手順によれば、分子中の残基ごとに単一のアラニン突然変異が導入される。  得られた変異分子を、in vitroでの生物学的活性、またはin vitro増殖活性について試験する。  ポリペプチド活性のために重要な部位はさらに、構造分析、例えば、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識によって決定することができる(Smith et al., J. Mol.Biol. 224: 899-904 (1992); de Vos et al., Science 255: 306-312 (1992））。
【０１６０】
さらに、本願発明は、本願発明のポリペプチドの断片を含む。  断片は、配列番号：１または３、または配列番号：１または３の相補体(または他の変異体)を含む核酸分子によってコードされるポリペプチドから誘導することができる。  しかし、本願発明はさらに、本願明細書に記載のポリペプチドの変異体の断片も含む。  本願明細書では、断片は、少なくとも連続する６個のアミノ酸を含む。  有用な断片として、ポリペプチド特異的な抗体を作成するための免疫源として使用可能なポリペプチド、それに、断片の生物学的活性の一つ以上を保持しているものがある。
【０１６１】
生物学的に活性な断片(例えば、６、９、12、15、16、20、30、35、36、37、38、39、40、50、100またはそれ以上の長さのアミノ酸を含むペプチド)は、ポリペプチド配列に関する周知の分析方法によって同定される、ドメイン、セグメントまたはモチーフ、例えば、単一ペプチド、細胞外ドメイン、一つ以上の膜間セグメントまたはループ、リガンド結合領域、亜鉛フィンガードメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、アシル化部位、グリコシル化部位、またはホスホリル化部位を含む。
【０１６２】
断片は、孤立している(他のアミノ酸またはポリペプチドに融合されない)か、またはさらに大きなポリペプチド内にあってもよい。  さらに、幾つかの断片は、単一のさらに大きなポリペプチド内に含まれる。  ある実施態様によれば、宿主内で発現するために設計される断片は、ポリペプチド断片のアミノ末端に融合される異種のプレ-ポリペプチド領域またはプロ-ポリペプチド領域、および断片のカルボキシル末端に融合される領域をさらに具備することができる。
【０１６３】
従って、本願発明は、キメラポリペプチドまたは融合ポリペプチドを提供する。  これらは、ポリペプチドに対して実質的に同種ではないアミノ酸配列を有する異種タンパク質またはポリペプチドに作動可能に結合する本願発明のポリペプチドを含む。  「作動可能に結合する」の語は、ポリペプチドおよび異種タンパク質が、フレーム内で融合することを指す。  異種タンパク質は、ポリペプチドのＮ-末端またはＣ-末端に対して融合可能である。  ある実施態様によれば、融合ポリペプチドは、ポリペプチドそれ自体の機能に影響を与えない。  例えば、融合ポリペプチドとして、ポリペプチド配列がＧＳＴ配列のＣ-末端に融合するＧＳＴ-融合ポリペプチドがある。  他のタイプの融合ポリペプチドとして、酵素融合ポリペプチド、例えば、β−ガラクトシダーゼ融合物、酵母２-ハイブリッドＧＡＬ融合物、ポリ-His融合物およびIg融合物があるが、これらに限定されない。  このような融合ポリペプチド、特に、ポリ-His融合物は、組換えポリペプチドの精製を容易にすることができる。  特定の宿主細胞(例えば、哺乳動物の宿主細胞)では、ポリペプチドの発現および／または分泌は、異種シグナル配列を用いて増加させることができる。  したがって、その他の実施態様によれば、融合ポリペプチドは、そのＮ-末端に異種シグナル配列を含む。
【０１６４】
欧州公開特許公報第0 464 533号は、免疫グロブリン定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示している。  Ｆｃは、治療および診断において有用であり、例えば、改良された薬動力学性をもたらす(欧州公開特許公報第0 232 262号)。  薬物開発において、例えば、ヒトタンパク質は、アンタゴニストを同定するためのハイスループットスクリーニングアッセイのために、Ｆｃ部分と融合されている。  Bennett et al., Journal of Molecular, Recognition, 8：52-58 (1995) およびJohanson et al., The Journal of Biological Chemistry, 270, 16：9459-9471 (1995)。  したがって、本願発明は、本願発明のポリペプチドと、種々のサブクラスの免疫グロブリン(IgＧ、IgＭ、IgＡ、IgＥ)の重鎖または軽鎖の定常領域の種々の部分とを含有する可溶性融合ポリペプチドをさらに含む。
【０１６５】
キメラまたは融合ポリペプチドは、標準的な組換えＤＮＡ技術によって調製することができる。  例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片は、従来の技術に従ってフレーム内で共に結合される。  その他の実施態様によれば、融合遺伝子は、ＤＮＡ自動合成装置を含む従来の技術によって合成可能である。  あるいは、核酸断片のＰＣＲ増幅は、キメラ核酸配列を作成するためにアニーリングし、再増幅することができる二つの連続した核酸断片間に相補的に結合するアンカープライマーを用いて実施することができる(Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, 1992を参照）。  さらに、発現ベクターの多くは、融合部分をすでにコードしているもの(例えば、ＧＳＴタンパク質）が市販されている。  本願発明のポリペプチドをコードする核酸分子は、融合部分がポリペプチドにフレーム内で結合するように、このような発現ベクターにクローンニングすることが可能である。
【０１６６】
単離されたポリペプチドは、そのポリペプチドを天然に発現する細胞から精製することができ、そのポリペプチドを発現するように改変された(組換えた)細胞から精製することができ、または公知のタンパク質合成方法によって合成することができる。  ある実施態様によれば、ポリペプチドは、組換えＤＮＡ技術によって製造される。  例えば、ポリペプチドをコードする核酸分子は、発現ベクターに対してクローニングされ、発現ベクターは宿主細胞内に導入されて、ポリペプチドは宿主細胞内で発現する。  次いで、ポリペプチドは、標準的なタンパク質精製技術を用いて、適切な精製手順にに従って細胞から単離することができる。
【０１６７】
本願発明のポリペプチドは、抗体の生成または免疫応答の誘発のために使用することができる。  さらに、ポリペプチドは、試薬、例えば、ポリペプチドのレベルを定量的に決定するためのアッセイでの標識試薬、または生物学的流体で結合する分子(例えば、リガンド)として使用することができる。  さらに、ポリペプチドは、細胞または組織のためのマーカーとして使用することができ、それに対応するポリペプチドは、組織分化過程で本質的に、または疾患状態において優先的に発現する。  ポリペプチドは、対応する結合剤(例えば、相互作用トラップアッセイにおけるリガンド)の単離、および結合相互作用のペプチドまたは低分子アンタゴニストまたはアゴニストのスクリーニングのために使用することができる。  例えば、ＦＬＡＰを含むロイコトリエン経路の構成要素は、レセプターに結合するので、ロイコトリエン経路ポリペプチドは、このようなレセプターを単離するために使用することができる。
【０１６８】
本願発明の抗体
ある形態のポリペプチドまたは核酸産物に対しては特異的に結合するが、それ以外の形態のポリペプチドまたは核酸産物には特異的に結合しない、ポリクローナルおよび／またはモノクローナル抗体(例えば、表３に示したようなＳＮＰを有する核酸によってコードされるポリペプチド)が提供される。  さらに、本願発明の核酸(例えば、配列番号：１または配列番号：３、または配列番号：１または配列番号：３の相補体)によってコードされるポリペプチド、または多型性部位またはこの部位を含有する本願発明の核酸によってコードされるポリペプチドのいずれかの部分に結合する抗体が提供される。  さらに、本願発明は、本願発明のポリペプチドおよびポリペプチド断片、またはそれらの一部に対する抗体、または、配列番号：１または３のすべてまたは一部、またはそれらの相補体、または他の変異体またはそれらの一部を含む核酸分子によってコードされるアミノ酸配列を有する抗体を提供する。
【０１６９】
本願明細書で使用する「抗体」の語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子内の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を有する分子を指す。  本願発明のポリペプチドに特異的に結合する分子は、ポリペプチドまたはそれらの断片に結合するが、実質的に、ポリペプチドを先天的に含む試料(例えば、生物学的試料)内のその他の分子に結合しない分子である。  免疫グロブリン分子の免疫的に活性な部分の例として、ペプシンのような酵素で抗体を処理することによって得られるＦ(ab)およびＦ(ab')2断片がある。  本願発明は、本願発明のポリペプチドに結合するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を提供する。  本願明細書で使用する「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」の語は、本願発明のポリペプチドの特定のエピトープと免疫反応可能な抗原結合部位の唯一の種類を含む抗体分子の集団を指す。  したがって、モノクローナル抗体組成物は、一般的には、免疫反応する本願発明の特定のポリペプチドについて単一結合親和性を示す。
【０１７０】
ポリクローナル抗体は、所望の免疫源(例えば、本願発明のポリペプチドまたはそれらの断片)を用いて、好適な個体を免疫化することによって、上述したようにして、所望の抗体を調製することができる。  免疫化された個体での抗体価は、標準的な技術(例えば、免疫化ポリペプチドを用いた酵素免疫吸着測定法(ELISA)によって、時間経過とともにモニタリングすることができる。  必要に応じて、ポリペプチドに対する抗体分子は、哺乳動物から(例えば、血液から)単離することができ、周知の技術(例えば、タンパク質Ａクロマトグラフィー)によってさらに精製することによって、ＩｇＧ画分を得ることができる。  免疫化処置後の適切な時間に、例えば、抗体価が最も高い時に、抗体を産生する細胞を対象から取得することができ、モノクローナル抗体を調製するために、これら細胞を、Kohler and Milstein, Nature 256：495-497 (1975)で初めて報告されたハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術(Kozbor et al., Immunol. Today 4：72 (1983))、EBV-ハイブリドーマ技術(Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, 1985, Inc., pp. 77-96)またはトリオーマ技術などの標準的な技術に適用するすることができる。  ハイブリドーマを産生するための技術は周知である(一般論として、Current Protocols in Immunology (1994) Coligan et al (eds) John Wiley & Sons, Inc., New York, NYを参照）。  簡潔にまとめれば、不死化細胞系(通常は、骨髄腫)は、上述したような免疫源で免疫化された哺乳動物由来のリンパ球(通常は、脾臓細胞)に融合され、得られたハイブリドーマ細胞の培地上清をスクリーニングして、本願発明のポリペプチドに結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを同定する。
【０１７１】
リンパ球および不死化細胞株を融合させるために使用される多くの周知のプロトコルの幾つかが、本願発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体を調製するために使用することができる(例えば、Current Protocols in Immunology (前出）；Galfre et al., Nature 266：55052 (1977)；R. H. Kenneth, in Monoclonal Antibodies：A New Dimension In Biological Analyses, Plenum Publishing Corp., New York, New York (1980)；およびLerner, Yale J Biol. Med. 54：387-402 (1981)を参照）。  さらに、当業者は、このような方法において、有用な多くの変法があることを理解している。
【０１７２】
モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを調製するための代替法によれば、本願発明のポリペプチドに対するモノクローナル抗体を同定し、次いで、ポリペプチドに結合する免疫グロブリンライブラリーを、ポリペプチドを用いて、組換え混合型免疫グロブリンライブラリー(例えば、抗体ファージディスプレイライブラリー)のスクリーニングを行うことによって単離することができる。  ファージディスプレイライブラリーの作成およびスクリーニングするためのキットは市販されている(例えば、Pharmacia Recombinant Phage Antibodies System, Catalog No. 27-9400-01；およびStrategy SurfZAP商標 Phage Display Kit, Catalog No. 240612）。 さらに、抗体ディスプレイライブラリーの作成およびスクリーニングの用途において高精度の反応性を示す方法および試薬の例が、例えば、米国特許第5,223,409号；PCT国際公開WO 92/18619；PCT国際公開WO 91/17271；PCT国際公開WO 92/20791；PCT国際公開WO 92/15679；PCT国際公開WO 93/01288；PCT国際公開WO 92/01047；PCT国際公開WO 92/09690；PCT国際公開WO 90/02809；Fuchs et al., BiolTequenics 9：1370-1372 (1991)；Eay et al., Hum. Antbod. Hybridoma 3：81-85 (1992)；Huse et al., Science 246：1275-1281 (1989)；Griffiths et a1., EMBO J. 12：725- 734 (1993)に開示されている。
【０１７３】
さらに、ヒト部分および非ヒト部分の双方を含み、かつ標準的な組換えＤＮＡ技術によって製造可能な組換え抗体(例えば、キメラおよびヒト型化モノクローナル抗体)は、本願発明の範囲内である。  このようなキメラおよびヒト型化モノクローナル抗体は、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術によって製造可能である。
【０１７４】
一般的に、本願発明の抗体(例えば、モノクローナル抗体)は、標準的な技術、例えば、アフィニティクロマトグラフィーまたは免疫沈降によって、本願発明のポリペプチドを単離するために使用することができる。  ポリペプチド特異的な抗体は、細胞からの天然ポリペプチドの精製を容易ならしめ、また、組換え的に産生されるポリペプチドの宿主細胞内での発現も促す。  さらに、本願発明のポリペプチドに特異的な抗体は、ポリペプチドの発現の存在頻度および存在パターンを評価するために、ポリペプチド(例えば、細胞溶解物、細胞上清または組織試料)を検出するために使用することができる。  抗体は、例えば、所定の処置方法での効果を決定するために、臨床試験手順の一部として、組織内のタンパク質レベルを診断的にモニタリングするために使用することができる。  検出可能な基質に対して抗体を結合させることによって、検出が容易になる。  検出可能な基質の例として、種々の酵素、補欠分子団、蛍光物質、発光物質、生体発光物質、および放射性物質がある。  好適な酵素の例として、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、Ｂ-ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼなどがあり；好適なプロテーゼグループ複合体の例として、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンがあり；好適な蛍光物質の例として、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンがあり；発光物質の例として、ルミノールが挙げられ；生体発光物質の例として、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンがあり、好適な放射性物質の例として、125Ｉ、131Ｉ、35Ｓまたは3Ｈがある。
【０１７５】
上述したように、ロイコトリエンに対する抗体を、本願発明の方法において使用することができる。  本願明細書に記載の方法を、種々の方法において用いる抗体を作成するために使用することができる。
【０１７６】
診断アッセイ
本願明細書に記載の核酸、プローブ、プライマー、ポリペプチドおよび抗体は、ＭＩの診断、またはＭＩまたはＦＬＡＰのようなＭＩ遺伝子に関連する疾患または状態に対する感受性の診断方法、それに、ＭＩまたはＭＩ感受性またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態の診断のために有用なキットにおいて、使用することができる。  ある実施態様によれば、ＭＩまたはＭＩ感受性、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態の診断のために有用なキットは、表３に記載のＳＮＰの一つ以上を具備した本願明細書に記載のプライマーを含む。
【０１７７】
本願発明の実施態様によれば、ＭＩまたはＭＩ感受性の診断(またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態またはこれらに対する感受性の診断)は、本願明細書に記載のＦＬＡＰ核酸での多型性を検出することによって行われる。  多型性として、単一のヌクレオチド、または一個を超えるヌクレオチドの挿入または欠失によって生じるフレームシフト改変のような、ＦＬＡＰ核酸における改変；コードされるアミノ酸における変化を生じる、少なくとも一つのヌクレオチドの変化；未成熟停止コドンを生成する、少なくとも一つのヌクレオチドの変化；ヌクレオチドによってコードされる一つ以上のアミノ酸の欠失を生じる幾つかのヌクレオチドの欠失；遺伝子または核酸のコード配列の中断を生じる、非等価の組換えまたは遺伝子変換のような、一つまたは幾つかのヌクレオチドの挿入；遺伝子または核酸のすべてまたは一部の複製；遺伝子または核酸のすべてまたは一部の移動；または、遺伝子または核酸のすべてまたは一部の再配列がある。  一個を超えるこのような改変は、一個の遺伝子または核酸において発生してもよい。  このような配列変化は、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドにおいても改変を招く。  例えば、改変がフレームシフト改変である場合、フレームシフトは、コードされるアミノ酸において出現するか、および／または、切断されたポリペプチドの生成を生じる未成熟停止コドンの生成を招く。  あるいは、ＦＬＡＰ核酸に関連する疾患または状態に関与する多型性、またはＦＬＡＰ核酸に関連する疾患または状態に対する感受性に関与する多型性として、一つ以上のヌクレオチドにおける同様の改変(すなわち、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドにおいて変化を招かない改変)がある。  このような多型性は、スプライシング部位を変化せしめ、ｍＲＮＡの安定性または移動性に影響を与え、または核酸の転写または翻訳に影響を与える場合がある。  上述した改変のいずれかを有するＦＬＡＰ核酸は、「改変された核酸」と称される。
【０１７８】
ＭＩまたはＭＩ感受性を診断する第一の方法において、ハイブリダイゼーション方法、例えば、Southern分析、Northern分析、またはin situハイブリダイゼーションを使用することができる(Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F. et al., eds.,John Wiley & Sons (1999年のすべての補遺を含む)を参照）。  例えば、ゲノミックＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡの被験体から得た生物学的試料(「試験試料」)は、ＦＬＡＰ核酸に関連する疾患または状態に対して感受性を有しており、この感受性を有する疑いがあるか、またはこの感受性についての素因を有するか、または感受性について欠陥を保有すると考えられる個体(「試験個体」)から得られる。  このような個体は、成体、子供、または胎児のいずれでもよい。  試験試料として、ゲノミックＤＮＡを含有する任意の供給源、例えば、血液試料、羊膜液試料、脳脊髄液試料、または皮膚、筋肉、頬または結膜粘液、胎盤、胃腸管またはその他の臓器由来組織試料などがある。  胎児細胞または組織由来のＤＮＡの試験試料を、適切な方法、例えば、羊水穿刺または絨毛膜柔毛サンプリングによって得ることができる。  次いで、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡ試料に関して、ＭＩ核酸内での多型性の有無、および／または、ＦＬＡＰによってコードされるスプライシング変異体の有無を決定するために試験される。  多型性またはスプライシング変異体の存在は、ゲノミックＤＮＡ、ＲＮＡ、またはｃＤＮＡでの核酸と核酸プローブとをハイブリダイゼーションすることによって示すことができる。  本願明細書に記載の「核酸プローブ」の語は、ＤＮＡプローブまたはＲＮＡプローブであり；核酸プローブは、ＦＬＡＰ核酸内に少なくとも一つの多型性を含有するか、またはＦＬＡＰ核酸の特定のスプライシング変異体をコードする核酸を含む。  プローブは、上述した核酸分子のいずれか(例えば、核酸、プローブまたはプライマーを含む核酸、断片、ベクターなど)とすることができる。
【０１７９】
ＭＩまたはＭＩ感受性(またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態)を診断するために、ＦＬＡＰ核酸を含有する試験試料は、少なくとも一つの核酸プローブと接触してハイブリダイゼーション試料を形成する。  ｍＲＮＡまたはゲノミックＤＮＡを検出するための好ましいプローブは、本願明細書に記載のｍＲＮＡまたはゲノミックＤＮＡにハイブリダイズ可能な標識された核酸プローブである。  核酸プローブは、例えば、全長核酸分子またはそれらの一部、例えば、少なくとも15、30、50、100、250または500ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドとすることができ、適切なｍＲＮＡまたはゲノミックＤＮＡにストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十分なオリゴヌクレオチドである。  例えば、核酸プローブは、配列番号：１および３の一方のすべてまたは一部、またはそれらの相補体またはそれらの一部とすることができ；または、配列番号：２のすべてまたは一部をコードする核酸とすることができる。  本願発明の診断アッセイにおいて使用するその他の好適なプローブは、上記した通りである(例えば、「本願発明の核酸」の見出し以下に記載したプローブおよびプライマーを参照されたい)。
【０１８０】
核酸プローブがＦＬＡＰ核酸に特異的に十分にハイブリダイゼーション可能な条件下に、ハイブリダイゼーション試料を置く。  本願明細書に記載の「特定のハイブリダイゼーション」の語は、完全なハイブリダイゼーションを示す(例えば、ミスマッチなし)。  特定のハイブリダイゼーションは、上記したような、高度にストリンジェントな条件から中度にストリンジェントな条件下で行うことができる。  特に好ましい実施態様によれば、特定のハイブリダイゼーションのためのハイブリダイゼーション条件は、高度にストリンジェントな条件である。
【０１８１】
次いで、特定のハイブリダイゼーションは、対象物が存在する場合、標準的な方法を用いて検出される。  特定のハイブリダイゼーションが、試験試料内で核酸プローブとＦＬＡＰ核酸との間で発生する場合、ＦＬＡＰは、多型性を有するか、あるいは核酸プローブ内に存在するスプライシング変異体である。  さらに、一個を超える核酸プローブは、この方法にて、並行して使用することができる。  核酸プローブのいずれか一つを用いた特定のハイブリダイゼーションは、ＦＬＡＰ核酸における多型性、またはＦＬＡＰ核酸をコードする特定のスプライシング変異体の存在を示すので、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性を診断する際の指標となる。
【０１８２】
Northern分析(Current Protocols in Molecula Biology, Ausubel, F. et al., eds., John Wiley & Sons (前出)を参照）にあっては、上記したハイブリダイゼーション方法は、疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性に関連する多型性または特定のスプライシング変異体の存在を同定するために使用される。  Northern分析について、ＲＮＡの試験試料は、適切な手段によって個体から得られる。  核酸プローブの個体由来のＲＮＡへの特定のハイブリダイゼーションは、上記したように、ＦＬＡＰ核酸における多型性、またはＦＬＡＰによってコードされる特定のスプライシング変異体の存在を示し、それ故に、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性を診断する指標となりうる。
【０１８３】
核酸プローブの代表的な使用例として、例えば、米国特許第5,288,611号および第4,851,330号を参照されたい。
【０１８４】
あるいは、ペプチド核酸(ＰＮＡ)プローブは、上記したハイブリダイゼーション方法において、核酸の代わりに使用することができる。  ＰＮＡは、例えば、Ｎ-(２-アミノエチル)グリシン単位のようなペプチド様の無機骨格と、メチレンカルボニルリンカーを介してグリシン窒素に結合する有機塩基(Ａ、Ｇ、Ｃ、ＴまたはＵ)とを有する疑似ＤＮＡである(例えば、Nielsen, P. E. et al., Bioconjugate Chemistry 5, American Chemical Society, p.1 (1994)を参照）。  ＰＮＡプローブは、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性に関与する多型性を有する核酸に特異的にハイブリダイズするように設計可能である。  ＰＮＡプローブのＦＬＡＰ核酸へのハイブリダイゼーションによって、本願明細書に記載したように、疾患または状態、または疾患または状態に対する感受性を診断する。
【０１８５】
本願発明の他の方法によれば、核酸での突然変異または多型性によって制限部位の創出または削除を招く場合には、改変された核酸または多型性を含有する核酸を検出するために、制限消化による突然変異分析を用いることができる。  ゲノミックＤＮＡを含有する試験試料は、個体から得られる。  ポリマーゼ連鎖反応(ＰＣＲ)は、被験個体由来のゲノミックＤＮＡの試験試料内のＦＬＡＰ核酸(および、必要に応じて、フランキング配列)を増幅するために使用することができる。 ＲＦＬＰ分析は、そこに記載の手順に従って実施される(Current Protocols in Molecular Biology, (前出)を参照)。  関連ＤＮＡ断片の消化パターンは、ＦＬＡＰ核酸内での改変または多型性の有無を示すので、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えばＭＩ)に対する感受性の有無が示される。
【０１８６】
さらに、配列分析を、ＦＬＡＰ核酸内の特定の多型性を検出するために使用することができる。  ＤＮＡまたはＲＮＡの試料は、試験個体から得られる。  核酸、および／または、必要に応じて、そのフランキング配列を増幅するために、ＰＣＲまたはその他の適切な方法を使用することができる。  ＦＬＡＰ核酸、または核酸の断片、またはｃＤＮＡ、またはｃＤＮＡの断片、またはｍＲＮＡ、またはｍＲＮＡの断片の配列は、標準的な方法を用いて決定される。  核酸、核酸断片、ｃＤＮＡ、ｃＤＮＡ断片、ｍＲＮＡまたはｍＲＮＡ断片の配列は、核酸、ｃＤＮＡ(例えば、配列番号：１または３、および／または配列番号：１または３の相補体の一つ以上、または、適切であれば、配列番号：２をコードする核酸配列またはそれらの断片)またはｍＲＮＡの既知の核酸配列に対して比較がされる。  ＦＬＡＰでの多型性の存在は、その個体が、疾患を有するか、またはＦＬＡＰに関連する疾患(例えば、ＭＩ)に対する感受性を有することを示す。
【０１８７】
さらに、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドは、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチド(ＡＳＯ)プローブを用いて増幅したオリゴヌクレオチドのドットブロットハイブリダイゼーションによって、ＦＬＡＰ核酸における多型性の存在を検出するために使用することができる(例えば、Saiki, R. et al., Nature 324：163-166 (1986)を参照）。  「対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチド」(本願明細書において、「対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドプローブ」とも称される)の語は、ＦＬＡＰに特異的にハイブリダイズし、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性に関与する多型性を含有する、約10〜50塩基対、例えば、約15〜30塩基対のオリゴヌクレオチドである。  ＦＬＡＰ核酸での特定の多型性に特異的な対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドプローブは、標準的な方法を用いて調製することができる(Current Protocols in Molecular Biology (前出)を参照）。  疾患、または疾患に対する感受性に関連する核酸での多型性を同定するために、試験用ＤＮＡ試料が個体から取得される。  ＰＣＲは、ＦＬＡＰ核酸のすべてまたは断片、およびそのフランキング配列を増幅するために使用することができる。  増幅されたＦＬＡＰ核酸(または核酸断片)を含有するＤＮＡは、標準的な方法を用いてドットブロットされ(Current Protocols in Molecular Biology (前出)を参照)、ブロットを、オリゴヌクレオチドプローブと接触せしめる。  次いで、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いた、個体由来のＤＮＡに対するハイブリダイゼーションは、ＦＬＡＰでの多型性を示すので、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性の指標である。
【０１８８】
対立遺伝子特異的なプライマーは、標的ＤＮＡにおいて多型性の重複が認められる部位にハイブリダイズし、そして、プライマーが完全な相補性を示す対立遺伝子形態だけを増幅する。  Gibbs, Nucleic Acid Res. 17, 2427-2448 (1989)を参照。  このプライマーは、離間した部位でハイブリダイズする第二のプライマーと組み合わせて使用される。  二個のプライマーを起点とする増幅によって、特定の対立遺伝子の存在を示唆する検出可能な産物を生じる。  通常は、第二の一対のプライマーを用いて対照試験も実施されており、その試験では、一方が、多型性部位で一個の塩基ミスマッチを示し、また、他方が、別異の部位で完全な相補性を示す。  一個の塩基ミスマッチが増幅を妨げるので、検出可能な産物は形成されない。  多型性を有する整列せしめたオリゴヌクレオチドの最も３'の位置においてミスマッチが含まれる場合、この位置がプライマーからの伸長を最も不安定化するため、この方法は、最も効果的に作用する(例えば、WO 93/22456参照)。
【０１８９】
ロックされた核酸(ＬＮＡ)と同等の類似体を添加することで、プライマーおよびプローブの大きさを８塩基程度にまで減らすことができる。  ＬＮＡは、フラノース環の２'位および４'位が、Ｏ-メチレン(オキシ-ＬＮＡ)、Ｓ-メチレン(チオ-ＬＮＡ)、またはアミノメチレン(アミノ-ＬＮＡ)部分を介して結合する、新規な種類に属する二環式ＤＮＡ類似体である。  これらＬＮＡのすべてに認められる共通点は、ＤＮＡ類似体について最も多く報告されている相補的核酸に対する親和性である。  例えば、特定のすべてのオキシ-ＬＮＡのノナマーは、相補的なＤＮＡまたはＲＮＡとそれぞれが複合体を形成した場合に、６４℃〜７４℃の融点を有することが示されている一方で、対応するＤＮＡのノナマーで形成した場合には、ＤＮＡおよびＲＮＡの双方において２８℃であった。  また、ＬＮＡモノマーが、標準的なＤＮＡまたはＲＮＡモノマーと組み合わせて使用される場合、Ｔmの実質的な増加が認められる。  プライマーおよびプローブに関して、ＬＮＡモノマーが含まれる位置(例えば、３'末端、５'末端または中間位置)によって、Ｔmは顕著に増加する。
【０１９０】
その他の実施態様によれば、個体由来の標的核酸配列セグメントに相補的なオリゴヌクレオチドプローブの構成配列(アレイ)は、ＦＬＡＰ核酸での多型性を同定するために使用することができる。  例えば、ある実施態様によれば、オリゴヌクレオチドを使用することができる。  オリゴヌクレオチドの構成配列は、通常は、異なる既知の位置において基質の表面に結合する、複数の異なるオリゴヌクレオチドプローブを含む。  さらに、「Genechip商標」とも称される、これらのオリゴヌクレオチドの構成配列は、例えば、米国特許第5,143,854号およびPCT国際公開WO 90/15070およびWO 92/10092などで記載されており、当該技術分野で周知である。  これらの構成配列は、一般的には、機械的な合成法、または、フォトリソグラフィー法および固相オリゴヌクレオチド合成法の組み合わせを利用する光を用いた合成方法によって製造することができる。  その全教示事項を参考までに本明細書に取り込んだ、Fodor et al., Science 251：767-777（1991）；Pirrung et al., 米国特許第5,143,854号；（PCT国際公開WO 90/15070も参照されたい）；Fodor et al., PCT国際公開WO 92/10092；および米国特許第5,424,186号を参照されたい。  機械的合成法を用いたこれらの構成配列を合成するための技術は、例えば、その全教示事項を参考までに本明細書に取り込んだ、米国特許第5,384,261号に記載されている。  その他の実施例によれば、直鎖の構成配列を使用することができる。
【０１９１】
オリゴヌクレオチドの構成配列が調製されると、目的の核酸は、この構成配列とハイブリダイズされ、多型性について検証される。  ハイブリダイゼーションおよび検証は、通常は、本願明細書に記載の方法、さらには、例えば、その全教示事項を参考までに本明細書に取り込んだ、公開されたPCT出願WO 92/10092およびWO 95/11995、そして、米国特許第5,424,186号に記載されている方法によって行われる。  要約すると、一つ以上の既に同定された多型性マーカーを含む標的核酸配列は、周知の増幅技術(例えば、ＰＣＲ)を用いて増幅される。  この方法は、通常、多型性に始まり、上流および下流の双方での標的配列において、この二つの鎖に対して相補的なプライマー配列の使用を含む。  不斉ＰＣＲ技術を使用してもよい。  標識を組み込んだ増幅された標的は、通常は、適切な条件下で構成配列とハイブリダイズする。  ハイブリダイゼーションおよび構成配列の洗浄が終了すると、次に、標的配列がハイブリダイズする構成配列上の位置を決定するために検証される。  スキャン検証して得られるハイブリダイゼーションデータは、通常は、構成配列上の位置に関する関数から導かれた蛍光強度として表現されるる。  逆の方法によれば、多型性を有するプローブを固体表面に結合させ、次いで、ＰＣＲ複製配列を添加して、これらのプローブにハイブリダイズさせる。
【０１９２】
単一の検出ブロックに関して記載すると、例えば、単一の多型性構成配列の検出では、複数の検出ブロック含めることができるので、複数の特定の多型性を分析することができる。  構成配列と標的とのハイブリダイゼーションが、変動する最適な条件下で実施されるためには、一般的に、検出ブロックが、一個の構成配列内または複数の別個の構成配列内に振り分けられてもよいことが理解される。  例えば、Ａ-Ｔが豊富なセグメントに属するものとは別に、Ｇ-Ｃが豊富なゲノム配列に属する多型性の検出が望ましいことがよくある。  このことは、各状況におけるハイブリダイゼーション条件を、個別に最適化できることを示している。
【０１９３】
多型性を検出するためのオリゴヌクレオチド構成配列のその他の用途は、例えば、その全教示事項を参考までに本明細書に取り込んだ、米国特許第5,858,659号および第5,837,832号に記載されている。  核酸分析のその他の方法は、本願明細書に記載の核酸における多型性、または本願明細書に記載の核酸によってコードされる変異体を検出するために使用することができる。  代表的な方法として、例えば、直接手動式配列決定(Church and Gilbert, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81：1991-1995 (1988)；Sanger, F. et al., Proc. Natl. Acad.Sci., USA 74：5463-5467 (1977)；Beavis et al., 米国特許第5,288,644号）；自動式蛍光配列決定；一本鎖構造多型性アッセイ(ＳＳＣＰ)；固定式変性ゲル電気泳動(ＣＤＧＥ)；変性勾配ゲル電気泳動(ＤＧＧＥ)(Sheffield, V. C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86：232-236（1989））、移動度シフト分析(Orita, M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86：2766-2770 (1989））、制限酵素分析(Flavell et al., Cell 15：25 (1978)；Geever et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78：5081（1981））；異種二本鎖分析；化学的ミスマッチ開裂(ＣＭＣ)(Cotton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85：4397-4401 (1985))；リボヌクレアーゼ(Myers, R. M. et al., Science 230：1242 (1985))；ヌクレオチドミスマッチを認識するポリペプチド(例えば、大腸菌mutＳタンパク質)の使用；対立遺伝子特異的なＰＣＲ、などがある。
【０１９４】
本願発明のある実施態様によれば、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性の診断は、定量ＰＣＲ(動力学的熱サイクル)による、発現分析によっても行うことができる。  TaqManを用いるこの技術は、患者が同種または異種であるかにかかわらず、多型性を同定するために使用することができる。  この技術は、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドまたはＦＬＡＰ核酸によってコードされるスプライシング変異体の発現、または組成物での改変の存在を評価することができる。  さらに、変異体の発現は、物理的または機能的差異として定量化することができる。
【０１９５】
本願発明のその他の実施態様によれば、ＭＩまたはＭＩ感受性の(または他のＦＬＡＰに関連する疾患または状態に対する)診断は、酵素免疫吸着測定法(ELISA)、Westernブロット、免疫沈降および免疫蛍光を含む種々の方法によっても、ＦＬＡＰポリペプチドの発現および／または組成物を試験することができる。  個体由来の試験試料は、発現時の改変および／またはＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの組成物での改変の存在、またはＦＬＡＰ核酸によってコードされる特定の変異体の存在について評価される。      
【０１９６】
ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの発現時の改変は、例えば、定量的ポリペプチド発現(すなわち、産生するポリペプチドの量)での改変であり、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの組成物での改変は、定量的ポリペプチド発現での改変(例えば、改変されたＦＬＡＰポリペプチドまたは異なるスプライシング変異体の発現)である。  好ましい実施態様によれば、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態に対する感受性の診断は、ＦＬＡＰ変異体によってコードされる特定のスプライシング変異体、またはスプライシング変異体の特定のパターンを検出することによってなされる。
【０１９７】
このような(定量的および定性的)改変の双方が可能である。  ポリペプチド発現または組成物に関する「改変」の語は、対照試料でのＦＬＡＰ核酸によるポリペプチドの発現または組成物と比較して、試験試料での発現または組成物における改変を指す。  対照試料は、試験試料に対応する試料(例えば、同じ種類の細胞由来)であり、疾患、またはＦＬＡＰ核酸に関連する疾患または状態に対する感受性によって影響を受けていない個体に由来する試料である。  対照試料と比較した場合の、試験試料でのポリペプチドの発現または組成物での改変は、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性の指標ともなる。  同様に、対照試料と比較した場合に、試験試料での一つ以上の異なるスプライシング変異体の存在、または試験試料での異なるスプライシング変異体の有意に異なる量の存在は、ＦＬＡＰ核酸に関連する疾患または状態に対する感受性の指標ともなる。  ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの発現または組成物を試験する種々の手段として、分光学、比色法、電気泳動、等電点電気泳動および免疫アッセイなどがあり(例えば、David et al., 米国特許第4,376,110)、例えば、免疫ブロッティング(Current Protocols in Molecular Biology、特に第10章、をも参照されたい)。  例えば、ある実施態様によれば、ポリペプチドに結合可能な抗体(例えば、上述したような抗体)、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体を使用することができる。
【０１９８】
抗体は、ポリクローナル、または、さらに好ましくは、モノクローナルとすることができる。  無傷な抗体、またはそれらの断片(例えば、FabまたはF(ab')2)を使用することができる。  「標識された」の語は、プローブまたは抗体に関しては、検出可能な基質をプローブまたは抗体に結合(すなわち、物理的に結合)したり、および、直接標識化される他の試薬で再活性化してプローブまたは抗体を間接的に標識化することで、プローブまたは抗体を直接に標識することも意図される。  間接的な標識の例として、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および、蛍光標識されたストレプトアビジンで検出できる、ビオチンを用いたＤＮＡプローブの末端標識がある。
【０１９９】
Westernブロッティング分析は、改変されたＦＬＡＰ(例えば、表３に記載のＳＮＰを有するＦＬＡＰ)によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する上述した抗体を使用すれば、未改変核酸によってコードされるポリペプチドに特異的に結合する抗体、または核酸によってコードされる特定のスプライシング変異体に特異的に結合される抗体は、特定のスプライシング変異体、または多型性または改変されたＦＬＡＰによってコードされるポリペプチドの試験試料での存在、または非多型性または未改変核酸によってコードされる特定のスプライシング変異体またはポリペプチドの試験試料での非存在を検証するために用いることができる。  多型性または改変された核酸によってコードされるポリペプチドの存在、または非多型性または未改変核酸によってコードされるポリペプチドの非存在に基づいて、ＦＬＡＰ核酸によってコードされる特定のスプライシング変異体の存在(または非存在)に関して、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはそれらに関連する疾患または状態に対する感受性についての診断がされる。
【０２００】
この方法のある実施態様によれば、試験試料でのＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドのレベルまたは量は、対照試料でのＦＬＡＰによってコードされるポリペプチドのレベルまたは量と比較される。  対照試料でのポリペプチドのレベルまたは量よりも高いまたは低い試験試料でのポリペプチドのレベルまたは量は、その相違が統計学的に有意であれば、ＦＬＡＰによってコードされるポリペプチドの発現における改変の指標となり、また、疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態に対する感受性を診断する指標ともなる。  あるいは、試験試料でのＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの組成物は、対照試料でのＦＬＡＰによってコードされるポリペプチドの組成物と(例えば、異なるスプライシング変異体の存在について)比較される。  試験試料でのポリペプチドの組成における相違に基づいて、対照試料でのポリペプチドの組成と比較して、疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態に対する感受性についての診断がされる。  その他の実施態様によれば、ポリペプチドのレベルまたは量および組成の双方は、試験試料および対照試料において評価することができる。  対照試料と比較される試験試料でのポリペプチドの量またはレベルにおける相違；対照試料と比較される試験試料での組成における相違；または、量またはレベルにおける相違、それに、組成における相違の双方は、疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性の指標である。
【０２０１】
さらに、本願発明は、ＦＬＡＰでの危険要素ハプロタイプを同定することで、個体での心筋梗塞に対する感受性を診断および同定する方法に関する。  ある実施態様によれば、危険要素ハプロタイプは、ＭＩの有意な危険度を付与する。  ある実施態様によれば、ハプロタイプと関連する有意性は見込値によって測定される。  さらにその他の実施態様によれば、有意性は年齢％によって測定される。  ある実施態様によれば、有意な危険度は、１.２、１.３、１.４、１.５、１.６、１.７、１.８および１.９を含む、少なくとも約１.２の見込値で測定されるが、これらに限定されない。  さらにその他の実施態様によれば、少なくとも１.２の見込値が有意である。  さらにその他の実施態様によれば、少なくとも約１.５の見込値が有意である。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加が、少なくとも約１.７である場合に有意といえる。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加として、約25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％および98％などがあるが、これらに限定されず、少なくとも約20％である。  さらにその他の実施態様によれば、危険度における有意な増加は、少なくとも約50％である。  しかし、危険度が医学的に有意であるか否かを同定することは、特定の疾患、ハプロタイプ、およびしばしば環境因子を含む、種々の因子によって変化することも理解される。
【０２０２】
さらに、本願発明は、心筋梗塞の(罹患した)疑いがある個体で頻繁に認められるＦＬＡＰ核酸での危険要素ハプロタイプについて、健康な個体(対照者)でのその頻度と比較して、スクリーニングする工程を含む、個体における心筋梗塞に対する感受性を診断する方法に関する。  ハプロタイプの存在は、心筋梗塞に対する感受性を示す。  心筋梗塞に関連するＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトマーカーの存在について遺伝子決定するための標準的な技術、例えば、蛍光に基づく技術(Chen et al., Geraofyae Res. 9, 492 (1999)、ＰＣＲ、ＬＣＲ、Nested ＰＣＲおよび核酸増幅のためのその他の技術を使用することができる。  好ましい実施態様によれば、上記した方法は、心筋梗塞に関連するＦＬＡＰ核酸でのＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトの個体での存在または頻度を評価する工程を含む。  ここで、健康な対照者と比較して、ＳＮＰおよび／またはマイクロサテライトが過剰であるかまたは頻度が高いことは、その個体が心筋梗塞の疑いがあることを示す。  スクリーニング用ツールとして使用可能なハプロタイプを含むＳＮＰについては、表９を参照されたい。  さらに、スクリーニング用ツールとして使用するためのＳＮＰおよびマーカーを記載した表３も参照されたい。
【０２０３】
ある実施態様によれば、危険要素ハプロタイプは、表３で表示した多型性の存在によって特徴付けられる。  例えば、
第256047位でのＳＮＰとして「Ｃ」または「Ｔ」が可能であるDGOOAAFIU；
第283477位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるSG13S25；
第287889位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるDGOOAAJFF；
第294503位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるDGOOAAHII；
第296020位でのＳＮＰとして「Ｔ」または「Ａ」が可能であるDGOOAAHID；
第310657位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるB#SNP#310657；
第312056位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ｔ」が可能であるSG13S30；
第316763位でのＳＮＰとして「Ｃ」または「Ａ」が可能であるSG13S32；
第320393位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるSG13S42；および
第324333位でのＳＮＰとして「Ｇ」または「Ａ」が可能であるSG13S35。
【０２０４】
診断方法において有用なキット(例えば、試薬キット)は、例えば、本願明細書に記載のハイブリダイゼーションプローブまたはプライマー(例えば、標識されたプローブまたはプライマー)、標識された分子を検出するための試薬、制限酵素(例えば、ＲＦＬＰ分析用の制限酵素）、対立遺伝子特異的なオリゴヌクレオチド、改変または未改変(天然の)ＦＬＡＰポリペプチドに結合する抗体、ＦＬＡＰを含む核酸を増幅させるための手段、または本願明細書に記載の核酸の核酸配列を分析するための手段、または本願明細書に記載のポリペプチドのアミノ酸配列を分析するための手段を含めた、本願明細書に記載の方法のいずれかにおいて有用な手段を含む。  例えば、ある実施態様によれば、ＭＩまたはＭＩ感受性を診断するためのキットは、ＭＩを有するかまたはＭＩが疑われる個体に頻繁に存在するＦＬＡＰ核酸内の領域の核酸増幅のためのプライマーを含むことができる。  プライマーは、ＭＩの指標である核酸をフランキングするＳＮＰ部分を用いて設計することができる。  特に好ましい実施態様によれば、プライマーは、表９に示したような、ＭＩについての危険要素ハプロタイプ、または、より具体的には、以下に示したＳＮＰマーカーによって設計されるハプロタイプに関連するＦＬＡＰ核酸内の領域を増幅するために設計される。  ある実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性に関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座で、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAJFF、DGOOAAHII、SG13S32およびSG13S35を含む。  ある特定の実施態様によれば、DGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAJFF、DGOOAAHII、SG13S32およびSG13S35の各々(Ｂ６ハプロタイプ)での、対立遺伝子Ｔ、Ｇ、Ｇ、Ｇ、ＡおよびＧの存在によって、心筋梗塞に対する感受性が診断される。  その他の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座に、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  ある特定の実施態様によれば、DGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42の各々(Ｂ５ハプロタイプ)での、対立遺伝子Ｔ、Ｇ、Ｇ、ＧおよびＡの存在によって、心筋梗塞に対する感受性が診断される。  第三の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座で、マーカーSG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42を含む。  ある特定の実施態様によれば、SG13S25、DGOOAAHII、SG13S30およびSG13S42の各々(Ｂ４ハプロタイプ)での、対立遺伝子Ｇ、Ｇ、ＧおよびＡの存在によって、心筋層梗塞形成に対する感受性が診断される。  第四の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座で、マーカーDGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32を含む。  ある特定の実施態様によれば、DGOOAAFIU、SG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32の各々(Ａ５ハプロタイプ)での、対立遺伝子Ｔ、Ｇ、Ｔ、ＧおよびＡの存在によって、心筋梗塞に対する感受性が診断される。      
【０２０５】
第五の実施態様によれば、心筋梗塞に対する感受性と関連するハプロタイプは、13q12遺伝子座で、マーカーSG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32を含む。  ある特定の実施態様によれば、SG13S25、DGOOAAHID、B#SNP#310657およびSG13S32の各々(Ａ４ハプロタイプ)での、対立遺伝子Ｇ、Ｔ、ＧおよびＡの存在によって、心筋梗塞に対する感受性が診断される。
【０２０６】
スクリーニングアッセイおよびそれによって同定される薬剤
本願発明は、本願発明の核酸をハイブリダイズするヌクレオチドの存在を同定するための方法(本願明細書では、「スクリーニングアッセイ」とも称する)、および本願発明の核酸によってコードされるポリペプチドの存在を同定するための方法を提供する。  ある実施態様によれば、試料内の目的の核酸分子(例えば、本願発明の核酸に対して有意な相同性を示す核酸)の存在(または、非存在)は、本願発明の核酸を含む核酸(例えば、配列番号：１または３またはそれらの相補体、または配列番号：２の配列を有するアミノ酸をコードする核酸、またはこのような核酸の断片または変異体の一つの配列を有する核酸)と試料とを、上記したストリンジェントな条件下で接触させ、次いで、ハイブリダイゼーションの存在(または、非存在)を評価することによって検証することができる。  好ましい実施態様によれば、高度にストリンジェンシーな条件は、選択的なハイブリダイゼーションに適切な条件である。  その他の実施態様によれば、目的の核酸分子を含有する試料が、目的の核酸分子(例えば、ＦＬＡＰ核酸)の一部と少なくとも部分的に相補的な連続する核酸配列を含有する核酸(例えば、上述したプライマーまたはプローブ)と接触され、接触された試料は、ハイブリダイゼーションの存在または非存在について評価される。  好ましい実施態様によれば、連続核酸配列を含有する核酸は、目的の核酸分子の一部に対して完全に相補的である。
【０２０７】
これらの実施態様のいずれにおいても、目的の核酸のすべてまたは一部を、ハイブリダイゼーションを行う前に増幅することができる。
【０２０８】
その他の実施態様によれば、試料内の目的のポリペプチド(例えば、本願発明のポリペプチドまたはそれらの断片または変異体)の存在(または、非存在)は、目的のポリペプチドに特異的にハイブリダイズする抗体(例えば、上述した抗体)と試料とを接触させ、目的のポリペプチドに対する抗体の結合の存在(または、非存在)について試料を評価することで、評価を行うことができる。
【０２０９】
その他の実施態様によれば、本願発明は、薬剤(例えば、融合タンパク質、ポリペプチド、疑似ペプチド、プロドラッグ、受容体、結合剤、抗体、低分子または他の薬剤、または本願明細書に記載のポリペプチドの活性を変える(例えば、増加または減少させる)リボザイム、または本願明細書に記載のポリペプチドと相互作用する)ものを同定するための方法を提供する。  例えば、このような薬剤として、本願明細書に記載のポリペプチドに結合する薬剤(例えば、ロイコトリエン経路の構成要素のための結合剤、例えば、ＦＬＡＰ結合剤)；例えば、本願発明のポリペプチドの活性を刺激または阻害する薬剤；または本願発明のポリペプチドがロイコトリエン経路結合剤の構成要素と相互作用する能力を改変する(例えば、改善または阻害する)薬剤(例えば、受容体または他の結合剤)；または、ロイコトリエン経路の構成要素ポリペプチドの翻訳後プロセスを改変する薬剤、例えば、ＦＬＡＰポリペプチド(例えば、細胞表面のような細胞内の他の位置で通常は合成されるポリペプチドに関するタンパク分解性プロセスを改変する薬剤；細胞からの多量のポリペプチドの放出を促すためにタンパク分解性プロセスを改変する薬剤など)などがある。
【０２１０】
ある実施態様によれば、本願発明は、本願明細書に記載のポリペプチドに結合し、このポリペプチド(または、それらの生物学的に活性な部分)の活性を調整する候補薬剤または試験薬剤をスクリーニングするためのアッセイ、およびこのアッセイによって同定可能な薬剤を提供する。  試験薬剤は、生物学的ライブラリー；個別に対処可能な並行固相または溶液相ライブラリー；デコンヴォルーションを必要とする合成ライブラリー法；「一ビーズ一化合物」ライブラリー法；および、アフィニティークロマトグラフィー選別を用いる合成ライブラリー法を含む当該技術分野で周知の組み合わせライブラリー法などの多様な方法のいずれかを用いて取得することができる。  生物学的ライブラリーによった場合では、ポリペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つの方法では、ポリペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の低分子ライブラリーが利用可能である(Lam, K.S., Anticancer Drug Des. 12:145 (1997））。
【０２１１】
ある実施態様によれば、ＦＬＡＰポリペプチドの活性を改変する薬剤を同定するために、細胞、細胞溶解物、またはＦＬＡＰポリペプチド(例えば、配列番号：２またはＦＬＡＰ核酸によってコードされる他のスプライシング変異体、例えば、表３に記載のＳＮＰを含む核酸)を含有または発現する溶液、またはそれらの断片または誘導体(上記したような)が、試験される薬剤と接触可能であり、あるいは、ポリペプチドは、試験される薬剤と直接的に接触可能である。  ＦＬＡＰ活性のレベル(量)が評価され(例えば、ＦＬＡＰ活性のレベル(量)が直接または間接的に測定され)て、対照での活性レベル(すなわち、試験される薬剤が存在しない状態でのＦＬＡＰポリペプチドまたはそれらの活性断片または誘導体の活性のレベル)と比較される。  薬剤の存在下での活性のレベルが、薬剤の非存在下での活性のレベルとは統計学的に有意な量で異なる場合、この薬剤は、ＦＬＡＰポリペプチドの活性を改変する薬剤であるといえる。  薬剤の非存在下での活性と比較して、薬剤の存在下でのＦＬＡＰ活性のレベルの増加は、この薬剤がＦＬＡＰ活性を高める薬剤である(アゴニストである)ことを示している。  同様に、薬剤の非存在下での活性と比較して、薬剤の存在下でのＦＬＡＰ活性のレベルの減少は、この薬剤がＦＬＡＰ活性を阻害する薬剤である(アンタゴニストである)ことを示している。  その他の実施態様によれば、試験される薬剤の存在下での、ＦＬＡＰポリペプチドまたはそれらの誘導体もしくは断片の活性のレベルは、すでに確立された対照のレベルと比較される。  薬剤の存在下での活性レベルと対照レベルとの統計学的に有意な差異は、この薬剤がＦＬＡＰ活性を改変することを示している。
【０２１２】
さらに、本願発明は、ＦＬＡＰ核酸(例えば、アンチセンス核酸、融合タンパク質、ポリペプチド、疑似ペプチド、プロドラッグ、受容体、結合剤、抗体、低分子または他の薬剤、またはリボザイム)の発現を改変する薬剤、それに、その核酸の発現(例えば、転写または翻訳)を改変する(例えば、増加または減少せしめる)薬剤、または、本願明細書に記載の核酸と相互作用する薬剤を同定するためのアッセイ、ならびにこれらアッセイによって同定可能な薬剤に関する。  例えば、ＦＬＡＰポリペプチドをコードする核酸(例えば、ＦＬＡＰ核酸)を含有する溶液は、試験される薬剤と接触可能である。  この溶液は、例えば、核酸を含有する細胞または核酸を含有する細胞溶解物を含むことができ、あるいは、この溶液は、核酸の転写／翻訳に必要な要素を含む他の溶液とすることができる。  必要に応じて、溶液に懸濁していない細胞を使用することができる。  ＦＬＡＰ発現のレベルおよび／またはパターン(例えば、ｍＲＮＡまたは発現タンパク質のレベルおよび／またはパターン、例えば、異なるスプライシング変異体のレベルおよび／またはパターン)が評価され、対照での発現レベルおよび／またはパターン(すなわち、試験される薬剤の非存在下でのＦＬＡＰ発現のレベルおよび／またはパターン)と比較される。  薬剤の存在下でのレベルおよび／またはパターンが、薬剤の非存在下でのレベルおよび／またはパターンと統計学的に有意に異なる場合、この薬剤は、ＦＬＡＰ核酸の発現を改変する薬剤といえる。  ＦＬＡＰ発現の改善は、この薬剤が、ＦＬＡＰ活性のアゴニストであることを示す。  同様に、ＦＬＡＰ発現の阻害は、この薬剤が、ＦＬＡＰ活性のアンタゴニストであることを示す。
【０２１３】
その他の実施態様によれば、試験される薬剤の存在下でのＦＬＡＰポリペプチド(例えば、異なるスプライシング変異体)のレベルおよび／またはパターンは、すでに確立された対照でのレベルおよび／またはパターンと比較される。  薬剤の存在下での量および作用形態のレベルおよび／またはパターンが、対照のレベルおよび／またはパターンと比較して、統計学的に有意に異なる場合、この薬剤が、ＦＬＡＰ発現を改変することを示す。
【０２１４】
本願発明のその他の実施態様によれば、細胞、細胞溶解物、またはリポーター遺伝子に作動可能に結合するＦＬＡＰ核酸のプロモーター領域をコードする核酸を含有する溶液を用いて、ＦＬＡＰ核酸の発現を改変する薬剤、または本願明細書に記載の核酸と相互作用する薬剤を同定することができる。  試験される薬剤と接触した後、リポーター遺伝子の発現のレベル(例えば、ｍＲＮＡまたは発現タンパク質のレベル)が評価され、対照での発現レベル(すなわち、試験される薬剤の非存在下でのリポーター遺伝子の発現レベル)と比較される。  薬剤存在下でのレベルが、量および作用形態において、薬剤非存在下でのレベルとは統計学的に有意に異なる場合、ＦＬＡＰ核酸プロモーターに作動可能に結合する核酸の発現を改変する能力に基づいて、この薬剤は、ＦＬＡＰ核酸の発現を改変する薬剤といえる。
【０２１５】
リポーターの発現の改善は、この薬剤が、ＦＬＡＰ活性のアゴニストであることを示している。  同様に、リポーターの発現の阻害は、この薬剤が、ＦＬＡＰ活性のアンタゴニストであることを示している。  その他の実施態様によれば、試験薬剤の存在下でのリポーターの発現レベルは、すでに決定された対照のレベルと比較される。  薬剤の存在下でのレベルが、量または作用形態において、対照のレベルとは統計学的に有意に異なる場合、この薬剤は、発現を改変する薬剤といえる。
【０２１６】
ＦＬＡＰ核酸によってコードされる異なるスプライシング変異体の量を改変する薬剤(例えば、第一のスプライシング変異体の活性を改善し、第二のスプライシング変異体の活性を阻害する薬剤）、および第一のスプライシング変異体の活性のアゴニストであって、第二のスプライシング変異体の活性のアンタゴニストである薬剤が、上述した方法を用いて容易に同定できる。
【０２１７】
本願発明のその他の実施態様によれば、このアッセイは、ポリペプチドの活性への試験薬剤による影響を、ＦＬＡＰ結合剤との比較において、評価するために使用することができる。  例えば、ＦＬＡＰ核酸と相互作用する化合物(本願明細書にて「ＦＬＡＰ結合剤」と称され、ＦＬＡＰ核酸と相互作用するポリペプチドまたは受容体などの他の分子、または５-ＬＯなどの他の分子)を発現する細胞は、試験薬剤の存在下でＦＬＡＰと接触され、試験薬剤がＦＬＡＰとＦＬＡＰ結合剤との相互作用を改変する能力が決定される。  あるいは、ＦＬＡＰ結合剤を含有する細胞溶解物または溶液を使用することができる。  ＦＬＡＰまたはＦＬＡＰ結合剤に結合する薬剤は、ＦＬＡＰが、ＦＬＡＰ結合剤に結合する能力、ＦＬＡＰ結合剤に関連する能力、またはＦＬＡＰ結合剤と相互作用する能力を阻害または改善させることで、相互作用性を改変することができる。  試験薬剤が、ＦＬＡＰ核酸またはＦＬＡＰ核酸結合剤に結合する能力の決定は、例えば、試験薬剤と放射性同位体または酵素標識とを結合することによって実現可能である。  ポリペプチドに対する試験薬剤の結合が、125Ｉ、35Ｓ、14Ｃまたは3Ｈで標識された試料の直接的または間接的検出、放射能発光の直接検出による放射能同位体の検出、または、シンチレーション計測によって、決定することができる。  あるいは、試験薬剤は、例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼを用いて酵素的に標識することができ、適切な基質から産物への変換を決定することによって、この酵素標識は検出される。  任意の反応体を標識化せずに、試験薬剤が、ポリペプチドと相互作用する能力を決定することも、本願発明の意図するところである。  例えば、試験薬剤、ＦＬＡＰまたはＦＬＡＰ結合剤のいずれをも標識化しなくとも、ミクロフィジオメーターは、試験薬剤とＦＬＡＰまたはＦＬＡＰ結合剤との相互作用を検出するために使用することができる。  McConnell, H. M. et al., Science 257：1906-1912 (1992)。  本願明細書で使用される「ミクロフィジオメーター」(例えば、Cytosensor商標)の語は、光対処可能なポテンシオメトリックセンサー(ＬＡＰＳ)を用いて、セルが、その環境を酸性化する速度を測定する分析装置である。  この酸性化速度の変化は、リガンドとポリペプチドとの間の相互作用の指標として使用可能である。
【０２１８】
よって、これらレセプターは、ＦＬＡＰに関連する疾患または状態、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態に対する感受性を治療するために使用されるアンタゴニスト、またはＦＬＡＰに関連する疾患または状態(例えば、ＭＩ)に対する感受性を研究するためのアンタゴニストである化合物をスクリーニングするために使用することができる。  薬剤は、ＦＬＡＰ活性化を制御するために設計することができ、ＦＬＡＰと相互作用するタンパク質(例えば、５-ＬＯ)の下流の遺伝子またはポリペプチドを、シグナル経路および転写作用を制御するために使用することができる。
【０２１９】
本願発明のその他の実施態様によれば、このアッセイは、本願明細書に記載したような、一つ以上のＦＬＡＰポリペプチドと相互作用するポリペプチドを同定するために使用することができる。  例えば、酵母２-ハイブリッド系、例えば、Fields and Song (Fields, S. and Song, O., Nature 340：245-246 (1989))に記載の系は、一つ以上のＦＬＡＰポリペプチドと相互作用するポリペプチドを同定するために使用することができる。  酵母２-ハイブリッドシステムでは、ベクターは、二つの機能的ドメイン(ＤＮＡ結合ドメインおよび転写活性ドメイン)を有する転写因子の順応性に基づいて構築される。  二つのドメインが分割されているが、互いに相互作用する二つの異なるタンパク質に融合される場合、転写活性は取得可能であり、特定のマーカー(例えば、HisおよびAdeのような栄養マーカー、またはlacZのようなカラーマーカー)の転写は、相互作用および転写活性の存在を同定するために使用することができる。  例えば、本願発明の方法では、第一のベクターとして、ＤＮＡ結合ドメインをコードする核酸、およびＦＬＡＰポリペプチド、スプライシング変異体、またはそれらの断片または誘導体を含んだものが使用され、第二ベクターとして、転写活性ドメイン、ＦＬＡＰポリペプチド、スプライシング変異体、またはそれらの断片または誘導体と潜在的に相互作用しえるポリペプチドをコードする核酸(例えば、ＦＬＡＰポリペプチド結合剤またはレセプター)を含んだものが使用される。  適切な条件下で行う第一のベクターおよび第二のベクターを含む酵母のインキュベーション（例えば、Matchmaker商標 system from Clontech（Palo Alto, California, USA）が利用しているような交配条件)は、目的のマーカーを発現するコロニーの同定を可能にする。      
【０２２０】
これらのコロニーは、ＦＬＡＰポリペプチドまたはそれらの断片または誘導体と相互作用するポリペプチドを同定するために試験することができる。  このようなポリペプチドは、上記したように、ＦＬＡＰポリペプチドの発現の活性を改変する薬剤として有用な場合がある。
【０２２１】
上記した本願発明のアッセイ方法での一つ以上の実施態様によれば、ポリペプチドの一方または双方の非複合体からの複合体の分離を容易ならしめ、そして、アッセイの自動化を促すために、ＦＬＡＰ、ＦＬＡＰ結合剤、またはアッセイの他の要素のいずれかを、固体支持体上に固定することが望ましい場合がある。  ポリペプチドへの試験薬剤の結合、または、試験薬剤の存在下または非存在下でのポリペプチドと結合剤との相互作用は、反応体を保存するのに好適な管状容器内で実現可能である。  このような容器の例として、マイクロタイタープレート、試験管、およびマイクロ遠心管などがある。  ある実施態様によれば、融合タンパク質(例えば、グルタチオン-Ｓ-トランスフェラーゼ融合タンパク質)は、マトリックスまたは他の固体支持体へのＦＬＡＰ核酸またはＦＬＡＰ結合剤の結合を可能ならしめるドメインと共に提供することができる。
【０２２２】
その他の実施態様によれば、本願発明の核酸分子の発現のモジュレーターは、細胞、細胞溶解物、またはＦＬＡＰ核酸をコードする核酸を含有する溶液を、試験薬剤と接触せしめて、細胞、細胞溶解物、または溶液中の適切なｍＲＮＡまたはポリペプチド(例えば、スプライシング変異体)の発現を決定する方法によって同定される。  試験薬剤の存在下での適切なｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現レベルは、試験薬剤の非存在下でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現レベルと比較される。  そして、この試験薬剤は、この比較に基づいて、発現のモジュレーターとして同定することができる。  例えば、ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現が、試験薬剤の非存在下よりも存在下で(統計学的に有意に)大きい場合、この試験薬剤は、ｍＲＮＡまたはポリペプチド発現の刺激物質またはエンハンサーとして同定される。  あるいは、ｍＲＮＡまたはポリペプチドの発現が、試験薬剤の非存在下よりも存在下で(統計学的に有意に)小さい場合、この試験薬剤は、ｍＲＮＡまたはポリペプチド発現の阻害剤として同定される。  細胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチド発現のレベルは、本願明細書に記載したｍＲＮＡまたはポリペプチドの検出方法によって決定することができる。
【０２２３】
その他の実施態様によれば、本願発明は、本願明細書に記載のＦＬＡＰ結合剤(例えば５-ＬＯ)などのロイコトリエン経路結合剤の構成要素の活性を変える(例えば、減少または増加させる)薬剤(例えば、融合タンパク質、ポリペプチド、疑似ペプチド、プロドラッグ、受容体、結合剤、抗体、低分子または他の薬物、またはリボザイム)を同定するための方法を提供する。  例えば、このような薬剤として、例えば、ロイコトリエン経路結合剤(例えば、ＦＬＡＰ結合剤)の構成要素の活性を刺激または阻害する薬剤；ロイコトリエン経路結合剤の構成要素(例えば、受容体または他の結合剤)が本願発明のポリペプチドと相互作用する能力を改変する(例えば、改善または阻害する)薬剤；または、ロイコトリエン経路結合剤の構成要素の翻訳後プロセスを改変する薬剤(例えば、細胞表面のような細胞内の他の位置で通常は合成されるロイコトリエン経路の構成要素結合剤に関するタンパク分解プロセスを改変する薬剤、それに、細胞から活性結合剤を放出するタンパク分解プロセスを改変する薬剤など)などがある。
【０２２４】
例えば、本願発明は、ロイコトリエン経路の構成要素(または、それらの酵素的に活性な要素)へ結合したり、あるいは、これらの活性を調整する候補薬剤または試験薬剤をスクリーニングするためのアッセイ、および、このアッセイによって同定可能な薬剤を提供する。  上記したように、この試験薬剤は、生物学的ライブラリー；個別に対処可能な並行固相または溶液相ライブラリー；デコンヴォルーションを必要とする合成ライブラリー法；「一ビーズ一化合物」ライブラリー法；および、アフィニティークロマトグラフィー選別を用いる合成ライブラリー法を含む当該技術分野で周知の組み合わせライブラリー法での多様な方法のいずれかを用いて取得することができる。  生物学的ライブラリーによった場合、ポリペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つの方法では、ポリペプチド、非ペプチドオリゴマーまたは化合物の低分子ライブラリーが利用可能である(Lam, K.S., Anticancer Drug Des. 12:145 (1997））。
【０２２５】
ある実施態様によれば、ロイコトリエン経路の構成要素(例えば、ＦＬＡＰ結合剤、またはロイコトリエン経路の構成要素に結合する薬剤(「結合剤」)の活性を改変する薬剤を同定するために、細胞、細胞溶解物、または結合剤(例えば、５-ＬＯ、またはロイコトリエン経路構成要素受容体、または他の結合剤)を含有または発現する溶液、または断片(例えば、酵素的に活性な断片)またはそれらの誘導体は、試験される薬剤と接触することができ、あるいは、結合剤(またはそれらの断片または誘導体)は、試験される薬剤と直接に接触させることができる。  結合剤の活性レベル(量)が(直接的または間接的に)評価されて、対照での活性レベル(すなわち、試験される薬剤の非存在下での活性レベル)と比較される。  薬剤存在下での活性レベルが、薬剤非存在下での活性レベルと統計学的に有意に異なる場合、この薬剤は、ロイコトリエン経路の構成要素の活性を改変する薬剤であるといえる。  対照と比較した活性レベルの増加は、この薬剤が、活性を高める薬剤(アゴニスト)であることを示す。  同様に、対照と比較した活性レベルの減少は、この薬剤が、活性を阻害する薬剤(アンタゴニスト)であることを示す。  その他の実施態様によれば、試験される薬剤の存在下での活性レベルは、すでに決定された対照でのレベルと比較される。  対照でのレベルおよび量と比較して、薬剤の存在下での活性レベルが、統計学的に有意に異なる場合、この薬剤は、活性を改変する薬剤であるといえる。
【０２２６】
さらに、本願発明は、上記したスクリーニングアッセイによって同定される新規な薬剤に関する。  それ故に、本願明細書に記載の薬剤を適切な動物モデルにおいて使用することも、本願発明では意図している。  例えば、本願明細書に記載の薬剤(例えば、調整薬剤、アンチセンス核酸分子、特異的な抗体、またはポリペプチド結合剤である試験薬剤)は、このような薬剤を用いた治療の効力、毒性または副作用を決定するために、動物モデルに対して使用することができる。  あるいは、本願明細書に記載の同定された薬剤は、このような薬剤の作用機構を決定するために、動物モデルに対して使用することができる。
【０２２７】
さらに、本願発明は、本願明細書に記載の処置のために用いる、上記スクリーニングアッセイで同定された新規な薬剤の使用にも関する。  加えて、本願明細書に記載の同定された薬剤は、ポリペプチドまたは核酸(または、ポリペプチドまたは核酸を含む細胞)と本願明細書に記載の薬剤とを接触させることによって、ＦＬＡＰ核酸によってコードされるポリペプチドの活性を改変するために、またはＦＬＡＰ核酸の発現を改変するために使用することができる。
【０２２８】
本願発明を、いかなる限定をも意図していない以下の実施例に沿って説明する。
【０２２９】
本明細書で引用した全文献の教示事項は、本願明細書に組み込んである。
【実施例】
【０２３０】
実施例１：遺伝子およびＭＩに関連するハプロタイプの同定
被験者および方法
研究対象集団
1981年〜2000年の期間内に、アイスランドにおいて、あらゆるＭＩを含む梗塞形成歴を有するすべての者(8,000名を超える患者)を、研究対象とした。  この患者の登録は、主要な国際的連携プロジェクトでもある(心臓血管疾患の傾向および決定因子をモニターする) World Health Organization MONICA Project（The World Health Organization MONICA Projectの一部である。  (WHO MONICA Project Principal Investigators. J Clin. Epidemiol. 1988;41:105-14）。  登録時のすべての患者の診断は、症状、心電図、心臓酵素、および剖検による知見に基づいた厳格な診断規則に沿って行われた。
【０２３１】
家族歴を有する事例および散在性の事例の双方に関して、５７０名の女性ＭＩ患者および１,３８０名の男性患者から血液試料を得た。  参加した患者それぞれについて、血液を二つの血縁関係から集めた(非罹患または罹患)。  ハプロタイプの構築に役立つように、これらの遺伝子型を使用した。
【０２３２】
連鎖分析
各患者が、６度の減数分裂の途上または６度の減数分裂を経た少なくとも一名の他の患者との間に関連性が付与されるように、１６０名の女性ＭＩ患者を、大きな家族分類に振り分けた(例えば、６度の減数分裂によって、又従兄弟は除外される)。  患者相互の関連性に関する情報は、アイスランド国全体を網羅する暗号化された遺伝子データベースから得た(Gulcher et al., Eur. J. Hum. Genet. 8:739-742 (2000))。  他でも記載されているプロトコルを用いて、1,000マイクロサテライトマーカーのフレームワークマップを用いて、ゲノム規模のスキャンを行った(Gretarsdottir S. et al., Am. J；Hum. Genet., 70:593-603, 2002))。  マーカーの順序および位置は、deCODE Genetics' high resolution Genetic map (Kong A et al., Nat. Genet., 31:241-247 (2002))から得た。  集団に基づく対立遺伝子の頻度は、種々の疾患プロジェクトの遺伝子研究に参加した30,000名を超えるアイスランド人の集団から構築された。  他のマーカーは、第１３染色体での最も高い連鎖ピーク内での遺伝子型を特定し、家族内の血縁による身元情報の増大に寄与した。  これらのマーカーについて、この集団での対立遺伝子頻度を求めるために、少なくとも１８０名のアイスランド人対照者での遺伝子型を決定した。
【０２３３】
統計学的分析のために、マルチポイントの罹患した対立遺伝子のみを共有する方法を用いて、連鎖についての証拠を評価した。  プログラムALLEGRO(Gudbjartsson D. F. et al.,Nat Genet., 25:12-13 (2000))を用いて、ＬＯＤおよび非パラメーター連鎖(ＮＰＬ)スコアの双方についてのすべての結果を得た。  ベースライン連鎖分析(Gretarsdottir S. et al., Am. A Hum. Genet. 70:593-603, (2002)) は、スペアーズのスコア関数(Whittermore AS, and Haplern JA.,Biometrics 50: 118-127 (1994)およびKruglyak et al., Ranz. J. Hune. Genet., 58:1347-1363 (1996))、指数関数的対立遺伝子共有モデル (Kong A., and Cox N. J., Am. J. Hum. Genet. 61:1179-1188 (1997））、および、感染した各対と各ファミリーとの間での秤量値の中間値を対数スケールで付与する、ファミリー加重スキームを使用する。
【０２３４】
超微細マッピングおよびハプロタイプ分析
候補感受性遺伝子座を、ＬＯＤスコア曲線の下にあり、最高のlodスコアよりも１lod低いスコアが属する領域として規定した。  この領域(約１２Ｍｂ)を、１００ｋｂ未満の平均マーカー間隔を有するマイクロサテライトマーカーを用いて、微細にマッピングした。      
【０２３５】
この領域内でマッピングされ、かつ公的なデータベースに格納されている使用可能なすべてのマイクロサテライトマーカーを使用した。  加えて、ヒトゲノムのdeCODE遺伝子配列内で同定されているマイクロサテライトマーカーも使用した。
【０２３６】
ハプロタイプ分析
ハプロタイプの頻度を、期待値-最大化アルゴリズムを用いて、患者グループおよび対照者グループにおいて見積もった(Dempster A. P. et al., J. R. Stat. Soc. B. 39：1-389 (1977））。  欠損遺伝子型に対処可能で、この段階で不確定なアルゴリズムを用いた。帰無仮説の下で、患者および対照者が同一の頻度を有すると仮定する。  確度アプローチを用いて、候補危険要素ハプロタイプは、対照者よりも患者において頻度が高いが、他のハプロタイプの頻度の比率は、試験される双方のグループで同じであると推定する、という代替仮説を試験してみた。  双方の仮説の下で確度を個別に最大化し、対応する１-df確度比統計表を使用して、統計学的有意性を評価した。
【０２３７】
１-lodドロップにて危険要素ハプロタイプを探索するために、マーカーを1,000Kb未満のサイズ領域に分けて、遺伝子決定されたマーカーのすべての可能な組み合わせでの関連性を調べた。  特定の量での試験がために、ｐ値を、シミュレーションを用いて調整した。  患者グループおよび対照者グループを一旦合わせて後、元来の患者グループおよび対照者グループと同じ規模の任意の二つの集団に分割した。  次いで、ハプロタイプ分析を繰り返して、登録された最も有意な登録ｐ値を決定する。  このランダム化スキームを、ｐ値の経験的分布を構築するために、100回超の回数で繰り返した。
【０２３８】
結果および考察
ＭＩ感受性遺伝子のためのゲノム規模の検索において、染色体13q12の位置で、遺伝子座をマッピングした。  図１は、第13染色体のフレームワークマーカーマップのためのマルチポイントの非パラメーター的ＬＯＤスコア連鎖スキャンを示している。  連鎖を示唆する２.５のＬＯＤスコアは、マーカーD13S289で集中的に認められた。  連鎖分析において使用した第13染色体のためのマーカーマップを表１に示している。  この位置のＬＯＤスコアは、連鎖の情報量を増大させるマイクロサテライトマーカーの数が増加した状態を維持していた(図２)。
【０２３９】
次いで、ピークマーカーから１LODだけ低下することで定義されるＬＯＤスコアの下で、非常に多くの数のマイクロサテライトマーカーを、中心の１２メガ塩基(Ｍｂ)セグメントに添加した。  図３Ａは、試験ハプロタイプを規定するための４つおよび５つのマイクロサテライトマーカーの組み合わせを用いた、４３７名の女性ＭＩ患者と７２１名の対照者についてのハプロタイプ関連症例−対照分析の結果を示している。  １２Ｍｂセグメント全体にわたって最も有意性の高いマイクロサテライトマーカーハプロタイプ関連性は、対立遺伝子４、０、２、１４および３をそれぞれ有する、マーカーDG13S1103、DG13S166、DG13S1287、DG13S1061およびDG13S301において認められた(ｐ値 1.02×10-7)。  このハプロタイプの出現頻度は、女性ＭＩ患者において７.３％、対照者では０.３％であった。  第一のハプロタイプと重複するＭＩに対して大きな関連性を示す幾つかのその他のハプロタイプが存在している。  図中に示したすべてのハプロタイプに共通の二つのマーカー(DG13S166およびD13S1238)によって規定される８０Kbセグメントは、唯一の遺伝子ＦＬＡＰ(ALOX5AP)を含む。  マーカーDG13S166およびD13S1238のための二つのマーカーハプロタイプに関与する対立遺伝子０および−２はそれぞれ、患者において過剰に認められた。  このハプロタイプの出現頻度は、女性ＭＩ患者において２７％であり、対照者では１５.４％であった(ｐ値 １×10-3)。  このことは、ＦＬＡＰ遺伝子における変異が、ＭＩ危険度に関与するという我々の最初の証拠であった。
【０２４０】
この結果を確認するために、ＦＬＡＰ遺伝子の全体を整列せしめ、多くのＳＮＰを規定した。  これらの多くは、４３７名の女性ＭＩ患者、１,０４９名の男性ＭＩ患者、および８１１名の対照者での遺伝子決定のために使用した。  これらのデータを用いるＭＩ患者の症例-対照研究において、いくつかのハプロタイプを発見し、これらを対照と比較してみたところ、女性ＭＩ患者において顕著に過剰再発現していることが判明した(表６を参照)。  ＦＬＡＰ遺伝子をカバーする連鎖不均衡なブロック内にこれらハプロタイプがあるため、これらは互いに密接に相関していた。  表７は、女性ＭＩ危険度ハプロタイプの代表例である、二つのハプロタイプを示している。  これらは、相対危険度２.４および４を示しており、女性ＭＩ患者の２３％および１３％がそれぞれを保有している。  表８は、これらと同じハプロタイプが、相対危険度はさらに低いながらも、男性ＭＩに対して関連性があることを示している。
【０２４１】
ＭＩに関連するＳＮＰマーカーのみに関与するハプロタイプを同定する研究において、ＦＬＡＰ遺伝子を配列決定し、遺伝子を領域フランキングすることによって、さらに多くのＳＮＰを同定した。  現在のところ、全部で４５個のＳＮＰを、１３４３名の患者および６２４名の対照者において遺伝子決定した。  相関する二つのシリーズのＳＮＰハプロタイプは、表９のＡおよびＢに示したように、患者において過剰に認められた。  ハプロタイプの長さは、３３〜６９ｋｂの間で変動し、ハプロタイプは、連鎖不均衡な１個または２個のブロックをカバーする。  双方のシリーズのハプロタイプは、SNP SG13S25の共通の対立遺伝子２を含む。  シリーズＡでのすべてのハプロタイプは、SNP DGOOAAHIDを含み、一方で、シリーズＢでのすべてのハプロタイプは、SNP DGOOAAHIIを含む。  シリーズＢにおいて、ハプロタイプＢ４、Ｂ５およびＢ６は、２を超える相対危険度(ＲＲ)を有しており、１０％を超える対立遺伝子頻度を有する。  シリーズＡでのハプロタイプは、わずかに低いＲＲと、さらに低いｐ値を有するが、高頻度である(１５〜１６％)。  シリーズＢおよびＡでのハプロタイプは密接に相関しており、すなわち、シリーズＢでのハプロタイプは、シリーズＡでのハプロタイプのサブセットを規定する。  従って、シリーズＢのハプロタイプは、シリーズＡよりもさらに特異的である。  しかしながら、シリーズＡのハプロタイプは、さらに感受性が高く、すなわち、集団に起因する危険度が、シリーズＡよりもシリーズＢではさほど認められなかったことから、シリーズＡのハプロタイプは、突然変異を有するさらに多くの個体を捕捉する。  さらに、これらのハプロタイプは、(５５歳以前に最初のＭＩを発症したと定義される)初期発症患者および両方の性別に関する同様の危険度比および対立遺伝子頻度を示す。  加えて、既知の危険因子(例えば、高血圧、高コレステロール、喫煙および糖尿病)を有する患者の種々のグループを分析しても、これらのハプロタイプとの有意な相関は不明であり、このことは、ＦＬＡＰ遺伝子でのハプロタイプが、ＭＩについての独立した遺伝子感受性を表すことを示している。
【０２４２】
ＦＬＡＰ遺伝子は、ロイコトリエン合成のために必要とされるタンパク質(ＬＴＡ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、ＬＴＥ４)をコードする。  その機能を有する阻害剤は、細胞質から細胞膜への５-リポオキシゲナーゼの移動を妨げ、５-リポオキシゲナーゼの活性を阻害する。  ロイコトリエンは、脂質酸化および／または炎症性効果を介するアテローム硬化性血小板の不安定化に強力に関与することができる、アラキドン酸から誘導される強力な炎症性脂質媒介体ある。  Allen et al(Circulation. 97:2406-2413 (1998))は、ＬＴＣ４およびＬＴＤ４に対する応答において、ヒト心外膜の冠状動脈の過剰再活性化を誘発できるアテローム性動脈硬化症が、ロイコトリエン受容体の出現に関連するという新たな機構を記載している。  Allen et al.,は、ヒトアテローム硬化性冠状動脈の分泌の様子を写した顕微鏡写真、ＦＬＡＰを含むロイコトリエン経路の多くの構成要素の陽性染色を示している。  Mehrabian et al.,は、マウスでのアテローム性動脈硬化症の感受性に関与する主要な遺伝子として、５-リポオキシゲナーゼ(５-ＬＯ)を同定したことを記載している。  Mehrabian et al.,は、ＬＤＬ-/-マウスにおいて、アテローム硬化性病変の大きさが約９５％減少したノックアウトモデルにおける酵素に関する異種欠損を記載している。  Mehrabian et al.,は、アテローム硬化性病変のマクロファージが豊富な領域において、酵素が豊富に発現することを示し、また、５-ＬＯおよび／またはその産物が病変の進行を促進するために局所的に作用することを示唆している(Mehrabian et al., Circulation Research. 91:120 (2002））。  アテローム性動脈硬化症の動物モデルにおけるＦＬＡＰの阻害の研究は稀にしかない。  しかし、冠状動脈を結紮して７２時間後に評価した急性ＭＩのウサギモデルにおいて、ＦＬＡＰ-阻害剤ＢＡＹ-ｘ-１００５は、死亡率を６５％から２５％にまで顕著に低下せしめ、ＣＰＫおよび好中球蓄積における増加を止めて、偽処置された動物において観察されたＥＧＧ-変化も止めた(J. Plzarmacol. Exp. Ther., 276: 332 (1996））。
【０２４３】
ＦＬＡＰ核酸、および疾患と関連性を示す同経路の他の構成要素(例えば、５-リポオキシゲナーゼ、ＬＴＡ４ヒドロラーゼ、ＬＴＢ４受容体、ＬＴＣ４シンターゼ、およびＣｙｓＬＴ２受容体)での突然変異および／または多型性は、診断試験として使用することができる。  ５-ＬＯ経路の構成要素は、特に、心筋梗塞での価値ある治療標的である。
【０２４４】
【表１Ｃ】
2006508180.tif 000017
【０２４５】
【表２】
2006508180.tif 000018
表３は、本願明細書に記載の方法によってゲノミック配列内で同定された、ＦＬＡＰタンパク質、マーカー、多型性およびＳＮＰをコードする位置を具備した５つのエキソンを示している。  ＳＮＰの一つであるB#SNP#302465は、コード領域である。  多型性であるSNP 302465は、タンパク質のアミノ酸配列を変更しない。
【０２４６】
【表３Ａ】
2006508180.tif 000019
【０２４７】
【表３Ｂ】
2006508180.tif 000020
【０２４８】
【表３Ｃ】
2006508180.tif 000021
【０２４９】
【表３Ｄ】
2006508180.tif 000022
【０２５０】
【表３Ｅ】
2006508180.tif 000023
【０２５１】
【表４】
2006508180.tif 000024
【０２５２】
【表５Ａ】
2006508180.tif 000025
【０２５３】
【表５Ｂ】
2006508180.tif 000026
その他のハプロタイプも、以下の表に示したように、ＭＩと関連していた。
【０２５４】
【表６】
2006508180.tif 000027
【０２５５】
【表７】
2006508180.tif 000028
【０２５６】
【表８】
2006508180.tif 000029
【０２５７】
【表９】
2006508180.tif 000030
実施例２：５-ＬＯプロモーターでの変異とＭＩとの関係
５-ＬＯ遺伝子のＧ-Ｃに富んだ転写因子結合領域での突然変異集団は、既に同定されている。  これらの突然変異は、通常は５ Sp １結合部分が直線状に存在するＡＴＧ翻訳部位から上流の１７６〜１４７bp領域での１個の欠失、２個の欠失、または一つの亜鉛フィンガー(Sp１/Egr-１)結合部位の付加からなる。  ヒト５-ＬＯ遺伝子プロモーターにて自然に生じるこれらの突然変異は、転写因子の結合およびリポーター遺伝子の転写を改変することが示されている。  ＤＮＡの変異形態が、ＣＡＴリポーター構築物の調製を促す能力は、野生型ＤＮＡの能力よりも顕著に低いことが示されている(J Clin. Invest. vol.89, Number ５, March 1997, 1130-1137）。
【０２５８】
５-ＬＯが、ヒトのアテローム硬化性疾患、特に心筋梗塞(ＭＩ)と関連するか否かを試験するために、連続する可変数のSp１/Egr-１結合部位からなるプロモーター多型性を、１,１１２名のＭＩ患者、ＰＡＯＤを保有する７４８名の患者、および５４１名の発作患者において遺伝子決定した。
【０２５９】
表１０に示した結果は、野生型の対立遺伝子(ほとんどの活性プロモーターおよび最も高い５-ＬＯ ｍＲＮＡの発現能力を有する対立遺伝子)が、ＭＩと有意に関連することを示している(ＲＲ-１.２、ｐ＜０.０５）。  この結果は、ＭＩの病原論において、５-ＬＯの発現の増加が某かの役割を果たす、という疾患仮説とも一致する。
【０２６０】
【表１０Ａ】
2006508180.tif 000031
実施例３：ＦＬＡＰ ＭＩ危険性ハプロタイプを有する個体でのＬＴＥ４生合成の増加
ロイコトリエン経路の最終生成物の既知の機能および５-ＬＯ関連性データに基づいて、ＦＬＡＰ遺伝子の発現の増加および／または機能の改善によって、ＦＬＡＰハプロタイプとＭＩとの関連性を、さらに詳細に説明する。  換言すると、「危険要素」ＦＬＡＰハプロタイプを保有する個体は、ＦＬＡＰの増量、またはさらに活性なＦＬＡＰのいずれか、または双方を有している。  これにより、これらの個体でのロイコトリエンの産生が増大する。
【０２６１】
この理論を実証するために、患者の血清試料でのＬＴＥ４(下流ロイコトリエン代謝産物)を測定した。  ヒト血清でのＬＴＥ４の定量は、タンデム質量分光測定法と組み合わせた液体クロマトグラフィーによって行った。  以下のプロトコルに従って実施した。
【０２６２】
分析方法
【０２６３】
【表１０Ｂ】
2006508180.tif 000032
装置および条件
【０２６４】
【表１０Ｃ】
2006508180.tif 000033
他の装置
【０２６５】
【表１０Ｄ】
2006508180.tif 000034
材    料
【０２６６】
【表１０Ｅ】
2006508180.tif 000035
【０２６７】
【表１０Ｆ】
2006508180.tif 000036
ストック溶液
メタノールで100μg/mlの濃度に調整されたＬＴＥ4のストック溶液を、供給業者に調製してもらった。  このストック溶液を、20μg/mlになるまでメタノールで希釈し、得られた溶液(ＷＳ-１)を、２〜８℃の温度で冷蔵保存した。
【０２６８】
49.5ｇ/mlの濃度の内部標準ストック溶液(ＬＴＥ4-ｄ3)を、供給業者に調製してもらった。  このストック溶液を、１g/mlの濃度になるまでメタノールで希釈し、得られた溶液を、２〜８℃の温度で冷蔵保存した。
【０２６９】
補充溶液、較正用標準および定性用対照試料の調製
これまでに得られた溶液を希釈して、１ng/ml〜10,000ng/mlの濃度の補充溶液(ＳＳ)を調製した。  以下の補充溶液が、調製された。
【０２７０】
【表１０Ｇ】
2006508180.tif 000037
【０２７１】
【表１０Ｈ】
2006508180.tif 000038
調製後、較正用標準および定性用対照のための補充溶液を、２〜８℃の温度で冷蔵保存した。
【０２７２】
較正用標準試料および定性用対照試料の調製
新鮮な較正用標準試料および定性用対照試料(ＱＣ)は、表Ｐ８および表Ｐ９のそれぞれに記載のブランク血漿を加えることによって、各使用時に調製した。
【０２７３】
【表１０Ｉ】
2006508180.tif 000039
【０２７４】
【表１０Ｊ】
2006508180.tif 000040
試料調製
各研究試料400μlの部分標本、較正用標準試料、ＱＣ試料および対照ブランクを、エッペンドルフバイアルに、ピペットで分取する。  ブランク以外のすべての試料に、20μlの内部標準用溶液を添加し、数秒間、試料を遠心分離して混合する。  10％酢酸の60μlを用いて血漿試料のpHをpH4.5に調整し、抽出前に、手早く、4100rpmで、10分間遠心分離する。  固体相を抽出し、96-ウェルプレートに、メタノール１mlおよび水１mlを加えて養生する。  次いで、血漿試料の400μlをプレートに置く。  減圧した後、ディスクを１分間乾燥させる。  水２mlおよび２％酢酸に溶解した30％メタノール１mlで洗浄する。  その後、プレートに、メタノール0.6mlを加えて溶出させる。  次いで、数分間、プレートを乾燥させる。  メタノール溶出物を、窒素気流下、45℃で、ほぼ乾燥するまで蒸発させる。  残渣を30μlの移動相に移して、数分間、遠心分離して混合する。  次いで、この溶液を、10,000rpmで、10分間、遠心分離し、そして、その10μlを、自動サンプラーで、定量のためにLC-MS/MSシステムに注入する。
【０２７５】
測定の実施
試料はバッチ内で調製され、そこで測定に供されるが、一般的なバッチは、以下の構成からなる。
【０２７６】
較正用標準試料１セット、予備用の最低度の較正用標準試料が１つ、そして、ブランク試料が１つである。
【０２７７】
１６名から採取した試料および対照用試料１セット（ＣL、ＣM、ＣH）。
【０２７８】
１７名から採取した試料および対照用試料１セット（ＣL、ＣM、ＣH）。
【０２７９】
血漿試料での定量分析
較正標準のピークエリア比ANALYTE/INTERNAL STANDARDおよびそれらの基準ANALYTE濃度から、標準曲線を計算する。  秤量曲線１/Ｘ2を使用する場合、二次回帰式からＬＴＥ4に関する既知の試料を計算した。  試料の測定ピークエリアを、標準曲線について用いた計算式に従って、ANALYTEのピコグラム／血漿ミリリットル(pg/ml)に変換した。
【０２８０】
標準曲線の回帰計算および未知の試料と対照試料とでの濃度の計算は、MassLynx Softwareを用いて行った。
【０２８１】
判定基準
較正標準
較正曲線に関する決定(Ｒ2)係数は、0.98を超えなければならない。
【０２８２】
較正曲線は、50pg/ml〜1500pg/mlの濃度範囲を対象としていた。
【０２８３】
較正曲線の濃度は、回帰式から再計算される場合、基準値の25％以内でなければならない。  これらの基準を外れた較正標準(各操作にて、多くて３つ)を除外して、残りの標準を用いて改めて較正を行った。  標準曲線が合格しない場合、試料を再分析しなければならない。
【０２８４】
対照試料
分析された定性用参照試料の少なくとも２/３が、回帰式から計算される場合、それらの基準値の25％以内でなければならない。  参照試料の２/３を超えるデータが外れてしまう場合には、試料を再分析しなければならない。
【０２８５】
結    果
表１１(下記)は、女性のＭＩ「危険要素」ハプロタイプに関して、低いＬＴＥ４レベルを保有する女性ＭＩ患者(最低レベルに属する５０名)よりも、高いＬＴＥ４レベルを保有する女性ＭＩ患者(最高レベルに属する５０名)に対して、さらに有意に関連することを示している。  加えて、高レベルのＬＴＥ４を保有する女性ＭＩ患者と、低レベルのＬＴＥ４を保有する女性ＭＩ患者とを比較するハプロタイプ分析によれば、高レベルにおいて、１.６倍もの「危険要素」ハプロタイプをを有することが示された(表１２を参照されたい)。  この結果は、高レベルのＬＴＥ４を保有するＭＩ患者のグループにおいて、「危険要素」ハプロタイプが豊富であることを明確に示すものである。  「危険要素」ハプロタイプの保有頻度は、女性ＭＩグループ全体では、それぞれ１２％および２０％であるが、高レベルのＬＴＥ４を保有する女性ＭＩグループでは、それぞれ１５％および２４％にまで上昇した。  これに対応して、「危険要素」ハプロタイプの保有頻度は、低レベルのＬＴＥ４を有する女性ＭＩのグループにおいて、それぞれ８％および１８％にまで減少する(注記：保有頻度は、２×疾患対立遺伝子頻度×(１−疾患対立遺伝子頻度)＋(疾患対立遺伝子頻度)2として表される。）
ＬＴＥ４は、ＭＩ危険度に関与する主要なロイコトリエン代謝産物は、ロイコトリエン合成経路の上流でのロイコトリエン合成速度を簡明に指し示す場合があることに注意されたい。  例えば、ロイコトリエンＢ４は、ＭＩ血小板の炎症性状態に関与するロイコトリエンＥ４よりも有望ではあると考えられるが、Ｂ４の半減期が短いので、血清試料内で確実に測定することは困難である。
【０２８６】
【表１１】
2006508180.tif 000041
【０２８７】
【表１２】
2006508180.tif 000042
実施例４
Ｃ反応性タンパク質(ＣＲＰ)と相関するＬＴＥ４の増加
ロイコトリエンの産生増加と、ＭＩの危険因子であると認識されている炎症性マーカーＣＲＰの増加との関連を調査した。  図９に示してあるように、血清ＬＴＥ４レベルと血清ＣＲＰレベルとの間に、有意な陽性の相関が認められた。
【０２８８】
実施例５
危険要素ハプロタイプを保有する患者でのＣＲＰレベルの評価
女性ＭＩの危険要素ハプロタイプの存在下での、炎症性マーカーのレベルの増加を確認するために、危険要素ハプロタイプを保有する女性ＭＩ患者のＣＲＰレベルを評価した。      
【０２８９】
その結果を、表１３に示す。  危険要素ハプロタイプを保有していない患者と比較して、危険要素ハプロタイプを保有する患者での平均ＣＲＰは大きかった。
【０２９０】
【表１３】
2006508180.tif 000043
実施例６
ＭＩ患者と対照者での血清ＬＴＥ４レベルの増加
ロイコトリエン経路の最終産物は、アテローム性動脈硬化症の進行および脂質酸化および／または炎症性効果を介してアテローム硬化性血小板の不安定化に強力に関与する、強力な炎症性脂質媒介物である。  その例を、以下の１〜５に示す。  １)ＭＩは、ＦＬＡＰでの遺伝変異体と相関する、２)ＭＩは、５-ＬＯでの高発現プロモーター多型性と相関する、３)Ｃ-反応性タンパク質レベルは、血清ロイコトリエンＥ４と相関する；および、４)ＭＩ危険度ＦＬＡＰハプロタイプを保有する患者は、血清ロイコトリエンＥ４およびＣＲＰ値が高い。  これらのデータに基づいて、血清ロイコトリエンＥ４レベルは、ＭＩ危険度と相関するという仮説を立てた。
【０２９１】
この仮説を検証するために、ＬＴＥ４(下流ロイコトリエン代謝産物)を、４８８名の女性ＭＩ患者および１６４名の対照者の血清試料に関して測定した。  ウィルコクソン順位-合計片側検定法を用いて得られた患者に関するＬＴＥ４レベルは、対照者のレベルより高かった。  較差のｐ値は、０.００９２であったので、我々の仮説は立証された。  したがって、増加したロイコトリエンＥ４は、ＭＩに対する危険因子であるといえる。  血清または血漿でのＬＴＥ４レベルは、一次的または二次的ＭＩを防ぐための最良の処置および生活様式管理計画を決定する際に、個体のＭＩ危険度の概略を把握するために用いてもよい。  その他のロイコトリエン代謝物を、同様にして、ＭＩ危険度プロフィールとして使用することもできる。
【０２９２】
ま と め
以上のことから、次のようなことが明らかになった。  ＭＩは、ＦＬＡＰでの遺伝変異体と相関する、ＭＩは、５-ＬＯでの高発現プロモーター多型性と相関する、女性ＭＩ危険度ＦＬＡＰハプロタイプを保有する患者の血清ＬＴＥ４のレベルは高い、ＬＴＥ４レベルは血清中のＣＲＰレベルと相関する、および、ＭＩ危険度ＦＬＡＰハプロタイプを保有する患者の血清ロイコトリエンＥ４およびＣＲＰ値は高い。
【０２９３】
以上をまとめると、これらの結果は、ロイコトリエン合成の増加が、女性のみならず、ＭＩでの危険因子であり、また、この危険度は、ＦＬＡＰおよび５-ＬＯ遺伝子における変異体によってその一部が誘発されて、血清ＬＴＥ４およびＣＲＰのレベルを測定することによってその一部が明らかになることを示している。
【０２９４】
本願明細書で使用したマーカー
【０２９５】
【表１４Ａ】
2006508180.tif 000044
【０２９６】
【表１４Ｂ】
2006508180.tif 000045
【０２９７】
【表１４Ｃ】
2006508180.tif 000046
【０２９８】
【表１４Ｄ】
2006508180.tif 000047
【０２９９】
【表１４Ｅ】
2006508180.tif 000048
【０３００】
【表１４Ｆ】
2006508180.tif 000049
【０３０１】
【表１４Ｇ】
2006508180.tif 000050
【０３０２】
【表１４Ｈ】
2006508180.tif 000051
本願明細書で引用したすべての文献は、参考までに、本願明細書に取り込んである。  本願発明の好適な実施態様について説明ならびに例示を行ってきたが、当業者であれば、特許請求の範囲に記載によって包含される発明の要旨を逸脱することなく、本願発明に対して形式的および実質的な変更を加えられるものと理解される。
【図面の簡単な説明】
【０３０３】
【図１】１６０名の女性患者における多様な系統および遺伝子型を、第１３染色体上の１,０００個のフレームワークマップを用いて連鎖解析して得られた複数の非パラメーター的ＬＯＤスコアを示すグラフである。  マーカーＤ１３Ｓ２８９にて、２.５の連鎖性ＬＯＤスコアが示唆された。  連鎖解析に用いた第13染色体に関するマーカーマップを、表１に示した。
【図２】さらに他の１４個のマーカーを候補領域に添加した後の系統群に関して得られたＬＯＤスコアを示すグラフである。  マイクロサテライトマーカーをさらに加えることによって、最高値のＬＯＤスコアを付与するマーカーの近辺で、０.７〜０.８の分散度で共有可能な情報を付加した。  連鎖解析の第二工程で用いるマーカーマップを、表２に示した。
【図３Ａ】試験ハプロタイプを規定するために、４マイクロサテライトマーカーと５マイクロサテライトマーカーとの組み合わせを用いて、４３７名の女性ＭＩ患者と７２１名の対照者者に関して行った、ハプロタイプ関連性事例と対照者との比較解析の結果を示すグラフである。  関連性のｐ値をｙ軸に、また、マーカーの位置をｘ軸にプロットしている。  ｐ値＜１０-5との関連性を示すハプロタイプのみが、図中に示されている。  マイクロサテライトマーカーを用いて認められた最も顕著なハプロタイプ関連性は、対立遺伝子４、０、２、14および３の各々に対応する、マーカーＤＧ１３Ｓ１１０３、ＤＧ１３Ｓ１６６、ＤＧ１３Ｓ１２８７、ＤＧ１３Ｓ１０６１およびＤＧ１３Ｓ３０１において認められた(ｐ値 １.０２×１０-7)。  ハプロタイプの保有頻度は、女性ＭＩ患者において７.３％であり、対照者者において０.３％である。  図中に示したすべてのハプロタイプに共通のセグメントは、唯一の遺伝子、ＦＬＡＰだけを含む。
【図３Ｂ】最も顕著なマイクロサテライトマーカーハプロタイプを示すマーカーの対立遺伝子を示す。  黒四角で示したセグメントは、最も顕著に関連するハプロタイプのすべてに共通している。  ＦＬＡＰ核酸は、マーカーＤＧ１３Ｓ１６６とＤ１３Ｓ１２３８との間に位置する。  マーカーＤＧ１３Ｓ１６６およびＤ１３Ｓ１２３８のそれぞれに対応する対立遺伝子０および-２を含む二つのマーカーハプロタイプは、患者において過剰量で認められる。  このハプロタイプの保有頻度は、患者において２７％であり、対照者者において１５.４％である(ｐ値 １×１０-3)。  それ故に、関連性分析は、出現ピーク内で最も強くＭＩと関連する遺伝子が、ＦＬＡＰであることを証明している。
【図４】ＦＬＡＰ(ＡＬＯＸ５ＡＰ)遺伝子の周囲に存在するマーカーおよび遺伝子を示すグラフである。
【図５】主要なＳＮＰおよびＡＬＯＸ５ＡＰ/ＦＬＡＰ遺伝子での(縦型長方形で示した)エキソンの相対的位置を示す図である。  ハプロタイプの長さは、３３〜６８ｋｂの間で変動する。
【図６】ＦＬＡＰ遺伝子のゲノム配列(配列番号：１)を示す図である。
【図７】ＦＬＡＰのアミノ酸配列(配列番号：２)およびＦＬＡＰのmＲNAのアミノ酸配列(配列番号：３)を示す図である。
【図８】患者由来の試料を配列決定して同定されたＳＮＰをフランキングするＦＬＡＰ核酸配列(配列番号：３９８〜５３５)を示す図である。
【図９】血清ＬＴＥ４レベルと血清ＣＲＰレベルとの間の顕著な正の相関を示すグラフである。
【図１】
2006508180.tif 000052
【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図７】
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【図９】
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【国際調査報告】
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