(57)【要約】本発明の化合物は式Iに見られる化学構造により表される: 式中AはR0、R1、B、C、D、E、F、G、H、I、J、およびKが本明細書で定義された、式IIのアミノ酸: またはその薬学的に許容される塩である。2006524232.tif 000347
2006524232.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物、あるいは薬学的に許容されるその塩:
2006524232.tif 000199
［式中、Aは式(II)のアミノ酸であり:
2006524232.tif 000200
式中、R0はHまたはCH3であり;
2006524232.tif 000201
R2およびR26は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3、R4、R5、R6、R10、R11、R12、R17、R18、R19、R22、R25、R27、R28、R29、およびR30は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4、R5およびR6、R10、R12、R17および R18、R19、R22、R25およびR26、R27およびR28、R29およびR30はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
R8、R16、およびR31は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
アルカノイル;
アルケノイル;
アルキノイル;
アリールオイル;
アリールアルカノイル;
アルキルアミノカルボニル;
アリールアミノカルボニル;
アリールアルキルアミノカルボニル;
アルキルオキシカルボニル;
アリールオキシカルボニル; および
アリールアルキルオキシカルボニル;
R7、R9、R13、R14、R15、R20、R21、R23、R24、R32、R33、およびR34は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Y=C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキル;
C3〜C6直鎖および分枝鎖アルケニル;
アリールアルキル;
ヘテロアリールアルキル;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルオキシ;
アリールオキシ;
アシルオキシ;
アリールアルキルオキシ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルアミノ;
アリールアミノ;
アリールアルキルアミノ;
ヘテロアリールアミノ;
ヘテロアリールアルキルアミノ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルカルボキサミド;
アリールカルボキサミド;
ヘテロアリールカルボキサミド;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルスルホンアミド;
アリールスルホンアミド;
アリールアルキルスルホンアミド;
ヘテロアリールスルホンアミド;
ヘテロアリールアルキルスルホンアミド; または
NH2C(O)NH;
式II中のCO-は式I中のBのα-アミノ基に共有結合してアミド結合を形成し、式II中の-N-R0はKのカルボン酸に共有結合してアミド結合を形成し;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項２】
Aは式(III)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000202
。
【請求項３】
下記式を有する、請求項2記載の化合物：
2006524232.tif 000203
。
【請求項４】
下記式を有する、請求項2記載の化合物：
2006524232.tif 000204
。
【請求項５】
下記式を有する、請求項2記載の化合物：
2006524232.tif 000205
。
【請求項６】
Aは下記式のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000206
。
【請求項７】
下記式を有する、請求項6記載の化合物：
2006524232.tif 000207
。
【請求項８】
下記式を有する、請求項6記載の化合物：
2006524232.tif 000208
。
【請求項９】
下記式を有する、請求項6記載の化合物：
2006524232.tif 000209
。
【請求項１０】
下記式を有する、請求項6記載の化合物：
2006524232.tif 000210
。
【請求項１１】
下記式を有する、請求項6記載の化合物：
2006524232.tif 000211
。
【請求項１２】
Aは式(V)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000212
。
【請求項１３】
下記式を有する、請求項12記載の化合物:
2006524232.tif 000213
［式中、X= OHまたはOAc。］。
【請求項１４】
Aは式(VI)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000214
。
【請求項１５】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000215
。
【請求項１６】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000216
。
【請求項１７】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000217
。
【請求項１８】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000218
。
【請求項１９】
下記式を有する、請求項14記載の化合物:
2006524232.tif 000219
［式中、X= OHまたはOAc。］。
【請求項２０】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000220
。
【請求項２１】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000221
。
【請求項２２】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000222
。
【請求項２３】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000223
。
【請求項２４】
下記式を有する、請求項14記載の化合物:
2006524232.tif 000224
［式中、X= OHまたはOAc。］。
【請求項２５】
下記式を有する、請求項14記載の化合物:
2006524232.tif 000225
［式中、X= OHまたはOAc。］。
【請求項２６】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000226
。
【請求項２７】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000227
。
【請求項２８】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000228
。
【請求項２９】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000229
。
【請求項３０】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000230
。
【請求項３１】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000231
。
【請求項３２】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000232
。
【請求項３３】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000233
。
【請求項３４】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000234
。
【請求項３５】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000235
。
【請求項３６】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000236
。
【請求項３７】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000237
。
【請求項３８】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000238
。
【請求項３９】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000239
。
【請求項４０】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000240
。
【請求項４１】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000241
。
【請求項４２】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000242
。
【請求項４３】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000243
。
【請求項４４】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000244
。
【請求項４５】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000245
。
【請求項４６】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000246
。
【請求項４７】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000247
。
【請求項４８】
下記式を有する、請求項14記載の化合物：
2006524232.tif 000248
。
【請求項４９】
Aは下記式のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000249
。
【請求項５０】
下記式を有する、請求項49記載の化合物：
2006524232.tif 000250
。
【請求項５１】
Aは式(VII)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000251
。
【請求項５２】
下記式を有する、請求項51記載の化合物：
2006524232.tif 000252
。
【請求項５３】
下記式を有する、請求項51記載の化合物:
2006524232.tif 000253
［式中、X= OHまたはOAc。］。
【請求項５４】
下記式を有する、請求項51記載の化合物：
2006524232.tif 000254
。
【請求項５５】
下記式を有する、請求項51記載の化合物：
2006524232.tif 000255
。
【請求項５６】
Aは式(IX)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000256
。
【請求項５７】
下記式を有する、請求項54記載の化合物：
2006524232.tif 000257
。
【請求項５８】
下記式を有する、請求項56記載の化合物：
2006524232.tif 000258
。
【請求項５９】
Aは下記式のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000259
。
【請求項６０】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000260
。
【請求項６１】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000261
。
【請求項６２】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000262
。
【請求項６３】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000263
。
【請求項６４】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000264
。
【請求項６５】
下記式を有する、請求項59記載の化合物：
2006524232.tif 000265
。
【請求項６６】
Aは式(VIII)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000266
。
【請求項６７】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000267
。
【請求項６８】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000268
。
【請求項６９】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000269
。
【請求項７０】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000270
。
【請求項７１】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000271
。
【請求項７２】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000272
。
【請求項７３】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000273
。
【請求項７４】
下記式を有する、請求項66記載の化合物：
2006524232.tif 000274
。
【請求項７５】
下記式を有する、請求項67記載の化合物：
2006524232.tif 000275
。
【請求項７６】
下記式を有する、請求項2記載の化合物：
2006524232.tif 000276
。
【請求項７７】
Aは式(XIII)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000277
。
【請求項７８】
下記式を有する、請求項77記載の化合物：
2006524232.tif 000278
。
【請求項７９】
下記式を有する、請求項77記載の化合物：
2006524232.tif 000279
。
【請求項８０】
Aは式(XII)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000280
。
【請求項８１】
下記式を有する、請求項80記載の化合物：
2006524232.tif 000281
。
【請求項８２】
下記式を有する、請求項80記載の化合物：
2006524232.tif 000282
。
【請求項８３】
下記式を有する、請求項80記載の化合物：
2006524232.tif 000283
。
【請求項８４】
下記式を有する、請求項80記載の化合物：
2006524232.tif 000284
。
【請求項８５】
Aは下記式のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000285
。
【請求項８６】
下記式を有する、請求項85記載の化合物：
2006524232.tif 000286
。
【請求項８７】
下記式を有する、請求項85記載の化合物：
2006524232.tif 000287
。
【請求項８８】
下記式を有する、請求項86記載の化合物：
2006524232.tif 000288
。
【請求項８９】
Aは式(XV)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000289
。
【請求項９０】
下記式を有する、請求項89記載の化合物：
2006524232.tif 000290
。
【請求項９１】
下記式を有する、請求項89記載の化合物：
2006524232.tif 000291
。
【請求項９２】
下記式を有する、請求項89記載の化合物：
2006524232.tif 000292
。
【請求項９３】
下記式を有する、請求項89記載の化合物：
2006524232.tif 000293
。
【請求項９４】
下記式を有する、請求項89記載の化合物：
2006524232.tif 000294
。
【請求項９５】
Aは式(XVI)のアミノ酸である、請求項1記載の化合物：
2006524232.tif 000295
。
【請求項９６】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000296
。
【請求項９７】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000297
。
【請求項９８】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000298
。
【請求項９９】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000299
。
【請求項１００】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000300
。
【請求項１０１】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000301
。
【請求項１０２】
下記式を有する、請求項95記載の化合物：
2006524232.tif 000302
。
【請求項１０３】
治療的に有効な量の請求項1記載の化合物と一つまたは複数の薬学的賦形剤とを含む薬学的組成物。
【請求項１０４】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000303
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の出発化合物を生体触媒的に変換する段階、
2006524232.tif 000304
［式中、R0はHまたはCH3であり:
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１０５】
生体触媒的に変換する段階はラッカーゼ触媒およびメディエータ化合物の存在下で行われる、請求項104記載の方法。
【請求項１０６】
ラッカーゼ触媒はT・ベルシコロール(T. versicolor)、T・ビロサ(T. villosa)、P・オストリータス(P. ostreatus)、およびP・ベルシコロール(P. versicolor)、ならびにその組合せからなる群より選択される微生物源または植物源に由来する、請求項105記載の方法。
【請求項１０７】
ラッカーゼ触媒はT・ベルシコロールに由来する、請求項106記載の方法。
【請求項１０８】
メディエータ化合物は2, 2'-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン)-6-スルホン酸、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール、ビオルル酸、N-ヒドロキシアセトアニリド、およびその組合せからなる群より選択される、請求項105記載の方法。
【請求項１０９】
メディエータ化合物は1-ヒドロキシベンゾトリアゾールである、請求項108記載の方法。
【請求項１１０】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000305
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の出発化合物を化学的に酸化する段階、
2006524232.tif 000306
［式中、R0はHまたはCH3であり:
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン;
および側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１１１】
化学的に酸化する段階はN-ヒドロキシジカルボン酸イミドで行われる、請求項110記載の方法。
【請求項１１２】
化学的に酸化する段階は過ヨウ素酸アルカリ金属塩およびアルキルヒドロペルオキシドで行われる、請求項110記載の方法。
【請求項１１３】
化学的に酸化する段階はアセトン-ベンゼン-水溶媒混合液中にてクラウンエーテルの存在下で行われる、請求項112記載の方法。
【請求項１１４】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000307
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であり、下記式の出発化合物を還元する段階、
2006524232.tif 000308
［式中、
X=OH;
R0=CH3;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン;
および側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１１５】
以下の段階をさらに含む請求項114記載の方法:
下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000309
［式中、XはOHまたはOAcであり;
R16はHまたはAcである。］。
【請求項１１６】
反応させる段階は生成化合物を無水酢酸、DMAP、およびピリジンのジクロロメタン溶液で処理する段階を含む、請求項115記載の方法。
【請求項１１７】
以下の段階をさらに含む請求項114記載の方法:
下記式の第三の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000310
［式中、XはOHであり;
R16は酪酸塩である。］。
【請求項１１８】
反応させる段階は生成化合物をリパーゼの存在下でアシル供与体化合物と反応させる段階を含む、請求項117記載の方法。
【請求項１１９】
反応させる段階はトルエン、メチル-tert-ブチルエーテル、ピリジン、またはその混合物、およびN,N-ジメチルホルムアミドとの混合物からなる群より選択される有機溶媒中で行われる、請求項118記載の方法。
【請求項１２０】
有機溶媒はメチル-tert-ブチルエーテルである、請求項119記載の方法。
【請求項１２１】
アシル供与体化合物は酪酸ビニルである、請求項118記載の方法。
【請求項１２２】
リパーゼはシュードモナス・セパシア(Pseudomonas cepacia)またはシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens)由来である、請求項118記載の方法。
【請求項１２３】
リパーゼは天然リパーゼである、請求項118記載の方法。
【請求項１２４】
リパーゼは遺伝子組換えリパーゼである、請求項118記載の方法。
【請求項１２５】
リパーゼは固相支持体に固定化される、請求項118記載の方法。
【請求項１２６】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000311
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階。
2006524232.tif 000312
【請求項１２７】
処理する段階はサッカロポリスポラ・ヒルステ(Saccharopolyspora hirsute)属菌の亜種ヒルスタ(hirsuta) (27875-ATCC)の存在下で行われる、請求項126記載の方法。
【請求項１２８】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000313
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階。
2006524232.tif 000314
【請求項１２９】
処理する段階はストレプトマイセス・カテニュラエ(Streptomyces catenulae) (23893-ATCC)の存在下で行われる、請求項128記載の方法。
【請求項１３０】
以下の段階をさらに含む請求項128記載の方法:
下記式の第二の生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を処理する段階。
2006524232.tif 000315
【請求項１３１】
処理する段階はラッカーゼ触媒およびメディエータ化合物の存在下で行われる、請求項130記載の方法。
【請求項１３２】
ラッカーゼ触媒はラッカーゼcである、請求項131記載の方法。
【請求項１３３】
メディエータ化合物は1-ヒドロキシベンゾトリアゾールである、請求項131記載の方法。
【請求項１３４】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000316
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000317
［式中:、R0=CH3;
X=OAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１３５】
処理する段階はジクロロメタン(dicholoromethane)中にてオゾンの存在下で行われ、続けて亜鉛/酢酸または硫化ジメチルにより行われる、請求項134記載の方法。
【請求項１３６】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000318
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000319
［式中、
R0=CH3;
X=OH;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１３７】
処理する段階はジクロロメタン(dicholoromethane)中にてオゾンの存在下で行われ、続けて亜鉛/酢酸または硫化ジメチルにより行われる、請求項136記載の方法。
【請求項１３８】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000320
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000321
［式中、
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１３９】
処理する段階はR23CH2P+Ph3X-または(EtO)2P(O)CH2R23の存在下で行われる、請求項138記載の方法。
【請求項１４０】
処理する段階はCrCl2ならびにCHI3、CHBr3、およびCHCl3からなる群より選択されるハロゲン化ビニルの存在下で行われる、請求項138記載の方法。
【請求項１４１】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000322
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000323
［式中、
R0=CH3;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
n=0、1、2、3または4;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１４２】
処理する段階は次亜塩素酸tert-ブチルの存在下で行われる、請求項141記載の方法。
【請求項１４３】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000324
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000325
［式中、
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１４４】
処理する段階は水素化ホウ素ナトリウムの存在下で行われる、請求項143記載の方法。
【請求項１４５】
以下の段階をさらに含む請求項143記載の方法:
下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000326
［式中、
R8=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
アルカノイル;
アルケノイル;
アルキノイル;
アリールオイル;
アリールアルカノイル;
アルキルアミノカルボニル;
アリールアミノカルボニル;
アリールアルキルアミノカルボニル;
アルキルオキシカルボニル;
アリールオキシカルボニル; および
アリールアルキルオキシカルボニル; ならびに
N=0、1、2、3または4。］。
【請求項１４６】
反応させる段階は酸塩化物の存在下で行われる、請求項145記載の方法。
【請求項１４７】
反応させる段階は酸無水物の存在下で行われる、請求項145記載の方法。
【請求項１４８】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000327
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000328
［式中、
R0=CH3;
R9=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１４９】
処理する段階は酢酸アンモニウムおよびシアノボロ水素化ナトリウムの存在下で行われる、請求項148記載の方法。
【請求項１５０】
処理する段階はメチルアミンおよび水素化ホウ素ナトリウムの存在下で行われる、請求項148記載の方法。
【請求項１５１】
以下の段階をさらに含む請求項148記載の方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000329
［式中、
R8=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
アルカノイル;
アルケノイル;
アルキノイル;
アリールオイル;
アリールアルカノイル;
アルキルアミノカルボニル;
アリールアミノカルボニル;
アリールアルキルアミノカルボニル;
アルキルオキシカルボニル;
アリールオキシカルボニル; および
アリールアルキルオキシカルボニルである。］。
【請求項１５２】
反応させる段階は臭化アルキル、塩化アルキル、およびヨウ化アルキルからなる群より選択されるハロゲン化アルキルの存在下で行われる、請求項151記載の方法。
【請求項１５３】
反応させる段階は酸無水物または酸塩化物の存在下で行われる、請求項151記載の方法。
【請求項１５４】
反応させる段階はスルホン酸無水物または塩化スルホニルの存在下で行われる、請求項151記載の方法。
【請求項１５５】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000330
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000331
［式中、
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１５６】
処理する段階は有機スズ試薬ならびにPd(PPh3)4およびPd(PPh3)2Cl2からなる群より選択されるパラジウム触媒の存在下で行われる、請求項155記載の方法。
【請求項１５７】
処理する段階は有機亜鉛試薬ならびにPd(PPh3)4およびPd(PPh3)2Cl2からなる群より選択されるパラジウム触媒の存在下で行われる、請求項155記載の方法。
【請求項１５８】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000332
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000333
［式中、
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１５９】
処理する段階はグリニヤール(Gringarg)試薬の存在下で行われる、請求項158記載の方法。
【請求項１６０】
処理する段階は有機亜鉛試薬の存在下で行われる、請求項158記載の方法。
【請求項１６１】
下記式の生成化合物の調製方法であって、
2006524232.tif 000334
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000335
［式中、
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１６２】
処理する段階はバルゲス(Burgess)試薬の存在下で行われる、請求項161記載の方法。
【請求項１６３】
以下の段階をさらに含む請求項161記載の方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000336
［式中、
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3である。］。
【請求項１６４】
処置する段階はオレフィンおよびGrubbs触媒の存在下で行われる、請求項163記載の方法。
【請求項１６５】
下記式の生成化合物の調製方法であって:
2006524232.tif 000337
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000338
［式中、
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１６６】
処置する段階は水素およびパラジウム触媒の存在下で行われる、請求項165記載の方法。
【請求項１６７】
以下の段階をさらに含む請求項165記載の方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000339
［式中、
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3である。］。
【請求項１６８】
処置する段階はリンイリドの存在下で行われる、請求項167記載の方法。
【請求項１６９】
以下の段階をさらに含む請求項165記載の方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下であって、下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を反応させる段階、
2006524232.tif 000340
［式中、
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3である。］。
【請求項１７０】
処理する段階はグリニヤール試薬の存在下で行われる、請求項169記載の方法。
【請求項１７１】
処理する段階は有機亜鉛試薬の存在下で行われる、請求項169記載の方法。
【請求項１７２】
以下の段階をさらに含む請求項169記載の方法:
下記式の第三の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、第二の生成化合物を反応させる段階。
2006524232.tif 000341
【請求項１７３】
処理する段階はバルゲス試薬の存在下で行われる、請求項172記載の方法。
【請求項１７４】
下記式の生成化合物の調製方法であって:
2006524232.tif 000342
以下の段階を含む方法:
生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階、
2006524232.tif 000343
［式中、
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH;
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。］。
【請求項１７５】
処理する段階はバルゲス試薬の存在下で行われる、請求項174記載の方法。
【請求項１７６】
以下の段階をさらに含む請求項174記載の方法:
式(XV)の化合物を形成させるのに有効な条件の下で、下記式の第一の中間化合物を処理する段階。
2006524232.tif 000344
【請求項１７７】
処理する段階はグリニヤール試薬の存在下で行われる、請求項176記載の方法。
【請求項１７８】
処理する段階は有機亜鉛試薬の存在下で行われる、請求項176記載の方法。
【請求項１７９】
以下の段階をさらに含む請求項176記載の方法:
式(XIV)の第一の中間化合物を形成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階。
2006524232.tif 000345
【請求項１８０】
処理する段階はオゾンの存在下で行われる、請求項179記載の方法。
【請求項１８１】
以下の段階をさらに含む請求項174記載の方法:
下記式の第二の生成化合物を形成させるのに有効な条件の下で、生成化合物を還元する段階。
2006524232.tif 000346
【請求項１８２】
還元する段階は水素およびパラジウム触媒の存在下で行われる、請求項181記載の方法。
【請求項１８３】
以下の段階を含む、哺乳動物で免疫反応を抑制するかまたは軽減する方法:
治療的に有効な量の請求項1記載の化合物を該哺乳動物に、哺乳動物で免疫反応を抑制するのに有効な条件の下で投与する段階。
【請求項１８４】
以下の段階を含む、慢性炎症または自己免疫疾患を患う哺乳動物を治療する方法:
治療的に有効な量の請求項1記載の化合物を哺乳動物に、慢性炎症または自己免疫疾患を治療するのに有効な条件の下で投与する段階。
【請求項１８５】
慢性炎症または自己免疫疾患は、喘息、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、および潰瘍性大腸炎からなる群より選択される、請求項184記載の方法。
【請求項１８６】
以下の段階を含む、神経変性疾患を患う哺乳動物を治療する方法:
治療的に有効な量の請求項1記載の化合物を哺乳動物に、神経変性疾患を治療するのに有効な条件の下で投与する段階。
【請求項１８７】
神経変性疾患は糖尿病性神経障害、筋萎縮性側索硬化症、脊椎損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、および脳卒中からなる群より選択される、請求項186記載の方法。
【請求項１８８】
HIV、菌類病原体、または寄生虫類により引き起こされる感染症を患う哺乳動物を治療する方法であって、以下の段階を含む方法:
治療的に有効な量の請求項1記載の化合物を哺乳動物に、感染症を治療するのに有効な条件の下で投与する段階。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、サイクロスポリン・ファミリーの化合物、具体的にはサイクロスポリンAの新規誘導体、そのような誘導体、そのような誘導体を含む薬学的組成物を調製する方法、およびそのような誘導体をさまざまな疾患の治療に使用する方法に関する。
【０００２】
本出願は、2003年3月17日付けで出願された米国特許仮出願第60/455,727号(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)の恩典を主張するものである。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
Neoral(登録商標)およびSandimmune(登録商標)(Novartis)として現在市販されているサイクロスポリンAは、移植臓器拒絶反応の阻止で最も広く処方されている薬物である。サイクロスポリンAは同様に、関節リウマチ、クローン病、乾癬、およびI型糖尿病などの自己免疫疾患ならびに喘息のような慢性炎症性疾患の治療で臨床上の有用性をこれまでに実証している。その他多くの前臨床試験での試験結果から、その他の治療領域でのサイクロスポリンAの有用性が示唆されている。
【０００４】
しかしながら、この薬物の治療係数が低いため、移植臓器拒絶反応の阻止以外の治療用途に向けたサイクロスポリンAの普及には制限がある。サイクロスポリンAの慢性投与による長期毒性が深刻な障害となっている。サイクロスポリンAによる慢性治療と関係するマイナスの結果としては、腎臓毒性、異常肝機能、多毛、ふるえ、神経毒性、胃腸の不快感、およびその他の副作用が挙げられる。免疫抑制の治療領域に関わる熟練者の多くは、サイクロスポリンAの使用に伴う毒性は作用機序に基づくものであると考えてきた。サイクロスポリンAは、カルシニューリンと呼ばれる遍在性のセリン/スレオニンホスファターゼを阻害する。サイクロスポリンAを構造的に修飾することで免疫抑制活性と毒性を分ける試みは、大部分がこれまでにうまくいっていない。それにもかかわらず、過去10年間にわたり、サイクロスポリンの毒性を理解する研究が継続されてきたことで、カルシニューリンの阻害とは関係がないその他の可能な解釈が得られている。
【０００５】
公表されている近年の研究結果(Paolini et al.,「Cyclosporin A and Free Radical Generation」, Trends in Pharmaceutical Sciences, 22:14-15 (2001); Buetler et al.,「Does Cyclosporin A Generate Free Radicals ?」Trends in Pharmaceutical Sciences, 21:288-290 (2000))から、サイクロスポリンAの媒介による活性酸素中間体の生成がこの薬物の使用に伴う顕著な副作用に関係している可能性があるということが示唆されている。インビトロおよびインビボ研究の結果から、サイクロスポリンAは活性酸素中間体を生成できるが、形成されるそのラジカルはサイクロスポリンA分子から直接的に生じるわけではなく、それがミトコンドリアまたはチトクロームP450の媒介によるサイクロスポリンAの代謝から生じる可能性は低いということが示唆されている。
【０００６】
新規サイクロスポリンA類似体ISATX247は強力なカルシニューリン阻害剤(Abel et al.,「ISATX247: A Novel Calcineurin Inhibitor」, J. Heart Lung Transplant, 20(2): 161 (2001); Aspeslet et al.,「ISATX247: A Novel Calcineurin Inhibitor」, Transplantation Proceedings, 33(1-2): 1048-1051 (2001))であり、これは動物実験でサイクロスポリンAと比べて減弱した毒性プロファイルをこれまでに実証している。この類似体がヒトで毒性の低下をもたらすかどうかは依然として明らかにされていない。Naicker et alのPCT国際出願番号WO99/18120では、サイクロスポリン類似体が特許請求されており、その場合には、サイクロスポリンAのMeBmt1((4R)-4-((E)-2-ブテニル)-4,N-ジメチル-L-スレオニン)アミノ酸側鎖が構造的に修飾されている。この出願で特許請求されている最も活性な化合物のいくつかは、側鎖中の一つまたは複数の水素に代わって重水素が組み込まれている。重水素の組込みは、水素の引き抜きが薬物の代謝における律速段階である場合には、インビボでの化合物の代謝を減速させることが知られており(Foster,「Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism」, Trends in Pharmaceutical Sciences, 5:524-527 (1984))、その分子の薬物速度論的特性を向上させることが知られている。サイクロスポリンA類似体に重水素を組み込むことで、現在理解されていないような方法で活性酸素中間体の生成に関与する経路を遮断することもできる。
【０００７】
その他の研究では、形質転換成長因子-β(TGF-β)の役割をサイクロスポリンAの腎臓毒性に結び付けている(Khanna et al.,「TGF-β: A Link Between Immunosuppression, Nephrotoxicity, and CsA」, Transplantation Proceedings, 30:944-945 (1998))。サイクロスポリンAは、腎臓でTGF-β、コラーゲンおよびフィブロネクチン遺伝子の発現を誘導する。TGF-βはサイクロスポリンAの効果に匹敵する多くの免疫抑制効果を有する。しかしながら、TGF-βは同様に、線維症の特徴であるコラーゲンおよびフィブロネクチンの発現を増加させることよって、細胞外マトリックス遺伝子の蓄積を引き起こす。糸球体硬化症(これはサイクロスポリンAの慢性使用によって起る)は細胞外マトリックスタンパク質の増加と関係しているので、サイクロスポリンAに関連する腎臓毒性はTGF-βの誘導によるものである可能性がある。サイクロスポリンAの新規類似体はTGF-βのようなタンパク質の遺伝子発現の誘導に対し異なる効果を及ぼす可能性があり、それは治療指数の向上を示す可能性がある。
【０００８】
従って、さまざまな疾患の治療に安全であり有効である新規のサイクロスポリン誘導体を手に入れることは好都合であろう。
【０００９】
本発明はこれらの目的を達成することに向けられる。
【発明の開示】
【００１０】
発明の概要
本発明の化合物は式(I)に見られる化学構造により表される:
2006524232.tif 000003
式中Aは式(II)のアミノ酸であり:
2006524232.tif 000004
式中:
R0はHまたはCH3であり;
2006524232.tif 000005
or; または
R2およびR26は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3、R4、R5、R6、R10、R11、R12、R17、R18、R19、R22、R25、R27、R28、R29、およびR30は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4、R5およびR6、R10、R12、R17および R18、R19、R22、R25およびR26、R27およびR28、R29およびR30はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
R8、R16、およびR31は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
アルカノイル;
アルケノイル;
アルキノイル;
アリールオイル;
アリールアルカノイル;
アルキルアミノカルボニル;
アリールアミノカルボニル;
アリールアルキルアミノカルボニル;
アルキルオキシカルボニル;
アリールオキシカルボニル; および
アリールアルキルオキシカルボニル;
R7、R9、R13、R14、R15、R20、R21、R23、R24、R32、R33、およびR34は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Y=C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキル;
C3〜C6直鎖および分枝鎖アルケニル;
アリールアルキル;
ヘテロアリールアルキル;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルオキシ;
アリールオキシ;
アシルオキシ;
アリールアルキルオキシ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルアミノ;
アリールアミノ;
アリールアルキルアミノ;
ヘテロアリールアミノ;
ヘテロアリールアルキルアミノ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルカルボキサミド;
アリールカルボキサミド;
ヘテロアリールカルボキサミド;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルスルホンアミド;
アリールスルホンアミド;
アリールアルキルスルホンアミド;
ヘテロアリールスルホンアミド;
ヘテロアリールアルキルスルホンアミド; または
NH2C(O)NH;
式II中のCO-は式I中のBのα-アミノ基に共有結合してアミド結合を形成し、式II中の-N-R0はKのカルボン酸に共有結合してアミド結合を形成し;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである;
あるいは薬学的に許容されるその塩。
【００１１】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000006
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の出発化合物を生体触媒的に変換する段階を含む:
2006524232.tif 000007
式中:
R0はHまたはCH3であり:
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１２】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000008
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の出発化合物を化学的に酸化する段階を含む:
2006524232.tif 000009
式中:
R0はHまたはCH3であり:
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン;
および側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１３】
本発明は同様に、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000010
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を還元する段階を含む:
2006524232.tif 000011
式中:
X=OH;
R0=CH3;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン;
および側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１４】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000012
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000013
【００１５】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000014
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000015
【００１６】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000016
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000017
式III
式中:
R0=CH3;
X=OAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１７】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000018
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000019
式中:
R0=CH3;
X=OH;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１８】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000020
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000021
式中:
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００１９】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000022
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000023
式中:
R0=CH3;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
n=0、1、2、3または4;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２０】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000024
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000025
式中:
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２１】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000026
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000027
式中:
R0=CH3;
R9=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２２】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000028
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000029
式中:
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２３】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000030
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000031
式中:
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２４】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000032
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000033
式中:
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２５】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000034
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000035
式中:
R0=CH3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２６】
本発明の他の局面は、下記式の生成化合物の調製方法に関する:
2006524232.tif 000036
この方法は生成化合物を生成させるのに有効な条件の下で、下記式の化合物を処理する段階を含む:
2006524232.tif 000037
式中:
R0=CH3;
R23=水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH;
COOR2; および
C(O)NR3R4;
R2=水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3およびR4は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
n=0、1、2、3または4;
p=0、1、2、または3;
X=OHまたはOAc;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである。
【００２７】
本発明は、さまざまな疾患の治療に安全であり有効であるサイクロスポリン類似体を開示する。本発明のサイクロスポリン化合物のいくつかは、既知のサイクロスポリン、具体的にはサイクロスポリンA、ならびにその他の天然に存在するサイクロスポリンまたは既知の合成によるサイクロスポリン類似体に匹敵する強力な免疫抑制活性を有する。本発明のサイクロスポリン類似体は、サイクロスポリンAを含めて、MeBmt1((4R)-4-((E)-2-ブテニル)-4,N-ジメチル-L-スレオニン)アミノ酸を有するサイクロスポリンの化学的変換により生成される。本発明のサイクロスポリン類似体、具体的にはCsAの類似体は、Bmt1((4R)-4-((E)-2-ブテニル)-4-メチル-L-スレオニン)アミノ酸の炭化水素側鎖中に重水素を組み込むことを含む。サイクロスポリン・ファミリーのメンバーの多くは、Bmt1およびMeBmt1アミノ酸を含んでいる。
【００２８】
本発明は、Bmt1側鎖に対する化学的な修飾を含むサイクロスポリン誘導体を得るための酸化的生体触媒または化学的酸化条件の使用に依る化学的方法を開示する。この正味の効果は、Bmt1アミノ酸の(E)-2-ブテニル末端をメチルビニルケトン部分に変換することである。サイクロスポリンAに由来するサイクロスポリンのメチルビニルケトンは、以前には決して報告されていない。サイクロスポリン・ファミリーの他のメンバーのメチルビニルケトン誘導体も知られていない。サイクロスポリンAメチルビニルケトンは、マウス脾細胞およびヒトT-リンパ球での混合リンパ球反応試験で顕著な免疫抑制活性を示す。
【００２９】
本発明は、さらなるサイクロスポリン誘導体に変換される合成中間体としてのサイクロスポリンAメチルビニルケトンの有用性についても記述する。メチルビニルケトンは汎用性の高い官能基であり、これは第1のアミノ酸位置に変化のある多種多様な固有のサイクロスポリン類似体に容易に化学変換されることができる。Wengerによる画期的なCsAの全合成(Wenger,「Total Synthesis of Cyclosporin A and Cyclosporin H, Two Fungal Metabolites Isolated from the Species Tolypocladium inflatum GAMS」, Helv. Chim. Acta, 67:502-525 (1984); Wengerの米国特許第4,396,542号(これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)以来、サイクロスポリン類、具体的にはサイクロスポリンAの多くの類似体がBmt1アミノ酸に修飾を加えてこれまでに合成されているが、CsA類似体の調製に利用されるこの合成経路は非常に長い。結果として、Bmt1の構造的な変化により調製された誘導体の数には限度があった。既に合成され試験されている、Bmt1アミノ酸に変化のあるサイクロスポリン類似体の数をたとえ考慮したとしても、サイクロスポリン分子のこの重要な部分に関する構造活性相関をさらに探究することには依然として考慮すべき余地がある。サイクロスポリンAメチルビニルケトンの生成により、多くの新規サイクロスポリン類似体をサイクロスポリンAから出発するごくわずかな化学的段階でいっそう効率的に合成することができる。
【００３０】
発明の詳細な説明
本発明の化合物はサイクロスポリン・ファミリーのメンバー、具体的にはサイクロスポリンAから得られる。サイクロスポリン・ファミリーは、真菌の菌株トリポクラジウム・ニベウム(Tolypocladium niveum)、トリポクラジウム・インフラタム(Tolypcladium inflatum)、およびシリンドロカルポン・ルシダム(Cyclindrocarpon lucidum)由来の代謝産物として産生され単離される全ての天然サイクロスポリン
2006524232.tif 000038
これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)を含むように意図される。その他の天然サイクロスポリンも改良型の発酵培養技術を適用することで単離されている(Traber et al.,「Cyclosporins-New Analogues by Precursor Directed Biosynthesis」, J. Antibiotics, XLII:591-597 (1989)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。
【００３１】
サイクロスポリンA、サイクロウンデカペプチドの構造、およびその環中の各アミノ酸に対する位置番号付けを下記に示す:
2006524232.tif 000039
サイクロスポリンAは、サイクロスポリン・ファミリーの化合物のうち最も著名なメンバーである。従って、サイクロスポリン・ファミリーの他のメンバーに対する名称および略称はサイクロスポリンAに基づいていることが多い。例えば、サイクロスポリンBは[Ala2]CyAまたは(Ala2)-CsAと表すことができ、これはアミノ酸のアラニンが、サイクロスポリンA中の第2位に存在するアミノ酸のα-アミノ酪酸(Abu)の代わりに第2位に存在することを示唆している。
【００３２】
単離され特徴付けられているサイクロスポリン・ファミリーの重要なメンバーを表1に示す。
【００３３】
（表１）サイクロスポリン
2006524232.tif 000040
本発明の新規化合物は、第1位のアミノ酸が以下のものである、記載のもののようなサイクロスポリン類、具体的にはサイクロスポリンAから得られる:
(a) MeBmt1 ((4R)-4-((E)-2-ブテニル)-4,N-ジメチル-L-スレオニンに対する略語; 合成名は(2S,3R,4R,6E)-3-ヒドロキシ-4-メチル-2-(メチルアミノ)-6-オクテン酸であり、N-メチル-ブテニル-スレオニンとも呼ばれる);
(b) デオキシ-MeBmt1 (合成名は(2S,3R,4R,6E)-4-メチル-2-(メチルアミノ)-6-オクテン酸である);
(c) Bmt1 ((4R)-4-((E)-2-ブテニル)-4-メチル-L-スレオニンに対する略語; 合成名は(2S,3R,4R,6E)-3-ヒドロキシ-4-メチル-2-(アミノ)-6-オクテン酸である); または
(d) デオキシ-Bmt1 (合成名は(2S,3R,4R,6E)-4-メチル-2-(アミノ)-6-オクテン酸である)。
【００３４】
サイクロスポリンのファミリーは、天然には存在していないサイクロスポリン誘導体であって、本明細書で、全合成法および半合成法により調製された誘導体にまでも及ぶ。多くの新規サイクロスポリン類似体は、サイクロウンデカペプチドの11個のアミノ酸のうちの1個または複数個の代わりに天然または非天然アミノ酸の組込みを可能とする全合成法により調製されている(Wengerの米国特許第4,396,542号; Wenger et alの米国特許第4,639,434号; Wengerの欧州特許出願第34567号; Ko et al.,「Solid Phase Total Synthesis of Cyclosporin Analogs」, Helv. Chim. Acta, 80(3):695-705 (1997); Rich et alの米国特許第5,948,693号 (これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。全合成法により調製されたサイクロスポリン類似体は、サイクロスポリン・ファミリーに属する。
【００３５】
半合成法がサイクロスポリン類に適用されており、その結果、サイクロスポリン類の多くの化学的誘導体が調製されている
2006524232.tif 000041
これらはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)。半合成法により調製されたサイクロスポリン類似体は、サイクロスポリン・ファミリーに属する。
【００３６】
本発明の新規化合物は、上記の参考文献にある全合成法または半合成法により調製されたもののような非天然サイクロスポリンを含むが、これらの参考文献にある非天然サイクロスポリンに限定されないサイクロスポリン・ファミリーから得られる。
【００３７】
本発明の化合物は式Iに見られる化学構造により表される:
2006524232.tif 000042
式中Aは式IIのアミノ酸であり:
2006524232.tif 000043
式中:
R0はHまたはCH3であり;
2006524232.tif 000044
R2およびR26は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
CH2OCH3;
CH2SCH3;
CH2CH2F;
CH2CF3;
CH2CH2CF3;
CH(CF3)2; および
CH2OCH2OC(O)CH3;
R3、R4、R5、R6、R10、R11、R12、R17、R18、R19、R22、R25、R27、R28、R29、およびR30は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環; および
(CH2)n-ヘテロアリール環;
R3 およびR4、R5およびR6、R10、R12、R17および R18、R19、R22、R25およびR26、R27およびR28、R29およびR30はともに、ヘテロ原子またはそれらが結合しているヘテロ原子を含む環状部分の形成をもたらす-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-および-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-であり;
R8、R16、およびR31は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
C3〜C7-シクロアルキル;
CH2-(C3〜C7-シクロアルキル);
(CH2)n-アリール環;
(CH2)n-ヘテロアリール環;
アルカノイル;
アルケノイル;
アルキノイル;
アリールオイル;
アリールアルカノイル;
アルキルアミノカルボニル;
アリールアミノカルボニル;
アリールアルキルアミノカルボニル;
アルキルオキシカルボニル;
アリールオキシカルボニル; および
アリールアルキルオキシカルボニル;
R7、R9、R13、R14、R15、R20、R21、R23、R24、R32、R33、およびR34は同じものであるかまたは異なるものであり、それらは独立して以下からなる群より選択され:
水素;
重水素;
ハロゲン;
ヒドロキシル;
ニトリル;
置換および無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルケニル鎖;
置換および無置換C3〜C6-分枝状アルキル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルケニル鎖;
置換および無置換C2〜C6-直鎖状アルキニル鎖;
置換および無置換C4〜C6-分枝状アルキニル鎖;
アルケニルおよびアルキニル基を有する置換および無置換C4〜C6-鎖
置換および無置換C3〜C7-シクロアルキル;
置換および無置換(CH2)p-(C3〜C7-シクロアルキル);
置換および無置換アリール;
置換および無置換ヘテロアリール;
置換および無置換アリールアルキル;
置換および無置換ヘテロアリールアルキル;
COOH; 
COOR2; および
C(O)NR3R4;
n=0、1、2、3、または4;
p=0、1、2、または3;
X=水素;
ヒドロキシル; または
アルカノイル、アリールオイル、アルキルアミノカルボニル、アリールアミノカルボニル、アリールアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で誘導体化されたヒドロキシル基;
Y=C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキル;
C3〜C6直鎖および分枝鎖アルケニル;
アリールアルキル;
ヘテロアリールアルキル;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルオキシ;
アリールオキシ;
アシルオキシ;
アリールアルキルオキシ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルアミノ;
アリールアミノ;
アリールアルキルアミノ;
ヘテロアリールアミノ;
ヘテロアリールアルキルアミノ;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルカルボキサミド;
アリールカルボキサミド;
ヘテロアリールカルボキサミド;
C1〜C6直鎖および分枝鎖アルキルスルホンアミド;
アリールスルホンアミド;
アリールアルキルスルホンアミド;
ヘテロアリールスルホンアミド;
ヘテロアリールアルキルスルホンアミド; または
NH2C(O)NH;
式II中のCO-は式I中のBのα-アミノ基に共有結合してアミド結合を形成し、式II中の-N-R0はKのカルボン酸に共有結合してアミド結合を形成し;
Bは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
α-アミノ酪酸;
アラニン;
スレオニン;
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のα-アミノ酪酸、アラニン、バリン、またはノルバリン;
Cはサルコシンであり;
Dは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
バリン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Eは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
バリン;
ノルバリン; および
側鎖中の炭素原子がヒドロキシル基で置換されている修飾型のバリンまたはノルバリン;
Fは以下からなる群より選択されるアミノ酸であり:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン;
Gはα-アミノ酪酸またはアラニンであり;
HはD-アラニンであり;
IおよびJは独立して以下からなる群より選択され:
ロイシン;
N-メチルロイシン;
γ-ヒドロキシ-N-メチルロイシン; および
γ-ヒドロキシロイシン; ならびに
KはN-メチルバリンまたはバリンである;
あるいは薬学的に許容されるその塩。
【００３８】
本明細書では「C1〜C6直鎖状アルキル鎖」という用語は、1〜6個の炭素原子を含んだ直鎖状の飽和炭化水素基を指す。例としては、メチル、エチル、プロピル、n-ブチル、n-ペンチル、およびn-ヘキシルが挙げられる。
【００３９】
本明細書では「C3〜C6直鎖状アルケニル鎖」という用語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を有する3〜6個の炭素原子を含んだ直鎖状の炭化水素基を指す。本明細書では「C2〜C6直鎖状アルケニル鎖」という用語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を有する2〜6個の炭素原子を含んだ直鎖状の炭化水素基を指す。例としては、エチレン、CD=CD2、2-プロペニル、3-ブテニル、4-ペンテニル、5-ヘキセニル、2-ブテニル、2-ペンテニル、3-ペンテニル、2-ヘキセニル、3-ヘキセニル、および4-ヘキセニルが挙げられる。
【００４０】
本明細書では「C3〜C6分枝状アルキル鎖」という用語は、3〜6個の炭素原子を含んだ分枝状の炭化水素基を指す。例としては、イソプロピル、イソブチル、tert-ブチル、およびネオペンチルが挙げられるが、これらに限定されることはない。
【００４１】
本明細書では「C4〜C6分枝状アルケニル鎖」という用語は、少なくとも一つの炭素-炭素二重結合を有する4〜6個の炭素原子を含んだ分枝状の炭化水素基を指す。例としては、2-メチル-2-プロペニル、3-メチル-2-ブテニル、および4-メチル-3-ペンテニルなどが挙げられる。
【００４２】
本明細書では「C３〜C6直鎖状アルキニル鎖」という用語は、炭素-炭素三重結合を有する3〜6個の炭素原子を含んだ直鎖状の炭化水素基を指す。本明細書では「C４〜C6-分枝状アルキニル鎖」という用語は、炭素-炭素三重結合を有する4〜6個の炭素原子を含んだ分枝状の炭化水素基を指す。例としては、
2006524232.tif 000045
、および同様のものが挙げられる。
【００４３】
本明細書では「C3〜C7シクロアルキル」という用語は、炭素原子が3〜7個の環状の炭化水素基を指す。例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、およびシクロヘプチルが挙げられる。
【００４４】
直鎖状および分枝状アルキル、直鎖状および分枝状アルケニル、アルキニル鎖ならびにシクロアルキル鎖の置換基は任意の位置に存在し、それらは独立してメチル、エチル、C3〜C7シクロアルキル、置換および無置換アリール、置換および無置換ヘテロアリール、
2006524232.tif 000046
より選択される。アルキル、アルケニルおよびアルキニル鎖の炭素-水素結合が炭素-重水素および炭素-フッ素結合と置換されると、ポリ重水素化およびポリフッ素化アルキル、アルケニルおよびアルキニル鎖が得られる。
【００４５】
本明細書では「アリール環」という用語は、環に芳香族性を与えるように存在する不飽和度のある炭素環を指す。例としては、置換または無置換フェニル環、ナフチル環、および同様のものが挙げられる。置換基(数が1〜2個)は任意の位置に存在し、それらは独立して
2006524232.tif 000047
より選択される。
【００４６】
本明細書では「ヘテロアリール環」という用語は、置換または無置換複素芳香族環を指し、これは5員環の複素環、6員環の複素環、および環融合型の二環式複素環とすることができる。ヘテロアリール環の例としては、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2-ピリミジル、4-ピリミジル、5-ピリミジル、チオフェン-2-イル、チオフェン-3-イル、2-フラニル、3-フラニル、オキサゾール-2-イル、オキサゾール-4-イル、オキサゾール-5-イル、チアゾール-2-イル、チアゾール-4-イル、チアゾール-5-イル、イミダゾール-2-イル、イミダゾール-4-イル、ピラゾール-3-イル、ピラゾール-4-イル、イソキサゾール-3-イル、イソキサゾール-4-イル、イソキサゾール-5-イル、イソチアゾール-3-イル、イソチアゾール-4-イル、イソチアゾール-5-イル、1,3,4-チアジアゾール-2-イル、ベンゾ[b]フラン-2-イル、ベンゾ[b]チオフェン-2-イル、2-ピロリル、3-ピロリル、1,3,5-トリアジン-2-イル、ピラジン-2-イル、ピリダジン-3-イル、ピリダジン-4-イル、2-キノリニル、3-キノリニル、4-キノリニル、1-イソキノリニル、3-イソキノリニル、4-イソキノリニル複素環、および同様のものが挙げられる。置換基(数が1〜2個)は任意の位置に存在し、それらは独立して
2006524232.tif 000048
より選択される。
【００４７】
本明細書では「アルカノイル」という用語は、カルボニル基に共有結合した置換または無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖、C3〜C6-分枝状アルキル鎖およびC3〜C7-シクロアルキル基を指す。例としては、アセテート、プロピオネート、ピバロエート、ブチレート、イソブチレート、シクロヘキサンカルボキシレート、および同様のものが挙げられる。
【００４８】
本明細書では「アルケノイル」という用語は、カルボニル基に共有結合した置換または無置換C3〜C6-直鎖状アルケニル鎖を指す。例としては、アクリレート、クロトネート、メタクリレート、2,4-ヘキサジエノエート、および同様のものが挙げられる。
【００４９】
本明細書では「アルキノイル」という用語は、カルボニル基に共有結合した置換または無置換C3〜C6-直鎖状アルキニル鎖を指す。例としては、プロピオレート、2-ブチノエート、および同様のものが挙げられる。アルカノイル、アルケノイルおよびアルキノイル鎖の置換基は任意の位置に存在し、それらは独立して
2006524232.tif 000049
より選択される。
【００５０】
本明細書では「アリールオイル」という用語は、置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環を指す。アリールアシル基の例としては、ベンゾイル、p-フルオロベンゾイル、2-ナフトイル、ニコチノイル、イソニコチノイル、および同様のものが挙げられる。
【００５１】
本明細書では「アリールアルカノイル」という用語は、炭素原子1、2、3または4個のアルキル鎖に共有結合した置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環であって、そのアルキル鎖の炭素原子のうちの1つがカルボニル基に共有結合したものを指す。このアルキル鎖は置換されているかまたは置換されておらず、直線状または分枝状であり、飽和しているかまたは飽和していない。アリールアルキルアシル基の例としては、フェニルアセトイル、p-フルオロフェニルアセトイル、2-フェニルプロピオノイル、マンデロイル、シンナモイル、および同様のものが挙げられる。
【００５２】
本明細書では「アルキルアミノカルボニル」という用語は、窒素原子に共有結合した置換または無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖、C3〜C6-分枝状アルキル鎖、およびC3〜C7-シクロアルキル基であって、その窒素原子がカルボニル基に共有結合したものを指す。アルキルアミノアシル基の例としては、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル、イソプロピルアミノカルボニル、tert-ブチルアミノカルボニル、シクロペンチルアミノカルボニル、シクロヘキシルアミノカルボニル、および同様のものが挙げられる。
【００５３】
本明細書では「アリールアミノカルボニル」という用語は、置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環を指す。例としては、フェニルアミノカルボニル、(ナフト-2-イル)アミノカルボニル、パラ-メトキシフェニルアミノカルボニル、(ピリド-4-イル)アミノカルボニル、(ピラジン-2-イル)アミノカルボニル、および同様のものが挙げられる。
【００５４】
本明細書では「アリールアルキルアミノカルボニル」という用語は、炭素原子1、2、3または4個のアルキル鎖に共有結合した置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環であって、そのアルキル鎖の炭素原子のうちの1つがアミノ基に共有結合し、そのアミノ基がカルボニル基に共有結合したものを指す。例としては、ベンジルアミノカルボニル、フェネチルアミノカルボニル、α-メチルベンジルアミノカルボニル、ピリド-4-イルメチルアミノカルボニル、および同様のものが挙げられる。
【００５５】
本明細書では「アルキルオキシカルボニル」という用語は、酸素原子に共有結合した置換または無置換C1〜C6-直鎖状アルキル鎖、C3〜C6-分枝状アルキル鎖、およびC3〜C7-シクロアルキル基であって、その酸素原子がカルボニル基に共有結合したものを指す。その置換基は任意の位置に存在し、それらは独立して
2006524232.tif 000050
より選択される。例としては、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、tert-ブチルオキシカルボニル(BOC)、および同様のものが挙げられる。
【００５６】
本明細書では「アリールオキシカルボニル」という用語は、置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環を指す。例としては、フェニルオキシカルボニル、(ナフト-2-イル)オキシカルボニル、パラ-メトキシフェニルオキシカルボニル、(ピリド-4-イル)オキシカルボニル、(ピラジン-2-イル)オキシカルボニル、および同様のものが挙げられる。
【００５７】
本明細書では「アリールアルキルオキシカルボニル」という用語は、炭素原子1、2、3または4個のアルキル鎖に共有結合した置換または無置換アリールまたはヘテロアリール環であって、そのアルキル鎖の炭素原子のうちの1つが酸素原子に共有結合し、その酸素原子がカルボニル基に共有結合したものを指す。例としては、ベンジルオキシカルボニル、フェネチルオキシカルボニル、α-メチルベンジルオキシカルボニル、(ピリド-4-イル)メチルオキシカルボニル、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル(FMOC)、および同様のものが挙げられる。
【００５８】
本明細書で使用されるサイクロスポリンの命名法および付番方式は、Biotechnology、第2版、Rehm et al編、535〜591頁(1997)にあるKallen et al、「Cyclosporins: Recent Developments in Biosynthesis, Pharmacology and Biology, and Clinical Applications」(その全体が参照により本明細書に組み入れられる)により使用されているものであり、それらは下記に示される:
位置番号付け  式I中の文字  サイクロスポリンA中のアミノ酸
1            A         N-メチル-ブテニル-スレオニン(MeBmt)
2            B        α-アミノ酪酸(Abu)
3            C        サルコシン(Sar)
4            D         N-メチル-ロイシン(MeLeu)
5            E        バリン(Val)
6            F         N-メチル-ロイシン(MeLeu)
7            G        アラニン(Ala)
8            H        (D)-アラニン((D)-Ala)
9            I         N-メチル-ロイシン(MeLeu)
10           J         N-メチル-ロイシン(MeLeu)
11           K         N-メチル-バリン(MeVal)
位置番号付けと「式I中の文字」との間の関係は、本発明の化合物の構造を定義するという目的で任意に割り当てられており、したがって、サイクロスポリン類似体中のアミノ酸を指定するのに知られているいずれかの慣例を表すものではない。
【００５９】
本発明の化合物は、サイクロスポリンA、またはサイクロウンデカペプチドの最初のアミノ酸位置(サイクロスポリンの命名法による)にMeBmt1、デオキシ-MeBmt1、デオキシ-Bmt1、もしくはBmt1を有するその他のサイクロスポリンを含めて、サイクロスポリン・ファミリーの既知化合物から得られる。本発明の新規化合物は全て、第1位に構造的に修飾されたアミノ酸を有する。第1位のアミノ酸に対する修飾に加えて、構造的変化が同様に第2〜11位のアミノ酸の1つまたは複数に同時になされている誘導体を含むことも本発明の範囲内である。
【００６０】
本発明は同様に、新規サイクロスポリン誘導体の調製のための新規の化学的および生体触媒的方法を提供する。そのような方法の1つとしては、サイクロスポリン・ファミリーのメンバー、具体的にはサイクロスポリンAを、新規サイクロスポリン誘導体であって、その誘導体を薬学的化合物として有用とする生物活性を保持するものに変換するための生体触媒の使用が挙げられる。この方法は、例えばサイクロスポリンA中の、MeBmt1を新たなアミノ酸残基(4R)-4-((E)-2-ケト-3-ブテニル)-4,N-ジメチル-L-スレオニン(系統的には(2S, 3R, 4R, 5E)-3-ヒドロキシ-4-メチル-2-(メチルアミノ)-7-オキソ-5-オクテン酸とも命名される)に変換することを含むものである。この生体触媒的方法の正味の効果は、下記に示されるように、アミノ酸側鎖の末端を「(E)-2-ブテニル」部分から末端「メチルビニルケトン」に変換することである。
2006524232.tif 000051
【００６１】
新規のサイクロスポリンメチルビニルケトン(Cs-MVK、式III)誘導体は、それらの誘導体をさまざまな病状または疾患を治療するための医薬品として有用とする生物活性を保持する。メチルビニルケトン官能基はまた、下記に示されるように、これらの化合物を、さらなる新規誘導体を調製するのに有用な合成中間体とする。
2006524232.tif 000052
従って、本発明の他の局面は、式IIIの化合物をさらなる化学的または生体触媒的操作に供することに関し、これにより薬学的有用性を保持する新規化合物が生成される。この反復型の方法によりもたらされる構造的修飾は、アミノ酸の第1位に限定されることはなく、サイクロウンデカペプチド周囲の、第2位から第11位のその他の10個のアミノ酸のうちの1個または複数個に行うことができる。
【００６２】
Cs-MVK誘導体を調製するための別法も開示されており、その場合には、生体触媒の使用を必要としない化学的酸化を行って、サイクロスポリンAを含むサイクロスポリン類を式IIIのサイクロスポリンメチルビニルケトンに変換する。
【００６３】
サイクロスポリンAを含むサイクロスポリン類のサイクロウンデカペプチドの第1位のアミノ酸(MeBmt1、デオキシ-MeBmt1、デオキシ-Bmt1またはBmt1)は、サイクロスポリンの生物活性で非常に重要な役割を果たすことがよく知られている。第1位のアミノ酸に対するこれらの構造的変化の結果として、本発明の新規サイクロスポリン誘導体は、いくつかの治療指標に対して薬学的有用性を有する。
【００６４】
サイクロスポリン類は、免疫系のT-リンパ球に対するその選択的作用によって及ぼされるその免疫抑制効果で最も知られている。カルシニューリン、すなわち哺乳動物の免疫系でリンパ球(T-細胞)の細胞内シグナル伝達の調節に関与する細胞内タンパク質ホスファターゼに対する阻害活性を有する本発明に開示の化合物は、哺乳動物で免疫抑制活性を示す。カルシニューリンとのその薬物の相互作用は、最初に生ずるサイクロフィリンA(サイクロスポリンに対する細胞内受容体)とサイクロスポリンAとの間の複合体で起る。カルシニューリンを阻害することの主な結果は、転写因子である活性化T細胞の核因子(NF-AT)の脱リン酸化が起らず、サイトカインであるインターロイキン-2(IL-2)の転写が阻害されるということである。インビトロおよびインビボ試験では、観測の効果はT-細胞の増殖およびリンパ球の分化(T-リンパ球からB-リンパ球)の阻害である。この生物活性プロファイルを持つ本発明で開示の化合物はサイクロスポリンAと同じクラスのものであり、これらの化合物を投与することで、臓器移植患者の免疫応答が抑制され、従って、同種移植の拒絶反応が阻止される。このクラスの本発明に開示の化合物は同様に、いくつか挙げると、喘息、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、および潰瘍性大腸炎のような自己免疫疾患および慢性炎症性疾患の治療で有用性がある。
【００６５】
本発明の他の局面は、免疫抑制活性とは異なるその他の有用な生物活性を有する新たなサイクロスポリンA類似体を提供する。本発明のサイクロスポリン誘導体のなかにはサイクロフィリンAに対する十分な結合親和性を保持するが、カルシニューリン阻害活性がなく、従って、免疫抑制活性がないものもある。サイクロフィリンAは、その他のサイクロフィリン類と同様に、タンパク質の折り畳みまたはシャペロン活性に重要なペプチジル-プロリルシス・トランス・イソメラーゼ(PPIase)である。サイクロスポリンAおよびFK-506は、哺乳動物で神経栄養活性を有することが明らかにされている(Snyder et al.,「Neural Actions of Immunophilin Ligands」, Trends in Pharmacological Sciences, 19:21-26 (1998)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。免疫抑制活性はないが強力なPPIase阻害活性を保持するサイクロスポリンAおよびFK-506の類似体は神経栄養活性を保持することも報告されている。このことは、免疫抑制活性と神経栄養活性とを分離することの実現可能性を実証するものである。これらの化合物は、数例を挙げると、糖尿病性神経障害、筋委縮性側索硬化症、脊椎損傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、および脳卒中のような多種多様な神経変性疾患の治療に対する治療的有用性を持つことが明らかにされている。本発明で開示される化合物は、類似の生物活性プロファイルを有しており、従って、類似の有用性を有している。
【００６６】
免疫抑制活性がないその他のサイクロスポリン誘導体、例えば、SDZ NIM 811はヒト免疫不全ウイルス(HIV)の生活環を破壊する能力を示した(Mlynar et al.,「The Non-immunosuppressive Cyclosporin A Analog SDZ NIM 811 Inhibits Cyclophilin A Incorporation Into Virions and Virus Replication in Human Immunodeficiency Virus Type 1 Infected Primary and Growth-Arrested T Cells」, J. Gen. Virol., 78(4):825-835 (1997)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。サイクロフィリンAとの結合は、サイクロスポリン類によるHIV-1阻害の必要条件である。サイクロフィリンAはHIV-1 p24gagに結合することが実証されており、このサイクロフィリン-Gag相互作用により、サイクロフィリンAがHIV-1ビリオンに組み込まれる。SDZ NIM 811のような形で機能する本発明に開示の化合物はこのタンパク質相互作用を阻害し、これがその抗ウイルス活性の分子的機序となっている可能性が高い。
【００６７】
上記の生物活性の多くは、サイクロスポリンAのようなサイクロスポリン類が細胞原形質膜を通過し、サイクロフィリンおよびカルシニューリンのような細胞内のタンパク質標的と相互作用することを必要とするが、いくつかの生物活性は原形質膜中のタンパク質とのサイクロスポリンの相互作用から生ずる。サイクロスポリンAは、7回膜貫通型Gタンパク質結合受容体(7-TM-GPCR)ならびに12回膜貫通(TM)型チャネルおよび輸送体の幅広い比較的非選択的な阻害因子である。これらの輸送体のうちの1つは、多剤耐性-1 P-糖タンパク質(MDR1によりコードされるPgp)、すなわち12 TMのATP結合カセット(ABC)輸送体である。MDR1 Pgpの細胞特異的な発現は、細胞の生存に基本的に必要な機能(例えば、血液脳関門での)、毒素の排除(例えば、腸における)、および毒性代謝物の浄化(例えば、肝臓における)を維持するが、しかしMDR1 Pgpは選択的な膜リン脂質に対するフリッパーゼでもある
2006524232.tif 000053
これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)。このPgp活性は細胞による抗がん剤の蓄積も制限しており、これがある腫瘍細胞のMDR表現形の原因となっている。いくつかのサイクロスポリン誘導体は、MDR1 Pgpによる薬物輸送の非常に強力で選択的な阻害剤としてふるまうことが見出された。バルスポダール(Valspodar)([3'-ケト-MeBmt1, Val2]-CsA)として知られる、そのようなサイクロスポリン誘導体の1つは、CsAよりも強力で選択的である(Loor,「Valspodar: Current Status and Perspectives」, Exp. Opin. Invest. Drugs, B 8:807-835 (1999)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。バルスポダールのような、本発明で開示のいくつかのサイクロスポリン誘導体は、免疫抑制活性(およびCsAのその他の付随的活性)がなく、それらはMDR腫瘍細胞の化学増感に有用である。
【００６８】
本発明で開示されるその他のサイクロスポリン誘導体は、抗真菌活性および抗寄生虫活性を有する。さらに、本発明で開示されるその他の化合物は、免疫刺激活性を有する。
【００６９】
本発明で開示される化合物は、温血の哺乳動物にストレートで(neat)または薬学的担体とともに投与することができる。本発明で開示される化合物は、免疫調節障害、自己免疫疾患、HIV感染症、神経変性疾患の治療のために、移植臓器拒絶反応の阻止のために、および化学療法に抵抗性がある腫瘍細胞の化学増感のために患者に投与することができる。
【００７０】
上記の疾患の治療のために、本発明のサイクロスポリン化合物の治療的に有効な用量を、通常の無毒性の薬学的に許容される担体、補助剤、および媒体を含有する単位投与製剤として経口的に、局所的に、非経口的に、吸入スプレーにより、または経直腸的に投与することができる。本明細書では、非経口という用語は、皮下注射、静脈内の、筋肉内の、胸骨内の注射、または注入技術を含む。
【００７１】
活性成分を含有する薬学的組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、キャンディー様錠剤、水性もしくは油性懸濁剤、分散性の散剤もしくは顆粒剤、乳剤、硬質もしくは軟質カプセル剤、またはシロップ剤もしくはエリキシル剤のような、経口用に適した形態のものとすることができる。本発明の薬学的組成物は、1つまたは複数の薬学的賦形剤で製剤化した活性成分を含む。本明細書では、「薬学的賦形剤」という用語は、無毒性で不活性な固体状の、半固体状のまたは液体状の増量剤、希釈剤、カプセル化物質、または製剤のあらゆる種類の補助剤を指す。薬学的賦形剤のいくつかの例は、乳糖、ブドウ糖、およびショ糖などの糖; トウモロコシでんぷんまたはジャガイモでんぷんなどのでんぷん; カルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロースなどのセルロースおよびその誘導体; トラガント末; 麦芽; ゼラチン; タルク; カカオ脂および坐薬用ろう状物質などの賦形剤; 落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、および大豆油などの油; プロピレングリコールなどのグリコール; オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチルなどのエステル; 寒天; 水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムなどの緩衝剤; アルギン酸; 発熱物質のない水; 等張食塩水; リンゲル溶液; エチルアルコール; リン酸緩衝溶液; ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムなどの無毒性で適合性の滑沢剤; ならびに着色剤、解除剤、甘味剤、および風味香料剤である。p-ヒドロキシ安息香酸エチルまたはp-ヒドロキシ安息香酸n-プロピルなどの、保存剤および酸化防止剤を薬学的組成物に含有させることもできる。
【００７２】
本発明で開示される化合物の局所投与または経皮投与用の剤形には、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、硬膏剤、パップ剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤、またはパッチ剤が含まれる。必要に応じて、活性成分を無菌条件の下で薬学的に許容される担体および必要とされる任意の保存剤または緩衝剤と混合する。軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤およびゲル剤は、本発明の活性化合物に加えて、動物性および植物性脂肪、油、ろう状物質、パラフィン、でんぷん、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコーン、ベントナイト、ケイ酸、タルクならびに酸化亜鉛、またはその混合物などの賦形剤を含むことができる。
【００７３】
経鼻投与の場合、本発明で開示される化合物は、必要に応じて、経鼻塗布器から液状としてまたは粉末状として投与することができる。眼科用途に適した形態としては、当技術分野において知られるように、ローション剤、チンキ剤、ゲル剤、軟膏剤および眼科用挿入物を挙げることができる。直腸投与(腸の局所療法)の場合、本発明の化合物は、坐剤またはかん腸剤の形で、特に溶液中で、例えば、植物油中でまたは停留かん腸として用いる油性系中で投与することができる。
【００７４】
本発明で開示される化合物は、噴霧器の形でまたは乾燥粉末として吸入経路により肺に送達することができる。喘息ならびにその他の気道閉塞および/または慢性副鼻腔炎の疾患の治療で、吸入経路の利点は、全身経路と比べて、患者はごく少量の薬物にさらされるだけであり、化合物は作用部位に直接的に送達されるということである。
【００７５】
本発明で規定されている疾病の治療に利用される本発明の化合物の用量は、治療の部位、治療される特定の病気、病気の重症度、治療される被験者(被験者は体重、年齢、全般的健康状態、性別、およびその他の要因が異なる可能性がある)ならびに望まれる効果に応じて変化するはずである。
【００７６】
1日につき体重1キログラムあたり約0.05 mgから約50 mgに及ぶ用量は、本発明で規定されている病気または疾患の治療に有用である。このことは、本発明で開示される化合物の投与量が1日につき患者あたり2.5 mgから約2.5 gmに及ぶということを意味している。
【００７７】
単位投与剤形を作製するために薬学的担体材料と組み合わすことができる活性成分の量は、治療される宿主および特定の投与方法に応じて変化するはずである。例えば、ヒトでの経口投与を対象とした製剤は、全組成物の約5から95パーセントまで変化させられる担体材料の適当かつ好都合な量と混合した本発明の活性化合物を2.5 mgから2.5 gmまで含むことができる。単位投与剤形は一般に、本発明の活性化合物を約5 mgから約500 mgまで含むことができる。局所製剤の用量は一般に、経口製剤に必要とされる用量より少なく(10分の1から100分の1に)なるはずである。
【００７８】
新規サイクロスポリンA誘導体の合成
本発明の新規サイクロスポリン誘導体を調製するための出発物質は、サイクロスポリンA(CsA)を含めて、サイクロスポリン・ファミリーのメンバーである。サイクロスポリンのMeBmt1、デオキシ-MeBmt1、Bmt1またはデオキシ-Bmt1側鎖の選択的酸化は、ラッカーゼ・ファミリー由来の酵素を使用することで生体触媒的に達成することができる。
【００７９】
ラッカーゼ(酵素番号1.10.3.2)は、酸素分子の還元を伴って一連の還元物質の酸化を触媒できるマルチ銅酸化酵素である(Xu et al,「Redox Chemistry in Laccase-Catalyzed Oxidation of N-Hydroxy Compounds」, Applied and Environmental Microbiology, 66:2052-2056 (2000)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))。類似の酸化還元電位を有すると思われる多くの化合物は、好ましくない反応速度によってラッカーゼ基質とはならないことが明らかにされている。しかしながら、一定の条件の下では、これらの化合物は小さな、酸化還元活性なラッカーゼ基質の介在によって、ラッカーゼにより間接的に酸化されることができる。ラッカーゼ触媒反応の既知のメディエータのなかには、2,2'-アジノビス(3-エチルベンゾチアゾリン)-6-スルホン酸(ABTS)ならびに1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)、ビオルル酸(VA)およびN-ヒドロキシアセトアニリド(NHA)などのN-ヒドロキシ化合物がある。
【００８０】
トラマテス・ベルシカラー(Triametes versicolor)由来のラッカーゼはABTS、NHA、およびHOBTなどのメディエータとの組み合わせで、製紙業においてリグニン分解およびパルプ漂白のための漂白剤として使用されている。有機合成においては、ラッカーゼ介在性の酸化は、芳香族メチル基を芳香族アルデヒドに変換すること(Fritz-Langhals et al.,「Synthesis of Aromatic Aldehydes by Laccase-Mediator Assisted Oxidation」, Tetrahedron Lett., 39:5955- 5956 (1998)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))ならびにベンジルアルコールをベンズアルデヒドに変換すること(Potthast et al.,「A Novel Method for the Conversion of Benzyl Alcohols to Benzaldehydes by Laccase-Catalyzed Oxidation」, J. Mol. Cat., A 108:5-9 (1996)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる))に使用されている。
【００８１】
HOBT介在性のラッカーゼによるサイクロスポリンの酸化は、ラッカーゼ酵素の新たな用途である。サイクロスポリンAを含めて、サイクロスポリン類をHOBT介在性のラッカーゼ酸化条件で処理することで、式IIIのサイクロスポリンメチルビニルケトン(Cs-MVK)が調製される。この生体触媒的方法の正味の効果は、スキーム1に示されるように、第1位のアミノ酸側鎖の末端を「(E)-2-ブテニル」部分から末端「メチルビニルケトン」に変換することである。
スキーム1
2006524232.tif 000054
HOBT介在性のラッカーゼ酸化から予測される可能性が高い生成物は、メチルまたはメチレン部位のアリル酸化の生成物、すなわち、第1級または第2級アルコールおよびこれらから生ずるいっそう高度に酸化された生成物、すなわち、アルデヒドまたはケトンである。しかしながら、これらの予測生成物は、よく見積もっても微量な反応生成物である。HOBT介在性のラッカーゼ酸化により主生成物としてCs-MVK (式III)が形成されることは、予想外であり前例がない。この生体触媒的方法はHOBTをメディエータとして用いることで最も良く機能するが、しかし本発明はABTS、VA、NHAのようなその他の既知のメディエータ、または当技術分野において知られるその他のメディエータの使用を含むものである。同様に、本発明はその他の既知の供給源、例えば、T・ビロサ(T. villosa)、P・オストリータス(P. ostreatus)、P・ベルシコロール(P. versicolor)、またはラッカーゼが見出されているその他の既知の生物に由来するラッカーゼ酵素の使用を含むものである。
【００８２】
MeBmt1、デオキシ-MeBmt1、Bmt1、またはデオキシ-Bmt1側鎖のサイクロスポリンをCs-MVK (式IIIの化合物)に選択的に酸化することは、ラッカーゼ酵素などの生体触媒の使用を必要としない化学変換により実践することもできる。Punniyamurthy et al.,「Cobalt Catalyzed Allylic and Benzylic Oxidations with Dioxygen in the Presence of Ethyl 2-Oxocyclopentanecarboxylate」, Tetrahedron Lett., 35:4003-4006 (1994)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)はこの類の官能基変換を報告しており、その場合には、「驚くべき」結果として、触媒量のコバルト(II)Schiff塩基複合体[ビス(サリチリデン-N-(メチル-3-ヒドロキシプロピオネート))]および酸素分子により、cis-2-オクテンが2-ケト-オクタ-3-エンに変換されている。
【００８３】
本発明の1つの態様は、過ヨウ素酸アルカリ金属およびアルキルヒドロペルオキシドを用いたアリル酸化を達成するための方法に関する(Marwah et alの米国特許第5,869,709号(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)を参照されたい)。サイクロスポリンAは、スキーム2に示されるように、室温でまたは穏やかに加熱しながら過酸化t-ブチルおよび過ヨウ素酸ナトリウムのアセトンまたはメチルイソブチルケトン溶液を用いる処理に供すると、CsA MVK(IIIa)生成物の形成をもたらす。
【００８４】
上記の過ヨウ素酸塩/過酸化物の条件はサイクロスポリン出発物質がグラムまたはそれ以下の反応スケールの場合には効果的であるが、この反応がさらに大きなスケールで行われる場合には相当な量の未反応のサイクロスポリンが分離し、Cs-MVK生成物の収量はもっと低くなる。過ヨウ素酸塩/過酸化物の条件をさらに最適化することには、t-ブチルヒドロペルオキシド(50〜100当量)、過ヨウ素酸カリウム(5〜10当量)、およびクラウンエーテル(18-クラウン-6、4〜10当量)のアセトン-ベンゼン-水(1.0 : 1.0 : 1.5)溶媒混合液を室温で3日間使用することが含まれる。これらの新たな条件の下で、サイクロスポリンの酸化はマルチグラムスケールで進行し、サイクロスポリン出発物質が高収量のCs-MVK生成物にほぼ完全に変換される。
スキーム2
2006524232.tif 000055
【００８５】
本発明の他の態様は、触媒のN-ヒドロキシジカルボン酸イミド、例えば、N-ヒドロキシフタルイミド、過酸化ジベンゾイル、還流アセトンまたはイソブチルメチルケトンおよび空気を用いたアリル基の酸化条件(Foricher et alの米国特許第5,030,739号(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)を参照されたい)に関する。これらの条件は、生体触媒的方法で使用される類似のN-ヒドロキシメディエータを使用するので魅力的である。サイクロスポリンAをこれらの条件に供すると、所望の生成物CsA-MVK(IIIa)が反応混合物のプロトンNMR分析により検出されるが、しかし単離される主生成物はN-ヒドロキシフタルイミドCsA付加化合物である。この付加化合物をその反応条件に再び供することで、CsA MVKが主生成物として単離される。本発明で記述される化学的方法のいずれかにより単離されるCs-MVK生成物は、前述の特許文献で報告されている生成物に基づいては予測できないことに注意しなくてはいけない。
【００８６】
本発明のCs-MVK生成物のさらなる化学修飾をそのケトンの水素化ホウ素ナトリウム還元により行って、スキーム3に示されるサイクロスポリンアルコールA(IVa-A)およびB(IVa-B)と称される、サイクロスポリンアルコールのジアステレオマー混合物(1 : 1)を得ることができる。このサイクロスポリンアルコール(IVa-AおよびIVa-B)は、セミ分取逆相HPLC (C8カラム)により分離可能である。サイクロスポリンアルコール「異性体A」は無水酢酸、DMAPおよびピリジンのジクロロメタン溶液を用いた処理に供すると、IVa-Aのサイクロスポリンアルコールモノアセチルエステル1、サイクロスポリンアルコールモノアセチルエステル2およびサイクロスポリンアルコールアセテートの混合物をもたらす。この生成物はセミ分取逆相HPLC (C8カラム)により精製され分離される。CsAアルコール「異性体B」の選択的アシル化は、有機溶媒中でリパーゼを用いる酵素的アシル化により行われる。このリパーゼはシュードモナス・セパシア(Pseudomonas cepacia)またはシュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescens)由来とすることができ、それは天然リパーゼまたは遺伝子組換えリパーゼとすることができる。他の態様として、リパーゼは固相支持体に固定化することができる。有機溶媒の例は、メチル-tert-ブチルエーテル、トルエン、ピリジン、またはその混合液、およびN,N-ジメチルホルムアミドとの混合液である。CsAアルコール「異性体B」(IVa-B)を酪酸ビニルならびに固定化したリパーゼAHおよびAKとともにメチル-tert-ブチルエーテル中で撹拌した場合に、IVa-Bのモノ酪酸エステルが調製される。
スキーム3
Cs-MVKの還元および生体触媒による選択的アシル化
2006524232.tif 000056
【００８７】
本発明で開示されるその他のサイクロスポリン誘導体は、生体触媒的または化学的方法を反復法のなかで適用することにより調製することができる。スキーム4はCsA-MVK(IIIa)をサッカロポリスポラ・ヒルステ(Saccharopolyspora hirsute)属菌の亜種ヒルスタ(hirsuta)(微生物番号27875-ATCC)とともにインキュベートした場合に、γ-ヒドロキシ-MeLeu4 CsA-MVKが形成されることを示している(実施例12を参照されたい)。最初にサイクロスポリンAを修飾することにより、例えば、CsAをストレプトマイセス・カテニュラエ(Streptomyces catenulae)(微生物番号23893-ATCC)とインキュベーションすることでCsAを[γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsAに変換することにより生体触媒反応の順序を逆にすることも可能である(実施例13を参照されたい)。次いで、セミ分取逆相(C8)クロマトグラフィーによる単離および精製後、[γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsAをHOBT介在性のラッカーゼc酸化に供して、[γ-ヒドロキシ-MeLeu9] CsA-MVKを生成させる(実施例14を参照されたい)。
スキーム4
反復性の生体触媒反応のサイクロスポリンAへの適用
2006524232.tif 000057
【００８８】
さらに、式IIIのサイクロスポリンメチルビニルケトンを二重結合の酸化的開裂により化学的に修飾して、式Vのアルデヒドを得ることができる。この変換は式IIIのサイクロスポリンメチルビニルケトンまたは式IVのサイクロスポリンアルコールから直接的に行うことができる。スキーム5に示されるように、どちらかの化合物をオゾン分解し、続いて還元すること(亜鉛/酢酸または硫化ジメチル)により高収率でサイクロスポリンアルデヒド(Va)が得られる。
スキーム5
サイクロスポリンアルデヒドをもたらす二重結合の酸化的開裂
2006524232.tif 000058
【００８９】
式Vのサイクロスポリンアルデヒドは、本発明の新規サイクロスポリン誘導体を調製するのに有用な他の合成中間体を提供する。スキーム6に示されるように、このサイクロスポリンアルデヒドに対しホスホラスイリド化学反応、すなわちWittig反応およびWittig-Horner-Emmons反応を成功裏に行うことができる。この化学反応はアルデヒドを式VIの置換オレフィンに変換し、それによって炭素鎖を伸長し、オレフィンに結合される種々の新規置換基を導入することができる。
スキーム6
サイクロスポリンアルデヒドに対するホスホラスイリド化学反応
2006524232.tif 000059
市販されているまたは化学文献のなかで見出される以下の手順により容易に調製される多数のホスホラスイリド前駆物質が存在する。本発明で利用されるこの種類の試薬を代表するもののいくつかの例を挙げれば以下の通りである:
ヨウ化メチルトリフェニルホスホニウムイオダイド;
臭化メチルトリフェニルホスホニウム;
臭化[3-(ジメチルアミノ)プロピル]トリフェニルホスホニウム;
臭化n-プロピルトリフェニルホスホニウム;
臭化(3,3-ジメチルアリル)トリフェニルホスホニウム;
メチルジエチルホスホノアセテート;
ジエチル(シアノメチル)ホスホネート;
ジエチル(シアノメチル)ホスホネート;
臭化Trans-2-ブテニルトリフェニルホスホニウム。
上記の羅列は本発明の範囲をこれらの試薬のみの使用に限定することを意図するものではない。
【００９０】
WittigまたはWittig-Horner-Emmons反応における反応性イリド種は、通常、上記のホスホニウム塩またはホスホネートを強塩基で処理することにより生成される。本発明で使用できる塩基の例としては、水素化ナトリウムまたはナトリウムビス(トリメチルシリル)アミドが挙げられる。通常、大過剰(5〜15当量)のホスホラスイリドを使用して、式Vの化合物と反応させる。反応温度は多くの場合、-78℃から0℃の間に維持される。この反応から単離される式VIの化合物は、アルケンのcisおよびtrans異性体として存在する可能性がある。
【００９１】
式VIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000060
ならびに第1位のアミノ酸が下記式のものであるその他の化合物:
2006524232.tif 000061
2006524232.tif 000062
【００９２】
本発明の他の局面は、式Vのサイクロスポリンアルデヒドを対応するカルボン酸およびその誘導体、例えば、カルボン酸のエステルおよびアミドに変換することに関する。サイクロスポリンアルデヒド(Va)を次亜塩素酸tert-ブチルで処理し、その後、メタノールおよびピリジンを添加することで、サイクロスポリンエステルが生成される(スキーム7)。
スキーム7
2006524232.tif 000063
【００９３】
サイクロスポリンアルデヒド(Va)を水素化ホウ素ナトリウムで還元することにより、定量的な収率でサイクロスポリンジオールが得られる(スキーム8)。このジオールのさらなる化学的修飾をピリジンの存在下、種々の酸塩化物または酸無水物でその第一級アルコールを選択的にエステル化(esterfication)することにより行って、式VIIのモノエステルを得ることができる。
スキーム8
2006524232.tif 000064
【００９４】
式VIIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000065
【００９５】
本発明の他の局面は、サイクロスポリンアルデヒド(Va)からのサイクロスポリンアミンおよびアミン誘導体の調製に関する。スキーム9に示されるように、CsAアルデヒド(Va)を酢酸のメタノール溶液の存在下、酢酸アンモニウムおよびシアノボロ水素化ナトリウムで還元的にアミノ化することによりサイクロスポリンアミン(R9 = H)が生成されるが、アルデヒド(Va)をメチルアミンで処理し、続けて水素化ホウ素ナトリウムで還元することによりサイクロスポリンメチルアミン(R9 = CH3)が生成される。サイクロスポリンアミンまたはサイクロスポリンメチルアミンのさらなる修飾には、式VIIIのアミン誘導体を生成するアルキル化またはアシル化が含まれる。サイクロスポリンアミンまたはサイクロスポリンメチルアミンを臭化アルキル、塩化アルキル、またはヨウ化アルキルなどのハロゲン化アルキルの存在下で反応させることにより、アルキル化を達成することができる。あるいは、サイクロスポリンアミンまたはサイクロスポリンメチルアミンを酸無水物もしくは酸塩化物の存在下で、またはスルホン酸無水物もしくは塩化スルホニルの存在下で反応させることにより、アシル化を達成することができる。
スキーム9
2006524232.tif 000066
【００９６】
式VIIIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000067
【００９７】
本発明の他の局面は、Wittig反応またはTakai反応による新規サイクロスポリンハロゲン化ビニルの調製に関する(スキーム10)。ヨウ化メチルトリフェニルホスホニウムイオダイドおよびナトリウムビス(トリメチルシリル)アミドから生成できるホスホラスイリドとのCsAアルデヒド(Va)のWittig反応によりサイクロスポリンヨウ化ビニルのcis-異性体が得られる。サイクロスポリンヨウ化ビニルのtrans-異性体は、アルデヒド(Va)を塩化クロム(II)の存在下でヨードホルムを用いて処理することにより調製することができる。その他のサイクロスポリンハロゲン化ビニル、例えば、サイクロスポリン臭化ビニルおよび塩化ビニルは、スキーム10に概要を示した方法により調製することもできる。
スキーム10
2006524232.tif 000068
【００９８】
サイクロスポリンヨウ化ビニルに対するさらなる化学修飾には、スキーム11に示されるように、式VIの新規サイクロスポリンオレフィンを供与するための有機スズまたは有機亜鉛試薬とのパラジウム介在性のカップリングが含まれる。
スキーム11
2006524232.tif 000069
【００９９】
式VIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000070
【０１００】
本発明の他の局面は、式Vのサイクロスポリンアルデヒドを各種のグリニヤール試薬と-78℃でまたは有機亜鉛試薬と0℃で処理することにより、式IXの新規サイクロスポリンジオールを調製することに関する(スキーム12)。多くの有機亜鉛試薬が市販されており、またはそれらは対応するグリニヤール試薬と塩化亜鉛から生成することができる。
スキーム12
2006524232.tif 000071
【０１０１】
式IXの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000072
【０１０２】
本発明は同様に、サイクロスポリンAアルデヒド(Va)から調製される化合物であって、第1位のアミノ酸が下記式のアミノ酸である化合物を開示する:
2006524232.tif 000073
【０１０３】
サイクロスポリンAアルデヒド(Va)から調製される化合物のその他の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000074
【０１０４】
本発明の他の局面は、式Xの新規サイクロスポリンジエン類似体の調製に関する。スキーム13に示されるように、式IVのサイクロスポリンアルコールをベンゼン中にて60〜80℃でバルゲス試薬により脱水することで、サイクロスポリンジエン(X = OAc)を得る。炭酸カリウムのメタノール溶液を用いて処理することによりそのアセチル保護基を除去して、サイクロスポリンジエン(X = OH)を得ることができる。Grubbs触媒の存在下での各種のオレフィン種とのサイクロスポリンジエンのオレフィンメタセシスにより、式Xの置換ジエンが滞りなく得られる。オレフィンメタセシスは外側の炭素-炭素二重結合部分でのみ起り、その一方で、内部の炭素-炭素二重結合には変化がないということは興味深い。
スキーム13
2006524232.tif 000075
【０１０５】
式Xの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000076
【０１０６】
本発明の他の局面は、式XIの新規サイクロスポリンメチルケトンの調製に関する。式IIIのサイクロスポリンメチルビニルケトンを式XIのサイクロスポリンメチルケトンに変換することは、スキーム14に示されるように、炭素上のパラジウムを用いた水素化の下で行うことができる。
スキーム14
2006524232.tif 000077
【０１０７】
式XIのサイクロスポリンメチルケトンは、本発明の新規サイクロスポリン類似体に変換できる有用なその他の合成中間体である。各種のホスホラスイリド種との式XIのサイクロスポリンメチルケトンのWittig反応により式XIIの新規オレフィンが得られる(スキーム15)。式XIIのサイクロスポリンオレフィンは、スキーム15に示されるように、別の合成経路により調製することができる。式XIのサイクロスポリンメチルケトンをグリニヤール試薬または有機亜鉛試薬で処理することにより、式XIIIの新規アルコールが滞りなく得られる。式XIIIのアルコールをバルゲス試薬により脱水することで、式XIIのサイクロスポリンオレフィンを生成する。
スキーム15
2006524232.tif 000078
【０１０８】
式XIIIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000079
【０１０９】
式XIIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000080
【０１１０】
本発明は同様に、式XのサイクロスポリンAメチルケトンから調製される化合物であって、第1位のアミノ酸が下記式のアミノ酸である化合物を開示する:
2006524232.tif 000081
【０１１１】
式XのサイクロスポリンAメチルケトンから調製される化合物のその他の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000082
【０１１２】
本発明の他の局面は、式XIVのサイクロスポリンアルデヒドから式VIの新規サイクロスポリンオレフィンを調製する別法に関する。サイクロスポリンA(X = OAc)を式XIVのサイクロスポリンアルデヒド(X = OAc)に変換することは、標準的なオゾン処理条件の下で行うことができる。式XIVのアルデヒドをグリニヤール試薬と-78℃でまたは有機亜鉛試薬と0℃で処理することにより、高収率で式XVのアルコールが得られる。この反応で使用される有機亜鉛試薬は市販のものとすることができ、またはこれは対応するグリニヤール試薬および塩化亜鉛から生成することができる。式XVのアルコールをバルゲス試薬のベンゼン溶液により脱水することで、式VIのオレフィンが滞りなく得られる(スキーム16)。
スキーム16
2006524232.tif 000083
【０１１３】
式XVの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000084
【０１１４】
式VIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000085
2006524232.tif 000086
【０１１５】
スキーム17に示されるように、式VIの新規サイクロスポリンオレフィン中の炭素-炭素二重結合を炭素上のパラジウムを用いたヒドロン化により還元して、式XVIの新規サイクロスポリン類似体を得ることができる。
スキーム17
2006524232.tif 000087
【０１１６】
式XVIの化合物の例としては、以下の化合物が挙げられる:
2006524232.tif 000088
【０１１７】
実施例
以下の例は、本発明の態様を説明するために提供されるものであるが、決してその範囲を限定することを意図するものではない。
【０１１８】
実施例1- 材料および方法(実施例3〜14に対する)
試薬は商業的供給源から購入し、受け取ったままの状態で使用した。反応および単離用の溶媒は試薬のものかまたは分光学的等級のものとし、さらに処理せずに使用した。無水tert-ブチルメチルエーテルは、少なくとも12時間105℃で予め活性化しておいたモレキュラーシーブに対し乾燥状態に維持した。溶媒はWaterbath B-480を備えたBuchiRotavapor-R-114、Vapour Condenser VC3000DおよびCVP 100ポンプを備えたGeneVac HT-12 Atlas Evaporator、またはVaporTrap RVT4104を備えたSavant SpeedVac(登録商標) Plus SC210Aを用いて真空下で除去した。1Hおよび13C-NMRスペクトルはCDCl3中で、シグナルがppmで報告されTMS(δ 0.0)、またはCDCl3(δ 77.23)に内部的に参照されるBruker WM-360分光計にて収集した。遠心はBeckman J2-MC Centrifuge(遠心分離機)、Fisher Scientific Marathon 26KM CentrifugeまたはEppendorf Centrifuge 5810を用いて達成した。微生物培養液は、29℃に維持された温度調節室内部でNew Brunswick Innova 5000回転式振盪培養機に載せて振盪した。無菌的な移入および植菌技術は、Nuaire NU-425-400生物学的安全キャビネット内で行った。セミ分取逆相HPLC精製は、モデル306ポンプ、モデル215リキッドハンドラー、およびPerkin-Elmer LCオーブン101カラムヒーターを備えたGilsonシステムにて、Zorbax StableBond Rx-C8カラム、21.2×250 mm、7 μmパッキングを利用して行った。分析的HPLCはSCL-1OAシステム制御装置、SPD-M1OAダイオードアレイ検出器、SIL-10AD自動注入器、LC-10AT液体クロマトグラフ、DGU-14A溶存ガス除去装置、およびCTO-10Aカラムオーブンを備えたShimadzuシステムにて、Zorbax StableBond Rx-C8カラム、4.6×150 mm、3 μmパッキングを利用して行った。LC/MS分析はPerkin Elmerシリーズ2000 MicropumpおよびZorbax StableBond Rx-C8カラム、4.6×50 mm、3 μmパッキングを備えたPerkin-Elmer SciEx API 2000LC/MS/MSシステムを用いて、70℃で行った。
【０１１９】
実施例2- 培養増殖および維持
培養物は4℃に保存した寒天斜面培地上でまたは-85℃で10%グリセロールの懸濁液として維持した。斜面培地由来の菌糸体および/または胞子を使用して、大豆粉-グルコース増殖培地12.5 mLを含んだ125 mL DeLongフラスコに植菌した。第I期培養物を250 rpmで48〜72時間振盪した。10%植菌物を第I期培養物から大豆粉-グルコース培地12.5 mLを含んだ125 mL DeLongフラスコに移入して、第II期培養を開始した。第II期培養物をサイクロスポリン型分子の投与前に250 rpmで24時間増殖させた。凍結保存バイアル由来の培養物は、あるバイアル(予め室温まで適切に温められた)の内容物を125 mL DeLongフラスコに無菌的に移入して、第II期培養を開始することによって始めた。この増殖培地は2部として調製した。A部は脱イオン水に溶解した大豆粉(1%)、酵母抽出物(1%)、NaCl(1%)およびK2HPO4(1%)溶液で構成された。そのpHを50%HClで7に調整した。B部は脱イオン水に溶解した4%グルコース溶液で構成された。使用の前に、AおよびB部を121℃および15 psiで20分間別々に加圧滅菌し、これらを無菌環境の下でともに混合し室温まで冷却させた。
【０１２０】
実施例3- 生体触媒的方法によるサイクロスポリンAメチルビニルケトン(IIIa)の調製
撹拌棒付きの500 mL反応容器中で、サイクロスポリンA(1.0 g)および1-ヒドロキシベンゾ-トリアゾール(500 mg)をtert-ブタノール70 mLに溶解した。撹拌しながらクエン酸ナトリウム/リン酸ナトリウム緩衝液(80 mM, 250 mL, pH 5.6)を添加することで、高粘度の白色懸濁液を得た。ラッカーゼC(1.8 g, ASA Spezialenzyme)を同一緩衝液35.5 mLの溶液として添加することで、反応混合液が見かけ上わずかに黄色に変化した。この反応液を、渦巻を作り出すのに十分なほど機械的に撹拌し、雰囲気および室温に20時間さらし、その時間後、反応混合液は見かけがオレンジ色になった。ロータベーパー(rotavapor)によりtert-ブタノール部分を除去後、オレンジ色の反応混合液を前処理用VARIAN Bond-Elut(登録商標) C8固相抽出カートリッジ(60 cc、吸着剤10 g)に負荷した。水で洗浄後、サイクロスポリン関連生成物をアセトニトリルにより溶出させた。このアセトニトリル溶出液を真空濃縮し、これを風袋測定済みのシンチレーションバイアルに移しSavant乾燥機内で真空乾燥して、粗生成物913.0 mgを黄褐色の固形物として得た。この固形物を最少容量のアセトニトリルに再溶解し、これをセミ分取逆相クロマトグラフィーによる2回注入の間に以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 μmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 60% B、2-15分: 60-70% B; 15-30分: 70-80% B; 30-31分: 80-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-60% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールしてCsA-MVK 551.3 mgを得た。
2006524232.tif 000089
【０１２１】
実施例4- N-ヒドロキシフタルイミドおよび過酸化ベンゾイルを用いた化学的方法によるサイクロスポリンAメチルビニルケトン(IIIa)の調製
N-ヒドロキシフタルイミド(68 mg, 0.41 mmoles)およびCsA(500 mg, 0.41 mmoles)のイソブチルメチルケトン(5.0 mL)溶液を54℃で加熱した。この溶液を過酸化ベンゾイル(75%水溶液)(80 mg, 0.27 mmoles)で処理し、その後、15時間激しく撹拌しながら空気をその反応混合物中でバブリングさせた。CsAの消費がTLC(3%メタノールのクロロホルム溶液)による判定で完了した時点で、反応液を油状残渣にまで濃縮した。後者を四塩化炭素で希釈し、この反応混合物を40℃で1時間撹拌した。過剰なN-ヒドロキシフタルイミドをろ過し、ろ液を減圧下で濃縮乾固させた。得られた油状残渣をカラムクロマトグラフィーで2%メタノールのクロロホルム溶液により溶出し精製した。主要な分画を濃縮して白色の固形物380 mgを得た。1H NMRおよびMSから、サイクロスポリンAメチルビニルケトン-N-ヒドロキシフタルイミド付加化合物と思われる新たな生成物の存在が示唆された。この生成物の少量(100 mg)を再び同じ手順にかけた。TLCにより新たなスポットが観測され、これをカラムクロマトグラフィー(シリカゲル上での2%メタノールのクロロホルム溶液)により精製することで、生体触媒的方法により単離されたCsA-MVKにあらゆる点で適合する生成物CsA-MVK (25 mg)を得た。
【０１２２】
実施例5- tert-ブチルヒドロペルオキシドおよび過ヨウ素酸ナトリウムを用いた化学的方法によるサイクロスポリンAメチルビニルケトン(IIIa)の調製
CsA(400 mg, 0.33 mmoles)のイソブチルメチルケトン(5.0 mL)混合液にtert-ブチルヒドロペルオキシド(70%水溶液、2.5 mL)を添加した。室温で過ヨウ素酸ナトリウム(425 mg, 1.99 mmoles)を添加後、得られた混合液を50℃で72時間激しく撹拌した。この混合液をジクロロメタン(10 mL)で希釈し、その有機層を分離し、水で徹底的に洗浄し、次いでそれを亜硫酸ナトリウム水溶液(15%水溶液、30 mL)とともに2時間撹拌した。その有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮乾固した。得られた残渣をシリカゲル上で10%メタノールのジクロロメタン溶液により溶出し精製した。単離された生成物(370 mg)は、未反応のサイクロスポリンAに加えて1HNMRによる判定で所望の生成物が70%であった。
【０１２３】
実施例6- tert-ブチルヒドロペルオキシドおよび過ヨウ素酸ナトリウムを用いた化学的方法によるサイクロスポリンAメチルビニルケトン(IIIa)の調製(最適化方法)
サイクロスポリンA(5 g, 4.2 mmol)をアセトン(25 mL)、ベンゼン(25 mL)、H2O(37.5 mL)に溶解した。この反応混合液に室温でtert-ブチルヒドロペルオキシド(70%水溶液31.25 mL, 258 mmol)、過ヨウ素酸カリウム(6.5 g, 28.3 mmol)、および18-クラウン-6エーテル(4.38 g, 16.5 mmol)を添加した。得られた混合液をN2雰囲気下、室温で3時間激しく撹拌した。有機溶媒を反応混合液から減圧除去した。残存する混合液を冷水(1 L)中に注ぎ込み、これをEtOAc/ヘキサン(200 mL, 1:1)の混合液で2回抽出した。この抽出液を合わせたものを10%亜硫酸ナトリウム水溶液中で2時間撹拌した。その有機層を分離し、Na2SO4で乾燥し、濃縮して粗生成物を回収した(3.5〜4 g, 70〜80%)。アセトニトリル(0.05% TFA含有)/水(0.05% TFA含有)溶媒系を用い、この粗生成物を分取またはセミ分取HPLCにより精製した。
【０１２４】
実施例7- サイクロスポリンCメチルビニルケトンの調製
サイクロスポリンC(100 mg, 0.08 mmol)をベンゼン(0.5 mL)、アセトン(0.5 mL)、および水(0.8 mL)に溶解した。次いでこの混合液をKIO4(140 mg, 0.57 mmol)、18-クラウン-6(90 mg, 0.32 mmol)、およびtert-ブチルヒドロペルオキシド(70%水溶液, 0.7 mL)で処理した。反応液をN2雰囲気下、室温で4日間撹拌し続けた。有機溶媒を反応混合液から減圧除去した。残存する混合液を冷水(50 mL)中に注ぎ込み、これを酢酸エチルおよびヘキサン(10 mL, 1:1)の混合液で2回抽出した。この抽出液を合わせたものを亜硫酸ナトリウム溶液(10%水溶液)中で2時間撹拌した。有機層を分離し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。粗生成物をセミ分取HPLCにより精製して、CsCメチルビニルケトン(21 mg, 21%)を白色の固形物として得た:
2006524232.tif 000090
【０１２５】
実施例8- サイクロスポリンDメチルビニルケトンの調製
サイクロスポリンD(200 mg, 0.16 mmol)をベンゼン(1 mL)、アセトン(1 mL)、および水(1.6 mL)に溶解した。次いでこの混合液をKIO4(280 mg, 1.15 mmol)、18-クラウン-6(180 mg, 0.66 mmol)、およびtert-ブチルヒドロペルオキシド(70%水溶液, 1.4 mL)で処理した。反応液をN2雰囲気下、室温で2日間撹拌し続けた。有機溶媒を反応混合液から減圧除去した。残存する混合液を冷水(100 mL)中に注ぎ込み、これを酢酸エチルおよびヘキサン(20 mL, 1:1)の混合液で2回抽出した。この抽出液を合わせたものを亜硫酸ナトリウム溶液(10%水溶液)中で2時間撹拌した。有機層を分離し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。粗生成物をセミ分取HPLCにより精製して、CsDメチルビニルケトン(12 mg, 6%)を白色の固形物として得た:
2006524232.tif 000091
【０１２６】
実施例9- サイクロスポリンAアルコール異性体A(IVa-A)およびB(IVa-B)の調製
実施例3、4、5、または6で得たサイクロスポリンメチルビニルケトン(37.5 mg)の0℃のメタノール(1.0 mL)溶液を一連の10 mg部の水酸化ホウ素ナトリウムで、各部間の反応時間を考慮に入れ、TLC分析により反応の完結が示されるまで処理した。18時間後、1 N HCl(1.0 mL)を滴下し、反応混合液を酢酸エチルで抽出した。この酢酸エチル抽出液を減圧下で蒸発乾固して、白色の固形物を得た。この固形物をクロロホルムで粉砕し、これをろ過で移し、その溶媒を再び減圧除去して白色の結晶性固形物29.8 mgを得た。この固形物を最少容量のアセトニトリルに再溶解し、これをセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 μmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 55% B、2-15分: 55-62% B; 15-30分: 62-70% B; 30-31分: 70-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-60% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールして両CsAアルコール異性体をそれぞれ11.8 mg得た。
2006524232.tif 000092
【０１２７】
実施例10- IVa-Aのサイクロスポリンモノアセチルエステル1、モノアセチルエステル2、およびジアセチルエステルの調製
サイクロスポリンAアルコール異性体IVa-A (22 mg)をジクロロメタン(10 mL)に溶解した。この溶液に無水酢酸(1.5等量)、DMAP(0.1等量)およびピリジン(1.5等量)を添加した。この反応を室温で進行させ、LC/MSにより監視した。試薬の量を最終的には過剰に(17等量のAc2O、17等量のピリジンおよび4.0等量のDMAP)添加して、出発物質の消費が81%になるまで反応を推進させた。その溶媒を減圧除去した。この粗生成物をセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、7u 250×21.2 mm、7 μmパッキング; 流速20 mL/分; カラム温度70℃; 波長210 nm; 移動相A=水、B=アセトニトリル; 勾配プロファイル: 0-2分: 60-68% B、2-15分: 68-73% B; 15-30分: 73-83% B; 30-31分: 80-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-60% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともに必要に応じてプールしてCsAモノアセチルエステル14.0 mg、CsAモノアセチルエステル21.4 mgおよびジアセチルエステル7.8 mgを得た。
2006524232.tif 000093
【０１２８】
実施例11- IVa-BのサイクロスポリンAモノブチレートエステルの調製
サイクロスポリンアルコール異性体IVa-B (20 mg)および酪酸ビニル(TCI) 114 μLを無水tert-ブチルメチルエーテル9 mLに溶解した。この溶液に固定化リパーゼAHおよびAK (Amanoから得たリパーゼ; Sergeeva et al., Biotechnol. Lett., 22:1419-1422 (2000)(これはその全体が参照により本明細書に組み入れられる)に記述されている固定化手順)をそれぞれ400 mg添加した。この反応液を250 rpmで振盪させながら45℃で5日間インキュベートした。0.45 μm径のPTFEシリンジフィルタに通してろ過することで、酵素を除去した。残留固形物を無水tert-ブチルメチルエーテル約10 mLで4回洗浄した。このろ液および洗浄液をプールし、その溶媒を減圧除去して黄褐色の油状物を得た。この油状物を最少容量のアセトニトリルに溶解し、これをセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 μmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 60-68% B、2-15分: 68-73% B; 15-30分: 73-83% B; 30-31分: 80-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-60% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールしてCsAモノブチレートエステル17.6 mgを得た。
2006524232.tif 000094
【０１２９】
実施例12- [γ-ヒドロキシ-MeLeu4]CsA-MVKの調製
CsAメチルビニルケトン(実施例3、4、5、または6由来、237.2 mg)の2.8 mL DMF溶液を、それぞれがサッカロポリスポラ・ヒルステ属菌の亜種ヒルスタ(ATCC 27875)の第II期液体培養物280 mLを含有する3個の異なる2.8 L浮遊培養(Fermbach)フラスコのなかに無菌的に分配した。この3個のフラスコのそれぞれに同じく消泡液100 μLを入れた。サイクロスポリンメチルケトンをこれらの培養物中に投与後、3個のフラスコを全て250 rpmおよび29℃でオービタルシェーカーに載せておいた。4日にわたり持続的に振盪した後、3個のフラスコを全て取り出し、最終pH値を取ったところ、その値は7.75〜8.43に及んでいた。各浮遊培養フラスコの内容物を別々に、以下の方法で処理した: 細胞を7500 rpmで15分間の遠心により除去した。この沈殿した細胞を遠心管内でメタノール(2×25 mL)により抽出した。6000 rpmで5分間遠心後、上清をプールし、その溶媒を減圧除去してそれぞれ、316.0 mg (フラスコ1)、86.9 mg (フラスコ2)および153.9 mg (フラスコ3)の残渣を得た。このバルクの、水性上清を分液漏斗内で、分離困難な乳濁液を分離することが必要な場合には遠心を利用して、酢酸エチル(2×200 mL)により300 mL部分中に抽出した。この有機抽出液を合わせたものを塩水とともに振盪し、ロータベーパーにより少容量にまで減少させた。このプールを風袋測定済みのシンチレーションバイアルに移し、その溶媒を完全に減圧除去してそれぞれ、65.4 mg (フラスコ1)、108.6 mg (フラスコ2)および158.5 mg (フラスコ3)の残渣を得た。フラスコ2および3の内容物をそれぞれセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 mmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 40% B、2-15分: 40-50% B; 15-30分: 50-60% B; 30-31分: 60-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-40% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールして生成物11.2 mgを得た。
2006524232.tif 000095
【０１３０】
実施例13- [γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsAの調製
サイクロスポリンA(143.7 mg)の1.0 mL エタノール溶液を、それぞれがストレプトマイセス・カテニュラエ(ATCC-23893)の第II期液体培養物280 mLを含有する2個の異なる2.8 L浮遊培養フラスコのなかに無菌的に分配した。さらに、サイクロスポリンA(141.0 mg)の1.0 mL DMFの第二溶液を、2個の異なる2.8 L浮遊培養フラスコに入れた同一微生物のさらに2つの第II期培養物に無菌的に分配した。サイクロスポリンAをこれらの培養物中に投与後、4個のフラスコを全て250 rpmおよび29℃でオービタルシェーカーに載せておいた。7日にわたり持続的に振盪した後、4個のフラスコを全て取り出し、最終pH値を取ったところ、その値は8.32〜8.38に及んでいた。細胞を7500 rpmで10分間の遠心により除去した。この沈殿した細胞を遠心管内でメタノール(2×20 mL)により抽出した。6000 rpmで5分間遠心後、上清をプールし、その溶媒を減圧除去した。このバルクの、水性上清を分液漏斗内で、酢酸エチル(2×400 mL)により300 mL部分中に抽出した。この有機抽出液を合わせたものを塩水とともに振盪し、ロータベーパーにより少容量にまで減少させた。この少容量のプールを沈殿した細胞から得た抽出液と合わせ、これを減圧乾燥して粗生成物723.1 mgを得た。この粗生成物を最少容量のアセトニトリルに再溶解し、これをセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 μmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 50% B、2-15分: 50-75% B; 15-30分: 75-100% B; 30-36分: 100% B; 36-37分: 100-50% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールして[γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsA 22.6 mgを得た。
2006524232.tif 000096
【０１３１】
実施例14- [γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsA-MVKの調製
[γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsA (21.0 mg)を1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(23 mg)のtert-ブタノール(3.2 mL)溶液2.2 mLに溶解した。撹拌しながらクエン酸ナトリウム/リン酸ナトリウム緩衝液(80 mM, 7.83 mL, pH 5.6)を添加することで、高粘度の白色懸濁液を得た。ラッカーゼC(56.7 mg, ASA Spezialenzyme)を同一緩衝液1.11 mLの溶液として添加することで、反応混合液が見かけ上わずかに黄色に変化した。この反応液を、渦巻を作り出すのに十分なほど機械的に撹拌し、雰囲気および室温に約18時間さらし、その時間後、反応混合液は見かけがオレンジ色になった。tert-ブタノール部分を反応混合液から減圧除去した。次いで、オレンジ色の反応混合液を2部分に分割した。各部分を前処理用VARIAN Bond-Elut(登録商標) C8固相抽出カートリッジ(30 cc、吸着剤500 mg)に負荷した。水1 mLで洗浄後、サイクロスポリン関連生成物をメタノール3 mLにより溶出させた。このメタノール溶出液を真空濃縮し、これを風袋測定済みのシンチレーションバイアルに移しSavant SpeedVac内で真空乾燥して、粗生成物27.9 mgを橙褐色の固形物として得た。この固形物をセミ分取逆相クロマトグラフィーにより以下の条件の下で精製した: カラム: Zorbax StableBond Rx C8、250×21.2 mm、7 μmパッキング、流速20 mL/分、カラム温度70℃、波長210 nm、移動相A=水、B=アセトニトリル、勾配プロファイル: 0-2分: 40% B、2-15分: 40-50% B; 15-30分: 50-60% B; 30-31分: 60-100% B; 31-34分: 100% B; 34-35分: 100-40% B。生成物を含有する分画をGeneVac乾燥機中で別々に乾燥し、次いでこれらをともにプールして[γ-ヒドロキシ-MeLeu9]CsA-MVK 7.0 mgを得た。
2006524232.tif 000097
【０１３２】
実施例15- 材料および方法(実施例16〜115に対する)
特に断りのない限り、試薬および溶媒は商業的供給源から受け取ったままの状態で使用した。プロトンおよび19F核磁気共鳴スペクトルはBruker AC 300またはBruker AV 300分光計にてプロトンの場合には300 MHzでおよびフッ素の場合には282 MHzで得た、あるいはそのスペクトルはBruker AMX 500分光計にてプロトンの場合には500 MHzで得た。スペクトルはppm(δ)で示されており、カップリング定数Jはヘルツで報告されている。テトラメチルシランをプロトンスペクトルの内部標準として使用し、その溶媒のピークを炭素スペクトルの基準ピークとして使用した。質量スペクトルはPerkin Elmer Sciex 100大気圧イオン化(APCI)質量分析計、またはFinnigan LCQ Duo LCMSイオントラップ・エレクトロスプレーイオン化(ESI)質量分析計にて得た。HPLC分析結果は、Dynamax C18カラム(200×4.5 mm)またはLunaC18(2)カラム(250×4.6 mm)を使い、標準的な溶媒勾配プログラム(方法A; 表2)および65℃のオーブン温度を利用して210 nmでUVを検出して得た。セミ分取HPLCはDynamax C18カラム(60A、8 μm)またはLunaC18(2)カラム(250×21.2 mm)を使い、標準的な溶媒勾配プログラム(方法B; 表3)および70℃のオーブン温度により行った。元素分析はQuantitative Technologies社(Whitehouse, NJ)によって行われた。
【０１３３】
（表２）方法A
2006524232.tif 000098
【０１３４】
（表３）方法B
2006524232.tif 000099
【０１３５】
実施例16- CsA MVKからのサイクロスポリンAアルデヒド(Va)の調製
青い色が現れるまで、オゾンを-78℃でCsAメチルビニルケトン(300 mg、0.247 mmol)のジクロロメタン(30 mL)溶液中にバブリングさせた。この混合液を窒素で数分間脱気し、次いで硫化メチル(0.5 mL)を-78℃で添加した。この反応混合液を室温まで昇温させ、一晩撹拌した。溶媒を減圧除去し、その残渣を酢酸エチルに溶解し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮してCsAアルデヒドVa粗生成物(280 mg, 96%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000100
【０１３６】
実施例17- CsAアルコールからのサイクロスポリンAアルデヒド(Vb)の調製
青い色が現れるまで、オゾンを-78℃でCsAアルコールIVb (X = OAc, R0 = CH3, 500 mg, 0.4 mmol)のメタノール(50 mL)溶液中にバブリングさせた。この混合液を窒素で数分間脱気し、次いで亜鉛粉(52 mg, 0.8 mmol)、続けて50%の酢酸溶液(20 mL)を-78℃で添加した。この反応混合液を室温まで昇温させた。溶媒を減圧除去し、その残渣を酢酸エチルに溶解し、これを水、飽和重炭酸ナトリウムおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィー(95:5 酢酸エチル/メタノール)により精製して、CsAアルデヒドVb (X = OAc, R0 = CH3, 250 mg, 52%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000101
【０１３７】
実施例18- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒド(Va)の反応
臭化メチルトリフェニルホスホニウム(136 mg, 0.38 mmol)のTHF(2 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.38 mL, 0.38 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で2時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (X = OH, 45 mg, 0.038 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で15分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(20 mg, 44%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000102
【０１３８】
実施例19- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化エチルトリフェニルホスホニウム(189 mg, 0.51 mmol)のTHF(5 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.51 mL, 0.51 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で4時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (X = OH, 60 mg, 0.051 mmol)のTHF(3 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で1時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(18 mg, 30%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000103
【０１３９】
実施例20- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化n-プロピルトリフェニルホスホニウム(196 mg, 0.51 mmol)のTHF(5 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.51 mL, 0.51 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で4時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒド(60 mg, 0.051 mmol)のTHF(3 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で1時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(15 mg, 24%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000104
【０１４０】
実施例21- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化n-ブチルトリフェニルホスホニウム(237 mg, 0.595 mmol)のTHF(4 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.6 mL, 0.6 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で2時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (140 mg, 0.119 mmol)のTHF(1 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物(30 mg)を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(5 mg, 3%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000105
【０１４１】
実施例22- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVbの反応
水素化ナトリウム(95%, 16 mg, 0.66 mmol)のTHF(2 mL)懸濁液にメチルジエチルホスホノアセテート(0.12 mL, 0.66 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で15分間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVb (X = OAc, 80 mg, 0.066 mmol)のTHF(3 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で30分間撹拌した。この混合液を10% NaH2PO4で反応停止し、これをエーテルで抽出した。このエーテル層を合わせたものを1 N NaOHおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物(17 mg)を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAメチルエステル(10 mg, 12%)を白色の固形物: 融点150〜152℃として得た。
2006524232.tif 000106
【０１４２】
実施例23- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
水素化ナトリウム(95%, 11 mg, 0.43 mmol)のTHF(2 mL)懸濁液にメチルジエチルホスホノアセテート(0.08 mL, 0.43 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で15分間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (X = OH, 50 mg, 0.043 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。このエーテル層を合わせたものを0.5 N NaOHおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAメチルエステル(22 mg, 42%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000107
【０１４３】
実施例24- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
ジエチル(シアノメチル)ホスホネート(0.083 mL, 0.51 mmol)のTHF(2 mL)溶液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.51 mL, 0.51 mmol)を0℃で滴下し、この混合液を窒素下0℃で15分間撹拌した。CsAアルデヒドVa (X = OH, 60 mg, 0.051 mmol)のTHF(3 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で15分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを1 N NaOHおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製して標的化合物(30 mg, 49%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000108
【０１４４】
実施例25- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化[3-(ジメチルアミノ)プロピル]トリフェニルホスホニウム(330 mg, 0.77 mmol)のTHF(3 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.77 mL, 0.77 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で2時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (X = OH, 90 mg, 0.077 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で5時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAニトリル(5 mg, 5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000109
【０１４５】
実施例26- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化(3,3-ジメチルアリル)トリフェニルホスホニウム(279 mg, 0.68 mmol)のTHF(3 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.68 mL, 0.68 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で1時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (80 mg, 0.068 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してtrans-オレフィン(5 mg, 5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000110
【０１４６】
実施例27- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化(3,3-ジメチルアリル)トリフェニルホスホニウム(279 mg, 0.68 mmol)のTHF(3 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.68 mL, 0.68 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で1時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒドVa (80 mg, 0.068 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物を得、これをセミ分取HPLCにより精製してcis-オレフィン(5 mg, 5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000111
【０１４７】
実施例28- ホスホラスイリドとのCsAアルデヒドVaの反応
臭化2-ブテニルトリフェニルホスホニウム(180 mg, 0.51 mmol)のTHF(3 mL)懸濁液にナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.0 M THF溶液, 0.43 mL, 0.43 mmol)を室温で滴下した。この混合液を窒素下で1時間撹拌し、次いで0℃まで冷却した。CsAアルデヒド(Va, 100 mg, 0.085 mmol)のTHF(2 mL)溶液を滴下し、この混合液を0℃で10分間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物(26 mg)を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(5 mg, 5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000112
【０１４８】
実施例29- サイクロスポリンAメチルエステルの調製
CsAアルデヒド(Va, 0.20 g, 0.17 mmol)のCCl4(6 mL)溶液をt-BuOCl(92 mg, 0.85mmol)で処理した。得られた混合液をN2雰囲気下、室温で5分間撹拌した。この反応液にメタノール(68 μl, 1.7 mmol)およびピリジン(138 μl, 1.70 mmol)の混合液を添加し、これをさらに30分間撹拌させた。次いで、この混合液をH2O(10 mL)に注ぎ込み、これをエーテルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製して標的化合物(30 mg, 15%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000113
【０１４９】
実施例30- サイクロスポリンAジオールの調製
CsAアルデヒド(Va, 200 mg, 0.170 mmol)のメタノール(2 mL)の氷冷溶液に水素化ホウ素ナトリウム(64 mg, 1.7 mmol)を添加した。この混合液をN2雰囲気下、0℃で1時間撹拌し、飽和塩化アンモニウムで反応停止し、これを酢酸エチル(2×50 mL)で抽出した。この有機層を合わせたものを硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮してそのアルコール(190 mg, 95%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000114
【０１５０】
実施例31- サイクロスポリンAモノエステルの調製
実施例30で得たCsAジオール(0.10 g, 0.85 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を0℃まで冷却した。この溶液を塩化アクリロイル(76 mg, 0.84 mmol)、ピリジン(90 μl, 1.1 mmol)およびDMAP (5 mg)で処理した。この反応液をN2雰囲気下で撹拌し、一晩のうちに室温までゆっくりと昇温させた。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止し、これをジクロロメタンで抽出した。この有機層を合わせたものを10% NaH2PO4溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAモノエステル(5.2 mg, 15%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000115
【０１５１】
実施例32- サイクロスポリンAモノエステルの調製
実施例30で得たCsAジオール(0.10 g, 0.85 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を0℃まで冷却した。この溶液をtrans-塩化クロトノイル(29 mg, 0.28 mmol)、ピリジン(34 μl, 0.42 mmol)およびDMAP (5 mg)で処理した。この反応液をN2雰囲気下で撹拌し、一晩のうちに室温までゆっくりと昇温させた。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止し、これをジクロロメタンで抽出した。この有機層を合わせたものを10% NaH2PO4溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAモノエステル(3.8 mg, 11%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000116
【０１５２】
実施例33- サイクロスポリンAモノエステルの調製
実施例30で得たCsAジオール(45 mg, 0.038 mmol)のジクロロメタン(1 mL)溶液を0℃まで冷却した。この溶液を塩化ベンゾイル(5.0 mg, 0.03 mmol)およびピリジン(10 μl, 0.14 mmol)で処理した。この反応液をN2雰囲気下で撹拌し、一晩のうちに室温までゆっくりと昇温させた。反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止し、これをジクロロメタンで抽出し、それを10% NaH2PO4溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAモノエステル(4.2 mg, 6%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000117
【０１５３】
実施例34- サイクロスポリンAアミンの調製
CsAアルデヒド(Va, 200 mg, 0.17 mmol)、酢酸アンモニウム(131 mg, 1.70 mmol)、水素化シアノホウ素ナトリウム(21 mg, 0.34 mmol)、および酢酸(48 μl)のメタノール(3 mL)混合液をN2雰囲気下、室温で24時間撹拌した。この混合液をエーテルで希釈し、次いでこれを1 N HClで抽出した。この水層を飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミン(19 mg, 9.5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000118
【０１５４】
実施例35- サイクロスポリンAメチルアミンの調製
CsAアルデヒド(Va, 0.20 g, 0.17 mmol)のCH3OH(3 mL)溶液をメチルアミン(0.4 mL, 2M THF溶液, 0.8 mmol)で処理し、これを室温で30分間撹拌させた。次いでこの反応液を0℃まで冷却し、NaBH4(16 mg, 0.85 mmol)で処理した。この混合液をN2雰囲気下でさらに2時間撹拌した。この混合液をH2Oで反応停止し、これをエーテルで希釈した。この粗生成物を1 N HClで抽出し、次いでこれを飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和した。次いで、この粗生成物を酢酸エチルで抽出し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAメチルアミン(6.3 mg, 3%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000119
【０１５５】
実施例36- サイクロスポリンベンジルアミンの調製
実施例34で得たCsAアミン(50 mg, 0.042 mmol)、ベンズアルデヒド(9 mg, 0.84 mmol)、水素化シアノホウ素ナトリウム(13 mg, 0.21 mmol)、および酢酸(100 μl)のメタノール(1.5 mL)溶液をN2雰囲気下、室温で一晩撹拌させた。この反応液を飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミン(8.4 mg, 15.6%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000120
【０１５６】
実施例37- サイクロスポリンアミドの調製
実施例34で得たCsAアミン(65 mg, 0.055 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を塩化ベンゾイル(38 mg, 0.28 mmol)およびピリジン(45 μl, 0.55 mmol)で処理した。この反応混合液をN2雰囲気下、室温で一晩撹拌させた。この混合液を酢酸エチルで希釈し、これを1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミド(18.6 mg, 26%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000121
【０１５７】
実施例38- サイクロスポリンスルホンアミドの調製
実施例34で得たCsAアミン(65 mg, 0.055 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を塩化ベンゼンスルホニル(49 mg, 0.28 mmol)およびピリジン(45 μl, 0.55 mmol)で処理した。この反応混合液をN2雰囲気下、室温で一晩撹拌させた。この混合液を酢酸エチルで希釈し、これを1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミド(12.4 mg, 17%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000122
【０１５８】
実施例39- サイクロスポリンアミンの調製
実施例35で得たCsAメチルアミン(50 mg, 0.042 mmol)のジクロロメタン(1.5 mL)溶液を塩化クロチル(38 mg, 0.42 mmol)で処理し、これをN2雰囲気下、室温で24時間撹拌させた。この反応液を水で反応停止し、これをエーテルで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミン(5.4 mg, 10%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000123
【０１５９】
実施例40- サイクロスポリンアミンの調製
実施例35で得たCsAメチルアミン(50 mg, 0.042 mmol)のジクロロメタン(1.5 mL)溶液を臭化ベンジル(72 mg, 0.42 mmol)で処理し、これをN2雰囲気下、室温で24時間撹拌させた。この反応液を水で反応停止し、これをエーテルで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミン(3.5 mg, 7%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000124
【０１６０】
実施例41- サイクロスポリンアミドの調製
実施例35で得たCsAメチルアミン(75 mg, 0.063 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を塩化ベンゾイル(45 mg, 0.32 mmol)およびピリジン(51 μl, 0.63 mmol)で処理した。この反応混合液をN2雰囲気下、室温で24時間撹拌させた。この混合液を酢酸エチルで希釈し、これを1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアミン(9.6 mg, 11%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000125
【０１６１】
実施例42- サイクロスポリンスルホンアミドの調製
実施例35で得たCsAメチルアミン(70 mg, 0.059 mmol)のジクロロメタン(2 mL)溶液を塩化ベンゼンスルホニル(53 mg, 0.30 mmol)およびピリジン(48 μl, 0.59 mmol)で処理した。この反応混合液をN2雰囲気下、室温で24時間撹拌させた。トリエチルアミン(82 μl, 0.30 mmol)を添加し、これをさらなる時間撹拌して、反応を完全に推し進めた。この混合液を酢酸エチルで希釈し、これを1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAスルホンアミド(6.6 mg, 8.5%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000126
【０１６２】
実施例43- サイクロスポリンヨウ化ビニル(cis-異性体)の調製
窒素下で激しく撹拌されているヨウ化メチルトリフェニルホスホニウムイオダイド(612 mg, 1.1 mmol)の無水THF(8 mL)懸濁液に、ナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.1 mL, 1 M THF溶液, 1.1 mmol)を滴下した。室温で10分の後、この混合液を0℃まで冷却し、CsAアルデヒド(Va, 136 mg, 0.11 mmol)の無水THF(5 mL)溶液を滴下した。-78℃で15分の後、この反応液を室温まで昇温させた。5分後、飽和塩化アンモニウム溶液(5 mL)を添加した。その残渣を酢酸エチル(3×200 mL)で抽出し、この有機抽出液を合わせたものを珪藻土の栓(plug of diatomaceous earth)に通してろ過し、これを亜硫酸水素ナトリウム水溶液(20%, 200 mL)で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物(145 mg)を得た。この物質を分取薄層クロマトグラフィー(シリカゲル, 1:1アセトン/ヘキサン)、続いてセミ分取HPLCにより精製してcis-ヨウ化ビニル(7.1 mg, 5%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000127
【０１６３】
実施例44- サイクロスポリンヨウ化ビニル(trans-異性体)の調製
塩化クロム(314 mg, 2.55 mmol)のTHF(5 mL)懸濁液に撹拌および窒素下で、ヨードホルム(334 mg, 0.85 mmol)およびCsAアルデヒド(Va, 100 mg, 0.085 mmol)の0℃のTHF(10 mL)溶液を添加した。0℃で1時間の後、この反応液を氷水中に注ぎ込み、これを酢酸エチル(2×200 mL)で抽出した。この有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。この粗物質を分取薄層クロマトグラフィー(SiO2, 1:1ヘキサン/アセトン)、続いてセミ分取HPLCにより精製してtrans-ヨウ化ビニル(3.5 mg, 3%)を淡黄色の油状物として得た。
2006524232.tif 000128
【０１６４】
実施例45- サイクロスポリンピリミジンの調製
実施例44で得たtrans-ヨウ化ビニル(48 mg, 0.036 mmol)のトルエン(10 mL)溶液に窒素下で、5-ピリミジルトリメチルスタンナン(180 mg, 0.73 mmol)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(6 mg, 5.5 μmol)を添加した。80℃で15時間の後、この混合液を室温まで冷却し、溶媒を減圧下で除去した。この粗物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAピリミジン(6.8 mg, 15%)を淡黄色の油状物として得た。
2006524232.tif 000129
【０１６５】
実施例46- サイクロスポリンチアゾールの調製
実施例44で得たtrans-ヨウ化ビニル(41 mg, 0.031 mmol)のTHF(2 mL)溶液に撹拌および窒素下で、臭化2-チアゾリル亜鉛(2-thiazolylzinc bromide) (0.31 mL, 1 M THF溶液, 0.31 mmol)およびジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II) (3 mg, 0.047 mmol)を添加した。室温で4時間の後、この溶媒を減圧下で除去した。この粗物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAチアゾール(12 mg, 30%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000130
【０１６６】
実施例47- サイクロスポリンチオフェンの調製
実施例44で得たtrans-ヨウ化ビニル(38 mg, 0.029 mmol)のTHF(2 mL)溶液に撹拌および窒素下で、臭化2-チオフェニル亜鉛(2-thiophenylzinc bromide) (0.58 mL, 0.5 M THF溶液, 0.58 mmol)およびジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II) (20 mg, 0.028 mmol)を添加した。室温で18時間の後、この溶媒を減圧下で除去した。この粗物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAチオフェン(3.9 mg, 10%)を帯黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000131
【０１６７】
実施例48- サイクロスポリンジオールの調製
臭化フェニルマグネシウム(1.0 Mエーテル溶液, 1.29 mL, 1.29 mmol)のTHF(4 mL)溶液に、0℃で塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 1.29 mL, 1.29 mmol)を添加した。この混合液を窒素下、0℃で30分間撹拌し、CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)を添加した。この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、4時間撹拌し、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジオール(7 mg, 13%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000132
【０１６８】
実施例49- サイクロスポリンジオールの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 0.85 mL, 0.85 mmol)のTHF(4 mL)溶液に、0℃で塩化ベンジルマグネシウム(1.0 Mエーテル溶液, 0.85 mL, 0.85 mmol)を添加した。この混合液を窒素下、0℃で30分間撹拌し、CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)を添加した。この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これをエーテルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジオール(5 mg, 10%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000133
【０１６９】
実施例50- サイクロスポリンオキシムの調製
CsAアルデヒド(Va, 460 mg, 0.39 mmol)のピリジン(2 mL)溶液をヒドロキシルアミン塩酸塩(27 mg, 0.39 mmol)で処理した。この反応混合液をN2雰囲気下、室温で1.5時間撹拌させた。次いで、この混合液をエーテルで希釈し、1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮して粗生成物516 mgを得た。粗生成物50 mgをセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(6.3 mg, 12.6%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000134
【０１７０】
実施例51- サイクロスポリンオキシムの調製
CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)、O-メチルヒドロキシアミン塩酸塩(3.6 mg, 0.043 mmol)およびピリジン(0.5 mL)の混合液を室温で1時間撹拌し、次いでこれをエーテルで希釈し、0.5 N HCl、飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣を分取薄層クロマトグラフィー(1:1 ヘキサン/アセトン)により前精製して粗生成物(15 mg)を得、これをセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(10 mg, 20%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000135
【０１７１】
実施例52- サイクロスポリンオキシムの調製
CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)、O-エチルヒドロキシアミン塩酸塩(4.2 mg, 0.043 mmol)およびピリジン(0.5 mL)の混合液を室温で1時間撹拌し、次いでこれをエーテルで希釈し、0.5 N HCl、飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(16 mg, 31%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000136
【０１７２】
実施例53- サイクロスポリンオキシムの調製
CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)、O-アリルヒドロキシアミン塩酸塩(4.7 mg, 0.043 mmol)およびピリジン(0.5 mL)の混合液を室温で1時間撹拌し、次いでこれをエーテルで希釈し、0.5 N HCl、飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(14 mg, 27%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000137
【０１７３】
実施例54- サイクロスポリンオキシムの調製
CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)、O-ベンジルヒドロキシアミン塩酸塩(6.9 mg, 0.043 mmol)およびピリジン(0.5 mL)の混合液を室温で1時間撹拌し、次いでこれをエーテルで希釈し、0.5 N HCl、飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(13 mg, 24%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000138
【０１７４】
実施例55- サイクロスポリンヒドラゾンの調製
CsAアルデヒド(Va, 50 mg, 0.043 mmol)、p-トルエンスルホンヒドラジド(7.9 mg, 0.043 mmol)およびエタノール(1 mL)の混合液を60℃で30分間撹拌し、その後、室温まで冷却した。溶媒を減圧除去し、粗生成物を分取薄層クロマトグラフィー(4:1 酢酸エチル/アセトン)により精製してCsAヒドラゾン(10 mg, 18%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000139
【０１７５】
実施例56- サイクロスポリンジエン(X = OAc)の調製
CsAアルコールIVb (X = OAc, 180 mg)のベンゼン(10 mL)溶液をN2下、バルゲス(Burgess)試薬(50 mg, 0.21 mmol)で24時間還流処理し、次いでこれを室温まで冷却し、H2O 4 mLで反応停止し、分離した。この水層をEtOAc(3×10 mL)で抽出し、その有機層を合わせたものをNa2SO4で乾燥し、濃縮乾固した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OAc, 25 mg, 14%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000140
【０１７６】
実施例57- サイクロスポリンジエン(X = OH)の調製
実施例56で得たCsAジエン(X= OAc, 28 mg, 0.022 mmol)をメタノール2 mLに溶解し、次いでK2CO3 (155 mg, 1.127 mmol)を添加した。この混合液を室温で5時間撹拌し、酢酸エチル50 mLで希釈し、水(10 mL)、塩水(10 mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を減圧除去し、粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OH, 9.0 mg, 33%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000141
【０１７７】
実施例58- サイクロスポリンジエン(X = OH)の調製
実施例57で得たサイクロスポリンジエン(X = OH, 11 mg, 0.009 mmol)をCH2Cl2 2 mLに溶解し、次いで酢酸メチル(8 mg, 0.09 mmol)および第3世代のGrubbs触媒(3 mg, 0.0045 mmol)を添加した。この混合液を1.5時間還流し、次いでその溶媒を減圧除去した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OH, 3.4 mg, 29%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000142
【０１７８】
実施例59- サイクロスポリンジエン(X = OH)の調製
実施例57で得たサイクロスポリンジエン(X = OH, 11 mg, 0.009 mmol)をCH2Cl2 3 mLに溶解し、次いでスチレン(10 mg, 0.09 mmol)および第2世代のGrubbs触媒(17 mg, 0.02 mmol)を添加した。この混合液を8時間還流した。その後、その溶媒を減圧除去し、残渣をセミ分取HPLCにより精製してALB 16085 (11 mg, 99%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000143
【０１７９】
実施例60- サイクロスポリンジエン(X = OH)の調製
実施例57で得たCsAジエン(X = OH, 50 mg, 0.042 mmol)をCH2Cl2 4 mLに溶解し、次いでビニルサイクロペンタン(40 mg, 0.42 mmol)および第2世代のGrubbs触媒(18 mg, 0.021 mmol)を添加した。この混合液を一晩還流した。その後、その溶媒を減圧除去し、残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(10 mg, 18%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000144
【０１８０】
実施例61- サイクロスポリンジエン(X = OH)の調製
25 mL丸底フラスコに、実施例57で得たCsAジエン(X = OH, 40 mg, 0.033 mmol)、CH2Cl2(4 mL)、3,3,3-トリフルオロプロペン(100 mg, 1.04 mmol)、および第3世代のGrubbs触媒(5 mg, 0.008 mmol)を満たした。この混合液を3,3,3-トリフルオロプロペンの雰囲気下、40℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、溶媒を減圧除去した。この残渣をカラムクロマトグラフィー(シリカゲル, 6:1 EtOAc/CH3CN)により前精製して淡褐色の固形物40 mgを得た。得られた固形物をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(8 mg, 19%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000145
【０１８１】
実施例62- サイクロスポリンジエン(X = OAc)の調製
25 mL丸底フラスコに、実施例56で得たCsAジエン(X = OAc, 22 mg, 0.018 mmol)、CH2Cl2(2 mL)、1-ヘキセン(15 mg, 0.178 mmol)、およびトリシクロヘキシルホスフィン[1,3-ビス(2,4,6-トリメチルフェニル)-4,5-ジヒドロイミダゾール-2-イル-エン][ベンジリジン]ルテニウム(IV)ジクロライド(6.8 mg, 0.008 mmol)を満たした。この混合液を24時間還流した。室温まで冷却した後、溶媒を減圧除去した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OAc, 10 mg, 43.5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000146
【０１８２】
実施例63- サイクロスポリンジエン(X = OAc)の調製
実施例62で得たCsAジエン(X = OAc, 5 mg, 0.0038 mmol)をメタノール2 mLに溶解し、次いでK2CO3 (5 mg, 0.038 mmol)を添加した。この混合液を室温で63時間撹拌し、溶媒を減圧除去し、その残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OH, 3.0 mg, 62%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000147
【０１８３】
実施例64- サイクロスポリンメチルケトンXIbの調製
10% Pd/C (70 mg)のメタノール(10 mL)懸濁液に、CsAメチルビニルケトンIIIb (X = OAc, 740 mg, 0.58 mmol)のメタノール(10 mL)溶液を添加した。この混合液を30 psiの水素下で2時間振盪した。この溶液を0.2 μmシリンジパックに通してろ過し、次いでこれを濃縮乾固してCsAメチルケトンXIb(X = OAc, 680 mg, 92%)を帯黄色の油状物として得た。これは次のステップに持ち込むのに十分に純粋であった。
2006524232.tif 000148
【０１８４】
実施例65- サイクロスポリン第3アルコールの調製
臭化アリルマグネシウム(2.3 mL, 1 Mジエチルエーテル溶液, 2.3 mmol)の無水THF(4 mL)溶液に撹拌および窒素下で、塩化亜鉛(2.3 mL, 1 M THF溶液, 2.3 mmol)を滴下した。この混合物を室温で10分間撹拌した後、実施例64で得たCsAメチルケトン(100 mg, 0.079 mmol)のTHF(4 mL)溶液を滴下した。24時間後、この反応液を水の滴下により反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を水で洗浄し、分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮した。この粗物質をセミ分取HPLCにより精製してCsA第3アルコール(X = OAc, 23 mg, 22%)を無色の油状物として得た。
【０１８５】
アセトン(23 mg, 0.01 mmol)のメタノール(4 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(30 mg, 0.2 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(50 mL)および水(30 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsA第3アルコール(X = OH, 7.9 mg, 35%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000149
【０１８６】
実施例66- サイクロスポリン第3アルコールの調製
臭化ベンジルマグネシウム(5.2 mL, 1 Mジエチルエーテル溶液, 5.2 mmol)のTHF(25 mL)溶液に撹拌および窒素下、-78℃で、実施例64で得たCsAメチルケトン(550 mg, 0.43 mmol)のTHF(10 mL)溶液を滴下した。さらに2部の臭化ベンジルマグネシウム(各0.8 mL)をそれぞれ2および3時間後に添加した。全体として5時間の後、この反応液を塩化アンモニウム飽和水溶液の滴下により反応停止した。この反応液を酢酸エチル(100 mL)で抽出し、水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsA第3アルコール(X = OAc, 133 mg, 22%)を淡黄色の油状物として得た: ESI MS m/z 1353 [C71H121N11O14+H]+。
【０１８７】
実施例67- サイクロスポリンオレフィンの調製
臭化メチルトリフェニルホスホニウム(600 mg, 1.68 mmol)の無水THF(4 mL)撹拌懸濁液に窒素下で、ナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.68 mL, 1 M THF溶液, 1.68 mmol)を添加した。室温で1時間の後、この混合液を0℃まで冷却し、実施例64で得たCsAメチルケトン(X = OAc, 212 mg, 0.16 mmol)の無水THF (4 mL)溶液を滴下した。0℃で1時間の後、塩化アンモニウム飽和溶液(5 mL)、次いで水を添加した。その残渣を酢酸エチル(3×200 mL)で抽出し、この有機抽出液を合わせたものを無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 27 mg, 12%)を無色の油状物として得た。
【０１８８】
CsAオレフィン(X = OAc, 24 mg, 0.02 mmol)のメタノール(3 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(30 mg, 0.2 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(50 mL)および水(30 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 8.1 mg, 35%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000150
【０１８９】
実施例68- サイクロスポリンオレフィンの調製
臭化エチルトリフェニルホスホニウム(633 mg, 1.7 mmol)の無水THF(5 mL)撹拌懸濁液に窒素下で、ナトリウムビス(トリメチルシリル)アミド(1.7 mL, 1 M THF溶液, 1.7 mmol)を添加した。室温で15分の後、この混合液を0℃まで冷却し、実施例64で得たCsAメチルケトン(215 mg, 0.17 mmol)の無水THF (4 mL)溶液を滴下した。0℃で24時間の後、塩化アンモニウム飽和溶液(5 mL)、次いで水を添加した。その残渣を酢酸エチル(3×200 mL)で抽出し、この有機抽出液を合わせたものを無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 12 mg, 5%)を無色の油状物として得た。
【０１９０】
その酢酸塩(12 mg, 9.6 μmol)のメタノール(2 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(12 mg, 96 μmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(50 mL)および水(30 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 2.5 mg, 21%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000151
【０１９１】
実施例69- サイクロスポリンジエンの調製
実施例65で得たCsA第3アルコール(X = OAc, 65 mg, 0.05 mmol)のベンゼン(7 mL)溶液に撹拌および窒素下で、バルゲス試薬(60 mg, 0.25 mmol)を添加した。この混合液を60℃で2時間撹拌した。冷却した後、この反応液を酢酸エチル(100 mL)で抽出し、これを水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OAc, 28 mg, 44%)を帯黄色の油状物として得た。
【０１９２】
その酢酸塩(28 mg, 0.02 mmol)のメタノール(4 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(35 mg, 0.2 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(50 mL)および水(10 mL)を添加した。その有機層を水で洗浄し、分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより3回精製してCsAジエン(2.2 mg, 8%)をcisおよびtrans異性体の混合物(無色の油状物)として得た。
2006524232.tif 000152
【０１９３】
実施例70- サイクロスポリンオレフィンの調製
実施例66で得たCsA第3アルコール(X = OAc, 133 mg, 0.09 mmol)のベンゼン(15 mL)溶液に撹拌および窒素下で、バルゲス試薬(117 mg, 0.49 mmol)を添加した。この混合液を60℃で1.5時間撹拌した。冷却した後、この反応液を酢酸エチル(100 mL)で希釈し、これを水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮してCsAオレフィン(X = OAc, 67 mg, 51%)を得た。これはさらに精製しなくても持ち込むのに十分に純粋であった: ESI MS m/z 1353 [C71H121N11O14+H]+。
【０１９４】
CsAオレフィン(X = OAc, 67 mg, 0.05 mmol)のメタノール(8 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(67 mg, 0.48 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(100 mL)および水(50 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(31 mg, 47%)をcisおよびtrans異性体の混合物(無色の油状物)として得た。
2006524232.tif 000153
【０１９５】
実施例71- サイクロスポリンオキシムの調製
実施例64で得たCsAメチルケトン(100 mg, 0.079 mmol)のピリジン(1 mL)撹拌溶液に、メトキシルアミン塩酸塩(8.0 mg, 0.079 mmol)を添加した。室温で1時間の後、この混合液をジエチルエーテルで希釈し、これを1 N塩酸水溶液、その後、水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(X = OAc, 19 mg, 18%)を帯黄色の油状物として得た: ESI MS m/z 1290 [C65H116N11O14+H]+。
【０１９６】
CsAオキシム(X = OAc, 19 mg, 0.014 mmol)のメタノール(2 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(20 mg, 0.14 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(100 mL)および水(50 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(X = OH, 4.2 mg, 23%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000154
【０１９７】
実施例72- サイクロスポリンオキシムの調製
実施例64で得たCsAメチルケトン(100 mg, 0.079 mmol)のピリジン(1 mL)撹拌溶液に、O-アリルヒドロキシルアミン塩酸塩・水和物(8.6 mg, 0.079 mmol)を添加した。室温で2時間の後、この混合液をジエチルエーテルで希釈し、これを1 N塩酸水溶液、その後、水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(X = OAc, 19 mg, 18%)を帯黄色の油状物として得た: ESI MS m/z 1316 [C67H118N12O14+H]+。
【０１９８】
CsAオキシム(X = OAc, 19 mg, 0.014 mmol)のメタノール(4 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(18 mg, 0.13 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(100 mL)および水(50 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsA(X = OH, 9.7 mg, 53%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000155
【０１９９】
実施例73- サイクロスポリンオキシムの調製
実施例64で得たCsAメチルケトン(100 mg, 0.079 mmol)のピリジン(1 mL)撹拌溶液に、O-ベンジルヒドロキシルアミン塩酸塩(13 mg, 0.079 mmol)を添加した。室温で2時間の後、この混合液をジエチルエーテルで希釈し、これを1 N塩酸水溶液、その後、水で洗浄した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(X = OAc, 35 mg, 32%)を帯黄色の油状物として得た: ESI MS m/z 1366 [C71H120N12O14+H]+。
【０２００】
CsAオキシム(X = OAc, 35 mg, 0.025 mmol)のメタノール(4 mL)撹拌溶液に、室温で炭酸カリウム(40 mg, 0.28 mmol)を添加した。18時間後、酢酸エチル(100 mL)および水(50 mL)を添加した。その有機層を分離し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で濃縮して粗生成物を得た。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAオキシム(X = OH, 18 mg, 53%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000156
【０２０１】
実施例74- サイクロスポリンAのアセチル化
サイクロスポリンA(5.0 g, 4.16 mmol)、無水酢酸(7.80 mL, 83.2 mmol)、およびDMAP(760 mg, 6.2 mmol)のジクロロメタン(40 mL)溶液をN2雰囲気下、室温で一晩撹拌した。この溶液に飽和重炭酸ナトリウム溶液(200 mL)を添加し、これをさらに2時間撹拌した。この混合液をエーテルで抽出し、これを1 N HClで洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で中和し、これを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮してCsA酢酸塩(4.92 g, 95%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000157
【０２０２】
実施例75- サイクロスポリンAアルデヒド(式XIV)の調製
青い色が現れるまで、オゾンを-78℃にて、実施例74で得たCsA酢酸塩(3.0 g, 2.4 mmol)のジクロロメタン(70 mL)溶液中にバブリングさせた。この混合液を窒素で数分間脱気し、硫化ジメチル(3 mL)を-78℃で添加した。この反応混合液を室温まで昇温させ、3時間撹拌した。反応混合液を真空濃縮し、その残渣を酢酸エチル(300 mL)に溶解し、これを水(2×70 mL)および塩水(70 mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮してCsAアルデヒドXIV(2.79 g, 94%)を白色の固形物として得た。この粗生成物をさらには精製せず、次のステップに持ち込んだ。
2006524232.tif 000158
【０２０３】
実施例76- 式XIVのアルデヒドからのCsAアルコールの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 6.5 mL, 6.5 mmol)を0℃の臭化エチニルマグネシウム溶液(0.5 M THF溶液, 13 mL, 6.5 mmol)に滴下し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 400 mg, 0.325 mmol)のTHF(5 mL)溶液を添加し、この混合液を1時間室温までゆっくりと昇温させ、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮してCsAアルコール(X = OAc, 390mg, 95%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000159
【０２０４】
実施例77- 式XIVのアルデヒドからのCsAアルコールの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 4.8 mL, 4.8 mmol)を0℃の臭化プロピニルマグネシウム溶液(0.5 Mエーテル溶液, 9.6 mL, 4.8 mmol)に添加し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.24 mmol)のTHF(4 mL)溶液を添加し、この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮してCsAアルコール(290mg, 94%)を白色の固形物として得た。この粗生成物の一部(40 mg)をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OAc, 20 mg, 50%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000160
【０２０５】
実施例78- 式XVのCsAアルコールの調製
実施例77で得たCsAアルコール(X = OAc, 20 mg, 0.016 mmol)、炭酸カリウム(100 mg, 0.724 mmol)およびメタノール(2 mL)の混合液を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OH, 8 mg, 42%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000161
【０２０６】
実施例79- 式XIVのアルデヒドからのCsAアルコールの調製
臭化エチルマグネシウム(1.0 Mエーテル溶液, 2.43 mL, 2.43 mmol)を0℃の2-メチル-1-ブテン-3-イン(0.23 mL, 2.43 mmol)のTHF(5 mL)溶液に添加し、この混合液を窒素下、0℃で1時間撹拌した。塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 2.43 mL, 2.43 mmol)を添加し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.24 mmol)のTHF(4 mL)溶液を添加し、この混合液を室温まで昇温させ、一晩撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OAc, 145 mg, 46%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000162
【０２０７】
実施例80- 式XVのCsAアルコールの調製
実施例79で得たCsAアルコール(X = OAc, 20 mg, 0.016 mmol)、炭酸カリウム(100 mg, 0.724 mmol)およびメタノール(2 mL)の混合液を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OH, 8 mg, 42%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000163
【０２０８】
実施例81- 式XIVのアルデヒドからのCsAアルコールの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 6.5 mL, 6.5 mmol)を0℃の臭化フェニルエチニルマグネシウム溶液(1.0 M THF溶液, 6.5 mL, 6.5 mmol)に滴下し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 400 mg, 0.325 mmol)のTHF(10 mL)溶液を添加し、この混合液を1時間室温までゆっくりと昇温させ、飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗生成物(400 mg, 94%)を白色の固形物として得た。この粗生成物の一部(100 mg)をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OAc, 27 mg, 29%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000164
【０２０９】
実施例82- 式XVのCsAアルコールの調製
実施例81で得たCsAアルコール(X = OAc, 27 mg, 0.02 mmol)、炭酸カリウム(100 mg, 0.724 mmol)およびメタノール(2 mL)の混合液を室温で15時間撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(11 mg, 42%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000165
【０２１０】
実施例83- 式XIVのアルデヒドからのCsAアルコールの調製
臭化エチルマグネシウム(1.0 Mエーテル溶液, 2.43 mL, 2.43 mmol)を0℃の3-エチニルチオフェン(0.3 mL, 2.43 mmol)のTHF(5 mL)溶液に添加し、この混合液を窒素下、0℃で1時間撹拌した。塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 2.43 mL, 2.43 mmol)を添加し、この混合液を0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.24 mmol)のTHF(4 mL)溶液を添加し、この混合液を室温まで昇温させ、一晩撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OAc, 168 mg, 52%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000166
【０２１１】
実施例84- 式XVのCsAアルコールの調製
実施例83で得たCsAアルコール(X = OAc, 20 mg, 0.015 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で5時間撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルコール(X = OH, 13 mg, 67%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000167
【０２１２】
実施例85- CsAオレフィンの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 9.7 mL, 9.7 mmol)を0℃の臭化フェニルマグネシウム溶液(1.0 M THF溶液, 9.7 mL, 9.7 mmol)に添加し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 400 mg, 0.325 mmol)のTHF(5 mL)溶液を添加し、この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、4時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗アルコールを白色の固形物として得た: ESI MS m/z 1311 [C68H115N11O14+H]+。
【０２１３】
この粗アルコール、バルゲス試薬(218 mg, 0.916 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を5時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 70 mg, 18%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000168
【０２１４】
実施例86- CsAオレフィンの調製
実施例85で得たCsAオレフィン(X = OAc, 70 mg, 0.054 mmol)、炭酸カリウム(200 mg, 1.45 mmol)およびメタノール(2 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 37 mg, 54%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000169
【０２１５】
実施例87- CsAオレフィンの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)を0℃の臭化p-フルオロフェニルマグネシウム溶液(1.0 M THF溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)に添加し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.243 mmol)のTHF(5 mL)溶液を添加し、この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、24時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗アルコールを白色の固形物として得た: ESI MS m/z 1329 [C68H114N11O14+H]+。
【０２１６】
この粗アルコール、バルゲス試薬(160 mg, 0.68 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を3時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 62 mg, 21%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000170
【０２１７】
実施例88- CsAオレフィンの調製
実施例87で得たCsAオレフィン(X = OAc, 62 mg, 0.047 mmol)、炭酸カリウム(60 mg, 0.43 mmol)およびメタノール(2 mL)の混合液を室温で一晩撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 38 mg, 63%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000171
【０２１８】
実施例89- CsAオレフィンの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)を0℃の臭化p-トリルマグネシウム溶液(1.0 M THF溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)に添加し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.243 mmol)のTHF(5 mL)溶液を添加し、この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、一晩撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗アルコールを白色の固形物として得た: ESI MS m/z 1325 [C69H117N11O14+H]+。
【０２１９】
この粗アルコール、バルゲス試薬(162 mg, 0.68 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を2時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 118 mg, 40%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000172
【０２２０】
実施例90- CsAオレフィンの調製
実施例89で得たCsAオレフィン(X = OAc, 118 mg, 0.09 mmol)、炭酸カリウム(100 mg, 0.724 mmol)およびメタノール(3 mL)の混合液を室温で一晩撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 60 mg, 53%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000173
【０２２１】
実施例91- CsAオレフィンの調製
臭化m-トリルマグネシウム(1.0 M THF溶液, 3.65 mL, 3.65 mmol)を0℃のCsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.243 mmol)のTHF(10 mL)溶液に添加し、この混合液を窒素下、0℃で1時間撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗アルコールを白色の固形物として得た: ESI MS m/z 1325 [C69H117N11O14+H]+。
【０２２２】
この粗アルコール、バルゲス試薬(160 mg, 0.68 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を2時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 42 mg, 14%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000174
【０２２３】
実施例92- CsAオレフィンの調製
実施例91で得たCsAオレフィン(X = OAc, 42 mg, 0.032 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で7時間撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 25 mg, 41%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000175
【０２２４】
実施例93- CsAオレフィンの調製
塩化亜鉛(1.0 Mエーテル溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)を0℃の臭化o-トリルマグネシウム溶液(1.0 M THF溶液, 4.9 mL, 4.9 mmol)に添加し、この混合液を窒素下、0℃で5分間撹拌した。CsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.243 mmol)のTHF(5 mL)溶液を添加し、この混合液を室温までゆっくりと昇温させ、一晩撹拌した。この混合液を飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出した。この有機層を合わせたものを塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮して粗アルコールを白色の固形物として得た: ESI MS m/z 1325 [C69H117N11O14+H]+。
【０２２５】
この粗アルコール、バルゲス試薬(160 mg, 0.68 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を2時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 28 mg, 9%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000176
【０２２６】
実施例94- CsAオレフィンの調製
実施例93で得たCsAオレフィン(X = OAc, 28 mg, 0.021 mmol)、炭酸カリウム(30 mg, 0.22 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で一晩撹拌し、次いでこれを酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 12 mg, 44%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000177
【０２２７】
実施例95- CsAオレフィンの調製
CsAアルデヒド(XIV, 400 mg, 0.32 mmol)のTHF(10 mL)溶液を-78℃まで冷却し、臭化4-ビフェニルマグネシウムで処理し、これをN2雰囲気下で30分間撹拌させた。この反応液を-78℃の飽和塩化アンモニウム水溶液で反応停止し、これを酢酸エチルで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物を短いシリカゲルカラムに通して洗浄(9:1 ヘキサン/酢酸エチルから9:1 酢酸エチル/メタノール)することにより精製して、粗アルコール(415 mg, 92%)を淡黄色の固形物として得た。
【０２２８】
この粗アルコール(400 mg, 0.29 mmol)のベンゼン(11 mL)溶液を50℃まで加熱した。次いでこの反応混合液をバルゲス試薬(200 mg, 0.087 mmol)で処理し、これを50℃で3時間撹拌させた。次いで反応液を70℃まで加熱し、さらに1.5時間撹拌した。反応液を室温までゆっくりと冷却させた。反応液をエーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OAc, 73.4 mg, 19%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000178
【０２２９】
実施例96- CsAオレフィンの調製
実施例95で得たCsAオレフィン(X = OAc, 74 mg, 0.054 mmol)のメタノール(2 mL)溶液を室温で撹拌し、炭酸カリウム(82 mg, 0.59 mmol)で処理し、これをN2雰囲気下で一晩撹拌させた。この混合液を酢酸エチルで希釈し、これを飽和重炭酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製してCsAオレフィン(X = OH, 33 mg, 46%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000179
【０２３０】
実施例97- CsAジエンの調製
臭化ビニルマグネシウム(1.0 M THF溶液, 1.0 mL, 1.0 mmol)を1時間以内に窒素下で-78℃のCsAアルデヒド(XIV, 300 mg, 0.24 mmol)のTHF(10 mL)溶液に4部として添加した。添加後、得られた混合液を-78℃で15分間撹拌し、次いで-78℃の飽和NH4Cl水溶液(2 mL)で反応停止した。この混合液を室温まで昇温させ、次いで飽和NH4Cl水溶液10 mLに注ぎ込み、これをEtOAc(3×25 mL)で抽出した。この有機層を合わせたものを飽和NH4Cl水溶液および塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。濃縮乾固して白色の固形物300 mgを得た。この粗アルコールをさらには精製せず、次のステップに使用した。
【０２３１】
この粗アルコール(300 mg)のベンゼン(5 mL)溶液に、バルゲス試薬(100 mg, 0.42 mmol)を添加し、次いで得られた混合液を窒素下、60℃で1時間撹拌した。その後、この反応混合液にもう1部のバルゲス試薬(100 mg, 0.42 mmol)を添加し、次いで得られた混合液を窒素下、60℃でさらに2時間で撹拌した。この反応混合液を室温まで冷却させ、EtOAc(50 mL)で希釈し、これを水で洗浄し、分離した。その水層をEtOAc(3×10 mL)で抽出し、この有機層を合わせたものをNa2SO4で乾燥し、濃縮乾固した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAジエン(X = OAc, 28 mg, 2ステップ全体で9%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000180
【０２３２】
実施例98- CsAアルキンの調製
実施例81で得たCsAアルコール(300 mg, 0.225 mmol)、バルゲス試薬(268 mg, 1.12 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を4時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルキン(X = OAc, 12 mg, 4%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000181
【０２３３】
実施例99- CsAアルキンの調製
実施例98で得たCsAアルキン(12 mg, 0.009 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルキン(5 mg, 43%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000182
【０２３４】
実施例100- CsAアルキンの調製
実施例83で得たCsAアルコール(100 mg, 0.075 mmol)、バルゲス試薬(35 mg, 0.15 mmol)およびベンゼン(4 mL)の混合液を50℃で1時間加熱し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してtrans-異性体(20 mg, 20%)を白色の固形物: ESI MS m/z 1323 [C68H111N11O13S+H]+として; およびcis-異性体(47 mg, 47%)を白色の固形物: ESI MS m/z 1323 [C68H111N11O13S+H]+として得た。
【０２３５】
このtrans-異性体の酢酸塩(20 mg, 0.008 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してtrans-異性体(5 mg, 25%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000183
【０２３６】
実施例101- CsAアルキンの調製
実施例83で得たCsAアルコール(100 mg, 0.075 mmol)、バルゲス試薬(35 mg, 0.15 mmol)およびベンゼン(4 mL)の混合液を50℃で1時間加熱し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してtrans-異性体(20 mg, 20%)を白色の固形物: ESI MS m/z 1323 [C68H111N11O13S+H]+として; およびcis-異性体(47 mg, 47%)を白色の固形物: ESI MS m/z 1323 [C68H111N11O13S+H]+として得た。
【０２３７】
このcis-異性体の酢酸塩(47 mg, 0.008 mmol)、炭酸カリウム(100 mg, 0.72 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で5時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してcis-異性体(5 mg, 11%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000184
【０２３８】
実施例102- CsAアルキンの調製
実施例76で得たCsAアルコール(390 mg, 0.31 mmol)、バルゲス試薬(220 mg, 0.93 mmol)およびベンゼン(10 mL)の混合液を4時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルキン(26 mg, 7%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000185
【０２３９】
実施例103- CsAアルキンの調製
実施例102で得たCsA酢酸塩(26 mg, 0.021 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルキン(14 mg, 54%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000186
【０２４０】
実施例104- CsAアルキンの調製
実施例77で得たCsAアルコール(200 mg, 0.157 mmol)、バルゲス試薬(187 mg, 0.786 mmol)およびベンゼン(5 mL)の混合液を5時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してtrans-異性体(30 mg, 15%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000187
【０２４１】
実施例105- CsAアルキンの調製
実施例77で得たCsAアルコール(200 mg, 0.157 mmol)、バルゲス試薬(187 mg, 0.786 mmol)およびベンゼン(5 mL)の混合液を5時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してcis-異性体(10 mg, 5%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000188
【０２４２】
実施例106- CsAアルキンの調製
実施例104で得たtrans-異性体(10 mg, 0.008 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してtrans-異性体(6 mg, 60%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000189
【０２４３】
実施例107- CsAアルキンの調製
実施例105で得たcis-異性体(10 mg, 0.008 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してcis-異性体(5 mg, 50%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000190
【０２４４】
実施例108- CsAアルキンの調製
実施例79で得たCsAアルコール(100 mg, 0.077 mmol)、バルゲス試薬(27 mg, 0.115 mmol)およびベンゼン(4 mL)の混合液を1時間加熱還流し、次いで室温まで冷却し、エーテルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してcis-異性体(10 mg, 10%)を白色の固形物: ESI MS m/z 1281 [C67H113N11O13+H]+として得た。
【０２４５】
cis-異性体の酢酸塩(26 mg, 0.021 mmol)、炭酸カリウム(50 mg, 0.36 mmol)およびメタノール(1 mL)の混合液を室温で8時間撹拌し、次いで酢酸エチルで希釈し、これを水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製してCsAアルキン(14 mg, 54%)を白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000191
【０２４６】
実施例109- サイクロスポリンオレフィンの還元
炭素(10 mg)上の10%パラジウムによる実施例86のCsAオレフィン(20 mg, 0.016 mmol)の水素化をメタノール(1 mL)中にて水素(30 psi)下、parr(水素化)振盪装置で2時間行った。この混合液をろ過し、そのろ液を真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製して標的物(12 mg, 60%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000192
【０２４７】
実施例110- サイクロスポリンオレフィンの還元
炭素(5 mg)上の10%パラジウムによる実施例88のCsAオレフィン(20 mg, 0.016 mmol)の水素化をメタノール(2 mL)中にて水素(25 psi)下、parr(水素化)振盪装置で1時間行った。この混合液をろ過し、そのろ液を真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製して標的物(12 mg, 60%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000193
【０２４８】
実施例111- サイクロスポリンオレフィンの還元
炭素(5 mg)上の10%パラジウムによる実施例90のCsAオレフィン(20 mg, 0.016 mmol)の水素化をメタノール(2 mL)中にて水素(25 psi)下、parr(水素化)振盪装置で1時間行った。この混合液をろ過し、そのろ液を真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製して標的物(14 mg, 70%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000194
【０２４９】
実施例112- サイクロスポリンオレフィンの還元
炭素(3 mg)上の10%パラジウムによる実施例92のCsAオレフィン(12 mg, 0.009 mmol)の水素化をメタノール(1 mL)中にて水素(20 psi)下、parr(水素化)振盪装置で1時間行った。この混合液をろ過し、そのろ液を真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製して標的物(10 mg, 83%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000195
【０２５０】
実施例113- サイクロスポリンオレフィンの還元
炭素(2 mg)上の10%パラジウムによる実施例94のCsAオレフィン(8 mg, 0.006 mmol)の水素化をメタノール(1 mL)中にて水素(25 psi)下、parr(水素化)振盪装置で1時間行った。この混合液をろ過し、そのろ液を真空濃縮した。この残渣をセミ分取HPLCにより精製して標的物(6 mg, 75%)を淡黄色の固形物として得た。
2006524232.tif 000196
【０２５１】
実施例114- サイクロスポリンオレフィンの還元
実施例96で得たCsAオレフィン(20 mg, 0.015 mmol)のメタノール(2 ml)溶液を10% Pd/C (5 mg)で処理し、これをH2ガスによる圧力(25 psi)下に置いた。反応は室温で1時間、Parr(水素化)振盪装置で行った。この混合液をマイクロフィルターに通してろ過し、そのフィルターをメタノールで洗浄した。ろ液を真空濃縮した。この粗生成物をセミ分取HPLCにより精製して標的化合物(6.3 mg, 31%)を灰色がかった白色の固形物として得た。
2006524232.tif 000197
【０２５２】
実施例115- サイクロスポリンオレフィンの還元
10% Pd/C (5 mg)のメタノール(3 mL)懸濁液に、実施例47で得たCsAオレフィン(10 mg, 0.012 mmol)のメタノール(2 mL)溶液を添加した。この混合液を水素下で2日間撹拌した。この溶液を0.2 μmシリンジパックに通してろ過し、次いでこれを濃縮乾固した。この物質をセミ分取HPLCにより精製してCsAチオフェン(2.4 mg, 24%)を無色の油状物として得た。
2006524232.tif 000198
【０２５３】
実施例116- 免疫抑制活性の測定
サイクロスポリンAおよび本発明のサイクロスポリン誘導体を混合リンパ球反応(MLR)試験で生物活性について試験した。MLR試験は、アレルギー刺激に免疫応答して細胞増殖を起こしているヒトリンパ球またはマウス脾細胞による3H-チミジンの取込みを測定するために設計されたものである。そのマウス系では異種のH2近交系マウス系統、つまりBalb/c (H2d)およびC57B1/6 (H2b)を使用する。ヒトおよびマウスMLRでサイクロスポリンAおよび本発明のサイクロスポリン誘導体を試験した結果は、同等のものであった。MLR試験は、免疫抑制活性を有するCsA誘導体を同定するのに有用であり、この活性をCsAの免疫抑制活性と比べて定量化するのに有用である。
【０２５４】
本発明の化合物を試験する目的で、一方向MLRを行った。この方法では、Balb/cマウスの脾細胞に由来する免疫応答の刺激因子として作用するように、C57B1/6マウスの脾細胞にγ線を照射する。最初に、Balb/CおよびC57B1/6マウスの脾臓を外科的に切除した。次に、各脾臓をメッシュにかけ、これをRPMI/HEPES/0.01%ヒト血清アルブミンで懸濁することによって、脾細胞を単離した。次いで、C57B1/6脾細胞(刺激因子)に2000 radでγ線を照射した。照射後、細胞を洗浄した。次に、刺激細胞および応答細胞をトリパン(ブルー)中にて20倍希釈でカウントした。細胞集団を1 mLあたり細胞5.12×106個に設定した。次いで、サンプルを無菌の96ウェル組織培養プレート中に入れた。各ウェルに、Balb/cマウス由来の脾細胞(応答因子)の一定分量(100 μL)およびC57B1/6マウス由来のγ線照射済み脾細胞(刺激因子)の一定分量(100 μL)を添加した(最終容量 = 細胞2.5×105個の細胞集団が入った200 μL)。サイクロスポリンAおよびサイクロスポリン誘導体の4 μg/ml原液の一定分量を量り、最終容量を200 μLとする量の培地と混合した。試験ウェル中のサイクロスポリンAの試験濃度は、10.0、20.0、30.0、40.0、および60.0 ng/mLであった。本発明のサイクロスポリン誘導体は、最初に薬物濃度10、100、および1000 ng/mLで試験して効力の範囲を測定し、その後、さらに狭い濃度間隔で再試験してIC50値(対照と比べて50%増殖を阻害するために決定される試験化合物の阻害濃度)を測定した。増殖に対する薬物の効果を測定するため、プレートを5% CO2中にて37℃で3日間インキュベートした。第4日目に、1 μCi/ウェルの3H-チミジンを添加し、プレートを24時間インキュベートした。第5日目に、細胞回収装置を用いて、細胞をガラスマイクロファイバーフィルターマット上に回収した。このフィルターマットを乾燥したものとシンチレーション液をサンプルバックに入れ、これを密閉した。次いで、脾細胞に取り込まれた放射能の量をβ線測定器により1分間測定した。最後に、各薬物に対する平均および標準偏差を算出し、結果を以下として表した:
%阻害(%対照) = (1 −[試験薬物の平均CMP÷薬物なしの平均CMP])×100; 
%増殖 = 100 - %阻害
【０２５５】
一次スクリーニングは、100 ng/ml試験化合物の固定値で行った。IC50はGraphPadソフトウェアを用いて7点の濃度-応答曲線から算出される。この免疫抑制試験で陽性対照として日常的に試験したサイクロスポリンAのIC50値は、8〜35 ng/mlの中に入った。この免疫抑制試験で試験した本発明の化合物のIC50値は通常、100 ng/ml ≦ IC50 ≦ 1000 ng/mlの範囲に入る。本発明の化合物IIIa(実施例3、4、5、および6に記述されている方法により合成した)は、この試験で310 ng/mlのIC50値(サイクロスポリンA IC50 = 14 ng/ml)を示した。実施例109に例示されている化合物は、160 ng/mlのIC50値(サイクロスポリンA IC50 = 16 ng/ml)を示した。
【０２５６】
免疫抑制活性を測定するために利用した代替試験は、コンカナバリンA刺激による脾細胞試験とした。この試験では、5〜7週齢のBALB/c雄マウスをCO2吸入により屠殺する。脾臓を切除し、これをナイロン・セルストレイナーに押圧し通過させることでバラバラにする。この脾細胞をRPMI 1640/5%ウシ胎児血清(FCS)で洗浄し、400gで沈殿させる。次いで、この細胞沈殿物をACK細胞溶解用緩衝液(150 mM NH4Cl, 1 mM KHCO3, 0.1 mM EDTA, 脾臓あたり3 ml)に室温で10分間再懸濁させることにより、赤血球を溶解させる。400gで沈殿させた後、細胞をRPMI 1640/5% FCSに再懸濁させ、再沈殿させることにより洗浄する。この細胞沈殿物をRPMI 1640/5% FCSに再懸濁し、これを再びセルストレイナーに押圧し通過させて細胞凝集魂を除去する。次いで、この細胞をカウントし、RPMI 1640/10% FCS/50 μM 2-メルカプトエタノール中で細胞2×106個/mlに調整する。細胞生存度をトリパンブルー染色により評価する。2×105個の脾細胞を添加する前に、サイクロスポリンAまたは試験化合物および2マイクログラムのコンカナバリンAを96ウェルプレートの各ウェルに添加する。細胞を37℃ CO2インキュベーター内で2日間培養し、その後、1 μCiの[3H]-チミジンで6時間パルスする。細胞をTomTec 96ウェルプレート回収装置によりフィルターマット上に回収し、その細胞をH2Oで溶解する。このフィルターマットおよびシンチレーション液をプラスチックスリーブ中に密閉する。[3H]チミジンの取込みをWallac Triluxプレートカウンターで測定する。一次スクリーニングは、100 ng/ml試験化合物の固定値で行う。IC50はGraphPadソフトウェアを用いて7点の濃度-応答曲線から算出される。この免疫抑制試験のIC50値は、先の方法で測定したものと一致していた。
【０２５７】
本発明を例示する目的で詳細に記述してきたが、そのような詳細な記述は単にその目的のために過ぎず、当業者は、先の特許請求の範囲により定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、さまざまな変形を本発明のなかで行うことができると理解されよう。
【国際調査報告】
2006524232.tif 000348
2006524232.tif 000349