(57)【要約】  組織接着剤シーラントは、アルデヒド及びアルデヒドと反応性であるアミノ酸含有種を含む架橋剤溶液と一緒にした場合に架橋し、封止を形成する、架橋可能なタンパク質を溶液中に含有する。シーラントは、組織単独の又はパッチと組合せた結合によく適している。アルデヒドとアミノ酸含有種の間の比は、アルデヒド部分:アミノ酸又はペプチドサブユニットのモルベースで、20:1〜1:1である。特に強力な封止は、タンパク質と架橋剤が、モル比15:1〜1:1で存在する場合に形成される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
架橋可能なタンパク質；並びに
アルデヒド及び該アルデヒドと反応性のアミノ酸含有種を含む架橋剤溶液を含有し、該アルデヒド及び該アミノ酸含有種は20:1〜1:1の比で存在し、かつ該タンパク質及び該架橋剤は15:1〜1:1の比で存在する、組織接着剤シーラント。
【請求項２】
前記架橋可能なタンパク質が、溶液中にある、請求項1記載のシーラント。
【請求項３】
該前記架橋可能なタンパク質が、水溶性タンパク質である、請求項1記載のシーラント。
【請求項４】
前記架橋可能なタンパク質が、水性懸濁液である、請求項1記載のシーラント。
【請求項５】
前記架橋可能なタンパク質が、組換えタンパク質である、請求項1記載のシーラント。
【請求項６】
前記タンパク質が、血清アルブミン、オボアルブミン、カゼイン、グロブリン、ゼラチン、及びコラーゲン繊維の懸濁液からなる群より選択される、請求項1記載のシーラント。
【請求項７】
前記血清アルブミンが、ヒト血清アルブミンである、請求項6記載のシーラント。
【請求項８】
前記血清アルブミンが、ウシ血清アルブミンである、請求項6記載のシーラント。
【請求項９】
前記タンパク質が、水溶性であり、該溶液の10〜55総質量％で存在する、請求項1記載のシーラント。
【請求項１０】
前記タンパク質が、該溶液の0.3〜9総質量％で存在するコラーゲン繊維懸濁液である、請求項1記載のシーラント。
【請求項１１】
前記架橋剤溶液を含有する該溶液が、1.5〜9のpHを有する、請求項1記載のシーラント。
【請求項１２】
前記アルデヒドが、その中に複数のアルデヒド部分を有する、請求項1記載のシーラント。
【請求項１３】
前記アルデヒドが、2個のアルデヒド部分を有する、請求項12記載のシーラント。
【請求項１４】
その中に少なくとも3個のアルデヒド部分を有する第二のアルデヒドをより少ない量さらに含有する、請求項13記載のシーラント。
【請求項１５】
前記アルデヒドが、(CH2)n(CHO)2 (式中、nは0〜8の整数である。)、及びC5-C8シクロアルカンジオンからなる群より選択される、請求項1記載のシーラント。
【請求項１６】
前記アルデヒドがグルタルアルデヒドである、請求項1記載のシーラント。
【請求項１７】
前記アミノ酸含有種が、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド、ポリペプチド、タンパク質、及び糖タンパク質からなる群より選択される、請求項1記載のシーラント。
【請求項１８】
前記アミノ酸含有種が、酸性、脂肪族、及びアミドからなる群より選択される残基を有するアミノ酸である、請求項1記載のシーラント。
【請求項１９】
前記アミノ酸含有種が、下記式を有するもの：
【化１】
2006528518.tif 000003
(式中、QはCH2又は無であり；R1は、各々の位置において独立してH、Na、K、C2-C6アルキルであり；R2は、独立してH、C1-C20アルキル基、スルホネート、カルボキシラート、ヒドロキシル、第4級アミン、放射性同位元素イオン、磁気検出可能なイオン、抗生物質部分及び抗体から選択された置換基を有するC0-C4アルキル基であり；並びに、nは1〜6までの整数である。)；それらのハロゲン化水素塩；並びに、それらの組合せである、請求項17記載のシーラント。
【請求項２０】
前記アミノ酸が、L-グルタミン酸及びL-アスパラギン酸からなる群より選択される、請求項19記載のシーラント。
【請求項２１】
前記アルデヒド:アミノ酸含有種のモル比が、10:1〜4:1である、請求項1記載のシーラント。
【請求項２２】
前記アルデヒド:アミノ酸含有種のモル比が、8:1〜6:1である、請求項1記載のシーラント。
【請求項２３】
前記タンパク質:架橋剤のモル比が、5:1〜3:1である、請求項1記載のシーラント。
【請求項２４】
医薬物質をさらに含有する、請求項1記載のシーラント。
【請求項２５】
パッチ材懸濁液をさらに含有する、請求項1記載のシーラント。
【請求項２６】
前記懸濁液がコラーゲンである、請求項25記載のシーラント。
【請求項２７】
前記懸濁液が、該架橋可能なタンパク質と混合される、請求項25記載のシーラント。
【請求項２８】
発泡剤をさらに含有する、請求項25記載のシーラント。
【請求項２９】
噴射剤をさらに含有する、請求項28記載のシーラント。
【請求項３０】
パッチをさらに含有する、請求項1記載のシーラントであって、ここでパッチは、第一及び第二の破裂可能なカプセルを含み、第一のカプセルは架橋可能なタンパク質を含み及び第二のカプセルは架橋剤溶液を含む、シーラント。
【請求項３１】
組織接着剤シーラントの架橋剤成分を調製する方法であって：
グルタルアルデヒド水溶液を調製する工程；
その後、該溶液へ、下記式を有する化合物：
【化２】
2006528518.tif 000004
(式中、QはCH2又は無であり；R1は、各々の位置において独立してH、Na、K、C2-C6アルキルであり；R2は、独立してH、C1-C20アルキル基、スルホネート、カルボキシラート、ヒドロキシル、第4級アミン、放射性同位元素イオン、磁気検出可能なイオン、抗生物質部分及び抗体から選択された置換基を有するC0-C4アルキル基であり；並びに、nは1〜6までの整数である。)；それらのハロゲン化水素塩；並びに、それらの組合せを加え、該化合物が溶解するまで、攪拌する工程；並びに
該化合物が該グルタルアルデヒドと反応し、オリゴマーを形成するのに十分な時間をかける工程を含む、方法。
【請求項３２】
前記グルタルアルデヒド水溶液のpHが、2〜11であるように変更する工程をさらに含む、請求項31記載の方法。
【請求項３３】
前記溶液が、該化合物が該グルタルアルデヒドと反応する間、加熱される、請求項31記載の方法。
【請求項３４】
前記グルタルアルデヒド水溶液のpHが、8〜11であるように変更する工程をさらに含む、請求項31記載の方法。
【請求項３５】
R1及びR2は各位置において、Hである、請求項31記載の方法。
【請求項３６】
体組織及びパッチと同時接触されている、請求項1記載の組織接着剤シーラントを含む、補強された体組織。
【請求項３７】
前記パッチが、コラーゲンである、請求項36記載の組織。
【請求項３８】
前記パッチが、体組織である、請求項36記載の組織。
【請求項３９】
前記コラーゲンが、シートの形状である、請求項37記載の組織。
【請求項４０】
前記パッチが、水性懸濁液である、請求項37記載の組織。
【請求項４１】
前記水性懸濁液が、発泡体である、請求項36記載の組織。
【請求項４２】
体組織が、肝臓、心臓、血管、骨、歯肉、肺、脳、皮膚、及び筋肉からなる群より選択される、請求項36記載の組織。
【請求項４３】
組織欠損を補強する方法であり、該方法が：
架橋可能なタンパク質；並びに、アルデヒド及び該アルデヒドと反応性のアミノ酸含有種を含む架橋剤溶液を含有し、該アルデヒド及び該アミノ酸含有種はモル比20:1〜1:1で存在し、かつ該タンパク質及び該架橋剤はモル比15:1〜1:1で存在するような、組織接着剤シーラントを、組織欠損に近接する周囲組織領域へ適用する工程；並びに
組織欠損を接着により閉鎖する工程を含む、方法。
【請求項４４】
前記架橋可能なタンパク質が、溶液中にある、請求項43記載のシーラント。
【請求項４５】
前記架橋可能なタンパク質が、組換えタンパク質である、請求項43記載のシーラント。
【請求項４６】
医薬物質をさらに含有する、請求項43記載のシーラント。
【請求項４７】
前記組織接着剤シーラントが、マルチ-バレル式シリンジから適用される、請求項43記載の方法。
【請求項４８】
マルチ-バレル式シリンジが、末端混合チップをさらに備える、請求項47記載の方法。
【請求項４９】
前記マルチ-バレル式シリンジが、末端スプレーチップをさらに備える、請求項47記載の方法。
【請求項５０】
前記接着剤が、噴射剤により送達される、請求項49記載の方法。
【請求項５１】
前記組織接着剤シーラントが、カテーテルから適用される、請求項43記載の方法。
【請求項５２】
機械的固定具を該周囲組織へ導入する工程をさらに含む、請求項43記載の方法。
【請求項５３】
接着剤閉鎖が、対向端を近接することにより形成される、請求項43記載の方法。
【請求項５４】
パッチを組織欠損及び周囲の組織領域と接触し、その結果該パッチが該組織接着剤シーラントにより保持される工程をさらに含む、請求項43記載の方法。
【請求項５５】
前記パッチが、水性懸濁液である、請求項54記載の方法。
【請求項５６】
前記水性懸濁液が、該組織接着剤と同時に適用される、請求項55記載の方法。
【請求項５７】
パッチが、コラーゲンである、請求項55記載の方法。
【請求項５８】
パッチが、組織欠損へ、髄腔内送達される、請求項55記載の方法。
【請求項５９】
前記組織接着剤シーラントが、髄腔内適用される、請求項43記載の方法。
【請求項６０】
前記組織接着剤シーラントが、組織欠損及び外科的に埋込まれた部品と同時接触される、請求項43記載の方法。
【請求項６１】
前記外科的に埋込まれた部品が、人工心臓弁、補助心臓器具、カテーテル、注入口、経皮的到達器具、ピン、プレート、締結具、及び人工骨からなる群より選択される、請求項60記載の方法。
【請求項６２】
請求項1記載の組織接着剤シーラントの接着有効量を、組織欠損部位へ投与する工程を含む、組織修復法。
【請求項６３】
組織欠損部位が、出血源である、請求項62記載の方法。
【請求項６４】
部位が、外傷、手術、動脈瘤、血管奇形、及び微生物作用からなる群より選択される原因による部位に含まれる、請求項63記載の方法。
【請求項６５】
投与部位に近接する皮膚を引っ張るために、請求項1記載の組織接着剤シーラントの有効量を、外用又は皮下投与する工程を含む、皮膚のしわ出現を低下する方法。
【請求項６６】
請求項1記載の組織接着剤シーラントを、組織空洞へ注入する工程を含む、組織空洞を充填する方法。
【請求項６７】
内在性又は外来性材料を、請求項1記載の組織接着剤の接着有効量伴うプリフォームへ結合する工程を含む、医療用インプラントの形成法。
【請求項６８】
架橋可能なタンパク質溶液が負荷された第一バレル並びにアルデヒド及び該アルデヒドと反応性であるアミノ酸含有種を含む架橋剤溶液が負荷された第二バレルを備え、ここで該アルデヒド及び該アミノ酸含有種は20:1〜1:1の比で存在し、かつ該タンパク質及び該架橋剤は15:1〜1:1の比で存在する、2-部品シリンジを、それらを組織接着剤シーラント送達システムとして使用するための説明書と共に備える、市販用キット。
【請求項６９】
前記架橋可能なタンパク質が、組換えタンパク質である、請求項68記載のシーラント。
【請求項７０】
医薬物質をさらに含有する、請求項68記載のシーラント。
【請求項７１】
混合チップをさらに備える、請求項68記載のキット。
【請求項７２】
スプレーチップをさらに備える、請求項68記載のキット。
【請求項７３】
パッチをさらに含む、請求項68記載のキット。
【請求項７４】
前記パッチが、コラーゲンである、請求項73記載のキット。
【請求項７５】
前記パッチが、水性懸濁液である、請求項73記載のキット。
【請求項７６】
前記懸濁液が、該架橋可能なタンパク質と混合される、請求項75記載のキット。
【請求項７７】
発泡剤をさらに含む、請求項72記載の方法。
【請求項７８】
噴射剤をさらに含む、請求項77記載のキット。
【請求項７９】
請求項31記載の方法により入手可能な、240torr(240mmHg)よりも大きい血圧に耐えることが可能である、補強された組織。
【請求項８０】
いずれかの例としてここで実質的に説明された、請求項1記載の組織接着剤シーラント。
【請求項８１】
いずれかの例としてここで実質的に説明された、請求項36記載の補強された組織。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、2003年7月23日に出願された米国特許仮出願第60/489,438号の優先権を主張するものであり、この出願は本願明細書に参照として組入れられている。
本発明は、生存組織の結合又は封鎖が可能である組織接着剤シーラントに関し、特に損傷を受けていない組織のものよりも優れた力学特性を伴う、手術条件下で架橋する2-成分組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
外科医は、専門性とは関わりなく、処置の過程で、損傷を受けた組織及び血管の修復に悩まされる。組織及び循環系の完全性の回復は、損傷が、外傷又は手術処置それ自身の結果のいずれであるのかとは関わりなく、処置の肯定的結果において重要である。
損傷した組織を結合する最古の方法は、クランプ、ステープル又は縫合糸のような、機械的固定具の使用である。機械的組織固定具は、様々な制限を被ることが証明されている。機械的固定具は、特筆すべき技術が必要であり、かつ適用に時間がかかる。さらに機械的固定具は、多くの高度に血管が発達した臓器、例えば、肝臓、肺及び脳においては無効である。機械的固定具は、結合の線に沿って漏出させることも多く、それ自身周囲組織にさらなる外傷を引き起こす。機械的固定具のこれらの特徴は、さらに手術処置及び癒合時間を遅らせる。
【０００３】
外傷に関連した血液喪失を止める機械的固定具の能力欠如は、おびただしい命の犠牲をもたらし、機械的固定具に関連した困難を克服する研究につながっている。これらの努力は、正常な癒合を促進するか又は少なくとも阻害することなく迅速に組織表面を互いに結合することが可能である接着剤又は糊の使用に焦点が当てられている。
組織接着の通常の種類は、フィブリン-ベースであり、及びフィブリノーゲン及びトロンビンの濃縮物を含む。フィブリン接着剤は、典型的には2-成分接着剤であり、これらは一緒に混合された場合に反応し、凝血塊-形成カスケードの最終段階を模倣する。得られる凝血塊は、組織へ接着し、かつ癒合が生じるまでそれらの間のギャップに橋をかける。しかしフィブリン-ベースの接着剤は、低い強度及びプールされたヒト血液からのフィブリン収集に関連した感染リスクのために、成功が限られたものとなっている。血液が有する肝炎及びHIVは、他の可能性のある疾患と共に、大きい懸念である。フィブリンシーラント調製のための自家血漿の使用は、この難点は克服しているが、時間がかかり、かつ交通事故で負う創傷又は拳銃による創傷のような直接的外傷の場合には、価値がほとんどない。
【０００４】
アルデヒドにより架橋したゼラチンをベースにした糊も、成功が限られたものとなっている。この種の糊の代表は、ホルムアルデヒドで架橋されたゼラチン-レゾルシノール(ＧＲＦ)又はグルタルアルデヒドで架橋されたゼラチン-レゾルシノール(GRFG)である。ゼラチン-ベースの糊は十分研究され、かつ全般的に有効であることが示されているが、これらの組成物は、温ゼラチン溶液の使用、アルデヒドに関連した組織刺激、及び結合部位で適切な架橋を得るために必要な操作手順の危険性(criticality)のために、成功が限定されたものとなっている。
フジツボ(barnacle)糊のような天然に見出された様々な接着剤は、優れた重合及び力学的特性を有するように見える。しかし天然の製品をベースにした糊の開発は、認知可能な量のこのような物質を精製する能力により妨害され、さらには外来糖タンパク質による免疫応答の誘起に関する懸念が消えない。
前述の制限のために、組織用の糊として機能する適当な合成組成物の発見にかなりの開発努力が向けられている。この目的のために、シアノアクリレート、ポリウレタン、ポリメチルメタクリレートが、他の合成ポリマーの中でもとりわけ組織用の糊として研究されている。これらの合成組成物は各々、毒性のある分解産物、貧弱な力学特性、周囲組織を過熱する硬化時の発熱、並びに生分解性でないことなどの様々な問題のために、限られた成功となっている。
組織溶着(welding)又はレーザー光が誘導した組織用の糊の硬化も研究されており、部分的にのみ成功することが証明されている。レーザーに関連した組織修復は、経壁性熱損傷並びに高度の技術及び十分に装備した手術チームの必要性のために、限られた成功となっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
膨大な開発努力が成されていることを考慮し、十分な力学的強度、生体適合性及び生体有用性に加え、様々な手術状況に調和した操作特性の必要要件に合致する利用可能な組織用の糊組成物はほとんどない。組織用の糊に関するこれらの厳しい必要要件を考慮すると、生体適合性のアルデヒドによる水溶性タンパク質の架橋は、いくつかの可能性のある解決法のひとつであるように見える。この分野の開発の例は、米国特許第5,385,606号及び第6,310,036号を含む。これらの特許に開示された接着剤は、生体適合性及び生体吸収性を満足のできるものにしているが、これらの先行技術の組織接着剤の利用特性及び力学的強度特性は、最適なものではない。従って生体適合性なだけではなく、さらによく定義された硬化でありかつ癒合の過程で遭遇する生理的力の強度を越える結合線を提供する組織接着剤シーラントの必要性が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
組織接着剤シーラントは、溶液又は懸濁液の形の架橋可能なタンパク質を含む。架橋剤溶液は、アルデヒド及びアルデヒドと反応性のアミノ酸含有種を含む。アルデヒド及びアミノ酸含有種は、20:1〜1:1の間の比で存在する。架橋可能なタンパク質及び架橋剤活性成分は、15:1〜1:1の比で存在する。タンパク質溶液及び架橋剤溶液を一緒にし、かつそれらの間に反応が生じるのに十分な時間をかける場合、遭遇する生理的力よりも大きい破裂圧力に耐えることが可能である封止が形成される。本願明細書に説明された組織接着剤の使用を通じ、体組織欠損は封鎖され、しわの出現は低下し、医療用インプラントが成形されかつ埋込まれる。
【０００７】
アミノ酸含有種は多価アルデヒドと反応し、オリゴマー架橋剤を形成する。多価アルデヒドと反応性であるアミノ酸含有種は、α-アミノ酸、β-アミノ酸、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、及びそれらの組合せを含む。
架橋可能なタンパク質溶液が負荷された第一のバレル及びアルデヒド及び該アルデヒドと反応性のアミノ酸含有種を含む架橋剤溶液が負荷された第二のバレルを有し、該アルデヒド及び該アミノ酸含有種は20:1〜1:1の比で存在し、及び該タンパク質及び該架橋剤は15:1〜1:1の比で存在するような少なくとも2-成分シリンジを、組織接着剤シーラント送達システムとしてのそれらの使用に関する説明書と共に備える市販のキットが示されている。このシリンジは、液体、ゲル、又は粉末の形で分配可能なパッチ材料を含む第三のバレルを備えてもよい。あるいは、パッチ材料は、2-バレル式シリンジの架橋可能なタンパク質部分と共に負荷される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明は、アルデヒドとアミノ酸含有種の間の反応により形成されたオリゴマーと
水溶性タンパク質の架橋による、組織塊又は補綴材料による高強度の封鎖及びコーティングを形成する。本発明は、組織からの出血を停止するための、単独での、又はパッチ材料と組合せる有用性を有する。本発明は、封止又はその上に補強パッチを伴う封止を形成するための有用性を有する。本発明の架橋可能なタンパク質は、本願明細書において、溶液を形成するための溶解又は生理的に適した水性溶媒との懸濁液の形成が可能なタンパク質を含むと定義される。本発明において機能する好ましいタンパク質は、ヒト又は動物起源のオボアルブミン、血清アルブミン及びゼラチンであり、動物は例えば以下を含む：ウマ、ブタ、ウシ、ヒツジ、カンガルー、ニワトリ、及びサカナ。コラーゲン繊維の懸濁液は、ここでは架橋可能なタンパク質として機能すると理解される。組換え体の全タンパク質又は切断型タンパク質は、組換えタンパク質が架橋可能であり続ける限りはここで機能することは理解される。組換えヒト血清アルブミンは、米国特許第5,633,146号；第5,986,062号；第5,521,287号及び第5,440,018号において詳細に開示されている。組換えタンパク質は、収集されたタンパク質に会合されるウイルスプリオン又は細菌の夾雑物を欠くことが理解される。ここで機能するアルブミンは、血漿中に認められるもののような他のタンパク質を比較的少量含んでもよい。ヒト血清アルブミンは、ヒト組織修復の状況において利用される、特に好ましい本発明において機能する架橋可能なタンパク質である。さらに限外濾過又は他の精製技術がアルブミンに適用される場合、これらは本発明の使用による免疫応答又は感染物質の導入のリスクを低下する点でうまくいくことが理解される。
【０００９】
本発明の組織接着剤シーラントの第一成分を形成するために、架橋可能なタンパク質は、水に溶解されるか、又は水中に懸濁され、1〜55質量％の架橋可能なタンパク質を含有する溶液を作成する。水溶液タンパク質は典型的には10〜55総質量％で存在するが、水性懸濁液タンパク質は0.3〜9総質量％で存在する。架橋可能なタンパク質は、生理的に許容できる緩衝液の水溶液中に溶解されることが好ましい。あるいはこのタンパク質は、架橋剤と混合されるまで、乾燥物又は粉末の形で維持することができる。生理食塩水は生理的緩衝液の例である。任意に、架橋可能なタンパク質溶液は、例として電解質、増粘剤、抗微生物剤、保存剤、及び着色剤を含む添加剤を含有する。電解質添加剤が存在する場合、これは典型的には、0〜5総質量％の範囲の量で認められ、例として塩化ナトリウム、塩化カリウム及びリン酸ナトリウムを含む。本発明の架橋可能なタンパク質溶液の増粘剤は、0〜50総質量％で存在する。架橋可能なタンパク質溶液中で機能する増粘剤は、例として、滅菌コラーゲン粒子、埋込み可能な品質等級の繊維性材料、例えばポリアミド、フルオロポリマー及びシルクなどを含む。本発明の増粘剤は、架橋可能なタンパク質溶液の操作性を改変することに加え、得られる組織接着封止の力学的特性を修飾するために役立つ。他の任意の添加剤、例えば抗微生物剤、保存剤及び着色剤は、当該技術分野において常用のものであり、各々典型的には0〜3総質量％の量で存在する。「Remington's Pharmaceutical Sciences」、16版、1980年、Mack Publishing Co.(Easton, PA)及び「Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics by Hardman and Limbird」、9版、1996年、McGraw-Hill(ニューヨーク)及び「The Merck Index: an encyclopedia of chemicals, drugs, and biologicals」、12版、1996年、Merck & Co.(Whitehouse Station, NJ)を参照のこと。本発明の架橋可能なタンパク質溶液の粘度は、架橋可能なタンパク質濃度、増粘剤の量及び種類、並びに他の様々な添加剤の存在を含むパラメータにより制御されることが理解される。架橋可能なタンパク質溶液の粘度は、具体的課題に従って容易に調節され、かつ水の粘度と10,000センチポアズの間の粘度を有する。架橋可能なタンパク質溶液は、使用時の動き(runnage)を防止するのに十分な粘度を有することが一般に好ましく、従って一般に10〜1,000センチポアズの範囲である。
【００１０】
架橋可能なタンパク質溶液と組合せた場合に本発明の組織接着剤シーラントを形成する架橋剤溶液成分は、多価アルデヒド及びそれと反応性のアミノ酸含有種を含む。本発明の多価アルデヒドは、好ましくは、1,000ダルトン未満の分子量を有する二価アルデヒドである。より好ましくは、多価アルデヒドは、2個の末端アルデヒド基の間にC0-C16アルキル又はアリール骨格中間体を有する。最も好ましいのは、C3-C8線状アルキルジアルデヒドである。グルタルアルデヒドは、線状アルキルジアルデヒドの特に好ましい種である。少量のトリ-又はポリアルデヒドと大量のジアルデヒドの導入は、架橋剤中の架橋を生じ、変更された溶液粘度及び最終の組織接着の力学特性を生じることが理解される。典型的にはトリ-又はポリアルデヒドは、ジアルデヒドに対する化学量論的モル比1:1000〜1:30で存在する。
【００１１】
アミノ酸含有種は、多価アルデヒドと反応し、オリゴマー架橋剤を形成する。多価アルデヒドと反応性のアミノ酸含有種は、α-アミノ酸、β-アミノ酸、ジペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、及びそれらの組合せを含む。所定のアミノ酸のd-及びl-の両配座異性体は、各配座異性体に関連した対応する生体吸収性を伴うようにここでは機能することは理解される。本発明のアミノ酸含有種は、塩、エステル及びそれらの誘導体化された形を含むことは理解される。加えてアミノ酸がβ-アミノ酸である場合、得られる接着剤は、生体吸収にかなり抵抗性がある。本発明のアミノ酸含有種への誘導体化は、溶媒和増強部分、例えばヒドロキシル、チオール、スルホニル、ハロなど；抗生物質；放射性同位体；磁気マーカー、及び抗体を含む。特に好ましいアミノ酸は、酸性のもの：グルタミン酸及びアスパラギン酸；脂肪族のもの：アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシン；並びに、アミド類、グルタミン及びアスパラギンを含む。最も好ましいアミノ酸含有種は、下記式Iに示したもの：
【化１】
2006528518.tif 000002
(式中、QはCH2又は無であり、R1は各々独立してH、Na、K、C2-C6アルキルであり；R2は独立してH、C1-C20アルキル基、スルホネート、カルボキシラート、ヒドロキシル、第4級アミン、放射性同位体イオン、磁気検出可能なイオン、抗生物質部分、及び抗体から選択された置換基を有するC0-C4アルキル基であり；並びに、nは、1〜6までの整数である。)；それらのハロゲン化水素塩；並びに、それらの組合せである。
【００１２】
式Iのアミノ酸含有種の好ましい態様は、L-グルタミン酸、L-グルタミン酸塩酸塩、L-グルタミン酸ナトリウム、L-グルタミン酸カリウム、L-グルタミン酸一ナトリウム、L-グルタミン酸一カリウム、L-アスパラギン酸、L-アスパラギン酸塩酸塩、L-アスパラギン酸ナトリウム、L-アスパラギン酸カリウム、L-アスパラギン酸一ナトリウム、及びL-アスパラギン酸一カリウム、並びにそれらの組合せである。L-グルタミン酸及びL-アスパラギン酸が、得られる架橋効率のために、特に好ましい。L-グルタミン酸一ナトリウム、L-グルタミン酸塩酸塩、L-グルタミン酸一カリウム、L-アスパラギン酸一ナトリウム、L-アスパラギン酸塩酸塩、及びL-アスパラギン酸一カリウムは、L-グルタミン酸と比べ、より長時間架橋液に投入され、同様の効率の架橋液を生じることが理解される。
【００１３】
本発明によると、アミノ酸含有種は、架橋剤溶液中に、アルデヒド部分のアミノ酸又はペプチドサブユニットに対するモル比が20:1〜1:1であるような量で存在する。この比の範囲内で、アミノ酸含有種の増加は一般に、硬化された組織接着剤シーラントの最終的な接着及び粘着の強度を増大する傾向があることが注目される。好ましくは、アルデヒド部分のアミノ酸又はペプチドサブユニットに対するモル比は、10:1〜4:1である。最も好ましくは、この比は8:1〜6:1である。アルデヒドがグルタルアルデヒドであり及びアミノ酸含有種がL-グルタミン酸である場合、グルタルアルデヒドは典型的には、溶液の2〜40質量％で存在し、アミノ酸含有種が示された比を満足する量で導入される。架橋可能なタンパク質溶液のように、架橋剤溶液は任意に、pH修飾剤、界面活性剤、酸化防止剤、浸透圧調節剤及び保存剤を含有する。pH修飾剤の例は、酢酸、ホウ酸、塩酸、酢酸ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、硝酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、及び硫酸である。ここで機能する界面活性剤は例として、塩化ベンザルコニウムを含む。ここで機能する酸化防止剤は例として、硫酸水素塩を含む。ここで機能する電解質は例として、塩化ナトリウムを含む。ここで機能する保存剤は例として、クロロブタノール、ソルビン酸塩、塩化ベンザルコニウム、パラベン、及びクロルヘキサジンを含む。
【００１４】
架橋剤溶液の調製は、典型的には、室温でのアルデヒドの水への混合により開始される。次に得られる溶液のpHが、2〜11の間であることが確認され、好ましくは水酸化ナトリウムのような水性塩基により塩基性に上昇される。好ましくはpHは、8〜11に上昇される。最も好ましくは、pHは8.2〜8.8へ上昇される。その後、機械的攪拌、音波処理又は受動溶解により完全に溶解した時点での最終濃度0.2モルに対応するのに十分な固形L-グルタミン酸が添加される。溶解を可能にする時間、混合が攪拌又は音波処理により生じるかどうか、溶解及びその後の濾過の温度のような変数は、全て架橋剤溶液を形成する際に容易に変更される変数であることが理解される。これらの変数の適切な制御は幅広のピークにつながり、及び高速液体クロマトグラフィー追跡は、一般にグルタルアルデヒド-グルタミン酸架橋剤である場合に親水性として特徴づけられ、その結果C-18カラム上でより長い保持時間を有する大型のオリゴマー種の収集に対応する。この群の比較的長いオリゴマー種は、硬化された本発明の組織接着剤シーラントの優れた結合特性に相関している。好ましくはこの架橋溶液の最終pHは、架橋可能なタンパク質溶液と混合する前に、pH1.5〜9.0に修飾される。より好ましくは、架橋剤溶液は、pH範囲1.5〜4.5である。一緒にした架橋剤溶液及び架橋可能なタンパク質溶液のゲル化時間は、架橋剤溶液の酸性度の関数として変動することは理解される。一般により酸性の本発明の架橋剤溶液は、それより高いpHを有する以外は同一の架橋剤溶液よりも、より長いゲル化時間を有する。
【００１５】
本発明の2-成分組織接着剤組成物は、多くの方法で組織へ適用される。例として、組織接着剤シーラントを作成するふたつの成分は、迅速に一緒に混合され、その後一般的なアプリケーターを用い適用することができる。混合チップを装着した比例したサイズの二重-バレル式シリンジがその代表であり、これは架橋可能なタンパク質を、架橋剤に対するモル比15:1〜1:1で送達する。好ましくは架橋可能なタンパク質は、架橋剤に対するモル比8:1〜1:1で送達される。好ましくは架橋可能なタンパク質は、架橋剤に対する比5:1〜3:1で送達される。実際の実践において、使用者は、混合チップを負荷されたシリンジに装着し、及びシリンジプランジャーを押し下げることにより、混合されたプレ-ゲル化された接着剤組成物が、混合チップから駆出される。あるいは混合チップは、商標TISSEEL(Immuno AG, ウイーン、オーストリア)で市販されているもののような、スプレーノズルチップと交換される。二重-バレル式シリンジに取付けられたスプレーノズルにより、ゲル化されない接着剤組成物の噴霧されたスプレーが、シリンジプランジャーを押し下げることにより放出される。
【００１６】
あるいは本発明の組織接着剤組成物は、架橋剤、架橋可能なタンパク質、及びパッチ材料を含有する3-成分システムとして適用部位に送達される。コラーゲンは、ここで使用されるパッチ材料の例である。あるいは移植された又は自家の組織、例えば心膜組織を使用することもできる。パッチ材料は、任意に本発明の架橋剤成分及び架橋可能なタンパク質成分よりも先に、又はこれらと一緒に送達される水性懸濁液として形成される。パッチ材料の同時送達は、第一及び第二のバレルは先に詳細に説明したように架橋可能なタンパク質及び架橋剤を送達し、並びに第三のバレルにはパッチ材料が負荷された、3-バレル式シリンジの使用により促進される。混合チップは、3-バレル式シリンジと共に提供されることが好ましい。あるいは、パッチ材料懸濁液は、本発明の架橋可能なタンパク質成分と混合され、並びに本願明細書において先に説明した混合チップ又はスプレーノズルチップにより、2-成分システムとして送達される。任意に発泡剤が、発泡された組織接着剤の形成を促進するために、本発明の接着剤成分へ導入される。ここで機能する発泡剤は、組織と適合性の界面活性剤を含む。これらの発泡剤の例は、可食性発泡体中の脂肪又はタンパク質を含むが、これらに限定されるものではない無毒の界面活性剤である。しかし界面活性剤は、意図された用途に応じて、イオン性又は非イオン性界面活性剤であることができる。イオン性界面活性剤は、例えば、ステアリン酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、α-オレフィン系スルホン酸エステル及びスルホアルキルアミドなどのアニオン性界面活性剤、並びにアルキルジメチルベンジルアンモニウム塩、アルキルトリメチルアンモニウム塩及びアルキルピリジニウム塩などのカチオン性界面活性剤；並びに、イミダゾリン界面活性剤などの両性界面活性剤を含む。非-イオン性界面活性剤は、例えばポリエチレンオキシドアルキルエーテル、ポリエチレンオキシドアルキルフェニルエーテル、グリセロール脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルなどを含む。
【００１７】
本発明の組織接着剤組成物が発泡剤と組合せて送達される状況において、好ましくは噴射剤が、スプレーノズルチップと流体連絡路されて提供される。ここで機能する噴射剤は例として、二酸化炭素、窒素、プロパン、フルオロカーボン、ジメチルエーテル、ヒドロクロロフルオロカーボン-22、1-クロロ-1,1-ジフルオロエタン、1,1-ジフルオロエタン、及び1,1,1-トリフルオロ-2-フルオロエタンなどの、エアゾール噴射剤を、単独で又は組合せて含む。
【００１８】
本発明の組織接着剤シーラント組成物は、様々な医学的処置において使用することができる。これらは、混合されたゲル化していない組織接着剤シーラントのカテーテル又は誘導針(introducer)を介した導入により、動脈又は静脈の出血を止めることを含む。あるいは一片のコラーゲンが血管へ挿入されるか、又は血管の表面に適用され、かつ混合されたゲル化していない本発明のシーラントによりコーティングされ、これによりコラーゲンの外面(outwardly facing surface)の間に封止を形成する。あるいは、パッチ材料が存在しない血管穴への混合されたゲル化していない本発明のシーラントの導入により、止血が実現される。本発明のシーラントは、血管内に、又は任意に膨張式カテーテルもしくは外圧により血管穴へ加えられた圧力により外側に適用することができることが理解される。別の適用において、本発明のシーラント組成物は、皮膚移植片を付着するために適用される。さらに別の適用において、パッチ材料は、ホルダーに固定され、その後架橋可能なタンパク質溶液に、引き続き架橋剤溶液、もしくは架橋剤及びアルブミン溶液に逐次浸漬コーティングされるか、又は本発明のシーラント混合物でスプレーコーティングされる。その後ホルダーは任意に、創傷に加圧するために使用される。その後組織接着剤シーラントの硬化時に、ホルダーは取り外される。さらに別の適用において、パッチは、各々、アルブミン溶液及び架橋剤溶液が入った、ふたつの破裂可能なカプセル又はポケットを備える。カプセル封入された溶液は、カプセルの開口部の破壊により活性化され(ライトスティックとして公知のものに類似した方法)、パッチの適用前にこれらの物質が混合することを可能にする。さらに別の適用において、コラーゲンパッチが、適用部位へ髄腔内に又は外部より送達され、その後架橋剤溶液の適用により活性化される。さらに別の適用において、歯周病手術の過程において、歯肉弁が、歯科用インプラント、歯肉組織、及び／又は象牙質表面に固定される。よりさらなる適応症は、吻合術及び冠動脈バイパス移植手術、分離肝切除移植術に続く肝臓の封鎖；肝臓、脾臓、肺、心臓、骨、及び脳組織の重度の出血の封鎖；移植片、破裂大動脈、破裂大静脈、再手術の結果としての断裂右心室、切断大動脈、人工心臓弁の生物学的、解剖学的又は機械的構築、左心室の補助装置、長期留置カテーテル、注入口、及び経皮的到達器具用の孔の封鎖；又はそうでなければ手術用縫合糸又はステープルの補助物もしくは代替物を含む。加えて本発明は、損傷を受けた個人が避難する前の損傷現場での重度の出血を封止するための外傷用キット(trauma kit)において機能する。
【００１９】
組織の移植片、亀裂、穿孔又は他の開口部を封鎖するための本発明の組織接着剤の使用に加え、本発明の接着剤は、従来の閉鎖構造物、縫合糸、ステープル、及びクランプの補助物としても機能することが理解される。補助物として、本発明の接着剤は、閉鎖構造物の第二又は第三の層に取って代わるか、あるいは組織分離のための追加の障壁として役立つ。これらの縫合糸又は他の閉鎖器具も、アルブミン又はコラーゲンで前処理するか又はそうでなければ注入することができ、引き続き架橋剤溶液の適用により適所に接着される。同じく封鎖構造物以外の器具(例えば心臓弁を縫いつけるカフリング)の埋込みは、これらの器具のアルブミン又はコラーゲンの最初の注入、その後の器具が埋込まれた後の器具への架橋剤溶液の適用により増強されることも理解されるであろう。
レシピエントは、短縮された処置期間及び／又は増強された閉鎖の完全性により、補助的本発明の組織接着剤の使用により恩恵を受ける。本発明の恩恵を受ける処置の例は、バチスタ心臓切除術、分離肝の厚い切除移植術における肝臓の封鎖、経皮的到達器具の封鎖、歯肉弁の固定、心臓ステント位置の安定化、血管内又は体の他の領域での血管ステント(など)の固定、並びに骨からの血液喪失の止めを含む。
【００２０】
皮膚科の状況において、本発明は、ぴんと張った皮膚への外用又は皮下注射を介して使用され、これにより皺の出現を減少する。瘢痕又はケロイドも同様に治療される。加えて本発明の組織接着剤シーラントは、充填材として、組織空洞へ、単独で、又はパッチと一緒に容易に注入することができる。
さらに別の状況において、本発明は、骨接着剤又は硬組織修復剤として、又は椎間板(spinal disc)の代替/充填材として使用することができる。これに関しては、骨折、人工関節などの固定において使用するために、炭酸カルシウムが、基本のシーラントに添加される。
【００２１】
さらに別の適用において、本発明の組織シーラントは、様々な内在性又は外来性材料をプレフォーム医療用インプラントに成形するための結合剤として使用される。この適用の例は、整形外科の骨代替のための滅菌された死体骨インプラントである。加えてコラーゲンの軟組織インプラント又は他の埋込み可能な材料は、再建形成外科によく適している。ここで機能する外来性材料は、生体適合性合成ポリマー、埋込み可能な金属及び死体から収集した組織；粉末、ゲル、懸濁液、又は固形物の形状のこれらの材料を含む。架橋可能なタンパク質溶液を成形前にこれと混合し、その後架橋剤溶液を噴霧することにより、従来のインプラントに対し優れた操作特性を有する成形されたプレフォームを生じる。
【００２２】
「パッチ」はここで、外科的埋込みに適合し、かつ本発明のシーラントによりコーティングされることが可能であるいずれかの形状の支持体を含むと定義され、その形は例として、水性懸濁液、溶液、粉末、ペースト、シート、リング、ステント、円錐、プラグ、ピン、スクリュー及び特定の解剖学的特徴に相補的であるように合わせられた複雑な三次元の形状を含む。本発明のパッチ材料は、例として、コラーゲン；ポリ乳酸；ヒアルロン酸；フルオロポリマー；シリコーン；例えばセルロース繊維、ポリアミド、酢酸レーヨン及びチタンなどの編組又は織物のメッシュ；皮膚；骨；チタン及びステンレス鋼を含む。コラーゲンは、特に好ましいパッチ材料である。あるいは、心膜組織又は他の体組織を、コラーゲンパッチの代わりに使用することができる。より好ましくは、コラーゲンは、生体吸収可能でありかつ厚さ2〜5mmを有する、様々な形状に容易に形成される柔軟で繊維状のシートである。このような繊維状コラーゲンシートは、多くの供給業者から市販されている。コラーゲンパッチは、シーラント強度を増強するために役立つ一方で、本発明の組織シーラントがそれに若干浸透することを可能にする。任意に、外科的状況において、治癒前に過剰なゲル化されない本発明の組織シーラントをぬぐい去る(wick away)ために、乾いた又は湿った吸収体ガーゼが創傷部位に隣接して配置される。
【００２３】
先に説明されたホルダーに加え、人工心臓弁の埋込みに使用される型のホルダーも、パッチに付随することができ、使用者はパッチをその位置に容易に保持することができる。適当なデザインのホルダーが当該技術分野において公知であり、これは弁を固定するためのグリッパーを備える。同じく米国特許第5,713,952号；第5,824,068号；第6,019,790号並びにそこに引用された参考文献のホルダーも参照のこと。ホルダーのグリッパーは、パッチを確実に適所に維持し、一旦適所に接着されたならば、パッチを解放するように操作することが可能である。任意に、縫合糸(ホルダーよりもむしろ)を、パッチを適所に保持するために使用することができる。
【００２４】
この接着剤は、例えば先に説明されたような手段、あるいは米国特許第4,792,062号又は第6,722,532号に開示された型に類似した二重スプレー装置を用い、スプレーとして適用することもできる。このような溶液中の架橋可能なタンパク質及び架橋剤溶液(先に説明された)の適用は、意図された標的領域の近傍にスプレー装置により同時送達され、接着剤としての成分の空気中混合を生じる。
この接着剤は、H2O2で金属を前処理した後、金属に結合可能である。
侵襲性が最小の外科的処置の状況、例えばラパロスコピー(lap-coly)、別の腹腔鏡処置、又は肺生検における封鎖の漏出において、本発明の接着剤は、カテーテル末端に到達する前に接着剤成分を混合するチップ又は2個の個別のチャネルを通り糊を送達し及びそれを末端で混合するチップのいずれかを用い、標的結合部位へ送達される。適当な混合チップは、先に説明されており、当該技術分野において公知である。
【００２５】
この接着剤の架橋剤溶液は、医学的処置に加え、移植のための組織の保存に有用である。特に先に説明されたようなグルタルアルデヒドを含有する架橋剤溶液は、移植及び心臓弁補綴のための架橋及び解毒プロセスにおいて使用することができる。
この接着剤の成分はさらに、接着剤が生体吸収性であるので、薬物送達物質として機能することができるように医薬物質を注入することができる。本発明により送達することができる医薬物質は、有機、無機及び有機金属化合物を含むが、これらに限定されない。これらの化合物は、水溶性又は水に不溶性であってよい。さらに医薬物質は、細胞、組織、臓器又は体システムに影響を及ぼす恩恵のある物質を含み、この体システムは例として、神経系、心臓血管系、免疫系、生殖系、筋骨格系、リンパ系、消化器系、排泄系、内分泌系、ホルモン系及び血液循環系を含む。
【００２６】
さらに本発明の薬物送達システムに含まれる医薬物質は、例として以下を含む：鎮痛薬、麻酔薬、殺虫薬(anthelminthic)、抗-アレルギー薬、抗-不整脈薬、抗-喘息薬、抗生物質、鎮痙薬、抗欝薬、糖尿病治療薬、抗真菌薬、血圧降下薬、抗-炎症薬、抗-片頭痛薬、抗-新生物形成薬、駆虫薬、抗-腫瘍薬、潰瘍治療薬、抗ウイルス薬、抗不安薬、気管支拡張薬、鎮咳薬又は風邪薬、細胞増殖抑制薬、催眠薬、低血糖治療薬、転移阻害薬、筋弛緩薬、新生物形成薬、及びトランキライザー化合物。「Remington's Pharmaceutical Sciences」、16版、1980年、Mack Publishing Co.(Easton, PA)及び「Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics by Hardman and Limbird」、9版、1996年、McGraw-Hill(ニューヨーク)及び「The Merck Index: an encyclopedia of chemicals, drugs, and biologicals」、12版、1996年、Merck & Co.(Whitehouse Station, NJ)。
【００２７】
本発明により送達可能な医薬物質は、分子量約50ダルトン〜約10,000,000ダルトンの範囲のものである。
プロドラッグが、医薬物質として本発明の薬物送達器具に含まれる。用語「プロドラッグ」は、例えば血中での加水分解により、in vivoにおいて迅速に転換され先の式の親化合物を生じる化合物を意味する。十分な考察が、T. Higuchi及びV. Stellaの「Pro-drugs as Novel Delivery Systems」、14巻、A.C.S. Symposium Series、並びに「Bioreversible Carriers in Drug Design」、Edward B. Roche、American Pharmaceutical Association and Pergamon Press、1987に提供されており、これらは両方とも本願明細書に参照として組入れられている。
加えて、本発明は、コンビナトリアルケミストリーを含む標準の有機合成技術、又は代謝を介するような生物学的方法のいずれかを用い生成された化合物を含むことが意図されている。
【００２８】
これらの組成物は任意に、選択された医薬物質を有効量、医薬として許容できる担体と組合せて含有し、加えて他の薬物、医薬物質、担体又は希釈剤を含有してもよい。「医薬として許容できる」とは、生物学的に又はそれ以外に望ましくないことはない物質を意味し、これは著しく望ましくない生物学的作用を引き起こすことなく、又はそれが含まれた医薬組成物の他の成分のいずれかと有害な様式で相互作用することなく、選択された物質と共に個々を投与することができる。
単独の医薬物質は、本発明の薬物送達器具により送達される。任意に2種又はそれよりも多い医薬物質を、本発明の薬物送達器具と同時に送達してもよい。
本発明はさらに、本発明の具体的態様の例証であることが意図されている下記例により例証される。これらの例は、添付された「特許請求の範囲」により定義される本発明の範囲を限定することは意図しない。
【００２９】
例1−架橋剤溶液の調製
グルタルアルデヒド14gを、脱イオンした蒸留水86gに機械的に攪拌しながら添加した。得られた溶液を、水酸化ナトリウム水溶液で、pH8.5に滴定した。L-グルタミン酸3gを、この溶液に添加し、添加されたグルタミン酸が全て溶解するまで、72時間混合した。
【００３０】
例2−ブタ心臓損傷モデルにおけるシーラントの効率及び強度
新鮮なブタ心臓を、組織円柱の鋭利な切断により、左心室遊離壁(free wall)中に、10〜12mmの円形経壁的欠損を生じることにより調製した。18-ゲージカテーテルを、左心室への先端の3-0シルクの巾着縫合により配置した。僧帽弁を、4-0ポリプロピレンの二重層連続縫合により、左心房切開後に封鎖した。大動脈根の切開後、左心室の流出管を、大型鉗子により冠動脈レベルで閉塞した。
圧力をモニタリングする水注入システムは、I.V.チューブセグメント、アネロイド圧力計、三尖ストップコック、及びバルーン血管形成術圧力発生装置(Scimed Pressure Generator：ミネアポリス、MN)を用いて構築した。
【００３１】
左心室遊離壁欠損を、0.375M NaClを含有する40質量％のウシ血清アルブミン溶液及び実施例1の溶液の比4:1の溶液を、湿った心外膜表面に3分間適用することにより封鎖した。これは、組織欠損に重なるシーラント円形層の形成を生じた。その後左心室に水を満たした。
ストップコックを操作することにより、圧力-モニタリングした左心室膨張の反復試験を行いながら、液体漏出に関して心室修復部位をチェックした。試験終了後、修復損傷部位を取り囲んでいる左心室遊離壁部分を切除し、修復の寸法をルーラーで測定した。
【００３２】
膨張圧の反復適用は、僧帽弁閉塞、大動脈根封鎖、及び左心室カテーテル挿入の部位に、液体漏出を生じた。その後これらは、前記BSA溶液及び実施例1の液体を含む液体接着剤でうまく封止された。封鎖後、最大2atmの生理的なものを上回る左心室膨張圧の反復適用の実施は、4℃の水中で一晩貯蔵した前後に、損傷修復部位での漏出を伴わなかった。左心室壁を通り心外膜下領域への液体の流出が認められた場合には、試験を中断した。修復部位の検査は、オーバーラップの長さが約4mmの、直径12mmの円形経壁的欠損を覆う厚さ約1mmのシーラントの円形層を示し、かつこの修復部位は比較的平坦であり、明白なシーラント材料過多は伴わなかった。
【００３３】
例3−接着強度に対する架橋可能なタンパク質の作用
前述の架橋可能なタンパク質溶液の形成法を、3回個別に繰り返した。各場合において、ウシ血清アルブミンは、ヒト血清アルブミン、オボアルブミン、及びγグロブリンなどのひとつと等量で交換した。その後実施例2の手法のシーラント成分として個別にこれらの架橋可能なタンパク質溶液のひとつを使用し、実施例2の方法を繰り返した。ヒト血清アルブミン、オボアルブミン、及びγグロブリンをベースにした各シーラントは、4℃の水中で一晩貯蔵した前後に、2atmを超える左心室膨張圧の反復適用が可能であった。
【００３４】
例4−ブタ肝臓モデルにおけるシーラント効率
新鮮なブタ肝臓を摘出し、加圧した血漿液貯蔵装置に肝動脈経由でつないだ。他の血管を縫合し、かつ肝臓を200torr(2.7x104Pa)に加圧した。10〜12mmの芯(core)を肝臓から摘出し、銃弾による損傷を模倣した。圧力低下及び血漿の出血が認められた。外径10mmを有するコラーゲンプラグを、実施例2の組織接着剤でコーティングし、このプラグを肝臓の穴に挿入した。3分間以内に、肝臓は、合計の貯留圧150torr(2.0x104Pa)を支えた。従って、本発明の接着剤は、適所のコラーゲンプラグを接着するように機能することが理解される。
【００３５】
例5−動脈瘤モデルにおけるシーラント効率
内径4mmの頸動脈を、新鮮な食肉処理したブタから剥離した。この動脈を、血漿貯蔵装置の一端につなぎ、他端を封止するために隔壁(septum)を追加した。動脈は、200torr(200mmHg)に加圧した。1mmの経壁的円形欠損を、組織円柱の鋭利な切除により模倣した。圧力の低下及び血漿の出血が認められた。直径3mmのコラーゲンシートを、カテーテルにより動脈を通って推し進め、切除部に留置した。実施例2の組織接着剤をカテーテル中で2個の個別の穴を通して送達した。シートを適所に5分間保持した後、カテーテルを取り外したところ、動脈は再度前-切除した弁への加圧に耐えることができた。
【００３６】
本願明細書で参照した特許又は刊行物は、個々の参考文献が例証的かつ個別に本願明細書に参照として組入れられているのと同程度に、参照として組入れられている。これらの特許及び刊行物は、本発明が属する技術分野の業者のレベルの指標である。
当業者は、本願明細書に説明された本発明の修飾及び変更を知っていると理解される。本発明の精神と同等な又はそれに属するこれらの修飾及び変更は、添付された「特許請求の範囲」に包含される。
【国際調査報告】
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