(57)【要約】本発明は、癌および他の増殖性疾患の治療を高める方法および組成物に関する。特定の態様において、本発明は、ガレクチン−３の抗アポトーシス活性を阻害する薬剤（例えば、「ガレクチン−３阻害剤」）の投与を組み合わせて、化学療法薬の毒性を増強する。いくつかの好ましい態様において、本発明の組み合わせ治療は、その細胞毒性が治療される細胞の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態によって影響を受ける化学療法薬の効果を向上させるために用いることができる。例えば、ガレクチン−３阻害剤は、ＤＮＡの複製の正確さ、または望ましくない増殖を行っている細胞の細胞周期の進行を妨害する化学療法薬と組み合わせて投与することができる。
2006522163.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における増殖性障害の治療処置の効果を高めるための方法であって、前記治療処置の細胞毒性は、該患者における癌細胞または望ましくない増殖が起こっている細胞の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態によって影響を受け、前記方法は、該患者に対して、前記治療処置と治療的有効量のガレクチン−３活性を阻害する薬剤（「ガレクチン−３阻害剤」）とを組み合せて適用することを含む治療レジメンを含む、方法。
【請求項２】
患者における腫瘍細胞または望ましくない増殖が起こっている細胞の成長速度を減少させる方法であって、前記方法は、該患者に対して、
（ｉ）その細胞毒性が前記細胞の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態によって影響を受ける化学療法薬、および、
（ｉｉ）前記細胞における１以上のＧ１／Ｓサイクリンのレベルを減少させるのに十分な量のガレクチン−３阻害剤、
を含む治療レジメンを適用する方法。
【請求項３】
患者においてガレクチン−３を発現する、腫瘍細胞または望ましくない増殖を起こしている細胞の成長速度を減少させる方法であって、前記方法は、
（ｉ）患者から前記細胞のサンプルを取得すること、
（ｉｉ）前記細胞サンプルのガレクチン−３の状態を確かめること、
（ｉｉｉ）ガレクチン−３を発現する細胞サンプルを持つ患者に対して、前記細胞中の、１以上のＧ１／Ｓサイクリンのレベルを減少させるのに十分な量の、ガレクチン−３阻害剤を含む治療レジメンを適用することを含む、方法。
【請求項４】
患者において、癌細胞または望ましくない増殖を行う細胞のＤＮＡ複製の正確さ、または細胞周期の進行を妨害する化学療法薬のプロアポトーシス効果を高める方法であって、前記方法は、前記患者に対して前記化学療法薬および前記細胞における１以上のＧ１／Ｓサイクリンのレベルを減少させるのに十分な量のガレクチン−３阻害剤を組み合わせて投与することを含む治療レジメンを含む、方法。
【請求項５】
抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質を発現する、腫瘍細胞または望ましくない増殖を起こしている細胞の成長速度を減少させる方法であって、前記方法は、
（ｉ）患者から前記細胞のサンプルを取得すること、
（ｉｉ）前記細胞サンプルの抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態を確かめること、
（ｉｉｉ）野生型またはレベルを上昇させた、またはＢｃｌ−２タンパク質を発現する細胞サンプルを有する患者に対して、治療的有効量のガレクチン−３阻害剤を含む治療レジメンを前記患者に投与すること、を含む方法。
【請求項６】
前記腫瘍は化学療法耐性がある、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記化学療法薬は、前記ガレクチン−３阻害剤なしで投与された場合、細胞静止性を示すが、前記ガレクチン−３阻害剤と組み合わせて投与された場合、細胞毒性を示す、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記治療的レジメンは、細胞毒性について前記細胞のＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ｘＬの状態によって影響を受ける化合療法薬を含む、請求項１、２または５のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３による信号伝達を阻害し、ガレクチン−３と１０−６Ｍ未満のＫｄで結合する、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
ガレクチン−３阻害剤は糖質である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ガレクチン−３阻害剤は抗体である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
ガレクチン−３阻害剤は小分子である、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
ガレクチン−３阻害剤はペプチドまたはポリペプチドである、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
前記ガレクチン−３阻害剤は、前記ガレクチン−３とＢｃｌ−２の相互作用を阻害する、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３のリン酸化を阻害する、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記ガレクチン−３阻害剤は、Ｓｅｒ−６におけるガレクチン−３のリン酸化を阻害する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ガレクチン−３阻害剤は、核と細胞質の間のガレクチン−３の転位を阻害するか、または、ガレクチン−３の核周囲膜への転位を阻害する、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３の発現を阻害する、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３遺伝子から転写されたｍＲＮＡ配列の一部に対応する配列を有する、アンチセンスまたはＲＮＡｉコンストラクトである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記化学療法薬は、ミトコンドリア性機能障害および／またはカスパーゼ活性化を誘導する、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
化学療法薬は、前記ガレクチン−３阻害剤の不存在下で、Ｇ２／Ｍでの細胞周期の停止を誘導する、請求項１、２、４または７のいずれかに記載の方法。  
【請求項２２】
前記化学療法薬は、クロマチン機能の阻害剤である、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記化学療法薬は、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記トポイソメラーゼ阻害剤は、アドリアマイシン、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エニポシド(eniposide)、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）およびミトキサントロンから選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記化学療法薬は微小管阻害薬である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記微小管阻害薬はタキサンである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記微小管阻害薬は、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンから選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
化学療法薬はＤＮＡ傷害物質である、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
ＤＮＡ傷害物質は、アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、 カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロフォスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、 ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メルクロレタミン（merchlorehtamine）、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスファミド、およびエトポシド（ＶＰ１６）から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記化学療法薬はアンチメタボライトである、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記アンチメタボライトは、葉酸塩アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび糖修正型アナログから選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記化学療法薬はＤＮＡ合成阻害剤である、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記ＤＮＡ合成阻害剤は、５−フルオロウラシルなどのチミジル化シンターゼ阻害剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＤＮＡ合成阻害剤は、メトキシトレキサート（methoxtrexate）などのジヒドロホレートレダクターゼ阻害剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＤＮＡ合成阻害剤は、フルダラビンなどのＤＮＡポリメラーゼ 阻害剤である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
前記化学療法薬はＤＮＡ結合剤である、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
前記ＤＮＡ結合剤は挿入剤である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記化学療法薬はＤＮＡ修復阻害剤である、請求項１、２または４のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記治療レジメンは、前記ガレクチン−３阻害剤に付加的または相乗効果的に、腫瘍細胞の成長に影響を及ぼす、少なくとも１つの追加的化学療法薬を含む、請求項３または５に記載の方法。
【請求項４０】
前記追加的化学療法薬はコルチコステロイドである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記コルチコステロイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニソロン、プレドニゾンおよびプレニゾロンから選択される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記治療的レジメンは、ＡＢＶ、ＡＢＶＤ、ＡＣ（乳房）、ＡＣ（肉腫）、ＡＣ（神経芽細胞腫）、ＡＣＥ、ＡＣｅ、ＡＤ、ＡＰ、ＡＲＡＣ−ＤＮＲ、Ｂ−ＣＡＶｅ、ＢＣＶＰＰ、ＢＥＡＣＯＰＰ、ＢＥＰ、ＢＩＰ、ＢＯＭＰ、ＣＡ、ＣＡＢＯ、ＣＡＦ、ＣＡＬ−Ｇ、ＣＡＭＰ、ＣＡＰ、ＣａＴ、ＣＡＶ、ＣＡＶＥ ＡＤＤ、ＣＡ−ＶＰ１６、ＣＣ、ＣＤＤＰ／ＶＰ−１６、ＣＥＦ、ＣＥＰＰ（Ｂ）、ＣＥＶ、ＣＦ、ＣＨＡＰ、ＣｈｌＶＰＰ、ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ−ＢＬＥＯ、ＣＩＳＣＡ、ＣＬＤ−ＢＯＭＰ、ＣＭＦ、ＣＭＦＰ、ＣＭＦＶＰ、ＣＭＶ、ＣＮＦ、ＣＮＯＰ、ＣＯＢ、ＣＯＤＥ、ＣＯＭＬＡ、ＣＯＭＰ、Cooper Regimen、ＣＯＰ、ＣＯＰＥ、ＣＯＰＰ、ＣＰ−慢性リンパ性白血病、ＣＰ−卵巣癌、ＣＴ、ＣＶＤ、ＣＶＩ、ＣＶＰ、ＣＶＰＰ、ＣＹＶＡＤＩＣ、ＤＡ、ＤＡＴ、ＤＡＶ、ＤＣＴ、ＤＨＡＰ、ＤＩ、ＤＴＩＣ／タモキシフェン、ＤＶＰ、ＥＡＰ、ＥＣ、ＥＦＰ、ＥＬＦ、ＥＭＡ８６、ＥＰ、ＥＶＡ、ＦＡＣ、ＦＡＭ、ＦＡＭＴＸ、ＦＡＰ、Ｆ−ＣＬ、ＦＥＣ、ＦＥＤ、ＦＬ、ＦＺ、ＨＤＭＴＸ、ヘキサ−ＣＡＦ、ＩＣＥ−Ｔ、ＩＤＭＴＸ／６−ＭＰ、ＩＥ、ＩｆｏＶＰ、ＩＰＡ、Ｍ−２、ＭＡＣ−ＩＩＩ、ＭＡＣＣ、ＭＡＣＯＰ−Ｂ、ＭＡＩＤ、ｍ−ＢＡＣＯＤ、ＭＢＣ、ＭＣ、ＭＦ、ＭＩＣＥ、ＭＩＮＥ、ミニＢＥＡＭ、ＭＯＢＰ、ＭＯＰ、ＭＯＰＰ、ＭＯＰＰ／ＡＢＶ、ＭＰ−多発性骨髄腫、ＭＰ−前立腺癌、ＭＴＸ／６−ＭＯ、ＭＴＸ／６−ＭＰ／ＶＰ、ＭＴＸ−ＣＤＤＰＡｄｒ、ＭＶ−乳癌、ＭＶ−急性骨髄性白血病、Ｍ−ＶＡＣメトトレキサート、ＭＶＰマイトマイシン、ＭＶＰＰ、ＮＦＬ、ＮＯＶＰ、ＯＰＡ、ＯＰＰＡ、ＰＡＣ、ＰＡＣ−Ｉ、ＰＡ−ＣＩ、ＰＣ、ＰＣＶ、ＰＥ、ＰＦＬ、ＰＯＣ、ＰｒｏＭＡＣＥ、ＰｒｏＭＡＣＥ／ｃｙｔａＢＯＭ、ＰＲｏＭＡＣＥ／ＭＯＰＰ、Ｐｔ／ＶＭ、ＰＶＡ、ＰＶＢ、ＰＶＤＡ、ＳＭＦ、ＴＡＤ、ＴＣＦ、ＴＩＰ、ＴＴＴ、Ｔｏｐｏ／ＣＴＸ、ＶＡＢ−６、ＶＡＣ、ＶＡＣＡｄｒ、ＶＡＤ、ＶＡＴＨ、ＶＢＡＰ、ＶＢＣＭＰ、ＶＣ、ＶＣＡＰ、ＶＤ、ＶｅｌＰ、ＶＩＰ、ＶＭ、ＶＭＣＰ、ＶＰ、Ｖ−ＴＡＤ、５＋２、７＋３、「８ｉｎ１」から選択される組み合わせ治療である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
前記追加化学療法薬は、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ｂｃｇ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カムポテシン（campothecin）、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルヒチン、シクロフォスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエネストロール、ジエチルスチルべステロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、イロノテカン（ironotecan)、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレチド（octreotide）、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレクシド（raltitrexed)、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、チタノセンジクロリド、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンから選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
前記化学療法薬は、タモキシフェン、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−α−モルホリニル）プロポキシ）キナゾリン、４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン、ホルモン類、ステロイド類、ステロイド合成アナログ、１７ａ−エチニルエストラジオール、ジエチルスチルベステロール、テストステロン、プレドニゾン、フルオキシメステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、テストロラクトン、メゲストロールアセテート、メチルプレドニソロン、メチル-テストステロン、プレドニソロン、トリアムシノロン、クロロトリアニセン、ヒドロキシプロゲステロン、アミノグルテチミド、エストラムスチン、メドロキシプロゲステロンアセテート、ロイプロリド、フルタミド、トレミフェン、ゾラデックス（Zoladex）、抗血管由来物質、マトリクスメテロプロテイナーゼ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＺＤ６４７４、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、抗−Ｈｅｒ−２抗体（ＺＤ１８３９およびＯＳＩ７７４）、ＥＧＦＲ阻害剤、ＥＫＢ−５６９、Imclone抗体Ｃ２２５、ｓｒｃ阻害剤、ビカルタミド、表皮成長因子阻害剤、Ｈｅｒ−２阻害剤、ＭＥＫ−１キナーゼ阻害剤、ＭＡＰＫキナーゼ阻害剤、Ｐ１３阻害剤、ＰＤＧＦ阻害剤、コンブレタスタチン、ＭＥＴキナーゼ阻害剤、ＭＡＰキナーゼ阻害剤、非受容体の阻害剤、およびレセプターチロシンキナーゼ（イマチニブ）、インテグリンシグナリングの阻害剤、およびインスリン様成長因子レセプターの阻害剤から選択される、請求項１、２、４または７のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記治療レジメンはイオン化照射を含む、請求項１、３または５に記載の方法。
【請求項４６】
膵臓の腫瘍細胞、肺の腫瘍細胞、前立腺の腫瘍細胞、乳房の腫瘍細胞、結腸の腫瘍細胞、肝臓の腫瘍細胞、脳の腫瘍細胞、腎臓の腫瘍細胞、皮膚の腫瘍細胞、卵巣の腫瘍細胞および白血病細胞から選択される腫瘍細胞の成長を阻害するために使用される、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
扁平上皮癌、非扁平上皮癌、神経グリア芽細胞腫、肉腫、腺癌、メラノーマ、パピローマ、神経芽細胞腫、骨髄腫、リンパ腫、および白血病から選択される腫瘍細胞の成長を阻害するために使用される、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
腎細胞癌、カポジ肉腫、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、中皮腫、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽頭癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、肝臓癌、乳房アデノカルシノーマ、咽頭扁平上皮癌、前立腺癌、膵臓癌、消化器癌および胃癌から選択される増殖性障害の治療に使用される、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項４９】
慢性炎症, 、乾癬、子宮内膜症、良性の過形成、または角膜の血管新生に関連する疾患から選択される増殖性障害の治療に使用される、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項５０】
前記ガレクチン−３阻害剤は、部分的に解重合されたペクチンである、請求項１乃至５のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
前記部分的に解重合されたペクチンは、ラムノース残基を有している、ほぼメトキシ化されたポリガラクツロン酸である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記部分的に解重合されたペクチンは、本質的に、ホモガラクツロナン骨格と、該骨格に対する分枝依存性の程度が低い中性の糖側鎖からなる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記部分的に解重合されたペクチンは、ｐＨ調整されたペクチン、酵素的に改変されたペクチン、および/または熱的に改変されたペクチンを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記部分的に解重合されたペクチンは、改変されたシトラスペクチンを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記部分的に解重合されたペクチンは、分子量が１〜５００キロダルトン（ｋＤａ）である、請求項５０に記載の方法。  
【請求項５６】
前記部分的に解重合されたペクチンは、分子量が１０〜２５０キロダルトン（ｋＤａ）である、請求項５０に記載の方法。  
【請求項５７】
前記部分的に解重合されたペクチンは、分子量が５０〜２００キロダルトン（ｋＤａ）である、請求項５０に記載の方法。  
【請求項５８】
前記部分的に解重合されたペクチンは、分子量が７０〜１５０キロダルトン（ｋＤａ）である、請求項５０に記載の方法。  
【請求項５９】
前記部分的に解重合されたペクチンは、分子量が８０〜１００キロダルトン（ｋＤａ）である、請求項５０に記載の方法。  
【請求項６０】
前記部分的に解重合されたペクチンは、５％未満のエタノールを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記ガレクチン−３阻害剤と組み合わせて用いられる場合の前記治療処置または化学療法薬の有効用量（ＥＤ５０）は、前記治療処置または化学療法薬が単独で用いられる場合のＥＤ５０より少なくとも５倍少ない、請求項１、２または４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
前記ガレクチン−３阻害剤と組み合わせて用いられる場合の前記治療処置または化学療法薬の治療指数（ＴＩ）は、前記化学療法薬が単独で用いられる場合のＴＩより少なくとも５倍大きい、請求項１、２または４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
前記ガレクチン−３阻害剤は、前記治療処置と同時に投与される、請求項１、２または４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６４】
前記ガレクチン−３阻害剤は、前記治療処置を適用する前に投与される、請求項１、２または４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
前記ガレクチン−３阻害剤は、前記治療処置を適用した後に投与される、請求項１、２または４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６６】
前記ガレクチン−３阻害剤は非経口的に投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項６７】
前記ガレクチン−３阻害剤は静脈内注入によって投与される、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ガレクチン−３阻害剤は経口的に投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項６９】
前記ガレクチン−３阻害剤は吸入によって投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項７０】
前記ガレクチン−３阻害剤は局所投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項７１】
前記ガレクチン−３阻害剤は皮下注射によって投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項７２】
前記ガレクチン−３阻害剤は筋肉内または腹腔内の注射または注入によって投与される、請求項１乃至５のいずれかに１項に記載の方法。
【請求項７３】
（ｉ）望ましくない増殖を行う細胞のＤＮＡ複製の正確さ、または細胞周期の進行を妨害する化学療法薬、（ｉｉ）治療的有効量のガレクチン−３阻害剤、ならびに（ｉｉｉ）化学療法薬およびガレクチン−３阻害剤の組み合わせ投与のための説明書および/またはラベルを含むキット。
【請求項７４】
（ｉ）治療的有効量のガレクチン−３阻害剤、および（ｉｉ）ガレクチン−３を発現する腫瘍を持つ患者の治療のためのガレクチン−３阻害剤の投与のための説明書および/またはラベルを含むパッケージされた調合薬。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
ガレクチンは植物および動物細胞で発現し、β-ガラクトシド糖に結合するタンパク質の一ファミリーである。これらのタンパク質は、細胞表面上にも、細胞質内にも、核内にも、また細胞外流体中にも見い出すことができる。最も多くの研究がなされてきた２つのガレクチンは、ガレクチン−１とガレクチン−３であり、これらはそれぞれおおよそで１３乃至１６ｋＤ、２９乃至３５ｋＤの範囲の分子量を有し、またβ-ガラクトシド含有物質に対する親和性を有し、細胞遊走、細胞対細胞接着、血管新生、細胞融合および他の細胞対細胞の相互作用、ならびに、免疫ベースの反応およびアポトーシスを含め、生物学的プロセスにおいて数多くの重要な役割を果たしていることが見出されている。こうしたことから、ガレクチンの役割は癌および他の増殖性疾患に大変強く結び付けられている。前述の活性を示すガレクチンは数多くあるが、ガレクチン−３およびガレクチン−１が、癌に関与する細胞プロセスとの関連を強く示唆されてきた。
【０００２】
ガレクチン−３は分子量が約３０，０００の糖結合タンパク質である。それは、コラーゲンの特徴であるＧｌｙ−Ｘ−Ｙタンデム反復配列を含有するアミノ末端部分と、糖結合部位を含有するカルボキシル末端部分という、２つの異なる構造モチーフから成る。ガレクチン−３はほとんどすべての腫瘍に見つかり、β−ガラクトシド含有糖結合体に対する結合親和性を有する。ガレクチン−３は、細胞対細胞の相互作用を媒介することで、細胞接着、細胞遊走および転移の伝播を助長する役割を果たしていると考えられている。ガレクチン−３を高発現している細胞は転移しやすく、化学療法または放射線で誘導されたアポトーシスに、より耐性であることが見出されている。また、ガレクチン−３は血管新生を促進する役割も担っていることが文献で報告されている。
【０００３】
ガレクチン−３は、アポトーシスすなわちプログラムされた細胞死の調節に関与するタンパク質である、Ｂｃｌ−２の「死抑制モチーフ（death suppression motif）」を共有していることがわかっている。Ｂｃｌ−２は、アポトーシスを調節するタンパク質の一ファミリーのメンバーである。該ファミリーのメンバーのいくつかはアポトーシスを促進するが、一方、Ｂｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘＬを含む他のメンバーは、それを阻害することによって相殺する。
【０００４】
化学療法耐性細胞において、アポトーシスの誘導を阻害するＢｃｌ−２および／またはＢｃｌ−ｘＬの発現レベルの変化によるＢｃｌファミリーのタンパク質の活性の変化、リン酸化の状態、または細胞内局在化は、そのような耐性のメカニズムとしばしば関連付けられる。Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬおよび関連タンパク質の阻害は、細胞毒性の化学療法薬の投与との組み合わせにおいて、化学療法耐性を克服し、化学療法薬の効果を回復、もしくは向上させるかもしれない。いくつかの癌性細胞において認められるＢｃｌ−２および／またはＢｃｌ−ｘＬの過剰は、アポトーシス誘導物質に対する細胞応答の欠如に相関する。ガレクチン−３は、Ｂｃｌ−２を有するヘテロダイマーを作製することが可能であり、この相互作用を介して、おそらくＢｃｌ−２の抗アポトーシス作用に関与する。ガレクチン−３の信号導入経路は、Ｂｃｌ−２経路といくつかの共通性を有している。
【０００５】
Ｂｃｌ−２経路は、多くの癌治療レジメンの標的である。抗新生物剤に対する耐性を育てる、または持つ新生物は、Ｂｃｌ−２タンパク質のレベルを上昇させることが多く、これらの薬剤によるアポトーシス誘導に耐性を示す。そのような場合、抗新生物剤とＢｃｌ−２媒介性抗アポトーシス効果を止める治療薬との組み合わせは、抗新生物剤のみに対して奏効しない患者に対する効果的な治療となる。
【発明の概要】
【０００６】
本発明の一局面は、患者における乾癬、リウマチ性関節炎、層状魚鱗癬、表皮剥離性角質増殖、再狭窄、子宮内膜症、異常な創傷治癒、良性過形成もしくは角膜の血管新生に関係する疾患などの高増殖性疾患に関連する、腫瘍細胞または他の望ましくない増殖性細胞の成長速度を、組み合わせ治療レジメンを適用することによって減少させるための方法を提供する。組み合わせ治療レジメンには、その細胞毒性が腫瘍細胞の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質によって影響を受ける化学療法薬、および例えば、腫瘍細胞における１以上のＧ１／Ｓサイクリンの濃度を減少させるのに十分な量の、ガレクチン−３の抗アポトーシス効果を阻害する薬剤（以下、「ガレクチン−３阻害剤」）が含まれる。
【０００７】
本発明の別の局面は、ガレクチン−３阻害剤を、例えば、治療された細胞における１以上のＧ１／Ｓサイクリンのレベルを減少させるのに十分な量を組み合わせて投与することによって、望ましくない増殖を行う細胞のＤＮＡ複製の正確さ、または細胞周期の進行を妨害する化学療法薬のプロアポトーシス効果を高める方法を提供する。
【０００８】
本発明のさらに別の局面は、ガレクチン−３を発現する腫瘍細胞の成長速度を減少させるための方法であって、（ｉ）患者から腫瘍細胞のサンプルを取得すること、（ｉｉ）腫瘍細胞サンプルのガレクチン−３の状態を確かめること、（ｉｉｉ）ガレクチン−３を発現する腫瘍細胞を持つ患者に対して、例えば、腫瘍細胞において１以上のＧ１／Ｓサイクリンの濃度を減少させるのに十分な量の、ガレクチン−３阻害剤を含む治療レジメンを適用すること、を含む方法を提供する。
【０００９】
いくつかの好ましい態様において、該治療レジメンは、細胞毒性が、腫瘍細胞のＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ｘＬの状態によって影響を受ける化学療法薬を含む。
【００１０】
ガレクチン−３阻害剤の例としては、糖質、抗体、有機小分子、ペプチドまたはポリペプチドが含まれる。いくつかの好ましい態様において、ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３と、Ｂｃｌ−２またはｂｃｌ−ｘＬなどの抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質との相互作用を阻害する。いくつかの好ましい態様において、該阻害剤は、ガレクチン−３のリン酸化を阻害する。例えば、Ｓｅｒ−６におけるガレクチン−３のリン酸化を阻害する。いくつかの好ましい態様において、ガレクチン−３阻害剤は、核と細胞質の間のガレクチン−３の転位を阻害する、または、ガレクチン−３の核周囲膜への転位を阻害し、ミトコンドリアからのシトクロムＣの放出を阻害する。いくつかの好ましい態様において、ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３の発現を阻害する。例えば、ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３遺伝子から転写されたｍＲＮＡ配列の部分に対応する配列を有するアンチセンスもしくはＲＮＡｉコンストラクトであることができる。
【００１１】
いくつかの好ましい態様において、ガレクチン−３阻害剤は、ミトコンドリア性機能障害および／またはカスパーゼ活性化を誘導する化学療法薬とともに投与される。例えば、ガレクチン−３阻害剤とともに投与される化学療法薬は、前記ガレクチン−３阻害剤の不存在下ではＧ２／Ｍにおける細胞周期の停止を誘導するものであることができる。
【００１２】
例示に過ぎないが、化学療法薬としては、クロマチン機能の阻害剤、ＤＮＡトポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、ＤＮＡ傷害物質、アンチメタボライト（例えば、葉酸塩アンタゴニスト、ピリミジンアナログ、プリンアナログおよび糖修正型アナログ）、ＤＮＡ合成阻害剤、ＤＮＡ相互作用剤（例えば、挿入剤）、ＤＮＡ修復阻害剤、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ阻害剤、抗分裂剤、細胞周期阻害剤、抗血管由来物質、抗移動物質（anti-migratory agent）、分化調節物質、成長因子阻害剤、ホルモンアナログ、アポトーシス誘導物質、レチノール酸レセプターアルファ／ベータ選択性アゴニスト、および/または抗生物質が上げられる。従来の化学療法薬に加えて、本方法の薬剤は、アンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡｉ、または、従来の化学療法の標的である望ましくない細胞増殖に寄与する細胞成分の発現を阻害する他のポリヌクレオチドを含むことができる。
【００１３】
別の態様において、本方法は、ガレクチン−３阻害剤と、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニソロン、プレドニゾンおよびプレニゾロンなどのコルチコステロイドとを組み合わせる。
【００１４】
さらに別の態様において、本方法は、ガレクチン−３阻害剤とイオン化放射とを組み合わせる。
【００１５】
本発明の別の局面は、（ｉ）望ましくない増殖を行う細胞のＤＮＡ複製の正確さ、または細胞周期の進行を妨害する化学療法薬、（ｉｉ）治療的有効量のガレクチン−３阻害剤、ならびに（ｉｉｉ）化学療法薬およびガレクチン−３阻害剤の組み合わせ投与のための指示書および/またはラベルを含むキットを提供する。
【００１６】
さらに別の局面は、（ｉ）治療的有効量のガレクチン−３阻害剤、および（ｉｉ）ガレクチン−３を発現する腫瘍を持つ患者の治療のためのガレクチン−３阻害剤の投与のための指示書および/またはラベルを含むパッケージされた調合薬を提供する。
【００１７】
本発明の方法に用いられるガレクチン−３阻害剤の好ましいクラスは、ポリマー骨格とそれに依存する側鎖を含む。側鎖は、ガラクトース、ラムノース、キシロースまたはアラビノースユニットで終了する。この物質は、合成でもよく、天然でもよく、または半合成でもよい。特定の態様において、治療化合物は、ラムノース残基を有していてもよい、ほぼ脱メトキシル化されたポリガラクツロン酸骨格を含む。そのような化合物は、天然に発生するペクチンから調製してもよいが、部分的に解重合されたペクチン、または改変されたペクチンであることが好ましい。
【００１８】
本発明の方法によれば、こうした物質を、治療される癌または高増殖性障害の具体的な種類および付属的な治療にしたがって、経口、注射、経皮的、皮下もしくは局所投与によって投与することができる。
【発明の詳細な説明】
【００１９】
Ｉ．概要
多くの化学療法薬は細胞毒性があり、癌治療におけるそれらの効果は、癌性細胞は一般的にその急速な代謝、増殖速度ゆえに、あるいは、それらが正常の細胞によっては採用されていない生化学的経路を採用しているため、そのような細胞毒性治療に対して、正常の細胞より感受性が高いという事実に基づいている。多くの化学療法薬において、細胞毒性作用は、プログラムされた細胞死（アポトーシスとも言う）を誘導する結果起こると考えられる。しかしながら、化学療法における大きな問題点は、多くの化学療法薬の効果を減少させる、または打ち消す化学療法耐性の発達であろう。そのような耐性によって、化学療法薬は、しばしば特定の癌細胞においてアポトーシスを誘導することができない。化学療法に対する耐性を打ち消すことによって、多くの化学療法薬の効果を回復することができ、それによって薬剤の用量を少なくし、これらの薬剤の望ましくない副作用を軽減するか、もしくはなくす助けとなる。化学療法耐性は、いくつかの例においては、抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の変化およびそれらの経路に関連している。
【００２０】
本発明のいくつかの局面の顕著な特徴は、細胞死を規制する際の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質とガレクチン−３との関連性、特に、ガレクチン−３は、これらのタンパク質のアポトーシス活性に対して陽性の効果を有していることにに依存する。さらに、ガレクチン−３の発現は、腫瘍細胞のいくつかの化学療法薬、例えば、シスプラチンやゲニステインに対する感受性に関係づけられてきた。例えば、ゲニステインは、ＢＴ５４９細胞および検出可能なレベルのガレクチン−３を発現しないヒト乳房上皮細胞株において、効果的にアポトーシスを誘導することが観察されている。ガレクチン−３トランスフェクトしたＢＴ５４９細胞をゲニステインで治療した場合、Ｇ（２）／Ｍフェーズで細胞周期が停止し、アポトーシスの誘導は行われない。しかしながら、それらの細胞のガレクチン−３阻害剤での治療は、化学療法薬感受性を回復するのに十分である。
【００２１】
本発明は、癌および乾癬、リウマチ性関節炎、層状魚鱗癬、表皮剥離性角質増殖、再狭窄、子宮内膜症など他の増殖性疾患、または異常な創傷治癒の治療を高める方法および組成物を意図している。本発明は、そのような疾患および状態の治療方法であって、化学療法薬の投与、放射線治療、または外科手術と、ガレクチン−３の抗アポトーシス活性を阻害する薬剤（例えば、「ガレクチン−３阻害剤」）の投与とを組み合わせる方法を提供する。特定の態様において、この組み合わせは、化学療法薬の毒性を増強させることになる。いくつかの好ましい態様において、本発明の組み合わせ治療は、その細胞毒性が治療された細胞の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態によって影響を受ける化学療法薬の効果を向上させるために用いることができる。例えば、ガレクチン−３阻害剤は、ＤＮＡ複製の正確さ、または望ましくない増殖をする細胞の細胞周期の進行を妨害する化学療法薬と組み合わせて投与することができる。
【００２２】
さらに、ガレクチン−３は、いくつかの腫瘍細胞において、サイクリンD(1)プロモータ活性を誘導することがわかっている。Lin et al., 2002,
Oncogene 21:8001-10を参照されたい。Ｄ型サイクリンは、サイクリンＤ−依存性キナーゼ（「ｃｄｋ」）を調節することによって、細胞周期の活性化を調整する。そして、それらは、細胞周期のＧ１フェーズを経て進行するのに必須である。この経路は、多数のヒト新生物においてデレギュレートされることが知られている。Ｇ１トランジションの持続性を短くするサイクリンＤの過剰発現の結果、乳癌において、おそらくアポトーシスを阻害することによって、中等度の放射線耐性をもたらすという仮説もある（Xia et al.,
2002, Semin. Radiat. Oncol. 12:296-304）。さらに、抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態もまた、放射線による殺傷効果に影響を及ぼし得る。したがって、本発明の別の局面は、ガレクチン−３阻害剤を投与することによる放射線治療に対する耐性を減少させることに関する。
【００２３】
本発明の方法によって、化学療法および放射線などの潜在的に毒性のある化学療法の用量は減少させてもよく、化学療法耐性を克服してもよい。本発明のこれらおよび他の利点を以下に述べる。
【００２４】
本発明はまた、疾患細胞サンプルのガレクチン−３の状態を確かめ、ガレクチン−３を発現する望ましくない増殖をする細胞を持つ患者に、ガレクチン−３阻害剤を含む治療レジメンを行う。
【００２５】
本発明の別の局面は、ガレクチンが血管新生の促進に関与するという観察に依存する。固体腫瘍が成長または転移するためには、腫瘍は血管新生されなければならない。特に、ガレクチン−３は、走化性およびモルホロジーに影響を及ぼすこと、in vivoで血管新生を刺激することが証明されている。本発明によれば、ガレクチン阻害剤を、従来の化学療法と組み合わせて患者に投与する。
【００２６】
癌および治療の性質によるが、ガレクチン阻害剤は、他の療法の前、同時、および/または後に投与することができる。他の薬物と同時に投与する場合、ガレクチン阻害剤は、１以上の他の薬物と別々に調剤してもよいし、一緒に調剤してもよい。
ＩＩ．定義
【００２７】
用語「アポトーシス」または「プログラムされた細胞死」は、望ましくない、または役に立たない細胞が、発育および他の通常の生物学的プロセスにおいて除外される生物学的プロセスを言う。アポトーシスは、正常の生理学的条件の下で起こる細胞死の形態であり、その細胞は、それ自身の終焉（「細胞の自殺」）に積極的に関与する。それは、正常の細胞交替および組織ホメオスタシス、胚形成、免疫寛性の誘導と維持、神経系の発育および内分泌依存性の組織萎縮において最もよく認められる。アポトーシスが起こっている細胞は、形態学的および生化学的特徴を示す。これらの特徴としては、クロマチン凝集、核および細胞質凝集、細胞質および核の、リボソーム、形態学的にインタクトなミトコンドリアおよび核物質を含有する膜結合小胞（アポトーシス体）への関与が挙げられる。ミトコンドリアからのチトクロームＣの放出は、アポトーシスに伴うミトコンドリア性機能障害の指標と見られている。In vivoで、これらのアポトーシス体は、マクロファージおよび近接の上皮細胞によって迅速に認識され、かつ食される。アポトーシス細胞を除去するためのこの効率的なメカニズムによって、in vivoで炎症反応が引き起こされない。In vivoで、このアポトーシス体ならびに他の残りの細胞フラグメントは、究極的に膨張し、最終的に溶解する。この、in
vitroでの細胞死の最終的なフェーズは、「二次的ネクローシス」と呼ばれてきた。
【００２８】
用語「抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質」は、Ｂｃｌ−２タンパク質に関連するタンパク質のファミリーを言い、それらは、細胞性アポトーシスのアンタゴニストである。このファミリーは、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−ｗ、Ｍｃｌ−１およびＡ−１を含む。例えば、Hockenbery et
al., 1990, Nature 348:334−336; Boise et al., 1993, Cell 74:597−608; Gibson et al.,
1996, Oncogene 13:665−675; Zhou et al., 1997, Blood 89:630−643; and Lin et al.,
1993, J. Immunol. 151:1979−1988を参照されたい。このタンパク質のファミリーは、Ｂｃｌホモロジー（ＢＨ）ドメイン（すなわち、ＢＨ１、ＢＨ２、ＢＨ３およびＢＨ４）と呼ばれる４つのホモロジー領域を共有している。ヒトＢｃｌ−２コード配列およびタンパク質の代表的な配列は、GenBank Accession NM_000657 (GI 4557356)に提供されている。ヒトＢｃｌ−ｘＬコード配列およびタンパク質の代表的な配列は、GenBank Accession Z23115 (GI 510900)に提供されている。例示されている抗アポトーシスBcl-2タンパク質は、GenBank Accessions NM_000657またはZ23115に示されているタンパク質配列と少なくとも９０％一致し、および/または、GenBank Accessions NM_000657またはZ23115に記載のコード配列に、ストリンジェントな洗浄条件下（０．２×ＳＳＣ、６５℃）でハイブリダイズする核酸配列によってコードされ得る。
【００２９】
用語「抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の状態」は、抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質をコードするｍＲＮＡのレベル；タンパク質のレベル；リン酸化残基もしくは他のタンパク質の翻訳後修飾の数および位置、もしくは不存在；タンパク質の細胞内局在化；抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質どうしの関連、もしくは他のタンパク質との関連の状態；および／または抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質の抗アポトーシス活性の他のあらゆる代理の、もしくは直接的な測定などの、定量測定をその意味に含む。
【００３０】
より具体的には、用語「抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質のレベルの状態」は、抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質に特異的な抗体を用いた免疫組織化学によって検出され得るものなど、細胞内の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質を意味する。
【００３１】
本明細書において用いられている用語「動物」は、哺乳動物、好ましくはヒトなどの哺乳動物を言う。同様に、本発明の方法によって治療される「患者」もしくは「被験体」は、ヒトか非ヒト動物のいずれかを意味し得る。
【００３２】
本明細書において用いられる用語「抗体」は、他に記載がなければ、広く、抗体分子および種々の抗体由来の分子の両方を意味する。そのような抗体由来分子としては、少なくとも１つの可変領域（重鎖可変領域または軽鎖可変領域）、ならびに個別の抗体軽鎖、個別の抗体重鎖、抗体の鎖と他の分子との間のキメラ融合などが含まれる。本発明の機能的免疫グロブリンフラグメントは、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２であってもよい。
【００３３】
本明細書において用いられている用語「癌」は、例えば、腎細胞癌、カポジ肉腫、慢性白血病、前立腺癌、乳癌、肉腫、膵臓癌、卵巣癌、直腸癌、咽頭癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、乳房アデノカルシノーマ、ミエローマ、リンパ腫、咽頭扁平上皮癌、消化器癌または胃癌などの細胞性障害を含むあらゆる腫瘍性疾患を言う。おそらく、本発明において治療される癌は、メラノーマ、肺癌、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸癌、または卵巣癌である。
【００３４】
細胞の「成長状態」は、細胞の増殖の速度および細胞の分化の状態を言う。
【００３５】
本明細書において用いられている「高増殖性疾患」または「高増殖性障害」は、患者において細胞の望ましくない増殖よって引き起こされる、または顕在化するあらゆる障害を言う。高増殖性としては、限定されないが、癌、乾癬、リウマチ性関節炎、層状魚鱗癬、表皮剥離性角質増殖、再狭窄、子宮内膜症および異常な創傷治癒が含まれる。
【００３６】
本明細書において用いられる「増殖している」および「増殖」は、細胞分裂を行っている細胞を言う。
【００３７】
本明細書において用いられている「望ましくない増殖」は、生物全体の正常の細胞交替、代謝、成長または伝播の一部ではない、細胞分裂および成長を言う。細胞の望ましくない増殖は、腫瘍および細胞の他の病理的増殖において認められ、正常機能を果たさず、そして殆どは、外部の介入がなければ、正常組織の細胞のそれを超える成長速度においてばらばらになるであろう。望ましくない細胞の増殖のために生じる病理学的状態を、本明細書においては、「高増殖性疾患」または「高増殖性障害」と呼ぶ。
【００３８】
本明細書において用いられている「形質転換された細胞」は、自然発生的に、抑制されない成長状態に転換された、すなわち、培養中、無限の分裂を経て成長する能力を取得した細胞を言う。形質転換された細胞は、それらの成長コントロールの喪失に関して、腫瘍、未分化および/または過形成といった語によって特徴付けることができる。本発明の目的のために、用語「悪性の哺乳動物細胞の形質転換された表現型」および「形質転換された表現型」は、限定されないが、哺乳動物細胞の細胞形質転換に関連する下記の表現型形質、すなわち、免疫無能もしくは同系の動物における、細胞培養における成長の持続性、半固体培地での成長、または造腫瘍性の成長によって検出される、不死化、形態学的もしくは成長の形質転換、および造腫瘍性含む。
ＩＩＩ．実施の形態
【００３９】
Ａ．ガレクチン−３阻害剤
本発明のいくつかの態様において、ガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３に結合する物質であり、その抗アポトーシス活性を減少させる。そのような物質は、例えば、細胞内シグナル伝達経路および/またはガレクチン−３の転位を阻害することによって機能する。例示に過ぎないが、その物質は、ガレクチン−３の多量体化および/またはガレクチン−３と、Ｂｃｌ−２やｂｃｌ−ｘＬなどの抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質との相互作用を阻害するものである。それはまた、例えば、ガレクチン−３のＳｅｒ−６でのリン酸化を阻害することによって、ガレクチン−３のリン酸化を阻害する物質でもある。全体的な力学レベルにおいて、該阻害剤は、核と細胞質の間のガレクチン−３の転位、またはガレクチン−３の核周囲膜への転位を阻害し、そしてチトクロームＣのミトコンドリアからの放出を阻害する物質であることができる。
【００４０】
本発明で考えられているガレクチン−３阻害剤の１つのクラスは、ポリマー、特に、ガレクチン−３に結合し、その抗アポトーシス活性を阻害する、ポリマーを含有する糖質である。本発明において有用な物質は、通常天然のポリマーまたは合成ポリマーおよびオリゴマーを含んでもよい。好ましくは、そのようなポリマーは、非常に毒性が低く、ここに用いられている癌治療と相乗効果的に相互作用して、その効果を増加させる。
【００４１】
本発明のプラクティスのためのポリマーの好ましいクラスは、活性ガレクチンと結合する糖部位を含有するが、単糖類よりやや高分子量でありそのような分子はブロッキング、活性化、抑制、またはガレクチンタンパク質の他の部分と相互作用を行うことができる糖質由来のポリマーである。治療物質の好ましいクラスは、天然または合成由来の、ガラクトースまたはアラビノースに富んだオリゴマーまたはポリマー種を含む。そのような物質は、好ましくは500,000ダルトンまでの分子量、より好ましくは100,000ダルトンまでの分子量を有している。１つの特別な物質は、ラムノース残基を側基に有し、そこからガラクトース末端側鎖が延びている、実質的にデメトキシル化したポリガラクツロン酸骨格を含むものである。別の特別の物質は、そこから側鎖が延びている、または延びていない、ホモガラクツロナン骨格を含む。
【００４２】
この一般的なクラスに入る物質群の１つは、ラムノース、ガラクトース、アラビノース、または他の糖残基がそこから延びている、実質的にデメトキシル化したポリガラクツロン酸骨格を含むものである。この種類の物質では、骨格から延びた末端のガラクトースまたはアラビノース単位がガレクチンタンパク質に結合すると考えられる。この分子の残りの本体は、免疫系応答を調節するこの化合物の作用を増強する。この一般的な種類の物質を下の式ＩおよびＩＩに解説するが、この一般的な化合物のさらに他の変異体も、本発明の原則に従って調製および使用できるであろうことは理解できる。
【００４３】
ホモガラクツロナン
【化１】
2006522163.tif 000003
【００４４】
ラムノガラクツロナン
【化２】
2006522163.tif 000004
【００４５】
上記式において、ｍは、≧０、ｎ、ｏおよびｐは≧１、Ｘはα−Ｒｈａｐ；およびＹｍは、糖の線形または分枝状鎖（鎖Ｙｍの各Ｙは、それぞれ個別に鎖の中に異なる糖を有する）。糖Ｙは、限定されないが、下記のうちのいずれかである：α−Ｇａｌｐ、β−Ｇａｌｐ、β−Ａｐｉｆ、β−Ｒｈａｐ、α−Ｒｈａｐ、α−Ｆｕｃｐ、β−ＧｌｃｐＡ、α−ＧａｌｐＡ、β−ＧａｌｐＡ、β−ＤｈａｐＡ、Ｋｄｏｐ、β−Ａｃｅｆ、α−Ａｒａｆ、β−Ａｒａｆおよびα−Ｘｙｌｐ。
【００４６】
天然のペクチンは、厳密には定期的な繰り返し構造を有しておらず、追加的なランダムな変形がペクチンの部分的加水分解によって導入される可能性があり、その結果Ｙｍおよびｎおよびｏの値がある相互作用から、上記式ＩＩで表されるｐ繰り返し単位の隣のものに変形するかもしれないことが理解されよう。
【００４７】
モノマー名の省略形を以下に定義する。ＧａｌＡ：ガラクツロン酸、Ｒｈａ：ラムノース、Ｇａｌ：ガラクトース、Ａｐｉ：エリトロ−アピオース、Ｆｕｃ：フコース、ＧｌｃＡ：グルクロン酸、ＤｈａＡ：３−デオキシ−Ｄ−リキソ−ヘプツロン酸、Ｋｄｏ：３−デオキシ−Ｄ−マンノ−２−オクツロソン酸、Ａｃｅ：アセリック酸（aceric acid）（３−Ｃ−カルボキシ−５−デオキシ−Ｌ−リキソース）、Ａｒａ：アラビノース。イタリック体のｐはピラノースを表し、イタリック体のｆはフラノースを表す）。
【００４８】
この種のポリマーの例としては、改変ペクチン、好ましくは、水溶性のｐＨ改変シトラスペクチンが挙げられる。この種の好適なポリマーは、例えば、米国特許第5,834,442号、第5,895,784号、第6,274,566号および第6,500,807号、ならびにＰＣＴ国際公開WO
03/000118号に開示されている。 
【００４９】
ペクチンは、多数の分岐側鎖が延びるポリガラクツロン酸骨格から成る高度に分岐した構造を有する複合糖質である。この分岐により、「スムース」と「ヘアリー」に特徴付けられる領域が生じている。ペクチンは、種々の化学的、酵素的または物理的処理で改変してこの分子をより小さな部分に分割し、分岐が減少したラムノース残基の側鎖を持つ、より直線状の、実質的にデメトキシル化したポリガラクツロン酸骨格をもつ部分にできることが、見出されている。得られた部分的に解重合されたペクチンは当業で改変ペクチンとして公知であり、この種類のガレクチン遮断物質は手術、化学療法または放射線と併用されたことはないが、癌を治療する上でのその効果が確立されている。  
【００５０】
その開示を引用によって本明細書中に援用することとする米国特許第5,895,784号では、改変ペクチン物質、それらの調製技術、および種々の癌の治療としての該物質の使用法が開示されている。前記'784号特許の物質は、ペクチンを溶液に入れ、計画的に変更される一連のｐＨに曝露してこの分子を分解し、治療上有効な改変ペクチンにする、といったpHベースの改変法により調製される、と解説されている。この'784号特許の物質はシトラスペクチンから調製されることが最も好ましいが、例えば、リンゴペクチン等、他のソースから得られるペクチン開始材料からも改変ペクチンを調製してよいことは理解されたい。また、改変は、ペクチンの酵素処理や、または、加熱などの物理的プロセスによって、行ってもよい。改変ペクチンおよびそれらの調製方法や使用に関する更なる開示は、米国特許第5,834,442号および米国特許出願第08/024,487号にも開示されている。その開示を引用によって本明細書中に援用する。この種類の改変ペクチンは、一般に１００キロダルトン未満の分子量を有する。このような物質の群は、３キロダルトン未満の平均分子量を有するものである。別の群は、１乃至１５キロダルトンの平均分子量を有しており、このような物質の具体的な群は、約１０キロダルトンの分子量を有するものである。ある態様において、改変ペクチンは、ペクチン酸側鎖のいくつかがなお存在しているポリマーの構造を有する。好ましい態様において、改変ペクチンは、ガラクトース-およびアラビノース含有側鎖のいくつかがなお付着している、ホモガラクツロン酸とラムノガラクツロナンＩのコポリマーである。改変ペクチンは、Multi Angle Laser Light Scattering (MALLS) 検出を用いたゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定したところ、分子量１乃至５００キロダルトン（ｋＤ）、好ましくは、１０乃至２５０ｋＤ、より好ましくは５０乃至２００ｋＤ、７０乃至１５０ｋＤ、最も好ましくは８０乃至１００ｋＤである。
【００５１】
エステル化の程度は、改変ペクチンの別の特徴である。いくつかの態様において、エステル化の程度は、０乃至８０％、好ましくは０乃至５０％、より好ましくは０乃至２５％、もっとも好ましくは１０％である。
【００５２】
サッカライド含有量は、改変ペクチンの別の特徴である。いくつかの態様において、改変ペクチンは、全体として単一の種類のサッカライドサブユニットからなる。別の態様において、改変ペクチンは、少なくとも２つ、好ましくは、少なくとも３つ、最も好ましくは少なくとも４つのタイプのサッカライドサブユニットをからなる。例えば、改変ペクチンは、全体としてガラクツロン酸サブユニットで構成してもよい。あるいは、改変ペクチンは、ガラクツロン酸サブユニットとラムノースサブユニットとの組み合わせを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、ガラクツロン酸、ラムノースおよびガラクトースのサブユニットの組み合わせを含んでもよい。さらに別の例において、改変ペクチンは、ガラクツロン酸、ラムノースおよびアラビノースのサブユニットの組み合わせを含んでもよい。またさらに別の例において、改変ペクチンは、ガラクツロン酸、ラムノース、ガラクトースおよびアラビノースのサブユニットの組み合わせを含んでもよい。いくつかの態様において、改変ペクチンのガラクツロン酸含有量は、５０％を超える、好ましくは、６０％を超える、最も好ましくは８０％を超える。いくつかの態様において、ラムノース含有量は、２５％未満、好ましくは１５％未満、最も好ましくは１０％未満であり、ガラクトース含有量は、５０％未満、好ましくは４０％未満、最も好ましくは３０％未満である。そして、アラビノース含有量は、１５％未満、好ましくは１０％未満、そして最も好ましくは５％未満である。いくつかの態様において、改変ペクチンは、上記サッカライドユニットに加えて、他のウロン酸、キシロース、リボース、リキソース、グルコース、アロース、アルトロース、イドース、タロース、グルオース（gluose）、マンノース、フルクトース、プシコース、ソルボース、またはタラロース（talalose）を含んでもよい。
【００５３】
当該方法に用いるのに好適な改変ペクチンは、種々の結合または組み合わせのいずれかとすることができる。結合とは、ペクチン中の個々の糖が互いに付着している部位を意味する。いくつかの態様において、改変ペクチンは、単一の種類の結合を含む。いくつかの好ましい態様において、改変ペクチンは、少なくとも２種の結合、最も好ましくは３種の結合を含む。例えば、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットを含んでもよい。あるいは、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびアラビノースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニット結合サブユニットであってもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよび、さらに３−結合アラビノースサブユニットを有するアラビノースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットであってもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに５−結合アラビノースを備えたアラビノースサブユニットに４つの位置を介して結合したアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに３−結合および５結合アラビノースサブユニットを備えたアラビノースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに３，５−結合アラビノース分枝点を有する、さらに３−結合および５−結合アラビノースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびガラクトースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに３−結合ガラクトースサブユニットを備えたガラクトースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに４―結合ガラクトースサブユニットを備えたガラクトースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよびさらに３，６−結合分枝点を持つ３−結合ガラクトースサブユニットを備えたガラクトースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。別の例において、改変ペクチンは、アルファ−１，４−結合ガラクツロン酸サブユニットおよび４，６−結合分枝点を有する４−結合ガラクトースサブユニットをさらに備えたガラクトースサブユニットに４つの位置を介して結合しているアルファ−１，２−ラムノースサブユニットを含んでもよい。いくつかの態様において、改変ペクチンの側鎖は、上記サッカライドユニットに加えて、ウロン酸、ガラクツロン酸、グルクロン酸、ラムノース、キシロース、リボース、リキソース、グルコース、アロース、アルトロース、イドース、タロース、グルオース（gluose）、マンノース、フルクトース、プシコース、ソルボースまたはタロース（talalose）を含む。 
【００５４】
いくつかの態様において、改変ペクチン調剤は、非経口投与に好適な、ほぼエタノールを含まない生成物である。ほぼエタノールを含まないとは、本発明の組成物が５重量％未満のエタノールを含有することを意味する。好ましい態様において、該組成物は、２重量％未満のエタノール、さらに好ましくは０．５重量％未満のエタノールを含有する。いくつかの態様において、該組成物はさらに、1以上の薬学的に許容できる賦形剤を含む。そのような組成物としては、本発明の改変ペクチンの水溶液が含まれる。そのような水溶液のいくつかの態様において、ペクチンの改変は、少なくとも７ｍｇ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０、もしくはさらに１５ｍｇ／ｍｌ以上の濃度で生じる。そのような組成物のいずれかは、エタノール以外の有機溶媒も実質的に含まない。
【００５５】
改変ペクチン物質のアポトーシス促進活性を、以下に実施例１において記載する。
【００５６】
ガレクチン−３に結合するガレクチン−３阻害剤の他のクラスは、ガレクチン−３に特異的な抗体、ガレクチン−３活性に結合する、およびそれを妨害するペプチドおよびポリペプチド、ガレクチン−３に結合する小さな（好ましくは2500amu未満）の有機分子が含まれる。
【００５７】
さらに説明すれば、本発明のいくつかの態様において、当該方法は、ガレクチン−３に免疫反応性を示す、および抗アポトーシス活性に阻害性を示す抗体を用いて行うことができる。
【００５８】
タンパク質治療薬の例がＰＣＴ国際公開公報02/100343号に記載されている。その引例は、インタクトなガレクチン−３と糖質リガンドとの結合を阻害し、それによって抗アポトーシス活性に必要な、ガレクチン−３の多量体化および架橋活性を阻害する、Ｎ末端を切断したガレクチン−３タンパク質を開示している。 
【００５９】
ガレクチン−３の小分子阻害剤の例としては、チオジガラクトシド（例えば、Leffler et
al., 1986, J. Biol. Chem.
261:10119に記載がある）およびＰＣＴ国際公開公報WO 02/057284に記載の薬剤があげられる。
【００６０】
ガレクチン−３に結合するガレクチン−３阻害剤のいくつかの好ましい態様において、阻害剤は、１０−６Ｍ以下、さらに好ましくは１０−７Ｍ未満、１０−８Ｍ、またはさらに１０−９Ｍの、ガレクチン−３と結合するための解離定数（Ｋｄ）を持つように選択される。
【００６１】
本発明に有用な、いくつかのガレクチン−３阻害剤は、ガレクチン−３に結合し、ガレクチン−３と１以上の抗アポトーシスＢｃｌ−２タンパク質との相互作用を断ち切ることによって、機能する。ガレクチン−３阻害剤は、Ｂｃｌ−２結合部位と直接的に結合し、それによって競合的にＢｃｌ−２結合を阻害してもよい。しかしながら、Ｂｃｌ−２タンパク質に結合するガレクチン−３阻害剤もまた考えられ、Ｂｃｌ−２タンパク質と結合し、競合的もしくはアロステリックにガレクチン−３の相互作用を阻害するガレクチン−３阻害剤を含む。
【００６２】
上記のように、当該ガレクチン−３阻害剤のいくつかは、ガレクチン−３のリン酸化を阻害することによってその効果を発揮する。ガレクチン−３阻害剤の結合は、ガレクチン−３のリン酸化の原因となるキナーゼのアクセスをブロックし、またはガレクチンの配座転位を引き起こし、リン酸化部位を隠し、または曝露してもよい。しかしながら、本発明はまた、ガレクチン−３のリン酸化の原因となるキナーゼに直接的に作用するキナーゼ阻害剤の使用も考慮に入れている。
【００６３】
さらに別の態様において、ガレクチン−３の活性の阻害も、ガレクチン−３タンパク質の発現を阻害することによって達成される。そのような阻害は、ガレクチン−３遺伝子から転写されるｍＲＮＡ配列の一部に対応する配列を有するアンチセンスまたはＲＮＡｉコンストラクトを用いて達成される。
【００６４】
いくつかの態様において、ガレクチン−３阻害剤は核酸であることができる。ある態様において、本発明は、ガレクチン−３ｍＲＮＡにハイブリダイズし、ガレクチン−３の発現を減少させるアンチセンス核酸の使用に関する。そのようなアンチセンス核酸は、例えば、発現プラスミドとして送達することができる。それは、細胞に転写されたとき、少なくともガレクチン−３をコードする細胞ｍＲＮＡの特有の部分に相補的であるＲＮＡを産生する。あるいは、コンストラクトはex vivoで生成されるオリゴヌクレオチドであり、それは、細胞に導入された時、ガレクチン−３をコードするｍＲＮＡおよび／またはゲノム配列にハイブリダイズすることによって発現の阻害を引き起こす。そのようなオリゴヌクレオチドは、内因性のヌクレアーゼ、例えば、エキソヌクレアーゼおよび/またはエンドヌクレアーゼに耐性のある、任意に改変されたオリゴヌクレオチドであり、したがってそれはin vivoで安定である。アンチセンスオリゴヌクレオチドに使用される核酸分子の例としては、ＤＮＡのホスホラミデート、ホスホチオエートおよびメチルホスホねーとメチルホスホネートアナログが挙げられる（例えば、米国特許第5,176,996号；第5,264,564号；および第5,256,775号参照）。さらに、核酸治療に有用なオリゴマーを構築するための一般的なアプローチが概観されている。例えば、van der Krol et
al., (1988) Biotechniques 6:958-976;
and Stein et al., 1988, Cancer Res. 48:2659-2668参照。
【００６５】
別の態様において、本発明は、ガレクチン−３遺伝子の発現のノックダウンに影響を与えるＲＮＡインターフェアランス（ＲＮＡｉ）の使用に関する。ＲＮＡｉコンストラクトは、標的遺伝子の発現を特異的にブロックすることができる二本鎖ＲＮＡを含む。「ＲＮＡインターフェアランス」すなわち「ＲＮＡｉ」は、植物およびムシにおいて観察された現象に最初に適用された語であり、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、特異的かつ、転写後の方法で遺伝子の発現をブロックする。ＲＮＡｉは、in
vitroまたはin vivoでの遺伝子発現を阻害するのに有用な方法を提供する。本明細書において用いられている用語「ＲＮＡｉコンストラクト」は、小さな妨害性（interfering）のＲＮＡｓ（ｓｉＲＮＡｓ）、ヘアピンＲＮＡ、およびその他の、in vivoで切断され、ｓｉＲＮＡを形成することが可能なＲＮＡ種を含む同種の語である。ここでＲＮＡｉコンストラクトは、細胞中にｄｓＲＮＡまたはヘアピンＲＮＡを産生する転写物、および／またはin vivoでｓｉＲＮＡを産生し得る転写物を生じることができる発現ベクター（ＲＮＡｉ発現ベクターとも称する）も含む。 
【００６６】
ＲＮＡｉコンストラクトは、標的核酸配列と同一もしくは略同一の長いストレッチｄｓＲＮＡ、または標的核酸配列の一部のみと同一もしくは略同一の短いストレッチのｄｓＲＮＡのいずれかを含むことができる。
【００６７】
任意に、ＲＮＡｉコンストラクトは、阻害される遺伝子（すなわち、「標的」遺伝子）のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部のヌクレオチド配列に、細胞の生理学的条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含有する。二本鎖ＲＮＡは、ＲＮＡｉを媒介する能力を有しているという点で天然のＲＮＡに十分類似しているだけでよい。したがって、本発明は、遺伝子の突然変異、株の多型、または進化の多様化によって起こるかもしれない、配列の変型を許容することができるという利点を有する。標的配列とＲＮＡｉの間の許容されるヌクレオチドのミスマッチの数は、５塩基対中わずか１、または１０塩基対中わずか１、または２０塩基対中わずか１である。ｓｉＲＮＡ二本鎖の中心におけるミスマッチは、最も致命的であり、基本的に標的ＲＮＡの切断をだめにするかもしれない。対照的に、標的ＲＮＡに相補的なｓｉＲＮＡ鎖の３’末端におけるヌクレオチドは、標的認識の特異性に対して有意な寄与を示さない。配列同一性は、当業において公知の配列の比較およびアライメントアルゴリズムによって比較し（Gribskov and Devereux, Sequence Analysis Primer,
Stockton Press, 1991およびそこに引用されている引例を参照されたい）、ヌクレオチド配列どうしのパーセント差異を、例えば、デフォルトパラメータを用いるBESTFITソフトウェアプログラムにおいて実行されるようなSmith-Watermanアルゴリズム（例えば、 University of Wisconsin Genetic Computing Group） によって計算することによって最適化してもよい。阻害性ＲＮＡと標的遺伝子の部分の間が、９０％以上の配列同一性、さらには１００％の配列同一性を有することが好ましい。あるいは、ＲＮＡの二本鎖領域は、機能的に、標的遺伝子転写物の一部にハイブリダイズすることが可能なヌクレオチド配列として定義される（例えば、４００ｍＭ ＮａＣｌ、４０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、ｐＨ６．４、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５０℃または７０℃、１２〜１６時間のハイブリダイゼーションに続いて洗浄を行う）。
【００６８】
二本鎖構造は、単一の自己相補的ＲＮＡ鎖または２つの相補的ＲＮＡ鎖によって形成してもよい。ＲＮＡ二本鎖形成は、細胞の内部または外部のいずれかに作製することができる。ＲＮＡは、少なくとも１細胞につき１コピーの送達を可能にする量で導入することができる。二本鎖物質の用量を増やせば（例えば、１細胞あたり、少なくとも５、１０、１００、５００もしくは１０００コピー）、より効果的な阻害を行うかもしれない。一方、低用量も具体的な用途に有用である。阻害は、配列特異的である。ＲＮＡの二本鎖領域に対応するヌクレオチド配列は、遺伝子的阻害の標的とされている。
【００６９】
当該ＲＮＡｉコンストラクトは、「小さな妨害性ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」であることができる。これらの核酸は、約１９乃至３０ヌクレオチド長であり、さらに好ましくは２１乃至２３ヌクレオチド長である。ｓｉＲＮＡは、ヌクレアーゼ複合体を採用し、特異的な配列と対になって、該複合体を標的ｍＲＮＡに導くものであることが理解される。その結果、標的ｍＲＮＡは、タンパク質複合体中のヌクレアーゼによって低下される。特定の態様において、２１乃至２３ヌクレオチドのｓｉＲＮＡ分子は、３’ヒドロキシル基を有している。いくつかの態様において、ｓｉＲＮＡコンストラクトは、長い二本鎖ＲＮＡを、例えば、酵素ダイサーの存在下で処理することによって作製され得る。ある態様において、ショウジョウバエ(Drosophila)がin
vitro系で用いられる。この態様において、ｄｓＲＮＡは、ショウジョウバエ胚由来の可溶性抽出物と組み合わされ、それによって、組み合わせを作製する。該組み合わせは、ｄｓＲＮＡが処理されて約２１乃至約２３ヌクレオチドのＲＮＡ分子となる条件下で維持される。ｓｉＲＮＡ分子は、当該技術分野の当業者に公知の多くの方法を用いて精製することができる。例えば、ゲル電気泳動を用いて、ｓｉＲＮＡを精製することができる。あるいは、未変性法、例えば、未変性カラムクロマトグラフィーを用いてｓｉＲＮＡを精製することができる。さらに、クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー）、グリセロール勾配遠心分離、抗体を用いたアフィニティ精製を用いてｓｉＲＮＡを精製することができる。
【００７０】
ＲＮＡｉコンストラクトは、化学的合成法または組み換え核酸技法によって作製することができる。治療された細胞の内因性ＲＮＡポリメラーゼが、in vivoでの転写を媒介するかも知れない。またはクローニングされたＲＮＡポリメラーゼが、in
vitroでの転写に使用することができるかもしれない。ＲＮＡｉコンストラクトは、リン酸−糖骨格あるいはヌクレオチドのいずれかに対する改変、例えば、細胞性ヌクレアーゼに対する感受性を減少させ、バイオアベラビリティーを向上させるため、製剤特性を向上させるため、および／または、他のファーマコキネティック特性を変化させるため改変を含む。例えば、天然のＲＮＡのホスフォジエステル結合を、少なくとも１つの窒素またはイオウへテロ原子を含むように改変してもよい。ＲＮＡ構造の改変は、ｄｓＲＮＡに対する一般的な反応を避けながら、特異的な遺伝子的阻害を可能にするように目的にあわせて作製してもよい。同様に、塩基を、アデノシンデアミナーゼの活性をブロックするために改変してもよい。ＲＮＡｉコンストラクトは、酵素的に作製することもできるし、または、部分的／全体的な有機合成によって作製してもよい。あらゆる改変リボヌクレオチドをin
vitroで酵素的、または有機的合成によって導入してもよい。ＲＮＡ分子を化学的に改変する方法は、ＲＮＡｉコンストラクトを改変するために採用することができる（例えば、Heidenreich et
al., 1997, Nucleic Acids Res., 25:776-780;
Wilson et al., 1994, J. Mol. Recog. 7:89-98; Chen et al., 1995, Nucleic Acids Res. 23:2661-2668; Hirschbein et al., 1997, Antisense
Nucleic Acid Drug Dev. 7:55-61参照)。例示に過ぎないが、ＲＮＡｉコンストラクトの骨格は、ホスホロチオエート、ホスホラミデート、ホスホジチオエート、キメラメチルホスホネート−ホスフォジエステル、ペプチド核酸、オリゴマーを含有する５−プロピル−ピリミジン、または糖改変（例えば、２’−置換リボヌクレオシド、ａ−構成）によって改変することができる。
【００７１】
いくつかのケースにおいて、ｓｉＲＮＡ分子の少なくとも１つの鎖は、約１乃至約６のヌクレオチド長（２乃至４のヌクレオチド長でもよい）の３’末端オーバーハングを有している。より好ましくは、３’末端オーバーハングは、１乃至３ヌクレオチド長である。いくつかの態様において、１つの鎖は、３’末端オーバーハングを有し、他の鎖は、平滑末端またはオーバーハングを有している。オーバーハングの長さは、それぞれの鎖につき同じでもよいし異なっていてもよい。ｓｉＲＮＡの安定性をより向上させるために、３’末端オーバーハングは、劣化に対して安定させることができる。ある態様において、ＲＮＡは、プリンヌクレオチド、例えば、アデノシンもしくはグアノシンヌクレオチドを導入することによって安定化することができる。あるいは、ピリミジンヌクレオチドを改変したアナログで置換すること、例えば、ウリジンヌクレオチド３’末端オーバーハングを２’−デオキシチミジンで置換することも許容され、ＲＮＡｉに効果を及ぼさない。２’ヒドロキシルが存在しないことによって、組織培養培地においてオーバーハングのヌクレアーゼ耐性を有意に上昇させる。そしてそれは、in vivoにおいても有益かもしれない。
【００７２】
ＲＮＡｉコンストラクトは、長い二本鎖ＲＮＡの形態とすることもできる。いくつかの態様において、ＲＮＡｉコンストラクトは、少なくとも２５、５０、１００、２００、３００または４００塩基である。いくつかの態様において、ＲＮＡｉコンストラクトは、４００〜８００塩基長である。二本鎖ＲＮＡは、細胞内消化され、例えば、細胞内にｓｉＲＮＡ配列を作製する。しかしながら、おそらく配列依存性のｄｓＲＮＡ反応によって引き起こされるかもしれない有害効果ゆえに、長い二本鎖ＲＮＡをin vivoで用いることは必ずしも実践的ではない。そのような態様においては、局所送達系および/またはインターフェロンもしくはＰＫＲの効果を減少させる薬剤を用いることが好ましい。
【００７３】
あるいは、ＲＮＡｉコンストラクトは、ヘアピン構造（ヘアピンRNAと称する)の形態である。ヘアピンＲＮＡは、外因的に合成することができる。または、in vivoでＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモータから転写することによって形成することができる。哺乳動物細胞においてサイレンス化する遺伝子のための、そのようなヘアピンＲＮＡを作製および使用する例は、例えば、Paddison et
al., Genes Dev ., 2002,
16:948-58; McCaffrey et al., Nature, 2002, 418:38-9; McManus et al., RNA, 2002, 8:842-50; Yu et al.,
Proc. Nat'l Acad. Sci. USA, 2002,
99:6047-52)に記載されている。好ましくは、そのようなヘアピンＲＮＡは、所望の遺伝子の連続的かつ安定した抑制を確保するために、細胞内または動物において設計することができる。ｓｉＲＮＡが細胞内でヘアピンＲＮＡをプロセシングすることは当業に公知である。
【００７４】
ＰＣＴ出願WO01/77350号は、導入遺伝子の両方向転写を行い、同じ導入遺伝子のセンスおよびアンチセンスＲＮＡ転写物を真核細胞中に産生するためのベクターの例を記載している。したがって、いくつかの態様において、本発明は、以下の特有の特徴を持つ組み換えベクターを提供する：反対方向に配列され、当該ＲＮＡｉコンストラクトの導入遺伝子に隣接する２つの重複転写単位を有するウイルス複製単位を含み、該２つの重複転写単位は、同じ導入遺伝子フラグメントから、宿主細胞において、センスおよびアンチセンスＲＮＡ転写物を産生する。
【００７５】
別の態様において、本発明は、ガレクチン−３のｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、ｍＲＮＡの翻訳を阻止するように設計されたリボザイム分子の使用に関する（例えば、ＰＣＴ国際公開公報WO90/11364、１９９０年１０月４日公開；Sarver et al., 1990, Science 247:1222-1225; および米国特許第5,093,246号参照)。特定のmRNAを破壊するために、部位特異的認識配列においてｍＲＮＡを切断するリボザイムを使用することができるが、ハンマーヘッドリボザイムを使用することが好ましい。ハンマーヘッドリボザイムは、標的ｍＲＮＡを用いて相補的な塩基対を形成する隣接領域によって示される位置において、ｍＲＮＡを切断する。標的ｍＲＮＡが２つの塩基からなる以下の配列：５’−ＵＧ−３’が唯一の要件である。ハンマーヘッドリボザイムの構築および作製は、当該技術分野において公知であり、Haseloff and Gerlach, 1988, Nature, 334:585-591により詳細に記載されている。本発明のリボザイムはまた、テトラヒメナ好熱菌（Tetrahymena
thermophila）において天然に発生するもののようなＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ（「Ｃｅｃｈ型リボザイム」）を含む（ＩＶＳまたはＬ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡとして知られている)。これについては、広く記載されている（例えば、Zaug, et
al., 1984, Science, 224:574-578;
Zaug and Cech, 1986, Science,
231:470-475; Zaug, et al., 1986, Nature, 324:429-433; 国際公開公報第WO88/04300、University
Patents Inc.; Been and Cech, 1986, Cell,
47:207-216参照)。
【００７６】
更に別の態様において、本発明は、ガレクチン−３遺伝子の発現を阻害するＤＮＡ酵素の使用に関する。ＤＮＡ酵素は、アンチセンスおよびリボザイムのテクノロジーの力学的特徴のいくつかを組み込んでいる。ＤＮＡ酵素は、アンチセンスオリゴヌクレオチドのように、特定の標的核酸配列を認識するように、しかしながら、リボザイムのように、酵素的および特異的に標的核酸を切断するように設計されている。例示に過ぎないが、標的核酸を特異的に認識し、切断する理想的なＤＮＡ酵素を設計するために、当業者はまず、独特の標的配列を同定しなければならない。好ましくは、独特のまたは実質的な配列は、約１８乃至２２ヌクレオチドでＧ／Ｃに富んでいることである。Ｇ／Ｃ含有率が高いと、ＤＮＡ酵素と標的配列との間の相互作用を強める助けとなる。ＤＮＡ酵素を合成する際、メッセージに対する酵素を標的とする特異的なアンチセンス認識配列が、ＤＮＡ酵素の２つの腕とＤＮＡ酵素ループを含むように分割される。ＤＮＡ酵素を作製および投与する方法は、例えば、米国特許第6,110,462号に見出すことができる。
【００７７】
Ｂ．化学療法薬
組み合わせ化学療法において用いられ得る調合薬は、例示に過ぎないが、アミノグルテチミド、アムサクリン、アナストロゾール、アスパラギナーゼ、ｂｃｇ、ビカルタミド、ブレオマイシン、ブセレリン、ブスルファン、カムポテシン（campothecin)、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロネート、コルヒチン、シクロフォスファミド、シプロテロン、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ジエネストロール、ジエチルスチルべステロール、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エストラジオール、エストラムスチン、エトポシド、エキセメスタン、フィルグラスチム、フルダラビン、フルドロコルチゾン、フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、ゲムシタビン、ゲニステイン、ゴセレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブ、インターフェロン、イリノテカン、イロノテカン（ironotecan)、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、レバミゾール、ロムスチン、メクロレタミン、メドロキシプロゲステロン、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトタン、ミトキサントロン、ニルタミド、ノコダゾール、オクトレオチド、オキサリプラチン、パクリタキセル、パミドロネート、ペントスタチン、プリカマイシン、ポルフィマー、プロカルバジン、ラルチトレクシド（raltitrexed)、リツキシマブ、ストレプトゾシン、スラミン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストステロン、チオグアニン、チオテパ、チタノセンジクロリド、トポテカン、トラスツズマブ、トレチノイン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、およびビノレルビンを含む。
【００７８】
これらの化学療法薬は、それらの作用機序によって、例えば、以下のグループに分類することができる。アンチメタボライト／抗癌剤、例えば、ピリミジンアナログ（５−フルオロウラシル、フロキシウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビン）およびプリンアナログ、葉酸塩アンタゴニストおよび関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；天然の生成物を含めた抗増殖剤／抗分裂剤、例えば、ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビノレルビン）、微小管崩壊剤、例えば、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビン、エピジポドフィロトキシン（epidipodophyllotoxins）（テニポシド)、ＤＮＡ傷害物質（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロフォスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メルクロレタミン（merchlorethamine）、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、パクリタキセル、プリカマイシン、プロカルバジン、テニポシド、トリエチレンチオホスホラミド、およびエトポシド（ＶＰ１６））；抗生物質、例えば、ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、およびマイトマイシン；酵素（Ｌ−アスパラギンを全身で代謝し、それ自身のアスパラギンを合成する能力を持たない細胞を削除するＬ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；抗増殖／抗分裂アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロフォスファミド、およびアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホン酸塩−ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）およびアナログ、ストレプトゾシン）、トラゼン−ダカルバジニン（ＤＴＩＣ）；抗増殖／抗分裂アンチメタボライト、例えば、葉酸アナログ（メトトレキサート）；白金コーディネーション複合体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン類、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）およびアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝血剤（ヘパリン、合成ヘパリンおよび他のトロンビン阻害剤）； フィブリン溶解酵素物質（例えば、組織プラスミノゲン活性剤、ストレプトキナーゼおよびウロキナーゼ）、アスピリン、COX-2阻害剤、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマム（abciximab）；抗移動物質（antimigratory agents）；分泌抑制剤（ブレベルジン（breveldin））；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリマス（tacrolimus）（ＦＫ−５０６）、シロリマス（ラパマイシン)、アザチオプリン、ミコフェノレート・モフェチル）；抗血管由来化合物（ＴＮＰ−４７０、ゲニステイン）および成長因子阻害剤（血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤、繊維芽細胞生長因子（ＦＧＦ）阻害剤、表皮成長因子（ＥＧＦ）阻害剤）；アンジオテンジンレセプターブロッカー；酸化窒素供与体；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤および分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン(アドリアマイシン)、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド (eniposide)、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）およびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン)、コルチコステロイド(コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルペドニソロン（methylpednisolone）、プレドニゾン、およびプレニゾロン)；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア性機能障害誘導物質およびカスパーゼ活性物質；クロマチン崩壊物質。
【００７９】
これらの化学療法薬は、ガレクチン阻害剤とともに、すなわち組み合わせにおいて用いられる。多くの組み合わせ治療が従来技術において開発されている。限定するものではないが、それを表１に記載する。
【００８０】
【表１】
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【００８１】
従来の化学療法薬に加えて、本方法の薬剤はまた、化合物およびアンチセンスＲＮＡ、ＲＮＡｉ、または望ましくない細胞増殖に寄与する、従来の化学療法の標的である、細胞成分の発現を阻害する他のポリヌクレオチドであることができる。そのような標的は、例示に過ぎないが、成長因子、成長因子レセプター、細胞周期調節転写因子、または信号伝達キナーゼが挙げられる。
【００８２】
本発明の方法は、従来の化学療法薬をより低用量でより大きな機能を発揮させることができるので、従来公知の組み合わせ治療に比べて有利である。本発明の好ましい態様によれば、ガレクチン−３阻害剤と組み合わせて使用した場合の化学療法薬または従来の化学療法薬の組み合わせの有効量（ＥＤ５０）は、化学療法薬のみの場合のＥＤ５０の少なくとも５倍未満である。逆に、ガレクチン−３阻害剤と組み合わせて使用した場合のそのような化学療法薬またはそのような化学療法薬の組み合わせの治療指数(ＴＩ)は、従来の化学療法薬での治療法のみのＴＩの少なくとも５倍高い。
【００８３】
Ｃ．他の治療方法
さらに別の態様において、本方法は、ガレクチン−３阻害剤と、イオン化放射、ガンマ放射、粒子ビームを含む放射線治療とを組み合わせている。 
【００８４】
Ｄ．投与
ガレクチン−３阻害剤またはガレクチン−３阻害剤を含有する組み合わせ治療は、経口投与、静脈注射による非経口投与、経皮投与、肺吸入法、鞘膜内または直腸内投与、皮下埋め込み術、筋肉内注射または患部組織への直接注射、例えば、腫瘍部位への注射によって投与することができる。いくつかの例において、物質は、手術時に局所投与してもよい。別の例においては、局所投与は、眼への治療的組成物の直接投与とともに、目薬によって行うこともできる。
【００８５】
該物質は、所望の投与経路に適するように製剤される。製剤は、当該技術分野において公知の、薬学的に許容できる緩衝剤、安定剤、局所麻酔剤などを含めた好適な賦形剤を含んでもよい。非経口投与の場合、例示された製剤は、無菌溶液もしくは懸濁液としてもよい。経口投与法の場合、シロップ、錠剤もしくは美味しく味付けした溶液；局所投与の場合、ローション、クリーム、スプレーもしくは軟膏；吸入による投与の場合、微結晶性粉末もしくは噴霧療法に好適な溶液；鞘膜内または直腸内投与の場合、ペッサリー、座薬、クリームもしくは泡剤とすることができる。投与経路は非経口であることが好ましい。静脈内投与がより好ましい。
【００８６】
Ｅ．治療のための標的の例
ガレクチン−３阻害剤は、膵臓の腫瘍細胞、肺の腫瘍細胞、前立腺の腫瘍細胞、乳房の腫瘍細胞、結腸の腫瘍細胞、肝臓の腫瘍細胞、脳の腫瘍細胞、腎臓の腫瘍細胞、皮膚の腫瘍細胞、卵巣の腫瘍細胞の成長を阻害し、したがって、扁平上皮癌、非扁平上皮癌、神経グリア芽細胞腫、肉腫、腺癌、メラノーマ、パピローマ、神経芽細胞腫および白血病の成長を阻害する。
【００８７】
本発明の方法は、限定するわけではないが、乾癬、リウマチ性関節炎、層状魚鱗癬、表皮剥離性角質増殖、再狭窄、子宮内膜症、良性過形成、角膜の血管新生に関係する疾患、または異常な創傷治癒、および腎細胞癌、カポジ肉腫、慢性リンパ性白血病、リンパ腫、中皮腫、乳癌、肉腫、卵巣癌、直腸癌、咽頭癌、メラノーマ、結腸癌、膀胱癌、肥満細胞腫、肺癌、肝臓癌、乳房アデノカルシノーマ、咽頭扁平上皮癌、前立腺癌、膵臓癌、消化器癌または胃癌を含む種々の癌を含めた種々の細胞増殖性疾患および癌の治療に有効である。該方法はまた、腫瘍成長に関係する血管新生の阻害、または慢性炎症に関係する疾患および自己免疫疾患の治療に有効である。
【００８８】
関連する組成物および使用についての更なる開示が、米国特許第6,680,306号および第08/024,487号、第10/299,478号、第10/176,022号および第60/461,006に記載されている。その開示を引用によって本明細書中に援用する。
【００８９】
もちろん、標的化された癌細胞が、高いレベルを有しているか、または腫瘍および固体新生物の悪性の増殖に関与する活性ガラクチン-３（galactin-3）を有していれば、本発明の方法は、より有効であり、好ましい。したがって、ガレクチン−３の発現レベルおよびリン酸化の状態を決定すること、ならびにガレクチン−３の細胞間の位置を決定することは有益である。
【００９０】
腫瘍中のガレクチン−３の存在は、酸素結合免疫吸着検査法または固体腫瘍サンプルの免疫組織化学検査法のいずれかによって、ガレクチン−３に特異的な抗体を用いた免疫検出によって決定することができる。免疫組織化学検査法は、腫瘍サンプル中のガレクチン−３の細胞内局在化の測定を可能にするものである。リン酸化されたガレクチン−３に特異的なモノクローナル抗体を用いることによって、ガレクチン−３のリン酸化状態を同じ技法によって決定することができる。ガレクチン−３の発現は、ガレクチン−３のヌクレオチド配列に特異的なプローブを用い、サザンブロッティングにおいてガレクチン−３のmRNAを検出することによって決定することができる。別法として、ガレクチン−３遺伝子に特異的な一対のプライマーを用いた定量ポリメラーゼ連鎖反応法を行ってもよい。発現レベルおよびガレクチン−３の状態が一旦決定されれば、ガレクチン−３活性のレベルを上昇させる癌性成長を有する患者に、必要に応じて、他の抗癌剤治療とともにガレクチン−３阻害剤を用いた治療を行う。
【００９１】
ガレクチン−３およびＢｃｌ−２またはＢｃｌ−ｘＬは相互作用するので、また、ガレクチン−３阻害剤は、Ｂｃｌ−２またはＢｃｌ−ｘＬ活性が上昇した細胞を治療するのに特に有用であるので、患者の腫瘍または白血病細胞における活性のあるＢｃｌ−２およびＢｃｌ−ｘＬを決定するのに有益である。Ｂｃｌ−２またはＢｃｌ−ｘＬは、適切なタンパク質を検出するために特異的なプローブおよび抗体が用いられること以外は、上記ガレクチン−３について記載したのと同じ技法によって検出することができる。
【００９２】
Ｆ．実施例
実施例１：改変ペクチンによるアポトーシスの促進
Bcl-2を高発現し、化学療法耐性を示す細胞株において、改変ペクチンがアポトーシスを促進することができるかどうかを証明するために実験を行った。
【００９３】
細胞株ＤｏＨＨ２は、自発的に成長するＥＢＶ−陰性Ｂ細胞株であり、免疫芽球性リンパ腫に形質転換された、中心芽細胞中心細胞性非ホジキンリンパ腫に罹患している患者の胸膜液細胞から作製される。Kluin-Nelemans et al., “A new non-Hodgkin's B-cell line (DoHH2) with a chromosomal
translocation t(14;18)(q32;q21),” Leukemia
1991 Mar;5(3):221-4。Ｂｃｌ−２の発現は、染色体転位によってＤｏＨＨ２中でアップレギュレートされる。該細胞株は、Ｂｃｌ−２の状態に依存する高い化学療法耐性を有することが知られている。Ｂｃｌ−２アンチセンスポリヌクレオチドを用いて治療したとき、ＤｏＨＨ２はアポトーシスに進行する。それは、Ｂｃｌ−２の過剰発現がアポトーシスの欠如によるものであることを示す。
【００９４】
ＤｏＨＨ２細胞を改変ペクチンＧＣＳ−１００に、３つの異なる製剤Ｖ１、Ｖ２およびＶ３において曝露した。製剤Ｖ１は、１２．６％エタノールを含有し、Ｖ２は、１５％エタノールを含有し、Ｖ３は、０．２％エタノールを含有していた。In
vitroアポトーシスをＤｉｏＣ６（３）染色によってミトコンドリア脱分極の測定値として、０、４０、８０、１６０または３２０μｇ／ｍｌの各製剤を細胞培養培地に添加した４、２４、４８および７２時間後に定量化した。図１Ａ〜１Ｃ参照。全てのサンプルにおいて、アポトーシスが経時的に増加したが、ＧＣＳ−１００の添加によって、アポトーシスを行う細胞数は用量依存的に増加した。３つの製剤は同様に、用量が３２０μｇ／ｍｌのときに最大となったが、４０、８０または６０μｇ／ｍｌの低用量のとき、エタノール含有量が最小の製剤Ｖ３が、製剤Ｖ１またはＶ２と比べてより早い時点でアポトーシスを効果的に誘導した。
【００９５】
実施例２：ＧＣＳ−１００によるエトポシドの効果の増強
エトポシド（４’−デメチルエピポドフィロトキシン９−（４，６−ｏ−エチリデン−ベータ−Ｄ−グルコピラノシド））、a.k.a.ＶＰ−１６は、切断可能な酵素−ＤＮＡ複合体の形成を誘導し、安定化することによってトポイソメラーゼＩＩを阻害する細胞毒性化学療法薬である。改変ペクチンＧＣＳ−１００がin
vitro細胞培養系においてエトポシドの細胞毒性効果を高める能力を証明するために実験を行った。
【００９６】
実施例１に記載したように、ＤｏＨＨ２細胞をＲＰＭＩ１６４０培地中で培養し、４０μ／ｍｌのＧＣＳ−１００の存在下または不存在下で、種々の濃度で２４時間エトポシドに曝露した。実施例１に記載したように、ＧＣＳ−１００の製剤としてはＶ３を使用した。In
vitroでのアポトーシスをエトポシドとＧＣＳ−１００の組み合わせに曝露した２４時間後のミトコンドリア脱分極の測定値として、ＤｉｏＣ６（３）染色によって定量した。ＧＣＳ−１００がアポトーシスを高める能力を、２５倍の範囲のエトポシドの５つの濃度において試験した。 
【００９７】
図２に示すように、ＧＣＳ−１００は、エトポシド誘導性のアポトーシスを、低エトポシド濃度において、統計学的に有意に高めた。
【００９８】
前記説明は、主に改変ペクチン物質およびガレクチン−３と相互作用する物質を目的としているが、しかしながら、他のガレクチンも種々の癌の進行に関与していることが知られており、改変ペクチン物質ならびに上記した他の治療物質の双方がガレクチンと相互作用することが理解されよう。したがって、他の物質も本発明を実行するのに採用することができる。上記議論および説明は、特定の実施態様の例示に過ぎず、その実行のみに限定されるものではない。以下の請求項は、全ての等価物も含めて本発明の範囲を定義するものである。
【図面の簡単な説明】
【００９９】
【図１】図１Ａ〜１Ｃは、改変ペクチンＧＣＳ−１００を含む製剤による、in vitroでのアポトーシスの用量依存的および時間依存的な促進を示す。
【図２】図２は、改変ペクチンＧＣＳ−１００による種々の用量におけるエトポシドの効果の上昇を示す。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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