(57)【要約】本発明は、リポソーム製剤の製造方法を提供する。本方法に基づき、脂質画分を、水混和性有機溶媒に溶解する。バルクリポソーム製剤を形成する条件下、脂質画分を含むこの溶液は、水溶液に加えられ混合される。望ましくは、該製剤は１種以上の活性成分を含み得る。バルクリポソーム製剤は、所望される場合、更に加工され得る。例えば、サイズ分画もしくは減少、水混和性有機溶媒の除去、凍結乾燥、又は他の処理である。本方法は、大規模又は市販規模でのリポソーム製剤の製造を可能とする。
2006517594.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）脂質画分を水混和性有機溶媒に溶解すること、
（ｂ）バルクリポソーム製剤を形成するのに適した条件下、脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液を水溶液と混合すること、
を含む方法。
【請求項２】
１種以上の活性成分を加えることを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
活性成分を、水混和性有機溶媒に加える、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
活性成分を、脂質画分の添加前に水混和性有機溶媒に加える、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
活性成分を、水溶液に加える、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
活性成分を、工程（ｂ）の前に水溶液に加える、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
活性成分を、工程（ｂ）の間、又はその後に加える、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
活性成分のリポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）少なくとも１種の活性成分を水混和性有機溶媒に溶解すること、
（ｂ）脂質画分を水混和性有機溶媒に溶解すること、
（ｃ）バルクリポソーム製剤を形成するのに適した条件下、活性成分と脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液を水溶液と混合すること、
を含む方法。
【請求項９】
水混和性有機溶媒が、ｔ−ブタノールである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
活性成分は、少なくとも１種の抗腫瘍剤又は抗真菌剤を含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
活性成分が、タキサン又は誘導体、及びカンプトテシン又は誘導体からなる群から選択される少なくとも１種の薬剤を含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
活性成分が、パクリタキセル又はドセタキセルを含む、請求項２〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
活性成分を、約３５℃を超える温度で水混和性有機溶媒に溶解する、請求項３〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
活性成分を、約４０〜約５５℃の温度で水混和性有機溶媒に溶解する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
水混和性有機溶媒が、ｔ−ブタノールである、請求項１３又は１４に記載の方法。
【請求項１６】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、及びトコフェリル酸サクシネートの１種以上を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
脂質画分が、コレステロール、ＤＯＰＣ、テトラミリストイルカルジオリピン、及びトコフェリル酸サクシネートの３種以上を含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＤＯＰＣが、脂質画分の大部分を構成する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
脂質画分が、約９０：５：５のモル比で、少なくともＤＯＰＣ、コレステロール、及びテトラミリストイルカルジオリピンを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
水溶液が、全リポソーム製剤の体積の少なくとも約９０％である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
水溶液が、約１０％スクロースと約０．４−０．９％塩化ナトリウムである、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
工程（ａ）が、約３５〜約６５℃での、水混和性有機溶媒への、活性成分、パクリタキセル又はドセタキセルなどの任意の他のタキサンの添加によって達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
工程（ａ）が、約３５〜約６５℃での、水混和性有機溶媒中への、脂質画分を含む、脂質成分、コレステロール、カルジオリピン、ＤＯＰＣ、及びトコフェリル酸サクシネートの順次添加によって達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
工程（ｂ）が、水混和性有機溶媒中への、脂質画分を含む化合物の順次添加によって達成される、請求項８に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｂ）が、約３０〜４０℃で水相溶液を維持し、かつ３００〜４００ｒｐｍで混合しながら、水溶液に脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液を加えることを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
工程（ｃ）が、混合しながら、水溶液に脂質画分を含む水混和性有機溶媒を添加することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項２７】
工程（ｂ）が、冷却しながら、水溶液に脂質画分を含む水混和性溶媒を添加した後、溶液を混合することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
工程（ｃ）が、冷却しながら、水溶液に脂質画分を含む水混和性溶媒を添加した後、溶液を混合することを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項２９】
冷却が、約２５〜約３０℃の温度にすることである、請求項２７又は２８に記載の方法。
【請求項３０】
バルクリポソーム製剤のサイズを減少させて、サイズが減少したリポソーム製剤を得ることを更に含む、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
サイズ減少が、ポリカーボネートフィルターを通じたバルクリポソーム製剤の押出しによって達成される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
サイズ減少が、０．２μｍ及び０．１μｍのポリカーボネートフィルターを通じたバルクリポソーム製剤の押出しによって達成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
サイズ減少が、約２００ｐｓｉまでの圧力でのバルクリポソーム製剤の押出しによって達成される、請求項３１又は３２に記載の方法。
【請求項３４】
バルクリポソーム製剤が、少なくとも１種の活性成分を含む、請求項３１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
サイズ減少が、活性成分の沈殿なしに達成される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
リポソーム製剤から水混和性有機溶媒を実質的に除去することを更に含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
リポソーム製剤から水混和性有機溶媒を実質的に除去することを更に含む、請求項３０〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
タンジェンシャルフローろ過プロセスを用いるダイアフィルトレーションとろ過滅菌によって、リポソーム製剤から水混和性有機溶媒が実質的に除去される、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
１種以上の活性成分を加えることを更に含む、請求項３６〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
活性成分が水溶性成分であり、リポソーム製剤から水混和性有機溶媒を実質的に除去した後に加える、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
リポソーム製剤を、ろ過滅菌することを更に含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
活性成分を、ろ過滅菌の前に製剤に加える、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
リポソーム製剤を、凍結乾燥することを更に含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
活性成分を、リポソーム製剤を凍結乾燥する前に製剤に加える、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜３７のいずれか１項に記載の方法によって製造されるリポソーム製剤。
【請求項４６】
少なくとも１種の活性成分を含む、請求項４５に記載のリポソーム製剤。
【請求項４７】
活性成分が、少なくとも１種の抗腫瘍剤又は抗真菌剤を含む、請求項４６のリポソーム製剤。
【請求項４８】
活性成分が、タキサン又は誘導体、及びカンプトテシン又は誘導体からなる群から選択される少なくとも１種の薬剤を含む、請求項４６に記載の製剤。
【請求項４９】
活性成分が、パクリタキセル又はドセタキセルを含む、請求項４６に記載のリポソーム製剤。
【請求項５０】
医薬として許容できる賦形剤を更に含む、請求項４５〜４９のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項５１】
治療の必要のある患者での疾患の治療方法であって、該疾患を治療するように、患者に活性薬剤を送達するのに十分な量と位置で、請求項４７〜５０のいずれか１項に記載の組成物を患者に投与することを含む方法。
【請求項５２】
疾患が癌である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
組成物を非経口投与する、請求項５１又は５２に記載の方法。
【請求項５４】
組成物を局所投与する、請求項５１又は５２に記載の方法。
【請求項５５】
組成物を、腫瘍に直接注射することによって投与する、請求項５１又は５２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００３年２月１１日出願の同時係属中の米国仮特許出願６０／４４６，８９５に対する優先権を主張する。この出願の全体が、引用により本明細書に含まれるものとする。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、リポソーム製剤の製造方法、及びこれらの方法によって製造されるリポソーム製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
種々の活性成分（典型的には、抗腫瘍剤、抗真菌剤など）のリポソーム製剤を製造するための多くの公知の方法が存在する。このような方法として、例えば、エタノール希釈、薄フィルム水和、塩化メチレン法などが挙げられる。
【０００４】
凍結乾燥によって乾燥脂質粉末を製造するためにリポソーム形成脂質を溶解するのにｔ−ブタノールを伴う、他の方法が提案された（参照、例えば、米国特許第６，１４６，６５９号及び同第６，０９０，４０７号）。乾燥脂質粉末の、適切な水性媒質による水和により、多層膜リポソームが形成され、このリポソームは、投与のために超音波処理と噴霧によりサイズが減少される。しかし、主に以下に起因して、リポソーム製造のための第１選択溶媒としてｔ−ブタノールは使用されていない：ｉ）ｔ−ブタノール中の脂質（特にコレステロール）溶解性が限定される。ｉｉ）非経口投与剤型における医薬用賦形剤としてのｔ−ブタノールの許容性。ｉｉｉ）リポソーム製剤からのｔ−ブタノールの除去の必要性。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
小規模では有効であるが、現在の方法は、一般的に、多くの活性成分（特に、パクリタキセル及び他の抗癌剤）のリポソーム製剤の大量製造に不適当である。結果として、リポソーム製剤を製造するための現在の方法は、多くの医薬のリポソーム製剤の市販されている量を提供するのに十分ではない。従って、大規模又は市販規模で使用できる、活性成分のリポソーム製剤の製造方法の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
本発明は、リポソーム製剤の製造方法を提供する。本方法の１つの局面に従って、脂質画分は、水混和性有機溶媒に溶解される。脂質画分を含むこの溶液は、バルクリポソーム製剤を形成するのに適切な制御された条件下で、水溶液に添加され混合され得る。
【０００７】
望ましくは、該製剤は１種以上の活性成分を含み得る。本発明方法の別の局面に従って、少なくとも１種の活性成分と脂質画分が水混和性有機溶媒に溶解される。活性成分と脂質画分を含むこの溶液は、バルクリポソーム製剤を形成するのに適切な制御された条件下で、水溶液に添加され、混合される。
【０００８】
バルクリポソーム製剤は、所望される場合、例えば、サイズ分画もしくは減少、水混和性有機溶媒の除去、膜濾過による滅菌、凍結乾燥、又は他の処理により、更に処理され得る。
【０００９】
本発明は更に、本発明の製造方法によって製造されるリポソーム製剤、及びこのような製剤の使用方法を提供する。
【００１０】
本方法は、市販規模でのリポソーム製剤の製造を可能とする。本発明のこれらの利点、及び更なる本発明の特徴は、以下の詳細な説明と付随の図面から明白である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
発明の詳細な説明
本発明の方法に従って、水混和性有機溶媒は、脂質画分及び／又は１種以上の活性成分を溶解するために使用される。多くのこのような水混和性有機溶媒（例えば、ジメチルスルホキシド、エタノール、及びメタノール）が、本発明の状況で使用できる。しかし、最も好ましい水混和性有機溶媒はｔ−ブタノールである。
【００１２】
脂質画分は、リポソームを形成するために望まれる任意の適切な脂質（単数又は複数）を含み得る。脂質画分での好適な脂質として、例えば、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、及びトコフェリル酸サクシネートの１種以上が挙げられる。幾つかの実施態様では、テトラミリストイルカルジオリピンは、正に荷電したカチオン性カルジオリピン（例えば、１，３−ビス−（１，２−ビス−テトラデシロキシ−プロピル−３−ジメチルエトキシアンモニウムブロミド）−プロパン−２−オール［（Ｒ）−ＰＣＬ−２］などで代用され得る。好ましくは、脂質画分は、トコフェリル酸サクシネートなどの抗酸化剤を含む。より好ましくは、脂質画分は、これらの化合物を少なくとも２種（例えば、３種以上）を含み、最も好ましくは、脂質画分は化合物のこの全群を含む。脂質画分の所望の組成に依存して、所望される場合、種々の脂質の量は調整され得る。しかし、脂質画分の好適な組成は、ＤＯＰＣとして脂質の大部分を含む（例えば、ＤＯＰＣ：コレステロール：カルジオリピン  ９０：５：５（モル比））。抗酸化剤が含まれる場合、適切なモル比は、８９：５：５：１  ＤＯＰＣ：コレステロール：カルジオリピン：トコフェリル酸サクシネートである。
【００１３】
幾つかの実施態様では、有効な製剤は、水混和性有機溶媒に、脂質画分を形成する脂質の順次添加又は溶解によって製造できる。最も好ましくは、方法は、水混和性有機溶媒中に各々を溶解するために、コレステロール、ＤＯＰＣ、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネートの順次添加を含む。多くの実施態様では、脂質画分は、室温（即ち、約２５℃）を超える温度で水混和性有機溶媒に溶解されるのが望ましい。従って、ｔ−ブタノールが所望の溶媒である場合、脂質は、約３５〜約６５℃（例えば、約４５〜約５５℃）の温度で加えられ得る。
【００１４】
脂質画分が水混和性有機溶媒に加えられた後、生じた溶液を水溶液に加えて、バルクリポソーム製剤を形成できる。この段階で、典型的には、バルクリポソーム製剤は、例えば、動的光散乱によって評価されるように、多層膜リポソームを含む。
【００１５】
バルクリポソーム製剤の形成のための、水溶液量は変わり得るが、一般的には、それは、バッチサイズ（即ち、全リポソーム製剤の体積）の大部分である。好ましくは、水溶液量は、バッチサイズの少なくとも約８０％であり、そして水溶液量は、より好ましくは、バッチサイズの少なくとも約９０％である。幾つかの実施態様では、水溶液量は、バッチサイズを超え得る。
【００１６】
水溶液は水でありうるが、より典型的には、１種以上の更なる成分、例えば、糖、張性調整剤などを含む。適切な張性調整剤として、塩（好ましくは、塩化ナトリウム）や当業者に公知の他の薬剤が挙げられる。張性調整剤は、任意の適切な量で存在し得る；しかし、存在するとき、張性調整剤は、典型的には、水溶液の約２％未満、より典型的には、水溶液の約１％未満を表す。好ましくは、水溶液は、保護糖（例えば、トレハロース、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、デキストランなど、並びにこれらの組合せ）を含む。このような保護糖の１種以上は、任意の適切な量で存在し得る。しかし、存在するとき、保護糖調整剤は、典型的には、溶液の少なくとも約５％であり、一般的には、水溶液の約２０％未満である（より典型的には、水溶液の約１５％未満）。この目的のために最も好適な水溶液は、１０〜１２％のスクロース及び０．４〜０．９％の塩化ナトリウムである。
【００１７】
脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液は、バルクリポソーム製剤の形成を達成できる任意の方法によって、水溶液に加えられ得る。しかし、ｔ−ブタノール中の脂質溶液を４０℃未満に冷却すると、脂質が沈殿する。同様に、室温に維持された水相溶液への脂質溶液の添加によってもまた、脂質の沈殿及び（存在するとき）活性成分の沈殿が起こり得る。従って、水混和性有機溶媒溶液は、（例えば、通常のミキサー（Ｌａｂｍａｓｔｅｒによって製造されるミキサーなど）を用いて）混合しながら、例えば、３０℃を超える温度に維持しつつ（例えば、約３０〜約４０℃に水溶液を維持しつつ）、約３００〜約４００ｒｐｍで、水溶液に加えられるのが好ましい。また、約３５℃の温度を維持しながら、脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液が水溶液に加えられることは、しばしば、リポソーム形成を助ける。例えば、水溶液に加えられるとき、水混和性有機溶媒は、約２５℃〜約４０℃、より好ましくは、約３０℃〜約４０℃、最も好ましくは、約３０℃〜約３５℃（特に、水混和性有機溶媒がｔ−ブタノールである場合）に維持できる。
【００１８】
脂質画分を含む水混和性有機溶媒が水溶液に加えられる速度、及びこのような添加の間の水溶液の混合速度は、沈殿を伴わない脂溶性活性成分（パクリタキセル、ドセタキセル）を含むリポソーム製剤の形成を明白にする。例えば、ｔ−ブタノールが水混和性有機溶媒として働く場合、ｔ−ブタノール及び水溶液は、約５分〜約１時間、より典型的には約１０〜約４５分、典型的には、約１５〜約３０分混合しながら、混合され得る。大規模製造のために、添加の時間（即ち、混合時間）は、かなり長くてもよい（例えば、数時間以上）。また、混合速度は、必要とされる場合、上記のように、３００ｒｐｍよりやや低いか、又は４００ｒｐｍよりもやや高くてもよい（例えば、少なくとも約２００ｒｐｍ、又は少なくとも約５００ｒｐｍ及び約８００ｒｐｍまで、又は、さらに、約１０００ｒｐｍまで）。従って、混合速度は、約２００〜約８００ｒｐｍであってもよい（例えば、約５００ｒｐｍ〜約１０００ｒｐｍ）。大規模製造のために、好適な範囲は、約６００ｒｐｍ〜約８００ｒｐｍである。
【００１９】
あるいは、脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液の、水溶液への添加は、溶液を冷却しながら達成され得る。典型的には、これは、冷却しながら、水溶液に脂質画分を含む水混和性有機溶媒の添加の後に溶液を混合することを含む。例えば、脂質画分を含む水混和性有機溶媒溶液は、約２５℃〜約３０℃の温度に冷却しながら、水溶液に加えることができる。
【００２０】
多くの適用で、リポソーム製剤が医学適用に使用されるのが好ましい。このような適用に関し、製剤は、１種以上の活性成分を含み得る。活性成分は、リポソーム製剤に製剤化されるのが望ましい任意の薬剤（又は薬剤の組合せ）（例えば、低分子、オリゴヌクレオチド、又は他の薬剤）であり得る。典型的には、活性成分は、少なくとも１種の抗腫瘍剤又は抗真菌剤を含む。好適な活性成分は、タキサン又は誘導体（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、及び関連化合物（例えば、エポチロンＡ及びＢ、エポチロン誘導体など））及び他の抗癌剤（例えば、ミトキサントロン、カンプトテシン、及び関連分子（例えば、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（即ち、ＳＮ−３８）、イリノテカンなど）及び誘導体、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、アドリアマイシン、タモキシフェン、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、ゲムシタビシンＨＣｌ、ミクソタントロン、及び癌の治療に有用な他の公知の化学療法剤、及びアンチセンスオリゴヌクレオチド（癌遺伝子の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド（例えば、配列５’−ＧＴＧＣＴＣＣＡＴＴＧＡＴＧＣ−３’を有する１５マー  アンチ  ｃ−ｒａｆ  １オリゴヌクレオチドを開示する、米国特許第６，５５９，１２９号及び同第６，３３３，３１４号、及び同第６，１２６，９６５後を参照）））などの薬剤であり得る。
【００２１】
好ましくは、活性成分は、タキサン又は誘導体、及びカンプトテシン又は誘導体からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤を含む。誘導体又はアナログは、もとのままの薬剤と同じ活性、必要に応じて、より高いかもしくはより低い程度であるが、無効ではない活性を有することを当業者は認識する。このような化学修飾は、構造活性相関（ＳＡＲ）又は分子モデリングに基づく。例えば、官能基は置換又は除去され得る。最も好ましい活性成分は、パクリタキセルである。
【００２２】
所望される活性成分の任意の量が使用できるが、パクリタキセルを使用する場合、典型的には、バッチサイズに対して、少なくとも約１％重量の活性成分の量を、水混和性有機溶媒に溶解する。より典型的には、少なくとも、（バッチサイズに対し）１ｍｇ／ｍｌパクリタキセルを使用する場合、パクリタキセルを、バッチサイズに対して、少なくとも５体積％のｔ−ブタノールに溶解する。幾つかの実施態様では、活性成分の量が、バッチサイズに対し約５体積％を超えることが可能である。同様に、１０体積％までのｔ−ブタノール、又は１：１（体積比）かつ合計で１０体積％を超えないｔ−ブタノールとエタノールとの混合物が使用できる。
【００２３】
化合物の化学に適切な様式で、製剤化プロセスの間に、１種以上の活性成分が加えられる。例えば、水溶性成分（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）は、バルクリポソーム形成の前などに、水溶液に加えられ得る。水溶液への水溶性成分の添加は、リポソームに捕捉されるか又はリポソームに結合するように、水混和性有機溶媒の添加前に行われ得る。あるいは、溶媒除去の後、しかし、以下に記載するろ過滅菌及び凍結乾燥の工程の前に、サイズが減少したリポソームに幾つかの水溶性活性成分（例えば、ＳＮ３８）を加えられ得る。更に、有機溶媒に可溶性であるような活性成分は、水混和性有機溶媒に溶解することによって添加され得る。好ましくは、有機溶媒に可溶性である活性成分は、脂質画分の添加前に、水混和性有機溶媒に加えられ得る。１種以上の活性成分は、脂質画分を含む水混和性有機溶媒と水溶液を混合する間、又はその後に加えられ得る。
【００２４】
多くの実施態様では、１種以上の活性成分（水溶性薬剤を除外）は、室温を超える温度（例えば、約３５℃）で、水混和性有機溶媒、特にｔ−ブタノールに溶解するのが望ましい。従って、例えば、パクリタキセルが所望の活性成分である場合、それは、約３５℃〜約６５℃（例えば、約４０℃〜約５５℃）の温度で、ｔ−ブタノールなどの水混和性有機溶媒に溶解され得る。他の活性成分がｔ−ブタノール又は他の水混和性有機溶媒に溶解され得る温度は、活性成分の性質に依存して変わり得るが、溶解の適切な温度を選択することは当業者の通常の技術内である。上記のように、温度を維持しながら、脂質画分と活性成分を含む水混和性有機溶媒を、水溶液に加えるのがしばしば望ましい。
【００２５】
これらの方法によって形成されたバルクリポソーム製剤は、サイズ減少、又は分画、又は他の制御を受けるのがしばしば好ましい。このようなサイズ処理は、好ましくは、リポソームの粒子サイズをより均一にするように適用される。リポソーム製剤の平均サイズは、例えば、動的光散乱技術で測定した場合に、約５０ｎｍ〜約２００ｎｍ、好ましくは１００〜１８０ｎｍ、より好ましくは１００〜１６０ｎｍであり得る。更に、サイズが減少したリポソームの９９パーセンタイル分布（Ｄ９９）は、例えば、動的光散乱技術で測定した場合、約１００ｎｍ〜約４００ｎｍ、好ましくは１５０〜３００ｎｍ、より好ましくは１８０〜２５０ｎｍであり得る。これを達成する代表的方法は、予め選択されたサイズ（例えば、０．２μｍ、０．１μｍなど）のポリカーボネートフィルターなどの篩いを通す押出しによって、バルクリポソーム製剤を処理することである。好ましくは、リポソームは、製剤からの活性成分の沈殿無しに、典型的には約２００ｐｓｉまでの圧力で０．２μｍ及び０．１μｍのポリカーボネートフィルターを通した押出しによってサイズが減少される。大規模製造に関し、圧力は、約２００ｐｓｉを超え得る（例えば、約２００〜約８００ｐｓｉ）。
【００２６】
バルクリポソーム製剤（又はサイズが減少した製剤）は、脂質画分を溶解するのに最初に使用した水混和性有機溶媒の大部分を含む。多くの適用に関し（主として医学用途）、バルク又はサイズが減少したリポソーム製剤から溶媒を実質的に除去する（そして、より望ましくは、溶媒を完全除去する）ことが望ましい。更に、製剤が凍結乾燥されるのならば、凍結乾燥工程の間、リポソームサイズを保ち、かつリポソーム中の活性成分を維持するために、水混和性有機溶媒（ｔ−ブタノール）を実質的に除去（好ましくは、完全除去）するのが必須である。リポソーム製剤から水混和性有機溶媒（特にｔ−ブタノール）を実質的に除去する１つの好適な方法は、タンジェンシャルフローろ過プロセスを用いるダイアフィルトレーションを含む。
【００２７】
１例として、サイズが減少したリポソーム製剤は、１０００ダルトン未満の低分子の通過を可能とする、０．１平方メートル〜数百平方メートルの範囲の表面積を有する、見かけの分画分子量（ＭＷＣＯ）（１０，０００ダルトン〜５００，０００ダルトンの範囲）のメンブランフィルターカセット又はカートリッジを通して再循環され得る。これらのメンブランフィルターを通すリポソーム溶液の再循環によって、そして出口流の制限によって、膜貫通圧力は、低分子（例えば、１０％糖溶液及びｔ−ブタノール）が通過するのを可能とする膜の孔に対し生じ得る。この方法は、連続様式又は濃縮様式のいずれかで行われ得る。連続様式では、リポソーム製造で使用される水相を、濾液が除去されるのと同じ速度で、再循環しているリポソームに加える。濃縮−希釈様式では、ｔ−ブタノールを含む水相は、サイズが減少したリポソームから除去され、所望の体積にリポソーム溶液を濃縮し（好ましくは、最初の体積の５０％）、次いで、開始体積に戻すために、リポソーム製造で使用された水相を加える。水混和性溶媒（例えば、ｔ−ブタノール）が所望レベルまで（好ましくは、全体積の１％未満）まで除去されるまで、この方法は、反復様式で繰り返され得る。連続又は濃縮−希釈様式のいずれかで、最小で水相の４体積（最初の開始体積）が交換されて、許容できるレベルまでｔ−ブタノールを除去する。
【００２８】
リポソーム製品のろ過滅菌は、通常の滅菌方法（最後の加熱滅菌（オートクレーブなど）、ガンマ線照射、エチレンオキシド処理）の代替であり、それは、医療適用の全ての非経口投与形態の必要条件（法的な要求事項）である。リポソームを、０．２２μ滅菌フィルターに通過させることによって、全ての生存微生物はリポソーム製品から除去される。ろ過滅菌は、無菌条件下で、滅菌された容器内に該製品を充填する前に行われる。
【００２９】
製造、及び（所望ならば）サイズ制御及び／又は水混和性有機溶媒の除去の後、バルク又はサイズが減少した脂質製剤は、好ましくは、凍結乾燥される。任意の適切なデバイス又は方法が使用され得る。好適なデバイスは、Ｇｅｎｅｓｉｓ−２５ＥＬ（Ｖｉｒｔｉｓにより製造される）及び任意の適切なサイズの凍結乾燥機（例えば、Ｖｉｒｔｉｓ，Ｅｄｗａｒｄｓ，ａｎｄ  Ｈｕｌｌ  Ｃｏｒｐ．により製造されるものなど）である。バルク又はサイズが減少したリポソーム製剤は、長期間（例えば、少なくとも約数ヶ月又は数年など）、凍結乾燥形態（例えば、約−２〜８℃での低温保存）で維持され得る。
【００３０】
使用に関し、凍結乾燥バルク又はサイズ分画されたリポソーム製剤は、適切な体積の再構成溶液で再構成され得る。再構成溶液は、好ましくは、極性溶媒、最も好ましくは、水系であり、それは、脱イオン水又は滅菌水又は適切な生理食塩水溶液であり得る。任意の適切な体積の再構成溶液が使用できる。例えば、約１ｍｌ〜約５０ｍｌ、より典型的には約３〜約２５ｍｌ。使用に関し、リポソーム製剤は、所望される場合、例えば、適切な生理学的に適合性の緩衝液又は生理食塩水溶液などに希釈され得る。再構成を助けるために、製剤は、所望される場合、温和に又は激しく撹拌（親指と人差し指を用いてスナップする動き）され得る。
【００３１】
本発明は更に、本明細書記載の製造方法によって製造されるリポソーム製剤、及びこのような製剤の使用方法を提供する。本発明のリポソーム製剤は、典型的には、ヒト又は動物患者への投与のために製剤化され得る。このような使用に関し、本発明製剤は、活性剤のリポソーム製剤に加えて、非毒性の、不活性な医薬として適切な賦形剤を含み得る。医薬として適切な賦形剤として、固体、半固体、又は液体の、希釈剤、充填剤、及び全ての種類の製剤化補助剤が挙げられる。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬、顆粒、座薬、溶液、懸濁剤やエマルション、ペースト、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、散剤、スプレーは、適切な医薬製剤であり得る。座薬は、リポソームの活性剤に加えて、適切な水溶性又は水不溶性賦形剤を含み得る。適切な賦形剤は、本発明のリポソームの活性剤が治療用途を可能にするために十分に安定である賦形剤（例えば、ポリエチレングリコール、特定の脂肪、及びエステル、又はこれらの物質の混合物）である。軟膏、ペースト、クリーム、ゲルもまた、リポソームの活性剤が安定である適切な賦形剤を含み得る。適用の所望の様式（例えば、非経口、局所、経口など）に依存して、リポソーム製剤を製剤化することは当業者の通常の技術の範囲内である。
【００３２】
本発明はまた、投与単位の医薬製剤を含む。このことは、以下を意味する：製剤は個々のパーツ（例えば、バイアル、シリンジ、カプセル、丸薬、座薬、又はアンプル）の形態である。活性剤のリポソーム製剤の内容物は、個々の投与量の分数又は倍数に対応する。投与単位は、例えば、個々の投与量の１、２、３、又は４倍、又は個々の投与量の１／２、１／３、又は１／４を含み得る。個々の投与量は、好ましくは、１投与で与えられ、通常、１日投与量の全部、半分、１／３、又は１／４に対応する活性剤の量を含む。
【００３３】
本発明製剤（特に活性剤を含むもの）は、脊椎動物（例えば、ヒト又は非ヒト動物）での疾患を処置する方法を容易にし、この方法は、本明細書中に記載される医薬製剤（典型的には、疾患の処置に特定された治療剤を含む）を患者に投与する工程を含む。本発明の方法に従って、本明細書中に記載される製剤（望ましくは、活性剤を含む）は、脊椎動物における疾患を処置するのに十分な量と位置で、処置が必要な脊椎動物に投与される。この医薬製剤は、製剤の型に適当な様式（例えば、公知又は開発されている方法などによって、静脈内、皮下、局部、局所（例えば、皮膚又は真皮組織に対して、或は粘膜組織に対して）、経口、非経口、腹腔内、直腸、腫瘍もしくは処置の必要な部位への直接注射によってなど）で患者に投与される。
【００３４】
１実施態様では、本方法の疾患は癌であり、この例では、医薬製剤は、適切な抗癌剤（本明細書中に記載されるものなど）を含み得る。別の実施態様では、疾患は、感染（ウイルス感染、細菌感染、又は真菌感染など）である。本発明の方法に従って、疾患の有効な処置は、望ましくは疾患又はその症状をなくすが、疾患の影響を完全になくす必要は無いことを理解すべきである。実際、本発明の方法に従う首尾良い治療は、疾患、感染の重篤度の減少、又は疾患が患者において進行する速度の減少によって測定できる。
【実施例】
【００３５】
本実施例は、本発明のリポソーム製剤の製造方法を示す。本実施例は、当業者への更なるガイドとして提供され、本発明を限定するものとして決して解釈すべきではない。
【００３６】
材料及び方法
下記の実施例で、ＤＯＰＣ、コレステロール、テトラミリストイルカルジオリピンは、Avanti Polar Lipids, Inc., Alabaster, ALから得た。パクリタキセルは、Hande Tech, Austin, TXから得た。ｔ−ブタノールとエタノールは、J. T. Bakerから得た。スクロースはMallinckrodtから得た。Ｄ−アルファトコフェリル酸サクシネートはSigmaから得た。
【００３７】
リポソームサイズ測定は、Partcile Sizing Systems（PSS, CA）Z-380装置を用いて行った。凍結乾燥は、Genesis 25-EL（VirTis製）を用いて行った。Pellicon 2タンジェンシャルフローろ過システム及び１００  ｋＤ  ＭＷＣＯポリエーテルスルホンメンブランカセットは、Millipore Corporation, Bedford, MAから得た。
【００３８】
凍結割断電子顕微鏡に関し、低温固定処理の間、氷結晶生成と人為的な結果を避けるために、１秒当たり１０，０００ケルビンの冷却速度で、液体窒素冷却プロパン中でのサンドイッチ技術を用いてサンプルを急冷した。低温固定されたサンプルは、JEOL-JED-9000フリーズエッチング装置を用いて割断し、暴露された割断面を、２５〜３５°の角度で３０秒間、白金で影付けし、３５秒間炭素で被覆した。レプリカを洗浄し、Philips CM 10電子顕微鏡を用いて試験した。
【００３９】
本発明の方法による、ｔ−ブタノール溶媒を用いるリポソームパクリタキセル製剤の製造：
活性成分１ｍｇ／ｍｌの、リポソームパクリタキセル製剤の２００ｍｌ及び５００ｍｌバッチは、本発明の方法によって下記のように製造した。本実施例の目的のため、方法を、１例として、２００ｍｌバッチに関して詳細に記載する。
表１は製剤組成及び製剤で使用されるバッチ量を列挙する。
【００４０】
【表１】
2006517594.tif 000003
【００４１】
＊  製剤中の、成分の最終的に意図する濃度
＊＊  比重０．７８９ｇ／ｍｌ。工程中に除去される。
【００４２】
８．０ｇのｔ−ブタノール溶媒（３５〜４０℃で溶媒容器を維持後）を、最初に、撹拌子を有する、予め重量を測ったビーカー中で秤量した。
【００４３】
ホットプレート上の加熱によって３５℃を超える溶媒温度を維持しながら、パクリタキセル２００ｍｇを秤量し、混合しながらｔ−ブタノールに加えた。ビーカーをアルミホイルで覆い、溶媒の蒸発による消失を防止した。
【００４４】
パクリタキセルが完全に溶解した後（時間約１５〜２０分）、コレステロール１５０ｍｇを別個に秤量し、パクリタキセルを含むｔ−ブタノール溶液に加え、完全に溶解するまで混合した（時間３〜５分）。
【００４５】
テトラミリストイルカルジオリピン４９０ｍｇ、ＤＯＰＣ  ５．４ｇ、トコフェリル酸サクシネート６２ｍｇを個々に秤量し、この順序でｔ−ブタノール溶液に加え、溶液温度を約４０〜５０℃に維持しながら、溶液から溶解しなかった脂質が無くなるまで混合した。溶液へ加えた成分の溶解のための総時間は約４５分であり、溶液温度は約４８℃であった。
【００４６】
脱イオン水溶液（Ｍｉｌｌｉ  Ｑシステム）中にスクロース４００ｇ及び塩化ナトリウム３６ｇを溶解することによって、１０％スクロース及び０．９％塩化ナトリウムの水相溶液（４０００ｍｌ）を調製し、この溶液をＭｉｌｌｉＰａｋ  ２０滅菌フィルターを通し濾過した。
【００４７】
濾過したスクロース溶液１９０ｇを、３６℃に温度を維持するように設定した循環水浴を装着した、予め秤量したジャケット付きガラス容器中に秤量した。
【００４８】
スクロース溶液を、３００ｒｐｍで１０分、Labmaster lightninミキサーを用いて混合し、溶液温度を３５℃に平衡化した。
【００４９】
パクリタキセルと脂質画分を含むｔ−ブタノール溶液を、安定流で３００ｒｐｍで混合しながら、１分以内に水溶液に加えた。加えた脂質画分の重量（溶液として）は、約１５ｇであった。
【００５０】
得られた溶液は、ｔ−ブタノール溶液の添加の完了後直ちに、リポソーム製剤に特徴的な僅かな半透明を有して、濁った。形成直後、バルクリポソーム溶液の温度は３６℃であると測定され、そして、この溶液を３００ｒｐｍで更に１０分間混合した。バルクリポソームを２５℃に冷却しながら、混合速度を、更に３０分間、５００ｒｐｍに増大させた。
【００５１】
バルクリポソームのリポソームサイズ測定は、それらが、平均サイズ１．３ミクロンを有する多層膜リポソームであることを示した。バルクリポソームのｐＨは、４．６３であると測定された。
【００５２】
バルクリポソームを、１００−２００ｐｓｉの圧力で、０．２μ及び０．１μ孔サイズのポリカーボネートメンブランフィルターを通す押出しによって、サイズ減少させた。フィルター上のサイズ減少処理の間、薬剤沈殿は観察されず、活性成分であるパクリタキセルはリポソームに捕捉されていることが立証された。表２は、サイズ減少後のリポソームベースのパクリタキセルの粒子サイズデータを示す。図１は、ＰＳＳ装置を用いる動的光散乱によって測定した、サイズが減少したリポソームのサイズ分布を示す。平均直径は、１２０．７ｎｍ（標準偏差＝３７．３ｎｍ）と測定され、分布は以下のようであった：２５％＜８６．８ｎｍ、５０％＜１０７．２ｎｍ、７５％＜１３２．３ｎｍ、９０％＜１５８．８ｎｍ、及び９９％＜２１９．７ｎｍ。
【００５３】
【表２】
2006517594.tif 000004
【００５４】
＊χ２があまりに大きい。Ｎｉｃｏｍｐ分布は、リポソームの大部分が１μ（１０００ｎｍ）より大きいことを示す。
【００５５】
サイズ減少後、リポソームに、タンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）手順を用いてｔ−ブタノール溶媒除去を行った。この目的のために、０．１平方メートルの表面積のポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）メンブランカセットと共に組立てられたPellicon 2 TFFシステム（Millipore Corp. Bedford, MA）を用いた。バルクリポソーム又はサイズが減少したリポソームから、これらの形成に使用されるｔ−ブタノールを除去するために使用されるＴＦＦシステムの模式図を図２に示す。使用した特別なメンブランカセットは、１００,０００ダルトン（分子量カットオフ即ちＭＷＣＯ  １００ｋＤ）よりも大きい溶質分子（例えば、蛋白質）又はリポソームなどの組織化構造を保持できるが、より小さな溶質分子（スクロースやｔ−ブタノールなど）がメンブランを通過させる、制限されたチャネルスクリーン（Ｃ型）と共に組立てられる。サイズが減少したリポソームは、溶媒除去のために、ＴＦＦシステムに導入される前に、１０％スクロース溶液約２００ｇの添加によって、最初に２倍に希釈された。入口流、入口圧、出口圧（即ち、背圧）、及び濾液流を、工程の間監視し、そして、これらを表３に示す。合計７回の反復（interations）（７体積の濾液が集められた）が、濃縮−希釈様式の操作で行われた。
【００５６】
【表３】
2006517594.tif 000005
【００５７】
ｔ−ブタノール含有水相は、２つの別個の実験で濾液として除去される（供給及び流出様式）ので、５００ｍｌバッチの場合、タンジェンシャルフローろ過プロセスによる溶媒除去は、濃縮−希釈様式、並びに水相の連続注入の両方で行った。６００ｍｌ／分までのリポソーム供給速度を用いて、２０ｐｓｉまでのより高い入口圧力を生じさせた。溶媒除去の大規模プロセスは、５０ｐｓｉまでの入口圧力を生じさせる、１００  ｌ／分までの流速を使用し得る。より大きな表面積（１０００平方メートルまで）を有する、同様（１００  ｋＤ）のＭＷＣＯ、より小さい（１０  ｋＤ）のＭＷＣＯ、又はより大きい（３００  ｋＤ）ＭＷＣＯのＴＦＦメンブランカセットを、ｔ−ブタノールを除去する商業スケール製造に使用し得る。しかし、１００  ｋＤ  ＭＷＣＯメンブランカセットは、リポソームからｔ−ブタノールを除去するために使用される好適なサイズである。３００  ｋＤや５００  ｋＤなどのより大きなＭＷＣＯメンブランカセットは、この機能を行うことができるが、いくらかのリポソームはまた、プロセス中に濾液へと流され得る。図２のフローチャートは、２００ ｍｌスケールバッチから２００ ｌスケールの、バルクリポソーム形成において使用される水混和性有機溶媒（ｔ−ブタノール及びエタノール）の除去のために使用され得る。本実施例で記載される濃縮−希釈様式は、小スケール（１０００ｍｌまで）が実用的であるが、連続様式（供給及び流出）では、大スケールで実施される。
【００５８】
ＴＦＦプロセスによる溶媒除去後、リポソームの粒子サイズ測定は以下を示した：リポソームサイズは、溶媒除去プロセスの間、影響されない（図３参照）。平均直径は１１５．６ｎｍ（標準偏差＝３３．６ｎｍ）と測定され、分布は以下のようであった：２５％＜８４．６ｎｍ、５０％＜１０３．２ｎｍ、７５％＜１２５．９ｎｍ、９０％＜１５０．２ｎｍ、及び９９％＜２０２．６ｎｍ。
【００５９】
溶媒除去後、リポソームを、凍結乾燥前に、ＭｉｌｌｉＰａｋ  ２０滅菌フィルターを通しろ過滅菌した。ろ過滅菌されたリポソームを、２０ｍｌガラス（１バイアル当たり１０．５ｍｌ）に充填し、凍結乾燥した。凍結乾燥リポソームを、脱イオン水１０ｍｌで再構成した。再構成したリポソームを、リポソームサイズ、パクリタキセル、ＤＯＰＣ、コレステロール、カルジオリピン含量について分析した。凍結乾燥後再構成したパクリタキセル含有リポソームのサイズ分布（図４参照）は有意な変化を示さず、リポソームの完全性は、凍結乾燥工程の間、保持されることが示されている。平均直径は、１１７．６ｎｍ（標準偏差＝４０．２ｎｍ）と測定され、分布は以下のようであった：２５％＜８１．７ｎｍ、５０％＜１０３．３ｎｍ、７５％＜１３０．３ｎｍ、９０％＜１６０．４ｎｍ、及び９９％＜２３０．５ｎｍ。
【００６０】
これらのリポソームをまた、上記手順を用いて、凍結割断電子顕微鏡によって評価した。得られた電子顕微鏡像は、２０〜１５０ｎｍの範囲の直径をもった、単一の二重層（また、単ラメラ小胞、又は略記でＳＵＶ）の、殆ど球形のリポソームの均一分布を示す。リポソームの主要組成は、個別であり、会合も凝集もしていない（図５参照）。
【００６１】
サイズ減少後、溶媒除去後のろ過滅菌後のバルクリポソームの分析の結果（表４）は、本発明の方法が、ｔ−ブタノールを用いて、パクリタキセルなどの水不溶性活性成分を含有するリポソームを製造するために使用できることを立証する。
【００６２】
【表４】
2006517594.tif 000006
【００６３】
特許、特許出願、及び刊行物を含む本明細書で引用した全ての参考文献は、引用によりその全体が本明細書に含まれる。
【００６４】
好適実施態様を強調して本発明を記載したが、好適実施態様のバリエーションが使用でき、本発明が、本明細書に具体的に記載されたものとは異なるように実施できることは、当業者に明白である。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲で規定される本発明の思想と範囲に包含される全ての改変を含む。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】図１は、サイズ減少後の、ｔ−ブタノール処理によって製造されたパクリタキセル含有リポソームのサイズ分布を示すヒストグラムである。
【図２】図２は、タンジェンシャルフローろ過による溶媒除去のためのフローチャートである。
【図３】図３は、サイズ減少及びタンジェンシャルフローろ過による溶媒除去後の、ｔ−ブタノール処理によって製造されたパクリタキセル含有リポソームのサイズ分布を示すヒストグラムである。
【図４】図４は、ｔ−ブタノール処理によって製造された（凍結乾燥後に再構成された）パクリタキセル含有リポソームのサイズ分布を示すヒストグラムである。
【図５】図５は、ｔ−ブタノール処理によって製造された（凍結乾燥後に再構成された）パクリタキセル含有リポソームの凍結割断電子顕微鏡像である。
【図１】
2006517594.tif 000007
【図２】
2006517594.tif 000008
【図３】
2006517594.tif 000009
【図４】
2006517594.tif 000010
【図５】
2006517594.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成16年12月10日(2004.12.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）脂質画分をｔ−ブタノール溶媒に溶解すること、
（ｂ）脂質画分を含むｔ−ブタノール溶媒を水溶液に添加すること、
（ｃ）約２５℃〜約４０℃の温度で、脂質画分を含むｔ−ブタノールを水溶液と混合して、バルクリポソーム製剤を形成すること、
を含む方法。
【請求項２】
リポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）脂質画分を、ｔ−ブタノールとエタノールの混合溶媒に溶解すること、
（ｂ）脂質画分を含むｔ−ブタノールとエタノールの溶媒を、水溶液に添加すること、
（ｃ）約２５℃〜約４０℃の温度で、脂質画分を含むｔ−ブタノールとエタノールの溶媒を水溶液と混合して、バルクリポソーム製剤を形成すること、
を含む方法。
【請求項３】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネート、及び１，３−ビス−（１，２−ビス−テトラデシロキシ−プロピル−３−ジメチルエトキシアンモニウムブロミド）−プロパン−２−オール［（Ｒ）−ＰＣＬ−２］からなる群より選択される１種以上の脂質を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネートからなる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネートの順次添加によって形成される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＤＯＰＣが、脂質画分の大部分を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
脂質画分が、約３５〜約６５℃の温度で溶媒に溶解される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
温度が、約４５℃〜約５５℃である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
水溶液が、バルクリポソーム製剤の少なくとも９０％である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
水溶液が、１種以上の張性調整剤を更に含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
水溶液が、１種以上の保護糖を更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
脂質画分を含む溶媒が、約３０℃〜約４０℃の温度で水溶液と混合される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
温度が約３０℃〜約３５℃である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
混合速度が、約２００ｒｐｍ及び約１０００ｒｐｍである、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
混合速度が、約５００ｒｐｍ及び約１０００ｒｐｍである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
混合速度が、約６００ｒｐｍ及び約８００ｒｐｍである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
脂質画分を含む溶媒が約５分〜１時間の時間で水溶液に添加される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
時間が、約１０分〜約４５分である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
時間が、約１５分〜約３０分である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
１種以上の活性成分を加えることを更に含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
１種以上の活性成分が、バルクリポソーム形成の前に添加される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１種以上の活性成分が、有機溶媒に添加される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１種以上の活性成分が、脂質画分の添加の前に、有機溶媒に添加される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１種以上の活性成分が、３５℃を超える温度で、有機溶媒に添加される、請求項２２又は２３に記載の方法。
【請求項２５】
１種以上の活性成分が、約３５℃〜約６５℃の温度で、有機溶媒に添加される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
１種以上の活性成分が、約４０℃〜約５５℃の温度で、有機溶媒に添加される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
１種以上の活性成分が、水溶液に添加される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
１種以上の活性成分が、工程（ｂ）の前に、水溶液に添加される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２９】
１種以上の活性成分が、工程（ｃ）の後に、水溶液に添加される、請求項２０に記載の方法。
【請求項３０】
脂質画分を含む溶媒が、１種以上の活性成分の沈殿なしにリポソームを形成する速度で、水溶液と混合される、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
１種以上の活性成分が、抗腫瘍剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、および抗真菌剤からなる群より選択される、請求項２０〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
抗腫瘍剤が、タキサン、ミトキサントロン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、タモキシフェン、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、ゲムシタビシンＨＣｌ、及びそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
タキサンが、パクリタキセルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、癌遺伝子を対象とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
癌遺伝子が、ｒａｆである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
バルクリポソーム製剤をサイズ減少して、サイズが減少したリポソーム製剤を得ることを更に含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
サイズ減少が、沈殿なしに達成される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
サイズ減少が、ポリカーボネートフィルターを通じたバルクリポソーム製剤の押出しにより達成される、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
フィルターが、約０．２μｍ〜約０．１μｍである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
サイズ減少が、約２００ｐｓｉ〜約８００ｐｓｉの圧力でのバルクリポソーム製剤の押出しによって達成される、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
水混和性有機溶媒を実質的に除去することを更に含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
有機溶媒が、タンジェンシャルフローろ過プロセスを用いるダイアフィルトレーションにより、実質的に除去される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
１種以上の活性成分を添加することを更に含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
活性成分が、水溶性活性成分である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
活性成分が、有機溶媒の除去の後に添加される、請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４６】
リポソーム製剤を濾過滅菌することを更に含む、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
リポソーム製剤を凍結乾燥することを更に含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正書】
【提出日】平成17年8月18日(2005.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）脂質画分をｔ−ブタノールを含む有機溶媒に溶解すること、
（ｂ）脂質画分を含むｔ−ブタノール溶媒を水溶液に添加すること、
（ｃ）約２５℃〜約４０℃の温度で、脂質画分を含む有機溶媒を水溶液と混合して、バルクリポソーム製剤を形成すること、
を含む方法。
【請求項２】
リポソーム製剤の製造方法であって、
（ａ）脂質画分を、ｔ−ブタノールとエタノールを含む有機溶媒に溶解すること、
（ｂ）脂質画分を含む有機溶媒を、水溶液に添加すること、
（ｃ）約２５℃〜約４０℃の温度で、脂質画分を含む有機溶媒を水溶液と混合して、バルクリポソーム製剤を形成すること、
を含む方法。
【請求項３】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネート、及び１，３−ビス−（１，２−ビス−テトラデシロキシ−プロピル−３−ジメチルエトキシアンモニウムブロミド）−プロパン−２−オール［（Ｒ）−ＰＣＬ−２］からなる群より選択される１種以上の脂質を含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネートからなる、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
脂質画分が、コレステロール、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、テトラミリストイルカルジオリピン、トコフェリル酸サクシネートの順次添加によって形成される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＤＯＰＣが、脂質画分の大部分を含む、請求項３〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
脂質画分が、約３５〜約６５℃の温度で有機溶媒に溶解される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
温度が、約４５℃〜約５５℃である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
水溶液が、バルクリポソーム製剤の少なくとも９０％である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
水溶液が、１種以上の張性調整剤を更に含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
水溶液が、１種以上の保護糖を更に含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
脂質画分を含む溶媒が、約３０℃〜約４０℃の温度で水溶液と混合される、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
温度が約３０℃〜約３５℃である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
脂質画分を含む有機溶媒が、約２００ｒｐｍ〜約１０００ｒｐｍの速度で水溶液と混合される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
脂質画分を含む有機溶媒が、約５００ｒｐｍ〜約１０００ｒｐｍの速度で水溶液と混合される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
脂質画分を含む有機溶媒が、約６００ｒｐｍ〜約８００ｒｐｍの速度で水溶液と混合される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
脂質画分を含む有機溶媒が約５分〜１時間の時間で水溶液に添加される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
時間が、約１０分〜約４５分である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
時間が、約１５分〜約３０分である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
１種以上の活性成分を加えることを更に含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
１種以上の活性成分が、バルクリポソーム形成の前に添加される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
１種以上の活性成分が、有機溶媒に添加される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
１種以上の活性成分が、脂質画分の添加の前に、有機溶媒に添加される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１種以上の活性成分が、脂質画分の添加の後に、有機溶媒に添加される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
１種以上の活性成分が、３５℃を超える温度で、有機溶媒に添加される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
１種以上の活性成分が、約３５℃〜約６５℃の温度で、有機溶媒に添加される、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
１種以上の活性成分が、約４０℃〜約５５℃の温度で、有機溶媒に添加される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１種以上の活性成分が、水溶液に添加される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
１種以上の活性成分が、有機溶媒の添加の前に水溶液に添加される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
脂質画分を含む有機溶媒が、１種以上の活性成分の沈殿なしにリポソームを形成する速度で、水溶液と混合される、請求項２０〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
１種以上の活性成分が、抗腫瘍剤、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及び抗真菌剤からなる群より選択される、請求項２０〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
抗腫瘍剤が、タキサン、ミトキサントロン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、メトトレキセート、アドリアマイシン、タモキシフェン、トレミフェン、シスプラチン、エピルビシン、ゲムシタビシンＨＣｌ、及びそれらの誘導体からなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
タキサンが、パクリタキセルである、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが、癌遺伝子を対象とする、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
癌遺伝子が、ｒａｆである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
バルクリポソーム製剤をサイズ減少して、サイズが減少したリポソーム製剤を得ることを更に含む、請求項１〜３５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
サイズ減少が、沈殿なしに達成される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
サイズ減少が、ポリカーボネートフィルターを通じたバルクリポソーム製剤の押出しにより達成される、請求項３６又は３７に記載の方法。
【請求項３９】
フィルターが、約０．２μｍ〜約０．１μｍである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
サイズ減少が、約２００ｐｓｉ〜約８００ｐｓｉの圧力でのバルクリポソーム製剤の押出しによって達成される、請求項３６〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
水混和性有機溶媒を実質的に除去することを更に含む、請求項１〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
有機溶媒が、タンジェンシャルフローろ過プロセスを用いるダイアフィルトレーションにより、実質的に除去される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
１種以上の活性成分を添加することを更に含む、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
活性成分が、水溶性活性成分である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
活性成分が、有機溶媒の除去の後に添加される、請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４６】
リポソーム製剤を濾過滅菌することを更に含む、請求項１〜４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
リポソーム製剤を凍結乾燥することを更に含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【国際調査報告】
2006517594.tif 000012
2006517594.tif 000013
2006517594.tif 000014
2006517594.tif 000015