(57)【要約】式（Ｉ）2006522023.tif 000032［式中：ＸはＮ、ＣＨであり、ｎは１ないし３の整数であり；またＲ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］の化合物、およびその医薬上許容される塩は；疾患、損傷、または他の外傷起因の血管透過性を阻害するために有効である。
2006522023.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
虚血性脳血管事象後の患者に神経保護を提供する方法であって、式
【化１】
2006522023.tif 000022
［式中：
ＸはＮ、ＣＨであり、
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］
の化合物、またはその医薬上許容される塩を治療上有効な量で提供すること含む方法。
【請求項２】
虚血性脳血管事象後の患者の神経学的欠損を阻害する方法であって、式
【化２】
2006522023.tif 000023
［式中：
ＸはＮ、ＣＨであり、
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］
の化合物、またはその医薬上許容される塩を治療上有効な量で提供することを含む方法。
【請求項３】
虚血性脳血管事象後の患者の梗塞体積を減少させる方法であって、式
【化３】
2006522023.tif 000024
［式中：
ＸはＮ、ＣＨであり、
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］
の化合物、またはその医薬上許容される塩を、治療上有効な量で投与することを含む方法。
【請求項４】
脳血管事象を被った患者の、虚血後の大脳血管の血管透過性を阻害する方法であって、式
【化４】
2006522023.tif 000025
［式中：
ＸはＮ、ＣＨであり、
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］
の化合物、またはその医薬上許容される塩を、治療上有効な量で投与することを含む方法。
【請求項５】
Ｒ’がメチルである、請求項１ないし４いずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
Ｒがメチルまたはエチルである、請求項１ないし５いずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＸがＮである、請求項１ないし６いずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
ＸがＣＨである、請求項１ないし６いずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
化合物が：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）−プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）−プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
またはその医薬上許容される塩である、請求項１ないし４いずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
化合物が虚血性事象後約６ないし約２４時間の間に投与される、請求項１ないし９いずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
治療上有効な量が約１ｍｇ／ｋｇないし約３０ｍｇ／ｋｇである、請求項１ないし１０いずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
式（Ｉ）の化合物を静脈内投与することを含む、請求項１ないし１１いずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
患者がヒトである、請求項１ないし１２いずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
虚血性事象が一過性である、請求項１ないし１３いずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
虚血性事象が急性である、請求項１ないし１３いずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
虚血性事象が脳卒中、頭部外傷、脊髄外傷、全身性無酸素症、または低酸素症である、請求項１ないし１５いずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
虚血性事象が頭蓋出血、周産期仮死、心停止、またはてんかん重積中に起こる、請求項１ないし１５いずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
構造：
【化５】
2006522023.tif 000026
［式中：
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである］
を有する化合物、またはその医薬上許容される塩。
【請求項１９】
Ｒ’がメチルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒがメチルまたはエチルである、請求項１８または請求項１９の化合物。
【請求項２１】
化合物：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
またはその医薬上許容される塩。
【請求項２２】
請求項１８ないし２１いずれか１項で定義される化合物、および医薬上許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２３】
血管透過性を阻害する量の、請求項１ないし９いずれか１項で定義される化合物、および医薬上許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項２４】
静脈内投与の形態である、請求項２１で記載された組成物。
【請求項２５】
下記：
（ａ）式
【化６】
2006522023.tif 000027
［式中、Ｒ’は請求項１８で定義されたものである］のキノリンを、式
【化７】
2006522023.tif 000028
［式中、Ｒおよびｎは請求項１８で定義されたものである］
のアルコールと反応させるか、または
（ｂ）式
【化８】
2006522023.tif 000029
［式中、Ｒ、Ｒ’、およびｎは請求項１８で定義されたものであり、またＹはハロゲンである］
のキノリンと、式
【化９】
2006522023.tif 000030
のアニリンと反応させるか、または
（ｃ）式
【化１０】
2006522023.tif 000031
［式中、Ｒ、Ｒ’、およびｎは請求項１８で定義されたものである］
の化合物を環化させ、所望のキノリンを得る
の１つを含む、請求項１８ないし２１いずれか１項に記載された化合物の調製方法。
【請求項２６】
虚血性脳血管事象後の患者に神経保護を提供するための、虚血性脳血管事象後の患者の神経学的欠損を阻害するための、虚血性脳血管事象後の患者の梗塞体積を減少するための、または脳血管事象を被った患者の虚血後の大脳血管の血管透過性を阻害するための薬剤調製における、請求項１ないし９いずれか１項で定義された化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
毎年約７５０，０００件の脳卒中が起こる米国では、脳卒中は死因の第三位であり、また身体障害の主要な原因である。虚血性脳卒中はその約８０％を占め、原発性脳内出血性卒中は約１５ないし２０％である。今日まで、急性虚血性脳梗塞について唯一承認されている効果的な治療は、組換え組織プラスミノーゲンアクチベータ、ｔ−ＰＡの静脈内投与を用いる血栓溶解治療である。この治療の効用は非常に限られている。発病後３時間以内に治療は行わなければならないのに、患者の大部分は大幅に遅れて治療を求め、および／または受ける。加えて、ｔ−ＰＡを用いる治療により、脳内出血や潜在的に壊滅的な合併症が起こる危険性が増大する。治療に先立って出血の存在を排除し、またｔ−ＰＡでの治療中および治療後に血圧を慎重に管理し、およびモニターしなければならない。現在では、どの神経保護治療も虚血性脳卒中、出血性脳卒中、または脳外傷の治療に有効ではない。脳卒中、および血管透過性に関連する他の状態のための新しい治療が非常に必要とされている。
【０００２】
発明の説明
本発明により、構造式：
【化１】
2006522023.tif 000003
［式中：
ＸはＮ、ＣＨであり、
ｎは１ないし３の整数であり；また
Ｒ’およびＲは独立して炭素数１ないし３のアルキルである（ただしｎが１の場合、ＸはＮでない）］
の化合物、またはその医薬上許容される塩が提供される。
【０００３】
炭素数１ないし３のアルキルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびｉ−プロピルを含む。
本発明のある好ましい具体例において、Ｒ’はメチルである。
本発明の他の好ましい具体例において、Ｒはメチル、またはエチルである。
本発明のさらなる他の具体例において、ｎは２、または３である。
好ましくは、本発明のある好ましい具体例において、ＸはＮである。
さらなる他の好ましい具体例において、ＸはＣＨである。
【０００４】
医薬上許容される塩は：酢酸、乳酸、カルボン酸、クエン酸、桂皮酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、シュウ酸、プロピオン酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、グリコール酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、および同様に知られている許容される酸、のような有機および無機酸由来のものである。
【０００５】
本発明特定の化合物は：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）−プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）−メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）−エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；および
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）−プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；およびその医薬上許容される塩を含む。
【０００６】
式Ｉ［ここで、ＸはＣＨであり、また他のすべての基は上で定義されるものである］の化合物の調製方法も提供され、該方法は下記：
（ａ）式
【化２】
2006522023.tif 000004
［式中、Ｒ’は本明細書で定義されるものである］
のキノリンを、式
【化３】
2006522023.tif 000005
［式中、Ｒおよびｎは上で定義されるものである］
のアルコールと、所望により例えば水素化ナトリウム、またはナトリウムのような塩基の存在下で反応させるか、または、
【０００７】
（ｂ）式
【化４】
2006522023.tif 000006
［式中、Ｒ、Ｒ’、およびｎは上で定義されるものであり、あるいはＹは塩素、または臭素である］
のキノリンを、式
【化５】
2006522023.tif 000007
のアニリンと、所望により例えば水素化ナトリウム、またはピリジン塩酸塩のような、適当な塩基中で反応させるか、または、
【０００８】
（ｃ）式
【化６】
2006522023.tif 000008
の化合物を、好ましくは、アセトニトリル、ブチロニトリル、トルエン、またはキシレン中で、触媒としてのアルコールまたはアミン塩基とともに、ＵＳ  ０６／４９６，１９１で説明されている、例えば８０ないし１１０oＣの適当な温度で、オキシ塩化リンを用いるような脱水状態下で環化させ、所望のキノリンを得る、
を含む。
【０００９】
本発明の化合物は、下記説明のように調製される。本発明の化合物は：（ａ）市販されている開始材料（ｂ）文献で説明されている方法で調製が可能である既知の開始材料、または（ｃ）本明細書のスキーム、および実験操作で説明される新しい中間体から調製された。
【００１０】
反応は用いる試薬および材料に適し、および変換を行うのに適している溶媒中で行われる。分子上に存在する様々な官能基は、提案される化学変換に一致していなければならないということは、有機合成分野の当業者により理解されよう。明記されない場合、合成段階の順番、保護基の選択、および脱保護の条件は当業者にとって容易に理解されよう。加えてある場合には、開始材料の置換基は特定の反応条件に適合しなくてよい。特定の置換基に関連する制約は、当業者にとって明らかであろう。反応は適当な不活性雰囲気中で行われた。
【００１１】
式Ｉの化合物をスキーム１の説明のように調製した。式Ｉの化合物［ここで、Ｒ’はＭｅ、ＸはＮ、およびｎは３である］は、ニートまたはエチレングリコールジメチルエーテルのような溶媒中のヨウ化ナトリウムの存在下で、７−（３−クロロプロポキシ）−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリン−カルボニトリル，１を、Ｎ−メチルピペラジン、Ｎ−エチルピペラジン、またはＮ−プロピルピペラジンのようなＮ−アルキルピペラジンで処理することにより、容易に得られる。これらの化合物の調製は、文献［Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｄ．Ｈ．，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，３９６５（２００１）］で報告されている。
【００１２】
式Ｉの類似の化合物［ここで、Ｒ’はＭｅ、ＸはＮ、およびｎは２である］は、ニートまたはエチレングリコールジメチルエーテルのような溶媒中のヨウ化ナトリウムの存在下で、７−（２−クロロエトキシ）−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）−アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル，２を、Ｎ−メチル、またはＮ−エチルピペラジンで処理することにより容易に得られる。これらの化合物の調製は、文献［Ｙｅ，Ｆ．ｅｔ．ａｌ．，２２１ｔｈ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（Ａｐｒｉｌ，２００１）］で報告されている。
【００１３】
【化７】
2006522023.tif 000009
【００１４】
別法として、式Ｉの化合物は７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル中間体を経由して調製されうる。この重要な中間体の調製をスキーム２で示す。式３のアニリンは（エトキシメチレン）マロン酸ジエチルをニートかまたはトルエンのような共溶媒の存在下で、６０ないし１２０oＣの温度範囲で反応されてよい。その後好ましくは、ジフェニルエーテル：ビフェニルが３：１混合のような溶媒系中、２６０oＣのような高温で、熱的に環化することにより、式４の化合物が提供される。好ましくは、エタノールのようなアルコール溶媒中で、水酸化ナトリウムのような塩基性条件下、高温でエステル基を加水分解することにより、式５の化合物が生じる。酸基の第１アミドへの変換は、１，１−カルボニルジイミダゾールのような活性化剤で処理することにより達成することができ、次いでアンモニアガス、または好ましくは水酸化アンモニウム水溶液を添加する。式６の化合物の第１アミド基を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのような溶媒中で塩化シアヌルのような試薬で脱水することにより、式７の化合物が提供される。別法として、式３のアニリンを、（エトキシメチレン）シアン酢酸エチルとニートまたはトルエンのような共溶媒の存在下、６０ないし１２０oＣの温度範囲で処理することも可能である。その後好ましくは、ジフェニルエーテル：ビフェニルが３：１混合のような溶媒系中、２６０oＣのような高温で、熱的に環化することにより、式７の化合物が提供される。７とオキシ塩化リンのような塩素化剤の反応により、式８の化合物を得る。式８の化合物を、ピリジン塩酸塩の存在下、２，４−ジクロロ−５−メトキシアニリンで処理することにより、重要な７−フルオロ中間体９が提供される。
【００１５】
【化８】
2006522023.tif 000010
【００１６】
式８［ここで、Ｒ’はＥｔである］の化合物への代替経路をスキーム３に示す。スキーム２の条件を用いて、４−ベンジルオキシ−３−フルオロアニリンを式１０の化合物へ変換する。チオアニソール、およびトリフルオロ酢酸でベンジル基を除去することにより、式１１の６−ヒドロキシ誘導体が提供される。１１をトリフェニルホスフィン、アゾジカルボン酸ジエチル、およびエタノールで処理することにより、式８［ここで、Ｒ’はエチルである］の化合物が得られる。
【００１７】
【化９】
2006522023.tif 000011
【００１８】
スキーム４に示すように、ナトリウムまたは水酸化ナトリウムのような塩基の存在下での、式９の化合物の式１２のアルコールとの反応により、式Ｉの本発明の化合物が提供される。この反応は、１２０oＣないし１４０oＣの至適温度で、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドのような共溶媒の存在下で行うことが可能である。
【００１９】
【化１０】
2006522023.tif 000012
本発明の化合物はいくつかの標準的な薬理試験で評価され、該試験は本発明の化合物がＳｒｃキナーゼを阻害し、また血管透過性の予防に有効であるということを示した。
【００２０】
Ｓｒｃキナーゼアッセイ
Ｓｒｃ（部分精製酵素製剤、アップステートバイオテクノロジー社（レイクプラシッド、ＮＹ）から購入）チロシンキナーゼ活性の阻害剤をＥＬＩＳＡ法で分析する。ベーリンガーマンハイム  チロシンキナーゼアッセイキット（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社（スイス、バーゼル））を、Ｔｙｒ１５を含むｃｄｃ２基質ペプチドとともにアッセイに用いる。西洋わさびペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合の抗ホスホチロシンを、呈色反応でリン酸化ペプチドを検出するために用いる。
【００２１】
反応条件：各々の化合物５マイクロリットルのアリコートをアッセイ時に新しく調製し、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５、１０％  ＤＭＳＯ）の溶液として、反応ウェルへ添加する。Ｓｒｃ、バッファー、およびペプチド／ウシ血清アルブミンミックスを含む、反応ミックスの３５マイクロリットルを、化合物のウェルへ添加し、３０oＣで１０分間培養する（反応バッファー：５０ｍＭ  トリスＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、０．１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．５ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４）。反応をＡＴＰ（５００μＭ）１０マイクロリットルの添加により開始し、３０oＣで１時間培養し、０．５Ｍ  ＥＤＴＡ２０マイクロリットルの添加により終了する。次いで、反応混合物をリン酸化ペプチドとともにストレプトアビジンコーティングのマイクロタイタープレートへ移し、２０分間結合させておく。結合していないペプチドおよび反応混合物をデカントし、プレートをＰＢＳで６回洗浄する。キット中に供給されるＨＲＰ結合のホスホチロシン抗体を、プレートとともに１時間培養し、次いでデカントする。プレートを再度ＰＢＳで６回洗浄する。基質を添加し、４０５ｎｍの吸光度を測定する。
【００２２】
あるいは、Ｄｅｌｆｉａ法（パーキンエルマー社）を用いること、ＨＲＰ結合のホスホチロシン抗体の代わりにユーロピウム結合のホスホチロシン抗体を用いたこと、ウシ血清アルブミンの代わりにピアーススーパーブロック（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋ）を用いたこと、またキナーゼ反応および抗体結合後に６回洗浄したことを除き、本質的に記載されているようにアッセイを行った。ユーロピウムの蛍光を用いて、反応程度をモニターした。
【００２３】
活性は式：（１−Ａｂｓ／Ａｂｓ（ｍａｘ））×１００＝％阻害
により算出される％阻害で決定される。試験剤を複数濃度で用いると、ＩＣ５０（５０％阻害を与える濃度）を決定することができる。表１に示すように、本発明の化合物はインビトロでｓｒｃキナーゼを阻害する。
【００２４】
足場非依存性Ｓｒｃ形質転換線維芽細胞増殖アッセイ
ＣＭＶプロモーターを含むプラスミドで安定に形質転換されたラット２線維芽細胞は、ｖ−Ｓｒｃ遺伝子中、ｖ−Ｓｒｃ触媒ドメインの代わりにヒトｃ−Ｓｒｃ触媒ドメインを下記のように挿入した、ｖ−Ｓｒｃ／Ｈｕ  ｃ−Ｓｒｃ融合遺伝子を制御した。
【００２５】
クローニングおよびプラスミド構築
ｐＳｒｃＨｉｓのＰｒａｇｕｅ  Ｃ  ｖ−Ｓｒｃ遺伝子（ＷｅｎｄｌｅｒおよびＢｏｓｃｈｅｌｌｉ、腫瘍遺伝子４：２３１−２３６；１９８９）をＮｃｏＩおよびＢａｍＨＩで切断し、Ｔ４  ＤＮＡポリメラーゼで処理し、またＴ４  ＤＮＡポリメラーゼ処理により平滑末端化されたｐＴＲＥ（クロンテック社）のＲＩ部位へクローニングした。ＰｒＣ  ｖ−Ｓｒｃ：：ｈｕ  ｃ−Ｓｒｃ融合は、ｖ−Ｓｒｃのカルボキシル末端の約２５０個のアミノ酸をコードするＢｇｌ２−ＸｂａＩ断片を、ｖ−Ｓｒｃ：：ｈｕｃ−Ｓｒｃ融合断片（下記）を含むＢｇｌ２−ＸｂａＩ断片で置換することにより作製した。胸部ｃＤＮＡライブラリー（インビトロジェン社）からのヒトｃ−Ｓｒｃ部分クローンを、オリゴヌクレオチド対
【表１】
2006522023.tif 000013
および
【表２】
2006522023.tif 000014
を用いて増幅し、次いでｐＣＲＳｃｒｉｐｔ（ストラタジーン社）へクローニングした。このクローン中のヒトｃ−Ｓｒｃ触媒ドメインを、これらのオリゴヌクレオチド（ｖ−Ｓｒｃおよびヒトｃ−Ｓｒｃ  ＯＲＦ中、ｖ−ｓｒｃヌクレオチド７３４をヒトｃ−Ｓｒｃヌクレオチド７４２に、およびヒトｃ−Ｓｒｃヌクレオチド１５５１をｖ−ｓｒｃヌクレオチド１５４３に融合させる）で増幅した。２つのｖ−Ｓｒｃ配列：
（１９８塩基対のｖ−ｓｒｃ５’断片：
【表３】
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から
【表４】
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までの断片と、２５２塩基対のｖ−ｓｒｃ３’断片：
【表５】
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（ｖ−ｓｒｃ  ＯＲＦの１５４３−１５６７残基）から
【表６】
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（ＸｂａＩおよびＥｃｏＲＩ制限部位を付加したｖ−ｓｒｃ  ＡＴＧの１７６９−１７９４残基）（プライマー４））までの断片をＰＣＲで増幅した。プライマー１および４を、３断片のＰＣＲ増幅および融合を行うために用い、該断片はｖ−Ｓｒｃ：：ヒトｃ−Ｓｒｃ融合断片、およびＰｒａｇｕｅ  Ｃ  ｖ−Ｓｒｃ遺伝子およびラウス肉腫ウイルスの３’非翻訳領域から増幅された５’および３’断片である。この反応はインフレームｖ−Ｓｒｃ：：ヒトｃ−Ｓｒｃ遺伝子融合（ｖ−Ｓｒｃのアミノ酸残基Ｖ２４４をアミノ末端側ヒトｃ−ＳｒｃのＣ２４８に、およびヒトｃ−ＳｒｃのＡ５１７をｖ−ＳｒｃのＱ５１５に）を作製する。この融合遺伝子断片は、ｖ−Ｓｒｃ  ＳＨ２ドメインのカルボキシル末端から３分の１、およびｖ−Ｓｒｃカルボキシル末端尾に隣接するヒトｃ−Ｓｒｃ触媒ドメインへ融合するＳＨ２触媒ドメインリンカーをコードする。融合断片５’末端近くの人工でないＢｇｌ２部位、および該断片３’末端の人工のＸｂａＩ部位を、上記したように、全長ｖ−Ｓｒｃ：：ヒトｃ−Ｓｒｃ融合遺伝子を作製するための断片を切断するために用いた。作製物の整合性をＤＮＡシークエンスにより確かめた。この遺伝子を本研究中で用いるｐＩＲＥＳ（クローンテック社）のような他の発現プラスミドへクローニングするために、同様の方法を用いた。
【００２６】
ｓｒｃ依存性浮遊増殖の測定のために、これらの形質転換したＲａｔ２線維芽細胞を用いる。
【００２７】
１日目、ウルトラ−ロウ  クラスタープレート（Ｕｌｔｒａ−ｌｏｗ  ｃｌｕｓｔｅｒ  ｐｌａｔｅｓ）（コーニングコスター社（アクトン、ＭＡ））に、１ウェルあたり１０，０００個のセルを播種する。あるいは、ウルトラ−ロウ  クラスタープレート（コスター３４７４）を、Ｓｉｇｍａｃｏｔｅ（シグマ（セントルイス、ＭＯ））で処理し、７０％エタノールですすぎ、フードにて乾燥させた後、５０００個のセルを播種する。２日目、化合物を１０マイクロモルから０．００９マイクロモルまでの２倍連続希釈にて添加し、５日目、ＭＴＳ試薬（プロメガ社（マディソン、ＷＩ））を添加し（ＭＴＳ／培地ミックス１００マイクロリットル＋すでにセル上にある培地１００マイクロリットル）、４９０ｎｍの吸光度を測定する。結果は下記：
％阻害＝（サンプル−ブランクの４９０ｎｍでの吸光度）／（化合物のない対照−ブランクの４９０ｎｍでの吸光度）×１００％
のように、増殖（マイクロモルユニット）のためのＩＣ５０を算出することで分析した。表１に示すように、本発明の化合物はｓｒｃ依存性細胞増殖を阻害する。
【００２８】
表１．Ｓｒｃ酵素および細胞の活性阻害
【化１１】
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【表７】
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【００２９】
実施例１のＩＰ投与は、局所虚血の一過性モデルに神経保護を提供する
実施例１は一過性局所虚血のラットモデルで試験した。ウィスターラットを、Ｌｏｎｇａらにより、Ｓｔｒｏｋｅ  １９８９，２０：８４で説明されているような、腔内縫合アプローチを用いて、９０分間中大脳動脈（ＭＣＡ）の閉塞にさらし、その後４８時間再灌流した。虚血開始後８５分で、動物は実施例１の化合物を受けとる（１．５、５、１５、または４５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐ）。再灌流後、その動物を、神経機能の欠陥および体重の減少／増加に関して、４８時間にわたって評価した。ＭＣＡ閉塞後４８時間で屠殺した後、梗塞の大きさを測定した。投与量５および４５ｍｇ／ｋｇの実施例１は、有意に脳卒中誘発神経学的欠損からの回復を促進した。実施例１の最大投与量では、梗塞性脳組織の体積に減少が観察されたが、統計的な有意性は、投与量４５ｍｇ／ｋｇ  ｉｐでのみ達成された。体重の回復における改善も実施例１で扱った動物において観察された。
【００３０】
実施例１のＩＶ投与は、局所虚血の一過性モデルに神経保護を提供する
ウィスターラットを、Ｌｏｎｇａらにより、Ｓｔｒｏｋｅ  １９８９，２０：８４で説明されたような腔内縫合アプローチを用いて、９０分間、中大脳動脈（ＭＣＡ）の閉塞にさらし、その後４８時間再灌流した。ＭＣＡ閉塞後３０分で、２０ｍＭ  クエン酸塩／０．８５％  生理食塩水（ｐＨ３）中の実施例１の静脈内処方を、３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ）量で投与した。再灌流後、動物を、神経機能の欠陥、および体重の減少／増加に関して、４８時間にわたって評価した。脳組織梗塞体積は、各々２２％、５３％、および４２％減少した。脳卒中後の体重減少も有意に減少した。加えて、表２に示すように、脳卒中誘発の神経学的欠損は、３つの投与すべてで有意に減少した。それ故に、本発明の化合物は局所虚血後の神経保護を提供する。
表２
【表８】
2006522023.tif 000021
【００３１】
治療的側面
治療的側面を調べるために、一過性局所虚血の本モデルで３つの研究を行った。ウィスターラットを上記のように、９０分間ＭＣＡ閉塞にさらし、その後再灌流した。実施例１を単一で、脳卒中後３０分、９０分、３時間、４時間、５時間、および６時間に、ボーラス投与（１０ｍｇ／ｋｇ）した。梗塞組織の体積を組織染色で測定した。脳組織の梗塞は、虚血損傷後３０分ないし４時間の間に投与された実施例１の単一投与（１０ｍｇ／ｋｇ）で、統計的に（治療した媒体の％として）減少した。統計的に有意な神経学的欠損からの保護（治療した媒体の％として）は、脳卒中後５時間までに投与された実施例１の単一投与（１０ｍｇ／ｋｇ）で達成され、また統計的に有意な虚血誘発の体重減少からの保護（治療した媒体の％として）は、脳卒中後５時間までの実施例１の単一投与（１０ｍｇ／ｋｇ）で達成された。それ故に、本発明の化合物は、現在利用できる治療に比べて優位な治療的側面を示す。
【００３２】
虚血後の血管透過性
ウィスターラットを、ＬｏｎｇａｓらによりＳｔｒｏｋｅ  １９８９，２０：８４で説明されているような腔内縫合アプローチを用いて、９０分間中大脳動脈（ＭＣＡ）の閉塞にさらし、その後２４時間再灌流した。実施例１の化合物を、虚血開始後３０分で、単一ＩＶボーラスとして（３、１０、および３０ｍｇ／ｋｇ（ｉｖ）で）投与した。屠殺２時間前、動物は生理食塩水中２％エバンスブルーのＩＶ注射を受けた。脳を生理食塩水で灌流し、また線条体を解剖した。エバンスブルーを抽出し、また外部標準に基づく分光蛍光光度計により定量化した。血管外遊出したエバンスブルーが６０％減少したことに証明されるように、虚血性の線条体中の血管透過性は減少した。それ故に、本発明の化合物は虚血損傷に関連する血管透過性を減少する。
【００３３】
永久局所虚血
実施例１は、永久局所虚血の２匹のラットモデルにおいても評価された。極度の重症度モデル（内頸動脈の腔内縫合閉塞）および比較的短時間の結果（２８時間）において、効果は全く見られなかった。
【００３４】
感覚運動皮質に広範な梗塞を引き起こすモデルにおいて、脳卒中後２１日間神経学的欠損の定量評価をし、該評価により実施例１の化合物は、脳卒中後の神経学的な結果に有意な改善を提供した。ウィスターラット（グループあたりｎ＝５）を、局所虚血性脳卒中モデルの対象とし、Ｃｈｅｎら（Ｓｔｒｏｋｅ  １７：７３８，１９８６）により説明されたように、実質的な結果として感覚運動皮質に広範な虚血を生じた。実施例１または媒体を、脳卒中誘発後９０分、４時間、２４時間、および２８時間後に、１０ｍｇ／ｋｇで、ＩＶボーラスとして投与した（全投与量４０ｍｇ／ｋｇ）。感覚運動の欠陥（姿勢反射、視覚および触覚の前肢配置および後肢配置試験）に関して、動物を虚血誘発後１、２、４、７、９、１１、１４、１６、１８、および２１日で評価した。結果を、勾配間差異の統計的な有意性を決定するために、また２１日後の最終的な神経学的結果を比較するために、一般化回帰モデルで評価した。２１日までに、実施例１で治療した対象に関する行動スコア（Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  Ｓｃｏｒｅ）に、対照群と比べて統計的に有意な改善があった。それ故に、本発明の化合物は神経学的欠損の長期間改善を提供する。
【００３５】
疾患、損傷、または他の外傷起因の血管透過性は、中枢神経系、心肺系、消化器系、および腎系の器官を含む様々な組織、および器官で起こりうる。本発明の化合物は、疾患、損傷、または他の外傷起因の血管透過性を阻害するために有効である。特に血管透過性は、脳血管事象後、大脳および脊髄組織中で阻害されうる。血管透過性は、脳血管事象後の血管外漏出および／または浮腫の主要な原因であり、また神経学的な疾患および身体障害を引き起こすことも多い。一過性および急性の虚血性事象を含むがこれに限定されない脳血管事象は、本発明に従って治療されてよい。急性の事象は、脳卒中、頭部外傷、脊髄外傷、全身性無酸素症（ｇｅｎｅｒａｌ  ａｎｏｘｉａ）、胎児低酸素症を含む低酸素症、低血糖症、低血圧、ならびにエンボリ（ｅｍｂｏｌｅ）、融合過多（ｈｙｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）および低酸素症の進行中に見られる同様の損傷を含むが、これに限定されない。脳卒中は局所および全虚血、一過性脳虚血発作、および他の脳虚血に付随する脳血管の不具合を含むが、これに限定されない。本発明は脳出血、頭蓋内外の動脈の塞栓症または血栓症起因の梗塞、心停止およびてんかん重積状態における、特に脳への血流が一時停止した場合での周産期仮死、を含む脳血管事象の範囲においても有効であろう。血管外漏出に関連する脳血管事象は、脳内炎症に関連する脳炎および髄膜炎を含むがこれに限定されない感染も含み、これは血管外漏出が周囲組織へ損傷を伝播することによる。糖尿病、多発性硬化症、腎疾患、およびアテローム性動脈硬化症のような全身性の疾患は、結果として血管透過性を増大させる可能性がある。本発明の化合物は、心筋虚血および虚血性腸疾患を含むがこれに限定されない、中枢神経系外での局所組織／器官の虚血性（低酸素の）事象により引き起こされる血管透過性の阻害に関しても有効である。
【００３６】
本発明の化合物は患者に神経保護を提供する。本明細書で用いる“神経保護”は、細胞死またはアポトーシスに対する、神経細胞の保護を言う。細胞死またはアポトーシスの程度の１つの尺度は、梗塞体積；壊死または死んだ脳組織の体積である。画像処理技法および患者の臨床状態を、虚血性事象後の梗塞体積を評価するために用いてよい。本発明の化合物は、同様の虚血性事象において本発明の薬剤がない典型の体積と比べて、患者の梗塞体積を減少する。
【００３７】
本発明の化合物は、血管透過性に関連する神経変性および／または神経毒性を予防、減少、または阻害し、この血管透過性は、結果として視覚障害、言語障害、記憶障害、認知障害、または機能障害を含むがこれに限定されない症状、および運動麻痺を含むがこれに限定されない運動障害を生じる。上記した損傷または疾患起因の神経学的欠損は、本発明に従って阻害、または予防されてよい。それ故に本発明は、哺乳類、好ましくはヒトにおいて上記の血管外漏出または透過性に関連する状態を治療、予防、阻害、または緩和する方法であって、本発明の化合物を哺乳類へ、また特にそれらを必要とするヒト患者へ、医薬上効果のある量で、および特に血管透過性を阻害する量で与えることを含む方法を提供する。
【００３８】
式Ｉの化合物、その混合物、およびまたはその医薬上許容される塩、およびその医薬上許容される担体の少なくとも１つを含む、血管透過性の治療または調節のための医薬組成物も、本発明により包含される。かかる組成物はＲｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ａｌｆｏｎｏｓｏ  Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８５）で説明されているような、医薬上許容される方法に従って調製される。医薬上許容される担体は、剤形中の他の成分と適合性があり、また生物学的に許容されるものである。
【００３９】
液体担体は、静脈溶液を含む溶液、懸濁液、乳濁液、シロップ、およびエリキシル剤の調製に用いられてよい。本発明の有効成分は、水、有機溶媒、またはそれらの混合物のような医薬上許容される液体担体中で、溶解または懸濁することが可能である。この液体担体は、溶解剤、乳化剤、バッファー、防腐剤、甘味料、香料、懸濁剤、増粘剤、色素、粘性制御剤、安定化剤、浸透圧調節剤、酸化防止剤、および消泡剤のような他の適当な医薬添加剤を含んでよい。
【００４０】
経口、静脈内、および非経口投与用の液体担体の適当な例は、水（特に、上記したような添加剤、例えばセルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液を含む）、生理食塩水、ブドウ糖溶液、ブドウ糖−生理食塩水、およびブドウ糖水溶液、アルコール（例えばグリコールのような一価アルコール、および多価アルコールを含む）、およびその誘導体を含む。液体担体は、非経口および静脈内投与用に、滅菌形態で用いられる。液体剤形のＰＨは、所望によりＨＣｌ、水酸化ナトリウム、およびリン酸の添加により調節されてよい。好ましくは、本発明の組成物は、等浸透圧の、生理学的に適合するバッファー系中の滅菌溶液または懸濁液である、液体医薬組成物である。
【００４１】
本発明の液体医薬組成物は、例えば筋肉、腹腔、静脈内、または皮下投与により投与されてよい。好ましくは、本発明の医薬組成物は、腹腔または静脈内注射により患者に投与される。もっとも好ましくは、組成物は、例えば静脈内ボーラス注射、静脈内点滴、繰り返し遅延ボーラス投与、または注入により静脈内投与される。
【００４２】
経口投与は、液体または固体組成物の形態であってよい。本発明の化合物はニートで、または慣用的な医薬担体と組み合わせて、経口または非経口投与されてもよい。適用可能な固体担体は、香料、湿潤剤、溶解剤、懸濁剤、賦形剤、流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔｓ）、圧迫包帯（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｉｄｓ）、結合剤、または錠剤−崩壊剤、またはカプセル材料の機能を果たしてもよい、１つまたはそれ以上の物質を含みうる。散剤中、担体は微細に分けられた固体であって、微細に分けられた有効成分との混合物である。錠剤中、有効成分は適当な比率で必須の圧迫性を有する担体と混合され、および所望の形および大きさに詰められる。好ましくは、散剤および錠剤は、有効成分の９９％までを含む。適当な個体担体は、例えばリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、乳糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、およびイオン交換樹脂を含む。
【００４３】
好ましくは、医薬組成物は単位投与形であって、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、溶液、懸濁液、乳濁液、顆粒剤、坐剤、アンプル、またはボーラスである。かかる形態において、組成物は有効成分を適当量含む単位投与にさらに分けられ；単位投与形は例えば、充填散剤、凍結乾燥散剤、あるいはアンプルまたはバイアル中の固形物、あるいは液体を含むバイアル、アンプル、プレフィルドシリンジ、もしくはサシェのような組成物にパッケージされてよい。単位投与形は、例えばカプセル剤または錠剤そのものであってよく、あるいはパッケージ形態中かかる組成物の適当数であってよい。
【００４４】
患者への投与量は、何に投与されるか、予防または治療のような投与目的、患者の状態、投与方法などに応じて異なるだろう。“治療上効果のある量”は、疾患または損傷の症状の治療、または回復のために十分な量である。通常、単位投与量（または投与形）は、約１ｍｇ／ｋｇないし約３０ｍｇ／ｋｇ、またより好ましくは、約１ｍｇ／ｋｇないし約１０ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物を含むだろう。所望により、患者は複数投与されるだろう。特定ケースの治療で用いられる投与量は、担当医師の主観によって決定されなければならない。関連する可変量は、患者の特定条件、およびサイズ、年齢および反応パターンを含む。
【００４５】
本発明は、脳卒中および血管透過性に関連する他の状態のために、今まで知られている治療を超える利点を提供する。特に、虚血損傷後できるだけ早く患者を治療することが好ましい一方で、本発明の化合物は、虚血損傷後約１８ないし２４時間までにさえ投与されれば、特定患者の神経変性および神経学的欠損の発達を予防するのに有効である可能性がある。さらに治療は継続してよく、また患者の予後における改善は、虚血損傷後約７２時間またはそれ以上に至るまでの間、本発明の化合物を連続して、または繰り返して投与した結果である可能性がある。
【００４６】
本発明の１つの具体例は、虚血性事象後約６ないし２４時間の間に化合物を投与することを含む。さらなる具体例は、虚血性事象後約１８ないし２４時間の間に化合物を投与することを含む。
【００４７】
本明細書で用いる“提供”は、本発明の化合物または組成物を直接投与することか、あるいは体内で有効な化合物または物質を等価量形成するだろうプロドラッグ、誘導体、または類似体を投与することを意味する。
【００４８】
本発明は、式Ｉの化合物のプロドラッグを含む。本明細書で用いる“プロドラッグ”はインビボでの代謝法（例えば加水分解）により式Ｉの化合物へ変換できる化合物を意味する。プロドラッグの様々な形態は、例えばＢｕｎｄｇａａｒｄ，（ｅｄ．），Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９８５）；Ｗｉｄｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．（ｅｄ．），Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．４，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）；Ｋｒｏｇｓｇａａｒｄ−Ｌａｒｓｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄ）．“Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ５，１１３−１９１（１９９１），Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  ｅｔ  ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，８：１−３８（１９９２），Ｂｕｎｄｇａａｒｄ，  Ｊ．  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，７７：２８５  ｅｔ  ｓｅｑ．（１９８８）；およびＨｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｓｔｅｌｌａ  （ｅｄｓ．）Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ（１９７５）で説明されているような分野で知られている。
【００４９】
本発明は、本発明の範囲を限定しない下記の具体的な実施例とあわせて、より十分に説明されるだろう。
【００５０】
参考例１
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸エチル
３−フルオロ−４−メトキシアニリン（３．００ｇ、２１．２６ｍｍｏｌ）およびエトキシメチレンマロン酸ジエチル（４．５９ｇ、２１．２６ｍｍｏｌ）の混合物を１１０ｏＣで１時間加熱し、室温に冷却した。ヘキサンを添加し、固体を濾過により収集した。この材料をジフェニルエーテル：ビフェニルが３：１の混合物４５ｍＬ中に懸濁し、混合物を２時間加熱還流し、茶色溶液を得た。反応混合物を室温に冷却し、ヘキサンを添加した。生じた固体を濾過により収集し、ヘキサンで洗浄し、白色固体、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸エチル（２．６２ｇ、ｍｐ＞３００°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２６５．９（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１３Ｈ１２ＦＮＯ４として
計算値（％）：Ｃ，５８．８７；Ｈ，４．５６；Ｎ，５．２８．
測定値（％）：Ｃ，５８．６６；Ｈ，４．１６；Ｎ，５．１４．
【００５１】
参考例２
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸エチル（２．２ｇ、８．３０ｍｍｏｌ）および１Ｎ水酸化ナトリウム１３．２ｍＬおよびエタノール４０ｍＬの混合物を３時間加熱還流し、室温に冷却した。水を添加し、混合物を酢酸で酸性にした。生じた固体を濾過により収集し、水で洗浄し、白色固体、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４，−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸（１．９０ｇ、ｍｐ２６５−２６７°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２３８．１（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１１Ｈ８ＦＮＯ４−１．２Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５１．０４；Ｈ，４．０３；Ｎ，５．４１．
測定値（％）：Ｃ，５０．９８；Ｈ，３．９５；Ｎ，５．３３．
【００５２】
参考例３
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボキサミド
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１４ｍＬ中、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボン酸（１．０ｇ、４．２１ｍｍｏｌ）および１，１’−カルボニルジイミダゾール（１．５１ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）の混合物を６５ｏＣで２時間加熱し、室温に冷却し、氷水浴上の水酸化アンモニウム水溶液２００ｍＬに注いだ。溶液は室温で一晩かき混ぜておき、その後濃縮して少量にした。氷冷水を添加し、その後酢酸で酸性にした。生じた固体を濾過により収集し、水で洗浄し、白色固体、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボキサミド（８２１ｍｇ、ｍｐ＞３００°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２３６．８（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１１Ｈ９ＦＮ２Ｏ３−０．２Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５５．０９；Ｈ，３．９４；Ｎ，１１．６８．
測定値（％）：Ｃ，５５．００；Ｈ，３．６３；Ｎ，１１．４９．
【００５３】
参考例４
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１５ｍＬ中、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４，−ジヒドロ−３−キノリンカルボキサミド（７００ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）および塩化シアヌル（３４１ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の混合物を６５ｏＣで６時間加熱し、次いで室温に冷却し、さらに塩化シアヌル（２０６ｍｇ）を添加した。混合物を６５ｏＣで４時間加熱し、室温で一晩かき混ぜた。反応混合物を冷水へ注ぎ、炭酸水素ナトリウム（飽和）で中和した。固体を濾過により収集し、水およびヘキサンで洗浄し、未精製物（６１０ｍｇ）を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ｆｌａｓｈ  ｃｏｌｕｍｎ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を用い、ジクロロメタン中３％メタノールないしジクロロメタン中１０％メタノールの勾配で溶出し精製することで、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（２７２ｍｇ、ｍｐ１４７−１４９°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２１６．８（Ｍ−Ｈ）−
元素分析：Ｃ１１Ｈ７ＦＮ２Ｏ２−０．１ジクロロメタンとして
計算値（％）：Ｃ，５８．８０；Ｈ，３．１９；Ｎ，１２．３６．
測定値（％）：Ｃ，５９．０６；Ｈ，２．９６；Ｎ，１１．９７．
【００５４】
参考例４の別法
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル
トルエン中、３−フルオロ−４−メトキシアニリン（１５．３１ｇ、１０８ｍｍｏｌ）および（エトキシメチレン）シアン酢酸エチル（１８．３６ｇ、１０８ｍｍｏｌ）の混合物を１００ないし１１０ｏＣで４．５時間加熱し、室温に冷却した。ヘキサンおよび酢酸エチルが１：１の混合物を添加し、混合物を氷浴で冷却した。固体を収集し、ヘキサンで洗浄し、第一群２６．１０ｇ、および第二群１．２４ｇを得た。この材料の一部２．０ｇを、加熱還流したジフェニルエーテル：ビフェニルが３：１の混合物１８ｍＬへ添加した。この混合物を４時間加熱還流し、冷却し、ヘキサンへ注いだ。固体を濾過により収集し、酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄し、茶色固体、７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４，−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（６２４ｍｇ）を得た。濾液を濃縮し、残渣を酢酸エチル中に溶解し、ヘキサンを添加した。生じた固体を濾過により収集し、黄色固体の７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（１．０７ｇ）を得た。
【００５５】
参考例５
４−クロロ−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル
７−フルオロ−６−メトキシ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（１．０ｇ、４．５９ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン１４ｇの混合物を３０分間加熱還流し、真空で濃縮した。残渣を炭酸水素ナトリウム水溶液および酢酸エチル間で分配した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、シリカゲルで濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、酢酸エチル：ヘキサンが１：５、ないし酢酸エチル：ヘキサンが１：１の勾配で溶出し精製することにより、４−クロロ−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（６３１ｍｇ、ｍｐ１６０−１６２°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２３６．９（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１１Ｈ６ＣｌＦＮ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５５．８３；Ｈ，２．５６；Ｎ，１１．８４．
測定値（％）：Ｃ，５５．６６；Ｈ，２．８４；Ｎ，１１．９１．
【００５６】
参考例６
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル
２−エトキシエタノール４５ｍＬ中、４−クロロ−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（４．１２ｇ、１８ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロ−５−メトキシアニリン（４．５６ｇ、２４ｍｍｏｌ）（Ｔｈｅｏｄｏｒｉｄｉｓ，Ｇ．；Ｐｅｓｔｉｃ．Ｓｃｉ．１９９０，３０，２５９）、およびピリジン塩酸塩（２．３１ｇ、１９．９ｍｍｏｌ）の混合物を１２０°Ｃで３時間加熱し、室温に冷却した。反応混合物を炭酸水素ナトリウム水溶液へ添加し、２０分間かき混ぜた。固体を濾過により収集し、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（４．８９ｇ、ｍｐ＞２６０°Ｃ）を得た。
ＨＲＭＳ理論  ３９２．０３６３４；測定値（％）  ３９２．０３５５６（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１８Ｈ１２Ｃｌ２ＦＮ３Ｏ２−２．０Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５０．４８；Ｈ，３．７７；Ｎ，９．８１．
測定値（％）：Ｃ，５０．４１；Ｈ，２．８２；Ｎ，９．７８．
【００５７】
参考例７
６−ベンジルオキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル
４−ベンジルオキシ−３−フルオロアニリン（６．０６ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）（ＵＳ５，６２２，９６７）および（エトキシメチレン）シアン酢酸エチル（５．０８ｇ、３０．０ｍｍｏｌ）の混合物を、１２０ｏＣで４５分間加熱し、室温に冷却した。この固体を２４５ｏＣで、ジフェニルエーテル：ビフェニルが３：１の混合物へ、少しずつ添加した。この混合物を２４５ｏＣで３時間加熱し、冷却し、固体を濾過により収集し、ヘキサンおよびジエチルエーテルで洗浄し、６−ベンジルオキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（２．６０ｇ、ｍｐ＞２５０°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２９３．１（Ｍ−Ｈ）−
【００５８】
参考例８
６−ベンジルオキシ−４−クロロ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル
６−ベンジルオキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−３−キノリンカルボニトリル（６４５ｍｇ、２．１９ｍｍｏｌ）およびオキシ塩化リン１０ｍＬの混合物を１１５ｏＣで１．５時間加熱し、真空で濃縮した。残渣を氷冷した水酸化アンモニウム水溶液で処理し、生じた固体を濾過により収集した。フラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、ヘキサン中１％酢酸エチル、ないしヘキサン中６％酢酸エチルの勾配で溶出し精製することにより、６−ベンジルオキシ−４−クロロ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２８４ｍｇ、ｍｐ１５９−１６０°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ３１３．１３（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１７Ｈ１０ＣｌＦＮ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，６５．１５；Ｈ，３．０６；Ｎ，８．８２．
測定値（％）：Ｃ，６５．２９；Ｈ，３．２２；Ｎ，８．９６．
【００５９】
参考例９
４−クロロ−７−フルオロ−６−ヒドロキシ−３−キノリンカルボニトリル
トリフルオロ酢酸１２ｍＬ中、６−ベンジルオキシ−４−クロロ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（７３３ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）およびチオアニソール１ｍＬの混合物を９時間加熱還流し、真空で濃縮した。残渣を氷冷水で処理し、水酸化アンモニウム水溶液を添加しｐＨ９ないし１０の塩基性にした。生じた固体を濾過により収集し、ジエチルエーテルで洗浄した。濾液を酢酸エチル中１０％メタノールで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。残渣を初めに得た固体とあわせて、この物質を酢酸エチル中５％メタノールに溶解し、シリカゲルで吸収させた。フラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、ヘキサン中の酢酸エチル量を酢酸エチル中５％メタノールまで増加させるヘキサン勾配で溶出し精製することにより、４−クロロ−７−フルオロ−６−ヒドロキシ−３−キノリンカルボニトリル（２６０ｍｇ、ｍｐ＞２５０°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２２０．９（Ｍ−Ｈ）−
元素分析：Ｃ１０Ｈ４ＣｌＦＮ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５３．９６；Ｈ，１．８１；Ｎ，１２．５８．
測定値（％）：Ｃ，５４．２３；Ｈ，２．０２；Ｎ，１２．０６．
【００６０】
参考例１０
４−クロロ−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル
テトラヒドロフラン１５ｍＬ中、４−クロロ−７−フルオロ−６−ヒドロキシ−３−キノリンカルボニトリル（１８５ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（３９２ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）、およびエタノール（１５３ｍｇ、３．３２ｍｍｏｌ）の０°Ｃの混合物へ、アゾジカルボン酸ジエチル（２６０ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を０°Ｃで４５分間放置し、室温で一晩かき混ぜた。反応混合物を真空で濃縮し、その後フラッシュカラムクロマトグラフィーを用い、ヘキサン中１％酢酸エチルないしヘキサン中５％酢酸エチルの勾配で溶出し精製することにより、４−クロロ−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（ｍｐ１６５−１６６°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ２５１．０（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ１２Ｈ８ＣｌＦＮ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５７．５０；Ｈ，３．２２；Ｎ，１１．１８．
測定値（％）：Ｃ，５７．２４；Ｈ，３．４１；Ｎ，１１．０９．
【００６１】
参考例１１
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル
参考例６の手順に従って、４−クロロ−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（１９７ｍｇ、０．７８ｍｍｏｌ）、２，４−ジクロロ−５−メトキシアニリン（２２０ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）、およびピリジン塩酸塩（１２０ｍｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の混合物を、フラッシュカラムクロマトグラフィーに通し、ジクロロメタン中１％メタノールまでのジクロロメタン勾配で溶出することにより、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（１８３ｍｇ、ｍｐ１８４−１８６°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ４０６．０（Ｍ＋Ｈ）
元素分析：Ｃ１９Ｈ１４Ｃｌ２ＦＮ３Ｏ２−０．５Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５４．９６；Ｈ，３．６４；Ｎ，１０．１２．
測定値（％）：Ｃ，５４．９９；Ｈ，３．５９；Ｎ，１０．０５．
【００６２】
実施例１
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル
Ｎ−メチルピペラジン４ｍＬ中、７−［３−クロロプロポキシ］−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（６５６ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）、およびヨウ化ナトリウム（２１０ｍｇ、１．４０ｍｍｏｌ）の混合物を８００Ｃで２０時間加熱した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルおよび炭酸水素ナトリウム水溶液（飽和）間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィーを用い、ジクロロメタン中３０％メタノールで溶出し精製した。生成物を含む画分を収集し、真空で濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加し、淡桃色固体を濾過により収集し、５６０ｍｇ（７５％）の４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル：ｍｐ１１６−１２００Ｃ；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５３０．２，５３２．２（Ｍ＋１）を得た。
【００６３】
実施例２
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル
エチレングリコールジメチルエーテル５ｍＬ中、７−［３−クロロプロポキシ］−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（３．５０ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）、ヨウ化ナトリウム（１．１２ｇ、７．５０ｍｍｏｌ）、およびＮ−エチルピペラジン４．８ｍＬの混合物を、９５０Ｃで２０時間加熱した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルおよび飽和炭酸水素ナトリウム水溶液間で分配した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いでブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。ジエチルエーテルを残渣に添加し、白色固体を濾過により収集し、１．８０ｇ（４４％）の４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル：ｍｐ１０２−１０４０Ｃ；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５４４．３，５４６．４（Ｍ＋１）を得た。
【００６４】
実施例３
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
実施例１の調製に用いた方法に従って、７−［２−クロロエトキシ］−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル、およびＮ−メチルピペラジンの反応により調製した：ｍｐ１６５−１６７０Ｃ；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５１６．０，５１８．２（Ｍ＋１）。
【００６５】
実施例４
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル
実施例１の調製に用いた方法に従って、７−［２−クロロエトキシ］−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル、およびＮ−エチルピペラジンの反応により調製した：ｍｐ１０１−１０５０Ｃ；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５３０．４，５３２．４（Ｍ＋１）。
【００６６】
実施例５
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
１３５°Ｃで、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１０ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（６００ｍｇ、１．５３ｍｍｏｌ）、および１−メチルピペリジン−４−メタノール（３９５ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ）の溶液へ、水酸化ナトリウム（３６２ｍｇ、９．０６ｍｍｏｌ）を少しずつ添加した。４５分後、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウムへ注いだ。１５分間かき混ぜた後、固体を濾過により収集した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて、ジクロロメタン中５％メタノールないしジクロロメタン中２５％メタノールの勾配で溶出し、精製した。ジエチルエーテルでトリチュレートすることにより、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル（３９６ｍｇ、ｍｐ２００−２０２°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５０１．３（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２５Ｈ２６Ｃｌ２Ｎ４Ｏ３０．８Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５８．２１；Ｈ，５．３９；Ｎ，１０．８６．
測定値（％）：Ｃ，５８．１９；Ｈ，５．２３；Ｎ，１０．６７．
【００６７】
実施例６
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、水酸化ナトリウム（１２８ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）および１−メチル−４−ピペリジンエタノール（１８０ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）［ＥＰ  ０５８１５３８］の混合物を、１１０°Ｃで１時間加熱した。４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−フルオロ−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１３５°Ｃで５時間加熱した。その後４時間にわたって、さらに１２８ｍｇの水酸化ナトリウムを反応混合物へ１３０°Ｃで添加した。反応混合物を酢酸エチルおよび水の間で分配した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、真空で乾燥した。残渣を、調製用薄層クロマトグラフィーを用い、ジクロロメタン中２０％メタノールで溶出することで精製し、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル（１０５ｍｇ、ｍｐ１９０−１９１°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５１５．１９（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２６Ｈ２８Ｃｌ２Ｎ４Ｏ３−１．０Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５８．５３；Ｈ，５．６７；Ｎ，１０．５０．
測定値（％）：Ｃ，５８．６５；Ｈ，５．５７；Ｎ，１０．３４．
【００６８】
実施例７および８は、実施例５の方法および対応するアルコールにより、同じように得た。
【００６９】
実施例７
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ＭＰ１４４−１４５℃；Ｍａｓｓ  ｓｐｅｃ．５２９．２（ＥＳ＋）
【００７０】
実施例８
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル
ＭＰ１９２−１９５℃；Ｍａｓｓ  ｓｐｅｃ．５１５．２（ＥＳ＋）
【００７１】
実施例９
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、３−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）プロパノール（１５５ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）（ＷＯ  ２００４７２１２）、および水酸化ナトリウム（１９６ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）の混合物を、１２５°Ｃで３時間加熱した。反応混合物を、飽和炭酸水素ナトリウムへ注ぎ、１時間かき混ぜた。水溶液をジクロロメタン中１０％メタノールで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮した。残渣を、調製用薄層クロマトグラフィーを用い、ジクロロメタン中１５％メタノールで溶出し、精製した。ヘキサンでトリチュレートすることにより、薄茶色固体の、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］−キノリン−３−カルボニトリル（１１６ｍｇ、ｍｐ１３７−１３８°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５４２．０（Ｍ−Ｈ）−
元素分析：Ｃ２７Ｈ３１Ｃｌ２Ｎ５Ｏ３−０．６Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５８．４０；Ｈ，５．８４；Ｎ，１２．６１．
測定値（％）：Ｃ，５８．３１；Ｈ，５．７１；Ｎ，１２．４３．
【００７２】
実施例１０
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、１−メチルピペリジン−４−メタノール（１８８ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）（ＷＯ  ２００４７２１２）、および水酸化ナトリウム（１９６ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）の混合物を１２５°Ｃで３時間加熱した。反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウムへ注ぎ、１時間かき混ぜた。固体を濾過により収集し、水で洗浄し、真空で乾燥した。固体を、調製用薄層クロマトグラフィーを用い、ジクロロメタン中１５％メタノールで溶出することで精製した。ジエチルエーテルでトリチュレートすることにより、薄茶色固体の、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル（６７ｍｇ、ｍｐ１８２−１８６°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５１３．０（Ｍ−Ｈ）−
元素分析：Ｃ２６Ｈ２８Ｃｌ２Ｎ４Ｏ３−１．４Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５７．７６；Ｈ，５．７４；Ｎ，１０．３６．
測定値（％）：Ｃ，５７．６５；Ｈ，５．４３；Ｎ，１０．１５．
【００７３】
実施例１１
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、および３−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）プロパノール（２４１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の混合物を、１２５°Ｃで５分間加熱した。水酸化ナトリウム（６０％）（９８ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１２５°Ｃで１時間加熱した。さらに水酸化ナトリウム（９８ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１２５°Ｃで２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、飽和炭酸水素ナトリウムへ注ぎ、１時間かき混ぜた。水溶液をジクロロメタン中１０％メタノールで抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空で濃縮した。残渣を、調製用薄層クロマトグラフィーを用い、ジクロロメタン中１２％メタノールで展開することにより精製した。ジエチルエーテルおよびヘキサンでトリチュレートすることにより、薄茶色固体の、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）−プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル（１４６ｍｇ、ｍｐ１２７−１３０°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５５８．３（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２８Ｈ３３Ｃｌ２Ｎ５Ｏ３−１．５Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５７．４４；Ｈ，６．２０；Ｎ，１１．９６．
測定値（％）：Ｃ，５７．４４；Ｈ，６．２４；Ｎ，１１．７９．
【００７４】
実施例１２
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、および３−（１−メチル−４−ピペリジニル）プロパノール（１５４ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の混合物を、１２５°Ｃで５分間加熱した。水酸化ナトリウム（６０％）（９８ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１２５°Ｃで１時間加熱した。さらに水酸化ナトリウム（９８ｍｇ、２．４５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１２５°Ｃで２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、飽和炭酸水素ナトリウムを注ぎ、１時間かき混ぜた。沈殿物を収集し、水で洗浄し、真空で乾燥した。残渣を、調製用薄層クロマトグラフィーを用いて、ジクロロメタン中１５％メタノールで展開することにより精製した。ジエチルエーテルでトリチュレートすることにより、オフホワイト色固体、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル（１４６ｍｇ、ｍｐ１４８−１５１°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５４３．２（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２８Ｈ３２Ｃｌ２Ｎ４Ｏ３−１．８Ｈ２Ｏとして
計算値（％）：Ｃ，５８．３９；Ｈ，６．２３；Ｎ，９．７３．
測定値（％）：Ｃ，５８．４０；Ｈ，６．１６；Ｎ，９．６４．
【００７５】
実施例１３
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、および２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エタノール（１４１ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ））の混合物を１００°Ｃまで加熱した。水酸化ナトリウム（６０％）（１９６ｍｇ、４．９ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を１２５°Ｃで３時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水２５ｍＬで処理した。混合物を２時間かき混ぜた。沈殿物を収集し、水で洗浄し、真空で乾燥した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて、ジクロロメタン中５％メタノールないしジクロロメタン中１５％メタノールの勾配で溶出し、精製した。ジエチルエーテルでトリチュレートすることにより、オフホワイト色固体の、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）−エトキシ］−キノリン−３−カルボニトリル（１２３ｍｇ、ｍｐ１４１−１４３°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５３０．２（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２６Ｈ２９Ｃｌ２Ｎ５Ｏ３として
計算値（％）：Ｃ，５８．８７；Ｈ，５．５１；Ｎ，１３．２０．
測定値（％）：Ｃ，５８．４８；Ｈ，５．４５；Ｎ，１２．９５．
【００７６】
実施例１４
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−フルオロ−３−キノリンカルボニトリル（２００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）、および１−メチル−４−ピペリジンエタノール（１４０ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ）の混合物を１００°Ｃまで加熱した。水酸化ナトリウム（６０％）（１６２ｍｇ、４．０５ｍｍｏｌ）を少しずつ添加し、混合物を１２５°Ｃで３時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、水２５ｍＬで処理した。沈殿物を収集し、水で洗浄し、また真空で乾燥した。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーを用いて、初めにジクロロメタン、次いでジクロロメタン中５％メタノールないしジクロロメタン中３０％メタノールの勾配で溶出し、精製した。ジエチルエーテルでトリチュレートすることにより、オフホワイト色固体の、４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−キノリン−３−カルボニトリル（１２１ｍｇ、ｍｐ１７４−１７６°Ｃ）を得た。
ＭＳ  ５２９．１（Ｍ＋Ｈ）＋
元素分析：Ｃ２７Ｈ３０Ｃｌ２Ｎ４Ｏ３として
計算値（％）：Ｃ，６１．２５；Ｈ，５．７１；Ｎ，１０．５８．
測定値（％）：Ｃ，６１．４０；Ｈ，５．８４；Ｎ，１０．３５．
【００７７】
実施例１５
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル
実施例１の調製に用いた方法に従って、７−［３−クロロエトキシ］−４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル、およびＮ−プロピルピペラジンの反応により調製した：ｍｐ９７−１０１℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５５８．２，５６０．２（Ｍ＋１）。
【国際調査報告】
2006522023.tif 000033
2006522023.tif 000034
2006522023.tif 000035