(57)【要約】【課題】前投薬と、より改善された技術でも、２０〜３０％の患者に膨張患部の慢性再狭窄症が生じ、これは依然として頻繁に生じる重大な問題である。【解決手段】本発明は式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体等であって：    Ｒ3−ＮＨ−Ｃ（＝Ｘ）−Ｐ（＝Ｏ）ＯＲ1ＯＲ2    （Ｉ）  Ｒ1およびＲ2は同一であるかまたは異なり、Ｒ1およびＲ2は酸素および燐原子と共にジオキサホスファシクロアルカン環を形成し；ＸはＯまたはＳであり；ＸがＯである場合、Ｒ3はシクロヘキシルメチルではなく、ＸがＳである場合、Ｒ3はシクロヘキシルでないという条件で、ＸがＯである場合、Ｒ3はビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、および少なくともアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの１つにより随意置換されたシクロアルキルから選ばれ；ＸがＳである場合、Ｒ3はビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、およびアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの少なくとも１つにより随意置換されたシクロアルキルから選ばれることを特徴とする化合物である。
2006522108.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む以下の式Ｉの化合物であって：
【化１】
2006522108.tif 000009
Ｒ1およびＲ2は同一であるかまたは異なり、それぞれ水素、アシルオキシアルキルおよびアリールから選ばれるか、Ｒ1およびＲ2は酸素および燐原子と共にジオキサホスファシクロアルカン環を形成し；
ＸはＯまたはＳであり；
ＸがＯである場合、Ｒ3はシクロヘキシルメチルではなく、
ＸがＳである場合、Ｒ3はシクロヘキシルでないという条件で、
ＸがＯである場合、Ｒ3は少なくともアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの１つによって、随意置換されたビシクロアルキル、随意置換されたシクロアルキルアルキル、および置換されたシクロアルキルから選ばれ；ＸがＳである場合、Ｒ3はアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの少なくとも１つにより随意置換されたビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、およびシクロアルキルから選ばれることを特徴とする化合物。
【請求項２】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＯであり、Ｒ3は置換シクロアルキルおよび置換ビシクロアルキルから選ばれることを特徴する請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＯであり、Ｒ3は少なくとも１個のアミノ基で置換されたビシクロアルキル、シクロアルキルアルキルおよびシクロアルキルから選ばれることを特徴する請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＯであり、Ｒ3は置換シクロヘキシルであることを特徴する請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＯであり、Ｒ3はシクロヘキシルエチル、ノルボルニルおよび２−アミノシクロヘキシルから選ばれることを特徴する請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＳであり、Ｒ3はアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの少なくとも１つで置換されたビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、およびシクロアルキルから選ばれることを特徴する請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＳであり、Ｒ3は少なくとも１個のアミノ基で置換されたシクロアルキルであることを特徴する請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む式Ｉの化合物であって、ＸはＳであり、Ｒ3はシクロヘキシルエチル、ノルボルニル、２−アミノシクロヘキシルおよびシクロヘキシルメチルから選ばれることを特徴する請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
ＸはＯであり、Ｒ3は（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル、エンド−２−ノルボルニルおよびシス−２−アミノシクロヘキシルから選ばれることを特徴する請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
ＸはＳであり、Ｒ3はシクロヘキシルメチルであることを特徴する請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｎ−（シクロヘキシルメチル）チオカルバモイルホスホン酸；
Ｎ−［（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスホン酸；
Ｎ−［エンド−２−ノルボルニル）］カルバモイルホスホン酸；
Ｎ−（シス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスホン酸；および
これらの化合物の光学活性体、およびこれらの化合物の薬学的に受容し得る塩、水和物、溶媒和物、および多形体から選ばれることを特徴する請求項１に記載の式Ｉの化合物。
【請求項１２】
Ｎ−（シス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスホン酸およびその薬学的に受容し得る塩、水和物、溶媒和物、および多形体。
【請求項１３】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を請求項１記載の式Ｉの化合物を活性成分として含み、薬学的に受容し得る担体を共に含む医薬組成物。
【請求項１４】
マトリックスメタロプロテアーゼに関連する病態および病状の阻止、治療および／または予防用であることを特徴とする請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記病態が癌、関節炎、再狭窄症および多発性硬化症から選ばれることを特徴とする請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む請求項１に記載の式Ｉの化合物を薬剤調製に使用する使用法。
【請求項１７】
癌、関節炎、再狭窄症および多発性硬化症から選ばれる病態を治療または制御するための薬剤を調製するための請求項１６に記載の使用法。
【請求項１８】
マトリックスメタロプロテアーゼの阻害によって軽減される病態を有する哺乳動物の治療法であって、これを必要とする個体に有効量の請求項１に記載の一般式Ｉの化合物を投与することを含み、前記化合物は式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含むことを特徴とする治療方法。
【請求項１９】
マトリックスメタロプロテアーゼの阻害で軽減する前記病態が癌、関節炎、再狭窄症および多発性硬化症から選ばれることを特徴とする請求項１８に記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はある種の新規化合物、この様な化合物の調製プロセス、それらを含む医薬組成物およびこの様な化合物および組成物の医療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌、関節炎、再狭窄症または多発性硬化症等の疾患の治療へのアプローチとしてのマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害が現在、医薬産業界で強い関心が持たれている領域である［ホイットカー（Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ、Ｍ．）、フロイド（Ｆｌｏｙｄ、Ｃ．Ｄ．）、ブラウン（Ｂｒｏｗｎ、Ｐ．）、ギアリング（Ｇｅａｒｉｎｇ、Ａ．Ｊ．Ｈ．）、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９９、９９、２７３５−２７７６］。
【０００３】
ＭＭＰはストロメリシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼを含む亜鉛含有カルシウム依存性酵素のファミリーである。２０種以上のＭＭＰが同定されている。ＭＭＰは生理学的および病理学的条件の双方で細胞外基質のタンパク質性成分を分解や修復することが可能である。ＭＭＰの誤制御と過剰発現は数多くの病状の主な因子であると考えられ、そのほとんどは結合組織の望ましくない分解が特徴である。これらの病状にはリューマチ性関節炎、腫瘍浸潤、腫瘍転移、血管形成、多発性硬化症、歯周病、冠動脈疾患、再狭窄症、鬱血性心不全、異常創傷治癒、骨基質劣化、骨粗しょう症、肝硬変、脳虚血、髄膜炎その他が含まれる。腫瘍細胞浸潤性はＭＭＰ依存性であることが示され、ＭＭＰ阻害剤がインビトロおよびインビボで腫瘍細胞浸潤を阻止することが知られている。
【０００４】
冠動脈アテローム性動脈硬化とその臨床進行は、西欧社会で依然として死亡の主な原因である。経皮経管冠動脈形成（ＰＴＣＡ）は、米国およびヨーロッパで推定年間百万件以上の虚血性心臓疾患の治療の中心となっている。ＰＴＣＡ手術にはバルーン拡張、切除アテロクトミー、ステント埋込術およびレーザー切除が含まれる。
一方、ある種のカルバモイルホスフォネート誘導体類がＭＭＰを阻止し得るとして国際公開第０１／２６６６１号に記載された。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前投薬と、より改善された技術によって経皮血管再生手術の急性合併症がかなり減少したにもかかわらず、２０〜３０％の患者に膨張患部の慢性再狭窄症が生じ、これは依然として頻繁に生じる重大な問題である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第１の態様によれば、本発明は式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および該幾何異性体類および該光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む新規カルバモイルホスフォネート類およびチオカルバモイルホスフォネート類を供給する。
式Ｉは以下の通りである。
【０００７】
【化２】
2006522108.tif 000003
【０００８】
Ｒ1およびＲ2は同一であるかまたは異なり、それぞれ水素、アシルオキシアルキルおよびアリールから選ばれるか、Ｒ1およびＲ2は酸素および燐原子と共にジオキサホスファシクロアルカン環を形成し；
ＸはＯまたはＳであり；
ＸがＯである場合、Ｒ3はシクロヘキシルメチルではなく、
ＸがＳである場合、Ｒ3はシクロヘキシルでないという条件で、
ＸがＯである場合、Ｒ3は、ビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、および少なくともアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの１つにより置換シクロアルキルから選ばれ；ＸがＳである場合、Ｒ3はアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの少なくとも１つにより随意置換されたビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、およびシクロアルキルから選ばれる。
【０００９】
本発明の化合物類は不斉炭素原子を有してもよく、従ってそれらの分子はラセミ混合物類またはそれぞれの光学活性体（エナンチオマーまたはジアステレオマー）として存在し得る。従って、本発明の範囲内には、本発明での化合物の全ての可能な異性体およびそれらの混合物が含まれる。同様に、本発明の化合物が結晶性である場合、多形体で存在してもよい。従って、本発明の範囲内には、式Ｉの化合物の全ての可能な多形体が含まれる。
【００１０】
単独またはシクロアルキル基の一部で示される場合、用語「アルキル」はアルキレン基も包含し、１〜６個の炭素原子で構成されることが好ましい。アルキル基が３個以上の炭素でなる場合、鎖状または分枝であり得る。さらに、シクロアルキル基のリングサイズが３〜８炭素原子であることが好ましく、ビシクロアルキル骨格が６〜１０個の原子で構成されることが好ましい。用語「シクロアルキル」および「ビシクロアルキル」は、少なくとも１個の不飽和結合を含むシクロアルキレンおよびビシクロアルキレン成分を包含する。用語「ビシクロアルキル」および「シクロアルキルアルキル」は、少なくとも１個のアルキル、アミノ、アミジノ、およびグアニジノ基で置換されたこれらの基を有する選択肢も包含するが、用語「アミノ」、「アミジノ」および「グアニジノ」は置換または未置換の当該基を包含し、置換基がアルキル基であることが好ましい。従って、例えば置換アミノ基には第２級または第３級アミノ基置換基も含まれる。
【００１１】
上記式Ｉ中でＸがＯである場合、Ｒ3は置換シクロアルキルおよびビシクロアルキルでなる群より選ばれることが好ましい。Ｒ3が置換シクロヘキシルおよびノルボルニルから選ばれることがより好ましい。Ｒ3が２−アミノシクロヘキシル、シクロヘキシルエチルおよびノルボルニルから選ばれることがさらに好ましい。上記式ＩでＸがＳである場合、Ｒ3は好ましくは置換シクロアルキル、より好ましくは置換シクロヘキシル、さらに好ましくはシクロヘキシルアルキルである。
【００１２】
より具体的には、本発明による好ましい化合物類は式Ｉの化合物であって、ＸはＯであり、Ｒ3は（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル、エンド−２−ノルボルニルおよびシス−２−アミノシクロヘキシルより選ばれる。別な好ましい化合物は式Ｉの化合物であって、ＸがＳであり、Ｒ3がシクロヘキシルメチルである。
【００１３】
本発明の別な態様は、上記式Ｉの新規化合物を活性成分として含む薬剤および医薬組成物を調製する該化合物の使用法である。
【００１４】
本発明はまた、マトリックスメタロプロテアーゼの阻害により軽減する病態を有する哺乳動物類の治療法であって、必要とする個体に有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に受容し得る塩を投与する過程を有する治療法を提供する。
【００１５】
用語「有効量」とは、所望の治療結果を達成するに有効である活性成分（上記式Ｉのホスフォネート、または薬学的に受容し得る塩、水和物または溶媒和物、またはその多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体または前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体）の量を示すことを意味する。有効量は投与の形、治療する個体の年齢群と体重、活性成分の投与法、使用した担体のタイプ（例えば活性成分を迅速に放出する担体であるか、一定期間にわたって放出する担体であるか）に依存する他、一般的に知られる様々な他の因子に依存する。当業者が日常的な実験により、各症例で有効量を決定するのに実質的な困難はないと考えられる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、国際公開第０１／２６６６１号記載の式Ｉの化合物由来の特定の群の化合物が、作用の選択性を改善し、従ってマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に関連する病態または病状の阻止、治療および／または予防に特に有用であるという驚くべき事実がわかった。より具体的には、本発明の新規化合物はカルバモイルまたはチオカルバモイル構造を有し、例えば癌、関節炎、再狭窄症および多発性硬化症等のＭＭＰに関連する様々な病態または病状の阻止、治療および／または予防に有用であると考えられる。
【００１７】
本発明を理解し、それがどの様に実施されるかを知るために、以下の付属する図を参照して好ましい実施態様を説明するが、これらは非制限的実施例であるにすぎない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明によれば、いくつかのカルバモイルまたはチオカルバモイルホスフォネート類は、当該物質がもつマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）の阻害効果に関連し生物学上、画期的な性質を有することが分かったのである。中でもこれらの性質には毒性の減少、経口生物適合性の改善、肺における癌転移の広がりをインビボで阻害する能力、前立腺癌における転移の広がりのインビボで阻害する能力、および再狭窄症のインビボ阻害能が含まれる。
【００１９】
本発明の新規化合物は式Ｉの化合物の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体の他、式Ｉの化合物の幾何異性体および光学活性体、および前記幾何異性体および前記光学活性体の薬学的に受容し得る塩、溶媒和物、水和物および多形体を含む以下の式Ｉを有する。
【００２０】
【化３】
2006522108.tif 000004
【００２１】
式中、Ｒ1およびＲ2は同一であるかまたは異なり、それぞれ水素、アシルオキシアルキルおよびアリールから選ばれるか、Ｒ1およびＲ2は酸素および燐原子と共にジオキサホスファシクロアルカン環を形成し；
ＸはＯまたはＳであり；
ＸがＯである場合、Ｒ3はシクロヘキシルメチルではなく、
ＸがＳである場合、Ｒ3はシクロヘキシルでないという条件で、
ＸがＯである場合、Ｒ3はビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、および少なくともアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの１つにより置換されたシクロアルキルから選ばれ；ＸがＳである場合、Ｒ3は、随意少なくともアルキル、アミノ、アミジノおよびグアニジノの１つにより置換されたビシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、およびシクロアルキルから選ばれる。
【００２２】
本発明は式Ｉの化合物の異性体全て、およびその薬学的に受容し得る塩、水和物、溶媒和物、および個々の異性体またはラセミ混合物としての任意の光学活性体を含む多形体を包含することは当然である。
【００２３】
本発明の化合物を公知の方法により一般的に合成し得る：サロモン（Ｃ．Ｊ．Ｓａｌｏｍｏｎ）およびブリューアー（Ｅ．Ｂｒｅｕｅｒ、Ｆａｃｉｌｅ）「ホスフォノチオールホルメート類のワンポット調製−カルバモイルホスフォネート類への便利なアプローチ（Ｏｎｅ−Ｐｏｔ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｎｏｔｈｉｏｆｏｒｍａｔｅｓ−Ａ  Ｃｏｎｖｉｎｉｅｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｃａｒｂａｍｏｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ）」、Ｓｙｎｌｅｔｔ、２０００、８１５−６．Ｒ；チェン（Ｃｈｅｎ、Ａ．）、シュロスマン（Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ、Ｅ．）、ブリューワー（Ｂｒｅｕｅｒ、Ｇ．）、ハーゲル（Ｈａｇｅｌｅ、Ｃ．）、ティルマン（Ｔｉｌｌｍａｎｎ、Ｊ．Ｍ．）、ファンデルダー（Ｖａｎ  Ｇｅｌｄｅｒ）およびゴロム（Ｇ．Ｇｏｌｏｍｂ）、「長鎖機能性ビスホスフォネート−合成、抗石灰化および抗再吸収活性（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｎｔｉｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ａｎｔｉｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ）」、Ｈｅｔｅｒｏａｔｏｍ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２０００、１１、４７０−４７９；サロモン（Ｃ．Ｊ．Ｓａｌｏｍｏｎ）およびブリューワー（Ｅ．Ｂｒｅｕｅｒ）、「Ｍｅ3ＳｉＢｒを用いるホスフォネートジイソプロピルエステル類の効率的および選択的脱アルキル（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｄｅａｌｋｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  Ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌ  Ｅｓｔｅｒｓ）」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｎ  Ｌｅｔｅｒｓ、１９９５、３６、６７５９−６７６０；カヴァ（Ｍ．Ｐ．Ｃａｖａ）およびレビンソン（Ｍ．Ｉ．Ｌｅｖｉｎｓｏｎ）、「ラベソン試薬類のチオ化反応（Ｔｈｉｏｎａｔｉｏｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｌａｗｅｓｓｏｎ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ）」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、１９８５、４１、５０６１−５０８７。典型的な手順にはアミンをトリアルキルホスフォノチオールホルメートと反応させ、Ｎ−置換カルバモイルホスフォネートジエステルを生成し、その後ブロモトリメチルシラン媒介の脱アルキル化を行う工程が含まれる。または、Ｎ−置換カルボニルホスフォネートジエステルをジアルキルホスファイトのイソシアネートへの塩類基触媒付加で合成することもできる。チオカルバモイルホスフォネートジエステルは、カルバモイルホスフォネートジエステルを、ラベソン試薬としても知られる２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフォネート−２，４−ジスルフィドと加熱することによっても合成される。
【００２４】
シス−２−アミノシクロヘキサンカルボン酸、シス−２−アミノシクロブタンカルボン酸類似体、およびシス−２−アミノシクロペンタンカルボン酸の純エナンチオマーの調製用の光学活性出発物質が、光学分割またはフロップ（Ｆ．Ｆｕｌｏｐ）による文献Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２００１、１０１、２１８１に記載の立体選択性合成法によって得られる。
【００２５】
以下のスキームは（１Ｒ、２Ｓ）−２−アミノシクロヘキシルカルバモイルホスフォン酸およびそのＮ−ジメチルアミノ誘導体の調製を示す。
【００２６】
【化４】
2006522108.tif 000005
【００２７】
本発明の新規化合物類はマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）に関連する病態または病状の防止、治療および／または予防に特に有用である。より具体的には、本発明の新規化合物類は癌、転移、関節炎、再狭窄症、傷の治癒または多発性硬化症の防止、治療および／または予防に有用であると考えられる。
【００２８】
表１は驚くべき改善特性を示すための、同じ出願人の国際公開第０１／２６６６１号に記載された既知のカルバモイルホスフォン酸類（化合物１〜７）の効果と比較した、選ばれた新規カルバモイルホスフォネート類（化合物８〜１１）の生物効果のまとめを示す。
【００２９】
例えば、シクロヘキシルメチルチオカルバモイルホスフォン酸（表１の化合物８）は、シクロヘキシルメチルカルバモイルホスフォン酸（表１の化合物５、国際公開第０１／２６６６１号に開示）と比較して、経口生物適合性に改善が見られる。特に構造上の差が化合物５および８と類似である表１の化合物１および２に対して得られた生物学的データをみても、上記の経口生物適合性の改善を予測することができなかった。
【００３０】
（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチルカルバモイルホスホン酸を、その低分子量同属体であるシクロヘキシルメチルカルバモイルホスホン酸（表１の化合物５）と比較する。ここでも、経口生物適合性に１４〜１９％の実質的な増加が見られ、予想以上であった。
【００３１】
環式２−アミノカルバモイルホスフォネートである化合物１１をその類似体である非環式２−アミノカルバモイルホスフォネート（化合物６）と比較する。この様な比較から、化合物１１がその非環式類似体６よりインビトロでＭＭＰ−２に対し約１３倍活性が高いことに注目し得る。化合物１１は再狭窄症に対しても選択的インビボ活性を示す。
【００３２】
【表１】
2006522108.tif 000006
【００３３】
本発明の化合物の選択性に関して、表２にはＭＭＰ酵素の５種のサブタイプについて選択されたカルバモイルホスフォネートのＩＣ50値を示す。表２から、本発明のカルバモイルホスフォネートが４種の他のＭＭＰサブタイプと比較して、最も臨床的に重要な酵素サブタイプであるＭＭＰ−２の特異的阻害剤であることに注目する必要がある。この選択性は本発明の化合物の大きな利点である。
【００３４】
表２の結果はまた、活性および選択性に対する立体構造の重要性を示す。従って、光学異性体９は９ａより５倍活性が高く、他の試験されたＭＭＰに対するよりもＭＭＰ−２に対する選択性の方がはるかに高い。
【００３５】
幾何異性体１０および１０ａを同様に比較すると、前者はＭＭＰ−２に対して１５０倍以上活性が高く、幾何異性体１０はエキソ化合物１０ａよりＭＭＰ−２に対して選択性が高い。シスアミノヘキシル化合物１１はそのトランス幾何異性体１１ａよりもＭＭＰ−２に対する活性が３００倍高く、１１の選択性は１１ａの選択性よりはるかに大きい。
【００３６】
表２に列記した新規化合物９、９ａ、１０、１０ａ、１１および１１ａの構造は以下の通りである：
【００３７】
【化５】
2006522108.tif 000007
【００３８】
【表２】
2006522108.tif 000008
【００３９】
式Ｉの化合物自体を、薬学的に受容し得る担体を有する医薬組成物として投与することが好ましい。従って、本発明は一般式Ｉの化合物、または薬学的に受容し得るその塩、または薬学的に受容し得るその溶媒和物、および薬学的に受容し得る担体を有する医薬組成物も提供する。
【００４０】
本明細書で用いる用語「薬学的に受容し得る」とは、ヒトおよび脊椎動物用の化合物、組成物および成分を包含する。
【００４１】
通常、本発明の医薬組成物は経口投与用に用いられるが、注射および経皮吸収等による他の経路による投与用の組成物も考慮される。経口投与用に特に適した組成物は錠剤およびカプセル等の単位投薬型のものである。小袋中に入れた粉末等の他の一定量の単位投与薬ができる他の型も使用し得る。
【００４２】
通常の医療行為に応じて、担体は希釈剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、潤滑剤、着色剤、香料または他の通常の添加剤を含んでもよい。具体的な担体には例えば微結晶性セルロース、澱粉、ナトリウム澱粉グリコレート、ポリビニルピロリドン、ポリビニルポリピロリドン、ラウリル硫酸ナトリウムまたは蔗糖が含まれる。
【００４３】
最も適した組成物を単位投薬型に調合する。この様な単位投薬には通常０．１〜１０００ｍｇ、より普通には０．１〜５００ｍｇ、特に０．１〜２５０ｍｇの範囲の量の活性成分が含まれる。
【００４４】
本発明を以下の非制限的実施例により説明する。
【実施例】
【００４５】
Ａ．合成手順
実施例１
ジエチル−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）カルバモイルホスフォネート
トリエチルホスフォノチオールホルメート（１．２８ｇ、５．６５ｍＭ）およびシクロヘキシルメチルアミン（０．７５ｍｌ、５．７６ｍＭ）のＭｅＣＮ（１０ｍｌ）溶液を室温に３日間置いた。揮発物を除去し油状生成物の残渣１．４ｇ（８９．３％）を得た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）31Ｐ−２．０１ｐｐｍ；1Ｈ、０．８〜１．３（ｍ、５Ｈ）、１．３３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、６Ｈ）、１．４〜１．７５（ｍ、５Ｈ）、３．１３（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、４．１８（ｍ、４Ｈ）、７．２３（ｍ、１Ｈ）；分析値：Ｃ12Ｈ24ＮＯ4Ｐに対する計算値Ｃ５１．９８、Ｈ８．７２、Ｎ５．０５、実測値Ｃ５１．１５、Ｈ９．１４、Ｎ５．３８。
【００４６】
実施例２
ジエチル−Ｎ−（シクロヘキシルメチル）チオカルバモイルホスフォネート
ジエチル−Ｎ−シクロヘキシルメチルカルバモイルホスフォネート（２．３ｇ、８．３ｍＭ）およびラベソン試薬（１．６８ｇ、４．１ｍＭ）のトルエン（６０ｍｌ）溶液を１時間還流した。31ＰＮＭＲは出発物質の消失と、−１．９３ｐｐｍに新しいピークと若干の不純物の出現を示した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲル上のクロマトグラフィーで精製した。所望の生成物をＡｃＯＥｔで溶出し、０．６２ｇの純粋な生成物を黄色結晶（アセトン−ヘキサンから）として得た（ｍ．ｐ．５３℃）。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）31Ｐ−１．３４ｐｐｍ；1Ｈ、９．０３（１Ｈ，ｂｓ）、４．３１〜４．１３（４Ｈ、ｍ）、３．５３（２Ｈ、ｔ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、１．７５〜１．６５（５Ｈ、ｍ）、１．３５（６Ｈ、ｔ）、１．４４〜０．９５（６Ｈ、ｍ）；分析値：Ｃ12Ｈ24ＮＯ3ＰＳに対する計算値Ｃ４９．１４、Ｈ８．１９、Ｎ４．７７、実測値Ｃ４９．４５、Ｈ８．３８、Ｎ４．６０。
【００４７】
実施例３
Ｎ−（シクロヘキシルメチル）チオカルバモイルホスフォン酸（８）
ジエチル−Ｎ−シクロヘキシルメチルチオカルバモイルホスフォン酸（０．６ｇ）およびブロモトリメチルシラン（１．０８ｍｌ）のアセトニトリル（１５ｍｌ）溶液を常温で終夜置いた。反応混合物をメタノールで分解し、蒸発乾固して０．４５ｇの半固体を得た。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−０．４８ｐｐｍ；1Ｈ、３．３９（２Ｈ、ｄｄ、3ＪHH＝７．２Ｈｚ、4ＪHP＝１．６Ｈｚ）、１．６〜１．４（５Ｈ、ｍ）、１．１５〜０．８（６Ｈ、ｍ）。
【００４８】
実施例４
ジエチル−Ｎ−「（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォネート
トリエチルホスフォノチオールホルメート（２．３３ｇ、１０．３１ｍＭ）および（Ｒ）−（−）−１−シクロヘキシルアミン（１．５６ｍｌ、１０．５２ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温に終夜置いた。溶媒を真空で留去し、残渣を高真空中で乾燥して微量の溶剤を除き、２．８４ｇ（９４．６％）の生成物を得た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−０．７８ｐｐｍ、1Ｈ、０．８０〜１．８０（ｍ、複数、１１Ｈ）、１．０８（ｄ、重畳、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ）、１．３２（ｔ、重畳、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ）、３．９０（ｍ、１Ｈ）、４．１７（ｍ、４Ｈ）、６．９０（ｂｒｄ、１Ｈ）。
【００４９】
実施例５
Ｎ−［（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォン酸（９）
ジエチル−Ｎ−［（Ｒ）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォネート（２．３６８ｇ、８．１２ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（５．２６ｍｌ、４０．６２ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温に２．５時間置いた。溶剤を留去し、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を加え留去した。固体残渣（１．８８４ｇ、９８％）をＥｔＯＨから再結晶した。ｍ．ｐ．１５５〜１５６℃、「α」D＝＋２０．９８（ｃ＝０．０７、ＭｅＯＨ）、ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−２．６０ｐｐｍ；1Ｈ、０．６０〜１．５６（ｍ、複数、１１Ｈ、シクロヘキシル）、０．９４（ｄ、重畳、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨＣＨ3）、３．５６（５重項、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、ＮＨＣＨ）：分析値：Ｃ9Ｈ18ＮＯ4Ｐに対する計算値、Ｃ４５．９６、Ｈ７．６６、Ｎ５．９６；実測値、Ｃ４５．６９、Ｈ７．５５、Ｎ５．６６
【００５０】
実施例６
（ａ）Ｎ−［（Ｓ）−（−）−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォン酸（９ａ）
トリエチルホスフォノチオールホルメート（２．３８ｇ、１０．５３ｍＭ）および（Ｓ）−（＋）−１−シクロヘキシルエチルアミン（１．６ｍＬ、１０．７６ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温に終夜置いた。揮発物を除去し、残渣を高真空中で乾燥して２．３５ｇの無色のオイル（７６％）を得た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−０．７８ｐｐｍ；1Ｈ、０．８０〜１．８０（ｍ、複数、１１Ｈ、シクロヘキシル）、１．１０（ｄ、重畳、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨＣＨ3）、１．３４（ｔ、重畳、Ｊ＝７．２Ｈｚ、６Ｈ、２×ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、３．９０（ｍ、１Ｈ、ＮＨＣＨ）、４．２０（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、６．８６（ｂｒ、１Ｈ、ＮＨ）。
【００５１】
（ｂ）Ｎ−［（Ｓ）−（−）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォン酸（９ａ）
ジエチル−Ｎ−［（Ｓ）−（＋）−１−シクロヘキシルエチル］カルバモイルホスフォネート（１．９９７ｇ、６．８５ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（４．４３ｍｌ、３４．２５ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温に２．５時間置き、蒸発させた。ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を加え蒸発させ、１．６１ｇ（９９％）の白色固体が残った。ｍ．ｐ．１６７〜１６８℃、［α］D＝２０．２１（ｃ＝０．０７、ＭｅＯＨ）。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−２．６２ｐｐｍ；1Ｈ、０．６０〜１．５６（ｍ、複数、１１Ｈ、シクロヘキサン）、０．９０（ｄ、重畳、Ｊ＝６．９Ｈｚ、３Ｈ、ＣＨＣＨ3）、３．５２（５重項、Ｊ＝６．９Ｈｚ１Ｈ、ＮＨＣＨ）：分析：Ｃ9Ｈ18ＮＯ4Ｐに対する計算値；Ｃ４５．９６、Ｈ７．６６、Ｎ５．９６、実測値；Ｃ４６．０９、Ｈ７．６６、Ｎ５．７９。
【００５２】
実施例７
ジエチル−Ｎ−「エンド−２−ノルボルニル」カルバモイルホスフォネート
ＤＭＦ（１０ｍｌ）に溶解したエンド−２−アミノノルボラン塩酸塩（１ｇ、６．７７ｍＭ）にＥｔ3Ｎ（０．９４ｍｌ、６．７７ｍＭ）を加え、Ｅｔ3ＮＨ+Ｃｌ-を沈殿させた。反応混合物にＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解したトリエチルホスフォノチオールホルメート（１．５３ｇ、６．７７ｍＭ）を加え、反応混合物を室温で３日間攪拌した。溶媒を真空で留去し、残渣をエーテルに溶かし５％ＨＣｌ水溶液で抽出した。エーテルを留去し乾燥後、白色固体（１．４９４ｇ、８０％）が得られた。ｍ．ｐ．４８〜５０℃。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−１．１３ｐｐｍ；1Ｈ、０．８２（ｄｔ、Ｊ＝１３．５、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、１．１０〜１．６５（ｍ、１２Ｈ）、２．０６（ｔｔ、Ｊ＝１３．５、４．５Ｈｚ、１Ｈ）、２．２２（ｔ、１Ｈ）、２．４５（ｓ、１Ｈ）、４．１０〜４．２５（ｍ、５Ｈ）、７．０５（ｂｒｄ、１Ｈ）：分析値：Ｃ12Ｈ22ＮＯ4Ｐに対する計算値；Ｃ５２．２８、Ｈ７．９８、Ｎ５．０８、実測値；Ｃ５２．０１、Ｈ７．８５、Ｎ５．３２。
【００５３】
実施例８
Ｎ−「エンド−２−ノルボルニル」カルバモイルホスフォン酸（１０）
ジエチル−Ｎ−エンド−２−ノルボルニルカルバモイルホスフォネート（１．２４６ｇ、４．５２ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（２．９３ｍｌ、２２．６３ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温に３時間置いた。溶媒を留去し、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を加え留去した。固体残渣をＥｔＯＨから再結晶し、０．７２７ｇ（７３％）を得た。ｍ．ｐ．１６４〜１６５℃。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−２．７９ｐｐｍ；1Ｈ、０．７６（ｄｔ、Ｊ＝１３．２、３．３Ｈｚ、１Ｈ）、１．０〜１．４（ｍ、複数、６Ｈ）、１．８１（ｍ、１Ｈ）、２．０２（ｓ、１Ｈ）、２．２１（ｓ、１Ｈ）、３．８０（ｂｒｄ、１Ｈ）：分析値：
Ｃ8Ｈ14ＮＯ4Ｐに対する計算値；Ｃ４３．８３、Ｈ６．３９、Ｎ６．３９、実測値；Ｃ４３．７９、Ｈ６．１８、Ｎ６．１９。
【００５４】
実施例９
Ｎ−［エキソ−２−ノルボルニル］カルバモイルホスフォネート（１０ａ）
（ａ）ジエチル［エキソ−２−ノルボルニル］カルバモイルホスフォネート
トリエチルホスフォノチオールホルメート（１．９６ｇ、８．６６ｍＭ）およびエキソ−２−アミノノルボルナン（１ｇ、８．９９ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温で終夜置いた。揮発物を留去し、残渣を高真空中で乾燥してオイル２．２８ｇ（９５％）を得た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−１．０９ｐｐｍ；1Ｈ、１．００〜１．５０（ｍ、複数、１３Ｈ）、１．７５（ｍ、１Ｈ）、２．１８（ｄ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、１Ｈ）、２．２４（ｓ、１Ｈ）、３．７４（ｍ、１Ｈ、ＮＨＣＨ）、４．１０〜４．２５（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、６．９７（ｂｒｄ、１Ｈ、ＮＨ）。
【００５５】
（ｂ）Ｎ−［エキソ−２−ノルボルニル］カルバモイルホスフォネート（１０ａ）
ジエチル−Ｎ−エキソ−２−ノルボルニルカルバモイルホスフォネート（１．４６ｇ、５．３ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（３．４２ｍｌ、２６．４５ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液を室温で４時間置いた。溶媒を留去し、ＭｅＯＨ（１０ｍｌ）を加え留去した。固体残渣をＥｔＯＨから再結晶した（１ｇ、８６％）．ｍ．ｐ．１７０〜１７２℃。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−２．７９ｐｐｍ；1Ｈ、０．８５〜１．０５（ｍ、複数、３Ｈ）、１．０５〜１．４７（ｍ、４Ｈ）、１．５０〜１．６０（ｍ、１Ｈ）、１．９８（ｄ、Ｊ＝３Ｈ、１Ｈ）、２．０７（ｓ、１Ｈ）、３．４１（ｂｒｄ、１Ｈ、ＮＨＣＨ）。分析値：Ｃ8Ｈ14ＮＯ4Ｐに対する計算値；Ｃ４３．８３、Ｈ６．３９、Ｎ６．３９、実測地；Ｃ４３．８７、Ｈ６．６７、Ｎ６．２２。
【００５６】
実施例１０
ジエチルＮ−（シス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート
シス−１，２−ジアミノシクロヘキサン（１ｇ、８．７５ｍＭ）のＭｅＣＮ（１５ｍｌ）溶液に、ＭｅＣＮ（１５ｍｌ）に溶解したトリエチルホスフォノチオールホルメート（２ｇ、８．８ｍＭ）を約１０分間で滴下し、反応混合物を室温でさらに１．５時間攪拌した。反応混合物を31ＰＮＭＲで調べると２つの信号を示した：１）モノホスフォノホルミル化生成物に対応する０．１９ｐｐｍのピーク（８３．５％）、およびビスホスフォノホルミル化生成物に対応する−０．５９ｐｐｍのピーク（１６．５％）。溶媒を留去後、生成物を分離するため粗反応混合物を「Ｂｏｃ無水物」との反応に供した。
【００５７】
実施例１１
ジエチル−Ｎ−（シス−２−Ｂｏｃ−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート
ＥｔＯＨ中に溶解した実施例８の生成物に「Ｂｏｃ無水物」（３．５ｇ、１６ｍＭ）を加え、反応混合物を室温で２．５時間攪拌した。反応混合物を31ＰＮＭＲで調べると２つの信号を示した：１）−３８ｐｐｍのピーク（８３．５％）および２）−０．６５ｐｐｍのピーク（１６．５％）。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／石油エーテル、８５：１５）で分離し、２．３６ｇのモノホスフォリル化生成物（Ｒｆ＝０．６）を得た。ｍ．ｐ．＞２４０℃。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−１．１９ｐｐｍ；1Ｈ、１．３０〜１．８５（ｍ、２３Ｈ）、３．９２（ｍ、１Ｈ）、４．１０〜４．３０（ｍ、５Ｈ）、４．８０（ｂｒｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）、７．４２（ｂｒｄ、ｓ、１Ｈ）。
【００５８】
実施例１２
Ｎ−（シス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォン酸（１１）
ジエチル−（シス−Ｂｏｃ−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート（２．３６ｇ、６．２５ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（４．８５ｍｌ、３７．５ｍＭ）の乾燥ジオキサン（２０ｍｌ）溶液を６０℃で３時間攪拌した。反応混合物を31ＰＮＭＲで調べると２個の信号の存在が示された：１）「Ｂｏｃ」基が分子内に残留するビス脱エチル生成物に対応する−１７．２ｐｐｍのピーク（４８％）、および２）完全に脱保護された化合物に対応する−１９．５ｐｐｍのピーク（４２％）。室温で２週間後、溶液は２番目の化合物のみを含んでいた。揮発性成分を留去し、残渣をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）で処理して再度留去し、白色固体を得た。生成物をＥｔＯＨで洗浄し乾燥した。ｍ．ｐ．２４８〜２５０℃。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−２．２１ｐｐｍ；1Ｈ、１．２０〜１．７５（ｍ、８Ｈ）、３．３５（ｍ、１Ｈ）、４．２４（ｍ、１Ｈ）。分析値：Ｃ7Ｈ15Ｎ2Ｏ4Ｐに対する計算値、Ｃ３７．８４、Ｈ６．７５、Ｎ１２．６１；実測値、Ｃ３７．４８、Ｈ６．４９、Ｎ１２．３６
【００５９】
または、Ｂｏｃ保護基を除去するためにトリフルオロ酢酸による室温処理でジエチル−Ｎ−（シス−２−Ｂｏｃ−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネートを得、次いで室温でブロモトリメチルシラン媒介の脱アルキル化により化合物１１をジエチル−Ｎ−（シス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネートから調製した。先に説明したワンポット法とは対照的にこの方法は２段階でなるが、より少ない時間で完了することができる。
【００６０】
実施例１３
トランス−２−アミノシクロヘキシルカルバモイルホスフォン酸（１１ａ）
（ａ）ジエチル−Ｎ−（トランス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート
トランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン（０．５３ｍｌ、４．４１ｍＭ）のＭｅＣＮ（５ｍｌ）溶液中に、ＭｅＣＮ（５ｍｌ）に溶解したトリエチルホスフォノチオールフォルメート（１ｇ、４．４１ｍＭ）を１０分間で滴下した。反応混合物を室温で２４時間攪拌した。31ＰＮＭＲスペクトロスコピーで調べると積分比７２：２８で生成物を示す−０．７６４と−０．１７１ｐｐｍに２つのピークの存在を示した。主ピークはビス−ホスフォノホルミル化の生成物に属すると推測された。生成物を分離するため、反応混合物を下記の様に「Ｂｏｃ無水物」で処理した。
【００６１】
（ｂ）ジエチル−Ｎ−（トランス−２−［Ｂｏｃ−アミノ］シクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート
ＥｔＯＨに溶解した先の工程の生成物に「Ｂｏｃ無水物（１ｇ、４．５８ｍＭ）」を加え、反応混合物を室温で終夜攪拌した。溶媒を真空で除去し、残渣をクロマトグラフィー（ＡｃＯＥｔ／石油エーテル、８：２）で分離して０．４２ｇのモノホスフォリル化生成物を得た（Ｒｆ＝０．４８）。ｍ．ｐ．＞２４０℃。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：31Ｐ、−１．６１ｐｐｍ；1Ｈ、１．１〜１．５（ｍ、１９Ｈ、シクロヘキシル＋Ｂｏｃ＋２×ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、１．７２（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル）、２．０４（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル）、３．４（ｍ、１Ｈ、ＣＨＮＨＢｏｃ）、３．７（ｍ、１Ｈ、ＣＨＮＨＣＯ）、４．２（ｍ、４Ｈ、２×ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、４．７（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、ＮＨＢｏｃ）、７．４２（ｂｒｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、ＮＨＣＯ）。分析値：Ｃ16Ｈ31Ｎ2Ｏ5Ｐに対する計算値、Ｃ５０．８０、Ｈ８．２０、Ｎ７．４０；実測値、Ｃ５０．８８、Ｈ８．１７、Ｎ７．２５。
【００６２】
第１生成物の溶出後、カラムをＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ（９：１）で展開し、ビスホスフォリル化から得られる第２化合物（０．２３３ｇ、Ｒｆ＝０．１、ｍ．ｐ．１５０〜１５２℃）を溶出した。分析値：Ｃ16Ｈ32Ｎ2Ｏ8Ｐ2に対する計算値、Ｃ４３．４４、Ｈ７．２４、Ｎ６．３３；実測値、Ｃ４３．２６、Ｈ７．３０、Ｎ６．１４。
【００６３】
（ｃ）Ｎ−（トランス−２−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォン酸（１１ａ）
ジエチル−Ｎ−（トランス−２−Ｂ−アミノシクロヘキシル）カルバモイルホスフォネート（０．４ｇ、１．０６ｍＭ）およびＴＭＳＢｒ（０．８ｍｌ、６．１８ｍＭ）の乾燥ジオキサン（１０ｍｌ）溶液を還流下に３時間、室温で終夜攪拌した。溶剤を留去し淡褐色固体を得、ＥｔＯＨから再結晶した（１８ｇ、７６％、ｍ．ｐ．＞２４０℃）。ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：31Ｐ、−３．１５ｐｐｍ；1Ｈ、１．０〜２．０（ｍ、複数、８Ｈ、シクロヘキシル）、３．０４（ｔｄ、Ｊ＝１１．７、３．９Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨＮＨ2）、３．７７（ｔｄ、Ｊ＝１１．７、３．９Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨＮＨＣＯ）。分析値：Ｃ7Ｈ15Ｎ2Ｏ4Ｐに対する計算値、Ｃ３７．８４、Ｈ６．７５、Ｎ１２．６１；実測値、Ｃ３７．１８、Ｈ６．７５、Ｎ１１．９６。
【００６４】
Ｂ．生物学的研究
表１にまとめられた生物効果を以下のモデルで評価した。
【００６５】
マトリゲルケモインベージョン分析
本分析は、細胞が製造するＭＭＰを阻害することによる化合物の癌細胞侵入性抑制能を測定する。本分析は、増殖するために癌細胞が横断しなければならない天然基底膜に類似させて再構築された基底膜試料を使用する。試験される化合物を様々な濃度で侵入チャンバーに加え、得られた侵入性を未処理試料と比較した。
【００６６】
マトリゲルケモインベージョン実験の説明
（ａ）ケモインベージョン分析をボイデン（Ｂｏｙｄｅｎ）チャンバー中で行った。マトリゲル（２５μｇ）をポリカーボネート化フィルター（ＰＶＰフリー、ヌクレオポア（Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ））上で乾燥させた。繊維芽細胞馴化培地（無血清ＤＭＥＭ中で培養した密集ＮＩＨ−３Ｔ３細胞から得られた）を化学誘引物質として使用した。１ｍＭのＥＤＴＡに短時間暴露して細胞を収穫し、０．１％ウシ血清アルブミンを含むＤＭＥＭで洗浄し、ボイデンチャンバー中に添加した（２００，０００個の細胞）。チャンバーを３７℃、５％ＣＯ2／９５％空気雰囲気中で６時間、加湿インキュベーター中でインキュベーションした。マトリゲル層を横断しフィルターの底面に付着した細胞をディフクイック（ＤｉｆｆＱｕｉｃｋ：アメリカンサイエンティフィック（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）製品）で染色し、計数した。
【００６７】
様々な化合物を潜在的阻害剤として、１００μＭ、５０μＭおよび１０μＭの３種の濃度で試験した。１００μＭで不活性である化合物を不活性と分類した。５０μＭで得られた結果（パーセントで表現）を表１に列記する。
【００６８】
インビトロＭＭＰ阻害能（ＩＣ50値）の測定
市販組み換えＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９酵素をスクシニル化ゼラチンと共に４種の異なった濃度で３時間インキュベーションした。試験化合物を４〜６種の異なった濃度で組み換え酵素に加え、阻害能をＥＬＩＳＡリーダーで測定した色変化で表現した。阻害活性（ＩＣ50）を得られた速度データから計算した。
【００６９】
内皮細胞細管形成
血管新生のインビトロモデルであり、原発性腫瘍と転移性患部との発達に必須の過程である細管形成能阻害能について、いくつかの化合物を試験した。新たに生成した腫瘍への上皮細胞の移行が血管新生の初期相であり、ＭＭＰの発現に依存する。上皮細胞管形成を測定するこの分析により、１００〜５μＭの範囲の濃度でいくつかのカルバモイルホスフォネートの血管新生に対する効果を評価した。表１は５０μＭ濃度におけるこれらのカルバモイルホスフォネートの試験から得られた結果を示す。
【００７０】
上皮細胞細管形成実験の説明
上皮細胞を１ｍＭのＥＤＴＡで処理して収穫し、ウエルあたり５０，０００個の細胞で２４ウエルプレート中のマトリゲル層に加えた。付着後、培地（１ｍｌ）を加え、プレートを単層培養としてインキュベーションした。ホフマン顕微鏡を用いて１時間毎にプレートを分析した。この分析を用い、培地に添加し得る細管様構造形成に対する阻害因子または刺激因子を評価する。
【００７１】
動物モデルにおける腫瘍成長および転移−インビボ試験
新規カルバモイルホスフォネートがインビボで転移患部形成を阻害する能力を、腹腔内（ＩＰ）および経口（ＰＯ）投与の双方によりマウスメラノーマモデルで試験した。このモデルで、腫瘍細胞をマウスの尾の静脈中に注射し、化合物を１日あたり５０ｍｇ／ｋｇを投与して２１日間処置し、マウスの肺に生成した腫瘍を適当に固定した後に計数した。４種の化合物８〜１１のそれぞれを腹腔内注射または経口経路で各８匹のマウス群に投与した。その結果を表１に列記する。この結果から、新規カルバモイルホスフォネートはきわめて改善された経口生物適合性を有することが分かる。経口投与は患者にとって、特に本出願の主題である薬剤が想定されている治療等、長期慢性治療にとって最も便利な方法であるので、この経口生物適合性の改善は本質的に重要である。
【００７２】
代表的なカルバモイルホスフォネートの急性インビボ毒性の測定
化合物１および１１を３種の投与量、５０ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇおよび５００ｍｇ／ｋｇで各８匹の健康なマウスの群に毎日、２週間投与した。化合物１に関連する毒性の結果を図１に、新規化合物１１に関連する毒性の結果を図２に示す。これらの図から、シクロペンチル誘導体１は２５０ｍｇ／ｋｇおよび５００ｍｇ／ｋｇの投与量で毒性を示すが、２−アミノシクロヘキシル誘導体１１は有効投与量の１０倍、すなわち５００ｍｇ／ｋｇでも全く毒性を示さなかった。
【００７３】
再狭窄症のウサギモデル
体重２．５〜３．５ｋｇのニュージランド白ウサギ（ハーランラボラトリーズ（Ｈａｒｌａｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、エルサレム、イスラエル）をイスラエルのヘブライ大学および国立健康研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、ＵＳＡ）のアニマルケアガイドラインに従って使用した。血管形成手術の３０日前に動物にコレステロール２％、ピーナッツ油６％のアテローム発生性食餌を与えた。高コレステロール血症（血漿コレステロール：１２００ｍｇ／ｄＬ）が確認された。キシラジン（６ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）で動物を麻酔した．ヘパリン（２００Ｕ／ｋｇ）、アトロピン（０．０５ｍｇ）およびノルフロキサシン（７０ｍｇ）を与えた。３ｍｍ血管形成バルーンカテーテル（コルディス（Ｃｏｒｄｉｓ）、８気圧で２３１分の膨張）により左総頚動脈にバルーン移植を行った。無秩序に指定した動物に化合物１１をＩＰ注入し、−１、＋１、＋４、＋６および＋８日に投与した（全投与量７０ｍｇ／ｋｇ）。対照動物には食塩類水を与えた。実験群の型を知らない研究者が実験を行った。ペントタールによる安楽死後、動脈１５０ｍｌの４％ホルムアルデヒド溶液（ｐＨ７．４）でその場で潅流固定し、形態学的分析用に加工し、ベルホエフ（Ｖｅｒｈｏｅｆｆ）エラスチン染色、マイヤー（Ｍａｙｅｒ）ヘマトキシリンおよび修飾モバット（Ｍｏｖａｔ）ペンタクロームで染色した。実験に５匹の動物、対照群に５匹の動物を使用した。
【００７４】
結果
シス−２−アミノシクロヘキシルカルバモイルホスフォン酸１１を５回に分けて、８日間にわたって７０ｍｇ／ｋｇを投与した３０日後の高コレステロール血症再狭窄症ウサギモデルで、有意で顕著な再狭窄症の阻害が観察された。これらの結果を図３および４に示す。より具体的には、図３は対照群に対する化合物１１により処置した群の、新たに形成した内膜と血管壁の厚さの間の比率を示す。図４は対照群と化合物１１で処置した群で比較した、血管の閉塞断面を示す。
【００７５】
再狭窄症の顕著な阻害はこのモデルにおける他の臨床療法（様々な抗炎症または抗増殖剤）で匹敵するものがない。さらに、バチマスタット（Ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）等の既知のＭＭＰ阻害剤による再狭窄症処置は同じモデルで成功しなかった。一般的な小さなサイズの手術にもかかわらず、処置群において大きな空洞が達成されたことは注目すべきことである。血管の組織学像および血管の閉塞領域が図５Ａ（化合物１１で処置した群）および５Ｂ（未処置、対照群）に示される。従って、血管サイズに影響せずに再狭窄症を減少させる場合に、より低い投与量でも有効であることを示唆し得ると思われる。
【００７６】
理論はわからないが、本発明の新規化合物の作用の様式はＭＭＰ阻害および／または血管新生阻害により行われることが示唆される。
【００７７】
前立腺腫瘍モデル
ルシフェラーゼ遺伝子感染ヒト前立腺腫瘍細胞ＤＵ１４５、ＰＣ３またはＬＭＣａｐを雄マウスの前立腺に同所注入した（２×１０6細胞／マウス）。実験マウスを化合物１１で毎日処置した（５０ｍｇ／ｋｇＩＰ）。腫瘍移植後１４日から初めて毎週、マウスの局所腫瘍成長および転移を光量子感受性冷電荷結合素子カメラ（ＣＣＣＤ）でモニターした。放出された光量子を、ルシフェラーゼに暴露すると腫瘍細胞が放出する光量子の量に比例するデジタル化映像に変換する。図６は同所前立腺癌モデルの対照実験の結果を示すが、その中で図７は同所前立腺癌の実験における処置群で得られた結果を示し、その実験ではマウスは化合物１１の毎日の腹腔内注入により５週間処置された。図が示す様に、化合物１１で処置されたマウスは腫瘍容積がかなり低くなっており、腫瘍の広がりもかなり低くなっていた。従って、化合物１１は腫瘍の転移拡大を阻害した。さらに処置されたマウスの腫瘍容積が小さくなっていることから、この化合ブルは局所腫瘍成長も阻害した。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】３つの異なった投与量における化合物１のマウスにおける毒性を示すグラフである。
【図２】図１における投与量と同じ投与量における化合物１１の毒性を示すグラフである。
【図３】平均の新内膜−媒体比（Ｎ／Ｍ）として表された新内膜過形成に対する化合物１１の効果を示す。
【図４】最狭窄率に対する化合物１１の効果を示す。
【図５】処置（５Ａ）および対照（５Ｂ）のウサギ頚動脈間の差を示すが、処置を第−１日に開始し、７０ｍｇの化合物１１の投与量を５回に分け、第−１、＋１、＋４、＋６および＋８日に投与した。
【図６】正位前立腺癌の対照実験を示し、処置せずにマウスを５週間モニターした。
【図７】正位前立腺癌実験における処置群で得られた結果を示す。このとき、マウスの処置を化合物１１の腹腔内注入５週間、毎日とした。
【符号の説明】
【００７９】
図１
１     マウス（生存）
２     処置（日数）
図２
１     マウス（生存）
２     処置（日数）
３     ｍｇ／マウス
図３
１     対照
２     化合物１１
図４
１     ％再狭窄症
２     対照
３     化合物１１
図６、図７
１     転移
２     腫瘍容積（蛍光強度）
３     マウス
４     時間（週）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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