(57)【要約】鼻咽腔カルシノーマを治療するために有用な新規な薬剤の組み合わせが開示され、新規な薬剤の組み合わせは一つ又はそれより多いファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤と一つ又はそれより多いアンスラサイクリンを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、そのプロドラッグ又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤或いは上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤プロドラッグの薬学上受容可能な塩、及びアンスラサイクリン、そのプロドラッグ又は上記アンスラサイクリン又は上記アンスラサイクリンプロドラッグの薬学上受容可能な塩を含む薬学組成物。
【請求項２】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、式Ｉ
【化１】
2006500421.tif 000037
による化合物
（式中、
ｎ１は、０又は１であり；
Ｘは、各存在に関して別個に、（ＣＨＲ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４Ｚ（ＣＨ２）ｎ５；であり；
Ｚは、Ｏ，Ｎ（Ｒ１２），Ｓ又は結合であり；
ｎ３は、各存在に関して別個に、０又は１であり；
ｎ４及びｎ５の各々は、各存在に関して別個に、０、１、２、又は３であり；
Ｙは、各存在に関して別個に、ＣＯ，ＣＨ２，ＣＳ，又は結合であり；
Ｒ１は、
【化２】
2006500421.tif 000038
【化３】
2006500421.tif 000039
【化４】
2006500421.tif 000040
【化５】
2006500421.tif 000041
【化６】
2006500421.tif 000042
【化７】
2006500421.tif 000043
【化８】
2006500421.tif 000044
【化９】
2006500421.tif 000045
【化１０】
2006500421.tif 000046
【化１１】
2006500421.tif 000047
，又はＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；
Ｒ２，Ｒ１１，及びＲ１２各々は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル及びアリールからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、上記の任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ８又はＲ３０により置換されており；
Ｒ３は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ３０により置換されており；
Ｒ４及びＲ５各々は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ３０により置換されており、各置換基は別個に選択され、或いはＲ４及びＲ５が結合してアリールを形成する炭素と併せて互いに一緒になることができ；
Ｒ６は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意にＯＨ，（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），及びハロから各々別個に選択される一つ又はそれより多い置換基により置換されており；
式中、Ｒ８及びＲ９各々は、各存在に関して別個に、Ｈ，又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、アリール、又はアリール（Ｃ１−６）アルキルであり；
Ｒ７は、各存在に関して別個に、Ｈ，＝Ｏ，＝Ｓ，又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意にＯＨ，（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），及びハロから各々別個に選択される一つ又はそれより多い置換基により置換されており；
Ｒ１０はＣであるか；又は、ｎ１が０のとき、Ｒ６及びＲ７が結合してシクロヘキシルを形成する炭素原子と併せて互いに一緒になることができ；
Ｒ２１は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル及びアリール（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティはＲ８及びＲ３０からなる群から各々別個に選択された一つ又はそれより多い置換基により任意に置換されており；
Ｒ２２はＨ，（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ３−６）シクロアルキルチオ、Ｒ８−ＣＯ−，又は式：
【化１２】
2006500421.tif 000048
による置換基であり；
Ｒ２４及びＲ２５各々は、各存在に関して別個に、Ｈ，（Ｃ１−６）アルキル、又はアリール（Ｃ１−６）アルキルであり；
Ｒ３０は、各存在に関して別個に、（Ｃ１−６）アルキル、−Ｏ−Ｒ８，−Ｓ（Ｏ）ｎ６Ｒ８，−Ｓ（Ｏ）ｎ７Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＮ，ＮＯ２，−ＣＯ２Ｒ８，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），−ＮＣＯ−Ｒ８，又はハロゲンであり；
ｎ６及びｎ７各々は、各存在に関して別個に、０、１又は２であり；
式中、ヘテロシクリルは、アゼピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、クロマニル、シノリニル（cinnolinyl）、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオ−ピラニルスルフォン、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノロニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、モルフォリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキサゼピニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、ピリジルＮ−オキシド、キノキサリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロ−キノリニル、チアモルフォリニル、チアモルフォニリルスルフォキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチエニル又はチエニルであり；そして
式中、アリールはフェニル又はナフチルであり；
ｎ１が１で、Ｒ１０がＣであり、そしてＲ６がＨであるとき、Ｒ１０とＲ７は共に一緒になって、
【化１３】
2006500421.tif 000049
を形成することができ；或いは
ｎ１が１で、Ｒ１０がＣであり、そしてＲ７が＝Ｏ，−Ｈ又は＝Ｓであるとき、Ｒ１０とＲ６は共に一緒になって、
【化１４】
2006500421.tif 000050
を形成することができ、
式中、Ｘ１，Ｘ２，及びＸ３各々は、別個に、Ｈ，ハロゲン、−ＮＯ２，−ＮＣＯ−Ｒ８，−ＣＯ２Ｒ８，ＣＮ，又は−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９）であり；そして
Ｒ１がＮ（Ｒ２４Ｒ２５）のとき、ｎ３は１であり、ｎ４及びｎ５は各々０であり、Ｚは結合であり、そしてＲ３及びＲ１１は一緒になって
【化１５】
2006500421.tif 000051
を形成することができ、
式中、ｎ２は１−６であり、そしてＸ４及びＸ５は各々別個にＨ，（Ｃ１−６）アルキル、又はアリールであるか、又はＸ４とＸ５が一緒になって（Ｃ３−６）シクロアルキルを形成する）；
請求項１記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項３】
Ｒ１が、
【化１６】
2006500421.tif 000052
【化１７】
2006500421.tif 000053
【化１８】
2006500421.tif 000054
【化１９】
2006500421.tif 000055
【化２０】
2006500421.tif 000056
，又はＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；そして
ＸがＣＨ（Ｒ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４又はＺであり、式中、ＸがＺのとき、ＺはＯ，Ｓ，又はＮ（Ｒ１２）である；
請求項２記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項４】
Ｒ１が、
【化２１】
2006500421.tif 000057
であり；
ＸはＣＨ（Ｒ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４であり；そして
ｎ１は０である；
請求項３記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項５】
Ｒ１が、
【化２２】
2006500421.tif 000058
であり；
ｎ３，ｎ４，及びｎ５各々は０であり；
Ｚは結合であり；
Ｙは各存在に関して別個にＣＯ又はＣＳであり；そして
ｎ１は０である；
請求項３記載の薬学組成物又は又は薬学上受容可能な塩。
【請求項６】
Ｒ１が、
【化２３】
2006500421.tif 000059
であり；
Ｒ６はＨであり；
ｎ１は１であり；
Ｒ７及びＲ１０は一緒になって
【化２４】
2006500421.tif 000060
を形成し；
ｎ３は１であり、そしてＲ１１はＨであり；
ＺはＯ又は結合であり；
ｎ５は０であり；そして
ＹはＣＯ又はＣＨ２又は結合である；
請求項３記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項７】
Ｒ１がＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；
ｎ１は０であり；
ｎ３は１であり；
ｎ４は０であり；
ｎ５は０であり；
ＹはＣＯ又はＣＳであり；
Ｚは結合であり；そして
Ｒ３及びＲ１１は一緒になって
【化２５】
2006500421.tif 000061
を形成する；
請求項３記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項８】
Ｒ１が、
【化２６】
2006500421.tif 000062
であり；
Ｒ７はＨ又は＝Ｏであり；
ｎ１は１であり；
Ｒ６及びＲ１０は一緒になって
【化２７】
2006500421.tif 000063
を形成し；
ｎ３は１であり、そしてＲ１１はＨであり；
ｎ５は０であり；
ＹはＣＯ又はＣＨ２であり；そして
Ｚは０であるか又は結合である；
請求項３記載の薬学組成物又は薬学上受容可能なその塩。
【請求項９】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
８−ブチル−７−（３−イミダゾール−５−イル）−１−オキソプロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
８−ブチル−２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−（イミダゾール−４−イル−プロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
８−ブチル−７−（４−イミダゾリルプロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（イミダゾール−４−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−７−（１−オキソ−２−（１−（フェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−７−（２−（１−フェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（（４−イミダゾリル）カルボニル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）メチル−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
６−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
６−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−（フェニルメトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；又は
２−（２−ブトキシフェニル）−７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；又は
薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の薬学組成物。
【請求項１０】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
１，２−ジヒドロ−１−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−クロロ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１０−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−８−フルオロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；又は
薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の薬学組成物。
【請求項１１】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
１−（２−１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル（−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−クロロ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１０−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−８−フルオロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
である、請求項１０記載の組み合わせ。
【請求項１２】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（メルカプトエチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジンジスルフィド；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の組み合わせ。
【請求項１３】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
５−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−５，６−ジヒドロ−２−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の組み合わせ。
【請求項１４】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
発明の第１の側面の第７のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
１，２−ジヒドロ−１−（２−（イミダゾール−１−イル）−１−オキソエチル）−４−（２−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−１−（２−（ピリジン−３−イル）−１−オキソエチル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；又は
１，２−ジヒドロ−４−（２−（メトキシフェニル）−１−（２−（ピリジン−４−イル）−１−オキソエチル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の組み合わせ。
【請求項１５】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
【化２８】
2006500421.tif 000064
【化２９】
2006500421.tif 000065
【化３０】
2006500421.tif 000066
【化３１】
2006500421.tif 000067
【化３２】
2006500421.tif 000068
【化３３】
2006500421.tif 000069
【化３４】
2006500421.tif 000070
【化３５】
2006500421.tif 000071
【化３６】
2006500421.tif 000072
【化３７】
2006500421.tif 000073
【化３８】
2006500421.tif 000074
【化３９】
2006500421.tif 000075
【化４０】
2006500421.tif 000076
【化４１】
2006500421.tif 000077
【化４２】
2006500421.tif 000078
【化４３】
2006500421.tif 000079
【化４４】
2006500421.tif 000080
【化４５】
2006500421.tif 000081
【化４６】
2006500421.tif 000082
【化４７】
2006500421.tif 000083
【化４８】
2006500421.tif 000084
【化４９】
2006500421.tif 000085
【化５０】
2006500421.tif 000086
【化５１】
2006500421.tif 000087
【化５２】
2006500421.tif 000088
【化５３】
2006500421.tif 000089
【化５４】
2006500421.tif 000090
【化５５】
2006500421.tif 000091
【化５６】
2006500421.tif 000092
【化５７】
2006500421.tif 000093
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の薬学組成物。
【請求項１６】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
【化５８】
2006500421.tif 000094
【化５９】
2006500421.tif 000095
【化６０】
2006500421.tif 000096
【化６１】
2006500421.tif 000097
【化６２】
2006500421.tif 000098
【化６３】
2006500421.tif 000099
【化６４】
2006500421.tif 000100
【化６５】
2006500421.tif 000101
【化６６】
2006500421.tif 000102
【化６７】
2006500421.tif 000103
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の薬学組成物。
【請求項１７】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が、
発明の第１の側面の第９のより好ましい態様の第１のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
【化６８】
2006500421.tif 000104
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２記載の薬学組成物。
【請求項１８】
アンスラサイクリンが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項１７記載の薬学組成物。
【請求項１９】
アンスラサイクリンがドキソルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項１７記載の薬学組成物。
【請求項２０】
アンスラサイクリンがは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又はそのプロドラッグであるか、又は薬学上受容可能なアンスラサイクリン又はアンスラサイクリンプロドラッグの塩である、請求項１乃至１７の何れか１項記載の薬学組成物。
【請求項２１】
アンスラサイクリンがドキソルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項２０記載の薬学組成物。
【請求項２２】
鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法であって、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、請求項１８記載の薬学組成物に接触させることを含む方法。
【請求項２３】
鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法であって、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、請求項１９記載の薬学組成物に接触させることを含む方法。
【請求項２４】
鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法であって、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、請求項２０記載の薬学組成物に接触させることを含む方法。
【請求項２５】
鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法であって、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、請求項２１記載の薬学組成物に接触させることを含む方法。
【請求項２６】
患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法であって、上記患者に、請求項１８記載の薬学組成物を接触させることを含む方法。
【請求項２７】
患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法であって、上記患者に、請求項１９記載の薬学組成物を接触させることを含む方法。
【請求項２８】
患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法であって、上記患者に、請求項２０記載の薬学組成物を接触させることを含む方法。
【請求項２９】
患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法であって、上記患者に、請求項２１記載の薬学組成物を接触させることを含む方法。
【請求項３０】
患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法であって、上記患者に、有効な量の一つ又はそれより多いファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物と一つ又はそれより多いアンスラサイクリン化合物の組み合わせを投与することを含むが、上記有効な量の一つ又は複数のファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物及びアンスラサイクリンは、組み合わせにおいて上記鼻咽腔カルシノーマを治療するのに有効である方法。
【請求項３１】
患者が哺乳類である、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
患者がヒトである、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及びアンスラサイクリンを実質上同時に投与する、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
請求項１８記載の薬学組成物及び鼻咽腔カルシノーマの治療のための使用のための指示書を含む、薬学キット。
【請求項３５】
請求項１９記載の薬学組成物及び鼻咽腔カルシノーマの治療のための使用のための指示書を含む、薬学キット。
【請求項３６】
請求項２０記載の薬学組成物及び鼻咽腔カルシノーマの治療のための使用のための指示書を含む、薬学キット。
【請求項３７】
請求項２１記載の薬学組成物及び鼻咽腔カルシノーマの治療のための使用のための指示書を含む、薬学キット。
【請求項３８】
ａ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤又はそのプロドラッグ又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤プロドラッグの薬学上受容可能な塩及び薬学上受容可能な担体、媒体又は希釈剤を含む第１ユニット投薬形態；ｂ）アンスラサイクリン又はそのプロドラッグ又は上記アンスラサイクリン又は上記アンスラサイクリンプロドラッグの薬学上受容可能な塩及び薬学上受容可能な担体、媒体又は希釈剤を含む第２ユニット投薬形態を含むキット。
【請求項３９】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が式Ｉの化合物又は薬学上受容可能なその塩を含み、そして上記アンスラサイクリンがドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である、請求項３８記載のキット。
【請求項４０】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が式：
【化６９】
2006500421.tif 000105
の化合物又は薬学上受容可能なその塩を含み、そしてアンスラサイクリンがドキソルビシン又は薬学上受容可能なその塩である、請求項３９記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の背景
鼻咽腔カルシノーマ（ＮＰＣ）はヒトの偏平上皮細胞の癌であり、後方鼻咽腔（posterior nasopharynx）の表面上皮に起こる（Ｌｉａｏ，Ｗ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  １７：３２３−３２８（２０００））。未分化のＮＰＣは、ヒトの上皮の悪性腫瘍の間でそれらを独特のものとさせる幾つかの目立った特徴を有する（Ａｂｌａｓｈｉ，Ｄ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ａｎｄ  Ｋａｐｏｓｉ’ｓ  ｓａｒｃｏｍａ  Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ／Ｈｕｍａｎ  Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ  ８  ＩＡＲＣ  ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ  ｒｉｓｋｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎｓ．ＩＡＲＣ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ，ｎｏ７０：９７）。それらはほとんどの国々において稀であるが、幾つかの選択されたエリア、特に南アフリカ及び北アフリカにおいては高い発病率で発生する。
【０００２】
ＮＰＣは、患者の地理的な起源に拘わらず、エプスタイン−バールウイルス（ＥＢＶ）に付随することが一致している。組織切片上で、ＮＰＣは、ほとんどがＴ系列の非悪性リンパ球により激しく侵入されているらしい。ＥＢＶの完全長のゲノムが全ての悪性腫瘍上皮細胞の中に含まれ、そして悪性腫瘍の表現型に寄与するらしい幾つかのウイルス産物をコードすることが一致している。しかしながら、腫瘍細胞中ではウイルス粒子の生産がない；換言すると、ＮＰＣ細胞は主に「潜伏性の」ＥＢＶ−感染の状態にある。潜伏性のウイルス産物の幾つかは、ＥＢＮＡ１蛋白質及びＥＢＥＲ１及び２と呼ばれる小さな非翻訳ＲＮＡの２つの種である。Ｌａｔｅｎｔ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＭＰ１）と呼ばれる別のＥＢＶ−蛋白質がＮＰＣの約５０％において生産される。他のウイルスメッセンジャー及びそれらの対応する蛋白質は調査中である。（Ｆｒｉｅｓｅ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ＢａｍＨＩ  Ａ  ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，７１：２７３５−２７７１，１９９７；Ｋｉｅｎｚｌｅ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｅｎｃｏｄｅｄ  ＲＫ−ＢＡＲＦ０  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，７３：８９０２−８９０６，１９９９；Ｄｅｃａｕｓｓｉｎ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＢＡＲＦ１  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｅｄ  ｂｙ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，６０：５５８４−５５８８，２０００．）
【０００３】
ＮＰＣの腫瘍形成は細胞の遺伝子の変化によっても促進される。ｐ１６／ＩＮＫ４遺伝子の点変異又は高メチル化による不活性化はこれらの変化にほとんど一貫している。（Ｌｏ，Ｋ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ１６  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５６：２７２１−２７２５，１９９６．）小さな同型接合（homozygous）の欠損又は異型接合の損失は頻繁に第３ｐ染色体において起こることから、この領域がＮＰＣ腫瘍形成に不可欠の腫瘍抑圧遺伝子を含むことを示唆する。（Ｌｏ，Ｋ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ａｌｌｅｌｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｅｄ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，６０：３３４８−３３５３，２０００．）ほとんどの他のヒトの上皮悪性腫瘍において記録されたデータとは対照的に、ｐ５３は稀にＮＰＣ中で変異している。（Ｅｆｆｅｒｔ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｔｅｒｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，６６：３７６８−３７７５，１９９２．）ｐ５３の機能上の不活性化は、幾人かの著者らにより気づかれていたが、この能力の不活性化の機構は明らかにされないままである。（Ｆｒｉｅｓ，Ｋ．Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｌａｔｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  ｂｌｏｃｋｓ  ｐ５３−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ２０  ｇｅｎｅ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，７０：８６５３−８６５９，１９９６．）
【０００４】
悪性腫瘍ＮＰＣ細胞は短い倍加時間及び高い転移能を有する。にもかかわらず、それらはインサイチュ及びインビトロにおいてアポトーシスにはいる傾向がある。大多数の場合には、アポトーシス指数がＮＰＣの組織切片上では高い。（Ｈａｒｎ，Ｈ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔａｇｅ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，３３：１１７−１２２．）さらに、ＮＰＣ細胞がインビトロにて強力にＣＤ９５を発現し、そしてＣＤ９５−媒介アポトーシスに高い感受性を示すことが示された。（Ｓｂｉｈ−Ｌａｍｍａｌｉ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ：ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＤ９５  ａｎｄ  ＣＤ４０  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５９：９２４−９３０，１９９９．）
【０００５】
アポトーシスに対する脆弱性は、一部には、ほとんどの頭部及び頸部カルシノーマよりも、ＮＰＣが放射線治療及び化学治療に高い感受性を有する理由を説明する。放射線治療は初期腫瘍の処置のための基礎的な治療武器であるが、誘導性化学治療、付随性化学治療又はアジュバント化学治療と組み合わされるケースが増えている。（Ａｌｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ），１４：１２２３−１２３０，２０００．）誘導性化学治療の短期間の結果はしばしば顕著である。完全な緩解の率が２から３コースの誘導性化学治療後の１０から２５％がごく普通である。（Ｂｅｎａｓｓｏ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｎａ  ｃｈｅｍｏ−ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｓｔａｇｅ  ＩＶ  ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８３：１４３７−１４４２，２０００；Ｃｈｕａ，Ｄ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｆａｉｌｕｒｅ  ａｆｔｅｒ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｌｏｃｏｒｅｇｉｏｎａｌｌｙ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｔｈｅ  Ｑｕｅｅｎ  Ｍａｒｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ．Ｉｎｔ  Ｒａｄｉａｔ  Ｏｎｃｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｐｈｙｓ，４９：１２１９−１２２８，２００１．）幾つかの研究において、完全なリンパ腫の緩解の率は５０％に達し得る。（Ｆｒｉｋｈａ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒａｌ  ａｎｄ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｎｅｏａｄｊｕｖａｎｔ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｂｕｌｌ  Ｃａｎｃｅｒ，８４：２７３−２７６，１９９７．）しかしながら、これらの良好な応答は予測不可能であり、そしてしばしば短期間である。さらに、ほんの僅かな研究においてしか、長期間の生存において幾つかの改良を付随して誘導性化学治療に対して短期間の応答であった。（Ｂｅｎａｓｓｏ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ  ｃｈｅｍｏ−ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｓｔａｇｅ  ＩＶ  ｕｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８３：１４３７−１４４２，２０００．）
【０００６】
これまで、ＮＰＣの治療におけるその主要な役割にも拘わらず、化学治療のＥＢＶ−陽性ＮＰＣ細胞に対する効果はあまり調査されていない。一つの主要な理由は、インビトロにおいてＮＰＣ細胞を成長させるのが極めて困難なことである。数十年の間に、実験用ＮＰＣ材料の唯一の源は、異種移植片としてヌードマウスに伝播された腫瘍系列であり、そしてほんの小さなフラクションの臨床ＮＰＣ検体しか移植に成功することができなかった。（Ｂｕｓｓｏｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｂｌｅ  ＥＢＶ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，４２：５９９−６０６，８８．）より最近では、インビトロにて増殖させたＮＰＣ細胞系の報告があったが、これらの系列の多くはＥＢＶを含まず、即ち、インビボのＮＰＣ細胞の真の代表ではないかもしれない。（Ｌｉｎ，Ｃ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ，ｈｕｍａｎ  ｐａｐｉｌｌｏｍａ  ｖｉｒｕｓ，ａｎｄ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｗｉｔｈ  ｎｉｎｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，７１：７３１−７３６，１９９４．）顕著な前進は、Ｘｅｎｏ−６６６と呼ばれるチャイニーズＮＰＣ異種移植片からの誘導により作成され、Ｃ６６６−１と呼ばれるそのサブクローンは永久にインビトロで生育でき、そしてＥＢＶゲノムを保持する。（Ｃｈｅｕｎｇ，Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ（Ｃ６６６−１）ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｌｙ  ｈａｒｂｏｕｒｉｎｇ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８３：１２１−１２６，１９９９．）我々は、他のＮＰＣ異種移植片、特にＣ１５北アフリカＮＰＣ異種移植片から誘導した細胞の短期間インビトロ培養物を改良することにおいても前進をなした。
【０００７】
ＮＰＣ細胞中の抗−新生物薬剤の細胞障害性効果の根底にある生物学上の機構は、まだ完全に明らかにされなければならない。このトピックに対する文献の報告はほとんどなく、主にシスプラチンとタキソールの効果に焦点を向けられてきた。シスプラチンは約１μＭの濃度においてＣＮＥ１  ＮＰＣ細胞系において成長停止を誘導することが示された。この成長停止は老年期関連のβ−ガラクトシダーゼの発現の増加に付随した。（Ｗａｎｇ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｓｅｎｅｓｃｅｎｔ−ｌｉｋｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｒｒｅｓｔ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５８：５０１９−５０２２，１９９８；Ｗａｎｇ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，２１：４０３−４０８，２００１．）タキソールは、ＴＷＯ１及びＴＷ０３９なるＮＰＣ細胞系において成長停止及び／又はアポトーシスを誘導することが示された。（Ｌｏｕ，Ｐ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｔａｘｏｌ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  Ｅ−ｃａｄｈｅｒｉｎ  ａｎｄ  ｂｅｔａ−ｃａｔｅｎｉｎ  ｌｅｖｅｌｓ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ＴＷ−０３９：ｃｒｏｓｓ−ｔａｌｋ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−  ａｎｄ  ａｃｔｉｎ−ｂａｓｅｄ  ｃｙｔｏｓｋｅｌｔｏｎｓ．Ｊ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ，７９：５４２−５５６，２０００；Ｈｕａｎｇ，Ｔ．Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＡＤ２  ｃｈｅｃｈｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｂ１／ＣＤＣ  ２  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｓｓｏｃｉａｔｅ  ｗｉｔｈ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，５：２３５−２４１，２０００．）重要なこととして、しかしながら、前述の研究は、ＥＢＶ−陰性の分化したＮＰＣ’ｓ（ＣＮＥ１，ＴＷ０３９）の稀な形態に由来したか、又はインビトロにて僅かな継代の後でＥＢＶゲノムを喪失していた（ＴＷＯ１）、ＥＢＶ陰性細胞系上で実施された。（Ｌｉｎ，Ｃ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ，ｈｕｍａｎ  ｐａｐｉｌｌｏｍａ  ｖｉｒｕｓ，ａｎｄ  ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ  ｗｉｔｈ  ｎｉｎｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ，７１：７３１−７３６，１９９４．）即ち、前述の研究の標的細胞系は未分化ＥＢＶ陽性ＮＰＣ’ｓの真の代表だとみなすことができない。
【０００８】
Ｃ６６６−１及びＣ１５  ＮＰＣ腫瘍系を操作することにおける技術進歩により、真のＥＢＶ陽性ＮＰＣ細胞に対して抗新生物薬剤をインビトロにおいて試験することが、最近可能になった。上記のとおり、Ｃ６６６は異種（ｘｅｎｏ）６６６移植ＮＰＣに由来した。そのＥＢＶゲノムとの関係を安定化させるため、Ｃ６６６を次にサブクローン化したが、Ｃ６６６−１は結果のクローンの一つであった。対照的に、永久のインビトロ細胞系は、まだ、Ｃ１５を移植されたＮＰＣから誘導されなければならない。しかしながら、悪性腫瘍Ｃ１５細胞の選択的インビトロ成長は可能であり、ＰｏｌｙＨｅｍａマトリックスの使用を通して得られた。ＰｏｌｙＨｅｍａマトリックスはマウス繊維芽細胞の増殖を阻害し、そして小さな浮遊凝集物の形態にてＣ１５細胞の増殖を許容した。
【０００９】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ’ｓ）
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ’ｓ）は、幾つかの実験系において悪性腫瘍細胞のアポトーシスを誘導するために観察された分子上標的とされた薬剤である。ＦＴＩ’ｓは不所望の副作用における平行増加なしに化学治療又は放射線治療の利益を増加させ得る、との幾つかの示唆が存在する。（Ｍｏａｓｓｅｒ，Ｍ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆａｒｎｅｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｃａｕｓｅ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｍｉｔｏｔｉｃ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  ｔａｘｏｌ  ａｎｄ  ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，９５：１３６９−１３７４，１９９８；Ｓｅｂｔｉ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  Ｉ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｙ：ｌｅｓｓｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ａｎｄ  ｂｅｎｃｈ−ｔｏ−ｂｅｄｓｉｄｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９：６５８４−６５９３，２０００．）ＦＴＩ’ｓはｒａｓ蛋白質のファルネシル化及び膜アンカー化を阻害するために最初はデザインされたが、それらが他の蛋白質、並びに、特にＲｈｏ  Ｂ，ｒａｐ  ２，及びラミニンＡ及びＢのファルネシル化を干渉することが今は明らかである。ＦＴＩ’ｓによる細胞の処理は形質転換された細胞のアポトーシスを誘導するゲラニル化されたＲｈｏ  Ｂの蓄積をもたらすことが観察された。（Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｇ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ．Ｓｅｍｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ，１０：４４３−４５２．，２０００．）別の細胞モデルにおいて、ＦＴＩ’ｓはＰＩ−３キナーゼ活性を阻害することが示された。（Ｐｌｏ，Ｉ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｐｈｏｓｐｈｏｉｎｏｓｉｔｉｄｅ  ３−ｋｉｎａｓｅ／Ａｋｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｂｙ  ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ，４５２：１５０−１５４，１９９９．）
【００１０】
アンスラサイクリン
アンスラサイクリン、例えばドキソルビシンは、反応性酸素種（ＲＯＳ）の生産を誘導することによりそれらの細胞障害性効果を及ぼす。ＲＯＳは、ＤＮＡ損傷、ｐ２１／ｗａｆｌ，ＧＡＤＤ  ４５，ＣＤ９５及びＢａｘのアップ制御をもたらすｐ５３の活性化を誘導することができる。（Ｋｏｓｔｉｃ，Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｘｔｅｅｎ  ｎｏｖｅｌ  ｐ５３  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｇｅｎｅｓ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９：３９７８−３９８７，２０００．）ＲＯＳは脂質膜に対していくらかの影響も有し、そして脂質の第２メッセンジャーの生産を誘導することもできる。（Ｂｅｔｔａｉｅｂ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ−  ａｎｄ  ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ−ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ  ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｒｕｇ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｅｒａｍｉｄｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，５５：１１８−１２５，１９９９．）
【００１１】
現在、ＦＴＩ−及びドキソルビシン−修飾経路がアポトーシスを誘導する様式において何処で如何にして横切るかを知ることは難しい。カスパーゼ８がＣＤ−９５−媒介性アポトーシスの間のＴＲＡＦ１分割の鍵となるエフェクターであると仮定されてきた。（Ｌｅｏ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，ＴＲＡＦ１  ｉｓ  ａ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−α  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，５５：８０８７−８０９３，２０００．）しかしながら、薬剤により誘導されたＴＲＡＦ１の分割はＣＤ９５−アゴニストにより誘導された分割と比較したときに、いくつかの異なる特徴を有する。これらの特徴のうち、薬剤処理されたサンプルにおいてはＴＲＡＦ１の分割された形態に対する未分割の比が高いまま維持されることから、ＴＲＡＦ１の生産の増加が分割のプロセスと平行して薬剤処理されたＮＰＣ細胞において生じることを示唆する。おもしろいことに、分割分子の未分割分子に対する同じ高い比率は、Ｌｅｏらにより、外来ＴＲＡＦ１を発現するドキソルビシン処理されたＨＴ１０８０細胞系において報告された。（同上）
【００１２】
ＴＲＡＦ１は極めて制限された組織分配を有する。ＥＢＶ形質転換されたＢ−リンパ球の場合のように、ＮＰＣ中のＴＲＡＦ１の強い発現はＥＢＶの存在に関連しているらしい。（Ｍｏｓｉａｌｏｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＬＭＰ１  ｅｎｇａｇｅｓ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ．Ｃｅｌｌ，８０：３８９−３９９，１９９５．）即ち、ＴＲＡＦ１の分割は、ＮＰＣ細胞中、例えば生検材料中の化学物質誘導性アポトーシスを特別に監視するための有用なマーカーのはずである。
【００１３】
以下の、胞生存性アッセイにおいては、Ｃ１５とＣ６６６−１の両方が１μＭを下回る濃度においてドキソルビシンの細胞障害性効果に著しく感受性であることが観察された。しかしながら、ドキソルビシンもタキソールもそれ自身に対してアポトーシスを誘導しなかった。おもしろいことに、ドキソルビシンは、Ｃ１５腫瘍系のドナーであった患者において著しいが一過性の腫瘍の緩解を達成した薬剤の組み合わせに含まれた。
【００１４】
ＮＰＣ細胞の化学物質誘導性アポトーシスを達成して、細胞障害性を増加させるために、ドキソルビシンをＦＴＩ’ｓと混合した。化合物Ａは以下の構造を有するファルネシルトランスフェラーゼ酵素の選択的阻害剤である：
【００１５】
【化１】
2006500421.tif 000002
【００１６】
Ｃ１５及びＣ６６６−１の両方に対するドキソルビシンの細胞障害性効果は、化合物Ａと組み合わせて使用された時に、劇的に増強された。Ｃ１５細胞に対する細胞障害性効果は、広範囲に及ぶ（massive）アポトーシスに関連し、ＴＲＡＦ１の初期の分割に関連し、上記組み合わせへの細胞暴露を開始して４８時間後であった。Ｃ６６６−１に対する細胞障害性効果は成長の停止及び正体不明の細胞死に関連しており、アポトーシスの発生が試験された濃度において観察されない。
【００１７】
注目すべきは、同じアッセイにおいては、下で、Ｃ１５とさらにより注目に値するＣ６６６−１細胞の両方がドキソルビシンに対するよりもシスプラチンに対する感受性が低かったことである。この結果は、短時間細胞障害性アッセイにおいてのＣ６６６−１細胞のシスプラチンに対する感度の低さに関する以前の報告と一致した。（Ｗｅｉｎｒｉｂ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌｕｓ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｐ５３  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ＥＢＶ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  −ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，８：３５２−３６０．，２００１．）シスプラチンはＮＰＣ’ｓの化学治療における現在最も有効な薬剤とされているから、これらの結果は驚くべきことである。（Ａｌｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ），１４：１２２３−１２３０，２０００．）
【００１８】
発明の概要
第１の側面において、本発明は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、そのプロドラッグ又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤或いは上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤プロドラッグの薬学上受容可能な塩、及びアンスラサイクリン、そのプロドラッグ又は上記アンスラサイクリン又は上記アンスラサイクリンプロドラッグの薬学上受容可能な塩を含む薬学組成物を特徴とする。
【００１９】
本発明の第１の側面の第１の好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、国際特許出願公開番号ＷＯ  ００／３９１３０に開示された化合物である；即ち、式Ｉ
【００２０】
【化２】
2006500421.tif 000003
【００２１】
による化合物
（式中、
ｎ１は、０又は１であり；
Ｘは、各存在に関して別個に、（ＣＨＲ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４Ｚ（ＣＨ２）ｎ５であり；
Ｚは、Ｏ，Ｎ（Ｒ１２），Ｓ又は結合であり；
ｎ３は、各存在に関して別個に、０又は１であり；
ｎ４及びｎ５の各々は、各存在に関して別個に、０、１、２、又は３であり；
Ｙは、各存在に関して別個に、ＣＯ，ＣＨ２，ＣＳ，又は結合であり；
Ｒ１は、
【００２２】
【化３】
2006500421.tif 000004
【００２３】
，又はＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；
Ｒ２，Ｒ１１，及びＲ１２各々は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル及びアリールからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、上記の任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ８又はＲ３０により置換されており；
Ｒ３は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ３０により置換されており；
Ｒ４及びＲ５各々は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、アリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意に一つ又はそれより多いＲ３０により置換されており、各置換基は別個に選択され、或いはＲ４及びＲ５が結合してアリールを形成する炭素と併せて互いに一緒になることができ；
Ｒ６は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意にＯＨ，（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），及びハロから各々別個に選択される一つ又はそれより多い置換基により置換されており；
式中、Ｒ８及びＲ９各々は、各存在に関して別個に、Ｈ，又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ２−６）アルキニル、アリール、又はアリール（Ｃ１−６）アルキルであり；
Ｒ７は、各存在に関して別個に、Ｈ，＝Ｏ，＝Ｓ，又は（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ２−６）アルケニル、（Ｃ３−６）シクロアルキル、（Ｃ３−６）シクロアルキル（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル、（Ｃ５−７）シクロアルケニル（Ｃ１−６）アルキル、アリール、アリール（Ｃ１−６）アルキル、ヘテロシクリル、及びヘテロシクリル（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティは任意にＯＨ，（Ｃ１−６）アルキル、（Ｃ１−６）アルコキシ、−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＯＯＨ，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），及びハロから各々別個に選択される一つ又はそれより多い置換基により置換されており；
Ｒ１０はＣであるか；又は、ｎ１が０のとき、Ｒ６及びＲ７が結合してシクロヘキシルを形成する炭素原子と併せて互いに一緒になることができ；
Ｒ２１は、各存在に関して別個に、Ｈ又は（Ｃ１−６）アルキル及びアリール（Ｃ１−６）アルキルからなる群から選択される任意に置換されたモイエティであって、但し、任意に置換されたモイエティはＲ８及びＲ３０からなる群から各々別個に選択された一つ又はそれより多い置換基により任意に置換されており；
Ｒ２２はＨ，（Ｃ１−６）アルキルチオ、（Ｃ３−６）シクロアルキルチオ、Ｒ８−ＣＯ−，又は式：
【００２４】
【化４】
2006500421.tif 000005
【００２５】
による置換基であり；
Ｒ２４及びＲ２５各々は、各存在に関して別個に、Ｈ，（Ｃ１−６）アルキル、又はアリール（Ｃ１−６）アルキルであり；
Ｒ３０は、各存在に関して別個に、（Ｃ１−６）アルキル、−Ｏ−Ｒ８，−Ｓ（Ｏ）ｎ６Ｒ８，−Ｓ（Ｏ）ｎ７Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−Ｎ（Ｒ８Ｒ９），−ＣＮ，ＮＯ２，−ＣＯ２Ｒ８，−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９），−ＮＣＯ−Ｒ８，又はハロゲンであり；ｎ６及びｎ７各々は、各存在に関して別個に、０、１又は２であり；
式中、ヘテロシクリルは、アゼピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、ベンズオキサゾリル、クロマニル、シノリニル（cinnolinyl）、ジヒドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオ−ピラニルスルフォン、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキノロニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、モルフォリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキサゼピニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、ピリジルＮ−オキシド、キノキサリニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロ−キノリニル、チアモルフォリニル、チアモルフォニリルスルフォキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチエニル又はチエニルであり；そして
式中、アリールはフェニル又はナフチルであり；
ｎ１が１で、Ｒ１０がＣであり、そしてＲ６がＨであるとき、Ｒ１０とＲ７は共に一緒になって、
【００２６】
【化５】
2006500421.tif 000006
【００２７】
を形成することができ；或いは
ｎ１が１で、Ｒ１０がＣであり、そしてＲ７が＝Ｏ，−Ｈ又は＝Ｓであるとき、Ｒ１０とＲ６は共に一緒になって、
【００２８】
【化６】
2006500421.tif 000007
【００２９】
を形成することができ、
式中、Ｘ１，Ｘ２，及びＸ３各々は、別個に、Ｈ，ハロゲン、−ＮＯ２，−ＮＣＯ−Ｒ８，−ＣＯ２Ｒ８，ＣＮ，又は−ＣＯＮ（Ｒ８Ｒ９）であり；そして
Ｒ１がＮ（Ｒ２４Ｒ２５）のとき、ｎ３は１であり、ｎ４及びｎ５は各々０であり、Ｚは結合であり、そしてＲ３及びＲ１１は一緒になって
【００３０】
【化７】
2006500421.tif 000008
【００３１】
を形成することができ、
式中、ｎ２は１−６であり、そしてＸ４及びＸ５は各々別個にＨ，（Ｃ１−６）アルキル、又はアリールであるか、又はＸ４とＸ５が一緒になって（Ｃ３−６）シクロアルキルを形成する）；
又は薬学上受容可能なその塩である。
【００３２】
発明の第１の側面の第２の好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１は、
【００３３】
【化８】
2006500421.tif 000009
【００３４】
，又はＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；そして
ＸはＣＨ（Ｒ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４又はＺであり、式中、ＸがＺのとき、ＺはＯ，Ｓ，又はＮ（Ｒ１２）である）；
又は薬学上受容可能な塩である。
【００３５】
発明の第１の側面の第２の好ましい態様の第１のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１は、
【００３６】
【化９】
2006500421.tif 000010
【００３７】
であり；
ＸはＣＨ（Ｒ１１）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４であり；そして
ｎ１は０である）；
又は薬学上受容可能な塩である。
【００３８】
発明の第１の側面の第２のより好ましい態様の第２のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１は、
【００３９】
【化１０】
2006500421.tif 000011
【００４０】
であり；
ｎ３，ｎ４，及びｎ５各々は０であり；
Ｚは結合であり；
Ｙは各存在に関して別個にＣＯ又はＣＳであり；そして
ｎ１は０である）；
又は薬学上受容可能な塩である。
【００４１】
発明の第１の側面の第２のより好ましい態様の第３のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１は、
【００４２】
【化１１】
2006500421.tif 000012
【００４３】
であり；
Ｒ６はＨであり；
ｎ１は１であり；
Ｒ７及びＲ１０は一緒になって
【００４４】
【化１２】
2006500421.tif 000013
【００４５】
を形成し；
ｎ３は１であり、そしてＲ１１はＨであり；
ＺはＯ又は結合であり；
ｎ５は０であり；そして
ＹはＣＯ又はＣＨ２又は結合である）；
又は薬学上受容可能な塩である。
【００４６】
発明の第１の側面の第２のより好ましい態様の第４のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１はＮ（Ｒ２４Ｒ２５）であり；
ｎ１は０であり；
ｎ３は１であり；
ｎ４は０であり；
ｎ５は０であり；
ＹはＣＯ又はＣＳであり；
Ｚは結合であり；そして
Ｒ３及びＲ１１は一緒になって
【００４７】
【化１３】
2006500421.tif 000014
【００４８】
を形成する）；
又は薬学上受容可能な塩である。
発明の第１の側面の第２のより好ましい態様の第５のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物
（式中、
Ｒ１は
【００４９】
【化１４】
2006500421.tif 000015
【００５０】
であり；
Ｒ７はＨ又は＝Ｏであり；
ｎ１は１であり；
Ｒ６及びＲ１０は一緒になって
【００５１】
【化１５】
2006500421.tif 000016
【００５２】
を形成し；
ｎ３は１であり、そしてＲ１１はＨであり；
ｎ５は０であり；
ＹはＣＯ又はＣＨ２であり；そして
Ｚは０であるか又は結合である）；
又は薬学上受容可能な塩である。
【００５３】
発明の第１の側面の第３のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
８−ブチル−７−（３−イミダゾール−５−イル）−１−オキソプロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
８−ブチル−２−（２−ヒドロキシフェニル）−７−（イミダゾール−４−イル−プロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
８−ブチル−７−（４−イミダゾリルプロピル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（イミダゾール−４−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−７−（１−オキソ−２−（１−（フェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−７−（２−（１−フェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（（４−イミダゾリル）カルボニル）−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）メチル−２−（２−メトキシフェニル）−８−（１−メチルプロピル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
６−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
６−ブチル−７−（２−（４−シアノフェニルメチルイミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−フェニル−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−８−（シクロヘキシルメチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
５−ブチル−７−（２−（１Ｈ−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−２−（２−（フェニルメトキシ）−フェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；又は
２−（２−ブトキシフェニル）−７−（２−（４−シアノフェニルメチル）−イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジン；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００５４】
発明の第１の側面の第４のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
１，２−ジヒドロ−１−（（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メチル）−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−クロロ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１０−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−８−フルオロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００５５】
発明の第１の側面の第４のより好ましい態様のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
９−クロロ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１０−ブロモ−１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−４−イル）−１−オキソエチル）−１，２−ジヒドロ−８−フルオロ−４−（２−メトキシフェニル）−イミダゾ［１，２−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
である。
【００５６】
発明の第１の側面の第５のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
７−（２−アミノ−１−オキソ−３−チオプロピル）−８−（メルカプトエチル）−２−（２−メトキシフェニル）−５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２ａ］ピラジンジスルフィド；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００５７】
発明の第１の側面の第６のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
５−（２−（１−（４−シアノフェニルメチル）イミダゾール−５−イル）−１−オキソ−エチル）−５，６−ジヒドロ−２−フェニル−１Ｈ−イミダゾ［１，２−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００５８】
発明の第１の側面の第７のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
１，２−ジヒドロ−１−（２−（イミダゾール−１−イル）−１−オキソエチル）−４−（２−メトキシフェニル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；
１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−１−（２−（ピリジン−３−イル）−１−オキソエチル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；又は
１，２−ジヒドロ−４−（２−メトキシフェニル）−１−（２−（ピリジン−４−イル）−１−オキソエチル）イミダゾ［１，２ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン；であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００５９】
発明の第１の側面の第８のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
【００６０】
【化１６】
2006500421.tif 000017
【００６１】
【化１７】
2006500421.tif 000018
【００６２】
【化１８】
2006500421.tif 000019
【００６３】
【化１９】
2006500421.tif 000020
【００６４】
【化２０】
2006500421.tif 000021
【００６５】
【化２１】
2006500421.tif 000022
【００６６】
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
発明の第１の側面の第９のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
【００６７】
【化２２】
2006500421.tif 000023
【００６８】
【化２３】
2006500421.tif 000024
【００６９】
【化２４】
2006500421.tif 000025
【００７０】
【化２５】
2006500421.tif 000026
【００７１】
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
発明の第１の側面の第９のより好ましい態様の第１のより好ましい態様によれば、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は、式Ｉの化合物であって、当該化合物が、
【００７２】
【化２６】
2006500421.tif 000027
【００７３】
であるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
上記第９のより好ましい態様の第２のより好ましい態様は、上記第８のより好ましい態様の第１のより好ましい態様を含み、但し、アンスラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００７４】
上記第９のより好ましい態様の第３のより好ましい態様は、上記第８のより好ましい態様の第２のより好ましい態様を含み、但し、アンスラサイクリンは、ドキソルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
【００７５】
発明の第１の側面の好ましい態様において、そして発明の上記第１の側面の第１から第９までの好ましい態様の各々において、そして発明の第１の側面の第１０の好ましい態様と名付けたそれらのより好ましい態様の各々において、但し、アンスラサイクリンは、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又はそのプロドラッグであるか、又は薬学上受容可能なアンスラサイクリン又はアンスラサイクリンプロドラッグの塩である。
【００７６】
上記第１０の好ましい態様のより好ましい態様において、アンスラサイクリンは、ドキソルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である。
第２の側面において、本発明は、発明の上記の第１の側面によるか、又は第１の側面の上記のより好ましい態様によるか、又は上記の第１の側面の上記のより好ましい態様の何れか一つによる薬学組成物、及び薬学上受容可能な担体、媒体又は希釈剤を特徴とする。
【００７７】
第３の側面において、本発明は、鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法を特徴とし、当該方法は、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物とアンスラサイクリン化合物の組み合わせに接触させることを含むが、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物及び上記アンスラサイクリン化合物の各々は、発明の上記の第１の側面によるか、又は第１の側面の上記の好ましい態様の何れか一つによるか、又は上記の第１の側面の上記のより好ましい態様の何れか一つによる薬学組成物中に開示されたファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物、アンスラサイクリン化合物から選択される。
【００７８】
上記の第３の側面の第１の好ましい態様において、本発明は、鼻咽腔カルシノーマ細胞の増殖の速度を低下させる方法を特徴とし、当該方法は、上記鼻咽腔カルシノーマ細胞を、発明の上記の第１の側面によるか、又は第１の側面の上記の好ましい態様の何れか一つによるか、又は上記の第１の側面の上記のより好ましい態様の何れか一つによる薬学組成物に接触させることを含む。
【００７９】
上記の第３の側面の第２の好ましい態様において、本発明は、患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法を特徴とし、当該方法は、上記患者を、発明の上記の第１の側面によるか、又は第１の側面の上記の好ましい態様の何れか一つによるか、又は上記の第１の側面の上記のより好ましい態様の何れか一つによる薬学組成物に接触させることを含む。
【００８０】
上記の第３の側面の第３の好ましい態様において、本発明は、患者において鼻咽腔カルシノーマを治療する方法を特徴とし、当該方法は、上記患者に、有効な量の一つ又はそれより多いファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物と一つ又はそれより多いアンスラサイクリン化合物の組み合わせを投与するが、上記有効な量の一つ又は複数のファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物及びアンスラサイクリンは、組み合わせにおいて上記鼻咽腔カルシノーマを治療するのに有効である。
【００８１】
上記の第３の側面の第４の好ましい態様において、発明は、患者が哺乳類である、上記の第４の好ましい態様の上記の第１、第２又は第３の好ましい態様の何れか一つによる方法を特徴とする。
【００８２】
上記の第３の側面の第５の好ましい態様において、発明は、患者がヒトである、上記の第３の側面の上記の第１、第２、第３又は第４の好ましい態様の何れか一つによる方法を特徴とする。
【００８３】
上記の第３の側面の第６の好ましい態様において、発明は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及びアンスラサイクリンを実質上同時に投与する、上記の第３の側面の上記の第１、第２、第３、第４又は第５の好ましい態様の何れか一つによる方法を特徴とする。
【００８４】
第４の側面において、発明は、一つ又はそれより多いファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤又は薬学上受容可能なその塩及び一つ又はそれより多いアンスラサイクリン又は薬学上受容可能なその塩及び鼻咽腔カルシノーマの治療のための使用のための指示書を含む、薬学キットを特徴とする。
【００８５】
発明の上記の第４の側面の第１の好ましい態様において、キットは、ａ）ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤又はそのプロドラッグ又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤又は上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤プロドラッグの薬学上受容可能な塩及び薬学上受容可能な担体、媒体又は希釈剤を含む第１ユニット投薬形態；ｂ）アンスラサイクリン又はそのプロドラッグ又は上記アンスラサイクリン又は上記アンスラサイクリンプロドラッグの薬学上受容可能な塩及び薬学上受容可能な担体、媒体又は希釈剤を含む第２ユニット投薬形態を含むことを特徴とする。
【００８６】
発明の上記の第４の側面の上記の第１の好ましい態様のより好ましい態様において、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が式Ｉの化合物又は薬学上受容可能なその塩を含み、そして上記アンスラサイクリンがドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、又はアムルビシンであるか、又は薬学上受容可能なその塩である、キットを特徴とする。
【００８７】
発明の上記の第４の側面の上記の第１の好ましい態様のさらにより好ましい態様においては、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が式：
【００８８】
【化２７】
2006500421.tif 000028
【００８９】
の化合物又は薬学上受容可能なその塩を含み、そしてアンスラサイクリンがドキソルビシン又は薬学上受容可能なその塩である、キットを特徴とする。
国際特許出願公開番号ＷＯ００／３９１３０の開示は、式Ｉの化合物を合成する一つ又はそれより多い方法を教示する。
【００９０】
別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、一つ又はそれより多い以下の合衆国特許の中に記載される。
【００９１】
【表１】
2006500421.tif 000029
【００９２】
別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、一つ又はそれより多い以下の合衆国特許公開の中に記載される。
【００９３】
【表２】
2006500421.tif 000030
【００９４】
さらに別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、一つ又はそれより多い以下の合衆国特許の中に記載される。
【００９５】
【表３】
2006500421.tif 000031
【００９６】
【表４】
2006500421.tif 000032
【００９７】
特に好ましいのは、以下の国際特許出願及び公開：ＷＯ００／３９１３０，ＷＯ９８／００４０９，ＷＯ９９／６５９２２，ＷＯ９９／６５８９８，ＷＯ９９／６４４０１，及びＰＣＴ／ＵＳ０１／２３９５９に記載されたファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物である。
【００９８】
さらに別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記アンスラサイクリン化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、一つ又はそれより多い以下の合衆国特許の中に記載される。
【００９９】
【表５】
2006500421.tif 000033
【０１００】
さらに別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記アンスラサイクリン化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、以下の一つ又はそれより多い合衆国特許公開：２００２１３７６９４、２００２００７７３０３、及び２００１００５３８４５の中に記載される。
【０１０１】
またさらに別の好ましい側面によれば、本発明は、少なくとも一つのアンスラサイクリン化合物及び少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物を含む薬剤の組み合わせに関し、但し、上記アンスラサイクリン化合物は、その各々の開示が全体において引用により本明細書に編入される、一つ又はそれより多い以下の国際特許出願及び公開の中に記載される。
【０１０２】
【表６】
2006500421.tif 000034
【０１０３】
より好ましい側面によれば、本発明は、国際特許公開番号ＷＯ００／３９１３０に記載された少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物をアンスラサイクリンと共に含む薬剤の組み合わせに関する。アンスラサイクリンの間では、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、及びアムルビシンが好ましく、そしてドキソルビシンがもっとも好ましい。国際特許公開番号ＷＯ００／３９１３０の開示は、その全体において引用により本明細書に編入される。
【０１０４】
特に好ましい態様において、発明は、化合物Ａとドキソルビシンを含む薬剤の組み合わせを特徴とする。
それらの作用機構の結果として、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物、特に上記の化合物は、通常、細胞増殖抑制性タイプの活性を有する。
【０１０５】
少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及び少なくとも一つのアンスラサイクリンを含む発明による薬剤の組み合わせを使用することにおいて、目的は増加した抗癌活性、例えば腫瘍のサイズの延期された安定化、又は腫瘍の退行を得ることである。
【０１０６】
本発明によれば、組成物は、その投与後にそれが腫瘍細胞の増殖を阻害するか、遅延させるか又は妨害するなら、活性である。即ち、発明による薬剤の組み合わせを含む薬学組成物の有利な特徴は、腫瘍の成長の遅延の増加であり得る。
【０１０７】
発明による薬剤の組み合わせは、分離したとみなされたアンスラサイクリン化合物又はファルネシルトランスフェラーゼ化合物各々により得られた活性との比較において、アンスラサイクリン化合物又はファルネシルトランスフェラーゼ化合物何れかの抗癌活性を有利に延期するか又は維持し得る。
【０１０８】
本発明による組み合わせの別の利点は、障害性に関する。特定すると、上記組み合わせの治療上の相乗性は、上記化合物が単独で投与されたのと同じレベルの治療活性を達成するのに必要なはずの用量と比較して、低い用量の一方又は両方の化合物を与える。
【０１０９】
用語「プロドラッグ」は、目的の薬剤の薬学上受容可能な代謝前駆体、即ち、体内で所望の薬剤の活性形態に変換される化合物又は組成物を意味する。
以下のとおり若干の略語が本明細書にて使用される。
【０１１０】
ＥＢＥＲｓ    ＥＢＶによりコードされたＲＮＡｓ
ＥＢＮＡ１    エプスタイン−バール核抗原１
ＥＢＶ        エプスタイン−バールウイルス
Ｆｔａｓｅ    ファルネシルトランスフェラーゼ
ＧＧＴａｓｅ  ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ
ＦＴＩ        ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤
ＬＭＰ１      潜伏性（ｌａｔｅｎｔ）膜蛋白質１
ＮＰＣ        鼻咽腔カルシノーマ
ＴＲＡＦ      ＴＮＦ受容体関連因子
【０１１１】
発明の薬剤組み合わせを形成するアンスラサイクリン化合物及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害性化合物は、同時か、別々か、又は時間をかけて順番に（sequenced）投与することができ、この頻度を採用することにより、組み合わせの最大効率を得て、そして各投与に関しては、迅速な全投与から連続潅流までの範囲の可変期間を有することができる。上記の組み合わせを形成する化合物は、異なる速度で投与することができ、連続、断続、反復、交替、又は順番のスキムから選択されるスキムにより独立して投与することができ、そして一日当たり多数回反復することができる。
【０１１２】
有利なことに、細胞増殖抑制活性を有する上記ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤は連続のスキムに従い投与することができる。より有利なことに、このスキムは、例えば、本明細書にて記載されたインビトロ細胞生存性において測定されたような、細胞の成長の５０％を阻害するのに必要な濃度（ＩＣ５０）よりも高いか又は等しい血漿レベルを与える。有利なことに、アンスラサイクリンは、腫瘍モデルの種類に応じたスキムに従い；好ましくは断続のスキムに従い、投与することができる。
【０１１３】
本発明の薬剤の組み合わせは、構成物の物理的関連により得られたものに限定されないのみならず、同時か又は時間をかけて広がり得る分離投与を可能にするものにも限定されないことが、前記から当然の結果として起こる。即ち、上記構成物は、別の方法及び経路により独立に投与することができ、限定ではないが、経口、腹膜内、非経口、静脈内、局所、直腸内、膣内、及び呼吸粘膜経路を含む。
【０１１４】
有利なことに、本発明による組み合わせのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及びアンスラサイクリン構成物は、経口により投与され；もっとも好ましくは、本発明による組み合わせのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及びアンスラサイクリン構成物は、経口経路により生物利用可能性である。
【０１１５】
また、有利なことに、本発明による組み合わせのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及びアンスラサイクリン構成物は、静脈内投与してよい。
また、有利なことに、本発明による組み合わせのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤構成物は、経口投与してよく、そしてアンスラサイクリン構成物は静脈内投与してよく、逆もまた同じである。
【０１１６】
静脈内注射のための生成物は、一般に、使用のときに即座に調製できる、薬学上受容可能な滅菌溶液又は懸濁液である。非水性溶液又は懸濁液の調製のためには、中性植物オイル、例えばオリーブオイル、ゴマ油又はパラフィンオイル又は注射可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルを使用することができる。上記滅菌水性溶液は、水中のアンスラサイクリン化合物及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物の一方又は両方の溶液にて構成することができる。当該水性溶液は、ｐＨが適切に調節されて例えば十分な量の塩化ナトリウム又はグルコースにより等張性が生じる限り、静脈内投与に適している。滅菌は、加熱によるか又は組成物に対して有害に作用しないあらゆる他の手段により実施することができる。上記の薬剤の組み合わせは、リポソームの形態又は指示体、例えばシクロデキストリン又はポリエチレングリコールとの組み合わせ形態にて存在することができる。
【０１１７】
経口投与のための固形組成物としては、圧縮されたタブレット、ピル、粉末（ゼラチンカプセル、カシェ剤）又は顆粒を使用することができる。これらの組成物においては、アンスラサイクリン化合物及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物の一方又は両方を一つ又はそれより多い不活性希釈剤、例えば、スターチ、セルロース、蔗糖、乳糖又はシリカと、アルゴン流の下で混合する。これらの組成物は、同様に、希釈剤以外の物質、例えば、一つ又はそれより多い潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム又はタルク、色素、コーティング（コートされたタブレット）又はラッカーを含み得る。
【０１１８】
経口投与のための液体組成物としては、不活性希釈剤、例えば水、エタノール、グリセロール、植物油又はパラフィンオイルを含む、薬学上受容可能な溶液、懸濁液、乳濁液、シロップ及びエリキシルを使用することが可能である。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば湿潤剤、甘味料、濃化剤、芳香剤又は安定化製品を含むことができる。
【０１１９】
直腸の投与のための組成物は、座剤又は直腸カプセルであり、アンスラサイクリン化合物及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物以外に、賦形剤、例えばココアバター、半合成グリセリド又はポリエチレングリコールを含む。
局所投与のための組成物は、例えば、クリーム、ローション、眼科用ローション、マウスウオッシュ鼻ドロップ又はエアロゾルであり得る。
【０１２０】
概して、医師が、治療される被験者の各々の年齢、体重及び全ての他の因子の函数として、アンスラサイクリン化合物及びファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物の各々の適切な用量を決定することになる。一般に、用量は、要求される効果、治療の期間及び使用される投与の経路に依存する。用量は、一般に、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤に関して言えば、成人の経口投与によると１日あたり１０ｍｇから２０００ｍｇであり、５０ｍｇから１０００ｍｇの活性物質の範囲のユニット用量であり；そしてアンスラサイクリンに関して言えば、成人の静脈内投与によると１日あたり１０ｍｇから１０００ｍｇの活性物質である。上記治療を１日当たり又は１週あたり多数回反復することができ、医師により適切に決定される。好ましくは、安定化、部分的緩解、全快又は回復が達成されるまで、上記治療を続ける。
【０１２１】
構成物の投与を同時か、分離してか又は時間をかけて広げ得る、発明による組み合わせにおいては、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物の量が組み合わせの１０から９０重量％であることが特に都合が良く、関連する物質の性質、要求される効果及び処置される癌の性質の函数として、この要旨のために変更することが可能である。
【０１２２】
発明による薬剤の組み合わせは、様々な組織及び／又は器官の細胞の悪性又は良性細胞増殖に関連する疾患の治療のために利用することができ、筋肉、骨又は関節組織、皮膚、脳、肺、生殖器官、リンパ系、腎臓系、乳房又は血液細胞、肝臓、消化装置、結腸、膵臓及び甲状腺又は副腎を含み、そして以下の病理を含む：乾癬、再狭窄、別の種類の肉腫、例えばカポジ肉腫、頭部の癌、及び頸部、膵臓、結腸、肺、卵巣、胸部、脳、前立腺、肝臓、腹部、膀胱、腎臓、前立腺又は精巣の癌、ウイルムス腫、奇形癌、胆管カルシノーマ、絨毛癌、メラノーマ、大脳腫瘍、例えば、神経芽腫、神経膠腫、多発性骨髄腫、白血病及びリンパ腫、例えば慢性リンパ球白血病、急性又は慢性顆粒性リンパ腫、及びホジキン病。
【０１２３】
発明による組み合わせは、癌、例えば、膵臓、結腸、肺、卵巣、乳房、脳、前立腺、肝臓、腹部、膀胱又は精巣、及び頭部及び頸部の癌の治療に特に有用であり得て、そしてより都合が良いのは頭部及び頸部の癌である。発明の特に好ましい態様においては、発明による組み合わせを鼻咽腔カルシノーマの治療のために使用する。
【０１２４】
特に、発明の薬剤の組み合わせは、何れかの化合物を単独で使用する場合の用量よりも低い用量にてアンスラサイクリン化合物及び／又はファルネシルトランスフェラーゼ阻害化合物を用いることが可能であるとの利点を有する。
【０１２５】
即ち、本発明は、上記の病理；有利なのは癌、もっとも有利なのは鼻咽腔カルシノーマの治療のために有用な医薬の製造のための、少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及び少なくとも一つのアンスラサイクリンを含む組み合わせの使用に関する。さらに、本発明は、同時、別々又は時間をかけて順番に投与するための、医薬の製造のための、少なくとも一つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤及び少なくとも一つのアンスラサイクリンを含む組み合わせの使用に関する。
【０１２６】
本明細書にて言及されるファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤化合物は、当業者に知られている共通の手段により製造することができ、本明細書にて引用により既に特別に編入された特許から明らかである。同様に、アンスラサイクリン化合物は当業界でよく知られた手段により製造することができる。
【０１２７】
本発明は、発明を如何にして実施するを当業者に教示するようにデザインされた以下の実施例によりさらに例示される。以下の実施例は発明の端なる例示であり、請求された発明に限定するものとして解釈されるベきではない。
【０１２８】
発明の詳細な説明
材料
化合物ＡとＢＩＭ−４６０６８は、バイオメジャー、インコーポレイテッド（ミル−ド、マサチューセッツ）から供給された。ＦＴＩ−２７７とＧＧＴＩ−２８６はエクスパンシア（アラモン、フランス）から供給された。タキソール、シスプラチン、ドキソルビシン及び５−フルオロウラシルはシグマ（セント−クエンチン、フォーラビエル、フランス）から購入した。Ｃ１５は、皮下継代によりヌードマウスに増殖させた未分化ＮＰＣ腫瘍系である。（Ｂｕｓｓｏｎ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｒｅｅ  ｔｒａｎｓｌａｔａｂｌｅ  ＥＢＶ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，４２：５９９−６０６，８８．）それは、モロッコで生まれた１３歳の少女の初期鼻咽腔腫瘍の生検から確立された。当該生検は、臨床材料の使用に関する制度化されたガイドラインに従い、あらゆる治療法の前に回収された。この患者はリンパ腫及び骨の転移に付随した、容積の大きな初期腫瘍を有し、そして、鼻咽腔及び頸部の放射線治療の前に、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ドキソルビシン及びメチルプレドニソロンの組み合わせを用いる誘導化学治療により治療された。７０％の腫瘍の応答が化学治療の２カ月後に初期腫瘍及び頸部リンパ腫転移の両方において達成された。完全な臨床上の緩解が放射線治療の後に得られたが、しかしながら、骨の転移のために緩解は５カ月間しか継続しなかった。Ｃ１５細胞は野生型ｐ５３を発現する。（Ｅｆｆｅｒｔ，Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐ５３  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｊ  Ｖｉｒｏｌ，６６：３７６８−３７７５，１９９２．）
【０１２９】
Ｃ６６６−１は、ＮＰＣ異種移植片に関してインビトロにおいて増殖させたＥＢＶ−陽性細胞系であり、ｘｅｎｏ−６６６と呼ばれる。（Ｃｈｅｕｎｇ，Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  （Ｃ６６６−１）  ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｌｙ  ｈａｒｂｏｕｒｉｎｇ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８−１２６，１９９９．）初期インビトロ培養物は継代１８のｘｅｎｏ−６６６に由来し、Ｃ６６６と命名された。次に、Ｃ６６６を低密度生育に適合させて、いくつかのサブクローンを単離した。それらのうちのひとつがＣ６６６−１と命名され、広範囲に特性決定されて、のちにこの研究において使用された。（同上；Ｗｅｉｎｒｉｂ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｐｌｕｓ  ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｐ５３  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ＥＢＶ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｎｄ  −ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，８：３５２−３６０．，２００１。）Ｃ６６６−１細胞は変異したｐ５３を発現する。（Ｗｅｉｎｒｉｂ，Ｌ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ，８：３５２−３６０．，２００１．）
【０１３０】
ＥＢＥＲ’ｓ（ＥＢＶによりコードされたＲＮＡ’ｓ）のインサイチュハイブリダイゼーション
異種移植片化されたＣ１５及びＣ６６６−１腫瘍の断片を（酢酸、ホルムアルデヒド及びエタノールの混合物中で）固定し、パラフィンに埋め込み、そして４μｍの切片に切った。ＥＢＥＲ１及び２の両方に反応するフルオレセインで標識されたペプチド核酸（ＰＮＡ）を用いたインサイチュハイブリダイゼーションにより、ＥＢＥＲ’ｓの検出を実施した。（Ｄａｋｏ  ＥＢＥＲ−ＰＮＡプローブ、ダコ、トラップ、フランス。）ハイブリダイゼーションのプロセスは製造者により薦められるとおりに実施し、ＲＮＡを含まない水を使用した。ハイブリダイズしたプローブを、アルカリホスファターゼにコンジュゲートされた抗フルオレセイン抗体により検出した（ＰＮＡ  ＩＳＨ検出キット、Ｄａｋｏ）。
【０１３１】
インビトロ実験のためのＮＰＣ細胞の調製
インビトロ実験の前に、以前に報告されたとおりに、Ｃ１５異種移植片化腫瘍を細胞分散のためにミンチしてタイプＩＩコラゲナーゼで処理した。（Ｓｂｉｈ−Ｌａｍｍｌｉ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ：ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＤ９５  ａｎｄ  ＣＤ４０  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５９：９２４−９３０，１９９９．）残渣の細胞凝集物を、１００μｍポアのナイロンセル濾過器上で濾過することにより除去した。Ｃ６６６−１細胞は、コラゲナーゼＩをコートされたプラスチックフラスコ中でインビトロにおいて永久に増殖させた。（Ｂｉｏｃｏａｔ，Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，フランス）。インビトロ培養培地は、Ｃ１５及びＣ６６６−１両者に関して５％ウシ胎児血清を含むＨｅｐｅｓ緩衝ＲＰＭＩであった。Ｃ６６６−１細胞は単一の悪性腫瘍クローンに由来し、マウスの繊維芽細胞の汚染を含まなかった。対照的に、Ｃ１５細胞懸濁液はしばしばマウス繊維芽細胞で汚染された。よって、いくつかの実験に関しては、Ｃ１５細胞懸濁液を、細胞の付着を阻害する抗接着ポリマーであるポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）をコートされたプラスチック上で生育させた（Ｆｕｋａｚａｗａ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｎｃｈｏｒａｇｅ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｇｒｏｗｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｔｈｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ  ｃｅｌｌｓ  ｏｎ  ｐｏｌｙ（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ  ｍｅｔａｃｒｙｌａｔｅ）−ｃｏａｔｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，６７：８７６−８８２，１９９６．）（ＰｏｌｙＨＥＭＡ，Ｓｉｇｍａ，セイント−クエンチンフォラビエル、フランス）。このコーティング法を用いて、繊維芽細胞の増殖を完全に阻害したが、Ｃ１５細胞は非アンカースフェロイド又は７２時間目に１５０μｍの平均直径の凝集物として生育させた（図１）。
【０１３２】
Ｋｉ  ６７免疫染色
Ｃ１５細胞凝集物をサイトスピンによりガラススライド上に蒸着させ、アセトン中で４℃において１０分間固定し、そしてＫＩ  ６７抗原に対するマウスモノクローナル抗体（Ｄａｋｏ，トラップ、フランス）により染色した。この抗体は、ヒト抗原に特異的であり、そしてそのマウス対応物には交差反応しない。免疫反応性をペルオキシダーゼをコンジュゲートされた抗体（パワービジョンキット、Ｉｍｍｕｎｏ  Ｖｉｓｉｏｎテクノロジーズ、デーリーシティー、カリフォルニア）により検出した。スライドはヘマトキシリンにより対比染色した。
【０１３３】
インビトロプレニル−トランスフェラーゼアッセイ
化合物Ａ及び他の薬剤のＦＴａｓｅ活性に対する効果を、ヒトの脳のサイトゾル由来のＦＴａｓｅ（ＡＢＳ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ，ウイルミントン、ドイツ）を標的酵素として用い、そして野生型ＣＡＡＸボックスを含む組換えヒトＨ−Ｒａｓ蛋白質（Ｂｉｏｍｏｌ，プリマウスミーティング、パナマ）を特異的基質として用いてインビトロでアッセイした。［３Ｈ］−ファルネシル化のためのインキュベーション混合物（２５μｌ）は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），５ｍＭジチオスレイトール、２０μＭ  ＺｎＣｌ２，４０ｍＭ  ＭｇＣｌ２，０．６μＭ［３Ｈ］−ファルネシルピロホスフェート（２２．３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（ＮＥＮ，ボストン、マサチューセッツ），４μＭの組換えＨ−Ｒａｓ及び１０μｇのＦＴａｓｅを含んだ。３７℃において６０分後に、１５０μｌの無水エタノールを添加することにより、反応を停止した。上記混合物を、次に、Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ  ＧＦ／Ｂマイクロプレート（Ｐａｃｋａｒｄ，ランジス、フランス）上で濾過し、そしてシンチレーションカウンティングの前にエタノールで６回洗浄した。５０μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ０を添加した後、プレートをＰａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐ  Ｃｏｕｎｔシンチレーションカウンターによりカウントした。ＧＧＴａｓｅＩ活性に対する薬剤の効果は、ヒトの脳由来のＧＧＴａｓｅＩ（ＡＢＳ試薬）を標的酵素として、そして変異したＣＡＡＸボックスを含むヒト組換えＨ−Ｒａｓ（ＣＶＬＬ）（Ｂｉｏｍｏｌ）を用いた類似の方法によりアッセイした。インキュベーション混合物は、４μＭの組換えＨ−Ｒａｓ，０．６μＭの［３Ｈ］−ゲラニルゲラニル−ピロホスフェート（１９．３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（ＮＥＮ）及び１００μｇのＧＧＴａｓｅＩを含んだ。ＧＧＴＩ−２８６をＧＧＴａｓｅＩ阻害アッセイの陽性対照として使用した。結果は、組換えＨ−Ｒａｓ蛋白質へのプレニルの取り込みの５０％を阻害するのに必要な薬剤の濃度として表現した（ＩＣ５０）。
【０１３４】
完全な細胞におけるファルネシルトランスフェラーゼ阻害の評価
完全な細胞でのファルネシルトランスフェラーゼに対する化合物Ａの効果を、ＡＴＣＣから購入したヒト膵臓カルシノーマ細胞系であるＭＩＡＰａｃａ細胞において評価した。
Ｈ−Ｒａｓ及びＮ−Ｒａｓの両者を内因性ファルネシルトランスフェラーゼの参照基質として調査した。全蛋白質抽出物を、増加する濃度の化合物Ａ（１−１００ｎＭ）を、陰性対照としての未処理細胞由来の抽出物と共に４８時間処理したＭＩＡＰａｃａ細胞から調製した。陽性対照はメバスタチン（３０μＭ）で処理された細胞から供給された。メバスタチンはＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤であり、ファルネシル代謝前駆体の合成をブロックする。細胞抽出物をＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル（１５％）により分離して、Ｈ−Ｒａｓ及びＮ−Ｒａｓに向けられたポリクローナル抗体を用いたウエスタンブロットにより分析した（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ハイデルベルグ、ドイツ）。ファルネシルトランスフェラーゼ阻害はＨ−Ｒａｓ及びＮ−Ｒａｓの非プレニル化形態の検出により間接に評価したが、わずかに高い分子量にシフトし、抗体とはより効率よく反応した。
【０１３５】
ＮＰＣ細胞生存性に対する薬剤効果の評価
細胞の生存性アッセイを、コートされないか（Ｃ６６６−１）又はポリＨＥＭＡでコートされた（Ｃ１５）９６ウエルプラスチックマイクロプレート中で実施した。各細胞系に関して、ウエルあたりに分配された細胞の数を最適化することにより、対数成長を保持しながらもっとも高い代謝活性を試験の終わりまで達成した。Ｃ１５及びＣ６６６−１細胞を、それぞれ、１０５及び３５  Ｘ  １０３／ウエルにて、１５０μｌの培養培地中で接種した。一晩の前インキュベーション培養の後に、化学治療用薬剤の連続希釈（５０μｌ；最終濃度５０ｎＭ  −  ５０μＭ）を４通りにして２５０μｌの容量まで添加した。試験された薬剤との７２時間のインキュベーション完了後に、細胞の生存性をＷＳＴ−１アッセイを用いて評価した（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ，フランス）。ＷＳＴ−１アッセイはミトコンドリアのデヒドロゲナーゼによるテトラゾリウム塩の分割に基づく。他の試験とは対照的に、それはマイクロウエルプレート中の細胞を洗浄する必要がなく、そしてスフェロイド培養と適合性である。細胞を、培養培地に加えられた１０μｌのＷＳＴ−１試薬と３から６時間、３７℃においてインキュベートした。プレートを次にＥＬＩＳＡリーダー（Ｄｙｎａｔｅｃｈ  ＭＲ７０００，ガーンジーチャンネルアイランド、ＵＳＡ）上で４９０ｎｍのフィルターを用いて読んだ。平均及び標準偏差は４通りのサンプルにて測定した。各化合物に関して、シグモイド曲線の直線部分に入る値は直線回帰分析に含まれ、そして５０％阻害濃度（ＩＣ  ５０）を評価するのに使用された。
【０１３６】
薬剤処理されたＮＰＣ細胞中のカスパーゼ活性の評価
カスパーゼ活性を、ＣａｓｐａＴａｇキットを用いて製造者の指示に従いフローサイトメトリーにより単一細胞レベルにて評価した（Ｑｕａｎｔｕｍ−Ａｐｐｌｉｇｅｎｅ，Ｉｌｌｋｉｒｃｈ，フランス）。この手法は、カルボキシフルオレセインで標識された細胞透過性の一般カスパーゼ阻害剤（ＶＡＤ−フルオロメチルケトン）を含んだ。この蛍光阻害剤は活性カスパーゼに不可逆的に結合するから、アポトーシス細胞においては選択的に保持される。アポトーシス誘導のため、Ｃ１５及びＣ６６６−１細胞を２４ウエルプレート中で１０６及び３  ｘ１０５細胞／ウエルにてそれぞれ接種し、一晩前インキュベートし、そして薬剤で４８時間処理した。このコンテクストにおいて、Ｃ１５をＰｏｌｙＨＥＭＡ上でインキュベートすることは不可能であったが、何故ならば、結果の細胞凝集物がフローサイトメトリーに適していなかったからであった。ヒト悪性腫瘍細胞を混在したマウス繊維芽細胞から識別するため、Ｃ１５細胞懸濁液を、アロ−Ｐｈｙｃｏ−Ｃｙａｎｉｎｅ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｍｅｙｌａｎ，フランス）にコンジュゲートさせた抗体ヒトＨＬＡ（ヒト白血球抗原）Ａ，Ｂ，Ｃによる追加の染色に供した。第１の工程において、Ｃ１５及びＣ６６６−１の両者を、それらの培養プレート中で、蛍光ＶＡＤ−ＦＭＡと共に、３００μｌの培養培地中で、１時間３７℃においてインキュベートした。細胞を次に洗浄してトリプシン処理した。Ｃ１５細胞をさらに抗−ＨＬＡ抗体とインキュベートした。最後に、カスパーゼ及びＨＬＡ蛍光の両方をＦＡＣＳキャリバーフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，フランクリンレイクス、ニュージャージー）を用いて分析した。
【０１３７】
ＰＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ）及びＴＲＡＦ１分割の評価
全細胞抽出物を、薬剤処理したのと対照のＣ１５及びＣ６６６−１細胞からＲＩＰＡ−ＳＤＳバッファー中で調製した。（Ｓｂｉｈ−Ｌａｍｍａｌｉ，Ｆ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  Ｅｐｓｔｅｉｎ  Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ：ｏｐｐｏｓｉｔｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＣＤ９５  ａｎｄ  ＣＤ４０  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５９：９２４−９３０，１９９９．）３０から５０μｇの全蛋白質抽出物を７．５％（ＰＡＲＰ）又は８−１６％勾配（ＴＲＡＦ１）ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上の電気泳動に供した。分離された蛋白質を、ホースラディッシュペルオキシダーゼ−コンジュゲート抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｌｅｓ  Ｕｌｉｓ，フランス）により示された（revealed）抗−ＰＡＲＰ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ボストン、マサチューセッツ）又は抗−ＴＲＡＦ−１（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ハイデルベルグ、ドイツ）抗体をプローブとするＩｍｍｏｂｉｌｏｎ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，フランス）に転写した。ＥＣＬ化学発光系により検出を実施した（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｌｅｓ  Ｕｌｉｓ，フランス）。Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚからの２種類の抗体をＴＲＡＦ１−分割の研究のために使用した：モノクローナルＨ−３及びＨ−１３２ポリクローナル；陽性対照はＣＤ９５−アゴニスト抗体、７Ｃ１１で２４時間処理されたＣ１５細胞により提供された（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，マルセイユ、フランス）。
【０１３８】
ＮＰＣ腫瘍系中のＥＢＥＲ’ｓの検出
Ｃ１５及びＣ６６６−１が潜在性ＥＢＶ−感染を保持することをチェックするために、ＥＢＥＲ’ｓ発現を両腫瘍系においてインサイチュハイブリダイゼーションにより検出した（図１Ａ及びＢ）（インビトロ継代４０のヌードマウスへの細胞注入により、Ｃ６６６−１異種移植片腫瘍をリフォームした）。予測されたとおり、ＥＢＥＲ’ｓ染色は本質的に核であった。ほとんどであるが全てではない悪性腫瘍細胞が陽性染色され、新鮮なＮＰＣ生検を用いた以前の報告と一致する観察である。（Ｗｕ，Ｔ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，Ａｂｕｎｄａｎｔ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＥＢＥＲ１  ｓｍａｌｌ  ｎｕｃｌｅａｒ  ＲＮＡ  ｉｎ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  ｄｉｓｔｉｎｃｔｉｖｅ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎ  ｆｏｒｍａｌｉｎ−ｆｉｘｅｄ  ｐａｒａｆｆｉｎ−ｅｍｂｅｄｄｅｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ，１３８：１４６１−１４６９，１９９１．）
【０１３９】
Ｃ１５及びＣ６６６−１増殖の評価
以前に報告されたとおり、Ｃ６６６−１細胞はインビトロにおいて堅実に増殖し、様々な種類のプラスティック容器において細胞単層として成長した。（Ｃｈｅｕｎｇ，Ｓ．Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ（Ｃ６６６−１）ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔｌｙ  ｈａｒｂｏｕｒｉｎｇ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８３：１２１−１２６，１９９９．）マウス繊維芽細胞による汚染の増加を回避するため、腫瘍を分散させたＣ１５をＰｏｌｙＨｅｍａマトリックスをコートされたマイクロプレートに接種して浮遊凝集物として生育させた。これらの凝集した細胞は、それらの重要なフラクション中のヒトＫｉ  ６７抗原の免疫細胞学検出により証明されたところによると、増殖したままであった（図１Ｃ）。さらに、３日連続培養の間のＷＳＴ低下の繰り返しの測定は、生存細胞の一致した堅実な増加を証明した（図１Ｄ）。Ｃ１５細胞の倍加時間は１．５日と見積もられた。同じプレートにおいて、プラスティックコーティングなしでは、Ｃ６６６−１細胞の倍加時間は約３．５日であった（図１Ｄ）。
【０１４０】
ＮＰＣ細胞に適用された慣用の薬剤のインビトロの短期間障害性
シス−プラチナム、ブレオマイシン、５ＦＵ，ドキソルビシン及びタキソールは、ＮＰＣ化学治療においてもっとも頻繁に使用される薬剤である。（Ａｌｉ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｈｕｎｔｉｎｇｔ），１４：１２２３−１２３０，２０００．）それらの短期間の細胞障害性効果を、インビトロにおいて、Ｃ１５及びＣ６６６−１細胞上で、ＷＳＴ低下に基づく細胞生存性アッセイを用いて、評価した。培養された細胞を様々な濃度の各治療剤の存在下で７２時間インキュベートした。表Ｉに示されるとおり、Ｃ１５及びＣ６６６−１の両方ともに、１μＭを下回る濃度においてドキソルビシンに対して非常に感受性であった。Ｃ６６６−１細胞はタキソールにも感受性が高かったが、Ｃ１５細胞は全体的にこの薬剤に対して耐性であっ。一方、Ｃ１５は、シスプラチナム（１μＭ  ＩＣ５０）の細胞障害性効果に中度に感受性であったが、Ｃ６６６−１細胞は５倍耐性であった。ブレオマイシン又は５−ＦＵの顕著な効果は、試験された濃度において何れの細胞系においても観察されなかった。
【０１４１】
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の特性決定
ドキソルビシンはＣ１５及びＣ６６６−１の両方に対して極めて活性であったが、試験された濃度においてはこれらの細胞系の中で広範囲のアポトーシスを誘導することが観察されなかった。よって、分子上標的とされた薬剤、特にファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（ＦＴＩ’ｓ）をドキソルビシンと共に使用することにより、その細胞障害性効果を増加させ、そしてアポトーシスを誘導しようとすることが仮定された。化合物Ａはペプチド模倣性のＦＴＩであり、ファルネシルトランスフェラーゼの高選択性であるようにデザインされたものである。この化合物の生物活性は、精製されたヒトプレニル−トランスフェラーゼの活性に対するその効果及び完全細胞中のｒａｓ−プロセシングのその阻害に関して最初にアッセイした。表ＩＩは、化合物Ａがインビトロにおけるヒト脳のＦＴａｓｅの有力な阻害剤であることを示す。ＩＣ５０値は、ナノモラーの範囲内であり、試験された公知のＦＴＩ化合物ＦＴＩ−２７７及びＢＩＭ−４６０６８に比べて優るとも劣らない。（Ｓｕｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｒａｓ  ＣＡＡＸ  ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ  ＦＴＩ  ２７６  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｂｌｏｃｋｓ  ｔｕｍｏｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ  ｏｆ  ａ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｗｉｔｈ  Ｋ−Ｒａｓ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐ５３  ｄｅｌｅｔｉｏｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ，５５：４２４３−４２４７，１９９５；Ｐｒｅｖｏｓｔ，Ｇ．Ｐ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｂｙ  ａ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ＢＩＭ−４６０６８．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８３：２８３−２８７，１９９９．）他の試験されたＦＴＩ’ｓとは対照的に、化合物ＡによるＧＧＴａｓｅ−Ｉに対する活性が１００μＭの濃度まで観察されなかったことから、そのＦＴａｓｅに対する高い選択性を示すことは注目に値する。化合物Ａの蛋白質−ファルネシル化に対する効果を、さらに、プレニル化−阻害剤のプロトタイプ標的細胞である完全なＭＩＡＰａｃａにおいて評価した。Ｈ−Ｒａｓ及びＮ−Ｒａｓは、ファルネシルトランスフェラーゼの古典的基質であり、共にＭＩＡＰａｃａ細胞中で発現されて変異していない。細胞をほんの５０ｎＭの化合物Ａと４８時間インキュベートしたときに、Ｈ−ＲａｓとＮ−Ｒａｓのファルネシル化の顕著な阻害が得られた。
【０１４２】
化合物Ａと組み合わせて使用された場合のＮＰＣ細胞に対するドキソルビシンの細胞障害性活性の増強
図２Ａに示すとおり、化合物Ａは単独で使用された場合にＣ１５及びＣ６６６−１細胞の両方に対してほんの限定された障害性しか有さなかった（ＩＣ５０＝１０μＭ）。しかしながら、ドキソルビシンの細胞障害性効果は化合物Ａと組み合わせたときに劇的に増強された。Ｃ１５細胞に関しては、相加的効果以上のものが、５００ｎＭ又は１μＭの濃度のドキソルビシン及び５μＭの化合物Ａに関して明らかであった。Ｃ６６６−１細胞に関しては、ドキソルビシンとの相乗効果を得るために、高濃度のＦＴＩ薬剤が必要であった。さらに、１及び２μＭのドキソルビシン濃度に関して相加的効果以上のものが観察された。対照的に、増強されたシスプラチン及びブレオマイシンの細胞障害性は試験された濃度の化合物Ａとの組み合わせにおいて観察されなかった。
【０１４３】
ドキソルビシン／化合物Ａの組み合わせの細胞障害性効果に対するアポトーシスの寄与
ドキソルビシン／化合物Ａの組み合わせとの４８時間のインキュベーションの後に、多数のＣ１５細胞が、集まり（round up）始め、それらの突起（processes）を収縮し始め、そして次に培養皿から離脱し始めた。Ｈｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２を用いた核染色下で、核アポトーシスに関連する典型的な変化−核凝縮及び断片化−がインキュベーションの４８時間目に検出され、そして７２時間にはより明確になった。そのような形態上の変化は、ドキソルビシン又は化合物Ａ単独により処理されたＣ１５細胞においては、はるかにはっきりしなかった。Ｃ１５細胞とは対照的に、核の形態上の顕著な変化は、ドキソルビシンと化合物Ａの両方の存在下でさえもＣ６６６−１細胞においては観察されなかったが、部分的クロマチン凝縮を伴ういくつかの核は記録された。４８時間の期間の処置の後に明白であったカスパーゼ活性化のフローサイトメトリー分析により、両方の薬剤による処理下にあるＣ１５細胞のアポトーシスがさらに証明された。最後に、ＰＡＲＰ分割をウエスタンブロットにより、一つの薬剤又は両方の連合により処理されたＣ１５細胞の蛋白質抽出物において分析した。組み合わせ処理のほんの２４時間後に、強いＰＡＲＰ分割が明らかであった。４８時間目には、ＰＡＲＰの完全な断片がほとんど検出可能であった。中度のＰＡＲＰ分割はドキソルビシン又は化合物Ａ単独により処理された細胞においても検出されたが、これらの実験条件においては、はるかに低いフラクションの蛋白質しか影響されなかった。化合物Ａとドキソルビシンを組み合わせて処理した場合でさえも、カスパーゼ活性化及びＰＡＲＰ分割はＣ６６６−１細胞において検出されなかった。
【０１４４】
化合物Ａ−ドキソルビシンの組み合わせにより処理されたＣ１５細胞におけるＴＲＡＦ１の分割
ドキソルビシン及び／又は化合物Ａにより処理されたＮＰＣ細胞をＴＲＡＦ１の分割に関して調査した。ＴＲＡＦ１は限定された組織分配を有するが、その発現がＥＢＶ−感染により正規の場所以外で誘導されるシグナリングアダプターである。（Ｍｏｓｉａｌｏｓ，Ｇ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ  ｖｉｒｕｓ  ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ＬＭＰ１  ｅｎｇａｇｅｓ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ．Ｃｅｌｌ，８０：３８９−３９９，１９９５．）ＴＲＡＦ１はＥＢＶ陽性ＮＰＣ細胞において強く発現されることが報告された。（Ａｒｄｉｌａ−Ｏｓｏｒｉｏ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｏｆ  ＬＭＰ１−ＴＲＡＦ３  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｇｌｙｃｏｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ−ｒｉｃｈ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｏｆ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ  ａｎｄ  ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，８１：６４５−６４９，１９９９．）一方、Ｌｅｏら（２００１）は、アポトーシス、特に死因の（death）受容体媒介性アポトーシスのみならずドキソルビシン誘導性アポトーシスを経た細胞においてＴＲＡＦ１がアスパラギン酸１６３において分割されることを報告した。（Ｌｅｏ，Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，ＴＲＡＦ１  ｉｓ  ａ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ｏｆ  ｃａｓｐａｓｅｓ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｕｍｏｒ  ｎｅｃｒｏｓｉｓ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−α  ｉｎｄｕｃｅｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，５５：８０８７−８０９３，２０００．）ＣＤ９５アゴニスト（７Ｃ１１）により２４時間処理されたＣ１５細胞を陽性対照として使用した；完全ＴＲＡＦ１の量の劇的な低下が対応する蛋白質抽出物中で観察された。同時に、Ｌｅｏら（前出）により特性決定された分割断片：断片Ｉ（２４ｋＤ，Ｈ−１３２と反応性）及びＩＩ（３０ｋＤ，Ｈ−３と反応性）の顕著な増加があった。ドキソルビシン又は化合物Ａを単独処理した細胞においては、ＴＲＡＦ１分子の修飾が観察されなかった。対照的に、断片Ｉ及びＩＩに類似の分割された断片の実質上の増加が、ドキソルビシン及び化合物Ａの組み合わせにより処理された細胞の抽出物において観察された。ＣＤ９５アゴニストと薬剤の組み合わせにより誘導された分割のパターンにはいくらかの違いがあった。分割された断片の視覚化に拘わらず、完全なＴＲＡＦ１の量は薬剤処理された細胞においてほんのわずかに減少した。さらに、分割された断片ＩＩは７Ｃ１１アゴニストよりもわずかに大きなサイズを矛盾なく有した。ＴＲＡＦ１はＣ６６６−１の中でも検出されたし、そしてＣＤ９５アゴニストの存在下での処理のもとでは容易に分割されたが、薬剤処理下では分割されなかった。この観察はアポトーシスプロセスの不在に一致する。
【０１４５】
他に定義しない限り、本明細書において使用された技術用語及び科学用語は、発明の属する分野の当業者により共通に理解される意味と同じである。また、本明細書において引用された全ての刊行物、特許刊行物、特許又は他のレファレンスは引用により本明細書に編入される。
【０１４６】
発明はその詳細な説明に関連して記載されたが、前記記載は発明の範囲を例示するものであって限定するものではないことを意図し、発明は特許請求の範囲により定義されることが理解されるべきである。
【０１４７】
【表７】
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【０１４８】
【表８】
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【図面の簡単な説明】
【０１４９】
【図１】ＮＰＣ腫瘍系の中のＥＢＥＲｓの検出及びインビトロにおけるＮＰＣ細胞増殖の評価。Ａ及びＢ：Ｃ１５（Ａ）及びＣ６６６−１（Ｂ）ＮＰＣ細胞により形成された異種移植片化された腫瘍の組織切片上のＥＢＥＲｓのインサイチュハイブリダイゼーション。（スケールバー：２０μＭ。）Ｃ：ＰｏｌｙＨｅｍａマトリックス上でインビトロにて７２時間生育させたＣ１５細胞のＫｉ  ６７免疫染色；細胞凝集物（平均サイズ１５０μＭ）をサイトスピンし、そして免疫染色前にアセトン（１０分／４℃）中で固定した。（スケールバー：１０μＭ。）Ｄ：連続ＷＳＴ−１アッセイによりインビトロにて証明されたＣ１５（実線）及びＣ６６６−１（破線）細胞の増殖。細胞は９６ウエルプレート中で１０５／ウエルにてＰｏｌｙＨｅｍａ（Ｃ１５）をコートされたプラスチック上で、及び３５  Ｘ  １０３／ウエルにてコーティングなしに（Ｃ６６６−１）接種した。ＷＳＴ−１反応を２４、４８及び７２時間実施して、４９０ｎｍにおける吸光度により反映される細胞生存性の進化を評価した。データは４通りの平均である（±標準偏差）。類似の結果は３つの異なる実験において得られた。
【図２】単独又はドキソルビシンとの組み合わせにおける化合物ＡのＮＰＣ細胞の生存性に対する効果。Ｃ１５及びＣ６６６−１細胞を、ＷＳＴ−１アッセイを用いた細胞生存性の評価の前に、９６ウエルプレート上で様々な濃度の薬剤の存在下で生育させた。観察された結果は、４通りの平均（±標準偏差）として報告し、そして３つの類似の実験の典型である。Ａ：様々な濃度の化合物Ａ単独によるＮＰＣ細胞の処理。Ｂ：ＮＰＣ細胞の様々な濃度のドキソルビシンによる処理であって、化合物Ａ，５μＭ（Ｃ１５）又は１０μＭ（Ｃ６６６−１）を伴うか又は伴わない。
【図３】化合物Ａと組み合わせたドキソルビシンにより処理したＣ１５細胞中の核断片化の誘導。核は、ヘキスト３３３４２染色により可視化した（スケールバー：１０μＭ）。Ａ：非処理細胞；Ｂ：化合物Ａ（５μＭ）と組み合わせたドキソルビシン（１μＭ）により４８時間処理した細胞；ほとんどの核が縮まり（矢印）、そしてクロマチン凝縮及び断片化を呈した（矢印の頭）。
【図４】化合物Ａと組み合わせたドキソルビシンにより処理したＣ１５細胞中のカスパーゼの誘導。Ｃ１５細胞をドキソルビシン（１μＭ）、化合物Ａ（５μＭ）又は両分子の組み合わせにより４８時間処理した。カスパーゼ活性の測定は蛍光カスパーゼ基質阻害剤（カルボキシフルオレセインにより標識されたＶＡＤ−フルオロメチルケトン）の選択的細胞内停留に基づいた。蛍光基質の停留は、非処理（グレーの線）又は処理（黒の線）のＣ１５においてフローサイトメトリーにより評価した。
【図５】化合物Ａと組み合わせたドキソルビシンにより処理したＣ１５細胞中のＰＡＲＰ−分割の誘導。Ｃ１５細胞をドキソルビシン（１μＭ）、化合物Ａ（５μＭ）又は両分子の組み合わせにより、示された時間処理した。対応する細胞溶解物（レーンあたり５０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離して、抗ＰＡＲＰモノクローナル抗体を用いるウエスタンブロットにより分析した。ＰＡＲＰの分割産物は８５ｋＤであり、ＣＤ９５アゴニスト−抗体７Ｃ１１により処理されたＣ１５細胞に由来する陽性対照の抽出物において示された。
【図６】化合物Ａと組み合わせたドキソルビシンにより処理したＣ１５細胞中のＴＲＡＦ１−分割の誘導。Ａ：Ｌｅｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）により報告されたＦａｓ−媒介性ＴＲＡＦ１−分割のダイアグラム。Ｈ−３モノクローナル抗体及びＨ−１３２ポリクローナル抗体の産生に使用される標的ペプチドの位置をハッチボックスにより示す。Ｈ−３により標的とされたペプチドはフラグメントＩＩの中に完全に含まれたが、Ｈ１３２により標的とされたペプチドは概してフラグメントＩと対応部分が同一線形上に並んだ（ｃｏ−ｌｉｎｅａｒ）。Ｂ：Ｃ１５細胞をドキソルビシン（１μＭ）、化合物Ａ（５μＭ）又は両者の組み合わせにより２４時間処理した。対照の細胞をＦａｓ−アゴニスト抗体７Ｃ１１により処理した。抗−ＴＲＡＦ−１抗体を用いたウエスタンブロット分析の前に、細胞溶解物（レーンあたり５０μｇの蛋白質）を８−１６％のＳＤＳ−ＰＡＧＥ直線勾配上で分離した。両方の抗体が４６ｋＤに主バンドを検出した。小さなサイズの断片に相当する追加のバンドが目視され、主に７Ｃ１１又はドキソルビシンと化合物Ａの組み合わせで処理されたサンプル中であった。７Ｃ１１により処理された細胞の抽出物中では、これらの小さな断片が２９ｋＤ（Ｈ−３）及び２４ｋＤ（Ｈ−１３２）の見かけ上の分子量を有し、Ｌｅｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）に報告されたＴＲＡＦ１断片のサイズに匹敵した。類似の結果が３つの類似の実験において得られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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