(57)【要約】本発明は神経障害の分野に属する。本発明は、脱髄疾患の処置及び／又は予防のための医薬の製造のためのインターフェロン（ＩＦＮ）と組み合わせた式（Ｉ）の化合物の使用に関する。特に、本発明は、脱髄疾患、例えば多発性硬化症の処置及び／又は予防のためのリバビリンとＩＦＮ−ベータの組み合わせの使用に関する。
2006518725.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2006518725.tif 000012
（Ｒ1は、水素、アシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルファニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル、Ｃ1−Ｃ6スルホニル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、あるいはＣ3−Ｃ8員ヘテロシクロアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアリール、Ｃ1−Ｃ6アルキルヘテロアリール、任意に１〜３個のヘテロ原子を含むＣ1−Ｃ6アルキルシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ6−アルケニルアリール又は−ヘテロアリール、Ｃ2−Ｃ6−アルキニルアリール又は−ヘテロアリール、スルホニル若しくはホスホリル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択され；
Ｒ2は、水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択され；
Ｒ3は、水素、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択され；
ＡはＮ又はＣＲ4であり、
ここで、Ｒ4はＨ又はＮＲ5Ｒ5’であり、
ここで、Ｒ5及びＲ5’は、水素、アシル、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ2−Ｃ6アルケニル、Ｃ2−Ｃ6アルキニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルファニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルホニル、Ｃ1−Ｃ6アルキルスルホニルアミノアリール、アリール、ヘテロアリール、Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、又はヘテロシクロアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルキルアリール、Ｃ1−Ｃ6アルキルヘテロアリール、任意に１〜３個のヘテロ原子を含むＣ1−Ｃ6アルキルシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ6−アルケニルアリール又は−ヘテロアリール、Ｃ2−Ｃ6−アルキニルアリール又は−ヘテロアリール、スルホニル若しくはホスホリル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から互いに独立して選択され；
Ｒ3とＲ5は一緒に複素環を形成してもよい）の化合物の使用であって、
脱髄疾患の処置及び／又は予防のための薬物の製造のための、同時に、連続的に又は別々に用いるためのインターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−β）、あるいはそのイソ型、突然変異タンパク質、融合タンパク質、機能的誘導体、活性画分又は塩と組み合わせての使用。
【請求項２】
Ｒ1がＨである、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
Ｒ2がＯＨである、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
Ｒ3がＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
ＡがＮである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
Ｒ3とＲ5が６員の複素環を形成する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７】
複素環がピリミジン又はピリミジン−オンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項８】
前記化合物が１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（リバビリン）である、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記脱髄疾患が多発性硬化症である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記融合タンパク質がＩｇ融合体を含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
前記機能的誘導体が、アミノ酸残基上に１又は複数の側鎖として生じる１又は複数の官能基に結合した少なくとも１つの部分を含んで成る、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
前記部分がポリエチレン部分である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記ＩＦＮ−βが約１〜５０μｇ／人／日、又は約１０〜３０μｇ／人／日、又は約１０〜２０μｇ／人／日の投与量で投与される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記ＩＦＮ−βが毎日又は一日おきに投与される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
前記ＩＦＮ−βが週二回又は三回投与される、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記ＩＦＮ−βが皮下投与される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記ＩＦＮ−βが筋肉内投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記化合物が、約１００〜２０００ｍｇ／人／日、又は約４００〜１２００ｍｇ／人／日、又は約８００〜１０００ｍｇ／人／日、又は約１０００〜１２００ｍｇ／人／日の投与量で投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１９】
前記化合物が経口投与される、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は神経障害の分野に属する。本発明は、脱髄疾患の処置及び／又は予防のための医薬の製造のためのインターフェロン（ＩＦＮ）と組み合わせた式（Ｉ）の化合物
【化１】
2006518725.tif 000003
の使用に関する。特に、本発明は、脱髄疾患、例えば多発性硬化症（ＭＳ）の処置及び／又は予防のためのリバビリンとＩＦＮ−ベータの併用に関する。
【背景技術】
【０００２】
脱髄疾患は、神経系のミエリン鞘に関する障害である。多くの神経線維を覆うミエリン鞘は、若年期に形成されるリポタンパク質層から構成される。ミエリンは、ＣＮＳの乏突起膠細胞により形成され、そして軸索に沿った神経インパルスの伝達を促進する。
【０００３】
多くの先天性代謝障害（例えば、フェニルケトン尿症、他のアミノ酸尿症；テイ・サックス病、ニーマン・ピック病、及びゴーシェ病；フルラー症候群；クラッベ病及び他の大脳白質萎縮症）は、主にＣＮＳにおけるミエリン鞘の発達に影響を及ぼす。生化学的な欠損が補正又は補填されえない限り、永久的で、しばしば広範囲な神経学的な欠損が生じる。
【０００４】
晩年の脱髄は多くの神経障害の特徴であり；それは、局所的損傷、虚血、毒性物質、又は代謝障害に起因する神経又はミエリンに対する損傷から生じることがある。広範なミエリン消失は通常、軸索変性としばしば細胞体変性が続き，どちらも非可逆的なことがある。しかし，多くの場合でミエリン再生が生じ，神経機能の修復，再生，及び完全回復が急速に起こる。回復はしばしば多くの末梢神経障害の特徴である節性脱髄後に生じ，この過程により多発性硬化症（ＭＳ）の再燃及び寛解が説明されうる。中枢神経脱髄（すなわち、脊髄，脳，又は視神経のもの）は原発性脱髄性疾患の最たるものであり、その原因は不明である。最もよく知られている脱髄疾患がＭＳである（後述参照）。
【０００５】
更に、脱髄疾患は以下のものを含んで成る：
急性播種性脳脊髄炎。血管周囲性ＣＮＳの脱髄を特徴とし、自然発生的に生じることがあるが，通常ウイルス感染やウイルス予防接種に続発する； 
ウイルスワクチン接種後の急性炎症性末梢ニューロパシー又はギラン-バレー症候群。これらは末梢構造にだけ影響を及ぼす。
副腎白質ジストロフィ及び副腎脊髄神経障害。これらは、副腎機能不全及び神経系の広範囲の脱髄を特徴とするまれなX染色体性劣性代謝性障害である。
レーバー遺伝性視神経萎縮症及び関連のミトコンドリア障害。これらは主に中心視覚の両側性喪失を特徴とし、ＭＳの視神経炎に似ていることがある；並びに
ＨＴＬＶ関連ミエロパシー。ヒトT細胞ウイルスの感染に伴う遅進性脊髄疾患で，両下肢の痙性脱力を特徴とする。
【０００６】
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳及び脊髄の播種性脱髄斑を特徴とする遅進性の中枢神経疾患で，多発性で様々な神経症候を発現し，通常寛解と再燃を伴う(The Merck Manual Home Edition, www.merck.comを参照のこと)。 
【０００７】
原因は不明だが，現時点で特定の機構を示唆する幾つかの手がかりにより免疫学的異常が疑われている。仮説の原因には，遅発性又は潜在性のウイルスによる感染、及び酵素によるミエリン溶解がある。ＩｇＧは通常ＣＳＦにおいて増大し、そして増大した力価は種々のウイルス、例えば麻疹と関連している。これらの知見並びに報告されているＨＬＡアロタイプ及びＴ細胞数の変化との関連の重要性は不明であり、そしてその証拠はやや矛盾している。家族発生率の高さは遺伝感受性であることを示唆しており、女性は男性と比べてややより頻繁に発症する。環境因子が存在しているようである。発症年齢が通常２０〜４０歳であるば、ＭＳは患者が生後１５年を過ごした地理的地域と関連しており，１５歳以降の転居は危険率を変えるものではない。
【０００８】
乏突起神経細胞の破壊と血管周囲炎症を伴う脱髄の斑又は島は、ＣＮＳを通じて広まり、主に側索，後索（特に頸部及び胸部），視神経，及び脳室近傍の白質は好発部位である。中脳，橋，及び小脳の神経路も侵され，そして大脳及び脊髄の灰白質も侵されることがある。
【０００９】
通常，細胞体と軸索は，特に初期の病巣では保全されている。後に，軸索，特に長経路が破壊されることがあり、そして線維性神経膠症が神経路を「硬化」した外観にする。初期及び後期両方の病変が同時に見られることがある。。ミエリンの脂質及びタンパク質成分の化学変化が班の内部や周囲において証明されている。
【００１０】
寛解と反復する再燃を伴うＣＮＳ機能不全の様々な症状及び徴候が前記疾患を特徴付ける。最も一般的な主症状は，１又は複数の体肢，体幹，一側顔面の異常感覚；下肢又は手の麻痺や巧緻運動障害；あるいは視覚障害，例えば部分盲と片眼の痛み（球後視神経炎）、視覚のかすみ，あるいは暗点である。他の一般的な初期症状としては，複視を引き起こす眼筋麻痺（球後視神経炎），１又は複数の体肢の一時的弱体，肢の軽度の硬直又は異常な疲労感，軽い歩行障害，膀胱制御困難，めまい，並びに軽微な情緒障害がある。これらは全て散在性のＣＮＳの関与を示唆しており、そして、しばしば疾患が認識される数カ月ないし数年前に発現している。
【００１１】
経過は非常に多様で予測困難であり，多くの患者において弛張性である。最も重症の場合を除いて，生命の期間が短くなることはおそらくない。当初、特に疾患が球後視神経炎から開始する場合，数カ月又は数年の寛解が発症を引き離すことがある。寛解は10年以上続くことがある。しかし，患者によっては頻繁に発作が再発し，そして急速に再起不能となる。少数，特に中年期発症の男性患者の場合、経過が急速に進行することがある。発熱又は環境からの過度の熱に曝されることが，ときに症状を悪化させる。 
【００１２】
診断は間接的に，臨床的及び検査上の特徴から演繹的に行われる。MRIは最も感受性の高い画像診断技術であり，斑を示すことができる。ガドリニウム造影増強法は、古い脳斑から活性炎症領域を際立たせることができる。造影増強CTスキャンでＭＳの病変がみられることがあるあり、二倍量のヨードを投与し、そしてスキャニングを遅らせることで（二倍投与遅動CTスキャン）が感受性が増加することがある。
【００１３】
ＣＳＦは患者の大部分で異常である。ＩｇＧは１３％を超すことがあり、そしてリンパ球及びタンパク質含量が若干増大することがある。血液脳関門内でのＩｇＧ合成を示すオリゴクローナルなバンドが，９０％超のＭＳの患者のＣＳＦのアガロース電気泳動によって検出されることがあるが，これらのバンドがないということがＭＳを除外するわけではない。ＩｇＧレベルは疾患の重症度と相関関係にある。ミエリン塩基性タンパク質が脱髄活性時に上昇することがある。
【００１４】
自然寛解と変動する症状が治療評価を困難にする。コルチコステロイドは主要な治療法である。それらは発作間の症状出現期を短くするが，長期間にわたる障害に明らかに作用することはない。急性視神経炎を示す患者は，高投与静注コルチコステロイドによってＭＳの開始を遅らせることができる。
【００１５】
より重症な進行性の型のために免疫抑制薬（メトトレキサート，アザチオプリン，シクロホスファミド，クラジリビン）が使用されることがある。インターフェロンβによる免疫調節治療はＭＳの再発の頻度を低下させる。尚も研究中の他の有望な治療法には、他のインターフェロン、経口ミエリン、及びガラティラメルがあり、これは身体が自分自身のミエリンへの攻撃にされされないようにするのを助ける。ガラティラメルはミエリン塩基性タンパク質と類似性を有する合成コポリマーであり、そして毎日皮下注射で投与される。その主な作用は、ミエリンに対する免疫応答を抑制して免疫寛容を促進すると考えられている(Clegg and Bryant, 2001)。
【００１６】
インターフェロンはサイトカインであり、すなわち、細胞間のメッセージを伝達し、そして感染を引き起こす微生物を破壊するのを助け、あらゆる結果として生じる損傷を修復することにより免疫系で重要な役割を果たす可溶性タンパク質である。インターフェロンは感染細胞で天然に分泌され、そして１９５７年に最初に同定された。それらの名前は、それらがウイルスの複製及び産生に「干渉(interfere)」するという事実に由来する。
【００１７】
インターフェロンは抗ウイルス活性及び抗増殖性活性の両方を示す。生化学的及び免疫学的特性を基に、天然のヒトインターフェロン は、３つの主要なクラスに分類される：インターフェロンα(白血球)、インターフェロンβ(線維芽細胞)及びインターフェロンγ(免疫)。α-インターフェロンは現在、毛様細胞性白血病、性病疣、カポシ肉腫(後天性免疫不全症候群(AIDS)患者が通常罹患する癌)、並びに慢性非-A非-B型肝炎の治療のために、米国及び他の国々において承認されている。
【００１８】
更にインターフェロン（ＩＦＮ）は、ウイルス感染に反応して身体で産生される糖タンパク質である。これらは、保護された細胞におけるウイルス複製を阻害する。比較的小さい分子量のタンパク質から構成されるＩＦＮは、驚くべきことにそれらの作用は非特異的であり、すなわち、ひとつのウイルスにより誘導されたＩＦＮは、広範な他のウイルスにも効果的である。しかし、これらは種特異性であり、すなわちひとつの種により産生されたＩＦＮは、同じ種又は密に関連した種の細胞において抗ウイルス活性を刺激するのみである。ＩＦＮは、それらの抗腫瘍及び抗ウイルス活性を発揮するサイトカインの第一群であった。
【００１９】
これら３つの主要なＩＦＮは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γと称されている。このようなＩＦＮの主な種類は、最初にそれらの細胞起源(白血球、線維芽細胞又はＴ細胞)に従い分類された。しかし、数種類がひとつの細胞により作成され得ることが明らかになりつつある。従って現在、白血球ＩＦＮはＩＦＮ−α、線維芽細胞ＩＦＮはＩＦＮ−β及びＴ細胞ＩＦＮはＩＦＮ−γと称されている。更に第四の型のＩＦＮ、「Namalwa」細胞株(バーキットリンパ腫に由来)において産生されたリンパ芽球ＩＦＮも存在し、これは白血球ＩＦＮと線維芽細胞ＩＦＮの混合物を生成しているようである。
【００２０】
インターフェロン単位又はインターフェロンの国際単位（国際単位の場合、Ｕ又はＩＵ）は、ウイルス損傷に対して細胞の５０％を保護するのに必要な量として定義されたＩＦＮ活性の測定値として報告されている。生物活性を測定するのに使用されうるアッセイ葉、既述の細胞変性効果阻害アッセイである(Rubinstein, et al. 1981 ;Familletti, P. C. , et al., 1981)。インターフェロンのためのこの抗ウイルスアッセイにおいて、約１ユニット／ｍｌのインターフェロンは、５０％の細胞変性効果を生み出すのに必要な量である。この単位は、National Institutes of Health (Pestka, S. 1986)により提示されているＨｕ−ＩＦＮベータの国際的な参照標準に関して決定されている。
【００２１】
各クラスのＩＦＮは、複数の異なる種類を含む。ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γは各々、単独の遺伝子産物である。
【００２２】
ＩＦＮ−αとして分類されるタンパク質は、約１５の型を含む最も多様な群である。９番染色体上に、少なくとも２３のメンバーを含む、ＩＦＮ−α遺伝子のクラスターが存在し、その中の１５のメンバーは、活性があり且つ転写されている。成熟型ＩＦＮ−αはグリコシル化されない。
【００２３】
ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βは、全て同じ長さ（１６５又は１６６アミノ酸）であり、同様の生物学的活性を伴う。ＩＦＮ−γは、１４６個の長さのアミノ酸であり、かつα及びβクラスほど密には似ていない。ＩＦＮ−γのみが、マクロファージを活性化するか、もしくはキラーT細胞の成熟を誘導することができる。これらの新規な治療薬の型は、時に生物学的反応修飾物質(BRM)と称されており、これは、それらが腫瘍に対する生物の反応に作用して免疫調節を介する認識に影響を及ぼすためである。
【００２４】
ヒト線維芽細胞インターフェロン（ＩＦＮ−β）は、抗ウイルス活性を有し、かつ更に天然のキラー細胞を新生物細胞に対して刺激することができる。これは、ウイルスにより誘導された約20,000Da及び二本鎖RNAのポリペプチドである。Derynkら(Derynk R.ら、1980)は、組換えDNA技術によりクローニングされた、線維芽細胞インターフェロン遺伝子のヌクレオチド配列から、このタンパク質の完全なアミノ酸配列を推定した。これは、１６６アミノ酸長である。
【００２５】
Shepardら(1981)は、その抗ウイルス活性を無効にする塩基８４２（１４１位でのCysがTyrとなる）の突然変異、並びにヌクレオチド1119-1121の欠失を伴う変異体クローンを説明している。
【００２６】
Markら(1984)は、１７位のCysがSerとなるアミノ酸の切り替えを生じるよう、塩基469(T)を(A)で置換することにより、人工的突然変異を挿入した。得られたＩＦＮ−βは、「天然の」ＩＦＮ−βと同様の活性があり、かつ長期保存(-70℃)の期間安定していることが報告されている。
【００２７】
Rebif（登録商標）(組換えヒトインターフェロンβ)は、多発性硬化症(MS)のインターフェロン療法において最も新しく開発され、かつ治療において著しい進歩を示している。Rebif（登録商標）は、哺乳類細胞株において産生されたインターフェロン（ＩＦＮ）β１aである。一週間に三回皮下から投与されたインターフェロンβ−１ａが再発寛解型多発性硬化症（ＲＲ−ＭＳ）の治療において有効であることが確証された。インターフェロンβ−１ａは、再発の回数及び重症度を低下させ、そしてＭＲＩで測定した場合当該疾患の苦しみ及び疾患活動性を低下させることによりＭＳの経過に長期間ポジティブに作用しうる(Study Group, 1998)。
【００２８】
リバビリン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）は、初めて合成された広範なスペクトルの抗ウイルスヌクレオシドであり、Merck Index第１１版に化合物番号８１９９として記載されている、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の競合阻害剤である。これは、例えばICN Pharmaceuticals,Inc., Costa Mesa, Californiaから市販されている。リバビリンは、米国特許第４，１３８，５４７号又は米国特許第３，９９１，０７８号に記載のように調製されうる。その製造法及び製剤は米国特許第４，２１１，７７１号に記載されている。
【００２９】
リバビリン投与に伴う主な毒性は、処置の中止の際の可逆性の用量依存性貧血である(Di Bisceglie AM et al., 1992; Jarvis, S. et al., 1998)。リバビリンはまた、細胞増殖の遅れを誘導することが知られている(Joksic G. et al., 2000)。抗ウイルス治療及び抗新生物治療において使用される多数の他のトリアゾール型のヌクレオシド類似体は、低レベルのＩＭＰＤＨ選択性を有することが知られており、長期の治療及び／又は比較的多い投与量での治療を脅かす。
【００３０】
これまでのところ、リバビリンは、呼吸器合胞体ウイルス(Hall CB et al., 1985)、ラッサ熱ウイルス(McCormick JB, et al., 1986)、インフルエンザ(Togo Y, McCracken EA. , 1976)及びＣ型肝炎(Reichard O, et al., 1991 ; Di Bisceglie AM et al., 1992;)を含むウイルス感染を処置するための単剤療法に広範に使用されている。また、リバビリンとインターフェロンアルファ（ＩＦＮ−α）の組み合わせは、リバビリン単独よりもＣ型肝炎の処置に有効であることが明らかとなっている(Brillanti s., et al., 1994)。その直接的な抗ウイルス剤としての周知の役割に加え、リバビリンはまた免疫調節的な特性を示す(Hultgren C. et al., 1998; Tam RC et al., 1999)。
【００３１】
EP11329393及びW001/68034には、リバビリン類似体（Ｌ異性体、レボビリン）の合成及び感染、例えばＢ型肝炎ウイルスの感染、寄生虫の繁殖、例えば、原生動物又は蠕虫の繁殖、ウイルスにより生じる新生物、例えばガン又は腫瘍、あるいは自己免疫疾患、例えば、関節炎、乾癬又は多発性硬化症、の処置のための単独での、あるいは抗ウイルス剤（例えば、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ガンマ、リバビリン、アシクロビル）、抗真菌剤、抗腫瘍剤、皮膚病薬、片頭痛用製剤又はステロイドとの組み合わせでの使用、が記載されている。
【００３２】
WO00/30656には、リバビリンと神経栄養性因子、例えばＮＧＦ（神経成長因子）又はＦＧＦ（線維芽細胞成長因子）との組み合わせを用いた神経系疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症及びハンチントン病の処置方法が記載されている。
【００３３】
リバビリンとＩＦＮ−βとの組み合わせによる脱髄疾患の処置はこれまで当業界で考えられていなかった。
【００３４】
本発明の要約
本発明は、式（Ｉ）
【化２】
2006518725.tif 000004
（ここで、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3及びＡは、以後の記載において詳細に説明する）の化合物の使用であって、脱髄疾患の処置及び／又は予防のための薬物の製造のための、同時に、連続的に又は別々に用いるためのインターフェロン（ＩＦＮ）、あるいはそのイソ型、突然変異タンパク質、融合タンパク質、機能的誘導体、活性画分又は塩と組み合わせての使用に関する。
【００３５】
本発明の詳細な説明
本発明は、脱髄疾患の処置及び／又は予防のための薬物の製造のための、同時に、連続的に又は別々に用いるためのインターフェロン（ＩＦＮ）、あるいはそのイソ型、突然変異タンパク質、融合タンパク質、機能的誘導体、活性画分又は塩と組み合わせての式（Ｉ）
【化３】
2006518725.tif 000005
の化合物の使用に関する。
【００３６】
式（Ｉ）内の置換基を以下定義する：
【００３７】
Ｒ1は、水素、アシル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルケニル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルキニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアルコキシ、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルスルファニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6スルホニル、アリール、ヘテロアリール、非置換又は置換Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、あるいは非置換又は置換Ｃ3−Ｃ8員ヘテロシクロアルキル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアリール、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルヘテロアリール、任意に１〜３個のヘテロ原子を含む非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルシクロアルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6−アルケニルアリール又は−ヘテロアリール、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6−アルキニルアリール又は−ヘテロアリール、スルホニル若しくはホスホリル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択される。
【００３８】
Ｒ2は、水素、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルケニル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルキニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択される。
【００３９】
Ｒ3は、水素、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルケニル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルキニル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から選択される。
【００４０】
ＡはＮ又はＣＲ4である。
【００４１】
Ｒ4はＨ又はＮＲ5Ｒ5’である。
【００４２】
Ｒ5及びＲ5’は、水素、アシル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルケニル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6アルキニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノカルボニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアルコキシ、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルスルファニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルスルホニル、アリール、ヘテロアリール、非置換又は置換Ｃ3−Ｃ8シクロアルキル、あるいは非置換又は置換Ｃ3−Ｃ6員ヘテロシクロアルキル、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルアリール、非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルヘテロアリール、任意に１〜３個のヘテロ原子を含む非置換又は置換Ｃ1−Ｃ6アルキルシクロアルキル、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6−アルケニルアリール又は−ヘテロアリール、非置換又は置換Ｃ2−Ｃ6−アルキニルアリール又は−ヘテロアリール、スルホニル若しくはホスホリル、を含んで成る、あるいはそれらから成る群から互いに独立して選択される；
【００４３】
Ｒ3とＲ5は一緒に複素環を形成することがある。
【００４４】
以下の段落は、明示的に記載した他の定義がより広い定義を提供しない限り、本発明で使用する化合物を構成し、且つ本明細書及び特許請求の範囲を通じて一様に適用されることが意図される種々の化学的部分の定義を提供する。
【００４５】
「アシル」は、基-C(O)Rを意味し、ここでRは「C1-C6アルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」を含む。
【００４６】
「C1-C6アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する１価のアルキル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、tert-ブチル、n-ヘキシルなどの基により例示される。
【００４７】
「C2-C6アルケニル」は、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ又は２つのアルケニル不飽和部位を有するアルケニル基を意味する。好ましいアルケニル基には、エテニル（-CH=CH2）、n-2-プロペニル（アリル、-CH2CH=CH2）などが含まれる。
【００４８】
「C2-C6アルキニル」は、好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、かつ少なくとも１つ又は２つのアルキニル不飽和部位を有するアルキニル基を意味し、好ましいアルキニル基にはエチニル（-C≡CH）、プロパルギル（-CH2C≡CH）などが含まれる。
【００４９】
「アミノカルボニル」は、基−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’意味し、ここで、各Ｒ，Ｒ’は独立してハロゲン又はC1-C6アルキル又はアリール又はヘテロアリール又は「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」を含む。
【００５０】
「C1-C6アルキルアミノカルボニル」は、アミノカルボニル置換基を有するC1-C6アルキル基、例えば２−（ジメチルアミノカルボニル）エチルなどを意味する。
【００５１】
「アミノ」は、各Ｒ，Ｒ’が独立して水素又は「C1-C6アルキル」又は「アリール」又は「ヘテロアリール」又は「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」又は「シクロアルキル」又は「ヘテロシクロアルキル」であり、且つＲ及びＲ’が、それらが結合する窒素原子と一緒に、３〜８員のヘテロシクロアルキル環を任意に形成しうる基−ＮＲＲ’意味する。
【００５２】
「C1-C6アルキルアミノ」は、アミノ置換基を有するC1-C5アルキル基、例えば２−（１−ピロリジニル）エチルなどを意味する。
【００５３】
「C1-C6アルキルアルコキシ」は、アルコキシ置換基を有するC1-C6アルキル基、例えば２−エトキシエチルなどを意味する。
【００５４】
「C1-C6アルキルスルファニル」は、スルファニル置換基を有するC1-C5アルキル基、例えば２−（エチルスルファニル）エチルなどを意味する。
【００５５】
「C1-C6アルキルスルフィニル」は、スルフィニル置換基を有するC1-C5アルキル基、例えば２−（メチルスルフィニル）エチルなどを意味する。
【００５６】
「C1-C6アルキルスルホニル」は、スルホニル置換基を有するC1-C5アルキル基、例えば２−（メチルスルホニル）エチルなどを意味する。
【００５７】
「アリール」は、単一の環（例えばフェニル）又は複数の縮合環（例えばナフチル）を有する６〜14個の炭素原子の不飽和芳香炭素環基を意味する。好ましいアリールには、フェニル、ナフチル、フェナントレニルなどが含まれる。
【００５８】
「ヘテロアリール」は、単環式複素環式芳香族、又は２環式もしくは３環式縮合複素環式芳香族基を意味する。複素環式芳香族基の具体例には、任意に置換されたピリジル、ピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、1,2,3-トリアゾリル、1,2,4-トリアゾリル、1,2,3-オキサジアゾリル、1,2,4-オキサジアゾリル、1,2,5-オキサジアゾリル、1,3,4-オキサジアゾリル、1,3,4-トリアジニル、1,2,3-トリアジニル、ベンゾフリル、[2,3-ジヒドロ]ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンゾトリアゾリル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、3H-インドリル、ベンズイミダゾリル、イミダゾ[1,2-a]ピリジル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、キノリジニル、キナゾリニル、フタラジニル、キノキサリニル、シノリニル、ナフチリジニル、ピリド[3,4-b]ピリジル、ピリド[3,2-b]ピリジル、ピリド[4,3-b]ピリジル、キノリル、イソキノリル、テトラゾリル、5,6,7,8-テトラヒドロキノリル、5,6,7,8-テトラヒドロイソキノリル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、キサンテニル又はベンゾキノリルが含まれる。
【００５９】
「C3-C8シクロアルキル」は、３〜８個の炭素原子を有する飽和又は部分的に不飽和の炭素環を意味する。好ましいシクロアルキルには、シクロペンチル、シクロヘキシル、ノルボミル(norbomyl)などが含まれる。
【００６０】
「ヘテロシクロアルキル」は、最大３個の炭素原子がＯ、Ｓ、ＮＲ（Ｒは水素又はメチルとして定義される）から成る群から選択されるヘテロ原子で置換されている、上記定義に従うC3-C8シクロアルキル基を意味する。好ましいヘテロシクロアルキルには、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、１−メチルピペラジン、モルホリン等が含まれる。
【００６１】
「C1-C6アルキルアリール」は、アリール置換基、例えばベンジル、フェネチルなどを有するC1-C6アルキル基を意味する。
【００６２】
「C1-C6アルキルヘテロアリール」は、ヘテロアリール置換基、例えば２−フリルメチル、２−チエニルメチル、２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチルなどを有するC1-C6アルキル基を意味する。
【００６３】
「C1-C6アルキルシクロアルキル」は、シクロアルキル置換基、例えばシクロヘキシルメチル、シクロペンチルプロピルなどを有するC1-C6アルキル基を意味する。
【００６４】
「C2-C6アルケニルアリール」は、アリール置換基、例えば２−フェニルビニルなどを有するC2-C6アルケニル基を意味する。
【００６５】
「C2-C6アルケニルヘテロアリール」は、ヘテロアリール置換基、例えば２−（３−ピリジニル）ビニルなどを有するC2-C6アルケニル基を意味する。
【００６６】
「C2-C6アルキニルアリール」は、アリール置換基、例えばフェニルエチニルなどを有するC2-C6アルキニル基を意味する。
【００６７】
「C2-C6アルキニルヘテロアリール」は、ヘテロアリール置換基、例えば２−チエニルエチニルなどを有するC2-C6アルキニル基を意味する。
【００６８】
「スルファニル」は、基−Ｓ−Ｒを意味し、ここで、ＲはＨ、「C1-C6アルキル」、ハロゲンで置換された「C1-C6アルキル」、例えば−ＳＯ−ＣＦ3基、「C2-C6アルケニル」、「C2-C6アルキニル」、「C3-C8シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」、「C2-C6アルケニルアリール」、「C2-C6アルケニルヘテロアリール」、「C2-C6アルキニルアリール」、「C2-C6アルキニルヘテロアリール」、「C1-C6アルキルシクロアルキル」、「C1-C6アルキルヘテロシクロアルキル」を含む。好ましいスルファニル基には、メチルスルファニル、エチルスルファニルなどが含まれる。
【００６９】
「スルホニル」は、基「−ＳＯ2−Ｒ」を意味し、ここで、Ｒは、Ｈ，「アリール」、「ヘテロアリール」、「C1-C6アルキル」、ハロゲンで置換された「C1-C6アルキル」、例えば−ＳＯ2−ＣＦ3基、「C2-C6アルケニル」、「C2-C6アルキニル」、「C3-C8シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」、「C2-C6アルケニルアリール」、「C2-C6アルケニルヘテロアリール」、「C2-C6アルキニルアリール」、「C2-C6アルキニルヘテロアリール」、「C1-C6アルキルシクロアルキル」、「C1-C6アルキルヘテロシクロアルキル」から選択される。
【００７０】
「スルフィニル」は、基「−Ｓ（Ｏ）−Ｒ」を意味し、ここで、Ｒは、「C1-C6アルキル」、ハロゲンで置換された「C1-C6アルキル」、例えば−ＳＯ−ＣＦ3基、「C2-C6アルケニル」、「C2-C6アルキニル」、「C3-C8シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」、「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」、「C2-C6アルケニルアリール」、「C2-C6アルケニルヘテロアリール」、「C2-C6アルキニルアリール」、「C2-C6アルキニルヘテロアリール」、「C1-C6アルキルシクロアルキル」、「C1-C6アルキルヘテロシクロアルキル」から選択される。
【００７１】
「ホスホリル」は、基−ＰＯＲＲ’を意味し、ここで、それぞれＲ，Ｒ’は独立して水素、ＯＨ、アルコキシ、アルキルである。
【００７２】
「アルコキシ」は、基-O-Rを意味し、ここでRは「C1-C6アルキル」又は「アリール」又は「ヘテロアリール」又は「C1-C6アルキルアリール」又は「C1-C6アルキルヘテロアリール」を含む。好ましいアルコキシ基には、例としてメトキシ、エトキシ、フェノキシなどが含まれる。
【００７３】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素原子を意味する。
【００７４】
「置換又は非置換」：個々の置換基の定義により特に制限されない限り、「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、および「ヘテロアリール」などの上記基は、「C1-C6アルキル」、「C2-C6アルケニル」、「C2-C6アルキニル」、「シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「C1-C6アルキルアリール」、「C1-C6アルキルヘテロアリール」、「C1-C6アルキルシクロアルキル」、「アミノ」、「アンモニウム」、「アシル」、「アシルオキシ」、「アシルアミノ」、「アミノカルボニル」、「アルコキシカルボニル」、「ウレイド」、「アリール」、「カルバメート」、「ヘテロアリール」、「スルフィニル」、「スルホニル」、「アルコキシ」、「スルファニル」、「ハロゲン」、「カルボキシ」、トリハロメチル、シアノ、ヒドロキシ、メルカプト、ニトロなどからなる群から選択される１〜５個の置換基で任意に置換することができる。あるいは当該置換はまた、特にビシナルな官能性置換基が関与する場合に、隣接置換基が閉環を受けて、その結果例えば保護基を得るために閉環により形成されるラクタム、ラクトン、環状無水物だけでなく、アセタール、チオアセタール、アミナールを形成する状態を含んでよい。
【００７５】
以下、式（Ｉ）の化合物は、「本発明の化合物」とも称することがある。
【００７６】
用語「予防」は、本発明の文脈の中で、疾患あるいは疾患の１又は複数の症候の完全な予防だけでなく、疾患の開始前又は早期発症時の作用のあらゆる部分的又は実質的な予防、減衰、減少、低下又は軽減を意味する。
【００７７】
用語「処置」は、本発明の文脈の中で、疾患の進行に対するあらゆる有益な作用を意味し、例えば、疾患の発症後の病理学的な展開の減衰、減少、低下又は軽減である。
【００７８】
「脱髄疾患」は、本発明の文脈において使用する場合、神経系のミエリン鞘の異常、特に、ミエリンの破壊に関与する疾患であり、上記「背景技術」に記載の通りである。
【００７９】
「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」は、本明細書で使用する場合、文献でそのようなものとして定義されているあらゆる分子を含むことが意図されており、例えば、上記「背景技術」で言及されているあらゆる型のＩＦＮを含んで成る。特に、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γは上記定義に含まれる。ＩＦＮ−βは、本発明によると好ましいＩＦＮである。本発明において適当なＩＦＮ−βは、市販のもの、例えばＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ）又はＢｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｒｉｎｇ）である。ヒト起源のインターフェロンの使用も本発明において好ましい。用語「インターフェロン」は、本明細書で使用する場合、それらの塩基、機能的誘導体、変異体、類似体及び活性フラグメントを包含することを意図する。
【００８０】
用語「インターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）」は、本明細書で使用する場合、特にヒト起源の、体液からの単離により得られるような、又は原核宿主細胞若しくは真核宿主細胞からＤＮＡ組換え技術により得られるような線維芽細胞インターフェロン、並びにその塩、機能的誘導体、変異体、類似体及び活性フラグメントを含むことを意図する。
【００８１】
本明細書で使用する場合、用語「突然変異タンパク質」とは、野生型ＩＦＮと比較して生じる産物の活性をほとんど変化させることなく、天然ＩＦＮの１又は複数のアミノ酸残基が異なるアミノ酸残基で置換されており、あるいは欠失しており、あるいは１又は複数のアミノ酸残基がＩＦＮの天然配列に付加されているＩＦＮ類似体を意味する。これらの突然変異タンパク質は、既知の合成技術及び／又は部位指定突然変異誘発技術、あるいはそれらに適した任意な他の知られている技術により調製される。好ましい突然変異タンパク質には、例えばShepardら(1981)又はMarkら(1984)に記載のものが含まれる。
【００８２】
任意のそのような突然変異タンパク質は、好ましくは、例えば、ＩＦＮと実質的に同様の活性又はそれよりはるかに優れた活性を有する、ＩＦＮのアミノ酸配列と十分にうり二つのアミノ酸配列を有する。インターフェロンの生物学的機能は当業者に周知であり、そして生物学的標準品が確立されており、そして、例えばNational Institute for Biological Standards and Control(http://immunology.org/links/NIBSC)から入手可能である。
【００８３】
ＩＦＮ活性の決定のためのバイオアッセイは説明されている。ＩＦＮアッセイは、例えばRubinsteinら(1981)に記載のように実施されうる。従って、任意の所定の突然変異タンパク質がルーチンな実験によりＩＦＮと実質的に同様の、又はそれよりはるかに優れた活性を有するか否かが決定されうる。
【００８４】
本発明に従い使用されうるＩＦＮの突然変異タンパク質、又はそれをコードする核酸には、
過度の実験無しに、本明細書で提示されている技術及び手引きに基づき、当業者によりルーチンに得られる置換ペプチド又はポリヌクレオチドに実質的に相当する配列の有限集合が含まれる。
【００８５】
本発明に従う突然変異タンパク質の好ましい変化は、「保存的」置換として知られているものである。本発明のポリペプチド又はタンパク質の保存的アミノ酸置換は、１つの群の中に同義のアミノ酸を含むことがあり、これは、当該群のメンバー間の置換が分子の生物学的機能を保存する、十分に類似の物理化学的特性を有するアミノ酸である。アミノ酸の挿入及び欠失も、上文で定義された配列においてそれらの機能を変化させることなく行われることがあり、これは特に、当該挿入又は欠失がわずかに数個のアミノ酸、例えば３０個以下のアミノ酸、好ましくは１０個以下のアミノ酸に関与し、且つ機能的な高次構造にとって必須のアミノ酸を除去又は置換しない場合である。そのような欠失及び／又は挿入によって産生されるタンパク質及び突然変異タンパク質は、本発明の範囲内である。
【００８６】
好ましくは、同義アミノ酸群は表Ｉに規定するものである。更に好ましくは、同義アミノ酸群は表ＩＩに規定するものであり、そして最も好ましくは同義アミノ酸群は表ＩＩＩに規定するものである。
【表１】
2006518725.tif 000006
【００８７】
【表２】
2006518725.tif 000007
【００８８】
【表３】
2006518725.tif 000008
【００８９】
本発明の使用のための、ＩＦＮの突然変異タンパク質を得るために使用されうるタンパク質におけるアミノ酸置換の生成の例には、任意な既知の方法の段階、例えば、Markらの米国特許第４，９５９，３１４号、第４，５８８，５８５号及び第４，７３７，４６２号；Kothsらの第５，１１６，９４３号、Namenらの第４，９６５，１９５号；Chongらの第４，８７９，１１１号；並びにLeeらの第５，０１７，６９１号において提示されているもの；並びに米国特許第４，９０４，５８４号(Shaw et al)において提示されているリジン置換タンパク質、が含まれる。ＩＦＮ−ベータの具体的な突然変異タンパク質は、例えばMarkら(1984)により説明されている。
【００９０】
用語「融合タンパク質」は、別のタンパク質と融合した、ＩＦＮ、又はそれらの突然変異タンパク質を含んで成るポリペプチドを意味し、これは、例えば体液中に長期の滞留時間存在する。ＩＦＮは、従って、別のタンパク質、ポリペプチド等、例えば免疫グロブリン又はそれらのフラグメントと融合されることがある。
【００９１】
「機能的誘導体」は、本明細書で使用する場合、ＩＦＮの誘導体、並びにそれらの突然変異タンパク質及び融合タンパク質を対象とし、これらは、側鎖として残基あるいはＮ又はＣ末端の基の上に生じる官能基から当業界で知られている手段で調製されることがあり、それらが医薬として許容される限り、すなわち、それらがＩＦＮ活性と実質的に同様のタンパク質活性を破壊せず、且つそれを含む組成物に毒性を付与しない限り、本発明に含まれる。これらの誘導体は、例えば、ポリエチレングリコール側鎖を含むことがあり、これは抗原性の部位をマスキングすることがあり、そして体液中でのＩＦＮの滞留を延長させることがある。他の誘導体には、カルボキシル基の脂肪性エステル、アンモニア又は第一級若しくは第二級アミンとの反応によるカルボキシル基のアミド、アシル部分（例えば、アルカノイル又は炭素環アロイル基）により形成されるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体あるいはアシル部分により形成される遊離ヒドロキシル基（例えば、セリル又はスレオニル残基のもの）のＯ−アシル誘導体、が含まれる。
【００９２】
ＩＦＮ、又は突然変異タンパク質及び融合タンパク質の「活性画分」として、本発明は、当該タンパク質分子単独のポリペプチド鎖のあらゆるフラグメント若しくは前駆体、又はそれらと結合する関連分子若しくは残基、例えば糖若しくはリン酸残基と一緒のもの、あるいは前記タンパク質分子若しくは糖残基自身の凝集物、を対象とし、但し、前記画分は相当のＩＦＮと比較して有意に低下した活性を示さない。
【００９３】
用語「塩」は、本明細書では上述のタンパク質又はそれらの類似体のカルボキシル基の塩及びアミノ基の酸付加塩の両方を意味する。カルボキシル基の塩は、当業界で知られている手段で形成されることがあり、そして無機塩、例えばナトリウム、カルシウム、アンモニウム、第二鉄又は亜鉛の塩等、及び有機塩基との塩、例えばアミン、例えばトリエタノールアミン、アルギニン若しくはリジン、ピペリジン、プロカイン等により形成されるもの、を含むことがある。酸付加塩には、例えば、鉱酸、例えば塩酸又は硫酸との塩、及び有機酸、例えば酢酸又はシュウ酸との塩を含む。当然ながら、あらゆるそのような塩は、本発明に関連するタンパク質（ＩＦＮ）の生体活性、すなわち、相当の受容体と結合し、且つ受容体シグナル伝達を開始する能力を保持しなければならない。
【００９４】
本発明における脱髄疾患は、例えば、序文に記載のような多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎、急性炎症性末梢ニューロパシー、副腎白質ジストロフィ及び副腎脊髄神経障害、レーバー遺伝性視神経萎縮症、又はＨＴＬＶ関連ミエロパシーでありうる。それらは、好ましくは、異常な髄鞘形成を伴うニューロパシーでありうる。それらは末梢神経又は中枢神経と関連することがある。
【００９５】
最も一般的な脱髄疾患は多発性硬化症である。従って、本発明の好ましい態様において、本発明の化合物とインターフェロンの組み合わせは、多発性硬化症（ＭＳ）の処置及び／又は予防に使用される。本発明によると、ＭＳは慢性的な進行性疾患の発症を示すことがある。それはまた再発寛解型多発性硬化症又はこの疾患のあらゆる中間の徴候でありうる。
【００９６】
本発明の１つの態様によると、式（Ｉ）のＲ1はＨである。別の態様において、Ｒ2はＯＨである。更なる態様において、ＡはＮである。本発明のより更なる態様において、Ｒ3とＲ5は６員の複素環を形成する。本発明の好ましい態様において、複素環はピリミジン又はピリミジン−オンである。
【００９７】
本発明によると、本発明の化合物としてのリバビリン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）の使用は特に好ましい。
【００９８】
本発明によると、組換えヒトＩＦＮ−ベータと本発明の化合物の使用は更に特に好ましい。
【００９９】
特別な種類のインターフェロン変異体が近年説明されている。いわゆる「コンセンサスインターフェロン」は、ＩＦＮの非天然変異体である（ＵＳ６，０１３，２５３）。コンセンサスインターフェロンは、多発性硬化症の処置に有効であることが証明された。
【０１００】
従って、本発明の好ましい態様において、本発明の化合物はコンセンサスインターフェロンと組み合わせて使用される。
【０１０１】
本明細書で使用する場合、ヒトインターフェロンコンセンサス（ＩＦＮ−ｃｏｎ）は、天然ヒト白血球インターフェロンサブタイプ配列の大部分のＩＮＦ−αにとって代表的なサブセットに共通のアミノ酸残基を主に含み、且つ、全てのサブタイプに共通のアミノ酸が存在しない１又は複数のそれらの位置には、その位置で主に生じるアミノ酸を含み、そしていずれの場合にも少なくとも１つの天然のサブタイプのその位置において存在しないアミノ酸を全く含まない、非天然ポリペプチドを意味する。ＩＦＮ−ｃｏｎは、限定しないが、米国特許第４，６９５，６２３号、第４，８９７，４７１号及び第５，５４１，２９３号に開示されているＩＦＮ−ｃｏｎ１、ＩＦＮ−ｃｏｎ２及びＩＦＮ−ｃｏｎ３と表記されるアミノ酸配列を包含する。ＩＦＮ−ｃｏｎをコードするＤＮＡ配列は、上述の特許に記載のとおり、又は他の標準的な方法により生成されうる。
【０１０２】
更に好ましい態様において、融合タンパク質は、Ｉｇ融合体を含んで成る。当該融合体は、直接的であっても、又は１〜３アミノ酸残基長程度の短さ若しくはそれ以上、例えば１３アミノ酸残基長、でありうる短いリンカーペプチドを介していてもよい。前記リンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド、例えば、又はＩＦＮ配列と免疫グロブリン配列との間に導入されたＧｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔを含んで成る１３アミノ酸のリンカー配列であってもよい。結果として生じる融合タンパク質は、改良された特性を有することがあり、例えば体液中での長期間の滞留時間（半減期）、比活性の増大、発現レベルの増大、又は当該融合タンパク質の精製が容易になること、である。
【０１０３】
更に好ましい態様において、ＩＦＮはＩｇ分子の定常領域と融合される。好ましくは、それは重鎖領域、例えばヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメインと融合される。Ｉｇ分子の他のイソ型も本発明の融合タンパク質の生成に適しており、例えばイソ型ＩｇＧ2、ＩｇＧ3又はＩｇＧ4、あるいは他のＩｇクラス、例えばＩｇＭ又はＩｇＡである。融合タンパク質は、単量体又は多量体、ヘテロ若しくはホモ多量体でありうる。
【０１０４】
更に好ましい態様において、機能的誘導体は、１又は複数の官能基に結合した少なくとも１つの部分であって、アミノ酸残基上に１又は複数の側鎖として生じる部分を含んで成る。好ましくは、当該部分はポリエチレン（ＰＥＧ）部分である。ＰＥＧ化は、既知の方法、例えばＷＯ９９／５５３７７に記載のものにより実施されうる。
【０１０５】
再発寛解型多発性硬化症の処置に現在使用されているヒトＩＦＮ−ベータの標準的な投与量は、８００００ＩＵ／ｋｇ／日〜２０００００ＩＵ／ｋｇ／日又は６ＭＩＵ（百万国際単位）／人／日〜１２ＭＩＵ／人／日又は２２〜４４μｇ（マイクログラム）／人に及ぶ。本発明によると、ＩＦＮは好ましくは約１〜５０μｇ／人／日、更に好ましくは約１０〜３０μｇ／人／日又は約１０〜２０μｇ／人／日の投与量で投与されうる。好ましい投与経路は皮下投与であり、例えば、週三回投与される。更に好ましい投与経路は筋肉内投与であり、これは、例えば週一回適用されうる。
【０１０６】
好ましくは２２〜４４μｇ又は６ＭＩＵ〜１２ＭＩＵのＩＦＮ−ベータが皮下注射により週三回投与される。
【０１０７】
ＩＦＮ−ベータは、一日おきに２５０〜３００μｇ又は８ＭＩＵ〜９．６ＭＩＵの投与量で皮下投与されうる。
【０１０８】
３０μｇ又は６ＭＩＵのＩＦＮ−ベータが更に週一回筋肉内投与されうる。
【０１０９】
ＩＦＮ−ベータはまた、毎日又は一日おきに、より少ない頻度で投与されうる。好ましくは、ＩＦＮ−ベータは週一回、二回又は三回投与される。
【０１１０】
本発明の活性成分の投与は、静脈内、筋肉内又は皮下の経路によることがある。ＩＦＮ−ベータにとって好ましい投与経路は皮下経路である。
【０１１１】
好ましい態様において、本発明の化合物、好ましくはリバビリンは、約１００〜２０００ｍｇ／人／日、好ましくは約４００〜１２００ｍｇ／人／日、更に好ましくは約８００〜１０００ｍｇ／人／日、又は約１０００〜１２００ｍｇ／人／日の投与量で投与される。６５ｋｇ未満の体重の患者にとって通常の投与量は８００ｍｇ／日であり、６５〜８５ｋｇの体重の患者にとって通常の投与量は１０００ｍｇ／日であり、そして８５ｋｇ超の体重の患者にとって通常の投与量は１２００ｍｇ／日である。用いられる実際の投与量は、患者の要件及び処置される症状の重症度によって変更されうる。特定の状況にとって適切な用法の決定は、当業界の技術範囲内である。便宜上、一日の合計の投与量は、必要に応じて一日の間で分けて一部ずつ投与されることがある。
【０１１２】
好ましい態様において、本発明の化合物、好ましくはリバビリンは経口投与される。
【０１１３】
リバビリンは注射により、又は好ましくは経口から投与されうる。投与形態によって、当該化合物は適切な希釈剤及び担体で製剤化することができ、重量当たり約０．０１％〜約１５％、好ましくは重量当たり約１％〜１０％の前記化合物を有する軟膏、クリーム、フォーム、及び溶液を形成する。注射の場合、リバビリンは、生理学的に適合性のある溶液中に約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５００ｍｇ／ｍｌに溶解又は懸濁された溶液又は懸濁液の形態で存在する。注射は静脈内、筋肉内、脳内、皮下又は腹腔内にされうる。
【０１１４】
経口投与の場合、リバビリンは、カプセル、錠剤、経口懸濁液、又はシロップの形態で存在してもよい。錠剤又はカプセルは約１０〜５００ｍｇのリバビリンを含むことがある。好ましくは、それらは約３００ｍｇのリバビリンを含むことがある。カプセルは通常のゼラチンカプセルであってもよく、そして、上文で示した量のリバビリンに加え、少量の、例えば重量当たり５％未満のステアリン酸マグネシウム又は他の賦形剤を含むことがある。錠剤は、前述の量の前記化合物及び、ゼラチン溶液、デンプン糊／水、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール／水等でありうる結合剤を、典型的な糖衣により含むことがある。
【０１１５】
コルチコステロイドは脱髄疾患の処置において治療的に有効である。従って、本発明の薬物は、同時の、連続的な又は別々の使用のために更にコルチコステロイドを含んで成ることがある。コルチコステロイドの処置として、例えば、２〜３週にわたり漸減されるプレドニゾンを経口から６０〜１００ｍｇ／日又は３〜５日メチルプレドニゾロンを静脈内から５００〜１０００ｍｇ／日投与することがある。
【０１１６】
ガラティラメルはミエリン塩基性タンパク質と類似性を有する合成コポリマーであり、そして毎日皮下注射で投与される。これは多発性硬化症に治療効果を有することも証明されている。本発明の好ましい態様において、薬物は連続的な、別々の又は同時の使用のために更にガラティラメルを含んで成る。
【０１１７】
本発明の化合物及びＩＦＮは、医薬組成物において製剤化されうる。
【０１１８】
用語「医薬として許容される」とは、活性成分の生体活性の有効性を妨害せず、且つ投与される宿主にとって毒性が無いあらゆる担体を包含することを意味する。例えば、非経口投与の場合、活性タンパク質は、ビヒクル、例えば生理食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミン及びリンガー液中で注射のための単位剤形で製剤化されうる。
【０１１９】
本発明の医薬組成物の活性成分は、種々の経路で個体に投与されうる。投与経路には、皮内、経皮（例えば、徐放製剤において）、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外、局所、及び鼻内の経路が含まれる。任意の他の治療的に有効な投与経路が使用されることがあり、例えば、上皮又は内皮組織を介した吸収、又は活性物質をコードするＤＮＡ分子が患者に投与され、これが当該活性物質をin vivoで発現させ、そして分泌させる遺伝子治療（例えばベクターを介して）による。更に、本発明のタンパク質は、生物学的に活性な物質以外の成分、例えば医薬として許容される界面活性剤、賦形剤、担体、希釈剤及びビヒクルと一緒に投与されうる。
【０１２０】
皮下経路は本発明において好ましい。
【０１２１】
本発明を実施する別の可能性は、ＩＦＮの遺伝子を内因的に活性化することである。この場合、ＩＦＮの発現にとって通常サイレントな細胞又は十分でないＩＦＮの量を発現する細胞におけるＩＦＮの内因性の産生を誘導及び／又は増強するためのベクターが脱髄疾患の処置に使用される。ベクターは、ＩＦＮを発現するのに望ましい細胞において機能的な制御配列を含んで成ることもある。そのような制御配列は、例えばプロモーター又はエンハンサーであってもよい。制御配列は、続いて、相同組換えによりゲノムの正しい遺伝子座に導入され、その結果制御配列と、発現が誘導又は増強に必要とされる遺伝子とを作用可能に連結させる。この技術は、通常「内因性遺伝子活性化(endogenous gene activation)」（ＥＧＡ）と称され、そして例えばＷＯ９１／０９９５５に記載されている。
【０１２２】
本発明は更に、神経疾患の処置及び／又は予防のための薬物の製造におけるＩＦＮを生産するよう遺伝子改変した細胞の使用に関する。
【０１２３】
非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）投与の場合、ＩＦＮは、溶液、懸濁液、乳濁液又は凍結乾燥粉末として、医薬として許容される非経口ビヒクル（例えば、水、生理食塩水、デキストロース溶液）及び等張性を維持する添加物（例えばマンニトール）又は化学的安定性を維持する添加物（例えば保存剤及び緩衝液）と一緒に製剤化されうる。製剤は一般的に使用される技術により滅菌される。
【０１２４】
本発明におけるＩＦＮの生物学的利用能も、人体における分子の半減期を増大させる複合手順を用いることにより、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ９２／１３０９５に記載のように分子とポリエチレングリコールを連結させることにより改善されうる。
【０１２５】
単回又は複数回投与として個体に投与される投与量は、種々の因子、例えば薬物動態特性、投与経路、患者の症状及び特性（性別、年齢、体重、健康、サイズ）、症候の程度、併用療法、処置の頻度及び所望の効果によって変化するであろう。
【０１２６】
日用量は、通常分割量で又は所望の結果を得るのに有効な維持放出形態で与えられる。第二又はその後の投与は、個体に投与された最初の又は以前の投与量と同じ、それより少ない又はそれより多い投与量で実施されうる。第二又はその後の投与は、病気の間又はその発症前に投与されうる。
【０１２７】
本発明によると、本発明の化合物及びＩＦＮは、他の治療計画又は治療物質（例えば、多剤投与計画）の前に、それらと同時に又はそれらに連続して、治療的に有効な量で、個体に予防的又は治療的に投与されうる。他の治療物質と同時に投与される活性物質は、同一の又は異なる組成物において投与されうる。
【０１２８】
本明細書で引用する全ての刊行物、例えば論文又は要約、公表された又は公表されていない米国又は外国特許出願、交付済みの米国又は外国特許あるいは任意な他の引用文献が、引用によりその全体、例えば引用文献中に提示されている全てのデータ、表、図及び文書が本明細書に組み入れられる。更に、本明細書で引用されている引用文献において引用されている引用文献の全ての内容も、引用によりその全体が組み入れられる。
【０１２９】
既知の方法の段階、常用の方法の段階、既知の方法又は常用の方法への言及は、本発明のあらゆる観点、記載又は態様が関連技術において開示され、教示され又は示唆されていることを承認するものではない。
【０１３０】
具体的な態様の前述の記載は、他の者が当業界の技術範囲内の知識を応用することにより、過度の実験無しに、本発明の一般的概念を逸脱することなく、種々の応用のためにそのような具体的な態様を容易に修飾及び／又は採用することができる本発明の一般的な性質を非常に十分に明らかにしている。従って、そのような採用及び修飾は、本明細書に示す教示及び手引きに基づき、開示された態様の均等の範囲内の意味の範囲内であることが意図される。本明細書の用語及び語法は説明目的であって、限定目的ではなく、その結果、本明細書の用語及び語法は、当業界の通常の技術のうちの１つの知識と組み合わせて、本明細書で示す教示及び手引きを考慮して当業者によって解釈されるべきである。
【０１３１】
本発明を説明してきた結果、例示目的で供され、そして本発明を限定することを意図していない以下の実施例を参照することで本発明はより容易に理解されるであろう。
【実施例】
【０１３２】
多発性硬化症のin vivoモデルにおけるリバビリンの単独での又はＩＦＮ−ベータと組み合わせての効果
疾患の発症に対するリバビリンの単独又はＩＦＮ−ベータと組み合わせての効果は、多発性硬化症（ＭＳ）の確立された動物モデルを用いてアッセイされる。実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）モデルはマウスの慢性脱髄モデルである。マウスにおけるＥＡＥの誘導に使用される方法は、sahrbacherら(1998)により公表されたプロトコールを出典とするものである。
【０１３３】
ＥＡＥ誘導プロトコール
マウス
種、系統、亜系及び性別：Charles River Italia (Calco, Lecco, Italy)供給のIFFA CREDO (Saint Germain sur I'Arbresle, France)コロニー由来のＣ５７  ＢＬ／６ＪＩＣＯ雌マウス。
年齢及び体重（ランダム化でのもの）：約８週齢；１８〜２２ｇ
飼育：動物は以下の条件で維持する：
−１０匹の動物／空調室のケージ
−温度：２２℃±２
−相対湿度：５５％±１０
−換気：約１５〜２２／時間（ＨＥＰＡ９９．９９％でフィルター処理済み）
−光：１２時間周期（午前７時〜午後７時）
−ケージ：Ｍａｒｋｒｏｌｏｎ（登録商標）ケージ、４２．５ｘ２６．６ｘ１５。それぞれステンレス鋼のカバーフィードラックをそれぞれ取り付けた。グリルはケージの底の上に挿入する。グリルを通過してケージの底に落ちる廃棄物は定期的に処分する。
【０１３４】
食餌：Charles River Italiaの餌のライセンシーであるMucedola S.r.l. Settimo Milaneseにより製造されたGLP 4RF25最高品質のペレット状餌。弱った動物の飼育を促進するために、7日目から、毎日湿ったペレットを檻の底に置く。製造業者は、栄養分及び夾雑物に関する分析証明書を提供し、そのレベルは、EPA-TSCAの提唱した範囲内(44FR:44053- 44093、1979年7月26日)である。動物はこの餌を「自由」に摂取可能である。
【０１３５】
水：市営の主給水システムから得る。水は、ろ過し、かつ自動バルブシステムにより動物に「自由」に配給される。自動給水システムに加え、プラスチックボトルを用いた。定期的に飲料水は、微生物数、重金属、他の夾雑物(例えば、溶媒、殺虫剤)、並びに他の化学的及び物理的特性について分析する。飲料水の品質の許容限度は、EEC指令80/778により定義されたものである。
【０１３６】
免疫化の手順
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）は、以下のマウスの群において誘導される：１０匹の雌のマウスの６つの群を、マイコバクテリウム・チューバークロシス(Mycobacterium tuberclosis)を0.5mg含有する完全フロインドアジュバント(CFA, Difco, Detroit, U.S.A)中の200μg MOG35-55ペプチド(Neosystem、Strasbourg, France)で構成された乳剤0.2mlを、左側腹部に皮下注射することにより、免疫化する（０日目）。
【０１３７】
直後に、それらに、緩衝液(0.5M NaCl、0.017％ Triton X-100、0.015M Tris、pH7.5)400μlに溶解した500ngの百日咳毒(List Biological Lab., Campbell, CA, U.S.A.)を腹腔内注射する。
【０１３８】
２日目に、これらの動物に、2回目の百日咳毒500ngを腹腔内注射する。
【０１３９】
7日目に、これらのマウスに、CFA中の、第二の用量200μgのMOG35-55ペプチドを、皮下注射により右側腹部に投与する。この手法は、8〜10日目位から開始して、尾部から生じかつ前肢へと上行していき、徐々に進行性の麻痺を生じる。
【０１４０】
当該処置は、各動物につき、１以上の臨床スコアを見て開始し、そしてその後６０日連続して続ける。動物は以下のように毎日処置される：
【０１４１】
【表４】
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【０１４２】
ＰＢＳはリバビリン及びｒ−ｍＩＦＮ−βを適当な濃度に希釈するためのビヒクルとして使用する。
【０１４３】
ｍＩＦＮ−βは、毎日皮下又は腹腔の経路から２０，０００Ｕ／マウスの投与量で、２００μＬ／マウスの量で毎日投与される。リバビリンは、腹腔内又は脳内(i.c,)から２つの異なる投与量５０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇで、単独で、又はｍＩＦＮ−βと組み合わせて、皮下又は腹腔内の経路から２０，０００Ｕ／マウスの投与量で、２００μ／マウスの量で毎日投与される。
【０１４４】
臨床的徴候及び動物の体重は、処置される各群において毎日モニタリングされる。７日目から開始して、動物は以下の臨床的スコアを用いて麻痺の存在について試験される：
0＝疾患徴候なし
0.5＝部分的尾麻痺
1＝尾麻痺
1.5＝尾麻痺 + 部分的一側性後肢麻痺
2＝尾麻痺 + 後肢衰弱又は部分的後肢麻痺
2.5＝尾麻痺 + 部分的後肢麻痺(骨盤下方)
3＝尾麻痺 + 完全な後肢麻痺
3.5＝尾麻痺 + 完全な後肢麻痺 + 失禁
4＝尾麻痺 + 後肢麻痺 +前肢の衰弱又は部分麻痺
5＝瀕死又は死亡
【０１４５】
組織学的解析
処置終了時に、動物は、ペントバルビタール麻酔のもと、左心室を通し4％ホルムアルデヒドで灌流固定される。次にそれらの脊髄を、慎重に剥離し、かつホルマリン中に固定する。脊髄切片を、パラフィンブロック中に包埋する。切片化、並びに炎症に関するヘマトキシリン・エオシンによる染色、及び脱髄検出のためのKluver-PAS (ルクソールファストブルー＋過ヨウ素酸シッフ染色)を行う。
【０１４６】
臨床試験の結果は、各群内で平均(±SEM)スコアで表わす。試験物質の作用は、媒体-処理したポジティブコントロール群のものと比較される。群間の臨床的スコア値の差異は一元配置ANOVAで解析し、引き続き有意である場合は、各測定時間においてフィッシャー検定により解析する。体重データは、一元配置ANOVAで、引き続き有意である場合は、Tukey検定により評価する。S-Plus（登録商標）ソフトウェアを使用する。
【０１４７】
ＩＦＮ−βとリバビリンを組み合わせた処置の有意な効果が観察されうることが予想される。
【０１４８】
【表５】
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【表６】
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【国際調査報告】
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