(57)【要約】抗体含有粒子を含んで成る組成物を供する。これらの粒子は、適当な希釈剤による再構成に有用な抗体含有粉末を形成するために使用することができる。当該再構成組成物は、次に、注射、例えば、皮下注射による送達に適当な量における抗体を含んで成る。また、当該様々な組成物の調製方法、並びに使用法を供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体含有粒子を含んで成る組成物であって、当該粒子が７．５μｍ以上且つ１００μｍ以下のマスメディアン径を有する組成物。
【請求項２】
上記粒子が１０μｍ且つ１００μｍ以下のマスメディアン径を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記抗体が抗体断片である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
上記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2、Ｆｖ、及び単一ポリペプチド鎖結合分子から成る群から選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
上記抗体が完全長の抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
上記抗体がマウス抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
上記抗体がキメラ抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
上記抗体がＣＤＲ−移植化抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
上記抗体がヒト化抗体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
上記抗体が抗体−接合体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
上記抗体、又は抗体断片が、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭから成る群から選択されるタイプである、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
上記抗体がＩｇＧ−タイプである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
更に、医薬的に受容可能な賦形剤を含んで成る、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
上記医薬的に受容可能な賦形剤が、上記抗体含有粒子中に存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
上記医薬的に受容可能な賦形剤が、上記抗体含有粒子から分離し、且つ独立した粒子を構成する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
上記賦形剤が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、オリゴペプチド、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、抗酸化剤、表面活性剤、バッファー、酸、塩基、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
上記賦形剤が炭水化物である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
上記炭水化物が、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストラン、デキストラン、スターチ、マンニトール、キシリトール、ラクチトール、グルシトール、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトール、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
上記炭水化物が、スクロース及びトレハロースから成る群から選択される、請求項１７に記載の組成物。
【請求項２０】
上記賦形剤が塩又はバッファーから選択される、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２１】
上記塩またはバッファーが、クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、およびこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
上記賦形剤が表面活性剤である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２３】
上記表面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項２２に記載の組成物。
【請求項２４】
上記賦形剤がアミノ酸である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項２５】
上記アミノ酸が、ロイシン、ヒスチジン、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
上記組成物が、シリンジ中に収容される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２７】
上記組成物がバイアル中に収容される、請求項１に記載の組成物。
【請求項２８】
上記抗体が非晶質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項２９】
上記抗体が部分的にアモルファスである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３０】
実質的に凝集体を含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項３１】
約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量における抗体、希釈剤、及び任意的な賦形剤を含んで成る再構成組成物であって、上記再構成組成物が、抗体又は抗体断片、及び任意的な賦形剤を含んで成る噴霧乾燥粉末である再構成組成物。
【請求項３２】
無菌形態における、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
上記抗体が抗体断片である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
上記抗体断片が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2、Ｆｖ、及び単一ポリペプチド鎖結合分子から成る群から選択される、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
上記抗体が完全長の抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３６】
上記抗体がマウス抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３７】
上記抗体がキメラ抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３８】
上記抗体がＣＤＲ−移植化抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３９】
上記抗体がヒト化抗体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項４０】
上記抗体が抗体−接合体である、請求項３１に記載の組成物。
【請求項４１】
上記抗体、又は抗体断片が、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭから成る群から選択されるタイプである、請求項３１に記載の組成物。
【請求項４２】
上記抗体がＩｇＧ−タイプである、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
上記医薬的に受容可能な賦形剤が存在する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項４４】
上記賦形剤が、アミノ酸、アミノ酸誘導体、オリゴペプチド、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、抗酸化剤、表面活性剤、バッファー、酸、塩基、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
上記賦形剤が炭水化物である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
上記炭水化物が、フルクトース、マルトース、ガラクトース、マンノース、ソルボース、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストラン、デキストラン、スターチ、マンニトール、キシリトール、ラクチトール、グルシトール、ピラノシルソルビトール、ミオイノシトール、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
上記炭水化物が、スクロース及びトレハロースから成る群から選択される、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４８】
上記賦形剤が塩又はバッファーから選択される、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４９】
上記塩またはバッファーが、クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
上記賦形剤が表面活性剤である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５１】
上記表面活性剤が、Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】
上記賦形剤がアミノ酸である、請求項４４に記載の組成物。
【請求項５３】
上記アミノ酸が、ロイシン、ヒスチジン、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項５２に記載の組成物。
【請求項５４】
上記組成物がシリンジ中に収容される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項５５】
上記組成物がバイアル中に収容される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項５６】
上記希釈剤が、注射のための静菌水、水中のデキストロース５％、リン酸緩衝食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ液、食塩水、無菌水、脱イオン水、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項５７】
上記任意的な賦形剤が存在する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項５８】
上記抗体が、約２５ｍｇ／ｍＬから約２５０ｍｇ／ｍＬの量において存在する、請求項３１に記載の組成物。
【請求項５９】
実質的に凝集体を含まない、請求項３１に記載の組成物。
【請求項６０】
抗体を含んで成る噴霧乾燥粉末を供する工程、及び再構成組成物を形成するために賦形剤を添加する工程を含んで成る再構成組成物を調製する方法であって、上記抗体が約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量において再構成組成物中に存在する方法。
【請求項６１】
上記再構成組成物が賦形剤を含んで成る、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
上記賦形剤が噴霧乾燥粉末中に存在する、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
上記賦形剤が、上記希釈剤の添加工程とともに、又は当該工程後に添加される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
上記噴霧乾燥粉末を供する工程が、液体フィードを形成するために、液体中に上記抗体を混合すること、及び噴霧乾燥粉末を形成するために、当該液体フィードを噴霧乾燥することを含んで成る、請求項６０に記載の方法。
【請求項６５】
上記再構成組成物が、実質的に凝集体を含まない、請求項６０に記載の方法。
【請求項６６】
上記再構成組成物が、上記希釈剤の添加から約１５分以内に視覚的に透明になる、請求項６０に記載の方法。
【請求項６７】
上記再構成組成物が、上記希釈剤の添加から約１０分以内に視覚的に透明になる、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
上記再構成組成物が、上記希釈剤の添加から約５分以内に視覚的に透明になる、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
上記希釈剤が、注射のための静菌水、水中のデキストロース５％、リン酸緩衝食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ液、食塩水、無菌水、脱イオン水、及びこれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項７０】
上記抗体が、上記再構成組成物中、約２５ｍｇ／ｍＬから約２５０ｍｇ／ｍＬの量において存在する、請求項６０に記載の方法。
【請求項７１】
注射を介して、再構成組成物中に存在する治療的有効量の抗体を投与することを含んで成る、患者に対する組成物の投与方法であって、上記再構成組成物が、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの抗体濃度、希釈剤、及び任意的な賦形剤を含んで成り、上記再構成組成物が、上記抗体及び任意的な賦形剤を含んで成る噴霧乾燥粉末から形成される方法。
【請求項７２】
上記注射が皮下注射である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７３】
上記注射が筋肉内注射である、請求項７１に記載の方法。
【請求項７４】
上記注射が静脈内注射である、請求項７１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的な、粉末組成物を形成することができる抗体含有粒子に関する。これらの組成物は、次に、希釈剤で再構成することができ、これにより他の物質中で皮下投与に適した再構成組成物を形成する。付け加えると、本発明は、再構成組成物の調製方法、並びに再構成組成物の患者に対する投与方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗体は、生物、例えば、哺乳動物により生産される、相対的に大きな巨大分子である。抗体はしばしば、必然的ではないが、生体内における外来タンパク質に対する免疫応答の一部として分泌される。当該抗体は外来タンパク質と特異的に結合する能力を有するように形成され、これにより、上記生物により明らかとされ、あるいは、中和されることができる抗体−外来タンパク質複合体を形成する。このように、抗体は多くの生物の免疫応答において重要な役割を果たす。
【０００３】
化学者及び研究者は、抗体の他の使用方法を発見してきた。例えば、臨床家は、タンパク質検出試験を供するために、特定のタンパク質と結合する抗体の特異性に頼る。最も基礎的な抗体に基づくタンパク質検出試験において、注目のタンパク質を含むであろう試料は、基質上で固定化される。その後、標識抗体（例えば、放射標識抗体）を含む溶液をタンパク質結合基質と接触させ、これにより、基質上で標識抗体を当該タンパク質と結合させる。例えば、適当なフィルムに暴露させることによる標識抗体の検出は、注目のタンパク質が試料中に存在していたことを明らかにする。放射標識及び他の検出可能な標識を使用する当該方法のバリエーションは、いくつかの検出及び診断アッセイ、例えば、家庭用妊娠検査及びウェスタンブロット法において使用される。
【０００４】
また、化学者は、注目のタンパク質をいくつかの異なるタンパク質を含有する混合物から回収するために、抗体の特異性に頼る。当該アプローチにおいて、同じ注目のタンパク質に対して親和性を有する抗体を、カラム形態（一般的に「アフィニティーカラム」を意味する）において基質上で固定させる。タンパク質の混合物を当該カラムに通すことにより、抗体−タンパク質結合によりカラム中に注目のタンパク質が維持される。それから、当該結合タンパク質を遊離させるために、カラムに適当な薬剤（例えば、酸）を接触させることにより、相対的に純粋な形態におけるタンパク質を回収し、それにより、相対的に高濃度のタンパク質を回収することができる。
【０００５】
更に最近、化学者は、ある状態又は疾患に苦しむ患者の治療において、抗体の特異性に頼っている。最初、患者の治療において優れた見込みを示すが、治療的使用のための抗体は、この治療的アプローチの広範な採用を制限するいくつかの問題に遭遇する。特に、患者に対する投与に適当な形態において、治療的な使用を意図する抗体を供することは困難である。
【０００６】
例えば、抗体のタンパク質的な特性は、これらの薬剤を容認できないほど高分解に暴露するため、抗体は、消化管を通した吸収には不適当である。
【０００７】
治療的抗体の注射は、消化管における抗体の分解に関する問題を迂回する。しかしながら、抗体の注射は多分な投与量を伴う。特に、一般的に低い力価の抗体は、しばしば、in vivo において医薬的に有効なレベルにするために、用量当たり相対的に多量に投与することが必要とされる。皮下注射に関する限り、多量の活性剤、例えば、抗体は、当該投与経路に関する皮下投与に受容可能な容量（典型的には、０．５−１ｍＬ）が制限される皮下に容易には送達されない。このように、抗体の皮下注射に関し、相対的に多量（即ち、用量）の抗体が相対的に少量の製剤中に存在していなければならない。更に、一般的には、液体平衡、血圧、浸透圧不均衡等に関する問題を避けるために、より少量（皮下又は他に）注射することが好ましい。
【０００８】
このように、抗体の皮下注射は、典型的には、１００ｍｇ／ｍＬ以上、しばしば２００−５００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度を必要とする。これらの相対的に高濃度の要件は、全ての巨大分子、及び特には抗体のための有意な投与を意味する。特に、抗体の本質的に低い水性溶解度により、抗体分子の凝集は特に問題であり、特に相対的に高濃度の抗体が必要とされる場合に問題となる。更に抗体の凝集は、それらの濃度が増加すると更に明白となる。例えば、米国特許第６，２６７，９５８号を参照のこと。
【０００９】
凝集に関連する上記の困難性は、処方の間だけでなく、製造においても同様に存在する。更に、凝集はしばしば保存（特に、室温での）において起こる。固形製剤形態は、原則として、溶液型製剤の当該有効期間の制約を克服する。このような固形形態は、しかしながら、高濃度での再構成において薬剤を安定とするため、そして、合理的な短期で有効な再構成を供するために未だ必要とされる。最後に、いかなる製剤形態も、簡単で再現性のある、例えば、２６−２９Ｇ針からのシリンジ性能（syringeability)を許容するために低い粘性を有することが必要であろう。
【００１０】
米国特許出願公報ＵＳ２００２／０１３６７１９は、これらのタンパク質の安定な製剤を供するために、全ての抗体及び抗体断片の結晶形態を使用することを提案する。当該アプローチの問題は、しかしながら、結晶型抗体及び／又は抗体断片を供するのに、その製剤の製造に関して、追加的な工程及び／又は複雑性を導入することである。更に、懸濁形態において注射される結晶抗体は、保存、用量調整、及び結晶において一般に遭遇する投与において困難な傾向となりうる。
【００１１】
凍結乾燥に基づく抗体の処方は、例えば、米国特許第６，２６７，９５８号において、提案されているが、このような処方は、相対的に長い再構成時間を有することが知られており、上記において、当該処方、並びに再構成製剤形態の投与の患者の両方を準備するという問題を提示する。結果的に、追加的な処方アプローチが必要とされる。このため、本発明は、他の物質中において、抗体の投与に関する問題を解決するために、相対的に速い再構成時間を有する抗体含有製剤を供することとした。
【発明の開示】
【００１２】
発明の概要
従って、本発明の主な目的は、抗体含有粒子を含んで成る組成物を供することであり、上記において、上記粒子は７．５μｍ以上及び約１００μｍ以下のマスメディアン径を有する。
【００１３】
本発明の更なる目的は、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量における抗体、希釈剤、及び任意的な賦形剤を含んで成る再構成組成物を供することであり、上記において、当該再構成組成物は、抗体含有粒子及び任意的な賦形剤を含んで成る粉末から形成される。
【００１４】
本発明のより更なる目的は、上記粒子が噴霧乾燥により調製される、このような組成物を供することである。
【００１５】
本発明の他の目的は、上記抗体がＩｇＧ型抗体である、このような組成物を供することである。
【００１６】
本発明の更なる目的は、任意的な賦形剤が存在する、このような組成物を供することである。
【００１７】
本発明の追加的な目的は、抗体含有粒子を含んで成る粉末を供すること、及び再構成組成物を形成するために賦形剤を添加する工程を含んでなる、再構成組成物を調製する方法を供することであり、上記において、当該抗体は、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍｌの量において再構成組成物中に存在する。
【００１８】
本発明の更なる目的は、再構成組成物が賦形剤を含んで成る、このような方法を供することである。
【００１９】
本発明の更なる他の目的は、上記賦形剤が、粉末中に存在する、このような方法を供することである。
【００２０】
本発明のより更なる目的は、上記賦形剤が、希釈剤を添加する工程とともに、又はその後に添加されるこのような方法を供することである。
【００２１】
本発明のより更なる目的は、上記再構成組成物が、希釈剤の添加から約１５分以内に視覚的に透明になる、このような方法を供することである。
【００２２】
本発明のより更なる目的は、上記再構成組成物が、希釈剤の添加から約１０分以内に視覚的に透明になる、このような方法を供することである。
【００２３】
本発明の他の目的は、上記再構成組成物が、希釈剤の添加から約５分以内に視覚的に透明になる、このような方法を供することである。
【００２４】
本発明の更なる他の目的は、上記抗体が、再構成組成物中、約２５ｍｇ／ｍＬから約２５０ｍｇ／ｍＬの量において存在する、このような方法を供することである。
【００２５】
本発明の更なる目的は、注射を介して、本明細書中に説明する再構成組成物を投与することを含んで成る、患者を治療する方法を供することである。
【００２６】
本発明の追加的な目的、利点、及び新規な特色は、以下の説明により表され、そして、ある程度は、以下における当業者にとって明らかになるであろうし、又は本発明の実施により知ることができる。
【００２７】
それから、ある態様において、抗体含有粒子を含んで成る組成物が供される。当該抗体含有粒子は、好ましくは、７．５μｍ以上且つ１００μｍ以下のマスメディアン径（ＭＭＤ）を有する。以下に更に詳細に説明されるように、上記抗体含有粒子は典型的には、必然的ではないが、抗体を含んで成る液体を噴霧乾燥することにより調製される。このような方法で形成された粒子は、「噴霧乾燥粒子」を慣習的に意味する。噴霧乾燥粒子の最終は、次に、他の方法から形成される他の粉末と対照的に「噴霧乾燥粉末」を慣習的に意味する。
【００２８】
好ましくは、本発明に関して使用される抗体は非晶質である。有利には、本発明は完全に非晶質抗体に適合し、それにより、結晶形態における抗体を供する余分な工程及び出費が回避される。いくつかの環境において、上記抗体は、アモルファス形態、実質的なアモルファス形態、又は部分的なアモルファス形態として存在できる。
【００２９】
他の態様において、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量における抗体、希釈剤及び任意的な賦形剤を含んで成る、再構成組成物が供され、上記において、再構成組成物は、抗体及び任意的な賦形剤を含んで成る粉末（典型的には、噴霧乾燥粉末）から形成される。好ましくは、当該再構成組成物は、無菌形態において調製される。
【００３０】
上記抗体は、如何なる抗体も含むことができ、そして本発明はこれに関して制限されない。有利には、再構成組成物は、相対的に高濃度の抗体を含んで成る。更に、上記粒子、粉末、及び、再構成組成物は、最少量の抗体の凝集体を有する。
【００３１】
本発明の他の態様は、抗体を含んで成る粉末（更に、典型的には、必然的ではないが、噴霧乾燥粉末）を供する工程、及び再構成組成物を形成するために希釈剤を添加する工程を含んで成る、再構成組成物の調製方法を供し、上記において、抗体は、再構成組成物中、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量において存在する。任意的に、賦形剤は、再構成組成物中に存在してもよい。存在する場合、当該賦形剤は、（ａ）各抗体含有粒子中に存在、及び／又は、（ｂ）噴霧乾燥粉末中に存在することができるが、抗体含有粒子から認識及び分離でき、及び／又は（ｃ）希釈剤の添加の工程とともに、あるいは、その後に添加してもよい。また、上記のいずれかの組み合わせも構想される。
【００３２】
噴霧乾燥粉末を所望する場合、当該粉末を供する工程は、以下により詳細に説明するように、上記抗体を含んで成る液体フィード混合物を噴霧乾燥させることにより達成することができる。本発明のある利点は、再構成時間（例えば、希釈剤の添加から再構成組成物中において、視覚的な透明性に達するまでの時間）が相対的に短く、それにより、成物の調製及び患者への投与の調整に関連する複合体を除去することである。
【００３３】
本発明の他の態様において、再構成組成物を患者に投与する方法を供する。当該方法は、患者に対して、好ましくは、本明細書で説明するように、再構成組成物中に存在する、上記抗体の治療的有効量を投与することを含んで成る。当該態様において、上記抗体の投与に対する応答性の状態に苦しむ患者に、注射、例えば、皮下注射を介して、抗体の治療的有効量を投与する。
【００３４】
発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、上記抗体、希釈剤、賦形剤、噴霧乾燥法、及びこのように変動しうるものを制限しないことを理解すべきである。また、本明細書中で使用される用語は、特定の態様のみに対するものであり、制限することを意図するものではないことを理解すべきである。
【００３５】
本明細書において使用される、単数形態は、前後関係において明らかに他を指示しない限り、複数の指示物を含むことに注意しなければならない。このように、例えば、「抗体」とは、単一の抗体、並びに、２又はそれ以上の同一又は異なる抗体を含み、賦形剤とは、単一の賦形剤、並びに、２又はそれ以上の同一又は異なる賦形剤を含む。
【００３６】
本発明の明細書及び請求項中において、以下に説明される定義に関して以下の用語が使用され得る。
【００３７】
「アミノ酸」の語は、アミノ基及びカルボキシル基の両方を含むいかなる分子も意味する。アミノ基は最も一般的には、カルボキシル官能基に対してベータ位（即ち、カルボキシル基から２番目の原子であって、カルボキシル基の炭素原子は数えない）にあるが、当該アミノ基は、分子中のいかなる位置に存在してもよい。また、アミノ酸は、追加的な官能基、例えば、アミノ、チオ、カルボキシル、カルボキサミド、イミダゾール等を含んでよい。本明細書において使用されるように、「アミノ酸」の語は、特に、アミノ酸、並びにその誘導体、例えば、制限されることなく、ノルバリン、２−アミノヘプタン酸、及び、ノルロイシンを含む。アミノ酸は、合成されても、又は天然であってもよく、そして、ラセミ体、又は光学活性（Ｄ−又はＬ−）形態のいずれかにおいて使用することができ、様々な割合の立体異性体を含む。当該アミノ酸は、このような化合物のいかなる組み合わせであってもよい。最も好ましくは、天然のアミノ酸である。当該天然アミノ酸は、フェニルアラニン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、バリン、セリン、プロリン、スレオニン、アラニン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン、アルパラギン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システイン、トリプトファン、アルギニン、及びグリシンである。
【００３８】
「オリゴペプチド」は、モノマーが全部で１００アミノ酸以下、好ましくは、２５アミノ酸以下であるいかなるポリマーも意味する。また、オリゴペプチドの語は、１つのアミド結合により結合される２つのアミノ酸から成るポリマー、並びに３つのアミノ酸から成るポリマーを包含する。
【００３９】
粉末（例えば、「乾燥粉末」における）について言及する「乾燥」は、約１０％以下の水分しか含まないものとして定義される。好ましい組成物は、７％以下の水分、より好ましくは、５％以下の水分、より更に好ましくは、３％以下の水分、そして、最も好ましくは２％以下の水分しか含まない。いかなる与えられた組成物の水分も、例えば、ミツビシモイスチャーメーターモデル＃ＣＡ−０６を使用してＫａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定法により決定することができる。
【００４０】
本明細書において使用される「賦形剤」は、粒子、粉末又は組成物の非抗体及び非希釈剤成分を意図する。このように、「賦形剤」、例えば、バッファー、糖質、アミノ酸等が、製剤の成分として意図され、そして、反対に、例えば、不純物（例えば、ほこり）等の製剤の成分を意図するものではない。
【００４１】
「治療的有効量」は、所望する治療的効果を供するために必要な抗体の量である。必要とされる正確な量は、対象者間で変化するであろうし、そして、あるいは、以下に更に詳細に説明するいくつかの因子により影響されるであろう。適当な「治療的有効量」はしかしながら、いかなる個々のケースにおいても、通常の当業者により決定することができる。
【００４２】
「実質的に」の語は、５０％以上、より好ましくは、８５％以上、更に好ましくは、９２％以上、そして、最も好ましくは９６％以上の状態を満足する系を意味する。
【００４３】
「抗体」の語は、典型的には、「抗原」を意味する他の分子と結合できる免疫グロブリンタンパク質を意味する。本明細書において使用される場合、「抗体」の語は、抗原と結合できる全ての抗体、並びにいかなるその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）2、Ｆｖ、単ポリペプチド鎖結合分子［例えば、米国特許第５，２６０，２０３号において説明される］等）を含むことが理解されるだろう。追加的には、「抗体」の語は全ての抗体型、例えば、ポリクローナル、モノクローナル、及び、ファージディスプレイ技術により産出されたこれらのもの、並びに、例えば、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、及びＩｇＧ4を含む）、ＩｇＭ（サブクラスＩｇＭ1及びＩｇＭ2を含む）、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ1及びＩｇＡ2を含む）、ＩｇＤ及びＩｇＥを含む抗体クラス、サブクラス、サブタイプ等を包含するだろう。
【００４４】
「患者」の語は、抗体又は抗体断片の投与により予防することができる状態に苦しんでいる、又はその傾向にある生物を意味し、そして、ヒト及び動物の両方を含む。
【００４５】
「任意的」及び「任意的な」は、引き続いて説明される状況が発生しても、あるいは、発生しなくてもよく、そのため、その説明は、その状況が発生する例及び発生しない例を含む。このため、例えば、「任意的な賦形剤」を含んで成る再構成組成物は、１又は複数の賦形剤を含んで成る再構成組成物、並びに賦形剤が欠如している再構成組成物を含んで成る。
【００４６】
それから最初の態様に戻ると、本発明は、抗体含有粒子を含んで成る組成物を供し、上記において、当該粒子は一定のサイズを有する。７．５μｍ以上で約５００μｍ以下のマスメディアン径を有する粒子を含んで成る粉末は、簡単な方法において、再構成組成物を形成することが発見された。しかしながら、典型的には、上記粒子は、７．５μｍ以上で約１００μｍ以下のマスメディアン径を有する。より大きな粒子は、所望されない水分量を保持するおそれがあり、そして相対的にゆっくりと再構成し得る。より小さな粒子は、それらの製造のために、より厳密な手順、及び／又は、例えば、粉砕といった追加的なプロセシング工程を必要とし得る。このように、本明細書において供される範囲外の粒子も、本発明に関して使用することができるが、当該範囲以内である粒子が好ましい。本明細書において説明される複数の抗体含有粒子は、簡便に粉末を形成する。
【００４７】
しかしながら、１０μｍ以上で約１００μｍ以下、より好ましくは１０μｍ以上で約５０μｍ以下、更に好ましくは１０μｍ以上で約３０μｍ以下のマスメディアン径を有する粒子が特に好ましく、約１５μｍ以上で約３０μｍ以下のマスメディアン径を伴うものが最も好ましい。
【００４８】
所望のサイズ範囲を有する粒子は、いくつかの方法により供することができる。例えば、相対的に大きな抗体含有粒子は、ミリングすることにより適当なサイズに微粒子化することができる。相対的に大きな粒子を所望のサイズを有するより小さな粒子へと減少させるために、商業的に入手可能なミル、例えば、DN Industries (Bristol, PA) からのＳＴＯＫＥＳ（登録商標）を使用できる。幾つかのミルタイプを使用するこができ、例えば、可動内部分、例えば、プレート、ブレード、ハンマー、ボール、小石等を含んで成るエアージェットミルを含み、上記において、粉砕、又は所望しない大きな粒子を所望する小さな粒子にするために使用される。
【００４９】
上記粒子が所望するサイズを有することを保証するために、当該粒子は、粒子のサイズを決定するための既知の技術を使用して分析することができる。例えば、当該粒子は、視覚的に点検し、及び／又は、既知の大きさの開口を有する１又は複数のメッシュスクリーンを通過させてもよい。視覚的な点検において、光学的、電子顕微鏡走査（ＳＥＭ）、及び透過型電子顕微鏡技術を含む顕微鏡技術を使用してもよい。追加的には、粒子サイズの分析はレーザー回折法を使用して行うことができる。レーザー回折による粒子サイズの分析を行うための商業的に入手可能なシステムは、Clausthal-Zellerfeld(HEOS H1006) から入手できる。
【００５０】
粒子のサイズの測定において、幾つかの技術が使用できる。例えば、粉末のマスメディアン径は、Ｈｏｒｉｂａ ＣＡＰＡ−７００粒子サイズアナライザー（Horiba Instruments Inc. , Irvine CA)、又は同様の機器を使用して測定することができる。粒子サイズの測定は、一般的に、懸濁培地中に分散した粒子の遠心沈降に基づく。粒子のストークス径に基づくマスメディアン径は、粒子密度並びに懸濁培地の密度及び粘性を使用して計算できる。
【００５１】
抗体含有粒子は、いかなる形状を取っていてもよく、そして本発明はこれに関して制限されない。典型的な粒子形状は、回転楕円体、楕円形、多角形、リング型等を含む。その形態に関わらず、抗体含有粒子は当該粒子中に抗体を有する。これは、一般的に、ビーズ、樹脂、又は同様の物質に対して共有結合的に付着し、通常、例えば、抗体に基づく検出アッセイにおいて使用される「抗体付着粒子」とは対照的である。「抗体含有粒子」の語は、特に、「抗体付着粒子」のようなものは除外する。
【００５２】
抗体含有粒子（典型的には、粉末の形態における）は、例えば、噴霧乾燥粉末の形成すること、凍結乾燥化生成物の粉砕すること等を含む幾つかの異なるアプローチにおいて調製することができる。
【００５３】
抗体含有液の噴霧乾燥は、抗体含有粒子を供するために好ましいアプローチであることが示される。噴霧乾燥は、一般的には、”Spray Drying Handbook”, 5th ed., K. Masters, John Wiley & Sons, Inc. , NY, N. Y. (1991), and in Platz, R. , et al., 国際特許公報ＷＯ９７／４１８３３、及び、ＷＯ９６／３２１４９において説明されるように行うことができる。
【００５４】
端的には、当該目的のための噴霧乾燥は、抗体含有液を供することにより、開始する。典型的には、必然的ではないが、抗体含有液は、抗体の溶解度、抗体の量、及び培地のｐＨに依存する水溶液又は懸濁液の形態である。このように、上記抗体は、一般的に、先ず、ｐＨ調整剤（例えば、酸又は塩基）及び／又はバッファーを任意的に含んで成る水に溶解又は懸濁させる。本明細書において使用される噴霧乾燥させる抗体含有液は、互換的に「フィード液」又は「抗体含有フィード液」を意味する。
【００５５】
典型的な水性フィード液は、一般的に、約３から約１１の範囲、より典型的には約３．５から約９の範囲のｐＨを有し、中性ｐＨ（例えば、約５．５から約７．８）が最も好ましい。このように、フィード液は、約３から約４、約４から約５、約５から約６、約６から約７、約７から約８、又は、約８から約９の範囲のｐＨを有することができる。フィード液のｐＨの調整は、酸又は塩基を加えることにより達成できる。
【００５６】
上記フィード液は、１又は複数の追加的な賦形剤を任意的に含んでよい。フィード液に添加できる制限のない賦形剤の例は、水−混和性溶媒、アミノ酸、アミノ酸誘導体、オリゴペプチド、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、抗酸化剤、表面活性剤、バッファー、酸、塩基、及び、これらの組み合わせを含む。
【００５７】
任意的に１又は複数の水−混和性溶媒は、上記フィード液中に含まれてもよい。例えば、水−混和性溶媒、例えば、アセトン、アルコール及び他の既知の水−混和性溶媒はフィード液に添加することができる。代表的なアルコールは、低級アルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等である。水性フィード液が水−混和性溶媒を含んで成る場合、混合された溶媒系が形成され、そして、典型的には、約０．１％から約８０％の水混和性溶媒、より好ましくは約２０％から約４０％、そして、最も好ましくは約１０％から約３０％の水混和性溶媒を含むであろう。
【００５８】
また、上記フィード液は、１又は複数のアミノ酸を任意的に含んで成ることができる。典型的なアミノ酸（及びその誘導体）は、グリシン、アラニン、バリン、アスパラギン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、プロリン、メチオニン、そのアシル化形態、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されるものを含む。好ましくは、しかしながら、上記アミノは、ヒスチジン、ロイシン、又はこれらの組み合わせである。
【００５９】
また、本明細書において説明するアミノ酸のいずれかを含むオリゴペプチドは、フィード液中の任意的な賦形剤としての使用のために適当である。好ましいオリゴペプチドは、しかしながら、ポリ−リジン（例えば、２から１０のリジン残基、より好ましくは４から１０のリジン残基を含んで成る）、ポリ−グルタミン酸（例えば、２から１０のグルタミン酸残基、より好ましくは４から１０のリジン残基を含んで成る）、及びポリ−リジン／アラニン（例えば、いかなる配列順における、２から５のリジン及びアラニンの残基を含んで成る）、ジロイシン、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｇｌｙ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ａｌａ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｖａｌ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｉｌｅ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｍｅｔ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｐｒｏ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｐｈｅ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｔｒｐ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｓｅｒ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｔｈｒ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｃｙｓ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｔｙｒ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ａｓｐ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｇｌｕ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｌｙｓ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ａｒｇ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｈｉｓ、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｎｏｒ、ｇｌｙ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ａｌａ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｖａｌ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｉｌｅ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｍｅｔ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｐｒｏ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｐｈｅ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｔｒｐ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｓｅｒ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｔｈｒ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｃｙｓ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｔｙｒ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ａｓｐ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｇｌｕ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｌｙｓ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ａｒｇ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｈｉｓ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｎｏｒ−ｌｅｕ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｇｌｙ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ａｌａ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｖａｌ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｉｌｅ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｍｅｔ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｐｒｏ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｐｈｅ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｔｒｐ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｓｅｒ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｔｈｒ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｃｙｓ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｔｒｙ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ａｓｐ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｇｌｕ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｌｙｓ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ａｒｇ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｈｉｓ−ｌｅｕ、ｌｅｕ−ｎｏｒ−ｌｅｕ、ｌｙｓ−ｌｙｓ−ｌｙｓ、及びこれらの組み合わせを含む。特に好ましいオリゴペプチドは、ｌｅｕ−ｌｅｕ−ｌｅｕ又は「トリロイシン」である。
【００６０】
炭水化物、例えば、糖質、誘導化糖質、例えば、アルジトール、アルドン酸、エステル化糖質、及び糖質ポリマーは、任意的な賦形剤としてフィード液中に存在できる。特定の炭水化物賦形剤は、例えば、モノサッカライド、例えば；フルクトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等；ジサッカライド、例えば、ラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース等；ポリサッカライド、例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、スターチ等；及び、アルジトール、例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトール、ソルビトール（グルシトール）、ピラノジルソルビトール、ミオイノシトール等を含む。フィード液における使用に好ましい炭水化物は、スクロース及びトレハロースを含む。幾つかの条件において、フィード液、並びに生じた粒子及び粉末は、メレジトースを含まないことが望ましい。
【００６１】
また、フィード液中の任意的な賦形剤は、無機塩又はバッファー、例えば、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせを含んでよい。一価又は二価のカチオンを供する塩、例えば、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、マンガン、カルシウム、亜鉛及びマグネシウムが好ましい。好ましくは、上記塩又はバッファーは、クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム及びこれらの組み合わせから成る群から選択される。
【００６２】
また、上記フィード液は、任意的に、フィード液中での微生物の成長の防止又は阻止するための抗微生物剤を含んでよく、それにより、生じる製剤中に存在する。本発明に適当な抗微生物剤の制限のない例は、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、チマーソル（thimersol)、及びこれらの組み合わせを含む。
【００６３】
任意的に、抗酸化剤も同様にフィード液中に存在してもよい。抗酸化剤は、酸化を防止するために使用され、それにより抗体の劣化を防止する。本発明に使用される適当な抗酸化剤は、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒドナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、及びこれらの組み合わせを含む。
【００６４】
また、上記フィード液は、任意的に、表面活性剤を含んで成る。典型的な表面活性剤は、：ポリソルベート、例えば、Ｔｗｅｅｎ、例えば、「Ｔｗｅｅｎ−２０」及び「Ｔｗｅｅｎ−８０」及びプルロニック（pluronics)、例えば、Ｆ６８及びＦ８８（ともに、BASF, Mount Olive, New Jerseyから入手可能）；ソルビタンエステル；脂質、例えば、リン脂質、例えば、レクチン及び他のフォスファチジルコリン、フォスファチジルレタノールアミン（好ましくはリポソーム形態中にはない）、脂肪酸及び脂肪酸エステル；ステロイド、例えば、コレステロール、；並びに、キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡ、亜鉛及び他のこのような適当なカチオンを含む。
【００６５】
酸又は塩基は、任意的な賦形剤としてフィード液中に存在してもよい。使用できる酸の制限のない例は、塩酸、酢酸、リン酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル酸、及び、これらの組み合わせから成る群から選択されるこれらの酸を含む。適当な塩基の例は、制限することなく、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、フマル酸カリウム、及び、これらの組み合わせから成る群から選択される塩基を含む。
【００６６】
本発明に従う組成物における使用に適当な他の任意的な賦形剤は、"Remington: The Science & Practice of Pharmacy,"19 ed. , Williams & Williams, (1995), "Physician's Desk Reference, 52nd ed. , Medical Economics, Montvale, NJ (1998), WO 96/32096, 及び "Handbook of Pharmaceutical Excipients,"3rd ed., Kibbe, A. H. Editor (2000)において挙げられる。
【００６７】
粒子当たりの相対的に多量の抗体を含む抗体含有粒子を供するために、相対的に高濃度の抗体がフィード液中に存在するであろう。フィード液中の抗体及び任意的な賦形剤（例えば、糖質、担体、塩等）の濃度は、慣習的に、「固体濃度」を意味する。本質的に、当該固体濃度は、生じる噴霧乾燥粒子中で究極的に保持される、抗体含有フィード液中に存在する全成分の総濃度を示す。存在する場合、しかしながら、揮発性塩（例えば、ＮａＨＣＯ3）は、これらの塩が実際には噴霧乾燥粒子中に存在していないとしても固体濃度の一部として含まれる。
【００６８】
フィード液中の典型的な固体濃度は、約０．０１％（重量／容積又はｗ／ｖ）から約３０％（ｗ／ｖ）、約０．５％（ｗ／ｖ）から約３０％（ｗ／ｖ）、及び、約１．０％（ｗ／ｖ）から約２０％（ｗ／ｖ）の濃度を含むが、当該範囲外の固体濃度もまた使用してもよい。それから、ｍｇ／ｍｌの語において、対応する典型的な固体濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌから約３００ｍｇ／ｍｌ、及び、約１０ｍｇ／ｍｌから約２００ｍｇ／ｍｌである。特に、フィード液は、典型的には、以下の固体濃度の１つを有するであろう：０．１ｍｇ／ｍｌ以上、５ｍｇ／ｍｌ以上、７．５ｍｇ／ｍｌ以上、１０ｍｇ／ｍｌ以上、１５ｍｇ／ｍｌ以上、２０ｍｇ／ｍｌ以上、３０ｍｇ／ｍｌ以上、４０ｍｇ／ｍｌ以上、又は５０ｍｇ／ｍｌ以上。好ましくは、フィード液は、７．５ｍｇ／ｍｌ以上、より好ましくは、約１０から約１５ｍｇ／ｍｌの固体濃度を有する。追加的には、１００ｍｇ／ｍＬの固体濃度もまた使用してもよい。典型的には、必然的ではないが、抗体は約５０％以上、より好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、更により好ましくは約９５％以上、いっそう更に好ましくは約９８％以上、そして、最も好ましくは約９９％以上の総固体濃度を構成するであろう。
【００６９】
より高い個体濃度は、一般的に、与えられた粒子中において相対的に高い濃度の抗体に対応するため、上記フィード液は、好ましい固体濃度範囲の高い値（即ち、より高い個体含有量）において噴霧乾燥させることが好ましい。当該方法において、少数の抗体含有粒子は、伸展、粉末により、所望される抗体濃度を有する再構成製剤を供するために必要とされる。追加的には、フィード液中の相対的に高濃度の抗体は、噴霧乾燥の間、液滴表面中の抗体の相対的に低い割合の「内部に対する暴露」量をもたらし、それにより、相対的に多い抗体が完全に液滴中に存在するために、空気−液滴界面に関する分解の相対量が減少する。
【００７０】
究極的には、上記噴霧乾燥粒子中の抗体量は、一般的に、少なくともだいたい以下の抗体の割合の１つを含むであろう：１重量％、５重量％、１０重量％、２０重量％、３０重量％、４０重量％、５０重量％、６０重量％、７０重量％、８０重量％、９０重量％、又はそれ以上。好ましくは、上記抗体含有粒子（そして、後から１又は複数の任意的な賦形剤が添加される）から形成される粉末は、少なくとも約５０％、例えば、約５０から９９．９重量％の抗体含有粒子の総量を含むであろう。
【００７１】
再構成組成物中、又は噴霧乾燥粉末中のいかなる個々の賦形剤（存在する場合）の量も、当該賦形剤の活性及び所望される噴霧乾燥粉末及び／又は再構成組成物の粒子の特定の要件に依存して変化するであろう。典型的には、いかなる個々の賦形剤の最適量は、慣習的な実験通して、即ち、異なる量の賦形剤（低から高の範囲）を含む組成物を調製すること、その安定性、再構成性（再構成時間を含む）、製剤中の凝集率等を検査すること、それから更に、有意な副作用のない最適な性能が得られる範囲を決定することにより決定される。
【００７２】
しかしながら、一般的に、上記賦形剤は、再構成組成物または噴霧乾燥粉末中において、約０．０１重量％から約９９重量％、好ましくは約５重量％から約９８重量％、より好ましくは約１５重量％から約９５重量％の賦形剤が存在し、３０重量％以下の濃度であるものが最も好ましい。
【００７３】
抗体及び任意的な賦形剤を選んでから、噴霧乾燥のためのフィード液を形成するために、当該抗体及び任意的な賦形剤に液体を加える。当該液体は一般的に水性であるが、噴霧乾燥に適当な如何なる液体を使用してもよい。一般的に上記フィード液は溶液、例えば、水溶液、であろうが、懸濁液もまた使用してよい。上記フィード液は典型的には、噴霧乾燥の前に十分に混ぜる。
【００７４】
それから、上記フィード液を慣習的な噴霧乾燥機、例えば、商業者、例えば、Ｎｉｒｏ Ａ／Ｓ（デンマーク）、Ｂｕｃｈｉ（スイス）から入手可能なものの中で噴霧乾燥させ、乾燥粉末がもたらされる。溶液の噴霧乾燥に最適な条件は、製剤の成分に依存して変化し、一般的に実験的に決定される。物質を噴霧乾燥させるために使用されるガスは、典型的には、空気であるが、不活性ガス、例えば、窒素またはアルゴンもまた適当である。更には、物質を噴霧乾燥させるために使用されるガスの入り口及び出口の両方の温度は、噴霧された物質中で、活性剤の分解が生じないような温度である。このような温度は、典型的には、実験的に決定されるが、一般的に、入り口の温度は約５０℃から約２００℃の範囲であり、一方、出口の温度は約３０℃から約１５０℃の範囲であろう。好ましいパラメーターは、約２０から１５０ｐｓｉ（０．１４から１．０３ＭＰａ）、及び好ましくは約３０〜約４０から１００ｐｓｉ（０．２１−０．２８から０．６９ＭＰａ）の範囲の噴霧圧を含む。利用される典型的な噴霧圧は以下のうちの１つであろう：２０ｐｓｉ（０．１４ＭＰａ）、３０ｐｓｉ（０．２１ＭＰａ）、４０ｐｓｉ（０．２８ＭＰａ）、５０ｐｓｉ（０．３４ＭＰａ）、６０ｐｓｉ（０．４１ＭＰａ）、７０ｐｓｉ（０．４８ＭＰａ）、８０ｐｓｉ（０．５５ＭＰａ）、９０ｐｓｉ（０．６２ＭＰａ）、１００ｐｓｉ（０．６９ＭＰａ）、１１０ｐｓｉ（０．７６ＭＰａ）、１２０ｐｓｉ（０．８３ＭＰａ）またはそれ以上。噴霧乾燥粒子は、他の乾燥法により調製された粉末と物理的に異なり、そして、典型的には、他の乾燥法、例えば、凍結乾燥により調製された粉末とは異なる形態及び熱履歴（ガラス転移温度、ガラス転移幅、及びエンタルピー緩和特性を含む）を示す。
【００７５】
上記噴霧乾燥粉末は、一般的に、約２０重量％以下、通常は約１０重量％以下、及び好ましくは約６重量％以下の水分含有量を有するであろう。より好ましくは、上記噴霧乾燥粉末は、典型的には約３重量％以下、より好ましくは約２重量％以下、及び最も好ましくは約０．５から２重量％の残留含水量を有する。このような低い含水個体は、包装及び保管において優れた安定を示す傾向にある。任意的に、上記噴霧乾燥粉末は、吸湿を防止するすために密封した容器、例えば、ブリスター包装、バイアル等において保管してもよい。
【００７６】
抗体を含むフリーズドライ生成物または凍結乾燥生成物の粉砕は、抗体含有粒子を供するための他のアプローチを示す。当該アプローチにおいて、抗体は混合物を形成するために水に導入される。噴霧乾燥に関して上述の通り、任意的に、１または複数の賦形剤（例えば、糖質、例えば、スクロース及びトレハロース、バルク剤、例えば、マンニトール、界面活性剤、抗酸化剤等）もまた、上記混合体に導入できる。混合物が形成されると、当該混合物の温度は、慣習的な技術を使用して、その共融点以下に下げられる。それから、混合物由来の水を昇華し、それによりフリーズドライ生成物が形成される。
【００７７】
簡便には、商業的に入手可能なフリーズドライアーは凍結及び昇華工程を行うために利用できる。商業的に入手可能なフリーズドライアーの例は、Ｈｕｌｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｗａｒｍｉｎｓｔｅｒ，ＰＡ）及びＳｔｅｒｉｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍｅｎｔｏｒ，ＯＨ）から入手可能なものが挙げられる。特定のフリーズドライ技術が使用されるにも関わらず、フリーズドライ化の結果は、「乾燥泡沫」又は「ケーキ」の状態におけるフリーズドライ生成物の形成である。
【００７８】
凍結乾燥生成物の引き続く粉砕は、抗体含有粒子をもたらす。凍結乾燥化生成物の粉砕は、いくつかの当業界に既知の方法を使用して行うことができる。一般的に、粒子サイズを減少させる点について以前に述べたように、商業的に入手可能なミルは、粒子を所望する粒子サイズに粉砕するために利用される。フリーズドライ物質の粉砕から調製された粒子は、しかしながら、噴霧乾燥技術から調製された粒子と異なる。本発明の目的のめためには、噴霧技術と生じる噴霧乾燥粒子が好ましい。
【００７９】
抗体含有粒子を形成するための他のアプローチもまた使用することができる。例えば、顆粒化技術、沈殿技術等は、粒子を調製するために使用できる。必要であれば、所望のサイズを有する抗体含有粒子を供するために粉砕工程（上述の通り）を行うことができる。
【００８０】
抗体含有粒子を供するために、如何なるアプローチが使用されようと、抗体含有粒子は回収され、そして、一緒に混合され、それにより粉末を形成する。抗体含有粒子を乾燥条件下（即ち、相対的に低い湿度）に保つことが好ましい。更に、可能な最も優れた程度にするため、上記粒子及び粉末の更なる取り扱い（例えば、化抗、包装及び貯蔵）は乾燥条件下で行われる。
【００８１】
所望すれば、１又は複数の粒子性賦形剤を上記粉末に添加してもよい。当該態様において、上記粉末は、抗体含有粒子（また、１又は複数の賦形剤）だけでなく、賦形剤の独立した粒子を構成することもあるであろう。換言すれば、抗体含有粒子に加えて、上記粉末は物理的に分離した「賦形剤のみ」の粒子の混合物を含んで成ってよい。１又は複数の上記の個々の賦形剤は、上記賦形剤が粒子形態で供されることができる限り、粉末に加えることができる。
【００８２】
任意的に、上記粉末は分割することができる。例えば、当該粉末は質量に基づき分割することができ、そして、例えば、バイアル又はシリンジ中で保管してもよい。治療的投与に至適な各分割したポーションはユニットドーズの抗体を含むであろう。有利には、バイアル（例えば、ガラスまたはプラスチックバイアル）中に充填できる粉末と当該粉末の使用説明書が中に入っているキットを供することができる。当該キットは、粉末の再構成における使用のために前もって測定された希釈剤のバイアルを任意的に含んでよい。追加的には、上記キットは、再構成された粉末を患者に対して投与するための針及びシリンジを任意的に含む。
【００８３】
有利には、上記抗体含有粒子（典型的には、粉末形態における）は、再構成組成物を形成するために再構成することができる。当該抗体は、患者に対する投与に適当な濃度において、再構成組成物中に存在する。しかしながら好ましくは、再構成組成物は、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量における抗体、希釈剤、任意的な希釈剤を含んで成り、上記において、再構成組成物は、抗体及び任意的な賦形剤を含んで成る粉末（典型的には噴霧乾燥粉末）から形成される。典型的には、必然的ではないが、当該粉末は噴霧乾燥プロセス（時々噴霧乾燥粉末を意味する）により調製された粉末形態において存在する。
【００８４】
上記再構成組成物は、典型的には、以下の、抗体を含んで成る粉末（典型的には、噴霧乾燥粉末）を供すること、及び再構成組成物を形成するために希釈剤を添加することの工程を含んで成る方法により調製され、上記において、抗体は約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量において、再構成組成物中に存在する。粉末を再構成するための希釈剤を添加する工程は、典型的には、必然的ではないが室温において行われる。
【００８５】
組成物を再構成するためにいかなる適当な希釈剤も使用することができ、そして、本発明はこの点において制限されない。しかしながら、好ましい希釈剤は、注射のための静菌水、水中のデキストロース５％、リン酸緩衝食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ液、食塩水、無菌水、脱イオン水、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されるものである。
【００８６】
上記粉末に加えられる希釈剤の量は、意図する投与に適当な濃度を生じるような量である。与えられる適用に適当な抗体濃度は、通常の当業者は知っているか、又は実験的に決定できる。しかしながら、典型的には、再構成組成物中の抗体の濃度は、約１０００ｍｇ／ｍＬ又はそれ以下である。このように、例えば、１０００ｍｇの抗体を含んで成るフィード液を完全に噴霧乾燥すること、及び全ての噴霧乾燥粉末を完全に回収することは、１０００ｍｇ／ｍＬの抗体濃度を有する再構成組成物を形成するために１ｍＬの希釈剤を必要とし、５００ｍｇ／ｍＬの抗体濃度を有する再構成組成物を形成するためには２ｍＬの希釈剤が必要であろう。
【００８７】
皮下投与のために、再構成組成物中の好ましい濃度範囲は、約２５ｍｇ／ｍＬから約７５０ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは約２５ｍｇ／ｍＬから約５００ｍｇ／ｍＬであり、更に好ましくは約５０ｍｇ／ｍＬから約４５０ｍｇ／ｍＬであり、より更に好ましくは約７０ｍｇ／ｍＬから約４００ｍｇ／ｍＬであり、そして、より更に好ましくは約１００ｍｇ／ｍＬから約３００ｍｇ／ｍＬである。上記抗体の他の好ましい範囲は、約２５ｍｇ／ｍＬから約２５０ｍｇ／ｍＬである。
【００８８】
静脈内投与に関して、典型的な抗体濃度は、約２．５ｍｇ／ｍＬから約１００ｍｇ／ｍＬ、約５ｍｇ／ｍＬから約７５ｍｇ／ｍＬ、約１０ｍｇ／ｍＬから約５０ｍｇ／ｍＬを含む。
【００８９】
いくつかの例において、再構成組成物中の抗体濃度は、抗体含有粒子を形成するために使用される溶液（例えば、噴霧乾燥粉末のためのフィード液）中のものより高いであろう。例えば、再構成組成物中の抗体濃度は、抗体含有粒子を形成するために使用される液体（例えば、噴霧乾燥粉末のためのフィード液）中のものよりも、約２から約５０倍、好ましくは約３から約２５倍、そしてより好ましくは約４から約１０倍であってよい。
【００９０】
いくつかの環境において、再構成組成物は、上記抗体、並びに噴霧乾燥及びその後の貯蔵（例えば、炭水化物／またはアミノ酸）における抗体の化学的または物理的な不安定性を防止または減少させる賦形剤のフィード液から調製された。抗体に対する賦形剤の典型的なモル比は：１モルの抗体に対して約０．０００１から０．００１モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約０．００１から０．０１モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約０．０１から０．１モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約０．１から１モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約１から１０モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約１０から１００モルの賦形剤；１モルの抗体に対して約１００から１０００モルの賦形剤を含む。
【００９１】
上記再構成組成物は好ましくは、実質的に凝集体を有さない。上記粒子、粉末、及び再構成組成物は２０重量％以下の全凝集体、より好ましくは１０重量％以下の全凝集体、更に好ましくは５重量％以下の全凝集体、より更に好ましくは２重量％以下の全凝集体しか有さず、１重量％以下の全凝集体しか伴わないものが最も好ましい。
【００９２】
粉末を再構成するために必要とされる時間は、抗体、１又は複数の任意的な賦形剤の存在及び効果、使用される希釈剤等を含む因子の多様性に依存するであろう。しかしながら、再構成組成物は、希釈剤を添加してから、好ましくは約１５分以内に、より好ましくは１０分以内に、そして最も好ましくは５分以内に視覚的に透明になる。
【００９３】
前述のように、再構成組成物は、任意的に賦形剤を含んで成る。再構成組成物中の賦形剤は、粉末を構成する抗体含有粒子中のその存在により存在してもよい。追加的には、上記賦形剤は、再構成の前であって、粉末を形成する抗体含有粒子処方後の添加の結果、組成物中に存在しうる。更には、上記賦形剤は、希釈剤の添加とともに、又は希釈剤の添加後に加えることにより、再構成組成物中に存在できる。更に、医薬組成物中に通常使用される如何なる賦形剤も使用することができ、そして、前述の如何なる賦形剤、例えば、アミノ酸、アミノ酸誘導体、オリゴペプチド、炭水化物、無機塩、抗微生物剤、抗酸化剤、表面活性剤、バッファー、酸、塩基、及びこれらの組み合わせから成る群から選択されるものを含んでよい。
【００９４】
好ましくは、再構成組成物は、注射に適当である。このように、本明細書において説明した製剤−再構成の前及び後の両方とも−は、細菌、及び細菌のエンドトキシンを含まない。追加的には、再構成組成物は、好ましくは、光学顕微鏡で測定した場合、容器当たり大きさが１０μｍ以上の３０００以下の粒子（明かりを暗くして測定した場合は６０００以下）及び容器当たり大きさが２５μｍ以上の３００以下の粒子（明かりを暗くして測定した場合は６００以下）が存在する慣習的な注射可能な粒子レベル要件に合致する、又はそれを上回る。これらの要件は他の投与経路、例えば、肺経路の他の要件とは対照的である。肺経路において、例えば、一般的に受け入れられる吸入可能な粉末の要件は、細菌がグラム当たり約１０コロニー−フォーミングユニット（ＣＦＵ）まで存在することができることを供する。
【００９５】
無菌は、例えば、抗体含有粒子を供するために使用されるプロセス（例えば、噴霧乾燥プロセス）、並びにその後の完全な無菌条件下でのパッキングを行うことにより保証される。追加的には、無菌化は、照射、並びに化学的方法（例えば、気化過酸化水素に最終組成物を暴露する）を介して達成することができる。更には、技術の組み合わせを使用することができる。噴霧乾燥させた抗体含有製剤に関して、当該噴霧乾燥は、無菌を保証するために、流入する溶液及び空気の流れをろ過する無菌の閉じた系中で導くことができる。このように、例えば、フィード液をろ過するために０．２μｍフィルターを使用することができる。追加的には、噴霧プロセスにおいて使用されるガスをろ過するために０．２μｍフィルターを使用することができる。
【００９６】
調製されると、更に無菌条件下において、抗体含有粉末は適当な容器（例えば、ガラスバイアル）中に充填され、所望する容器を充填するために、機械的な充填機が使用でき、そして、本発明はこの点に関して制限されない。典型的な充填機は、Ｍ＆Ｏ Ｐｅｒｒｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｃｏｒｏｎａ，ＣＡ）から入手可能であり、そして、そのＭｏｄｅｌ ２１１５充填機も含む。このような充填機は、約１００−２００ｍｇの充填重量において、分当たり少なくとも３５から４５の所望する容器を充填することが可能である。粉末を気密シールでパックし、充填した粉末を輸送し、そして配給し、そして必要となるまで保管することができる。
【００９７】
上記抗体に関して、如何なる抗体も抗体含有粒子中、並びに本明細書中で説明する組成物中において使用できる。本発明に関して有用な抗体の制限のない例は、微生物（呼吸器病原体を含む）に対する抗体、腫瘍抗原に対して作られるモノクローナル抗体、及び細胞レセプターに対する抗体（炎症及びアレルギーに関するレセプターを含む）を含む。上記再構成組成物は、完全長の抗体又は抗体断片のいずれかを含んで成ることができるため、完全長の抗体、並びに抗体断片は、治療薬、診断薬、及び／又は検査薬としての実証された価値を有する。抗体断片が使用される場合、注目の抗体断片が、例えば、治療薬、診断薬、検査薬等の価値を有する限り、如何なる断片型も使用できる。しかしながら、一般的に、当該抗体断片は、通常、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）2断片、Ｆｖ断片、及びシングルポリペプチド鎖結合分子から成る群から選択されるであろう。抗体が、治療薬又は診断薬、例えば、放射性医薬、化学療法薬、又は放射性標識に付着する（一般的に、必然的ではないが、共有結合的に付着する）免疫複合体もまた挙げられる。上記の如何なる医薬的に受容可能な塩もまた使用することができる。また、上記抗体は、脂質、リポソーム、微粒子等と共に処方することができる。
【００９８】
本発明の組成物における使用に適当な抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＤ及びＩｇＭを含む。しかしながら、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＭが使用されることが好ましく、ＩｇＧ及びＩｇＡを伴う抗体が特に好ましい。
【００９９】
本明細書において使用される抗体は、通常の当業者に知られている技術を使用して得ることができる。このような技術は、例えば、組み換え技術、ペプチド合成技術、及び単離技術を含む。
【０１００】
例えば、ポリクローナル抗体は、動物宿主中に抗体と結合するであろう抗原を皮下的に、静脈的に、又は筋肉内的に注射することにより調製することができる。当該動物宿主は、典型的には、必然的ではないが、ウサギ又はマウスである。しばしば、宿主における注射部位は、注射の前に、剃られ、そしてアルコールで拭かれるであろう。一般的に、上記注射は、動物宿主中の複数の部位で行われる。典型的には、抗原含有注射の総量は約１ｍＬ以上ではない。
【０１０１】
宿主細胞中に抗原を注射すると、宿主動物の免疫応答が、当該抗原に対して作られる抗体の製造を開始させる。特に、宿主動物のリンパ球は、血流中に当該抗原に対する抗体を産出し、そして分泌するであろう。それぞれは同じ抗原と結合するが、異なる抗体は、異なる抗原決定因子（「エピトープ」といわれる）とおそらく結合し、これにより、当該アプローチにより産出された抗体の「ポリクローナル」天然物を供される。
【０１０２】
動物宿主の血流中を循環しているポリクローナル抗体を回収するために、上記動物から血液採取が行われる。血液は、慣習的な技術、例えば、シリンジを備えた針の先端部を宿主に挿入することにより採取することができる。それから血液を採取し、典型的には、３７℃で一昼夜凝血させる。それから当該凝結させた血液を、上記血清を既知の方法（例えば、分当たり２５００回転で、約２０分間遠心分離し、そして抗体含有ポーションを収集する）により回収する前に、一般的に２４時間冷蔵する。血液採取は、周期的に、例えば、抗原の注射から約４週間後、抗原の注射から約７週間後、抗原の注射から約１１週間後、その後毎回三週間後において行う。
【０１０３】
上記血液採取は、所望する抗体の力価を決定すること（例えば、慣習的な酵素結合免疫測定法、又は「ＥＬＩＳＡ」により）、並びに抗体を回収すること（十分な力価が存在すると仮定）の２つの目的に役立つ。如何なる与えたれた試料中の抗体も、例えば、遠心分離、アフィニティーカラムを通した分離（例えば、「プロテイン−Ａ」カラム）、及びこれらの組み合わせにより回収できる。追加的な回収技術は通常の当業者に知られており、そして、同様に使用することができる。
【０１０４】
得られた血液試料が不十分な又は一般的に低い力価を有する範囲では、力価を増加させるために、及び／または抗体を供するのに十分なレベルの力価を維持するために、幾つかのアプローチが使用される。あるアプローチにおいて、動物宿主中で誘導された抗原は、タンパク質（例えば、スカシ貝ヘモシアニン又はアルブミン）と接合でき、それにより上記抗原の全体的な抗原性が増加する。追加的には、アジュバントとして知られる他の物質は、免疫応答を増強するために抗原と共に注射することができる。典型的には、完全フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバントは、初回注射において抗原と共に注射され、不完全フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバントは、後の注射において抗原と共に注射される。完全フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバント及び不完全フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバントは共に、商業的に入手可能であり、例えば、Sigma-Aldrich,Inc.(St. Louis, MO)から入手できる。
【０１０５】
また、モノクローナル抗体も本発明に関して使用できる。単一のリンパ球由来の細胞の培養コロニーから生成すると、モノクローナル抗体は、抗原上の１つのエピトープのみを認識する。モノクローナル抗体は、慣習的に、Kohler et al. (1975) Nature 256: 495において説明される方法を使用して調製することができる。
【０１０６】
端的には、モノクローナル抗体は、最初に、注目の抗原を適当な動物宿主、例えば、マウスに注射することにより調製することができる。その後、当該動物宿主を安楽死させ、そして動物宿主の脾臓中の抗体−生産リンパ球を回収するために脾臓を摘出する。それらの制限された成長能のために、癌細胞の多産及び実質的に制限のない成長の有利性を得るように正常な抗体−生産リンパ球を癌細胞と融合させる。リンパ球と癌細胞の融合は、ハイブリドーマ細胞をもたらす。適当な細胞培地に置くと、当該ハイブリドーマ細胞株は際限なく成長することができる。２つの異なる型の細胞の融合は、慣習的な融合剤、例えば、ポリエチレングリコールを使用して発生する。
【０１０７】
ハイブリドーマ中で使用される癌細胞及び当該細胞培養培地は、ハイブリドーマにとって選択が可能となるように特異的に選ばれる。これは、癌細胞としてヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ）を合成する能力を失ったミエローマ細胞を使用することにより、及び細胞培養培地としてＨＡＴ培地（即ち、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びピリミジンチミジンを含んで成る細胞培養培地）を使用することにより達成される。当該アプローチは、２つの経路を通して、生命を維持するプリンを得るための細胞の能力を前提とする：最初の経路は、ヒポキサンチンの存在下において、酵素ＨＧＰＲＴを必要とし；そして、２つ目の経路は、ギ酸拮抗薬、例えば、メトトレキセート又はアミノプテリンの存在において遮断されるギ酸により媒介される。当該アプローチの論理は以下の通りである：（ｉ）必須酵素ＨＧＰＲＴを欠くためにＨＡＴ培地中に存在するヒポキサンチンを使用することができないため、及び、ＨＡＴ培地中のギ酸拮抗薬であるアミノプテリンが、プリンを合成するための経路を媒介するギ酸を遮断するために、ＨＧＰＲＴを欠損している非融合ミエローマ細胞は成長しないであろう；（ii）非融合リンパ球は、その制限された寿命により、際限なく成長することができない；そして、（iii ）当該リンパ球がプリンを形成するために必須なヒポキサンチンを利用するために不可欠なＨＧＰＲＴを供するために、ハイブリドーマ細胞（リンパ球と癌細胞の成功的な融合）は際限なく成長することができる。
【０１０８】
好ましいＨＧＰＲＴ−欠損細胞は、the Salk Institute Cell Distribution Center(San Diego,CA)から入手可能なマウス型ＭＯＰＣ−２１若しくはＭＰＣ−１１細胞、及び the American Type Culture Collection(Rockville,MD)から入手可能なＳＰ２細胞を含む。ＨＡＴ培地を含む細胞培地は、例えば、Sigma-Aldrich, Inc. (St. Louis, MO) から商業的に入手可能である。
【０１０９】
それから、上記ハイブリドーマを、慣習的な技術、例えば、免疫沈降法、放射免疫アッセイ、ＥＬＩＳＡ法、又は類似の技術を使用して、抗体の産生のためにアッセイする。ハイブリドーマが所望の抗体（即ち、特定の抗原上の特定のエピトープに対して生産される抗体）を産出していると確認される場合、当該ハイブリドーマは、当該ハイブリドーマを適当な培地中に置くことによりサブクローニングし、そして成長させる。当該方法において、モノクローナル群が形成される。
【０１１０】
サブクローニングしたハイブリドーマにより分泌されたモノクローナル抗体は、慣習的な技術、例えば、プロテイン−Ａカラム、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー等を使用して分離される。
【０１１１】
追加的には、上記抗体は、組み換えＤＮＡ技術を使用して誘導することができる。例えば、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、例えば、適当なオリゴヌクレオチドプローブを使用して、ハイブリドーマ細胞から単離することができる。その後、当該ＤＮＡを適当な発言ベクター中に置き、それから、宿主細胞、例えば、大腸菌（E.coli)、中国ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は免疫グロブリンを生産しない他の細胞中にトランスフェクションすることができる。ハイブリドーマ細胞から得られたＤＮＡは、当然に、トランスフェクション前に改変することができる。例えば、ヒトの重−及び軽−鎖定常領域又は他の領域をコードする配列は、相同的宿主（マウス）細胞の配列で置換することができる。当該方法において、生じた抗体は、更にヒト化され、典型的には、ヒトに対する投与において抗原性が少ないであろう。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと。
【０１１２】
また、抗体は、慣習的に様々な供給者から得ることができる。例えば、抗体生産細胞は、the Salk Institute Cell Distribution Center (San Diego, CA) 及び the American Type Culture Collection (Rockville, MD) から入手することができる。好ましい細胞株は、特許委託番号(Patent Deposit Number) ＰＴＡ−４１１２として American Type Culture Collection で命名されたものである。当該細胞株により生産された抗体は、ポリ（エチレングリコール）に特異的であり、そして米国特許出願公報ＵＳ２００３／００１７５０４号においてより詳細に説明される。追加的なポリ（エチレングリコール）に特異的な抗体は、そしてＣＣＴＣＣ−Ｖ−２００００１として寄託及び命名され、そして、米国特許番号６，９５６，８４９号においてより詳細に説明される。追加的には、商業的供給者、例えば、Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)及び他の供給者は抗体を供することができる。
【０１１３】
上記抗体は、化学者、臨床家、又は診断者の要求又は要望により、適応させ、又は更に改変させることができる。例えば、異なる生物に由来し、又は基づく２以上の部分を組み合わせた抗体のキメラ形態を使用することができる。追加的には、ＣＤＲ−移植化抗体、及び／又は異なるグリコシル化形態を使用することができる。更には、薬剤（例えば、化学治療剤）が抗体又は抗体断片の非結合部と直接結合している、抗体−接合体、及び抗体断片−接合体を使用することができる。
【０１１４】
如何なるタイプの抗体も使用することができ、そして、本発明はこの点において制限されない。例えば、マウス又は他の宿主の全可変領域がヒトの定常領域と共に発現し、それにより、ヒトのエフェクター機能、並びに減少した免疫原生を供する、キメラ抗体を使用することができる。追加的に、ヒト化及びＣＤＲ移植片抗体中のマウス又は宿主抗体Ｖ領域由来の相補性決定領域はヒトＶ領域由来のフレームワーク領域と結合し、それにより減少した免疫原生をもたらす。追加的には、合成ファージライブラリー又はヒト免疫グロブリンの生殖系列遺伝子断片を合成するように処理した遺伝子組み換えマウス若しくは他の遺伝子組み換え動物から調製した完全なヒト抗体が使用できる。本明細書において使用される「抗体」の語は、これらのタイプの抗体のそれぞれを包含するものとして理解されるであろう。
【０１１５】
本発明おける使用のための特異的な抗体は、例えば（知られている場合は括弧中に商標名が供される）、アブシキシマブに関する抗体（ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、アフェリモバム（Ｓｅｇａｒｄ（登録商標））、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））、Ｂ−リンパ球に対する抗体（Ｌｙｍｐｈｏｓｔａｔ−ＢTM）、アトリズマブ、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標））、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ビシクロマブ、ＣＡＴ−２１３又はベルチリムマブ、ＣＤＰ−５７１（ＨｕｍｉｃａｄｅTM）、ＣＤＰ−８６０、ＣＤＰ−８７０、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、クレノリキシマブ、ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））、エクリズマブ（ＡｌｅｘｉｏｎTM）、エドレコロマブ（Ｐａｎｏｒｅｘ（登録商標））、エファリズマブ（ＲａｐｔｉｖａTM）、エプラツズマブ（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ（登録商標））、フォントリズマブ、ガビリノマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））、イブリツモマブ・チウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標））、イノリモマブ、ケリキシマブ、ラベツズマブ（ＣＥＡ−Ｃｉｄｅ（登録商標））、レルデリムマブ（Ｔｒａｂｉｏ（登録商標））、放射標識リム−１（Ｏｎｃｏｌｙｍ（登録商標））、メテリムマブ、メポリズマブ、ミツモマブ、ムロモナド−ＣＤ３（Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ−ＯＫＴ３（登録商標））、ネバクマブ（Ｃｅｎｔｏｘｉｎ（登録商標））、ナタリズマブ（Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標））、オヅリモマブ（Ａｎｔｉｌｆａ（登録商標））、オマリズマブ（Ｘｏｌａｉｒ（登録商標））、オレゴボマブ（ＯｖａＲｅｘ（登録商標））、パリビズマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標））、ペムツモマブ、ペキセリズマブ、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、サツモマブ・ペンデチド（Ｏｎｃｏｓｃｉｎｔ（登録商標））、セビルマブ（Ｐｒｏｔｏｖｉｒ（登録商標））、シプリズマブ、トシツモマブ及びＩ131トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、トラツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））、ツビルマブ、及びビシリズマブ（Ｎｕｖｉｏｎ（登録商標））を含む。
【０１１６】
また、本発明は、約２５ｍｇ／ｍＬから約１０００ｍｇ／ｍＬの量（好ましくは、必然的ではないが）における抗体、希釈剤、及び任意的な賦形剤を含んで成る治療的有効量の再構成組成物を、注射を介して投与することを含んで成る、抗体の治療に応答性である状態に苦しむ患者に対する組成物の投与方法を供する。典型的には、上記再構成組成物は、抗体、及び任意的な賦形剤を含んで成る噴霧乾燥粉末から形成される。
【０１１７】
特定の抗体の投与により治療又は予防できる如何なる状態も治療するために、上記治療方法を使用することができる。通常の当業者は、特異的な抗体が効率的に治療できることを認識する。投与される実際の用量は、対象の年齢、体重、及び通常の状態、並びに治療する状態の重症度、ヘルスケアの専門家の判断、及び使用される特異的な抗体又は抗体断片に依存するであろう。治療的有効量は通常の当業者に知られており、及び／又は適切な引用文書及び文献において説明される。一般的に、治療的有効量は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ／日から約１００ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日から約７５ｍｇ／ｋｇ／日であり、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｋｇ／日から約５０ｍｇ／ｋｇ／日の用量であろう。
【０１１８】
再構成組成物は、好ましくは皮下（ｓｃ）注射（インフュージョン又はボーラス用量のいずれかにより）を介して投与することができるが、他の注射形態もまた使用できる。治療的適用のために計画された典型的な単位投与量及び再構成組成物の投与経路は、以下の表１において供される。当該表中において、ｍｇ／m2の言及は患者の身体の表面積（ＢＳＡ）の平方メートル当たりのｍｇにおける用量を表す。多様な公式の使用を含む患者のＢＳＡを誘導するいくつかの方法が存在する。典型的な公式は、Ｍｏｓｔｅｌｌａｒにより示唆されている：m2中のＢＳＡ＝（[センチメートルにおける患者の身長]×[キログラムにおける患者の体重]／３６００）1/2。Mosteller (1987) N. Engl. J. Med. 22 ; 317 (17) : 1098. を参照のこと。
【０１１９】
表１
様々な再構成組成物のための用量及び投与経路
【表１】
2006514954.tif 000002
【０１２０】
如何なる与えられた組成物の単位投与量も、臨床家の判断、患者の要求等による多様な投与スケジュールにおいて投与することができる。特定の投与スケジュールは、通常の当業者に知られており、又は、例えば、適当な文献の引例により得ることができる。典型的な投与スケジュールは、制限なく、１日当たり５回、１日当たり４回、１日当たり３回、１日当たり２回、１日当たり１回、週に３回、週に２回、週に１回、月に２回、月に１回、及びそれらのいずれかの組み合わせを含む。臨床的な終了に達すると、当該組成物の投与は停止される。
【０１２１】
以下の実施例は本発明を例示し、そして、本発明の範囲を制限するものとしては構成されない。これらの実施例のバリエーション及び相当するものは、当該明細書の開示、図面、及び請求の範囲に明るい通常の当業者に対して明らかであろう。
【０１２２】
実験
本発明の実施は、他に意図されない限り、医薬的な処方等の慣習的な技術を利用することができ、それらは当業者の範疇である。このような技術は全て文献において説明されている。例えば、Remington, The Science and Practice of Pharmacy, supra を参照のこと。
【０１２３】
以下の実施例において、使用される数字（例えば、量、温度等）に関する正確さを保障する努力がなされたが、幾つかの実験誤差及び偏差が含まれているだろう。他に意図されない限り、温度は℃であり、そして圧力は海面での大気圧、またはその付近におけるものである。全ての試薬は他に意図されない限り、商業的に得た。
【０１２４】
当該実験の特定の目的は、１又は複数の以下の特性を示す高濃度（＞１００ｍｇ／ｍＬ）のモノクローナル抗体の製剤を調製することであった：加工安定性（即ち、噴霧乾燥及び低いタンパク質濃度、５ｍｇ／ｍＬにおける再構成後に残存している、＞９５％以上のモノマー、）；再構成安定性（即ち、噴霧乾燥及び高いタンパク質濃度、＞１００ｍｇ／ｍＬにおける再構成後に残存している、＞９５％モノマー）；１５分以下の高濃度における再構成の時間；並びに、経験的に決定されるシリンジングの容易性、及び投与量の均一性により定義され、タンパク質濃度及びシリンジング中の安定性における有意な変化がないことにより定義される、細い（２８Ｇ）針を通過する優れたシリンジ性能。
【０１２５】
物質：
ヒトＩｇＧ：ポリクローナルヒトＩｇＧ（Ｌｏｔ＃３１Ｋ９００１）は、Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) から購入した。それは賦形剤を本質的に含まない凍結乾燥化粉末として供され、そして、如何なる精製もすることなく当該実験において使用した。
【０１２６】
ＣＡＴ−２１３：ＣＡＴ−２１３は、ヒト エオタキシン（eotaxin）−１に特異的な完全ヒトモノクローナル抗体（ＩｇＧ4）である。エオタキシン−１は、脱顆粒する組織中の好酸球を特異的に誘引するケモカインであり、組織の損傷及び炎症を起こす。これは、喘息を含む様々なアレルギー反応において起こり、そして、このために、アレルギー性鼻炎において有用である。ＣＡＴ−２１３は Cambridge Antibody Technologies (Cambridge, UK) より提供された。ＣＡＴ−２１３の調製方法を含むＣＡＴ−２１３に関する追加的な情報は、ＷＯ０１／６６７５４において説明される。
【０１２７】
他の物質：クエン酸、一塩基性リン酸ナトリウム、ヒスチジン、トレハロース及びスクロースは Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO) から購入した。Ｔｗｅｅｎ−８０は JT Baker (Phillipsburg, NJ) から得、一方、二塩基性リン酸ナトリウム及びクエン酸ナトリウムに水和物は、それぞれ、Spectrum (Gardena, CA) 及び Mallinckrodt (Paris, KY) から購入した。全ての化学薬品は分析用グレードであった（純度＞９５％）。
【０１２８】
実験方法：
製剤調製：Ｓｉｇｍａから購入した凍結乾燥ＩｇＧ物質を、１ｍＭのヒスチジンバッファー、ｐＨ６．０により５ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成した。トレハロース及びＴｅｅｎ−２０を再構成タンパク質溶液に、それぞれ１２ｍＭ及び０．００２％の濃度で加えた。生じた混合物を、マグネチックスターラーを使用してゆっくりと撹拌し、均一な溶液を得た。それから当該溶液を以下に説明する方法に従い噴霧乾燥させた。
【０１２９】
ダイアフィルトレーション：供されたＣＡＴ−２１３溶液をダイアフィルトレーションして、塩を除去し、そして２ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．６で存在しているバッファーを置換した。ダイアフィルトレーションは、ＹＭ３０Ｋ膜 (Millipore Corporation, Bedford, MA) を伴うセル装置を撹拌する２００ｍＬ Ｔｙｐｅ ８２００ Ａｍｉｃｏｎ (Amicon Co. , Beverly, MA) を使用して行った。上記タンパク質溶液を、マグネチックスターラーを使用して、剪断器に対する上記タンパク質の暴露を最小にするために低い撹拌速度で一定に撹拌した。上記の全ての操作は、冷蔵下（２から８℃）で、６５ｐｓｉの圧力において行った。ダイアフィルトレーションは、タンパク質溶液の初期容量の少なくとも７倍の量がろ液中に回収されるまで続け、それにより、開始バッファー成分の７倍の洗浄を許容する。保持溶液中のタンパク質濃度は、以下に説明するように、サイズ除外−高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりモニターした。最終溶液に、いくつかのタンパク質が、ダイアフィルトレーション中の沈殿物として失っていることを示す、僅かな濁りが現れたことに注意するべきである。当該減少を定量的に評価するために、当該沈殿物は、最終タンパク質溶液を０．２２μｍの膜を通してろ過することにより回収した。そのタンパク質濃度及びろ過したタンパク質溶液中に残っている％モノマーを、以下に説明するように、ＨＰＬＣにより決定した。ダイアフィルトレーションによるタンパク質の減少は２５から３０％の範囲であり、そして、それらは全ての行われたダイアフィルトレーションに再現性があった。
【０１３０】
ＩｇＧ ＨＰＬＣ分析：ＩｇＧ製剤のサイズ除外クロマトグラフィー分析は、ＳＷXL４０００（７．８×３００ｍｍ）サイズ除外カラム(TosoHaas Biosep, Montgomeryville, PA)、及び完全自動化ＨＰ１０５０ＨＰＬＣシステム(Hewlett Packard, Palo Alto, CA)を使用して行った。典型的な１５から２５μｇのタンパク質をカラムに充填した。溶出は、０．０５Ｍのリン酸カリウムバッファー（ｐＨ６．８）、０．１Ｍの塩化カリウム及び０．００１５Ｍの亜硝酸ナトリウムから成る移動相で１ｍＬ／分の低速において行った。単量体タンパク質を約１０分間溶出し、そして、溶出を Hewlett Packard UV-VIS detector (Palo Alto, CA) を使用して、２８０ｎｍでモニターした。全ての試料を２回ずつ行い、報告する結果は平均値±１標準偏差を反映する。ヒトＩｇＧ濃度を、検量線への外挿により計算し、凍結乾燥化物質をヒスチジンバッファーで１ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成することにより調製し、そして、１から５０μｇ（ｒ2＞０．９９９）の範囲にわたりカラム上に注入した。
【０１３１】
ＣＡＴ−２１３ＨＰＬＣ分析：少しの例外を伴い、ＩｇＧ ＨＰＬＣ分析に関して説明したように、同じ実験セットアップ及び条件を使用して、ＣＡＴ−２１３のＨＰＬＣ分析を行った。リン酸カリウムバッファー及び２８０ｎｍでのモニタリングの代わりに、移動相として、０．２Ｍのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５のバッファーを使用し、タンパク質溶出を２２０ｎｍでモニターした。全ての試料は２回ずつ行い、報告する結果は平均値±１標準偏差を反映した。ＣＡＴ−２１３濃度を、検量線への外挿により計算し、ＣＡＴ−２１３スタンダードを移動相で希釈することにより調製し、そして、それらを１から５０μｇ（ｒ2＞０．９９９）の範囲にわたりカラム上に注入した。
【０１３２】
噴霧乾燥：上記ＩｇＧ製剤を、改良ノズルを装備したＢｕｃｈｉ 噴霧乾燥機(Buchi, Switzerland)を使用して噴霧乾燥させた。当該製剤を、５ｍｇ／ｍＬの流速で連続的に噴霧乾燥機に入れ、そして７０℃の入口温度及び４０ｐｓｉ噴霧圧で乾燥させた。その出口温度は３８−４０℃の範囲にした。ＣＡＴ−２１３製剤のためには、噴霧乾燥は、１１５℃の入り口温度及び８０ｐｓｉの噴霧圧により、製剤を５ｍｇ／ｍＬの流速でＢｕｃｈｉに連続的に入れることにより達成した。その出口温度は、これらの条件下において６５−６７℃の範囲にした。
【０１３３】
加工安定性：噴霧乾燥後、粉末製剤を、適当な希釈剤により噴霧乾燥前（約５ｍｇ／ｍＬ）と同様なタンパク質濃度に再構成した。噴霧乾燥ＩｇＧ及びＣＡＴ−２１３製剤の加工安定性は、上述のようにＨＰＬＣにより、不可逆的な可溶性凝集物の製剤のモニタリングにより決定した。全てのＩｇＧ製剤は脱イオン水中で再構成し、一方ＣＡＴ−２１３製剤は０．０５％又は０．１％Ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ−８０のいずれかを含んだ希釈剤で再構成した。
【０１３４】
再構成安定性：高濃度の再構成安定性を決定するために、以下に説明するように、上記製剤を５０、７０、１００、１５０または２００ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度とするための適当な希釈剤で再構成した。再構成製剤の分割量は、タンパク質濃度〜５ｍｇ／ｍＬに直ちに希釈し、そして、上述のＨＰＬＣ手順を使用して安定性を分析した。ＩｇＧ及びＣＡＴ−２１３製剤に使用される希釈剤は、上述の通り、加工安定性の評価のために使用したものと同じである。
【０１３５】
再構成時間分析：再構成プロセスの間、完全に再構成に達するのに必要とされる時間は、視覚的な透明さにより評価され、再構成時間として決定され、そして報告された。
【０１３６】
シリンジ性能分析：高濃度のＣＡＴ−２１３製剤を、１ｍＬのツベルクリンシリンジ(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)を使用して２８Ｇ針を通して手動でシリンジングした。当該針を通る製剤の容易さは手動的に評価した。更に製剤の均一性は、上述のＨＰＬＣ手順を使用して、シリンジングの前後において残存しているタンパク質濃度及び％モノマーを記録することにより決定した。
【０１３７】
不溶性凝集体分析：大きな不溶性の凝集体の存在を決定するために、再構成及び続く０．２２μｍ膜を通したろ過の後直ちに、高濃度のＣＡＴ−２１３製剤のＵＶ吸収を２８０、３５０及び４００ｎｍでモニターした。ろ過の前後の散乱光の強度の潜在的な減少が、ろ過していない溶液中の不溶性凝集体の存在を示すものとして役立った。更に、未処理及びろ過した試料由来の散乱した光の吸収は、開始試料を５、２．５及び１．２５ｍｇ／ｍＬのタンパク質濃度に連続的に希釈した後、モニターした。
【実施例】
【０１３８】
実施例１
ＩｇＧ製剤
乾燥粉末ＩｇＧ製剤を調製した。ポリクローナル抗体ＩｇＧ及びトレハロース（相対的に高いガラス転移温度であるため、ガラス形成物質）を、ＩｇＧに対するトレハロースの割合が〜３５０：１において混合した。更に、タンパク質凝集を最小とさせるため、及び噴霧乾燥粉末の速い再構成を促進するために、少量のＴｗｅｅｎ−２０を当該製剤に加えた。最後に、安定性を増強させるために、ヒスチジンバッファーを含ませた。上記成分を上述のように噴霧乾燥させ、そして生じた噴霧乾燥製剤を試験した。
【０１３９】
加工安定性：ヒトＩｇＧ噴霧乾燥製剤を、噴霧乾燥（ＳＤ）の前後、及び低濃度（５ｍｇ／ｍＬ）の再構成後において、ＨＰＬＣにより分析した。噴霧乾燥製剤を脱イオン水で再構成する前及び後の両方において、残存している％モノマーをＨＰＬＣにより分析した。各試料を二回ずつ行い、％平均値±標準偏差（ｎ＝２）として報告した。
【０１４０】
結果は図１Ａ中のグラフにおいて供され、そこで、当該ＨＰＬＣ分析は、開始物質（凍結乾燥化ヒトＩｇＧ、「ＳＤ前」とする）の低純度を示し、僅か９１．１±０．７％のモノマーから成った。噴霧乾燥粉末中のＩｇＧ（図１Ａ中「ＳＤ後」とする）の処方は、可溶性モノマーの変化していない割合により示されたように（９１．３±１．０％）、その純度特性を変化させなかった。追加的には、上記クロマトグラムは、図１Ｂ（凍結乾燥化ヒトＩｇＧ製剤）及び図１Ｃ（噴霧乾燥化ヒトＩｇＧ製剤）において、高分子量種から成る両製剤の主な不純物を示す。当該結果は、ヒトＩｇＧが、噴霧乾燥の間、及び低タンパク質濃度への再構成後において、如何なる分解も経ていないことを示唆し、優れた加工安定性を示す。
【０１４１】
ＩｇＧ再構成安定性：ＩｇＧ製剤のための高濃度の再構成安定性の決定が行われ、そして、当該結果は、図２において示される。更に、製剤は脱イオン水で再構成され、そして、残存している％モノマーをＨＰＬＣにより分析した。各試料を２回ずつ行い、そして、％平均値±標準偏差（ｎ＝２）として報告した。
【０１４２】
図２Ａにおいて示される通り、溶解性モノマーの量において、「凍結乾燥（２００ｍｇ／ｍＬで再構成）」とされた組成物において、７９．９±０．３％への減少により証明されるように、５ｍｇ／ｍＬの濃度［「凍結乾燥（５ｍｇ／ｍＬで再構成）」］における凍結乾燥開始物質（Ｓｉｇｍａにより供された）は、高濃度[「凍結乾燥（２００ｍｇ／ｍＬで再構成」）]において、その完全性を維持することができなかった。
【０１４３】
更に、図２Ｂにおいて供されるクロマトグラムにより示されるように、可溶性モノマーの量における当該減少は、高分子量種の製剤によるものであり、７．８分辺りで溶出している。これらのより高次の製剤の凝集は、５ｍｇ／ｍＬにおいて非存在であったことから、濃度によるように見える。図２Ａに戻ると、噴霧乾燥製剤における選択された賦形剤の添加は、５０、１００及び２００ｍｇ／ｍＬにおける再構成においてタンパク質の完全性を維持した。図２Ａ中の「噴霧乾燥」の結果を参照のこと。これは、タンパク質モノマーの安定化によるものであり、このため高次の凝集は、２００ｍｇ／ｍＬの濃度においてさえ非存在であった。図２Ｃにおいて供されるクロマトグラムを参照のこと。
【０１４４】
開始物質と噴霧乾燥製剤の間の安定性において観察された違いは、当該乾燥化製剤に加えた賦形剤（トレハロース及びＴｗｅｅｎ−２０）の保護効果によるものであった。当該データは、２００ｍｇ／ｍＬの高タンパク質濃度への再構成後に、噴霧乾燥製剤がヒトＩｇＧを安定化することを示す。
【０１４５】
再構成時間分析：表IIにおいて提供される再構成分析により示されるように、２００ｍｇ／ｍＬにおいて、噴霧乾燥製剤は、対応する凍結乾燥化開始物質よりも極めて早く再構成した。両製剤は、上述のように、脱イオン水で再構成した。
【０１４６】
表II
噴霧乾燥化及び凍結乾燥化製剤の再構成時間
【表２】
2006514954.tif 000003
【０１４７】
実施例２−８
ＣＡＴ−２１３製剤
３つのＣＡＴ−２１３製剤を調製した。各製剤の組成は表III において供される。製剤は、低濃度（５ｍｇ／ｍＬ）において、様々な量のＴｗｅｅｎ−８０を含む希釈剤により再構成した：０．０５％ｗ／ｖ含有希釈剤Ａ及び０．１％ｗ／ｖ含有希釈剤Ｂ。
【０１４８】
表III 
予備ＣＡＴ−２１３製剤の組成説明
【表３】
2006514954.tif 000004
【０１４９】
加工安定性分析の結果は、図３において、噴霧乾燥後に残存した％モノマーとして示される。資料分析は２回ずつ行い、そして結果は平均値±１標準偏差を表す。全ての３つの製剤は、噴霧乾燥及び低濃度における再構成後の安定性を維持した。これらの結果は、ヒトＩｇＧで得られたものと一致し、噴霧乾燥技術は極めて強力な処方アプローチであることを示している。
【０１５０】
それらの完全性を更に評価するために、全ての３つのＣＡＴ−２１３含有製剤をＳＥＣ−ＨＰＬＣを使用して評価した。試料の分析は２回ずつ行い、その結果は平均値±１標準偏差を表す。噴霧乾燥前の５ｍｇ／ｍＬの製剤を分析し、続いて、希釈剤Ａで７０ｍｇのＣＡＴ−２１３／ｍＬ、希釈剤Ｂで７０ｍｇのＣＡＴ−２１３／ｍＬ、及び希釈剤Ｂで１５０ｍｇのＣＡＴ−２１３／ｍＬにそれぞれ再構成した３つの噴霧乾燥製剤を分析した。当該結果は図４において示される。
【０１５１】
図４に戻ると、ＳＥＣ−ＨＰＬＣデータは、ＣＡＴ−２１３が、全ての３つの製剤において使用した希釈剤のタイプに関わらず、７０ｍｇ／ｍＬ（９９．３から９９．５％）での再構成における噴霧乾燥製剤中に、その高い単量体状態を維持したことを示す。１５０ｍｇ／ｍＬの濃度においてさえ、噴霧乾燥及び高温での再構成後に残存するモノマー割合が実質的に変化していない（９８．８から９９．９％）ことにより示されるように、全ての３つの製剤は、優れた安定性を示している。１９０ｍｇ／ｍＬにおけるストックＣＡＴ−２１３製剤及び再構成ＣＡＴ−２１３製剤に対応するクロマトグラムは、図５Ａ及び図５Ｂにおいて、それぞれ供される。
【０１５２】
加工の容易性及び再構成の安定性が実証され、高濃度での再構成時間についても、製剤を評価した。
【０１５３】
再構成時間は、希釈剤Ｂでの１００ｍｇ／ｍＬのＣＡＴ−２１３濃度において、製剤２及び３を評価し、当該結果を表IVにおいて示す。製剤１は十分な試料サイズを欠いていたために分析しなかった。製剤は希釈剤Ｂで再構成し、そしてＨＰＬＣにより分析した。試料分析は２回ずつ行い、そして結果は平均値±１標準偏差を表す。
【０１５４】
表IV
製剤２及び３の再構成時間
【表４】
2006514954.tif 000005
【０１５５】
透明で、非粘性の溶液を形成するように再構成された両製剤は、たとえ高いタンパク質濃度であっても、大きな不溶性の凝集体の存在を欠くことを示唆している。両製剤は１５分以内に再構成し；製剤２は１０分にわたり再構成し；一方製剤３は短時間で再構成した（＜４分）。理論により結び付けられることを望むわけではないが、製剤３中に含まれた表面活性剤（噴霧乾燥前に添加した）が、当該表面活性剤の再構成段階の間だけの添加と比べて、より速い再構成を促進したのかもしれない。追加的には、粉末中の表面活性剤は、表面活性剤にも含まれる希釈剤でその湿潤性を著しく促進することができる。これらの結果は、文献調査に一致し、また、凍結乾燥粉末の早い再構成を可能にすることにおいて、表面活性剤の有用性を実証した。例えば、Webb et al. (2001) Anal. Chem. 73 (21) : 5296-301 を参照のこと。
【０１５６】
製剤２及び３のシリンジ性能は、更に、上述において与えられた方法に従い、１００ｍｇ／ｍＬの濃度で評価した。製剤１は十分な試料サイズに欠けていたために分析しなかった。当該結果は表Ｖにおいて与えられる。両製剤は２８Ｇ針を容易に通過した。シリンジングの前後において残存しているＣＡＴ−２１３濃度及び％モノマーにおいて、有意な変化は観察されず、当該製剤はシリンジングの間均一性及び安定性を維持することを示唆しており、それによりシリンジ性能の容易性及び均一性のためのターゲットを満足している。
【０１５７】
表Ｖ
製剤２及び３のためのシリンジ性能分析
【表５】
2006514954.tif 000006
【０１５８】
高濃度製剤の再現性  再現性を確立するために、追加的なＣＡＴ−２１３製剤を処方した。製剤は、ジサッカライドスクロース（製剤＃４）又はトレハロース（製剤＃５）を伴う内部表面活性剤を含んで成る。正確な組成は、表VIに与えられる。
【０１５９】
表VI
高濃度のＣＡＴ−２１３製剤の組成説明
【表６】
2006514954.tif 000007
【０１６０】
噴霧乾燥（ＳＤ）の前後、及び１４０ｍｇ／ｍＬの０．１％ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ−８０での再構成後におけるＣＡＴ−２１３製剤のＳＥＣ−ＨＰＬＣ分析を行った。１４０ｍｇ／ｍＬの再構成分析の結果は、図６において示され、両製剤において残存している％モノマーにおいて変化がなかったことを示した。これらの結果は先のデータを確認し、これにより噴霧乾燥製剤の実施再現性を実証している。更に両製剤は５分以内に再構成され（表VII ）、透明な非粘性の溶液を形成し、当該製剤が大きな不溶性の凝集体を欠いていたという結論を支持している。上記製剤は、希釈剤Ｂで再構成され；製剤５は試料サイズに欠いていたために、１９０ｍｇ／ｍＬでの分析はしなかった。
【０１６１】
表VII 
高濃度のＣＡＴ−２１３製剤の再構成時間
【表７】
2006514954.tif 000008
【０１６２】
実施再現性を確立したので、１９０ｍｇ／ｍＬでの製剤の性能を評価した。ＣＡＴ−２１３含有製剤４は、噴霧乾燥（ＳＤ）の前後、並びに、噴霧乾燥及び１９０ｍｇ／ｍＬにおける０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後に分析した。製剤５は試料サイズが足りなかったために分析することができなかった。上記試料分析は２回ずつ行い、そして当該結果は平均値±１標準偏差を表す。
【０１６３】
％モノマー変化の分析結果は、図７において示され、一方、再構成時間は表VII （上記）において与えられる。当該データは、噴霧乾燥前と比較して、加工及び再構成後の製剤中の％モノマーにおいて、有意な変化が存在しなかったことを示し、ＩｇＧと同様に、たとえより遅い再構成を示していても（約１０分間）、ＣＡＴ−２１３の安定性が１９０ｍｇ／ｍＬでさえ維持されたことを示唆している。たとえ当該製剤の増加した粘性、増加した再構成時間を伴ったとしても、当該製剤は医薬的に受容可能であると考えられる。
【０１６４】
製剤４中の１９０ｍｇ／ｍＬにおける微量な不溶性凝集体の存在は、更に、上述した（不溶性凝集体分析を参照のこと）ＵＶ濁度アッセイを使用して調査した。ろ過及び未ろ過試料の吸光度は表VIIIにおいて示される。
【０１６５】
表VIII
高濃度のＣＡＴ−２１３製剤４の不溶性凝集体分析
【表８】
2006514954.tif 000009
【０１６６】
ろ過及び未ろ過試料（同じ濃度における）の間の３５０及び４００ｎｍでの散乱強度において、有意な違いがないことは、大きな不溶性粒子の存在によりもたらされる光の散乱が存在しないことを示した。これは、高濃度での再構成製剤における不溶性凝集体の不存在の実証的な証拠を供するであろう。しかしながら、より小さな不溶性粒子が存在しうる可能性は除外できない。
【０１６７】
粘性減少製剤  全ての製剤は受容可能であるように見えるが、高濃度での製剤４及び５のより速い再構成を可能にする試みがなされた。高い粘性がいくらか長い再構成時間をもたらしたようであるため、粘性の減少はより速い再構成時間を供することが仮定された。高濃度における糖質の粘性−増強効果が詳しく記述されていることから（例えば、Mazurkiewicz et al. (1998) Pol. J. Food Nutr. Sci. 7 (48): 171-180 を参照のこと)、製剤は、減少させた量のスクロースで設計した。２つの粘性−減少製剤である、製剤６及び７は表IXにおいて与えられる。
【０１６８】
表IX
粘性減少ＣＡＴ−２１３製剤の組成説明
【表９】
2006514954.tif 000010
【０１６９】
両製剤は、１９０ｍｇ／ｍＬで（希釈Ｂを使用して）素早く（＜１０分）再構成し、透明な溶液を再構成し、それにより、高い粘性及びより遅い再構成時間が、相対的に過剰量の糖質の存在によるものであったことを確認した。当該２つの製剤の再構成時間は表Ｘにおいて与えられる。
【０１７０】
表Ｘ
製剤６及び７の粘性減少ＣＡＴ−２１３の再構成時間
【表１０】
2006514954.tif 000011
【０１７１】
ＣＡＴ−２１３含有製剤は、噴霧乾燥（ＳＤ）の前後、及び１９０ｍｇ／ｍＬにおける０．１％ｗ／ｖのＴｗｅｅｎ−８０での再構成後において、ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより％モノマーを分析した。試料分析は２回ずつ行い、そして、当該結果は平均値±１標準偏差を示す。
【０１７２】
図８において示される結果は、噴霧乾燥前と比較すると、噴霧乾燥及び再構成後に残存する％モノマーにおいて変化がないことを示し、それぞれ２倍及び４倍の製剤中の炭水化物の含有量の減少は、タンパク質の安定性において主要な影響を有さないことを示唆している。
【０１７３】
結論：これらの結果は、抗体が噴霧乾燥させた乾燥粉末として成功的に処方することができることを実証する。当該乾燥粉末製剤は、タンパク質の安定性を失うことなく高いタンパク質濃度に素早く再構成することができ、そして当該再構成製剤は、シリンジング中、均一性を維持しながら細いゲージ針を通して容易にシリンジングすることができる。概要において、当該実験は、噴霧乾燥技術が皮下投与に必要とされる全ての性能標準を備える抗体製剤を産出できることを実証し、それにより、当該経路を介してこれらの分子を送達することを可能にしている。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１Ａ】図１Ａは、実施例で説明される噴霧乾燥前（「ＳＤ前」）及び噴霧乾燥後（「ＳＤ後」）のＩｇＧ含有製剤のパーセントモノマー分析（サイズ除外クロマトグラフィー−高速液体クロマトグラフィー、「ＳＥＣ−ＨＯＬＣ」を使用）を示す。
【０１７５】
【図１Ｂ】図１Ｂは、実施例において更に説明されるように、５ｍｇ／ｍＬでの再構成後の凍結乾燥ヒトＩｇＧ開始物質のクロマトグラムである。
【０１７６】
【図１Ｃ】図１Ｃは、実施例において更に説明されるように、５ｍｇ／ｍＬでの再構成後の噴霧乾燥ヒトＩｇＧ開始物質のクロマトグラムである。
【０１７７】
【図２Ａ】図２Ａは、実施例において更に説明されるように、様々な濃度での凍結乾燥物質及び噴霧乾燥製剤のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。
【０１７８】
【図２Ｂ】図２Ｂは、実施例において更に説明されるように、２００ｍｇ／ｍＬでの凍結乾燥ヒトＩｇＧ開始物質のクロマトグラムである。
【０１７９】
【図２Ｃ】図２Ｃは、実施例において更に説明されるように、２００ｍｇ／ｍＬでの噴霧乾燥ヒトＩｇＧ開始物質のクロマトグラムである。
【０１８０】
【図３】図３は、実施例において更に説明されるように、噴霧乾燥前、噴霧乾燥及び０．０５％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後、並びに噴霧乾燥及び０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後の抗体含有製剤のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。製剤は、５ｍｇ／ｍＬの濃度を供するように再構成させた。図中、再構成は「recon.」、及び噴霧乾燥は「ＳＤ」として省略する。
【０１８１】
【図４】図４は、実施例において更に説明される噴霧乾燥前、噴霧乾燥及び０．０５％ｗ／ｖＴｗｅｅｎでの再構成後、並びに噴霧乾燥及び０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０（共に７０ｍｇ／ｍＬ及び１５０ｍｇ／ｍＬにおける)での再構成後の抗体含有製剤のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。図中、再構成は「recon.」及び噴霧乾燥は「ＳＤ」として省略する。
【０１８２】
【図５Ａ】図５Ａは、実施例において更に説明されるように、ストック抗体組成物のクロマトグラムである。
【０１８３】
【図５Ｂ】図５Ｂは、実施例において更に説明されるように、１９０ｍｇ／ｍＬの再構成後の再構成抗体含有製剤のクロマトグラムである。
【０１８４】
【図６】図６は、実施例において更に説明されるように、噴霧乾燥前、並びに噴霧乾燥及び０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後の２つの抗体含有製剤（それぞれ異なる糖質賦形剤を有する）のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。噴霧乾燥後製剤は、１４０ｍｇ／ｍＬの濃度を供するように再構成した。図中、噴霧乾燥は「ＳＤ」として省略する。
【０１８５】
【図７】図７は、実施例において更に説明されるように、噴霧乾燥前、並びに噴霧乾燥及び０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後の抗体含有製剤のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。噴霧乾燥後製剤は、１９０ｍｇ／ｍＬの濃度を供するように再構成した。図中、省略「ＳＤ」は「噴霧乾燥」を表す。
【０１８６】
【図８】図８は、実施例において更に説明されるように、噴霧乾燥前、並びに噴霧乾燥及び０．１％ｗ／ｖＴｗｅｅｎ−８０での再構成後の２つの抗体含有製剤（それぞれ異なる量の同じ糖質賦形剤を有する）のパーセントモノマー分析（ＳＥＣ−ＨＰＬＣ）を示す。噴霧乾燥後製剤は、１９０ｍｇ／ｍＬの濃度を供するように再構成した。図中、噴霧乾燥は「ＳＤ」として省略した。
【図１Ａ】
2006514954.tif 000012
【図１Ｂ】
2006514954.tif 000013
【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
2006514954.tif 000016
【図２Ｃ】
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【図３】
2006514954.tif 000018
【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
2006514954.tif 000021
【図６】
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【図７】
2006514954.tif 000023
【図８】
2006514954.tif 000024
【国際調査報告】
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