(57)【要約】【課題】コチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物を提供する。【解決手段】緑茶葉抽出物とカワラヨモギ抽出物よりなることを特徴とし、前記組成物は、好ましくは、緑茶葉抽出物４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物３０−６０重量％を含み、より好ましくは、緑茶葉抽出物４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物１５−４０重量％、セリ抽出物２−１０重量％、エゾウコギ抽出物２−１０重量％、カリンの実抽出物２−１０重量％、ドクダミ抽出物２−１０重量％、ショウガ抽出物２−１０重量％及び玉ねぎ抽出物２−１０重量％の割合にて配合されてなる。
2006519010.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶葉抽出物及びカワラヨモギ抽出物よりなる
コチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項２】
前記組成物にセリ抽出物、エゾウコギ抽出物、カリンの実抽出物、ドクダミ抽出物、ショウガ抽出物及び玉ねぎ抽出物をさらに含むことを特徴とする
請求項１記載のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項３】
緑茶葉抽出物４０−７０重量％とカワラヨモギ抽出物３０−６０重量％よりなることを特徴とする
請求項１記載のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項４】
緑茶葉抽出物４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物１５−４０重量％、セリ抽出物２−１０重量％、エゾウコギ抽出物２−１０重量％、カリンの実抽出物２−１０重量％、ドクダミ抽出物２−１０重量％、ショウガ抽出物２−１０重量％及び玉ねぎ抽出物２−１０重量％よりなることを特徴とする
請求項２記載のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項５】
前記抽出物は、緑茶葉、カワラヨモギ、セリ、エゾウコギ、カリンの実、ドクダミ、ショウガ及び玉ねぎをそれぞれ１１０℃において３時間熱水抽出し、固形粉が３０％になるように濃縮した後に乾燥して得られることを特徴とする
請求項１〜４のいずれかに記載のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項６】
前記組成物は、食品、食品添加剤、飲み物または飲み物添加剤として用いられることを特徴とする
請求項３または４記載のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物。
【請求項７】
請求項３または４記載の組成物をカプセルに充填してなる
コチニン誘導及び抗酸化効果を有するカプセル剤。
【請求項８】
請求項３または４記載の組成物０．１−０．５％を水と混合してなる
コチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性飲み物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物質から抽出した機能性食品組成物に係り、より詳しくは、緑茶葉、カワラヨモギ（茵陳蒿)、セリ、エゾウコギ、カリンの実、ドクダミ、ショウガ及び玉ねぎから喫煙によるニコチンをコチニンに誘導することにより、ニコチン由来の発癌物質の生成を抑えると共に、優れた抗酸化効果を有する機能性食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ニコチンは喫煙により発生するおよそ４０種類の毒性発癌物質のうち体内に吸収される代表的な猛毒性物質であって、無色または薄い黄色を帯びる。また、このニコチンは、光や空気に接触すれば、酸化により茶色に変色され、神経節の細胞膜上に働いて血圧の上昇、骨格筋繊維の痙攣、興奮による口腔内の麻痺などを引き起こすと知られている。
【０００３】
そして、ニコチンはおよそ２００種の発癌性物質であるＮ−ニトロソアミン類のほかに、コチニンとケト酸（Keto acid）、ヒドロキシ酸（Hydroxy acid）に代謝されるが、コチニン、ケト酸及びヒドロキシ酸は喫煙行為に影響されるファクタに過ぎず、発癌ファクタではないことが明らかになっている。
【０００４】
一方、シトクロムＰ４５０（Cytochrome Ｐ４５０）は肝臓や肺において解毒作用に関与する酵素であって、各種のシトクロムＰ４５０が相異なる機能を有しているが、これらのうちシトクロムＰ４５０の２Ａ６，２Ｂ６，２Ｃ８，２Ｃ９，２Ｄ６，２Ｅ１，２Ｆ１などはニコチンからコチニンへと誘導される代謝に関与し、シトクロムＰ４５０の１Ａ２，２Ａ６，３Ａ４はニコチンから発癌性物質であるＮ−ニトロソアミン類に転換させる代謝に関与すると知られている。
【０００５】
このとき、Ｎ−ニトロソアミン類に代表される物質としては、４−メチルニトロサミノ−１−３−ピリジル−１−ブタノン（4-methylnitrosamino-1-3-pyridyl- 1-butanone；以下、「ＮＮＫ」という。）がある。
【０００６】
このため、ニコチンが他の物質に転換される代謝過程において特異的な経路を活性化させるならば、ニコチンがＮ−ニトロソアミン類に転換されることを抑え、ニコチンから発癌ファクタではないコチニンに誘導される転換率を高めることができるので、タバコに対する危害を減らしつつ、究極的には癌の発生を予防することができる。
【０００７】
また、通常、自由ラジカルは、発癌（例えば、下記の非特許文献１参照。）、炎症（例えば、下記の非特許文献２参照。）、血管収縮による局所貧血（例えば、下記の非特許文献３参照。）、動脈硬化（例えば、下記の非特許文献４参照。）、リウマチ性関節炎（例えば、下記の非特許文献５参照。）などの疾病を引き起こすということが各種の実験から明らかになっている。
【０００８】
このため、自由ラジカルのレベルを安全で且つ効果的に減らせる自由ラジカル捕捉剤（free radicals scavenger）に対する開発が盛んになされつつある。
【非特許文献１】Weitzman, S. A., Weitberg, A. B., Clark, E. P., and Stossel, T. P. (1985) Science, 227, 1231-1233
【非特許文献２】Cheeseman, K. H., and Forni, L. G. (1988) Biochem. Pharmacol., 37, 4225-4233
【非特許文献３】Hammond, B., Kontos, H. A., and Hess, M. L. (1985) Can. J. Physiol. Pharmacol., 63, 173-187
【非特許文献４】Palinski, W., Rosenfeld, M. E., Yla, H. S., Gurtner, G. C., Socher, S. S., Butler, S. W., Carew, T. E., Steinberg, D., and Witztum, J. L. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci., 86, 1372-1376
【非特許文献５】Fantone, J. C., and Ward, P. A. (1985) Human Pathol., 16,   973-978
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、安全で且つ効果的なコチニン誘導剤と抗酸化製剤を開発するためになされたものであり、その目的は、天然成分を用いることにより、優れた抗酸化効果を示すだけではなく、喫煙によるニコチンの分解代謝中に体内に有害な化学物質であるＮ−ニトロソアミン類に転換されることを抑えて無害なコチニン生成経路に誘導する機能性食品組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するために、本発明に係る組成物は、緑茶葉抽出物とカワラヨモギ抽出物よりなることを特徴とし、前記組成物には、緑茶葉抽出物が４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物が３０−６０重量％含まれることが好ましい。
【００１１】
また、より好ましくは、前記組成物は、緑茶葉抽出物４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物１５−４０重量％、セリ抽出物２−１０重量％、エゾウコギ抽出物２−１０重量％、カリンの実抽出物２−１０重量％、ドクダミ抽出物２−１０重量％、ショウガ抽出物２−１０重量％及び玉ねぎ抽出物２−１０重量％の割合にて配合されてなることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る機能性食品組成物は、優れた抗酸化効果を示すだけではなく、ニコチンからコチニンに転換される代謝を誘導させ、ＮＮＫによる突然変異能を抑える効果に優れているので、食品分野に機能性マテリアルとして適用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明は、緑茶葉抽出物とカワラヨモギ抽出物よりなることを特徴とするコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性食品組成物を提供する。
【００１４】
本発明に係る組成物は、緑茶葉抽出物４０−７０重量％とカワラヨモギ抽出物３０−６０重量％よりなる。
【００１５】
また、この組成物は、好ましくは、緑茶葉抽出物４０−７０重量％、カワラヨモギ抽出物１５−４０重量％、セリ抽出物２−１０重量％、エゾウコギ抽出物２−１０重量％、カリンの実抽出物２−１０重量％、ドクダミ抽出物２−１０重量％、ショウガ抽出物２−１０重量％及び玉ねぎ抽出物２−１０重量％の割合にて配合されてなる。
【００１６】
本発明において、前記抽出物としては、緑茶葉、カワラヨモギ、セリ、エゾウコギ、カリンの実、ドクダミ、ショウガ及び玉ねぎをそれぞれ１１０℃において３時間熱水抽出した後、前記熱水抽出物に固形粉が３０％含まれるように濃縮して乾燥したものを用いる。
【００１７】
以下、本発明を詳述する。
【００１８】
本発明は、体内ニコチン及びタバコの有害性を認識し、ニコチン由来のＮ−ニトロソアミン類生成の抑制効果及び優れた抗酸化効果を有する天然物をスクリーニング中に（−）−カテキンと（−）−エピガロカテキンガラートを多量含んでいる緑茶とカワラヨモギを主原料として加える場合、タバコの有害成分であるニコチン由来のＮ−ニトロソアミン類の生成抑制能に優れ、且つ、発癌物質に対して抗突然変異効果及び優れた抗酸化効果を有する機能性食品組成物への適用が可能であることを知見し、これに基づき、本発明を完成するに至った。
【００１９】
本発明に係る機能性食品組成物は、健康食品、飲み物または飲み物添加剤として用いることができ、前記機能性製剤を０．１％ないし０．５％水に混合して機能性飲み物として用いることが好ましい。
【００２０】
以下、本発明への理解を助けるために、好適な実施例を挙げる。しかし、下記の実施例は本発明を一層容易に理解させるために提供されるものに過ぎず、本発明が下記の実施例に限定されることはない。
【実施例１】
【００２１】
天然物の選定
【００２２】
本発明に適用して好適な天然物は、自由ラジカルである１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl；以下、「ＤＰＰＨ」という。）（Sigma,USA，Ｄ−９１３２）を用いたＯ２−捕捉（scavenging）効果を測定し、高活性を有する天然物を選んで使用した。
【００２３】
（１）抽出物の製造
カワラヨモギ粉末は、カワラヨモギ３０ｇを水６００ｍｌに入れ、１１０℃において３時間熱水抽出を行った。その後、真空濃縮器により固形粉が３０％になるまで濃縮し、その濃縮物を凍結乾燥して完成粉末を得た。緑茶葉、セリ、エゾウコギ、カリンの実、ドクダミ、ショウガ及び玉ねぎの粉末も前記カワラヨモギ粉末の製造過程と同じ過程を経て得た。
【００２４】
（２）実験方法
ＤＰＰＨは２×１０−４Ｍ濃度になるようにエタノールに溶解して用いた。
【００２５】
８種類の天然粉末はそれぞれ濃度を１，０００ｐｐｍにし、キュベット（cuvette）にＤＰＰＨ１．５０ｍｌ、サンプル０．１５ｍｌ、蒸留水１．３５ｍｌを加えて３０分間室温において反応させた後、５２０ｎｍにおける吸光度を測定することにより、抗酸化効果を調べた。
【００２６】
抗酸化効果は、下記式１により求めた。
【００２７】
【数１】
2006519010.tif 000003
【００２８】
（３）実験の結果
表１に、８種類のそれぞれの製剤に対してＤＰＰＨを用いた場合の自由ラジカルの捕捉効果を測定して示す。表１から明らかなように、緑茶が最も高い効果を示し、次に、カワラヨモギが高い抗酸化効果を示した。
【００２９】
【表１】
2006519010.tif 000004
【実施例２】
【００３０】
機能性製剤
【００３１】
（１）実験対象
実験の対象として、実施例１に従い得られた植物抽出物を混合して製造された機能性製剤を用いた。  
用いられた機能性製剤の配合比は、下記表２に示す。
【００３２】
【表２】
2006519010.tif 000005
【００３３】
（２）実験方法
ＤＰＰＨは、２×１０−４Ｍの濃度になるようにエタノールに溶解して用いた。
【００３４】
緑茶とカワラヨモギ、そして混合した機能性製剤（ａ），（ｂ），（ｃ）の３種に対してはそれぞれ５００ｐｐｍ，２５０ｐｐｍ，１２５ｐｐｍ，６２．５ｐｐｍ，３１．３ｐｐｍの濃度になるように蒸留水で溶解した後、キュベットにＤＰＰＨ１．５ｍｌ、サンプル０．１５ｍｌ、蒸留水１．３５ｍｌを加え、３０分間室温において反応させた。そして、５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００３５】
このとき、サンプルに対する抗酸化効果は前記式１により求めた。その後、ＩＣ５０（５０％の阻害活性）値に基づいて比較を行った。
【００３６】
（３）実験の結果
緑茶とカワラヨモギ、そして混合した機能性製剤（ａ），（ｂ），（ｃ）の３種と陽性対照群としての（−）−カテキン（Sigma, USA, Ｃ−０５６７）、（−）−エピガロカテキンガラート（Sigma, USA, Ｅ−４１４３）に対してＤＰＰＨを用いた場合の自由ラジカルの捕捉効果をＩＣ５０値として下記表３に示す。
【００３７】
下記表３から明らかなように、３種類の機能性製剤（ａ），（ｂ），（ｃ）のうち機能性製剤（ｃ）が最も良好な効果を示した。
【００３８】
【表３】
2006519010.tif 000006
【実施例３】
【００３９】
動物実験によるコチニン誘導効果の測定
【００４０】
（１）実験対象
抗酸化効果実験の結果最も良好な活性を示す機能性製剤（ｃ）を用い、実際にニコチンが分解されながらコチニン生成誘導効果があるかどうかを調べた。
【００４１】
一次的に、ＳＤラット（２５０ｇ，♂，サムタコ、韓国）を対象として高速液体クロマトグラフィ（High performance liquid chromatography；以下、「ＨＰＬＣ」という。）方式によりニコチン分解コチニン生成誘導効能を測定した。
【００４２】
（２）実験方法
ＳＤラット３０匹に対して１０日間（−）−ニコチン（(-)-nicotin, Sigma, USA, Ｎ−３８７６）を１日につき２回腹腔投与してニコチン中毒を引き起こした。このとき、腹腔投与量は体重１ｋｇ当たり３ｍｇ（３ｍｇ／ｋｇ）にした。
【００４３】
１０日後、１５匹ずつ２グループに分け、ある一つのグループには水１ｍｌを、もう一つのグループには機能性製剤（ｃ）１ｍｌ（２％濃度）を経口投与し、ニコチン３ｍｇ／ｋｇを腹腔投与した。
【００４４】
その後、１時間経過後、水１ｍｌまたは機能性製剤（ｃ）１ｍｌ（２％濃度）をさらに経口投与した。
【００４５】
そして、１時間経過後に前記ＳＤラットの心臓から血液を採血し、前記血液から分離された血漿（Plasma）をサンプルとして用いた。
【００４６】
サンプルの前処理
前記分離された血漿を分析するための処理方法として、血漿１ｍｌに５ＭのＮａＯＨ １ｍｌを加えてアルカリ化させ、２ＭのＮａＣｌ ０．５ｍｌを加えてエマルジョン（Emulsion）層を最少化させた後、ジクロロメタン（Dichloromethane， ＣＨ２Ｃｌ２）４ｍｌを加えて６分間よく混合した。その後、１２，０００ｒｐｍにて５分間遠心分離（Centrifugation）した後、ジクロロメタン層１ｍｌを４ｍｌのバイアル（vial）に移し、窒素ガスにより乾燥したものを用いた（Jung, B. H, Chung, B. C et al. (1999) J. Pharm. Biomed. Anal, 20. 195-202）。
【００４７】
ＨＰＬＣシステム及び分析条件
コチニン分析は、ＨＰＬＣシステムを用いて行った。このとき、システムの構成は、検出器としてワータス５１０ポンプ（Waters Co. USA）とヨンインＭ ７２０（Young-In Co. Korea）を、カラムとしてハイドロスフィア（Hydrosphere）Ｃ１８（５μｍ，１２ｍｍ，１５０×４．６ＩＤ）を用いた。
【００４８】
分析条件として、移動相溶媒としてはｐＨ緩衝液（buffer）：アセトニトリル：メタノールを８８０：９０：３０（ｖ／ｖ）にて混合したものを用いた。また、ｐＨ緩衝液は下記の如き組成にして用いた。
【００４９】
０．１Ｍのクエン酸（Citric acid）：０．２Ｍのディソディューム・ハイドロジェンフォスフェイト・ドデカハイドロレート（disodium hydrogenphosphate dodecahydrate）を５６．４：４３．６（ｖ／ｖ）の割合にて混合し、トリメチルアミン（trimethylamine）を用いてｐＨを４．８に調整した。そして、サンプルを移動相溶媒１ｍｌにて溶解させて２００μｌを注入（injection）し、ＵＶ２６０ｎｍにて流速（flow rate）１ｍｌ／分の条件下で検出を行った。
【００５０】
標準曲線と検量式は、コチニン標準フォームは（−）−コチニン［(-)-Cotinine, Sigma, USA, Ｃ−０４３０］０．１−０．４ｐｐｍ濃度にて求めた。
【００５１】
（３）実験結果
水を経口投与した対照群と機能性製剤（ｃ）を経口投与した実験群の血漿は、コチニン濃度がそれぞれ０．６２±０．１２μｇ／ｍｌと０．８８±０．０８μｇ／ｍｌと測定され、これより、実験群の方が対照群よりも約３０％多いコチニンを生成していることが分かった。
【００５２】
上記の結果は、図２に示す。
【実施例４】
【００５３】
臨床実験によるコチニン誘導効果の測定
【００５４】
（１）実験対象
機能性製剤（ｃ）に対するニコチン分解効能を検証するために、１日につき１５−２５本のタバコ（ディス、韓国タバコ公社、ニコチン０．６ｍｇ／本）を吸う２０代の健康な男２０名を対象として臨床実験を行った。
【００５５】
（２）実験方法
実験前日、対象者には喫煙と飲酒を禁止させ、実験の確実性を高めるために数回繰り返して実験し、統計処理を行った。
【００５６】
水を飲む対照群と機能性製剤（ｃ）を飲む実験群は、相異なる日にそれぞれ実験を行い、体の具合と実験時間帯をできる限り一致させた。
【００５７】
実験当日、個人の体内におけるニコチン蓄積度を測定するために、１次尿を取った後、水１３０ｍｌまたは機能性製剤（ｃ）１３０ｍｌ（１％濃度）を飲ませ、１０分間隔にてディス３本を吸わせた。その後、１２０分、２４０分、４８０分後に２次、３次、４次尿を取った。
【００５８】
取られた尿は、直ちに零下２０℃にて保管され、尿に含まれているコチニンを一括的に定量化した。
【００５９】
コチニン定量はＢａｒｌｏｗら（Barlow, R. D., Stone, R. B., Wald, N. J., and  Puhakainen, E. J. (1987) Clin. Chim. Acta., 165, 45-52)により開発された直接混合（Direct mixing）方法を変形した方法により行った。
【００６０】
すなわち、１．５ｍｌのポリプロピレン（Polypropylene）チューブに５００μｌのサンプル及びコチニン標準試薬（(-)-Cotinine, Sigma, USA, Ｃ−５９２３）、２５０μｌの４Ｍ塩化アセテート緩衝液（ｐＨ ４．７）、１００μｌの１．５Ｍシアン化カリウム（ＫＣＮ）、１００μｌの０．４Ｍクロラミン（Chloramine）−Ｔ及び５０％のアセトニトリル水溶液に溶解した７８ｍＭバルビツール酸（Barbituric acid）５００μｌを順次に入れ、１０秒間よく混合した。
【００６１】
そして、常温において１５分間静置反応させ、１００μｌの１Ｍ塩化メタバイサルファイト（Sodium metabisulphite）を入れて反応を止めた後、４８０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００６２】
標準曲線と検量式は、コチニン標準試薬１−５μｍｏｌ／ｌの濃度にて求めた。
【００６３】
このとき、実験結果の信頼性を図るために、１サンプル当たり３本のチューブを用いた。
【００６４】
そして、個人の１次尿中のコチニンの量を１００とし、それぞれ２次、３次、４次コチニンの量を１次と比較することにより、生成率を統計処理した。
【００６５】
（３）実験の結果
図３に示すように、１次から４次までのコチニン生成率を統計処理したところ、機能性製剤（ｃ）の場合、コチニン生成率は２時間、４時間、８時間において対照群の方よりもそれぞれ３０％，３０％，２０％高くなっていることが分かった。
【００６６】
その結果、本発明に係る機能性製剤（Ｃ）は、ニコチンが発癌物質としてのＮ−ニトロソアミン類への転換を抑える代わりに、ニコチンのコチニンへの転換代謝量を増やしていると推定される。
【実施例５】
【００６７】
抗突然変異効果
【００６８】
タバコに一定濃度（約０．１−０．５ｎｇ）が含まれているＮＮＫは、生体内に入ると、肝臓や肺に存在するシトクロムＰ４５０の１Ａ２，２Ａ６，３Ａ４酵素により代謝される。しかし、この代謝物質は、肺癌などを引き起こす物質であって、体内に極めて有毒な物質であることが明らかになっている。
【００６９】
（１）実験方法
機能性製剤（ｃ）が有している抗突然変異効果を調べるために、ＮＮＫ（Chemsyn,USA,Ｕ１０１８）により引き起こされる突然変異に対する機能性製剤（ｃ）、粉末緑茶及びケルセチン２水和物（Quercetin dihydrate, Sigma, USA, Ｑ−０１２５）の抗突然変異効果を比較・測定した。
【００７０】
ヒスティジン（Histidine）要求性菌株であるネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）ＴＡ１００とＴＡ１５３５を用いてエームズ実験（Ames test）を行うことにより、突然変異抑制効能試験を行った（Maron, D., Ames, B. N. (1983). Mutation Research, 113, 173-215）。
【００７１】
アロクロル（Aroclor １２５４； Supelco, USA, ４８７３３）を７週齢の雄ラット（Sprague Dawley rat, ２５０ｇ，♂，サムタコ、韓国）に５００ｍｇ／ｋｇの容量にて腹腔注射することにより、肝臓の解毒作用を行うタンパク質を誘導し、注射後５日後に無菌操作下で肝臓を摘出した。
【００７２】
無菌操作下で摘出された肝臓は、４℃，０．１５Ｍ塩化カリウム（ＫＣｌ）溶液によりホモジェナーゼを用いて均質化させ、９，０００ｇにおいて１０分間遠心分離した後、上澄み液を取り、Ｓ−９混合液の製造に用いた。
【００７３】
Ｓ−９混合液の組成は、１０ｍｌを基準として０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５ｍｌ，０．１ＭのＮＡＤＰ ０．４ｍｌ、１Ｍグルコース−６−フォスファイト０．０５ｍｌ、０．４ＭのＭｇＣｌ２ ０．２ｍｌ、滅菌３次蒸留水３．３５ｍｌ及び肝臓摘出液１ｍｌである。
【００７４】
そして、実験群としての機能性製剤（ｃ）と陽性対照群としての粉末緑茶、ケルセチン２水和物は、０．２μｍフィルタに通させることによりろ過し、実験に用いた。
【００７５】
抗突然変異実験は、１２時間栄養培地（Difco, USA, ２３４０００）において培養したネズミチフス菌ＴＡ１００またはＴＡ１５３５ ０．１ｍｌ，実験物質０．１ｍｌ、Ｓ−９混合液０．５ｍｌ、ＮＮＫ（１０ｍｇ／ｍｌ）０．１ｍｌを混合した。このときに用いられた実験物質は、１プレート当たり２，１，０．５，０．２５，０．１２５μｇの濃度になるように処理した。
【００７６】
混合液を３７℃において２０分間放置した後、０．０５ｍＭのヒスティジンと０．０５ｍＭのバイオチンが含まれているトップアガー(top agar)２ｍｌに混ぜてＨｉｓ−平板培地に塗布した。このとき、各容量の平板培地は３枚ずつにし、３７℃において４８時間培養した後、復帰突然変異群落の数を記録した。抗突然変異の活性は、Ｈｉｓ＋復帰突然変異の阻害率として示した。突然変異抑制効能（％）は、下記式２から計算された。
【００７７】
【数２】
2006519010.tif 000007
【００７８】
（２）実験の結果
図４は、機能性製剤（ｃ）がＮＮＫによる突然変異抑制効能を有するかどうかを測定したものであり、（Ａ）は、ネズミチフス菌ＴＡ１００に対する突然変異抑制能を示し、（Ｂ）は、ネズミチフス菌ＴＡ１５３５に対する突然変異抑制能を示す。
【００７９】
その結果、ＮＮＫのみを処理したネズミチフス菌ＴＡ１００の自然発生的な復帰突然変異群落の数は、１７０±１６であり、ネズミチフス菌ＴＡ１５３５の自然発生的な復帰突然変異群落の数は４１±４であるのに対し、ＮＮＫと共に機能性製剤０．５ｍｇ／プレートを処理した場合には、ネズミチフス菌においてほとんどコロニを形成せず、いずれも突然変異抑制能があることが明らかになった。また、ネズミチフス菌ＴＡ１００においては、むしろ機能性製剤（ｃ）の方がケルセチン２水和物よりも一層優れた突然変異抑制能を示した。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】本発明の緑茶とカワラヨモギ、機能性製剤の３種類（ａ），（ｂ），（ｃ）と陽性対照群（Positive control）としての（−）−カテキン（(-)-Catechin）、（−）−エピガロカテキンガラート（(-)-Epigallocatechin gallate；ＥＧＣＧ）に対してＤＰＰＨを用いた場合の自由ラジカルの捕捉効果を示すグラフである。
【図２】本発明のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性製剤（ｃ）を投与したＳＤラット実験群の血漿内と、水を投与したＳＤラット対照群の血漿内のコチニン量を示すグラフである。
【図３】本発明のコチニン誘導用及び抗酸化機能性製剤（ｃ）を摂取した喫煙実験者と、対照群として水を摂取した喫煙実験者の尿中コチニン生成率を示すグラフである。
【図４】本発明のコチニン誘導及び抗酸化効果を有する機能性製剤（ｃ）と、粉末緑茶及びケルセチン２水和物（Quercetin dihydrate）のネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）ＴＡ１００とＴＡ１５３５の陽性対照群に対する抗突然変異能を測定したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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