(57)【要約】本発明は、適用した領域に残したまま水で洗い流す必要がない局所適用のための液体洗浄製品に関する。局所適用された場合、洗浄製品は皮脂や皮膚上の微生物のレベルを比較的短い時間で効果的に減少させる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
約０．００５重量％から約０．５重量％の二酸化塩素化合物を含有する液体洗浄剤組成物であって、ヒト及び動物の皮膚、毛髪及び爪並びに動物の毛皮への適用に適した洗浄剤組成物。
【請求項２】
乾燥剤を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記乾燥剤がシリコーン系物質である請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
上記乾燥剤がエチルアルコールである請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
湿潤剤を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
増粘剤を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
香料を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
上記香料が約０重量％から約１．５重量％の濃度で添加されている請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
着色料を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
一又は複数の保湿剤を更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
上記一又は複数の保湿剤が約０重量％から約５重量％の濃度で添加されている請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
一又は複数の塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ヘキシルレゾルシノール、ヨードチンキ、イソプロピルアルコール及び塩化メチルベンゼトニウム又はその組み合わせを更に含有する請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
上記組成物が、ヒト及び動物のための、皮膚洗浄剤、落屑スクラブ洗浄剤、微小皮膚剥離製品、皮膚消毒剤、又はシャンプーである請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
組成物を局所適用するヒト又は動物の外部体表面の洗浄方法であって、組成物が約０．００５重量％から約０．５重量％の二酸化塩素化合物を含有する方法。
【請求項１５】
組成物が乾燥剤を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記乾燥剤がシリコーン系物質である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
上記乾燥剤がエチルアルコールである請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
上記組成物が湿潤剤を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
上記組成物が増粘剤を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
上記組成物が香料を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
上記組成物が着色料を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２２】
上記組成物が一又は複数の保湿剤を更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２３】
上記組成物が一又は複数の塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ヘキシルレゾルシノール、ヨードチンキ、イソプロピルアルコール及び塩化メチルベンゼトニウム又はその組み合わせを更に含有する請求項１４に記載の方法。
【請求項２４】
上記組成物が、外部体表面の傷に適用される請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
［関連出願へのクロスリファレンス］
この出願は、出典明示により全体がここに取り込まれる２００２年５月２０日出願の米国仮出願第６０／３８１９２６号に基づく優先権を主張する。
【０００２】
［発明の背景］
１．発明の技術分野
本発明は、皮膚及び動物の毛髪、皮膚、爪及び隣接組織への、局所適用に有用な皮膚洗浄剤組成物に関する。
【０００３】
２．先行技術の説明
ヒトの手を石鹸と温水で洗うことは皮膚表面を洗浄しかつ微生物を減少させる効果的な手段であることはよく知られている。しかしながら、手を十分に乾かさないと、微量な残留水が細菌や真菌、例えば酵母やカビに生育場所を与えることがある。これは概して集団に深刻な驚異を与えるものではないものの、集団感染の傾向が高い病院環境では、如何なる汚染リスクも最小にすることが望ましい。
【０００４】
過去数年にわたって、水での洗浄法を用いないで皮膚、毛髪及び爪を効果的に洗浄殺菌する液体洗浄製品を製剤化する研究努力が払われている。これら液体洗浄製品の多くは組成物中に比較的高い濃度又は重量パーセントで有機系アルコールや他の成分、例えば塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ヘキシルレゾルシノール及びヨードチンキを配合するものである。アルコール類は製品を素早く乾燥させるが、許容できない度合いまで皮膚を乾燥させてしまい、皮膚を痒くし、皮膚にひびや擦り剥きを生じさせる。また、アルコール類は可燃性で、胞子生成カビ又は胞子生成細菌に対しては有効ではなく、皮脂のような油を皮膚から十分に落とすことができない。
【０００５】
従って、皮膚又は毛髪に適用したときに水がなくとも効果があり、更には皮膚や毛髪に対してやさしく、広い範囲の微生物に対して一層効果的な、洗い流し不要の局所適用用液体洗浄組成物を開発する必要性がある。
【０００６】
［発明の概要］
本発明は適用した領域に残したままにすることができ水で洗い流す必要がない局所適用用液体洗浄製品に関する。該洗浄製品は、局所適用されると、皮膚上の望ましくない油や微生物のレベルを比較的短い時間で効果的に減少させる。更に、該洗浄製品は速やかに乾燥し、反復使用によって皮膚や毛髪に損傷を与えたり乾燥を引き起こすことはない。該洗浄製品は水溶性保湿剤を含有していてもよく、それによって皮膚に保湿効果をもたらす。
【０００７】
本発明は有効量の二酸化塩素化合物を含有する洗浄剤組成物を提供する。該洗浄剤組成物は乾燥過程を進ませる薬剤及びエモリエント又は皮膚保湿のための油を更に含有しうる。本発明はまたここに記載した洗い流さなくてもよい洗浄剤組成物を使用して、皮膚の油（皮脂）及び微生物のレベルを減少させる方法にも関する。
【０００８】
［例示的実施態様の詳細な記載］
本発明は、動物の毛皮を含む、ヒト及び動物の皮膚、毛髪及び爪に使用する液体洗浄組成物に関する。
本発明の組成物は、適用領域から酸化によって、皮脂及び死んだ皮膚細胞のような有機性屑を除去するのに効果的な有効量の二酸化塩素化合物を含有する。本発明の洗浄組成物中に存在する二酸化塩素化合物はまた酸化プロセスを介して適用領域から微生物を除去する。
【０００９】
ここで使用されるところの「洗浄剤(クレンザー)」という用語は、適用領域から油／皮脂及び有機性屑を取り除くことができ、適用部位から微生物を取り除くことができ、適用部位を酸化することができる組成物を意味するものである。同様に、ここで使用されるところの「洗浄」という用語は洗浄剤の適用領域から油／皮脂及び有機性屑を取り除き、適用領域から微生物を取り除き、適用領域を酸化することを意味するものである。
【００１０】
本発明の一実施態様では、本発明の洗浄剤組成物は創傷及び外傷を被った皮膚の領域を洗浄するために使用される。ここで使用されるところの「創傷」という用語は、皮膚及び／又は外部体表面への外傷を含む状態を意味するものであり、限定されるものではないが次の症状を含む：皮膚の表面が傷ついた（無傷ではない）皮膚領域、外部表面火傷、圧迫潰瘍、外科すり傷(surgical wounds abrasions)及び他の外傷。これらの実施態様では、洗浄剤組成物は処置領域から望ましくない微生物を減少させ又は除去するのに役立ち、更に創傷領域を悪化させないで死んだ組織を除去するのに役立つ。創傷領域の洗浄は、治癒を促進することになる酸化過程を介して生じる。
【００１１】
本発明のある種の実施態様では、乾燥過程に役立つ薬剤を含む。本発明のある種の実施態様では、乾燥剤はシリコーン成分である。本発明の他の実施態様は皮膚を保湿しリフレッシュさせるエモリエント剤を含有する。本発明の他の実施態様は、限定されるものではないが、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ヘキシルレゾルシノール、ヨードチンキ、イソプロピルアルコール及び塩化メチルベンゼトニウム又はその組み合わせを含む、皮膚洗浄剤に見出される一又は複数の成分を場合によっては含有していてもよい。
【００１２】
本発明の液体洗浄剤は、抗微生物機能を付与し、また適用領域からの皮脂の除去に役立つ一又は複数種の二酸化塩素化合物を含有している。このような二酸化塩素化合物の例としては、限定されるものではないが、亜塩素酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム及び亜塩素酸塩イオンがある。「二酸化塩素発生化合物」及び「二酸化塩素化合物」という用語はここでは交換可能に使用する。本発明の一実施態様では、二酸化塩素化合物は二酸化塩素を含有する水溶液である。該水溶液は二酸化塩素ガスを精製水中に溶解させることによって調製される。
【００１３】
本発明の液体洗浄剤組成物は、ヒト及び動物のための、皮膚洗浄剤、落屑スクラブ洗浄剤、微小皮膚剥離製品(micro-dermabrasion product)、皮膚消毒剤、又はシャンプーの形態でありうる。
本発明の一実施態様では、組成物中に存在する二酸化塩素化合物の濃度は、約０．００５重量％から約０．５重量％の範囲である。本発明の他の実施態様では、塩素化合物の濃度は約０．０１から約０．４重量％の範囲である。本発明の更に他の実施態様では、二酸化塩素化合物の濃度は約０．０３重量％から約０．１５重量％の範囲である。
【００１４】
場合によっては一又は複数のシリコーン系物質を本発明の液体洗浄剤組成物に含有させて、乾燥過程を更に補助するようにしてもよい。シリコーン系物質、例えばシクロメチコン、トリメチルシロキシシリケート又はその組み合わせを約５重量％から約３５重量％の濃度で製剤中に含有させることができる。本発明のある実施態様では、乾燥剤はエチルアルコールであり、１０％ｖ／ｖ未満の量で導入され、可燃製品中のアルコール量より十分に少量である。
【００１５】
また、場合によっては湿潤剤を添加して本発明の液体洗浄剤組成物内での液体の保持を補助することができ、増粘剤を添加して液体洗浄剤組成物の粘度を変更させることができる。本発明の一実施態様では、湿潤剤は約０重量％から約５重量％の濃度で含有せしめられ、増粘剤は約０重量％から約６．５重量％の濃度で含有せしめられる。増粘剤はセルロース系物質、ヒュームドシリカ又はその組み合わせ、例えば約０重量％から約１．５重量％の濃度で添加されるメチルセルロースを、約０重量％から約５．０重量％の濃度で添加されるヒュームドシリカと組み合わせて使用できる。本発明の実施態様において使用できる他の増粘剤には、ポリアクリル酸骨格を含む高分子量のポリマーであるカルボマー(carbomers)が含まれる。
【００１６】
場合によっては、エモリエント剤及び美的添加剤(aesthetic additives)、例えば香料及び／又は着色料をまた液体洗浄剤組成物に加えることができる。エモリエント剤又は保湿剤、香料及び着色料は必要に応じてまた消費者に許容される濃度で添加される。例えば、製剤は約０重量％から約１．５重量％の香料、染料又はその組み合わせを含有しうる。製剤はまた約０重量％から約５重量％の水溶性保湿剤、例えばグリセリン又はメトキシアミノプロピルＰＥＧ／ＰＰＧ-７／１３ジメチコンポリオール又はその組み合わせを含有してもよい。保湿剤は適用領域の保湿に役立つように洗浄剤製品に添加される。
【００１７】
本発明の一実施態様は本発明の組成物を局所適用することを含むヒト又は動物の外部体表面の洗浄方法を提供する。
次の実施例は本発明に従って調製できる液体洗浄剤を例示するものである。ある種の洗浄剤の代表的な抗微生物性能データ及び皮脂除去データがまた含められる。提供される洗浄剤製剤は例示のためだけのものであって、範囲を限定するものではない。
【実施例】
【００１８】
Ａ．  洗浄剤組成物の抗微生物効果の測定
目的：
この実験の目的は次の手順を用いて試験製品の抗微生物効果を評価することにある。
範囲：
１０回の連続した製品適用の過程にわたって各適用時に１試験製品当たり４人のヒト患者を使用する試験製品の抗微生物効果で、微生物試料はベースラインと、１回、３回、７回及び１０回の製品適用後に採取。セラチア菌(Serratia marcescens)（ＡＴＣＣ番号１４７５６）がマーカー生物である。
試験物質：
手の殺菌洗浄剤
【００１９】
装置：
ピペッター１．０ｍＬ容量
ピペッター０．１ｍＬ容量
ブンゼンバーナー
秒針付き時計
インキュベーター２５℃＋／−２℃
ボルテックスミキサー
冷蔵庫、２℃−８℃
【００２０】
補充品：
滅菌した５．０ｍＬ容量の血清学用ピペット
滅菌した希釈管
滅菌したポリスチレンペトリ皿
滅菌したパウダーフリーの外科用手袋
滅菌した１．０ｍＬ容量のピペットチップ
滅菌した０．１ｍＬ容量のピペットチップ
７０％エタノール
プロパンガス瓶
試験管ラック
【００２１】
試験液及び培地：
サンプリング液
滅菌剥離液（ＳＳＦ）
中和及び希釈液
中和剤製品を含むバターフィールドリン酸緩衝生理食塩水（ＢＢＰ＋）
中和剤製品を含む滅菌した剥離液（ＳＳＦ＋）
培地
トリプシン大豆寒天（ＴＳＡ）
中和アッセイ及び接種調製のためのトリプシンソイブロス（ＴＳＢ）
【００２２】
試験法：
４人の被験者が１０回の製品使用手順の過程にわたって一つの試験製品を使用した。
明らかに健康な１８才より年上であるが７０才より若い被験者を実験に参加させた。全ての被験者の手には、被験者と実験を危うくする臨床的に明らかな皮膚病、手及び前腕への傷、開放創、ささくれ、及び／又は任意の他の疾患はなかった。被験者は、局所適用又は全身性抗菌剤、ステロイド、又は正常な微生物叢に影響を及ぼすことが知られている任意の他の医薬を使用していることが分かった場合には実験には参加させなかった。
【００２３】
接種調製物
セラチア菌(Serratia marcescens)（ＡＴＣＣ番号１４７５６）を用いて試験製品の効果を調べた。セラチア菌の保存培養物を、寒天プレート又はスラントから一つのコロニーを１０ｍＬの滅菌トリプチケースソイブロス（ＴＳＢ）に無菌的に移し、それをついで２４＋／−２時間、２５＋／−２℃でインキュベートした。５００ｍＬのＴＳＢを含む１リットルのフラスコを０．５ｍＬの２４時間ブロスで接種し、移し、２５＋／−２℃で２０＋／−２時間インキュベートした。培養物の引き上げの前に、手の汚染の場合でも数のアッセイの場合でも、懸濁液を撹拌又振盪した。実験の使用期間の初めと終わりに生物数について懸濁液をアッセイした。懸濁液は６時間を越えては使用しなかった。
【００２４】
中和
実験開始前に、セラチア菌(Serratia marcescens)を用いて、「Standard Practice for Evaluation Inactivators of Antimicrobial Agents Used in Disinfectants, Sanitizers,Antiseptic, or Preserved Products」(ASTM E1054-91)に従って、抗菌製品中和剤の適切性を確認した。
【００２５】
試験期間
各被験者を、試験期間において、一日に二（２）時間又は三（３）時間の間、使用した。
ブランドの石鹸を使用して練習の洗浄を実施して、手からゴミや油を除去し、被験者を試験製品洗浄手順に慣れさせた。このために使用される水温と次の全洗浄サイクルを４０℃＋／−２℃に制御した。
【００２６】
指定した試験日と試験時期に、およそ１．０ｘ１０８ｃｆｕ／ｍＬのセラチア菌(Serratia marcescens)（ＡＴＣＣ番号１４７５６）を含む５．０ｍＬの一定分量の懸濁液を各被験者のカップ状の手の中に移した。接種液をついで両手に均等に分散させ、手首の上には達しないようにし、４５秒の間、穏やかに連続して擦った。時間を計って２分の空気乾燥後に、被験者は以下の指示に従って試験製品を使用した。
１．  被験者のカップ状の手の中に５ｍＬの試験製品を分配した。
２．  被験者は３０秒の間、手を擦って泡立てた。
３．  被験者は３０秒の間、手を洗い流した。
４．  被験者は使い捨てペーパータオルで手を軽く乾燥させた。
【００２７】
各被験者は全部で連続１０回の上述の接種／製品適用サイクルを実施した。各サイクル間は最小５分、最大１５分あけた。１回、３回、７回、１０回の接種／製品適用サイクル後に残留セラチア菌を手から採取した。全試料は以下に記載の手袋液採取手順を用いて採取する。
【００２８】
手袋液採取手順
所定の製品適用手順に従って、パウダーフリーの緩くフィットする滅菌ラテックス手袋を着用した。指定されたサンプリング時に、製品中和剤を含まない７５ｍＬの滅菌剥離液を手袋に滴下した。手首を保護し、６０秒間、均一な形で手袋を通して手を擦った。手袋の液体（希釈度１００）の５．０ｍＬの一定分量を取り除き、製品中和剤を含む滅菌剥離液及びバターフィールドリン酸緩衝液で段階希釈した。
【００２９】
播種
二組の連続プレートをトリプシン大豆寒天を使用して適切な希釈物から調製した。プレートをおよそ４８時間、２５℃＋／−２℃でインキュベートした。セラチア菌(Serratia marcescens)は赤いコロニーを産生し、そのコロニーだけをカウントした。
【００３０】
分析方法
データの収集
回収した生存している微生物の数を、二枚プレートに対する、７５Ｘ希釈因子Ｘ平均プレートカウントなる式を使用して推定した。それぞれの手から回収した生存している微生物の推定ｌｏｇ１０数を「Ｒ-値」とした。これは各サンプリング時での各被験者に対する調節された平均ｌｏｇ１０コロニーカウント測定値である。各Ｒ-値は次の式を使用して決定した：
Ｒ＝ｌｏｇ１０[７５ Ｘ Ｃｉ Ｘ １０−Ｄ Ｘ ２]
ここで、
７５＝各手袋に滴下した剥離液の量
Ｃｉ＝特定の希釈レベルでの各被験者に対する二枚のプレートカウントの算術平均コロニー数
Ｄ＝希釈係数
２＝中和希釈。
接種レベルのｌｏｇとＲ-値の差は対数減少又はＶ-値であり、次の式を使用して決定された：
Ｖ＝ＬｏｇＩ−Ｒ-値
ここで、
Ｉ＝微生物の接種レベル
Ｒ＝上の計算のＲ-値。
【００３１】
所見及び結論：
手袋液試験を利用した手の消毒剤に対する２-ｌｏｇ減少は有意な抗微生物活性を示した。３名のパネリストが実験を同時に開始した。４人目のパネリストが３時間後に実験を開始した。これは、最初の３人の被験者の場合よりも４番目のパネリストの方が最初の接種数が高かったためである。４番目のパネリストの対数減少はまた最初の３人のパネリストよりも高かった。
【００３２】
手の消毒剤は４回の試験洗浄に対して最初の三人のパネリストで２．４のセラチア菌(Serratia marcescens)の平均対数減少を示した。４番目のパネリストは４回の試験洗浄に対して平均４．２の対数減少を示した。
手袋液試験の結果は、手の消毒剤がセラチア菌(Serratia marcescens)を減少させるのに効果的で、有意な抗微生物活性を示すことを示している。
【００３３】
Ｂ．皮脂減少の実験
目的：
この実験の目的はヒトの毛髪及び皮膚での皮脂の減少における試験製品の効果を評価することにある。
範囲：
試験製品は、年齢、性別、皮膚状態の異なる３人の成人被験者を使用して評価した。
試験材料：
試験製品：水なしの皮膚洗浄剤及びシャンプー
【００３４】
装置：
皮脂計ＳＭ８１０
補助品：
ペーパータオル
試験方法及び所見：
４（３）名の被験者は一つ（１）の試験製品を使用し、被験者一名当たり毛髪の三領域と皮膚の三領域を調べ処置した。
【００３５】
無傷の皮膚での試験
皮脂計は平方センチ当たりの皮脂のマイクログラム数（マイクログラムはグラムの百万分の一）を測定する。皮脂の読み取りは各個人に対して３箇所の顔の皮膚領域で行った。全被験者の全部位についての最初の平均値は部位当たり２０９マイクログラムであった。
製品を飽和させたコットンナプキンを使用して、測定された選択皮膚領域に試験溶液を適用した。およそ４分間にわたって皮膚を空気乾燥させた。測定を同じ機器オペレーターが同じ位置で再度行った。洗浄剤の適用後の皮脂の読み取り値は平均４７で、皮膚の平均の皮脂減少は７８％であった。
【００３６】
毛髪での試験
毛髪及び頭皮の三領域について同じようにして同一の被験者から皮脂読み取り値を取得した。全ての被験者の全ての部位に対する最初の平均値は１７６であった。試験溶液を毛髪に噴霧し、応答者がおよそ一分間素早く擦り、ついで応答者がペーパータオルで乾燥させ、およそもう２分にわたってできるだけ十分に空気乾燥させた。洗浄剤の適用後の皮脂読み取り値は平均３０で、毛髪の皮脂レベルは８３％減少していた。
【００３７】
結論
およそ４分間にわたる皮膚の皮脂レベルの７８％の減少及び毛髪上の８３％の減少に基づいて、我々は、二酸化塩素洗浄剤溶液が、石鹸及び／又は水での一般的な洗浄を行わないでも皮脂レベルを低減させるのに非常に有効であると結論付けた。
【００３８】
Ｃ．洗浄剤の実験室での実験
Ｉ  目的：試験製品がラベル記載の保存料及び／又は抗微生物特性を示すことを実証すること。
ＩＩ  参考文献
２１Ｃ.Ｆ.Ｒ.セクション３３３。局所適用用抗微生物薬剤のヒトへの使用のための一般用医薬製品。Microconsult, Inc. 試験方法ＭＣ-１４。ＯＴＣ薬物製品のための消毒試験法。
【００３９】
ＩＩＩ  試験生物：
次の微生物の培養物を保存培養物として維持し、それから作用する接種菌液を調製する。この試験で使用される生存している微生物は元の保存培養物から除去された５継代以下でなければならない。試験の目的に対しては一継代は樹立された培養物から新鮮培地への生物の移動として定義される。全ての移動はカウントされる。
Ａ．大腸菌（ＡＴＣＣ番号８７３９）
Ｂ．黄色ブドウ球菌（ＡＴＣＣ番号６５３８）
【００４０】
ＩＶ  材料：
Ａ．蓋付きの試験管
Ｂ．１０．０ｍｌ及び１．０ｍｌの外科用ピペット
Ｃ．０．８５％のリン酸緩衝生理食塩水又はペプトン水、ｐＨ７．０−７．２
Ｄ．ペトリ皿、培養ループ、及び他の微生物学用器具
Ｖ  培地：
Ａ．レシチン及びＴｗｅｅｎ８０を含むトリプシン大豆寒天
【００４１】
ＶＩ  手順
Ａ  試験試料の調製
１．適切にラベルを貼った又はコード付けした６本の試験管のそれぞれに９．９ｍｌの製品を正確にピペットで取る。
２．室温で試験試料を保存する。
【００４２】
Ｂ．接種菌液の調製
１．  特定した微生物の各々の最近増殖させたストック培養物から適切な体積の固形寒天培地の表面に播種する。細菌培養物を１８−２４時間、３０−３５℃でインキュベートする。
２．  細菌培養物を収集するために、プレートからの試験微生物が満たされたループを、生理食塩水を含むチューブ中に入れてボルテックスする。接種レベルの濃度が生成物１ｍｌ当たり１０−７から１０−８微生物の間になるようにカウントを滅菌生理食塩水又は更なる微生物で調節する。
３．  滅菌リン酸緩衝生理食塩水での段階希釈によって接種懸濁液の各ミリリットル中の生存している微生物数を決定する。
４．  全生物に対して１０−６、１０−７及び１０−８の希釈物を蒔く。
５．  レシチン及びＴｗｅｅｎ８０を含む約２０ｍｌの４５℃のトリプシン大豆寒天で覆う。
６．  双方の試験生物について３０−３５℃で４８時間インキュベートする。
７．  試験生物をカウントする。
８．  接種菌液１ｍｌ当たりのコロニー形成単位（ｃｆｕ／ｍｌ）として次のようにして生物数を計算する：
ｃｆｕ／ｍｌ（０．１ｍｌ）／９．９ｍｌ＝ｃｆｕ／ｍｌ製品
【００４３】
Ｃ．試料の接種及び播種
１．  ０．１ｍｌの各試験懸濁液を適切に標識した９．９ｍｌの試験材料の試料中に各無菌的に移す。各試験生物を単一の９．９ｍｌの試験材料試料中に純粋培養物として接種する。
２．  ボルテックスによって全試料を十分に混合又は攪拌する。
３．  １５秒及び５．０分の間、静置する。
４．  １５秒と５．０分に一定分量を取り除き、９．９ｍｌの滅菌生理食塩水に移す。
５．  １０−２から１０−６までの段階希釈を実施する。
６．  １．０ｍｌの各希釈物を２通りの１００ｘ１５ｍｍペトリ皿中に移す。
７．  レシチン及びＴｗｅｅｎ８０を含む約２０ｍｌの４５℃のトリプシン大豆寒天で覆う。
８．  穏やかにプレートを回旋させ、固化させる。
９．  プレートを３５℃で４８時間、２５℃で４８時間、インキュベートする。
【００４４】
Ｄ．試料の評価
１．  プレート及び適切なデータシート上の記録結果を読みとる。
２．  各試験微生物の接種菌液濃度の計算値を使用して、各死滅割合について各微生物の対数減少値を計算する。
【００４５】
ＶＩＩ  データ
Ａ．  死滅割合の結果
１．  １５秒の結果
2006512304.tif 000002
【００４６】
２．  ５分の結果
2006512304.tif 000003
【国際調査報告】
2006512304.tif 000004