(57)【要約】本発明は、微生物を有効量の明細書中に記載される化合物に接触させることにより、ペプチド脱ホルミル化酵素を発現する微生物の増殖を阻害するための方法を提供する。この方法は、グラム陽性微生物およびグラム陰性微生物（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍａｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、およびＥ．ｃｌｏａｃａｅ）の増殖を阻害する。この方法は、インビトロ、エキソビボおよびインビボで実施され得る。被験体に有効量の上述の化合物を投与または送達することにより、その被験体においてペプチド脱ホルミル化酵素を発現する微生物による感染の症状を緩和するための方法も、さらに提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造
【化１】
2006507219.tif 000065
を有する化合物であって、
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、独立して同じかまたは異なり、水素、置換または非置換のＣ５〜Ｃ１４の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、４−ヒドロキシフェニルメチレン、イミダゾールメチレンなど）、および置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ―メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択される；
ここで、Ｒ３は、置換または非置換の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、トリアゾールメチレン、チオフェニルメチレンなど）、ならびに置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、エチル、プロピル、２−ヒドロキシルなど）および−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群から選択され、ここで、Ｘは、Ｏ、Ｓ，ＮＨ、ＮＲ６、およびＣＨ２からなる群から選択され、ここで、Ｒ６は、低級アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である；
ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して同じかまたは異なり、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群から選択され、ここで、Ｒ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）；
ここで、Ａ２は、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８、または＝Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）からなる群から選択され、ここで、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、独立して同じかまたは異なり、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここでＢ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１１は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ２は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ−メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択され、ここで、Ｂ２が−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−である場合、Ｂ２は、Ｒ１２、Ｒ１３、またはＲ１４を介してＲ４またはＲ５へとさらに結合され得、環式構造を形成し、ここで、−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−フラグメントは、全体として、プロリンあるいはプロリンの誘導体またはアナログである；
ここで、Ｂ３は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ４は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒ１６）−または−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、リンカーは、存在しないか、または痕跡を残さないリンカーである；ならびに
ここで、毒素は、活性化した酵素によって活性化されると毒性となる薬剤であるが、５−フルオロデオキシウリジン、あるいはその誘導体またはアナログではない、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１およびＲ２が両方とも水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３が−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここで、Ｘが酸素、イオウまたはメチルからなる群から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘがイオウまたは酸素である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ａ１およびＡ２が両方とも酸素である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｂ１が−ＮＨである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
前記リンカーが、Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−、ならびに、Ｘ１およびＸ２が独立して同じかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、およびＲａが水素または低級アルキルであるＮ（Ｒａ）からなる群から選択される−Ｃ６Ｈ４−ＣＨ２−Ｘ１−Ｃ（＝Ｘ２）、ならびに、ｎが２または３であり、Ｒｂが水素または低級アルキルである−（ＣＨ２）ｎ−ＮＲｂ−（Ｃ＝Ｏ）−からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｂ４が存在しない、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記毒素が、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、シプロフロキサシン、ナイトロジェンマスタード、ならびにそれらの誘導体、アナログおよび薬学的に受容可能な塩からなる群から選択される、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｂ２が−ＮＨであり、Ｂ３が−Ｏ−であり、Ｂ４が２−メチル−プロピルであり、そしてＲ５が水素である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
前記毒素が、ノルフロキサシン、あるいはその誘導体、アナログまたは薬学的に受容可能な塩である、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
前記化合物が精製されたものである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物およびキャリアを含む、組成物。
【請求項１４】
前記キャリアが、薬学的に受容可能なキャリアである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
微生物を有効量の請求項１に記載の化合物と接触させる工程を包含する、微生物の成長を阻害するための方法。
【請求項１６】
被験体に有効量の請求項１に記載の化合物を投与する工程を包含する、被験体を処置するための方法。
【請求項１７】
潜在的な治療薬剤を同定するための方法であって、以下の工程：
（ａ）微生物を請求項１に記載の化合物と、該化合物が該微生物中に取り込まれるために好ましい条件の下で接触させる工程；および
（ｂ）該微生物の処理していないサンプルとの比較において、該微生物の増殖量をアッセイする工程、
を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、米国特許法第１１９条の下で、米国仮特許出願第６０／３７４，０８９号（２００２年４月１８日出願、その内容は、本明細書によって本開示中に参考として援用されれる）による優先権を主張する。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、酵素触媒性薬剤活性化（ＥＣＴＡＴＭ）療法、特に、ペプチド脱ホルミル化酵素（「ＰＤＦ」）を発現する微生物に特異的なＥＣＴＡ療法の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
本開示を通して、種々の刊行物が括弧内の第１著者および日付、特許番号、または公開番号によって参照される。完全な書誌的な参照は、本願の最後に提供される。これらの参考文献の開示は、本願の属する分野の状態をより完全に記載するために、本明細書によって本開示中に参考として援用される。
【０００４】
酵素触媒性薬剤活性化（ＥＣＴＡＴＭ）療法は、標的酵素に独特なプロドラッグ基質を提供する、新規の技術である。従来の療法とは異なり、ＥＣＴＡプロドラッグは、標的酵素を阻害することも、不可逆的に不活性化することもない。米国特許第６，１５９，７０６号、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６６０７、ＰＣＴ／ＵＳ９９／０１３３２、およびＰＣＴ／ＵＳ００／２０００８。
【０００５】
標的酵素は、感染した細胞内のような、標的細胞内または標的酵素が発現している環境下で（標的酵素が存在していない環境と比較して）優先的に、ＥＣＴＡプロドラッグを毒素に変換する。化合物は標的化薬剤を必要としないので、化合物は、局所的または全身的に、直接的に利用され得る。
【０００６】
ＥＣＴＡ分子は、大部分の例において、自発的に（標的酵素による活性化なしに）細胞毒性生成物を生じない。ＥＣＴＡ分子は、非標的酵素によっては評価可能なほどに活性化されない。このことにより、非疾患組織または非感染組織に対する毒性を生ずるかもしれない。表１は、ＥＣＴＡ分子および酵素アクチベーターの特徴を総括する。
【０００７】
【表１】
2006507219.tif 000002
植物、人々または農業的に重要な動物における細菌感染、ウイルス感染および真菌感染の場合、病原生物には存在するが、宿主には存在しない代謝経路が、潜在的なＥＣＴＡ標的酵素の供給源である。例えば、いくつかの経路および関与する酵素は、細菌、真菌および植物でのみ見出されており、哺乳動物細胞においては見出されていない。１つの例が、「必須」アミノ酸−動物は合成できず、食物と共に摂取しなければならないアミノ酸の合成である。ＮｅｌｓｏｎおよびＣｏｘ（１９７２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
別の例は、ペプチド脱ホルミル化酵素（「ＰＤＦ」，ＥＣ３．５．１．３１）であり、成長しているポリペプチド鎖において、Ｎ末端のＮ−ホルミルメチオニンの脱ホルミル化を触媒する。Ｍｅｉｎｎｅｌ（１９９９）。この酵素は、細菌に存在し、活性である（Ｍｅｉｎｎｅｌら，１９９３）が、哺乳動物に存在しているという報告はされていない。細菌性ＰＤＦの配列と相同な配列が細菌哺乳動物において見出されたが、その正確な機能は未知である。Ｇｉｇｌｉｏｎｅら（２０００ａ）および（２０００ｂ）。
【０００９】
この酵素は、ヒトにおいて活性ではないので、抗細菌性薬物（大部分はＰＤＦ阻害剤）の標的として使用されている。ジチオールは、活性部位の金属イオンとスルヒドリル基の協調によって、非特異的なＰＤＦ阻害剤として作用し得る。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９７）。１，２−ジチオールまたは１，３−ジチオールの場合、活性部位からの金属イオンのゆっくりとした溶出が生じる。それぞれ安定な５員環または６員環を形成し、その各々が、この効果を担っている２つの金属−イオウ結合を含む。
【００１０】
合理的に設計されたコンビナトリアルライブラリーが、一般構造がＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ（Ｒａ）−ＣＯＮＨ−ＣＨ（Ｒｂ）−ＣＯＮＨ−Ｒｃである機構ベースのＰＤＦ阻害剤を選択するために使用された。Ｗｅｉら（２０００）。ライブラリーから選択された最適な阻害剤は、Ｒａとしてｎ−Ｂｕ基、Ｒｂとして−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝）ＮＨ−ＮＨ２、そしてＲｃとして２−ナフタレンを有している。この化合物は、１５ｎＭのＫｉを有する競合的ＰＤＦ阻害剤として作用する。
【００１１】
Ｊａｙａｓｅｋｅｒａら（２０００）は、Ｅ．ｃｏｌｉのＰＤＦを阻害することが公知の抗コレステロール性チロプピック酸（ｔｈｙｒｏｐｒｏｐｉｃ  ａｃｉｄ）と構造的に関連する一連の非ペプチド性化合物を記載する。アクチノニン（Ａｃｔｉｎｏｎｉｎ）は、ナノモーラーより小さいＫｉ範囲の活性を有する強力なＰＤＦ阻害剤であることが報告されている。Ｃｈｅｎら（２０００）。
【００１２】
ＷｅｉおよびＰｅｉ（２０００）は、５−フルオロデオキシウリジンの５’−ジペプチジル誘導体が、ＰＤＦ触媒性の脱ホルミル化に際して低分子（５−フルオロデオキシウリジン（５−Ｆ−ｄＵｒｄ））を放出することを記載している。５−Ｆ−ｄＵｒｄの形成は、精製したＰＤＦまたはＥ．ｃｏｌｉ粗溶解物によって触媒される基質の反応において、モニタリングされた。この化合物は、Ｅ．ｃｏｌｉ細菌に適用した場合、わずかに細胞毒性であった（ＩＣ５０＞１００μＭ）。細菌内でのＰＤＦの発現の増大（ＰＤＦ過剰発現株を使用）によっては、能力は増大しなかった。この化合物は、グラム陽性微生物に対しては、いくらかより有効であった（ＩＣ５０＝５０μＭ）。
【００１３】
さらなる阻害剤が、Ａｐｆｅｌら（２０００）、Ａｐｆｅｌら（２００１ａ）、Ａｐｆｅｌら（２００１ｂ）、Ｃｌｅｍｅｎｔｓら（２００１）、Ｄｕｒａｎｄら（１９９９）、およびＣｈｅｎら（２０００）に記載されている。しかし、ＰＤＦによって選択的にかつ有効に活性化されて毒素になる化合物または薬剤は、報告されていない。本発明は、この必要性を満たし、同様に関連する利益を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の開示）
従って、１つの局面において、本発明は、以下の構造を有するプロドラッグ化合物を提供する：
【００１５】
【化２】
2006507219.tif 000003
ここで、毒素は、酵素によって活性化されると放出される、５−Ｆ−ｄＵｒｄとは異なる、細胞毒性のある分子または抗生物活性のある分子である；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、独立して同じかまたは異なり、水素、置換または非置換のＣ５〜Ｃ１４の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、４−ヒドロキシフェニルメチレン、イミダゾールメチレンなど）、および置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ―メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択される；
ここで、Ｒ３は、置換または非置換の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、トリアゾールメチレン、チオフェンメチレンなど）、ならびに置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、エチル、プロピル、２−ヒドロキシエチルなど）および−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群から選択され、ここで、Ｘは、Ｏ、Ｓ，ＮＨ、ＮＲ６、およびＣＨ２からなる群から選択され、ここで、Ｒ６は、低級アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である；
ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して同じかまたは異なり、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群から選択され、ここで、Ｒ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）である；
ここで、Ａ２は、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８、または＝Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）からなる群から選択され、ここで、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、独立して同じかまたは異なり、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここでＢ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１１は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ２は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ−メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択され、ここで、Ｂ２が−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−である場合、Ｂ２は、Ｒ１２、Ｒ１３、またはＲ１４を介してＲ４またはＲ５へとさらに結合され、環式構造を形成し得、ここで、−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−フラグメントは、全体として、プロリンあるいはプロリンの誘導体またはアナログである；
ここで、Ｂ３は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ４は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｎ（Ｒ６）−および−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、リンカーは、存在しないか、または痕跡を残さないリンカーであり、以下の構造の１つから選択され得る：
【００１６】
【化３】
2006507219.tif 000004
ここで、ｎは、２または３であり、Ｒは、低級アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である；
ここで、ＹおよびＺは、独立して同じかまたは異なり、水素、低級アルキル、置換または非置換の低級アルケニル、置換または非置換の低級アルキニル、置換または非置換のアリール基、置換または非置換の複素環式基、置換または非置換の低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、カルボキシレート、スルホネート、アルキルスルホン、アルキルスルホキシドおよびトリアルキルシリルからなる群から選択される。
【００１７】
１つの局面において、Ｒ１およびＲ２は、独立して同じかまたは異なり、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６の低級アルキルからなる群から選択される。さらなる局面において、Ｒ１およびＲ２は、独立して同じかまたは異なり、メチルおよびＨからなる群から選択される。またさらなる局面において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれＨである。
【００１８】
１つの局面において、Ｒ３は、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここで、Ｘは、酸素、イオウまたはメチレンからなる群から選択される。さらなる局面において、Ｒ４は、置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６の低級アルキル、およびＨからなる群から選択される。またさらなる局面において、Ｒ４は、メチルまたはＨである。Ｒ４およびＲ５が、独立して同じかまたは異なり、Ｈおよび置換または非置換のＣ１〜Ｃ６のアルキルからなる群から選択される化合物もまた提供される。
【００１９】
別の局面において、Ｒ４およびＲ５は、独立して同じかまたは異なり、Ｈおよびメチルからなる群から選択される。代替的な実施形態において、Ｒ４およびＲ５のいずれかまたは両方がＨである。
【００２０】
１つの局面において、ペプチド脱ホルミル化酵素のＥＣＴＡ化合物は、Ｎ−ホルミル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−リンカー−原毒素族（Ｐｒｏｔｏｔｏｘｏｐｈｏｒｅ）の構造を有する。
【００２１】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２２】
【化４】
2006507219.tif 000005
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２３】
【化５】
2006507219.tif 000006
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２４】
【化６】
2006507219.tif 000007
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２５】
【化７】
2006507219.tif 000008
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２６】
【化８】
2006507219.tif 000009
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２７】
【化９】
2006507219.tif 000010
毒素が存在しない場合、化合物はＮＢ３１４５である。
【００２８】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００２９】
【化１０】
2006507219.tif 000011
毒素が存在しない場合、化合物はＮＢ３１６２である。
【００３０】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００３１】
【化１１】
2006507219.tif 000012
毒素が存在しない場合、化合物はＮＢ３１７７である。
【００３２】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００３３】
【化１２】
2006507219.tif 000013
毒素が存在しない場合、化合物はＮＢ３１４４である。
【００３４】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００３５】
【化１３】
2006507219.tif 000014
毒素が存在しない場合、化合物はＮＢ３１６５である。
【００３６】
微生物を有効量の上記の化合物に接触させることにより、ＰＤＦを発現する微生物の増殖を阻害するための方法もまた、本発明によって提供される。この方法は、グラム陽性微生物およびグラム陰性微生物（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍａｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、およびＥ．ｃｌｏａｃａｅ）の増殖を阻害する。この方法は、インビトロ、エキソビボおよびインビボで実施され得る。被験体に有効量の上述の化合物を投与または送達することにより、その被験体においてＰＤＦを発現する微生物による感染の症状を緩和するための方法も、さらに提供される。「被験体」は、本明細書において定義され、哺乳動物（例えば、ヒト患者）を含む。
【００３７】
本発明はまた、単独でか、あるいは公知であるかまだ発見されていない他の化合物または他の薬剤およびキャリアと組合わせて、上述のプロドラッグ化合物を含む組成物も提供する。１つの局面において、キャリアは、別の分子または不活性物質（例えば、プレートまたはカラム）である。代替的な実施形態において、キャリアは、薬学的に受容可能なキャリアである。薬学的に受容可能なキャリアは、当該分野で公知であり、上に簡単に記載されている。
【００３８】
（発明を行うための様式）
本明細書で使用する場合、特定の用語は、以下に定義される意味を有し得る。
【００３９】
単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文章が違うことを明確に指示しない限り、複数についての言及を含む。例えば、用語「ａ  ｃｅｌｌ」は、複数の細胞（それらの混合物を含む）を含む。
【００４０】
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は、その組成物および方法は、示す要素を含むが、他のものを除外しないことを意味することを意図する。「本質的に〜からなる」は、組成物および方法を定義するために使用する場合、その組合せに本質的に重要である他の要素を除外することを意味する。従って、本質的に本明細書で定義される要素からなる組成物は、単離方法および精製方法からの極微量の夾雑物および薬学的に受容可能なキャリア（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、防腐剤など）を除外しない。「からなる」は、他の成分の極微量よりも多い量の要素、および本発明の組成物を投与するための実質的な方法工程を除外することを意味する。これらの変遷用語の各々によって定義される実施形態は、本発明の範囲内である。
【００４１】
「低級アルキル、アルキニル、またはアルケニル」は、直鎖状の、分岐鎖上のまたは環式の基を意味し、他に定義しない限り、１〜１０個の炭素原子を含む（Ｃ１〜Ｃ１０）か、あるいは、Ｃ１〜Ｃ６、あるいはＣ１〜Ｃ４を含有する基である。
【００４２】
本明細書で使用する場合、用語「プロドラッグ」は、薬学的に活性な薬剤または物質の前駆体形態または誘導体形態を意味し、薬物代謝物と比較して標的細胞に対する細胞毒性が弱く、酵素的に活性化され得るか、またはより活性な形態へと変換され得る。
【００４３】
「組成物」は、活性薬剤、および不活性（例えば、表面、塗装、検出可能な薬剤または標識、あるいは薬学的に受容可能なキャリア）または活性な他の化合物または組成物（例えば、アジュバントまたは消毒薬）の組合せを意味することを意図する。
【００４４】
「薬学的組成物」は、活性薬剤と不活性または活性なキャリアとの組合せを含むことを意図し、この組合せにより、この組成物が、インビトロ、インビボまたはエキソビボでの診断的使用または治療的使用に適切なものとなる。
【００４５】
用語「予防的効果量」とは、被験体における感染または植物の外寄生を防止する上で有効な量をいう。
【００４６】
用語「薬学的に受容可能なキャリア」および「生物学的に受容可能なキャリア」とは、本発明の化合物と共に宿主または患者に投与されるキャリアまたはアジュバントをいい、有効量の化合物を送達するために十分な容量で投与される場合、化合物の薬学的活性を破壊せず、非毒性である。適切なキャリアの例としては、液相キャリア（例えば、滅菌溶液または水溶液）および下に記載するキャリアが挙げられる。薬学的に受容可能なキャリアの例としては、任意の標準的な薬学的キャリア（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、水、および乳濁液（例えば、油／水乳濁液または水／油乳濁液））、ならびに種々の型の加湿剤が挙げられる。組成物はまた、安定剤および防腐剤も有し得る。キャリア、安定剤およびアジュバントの例については、Ｍａｒｔｉｎ，ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ'Ｓ  ＰＨＡＲＭ．ＳＣＩ．，１５版（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ（１９７５））を参照のこと。
【００４７】
「置換基」とは、置換される基において、炭素または窒素に結合した１個以上の水素を置換する基をいう。例示的な置換基としては、アルキル、アルキリデニル、アルキルカルボキシ、アルコキシ、アルケニル、アルケニルカルボキシ、アルケニルオキシ、アリール、アリールオキシ、アルキルアリール、アルキルアリールオキシ、ＯＨ、アミド、カルボキサミド、カルボキシ、スルホニル、＝Ｏ、＝Ｓ、−ＮＯ２、ハロゲン、ハロアルキル、必要に応じて置換されている飽和または不飽和の縮合環、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−ＳＯ３Ｒ、−ＳＲ、−ＮＲＲ’、−ＯＨ、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒまたは−（ＣＨ２）ｎＣＯＮＲＲ’が挙げられ、ここで、ｎは、０〜４であり、ＲおよびＲ’は、独立してＨ、アルキル、アリールまたはアルキルアリールである。置換基はまた、炭素原子および１個以上の結合している水素原子の必要に応じて置換されたヘテロ原子による置換も含む。
【００４８】
用語「処置」とは、以下のいずれかをいう：患者における特定の障害の症状を緩和すること；特定の障害に関連する確認可能な測定値を改善すること；または、微生物の数を減少させること。当業者は、微生物量の減少または感染に関連する症状の緩和を記録することよって、宿主が「処置」されている時を決定することができる。
【００４９】
用語「薬学的に受容可能な塩、プロドラッグまたは誘導体」とは、本発明の化合物の任意の薬学的に受容可能な塩、エステル、エーテル、エステルの塩、溶媒化合物（例えば、エタノレート（ｅｔｈａｎｏｌａｔｅ））、または他の誘導体に関し、レシピエントに投与されると、本発明の化合物、あるいはその活性な代謝物または残留物を（直接的または間接的に）提供し得る。特に好ましい誘導体およびプロドラッグは、このような化合物が哺乳動物に投与される場合、本発明の化合物の生物学的利用能を増大させる（例えば、経口投与される化合物がより容易に血中に吸収されることを可能にすることによって）か、または生物学的区画（例えば、脳またはリンパ系）への親化合物の送達を増強する、誘導体およびプロドラッグである。
【００５０】
本発明の化合物の塩は、無機性または有機性の酸および塩基から得られ得る。酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。他の酸（例えば、シュウ酸）は、それ自身では薬学的に受容可能ではないが、本発明の化合物およびそれらの薬学的受容可能な酸付加塩を得る場合に、中間体として有用な塩を調製する際に使用され得る。塩基の例としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）の水酸化物、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）の水酸化物、アンモニア、式ＮＷ４＋（ここで、Ｗは、Ｃ１〜４のアルキルおよびＴＨＡＭ（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）である）の化合物が挙げられる。
【００５１】
塩の例としては、アセテート、アジペート、アルギネート、アスパルテート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビスルフェート、ブチレート、シトレート、カンホレート、カンホルスルホネート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルホネート、フマレート、フルコヘプタノエート、グリセロホスフェート、へミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロアイオダイド、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ラクテート、マレエート、メタンスルホネート、２−ナフタレンスルホネート、ニコチネート、オキサレート、パーモエート（ｐａｌｍｏａｔｅ）、ペクチネート、パースルフェート、フェニルプロピオネート、ピクレート、ピバレート、プロピオネート、スクシネート、タートレート、チオシアネート、トシレートおよびウンデカノエートが挙げられる。塩の他の例としては、適切なカチオン（例えば、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、ＮＨ４＋、およびＮＷ４＋（ここで、Ｗは、Ｃ１〜４のアルキル基である））と化合物を形成した本発明の化合物のアニオンが挙げられる。
【００５２】
治療的使用のために、本発明の化合物の塩は、薬学的に受容可能である。しかし、薬学的に受容可能ではない酸および塩基の塩もまた、例えば、薬学的に受容可能な化合物の調製または精製において、または植物において微生物の外寄生を軽減するための使用について、用途を見出し得る。
【００５３】
用語「痕跡を残さないリンカー」は、１つの分子の２つの部分の間のスペーサーつまりコネクターであって、分子の２つの部分の間の特定の結合が切断された場合、この分子の第２の部分に結合したままであり、その痕跡を残さずに取り除かれるコネクターを示す。例えば、Ｆ．Ｍ．Ｈ．ｄｅ  Ｇｒｏｏｔら（２０００）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４３:３０９３−３１０２を参照のこと。
【００５４】
用語「有効量」は、治療的有効量または予防的有効量を含む。この用語は、単独での治療または他の薬剤との併用のいずれかとして、患者における感染または植物における外寄生を処置または予防する際に有効な量をいう。
【００５５】
微生物の「増殖を阻害する」とは、薬剤と接触させることによって、この薬剤と接触させられていない同じ種のコントロール微生物と比べて、このような微生物の増殖速度を減少させることを意味する。
【００５６】
「被験体」は、ＰＤＦを発現する微生物に対して、直接的な宿主または間接的な宿主であるか、またはあり得る任意の生体であり、植物および動物（例えば、魚類、鳥類または哺乳動物、好ましくはヒト）を含む。魚類としては、ペットおよび養殖魚が挙げられるが、これらに限定されない。鳥類としては、ペット、競技用動物および家畜が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物としては、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５７】
例としては、非脊椎動物、脊椎動物（例えば、鳥類または哺乳動物（例えば、ヒト患者））が挙げられるが、これらに限定されない。哺乳動物としては、マウス、サル、ヒト、家畜、競技用動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
ＰＤＦは、よく研究された酵素である。その結晶構造は公知である。Ｃｈａｎら（１９９７）。この酵素は、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞において発現されている（Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９７））。この論文の著者らは、この遺伝子配列の文献データに基づいて設計されたプライマーを用いるＰＣＲによって、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｄｅｆの遺伝子を単離した。精製した酵素は、大気中酸素による触媒部位のＦｅ２＋の急速な酸化に起因して不安定である。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９８）。不活性化を避けるための酵素の適切な操作条件が報告されている。Ｒａｊａｇｏｐａｌａｎら（１９９７）。重要なことに、Ｚｎ２＋およびＮｉ２＋を含有するＰＤＦは安定であり、酵素の触媒的特性をインビトロで評価することが可能である。ＰＤＦには、単純な継続的比色アッセイが存在する。ＷｅｉおよびＰｅｉ（１９９７）。それは、基質としてＮ−ホルミルメチオニルロイシンｐ−ニトロアニリドを利用する。ＰＤＦ反応に続く共役アミノペプチダーゼ反応により、ｐ−ニトロアニリンが放出され、これは４０５ｎｍで分光光度計でモニタリングされ得る。
【００５９】
ＰＤＦは、完全なＥＣＴＡの標的酵素である。ＰＤＦは、細菌では活性であり、ヒト宿主では不活性である。ＰＤＦは、広い基質特異性を有している。脱ホルミル化は、メチオニン（または、基質のＰＩ位置に寛容な別のアミノ酸（例えば、ノルロイシン））の遊離アミノ基を解放し、このアミノ基は、続いて求核攻撃を行い得る。合理的に設計したジペプチドを用いて、この遊離アミノ基は、ジペプチドの最適に配置されたカルボニル基を攻撃し得、従って、ジペプチド起源の環状分子（ジケトピペラジン、ＤＫＰ）を形成し、毒素を放出する。このジペプチドは、ＤＫＰ形成を増強するために最適化され得る。提供される反応スキームは、図に示される。ここで、Ｘは、イオウ（メチオニン）または−ＣＨ２−（ノルロイシン）であり得る。Ｒ１およびＲ２は、公開されているＰＤＦについてのＳＡＲデータに基づいて選択され得る、脂肪族ラジカルである。Ｈｕら（１９９８）。
【００６０】
従って、１つの局面において、本発明は、以下の構造を有するプロドラッグ化合物を提供する。
【００６１】
【化１４】
2006507219.tif 000015
ここで、毒素は、酵素によって活性化されると放出される、５−Ｆ−ｄＵｒｄとは異なる、細胞毒性のある分子または抗生物活性のある分子である；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４およびＲ５は、独立して同じかまたは異なり、水素、置換または非置換のＣ５〜Ｃ１４の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、４−ヒドロキシフェニルメチレン、イミダゾールメチレンなど）、および置換または非置換のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ―メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択される；
ここで、Ｒ３は、置換または非置換の芳香族またはヘテロ芳香族（例えば、フェニルメチレン、トリアゾールメチレン、チオフェンメチレンなど）、ならびに置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、エチル、プロピル、２−ヒドロキシルなど）および−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３からなる群から選択され、ここで、Ｘは、Ｏ、Ｓ，ＮＨ、ＮＲ６、およびＣＨ２からなる群から選択され、ここで、Ｒ６は、低級アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である；
ここで、Ａ１およびＡ３は、独立して同じかまたは異なり、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、または＝Ｎ−Ｒ７からなる群から選択され、ここで、Ｒ７は、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）である；
ここで、Ａ２は、＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＨ、＝Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−Ｒ８、または＝Ｃ（Ｒ９）（Ｒ１０）からなる群から選択され、ここで、Ｒ８、Ｒ９、およびＲ１０は、独立して同じかまたは異なり、水素またはＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここでＢ１は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１１）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１１は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ２は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１２、Ｒ１３、およびＲ１４は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、３−ヒドロキシプロピル、３−アミノプロピル、Ｎ−メチル−３−アミノエチル、２−メトキシエチルなど）からなる群から選択され、ここで、Ｂ２が−Ｎ（Ｒ１２）−または−Ｃ（Ｒ１３）（Ｒ１４）−である場合、Ｂ２は、Ｒ１２、Ｒ１３、またはＲ１４を介してＲ４またはＲ５へとさらに結合され得、環式構造を形成し、ここで、−Ｂ２−Ｃ（Ｒ４）（Ｒ５）−Ｃ（＝Ａ３）−フラグメントは、全体として、プロリンあるいはプロリンの誘導体またはアナログである；
ここで、Ｂ３は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−または−Ｎ（Ｒ１５）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１５は、水素およびＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、Ｂ４は、存在しないか、あるいは−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｎ（Ｒ６）−および−Ｃ（Ｒ１６）（Ｒ１７）−からなる群から選択され、ここで、Ｒ１６およびＲ１７は、独立して同じかまたは異なり、水素、あるいは置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６のアルキル（例えば、メチル、エチル、またはメトキシメチル）からなる群から選択される；
ここで、リンカーは、存在しないか、または痕跡を残さない（ｔｒａｃｅｌｅｓｓ）リンカーであり、以下の構造の１つから選択され得る：
【００６２】
【化１５】
2006507219.tif 000016
ここで、ｎは、２または３であり、Ｒは、低級アルキル（例えば、メチルまたはエチル）である；
ここで、ＹおよびＺは、独立して同じかまたは異なり、水素、低級アルキル、置換または非置換の低級アルケニル、置換または非置換の低級アルキニル、置換または非置換のアリール基、置換または非置換の複素環式基、置換または非置換の低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、カルボキシレート、スルホネート、アルキルスルホン、アルキルスルホキシドおよびトリアルキルシリルからなる群から選択される。
【００６３】
１つの局面において、Ｒ１およびＲ２は、独立して同じかまたは異なり、置換または非置換のＣ１〜Ｃ６の低級アルキルからなる群から選択される。さらなる局面において、Ｒ１およびＲ２は、独立して同じかまたは異なり、メチルおよびＨからなる群から選択される。またさらなる局面において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれＨである。
【００６４】
１つの局面において、Ｒ３は、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｘ−ＣＨ３であり、ここで、Ｘは、酸素、イオウまたはメチレンからなる群から選択される。さらなる局面において、Ｒ４は、置換または非置換の飽和または不飽和のＣ１〜Ｃ６の低級アルキル、およびＨからなる群から選択される。またさらなる局面において、Ｒ４は、メチルまたはＨである。１つの局面において、Ｒ４およびＲ５が、独立して同じかまたは異なり、Ｈおよび置換または非置換のＣ１〜Ｃ６のアルキルからなる群から選択される。
【００６５】
別の局面において、Ｒ４およびＲ５は、独立して同じかまたは異なり、Ｈおよびメチルからなる群から選択される。代替的な実施形態において、Ｒ４およびＲ５のいずれかまたは両方がＨである。
【００６６】
毒素の例としては、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド類、マイトマイシン、ブレオマイシン、ペニシリン、セファロスポリン、オキサシリン、カルボペネム（ｃａｒｂｏｐｅｎｅｍ）、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド、シクロセリン、フルオロキノロン類、グリコペプチド、アミノ配糖体、ペプチド抗生物質、オキサゾリジノン類、キノロン類、スルホンアミド、細胞毒性ヌクレオシド、プテリジンファミリー、ナイトロジェンマスタード、ポリハロゲン化ビフェニル、ジイネン（ｄｉｙｎｅｎｅ）、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｉｌｌｏｔｏｘｉｎ）、タキソイド（ｔａｘｏｉｄ）、ドキソルビシン、カルミノマイシン（ｃａｒｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、ダウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキサート、メトプテリン、ジクロロメトトレキサート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン（ｐｏｒｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、６−メルカプトプリン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシン（ｐｏｄｏｐｈｉｌｌｏｔｏｘｉｎ）、エトポシド、リン酸エトポシド、メルファラン、ビンデシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイドシジン（ｌｅｕｒｏｓｉｄｉｎｅ）、ロイロシン（ｌｅｕｒｏｓｉｎｅ）、ビス−（２−クロロエチル）アミン、トリクロロカーバン（ｔｒｉｃｈｌｏｒｃａｒｂａｎ）、トリクロロカーバニリド（ｔｒｉｃｈｌｏｒｏｃａｒｂａｎｉｌｉｄｅ）、トリブロモサリチルアニリド、スルファメトキサゾール（ｓｕｌｐｈａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ）、クロラムフェニコール、シクロセリン、トリメトプリム、クロルヘキシジン、ヘキサクロロフェン、フェンチクロル（ｆｅｎｔｉｃｈｌｏｒ）、５−クロロ−２−(２，４−ジクロロフェノキシ)フェノール、４−クロロ−２−(２、４−ジクロロフェノキシ)フェノール、３−クロロ−２−(２，４−ジクロロフェノキシ)フェノール、６−クロロ−２−(２，４−ジクロロフェノキシ)フェノール、５−クロロ−２−(３，４−ジクロロフェノキシ)フェノール、５−クロロ−２−(２，５−ジクロロフェノキシ)フェノール、５−クロロ−２−(３，５−ジクロロフェノキシ)フェノール、２、２’−ジヒドロキシビフェニエーテル、ハロゲン化２−ヒドロキシベンゾフェノン、２−メルカプトピリジン−Ｎ−オキシド、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）、カンプトテシン（ｃａｍｐｔｏｔｈｅｓｉｎ）、アポトリデン（ａｐｏｐｔｏｌｉｄｅｎｅ）、シスプタチン、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、ハリコンドリン（ｈａｌｉｃｈｏｎｄｒｉｎ）、ヘミアステリン（ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ）、メチオプリム（ｍｅｔｈｉｏｐｒｉｍ）、タプシガリン（ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ）、クロロキン、４−ヒドロキシシクロホスファミド、エトポシド、コルヒチン、メルファラン、ケルセチン、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、エラブスタチン（ｅｒｂｓｔａｔｉｎ）、Ｎ−(４−アミノブチル)−５−クロロ−２−ナフタレン−スルホンアミド、ピリジニルオキサゾール−２−オン、イソキノリルオキサゾロン−２−オン、ベラパミル、キニーネ、キニジン、およびクロロキンからなる群が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６７】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００６８】
【化１６】
2006507219.tif 000017
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００６９】
【化１７】
2006507219.tif 000018
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７０】
【化１８】
2006507219.tif 000019
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７１】
【化１９】
2006507219.tif 000020
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７２】
【化２０】
2006507219.tif 000021
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７３】
【化２１】
2006507219.tif 000022
毒素が存在しない場合、この化合物はＮＢ３１４５である。
【００７４】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７５】
【化２２】
2006507219.tif 000023
毒素が存在しない場合、この化合物はＮＢ３１６２である。
【００７６】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７７】
【化２３】
2006507219.tif 000024
毒素が存在しない場合、この化合物はＮＢ３１７７である。
【００７８】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００７９】
【化２４】
2006507219.tif 000025
毒素が存在しない場合、この化合物はＮＢ３１４４である。
【００８０】
１つの局面において、化合物は以下の構造を有する：
【００８１】
【化２５】
2006507219.tif 000026
毒素が存在しない場合、この化合物はＮＢ３１６５である。
【００８２】
微生物を有効量の上記の化合物と接触させることによりＰＤＦを発現する微生物の増殖を阻害する方法も、本発明により提供される。ＰＤＦの発現を検出するための方法は、当該分野で公知である（例えば、ＷｅｉおよびＰｅｉ（１９９７）を参照のこと）。この方法は、グラム陽性微生物およびグラム陰性微生物（例えば、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ、Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｅ．ａｅｒｏｇｅｎｅｓ、Ｅ．ｃｌｏａｃａｅおよび以下の表２に同定される微生物）の増殖を阻害する際に特に有用である。被験体に有効量の上記の化合物を投与または送達することによりその被験体において感染（この感染はＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる）の症状を緩和するための方法が、さらに提供される。被験体に有効量の上記の化合物を投与または送達することによりＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染を処置するための方法もまた提供される。「被験体」は、上に定義されており、哺乳動物（例えば、ヒト患者）を含む。ＰＤＦを発現する微生物の例、ならびに、これらの微生物の感染により引き起こされるそれに対応する疾患および症状が、下の表２で提供される。
【００８３】
【表２】
2006507219.tif 000027
本発明また、単独でか、あるいは公知またはまだ発見されていない他の化合物または他の薬剤、およびキャリアと組合わせて、上述のプロドラッグ化合物を含む組成物も提供する。１つの実施形態において、キャリアは、薬学的に受容可能なキャリアである。
【００８４】
プロドラッグの臨床的使用において、抗生物質は、おそらく、よく確立された指針に従う。投薬は、おそらく、大部分の他の抗生物質について既に使用されている投薬と類似する。８時間ごとに１度または１日に１度、１週間または２週間の間または患者が感染性生物について陰性であると試験されるまで、プロドラッグの用量は１００ｍｇ〜１ｇｍの範囲であることが推定される。
【００８５】
1つの局面において、本発明は、有効量の基質プロドラッグを適用することにより、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染について、植物を処置または防護する方法を含む。
【００８６】
植物を処置するために使用される場合、化合物の良好な分散および接着を達成するために、化合物を分散および接着を補助する成分と共に処方することが有利であり得る。適切な処方は、当業者に公知である。
【００８７】
本発明はまた、葉、根、あるいは植物または根の周囲の土壌に有効量のプロドラッグ化合物を適用することにより、ＰＤＦを発現する微生物の感染について、植物を処置または保護するための方法も提供する。これらの単離された化合物は、公知の農薬または殺虫剤と併用され得る。
【００８８】
本発明に属する化合物は、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染について、植物を処置または保護するために使用される場合、加湿可能な粉末、顆粒などとして処方され得るか、または適切な媒体などの中に微小被包化され得る。他の処方物の例としては、可溶性粉末、加湿可能な顆粒、乾燥流動物（ｆｌｏｗａｂｌｅ）、水性流動物、加湿可能で分散可能な顆粒、乳化可能な濃縮物および水性懸濁液が挙げられるが、これらに限定されない。他の適切な処方物は、当業者に公知である。
【００８９】
本発明はさらに、ＰＤＦを発現する微生物によって引き起こされる感染について予防または処置のいずれかを行うために有効な量で、魚類にプロドラッグ化合物を投与するための方法を提供する。化合物は、化合物を魚類用の給餌に取り込むことにより投与され得る。あるいは、化合物は、魚類が生活している水に添加され得るか、またはその中に含まれる。最後に、化合物は、適切な薬学的調製物として魚類に投与され得る。他の適切な処方は、当業者に公知である。
【００９０】
本発明のプロドラッグを製造するためのプロセスが、さらに提供される。一般に、このプロセスは、以下の工程を必要とする：
【００９１】
【化２６】
2006507219.tif 000028
合理的に設計されたコンビナトリアルライブラリーが、機構ベースのＰＤＦ阻害剤を選択するために使用された。Ｗｅｉら（２０００）。ライブラリーから選択された最適な阻害剤は、以下の構造を有している：ＨＳ−ＣＨ２−ＣＨ［（ＣＨ２）３−ＣＨ３］−ＣＯＮＨ−ＣＨ［−（ＣＨ２）３−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ２］−ＣＯＮＨ−Ｒ（ここで、Ｒは、２−ナフタレンである）。この化合物は、１５ｎＭのＫｉを有する競合的ＰＤＦ阻害剤として作用する。
【００９２】
上記のダイアグラムに関して、Ｘは、イオウ（メチオニン）または−ＣＨ２−（ノルロイシン）であり得る。Ｒ１〜Ｒ５およびＢ１〜Ｂ３は、上に規定した通りである。反応条件および略語の完全な名称は、以下の実施例において見出され得る。
【００９３】
本発明は、ＰＤＦを発現する微生物を含むサンプルを有効量の候補プロドラッグ化合物に接触させることで、ＰＤＦを発現する生物の増殖を阻害する潜在的な治療剤を同定するための方法を提供する。別個のサンプルにおいて、同じ微生物を有効量の本発明のプロドラッグに接触させる。薬剤が、本明細書に記載されるプロドラッグと比較して匹敵する抗増殖性能力を有している場合、その候補は、ＰＤＦを発現する微生物の成長を阻害するか、またはそれを殺すために有用である。
【００９４】
プロドラッグは、ＰＤＦによるプロドラッグの活性化に好ましい条件下でサンプルと接触させられ、次いで、サンプルの増殖阻害または微生物の死をアッセイする。あるいは、サンプルは、基質についてのＰＤＦによる反応の副生成物の存在について試験され得る。種々の量の基質が、ＰＤＦが細胞から毒素を放出するために有効な時間の間ＰＤＦを発現する微生物と接触させられ、この細菌を溶解し、そして当該分野で公知の方法（例えば、ＨＰＬＣ）を使用して検体が分析され、反応生成物を同定する。
【００９５】
種々の濃度の潜在的な薬剤をサンプルと接触させ、その薬剤の最適な有効濃度を決定する。従って、１つの局面において、本発明は、ＰＤＦの選択的な基質である薬剤の発見およびその使用に関する。
【００９６】
本明細書に記載するプロドラッグおよびスクリーニングを行うために必要な装置を含むキットもまた、本発明によって提供される。
【００９７】
本発明の方法は、インビトロ、エキソビボまたはインビボで実施され得る。動物（例えば、ラットまたはマウス）において本発明をインビボで実施することにより、治療的薬剤またはプロドラッグの臨床試験に先立って使用され得る、簡便な動物モデル系が提供される。この系において、微生物量が減少するか、または感染の症状が改善された場合（それぞれ、未処置の感染した動物と比較する）に、潜在的なプロドラッグは成功である。感染していない別のネガティブコントロールの細胞群または動物群を有することもまた、有用であり得、これらは比較の基準を提供する。
【００９８】
インビボで実施する場合、候補プロドラッグは、有効量で動物に投与または送達される。本明細書で使用する場合、インビボおよびエキソビボの目的についての用語「投与する」とは、微生物量を減少させるために有効な有効量の候補プロドラッグを被験体に提供することを意味する。これらの例において、薬剤またはプロドラッグは、薬学的に受容可能なキャリアと共に投与され得る。本発明の薬剤、プロドラッグおよび組成物は、例えば、薬学的組成物中の活性成分として、医薬の製造において使用され得、ならびに、従来の手順に従った投与によるヒトおよび他の動物の処置のために使用され得る。
【００９９】
薬学的組成物を投与する方法は、当業者に公知であり、微量注入、静脈内投与または非経口投与が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、局所的（ｔｏｐｉｃａｌ）投与、経口投与、または局所的（ｌｏｃａｌ）投与、および静脈内投与、皮下投与、または筋肉内投与について意図されている。投与は、処置の経過にわたり、継続的または間欠的に行われ得る。投与についての最も有効な手段および投薬を決定するための方法は、当業者に公知であり、治療に使用されるプロドラッグ、治療の目的、処置される微生物、感染の重篤度、および処置される被験体によって変化する。一回の投与または複数回の投与は、処置医により選択される用量レベルおよびパターンで行われ得る。例えば、組成物は、抗生物質耐性のある微生物による感染に既に罹患している被験体に投与され得る。この状況において、有効「治療量」の組成物が、微生物の成長と増殖が継続するのを防止するため、およびそれを少なくとも部分的に止めて、感染に関連する症状を改善するために投与され得る。
【０１００】
しかし、プロドラッグは、感染を発症しやすいか、またはその危険性がある被験体または個体に投与され得る。これらの実施形態において、「薬学的有効量」の組成物が、細胞の生存および機能を感染前のレベルに近い一定のレベルで維持するために投与される。
【０１０１】
インビボでの投与は、処置の経過にわたり、継続的または間欠的にある用量で行われ得る。投与についての最も有効な手段および投薬量を決定するための方法は、当業者に公知であり、治療に使用される組成物、治療の目的、処置される標的細胞、および処置される被験体によって変化する。一回の投与または複数回の投与は、処置医により選択される用量レベルおよびパターンで行われ得る。薬剤の投与の適切な投薬処方および方法は、下に見出され得る。
【０１０２】
薬学的組成物は、経口投与、鼻腔内投与、非経口投与、または吸入治療によって投与され得、錠剤、ロゼンジ、顆粒、カプセル、ピル、アンプル、坐剤、またはエアロゾルの形態を取り得る。薬学的組成物はまた、水性希釈剤または非水性希釈剤中に存在する活性成分の懸濁液、溶液および乳濁液、シロップ、顆粒化物または粉末の形態を取り得る。本発明の薬剤に加えて、薬学的組成物はまた、他の薬学的に活性な化合物、または複数の本発明の化合物を含み得る。
【０１０３】
より具体的には、本発明の薬剤（本明細書において活性成分ともいわれる）は、任意の適切な経路（経口経路、直腸経路、経鼻経路、局所的経路（経皮経路、エアロゾル経路、頬経路および舌下経路が挙げられる）、経膣経路、非経口経路（皮下経路、筋肉内経路、静脈内経路および皮内経路が挙げられる）、および経肺経路）により治療のために投与され得る。経路はレシピエントの状態および年齢、ならびに処置される疾患により変化することも理解される。
【０１０４】
理想的には、薬剤は、疾患部位で活性化合物の最大濃度が達成されるように投与されるべきである。これは、例えば、薬剤（必要に応じて生理食塩水中に含まれる）の静脈内注入、または経口投与（例えば、活性成分を含む、錠剤、カプセルまたはシロップとしての投与）によって達成され得る。薬剤の所望の血中レベルは、継続的な注入によって持続され、疾患組織内に治療量の活性成分を提供し得る。作動可能な混合物を使用することにより、個々の治療的化合物または薬物を単独で使用する場合に必要とされ得る投薬量よりも少ない各々の構成要素薬剤の総投薬量を必要とする治療的混合物が提供され、それによって副作用を軽減することが意図される。
【０１０５】
薬剤を単独で投与することは可能であるが、少なくとも１種類の活性成分（上で定義した）を、その活性成分についての１種類以上の薬学的に受容可能なキャリア、および必要に応じて他の治療的薬剤と共に含む薬学的処方物として、薬剤を提供することが好ましい。各キャリアは、「受容可能」でなければならず、「受容可能」とは、処方物中の他の成分に適合性であり、患者にとって有害ではないという意味である。
【０１０６】
処方物としては、経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所的投与（経皮投与、頬投与および舌下投与が挙げられる）、経膣投与、非経口投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与および皮内投与が挙げられる）、および経肺投与のために適切な処方物が挙げられる。処方物は、単位投薬形態で簡便に提供され得、薬学の分野において公知の任意の方法によって調製され得る。このような方法は、活性粒子を、１種類以上の補助的成分を構成するキャリアと組合わせる工程を包含する。一般的に、処方物は、均一かつ密接に、活性粒子を、液体キャリアまたは微細に分割された固体キャリア、あるいはその両方と組合わせ、次いで、必要な場合には、製品の形状を整えることによって、調製される。
【０１０７】
経口投与のために適切な本発明の処方物は、分離単位（例えば、カプセル、カシェ剤または錠剤）として提供され得、その各々は、所定の量の活性成分を、粉末もしくは顆粒として、水性の液体もしくは非水性の液体中の溶液または懸濁液として、または油中水型の液体乳濁液もしくは水中油型の液体乳濁液として含む。活性成分はまた、ボーラス、舐剤またはパスタを提供し得る。
【０１０８】
錠剤は、圧縮または成形によって製造され得、必要に応じて１種類以上の補助的成分を有する。圧縮錠剤は、自由流動形態（例えば、粉末または顆粒）の活性成分を適切な機械で圧縮することにより調製され得、この自由流動形態の活性成分は、必要に応じて、結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔ）（例えば、ナトリウムスターチグリコレート、架橋化ポビドン、架橋化ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、界面活性剤または分散剤と混合されている。成形錠剤は、不活性な液体希釈剤で湿らせた粉末化した化合物の混合物を適切な機械で成形することにより製造され得る。錠剤は、必要に応じて、コーティングまたは刻み目を付けられ得、そして活性成分がゆっくりと放出されるか、または制御されたように放出されるように処方され得る。ここで、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の割合で使用することにより、所望の放出プロフィールが提供される。錠剤は、必要に応じて、腸溶性コーティングを施して提供され、胃ではない腸の部分において放出される。
【０１０９】
口での局所的投与のために適切な処方物としては、香り付けした基礎（通常は、スクロースおよびアカシア、またはトラガカント）中に活性成分を含むロゼンジ、不活性な基礎（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア）中に活性成分を含む香錠；および、適切な液体キャリア中に活性成分を含むうがい薬が挙げられる。
【０１１０】
本発明に従う局所投与のための薬学的組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、パスタ（ｐａｓｔ）、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして処方され得る。あるいは、処方物は、活性成分および必要に応じて１種類以上の賦形剤または希釈剤を浸透させたパッチまたは包帯剤（例えば、包帯または接着性の硬膏）を含み得る。
【０１１１】
所望の場合には、クリーム基礎の水相は、例えば、少なくとも約３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわち２つ以上のヒドロキシル基を有するアルコール（例えば、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール、ならびにそれらの混合物）を含み得る。局所的処方は、望ましくは、皮膚または他の患部への薬剤の吸収または浸透を増強する化合物を含み得る。このような皮膚浸透増強剤の例としては、ジメチルスルホキシドおよび関連するアナログが挙げられる。
【０１１２】
本発明の乳濁液の油相は、既知の様式で既知の成分から構成され得る。この相はただ乳化剤（あるいは、排出促進剤として知られる）のみを含み得るが、望ましくは、少なくとも１種類の乳化剤と、脂肪またはオイルあるいはその両方との混合物を含む。好ましくは、親水性乳化剤は、安定剤として作用する親油性乳化剤と共に含まれる。１つのバリエーションにおいて、乳化剤はオイルと脂肪の両方を含む。総じて、安定剤を有するかまたは有さない乳化剤は、いわゆる乳化ワックスを構成し、オイルおよび／または脂肪を共に有するそのワックスは、いわゆる乳化軟膏基礎を形成し、この基礎は、クリーム処方物の油性分散相を形成する。
【０１１３】
本発明の処方物での使用のために適切な排出促進剤および乳濁液安定剤としては、Ｔｗｅｅｎ６０、Ｓｐａｎ８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリルモノステアレートおよびナトリウムラウリルスルフェートが挙げられる。
【０１１４】
処方物のための適切なオイルまたは脂肪の選択は、所望の化粧品特性が達成されることに基づく。これは、薬学的乳濁液処方物において使用される可能性のある大部分のオイルにおいて、活性化合物の可溶性が非常に低いためである。従って、クリームは、好ましくは、油っぽくなく、染色性ではなく、そして洗浄可能である製品であるべきであり、菅または他の容器からの漏れを避けるために適切な粘度を有する。直鎖または分岐鎖の一塩基性または二塩基性のアルキルエステル（例えば、ジイソアジペート、イソセチルステアレート、ヤシ油脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリステート、デシルオレエート、イソプロピルパルミテート、ブチルステアレート、２−エチルへキシルパルミテートまたは分岐鎖エステルの混合物（Ｃｒｏｄａｍｏｌ  ＣＡＰとして公知））が、使用され得る。これらは、要求される特性に基づいて、単独でまたは併用で使用され得る。あるいは、高融点脂質（例えば、白色ワセリン）および／または流動パラフィン、あるいは他の金属油が、使用され得る。
【０１１５】
また、眼への局所的投与のために適切な処方物としては、点眼剤が挙げられ、点眼剤において、活性成分は、適切なキャリア、特に薬剤のための水性溶媒に溶解または懸濁されている。
【０１１６】
直腸投与のための処方物は、例えば、ココア脂またはサリチレートを含む適切な基礎を有する坐剤として提供され得る。
【０１１７】
経膣投与のために適切な処方物は、薬剤に加えて、当該分野で適切であることが公知であるキャリアを含む、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、パスタ、泡沫体またはスプレー処方物として提供され得る。
【０１１８】
キャリアが固体である場合の経鼻投与のために適切な処方物としては、例えば、約２０〜約５００ミクロンの範囲の粒子サイズを有する粗雑粉末が挙げられ、これは、乾燥粉末として投与されるか、または吸入デバイスにおいて、鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻道を介することによる迅速な吸入によって投与される。キャリアが投与（例えば、経鼻スプレー、点鼻剤、または噴霧器によるエアロゾル投与）のための液体である場合の適切な処方物としては、薬剤の水性溶液または油性溶液が挙げられる。
【０１１９】
非経口投与のための適切な処方物としては、水性または非水性の等張性滅菌注射溶液（これは、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および処方物を意図するレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る）；および、水性または非水性の滅菌懸濁液（これは、懸濁剤および増粘剤を含み得る）、ならびにリポソーム、または化合物を血液成分または１つ以上の組織に標的化するように設計された他の微粒子システムが挙げられる。処方物は、単位用量または複数用量のシールされた容器（例えば、アンプルおよびバイアル）で提供され得、フリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存され得、使用の直前に滅菌液体キャリア（例えば、注射のための水）の添加のみを必要とする。即時注射溶液および即時注射懸濁液は、既に述べた種類の滅菌の粉末、顆粒および錠剤から調製され得る。
【０１２０】
目的の単位投薬処方物は、１日分の薬剤の用量または単位、１日分の薬剤の用量の一部（本明細書において、上述）、またはそれらの適切な分割量を含有する処方物を含む。
【０１２１】
特に上述した成分に加えて、本発明の処方物は、問題となっている型の処方物に関連する当該分野の従来の他の薬剤を含み得ることが理解されるべきである。例えば、経口投与のために適切な薬剤は、甘味料、増粘剤および香料添加剤のようなさらなる薬剤を含み得る。本発明の薬剤、組成物および方法が、他の適切な組成物および治療と併用されることもまた意図される。
【０１２２】
本発明のこれらの薬剤および上述の化合物、ならびにそれらの誘導体は、本明細書に記載される方法における使用のための医薬の調製のために使用され得る。
【０１２３】
プロドラッグ抗生物質の臨床的使用において、抗生物質は、おそらく、よく確立された指針に従う。投薬は、おそらく、大部分の他の抗生物質について既に使用されている投薬と類似する。８時間ごとに１度または１日に１度、１週間または２週間の間または患者が感染性生物について陰性であると試験されるまで、プロドラッグの用量は１００ｍｇ〜１ｇｍの範囲であることが推定される。
【０１２４】
以下の実施例は、例示のためであって、本発明を制限することは意図しない。
【実施例】
【０１２５】
（実施例１  化合物番号１および番号２の合成スキーム）
【０１２６】
【化２７】
2006507219.tif 000029
ＢＯＣ  −  Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル；ＢＯＰ  −  ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート；ＴＥＡ  −  トリエチルアミン；ＴＨＦ  −  テトラヒドロフラン；ＲＴ  −  室温；ＴＦＡ  −  トリフルオロ酢酸
（化合物１の合成）
無水ＴＨＦ（２５ｍｌ）中のＮ−Ｂｏｃロイシン（１．０ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、トリクロサン（１．２５ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（１．９１ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１．３３ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン雰囲気下で０℃で４時間攪拌した。水（２０ｍｌ）を加えて、その反応混合物を酢酸エチルで抽出した（２×３０ｍｌ）。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、溶出液としてへキサン中の２％酢酸エチルを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーを使用して精製し、無色のゴムとして化合物１を得た（１．６６ｇ、７５％）。
【０１２７】
【化２８】
2006507219.tif 000030
（化合物番号２の合成）
無水アニソール（０．０５５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）中の化合物１（０．２５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却し、ＴＦＡ（０．５６ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を１５分間にわたりゆっくりと添加した。氷浴を除去し、攪拌をさらに３時間続けた。次いで、減圧下で全ての揮発成分を除去し、ゴムを得た。無水ＴＨＦを添加し、アルゴン雰囲気下で０℃まで冷却した。ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（０．２５ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、Ｎ−ホルミルメチオニン（０．１ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（０．２１ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。薄層クロマトグラフィーは、０℃で０．５時間後に反応の完了を示した。反応物を水、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の厚いゴムとして化合物番号２を得た。
【０１２８】
【化２９】
2006507219.tif 000031
（実施例２  一般的合成スキーム）
【０１２９】
【化３０】
2006507219.tif 000032
【０１３０】
【化３１】
2006507219.tif 000033
【０１３１】
【化３２】
2006507219.tif 000034
ここで、上の合成スキームのすべてにおいて、ＸおよびＹは、独立して同じかまたは異なり、水素、低級アルキル（置換または非置換）、低級アルケニル（置換または非置換）、低級アルキニル（置換または非置換）、アリール基（置換または非置換）、複素環式基（置換または非置換）、低級アルコキシ、低級アルキルチオ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、カルボキシレート、スルホネート、アルキルスルホン、アルキルスルホキシドおよびトリアルキルシリルからなる群から選択される。
【０１３２】
上の一般的合成スキームおよび以下の特定の実施例において、以下が適用される：ＰｙＢＯＰは、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートである；ＤＭＦは、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドである；ＮａＨＣＯ３は、炭酸水素ナトリウムである；ＲＰ−ＨＰＬＣは、逆相高速液体クロマトグラフィーである；ＴＬＣは、薄層クロマトグラフィーである；ＨＣｌは、塩酸である；ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸である；および、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンである。
【０１３３】
上の一般的方法を使用して、以下の特定の化合物を調製した。
【０１３４】
（実施例３：（ｒ）−ピロリジン１，２−ジカルボン酸２−ｔｅｒｔ−ブチルエステル−１−４−ホルミル−２，６−ジメチル−フェニル）エステルの調製（スキーム２、化合物２））
【０１３５】
【化３３】
2006507219.tif 000035
乾燥ＤＭＦ（１２ｍＬ）中のＮ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｄ−プロリン（２．３４ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）および３，５−ジメチル−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．９６ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）の溶液にＰｙ−ＢＯＰ（６．８ｇ、１３．０ｍｍｏｌ）を添加し、溶解するまで攪拌した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（７．６ｍＬ、４３．０ｍｍｏｌ）および４−ジメチルアミノピリジン（１２２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を攪拌しながら添加した。得られた溶液を２．５時間攪拌した。反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で覆い、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および飽和ブラインで洗浄した。エーテル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮した。生じた赤色のオイルをジクロロメタン溶出液を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。透明の明黄色のオイルを回収した（１．１６ｇ、３１％）。
【０１３６】
【化３４】
2006507219.tif 000036
（実施例４：２−（ｓ）−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−酪酸２，５−ジオキソ−ピロリジン−１−イルエステルの調製（スキーム２の中間体））
【０１３７】
【化３５】
2006507219.tif 000037
乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のＮ−ホルミル−Ｌ−メチオニン（１．７７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（１．３８ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）の氷冷した溶液に１，３−ジクロロヘキシカルボジイミド（２．４８ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を氷浴中で攪拌し、結晶を急速に形成させた。反応物を冷蔵庫に一晩（約１４時間）置いた。結晶沈殿物（おそらく、ジシクロへキシルウレアの副生成物）を濾過により除去した。濾液を塩化メチレンで希釈し、生じた固体を濾過で除去した。濾液を真空下で固体にした。これらの固体を酢酸エチルに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和ブラインで洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下でオイルにした。この粗オイル（２．８ｇ、１０２％（理論上））をさらに精製することなく使用した。
【０１３８】
（実施例５：１−（ｓ）−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリル）−ピロリジン−２−カルボン酸−４−ホルミル−２，６−ジメチル−フェニルエステルの調製（スキーム２、化合物３）：）
【０１３９】
【化３６】
2006507219.tif 000038
乾燥ジクロロメタン（５．０ｍＬ）中の化合物５（１．１６ｇ、３．３３ｍｍｏｌ）の溶液にトリフルオロ酢酸（５．０ｍＬ）を添加した。生じた溶液を窒素下で３０分間攪拌した。溶液を真空下で濃縮して過剰のＴＦＡを除去し、次いで、ジクロロメタン（７ｍＬ）に再度溶解した。この溶液に化合物４（０．９１ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．２ｍＬ、６．８８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素下で室温で３時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチル中に入れ、次いで、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｍ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、および飽和ブラインで洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して乾燥させた。透明なオイルを回収した（１．０９ｇ、収率８１％）。
【０１４０】
【化３７】
2006507219.tif 000039
（実施例６：１−（ｓ）−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリル）−ピロリジン−２−カルボン酸−４−ヒドロキシメチル−２，６−ジメチル−フェニルエステルの調製（スキーム２、化合物４））
【０１４１】
【化３８】
2006507219.tif 000040
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物３（１．０８ｇ、２．７ｍｍｏｌ）の溶液に硼水素化ホウ素ナトリウム（５０ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を添加した。生じた懸濁液を２０分間攪拌し、その後、ＴＬＣ分析は、アルデヒドの完全な還元を示した。混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で覆い、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｍ、１５ｍＬ）でクエンチした。有機層を分離し、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｍ、１５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５ｍＬ）、およびブラインで洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して乾燥させた。残留物を酢酸エチル／ジクロロメタン溶出液を用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、白色の固体を得た（１６５ｍｇ、収率１５％）。
【０１４２】
【化３９】
2006507219.tif 000041
（実施例７：１−エチル−６−フルオロ−７−（４−｛４−［１−（ｓ）−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリル）−ピロリジン−２−カルボニルオキシ］−３，５−ジメチル−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸の調整（スキーム２、化合物５））
【０１４３】
【化４０】
2006507219.tif 000042
無水ＤＭＦ中の化合物２（２０ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）および１，１−カルボニルジイミダゾール（３６ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で３時間攪拌した。生じた透明の黄色の溶液を氷浴中で冷やし、水（３μＬ、０．１７ｍｍｏｌ）でクエンチし、９０分間攪拌した。室温まで温めた後、ノルフロキサシン（１９ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）および炭酸水素ナトリウム（１７ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加して、懸濁液を形成した。懸濁液は、１５０分の攪拌の後、徐々に透明になった（しかし、完全にではない）。反応混合物を酢酸エチル（１０ｍＬ）中に入れ、１０％クエン酸溶液（２×４ｍＬ）および飽和ブライン（４ｍＬ）で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で乾燥状態にした。生じた透明のオイル（２９ｍｇ）を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（２０〜６０％アセトニトリル）で精製し、黄色の粉末として生成物を得た（１０．３ｍｇ、収率２７％）。
【０１４４】
【化４１】
2006507219.tif 000043
（実施例８：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−エチル−ペンタン酸４−クロロメチル−フェニルエステルの調製（スキーム３））
【０１４５】
【化４２】
2006507219.tif 000044
化合物Ｘ（０．２ｇｒ、０．５５ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン溶液を氷浴中で冷却し、ＰＣｌ５（０．１１ｇｒ、０．５５ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で添加した。反応が完了した後で、ＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、１０分間攪拌した。有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ２ＳＯ４）。揮発成分を蒸発させて、化合物ＸＸを得、これをさらに精製することなく次の反応のために使用した。
【０１４６】
【化４３】
2006507219.tif 000045
（実施例９：２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−メチル−ペンタン酸４ー−ホルミル−フェニル−エステルの調製（スキーム１、化合物２））
【０１４７】
【化４４】
2006507219.tif 000046
（実施例１０：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−ヒドロキシメチル−フェニルエステルの調製（スキーム１、化合物４））
【０１４８】
【化４５】
2006507219.tif 000047
（実施例１１：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−（１−ヒドロキシ−１，２−ジヒドロ−ピリジン−２−イルスルファニルメチル）−フェニルエステル（ＮＢ３０２４）の調製）
【０１４９】
【化４６】
2006507219.tif 000048
（実施例１２：  ２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−メチル−ペンタン酸２，６−ジブロモ−４−ヒドロキシメチル−フェニルエステル（ＮＢ３１４４）の調製）
【０１５０】
【化４７】
2006507219.tif 000049
（実施例１３：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸５’−ヒドロキシメチル−［１，１’；３’，１”］ターフェニル−２’−イルエステルの調製（ＮＢ３１４５））
【０１５１】
【化４８】
2006507219.tif 000050
（実施例１４：  ２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸２−ブロモ−４−ヒドロキシメチル−６−メトキシ−フェニルエステル（ＮＢ３１６２）の調製）
【０１５２】
【化４９】
2006507219.tif 000051
（実施例１５：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−ヒドロキシメチル−２，６−ジメチル−フェニルエステル（ＮＢ３１６５）の調製）
【０１５３】
【化５０】
2006507219.tif 000052
（実施例１６：１−エチル−６−フルオロ−７−（４−｛４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルオキシカルボニル｝−ピペラジン−１−イル）−４−オキソ−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸（ＮＢ３０５７）の調製）
【０１５４】
【化５１】
2006507219.tif 000053
（実施例１７：１−シクロプロピル−６−フルオロ−４−オキソ−７−ピペラジン−１−イル−１，４−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸４−［２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタノイルオキシ］−ベンジルエステル（ＮＢ３０６８）の調製）
【０１５５】
【化５２】
2006507219.tif 000054
（実施例１８：２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸２−ブロモ−６−フラン−２−イル−４−ヒドロキシメチル−フェニルエステル（ＮＢ３１７７）の調製）
【０１５６】
【化５３】
2006507219.tif 000055
（実施例１９：  ２−（２−ホルミルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−４−メチル−ペンタン酸４−｛［ビス−（２−クロロ−エチル）−カルバモイルオキシ］−メチル｝−フェニルエステル（ＮＢ３１０３）の調製）
【０１５７】
【化５４】
2006507219.tif 000056
（実施例２０  感受性試験）
抗微生物性化合物のＭＩＣを決定するためのＮＣＣＬＳ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ）方法をハイスループットスクリーニングのために改変した。試験化合物の全てのストックを、それらの溶解性に依存して水またはＤＭＳＯのいずれかの中に調製した。最も高い濃度において、ＤＭＳＯ含量は０．５％を超えるべきではない。簡潔には、最も高い濃度からの２０個の試験化合物の２倍連続希釈物を３８４ウェルのマイクロタイタープレートに作製した。各ウェルに最終濃度約１〜１．５×１０６細胞／ｍｌとなるように、培地中に試験細菌を接種した。マイクロプレート読み取り機（Ｔｅｃａｎ  ＳｐｅｃｔｒａＦｌｕｏｒ  Ｐｌｕｓ）を使用して、細菌の成長を６００ｎｍの光学密度の増大により決定した。ＭＩＣは、細菌の成長に必要な適切な温度での１６〜１８時間のインキュベーションの後で、細菌の成長（可視的な成長と等しい）が阻害された、最低濃度として定義する。化合物番号２についての結果を表３（細菌）および表４に示す。
【０１５８】
【表３−１】
2006507219.tif 000057
【０１５９】
【表３−２】
2006507219.tif 000058
【０１６０】
【表４】
2006507219.tif 000059
Ｅ．ｃｏｌｉ／ＴＥＭ  −  ＴＥＭ−１  β−ラクタマーゼ発現Ｅ．ｃｏｌｉ；ＭＲＳＡ  −  メチシリン耐性Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ；ＭＳＳＡ  −  メチシリン感受性Ｓ．Ａｕｒｅｕｓ
哺乳動物細胞を上述のように化合物番号２で処理した。この化合物は、１６時間の曝露の後で哺乳動物細胞に対して毒性ではない（ＩＣ５０は約３０μＭ）。
【０１６１】
上で提供したアッセイを使用して、化合物番号２の能力をトリクロサンと比較した。結果を表５に示す。
【０１６２】
【表５】
2006507219.tif 000060
（実施例２１：鍵となる細菌性病原体に対するＮＢ３０５７およびＮＢ３０６８の活性）
表６では、いくつかの細菌性病原体に対するＮＢ３０５７およびＮＢ３０６８のＭＩＣをノルフロキサシンおよびシプロフロキサシンと比較している。
【０１６３】
【表６】
2006507219.tif 000061
（実施例２２：種々の化合物の血漿安定性の測定）
表７は、ＰＢＳ、ミュラー−ヒントン培地、マウス血漿およびヒト血漿におけるいくつかのＰＤＦ  ＥＣＴＡ化合物の血漿安定性を示す。
【０１６４】
【表７】
2006507219.tif 000062
本発明を上記の実施形態と関連して記載してきたが、上述の記載および実施例は、例示の目的であって、本発明の範囲を制限することを意図していない。本発明の範囲内にある他の局面、利点および改変が、本発明の属する分野の当業者に明らかである。
【０１６５】
【化５５】
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【０１６６】
【化５６】
2006507219.tif 000064
【図面の簡単な説明】
【０１６７】
【図１】この図面は、本発明の化合物のＰＤＦ活性化についての反応スキームを提供する。
【図１】
2006507219.tif 000066
【国際調査報告】
2006507219.tif 000067