(57)【要約】本発明は、3−ピロール置換 2−インドリノン化合物5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの多形に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2006518755.tif 000015
実質的に多形Ｉ型を含まない。
【請求項２】
式Ｉの化合物：
【化２】
2006518755.tif 000016
実質的に多形II型を含まない。
【請求項３】
図１に示されるＰＸＲＤパターンを有する型IIの請求項１の化合物。
【請求項４】
図１に示されるＰＸＲＤパターンを有する型Iの請求項２の化合物。
【請求項５】
式Ｉの化合物の多形Ｉを含む組成物：
【化３】
2006518755.tif 000017
ここで、多形Iを前記組成物中に約８５重量％以上含む。
【請求項６】
多形Iを前記組成物中に約９０重量％以上含む、請求項５記載の組成物。
【請求項７】
多形Iを前記組成物中に約９５重量％以上含む、請求項５記載の組成物。
【請求項８】
多形Iを前記組成物中に約９９重量％以上含む、請求項５記載の組成物。
【請求項９】
式Ｉの化合物の多形IIを含む組成物：
【化４】
2006518755.tif 000018
ここで、多形IIを前記組成物中に約８５重量％以上含む。
【請求項１０】
多形IIを前記組成物中に約９０重量％以上含む、請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
多形IIを前記組成物中に約９５重量％以上含む、請求項９記載の組成物。
【請求項１２】
多形IIを前記組成物中に約９９重量％以上含む、請求項９記載の組成物。
【請求項１３】
式Ｉの化合物の多形：
【化５】
2006518755.tif 000019
ここで、前記多形は、
（ａ）酸性水性溶液中で前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記水性溶液を塩基性化し、それによって多形II型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形Ｉ型を分離する、
によって調製される。
【請求項１４】
式Ｉの化合物の多形：
【化６】
2006518755.tif 000020
ここで、前記多形は、
（ａ）水素結合を形成しない極性有機溶媒中に前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記極性有機溶媒を蒸発させ、それによって多形II型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形Ｉ型を分離する、
によって調製される。
【請求項１５】
式Ｉの化合物の多形：
【化７】
2006518755.tif 000021
ここで、前記多形は、
（ａ）水素結合を形成する極性有機溶媒中で前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記極性有機溶媒を蒸発させ、それによって多形I型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形II型を分離する、
によって調製される。
【請求項１６】
前記水素結合を形成しない極性有機溶媒がＴＨＦである、請求項１４の方法により調製される多形。
【請求項１７】
前記水素結合を形成する極性有機溶媒がメタノールである、請求項１５の方法により調製される多形。
【請求項１８】
請求項１または２のいずれかの化合物、および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む、医薬組成物。
【請求項１９】
プロテインキナーゼの触媒活性を調整する方法であって、前記プロテインキナーゼを請求項１または２のいずれかの化合物と接触させる工程を含む、前記方法。
【請求項２０】
前記プロテインキナーゼが、リセプターチロシンキナーゼ、非−リセプターチロシンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群から選択される、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
生物内のプロテインキナーゼ関連疾患を治療または予防する方法であって、請求項１または２のいずれかの化合物、および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物の治療的に有効量を前記生物に投与することを含む、前記方法。
【請求項２２】
前記プロテインキナーゼ関連疾患が、リセプターチロシンキナーゼ関連疾患、非−リセプターチロシンキナーゼ関連疾患およびセリン−トレオニンキナーゼ関連疾患からなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記プロテインキナーゼ関連疾患が、ＥＧＦＲ関連疾患、ＰＤＧＦＲ関連疾患、ＩＧＦＲ関連疾患、ｃ−ｋｉｔ関連疾患およびｆｌｋ関連疾患からなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
前記プロテインキナーゼ関連疾患が、白血病、脳の癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、星状細胞腫、カポジ肉腫、グリア芽細胞腫、肺癌、膀胱癌、頭部癌、頚部癌、黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌、泌尿器癌および消化管間質腫からなる群から選択される癌である、請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
前記プロテインキナーゼ関連疾患が、糖尿病、自己免疫異常、過剰増殖疾患（hyperproliferation disorder）、再狭窄、線維症、乾癬、フォンヘペルーリンドー病（von Heppel-Lindau disease）、変形性関節症、リウマチ様関節炎、脈管形成、炎症性疾患、免疫疾患および心血管疾患からなる群から選択される、請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
前記生物がヒトである、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
請求項１または２のいずれかの化合物および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を投与することを含む、コンパニオン動物の癌の治療方法。
【請求項２８】
前記コンパニオン動物がネコまたはイヌである、請求項２７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
クロスレファレンス
本出願は、２００３年２月２４日に出願された米国仮出願番号６０／４４８，８６３に対する３５U.S.C.１１９(e)規定の優先権を主張し、その開示全体を参照として本明細書に援用する。
発明の背景
発明の分野
本発明は、３−ピロール置換２−インドリノン化合物5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの多形に関する。
【０００２】
背景技術
5−(5−フルオロ−２−オキソ−1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドは、プロテインキナーゼ(PK)調節能を示す化合物である。当該化合物は、それゆえ異常なＰＫ活性に関連する疾患を治療するのに有益である。
【０００３】
簡潔には、ＰＫはタンパク質のチロシン、セリンおよびトレオニン残基の水酸基のリン酸化を触媒する酵素である。実質上細胞生命の全ての側面（例えば、細胞増殖、分化および増殖）や色々とＰＫ活性に依存しているので、この表面的には単純な活性の結果は驚異的である。さらに、異常なＰＫ活性は、乾癬のような相対的に生命を脅かすものではない疾患からグリア芽細胞腫(脳の癌)のような非常に悪性の疾患までにおよぶ多くの疾患に関連している。
【０００４】
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドは、リセプターチロシンキナーゼ(RTK)（ＰＫの一つのクラス）の阻害剤である。RTKおよびそれらのリガンド、VEGF、PDGF、およびFGFは、充実性腫瘍中での脈管形成として知られる血管新生を媒介する。結果として、RTKを阻害することによって腫瘍中の新しい血管の生長が阻害される。理論的には、抗脈管形成剤と名付けられたこの新しいクラスの化合物は、通常の抗癌剤と比較して生体への毒性はかなり低い。5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドは、コンパニオン動物（主にイヌ）の癌の治療用として現在開発中であり、そしてとりわけヒトの癌の治療にも有用である。そのような癌には制限的でない例として、白血病、脳の癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、星状細胞腫、カポジ肉腫、グリア芽細胞腫、肺癌、膀胱癌、頭部および頚部癌、黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌、泌尿器癌および消化管間質腫が含まれる。また、制限的ではないが肥満細胞症を含むマスト細胞の過剰発現も含まれる。
発明の概要
本発明者らは、化合物5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−−イルエチル)−アミドが、それぞれ異なった物理的性質を有する２つの多形、多形Iおよび多形IIで存在することを見つけた。
【０００５】
それゆえ第１の態様は、本発明は式Ｉの化合物：
【０００６】
【化１】
2006518755.tif 000002
【０００７】
実質的に多形Ｉ型を含まない、に関する。
第２の態様は、本発明は式Ｉの化合物：
【０００８】
【化２】
2006518755.tif 000003
【０００９】
実質的に多形II型を含まない、に関する。
好ましい態様では、第１の態様の化合物は、図１に示すＰＸＲＤパターン型IIを有し、そして第２の態様の化合物は図１に示すＰＸＲＤパターン型Iを有する。
【００１０】
第３の態様では、本発明は式Ｉの化合物の多形Ｉを含む組成物に関し、
【００１１】
【化３】
2006518755.tif 000004
【００１２】
ここで、多形Iは、前記組成物の約８５重量％以上；または前記組成物の約９０重量％以上；または前記組成物の約９５重量％以上；または前記組成物の約９９重量％以上含まれる。
【００１３】
第４の態様では、本発明は式Ｉの化合物の多形IIを含む組成物に関し、
【００１４】
【化４】
2006518755.tif 000005
【００１５】
ここで、多形IIは、前記組成物の約８５重量％以上；または前記組成物の約９０重量％以上；または前記組成物の約９５重量％以上；または前記組成物の約９９重量％以上含まれる。
【００１６】
５番目の態様では、本発明は式Ｉの化合物の多形に関し、
【００１７】
【化５】
2006518755.tif 000006
【００１８】
ここで、前記多形は以下によって調製される：
（ａ）酸性水性溶液中で前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記水性溶液を塩基性化し、それによって多形II型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形Ｉ型を分離する。
【００１９】
６番目の態様では、本発明は式Ｉの化合物の多形に関し、
【００２０】
【化６】
2006518755.tif 000007
【００２１】
ここで、前記多形は以下によって調製される：
（ａ）水素結合を形成しない極性有機溶媒中に前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記極性有機溶媒を蒸発させ、それによって多形II型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形Ｉ型を分離する。
【００２２】
７番目の態様は、本発明は式Ｉの化合物の多形に関し、
【００２３】
【化７】
2006518755.tif 000008
【００２４】
ここで、前記多形は以下によって調製される：
（ａ）水素結合を形成する極性有機溶媒中に前記化合物を溶解し；
（ｂ）前記極性有機溶媒を蒸発させ、それによって多形I型を実質的に含まない前記化合物を沈殿させ；そして
（ｃ）沈殿した前記化合物の多形II型を分離する。
【００２５】
本発明の好ましい態様では、６番目の態様の水素結合を形成しない極性有機溶媒はＴＨＦである。他の好ましい態様では、７番目の態様の水素結合を形成する極性有機溶媒はメタノールである。
【００２６】
８番目の態様では、本発明は第一または第二の態様の化合物および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物に関する。
９番目の態様では、本発明は、プロテインキナーゼを第一または第二の態様の化合物と接触させる工程を含む、プロテインキナーゼの触媒活性を調整する方法に関する。
好ましい態様では、プロテインキナーゼは、リセプターチロシンキナーゼ、非−リセプターチロシンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群から選択される。
【００２７】
１０番目の態様では、生物内のプロテインキナーゼ関連疾患を治療または予防する方法であって、第一または第二の態様の化合物、および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物の治療的に有効量を前記生物に投与することを含む方法に関する。好ましい態様では、前記プロテインキナーゼ関連疾患は、リセプターチロシンキナーゼ関連疾患、非−リセプターチロシンキナーゼ関連疾患およびセリン−トレオニンキナーゼ関連疾患からなる群から選択される。他の好ましい態様では、前記プロテインキナーゼ関連疾患は、ＥＧＦＲ関連疾患、ＰＤＧＦＲ関連疾患、ＩＧＦＲ関連疾患、ｃ−ｋｉｔ関連疾患およびｆｌｋ関連疾患からなる群から選択される。更に他の好ましい態様では、前記プロテインキナーゼ関連疾患は、白血病、脳の癌、非小細胞肺癌、扁平上皮癌、星状細胞腫、カポジ肉腫、グリア芽細胞腫、肺癌、膀胱癌、頭部癌、頚部癌、黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌、泌尿器癌および消化管間質腫からなる群から選択される癌である。また、制限的ではないが肥満細胞症を含むマスト細胞の過剰発現も含まれる。更に他の好ましい態様では、前記プロテインキナーゼ関連疾患は、糖尿病、自己免疫異常、過剰増殖疾患（hyperproliferation disorder）、再狭窄、線維症、乾癬、フォンヘペルーリンドー病（von Heppel-Lindau disease）、変形性関節症、リウマチ様関節炎、脈管形成、炎症性疾患、免疫疾患および心血管疾患からなる群から選択される。更なる他の好ましい態様では、生物はヒトである。
【００２８】
１１番目の態様では、第一または第二の態様の化合物および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を投与することを含む、コンパニオン動物の癌の治療方法に関する。好ましい態様では、前記コンパニオン動物はネコまたはイヌである。
発明の詳細な説明
特に言及しない限り、明細書および特許請求の範囲で使用されている以下の用語は、下に述べる意味を有する。
【００２９】
"多形"は、結晶格子中の分子の異なった配列および／または配座によるいくつかの固有の型を生じる、物質の固体相に関する。
多形は、化合物の異なった溶媒和物化されていない（unsolvated）結晶形としても定義することができる。
【００３０】
多形は、典型的には異なった化学および物理的性質を有する。本発明の好ましい態様の文脈では、用語“多形”は、溶媒和物（すなわち、溶媒または水を含む型）、アモルファス型（すなわち、非結晶形）および脱溶媒した溶媒和物（すなわち、溶媒和物から溶媒を除去することによってのみ調製できる型）をも含む。
【００３１】
本発明の好ましい態様では、純粋な単一の多形、並びに二つまたはそれ以上の異なった多形を含む混合物も含まれる。純粋な単一の多形は、実質的に他の多形を含まない。"実質的に含まない"とは、他の多形は約１５重量％以下、より好ましくは約１０重量％以下、さらにより好ましくは約５重量％以下、もっとも好ましくは約１重量％以下の量で存在することを意味する。当業者は、“約１５重量％以下の量”というフレーズは、興味の対象の多形が約８５重量％以上の量で存在することを意味することは理解できるであろう。同様に、“約１０重量％以下”とは、興味の対象の多形が約９０重量％以上の量で存在することを意味し、そして他も同様である。
【００３２】
本発明の好ましい態様の化合物の多形は、化合物の特定の多形が同じ化合物の他の多形よりもよりよい物理的および化学的特性を有していることがあるので望ましい。例えば、ある多形は、ある溶媒中において高い溶解性を有するであろう。そのような高められた溶解性は、本発明の好ましい態様の化合物の調剤または投与を容易にすることができる。異なった多形は、薬剤の錠剤化特性に影響を与え、そして薬剤の製剤化に影響を与える異なった機械的特性（例えば、異なった圧縮性、融和性、錠剤性）も有するかもしれない。特定の多形は、他の多形と比較して、同じ溶媒中での異なった溶解速度をも示すかもしれない。異なった多形は、異なった物理的(準安定多形からより安定な多形への固体状態転換)および化学的（反応性）安定性を有することもできる。
【００３３】
本発明の好ましい態様は、本発明の好ましい態様の多形および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を含む。本発明の好ましい態様の多形を含む製剤的に許容される組成物の製剤化のための担体および賦形剤は、当業界ではよく知られており、そして例えば２００１年２月１５日に出願された米国特許出願番号０９／７８３，２６４に開示されており、その開示全体を本明細書に援用する。ＷＯ０１／６０８１４参照。
【００３４】
本発明の好ましい態様には、プロテインキナーゼの触媒活性を調整する方法であって、前記プロテインキナーゼを本発明の好ましい態様の多形と接触させる工程を含む方法が含まれる。前記プロテインキナーゼは、リセプターチロシンキナーゼ、非−リセプターチロシンキナーゼおよびセリン−トレオニンキナーゼからなる群から選択される。
【００３５】
本発明の好ましい態様は、生物内（例えばヒト）のプロテインキナーゼ関連疾患を治療または予防する方法であって、本発明の好ましい態様の多形および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物の治療的に有効量を前記生物に投与することを含む方法が含まれる。本発明の好ましい態様では、プロテインキナーゼ関連疾患は、リセプターチロシンキナーゼ関連疾患、非−リセプターチロシンキナーゼ関連疾患およびセリン−トレオニンキナーゼ関連疾患からなる群から選択される。本発明の他の好ましい態様では、プロテインキナーゼ関連疾患は、ＥＧＦＲ関連疾患、ＰＤＧＦＲ関連疾患、ＩＧＦＲ関連疾患、およびｆｌｋ関連疾患からなる群から選択される。本発明の他の好ましい態様では、プロテインキナーゼ関連疾患は、扁平上皮癌、星状細胞腫、カポジ肉腫、グリア芽細胞腫、肺癌、膀胱癌、頭部および頚部癌、黒色腫、卵巣癌、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌、神経膠腫、結腸直腸癌、泌尿器癌および消化管間質腫からなる群から選択される癌である。本発明の好ましい態様では、プロテインキナーゼ関連疾患は、糖尿病、自己免疫異常、過剰増殖疾患（hyperproliferation disorder）、再狭窄、線維症、乾癬、フォンヘペルーリンドー病（von Heppel-Lindau disease）、変形性関節症、リウマチ様関節炎、脈管形成、炎症性疾患、免疫疾患および心血管疾患からなる群から選択される。
【００３６】
本発明の好ましい態様では、本発明の好ましい態様の多形および製剤的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物を投与することを含むコンパニオン動物の癌の治療方法も含まれる。本明細書で使用されるように、“コンパニオン動物”という用語には、制限的ではないがネコおよびイヌが含まれる。
【００３７】
実施例
以下の実施例は、当業者が本発明をより明確に理解し、実施することができるために記載している。それらは、本発明の範囲を制限するように解釈してはならず、単にそれらの例示的および代表的なものに過ぎない。
【００３８】
5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの合成
【００３９】
【化８】
2006518755.tif 000009
【００４０】
5−フルオロ−1,3−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−ホルミル−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドと縮合し、表記化合物を得た。
【００４１】
MS+ve APCI 397 [M++1]. 
スケールアップ手順：
５−ホルミル−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(61g)、5−フルオロ−1,3−ジヒドロ−インドール−2−オン(79g)、エタノール(300mL)およびピロリジン(32mL)を４．５時間リフラックスした。酢酸(24mL)をその混合物に添加し、リフラックスを３０分間続けた。その混合物を室温まで冷却し、固形物が真空ろ過で集められ、エタノールで２度洗浄した。その固形物を12N塩酸(6.5mL)を含む４０％アセトン水（４００ｍｌ）中で１３０分間攪拌した。その固形物を真空ろ過で回収し、４０％アセトン水で２度洗浄した。該固形物を真空下で乾燥して5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(86g、収率７９％)をオレンジの固形物として得た。１H-NMR(ジメチルスルフォキシド−d6)δ2.48, 2.50 (2×s, 6H, 2×CH3), 6.80, 6.88, 7.68, 7.72 (4×m, 4H, 芳香族およびビニル), 10.88 (s, 1H, CONH), 12.12 (s, 1H, COOH), 13.82 (s, 1H, ピロールNH)。MS m/z 299 [M-1]。
【００４２】
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(100g)およびジメチルホルムアミド(500mL)を攪拌し、ベンゾトリアゾール−1−イルオキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート(221g),１−（２−アミノエチル）ピロリジン(45.6g)およびトリエチルアミン(93mL)を添加した。その混合物を室温で２時間攪拌した。得られた固形物を真空ろ過により回収し、エタノールで洗浄した。該固形物を６４℃で一時間エタノール（５００ｍｌ）中で攪拌することによってスラリー洗浄し、室温まで冷却した。該固形物を真空ろ過により回収し、エタノールで洗浄し、真空下で乾燥して、5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミド(101.5g、77%収率)を得た。１H-NMR(ジメチルスルホキシド−d6)δ1.60(m, 4H, 2×CH2), 2.40, 2.44 (2×s, 6H, 2×CH3), 2.50 (m, 4H, 2×CH2), 2.57, 3.35 (2×m, 4H, 2×CH2), 7.53, 7.70, 7.73, 7.76 (4×m, 4H, 芳香族およびビニル), 10.88 (s, 1H, CONH), 13.67 (s, 1H, ピロールNH)。MS m/z 396 [M+1]。
【００４３】
多形の同定と物理的特性の決定のための一般的な解析方法
様々な溶媒中での多形の溶解性の評価
多形およそ１．５ｍｇを１０ｍｌのガラス容器（風袋測定した）に移し、重量測定した（正確に０．1ｍｇ）。段階的にガラス容器に溶媒を添加した（それぞれの容器に１つの溶媒）。それぞれの添加の後に、該ガラス容器に蓋をしてシェイクした。固体の溶解を目視で観測した。もしあきらかな溶解が見られなかったら、すばやくさらなる溶媒を添加した。もし溶解が明らかであれば、その容器を次の溶媒の添加まで少なくとも３０分間ベンチに置いた。このステップを、黒と白の背景に対して結晶が見られなくなるまで繰り返した。溶解性は、重量を最終容積および最後の添加前の容積で割ることによって段階分けした。もし、１０ｍｌの溶媒添加後でも固形物が残っていれば、その溶解性は重量を最終容積で割ったものより低いと表現した。もし固形物が最初の溶媒添加後に完全に溶解した場合は、その溶解性は重量を溶媒体積で割ったものよりも大きいと表現した。溶解性は、mg/mLで表した。すべての実験は室温で実施した。
【００４４】
多形のｐＨ−溶解性プロファイルの決定
ｐＨ１−１３としたＨＣｌまたはＮａＯＨのいずれかの様々な濃度の約３ｍｌの水溶液を１０ｍｌガラス容器に移した。多形の十分な量を添加した。該容器をアルミホイルでラップして、手で攪拌した。それらをさらなる処置まで終夜ドラフト内に置いた。
【００４５】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）
粉末Ｘ線回折は、スシンタグ（Scintag）DMS/NT1.30aおよびマイクロソフトウィンドーズNT 4.0ソフトウェアによる操作の基、Scintag X2 Advanced Diffraction Systemを使用して測定した。そのシステムは、1.5406ÅのCuKα１放射を与える銅のＸ線源 (45ｋＶおよび40mA)、および固相Peltier冷却検出器を使用する。そのビームアパーチャーは、チューブ発散、２と４ｍｍのアンチ散乱スリット、および０．５と０．２ｍｍ幅の受光スリットを使用してコントロールした。データは、０．０３／ステップのステップスキャンで各ステップ一秒のカウントタイムで、２〜３５の２シータで測定した。測定には、スシンタグラウンド（Scintag round）、直径９ｍｍインサートであるトップローディングステンレススチールサンプルカップを使用した。粉末をホルダーにパックし、緩やかにグラススライドで圧縮し、サンプル表面とホルダーの表面の間が共平面となるようにした。
【００４６】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定(DSC)データは、DSC熱量測定装置(TA Instruments 2920)を使用して得た。粉末１−１０ｍｇをアルミニウムＤＳＣパンにパックした。アルミニウムの蓋をパンのトップに置き、押し付けた。その押し付けられたパンをサンプルセルに、レファレンスである空のパンとともに置いた。温度は、３０℃から３００℃まで１０℃／分の速度で上昇させた。
【００４７】
偏光顕微鏡
顕微鏡観察は、オリンパスBHSP偏光顕微鏡を用いて行った。粉をシリコンオイル上に置き、顕微鏡用スライドとカバーガラスの間に分散させた。観察の前に、粉末サンプルをよく分散させるためにカバーグラスを徐々にスライドに対してこすりつけた。顕微鏡観察は、粉末サンプルの粒子サイズ、形、および結晶性を評価するために使用した。顕微鏡にホットステージをつけたときは、他の技術（例えば、ＤＳＣ、熱重量分析（ＴＧＡ））によって観測された熱的事象も可視化される。
フーリエ変換赤外分光光度計（ＦＴＩＲ）
ＫＢｒペレットして赤外解析のための多形サンプルを調製した。赤外透過データを、ＴＧＳ検出器付のＮｉｃｏｌｅｔ  ７６０ＦＴＩＲで、４０００〜４００ｃｍ−１の範囲で取得した。装置ゲインとして表現される感度は４であった。データは、Happ-Genzel apodizationを使用したフーリエ変換値として加工された。最終のＦＴ−ＩＲスペクトルは２００スキャン（200 individual scans）で表した。
フーリエ変換ラマンスペクトル
多形約２ｍｇを１．７ｍｍガラスキャピラリーチューブにパックし、1.00WT 1064-nm レーザー光にさらした。ラマンスペクトルは３８００から１００ｃｍ−１で取得した。そのデータは、ＩＮＧＡＳ検出器を有するNicolet 960 FT−ラマンスペクトロメーターを使用して収集した。装置ゲインとして表される感度は８であった。データは、再びHapp-Genzel apodizationを使用したフーリエ変換値として加工した。その最終FT−ラマンスペクトルは、２００スキャン（200 individual scans）で表した。
回転ディスク固有溶解速度（ＩＤＲ）測定
ＩＤＲは、ファイバーオプティックＵＶ自動溶解システム（fiber optic UV automated dissolution system）を使用して測定した。その溶解プロセスを、分ごとに１０データポイントで、ファイバーオプティックプローブを使用して、ある場合には４２６．２ｎｍで継続的にモニターした。実験のための圧縮したディスクを調製するために、粉をステンレススチール（ＳＳ）のダイ(1 1/4“dia×1”、ID 3/16”)中で、ハイスピードスチール（ＨＳＳ）パンチ（直径３／１６”および長さ３ １／２”）を使用して圧縮した。そのＨＳＳパンチは、約１０ｍｇの薬剤をダイの穴に置くために約１／４”を残して、約３／４”の距離でダイに挿入された。ステンレススチールベースのプレートは（直径１／４”）、穴をカバーするように置かれた。全体の組み立ては、２ボルトのホルダーによって確かめられた。粉を圧縮するために、カーバープレス（Carver press）を〜１０００lbs(〜３７，０００psi)で３分間使用した。ダイとホルダーはカーバープレスから除かれ、パンチはペレットをリラックスさせられる／広げられるように少し引き戻した。それから、ダイを止めねじでＨＳＳパンチにきつく取り付けた。薬剤ペレットの一表面がさらされている薬剤を含む全体のパンチとダイの集合物は、ホルダーからユニットとして除去され、電気モーターにつけられた。データ取得プログラムの開始後３分後に、ダイを３００ｒｐｍで回転させ、溶解培地中に沈めた。その溶解培地は、ガス抜きをし、５００ｍｌ水ジャケットビーカー(Pyrex, No.1000)に入れた。最初の３分間のデータはそれぞれの溶解試験のベースライン値を提供した。その溶解培地はｐＨ＝２溶液(0.01 N HClおよび0.05 M KCl)からなっていた。そのダイは、薬剤コンパクトが５００ｍｌ溶解容器の底から約２．５”で液体表面からもおよそ同じ距離になるように位置された。
【００４８】
その固有の溶解プロファイルをマイクロソフトエクセルを使用してプロットし、固有の溶解速度を式（１）に従ったプログラムによって自動的に計算させた。
【００４９】
【化９】
2006518755.tif 000010
【００５０】
溶解培地の体積は300ｍｌであった。溶解培地にさらされるペレットの表面面積は、０．１７７ｃｍ２であった。溶解のための時間は、通常は１５分であったが必要に応じ変更した。
【００５１】
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミド多形の物理的特性の決定
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの２つの多形の型を同定した。該化合物の２つの多形型の熱力学的関係、それらの溶解性特性、およびそれらの固体状態特性は、固体型選択および活性製剤成分（ＡＰＩ）製造での適切なプロセスコントロールにおいて、速やかに明らかになった。それゆえ、様々な技術（例えば、溶解性、ＩＤＲ、ＰＸＲＤ、ＩＲ／ラマン分光、偏光顕微鏡およびＤＳＣ）を使用して、該化合物の２つの多形型の間の安定性を理解し、固体状態特性を明らかにする努力を行った。
溶解性
様々な溶媒中での5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの評価された溶解性を表Ａに示した。当該実験は、多形Ｉを使用して室温で実施した。その溶解性は、３つのグループに分けられた。
グループＩ
イソプロピルアルコール、ＣＨ２Ｃｌ２、酢酸エチル、アセトニトリル、アセトン、クロロホルム、トルエン、ヘキサンおよび水ｐＨ＞６水中での5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの溶解性：溶解性は大変低い(<<0.3 mg/mL)。
グループＩＩ
メタノール、エタノール、ジオキサンおよびＴＨＦでの溶解性：溶解性は依然として低い(0.1−0.4mg/mL)が、グループＩの溶媒での溶解性よりは明らかに高い。
グループIII
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドのジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびｐＨ＜＝２水中での溶解性：溶解性は相対的に高い（＞１ｍｇ／ｍｌ）。
【００５２】
【表１】
2006518755.tif 000011
【００５３】
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドのｐＫａは8.50である。予想されたように、この化合物の平衡溶解度は低溶液ｐＨで高かった（表Ａ）。しかし、溶解培地中での粒子の溶解性は、溶解層のｐＨに依存する。固体と直に接する溶解層のｐＨ値(ｐＨh＝０)は、ｐＨメーターにより測定される溶液の平衡ｐＨから得られる。結果を表Ｂに示した。開始ｐＨが１０以上である場合は、5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル] −2,4−ジメチル−1 H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの溶解性は大変低い。それ故、平衡での溶液のｐＨはほとんど変化しない。一方、開始ｐＨがｐＨ＜１０であれば、より多くの5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドが溶液中に移行し、溶液の平衡ｐＨは開始ｐＨよりも高くなる（表Ｂ）それゆえ、バルク溶解培地のｐＨが１．４くらい低い場合であっても、ｐＨh＝０は相対的に高く維持される（＞５）ことをデータは示している。
【００５４】
【表２】
2006518755.tif 000012
【００５５】
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドのｐＨ−溶解性プロファイルを測定する試みは成功しなかった。非常に細かい粒子が、ｐＨ＜２．２において最初の薬剤の溶解で形成された。それらの細かい粒子を０．４５μｍのフィルターメンブレンに通し、雲状のろ過物を得た。より小さな穴でのフィルターメンブレン （０．１μｍ）は、そのようなデータをすぐに使用することが明らかではないので試さなかった。
【００５６】
IDR 
多形IIの固有の溶解速度(IDR)を多形Iのものと比較した。多形IIのＩＤＲは２３℃ｐＨ２バッファーでの多形ＩのＩＤＲの約３倍であった（表Ｃ）。この結果は、多形IIは安定性に劣り、より低い溶解性を有していて、それゆえ同一温度同一溶媒では低いＩＤＲを有すると予想される、先の観測とは矛盾する。理論に縛られることは望まないが、その矛盾の一つの説明は、その薬剤が実験条件下で固相転換を起こしたというものである。結局、ＩＤＲはオリジナルの２つの多形の熱力学的関係では比較できない。多形Ｉの薬剤ペレットの顕微鏡観察は、固相転換仮説に対するポジティブな証拠を示した。溶解培地に露出している側面でのペレットの色は、最初のペレットの黄色に比較してオレンジ−レッドであった。ペレットが溶解培地(0.05M KCl, pH 2 緩衝液)に接触してすぐに多形Ｉが塩酸塩に転換されたというのは可能である。通常のイオン効果のため、新しく形成された塩酸塩の溶解性、それ故ＩＤＲは、多形IIで予想されたのもよりも非常に低い。多形IIペレットが同じ溶解培地にさらされた後は、明かな色の変化はみられなかった。
【００５７】
さらに塩酸塩形成仮説を試験するために、多形IとII両方を上述の溶解培地に懸濁した。しかし、少なくとも懸濁後調製後１５分では粒子の色の変化はみられなかった。この結果は、観測された溶解試験中の多形IIの固相安定性には合致しているが、多形Ｉペレットのすばやい塩酸塩への転換は支持していない。懸濁液を調製して一日後、たぶん塩酸塩の結晶と思われるオレンジーレッド針状結晶が両方の容器でみられた。この結果は、塩酸塩の溶解性は、溶解性試験で使用した培地における多形Ｉおよび多形II両方の溶解性より低いことを確認している。ＩＤＲ実験の前の圧密が多形Ｉの結晶をモディファイし、素早い転換能力を与えるというのも可能である。様々な圧力で圧密された多形ＩペレットのＸＲＤパターンはある程度のアモルファス含量を示し、それはＩＤＲ実験中の素早い塩形成に関係しているかも知れない。
粉末Ｘ線回折 (PXRD) 
5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの２バッチの独特に異なった粉末Ｘ線回折(PXRD)パターンが観測された（図１）。そのような観測は、この薬剤の多形の存在を示唆している。それゆえ、FTIRとRamanスペクトルを5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの多形を確かめるために使用した。
IRおよびラマンスペクトル
ＩＲとラマンスペクトルを図２および図３にそれぞれ示した。5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの２つの型において、データとしてスペクトルの違いが明らかに見られる。一般的に、それらのバリエーションは、分子のＮ−ＨおよびＣ＝Ｏ官能基に関連した振動モードの変化を含む。２つの型のＣ−Ｈ伸縮モードにもいくつかの変化が観測された。5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの多形ＩとIIの溶液NMRデータ(DMSO中)は同一であり、5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの両多形は化学的には等しいことが確かめられた。それゆえ、２つのサンプル間のいずれの振動スペクトルの違いは、5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸 (2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミドの２つの型の結晶パッキングによるようである。
【００５８】
多形IIのＩＲデータを見ると、多形Ｉのスペクトルでは存在しない３１９８ｃｍ−１での広い振動バンドが存在する。この振動数での広い振動バンドは、Ｏ−Ｈ伸縮によるであろう。多形IIのＩＲデータでは、多形Ｉでは見られる１６３１ｃｍ−１でのＣ＝Ｏアミドカルボニル伸縮も見られない。逆に、多形 IIのＩＲデータは、多形Ｉのデータでは存在しない１５８９ｃｍ−１での強いピークを示している。この振動数での振動は典型的にＣ＝Ｎ伸縮である。多形ＩのＩＲデータと比較して多形IIのＩＲデータではＣ−Ｏ振動が存在しないのと共に、Ｃ＝ＮとＯ−Ｈ伸縮モードの存在は、２つの形間でのケト−エノール互変異であることを示唆する。その３−アミドカルボニル基間のこの変化の位置は知られていない。しかし、多形ＩのＩＲデータでの２７９８ｃｍ−１のＣＨ２振動についての多形IIデータにおける２７９８ｃｍ−１と２７７６ｃｍ−１の２つの振動バンドへの割れは、Ｃ−Ｎアミド結合の回転を容易にし、メチル基と隣接するアミド基でエノール化が起きていることを示唆する。両方の多形のＦＴＩＲスペクトルを図２に示した。ラマンスペクトルも、２つの多形の粉間で同様な違いを示した（図３）。
偏光顕微鏡
両方の多形は、偏光顕微鏡下で複屈折を示す。それゆえ、両方の多形は、ＰＸＲＤパターンでの強い回折ピークと符合し、結晶性である。多形Iの粒子は、多形IIのそれよりもかなり小さい。
熱力学的安定性
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
両方の多形のＤＳＣスキャンは、異なった融点と異なった融解エンタルピーを示す（表Ｃ）。多形IIの融点は、多形Ｉの融点よりも約３℃高い。それゆえ、多形IIは、融点近くでは熱力学的により安定な多形である。より高い融点の多形IIは、より高い溶融エンタルピーをも有する。それゆえ、“融解熱”ルールは、２つの固体形がモノトロピー的関係であると予測する。ホットステージ顕微鏡にて観察された融点は、同様の差（約３℃）を示す。ＤＳＣとホット−ステージ顕微鏡の両方から、それぞれの多形の融点以下の温度では、熱的イベントは観測されなかった。
【００５９】
【表３】
2006518755.tif 000013
【００６０】
ＰＸＲＤ
２つの多形間の相対的な熱力学的安定性の関係を決定するために、ＰＸＲＤを使用して室温でスラリー転換実験も実施した。結果を表Ｄに示した。
【００６１】
当業者は、懸案の多形の熱力学的安定性は、制限的ではないが、サンプルサイズ、攪拌速度（もしサンプルが攪拌されていれば）、種結晶が使用されているか、多形間の相対的存在比、使用溶媒および温度を含む多くの因子に依存することは理解できるであろう。
【００６２】
【表４】
2006518755.tif 000014
【００６３】
多形 I、２０ｍｇを１０ｍｌガラス容器中の様々な溶媒に、極微量の多形II種結晶とともに懸濁した。その懸濁液を、フィルターにかけてＰＸＲＤによる解析の前に、２週間マグネチックスターラーで攪拌した。メタノールとアセトン懸濁液は純粋な多形IIを生じる、すなわち２つの溶媒で媒介される多形Ｉから多形IIへの転換を示す。それゆえ、そのデータは、多形IIは室温では多形Ｉよりも熱力学的に安定であることを示唆している。多形 IIは融点付近でもより安定なので、２つの多形はモノトロピー的に関係している、すなわち、多形IIは室温から融点までより安定である。しかし、多形Iはテトラヒドロフラン (THF)懸濁液中では安定であるようだ。ＴＨＦ中での安定性はアセトン中よりも高いので（表Ａ）、低い溶解性はゆっくりとした転換速度の理由ではない。
【００６４】
理論に縛られたくはないが、ＴＨＦ分子が独特に溶液中で5−[5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロインドール−(3Z)−イリデンメチル]−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イルエチル)−アミド分子と相互作用し、多形IIの核形成と結晶成長を阻害し、ＴＨＦ中で多形Ｉを反応速度的に安定にすることは可能である。
【００６５】
以下に多形Ｉと多形IIの調製について述べる。
多形Iの調製：方法１
5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミド２４．８ｍｇを、ホットプレート上で加熱しながらｐＨ２の緩衝液（０．０１Ｎ  ＨＣｌおよび０．０４Ｍ  ＫＣｌ）の適当量（少なくとも６ｍｌ）に完全に溶解した。その溶液を５分間ドラフトにて冷却した。１Ｎ  ＮａＯＨ溶液を添加して溶液から沈殿を生じさせた。その固形は多形IIを含んでおらず、ある程度のアモルファス性状をもった主に多形Ｉからなっていた。
多形Iの調製：方法２
5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミド４１．３ｍｇを２５ｍｌテトラヒドロフラン(THF)と５ｍｌの水と混合した。その混合物をわずかに加熱し、その固体物を溶解した。得られたクリアーな溶液を、溶媒を蒸発させるために蓋のされていないガラス容器に回収した。溶媒の適当な量が蒸発するときに沈殿が生じる。その沈殿は、顕微鏡観察によって示された針状結晶からなっていた。その沈殿を濾過し、ＸＲＤによる解析の前にゆっくりとすりつぶした。そのすりつぶしは、得られた固形物の粒子サイズを小さくし、ＰＸＲＤパターンでの好ましい結晶配向の効果を減らす。ＰＸＲＤの結果は、その個体物は純粋な多形Ｉであることを示した。
多形IIの調製
5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミド約６ｍｇを少なくとも２０ｍｌのメタノールに溶解し、透明な溶液を得た。わずかな加熱が固体の溶解を容易にするのに適当であろう。このメタノール溶液を室温で冷却し、ゆっくりと乾燥するまで蒸発させた。メタノール少量(−2mL)を添加して、固形の一部を溶解した。残存した結晶は多形IIであった。
【００６６】
これまでの記述より、当業者は容易に本発明の必須の特徴を理解することができ、そして本発明の精神および範囲から離れることなく、当業者は過度の実験を要さず様々な用途や条件に適応するために本発明の様々な変化や修正をなすことができる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの多形I(型I)および多形II(型II)の粉末Ｘ線回折(PXRD)パターンである。
【図２】図２は、5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの多形I(上のスペクトル)および多形II(下のスペクトル)のＩＲスペクトルの高および中波長領域で測定した赤外(IR)透過スペクトルである。
【図３】図３は、5−(5−フルオロ−２−オキソー1,2−ジヒドロ−インドール−3−イリデンメチル)−2,4−ジメチル−1H−ピロール−3−カルボン酸(2−ピロリジン−1−イル−エチル)−アミドの多形I(上のスペクトル)および多形II(下のスペクトル)のラマンスペクトルの高および中波長領域で測定したラマンスペクトルである。
【図１】
2006518755.tif 000022
【図２】
2006518755.tif 000023
【図３】
2006518755.tif 000024
【国際調査報告】
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