(57)【要約】  本発明は、抗癌効果及び癌転移抑制効果を有する長生ドラジからの抽出物に関し、より詳細には癌転移、細胞接着、細胞浸潤及び細胞増殖に対する抑制効果を有する長生ドラジからの抽出物に関する。本発明の長生ドラジ抽出物は、腫瘍形成及び癌転移を抑制する。従って、本発明の長生ドラジ抽出物を有効成分として含有する抗癌剤は癌の予防及び治療に有用であろう。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
長生ドラジからの抽出物を有効成分として含有する、腫瘍形成及び癌転移を抑制する薬剤。
【請求項２】
前記長生ドラジからの抽出物は熱水抽出物又は有機溶剤抽出物であること、を特徴とする請求項１に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗癌効果及び癌転移抑制効果を有する長生ドラジからの抽出物に関し、より詳細には癌転移、細胞接着、細胞浸潤及び細胞増殖に対する抑制効果を有する長生ドラジからの抽出物に関する。
【背景技術】
【０００２】
キキョウ科のキキョウ（学名Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ  ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ  Ａ．ＤＣ）の根は、主根の長さが約１０〜１５ｃｍ、根径が１〜３ｃｍで、茶ねずみ色から乳白色をしており、上部には不規則に分岐する部位を有し、長手方向に皺、横断方向に殻眼及び皺がある。さらに、それらは硬いが本来非繊維質で、そのため割れ易い、また若干の香り及び苦味がある（リュク、チャン‐ソオ他、「モダン・ファーマコグノシー」ハクチャングサ社、ソウル市、ｐ．４６０〜４６１、１９９３年（Ryuk, Chang-Soo, et al., Modern Pharmacognosy, Hackchangsa Co., Seoul, 460-461,1993））。  
【０００３】
キキョウ根の主な薬学的成分として、トリテルペンサポニン（プラチコジンＡ、Ｃ、Ｄ、Ｄ２及びＤ３）があり、根の約２％を構成する。動物試験により、こうした薬学的成分には様々な作用、例えば鎮咳作用及び去痰作用、中枢神経系抑制作用（鎮静作用、痛みの緩和及び解熱）、急性慢性炎症に対する抗炎症作用、抗潰瘍作用、胃液分泌抑制作用、血管拡張により血圧を低下させる抗コリン作用、血糖低下作用、及びコレステロール代謝促進作用があることが確認されている（「ケミカル＆ファーマスーティカル・ブリティン」第２０号、ｐ．１９５２、１９７２年；「ケミカル＆ファーマスーティカル・ブリティン」第２３号、ｐ．２９６５、１９７５年；「ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエティ、パーキン・トランスアクションＩ」ｐ．６６１、１９８４年；「総合医学」３、１、１９５１年；「ジャーナル・オブ・ファーマスーティカル・ソサエティ・オブ・コリア」第１９号、ｐ．１６４、１９７５年（Chem., Pharm. Bull., 20, 1952 (1972); Chem. Pharm. Bull., 23, 2965 (1975); J. Chem. Soc. , Perkin trans I, 661 (1984); Sogoigaku, 3,1 (1951) ; J. Pharm., Soc. Kor., 19, 164 (1975)））。キキョウ根から分離した他の薬学的成分としては、αスピナステロール、スチグマスト‐７‐エノール、及びαスピナステロール・グルコシド等のステロイド化合物、及び、イヌリン及びベツリン等の多糖類が挙げられる。
【０００４】
本明細書では、用語「長生ドラジ」は２０年生以上のキキョウ根の名称であるが、その様々な薬学的作用にもかかわらず、キキョウを長期に亘り栽培するのは困難であった。しかしながら、２０年生以上のキキョウ根である長生ドラジの栽培を可能にする技術が最近開発され（韓国特許第０４５７３１号、リー・ソンホ（Lee, Sung-Ho）、発明の名称「メソッド・フォー・プロデューシング・ペレニアル・バルーンフラワーズ（a method for producing perennial balloonflowers）」）、その結果現在では長生ドラジの大量生産が可能になった。こうした長生ドラジは、２〜４年間栽培された通常のキキョウ根と比較すると、薬学的効果及び生理作用において優れている。     
【０００５】
現在までの長生ドラジについての研究としては、抗糖尿作用に関する試験（「ジャーナル・オブ・ザ・コリアン・ソサエティ・オブ・フードサイエンス・アンド・ニュートリション」第２５号、ｐ．９８６、１９９６年（J. Korean Soc. Food Sci. Nutri., 25, 986 (1996)）、及び抗高脂血症に関する試験（「ジャーナル・オブ・ファーマスーティカル・ソサエティ・オブ・ジャパン」第９３号、１９７３年、ｐ．１１８８〜１１９４(J. Pharmaceutical Society of Japan 93 (1973), 1188-1194)）が挙げられ、その肝臓障害の予防及び抑制についての研究も行なわれている。加えて、キキョウ根からの熱水及びエタノール抽出物がカビのアプラトキシンを抑制すること、イヌリン画分には食菌作用及び固形癌である肉腫に対する強力な抗腫瘍作用があること、及びキキョウ根からの４０％抽出物にはアルコール吸収抑制作用があることが知られている（「マイコパソロジア」第６６号、ｐ．１６、１９７９年、「生薬学雑誌」第４０号、ｐ．３６７、１９８６年、「生薬学雑誌」第４０号、ｐ．３７５、１９８６年、日本国特開昭６０−８９４２７号公報、１９８５年（Mycopathologia, 66, 16 (1979), Shoyakugaku Zasshi, 40, 367 (1986), Shoyakugaku Zasshi, 40, 375 (1986), Japanese Patent No. 60-89427 (1985)）。
【０００６】
人類の健康を脅かす悪性腫瘍（癌）は、世界で第１位又は第２位の死因であり、欧米社会では心循環器疾患に次ぐ最も一般的な死因となっている。現代社会では、高齢化、喫煙人口の増加及び大気汚染により肺癌が増加している。また、結腸癌、乳癌、前立腺癌等も、欧米風の食生活が齎した高脂肪食の摂取、環境汚染物質の増加、及び飲酒の増加等が原因で、増加傾向が見られる。よって、癌の早期予防及び治療を可能にし、それによりヒトの健康促進、健康生活の質の向上、及びヒトの健康管理の促進に役立つ、抗癌物質の開発が急務となっている。    
【０００７】
今までに癌治療用に開発された薬品は、注射又は経口投与で血流により全身に作用させて全身治療するため、癌細胞に対する特異性のレベルは低い。従って、こうした薬品の投与では、全身的副作用が起き、外科手術又は放射線治療と比べ強い副作用を示すといった短所がある。既存の抗癌薬品は半年〜１年間に３〜４週間間隔で各週３〜５日投与されるが、それにより抗癌薬品による様々な副作用が起き、その結果治療を中断する場合がしばしば発生している。既存の化学療法は直接癌細胞を攻撃することにより医学的効果を示すが、極めて強い副作用を有し、非特異的である。こうした短所にもかかわらず、画期的な新薬は、近年数年間市場に登場しなかった。
【発明の開示】
【０００８】
本発明の目的は、癌細胞転移及び腫瘍形成を抑制する治療剤を提供することであり、該治療剤には、安全で無毒な天然物質である長生ドラジからの抽出物を、有効成分として含む。
【０００９】
上記の目的を達成するために、本発明は腫瘍形成及び癌転移を抑制する薬剤を提供するが、該薬剤には有効成分として長生ドラジからの抽出物を含む。
【００１０】
これ以降、本発明について詳細に記述する。
【００１１】
本発明者らは、安全で無毒な天然物質を使用して、癌転移及び腫瘍形成を抑制する薬剤を開発するために、広範囲に亘る研究を行ない、その結果長生ドラジからの抽出物が癌細胞（メラノーマ）の肺転移、細胞接着、細胞浸潤及び細胞増殖を抑制することを発見した。この発見に基づき、本発明は完成された。
【００１２】
本発明による長生ドラジ抽出物を、当技術分野で従来使用される任意の方法により製造する。長生ドラジ抽出物は熱水抽出物又は有機溶剤抽出物とするのが好ましく、該抽出物は単独で又は薬学上許容されるハーブ材料と混合して調製可能である。長生ドラジを抽出する際には、長生ドラジの粉末を使用するのが好ましいが、該粉末は長生ドラジを乾燥させて含水率を５％未満にし、この乾燥させた材料を粉末にして、粒子サイズが０．６ｍｍ未満の粉末を選別し、調製したものである。
【００１３】
熱水抽出物を好適には、約５〜１０倍容量の水を長生ドラジ粉末に対して添加し、その溶液を温度９０〜１００℃で４〜６時間に亘り２度抽出することにより調製する。その結果得た濾液を、単独で又は許容可能なハーブ材料又はハーブ抽出物から選択したものと混合して使用する。
【００１４】
有機溶剤抽出物を好適には、約３倍容量の有機溶剤を長生ドラジ粉末に対して添加し、その溶液を室温で２度抽出し、その結果得た濾液を減圧濃縮し、次に許容可能なハーブ材料又はハーブ抽出物から選択したものをこの濃縮物に添加して調製する。有機溶剤としては、アルコール、好適にはメタノール又はエタノール、を使用するのが好ましいと思われる。
【００１５】
本発明の長生ドラジ抽出物を、食品衛生上許容される又は薬学上許容される賦形剤を使用する既知の方法により製剤して、それにより製薬製剤を調製してもよい。製薬製剤を調製する際には、有効成分としての長生ドラジ抽出物を好適には担体と混合又は希釈する、或いは容器状の担体に封入する。担体を希釈剤として用いる場合、該担体を媒介物、賦形剤又は媒質として働く固体、半固体又は液状物質としてもよい。そのようにして、製剤を錠剤、丸剤、粉末、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エアゾル剤、軟又は硬カプセル剤、滅菌注射、滅菌粉末等の形態にしてもよい。適切な担体、賦形剤又は希釈剤の例として、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、ソルビトール、マンニトール、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、及び鉱物油が挙げられる。製剤には、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤等を含有してもよい。本発明の長生ドラジ抽出物を含む血管新生阻害剤を、哺乳動物に投与後に、有効成分を迅速に、継続して又は遅延して放出させる当技術分野でよく知られる如何なる方法によっても製剤可能である。    
【００１６】
本発明の長生ドラジ抽出物に有効成分として含まれる血管新生阻害剤を、その目的に応じて、様々な経路、経口、経皮、皮下、静脈内、及び筋内経路を介して投与可能である。ヒトに対しては、本発明の抽出物の１日投与量を通常、１０〜１，０００ｍｇ／ｋｇ体重としてもよく、好適には１０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重とし、１回又は数回投与してもよい。しかしながら、本発明の抽出物の実際の投与量は、投与経路、患者の年齢、性別及び体重、健康状態、疾病重症度等を含む様々な要因に鑑みて決定すべきである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
これ以降、本発明についてさらに詳細に実施例及び試験例により記述する。しかし、当然のことながら、これらの実施例は本発明の好適な一実施例を説明する目的で提示するものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００１８】
実施例１：長生ドラジからの熱水抽出物の製造
２リットルの蒸留水を０．２ｋｇの長生ドラジ粉末に添加し、その溶液を２回９０〜９５℃で５時間抽出し、濾過した。濾過液を凍結乾燥させて、１００ｇの長生ドラジ抽出物を得た。
【００１９】
以下の試験を行い、メラノーマ癌細胞の肺転移、細胞接着、細胞浸潤、及び癌細胞増殖に対する本発明の薬剤の抑制効果について検討した。
【００２０】
試験動物及び処理
１．試薬
以下の試薬を購入使用した。
Ｂ１６Ｆ１０細胞株を、韓国細胞株バンク（Ｋｏｒｅａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ  Ｂａｎｋ）より購入し、マトリゲル、エオシン、ゼラチン、ＥＭＥＭ培地、及びウシ胎仔血清をシグマ化学社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）より購入した。
【００２１】
２．動物
試験動物として、体重２５〜３０ｇの生後８週間のＣ５７ＢＬ／６マウスを使用し、該マウスには飼料（ピュリーナ社（Ｐｕｒｉｎａ）、韓国）及び水を自由に摂取させた。これらの動物を温度２１〜２４℃、相対湿度４０〜８０％、１２時間明期／１２時間暗期のサイクル下で飼育した。
【００２２】
試験例１：Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおけるメラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の肺転移に対する長生ドラジ抽出物の抑制効果
１．試験方法
長生ドラジ抽出物の、癌転移に対する抑制効果について検討するために、転移性メラノーマ癌細胞Ｂ１６−Ｆ１０をＣ５７ＢＬ／６試験動物の尾静脈に注射した。次に、長生ドラジ抽出物を経口で該試験動物に投与し、その後肺に転移したメラノーマ癌細胞Ｂ１６−Ｆ１０のコロニー数を、ヘマトキシリン-エオシン染色により計数した。その結果を下表１に示す。  
【００２３】
表１
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【００２４】
図１は、肺に転移したコロニー数を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。図２の上部分は肺に転移したメラノーマ癌細胞Ｂ１６−Ｆ１０のコロニーを示す写真であり、ヘマトキシリン-エオシンで染色後に撮影したものである。図２の下部分は、メラノーマ細胞組織をパラフィン包埋後にヘマトキシリン-エオシン染色した結果を示す写真である。表１及び図１より明らかなように、メラノーマ細胞Ｂ１６Ｆ１０をＣ５７ＢＬ／６マウスに投与し、各濃度の長生ドラジ抽出物を１４日間該マウスに投与し、肺に転移したメラノーマＢ１６Ｆ１０細胞のコロニー数を計数したが、その結果、肺に転移したコロニー数は長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて減少したことが示された。
【００２５】
試験例２：メラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０の細胞接着に対する長生ドラジ抽出物の抑制効果
１．試験方法
長生ドラジ抽出物の細胞接着抑制効果について検討するために、転移性メラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０を、ゼラチンで被覆した４８ウエルプレートで継代培養し、次に、各濃度の試料をウエルプレートに  入れた。１８時間後、細胞接着を顕微鏡で観察し、それにより接着した細胞数を計数した。その結果を図３に示す。  
【００２６】
図３は、細胞接着抑制を長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。図３に示すように、細胞接着抑制は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて増大した。
【００２７】
試験例３：長生ドラジ抽出物のメラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０の細胞浸潤に対する抑制効果
１．試験方法
長生ドラジ抽出物の細胞浸潤抑制効果について検討するために、転移性メラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０をマトリゲルで被覆した４８ウエルプレートで継代培養し、次に、各濃度の試料をウエルプレートに入れた。１８時間後、細胞浸潤を顕微鏡で観察し、それにより浸潤した細胞数を計数した。その結果を図４に示す。
【００２８】
図４は、浸潤した細胞数を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。図４に示すように、浸潤した細胞数は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて減少し、長生ドラジ抽出物がメラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の浸潤に対して抑制効果を有することが示唆された。
【００２９】
試験例４：長生ドラジ抽出物のメラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０増殖に対する抑制効果
１．試験方法
長生ドラジ抽出物の癌細胞増殖に対する抑制効果について検討するために、転移性メラノーマ癌細胞Ｂ１６Ｆ１０を４８ウエルプレートで継代培養し、各濃度の試料をウエルプレートに入れた。２４時間後、増殖した細胞数をＭＴＴ法により計数した。ＭＴＴ法では、細胞中のミトコンドリア酵素がＭＴＴを減少させてホルマザンを生成するという事実に基づき、ホルマザン濃度を計測する。その結果を図５に示す。
【００３０】
図５は、癌細胞増殖抑制を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。図５に示すように、メラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の細胞増殖は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて抑制された。
【００３１】
上述したように、本発明の長生ドラジ抽出物について、肺転移抑制効果を、メラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０を尾静脈経由で投与して肺転移を誘発させたＣ５７ＢＬ／６マウスのインビボ動物試験で検討した。その結果肺転移は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて減少したことが示された。また、細胞接着に対する長生ドラジ抽出物の抑制効果も、メラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０を使用したインビボ試験で検討し、その結果メラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の細胞接着は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて減少したことが示された。さらに、メラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の細胞接着及び浸潤に対する長生ドラジ抽出物の抑制メカニズムについて検討するために、長生ドラジ抽出物に対するメラノーマ癌細胞株Ｂ１６Ｆ１０の増殖について検討したが、その結果癌細胞増殖は、長生ドラジ抽出物の処理濃度に応じて減少した。
【００３２】
試験例５：急性毒性試験
１．経口投与
体重２５ｇのＩＣＲマウス５０匹を各１０匹から成る５群に分けた。本発明の長生ドラジ抽出物を経口投与にて該５動物群に其々１、５、２５、１２５及び６２５ｍｇ／ｋｇ投与した。その後２週間に亘り毒性を観察した。その結果５群全てで死亡した動物はなかったことが示された。  
【００３３】
２．腹部投与
体重２５ｇのＩＣＲマウス４０匹を各１０匹から成る４群に分けた。本発明の長生ドラジ抽出物を該４動物群の腹腔に其々０．２、２、２０及び２００ｍｇ／ｋｇ投与した。その後２４時間に亘り毒性を観察した。その結果４群全てで死亡した動物はなかったことが示された。
【００３４】
上記の結果、本発明の長生ドラジ抽出物には殆ど又は全く急性毒性がないことが確認された。
【００３５】
以下の製剤例では、本発明の長生ドラジ抽出物を有効成分として含む抗癌剤の製剤について説明する。しかし、当然ながら本発明の抗癌剤はこれらの製剤例により制限されるものではない。
【００３６】
製剤例１：錠剤調剤
長生ドラジ抽出物      ５０ｍｇ
乳糖                      ２０ｍｇ
澱粉                      ２０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  適量
本発明の長生ドラジ抽出物を有効成分として含有する上記組成物を従来の錠剤化方法により錠剤化し、錠剤を調剤した。
【００３７】
製剤例２：カプセル製剤の調剤
長生ドラジ抽出物      ５０ｍｇ
乳糖                      ２０ｍｇ
澱粉                      ２０ｍｇ
タルク                    １ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  適量
本発明の長生ドラジ抽出物を有効成分として含有する上記組成物を従来の方法によりゼラチンカプセルに充填し、カプセル製剤を調剤した。
【００３８】
上述したように、安全で無毒な天然物質である本発明の長生ドラジ抽出物を、有効成分として、含む本発明の治療剤により、癌転移及び腫瘍形成を抑制できる。従って、本発明の治療剤は、癌治療及び予防に関して臨床的に有用であろう。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
上述したように、癌転移及び腫瘍形成を抑制する本発明の長生ドラジ抽出物含有組成物は、機能性食品及び医薬品として有用であろう。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】肺に転移したコロニー数を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。
【図２】ヘマトキシリン-エオシンで染色後の、肺に転移したメラノーマ癌細胞Ｂ１６−Ｆ１０のコロニーを示す写真である。
【図３】細胞接着抑制を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。
【図４】浸潤した細胞数を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。
【図５】癌細胞増殖抑制を、長生ドラジ抽出物の処理濃度別に示すグラフ図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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