(57)【要約】再狭窄を阻害するための方法、組成物、及び用具が提供される。詳細には、分子シャペロンの部位特異的送付に有用な分子シャペロン阻害剤組成物及び医療用具が開示される。一実施形態では、医療用具が、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、マクベシン、ならびにこれらの誘導体及び類似体からなる群から選択される分子シャペロン阻害剤で被覆された血管ステントである。別の実施形態では、再狭窄防止に有効な量のゲルダナマイシンを外膜に送付するための注入カテーテルが提供される。
2006507021.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
再狭窄防止組成物を送付するための医療用具において、
外面、内面、第１の開放端部、第２の開放端部を含み、前記内面又は前記外面の少なくとも一方が、再狭窄防止に有効な量の少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤を、哺乳動物の組織に送付するように構成される、一般に円筒形のステントを備える、医療用具。
【請求項２】
前記ステントが機械的に拡張可能である、請求項１に記載の医療用具。
【請求項３】
前記ステントが自己拡張性である、請求項１に記載の医療用具。
【請求項４】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、前記ステントの前記内面と前記外面との両方にある、請求項１に記載の医療用具。
【請求項５】
前記内面又は前記外面の少なくとも一方が、ポリマーで被覆され、前記ポリマーには少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が組み込まれ、前記ポリマーが前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤を、前記哺乳動物の前記組織に送付する、請求項１に記載の医療用具。
【請求項６】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、熱ショックタンパク質の正常な生物学的機能を阻害又は妨害する、請求項１に記載の医療用具。
【請求項７】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、ベンゾキノンアンサマイシンである、請求項６に記載の医療用具。
【請求項８】
前記ベンゾキノンアンサマイシンが、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、マクベシン、ならびにこれらの誘導体及び類似体からなる群から選択される、請求項７に記載の医療用具。
【請求項９】
前記ステントが、バルーンカテーテルを使用して、解剖学的内腔の前記組織へ送付される、請求項１に記載の医療用具。
【請求項１０】
前記組織が血管腔である、請求項１に記載の医療用具。
【請求項１１】
前記ポリマーが、ポリウレタン、シリコーン、ポリオレフィン、ポリイソブチレン、エチレンαオレフィンコポリマー、アクリルポリマー及びコポリマー、エチレン・ビニルアセテートコポリマー、ポリブチルメタクリレート、ハロゲン化ビニルポリマー及びコポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリビニルエーテル、ポリビニルメチルエーテル、ハロゲン化ポリビニリデン、ポリフッ化ビニリデン、ポリ塩化ビニリデン、ポリアクリロニトリル、ポリビニルケトン、ポリスチレンのようなポリビニル芳香族化合物、ポリビニルアセテートのようなポリビニルエステル、ビニルモノマーどうしのコポリマー、エチレン・メチルメタクリレートコポリマーのようなオレフィン、アクリロニトリル・スチレンコポリマー、ＡＢＳ樹脂、エチレン・ビニルアセテートコポリマー、ナイロン６６及びポリカプロラクタムのようなポリアミド、アルキド樹脂、ポリカーボネート、ポリオキシメチレン、ポリイミド、ポリエーテル、エポキシ樹脂、ポリウレタン、レーヨン、レーヨン・トリアセテート、セルロース、セルロースアセテート、セルロースブチレート、セルロースアセテートブチレート、セロハン、硝酸セルロース、セルロースプロピオネート、セルロースエーテル、カルボキシメチルセルロース、及びこれらの組合せからなる群から選択される、請求項５に記載の医療用具。
【請求項１１】
再狭窄防止に有効な量の分子シャペロン阻害剤を含むポリマー被覆を有する、血管ステント。
【請求項１２】
パリレンプライマー被覆を更に含む、請求項１１に記載の血管ステント。
【請求項１３】
前記ポリマー被覆が、ポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物を含む、請求項１１に記載の血管ステント。
【請求項１４】
前記分子シャペロン阻害剤の濃度は、分子シャペロン阻害剤対ポリマーが０．１重量％〜９９重量％である、請求項１又は１１に記載の血管ステント。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、熱ショックタンパク質の正常な生物学的機能を阻害又は妨害する、請求項１１に記載の血管ステント。
【請求項１６】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、ベンゾキノンアンサマイシンである、請求項１１に記載の血管ステント。
【請求項１７】
前記ベンゾキノンアンサマイシンが、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、マクベシン、ならびにこれらの誘導体及び類似体からなる群から選択される、請求項１６に記載の血管ステント。
【請求項１８】
前記ステントが、バルーンカテーテルを使用して、哺乳動物の解剖学的内腔の組織へ送付される、請求項１１に記載の血管ステント。
【請求項１９】
少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤の部位特異的送付を含む、哺乳動物の再狭窄を阻害するための方法。
【請求項２０】
前記分子シャペロン阻害剤が、血管ステントを使用して、再狭窄の危険のある部位へ送付される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記分子シャペロン阻害剤が、注入カテーテルを使用して、再狭窄の危険のある部位へ送付される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、熱ショックタンパク質の正常な生物学的機能を阻害又は妨害する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤が、ベンゾキノンアンサマイシンである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記ベンゾキノンアンサマイシンが、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、マクベシン、ならびにこれらの誘導体及び類似体からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記熱ショックタンパク質が、１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、７０ｋＤａ、６０ｋＤａ、４０ｋＤａ、２５ｋＤａ、及び２０ｋＤａ分子量の熱ショックタンパク質からなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
再狭窄防止に有効な量のゲルダナマイシンを含む被覆を有する血管ステントを設けるステップを含む、再狭窄を阻害するための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［０００１］本出願は、２００２年３月１８日付出願の、米国仮特許出願第６０／３６５４９７号の優先権を主張する。
［０００２］本発明は、再狭窄を治療又は予防するための医療用具及び組成物に関する。詳細には、本発明は、医療用具を使用した、非増殖性化合物の部位特異的送付に関する。更に詳細には、本発明は、再狭窄の危険のある哺乳動物の血管系の部位に分子シャペロン阻害剤を送付するための用具に関する。
【背景技術】
【０００２】
［０００３］心臓血管疾患、特にアテローム性動脈硬化症は、依然として先進国の主な死亡原因となっている。アテローム性動脈硬化症は、血管内腔の狭細（ｎａｒｒｏｗｉｎｇ）又は狭窄を引き起こす多因子性疾患である。簡単に言うと、血管内皮の損傷から生じる病的炎症性反応により、単核細胞と血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）とが、内皮下層から動脈壁の内膜層へ遊走する。ここで、ＶＳＭＣが増殖して細胞外基質を堆積させるため、血管壁が厚くなり、血管の開存性が低下する。
【０００３】
［０００４］狭窄性の冠状動脈による心臓血管疾患は、一般に、冠状動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）又は血管形成術を使用して治療される。血管形成術は、バルーンカテーテルを冠状動脈に挿入して血管狭窄に到達するまで進める、経皮的処置である。その後、バルーンを膨張させて動脈の開存性を回復させる。１つの血管形成術の変形例として、動脈ステント留置術（ｄｅｐｌｏｙｍｅｎｔ）がある。簡単に言うと、動脈の開通性の回復後に、バルーンが収縮され、血管ステントが血管腔の狭窄部位に挿入される。その後、カテーテルが冠状動脈から取り外され、留置されたステントが植え込まれた状態で残って、新たに開いた動脈が自然に収縮するのを防止する。しかし、バルーンカテーテル法やステント留置術によって血管の損傷が生じるおそれがあり、結局、ＶＳＭＣの増殖や前に開いた動脈内での新生内膜（ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ）の形成につながる。前に開いた動脈が再び閉塞されるこの生物学的プロセスは、再狭窄と呼ばれる。
【０００４】
［０００５］再狭窄の治療は、場合によってはＣＡＢＧを含む、一般により侵襲性の高い更なる処置を必要とする。したがって、再狭窄を防止する方法又は初期状態を治療する方法が、積極的に追求されている。再狭窄を防止する１つの可能な方法は、単核細胞の局所的な侵入／活性化を妨げる薬剤を投与することにより、ＶＳＭＣの増殖及び遊走を引き起こす成長因子の分泌を防ぐことである。抗腫瘍薬等の代謝阻害剤が、現在、可能性のある再狭窄防止化合物として試験されている。しかし、最近、代謝阻害剤の全身投与に関連する毒性が、原位置の部位特異的薬剤送付の試験を促している。
【０００５】
［０００６］再狭窄防止被覆ステントは、部位特異的薬剤送付の１つの可能性ある方法である。被覆ステントは、留置されると再狭窄防止剤を組織内へ直接放出して、受容者が全身薬剤送付に関連する副作用を受けることなく、臨床上効果的な薬剤濃度を局所的に達成できるようにする。更に、抗増殖剤を直接治療部位に局所的に送付することにより、特定の細胞標的技術が不要になる。
【０００６】
［０００７］最近、細胞周期の進行又は完了を阻害する化合物を使用した、重要な試験が行われている。便宜上、哺乳動物の細胞周期は４つの別個の部分に分割されている。有糸分裂及び細胞分裂は、約１時間だけ続くＭ期で生じる。次にＧ１期（ギャップ（ｇａｐ）のＧ）に入り、その次にＤＮＡが複製されるＳ期（合成（ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ）のＳ）に入り、最後に細胞が有糸分裂の準備をするＧ２期に入る。一般に、培養されている真核細胞の細胞周期時間は１６〜２４時間であるが、一部の多細胞生物では、細胞周期が１００日以上も続くことがある。更に、ニューロン（ｎｅｕｒｏｎｓ）等の一部の細胞は、成熟した哺乳動物内で完全に分裂するのを止め、静止しているものとみなされる。細胞周期のこの期は、しばしばＧ０と呼ばれる。
【０００７】
［０００８］非静止性の細胞の周期時間の変化は、Ｇ１期の持続期間に大きく依存する。したがって、かなりの数の抗増殖細胞の周期阻害剤が、Ｇ１中に発生する細胞機能を標的とすることが必然的である。しかし、細胞周期の阻害は、選択的にＧ１期を標的とする薬剤に限定されるものではない。例えば、紡錘体の形成又は紡錘体の分離を妨げるいくつかの細胞毒性化合物が公知である。パクリタキソール（ｐａｃｌｉｔａｘｏｌ）のようなのこれらの化合物は、細胞周期のＭ期を標的とする。ＤＮＡトポイソメラーゼ（ｔｏｐｉｓｏｍｅｒａｓｅｓ）阻害剤のようなＤＮＡ合成に影響を与える化合物は、Ｇ２期及びＳ期中の細胞増殖を妨げる。しかし、影響を受ける細胞周期の期に関係なく、抗増殖化合物は、分裂する細胞を標的とし、静止した細胞を基本的に元のままとする。この理論は、大部分の抗癌化学療法薬の開発の基礎をなす。
【０００８】
［０００９］増殖する細胞がどの期にあるかに関係なく、タンパク質代謝回転は必須のプロセスである。フォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）、細胞内輸送、及び分解を含む、タンパク質の翻訳後プロセシング（ｐｏｓｔ  ）は、分子シャペロンとして知られる熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）のファミリーにより成立される（Ｓｍｉｔｈ  Ｄ．Ｆ等、１９９８年、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｐａｒｏｎｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ（分子シャペロン：薬理学的介入のための生物学及び考察）」、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｖ．Ｖｏｌ．５０，Ｎｏ  ４；４９３−５１３）。タンパク質は、疎水性部分と親水性部分との間のペプチド内鎖の相互作用を通して翻訳後構成を想定する。新たに合成されたペプチドがリボゾームから発現すると、疎水性部分と親水性部分とが、同一のポリペプチド鎖の、他の最近転化された部分を含む細胞内環境に晒される。（Ｍａｒｔａｉｎ  Ｊ．及び  Ｆ．Ｕ．Ｈａｒｔｌ、１９９７年、「Ｃｈａｐｅｒｏｎｅ−ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｌｄｉｎｇ（シャペロンの助けによるタンパク質フォールディング）」、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．７；４１−５２）。
【０００９】
［００１０］シャペロンのような分子中間体がない場合、未完成ポリペプチド鎖の一部が非特異的に相互作用して、変性した非機能的タンパク質（Ｉｄ）となる。更に、分子シャペロンは、細胞内環境全体を通して、最近合成された天然タンパク質を輸送するのに必須である。例えば、シャペロンは、ミトコンドリア膜を含む細胞膜にわたるタンパク質の輸送に直接関与する。核遺伝子により符号化されたミトコンドリアタンパク質は、細胞内リボゾームから細胞質を通して、ミトコンドリア膜にわたって輸送されなければならず、このタンパク質は、ミトコンドリア膜で、細胞とミトコンドリアシャペロンとが組み合わさって作用することによって、リフォールディングされる。（Ｌａｎｇｅｒ，Ｔ等、１９９７年、「Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｉｎ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ（ミトコンドリアの生物発生における分子シャペロンタンパク質の機能）」、Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｆｏｌｄｉｎｇ  Ｃａｔａｌｙｓｔｓ（分子シャペロン及びタンパク質フォールディング触媒の手引き）、（Ｇｅｔｈｉｎｇ  Ｍ−Ｊ  ｅｄ）ｐｐ  ４９９−５０６、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕ．Ｋ．）。
【００１０】
［００１１］分子シャペロンは、概算の分子量に基づいて複数のファミリーに分類される。真核系では、主なＨｓｐは、Ｈｓｐ１００、Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０、Ｈｓｐ、及び分子量が２０〜２５キロダルトンのより小さいＨｓｐのファミリーである。各ファミリーの正確な機能はまだ解明されていないが、新生ペプチド鎖フォールディングは主にＨｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０により成立されることが理解される。より小さいＨｓｐは、誤ってフォールディングされたタンパク質と相互作用して、分離廃止（ｄｅｓｅｇｒｅｇａｔｉｏｎ）及び分解を促進する。多くのＨｓｐは、タンパク質のフォールディング及び分解に関与する以外の機能を有する。例えば、Ｈｓｐ７０はタンパク質膜の転置に重要な役割を果たし、最近では、Ｈｓｐ９０が重要な調節タンパク質であることが確認されている。Ｈｓｐ１００ファミリーのタンパク質は、熱ショック関連タンパク質の凝集を防止し、場合によっては反転させるのを助け、細胞が熱耐性を得るのを促進する。（Ｈａｒｔｌ，Ｆ．Ｕ．、１９９６年、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ｉｎ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｌｄｉｎｇ（細胞タンパク質フォールディングにおける分子シャペロン）」、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄ．）３８：５７１−５８０）。
【００１１】
［００１２］真核系で最も多く発現するＨｓｐは、Ｈｓｐ９０である。Ｈｓｐ９０のノックアウトモデルを使用して、Ｈｓｐ９０の発現が細胞の生存と増殖に必須であることが証明されたが、Ｈｓｐ９０は新生ペプチド鎖フォールディングの媒介にはわずかな役割しか果たしていないものと思われる。したがって、重要な試験は、正常な細胞代謝に対するＨｓｐ９０の寄与を理解することを対象としている。最近、Ｈｓｐ９０が、複数の必須の細胞内機能に関与していることが証明された。Ｈｓｐ９０は、熱ショックに続く変性タンパク質のリフォールディング（ｒｅ−ｆｏｌｄｉｎｇ）に関与するのに加えて、転写因子、チロシンキナーゼ及びセリンキナーゼ、トレオニンキナーゼ、及びステロイドホルモン受容体を含む広範囲の調節タンパク質と相互作用する。（Ｅｇｇｅｒｓ，Ｄ．Ｋ．等、１９９７年、「Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｎａｓｃｅｎｔ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｙｔｏｓｏｌ  ｏｆ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ（哺乳動物細胞の細胞質ゾルにおける新生ポリペプチドと分子シャペロンの複合体）」、Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌｌ．８：１５５９−１５７３）。
【００１２】
［００１３］分子シャペロンの媒介による活性化及びタンパク質の集合が信号変換に必要であるため、細胞周期制御及び転写調節が複雑な経路になっている。Ｈｓｐ９０はこの経路の中核をなし、Ｈｓｐ７０結合タンパク質、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）、ＦＫＢＰ５１、ＦＫＢＰ５２、ＦＫＢＰ５６、及びＦＫＢＰ５９（以下、まとめてＨｓｐ９０結合イムノフィリン（ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ）と称する）を含む多数のＨｓｐ９０結合タンパク質を含む。これらのＨｓｐ９０結合イムノフィリンは、ペプチジルプロピル（ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｐｙｌ）イソメラーゼ（ＰＰｌａｓｅ）活性を有する。ＰＰｌａｓｅは、ポリペプチド鎖内のプロピル残留物をトランスからシスの立体配置に変換し、次にタンパク質のフォールディング、したがってタンパク質の活性化を加速させる。更に、最近、アデノシントリホスファターゼ（ＡＴＰａｓｅ）が、Ｈｓｐ９０の生体内活性に必須であることがわかっている（Ｎａｉｒ  Ｓ．Ｃ．等、１９９７年、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｌｏｎｉｎｇ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ＦＫＢＰ５１  ａｎｄ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  Ｈｓｐ９０  ａｎｄ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ヒトＦＫＢＰ５１の分子クローニング、ならびにＨｓｐ９０及びプロゲステロン受容体とのイムノフィリン相互作用の比較）」、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１７：５９４−６０３）。
【００１３】
［００１４］Ｈｓｐ９０ノックアウト遺伝子を有する細胞は増殖しないという認識により、Ｈｓｐ９０は抗増殖化学療法薬の魅力的な細胞内標的となる。更に、Ｈｓｐ９０を含む多くの分子シャペロンは、構成的に発現するため、シャペロン阻害剤は、細胞周期のいずれの点においても細胞増殖を効果的に阻害することができる。したがって、分子シャペロン阻害剤は、理想的な抗増殖の候補であり、再狭窄の治療又は阻害に有利であることがわかっている。したがって、本発明の目的は、再狭窄の危険のある哺乳動物の解剖学的内腔に分子シャペロン阻害剤を部位を特定して送付するための医療用具及び方法を提供することである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
［００１５］本発明は、再狭窄を治療又は阻害するための医療用具及び方法に関する。詳細には、本発明は、再狭窄の危険のある哺乳動物の脈管構造の部位に分子シャペロン阻害剤を送付するための用具に関する。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
［００１６］本発明の一実施形態では、再狭窄が生じる危険のある哺乳動物の内腔の組織に分子シャペロン阻害剤を直接送付するように、ステントが構成される。
［００１７］本発明の別の実施形態では、再狭窄が生じる危険のある哺乳動物の内腔の組織に、哺乳動物の熱ショックタンパク質（Ｈｓｐ）の阻害剤を直接投与することにより、再狭窄が治療又は阻害される。
【００１６】
［００１８］本発明の更に別の実施形態では、Ｈｓｐの分子量が１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、７０ｋＤａ、６０ｋＤａ、４０ｋＤａ、２５ｋＤａ、及び２０ｋＤａからなる群から選択される。
【００１７】
［００１９］本発明の更に別の実施形態では、ＨｓｐがＨｓｐ９０である。
［００２０］本発明の更に別の実施形態では、分子シャペロン阻害剤がゲルダナマイシン（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）を含むベンゾキノンアンサマイシン（ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ  ａｎｓａｍｙｃｉｎ）である。
【００１８】
［００２１］本発明の別の実施形態では、分子シャペロン阻害剤を送付するように構成されたステントが血管ステントであり、哺乳動物の解剖学的内腔が血管である。
［００２２］本発明の更に別の実施形態では、血管ステントが、バルーンカテーテルを使用して、血管内の再狭窄の危険のある部位に送付される。
【００１９】
［００２３］本革新技術の別の実施形態では、注入カテーテルが使用されて、再狭窄の部位又は再狭窄の部位近くの外膜、あるいは再狭窄になりやすい部位に、シャペロン阻害剤を送付する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
［００３４］前述したように、分子シャペロンは、正常な細胞代謝及び増殖に必須の、構成的に発現された調節タンパク質である。分子シャペロンは、調節されたタンパク質代謝回転、翻訳後フォールディング（ｆｏｌｄｉｎｇ）、及びタンパク質輸送を助け、種々の信号タンパク質の調節要因として機能する。したがって、分子シャペロンは、抗増殖化学療法薬の魅力的な標的である。
【００２１】
［００３５］熱ショックタンパク質９０（Ｈｓｐ９０）は、抗増殖化合物が標的とする最も期待される分子シャペロンの１つである。（Ｎｅｃｋｅｒｓ，Ｌ．等、１９９９年、「Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ  ａｓ  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ａｎｔｉ−ｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔ：Ｉｓ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｔａｒｇｅｔ  ａｎｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｃｔｉｖｉｔｙ．（可能性ある抗癌剤としてのゲルダナマイシン、ＩＳ分子標的及び生物化学活性）」、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ．１７：３６１−３７３及びＹｏｒｇｉｎ  Ｐ．Ｄ等、２０００年、「Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ，ａ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ９０−ｂｉｎｉｄｎｇ  ａｇｅｎｔ，ｏｎ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｎｏｎｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ（ゲルダナマイシン、すなわち熱ショックタンパク質９０結合剤が、Ｔ細胞機能及びＴ細胞非受容体タンパク質チロシンキナーゼに与える効果）」、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４（６）２９１５−２９２３）。Ｈｓｐ９０は、転写因子、チロシンキナーゼ、セリンキナーゼ、トレオニンキナーゼ、ステロイドホルモン受容体、Ｈｓｐ７０結合タンパク質、ＦＫＢＰ５１、ＦＫＢＰ５２、ＦＫＢＰ５６、及びＦＫＢＰ５９（Ｈｓｐ９０結合イムノフィリン）を含む種々の調節タンパク質と結合する。（Ｃａｒｄｅｎａｓ，Ｍ．Ｅ．等、１９９８年、「Ｓｉｇｎａｌ−ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｃａｓｃａｄｅｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ  ｂｙ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ（天然物による治療的介入のための標的としての信号変換カスケード）」、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｏｃｔ．，１６（１０）４２７−４３３）。Ｈｓｐ９０結合イムノフィリンは、ペプチジルプロピル（ｐｅｐｔｉｄｙｌｐｒｏｐｙｌ）イソメラーゼ（ＰＰｌａｓｅ）活性を有する。（Ｂａｒｅｎｔ，Ｒ．Ｌ．等、１９９８年、「Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＦＫＢＰ５１／ＦＫＢＰ５２  ｃｈｉｍｅｒａｓ  ａｎｄ  ｍｕｔａｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｓｐ  ９０  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ（Ｈｓｐ９０結合のためのＦＫＢＰ５１／ＦＫＢＰ５２キメラ及び変異体、ならびにプロゲステロン複合体との結合の分析）」、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１２：３４２−３５４）。ＰＰｌａｓｅは、ポリペプチド鎖内のプロピル残留物をトランス型からシス型の立体配置に変換し、次にタンパク質のフォールディング、したがってタンパク質の活性化を加速させる。更に、最近、Ｈｓｐ９０がアデノシントリホスファターゼ（ＡＴＰａｓｅ）活性を有し、これがＨｓｐ９０の生体内活性に必須であることがわかっている。これらの特性を組み合わせると、Ｈｓｐ９０は最も魅力的な抗増殖標的となる。
【００２２】
［００３６］アンサマイシン（ａｎｓａｍｙｃｉｎｓ）及びラディシコール（ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）を含む分子シャペロンに結合して、これらを阻害することのできる多数の化合物がある。アンサマイシンはすべて、Ｎ末端ＡＴＰ結合ポケットに結合することによりＨｓｐ９０を阻害する。（Ｒｏｅ，Ｓ．Ｍ．等、１９９９年、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｓｐ９０  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｃｈａｐｅｒｏｎｅ  ｂｙ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ｒａｄｉｃｉｃｏｌ  ａｎｄ  ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ（抗腫瘍抗生物質ラディシコール及びゲルダナマイシンによる、Ｈｓｐ９０分子シャペロンの阻害の構造的基盤）」、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：２６０−２６６）。ラディシコールは、アンサマイシンではないＨｓｐ９０阻害剤であるが、同一の作用機構（Ｉｄ）を有することがわかった。したがって、新しい阻害剤を探すときに、同一の部位に結合するという予測に基づいて化合物が選択された。このような化合物の１つはノボビオシン（ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ）である。驚いたことに、ノボビオシンは、その有効性が明らかであるにもかかわらず、ＡＴＰ結合部分に遠位の部位に結合することによって作用することがわかった。この偶然の発見は、特定の阻害機構よりもＨｓｐ９０阻害に基づくスクリーニングの方がおそらく有効であることを提示している。
【００２３】
［００３７］しかし、熱ショックタンパク質の正常な生物学的機能を阻害又は妨害するすべての分子シャペロン阻害剤が、本発明の範囲に含まれる。本明細書中で使用されるように、熱ショックタンパク質は、限定されないが、約１００ｋＤａ、９０ｋＤａ、７０ｋＤａ、６０ｋＤａ、４０ｋＤａ、２５ｋＤａ、２０ｋＤａ等を含む分子量を有するものを含む。
【００２４】
［００３８］本発明の一実施形態では、アンサマイシンはベンゾキノンアンサマイシン及びその誘導体である。多くのベンゾキノンアンサマイシンは、ストレプトマイセス・ヒグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）の発酵物として自然に発生する。最もよく知られた自然に発生するベンゾキノンアンサマイシンは、１９７０年にＤｅＢｏｅｒにより最初に特徴付けされた非原生動物の抗生物質ゲルダナマイシンである。（ＤｅＢｏｅｒ  Ｃ．等、１９７０年、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  Ｖｏｌ．２３，ｐａｇｅ  ４４２）。例えば、１９７１年７月２７日付で発行されたＤｅＢｏｅｒ他の米国特許第３５９５９５５号、１９８１年４月１４日付で発行されたＳａｓｋｉ他の米国特許第４２６１９８９号、１９９９年８月３日付で発行されたＳｃｈｎｕｒの米国特許第５９３２５６６号、及び２００１年１月１６日付で発行されたＤｅＦｒａｎｃｏ他の米国特許第６１７４８７５Ｂ１号を参照されたい。ゲルダナマイシンに加えて、ハービマイシン（ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）及びマクベシン（ｍａｃｂｅｃｉｎ）等の複数の他の自然に発生するベンゾキノンアンサマイシン、ならびにいくつかの合成由来類似体及び誘導体がある。ベンゾキノイドアンサマイシンは、ベンゾキノン部分（ｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎｅ  ｍｏｉｅｔｙ）、アンサ環、及びカルバメート部分（ｃａｒｂａｍａｔｅ  ｍｏｉｅｔｙ）を有し、以下の一般式で示すことができる。
【００２５】
【化１】
2006507021.tif 000003
［００３９］Ｒ１＝ＯＣＨ３；Ｒ２＝Ｈ；Ｒ３＝ＯＨ；Ｒ４＝ＯＣＨ３のとき、ベンゾキノイドアンサマイシンはゲルダナマイシンであり、Ｒ１＝Ｈ；Ｒ２＝ＯＣＨ３；Ｒ３＝ＯＣＨ３；Ｒ４＝ＯＣＨ３のとき、ベンゾキノイドアンサマイシンはハービマイシン（ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）であり、Ｒ１＝Ｈ；Ｒ２＝ＯＣＨ３；Ｒ３＝ＯＣＨ３；Ｒ４＝ＣＨ３のとき、ベンゾキノイドアンサマイシンはマクベシン（ｍａｃｂｅｃｉｎ）である。
【００２６】
［００４０］本発明の別の実施形態では、分子シャペロン阻害剤がラディシコールである。
［００４１］更に別の実施形態では、分子シャペロン阻害剤がノボビオシンである。
【００２７】
［００４２］本発明の更に別の実施形態では、アンサマイシンがトリエノマイシン（ｔｒｉｅｎｏｍｙｃｉｎ）、ならびにその類似体及び誘導体である。例えば、米国特許第５１０９１３３号を参照されたい。
【００２８】
［００４３］本発明の分子シャペロン阻害剤は、医療用具を使用して、単独で、あるいは共力治療剤及び／又は添加治療剤と組み合わせて、直接患部に送付される。可能性ある共力治療剤及び／又は添加治療剤は、抗血小板剤、遊走抑制剤（ａｎｔｉｍｉｇｒａｔｏｒｙ）、抗線維素溶解薬等の再狭窄プロセスの異なる側面に影響を与える薬剤を含む。代代え的に、これらの治療剤は、抗増殖剤及び／又は抗炎症薬として作用するが、分子シャペロン活性を阻害するのとは異なる機構を通して作用する薬剤を含む。例えば、限定されないが、本発明の範囲に含まれると考えられる共力の組合せとして、少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤とアンチセンスのアンチｃ−ｍｙｃオリゴヌクレオチド、少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤とラパマイシン（ｒａｐａｍｙｃｉｎ）又は４０−０（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシンのようなラパマイシンの類似体及び誘導体、少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤とエキソチェリン（ｅｘｏｃｈｅｌｉｎ）、少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤とｎ−アセチルシステイン阻害剤、少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤とＰＰＡＲγ作動薬等がある。
【００２９】
［００４４］本発明の教示により使用される医療用具は、永久的な医療用移植片、一時的な移植片、又は取外し可能な用具とすることができる。例えば、限定されるものではないが、本発明の医療用具として、ステント、カテーテル、微小粒子、プローブ、及び血管移植片（ｇｒａｆｔ）がある。
【００３０】
［００４５］本発明の一実施形態では、ステントが薬剤送付プラットホームとして使用される。ステントは、血管ステント、尿管ステント、胆管ステント、又は他の管もしくは臓器内腔で使用されるステントとすることができる。血管ステントは、末梢、神経、又は冠状動脈の適用で使用することができる。ステントは、剛性の拡張可能なステント又は柔軟な自己拡張性ステントとすることができる。生体適合性材料を使用して、限定されないが、金属又はポリマーを含む本発明のステントを作ることができる。本発明のステントは生体吸収性であってもよい。
【００３１】
［００４６］本発明の一実施形態では、血管ステントが、血管形成術の直後に冠状動脈に植え込まれる。しかし、ステント植込み、すなわち血管ステント留置に関連する１つの重要な問題は、再狭窄である。再狭窄は、前に開いた内腔がＶＳＭＣの増殖により再び閉塞されるプロセスである。したがって、本発明の目的は、ＶＳＭＣの遊走及び増殖を抑制又は排除することにより再狭窄を減少させ、かつ／又は防止するステントを提供することである。
【００３２】
［００４７］本発明の一実施形態では、金属製の血管ステントが、１つ又は複数の再狭窄防止化合物、詳細には少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤で被覆され、より詳細には、この分子シャペロン阻害剤はベンゾキノンアンサマイシンである。ベンゾキノンアンサマイシンを、被覆される用具と拒否反応を起こすことがなく、また、ベンゾキノンアンサマイシンを不活性化させることのない安定した組成物を提供するキャリア化合物に、溶解又は懸濁させることができる。金属製ステントには、医療用具製造の分野で通常の知識を有する者に公知の技術を使用して、生物学的に活性のベンゾキノンアンサマイシン被覆が設けられる。限定されない適切な例として、含浸、吹付け、はけ塗り、浸し塗り、ロール塗りがある。ベンゾキノンアンサマイシン溶液がステントに塗布された後、乾燥され、安定したベンゾキノンアンサマイシン送付医療用具にされる。乾燥技術として、限定されないが、強制熱風、強制冷風、真空乾燥、又は静止蒸発がある。更に、医療用具、すなわち金属製の血管ステントの表面に、本発明のベンゾキノンアンサマイシン組成物の受け部又は溜め部として働く溝又は窪みを作ることができる。
【００３３】
［００４８］本発明の教示により使用される分子シャペロン阻害剤の、再狭窄防止に有効な量を、滴定プロセスにより決定することができる。滴定は、一連のステントセットを準備することにより達成される。各ステントセットは、選択された、異なる投与量の分子シャペロン阻害剤作動薬で被覆され、又はこの作動薬を含む。使用される最高濃度は、化合物の公知の毒物学に部分的に基づく。本発明の教示により製造されたステントによって送付される薬剤の最大量は、公知の毒性レベルよりも少ない。各ステントセットは、実施例５で後述するように、好ましい動物モデルを使用して生体内で実験される。さらなる試験で選択される投与量が、所望の臨床的結果を達成するのに必要な最少投与量となる。本発明の場合、所望の臨床的結果は、血管の再閉塞又は再狭窄の阻害として定義される。一般に、限定する意図ではないが、本発明の分子シャペロン阻害剤の、再狭窄防止に有効な量は、使用される特定の分子シャペロン阻害剤及び選択される送付プラットホームに応じて、約０．５ｎｇ〜１．０ｍｇである。
【００３４】
［００４９］選択される分子シャペロン阻害剤に加えて、治療効果は、投与量、送付経路、及び病気の進行の程度（治療部位）を含む要因により影響される。分子シャペロン阻害剤組成物の有効な量を、医薬品化学及び薬理学の分野で通常の知識を有する者に公知の方法を使用して確認することができる。最初に、標準の実験室的方法を使用して、所与の分子シャペロン阻害剤組成物の毒性プロファイルが設定される。例えば、細胞毒性を決定するために細胞培養システムを使用して、候補の分子シャペロン阻害剤組成物が、生体外で種々の濃度で実験される。無毒又は最小の毒性の濃度範囲が設定されると、適切な動物モデルを使用して、分子シャペロン阻害剤組成物が、生体内でその範囲全体を通して実験される。分子シャペロン阻害剤組成物の生体外及び生体内毒性プロファイルの設定後、設定された無毒又は最小の毒性の範囲で化合物が抗増殖活性を維持しているか否かを確認するために、生体外で実験が行われる。
【００３５】
［００５０］最後に、承認された食品医薬品局（ＦＤＡ）の臨床試験プロトコル、又はヒトの臨床試験を最小の侵襲的技術で行うことを推奨し承認する機関を有する治験審査委員会（ＩＲＢ）により承認されたプロトコルにしたがって、候補の分子シャペロン阻害剤組成物がヒトの治療部位に投与される。血管造影技術、又は介入心臓学の分野で通常の知識を有する者に公知の他の適切な方法を使用して、治療部位が選択される。その後、候補の分子シャペロン阻害剤組成物は、ある範囲の投与量を使用して、選択された治療部位に投与される。好ましくは、最適な投与量は、実験された分子シャペロン阻害剤組成物に対して設定された、最も毒性のない濃度、又は最小の毒性の濃度である。必要に応じて臨床的な追跡調査が行われて、治療効果及び生体内の毒性を監視する。この間隔は、試験者及び試験を監督するＦＤＡ又はＩＲＢと共同で、熟練した医師及び／又は臨床試験プロトコルに設定された者の臨床経験に基づき決定される。
【００３６】
［００５１］本発明の分子シャペロン阻害剤療法を、任意の数の技術及び／又は医療用具を使用して治療部位に直接施すことができる。本発明の一実施形態では、分子シャペロン阻害剤組成物が血管ステントに塗布される。血管ステントは、任意の組成又は設計とすることができる。例えば、ステントは、自己拡張性、又は図２のバルーンカテーテルを使用して機械的に拡張されるステント１０とすることができる。ステント１０を、ステンレス鋼、チタン合金、ニッケル合金、又は生体適合性ポリマーから作ることができる。更に、ステント１０は、ポリマー製、又は少なくとも１つのポリマーで被覆された金属製ステントであってもよい。他の実施形態では、送付用具が、動脈瘤シールド、血管移植片、又は外科用パッチである。更に他の実施形態では、本発明の分子シャペロン阻害剤療法は、多孔又は「ウィーピング（ｗｅｅｐｉｎｇ）」カテーテルを使用して行われ、ヒドロゲル組成物を含む分子シャペロン阻害剤を治療部位に送付する。更に他の実施形態は、カテーテル又は他の血管内用具もしくは経心筋板（ｔｒａｎｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌ）用具を使用して送付される微小粒子を含む。
【００３７】
［００５２］別の実施形態では、注入カテーテルを使用して、本発明のシャペロン阻害剤を、再狭窄が生じる危険のある血管閉塞又は脈管構造部位（治療部位）内に直接、あるいは隣接して送付することができる。本明細書中で使用されるように、隣接とは、再狭窄防止組成物を治療レベルで治療部位に到達させるのに十分近接した、治療部位に遠位又は近位の脈管構造内の点を意味する。再狭窄が生じる危険のある血管部位は、管腔裏層に損傷を与えるおそれのある処置を行う治療部位として定義される。再狭窄が生じる危険性を高める処置の非限定的な例として、血管形成術、ステント留置、血管移植片（ｇｒａｆｔ）、アブレーション（ａｂｌａｔｉｏｎ）療法、及び近接照射療法がある。
【００３８】
［００５３］本発明の一実施形態では、米国特許出願公開第２００２／０１９８５１２Ａ１号ならびに関連米国特許出願第０９／９６１０８０号及び第０９／９６１０７９号に示される注入カテーテルを使用して、本発明のシャペロン阻害剤を、直接外膜に投与することができる。図３、４、及び５は、このような一実施形態を示す。図３は、内部に入れ子になった注射針２４と、膨張源（図示せず）に接続されてカテーテル本体を図４に示すように膨張させるバルーン内部２２とを有する、膨張前のカテーテルバルーン２０のＣ字形構成を示す。針２４は、患者の外側に配置された近位リザーバ（図示せず）からシャペロン阻害剤を外膜へ移行させる注入口２６を有する。
【００３９】
［００５４］図４は、膨張したバルーン３０が、カテーテル本体２８と、外膜を貫通可能な注射針２４とに取り付けられる状態を示す。図５は、本発明のシャペロン阻害剤を外膜３４に直接留置する状態を示す。バルーン２０が膨張すると、注射針２４が血管壁３２を貫通して、シャペロン阻害剤３６を組織に注入する。
【００４０】
［００５５］医療用具を、実際には、設計に適した物理的特性を有する生体適合性材料から製造することができる。例えば、タンタル、ステンレス鋼、及びニチノールが多くの医療用具に適していることがわかっており、これらを本発明で使用することができる。また、生体安定性又は生体吸収性ポリマーで作られた医療用具を本発明の教示により使用することができる。医療用具表面を清潔にして、製造中に投入される汚染物がないようにすべきであるが、医療用具表面は、本発明で塗布される被覆を維持するために特別な表面処理をする必要がない。本発明により、医療用具の両面（医療用具の構成に応じて、ステント１０の内面１４及び外面１２、又は上面及び下面）に被覆が設けられる。
【００４１】
［００５６］本発明による被覆された医療用具を提供するために、溶媒、溶媒中に溶解されたポリマー、及び溶媒中に分散された分子シャペロン阻害剤組成物を含む溶液が最初に調製される。互いに相溶性の溶媒、ポリマー、及び治療物質を選択することが重要である。溶媒が、ポリマーを、溶液中の所望の濃度で溶液に入れることができることが必須である。選択された溶媒及びポリマーが、分子シャペロン阻害剤の治療特性を化学的に変化させないことも必須である。しかし、分子シャペロン阻害剤組成物は、溶媒全体に分散されるだけでよいため、溶媒を含む純溶液中に含まれていても、溶媒中に微粒子で分散されていてもよい。溶液が医療用具に塗布され、溶媒が蒸発して、ポリマー及び分子シャペロン阻害剤組成物を含む被覆が医療用具上に残る。
【００４２】
［００５７］一般に、溶液を医療用具に吹き付けることにより、又は医療用具を溶液中に浸漬させることにより、溶液を医療用具に塗布することができる。浸漬による塗布と吹付けによる塗布とのどちらを選択するかは、主に溶液の粘度及び表面張力に応じて決まるが、エアブラシから使用可能であるような微細な噴霧で吹き付けることにより、被覆が最も均一になり、医療用具に塗布される被覆材料の量が最もよく制御されることがわかっている。吹付けによる被覆と浸漬による被覆のいずれにおいても、被覆の均一性を向上させ、医療用具に塗布される分子シャペロン阻害剤組成物の量の制御を向上させるために、一般に、複数の塗布ステップが望ましい。ポリマー被覆の全厚は、約１ミクロン〜約２０ミクロン又はそれより大である。本発明の一実施形態では、分子シャペロン阻害剤組成物がベースコートに含まれ、分子シャペロン阻害剤を含むベースコートの上にトップコートが塗布されて、分子シャペロン阻害剤の組織内への放出を制御する。
【００４３】
［００５８］選択されたポリマーは、生体適合性で、医療用具を植込んだ時に血管壁に与える刺激を最小にするポリマーでなければならない。ポリマーは、所望の放出速度又は所望のポリマー安定度に応じて、生体安定性又は生体吸収性ポリマーとすることができる。使用可能な生体吸収性ポリマーとして、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリカプロラクトン、ポリ（ラクチド−共−グリコリド）、ポリ（エチレンビニルアセテート）、ポリ（ヒドロキシブチレート−共−バレレート）、ポリジオキサノン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリ（グリコール酸）、ポリ（Ｄ、Ｌ−乳酸）、ポリ（グリコール酸−共−トリメチレンカーボネート）、ポリリン酸エステル、ポリリン酸エステルウレタン、ポリ（アミノ酸）、シアノアクリレート、ポリ（トリメチレンカーボネート）、ポリ（イミノカーボネート）、コポリ（エーテルエステル）（例えば、ＰＥＯ／ＰＬＡ）、ポリアルキレンオキサレート、ポリホスファゼン、ならびにフィブリン、フィブリノーゲン、セルロース、澱粉、コラーゲン、ヒアルロン酸等の生体分子がある。
［００５９］
更に、ポリウレタン、シリコーン、及びポリエステル等の、慢性的な組織反応が比較的低い生体安定性ポリマーを使用することができ、また、医療用具上で溶解、硬化又は重合することができれば、ポリオレフィン、ポリイソブチレン、及びエチレンαオレフィンコポリマー；アクリルポリマー及びコポリマー、エチレン−共−ビニルアセテート、ポリブチルメタクリレート、ポリ塩化ビニルのようなハロゲン化ビニルポリマー及びコポリマー、ポリビニルメチルエーテルのようなポリビニルエーテル；ポリフッ化ビニリデン及びポリ塩化ビニリデンのようなハロゲン化ポリビニリデン；ポリアクリロニトリル、ポリビニルケトン；ポリスチレンのようなポリビニル芳香族化合物、ポリビニルアセテートのようなポリビニルエステル；エチレン・メチルメタクリレートコポリマーのようなビニルモノマーどうし及びオレフィンのコポリマー、アクリロニトリル・スチレンコポリマー、ＡＢＳ樹脂、及びエチレン・ビニルアセテートコポリマー；ナイロン６６及びポリカプロラクタム（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔａｍ）等のポリアミド；アルキド樹脂；ポリカーボネート；ポリオキシメチレン；ポリイミド；ポリエーテル；エポキシ樹脂；ポリウレタン；レーヨン；レーヨン・トリアセテート；セルロース、セルロースアセテート、セルロースブチレート；セルロースアセテートブチレート；セロハン；硝酸セルロース、セルロースプロピオネート；セルロースエーテル；及びカルボキシメチルセルロース等の他のポリマーを使用することができる。
【００４４】
［００６０］ポリマーと分子シャペロン阻害剤組成物との比は、ポリマーの、分子シャペロン阻害剤組成物を医療用具上に固定する効果、及び被覆が血管の組織に分子シャペロン阻害剤組成物を放出する速度に応じて決まる。医療用具上に分子シャペロン阻害剤組成物を保持する効果が比較的低い場合に、より多くのポリマーが必要であり、可溶性の高い分子シャペロン阻害剤組成物の溶出を制限する溶出母材を提供するために、より多くのポリマーが必要である。したがって、治療物質とポリマーとの比が広範囲であることが適切であり、治療物質対ポリマーの約０．１重量％〜９９重量％とすることができる。
【００４５】
［００６１］本発明の一実施形態では、図１に示す血管ステントが、基層と外層とからなる２層の生体安定性ポリマー母材を使用して、分子シャペロン阻害剤で被覆される。ステント１０は、一般に円筒形で、外面１２と、内面１４と、第１の開放端部１６と、第２の開放端部１８とを有し、外面１２及び内面１４は、本発明の教示により、再狭窄防止に有効な量の少なくとも１つの分子シャペロン阻害剤を送付するように構成される。簡単に言うと、エチレン・ビニルアセテートコポリマーとポリブチルメタクリレートの溶液を含むポリマー基層がステント１０に塗布されて、外面１２がポリマーで被覆される。別の実施形態では、ステント１０の内面１４と外面１２の両方にポリマー基層が設けられる。分子シャペロン阻害剤又はその混合物が基層に組み込まれる。次に、ポリブチルメタクリレートのみを含む外層が、先に基層が設けられたステント１０の外層１４に塗布される。別の実施形態では、ステント１０の内面１４と外面１２の両方にポリマー外層が設けられる。
【００４６】
［００６２］ポリブチルメタクリレート外層の厚さは、拡散障壁として働く基部被覆から分子シャペロン阻害剤が溶出する速度を決定する。エチレン・ビニルアセテートコポリマー、ポリブチルメタクリレート、及び分子シャペロン阻害剤の溶液を、いくつかの複数の方法で医療用具内又は上に組み込むことができる。本発明の一実施形態では、分子シャペロン阻害剤／ポリマー溶液がステント１０に吹き付けられ、乾燥される。別の実施形態では、溶液を一方の極に帯電させて、ステント１０を他方の極に帯電させることができる。このような方法で、分子シャペロン阻害剤／ポリマー溶液とステントとが互いに引き付けられて、無駄を減らし、被覆厚さをより良好に制御する。
【００４７】
［００６３］本発明の別の実施形態では、分子シャペロン阻害剤がベンゾキノンアンサマイシンであり、ポリマーが生体吸収性である。本発明の生体吸収性ポリマーとベンゾキノンアンサマイシンとの混合物を、ポリマー吸収速度が薬剤の放出を制御するように構成することができる。本発明の一実施形態では、ポリカプロラクトン・ゲルダナマイシン混合物が調製される。ステント１０にポリカプロラクトン・ゲルダナマイシン混合物が安定して被覆され、このステント被覆の厚さは約０．１μｍ〜約１００μｍである。ポリマー被覆厚さは、送付されるゲルダナマイシンの総量を決定し、ポリマーの吸収速度は、投与速度を決定する。
【００４８】
［００６４］前述した例を使用して、ポリマー化学の分野で通常の技術を有する者が、広範囲の投与量及び投与速度を有する被覆を構成することができる。更に、ポリマーを含まない被覆と、医薬品化学及び医療用具製造の分野の技術を有する者に公知の技術とを使用して、薬剤送付速度及び濃度を制御することもできる。
【００４９】
［００６５］以下の実施例は、本発明の分子シャペロン阻害剤溶出医療用具をより正確に定義し、使用可能にするために提示される。種々の他の実施形態及び本発明の使用方法があり、これらは本明細書及び実施例を読んで理解すれば当業者に明らかになることを理解されたい。更に、ベンゾキノンアンサマイシン、詳細にはゲルダナマイシンは、本発明の教示により使用可能な分子シャペロン阻害剤の単なる一例であることを理解されたい。これらの代替形態は、本発明の一部であるとみなされる。
【実施例１】
【００５０】
金属ステント洗浄手順
［００６６］ステンレス鋼ステントが、ガラスビーカーに入れられ、試薬用又はより上質のヘキサンで覆われた。ヘキサンに浸漬されたステントを含むビーカーが超音波水槽に入れられ、約２５〜５０ｋＨｚの周波数で１５分間処理された。次に、ステントがヘキサンから取り出され、ヘキサンが廃棄された。その後、ステントが試薬用又はより上質の２−プロパノールに浸漬され、ステントと２−プロパノールとを含む容器が、前と同様に超音波水槽内で処理された。ステントを有機溶媒で洗浄した後、ステントは蒸留水で完全に洗浄され、その後、１．０Ｎ水酸化ナトリウム溶液に浸漬されて、前と同様に超音波水槽内で処理された。最後に、ステントが水酸化ナトリウムから取り出され、蒸留水で完全にすすぎ洗いされて、４０℃の真空オーブンで一晩乾燥された。
【００５１】
［００６７］乾燥したステントを、乾燥した環境で室温まで冷却した後、これらのステントが計量されて、重量が記録された。
【実施例２】
【００５２】
薬剤／ポリマーシステムを使用した、洗浄、乾燥済みのステントの被覆
［００６８］ゲルダナマイシン２５０μｇが正確に計量され、テトラヒドフラン（ＴＨＦ）２７．５６ｍｌを含む細首のガラス瓶に添加された。透明な溶液が得られるまで、ゲルダナマイシンＴＨＦ懸濁液が完全に混合された。
【００５３】
［００６９］次に、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）２５１．６ｍｇがゲルダナマイシン−ＴＨＦ懸濁液に添加され、ＰＣＬが溶解して薬剤／ポリマー溶液を生成するまで混合された。
【００５４】
［００７０］洗浄、乾燥済みのステントが、吹付け技術を使用して被覆され、又は薬剤／ポリマー溶液中に浸漬された。ステントは、必要に応じて、約１０μｇ〜１ｍｇの最終被覆重量が得られるように被覆された。最後に、被覆されたステントが、５０℃の真空オーブンで一晩乾燥された。乾燥、被覆済みのステントが計量され、重量が記録された。
【００５５】
［００７１］ステントに加えられた薬剤の濃度が、最終被覆重量に基づいて求められた。最終被覆重量は、ステントの被覆前の重量を、乾燥、被覆済みのステントの重量から減算することにより算出される。
【実施例３】
【００５６】
サンドイッチ形被覆を使用した、洗浄、乾燥済みのステントの被覆
［００７２］本発明の一実施形態では、洗浄、乾燥済みのステントが、最初にポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）又は他の適切なポリマーで被覆され、次にゲルダナマイシンで被覆される。最後に、２度目のＰＶＰの被覆が行われて、ステントをシールし、ＰＶＰ−ゲルダナマイシン−ＰＶＰサンドイッチ被覆ステントを生成する。別の実施形態では、ゲルダナマイシンを含むポリマー被覆を塗布する前に、パリレンプライマーがむき出しの金属ステントに塗布される。更に別の実施形態では、ポリマーキャップ被覆がゲルダナマイシン被覆上に塗布される。このキャップ被覆は、ゲルダナマイシンを含むポリマー被覆に使用されるポリマーとは異なるポリマーを含む。
【００５７】
［００７３］本発明の別の実施形態では、ゲルダナマイシンの放出を制御するために、ポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートのポリマー混合物が使用された。
【００５８】
［００７４］以下の実施例は、限定としてではなく、本発明の教示により使用可能な１つのポリマー被覆としてのみ言及される。他の被覆が本明細書中に記載され、これらも本発明の範囲に含まれるものとみなされる。
【００５９】
［００７５］サンドイッチ被覆手順：ＰＶＰ１００ｍｇがＴＨＦ１２．５ｍｌを含む５０ｍｌエルレンマイヤー（Ｅｒｌｅｎｍｅｙｅｒ）に添加された。ＰＶＰがすべて溶解するまでフラスコが入念に混合された。別の洗浄、乾燥済みのエルレンマイヤーフラスコで、ゲルダナマイシン２５０μｇがＴＨＦ１１ｍｌに添加されて、溶解するまで混合された。
【００６０】
［００７６］次に、平滑な融合ポリマー層が得られるまで、洗浄、乾燥済みのステントにＰＶＰが吹き付けられた。その後、ステントが、５０℃の真空オーブンで３０分間乾燥された。
【００６１】
［００７７］次に、ゲルダナマイシンの９つの連続層が、ポリマー被覆ステントに塗布された。ステントは、連続するゲルダナマイシン被覆の各々の間で乾燥された。最後のゲルダナマイシン被覆が乾燥した後、ＰＶＰの３つの連続被覆がステントに塗布され、その後、被覆済みのステントが５０℃の真空オーブンで一晩乾燥された。乾燥、被覆済みのステントが計量され、重量が記録される。
【００６２】
［００７８］薬剤／ポリマー溶液の薬剤濃度と、ステント上に加えられた最終的な薬剤の量とが、最終被覆重量を決定する。最終被覆重量は、ステントの被覆前の重量を、乾燥、被覆済みのステントの重量から減算することにより算出される。
【実施例４】
【００６３】
純粋な薬剤による、洗浄、乾燥済みのステントの被覆
［００７９］ゲルダナマイシン１．００μｇが正確に計量され、無水メタノール（ＭｅＯＨ）１１．４ｍｌを含む細首のガラス瓶に添加された。次に、ゲルダナマイシン・メタノール懸濁液が、５０℃で１５分間加熱され、その後、ゲルダナマイシンが完全に溶解するまで混合された。
【００６４】
［００８０］次に、洗浄、乾燥済みのステントが、血管形成バルーンカテーテルアセンブリのバルーン部分上に取り付けられた。その後、ステントにゲルダナマイシン−ＭｅＯＨ溶液が吹き付けられ、また代替形態では、ステントがゲルダナマイシン−ＭｅＯＨ溶液に浸漬された。被覆済みのステントが、５０℃の真空オーブンで一晩乾燥された。乾燥、被覆済みのステントが計量され、重量が記録された。
【００６５】
［００８１］ステント上（内）に加えられた薬剤の濃度が、最終被覆重量に基づいて求められた。最終被覆重量は、ステントの被覆前の重量を、乾燥、被覆済みのステントの重量から減算することにより算出される。
【実施例５】
【００６６】
ブタモデルにおける分子シャペロン阻害剤被覆血管ステントの生体内実験
［００８２］分子シャペロン阻害剤γ作動薬の、急性損傷ブタ冠状動脈の血管内ステント留置に反応して新生内膜肥厚を低減させる能力が、以下の実施例に示される。以下に概説するように、２つの対照群及び３つの治療群が使用された。
【００６７】
１．対照群
各対照群で６頭の動物が使用された。第１の対照群は、ポリマー被覆も薬剤被覆もない洗浄、乾燥済みのＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントの再狭窄防止効果を実験する。第２の対照群は、ポリマーのみの再狭窄防止効果を実験する。薬剤のない、ポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物被覆を有する洗浄、乾燥済みのＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントが、第２の対照群で使用された。
【００６８】
２．実験治療群
３つの異なるステント構成と２つの異なる薬剤投与量が、再狭窄防止効果について評価される。１２頭の動物が各群に含まれる。
【００６９】
［００８３］ゲルダナマイシン１０重量％を含む、７５対２５のポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物からなる被覆を有する、群１のＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントは、本発明の教示により高速放出群と指定される。
【００７０】
［００８４］ゲルダナマイシン１０重量％を含む、８０対２０のポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物からなる被覆を有する、群２のＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントは、本発明の教示により低速放出群と指定される。
【００７１】
［００８５］血管内用具（ｅｎｄｏｖａｓｃｕｌａｒ）の試験のために最も適切な動物モデルとして、ブタが浮上した。冠状血管の解剖学的構造及び大きさが、ヒトのものに匹敵する。更に、血管損傷に反応して生じる新生内膜肥厚が、ヒトに臨床的に見られるものと類似している。ブタ動物モデルで得られる結果は、ヒトの臨床的結果の予測になると考えられる。このため、規制機関は、ブタの６ヶ月間のデータがあれば、ヒト実験に進むのに十分であると考えている。したがって、本明細書中で使用されるように、「動物」は哺乳動物、魚類、は虫類、鳥類を含む。哺乳動物は、限定されないが、ヒト含む霊長類、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ウサギ、ブタ、ウマ、及びウシを含む。
【００７２】
［００８６］養豚場のブタ（又はミニブタ）の、アテローム性動脈硬化症でない急性損傷ＲＣＡ、ＬＡＤ、及び／又はＬＣＸが、この試験で使用される。被覆され制御されたステントの留置は、動物及び動脈によって任意である。動物は実験動物福祉法（Ｐ．Ｌ．８９−５４４）、ならびに１９７０年（Ｐ．Ｌ．９１−５７９）、１９７６年（Ｐ．Ｌ．９４−２７９）、及び１９８５年（Ｐ．Ｌ．９９−１９８）の補正の要件に従って管理され飼育される。この法の遵守は、「ｔｈｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓ（実験動物の管理及び使用の手引き）」、ＩＬＡＲ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  Ｐｒｅｓｓ，１９９６年改訂版に準拠することにより達成される。獣医師は、予備試験期間中に各動物の身体検査を行って、確実に健康なブタのみがこの試験で使用されるようにする。
【００７３】
Ａ．術前処置
［００８７］実験に使用する前に、３〜５日間動物が監視された。体重に合わせて適切に薬剤投与量を調節するために、処置の少なくとも３日前に動物の体重が概算された。ステント留置の少なくとも１日前に、アスピリン６５０ｍｇが投与される。動物は、処置の１２時間前から絶食させる。
【００７４】
Ｂ．麻酔
［００８８］筋内テラゾール（Ｔｅｌａｚｏｌ）及びキシラジン（Ｘｙｌａｚｉｎｅ）を使用して、動物に麻酔が誘発された。アトロピンが投与されて（２０μｇ／ｋｇＩ．Ｍ．）、呼吸と唾液分泌とを制御する。軽い麻酔が誘発されると、被験動物が挿管された。酸素中のイソフルラン（吸入により効果を示すには０．１〜５．０％）が投与されて、麻酔の外科的レベルを維持する。心電図による連続した監視が行われた。損失した血液量を取り替える必要がある場合に備えて、Ｉ．Ｖ．カテーテルが耳の静脈に挿入された。心電図と刺激に対する動物の反応とにより、麻酔のレベルが連続して監視される。
【００７５】
Ｃ．カテーテル導入及びステント留置
［００８９］麻酔の誘発に続いて、手術で接触する部位が剃毛され、クロルヘキシジン石けんでこすり洗いされた。左右大腿動脈（又は頚動脈）の部位に切開が行われ、手術部位にベータダイン溶液が塗布された。動脈穿刺又は切開により動脈シースが導入され、動脈内に進められた。ガイドカテーテルがシースに挿入され、必要に応じてＸ線透視ガイド下で、０．８８９ｍｍ（０．０３５インチ）ガイドワイヤを介して冠状動脈の口内へ進められた。基線血液ガス、ＡＣＴ、及びＨＣＴについて、動脈血サンプルが得られた。ヘパリン（２００ユニット／ｋｇ）が必要に応じて投与され、ＡＣＴ≧３００秒を達成し維持する。動脈血圧、心拍、及び心電図が記録される。
【００７６】
［００９０］ガイドカテーテルを適切な冠状動脈の口に挿入した後、血管造影画像が少なくとも２つの直交する図で得られ、留置部位の適切な位置を特定する。定量的冠状動脈造影（ＱＣＡ）が行われて記録される。ニトログリセリン（２００μｇＩ．Ｃ．）が治療前に投与され、必要に応じて動脈血管痙攣を制御することができる。送付システムは、負圧で５秒間バルーンを吸引することにより、かつガイドワイヤルーメンをヘパリン加生理食塩水で洗い流すことにより、準備された。
【００７７】
［００９１］ステントの留置、開存性、及び位置決めは、血管造影により評価され、ＴＩＭＩスコアが記録される。結果がビデオ及び映画に記録される。最終的な内腔寸法がＱＣＡ及び／又はＩＶＵＳにより測定される。これらの手順は、用具がブタの３本の主な冠状動脈の各々に植え込まれるまで繰り返される。ステントは、１：１．２の拡張比を有するように留置される。最後の植込み後、動物が麻酔から覚めるようにする。２８日後に致死させるまで、アスピリン３２５ｍｇｐ．ｏ．ｑｄが投与される。
【００７８】
Ｄ．追跡処置及び終末
［００９２］２８日後、動物は麻酔をかけられ、６Ｆ動脈シースが導入されて進められる。６Ｆの大型ルーメンガイドカテーテル（診断ガイド）がシースに挿入されて、Ｘ線透視ガイド下で、ガイドワイヤ上を通って冠状動脈内へ進められる。ガイドカテーテルを適切な冠状動脈口に挿入した後、血管造影画像が撮影されて、ステント留置部位を評価する。再見処置の終了時に、過量のペントバルビタール静脈内投与及びＫＣＬ静脈内投与により、動物を安楽死させた。心臓、腎臓、及び肝臓が摘出され、外傷又は内傷があるか否か目視検査される。臓器は、乳酸加リンゲル１０００ｍｌにより１００ｍｍＨｇで洗い流され、次に、ホルマリン１０００ｍｌにより１００〜１２０ｍｍＨｇで洗い流された。すべての臓器がラベルを貼ったホルマリン溶液の容器に保存される。
【００７９】
Ｅ．組織検査及び病理検査
［００９３］組織検査処理の前に、ステント留置血管がＸ線撮影された。ステント留置部分は、標準の組織検査試験プロトコルに従って、定例の組織検査について処理され、区分され、着色された。治療した血管の長さを通る連続部分に、適切な着色が交互に施された。
【００８０】
Ｆ．データ分析及び統計
１．ＱＣＡ測定
［００９４］定量的血管造影が行われて、膨張のピークでのバルーンの大きさと、ステント留置前後及び２８日の追跡時の血管径を測定した。以下のデータが、血管造影データから測定又は算出される。
【００８１】
ステントと動脈との比
最小内腔径（ＭＬＤ）
遠位及び近位の基準内腔径
狭窄百分率＝（最小内腔径÷基準内腔径）×１００
２．組織形態計測的分析
［００９５］本来の近位及び遠位の血管と、ステントの近位、中位、及び遠位部分との断面から、組織検査的測定が行われた。Ｓｃｈｗａｒｔｚその他（Ｓｃｈｗａｒｔｓ  ＲＳその他、「Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｉｎｊｕｒｙ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ（再狭窄及び冠状動脈損傷に比例する新生内膜反応：ブタモデルにおける結果）」、Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ  １９９２年；１９：２６７−７４）に記載された方法を使用して、血管損傷スコアが算出された。各動脈部分の平均損傷スコアが算出された。動脈部分のスコアを記録し組織病理検査を行う試験者らには、用具のタイプがわからないようにした。以下の測定値が求められた。
【００８２】
外弾性層（ＥＥＬ）面積
内弾性層（ＩＥＬ）面積
管腔面積
外膜面積
平均新生内膜厚さ
平均損傷スコア
３．新生内膜面積及びステント内再狭窄の百分率が以下の通り算出される。
【００８３】
新生内膜面積＝（ＩＥＬ−管腔面積）
ステント内再狭窄＝［１−（管腔面積）÷ＩＥＬ］×１００
［００９６］治療により、むき出しのステント対照とポリマー被覆対照と比較して、新生内膜面積及び／又はステント内再狭窄が大幅に減少すれば、所与の治療群が有利であると考えられる。
【００８４】
Ｇ．外科用品及び器具
［００９７］以下の外科用品及び器具が、前述した処置に必要である。
１．標準の血管接触外科用トレー
２．非イオン対照液
３．ＡＣＴ用具及び付属品
４．ＨＣＴ用具及び付属品（該当する場合）
５．呼吸及び血行力学監視システム
６．ＩＰＰＢ人工呼吸器、関連する呼吸回路、及びガス麻酔用具
７．血液ガス分析用具
８．０．８８９ｍｍ（０．０３５インチ）ＨＴＦ又はＷｈｏｌｅｙ修正Ｊガイドワイヤ、０．３５５６ｍｍ（０．０１４インチ）ガイドワイヤ
９．６、７、８、９Ｆシースイントロデューサ及びガイドカテーテル（いずれか該当する方）
１０．ＱＣＡ機能を持つ血管造影用具
１１．移動式非細動器（Ａｍｌｕｌａｔｏｒｙ  ｄｅｆｉｂｒｉｌｌａｔｏｒ）
１２．標準の血管形成用具及び付属品
１３．ＩＶＵＳ用具（該当する場合）
１４．放射標識細胞試験用用具（該当する場合）
１５．遠心機
１６．血小板凝集計
１７．インジウム１１１オキシム、又は指定された他のもの
１８．自動血小板計数器
１９．放射線検出用具
【００８５】
Ｆ．結果
動物実験の結果が図１１に示される。図１１は、養豚場のブタの２８日間の効果の試験をグラフで示す。ＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステント（１８ｍｍ×３−３．５ｍｍ径）が、本明細書中に記載されたように被覆され、滅菌され、前述したように１：１．２の拡張比で養豚場のブタに植え込まれた。動物は、回復して２８日間維持され、その後安楽死させられて、組織化学及び組織形態計測のために、標準の技術を使用して組織が固定され処理された。図１１は、近位ステント部分及び遠位ステント部分の組合せにおける、新生内膜厚さと損傷スコアとの相関をグラフで示す。新生内膜厚さ及び損傷スコアは、ステントの各支柱で測定された。むき出しのステント対照群で、損傷スコアと新生内膜厚さとに良好な相関が観察された。「高速放出」ステントからのデータが「低速放出」対照及びむき出しのステント対照と比較されると、損傷スコア増加時の新生内膜厚さの大幅な減少が観察された。図１１では、黒菱形は、むき出しの金属製ＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７対照ステントを示し、四角は、ポリマーのみの被覆（薬剤なし）を有するＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７対照ステントを示し、三角は、「高速溶出プロファイル」被覆を有するＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントを示し、×形は、「低速溶出プロファイル」被覆を有するＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ７ステントを示す。これらの結果は、高速放出のゲルダナマイシンを含む被覆が、対照と比べて減少した平均損傷スコアを有するステントを提供することを明らかに示す。
【実施例６】
【００８６】
ゲルダナマイシンによるヒト冠状動脈平滑筋細胞の阻害
Ａ．材料
１．ヒト冠状動脈平滑筋細胞（ＨＣＡＳＭＣ）が、Ｃａｍｂｒｅｘ，Ｉｎｃ．の１部門であるＣｌｏｎｅｔｉｃｓから入手された。
【００８７】
２．Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓから供給され、ウシ胎児血清、インスリン、ｈＦＧＦ−Ｂ（ヒト線維芽細胞成長因子）、ｈＥＧＦ（ヒト表皮成長因子）が補われるＨＣＡＳＭＣ基本培地
３．Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（ヨーロッパ）のゲルダナマイシン
４．無水メタノール
５．２４ウェルポリスチレン組織培養皿
Ｂ．ヒト冠状動脈平滑筋細胞増殖阻害の試験
［００９８］ヒト冠状動脈平滑筋細胞（ＨＣＡＳＭＣ）が、２４ウェルのポリスチレン組織培養皿に、１ウェル当たり５×１０３個の細胞の密度で接種された。２つの異なる給餌方法及び読取り方法が使用された。方法１：細胞が、種々の濃度のゲルダナマイシン（表１参照）を含む細胞培養基で平板培養され、３７℃で４８時間培養された。最初の４８時間の培養後、ゲルダナマイシンを含む培養基が取り替えられ、薬剤のない培養基が細胞に供給され、更に４８時間培養された後に読み取られた。
【００８８】
［００９９］方法２：細胞が、種々の濃度のゲルダナマイシン（表１参照）を含む細胞培養基で平板培養され、３７℃で４８時間培養された。最初の４８時間の培養後、ゲルダナマイシンを含む培養基が取り替えられ、ゲルダナマイシンを含む培養基が細胞に供給され、更に４８時間培養された後に読み取られた。
【００８９】
［０１００］ゲルダナマイシン原液０．５ｍｇ／ｍｌが無水メタノール中に調製され、細胞培養基中で以下の最終実験濃度まで希釈された。
【００９０】
【表１】
2006507021.tif 000004
［０１０１］４日目に培養物が分析されて、ゲルダナマイシンの増殖阻害効果が判定された。図６及び７は、両方の細胞培養方法について０．１ｎＭ〜１００ｎＭのゲルダナマイシンレベルでの阻害百分率をグラフで示す。図６及び７から、著しいＨＣＡＳＭＣ阻害（＞５０％阻害）は、０．９ｎＭの投与量で始まり、５０ｎＭでほぼ１００％まで劇的に上昇することが見て取れる。
【実施例７】
【００９１】
被覆ステントからのゲルダナマイシンの薬剤溶出プロファイル
［０１０２］限定されないが、ＭｅｄｔｒｏｎｉｃＡＶＥ  Ｓ６７０、Ｓ６６０、及びＳ７等の血管ステントに、ゲルダナマイシンを含むポリマー被覆が設けられ、溶出プロファイルが判定された。
【００９２】
生体外薬剤溶出試験
Ａ．高速ゲルダナマイシン溶出用被覆
［０１０３］長さ１８．０ｍｍ×直径３．０ｍｍのステントに、前述した薬剤溶出用ポリマー被覆が設けられた。この実施例では、被覆が、ゲルダナマイシン１０重量％を含む、７５：２５のポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物から構成された。被覆されたステントは、３７℃に予熱された２ｍｌの溶出培養基（０．４％ＳＤＳを含む１０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ６）で培養された。溶出培地は、毎日回収され、予熱した２ｍｌの溶出培養基に取り替えられた。薬剤含有量が、ＨＰＬＣにより、Ｗａｔｅｒｓ  ＮｏｖａＰａｃｋ  Ｃ１８カラムでの水対アセトニトリルのグラジエントを使用し、３４０ｎｍの波長の紫外線で検出して、分析された。図８に示された溶出プロファイルは、「高速溶出」速度である。
【００９３】
Ｂ．低速ゲルダナマイシン溶出用被覆
［０１０４］別の生体外薬剤溶出実験では、長さ１８．０ｍｍ×口径３．０ｍｍのステントに、ゲルダナマイシン１０重量％を含む、８０：２０のポリブチルメタクリレート−ポリエチレンビニルアセテートポリマー混合物からなる薬剤溶出用ポリマー被覆が設けられた。被覆されたステントは、３７℃に予熱された２ｍｌの溶出培養基（０．４％ＳＤＳを含む１０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ６）で培養された。溶出培養基は、毎日回収され、予熱した２ｍｌの溶出培地に取り替えられた。薬剤含有量が、ＨＰＬＣにより、Ｗａｔｅｒｓ  ＮｏｖａＰａｃｋ  Ｃ１８カラムでの水対アセトニトリルのグラジエントを使用し、３４０ｎｍの波長の紫外線で検出して、分析された。図９に示された溶出プロファイルは、「低速溶出」速度である。
【００９４】
生体内薬剤溶出試験
［０１０５］生体内試験では、高速及び低速の両方のゲルダナマイシン溶出用被覆を有するステントが、前述したように準備された。被覆されたステントが、合計３３６時間、ウサギ腸骨（ｉｌｉａｃｓ）に植え込まれた。図１０に示す各時間点で、ウサギは安楽死させられて、ステントを留置した血管が除去され保存される。すべてのステントがすべての時間点から回収された後、各ステントの回りの組織が入念に除去され、残りの被覆がステント表面から剥がされるまで、ステントがジメチルスルホキサイド（ＤＭＳＯ）中で３７℃で培養された。前述したＨＰＬＣを使用して、ＤＭＳＯの薬剤含有量が分析された。ウサギ腸骨から除去された後に被覆に残る薬剤の濃度は、所与の時間点について生体内で溶出された薬剤の総量に反比例する。比較の目的で、生体内で使用されたステントと全く同様に準備されたステントが、前述したように溶出緩衝剤中で培養され、各時間点で生体内ステントと並行して実験される。
【００９５】
［０１０６］図１０は、生体内薬剤溶出プロファイルを、対応する生体外薬剤溶出プロファイルとグラフ上で比較している。生体内薬剤溶出プロファイルは、破線で示され、生体外薬剤溶出プロファイルは、実線で示される。「低速溶出速度」被覆を有するステントが、生体内試験については三角で、生体外実験については白四角で示される。「高速溶出速度」被覆は、生体内試験については菱形で、生体外実験については白丸で示される。
【００９６】
［０１０７］特別な指示のない限り、材料の量を表すすべての数と、本明細書及び特許請求の範囲で使用される分子量、反応条件等の特性が、すべての場合に「約」という語で修飾されるものと理解すべきである。したがって、逆の指示のない限り、以下の明細書及び添付の特許請求の範囲に記載された数値パラメータは、本発明により得られるよう求められる所望の特性に応じて変化可能な概算である。少なくとも、また、特許請求の範囲の等価物の原理の適用を制限しようとすることなく、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮して、通常の切上げ、切捨て技法を適用することにより、解釈されるべきである。本発明の広い範囲に記載された数値範囲及びパラメータが概算であるにもかかわらず、特定の実施例に記載された数値はできる限り正確に報告される。しかし、数値は、本来、実験測定値に見られる標準偏差から必ず生じるあるエラーを含む。
【００９７】
［０１０８］本発明について説明する文脈（特に頭記の特許請求の範囲の文脈）で使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という語、及び同様の指示対象は、本明細書中に特に指示がない限り、又は文脈と明らかに矛盾していない限り、単数と複数の両方を含むものと解釈すべきである。本明細書中の値の範囲の列挙は、単に範囲内に含まれる別々の値に個々に言及する略記方法の働きをするためのものである。本明細書中に特に指示がない限り、個々の値は、あたかも個々に本明細書中に列挙されているように、本明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載されたすべての方法は、本明細書中に特に指示がない限り、又は文脈と明らかに矛盾していない限り、任意の適切な順序で行うことができる。すべての実施例、又は本明細書中の例示的な言い回し（例えば「等」）の使用は、単に本発明をより明確にするためのものであり、別の形で特許請求されている本発明の範囲を限定するものではない。本明細書中のどの言い回しも、本発明の実施に必須の特許請求されていない要素を示すものと解釈すべきではない。
【００９８】
［０１０９］本明細書中に開示された本発明の代替要素又は代替形態の分類は、限定と解釈すべきではない。各群の構成部分を、個々に、又は本明細書中に見られる群の他の構成部分又は他の要素と組み合わせて言及し、特許請求することができる。群の１つ又は複数の構成部分を、利便性及び／又は特許性の理由の群に含むことができ、又はこの群から削除することができることが予想される。このような包含又は削除が発生するときに、明細書は、修正された群を含むものと考えられ、添付の特許請求の範囲で使用されるすべてのマーカッシュ群の記述を実現する。
【００９９】
［０１１０］本発明を実施する発明者らに公知の最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が、本明細書中に記載される。勿論、これらの好ましい実施形態の変形形態は、前述の説明を読めば、当業者に明らかになろう。発明者は、当業者がこのような変形形態を適宜使用することを期待しており、発明者らは、特に本明細書中に記載された以外の方法で、本発明が実施されることを意図している。したがって、本発明は、適用可能な法により許可されるように、添付の特許請求の範囲に列挙された主題のすべての修正及び等価物を含む。更に、本明細書中に特に指示がない限り、又は文脈と明らかに矛盾していない限り、すべての可能な変形形態における前述した要素の任意の組合せが、本明細書により包含される。
【０１００】
［０１１１］更に、本明細書全体を通して、特許及び印刷された刊行物に多数の言及がなされている。前述した引用文献及び印刷された刊行物の各々が、参照により本明細書中に完全に組み込まれている。
【０１０１】
［０１１２］最後に、本明細書中に開示された本発明の実施形態は、本発明の原理を例示するものであることを理解すべきである。使用可能な他の修正も、本発明の範囲に含まれる。このため、例として、限定ではなく、本発明の代替構成を本明細書中の教示に従って使用することができる。したがって、本発明は、図示され記載された通りのものに限定されない。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】本発明の再狭窄防止化合物を送付するのに使用される血管ステントを示す図である。
【図２】血管形成術に使用されるバルーンカテーテルアセンブリと、再狭窄の危険のある解剖学的内腔へのステントの部位特異的送付とを示す図である。
【図３】血管内カテーテルに軸が取り付けられた、本発明の原理による、後退位置（バルーン収縮）の注入カテーテルの針を示す図である。
【図４】血管を囲む外膜組織に物質を送付するときの、図３の用具の使用を示す図である。
【図５】血管を囲む外膜組織に物質を送付するときの、図３の用具の使用を示す図である。
【図６】ゲルダナマイシンがヒト冠状動脈平滑筋細胞（ＨＣＡＳＭＣ）増殖に与える４日間の効果を示すグラフである。
【図７】ＨＣＡＳＭＣ増殖の阻害百分率を、ゲルダナマイシン濃度（ｎＭ）の関数として示すグラフである。
【図８】ゲルダナマイシン被覆血管ステントの、生体外高速溶出プロファイルを示すグラフである。
【図９】ゲルダナマイシン被覆血管ステントの、生体外低速溶出プロファイルを示すグラフである。
【図１０】ゲルダナマイシン被覆ステントの生体外溶出プロファイルと、ゲルダナマイシン被覆ステントの生体内溶出プロファイルとを比較するグラフである。
【図１１】実験用ブタの近位ステント部分及び遠位ステント部分の組合せにおける、新生内膜厚さと損傷スコアとの相関を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【国際調査報告】
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