(57)【要約】本発明は、酸素剥奪に供された酸化的に適合性の細胞における、代謝完全性の復帰または保存において特に活性である新規フラノン誘導体に関する。フラノン誘導体およびその薬学的に受容可能な塩は、神経炎症、および神経変性障害に対する細胞保護的活性および保護的活性を有し；発作、脳虚血、心筋梗塞、心筋虚血、慢性心不全、炎症および他の酸化的ストレス関連状態、ならびにアルツハイマー病および老年痴呆の処置に有用であり；また、このような状態の処置のための薬学的処方物の製造にも有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2006502963.tif 000148
の化合物（単一の互変異性体、単一の立体異性体ならびに互変異性体および／または立体異性体の混合物を含む）、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩であって、
Ｒ１は：−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’；−ＣＨ２ＯＲ’’’；シアノ；必要に応じて置換された複素環式；必要に応じて置換された複素環式−アルキル；必要に応じて置換されたヘテロアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアラルキルであり；
Ｒ２は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環式；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；
Ｒ３は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環式；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；
Ｒ４は：水素；アルキル；アルキルカルボニル；（ポリ）アルコキシアルキレン；またはジアルコキシホスホリルオキシであり；
Ｘは：低級アルキレン；−Ｎ（Ｒ’）−；−Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；−Ｓ（Ｏ）２−；またはＸがＲ２と一緒になって、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２であり；
Ｙは：−Ｎ（Ｒ’）−；−Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；−Ｓ（Ｏ）２−；またはＹがＲ３と一緒になって、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２であり；
あるいはＸ−Ｒ２がＹ−Ｒ３と一緒になって、必要に応じて置換された脂肪族環もしくは芳香環を形成し；
Ｒ’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；ホスホリル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
Ｒ’’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
あるいはＲ’およびＲ’’が、これらが結合する原子と一緒になって、５〜７員の飽和または不飽和芳香環を形成し、必要に応じて、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子が組み込まれ、そして必要に応じて、低級アルキル、ハロ、シアノ、アルキルチオ、低級アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、およびオキソからなる基から選択される１つ以上の置換基で置換され；
Ｒ’’’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；アシル、必要に応じて置換されたシクロアルキル；ホスホリル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
ただし、該化合物は、４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニル−２−メタン−スルホニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルではなく、さらにＸが低級アルキレンであってＲ２が必要に応じて置換されたアルキルでない、
化合物。
【請求項２】
ＸおよびＹが、共に−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、および−Ｓ（Ｏ）２−から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸおよびＹが、共に−Ｓ−である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ４が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ４が水素である、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
請求項１に記載の化合物であって、ここで、Ｒ１が−ＣＨ２ＯＲ’’’；−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；そしてＲ’、Ｒ’’、およびＲ’’’が水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される、化合物。
【請求項７】
請求項２に記載の化合物であって、Ｒ１が−ＣＨ２ＯＲ’’’；−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；そしてＲ’、Ｒ’’、およびＲ’’’が水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される、化合物。
【請求項８】
請求項５に記載の化合物であって、Ｒ１が−ＣＨ２ＯＲ’’’；−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；そしてＲ’、Ｒ’’、およびＲ’’’が水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そしてＲ’が水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される、化合物。
【請求項９】
請求項２に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ３は同一であり、以下：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換されたヘテロアリール；および必要に応じて置換されたヘテロアラルキルから選択される、化合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ３は同一であり、以下：必要に応じて置換された（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル；必要に応じて置換された（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル；必要に応じて置換されたフェニル；必要に応じて置換されたナフタレニル；必要に応じて置換されたベンジル；必要に応じて置換された１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾチアゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾオキサゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾセレナゾール−２−イル；必要に応じて置換されたフラン−２−イル−低級アルキル；必要に応じて置換されたチアゾール−２−イル；必要に応じて置換された１Ｈ−イミダゾール−２−イル；必要に応じて置換されたピリジン−２−イル；必要に応じて置換されたピリミジン−２−イル；必要に応じて置換されたキノリニン−４−イル；必要に応じて置換された［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル；必要に応じて置換された２Ｈ−［１，２，４］−トリアゾール−３−イル；および必要に応じて置換された［１，３，４］チアジアゾール−２−イルから選択され；
そしてここで前記置換基は、（Ｃｌ〜Ｃ８）アルキル；（Ｃｌ〜Ｃ８）アルケニル；ハロゲン；ハロアルキル；アシル、スルホン酸；スルファニル；アミノ；１置換アミノまたは２置換アミノ；アリール；カルボキシ；カルボキシビニル；エステル；アミド、ヒドロキシ；およびアルコキシから選択される、化合物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ３は同一であり、以下：１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；ベンゾチアゾール−２−イル；５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イル；６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イル；ベンゾオキサゾール−２−イル；４−メトキシ−ベンジル；２，４−ジクロロベンジル；２−クロロ−６−フルオロ−ベンジル；５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イル；フラン−２−イルメチル；シクロヘキシル；ピリジン−４−イル；５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル；ピロリジン−１−カルボチオイル；４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニル；４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イル；４−メチル−ピリミジン−２−イル；およびピリミジン−２−イルから選択される、化合物。
【請求項１２】
ＸおよびＹが−Ｓ−である、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１３】
ＸおよびＹが−Ｓ−である、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の化合物であって、Ｒ’は−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり；Ｒ’は水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そしてＲ４は水素である、化合物。
【請求項１５】
請求項１３に記載の化合物であって、Ｒ１は−ＣＨ２ＯＲ’’’であり；Ｒ’’’は水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そしてＲ４は水素である、化合物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の化合物であって、Ｒ’は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；Ｒ’およびＲ’’は水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そしてＲ４は水素である、化合物。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物であって、Ｒ２およびＲ３が、必要に応じて置換されたジチア−シクロヘキセン；必要に応じて置換されたジチア−シクロヘプテン；または７，８−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−ジチア−ベンゾシクロヘプテンを形成し；そしてここで、前記置換基が、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、ハロゲン、またはオキソから選択される、化合物。
【請求項１８】
式ＩＩＩ：
【化２】
2006502963.tif 000149
の化合物（単一の互変異性体、単一の立体異性体ならびに互変異性体および／または立体異性体の混合物を含む）、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩であって、
Ｒ５は：−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ；−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ；−ＣＨ２ＯＲｄ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ；シアノ；必要に応じて置換された複素環式；または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
Ｒ６は：水素；−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ；−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ；−ＣＨ２ＯＲｄ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ；シアノ；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換され複素環式；必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアリール；
あるいはＲ５およびＲ６が、それらが結合する原子と一緒になって、必要に応じて置換された環を形成し；
Ｒ７は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環式；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；ただし、Ｒ６がアルキルである場合、Ｒ７は必要に応じて置換された複素環式、必要に応じて置換されたヘテロアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアラルキルであり；
あるいはＲ５およびＲ７が、それらが結合する原子と一緒になって、必要に応じて置換された複素環式環を形成し；
Ｒ８は：水素；アルキル；アルキルカルボニル；（ポリ）アルコキシアルキレン；またはジアルコキシホスホリルオキシであり；
Ｙ’は：−Ｎ（Ｒａ）−；Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；または−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒａは：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
Ｒｂは：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
あるいはＲａおよびＲｂが、それらが結合する原子と一緒になって、５〜７員の飽和または不飽和芳香環を形成し、必要に応じて、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を組み込み、そして必要に応じて、必要に応じて置換された低級アルキル、ハロ、シアノ、アルキルチオ、低級アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、およびオキソからなる基から選択される１つ以上の置換基で置換され；
Ｒｃは、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒｄは：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；アシル、必要に応じて置換されたシクロアルキル；または必要に応じて置換されたアリールである；
化合物。
【請求項１９】
Ｙ’が−Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；および−Ｓ（Ｏ）２−から選択される、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｙ’が−Ｓ−である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ８が水素である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ８が水素である、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
請求項２０に記載の化合物であって、Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；そしてＲａが水素；（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル；および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルから選択される、化合物。
【請求項２４】
請求項２０に記載の化合物であって、Ｒ６が水素または−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；そしてＲａが水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される、化合物。
【請求項２５】
請求項２３に記載の化合物であって、Ｒ６が水素または−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；そしてＲａが水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択される、化合物。
【請求項２６】
請求項２０に記載の化合物であって、Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、そしてＲｃが水素；（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル；およびアリールから選択される、化合物。
【請求項２７】
Ｒ６が水素である、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
請求項２０に記載の化合物であって、Ｒ７がベンジル；４−フルオロベンジル；１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；５−メチル−１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；ベンゾチアゾール−２−イル；５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イル；および４−フェニル−チアゾール−２−イルから選択される、化合物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の化合物であって、Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；Ｒａが水素；（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル；および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキルから選択され；そしてＲ６が水素である、化合物。
【請求項３０】
請求項２８に記載の化合物であって、Ｒ５およびＲ６が−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；Ｒａが水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そしてＲ６が水素である、化合物。
【請求項３１】
請求項２８に記載の化合物であって、Ｒ５が−Ｃ（Ｏ）ＲＣであり；Ｒｃが水素；（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル；またはアリールから選択され；そしてＲ６が水素である、化合物。
【請求項３２】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の少なくとも１つの治療有効量の化合物を含む薬学的処方物であって、少なくとも１つの薬学的に受容可能な賦形剤と混合されている、薬学的処方物。
【請求項３３】
医薬として使用するための、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項３４】
酸化的ストレスを特徴とする状態の処置または予防のための医薬の製造のための、請求項１〜３１のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物の使用。
【請求項３５】
前記状態が、発作；脳虚血；網膜虚血；術後性認知機能障害；末梢神経障害；脊髄損傷；頭部外傷；および外科的外傷から選択される、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記状態が、炎症性成分または自己免疫性成分を含む、請求項３４の使用。
【請求項３７】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の１つ以上の化合物の使用であって、神経炎症または神経変性疾患を特徴とする状態の処置または予防のための医薬の製造のための、使用。
【請求項３８】
前記状態が、アルツハイマー病および老年痴呆から選択される、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の１つ以上の有効量の化合物を投与する工程を包含する、酸化的ストレスを特徴とする状態に罹患した哺乳類の処置のための方法。
【請求項４０】
請求項３９に記載の方法であって、前記状態が、発作；脳虚血；網膜虚血；術後性認知機能障害；末梢神経障害；脊髄損傷；頭部外傷；および外科的外傷から選択される、方法。
【請求項４１】
前記状態が、炎症性成分または自己免疫性成分を含む、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記化合物が以下から選択される、請求項４１に記載の方法：
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−スルホ−エチルスルファニル）−２−（２−スルホ−エチルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステ；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル，塩酸塩；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキソ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【請求項４３】
前記化合物が以下から選択される、請求項４０に記載の方法：
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・３−（２，４−ジクロロベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【請求項４４】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載の有効量の化合物を投与する工程を包含する、神経炎症または神経変性疾患を特徴とする状態に罹患した哺乳類の処置のための方法。
【請求項４５】
前記状態が、アルツハイマー病および老年痴呆から選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記化合物が以下から選択される、請求項４４に記載の方法：
・３−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニル）−２−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（ベンゾチアゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−エトキシ−３−（１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【請求項４７】
上記明細書の発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、フラノン誘導体、特に、細胞保護的活性を有する誘導体（特に、ある種の３−ヒドロキシ−２−オン誘導体）に関する。本発明はまた、発作、心筋梗塞および慢性心不全ならびに代表的に細胞性酵素調節に応答性の他の酸化的ストレス関連状態を処置するための処方物および方法に関する。本発明はまた、神経炎症（ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、認知障害および神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病および老年痴呆）を処置するための処方物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
本発明は、本出願人らの先願である米国特許出願番号１０／１３８，９３７号および１０／１３８，０３２号に記載される一連のピルビン酸誘導体から、適切な条件下で形成される特定の新規フラノン誘導体を取り扱う。
【０００３】
フラノンは、以下の一般的構造を有する化合物である
【０００４】
【化３】
2006502963.tif 000002
。フラノン誘導体化組成物は、種々の有用性を有することが当該分野で公知である。例えば、米国特許第６，２９６，８８９号は、乳製品およびコーヒーの芳香香味（ａｒｏｍａ  ｆｌａｖｏｒ）増強を提供するための１−ノネン−３−オンと組み合わせての特定のフラノン化合物を使用を記載する。特定のフラノン（例えば、３，−（３，４−ジフルオロフェニル）−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン、３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノンおよび５，５−ジメチル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−３−（３−フルオロフェニル）−５Ｈ−フラン−２−オン）は、特定の炎症性状態を処置するのに有用なシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）インヒビターであることが示された（米国特許第５，４７４，９９５号、同第６，２３９，１７３号）。フラノン誘導体の有用性の多様性は、海洋構造物上での種々の海草、無脊椎動物および細菌の増殖を阻害し得る、海洋抗付着物剤（米国特許第６，０６０，０４６号）としての、オーストラリア赤海草Ｄｅｌｉｓｅａ  ｎｕｌｃｈａから単離された特定のハロゲン化フラノンの発見によってさらに示される。フラノン誘導体４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニル−２−メタンスルホニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル（ＣＡＳ登録番号２９９９２３−６１−８）は、とりわけ、ＩｎｔｅｒＢｉｏＳｃｒｅｅｎ  Ｌｔｄ．（Ｍｏｓｃｏｗ，Ｒｕｓｓｉａ−ｗｗｗ．ｉｂｓｃｒｅｅｎ．ｃｏｍ）の化合物ライブラリーからのスクリーニングのために利用可能である。
【０００５】
化合物４−ヒドロキシ−３−イソブチル−２−（３−メチル−ブチリル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステルの合成は、Ｔｒｏｇｏｌｏ，Ｃ．ら、Ａｎｎａｌｉ  ｄｉ  Ｃｈｉｍｉｃａ  ６２（１０），６７４−９２，（１９７２）に記載され、４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，３−ジペンチル−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの合成は、Ｈｏｆｆｍａｎ，Ｒ．Ｖ．ら、Ｊｏｕｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，６２（８）２４５８−２４６５，（１９９７）に記載される。ヒドロキシアルカノエートからの特定のフラノン誘導体の合成は、Ｓｔａｃｈ，Ｈ．，Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ（１９８７），７０（２），３６９−７４に記載される。
【０００６】
脳虚血または「発作」は、脳の全てまたは一部への血流の重篤な減少または停止をいう。脳虚血は、脳血管性閉塞、血栓塞栓障害、心不全および出血偶発症候が挙げられるがこれらに限定されない多くの原因または障害の結果として生じ得る。薬理学的介入は、初期障害の妥当な間隔以内に提供される場合、脳虚血後の大脳組織死を有意に減少し得ることが、いまや公知である。
【０００７】
アルツハイマー病（「ＡＤ」）は、ヒト中枢神経系の進行性疾患である。これは、初老期における痴呆、見当識障害、記憶喪失、言語障害、計算障害、または視覚空間見当識障害によって、および精神医学的発現によって示される。これは、脳のいくつかの領域におけるニューロンの変性と関連する。アルツハイマー病は、Ｐｒｉｃｅ，Ｄ．Ｌ．ら（Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍ．１４：Ｓ９−Ｓ１４（１９９１））；Ｐｏｌｌｗｅｉｎ，Ｐ．ら（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２０：６３−６８（１９９２））；Ｒｅｇｌａｎｄ，Ｂ．ら（Ｍｅｄ．Ｈｙｐｏｔｈ．３８：１１−１９（１９９２））およびＪｏｈｎｓｏｎ，Ｓ．Ａ．（Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ａｇｉｎｇ，第４巻，Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ，Ｍ．（編），Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，ＮＹ，１６３−１７０（１９９０））によって概説される。
【０００８】
本発明は、酸化的ストレスおよび／または炎症によって特徴付けられる状態に対する新規の治療を提供することへの要望、および特に、脳虚血の事象における神経的保護を提供することへの要望に取り組み、特に、虚血性傷害後、有意な期間（例えば、約５時間以上）の後に最初に投与される場合でも効果的な薬剤が所望される。本発明はまた、神経性炎症、認知障害、および／または神経変性障害（例えば、アルツハイマー病および老年痴呆）によって特徴付けられる状態に対する新規の治療を提供することへの要望に取り組む。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、酸素剥奪に供された酸化的に適合性の細胞における、代謝完全性の復帰または保存において特に活性である新規フラノン誘導体に関する。このようなフラノン誘導体は、酸化的ストレスによって特徴付けられる多くの状態の処置のための薬学的組成物の製造において、特に、虚血傷害後の有意な時間間隔で投与される場合でさえも、脳虚血の事象における神経的保護を提供することにおいて、有用である。特に、本発明の組成物は、限局性脳虚血の標準的実験モデルにおいて神経的保護を提供することによって示されるように、発作の処置において有用である。本発明の組成物はまた、神経性炎症、認知障害および神経変性疾患（例えば、脳血管疾患におけるニューロパシー、脳の外傷、脳性麻痺、癲癇、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンティングトン病、精神病（ｍｅｎｔａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ）（例えば、精神病（ｐｓｙｃｈｏｓｉｓ）、精神分裂病、鬱病）、パーキンソン病、フリードライヒ病、ダウン症候群、クロイツフェルト−ヤコブ症候群、アルツハイマー病、および老年痴呆）の処置において有用である。
【００１０】
本発明の組成物はまた、心筋虚血（心筋梗塞）ならびに酸化的ストレスおよび／または炎症によって特徴付けられる他の適応症（糖尿病、腎疾患、月経前症候群、喘息、心肺炎症性障害、慢性心不全、慢性関節リウマチ、筋疲労、間欠性跛行が挙げられるがこれらに限定されない）によって特徴付けられる他の適応症の処置において有用であり、そして移植のための同種移植片組織の保存のために有用である。
【００１１】
本発明は、以下の式によって示される化合物に関し：
【００１２】
【化４】
2006502963.tif 000003
ここで、Ｒ１は：−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’；−ＣＨ２ＯＲ’’’；シアノ；必要に応じて置換された複素環；必要に応じて置換された複素環−アルキル；必要に応じて置換されたヘテロアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアラルキルであり；
Ｒ２は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；
Ｒ３は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；
Ｒ４は：水素；アルキル；アルキルカルボニル；（ポリ）アルコキシアルキレン；またはジアルコキシホスホリルオキシ（または、容易に加水分解され、ＯＨ部分を提供する他の部分）であり；
Ｘは：低級アルキレン；−Ｎ（Ｒ’）−；−Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；−Ｓ（Ｏ）２−であるか；またはＸがＲ２と一緒になって、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２であり；
Ｙは：−Ｎ（Ｒ’）−；−Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；−Ｓ（Ｏ）２−であるか；またはＹがＲ３と一緒になって、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２であり；
あるいはＸ−Ｒ２がＹ−Ｒ３と一緒になって、必要に応じて置換された脂肪族環もしくは芳香環を形成し；
Ｒ’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；ホスホリル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
Ｒ’’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
あるいはＲ’およびＲ’’は、これらが結合する原子と一緒になり、５〜７員の飽和または不飽和の芳香環を形成し、必要に応じて、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１つ以上の付加的ヘテロ原子を組み込み、そして必要に応じて、必要に応じて置換された低級アルキル、ハロ、シアノ、アルキルチオ、低級アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、およびオキソからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換され；
Ｒ’’’は：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；アシル；ホスホリル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
この化合物は、互変異性体単独、立体異性体単独ならびに互変異性体および／または立体異性体の混合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩を含む。
【００１３】
１つの実施形態において、Ｒ４は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、または（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルカルボニルである。
【００１４】
Ｒ２および／またはＲ３が、天然または置換された、アミノ酸またはペプチドである別の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ３は、群：Ａｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、ＳｅｒおよびＴｈｒ、特に、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、ＧｌｕおよびＧｌｙから選択される。Ｒ２および／またはＲ３が、天然または置換された、ジペプチドまたはトリペプチド、特に、天然ペプチドであるこれらの化合物は、さらに好ましい。
【００１５】
さらに別の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ３は、必要に応じて置換されたヘテロアリール基またはヘテロアラルキル基であり、特に、必要に応じて置換される窒素含有ヘテロアリールであり、そして、特に、群：イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、チアジアゾール、オキサジアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾセレナゾール（ｂｅｎｚｏｓｅｌｅｎａｚｏｌ）、およびベンゾチアゾール、または必要に応じて置換されたヘテロアラルキル基、特に、必要に応じて置換されたフラニル−低級アルキル基から選択される。
【００１６】
さらに別の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ３は、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたシクロアルキルである。
【００１７】
別の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ３は、必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたアラルキル、好ましくは、必要に応じて置換されたフェニルまたはベンジルである。
【００１８】
前述の実施形態の各々において、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；−ＣＨ２ＯＲ’’’；または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；そしてＲ’、Ｒ’’、およびＲ’’’が、水素または（Ｃ１〜Ｃ８）低級アルキルであり、特に、Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’が水素または（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルであることが、さらに好ましい。
【００１９】
本発明の薬学的に受容可能な塩について、本発明のフラノン化合物のＴＥＡ塩、ＴＦＡ塩、ＨＣｌ塩、ＨＢｒ塩、ＭｓＯＨ塩、ＴｓＯＨ塩、ＡｃＯＨ塩およびＮａ塩が、現在好ましい。
【００２０】
前述の実施形態の各々において、ＸおよびＹが、同じであり、特に、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−であり、好ましくは、−Ｓ−であり；そして、特に、−Ｘ−Ｒ２および−Ｙ−Ｒ３が同じである化合物が、さらに好ましい。
【００２１】
本発明の別の実施形態は、式Ｉに従う化合物に関し、ここで、Ｘ−Ｒ２および／またはＹ−Ｒ３が、以下の式によって示され：
【００２２】
【化５】
2006502963.tif 000004
ここで、Ｒ２，１は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ２、−Ｓ−、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｒ２，２は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアラルキル、または必要に応じて置換されたアリル（特に、脂肪族置換基、芳香族置換基および環状アシル置換基が挙げられる）であり；
Ｒ２，３は、水素、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、または−ＣＨ２−Ｓ−（Ｒ２，３の各場合において、独立して選択される）であり；
Ｒ２，４は、水素、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、または−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｒ２，５は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または必要に応じて置換されたアリールであり；
Ｒ２，は、水素、必要に応じて置換されたアルキル、または必要に応じて置換されたアリール（Ｒ２，の各場合において、独立して選択される）であり；
ｋは、０、１または２であり；
ｍは、０、１または２であり；そして
ｎは、０、１、２または３であり；
Ｒ２，１、Ｒ２，３およびＲ２，４の少なくとも１つは、−ＣＨ２−Ｓ−である。
【００２３】
Ｘ−Ｒ２および／またはＹ−Ｒ３が、式ＩＩによって示される化合物の中で、以下の群から選択される置換基の化合物が好ましい：
Ｒ２，１は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ２，であり、ここで、Ｒ２，が、水素または低級アルキル、特にエチルであり；
Ｒ２，２は、水素であり；
Ｒ２，３は、−ＣＨ２−Ｓ−であり；
Ｒ２，４は、水素、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアラルキルであり；
Ｒ２，５は、水素または低級アルキル、特に水素であり；そして／あるいは
ｋ、ｍおよびｎは、それぞれ、０、２、１；１、０、１；または２、０、１である。
【００２４】
本発明の別の局面は、以下の式によって示される化合物に関する：
【００２５】
【化６】
2006502963.tif 000005
ここで、Ｒ５は：−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ；−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ；−ＣＨ２ＯＲｄ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ；シアノ；必要に応じて置換された複素環；または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
Ｒ６は：水素；−Ｃ（Ｏ）ＯＲａ；−Ｃ（Ｏ）ＮＲａＲｂ；−ＣＨ２ＯＲｄ；−Ｃ（Ｏ）Ｒｃ；シアノ；必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換され複素環；必要に応じて置換されたアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアリールであり；
あるいはＲ５およびＲ６は、これらが結合する原子と一緒になり、必要に応じて置換された環を形成し；
Ｒ７は：必要に応じて置換されたアルキル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；必要に応じて置換されたアリール；必要に応じて置換されたアラルキル；必要に応じて置換された複素環；必要に応じて置換されたヘテロアリール；必要に応じて置換されたヘテロアラルキル；必要に応じて置換されたヌクレオシド；必要に応じて置換されたアミノ酸；または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチドであり；ただし、Ｒ６がアルキルである場合、Ｒ７は必要に応じて置換された複素環、必要に応じて置換されたヘテロアリール、または必要に応じて置換されたヘテロアラルキルであり；
あるいはＲ５およびＲ７は、これらが結合する原子と一緒になり、必要に応じて置換された複素環式環を形成し；
Ｒ８は：水素；アルキル；アルキルカルボニル；（ポリ）アルコキシアルキレン；またはジアルコキシホスホリルオキシであり；
Ｙ’は：−Ｎ（Ｒａ）−；Ｓ−；−Ｓ（Ｏ）−；または−Ｓ（Ｏ）２−であり；
Ｒａは：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；アルキルエーテル；必要に応じて置換されたシクロアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
Ｒｂは：水素；アルケニル；必要に応じてアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
あるいはＲａおよびＲｂは、これらが結合する原子と一緒になり、５〜７員の飽和または不飽和の芳香環を形成し、必要に応じて、Ｎ、Ｏ、またはＳから選択される１つ以上の付加的ヘテロ原子を組み込み、そして必要に応じて、必要に応じて置換された低級アルキル、ハロ、シアノ、アルキルチオ、低級アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、およびオキソからなる群から選択される１つ以上の置換基で置換され；
Ｒｃは、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたアリールであり；そして
Ｒｄは：水素；アルケニル；必要に応じて置換されたアルキル；アシル、必要に応じて置換されたシクロアルキル；または必要に応じて置換されたアリールであり；
これらは、互変異性体単独、立体異性体単独ならびに互変異性体および／または立体異性体の混合物、ならびにそれらの薬学的に受容可能な塩を含む。
【００２６】
別の実施形態において、Ｒ７は、必要に応じて置換されたヘテロアリール基、特に、必要に応じて置換された窒素含有置換へテロアリールであり、そして、特に、イミダゾール；ピラゾール；トリアゾール；チアジアゾール；オキサジアゾール；ベンゾイミダゾール；ベンゾオキサゾール；ベンゾセレナゾール；およびベンゾチアゾールからなる群から選択される。
【００２７】
別の実施形態において、Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり；Ｒａは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、または（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルであり；そしてＲｃは、低級アルキルまたはアリールである。
【００２８】
別の実施形態において、Ｒ５は、ヘテロアリールであり、Ｒ６は、水素である。
【００２９】
別の好ましい実施形態において、Ｒ６は、水素または−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり；Ｒａは、水素または低級アルキル（Ｃ１〜Ｃ８）である。
【００３０】
別の好ましい実施形態において、Ｒ５およびＲ６は、環、特に、ピリミジン−２，４，６−トリオン環またはシクロヘキサノン環を形成する。
【００３１】
別の好ましい実施形態において、Ｒ５およびＲ７は、環を形成し、特に、Ｒ７がベンゾイミダゾールの場合、環は、３−メチル−チオモルホリン−３−オールであり、形成される化合物は、１，４−ジヒドロ−４−メチル−３ａ，４−ジヒドロ−３−オキサ−１０−チア−４ａ，９−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−２−オンである。
【００３２】
別の好ましい実施形態において、Ｒ８は、水素である。
【００３３】
前述の各々の実施形態において、Ｒ５が、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり；Ｒ６が、水素であり、Ｙ’が、−Ｓ−である化合物が、さらに好ましい。
【００３４】
別の局面において、本発明は、特に、前記金属が、二価の銅、マンガン、または亜鉛から選択され、特に、ここで、前記金属が、Ｃｕ２＋Ｃｌ２、Ｍｎ２＋Ｃｌ２、およびＺｎ２＋Ｃｌ２から選択される場合、金属と錯体を形成する式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物に関する。
【００３５】
別の局面において、本発明は、治療有効量の式Ｉもしくは式ＩＩＩの化合物を含む薬学的組成物または少なくとも１つの薬学的に受容可能な賦形剤と混合されたその薬学的に受容可能な塩に関する。式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物が、好ましい化合物から選択される薬学的混合物は、特に好ましい。
【００３６】
なお別の局面において、本発明は、哺乳動物における細胞性酵素調節に応答性である発作および／または他の酸化的ストレス関連状態（例えば、脳虚血、心筋梗塞および慢性心不全（特に、発作／脳虚血））を処置する必要がある哺乳動物に、治療有効量の式Ｉもしくは式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与することによって、これらを処置する方法に関する。処置の方法および処置のための薬学的組成物の製造における使用が特に好ましく、ここで、式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物が、好ましい化合物から選択され、特に、以下から選択される化合物から選択される：
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・３−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【００３７】
好ましい実施形態において、本発明は、発作、脳虚血、網膜虚血、外科手術後認知機能不全、末梢神経障害／神経障害性疼痛、脊髄傷害、頭部傷害および外科的外傷から選択される状態を処置する方法に関する。
【００３８】
別の好ましい実施形態において、本発明は、炎症性成分または自己免疫成分に関与する状態、特に、糖尿病、腎疾患、月経前症候群、喘息、慢性関節リウマチ、変形性関節症、筋疲労、過敏性腸疾患、炎症性腸疾患、および間欠性跛行が挙げられるがこれらに限定されない疾患を処置する方法に関する。処置の方法および処置のための薬学的組成物の製造における使用が特に好ましく、ここで、化合物は、好ましい化合物から選択され、特に、以下から選択される化合物から選択される：
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−スルホ−エチルスルファニル）−２−（２−スルホ−エチルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル，塩酸塩；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキソ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【００３９】
酸化的ストレスによって特徴付けられる別の群の疾患は、皮膚状態の群に含まれ、この疾患としては、有害な紫外線（ＵＶ）照射、ストレスおよび疲労のような傷害から生じる年齢関連損傷または傷害の防止あるいは年齢関連損傷または傷害に対する皮膚組織の保護および接触皮膚炎、皮膚刺激、皮膚色素化、乾癬、または挫瘡の処置が挙げられるがこれらに限定されない。
【００４０】
なお別の局面において、本発明は、神経性炎症、認知障害、および／または神経変性障害の処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の式Ｉもしくは式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を投与することによって、これらを処置する方法に関連する。処置の方法および処置のための薬学的組成物の製造における使用が特に好ましく、ここで、式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物は、好ましい化合物から選択され、特に、以下から選択される化合物から選択される：
・３−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニル）−２−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（ベンゾチアゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−エトキシ−３−（１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【００４１】
本発明の特定の実施形態は、種々の発明の式からのペンダント置換基の、新規の組み合わせおよび好ましい組み合わせを提供する。
【００４２】
化合物４−ヒドロキシ−３−メタンスルホニル−２−メタンスルホニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルは、本発明の物質の組成物から除外される（が、例えば、使用の方法および薬学的処方物からは、除外されない）。
【００４３】
（発明の詳細な説明）
（定義）
本明細書中で使用される場合、以下の語および句は、一般に以下に示す意味を有すると意図され、これらが用いられる文脈が他のように示す程度を除外する。
【００４４】
用語「任意の」または「必要に応じて」は、続いて記載される事象または状況が、生じても生じなくてもよいこと、そしてこの記載が、上記の事象または状況が生じる場合およびそれが生じない場合を含むことを意味する。例えば、「必要に応じて置換されたアルキル」は、以下に規定されるような「アルキル」または「置換アルキル」のいずれかを意味する。このような基が立体的に実際的でなく、および／または合成的に実行不可能な任意の置換または置換パタ−ンを導入するよう意図されないことが、１つ以上の置換基を含む任意の基に関して、当業者に理解される。
【００４５】
特定の化合物、反応物、または反応パラメータの略語が、以下の様に規定される：
「ＤＣＭ」は、ジクロロメタンまたはメチレンクロライドをいう。
【００４６】
「ＤＭＦ」は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドをいう。
【００４７】
「Ｅｑ．」は、当量をいう。
【００４８】
「ＭｅＯＨ」は、メタノ−ルをいう。
【００４９】
「ＴＦＡ」は、トリフルオロ酢酸をいう。
【００５０】
用語「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたシクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアルケニル）、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたシクロアルケニル）、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアリ−ル）、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロアリ−ル）および−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）基をいう。
【００５１】
用語「アシルオキシ」は、例えば、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−アルキルを含む、−Ｏ−アシル部分をいう。
【００５２】
用語「アルコキシ」は、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルケニル、−Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−シクロアルケニル、および−Ｏ−アルキニル基をいう。好ましいアルコキシとしては、−Ｏ−アルキルが挙げられ、そして例としてメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシなどが挙げられる。
【００５３】
用語「置換アルコキシ」は、−Ｏ−（置換アルキル）、−Ｏ−（置換アルケニル）、−Ｏ−（置換シクロアルキル）、−Ｏ−（置換シクロアルケニル）、−Ｏ−（置換アルキニル）および−Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキレン）−アルコキシ基をいう。
【００５４】
用語「アルキル」は、好ましくは約１〜２０炭素原子、より好ましくは１〜１０の炭素原子、さらにより好ましくは１〜６の炭素原子を有する、モノラジカルの分岐または非分岐鎖の飽和炭化水素鎖を指す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−デシル、テトラデシル基などのような群により例示される。
【００５５】
用語「置換アルキル」は、１以上（５まで、好ましくは３まで）の水素原子が、以下の群から独立して選択される置換基により置換されているアルキル基を指す：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアミノ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、スルファニル、およびスルホン酸。アルキルに対する好ましい任意の置換基の１つは、例えば２−ヒドロキシエチル、３−ヒドロキシプロピル、３−ヒドロキシブチル、４−ヒドロキシブチルなどのような、ヒドロキシアルキル基により例示されるヒドロキシ；例えば２，３−ジヒドロキシプロピル、３，４−ジヒドロキシブチル、２，４−ジヒドロキシブチルなどのような、ジヒドロキシアルキル基（グリコール）；ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびポリブチレングリコールなどとして公知の化合物である。
【００５６】
用語「アルキレン」は、上に規定されるモノラジカル、アルキル由来のジラジカルをいう。この用語は、例えばメチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレン異性体［例えば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−］などのような群により例示される。
【００５７】
用語「置換アルキレン」は、上に規定されるモノラジカル、置換アルキル由来のジラジカルをいう。置換アルキレンの例には、クロロメチレン（−ＣＨ（Ｃｌ）−）、アミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２−）、メチルアミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨＭｅ）ＣＨ２−）、２−カルボキシプロピレン異性体（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２−）、エトキシエチレン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）、エチル（Ｎ−メチル）アミノエチレン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−）、１−エトキシ−２−（２−エトキシ−エトキシ）エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−）などがある。
【００５８】
用語「アミノ」は、−ＮＨ２基をいう。
【００５９】
用語「置換アミノ」は、各Ｒが、独立して以下の群から選択される−ＮＨＲまたはＮＲＲ基をいう：必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換アリール、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、アシル、必要に応じて置換されたアルコキシ、カルボキシおよびアルコキシカルボニル。
【００６０】
用語「アミノ酸」または「天然のアミノ酸」は、他に指定されることがなければ（グリシンのようなアキラルなアミノ酸を除く）、一般にペプチド分野において受け入れられ、２０の一般的なアミノ酸をいい、Ｌ−アミノ酸を表す。
用語「置換アミノ酸」は、通常はそのアミノ酸の部分ではない１つ以上の追加の化学的部分を含むアミノ酸を言う。このような置換基は、選択された側鎖または末端残基と反応し得、かつ当該分野で受け入れられた他の方法を介する標的化誘導（ｄｅｒｉｖｉａｔｉｚｉｎｇ）剤により導入され得る。例えば、システイン残基は、最も一般的に、クロロ酢酸またはクロロアセトアミドのようなα−ハロアセテート（および対応するアミン）と反応して、カルボキシメチル誘導体またはカルボキシアミドメチル誘導体を得る。システイニル残基はまた、ブロモトリフルオロアセトン、α−ブロモ−β−（５−イミドゾイル）プロピオン酸、クロロアセチルホスフェート、Ｎ−アルキルマレイミド、３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィド、メチル２−ピリジルジスルフィド、ｐ−クロロマーキュリベンゾエート（ｃｈｌｏｒｏｍｅｒｃｕｒｉｂｅｎｚｏａｔｅ）、２−クロロマーキュリ−４−ニトロフェノール、またはクロロ−７−ニトロベンゾ−２−オキサ−１，３−ジアゾールとの反応により誘導される。カルボキシル側鎖（ｓｉｄｅ  ｇｒｏｕｐ）（アスパルチルまたはグルタミル）が、例えば、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリニル−（４−エチル）カルボジイミド）または１−エチル−３（４  アゾニア４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミドのようなカルビジイミド（Ｒ’−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｒ’）との反応により選択的に改変される。さらに、アスパルチル残基およびグルタミル残基が、アンモニウムイオンとの反応によりアスパラギニル残基およびグルタミニル残基に変換される。グルタミニル残基およびアスパラギニル残基は、しばしば対応するグルタミル残基およびアスパラチル残基へと脱アミド化される。あるいは、これらの残基は、穏やかな酸性条件下で脱アミド化される。他の改変体としては、プロリンおよびリジンのヒドロキシル化、セリン（ｓｅｒｙｌ）またはトレオニン（ｔｈｅｏｎｙｌ）残基のヒドロキシル基のリン酸化反応、リジン、アルギニンおよびヒスチジン側鎖のα−アミノ基のメチル化（例えば、Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌｅ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、７９−８６頁（１９８３））、Ｎ−末端アミンのアセチル化、およびいくつかの例において、Ｃ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。
用語「芳香族」は、共役不飽和（４ｎ＋２）π電子系（ここでｎは正の整数）を有するサイクリック部分またはポリサイクリック部分をいい、時々非局在化したπ電子系をいう。
【００６１】
用語「アリール」は、単一の環（例えば、フェニル）または複数の縮合（ヒューズド）環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する６〜２０の炭素原子からなる芳香族環状炭化水素基をいう。好ましくは、アリールは、フェニル、ナフチルなどを含む。
【００６２】
用語「置喚アリール」は、上で規定されるようなアリール基をいい、アリール置換基に対する定義により他のように制約されない限り、１〜５の置換基、好ましくは１〜３の置換基から置換され、その置換基は、以下からなる基から独立して選択される：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、スルファニル、およびスルホン酸。好ましいアリール置換基としては、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ハロ、シアノ、ニトロ、トリハロメチル、カルボキシアルケニル、およびスルフィニルが挙げられる。
【００６３】
用語「アリールオキシ」は、−Ｏ−アリール基をいう。
【００６４】
用語「置換アリールオキシ」は、−Ｏ−（置喚アリール）基をいう。
【００６５】
用語「アラルキル」は、「−アルキレン−アリール」（各々が、本明細書中で規定する意味を有する）部分をいう。このようなアラルキル基は、ベンジル、フェネチル、３−ナフチルプロピルなどにより例示される。
【００６６】
用語「置換アラルキル」は、「−（必要に応じて置換されたアルキレン（ａｋｌｙｌｅｎｅ）−（必要に応じて置換されたアリール））（各々が、本明細書中で規定する意味を有する）部分をいい、ここで少なくとも１つのアリール基またはアルキレン基が、置換される（例えば、４−（Ｎ−メチルピロリル）ペンチレン）。
【００６７】
用語「カルボニル」は、ジラジカル「−Ｃ（＝Ｏ）−」をいい、これはまた、「−Ｃ（Ｏ）−」として例示される。
【００６８】
用語「（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル」は、以下の基をいう：−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたシクロアルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルケニル）、および−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（必要に応じて置換されたアルキニル）。これらの部分はまた、エステルともいわれる。  
【００６９】
用語「（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル」は、−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアミノ）基をいう。この部分はまた、第１級カルボキサミド、第２級カルボキサミドまたは第３級カルボキサミドともいわれる。
【００７０】
用語「（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニルオキシ」は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアミノ）基をいう。
【００７１】
用語「カルボキシ」または「カルボキシル」は、「−Ｃ（Ｏ）ＯＨ」部分をいい、これはまた、「−ＣＯＯＨ」として例示される。
【００７２】
用語「認知障害」は、忘却、混乱、記憶喪失、注意および記憶の欠損、行動および関連障害、無為、興味喪失、情動障害、および／またはある場合、個人的心労の症状により一般に特徴付けられる障害をいう。これらの症状は、一般的な加齢プロセスおよび／または器質脳疾患、脳血管疾患、頭部外傷、または発達欠陥もしくは遺伝子欠陥の結果として生じ得る。認知障害としては、アルツハイマー病、老人性痴呆症、不安、ＨＩＶ関連痴呆、糖尿病ニューロパシー；鬱病；パーキンソン病；薬物依存症；薬物乱用；意識障害、睡眠障害、日周期障害、気分障害、癇癪；ダウン症；舞踏病またはハンティングトン病；ストレス関連身体障害；ピック病、フリードライヒ失調症、クロイツフェルト−ヤコブ病；パニック、恐怖またはストレスに関する障害が挙げられる。
【００７３】
用語「式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物」は、開示されるような本発明のフラノン誘導体、および／またはこのような化合物もしくはその金属錯体の薬学的に受容可能な塩を包含するよう意図される。さらに、本発明の化合物は、ケトおよびエノール互変体、個々の立体化学的異性体（置換基の選択から生じる）および互変体および／または異性体の混合物を含む。
【００７４】
用語「シクロアルキル」は、単一の環または複数の縮合環を有する約３〜４０（好ましくは約４〜１５）の炭素原子を有する非芳香族環状炭化水素基をいう。このようなシクロアルキル基としては、例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどのような単環構造またはアダマンタニルなどのような複素環式構造が挙げられる。
【００７５】
用語「置換シクロアルキル」は、以下からなる基から独立して選択される１〜５の置換基、そして好ましくは１〜３の置換基で置換されたシクロアルキル基をいう：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、スルファニル、およびスルホン酸。アルキル基で置換されるシクロアルキル環はまた、「アルキルシクロアルキル」といわれる。
【００７６】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードをいう。
【００７７】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１つの環内で、約１〜４０（好ましくは約３〜１５）の炭素原子を有する芳香族環状炭化水素基および約１〜１０のヘテロ原子（好ましくは、窒素、硫黄、セレン、リン、および／または酸素から選択される約１〜４のヘテロ原子）を有する芳香族環状炭化水素基をいう。このようなヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジルもしくはフリル）または複数の縮合環（例えば、インドリジニルまたはベンゾチエニル）を有し得る。好ましいヘテロアリールとしては、ピリジル、ピローリルおよびフリルが挙げられる。他の好ましいヘテロアリールとしては、イミダゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアジアゾール、オキソジアゾール、ピラゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾセレナゾール、およびベンゾチアゾールが挙げられる。
【００７８】
用語「置喚ヘテロアリール」は、ヘテロアリール置換基についての定義により他のように制約されない限り、以下からなる基から独立して選択される１〜５の置換基、好ましくは１〜３の置換基で置換されており、上で規定されるようなヘテロアリール基をいう：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、スルファニル、およびスルホン酸。
【００７９】
用語「ヘテロアラルキル」は、「−アルキレン−ヘテロアリール」（各々が本明細書中で規定される意味を有する）部分をいう。
【００８０】
用語「置換ヘテロアラルキル」は、「−（必要に応じて置換されたアルキレン）−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）」（各々が本明細書中で規定される意味を有する）部分をいう。
【００８１】
用語「ヘテロアリールオキシ」は、−Ｏ−ヘテロアリール基をいう。
【００８２】
用語「ヘテロ環」、「ヘテロ環式」および「ヘテロシクリル」は、環内で、約１〜４０（好ましくは約３〜１５）の炭素原子、および約１〜１０のヘテロ原子（好ましくは、窒素、硫黄、リン、および／または酸素から選択される、約１〜４のヘテロ原子）を有するモノラジカルの飽和もしくは不飽和の、非芳香族環状炭化水素基をいう。このようなヘテロ環の基は、単一の環または複数の縮合環を有し得る。より好ましいヘテロ環としては、モルホリノ、ピペリジニルなどが挙げられる。
【００８３】
用語「置換ヘテロ環」、「置換ヘテロ環式」および「置換へテロシクリル」は、ヘテロ環置換基についての定義により他のように制約されない限り、以下からなる基から独立して選択される、１〜５の置換基、そして好ましくは１〜３の置換基から置換され、上で規定されるようなヘテロシクリル基をいう：＝Ｏ、＝Ｓ、アシル、アシルオキシ、必要に応じて置換されたアルケニル、必要に応じて置換されたアルコキシ、必要に応じて置換されたアルキル（例えば、トリハロメチル）、必要に応じて置換されたアルキニル、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアリールオキシ、アジド、カルボキシル、（必要に応じて置換されたアルコキシ）カルボニル、（必要に応じて置換されたアミノ）カルボニル、シアノ、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルケニル、ハロゲン、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアリールオキシ、必要に応じて置換されたヘテロシクリル、必要に応じて置換されたヘテロシクロキシ、ヒドロキシル、ニトロ、スルファニル、スルフィニル、スルファニル、およびスルホン酸。
【００８４】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、「−アルキレン−ヘテロ環」部分（各々が本明細書中で規定される意味を有する）をいう。
【００８５】
用語「置換ヘテロシクロアルキル」は、「−（必要に応じて置換されたアルキレン）−（必要に応じて置換されたヘテロ環）」部分（各々が本明細書中で規定される意味を有する）をいう。
【００８６】
用語「ヘテロシクロキシ」は、−Ｏ−ヘテロ環基をいう。
【００８７】
用語「炎症」、「炎症性状態」、または「炎症状態」としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：筋肉疲労、変形性関節症、関節リウマチ、炎症性腸症候群または障害、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎）、乾燥症、湿疹、酒さ、脂漏症、乾癬、アテローム性動脈硬化症、熱傷および放射傷、にきび、油性肌、皺、過剰セルライト、過剰孔径、固有の皮膚加齢、光加齢、写真損傷、有害なＵＶ損傷、角質化異常、レチノイド誘導刺激を含む刺激、多毛症、脱毛症、色素沈着異常、創傷に起因する炎症、瘢痕もしくは皮膚移植線条、弾性喪失、皮膚萎縮および歯肉炎。
【００８８】
用語「虚血」は、血管の機能的収縮または実際の閉塞に起因する器官または組織への血液欠乏をいう。発作としても知られる脳虚血は、脳の血管への血液および酸素の妨害または減少から通常生じる；よりまれには、これは出血の結果であり得る。発作の徴候としては、ただいくつかの名前を挙げると、麻痺、不明瞭言語、一般的な錯乱、歩行障害、つま先、足および脚にわたる皮質感覚喪失、ならびに尿失禁が挙げられる。心臓の構造異常に起因する心臓不整脈または疾患を含む多くの型の心臓疾患は、脳塞栓を生じ得る。リウマチ性弁膜疾患を含む、任意の原因からの心房細動が、脳の動脈へ移動し得る作り出されている塞栓を生じ得る。形成および塞栓移動は、動脈硬化心臓疾患および心筋梗塞の結果として生じ得る。塞栓形成はまた、心臓内手術および補綴バルブ置換に関する明確な危険である。心臓バイパス手術および血管形成は、脳の動脈中に移動し得、多くの動脈中の一連の閉塞を引き起こして、精神的障害を生じる、微小塞栓の形成を生じ得る。心臓塞栓はまた、人工心臓の移植における、主要な合併症である。さらに、任意の型の全身手術の後の脳卒中の全体的な危険は、０．２％〜１％である。急性および亜急性の細菌性心内膜炎の成長は、主な頭蓋内の動脈を閉塞し得る塞栓を生じ得る。虚血の危険がある集団は、冠状動脈バイパス移植手術（ＣＡＢＧ）について予定される患者、術後合併症の危険がある患者、クモ膜下出血（ＳＡＨ）を有する患者、第１のまたは第２の虚血性脳卒中を有する患者、急性の虚血脳卒中を有する患者、心肺蘇生術（ＣＰＲ）を受けている患者、一時的な葉摘手術を受けている患者、優位半球切除した患者、予防脳照射を受ける患者、神経学的欠損を有する閉鎖性頭部障害を有する患者、微小脈管多発脳梗塞性痴呆を有する患者、ホモ接合性およびヘテロ接合性ＭＥＬＡＳ（ミトコンドリアミオパシー、脳障害、ラクトアシドーシス、脳卒中）を持つ患者；アテローム性動脈硬化症もしくは進行性核上性麻痺疾患を有する患者、症候性のおよび無症候性のハンティングトン病を有する患者、新生児仮死を有する患者、髄膜炎もしくは脳炎を有する患者、疱疹後神経障害を有する患者、間欠性跛行を有する患者、脊髄損傷を有する患者、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）もしくはフリートライヒ運動失調を患う患者、糖尿病ニューロパシーを患う患者、または全身性疾患、癌腫、血管収縮（可逆性脳血管収縮（例えば、片頭痛、障害、特発疾患）を含む）、または静脈状態（脱水症、肺動脈塞栓症、頭蓋周囲感染、分娩後状態および術後状態ならびに器官系癌を含む）の後の凝固能亢進性状態と関連する疾患を有する患者を含むが、これに限定されない。
【００８９】
用語「神経変性障害」は、神経の欠失により特徴付けられる障害をいい、そして炎症性プロセスを含んでも含まなくてもよい。神経変性障害としては、脳卒中、頭部障害、脳低酸素症、脊髄損傷、老年痴呆、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、脳アミロイド血管症、ＨＩＶ関連痴呆症、パーキンソン病、ハンティングトン病、プリオン疾患、重症筋無力症、ダウン症、クロイツフェルト−ヤコブ病、糖尿病ニューロパシ−、ニューロパシー痛、脳炎、髄膜炎、およびデュセーヌ筋ジストロフィが挙げられる。
【００９０】
用語「神経炎症」または「神経炎症性疾患、神経炎症障害または神経炎症状態」は、死後の脳サンプルにおける多数の反応性小神経膠細胞により特徴付けられる疾患、障害または状態をいい、活性炎症性プロセスを示す（ＭｃＧｅｅｒ  Ｅ．Ｇ．およびＭｃＧｅｅｒ  Ｐ．Ｌ．、「Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ」Ｃａｌｎｅ  Ｄ．Ｂ．編、Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、１９９４：２７７−３００）。神経炎症は、脳損傷または自己免疫障害に応答して生じる炎症をいい、健康な神経組織および／または脳組織の破壊を引き起こすことが示されてきた。神経炎症は、広範な急性および慢性の神経変性障害（脳卒中、頭部障害、脳アミロイド血管症、ＨＩＶ関連痴呆症、ハンティングトン病、プリオン疾患、髄膜炎、ミエリン分解、ダウン症、虚血後脳損傷、脳障害、パーキンソン病、老年痴呆、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、および末梢神経系に関与する特定の障害（例えば、重症筋無力症およびデュセーヌ筋ジストロフィ））に関与する機構に関する。
【００９１】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」または「薬学的に受容可能な賦形剤」としては、任意および全ての、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが挙げられる。薬学的に活性な物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除いて、治療組成物におけるその使用が企図される。補助活性成分がまた、この組成物中に組み込まれ得る。
【００９２】
用語「薬学的に受容可能な塩」とは、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保持し、そして生物学的にもそれ以外にも望ましくない塩をいう。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基および／もしくはカルボキシル基またはそれらと類似の基の存在によって、酸性塩および／または塩基性塩を形成し得る。薬学的に受容可能な塩基付加塩は、無機塩基および有機塩基より調製され得る。無機塩基由来の塩としては、単なる例として、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基から誘導される塩としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：１級アミン、２級アミン、および３級アミン（例えば、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環式アミン、二複素環式アミン、三複素環式アミン、混合ジアミンおよび混合トリアミン（ここで、アミン上の少なくとも２つの置換基が、異なっており、そして、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環式などからなる群より選択される）を含むが、これらに限定されない。また、アミノ基の窒素と一緒になった２つまたは３つの置換基が複素環式基またはヘテロアリール基を形成するアミンも含まれる。
【００９３】
適切なアミノの特定の例としては、単なる例示として、以下が挙げられる：イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソプロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン（ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなど。
【００９４】
薬学的に受容可能な酸付加塩は、無機酸および有機酸から調製され得る。無機酸から誘導される塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの塩が挙げられる。有機酸から誘導される塩としては、以下が挙げられる：酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの塩。
【００９５】
用語「スルファニル」は、以下の基をいう：−Ｓ−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｓ−（必要に応じて置換されたアリール）、−Ｓ−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）、−Ｓ−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）。好ましいスルファニル基としては、例示として、メチルスルファニル（−ＳＣＨ３）、ｎ−（イソプロピルスルファニル）（−ＳＣＨ（ＣＨ３）２）などが挙げられる。
【００９６】
用語「スルフィニル」は、以下の基をいう：−Ｓ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｓ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたアリール）、−Ｓ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）、−Ｓ（Ｏ）−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）。
【００９７】
用語「スルホニル」は、以下の基をいう：−Ｓ（Ｏ２）−（必要に応じて置換されたアルキル）、−Ｓ（Ｏ２）−（必要に応じて置換されたアリール）、−Ｓ（Ｏ２）−（必要に応じて置換されたヘテロアリール）、−Ｓ（Ｏ２）−（必要に応じて置換されたヘテロシクリル）。
【００９８】
用語「スルホン酸」は、以下の基をいう：−Ｓ（Ｏ２）−ＯＨ。
【００９９】
用語「互変異性体」は、その構造が、原子の配列において顕著に異なり、しかし容易かつ迅速な平衡状態にて存在する化合物をいう。最も一般的な種類の互変異性は、水素の結合点が異なる構造を含む。当該分野で周知のように、本発明の化合物のような化合物における、３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン基は、ジヒドロフラン２，３−ジオン基と互変異性平衡にあり得る：
【０１００】
【化７】
2006502963.tif 000006
簡便のために、本発明の全ての化合物が、３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン形態を有することが示され、しかし両方の互変異性形態の化合物が、本発明の範囲内にあると意図されることが理解されるべきである。
【０１０１】
用語「治療有効量」とは、以下に規定されるような処置を必要とする哺乳動物に投与される場合に、そのような処置をもたらすのに十分である、式Ｉの化合物の量をいう。この治療有効量は、被験体および処置される疾患状態、被験体の体重および年齢、疾患状態の重篤度、選択される式Ｉまたは式ＩＩＩの特定の化合物、従うべき投薬レジメン、投与の時期、投与方法など（これらの全てが当業者に容易に決定され得る）に依存して、変動する。
【０１０２】
用語「処置」または「処置すること」とは、哺乳動物における疾患または障害の任意の処置を意味し、以下を包含する：
その疾患または障害に対して予防または保護すること、すなわち、その臨床状態を発症させないこと；
その疾患または障害を阻害すること、すなわち、臨床状態の発症を阻止または抑制すること；および／または
その疾患または障害を緩和すること、すなわち、臨床状態の退行を引き起こすこと。
ヒトの医療において、最終的に誘導される事象が未知で潜在性であり得るか、または患者がその事象の発現の充分後まで確認されないので、「予防」と「抑制」との間を区別することが常に可能であるわけではないことは、当業者によって理解される。従って、本明細書中で使用される場合、用語「予防」とは、本明細書中で規定されるような「予防」および「抑制」の両方を包含するように、「処置」の１要素として意図される。用語「保護」は、本明細書中で使用される場合、「予防」を含むように意味される。
【０１０３】
用語「有効量」は、処置される障害状態または疾患状態についての処置を提供するのに十分な投薬を意味する。これは、患者、疾患およびもたらされる処置に依存して変動する。
【０１０４】
（命名法）
本発明の化合物は、例えば、以下の式Ｉａ、Ｉｂ、ＩｃおよびＩｄを参照して、以下に記載されるように、命名および番号付けされる。
【０１０５】
【化８】
2006502963.tif 000007
式Ｉａは、式Ｉに従う化合物を表し、式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’は、エチルであり；Ｒ２およびＲ３は、各々、１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルであり；Ｒ４は、水素であり；Ｘは、硫黄であり、そしてＹは、硫黄である。この化合物は、立体配置を特定化することなく示される。式ｌａの化合物は、以下のように命名され得る：３−（５−クロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１０６】
【化９】
2006502963.tif 000008
式Ｉｂは、式Ｉの化合物を表す。式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’は、エチルであり；Ｒ２およびＲ３は、各々、２−アミノ−４−［１−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルカルバモイル］−酪酸であり；Ｒ４は、水素であり；Ｘは、硫黄であり、そしてＹは、硫黄である。この化合物は、立体配置を特定化することなく示される。式Ｉｂの化合物は、以下のように命名され得る：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸。式Ｉｂに対応する類似化合物（式中、ＸおよびＹは、各々、−Ｓ（Ｏ）２−である）は、以下のように命名され得る：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エタンスルホニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エタンスルホニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸。
【０１０７】
【化１０】
2006502963.tif 000009
式Ｉｃは、式Ｉの化合物を表し、式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’は、エチルであり；Ｒ４は、水素であり；ＸおよびＹは、硫黄であり、そしてＸ−Ｒ２は、Ｙ−Ｒ３と一緒になって、ヒドロキシメチル置換された脂肪族環を形成する。式Ｉｃの化合物は、以下のように命名される：３−ヒドロキシ−６−ヒドロキシメチル−２−オキソ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−１−オキサ−４，７−ジチア−アズレン−８ａ−カルボン酸エチルエステル。
【０１０８】
【化１１】
2006502963.tif 000010
式Ｉｄは、式Ｉに従う化合物を表す。式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’は、エチルであり；Ｒ２は、１Ｈ−ベンゾイミダゾールであり、Ｙは、Ｒ３と一緒になって、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２であり、式中、Ｒ’は、メチルであり；Ｒ４は、水素であり；そしてＸは、−Ｓ（Ｏ）−である。式Ｉｄの化合物は、以下のように命名され得る：２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ジメトキシ−ホスホリル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１０９】
一般に、本出願において使用される命名法を、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＳｏｆｔ  Ｃｏｒｐ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）による、ＣｈｅｍＯｆｆｉｃｅ（登録商標）バージョン６．０のプログラム内のＡＵＴＯＮＯＭＴＭネーミングパッケージのバージョン２．１を使用して、行った。
【０１１０】
（本発明の化合物の合成）
（合成反応パラメーター）
用語「溶媒」、「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」は、これらに関連して記載される反応条件下で不活性な溶媒を意味する。本発明の化合物の合成において用いられる溶媒としては、例えば、以下が挙げられる：メタノール、アセトン、水、アセトニトリル、１，４−ジオキサン、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、クロロホルム、塩化メチレン（すなわちジクロロメタン）、ジエチルエーテル、ピリジンなど、ならびにそれらの混合物。逆に指定しない限り、本発明の反応において使用される溶媒は、不活性な有機溶媒である。
【０１１１】
用語「ｑ．ｓ．」は、言及された機能を達成するのに十分な量（例えば、溶液を所望の容量（すなわち、１００％）にするのに十分な量）添加することを意味する。
【０１１２】
逆に指定しない限り、本明細書中に記載される反応は、０℃〜１１０℃（好ましくは、０℃〜２５℃；最も好ましくは「室温」または「周囲温度」（例えば、２０℃））の温度範囲内で大気圧にて生じる。さらに、他に指定しない限り、反応時間および反応条件は、概算（例えば、約０℃〜約１１０℃（好ましくは、約０℃〜約２５℃；最も好ましくは、約「室温」または「周囲温度」（例えば、約２０℃））の温度範囲内で、約１時間〜約１０時間（好ましくは約５時間）の期間にわたってほぼ大気圧で生じる）であることが意図される。実施例において与えられるパラメーターは、特定のものであって、概算のものではないことが意図される。
【０１１３】
本明細書中に記載される化合物および中間体の単離および精製は、所望の場合、任意の適切な分離手順または精製手順（例えば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくは厚層（ｔｈｉｃｋ−ｌａｙｅｒ）クロマトグラフィー、またはこれらの手順の組合せ）によってもたらされ得る。適切な分離手順および単離手順の特定の例示は、本明細書中以下の実施例を参照して行われ得る。しかし、非対称的な合成アプローチおよび他の等価な分離手順または単離手順もまた、もちろん使用され得る。
（反応スキームの簡単な説明）
反応スキーム１は、ピルベート誘導体間でのアルドール付加、およびその後の塩基の存在下での分子内環化反応による、式Ｉの化合物の合成を示す。
【０１１４】
反応スキーム２は、式Ｉの化合物の合成を示す。ここで、Ｘ−Ｒ２は、Ｙ−Ｒ３と一緒になって、必要に応じて置換された脂肪族環または芳香族環（ここで、ＸおよびＹは、−Ｓ−である）を形成する。
【０１１５】
反応スキーム３は、ピルベート誘導体と別の分子のカルボニル成分との間での塩基触媒化縮合による、式ＩＩＩの化合物の合成を示す。
（出発物質）
化合物であるエチル−３−ブロモピルベートは、例えば、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ、Ｗｉから市販されている。他の反応物も同様に、市販されているか、または一般に用いられる方法論を使用して、当業者によって容易に調製され得る。
【０１１６】
反応スキーム１の式１０１および１０２において用いられる出発物質は、同時係属中の米国出願番号１０／１３８、９３７および１０／１３８，０３２において記載されるように、ハロピルベート（好ましくは、エチル−３−ブロモピルベート）を、式Ｒ２−Ｘ−ＨまたはＲ３−Ｙ−Ｈ（式中、Ｒ２およびＲ３は、先に記載した意味を有し、そしてＸおよびＹは、−Ｎ（Ｒ’）−または−Ｓ−である）の前駆体と接触させることによって、調製される。このような出発物質としては、以下：
・アリール化合物、アラルキル化合物、ヘテロアリール化合物またはヘテロアラルキル化合物、
・ヌクレオシド、アミノ酸、ジペプチド、トリペプチドまたはテトラペプチド、
・アリール−アミン、アリール−チオール、アリール−スルファン、アリール−スルホン、
・アラルキル−アミン、アラルキル−チオール、アラルキル−スルファン、アラルキル−スルホン、
・ヘテロアリール−アミン、ヘテロアリール−チオール、ヘテロアリール−スルファン、ヘテロアリール−スルホン、あるいは、
・ヘテロアラルキル−アミン、ヘテロアラルキル−チオール、ヘテロアラルキル−スルファン、ヘテロアラルキル−スルホン、
が挙げられ、そしてこれらは、必要に応じて、有機塩基（例えば、第三級アミンまたはイミダゾール）の存在下において、適切な溶媒（例えば、メタノール、アセトン、水、アセトニトリル、１，４−ジオキサンまたはＤＭＦ）中で接触される。この反応は、０℃〜１１０℃（好ましくは、０℃〜２５℃）の温度にて、３０分〜１５時間（好ましくは、３〜５時間）生じ、この溶媒を除去し、単離しそして精製した後、式１０１または１０２の対応する生成物が得られる。当業者に周知の、さらなる単離工程および精製工程を行って、単一の立体異性体および／または互変異性体を提供し得る。ＸがＲ２と一緒になるかまたはＹがＲ３と一緒になって−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ’）２となる場合、ホスファイト（ｐｈｏｓｐｈｉｔｅ）前駆体（代表的には、トリアルキルホスファイト）は、ハロピルベートと接触される。
【０１１７】
【化１２】
2006502963.tif 000011
反応スキーム１の工程１において例示されるように、式１０１および１０２の２つの互変異性ピルベート誘導体間でのアルドール付加（式中、ＲａおよびＲｂは、低級アルキル（好ましくは、エチル）である）によって、式Ｉ／１０３の対応する環化フラノン誘導体が得られる。多くの式Ｉの化合物の合成において、基Ｘ−Ｒ２および基Ｙ−Ｒ３は、式１０１および１０２の同じピルベート誘導体であり、これは、（互変異性形態に関係なく）単一反応物として用いられる。式１０１のピルベート誘導体と１０２のピルベート誘導体との間でのアルドール付加（式中、Ｒ２およびＲ３は、キラル中心を含む）により、ジアステレオマーが生成される。Ｒ２およびＲ３がアキラルである場合、これは、ラセミ体混合物を生成し、得られる化合物は、フラノンの５位にて１つのキラル中心のみを有する。
【０１１８】
各場合において、反応スキーム１、工程１の生成物は、式Ｉに従う本発明の化合物の範囲内である。式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’（Ｒ’は、ＲａまたはＲｂに対応する低級アルキル基である）であり、そしてＲ４は、水素である。式Ｉの化合物（式中、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’（Ｒ’は、低級アルキル以外である）、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’もしくは−ＣＨ２ＯＲ’’’であるか、またはＲ４は、水素以外である）は、有機合成における当業者に周知の反応物および条件を使用して、反応スキーム１の工程１の後に例示されるように（例えば、Ｒ１低級アルキルエステルを、別のエステル、アミド、遊離酸、アルコールまたは類似の部分に転換することによって）、調製され得る。
【０１１９】
（反応スキーム２）
式Ｉの化合物（式中、Ｘ−Ｒ２はＹ−Ｒ３と一緒になって、必要に応じて置換された脂肪族環または芳香族環を形成する（ここで、ＸおよびＹは、同じ（例えば、−Ｓ−）である））は、例えば、反応スキーム２に関して以下に例示されるように、合成される。
【０１２０】
【化１３】
2006502963.tif 000012
【０１２１】
【化１４】
2006502963.tif 000013
反応スキーム２の工程１において例示されるように、必要に応じて置換された、式２０１のジチオール（式中、Ｒｃは、必要に応じて、低級アルキル、ヒドロキシ（低級アルキル）、スルホン酸（低級アルキル）、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’から選択される１個以上の置換基であるか、または必要に応じて置換された脂肪族環または芳香族環を表す）および式２０２１のハロピルベートを反応させて、式２０３の対応するジチオール架橋ジピルベート化合物が得られる。
【０１２２】
反応スキーム２、工程２において例示されるように、式２０３の化合物は、反応スキーム１の工程１において用いられるアルドール付加条件と同じ条件下で、式Ｉ／２０４の対応する化合物に環化される。
【０１２３】
【化１５】
2006502963.tif 000014
反応スキーム３において例示されるように、式３０１のピルベート（式中、Ｒａは、低級アルキル基、好ましくは、エチルである）と式３０２のカルボニル成分（式中、Ｒａ、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は、本明細書中で記載されるとおりである）との間での塩基触媒縮合によって、式ＩＩＩの対応する環化フラノン誘導体（式中、Ｒ８は、水素である）が得られる。式ＩＩＩの化合物（式中、Ｒ８は、水素以外である）は、当該分野で周知の方法によって、調製され得る。例えば、Ｒ８がアルキルカルボニルである化合物は、塩基の存在下におけるアルコール基のアセチル化によって調製され得る。
【０１２４】
（好ましいプロセスおよび最終工程）
本発明の化合物を生成するために好ましいプロセスは、実施例１〜３４の合成について例証されるとおりである。このプロセスは、ピルベート誘導体の調製、およびその後のアルドール付加および２個のピルベート誘導体間の環化を包含する。ピルベート前駆体の調製は、前出の米国出願第１０／１３８，９３７号および１０／１３８，０３２において、すでに例証されている。本発明において、式Ｉの化合物を調製するために好ましいプロセスは、アルドール付加、およびその後の、塩基の存在下におけるピルベート誘導体の互変体（すなわち、エノール形態およびケト形態）間の環化である。
【０１２５】
従って、１つの好ましい局面において、ピルベート誘導体は、塩基で処理される。
【０１２６】
別の好ましい局面において、環化フラノンジアステレオマーは、そのピルベート誘導体がキメラ中心を含む場合、逆相クロマトグラフィー方法を使用して、分離される。
【０１２７】
なお別の好ましい局面において、環化フラノンラセミ混合物は、そのピルベート誘導体がアキラル中心を含む場合、キラルカラムクロマトグラフィー方法を使用して、分離される。
【０１２８】
なお別の好ましい局面において、立体異性体は、１つの塩から別の塩に、または実施例において例証されるように塩を含まない実体からのいずれかから、種々の薬学的に受容可能な塩に転換される。
【０１２９】
式Ｉまたは式ＩＩＩの化合物を薬学的に受容可能な酸と接触させて、対応する酸付加塩を形成する。
【０１３０】
式Ｉまたは式ＩＩＩの薬学的に受容可能な酸付加塩を塩基と接触させて、式Ｉまたは式ＩＩＩの対応する遊離塩基を形成する。
【０１３１】
（好ましい化合物）
式Ｉおよび式ＩＩＩの化合物は、開示されるような、本発明のフラノン誘導体、および／またはそのような化合物の薬学的に受容可能な塩を包含する。さらに、本発明の化合物は、置換基の選択に起因して、個々の立体化学的異性体または互換異性体およびそれらの混合物を含む。
【０１３２】
式Ｉの置換基の以下の組み合わせおよび順列（それぞれ、優先度の高い順番に、部分集団化される）が、本発明の化合物、薬学的処方物、および製造方法および使用方法のために、好ましい。
【０１３３】
１．Ｘは、Ｙと同じである：
ａ．特に、ＸおよびＹは、−Ｓ−または−Ｓ（Ｏ）−であり、好ましくは、−Ｓ−である。
【０１３４】
ｉ．好ましくは、Ｒ４は、水素である。
【０１３５】
ｉｉ．好ましくは、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、そしてＲ’は、水素または低級アルキルである。
【０１３６】
ｉｉｉ．好ましくは、Ｒ２は、Ｒ３と同じである。
【０１３７】
・特に、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、必要に応じて置換されたアミノ酸または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチド、および、以下で好ましいとさらに記載されているものから選択される。
【０１３８】
２．Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’；−ＣＨ２ＯＲ’’’または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり、ここで、Ｒ’、Ｒ’’およびＲ’’’は、水素または低級アルキルである。
【０１３９】
ａ．好ましくは、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、ここで、Ｒ’は、水素または低級アルキルである。
【０１４０】
ｉ．特に、Ｒ４は、水素である。
【０１４１】
ｉｉ．特に、Ｒ２は、Ｒ３と同じである。
【０１４２】
１．特に、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、必要に応じて置換されたアミノ酸または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドもしくはテトラペプチド、および以下で好ましいとさらに記載されているものから選択される。
【０１４３】
３．Ｒ４は、水素である。
【０１４４】
４．Ｒ２は、Ｒ３と同じである：
ａ．特に、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキル、必要に応じて置換されたシクロアルキル、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、必要に応じて置換されたアミノ酸または必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドまたはテトラペプチドから選択される。
【０１４５】
ｉ．好ましくは、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたヘテロアリール、必要に応じて置換されたヘテロアラルキル、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたアラルキルである。
【０１４６】
・特に、必要に応じて置換されたヘテロアリールまたは必要に応じて置換されたヘテロアラルキルは、以下：必要に応じて置換された４−ピリジニル、必要に応じて置換された２−ピリジニル、必要に応じて置換された１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル、必要に応じて置換された１Ｈ−ベンゾチアゾール−２−イル、必要に応じて置換されたベンゾオキサゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾセレナゾール（ｂｅｎｓｅｌｅｎａｚｏｌ）−２−イル；必要に応じて置換された１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル、必要に応じて置換された２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル、必要に応じて置換された４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル、必要に応じて置換された［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル、必要に応じて置換された［１，２，４］チアジアゾール−５−イル、必要に応じて置換された［１，３，５］チアジアゾール−２−イル、必要に応じて置換された４，５−ジヒドロ−チアゾール−２−イル、必要に応じて置換された１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル、必要に応じて置換された１Ｈ−イミダゾール−２−イル、必要に応じて置換されたキノリン−４−イル、必要に応じて置換されたピリミジン−４−イル、必要に応じて置換されたピリミジン−２−イル、必要に応じて置換された２Ｈ−クロメン−７−イル、必要に応じて置換されたフラン−２−イル−低級アルキル、および必要に応じて置換された３，４−ジヒドロ−キナゾリン−２−イルから選択され、そしてここで、これらの置換基は、以下：（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルケニル、ハロゲン、ハロアルキル、アシル、スルホン酸、スルホニル、アミノ、一置換アミノもしくは二置換アミノ、アリール、カルボキシ、カルボキシビニル、エステル、アミド、ヒドロキシ、およびアルコキシから選択される。
【０１４７】
ａ．より好ましくは、必要に応じて置換されたヘテロアリールまたはヘテロアラルキルは、以下：必要に応じて置換されたベンジル；必要に応じて置換された１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾチアゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾオキサゾール−２−イル；必要に応じて置換されたベンゾセレナゾール（ｂｅｎｚｏｓｅｎｌｅｎａｚｏｌ）−２−イル；必要に応じて置換されたフラン−２−イル−低級アルキル；必要に応じて置換されたチアゾール−２−イル；必要に応じて置換された１Ｈ−イミダゾール−２−イル；必要に応じて置換されたピリジン−２−イル；必要に応じて置換されたピリミジン−２−イル；必要に応じて置換されたキノリニン−４−イル；必要に応じて置換された［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル；必要に応じて置換された２Ｈ−［１，２，４］−トリアゾール−３−イル；および必要に応じて置換された［１，３，４］チアジアゾール−２−イルから選択され；そしてこれらの置換基は、以下：（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルケニル、ハロゲン、ハロアルキル、アシル、スルホン酸、スルホニル、アミノ、一置換アミノもしくは二置換アミノ、アリール、カルボキシ、カルボキシビニル、エステル、アミド、ヒドロキシ、およびアルコキシから選択される。
【０１４８】
ｂ．最も好ましくは、１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；ベンゾチアゾール−２−イル；５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イル；６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イル；ベンゾオキサゾール−２−イル；５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イル；フラン−２−イルメチル；ピリジン−４−イル；５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル；ピロリジン−１−カルボチオイル；４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニル；４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イル；４−メチル−ピリミジン−２−イル；およびピリミジン−２−イルである。
【０１４９】
・特に、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’であり、Ｒ’は、水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そして、Ｒ４は、水素である。
【０１５０】
・特に、Ｒ１は、−ＣＨ２ＯＲ’’’であり；Ｒ’’’は、水素および（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そして、Ｒ４は、水素である。
【０１５１】
・特に、Ｒ１は、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’であり；Ｒ’およびＲ’’は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヒドロキシ（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルから選択され；そして、Ｒ４は、水素である。
【０１５２】
ｉｉ．好ましくは、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたジペプチド、トリペプチドまたはテトラペプチドである。
【０１５３】
特に、（４−アミノ−４−カルボキシブチリルアミノ−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルである。
【０１５４】
ｉｉｉ．好ましくは、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアルキルまたは必要に応じて置換されたシクロアルキルである。
【０１５５】
・特に、Ｒ２およびＲ３は、以下：（Ｃ３〜Ｃ８）シクロアルキル、ブチル、２−アセチルアミノ−２−メトキシカルボニル−エチル、３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピル、２−カルボキシ−２−イソブチリルアミノ−エチル、２−メトキシカルボニル−エチル、３−エトキシカルボニルメチル；メトキシカルボニルメチル、カルボキシメチル−カルバモイル−エチル、ジメチルチオカルバモイル、イソブチル、２−ヒドロキシ−１−メチル−プロピル、２，３−ジヒドロキシ−プロピル、およびアリルから選択される。
【０１５６】
ｉｖ．好ましくは、Ｒ２およびＲ３は、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたアラルキルであり、
１．特に、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたアラルキルは、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたナフチルまたは必要に応じて置換されたベンジルから選択される。
【０１５７】
ａ．より好ましくは、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換されたアラルキルは、以下：４−メトキシ−ベンジル；２，４−ジクロロ−ベンジル；２−クロロ−６−フルオロ−ベンジル；４−フルオロ−ベンジル；ベンジル；２−クロロ−フェニル；および２−クロロ−４−フルオロ−フェニルから選択される。
【０１５８】
５．Ｘ−Ｒ２は、Ｙ−Ｒ３と一緒になって、必要に応じて置換された脂肪族環および芳香族環を形成する。
【０１５９】
ａ．特に、必要に応じて置換されたジチア−シクロヘキセン、必要に応じて置換されたジチア−シクロヘプテン、７，８−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−ジチア−ベンゾシクロヘプテンであり、
ｉ．特に、１，４−ジクロロ−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−５，９−ジチア−ベンゾシクロヘプテン、２，３−ジメチル−［１，４］ジチエパン、または［１，３］ジチアン−２−チオンである。
【０１６０】
６．金属錯体であって、この金属は、二価の銅、マグネシウム、および亜鉛から選択される。
【０１６１】
ａ．特に、この金属は、Ｃｕ２＋Ｃｌ２、Ｍｎ２＋Ｃｌ２、およびＺｎ２＋Ｃｌ２から選択される。
【０１６２】
ｉ．特に、式Ｉの化合物との錯体であって、ここで、ＸＲ２およびＹＲ３は、両方が、ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルである。
【０１６３】
Ｘ−Ｒ２および／またはＹ−Ｒ３が式ＩＩで示される化合物のうち、好ましいのは、その置換基が以下の群から選択される化合物である：
・Ｒ２．１は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ’であり、ここでＲ’は、水素または低級アルキル（特にエチル）である；
・Ｒ２．２は、水素である；
・Ｒ２．３は、−ＣＨ２−Ｓ−である；
・Ｒ２．４は、水素、必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換されたアラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアラルキルである；
・Ｒ２．５は、水素または低級アルキル（特に水素）である；および／または
・ｋ、ｍおよびｎは、それぞれ、０、２、１；１、０、１；もしくは２、０、１である。
【０１６４】
本発明の化合物、薬学的処方物、製造方法および使用方法のために好ましいのは、式ＩＩＩの置換基群の以下の組み合わせおよび順列である（それぞれ、好ましさが増加する順序で部分集合化されている）：
１．Ｙ’は、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−または−Ｓ（Ｏ）２−である；特にここでＹ’は−Ｓ−である
ｉ．好ましくは、Ｒ７は、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたナフタレニル、必要に応じて置換されたベンジル、必要に応じて置換された１−Ｈ−ベンゾイミダゾール２−イル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾール−２−イル、必要に応じて置換されたベンゾオキサゾール−２−イル、必要に応じて置換されたフラン−２−イル−低級アルキル、必要に応じて置換されたチアゾール−２−イル、必要に応じて置換された１Ｈ−イミダゾール−２−イル、必要に応じて置換されたピリジン−２−イル、必要に応じて置換されたピリミジン−２−イル、必要に応じて置換されたキノリニン−４−イル；必要に応じて置換された［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル、必要に応じて置換された２Ｈ−［１，２，４］−トリアゾール−３−イルである。
【０１６５】
ａ．より好ましくは、Ｒ７は、ベンジル；４−フルオロベンジル；１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；５−メチル−１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；ベンゾチアゾール−２−イル；５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イル；および４−フェニル−チアゾール−２−イルから選択される
ｉｉ．好ましくは、Ｒ８は、水素である
ｉｉｉ．好ましくは、Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、Ｒａは、水素、（Ｃｌ−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルから選択され、そしてＲｃは、水素、（Ｃｌ−Ｃ８）アルキル、およびアリールから選択される
ａ．より好ましくは、Ｒ６は、水素または−Ｃ（Ｏ）ＯＲａであり、そしてＲａは、水素および（Ｃ１−Ｃ８）アルキルから選択される
ｉｖ．好ましくは、Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、そしてＲｃは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、およびアリールであり、そしてＲ６は、水素である。
【０１６６】
２．Ｒ５は、−Ｃ（Ｏ）ＯＲａまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒｃであり、そしてＲａは、水素、（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキルから選択され、そしてＲｃは、水素、（Ｃｌ−Ｃ８）アルキル、およびアリールから選択される
ｉ．特に、Ｒ８は水素である
ｉｉ．特に、Ｒ７は、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたナフタレニル、必要に応じて置換されたベンジル、必要に応じて置換された１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾール−２−イル、必要に応じて置換されたベンゾオキサゾール−２−イル、必要に応じて置換されたフラン−２−イル−低級アルキル、必要に応じて置換されたチアゾール−２−イル、必要に応じて置換された１Ｈ−イミダゾール−２−イル、必要に応じて置換されたピリジン−２−イル、必要に応じて置換されたピリミジン−２−イル、必要に応じて置換されたキノリニン−４−イル；必要に応じて置換された［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル、必要に応じて置換された２Ｈ−［１，２，４］−トリアゾール−３−イルから選択される
ａ．好ましくは、Ｒ７は、ベンジル；４−フルオロベンジル；１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；５−メチル−１−Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル；ベンゾチアゾール−２−イル；５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イル；および４−フェニル−チアゾール−２−イルから選択される。
【０１６７】
３．Ｒ５およびＲ６は、それらが結合する原子と一緒になって環を形成し、この環は、必要に応じてＮ、Ｏ、もしくはＳから選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を組み込み、かつ必要に応じて置換された低級アルキル、ハロ、カルボキシ、およびオキソからなる群より選択される１つ以上の置換基で置換される；
ａ．特に、ピリミジン２，４，６−トリオン環またはシクロヘキサノン環である。
【０１６８】
４．Ｒ５およびＲ７は、それらが結合する原子と一緒になって環を形成し、この環は、必要に応じてＮ、Ｏ、もしくはＳから選択される１つ以上のさらなるヘテロ原子を組み込み、かつ必要に応じて置換された低級アルキル、ハロ、カルボキシ、およびオキソからなる群より選択される１つ以上の置換基で置換される；
ａ．特に、３−メチル−チオモルホリン−３−オール環であり、そして形成される化合物は、１，４−ジヒドロ−４−メチル−３ａ，４−ジヒドロ−３−オキサ−１０−チア−４ａ，９−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−２−オンである。
【０１６９】
好ましい化合物としては、以下、ならびにその立体異性体、互変異性体、塩、および混合物が挙げられる：
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−１−オキサ−スピロ［４．５］デカ−３−エン−２，６−ジオン；
・メタンスルホン酸３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・３−［９−（３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル］−２−［９−（３，４−ジヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−テトラヒドロ−フラン−２−イル）−２−メチル−９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（２−メチル−プロパン−１−スルホニル）−２−（２−メチル−プロパン−１−スルホニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル）−２−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−２−メチル−３−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−（４−メチル−ピペラジン−１−カルボニル）−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（３−スルホ−プロピルスルファニル）−２−（３−スルホ−プロピルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−スルホ−エチルスルファニル）−２−（２−スルホ−エチルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル（塩酸塩として）；および
・３−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニル］−２−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１７０】
より好ましい化合物としては、以下、ならびにその立体異性体、互変異性体、塩、および混合物が挙げられる：
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−５−チアゾール−２−イル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−１−オキサ−７，９−ジアザ−スピロ［４．５］デカ−３−エン−２，６，８，１０−テトラオン；
・リン酸モノ−［３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチル］エステル；
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−１−オキサ−７，９−ジアザ−スピロ［４．５］デカ−３−エン−２，６，８，１０−テトラオン；
・２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−［４−（２−カルボキシ−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−カルボキシ−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・ジ−［２−（４−ヒドロキシ−５−オキソ−２−カルボン酸メチルエステル）］−ジスルフィド；
・４−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル）−２−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ヘキシルスルファニル−２−ヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
３−（２−ジエチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジエチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（２−メトキシカルボニル−エチルスルファニル）−２−（２−メトキシカルボニル−エチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−メトキシカルボニルメチルスルファニル−２−メトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−ｐ−トリルスルファニル−２−ｐ−トリルスルファニルメチル−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１７１】
最も好ましい化合物としては、以下、ならびにその立体異性体，互変異性体、塩、および混合物が挙げられる：
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−チアゾール−］−２−イル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド；
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−ベンゾイル−３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
ジメチルアミノ−酢酸３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチルエステル；
・４−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・４−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−５−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・５−アセチル−４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン；
・２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルホニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ベンジルスルファニル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−メチルスルファニル−２−メチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−２−オキソ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−１−オキサ−４，７−ジチア−アズレン−８ａ−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキシルエステル；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロペンチルスルファニル−２−シクロペンチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−イソブチルスルファニル−２−イソブチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（ナフタレン−２−イルスルファニル）−２−（ナフタレン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニル）−２−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−クロロ−フェニルスルファニル）−２−（２−クロロ−フェニルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキサ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（３−アミノ−［１，２，４］チアゾール−５−イルスルファニル）−２−（３−アミノ−［１，２，４］チアゾール−５−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エタンスルホニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エタンスルホニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・Ｒ−３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・Ｓ−３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・Ｒ−３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（２−アセチルアミノ−２−メトキシカルボニル−エチルスルファニル）−２−（２−アセチルアミノ−２−メトキシカルボニル−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル、および
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・（Ｓ）−３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・（Ｒ）−（３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１７２】
他の最も好ましい化合物としては、以下、ならびにその立体異性体、互変異性体、塩、および混合物が挙げられる：
・３−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニル）−２−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（４−フルオロ−ベンジルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・４−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニル）−２−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（ベンゾチアゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメタンスルフィニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−イソブチルオキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−エトキシカルボニルメチルスルファニル−２−エトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ブチルスルファニル−２−ブチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ベンジルスルファニル−２−ベンジルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−２−（４−メトキシ−フェニルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−エトキシ−３−（１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（１−オキシ−ピリジン−２−イルスルファニル）−２−（１−オキシ−ピリジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；および
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０１７３】
（有用性、試験および投与）
（一般的有用性）
本発明の化合物、多数の障害（特に、酸化的ストレスおよび／または炎症によって特徴付けられる障害）を処置する際に有用である。特に本発明の化合物は、脳虚血（最も頻繁には、血栓症、血管閉塞および塞栓症によって引き起こされる「脳卒中」）、心筋虚血（慢性安定狭心症、狭心症、不安定狭心症およびプリンツメタル狭心症、無症候性虚血、再梗塞、再閉塞、再狭窄、心筋梗塞および他の形態の心臓疾患）、糖尿病、腎臓疾患、月経前症候群、喘息、心肺炎症障害、慢性心不全、慢性関節リウマチ、筋肉疲労、刺激性腸症候群、炎症性腸疾患、間欠性跛行を処置する際に、および移植のための同種移植片組織の保存のために、使用され得る。本発明の化合物はまた、皮膚科学的状態の群に入る状態を処置する際、特に、皮膚組織の加齢性損傷または傷害（例えば、有害な紫外線（ＵＶ）放射線、ストレスおよび疲労）から生じる損傷の予防および防御の際、ならびに接触性皮膚炎、皮膚過敏、皮膚色素沈着、乾癬または挫瘡の処置の際に有用である。本発明の化合物はまた、神経炎症、認知、および神経変性と関連する多くの障害、特に、フリードライヒ失調症、癲癇、パーキンソン病、アルツハイマー病、および老人性痴呆症の処置において有用である。
【０１７４】
特定の理論または作用機構に同意することなく、本発明の化合物は、広範に種々の生理学的プロセスにわたって機能する「オキシドレダクターゼ」として公知の特定の酵素を標的化し得る。特に、オキシドレダクターゼは、一方の分子が酸化され、他方の分子が還元されて、一分子の水が、この反応に入るように、２つの分子が相互作用する反応を触媒する。いくつかの最も重要なオキシドレダクターゼとしては、例えば、リアーゼ、ラクターゼ、デヒドロゲナーゼ（ユビキノンを含む）、レダクターゼ、ペルオキシダーゼ、硝酸シンターゼ、コレステロールオキシダーゼ、アシル−コエンザイムＡデヒドロゲナーゼおよびレダクターゼ、ヒドロキシラーゼなどが挙げられる。これらの酵素は、消化、シグナル伝達、イオン恒常性の維持などのような必須のプロセスにおいて役割を果たす。オキシドレダクターゼの変化は、全ての既知のヒト遺伝病の３％程度の原因であると考えられる。上記の疾患および障害に加えて、オキシドレダクターゼ活性の異常は、欝血性心不全、呼吸鎖欠陥（例えば、呼吸鎖の酵素に関連する異常）、糖原病、慢性関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、慢性アルコール肝臓損傷（ＣＡＬＤ）、レフサム病（遺伝性ニューロパシー）、クローン病、イールズ病（周辺部脈管炎（ｐｅｒｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ））、プリオン病、ハンチントン舞踏病、白内障、多発性硬化症、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、ツェルヴェーガー症候群（ペルオキシソーム生物発生（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ  ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ））、多嚢胞性卵巣症候群、アルパーズ症候群（脳障害）、脂肪症／脂肪肝炎（ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ）、代謝症候群（ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、糖尿病、喘息、ファンコーニ貧血、網膜症、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、前子癇（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ）、胆汁うっ滞性肝臓病（ｃｈｏｌｅｓｔａｔｉｃ  ｌｉｖｅｒ  ｄｉｓｅａｓｅ）、末期腎臓病、クロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、および鎌状赤血球病のような障害が根底にあり得る。
【０１７５】
（試験）
この節は、本発明の組成物を含む組成物が、例えば、インビトロモデルおよび／またはインビボ動物モデルを使用してどのように選択され、そして例示的な適応症（すなわち、発作、慢性心不全、心筋梗塞およびアルツハイマー病）における治療的介入としてどのように使用されるかを記載する。
【０１７６】
脳に対する傷害（ｉｎｓｕｌｔ）（虚血のように、脳の血液供給を中断させるか、または低酸素（低い酸素）または無酸素（酸素無し）のように、脳の酸素供給を中断する）によって、細胞死を導くニューロン不均衡が急速にもたらされる（Ｆｌｙｎｎ，Ｃ．Ｊ．，ら，１９８９，Ｇ．Ｓｉｅｇｅｌら，（編），Ｂａｓｉｃ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）。種々の型の脳虚血に関するニューロン損傷および炎症を導く細胞機構および分子機構の研究は、インビボでのニューロンの代謝特徴を保持するインビトロモデル系（例えば、初代細胞培養物）を使用して実行され得る。このような細胞ベースのモデルの使用は、無酸素、低血糖症、興奮毒性、および反応性酸素種への曝露のような状態におけるニューロン死を導く生化学機構の同定において進歩を導いている。褐色細胞腫細胞株であるＰＣ１２のようなニューロン細胞株はまた、これらの細胞株において発現されるニューロン特異的タンパク質の構造および機能に対する酸化ストレスの影響を研究するための有用なモデルである。多くのニューロン細胞株が本当のニューロンの特性全てを発現するわけではないので、ここで、初代ニューロン培養物を、インタクトな脳で生じるプロセスを識別するインビトロモデルとして幅広く使用する。
【０１７７】
虚血のインビトロモデルは、例えば、ニューロン培養物を、大きな無酸素性または低酸素性チャンバに配置し、そして培養培地を脱酸素化規定イオン組成の培地と交換することによって、インビボ条件を模倣する酸素およびグルコース欠乏に近似させる。ニューロングルタミン酸レセプター（特に、Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプター）の毒性過剰刺激は、低酸素虚血ニューロン損傷（Ｃｈｏｉ，Ｄ．Ｍ．，１９８８，Ｎｅｕｒｏｎ  １：６２３−６３４）、反応性酸素種（ＲＯＳ）の虚血誘導（Ｗａｔｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．，ら，１９８８，Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，５９：２６９−２８１）、過剰なカルシウム流入（Ｇｒｏｔｔａ，Ｊ．Ｃ．，１９８８，Ｓｔｒｏｋｅ１９：４４７−４５４）、アラキドン酸増加（Ｓｉｅｓｊｏ，Ｂ．Ｋ．，１９８１，Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．１：１５５−１８６）およびＤＮＡ損傷（ＭａｃＭａｎｕｓ，Ｊ．Ｐ．，ら，１９９３，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，１６４：８９−９２）（それぞれが神経変性のカスケードをひきおこす）に寄与する。
【０１７８】
初代胚性海馬ニューロン細胞は、ニューロン機能のモデルにおいて有用であるとして幅広く認識されている。海馬は、一般に、中枢神経系（ＣＮＳ）ニューロンに代表的な十分に特徴付けられた特性を有する、比較的均一な集団の供給源のニューロンである。錐体ニューロン（海馬において主要な細胞型）は、全ニューロン集団の８５％〜９０％を占めると推定されている（ＢａｎｋｅｒおよびＧｏｓｌｉｎ，１９９８，Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ  Ｎｅｒｖｅ  Ｃｅｌｌｓ，第２版、Ｔｈｅ  ＭＩＴ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）。海馬はまた、長期増強のような、シナプス機能における活性依存性変化について顕著な能力を示す（Ｈａｗｋｉｎｓ  ＲＤ，Ｋａｎｄｅｌ  ＥＲ，Ｓｉｅｇｅｌｂａｕｍ  ＳＡ．（１９９３）Ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｔｏ  ｍｏｄｕｌａｔｅ  ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ  ｒｅｌｅａｓｅ：ｔｈｅｍｅｓ  ａｎｄ  ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｙｎａｐｔｉｃ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ［総説］，Ａｎｎ．Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１６：６２５−６６５．）。
【０１７９】
実施例に詳細に記載される方法に従って、本発明を支持して実施される実験において、無酸素／虚血を、海馬ニューロン細胞の初代培養物において誘導し、そして化合物を、細胞死を妨げるそれらの能力について試験した。次いで、このようなインビトロアッセイにおいて活性を有することが見出された特定の化合物を、大脳虚血（「発作」）の１つ以上の動物モデル（例えば、ラットにおける中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデル）においてさらに試験した。
【０１８０】
簡単に述べると、海馬ニューロンの初代培養物は、ニューロン保護における活性について化合物を試験するために使用される。海馬培養物は、代表的に、１８〜１９日目の胎仔ラットから調製される。この年齢において、錐体ニューロンの発生（約Ｅ１５においてラットで開始する）が基本的に完了する。この段階の脳組織は、比較的容易に解離し、髄膜は、容易に除去され、そしてグリア細胞の数は、依然として比較的中程度である（Ｐａｒｋ  ＬＣ，Ｃａｌｉｎｇａｓａｎ  ＮＹ，Ｕｃｈｉｄａ  Ｋ，Ｚｈａｎｇ  Ｈ，Ｇｉｂｓｏｎ  ＧＥ．（２０００）Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｅｌｉｃｉｔｓ  ｂｒａｉｎ  ｃｅｌｌ  ｔｙｐｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｃｅｌｌ  ｄｅａｔｈ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ  ７４（１）：１１４−１２４）。
【０１８１】
本発明の化合物の活性を評価するために、試験化合物を、実施例に詳細に記載されるように、１つ以上の標準的なストレッサー（低酸素を含む）に対して細胞を保護するその能力について評価する。一般的に、所望の治療化合物候補は、約１ｍＭ未満の濃度、より好ましくは約１００μＭ未満の濃度でこのモデルにおいて効果的である。効果的（有効）とは、このような化合物が、ストレッサー誘導死から、試験される細胞の少なくとも２０％、好ましくは３０％、より好ましくは、４０％、さらにより好ましくは５０％以上を保護することを意味する。例として、約１〜１０００μＭの範囲の濃度にわたって保護を提供する際に効果的である化合物は、インビボで神経保護を提供すると期待される。正確な値は、神経保護細胞アッセイが行われる特定の条件に依存して変化し得るので、本発明の化合物が効果的であるとみなされる絶対的な濃度を提供するよりもむしろ、引き続いて試験化合物を比較することに対する基準の形態で、ガイドラインとして上記基準を提供することが、本開示の意図である。代表的に、このようなインビトロ細胞系において神経保護性であることが見出される化合物は、次いで、神経保護のインビボ動物モデル（例えば、下記のラット中大脳動脈閉塞モデル、または当該分野で周知のモデルのような他の適切なモデル）においてさらに試験される。
【０１８２】
大脳虚血傷害は、頭蓋への血管または頭蓋内の血管を閉塞することによって、動物においてモデル化される（Ｍｏｌｉｎａｒｉ，Ｇ．Ｆ．，１９８６，Ｈ．Ｊ．Ｍ．Ｂａｒｎｅｔｔ，ら，（編）Ｓｔｒｏｋｅ：Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ，Ｖｏｌ．１，Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，ＮＹ）。ラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）モデルは、ヒト（例えば、発作を経験するヒト）における大脳虚血損傷に近似する一過性の限局性大脳虚血を誘導するための最も幅広く使用される技術のうちの１つである。このモデルにおいて虚血の引き金として使用される中大脳動脈は、ヒト発作において最も影響を受ける血管である。このモデルはまた、再灌流の期間（これは、代表的に、ヒト発作の犠牲者において生じる）を伴う。２時間の閉塞を含むＭＣＡＯは、２４時間の時点での死亡率の増加なしに得られ得る最大サイズの皮質梗塞を生成することが見出された。
【０１８３】
簡単に述べると、ナイロンフィラメントが、ラットの右頸動脈内に移植される。閉塞をもたらすために、ラットを麻酔し、そしてフィラメントを、内動脈および外動脈の分岐点から１８〜２０ｍｍ、内頸動脈へ進め、フィラメントの周りで縫合糸を２時間、きつく結紮する。２時間の閉塞後、動物を再び麻酔し、そしてフィラメントを除去して、実験の残りのために再灌流させる。試験薬物を、このプロセスの間、閉塞の前、閉塞の間、または閉塞後の任意のときに投与し得、種々の手段の１つ以上（限定しないが、脳室内（ＩＣＶ）注入、静脈内（ＩＶ）注入、腹腔内（ＩＰ）投与、ならびに腸内投与（例えば、胃管栄養法）が挙げられる）によって投与され得る。動物を、実施例に記載されるように、実験の間、正常温度に維持する。閉塞および再灌流後の所定の時間において、動物を屠殺し、そしてそれらの脳を取り出し、そして梗塞容積によって測定されるような、損傷の評価のために処理する。一般的に、化合物は、このモデルにおいて、これらが、ＩＣＶまたはＩＶで投与される場合、約１０ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは、１ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは、１００μｇ／ｋｇ未満、そしてさらにより好ましくは約１μｇ／ｋｇ未満である用量で、全梗塞容積の有意な減少を提供する場合、活性を有するとみなされる。全梗塞容積の有意な減少とは、コントロール値と比較して、少なくとも２０％、好ましくは、少なくとも３０％、より好ましくは、少なくとも４０％、そしてさらにより好ましくは、約５０％の減少を意味する。
【０１８４】
神経保護における効力のさらなる確証は、機能試験（例えば、握力試験またはロトロッド（ｒｏｔｏｒｏｄ）試験）を用いて評価され得る。神経保護を示す化合物を用いて処置された動物は、感覚運動機能の喪失を示す握力の有意な減少を示した未処置の動物と比較して、ＭＣＡＯ後に、それらのＭＣＡＯ前握力値を維持する。同様に、神経保護を示す化合物で処置された動物はまた、より高い脳レベルにおける感覚運動機能の喪失を示す、ロトロッドスコアの有意な減少を示した未処置の動物と比較して、ＭＣＡＯ後のそれらのＭＣＡＯ前ロトロッド活動スコアを維持した。
【０１８５】
同様に、筋細胞の初代培養物は、例えば、心筋虚血またはうっ血性心不全から生じる心臓損傷に対する保護を提供する能力についてインビトロで化合物を試験するために使用され得る。新生仔のラット由来の心筋細胞の調製は、実施例に記載される。このような細胞は、代表的に、心筋虚血の分子モデルを研究するために使用され（Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＫＡ，Ｄｉｓｃｈｅｒ，ＤＪ  ＆  Ｂｉｓｈｏｐｒｉｃ，ＮＨ．１９９５．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．２７：４５３−４５８；Ｃａｍｉｌｌｅｒｉ，Ｌ，Ｍｏｉｎｓ，Ｎ，Ｐａｐｏｎ，Ｊ，Ｍａｕｂｌａｎｔ，Ｊ，Ｂａｉｌｌｙ，Ｐ，ｄｅ  Ｒｉｂｅｒｏｌｌｅｓ，Ｃ  ＆  Ｖｅｙｒｅ，Ａ．１９９７．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．＆  Ｔｏｘｉｃｏｌ．１３：４３５−４４４；Ｂｉｅｌａｗｓｋａ，ＡＥ，Ｓｈａｐｉｒｏ，ＪＰ，Ｊｉａｎｇ，Ｌ，Ｍｅｌｋｏｎｙａｎ，ＨＳ，Ｐｉｏｔ，Ｃ，Ｗｏｌｆｅ，ＣＬ，Ｔｏｍｅｉ，ＬＤ，Ｈａｎｎｕｎ，ＹＡ  ＆  Ｕｍａｎｓｋｙ，ＳＲ．１９９７．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５１：１２５７−１２６３）、従って、心筋保護活性の指標として受容される。この目的のための例示的なストレッサーアッセイが、実施例に提供される。例えば、培養物中の心筋細胞は、収縮性（「拍動」）活性を示し；各心筋細胞の収縮は、「カルシウムトランジエント（ｃａｌｃｉｕｍ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ）」と呼ばれる細胞内カルシウムの上昇と関連する。これらのカルシウムトランジエントは、Ｆｌｕｏ−４（カルシウムが結合すると大きな蛍光強度の増加を示す蛍光色素）を使用して測定され得る。このアッセイは、細胞ベースであり、そして虚血損傷に対して保護し、かつ細胞にそれらの収縮機能を維持させる、潜在的な細胞保護分子の能力を試験する。
【０１８６】
化合物のさらなる確証は、器官全体アッセイ（例えば、心臓機能の単離された心臓（ランゲンドルフ）モデル）で実施され得る。同様に、化合物は、疾患（例えば、糖尿病、腎不全、喘息、筋肉疲労、炎症）のさらなる動物モデルにおいてさらに確証され得、これらの動物モデルは、当該分野において周知である。
【０１８７】
化合物の神経抗炎症活性のさらなる確証は、ミクログリア細胞株からのＩＬ−１β放出の阻害によって、インビトロで評価され得る。
【０１８８】
インターロイキン−１（ＩＬ−１）は、３０％  配列相同性を共有する２つの別個の形態（αおよびβ）にて存在する炎症促進性サイトカインである。ＩＬ−１の構成的発現は、脳においては低いが、このサイトカインの両方の形態のレベルは、傷害後に劇的に増大する。ＩＬ−１が、大脳虚血によって誘導される神経変性の重要なメディエーターであるという実質的な証拠が存在する（Ｔｏｕｚａｎｉ  Ｏら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ  １００：２０３−２１５，１９９９）。両方のＩＬ−１形態は、発作の実験的モデルにおいて迅速に誘導され、組換えＩＬ−１βの投与は、虚血性傷害を増強する（Ｈｉｌｌ  ＪＫ．ら，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  ８２０：４５−５４，１９９９，Ｈｉｌｌｈｏｕｓｅ  ＥＷら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ  ２４９：１７７−１７９，１９９８、Ｌｏｄｄｉｃｋ  ＳＡら，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  １６：９３２−９４０，１９９６、Ｓｔｒｏｅｍｅｒ  ＲＰら，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  １８：８３３−８３９，１９９８を参照のこと）。逆に、ＩＬ−１作用を、レセプターアンタゴニストまたは中和抗体でブロックすると、虚血損傷のモデルにおけるニューロン死および炎症が顕著に減少する（Ｂｅｔｚ  ＡＬ，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  １５：５４７−５５１，１９９５、Ｒｅｌｔｏｎ  ＪＫ，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ  Ｂｕｌｌ  ２９：２４３−２４６，１９９２、Ｙａｍａｓａｋｉ  Ｙら，Ｓｔｒｏｋｅ  ２６：６７６−６８０，１９９５を参照のこと）。さらに、ＩＬ−１β生成が減少したマウス（カスパーゼ−１ノックアウト）は、虚血性傷害から有意に保護され（Ｓｃｈｉｅｌｋｅ  ＧＰら，Ｊ  Ｃｅｒｅｂ  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ  １８：１８０−１８５，１９９８）、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの二重ノックアウトは、野生型マウスと比較して、劇的に減少した虚血性梗塞容積を示す（皮質において８７％減少）（Ｂｏｕｔｉｎ  Ｈら，Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  ２１：５５２８−５５３４，２００１）。
【０１８９】
虚血性損傷における役割に加えて、ＩＬ−１上昇は、多くの神経変性疾患と関連している。アルツハイマー病（ＡＤ）におけるＩＬ−１の役割についての証拠が増えつつある（Ｍｒａｋ  ＲＥら，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ａｇｉｎｇ  ２２（６）：９０３−９０８，２００１）。上昇したレベルのＩＬ−１βは、この疾患において、アミロイド斑を囲むことが示され、現在の遺伝的研究では、ＩＬ−１αの多型が、ＡＤの危険性の増加（３〜６倍増加）と関連することが示された（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＷＳら，Ｊ  Ｌｅｕｋｏｃ  Ｂｉｏｌ  ７２（２）：２３３−２３８，２００２）。この多型はまた、ＡＤ患者における認知低下の速度と相関した（Ｍｕｒｐｈｙ  ＧＭら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，５６（１１）１５９５−１５９７，２００１）。ＡＤの危険性は、ＩＬ−１αにおける多型が、ＩＬ−１βにおける別の多型と組み合わせて見いだされる場合に、よりさらに増大する（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ＷＳ，前出を参照のこと）。このことは、これらのサイトカインが、この疾患の病理において重要な役割を果たすという説得力のある証拠を提供する。
【０１９０】
このアッセイは、ＬＰＳおよびインターフェロン−γでの炎症性のチャレンジ後のマウスミクログリア細胞株からのＩＬ−１βの放出を測定する。試験物品が、ミクログリア細胞活性化およびＩＬ−１β放出を阻害する能力は、試験物品と炎症性チャレンジとの同時インキュベーションにより決定される。サイトカイン放出は、マウスＩＬ−１β  ＥＬＩＳＡを使用して測定され、細胞毒性は、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（細胞生存性を測定する蛍光色素）を用いて決定される。
【０１９１】
抗炎症性活性のインビボ評価は、カラゲナン誘導足浮腫を測定する十分に特徴付けられたアッセイ、および局所的アラキドン酸に対するマウス耳炎症応答によって決定され得る（Ｇａｂｏｒ，Ｍ．，Ｍｏｕｓｅ  Ｅａｒ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｍｏｄｅｌｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２０００）。カラゲナン誘導足浮腫は、炎症のモデルであり、これは、ラットの足の足底内表面へのカラゲナン投与に続く、時間依存性の浮腫の形成を引き起こす。マウスの耳へのアラキドン酸（ＡＡ）の適用は、即時の血管拡張および紅斑を生じ、続いて、浮腫の急激な発生を生じる（これは、４０〜６０分で最大である）。浮腫の発生は、タンパク質および白血球の管外遊出と同時である。１時間後、浮腫は急速に減少し、そして炎症細胞が組織を離れ、その結果、６時間で、耳は、ほぼ正常に回復する。それぞれ、実施例４２および４３に記載されるように、これらのアッセイは、投与の全身経路および局所経路を介してこれらの炎症性プロセスを処置する、試験化合物の能力を測定する。
【０１９２】
（投与）
式ＩまたはＩＩＩの化合物は、治療的有効投薬量（例えば、先に記載された疾患状態に対する処置を提供するのに十分な投薬量）で投与される。本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の投与は、類似の有用性を提供する薬剤についての投与の受容された様式のいずれかにより得る。
【０１９３】
ヒト投薬量レベルが本発明の化合物について最適化されなければならないものの、一般的に、毎日の用量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜２．０ｍｇ、好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．１〜１．５ｍｇ、そして最も好ましくは、体重１ｋｇ当たり約０．３〜１．０ｍｇである。従って、７０ｋｇのヒトへの投与について、投薬量範囲は、１日当たり約０．７〜１４０ｍｇ、好ましくは、１日当たり約７．０〜１０５ｍｇ、そして最も好ましくは、１日当たり約２１〜７０ｍｇである。投与される活性化合物の量は、もちろん、処置される被験体および疾患状態、苦痛の重篤度、投与の方法およびスケジュール、ならびに処方する医師の判断に依存する。
【０１９４】
上記状態の処置のために本発明の化合物を使用する際、薬学的に受容可能な投与の様式のいずれかが使用され得る。処方物ＩまたはＩＩＩの化合物は、単独でまたは薬学的に受容可能な賦形剤とともにのいずれかで、投与され得、これには、固体、半固体、液体またはエアロゾル投薬形態（例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、液体、懸濁剤、坐剤、エアロゾルなど）が挙げられる。式Ｉの化合物はまた、好ましくは、正確な投薬量の単回投与に適した単位投薬形態で、所定の速度での化合物の長期投与のために、持続放出または制御放出の投薬形態（蓄積注射、浸透圧ポンプ、丸剤、経皮（電気輸送を含む）パッチなどを含む）で投与され得る。組成物は、代表的に、従来の薬学的キャリアまたは賦形剤および式Ｉもしくは式ＩＩＩの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む。さらに、これらの組成物は、他の医療的薬剤、薬学的薬剤、キャリア、アジュバントなど（限定しないが、抗凝固剤、血餅溶解剤、透過性増強剤および徐放性処方物が挙げられる）を含み得る。
【０１９５】
一般的に、意図される投与の様式に依存して、薬学的に受容可能な組成物は、約０．１重量％〜９０重量％、好ましくは、約０．５重量％〜５０重量％の式ＩもしくはＩＩＩの化合物または塩を含み、残りは、適切な薬学的賦形剤、キャリアなどである。
【０１９６】
上で詳細に記載される状態のための投与の１つの好ましい方法は、苦痛の程度に従って調節され得る従来の毎日の投薬レジメンを使用する、経口である。このような経口投与のために、薬学的に受容可能な非毒性の組成物を、任意の通常使用される賦形剤（例えば、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石、セルロース、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、ゼラチン、スクロース、炭酸マグネシウムなど）のいずれかを混合することによって形成する。このような組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、分散性錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、徐放性処方物などの形態をとる。
【０１９７】
好ましくは、組成物は、丸剤または錠剤の形態を取り、従って、組成物は、活性成分とともに、ラクトース、スクロース、リン酸二カルシウムなどのような希釈剤；ステアリン酸マグネシウムなどのような滑沢剤；ならびにデンプン、アカシアガム、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、セルロースおよびこれらの誘導体のような結合剤などを含む。
【０１９８】
液体の薬学的に投与可能な組成物は、例えば、上記に規定される活性化合物および任意の薬学的アジュバントを、キャリア（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、グリセロール、グリコール、エタノールなど）中に溶解、分散などして、それによって、溶液または懸濁液を形成することによって、調製され得る。所望である場合、投与されるべき薬学的組成物はまた、最小量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤、乳化剤、または可溶化剤、ｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、シクロデキストリン誘導体、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンアセテート、トリエタノールアミンオレエートなど））を含み得る。このような投薬形態を調製する実際の方法は、当業者に公知であるか、または明らかである；例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，第１５版，１９７５を参照のこと。投与されるべき組成物または処方物は、いずれにしても、処置される被験体の症状を軽減するのに有効な量で、ある量の活性化合物を含む。
【０１９９】
０．００５％〜９５％の範囲の活性成分を含む投薬形態または組成物（残りは、非毒性キャリアから構成される）が調製され得る。
【０２００】
経口投与のために、薬学的に受容可能な非毒性組成物は、通常使用される賦形剤（例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、滑石、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石など）のいずれかの混合によって形成される。このような組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、カプセル剤、散剤、持続性処方物などの形態をとる。このような組成物は、０．０１％〜９５％の活性成分、好ましくは、０．１〜５０％の活性成分を含み得る。
【０２０１】
固体投薬形態のために、溶液または懸濁液（例えば、プロピレンカルボネート、植物油、またはトリグリセリド中）は、好ましくは、ゼラチンカプセル中にカプセル化される。このようなジエステル溶液、ならびにそれらの調製およびカプセル化は、米国特許第４，３２８，２４５号；同第４，４０９，２３９号；および同第４，４１０，５４５号に開示される。液体投薬形態について、溶液（例えば、ポリエチレングリコール中）は、投与のために容易に測定されるのに十分な量の薬学的に受容可能な液体キャリア（例えば、水）で希釈され得る。
【０２０２】
あるいは、液体または半固体の経口処方物は、活性化合物または塩を、植物油、グリコール、トリグリセリド、プロピレングリコールエステル（例えば、プロピレンカーボネート）など中に溶解または分散し、そしてこれらの溶液または懸濁液をハードゼラチンカプセルシェルまたはソフトゼラチンカプセルシェル中にカプセル化することによって調製され得る。
【０２０３】
他の有用な処方物としては、米国特許Ｒｅ．２８，８１９号および米国特許第４，３５８，６０３号に示される処方物が挙げられる。
【０２０４】
処方物は、連続処置のために、単回の単位投薬形態で投与され得るか、または症状の軽減が具体的に必要とされる場合、任意に、単回の単位投薬形態で投与され得る。例えば、処方物は、発作、心筋梗塞、または慢性心不全の症状の発症後に、ボーラスとして、または連続的な静脈内注入として投与され得る。
【０２０５】
投与の別の好ましい様式は、局所的投与である。「局所的投与」とは、皮膚の表面上への塗りつけ、噴霧などによる、本発明の組成物の適用をいう。適用される正確な量は、皮膚１平方センチメートル当たり約０．１ｍｇの組成物〜皮膚１平方センチメートル当たり約２５ｍｇの組成物までで変化し得る。本発明の化合物は、軟膏、クリーム剤もしくはローション剤として、または経皮パッチとして、皮膚に対する局所的投与のために処方され得る。口内に局所的に投与するために適した処方物としては、ロゼンジ、香錠およびマウスウォッシュが挙げられる。
【０２０６】
非経口投与は、一般的に、皮下、筋肉内または静脈内のいずれかでの、注射によって特徴付けられる。注射可能物は、従来の形式で、液体、溶液または懸濁液、注射の前に液体中の溶液または懸濁液に適切な固体形態、あるいはエマルジョンとしてのいずれかで調製され得る。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどである。さらに、所望である場合、投与されるべき薬学的組成物はまた、最小量の非毒性補助物質（例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝化剤、溶解性向上剤など（例えば、酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、シクロデキストリンなど））を含み得る。
【０２０７】
非経口投与のためのより最近開発されたアプローチは、一定レベルの投薬量が維持されるように、徐放性または持続性システムの実施を使用する。例えば、米国特許第３，７１０，７９５号を参照のこと。このような非経口組成物に含まれる活性化合物のパーセンテージは、それらの特定の性質、ならびにその化合物の活性および被験体の必要性に高く依存する。しかし、溶液中の０．０１％〜１０％の活性成分のパーセンテージは、使用可能であり、そしてこの組成物が、後に上記パーセンテージに希釈される固体である場合、より高い。好ましくは、組成物は、溶液中に、０．２〜２％の活性薬剤を含む。
【０２０８】
活性化合物単独または他の薬学的に受容可能な賦形剤とあわせた経鼻溶液もまた投与され得る。
【０２０９】
活性化合物または塩の処方物はまた、噴霧器のためのエアロゾルまたは溶液として、あるいは吸入のための微細粉末として、単独で、または不活性なキャリア（例えば、ラクトース）とともに、呼吸管に投与され得る。このような場合、処方物の粒子は、５０ミクロン未満、好ましくは、１０ミクロン未満の直径を有する。
【実施例】
【０２１０】
（実施例）
以下の調製および実施例は、当業者が本発明をより明瞭に理解し、そして本発明を実施することを可能にするために提供される。これらの実施例は、本発明の範囲の限定とみなされるべきではなく、単なる本発明の例示およびその代表例と見なされるべきである。
【０２１１】
（一般的な特徴付け方法）
以下の実施例において報告されるように、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＴＸ３００分光計において、大半の場合にはテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を内部参照として使用することにより、記録した。質量スペクトルを、エレクトロスプレーイオン化（正または負のモード）（ＥＳＩ）または大気圧化学イオン化（正または負のモード）（ＡＰＣＩ）のいずれかを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＬＣ／ＭＳＤ装置において得た。
【０２１２】
（実施例１：３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２１３】
【化１６】
2006502963.tif 000015
エタノール（４０ｍＬ）およびアセトン（５０ｍＬ）中の２−メルカプトベンズイミダゾール（４．０ｇ）およびブロモピルビン酸エチル（４ｍＬ）の溶液を、アルゴン下、２０℃で１６時間攪拌した。生成された白色固体を濾過し、４．５ｇのピルビン酸付加体を得、これをさらに精製せずに次の工程に直接使用した。母液を濃縮し、白色固体の２次生成物（ｃｒｏｐ）を生成させた。濾過した後、４．１７ｇの同じ中間体を得た。ピルビン酸付加体の１次生成物（４．５ｇ）を塩化メチレンに溶解し、ｐＨが７に達するまで、炭酸水素ナトリウム水溶液で処理した。塩化メチレン相を分離し、乾燥し、そして、約２０ｍＬの容量まで濃縮した。この溶液に、４−ジメチルアミンピリジン（７００ｍｇ）を添加し、その後、アルゴン下、２０℃で攪拌した。カラムクロマトグラフィー精製（１００ｇのシリカゲル、溶離液として塩化メチレン−エタノール混合物の勾配を用いる）を行い、生成物と４−ジメチルアミンピリジン（２．７８ｇ）の混合物と共に、表題のフラノン生成物を得た（５００ｍｇ）。
【０２１４】
【化１７】
2006502963.tif 000016
。
【０２１５】
（実施例２：３−（３−アミノ−［１，２，４］チアジアゾール−５−イルスルファニル）−２−（３−アミノ−［１，２，４］チアジアゾール−５−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２１６】
【化１８】
2006502963.tif 000017
（２Ａ．トリメチルアミン塩の調製）
エタノール（１５ｍＬ）中、５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール（６６５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の懸濁液を、アルゴン下、２０℃で１時間攪拌した。この溶液に、トリメチルアミン水溶液（２ｍＬ）を添加し、ｐＨを中性にし、次いで、さらに１６時間攪拌させた。濾過後、表題フラノン生成物のトリメチルアミン塩を単離した（８２０ｍｇ）。
【０２１７】
【化１９】
2006502963.tif 000018
（２Ｂ．塩を含まないフラノンの調製）
エタノール（１５ｍＬ）中の５−アミノ−１，３，４−チアジアゾール−２−チオール（６６５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の懸濁液をアルゴン下、２０℃で１時間攪拌した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．５に調整した。２０℃で１６時間の攪拌の後、生成した沈殿物を濾過して分離した。乾燥させて、表題の塩を含まないフラノン生成物を、固体として得た（５９０ｍｇ）。
【０２１８】
【化２０】
2006502963.tif 000019
。
（実施例３：３−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２１９】
【化２１】
2006502963.tif 000020
エタノール（１５ｍＬ）中の３−アミノ−５−メルカプト−１，２，４−トリアゾール（５８０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の懸濁液をアルゴン下、２０℃で２時間攪拌した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．５に調整した。エバポレートして乾燥させた後、残査を高温のエタノールで抽出した。冷却して、エタノール溶液を濾過し、濾過物を乾燥までエバポレートして、淡褐色の粉末として表題のフラノン生成物を得た（６５０ｍｇ）。
【０２２０】
【化２２】
2006502963.tif 000021
。
【０２２１】
（実施例４：４−ヒドロキシ−３−（５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２２２】
【化２３】
2006502963.tif 000022
アセトン（１０ｍＬ）およびエタノール（１２ｍＬ）中の３−メルカプト−５−ニトロベンズイミダゾール（９７５ｍｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下、２０℃で３時間攪拌した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．２に調整した。エバポレートして乾燥させた後、残査を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し、水（２×１０ｍＬ）で抽出した。水相の２番目の部分（１０ｍＬ）を凍結乾燥して、淡褐色の粉末として表題のフラノン生成物を得た（６４６ｍｇ）。
【０２２３】
【化２４】
2006502963.tif 000023
。
【０２２４】
（実施例５：４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２２５】
【化２５】
2006502963.tif 000024
アセトニトリル（１００ｍＬ）中の５−フェニル−１，３，４−オキサジアゾール−２−チオール（８９１ｍｇ、５．０ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下、２０℃で３時間攪拌した。この溶液にジイソプロピルエチルアミン（０．５ｍＬ）を添加し、次いで、さらに３時間攪拌した。溶媒を除去した後、残査をエタノール（５ｍＬ）に溶解した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．２に調整した。エバポレートして乾燥させた後、残査を酢酸エチル（１５０ｍＬ）に溶解し、水（２×１０ｍＬ）で抽出した。水相の２番目の部分（１０ｍＬ）を凍結乾燥した。さらに、カラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、塩化メチレン−エタノール９５：５〜８０：２０）を行い、表題のフラノン生成物を得た（８０ｍｇ）。
【０２２６】
【化２６】
2006502963.tif 000025
。
【０２２７】
（実施例６：３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２２８】
【化２７】
2006502963.tif 000026
アセトニトリル（１００ｍＬ）中の５−クロロ−２−メルカプトベンゾチオゾール（１．０１ｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下、２０℃で３時間攪拌した。沈殿物を濾過し、アセトニトリルで洗浄した。真空下で乾燥させ、対応するピルビン酸付加体（１．６８ｇ）を固体として得た。この中間体の一部（２００ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．２に調整した。エバポレートして乾燥させた後、残査をカラムクロマトグラフィー法（シリカゲル、塩化メチレン−エタノール９５：５〜８０：２０）を用いて精製し、表題のフラノン生成物を得た（７２ｍｇ）。
【０２２９】
【化２８】
2006502963.tif 000027
。
【０２３０】
（実施例７：４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２３１】
【化２９】
2006502963.tif 000028
エタノール（１０ｍＬ）およびアセトン（２０ｍＬ）中の５−メトキシ−２−ベンズイミダゾールチオール（９０１ｍｇ、５ｍｍｏｌ）およびブロモピルビン酸エチル（０．６５ｍＬ、５．１６ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下、２０℃で３時間攪拌した。沈殿物を濾過し、酢酸エチルで洗浄した。真空下で乾燥させ、対応するピルビン酸付加体中間体（１．２０ｇ）を固体として得た。この中間体の一部（３００ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を用いて約７．２に調整した。エバポレートして乾燥させた後、残査を酢酸エチルに溶解し、水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、有機相を乾燥までエバポレートし、表題のフラノン生成物を得た（２４０ｍｇ）。
【０２３２】
【化３０】
2006502963.tif 000029
。
【０２３３】
（実施例８：４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−ｐ−トリルスルファニル−２−ｐ−トリルスルファニルメチル−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２３４】
【化３１】
2006502963.tif 000030
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の４−メチルベンゼンチオール（２４８ｍｇ、２ｍｍｏｌ）溶液に、ブロモピルビン酸エチル（２ｍＬ  ＡｃＣＮ中、４３１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を滴下し、激しく攪拌した。添加が完了した後、反応物をさらに３０分間攪拌した。次いで、水（２×５ｍＬ）で洗浄し、Ｎ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒をエバポレートした後、残査をクロマトグラフィーを行い、ピルビン酸付加体中間体（エノール形態とケト形態の１：１混合物）を、淡黄色油状物として得た（３１０ｍｇ、６５％）。
【０２３５】
【化３２】
2006502963.tif 000031
ＤＣＭ（５ｍＬ）中の中間体溶液に３滴のＴＥＡ（０．２ｍＬのＤＣＭ中）を添加した。反応を、ＭＳを使用してモニタリングした。反応完了後（３時間）、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ水溶液（０．１Ｍ，１０ｍＬ）で洗浄した。溶媒をエバポレートした後、残査をクロマトグラフィーを行い、淡黄色油状物として表題のフラノン生成物を得た（５３ｍｇ、５８％）。
【０２３６】
【化３３】
2006502963.tif 000032
。
【０２３７】
（実施例９：３−（２−アセチルアミノ−２−メトキシカルボニル−エチルスルファニル）−２−（２−アセチルアミノ−２−メトキシカルボニル−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２３８】
【化３４】
2006502963.tif 000033
アセトニトリル（５ｍＬ）中の２−アセチルアミノ−３−メルカプト−プロピオン酸メチルエステル（１７７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）溶液に、室温で攪拌しながら、ブロモピルビン酸エチル（１．０ｍＬ  ＡｃＣＮ中、２１５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応を、ＭＳを使用してモニタリングした。完了後、３０ｍＬのＥｔＯＡｃを加えて反応をクエンチした。溶媒をエバポレートした後、残査を、溶離液としてＤＣＭ／ＭｅＯＨ（８：１）を用いてクロマトグラフィーを行い、エノール形態およびケト形態の両方を含む黄色油状物として対応するピルビン酸付加体を得た（１５１ｍｇ、５２％）。
【０２３９】
【化３５】
2006502963.tif 000034
ＡｃＣＮ（３ｍＬ）中のピルビン酸付加体（８５ｍｇ）溶液に、５滴のＮａ２ＣＯ３（２．０Ｍ）を添加した。得られた懸濁液を、ＭＳが縮合の完了を示すまで、３時間攪拌した。反応物を、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）を加えてクエンチし、次いで混合物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒をエバポレートした後、残査をクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ、６：１）を行い、淡黄色油状物として表題のフラノン生成物を得た（４２ｍｇ、５３％）。
【０２４０】
【化３６】
2006502963.tif 000035
。
【０２４１】
（実施例１０：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＴＦＡ塩の調製）
【０２４２】
【化３７】
2006502963.tif 000036
水（５０ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）中のＩ−グルタチオン（２−アミノ−４−［１−（カルボキシメチル−カルバモイル）−２−メルカプト−エチルカルバモイル］−酪酸）（８．１４ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）溶液（窒素で脱気およびパージした）に、室温でブロモ−３−エチルピルビン酸（５．１７ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）を添加した。ブロモ−３−エチルピルビン酸を添加すると、ほぼ瞬時に濁った懸濁物が黄味がかった半透明に変わった。室温で、２時間攪拌した後、混合物を、減圧下で、ロータリーエバポレータ−で濃縮した。次いで、この溶液を塩化メチレンで十分に洗浄した。有機層を破棄した。水層を減圧下でエバポレートして乾燥させた。高減圧下で４８時間凍結乾燥した後、ピルビン酸−グルタチオン付加体として黄味がかった固体を得た（１３．０ｇ、９８．０％）。ＮＭＲデータは、生成物の２つの互変異性体形態（すなわち、ケト形態、２−アミノ−４−［１−（カルボキシメチル−カルバモイル）−２−（２−カルボキシ−２−オキソ−エチルスルファニル）−エチルカルバモイル］−酪酸エチルエステルおよびエノール形態、３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−ヒドロキシ−アクリル酸エチルエステル）が存在することを示す。
【０２４３】
【化３８】
2006502963.tif 000037
ピルビン酸−グルタチオン付加体（１．０ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）に溶解し、１．０Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を用いて、溶液のｐＨを７．４に調整した。開始反応物の消失の後（ＬＣ／ＭＳでモニタリングする）混合物を、水中の１０％ＴＦＡを用いてｐＨ３．０に調整した。溶離液として水を用いて、溶液をＢｉｏ  ｇｅｌ  Ｐ２カラムを通し、生成物をＨＢｒのナトリウム塩とＴＦＡから分離した。生成物を含有する画分をプールし、減圧下、３０℃で濃縮し、最終的に凍結乾燥して、淡黄色固体として、０．８ｇの生成物を得た（これは、ＬＣで約８５％純度であると見出された）。この粗生成物を、勾配として水およびアセトニトリル（５〜１５％  ＣＨ３ＣＮ、５０分；１５％  ＡｃＣＮ、５０〜７０分）を使用し、逆相中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）を用いてさらに精製した。所望のフラノンを含有する画分をプールし、減圧下、３０℃で濃縮し、次いで、凍結乾燥して、白色固体として表題生成物を得た（０．７ｇ，７７％）。
【０２４４】
【化３９】
2006502963.tif 000038
。
【０２４５】
（実施例１１：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、塩を含まないジアステレオマー混合物の調製）
【０２４６】
【化４０】
2006502963.tif 000039
実施例１０において調製したジアステレオマー混合物のＴＦＡ塩（１ｇ、０．９７６ｍｍｏｌ）を水（１５ｍｌ）に溶解し、これに、周囲温度で、２当量の１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（１．９５ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ）を添加し、この溶液を１０分間アジテートした。次いで、混合物を、水およびアセトニトリルを溶出液（５〜１５％  ＣＨ３ＣＮ、５０分；１５％  ＣＨ３ＣＮ，５０〜７０分）として用いて、逆相ＨＰＬＣで精製した。所望のフラノンを含有する画分をプールし、減圧下、３０℃で濃縮し、最終的に凍結乾燥して、白色固体として塩を含まない表題生成物を得た。１９Ｆ  ＮＭＲは、実質的に全て（＞９９．５％、精製の前後の相対ピーク強度に基づく）の元のＴＦＡ塩が塩を含まない形態に変換されていることを示した。
【０２４７】
【化４１】
2006502963.tif 000040
。
【０２４８】
（実施例１２：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−  （カルボキシメチル−カルバモイル−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＨＣｌ塩の調製）
【０２４９】
【化４２】
2006502963.tif 000041
脱イオン水（１０ｍＬ）中の実施例１０において調製したジアステレオマー混合物のＴＦＡ塩（６０ｍｇ、０．０５８６ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、ＨＣｌ溶液（２．１５ｍＬ、０．１２９ｍｍｏｌ、０．０６Ｍ、２．２当量）を滴下した。混合物を０℃で２０分間攪拌し、次いで、凍結乾燥して、白色の粘着性固体を得た（４８．２ｍｇ）。１９Ｆ  ＮＭＲは、実質的に全て（＞９９％、ＨＣｌ処理の前後の相対ピーク強度に基づく）の元のＴＦＡ塩がＨＣｌ塩に変換されていることを示した。
【０２５０】
【化４３】
2006502963.tif 000042
。
【０２５１】
（実施例１３：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＨＢｒ塩の調製）
【０２５２】
【化４４】
2006502963.tif 000043
ジアステレオマー混合物のＨＢｒ塩を、実施例１２に記載したのと同じ手順で、ＨＣｌをＨＢｒに置換して、淡黄色の粘着性固体として調製した。
【０２５３】
【化４５】
2006502963.tif 000044
。
【０２５４】
（実施例１４：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＭｓＯＨ塩の調製）
【０２５５】
【化４６】
2006502963.tif 000045
脱イオン水（１０ｍＬ）中の実施例１１において調製した塩を含まないジアステレオマー混合物（６０ｍｇ、０．０７５３ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃（氷浴）で０．１Ｍの硫酸メチル水溶液（１．５１ｍＬ、０．１５１ｍｍｏｌ、２当量）を滴下した。混合物を０℃で２０分間攪拌し、次いで、凍結乾燥して、ふわふわした白色固体として表題のフラノン塩を得た（６１．５ｍｇ）。
【０２５６】
【化４７】
2006502963.tif 000046
。
【０２５７】
（実施例１５：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＴｓＯＨ塩の調製）
【０２５８】
【化４８】
2006502963.tif 000047
ジアステレオマー混合物のＴｓＯＨ塩を、塩を含まない混合物を２当量の希釈ＴｓＯＨ水溶液と処理することで、実施例１４に記載した手順に従って調製した。表題のフラノン塩を、白色のふわふわした固体として得た。
【０２５９】
【化４９】
2006502963.tif 000048
（実施例１６：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のＡｃＯＨ塩の調製）
【０２６０】
【化５０】
2006502963.tif 000049
ジアステレオマー混合物の酢酸塩を、塩を含まない混合物を２当量の希釈ＡｃＯＨ水溶液と処理することで、実施例１４に記載した手順に従って調製した。表題のフラノン塩を、白色のふわふわした固体として得た。
【０２６１】
【化５１】
2006502963.tif 000050
。
【０２６２】
（実施例１７：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のビス−トリメチルアミン塩の調製）
【０２６３】
【化５２】
2006502963.tif 000051
ジアステレオマー混合物のトリメチルアミン塩を、塩を含まない混合物を２当量の希釈ＴＥＡ水溶液と処理することで、実施例１４に記載した手順に従って調製した。表題のフラノン塩を、白色固体として得た。
【０２６４】
【化５３】
2006502963.tif 000052
。
【０２６５】
（実施例１８：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のテトラ−トリエチルアミン塩の調製）
【０２６６】
【化５４】
2006502963.tif 000053
ジアステレオマー混合物のトリエチルアミン塩を、塩を含まない混合物を４当量の希釈ＴＥＡ水溶液と処理することで、実施例１４に記載した手順に従って調製した。表題のフラノン塩を、白色固体として得た。
【０２６７】
【化５５】
2006502963.tif 000054
。
【０２６８】
（実施例１９：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸、ジアステレオマー混合物のナトリウム塩の調製）
【０２６９】
【化５６】
2006502963.tif 000055
ジアステレオマー混合物のナトリウム塩を、塩を含まない混合物を２当量の希釈ＮａＯＨ溶液（０．０５Ｍ）と処理することで、実施例１４に記載した手順に従って調製した。表題のフラノン塩を、白色固体として得た。
【０２７０】
【化５７】
2006502963.tif 000056
。
【０２７１】
（実施例２０：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−  （カルボキシメチル−カルバモイル−エチルスルファニル−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸ジアステレオマー、ＴＦＡ塩の分離）
【０２７２】
【化５８】
2006502963.tif 000057
２つの単一のジアステレオマーを混合物から分離した（この調製は、実施例１０に記載した）。分離は、各々が０．１％のＴＦＡを含む水およびアセトニトリルの勾配溶離液（２〜１８％  ＡｃＣＮで２５分間、次いで、１８％  ＡｃＣＮで２５〜３０分間）を用いて、分離用ＨＰＬＣによりなされた。
【０２７３】
【化５９】
2006502963.tif 000058
。
【０２７４】
（実施例２１：３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸ジアステレオマー、ＨＢｒ塩の調製）
【０２７５】
【化６０】
2006502963.tif 000059
実施例１３および２０に記載される手順に従って、異性体＃１および異性体＃２の両方のＨＢｒ塩を（黄色の粘着性固体として）調製した。
【０２７６】
【化６１】
2006502963.tif 000060
（実施例２２）
（３−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニル］−２−［２−（４−アミノ−４−カルボキシ−ブチリルアミノ）−２−（カルボキシメチル−カルバモイル）−エチルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸ジアステレオ異性体、ＨＣｌの調製）
【０２７７】
【化６２】
2006502963.tif 000061
実施例１２および２０に記載される手順に従って、異性体＃１および異性体＃２の両方のＨＣｌ塩を（白色の粘着性固体として）調製した。
【０２７８】
【化６３】
2006502963.tif 000062
（実施例２３）
（３−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニル］−２−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２７９】
【化６４】
2006502963.tif 000063
水（１ｍＬ）およびアセトニトリル（１ｍＬ）中の、カプトプリル（２９３ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）およびエチルブロモピルベート（０．１７６ｍＬ、１．４０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で、１６時間２０℃で攪拌した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を使用して約７．２に調整し、そしてさらに３時間、２０℃で攪拌した。次いで、溶液のｐＨを、臭化水素水溶液（４８％）を使用して、約４に調整した。この溶液を、塩化メチレンで３回洗浄した。有機相を廃棄し、そして水相を凍結乾燥した。残渣を、塩化メチレン−メタノール（９０：１０）溶液中に溶解した。透明溶液を、遠心分離後に回収した。エバポレーションにより、表題フラノン生成物（２９５ｍｇ）を得た。
【０２８０】
【化６５】
2006502963.tif 000064
（実施例２４）
（４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２８１】
【化６６】
2006502963.tif 000065
エタノール（５ｍＬ）中４−メルカプトピリジン（２２２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）およびエチルブロモピルベート（０．２６４ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下で２０℃で３時間攪拌した。溶液のｐＨを、炭酸水素ナトリウム水溶液を使用して約７．２に調整した。乾燥するまでエバポレートした後、残渣を、酢酸エチル中に溶解し、そして炭酸水素ナトリウム水溶液、水で洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥した。エバポレーションおよびクロマトグラフィー（シリカゲル、９０：１０〜８０：２０の塩化メチレン−メタノール）により、表題フラノン生成物（２４０ｍｇ）を得た。
【０２８２】
【化６７】
2006502963.tif 000066
（実施例２５）
（５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキサ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２８３】
【化６８】
2006502963.tif 000067
アセトニトリル（２ｍＬ）およびアセトン（４ｍＬ）中の３，６−ジクロロ−１，２−ベンゼンジチオール（２１１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）、エチルブロモピルベート（０．５２８ｍＬ、４．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．１ｍＬ）の溶液を、アルゴン下で２０℃で１６時間攪拌した。乾燥するまでエバポレートした後、残渣を酢酸エチル中に溶解し、そして希ＨＣｌ水溶液で洗浄し、そして無水硫酸マグネシウムで乾燥した。エバポレーションおよび２つの異なる溶出系［（シリカゲル、９９：１〜９８：２の塩化メチレン−メタノール）および（シリカゲル、ヘキサン−酢酸エチル  ４：１）］を使用する複数回のクロマトグラフィーを連続して繰り返して、表題フラノン生成物（２０ｍｇ）を得た。
【０２８４】
【化６９】
2006502963.tif 000068
（実施例２６）
（３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸の調製）
【０２８５】
【化７０】
2006502963.tif 000069
実施例１に記載されるように調製した３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル（３２ｇ）を、水（４００ｍＬ）およびエタノール（３００ｍＬ）中に懸濁した。この懸濁物を継続的に攪拌し、そして炭酸水素ナトリウム水溶液（３５０ｍＬの水中２３ｇ）を、約５時間の間滴下して、約７．５〜８のｐＨを維持した。得られた混合物を、２０℃で２日間攪拌した。乳状混合物を、ロータリーエバポレータに入れ、減圧下で、４０℃より低い温度でエタノールを除去した。この懸濁物は、エバポレーションの開始後直ぐに透明な溶液になった。エバポレーションプロセスの間、４００ｍＬの水を添加して、エタノールの完全な除去を確認した。この溶液を、ｐＨ８に調整し、そして４０℃で１８時間攪拌した。この生成物を、酢酸水溶液（２３０ｍＬの水中１２ｍＬの酢酸）を使用して溶液をｐＨ５〜６に酸性化することによって、沈殿させた。固体を濾過し、水（４０ｍＬ）およびアセトニトリル（４０ｍＬ）で洗浄し、そして減圧下で乾燥して、３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸を、淡灰色固体として得た（１６．５ｇ）。
【０２８６】
【化７１】
2006502963.tif 000070
（実施例２７）
（３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドの調製）
【０２８７】
【化７２】
2006502963.tif 000071
塩化メチレン（２０ｍＬ）中の、２，３−ビス−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（５５ｍｇ）、ジメチルアミノピリジン（２０ｍｇ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（８５ｍｇ）の混合物を、室温で２時間攪拌した。エタノールアミン（０．０３ｍＬ）を添加した後、ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍＬ）を添加し、そしてこの混合物を、室温で一晩攪拌し、そして水中に注いだ。有機層を分離し、乾燥し、そして濃縮した。残渣を、ジクロロメタン中１０％のメタノールで溶出するシリカゲルカラムによって精製して、５０ｍｇの３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを褐色固体として得た。
【０２８８】
【化７３】
2006502963.tif 000072
（実施例２８）
（３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸の調製）
【０２８９】
【化７４】
2006502963.tif 000073
６ｍＬの塩化メチレン／メタノール（５：１）中のグリオキシル酸一水和物（９８ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（４１８μＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加し、そして激しく攪拌した。６ｍＬの塩化メチレン／メタノール（５：１）中の３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−オキソ−プロピオン酸エチルエステル（２８１ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を、３時間に亘って滴下し、そしてこの反応を、室温で一晩（１５時間）攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＮａＨ２ＰＯ４で中和し、そして酢酸エチルで洗浄した。得られた非常に極性の生成物は、水層に残り、そしてこれを、逆相ＨＰＬＣによって精製した。純粋な画分をプールし、そして減圧下で濃縮した。溶媒をエバポレートすると、３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸が白色固体として沈殿し（７０ｍｇ）、これを濾過して、水で洗浄した。濾液を冷却し、そして凍結乾燥して、淡黄色固体を得、これは、所望の精製物のトリエチルアミン塩であることが決定された。
【０２９０】
【化７５】
2006502963.tif 000074
（実施例２９）
（４−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−５−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オンの調製）
【０２９１】
【化７６】
2006502963.tif 000075
無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３０ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−フラニルメチルスルファニル）−２−［（２−フラニルメチルスルファニル）−メチル］−２，５−ジヒドロフラン−２−カルボン酸エチルエステル（０．５ｇ、１．２１９ｍｍｏｌ）の溶液に、アルゴン雰囲気下で、０〜５℃で、ＬｉＢＨ４のＴＨＦ溶液（２ｍＬ、４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌し、そして水（１ｍＬ）をゆっくりと添加した。この混合物を５分間攪拌し、そして濃塩酸（１ｍＬ）を添加した。この溶液を、水（１５０ｍＬ）と混合し、そして塩化メチレンで抽出した（２×１００ｍＬ）。合わせた有機溶液を、水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、そしてエバポレートした。残渣を、カラムクロマトグラフィーによって精製し、そしてヘキサンおよび酢酸エチル（３：１〜２：１、ｖ／ｖ）の混合溶媒で溶出して、５５．６ｍｇの４−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−５−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オンを、クリーム色の油状物として得た。
【０２９２】
【化７７】
2006502963.tif 000076
（実施例３０）
（４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２９３】
【化７８】
2006502963.tif 000077
塩化メチレン（２５ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−フラニルメチルスルファニル）−２−［（２−フラニルメチルスルファニル）−メチル］−２，５−ジヒドロフラン−２−カルボン酸エチルエステル（０．３ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（０．１９ｍＬ、２．３６ｍｍｏｌ）および塩化トリメチルアセチル（０．２２ｍＬ、１．７７ｍｍｏｌ、２．４当量）を、アルゴン雰囲気下で添加した。この混合物を、アルゴン下で一晩穏やかに還流し、次いでエバポレートした。残渣を、ヘキサンおよび酢酸エチル（４：１、ｖ／ｖ）の混合溶媒を用いて溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、０．３１８１ｇの４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルを淡黄色油状物として得た。
【０２９４】
【化７９】
2006502963.tif 000078
（実施例３１）
（３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルホニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルの調製）
【０２９５】
【化８０】
2006502963.tif 000079
塩化メチレン（２５ｍＬ）中の４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−フラニルメチルスルファニル）−２−［（２−フラニルメチルスルファニル）−メチル］−２，５−ジヒドロフラン−２−カルボン酸エチルエステル（０．５ｇ、１．２１９ｍｍｏｌ）の溶液に、−７８℃で、ｍ−クロロペルオキシ安息香酸（１．２１６ｇ、純度７７％、４．４５当量）を添加した。この混合物を一晩攪拌し、そして温度を、室温まで自然に上昇させた。この混合物を乾燥するまでエバポレートし、その残渣を、水（２５ｍＬ）と混合した。濾過後、水性濾液をエバポレートし、その残渣を、酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製し、０．１３８７ｇの固体を、８０％の純度で得た。この物質を、９５％  Ｈ２Ｏ／５％  ＭｅＣＮ（０分）〜２０％  Ｈ２Ｏ／８０％  ＭｅＣＮ（２１０分）の勾配移動相を用いるＭＰＬＣによってさらに精製して、６７ｍｇの３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルホニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステルを黄色固体として得た。
【０２９６】
【化８１】
2006502963.tif 000080
2006502963.tif 000081
（実施例３２）
（ジメチルアミノ−酢酸  ３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチルエステルの調製）
【０２９７】
【化８２】
2006502963.tif 000082
ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン（２２０ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノアセチルクロライド塩酸塩（１７４ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．２８０ｍＬ、２．００ｍｍｏｌ）の溶液を、２２時間攪拌した。次いで、この反応混合物を、ＳｉＯ２のプラグに通し、これを次いでヘキサンで洗浄して、過剰のＤＭＦを除去し、そして引き続いて、１：１のＥｔＯＡｃおよびＭｅＯＨの混合物で洗浄して、ジメチルアミノ−酢酸  ３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチルエステルを収集した。溶媒をエバポレートし、残渣を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２：ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：酢酸、８７：１０：３  ｖ／ｖ／ｖ）に供して、オフホワイトの固体を得、これを、０．５Ｍ  ＨＣｌ中に溶解し、そして凍結乾燥した（７３ｍｇ、２６％、ＧＬＩ−１００７８１７ｂ）。
【０２９８】
【化８３】
2006502963.tif 000083
（実施例３３）
前述の実施例の手順に従い、そしてスキーム１および２に記載されるように、以下の式Ｉの化合物を得た：
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−チアゾール−２−イル−５Ｈ−フラン−２−オン：
【０２９９】
【化８４】
2006502963.tif 000084
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
【０３００】
【化８５】
2006502963.tif 000085
・３−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニル）−２−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３０１】
【化８６】
2006502963.tif 000086
・ジメチルアミノ−酢酸  ３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−イルメチルエステル；
【０３０２】
【化８７】
2006502963.tif 000087
・４−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３０３】
【化８８】
2006502963.tif 000088
・４−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３０４】
【化８９】
2006502963.tif 000089
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３０５】
【化９０】
2006502963.tif 000090
・３−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニル）−２−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３０６】
【化９１】
2006502963.tif 000091
・３−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５，６−ジクロロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３０７】
【化９２】
2006502963.tif 000092
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３０８】
【化９３】
2006502963.tif 000093
・３−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３０９】
【化９４】
2006502963.tif 000094
・２−（ベンゾチアゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１０】
【化９５】
2006502963.tif 000095
2006502963.tif 000096
・４−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−５−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３１１】
【化９６】
2006502963.tif 000097
・４−ヒドロキシ−３−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１２】
【化９７】
2006502963.tif 000098
・２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−エトキシ−３−（１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１３】
【化９８】
2006502963.tif 000099
・３−（フラン−２−イルメタンスルフィニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１４】
【化９９】
2006502963.tif 000100
・２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１５】
【化１００】
2006502963.tif 000101
・２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−３−（フラン−２−イルメタンスルホニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル（単一の異性体）；
【０３１６】
【化１０１】
2006502963.tif 000102
・４−ヒドロキシ−３−メチルスルファニル−２−メチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３１７】
【化１０２】
2006502963.tif 000103
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
【０３１８】
【化１０３】
2006502963.tif 000104
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステル；
【０３１９】
【化１０４】
2006502963.tif 000105
・４−ヒドロキシ−３−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２０】
【化１０５】
2006502963.tif 000106
・３−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−２−オキソ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−１−オキサ−４，７−ジチア−アズレン−８ａ−カルボン酸エチルエステル；
【０３２１】
【化１０６】
2006502963.tif 000107
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−イソブチリルオキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２２】
【化１０７】
2006502963.tif 000108
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−エトキシカルボニルメチルスルファニル−２−エトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２３】
【化１０８】
2006502963.tif 000109
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２４】
【化１０９】
2006502963.tif 000110
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
【０３２５】
【化１１０】
2006502963.tif 000111
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２６】
【化１１１】
2006502963.tif 000112
・４−ヒドロキシ−３−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２７】
【化１１２】
2006502963.tif 000113
・３−シクロペンチルスルファニル−２−シクロペンチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２８】
【化１１３】
2006502963.tif 000114
・３−ブチルスルファニル−２−ブチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３２９】
【化１１４】
2006502963.tif 000115
・４−ヒドロキシ−３−イソブチルスルファニル−２−イソブチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３０】
【化１１５】
2006502963.tif 000116
・４−ヒドロキシ−３−（ナフタレン−２−イルスルファニル）−２−（ナフタレン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３１】
【化１１６】
2006502963.tif 000117
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニル）−２−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３２】
【化１１７】
2006502963.tif 000118
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３３】
【化１１８】
2006502963.tif 000119
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３４】
【化１１９】
2006502963.tif 000120
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３５】
【化１２０】
2006502963.tif 000121
・３−ベンジルスルファニル−２−ベンジルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３６】
【化１２１】
2006502963.tif 000122
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−２−（４−メトキシ−フェニルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３７】
【化１２２】
2006502963.tif 000123
・３−（２−クロロ−フェニルスルファニル）−２−（２−クロロ−フェニルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３８】
【化１２３】
2006502963.tif 000124
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３３９】
【化１２４】
2006502963.tif 000125
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４０】
【化１２５】
2006502963.tif 000126
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４１】
【化１２６】
2006502963.tif 000127
2006502963.tif 000128
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４２】
【化１２７】
2006502963.tif 000129
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３４３】
【化１２８】
2006502963.tif 000130
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４４】
【化１２９】
2006502963.tif 000131
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４５】
【化１３０】
2006502963.tif 000132
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−スルホ−エチルスルファニル）−２−（２−スルホ−エチルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４６】
【化１３１】
2006502963.tif 000133
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４７】
【化１３２】
2006502963.tif 000134
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４８】
【化１３３】
2006502963.tif 000135
2006502963.tif 000136
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３４９】
【化１３４】
2006502963.tif 000137
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル−メチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３５０】
【化１３５】
2006502963.tif 000138
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３５１】
【化１３６】
2006502963.tif 000139
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル、塩酸塩；
【０３５２】
【化１３７】
2006502963.tif 000140
（実施例３４）
これまでの実施例および反応スキーム３に記載されるような手順に従って、式ＩＩＩの以下の化合物を調製した：
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−ベンゾイル−３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３５３】
【化１３８】
2006502963.tif 000141
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
【０３５４】
【化１３９】
2006502963.tif 000142
・５−アセチル−４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン；
【０３５５】
【化１４０】
2006502963.tif 000143
・３−ベンジルスルファニル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
【０３５６】
【化１４１】
2006502963.tif 000144
・４−ヒドロキシ−３−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸２イソプロピル−５−メチル−シクロヘキシルエステル；
【０３５７】
【化１４２】
2006502963.tif 000145
（実施例３５）
（ニューロン細胞ストレスアッセイを利用する活性の決定）
（Ａ．初代海馬ニューロン細胞の単離および培養）
（材料）
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７：１×Ｂ２７補充物（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．５μＭ  Ｌ−グルタミン、２５μＭ  Ｌ−グルタミン酸、および１×ペニシリン／ストレプトマイシンを含有する、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）。
・ハンクス基礎塩類溶液（ＨＢＳＳ，Ｃａ／Ｍｇを含まない）を、ＨＥＰＥＳ（１０ｍＭ、ｐＨ７．３）、重炭酸ナトリウム（０．３５％）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、および１ｍＭ  ピルビン酸を補充した１×ハンクスＣＭＦ（Ｇｉｂｃｏ）を調製することにより調製する。
・ポリ−Ｄ−リジン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、０．２μｍフィルターチューブを通して濾過した５０μｇ／ｍｌ溶液。
・Ｓｉｇｍａｃｏｔｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
・ポリ−Ｄ−リジン（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で処理したプラスチック培養フラスコ（Ｔ７５ｃｍ２）または１２ウェル細胞培養プレート。
【０３５８】
（初代海馬神経細胞の調製）
雌性妊娠マウス（Ｅ１８〜Ｅ１９）を、ＣＯ２で安楽死させ、続いて子宮を取り出した。次いで、この子宮を滅菌プラスチックペトリ皿に置いた。胚を嚢から取り出し、胚性脳を取り出し、小さなペトリ皿中、冷（４ｏＣ）緩衝化塩類溶液（ＨＢＳＳ；Ｃａ／Ｍｇを含まない；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中に浸した。次いで、解剖顕微鏡下で海馬を脳から取り出し、パラフィンで覆ったディッシュの上に置いた。髄膜を剥がし、解剖した海馬を小さなペトリ皿中のＨＢＳＳ中に回収した。海馬を、ＨＢＳＳを満たした１５ｍｌ遠心管に移した（通常は、１０〜１２個の脳）。脳を含む試験管を、卓上型遠心機で２分間、１０００ｒｐｍにて遠心分離した。上清を除去し、２ｍｌのＨＢＳＳを遠心管中の海馬に添加し、得られた懸濁液を、各々、徐々に小さくなった開口部を有する、シリコン処理した、先端を長くした硝子ピペットを用いて（標準的なサイズの開口部（約１．０ｍｍ直径）を有するピペットを用いて開始して、標準サイズの約１／２の開口部（約０．５ｍｍ直径）を有するピペット、次いで、そのサイズの約１／２（０．２５ｍｍ直径）の開口部を有するピペットを用いる）、２回細かくした。次いで、懸濁液を再び卓上型遠心機で２分間１０００ｒｐｍにて遠心分離し、上清を廃棄し、２ｍｌのＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｉ（抗生物質を含む）を遠心管に添加した。次いで、上記の細かくする手順をこの懸濁液に対して繰り返した。
【０３５９】
細胞の密度を、標準的な計数手順を用い、トリパンブルー染色排除（ｓｔａｉｎ  ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）で細胞の生存能力について補正して、細胞の小さなアリコートに対して決定した。この手順を使用すると、推定収量は、３×１０５〜６×１０５細胞／脳である。次いで、細胞を、約１．５×１０６細胞（Ｔ７５フラスコ）または約７０，０００細胞／ウェル（２４ウェルプレート）の密度にて、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７Ｉを入れたＰＤＬをコーティング２４ウェルプレート、フラスコまたはＭｅｔＴｅｋディッシュに添加した。プレートした細胞を、５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２の雰囲気にて３７℃でインキュベートした。新たなＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ培地（５μＭ  シトシンアラビノシド（Ａｒａ−Ｃ）を含む）で培地の半分を交換することにより、培地を３〜４日後に新しくした。最初の培養から７〜８日後、培地を、その半分を回収し、等量の新たなＮｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ培地（Ａｒａ−Ｃなし）と交換することによって再び新しくした。
【０３６０】
（Ｂ．海馬酸素欠乏−再酸素化細胞死アッセイ）
このアッセイを使用して、培養海馬神経細胞において、酸素欠乏−再酸素化により虚血を誘導した。試験化合物を添加して、虚血誘導性神経細胞傷害および細胞死に対する効能および効力を評価した。
【０３６１】
（材料）
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地、ＮｏＧ  ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地、Ｂ２７補充物およびＢ２７補充物（ＡＯなし）をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓより入手した。
・Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７培地を、２×Ｂ２７（ＡＯなし）補充物、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび０．２５×ペニシリン／ストレプトマイシンを用いて調製した。
・Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓから入手し、新たな５μＭ  溶液を、１０ｍＭ  ストックから使用直前に調製した。
・ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌは、ＮｏＧ  ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地ならびに１ｍＭ  グルコース、０．５ｍＭ  Ｌ−グルタミン０．２５×ペニシリン／ストレプトマイシン、および１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）を含む。
・初代海馬ニューロン細胞を、上記の方法に従って調製し、使用前に、ポリ−Ｄ−リジンをコーティングした２４ウェルプレート中で１０〜１１日間培養した。
【０３６２】
脱酸素化ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地（１００ｍｌ）を、低酸素チャンバにおいてＴ１５０ｃｍ２フラスコ中にその培地を一晩予備平衡化することにより調製した。低酸素条件下での予備インキュベーションの後、そのＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を、１００％  Ｎ２を用いて３０分間軽く泡立たせ、培地を完全に脱酸素化した。さらに２０ｍｌのＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌを、Ｔ７５ｃｍ２フラスコ中で予備平衡化し、通常のインキュベーター（５％  ＣＯ２）において一晩インキュベートした。再酸素化培地を、培養インキュベーター（５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２）中に一晩Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７培地を入れることによって調製した。
【０３６３】
海馬神経のプレーティングから１０〜１１日後に、存在している培養培地を（Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７ｍ）、吸引することによって細胞から除去する。細胞を、６００μｌ／ウェル（２４ウェル培養プレート）のグルコースを含有しないＢＳＳで１回洗浄する。脱酸素化ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ（２４ウェルプレートの各ウェルについて４００μｌ／ウェル）により、ニューロンを補充する。試験化合物を各ウェルに直接添加した（通常、３種類の濃度の化合物およびポジティブコントロール（各３連））。大部分の試験化合物を、１００％  ＤＭＳＯ中に溶解した；しかし、細胞培地中の最終ＤＭＳＯ濃度が決して０．５％を超えないように、濃度を調節した。試験化合物とともに細胞を含有するプレートを、プレートのふたを半開きにした状態で、低酸素チャンバに４〜５時間入れた。酸素正常状態コントロールについては、予備平衡化した酸素正常状態ＬｏＧ−Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を各ウェルの細胞に添加し、プレートを、通常の培養インキュベーター中に４〜５時間再配置した。４〜５時間の低酸素症の後、存在する培地を、注意深く吸引し、４００μＬの新たな再酸素化（予備平衡化）Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ／Ｂ２７を各ウェルに添加した。同じ試験化合物（同じ濃度）を対応するウェルに添加し戻した。プレートを細胞培養インキュベーター（５％  ＣＯ２／９５％  Ｏ２）に入れ、２０〜２４時間再酸素化した。２０〜２４時間再酸素化した後、生存ニューロンを、以下に記載のｃｅｌｌ  ｔｒａｃｋｅｒ  ｇｒｅｅｎ蛍光法を使用して定量した。
【０３６４】
細胞生存性について試験するために、存在する培養培地を、２４ウェルプレートの各ウェルから吸引し、ニューロンを１ｍｌのＨＢＳＳ（ｐＨ７．４、３０〜３７℃に予め温めてある）で１回洗浄した。各ウェルに、ＨＢＳＳに溶解した５００μＬの５μＭ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ  蛍光色素を添加した。プレートを、遮光して、室温にて１５分間静置し、次いで、１ｍｌのＨＢＳＳで洗浄した。次いで、５００μＬのＨＢＳＳを各ウェルに添加し、蛍光性の細胞を、蛍光顕微鏡を使用して計数した。コントロール細胞と比較して有意に増加した細胞生存性は、保護化合物の指標である。
【０３６５】
上記のように試験した場合、本発明の化合物は、約１〜１０００μＭの範囲の濃度で、試験した細胞の少なくとも２０％においてストレッサー誘導性細胞死に対する保護を提供する。上記のように試験した場合、例えば、以下：
・４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・１，４−ジヒドロキシ−４−メチル−３ａ、４−ジヒドロ−３−オキサ−１０−チア−４ａ，９−ジアザ−シクロペンタ［ｂ］フルオレン−２−オン；
・３−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・４−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−５−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・５−アセチル−４−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−３−ヒドロキシ−５Ｈ−フラン−２−オン；
・２−（フラン−２−イルメタンスルファニルメチル）−３−（フラン−２−イルメチルスルフォニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（フラン−２−イルメタンスルフォニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルフォニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ベンジルスルファニル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−［４−（２−カルボキシ−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−カルボキシ−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−２−オキソ−５，６−ジヒドロ−２Ｈ−１−オキサ−４，７−ジチア−アズレン−８ａ−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−エトキシカルボニルメチルスルファニル−２−エトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキシルエステル；
・３−シクロペンチルスルファニル−２−シクロペンチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ブチルスルファニル−２−ブチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニル）−２−（９Ｈ−プリン−６−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニル）−２−（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−フェニルスルファニル）−２−（４−メトキシ−フェニルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−（４−メチルピペラジン−１−カルボニル）−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−イミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロフラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−ジエチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジエチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸メチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル塩酸塩；
・４−ヒドロキシ−３−（２−メトキシカルボニル−エチルスルファニル）−２−（２−メトキシカルボニル−エチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−メトキシカルボニルメチルスルファニル−２−メトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキサ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−ｐ−トリルスルファニル−２−ｐ−トリルスルファニルメチル−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［ｌ，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
のような本発明の化合物は、１〜１００μＭの範囲の濃度で、試験した細胞の少なくとも４０％の、ストレッサー誘導性細胞死に対する保護を提供した。
【０３６６】
（実施例３６）
（筋細胞カルシウム収縮性アッセイ）
（Ａ．一次新生児の筋細胞の単離および培養）
（材料）
・１０×心臓解剖溶液（Ｈｅａｒｔ  Ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）（ＨＤＳ）は、細胞培養グレード水中に以下の成分（ｇ／ｌ）を含む：ＮａＣｌ，６８；ＨＥＰＥＳ，４７．６；ＮａＨ２ＰＯ４，２；グルコース，１０；ＫＣｌ，４；ＭｇＳＯ４，１，ｐＨは７．４に調製された。希釈された（１×ＨＤＳ）溶液の濾過滅菌の前に、１０ｍｇフェノールレッドを、各５００ｍｌの培地に添加した。
・トランスフェリンおよびウシインシュリンを、Ｉｎｖｉｔｏｒｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得、組織培養グレード水に４ｍｇ／ｍｌの濃度で再懸濁した。
・ＤＭＥＭ−Ｆ１２グルタミンおよび塩酸ピリドキンを１：１で含むＤＭＥＭ−Ｆ１２、粉末をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入した。１リットル当量の粉末に、撹拌しながら、９５０ｍｌの組織培養グレード水中に２．４３ｇの重炭酸ナトリウムおよび１０ｍｌの１００×ペニシリン／ストレプトマイシンを添加した。ｐＨを１Ｍ  ＨＣｌで７．２に調節し、そして体積を１リットルに調節した。この溶液を、濾過滅菌した後、２．５ｍｌの４ｍｇ／ｍｌトランスフェリン、２５０μｌの４ｍｇ／ｍｌインシュリンおよび３０．７ｍｇのブロモデオキシウリジンを添加した。
・４％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２をまた、組織培養プレートを予めコーティングするためにそして心筋細胞ペレットの初期懸濁のために調製した。
・コラゲナーゼ溶液（４９ｍｇのコラゲナーゼを、１２０ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁し）。
・Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製のウシ胎児血清（ＦＢＳ）
（一次新生児心筋培養物の調製）
組織培養ウェアを、９６ウェルプレートの１ウェルあたり５０μｌおよび１２ウェルプレートの１ウェルあたり０．２５ｍｌを、３７℃にてインキュベートすることによってＤＭＥＭ−Ｆ１２−４％ＦＢＳで予めコーティングした。
【０３６７】
２日齢のラットの子を、それらの母親から離し、そして滅菌した容器に入れる。子を、７０％のアルコール中に素早く浸し、次いで断頭し、そして身体を空の滅菌組織培養皿に配置した。切開を、首から始めそして腹に向かって進行させ、胸骨を通って切断した。心臓を取り除き、そして１×ＨＤＳを含有する組織培養皿に配置した。心房を切り取り、そして残っている心室（これらは各３〜４片に切り出される）を１×ＨＤＳを含有する別個の組織培養皿に配置した。次いで、心室を、滅菌した２５０ｍｌガラスフラスコに移し、そして１×ＨＤＳを除去した。２０ｍｌの予め温めたコラゲナーゼ溶液を心室に添加し、続いて振盪しながら３７℃にてインキュベートした。３０分後、コラゲナーゼ溶液を除去し、２０ｍｌの新しい予め温めたコラゲナーゼで置換した。インキュベートをさらに３０分続ける。インキュベートの終わりに、任意の組織の塊を処理し、その後、破壊した組織片からコラゲナーゼ（単離された心筋細胞を含む）を除去した。単離された筋細胞を、２ｍｌのウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含む５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブに添加した。残っている組織片を、２０ｍｌの新しい予め温められたコラゲナーゼの添加によって、二次消化に供し、３０分間上記のようにインキュベートする。次いで、この二次消化物を１０分間、１０００ｒｐｍで遠心分離した（卓上用遠心分離）。得られた上清を捨て、そして細胞ペレットを、４ｍｌのＦＢＳで懸濁した。得られた細胞懸濁液を、３７℃のインキュベーターに配置した。この工程を、さらに数回繰り返し、さらなる物質を回収した。
【０３６８】
Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配を、混合しながら、２２．５ｍｌのＰｅｒｃｏｌｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に２．５ｍｌの１０×ＨＤＳを添加することによって調製した（Ｐｅｒｃｏｌｌストック）。上部勾配溶液（１１ｍｌ  Ｐｅｒｃｏｌｌストックおよび１４ｍｌ  １×ＨＤＳ）および底部勾配溶液（１３ｍｌ  Ｐｅｒｃｏｌｌストックおよび７ｍｌ  １×ＨＤＳ）を調製した。４ｍｌの上部勾配溶液を、６×１５ｍｌの滅菌したＦａｌｃｏｎチューブに移した。３ｍｌの底部勾配溶液を、チューブの底部に血清学的ピペットを挿入し、そしてゆっくりと液体を添加することによって、各チューブに入れた。
【０３６９】
全ての消化物（５）を、１つの５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブにプールし、そして卓上用遠心分離で、１０分間１０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を捨て、そして細胞ペレットを、１２ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁した。２ｍｌの細胞懸濁液を、各勾配の上部に添加した。次いで、勾配チューブを、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｌｌｅｇｒａ  ６遠心分離器（ＧＨ３．８Ａローター）で破壊せずに、３０分間３０００ｒｐｍで遠心分離した。遠心分離に次いで、細胞を、２つの界面で２つの鋭いバンドに分離した。２つのバンドのうちの低いほうのバンドは、心筋細胞について冨化させた；また、チューブの底部に心筋細胞ペレットが存在した。上部のバンドは、繊維芽細胞および他の非心筋細胞について冨化された。勾配の上部を、心筋細胞相のちょうど上まで吸引した。次いで、心筋細胞層を、ペレットと共に慎重に除去し、そして２つの画分を、さらなる勾配チューブからの対応する画分と共に滅菌した５０ｍｌのＦａｌｃｏｎチューブにプールした；次いで、１×ＨＤＳを、約５０ｍｌの全容量まで添加した。このチューブを、７分間１０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を捨て、そして２５ｍｌの１×ＨＤＳに再懸濁した。さらに２５ｍｌの１×ＨＤＳを添加し、そして遠心分離工程を繰り返した。この細胞ペレットを、４０〜５０ｍｌのＤＭＥＭＦ１２〜４％  ＦＢＳに慎重であるが徹底的に再懸濁した。
【０３７０】
細胞懸濁液の小アリコートを、血球計で計数した。ＤＭＥＭ／Ｆ１２−ＦＢＳコート培地を、組織培養皿から吸引した。心筋細胞を、２００μＬ中９６ウェルあたり７．５×１０４／ウェルのプレーティング密度および３ｍｌ中１２ウェルあたり１．５×１０５／ウェルのプレーティング密度で添加した。培養物を、３７℃にて、５％のＣＯ２で一晩インキュベートした。元の培地を除去し、そして使用する前に、新しいＤＭＥＭ／Ｆ１２−５％ＦＢＳを、各培養物に添加し、さらに４８時間、３７℃にて、５％のＣＯ２下でインキュベートした。
【０３７１】
（Ｂ．収縮性アッセイ）
（材料）
・完全ＤＭＥＭ−Ｆ１２：ＤＭＥＭ／Ｆ１２（粉末、１：１、グルタミンおよびピリドキシンヒドロクロリドを含有する）を、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から購入した。１ｌの緩衝液を調製するのに十分な粉末および２．４３ｇの重炭酸ナトリウムを、９５０ｍｌの組織培養グレードの水に混合した。ｐＨを、１ＭのＨＣｌで７．２に調整し、そして残りに水を加えて１ｌにした。滅菌濾過のＮｏｔＩ、１０ｍｌの１００×ペニシリン／ストレプトマイシン、２．５ｍｌの４ｍｇ／ｍｌ  トランスフェリン、２５０μｌの４ｍｇ／ｍｌ  インシュリンおよび３０．７ｍｇのブロモデオキシウリジンを添加し、そしてこの混合物を、使用前に、３７℃でインキュベートした。
【０３７２】
・ＤＭＥＭ中１ｍＭのグルコースを、Ｌ−グルタミンも、グルコースも、ピルビン酸ナトリウムも含まないＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから購入）から作製した。
【０３７３】
・２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４：Ｆｌｕｏ−４の細胞永続性ＡＭエステルを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）から、−２０℃で保存された乾燥粉末として得た。この蛍光色素は、感光性であり、そして光分解を防止するために、使用前にＤＭＳＯ中１ｍＭに入れ替えるべきである。
【０３７４】
・１０ｍＭ  ＣａＣｌ２溶液を、毎日、１×ＨＢＳＳ中に入れ替え、そして使用前に３７℃でインキュベートした。新生児心筋細胞を、上記のようにして単離した。この心筋細胞を、９６ウェルフォーマットで、７．５×１０４／ウェルでプレーティングし（黒色の透明な底のプレート）、そしてアッセイで使用する前に、５％  ＦＢＳの存在下で、２日間増殖させた。
【０３７５】
生理学的な虚血を、１ｍＭグルコースを含有するＤＭＥＭ中で、嫌気性チャンバー（０％  Ｏ２、８５％  Ｎ２、５％  ＣＯ２および１０％  Ｈ２）内に心筋細胞を配置することによってシミュレートした。ポジティブコントロール細胞を、２５ｍＭのグルコースを含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２で処理し、この処理は低酸素に対して保護する。
【０３７６】
試験化合物を、９６ディープウェルのマザープレート中にてＤＭＥＭ（１ｍＭ）グルコース中で作製し、そしてアッセイに使用するために適切に希釈した。この培地を細胞から除去し、そして試験化合物を含むか含まない、２００μｌのＤＭＥＭ−Ｆ１２または１ｍＭ  ＤＭＥＭのいずれかで置換した。その後、プレートを、嫌気性チャンバ中にある３７℃インキュベーターの内側に配置し、１６時間インキュベートした。次いで、このプレートを除去し、そして予め温めた５％  ＦＢＳを含有するＤＭＥＭ−Ｆ１２の添加によって再酸素負荷した。低酸素処理は細胞に損傷を与え得、そして／または細胞を殺し得るので、培地の穏やかな吸引によってウェルの下部から細胞を取り除くことが、この工程で必要である。次いで、この細胞を、３７℃にて通常のインキュベーターに配置し、そして２時間インキュベートし、細胞に再酸素負荷した。
【０３７７】
２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４の作業溶液を、予め温めた１×ＨＢＳＳに添加した。まず細胞から培地を除去し、そして１００μｌの２０μＭ  Ｆｌｕｏ−４で置換することによってこの細胞にＦｌｕｏ−４をロードした。ロードされていないコントロール細胞を、並行して１×ＨＢＳＳ単独で処理した。次いで、全細胞を３７℃で３０分間インキュベートした。蛍光測定を行う前に、全ての細胞を、指示薬を含まない培地（ＨＢＳＳ）中で洗浄し、細胞表面で非特異的に会合している全ての染料を除去した。次いで、細胞を室温でさらに２０分間インキュベートした。基礎のＦｌｕｏ−４蛍光を、マイクロプレート蛍光計（ＦｌｕｏｒｓｋａｎＴＭ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ  Ｏｙ，Ｈｅｌｓｉｎｋｉ，Ｆｉｎｌａｎｄ）で、４８５ｎｍ励起フィルターと５３８ｎｍ発光フィルターの対を使用して測定する。各ウェルを、ベースライン読み取りを得るために１６０ミリ秒間読み、次に、１０ｍＭ  ＣａＣｌ２の添加によって接触するように刺激した。３７℃にて３０分間インキュベートした後、刺激された蛍光読み取りを、９０分後に行った。
【０３７８】
上記のように試験した場合、以下のような本発明の化合物は、量的なカルシウム過渡応答（ｃａｌｃｉｕｍ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔｓ）の存在（約３０％以上）を示した。この存在は、虚血性損傷に対して保護する能力および細胞に細胞の収縮性機能を維持させる能力を示す：
・３−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）−２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニル（ｐｒｏｐｙｌｄｕｌｆａｎｙｌ）］−２−［３−（２−カルボキシ−ピロリジン−１−イル）２−メチル−３−オキソ−プロピルスルファニルメチル］−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−ニトロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０３７９】
（実施例３７）
（大脳虚血のラット中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）のモデル）
（Ａ．動物の準備）
体重３００〜３５０ｇの雄Ｗｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ，ＩＮ）を、これらの実験に一般的に使用する。動物が、標準の研究室条件下で、水および市販されるげっ歯類用食物を自由に入手できるようにする。室温を２０〜２３℃で維持し、そして部屋の照明は１２／１２時間の明／暗サイクルである。動物を研究前の５〜７日間研究室環境に順応させ、そして手術の前の一晩絶食させる（水は自由に飲める）
（Ｂ．中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ））
麻酔を０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって維持する。手術の前に、動物の首を剃毛し、そして滅菌した。体温を外部の加熱冷却デバイスを介して３７．５℃＋／−１℃でコントロールし、維持した。体温をより低くするために、循環空気を冷やすために氷を使用する冷却チャンバーに動物を配置する。研究の間中、体温をラットの肩甲骨の間に、ＭＣＡＯの時に皮下に移植された温度トランスポンダー（ＢＭＤＳ  Ｉｎｃ．，Ｓｅａｆｏｒｄ，ＤＬ）を使用して記録する。この温度トランスポンダーは、使用者がポケットスキャナ（ＢＭＤＳ  Ｉｎｃ．，Ｓｅａｆｏｒｄ，ＤＬ）を介して体温を読み取るのを可能にする。体温はまた、動物の直腸へ温度プローブを挿入することによって測定し得る。体温を、閉塞後の６時間、１時間毎に読み取るが、温度を動物の適温に維持し得るために頻繁に測定する。
【０３８０】
動物を、以下のように改変された腔内フィラメント技術（ｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌ  ｆｉｌａｍｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を使用して２時間のＭＣＡＯに供した。首の腹側部上にて正中切開をなし、外頸動脈および内頸動脈を曝す。右外頸動脈および総頸動脈を、縫合糸に（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）よって結紮し、そして右内動脈を、微小血管クリップ（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌ  Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用して一時的に結紮する。小さな切開を総頸動脈にてなした。ナイロンフィラメント（その先端は加熱によって丸くされている）を、釣り糸（Ｓｔｒｅｎ  Ｆｉｓｈｉｎｇ  Ｌｉｎｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）から調製し、そして右総頸動脈から挿入する。フィラメントを、内頸動脈および外頸動脈の分岐点から１８〜２０ｍｍにて内頸動脈の中に進行させ、そして縫合糸を、フィラメントの周りで密接に結紮する。閉塞の２時間後、動物を再麻酔し、フィラメントの除去により実験の残りのための再灌流を可能にする。
【０３８１】
（Ｃ．薬物投与）
試験化合物を、任意の多数の経路（例えば、下記のようなもの）によって投与し得る。プロトコルに適切なように、閉塞の前、最中または後に、化合物を、投与し得る。
【０３８２】
（ａ）脳室内（ＩＣＶ）注入）
麻酔した動物を、定位装置（Ｈａｒｖａｒｄ  Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｓ．Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ）上に配置する。全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、頭皮を剃毛しそして滅菌する。約３ｃｍの長さの正中矢状切開を、目のわずかな後側でなし、頭蓋骨を曝す。頭蓋骨を端部の丸いスパチュラでこすり、骨膜結合性組織を取り除く。バーの穴を、ブレグマの左側から１．５ｍｍ外側、１ｍｍ後側に配置し、左側脳室を標識する。脳注入カニューレ（ＡＬＺＥＴ−Ｃｏ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）を、この穴へと４ｍｍの深さで挿入する。所望の深さを、カニューレにスペーサーで取り付けることにより調節する。４ｃｍのシラスチックカテーテル（Ｈｅｌｉｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ．，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）に取りつけたカニューレを、歯科用セメント（Ｋｅｔａｃ−ｃｅｍｅｎｔ，Ｎｏｒｒｉｓｔｏｗｎ，ＰＡ）を用いて適所に固定する。カテーテルを、持続的注入のための肩甲骨の間の皮下に配置した準備された浸透圧ポンプか、短い注入のためのシリンジのいずれかに取り付ける。
【０３８３】
（ｂ）頸静脈への静脈内（ＩＶ）浸透圧ポンプ移植）
全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、動物の首を剃毛し、そして滅菌する。正中切開を首の腹側部でなし、頸静脈を曝す。静脈を分離し、そして切開点に対して吻側を縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で結紮し、そして微小血管クリップ（Ｆｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｏｏｌ  Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，  ＣＡ）を、心臓の近くに配置する。小さな切開を、２つの結紮の間でなす。ＡＬＺＥＴ（Ａｌｚｅｔ  Ｃｏ．，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）ポンプに接続したＰＥ−６０管（Ｂｅｃｔｏｎ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）に取り付けた２ｃｍシラシチックカテーテル（Ｈｅｌｉｘ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ．）を導入し、心臓に向かって頸静脈中に２ｍｍ進行させる。微小血管クリップを取り除き、そしてカテーテルを縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。ポンプを、肩甲骨の間の皮下に作成されたポケットに配置し、カテーテルが、首および頭の自由な移動を可能にするに十分な緩さで頸静脈に首を越えて到達するようにする。
【０３８４】
（ｃ）大腿静脈を介するＩＶ注入）
全ての手順の間、０．８％酸素中の３．０％イソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、麻酔を維持する。手術の前に、右側大腿静脈の外部部位を剃毛し、そして滅菌する。３ｃｍの切開を右側の鼡径部領域になし、そして大腿静脈を分離する。小さい切開を大腿静脈上になし、微小血管クリップで一時的に結紮し、ポリエチレン（ＰＥ−５０）カテーテル（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を導入し、そして前進させる。カテーテルを、縫合糸（絹５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。カテーテルの他の端部を、ボーラス注射のためのヘパリン化処理生理食塩水で満たしたシリンジに結合する。ボーラス注射または浸透圧ポンプによる連続注射のいずれかのために、首の項部での摘出点までＰＥカテーテルを持ち上げ得るために、止血物質を使用して、ポケットを動物の背中の皮下に作製する。
【０３８５】
（ｄ）腹腔内（ＩＰ）注射）
覚醒しているラットを、標準な手保持位置（ｈａｎｄ  ｈｏｌｄ  ｐｏｓｉｔｉｏｎ）に維持し、２３  ３／４Ｇニードルを、正中からわずかに離れて、腹膜を過ぎて腹部の下部右側４分の１へ注射する。器官注射を避けるために、シリンジのプランジャーをわずかに引き戻す。流体が引き戻されない場合、シリンジの内容物を腹腔へと送達する。
【０３８６】
（ｅ）栄養補給）
標準のラット栄養チューブ（Ｐｏｐｐｅｒ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ）を、３ｃｃの皮下シリンジに結合する。動物を垂直な位置に肩で保持する。栄養補給チューブを口に配置し、次いでそのチューブが胃に到達するまで前進させる（チューブのおよその挿入長さは、栄養補給の前に測定した）。シリンジの内容物をゆっくり送達し、次いでチューブを引き戻す。
【０３８７】
（Ｄ．挙動評価）
ＭＣＡＯの１時間後、動物を尾で穏やかに保持し、そして前肢屈曲について観察した。次いで、動物を床に配置し、歩行パターンを観察する；Ｂｅｄｅｒｓｏｎ格付けシステム（表１）でスコア３である動物のみを、この研究に含む。
【０３８８】
（表１  神経学的評価のためのＢｅｄｅｒｓｏｎ格付けシステム）
【０３８９】
【表１】
2006502963.tif 000146
（Ｅ．虚血損傷の評価）
いくつかの実験においてＭＣＡＯの２４時間後、またはより長い時間後、動物をＣＯ２窒息（ドライアイス）によって屠殺する。標準の手段を使用して、脳を頭蓋骨からすばやく取りだし、冷却した生理食塩水溶液でリンスし、そしてラット脳組織スライサー（ＡＳＩ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ，ＭＩ）上に配置した。２ｍｍの厚さの７つの冠状切片を、剃刀の刃を使用して各脳から切り出す。これらの切片を、１．０％の塩化２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｕｍｅ）（ＴＴＣ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を含有する０．９％生理食塩水中に浸し、そして３７℃の水浴中で、３０分間インキュベートした。
【０３９０】
染色後、各２ｍｍ切片を、ＴＭＣ−７カメラ（ＪＨ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａ）（これは、デスクトップＰＣに直接接続され、そして各脳切片の画像を取り込まれ、保存される）を用いて撮影する。この画像を、コンピューターベースの画像処理システム（Ｍｅｔａｍｏｒｐｈ）を使用して、目的の領域の測定のために使用する。
【０３９１】
各面積の測定のために、目的の領域をフリーハンド選択ツールを使用して選択し、面積を測定コマンドを選択することによって自動的に計算する。目的の主な領域についての測定は、右半球、左半球、総梗塞、皮質下梗塞、総半影および皮質下半影である。目的の全ての領域を脳の７つ全ての切片について測定した後、ＥｘｃｅｌＴＭマクロを使用して、切片の番号および目的の対応する領域によって分類する。このマクロはまた、皮質の半影、皮質の梗塞および総虚血損傷を各切片について計算する；各ラットの脳の対応する面積）を一緒にし、各面積についての単一の測定を生成する。同側の半球は、ＭＣＡＯの後、腫張するので、水腫体積を計算し、各脳切片の右半球と左半球との間の体積測定の差異として報告する。腫張する半球％を使用して、全体積を水腫について較正する。
【０３９２】
各ラットの脳について以下の計算を使用して、損傷体積を測定する。
【０３９３】
【表２】
2006502963.tif 000147
（Ｆ．統計的分析）
サンプルの大きさを、有意な結果の９０％の可能性を達成するように選択する。各ラットの脳の７つの切片中で目的の同じ領域を示す測定値を一緒にし、各動物における総梗塞、皮質下梗塞、皮質梗塞、総半影、皮質下半影、皮質半影、総虚血損傷および水腫についての単一の測定値を得る。グループデータを、平均＋／−平均値標準誤差として示す。ｐ＜０．０５のレベルの差異を、統計的に有意であるとみなす。グループの間で、目的の各領域の比較を、片側スチューデントｔ検定（２つのグループの間）または一方向ＡＮＯＶＡにより、次いでＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉの複数比較あるいは非母数Ｄｕｎｎｅｔｔ試験（コントロールグループと薬物処理グループの間）によって行う。
【０３９４】
上記のように試験した場合、以下のような本発明の化合物は、１ｋｇあたり約１０μｇ〜約４０ｍｇの範囲の用量で、総梗塞体積の少なくとも約４０％の減少を提供した：  
（実施例３８）
（心筋感染のモデル：左冠状動脈の結紮（ラット））
体重２５０〜３２０ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙを、標準的な実験室条件下で、水および市販のげっ歯類用食餌を自由に取れるようにする。室温を、２０〜２３℃に維持し、そして室内照明を、１２／１２時間の明／暗サイクルに設定する。動物を、研究の５〜７日前に研究室環境に順応させ、そして手術  の前に一晩絶食させる。
【０３９５】
（急性実験のための外科的手順）
ラットを、ウレタン（１．２〜１．５ｇｍ／ｋｇ）で麻酔する。中心体温を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。手術領域を、剃毛し、そして腹側正中切開を行って、気管および頸静脈領域を露出する。カテーテル（ＰＥ５０）を、化合物の投与および麻酔の維持のために、頸静脈中に配置する。気管を切開し、そして１４〜１６ゲージの改変静脈内カテーテルを挿入し、気管内チューブとして適所に結びつける。この動物を、右横臥位にし、そして最初に５〜１０ｍｌ／ｋｇの一回呼吸気量を有するＨａｒｖａｒｄ人工呼吸器を取り付ける。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。この手術部位をアルコール綿棒で清潔にし、皮膚切開を、第４〜第５肋間隙にわたり肋骨部で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔を、第４〜第５肋間隙を通して出し、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通し、この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍで、肺動脈円錐の左縁部と接触して位置する。チューブの一片を、この縫合糸の上に配置して、オクルダーを形成する。この冠状動脈を、抵抗力が感じられるまでこのチューブをスライドして、このチューブを血管クランプを用いて適所に保持することによって、３０分間かけて塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。３０分後、このオクルダーを取り出し、縫合糸を適所に残す。ＥＣＧを、再灌流の最初の１０分間、モニタリングする。このラットを、残りのプロトコルのために、圧力制御人工呼吸器に移す。これらのラットを、１０〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏの最大吸入圧および６０〜１１０呼吸／分の呼吸数で、小動物人工呼吸器により人工呼吸する。心臓を、９０分間再灌流させる。
【０３９６】
（２４時間研究のための外科的手順）
ラットを、ケタミン／キシラジンの腹腔内注射（９５および５ｍｇ／ｋｇ）により麻酔し、そして１４〜１６ゲージの改変静脈内カテーテルを挿管する。麻酔レベルを、トウピンチによって１５分ごとにチェックする。中心体温を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。手術領域を、剃毛し、こすり洗いする。腹側正中切開を行って、頸静脈を露出する。カテーテル（ＰＥ５０）を、化合物の投与および麻酔の維持のために、頸静脈中に配置する。この動物を、右横臥位にし、そして最初に、５〜１０ｍｌ／ｋｇ  Ｈ２Ｏの一回呼吸気量を有する人工呼吸器または８〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏの最大吸入圧および６０〜１１０呼吸／分の呼吸数を有する圧力制御人工呼吸器を取り付ける。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。この手術部位を、外科用綿棒およびアルコールで清潔にする。皮膚切開を、第４〜第５肋間隙にわたり肋骨部で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔を、第４〜第５肋間隙を通して出し、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通し、この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍで、肺動脈円錐の左縁部と接触して位置する。チューブの一片を、この縫合糸の上に配置して、オクルダーを形成する。この冠状動脈を、抵抗力が感じられるまでこのチューブをスライドして、このチューブを血管クランプを用いて適所に保持することによって、３０分間かけて塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。３０分後、このオクルダーを取り出し、縫合糸を適所に残す。ＥＣＧを、再灌流の最初の１０分間、モニタリングする。この三層の切開部を閉じる。ＩＶカテーテルを取り出すかまたは皮膚の下を通し、そして肩甲骨の間で外に出して、血液の排出またはさらなる薬物治療を可能にする。このラットが自力で呼吸できるようになるまで、人工呼吸する。これらのラットから管を取り外し、加熱パッドの上で回復させる。一旦目が覚めると、これらのラットをそのケージに戻す。術後の鎮痛のために、動物にブプレノルフィン（０．０１〜０．０５ｍｇ／ｋｇ  ＳＱ）を投与する。所定の再灌流時間（２４時間）の後、これらの動物を麻酔し、そして深い麻酔をして、心臓を取り出す。
【０３９７】
（処置プロトコル）
（食餌）
冠状動脈の結紮の前または後に、慣習的な食餌を動物に与える。処置の長さは、研究ごとに異なる。３００ｇｍのラットについて、１日あたり１５ｇｍの食餌の平均消費に基づいて、用量を計算する。研究の間、ラットの体重をモニタリングする。消費されなかった食餌を計量して、消費率を見積もる。
【０３９８】
（栄養）
動物に、栄養を経口投与する。処置の長さおよび頻度は、研究ごとに異なる。標準的なラット栄養チューブ（Ｐｏｐｐｅｒ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，ＮＹ）  を、３ｃｃの皮下注射器に取り付ける。これらの動物の肩部をつかんで垂直位置に保持する。給餌チューブを、その口に入れ、次いで、このチューブが胃に達するまで進める（このチューブの適切なおよその挿入長さは給餌の前に測定されるべきである）。この注射器の内容物を、ゆっくりと送達し、次いで、このチューブを引き抜く。
【０３９９】
（ＩＶ処置）
腹切開を行い、頸静脈領域を露出する。化合物の投与のために、カテーテル（ＰＥ５０）を、頸静脈中に配置する。動物に、ボーラス注射および／または連続注入により投与する。処置の時間および継続時間は、プロトコルごとに異なる。
【０４００】
（組織処理）
再灌流の後、各動物に、２００単位のヘパリン（ＩＶ）を、全身麻酔で静脈内投与し、そして心臓を取り出し、冷生理食塩水中に入れる。取り出した後、冠状動脈を、すでに適所にある縫合糸で結紮する。この心臓を、灌流装置に置き、Ｅｖａｎｓ  Ｂｌｕｅ色素を注入して、危険性のある領域を描写する。次いで、この心臓を、頂部から基部まで、５個の２ｍｍ厚の横断スライスに切る。これらのスライスを、０．９％生理食塩水中１％の塩化トリフェニルテトラゾリウム（ＴＴＣ）（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）中で、３７℃で２０分間インキュベートする。テトラゾニウムは、デヒドロゲナーゼ酵素の存在下でＮＡＤＨと反応し、生存組織を深赤色に染色し、これは梗塞した淡く染色した壊死組織から容易に区別される。染色手順のために、これらのスライスを、小さいペトリ皿のフタの中に、頂端部を下にして置く。この皿の底を、これらのスライスの上に置き、これらのスライスを平らに保つ。これらのスライスを、底側を上にして、縁から底の順で写真を撮る。梗塞組織の面積、危険性のある面積および全左心室の面積を、コンピューター画像分析システムを使用して決定する。各領域の全面積を一緒にして、心臓全体の合計を得る。梗塞の大きさを、全心室の割合および危険性のある面積の割合の両方として表す。
【０４０１】
（統計的分析）
群のデータを、平均＋／−ＳＥＭとして表す。処置群間の比較を、ＡＮＯＶＡを使用して実施し、ここでｐ＜０．０５が有意であるとみなす。その後の比較を、Ｄｕｎｎｅｔｔ検定またはＴｕｋｅｙ検定のいずれかを使用して行い得る。
【０４０２】
本発明の化合物は、この方法により試験された場合、活性を示す。
【０４０３】
（実施例３９）
（感覚運動挙動の評価）
（Ａ．ラットにおける前脚および後脚の握力）
中央大脳動脈（ＭＣＡ）の一過性または永久的な片側性閉塞により引き起こされる脳梗塞を有する動物、および偽手術ラットを、握力、神経筋の標準的なモデルおよび感覚運動形成について、ラット用のコンピューター握力メーター（Ｄｕａｌ  Ｓｔａｎｄ  Ｍｏｄｅｌ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）を使用して試験する。
【０４０４】
試験前の３０分間、動物を試験室に移す。試験の前に、メーカーの指示書に従って、各ゲージを既知の重量の設定で較正し、装置を動物の大きさに調節する。前脚の測定を、最大に伸ばした状態でこのメーターを用いて実施し、被検動物がグリップバーから離れた場合の読み取りを停止する。後脚の測定を、最大に圧縮した様式でこのメーターを用いて実施し、被検動物の後脚がバーからメーターに向かって押された場合の読み取りを固定する。一貫した技術を使用してこのグリップバーを越えて引く場合、各動物を、研究者が手で保持し、前脚および後脚がこのグリップバーを自由に握れるようにする。
【０４０５】
試験を、盲目的な無作為様式で、手術後２日で実施し、一週間に２回、所定の間隔で繰り返す。代表的には、データを記録し、次の試験のためにメーターの目盛りをゼロにするのに十分長い試験間隔で、３個の首尾良い読み取りを各動物について得る。
【０４０６】
（Ｂ．ラットにおけるローターロッド試験）
（装置）
ラット用のＲｏｔａ−Ｒｏｄ  Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ（７７５０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｍｏｄｅｌ，ＵＧＯ  ＢＡＳＩＬＥ，ＣＯＭＥＲＩＯ−ＩＴＡＬＹ製）。
【０４０７】
（手順）
中央大脳動脈（ＭＣＡ）の一過性または永久的な片側性閉塞により引き起こされる脳梗塞を有する動物、および偽手術ラットを、ラット用のＲｏｔａ−Ｒｏｄ  Ｔｒｅａｄｍｉｌｌ（７７５０  Ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ  Ｍｏｄｅｌ，ＵＧＯ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｃｏｍｅｒｉｏ，Ｉｔａｌｙ）を使用して、この研究において試験する。これらの動物を、試験の３０分前に試験室に移す。試験の前に、全てのラットは、２〜３時間の間隔で、１〜２分のトレーニングランを２〜３回受ける。
【０４０８】
装置上のシリンダーを、ラットを適所に配置する前に、作動させる。モーターを、ＲＥＳＥＴモードで、７７００の一定の選択速度に設定し、そしてラットをそのセクションに一匹ずつ置く。
【０４０９】
試験を、盲目的な無作為様式で、手術後２日で実施し、一週間に２回、所定の間隔で繰り返す。代表的には、データを記録し、次の試験のためにメーターの目盛りをゼロにするのに十分長い試験間隔で、３個の首尾良い読み取りを各動物について得る。
【０４１０】
本発明の化合物は、この方法で試験され得る。
【０４１１】
（実施例４０）
（うっ血性心不全のモデル）
（実験準備）
２２５〜２７５ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、ケタミン／キシラジン（９５ｍｇ／ｋｇおよび５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔し、そして１４〜１６ゲージの改変静脈内カテーテルを挿管する。身体中心温度（ｃｏｒｅ  ｂｏｄｙ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）を、加熱ブランケットを使用することによって、３７℃に維持する。この手術領域を、クリップ止めし、こすり、そしてこの動物を、右横臥位にし、そして最初に１０〜１５ｃｍ  Ｈ２Ｏのピーク吸気圧力および６０〜１１０呼吸／分の呼吸数を有する人工呼吸器を取り付ける。１００％Ｏ２を、この人工呼吸器によってこの動物に送達する。ＥＣＧ電極を配置して、標準リードＩＩ  ＥＣＧを記録する。切開を、第４〜第５肋間隙にわたり胸郭で行う。下にある筋肉を、外側胸静脈を避けるよう慎重に解剖して、肋間筋肉を露出する。胸腔を、第４〜第５肋間隙を通して入り、そして切開部を広げて、心臓を見えるようにする。心膜を開いて、心臓を露出する。
【０４１２】
テーパー針に通した６−０シルク縫合糸を、その起点付近で左冠状動脈の周りに通し、この起点は、左心耳の挿入部から約１ｍｍである。冠状動脈を、縫合糸をこの動脈の周りに結ぶことによって塞ぐ。ＥＣＧを、虚血を示すＳ−Ｔ変化についてモニタリングする。この動物が心室性細動を発症した場合、穏やかな心臓マッサージを使用して、この動物を正常な拍動に変える。偽操作コントロールを、同じ手順に供するが、縫合糸は結ばない。切開部を三層で閉じる。感染した動物または瀕死の動物は、研究から排除する。
【０４１３】
手術の４週間後、動物を麻酔し、そしてカテーテルを右頸動脈に配置し、そして血流力学的測定のために、左心室まで進める。圧力トレース記録し、そして心拍数、左心室の収縮期血圧および拡張期血圧、左心室の展開時血圧、ならびにｄＰ／ｄｔ最大値および最小値について分析する。測定を行った後、２ｍｌの血液を取り、血清チューブおよび血漿チューブに入れる。心臓を取り出し、そしてＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ装置を以下のように配置する。
【０４１４】
（Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ手順）
緩衝液調製Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅｌｅｉｔ（ＫＨ）緩衝溶液（ＮａＣｌ  １１８ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＣｌ  ４．７ｍｍｏｌ／Ｌ、ＭｇＳＯ４  １．２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＫＨＰＯ４  １．２ｍｍｏｌ／Ｌ、グルコース  １１ｍｍｏｌ／Ｌ、ＮａＨＣＯ３  ２５ｍｍｏｌ／Ｌ、およびＣａＣｌ２  ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ（Ｓｉｇｍａ）を含む）を、Ｎａｎｏｐｕｒｅ発熱物質を含まない水を使用して、毎日新たに作製した。
【０４１５】
動物は、２００単位のヘパリンを受容し、胸部を開き、心臓を素早く切り出し、氷冷ＫＨ緩衝溶液中においた。心臓の収縮活性が完全に止んだ後に、心臓を切り取り、そして上行大動脈を結合組織から取り除く。心臓を、素早く秤量し、次いで、大動脈にカニューレを挿入し、そして心臓を、非再循環Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流装置に取り付ける（Ｒａｄｎｏｔｉ  Ｇｌａｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｒｏｖｉａ，ＣＡ）。心臓を、９５％Ｏ２および５％ＣＯ２で酸素付加したＫＨ緩衝溶液を用いて、大動脈を介して、逆行様式で灌流して、３７℃でｐＨ７．４を維持する。収縮機能を評価するために、ラテックスバルーンを、僧帽弁口を通して左心室に挿入し、そして剛性のポリエチレンチュービングによって、圧力変換器に接続する。バルーンを水を用いて、１〜１０ｍｍＨｇの左心室最終拡張圧力（ＬＶＥＤＰ）まで、膨張させる。流速は、１２ｍｌ／分で開始し、そして６５ｍｍＨｇと７５ｍｍＨｇとの間の灌流圧力を得るために、ベースラインの最初の１５分間の間、調節される。ベースラインについての標的パラメーターは、以下の通りである：灌流圧力６５〜７５ｍｍＨｇ；ＬＶＥＤＰ  １０ｍｍＨｇ。
【０４１６】
心臓を１５分間安定化させる。この時間の後、機能的測定を行い、この後、圧力容積曲線を、バルーンの容積を０．０５ｍｌの増分で調節し、そして心室圧力を記録することによって作製する。左心室収縮期圧力（ＬＶＳＰ）、左心室および拡張期圧力（ＬＶＥＤＰ）、左心室展開時（ｄｅｖｅｌｏｐｏｅｄ）圧力（ＬＶＤＰ）、左心室圧力の上昇および降下の一次導関数（ｄｐ／ｄｔ最大、ｄｐ／ｄｔ最小）、灌流圧力および心拍数を、コンピューター化したデータ獲得システムを使用して、自動的に記録する。
【０４１７】
（他の測定）
除去後、心臓、肺および肝臓を秤量した。肺および肝臓を計量し、湿潤  対  乾燥の比を決定するために、一晩乾燥させる。
【０４１８】
Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ手順の完了後、心臓を、冷生理食塩水に入れて、拍動を止め、次いで頂部から基部へと５つの２ｍｍの厚みの横断スライスに切断する。スライス＃３を、０．９％生理食塩水中１％のトリフェニルテトラゾリウムクロリド（ＴＴＣ）において、３７℃で２０分間インキュベートする。テトラゾニウムは、デヒドロゲナーゼ酵素の存在下でＮＡＤＨと反応し、生存組織を深赤色に染色し、これは梗塞した淡く染色していない壊死組織から容易に区別される。染色手順のために、このスライスを、小さいペトリ皿のフタの中に、頂端部を下にして置く。この皿の底を、このスライスの上に置き、これらのスライスを平らに保つ。次いで、このスライスを写真撮影し、そして梗塞した組織、左心室および右心室の面積を、コンピューター画像分析システムを使用して決定する。梗塞の大きさを、全心室の割合として表す。左心室および右心室の全面積を測定する。残りの部分は、右心室および左心室に分けて、チオバルビツール反応性物質（ＴＢＡＲＳ）およびグルタチオンアッセイのために凍結する。
【０４１９】
（処理プロトコール）
偽操作群およびコントロール群に対して処理を与えない。
【０４２０】
（ＣＨＦ研究についての測定）
インビボ測定は、心拍数（ＨＲ）、左心室の収縮期血圧（ＬＶＳＰ）、左心室最終拡張期血圧（ＬＶＥＤＰ）、ｄＰ／ｄｔの最小値および最大値、右心室収縮期圧力（ＲＶＳＰ）、右心室拡張期圧力（ＲＶＤＰ）、および右心室最終拡張期圧力（ＲＶＥＤＰ）、ならびに全体重から構成される。エキソビボ測定は、ＨＲ、ＬＶＳＰ、ＬＶＥＤＰ、ｄＰ／ｄｔの最小値および最大値、ならびに圧力容積曲線から構成される。心臓重量、梗塞サイズ、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ）、カタラーゼ、チオバルビツール反応性物質（ＴＢＡＲＳ）、グルタチオン比（ＧＳＨ／ＧＳＳＧ）、肺および肝臓の湿潤重量  対  乾燥重量の比、血清イソプロスタンおよびインターロイキン−６（ＩＬ−６）が、エキソビボでも測定される。
【０４２１】
本発明の化合物は、この方法によって試験され得る。
【０４２２】
（実施例４１）
（インターロイキン−１β  ミクログリア細胞アッセイ）
（材料および装置）
Ａ．細胞調製および実験のための材料
−マウスミクログリア細胞株
−ＤＭＥＭ高グルコース培地（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１１９６５−０９２）
−ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＳＨ３００７０．０３）
−１００×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１５１４０−１２２）
−ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｌ２５３７）
−インターフェロン−γ（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃１４７７７）
−Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｃ２９２５）
−ＨＢＳＳ緩衝液（９５０ｍｌ  発熱物質を含まない水，２．４４ｇ／Ｌ  ＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ、３．７３ｇ／Ｌ  ＫＣｌ、５９．５８ｇ／Ｌ  Ｈｅｐｅｓ、５８．４４ｇ／Ｌ  ＮａＣｌ、１．３６ｇ／Ｌ  ＫＨ２ＰＯ４、１．９１ｇ／Ｌ  ＣａＣｌ２．２Ｈ２ＯおよびＨＣｌを用いてｐＨ４．５まで）
−ポリ−Ｄ−リジンでプレコートした滅菌９６−ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔａｌｏｇ＃３６６５）
−９６−ウェルディープウェルマザープレート、ＤｙＮＡ  Ｂｌｏｃｋ  １０００（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃４０００２−００８）。
【０４２３】
Ｂ．Ｉｌ−１β  Ｅｌｉｓａについての材料
−マウスＩＬ−１β  Ｄｕｏ  Ｓｅｔ（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃  ＤＹ４０１）
−基質溶液（Ｒ  ＆  Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＤＹ  ９９９）
−ウシ血清アルブミン画分Ｖ（ＢＳＡ  Ｖ）（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ４５０３）
−９６−ウェルＣｏｓｔａｒ  ＥＩＡ高結合プレート（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃２９４４２−３０２）
−プレートシール（ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃２９４４２−３１０）
−ＰＢＳ（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔａｌｏｇ＃９２４０）
−細胞培養等級水（Ｉｒｖｉｎｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｃａｔａｌｏｇ＃９３１２）
−Ｔｗｅｅｎ  ２０（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ  １３７９）
−スクロース（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｓ７９０３）
−アジ化ナトリウム（Ｓｉｇｍａ  Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｓ  ８０３２）
−Ｈ２ＳＯ４  ５Ｎ  （ＶＷＲ  Ｃａｔａｌｏｇ＃ＪＴ  ５６９１−２）。
【０４２４】
（実験調製および手順）
（ＬＰＳ活性化）
マウスミクログリア細胞を、ポリ−Ｄ−リジンコーティング９６ウェルプレートに、１０，０００細胞／ウェルの密度で、播種し、そして２４時間結合させた。細胞を、試験物品の存在下または非存在下で、ＬＰＳ（１０  ｇ／ｍｌ）およびＩＦＮγ（１０ｎｇ／ｍｌ）の添加によって刺激した。次いで、細胞を２４時間３７℃で、インキュベートし、その後、培地を除去し、そして以下に記載されるように、サイトカイン決定のために使用した。
【０４２５】
（細胞生存度）
試験物品への曝露後、マウスミクログリア細胞の生存度を、蛍光生存度色素、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎを使用して、決定した。Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎを、１×ＨＢＳＳ中の５μＭの作業濃度で使用した。細胞を、ＨＢＳＳ（２００μｌ／ウェル）で一度洗浄し、そして１００μｌのＣｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒ  Ｇｒｅｅｎを各ウェルに添加した。次いで、細胞を３７℃で３０分間インキュベートし、その後、Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｋｅｒを除去し、そして細胞をＨＢＳＳ（２００μｌ／ウェル）で一度洗浄した。１００μｌの新鮮なＨＢＳＳを、各ウェルに添加し、そしてプレートをＦｌｕｏｒｏｓｋａｎプレートリーダーで、４８５ｎｍの励起波長および５３８ｎｍの放射波長を使用して、読んだ。
【０４２６】
（マウス  ＩＬ−１β  Ｅｌｉｓａ）
溶液
洗浄緩衝液：ＰＢＳ  １Ｌ＋５００μｌ  Ｔｗｅｅｎ  ２０（最終０．０５％）ｐＨ  ７．２−７．４。
ブロッキング緩衝液：５００ｍｌ  ＰＢＳ＋５ｇ  ＢＳＡ  Ｖ（１％）＋２５ｇスクロース（５％）＋０．２５ｇアジ化ナトリウム（０．０５％）。
試薬希釈液：５００ｍｌ  ＰＢＳ＋５ｇ  ＢＳＡ  Ｖ（１％）ｐＨ７．２〜７．４、そしてフィルターは、０．２μｍを通して滅菌する。
停止溶液：２Ｎ硫酸。
【０４２７】
Ｄｕｏ  Ｓｅｔ調製：
１．ＩＬ−１β捕捉抗体を、１ｍｌのＰＢＳで再構成して、最終濃度の７２０μｇ／ｍｌを得、そして作業濃度は、４μｇ／ｍｌであった。１つの９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェルで）をコーティングするために、５６μｌの７２０μｇ／ｍｌストックを１０ｍｌのＰＢＳに希釈した。
２．ＩＬ−１β標準を、０．５ｍｌの試薬希釈液（７０ｎｇ／ｍｌ）で再構成した。高標準の１ｎｇ／ｍｌ（各々１００μｌ＋セリン希釈に十分な２ウェル）のために、７．１μｌの７０ｎｇ／ｍｌの標準を、０．５ｍｌの試薬希釈液に希釈した。
３．ＩＬ−１β検出抗体を、１ｍｌの試薬希釈液で再構成して、最終濃度の１８μｇ／ｍｌを得、そして作業濃度は、１００ｎｇ／ｍｌである。１つの９６ウェルプレート（１００μｌ／ウェルで）について、５６μｌの１８μｇ／ｍｌストックを、１０ｍｌの試薬希釈液に希釈した。
【０４２８】
（ＩＬ−１β  ＥＬＩＳＡ手順）
プレート調製：
１．Ｃｏｓｔａｒ  ＥＩＡ  Ｈｉ結合プレートを、捕捉抗体で、４μｇ／ｍｌで、コーティングした。各ウェルを１００μｌでコーティングし、そしてプレートをシールし、そして室温で一晩インキュベートした。
２．各ウェルを吸引し、そして洗浄緩衝液で３回洗浄した。各ウェルを頂部まで満たし、分配し、そして任意の残りの緩衝液を、プレートを反転させることによって除去し、そしてきれいなペーパータオルに穏やかに吸い取らせて除去した。
３．非特異的結合部位を、３００μｌのブロック緩衝液を各ウェルに添加することによって、ブロックし、そしてシール後、室温で少なくとも１時間インキュベートした。
４．洗浄後、プレートをここで、サンプルのために準備した。
【０４２９】
アッセイ手順：
５．１００μｌの標準またはサンプルのいずれかを、捕捉コーティングされかつプレブロックされたプレートの各ウェルに添加した。プレートをシールし、そして２時間室温でインキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
６．１００μｌの検出抗体（１００ｎｇ／ｍｌ）を各ウェルに添加した。
７．プレートをシールし、そして室温で２時間インキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
８．１００μｌのストレプトアビジン−ＨＲＰの作業希釈液を添加し、そしてプレートをシールし、そして暗所室温で、２０分間インキュベートし、続いて、工程２のように洗浄した。
９．新たな基質溶液を、呈色試薬Ａ（Ｈ２Ｏ２）および呈色試薬Ｂ（テトラメチルベンジジン）を、１：１の比で混合することによって、調製した。１００μｌのこの基質溶液混合物を、各ウェルに添加し、そしてプレートを暗所室温で、２０分間インキュベートした。
１０．５０μｌの停止溶液を、各ウェルに添加し、穏やかにたたく（ｔａｐｐｉｎｇ）ことによって混合を確実にした。
１１．各プレートを、Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘで１回、４５０ｎｍで読んだ。
【０４３０】
（結果）
上記のように試験した場合、本発明の化合物は、例えば、以下は、２０μＭ以下のＥＣ５０でＩＬ−１β誘導を阻害した：
・３−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニル）−２−（２−クロロ−４−フルオロ−フェニルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（４−フルオロ−ベンジルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−５Ｈ−フラン−２，２−ジカルボン酸ジエチルエステル；
・４−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−５−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・３−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニル）−２−（２−クロロ−６−フルオロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−メトキシ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニル）−２−（２，４−ジクロロ−ベンジルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（ベンゾチアゾール−２−スルフィニルメチル）−３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（６−ニトロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメタンスルフィニル）−２−（フラン−２−イルメタンスルフィニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾオキサゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−
２−カルボン酸メチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニル］−２−［４−（２−メトキシカルボニル−ビニル）−フェニルスルファニルメチル］−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−イソブチリルオキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（２，２−ジメチル−プロピオニルオキシ）−３−エトキシカルボニルメチルスルファニル−２−エトキシカルボニルメチルスルファニルメチル−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニル）−２−（４−フェニル−チアゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（フラン−２−イルメチルスルファニル）−２−（フラン−２−イルメチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ブチルスルファニル−２−ブチルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メトキシ−ベンジルスルファニル）−２−（４−メトキシ−ベンジルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−ベンジルスルファニル−２−ベンジルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−エトキシ−３−（１−エチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（１−オキシ−ピリジン−２−イルスルファニル）−２−（１−オキシ−ピリジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−３−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−メチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０４３１】
（実施例４２）
（ラット脚水腫アッセイ）
（動物調製）
１７５〜２００ｇの体重の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、この研究で使用する。動物を、標準的な実験室条件下で、水および市販のげっ歯類用食餌を自由に取れるようにする。室温を、２０〜２３℃に維持し、そして室内照明を、１２／１２時間の明／暗サイクルで設定する。動物を、研究の５〜７日前に実験室環境に順応させる。
【０４３２】
（実験手順）
ビヒクル、基準物質または試験物質を、カラゲナン注射の１時間前に投与することによって、各動物を以下のように処置する：
（大腿静脈を介するＩ．Ｖ．注射）
麻酔を、酸素中３．０％のイソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、この手順全体にわたって維持する。手術の前に、右大腿静脈の外側部位を、剃毛し、そして消毒する。右鼡径部領域を３ｃｍ切開し、そして大腿静脈を単離する。この大腿静脈を、微小血管クリップで一時的に結紮し、この大腿静脈上に小さな切開部を作成して、ポリエチレン（ＰＥ−５０）カテーテル（Ｂｅｃｔｏｎ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を導入し、進める。このカテーテルを、縫合糸（シルク  ５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ  Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。このカテーテルの他方の端部を、ボーラス注射のための生理食塩水で満たした注射器に取り付ける。止血剤を使用して、動物の背部の皮下に、ポケットを作成し、その結果、ＰＥカテーテルは、ボーラス注射または浸透圧ポンプによる連続的な注射のいずれかのために、肩甲骨の間の体外点まで挿入され得る。
【０４３３】
（Ｉ．Ｐ．注射）
目覚めたラットを、標準的な手掴み位置に保持する。２３  ３／４Ｇ針を、腹部の右下４分の１に、腹膜の中央からわずかに離れた場所を通して注射する。臓器注射を回避するために、注射器のプランジャーをわずかに引き戻す。流体が排出されない場合、この注射器の内容物は、腹腔中に送達される。
【０４３４】
（栄養供給）
標準的なラット栄養補給チューブ（Ｐｏｐｐｅｒ  ＆  Ｓｏｎｓ  Ｉｎｃ，ＮＹ）を、３ｃｃの皮下注射器に取り付ける。この動物を、垂直位置に保持する。給餌チューブを、口に入れ、次いで、このチューブが胃に達するまで徐々に進める（このチューブの適切な挿入長さは、給餌前に測定されるべきである）。この注射器の内容物を、ゆっくりと送達し、次いで、このチューブを引き抜く。
【０４３５】
処置の１時間後、各動物を、酸素中３．０％のイソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ  Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）で麻酔し、生理食塩水中１％のカラゲナンλＩＶ型（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）懸濁液（１００μｌ）を、右後足の足底内表面に投与する。足水腫を、カラゲナン注射の４時間後に、体積測定器を使用して足容量の増加を測定することによって、または精密はかりを使用して足重量の増加を測定することによってのいずれかで測定する。水腫の測定の直前に、これらの動物を、ＣＯ２窒息により安楽死させ、そして後の分析のために、５００μｌの血液を心臓穿刺によって採取する。足容量を、この足により置き換えられる、予め較正したチャンバから水の程度によって決定する。左後足（コントロール）の容量を、右後足（カラゲナンで処置）の容量から引いて、カラゲナン誘導性水腫の容量を決定する。足間の重量差を測定するために、両足を切断し、別々に計量した。
【０４３６】
モデル間の変動を最小限にするために、以下の工程を行う：
・カラゲナンを、研究の前（注射の２〜３時間前）に毎日新しく調製する。
・体積測定器を、研究の前に毎日較正する。
・カラゲナン注射により処置した足にかなりの出血または血腫を生じた場合、この動物をこの研究から除外する。
・測定の前に、各足を、脛骨足根関節で足首の周りに印をつけて、各足が同じレベルで浸されることを保証する。
・容量の読み取りを繰り返す必要がある場合、この足は完全に乾かされなければならない。
【０４３７】
（統計的分析）
右足と左足との間の重量または容量の差違を、分析用の動物の各々について計算する。グループデータを、平均＋／−ＳＥＭとして表し、ｐ＜０．０５を有意であるとみなす。群間の比較を、独立スチューデントｔ検定（２つの群の間）または一方向ＡＮＯＶＡに続くＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重比較によって行う。
結果：本発明の特定の化合物が、この方法によって試験された場合に、活性を示した。
【０４３８】
（実施例４３）
（局所アラキドン酸に対するマウス耳炎症応答）
（動物）
Ｂａｌｂ  Ｃ  マウス２３〜２８ｇ、Ｓｉｍｏｎｓｅｎ  Ｌａｂｓ，Ｇｉｌｒｏｙ，ＣＡから。
【０４３９】
（材料）
・アラキドン酸、純度９９％、Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｌｉｖｅｒ（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ）から、アセトン中で２ｍｇ／２０μｌ（２００ｍｇ／ｍｌ）で再構成される。
・吸入麻酔：イソフルラン３％（Ｂａｘｔｅｒ）。
・血液サンプルチューブ：Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブｗ／ヘパリン（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）。
・ＴＮＦａ  Ｅｌｉｓａアッセイ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）。
【０４４０】
（実験手順）
アセトン、エタノールまたは水性エタノールの溶液中で調製した試験化合物、ポジティブコントロール（アラキドン酸のみ）および標準（デキサメタゾン、０．１ｍｇ／ｋｇ）を、Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆレピペッター（ｒｅｐｉｐｅｔｔｏｒ）ピペットを用いて、各側に１０μｌの容量（合計２０μｌ）で、右耳の両面に適用する。３０分後、１０μｌのアラキドン酸を、この右耳の両側（合計２０μｌ）に適用する。アラキドン酸の適用の１時間後、このマウスをイソフルランで深く麻酔し、血液サンプルを眼窩洞を介して採取し、Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒチューブに入れる。次いで、これらの動物をＣＯ２吸入によって安楽死させ、右耳を根元から切断する。８ｍｍの皮膚パンチを使用して、耳組織の均一なプラグを得る。この耳プラグを、迅速に０．１ｍｇの位まで計量し、次いで、ＴＮＦαの決定のために瞬間冷凍する。
【０４４１】
（統計的分析）
群データを、平均＋／−ＳＥＭとして表し、ｐ＜０．０５を有意であるとみなす。群間の比較を、独立スチューデントｔ検定（２つの群の間）またはＡＮＯＶＡ（３つ以上の群）に続くＤｕｎｎｅｔ検定によって行う。
【０４４２】
（結果）
本発明の化合物、例えば、以下は、この方法によって試験した場合、水腫の有意な減少（１０〜７０％、ｐ＜０．０５）を示した：
・３−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニル）−２−（５−フェニル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−５−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−３−ヒドロキシ−５−ヒドロキシメチル−５Ｈ−フラン−２−オン；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（４−トリフルオロメチル−ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリミジン−２−イルスルファニル）−２−（ピリミジン−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（２−スルホ−エチルスルファニル）−２−（２−スルホ−エチルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−２−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニル）−２−（ベンゾセレナゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−スルホン酸−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニル）−２−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニル）−２−（ピロリジン−１−カルボチオイルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−シクロヘキシルスルファニル−２−シクロヘキシルスルファニルメチル−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニル）−２−（２−ジメチルアミノ−エチルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル、塩酸塩；
・４−ヒドロキシ−５−オキソ−３−（ピリジン−４−イルスルファニル）−２−（ピリジン−４−イルスルファニルメチル）−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・５，８−ジクロロ−３−ヒドロキシ−２−オキソ−２Ｈ−１−オキサ−４，９−ジチア−ベンゾ［ｆ］アズレン−１０ａ−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−クロロ−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル；
・３−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニル）−２−（５−アミノ−［１，３，４］チアジアゾール−２−イルスルファニルメチル）−４−ヒドロキシ−５−オキソ−２，５−ジヒドロ−フラン−２−カルボン酸エチルエステル。
【０４４３】
本発明は、その特定の実施形態を参照して記載されてきたが、本発明の真の精神および範囲から逸脱することなく、種々の変更がなされ、等価物が置換され得ることが、当業者に理解されるべきである。さらに、多くの改変が、特定の状況、材料、物質の組成、プロセス、プロセス工程または工程を適合するために、本発明の目的、精神および範囲に対してなされ得る。このような改変の全ては、添付の特許請求の範囲内であることを意図する。上記の特許および刊行物の全ては、本明細書中で参考として援用される。
【国際調査報告】
2006502963.tif 000150