(57)【要約】ＭＩＦ活性が関連する病因状態の処置を含み、種々の疾患の処置で有用であるＭＩＦの阻害剤が提供される。ＭＩＦの阻害剤は、その立体異性体、プロドラッグおよび医薬的に許容可能な塩を含む以下の構造（Ｉａ）および（Ｉｂ）を持ち、式中ｎ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、ＸおよびＺは本明細書で定義されたようなものである。医薬的に許容可能な担体との組み合わせで、ＭＩＦの阻害を含む組成物、ならびにその使用のための方法も提供される。
2006517977.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造
【化１】
2006517977.tif 000132
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグまたはその医薬的に許容可能な塩であって、式中Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０であるという条件で、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、
【化２】
2006517977.tif 000133
およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、
置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、およびＲ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択される、化合物。
【請求項２】
医薬的に許容可能な担体または希釈液との組み合わせでの、請求項１の化合物を含む、組成物。
【請求項３】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における炎症を治療するための方法。
【請求項４】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における敗血性ショックを治療するための方法。
【請求項５】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における関節炎を治療するための方法。
【請求項６】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物におけるがんを治療するための方法。
【請求項７】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における急性呼吸窮迫症を治療するための方法。
【請求項８】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における炎症性疾患を治療するための方法。
【請求項９】
前記炎症性疾患が、リウマチ様関節炎、変形性関節炎、炎症性腸疾患および喘息からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における自己免疫疾病を治療するための方法。
【請求項１１】
前記自己免疫疾病が、糖尿病、喘息および多発性硬化症からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における免疫応答を抑制するための方法。
【請求項１３】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における血管新生を減少させるための方法。
【請求項１４】
効果的な量の請求項１に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における過剰グルココルチコイドレベルに関連する疾患を処置するための方法。
【請求項１５】
前記疾患がクッシング病である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するための医薬組成物であって、請求項１に記載のＭＩＦ阻害化合物、および前記疾患または疾病を処置するための薬剤を含む医薬組成物であって、前記薬剤が、測定可能なＭＩＦ阻害活性を持たない、医薬組成物。
【請求項１７】
ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するための医薬組成物であり、請求項１に記載のＭＩＦ阻害化合物、および非ステロイド性抗炎症薬剤類、抗感染薬剤類、ベータ刺激剤類、ステロイド類、抗ヒスタミン類、抗がん剤類、喘息薬類、敗血薬類、関節炎薬類および免疫抑制剤類からなる群より選択される薬剤を含む医薬組成物。
【請求項１８】
構造
【化３】
2006517977.tif 000134
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩。
【請求項１９】
効果的な量の、構造
【化４】
2006517977.tif 000135
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩を、患者に投与することを含む、必要としている患者のＭＩＦ活性を減少させる方法。
【請求項２０】
構造
【化５】
2006517977.tif 000136
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩であって、式中Ｒ1は、−（ＣＨ2）nＣＯＯＲ’’’、−（ＣＨ2）nＮ（Ｒ’’’）2、−（ＣＨ2）nＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’’’）2、
【化６】
2006517977.tif 000137
からなる群より選択され、ｎは１〜４の整数であり、Ｒ12は、水素、塩素、フッ素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ4は、
【化７】
2006517977.tif 000138
からなる群より選択され、Ｒ’’’は独立して、水素、フッ素、塩素、直線Ｃ1〜Ｃ5アルキルおよび分岐Ｃ1〜Ｃ5アルキルからなる群より選択され、Ｒ’’’’は、水素、ハロゲン、アルキル、シアノ、ニトロ、−ＣＯＯＲ’’’、−Ｎ（Ｒ’’’）2、−ＯＲ’’’、−ＮＨＣＯＲ’’’および−ＯＣＦ3からなる群より選択される、化合物。
【請求項２１】
構造
【化８】
2006517977.tif 000139
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩であって、式中
Ｒ1は、
【化９】
2006517977.tif 000140
からなる群より選択され、Ｒ12は、水素、塩素、フッ素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ4は、
【化１０】
2006517977.tif 000141
からなる群より選択される、化合物。
【請求項２２】
必要とする患者におけるＭＩＦ活性を減少させるための方法であって、効果的な量の構造
【化１１】
2006517977.tif 000142
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグまたはその医薬的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、式中Ｘは酸素または硫黄であり、
Ｚは−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０であるという条件で、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、
【化１２】
2006517977.tif 000143
およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’
’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、置換アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、およびＲ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択される、
方法。
【請求項２３】
構造
【化１３】
2006517977.tif 000144
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグまたはその医薬的に許容可能な塩であって、式中Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０であるという条件で、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、ア
シルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、
【化１４】
2006517977.tif 000145
およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択される、化合物。
【請求項２４】
医薬的に許容可能な担体または希釈液との組み合わせでの、請求項２３の化合物を含む
組成物。
【請求項２５】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における炎症を治療するための方法。
【請求項２６】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における敗血性ショックを治療するための方法。
【請求項２７】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における関節炎を治療するための方法。
【請求項２８】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物におけるがんを治療するための方法。
【請求項２９】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における急性呼吸窮迫症を治療するための方法。
【請求項３０】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における炎症性疾患を治療するための方法。
【請求項３１】
前記炎症性疾患が、リウマチ様関節炎、変形性関節炎、炎症性腸疾患および喘息からなる群より選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における自己免疫疾病を治療するための方法。
【請求項３３】
前記自己免疫疾病が、糖尿病、喘息および多発性硬化症からなる群より選択される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における免疫応答を抑制するための方法。
【請求項３５】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における血管新生を減少させるための方法。
【請求項３６】
効果的な量の請求項２３に記載の化合物を、動物に投与することを含む、温血動物における過剰グルココルチコイドレベルに関連する疾患を処置するための方法。
【請求項３７】
前記疾患がクッシング病である、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するための医薬組成物であり、請求項２３に記載のＭＩＦ阻害化合物および前記疾患または疾病を処置するための薬剤を含む医薬組成物であり、前記薬剤が、測定可能なＭＩＦ阻害活性を持たない、医薬組成物。
【請求項３９】
ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するための医薬組成物であり、請求項２３に記載のＭＩＦ阻害化合物、および非ステロイド性抗炎症薬剤類、抗感染薬剤類、ベータ刺激剤類、ステロイド類、抗ヒスタミン類、抗がん剤類、喘息薬類、敗血薬類、関節炎薬類および免疫抑制剤類からなる群より選択される薬剤を含む医薬組成物。
【請求項４０】
必要とする患者におけるＭＩＦ活性を減少させるための方法であって、効果的な量の構
造
【化１５】
2006517977.tif 000146
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグまたはその医薬的に許容可能な塩を前記患者に投与することを含み、式中Ｘは酸素または硫黄であり、
Ｚは−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０であるという条件で、Ｚが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリ
ール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、および、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択される、方法。
【請求項４１】
式ＩＶａの化合物を調製するための処理方法であって、式Ｉ
【化１６】
2006517977.tif 000147
の化合物を、式ＩＩ
【化１７】
2006517977.tif 000148
の化合物と反応させ、それによって、式ＩＩＩ
【化１８】
2006517977.tif 000149
の化合物を得るステップ、および式ＩＩＩの化合物を、式Ｘ−Ｒ1の化合物と反応させ、それによって、式ＩＶａの化合物を得るステップを含み、
【化１９】
2006517977.tif 000150
式ＩＶａの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であって、
式中、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置
換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、および、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択され、
Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、およびＲ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される、処理方法。
【請求項４２】
式ＩＶｂの化合物を調製するための処理方法であって、
式Ｉ
【化２０】
2006517977.tif 000151
の化合物を、式ＩＩ
【化２１】
2006517977.tif 000152
の化合物と反応させ、それによって、式ＩＩＩ
【化２２】
2006517977.tif 000153
の化合物を得るステップ、および式ＩＩＩの化合物を、式Ｘ−Ｒ1の化合物と反応させるステップで、式中、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、およびＲ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、それによって、式ＩＶｂの化合物を得るステップを含み、
【化２３】
2006517977.tif 000154
式ＩＶｂの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適である、処理方法。
【請求項４３】
式ＩＶａの化合物を調製するための処理方法であって、
式Ｉ
【化２４】
2006517977.tif 000155
の化合物を、ピペラジンと反応させ、それによって、式ＩＩＩａ
【化２５】
2006517977.tif 000156
の化合物を得るステップ、およびその後式ＩＩＩａの化合物を、式Ｒ4−Ｃ（Ｏ）−Ｘの化合物と反応させ、それによって、式ＩＶａの化合物を得るステップを含み、
【化２６】
2006517977.tif 000157
式ＩＶａの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であって、
式中、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリー
ル、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、およびＲ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される、処理方法。
【請求項４４】
式ＩＶｂの化合物を調製するための処理方法であって、
式Ｉ
【化２７】
2006517977.tif 000158
の化合物を、ピペラジンと反応させ、それによって、式ＩＩＩａ
【化２８】
2006517977.tif 000159
の化合物を得るステップ、およびその後式ＩＩＩａの化合物を、式Ｒ4−Ｃ（Ｏ）−Ｘの化合物と反応させ、それによって、式ＩＶｂの化合物を得るステップを含み、
【化２９】
2006517977.tif 000160
式ＩＶｂの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であって、式中、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリ
ール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、およびＲ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される、処理方法。
【請求項４５】
式Ｉの中間体化合物を調製するための処理方法であって、
式Ｉａａ
【化３０】
2006517977.tif 000161
の化合物を、シクロヘキサンアミンと反応させて、それによって式ＩＩＩａａ
【化３１】
2006517977.tif 000162
の化合物を得るステップ、および式ＩＩＩａａの化合物をＰＯＣｌ3と反応させて、それによって、式Ｉａ
【化３２】
2006517977.tif 000163
の化合物を得るステップ、およびその後に、式Ｉａの化合物を酢酸中の酢酸アンモニウムと反応させ、それによって式Ｉの中間体化合物を得るステップを含み、
【化３３】
2006517977.tif 000164
式Ｉの化合物が、ＭＩＦ阻害剤の調製に好適であって、
式中、Ｒ2およびＲ3は独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択されるか、またはＲ5およびＲ6が隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキ
ル、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリールおよびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、およびＲ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、式中ｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される、処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）の阻害剤、ＭＩＦ阻害剤を同定するための方法、およびそのような阻害剤の投与によって、ＭＩＦ−関連疾病を処置する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リンフォカイン、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）は、宿主防御におけるマクロファージの機能の仲介物として同定され、その発現が、遅延型過敏症、免疫調節、炎症および細胞性免疫に相関する。Ｍｅｔｚ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６６：１９７−２２３，１９９７を参照のこと。大きさとして１２〜１３キロダルトン（ｋＤａ）である、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）は、いくつかの哺乳動物および鳥類で同定され、たとえば、Ｇａｌａｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｅｄ．Ｅｕｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．３１９：２３３−２３６，１９９３、Ｗｉｓｔｏｗ  ｅｔ  ａｌ．．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：１２７２−１２７５，１９９３、Ｗｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７５２２−７５２６，１９８９、Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６５：７５６−７５９，１９９３、Ｂｌｏｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２：２０９５−２１０２，１９９３、およびＢｌｏｃｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６０：２６９−２７０，１９９２を参照のこと。ＭＩＦ阻害剤はまた、その内容、全体が参照文献にて本明細書に組み込まれている、２００２年５月２４日に申請された、同時係属米国特許明細書番号第１０／１５６，６５０号でも開示されている。
【０００３】
ＭＩＦは、マクロファージ遊走を阻害可能なものとして、まず特徴づけされたけれども、ＭＩＦはまた、インターフェロン−ガンマによって影響を受けるものとは異なる機構で、マクロファージ接着に効果を与えること、インターロイキン−１−β、インターロイキン−６、および腫瘍壊死因子アルファを発現するように、マクロファージを誘導すること、およびＨＬＡ−ＤＲ（ヒト白血球抗原（Ｈｕｍａｎ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ）、ｄ−関連、クロモソーム６上のｄ座にてコードされ、リンパ細胞上で見られた）をアップ−レギュレートすること、一酸化窒素合成を増やし一酸化窒素濃度を上昇させること、およびＬｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｅｎｏｖａｎｉ腫瘍細胞を殺し、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ａｖｉｕｍ増殖を阻害するように、マクロファージを活性化することも明らかである。ＭＩＦは、免疫回避分子としてのその潜在的な役割に加えて、ウシ血清アルブミン、または不完全フロイントまたはリポソーム中のＨＩＶ  ｇｐ１２０と一緒に与えたときに、免疫アジュバントとして働き得、完全フロイントと同等の増殖を誘導する抗原を誘発させる。また、ＭＩＦは、グルココルチコイドカウンター調節因子および血管新生因子として記述されてきている。グルココルチコイドによって誘導され、阻害はされないいくつかのタンパク質の１つとして、グルココルチコイドの免疫抑制効果を減衰するように働く。それゆえ、グルココルチコイドの免疫抑制効果を調節する強力な因子として見られる。したがって、その活性／遺伝子発現が、過剰な外来性グルココルチコイドの投与（たとえば、炎症、免疫などを抑制することを目的とした臨床時）によって、過剰誘導される場合に、ＭＩＦそれ自身が、炎症／免疫応答を悪化させるので、重大な毒性が存在する。Ｂｕｃｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３３：２４３−２５２，１９９８を参照のこと。
【０００４】
ＭＩＦはまた、ｅｒｋリン酸化およびＭＡＰキナーゼを誘導し、マトリックスメタロプロテアーゼ、ｃ−ｊｕｎ（プロトがん遺伝子、ｊｕｎ）、ｃ−ｆｏｓ（プロトがん遺伝子
ｆｏｓ）、およびＩＬ−１  ｍＲＮＡのアップレギュレーションを誘導する、細胞内カスケードを順に活性化する、特異的レセプターを介して細胞上で働くと考えられている一方で（Ｏｎｏｄｅｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：４４４−４５０，２０００を参照のこと）、適切な基質（たとえばドパクローム）を互変異性化させるその能力によって例示されるように、外因性酵素活性も持つ。さらに、この酵素的活性が、ＭＩＦに対する生物学的応答、およびｉｎ  ｖｉｔｒｏおよびｉｎ  ｖｉｖｏでのこのタンパク質の活性を仲介するのかどうかは、不明のままである。ＭＩＦの部位特異的変異導入によって、完全に固有の活性を持つが、酵素活性は持たない変異体が産出された（Ｈｅｒｍａｎｏｗｓｋｉ−Ｖｏｓａｔｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３８：１２８４１−１２８４９，１９９９）一方で、Ｓｗｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．は、サイトカイン活性とＭＩＦに対する触媒部位間の直接の関係を記述した（Ｓｗｏｐｅ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１７（３）：３５３４−３５４１，１９９８）。したがって、ドパクロームトートメラーゼのみの阻害を介したＭＩＦ活性の阻害剤を同定する戦略によって、臨床値のＭＩＦ活性の阻害剤が産出されることは、不明である。ＭＩＦの、その細胞表面レセプターの阻害を評価する能力はまた、高親和性レセプターが現在知られていないので、制限される。
【０００５】
ＭＩＦが、感染部位においてマクロファージを濃縮するそのサイトカイン活性、および細胞仲介免疫に関して知られているという観察によって、ＭＩＦ阻害剤を開発する興味が引き出される。さらに、ＭＩＦは、マクロファージ接着、ファゴサイトーシス、および殺腫瘍活性の仲介物として知られている。Ｗｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：２００６−２０１１，１９９１を参照のこと。したがって、ＭＩＦの阻害は、結果として、さもなければマクロファージが炎症の部位に運びうる、サイトカイン、増殖因子、ケモカインおよびリンフォカインの間接的な阻害となる。ヒトＭＩＦ  ｃＤＮＡが、Ｔ−細胞株より単離されてきており、活性形態としてホモトリマーを形成する、１１５アミノ酸残基を持つ、約１２．４ｋＤａの分子量を持つタンパク質をコードしている（Ｗｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７５２２−７５２６，１９８９）。ＭＩＦが本来、活性化Ｔ−細胞にて観察された一方で、現在では、肝臓、肺、眼レンズ、卵巣、脳、心臓、脾臓、腎臓、筋肉などを含む種々の組織にて報告されている。Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３（１）：６１−６７，１９９９を参照のこと。ＭＩＦの他の特徴としては、小胞体／ゴルジ体（ＥＲ／Ｇｏｌｇｉ）経路を介した古典的な分泌を指向するための、典型的なリーダー配列の欠如（リーダー欠損タンパク質）があげられる。
【０００６】
ＭＩＦのサイトカイン活性を中和することによって働くＭＩＦ阻害剤（およびＭＩＦ阻害剤を同定するための方法）は、他の型の阻害剤に対して有意な利点を示す。たとえば、トートメラーゼ活性のみと、炎症応答の間の関係は、議論の余地がある。さらに、細胞内で働く阻害剤は、しばしば、関連標的におけるその作用、および細胞内の標的の活性化の効力によって、しばしば毒性である。リガンドレセプター複合体の小分子阻害剤は、同定するのが難しく、もちろん最適化および開発するのも難しい。ＭＩＦのようなサイトカインの理想的な阻害剤は、ＭＩＦそれ自身を変化させるものであり、細胞より放出されたときに、効果的に中和される。この活性を持つ小分子は、タンパク質と薬物としての化学物質の間の基本的な差違があるために、抗体より優れている。ＭＩＦ阻害剤は、２００２年５月２４日に申請された、同時係属米国特許明細書番号第１０／１５６，６５０号にて開示されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
ＭＩＦは、種々の組織で同定されてきており、多数の病理学的事象に関連してきているので、ＭＩＦの阻害剤を同定するための、本技術分野での必要性が存在する。また、その
ような阻害剤を含む医薬組成物、ならびに、たとえば免疫関連疾病、または腫瘍関連血管新生のような、他のＭＩＦ誘導病理学的事象を処置するための、その使用に関連した方法に対する必要性も存在する。好ましい実施形態が、これらの要求を満たし得、同様に、他の利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
好ましい実施形態において、ＭＩＦの阻害剤は、立体異性体、プロドラッグおよびその医薬的に許容可能な塩を含む、以下の一般式（Ｉａ）および（ＩＩｂ）をもって、提供され、
【０００９】
【化１】
2006517977.tif 000003
【００１０】
式中ｎ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、ＸおよびＺは以下で示したようなものである。
【００１１】
好ましい実施形態のＭＩＦ阻害剤は、広い範囲での治療適用において、有用性を持ち、制限はしないが、種々の免疫関連応答、腫瘍増殖（たとえば前立腺がんなど）、糸球体腎炎、炎症、マラリア性貧血、敗血性ショック、腫瘍関連血管新生、硝子体網膜症、乾癬、移植片対ウイルス性宿主疾患（組織拒絶）、アトピー性皮膚炎、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、中耳炎、クローン病、急性呼吸窮迫症候群、遅延型過敏症などを含む、種々の疾病、疾患または病理学的状態を処置するために使用しうる。たとえば、Ｍｅｔｚ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ（上記）、Ｓｗｏｐｅ  ａｎｄ  Ｌｏｌｉｓ，Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １３９：１−３２，１９９９、Ｗａｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍ．Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．１５（１）：４７−５４，１９９９、Ｎｉｓｈｉｈｉｒａ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２（１）：１７−２８，１９９８、Ｂｕｃａｌａ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４０：７４−８２，１９９８、Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７６（３−４）：１５１−１６１，１９９８、Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ  ３（１１）：５０２−５０７，１９９７、Ｂｕｃａｌａ  ｅｔ  ａｌ．，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１０（１４）：１６０７−１６１３，１９９６を参照のこと。そのような方法には、好ましい実施形態にて提供されたような、効果的な量の１つまたはそれ以上のＭＩＦの阻害剤を、好ましい医薬組成物の形態で、それを必要としている動物に投与することが含まれる。したがって、他の実施形態において、医薬組成物は、医薬的に許容可能な担体および／または希釈液との組み合わせにて、１つまたはそれ以上の好ましい実施形態のＭＩＦの阻害剤を含んで提供される。
【００１２】
好ましい実施形態の１つの戦略は、ＭＩＦの構造変化を誘導するように、そして、モノクローナル抗体に対する免疫応答性の欠失を誘導するように、ＭＩＦと相互作用する分子
を特徴づける。スクリーニングによって同定されたときに、この変化により、ＭＩＦの小分子阻害剤を同定する。この特定の観点は、免疫応答性の欠失が、活性に関するサロゲートとして働きうる場合に、生物活性ポリペプチドに拡張されうる（たとえば、サイトカイン活性、酵素活性、共因子活性など）。
【００１３】
第一実施形態において、化合物は、構造
【００１４】
【化２】
2006517977.tif 000004
【００１５】
または立体異性体、プロドラッグまたはその医薬的に許容可能な塩を持って提供され、式中Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5−、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、
【００１６】
【化３】
2006517977.tif 000005
【００１７】
−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘ
テロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【００１８】
第一実施形態の一つの観点において、組成物が、医薬的に許容可能な担体または希釈液との組み合わせで、第一実施形態の化合物を含んで提供される。
【００１９】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での炎症を処置するために、方法が提供される。
【００２０】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での敗血性ショックを処置するために、方法が提供される。
【００２１】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での関節炎を処置するために、方法が提供される。
【００２２】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物でのがんを処置するために、方法が提供される。
【００２３】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での急性呼吸窮迫症候群を処置するために、方法が提供される。
【００２４】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での炎症性疾患を処置するために、方法が提供される。前記炎症疾患には、リウマチ様関節炎、変形性関節炎、炎症性腸疾患または喘息が含まれる。
【００２５】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での自己免疫疾病を処置するために、方法が提供される。前記自己免疫疾病には、糖尿病、喘息または多発性硬化症が含まれうる。
【００２６】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での免疫応答を抑制するために、方法が提供される。
【００２７】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での血管新生を減少させるために、方法が提供される。
【００２８】
第一実施形態の一つの観点において、効果的な量の第一実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での過剰なグルココルチコイドに関連する疾患を処置するために、方法が提供される。前記疾患には、クッシング病が含まれうる。
【００２９】
第一実施形態の一つの観点において、ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するために医薬組成物が提供され、前記医薬組成物には、第一実施形態にしたがったＭＩＦ阻害化合物、および前記疾患または疾病を処置するための薬物が含まれ、そこで前記薬剤は、測定可能なＭＩＦ阻害活性を持たない。
【００３０】
第一実施形態の一つの観点において、ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するために医薬組成物が提供され、前記医薬組成物には、第一実施形態にしたがったＭＩＦ阻害化合物、および非ステロイド抗炎症剤、抗感染剤、ベータ刺激剤、ステロイド類、抗ヒスタミン類、抗がん剤類、喘息薬剤、敗血症薬類、関節炎薬類および免疫抑制剤類からなる群より選択される薬物が含まれる。
【００３１】
第二の実施形態において、化合物が、構造
【００３２】
【化４】
2006517977.tif 000006
【００３３】
または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩をもって提供される。
【００３４】
第三の実施形態において、効果的な量の、構造
【００３５】
【化５】
2006517977.tif 000007
【００３６】
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるＭＩＦ活性を減少させるために、方法が提供される。
【００３７】
第四の実施形態において、化合物が、構造
【００３８】
【化６】
2006517977.tif 000008
【００３９】
または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩をもって提供され、式中Ｒ1は、
【００４０】
【化７】
2006517977.tif 000009
【００４１】
−ＣＨ2ＣＨ2Ｎ（Ｒ’’’）2、−ＣＨ2ＣＨ2ＮＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’’’）2、および−ＣＨ2ＣＯＯＲ’’’からなる群より選択され、Ｒ12は水素、塩素、フッ素およびメチルからなる群より選択され、Ｒ4が、
【００４２】
【化８】
2006517977.tif 000010
【００４３】
からなる群より選択され、Ｒ’’’が独立して、水素、フッ素、塩素、直線Ｃ1〜Ｃ5アルキル、および分岐Ｃ1〜Ｃ5アルキルからなる群より選択され、Ｒ’’’’が、水素、ハロゲン、アルキル、シアノ、ニトロ、−ＣＯＯＲ’’’、−Ｎ（Ｒ’’’）2、−ＯＲ’’’、−ＮＨＣＯＲ’’’および−ＯＣＦ3からなる群より選択される。
【００４４】
第五の実施形態において、化合物が、構造
【００４５】
【化９】
2006517977.tif 000011
【００４６】
または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩をもって提供され、式中Ｒ1は、
【００４７】
【化１０】
2006517977.tif 000012
【００４８】
からなる群より選択され、Ｒ4は、
【００４９】
【化１１】
2006517977.tif 000013
【００５０】
からなる群より選択され、Ｒ12は水素、塩素、フッ素およびメチルからなる群より選択される。
【００５１】
第六実施形態において、効果的な量の、構造
【００５２】
【化１２】
2006517977.tif 000014
【００５３】
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるＭＩＦ活性を減少させるために、方法が提供され、式中、Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４で
あり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5−、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、
【００５４】
【化１３】
2006517977.tif 000015
【００５５】
−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、置換アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【００５６】
第七の実施形態において、化合物が、構造
【００５７】
【化１４】
2006517977.tif 000016
【００５８】
または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩をもって提供され、式中、Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5−、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、
【００５９】
【化１５】
2006517977.tif 000017
【００６０】
−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換
アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【００６１】
第七実施形態の一つの観点において、組成物が、医薬的に許容可能な担体または希釈液との組み合わせで、第七実施形態の化合物を含んで提供される。
【００６２】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での炎症を処置するために、方法が提供される。
【００６３】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での敗血性ショックを処置するために、方法が提供される。
【００６４】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での関節炎を処置するために、方法が提供される。
【００６５】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物でのがんを処置するために、方法が提供される。
【００６６】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での急性呼吸窮迫症候群を処置するために、方法が提供される。
【００６７】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での炎症性疾患を処置するために、方法が提供される。前記炎症疾患には、リウマチ様関節炎、変形性関節炎、炎症性腸疾患または喘息が含まれる。
【００６８】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での自己免疫疾病を処置するために、方法が提供される。前記自己免疫疾病には、糖尿病、喘息または多発性硬化症が含まれうる。
【００６９】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での免疫応答を抑制するために、方法が提供される。
【００７０】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での血管新生を減少させるために、方法が提供される。
【００７１】
第七実施形態の一つの観点において、効果的な量の第七実施形態の化合物を温血動物に投与することを含む、前記動物での過剰なグルココルチコイドに関連する疾患を処置するために、方法が提供される。前記疾患には、クッシング病が含まれうる。
【００７２】
第七実施形態の一つの観点において、ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するために医薬組成物が提供され、前記医薬組成物には、第七実施形態にしたがったＭＩＦ阻害化合物、および前記疾患または疾病を処置するための薬物が含まれ、そこで前記薬剤は、測定可能なＭＩＦ阻害活性を持たない。
【００７３】
第七実施形態の一つの観点において、ＭＩＦが病原性である疾病または疾患を処置するために医薬組成物が提供され、前記医薬組成物には、第七実施形態にしたがったＭＩＦ阻害化合物、および非ステロイド抗炎症剤、抗感染剤、ベータ刺激剤、ステロイド類、抗ヒスタミン類、抗がん剤類、喘息薬剤、敗血症薬類、関節炎薬類および免疫抑制剤類からなる群より選択される薬物が含まれる。
【００７４】
第八実施形態において、効果的な量の、構造
【００７５】
【化１６】
2006517977.tif 000018
【００７６】
を持つ化合物、または立体異性体、プロドラッグ、またはその医薬的に許容可能な塩を患者に投与することを含む、それを必要とする患者におけるＭＩＦ活性を減少させるために、方法が提供され、式中、Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘ
テロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【００７７】
第九実施形態において、式Ｉ
【００７８】
【化１７】
2006517977.tif 000019
【００７９】
の化合物を、式ＩＩ
【００８０】
【化１８】
2006517977.tif 000020
【００８１】
の化合物と反応させること、それによって式ＩＩＩ
【００８２】
【化１９】
2006517977.tif 000021
【００８３】
の化合物を得ること、および式ＩＩＩの化合物を、式Ｘ−Ｒ1の化合物と反応させること、それによって式ＩＶａ
【００８４】
【化２０】
2006517977.tif 000022
【００８５】
の化合物を得ること、のステップを含む、式ＩＶａの化合物を調製するための処理方法が提供され、ここで、式ＩＶａの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であり、式中、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5−、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7、Ｒ8および−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換
アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。  
【００８６】
第十実施形態において、式Ｉ
【００８７】
【化２１】
2006517977.tif 000023
【００８８】
の化合物を、式ＩＩ
【００８９】
【化２２】
2006517977.tif 000024
【００９０】
の化合物と反応させること、それによって式ＩＩＩ
【００９１】
【化２３】
2006517977.tif 000025
【００９２】
の化合物を得ること、および式ＩＩＩの化合物を、式Ｘ−Ｒ1の化合物と反応させることで、式中Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、ｘは２〜４であり、それによって式ＩＶｂ
【００９３】
【化２４】
2006517977.tif 000026
【００９４】
の化合物を得ること、のステップを含む、式ＩＶｂの化合物を調製するための処理方法が提供され、ここで、式ＩＶｂの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適である。
【００９５】
第十一実施形態において、式Ｉ
【００９６】
【化２５】
2006517977.tif 000027
【００９７】
の化合物を、ピペラジンと反応させること、それによって式ＩＩＩａ
【００９８】
【化２６】
2006517977.tif 000028
【００９９】
の化合物を得ること、および式ＩＩＩａの化合物を、式Ｒ4−Ｃ（Ｏ）−Ｘの化合物と反応させること、それによって式ＩＶａ
【０１００】
【化２７】
2006517977.tif 000029
【０１０１】
の化合物を得ること、のステップを含む、式ＩＶａの化合物を調製するための処理方法が提供され、ここで、式ＩＶａの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であり、式中、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アル
キル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテ���シクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【０１０２】
第十二実施形態において、式Ｉ
【０１０３】
【化２８】
2006517977.tif 000030
【０１０４】
の化合物を、ピペラジンと反応させること、それによって式ＩＩＩａ
【０１０５】
【化２９】
2006517977.tif 000031
【０１０６】
の化合物を得ること、および式ＩＩＩａの化合物を、式Ｒ4−Ｃ（Ｏ）−Ｘの化合物と反応させること、それによって式ＩＶｂ
【０１０７】
【化３０】
2006517977.tif 000032
【０１０８】
の化合物を得ること、のステップを含む、式ＩＶｂの化合物を調製するための処理方法が提供され、ここで、式ＩＶｂの化合物が、ＭＩＦ阻害剤としての使用に好適であり、式中、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、Ｒ8、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、
Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換���シルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【０１０９】
第十三実施形態において、式Ｉａａ
【０１１０】
【化３１】
2006517977.tif 000033
【０１１１】
の化合物を、シクロヘキサンアミンと反応させること、それによって式ＩＩＩａａ
【０１１２】
【化３２】
2006517977.tif 000034
【０１１３】
の化合物を得ること、および式ＩＩＩａａの化合物を、ＰＯＣｌ3と反応させること、それによって式Ｉａ
【０１１４】
【化３３】
2006517977.tif 000035
【０１１５】
の化合物を得ること、その後、式１ａの化合物を、酢酸中の酢酸アンモニウムと反応させること、それによって、式Ｉ
【０１１６】
【化３４】
2006517977.tif 000036
【０１１７】
の中間化合物を得ること、のステップを含む、式Ｉの中間化合物を調製するための処理方法が提供され、ここで、式Ｉａの化合物が、ＭＩＦ阻害剤の調製に好適であり、式中、Ｒ2およびＲ3は、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリー
ル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｘは、Ｃｌ、ＢｒおよびＩからなる群より選択され、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【０１１８】
これら、そして他の実施形態およびその観点は、以下の詳細な記述に参照して、明らかになるであろう。このために、種々の参考文献が、より詳細な特定の手順、化合物および／または組成物に関して、記述しているものを列挙し、その全てが参考文献として、本明細書に組み込まれている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１１９】
以下の記述および実施例は、本発明の好ましい実施形態を、詳細に例示している。当業者は、その目的に組み込まれている、本発明の多数の変更および改変が存在することを認識するであろう。したがって、好ましい実施形態の記述は、本発明の目的を制限するとは考えるべきでない。
【０１２０】
好ましい実施形態を理解することを助けるために、特定の定義が本明細書で提供される。
【０１２１】
本明細書で使用するところの語句「ＭＩＦ活性（ＭＩＦ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）」は広義
の語句であり、限定はしないが、少なくとも部分的に、マクロファージ遊走阻害因子によって仲介された活性または効果を意味することを含んで、通常の意味で使用される。したがって、ＭＩＦ活性には、制限はしないが、マクロファージ遊走の阻害、トートメラーゼ活性（たとえばフェニルピルビン酸またはドパクロームを用いる）、エンドトキシン誘導ショック、炎症、グルココルチコイドカウンター調節、３Ｔ３繊維芽細胞内へのチミジン取り込みの誘導、ｅｒｋリン酸化およびＭＡＰキナーゼ活性の誘導が含まれる。
【０１２２】
本明細書で使用するところの語句「輸出（ｅｘｐｏｒｔ）」は広義の語句であり、限定はしないが、エネルギー−依存でありうるか、またはありえない、正純リーダー配列を介した、標準のリーダー配列指向分泌以外の方法による、細胞膜または細胞外空間への、翻訳細胞産物の輸送の代謝的に活性な工程を意味することを含んで、通常の意味で使用される。さらに、リーダー配列−依存である分泌とはちがって、「輸出」は、ブレフェルジンＡおよび他の同様の化合物に抵抗性である（すなわち、輸出されたタンパク質は、ＥＲ／Ｇｏｌｇｉを介して輸送はされず、ブレフェルジンＡは、輸出タンパク質のトラフィッキングにおける直接の効果を持たないと予想される）。本明細書で使用されるところの、「輸出」はまた、「非古典的分泌（ｎｏｎ−ｃｌａｓｓｉｃａｌ  ｓｅｒｅｃｔｉｏｉｎ）」として意味されうる。
【０１２３】
本明細書で使用するところの語句「リーダ欠損タンパク質（ｌｅａｄｅｒｌｅｓｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ）」は広義の語句であり、限定はしないが、基準リーダー配列を欠き、細胞内部から細胞外環境に輸送される、タンパク質またはポリペプチドを意味することを含んで、通常の意味で使用される。細胞外環境におけるリーダー欠損タンパク質は、細胞外空間に局在するか、または細胞膜の外側表面に結合しているタンパク質を意味する。好ましい実施形態の文脈において、リーダー欠損タンパク質には、マクロファージ遊走阻害因子およびその断片のような、天然に存在するタンパク質、ならびに、リーダー配列を欠き、輸出されるように設計されているタンパク質、またはリーダー欠損タンパク質、またはそれらの区画と他のタンパク質の融合を含むように設計されているタンパク質が含まれる。
【０１２４】
本明細書で使用するところの語句「阻害剤（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）」は広義の語句であり、限定はしないが、ＭＩＦの立体配座を変更可能な、および／またはＭＩＦに対するモノクローナル抗体と競合することが可能な、そして、ＭＩＦの少なくとも１つの活性または、細胞からのその輸出を、阻害剤がない場合の活性または輸出と比較して、減少させることが可能な、分子（たとえば天然の、または合成の化合物）を意味することを含んで、通常の意味で使用される。言い換えれば、「阻害剤」は、阻害剤なしで実施したアッセイと比較して、阻害剤とともに実施したアッセイにおいて、測定されたＭＩＦの量、ＭＩＦ活性、または細胞外および／または細胞内で検出されたＭＩＦタンパク質おいてに統計学的に有意な変化がある場合に、立体配座および／または活性および／または輸出を変化させる。
【０１２５】
本明細書で使用するところの語句「結合剤（ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）」は広義の語句であり、限定はしないが、阻害剤を含む、ＭＩＦに結合する任意の分子を意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１２６】
一般的に、ＭＩＦ阻害剤は、ＭＩＦの生理学的機能を阻害し、したがって、ＭＩＦが病原性である疾患の処置にて有用である。
【０１２７】
ある好ましい実施形態において、ＭＩＦの阻害剤が、その立体異性体、プロドラッグまたは医薬的に許容可能な塩をふくみ、以下の構造（Ｉａ）および（Ｉｂ）、
【０１２８】
【化３５】
2006517977.tif 000037
【０１２９】
を持って提供され、式中Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、同一であるか、または異なり、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7またはＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は同一であるか、または異なり、独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’
は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。
【０１３０】
好ましい実施形態において、官能基Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は、一重結合によって、（Ｒ2およびＲ3の場合にように）芳香環、または（Ｒ1およびＲ4の場合のように）ヘテロ原子に結合している。しかしながら、特定の実施形態において、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4は好ましくは、結合官能基によって連結可能である。好ましい連結官能基は、炭素骨格を持ち、または、１つまたはそれ以上の骨格炭素が、窒素、酸素または硫黄のような、ヘテロ原子で置換された、炭素骨格を持つ。特に好ましい結合には、エーテル基、カルボキシル基、カルボニル基、スルフィド基、スフホニル基、カルボキシアミド基、スルホンアミド基、アルキル鎖、芳香環、アミン基などが骨格の一部として含まれる。好ましい連結基は、一般的に、長さにして、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０、またはそれ以上の原子の骨格を持つ。特に好ましい骨格は、長さにして、１、２、３、４または５原子であるものである。好ましい実施形態において、効果的な量の、その立体異性体、プロドラッグまたは医薬的に許容可能な塩を含む、以下の構造（Ｉａ）および／または（Ｉｂ）、
【０１３１】
【化３６】
2006517977.tif 000038
【０１３２】
を持つ化合物を患者に投与することを含む、必要としている患者におけるＭＩＦ活性を減
少させるために、方法が提供され、式中Ｘは酸素または硫黄であり、Ｚは、−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０である場合にはＺが−Ｃ（＝Ｏ）−であり、Ｒ1は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキルおよびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−であり、そこでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ2およびＲ3は、同一であるか、または異なり、独立して、ハロゲン、−Ｒ5、−ＯＲ5、−ＳＲ5および−ＮＲ5Ｒ6からなる群より選択され、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7およびＲ8からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は同一であるか、または異なり、独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は隣接した窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換へテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシ��アリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択され、Ｒ8は、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、ジアルキル、およびＲ’Ｒ’’Ｎ（ＣＨ2）x−からなる群より選択され、ここでｘは２〜４であり、Ｒ’およびＲ’’は独立して、水素、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリール、置換ヘテロシクロアリール、およびジアルキルからなる群より選択される。本明細書で使用されるところの、以上の語句は以下の意味を持つ。本明細書で使用するところの語句「アルキル（ａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０炭素原子を含む、直鎖または分岐鎖、非環状または環状
、不飽和または飽和脂肪族炭化水素を意味することを含む、通常の意味で使用され、一方で、語句「低級アルキル（ｌｏｗｅｒ  ａｌｋｙｌ）」は、アルキルと同様の意味を持つが、しかし、１、２、３、４、５または６炭素原子を含む。代表的な飽和直鎖アルキル類には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどが含まれ、一方、飽和分岐鎖アルキル類には、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどが含まれる。代表的な飽和環状アルキル類には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、−ＣＨ2シクロプロピル、−ＣＨ2シクロブチル、−ＣＨ2シクロペンチル、−ＣＨ2シクロヘキシルなどが含まれ、一方不飽和環状アルキル類には、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどが含まれる。環状アルキル類はまた、「ホモ環状環（ｈｏｍｏｃｙｃｌｉｃ  ｒｉｎｇｓ）」として呼ばれ、デカリンやアダマンタンのようなジ−およびポリ−ホモ環状環が含まれる。不飽和アルキル類は、隣接炭素原子間で少なくとも１つの二重結合または三重結合を含む（それぞれ「アルケニル（ａｌｋｅｎｙｌ）」または「アルキニル（ａｌｋｙｎｙｌ）」として呼ばれる）。代表的な直鎖および分岐鎖アルケニル類には、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニル等が含まれ、一方、代表的な直鎖および分岐鎖アルキニル類には、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１ブチニルなどが含まれる。
【０１３３】
本明細書で使用するところの語句「アルキルアリール（ａｌｋｙｌａｒｙｌ）」は広義の語句であり、限定はしないが、アルキル部位で置換された少なくとも１つのアリール水素原子を持つアリールを意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１３４】
本明細書で使用するところの語句「アリール（ａｒｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、フェニルまたはナフチルのような、芳香族炭素環状部位を意味することを含んで、通常の意味で使用される。  
【０１３５】
本明細書で使用するところの語句「アリールアルキル（ａｒｙｌａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、ベンジル、−ＣＨ2（１または２−ナフチル）、−（ＣＨ2）2フェニル、−（ＣＨ2）3フェニル、−ＣＨ（フェニル）2などのような、アリール部位で置換された少なくとも１つのアルキル水素原子を持つアルキルを意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１３６】
本明細書で使用するところの語句「ヘテロアリール（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、５、６、７、８、９または１０員の芳香ヘテロ環状環で、窒素、酸素および硫黄から選択された少なくとも１つのヘテロ原子を持ち、少なくとも１つの炭素原子を含むものを意味し、単環状および二環状環系両方を含むことを含んで、通常の意味で使用される。代表的なヘテロアリール類には、（限定はしないが）フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シノリニル、フタラジニルおよびキナゾリニルが含まれる。
【０１３７】
本明細書で使用するところの語句「ヘテロアリールアルキル（ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−ＣＨ2ピリジニル、−ＣＨ2ピリミジニルなどのような、ヘテロアリール部位で置換された、少なくとも１つのアルキル水素原子を持つアルキルを意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１３８】
本明細書で使用するところの語句「ヘテロシクロ（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」および「ヘテロシクロ環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ  ｒｉｎｇ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、５、６または７員単環状、または７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４員ポリ環状、飽和、不飽和または芳香いずれかであり、窒素、酸素および硫黄から独立して選択される１、２、３または４ヘテロ原子を含む、ヘテロシクロ環を意味することを含んで、通常の意味で使用され、そこで、窒素および硫黄ヘテロ原子は任意に酸化されてよく、窒素ヘテロ原子は、任意に四級化されて良く、任意の上記ヘテロシクロ類が、ベンゼン環ならびに三環状（およびそれ以上の）ヘテロ環状環に融合した、二環状環が含まれる。ヘテロシクロは、ヘテロ原子または炭素原子を介して接着しうる。ヘテロシクロ類には、以上で定義したようなヘテロアリール類が含まれる。したがって、以上で列記した芳香族ヘテロアリール類に加えて、ヘテロシクロ類にはまた、（限定はしないが）モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどが含まれる。
【０１３９】
本明細書で使用するところの語句「ヘテロシクロアルキル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−ＣＨ2モルホリニルなどのような、ヘテロシクロによって置換された少なくとも１つのアルキル水素原子を持つアルキルを意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１４０】
本明細書で使用するところの語句「ヘテロシクロアリール（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅａｒｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、ヘテロシクロによって置換された少なくとも１つのアリール水素原子を持つアリールを意味することを含んで、通常の意味で使用される。
【０１４１】
本明細書で使用するところの語句「アシル（ａｃｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ｌ−の形態の群またはラジカルを意味することを含む、通常の意味で使用され、式中Ｒは、限定はしないが、それぞれ本明細書で定義されたような、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリールまたは置換ヘテロシクロアリールを含む有機官能基であり、Ｌは、以上で定義されたようなＲ、または一重結合である。アシル基の例には、式
【０１４２】
【化３７】
2006517977.tif 000039
【０１４３】
の部位が含まれ、式中、ｐは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０およびそれ以上の整数から選択された整数であり、各Ｑは独立して水素およびＲより選択され、Ｒは、それぞれ本明細書で定義されたような、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリールまたは置換ヘテロシクロアリールを、限定はしないが含む、有機基である。好ましい実施形態において、ｐは１であり、各Ｑは水素である。
【０１４４】
本明細書で使用するところの語句「アリールアシル（ａｒｙｌａｃｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、Ｒ基が本明細書で定義したようなアリール基を含む、アシル基を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１４５】
本明細書で使用するところの語句「アルキルアシル（ａｌｋｙｌａｃｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、Ｒ基が、本明細書で定義したようなアルキル基を含む、アシル基を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１４６】
本明細書で使用するところの語句「アシルアルキル（ａｃｙｌａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ａｌｋ−の形態の群またはラジカルを意味することを含む、通常の意味で使用され、式中Ｒは、限定はしないが、それぞれ本明細書で定義されたような、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリールまたは置換ヘテロシクロアリールを含む有機官能基であり、Ａｌｋはアルキル部位を含む。
【０１４７】
本明細書で使用するところの語句「アシルアリール（ａｃｙｌａｒｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−Ａｒｙ−の形態の群またはラジカルを意味することを含む、通常の意味で使用され、式中Ｒは、限定はしないが、それぞれ本明細書で定義されたような、アルキル、アルキルアリール、置換アルキルアリール、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、アシルアルキル、置換アシルアルキル、アシルアリール、置換アシルアリール、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアリールまたは置換ヘテロシクロアリールを含む有機官能基であり、Ａｒｙはアリール部位を含む。
【０１４８】
本明細書で使用するところの語句「置換された（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、少なくとも１つの水素原子が、置換基によって置換された、任意の以上の基（たとえばアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロまたはヘテロシクロアルキル）を意味することを含む、通常の意味で使用される。ケト置換基（「−Ｃ（＝Ｏ）−」）の場合、２つの水素原子が置換される。置換される場合、好ましい実施形態の文脈において、「置換基類（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔｓ）」には、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、カルボキシアミド、カルボキシル、エーテル、カルボニル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロアルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、−ＮＲaＲb、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）Ｒb、−ＯＲa、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＮＲaＣ（＝Ｏ）ＯＲb、−ＮＲaＳＯ2Ｒb、−ＯＲa、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−ＳＨ、−ＳＲa、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＳＯＲa、−Ｓ（＝Ｏ）2Ｒa、−Ｏ
Ｓ（＝Ｏ）2Ｒa、−Ｓ（＝Ｏ）2ＯＲaが含まれ、式中ＲaおよびＲbは、同一または異なり、独立して水素、アルキル、ハロアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、または置換ヘテロシクロアルキルである。
【０１４９】
本明細書で使用するところの語句「ハロゲン（ｈａｌｏｇｅｎ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５０】
本明細書で使用するところの語句「ハロアルキル（ｈａｌｏａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、トリフルオロメチルなどのような、ハロゲンで置換された少なくとも１つの水素原子を持つアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５１】
本明細書で使用するところの語句「アルコキシ（ａｌｋｏｘｙ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、メトキシ、エトキシなどのような、酸素結合を介して連結したアルキル部位（たとえば−Ｏ−アルキル）を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５２】
本明細書で使用するところの語句「チオアルキル（ｔｈｉｏａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、メチルチオ、エチルチオなどのような、硫黄結合を介して連結したアルキル部位（たとえば−Ｓ−アルキル）を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５３】
本明細書で使用するところの語句「アルキルスルホニル（ａｌｋｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、メチルスルホニル、エチルスルホニルなどのような、スルホニル結合を介して連結したアルキル部位（たとえば−ＳＯ2−アルキル）を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５４】
本明細書で使用するところの語句「アルキルアミノ（ａｌｋｙｌａｍｉｎｏ）」および「ジアルキルアミノ（ｄｉａｌｋｙｌ  ａｍｉｎｏ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノのような、窒素結合を介して連結した、それぞれ、１つのアルキル部位または２つのアルキル部位（たとえば、−Ｎ−アルキル）を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５５】
本明細書で使用するところの語句「ヒドロキシアルキル（ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、少なくとも１つのヒドロキシル基で置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。  
【０１５６】
本明細書で使用するところの語句「モノ−（ｍｏｎｏ−）またはジ（シクロアルキル）メチル（ｄｉ（ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、シクロプロピルメチル、ジシクロプロピルメチルなどのような、１つまたは２つのシクロアルキル基で置換されたメチル基を意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５７】
本明細書で使用するところの語句「アルキルカルボニルアルキル（ａｌｋｙｌｃａｒｂｏｎｙｌａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−Ｃ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５８】
本明細書で使用するところの語句「アルキルカルボニルオキシアルキル（ａｌｋｙｌｃ
ａｒｂｏｎｙｌｏｘｙａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏアルキル基または−ＯＣ（＝Ｏ）アルキル基で置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１５９】
本明細書で使用するところの語句「アルキルオキシアルキル（ａｌｋｙｌｏｘｙａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−Ｏ−アルキル基で置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１６０】
本明細書で使用するところの語句「アルキルチオアルキル（ａｌｋｙｌｔｈｉｏａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、−Ｓ−アルキル基で置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１６１】
本明細書で使用するところの語句「モノ−（ｍｏｎｏ−）またはジ（アルキル）アミノ（ｄｉ（ａｌｋｙｌ）ａｍｉｎｏ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、それぞれ、１つのアルキルまたは２つのアルキルで置換されたアミノを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１６２】
本明細書で使用するところの語句「モノ−（ｍｏｎｏ−）またはジ（アルキル）アミノアルキル（ｄｉ（ａｌｋｙｌ）ａｍｉｎｏａｌｋｙｌ）」は、広義の語句であり、限定はしないが、モノ−またはジ（アルキル）アミノで置換されたアルキルを意味することを含む、通常の意味で使用される。
【０１６３】
以下の番号つけしたスキームを、好ましい実施形態の文脈で使用する。
【０１６４】
【化３８】
2006517977.tif 000040
【０１６５】
式中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ、Ｚおよびｎは以上で定義されたようなものである。
【０１６６】
Ｚ部位に依存して、好ましい実施形態の代表的な化合物には、Ｚがメチレン（−ＣＨ2−）である場合、以下の構造（ＩＩａ）および（ＩＩｂ）が、Ｚがカルボニル（−Ｃ（＝Ｏ）−）である場合、構造（ＩＩＩａ）および（ＩＩＩｂ）が含まれる。
【０１６７】
【化３９】
2006517977.tif 000041
【０１６８】
式中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ7、およびＲ8、Ｘおよびｎは以上で定義されたようなものである。  
【０１６９】
さらなる実施形態において、それぞれ構造（ＩＶａ）、（ＩＶｂ）、（Ｖａ）、（Ｖｂ）、（ＶＩａ）および（ＶＩｂ）によって表されるように、ｎは０、１または２である。
【０１７０】
【化４０】
2006517977.tif 000042
【０１７１】
式中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ、およびＺは以上で定義されたようなものである。
【０１７２】
またさらなる実施形態において、好ましい実施形態の化合物は、Ｘが酸素の場合、以下の構造（ＶＩＩａ）、（ＶＩＩｂ）を、Ｘが硫黄の場合、以下の構造（ＶＩＩＩａ）、（ＶＩＩＩｂ）を持つ。
【０１７３】
【化４１】
2006517977.tif 000043
【０１７４】
式中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、およびＺは以上で定義されたようなものである。
【０１７５】
特に好ましい実施形態において、ＭＩＦ阻害剤は、構造
【０１７６】
【化４２】
2006517977.tif 000044
【０１７７】
で、式中Ｒ1’が、以下の式
【０１７８】
【化４３】
2006517977.tif 000045
【０１７９】
の部位から選択され、各Ｒ*は独立して、水素、ハロゲン、アルキル、ヒドロキシ、アルコキシ、ニトロ、アミン、ニトリル、カルボン酸、カルボン酸エステル、アルキルアミン、ＣＦ3、−ＯＣＦ3、スルホンアミドおよびカルボキシアミドから選択される、ものである。特に好ましい実施形態において、Ｒ1’中の各Ｒ*は水素であり、以下のような構造である。
【０１８０】
【化４４】
2006517977.tif 000046
【０１８１】
特に好ましい実施形態において、ＭＩＦ阻害剤は、以下の構造
【０１８２】
【化４５】
2006517977.tif 000047
【０１８３】
のものである。
【０１８４】
好ましい実施形態の化合物は、一般的に、遊離酸または遊離塩基として利用しうる。あるいは、好ましい実施形態の化合物は、好ましくは、酸または塩基添加塩の形態であり得る。好ましい実施形態の、遊離塩基アミノ化合物の酸添加塩は、本技術分野でよく知られている方法によって調製可能であり、有機および無機酸から形成しうる。好適な有機酸には、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、タルタル酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデン酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グルコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸が含まれる。好適な無機酸には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸および硝酸が含まれる。遊離酸の塩基添加塩は同様に、本技術分野でよく知られている方法によって調製してよく、アルカリおよびアルカリ土類金属（たとえばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、バリウムまたはカルシウム）から選択したカチオンならびにアンモニウムカチオンのような、好適な塩基から形成してよい。構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）の語句「医薬的に許容可能な塩（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  ｓａｌｄ）」は、任意の、そして全ての許容可能な塩形態を含むと意図されている。
【０１８５】
構造（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、当業者に公知の有機合成技術にしたがって、ならびに、実施例にて列記した代表的な方法によって、調製してよい。
【０１８６】
薬物標的としてのＭＩＦ
マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）は、その活性が、種々の病態学的条件にて示唆
されているので、薬物標的としての解析によく適す可能性がある。たとえば、ＭＩＦは、炎症応答および細胞増殖両方で、明らかなメディエーターであると示されてきている。これに関し、ＭＩＦは、サイトカイン、下垂体ホルモンとして、グルココルチコイド−誘導免疫調節因子として、そしてまさに最近では、神経免疫調節因子として、および神経機能で、役割を果たすと示されてきている。Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４：７０７−７１４，１９９８、Ｂｕｃａｌａ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４０：７４−８２，１９９８、Ｂａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４（４）：２１７−２３０，１９９８。さらに、最近では、抗ＭＩＦ抗体が、さまざまに使用され、血管新生の明確な減少をともなった、腫瘍増殖の明らかな減少をもたらすことが示された。Ｏｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  １２（４）：３０９−３１４，２０００、Ｍｅｔｚ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ（上記）。したがって、ＭＩＦを阻害可能な小分子は、炎症応答の処置、血管新生、ウイルス感染、細菌感染の減少、がんの処置（とりわけがん化およびアポトーシス）、移植片対宿主疾患および関連組織拒絶の処置で、有意な価値を持つ。ＭＩＦ阻害剤は、種々の免疫関連応答、腫瘍増殖、糸球体腎炎、炎症、マラリア貧血、敗血性ショック、腫瘍関連血管新生、硝子体網膜症、乾癬、移植片対ウイルス性宿主疾患（組織拒絶）、アトピー性皮膚炎、リウマチ様関節炎、炎症性腸疾患、炎症性肺疾患、中耳炎、クローン病、急性呼吸窮迫症、遅延型過敏症にてとりわけ有用であり得る。ＭＩＦ阻害剤はまた、ストレスおよびグルココルチコイド機能疾患、たとえば、グルココルチコイド活性の対抗調節の処置、またはアラキドン酸放出のグルココルチコイド調節抑制（Ｃｙｓ−６０に基づく触媒ＭＩＦオキシドレダクターゼ活性またはＪＡＢＩ／ＣＳＮＳ−ＭＩＦ−相互作用に基づく機構）の無効化でも有用である。
【０１８７】
ＭＩＦ阻害剤の利用の１つの例は、エンドトキシン暴露の後、検出可能なＭＩＦの血清濃度が、急性期（１〜８時間）の間に、徐々に増加し、８時間でピークに達し、２０時間まで、急性期後（＞８時間）の間持続するという事実によっても明らかである。作用の原理に限定はしない一方で、ＭＩＦは、エンドトキシン−誘導ショックの炎症性ステージの間、たとえば、感染に対する局所応答の部分として、活性化Ｔ−細胞およびマクロファージによって産出される可能性がある。一旦、たとえば低濃度のＬＰＳのような炎症促進性刺激によって、またはＴＮＦ−αおよびＴＮＦ−γによって放出されたならば、マクロファージ由来ＭＩＦが、エンドトキシンショックの急性期の間に産出されるＭＩＦのおそらく供給源であろう。ＬＰＳに対する応答においてＭＩＦを放出する、下垂体、およびマクロファージ両方が、感染がもはや局所部位に限定されない、エンドトキシンショックの急性後フェーズにおけるＭＩＦの可能性ある供給源である。たとえば、その全てが参考文献によって本明細書に組み込まれており、抗−ＭＩＦ抗体でのこれらの結果を示している、米国特許第６，０８０，４０７号を参照のこと。
【０１８８】
本明細書で実証したように、好ましい実施形態の阻害剤は、ＬＰＳチャレンジ後、マウスにおける死亡率を阻害し、ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αレベルを減衰させるようである。したがって、種々の炎症性条件が、ＭＩＦ阻害剤での処置によって影響を受けやすい可能性がある。これに関して、他の利点のなかで、ＭＩＦ活性および／または放出の阻害が、炎症性応答およびショックを処置するために使用可能である。有益な効果が、ショック応答の早期および後期ステージ両方における介入で達成されうる。この観点において、ＭＩＦ阻害剤の保護効果に関する任意の理論または機構に制限はしないで、抗ＭＩＦの研究によって、抗ＭＩＦ抗体の導入が、循環血清ＴＮＦ−αレベルにおけるかなりの（３５〜４０％までの）減少と関連することが実証された。この減少は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのマクロファージにおけるＭＩＦのＴＮＦ−α誘導活性と一致し、この時点で、ＭＩＦが循環中で検出不可能であるという事実にもかかわらず、エンドトキシン投与後１〜２時間でおこる、血清ＴＮＦ−αレベルでの非常に高いピークに関して、部分的に、その原因となっていることを示唆している。したがって、ＭＩＦ阻害治療は、炎症性応答の早期ステージにて、有益であり得る。  
【０１８９】
ＭＩＦはまた、ショック応答の急性後ステージの間に役割を果たし、したがって、抗ＴＮＦ−α治療のような、他の処置が効果的でない後期ステージにおいて、介在する可能性を提供している。ＭＩＦの阻害が、高濃度のエンドトキシン（たとえば循環中に、下垂体ＭＩＦの放出を誘導する濃度）でチャレンジした動物、およびＴＮＦ−αでチャレンジした動物における致死ショックに対して保護可能である。したがって、ＭＩＦを阻害し、ＴＮＦでチャレンジした動物を保護する能力によって、敗血性ショックの後期相および急性期後の間のＭＩＦを中和することが効果的であることが示唆される。
【０１９０】
本明細書で証明されるように、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βレベルは、少なくともＭＩＦレベルに対するいくつかの例にて、相関している。したがって、抗−ＭＩＦ小分子が、移植拒絶、ＣＮＳ疾患の免疫仲介及び炎症性要素（たとえばアルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症など）、筋ジストロフィー、血液凝固疾患（たとえば凝固因子異常、肝内性肝静脈閉塞症など）、アレルギー性神経炎、肉芽腫、糖尿病、移植片対宿主疾患、慢性腎臓障害、脱毛（毛欠損）、急性膵炎、関節疾患、鬱血性心不全、心臓血管疾患（再狭窄、アテローム性動脈硬化症）、関節疾患および変形性関節症を含む、種々のＴＮＦ−αおよび／またはＩＬ−１β関連疾患状態にて有用であり得る。
【０１９１】
さらに、本技術分野でのさらなる証拠によって、サイトカイン産出の強力な阻害剤である一方で、ステロイドが、ＭＩＦ発現を実際に増加させることが示唆されてきた。Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４（６）：４１３−４２４，１９９８、Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４（２５）：１８１００−１８１０６，１９９９、Ｃａｌａｎｄｒａ  ａｎｄ  Ｂｕｃａｌａ，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（１）：７７−８８，１９９７、Ｂｕｃａｌａ，ＦＡＳＥＢ  Ｊ．１０（１４）：１６０７−１６１３，１９９６。したがって、炎症、ショックのようなサイトカイン仲介病態生理学的状態、および他のサイトカイン仲介病理学的状態、とりわけ、リウマチ様関節炎のような慢性炎症状態における処置において、ステロイド治療との組み合わせで、ＭＩＦ阻害剤を利用することが、特に有用である。そのような組み合わせ治療は、病態的または他の炎症応答の発生の後でさえも、有益であり得る。たとえば、臨床設定において、敗血性ショック症状の開始に続く、ステロイドの投与は、有益性が少ないことが証明された。Ｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１７：６５３−６５８，１９８７、Ｓｐｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１１：１１３７−１１４１，１９８４を参照のこと。組み合わせステロイド類／ＭＩＦ阻害治療は、この障害に打ち勝つために使用されうる。さらに、当業者は、そのような治療が、局所および／または全身で、ＭＩＦ放出および／または活性を阻害することに仕立てることが可能である。
【０１９２】
アッセイ
化合物のＭＩＦ阻害剤としての効果は、種々のアッセイ方法によって決定しうる。好ましい実施形態の好適な阻害剤は、ＭＩＦおよび／またはＭＩＦ輸出に関連する１つまたはそれ以上の活性を減少可能である。構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）、または任意の他の構造の化合物を、（限定はしないが）以下で記述するアッセイを含む、本目的のための、１つまたはそれ以上の一般的に許容されたアッセイによって、ＭＩＦの阻害剤としての活性に関して査定しうる。
【０１９３】
アッセイは、一般的に３つのカテゴリーに分類可能であり、それらは、輸出をモニタするアッセイ、エフェクターまたは小分子結合をモニタするアッセイ、およびＭＩＦ活性をモニタするアッセイである。しかしながら、これらのアッセイの組み合わせが、本出願に包含されることに留意すべきである。驚くべきことに、ＭＩＦのエピトープマッピングが、生物学的活性のサロゲートとして働くことが明らかである。たとえば、１つのアッセイ
において、候補阻害剤の存在が、細胞（たとえば、ＴＨＰ−１細胞−ヒト急性単球白血球細胞株）からのＭＩＦの輸出の検出を阻害し、これは、Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から市販されているもののような、モノクローナル抗体を用いて測定され、一方で、ポリクローナル抗体が、ＭＩＦが存在することを示している。さらに、細胞に基づく、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを使用して、これらの可能性ある阻害剤が、ＭＩＦ活性を阻害することを実証している。あるいは、これらの２つのアッセイ（たとえば結合および活性アッセイ）を、またＭＩＦ活性に影響を与える、試験化合物の結合（たとえば、モノクローナル抗体を置換する、またはそれらの結合を阻害する能力）を検出する、単一のアッセイに組み合わせうる。そのようなアッセイには、ＥＬＩＳＡ型アッセイ（または同様の結合アッセイ）をＭＩＦ互変異性アッセイまたは同様の機能的アッセイと組み合わせることが含まれる。当業者が、簡単に理解しうるように、使用する実際のアッセイは、対象の化合物のＭＩＦに結合する能力を検出可能であるという条件で、重要ではない。加えて、アッセイは、生物学的に不活性なＭＩＦではなく、活性なＭＩＦに相互作用する化合物に関して選択するために、化合物のＭＩＦを阻害する能力を好ましくは検出する。
【０１９４】
生物学的に不活性なＭＩＦではなく、活性なＭＩＦに結合するモノクローナル抗体を阻害する能力を示している化合物（たとえば阻害小分子）が、ＭＩＦの配座を変化させる、または抗体結合に必要なエピトープを阻害する様式いずれかで、ＭＩＦと相互作用している化合物（たとえば小分子）の存在を必然的に示唆することも理解されなければならない。他の実施形態において、ＭＩＦ阻害活性はまた、ＭＩＦを含むポリペプチド複合体の形成を干渉する結果としても認識され得、そのような複合体を阻害することは、結果として、配座変化阻害検出となる。したがって、ＭＩＦの配座変化をモニタするアッセイの使用が、小分子のような化合物間の、ｍＡｂとの競合を測定するアッセイに加えて、またはそのようなアッセイの代替として、利用する場合に、利点がある。種々のそのようなアッセイが、本技術分野で公知であり、熱量測定、円偏光二色性、蛍光エネルギー伝達、光スキャタリング、核磁気共鳴（ＮＭＲ）、表面プラズモン共鳴、シンチレーション近似アッセイ（米国特許第５，２４６，８６９号）などが含まれる。また、国際公開公報０２／０７７２０−Ａ１号および国際公開公報９７／２９６３５−Ａ１号を参照のこと。したがって、当業者は、結合、好ましくは配座変化、またはＭＩＦの活性部位近くの配列を示唆する任意のアッセイが利用可能であることを認識しうる。いくつかのより複雑な近似アッセイおよび配座アッセイの記述を以下に列挙しているが、この議論は、単に例示であり、好ましい実施形態で使用しうる技術の型に対する制限としては解釈されるべきではない。
【０１９５】
１つの例にて、円偏光二色性が、候補阻害剤結合を測定するために利用しうる。円偏光二色性（ＣＤ）は、部分的に、ほとんどの生物学的タンパク質巨大分子が、非対称モノマーユニット、Ｌ−アミノ酸で構築されており、したがって、これらはすべて、光学活性の特性を持っているという事実に基づいている。さらに、ＤＮＡまたはアルファへリックスポリペプチドのような柔軟性のない構造が、適切な分光学的系を用いて測定可能である光学特性を持っている。事実、簡単に測定される分光学的パラメータにおける大きな変化によって、種々の環境下で、配座状態、および配座状態の変化を同定するための、そして時折、巨大分子内、または巨大分子に接着した単一基の摂動を観察するため、選択的方法を提供可能である。さらに、ＣＤ解析は、小分子およびリガンドとの、種々の巨大分子の相互作用をプローブするためにしばしば利用され得てきた。Ｄｕｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．２７（２）：１４７−１５１，１９９８、Ｋｌｅｉｆｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３９（２６）：７７０２−７７１１，２０００、Ｂｉａｎｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ３８（４２）：１３８４４−１３８５２，１９９９、Ｓａｒｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ
１４３４（２）：３０４−３１６，１９９９を参照のこと。
【０１９６】
パスツール原理は、光学的に活性な分子は、非対称でなければならないと述べている。すなわち、分子およびそのミラーイメージは、重ね合わすことができない。平面偏光は、相における左円偏光および右円偏光巡回の組み合わせである。この光の、非対称分子との相互作用によって、結果として、吸収領域で、異なる吸収として見られる（すなわち二色性）、１つの円偏光成分の優先的相互作用となる。Ｕｒｒｙ，Ｄ．Ｗ．，「生物分子配座に対するアプローチ（Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌ．，ｐｐ．３３−１２０（１９６９）、Ｂｅｒｏｖａ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｙ，「円偏光二色性：原理と適用（Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００）を参照のこと。
【０１９７】
よって、円偏光二色性は、発色団が、特定の波長で平面偏光と相互作用した結果おこる、吸収現象である。吸収バンドは、その発色団に対する右および左円偏光成分の異なる吸収に依存して、陰性であるか、または陽性であるか、いずれかであり得る。バックグラウンドの寄与と、実際の光相互作用の領域から対象の多ミリミクロンの発色団を測定する旋光分散（ＯＲＤ）とは異なり、ＣＤは、事象が起こる波長での、光学事象を測定する利点を提供する。よって、円偏光二色性は、発色団の電子遷移に特異的である。Ｂｅｒｏｖａ
ａｎｄ  Ｗｏｏｄｙ，「円偏光二色性：原理と適用（Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００）を参照のこと。
【０１９８】
円偏光二色性の、巨大分子の溶液への適用は、結果として、配座状態を同定する能力となる（Ｂｅｒｏｖａ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｙ，「円偏光二色性：原理と適用（Ｃｉｒｃｕｌａｒ  Ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，（２０００））。本技術は、巨大分子のランダムコイル、アルファへリックス、およびベータ鎖配座状態を区別可能である。タンパク質において、アルファへリックス線維タンパク質は、アルファへリックスポリペプチドのものと非常に似た吸収曲線を示すが、リゾチームやリボヌクレアーゼのような公知の構造の球形タンパク質では、へリックス構造と、Ｘ−線結晶学の研究との一致は少ない。球形タンパク質における難しさのさらなる原因としては、２８０ｎｍ周辺の分子において芳香発色団が普及していることである。へリックス変化の興味深い例が、ミオグロビンとアポミオグロビンを用いて示された。人工基ヘムを除去した後、残ったアポプロテインは、２５％まで減少した残留円偏光二色性楕円率を持つ。このへリックスの欠失は、分子中１０〜１５残基のアンコイルに起因する。他の非ペプチド、光学的に活性な発色団には、巨大分子の第一アミノ酸配列に局在する場合に、チロシン、トリプトファン、フェニルアラニンおよびシステインが含まれる。非ペプチド楕円率の例には、リボヌクレアーゼ中のジスルフィド遷移およびインスリンのシステイン遷移が含まれる。
【０１９９】
したがって、円偏光二色性は、ＭＩＦの配座に影響を与える能力に関して、候補阻害剤を選別するために使用してよい。
【０２００】
本明細書で提供するところの特定の実施形態において、ＭＩＦ−結合薬剤または阻害剤複合体形成は、ＭＩＦおよび検出可能に標識された結合薬剤を含む複合体の存在を検出することによって測定しうる。以下でより詳細に記述するように、たとえば、蛍光偏光によるような、蛍光エネルギーシグナル検出によって、ＭＩＦ−結合薬剤分子複合体の形成を示す、シグナルレベルの検出が提供される。したがって、本明細書で提供するように、候補阻害剤の存在しない状態、およびする状態での、ＭＩＦ−結合薬剤複合体形成の蛍光エネルギーシグナルに基づく比較によって、薬剤が、ＭＩＦと結合薬剤間の相互作用を変え
るかどうかを同定するための方法が提供される。たとえば、結合薬剤は、ＭＩＦ基質、抗−ＭＩＦ抗体または公知の阻害剤であってよく、一方、候補阻害剤は、試験されるべき化合物であってよく、またその逆であって良い。
【０２０１】
以上で記述したように、ある好ましい実施形態はまた、部分的に、ＭＩＦ−結合薬剤複合体形成の蛍光エネルギーシグナルに基づく決定に関する。蛍光エネルギーシグナル検出は、たとえば、蛍光偏光によって、または蛍光共鳴エネルギー伝達によって、または本技術分野で公知の他の蛍光方法によってでありうる。特定の他の実施形態の例として、ＭＩＦポリペプチドおよび候補阻害剤を、標識して良く、エネルギー伝達分子ドナー−アクセプター対を含んで良く、エネルギードナーからエネルギーアクセプターへの蛍光共鳴エネルギー伝達のレベルを測定する。
【０２０２】
ある実施形態において、候補阻害剤および／または結合薬剤を検出可能に標識し、特に好ましい実施形態においては、候補阻害剤および／または結合薬剤が、蛍光エネルギーシグナルを発生可能である。候補阻害剤および／または結合薬剤は、好適なレポーター分子または部位、たとえば、本技術分野で公知のような、そして、本明細書で記述された方法に基づいて、使用する特定の蛍光エネルギー技術にしたがって選択した、任意の種々の蛍光物質（たとえば発色団）を、共有的、または非共有的に結合させることによって、検出可能に標識可能である。本明細書で提供されたような、蛍光レポーター部位および方法は、たとえば、Ｈａｕｇｌａｎｄ（１９９６  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−  Ｓｉｘｔｈ
Ｅｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；１９９９  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−  Ｓｅｖｅｎｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｐｒｏｂｅｓ．ｃｏｍ／ｌｉｔ／）、およびそこで引用されている参考文献にて見ることができる。好ましい実施形態での蛍光団のように使用するために特に好ましいのは、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド（Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ）、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬおよびＣｙ−５である。しかしながら、任意の好適な蛍光団を使用して良く、特定の実施形態では、列記している以外の蛍光団が好ましい可能性がある。
【０２０３】
本明細書にて提供するように、蛍光エネルギーシグナルには、任意の蛍光放出、励起、エネルギー伝達、クエンチングまたは脱クエンチング事象などが含まれる。典型的には、蛍光エネルギーシグナルは、適切な波長の光に対する応答での、蛍光により検出可能に標識された候補阻害剤および／または結合剤によって仲介されうる。理論には限定せずに、簡単に記すと、蛍光エネルギーシグナルの発生は、一般的に、基底状態から励起状態へと蛍光団のエネルギー状態を一過性に上昇させる、適切なエネルギー供給源（たとえば、選択された蛍光レポーター部位、または蛍光団に対して、好適な波長の光）による、蛍光団の励起が含まれる。励起された発色団は、順に、典型的には、励起のために好適な異なる（たとえば通常より長い）波長を持つ検出可能な光の形態で、エネルギーを放射し、それにより、エネルギー的な基底状態へと戻る。好ましい実施形態の方法は、特定の蛍光団、基質標識方法および検出器具に依存して、任意の蛍光エネルギーシグナルの使用を意図し、これらは、当業者がよく知っている基準に従って、さらなる実験を必要なしに、簡単に選択しうる。
【０２０４】
ある実施形態において、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光偏光（ＦＰ）シグナルである。ある他の実施形態において、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）シグナルであり得る。ある他の好ましい実施形態において、蛍光エネルギーシグナルは、蛍光クエンチング（ＦＱ）シグナルまたは蛍光共鳴分光（ＦＲＳ）シグナルであ
りうる。（ＦＰ、ＦＲＥＴ、ＦＱおよびＦＲＳの詳細に関して、たとえば、国際公開公報９７／３９３２６号、国際公開公報９９／２９８９４号、Ｈａｕｇｌａｎｄ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｂｅｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ−６ｔｈ  Ｅｄ．，１９９６，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ，ｐ．４５６およびそれらに引用されている参考文献を参照のこと）。  
【０２０５】
ＦＰ、エネルギー供給源からの光子のその吸収と、光子のその続く放射の間におこる、発行団の（分子回転分散による）平均角度置換の測定は、発色団の励起状態の間の、回転分散の程度および速度に、分子の大きさおよび形に、溶液の粘度に、そして溶液の温度に依存する（Ｐｅｒｒｉｎ，１９２６  Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｒａｄ．１：３９０）。粘度及び温度を一定に保つ場合、ＦＰは、直接、発色団の見かけの分子量または大きさに比例する。偏光値は、異なる平面（たとえば垂直および水平）で測定された蛍光強度の比であり、したがって、発色団の強度によって影響を受けない、無次元量である。本明細書で提供された、検出可能に標識した候補阻害剤および／または結合薬剤のような、低分子量発色団は、溶液中の、急速な分子回転が可能であり（すなわち低異方性）、したがって、低い蛍光偏光読み取りをおこす。しかしながら、本明細書で提供したような、ＭＩＦのようなより大きな分子量の分子と比較したときに、基質の発色団部位が、溶液中の相対的にゆっくりな分子回転（すなわち高異方性）を示す複合体と関連し、結果として、より高い蛍光偏光読み取りとなる。
【０２０６】
ＭＩＦ：候補阻害剤および／または結合薬剤複合体の偏光値と比較した、遊離した、検出可能に標識された候補阻害剤および／または結合剤の偏光値のこの差は、遊離に対する複合化（たとえば結合）の比を決定するために利用されうる。この差はまた、たとえば、薬剤のない状態で検出されたＦＰを、薬剤がある状態で検出されたＦＰと比較することによって、そのような複合体の形成における、および／または先に形成された複合体の安定性における、候補薬剤（すなわち候補阻害剤）の影響を検出するためにも使用されうる。ＦＰ測定は、反応成分の分離なしに実施可能である。
【０２０７】
以上で記述したように、好ましい実施形態の１つの観点が、ＭＩＦの活性を変化させる阻害剤を同定する方法を提供するために、モノクローナル抗体、公知の阻害剤、または他の結合薬剤の結合または脱離、および／または候補阻害剤のＭＩＦとの複合体形成を利用する。驚くべきことに、好ましい実施形態の阻害剤は、そのような従来とはちがう方法で同定された。これに関して、生物学的に活性なＭＩＦへのモノクローナル抗体結合を阻害する／減少させる能力を示している化合物の種類は、細胞より天然に産出され、（市販されているような）不活性（組換え体）ＭＩＦを認識する抗体能力に影響を与えず、また、ｉｎ  ｖｉｖｏにて、ＭＩＦ活性の顕著な調節を示した。したがって、抗体結合は、酵素活性に対するサロゲートとして好ましい可能性があり、したがって、各候補化合物における、高価で、複雑な酵素的アッセイを走らせる必要性を減少させる。当業者が簡単に理解するように、酵素的アッセイを回避する能力によって、ハイスループット利用に非常に好適でありうるアッセイが導かれる。
【０２０８】
さらに、当業者が簡単に理解出来るように、そのようなアッセイは、ＭＩＦの文脈外および酵素または生物学的活性を結合アッセイに置換可能であるところではどこでも、利用してよい。たとえば、その生物学的活性形態が、不活性型（たとえば、小分子阻害形態）を認識しないモノクローナル抗体によって認識される、酵素または他のポリペプチドが好ましい可能性がある。酵素の文脈内で、モノクローナル抗体は、活性部位に結合しうるが、小分子によって置き換わりうる。したがって、抗体を置き換えた任意の小分子が、可能性のある酵素阻害剤としての強力なリードでありうる。当業者が理解するように、抗体は、酵素の活性状態に依存して構造を変化させるエピトープを認識し得、抗体のこのエピト
ープへの結合を妨害する、小分子の結合が、エピトープが活性部位にない場合でさえも、酵素的活性に関するサロゲートとしても働きうる。したがって、本明細書で用いられたアッセイの種類は、本質的に任意のポリペプチドと共に使用されうるまで拡張され、そこでは抗体置換が活性欠損の前兆となる。したがって、そのもっとも簡単な形態において、ポリペプチド、たとえば酵素およびその結合中和抗体を、本抗体を置換する小分子に関して選別するために使用可能であり、したがって、可能性のある阻害剤を同定する。
【０２０９】
ＭＩＦ−結合薬剤／候補阻害剤複合体は、以上で記述したようなＭＩＦと他の分子間の細胞内相互作用を実証するために、本技術分野で公知の多数の技術、たとえば、共精製、共沈殿、共免疫沈殿、放射性または蛍光性アッセイ、ウエスタン免疫ブロット解析、固相リガント・カウンターリガンド吸着剤技術、親和性クロマトグラフィーおよび表面親和性プラズモン共鳴のような親和性技術を含む親和性捕獲、ＮＭＲなどの任意の技術によって同定可能である（たとえば米国特許第５，３５２，６６０号を参照のこと）。そのような複合体の存在の決定は、モノクローナル、ポリクローナル、キメラおよび一般鎖抗体などを含む、ＭＩＦまたは結合薬剤に特異的に結合する抗体を利用しうる。
【０２１０】
標識化ＭＩＦおよび／または標識化結合薬剤／候補阻害剤をまた、複合体の存在を検出するために利用可能である。対象の分子を、好適なレポーター分子または部位、たとえば、任意の種々の酵素、蛍光物質、発光物質および放射活性物質に共有的、または非共有的に連結させることによって標識可能である。好適な酵素の例には、限定はしないが、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼおよびアセチルコリンエステラーゼが含まれる。好適な蛍光物質には、限定はしないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロチアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド、フィコエリスリン、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−５９４、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ、ＢＯＤＩＰＹ−ＦＬおよびＣｙ−５が含まれる。適切な発光物質には、限定はしないが、ルミノールが含まれ、好適な放射活性物質には、放射活性リン［32Ｐ］、ヨウ素［125Ｉまたは131Ｉ］またはトリチウム［3Ｈ］が含まれる。
【０２１１】
ＭＩＦおよび結合薬剤および／または候補阻害剤を、成分間の細胞内複合体の形成を可能にするのに十分な条件下、および時間で混合する。そのような複合体の形成のために好適な条件は、本技術分野で公知であり、複合体の存在の検出のため、および／または溶液中の遊離基質を検出するための溶液条件および方法を含む、本明細書で提供された技術に基づいて簡単に決定可能である。
【０２１２】
MIFとの複合体中の検出可能に標識された結合薬剤（類）および／または候補阻害剤（類）の結合、および／またはそのような複合体の一部ではない結合薬剤または候補阻害剤は、基質によって産出される蛍光エネルギーシグナルの検出によって、好ましい実施形態にしたがって同定しうる。典型的には、蛍光エネルギーシグナルを検出するためのエネルギー供給源は、基質を標識する蛍光レポーター部位に依存して、当業者がよく知っている基準にしたがって選択される。（ａ）ＭＩＦおよび（ｂ）検出可能に標識した結合薬剤および／または候補阻害剤を含む試験溶液を、エネルギー供給源に暴露して、蛍光エネルギーシグナルを産出させ、これを、種々の非常に公知の器具の任意によって検出し、特定の蛍光エネルギーシグナルにしたがって同定する。好ましい実施形態において、蛍光エネルギーシグナルは、偏光フィルターを備えた分光蛍光計を用いて検出可能である、蛍光偏光シグナルである。特に好ましい実施形態において、蛍光偏光アッセイは、たとえば、種々の反応チャンバー間で、多くの反応成分または条件を持つ、ハイスループットスクリーン（ＨＴＳ）を提供するために、ＬＪＬ  ＣＲＩＴＥＲＩＯＮ（商標）  Ａｎａｌｙｓｔ（ＬＪＬ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ）プレートリーダーを用いて読み取ることが可能な、多数の反応チャンバーそれぞれの中で、同時に実施される。蛍光
偏光読み取りを得るための、他の好適な器具の例には、ＰＯＬＡＲＳＴＡＲ（商標）（ＢＭＧ  Ｌａｂ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｏｆｆｅｎｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＢＥＡＣＯＮ（商標）（Ｐａｎｖｅｒａ，Ｉｎｃ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＰＯＬＡＲＩＯＮ（商標）（Ｔｅｃａｎ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，ＮＣ）機器が含まれる。
【０２１３】
ＭＩＦと結合薬剤および／または候補阻害剤間に形成された複合体の存在の検出は、本明細書で提供され、本技術分野で公知のような蛍光エネルギーシグナル法を含む、以上で記述したような、種々の方法によって実施しうる。そのような方法には、限定ではなく、例示の意味で、ＦＰ、ＦＲＥＴ、ＦＱ、他の蛍光定量アッセイ、共精製、共沈殿、共免疫沈降、放射定量、ウエスタン免疫ブロット解析、固相リガンド・カウンターリガンド吸着剤技術、親和性クロマトグラフィーおよび表面親和性プラズモン共鳴のような親和性捕獲、円偏光二色性などが含まれる。これら及び他の有用な親和性技術に関しては、親和性技術を含む、複合体を単離し、特性化するための技術に関する詳細として、その全てが参考文献にて本明細書に組み込まれている、たとえばＳｃｏｐｅｓ，Ｒ．Ｋ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，１９８７，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ、Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９８６，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ、およびＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ａｆｆｉｎｉｔｙ  Ｌｉｇａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９２，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａを参照のこと。種々の実施形態において、ＭＩＦは、約１０4Ｍ-1と等しいかまたはそれ以上、好ましくは約１０5Ｍ-1と等しいかまたはそれ以上、より好ましくは約１０6Ｍ-1と等しいかまたはそれ以上、またさらに好ましくは、約１０7Ｍ-1〜１０11Ｍ-1と等しいかそれ以上のＫaで、結合薬剤および／または候補阻害剤と結合する場合に、特異的な結合を介して、結合薬剤および／または候補阻害剤と相互作用しうる。結合パートナーの親和性は、以上で記述した蛍光エネルギーシグナル法にしたがって、たとえばＳｃａｔｃｈａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０（１９４９）によって記述されたもののような、従来のデータ取り扱い技術を用いて、産出されるデータから簡単に計算可能である。
【０２１４】
たとえば、蛍光エネルギーシグナルが、蛍光偏光シグナルである場合の種々の実施形態において、遊離している検出可能に標識した候補阻害剤および／または結合薬剤の（偏光した光における）蛍光異方性は、ＭＩＦがない状態で測定可能であり、完全に結合した基質の（偏光した光における）蛍光異方性は、滴定量のＭＩＦの存在下で測定可能である。偏光した光における蛍光異方性は、標識化した候補阻害剤および／または結合薬剤が、発色団の励起状態の寿命の間受ける、偏光運動の量の関数として変化し、それによって、遊離および完全に結合した候補阻害剤および／または結合薬剤の異方性が、たとえば、候補薬剤が存在するような、実験条件の与えられた組において、ＭＩＦへ結合した、候補阻害剤および／または結合薬剤の画分を決定するために、有効に利用可能である（たとえば、Ｌｕｎｄｂｌａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｍｏｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１０：６０７、Ｄａｎｄｌｉｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７１  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ．７：７９９、Ｃｏｌｌｅｔｔ，Ｅ．，Ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  Ｌｉｇｈｔ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９３  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。
【０２１５】
特定の好ましい実施形態は、部分的に、ＭＩＦ−結合薬剤複合体形成および安定性、および／またはＭＩＦ−候補阻害剤複合体形成をモニタするために、分子内エネルギー伝達の使用に関する。
【０２１６】
エネルギー伝達（ＥＴ）は、２つの分子、エネルギー寄与「ドナー（ｄｏｎｏｒ）」分子とエネルギー受領「アクセプター（ａｃｃｅｐｔｏｒ）」分子間の共鳴相互作用から発生する。エネルギー伝達は、（１）ドナーの放射スペクトルが、アクセプターの吸収スペクトルと重なる場合、および（２）ドナーとアクセプターが、互いに特定の距離（たとえば約１０ｎｍ以下）内である場合に起こりうる。エネルギー伝達の効果は、ドナーとアクセプターの近接性によって大きく影響を受け、距離とともに６のパワーとして減少する。したがって、ＥＴの測定は、アクセプターとドナー化合物の近接性を強く反映し、ＥＴの変化は、たとえば、ドナーとアクセプターの結合または解離のような、化合物の近接性における変化を、感度良く反映する。
【０２１７】
したがって、適切な部分で、１つまたはそれ以上のＥＴドナーおよびＥＴアクセプター分子を含む、ＭＩＦまたはＭＩＦ−結合薬剤複合体を接触させること、励起ＥＴドナー分子を産出させるために、ＥＴドナーを励起すること、およびＥＴドナーからＥＴアクセプターへのエネルギー伝達によって産出されるシグナルを検出することによって、候補ＭＩＦ阻害剤をアッセイするための方法を提供することが、好ましい実施形態の観点である。また本明細書で提供されるように、本方法は、ドナー−アクセプター対として機能可能な、任意の好適なＥＴドナー分子とＥＴアクセプター分子を利用可能である。
【０２１８】
特定の好ましい実施形態において、ＥＴドナーおよびアクセプター分子間のエネルギー伝達によって産出される検出可能なシグナルは、以上で議論したような、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）によってもたらされたものである。ＦＲＥＴは、分子内、または２つの異なる型の分子間で、励起ドナー発色団からのエネルギーが、直接アクセプター発色団に伝達される時に発生する（概要に関して、Ｗｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２１８：１−１３，１９９４を参照のこと）。
【０２１９】
好ましい実施形態の他の観点において、候補阻害剤のＭＩＦ輸出に影響を与える能力を試験する。
【０２２０】
そのようなアッセイの第一段階は、細胞外でＭＩＦを検出するために実施する。このアッセイのために、ＭＩＦを発現している試験細胞を使用する（たとえばＴＨＰ−１細胞）。試験細胞は、タンパク質を天然に産出するか、またはトランスフェクトした発現ベクターから産出しうる。試験細胞は、好ましくは通常タンパク質を発現し、そのようなトランスフェクションは単に発現されるレベルを増加させる。したがって、ＭＩＦおよびＩＬ−１の発現に関して、ＴＨＰ１細胞が好ましい。ＨＩＶ  ｔａｔ（ヒト免疫不全ウイルス感染細胞から放出されるタンパク質）のようなウイルス由来タンパク質をアッセイする場合、試験細胞が、タンパク質を「天然に」産出しない場合に、適切なベクターを用いて簡単にトランスフェクトし得、それによって、当業者が簡単に理解するように、試験細胞が、望むタンパク質を発現する。
【０２２１】
発現に続いて、ＭＩＦを、種々のよく知られている方法および手順の任意の１つによって検出する。そのような方法には、フローサイトメトリー、共焦点顕微鏡、イメージ解析、細胞細胞質ゾルまたは培地の免疫沈降、細胞培地のウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡ，１−または２−Ｄゲル解析、ＨＰＬＣまたはバイオアッセイと組み合わせた、抗体での染色が含まれる。初期スクリーニングの便利なアッセイはＥＬＩＳＡである。ＭＩＦ輸出は、１つの他のアッセイによって、好ましくは、細胞培地の免疫沈降と、続く代謝標識化によって確認しうる。簡単に記すと、ＭＩＦタンパク質を発現している細胞を、35Ｓ−メチオニンおよび／またはメチオニン中35Ｓ−システインおよび／またはシステインを含まない培地にて、１５分間、パルス標識し、過剰なメチオニンおよび／またはシステインを含む培地中で追跡する。培地画分を集め、マイクロヒュージ中でのように、遠心によって浄化した。１％  ＮＰ−４０、０．５％デオキシコレート（ＤＯＣ）、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ
、ｐＨ７．５、５ｍＭ  エチレンンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、１０ｎＭ  フェニルメチルスルホリルフルオリド（ＰＭＳＦ）、１０ｎｇ／ｍｌアプロチニン、１０ｎｇ／ｍｌロイペプチンおよび１０ｎｇ／ｍｌペプスタチンを含む溶解緩衝液を、前記浄化培地に加える。ＭＩＦに対する抗体を加え、続いて、冷中でインキュベートし、タンパク質Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＧａｍｍａＢｉｎｄ（商標）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）のような、沈殿第二抗体または免疫グロブリン結合タンパク質をさらなるインキュベーションのために加える。Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａであり、遊離および細胞結合抗原および抗体の測定および精製のために使用する免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）結合試薬であり、ファルマシア社（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，  Ｉｎｃ．）より入手可能である。Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａは、抗原のその結合を妨害することなしに、抗体（ＩｇＧクラス）のＦｃ部位に結合する。ファルマシア社からのＧａｍｍａＢｉｎｄ（商標）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｇであり、多くの種類の免疫グロブリンＧの定常領域に結合する結合試薬であり、ＩｇＧ抗体および抗原／抗体複合体を検出、定量および精製するために使用可能である。平行して、対照として、細胞質ゾルタンパク質をモニタし、細胞質ゾルタンパク質に対する抗体が免疫沈降において好ましい。免疫複合体をペレット化し、氷冷溶解緩衝液で洗浄する。複合体をさらに、氷冷ＩＰ緩衝液（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  Ｎａ−リン酸、ｐＨ  ７．２、１％  ＤＯＣ、１％  ＮＰ−４０、０．１％  ＳＤＳ）にて洗浄する。免疫複合体を直接ＳＤＳ−ゲル試料緩衝液内に溶出し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ中で電気泳動する。ゲルを蛍光間接撮影法のために処理し、乾燥させ、Ｘ−線フィルムに暴露する。あるいは、細胞を、レポーターでタグ化されたＭＩＦを産出するように、遺伝子工学的に改変し、それによって活性ＭＩＦの存在が、レポーターのサロゲート活性を介して得られる。
【０２２２】
理論に拘束される意図はなく、本阻害剤が、その生物学的活性を阻害するのに十分な、タンパク質の配座を変更するような様式で、天然に産出されたＭＩＦ複合体と直接相互作用することによって機能すると信じられている。この相互作用は、実際の相互作用の部位を決定するために、ＭＩＦ−化合物共結晶のＸ−線結晶学によってマップ可能である。１つの部位は、ＭＩＦのトートメラーゼ活性に関与するポケットに対して局在している。
【０２２３】
ＭＩＦ輸出の阻害剤に関するスクリーニングアッセイは、阻害剤の型および影響を与えている活性の性質にしたがって変化する。アッセイは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで実施してよい。一般的に、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、ＭＩＦ活性または多重化を評価するために設計され、ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイは、ＭＩＦ活性、モデル細胞または動物系での細胞外、および細胞内局在化を評価するために設計される。任意のアッセイにおいて、適切な対照と比較した統計学的に有意な増加または減少が、増強または阻害を示唆する。
【０２２４】
１つのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを、マクロファージ遊走を阻害するためにのＭＩＦの能力における、候補化合物の効果を試験することによって実施可能である。簡単に記すと、ヒト末梢血単球が、本質的にＷｅｉｓｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９０：１６７−１７８，１９８５およびＨａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１０：７５２−７５９，１９７３によって記述されたように、アガロース−液滴アッセイ系における指標細胞として好ましい。マクロファージ遊走を解析する他のアッセイ系もまた利用可能である。そのようなアッセイは、Ｈｅｒｍａｎｏｗｓｋｉ−Ｖｏｓａｔｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８：１２８４１−１２８４９，１９９９によって記述されている。  
【０２２５】
他のｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイは、ドパクロームのＤ−異性体の互変化を触媒するＭＩＦの能力を測定するために設計される（Ｒｏｓｅｎｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍ
ｅｄ．２：１４３−１４９，１９９６、Ｗｉｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０６：１５３−１６６，１９９３、Ａｒｏｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７７：３９３−３９７を参照のこと）。簡単に記すと、本方法では、Ｄ−ドパクロームが、候補阻害剤の存在する場合、およびしない場合で、ＭＩＦに対して提供され、５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸（ＤＨＩＣＡ）への互変化を触媒する能力がモニタされる。しかしながら、より速い反応速度が観察されるので、Ｄ−ドパクロームのメチルエステルが、好ましい可能性がある。互変化の検出は、任意の種々の標準方法の１つによって実施可能である。
【０２２６】
同様のアッセイにおいて、フェニルピルビン酸の互変化を触媒するＭＩＦの能力を試験しうる（Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８（４８）：１６０２４−１６０３３，１９９９を参照のこと）。簡単に記すと、本方法では、典型的なフェニルピルビン酸または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸のケトン化を分光学で追う。さらに、産物形成は、1Ｈ  ＮＭＲ解析のための、ＭＩＦでのこれらの化合物の処理と、続くマレイン酸への変換によって確認しうる。
【０２２７】
ｉｎ  ｖｉｖｏアッセイを、本明細書で記述したような、ＭＩＦ核酸分子を含む発現ベクターで、一過性または安定性のいずれかでトランスフェクトした細胞中で実施可能である。これらの細胞は、候補化合物の存在する場合、およびしない場合での、ＭＩＦ活性（たとえば、アポトーシス、増殖などの調節）、または細胞外および細胞内局在化を測定するために好ましい。アポトーシスに関してアッセイする場合、核酸断片化および細胞の間隙率を調べるために、たとえば、色素染色および顕微鏡を含む、種々の細胞解析を利用しうる。
【０２２８】
他のアッセイを、本系にＭＩＦの組換え体または天然に存在する形態を提供し、または試験化合物の存在する場合、およびしない場合で、外因性ＭＩＦ発現を誘導し、それによって、当該系の病理における、統計学的に有意な増加または減少を測定することによって、モデル細胞または動物系にて実施することができる。たとえば、ＬＰＳを、毒性ショック応答を誘導するために利用可能である。
【０２２９】
本明細書で簡単に記したアッセイは、ＭＩＦに対して特異的な阻害剤を同定するために利用しうる。
【０２３０】
本明細書で記述した任意のアッセイにおいて、試験細胞は、ＭＩＦを、天然に（たとえばＴＨＰ−１細胞）、またはタンパク質をコードしている組換え体ＤＮＡ分子の導入後に発現しうる。トランスフェクションおよび形質転換プロトコールは、本技術分野でよく知られており、Ｃａ2ＰＯ4−仲介トランスフェクション、エレクトロポレーション、ウイルスベクターの感染、ＤＥＡＥ−デキストラン仲介トランスフェクションなどを含む。以上で記述したタンパク質の代わりとして、キメラＭＩＦタンパク質（すなわち、他のタンパク質またはタンパク質断片との、ＭＩＦタンパク質の融合）、または、リーダー配列を欠くように、遺伝子工学的に改変したタンパク質配列を利用して良い。同様の様式で、融合を、分泌、輸出または細胞質ゾル保持を指向するように構築しうる。任意およびすべてのこれらの配列を、阻害剤をアッセイすることを補助するために、ＭＩＦとの融合構造中で利用しうる。宿主細胞はまた、疾病、ウイルスの感染等の結果として、ＭＩＦを発現しうる。リーダー配列の効力によって輸出される分泌タンパク質がよく知られており、ヒト絨毛膜ゴナドトロピン（ｈＣＧα）、成長ホルモン、ヘパトサイト増殖因子、トランスフェリン、神経増殖因子、血管内皮増殖因子、オバルブミン、およびインスリン様増殖因子が含まれる。同様に、細胞質ゾルタンパク質もよく知られており、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アクチンおよび他の細胞骨格タンパク質、タンパク質キナーゼＡまたはＣのような酵素が含まれる。もっとも有用な細胞質ゾルまたは分
泌タンパク質は、ＥＬＩＳＡのような、便利なアッセイで簡単に測定されるものである。３つのタンパク質（リーダーなし、分泌および細胞質ゾル）は、試験細胞中に、天然に共トランスフェクションによって、または別の宿主細胞内に別々にトランスフェクトされて、共発現しうる。さらに、本明細書で記述したアッセイに関して、細胞を、安定に形質転換させるか、または一過性にタンパク質を発現させうる。
【０２３１】
免疫沈降は、阻害を測定するために使用しうるそのようなアッセイの１つである。簡単に記すと、天然に、または導入ベクター構造からＭＩＦを発現している細胞を、メチオニン−および／またはシステイン−を含まない細胞培養培地中で、短時間、典型的には、１５分またはそれ以上で、35Ｓ−メチオニンおよび／または35Ｓ−システインで標識する。パルス標識の後、細胞を、過剰な未標識メチオニンおよびシステイン、及びリーダーなしタンパク質がヘパリン結合である場合、ヘパリンを含む培地で洗浄する。ついで細胞を、種々の時間間隔で、同様の追跡培地中で培養する。候補阻害剤または増強剤を、種々の濃度で培地に加える。培養上清を回収し、浄化する。上清を、抗−ＭＩＦ免疫血清またはモノクローナル抗体、またはペプチドタグが存在する場合、抗−タグ抗体と共にインキュベートし、続いて、スタフィロコッカス  アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）Ｃｏｗａｎ株Ｉ、タンパク質Ａ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）またはＧａｍｍａ−ｂｉｎｄ（商標）  Ｇ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）のような現像試薬とインキュベートする。免疫複合体を遠心によってペレットとし、１％ＮＰ−４０および０．５％  デオキシコレート、ＥＧＴＡ、ＰＭＳＦ、アプロチニン、ロイペプチンおよびペプスタチンを含む緩衝液中で洗浄する。ついで沈殿物を、リン酸ナトリウムｐＨ７．２、デオキシコレート、ＮＰ−４０およびＳＤＳを含む緩衝液中で洗浄する。免疫複合体を、ＳＤＳゲル試料緩衝液中に溶出して、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離する。ゲルを蛍光間接撮影法のために処理し、乾燥させ、ｘ−線フィルムに暴露する。
【０２３２】
あるいは、ＥＬＩＳＡが、細胞上清中のＭＩＦの量を検出し、定量するために好ましい可能性がある。ＥＬＩＳＡは、ハイスループットスクリーニングにおける検出のために好ましい。簡単に記すと、９６穴プレートを、抗−ＭＩＦ抗体または抗−タグ抗体でコートし、洗浄し、２％ＢＳＡでブロックする。ついで細胞上清をウェルに加える。インキュベーションと洗浄に続いて、（たとえばＭＩＦに対する）第二抗体を加える。第二抗体は、酵素またはビオチンのような、標識または検出試薬に共役しうる。さらなるインキュベーションの後、現像試薬を加え、ＭＩＦの量を、ＥＬＩＳＡプレートリーダーを用いて決定する。現像試薬は、第二抗体に共役する酵素（典型的には、抗−アイソタイプ抗体）、またはストレプトアビジンに共役する酵素に対する基質である。好適な酵素は、本技術分野でよく知られており、比色分析反応となる、基質（たとえばＡＢＴＳ）上で働く、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼが含まれる。酵素に共役する第二抗体を用いるよりも、抗−ＭＩＦ抗体が、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ、または他の等価の検出試薬に直接共役しうることが認識される。望むのならば、細胞上清を濃縮して、検出レベルを上げることができる。さらに、ＥＬＩＳＡなどのような検出方法を利用して、ＭＩＦの細胞内ならびに細胞外濃度をモニタしうる。細胞内濃度が望まれる場合、細胞溶解を実施する。細胞外濃度が望まれる場合、培地を選別可能である。
【０２３３】
ＥＬＩＳＡはまた、ハイスループットでの、多数の候補阻害剤または増強剤をスクリーニングするために容易に適合しうる。簡単に記すと、そのようなアッセイは、都合のよいことに細胞に基づくものであり、９６ウェルプレート内で実施される。天然に、または安定にＭＩＦを発現する試験細胞を、約２０，０００細胞／ウェルのような、発現した産物検出に十分なレベルでプレートする。しかしながら、もし細胞が天然にタンパク質を発現しない場合は、エレクトロポレーションまたはＣａ2ＰＯ4−仲介トランスフェクションによってのように、一過性発現が達成される。エレクトロポレーションのために、１００μｌの細胞（たとえば１５０，０００細胞／ｍｌ）およびベクターＤＮＡ（５μｇ／ｍｌ）
の混合液を、９６ウェルプレートの個々のウェルに分散させる。細胞を、９６ウェル電極を持つ器具（たとえばＥＣＭ６００  Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，ＢＴＸ，ジーントロニック社（Ｇｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．））を用いてエレクトロポレーションする。エレクトロポレーションの最適条件は、特定の宿主細胞型に関して、実験的に決定されている。電圧、抵抗および波長は、変更される典型的なパラメータである。エレクトロポレーションを最適化するためのガイドラインは、製造業者より得られるか、またはＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄ．），Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９８７）のような、プロトコールマニュアルで見られる。細胞を、当量の培地で希釈し、４８時間インキュベートする。エレクトロポレーションは、哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌などを含む、種々の細胞型上で実施しうる。インキュベーションの後、阻害剤あり、またはなしの培地を加え、細胞をさらに１〜２日間インキュベートする。この時点で、培養培地を回収し、タンパク質を、本明細書の任意のアッセイによってアッセイする。好ましくは、ＥＬＩＳＡを、タンパク質を検出するために利用する。５０μＭの初期濃度を試験する。この量が、輸出、またはモノクローナルＡｂ検出の統計学的に有意な減少となる場合に、候補阻害剤をさらに用量応答性で試験する。
【０２３４】
あるいは、濃縮した上清を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で電気泳動し、ナイロンまたはニトロセルロースのような、固体支持体に移してよい。ついでＭＩＦを、同位体または非同位体レポーター基を含むＭＩＦに対する抗体を用いて、免疫ブロットによって検出する（Ｈａｒｌｏｗ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８８を参照のこと）。これらのレポーター基には、限定はしないが、酵素、共因子、色素、放射性同位体、発光分子、蛍光分子、およびビオチンが含まれる。好ましくはレポーター基は、125Ｉまたはホースラディッシュ  ペルオキシダーゼであり、これは、２，２’−アジノ−ジ−３−エチルベンズチアゾリンスルホン酸によるインキュベーションによって検出しうる。以上で記述したこれらの検出アッセイは、ＭＩＦがペプチドタグを含む場合での使用に、簡単に適用される。そのような場合、抗体はペプチドタグに結合する。他のアッセイには、ＨＰＬＣを含む、大きさまたは電荷に基づくクロマトグラフィーおよびアフィニティークロマトグラフィーが含まれる。
【０２３５】
あるいは、バイオアッセイを、細胞培養液中に存在する活性ＭＩＦの量を定量するために使用しうる。たとえば、ＭＩＦの生物活性を、マクロファージ遊走アッセイによって測定しうる。簡単に記すと、ＭＩＦを含む発現ベクターをトランスフェクトした細胞を、およそ３０時間、培養し、その間、候補阻害剤またはエンハンサーを加える。インキュベーションに続いて、細胞を低血清培地に移し、さらに１６時間インキュベーションする。培地を除去し、遠心によって浄化する。プロテアーゼ阻害剤を含む溶解緩衝液を培地に加え、あるいは、細胞を溶解し、内部レベルを以下のように決定する。ついでＭＩＦの生物活性を、マクロファージ遊走アッセイ、イソメラーゼ活性または増殖アッセイによって測定する。増殖アッセイは、培養した静止３Ｔ３細胞へ、種々の量の希釈液を加えることによって実施する。トリチウム化チミジンを培地に加え、ＴＣＡ沈殿数を、およそ２４時間後に測定する。生色素ＭＴＴの減少が、増殖を測定する他の方法である。標準のために、精製した組換え体ヒトＦＧＦ−２（繊維芽細胞増殖因子２）を利用可能である。他の機能を、カプセルポリサッカライド（ＣＰＳ）誘導毒性ショック、ＴＳＳＴ−１誘導毒性ショック、コラーゲン誘導関節炎などのような、本技術分野で利用可能な他の適切なバイオアッセイにてアッセイしうる。
【０２３６】
他のｉｎ  ｖｉｔｒｏ血管新生アッセイには、コラーゲンゲル内での内皮細胞の増殖（Ｇｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ．６９：５０８，１９９３）、ＭＩＦタンパク質を輸出している細胞から、チャンバーによって分離したコラーゲンゲル上での脳
キャピラリー内皮細胞の共培養（Ｏｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ．１８６：１４７１，１９９２、Ａｂｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：５４，１９９３）、または細胞遊走アッセイ（Ｗａｒｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９５：１７８９，１９９５を参照のこと）を測定するバイオアッセイが含まれる。
【０２３７】
抗体の産出
本明細書で使用するところの語句「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、広義の語句であり、限定はせずに、ポリクローナル、単一特異的およびモノクローナル抗体、ならびに、そのような抗体の抗原結合断片を意味することを含んで、その通常の意味で使用される。好ましい実施形態の抗−ＭＩＦ／標的抗体に関して、本明細書で使用するところの語句「抗原（ａｎｔｉｇｅｎ）」は、広義の語句であり、限定はせずに、マクロファージ遊走阻害因子ポリペプチド、または標的ポリペプチド、その変異体、または機能的断片を意味することを含んで、その通常の意味で使用される。抗−ＭＩＦ／標的抗体またはそのような抗体の抗原結合断片は、少なくとも約１×１０5Ｍ-1、一般的に少なくとも約１×１０6Ｍ-1、好ましくは少なくとも約１×１０8Ｍ-1の、標的ポリペプチドまたはそのエピトープに対する特異的結合活性を持つとして特性化されうる。ＭＩＦ／標的ポリペプチド−特異的エピトープに対する特異的結合活性を維持する、抗ＭＩＦ／標的抗体のＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ＦｄおよびＦｖ断片が、好ましい実施形態に含まれる。とりわけ興味深いのは、活性ポリペプチドに結合する抗体であり、阻害小分子の結合において、置き換わる。当業者は、そのような置換が、配座変化の結果であり、したがって、エピトープの性質の変化、エピトープとの競合的結合、またはそのエピトープからの抗体の立体排除の結果であることを容易に理解するであろう。１つの例において、酵素の活性部位が特定の抗体に対するエピトープであり得、活性部位において、またはその近くで、小分子の結合に際し、抗体の免疫応答性が欠損し、したがって、抗体との免疫応答性の欠損を、酵素活性のサロゲートマーカーとして利用することが可能になる。
【０２３８】
さらに、本明細書で使用するところの語句「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、広義の語句であり、限定はせずに、たとえば、一本鎖抗体、キメラ、二機能およびヒト化抗体を含む、天然に存在する抗体ならびに天然に存在しない抗体、ならびにその抗原結合断片を意味することを含んで、その通常の意味で使用される。そのような天然に存在しない抗体は、固相ペプチド合成を用いて構築してよく、組換え的に産出して良く、またはたとえば、可変重鎖および可変軽鎖を含む、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって（Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｓｅ  ２４６：１２７５−１２８１（１９８９））得ることができる。これらの、そして他の、たとえばキメラ、ヒト化、ＣＤＲ−移植、一本鎖および二機能性抗体を作製する方法は、本技術分野でよく知られている（Ｗｉｎｔｅｒ  ａｎｄ  Ｈａｒｒｉｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １４：２４３−２４６（１９９３）、Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６（１９８９）、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９２）、Ｂｏｒｒａｂｅｃｋ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２ｄ  ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ（１９９５）、Ｈｉｌｙａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９２））。
【０２３９】
ある好ましい実施形態において、抗−ＭＩＦ／標的抗体を、たとえば、天然の供給源より調製可能であり、または以上で記述したように、組換え的に産出できる、ＭＩＦまたは標的ポリペプチドの活性部位領域を含む単離ペプチド、以上で記述したような合成ペプチドを含む、ＭＩＦ／標的ポリペプチドの免疫原性断片（たとえば、８〜３０またはそれ以上の連続アミノ酸配列を含む免疫原性配列）のような免疫原として利用して、作製して良
い。ＭＩＦ／標的ポリペプチドの非免疫原性ペプチド部位は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）のような担体分子とハプテンを連結することによって、または、融合タンパク質としてポリペプチド部位を発現させることによって、免疫原性にすることが可能である。種々の他の担体分子、および担体分子にハプテンを共役させるための方法が、本技術分野で公知である（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，上記、１９９２）。
【０２４０】
たとえばウサギ、ヤギ、マウスまたは他の哺乳動物内で、ポリクローナル抗体を作製するための方法が、本技術分野でよく知られている。さらに、モノクローナル抗体は、本技術分野でよく知られており、所定のものである方法を用いて得ることができる（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ、上記、１９９２）。たとえば、標的ポリペプチドで免疫した哺乳動物からの脾臓細胞を、ＳＰ／０２ミエローマ細胞のような、適切なミエローマ細胞株に融合させて、ハイブリドーマ細胞を作製する。クローン化したハイブリドーマ細胞株を、標識化した標的ポリペプチドまたはその機能的断片を用いて選別し、望む特異性を持つ、標的ポリペプチドモノクローナル抗体を分泌するクローンを同定する。望む特異性と親和性を持つ標的ポリペプチドモノクローナル抗体を発現しているハイブリドーマを単離し、たとえば標準化キットを作製するために有用である、抗体の持続的供給源として利用しうる。同様に、たとえば、一本鎖抗−標的ポリペプチドを発現している組換え体ファージもまた、標準化キットを調製するために利用しうる、モノクローナル抗体を提供する。
【０２４１】
ＭＩＦの阻害剤を利用する適用および方法
ＭＩＦの阻害剤は、以上で記述したように、種々の適用可能な方法を持つ。ＭＩＦの候補阻害剤を、細菌、真菌、植物、寄生生物、化学（小分子）ライブラリー、ペプチドまたはペプチド誘導体などのような、種々の供給源より単離または調達しうる。さらに、当業者は、統計学的に有意な変化が、対照レベルより観察される場合に、阻害が起こると認識する。
【０２４２】
病理学およびホメオスタシスにおけるＭＩＦの種々の役割を考えると、ＭＩＦ活性またはＭＩＦ細胞外局在の阻害が、治療的な効果を持ちうる。たとえば、最近の研究によって、ＭＩＦが、内毒素血症のメディエータであることが実証されており、そこでは、抗−ＭＩＦ抗体が、完全にＬＰＳ−誘導致死からマウスを保護した。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３６５：７５６−７５９，１９９３、Ｃａｌａｎｄｒａ  ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７９：１８９５−１９０２，１９９４、Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２：１９８−２０１，１９９４を参照のこと。さらに、抗−ＭＩＦ抗体は、敗血性ショックを誘導する、グラム陽性細菌でチャレンジしたマウスの生存を明らかに増加させた。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７６：１５１−１６１，１９９８。他の研究によって、腫瘍細胞増殖におけるＭＩＦの役割が立証され、ＭＩＦのアンチセンス阻害が、アポトーシス刺激に対する耐性を導いたことが立証された。Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．４：７０７−７１４，１９９８、Ｔａｋａｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３（１）：６１−６７，１９９９。さらに、ＭＩＦが、グルココルチコイド活性の対抗調節物であるという発見によって、ＭＩＦ細胞外局在を阻害する方法によって、自己免疫、炎症、内毒素血、成人呼吸窮迫症、炎症性腸疾患、中耳炎、炎症性関節疾患およびクローン病を含む、種々の病理学的状態の処置が可能になる可能性があることが示唆されている。Ｂｅｒｎｈａｇｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７６：１５１−１６１，１９９８、Ｃａｌａｎｄｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３７７：６８−７１，１９９５、Ｄｏｎｎｅｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：３２０−３２３，１９９７。ＭＩＦがまた、血管新生性であると認識されているので、このサイトカインの阻害が、抗血管新生活性を持ち、とりわけ、限定はしないが、がん、糖尿病性網膜症、乾癬、脈管障害、不妊、肥満および、クッシング病およびア
ジソン病のようなグルココルチコイド不全の遺伝的疾患を含む、血管新生性疾患にて有用でありうる。
【０２４３】
ＭＩＦ活性または輸出の阻害剤は、治療的に利用可能であり、また、特定の細胞に特異的な細胞表面レセプターに結合する部位を標的にすることとあわせて利用可能でもある。阻害剤またはエンハンサーの投与は、一般的に、確立されたプロトコールにしたがう。好ましい実施形態の組成物は、たとえば、経口、経鼻、静脈、頭蓋内、腹腔内、皮下、または筋肉内投与のためを含む、示唆された投与の様式に対して、処方しうる。他の実施形態内で、本明細書で記述した組成物を、徐放性インプラントの一部として投与可能である。また他の実施形態内で、好ましい実施形態の組成物を、凍結乾燥品としての安定性を提供する、適切な賦形剤を用いて、凍結乾燥として処方し、ついで再水和しうる。
【０２４４】
他の実施形態において、１つまたはそれ以上のＭＩＦの阻害剤を含む医薬組成物が提供される。投与の目的のために、好ましい実施形態の化合物を、医薬組成物として処方して良い。好ましい実施形態の医薬組成物は、好ましい実施形態の１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害剤、および医薬的に許容可能な担体および／または希釈液を含む。ＭＩＦの阻害剤は、特定の疾病を処置するのに効果的な量で、すわなち、ＭＩＦレベルまたは活性、症状を減少させることを達成するのに十分な量で、好ましくは患者に対して許容可能な毒性で、組成物中に存在する。好ましくは、好ましい実施形態の医薬組成物には、投与経路に依存して、用量あたり、約０．０１ｍｇ以下〜約１０００ｍｇ以上、好ましくは、約０．０２５、０．０５、０．０７５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８または０．９ｍｇ〜約６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、３００、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、５００、６００、７００、８００または９００ｍｇ、より好ましくは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０または２５ｍｇ〜約３０、３５、４０、４５、５０、５５または６０ｍｇの、ＭＩＦの阻害剤が含まれる。しかし、ある実施形態において、以上で記述したよりもより低い、またはより高い用量が好ましい可能性がある。適切な濃度および用量は、当業者によって簡単に決定される。
【０２４５】
医薬的に許容可能な担体および／または希釈液は、当業者がよく知っている。液体溶液として処方された組成物に関しては、許容可能な担体および／または希釈液には、生理食塩水および無菌水が含まれ、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および他の一般的な添加物が任意に含まれうる。組成物はまた、ＭＩＦの阻害剤に加えて、希釈液、分散および界面活性剤、結合剤および潤滑油を含むピル、カプセル、顆粒、または錠剤として処方することも可能である。当業者はさらに、ＭＩＦの阻害剤を、適切な様式で、そして、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １９９０にて記述されたような、許容された粒子にしたがって、処方して良い。
【０２４６】
さらに、プロドラッグも、好ましい実施形態の文脈内に含まれる。プロドラッグは、そのようなプロドラッグが患者に投与されたときに、ｉｎ  ｖｉｖｏにて、構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物を放出する、任意の共有結合担体である。プロドラッグは一般的に、通常の操作によって、またはｉｎ  ｖｉｖｏで、改変が開裂し、親化合物が産出されるような方法で、官能基を改変することによって調製される。
【０２４７】
立体異性体に関して、構造（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物は、キラル中心を持っており、ラセミ化合物、ラセミ体混合物として、および個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして存在しうる。そのようなすべての異性体形態が、好ましい実施形態内に含まれ、それらの混合物も含まれる。さらに、構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物の結晶形態のいくつかが、多型として存在し、これも好ましい実施形態に含まれる。さらに、構
造（Ｉａ）または（Ｉｂ）のいくつかの化合物はまた、水または他の有機溶媒と溶媒和物を形成しうる。そのような溶媒和物は同様に、好ましい実施形態の目的内に含まれる。
【０２４８】
他の実施形態において、炎症性疾患、関節炎、免疫関連疾病などを含む、種々の疾病または疾患を処置するために方法が提供される。そのような方法には、好ましい実施形態の化合物を、そのような疾病または疾患を処置するために十分な量で、温血動物に投与することが含まれる。そのような方法には、好ましくは、医薬組成物の形態で、好ましい実施形態のＭＩＦの阻害剤の全身投与が含まれる。本明細書で使用するところの、全身投与には、経口投与法および非経口投与法が含まれる。経口投与に関して、ＭＩＦの阻害剤の好適な医薬組成物には、粉末、顆粒、ピル、錠剤、およびカプセル、ならびに液体、シロップ、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。これらの組成物にはまた、香料、保存剤、懸濁剤、濃厚剤および乳化剤、および他の医薬的に許容可能な添加物も含まれうる。非経口投与に関して、好ましい実施形態の化合物は、ＭＩＦ活性および／または輸出の阻害剤に加えて、緩衝液、抗酸化剤、静菌剤、およびそのような溶液で一般的に利用される他の添加剤を含みうる、水性注射溶液中に調製可能である。
【０２４９】
以上で述べたように、好ましい実施形態の化合物の投与が、広い範囲の疾病または疾患を処置するために使用可能である。とりわけ、好ましい実施形態の化合物を、炎症、がん、免疫疾病などの処置のために、温血動物に投与しうる。
【０２５０】
ＭＩＦ阻害化合物は、他の医薬化合物との組み合わせ治療で使用して良い。好ましい実施形態において、ＭＩＦ阻害化合物は、ＭＩＦが病因性であるか、またはＭＩＦが、疾患工程において、きわめて重要な、または他の役割を果たしている場合に、疾患または状態を処置するために使用される従来の薬剤との組み合わせで存在する。特に好ましい実施形態において、医薬組成物は、限定はしないが、種々のがん、喘息または他の呼吸器疾患、敗血症、関節炎、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）または他の炎症性疾患、免疫性疾病またはＭＩＦが病因性である他の疾患または疾病の処置のための薬剤を含む、１つまたはそれ以上のさらなる医薬化合物との組み合わせで、限定はしないが、構造（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物を含む、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物を含んで提供される。        
【０２５１】
特に好ましい実施形態において、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物が、１つまたはそれ以上の非ステロイド抗炎症薬剤（ＮＳＡＩＤ）または、関節炎または他の炎症性疾患を処置するための他の医薬化合物との組み合わせで存在する。好ましい化合物には、限定はしないが、セレコキシブ、ロフェコキシブ、ＮＳＡＩＤ、たとえばアスピリン、セレコキシブ、トリサリチル酸コリンマグネシウム、ジクロフェナクカリウム、ジクロフェナクナトリウム、ジフルニサール、エトドラック、フェノプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ケトロラック、メラナミン酸、ナブメトン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サルサレート、スリンダックおよびトルメチン、およびコルチコステロイド類、たとえば、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ベータメテゾン、ベクロメタゾン二プロピオン酸、ブデソニド、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン、トリアムシノロンアセトニド、ベータメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、ベータメタゾン二プロピオン酸、ベータメタゾン吉草酸、デソニド、デソキシメタゾン、フルオシノロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、プロピオン酸クロベタゾールおよびデキサメタゾンが含まれる。
【０２５２】
特に好ましい実施形態において、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物が、１つまたはそれ以上のベータ刺激薬、吸入コルチコステロイド類、抗ヒスタミン剤類、ホルモン剤、または喘息、急性呼吸窮迫症、または他の呼吸器系疾患を処置するための他の医薬化合
物との組み合わせで存在する。好ましい化合物には、限定はしないが、ベータ刺激剤類、たとえば、一般的に処方される気管支拡張薬類、吸入コルチコステロイド類、たとえばベクロメタゾン、フルチカゾン、トリアムシノロン、モメタゾン、およびプレドニゾン、プレドニゾロンおよびメチルプレドニゾロンのようなプレドニゾロンの形態、抗ヒスタミン剤類、たとえばアザタジン、カルビノキサミン／シュードエフェドリン、セチリジン、シプロヘプタジン、デキシクロフェニラミン、フェキソフェナジン、ロラタジン、プロメタジン、トリペレンナミン、ブロムフェニラミン、コロヘニラミン、クレマスチン、ジフェンヒドラミンおよびホルモン類、たとえばエピネフリンが含まれる。
【０２５３】
特に好ましい実施形態において、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物は、医薬組成物において、アザチオピリンまたはコルチコステロイド類のようなＩＢＤを処置するための医薬化合物との組み合わせで存在する。
【０２５４】
特に好ましい実施形態のおいて、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物は、医薬組成物において、パクリタキセルのような、がんを処置するための医薬化合物との組み合わせで存在しうる。
【０２５５】
特に好ましい実施形態のおいて、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物は、医薬組成物において、免疫抑制化合物との組み合わせで存在しうる。特に好ましい実施形態のおいて、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物は、医薬組成物において、たとえば、リム疾患、狼瘡（たとえば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））、または後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）のような、自己免疫疾患を処置するための１つまたはそれ以上の薬物との組み合わせで存在しうる。そのような薬剤は、プロテアーゼ阻害剤、たとえばインジナビル、アムプレナビル、サクイナビル、ロピナビル、リトナビルおよびネルフィナビル、ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、たとえば、ジドブジン、アバカビル、ラミブジン、イダノシン、ザルシタビンおよびスタブジン、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤、たとえば、テノホビルジソプロキシルフマル酸、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、たとえばデラビルジン、エファビレンズおよびネビラピン、生物学的応答改変剤、たとえば、エタネルセプト、インフリキシマブ、および、腫瘍壊死因子を阻害するか、または干渉する他の化合物、抗ウイルス剤、たとえばアミブジンおよびジゾブジンとの組み合わせで存在する。
【０２５６】
特に好ましい実施形態において、１つまたはそれ以上のＭＩＦ阻害化合物は、ステロイド類または抗感染薬剤類のような、敗血症を処置するための医薬化合物との組み合わせで存在する。ステロイド類の例には、コルチコステロイド類、たとえばコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドニゾロン、ベータメタゾン、ベクロメタゾン、ジプロピオネート、ブデソニド、デキサメタゾンリン酸ナトリウム、フルニゾライド、フルチカゾンプロピオン酸、トリアムシノロンアセトニド、ベータメタゾン、フルオシノロン、フルオシノニド、ベータメタゾン二プロピオン酸、ベータメタゾン吉草酸、デソニド、デソキシメタゾン、フルオシノロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、クロベタゾールプロピオン酸およびデキサメタゾンが含まれる。抗感染薬剤の例には、駆虫剤類（メベンダゾール）、アミノシクロサイド類（ゲンタマイシン、ネオマイシン、トブラマイシン）を含む抗生物質、抗真菌抗生物質（アンフォテリシンｂ、フルコナゾール、グリセオフルビン、イントラコナゾール、ケトコナゾール、ニスタチン、ミカチン、トルナフタート）、セファロスポリン類（セファクロア、セファゾリン、セホタキシム、セフタジジン、セフトリアキゾン、セフロキシム、セファレキシン）、ベータ−ラクタム抗生物質（セホテタン、メロペネム）、クロラムフェニコール、マクロライド類（アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン）、ペニシリン類（ペニシリンＧナトリウム塩、アモキシシリン、アンピシリン、ジクロキサシリン、ナフシリン、ピペラシリン、トリカルシリン）、テトラサイクリン類（ドキシサイクリン、ミノサイクリン、テトラサイクリン）、バシトラシン、クリダマイシン、コリスチメサート
ナトリウム、硫酸ポリミキシンｂ、バンコマイシン、アシクロビル、アマンタジン、ジダノシン、エファビレンズ、ホスカルネット、ガンシクロビル、インジナビル、ラミブジン、ネルフィナビル、リトナビル、サキナビル、スタブジン、バラシクロビル、バルガンシクロビル、ジドブジンを含む抗ウイルス剤類、キノロン類（シプロフロキサシン、レノフロキサシン）、スルホンアミド類（スルファジアジン、スルフィソキサゾール）、スルホン類（ダプソン）、フラゾリドン、メトロニダゾール、ペンタミジン、スルファニルアミジウム  クリスタリナム、ガチフロキサシンおよびスルファメトキサゾール／トリメトプリムが含まれる。
【０２５７】
ある疾患の処置において、麻酔薬、たとえばエタノール、ブピバカイン、クロロプロカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、プロカイン、ロピバカイン、テトラカイン、デスフルラン、イソフルラン、ケタミン、プロポフォル、セボフルラン、コデイン、フェンタニル、ヒドロモルフォン、マルカイン、メペリジン、メタドン、モルフィン、オキシコドン、レミフェタニル、スフェンタニル、ブトルファノール、ナルブフィン、トラマドール、ベンゾカイン、ジブカイン、エチルクロライド、キシロカインおよびフェナゾピリジンとの組み合わせで、ＭＩＦ阻害剤で患者を処置することが有益である。
【実施例１】
【０２５８】
好ましい実施形態のＭＩＦの阻害剤を、以下の実施例で記述したように、調製し、活性または輸出の阻害に関して選別しうる。
【０２５９】
マクロファージ遊走アッセイ
マクロファージ遊走を、アガロースドロップレットアッセイ、およびＨａｒｒｉｎｇｔｏｎ  ａｎｄ  Ｓｔａｓｔｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１０（３）：７５２−７５９，１９７３によって記述されたようなキャピラリー法を用いることによって測定する。簡単に記すと、マクロファージを含む試料を、ヘマトクリットチューブ、７５ｍｍ長、１．２ｍｍ内径に加える。このチューブを熱密封し、１００×Ｇにて３分間遠心し、細胞−流体境界面にて切断し、Ｓｙｋｅｓ−Ｍｏｏｒｅ培養チャンバー内で、１滴のシリコーングリース内で包埋する。この培養チャンバーは、対照タンパク質（ＢＳＡ）または試料いずれかを含む。遊走面積を、マクロファージファンの見積もられたイメージをトレースし、面積測定によって、遊走の面積を測定することで、３７℃でのインキュベーションの２４および４８時間後に測定する。
【０２６０】
あるいは、９６−ウェルプレートの各ウェルを、各ウェルの中央に分散させた水中での、１μＬの液体０．８％（ｗ／ｖ）Ｓｅａ  Ｐｌａｑｕｅ  Ａｇａｒｏｓｅで先にコートする。ついでこのプレートを、アガロース滴が乾燥するまで、光ボックス上で穏やかに暖める。０．２％アガロース（ｗ／ｖ）を含み、３７℃にて熱した（ＭＩＦまたは他の対照あり、またはなしで）培地中、２５％（ｖ／ｖ）までの２μＬのマクロファージ含有細胞懸濁液を、先にコートしたプレートウェルに加え、５分間、４℃まで冷却する。ついで各ウェルを培地で満たし、４８時間、５％ＣＯ2−９５％空気下で、３７℃にてインキュベートする。アガロース小滴からの遊走を、小滴のきわから、遊走の末端までの距離を測定することによって２４時間および４８時間の時点で測定する。
【０２６１】
遊走アッセイ
組換え体マウスおよびヒト天然型、およびマウス変異体ＭＩＦの単球遊走阻害活性を、改変ボイデンチャンバーフォーマットにおけるヒト末梢血単核細胞またはＴ−細胞枯渇単核球の利用によって解析する。カルセインＡＭ−標識化単球を、Ｌ−グルタミン（フェノールレッドなし）および０．１ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミンまたはウシ血清アルブミンとともに、ＲＰＭＩ１６４０培地（単層または懸濁培養液中でのヒト白血病細胞の増殖のための培地、ロスウェル  パーク  メモリアル  インステュチュート（Ｒｏｓｗｅｌｌ  
Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）より）中、２．５〜５×１０6／ｍＬにて懸濁させる。細胞懸濁液の一部（２００μＬ）を、３７℃まで先に暖めた、Ｕ底９６ウェル培養プレート（コースター（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ））のウェルに加え、ＲＰＭＩ１６４０中のＭＩＦを、この細胞懸濁液に加えて、最終濃度を１、１０、１００および１０００ｎｇ／ｍＬとする。培養プレートを、温度−制御プレートリーダーのチャンバー内に入れ、３０秒間混合し、３７℃にて１０〜２０分間インキュベートする。インキュベーションの間、１０または２５ｎｇ／ｍＬでの２８μＬの先に暖めたヒト単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ−１、ペプロ  テック社（Ｐｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ．，Ｉｎｃ．）Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，ＮＪ）、または０．１ｍｇ／ｍＬ  ＨＳＡを含むＲＰＭＩ１６４０を、ＣｈｅｍｏＴＸプレート（ニューロ  プローブ社（Ｎｅｕｒｏ  Ｐｒｏｂｅ  Ｉｎｃ．）、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ、３ｍｍ  ウェル直径、５μＭフィルターポアサイズ）の底ウェルに加える。フィルタープレートを、注意深く底プレートに加える。処置した細胞懸濁液を、インキュベーターより取り除き、３０μＬを、フィルタープレートの各ウェルに加える。プレートをあわせて、９０分間、３７℃にて、５％  ＣＯ2での加湿チャンバー内でインキュベートする。インキュベーションにつづき、細胞懸濁液を、フィルターの表面から吸引し、続いてフィルターを底プレートから取り除き、各フィルターセグメントに、５０μＬの１×ＨＢＳＳ-（ハンクスのバランス塩溶液（Ｈａｎｋｓ’  Ｂａｌａｎｃｅ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、１×濃度）を加えることによって３回洗浄する。洗浄の間、スキージー（ニューロプローブ（ＮｅｕｒｏＰｒｏｂｅ））を利用して、残余ＨＢＳＳ-を除去する。フィルターを風乾させ、ついで蛍光プレートリーダーで、４８５ｎｍでの励起および５３５ｎｍでの放射にて、直接読む。走化性またはランダム遊走インデックスを、ＭＣＰ−１およびＭＩＦをどちらも含まないウェル中のフィルターの平均蛍光で割った、該ウェル組に関する平均フィルター−結合蛍光として定義する。蛍光で標識化した細胞の滴定によって、本アッセイで検出された蛍光のレベルが、細胞数と直線比例することが明らかになった（示していない）。
【０２６２】
トートメラーゼアッセイ
互変反応を、本質的にＲｏｓｅｎｇｒｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２（１）：１４３−１４９，１９９６によって記述されたように実施する。５，６−ジヒドロキシインドール−２−カルボン酸へのＤ−ドパクローム変換を査定する。０．１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび１０ｍＭ  リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０を含む試料溶液中の、０．４２ｍＭ基質と、１．４μｇのＭＩＦを含む、１ｍｌの試料キュベットを調製し、イミノクローム吸収の減少率を、４７５ｎｍにて追う。Ｌ−ドパクロームを対照として利用する。さらに、反応産物を、１．２ｍｌ／分の流速にて、２０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4緩衝液（ｐＨ４．０）および１５％メタノールを含む移動相を用いて、ＨＰＬＣを用いて追う。蛍光検出を、２９５／３４５ｎｍにて追う。
【０２６３】
あるいは、フェニルピルビン酸または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸を用いる互変反応を、本質的にＪｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３８：１６０２４−１６０３３，１９９９によって記述されたように実施する。このバージョンでは、フェニルピルビン酸のケトン化を、２８８ｎｍ（ｅ＝１７３００Ｍ-1ｃｍ-1）にてモニタし、（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸のケトン化を、３００ｎｍ（ｅ＝２１６００Ｍ-1ｃｍ-1）にてモニタする。アッセイ混合液には、５０ｍＭ  Ｎａ2ＨＰＯ4緩衝液（１ｍＬ、ｐＨ６．５）が含まれ、ＭＩＦの溶液の一部を十分に希釈し（２．３ｍｇ／ｍＬ溶液の０．５〜１．０μＬ、最終濃度９３〜１８６ｎＭ）、初期直線率を得る。アッセイを、エタノール中で作製した、ストック溶液からの、少量（１〜３．３μＬ）のフェニルピルビン酸または（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸いずれかの添加によって開始する。フェニルピルビン酸および（ｐ−ヒドロキシフェニル）ピルビン酸の結晶性形態が、エノールアイソマーとして、独占的に存在する（Ｌａｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．Ｂ  ２８：９２−９６，１９７４）。基質の濃度は、０．５％  ｖ
／ｖ未満で観察されるエタノールによる、ＭＩＦ活性の有意な阻害なしで、１０〜１５０Ｍの範囲であり得る。
【０２６４】
免疫沈降およびウエスタンブロット解析
細胞培養実験を、候補化合物の活性、ＭＩＦ発現、トラフィッキングおよび輸出を特性化するために設計する。細胞および条件培地画分を、４００μｌの溶解バッファ（１％  ＮＰ−４０、０．５％デオキシコレート、２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．５、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．０１ｍＭ  フッ化フェニルメチルスルホニル、１０ｎｇ／ｍｌ  アポロチニン、１０ｎｇ／ｍｌ  ロイペプチン、１０ｎｇ／ｍｌ  ペプトスタチン）を、１５分間のマイクロヒュージ中での遠心による浄化の後に、培地画分に加えることをのぞいて、本質的にすでに記述されているように（Ｆｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒｓ  ４：２６５−２７５，１９９１、Ｆｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６３８：１０９−１２６）、免疫沈降のための調製する。細胞または培地画分を、ＭＩＦに対するモノクローナルまたはポリクローナル抗体とともにインキュベートし、ＧａｍｍａＢｉｎｄ（商標）  Ｇ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＬＫＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を、さらなる３０分間のインキュベーションの間に加える。免疫複合体を、マイクロフュージ遠心沈殿させ、溶解バッファにて３回、氷冷免疫沈降洗浄バッファ（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．０１Ｍ  Ｎａ−リン酸ｐＨ７．２、１％  デオキシコレート、１％  ＮＰ−４０、０．１％  硫酸ドデシルナトリウム）で４回洗浄する。免疫複合体を、ＳＤＳゲル試料バッファ  １２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ６．８、４％  ＳＤＳ、１０％  グリセロール、０．００４％  ブロモフェノールブルー、２ｍＭ  ＥＧＴＡ中に直接溶解し、１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥにて分離する。ゲルを蛍光間接撮影法のために処理し、乾燥させ、−７０℃にてＸ−線フィルムに曝露する。ネオマイシンホスホトランスフェラーゼを免疫沈降する場合、ウサギ抗−ＮＰＴ抗体（５Ｐｒｉｍｅ−３Ｐｒｉｍｅ、Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）を使用した。
【０２６５】
ウエスタンブロット解析のために、タンパク質を、１２％  ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから、ニトロセルロース膜（２５ｍＭ  ３−［ジメチル（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］−２−ヒドロキシプロパン−スルホン酸、ｐＨ９．５、２０％  メタノールを含む冷バッファ中ポアサイズ０．４５μｍ）へ、０．４ａｍｐｓにて９０分間移す。細胞条件培地のウエスタンブロット解析のために、培地を（１０分間８００ｇにて）遠心し、上清を、膜濾過（１０ｋＤａカット−オフ、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−１０、アミコン（Ａｍｉｃｏｎ））によって１０倍に濃縮する。ついで試料を、還元条件下で、１６％  ＳＤＳ  Ｔｒｉｓ−グリシンＧｅｌ（ノベックス（Ｎｏｖｅｘ）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）上で分解し、２０Ｖ、３時間で、ニトロセルロース膜（ノベックス）上に移す。膜をウサギポリクローナル抗−ラット抗体（１：１０００）（トレイ  ピンズ  バイオラボ（Ｔｏｒｒｅｙ  Ｐｉｎｅｓ  Ｂｉｏｌａｂ）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）と、ついで、ホースラディッシュ  ペルオキシダーゼ−共役物（１：１０００）（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ）、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）とともにインキュベートした。ＭＩＦを、クロロナフトノール／Ｈ2Ｏ2での現像によって視覚化した。組換え体ＭＩＦ（２ｎｇ、Ｒ＆Ｓシステムズ（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ）、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓより購入）を、標準として電気泳動して、移した。膜は、１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．５、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＮａＮ3、０．３５％  ポリオキシエチレン−ソルビタン一ラウリン酸、および５％非脂肪乾燥ミルク（カルネーション社（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ  Ｃｏ．）、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｅｓ，ＣＡ）中で、室温１時間、ブロックする。膜を、モノクローナル抗体（カタログ番号ＭＡＢ２８９、Ｒ＆Ｄシステムズ、Ｍｉｎｅｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮより購入）、またはポリクローナル（ヤギポリクローナル血清、Ｒ＆Ｄシステムズ、カタログ番号ＡＦ−２８９−ＰＢ）とともにインキュベートする。インキュベーションに続いて、膜を、室温にて、１５０
ｍＭ  ＮａＣｌ、５００ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＮａＮ3、および０．０５％  ポリオキシエチレン−ソルビタン一ラウリン酸を含むバッファを１０回変えて洗浄する。モノクローナル抗体を使用する場合、ついで膜を、１μｇ／ｍｌウサギ抗−マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ、アフィニピュア、ジャクソン  イムノ  リサーチ  ラボラトリーズ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含むブロッキングバッファ中で、室温にて３０分間インキュベートする。ポリクローナルプロービングのためには、インキュベーションは、ウサギ抗−ヤギ（シグマ（Ｓｉｇｍａ）、カタログ番号Ｇ５５１８）を使用する。つづいて膜を、１Ｌの以上で記述したバッファ中で洗浄し、１５μＣｉ  125Ｉ−タンパク質Ａ（ＩＣＮ  バイオケミカルズ（ＩＣＮ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、Ｃｏｓｔａ  Ｍｅｓａ、ＣＡ）を含む１００ｍｌのブロッキングバッファ中で、１時間インキュベートし、１Ｌのバッファで洗浄する。放射シグナルを、オートラジオグラフィーによって視覚化する。
【０２６６】
ＭＩＦ結合を検出するために、一晩条件培地を、種々の量の候補化合物でも処理し、モノクローナルまたはポリクローナル抗体での免疫沈降によって選別した、ＬＰＳ（１０μｇ／ｍｌ）処置ＴＨＰ−１細胞より回収する。条件培地は、１０μＭの候補化合物の存在下で、モノクローナル抗体を用いて、検出可能なＭＩＦの有意な欠損を示すが、ポリクローナル抗体では観察されない。この応答は、ＭＩＦ酵素活性における候補化合物の効果を映し出している。したがって、モノクローナル応答性が、酵素活性に関するサロゲートマーカーとして働く。
【０２６７】
種々の濃度の阻害剤類似体を、ＬＰＳ刺激ＴＨＰ−１細胞に加え、一晩インキュベートさせる。次の日に、検出された免疫応答性ＭＩＦの量をＥＬＩＳＡによって評価する。候補化合物が、ＭＩＦを認識する抗体の能力を阻害する。
【０２６８】
候補化合物の、ＴＨＰ−１細胞によって産出されるＭＩＦの免疫応答性を減少させる能力を測定する。ＴＨＰ−１細胞を、１０μｇ／ｍｌのＬＰＳによって処置し、１０μＭの候補化合物を、ＬＰＳ−刺激後種々の時間にて加え、免疫応答性を、抗−ＭＩＦモノクローナルにてモニタする。候補化合物の添加に続いて、免疫応答性は急速に失われる。化合物またはバッファのみ対照のＭＩＦ検出における活性を、候補化合物を、種々の時間時点で、細胞培養液に最初に加える時に測定し、ついで相当する条件培地試料を、時間依存様式で処理する。
【０２６９】
候補化合物の、ＭＩＦの抗体認識を調節する能力を、生細胞のない状態で、前条件化培地を用いて試験する。この実験において、ＬＰＳを、以上で記述したような培養液中のＴＨＰ１に加える。６時間後、条件化培地を取り除き、細胞残渣物を浄化し、ＭＩＦの量が２２ｎｇ／ｍｌであると測定する。この前条件化培地を、ついで２つの群にわける。両方の群を、種々の時間に、３７℃でインキュベートし、その後、試験化合物またはバッファのみ（対照）を、３７℃でのインキュベーションのさらなる３０分間で加える。ついで検出可能なＭＩＦのレベルを、検出のためにモノクローナル抗−ＭＩＦ抗体を用いる、ＥＬＩＳＡによって測定する。ＭＩＦ特異的ＥＬＩＳＡシグナルの迅速な欠損が、候補化合物の存在に依存する。ＭＩＦの対照レベルは変化しない。したがって、候補化合物はＭＩＦと相互作用し、細胞がない状態でさえ、ＭＩＦと続いて相互作用する抗体の能力を防止する。この相互作用が触媒部位で起こるので、または触媒活性を抑制するので、免疫応答性の欠損は、酵素活性および／またはＭＩＦ関連活性の欠損に比例する。
【０２７０】
細胞外局在アッセイ
候補化合物の、ＭＩＦ輸出を調節するｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性をさらに査定するために、マウスマクロファージＲＡＷ２６４．７細胞（マウスマクロファージ細胞株、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）
を選択する。
【０２７１】
Ｒａｗ２６４．７マクロファージ（３×１０6細胞／ウェル）を、１２ウェル組織培養プレート（コースター（Ｃｏｓｔａｒ））中にプレートし、ＲＰＭＩ／１％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ハイクローン  ラボラトリーズ（Ｈｙｃｌｏｎｅ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）中で培養する。５％ＣＯ2湿潤大気中、３７℃でのインキュベーション３時間後、非接着細胞を取り除き、ウェルを、ＲＰＭＩ／１％ＦＢＳにて２回洗浄する。ついで細胞を、およそ９５％純粋であり、ピローゲンを含まない水中に再懸濁させた、（用量応答試験のために）１ｐｇ／ｍｌ〜１０００ｐｇ／ｍｌの範囲の濃度での、ＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）、またはＴＳＳＴ−１（毒性ショック症候群毒素−１（Ｔｏｘｉｃ  Ｓｈｏｃｋ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ  Ｔｏｘｉｎ−１）、トキシン  テクノロジー（Ｔｏｘｉｎ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、Ｓａｒａｓｏｔａ，ＦＬ）と共に２４時間インキュベートする。時間経過実験のために、平行培養の条件培地を、１ｎｇ／ｍｌ  ＴＳＳＴ−１またはＬＰＳでの刺激後、０．５、１、２、４、８および２４時間間隔にて取り除く。阻害研究のために、０．０１μＭ〜１０μＭの候補化合物、またはバッファ（対照）の存在下、ＲＡＷ２６４．７細胞（３×１０6細胞／ウェル）を、１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）または１ｎｇ／ｍｌのＴＳＳＴ−１と共に２４時間インキュベートする。細胞−条件培地中のＭＩＦをフィルター上で濃縮し、試料中に残っているＭＩＦを、ウエスタンブロッティングによって解析し、ＭＩＦバンド密度をまた、ストラタジーン（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）Ｅａｇｌｅ  Ｅｙｅ（商標）によって測定する。
【０２７２】
ＲＡＷ細胞を、１ｎｇ／ｍｌ  ＴＳＳＴ−１またはＬＰＳいずれかを加えることによって、ＭＩＦを発現するように誘導し、２４時間培養する。条件培地中のＭＩＦを以上で記述したように測定する。候補化合物は、バッファのみでインキュベートした細胞に比べて、濃度依存的形態にて、条件培地中で、免疫検出可能なＭＩＦレベルを減少させる。
【０２７３】
細胞培養、トランスフェクションおよび代謝ラベリング
Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）より得た標的細胞を、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１ｍＭ  ピルビン酸ナトリウム、１００ｎＭ  非必須アミノ酸および５０μｇ／ｍｌ
ゲンタマイシンを含むＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ
Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅｓ  Ｍｅｄｉｕｍ））中、４８−ウェルプレート中で、一晩培養する。ついで標的細胞を、トランスフェクションバッファ（１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＫＣｌ、１ｍＭ  ＣａＣｌ2、０．５ｍＭ  ＭｇＣｌ2、０．９ｍＭ  Ｎａ2ＨＰＯ4、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．４）中の、２μｇ／ｍｌのＣｓＣｌ−精製プラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。各ウェルに、トランスフェクションバッファ中の３００μｌのＤＮＡを加える。細胞を、３７℃にて３０分間インキュベートし、バッファを吸引する。１００μｍクロロキンを含む暖培地を１．５時間加える。この培地を取り除き、細胞を、完全培地にて二回洗浄する。ついで細胞を４０〜４８時間インキュベートする。対象のプラスミドを、選別可能マーカーネオマイシン  ホスホトランスフェラーゼを含む、ｐＭＡＭｎｅｏ（ネオマイシン耐性遺伝子を含むグルココルチコイド−誘導可能哺乳動物発現ベクター、クロンテック（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ）と共トランスフェクトする。２μｇの対象プラスミドを、１０μｇのｐＭＡＭｎｅｏと共トランスフェクトする場合、免疫蛍光顕微鏡によって検出するように、７０％を超えるのトランスフェクトした細胞が、ＭＩＦとｎｅｏ両方を発現する。  
【０２７４】
免疫沈降アッセイのために、標的細胞を、１ｍｌのメチオニンおよびシステインを含まないＤＭＥＭ中、１００μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび35Ｓ−システイン（Ｔｒａｎｓ
35Ｓ−ラベル、ＩＣＮ  バイオメディカルズ（ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）、Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）で、１５分間、代謝的にパルス標識する。標識に続いて、細胞単層を
、過剰（１０ｍＭ）の未標識メチオニンとシステインを含むＤＭＥＭにて、１〜２分間、一回洗浄する。ついで細胞を、示唆した時間、２ｍｌの本培地中で培養し、細胞上清を、リーダーなしタンパク質の存在に関して免疫沈降する。示した培養のために、追跡培地に、示唆した濃度で、モジュレーターを加える。
【０２７５】
あるいは、ＥＬＩＳＡによる解析のために、標的細胞を、２５０μｌの０．１Ｍ  炭酸ナトリウム、ｐＨ１１．４にて一回、１〜２分間洗浄し、即座に吸引する。あるいは高塩溶液が好ましい。細胞を、０．５％  ＦＢＳ＋２５μｇ／ｍｌヘパリンを含む培地で洗浄し、ついで細胞を、同様の培地中で、示した時間、インキュベートする。表示された培養のために、追跡培地にモジュレーターを加える。ｈＣＧ−αまたは任意の他の非−ヘパリン結合タンパク質のような、リーダー配列を含むタンパク質をコードしているベクターをトランスフェクトした細胞に関して、炭酸洗浄およびヘパリン含有培地を省略しうる。
【０２７６】
ＭＩＦ阻害剤に関するハイスループットスクリーニングアッセイ
ＭＩＦ阻害剤に関するハイスループットスクリーニングアッセイを、ＴＨＰ−１細胞によって産出されたＭＩＦを用いて、９６−ウェルフォーマットにて実施し、以下のように実施する。ＭＩＦアッセイは、以上で示唆したように、ＥＬＩＳＡによって実施する。ＴＨＰ−１細胞を、２０μｇ／ｍｌの細菌ＬＰＳを含むＲＰＭＩ培地中、およそ５×１０6細胞／ｍｌまで再懸濁させ、細胞を１８〜２０時間インキュベートする。つづいて、細胞上清を集め、推定阻害剤とともにインキュベートする。簡単に記すと、９６ウェルプレート（コースター（Ｃｏｓｔａｒ）番号３５９０）ＥＬＩＳＡプレートを、４μｇ／ｍｌの濃度にて、ＭＩＦモノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）  カタログ番号ＭＡＢ２８９）で、３７℃にて２時間、コートする。未希釈培養上清を、室温にて２時間インキュベーションで、ＥＬＩＳＡプレートに加える。ついでウェルを洗浄し、ビオチン化ＭＩＦポリクローナル抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ、＃ＡＦ−２８９−ＰＢ）を加え、さらにストレプトアビジン−ＨＲＰおよび色原体基質を加える。ＭＩＦの量は、ＭＩＦ標準曲線からの内挿によって計算する。
【０２７７】
血清中の候補阻害剤のＨＰＬＣ解析
小分子の効果をｉｎ  ｖｉｖｏで評価する前に、定量的な様式で、血液のような体液中の化合物を検出可能であることが望ましい。ＭＩＦ阻害剤のような、試験化合物をまず再現可能なように検出するために解析方法を確立し、ついで、生物学的流体中のその濃度を測定するために確立された。
【０２７８】
ＲＰ−ＨＰＬＣを、Ｓｙｍｍｅｔｒｙ  Ｓｈｉｅｌｄ  ＲＰ−８（４．６×７５ｍｍ  ｉｄ、ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）、Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を用いる、ヒューレット−パッカード（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）モデルＨＰ−１１００ユニットで実施する。移動相は、０．１％トリフルオロ酢酸を含む３５％  アセトニトリル／水の定組成溶液である。吸収を２３５ｎｍでモニタする。血清中の試験化合物の量を測定するために、試料血清タンパク質をまず、５０％  アセトニトリル（４℃、一晩）を用いて、つづいて１４０００ｒｐｍにて３０分間の遠心によって分離する。ついで上清を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって解析し、化合物濃度を、公知の標準の検定曲線に基づいて計算する。この手順にしたがって、逆相ＨＰＬＣを利用して、スパイク試験試料を用い、１．５〜８００ｎｇ（Ｒ２＝１）の直線範囲で、候補化合物を検出する（示していない）。以上の解析技術を、候補化合物を与えた動物からの血清に適用した場合に、候補化合物の循環濃度が、定量的に測定される。
【０２７９】
上記方法の開発に際し、化合物の異なる投与経路の効果を評価すること、および生物活性を特性化することが可能である。時間依存血清バイオアベイラビリティーを試験するために、動物を、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって、および強制飼養による経口で、候補化
合物で処置する。
【０２８０】
ＭＩＦのｉｎ  ｖｉｖｏ阻害
以下のｉｎ  ｖｉｖｏ実験の目的は、ＭＩＦを阻害する候補化合物を用いる、初期ｉｎ
ｖｉｔｒｏアッセイ結果を確認することである。ＬＰＳ−誘導毒性は、ＭＩＦならびにＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの過剰産出に関連しているようにみられる。動物を、これらの炎症性メディエーターを中和すること、または阻害することによって、エンドトキシンショックから保護可能である。本モデルは、敗血症および敗血性ショックの、再現可能で、迅速な致死モデルを提供するので、選択した。
【０２８１】
リポポリサッカライド（ＬＰＳ）の用量は、各実験の前に未使用とした。ＬＰＳ（大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  Ｃｏｌｉ）０１１１：Ｂ４、シグマ（Ｓｉｇｍａ））を、０．５％  ＴＦＡ（１ｍｌ  ＵＳＰ水＋５ｍｌ  トリエチルアミン（ピアス（Ｐｉｅｒｃｅ））を、５ｍｇのエンドトキシンのバイアルに加えることで、再構築する。一旦再構築したならば、溶液を、３７℃にて３０分間インキュベートする。つづいて、溶液を、３０秒間、３回、５６〜６０℃、バスソニケーター中で超音波処理する。超音波処理の後、この混合液を、３分間連続的にボルテックスする。ついで、ＬＰＳのショック溶液が使える状態となる。
【０２８２】
ＩＬ−１βおよびＴＮＦ−α、およびＭＩＦの血中での検出
１０匹の１０週齢（２０±２グラム）メスＢＡＬＢ／ｃマウス（チャールズ  リバー  ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，ＮＹ）を、えさおよび水を自由にとれる状態で、ケージあたり５匹の群で、飼育し、実験の少なくとも一週間前に順応させる。実験の日に、マウスの体重をはかり、無作為に、等平均体重の１０匹の動物を群に分類する。マウスに、２００μＬの処方候補化合物またはバッファのみを、ＬＰＳ（大腸菌０１１１：Ｂ４、１０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇ体重）およびβ−Ｄ−ガラクトサミン（５０ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔内注射直前、腹腔内で注射する。ＬＰＳの各用量（２０グラムマウスに０．２ｍｌ）を、腹腔内に投与し、５０ｍｇ／ｍｌのβ−Ｄ−ガラクトサミンの最終濃度と混合する。心臓穿刺からとった血液切片の回収に続いて、動物を犠牲死させる。典型的な回収は、ＬＰＳ処置後４時間の時点で実施する。血清を、取り扱いプロトコールにしたがって、血清分離器（Ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ（登録商標）ベクトン  ディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＮＪ）内で分離する。マウス血清Ｉｌ−１βおよびＴＮＦ−αを、製造業者の指示にしたがって、「マウスＩＬ１β免疫アッセイまたはマウスＴＮＦ−α免疫アッセイ」キット（Ｒ＆Ｄシステムズ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いて、ＥＬＩＳＡによって測定する。マウス血清における、血清ＭＩＦ濃度は、サンドイッチＥＬＩＳＡ（ケミカインＭＩＦキット（ＣｈｅｍｉＫｉｎｅ  ＭＩＦ  Ｋｉｔ）、ケミコン（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって定量する。試料を、二重に解析し、結果を平均する。
【０２８３】
マウスＬＰＳモデル
１０匹の８〜１０週齢（２０±２グラム）メスＢＡＬＢ／ｃマウスを、以上で記述したように、飼育し、順応させる。実験の日に、マウスの体重をはかり、無作為に、等平均体重の５匹の動物を群に分類する。マウスに、２００μＬの処方候補化合物またはバッファのみ（平均２０ｍｇ／ｋｇ化合物）を、ＬＰＳ（大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）０５５Ｂ５、シグマ）（４０、１０、５、２または０．５ｍｇ／ｋｇ体重）および５０ｍｇ／ｋｇ体重のβ−Ｄ−ガラクトサミンの腹腔内．注射後、注射する。マウスを最初の１８時間の間２時間ごと、および７日間、一日２回観察する。これらの研究のために、カプラン−マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）予測法を利用して、動物の生存を査定する。
【０２８４】
全てのｉｎ  ｖｉｖｏ試験に関して、処置群間の標準統計比較を、カテゴリー化データに対して、フィッシャー検定を、そして、連続変数に対してマンテル−コックス検定を用いて実施する。血清ＩＬ−１のレベルが、血清ＭＩＦと相関する場合、測定のためには、フィッシャー検定を適用する。解析は、Ｓｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０ソフトウェア（アバカス  コンセプツ（Ａｂａｃｕｓ  Ｃｏｎｃｅｐｔｓ）、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ，ＣＡ）を用いて実施する。両側であり、０．０５より小さな値の、全ての報告されたｐ値について、統計学的有意さを示していると考える。
【０２８５】
マウスモデル系（メスＢａｌｂ／ｃマウス）での内因性ＭＩＦの基底レベルを決定するため、およびさらに、ＬＰＳ（１０ｍｇ／ｋｇ）での処置に続く、内因性ＭＩＦの増加の速度および程度を決定するために、初期対照実験を実施する。メスＢａｌｂ／ｃマウスを、５０ｍｇ／ｋｇのβ−Ｄ−ガラクトサミンを混合させた、ＬＰＳ（シグマ  ０１１１：Ｂ１）で処置する。血清中のＭＩＦのレベルを、ＬＰＳ／ガラクトサミン処置後０、２、５および６時間にて、上述のように、ＨＰＬＣによって測定する。この代表的な実験の開始において、内因性ＭＩＦの基底レベルを測定する。マウスを候補化合物（５０％水溶液中に処方）および１０ｍｇ／ｋｇのＬＰSで処置した場合に、検出可能な循環ＭＩＦのレベルにおいて、有意な減少が存在する。さらなる実験において、ＭＩＦおよびＩＬ−１β両方が、ＥＬＩＳＡを介して、マウス血清中で測定される。２つの間での直接の、そして高い有意な相関が、ＭＩＦおよびＩＬ−１β間で観察される。この相関はまた、ＭＩＦとＴＮＦ−α間でも観察される。同様の実験において、血清ＩＬ−１βレベルおよび血清ＴＮＦ−αレベルの減少が、２０ｍｇ／ｋｇの候補化合物の投与の後観察される。
【０２８６】
ＬＰＳによって誘導される実験的毒性ショックの研究によって、ＭＩＦおよびＴＮＦ−αに対する主要な役割が明らかになってきた。ＬＰＳが、マクロファージ様細胞を、ＭＩＦを産出するように刺激し、順に、マクロファージ様細胞によるＴＮＦ−α分泌を誘導するという事実は、ＬＰＳの病因におけるＭＩＦの可能性のある役割を示唆している。候補化合物がＬＰＳショックを防止可能であるかどうかを試験するために、β−Ｄ−ガラクトサミンで感作したＢＡＬＢ／ｃマウスの致死ＬＰＳ仲介ショックのモデルを使用する。致死量のＬＰＳ（２、５および１０ｍｇ／ｋｇ）の注射の時点で、候補化合物で処置することによって、生存率が上昇する。この効果は、使用したＬＰＳの濃度によって調整され、これは、高濃度のＬＰＳを使用したときに、候補化合物の効果が飽和可能であり、したがって特異的であることを示している。
【０２８７】
ＭＩＦは、候補化合物の効果を克服する
候補化合物を投与したときの、外因性組換え体ヒトＭＩＦによって、化合物の有益な効果が逆転され、これは、候補化合物が、マウス血清中のＭＩＦレベルを調節することによって、ＬＰＳに対する動物の抵抗性を増加させるように働くという仮説を支持している。この実験にて、マウスを、さらに１ｍｇ／ｋｇのＬＰＳと２０ｍｇ／ｋｇの候補化合物を除いて、標準のＬＰＳプロトコールで処置し、何匹かの動物にはまた、３００μｇ／ｋｇのヒト組換え体ＭＩＦを投与する。１２時間の時点で、候補化合物とのＬＰＳにより、マウスは明らかに多く生存したが、この生存率は、ＭＩＦの投与によって中和される。
【０２８８】
コラーゲン誘導関節炎モデルにおけるＭＩＦ阻害剤
２０匹のＤＢＡ／１ＬａｃＪマウス、１０〜１２週齢を、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ、ギブコＢＲＬ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ））中に乳化させた、ウシコラーゲンＩＩ型（ＣＩＩ  １００μｇ）で、尾基底部にて、０日目に免疫する。７日目に、（フロイント不完全アジュバント中に乳化させた）コラーゲンの第二用量を、同様の経路を介して投与する。１４日目に、マウスに、１００ｍｇのＬＰＳ（０５５：Ｂ５）を皮下に注射する。７０日目に、マウスに、腹腔内に、４０μｇ  ＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）を注射する。群を、無作為化の後、キャリパーによって測定して、足の厚さにしたがって分け、バランス
開始群を作製する。バッファ中の候補化合物を、７１、７２，７３および７４日目にマウスに与える（合計８用量、０．４ｍｇ／用量、およそ２０ｍｇ／ｋｇ体重）。ついでマウスを、足の厚さに関して、２人の観察者によって、７４日目に試験する。この実験で、通常の高さより低くなるマウス（完全な関節炎の衰退）を、７０日目に、ＬＰＳの最終腹腔内．注射で処置し、サイトカイン産出ならびに急性炎症を刺激する。候補化合物処置マウスは、賦形剤のみの処置対照と比較して、足の浮腫のゆるやかな減少が進展する。後期段階にて、処置群の動物は、その対照と比較して、コラーゲン誘導関節炎の完全な発現に達しない。
【０２８９】
他の実験にて、１５匹のDＢＡ／１Ｊマウス、１０〜１２週齢を、フロイント完全アジュバント（ＦＣＡ、ギブコＢＲＬ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ））中に乳化させた、ウシコラーゲンＩＩ型（ＣＩＩ  １００μｇ）で、尾基底部にて、０日目に免疫する。２１日目に、（フロイント不完全アジュバント中に乳化させた）コラーゲンの第二用量を、同様の経路を介して投与する。２８日目に、マウスに、１００μｇのＬＰＳ（０５５：Ｂ５）を皮下に注射する。７１日目に、マウスに、腹腔内に、４０μｇ  ＬＰＳ（０１１１：Ｂ４）を注射する。群および処置プロトコールは、以上で記述したものと同様である。７４日の時点で、血液試料を回収し、サイトカインを測定する。候補化合物は、未処理ＣＩＡ試料と比較して、血清ＭＩＦレベルを減少させる。血清ＴＮＦ−αレベルのより有意な阻害が検出される。
【実施例２】
【０２９０】
ある実施形態のＭＩＦの阻害剤は、以下の反応スキームにしたがって調製する。これらのＭＩＦ阻害剤のそれぞれが、以上で記述した１つの種類の化合物に属する。変数Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｚおよびｎは以上で定義したとおりである。
【０２９１】
本発明の化合物の合成に関する一般方法
化合物を置換または未置換イサトイン酸無水物から開始して合成した。上述の構造（１ａ）および（１ｂ）の化合物内へのＲ2および／またはＲ3基を導入する戦略には、置換イサトイン酸無水物を、置換アントラニル酸から、前駆体化合物として調製することが含まれる。置換アントラニル酸は、置換ニトロ安息香酸より調製した。いくつかの場合で、ニトロ安息香酸は、反応スキーム１にて示したように、適切な安息香酸のニトロ化によって得たが、しかし、ニトロ安息香酸の調製のための任意の好適な方法が利用可能である。
【０２９２】
【化４６】
2006517977.tif 000048
【０２９３】
２つの異なる方法を利用して、上述の構造（１ａ）および（１ｂ）の化合物内にＲ1基を導入した。１つの方法において、反応スキーム１にて記述されたように調製した置換イ
サトイン酸無水物を、Ｎ−１位でアルキル化し、ついで、構造ｉの置換キノリノン中間体に変換した（以下反応スキーム２で描写した）。中間体ｉのアミン化によって、構造ｉｉのアミド中間体が産出され、これを、ホスホロウソキシクロリドと反応させて、反応スキーム２にて描写したようなｉｉｉ型の中間体を産出した。
【０２９４】
【化４７】
2006517977.tif 000049
【０２９５】
構造（１ａ）および（１ｂ）の化合物内へＲ4基を導入するために、構造ｉｉｉのクロロ中間体を、アシル化ピペラジンと反応させるか、または過剰のピペラジンとまず反応させて構造ｉｖの中間体を産出し、ついでアシル化して、反応スキーム３で描写したような標的化合物を産出した。中間体ｉｖのアシル化を、市販されているアシルクロライド、または反応スキーム３で示したような相当するカルボン酸とオキサリルクロライドの反応より調製した新鮮に調製したアシルクロライドいずれかで、前記中間体を処置することによって実施した。
【０２９６】
【化４８】
2006517977.tif 000050
【０２９７】
Ｒ1基を構造（１ａ）および（１ｂ）の化合物に導入するための他の方法において、構造ｉｘの中間体を、イサトイン酸無水物から調製し、最終段階で、Ｎ−１位にてアルキル化する。イサトイン酸無水物を、マレイン酸ジエチルで処理することによって、構造ｖの中間体に変換する。中間体ｖのアミン化、続いて、熱リンオキシクロライドとの反応によって、構造ｖｉｉのジクロロキノリノン中間体が産出された。酢酸中の中間体ｖｉｉの酢酸アンモニウムとの反応によって、構造ｖｉｉｉの中間体が得られ、これをアシルピペラジンで処理して、反応スキーム４にて描写したように、構造ｉｘの中間体を産出した。
【０２９８】
【化４９】
2006517977.tif 000051
【０２９９】
中間体ｉｘのＮ−１位のアルキル化によって、異なるＲ1置換基を持つ、望む化合物を産出した。中間体ｉｘを、炭酸カリウムおよび相当するアルキルハロゲン化物と共に熱す
るか、または反応スキーム５で描写したように、室温にて、ナトリウムヒドリドおよびアルキルハロゲン化物で、中間体を処理することによって、アルキル化を実施した。
【０３００】
【化５０】
2006517977.tif 000052
【０３０１】
中間体としての使用に好適なアシルおよびアルキルピペラジン類は、以下のように合成可能である。メチレンジクロライド（５ｍｌ）中の新鮮に希釈したチオニルクロライド（３．９ｍｌ、０．０５３ｍｏｌ）の溶液を、温度を２０℃未満に維持して、メチレンジクロライド（２５ｍｌ）中の２−チオフェンメタノール（４．２ｍｌ、０．０４４ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．４ｍｌ、０．０５ｍｏｌ）の撹拌溶液に滴下して加えた。ついで温度を、１時間かけて４０℃まで上昇させ、溶液をクラッシュアイス上に注いだ。ＣＨ2Ｃｌ2相を分離し、ＭｇＳＯ4上で乾燥させ、ついでＣＨ2Ｃｌ2（４５ｍｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−ピペラジン（２ｇ、０．０１１ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．５ｍｌ、０．０１１ｍｏｌ）の撹拌溶液に滴下して加えた。たとえば、Ｍｅａｎｗｅｌｌ  ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９３）Ｖｏｌ．３６．，ｐｐ．３２５１−３２６４、Ｃａｒｃｅｌｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ（１９９３）Ｎｏ．３６，ｐｐ．２９８４−２９９７を参照のこと。混合液を一晩室温にて撹拌した。ついで溶媒を減圧下で除去し、残余物をエーテルで抽出した。エーテル溶液を、減圧下で蒸発させ、残余物を、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（３．３ｍｌ、０．０４３ｍｏｌ）中に溶解し、３０分間続けた。ＴＦＡを減圧下で除去して、残余物をエーテルで倍散し、沈殿物を濾過して取り除き、風乾させて１−（２−チエニルメチル）ピペラジン  ジトリフルオロ酢酸（３．１６ｇ、７２％）を得た。たとえば、Ａｒｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．ＩＩ．（１９８３）ｐｐ．８１３−８１９を参照のこと。
【０３０２】
【化５１】
2006517977.tif 000053
【０３０３】
メチレンジクロライド（５ｍｌ）中の新鮮に希釈したチオニルクロライド（３．９ｍｌ、０．０５３ｍｏｌ）の溶液を、メチレンジクロライド（２５ｍｌ）中のフルフリルアルコール（３．８ｍｌ、０．０４４ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（７．４ｍｌ、０．０５ｍｏｌ）の撹拌溶液に滴下して加え、温度を２０℃未満に維持した。この混合液を、１時間撹拌し、ついで溶媒を蒸発させ、残余物をＣＨ2Ｃｌ2（１５０ｍｌ）中に溶解させた。得られた溶液を、ＣＨ2Ｃｌ2（４５ｍｌ）中のＮ−Ｂｏｃ−ピペラジン（２ｇ、０．０１１ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４ｍｌ、０．０２９ｍｏｌ）の撹拌溶液に滴下して加えた。この混合液を室温にて一晩撹拌し、溶媒を減圧下で除去し、残余物をエーテルで抽出した。エーテル溶液を減圧下で蒸発させ、残余物をＴＦＡ（３．３ｍｌ、０．０４３ｍｏｌ）中に溶解し、３０分間維持した。ＴＦＡを減圧下で除去し、残余物をエーテルで倍散し、得られた黒色沈殿物を濾過した。ついで沈殿物を２００ｍｌのＭｅＯＨ中に溶解し、活性化木炭を加え、この混合液を３０分間、還流下で熱した。木炭を濾過して取り除き、溶媒を蒸発させて、残余物をエーテルで倍散した。得られた白色沈殿物を濾過し、風乾して、１−（２−フリルメチル）ピペラジン  ジトリフルオロ酢酸（１．６４ｇ、４０％）を得た。たとえば、Ｌｕｋｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｃｚｅｃｈｏｓｌｏｖ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９５４）Ｖｏｌ．１９，ｐｐ．６０９−６１０を参照のこと。
【０３０４】
４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（化合物５９５−０３）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（２．０４ｇ、１．４９ｍＬ）を、Ｎ2大気下、０℃にて、ピリジン（１５ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル−１−ピペラジンカルボキシラート（２．５ｇ、１３．４ｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２０ｍｇ）の溶液に加え、室温にて一晩撹拌した。混合液を氷水に注ぎ、沈殿物を濾過し、水で数回洗浄して、乾燥させて、白色固体（３．５ｇ、８８％）を得た。M.P. 76℃. 1H NMR (DMSO-d6): δ 1.42 (s, 12H),
3.40 (m, 4H), 3.61 (m, 4H), 7.12 (m, 1H), 7.43 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.77 (d, J=
4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 297 (M+1), 319 (M+23). Anal. (C14H20N2O3S) C, H, N.
【０３０５】
【化５２】
2006517977.tif 000054
【０３０６】
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（化合物５９５−０４）の調製
ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の５９５−０３（３．５ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）の溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を加えた。溶液を室温にて３時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、残余物をクロロホルム中に溶解させた。有機相を、重炭酸ナトリウムの飽和溶液によって洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、蒸発させて、２．２０ｇ（９４％）の茶色粘性油を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 2.78 (m, 4H), 3.59 (m, 4H), 7.12 (t, J = 4.1, 1H), 7.38 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 197 (M+1).
【０３０７】
【化５３】
2006517977.tif 000055
【０３０８】
構造ｖｉのＮ−置換ピペラジンは、ＭＩＦ阻害剤の調製において、有用な中間体である。これらは、保護中間体ｖ（この場合、例示のために、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルまたは「Ｂｏｃ」で保護）の脱保護によって調製しうる。保護中間体は、望むＲ4基の添加によって、Ｎ−保護ピペラジンｉｖより作製しうる。上記反応スキームにおいては、Ｚは−ＣＨ2−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｎは０、１または２であり、ｎが０という条件では、Ｚは−Ｃ（＝）Ｏ−であり、Ｒ4は、−ＣＨ2Ｒ7、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ7、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ7Ｒ8および
【０３０９】
【化５４】
2006517977.tif 000056
【０３１０】
からなる群より選択され、Ｒ5およびＲ6は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクロ、置換へテロシクロ、ヘテロシクロアルキルおよび置換へテロシクロアルキルからなる群より選択され、またはＲ5およびＲ6は、隣接する窒素原子とともに、ヘテロシクロまたは置換ヘテロシクロを形成し、Ｒ7は、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、および置換へテロシクロアルキルからなる群より選択され、およびＲ8は、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクロ、置換ヘテロシクロ、ヘテロシクロアルキル、および置換へテロシクロアルキルからなる群より選択される。
【実施例３】
【０３１１】
以下は、描写したような一般構造１’（ａ）および１’（ｂ）の化合物のライブラリーの合成を記述している。記号「Ｍ」を含む化合物は、ＣＮ部位を含む。表１における数字記号は、以下のようである。
【０３１２】
「＋ｉ」を含む記号を持つ化合物において、Ｒ13は、窒素原子ではなく、キノロン基の酸素原子上の置換基であり、すなわち、以下で記述したような構造１’（ｂ）の化合物である。記号「ｉ」は、好ましい実施形態の他の場所でみられ、窒素原子ではなく、キノロン基の酸素原子上の置換基を意味する。
【０３１３】
【化５５】
2006517977.tif 000057
【０３１４】
調製されたＭＩＦ阻害剤の数字記号は表１で提供している。
【０３１５】
【表１】
2006517977.tif 000058
【０３１６】
中間体またはＭＩＦ阻害剤を調製するための反応スキームの詳細を以下に提供する。
【０３１７】
代表的な化合物の合成
４−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１）の調製
マロン酸ジエチル（８．１６ｇ、５１ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、２．２４ｇ、５６ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中のＮ−メチルイサトイン酸無水物（１０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１２０℃にて一晩熱した。ついで混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、８．４７ｇ（６７％）の白色固体を得た。M.P. 67℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 3.53 (s, 3H), 4.32 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 7.30 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.52 (d, J =
8.5 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 13.03 (s, 1H).
EIMS m/z 248 (M+1), 270 (M+23). Anal. (C13H13NO4) C, H, N.
４−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物２）の調製
シクロヘキシルアミン（２．０ｍＬ、１８．２０ｍｍｏｌ）を、トルエン（２０ｍＬ）中の化合物１（２．２５ｇ、９．１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過して、１．９ｇ（７０％）の白色固体を得た。M.P. 145℃.  1H NMR (DMSO-d6): 
δ 1.26 (m, 1H), 1.38 (m, 4H), 1.54 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.87 (m, 1H), 7.37 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.80 (t,
J = 8.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 10.46 (s, 1H), 17.46 (s, 1H),.  EIMS
m/z 301 (M+1), 323 (M+23). Anal. (C17H20N2O3) C, H, N.
【０３１８】
【化５６】
2006517977.tif 000059
【０３１９】
４−クロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物３）の調製
２０ｍＬリンオキシクロライド中の化合物２（１．５ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて２時間熱した。溶媒を、減圧下で蒸発させた。残余物を氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、９０３ｍｇ（８２％）の白色固体を得た。M.P. 235℃.  1H NMR (DMSO-d6): 3.66 (s, 3H), 7.50 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.74 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.91 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H).  EIMS m/z 219 (M+1), 241 (M+23). Anal. (C17H7ClN2O) C,
H, N.
１−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（６００ｍｇ、３．０６ｍｍｏｌ）を、トルエン（４０ｍＬ）中の化合物３（３１９ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１２０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中に懸濁させ、超音波処理し、濾過して、５４０ｍｇ（９８％）の白色固体を得た。M.P. 247℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.58 (s, 3H), 3.63 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 7.16 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 7.25, 2H), 7.79 (d, J = 4.8 Hz, 1H) 7.92 (d, J = 7.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 379 (M+1), 401 (M+23). Anal. (C20H18N4O2S) C, H, N.
【０３２０】
【化５７】
2006517977.tif 000060
【０３２１】
１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物５）の調製
ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のイサトイン酸無水物（２０ｇ、１２２ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、５．３９ｇ、１３５ｍｍｏｌ）の懸濁液に加え、室温にて１時間撹拌した。ついで、臭化４−フルオロベンジル（１６．８ｍＬ、１３５ｍｍｏｌ）を加え、この混合液を室温にて４時間撹拌した。この溶液を水中に注ぎ、形成された固体を濾過し、水で数回洗浄して、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、３０ｇ（９０％）の白色固体を得た。M.P. 167℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.27 (s, 2H), 7.17 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.25 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.74 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.8 Hz, 1H).  Anal. (C15H10FNO3) C, H, N.
【０３２２】
【化５８】
2006517977.tif 000061
【０３２３】
１−（４−フルオロベンジル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物６）の調製
マロン酸ジエチル（８．０ｇ、５１ｍｍｏｌ）の溶液を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、２．２１ｇ、５５ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。混合液にジメチルアセトアミド中の化合物５（１５ｇ、５３ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、その混合液を１２０℃にて一晩熱した。ついで混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、１３．３７ｇ（７８％）の白色固体を得た。M.P. 116 - 120℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H),
4.36 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.23-7.30 (m, 3H), 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 13.20 (s, 1H).  EIMS m/z 342 (M+1), 364 (M+23). Anal. (C19H16FNO4) C, H, N.
【０３２４】
【化５９】
2006517977.tif 000062
【０３２５】
１−（４−フルオロベンジル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物７）の調製
シクロヘキシルアミン（０．６７ｍＬ、５．８５ｍｍｏｌ）を、トルエン（２０ｍＬ）中の化合物６（１．０ｇ、２．９２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。溶液を冷
却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物をエーテルによって再結晶して、１．０ｇ（８７％）の白色固体を得た。M.P. 168℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.26 (m, 1H), 1.36 (m, 4H), 1.55 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.89 (m, 2H), 3.88 (m, 1H), 5.51 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.25 (m, 2H), 7.33 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.70 (t, J = 8.4 Hz,
1H), 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 10.35 (s, 1H), 17.66 (s, 1H),.  EIMS m/z 395 (M+1), 417 (M+23). Anal. (C23H23FN2O3) C, H, N.
４−クロロ−１−（４−フルオロベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８）の調製
２０ｍＬのニートリンオキソクロライド中の化合物７（０．７ｇ、１．７７ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて２時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を氷水中で懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールにて溶出し、４２０ｍｇ（７６％）の白色固体を得た。M.P. 231℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.54 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.34 (m, 2H), 7.46 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.80 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 335 (M+23). Anal. (C17H10ClFN2O) C, H, N.
１−（４−フルオロベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（２３４ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）を、トルエン（４０ｍＬ）中の化合物８（１７０ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１２０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中で懸濁させ、超音波処理して、濾過し、２４７ｍｇ（９７％）の白色固体を得た。M.P. 258℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.69 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.16 (m, 3H), 7.28 (m,
3H), 7.43 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.25, 2H), 7.81 (d, J = 4.8 Hz, 1H) 7.95 (d, J = 7.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 473 (M+1), 495 (M+23). Anal. (C26H21FN4O2S) C, H, N.
【０３２６】
【化６０】
2006517977.tif 000063
【０３２７】
２−アミノ−５−メチル安息香酸（化合物１０）の調製
エタノール中の５−メチル−２−ニトロ安息香酸（２０ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の溶液に、１０％  Ｐｄ／Ｃ（１ｇ）を加えた。この混合液を、水素大気下、室温にて一晩撹拌した。溶液をセライトを通して濾過し、減圧下で蒸発させて、１６ｇ（９６％）の白色固体を得た。M.P. 162℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.13 (s, 3H), 6.65 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 1.1, 1H).  EIMS m/z 174 (M+1), 152
(M+23).
【０３２８】
【化６１】
2006517977.tif 000064
【０３２９】
６−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物１１）の調製
トリクロロメチル  クロロホルメート（３６．２７ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）を、室温にて、乾燥ジオキサン中の化合物１０（４１．３ｇ、２７３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加え、この溶液を４時間還流した。この溶液を、氷浴中で冷却し、形成された固体を濾過した。固体をエーテルで洗浄し、室温にて真空下乾燥させ、４５．５ｇ（９４％）の白色固体を得た。M.P. 257℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.32 (s, 3H), 7.06 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.56 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 1.1, 1H), 11.63 (s, 1H).  EIMS (neg.
mode) m/z 176 (M-1), 152 (M+23).  Anal. (C9H7NO3) C, H, N.
１−ベンジル−６−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物１２）の調製
ＤＭＦ中の化合物１１（２５ｇ、１４１ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、６．２１ｇ、１５５ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ニート臭化ベンジル（１９．５３ｍＬ、１５５ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに、室温にて３時間撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、３６．５ｇ（９７％）の白色固体を得た。M.P. 150℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.32 (s, 3H), 5.27 (s, 2H), 7.15 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.26-7.39 (m, 5H), 7.54 (dd, J = 1.5, 8.7 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 1.5 Hz, 1H).  Anal. (C16H13NO3) C, H, N.
１−（４−フルオロベンジル−６−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物１３）の調製
ＤＭＦ中の化合物１１（５ｇ、２８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、１．２４ｇ、３１ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ニート４−フルオロベンジルブロマイド（３．８１ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに、室温にて３時間撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンによって洗浄して、６．３ｇ（７９％）の白色固体を得た。M.P. 153℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.32 (s, 3H), 5.24 (s, 2H), 7.14-7.17 (m, 3H), 7.44 (m, 2H), 7.54 (dd, J = 1.7, 8.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 1.2 Hz, 1H).  Anal. (C16H12FNO3) C, H, N.
１，６−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物１４）の調製
ＤＭＦ中の化合物１１（５ｇ、２８ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、１．２４ｇ、３１ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ヨウ化メチル（１．９２ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに、室温にて３時間撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘ
キサンで洗浄して、４．９ｇ（７４％）の白色固体を得た。M.P. 153℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.32 (s, 3H), 3.52 (s, 3H), 7.38 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.54 (dd, J = 1.7,
8.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
【０３３０】
【化６２】
2006517977.tif 000065
【０３３１】
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５）の調製
ニートジエチルマロン酸（１９．０７ｍＬ、１２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、５．５２ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物１２（３６．８ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。ついで混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、真空下室温にて乾燥させて、４１ｇ（９７％）の白色固体を得た。M.P. 113℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31
(t, J= 7.5 Hz, 3H), 2.33 (s, 3H), 4.35 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 7.15 - 7.30 (m, 6H), 7.43 (dd, J = 1.6, 8.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 1.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 338 (M+1), 360 (M+23). Anal. (C20H19NO4) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１６）の調製
ニートジエチルマロン酸（３．０４ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、０．８８ｇ、２２ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物１３（６．３ｇ、２２ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。ついで混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、真空下室温にて乾燥させて、５．１ｇ（７１％）の白色固体を得た。M.P. 130℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 2.34 (s, 3H), 4.37 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 5.94 (s, 2H), 7.09 - 7.32 (m, 5H), 7.45 (dd, J = 1.6, 8.7 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 1.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 356 (M+1), 378 (M+23). Anal. (C20H18FNO4) C, H, N.
４−ヒドロキシ−１，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１７）の調製
ニートジエチルマロン酸（２．２８ｍＬ、１４．２６ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、６２８ｍｇ、１５．６９ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルア
セトアミド中の化合物１４（１０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１２０℃にて一晩熱した。ついで混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、３．２６ｇ（８７％）の白色固体を得た。M.P. 132℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 2.50 (s, 3H), 3.50 (s, 3H), 4.33 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 7.41 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.7, 8.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 13.03 (s, 1H).  EIMS m/z
262 (M+1), 284 (M+23).
１−ベンジル−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物１８）の調製 
シクロヘキシルアミン（３．４１ｍＬ、２９．６４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物１５（５．０ｇ、１４．８２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、５．５ｇ（９５％）の白色固体を得た。M.P. 87℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.22 (m, 1H), 1.36 (m, 4H), 1.56 (m, 1H), 1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 3.87 (m, 1H), 5.51 (s, 2H), 7.14 -7.33 (m, 6H), 7.47 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 10.44 (s, 1H).  EIMS m/z 391 (M+1).
１−（４−フルオロベンジル）−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物１９）の調製
シクロヘキシルアミン（３．２２ｍＬ、２８．１４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物１６（５．０ｇ、１４．０７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、５．３ｇ（９３％）の黄色固体を得た。M.P. 156℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.24 (m, 1H), 1.37 (m, 4H), 1.57 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 3.87 (m, 1H), 5.49 (s, 2H), 7.11 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.36 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 1.6, 8.7
Hz, 1H), 7.90 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 10.39 (s, 1H).  EIMS m/z 409 (M+1), 431 (M+23).
４−ヒドロキシ−１，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物２０）の調製
シクロヘキシルアミン（２．８５ｍＬ、２４．９５ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物１７（３．２６ｇ、１２．４７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、３．８ｇ（９７％）の白色固体を得た。M.P. 218℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.28 (m, 1H), 1.36 (m, 4H), 1.55 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 3.59 (s, 3H), 3.87 (m,
1H), 7.51 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 10.49 (s, 1H).  EIMS m/z 315 (M+1), 337 (M+23).
【０３３２】
【化６３】
2006517977.tif 000066
【０３３３】
１−ベンジル−４−クロロ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２１）の調製
３０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物１８（５ｇ、１２．８０ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃にて３時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、１．５１ｇ（３８％）の黄色固体を得た。M.P. 219℃.  1H NMR (DMSO-d6):
δ 2.40 (s, 3H), 5.54 (s, 2H), 7.23-7.26 (m, 3H), 7.29-7.32 (m, 2H), 7.45 (d, J
= 8.8 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 1.5, 8.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 1.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 309 (M+1), 331 (M+23).
４−クロロ−１−（４−フルオロベンジル）−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２２）の調製
３０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物１９（５ｇ、１２．２４ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃にて３時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、１．９０ｇ（４７％）の黄色固体を得た。M.P. 206℃.  1H NMR (DMSO-d6):
δ 2.40 (s, 3H), 5.52 (s, 2H), 7.12-7.15 (m, 2H), 7.30-7.33 (m, 2H), 7.46 (d, J
= 8.7 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 1.2, 8.7 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 1.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 327 (M+1).
４−クロロ−１，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２３）の調製
３０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物２０（３ｇ、９．５ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃にて３時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、１．２ｇ（５４％）の黄色固体を得た。M.P. 241℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.44 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 7.62 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.73 (dd, J = 1.5, 8.7 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 1.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 255 (M+1).
１−ベンジル−６−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２４）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（４９０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を、トルエン（２０ｍＬ）中の化合物２０（３０９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１１０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中で懸濁させ、超音波処理し、濾過した。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の０〜２％メタノール勾配によって溶出して、３６２ｍｇ（７７％）の白色
固体を得た。M.P. 183℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.36 (s, 3H), 3.69 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.16-7.20 (m, 4H), 7.23-7.33 (m, 3H), 7.44 (d, J = 8.8 Hz,
1H), 7.50 (d, J= 3.8 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.81 (d, J= 4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 491 (M+23). Anal. (C27H24N4O2S) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−６−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２５）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（４９０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を、トルエン（２０ｍＬ）中の化合物２１（３２７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１１０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中で懸濁させ、超音波処理し、濾過した。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の０〜２％メタノール勾配によって溶出して、２１０ｍｇ（４３％）の白色固体を得た。M.P. 274℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.37 (s, 3H), 3.68 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 5.45 (s, 2H), 7.12-7.18 (m, 3H), 7.24-7.27 (m, 2H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz,
1H), 7.45 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.81 (d, J = 4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 509 (M+23). Anal. (C27H23FN4O2S) C, H, N.
【０３３４】
【化６４】
2006517977.tif 000067
【０３３５】
１−ベンジル−６−メチル−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２６）の調製
ジクロロメタン中の化合物２１（１．２ｇ、３．９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（１．６７ｇ、１９．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解させ、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１．３４ｇ（９６％）の黄色固体を得た。M.P. 152℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.34 (s, 3H), 2.94 (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 5.44 (s, 2H), 7.16-7.20 (m, 2H), 7.22 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.28-7.31 (m, 3H), 7.40 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H).  EIMS m/z 359 (M+1).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−６−メチル−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２７）の調製
ジクロロメタン中の化合物２２（１．６ｇ、４．９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ＣＨ2Ｃｌ2中のピペラジン（２．２ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加え、さらに一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１．３０ｇ（７２％）の黄色固体を得た。M.P. 121℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.35 (s, 3H), 2.96 (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 5.42 (s, 2H), 7.11-7.17 (m, 2H), 7.23-7.26 (m, 2H), 7.44 (dd, J = 1.2, 8.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H).  EIMS 
m/z 377 (M+1).
１，６−ジメチル−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２８）の調製
ジクロロメタン中の化合物２３（１ｇ、４．３ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（１．１ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１．０７ｇ（８８％）の黄色固体を得た。M.P. 274℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.39 (s, 3H), 2.94 (m, 4H), 3.48 (m, 4H), 3.54 (s, 3H), 7.45 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 1.3, 8.6 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H).  EIMS m/z 283 (M+1).
【０３３６】
【化６５】
2006517977.tif 000068
【０３３７】
１−ベンジル−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物２９）の調製
２−フロイルクロライド（１１８μＬ、１．２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物２６（２８７ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、ヘキサンおよびエーテルによって再結晶して、３４０ｍｇ（９０％）の白色固体を得た。M.P. 146℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.36 (s, 3H), 3.69 (m, 4H), 3.97 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.66 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.23 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.29-7.33 (m, 3H), 7.44 (d, J = 1.3, 8.7 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.89 (s, 1H).
EIMS m/z 475 (M+23).  Anal. (C27H24N4O3) C, H, N.
【０３３８】
【化６６】
2006517977.tif 000069
【０３３９】
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物３０）の調製
２−フロイルクロライド（１１８μＬ、１．２ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物２７（３００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、ヘキサンおよびエーテルによって再結晶して、３２０ｍｇ（８５％）の白色固体を得た。M.P. 276℃.  1H NMR (DMSO-d6):
δ 2.37 (s, 3H), 3.69 (m, 4H), 3.97 (m, 4H), 5.45 (s, 2H), 6.67 (dd, J = 1.7, 3.7 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.12 (m, 2H), 7.26 (m, 2H), 7.35 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.89 (s, 1H).  EIMS m/z 493 (M+23).  Anal. (C27H23FN4O3) C, H, N.
４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，６−ジメチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物３１）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物２８（２８２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２２１ｍｇ（５９％）の白色固体を得た。M.P. 231℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.41 (s, 3H), 3.56 (s, 3H), 3.63 (m, 4H), 3.95 (m, 4H), 6.66 (dd, J = 1.5, 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 1.2, 8.8 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.88 (s, 1H).  EIMS m/z 399 (M+23).  Anal. (C21H20N4O3) C, H, N.
１，６−ジメチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物３２）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物２８（２８２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２７７ｍｇ（７０％）の白色固体を得た。M.P. 214℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.41 (s, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.63 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 7.16 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.56 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.80 (d, J = 4.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 393 (M+1), 415 (M+23).  Anal. (C21H20N4O2S) C, H, N.
５−フルオロ−２−ニトロ安息香酸（化合物３３）の調製
３−フルオロ安息香酸（１ｇ、７．１３ｍｍｏｌ）を、室温以上でわずかに暖めることによって、濃Ｈ2ＳＯ4（２ｍｌ）中に溶解させた。この溶液を０℃まで冷却した。フミング硝酸（５３９ｍｇ、８．５６ｍｍｏｌ）を、温度を０℃以下に保ちながら、この溶液に
ゆっくりと加えた。この溶液を０℃にて３時間撹拌した。この溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、冷水によって洗浄し、乾燥させて、１．２ｇ（９２％）の白色固体を得た。M.P. 122℃.  1H NMR (DMSO-d6): 7.60 (dt, J= 2.9, 8.5 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 2.9, 8.6 Hz, 1H), 8.13 (dd, J = 4.8, 8.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 186 (M+1).
２−アミノ−５−フルオロ安息香酸（化合物３４）の調製
エタノール（１００ｍＬ）中の化合物３３（１０ｇ、５４ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて４時間、１０％  Ｐｄ／Ｃ（０．５ｇ）が存在する状態で、水素下で撹拌した。この溶液をセライトを通して濾過した。溶媒を減圧下で蒸発させて、８．２ｇ（９８％）の白色固体を得た。M.P. 142℃.  1H NMR (DMSO-d6): 6.71 (dd, J= 4.9, 8.9 Hz, 1H), 7.15 (dt, J = 2.9, 8.4 Hz, 1H), 7.37 (dd, J = 2.9, 9.8 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H).  EIMS m/z 156 (M+1).
６−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物３５）の調製
トリクロロメチル  クロロホルメート（７．０１ｍＬ、５８．１３ｍｍｏｌ）を、室温にて、乾燥ジオキサン中の、化合物３４（８．２ｇ、５２．８５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加え、この溶液を４時間還流した。この溶液を氷浴中で冷却し、形成した固体を濾過した。この固体をエーテルによって洗浄し、室温にて真空下乾燥させ、９．１ｇ（９６％）の白色固体を得た。    M.P. 240℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 7.19 (dd, J= 4.2, 8.9 Hz, 1H), 7.63 - 7.71 (m, 1H), 11.77 (s, 1H).  EIMS (neg. mode) m/z 180 (M-1).  Anal.
(C8H4FNO3) C, H, N.
【０３４０】
【化６７】
2006517977.tif 000070
【０３４１】
１−ベンジル−６−フルオロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物３６）の調製 
ＤＭＦ中の化合物３５（３ｇ、１６．７５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、７２９ｍｇ、１８．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ニートベンジルブロマイド（２．１７ｍＬ、１８．２３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンによって洗浄して、１．８８ｇ（４２％）の白色固体を得た。M.P. 95℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.29 (s, 2H), 7.26 (m, 2H), 7.35 (m, 5H), 7.40 (m, 2H), 7.64 (dt, J = 2.9, 8.4 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 3.2, 8.0 Hz, 1H).  Anal. (C16H13NO3) C, H, N.
６−フルオロ−１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物３７）の調製 
ＤＭＦ中の化合物３５（３ｇ、１６．７５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、７２９ｍｇ、１８．２２ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ニート４−フルオロベンジルブロマイド（２．２８ｍＬ、１８．２３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンによって洗浄して、３．
２３ｇ（６７％）の白色固体を得た。M.P. 107℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.27 (s, 2H), 7.19 (m, 2H), 7.29 (dd, J = 3.9, 9.0 Hz, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.65 (td, J = 5.5,
9.0 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 2.9, 7.9 Hz, 1H).  Anal. (C15H9F2NO3) C, H, N.
６−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物３８）の調製 
ＤＭＦ中の化合物３５（３ｇ、１６．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、０．７２９ｇ、１８．２３ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに室温にて１時間撹拌した。ついで、ニートヨウ化メチル（１．１４ｍＬ、１８．２３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、乾燥させた。固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンによって洗浄して、１．８４ｇ（５７％）の白色固体を得た。M.P. 133℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.90 (s, 3H), 7.51 (dd, J = 4.0, 8.8 Hz, 1H), 7.77 (m, 12).  Anal. (C9H6FNO3) C, H, N.
【０３４２】
【化６８】
2006517977.tif 000071
【０３４３】
１−ベンジル−６−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物３９）の調製
ニートマロン酸ジエチル（０．８９ｍＬ、５．８ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、２５６ｍｇ、６．４１ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加える。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで混合液を、３０分間９０℃まで熱して、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物３６（１．７４ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）の溶液を、この混合液にゆっくりと加え、１１０℃にて一晩熱した。この混合液を室温まで冷却し、氷水中に注ぎ、冷１０％  ＨＣｌによって酸性とした。形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、真空下室温にて乾燥させて、１．４ｇ（６４％）の白色固体を得た。M.P. 129℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 4.34 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 5.46 (s, 2H), 7.17 - 7.24 (m, 5H), 7.38 (dd, J = 4.6, 9.6 Hz, 1H), 7.50 (td, J= 2.9, 8.3 Hz, 1H),  7.80 (dd, J = 3.1, 9.4 Hz, 1H).  EIMS m/z 342 (M+1), 364 (M+23). Anal.
(C19H16FNO4) C, H, N.
６−フルオロ−１−（フルオロ−ベンジル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物４０）の調製
ニートマロン酸ジエチル（１．２ｍＬ、８．０ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、３５２ｍｇ、８．８ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加える。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで混合液を、３０分間９０℃まで熱して、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物３７（２．５ｇ、８．８ｍｍｏｌ）の溶液を、この混合液にゆっくりと加え、１１０℃にて一晩熱した。この混合液を室温まで冷却し、氷水中に注ぎ、冷１０％  ＨＣｌによって酸性とした。形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、真空
下室温にて乾燥させて、２．５ｇ（８７％）の白色固体を得た。M.P. 123℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J= 7.0 Hz, 3H), 4.37 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 7.19 (m, 2H), 7.29 (dd, J= 3.9, 9.0 Hz, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.65 (td, J= 5.5, 9.0 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 2.9, 7.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 360 (M+1), 382 (M+23). Anal. (C19H15F2NO4) C, H, N.
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物４１）の調製
ニートマロン酸ジエチル（１．２７ｇ、８．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、３７２ｍｇ、９．３ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加える。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで混合液を、３０分間９０℃まで熱して、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物３８（１．８ｇ、９．３ｍｍｏｌ）の溶液を、この混合液にゆっくりと加え、１２０℃にて一晩熱した。この混合液を室温まで冷却し、氷水中に注ぎ、冷１０％  ＨＣｌによって酸性とした。形成した固体を濾過し、水によって数回洗浄し、１．３ｇ（５３％）の白色固体を得た。M.P. 131℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t, J= 6.9 Hz, 3H), 3.54 (s, 3H), 4.31 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 7.56 (dd, J = 4.6, 9.3 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 2.9, 9.1 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 2.9, 9.3 Hz, 1H), 12.80 (s, 1H).  EIMS m/z 266 (M+1), 288 (M+23).
１−ベンジル−６−フルオロ−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物４２）の調製
シクロヘキシルアミン（２．９５ｍＬ、２５．７８ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物３９（４．４ｇ、１２．８９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、３時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を水中で懸濁し、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、４．０ｇ（７８％）の白色固体を得た。M.P. 130-134℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.37 (m, 5H), 1.56 (m, 1H), 1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 5.29 (s, 2H), 7.17 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.46 (dd, J = 3.9, 9.1 Hz, 1H), 7.57 (td, J = 2.9, 8.3 Hz,
1H),  7.81 (dd, J = 2.9, 8.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 394 (M+1).
６−フルオロ−１−（４−フルオロベンジル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物４３）の調製
シクロヘキシルアミン（３．２５ｍＬ、２８．３８ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物４０（５．１ｇ、１４．１９ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を水中で懸濁し、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、５．０ｇ（８６％）の白色固体を得た。M.P. 118℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.18 (m, 2H), 1.35 (m, 3H), 1.57 (m, 1H), 1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 3.86 (m, 1H), 5.48 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.24 (m, 2H), 7.35 (dd, J = 3.9, 9.0 Hz, 1H), 7.53 (td, J = 5.5, 9.0 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 2.9, 7.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 413 (M+1).
６−フルオロ−４−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物４４）の調製
シクロヘキシルアミン（１．９８ｍＬ、１７．３４ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物４１（２．３ｇ、８．６７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を水中で懸濁し、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルによって再結晶して、２．３８ｇ（９７％）の白色固体を得た。M.P. 193℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.28 (m, 1H), 1.36 (m, 4H), 1.55 (m, 1H), 1.68 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.90 (m, 1H), 7.70 (m, 3H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 10.41 (s, 1H).  EIMS m/z 341 (M+23).
１−ベンジル−４−クロロ−６−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４５）の調製
３０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物４２（３．５ｇ、８．８６ｍｍｏｌ
）の溶液を、９０℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を氷水中で懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールによって溶出し、１．２９ｇ（４７％）の黄色固体を得た。M.P. 228℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.29 (s, 2H), 7.27 (m, 4H), 7.32 (m, 2H), 7.58 (dd, J = 4.3, 9.3 Hz,
1H), 7.71 (td, J = 2.4, 8.0 Hz, 1H),  7.91 (dd, J = 2.9, 8.9 Hz, 1H)..  EIMS m/z 335 (M+23).
【０３４４】
【化６９】
2006517977.tif 000072
【０３４５】
４−クロロ−６−フルオロ−１−（４−フルオロベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４６）の調製
２０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物４３（５．１ｇ、１２．３６ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を氷水中で懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールによって溶出し、２．０５ｇ（５０％）の黄色固体を得た。M.P. 236℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.54 (s, 2H), 7.14 (m, 2H), 7.33 (m, 2H), 7.59 (dd, J = 4.0, 9.1
Hz, 1H), 7.72 (td, J = 2.8, 7.9 Hz, 1H), 7.91 (dd, J = 2.8, 8.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 331 (M+1).
４−クロロ−６−フルオロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４７）の調製
２０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物４４（２ｇ、６．２８ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を氷水中で懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールによって溶出し、０．８０ｇ（５６％）の黄色固体を得た。M.P. 258℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.67 (s, 3H), 7.78-7.89 (m, 3H).  EIMS m/z 259 (M+23).
１−ベンジル−６−フルオロ−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４８）の調製
ジクロロメタン中の化合物４５（１．０ｇ、３．２ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（８２６ｍｇ、９．５９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１．１ｇ（９６％）の黄色固体を得た。M.P. 162℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.70 (s, 1H), 2.94 (m, 4H), 3.53 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.19-7.25 (m, 3H), 7.42 (m, 2H), 7.51 (dd, J = 4.3, 9.3 Hz, 1H), 7.54 (td, J= 2.4, 8.0 Hz, 1H),  7.58 (dd, J = 2.9, 8.9 Hz, 1H)..  EIMS m/z 363 (M+1).
６−フルオロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物４９）の調製
ジクロロメタン中の化合物４６（２．０ｇ、６．０４ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（１．５６ｇ、１８．２１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、２．１８ｇ（９５％）の黄色固体を得た。M.P. 240℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.84 (s, 1H), 2.94 (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 5.45 (s, 2H), 7.15 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 7.44 (dd, J= 4.4, 9.3 Hz, 1H), 7.53 (td, J = 2.4, 8.0 Hz, 1H),  7.58 (dd, J = 2.9, 8.9 Hz, 1H).  EIMS m/z 381 (M+1).
【０３４６】
【化７０】
2006517977.tif 000073
【０３４７】
６−フルオロ−１−メチル−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５０）の調製
ジクロロメタン中の化合物４７（７５０ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（８１９ｍｇ、９．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、７８０ｍｇ（８６％）の黄色固体を得た。M.P. 211℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.91 (m, 4H), 3.47 (m, 4H), 3.56 (s, 3H), 7.54 (m, 1H), 7.63 (m, 2H).  EIMS m/z 287 (M+1).
１−ベンジル−６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５１）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物４８（３６３ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３３２ｍｇ（７３％）の白色固体を得た。M.P. 209℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.69 (m, 4H), 3.97 (m, 4H), 5.49 (s, 2H), 6.66 (m, 1H), 7.09 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 7.22 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 4.7, 9.5 Hz, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.69 (dd, J= 2.8, 9.7 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H).  EIMS m/z 479 (M+23).  Anal. (C26H21FN4O3) C, H, N.
６−フルオロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５２）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物４９（３８０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過
した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２８２ｍｇ（８５％）の白色固体を得た。M.P. 248℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.68 (m, 4H), 3.96 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.66 (dd, J = 1.6, 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.4 Hz,
1H), 7.15 (m, 2H), 7.28 (m, 2H), 7.47 (dd, J = 4.7, 9.6 Hz, 1H), 7.55 (m, 1H), 7.69 (dd, J = 2.8, 9.7 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H).  EIMS m/z 497 (M+23).  Anal. (C26H20F2N4O3) C, H, N.
６−フルオロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５３）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物５０（２８６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３３３ｍｇ（８７％）の白色固体を得た。M.P. 263℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.58 (s, 3H), 3.62 (m, 4H), 3.95 (m, 4H), 6.66 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.65 (m, 3H), 7.88 (s, 1H).  EIMS m/z 403 (M+23).  Anal. (C20H17FN4O3) C, H,
N.
１−ベンジル−６−フルオロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５４）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物４８（３６２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３５９ｍｇ（７６％）の白色固体を得た。M.P. 246℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.67 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 5.49 (s, 2H), 7.16 (m, 1H), 7.20-7.26 (m, 3H), 7.45 (dd, J = 4.6, 9.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.55 (td, J = 2.7, 9.2 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 2.8, 9.7 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 5.1 Hz, 1H).  EIMS m/z 473 (M+1).  Anal. (C26H21FN4O2S) C, H, N.
６−フルオロ−１−（フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５５）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物４９（３８０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２９４ｍｇ（６０％）の白色固体を得た。M.P. 211℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.67 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.15 (m, 3H), 7.27 (m, 2H), 7.46 (m, 2H), 7.54 (td, J= 2.6, 9.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 2.8, 9.7 Hz, 1H), 7.80 (d, J
= 5.1 Hz, 1H).  EIMS m/z 491 (M+1).  Anal. (C26H20F2N4O2S) C, H, N.
【０３４８】
【化７１】
2006517977.tif 000074
【０３４９】
６−フルオロ−１−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物５６）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物５０（２８６ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３９０ｍｇ（９８％）の白色固体を得た。M.P. 286℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.58 (s, 3H), 3.62 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 7.16 (dd, J = 3.5, 5.0, 1H), 7.50 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.63-7.68 (m, 3 H), 7.80 (d, J = 4.8 Hz, 1H). EIMS m/z 397 (M+1).  Anal. (C20H17FN4O2S) C, H, N.
２−アミノ−５−クロロ安息香酸（化合物５７）の調製
エタノール中の５−クロロ−２−ニトロ安息香酸（２０ｇ、１１０ｍｍｏｌ）の溶液に、新鮮に活性化させたラネーニッケル（２ｇ）を加えた。混合液を、水素大気下、室温にて一晩撹拌した。この溶液をセライトを通して濾過し、減圧下で蒸発させて、１６ｇ（９６％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 6.77 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.24 (dd,
J = 2.9, 8.9 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 8.7 (b, 3H); EIMS: 170 (M-H).
【０３５０】
【化７２】
2006517977.tif 000075
【０３５１】
６−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１．３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物５８）の調製
トリクロロメチルクロロホルメート（４．８ｍＬ、３００ｍｍｏｌ）を、室温にて、乾燥ジオン中の化合物５７（６．８４ｇ、４０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加え、この溶液を４時間還流した。溶液を氷浴中で冷却し、形成した固体を濾過した。固体をエーテルによって洗浄し、室温にて減圧下に乾燥させて、７．３ｇ（９２％）の白色固体を得た。1H NMR
(DMSO-d6): δ 7.47 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 8.6, 1.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 1.1, 1H), 11.63 (s, 1H).
１−ベンジル−６−クロロ−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１．３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物５９）の調製
ＤＭＦ中の化合物５８（４．９ｇ、２５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、１．２ｇ、３０ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに、室温にて１時間撹拌した。ついで、ニートベンジルブロマイド（３．７８ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。この固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、６．５ｇ（９０％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 5.45 (s, 2H), 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.26-7.39 (m, 5H), 7.65
(dd, J = 1.5, 8.7 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 1.5 Hz, 1H).
６−クロロ−１−（４−フルオロベンジル）−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１．３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物６０）の調製
ＤＭＦ中の化合物５８（５ｇ、２５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、１．２４ｇ、３１ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに、室温にて１時間撹拌した。ついで、ニート４−フルオロベンジルブロマイド（３．８１ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。この固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、７．３ｇ（９６％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 5.45 (s, 2H), 7.14-7.17 (m, 3H), 7.44 (m, 2H), 7.64 (dd, J = 1.7, 8.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 1.2 Hz, 1H).
１，６−ジメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１．３］オキサジン−２，４−ジオン（化合物６１）の調製
ＤＭＦ中の化合物５８（５ｇ、２５ｍｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、１．２４ｇ、３１ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、さらに、室温にて１時間撹拌した。ついで、ヨウ化メチル（１．９２ｍＬ、３１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をさらに３時間、室温にて撹拌した。この溶液を氷水に注ぎ、形成した固体を濾過し、水で数回洗浄し、乾燥させた。この固体をヘキサン中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過し、ヘキサンで洗浄して、４．６ｇ（７５％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 3.52 (s, 3H), 7.54 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 1.7, 8.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 1.2 Hz, 1H).
【０３５２】
【化７３】
2006517977.tif 000076
【０３５３】
１−ベンジル−６−クロロ−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物６２）の調製
ニートマロン酸ジエチル（１９．０７ｍＬ、１２５ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、５．５２ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトア
ミド中の化合物５９（３９．８８ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、真空下室温にて乾燥させて、３８ｇ（８６％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 5.45 (s, 2H), 7.17 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.2 (m, 2H), 7.31 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 2.8, 9.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 12.90 (b, 1H); EIMS: 358 (M+H).
６−クロロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物６３）の調製
ニートマロン酸ジエチル（３．０４ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、０．８８ｇ、２２ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物６０（６．７ｇ、２２ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、真空下室温にて乾燥させて、６．４ｇ（８５％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 4.34 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 5.43 (s, 2H), 7.1 (m, 2H), 7.2 (m, 2H), 7.40 (d, J = 9.2, 1H), 7.66 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 13.00 (b, 1H); EIMS: 376 (M+H).
６−クロロ−４−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物６４）の調製
ニートマロン酸ジエチル（２．２８ｇ、１４．２６ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、６２８ｍｇ、１５．６９ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物６１（１２ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１２０℃にて一晩熱した。混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、３．９６ｇ（９７％）の白色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 1.29 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 3.52 (s, 3H), 4.30 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 7.54 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 1.6, 8.9 Hz, 1H), 8.0
(m, 1H), 12.80 (b, 1H); EIMS: 282 (M+H).
１−ベンジル−６−クロロ−４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物６５）の調製
シクロヘキシルアミン（１．２７ｍＬ、１１．１７ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物６２（２．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルより再結晶して、２．２３ｇ（９６％）の白色固体を得た。M.P. 158℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.22 (m, 2H), 1.35 (m, 3H), 1.56 (m, 1H), 1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 5.51 (s, 2H), 7.16 (m, 2H), 7.24 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.42 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 10.36 (s, 1H).  EIMS m/z 411 (M+1).
６−クロロ−１−（４−フルオロベンジル）−４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物６６）の調製
シクロヘキシルアミン（１．８３ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物６３（３．０ｇ、８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルより再結晶して、３．１ｇ（９０％）の白色固体を得た。M.P. 157℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.21 (m, 2H), 1.35 (m, 3H), 1.55 (m, 1H), 
1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 3.87 (m, 1H), 5.49 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.23 (m, 2H), 7.44 (d, J = 9.3 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.6, 9.4 Hz, 1H), 7.80
(d, J = 2.8 Hz, 1H), 10.33 (s, 1H).
４−クロロ−６−ヒドロキシ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物６７）の調製
シクロヘキシルアミン（１．６２ｍＬ、１４．２ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物６４（２．０ｇ、７．１ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に懸濁させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルより再結晶して、２．２７ｇ（６７％）の白色固体を得た。M.P. 186℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.28 (m, 1H), 1.38 (m, 4H), 1.54
(m, 1H), 1.69 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.87 (m, 1H), 7.66 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 10.39 (s, 1H).  EIMS m/z 335 (M+1).
１−ベンジル−４，６−ジクロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物６８）の調製
２０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物６５（２ｇ、４．８６ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、８１０ｍｇ（５１％）の黄色固体を得た。M.P. 243℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.55 (s, 2H), 7.25 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 7.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.85 (dd, J = 2.1, 9.0 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.1 Hz, 1H).  EIMS m/z 352 (M+23).
【０３５４】
【化７４】
2006517977.tif 000077
【０３５５】
４，６−ジクロロ−１−（４−フルオロベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物６９）の調製
３０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物６６（３ｇ、７ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、１．２ｇ（５０％）の黄色固体を得た。M.P. 252℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 5.53 (s,
2H), 7.15 (m, 2H), 7.33 (m, 2H), 7.56 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.86 (dd, J = 2.1, 9.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 2.1 Hz, 1H).
４，６−ジクロロ−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７０）の調製
２０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物６７（２．２ｇ、６．５７ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて５時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し
、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、０．８ｇ（４８％）の黄色固体を得た。M.P. 256℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.65 (s, 3H), 7.60 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.94 (dd, J= 2.1, 9.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.1 Hz, 1H).  EIMS m/z 254 (M+1).
【０３５６】
【化７５】
2006517977.tif 000078
【０３５７】
１−ベンジル−６−クロロ−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７１）の調製
ジクロロメタン中の化合物６８（０．８ｇ、２．４３ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（６２８ｍｇ、７．２９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、０．９ｇ（９８％）の黄色固体を得た。M.P. 156℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.94 (m, 4H), 3.55 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.19
(m, 2H), 7.24 (m, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.39 (d, J= 8.9 Hz, 1H), 7.64 (dd, J = 2.6, 8.9 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.6 Hz, 1H).  EIMS m/z 379 (M+1).
６−クロロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７２）の調製
ジクロロメタン中の化合物６９（１．２ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（０．９ｇ、１０．４５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１．３６（９８％）の黄色固体を得た。M.P. 189℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.94 (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 5.43 (s, 2H), 7.14
(m, 2H), 7.26 (m, 2H), 7.43 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 2.5, 9.0 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 397 (M+1).
６−クロロ−１−メチル−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７３）の調製
ジクロロメタン中の化合物７０（０．８ｇ、３．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（８１９ｍｇ、９．５０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、９５０ｍｇ（９９％）の黄色固体を得た。M.P. 223℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.92 (m, 4H), 3.48 (m, 4H), 3.55 (s, 3H), 7.60 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.77 (m, 2H).  EIMS m/z 303 (M+1).
１−ベンジル−６−クロロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７４
）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７１（３７９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３６１ｍｇ（７６％）の白色固体を得た。M.P. 221℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (m, 4H), 3.97 (m, 4H), 5.48 (s, 2H), 6.67 (dd, J = 2.0, 3.6 Hz, 1H), 7.10 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.20 (m, 2H), 7.25 (m, 1H), 7.27 (m, 2H), 7.42 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.4, 9.2 Hz), 7.90 (s, 1H).  EIMS m/z 496 (M+23).  Anal. (C26H21ClN4O3) C,
H, N.
６−クロロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７５）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７２（３９７ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２１２ｍｇ（４３％）の白色固体を得た。M.P. 253℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.69 (m, 4H), 3.96 (m, 4H), 5.45 (s, 2H), 6.66 (m, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.20 (m, 2H), 7.27 (m, 2H), 7.46 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 2.4, 9.0 Hz), 7.89 (s, 1H).  EIMS m/z 514 (M+23).  Anal. (C26H20ClFN4O3) C, H, N.
６−クロロ−４−［４−（フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７６）の調製
２−フロイルクロライド（１４８μＬ、１．５ｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７３（３０３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２７１ｍｇ（６８％）の白色固体を得た。M.P. 228℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.56 (s, 3H), 3.64 (m, 4H), 3.94 (m, 4H), 6.65 (m, 1H), 7.08 (d, J = 3.4 Hz, 1H), 7.60 (d, J
= 9.0 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 1.9, 9.0 Hz, 1H), 7.86 (m, 2H).  EIMS m/z 419 (M+23).  Anal. (C20H17ClN4O3) C, H, N.
１−ベンジル−６−クロロ−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７７）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７１（３７９ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３９８ｍｇ（８２％）の白色固体を得た。M.P. 266℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (m, 4H), 3.93 (m, 4H), 5.48 (s, 2H), 7.15 (m, 1H), 7.19-7.26 (m, 3H), 7.32 (m, 2H), 7.42 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 2.6, 8.9 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H).  EIMS m/z 512 (M+23).  Anal. (C26H21ClN4O2S) C, H, N.
【０３５８】
【化７６】
2006517977.tif 000079
【０３５９】
６−クロロ−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７８）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７２（３９７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、２８０ｍｇ（５５％）の白色固体を得た。M.P. 253℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (m, 4H), 3.93 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.13-7.17 (m, 3H), 7.27 (m, 2H), 7.44 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J = 2.6, 9.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H).  EIMS m/z 508 (M+1).  Anal. (C26H20FClN4O2S) C, H, N.
６−クロロ−１−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物７９）の調製
２−チオフェンカルボニルクロライド（１６０μＬ、１．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃にて、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物７３（３０３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。この溶液を室温にまでし、一晩さらに撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、酢酸エチルによって再結晶して、３４１ｍｇ（８３％）の白色固体を得た。M.P. 262℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.57 (s, 3H), 3.64 (m, 4H), 3.91 (m, 4H), 7.16 (m, 1H), 7.50 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.79 (m, 2H), 7.86 (s, 1H).  EIMS m/z 414 (M+1). 
Anal. (C20H17ClN4O2S) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−（ピペラジン−１−イル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８０）の調製
ジクロロメタン中の化合物８（１５ｇ、４８ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にて、ジクロロメタン中のピペラジン（１２ｇ、１４４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液にゆっくりと加えた。この溶液を室温にて一晩撹拌した。溶媒を減圧下で除去した。残余物を水中にとり、短く超音波処理し、濾過した。固体を酢酸エチル中に溶解し、水によって洗浄した。有機層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、濃縮して、１７．１７ｇ（９８％）の黄色固体を得た。1H NMR (DMSO-d6): δ 2.8 (m, 2H), 3.0 (m, 2H), 3.6 (m, 2H), 3.7 (m, 2H), 5.45 (s, 2H), 7.1
(m, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.4 (m, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.90 (t, J= 8.2 Hz, 1H); EIMS: 363 (M+H).
【０３６０】
【化７７】
2006517977.tif 000080
【０３６１】
ピペラジン部位でのアシル化
化合物８１〜１０２として参照した化合物を、以下に記述したような、一般手順Ａまたは一般手順Ｂのいずれかを適用することによって調製した。一般手順Ａは、市販されている相当する塩化酸から表題化合物を調製するために使用し、一方で、一般手順Ｂは、市販されている酸から表題化合物を調製するために使用した。
【０３６２】
一般手順Ａ
相当する塩化酸（１．２５ｍｍｏｌ）を、０℃にてアルゴン下、ピリジン（５ｍＬ）中の化合物８０（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。溶液を室温までし、さらに一晩撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。固体を過剰の水で洗浄し、乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ＣＨ2Ｃｌ2中の０〜２％ＭｅＯＨ勾配によって溶出した。
【０３６３】
一般手順Ｂ
オキサリルクロライド（１．６６ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２滴）を、室温にてＣＨ2Ｃｌ2中の相当する酸（１．２５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、連続して加え、ついでアルゴン大気下、２時間撹拌した。溶媒を室温にて真空下で除去し、乾燥した相当する塩化酸を得た。乾燥ピリジン中の化合物８０（３００ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下で残余物に加え、短く超音波処理した。この溶液を、アルゴン大気下室温にて、一晩撹拌した。溶液を氷水中に注ぎ、形成した固体を濾過した。この固体を、過剰の水で洗浄し、乾燥させ、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ＣＨ2Ｃｌ2中の０〜２％ＭｅＯＨ勾配によって溶出した。
【０３６４】
４−（４−ベンゾイル−ピペラジン−１−イル）−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８１）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、２６９ｍｇ（７２％）の白色固体を得た。M.P. 242℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.66 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.14 (m, 3H), 7.28 (m, 3H), 7.42 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.48 (m, 5H), 7.63 (m, 1H), 7.94 (dd, J = 1.5, 9.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 467 (M+1).  Anal. (C28H23FN4O2) C, H, N.
４−（４−シクロペンタンカルボニル−ピペラジン−１−イル）−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８２）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、２１６ｍｇ（５８％）の白色固体を得た。M.P. 233℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.56-1.75 (m, 8H), 3.07 (m, 1H), 3.56 (m, 4H), 3.80 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.14 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.42 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.94 (dd, J = 1.5, 9.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 459 (M+1).  Anal. (
C27H27FN4O2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（２−チオフェン−２−イル−アセチル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８３）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、７２ｍｇ（１８％）の白色固体を得た。M.P. 199℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.58 (m, 4H), 3.82 (m, 4H), 4.05 (s, 2H), 5.46
(s, 2H), 6.97 (m, 2H), 7.14 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.40 (m, 2H), 7.48 (m, 5H), 7.63 (m, 1H), 7.92 (dd, J = 1.5, 9.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 487.4 (M+1).  Anal. (C27H23FN4O2S) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（イソキサゾール−５−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８４）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、２１３ｍｇ（５８％）の白色固体を得た。M.P. 253℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (m, 4H), 3.84 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.03 (d, J = 2.0Hz, 1H), 7.13 (m, 2H), 7.27 (m, 3H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H).  7.64 (m, 1H), 7.93 (dd, J = 1.5, 8.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J = 2.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 458 (M+1).  Anal. (C25H20FN5O3) C, H, N.
４−［４−（４−フルオロベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８５）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、３４１ｍｇ（８８％）の白色固体を得た。M.P. 272℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.66 (m, 4H), 3.84 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.31 (m, 5H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.93 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H).  EIMS m/z 485 (M+1).  Anal. (C28H22F2N4O2) C, H,
N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−４−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８６）の調製
表題化合物を、一般手順Ａを適用して調製し、２７３ｍｇ（７３％）の白色固体を得た。M.P. 274℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.60 (m, 4H), 3.86 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.61 (m, 1H), 7.90 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 8.71 (dd, J= 1.2, 4.4 Hz, 1H).  EIMS m/z 468 (M+1).  Anal. (C27H22FN5O2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（ピペリジン−１−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８７）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、２４３ｍｇ（６２％）の白色固体を得た。M.P. 223℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.51 (m, 6H), 3.19 (m, 4H), 3.40 (m, 4H), 3.62 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.41 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.64 (m, 2H), 7.92 (d, J = 8.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 474 (M+1).  Anal. (C27H28FN5O2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（ピロリジン−１−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物８８）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、２５２ｍｇ（６７％）の白色固体を得た。M.P. 232℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.78 (m, 4H), 3.44 (m, 4H), 3.61 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.27 (m, 3H), 7.42 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.62 (m, 2H), 7.93 (d, J= 8.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 459 (M+1).  Anal. (C26H26FN5O2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−スルホニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（
化合物８９）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、３３２ｍｇ（７９％）の黄色固体を得た。M.P. 226℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.25 (m, 4H), 3.73 (m, 4H), 5.44 (s, 2H), 7.13 (m, 2H), 7.26 (m, 3H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (m, 2H), 7.71 (m, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 4.5 Hz, 1H).  EIMS m/z 509 (M+1).  Anal. (C25H21FN4O3S2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（フラン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９０）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、１８３ｍｇ（４８％）の白色固体を得た。M.P. 261℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.65 (m, 4H), 3.86 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.73 (s, 1H), 7.13 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.43 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.92 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H).  EIMS m/z 457 (M+1). 
Anal. (C26H21FN4O3) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（１−メチル−１−Ｈ−ピロール−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９１）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、２３３ｍｇ（６０％）の白色固体を得た。M.P. 236℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.66 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.06 (dd, J = 2.4, 3.6 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 7.15 (m, 2H), 7.29 (m, 3H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (m, 1H), 7.94 (dd, J = 1.2, 8.0
Hz, 1H).  EIMS m/z 470 (M+1).  Anal. (C27H24FN5O2) C, H, N.
４−［４−（５−アセチル−チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９２）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、２５９ｍｇ（６０％）の白色固体を得た。M.P. 269℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.70 (m, 4H), 3.90 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.29 (m, 3H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.94 (m, 2H).  EIMS m/z 515 (M+1).  Anal. (C28H23FN4O3S) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９３）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、３１２ｍｇ（７９％）の白色固体を得た。M.P. 251℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.66 (m, 4H), 3.82 (m, 4H), 5.46 (s, 2H), 7.12 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.48 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (m, 2H), 7.87 (m, 1H), 7.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H).  EIMS m/z 473 (M+1).  Anal. (C26H21FN4O2S) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（ピリジン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９４）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製し、１２３ｍｇ（３２％）の白色固体を得た。M.P. 231℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.63 (m, 2H), 3.72 (m, 4H), 3.96 (m, 2H), 5.47 (s, 2H), 6.73 (s, 1H), 7.14 (m, 2H), 7.28 (m, 3H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.68 (m, 2H), 7.96 (m, 2H), 8.64 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 468 (M+1).  Anal. (C27H22FN5O2) C, H, N.
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（ピラジン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９５）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 145-156°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.8 (m, 8H), 5.47 (s, 2H), 7.15 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 8.7 (m, 1H
), 8.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（キノリン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９６）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 144-157°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 6H), 4.0 (m, 2H), 5.47 (s, 2H), 7.1 (m, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.71 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.86 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 518 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（５−メチル−イソキサゾール−３−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９７）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 130-137°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 2.48 (s, 3H), 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.53 (s, 1H), 7.15 (t, J =
9.2 Hz, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 472 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（テトラヒドロ−フラン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９８）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 123-135°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.8 (m, 2H), 2.1 (m, 2H), 3.6 (m, 4H), 3.8 (m, 6H), 4.7 (m, 1H), 5.47 (s, 2H), 7.15 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.8
Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 461 (M+H).
４−［４−（ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−（４−フルオロ−ベンジル〕−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物９９）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 140-160°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 8H), 5.47 (s, 2H), 6.09 (s, 2H), 7.00 (s, 2H), 7.1 (m, 1H), 7.15 (t, J =
7.8 Hz, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.92 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 511 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（４−トリフルオロメチル−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１００）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 181-185°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 8H), 5.47 (s, 2H), 7.1 (m, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.8 (m, 1H), 7.9 (m, 2H), 7.91 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 535 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−４−［４−（１Ｈ−イミダゾール−４−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０１）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 176-183°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.67 (s, 4H), 4.3 (m, 4H), 5.47 (s, 2H), 7.2 (m, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.6 (m, 2H), 7.76 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 457 (M+H).
１−（４−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（テトラヒドロ−チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０２）の調製
表題化合物を、一般手順Ｂを適用して調製した。MP: 133-140°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.9 (m, 1H), 2.0 (m, 1H), 2.1 (m, 1H), 2.3 (m, 1H), 2.9 (m, 2H), 3.7 (m, 8H), 4.32 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 5.47 (s, 2H), 7.15 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.3 (m, 3H), 7.4
3 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H); EIMS:
477 (M+H).
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１０３）の調製
ニートマロン酸ジエチル（１８．０５ｇ、１１２．７ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、４．９６ｍｇ、１２４ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中の化合物１１（２２ｇ、１２４ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％ＨＣｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、１０．２ｇ（３６％）の白色固体を得た。M.P. 242℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.30 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 2.35 (s, 3H), 4.34 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 7.19 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 11.35 (s, 1H), 13.03 (s, 1H).  EIMS m/z 248
(M+1).
【０３６５】
【化７８】
2006517977.tif 000081
【０３６６】
４−ヒドロキシ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物１０４）の調製
シクロヘキシルアミン（１３．８８ｍＬ、１２１．３３ｍｍｏｌ）を、トルエン（２００ｍＬ）中の化合物１０２（１０ｇ、４０．４４ｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に溶解させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルより再結晶して、１２ｇ（９８％）の白色固体を得た。M.P. 269℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.28 (m, 5H), 1.32 (m, 1H), 1.67 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 3.90 (m, 1H), 7.26 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.74 (s, 1H), 10.49 (s, 1H), 11.80 (s, 1H).  EIMS m/z 301 (M+1).
２，４−ジクロロ−６−メチル−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０５）の調製
４０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物１０４（１２ｇ、３９．９５ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて３時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、７．２ｇ（７６％）の白色固体を得た。
M.P. 159℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.28 (s, 3H), 7.93 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H).  EIMS m/z 237 (M+1).
【０３６７】
【化７９】
2006517977.tif 000082
【０３６８】
４−クロロ−６−メチル−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０６）の調製
酢酸アンモニウムを、氷酢酸中の化合物１０５（７．１ｇ、２９．９５ｍｍｏｌ）の懸濁液に加え、１４０℃にて４時間熱する。この溶液を冷却し、氷水中に注いだ。形成された固体を濾過し、水によって洗浄し、真空下で洗浄して、４．５ｇ（６９％）の白色固体を得た。M.P. 264℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.32 (s, 3H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (dd, J= 1.5, 8.4 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H).  EIMS m/z 219 (M+1).
６−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０７）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（８．７３ｇ、４１．１６ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物１０６（４．５ｇ、２０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１１０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中に懸濁させ、超音波処理し、濾過した。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の０〜２％メタノール勾配で溶出して、７．０ｇ（９２％）の白色固体を得た。M.P. 269℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.34 (s, 3H), 3.65 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 7.14 (m, 1H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.81 (d, J = 4.8 Hz, 1H).  EIMS m/z 379 (M+1).
【０３６９】
【化８０】
2006517977.tif 000083
【０３７０】
１−（２−ジメチルアミノ−エチル）−６−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０８）の調製
ＤＭＦ中の化合物１０７（８００ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）、２−ジメチルアミノエチルクロライドヒドロクロライド（１．５２ｇ、１０．５５ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（２．９１ｇ、２１．１０ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて一晩熱した。この溶液を冷却し、氷水内に注いだ。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、乾燥させた。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル中の０〜１０％メタノール勾配で溶出して、２１０ｍｇ（２４％）の淡黄色固体を得た。M.P. 132℃.  1H NM
R (DMSO-d6): δ 2.24 (s, 6H), 2.40 (s, 3H), 2.44 (m, 2H), 3.63 (m, 4H), 3.97 (m,
4H), 4.29 (m, 2H), 7.17 (dd, J= 3.4, 4.8 Hz, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.57 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 450 (M+1).  Anal. (C24H27N5O2S)
C, H, N.
６−メチル−１−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１０９）の調製
ＤＭＦ中の化合物１０７（１ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、４−（２−クロロエチル）モルホリン（２．４５ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（３．６４ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて一晩熱した。この溶液を冷却し、氷水内に注いだ。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、乾燥させた。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル中の０〜１０％メタノール勾配で溶出して、２２３ｍｇ（１７％）の白色固体を得た。M.P. 207℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.40 (s, 3H), 3.54 (m, 4H), 3.63 (m, 4H), 3.92 (m, 4H), 4.35 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 3.4, 4.8
Hz, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.61 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 492 (M+1).  Anal. (C26H29N5O3S) C, H, N.
１−（２−ジメチルアミノ−エチル）−６−メチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１０）の調製
ＤＭＦ中の化合物１０７（１ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、２−（ジイソプロピルアミノ）エチルクロライドヒドロクロライド（２．６４ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（３．６４ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて一晩熱した。この溶液を冷却し、氷水内に注いだ。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、乾燥させた。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル中の０〜１０％メタノール勾配で溶出して、４０９ｍｇ（３０％）の淡黄色固体を得た。M.P. 110-117℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 0.93 (s, 12H), 2.40 (s, 3H), 2.59 (m, 2H), 3.01 (m, 2H), 3.61 (m, 4H), 3.91 (m, 4H), 4.15 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 3.4, 4.8 Hz, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 506 (M+1). 
Anal. (C28H35N5O2S) C, H, N.
６−メチル−２−オキソ−１−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１１）の調製
ＤＭＦ中の化合物１０７（１ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）、１−（２−クロロエチル）ピロリジンハイドロクロライド（２．２４ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（３．６４ｇ、２６．４ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて一晩熱した。この溶液を冷却し、氷水内に注いだ。形成した固体を濾過し、水によって洗浄し、乾燥させた。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、酢酸エチル中の０〜１０％メタノール勾配で溶出して、２３６ｍｇ（１９％）の淡黄色固体を得た。M.P. 139-143℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.67 (m, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.53 (m, 4H), 2.61 (m, 2H), 3.01 (m, 2H), 3.62 (m, 4H), 3.93 (m, 4H), 4.30 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 3.4, 4.8 Hz, 1H), 7.49
(m, 2H), 7.60 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 476 (M+1).  Anal. (C26H29N5O2S) C, H, N.
４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１１２）の調製
ニートマロン酸ジエチル（１８．０５ｇ、１１２．７ｍｍｏｌ）を、Ｎ2大気下、ジメチルアセトアミド中のナトリウムヒドリド（ミネラル油中６０％、４．９６ｍｇ、１２４ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加えた。この混合液を、水素ガスの発生がなくなるまで、室温にて撹拌し、ついで３０分間、９０℃まで熱し、室温まで冷却した。ジメチルアセトアミド中のイサトイン酸無水物（２０ｇ、１２４ｍｍｏｌ）の溶液を、ゆっくりと加え、混合液を１１０℃にて一晩熱した。混合液を室温まで冷却し、氷水に注ぎ、冷１０％Ｈ
Ｃｌによって酸性にした。形成した固体を濾過し、水で数回洗浄して、８．７ｇ（３０％）の白色固体を得た。M.P. 173℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.31 (t, J= 6.6 Hz, 3H), 4.34 (q, J = 6.6 Hz, 2H), 7.20 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 11.50 (b, 1H); EIMS: 234 (M+H).
４−ヒドロキシ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボン酸シクロヘキシルアミド（化合物１１３）の調製
シクロヘキシルアミン（１３．８８ｍＬ、１２１．３３ｍｍｏｌ）を、トルエン（２００ｍＬ）中の化合物１１２（９．４ｇ、４０．４４ｍｍｏｌ）の溶液に加え、４時間還流した。この溶液を冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。得られた残余物を、水中に溶解させ、短く超音波処理し、濾過した。未精製産物を、エーテルより再結晶して、１０．１ｇ（８７％）の白色固体を得た。M.P. 223℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1.3 (m, 4H), 1.6 (m, 2H), 1.7 (m, 2H), 1.9 (m, 2H), 3.8 (m, 1H), 7.25 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 10.44 (b,
1H); EIMS (neg. mode): 285 (M-H).
【０３７１】
【化８１】
2006517977.tif 000084
【０３７２】
２，４−ジクロロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１４）の調製
４０ｍＬのニートリンオキシクロライド中の化合物１１３（８．５ｇ、３０ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて３時間熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。残余物を、氷水中に懸濁させ、固体重炭酸ナトリウムによって中和した。形成した固体を濾過し、水で洗浄し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の１％メタノールで溶出して、６．０ｇ（９１％）の白色固体を得た。M.P. 157℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1H-NMR (DMSO-d6): 7.9 (m, 1H), 8.09 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 1H); EIMS: 223 (M+H).
【０３７３】
【化８２】
2006517977.tif 000085
【０３７４】
４−クロロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１５）の調製
酢酸アンモニウム（２．１ｇ、２７ｍｍｏｌ）を氷酢酸中の化合物１１４（６．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）の懸濁液に加え、１４０℃にて４時間熱した。この溶液を冷却し、氷水中に注いだ。形成された固体を濾過し、水によって洗浄し、真空下で乾燥させて、５．２ｇ（９４％）の白色固体を得た。M.P. 302℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 1H-NMR (DMSO-d6): 
7.4 (m, 2H), 7.79 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H); EIMS: 205 (M+H).
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１６）の調製
ピペラジン−１−イル−チオフェン−２−イル−メタノン（８．０ｇ、４１ｍｍｏｌ）を、トルエン（５０ｍＬ）中の化合物１１５（４．１ｇ、２０ｍｍｏｌ）の溶液に加え、１１０℃にて一晩熱した。溶媒を真空下で除去した。残余物を水中に懸濁させ、超音波処理し、濾過した。未精製産物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の０〜２％メタノール勾配で溶出し、６．４ｇ（８８％）の白色固体を得た。M.P. 264℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 7.16 (t, J = 4.8 Hz,
1H), 7.23 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.61 (t, J = 8.3 Hz, 1H), 7.8 (m, 2H), 11.90 (b, 1H); EIMS: 364 (M+H).
【０３７５】
【化８３】
2006517977.tif 000086
【０３７６】
キノリノン部位のＮ−１位でのアルキル化の調製
一般手順Ｃまたは一般手順Ｄいずれかを適用することによって、化合物１１７〜１５８として参照された化合物を調製した。
【０３７７】
一般手順Ｃ
ＤＭＦ中、２．５ｍｍｏｌの相当するアルキルハライド（塩素、臭素またはヨウ素）を含む、化合物１１６（３６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６９１ｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液を、９０℃にて一晩熱した。この溶液を冷却し、氷水に注いだ。形成された固体を濾過し、水によって洗浄し、乾燥させた。固体が形成されない場合は、産物をジクロロメタンまたはｎ−ブタノールいずれかによって抽出し、真空下濃縮した。未精製産物を、フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、ジクロロメタン中の０〜５％メタノール勾配で溶出した。
【０３７８】
一般手順Ｄ
ＤＭＦ中の化合物１１６（３６４ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液を、室温にてアルゴン大気下、ＤＭＦ中のＮａＨ（ミネラル油中６０％、４４ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に加えた。溶液を室温にて１時間撹拌し、相当するアルキルハライドをシリンジを介して加えた。溶液をさらに、室温にて３〜４８時間撹拌した（ＴＬＣコントロール）。反応を、一般手順Ｃで記述したように進めた。
【０３７９】
１−（２−ジメチルアミノ−エチル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリンー３−カルボニトリル（化合物１１７）の調製
化合物を、一般手順Ｄにしたがって、相当するアルキルハライドより調製して、白色固体を得た。収量２１１ｍｇ（４８％）。M.P. 96-99℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 2.20 (s,
6H), 2.46 (m, 1H), 2.71 (s, 1H), 3.68 (m, 4H), 3.93 (m, 4H), 4.30 (m, 1H), 4.55
(m, 1H), 7.16 (dd, J = 3.4, 4.8 Hz, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.59 (d, J
= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (m, 2H), 8.02 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 436 (M+1).  Anal. (C23H25N5O2S) C, H, N.
１−イソブチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１８）の調製
化合物を、一般手順Ｄにしたがって、相当するアルキルハライドより調製して、白色固体を得た。収量８９ｍｇ（２１％）。M.P. 209℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 0.89 (s, 6H), 2.12 (m, 1H), 3.65 (m, 4H), 3.93 (m, 4H), 4.11 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.16 (dd, J = 3.6, 4.8 Hz, 1H), 7.32 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.60 (d, J =
8.8 Hz, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.79 (dd, J = 1.2, 4.8 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H).  EIMS m/z 421 (M+1).  Anal. (C23H24N4O2S) C, H, N.
１−（４−メトキシベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１１９）の調製
化合物を、一般手順Ｄにしたがって、相当するアルキルハライドより調製して、白色固体を得た。収量１２７ｍｇ（２６％）。M.P. 246℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.68 (m, 4H), 3.70 (s, 3H), 3.93 (m, 4H), 5.41 (s, 2H), 6.86 (m, 2H), 7.16 (m, 3H), 7.29 (m, 1H), 7.49 (m, 2H), 7.63 (m, 1H), 7.80 (d, J = 4.8, 2H), 7.93 (d, J = 5.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 485 (M+1).  Anal. (C27H24N4O3S) C, H, N.
１−（２−シクロヘキシル−エチル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２０）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。MP:  213-215°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.9 (m, 2H), 1.2 (m, 3H), 1.4 (m, 3H), 1.6 (m, 3H),
1.7 (m, 2H), 3.6 (m, 4H), 3.92 (s, 4H), 4.22 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.93 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 498 (M+Na).
２−（２−シクロヘキシル−エトキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２１）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。MP: 170-173°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.0 (m, 2H), 1.2 (m, 3H), 1.5 (m, 1H), 1.7 (m, 7H), 3.7 (m, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.48 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.01
(d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 475 (M+H).
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−（４−トリフルオロメチル−ベンジル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２２）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。MP: 248°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.72 (s, 4H), 3.95 (s, 4H), 5.59 (s, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.32 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.51
(dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.82 (dd, J =
1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 545 (M+Na).
１−シクロヘキシルメチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２３）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。MP: 122-127°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.1 (m, 5H), 1.6 (m, 6H), 3.6 (m, 4H), 3.93 (b, 4H),
4.11 (b, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.32 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz,
1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.80 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.9
(m, 1H); EIMS: 461 (M+H).
２−シクロヘキシルメトキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２４）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 166°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.4 (m, 5H), 1.7 (m, 6H), 3.68 (b, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.25 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.01 (d, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 461 (M+H).
２−オキソ−１−フェネチル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２５）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 258-260°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 2.8 (m, 2H), 3.65 (b, 4H), 3.93 (b, 4H), 4.4 (m, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.3 (m, 6H), 7.50 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
２−フェネチルオキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２６）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 145-147°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.68 (b, 4H), 3.93 (b, 4H), 4.62 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.1 (m, 1H), 7.2 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H),
7.4 (m, 2H), 7.5 (m, 1H), 7.51 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
２−（４−メトキシ−ベンジルオキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２７）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 192-194°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.69 (b, 4H), 3.76 (s, 3H), 3.94 (b, 4H), 5.47 (s, 2H), 6.96 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.5 (m, 4H), 7.78 (d, J = 3.6, 2H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 485 (M+H).
２−オキソ−１−（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２８）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 260-261°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.71 (b, 4H), 3.96 (b, 4H), 5.90 (s, 2H), 7.17 (m, 1H), 7.33 (m, 1H), 7.45 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 1.2, 4.0 Hz, 1H), 7.6
(m, 3H), 7.75 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 7.2 Hz, 2H); EIMS: 483 (M+H).
１−ナフタレン−２−イルメチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１２９）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 276-279°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.71 (b, 4H), 3.96 (b, 4H), 5.65 (b, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.41 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.5 (m, 3H), 7.51 (dd, J = 1.2,
3.6 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.7 (s, 1H), 7.8 (m, 2H), 7.9 (m, 2H), 7.96 (d, J = 9.2 Hz, 1H); EIMS: 505 (M+H).
２−（ナフタレン−２−イルメトキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３０）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 250°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 4H), 3.95 (b, 4H), 5.72 (s, 2H), 7.2 (m, 1H), 7
.5 (m, 4H), 7.67 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.8 (m, 3H), 7.9 (m, 3H), 8.1 (m, 2H); EIMS: 505 (M+H).
１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３１）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 203-204°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.7 (m, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.4 (m, 2H), 3.64 (b, 4H), 3.93 (b, 4H), 4.23 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 1.2, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 450 (M+H).
２−（３−ジメチルアミノ−プロポキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３２）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 130°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.9 (m, 2H), 2.17 (s, 6H), 2.43 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.7 (m, 4H), 3.95 (b, 4H), 4.47 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.52
(dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H); EIMS: 450 (M+H).
１−（２，２−ジメチル−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３３）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 111-116°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.9 (s, 9H), 3.65 (b, 4H), 3.93 (b, 4H), 4.20 (b, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.8 (m, 2H), 7.91 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 457 (M+Na).
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３４）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 242°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.71 (b, 4H), 3.93 (b, 4H), 5.2 (m, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.81 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H); EIMS: 447 (M+H).
４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３５）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 204°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.70 (b, 4H), 3.95 (b, 4H), 5.2 (m, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.5 (m, 2H), 7.8 (m, 3H), 8.1 (m, 1H); EIMS: 447 (M+H).
２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１−（４−トリフルオロメトキシ−ベンジル）−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３６）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 150-160°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 5.52 (s, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.3 (m, 5H), 7.44 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 1.0, 5.0 Hz, 1H), 7.96 (J = 1.3, 8.3 Hz, 1H); EIMS: 539 (M+H).
４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−２−（４−トリフルオロメトキシ−ベンジルオキシ）−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３７）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 170-172°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 4H), 3.98 (b, 4H), 5.63 (s, 2H), 7.2 (m, 1H
), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.5 (m, 2H), 7.70 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.8 (m, 2H),
7.85 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.08 (d, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 539 (M+H).
１−（３−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３８）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 261-263°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 4H), 3.94 (b, 4H), 5.50 (s, 2H), 7.1 (m, 3H), 7.2 (m, 1H), 7.3 (m, 2H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.9 (m, 1H); EIMS: 473 (M+H).
１−（２−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１３９）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 203-205°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 5.50 (s, 2H), 6.86 (t, J=
6.7 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.2 (m, 1H), 7.3 (m, 4H), 7.50 (dd, J= 0.9, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.81 (dd, J= 0.9, 5.0 Hz, 1H), 7.97 (dd, J = 1.2, 8.2 Hz, 1H); EIMS: 473 (M+H).
２−オキソ−１−プロピル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４０）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 210-212°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.97 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.6 (m, 2H), 3.6 (m, 4H),
3.9 (m, 4H), 4.16 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.1 (m, 1H), 7.33 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.79 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 407 (M+H).
２−プロポキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４１）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 198-199°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.01 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 1.8 (m, 2H), 3.69 (b, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.41 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.80 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 407 (M+H).
１−ブチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４２）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 155-157°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.93 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.4 (m, 2H), 1.6 (m, 2H),
3.6 (m, 4H), 3.92 (b, 4H), 4.20 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.33 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H); EIMS: 421 (M+H).
２−ブトキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４３）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 190-191°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.96 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.5 (m, 2H), 1.8 (m, 2H),
3.68 (b, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.46 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.80 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.02 (d, J= 8.4 Hz, 1H); EIMS: 421 (M+H).
１−（３−ヒドロキシ−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４４）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 209-210°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.7 (m, 2H), 3.5 (m, 2H), 3.6 (m, 4H), 3.9 (m, 4H),
4.26 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.65 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 7.1 (m, 1H), 7.34 (t, J= 7.2
Hz, 1H), 7.49 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.64 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.76 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 7.6 Hz, 1H); EIMS: 423 (M+H).
１−シクロプロピルメチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４５）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 198°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.45 (d, J = 6.4 Hz, 4H), 1.2 (m, 1H), 3.6 (m, 4H), 3.9
(m, 4H), 4.17 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.1 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 1.2,
3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.79 (dd, J = 1.2, 4.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J= 7.6 Hz, 1H), ; EIMS: 419 (M+H).
２−シクロプロピルメトキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４６）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 200-203°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.5 (m, 2H), 0.6 (m, 2H), 1.3 (m, 1H), 3.69 (b, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.31 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.8 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.4
Hz, 1H); EIMS: 419 (M+H).
１−（４−シアノ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４７）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 260-263°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.72 (b, 4H), 3.95 (b, 4H), 5.58 (s, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.31 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H),
7.50 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.8 (m, 3H), 7.96 (d,
J = 7.2 Hz, 1H); EIMS: 480 (M+H).
２−（４−シアノ−ベンジルオキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４８）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 214-218°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 3.71 (b, 4H), 3.95 (b, 4H), 5.58 (s, 2H), 7.17 (t, J= 2.8 Hz, 1H), 7.31 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.40 (d, J =
8.0 Hz, 2H), 7.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.63 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.8 (m, 3H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H); EIMS: 480 (M+H).
２−オキソ−１−ペンチル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１４９）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 201-202°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.88 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.3 (m, 4H), 1.6 (m, 2H),
3.6 (m, 4H), 3.92 (b, 4H), 4.19 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.33 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.75 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.8 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 0.8, 8.0 Hz, 1H); EIMS: 435 (M+H).
２−ペンチルオキシ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１５０）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 152-155°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.4 (m, 4H), 1.7 (m, 2H),
3.7 (m, 4H), 3.94 (b, 4H), 4.45 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 7.17 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.50 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.7 (m, 2H), 7.80 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.0
2 (d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 435 (M+H).
１−（４−メチル−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１５１）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 236-238°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 2.25 (s, 3H), 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 5.44 (s, 2H), 7.12 (s, 4H), 7.2 (m, 1H), 7.29 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 1.2, 4.0 Hz, 1H), 7.6 (m, 1H), 7.81 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 1.2, 8.4 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
２−（４−メチル−ベンジルオキシ）−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１５２）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 188-191°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 2.31 (s, 3H), 3.7 (m, 4H), 3.9 (m, 4H), 5.50 (s, 2H), 7.2 (m, 1H), 7.21 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.41 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.5 (m, 2H),
7.77 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 7.80 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.4 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
２−オキソ−１−プロピル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５３）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 92-96°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.91 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.6 (m, 2H), 3.13 (s, 4H), 3.88 (s, 4H), 4.3 (m, 4H), 7.1 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.45 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.34 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 455 (M+H).
１−ブチル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５４）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 90-96°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.3 (m, 5H), 1.6 (m, 2H), 3.13 (s, 4H), 3.88 (s, 4H), 4.32 (m, 4H), 7.15 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.45 (dd, J
= 1.2, 3.6, 1H), 7.79 (dd, J = 1.2, 5.2 Hz, 1H), 8.34 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 469 (M+H).
１−アリル−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５５）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 89-96°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.15 (s, 4H), 3.89 (s, 4H),
4.31 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 5.0 (m, 4H), 5.9 (m, 1H), 7.15 (m, 1H), 7.39 (dd, J =
4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 0.8, 3.6 Hz), 7.79 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.34 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.68 (dd, J = 1.6, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 453 (M+H).
１−（２−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５６）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 105-110°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 3.19 (s, 4H), 3.91 (s, 4H), 4.30 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 5.60 (s, 2H), 6.81 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 7.2 (m, 3H), 7.39 (m, 1H), 7.46 (dd, J = 0.8, 3.6 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.38 (dd, J = 1.6, 8.0 Hz, 1H), 8.63 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz, 1H); EIMS: 521 (M+H).
１−（３−フルオロ−ベンジル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボ
ニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５７）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P. 105-110°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.29 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 3.18 (s, 4H), 3.89 (s, 4H), 4.31 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 5.56 (s, 2H), 7.1 (m, 4H), 7.4 (m, 3H), 7.79 (d, J=
4.4 Hz, 1H), 8.36 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.67 (d, J = 3.2 Hz, 1H); EIMS: 521 (M+H).
１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−２−オキソ−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−［１．８］ナフチリジン−３−カルボン酸エチルエステル（化合物１５８）の調製
化合物を、一般手順Ｃにしたがって、相当するアルキルハライドより調製した。M.P.  84-94°C; 1H-NMR (DMSO-d6): 1.30 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.7 (m, 2H), 2.14 (s, 6H),
2.30 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.13 (b, 4H), 3.88 (b, 4H), 4.3 (m, 4H), 7.2 (m, 1H),
7.3 (m, 1H), 7.45 (dd, J = 1.2, 3.6 Hz, 1H), 7.79 (dd, J = 0.8, 4.8 Hz, 1H), 8.34 (dd, J = 2.0, 8.0 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 2.0, 4.8 Hz, 1H); EIMS: 498 (M+H).
２−オキソ−１−フェニル−４−［４−（チオフェン−２−カルボニル）−ピペラジン−１−イル］−１，２−ジヒドロ−キノリン−３−カルボニトリル（化合物１５９）の調製
酢酸第二銅（４９７ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３８０μＬ、２．７４ｍｍｏｌ）およびボロン酸フェニル（３３５ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン中の化合物１１６（５００ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の溶液に続けて加えた。溶液を室温にて４８時間撹拌した。この溶液をセライトを通して濾過し、飽和ＮａＨＣＯ3溶液、水および食塩水によって連続して洗浄した。有機相を、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、蒸発させて、残余物を得、これを、フラッシュクロマトグラフィーによって精製して、ジクロロメタン中の０〜１％ＭｅＯＨ勾配で溶出して、１８７ｍｇ（３１％）の白色個体を得た。M.P. 289℃.  1H NMR (DMSO-d6): δ 3.78 (m, 4H), 4.02 (m, 4H), 6.60 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (m, 1H), 7.38 (m, 3H), 7.57-7.71 (m, 5H), 7.88 (dd, J = o.8, 4.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 7.2 Hz, 1H).  EIMS m/z 441 (M+1).  Anal. (C25H20N4O2S) C, H, N.
【０３８０】
【化８４】
2006517977.tif 000087
【実施例４】
【０３８１】
ＭＩＦの以下の阻害剤を、実施例で記述した方法によって調製した。これらのＭＩＦ阻害剤のそれぞれが、以上で記述した構造１（ａ）の化合物の種類に属する。トートメラーゼアッセイの結果により、以下の候補化合物のそれぞれが、特定の高レベルのＭＩＦ活性の阻害を示すことが示された。これらのＭＩＦ阻害剤は、それぞれ、０．０１ｎＭ〜５０μＭの濃度で活性である。
【０３８２】
【化８５】
2006517977.tif 000088
【０３８３】
【化８６】
2006517977.tif 000089
【０３８４】
【化８７】
2006517977.tif 000090
【０３８５】
【化８８】
2006517977.tif 000091
【０３８６】
【化８９】
2006517977.tif 000092
【０３８７】
【化９０】
2006517977.tif 000093
【０３８８】
【化９１】
2006517977.tif 000094
【０３８９】
【化９２】
2006517977.tif 000095
【０３９０】
【化９３】
2006517977.tif 000096
【０３９１】
【化９４】
2006517977.tif 000097
【０３９２】
【化９５】
2006517977.tif 000098
【０３９３】
【化９６】
2006517977.tif 000099
【０３９４】
【化９７】
2006517977.tif 000100
【実施例５】
【０３９５】
好ましい実施形態のＭＩＦの以下の阻害剤は、実施例で記述した方法によって調製可能である。
【０３９６】
【化９８】
2006517977.tif 000101
【０３９７】
【化９９】
2006517977.tif 000102
【０３９８】
【化１００】
2006517977.tif 000103
【０３９９】
【化１０１】
2006517977.tif 000104
【０４００】
【化１０２】
2006517977.tif 000105
【０４０１】
【化１０３】
2006517977.tif 000106
【０４０２】
【化１０４】
2006517977.tif 000107
【０４０３】
【化１０５】
2006517977.tif 000108
【０４０４】
【化１０６】
2006517977.tif 000109
【０４０５】
【化１０７】
2006517977.tif 000110
【０４０６】
【化１０８】
2006517977.tif 000111
【０４０７】
【化１０９】
2006517977.tif 000112
【０４０８】
【化１１０】
2006517977.tif 000113
【０４０９】
【化１１１】
2006517977.tif 000114
【０４１０】
【化１１２】
2006517977.tif 000115
【０４１１】
【化１１３】
2006517977.tif 000116
【０４１２】
【化１１４】
2006517977.tif 000117
【０４１３】
【化１１５】
2006517977.tif 000118
【０４１４】
【化１１６】
2006517977.tif 000119
【０４１５】
【化１１７】
2006517977.tif 000120
【０４１６】
【化１１８】
2006517977.tif 000121
【０４１７】
【化１１９】
2006517977.tif 000122
【０４１８】
【化１２０】
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【０４１９】
【化１２１】
2006517977.tif 000124
【０４２０】
【化１２２】
2006517977.tif 000125
【０４２１】
【化１２３】
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【０４２２】
【化１２４】
2006517977.tif 000127
【０４２３】
【化１２５】
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【０４２４】
【化１２６】
2006517977.tif 000129
【０４２５】
【化１２７】
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【実施例６】
【０４２６】
化合物２００を、種々の異なる濃度で、ＴＨＰ−１  Ｃｅｌｌ  Ａｓｓａｙにて試験した。化合物２００は、図１で示したように、ＭＩＦ阻害活性を示す。化合物２００は、ＭＩＦ阻害活性を示す。
【実施例７】
【０４２７】
化合物２００を種々の異なる濃度で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏトートメラーゼ阻害活性に関して試験した。化合物２００は、図２で示したように、ＭＩＦ阻害活性を示している。
【実施例８】
【０４２８】
化合物２０３を、種々の異なる濃度で、ｉｎ  ｖｉｔｒｏトートメラーゼ阻害活性に関して試験した。化合物２０３は、図３で示したように、ＭＩＦ阻害活性を示している。
【実施例９】
【０４２９】
化合物２００および化合物２０３のＭＩＦ阻害活性を比較した。両方が、十分なＭＩＦ阻害活性を示している。
【０４３０】
【表２】
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【０４３１】
好ましい実施形態は、その特定の実施形態と関連して記述してきた。さらなる改変が可能であり、本明細書は、本発明の原理に沿い、本発明が関連する本技術分野で公知または慣習実施の範囲内である、また、本明細書に列記した必須の特徴に適用しうる、そして本発明の目的およびその同等なものの範囲内であるような、本開示物からのそのような逸脱を含む、任意の改変物、使用または適用をカバーする意図がある。特許および技術的文献を限定はしないが含む、本明細書に引用した各参考文献は、その全てにおいて、参考文献にて本明細書で組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０４３２】
【図１】図１は、化合物２００に関するＴＨＰ−１  Ｃｅｌｌ  Ａｓｓａｙデータを提供している。
【図２】図２は、化合物２００に関する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏトートメラーゼ阻害活性データを提供している。
【図３】図３は、化合物２０３に関する、ｉｎ  ｖｉｔｒｏトートメラーゼ阻害活性データを提供している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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