(57)【要約】式（Ｉ）を有する化合物が提供される：【化１９２】2006514614.tif 000221ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、式（ａ）の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、Ｒ１およびＲ２は一緒になって、基（式（ａ））で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈもしくは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
2006514614.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2006514614.tif 000205
を有する化合物であって、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【化２】
2006514614.tif 000206
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、そして、Ｌは任意のリンカー基であるか、または
Ｒ１およびＲ２は一緒になって、以下の基：
【化３】
2006514614.tif 000207
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される、
化合物。
【請求項２】
以下の式ＩＩ：
【化４】
2006514614.tif 000208
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｌが存在しない、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が一緒になって、以下の基：
【化５】
2006514614.tif 000209
で置換された環を形成する、請求項１、２または３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２が一緒になって、炭素環式環を形成する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１およびＲ２が一緒になって、六員環を形成する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１およびＲ２が一緒になって、アリール環を形成する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
式ＩＩＩ：
【化６】
2006514614.tif 000210
を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
式ＩＶ：
【化７】
2006514614.tif 000211
を有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
式Ｖ：
【化８】
2006514614.tif 000212
を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
式ＶＩ：
【化９】
2006514614.tif 000213
を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
式ＶＩＩ：
【化１０】
2006514614.tif 000214
を有する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３が、Ｈ、ヒドロカルビル、−Ｓ−ヒドロカルビル、−Ｓ−Ｈ−、ハロゲンおよびＮ（Ｒ９）（Ｒ１０）から選択され、ここで、Ｒ９およびＲ１０の各々が、独立してＨおよびヒドロカルビル基から選択される、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が、Ｈ、ならびに、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＣ１〜Ｃ３アルキル基のようなＣ１〜Ｃ１０アルキル基から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が−ＣＨ３である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６】
式ＶＩＩＩ：
【化１１】
2006514614.tif 000215
を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１７】
式ＩＸ：
【化１２】
2006514614.tif 000216
を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１８】
式Ｘ：
【化１３】
2006514614.tif 000217
を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１９】
式ＸＩ：
【化１４】
2006514614.tif 000218
を有する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ３が、Ｏ、ヒドロカルビルおよびＮ（Ｒ９）から選択され、ここで、Ｒ９がＨおよびヒドロカルビル基から選択される、請求項１６〜１９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ３が、Ｏ、Ｃ１〜Ｃ１０アルケニル基、例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルケニル基およびＣ１〜Ｃ３アルケニル基、ＮＨならびにＮ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、例えば、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＮ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル基から選択される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ４がＨ、ならびにＣ１〜Ｃ６アルキル基およびＣ１〜Ｃ３アルキル基のようなＣ１〜Ｃ１０アルキル基から選択される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ４がＨである、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ４が以下の式：
【化１５】
2006514614.tif 000219
の基である、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ５が置換された環である、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ５が炭素環式環である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ５が六員環である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ５がアリール環である、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ５が以下の式：
【化１６】
2006514614.tif 000220
を有する基であり、ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５の各々が、独立して、Ｈ、ハロゲンおよびヒドロカルビル基から選択される、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３０】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５の各々が、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル、フェニル、Ｏ−アルキル、Ｏ−フェニル、ニトリル、ハロアルキル、カルボキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２アルキルおよびＮＨ−アセチル基から選択される、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと、必要に応じて配合された、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項３２】
医療における使用のための、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３３】
１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３４】
前記状態または疾患が、糖尿病および肥満のような代謝障害；高血圧のような心脈管障害；緑内障；関節炎または喘息のような炎症性障害；免疫障害；骨粗しょう症のような骨障害；癌；子宮内増殖遅延；顕性鉱質コルチコイド過剰症候群（ＡＭＥ）；多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）；多毛；座瘡；希発月経もしくは無月経；副腎皮質腺腫および癌腫；クッシング症候群；下垂体腫瘍；侵襲性癌腫；乳癌；ならびに子宮内膜癌からなる群より選択される、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
有害な１１β−ＨＳＤレベルに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
１１β−ＨＳＤ活性を調節するための医薬品の製造における、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３７】
１１β−ＨＳＤ活性を阻害するための医薬品の製造における、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項３８】
以下：
（ａ）請求項１〜３０のいずれか１項に規定される式を有する１種以上の候補化合物を用いて、１１β−ＨＳＤアッセイを実施する工程；
（ｂ）該１種以上の候補化合物が、１１β−ＨＳＤ活性を調節し得るかどうかを決定する工程；および
（ｃ）１１β−ＨＳＤ活性を調節し得る該１種以上の候補化合物を選択する工程
を包含する、方法。
【請求項３９】
以下：
（ａ）請求項１〜３０のいずれか１項に規定される式を有する１種以上の候補化合物を用いて、１１β−ＨＳＤアッセイを実施する工程；
（ｂ）該１種以上の候補化合物が、１１β−ＨＳＤ活性を阻害し得るかどうかを決定する工程；および
（ｃ）１１β−ＨＳＤ活性を阻害し得る該１種以上の候補化合物を選択する工程
を包含する、方法。
【請求項４０】
請求項３８または請求項３９に記載の方法により同定される、化合物。
【請求項４１】
医療における使用のための、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと、必要に応じて配合された、請求項４０に記載の化合物を含む、薬学的組成物。
【請求項４３】
１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、請求項４０に記載の化合物の使用。
【請求項４４】
前記状態または疾患が、糖尿病および肥満のような代謝障害；高血圧のような心脈管障害；緑内障；関節炎または喘息のような炎症性障害；免疫障害；骨粗しょう症のような骨障害；癌；子宮内増殖遅延；顕性鉱質コルチコイド過剰症候群（ＡＭＥ）；多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）；多毛；座瘡；希発月経もしくは無月経；副腎皮質腺腫および癌腫；クッシング症候群；下垂体腫瘍；侵襲性癌腫；乳癌ならびに子宮内膜癌からなる群より選択される、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
有害な１１β−ＨＳＤレベルに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、請求項４０に記載の化合物の使用。
【請求項４６】
１１β−ＨＳＤが、１１β−ＨＳＤ  １型である、請求項３３〜４５のいずれか１項に記載の発明。
【請求項４７】
１１β−ＨＳＤが、１１β−ＨＳＤ  ２型である、請求項３３〜４５のいずれか１項に記載の発明。
【請求項４８】
実質的に、実施例のいずれかを参照して明細書中に記載されるような、化合物。
【請求項４９】
実質的に、実施例のいずれかを参照して明細書中に記載されるような、組成物。
【請求項５０】
実質的に、実施例のいずれかを参照して明細書中に記載されるような、方法。
【請求項５１】
実質的に、実施例のいずれかを参照して明細書中に記載されるような、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、ある化合物に関連する。特に、本発明は、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（Ｕｐ−ＨＳＤ）を阻害し得る化合物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
（序論）
糖質コルチコイドであるグルココルチコイドの役割は、コレステロールからの副腎皮質において合成される。ヒトの体内における主要な糖質コルチコイドは、コルチゾールであり、このホルモンは、概日性の散発的な様式での、脳下垂体からの副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）に応答して合成および分泌されるが、このホルモンの分泌はまた、ストレス、運動および感染により刺激され得る。コルチゾールは、主に、トランスコルチン（コルチゾール結合タンパク質）またはアルブミンに結合して循環し、生物学的プロセスについて、わずかな分画のみが遊離体（５〜１０％）である［１］。
【０００３】
コルチゾールは、広範な生理学的効果を有し、これらとしては、炭水化物、タンパク質および脂質代謝の調節、正常な成長および発生の調節、認知機能に対する影響、ストレスに対する抵抗性、ならびに、鉱質コルチコイド活性が挙げられる。コルチゾールは、インシュリンと比較して逆方向に作用し、つまり、血中糖新生を刺激し、末梢グルコース取込みを阻害し、そして、血中グルコース濃度を上昇させる。糖質コルチコイドはまた、免疫応答の調節にも必須である。高濃度で循環する場合、糖質コルチコイドは免疫抑制性であり、抗炎症剤として薬理学的に使用される。
【０００４】
糖質コルチコイドは、他のステロイドホルモンと同様に親油性であり、細胞膜を自由に浸透する。コルチゾールは、主に、細胞内糖質コルチコイドレセプター（ＧＲ）に結合し、次いで、転写因子として機能して、糖質コルチコイド応答性遺伝子の発現を誘導し、結果としてタンパク質合成を誘導する。
【０００５】
（１１β−ＨＳＤ酵素の役割）
１１β−ＨＳＤによるコルチゾール（Ｆ）のその不活性な代謝産物であるコルチゾン（Ｅ）への変換は、１９５０年代に最初に記載されたが、その後、この変換についての生物学的重要性は示唆されていなかった［２］。１９８３年に、Ｋｒｏｚｏｗｓｋｉらは、鉱質コルチコイドレセプター（ＭＲ）が、糖質コルチコイドおよび鉱質コルチコイドについて、同等の結合親和性を有することを示した［３］。コルチゾールの循環濃度は、アルドステロンの濃度の１００倍高く、ストレス時または活動量が高い間には、なおさら、いかにＭＲが鉱質コルチコイド特異的なままであり、絶えず糖質コルチコイドにより占拠されないかを明らかにはしなかった。Ｅａｒｌｉｅｒ  Ｕｌｉｃｋら［４］は、「顕性鉱質コルチコイド過剰」（ＡＭＥ）として知られる高血圧状態を記載し、副腎からのアルドステロンの分泌が実際に低い場合に、コルチゾールの末梢代謝が妨害されたことを観察した。これらの発見により、これらの酵素についての保護的な役割が示唆された。鉱質コルチコイド依存性組織においてコルチゾールをコルチゾンに変換することにより、１１β−ＨＳＤ酵素は、ＭＲを鉱質コルチコイドによる占拠から保護し、鉱質コルチコイド特異的であることを可能にする。アルドステロン自体は、Ｃ−１８位におけるアルデヒド基の存在により酵素から保護される。
【０００６】
１１β−ＨＳＤ酵素の先天的な欠損は、コルチゾールによるＭＲの全体的な占拠を生じ、ＡＭＥにおいて、高血圧および低カリウム症状が見られる。
【０００７】
１１β−ＨＳＤの局在化は、この酵素およびその活性が、ＭＲ依存性の組織（腎臓および耳下腺）において高度に存在していることを示した。しかし、ＭＲが鉱質コルチコイド特異的でなく、通常、糖質コルチコイドにより占拠されている組織においては、１１β−ＨＳＤは、これらの組織（例えば、心臓および海馬）には存在しない［５］。この研究はまた、１１β−ＨＳＤの阻害が、これらの鉱質コルチコイド依存性組織におけるＭＲのアルドステロンの特異性の欠失を生じたことを示した。
【０００８】
１１β−ＨＳＤの２つのイソ酵素が存在することが示されている。この両方が進化の過程で広範に保存されている短鎖アルコールデヒドロゲナーゼ（ＳＣＡＤ）スーパーファミリーのメンバーである。１１β−ＨＳＤ２型は、デヒドロゲナーゼとして機能し、コルチゾールのＣ−１１位にある第二級アルコール基を第二級ケトンに変換し、代謝活性の低いコルチゾンを生じる。１１β−ＨＳＤ１型は、主にインビボにおいてレダクターゼとして機能すると考えられ、これは、２型とは逆方向である［６］［以下を参照のこと］。１１β−ＨＳＤ１型および２型は、わずか３０％のアミノ酸相同性を有する。
【０００９】
【化１７】
2006514614.tif 000003
（１１β−ＨＳＤ酵素活性）。
【００１０】
コルチゾールの細胞内活性は、糖質コルチコイドの濃度に依存し、ホルモンの全体的な分泌および合成に関与することなく、改変され、そして、独立して制御され得る。
【００１１】
（１１β−ＨＳＤ１型の役割）
インビボにおける１１β−ＨＳＤ１型の方向は、一般に、２型の脱水素化とは逆であると認められている。インビボにおける１型遺伝子が破壊されているホモ接合性マウスは、コルチゾンをコルチゾールに変換することができず、酵素の還元的活性についてのさらなる証拠を提供する［７］。１１β−ＨＳＤ１型は、多くの重要な糖質コルチコイドにより調節される組織（肝臓、下垂体、性腺、脳、脂肪および副腎など）において発現されるが、これらの組織の多くにおける酵素の機能は、ほとんど理解されていない［８］。
【００１２】
体内におけるコルチゾンの濃度は、コルチゾールの濃度よりも高く、コルチゾンはまた、結合グロブリンにほとんど結合せず、コルチゾンを、何倍も生物学的に利用可能にしている。コルチゾールは副腎皮質により分泌されるが、ＥからＦへの細胞内変換が、糖質コルチコイドの作用を調節することにおいて重要な機構であり得るという証拠が増す［９］。
【００１３】
１１β−ＨＳＤ１型は、特定の組織が、コルチゾンをコルチゾールに変換して、局所的な糖質コルチコイド活性を増加させ、適合応答を増強することを可能にし、糖質コルチコイドの活性の失敗を生じ得る２型活性を相殺する［１０］。ストレス応答の増強は、脳において特に重要であり、高レベルの１１β−ＨＳＤ１型が、海馬周辺で見られ、さらに、この酵素の役割を解明する。１１β−ＨＳＤ１型はまた、肝細胞成熟において重要な役割を果たすようである［８］。１１β−ＨＳＤ１型酵素の別の新生の役割は、多くの非ステロイド性カルボニル化合物の解毒プロセスにあり、多くの毒性化合物のカルボニル基の減少は、溶解性を高め、従って、その外分泌を増加させるための一般的な方法である。１１β−ＨＳＤ１型酵素は、最近、肺組織において活性であることが示されている［１１］。１型の活性は、生後までは見られず、従って、妊娠の間に喫煙する母親がその子供に対して、子供がこの化合物を代謝的に解毒し得るようになる前に、タバコの有害な作用を与える。
【００１４】
（１１β−ＨＳＤ２型の役割）
以前に言及されているように、１１β−ＨＳＤ２型は、コルチゾールをコルチゾンに変換し、従って、身体の多くの重要な調節組織におけるＭＲを保護する。ＭＲを糖質コルチコイドによる占拠から保護することの重要性は、ＡＭＥまたは甘草ｉｎｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎを有する患者において見られる。２型酵素の欠損または不能は、高血圧症候群を生じ、研究は、高血圧症候群を有する患者が、コルチゾール：コルチゾンの尿中排泄比の増加を有することを示している。これは、放射標識されたコルチゾールの半減期の報告された減少と共に、１１β−ＨＳＤ２型活性の減少を示唆する［１２］。
【００１５】
（１１β−ＨＳＤインヒビターの開発のための原理）
上記のように、先行コルチゾールは、インシュリンの作用に対抗し、すなわち、肝臓の糖新生を刺激し、末梢のグルコース取込みを阻害し、血中グルコース濃度を増加する。このコルチゾールの作用は、グルコース不耐性または糖尿病メリティスに罹患する患者において増強されているようである。酵素１１β−ＨＤＳ１型の阻害は、グルコースの取り込みを増加させ、肝臓糖新生を阻害し、循環グルコースレベルの減少をもたらす。それゆえ、強力な１１β−ＨＳＤ１型インヒビターの開発が、上昇した血中グルコースレベルに関連する症状についての考慮すべき治療可能性を有し得る。
【００１６】
糖質コルチコイドの過剰は、ニューロン機能不全を生じ得、そしてまた、認知機能を損ない得る。特異的１１β−ＨＳＤ１型インヒビターは、加齢に関連するニューロン機能不全および認知機能の喪失を減少し、コルチゾンのコルチゾールへの変換をブロックすることによって、幾分重要であり得る。
【００１７】
糖質コルチコイドはまた、免疫応答の調節部分において重要な役割を有する［１３］。糖質コルチコイドは、サイトカインの産生を抑制し得、そして、レセプターレベルを調節し得る。これらはまた、Ｔヘルパー（Ｔｈ）リンパ球がＴｈ１またはＴｈ２表現型のいずれに進行するかを決定することに関与する。これらの２つの異なる型のＴｈ細胞は、異なるプロフィールのサイトカインを分泌し、Ｔｈ２は、糖質コルチコイド環境において優性である。１１β−ＨＳＤ１型を阻害することによって、Ｔｈ１サイトカイン応答が有利に働く。１１β−ＨＳＤ２型を阻害することもまた可能であり、従って、コルチゾールの不活性化を阻害することによって、糖質コルチコイドの抗炎症性作用を増強することも可能であり得る。
【００１８】
本発明の局面は、添付の特許請求の範囲に規定される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
（本発明の要約した局面）
１つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【００２０】
【化１８】
2006514614.tif 000004
を有する化合物を提供し、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００２１】
【化１９】
2006514614.tif 000005
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５はヒドロカルビル基であり、かつＬは任意のリンカー基であるか、または、
Ｒ１およびＲ２が一緒になって、以下の基：
【００２２】
【化２０】
2006514614.tif 000006
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００２３】
１つの局面において、本発明は、
（ｉ）式Ｉ：
【００２４】
【化２１】
2006514614.tif 000007
を有する化合物を含み、
（ｉｉ）必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと配合された薬学的組成物を提供し、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００２５】
【化２２】
2006514614.tif 000008
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、かつ、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、
Ｒ１およびＲ２は、一緒になって、以下の基：
【００２６】
【化２３】
2006514614.tif 000009
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００２７】
１つの局面において、本発明は、式Ｉ：
【００２８】
【化２４】
2006514614.tif 000010
を有する、医療における使用のための化合物を提供し、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００２９】
【化２５】
2006514614.tif 000011
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、かつ、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、
Ｒ１およびＲ２は一緒になって、以下の基：
【００３０】
【化２６】
2006514614.tif 000012
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００３１】
１つの局面において、本発明は、１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における化合物の使用を提供し、ここで、この化合物は、式Ｉ：
【００３２】
【化２７】
2006514614.tif 000013
を有し、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００３３】
【化２８】
2006514614.tif 000014
の基であり、ここで、Ｒ４はＨおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、かつ、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、Ｒ１およびＲ２は一緒になって、以下の基：
【００３４】
【化２９】
2006514614.tif 000015
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００３５】
（いくつかの利点）
本発明の１つの重要な利点は、本発明の化合物が、１１β−ＨＳＤインヒビターとして機能し得ることである。この化合物は、不活性な１１−ケトステロイドの、その活性なヒドロキシ等価物との相互交換を阻害し得る。従って、本発明は、不活性形態の活性形態への変換が制御され得る方法を提供し、この方法は、このような制御の結果として得られ得る有用な治療効果へと変換される。より具体的には（制限はしないが）、本発明は、ヒトにおけるコルチゾンとコルチゾールとの間の相互交換に関する。
【００３６】
本発明の化合物の別の利点は、これらが、インビボで強力な１１β−ＨＳＤインヒビターであり得ることである。
【００３７】
本発明の化合物のいくつかはまた、これらが経口で活性であり得るという点で有利である。
【００３８】
本発明は、（ｉ）炭水化物代謝の調節、（ｉｉ）タンパク質代謝の制御、（ｉｉｉ）脂質代謝の制御、（ｉｖ）正常な成長および／または発生の制御、（ｖ）認知機能への影響、（ｖｉ）ストレスおよび鉱質コルチコイド活性に対する抵抗性のうちの１つ以上についての医薬のために提供され得る。
【００３９】
本発明の化合物のいくつかはまた、肝臓糖新生を阻害するのに有用であり得る。本発明はまた、糖尿病メリティス、肥満（求心性肥満を含む）、ニューロンの喪失および／または老齢の認知障害における内因性糖質コルチコイドの効果を軽減するための医薬を提供し得る。従って、さらなる局面において、本発明は、医薬が投与される患者において１種以上の治療効果を生じるための医薬の製造の製造における１１β−ＨＳＤのインヒビターの使用を提供し、ここで、上記治療効果は、肝臓糖新生の阻害、脂肪組織および筋肉におけるインシュリン感受性の増加、ならびに、糖質コルチコイドにより増強された神経毒性または神経不全もしく神経損傷に起因するニューロンの喪失／認知障害の阻害または減少から選択される。
【００４０】
代替的な観点から、本発明は、肝臓インシュリン抵抗性、脂肪組織のインシュリン抵抗性、筋肉のインシュリン抵抗性、糖質コルチコイドにより増強された神経毒に起因するニューロンの喪失または機能不全ならびに上記の状態の任意の組合せからなる群から選択される状態に罹患しているヒトもしくは動物被験体の処置方法を提供し、この方法は、上記患者に本発明に記載される化合物の薬学的に活性な量を含む違約を投与する工程を包含する。
【００４１】
本発明の化合物のいくつかは、特に、薬剤が、早期年齢から投与される必要があり得る場合に、癌（例えば、乳癌）、ならびに（代替的には）、非悪性状態の処置（例えば、自己免疫疾患の予防）に有用であり得る。
【００４２】
（本発明の詳細な説明）
１つの局面において、本発明は、式Ｉ
【００４３】
【化３０】
2006514614.tif 000016
を有する化合物を提供し、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００４４】
【化３１】
2006514614.tif 000017
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、かつ、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、
Ｒ１およびＲ２は一緒になって、以下の基：
【００４５】
【化３２】
2006514614.tif 000018
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００４６】
１つの局面において、本発明は、
（ｉ）上に定義される式Ｉを有する化合物を含み、
（ｉｉ）必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと配合されている、薬学的組成物を提供する。
【００４７】
１つの局面において、本発明は、医療における使用のための、上に定義される式Ｉを有する化合物を提供する。
【００４８】
１つの局面において、本発明は、１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、上で定義された式Ｉを有する化合物の使用を提供する。
【００４９】
１つの局面において、本発明は、有害な１１β−ＨＳＤレベルに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における上に定義される式Ｉを有する化合物の使用を提供する。
【００５０】
１つの局面において、本発明は、１１β−ＨＳＤ活性を阻害するための薬剤の製造における上に定義される式Ｉを有する化合物の使用を提供する。
【００５１】
１つの局面において、本発明は、１１β−ＨＳＤ活性を阻害するための薬剤の製造における上に定義される式Ｉを有する化合物の使用を提供する。
【００５２】
１つの局面において、本発明は、方法を提供し、この方法は、（ａ）上に定義される式Ｉを有する１種以上の候補化合物を用いて１１β−ＨＳＤアッセイを実施する工程；（ｂ）上記１種以上の候補化合物が１１β−ＨＳＤ活性を調節し得るかどうかを決定する工程；および（ｃ）１１β−ＨＳＤ活性を調節し得る上記１種以上の候補化合物を選択する工程を包含する。
【００５３】
１つの局面において、本発明は、方法を提供し、この方法は、（ａ）上に定義される式Ｉを有する１種以上の候補化合物を用いて１１β−ＨＳＤアッセイを実施する工程；（ｂ）上記１種以上の候補化合物が１１β−ＨＳＤ活性を阻害し得るかどうかを決定する工程；および（ｃ）１１β−ＨＳＤ活性を阻害し得る上記１種以上の候補化合物を選択する工程を包含する。
【００５４】
１つの局面において、本発明は、以下を提供する：
・上記の方法により同定される化合物、
・医療における上記化合物の使用、
・必要に応じて薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤、賦形剤またはアジュバントと配合された、上記化合物を含む薬学的組成物
・１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における上記化合物の使用、ならびに
・有害な１１β−ＨＳＤレベルに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における上記化合物の使用。
【００５５】
参照を簡単にするために、本発明のこれらおよび他の局面がここで、適切な節の表題の下で議論される。しかし、各節の下の教示は、各特定の節に限定される必要はない。
【００５６】
（好ましい局面）
１つの好ましい局面において、本発明の化合物は、式ＩＩ：
【００５７】
【化３３】
2006514614.tif 000019
を有する。
【００５８】
１つの好ましい局面において、Ｌは存在しない。この局面において、本発明は、式Ｉ：
【００５９】
【化３４】
2006514614.tif 000020
を有する化合物を提供し、ここで、
Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、以下の式：
【００６０】
【化３５】
2006514614.tif 000021
の基であり、ここで、Ｒ４は、Ｈおよびヒドロカルビルから選択され、Ｒ５は、ヒドロカルビル基であり、かつ、Ｌは任意のリンカー基であるか、または、
Ｒ１およびＲ２は一緒になって、以下の基：
【００６１】
【化３６】
2006514614.tif 000022
で置換された環を形成し、ここで、Ｒ３は、Ｈまたは置換基であり、ここで、Ｘは、Ｓ、Ｏ、ＮＲ６およびＣ（Ｒ７）（Ｒ８）から選択され、ここで、Ｒ６は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択され、ここで、Ｒ７およびＲ８の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００６２】
本発明の化合物の１つの好ましい局面において、Ｒ１およびＲ２が一緒になって、以下の基：
【００６３】
【化３７】
2006514614.tif 000023
で置換された環を形成する。
【００６４】
本発明の化合物の１つの好ましい局面において、Ｒ１およびＲ２が一緒になって、炭素環式環を形成する。
【００６５】
本発明の化合物の１つの好ましい局面において、Ｒ１およびＲ２が一緒になって、六員環を形成する。
【００６６】
本発明の化合物の１つの好ましい局面において、Ｒ１およびＲ２が一緒になって、六員の炭素環式環を形成する。
【００６７】
本発明の化合物の１つの好ましい局面において、Ｒ１およびＲ２が一緒になって、アリール環を形成する。
【００６８】
本発明の好ましい化合物は、以下の式：
【００６９】
【化３８−１】
2006514614.tif 000024
【００７０】
【化３８−２】
2006514614.tif 000025
のうちの１つを有するものである。
【００７１】
本発明の１つの好ましい局面において、Ｒ３は、Ｈ、ヒドロカルビル、−Ｓヒドロカルビル、−Ｓ−Ｈ、ハロゲンおよびＮ（Ｒ９）（Ｒ１０）から選択され、Ｒ９およびＲ１０の各々は、独立して、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００７２】
本発明の１つの好ましい局面において、Ｒ３は、Ｈ、ヒドロキシ、アルキル（特に、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルキル基）、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよび他のペンチル異性体、ならびにｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体）、アルコキシ（特に、Ｃ１〜Ｃ１０アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ（例えば、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ基、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）またはハロゲン（例えば、フルオロ置換基）から選択される。
【００７３】
Ｒ３が−Ｓ−ヒドロカルビルである場合、好ましくは、Ｒ３は、−Ｓ−アルキル、−Ｓ−カルボン酸、Ｓ−エーテルおよび−Ｓ−アミドから選択され、好ましくは、−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、−Ｓ−Ｃ１〜１０カルボン酸、−Ｓ−Ｃ１〜１０エーテルおよび−Ｓ−Ｃ１〜１０アミドから選択される。
【００７４】
本発明の１つの好ましい局面において、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【００７５】
本発明のさらに好ましい化合物は、以下の式のうちの１つを有するものである：
【００７６】
【化３９−１】
2006514614.tif 000026
【００７７】
【化３９−２】
2006514614.tif 000027
化合物が式Ｉａ、式ＶＩＩＩ、式ＩＸ、式Ｘ、式Ｘａ、式ＸＩまたは式ＸＩａを有する場合のような、本発明のさらなる好ましい局面において、Ｒ３は、Ｏ、ヒドロカルビルおよびＮ（Ｒ９）から選択され、ここで、Ｒ９は、Ｈおよびヒドロカルビル基から選択される。より好ましくは、Ｒ３は、Ｏ、Ｃ１〜Ｃ１０アルケニル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルケニル基およびＣ１〜Ｃ３アルケニル基）ＮＨおよびＮ−Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基（例えば、Ｎ−Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＮ−Ｃ１〜Ｃ３アルキル基）から選択される。
【００７８】
本発明のさらなる好ましい局面において、Ｒ４は、ＨおよびＣ１〜Ｃ１０アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＣ１〜Ｃ３アルキル基）から選択される。好ましくは、Ｒ４はＨである。
【００７９】
本発明のさらなる好ましい局面において、Ｒ４は、以下の式：
【００８０】
【化４０】
2006514614.tif 000028
の基である。
【００８１】
これらの局面において、
【００８２】
【化４１】
2006514614.tif 000029
のような、上に示される基は、以下の式：
【００８３】
【化４２】
2006514614.tif 000030
であり得、ここで、各Ｒ５は、独立して、ヒドロカルビル基から選択される。各Ｒ５は、他のＲ５とは同じであっても異なっていてもよい。１つの局面において、２つのＲ５基は、同じである。
【００８４】
本発明のいくつかの好ましい局面において、Ｒ５は、環状ヒドロカルビル基である。好ましくは、Ｒ５は、炭化水素環を含む環状ヒドロカルビル基である。
【００８５】
Ｒ５は、置換された環または非置換の環であり得る。本発明のいくつかの好ましい局面において、Ｒ５は置換された環である。
【００８６】
好ましくは、Ｒ５は炭素環式環である。
【００８７】
好ましくは、Ｒ５は六員環である。
【００８８】
好ましくは、Ｒ５は、六員の炭素環式環である。より好ましくは、Ｒ５は、置換された六員の炭素環式環である。
【００８９】
本発明のいくつかの好ましい局面において、Ｒ５はアリール環である。好ましくは、Ｒ５は、置換されたアリール環である。
【００９０】
１つの非常に好ましい局面において、Ｒ５は、以下の式：
【００９１】
【化４３】
2006514614.tif 000031
を有する基であり、ここで、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５の各々は、独立して、Ｈ、ハロゲンおよびヒドロカルビル基から選択される。
【００９２】
好ましくは、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５の各々は、独立して、Ｈ、ハロゲン、アルキル（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、フェニル、Ｏ−アルキル、Ｏ−フェニル、ニトリル、ハロアルキル（例えば、ＣＦ３、ＣＣｌ３およびＣＢＲ３）、カルボキシアルキル、−ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２アルキルおよびＮＨ−アセチル基から選択される。
【００９３】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの２つ以上が、連結されて環を形成し得る。Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの２つ以上は、近接していても近接していなくてもよい。環は、炭素環式環または複素環式環であり得る。環は、必要に応じて、上に列挙されたＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５置換基のいずれかで置換され得る。Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５のうちの２つ以上は、連結されて、以下の基：
【００９４】
【化４４】
2006514614.tif 000032
の環を形成し得、ナフチル、キノリル、テトラヒドロキノリルまたはベンゾテトラヒドロピラニルを提供し得、これらの各々は、置換されていても置換されていなくてもよい。
【００９５】
（置換基）
本発明の化合物は、本明細書中に示される環系以外の置換基を有し得る。さらに、本明細書中の環系は、一般式として与えられ、このように中断されるべきである。所定の環メンバー上に具体的に示される置換基が存在しない場合、環メンバーは、任意の置換基で置換されていてもよく、Ｈはほんの一例である。環系は、１以上の程度の不飽和を含み得、例えば、いくつかの局面において、環系の１つ以上の環は芳香族である。環系は、炭素環式であり得るか、または、１つ以上のヘテロ原子を含み得る。
【００９６】
本発明の化合物は、特に、本発明の発明の環系化合物は、本明細書中に示されるもの以外の置換基を含み得る。例として、これらの他の置換基は、以下の１種以上であり得る：１種以上のハロ基、１種以上のＯ基、１種以上のヒドロキシ基、１種以上のアミノ基、１種以上の硫黄含有基（Ｓ）、１種以上のヒドロカルビル基（Ｓ）（例えば、オキシヒドロカルビル基）であり得る。
【００９７】
一般的な観点において、本発明の化合物の環系は、種々の干渉されない置換基を含み得る。特に、環系は、１種以上のヒドロキシ、アルキル（特に、低級（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル（例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよび他のペンチル異性体、ならびに、ｎ−ヘキシルおよび他のヘキシル異性体））、アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシなど）、アルキニル（例えば、エチニル）またはハロゲン（例えば、フルオロ置換基）を含み得る。
【００９８】
本発明のいくつかの化合物について、化合物は、ヒドロカルビルスルファニル基で置換され得る。用語「ヒドロカルビルスルファニル」とは、少なくとも１種のヒドロカルビル基（本明細書中で規定されるような）および硫黄を含む基を意味し、好ましくは、−Ｓ−ヒドロカルビル、より好ましくは、−Ｓ−炭化水素を意味する。この硫黄基は、必要に応じて酸素化され得る。
【００９９】
好ましくは、ヒドロカルビルスルファニル基は、−Ｓ−Ｃ１〜１０アルキルであり、より好ましくは、−Ｓ−Ｃ１〜５アルキルであり、より好ましくは、−Ｓ−Ｃ１〜３アルキルであり、より好ましくは、−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ３または−ＳＣＨ３である。
【０１００】
（さらなる局面）
いくつかの適用について、好ましくは、化合物は可逆的な作用を有する。
【０１０１】
いくつかの適用について、好ましくは、化合物は、不可逆的な作用を有する。
【０１０２】
１つの実施形態において、本発明の化合物は、乳癌の処置に有用である。
【０１０３】
本発明の化合物は、塩の形態であり得る。
【０１０４】
本発明はまた、本発明の化合物を調製するのに有用な、新規の中間体を包含する。例えば、本発明は、化合物についての新規アルコール前駆体を包含する。さらなる例として、本発明は、化合物のビス保護された前駆体を包含する。これらの前駆体の各々の例は、本明細書中に提示される。本発明はまた、本発明の化合物の合成のための、これらの前駆体の各々または両方を含むプロセスを包含する。
【０１０５】
（ステロイドデヒドロゲナーゼ）
１１βステロイドデヒドロゲナーゼは、「１１β−ＨＳＤ」または短く「ＨＤ」と呼ばれ得る。
【０１０６】
本発明のいくつかの局面において、１１β−ＨＳＤは、好ましくは、１１β−ＨＳＤ１型である。
【０１０７】
本発明のいくつかの局面において、１１β−ＨＳＤは好ましくは１１β−ＨＳＤ２型である。
【０１０８】
（ステロイドデヒドロゲナーゼの阻害）
ＨＤ活性に関連するいくつかの疾患状態が、不活性なコルチゾンの活性なコルチゾールへの変換によるものであると考えられる。ＨＤ活性に関連する疾患状態において、ＨＤ活性を阻害することが望ましい。
【０１０９】
ここで、用語「阻害する」とは、ＨＤの有害活性を減少および／または排除および／または遮蔽および／または回避することを含む。
【０１１０】
（ＨＤインヒビター）
本発明に従って、本発明の化合物は、ＨＤインヒビターとして作用し得る。
【０１１１】
ここで、本明細書中で本発明の化合物に関して使用される場合、用語「インヒビター」とは、ＨＤ活性を阻害し得る−例えば、ＨＤの有害活性を減少および／または排除および／または遮蔽および／または回避し得る化合物を意味する。ＨＤインヒビターは、アンタゴニストとして機能し得る。
【０１１２】
ステロイドデヒドロゲナーゼ活性を阻害する化合物の能力は、実施例の節に提示される適切なアッセイプロトコールを用いて評価され得る。
【０１１３】
本発明の化合物は、ＨＤ活性を阻害するその能力に加えて、または、それに変えて、他の有利な特性を有し得る。
【０１１４】
（ヒドロカルビル）
本明細書中で使用される場合、用語「ヒドロカルビル基」とは、少なくともＣおよびＨを含み、必要に応じて、１つ以上の他の適切な置換基を含み得る基を意味する。このような置換基の例としては、ハロ、アルコキシ、ニトロ、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。環状基であるという置換基の可能性に加えて、置換基の組合せが環状基を形成し得る。ヒドロカルビル基が１つ以上のＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも互いに結合している必要はない。例えば、少なくとも２つの炭素は、適切な元素または基を介して結合され得る。従って、ヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、硫黄、窒素および酸素を含む。ヒドロカルビル基の非限定的な例は、アシル基である。
【０１１５】
代表的なヒドロカルビル基は、炭化水素基である。ここで、用語「炭化水素」とは、アルキル基、アルケニル基、基が直鎖状、分枝もしくは環状であり得るアルキニル基、またはアリール基のうちのいずれか１つを意味する。用語「炭化水素」はまた、必要に応じて置換されているこれらの基を含む。炭化水素が置換基を有する分子構造である場合、置換は、炭化水素骨格上または分枝鎖上のいずれかであり得る；あるいは、置換は、炭化水素骨格および分枝鎖上にあり得る。
【０１１６】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、必要に応じて置換されたアルキル基、必要に応じて置換されたハロアルキル基、アリール基、アルキルアリール基、アルキルアリールアルキル基およびアルケン基から選択される。
【０１１７】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基（例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基およびＣ１〜Ｃ３アルキル基）から選択される。代表的なアルキル基としては、Ｃ１アルキル、Ｃ２アルキル、Ｃ３アルキル、Ｃ４アルキル、Ｃ５アルキル、Ｃ７アルキルおよびＣ８アルキルが挙げられる。
【０１１８】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は独立して、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ブロモアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ブロモアルキル基およびＣ１〜Ｃ３ブロモアルキル基から選択される。代表的なハロアルキル基としては、Ｃ１ハロアルキル、Ｃ２ハロアルキル、Ｃ３ハロアルキル、Ｃ４ハロアルキル、Ｃ５ハロアルキル、Ｃ７ハロアルキル、Ｃ８ハロアルキル、Ｃ１ブロモアルキル、Ｃ２ブロモアルキル、Ｃ３ブロモアルキル、Ｃ４ブロモアルキル、Ｃ５ブロモアルキル、Ｃ７ブロモアルキルおよびＣ８ブロモアルキルが挙げられる。
【０１１９】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、アリール基、アルキルアリール基、アルキルアリールアルキル基、−（ＣＨ２）１〜１０−アリール、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜１０−Ｐｈ−Ｃ１〜１０アルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜５−Ｐｈ−Ｃ１〜５アルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ、（ＣＨ２）１〜３−Ｐｈ−Ｃ１〜３アルキル、−ＣＨ２−Ｐｈおよび−ＣＨ２−Ｐｈ−Ｃ（ＣＨ３）３から選択される。アリール基は、ヘテロ原子を含み得る。従って、１つのアリール基または１つ以上のアリール基は、炭素環式であり得るか、または複素環式であり得る。代表的なヘテロ原子としては、Ｏ、ＮおよびＳが挙げられ、特にＮが好ましい。
【０１２０】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、−（ＣＨ２）１〜１０−シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜１０−Ｃ３〜１０シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜７−Ｃ３〜７シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜５−Ｃ３〜５シクロアルキル、−（ＣＨ２）１〜３−Ｃ３〜５シクロアルキルおよび−ＣＨ２−Ｃ３シクロアルキルからなる群から選択される。
【０１２１】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、アルケン基．代表的なアルケン基としては、Ｃ１〜Ｃ１０アルケン基、Ｃｉ−Ｃｅアルケン基、Ｃ１−Ｃ３アルケン基（例えば、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５、Ｃ６またはＣ７アルケン基）からなる群から選択される。好ましい局面において、アルケン基は、１、２または３のＣ＝Ｃ結合を含む。好ましい局面において、アルケン基は、１つのＣ＝Ｃ結合を含む。いくつかの好ましい局面において、少なくとも１つのＣ＝Ｃ結合を含むか、１つのみのＣ＝Ｃ結合は、アルケン鎖のＣ末端にあり、すなわち、結合は、環系に対して鎖の遠位端にある。
【０１２２】
本発明のいくつかの局面において、１つ以上のヒドロカルビル基は、独立して、オキシヒドロカルビル基からなる群から選択される。
【０１２３】
（オキシヒドロカルビル）
用語「オキシヒドロカルビル」基は、本明細書中で使用される場合、少なくともＣ、ＨおよびＯを含み、必要に応じて、１つ以上の他の適切な置換基を含み得る基を意味する。このような置換基の例としては、ハロ基、アルコキシ基、ニトロ基、アルキル基、環状基などが挙げられ得る。
【０１２４】
置換基が環状基であるという可能性に加えて、置換基の組合せが環状基を形成し得る。オキシヒドロカルビル基が１つ以上のＣを含む場合、これらの炭素は、必ずしも互いに結合されている必要はない。例えば、少なくとも２つの炭素が、適切な元素または基を介して結合され得る。従って、オキシヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含み得る。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかであり、例えば、硫黄および窒素を含む。
【０１２５】
本発明の１つの実施形態において、オキシヒドロカルビル基は、酸素炭化水素基である。
【０１２６】
ここで、用語「酸素炭化水素」とは、アルコキシ基、オキシアルケニル基、基が直鎖、分枝鎖もしくは環状であり得るオキシアルキニル基またはオキシアリール基のいずれか１つを意味する。用語「酸素炭化水素」はまた、必要に応じて置換されているこれらの基を含む。酸素炭化水素が、置換基を有する分枝構造である場合、置換は、炭化水素骨格上または分枝鎖上のいずれかであり得る；あるいは、置換は、炭化水素骨格上および分枝鎖上であり得る。
【０１２７】
代表的には、オキシヒドロカルビル基は、式Ｃ１〜４Ｏ（例えば、Ｃ１〜３Ｏ）のものである。
【０１２８】
（骨形成活性を決定するための動物アッセイモデル（プロトコール１））
（インビボエストロゲン産生の欠如）
本発明の化合物は、動物モデルを用いて、特に、卵巣切除したラットにおいて研究され得る。このモデルにおいて、エストロゲン性である化合物が、子宮の増殖を刺激する。
【０１２９】
化合物（１０ｍｇ／Ｋｇ／日を５日間）をラットに経口投与し、別の群の動物には、ビヒクルのみ（プロピレングリコール）を与えた。さらなる群は、エストロゲン性化合物であるＥＭＡＴＥを１０μｇ／日で５日間皮下投与した。研究の終了時に、子宮を摘出し、重量を測定し、結果を、子宮重量／全体重×１００として表した。
【０１３０】
子宮の増殖に対して有意な効果を有さなかった化合物は、エストロゲン性ではない。
【０１３１】
（レポーター）
種々のレポーターが、本発明のアッセイ方法（およびスクリーン）において使用され得、好ましいレポーターは、好都合なことに（例えば、分光法によって）検出可能なマーカーを提供する。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変化させる反応物を触媒する酵素をコードし得る。
【０１３２】
他のプロトコールとしては、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）および蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）が挙げられる。２つの非干渉のエピトープに対するモノクローナル抗体を使用する２部位のモノクローナルベースのイムノアッセイがさらに使用され得る。これらおよび他のアッセイは、他の場所に、Ｈａｍｐｔｏｎ  Ｒら（１９９０、Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、ＡＰＳ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓｔ  Ｐａｕｌ  ＭＮ）およびＭａｄｄｏｘ  ＤＥら（１９８３、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １５：８：１２１  １）に記載される。
【０１３３】
レポーター分子の例としては、（β−ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、（−グルクロニダーゼ、エキソ−グルカナーゼおよびグルコアミラーゼが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、放射標識されるかまたは蛍光タグ標識されたヌクレオチドは、発生器の転写物に取り込まれ得、これは、次いで、オリゴヌクレオチドプローブに結合する場合に、同定される。
【０１３４】
さらなる例として、多くの会社（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）およびＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）は、市販のキットおよびアッセイの手順のためのプロトコルを提供する。適切なレポーター分子または標識としては、放射線核種、酵素、蛍光、化学発光、または発色性因子および基質、補因子、インヒビター、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する米国特許としては、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０：ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７：ＵＳ−Ａ−４２７５１４９およびＵＳ−Ａ−４３６６２４１が挙げられる。
【０１３５】
（宿主細胞）
本発明に関して、用語「宿主細胞」は、本発明の因子に対する標的を含み得る任意の細胞を含む。
【０１３６】
従って、本発明のさらなる実施形態は、本発明の標的であるかまたは本発明の標的を発現するポリヌクレオチドで形質転換されるか、あるいはトランスフェクトされた宿主細胞を提供する。好ましくは、このポリヌクレオチドは、標的であるかまたは標的を発現するポリヌクレオチドの複製および発現のために、ベクター内に運ばれる。細胞は、このベクターと適合可能であるように選択され、そして例えば、原核生物（例えば、細菌）細胞、真菌細胞、酵母細胞、または植物細胞であり得る。
【０１３７】
グラム陰性細菌Ｅ．ｃｏｌｉは、異種遺伝子発現のための宿主として広く使用される。しかし、大量の異種タンパク質は、細胞内に蓄積する傾向がある。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞内タンパク質バルクからの所望のタンパク質の引き続いての精製は、時々、困難であり得る。
【０１３８】
Ｅ．ｃｏｌｉと対照的に、バチルス属からの細菌は、培養培地へタンパク質を分泌するそれらの能力のため、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切な他の細菌は、ストレプトミセス属およびシュードモナス属からの細菌である。
【０１３９】
本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの性質、および／または発現されたタンパク質のさらなるプロセシングのための望ましさに依存して、真核生物宿主（例えば、酵母または他の真菌）が好ましくあり得る。通常、酵母細胞は、操作がより容易なので、真菌細胞以上に好ましい。しかし、いくつかのタンパク質は、酵母細胞からは少ししか分泌されないか、またはいくつかの場合は、適切にプロセシングされない（例えば、酵母における過剰グリコシル化（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）かのいずれかである。これらの場合、異なる真菌宿主生物が選択されるべきである。
【０１４０】
本発明の範囲内の適切な発現宿主の例としては、真菌（例えば、アスペルギルス種（例えば、ＥＰ−Ａ−０１８４４３８およびＥＰ−Ａ−０２８４６０３に記載されるようなもの）ならびにトリコデルマ種）；細菌（例えば、バチルス種（例えば、ＥＰ−Ａ−０１３４０４８およびＥＰ−Ａ−０２５３４５５に記載されるようなもの））；ストレプトミセス種およびシュードモナス種；ならびに酵母（例えば、クリュベロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）種（例えば、ＥＰ−Ａ−００９６４３０およびＥＰ−Ａ−０３０１６７０に記載されるようなもの））ならびにサッカロミセス種が挙げられる。例として、代表的な発現宿主は、Ａｓｐｅｒｇｕｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ｔｕｂｉｇｅｎｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｕｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ｖａｒ．ａｗａｍｏｒｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ａｃｕｌｅａｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｏｒｖｚａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ｒｅｅｓｅｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ  ｌａｃｔｉｓおよびＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｄｉａｅから選択され得る。
【０１４１】
適切な宿主の使用（例えば、酵母宿主細胞、真菌宿主細胞、および植物宿主細胞）は、本発明の組換え発現産物において最適な生物学的活性を与えるのに必要とされ得るように、翻訳後の改変（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、切断、脂質化およびチロシン、セリンまたはスレオニンのリン酸化）を提供し得る。
【０１４２】
（生物）
本発明に関して、用語「生物」は、本発明に従う標的および／またはその生物から得られる産物を含み得る任意の生物を含む。生物の例としては、真菌、酵母、または植物が挙げられ得る。
【０１４３】
本発明に関して、用語「トランスジェニック生物」は、本発明に従う標的および／または得られた産物を含む任意の生物を含む。
【０１４４】
（宿主細胞／宿主生物の形質転換）
最初に示されるように、宿主生物は、原核生物または真核生物であり得る。適切な原核生物宿主の例としては、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓが挙げられる。原核細胞宿主の形質転換に関する教示は、当該分野においてよく実証されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第２版、１９８９、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ）およびＡｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９５）、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．を参照のこと。
【０１４５】
原核生物宿主が使用される場合、ヌクレオチド配列は、形質転換前に、（例えば、イントロンの除去によって）適切に改変されることが必要とし得る。
【０１４６】
別の実施形態において、トランスジェニック生物は酵母であり得る。この点に関して、酵母はまた、異種遺伝子発現のためのビヒクルとして広く用いられている。Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ種は、工業利用に関して長い歴史を持ち、異種遺伝子発現のための使用が挙げられる。Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅでの異種遺伝子の発現については、Ｇｏｏｄｅｙら（１９８７、Ｙｅａｓｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄ．Ｒ．Ｂｅｒｒｙら編、４０１〜４２９頁、Ａｌｌｅｎ  ａｎｄ  Ｕｎｗｉｎ、Ｌｏｎｄｏｎ）およびＫｉｎｇら（１９８９、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｙｅａｓｔｓ、Ｅ．Ｆ．ＷａｌｔｏｎおよびＧ．Ｔ．Ｙａｒｒｏｎｔｏｎ編、１０７〜１３３頁、Ｂｌａｃｋｉｅ、Ｇｌａｓｇｏｗ）により総説される。
【０１４７】
種々の理由から、Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅは、異種遺伝子発現に十分適切である。第１に、ヒトに対して非病原性であり、そして特定の内毒素を産生し得ない。第２に、種々の目的のための商業面での開発の後数世紀にわたる、安全な使用に関する長い歴史を持つ。これにより幅広い公衆の承認が得られた。第３に、この生物に向けられた幅広い商業的な使用および研究により、Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの遺伝学および生理学、ならびにラージスケールの発酵の特徴付けについての見識の蓄積が得られた。
【０１４８】
Ｓａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおける異種遺伝子発現および遺伝子産物の分泌の原理についての総説は、Ｅ．Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ  Ｅ．Ｋｅｎｎｙ（１９９３、「Ｙｅａｓｔ  ａｓ  ａ  ｖｅｈｉｃｌｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ  ｇｅｎｅｓ」、Ｙｅａｓｔｓ、第５巻、Ａｎｔｈｏｎｙ  Ｈ．ＲｏｓｅおよびＪ．Ｓｔｕａｒｔ  Ｈａｒｒｉｓｏｎ編、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｌｔｄ．）により与えられる。
【０１４９】
種々のタイプの酵母ベクターが利用可能であり、組込みベクター（これらを維持するために宿主ゲノムとの組換えを要求するベクター）、および自律的に複製するプラスミドベクターが挙げられる。
【０１５０】
トランスジェニックＳａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓを調製するために、酵母で発現するよう設計された構築物にヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構築物が調製される。異種発現に用いられる種々のタイプの構築物が開発されてきた。ヌクレオチド配列と融合される酵母において、プロモーター活性を含む構築物（通常は、ＧＡＬ１プロモーターのような酵母起源のプロモーター）が用いられる。通常、酵母起源のシグナル配列（例えば、ＳＵＣ２シグナルペプチドをコードする配列）が用いられる。酵母においてターミネーター活性は、発現系を終了させる。
【０１５１】
酵母の形質転換に関して、種々の形質転換プロトコルが開発されてきた。例えば、本発明に基づくトランスジェニックＳａｃｃａｒｏｍｙｃｅｓは、Ｈｉｎｎｅｎら（１９７８、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳＡ  ７５、１９２９）；Ｂｅｇｇｓ、ＪＤ（１９７８、Ｎａｔｕｒｅ、Ｌｏｎｄｏｎ、２７５、１０４）；およびＩｔｏ、Ｈら（１９８３、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ  １５３、１６３−１６８）の教示に従い調製され得る。
【０１５２】
形質転換された酵母細胞は、種々の選択マーカーを用いて選択される。形質転換に使用されるマーカーの中には、ＬＥＵ２、ＨＩＳ４、およびＴＲＰ１のような多くの栄養要求性マーカー、およびアミノグリコシド抗生物質マーカー（例えば、Ｇ４１８）のような多くの優性抗生物質耐性マーカーがある。
【０１５３】
別の宿主生物は植物である。遺伝的に改変された植物の構築における基本的な原理は、植物ゲノムに遺伝子情報を挿入し、挿入された遺伝的物質の安定な保持を獲得することである。遺伝子情報を挿入することに関して種々の技術が存在し、主な２つの原理は、遺伝子情報を直接導入することおよびベクター系を用いて遺伝子情報を導入することである。一般的な技術の総説は、Ｐｏｔｒｙｋｕｓ（Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９１）４２：２０５−２２５）およびＣｈｒｉｓｔｏｕ（Ａｇｒｏ−Ｆｏｏｄ−Ｉｎｄｕｓｔｒｙ  Ｈｉ−Ｔｅｃｈ  Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ  １９９４  １７−２７）の論文に見出され得る。植物の形質転換に関するさらなる教示はＥＰ−Ａ−０４４９３７５に見出され得る。
【０１５４】
したがって、本発明はまた、標的となるかまたは標的を発現するヌクレオチド配列を用いて宿主細胞を形質転換する方法を提供する。このヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、コードされるタンパク質の発現に適切な条件下で培養され得る。組換え細胞により産生されるタンパク質は、細胞の表面に提示され得る。所望の場合および当業者に理解されるように、コード配列を含む発現ベクターは、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通じてコード配列が分泌させるようシグナル配列を含んで設計され得る。他の組換え構築物は、可溶性タンパク質の精製を容易にするポリペプチド領域をコードするヌクレオチド配列にコード配列を連結し得る（Ｋｒｏｌｌ  Ｄ．Ｊ．（１９９３）ＤＮＡ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１２：４４１−５３）。
【０１５５】
（改変体／相同体／誘導体）
本明細書中で言及される特定のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列に加えて、本発明はまた、これらの改変体、相同体、および誘導体の使用を包含する。本明細書において用語「相同性（ｈｏｍｏｌｏｇｙ）」は、「同一性（ｉｄｅｎｔｉｔｙ）」と同一視され得る。
【０１５６】
本明細書での関係において、相同な配列は、少なくとも７５、８５または９０％同一（好ましくは少なくとも９５または９８％同一）であり得るアミノ酸配列を含むと解釈される。相同性はまた、類似性（ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ）（すなわち、類似の化学的特性／機能を有するアミノ酸残基）ともみなされ得るが、本発明の関係において、配列同一性に関して相同性を表現することが好ましい。
【０１５７】
相同性の比較は、目視により、またはより通常には容易に利用可能な配列比較プログラムの補助により行なわれ得る。これらの市販のコンピュータプログラムは２つ以上の間の相同性（％）を計算し得る。
【０１５８】
相同性（％）は、連続した配列全体で計算され得る。すなわち、ある配列が他の配列と並べられ、そしてある配列中のそれぞれのアミノ酸が、一度に１つの残基ずつ、他の配列中の対応するアミノ酸と直接的に比較される。これは、「アンギャップ（ｕｎｇａｐｐｅｄ）」アラインメントと呼ばれる。代表的に、このようなアンギャップアラインメントは、比較的少ない残基数にわたる場合のみに実施される。
【０１５９】
これは非常に単純で一貫した方法であるが、例えば、別の同一性の対の配列において、１つの挿入または欠失が、次のアミノ酸残基のアラインメントを出される原因になり、したがって潜在的に、全体のアラインメントが実施された場合、大きな相同性（％）の減少を引き起こすことが考慮されない。したがって、たいていの配列比較方法は、過度に全体的な相同性のスコアを悪くすることなく可能性のある挿入および欠失を考慮に入れた最適なアラインメントを生じるよう設計される。このことは、配列アラインメントに「ギャップ」を挿入し、局部的な相同性を最大限に活用する試みをすることにより達成される。
【０１６０】
しかし、これらのより複雑な方法は、アラインメントで起こるそれぞれのギャップに「ギャップペナルティー（ｇａｐ  ｐｅｎａｌｔｉｅｓ）」を割り当て、その結果、同じ数の同一アミノ酸に関して、可能な限り少ないギャップを有する配列アラインメント（これにより、２つの比較される配列間のより高い関連性が反映される）が、多くのギャップを有するアラインメントよりも高いスコアを達成する。「アファインギャップコスト（Ａｆｆｉｎｅ  ｇａｐ  ｃｏｓｔｓ）」は代表的に、ギャップの存在およびギャップ中の引き続く残基それぞれに対するより小さいペナルティーの存在について比較的高いコストを要求するよう用いられる。これは、最も共通して用いられるギャップスコアリングシステムである。高いギャップペナルティーは、当然より少ないギャップを有する最適化されたアラインメントを生じる。たいていのアラインメントプログラムは、ギャップペナルティーが変更されることを可能にする。しかし、このような配列比較のためのソフトウェアを用いる場合、デフォルト値を用いることが好ましい。例えば、ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージ（以下を参照のこと）を用いる場合、アミノ酸配列に対するデフォルトギャップペナルティーは、ギャップに対して−１２であり、そしてそれぞれの伸長に対して−４である。
【０１６１】
したがって、最大相同性（％）の計算には、ギャップペナルティーを考慮に入れた最適アラインメントの生成が第１に必要とされる。このようなアラインメントを実施するのに適切なコンピュータプログラムは，ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｂｅｓｔｆｉｔパッケージである（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ；Ｄｅｖｅｒｅｕｘら、１９８４、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２：３８７）。配列比較を実行し得る、それ以外のソフトウェアの例としては、ＢＬＡＳＴパッケージ（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９同書、１８章を参照のこと）、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌら、１９９０、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４０３−４１０）および比較ツールの中のＧＥＮＥＷＯＲＫＳパッケージソフトが挙げられるがこれらに限定されない。ＢＬＡＳＴおよびＦＡＳＴＡはオフラインおよびオンライン調査に利用可能である（Ａｕｓｕｂｅｌら、１９９９同書、７−５８〜７−６０頁を参照のこと）。しかしＧＣＧ  Ｂｅｓｔｆｉｔプログラムを用いることが好ましい。
【０１６２】
さらなる有用な参考文献が、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  Ｍａｙ  １５：１７４（２）：２４７−５０（そして公開された誤記が、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｌｅｔｔ  １９９９  Ａｕｇ  １：１７７（１）：１８７−８で明らかにされている）に見出される。
【０１６３】
最終的な相同性（％）は、同一性に関して測定されるが、アラインメントのプロセス自体は、代表的にオールオアナッシングの対の比較に依存されない。その代わり、測定される類似性スコアマトリクスが、化学的な類似性または進化の面での距離に基づくそれぞれの対の比較にスコアを割り当てるのに一般的に用いられる。このような共通して用いられるマトリクスの例は、ＢＬＯＳＵＭ６２マトリクス（ＢＬＡＳＴパッケージソフトのプログラムのデフォルトマトリクス）である。ＧＣＧ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎプログラムは、一般的に公開されているデフォルト値かまたは提供される場合は自前のシンボル比較テーブルのいずれかを用いる（さらなる詳細についてはユーザーマニュアルを参照のこと）。ＧＣＧパッケージについては公開されているデフォルト値を使用することが好ましい。他のソフトウェアの場合は、ＢＬＯＳＵＭ６２のようなデフォルトマトリクスを用いることが好ましい。
【０１６４】
いったんソフトウェアが最適なアラインメントを生じた場合、相同性（％）、好ましくは配列同一性（％）が計算されることが可能である。このソフトウェアは代表的に、これを配列比較の一部として行い、そして実数の結果を生じる。
【０１６５】
配列はまたは、アミノ酸残基の欠失、挿入または置換を有し、これは静的な変化を生じ、そして機能的に等価な物質を生じる。物質の二次的な結合活性が保持される限り、意図的なアミノ酸置換は、残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性における類似性に基づいてなされ得る。例えば、陰性に荷電したアミノ酸としてアスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられ；陽性に荷電したアミノ酸としてリジンおよびアルギニンが挙げられ；そして類似の親水性値を有する荷電していない極性の先端基を持つアミノ酸として、ロイシン、イソロイシン、バリン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、フェニルアラニン、およびチロシンが挙げられる。
【０１６６】
保存性置換が、例えば、以下の表に従ってなされ得る。２番目のカラムの同じブロックのアミノ酸、そして好ましくは３番目のカラムの同じ列のアミノ酸は、互いに置換され得る。
【０１６７】
（表１）
【０１６８】
【化４５】
2006514614.tif 000033
（発現ベクター）
標的として使用されるヌクレオチド配列または標的を発現するヌクレオチド配列は、組換え複製可能ベクターに組み込まれ得る。ベクターを用いて、適合可能な宿主細胞内で、および／または宿主細胞からヌクレオチド配列を複製し、発現し得る。発現は、プロモーター／エンハンサーおよび他の発現調節シグナルを含む制御配列を用いて制御され得る。原核生物プロモーターおよび真核生物細胞中で機能するプロモーターが用いられ得る。組織特異的または刺激特異的なプロモーターが用いられ得る。上記の２つ以上の異なるプロモーター由来の配列エレメントを含むキメラプロモーターもまた用いられ得る。
【０１６９】
ヌクレオチド配列の発現により宿主の組換え細胞によって産生されるタンパク質は、用いられる配列および／またはベクターに依存して分泌され得るか、または細胞内に含有され得る。コード配列は、特定の原核生物または真核生物の細胞膜を通じて物質コード配列が分泌されるようシグナル配列を含んで設計され得る。
【０１７０】
（融合タンパク質）
標的アミノ酸配列は、例えば、抽出および精製を補助するために融合タンパク質として産生され得る。融合タンパク質のパートナーの例として、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、６×Ｈｉｓ、ＧＡＬ４（ＤＮＡ結合および／または転写活性化ドメイン）および（−ガラクトシダーゼが挙げられる。融合タンパク質配列の除去を可能にするために、融合タンパク質のパートナーと目的のタンパク質との間にタンパク質分解性切断部位を含むこともまた、便宜的であり得る。好ましくは融合タンパク質は、標的の活性を妨害しない。
【０１７１】
融合タンパク質は、本発明の物質に融合された抗原または抗原決定基を含み得る。この実施形態において、融合タンパク質は、免疫系の汎用の刺激を提供する意味でアジュバンドとして作用し得る物質を含む、天然に存在しない融合タンパク質であり得る。抗原または抗原決定基は、物質のアミノ末端かまたはカルボキシ末端のいずれかに取り付けられ得る。
【０１７２】
本発明の別の実施形態において、アミノ酸配列は、融合タンパク質をコードする異種配列に連結され得る。例えば、この物質の活性に影響を与え得る薬剤に対するペプチドライブラリーのスクリーニングに関して、市販の抗体により認識される異種エピトープを発現するキメラ物質をコードすることは有用であり得る。
【０１７３】
（治療）
本発明の化合物は、治療剤として、すなわち治療適用に使用され得る。
【０１７４】
用語「治療」は、治癒効果、緩和効果、および予防効果を含む。
【０１７５】
治療は、ヒトまたは動物に対してであり得、好ましくは雌性動物である。
【０１７６】
（薬学的組成物）
１つの局面において、本発明は、薬学的組成物を提供し、この薬学的組成物は、本発明に従う化合物、必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア、希釈剤または賦形剤（これらの組み合わせを含む）を含む。
【０１７７】
薬学的組成物は、ヒトの医薬および獣医の医薬におけるヒト用法または動物用法のためであり得、代表的には、任意の１つ以上の薬学的に受容可能な希釈剤、キャリア、または賦形剤を含む。治療用途のための受容可能なキャリアまたは希釈剤は、薬学分野で周知であり、そして例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９８５）に記載される。薬学的キャリア、賦形剤または希釈剤の選択は、意図される投与経路および標準的な薬学的な実施に関して、選択され得る。薬学的組成物は、キャリア、賦形剤、もしくは希釈剤としてかまたはこれらに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁剤、コーティング剤、可溶化剤を含み得る。
【０１７８】
保存剤、安定剤、色素さらに香味剤が、この薬学的組成物中に提供され得る。保存剤の例としては、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが挙げられる。抗酸化剤および懸濁剤がまた、使用され得る。
【０１７９】
異なる送達系に依存した異なる組成物／処方物の要求が存在し得る。例として、本発明の薬学的組成物は、処方されて、ミニポンプを用いてかまたは粘膜経路によって（例えば、吸入のための経鼻スプレーもしくはエーロゾルまたは摂取可能溶液として）送達され得るか、または組成物が送達（例えば、静脈内経路によるか、筋内経路によるか、または皮下経路による）のために注射可能な形態で処方される非経口送達される。
【０１８０】
薬剤が胃腸粘膜を介して粘膜送達される場合、この薬剤は、胃腸管を通した通過の間に安定なままであり得るべきであり；例えば、この薬剤は、タンパク質分解性の分解に対して耐性であり、酸性ｐＨにおいて安定であり、そして胆汁の浄化効果に対して耐性であるべきである。
【０１８１】
適切な場合、薬学的組成物は、坐剤またはペッサリーの形態で吸入によって、ローション、溶液、クリーム、軟膏もしくは粉剤の形態で局所的に、皮膚パッチの使用によって、デンプンもしくはラクトースのような賦形剤を含む錠剤の形態で経口的に、または単独もしくは賦形剤との混合のいずれかでのカプセルもしくは卵で、または香味剤もしくは着色剤を含むエリキシル、溶液または懸濁剤の形態で投与され得るか、あるいは、これらは、非経口的に、例えば、静脈内的、筋内的または皮下的に注射され得る。非経口投与に関して、この組成物は、滅菌水溶液の形態で最良に使用され得、この滅菌水溶液は、他の物質、例えば、血液とのこの溶液の等張性を作るための十分な塩または単糖を含み得る。頬側投与または舌下投与に関して、この組成物は、従来様式で処方され得る錠剤またはトローチ剤の形態で投与され得る。
【０１８２】
（併用薬剤）
本発明の化合物は、１つ以上の他の活性な薬剤（例えば、１つ以上の他の薬学的に活性な薬剤）と組合わせて使用され得る。
【０１８３】
例として、本発明の化合物は、他の１１β−ＨＳＤインヒビターおよび／または他のインヒビター（例えば、アロマターゼインヒビター（例えば、４ヒドロキシアンドロステンジオン（４−ＯＨＡ））および／またはステロイドスルファターゼインヒビター（例えば、ＥＭＡＴＥ）および／またはステロイド（例えば、天然に存在するステルニューロステロイド（ｓｔｅｒｎｅｕｒｏｓｔｅｒｏｉｄ）デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）およびプレグネノロンサルフェート（ＰＳ）および／または他の構造的に類似した有機化合物のような）と組合わせて使用され得る。
【０１８４】
例として、本発明の化合物は、他のＳＴＳインヒビターおよび／または他のインヒビター、例えば、アロマターゼインヒビター
さらに、または代替的に、本発明の化合物は、生物学的応答の修飾因子と組合わせて使用され得る。
【０１８５】
用語、生物学的応答の修飾因子（「ＢＲＭ」）としては、サイトカイン、免疫調節因子、増殖因子、造血調節因子、コロニー刺激因子、走化性因子、溶血因子および血栓溶解因子、細胞表面レセプター、リガンド、白血球接着分子、モノクローナル抗体、予防ワクチンおよび治療ワクチン、ホルモン、細胞外マトリックス成分、フィブロネクチンなどが挙げられる。いくつかの適応において、好ましくは、生物学的応答の修飾因子は、サイトカインである。サイトカインの例としては、以下：インターロイキン（ＩＬ）（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１９）；腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）（例えば、ＴＮＦ−α）；インターフェロンα、インターフェロンβおよびインターフェロンγ；ＴＧＦ−βが挙げられる。いくつかの適用において、好ましくは、サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）である。いくつかの適用においてＴＮＦは、任意の型のＴＮＦ、例えば、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β（これらの誘導体または混合物を含む）であり得る。より好ましくは、サイトカインは、ＴＮＦ−αである。ＴＮＦに関する教示は、当該分野で見出され得る（例えば、ＷＯ−Ａ−９８／０８８７０およびＷＯ−Ａ−９８／１３３４８）。
【０１８６】
（投与）
代表的に、医師は、個々の被験体に対して最も適切である実際の投薬量を決定し、そしてこの投薬量は、特定の患者の年齢、体重および応答によって変化する。より低い投薬量が、平均の場合の典型である。当然、より高いまたはより低い投薬量範囲が正当である個々の例があり得る。
【０１８７】
本発明の組成物は、直接注射によって投与され得る。この組成物は、非経口投与、粘膜投与、筋内投与、静脈内投与、皮下投与、眼球内投与、または経皮投与のために処方され得る。必要性に依存して、薬剤は、０．０１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重の用量（例えば、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量）で投与され得る。
【０１８８】
さらなる例として、本発明の薬剤は、一日あたり１〜４回、好ましくは１日あたり１回または２回のレジメンに従って投与され得る。任意の特定の患者に対する特定の用量レベルおよび投薬頻度は、変動し得、そして種々の因子（使用される特定の化合物の活性、この化合物の代謝安定性および作用の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食事、投与形式および時間、排出速度、薬物の組み合わせ、特定の状態の重篤度、および治療を受ける宿主を含む）に依存する。
【０１８９】
代表的な送達様式（上記に示される）は別として、用語「投与」はまた、脂質媒介トランスフェクション、リポソーム、免疫リポソーム、リポフェクチン、カチオン性フェイシャル両親媒性物（ＣＦＡ）およびこれらの組み合わせのような技術による送達を含む。このような送達機構のための経路としては、粘膜経路、鼻経経路、口腔経路、非経口経路、胃腸経路、局所経路、または舌下経路が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９０】
用語「投与された」は、粘膜経路（例えば、吸入のための経鼻スプレーもしくはエーロゾルまたは摂取可能な溶液として）；送達が注射可能な形態による非経口経路（例えば、静脈経路、筋内経路または皮下経路）による送達が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１９１】
従って、薬学的投与に関して、本発明のＳＴＳインヒビターは、従来の薬学的処方技術ならびに薬学的キャリア、アジュバント、賦形剤、希釈剤などを用いて任意の適切な様式で、通常非経口投与のために、処方され得る。おおよその有効用量の割合は、１〜１０００ｍｇ／日、例えば、１０〜９００ｍｇ／日またはさらに１００〜８００ｍｇ／日の範囲であり得、問題の化合物の個々の活性に依存し、そしてこれは、平均体重（７０Ｋｇ）の患者に対してである。好ましくそしてより活性である化合物に関する、より有用な投薬量の割合は、２００〜８００ｍｇ／日、より好ましくは２００〜５００ｍｇ／日、最も好ましくは２００〜２５０ｍｇ／日の範囲である。これらは、単一投薬レジメンで提供され得、余剰の投薬レジメンおよび／または複数の投薬レジメンが、数日間にわたって続く。経口投与に関して、これらは、単一用量あたり１００〜５００ｍｇの化合物を含む錠剤、カプセル、溶液または懸濁液で処方され得る。あるいは、および好ましくは、この化合物は、適切な非経口的に投与可能なキャリア中に、非経口投与のために処方され、そして２００〜８００ｍｇ、好ましくは２００〜５００ｍｇ、より好ましくは２００〜２５０ｍｇの範囲の単一日投薬量の割合を提供する。しかし、このような有効日用量は、活性成分の本来の活性、患者の体重に依存して変動し、このような変動は、当該分野および医師の判断の範囲内である。
【０１９２】
（細胞周期）
本発明の化合物は、細胞周期障害の処置方法において有用であり得る。
【０１９３】
「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」第３版、Ｌｏｄｉｓｈら、１７７−１８１頁に考察されるように、異なる真核生物細胞は、非常に異なる速度で増殖し、そして分裂し得る。例えば、酵母細胞は、１２０分毎に分裂し、そしてウニおよび昆虫の胚細胞における受精卵の最初の分裂は、１５３０分しかかからない。なぜなら、１つの大きな既存細胞が、再分されるからである。しかし、最も成長している植物細胞および動物細胞は、数が２倍になるのに１０〜２０時間かかり、そしていくらかの複製物はよりゆっくりとして速度である。成体の多くの細胞（例えば、神経細胞および横紋筋細胞）は、すこしも分裂せず；創傷治癒を補助する線維芽細胞のような他の細胞は、要求に応じて増殖するが、さもなければ休止している。
【０１９４】
さらに、分裂する全ての真核生物細胞は、２つの娘細胞に均等に遺伝物質を提供する用意がなければならない。真核生物におけるＤＮＡ合成は、細胞分裂周期中、常には生じないが、細胞分裂前の一部に制限される。
【０１９５】
真核生物ＤＮＡ合成と細胞分裂との間の関連性は、哺乳動物細胞（これらは全て増殖および分裂し得た）の培養において徹底的に分析されている。細菌と対照的に、真核生物細胞は、ＤＮＡ合成においてその時間の一部のみを費やし、そして細胞分裂（有糸分裂）の前の時間に完了することが見出された。従って、時間のギャップが、ＤＮＡ合成後および細胞分裂前に生じ；別のギャップが、分裂後および次の回のＤＮＡ合成前に生じることが見出された。この分析は、真核生物細胞周期が、Ｍ（有糸分裂）期、Ｇ１期（最初のギャップ）、Ｓ期（ＤＮＡ合成）期、Ｇ２期（第２のギャップ）からなり、そしてＭに戻るという結論を導いた。有糸分裂間の期（Ｇ１、Ｓ、およびＧ２）は、集合的に間期として知られる。
【０１９６】
組織中の多くの非分裂細胞（例えば、全ての休止線維芽細胞）は、有糸分裂後およびＤＮＡ合成のちょうど前に周期を停止し；このような「休止」細胞は、細胞周期から外され（ｅｘｉｔｅ）そしてＧ０状態にあるといわれる。
【０１９７】
細胞が細胞周期の３つの間期のうちの１つにある場合、この細胞の相対的なＤＮＡ含量を測定する蛍光活性化細胞分類器（ＦＡＣＳ）を使用することによって、この細胞を同定することは可能であり；Ｇ１（ＤＮＡ合成前）にある細胞は、規定された量ｘのＤＮＡを有し；Ｓ（ＤＮＡ複製）の間、細胞はｘと２ｘとの間を有し；そしてＧ２（またはＭ）にある場合、細胞は、２ｘのＤＮＡを有する。
【０１９８】
動物細胞における有糸分裂および細胞質分裂の段階は、以下の通りである。
【０１９９】
（（ａ）間期）  間期のＧ２期は、有糸分裂開始の直前である。染色体ＤＮＡは、Ｓ期の間に複製され、そしてタンパク質に結合されるが、染色体はまだ、明確な構造として観察されない。核小体が、光学顕微鏡の下で可視的な唯一の核下部構造である。二倍体細胞では、ＤＮＡ複製前に、各型の２つの形態学的な染色体が存在し、そしてこの細胞は、２ｎであると言われる。Ｇ２では、ＤＮＡ複製後、細胞は４ｎである。４コピーの各染色体ＤＮＡが存在する。これらの姉妹染色体はまだ、互いから分離されていないので、これらは姉妹染色分体と呼ばれる。
【０２００】
（ｂ）前期の初期  中心小体（各々が、新たに形成された娘中心小体を有する）は、細胞の対極への移動を開始させる；染色体は、長い糸として観察され得る。核膜が、小胞へと脱凝集し始める。
【０２０１】
（ｃ）前期の中期および後期  染色体凝縮が完了する；各々の可視的な染色体構造は、それらの動原体において互いに保持された２つの染色分体からなる。各染色分体は、２つの新たに複製された娘ＤＮＡ分子のうちの１つを含む。微小管紡錘体は、中心小体に隣接した領域から放射状に伸び始め、これらは、それらの極により近づくように移動する。いくつかの紡錘体線維は、極から極へ達する；大半は、染色分体に移動し、そして動原体で付着する。
【０２０２】
（ｄ）中期  染色体は、細胞の赤道の方へと移動し、ここでそれらは、赤道面に整列されるようになる。この姉妹染色分体は、まだ分離されない。
【０２０３】
（ｅ）後期  ２つの姉妹染色分体が、個々の染色体に分離する。各々は、それらが移動した１つの極への紡錘体線維に結合された動原体を含む。従って、各染色体の１コピーが、各娘細胞に与えられる。同時に、細胞は、極−極紡錘体と同じように、伸長する。細胞質分裂は、分割溝が形成され始めるにつれて開始される。
【０２０４】
（ｆ）終期  新しい膜が、娘核の周囲に形成される；染色体は解かれ、そして明確性がより低くなり、核小体が再び可視的になり、そして核膜が、各娘核の周囲に形成される。細胞質分裂が、ほぼ完了し、そして紡錘体は、微小管および他の線維が解重合するにつれて消滅する。有糸分裂全体を通して、各極の「娘」中心小体は、それが全長になるまで伸長する。終期に、元々の中心小体の各々の複製が完了し、そして新しい娘中心小体が、次の間期の間に生成される。
【０２０５】
（ｇ）間期  細胞質分裂の完了時に、細胞は、細胞周期のＧ１期に入り、そして再度、この周期を進行する。
【０２０６】
細胞周期運動が、極めて重要な細胞プロセスであることが理解される。正常な細胞周期運動からの逸脱が、多くの医学的障害を生じさせ得る。増加したおよび／または無制限の細胞周期運動が、癌を生じ得る。細胞周期運動の減少は、変性状態を生じ得る。本発明の化合物を使用することによって、このような障害および状態を処置するための手段が提供され得る。
【０２０７】
従って、本発明の化合物は、癌（ホルモン依存性およびホルモン非依存性の癌を含む）のような細胞周期運動障害の処置における使用に適切であり得る。
【０２０８】
さらに、本発明の化合物は、乳癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肉腫、黒色腫、前立腺癌、膵臓癌などのような癌、および他の固形腫瘍の処置に適切であり得る。
【０２０９】
いくつかの適用について、細胞周期運動は、阻害されるか、および／または妨げられるか、および／または阻止され、好ましくはここで、細胞周期運動は、妨げられるか、および／または阻止される。１つの局面では、細胞周期運動は、Ｇ２／Ｍ期において、阻害され得るか、および／または妨げられ得るか、および／または阻止され得る。１つの局面では、細胞周期運動は、不可逆的に、阻害され得るか、および／または妨げられ得るか、および／または阻止され得、好ましくは、細胞周期運動は、不可逆的に、妨げられるか、および／または阻止される。
【０２１０】
用語「不可逆的に、防止されるか、および／または阻害されるか、および／または阻止される」とは、本発明の化合物の適用後に、この化合物を除去した際に、この化合物の効果（すなわち、細胞周期運動の防止、および／または阻害、および／または阻止）がなお観察可能であることを意味する。より詳細には、用語「不可逆的に、防止されるか、および／または阻害されるか、および／または阻止される」とは、本明細書中に提供される細胞周期運動アッセイプロトコールに従ってアッセイされた場合に、目的の化合物で処理された細胞が、コントロール細胞よりも、プロトコール１のステージ２の後に、より低い増殖を示すことを意味する。このプロトコールの詳細を、以下に示す。
【０２１１】
従って、本発明は、以下の化合物を提供する：細胞周期運動を妨げ、および／または阻害し、および／または阻止することによって、インビトロにおいて、エストロゲンレセプターポジティブ（ＥＲ＋）およびＥＲネガティブ（ＥＲ−）乳癌細胞の増殖阻害を引き起こす；および／またはインタクトな動物（すなわち、卵巣摘出されていない）において、ニトロソ−メチル尿素（ＮＭＵ）誘導性乳房腫瘍の後退を引き起こし、および／または癌細胞における細胞周期運動を妨げ、および／または阻害し、および／または阻止し；および／または細胞周期運動を妨げ、および／または阻害し、および／または阻止することによってインビボで作用し、および／または細胞周期運動アゴニストとして作用する、化合物。
【０２１２】
（細胞周期アッセイ（プロトコール２））
手順
ステージ１
ＭＣＦ−７乳癌細胞を、１０５細胞／ウェルの密度で、マルチウェル培養プレートに播種する。細胞を付着させ、そしてそれらの細胞を以下のように処理した場合に約３０％コンフルエントとなるまで増殖させた。
【０２１３】
コントロール−未処理
目的の化合物（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ；ＣＯＩ）２０μＭ
細胞を、ＣＯＩを含む増殖培地中において６日間増殖させる（培地／ＣＯＩの交換は、３日毎）。この期間の終了時に、細胞数を、Ｃｏｕｌｔｅｒ細胞計数器を使用して計数した。
【０２１４】
ステージ２
６日間のＣＯＩでの細胞処理後、細胞を、１０４細胞／ウェルの密度で再播種する。いかなるさらなる処理も付加しない。細胞を、増殖培地の存在下でさらに６日間増殖させ続ける。この期間の終了時に、再度、細胞数を計数する。
【０２１５】
（癌）
示されたように、本発明の化合物は、細胞周期運動障害の処置において有用であり得る。特定の細胞周期運動障害が、癌である。
【０２１６】
癌は、依然として大半の西洋諸国における死亡率の主因である。これまでに開発された癌療法は、ホルモン依存性腫瘍の増殖を阻害するためにホルモンの作用または合成をブロックすることを含んだ。しかし、より攻撃的な化学療法が、ホルモン非依存性腫瘍の処置のために現在では使用されている。
【０２１７】
従って、化学療法に付随する、いくらかまたはすべての副作用を欠くが、ホルモン依存性および／またはホルモン非依存性の腫瘍を抗癌処置する医薬の開発は、治療上の主たる進歩を示す。
【０２１８】
本発明者らは、本発明の化合物が、癌、そして特に乳癌の処置のための手段を提供すると考える。
【０２１９】
さらに、または代替的に、本発明の化合物は、癌（白血病を含む）および固形腫瘍（例えば、乳房、子宮内膜、前立腺、卵巣および膵臓の腫瘍）の増殖のブロックにおいて有用であり得る。
【０２２０】
（他の治療）
本発明の化合物／組成物が他の重要な医学的意味を有し得ることがまた理解される。
【０２２１】
例えば、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９９／５２８９０に列挙される障害の処置において有用であり得る（すなわち）：
さらに（あるいは）本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０５６３５に列挙される障害の処置において有用であり得る。参照を容易にするために、そのリストの一部をここに挙げる：癌、炎症または炎症性疾患、皮膚科障害、熱、心血管効果、出血、凝固および急性期反応、悪液質、拒食症、急性感染、ＨＩＶ感染、ショック状態、宿主対移植片反応、自己免疫疾患、再還流傷害、髄膜炎、片頭痛、およびアスピリン依存性抗血栓症；腫瘍増殖、侵入および伝播、新脈管形成、転移、悪性、腹水および悪性胸水；脳虚血、虚血性心疾患、変形性関節症、慢性関節リウマチ、骨粗しょう症、喘息、多発性硬化症、神経変性、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、発作、血管炎、クローン病および潰瘍性大腸炎；歯周炎、歯肉炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、慢性潰瘍、表皮水疱症；角膜潰瘍、網膜症および外科創傷治癒；鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アナフィラキシー；再狭窄、うっ血性心不全、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化症または内膜硬化症。
【０２２２】
さらに（あるいは）、本発明の化合物または組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０７８５９に列挙される障害の処置に有用であり得る。参照を容易にするために、そのリストの一部をここに挙げる：サイトカインおよび細胞増殖／分化活性；免疫抑制または免疫刺激活性（例えば、免疫欠損（ヒト免疫不全ウイルスでの感染を含む）；リンパ球増殖の調節を処置するため；癌および多くの自己免疫疾患を処置するため、および移植拒絶または腫瘍免疫誘導を防ぐため）；造血の調節、例えば、骨髄またはリンパ球疾患の処置；骨、軟骨、腱、靭帯および神経組織の成長を促進する（例えば、創傷治癒のため）やけど、潰瘍および歯周疾患ならびに神経変性の処置；卵胞刺激ホルモンの阻害または活性化合物（受精の調節）；走化性活性／ケモキネシス活性（例えば、傷害または感染の部位に特異的な細胞型を動員するため）；止血剤および血栓溶解剤活性（例えば、血友病および発作を処置するため）；抗炎症性活性（例えば、敗血性ショックまたはクローン病を処置するため）；抗菌薬として；例えば、代謝または挙動の調節因子；鎮痛薬として；特定の欠損性傷害を処置する；例えば乾癬の処置において（ヒトまたは獣医の医薬において）。
【０２２３】
さらに（あるいは）、本発明の組成物は、ＷＯ−Ａ−９８／０９９８５に列挙される障害の処置において有用であり得る。参照を容易にするために、その列挙の一部をここに挙げる：マクロファージ阻害性活性および／またはＴ細胞阻害性活性、それによる抗炎症性活性；抗免疫活性；すなわち、細胞免疫および／または体液性免疫応答に対する阻害性効果（炎症に関連しない応答を含む）；細胞外マトリックス成分およびフィブロネクチンを固定するマクロファージおよびＴ細胞の能力、ならびにＴ細胞におけるアップレギュレートされたｆａｓレセプター発現を阻害する；以下を阻害する：望ましくない免疫反応および炎症（慢性関節炎を含む関節炎、過敏症に関連する炎症、アレルギー性反応、喘息、全身エリテマトーデス、コラーゲン疾患および他の自己免疫病を含む）、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化性心疾患、再還流傷害、心停止、心筋梗塞、血管炎症性障害、呼吸抑制症候群または他の心肺疾患、消化性潰瘍に関連する炎症、潰瘍性大腸炎および他の胃腸管の疾患、肝線維症、肝硬変または他の肝疾患、甲状腺炎または他の分泌腺疾患、糸球体腎炎または他の腎疾患および泌尿器疾患、耳炎または他の耳鼻咽喉科疾患、皮膚炎または他の皮膚疾患、歯周病または他の歯の疾患、精巣炎または精巣上体炎、不妊症、精巣外傷もしくは他の免疫関連精巣疾患、胎盤機能不全、胎盤不全、習慣流産、子癇、子癇前症および他の免疫および／もしくは炎症関連婦人科疾患、後部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、前部ブドウ膜炎、結膜炎、脈絡網膜炎、ブドウ膜網膜炎、視神経炎、眼内性炎症、例えば、網膜炎もしくは類嚢胞黄斑水腫、交感性眼炎、強膜炎、色素性網膜炎、変性眼底疾患の免疫性および炎症性要素、眼性外傷の炎症性要素、感染により引き起こされる眼性炎症、増殖性硝子体網膜症、急性虚血視神経障害、過度の瘢痕形成、例えば、緑内障濾過手術後の、眼内インプラントに対する免疫および／もしくは炎症反応、ならびに他の免疫および炎症関連眼疾患、自己免疫疾患または状態または障害に関連した炎症（ここで、中枢神経系（ＣＮＳ）または任意の他の器官において、免疫および／もしくは炎症の抑制が有益である）、パーキンソン病、パーキンソン病の処置からの合併症および／もしくは副作用、ＡＩＤＳ関連痴呆複合ＨＩＶ関連脳障害、ドヴィック病、シドナム舞踏病、アルツハイマー病およびＣＮＳの他の変性疾患、状態、もしくは障害、発作の炎症性要素、ポリオ後症候群（ｐｏｓｔ−ｐｏｌｉｏ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、精神医学的な障害の免疫性および炎症性要素、脊髄炎、脳炎、亜急性硬化性汎脳炎、脳脊髄炎、急性神経障害、亜急性神経障害、慢性神経障害、ギヤン−バレー症候群、シドナム舞踏病、重症筋無力症、偽脳腫瘍、ダウン症候群、ハンチントン病、筋萎縮外側索硬化、ＣＮＳ圧迫もしくはＣＮＳ外傷もしくはＣＮＳの感染の炎症性要素、筋萎縮およびジストロフィーの炎症性要素、ならびに中枢神経系および末梢神経系の免疫および炎症関連疾患、状態もしくは障害、外傷後炎症、敗血症性ショック、感染性疾患、手術の炎症性合併症もしくは副作用、骨髄移植もしくは他の移植合併症および／もしくは副作用、遺伝子治療の炎症性および／もし���は免疫合併症ならびに副作用（例えば、ウイルス担体による感染に起因する）またはＡＩＤＳに関連した炎症、体液性および／もしくは細胞性免疫応答の抑制または阻害、単球もしくはリンパ球の量を減少することによる単球もしくは白血球増殖性疾患（例えば、白血病）の処置または緩和、天然または人工の細胞、組織、および器官（例えば、角膜、骨髄、器官、レンズ、ペースメーカー、天然もしくは人工の皮膚組織）の移植の場合の移植片拒絶の予防および／もしくは処置のため。
【０２２４】
先に述べたように、１つの局面において、本発明は、１１β−ＨＳＤに関連する状態または疾患の治療における使用のための医薬の製造における、本明細書中に記載されるような化合物の使用を提供する。
【０２２５】
１１β−ＨＳＤに関連する状態および疾患は、Ｗａｌｋｅｒ，Ｅ．Ａ，；Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｐ．Ｍ．；Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００３，１４（７），３３４−３３９に総説されている。
【０２２６】
好ましい局面において、状態または疾患は、以下からなるリストから選択される：
・代謝障害（例えば、糖尿病および肥満）
・心脈管障害（例えば、高血圧）
・緑内障
・炎症性障害（例えば、関節炎または喘息）
・免疫障害
・骨障害（例えば、骨粗しょう症）
・癌
・子宮内増殖遅延
・顕性鉱質コルチコイド過剰症候群（ＡＭＥ）
・多嚢胞性卵巣症候群（ＰＣＯＳ）
・多毛
・座瘡
・希発月経もしくは無月経
・副腎皮質腺腫および癌腫
・クッシング症候群
・下垂体腫瘍
・侵襲性癌腫
・乳癌；および
・子宮内膜癌。
【０２２７】
（要旨）
要するに、本発明は、ステロイドデヒドロゲナーゼインヒビターとして用いるための化合物および同じ用途のための薬学的組成物を提供する。
【実施例】
【０２２８】
本発明はここで、単に一例として記載される。
【０２２９】
（材料および方法）
（材料）
（酵素）
ラット肝臓およびラット腎臓を、正常なＷｉｓｔａｒラット（Ｈａｒｌａｎ  Ｏｌａｃ，Ｂｉｃｅｓｔｅｒ，Ｏｘｏｎ，ＵＫ）から得た。腎臓および肝臓の両方を、氷上で、ＰＢＳ−スクロース緩衝液（１ｇ／１０ｍｌ）中で、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いてホモジナイズした。肝臓および腎臓をホモジナイズした後、ホモジネートを４０００ｒｐｍにて５分間遠心分離した。得られた上清を除去し、−２０℃にてガラスバイアル中で保存した。ラット肝臓および腎臓のコルチゾール１μｌあたりのタンパク質量を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法を用いて決定した［１４］。
【０２３０】
（装置）
インキュベーター：機械式振盪水浴，ＳＷ  ２０，Ｇｅｒｍａｎｙ．
エバポレーター、Ｔｅｃｈｎｅ  Ｄｒｉｂｌｏｃｋ  ＤＢ  ３Ａ，ＵＫ
ＴＬＣアルミニウムシート２０×２０ｃｍシリカゲル６０  Ｆ２５４，Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ．
シンチレーションバイアル：キャップ付きの２０ｍｌポリプロピレンバイアル，ＳＡＲＳＴＥＤＴ，Ｇｅｒｍａｎｙ．
シンチレーションカウンター：Ｂｅｃｋｍａｎ  ＬＳ  ６０００  ＳＣ，Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，ＵＳＡ。
【０２３１】
（溶液）
アッセイ培地：０．２５Ｍスクロースを含むＰＢＳ−スクロース緩衝液，Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝化生理食塩水，１タブレット／１００ｍｌ，ｐＨ  ７．４  ＢＤＨ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｓｕｐｐｌｉｅｓ，ＵＫ．
シンチレーション流体：Ｅｃｏｓｃｉｎｔ  Ａ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，ＵＳＡ）．
放射活性化合物溶液：［１，２，６，７−３Ｈ］−コルチゾール（Ｓｐ．Ａｃ．８４Ｃｉ／ｍｍｏｌ）ＮＥＮ  Ｇｅｒｍａｎｙ、［４−１４Ｃ］−コルチゾール（Ｓｐ．Ａｃ．５３ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）ＮＥＮ  Ｇｅｒｍａｎｙ．
ＣｒＯ３および酢酸（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＵＫ）．
抽出流体：ジエチルエーテル，Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，ＵＫ．
Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬溶液：１リットルに希釈された、９５％エタノール中のＣｏｏｍａｓｓｉｅ  Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ  Ｇ−２５０，１００ｍｇ、１００ｍｌのリン酸（８５％  ｗ／ｖ）を含む。
【０２３２】
（化合物）
インヒビター：化合物を、以下の合成経路にしたがって合成した
補因子：ＮＡＤＰＨおよびＮＡＤＰ，Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＵＫ。
【０２３３】
（方法）
（放射標識したコルチゾンの合成）
対応する標識したコルチゾン（３Ｈ−Ｅおよび１４Ｃ−Ｅ）を合成するために、標識したコルチゾール（Ｆ）（３Ｈ−Ｆおよび１４Ｃ−Ｆ）を、ＣｒＯ３でＣ−１１位を酸化した。
【０２３４】
この反応のために、Ｆを、５０％酢酸／蒸留水（ｖ／ｖ）溶液中に溶解した０．２５％  ＣｒＯ３（ｗ／ｖ）中で酸化した。標識したＦを、１ｍｌのＣｒＯ３溶液に添加し、激しく混合して、インキュベーター中に、３７℃にて２０分間置いた。水性反応混合物を、４ｍｌのジエチルエーテルで抽出し、次いで、ジエチルエーテルを蒸発させて、残留物をＴＬＣプレートに移し、これを、以下の系で展開した：クロロホルム：メタノール  ９：１（ｖ／ｖ）。標識していないコルチゾン（Ｅ）をまた、ＴＬＣプレート上で展開させて、標識されたステロイドの位置を位置付けた。標識されたステロイドのスポットを位置付けた後、この領域をＴＬＣプレートから切り出し、０．５ｍｌのメタノールで抽出した。
【０２３５】
（ラット肝臓およびラット腎臓のμｌあたりのタンパク質量）
ラット肝臓およびラット腎臓におけるタンパク質量を決定する必要があった。実験をＢｒａｄｆｏｒｄ法に従って行なった［１４］。以下の方法を用いた：第１に、ＢＳＡ（タンパク質）溶液を調製した（１ｍｇ／ｍｌ）。１０〜１００のｇａｇタンパク質を含むタンパク質溶液を、チューブ内にピペッティングし、蒸留水を用いて容量を調節した。次いで、５ｍｌのタンパク質試薬をチューブに添加し、激しく混合した。吸光度を、試薬ブランクに対して、３ｍｌのキュベットにて、５９５ｎｍにて１５分後および１時間前に測定した。タンパク質の重量を、対応する吸光度に対してプロットし、ラット肝臓およびラット腎臓の細胞質におけるタンパク質濃度を決定するために使用される標準曲線を得た。
【０２３６】
（アッセイの評価−  １１β−ＨＳＤ活性の酵素濃度および時間依存性）
ＥからＦおよびＦからＥへの変換、ならびに、これらの変換に対して異なるインヒビターが有する影響を調べるための１１β−ＨＳＤアッセイを実施する前に、ラット肝臓ホモジネートおよびラット腎臓ホモジネートの量ならびに、インキュベーション時間を決定する必要がある。
【０２３７】
１１β−ＨＳＤ１型は、ＥからＦへの変換を担う酵素であり、この型の酵素は、ラット肝臓中に存在する。このアッセイにおいて用いられる基質溶液は、ＰＢＳ−スクロース中７０，０００ｃｐｍ／ｍｌの３Ｈ−Ｅおよび０．５μＭの未標識Ｅおよび補因子ＮＡＤＰＨ（９ｍｇ／１０ｍｌの基質溶液）を含んだ。１ｍｌの基質溶液および異なる量のラット肝臓ホモジネートを、全てのチューブに添加した。
【０２３８】
アッセイに必要とされるラット肝臓ホモジネートの量を、基質溶液を、２５、５０、１００および１５０μｌと共に、３０、６０、９０および１２０分間、水浴中３７℃にて、チューブを機械的に振盪させながらインキュベートすることによって決定した。インキュベーション後、ＴＬＣプレート上でのスポットの可視化のために、８，０００ｃｐｍ／５０μＬの１４Ｃ−Ｆおよび５０μｇ／５０μＬの未標識Ｆを含む５０μＬの回収溶液を添加し、次の２工程において生じるロスを補正した。次いで、Ｆを、４ｍｌのエーテル（２×３０秒サイクル、激しく混合）を用いて水相から抽出した。次いで、水相を、ドライアイスを用いて凍結し、有機層をデカントし、小さなチューブに注ぎ、蒸発させた。次いで、６滴のエーテルを小さなチューブに添加して、残留物を再溶解させ、これを、アルミニウムの薄層クロマトグラフィープレート（ＴＬＣプレート）に移した。ＴＬＣプレートを、標準的な条件下で、ＴＬＣタンク内で展開させた。用いた溶媒系は、クロロホルム：メタノール  ９：１（ｖ／ｖ）であった。ＴＬＣプレート上のＦのスポットを、ＵＶ光下で可視化して、ＴＬＣプレートから切り出した（Ｒｆ＝０．４５）。ＴＬＣプレートからのスポットを次いで、シンチレーションバイアル中に注ぎ、０．５ｍｌのメタノールを全てのバイアルに添加して、ＴＬＣプレートからの放射活性を５分間にわたって溶離した。１０ｍｌのＥｃｏｓｃｉｎｔをシンチレーションバイアルに添加し、これらを、シンチレーションカウンター内に注いで、形成された生成物の量をカウントした。
【０２３９】
１１β−ＨＳＤ２型アッセイ（ＦからＥへの変換）に対しても同じ手順を用いて、使用すべきラット腎臓の量およびインキュベーション時間を決定した。この時間を除いて、基質溶液は、３Ｈ−Ｆおよび未標識のＦを含み、回収物は、１４Ｃ−Ｅおよび未標識のＥを含み、そして、コルチゾンは、ＴＬＣプレート上で０．６５のＲｆ値を有する。
【０２４０】
（アッセイ手順−１１β−ＨＳＤインヒビター）
これらのアッセイにおいて、還元型（１型）および酸化型（２型）の方向の両方で異なるインヒビターの１１β−ＨＳＤ活性に対する影響を評価した。還元型方向において、Ｅは、基質であり、Ｆは生成物であり、参加型の場合には、逆である。ここで記載される方法は、酸化型の方向についてのものである。
【０２４１】
基質溶液は、ＰＢＳ−スクロース中の５０，０００ｃｐｍ／ｍｌの３Ｈ−Ｆおよび０．５μＭのＦを含んだ。１ｍｌの基質溶液を各チューブに添加し、インヒビターをまた、「コントロール」および「ブランク」のチューブを除いて、１０μＭの濃度にて、各チューブに添加した。１５０μＬを、ブランクを除く全てのチューブに添加し、これが、同時に形成された３Ｈ−Ｆの量について補正を行なった。チューブを機械的に振盪する水浴中、３７℃にて６０分間インキュベートした。腎臓、肝臓のホモジネートの量および用いた印キュベーション時間を、酵素依存性アッセイおよび時間依存性アッセイから得たものであった。インキュベーションの後、５００ｃｐｍ／５０μＬの１４Ｃ−Ｅおよび５０μｇ／５０μＬの未標識Ｅを含有する５０ｐｓｉの回収物を添加して、次の工程において生じるロスを補正した（ＴＬＣプレート上のスポットを可視化するため）。次いで、水性混合物を、４ｍｌのエーテル（２×３０秒サイクル、激しい混合）で抽出した。水相を凍結した後、エーテル（上側）層を、小さなチューブにデカントし、４５℃にて、完全に乾燥するまで蒸発させた。次いで、残留物を、６滴のエーテルに再溶解させ、ＴＬＣプレートに移した。ＴＬＣプレートをクロロホルム：メタノール（９：１  ｖ／ｖ）溶媒系で展開させ、溶媒の先端が約１８ｃｍ移動するまで、約９０分間ＴＬＣプレートを展開させた。生成物Ｅの位置を、ＵＶ光下で可視化し、ＴＬＣプレートから切り出し、シンチレーションバイアルに入れた。放射活性を０．５ｍｌメタノールを用いて５分間にわたって溶離した。０．５ｍｌのＰＢＳ−スクロースおよび１０ｍｌのＥｃｏｓｃｉｎｔを次いで添加し、激しく混合し、その後、シンチレーションカウンター内でカウントした。サンプルをカウントする前に、２つの全活性バイアルを調製した。これらは、０．５ｍｌの基質溶液、５０μＬの回収物、０．５ｍｌのメタノールおよび１０ｍｌのＥｃｓｃｉｎｔを含んだ。これらの２つの全活性バイアルが、最初に添加された１４Ｃ−Ｅおよび３Ｈ−Ｆの量を決定して、計算を行なうために必要とされた。
【０２４２】
還元型の方向（ＥからＦ）の場合、同じ方法を用いた。３Ｈ−Ｅおよび未標識のＥを含む基質溶液および１４Ｃ−Ｆおよび未標識のＦを含む回収物のみが、酸化型方向において用いた方法と異なる。
【０２４３】
全てのインヒビターを１０μＭにて試験した後、最も強力な１１β−ＨＳＤ１型および２型のインヒビターについて、容量依存性の実験を行なった。阻害％を見るために、４つの異なる濃度、１、５、１０および２０μＭを用いた。ラット肝臓、１型（還元型）およびラット腎臓、２型（酸化型）の両方についての方法は、全実験にわたって同じままである。
【０２４４】
（結果）
（ラット肝臓およびラット腎臓のμＬあたりのタンパク質量）
最初の実験を行い、各チューブに添加されるべきラット肝臓細胞質およびラット腎臓細胞質におけるタンパク質量を決定した。図１のグラフ１は、標準曲線を示し、これを下に両方の実験において用いられたタンパク質の量を算出した。ラット肝臓実験において、各チューブに添加されたタンパク質の量は、７５μｇ（２５μｌあたり）であった。ラット腎臓実験において、各チューブに添加されたタンパク質は、１３５．６μｇ（１５０μＬあたり）であった。
【０２４５】
（１１β−ＨＳＤ活性の酵素濃度および時間依存性）
この実験において、各チューブに添加したラット肝臓ホモジネートおよびラット腎臓ホモジネートの量と、インキュベーション時間を決定した。図２のグラフ２は、ラット肝臓実験（ＥからＦ、１１β−ＨＳＤ１型活性）の酵素濃度および時間依存的な経過を示す。図３のグラフ３は、ＦからＥ（１１β−ＨＳＤ２型活性）の酵素濃度および時間依存的な経過を示す。グラフを描写した後、ラット肝臓細胞質およびラット腎臓細胞質の最適な量、ならびに、その両方のインキュベーション時間を選択した。両方のバラエティーを選択する際の１つの重要なルールは、グラフの直線部分上でラット肝臓およびラット腎臓の量、ならびに、インキュベーション時間を選択することである。これは、酵素活性における変動を避けるためになされる。選択されたラット肝臓細胞質の量は、２５μＬであり、９０分のインキュベーション時間であり、そして、選択されたラット腎臓細胞質の量は１５０μＬであり、６０分のインキュベーション時間であった。
【０２４６】
（１１β−ＨＳＤインヒビター）
この実験において、ＥからＦ、ＦからＥへの変換に対する、異なるインヒビターの影響を決定した。両方向における阻害が試験された理由は、インヒビターおよび、どちらの型の１１β−ＨＳＤがより阻害するかを比較するためであった。化合物を、１１β−ＨＳＤ１型（ＥからＦ）および２型（ＦからＥ）を阻害する能力についてスクリーニングした。全てのインヒビターを最初に、１０μＭ濃度にて試験した。阻害％を、コントロール活性（インヒビターなしのチューブ）と比較した場合の、形成された生成物の標識された３Ｈ−Ｆおよび２Ｈ−Ｆの比における減少％として算出した。算出した全ての結果は、平均である（ｎ＝２）。
【０２４７】
（表２：阻害効果）
【０２４８】
【化４６−１】
2006514614.tif 000034
【０２４９】
【化４６−２】
2006514614.tif 000035
【０２５０】
【化４６−３】
2006514614.tif 000036
【０２５１】
【化４６−４】
2006514614.tif 000037
【０２５２】
【化４６−５】
2006514614.tif 000038
【０２５３】
【化４６−６】
2006514614.tif 000039
（ヒト１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型を用いる生物学的アッセイの開発）
（１１−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型コルチゾールラジオイムノアッセイのための標準的な操作手順）
（１１β−ＨＳＤ１コルチゾールＲＩＡ）
試薬：コルチゾン、コルチゾール（ヒドロコルチゾン）、ＮＡＤＰＨ、グルコース−６−リン酸、グリシレチン酸（ＧＡ）、デキストランでコーティングした炭（Ｃ６１９７）およびＤＭＳＯをＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈから入手し、カルベノキソロンをＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓから入手し、製品２１５４９３００１，３Ｈ−コルチゾンをＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｌｅｄ  Ｃｏｍｐｏｎｄｓ  Ｉｎｃから入手し、製品ＡＲＴ−７４３，３Ｈ−コルチゾールをＮＥＮから入手し、製品ＮＥＴ  ３９６，１４Ｃ−コルチゾールをＮＥＮから入手し、製品ＮＥＣ  １６３，ヒト肝臓ミクロソームをＸｅｎｏＴｅｃｈから入手し、製品Ｈ０６１０／ロット０２１００７８，ラット肝臓ミクロソームをＸｅｎｏＴｅｃｈから入手し、ＳＰＡビーズをＡｍｅｒｓｈａｍから入手し、製品ＲＰＮＱ００１７，イムノアッセイキットをＡｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓから入手し、製品９００−０７１，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｓ  Ｄｉｒｅｃｔ抗コルチゾール抗体は製品ＯＢＴ  ０６４６であり、Ｓｉｇｍａ抗コルチゾール抗体はＰｒｏｄｕｃｔ  Ｃ８４０９であり、そして、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体を、Ｂｅｃｋｍａｎ，製品ＩＭＢＵＬＫ３  ６Ｄ６から入手した。
【０２５４】
（緩衝溶液）
Ｂａｒｆ製の緩衝液１［１５］：１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ，ｐＨ  ７．２
Ｓｔｅｒｉｘプロトコール製の緩衝液２：０．２５Ｍスクロースを含有するＰＢＳ（ｐＨ  ７．４）
Ｓｉｇｍａ  ＲＩＡプロトコール製の緩衝液３：０．１Ｍ  ＮａＣｌおよび０．１％ゼラチンを含有する５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ８
Ｂａｒｆ製の停止溶液［１５］：１００％  ＤＭＳＯ中の１ｍＭ  グリシレチン酸。
【０２５５】
酵素アッセイを、各実験について指定された１０μＭ  ＮＡＤＰＨ、１ｍＭ  グルコース−６−リン酸およびコルチゾン濃度の存在下で行なった：
酵素アッセイ緩衝液：
１ｍＭ  ＥＤＴＡを含有する３０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ７．２
抗体結合緩衝液：
０．１Ｍ  ＮａＣｌおよび０．１％ゼラチンを含有する５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ  ８。
【０２５６】
化合物の調製：
１００％  ＤＭＳＯ中１０ｍＭのストック溶液を、必要とされるアッセイ濃度の１００倍で調製する。アッセイ緩衝液中に２５分の１に希釈する。また、コントロールとして、ニートなＤＭＳＯをアッセイ緩衝液に２５分の１で希釈する。
【０２５７】
基質の調製：
必要とされるアッセイ濃度（１７５μＭ）の６００倍でエタノール中のコルチゾン溶液を調製する。アッセイ緩衝液中に５０分の１で希釈する。
ＮＡＤＰＨを、アッセイ緩衝液中１．８ｍｇ／ｍｌの溶液として調製する。
Ｇ−６−Ｐを、アッセイ緩衝液中３．６５ｍｇ／ｍｌの溶液として調製する。
これらの３つの溶液を１：１：１で混合して、各サンプルへの２５μｌの添加に十分な量の溶液を作製する。２５μｌあたり０．５ｍＣｉに滴定したコルチゾンを添加し、溶液を十分に混合する。
【０２５８】
ミクロソームの調製：
ストックの２０ｍｇ／ｍｌの溶液を、アッセイ緩衝液で１００分の１に希釈する。
【０２５９】
抗体の調製：
ストック抗体溶液を、抗体結合緩衝液中１７μｇ／ｍｌに希釈する。
デキストランコーティングしたチャコールの調製：抗体結合緩衝液中２０ｍｇ／ｍｌの溶液を作製し、氷上で冷やす。
【０２６０】
酵素アッセイ：
ｕ底ポリプロピレン９６ウェルプレートに以下を添加する：
２５μｌ化合物希釈、またはコントロール、ＮＳＢおよびブランクには希釈したＤＭＳＯ
ブランクには、ＤＭＳＯ中の１０μｌの１ｍＭ  ＧＡ（酵素停止溶液）
全てのサンプルに２５μｌ基質混合物
全てのサンプルに５０μｌの希釈したミクロソーム
プレートを振盪しながら３７℃にて３０分インキュベートする
ブランクを除く全てのウェルに１０μｌの酵素停止溶液を添加する
ＮＳＢを除く全てのウェルに１００μｌの抗体溶液を添加し、これらのウェルに抗体結合緩衝液を添加する
３７℃にて１時間インキュベートする
氷上でプレートを１５分間冷やす
５０μｌ／ウェルの炭溶液を添加し、８チャネルピペットで混合する（４〜５回吸引する）
氷上でプレートを冷やす
４℃、２０００×ｇで１５分間遠心分離する
１００μｌの上清をＯｐｔｉｐｌａｔｅに移し、また、２５μｌの基質混合物を２つの空のウェルに添加して、計数効率をインキュベートする
２００μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ−４０を全てのウェルに添加し、Ｔｏｐｃｏｕｎｔ上でカウントする。
【０２６１】
（ラジオイムノアッセイ）
１１β−ＨＳＤ１酵素アッセイを、各実験について所定のｕ底ポリプロピレン９６ウェルプレートまたは１．５ｍｌ  Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブ中にて、上記の標準的な操作手順に従って行なった。酵素反応を停止した後、他に示されない限り、緩衝液３中で調製した１００μｌの抗体を、試験サンプルに添加し、１００μｌの緩衝液をＮＳＢサンプルに添加した。サンプルを３７℃にて１時間インキュベートし、氷上で１５分間冷やした。緩衝液３中で所定の濃度に調製したデキストランでこーティングした炭（５０μｌ／サンプル）を加え、サンプルを混合し（チューブについてはボルテックスし、９６ウェルプレートについては８チャネルピペットで５回吸引した）、さらに１０分間冷ました。サンプルを４℃にて２０００×ｇで１５分間遠心分離し、炭を沈殿させた。上清のアリコート（１００ミューｌ）をＯｐｔｉｐｌａｔｅに移し、１５０〜２００μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ４０中でＴｏｐｃｏｕｎｔ上でカウントした。いくつかの実験において、上清のアリコートをシンチレーションバイアルに移し、５ｍｌ  Ｕｌｔｉｍａ  Ｇｏｌｄ新地欄と中、Ｔｉｃａｒｂ  ＬＳＣ上でカウントした。
【０２６２】
（１１β−ＨＳＤ１アッセイの開発）
（１１β−ＨＳＤ１  ＴＬＣ様式のアッセイ）
（コルチゾンおよびコルチゾールの分離）
酵素アッセイを実施する前に、コルチゾールからのコルチゾンの分離についての文献に報告された溶媒系を調べた［１６，１７］。コルチゾンおよびコルチゾールの１０ｍｇ／ｍｌの溶液をメタノール中に調製し、アリコートをシリカゲルＴＬＣプレート上にスポットした。プレートをＣＨ２Ｃｌ２：ＩＭＳ  ９２：８ｖ／ｖ（２）で実行した。次いで、プレートを風乾させ、メタノール中０．１％  ローダミンをスプレーして、スポットを可視化した。以下の表は、得られた分離を記載する。
【０２６３】
（表３：ＴＬＣによるコルチゾールからのコルチゾンの分離）
【０２６４】
【化４７】
2006514614.tif 000040
この分離が、酵素アッセイにおいて使用するために適切であると考えた。
【０２６５】
文献は、いくつかの水溶液からのコルチゾールの抽出法を詳述する［１６，１７］。使用方法を選択するために、［４Ｃ］−標識したコルチゾールをＮＥＮから入手した。ストックを、５０μｌ中の４０００  ＤＰＭを含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中で、冷やしたコルチゾール（１μｇ）をキャリアとして添加して調製した。最終エタノール濃度は０．４％であった。この溶液のアリコートをガラス管（１００μｌ）に添加し、以下の抽出を行なった：１．  １ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２、ボルテックスし、相分離濾紙（Ｗｈａｔｍａｎ，ＩＰＳ）を通過させる、２．１ｍｌの酢酸エチル、ボルテックスし、相分離濾紙を通す、３．  １ｍｌのＣＨ２Ｃｌ２および２００μｌの０．０５％  ＣａＣｌ２、ボルテックスし、遠心分離（５００ｇで５分間）し、そして、上側の水相を除去する、４．  １ｍｌの酢酸エチルおよび２００μｌの０．０５％  ＣａＣｌ２、ボルテックスし、遠心分離（５００ｇで５分間）し、そして、上側の有機層を回収する。有機相を乾燥させ、残留物を１００μｌのＩＭＳ中に取った。このアリコートをＴＬＣプレート上にスポットし、前としてプレートを展開させた。ローダミンＢで可視化した後、スポットをシンチレーションバイアルにスクレープし、５ｍｌのＵｌｔｔｉｍａゴールドシンチラント中、液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｒｉＣａｒｂ）でカウントした。抽出効率を算出し、図４に示す。
【０２６６】
これらの結果から、９０％のコルチゾールが相分離濾過によって失われたことが明らかである。酢酸エチルは、コルチゾールをＣＨ２Ｃｌ２よりも効率的に抽出するようであり、これはおそらく、有機相が回収しやすいためである。酢酸エチルは、適切な抽出方法であるようである。
【０２６７】
（ヒトおよびラットの肝臓ミクロソームの１１β−ＨＳＤ１活性）
ラットおよびヒト肝臓ミクロソームにおける１１β−ＨＳＤ１活性を評価して、酵素活性の測定に必要とされる最小限のミクロソームタンパク質濃度を決定した。実験を、Ｂｒａｄｆｏｒｄ法に従って行った［１４］。これらのアッセイを、緩衝液２中で実施し、用いたコルチゾンの濃度は、インキュベーションあたり、０．５μＣｉの［３Ｈ］−コルチゾンを含有する２μＭであった。ミクロソームを、インキュベーションあたり、１００μｌの最終インキュベーション容量にて、ガラス管内で５０μｇ〜４００ｇの範囲の濃度にて試験した。サンプルを１時間３７℃の振盪水浴中にてインキュベートし、１ｍｌの酢酸エチルを添加してアッセイを停止した。回収物を回収するために、５０μｌの［１４Ｃ］−コルチゾールをサンプルに添加し、その後、２００μｌの０．０５％  ＣａＣｌ２を添加した。サンプルを激しく混合し、上記のように遠心分離した。上側の有機相を除去し、乾燥させ、残留物を１００μｌのメタノールおよび５０μｌのアリコートをＴＬＣプレート上にスポットさせた。これを、上記のように展開させた。サンプルを二重標識プログラムを用いてＴｒｉＣａｒｂ液体シンチレーションカウンター上でカウントした。回収効率を、５０μｌの［１４Ｃ］−コルチゾール溶液中に得たＤＰＭから決定し、これを、サンプルを用いてカウントした。結果を図５に示す。
【０２６８】
ラットおよびヒトのミクロソームにおける１１β−ＨＳＤ１活性は類似しており、ラットおよびヒトのミクロソームについて、それぞれ、０．７μｍｏｌ／ｍｇ／分および０．５μｍｏｌ／ｍｇ／分であった。ヒトミクロソームにおける活性は、ミクロソームタンパク質濃度とは無関係であるようで、このことは、抽出されたタンパク質濃度範囲が高すぎることを示唆し得る。
【０２６９】
より低いヒトミクロソームタンパク質濃度が評価された；サンプルあたり３．７μｇ〜１００μｇ。活性の時間経過をまた、３７℃にて０〜６０分にわたって決定した。抽出条件は、上記の通りであった。これらの実験からの結果を図６および７に示す。
【０２７０】
図６および７に示される結果は、酵素活性が、３０分までは、試験された全てのミクロソームタンパク質濃度においてインキュベーション時間で線形であり、酵素活性が、サンプルあたり３０μｇ未満のミクロソームタンパク質濃度において線形であることを示す。
【０２７１】
活性に対する基質濃度の影響を試験した。［３Ｈ］−コルチゾン濃度を０．５μＣｉ／サンプルに一定に保ち、未標識のコルチゾンを、４４ｎＭから２μＭまで変化させた。アッセイを、３７℃にて、サンプルあたり１０μｇのミクロソームタンパク質、３０分のインキュベーション時間で実施した。結果を図８に示す。これらのデータの二重逆数プロット（Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅ）は、６６０μＭのコルチゾンについての見かけのＫｍを与える、図９。
【０２７２】
標準化合物であるグリシレチン酸およびカルベノキソロンを、評価プロセスの一部としてこのアッセイ系において試験した。アッセイを、Ｂａｒｆ［１５］に記載されたように、１７５ｎＭのコルチゾン基質、１０μｇのミクロソームタンパク質、および３７℃にて３０分のインキュベーションを用いて実施した。上記図８および９のデータは、この基質濃度が、これらのアッセイ条件下で飽和していないことを示唆する。グリシレチン酸およびカルベノキソロンを、０．０１２μＭ〜３μＭの濃度にて試験し、ＤＭＳＯ濃度は全てのサンプルにおいて１％であった。結果を図１０および１１に示す。
【０２７３】
グリシレチン酸およびカルベノキソロンは、それぞれ、４０ｎＭおよび１１９ｎＭのＩＣ５０値を生じる。ＳＰＡ形式および組換え１１β−ＨＳＤを用いてＢａｒｆらによって、カルベノキソロンについて報告されたＩＣ５０は、３３０ｎＭであり［１５］、およそ３倍強力でない。この２つのアッセイ系における能力の差は、おそらく、異なるアッセイ条件（チック終点と比較したＳＰＡ、また、酵素供給源：組換え酵素に対してナイーブな肝臓酵素）によるものである。
【０２７４】
上記のアッセイ条件は、良好な酵素活性を支持するが、これらは、９６ウェル形式にも当てはまるべきである。
【０２７５】
（ハイスループット１１β−ＨＳＤ１アッセイの開発）
シンチレーション近似アッセイ（ＳＰＡ）においてＢａｒｆ［１５］により使用された抗体の供給は、問題であることが分かった。抗体（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ製）のサンプルバッチを、適合性について試験し、第２のオーダーを、大量に置き換えた。ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）形式を用いる頑丈な９６ウェルプレートアッセイを、利用可能なＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体を用いて開発し、これを以下に記載する。
【０２７６】
（イムノアッセイ様式）
Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ酵素イムノアッセイ系を、強力なアッセイ形式として評価した。このアッセイの基礎は、サンプルコルチゾール（１１β−ＨＳＤ１により生じる）と標識したコルチゾール結合との間の抗体結合についての競合である。キット内に提供される抗コルチゾール検出抗体は、マウスモノクローナルであり、コルチゾンと０．１％未満交差反応することが報告されている。このキットは、酵素活性を決定するためではなく、唾液、尿、血清および血漿における、そしてまた、組織培養培地における、コルチゾールレベルの分析のために設計されている。
【０２７７】
Ｂａｒｆ［１５］により記載された１１β−ＨＳＤ１酵素アッセイ条件を用いた；緩衝液１中のヒト肝臓ミクロソーム（２５μｇ〜２００μｇのタンパク質濃度）、４４ｎＭ〜７００ｎＭの濃度のコルチゾン、３７℃にて６０分間のインキュベーション。０．９％のＴｗｅｅｎ  ８０の効果もまた調べた。なぜならば、この試薬は、ステロイド代謝に関与する酵素の活性を向上すると報告されているからである。結果を図１２に示す。
【０２７８】
図１２（Ａ）は、タンパク質の効果を示す。Ｔｗｅｅｎ  ８０の存在下で試験した、７００μＭコルチゾン群からデータを取った。
【０２７９】
図１２（Ｂ）は、コルチゾンの効果を示す。Ｔｗｅｅｎ  ８０の存在下で試験した、２５μｇのミクロソームタンパク質群からデータを取った。
【０２８０】
図１２（Ｃ）は、Ｔｗｅｅｎ  ８０の効果を示す。７００μＭコルチゾンの存在下で試験した、２５μｇのミクロソームタンパク質群からデータを取った。
【０２８１】
このアッセイは、予測されていた通りに、標準曲線（３１３μｇ／ｍｌ〜１０，０００μｇ／ｍｌ）においてコルチゾールを検出したが、酵素アッセイサンプルから得られたシグナルは、ミクロソームタンパク質濃度の増加と共に減少し、このことは、ミクロソームタンパク質がイムノアッセイに影響し得ることを示唆する、図１２（Ａ）。外因性コルチゾンの添加が、酵素アッセイサンプルにおいて検出されたコルチゾールのレベルに影響を有さず、これは、抗体が、コルチゾンと交差反応しないことを示唆する、図１２（Ｂ）。酵素アッセイ緩衝液中に界面活性剤を含めても、影響はほとんどなかった、図１２（Ｃ）。
【０２８２】
１１β−ＨＳＤ１活性を検出するためのイムノアッセイ系を用いることが実行可能であるかを決定するために、このアッセイ条件を変更した；サンプルあたり２４μｇのミクロソームタンパク質および緩衝液２中、２μＭのコルチゾン基質。酵素活性をまた、サンプル内に存在する場合、ステロイド置換試薬（コルチゾール結合タンパク質からコルチゾールを放出するキット成分）の添加後にサンプル中で測定した。アッセイは、標準曲線（３１３μｇ／ｍｌ〜１０，０００μｇ／ｍｌ）内のコルチゾールを検出した。図１３は、異なる群について得られた、４０６ｎｍにおける吸光度を示す。
【０２８３】
コルチゾール標準の最低濃度および最高濃度は、図１３において、３１３μｇ／ｍｌおよび１０，０００μｇ／ｍｌであると示され、ＮＳＢ吸光度は、このアッセイにおいて得られるダイナミックレンジを示す。
【０２８４】
ミクロソームタンパク質と共にインキュベートしたサンプルから取った反応混合物の存在下で得られた吸光度（「酵素」）は、ミクロソームタンパク質を含まない反応混合物の存在下で得られた急高度（「酵素なし」）よりも低く、コルチゾールのレベルの増加を示す。
【０２８５】
キットステロイド置換試薬（「ＤＲ」）の存在下で、これらの２つの反応混合物は、同じパターンを示すが、シグナルは抑制される。
【０２８６】
コルチゾール標準の最高濃度の存在下でのグリシレチン酸（ＧＡ）は、コルチゾール濃度を測定するキットの能力に影響を及ぼさない。
【０２８７】
これらのアッセイについての２．５の信号バックグラウンド比は、かなり低いが、これらのデータは、抗体が、コルチゾール：ＡＰ結合体に結合し得ること、そして、これが、コルチゾールによって置き換えられえることを示す。得られる信号雑音比を改善するための試みにおいて、ミクロソームタンパク質濃度の増加の効果を調べるために、実験を行なった。
【０２８８】
緩衝液２中の２μＭのコルチゾンを用いて、ミクロソームタンパク質を、１００μｇ／インキュベーションから５μｇ／インキュベーションまで試験した。全ての他の条件は、上記のものと同一であった。結果を図１４に示す。
【０２８９】
ミクロソームタンパク質を１０μｇ／インキュベーションから５μｇ／インキュベーションまで減少させることによって、酵素活性の対応する減少を生じる。ミクロソームタンパク質を１０μｇ／インキュベーション以上に増加させることによって、ミクロソームの色に起因し得るシグナルの消失が生じる。従って、このアッセイのダイナミックレンジは、ミクロソームタンパク質濃度を増加させることによっては改善され得ない。
【０２９０】
（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体を用いるＲＩＡの開発）
１１β−ＨＳＤ１アッセイを、１０μｇ／ウェルのヒト肝臓ミクロソームタンパク質を用いて実施した。Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体を６．２５μｇ／ウェル〜２５μｇ／ウェルの濃度にてＲＩＡにおいて用い、結果を図１５に示す。
【０２９１】
Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体は、このアッセイにおいて十分に機能し、試験した全ての濃度において、良好なシグナルバックグラウンド比を得た。１２．５の信号雑音比およびウェルあたり６．１μｇの抗体は、同様であり、これは、抗体濃度を減少する可能性があることを示唆する。
【０２９２】
０．６７μｇ／ウェル〜６．７μｇ／ウェルの濃度における抗体力価を試験した。Ｕｐ−ＨＳＤ１アッセイを、２０μｇ／ウェルのヒトミクロソームタンパク質を用いて実施し、最適なシグナルバックグラウンド比を生じた。各抗体濃度を、「酵素なし」ブランク（ミクロソームから構成される緩衝液）、「ＧＡブランク」（ミクロソームの前に１０μｌの停止溶液を添加した）およびコントロール群に対して試験した。結果を図１６および１７に示す。
【０２９３】
飽和曲線は、上記酵素活性１．６８μｇ／ウェルの検出における差が存在しないことを示す。この抗体濃度での信号バックグラウンド比は良好である（６倍）。結果的に、抗体は、今後のアッセイにおいて１．７μｇ／ウェルで用いられる。
【０２９４】
ＲＩＡ検出を用いて、ヒト肝臓ミクロソームタンパク質濃度との酵素活性の直線性を試験する。Ｕｐ−ＨＳＤ１アッセイを、ミクロソームタンパク質濃度を１μｇ／ウェルから４０μｇ／ウェルに変化させて実施した。Ｕｐ−ＨＳＤ１活性は、２０μｇ／ウェルまではタンパク質と直線性であり（図１８）、従来の酵素アッセイで得られた結果（図７）
を確認した。
【０２９５】
このアッセイにおいて用いるためのヒトミクロソームタンパク質の最適な濃度は、１０μｇ／ウェルであるようである。
【０２９６】
酵素アッセイ緩衝液中にＴｗｅｅｎ  ８０を含める効果もまた調べた。このアッセイを、上記アッセイと平行して、酵素アッセイ緩衝液（緩衝液２）が０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０を含んだこと以外は同じ条件下で行なった。ミクロソームタンパク質を、４つの濃度にて試験した。Ｔｗｅｅｎ  ８０は、ブランクのＣＰＭを増加し、アッセイの信号雑音比を減少することが分かった。１０μｇ／ウェルのミクロソームタンパク質で試験した群からのそれぞれのデータを、図１９に示す。試験した全てのミクロソームタンパク質濃度において類似の結果が得られ、結果として、Ｔｗｅｅｎは、今後の研究において用いない。
【０２９７】
酵素アッセイおよびＲＩＡステージの両方が、同じ緩衝液中で行なわれ、両方の相が、酵素アッセイ緩衝液（緩衝液２）中または緩衝液３（ＲＩＡ緩衝液）中のいずれかで行なわれるように、プロトコールを単純化する。用いたミクロソームタンパク質濃度は、１０μｇ／ウェルであり、コルチゾン濃度は、１７５μＭであった。酵素アッセイおよびＲＩＡの両方を緩衝液３中で実施すると、データがわずかに改善するようである、図２０。
【０２９８】
インキュベーション時間との酵素活性の直線性を調べた。酵素アッセイを、１０μｇ／ウェルのミクロソームタンパク質および１７５ｎＭのコルチゾンで行い、種々の時点で停止した。結果を図２１に示す。
【０２９９】
１０μｇ／ウェルのミクロソームタンパク質および１７５ｎＭの基質を用いると、反応は、３０分までの時点では直線性である。これらの結果は、１７５ｎＭの基質濃度が、低すぎることを示す。従来の１１β−ＨＳＤ１アッセイにおいて観察された見かけのＫｍは、６６０ｎＭであった（図８および９）が、これらのアッセイは、終点での測定値であり、従って、最初の速度が、３０分間のインキュベーション時間で、低基質群において測定されたかどうかは定かではない。しかし、ヒト肝臓ミクロソーム１１β−ＨＳＤ１アッセイにおけるコルチゾンについて公開されているＫｍ値は、μｍｏｌ範囲内である［１８，１９］。１７５ｎＭの基質は、見かけのＫｍより十分に低いが、以下の２つの理由から、濃度を有意に増加する可能性はない：
（ｉ）化合物がコルチゾンと競合しない場合、測定される阻害は、基質が参考文献１において用いられた濃度を上回って増える場合に落ちる
（ｉｉ）基質濃度を増加することが、標識の特異的活性を減少し、アッセイの感度を低下させる。このことは、より高い濃度の［３Ｈ］−コルチゾンを添加することによって克服され得るが、このプロトコールは０．５μＣｉ／ウェルを用い、より高いレベルの放射活性が用いられる場合に、コストの影響が存在する。
【０３００】
基質の飽和を試験した。酵素アッセイを、全く方法の節において記載したように、示されたように１０μｇ／ウェルのミクロソームタンパク質および［冷コルチゾン］を含む緩衝液３中で、実施した。［３Ｈ］−コルチゾンは、全体的に０．５μＣｉ／サンプルであった。反応を、３０分後に、１０μｌの停止溶液を添加することによって停止した。ＲＩＡを、全く方法の節に示した通りに実施した。結果を図２２および２３に示す。
【０３０１】
図２３中い示されるこれらのデータのＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅプロットから決定した見かけのＫｍ（７００ｎＭ）は、チック形式の１１β−ＨＳＤ１アッセイ（図９、見かけのＫｍ  約６６０ｎＭ）において決定したものと非常に類似する。これらのデータは、１０μｇのミクロソームタンパク質では、酵素が、３０分のインキュベーションの時間にわたって、１７５ｎＭのコルチゾンにおいても飽和していないことを示唆する。
【０３０２】
ミクロソームタンパク質濃度またはインキュベーション時間を低下させることによって、反応を線形範囲内にすることは、部分的には問題を克服する。しかし、これらの調節のいずれかは、アッセイの感度を減少させ、インヒビターの見かけの強度を減少させる。結果的に、最初の実験を、１７５ｎＭコルチゾンで実施した。
【０３０３】
（１１β−ＨＳＤ１アッセイの評価）
化合物を試験する前に、酵素アッセイのＤＭＳＯに対する抵抗性を決定した。酵素アッセイ中に１％のＤＭＳＯを含んでも、全てまたはブランクの値に影響はないが、酵素活性および信号雑音比をわずかに上昇する（表４）。この実験は、０．３〜１０％のＤＭＳＯ濃度の範囲にわたって報告された、図２４。
【０３０４】
（表４：グリシレチン酸のＩＣ５０アッセイにおいて得られたコントロールおよびブランクのＣＰＭは、１％  ＤＭＳＯの効果と得られた信号雑音比を示す）
【０３０５】
【化４８】
2006514614.tif 000041
０．３％および１％のＤＭＳＯの存在下でのミクロソーム酵素活性にはわずかな上昇が見られる。１％を上回るＤＭＳＯ濃度において、酵素活性における線形の減少が存在する。ＤＭＳＯは、濃度に依存して、おそらくは、ミクロソーム膜上の効果に起因して、ミクロソーム酵素活性を増加も減少もし得る。これらのデータに基づいて、化合物は、１％  ＤＭＳＯの存在下でスクリーニングすることを意図する。
【０３０６】
ＩＣ５０値を、標準的なインヒビターであるグリシレチン酸について生成し、化合物を、０．０１２μＭと３μＭとの間の濃度にて、１％の最終ＤＭＳＯ濃度にて試験した、図２５。
【０３０７】
グリシレチン酸は、４１ｎＭのＩＣ５０で酵素の濃度関連阻害を生じ、良好なフィット値（Ｒ２＝０．９６２）およびヒルスロープ（Ｈｉｌｌｓｌｏｐｅ）を有する。これは、チック形式アッセイを用いて生じた４０ｎＭの値に類似する（図１０を参照のこと）。３０ｎＭのＩＣ５０値は、基質としてデヒドロ−デキサメタゾンを用いて、ヒト肝臓ミクロソームにおける１１β−ＨＳＤ１のグリシレチン酸阻害について報告されている［１９］。しかし、これらの値は、Ｂａｒｆらにより報告された値よりも低い［１５］。
【０３０８】
（表５：阻害データ）
【０３０９】
【化４９−１】
2006514614.tif 000042
【０３１０】
【化４９−２】
2006514614.tif 000043
【０３１１】
【化４９−３】
2006514614.tif 000044
【０３１２】
【化４９−４】
2006514614.tif 000045
【０３１３】
【化４９−５】
2006514614.tif 000046
【０３１４】
【化４９−６】
2006514614.tif 000047
【０３１５】
【化４９−７】
2006514614.tif 000048
【０３１６】
【化４９−８】
2006514614.tif 000049
【０３１７】
【化４９−９】
2006514614.tif 000050
【０３１８】
【化４９−１０】
2006514614.tif 000051
【０３１９】
【化４９−１１】
2006514614.tif 000052
【０３２０】
【化４９−１２】
2006514614.tif 000053
【０３２１】
【化４９−１３】
2006514614.tif 000054
（スルホンアミド合成）
（方法Ａ）
ピリジン（３当量）中に溶解したアミン（１当量）に、対応するスルホニルクロリド（１．２当量）を添加し、反応混合物を、Ｎ２下、室温にて一晩撹拌した。得られた混合物をＨＣｌ水溶液中に注ぎ、有機層を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧下で濃縮して、結晶固体としてもしくは粘性シロップとして所望のスルホンアミドを得た。粗製化合物を次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）またはＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、結晶固体を得た。
【０３２２】
（方法Ｂ）
Ｅｔ３Ｎ（５当量）中に溶解したアミン（１当量）に、対応するスルホニルクロリド（１．２当量）を添加し、反応混合物を、Ｎ２下、室温にて一晩撹拌した。得られた混合物を水中に注ぎ、有機層を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧下で濃縮して、結晶固体としてもしくは粘性シロップとして所望のスルホンアミドを得た。粗製化合物を次いで、溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）またはＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、結晶固体を得た。
【０３２３】
注釈：不溶性のアミンおよびスルホニルクロリドを、最少量のＣＨ２Ｃｌ２、ＴＨＦまたはＤＭＦ中に溶解した。
【０３２４】
（方法Ｃ）
ＤＣＭ中のアリールスルホニルクロリド（１．１当量）の溶液に、ピリジン（２．２当量）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。この溶液を、窒素下、室温にて１０分間撹拌した。次いで、アミン（１当量）を添加し、反応混合物を窒素下、室温にて４〜１６時間撹拌した。得られた混合物をＤＣＭと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、固体としてもしくは粘性シロップを得た。粗製化合物を次いで、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、結晶固体として所望のアリールスルホンアミドを得た。
【０３２５】
ＤＧＳ０３０２０Ａ（ＳＴＸ４１２）
方法Ａにより合成した。オフホワイトの結晶ＤＧＳ０３０２０Ａ（１８６ｍｇ；５５％）。ｍｐ  １８９〜１９０℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６８  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３２６】
【化５０】
2006514614.tif 000055
ＤＧＳ０３０２２Ａ（ＳＴＸ４１３）
方法Ａにより合成した。オフホワイトの結晶ＤＧＳ０３０２２Ａ（２３３ｍｇ；７２％）。ｍｐ  １７８℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７１  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３２７】
【化５１】
2006514614.tif 000056
ＤＧＳ０３０２４Ａ（ＳＴＸ４２１）
方法Ａにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３０２４Ａ（２４０ｍｇ；７６％）。ｍｐ  １３３〜１３４℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３２８】
【化５２】
2006514614.tif 000057
ＤＧＳ０３０３４Ａ（ＳＴＸ４２４）
方法Ａにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３０３４Ａ（２６２ｍｇ；８６％）。ｍｐ  １５２℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４８  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３２９】
【化５３】
2006514614.tif 000058
ＤＧＳ０３０３６Ａ（ＳＴＸ４２５）
方法Ａにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３０３６Ａ（１３６ｍｇ；４２％）。ｍｐ  ２９５〜２９６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５６  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３０】
【化５４】
2006514614.tif 000059
ＤＧＳ０３０５８Ａ（ＳＴＸ５１９）
方法Ａにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３０５８Ａ（１９９ｍｇ；５７％）。ｍｐ  １７２℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５６  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３１】
【化５５】
2006514614.tif 000060
ＤＧＳ０３０６２Ｂ（ＳＴＸ４６９）
無水ＤＭＦ（５ｍｌ）およびＮａＨ（７ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ，１．１当量）中のＤＧＳ０３０２２Ａ（５０ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ，１当量）の撹拌溶液に、ＭｅＩ（３ｍｌ，０．２１ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加し、混合物を１時間撹拌した。得られた混合物を水中に注ぎ、有機層を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧下で濃縮して、黄色の懸濁液を得た。粗製化合物（７０ｍｇ）を溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、白色結晶ＤＧＳ０３０６２Ａ（３６ｍｇ；６９％）を得た。ｍｐ  ９７〜９８℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６１  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３２】
【化５６】
2006514614.tif 000061
ＤＧＳ０３０７２Ａ（ＳＴＸ４７０）
無水ＤＭＦ（５ｍｌ）およびＮａＨ（１０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ，１．１当量）中のＤＧＳ０３０２２Ａ（５０ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ，１当量）の撹拌溶液に、Ｅｔｌ（２３ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ，１．５当量）を添加し、混合物を１時間撹拌した。得られた混合物を水中に注ぎ、有機層を酢酸エチルで抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、濾過して、減圧下で濃縮して、黄色の懸濁液を得た。粗製化合物（７０ｍｇ）を溶離液としてＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、ＤＧＳ０３０７２Ａ（１６ｍｇ；３０％）の淡黄色の粘性シロップを得た。ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７１  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３３】
【化５７】
2006514614.tif 000062
ＤＧＳ０３０８２Ａ（ＳＴＸ５２１）
方法Ａにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３０８２Ａ（２３０ｍｇ；６７％）。ｍｐ  ８５〜８６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６４  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３４】
【化５８】
2006514614.tif 000063
ＤＧＳ０３０８４Ａ（ＳＴＸ５２２）
方法Ａにより合成した。．黄色結晶ＤＧＳ０３０８４Ａ（４６ｍｇ；１０％）。ｍｐ  ２５３〜２５４℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．  ７４  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３５】
【化５９】
2006514614.tif 000064
ＤＧＳ０３０８６Ａ（ＳＴＸ５２３）
方法Ａにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３０８６Ａ（１０１ｍｇ；５７％）。ｍｐ  ２１９℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７１ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３６】
【化６０】
2006514614.tif 000065
ＤＧＳ０３０６４
２，４−ジクロロ安息香酸（１０ｇ，０．０５２３  ｍｏｌ，１当量）を過剰量のクロロ硫酸（１０．５ｍＬ，０．１５７１ｍｏｌ，３当量）と共に、Ｎ２下で、１８時間、１１５℃まで加熱した。得られた混合物を冷却し、その後、氷−水中にそそ板。得られた白色沈殿物を濾過して除き、十分な量の水で洗浄し、減圧下で一晩乾燥させた。粗製ＤＧＳ０３０６４（１１．５ｇ，７６％）を、さらに精製することなくその後の反応に用いた。ｍｐ  １７３〜１７４℃；ＴＬＣ  Ｒｆ；０．４８（４：１，ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ）；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ  ８．２８（１Ｈ，ｓ，Ａｒ−Ｈ），７．６５（１Ｈ，ｓ，Ａｒ−Ｈ）；ＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２８６．９［１００，（Ｍ＋Ｈ）＋］；ＨＲＭＳ  ｍ／ｚ（ＦＡＢ＋）２８７．８７９８，Ｃ７Ｈ３３５Ｃｌ３Ｏ４Ｓは２８７．８８１８，２９１．８７５５を必要とし，Ｃ７Ｈ３３７Ｃｌ３Ｏ４Ｓは２９１．８７５９を必要とする。
【０３３７】
ＤＧＳ０３０８８Ａ（ＳＴＸ５２４）
方法Ｂにより合成した。２つの化合物を単離した−ＤＧＳ０３０８８ＡおよびＤＧＳ０３０８８Ａ。白色結晶ＤＧＳ０３０８８Ａ（４８ｍｇ；１３％）。ｍｐ  １５３〜１５５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７９  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３８】
【化６１】
2006514614.tif 000066
ＤＧＳ０３０８８−１（ＳＴＸ５７５）
白色結晶ＤＧＳ０３０８８−１（３１ｍｇ；１２％）。ｍｐ  １４７〜１４８℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４５  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３：２）；
【０３３９】
【化６２】
2006514614.tif 000067
ＤＧＳ０３１００Ａ（ＳＴＸ５５２）
方法Ｂにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３１００Ａ（２２４ｍｇ；６９％）。ｍｐ  ２２２〜２２３℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５６  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４０】
【化６３】
2006514614.tif 000068
ＤＧＳ０３１０２Ａ（ＳＴＸ５５３）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１０２Ａ（１７０ｍｇ；５２％）。ｍｐ  ８９〜９０℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４１】
【化６４】
2006514614.tif 000069
ＤＧＳ０３１０４Ａ（ＳＴＸ５５４）
方法Ｂにより合成した。黄色結晶  ＤＧＳ０３１０４Ａ（２３０ｍｇ；６３％）。ｍｐ  ８５〜８６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４２】
【化６５】
2006514614.tif 000070
ＤＧＳ０３１１６Ａ（ＳＴＸ５８０）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１１６Ａ（１５１ｍｇ；４４％）。ｍｐ  １５３℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４３】
【化６６】
2006514614.tif 000071
ＤＧＳ０３１１８Ａ（ＳＴＸ５８１）
方法Ｂにより合成した。白色結晶ＤＧＳ０３１１８Ａ（４１６ｍｇ；４２％）。ｍｐ  ８８〜８９℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４９  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４４】
【化６７】
2006514614.tif 000072
ＤＧＳ０３１２０Ａ（ＳＴＸ５８２）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１２０Ａ（１８５ｍｇ；５５％）。ｍｐ  ９１〜９２℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４５】
【化６８】
2006514614.tif 000073
ＤＧＳ０３１２２Ａ（ＳＴＸ７３１）
方法Ｂにより合成した。２つの化合物を単離した−ＤＧＳ０３１２２ＡおよびＤＧＳ０３１２２Ｂ．黄色結晶ＤＧＳ０３１２２Ａ（６７ｍｇ；２２％）。ｍｐ  ２７２〜２７３℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５９  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４６】
【化６９】
2006514614.tif 000074
ＤＧＳ０３１２２Ｂ（ＳＴＸ５８３）
黄色結晶ＤＧＳ０３１２２Ｂ（４７ｍｇ；１６％）。ｍｐ  ２０４−２０６  Ｃ；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４８  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４７】
【化７０】
2006514614.tif 000075
ＤＧＳ０３１２４Ａ（ＳＴＸ５８４）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１２４Ａ（１２５ｍｇ；５５％）。ｍｐ  １８８〜１８９℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．３７  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４８】
【化７１】
2006514614.tif 000076
ＤＧＳ０３１２６Ａ（ＳＴＸ５８５）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１２６Ａ（１４５ｍｇ；４０％）。ｍｐ  ８４〜８６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．７１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３４９】
【化７２】
2006514614.tif 000077
ＤＧＳ０３１３０Ａ（ＳＴＸ７３０）
方法Ｂにより合成した。２つの化合物を単離した−ＤＧＳ０３１３０ＡおよびＤＧＳ０３１３０Ｂ。方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１３０Ａ（１０５ｍｇ；３３％）。ｍｐ  １２５〜１２６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５０】
【化７３】
2006514614.tif 000078
ＤＧＳ０３１３０Ｂ（ＳＴＸ７０１）
淡黄色結晶ＤＧＳ０３１３０Ａ（４５ｍｇ；１４％）。ｍｐ１６９  Ｃ；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５１】
【化７４】
2006514614.tif 000079
ＤＧＳ０３１３４Ａ（ＳＴＸ７０３）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１３４Ａ（９１ｍｇ；２３％）。ｍｐ  ２０６〜２０７℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．８１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５２】
【化７５】
2006514614.tif 000080
ＤＧＳ０３１３６Ａ（ＳＴＸ７０４）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１３６Ａ（２２５ｍｇ；７１％）。ｍｐ  ５４〜５５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５０  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５３】
【化７６】
2006514614.tif 000081
ＤＧＳ０３１３８Ｂ（ＳＴＸ７０５）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１３８Ｂ（２４ｍｇ；７％）。ｍｐ  ２４８℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）
【０３５４】
【化７７】
2006514614.tif 000082
ＤＧＳ０３１４０Ａ（ＳＴＸ７１１）
方法Ｂにより合成した。褐色結晶ＤＧＳ０３１４０Ａ（８５ｍｇ；２６％）。ｍｐ  ７３〜７５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５９  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）
【０３５５】
【化７８】
2006514614.tif 000083
ＤＧＳ０３１４２Ａ（ＳＴＸ７０６）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１４２Ａ（７９ｍｇ；２４％）。ｍｐ  ８９〜９１℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５６】
【化７９】
2006514614.tif 000084
ＤＧＳ０３１４４Ａ（ＳＴＸ７０７）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１４４Ａ（７９ｍｇ；２４％）。ｍｐ  ８９〜９１℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６９  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５７】
【化８０】
2006514614.tif 000085
ＤＧＳ０３１４６Ａ（ＳＴＸ７０８）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１４６Ａ（１８１ｍｇ；５１％）。ｍｐ  １７５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５７  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５８】
【化８１】
2006514614.tif 000086
ＤＧＳ０３１４８Ａ（ＳＴＸ７０９）
方法Ｂにより合成した。オフホワイトの結晶ＤＧＳ０３１４８Ａ（１０２ｍｇ；３１％）。ｍｐ  ２１４〜２１５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６２  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３５９】
【化８２】
2006514614.tif 000087
ＤＧＳ０３１５０Ａ（ＳＴＸ７１０）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１５０Ａ（１０１ｍｇ；３０％）。ｍｐ  ２００〜２０１℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．５０  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３６０】
【化８３】
2006514614.tif 000088
ＤＧＳ０３１５２Ａ（ＳＴＸ７１２）
方法Ｂにより合成した。淡黄色結晶ＤＧＳ０３１５２Ａ（１２０ｍｇ；３３％）。ｍｐ  １８１〜１８２℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６５  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３６１】
【化８４】
2006514614.tif 000089
ＤＧＳ０３１５８Ａ（ＳＴＸ７１３）
方法Ｂにより合成した。黄色結晶ＤＧＳ０３１５８Ａ（１５８ｍｇ；４０％）。ｍｐ  ３３４〜３３５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ：０．４７  ＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ（４：１）；
【０３６２】
【化８５】
2006514614.tif 000090
（ベンゾチアゾールアリールスルホンアミド誘導体の合成）
【０３６３】
【化８６−１】
2006514614.tif 000091
【０３６４】
【化８６−２】
2006514614.tif 000092
【０３６５】
【化８６−３】
2006514614.tif 000093
【０３６６】
【化８６−４】
2006514614.tif 000094
【０３６７】
【化８６−５】
2006514614.tif 000095
（Ｎ−ベンゾチアゾールベンゼンスルホンアミド誘導体の調製のための一般方法）
ＤＣＭ（５〜１０ｍＬ）中のアリールスルホニルクロリド（１．１当量）の溶液に、ピリジン（２．２当量）および触媒量のＤＭＡＰを添加した。溶液を窒素下、室温にて１０分間撹拌した。次いで、アミン（１当量）を添加し、反応混合物を窒素下、室温にて４〜１６時間撹拌した。得られた混合物をＤＣＭと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮して、黄色の残留物を得た。粗製化合物を次いで、フラッシュクロマトグラフィーで精製して、結晶固体として所望のベンゼンスルホンアミドを得た（収率４０〜９０％）。
【０３６８】
（２−アルキルスルファニル−ベンゾチアゾール−６−イル−アミンの合成）
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の６−アミノ−２−メルカプトベンゾチアゾール（２７３ｍｇ，１．５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＨ（６０％分散液，１．５ｍｍｏｌ）を添加し、その後、アルキルハロゲン化物（１．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて２４時間撹拌し、酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で黄色固体まで濃縮し、これを、再結晶またはフラッシュクロマトグラフィーにより精製し（収率６０〜９０％）。
【０３６９】
以下のアミンを、上記の方法で合成した：
（２−エチルスルファニルベンゾチアゾール−６−イルアミン）
黄色結晶固体。ｍｐ  ７７〜７８℃（文献では７７℃）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７８の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０３７０】
【化８７】
2006514614.tif 000096
（２−（２−メトキシエチルスルファニル）−ベンゾチアゾール−６−イルアミン）
黄色の粘性シロップ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６５の単一スポット（３０％  酢酸エチル／ＤＣＭ）；
【０３７１】
【化８８】
2006514614.tif 000097
（６−アミノベンゾチアゾール−２−イルメルカプト）−酢酸エチルエステル
オフホワイトの固体。ｍｐ  ８７〜８９℃（文献では９２℃，［２０］）；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７２の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０３７２】
【化８９】
2006514614.tif 000098
以下の化合物を、Ｎ−ベンゾチアゾールベンゼンスルホンアミドについての一般法を用いて合成した：
３−クロロ−Ｎ−（２−エチルスルファニルベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７５１，ＸＤＳ０１１４１）
オフホワイトの固体（２２０ｍｇ；５５％）。ＴＬＣ  Ｒｆ：０．８３の単一スポット（１７％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９６％（ｔＲ  メタノール中１．９分）；
【０３７３】
【化９０】
2006514614.tif 000099
［６−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル］−酢酸エチルエステル（ＳＴＸ７５２，ＸＤＳ０１１４２）
白色結晶固体（２１０ｍｇ；４６％）。ＴＬＣ  Ｒｆ：０．６９の単一スポット（１７％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．９分）９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０３７４】
【化９１】
2006514614.tif 000100
（３−クロロ−Ｎ−［２−（２−メトキシエチルスルファニル）−ベンゾチアゾール−６−イル］−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７５４，ＸＤＳ０１１４４））
オフホワイトの固体（１５０ｍｇ；７７％）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６０の単一スポット（１７％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度９４％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中３．１分）；
【０３７５】
【化９２】
2006514614.tif 000101
（２−［６−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル］−Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミド（ＳＴＸ７５５，ＸＤＳ０１１４５）および２−［６−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−ベンゾチアゾール−２−イル］−Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミド（ＳＴＸ７６３，ＸＤＳ０１１４５Ｂ））
ＤＭＣ（５ｍｌ）中のＡｌＣｌ３（５０ｍｇ）の懸濁液に、ジエチルアミン（０．４ｍｌ）を添加した。溶液を窒素下、室温にて１０分間撹拌した。［６−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−ベンゾチアゾール−２−イルスルファニル］−酢酸エチルエステル（ＳＴＸ７５２，１００ｍｇ）を添加し、混合物を室温にて３０分間撹拌し続けた。反応を水でクエンチし、ＤＣＭと５％  ＮａＨＣＯ３との間で分配した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、真空下でエバポレートして、黄色の残留物を生じ、これを、溶離溶媒として２０〜３０％  酢酸エチル−ＤＣＭを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製した。ＳＴＸ７５５（５０ｍｇ，４７％）を白色固体として得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６０の単一スポット（２５％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ８９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．７分）；
【０３７６】
【化９３】
2006514614.tif 000102
ＳＴＸ７６３（２５ｍｇ，２５％）を白色固体として得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３９の単一スポット（２５％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％  水−ＣＨ３ＣＮ中６．９分）；
【０３７７】
【化９３Ａ】
2006514614.tif 000103
３−クロロ−Ｎ−ベンゾチアゾール−６−イル−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７５０，ＸＤＳ０１１３９）
淡ピンクの針状物質（２６０ｍｇ；７７％）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４６の単一スポット（１７％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．５分）；
【０３７８】
【化９４】
2006514614.tif 000104
３−クロロ−Ｎ−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８８６，ＸＤＳ０１１８７Ｂ）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６５の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．４分）；
【０３７９】
【化９５】
2006514614.tif 000105
Ｎ−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）−Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニルスルホニル）−３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８８７，ＸＤＳ０１１８７Ａ）
オフホワイトの粉末。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８９の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度９１％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中３．１分）；
【０３８０】
【化９６】
2006514614.tif 000106
２，５−ジクロロ−Ｎ−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８８８，ＸＤＳ０１１８８Ｂ）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６８の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０３８１】
【化９７】
2006514614.tif 000107
Ｎ−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）−Ｎ−（２，５−ジクロロフェニルスルホニル）−２，５−ジクロロ−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８８９，ＸＤＳ０１１８８Ａ）
黄色固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７２の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９４％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．９分）；
【０３８２】
【化９８】
2006514614.tif 000108
Ｎ−（２−メチルベンゾチアゾール−６−イル）−４−プロピルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８９０，ＸＤＳ０１１８９）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７２の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０３８３】
【化９９】
2006514614.tif 000109
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾチアゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７５３，ＸＤＳ０１１４３）
白色結晶固体（１６０ｍｇ；４５％）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４２の単一スポット（１７％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０３８４】
【化１００】
2006514614.tif 000110
３−クロロ−Ｎ−メチル−Ｎ−（３−メチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３１，ＸＤＳ０１１６３）
アセトン（３ｍＬ）中のＳＴＸ７５３（６６ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（６６ｍｇ）を添加し、その後、メチルヨージド（６６ｍｇ）を添加した。混合物を室温にて２時間撹拌し、ＤＣＭ中に抽出し、ブラインで洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を真空下で除去して、油状の残留物を得、これを、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。オフホワイトの固体（５９ｍｇ、８０％）をＥｔＯＨ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３７の単一スポット（１００％  ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
【０３８５】
【化１０１】
2006514614.tif 000111
［（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニル）−（３−エトキシカルボニルメチル−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾチアゾール−６−イル）−アミノ］−酢酸エチルエステル（ＳＴＸ７６４，ＸＤＳ０１１４９）
アセトン（３ｍＬ）中のＳＴＸ７５３（２０ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（２０ｍｇ）を添加し、その後、メチル  ２−ブロモ酢酸エチル（５０μｌ）を添加した。混合物を室温にて４時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ中に抽出し、ブラインで洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を真空下で除去して、油状の残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーにより精製した。白色結晶固体（２０ｍｇ，６８％）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５１の単一スポット（３０％  酢酸エチル／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．６分）；
【０３８６】
【化１０２】
2006514614.tif 000112
（２−クロロベンゾチアゾール−６−イル−アミンおよび２−クロロ−ベンゾチアゾール−５−イル−アミンの合成）
濃Ｈ２ＳＯ４（６０ｍＬ）中の２−クロロベンゾチアゾール（１２．０ｇ，７０．７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＨＮＯ３（６９％溶液，６ｍＬ）を、０℃にて２０分間にわたって滴下した。混合物を５℃にて３時間撹拌し、氷−水（１５０ｍＬ）中に注いだ。沈殿物を回収し、５％炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄して、真空下で乾燥させた。１Ｈ  ＮＭＲ分析は、混合物が、７８％の６−ニトロ−２−クロロベンゾチアゾールおよび８％の５−ニトロ−２  クロロベンゾチアゾールを含んだことを示した。エタノールから再結晶させて、白色固体として６−ニトロ−２−クロロベンゾチアゾールを得た（１１ｇ，７２％）。３．５ｇの固体を還流中のエタノール−酢酸（１５０：１５ｍＬ）中に溶解させ、鉄粉末を一度に添加した。混合物を１．５時間還流させ、濾過した。濾液を真空下で半分の容量まで濃縮して、１０％  ＮａＯＨを用いてｐＨ  ７．５まで中和し、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、エバポレートして、残留物を得た。これを、エタノールから再結晶させた。淡紫結晶（２．５ｇ，８３％）を得た。Ｍｐ  １６０〜１６４℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．２７の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，４−Ｈ），７．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，７−Ｈ），６．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０，２．０Ｈｚ，５−Ｈ），５．５５（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２）。ニトロ化生成物の再結晶からの母液をエバポレートして、上記のように鉄粉末による還元に供した。粗製生成物をフラッシュクロマグラフィー（酢酸エチル−ＤＣＭ勾配溶出）により精製して、黄色固体として２−クロロ−ベンゾチアゾール−５−イル−アミンを生じた。Ｍｐ  １４６〜１４９℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５２の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，７Ｈ），７．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，４Ｈ），６．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，２．３Ｈｚ，６Ｈ），５．４０（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２）。
【０３８７】
以下の化合物を、Ｎ−ベンゾチアゾールベンゼンスルホンアミドについての一般方法により合成した：
（Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−６−イル）−Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニルスルホニル）−３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７６７，ＸＤＳ０１１５１Ａ））
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７８の単一スポット（３３％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９５％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中６．４分）；
【０３８８】
【化１０３】
2006514614.tif 000113
（３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７６８，ＸＤＳ０１１５１  Ｂ））
オフホワイトの結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６８の単一スポット（３３％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  メタノール中１．７分）；
【０３８９】
【化１０４】
2006514614.tif 000114
（３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３４，ＸＤＳ０１１６８））
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５２の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  メタノール中１．７）；
【０３９０】
【化１０５】
2006514614.tif 000115
（３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチルアミノベンゾチアゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３３，ＸＤＳ０１１６７））
ＣＨ３ＮＨ−ＴＨＦ（２Ｍ，３ｍＬ）中の３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７６８，１５０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）の溶液を、密封されたチューブ内、８２℃にて２４時間撹拌し、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ＤＣＭ勾配溶出）により精製した。白色結晶（１００ｍｇ，６８％）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．２７の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ４％  水−メタノール中１．８分）；
【０３９１】
【化１０６】
2006514614.tif 000116
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチルアミノベンゾチアゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３５，ＸＤＳ０１１７６）
３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３４，８０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）を出発物質として用いて、ＳＴＸ８３３について記載したように、化合物を調製した。白色結晶（６０ｍｇ，７８％）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．２５の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０３９２】
【化１０７】
2006514614.tif 000117
３−クロロ−Ｎ−（２−ジエチルアミノベンゾチアゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３６，ＸＤＳ０１１７７）
３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３４，７０ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）およびジエチルアミン−ＴＨＦ（３ｍＬ）を出発物質として用いて、ＳＴＸ８３３について記載した通りに化合物を調製した。白色結晶（５０ｍｇ，６８％）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６０の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９７％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中３．０分）；
【０３９３】
【化１０８】
2006514614.tif 000118
３−クロロ−Ｎ−（２−ジエチルアミノベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８７８，ＸＤＳ０１１６４）
３−クロロ−Ｎ−（２−クロロベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ７６８，２４０ｍｇ，０．６４ｍｍｏｌ）およびジエチルアミン−ＩＰＡ（３ｍＬ）を出発物質として用いて、ＳＴＸ８３３について記載した通りに化合物を調製した。フホワイトの結晶固体（１２８ｍｇ，４９％）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３３の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９６％（ｔＲ  ４％  水−メタノール中２．２分）；
【０３９４】
【化１０９】
2006514614.tif 000119
（２，６−ジメチルベンゾチアゾール−７−イルアミンの合成）
濃Ｈ２ＳＯ４（４ｍＬ）中の２，６−ジメチルベンゾチアゾール（３５０ｍｇ，２．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてＨＮＯ３（６９％，０．３ｍｍｏｌ）を添加した。０℃にて０．５時間撹拌した後、混合物を氷−水に注いだ。沈殿を回収し、５％  炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄し、エタノールから再結晶させて、黄色固体（１６０ｍｇ）として７−ニトロ−２，６−ジメチルベンゾチアゾールを生じた。生成物（１５０ｍｇ）をエタノール−ＴＨＦ（１０：２ｍＬ）中、大気圧下で５％  Ｐｄ／Ｃで水素化して、黄色固体として２，６−ジメチル−ベンゾチアゾール−７−イルアミン（１２０ｍｇ）を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５５の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ  ７．０７（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），５．２３（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），２．７３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３），２．２０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）。
【０３９５】
（６−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール−７−イルアミンの合成）
上記のように、６−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾールから出発して、化合物を調製した。黄色固体を得た。ｍｐ  １１７〜１１９℃（文献では１２１〜１２２℃）；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５５の単一スポット（４０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；
【０３９６】
【化１１０】
2006514614.tif 000120
（２，５−ジメチルベンゾチアゾール−４−イルアミンおよび２，５−ジメチルベンゾチアゾール−６−イルアミンの合成）
濃Ｈ２ＳＯ４（１２ｍＬ）中の２，５−ジメチルベンゾチアゾール（１．６３ｇ，１０ｍｍｏｌ）の溶液に、−５℃にてＨＮＯ３（６９％，１ｍｍｏｌ）を添加した。−５〜０℃にて２時間撹拌した後、混合物を氷−水（１５０ｍＬ）に注いだ。沈殿を回収し、５％炭酸水素ナトリウム、水および７０％エタノールで洗浄した。生成物（１．９８ｇ）は、ＮＭＲにより判断すると、４−ニトロ−２，５−ジメチルベンゾチアゾールおよび６−ニトロ−２，５−ジメチルベンゾチアゾールの１：１の比の混合物であった。生成物（９９８ｍｇ）を、エタノール−ＴＨＦ（５０：２０ｍＬ）中、大気圧下で、５％  Ｐｄ／Ｃ（６００ｍｇ）で水素化し、黄色固体（８８０ｍｇ）を得た。フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ勾配溶出）により分離して、２，５−ジメチルベンゾチアゾール−４−イルアミンを黄色結晶として得た（４００ｍｇ）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６０の単一スポット（１５％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；
【０３９７】
【化１１１】
2006514614.tif 000121
２，５−ジメチルベンゾチアゾール−６−イルアミンを、黄色固体として得た（３２０ｍｇ）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５５の単一のスポット（１５％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；
【０３９８】
【化１１２】
2006514614.tif 000122
（４−クロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イルアミンおよび４，６−ジクロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イルアミンの合成）
イソプロパノール（１２ｍＬ）中の５−アミノ−２−メチルベンゾチアゾール（８１８ｍｇ，４．９９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（７３２ｍｇ，５．４８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を６０℃にて１５分間撹拌し、ＤＣＭと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ勾配溶出）で精製した。４−クロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イルアミンをオフホワイトの結晶固体（５１０ｍｇ，５１％）として得た。ｍｐ  １２１〜１２２℃（文献では１２４℃）；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５１の単一スポット（２０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ  ７．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＡｒＨ），６．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＡｒＨ），５．４９（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），２．７５（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；ＡＰＣＩ−ＭＳ  １９９（ＭＨ）＋。
４，６−ジクロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イルアミンを、黄色固体として得た（６０ｍｇ，５％）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５７の単一スポット（２０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）：δ  ７．８９（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），５．２６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ２），２．７７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；ＡＰＣＩ−ＭＳ  ２３３（ＭＨ）＋。
【０３９９】
以下の化合物を、Ｎ−ベンゾチアゾールベンゼンスルホンアミドについての一般方法により合成した。
【０４００】
３−クロロ−Ｎ−（６−メトキシ−２−メチルベンゾチアゾール−７−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９８９，ＸＤＳ０２０３８）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７１の単一スポット（３０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０４０１】
【化１１３】
2006514614.tif 000123
３−クロロ−Ｎ−（２，６−ジメトキシ−ベンゾチアゾール−７−イル）−２−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０２１，ＸＤＳ０２０６９）
オフホワイトの結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４９の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  ２０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４０２】
【化１１４】
2006514614.tif 000124
３−クロロ−Ｎ−（２，５−ジメトキシ−ベンゾチアゾール−４−イル）−２−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９６，ＸＤＳ０２０４７）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７６の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．９分）；
【０４０３】
【化１１５】
2006514614.tif 000125
Ｎ−（２，５−ジメトキシベンゾチアゾール−６−イル）−Ｎ（−３−クロロ−２−メチルフェニルスルホニル）−３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９７，ＸＤＳ０２０４８Ａ）
オフホワイトのシロップ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７８の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ８５％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中４．２分）；
【０４０４】
【化１１６】
2006514614.tif 000126
３−クロロ−Ｎ−（２，５−ジメチルベンゾチアゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９８，ＸＤＳ０２０４８Ｂ）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３９の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９６％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．１分）；
【０４０５】
【化１１７】
2006514614.tif 000127
２，５−ジクロロ−Ｎ−（２，５−ジメチルベンゾチアゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９９，ＸＤＳ０２０４９）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４３の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４０６】
【化１１８】
2006514614.tif 000128
Ｎ−（４−クロロ−２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イル）−Ｎ−（３−クロロ−２−メチルフェニルスルホニル）−３−クロロ−２−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９１，ＸＤＳ０２０４２Ａ）
白色粉末。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７５の単一スポット（８％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中４．４分）；
【０４０７】
【化１１９】
2006514614.tif 000129
３−クロロ−Ｎ−（４−クロロ−２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９２，ＸＤＳ０２０４２Ｂ）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６９の単一スポット（８％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．５分）；
【０４０８】
【化１２０】
2006514614.tif 000130
２，５−ジクロロ−Ｎ−（４−クロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９３，ＸＤＳ０２０４３Ｂ）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７１の単一スポット（８％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中５．０分）；
【０４０９】
【化１２１】
2006514614.tif 000131
Ｎ−（４−クロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イル）−４−プロピルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９４，ＸＤＳ０２０４４Ｂ）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７０の単一スポット（８％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．７分）；
【０４１０】
【化１２２】
2006514614.tif 000132
Ｎ−（４−クロロ−２−メチルベンゾチアゾール−５−イル）−Ｎ−（４−プロピルフェニルスルホニル）−４−  プロピルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９９５，ＸＤＳ０２０４４Ａ）
白色粉末。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７０の単一スポット（８％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中３．８分）；
【０４１１】
【化１２３】
2006514614.tif 000133
（３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イルメチル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０２９，ＸＤＳ０２０７０Ａ）および３−クロロ−２−メチル−Ｎ，Ｎ−ビス−（２−メチル−ベンゾチアゾール−５−イルメチル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０３０，ＸＤＳ０２０７０Ｂ）の合成）
ＣＨ３ＣＮ中の３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホンアミド（１０３ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸水素カリウム（１００ｍｇ）を添加し、その後、５−ブロモメチル−２−メチルベンゾチアゾール（１２１ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、６時間還流させ、酢酸エチルと水との間で分配した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮させて、黄色残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル／ＤＣＭ，勾配溶出）で分離した。ＳＴＸ１０２９を白色固体として得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５５の単一スポット（１０％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４１２】
【化１２４】
2006514614.tif 000134
ＳＴＸ１０３０を白色固体として得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５０の単一スポット（１０％  ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中６．１分）；１Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ７．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ＡｒＨ），７．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＡｒＨ），７．５９（２Ｈ，ブロード，２＝１．１Ｈｚ，ＡｒＨ），７．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，ＡｒＨ），７．１１（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．１，１．１Ｈｚ，ＡｒＨ），４．５６（４Ｈ，ｓ，２×ＮＣＨ２），２．７８（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３），２．５８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；ＡＰＣＩ−ＭＳ  ５２８（ＭＨ）＋；ＦＡＢ−ＨＲＭＳ  Ｃ２５Ｈ２３ＣｌＮ３Ｏ２Ｓ３（ＭＨ＋）についての計算値５２８．０６４１，実測値５２８．０６３０。
【０４１３】
（Ｎ−インドールまたはＮ−インドリンアリールスルホンアミド誘導体の合成）
【０４１４】
【化１２５】
2006514614.tif 000135
（Ｎ−インドールまたはＮ−インドリンアリールスルホンアミド誘導体（ＳＴＸ８３２，ＳＴＸ９８１〜９８２，ＳＴＸ９８４，ＳＴＸ９８６−９８７，ＳＴＸ１０１８〜１０２０）の合成のための一般方法：）
ＤＣＭ中のアリールスルホニルクロリド（１．１当量）の溶液に、ピリジン（２．２当量）および触媒量のＤＭＡＰを添加し、その後、対応するアミン（１当量）を添加した。反応混合物を窒素下、室温にて４〜６時間撹拌し、ＴＬＣが反応の完了を示した後、次いで、酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、固体もしくは粘性シロップとして粗生成物を得た。化合物を次いで、フラッシュクロマトグラフィー（メタノール−ＤＣＭ勾配溶出）により精製して、結晶固体として所望のアリールスルホンアミドを得た。収率は５０〜８５％の範囲である。
【０４１５】
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８３２，ＸＤＳ０１１６５）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６８の単一スポット（３０％  酢酸エチル／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ４％  水−メタノール中１．８分）；
【０４１６】
【化１２６】
2006514614.tif 000136
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９８１，ＸＤＳ０２０１９）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７２の単一スポット（６％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．１分）；
【０４１７】
【化１２７】
2006514614.tif 000137
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（１Ｈ−インドール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９８２，ＸＤＳ０２０２０）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８８の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．５分）；
【０４１８】
【化１２８】
2006514614.tif 000138
５−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（ＳＴＸ９８６，ＸＤＳ０２０３０）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８２の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．３分）；
【０４１９】
【化１２９】
2006514614.tif 000139
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０１８，ＸＤＳ０２０６１）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８３の単一スポット（３０％  酢酸エチル／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９７％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．９分）；
【０４２０】
【化１３０】
2006514614.tif 000140
２，５−ジクロロ−Ｎ−（２，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０１９，ＸＤＳ０２０６２）
白色非結晶性  ｐｏｗｄｅｒ．ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８２の単一スポット（１０％  酢酸エチル／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中３．０分）；
【０４２１】
【化１３１】
2006514614.tif 000141
４−ｎ−プロピル−Ｎ−（２，３−ジメチル−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１０２０，ＸＤＳ０２０６３）
オフホワイトの結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．８２の単一スポット（１０％  酢酸エチル／ヘキサン）；ＨＰＬＣ純度  ９７％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．９分）；
【０４２２】
【化１３２】
2006514614.tif 000142
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（１−アセチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９８４，ＸＤＳ０２０２５）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５８の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９５％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．２分）；
【０４２３】
【化１３３】
2006514614.tif 000143
５−（３−クロロ−２−メチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−１−エチル−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドリウムクロリド（ＳＴＸ９８７，ＸＤＳ０２０３１）
ＳＴＸ９８７の遊離塩基を上記のように合成した。紫色の非結晶性粉末を得た；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７９の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４２４】
【化１３４】
2006514614.tif 000144
遊離塩基をＨＣｌ−エーテル溶液で処理し、淡いピンクの結晶固体としてＳＴＸ９８７を得た。ＨＰＬＣ純度  ９３  ％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中３．６分）；
【０４２５】
【化１３４Ａ】
2006514614.tif 000145
（１−アセチル−５−アミノインドリン）
エタノール−ＴＨＦ（１００ｍＬ：３０ｍＬ）中の１−アセチル−５−ニトロインドリン（１．０ｇ，４．８５ｍｍｏｌ）の溶液を、大気圧下、５％  Ｐｄ／Ｃ（６００ｍｇ）で２時間水素化し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過し、真空下で濃縮し、白色固体を生じ、これをエタノールから再結晶させた。白色結晶固体（５８０ｍｇ，６８％）を得た。Ｍｐ  １８５〜１８６．５℃（文献では１８４〜１８５℃，［２１］）；
【０４２６】
【化１３５】
2006514614.tif 000146
（１−エチル−５−アミノインドリン）
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の１−アセチル−５−アミノインドリン（１３０ｍｇ，０．７４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＬｉＡｌＨ４（４２ｍｇ，１．１１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて６時間撹拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、紫色の残留物（８０ｍｇ，６７％）を生じ、これを、さらに精製することなく用いた。
【０４２７】
【化１３６】
2006514614.tif 000147
（５−Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチルエステル，ＳＴＸ１０５０（ＫＲＢ０１１３２）の合成）
【０４２８】
【化１３７】
2006514614.tif 000148
５−アミノ−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチルエステル（ＫＲＢ０１１３１）：
メタノール（４０ｍＬ）中の５−ニトロ−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸メチルエステル（２０６ｍｇ，０．９４０ｍｍｏｌ）の溶液に、炭素上の５％パラジウム（４０ｍｇ）を添加し、混合物を１ａｔｍのＨ２下、５時間撹拌した。混合物をＣｅｌｉｔｅを通してろ過紙、濾液をエバポレートして、褐色の固体を得、これを、さらに精製することなく用いた（１７３ｍｇ，９７％），Ｒｆ  ０．６４の単一スポット（酢酸エチル）。
【０４２９】
【化１３８】
2006514614.tif 000149
ジクロロメタン（４ｍＬ）中の３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１２４ｍｇ，０．５５２ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１００μＬ，１．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、５−アミノ−１Ｈ−インドール−カルボン酸メチルエステル（１００ｍｇ，０．５２６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１．５時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）を添加し、混合物を、酢酸エチル（２０ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、エバポレートさせ、残留物を生じた。これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、白色固体（１２９ｍｇ，６５％）を得た。Ｒｆ  ０．８４の単一スポット（酢酸エチル）。ｍｐ  ２１６．８〜２１９．３℃［２２］，ＨＰＬＣ純度  ９９＋％（ｔＲ  １０％  水−アセトニトリル中２．０７分）。
【０４３０】
【化１３９】
2006514614.tif 000150
（ベンズイミダゾールアリールスルホンアミド誘導体の合成）
【０４３１】
【化１４０−１】
2006514614.tif 000151
【０４３２】
【化１４０−２】
2006514614.tif 000152
（１−アルキル−５−アミノ−２−メチルベンズイミダゾールおよび１−アルキル−６−アミノ−２メチルベンズイミダゾールの調製）
アセトン（５０ｍＬ）中の５−ニトロベンズイミダゾール（１．０ｇ，５．６ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（１．０ｇ）を添加し、その後、アルキルハロゲン化物（１．２〜１．５当量）を添加した。混合物を窒素下、室温にて撹拌し、ＴＬＣが反応の完了を示した後、次いで、酢酸エチルと水との間で分配した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、１−アルキル−５−ニトロ−２−メチルベンズイミダゾールおよび１−アルキル−６−ニトロ−２−メチルベンズイミダゾールの混合物を生じ、これを、エタノール−ＴＨＦ（１００ｍＬ，２：１）中に溶解させ、大気圧下で、８時間にわたって５％  Ｐｄ−Ｃで水素化した。Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した後、濾液をエバポレートして、黄色固体を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（メタノール−ＤＣＭ勾配溶出）により分離した。１−アルキル−５−アミノベンズイミダゾールおよび１−アルキル−６−アミノベンズイミダゾールを黄色固体または粘性シロップとして得た。
【０４３３】
５−アミノ−１，２−ジメチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０１１９１Ｂ，ＸＤＳ０２０８２Ｂ）：
黄色固体，ｍｐ  １２６〜１２７℃（文献では１２８℃，［２３］）。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３０の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３４】
【化１４１】
2006514614.tif 000153
６−アミノ−１，２−ジメチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０１１９１Ａ，ＸＤＳ０２０８２Ａ）：
黄色固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３３の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３５】
【化１４２】
2006514614.tif 000154
５−アミノ−１−エチル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０７９Ｂ）：
黄色シロップ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．２７の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３６】
【化１４３】
2006514614.tif 000155
６−アミノ−１−エチル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０７９Ａ）：
黄色固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３０の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３７】
【化１４４】
2006514614.tif 000156
５−アミノ−１−ｉ−ブチル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０９３Ｂ）：
黄色シロップ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４２の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３８】
【化１４５】
2006514614.tif 000157
６−アミノ−１−ｉ−ブチル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０９３Ａ）：
黄色固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４５の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４３９】
【化１４６】
2006514614.tif 000158
５−アミノベンゾイミダゾール−１−イル）−酢酸エチルエステル（ＸＤＳ０２０１２Ｂ）
黄色固体。  ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３６の単一スポット（５％メタノール／ＤＣＭ）；
【０４４０】
【化１４７】
2006514614.tif 000159
６−アミノベンゾイミダゾール−１−イル）−酢酸エチルエステル（ＸＤＳ０２０１２Ａ）
黄色固体。  ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４０の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４４１】
【化１４８】
2006514614.tif 000160
５−アミノ−１−ベンジル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０８６Ｂ）：
黄色シロップ。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．２７の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４４２】
【化１４９】
2006514614.tif 000161
６−アミノ−１−ベンジル−２−メチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０８６Ａ）：
黄色固体。  ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３０の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４４３】
【化１５０】
2006514614.tif 000162
（５−アミノ−４−クロロ−１，２−ジメチルベンズイミダゾール（ＸＤＳ０２０９６Ａ）の調製）
ＩＰＡ（１５ｍＬ）中の５−アミノ−１，２−ジメチルベンズイミダゾール（６００ｍｇ，３．７３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ−クロロスクシンイミド（５４８ｍｇ，４．１０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて２０分間撹拌し、ＤＣＭ（８０ｍＬ）で希釈して、５％炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄した。暗褐色の溶液を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、褐色の残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィー（メタノール−ＤＣＭ勾配溶出）に供した。黄色固体（２２０ｍｇ，３３％）を得た。ＴＬＣ  の単一スポットＲｆ  ０．６９（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４４４】
【化１５１】
2006514614.tif 000163
（Ｎ−ベンズイミダゾールアリールスルホンアミド誘導体の合成のための一般法）
ＤＣＭ中のアリールスルホニルクロリド（１．１当量）の溶液に、ピリジン（２．２当量）および触媒量のＤＭＡＰを添加し、その後、対応するアミン（１当量）を添加した。反応混合物を窒素下、室温にて、４〜１６時間撹拌し、ＴＬＣが反応の完了を示した後、次いで、酢酸と５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、固体または粘性シロップとして粗生成物を生じた。次いで、化合物をフラッシュクロマトグラフィー（メタノール−ＤＣＭ勾配溶出）により精製して、結晶固体として所望のアリールスルホンアミドを生じた。収率は、５０〜８０％の範囲である。
【０４４５】
３−クロロ−Ｎ−２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９７５，ＸＤＳ０２００１）
白色結晶固体。Ｍｐ２６５−２６６  Ｃ；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４３の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．分）；
【０４４６】
【化１５２】
2006514614.tif 000164
３−クロロ−Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９７６，ＸＤＳ０２００３）
白色結晶固体。Ｍｐ  ２８３−２８３℃。９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４４７】
【化１５３】
2006514614.tif 000165
３−クロロ−Ｎ−（４−クロロ−１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１２１，ＸＤＳ０２１０２Ｂ）
オフホワイトの結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５０の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９５％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．１分）；
【０４４８】
【化１５４】
2006514614.tif 000166
Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−４−プロピルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１２，ＸＤＳ０２０８８）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３８の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．１分）；
【０４４９】
【化１５５】
2006514614.tif 000167
２，５−ジクロロ−Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１３，ＸＤＳ０２０８９）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６７の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．０分）；
【０４５０】
【化１５６】
2006514614.tif 000168
２，４−ジクロロ−Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１４，ＸＤＳ０２０９０）
オフホワイトの結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５９の単一スポット（１０％メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．０分）
【０４５１】
【化１５７】
2006514614.tif 000169
４−ブロモ−Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１５，ＸＤＳ０２０９１）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６７の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．１分）；
【０４５２】
【化１５８】
2006514614.tif 000170
Ｎ−（１，２−ジメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−４−フェニルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１６，ＸＤＳ０２０９２）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７２の単一スポット（５％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．１分）；
【０４５３】
【化１５９】
2006514614.tif 000171
３−クロロ−Ｎ−（１−エチル−２−メチル−Ｉ  Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１０，ＸＤＳ０２０８４）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４５の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．２分）；
【０４５４】
【化１６０】
2006514614.tif 000172
３−クロロ−Ｎ−（１−エチル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１１，ＸＤＳ０２０８５）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４２の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．２分）；
【０４５５】
【化１６１】
2006514614.tif 000173
３−クロロ−Ｎ−（１−イソブチル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１９，ＸＤＳ０２１００）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５７の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．２分）；
【０４５６】
【化１６２】
2006514614.tif 000174
３−クロロ−Ｎ−（１−イソブチル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１２０，ＸＤＳ０２１０１）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５２の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．３分）；
【０４５７】
【化１６３】
2006514614.tif 000175
［６−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−２−メチルベンゾイミダゾール−１−イル］−酢酸エチルエステル（ＳＴＸ９７７，ＸＤＳ０２０１５）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４６の単一スポット（６％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４５８】
【化１６４】
2006514614.tif 000176
［５−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルアミノ）−２−メチルベンゾイミダゾール−１−イル］−酢酸エチルエステル（ＳＴＸ９７８，ＸＤＳ０２０１７）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４０の単一スポット（６％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４５９】
【化１６５】
2006514614.tif 000177
３−クロロ−Ｎ−  ベンジル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１７，ＸＤＳ０２０９８）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．７０の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．２分）；
【０４６０】
【化１６６】
2006514614.tif 000178
３−クロロ−Ｎ−（１−ベンジル−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１１８，ＸＤＳ０２０９９）
オフホワイトの固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６５の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．２分）；
【０４６１】
【化１６７】
2006514614.tif 000179
３−クロロ−Ｎ−（２−トリフルオロメチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ８７９，ＸＤＳ０１１７３）
白色結晶固体。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．５８の単一スポット（２０％  酢酸エチル／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．４分）；
【０４６２】
【化１６８】
2006514614.tif 000180
（３−クロロ−Ｎ−（２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−２−メチルベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ９８５，ＸＤＳ０２０２６）の調製）
上記の条件下での３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルクロリド（２当量）の２−メチルベンズイミダゾール（１当量）とのカップリング反応により、３−クロロ−Ｎ−［１−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］−２−メチル−ベンゼンスルホンアミドおよび３−クロロ−Ｎ−［１−（３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル］−２−メチル−ベンゼンスルホンアミドの１：１比（１ＨＮＭＲにより判断）の混合物を生じた。
【０４６３】
【化１６９】
2006514614.tif 000181
混合物（２００ｍｇ）をＴＨＦ（１５ｍＬ）中に溶解させ、Ｎヒドロキシベンゾトリアゾール（２００ｍｇ）を添加した。室温にて４８時間撹拌した後、混合物を酢酸エチルと５％炭酸水素ナトリウムとの間で分配した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、黄色の残留物を生じ、これをフラッシュクロマトグラフィー（メタノール／ＤＣＭ勾配溶出）で精製した。オフホワイトの非結晶性粉末を得た。ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３８の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％  水−メタノール中２．０分）；
【０４６４】
【化１７０】
2006514614.tif 000182
（Ｎ−ベンズイミダゾールアリールスルホンアミド誘導体の合成）
【０４６５】
【化１７１】
2006514614.tif 000183
（Ｎ１−フェニル−ベンゼン−１，２，４−トリアミン：）
エタノール−ＴＨＦ（１５０：５０ｍＬ）中の２，４−ジニトロフェニルアミン（１．５ｇ，５．８ｍｍｏｌ）の溶液に、ヒドラジン水和物（２ｍＬ，６５ｍｍｏｌ）およびＲａｎｅｙニッケル（２．０ｇ）を添加した。反応混合物を室温にて２０分間撹拌し、Ｃｅｌｉｔｅを通して濾過した。溶媒をエバポレートして、黒色の残留物を生じ、これをフラッシュクロマトグラフィー（メタノール−ＤＣＭ勾配溶出）により精製した。黒色結晶固体（１．０ｇ，８７％）を得た。Ｍｐ  １２８〜１２９℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４６の単一スポット（８％メタノール／ＤＣＭ）；
【０４６６】
【化１７２】
2006514614.tif 000184
Ｎ−（２−メチル−１−フェニル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−５−イル）−アセトアミド：
Ｎ’−フェニル−ベンゼン−１，２，４−トリアミン（８００ｍｇ，４ｍｍｏｌ）を、酢酸（１０ｍＭＬ）中に溶解させ、無水酢酸（１．０ｍＬ）をこの溶液に添加した。混合物を８０℃にて６時間撹拌し、室温まで冷却して、５％炭酸ナトリウムで中和し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して残留物を生じ、これをエタノールから結晶化した。褐色の結晶固体（０．８５ｇ，８０％）を得た。Ｍｐ  ２３１〜２３２℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３９の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４６７】
【化１７３】
2006514614.tif 000185
（２−メチル−１−フェニル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルアミン：）
６Ｎ  ＨＣｌ（５ｍＬ）中のＮ−（２−メチル−１−フェニル−１Ｈ−ベンズイミダゾール−５−イル）−アセトアミド（８００ｍｇ，３ｍｍｏｌ）の溶液を、７５℃にて３時間撹拌し、炭酸ナトリウムでｐＨ  ７まで中和し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮して、暗褐色の固体（６００ｍｇ，９０％）を生じた。ｍｐ  １４５〜１４６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．４７の単一スポット（１０％  メタノール／ＤＣＭ）；
【０４６８】
【化１７４】
2006514614.tif 000186
３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチル−１−フェニル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１４０，ＸＤＳ０２１１０）
化合物を、ベンゼンスルホンアミド形成の一般方法により調製した。淡いピンクの結晶固体を得た。Ｍｐ  ２５４〜２５６℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．６２の単一スポット（８％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度  ＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．６分）；
【０４６９】
【化１７５】
2006514614.tif 000187
３−クロロ−Ｎ−［１−（２−ヒドロキシエチル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−６−イル］−２−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１４１，ＸＤＳ０２１１５）
無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の［６−（３−クロロ−２−メチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−２−メチル−ベンゾイミダゾール−１−イル］−酢酸エチルエステル（１００ｍｇ，０．２３７ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃にてＬｉＡｌＨ４（５４ｍｇ，１．４２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を０℃にて０．５時間撹拌させ、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、６Ｎ  ＨＣｌで中和し、酢酸エチルで抽出した。有機相をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮して、淡いピンクの結晶固体（８２ｍｇ，９１％）を生じた。ｍｐ  ２１３〜２１４．５℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３９の単一スポット（１２％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．０分）；
【０４７０】
【化１７６】
2006514614.tif 000188
３−クロロ−Ｎ−［１−（２−ヒドロキシ−エチル）−２−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イル］−２−メチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＴＸ１１４２，ＸＤＳ０２１１６）
上記のように、［５−（３−クロロ−２−メチル−ベンゼンスルホニルアミノ）−２−メチル−ベンゾイミダゾール−１−イル］−酢酸エチルエステル（３５ｍｇ，０．０８３ｍｍｏｌ）から化合物を調製した。白色結晶固体（２２ｍｇ，８９％）を得た。Ｍｐ  ２４５〜２４７℃；ＴＬＣ  Ｒｆ  ０．３８の単一スポット（１２％  メタノール／ＤＣＭ）；ＨＰＬＣ純度＞９９％（ｔＲ  ２０％水−メタノール中２．０分）；
【０４７１】
【化１７７】
2006514614.tif 000189
（ベンズオキサゾール誘導体の合成）
【０４７２】
【化１７８】
2006514614.tif 000190
（３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８３９（ＫＲＢ０１００９）の合成）
【０４７３】
【化１７９】
2006514614.tif 000191
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルクロリド（１６３ｍｇ，０．７２３ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１４０μＬ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、６−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（１０２ｍｇ，０．６８８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過して、エバポレートし、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製して、白色固体（１５１ｍｇ，６５％）を得た。Ｒｆ  ０．５０の単一スポット（６０：４０  ヘキサン：酢酸エチル）。ｍｐ  １２７．１〜１２７．５℃，ＨＰＬＣ純度  ９７％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中２．０５分）。
【０４７４】
【化１８０】
2006514614.tif 000192
（Ｎ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−６−イル）−４−プロピル−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８４０（ＫＲＢ０１０１０）の合成）
【０４７５】
【化１８１】
2006514614.tif 000193
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の４ｎ−プロピルベンゼンスルホニルクロリド（１６３ｍｇ，０．７４４ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１４０μＬ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、６−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（１０５ｍｇ，０．７０９ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、エバポレートして、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、淡いピンクの固体（１６４ｍｇ，７０％）を得た。Ｒｆ  ０．４９の単一スポット（６０：４０  ヘキサン：酢酸エチル）。ｍｐ  １０１．７〜１０２．３℃，ＨＰＬＣ  純度９９％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中２．０２分）。
【０４７６】
【化１８２】
2006514614.tif 000194
（２，５−ジクロロ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−６−イル）−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８４１（ＫＲＢ０１０１１）の合成）
【０４７７】
【化１８３】
2006514614.tif 000195
ジクロロメタン（３ｍＬ）中の２，５−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド（１７４ｍｇ，０．７０９ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（１４０μＬ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、６−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（１００ｍｇ，０．６７５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、エバポレートして、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、白色固体（１５４ｍｇ，６４％）を得た。Ｒｆ  ０．５０の単一スポット（６０：４０  ヘキサン：酢酸エチル）。ｍｐ  １６７．０〜１６７．３℃，ＨＰＬＣ純度  ９７％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中１．９７分）。
【０４７８】
【化１８４】
2006514614.tif 000196
（３−クロロ−２−メチル−Ｎ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８４２（ＫＲＢ０１０１４）の合成）
【０４７９】
【化１８５】
2006514614.tif 000197
ジクロロメタン（２ｍＬ）中の３−クロロ−２−メチルベンゼンスルホニルクロリド（９６ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（８０μＬ，１．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、５−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（６０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、エバポレートして、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、白色固体（８９ｍｇ，６４％）を得た。Ｒｆ  ０．５２の単一スポット（１：１  ヘキサン：酢酸エチル）。ｍｐ  １８０．２〜１８０．５℃，ＨＰＬＣ純度  ９９％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中２．３２分）。
【０４８０】
【化１８６】
2006514614.tif 000198
（Ｎ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−５−イル）−４−プロピル−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８４３（ＫＲＢ０１０１５）の合成）
【０４８１】
【化１８７】
2006514614.tif 000199
ジクロロメタン（２ｍＬ）中の４ｎ−プロピルベンゼンスルホニルクロリド（９３ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（８０μＬ，１．０ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、５−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（６０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、エバポレートして、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、淡いピンクのオイル（１１２ｍｇ，８５％）を得た。Ｒｆ  ０．５３の単一スポット（１：１  ヘキサン：酢酸エチル）。ＨＰＬＣ純度  ９９＋％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中２．３８分）
【０４８２】
【化１８８】
2006514614.tif 000200
（２，５−ジクロロ−Ｎ−（２−メチル−ベンゾオキサゾール−５−イル）−ベンゼンスルホンアミド，ＳＴＸ８４６（ＫＲＢ０１０１６）の合成）
【０４８３】
【化１８９】
2006514614.tif 000201
ジクロロメタン（１．５ｍＬ）中の２，５−ジクロロベンゼンスルホニルクロリド（５２ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ピリジン（４０μＬ，０．５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物をＮ２下で５分間撹拌し、その後、５−アミノ−２−メチルベンゾオキサゾール（３０ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温にて１時間撹拌し、次いで、飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加し（８ｍＬ）、混合物を酢酸エチル（１５ｍＬ）中に抽出した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、エバポレートして、残留物を生じ、これを、フラッシュクロマトグラフィーを用いて精製し、淡いピンクの固体（４５ｍｇ，６３％）を得た。Ｒｆ  ０．５３の単一スポット（１：１  ヘキサン：酢酸エチル）。ｍｐ  １９３．５〜１９３．９℃，ＨＰＬＣ純度  ９８％（ｔＲ  １０％水−アセトニトリル中２．２７分）。
【０４８４】
【化１９０】
2006514614.tif 000202
上記の明細書中で言及した全ての刊行物は、本明細書中に参考として援用される。記載される本発明の方法および系の種々の改変および変更は、本発明の範囲および精神から逸脱することなく、当業者に明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態と組み合せて記載されているが、特許請求される本発明は、このような特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるべきである。実際、化学または関連分野の当業者に明らかである、本発明の実施するための記載される方法の種々の改変が、添付の特許請求の範囲内であることが意図される。
【０４８５】
（参考文献）
【０４８６】
【化１９１−１】
2006514614.tif 000203
【０４８７】
【化１９１−２】
2006514614.tif 000204
【図面の簡単な説明】
【０４８８】
本発明は、例としてのみ添付の図面を参照することによって、さらに詳細に記載される。
【図１】図１は、ラット肝臓およびラット腎臓の１Ｌあたりのタンパク質量を示すグラフ１である。
【図２】図２は、ラット肝臓における、１１β−ＨＳＤ１型活性の、酵素濃度および時間依存性の経過を示すグラフ２である。
【図３】図３は、ラット腎臓における、１１β−ＨＳＤ２型活性の、酵素濃度および時間依存性の経過を示すグラフ３である。
【図４】図４は、４つの抽出方法により得られる抽出効率を示すグラフである。
【図５】図５は、ラットおよびヒトの肝臓ミクロソームにおける１１β−ＨＳＤ１活性の比較を示すグラフである。
【図６】図６は、ヒトミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性に対する、インキュベーション時間の効果を示す一連のグラフである。
【図７】図７は、ヒトミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性に対する、ミクロソームタンパク質濃度の効果を示す一連のグラフである。
【図８】図８は、ヒト肝臓ミクロソームＵｐ  ＨＳＤ１についての基質（コルチゾン）飽和曲線を示すグラフである。
【図９】図９は、ヒト肝臓ミクロソーム１１ＨＳＤ１についての基質飽和データのＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅプロットである。
【図１０】図１０は、グリシレチン酸についてのＩＣ５０決定を示すグラフである。
【図１１】図１１は、カルベノキソロンについてのＩＣ５０決定を示すグラフである。
【図１２Ａ】図１２Ａは、イムノアッセイにより測定した１１β−ＨＳＤ１活性を示すグラフである。図１２Ａは、タンパク質の効果を示す。
【図１２Ｂ】図１２Ｂは、イムノアッセイにより測定した１１β−ＨＳＤ１活性を示すグラフである。図１２Ｂは、コルチゾンの効果を示す。
【図１２Ｃ】図１２Ｃは、イムノアッセイにより測定した１１β−ＨＳＤ１活性を示すグラフである。図１２Ｃは、Ｔｗｅｅｎ−８０の効果を示す。
【図１３】図１３は、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ  Ｃｏｒｔｉｓｏｌイムノアッセイの評価を示すグラフである。
【図１４】図１４は、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓイムノアッセイにより検出した１１β−ＨＳＤ１活性の測定に対する、ミクロソームタンパク質増加の効果を示すグラフである。
【図１５】図１５は、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗コルチゾール抗体を用いるＲＩＡによるＵｐ  ＨＳＤ１活性の検出を示すグラフである。
【図１６】図１６は、信号対雑音比に対するＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体濃度の効果を示すグラフである（ＧＡブランク群と比較したミクロソーム群）。
【図１７】図１７は、ＲＩＡによる、１１β  ＨＳＤ１活性の検出についてのＩｍｍｕｎｏｔｅｃｈ抗体飽和曲線を示すグラフである。
【図１８】図１８は、ＲＩＡによる、ヒト肝臓ミクロソームＵｐ  ＨＳＤ１活性の直線性を示すグラフである。
【図１９】図１９は、ＲＩＡによる、ヒト肝臓ミクロソームＵｐ  ＨＳＤ１活性の検出に対する、Ｔｗｅｅｎ  ８０の効果を示すグラフである。
【図２０】図２０は、ＲＩＡによる、ヒト肝臓ミクロソームＵｐ  ＨＳＤ１活性の検出に対する緩衝液系の効果を示すグラフである。
【図２１】図２１は、ＲＩＡにより検出されたヒト肝臓ミクロソームＵｐ  ＨＳＤ１活性のインキュベーション時間との直線性を示すグラフである。
【図２２】図２２は、ＲＩＡにより検出されたヒト肝臓ミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性についての基質飽和曲線を示すグラフである。
【図２３】図２３は、ＲＩＡにより検出されたヒト肝臓ミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性についての基質飽和データのＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅプロットである。
【図２４】図２４は、ヒト肝臓ミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性のＤＭＳＯ耐性を示すグラフである。
【図２５】図２５は、グリシレチン酸によるヒト肝臓ミクロソーム１１β−ＨＳＤ１活性の阻害についてのＩＣ５０曲線である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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