(57)【要約】本発明は、特定食作用区画における患者の血流からの病理学的標的のクリアランスを促すための、生物学的因子、例えば補体構成成分を用いる方法および組成物、ならびに赤芽球系列および骨髄球系列の細胞の操作を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の血液からの病理学的因子の排除方法であって、ＣＲ１受容体以外の部位で病理学的因子を結合し得る分子対と抗体の複合体を有する少なくとも１つの感作赤血球を前記患者に投与し、そしてＣＲ１交換反応と無関係に前記患者の血液から前記病理学的因子を排除することを包含する方法。
【請求項２】
前記分子対と抗体の複合体が共有結合される２つの抗体を含む請求項１記載の方法であって、前記抗体の一方が赤血球受容体部位との結合に特異的であり、そして他方の抗体が前記病理学的因子に特異的である方法。
【請求項３】
前記抗体がモノクローナル抗体である請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記患者がヒトまたは動物であり、そして前記抗体がヒト化または非ヒト化抗体である請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記抗体がＦＣ領域の任意の型を有するかあるいはそれを欠く抗体断片（Ｆａｂ）２またはＦａｂであり得る請求項２記載の方法。
【請求項６】
前記赤血球受容体部位がＣＲ１受容体以外の赤血球表面上の任意の免疫原性部位である請求項２記載の方法。
【請求項７】
前記病理学的因子が微生物、ウイルス、細菌、タンパク質、リケッチア、真菌、寄生生物；毒素、生物学的および化学的戦争用因子、異形成性および転移性癌細胞、自己免疫抗体、ならびに前記患者の病理学的過程を媒介するか身体中に存在し得る任意の分子のうちの少なくとも１つを含む少なくとも１つの因子である請求項１記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つのインタクトな赤血球または少なくとも１つの赤血球ゴーストをｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏで感作するために前記分子対を用いることを包含する請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記分子対が少なくとも１つの病理学的因子に特異的である請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記分子対がＣＲ１以外の赤血球表面タンパク質中に存在する少なくとも１つの免疫原性エピトープと結合する請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記感作赤血球分子対がヒト、非ヒト霊長類またはその他の動物のものである請求項１記載の方法。
【請求項１２】
ゴーストが老化マーカーを有し、前記分子対で前記赤血球ゴーストを感作する赤血球を調製することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１３】
前記赤血球の少なくとも１つが前記赤血球ゴーストの調製の前または後に感作される請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
ホスファチジルセリンの表面への出現を実行するために低張溶液中に前記赤血球を溶解し、前記赤血球ゴースト分子対をアポトーシス細胞模倣性にさせることを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１５】
分子対感作およびその後の赤血球溶解の前または後に赤血球表面にホスファチジルセリ
ンを付加することにより前記赤血球を化学的に修飾することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１６】
老化関連エピトープの作成を実行するためにガラクトース、α１、３の付加による分子対結合の前または後に前記赤血球を化学的に修飾することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１７】
二価陽イオン（Ｍｇ＋＋）の存在下で、そしてＡＴＰの非存在下で前記赤血球ゴーストを調製して、前記赤血球ゴースト分子対表面での高ホスファチジルセリン曝露を生じることを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１８】
ホスファチジルセリンの表面への限定された発現を有する赤血球ゴーストを提供するためにＡＴＰの存在下で前記赤血球ゴーストを調製することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項１９】
分子対感作とその後の溶解の前にヘテロ二機能性架橋試薬または抗体架橋により赤血球表面タンパク質を架橋して、前記赤血球ゴースト分子対を生成することにより前記老化マーカーを調製することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項２０】
高密度勾配遠心分離により少なくとも１つのアポトーシス性赤血球を生成し、老化赤血球のみを感作させ、その後溶解させて少なくとも１つのアポトーシス模倣性赤血球ゴースト分子対を生成することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項２１】
少なくとも１つのアポトーシス模倣性または天然アポトーシス性赤血球ゴースト分子対の生成を提供することを包含する請求項８記載の方法。
【請求項２２】
患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法であって：
ａ）有効量の分子対を患者に投与し、この場合、前記分子対はヒト化または非ヒト化抗体を用いて調製され、
ｂ）前記分子対をＣＲ１と異なる少なくとも１つの赤血球表面の特異的免疫原部位に結合させ、それにより感作赤血球分子対を形成し、そして
ｃ）前記感作赤血球分子対をＣＲ１以外の前記赤血球上の任意の部位に対する前記患者の血液中の特異的病理学的標的と結合させて、赤血球−分子対−病理学的標的を生じ、そして前記患者の血液から前記赤血球−分子対−病理学的標的を除去する
ことを包含する方法。
【請求項２３】
患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法であって：
ａ）分子対をｅｘ  ｖｉｖｏで用いて少なくとも１つの赤血球を感作し、
ｂ）有効量の前記感作赤血球分子対を前記患者に投与し、そして
ｃ）前記感作赤血球分子対を特異的病理学的因子と結合させて、赤血球−分子対−病理学的因子を生じ、そして前記患者の血液から前記赤血球−分子対−病理学的因子を除去する
ことを包含する方法。
【請求項２４】
患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法であって：
ａ）老化マーカーを有する少なくとも１つの赤血球ゴーストを調製し、
ｂ）少なくとも１つの分子対をｅｘ  ｖｉｖｏで用いて少なくとも１つの前記赤血球ゴーストを感作し、
ｃ）有効量の前記感作赤血球ゴースト分子対を患者に投与し、そして
ｄ）前記感作赤血球ゴースト分子対を前記患者の血液中に存在する特異的病理学的因子
と結合させて、赤血球ゴースト−分子対−病理学的因子を生じ、そして前記患者身体の特権化アポトーシス性または老化細胞天然クリアランス系により前記赤血球ゴースト分子対−病理学的因子を除去する
ことを包含する方法。
【請求項２５】
前記赤血球ゴーストがホスファチジルセリンの表面への出現を有し、そしてマクロファージホスファチジルセリン受容体による前記赤血球ゴーストの表面での前記ホスファチジルセリンの認識が遮断される請求項８記載の方法。
【請求項２６】
前記分子対が補体固定に適しているが、しかしＦＣγ受容体により認識され得ないＦｃ領域を含む請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
請求項１９記載の方法であって：
ａ）前記赤血球表面タンパク質が帯域３表面タンパク質であり、そして前記赤血球ゴーストがホスファチジルセリンの表面への出現を有し、そしてマクロファージホスファチジルセリン受容体による前記赤血球ゴーストの表面での前記ホスファチジルセリンの認識が遮断され、
ｂ）有効量のクロロキンを前記患者に投与して、前記感作赤血球ゴーストによる前記病理学的因子の排除を一時的に防止し、そして
ｃ）前記患者への前記クロロキンの投与を中止して、前記患者の血液から前記病理学的因子を排除する
ことを包含する請求項１９記載の方法。
【請求項２８】
前記赤血球分子対の生存時間を増大するために、アンドロゲンまたはアンドロゲン様物質を前記分子対とともに付加することを包含する請求項１記載の方法。
【請求項２９】
赤血球および分子対と抗体の複合体を含む組成物であって、前記赤血球がＣＲ１受容体以外である部位で前記分子対と抗体の複合体のうちの少なくとも１つに結合され得る、そして前記分子対と抗体の複合体が病理学的因子を結合し得る組成物。
【請求項３０】
前記分子対と抗体の複合体が少なくとも１つのモノクローナル抗体から成る請求項２９記載の組成物。
【請求項３１】
前記モノクローナル抗体がヒト化または非ヒト化抗体である請求項３０記載の組成物。
【請求項３２】
赤血球ゴーストおよび分子対と抗体の複合体を含む組成物であって、前記赤血球ゴーストがＣＲ１受容体以外である部位で前記分子対と抗体の複合体のうちの少なくとも１つに結合され得る、そして前記分子対と抗体の複合体が病理学的因子を結合し得る組成物。
【請求項３３】
前記赤血球ゴーストがホスファチジルセリンの表面への出現を有し、そして前記赤血球ゴーストの表面の前記ホスファチジルセリンがマクロファージホスファチジルセリン受容体による認識から遮断される請求項３２記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［発明の背景］
１．発明の分野
本発明は、免疫学の分野に関する。特に本発明は、末梢血からの病理学的およびその他の標的のｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスのための方法および組成物に向けられる。これらの標的としては、以下の微生物生物体、例えばウイルス、細菌、リケッチアおよび真菌、生物学的および化学的戦争用因子、異形成性および転移性癌細胞、自己免疫抗体、ならびに病理学的またはその他の過程を媒介するか身体中に存在する任意の分子が挙げられ得るが、これらに限定されない。適切な標的は、結合相手により結合されて、免疫複合体（ＩＣ）のような複合体を形成し得るものであり、これは次に食作用のようなプロセスにより循環から除去され得る。特に本発明は、生物学的因子、例えば抗体および補体構成成分を用いる方法および組成物、ならびに多食作用区画中の血流からの病理学的標的のクリアランスを促すための赤芽球系列および骨髄球系列の細胞の操作を包含する。
【背景技術】
【０００２】
２．従来技術の簡単な説明
脊椎動物は、微生物の侵襲からの防御のために複雑な防御系とともに進化してきた。概してこの防御系は、２つの部分、即ち体液性免疫系および細胞性免疫系からなる。免疫系は、循環中の病理学的標的のｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスのための２つの異なるメカニズムとともに進化してきた。第一のメカニズムは、体液性応答により媒介される免疫原標的の直接クリアランスである。本明細書中では、身体は、補体オプソニン化後に身体中で食作用性細胞区画において除去される免疫複合体（ＩＣ）を形成する標的と複合する標的特異的抗体を保有しなければならない。これらの例としては、循環多形核顆粒球（ＰＭＮ）ならびに肝臓および脾臓マクロファージが挙げられる。この作用は、食作用性細胞表面のＦＣγ受容体およびＣ３ｂ（またはＣＲ１）受容体により媒介される。表ＶＩのＡおよび表ＶＩのＢは、この直線的標的クリアランスを表す。これは、標的に対する免疫性を要する天然クリアランスメカニズムである。
【０００３】
表ＶＩ中のＣに示された病理学的標的のｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスのための第二のプロセスは、霊長類赤血球（Ｅ）ＣＲ１表面受容体（Ｅ  ＣＲ１）との結合による補体オプソニン化ＩＣの間接的クリアランスを包含する。反応は迅速であり、そしてＥ  ＣＲ１に結合されたＩＣ／Ｃ３ｂ複合体は、固定組織単球による赤血球−免疫複合体（Ｅ−ＩＣ）クリアランス反応を介した食作用のために肝臓および脾臓に迅速に迂回される。
【０００４】
間接的ｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスメカニズムに基づいて、ロナルドテイラー（Ronald
Taylor）は、ＩｇＧ抗標的−ＩｇＧ抗ＣＲ１として常に定義されるヘテロポリマー（Ｈ
Ｐ）が霊長類Ｅに結合されて、Ｅ  ＨＰを形成するストラテジーを示した。感作Ｅ  ＨＰは、「特権化」ＣＲ１部位で循環系中の特異的標的を迅速に結合する。一旦赤血球に結合されると、ＣＲ１−ＨＰ−標的免疫複合体は、認識され、Ｅから取り外され、食作用化され、そして肝臓中のマクロファージにより破壊されて、ＣＲ１欠損Ｅのその後の再循環を伴う。この間接的標的クリアランスメカニズムは、後述されるいくつかの欠点を有するが、しかし依然として循環における迅速なそしてある程度効率的なｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスを実証する。
【０００５】
抗原に対する応答は体液性応答および細胞性応答の両方を包含する、と一般に考えられる。体液性免疫応答は細胞により放出される非細胞性因子により媒介され、これらは血漿または細胞内液中に遊離して見出されることがあるし、見出されないこともあり得る。体
液性応答の主要構成成分は、Ｂリンパ球により産生される抗体により媒介される。
【０００６】
細胞媒介性免疫応答は、抗原提示細胞、ならびにＢリンパ球（Ｂ細胞）およびＴリンパ球（Ｔ細胞）を含めた細胞の相互作用に起因する。細胞免疫系は、ともに細網内皮系（ＲＥＳ）を含む骨髄球系列、多形核顆粒球、例えば好中球、好塩基球および好酸球ならびに単球の細胞から成る。ＲＥＳとしては、未熟循環血単球および肝臓中の成熟クッパー細胞、腎臓の糸球体内メサンギウムの細胞、肺中の肺胞マクロファージ、漿膜マクロファージ、脳ミクログリア、脾臓マクロファージおよびリンパ節マクロファージが挙げられる。これらの食作用性細胞は、それらの表面受容体およびそれらの顆粒含量に関して表ＩＩＩに特性化されている。
【０００７】
免疫応答は、種々の種類の細胞、主としてマクロファージまたはその他の抗原提示細胞による外来抗原の認識により開始されて、リンパ球、特にその特定の外来抗原を特異的に認識するリンパ球の活性化をもたらして、外来抗原の排除を生じる。外来抗原の排除に向けられる免疫応答を仕上げるのは、ヘルパー機能、刺激剤機能、サプレッサー機能およびその他の応答をもたらす複合相互反応である。免疫系の応答力は、刺激および抑制のための多数の部位で注意深く制御されなければならず、あるいは応答は、病理学的標的排除後に起こらないか、過剰応答されるか、あるいは継続しない。
【０００８】
外来抗原に対する応答の認識期は、免疫細胞上の特定の受容体への外来抗原の結合からなる。これらの受容体は一般に、抗原曝露前に存在する。認識は、マクロファージ様細胞による、あるいは血清または体液内の因子による認識による抗原との相互作用も包含し得る。
【０００９】
活性化期では、リンパ球は少なくとも２つの主要な変化を受ける。それらは増殖し、抗原特異的リンパ球のクローンの拡大および応答の増幅をもたらし、そして抗原刺激化リンパ球の子孫はエフェクター細胞に、または生存し、抗原に対する再曝露に応答するよう容易をする記憶細胞に分化する。この応答を増強する非常に多数の増幅メカニズムが存在する。
【００１０】
エフェクター期では、活性化リンパ球は、抗原の排除および免疫応答の確立をもたらし得る機能を実施する。このような機能としては、細胞性応答、例えば調節、ヘルパー、刺激剤、サプレッサーまたは記憶機能が挙げられる。多数のエフェクター機能は、細胞および細胞性因子の組合せ関与を要する。例えば抗体は外来抗原と結合して、遊離のまたは固定された血中好中球および単球食細胞によりそれらの食作用を強化する。
【００１１】
概して体液性免疫系機能は、侵入免疫原性標的に特異的な抗体の産生を生じ、免疫原のＴリンパ球プロセシングにより媒介されて、それをＢリンパ球に移すかまたは提示して、免疫原に特異的な抗体産生を開始する。細胞免疫系は、その第一のものは多形核顆粒球（好中球、好塩基球および好酸球）で、第二のものは細網上皮系（ＲＥＳ）を含む単球である骨髄球系列の細胞から成る。成熟単球は全て、これらの組織中への移動後のそれらのサイズの増大のために、依然として固定されたままで、それ自体循環系に再び入ることができない。それらは、オプソニン化免疫複合体を形成する修飾後に、ならびに身体からのオプソニン化免疫複合体のクリアランス後に、微生物侵入物またはその他の免疫原性標的を貪食する。したがって脊椎動物における細胞免疫防御は、抗原プロセシング、ならびに抗体産生細胞（リンパ球）および２つの異なる骨髄球系列のマクロファージを包含するよう進化してきた。両系列の結果として生じた機能は身体からの任意の標的クリアランスである。
【００１２】
ＩＣクリアランスにおける受容体の役割
ＩＣ上のオプソニンＣ３ｂの存在下で生じる、補体固定を伴うかまたは伴わない、それらのＦＣ領域を含めた抗体でオプソニン化された病理学的標的は、オプソニンの非存在下でよりも顆粒球および単球マクロファージの両方により効率的に食菌される。これは、任意の抗体のＦｃ領域に特異的な貪食細胞Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）により、ならびに活性化補体Ｃ３ｂの主要構成成分に特異的なＣＲ１受容体により媒介される。
【００１３】
オプソニン化免疫複合体のこの食作用性クリアランスは、適切な条件下で、顆粒球および単球の両方において食作用性細胞区画として機能することが既知である。単球は数ヶ月または数年間生き、そして約６％の正常ＷＢＣ（白血球）および＜２％の正常骨髄球を含む、ということが当業者により既知である。顆粒球は２〜３日生存し、全身循環中に約６時間存在し、全白血球の６０〜７０％を構成し、８０００万個／分の割合で骨髄中で産生され、そして循環系に放出される、ということも既知である。
【００１４】
表Ｉに詳述されているように、免疫複合体は天然メカニズムにより、例えば食作用性細胞表面のＣ３ｂおよびＦｃＲにより媒介される多形核顆粒球（ＰＭＮ）および単球の両方の食作用性細胞との免疫複合体の直接的相互作用により（表Ｉ−ＡおよびＩ−Ｂ）、ならびに霊長類Ｅ上に見出されるＣＲ１と補体構成成分（Ｃ３ｂ）オプソニン化免疫複合体との結合により媒介される食作用性細胞、主にＲＥＳの固定組織肝臓単球との抗体感作赤血球（Ｅ）に伴う標的の間接的相互作用（表Ｉ−Ｃ）により、身体から取り除かれ得る。
【００１５】
免疫複合体は、間接的人工的メカニズムによっても取り除かれ得る：その１つは、ｉｎ
ｖｉｖｏ標的クリアランスに関するＣＲ１交換反応（表Ｉ−Ｄ）に基づいた、ＣＲ１交換反応を活性化し、そして肝臓および脾臓における標的クリアランスを生じるＥ  ＣＲ１表面受容体を保有するＨＰ感作霊長類Ｅに対する標的のヘテロポリマー（ＨＰ＝ＩｇＧ抗標的−ＩｇＧ抗ＣＲ１）誘導性結合を包含するものであり；そしてもう１つは、本発明の好ましい実施形態において提唱されるような（表Ｉ−Ｅ）、ＣＲ１以外のＲＢＣ上の任意の部位でＩｇＧ抗標的−Ｆａｂとして表示されるＭＰを伴う、分子対感作ＲＢＣとの標的の間接的相互作用による標的クリアランスである。これは、主に肝臓および脾臓中の、そして多少は循環中での多食作用区画を包含するＣＲ１交換反応以外のメカニズムによるＥ
ＭＰ／標的／Ｃ３ｂオプソニン化複合体のクリアランスを生じる。
【００１６】
血流からの免疫複合体の直接的クリアランスは普通は効率的であるが、しかしながらいくつかの場合には、余分量のＩＣのクリアランスがしばしば組織中での免疫複合体沈着を引き起こす。これは、その後の補体活性化が炎症性応答を生じる過敏症を引き起こし得る。この種類の過敏症は、典型的には血清疾患、糸球体腎炎、慢性関節リウマチおよび全身性エリテマトーデスとして症状発現される。
【００１７】
しかしながら霊長類ＥのＣＲ１受容体への結合による免疫複合体のクリアランスは、その後のＣＲ１交換反応とともに、肝臓および脾臓中のマクロファージによる標的Ｅ  ＨＰ複合体の食作用による循環からの迅速且つ多少効率的な標的クリアランスを提供することが実証されている。
【００１８】
活性化補体構成成分Ｃ３ｂ免疫複合体（Ｃ３ｂ）の存在下での免疫複合体クリアランスは、ＰＭＮ食細胞上の、単球マクロファージ上の、ならびに霊長類Ｅ上のＣ３ｂまたはＣＲ１受容体の存在に基づいたより効率的なクリアランスメカニズムをもたらす。しかしながら霊長類赤血球上のＣＲ１受容体の存在は、ＰＭＮ取込みを競合的に抑制し、ほとんどの部分に関して、ＣＲ１交換反応によるクリアランスのために免疫複合体（Ｃ３ｂ）を肝臓および脾臓中の固定単球に向ける。
【００１９】
本発明の目的は、ＥＭ  Ｐ／標的複合体にＣ３ｂオプソニンを結合するよう機能する補
体活性化の存在下でのＥ  ＭＰ／標的複合体による標的の間接的クリアランス（表Ｉ：Ｅ参照）、ならびに食作用性細胞区画によるそのクリアランスである。
【００２０】
食作用：間接的ｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのプログラミング
赤血球（Ｅ）とのオプソニン化免疫複合体の結合は、食作用による赤血球−免疫複合体の取り込み及び破壊を引き起こし得る、ということが当業者により既知である。赤血球−免疫複合体をプロセシングするために選択される経路および区画は、赤血球当たりで結合される免疫複合体の数、ならびに利用可能な表面結合部位の均質表面分布によっている、ということも既知である。
【００２１】
一旦標的が直接または間接的に霊長類Ｅ  ＣＲ１部位に結合すると、第一に肝臓を、そして第二に脾臓を通過することにより、それはそれだけで除去される。このシナリオにおいて、循環顆粒球食作用性細胞は、免疫複合体の食細胞クリアランスから除外される。食作用の区画化を制御する因子は免疫複合体がＥと相互作用する方法である、ということが当業者により既知である。免疫複合体がＥ上のＣＲ１部位に結合されると、それは、Ｅ表面のＣＲ１クラスターの分散パッチの結果であることが既知である顆粒球食作用から締め出される。ＩＣの食作用のための多形核顆粒球は、全Ｅ表面のＩＣ結合部位の均質分布により生成されるＥ上のＩＣの平坦な配置を認識しなければならない（ＣＲ１分散パッチにより提供されない）。
【００２２】
Ｅ上のＣＲ１以外の部位でのＩＣの結合は、Ｅ  ＩＣ複合体を肝臓および脾臓中だけでなく、循環中ＰＭＮ食作用区画でも食べられるようにし、それによりもっぱらＣＲ１交換反応により提供されるものを超えたｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスの動態および全体的効率を増大する、ということが本発明の目的である。
【００２３】
身体からの免疫複合体の迅速ＣＲ１代理クリアランス：ＣＲ１交換反応による補体オプソニン化非依存性ＩＣクリアランスのためのヘテロポリマーの使用（表Ｉ−Ｄ）
ヘテロポリマーは、以下のように定義される：異なる特異性の２つの抗体からなるポリマーで、一方はＩｇＧ抗ＣＲ１抗体（あるいは同様の特異性を有する任意のその他の抗体または抗体断片）であり、他方はＩｇＧ抗病理学的標的（微生物等）である。ヘテロポリマーは、ＨＰを介してＣＲ１部位に免疫複合体を直接結合することにより、免疫複合体のＣ３ｂオプソニン化に取って代わるための代理物として用いられる。これは、肝臓および脾臓への標的の迅速な移動を、ならびに「特権化」ＣＲ１部位への標的／ＨＰ複合体の結合のために、肝臓および脾臓単球マクロファージの食作用区画における標的の隔離を生じる。以下の一連の事象は、病原体のＥ  ＨＰクリアランスを簡潔に示す：
１．Ｅは、２−特異的抗体対、ＨＰ、例えば上記のようなものにより、好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏで感作される。
２．Ｅ  ＨＰは、病理学的微生物を結合することにより相互作用し、補体固定または活性化のための要件は存在しない。
３．Ｅ  ＨＰ／微生物複合体は、正常循環機能の結果として循環中で肝臓および脾臓に移動する。
４．複合体は、Ｅ  ＨＰ／標的複合体のＦｃγ領域との、ならびにＥ  ＨＰ（ＨＰ感作Ｅのみ−標的なし）とのクッパー細胞表面のＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）の初期相互作用により引き起こされるＣＲ１交換反応に加わる。
５．ＨＰ／標的複合体、およびＨＰなし標的はともに、同時的にＣＲ１交換反応を受ける。
６．Ｅは、ＨＰが結合されたＣＲ１表面受容体を欠く循環系に放出される。ＨＰ／標的複合体およびＨＰ単独は、固定クッパー細胞または脾臓固定マクロファージによりＣＲ１交換インターナライゼーション後に分解される。
【００２４】
当業者に既知のＣＲ１交換反応は、主に肝臓および脾臓において起こるが、それを以下に説明する。
【００２５】
ＨＰ  ＣＲ１交換反応の特性化
１つは、Ｅ  ＨＰまたはＥ  ＨＰ標的複合体であって、ともに補体なしで肝臓および脾臓固定単球上のＦｃγＲに結合する。２つ目は、その結合が、ＣＲ１部分を切断するタンパク質分解酵素の放出を誘発して、ＣＲ１を欠くＥを循環中に放出し戻して、同時に、破壊のためにＨＰまたはＨＰ複合体（病理学的標的との）をインターナライズする。このようなものとして、ＣＲ１交換反応の結果、Ｅ表面のＣＲ１数が低減される。
【００２６】
標的の非存在下でこのようにして感作されたＥ（Ｅ  ＨＰ）は、それ自体、ＣＲ１交換反応を受けており、そして標的クリアランスを競合的に抑制している。循環中に放出し戻されるＥ上のＣＲ１部位の数の低減の結果、ならびに正常Ｅ中のＣＲ１受容体が表面での限定発現を示すと理解することは、標的化分子に関連しないＨＰまたはその他の可溶性免疫複合体により標的化されないその他の微生物に対する総宿主免疫応答の減損を引き起こす。この汎化免疫系低下は、一時的ではあるが、生物戦争因子への長期曝露といったＨＰによる反復回数の処置を要するか、あるいは病理学的標的が慢性疾患状態における自己免疫抗体である用途において特に問題を残す。
【００２７】
ＨＰの使用に伴う主な欠点は、病理学的標的のその迅速クリアランスにもかかわらず、多数の用途において病理学的標的から長期間宿主を防御する（「免疫感作する」）ことの必要性である。表Ｉにおいて、ＨＰは限定防御をもたらすとして適切に示されている。
【００２８】
ＨＰの迅速クリアランスメカニズムは病理学的標的の＞９９．９％のクリアランスに達しない、ということも既知である。多数の病理学的標的の迅速クリアランス速度は、９０％以下の病理学的標的クリアランスが達成され、残りの１０％がこの系により回復可能でない場合に立証される、ということをデータは示し、そして損失標的は血管系中に隔離されると考えられる。さらに、霊長類モデル系では、マウスモノクローナル抗体の使用は、ＨＰを弱めるマウス抗体に対するサルの免疫学的反応を発現して、補体オプソニン化に起因するメカニズムにより病原体クリアランスにおけるＨＰの機能低減を生じて、それらの抑制のためにこのＣＲ１交換経路を介した血液からのこれらのＥ  ＨＰが病理学的標的を掃去できないようにさせる、ということも既知である。
【００２９】
ある種の病理学的標的、例えばＨＩＶおよびマルブルクウイルスは、おそらくは悪性食作用区画、即ち固定単球に向けられるそれらの存在のために、ＣＲ１交換反応によるクリアランスに関して問題があることを立証する。さらにＨＩＶウイルスは、ＣＤ４発現単球中で低度の感染を遂行する。ＨＩＶおよびマルブルクウイルスおよびその他の病原体を、それらの破壊および身体からのクリアランスのために異なる食作用区画に向ける、ということは非常に重要であり得る。
【００３０】
病理学的標的（微生物、化学物質および自己抗体）に対するＣＲ１交換反応の使用のための主要機動力は、病理学的標的の迅速クリアランスである。要するに、このストラテジーの使用に伴う問題としては、以下のものが挙げられる：
・十分長期間（分）Ｅ  ＨＰを保持することができないこと、
・病理学的標的負荷の全てを除去できないこと（９０％のみ達成可能、これを〜１００％に増大する一般的ストラテジーはない）、
・Ｅ  ＣＲ１受容体およびＣＲ１交換反応による病原性免疫複合体の身体の天然補体オプソニン化クリアランスと妥協し得るＥ  ＣＲ１の一過性低減。
・ＦｃγＲと結合することにより媒介される肝臓のみにおける（そして低度に脾臓における）ＣＲ１交換反応において、Ｅ  ＨＰ／病理学的標的がプロセシングされて、ＣＲ
１枯渇を伴うＥの放出を生じて、おそらくは器官毒化を引き起こす。
・同様に、病理学的標的を伴わないＥ  ＨＰはこれもＦｃＲと結合することにより媒介される肝臓のみにおける（そして低度に脾臓における）ＣＲ１交換反応において同様にプロセシングされて、標的／Ｅ  ＨＰ複合体のクリアランスと直接競合して、ＣＲ１枯渇を伴うＥの放出を生じる、
・ＨＰに対する宿主免疫反応は、ＨＰの効力を低減して、特に多数回ＨＰ注射後に意図されたように機能する。
【００３１】
Ｅ表面でのＣＲ１枯渇は、それが病理学的標的作用の時点で一過性であり得る場合でも、重要な時期に宿主免疫系を弱らせる。この作用は、過剰量のＥ  ＨＰのプロセッシングがＥ  ＨＰ／病理学的標的複合体のプロセシングを競合的に抑制する肝臓におけるクッパー細胞の圧倒性により説明され得る。さらにＥ  ＨＰおよびその後のＣＲ１反応はそれ自体、循環血液食作用性細胞による標的の破壊を除外して、宿主免疫系の全体的有効性を本質的に限定する。最後に、交差種抗体拒絶反応は、その構成成分であるＣ３ｂ、Ｃ４ｂおよび産生された化学誘引物質Ｃ３ａおよびＣ４ａペプチドが細胞免疫系を悪性標的（即ちＥ  ＨＰそれ自体、そして病理学的標的でない）に動員する補体を活性化する。さらにまた、全部ではないが病理学的標的は、標的が毛細血管および小細静脈のような血管系中に隔離されるため、血流からのＥ  ＨＰを用いて除去され得る。肝臓および脾臓中のＣＲ１交換反応にクリアランス反応を限定すると、病理学的標的のこの小非除去分画は致命的なものになる。
【００３２】
必要とされるものは、免疫系効力低減を生じない血流から病理学的標的を排除する系である。用いられる系は、長期間個体を防御するかまたは「免疫感作」すべきであり、そして生物兵器および慢性長期自己免疫疾患への曝露のための予防といったような用途に特異的であるべきである。系は、それらが身体中で隔離される場合はどこでも、本質的に＞９９．９％の標的を効率的に除去し得る必要がある。本発明の好ましい実施形態では、肝臓および脾臓単球で観察されたものを上回る標的クリアランス増大を生じ得るクリアランスメカニズムにおける循環ＰＭＮ食細胞の偶発的含入も存在し得る。
【００３３】
［表の簡単な説明］
表Ｉは、直接および間接的方法による免疫複合体（ＩＣ）のクリアランスを示す。直接的方法は、オプソニン化（Ｃ３ｂ結合）ＩＣの食作用性細胞との結合ならびにそのクリアランスを包含する。間接的方法は、抗体対感作化赤血球（Ｅ）（インタクトなＥまたはゴーストＥ）との標的の結合を、循環からのその後のクリアランスとともに包含する。
【００３４】
表ＩＩは、ヘテロポリマー（ＨＰ）ＣＲ１交換反応ＩＣクリアランスと分子対選択的標的排除（ＳＴＥ）ＩＣクリアランスとの間のプロセス比較を、その３つの実施形態とともに示す。
【００３５】
表ＩＩＩは、全食作用性細胞区画中で発現された表面受容体ならびにそれらの粒状内容物を詳述する。
【００３６】
表ＩＶは、Ｅ表面へのＭＰの可能な結合のための付加的部位を列挙する。
【００３７】
表Ｖは、本明細書中に用いられる用語の注解を列挙する。
【００３８】
表ＶＩは、直接および間接的方法による免疫複合体（ＩＣ）のクリアランスを示す。
【００３９】
表ＶＩＩは、ヘテロポリマー（ＨＰ）ＣＲ１交換反応ＩＣクリアランスと分子対選択的標的排除（ＳＴＥ）ＩＣクリアランスとの間のプロセス比較を、多数の実施形態とともに
示す。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００４０】
［発明の概要］
患者の血液からの病理学的因子の排除方法が説明される。本発明の方法は、ＣＲ１受容体以外の部位で病理学的因子を結合し得る分子対と抗体の複合体を有する少なくとも１つの感作赤血球を患者に投与し、そしてＣＲ１交換反応と無関係に患者の血液から病理学的因子を排除することを包含する。本方法は、分子対と抗体の複合体が共有結合される２つの抗体を含み、抗体の一方が赤血球受容体部位との結合に特異的であり、そして他方の抗体が病理学的因子に特異的である。本発明の一実施形態において、本方法は、抗体がモノクローナル抗体であることを含む。本発明の方法は、患者がヒト、非ヒト霊長類または動物であり、そして抗体がヒト化または非ヒト化抗体であることを含む。好ましくは、本明細書にて記載された本発明の方法は、１つ以上の分子対と抗体の複合体を有する感作赤血球を患者に投与することを含む。
【００４１】
本発明の別の実施形態において、患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法が開示される。本方法は、有効量の分子対（この場合、分子対はヒト化または非ヒト化抗体を用いて調製される）を患者に投与し、分子対をＣＲ１と異なる少なくとも１つの赤血球表面の特異的免疫原部位に結合させ、それにより感作赤血球分子対を形成し、そして感作赤血球分子対をＣＲ１以外の赤血球上の任意の部位に対する患者の血液中の特異的病理学的標的と結合させて、赤血球−分子対−病理学的標的を生じ、そして患者の血液から赤血球−分子対−病理学的標的を除去することを包含する。
【００４２】
本発明の別の実施形態は、患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法であって、分子対をｅｘ  ｖｉｖｏで用いて少なくとも１つの赤血球ゴーストを感作し、有効量の感作赤血球分子対を患者に投与し、そして感作赤血球分子対を特異的病理学的因子と結合させて、赤血球−分子対−病理学的因子を生じ、そして患者の血液から赤血球−分子対−病理学的因子を除去することを包含する方法を開示する。
【００４３】
本発明のさらなる実施形態は、患者におけるｉｎ  ｖｉｖｏでの血液由来病原体クリアランスのための方法であって、老化マーカーを有する少なくとも１つの赤血球ゴーストを調製し、少なくとも１つの分子対をｅｘ  ｖｉｖｏで用いて少なくとも１つの赤血球ゴーストを感作し、有効量の感作赤血球ゴースト分子対を患者に投与し、そして感作赤血球ゴースト分子対を患者の血液中に存在する特異的病理学的因子と結合させて、赤血球ゴースト−分子対−病理学的因子を生じ、そして患者身体の特権化アポトーシス性または老化細胞天然クリアランス系により赤血球ゴースト分子対−病理学的因子を除去することを包含する方法が開示される。
【００４４】
さらに別の実施形態において、本発明は、赤血球および分子対と抗体の複合体を含む組成物であって、赤血球がＣＲ１受容体以外である部位で分子対と抗体の複合体のうちの少なくとも１つに結合され得る、そして分子対と抗体の複合体が病理学的因子を結合し得る組成物を提供する。さらなる実施形態において、本発明は、赤血球ゴーストおよび分子対と抗体の複合体を含む組成物であって、赤血球ゴーストがＣＲ１受容体以外である部位で分子対と抗体の複合体のうちの少なくとも１つに結合され得る、そして分子対と抗体の複合体が病理学的因子を結合し得る組成物である。
【課題を解決するための手段】
【００４５】
［発明の詳細な説明］
本明細書中で用いる場合、「患者」または「患者（複数）」という用語は、動物界の成
員、例えばヒト、非ヒト霊長類および動物を意味するが、これらに限定されない。
【００４６】
本発明は、上記背景技術からの異なる間接的ｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランス法を提供する。本発明の出願人等は、本発明の技術を説明するために、選択的標的排除Selective Target Elimination（ＳＴＥ）という用語を作り出した。ＳＴＥは、概して、末梢血からの病理学的またはその他の標的のクリアランスのために用いられ得る多数の実施形態を包含する。これらの実施形態ＳＴＥＩおよびＳＴＥＩＩは、ＨＰクリアランス系に固有の問題を取り扱うことを意図する。
【００４７】
ＳＴＥＩ（表ＶＩ：Ｅ）では、ＣＲ１以外のＥ表面のＩｇＧ抗標的−Ｆａｂ抗任意免疫原性部位と常に定義される分子対（ＭＰ）は、霊長類Ｅに結合されて、Ｅ  ＭＰを形成する。ＭＰ注射後、感作Ｅ  ＭＰは、ＣＲ１以外のＥ上の任意の部位に循環中の特定標的を迅速に結合して、主に肝臓および脾臓単球中での、おそらくは例えば循環ＰＭＮ中でのＥ
ＭＰ／標的／Ｃ３ｂオプソニン化複合体の食作用を生じる。ＳＴＥＩの利点は、本明細書中に考察されている。
【００４８】
本発明のＳＴＥＩＩ実施形態は、Ｅ  ＭＰ標的クリアランスを改良するよう意図されるが、この場合、ＭＰはｅｘ  ｖｉｖｏで赤血球ゴースト（Ｅｇ）を感作する。身体中への輸注後、Ｅｇ  ＭＰは循環中に存在する標的を結合し、そして病理学的標的を、患者の身体中で毎日無数のアポトーシス細胞を除去するために用いられる特権化アポトーシスまたは老化細胞天然クリアランス系に向ける。ＳＴＥＩＩは、短い受動免疫期間（ＳＴＥ  ＩＩａ、表ＶＩ：Ｆ）または長期の受動免疫（ＳＴＥ  ＩＩｂ、表ＶＩ：Ｇ）を提供する。
【００４９】
上記のプロセスは全て、天然プロセスの活性化による効率的且つ迅速なｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスを指示する。Ｅ  ＨＰは、「特権化」ＣＲ１交換反応の利用により機能する。Ｅ  ＭＰ  ＳＴＥ  Ｉは、食作用性細胞表面受容体（ＰＭＮおよびマクロファージ）の利用により機能する。Ｅｇ  ＭＰ（ＳＴＥ  ＩＩａ、ＳＴＥ  ＩＩｂ）は、血流中の天然アポトーシス細胞クリアランスメカニズムの使用により機能する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５０】
選択的標的排除ストラテジー
本発明は、概して末梢血からの病理学的またはその他の標的のクリアランスのために用いられ得る多数の実施形態を包含する。これらの標的は、微生物、毒性化学物質、毒素、自己免疫抗体等であり得る。これらの実施形態ＳＴＥＩおよびＳＴＥＩＩはともに、ＨＰクリアランス系およびそのＣＲ１交換反応に固有の問題を取り扱う。ＳＴＥ実施形態設計は、以下のＨＰクリアランスの不利な点を取り扱う：
１．単一食作用区画の使用（ＨＰクリアランスにおける標的は全て、肝臓においてのみ取り除かれる）。
２．毒性または別種の標的は全て、肝臓に迂回されて、器官毒化の危険を冒す。
３．クリアランス反応は迅速で且つ短期（分）である。
４．９０％クリアランスが達成されるに過ぎない（１０％は血管系中で失われると説明される）。
【００５１】
ＳＴＥ実施形態は、肝臓および脾臓固定組織単球食作用区画に循環食作用区画を付加することを試みることにより、これらの問題を取り扱う。これは、より良好なクリアランス率を達成し、そしてＨＰ系における肝臓器官毒化の危険を最小限にするという２倍効果を提供し得る。
【００５２】
選択的標的排除（ＳＴＥ）と呼ばれる本発明の実施形態は、本明細書中でＳＴＥ  ＩおよびＳＴＥ  ＩＩと呼ばれる２つの部類に入る。ともに、ＣＲ１交換反応とは関係なく、
ｉｎ  ｖｉｖｏ病理学的標的クリアランスを支持する。ＳＴＥ実施形態は、表ＩＩでＨＰおよびＣＲ１クリアランスと平行して示される。
【００５３】
Ｅ  ＨＰおよびＥ  ＭＰ／Ｅｇ  ＭＰプロセスは本明細書中に示されており、そしてそれらの全体的利点、不利な点および付与される免疫期間に関して特性化されている。
【００５４】
Ｅ  ＨＰ：ＣＲ１交換反応による循環中での迅速ｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのための霊長類Ｅ上の「特権化」ＣＲ１部位の使用（表ＶＩ：Ｄおよび表ＶＩＩ）
ヘテロポリマーは、以下のように定義される：異なる特異性の２つの抗体からなるポリマーで、一方はＩｇＧ抗ＣＲ１抗体であり、他方はＩｇＧ抗病理学的標的である。ヘテロポリマーは、ＩｇＧ抗ＣＲ１を介してＥＣＲ１部位に免疫複合体を直接結合することにより、免疫複合体のＣ３ｂオプソニン化に取って代わるための代理物として用いられる。以下の一連の事象は、病原体のＥ  ＨＰクリアランスを簡潔に示す：
１．Ｅは、２−特異的抗体対、ＨＰ、例えば上記のようなものにより、好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏで感作される。
２．Ｅ  ＨＰは、病理学的微生物を結合することにより相互作用し、補体固定または活性化のための要件は存在しない。
３．Ｅ  ＨＰ／標的複合体は、正常循環機能中に肝臓および脾臓に移動する。
４．ＣＲ１−ＨＰ−標的群は、当業者により移動反応として既知であるクリアランスのメカニズムを介して肝臓マクロファージによりＥから取り除かれる。この反応は、Ｅ  ＣＲ１のタンパク質分解を包含する。
５．ＨＰ／標的複合体ならびに標的を伴わないＨＰはともに移動反応を受けて、ＨＰおよびＨＰ／標的食作用ならびにＥ  ＣＲ１受容体の除去を生じる。
６．Ｅは、ＣＲ１表面受容体を欠く循環系に放出される。
【００５５】
典型的には≧９５％の病理学的標的クリアランスが、Ｅ  ＨＰを用いて達成される。標的の非存在下での感作Ｅはそれ自体、移動反応を受けているため、これは標的クリアランスを競合的に抑制する。循環中に放出し戻されるＥ上のＣＲ１部位の数の低減の結果、ならびに正常Ｅ中のＣＲ１受容体が表面での限定発現を示すと理解することは、標的化分子に関連しないＨＰまたはその他の可溶性免疫複合体により標的化されないその他の微生物に対する宿主免疫応答の減損を引き起こす。さらにまたＥ  ＨＰクリアランスプロセスは、生物戦争因子への長期曝露といったＨＰによる反復回数の処置を要するか、あるいは病理学的標的が慢性疾患状態における自己免疫抗体である環境において特に制限を有する。ＨＰは、宿主に対する長期防御を提供しない。
【００５６】
ＨＰにおけるマウスモノクローナル抗体の使用は、補体オプソニン化に起因する霊長類実験モデルに関する免疫学的反応を発現して、これらのＥ  ＨＰがＨＰ損傷のためにこのＣＲ１交換経路により血液から病理学的標的を除去できなくさせる。
【００５７】
簡潔に、このストラテジーの使用に伴う問題を以下に挙げる：
・十分な期間（数分に過ぎない）Ｅ  ＨＰを保持することができないこと、
・Ｅ  ＣＲ１受容体およびＣＲ１交換反応による病原性免疫複合体の身体の天然補体オプソニン化クリアランスと妥協し得る赤血球ＣＲ１の一過性低減。
・ＦｃγＲと結合することにより媒介される肝臓のみにおける（そして低度に脾臓における）ＣＲ１交換反応において、Ｅ  ＨＰ／病理学的標的がプロセシングされて、ＣＲ１枯渇を伴うＥの放出を生じる。
・同様に、病理学的標的を伴わないＥ  ＨＰはこれもＦｃγＲと結合することにより媒介される肝臓のみにおける（そして低度に脾臓における）ＣＲ１交換反応においてプロセシングされて、Ｅ  ＨＰ／標的複合体のクリアランスと直接競合して、ＣＲ１枯渇を伴うＥの放出を生じる。
・ＨＰに対する宿主免疫反応は、ＨＰの効力を低減して、特に多数回ＨＰ注射後に意図されたように機能する。
・＞９９％の病理学的標的を通常除去できないこと。
【００５８】
生物兵器および慢性長期自己免疫疾患への曝露のための予防といったような用途のために、必要とされるものは、おそらくは免疫系効力を低減しない血流から病理学的標的を排除する系である。用いられる系は、長期間個体を防御するかまたは個体に受動免疫を提供すべきであり、そしてそれらが身体中で隔離される場合はどこでも、本質的に＞９９．９％の標的を効率的に除去し得る必要がある。ＳＴＥクリアランスストラテジーは、ＨＰ媒介性クリアランスで観察されるものを上回る標的クリアランス増大を支持する、とわれわれは理解する。
【００５９】
Ｅ  ＭＰ：ＣＲ１交換反応を包含しない多食作用区画中での食作用による迅速且つ効率的な標的クリアランスのための天然食作用性受容体の使用
本発明は、概して、末梢血からの病理学的またはその他の標的のクリアランスのために用いられ得る多数の実施形態を包含する。これらの標的は、微生物、毒性化学物質、毒素、自己免疫抗体等であり得る。選択的標的排除（ＳＴＥ）と呼ばれる本発明の実施形態は、本明細書中でＳＴＥ  ＩおよびＳＴＥ  ＩＩと呼ばれる２つの部類に入る。ともに、ＣＲ１交換反応とは関係なく、ｉｎ  ｖｉｖｏ病理学的標的クリアランスを支持する。本発明のＳＴＥ実施形態は、肝臓および脾臓固定組織単球食作用区画に循環食作用区画を付加することを試みることにより、ＨＰクリアランス系に固有の問題を取り扱うし、さらにまた標的クリアランス改良を達成するために身体中のその他の天然系を利用する。ＳＴＥ実施形態は、表ＶＩＩでＨＰおよびＣＲ１クリアランスと平行して示される。
【００６０】
選択的標的排除Ｉ（ＳＴＥ  Ｉ）
ＳＴＥ  Ｉは、標的クリアランスが普通に起こる肝臓および脾臓中のマクロファージ区画への循環ＰＭＮ食作用区画の付加により特性化される。
【００６１】
ＳＴＥは、以下の利点により特性化される：
・霊長類Ｅの６０日半減期に基づいた１２０日受動免疫期間の提供、
・用いられる免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与できないこと（例えば用いられる抗体はヒト化される）、
・おそらくは標的クリアランスのための食作用区画の拡大のための、宿主中に存在する病理学的標的の＞９９％を中和し、除去する能力、
・標的クリアランス前の補体固定（補体トリガー）による病理学的標的の即時中和および破壊、
・循環ＰＭＮの食作用による標的のクリアランスが、ＣＲ１交換反応およびマクロファージ関与に関して実証されたものを改良し得る。
【００６２】
ＳＴＥＩは、ＭＰによるＥのｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ感作を包含する。この方法は、インタクトな循環ＲＢＣを利用して、循環中に存在する標的を間接的に除去する。
【００６３】
ＳＴＥ  Ｉの過程を以下に示す：
過程Ｉ：ＭＰによるＥ感作：本明細書中に記載されたようなＩｇＧ病理学的標的−ＲＢＣ結合抗体として構築されるＭＰのｉｎ  ｖｉｖｏでの注射。ＭＰは、ｍＡｂ（最初はネズミ起源の）の宿主免疫反応を回避するために、ヒト化ｍＡｂからなり、そして標的捕獲ｍＡｂは、補体固定に適しているが、しかし肝臓および脾臓固定組織単球ならびに循環中のＰＭＮ上のＦｃγＲにより認識されないＦｃ領域を有するとして特性化される。ＥのＭＰ感作は、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＭＰの注射により起こり得るし、あるいは万能ドナー細胞ま
たは自系ＲＢＣ感作はｅｘ  ｖｉｖｏでのＭＰとその後のＥ  ＭＰの輸注による。
【００６４】
この系では、注射により提供される受動免疫は１２０日の持続期間を保有するが、これはＲＢＣの平均寿命に基づいている。このＳＴＥ  Ｉ実施形態において、Ｅ  ＭＰ複合体は標的と結合し、補体を固定して、ＰＭＮおよび固定組織単球（それぞれ循環および肝臓／脾臓中に存在する）によるＥ  ＭＰ／標的複合体の食作用性クリアランスを生じる。
【００６５】
過程ＩＩ：補体固定および活性化を生じる標的とのＥ  ＭＰの結合
【００６６】
過程ＩＩＩ：ＰＭＮおよびマクロファージによるＥ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂオプソニン化免疫複合体の食作用
【００６７】
選択的標的排除Ｉ（ＳＴＥ  Ｉ）
ＳＴＥＩは、ＭＰによるＥのｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏ感作を包含する。この方法は、インタクトな循環赤血球（ＲＢＣ）を利用して、循環中に存在する標的を間接的に除去する。Ｅは、身体へのＭＰの注射によりｉｎ  ｖｉｖｏに感作される。逆に、万能ドナーＲＢＣまたは自系ＲＢＣは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで感作され、Ｅ  ＭＰはその後身体中に輸注される。
【００６８】
ＭＰは、Ｆｃ領域を欠くＩｇＧ病理学的標的−ＲＢＣ結合抗体断片として表される。ＭＰは、Ｍａｂ（最初はネズミ起源の）に対する宿主免疫反応を回避するために、ヒト化Ｍａｂからなり、そして標的捕獲Ｍａｂは、補体固定に適している正常Ｆｃ領域を保有するが、しかしながらこのＦｃ領域は、肝臓および脾臓固定組織単球ならびに循環中のＰＭＮ上のＦｃγＲによる認識を回避するために修飾を必要とし得る。循環Ｅ  ＭＰは任意の病理学的標的を直ちに結合して、補体固定および活性化を生じる。Ｅ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂ複合体は、循環ＰＭＮ、肝臓および脾臓固定組織単球を含めた多数の食作用性細胞区画中で循環から取り除かれる。標的を伴わないＥ  ＭＰは補体Ｃ３ｂオプソニンを保有せず、循環中でのその長期間生存を可能にする。
【００６９】
ＳＴＥ  Ｉは、肝臓および脾臓中の単球食作用区画とともに、Ｅ／病理学的標的複合体のクリアランスのための循環ＰＭＮ食作用区画を付加することにより特性化される。
【００７０】
本発明のＳＴＥ  ＩＩ実施形態は、インタクトなＲＢＣの代わりにＲＢＣゴーストを用いて、それによりＲＢＣ内容物の考え得る食細胞毒性を回避する。ＳＴＥ  ＩＩａは補体活性化とは無関係であるが、一方、ＳＴＥ  ＩＩｂは補体トリガーを保有して、Ｅｇ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂ複合体食作用性事象を開始する。
【００７１】
選択的標的排除ＩＩ（ＳＴＥ  ＩＩ）実施形態１
本発明の別のＳＴＥ実施形態は、補体トリガーの必要性を不要にするよう意図された。ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１と呼ばれるこの実施形態は、ＳＴＥ  Ｉと同一範囲の病理学的およびその他の標的を取り除き得るが、しかしながら受動免疫は、短期間に、例えばＳＴＥ
Ｉの１２０日に対比して約１時間に低減される。
【００７２】
ＳＴＥ  ＩＩに関する論理的根拠は、クリアランスのためにｉｎ  ｖｉｖｏで標的と直ちに結合するＭＰで感作された赤血球ゴースト（Ｅｇ）の輸注である。次に輸注Ｅｇは、標的クリアランス前に、肝臓および脾臓マクロファージがＥｇ  ＭＰをアポトーシス細胞として認識させる任意のプロセスによる迅速食作用および迅速クリアランスを予備プログラムされる。これは、アポトーシス細胞のための天然クリアランスメカニズムであって、マクロファージとのＥｇ  ＭＰ膜または模擬アポトーシス細胞の効率的結合、ならびに肝臓および脾臓におけるそれらのその後のインターナライゼーションおよび破壊を生じる。
【００７３】
模擬アポトーシス細胞Ｅｇ  ＭＰは、ｉｎ  ｖｉｖｏで標的を結合して、肝臓および脾臓中で直ちに取り除かれる。ＳＴＥ  Ｉは食作用区画を循環ＰＭＮに拡大しようと試みるが、しかしこのようなものはＳＴＥ  ＩＩの目標ではない。ＳＴＥ  ＩＩは、まさにＨＰがｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのための効率的ＣＲ１交換反応を利用するように、効率的ｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのための特権化メカニズムとして非常に効率的なアポトーシス細胞クリアランス系を用いる。
【００７４】
Ｅｇ  ＭＰは、以下による宿主天然アポトーシス細胞クリアランスメカニズムにより、クリアランスのための老化アポトーシス細胞として認識され、処理され得る：
・ＭＰ感作ならびにその後のＥ溶解の前または後のＥ表面のホスファチジルセリン（ＰＳ）の付加により、全齢のＥを化学的に修飾する。
・老化関連エピトープの作製を生じるヒト赤血球へのガラクトースα１，３の付加により、全齢のＥを化学的に修飾する。
・ＭＰ感作Ｅの溶解それ自体がＰＳの表面への出現を引き起こして、Ｅｇ  ＭＰをアポトーシス細胞模倣物にさせるべきである。
・二価陽イオン（Ｍｇ＋＋）の存在下での、そしてＡＴＰの非存在下でのＥ  ＭＰの溶解がＥｇ  ＭＰ表面での高ＰＳ曝露を引き起こすが、一方、これらの化学物質を用いないその他の方法はゴーストを提供し、ＰＳ発現限定を伴う。ｅｘ  ｖｉｖｏでのＥ溶解中のＡＴＰの同時存在は、Ｅｇ表面でのＰＳ曝露減少を生じる。
・ＭＰ感作とその後の溶解前に二機能性アルキル化剤により帯域−３のような任意のＲＢＣ表面タンパク質を架橋して、Ｅｇ  ＭＰを生成する。
・密度勾配遠心分離によりアポトーシスＲＢＣを単離および収集して、老化ＲＢＣのみを感作し、その後溶解させて、必要なアポトーシス模倣物Ｅｇ  ＭＰを生成する。
・アポトーシス模倣物または天然アポトーシスＥｇ  ＭＰの産生を生じる任意のその他の物理的または化学的処理または当業者に既知のその他の処理。
【００７５】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１の過程を以下に示す：
過程Ｉ：万能ドナーＲＢＣ、ＡＢＯ型「Ｏ」またはその他の自系インタクトなＲＢＣを、ＭＰ：ＩｇＧ抗標的−Ｆａｂ抗ＣＲ１以外のＲＢＣ上の任意結合部位で感作する。
過程ＩＩ：アポトーシス性であると認識されるようになるよう感作ＲＢＣを誘導する当業者に既知の物理的または化学的プロセスによりＲＢＣを処理する。例えばこれは、Ｅｇ  ＭＰを産生するためのインタクトなＥ  ＭＰの溶解、あるいはＥｇ  ＭＰ表面のＰＳの認識によりアポトーシス細胞クリアランスメカニズムを誘導する当業者に既知の任意の物理的または化学的処理を包含する。二価陽イオン（Ｍｇ＋＋）の存在下でのインタクトなＲＢＣの溶解は、ＲＢＣゴースト表面のＰＳの高レベルの発現を生じる、ということは既知である。そのレベルは、トランスロカーゼ酵素に膜層間の表面ＰＳを能動的に埋もれさせ、したがって表面ＰＳ調整メカニズムを提供する溶解プロセスへのＡＴＰの付随付加により低減され得る、ということも既知である。アポトーシスＲＢＣは単球食作用区画により天然メカニズムで貪食される、ということは当業者に既知である。
過程ＩＩＩ：標的特異的ＭＰ感作アポトーシス模擬ＲＢＣ（Ｅｇ  ＭＰ）は宿主中に輸注され、その結果、標的はＥｇ  ＭＰと直ちに結合する。これは、ＨＰ注射時にＥ  ＨＰに２〜３分の時間で標的の迅速結合を示すＥ  ＨＰ系における試験により支持される。
過程ＩＶ：Ｅｇ  ＭＰの模擬アポトーシス状態は、深部膜層から膜表面へのホスファチジルセリン（ＰＳ）の移動により特性化される。これが天然メカニズムによるＥｇ  ＭＰの効率的マクロファージ食作用を誘導する、ということは当業者に既知である。
【００７６】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１では、クリアランス方法のためのトリガーは、誘導性アポトーシス模擬ＭＰ  ＲＢＣの輸注およびそれらのクリアランスである。取り除かれる標的は、Ｅｇ表面のＭＰ特異的分子対により結合され、除去される。ＭＰによる標的の結合はしば
しば、標的／Ｅｇ  ＭＰが摂取され、マクロファージにより除去され得るまで、毒素または有毒化学物質の毒性を中和する。
【００７７】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１は、Ｅ表面の高度曝露ＰＳを伴うインタクトなＭＰ感作ＲＢＣを使用して、模擬アポトーシスＥの即時クリアランスを生じることを必要とする。インタクトな摂取ＲＢＣの内容物は、ＲＢＣ摂取マクロファージにおける食作用低減を引き起こす、ということは当業者には既知である。この望ましくない反応を回避するために、当業者に既知の任意の方法によりＥ  ＭＰアポトーシス模倣物が溶解され、そしてＥ  ＭＰゴースト膜が単離される。輸注後の細胞質内容物を伴わないゴーストは、肝臓および脾臓単球により効率的に取り除かれる。
【００７８】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１は、以下により特性化される：
・食作用区画の数の可能な増大、
・短期受動免疫、
・免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与することができないこと、
・宿主中に存在する病理学的標的の＞９９％を除去する能力、
・生じるプロセスに関する補体固定または活性化への依存性の欠如、
・ＣＲ１交換反応で観察されるものと類似する病理学的標的のクリアランスの迅速速度（分）。
【００７９】
選択的標的排除ＩＩ（ＳＴＥ  ＩＩ）実施形態２
本発明の別のＳＴＥ実施形態は、補体トリガーを用いて機能するよう意図される。ＳＴＥ  ＩＩ実施形態２と呼ばれるこの実施形態は、他のＳＴＥ実施形態と同一範囲の病理学的およびその他の標的を取り除き得るが、しかしながら受動免疫は、長い期間、例えば数ヶ月間延長される。
【００８０】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１では、高Ｅｇ表面発現ＰＳレベルは、アポトーシス細胞クリアランス経路による迅速クリアランスのためにＥｇ  ＭＰを予備プログラムするよう機能し、免疫の期間はつかの間である。ＳＴＥ  ＩＩは受動免疫の期間を数ヶ月に延長する。
【００８１】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態２では、Ｅｇ表面ＰＳは、当業者に既知の任意のメカニズムにより、例えばアネキシンＶ、ＩｇＧ抗ＰＳまたはＭＰ（ＩｇＧ抗病理学的標的−Ｆａｂ抗ＰＳ）により、ならびに任意のその他の同様のメカニズムにより、中和され、または有効に「埋められ」て、マクロファージ表面のＰＳ受容体によりＥｇ  ＭＰ表面ＰＳ認識を遮断する。
【００８２】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態２の過程を以下に示す：
過程Ｉ：万能ドナーＲＢＣ、ＡＢＯ型「Ｏ」または自系インタクトなＲＢＣを、ＭＰ：ＩｇＧ抗標的−Ｆａｂ抗ＣＲ１以外のＲＢＣ上の任意結合部位で感作する。
過程ＩＩ：任意の方法によりＥ  ＭＰを溶解し、Ｅｇ  ＭＰ表面のＰＳの種々の表面発現を生じる。この実施形態の目的は循環中のＥｇ  ＭＰの生存を延長することであるため、Ｅｇ  ＭＰ表面に存在するＰＳ部位は、本明細書中に記載されているように中和され得る。Ｅｇ  ＭＰへの付加的ＭＰの結合、即ちＩｇＧ抗標的−Ｆａｂ抗ＰＳは、アポトーシス細胞模倣物Ｅｇ  ＭＰのマクロファージ認識を妨げる。
過程ＩＩＩ：Ｅｇ  ＭＰにクリアランスのための標的を結合し、それによりＥｇ  ＭＰ表面に対するＣ３ｂのオプソニン化により補体トリガーを活性化する。このＣ３ｂは、肝臓および脾臓中の固定単球における天然メカニズムによりＥｇ  ＭＰ食作用を誘導するための唯一のシグナルである。本明細書中で用いられるＭＰの抗体はヒト化され、マクロファージ中のＦｃγ受容体により認識されない修飾Ｆｃ領域を保有して、Ｅｇ  ＭＰのｉ
ｎ  ｖｉｖｏ生存に付加する。
過程ＩＶ：肝臓および脾臓中のマクロファージによるＥｇ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂオプソニン化複合体のクリアランス。
【００８３】
ＳＴＥ実施形態２は、以下により特性化される：
・食作用区画の数の可能な増大、
・長期受動免疫、
・免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与することができないこと、
・宿主中に存在する標的の＞９９％を除去する能力、
・補体トリガーの存在、
・宿主循環中の標的出現後の特定の標的の迅速且つ継続的クリアランス。
【００８４】
選択的標的排除ＩＩａ（Ｅｇ  ＭＰ）：循環中に存在する標的のｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスのための天然アポトーシス細胞クリアランスメカニズムの使用（短期受動免疫）
ＲＢＣは１２０日の寿命を有する。それらは老化するようになると、膜構造および完全性の変化、例えばとりわけ当業者に理解されるような、膜の外部小葉上のホスファチジルセリン（ＰＳ）曝露および帯域３クラスター形成が起こる。それらの変化は循環からのＲＢＣ除去を合図し、脾臓および肝臓におけるマクロファージ媒介性赤血球食作用を促す。これは、ＲＢＣ老化細胞のクリアランスのために身体中に起こる天然クリアランスメカニズムである。３６，０００万個のＲＢＣが毎日食作用処理される、と見積もられる。
【００８５】
このメカニズムに基づいて、ＳＴＥ  ＩＩａプロセスのために、われわれはＲＢＣゴーストを調製し、ゴースト上の老化マーカーを生成して、それらをＭＰで感作した（Ｅｇ  ＭＰ）。ＳＴＥ  ＩＩａに関する論理的根拠は、ｉｎ  ｖｉｖｏで標的を直ちに結合するＥｇ  ＭＰの輸注である。Ｅｇ  ＭＰ／標的複合体は、天然アポトーシス／老化細胞クリアランス経路を介して、脾臓および肝臓中で、クリアランスのために老化細胞として直ちに認識される。
【００８６】
ＳＴＥ  Ｉは食作用区画を循環ＰＭＮに拡大しようと試みるが、しかしこのようなものはＳＴＥ  ＩＩａの目標ではない。ＳＴＥ  ＩＩａは、まさにＨＰがｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのための効率的ＣＲ１交換反応を利用するように、効率的ｉｎ  ｖｉｖｏ標的クリアランスのための特権化メカニズムとして非常に効率的なアポトーシス細胞クリアランス系を用いる。
【００８７】
Ｅｇ  ＭＰは、以下による身体の天然メカニズムにより、クリアランスのための老化アポトーシス細胞として認識され、処理され得る：
・ＭＰ感作ならびにその後のＥ溶解の前または後のＥ表面のホスファチジルセリン（ＰＳ）の付加により、全齢のＥを化学的に修飾する。
・低張溶液中のＥの溶解はそれ自体、ＰＳの表面への出現を生じて、Ｅｇ  ＭＰをアポトーシス細胞模倣物にさせるべきである。
・二価陽イオン（Ｍｇ＋＋）の存在下での、そしてＡＴＰの非存在下でのＥ  ＭＰの溶解がＥｇ  ＭＰ表面での高ＰＳ曝露を引き起こすが、一方、ＡＴＰによる溶解は表面ＰＳ発現限定を伴う。
・ＭＰ感作とその後の溶解前に、当業者に既知のようなヘテロ二機能性架橋試薬により帯域−３のようなＲＢＣ表面タンパク質を架橋するかまたは抗体架橋して、Ｅｇ  ＭＰを生成する。
・密度勾配遠心分離によりアポトーシスＲＢＣを単離して、老化ＲＢＣのみを感作し、その後溶解させて、必要なアポトーシス模倣物Ｅｇ  ＭＰを生成する。
・アポトーシス模倣物または天然アポトーシスＥｇ  ＭＰの産生を生じる任意のその
他の物理的または化学的処理または当業者に既知のその他の処理。
【００８８】
ＳＴＥ  ＩＩａでは、クリアランスメカニズムのためのトリガーは誘導性アポトーシス模擬Ｅｇ  ＭＰの輸注である。アポトーシス細胞クリアランスを開始するための補体トリガーは存在しない。しかしながら、古典的および／または代替的経路はともに、クリアランスプロセスの後期に関与する、ということは当業者に既知である。ＳＴＥ  ＩＩａでは、除去される標的はＥｇ表面のＭＰ特異的分子対により結合され、ゴーストとともに除去される。ＭＰによる標的の結合はしばしば、標的／Ｅｇ  ＭＰが摂取され、マクロファージにより除去され得るまで、毒素または有毒化学物質の毒性を中和する。
【００８９】
ＳＴＥ  ＩＩａは、以下により特性化される：
・短期受動免疫、
・免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与することができないこと、
・宿主中に存在する病理学的標的の＞９９％を除去する能力、
・クリアランスを開始するための補体トリガーの欠如、
・効率的天然メカニズムによる病理学的標的のクリアランスの迅速速度。
【００９０】
選択的標的排除ＩＩｂ（Ｅｇ  ＭＰ）：長期受動免疫
ＳＴＥ  ＩＩａでは、高いＥｇ表面発現ＰＳレベルは、アポトーシス細胞クリアランス経路による即時クリアランスのためにＥｇ  ＭＰを予備プログラムするよう機能し、免疫の期間はつかの間である。受動免疫の期間をおそらくは数ヶ月に延長するために、ＳＴＥ
ＩＩｂが意図された。
【００９１】
ＳＴＥ  ＩＩｂでは、ＰＳ表面曝露が低いかまたは全く示さないＥｇが調製される。ＰＳは、当業者に既知の任意のメカニズムにより、例えばアネキシンＶ、ＩｇＧ抗ＰＳまたはＭＰ（ＩｇＧ抗病理学的標的−Ｆａｂ抗ＰＳ）により、あるいは任意のその他の同様のメカニズムにより、中和され、または有効に「埋められ」て、これがマクロファージＰＳ表面受容体による認識からＥｇ表面ＰＳを遮断する。
【００９２】
Ｅｇは次に、除去される標的に特異的なＭＰで感作される。ＰＳがマクロファージ表面のＰＳ受容体により認識され、そしてＥｇ  ＭＰとの食細胞結合の最初の部位を提供する、ということは既知であるため、ＰＳの覆い隠しは循環中のＥｇ  ＭＰの長期生存を支持し、その結果、クリアランスのためにマークされた標的は結合されて、Ｅｇ  ＭＰ／標的複合体を形成する。複合体形成時に、補体は固定され、Ｅｇ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂ複合体はマクロファージ表面のＣＲ１スカベンジャー受容体を介してマクロファージにより貪食される。本明細書中では、Ｃ３ｂは標的複合体食作用を誘導するための唯一のシグナルである。ＭＰの抗体はヒト化され、肝臓および脾臓中のマクロファージ上のＦｃγＲによる認識を回避するために修飾化Ｆｃ領域を保有し、Ｅｇ  ＭＰのｉｎ  ｖｉｖｏ生存に付加し得る。
【００９３】
ＳＴＥ  ＩＩｂは、以下により特性化される：
・食作用区画の数の増大、
・長期受動免疫、
・免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与することができないこと、
・宿主中に存在する標的の＞９９％を除去する能力、
・補体トリガーの存在、
・特定の標的の迅速且つ継続的クリアランス。
【００９４】
ＳＴＥ  ＩＩｂ’（Ｅｇ  ＭＰ）：循環中に存在する標的の長期ｉｎ  ｖｉｖｏクリアランスのための天然アポトーシス細胞クリアランスメカニズムの使用のための別の実施形態
本発明のＳＴＥ  ＩＩｂ’実施形態は、ＳＴＥ  ＩＩａおよびＩＩｂの特徴を併有する。ＲＢＣゴーストは、主要ＲＢＣ膜タンパク質である帯域−３ポリペプチドの凝集を促すために調製される。帯域−３の凝集が宿主循環中に存在する天然自己抗体により認識される新生抗原を生成する、ということは当業者に周知である。さらに肝臓および脾臓中のマクロファージによる損傷ＲＢＣの食作用は、クラスター化帯域３抗原に結合する抗体ならびに当業者に理解されるような代替的補体経路の活性化により媒介される。
【００９５】
マラリアの寄生性因子であるマラリア原虫に感染したＲＢＣ（ＩＲＢＣ）は、帯域３タンパク質のクラスター形成といったような膜変化を示して、食作用区画を介したＲＢＣクリアランスを促す、ということも既知である。さらに、抗マラリア薬は自己抗体の帯域３との結合をかなり低減して、ＩＲＢＣ食作用をできなくする、ということが既知である。
【００９６】
抗マラリア薬はいくつかの小副作用を生じるが、しかしそれらはマラリア風土病地域への旅行者のための予防薬として推奨される。任意の病理学的標的に対する強力な応答を確保するための実際的見地から、この種の薬理学的物質の使用に関するいかなる制限も存在しない。
【００９７】
本発明のＳＴＥ  ＩＩｂ’実施形態では、帯域３のクラスター形成および低〜無ＰＳ表面曝露により特性化されるＭＰ感作ＲＢＣゴーストの使用は、抗マラリア薬と同時投与されると、Ｅｇ  ＭＰのｉｎ  ｖｉｖｏ生存を促す。Ｅｇ  ＭＰに関するクリアランスシグナルは、薬剤の血中レベルが減少された後に帯域３日強により提供される。
【００９８】
ＳＴＥ  ＩＩｂ’実施形態は、その場合、以下により特性化される：
・長期受動免疫、
・免疫グロブリンに対する宿主免疫反応を刺激して、受動免疫を付与することができないこと、
・宿主中の一連の標的の＞９９％を除去する能力、
・特定の標的の迅速且つ継続的中和。
【００９９】
霊長類における免疫複合体のクリアランスのための付加的食作用区画の可能な切り替えまたは含入：ＳＴＥ  ＩおよびＳＴＥ  ＩＩにおける分子対の使用
本発明の目的は、ＣＲ１交換反応と異なるメカニズムによる血流からの、任意の病理学的標的、例えば侵入微生物または自己免疫抗体の効率的且つ安全なクリアランスのための方法を提供することである。ＣＲ１交換反応ならびにその後の赤血球ＣＲ１部位の欠失および固定食作用性単球によるもっぱら肝臓および脾臓におけるＥ  ＣＲ１／病理学的標的複合体の食作用による免疫複合体クリアランスの問題を解決する必要がある。
【０１００】
免疫複合体の顆粒球対固定単球クリアランスを制御する因子は、Ｅへの免疫複合体の結合の部位である。Ｅ  ＣＲ１部位への免疫複合体の結合は、Ｅ表面の別個のおよび限定数のパッチにおけるその存在のために、Ｅ免疫複合体を、ＣＲ１交換反応が起こる肝臓および脾臓中に固定された単球マクロファージに向ける。しかしながらこれらのタンパク質結合部位の均質分散のために、ＭＰにより媒介されるＥ表面のＣＲ１と同等に、任意のその他の部位との免疫複合体の結合は、クリアランスを循環ＰＭＮ顆粒球食細胞にシフトし得る。表ＩＩＩは、Ｅ表面とのＭＰ結合のための付加的な可能な部位の一覧を示す。これらの部位は、全て天然の免疫原性である炭水化物およびタンパク質であり、Ｅ表面に発現される。ＣＲ１部位はＥ表面での発現限定を示し、このようなものとして、Ｅ  ＨＰ免疫複合体を固定組織マクロファージおよびＣＲ１交換に迂回する。ＳＴＥでは、全Ｅ  ＭＰ／
病理学的標的複合体は、多免疫複合体が全Ｅ表面全体に結合し、各々が限定表面積全体での偽足伸張の活性化を生じ、そして多数の免疫複合体が全Ｅ表面全体で結合して、Ｅおよびすべてのその結合免疫複合体の全体的摂取および破壊を支持する。食作用はジッパーメカニズムとして説明されてきたが、この場合、食作用区画ではＥ  ＩＣはＰＭＮ循環顆粒球を含むよう指図される。
【０１０１】
分子対（ＭＰ）、即ち血液からの免疫原または微生物クリアランスのために用いられるＭＰ（ａ１ａ２）、あるいは血液からの自己免疫抗体クリアランスのために用いられるＭＰ（ａ−ａｇ）の使用は、主としてＣＲ１部位および交換反応によるクリアランスならびに肝臓および脾臓中の固定単球から離れた免疫複合体の、Ｅ表面の任意のその他の表面発現免疫原分子との結合に、そしてＥ  ＭＰ／標的複合体の食作用を介した多数の食作用性細胞区画によるクリアランスに向ける。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態Ｅ  ＭＰ（ａ１ａ２）は、抗体対、即ち当業者に既知の任意の方法により共有結合された霊長類またはヒト赤血球上のＲｈｏ（Ｄ）部位に特異的な一方の抗体と、病理学的標的に特異的なもう一方の抗体である。
【０１０３】
以下の表は、その方法を説明する：
【０１０４】
【表１】
2006508025.tif 000002
【０１０５】
抗体は任意の種類のものであるか、あるいはＦｃ領域を欠く抗体断片（Ｆａｂ）２またはＦａｂであり、そしてＥとの抗体対の結合部位は、他の実施形態において、ＣＲ１を除いた対応する特異性抗体を介してＥ表面に均質に発現される任意の表面タンパク質または炭水化物に存在し得る。表ＩＩＩは、Ｅ表面とのＭＰの結合の可能な部位を示す。
【０１０６】
本発明の別の好ましい実施形態は、抗体−抗原（ａ−ａｇ）対を包含するが、この場合、好ましい実施形態における結合抗体はａ−ａ対で示されたものと同様であり、即ち、宿主中の抗原に特異的な抗体の迅速除去のために抗原に共有結合される抗Ｒｈｏ（Ｄ）抗体または抗体断片である。さらにまた、他の実施形態では、Ｅ表面とのａ−ａｇ対の結合の部位は、Ｅ上のＣＲ１を除いた対応する特異性抗体の使用によりＥ表面に均質に発現される任意のタンパク質または炭水化物であり得る。
【０１０７】
【表２】
2006508025.tif 000003
【０１０８】
世界中の約１０〜２０％の人々は、ＲｈＯ陰性であり、かれらの細胞表面にＤ抗原を保
有しない。本発明の２つのその他の好ましい実施形態は、全ＲＢＣ表面に均質に発現される別のタンパク質との感作対の結合を包含する。表ＩＩＩは、考え得る結合部位を提示する。
【０１０９】
Ｒｈ陰性個体にａ−ａ対またはａ−ａｇ対を結合するために、別の方法が用いられる。即ち、Ｅ表面に対を固定するための抗体、特に抗体断片（Ｆａｂ）２またはＦａｂの使用である。結合抗体上のＦｃ領域の欠如は、感作Ｅの補体オプソニン化を同様に遮断し、修飾抗体がＦｃ領域を欠き、それにより肝臓中の固定単球上のＦｃγＲ受容体に対して不応性であるため、Ｅ  ＭＰ（ａ−ａ）またはＥ  ＭＰ（ａ−ａｇ）感作Ｅ長期生存（１２０日まで）を支持する。全てのＭＰ対のアンカー抗体上のＦｃ領域の非存在は、同様に、ＲｈＯ（Ｄ）ＭＰ結合部位での補体固定および活性化を防止する。以下の表は、好ましい実施形態のいくつかを説明する：
【０１１０】
【表３】
2006508025.tif 000004
【０１１１】
【表４】
2006508025.tif 000005
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態では、ＭＰは以下のように定義される：
ＭＰ（ａ１−ａ２）対
ＲｈＰＯＳ  Ｅ
・Ｅ／ＩｇＧ抗ＲｈＯ（Ｄ）−ＩｇＧ抗病理学的標的
・Ｅ／（Ｆａｂ）２またはＦａｂ抗ＣＲ１以外の他の表面タンパク質−ＩｇＧ抗病理学的標的
ＲｈＮＥＧ  Ｅ
・Ｅ／（Ｆａｂ）２またはＦａｂ抗ＣＲ１以外の他の表面タンパク質−ＩｇＧ抗病理学的標的
ＭＰ（ａ−ａｇ）対
ＲｈＰＯＳ  Ｅ
・Ｅ／ＩｇＧ抗ＲｈＯ（Ｄ）−自己免疫Ａｂに特異的な抗原
・Ｅ／（Ｆａｂ）２またはＦａｂ抗ＣＲ１以外の他の表面タンパク質−自己免疫Ａｂに特異的な抗原
ＲｈＮＥＧ  Ｅ
・Ｅ／（Ｆａｂ）２またはＦａｂ抗ＣＲ１以外の他の表面タンパク質−自己免疫Ａｂに特異的な抗原
【０１１３】
本発明の好ましい実施形態では：
・上記感作Ｅはいずれも補体を固定しない（病理学的標的結合前）。
・補体は、病理学的標的結合後にのみ固定され、活性化され、これが食作用を誘発する。
【０１１４】
上記の感作Ｅは全て、誘導される薬剤またはその他のメカニズム、食作用性細胞（顆粒球および単球の両方）表面のＦｃγＲの発現低減のために、食作用に耐性である。
【０１１５】
本発明の別の実施形態は、肝臓および脾臓中のＦｃγＲ受容体により認識されない補体を固定し得るＦｃ領域を保有する抗体（標的捕獲抗体）を遺伝子工学処理することにより、最大Ｅ  ＭＰ生存達成を提供する。Ｄ表面抗原を保有するＥに関して上記された２つの実施形態の好ましい態様は、顆粒球食作用を助長するためにＥ表面にこれらの対の均質分散が存在するような方法での、抗体［抗ＲｈＯ（Ｄ）］−抗体または抗体［抗ＲｈＯ（Ｄ）］−抗原（病理学的自己免疫またはその他の抗体に特異的である）をＥ表面に固定するための一般的抗ＲｈＯ（Ｄ）抗体の使用である。これらの対の両方の特徴は、第一に、Ｅ
ＲｈＯ（Ｄ）タンパク質との抗ＲｈＯ（Ｄ）抗体の結合が免疫補体を固定または活性化しないということ、そして第二に、両ＭＰ対のＥ表面での均質分散が、それぞれの病理学的標的との相互作用時に、補体を固定および活性化し、そして食細胞補体オプソニン受容体により食作用を刺激することである。
【０１１６】
感作Ｅ、即ちＥ  ＭＰ（ａ１−ａ２）およびＥ  ＭＰ（ａ−ａｇ）の産生は、Ｒｈ陽性および陰性宿主中で、計画的に、補体を固定し得ない。これらの感作Ｅはそれ自体、病理学的標的の結合前には、全ての食作用性細胞、ＰＭＮおよび単球上に位置することが既知であるＦｃγＲと相互作用するＦｃ領域が存在する場合には、血流からのクリアランスに感受性である。これを、以下の表で説明する：
【０１１７】
【表５】
2006508025.tif 000006
【０１１８】
それらの病理学的標的の結合前のＥ  ＭＰのＦｃ媒介性クリアランスの抑制
適正構築時のＥ  ＭＰは、最大１２０日間（これは赤血球の半減期が６０日であることを示す）、循環系中に残存し得る。顆粒球および固定マクロファージ、例えば肝臓中のクッパー細胞が、Ｅ  ＭＰ（Ｆｃ）のような正常Ｆｃ領域を保有する免疫複合体を結合する表面ＦｃγＲを保有する、ということは当業者に既知である。食作用性反応は２段階で起こり、Ｆｃ発現免疫複合体がＦｃγ受容体に結合し、これが次に局所的偽足飲み込み反応を引き起こす、ということが確立されている。全Ｅ免疫複合体を貪食するために、多Ｆｃ決定因子は全Ｅ表面全体で結合されねばならない。好ましい方法では、この反応は、Ｅ  ＭＰが病理学的標的を結合する前に血流から除去されないよう、任意の手段により遮断される。
【０１１９】
Ｅ  ＭＰは補体を固定せず、示された４つの実施形態のうちの３つがＦｃ領域を保有し、Ｅ  ＭＰと全食作用性細胞上に位置するＦｃγＲ部位との間の相互作用を遮断するため
の方法が用いられる。
【０１２０】
ＦｃγＲとのＥ  ＭＰ  Ｆｃ領域相互作用を妨げるための多数の方法が存在する、ということは当業者に既知である。本発明に関する好ましい方法は、自己免疫障害および免疫性血球減少に及ぼす作用を発揮することが既知である性ホルモンの使用である。性ホルモンのうちの一作用は、全ての食作用性細胞におけるＦｃγＲの発現を低減することである。糖質コルチコイド、プロゲステロンおよびアンドロゲン（ダノゾールを除く）が食作用性細胞上のＦｃγＲの発現を低減する、ということが既知である。以下のことがさらに実証されている：
・アンドロゲンは主にＦｃγＲ１、２およびＦｃγＲ２の表面発現を低減する、
・アンドロゲンの作用に拮抗する薬剤は、マクロファージＦｃγＲ発現に及ぼす作用を有さなかった、
・これらのアンドロゲン拮抗薬は、マクロファージＦｃγＲ発現に及ぼすアンドロゲンの作用を中和した。
・ＦｃγＲ１、２およびＦｃγＲ２はともに、全ての顆粒球および脾臓マクロファージ上に発現され、Ｅ免疫複合体（Ｆｃ）をマクロファージに結合するよう機能する。
【０１２１】
これは、ＦｃγＲが発現を低減するという知識と組合せて、マクロファージ表面のＣ３ｂ（ＣＲ１）受容体による免疫複合体（Ｃ３ｂ）認識ならびにその後の食作用に影響を及ぼさない。Ｅ  ＭＰ／標的複合体は補体を固定して、活性化し、そしてＣ３ｂ表面受容体を発現する任意の食作用性細胞により除去される。
【０１２２】
ＦｃγＲ受容体の作用を無効にするために用いられる別の方法としては、Ｅ  ＭＰとＦｃγＲとの反応を競合的に抑制する系への余分量の可溶性Ｆｃ領域の導入が挙げられる。
【０１２３】
最後に、上記のように、補体固定およびＦｃγＲ認識マップに関与するＦｃドメインは異なる遺伝子座に位置する。マクロファージ表面のＦｃγＲ受容体により認識されることなく、効率的Ｃ１ｑ結合（補体固定）およびその後の補体活性化を支持する組換えＦｃ断片が構築され得る。
【０１２４】
ＦｃγＲの修飾は、宿主循環中のＥ  ＭＰおよびＥｇ  ＭＰ生存を延長する、ということは当業者に既知である。肝臓および脾臓中のマクロファージからの標的クリアランスを循環ＰＭＮ食細胞を含むよう拡大することも、ＳＴＥの目的である。ＦｃγＲ  ＩＩＩは好中球動員を媒介して、免疫複合体を貪食する、と当業者は理解する。肝臓および脾臓マクロファージ上のＦｃγＲとのＥ  ＭＰまたはＥｇ  ＭＰの結合を回避するためのＦｃ修飾化領域は、ＰＭＮとのＥ  ＭＰまたはＥｇ  ＭＰの結合を同様に妨げる。このシナリオでは、補体トリガーは、ｉｎ  ｖｉｖｏでのＥ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂおよびＥｇ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂ複合体の必要とされる食作用を支持する。
【０１２５】
ＭＰおよびアンドロゲンのｉｎ  ｖｉｖｏでの混合注射はＥ  ＭＰ複合体に最適寿命を提供する
免疫複合体（Ｆｃ）およびＥ免疫複合体（Ｆｃ）は、食作用性細胞表面のＦｃγＲにより媒介されるメカニズムにより除去される、ということが当業者に既知である。同様の現象は、ｉｎ  ｖｉｖｏでは、Ｅ  ＨＰの、同様にＥ  ＭＰの存在下で起こる。ＭＰおよびアンドロゲンまたは当業者に既知の任意のその他の同様に作用する物質の併用投与、あるいは食作用性細胞表面のＦｃγＲによる非認識へのＦｃ領域の遺伝子修飾は、Ｅ  ＭＰの防御ならびに全食作用性細胞上のＦｃγＲの発現低減を生じる。これは、１２０日というｉｎ  ｖｉｖｏでのＥ  ＭＰの平均生存時間を支持し、そして任意の時機にアンドロゲン作用を中和するための薬剤の導入により逆転されるか、あるいは処方間隔での反復投与により継続される。
【０１２６】
Ｅ  ＭＰ／標的複合体のｉｎ  ｖｉｖｏでの補体固定および活性化能力
血流から除去されるＥ  ＭＰ／標的複合体は、補体を固定し、活性化する。補体の活性化とその後のＥ  ＭＰ／標的複合体のＣ３ｂオプソニン化は、循環顆粒球によるＥ  ＭＰ／標的／Ｃ３ｂ複合体の食作用を開始するために必要である。これは、顆粒球食細胞の表面に発現されるＣ３ｂ受容体の存在により媒介され得る。固定肝臓および脾臓単球中の同様のＣ３ｂ受容体も、このクリアランスに加わる。
【０１２７】
ＳＴＥ  Ｉによる病理学的標的のＥ  ＭＰクリアランスの動態
以下の過程は、標的結合前のＥ  ＭＰの早発性クリアランスを回避するためにＦｃγＲ受容体に不応性であるよう修飾された、除去される標的ならびにＲｈＯ（Ｄ）型の宿主に関する特定のＭＰの注射時に起こる。
・その表面に多数のＭＰを保有するＥは、血流中に残存し、１２０日までの間活性である（そして付加的注射により延長され得る）。
・各Ｅ  ＭＰは除去される単一病理学的標的を結合する。
・この最初の結合の後に、Ｅ  ＭＰ表面全体の病理学的標的の付加的結合が生じる。
・Ｅ  ＭＰ／標的複合体の補体固定は、結合された最初の標的がマクロファージおよびＰＭＮにＥ  ＭＰ／標的複合体を固定するのを可能にし、偽足がＥを部分的に飲み込む。
・このＥ  ＭＰ／標的／マクロファージ複合体は、完全赤血球食作用を支持するのに十分な病理学的標的が結合され、補体が活性化されるまで、インタクトな状態で循環し続ける。
・同時に標的およびＥ  ＭＰによる補体固定は、当業者に既知の古典的補体経路および代替的補体経路における補体固定および活性化のメカニズムによるいくつかの微生物標的の即時破壊を引き起こす。
・完全食作用は、多数の標的とＥ  ＭＰの結合によっており、これは、Ｅ  ＭＰが循環食作用性細胞に結合されている間、起こり続ける。
・標的を除去するためにＥ  ＨＰおよびＣＲ１交換反応を用いる場合（この場合、Ｅ上の単一という少ない標的がＥ  ＨＰにより除去され、病理学的標的は依然として生存可能であり、それにより迅速クリアランスを要する）よりもＥ  ＭＰを用いた場合のほうが病理学的標的のクリアランス率は重要性が低く、そして不都合な点は全て、上記のようであると推定される。
・Ｅ  ＭＰを用いて、一旦、最小閾値の補体不活性化標的がＥ  ＭＰ／標的／ＰＭＮ複合体に結合されると、ＰＭＮはＭＰ／標的複合体を完全にインターナライズし、破壊し、そしてＥ  ＭＰ／標的複合体も肝臓および脾臓中の固定組織マクロファージに結合されて、そして除去され得る。
・病理学的標的へのこの免疫拡大は、生物戦争の兵器のｉｎ  ｖｉｖｏ中和、ならびにこの疾患状態を有する患者における自己免疫抗体の連続長期クリアランスといった用途を支持する。
【０１２８】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態１による病理学的標的のＥｇ  ＭＰクリアランスの動態
この実施形態におけるＥｇ  ＭＰは、ゴースト表面に多数のＰＳ部位を保有する。
・輸注Ｅｇ  ＭＰは、循環中に存在する場合は、病理学的標的を直ちに結合する。
・曝露ＰＳは肝臓および脾臓の固定組織単球上のＰＳ受容体に結合するが、この場合、それらは老化アポトーシス細胞としてのそれらの認識のために直ちに除去される。
・この実施形態における循環中のＥｇ  ＭＰの持続期間は、数時間の期間に限定される。
・補体固定が、この天然アポトーシス細胞クリアランス経路による食作用を誘発する必要はないが、しかしながらゴースト赤血球表面に曝露されたＰＳは代替的補体経路を活性化し、Ｅｇ  ＭＰ上にＣ３ｂの沈着を生じることが示されている。これは、アポトーシ
ス細胞クリアランス経路の迅速性を説明し得る。
【０１２９】
ＳＴＥ  ＩＩ実施形態２による病理学的標的のＥｇ  ＭＰクリアランスの動態
Ｅｇ  ＭＰは、ゴースト表面に少数のＰＳ部位を保有する。存在する少数のＰＳ部位は、ＭＰとの複合体生成（ＩｇＧ抗標的−ＩｇＧ抗ＰＳ）により「埋め隠され」て、Ｅｇ  ＭＰのマクロファージ認識ならびに循環中のその長期生存を妨げる。
・輸注Ｅｇ  ＭＰは、循環中に存在する場合は、病理学的標的を直ちに結合する。
・表面ＰＳ部位の遮断ならびに存在する抗体上のＦｃ領域の修飾のためにＥｇ  ＭＰそれ自体が食作用を誘発できないことが、循環中のＥｇ  ＭＰ生存を数ヶ月間延長する。
・標的とＥｇ  ＭＰとの複合体生成はその後、補体固定ならびにＣ３ｂによるＥｇ  ＭＰ／標的複合体のオプソニン化を生じる。
・補体トリガーにより生成されるＣ３ｂは、それらの表面Ｃ３ｂ受容体により媒介される肝臓および脾臓の固定単球によるクリアランスに関してＥｇ  ＭＰ／標的複合体をマークする。
・標的のクリアランスは、Ｅｇ  ＭＰが循環系中に存在する限り、身体中で同様に継続する。
【０１３０】
例証のために本発明の特定の実施形態を本明細書中に記載してきたが、添付の特許請求の範囲に限定されているように、本発明を逸脱しない限り、本発明の詳細について多数の変更がなされ得る、ということは当業者には明らかである。
【０１３１】
【表６】
2006508025.tif 000007
【０１３２】
【表７−１】
2006508025.tif 000008
【表７−２】
2006508025.tif 000009
【０１３３】
【表８】
2006508025.tif 000010
【０１３４】
【表９】
2006508025.tif 000011
【０１３５】
【表１０】
2006508025.tif 000012
【０１３６】
【表１１】
2006508025.tif 000013
【０１３７】
【表１２−１】
2006508025.tif 000014
【表１２−２】
2006508025.tif 000015
【国際調査報告】
2006508025.tif 000016