(57)【要約】【解決手段】植物および植物部分に対して様々な有益性をもたらすために修飾レシチンを使用する方法が開示される。成長中の植物に塗布させた修飾レシチンは、経済上重要な果物および野菜において、果実および植物の強固さ、大きさ、色彩および安定性の改善をもたらすことができる。
2006512085.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物または植物部分を改質させる方法であって、該植物または植物部分の健康状態、成長またはライフサイクルを変化させるのに十分な量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む方法。
【請求項２】
前記修飾レシチンが酵素修飾レシチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記酵素修飾レシチンが、卵レシチン、大豆レシチン、ヒマワリレシチン、ピーナッツレシチン、ゴマレシチンおよびカノーラレシチンからなる群に由来する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記酵素修飾レシチンが大豆レシチンに由来する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記修飾レシチンがアセチル化レシチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記修飾レシチンがヒドロキシル化レシチンである、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記植物部分が、果実、葉、花、根、茎および塊茎からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記植物部分が果実または塊茎から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記植物部分が、前記植物部分を前記植物から収穫する前に前記組成物に曝露される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記植物部分が、前記植物部分を前記植物から収穫した後に前記組成物に曝露される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記植物または植物部分を前記組成物で処理することが、前記の植物または植物部分に前記組成物を噴霧すること、および前記植物または植物部分を前記組成物に浸漬することからなる群から選択される方法により達成される、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物中の前記修飾レシチン濃度が約１ｐｐｍ〜約２０，０００ｐｐｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組成物中の前記修飾レシチン濃度が約１０ｐｐｍ〜約１０，０００ｐｐｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記組成物中の前記修飾レシチン濃度が約２５ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記方法が、植物部分の品質を改善するためのものであって、該植物部分の品質を改善するのに十分な量で修飾レシチンを含む組成物で該植物部分または相当する植物を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記植物部分の前記品質が、膨らみ、色彩、風味および裂果からなる群から選択される特徴の少なくとも１つを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記方法が、植物部分における老化を遅延させるためのものであって、該植物部分における老化を遅延させるのに十分な量で修飾レシチンを含む組成物で該植物部分または相当する植物を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
老化遅延が、前記植物部分の貯蔵寿命すなわち保管寿命の延長により測定される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記方法が、植物部分の大きさ、重量またはその両方を増加させるためのものであって、該植物部分の大きさ、重量またはその両方を増加させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物部分または相当する植物を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記方法が、植物または植物部分の成長を刺激するためのものであって、該植物または植物部分の成長を刺激するのに十分な量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記組成物が、切り枝を前記組成物で処理することにより、該切り枝上の根の根形成および発達を増強するのに使用される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記組成物が、塊茎植物またはそれらの塊茎を前記組成物で処理することにより、塊茎形成を増強するのに使用される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記組成物が、芝草を前記組成物で処理することにより、芝草成長を刺激するのに使用される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記方法が、植物または植物部分の美的特性を改善するためのものであって、該植物または植物部分の美的特性を改善するのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記方法が、植物になる果実を増加させるためのものであって、該植物になる果実を増加させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物またはその適切な部分を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
前記方法が、植物からの落果を低減させるためのものであって、落果を低減させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物またはその適切な部分を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記果実がリンゴである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法が、ストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護するためのものであって、ストレスに関連した損傷から該植物または植物部分を保護するのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記の植物または植物部分が、ストレス状況に曝露される前に前記組成物で処理される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記の植物または植物部分が、ストレス状況に曝露されている間に前記組成物で処理される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記の植物または植物部分が、ストレス状況に曝露された後に前記組成物で処理される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
前記組成物が少なくとも１種類の添加物をさらに含む、請求項２８に記載の方法。
【請求項３３】
前記ストレス損傷が非生物的ストレスの結果である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
前記非生物的ストレスが、冷害、凍結、風、霰、水害、干ばつ、暑さ、土壌圧縮、土壌痂皮、農薬、または上述のストレスの少なくとも２つの組合せの結果である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記農薬が、植物成長調節因子、殺虫剤、防虫剤、殺真菌剤、除草剤または肥料である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ストレス損傷が生物的ストレスの結果である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３７】
前記生物的ストレスが、病原体、昆虫、線虫、カタツムリ、ダニ、雑草、またはヒトおよびヒト以外の動物により引き起こされる物理的損害により引き起こされる、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記病原体が真菌、細菌またはウイルスである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
植物または植物部分における過敏応答を排除する方法であって、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、ポリフェノールオキシダーゼおよびペルオキシダーゼからなる群から選択される酵素の総活性を増加させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む方法。
【請求項４０】
植物または植物部分における酵素の総活性を増加させる方法であって、該酵素が、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼおよびインドール−３−酢酸オキシダーゼからなる群から選択され、酵素の総活性を増加させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む方法。
【請求項４１】
植物または植物部分におけるリグニン合成を増加させる方法であって、該植物または植物部分におけるリグニン合成を増加させるのに有効量で修飾レシチンを含む組成物で該植物または植物部分を処理する工程を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の相互参照】
【０００１】
本願は、２００３年１月３日に出願された米国仮出願第６０／４３８，０１６号および２００３年７月１０日に出願された同第６０／４８６，２７５号に対する有益性を主張する。
【連邦政府により後援を受けている研究または開発に関する記述】
【０００２】
適用なし。
【発明の背景】
【０００３】
植物および植物部分の多くは、人々にとって非常に経済的に重要である。果物、野菜、食用塊茎および切り花ビジネスはすべて、世界的に数十億ドル規模の産業である。芝草は、また別の数十億ドル規模の産業である。長い年月をかけて、人々は、様々な経済的に重要な植物および植物部分の生産を増加することを習得してきた。化学薬剤を植物に塗布して、例えば木からの落果を阻止することにより、果実の市場向きの収穫高を増加させている。さらに、人々は、収穫後の貯蔵および市場取引の期間中に、経済的に重要な植物部分の損失を低減させることを習得してきた。これに関しては、様々な化学薬剤を使用して、果物、野菜および切り花の貯蔵寿命(storage)および保管寿命(shelf life)を延長させている。しかしながら、生産高を増加させる薬剤の多くは、果物および野菜を柔らかくさせる望ましくない影響を有し、したがって、乏しい貯蔵寿命および保管寿命をもたらす。さらに、収穫高を増加させ、かつ貯蔵寿命および保管寿命を延長させる薬剤の多くは、毒物学的問題および環境的問題を有する。代わりの薬剤を見つけ出すことは、植物産業において非常に興味深い。
【０００４】
植物産業に対する別の主要な挑戦は、非生物的および生物的ストレスに関連する損傷からの経済的に重要な植物の保護に関する。具体的には、１９４０年代後半から１９９０年代後半にかけての米国における作物の損失の６０％以上が、非生物的ストレスに起因した（USDA Agricultural Statistics, 1998を参照）。非生物学的ストレスとしては、冷害、凍結、干ばつ、暑さおよび他の環境的要因が挙げられる。昆虫、線虫、カタツムリ、ダニ、雑草、病原体（例えば、真菌、細菌およびウイルス）により引き起こされるもの、ならびにヒトおよびヒト以外の動物により引き起こされる物理的損害を含む生物学的ストレスもまた、米国においてかなりの作物の損失を招いた。したがって、ストレス損傷を防止または軽減し、またストレス損傷後の回復を加速させるのに使用することができる技術を見つけ出すことは、植物産業において非常に興味深い。
【０００５】
近年、リゾホスファチジルエタノールアミン（ＬＰＥ）のようなある特定のリン脂質が、様々な経済的に重要な植物および植物部分に対して幾つかの有益な効果（ストレスに関連した損傷から植物を保護すること（ＷＯ０１／７２１３３０号、およびＵＳ２００３／００６４８９３号を参照）ならびに貯蔵寿命および保管寿命を延長させること、ならびに植物部分の成熟を加速させること（Frag, K.M. et al., Physiol. Plant, 87:515-524 (1993)、Farag, K.M. et al., HortTech, 3:62-65 (1993)、Kaur, N., et al., HortScience, 32:888-890 (1997)、Ryu, S.B., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 94: 12717-12721 (1997)、米国特許第５，１２６，１５５号および同第５，１１０，３４１号、ならびにＷＯ９９／２３８８９号を参照）を含む）をもたらすことが可能であることがわかってきた。しかしながら、大規模な用途に関しては、これらのリゾリン脂質は、現在は比較的高価である。リゾリン脂質によりもたらされるのと同じかまたはそれ以上の効果を費用効率よくもたらす潜在力を有する代わりの薬剤が、当該技術分野で切望されている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、植物または植物部分の健康状態、成長またはライフサイクルを変化させるのに有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理することにより、植物または植物部分に様々な有益な効果をもたらす方法を提供する。
【０００７】
ある態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物部分またはその相当する植物を処理することにより、植物部分の品質（例えば、果物、野菜、花または塊茎の品質）を改善させる方法に関する。例えば、上記方法は、果物および野菜の膨らみ、色彩および風味を改善させるのに、ならびに裂果を低減させるのに使用することができる。本発明の方法に使用することができる修飾レシチンとしては、酵素修飾レシチン（ＥＭＬ）および化学修飾レシチン（例えば、アセチル化レシチン（ＡＣＬ）およびヒドロキシル化レシチン（ＨＤＬ））が挙げられる。
【０００８】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物部分またはその相当する植物を処理することにより、植物部分における老化を遅延させる方法に関する。老化の遅延は、果物、野菜、花および塊茎のような各種製品に関して貯蔵寿命および保管寿命の延長をもたらすことができる。
【０００９】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物部分またはその相当する植物を処理することにより、植物部分（例えば、果物）の大きさ、重量またはその両方を増加させる方法に関する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理することにより、植物または植物部分の成長を刺激する方法に関する。この方法は、切り枝上の根の根形成および発達を増強するのに、塊茎形成を増強するのに、また芝草の成長を刺激するのに使用することができる。
【００１１】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理することにより、植物または植物部分の美的特性を改善させる方法に関する。美的特性が改善された植物または植物部分は、常連客にとってより魅力的に見えるであろう。
【００１２】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物またはその適切な部分を処理することにより、植物になる果実を増加させる方法または落果を低減させる方法に関する。
【００１３】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理することにより、ストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護する方法に関する。
【００１４】
他の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理することにより、植物または植物部分における過敏応答を排除する方法（これは、植物または植物部分においてフェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）、ポリフェノールオキシダーゼ（ＰＰＯ）、ペルオキダーゼ（ＰＯＤ）およびインドール−３−酢酸オキシダーゼ（ＩＡＡオキシダーゼ）のような１種類またはそれ以上の酵素の総活性の増加を測定することにより検出することができる）、および植物または植物部分におけるリグニン合成を増加させる方法に関する。
【００１５】
別の態様では、本発明は、非生物学的または生物学的ストレスにより引き起こされるストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護する方法に関する。上記方法は、植物または植物部分に塗布することが意図される農薬に、有効量のレシチンを添加することを包含する。
【発明の詳細な説明】
【００１６】
比較的低コストのＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬを含む修飾レシチンは、植物または植物部分の健康状態、成長またはライフサイクルを変化させることにより、植物または植物部分に塗布されると、様々な有益な効果をもたらすことができることが開示される。「ライフサイクル」という用語は、植物または植物部分の収穫前および収穫後の両方の段階を包含するように本明細書中では広範囲に使用される。概して、修飾レシチンは、植物または植物部分において、品質および全体の健康状態を改善し、成長を刺激し、また老化プロセスを遅延させることができる。修飾レシチンはまた、結実を増加させ、落果を減少させ、またストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護することもできる。これらの特性に基づいて、修飾レシチンは多くの異なる方法で塗布させて、植物産業に利益を与えることができる。例えば、修飾レシチンを塗布させて、膨らみ、色彩、風味および香りに関して、果物、野菜、塊茎および切り花の品質を改善させ、また裂果を低減させることができる。また、修飾レシチンを塗布させて、植物部分において老化プロセスを遅延または延期させることにより、果物、野菜、塊茎および切り花のような様々な植物部分の貯蔵寿命および保管寿命を延長させることができる。修飾レシチンの成長刺激活性を利用することにより、果物、野菜および塊茎の大きさおよび／または重量を増加させ、芝草の成長を刺激し、また塊茎、根および芽の数を増加させることができる。また、修飾レシチンを使用して、植物または植物部分の全体的な健康状態を改善させることにより、植物または植物部分を消費者にとってより魅力的にさせることができる。さらに、修飾レシチンを塗布させて、結実を増加させ、また落果を低減させることにより、果実生産を増加させることができる。さらに、修飾レシチンを用いて、ストレスに関連した損傷により引き起こされる作物の損失を低減させることができる。本明細書中に開示される有益な効果は、商業価値を有する植物または植物部分すべて（例えば、果実、花、葉、根および茎）に適用可能である。好ましくは、本発明は、果物、野菜、塊茎、切り花およびそれらの相当する植物で実施される。本発明はまた、好ましくは芝草、花壇用植物ならびに他の機能的植物および観葉植物に実施される。
【００１７】
生理学的レベルで、ＥＭＬは、ＰＡＬ、ＰＯＤおよびＰＰＯを含むリグニン合成酵素のような各種酵素の誘導を特徴とする植物における過敏反応のカスケードを誘発することができ、植物の細胞壁へのさらなるリグニンの合成および堆積をもたらすことを本発明者等は発見した（以下の実施例を参照）。この応答は、応答を誘導する１つまたはそれ以上の誘発因子を分泌する病原体（例えば、真菌、細菌またはウイルス）により感染された植物において見られる自己防衛過敏応答に類似している。ＰＡＬ、ＰＯＤ、ＰＰＯおよび他の酵素の誘導により、誘発因子誘導性の過敏応答は、炭素フラックスの方向に影響を与え（例えば、フェニルプロパノイド、イソプレノイドおよびフィトアレキシン生産を増加させ）、続いて栄養器官および生殖器官の成長、色彩の発達およびストレスの軽減のような様々な生理学的応答を引き起こすことが知られている(Hammond-Kosack K., and Jones J 2000 Responses to Plant Pathogens, In: Biochemistry & Molecular Biology of Plants, Buchanan BB, Gruissem W, and Jones RL eds. American Society of Plant Biologists, Rockville, MD)。ストレスの軽減に関する最終結果の１つは、感染した植物組織の崩壊であり、病原体を捕捉して、したがって病原体が植物の他の部分に感染するのを防ぐ。理論に限定されることを意図しないが、本発明者等は、物理的創傷の非存在下で見られるＥＭＬにより誘発される過敏応答は、病原体からの誘発因子により誘発されるものほど劇的でなく、したがって組織崩壊を引き起こさないし、また正常な組織機能を妨げもしないと考える。しかしながら、細胞壁に堆積したさらなる限定量のリグニンは、細胞壁を補強するのに十分であり、植物組織に対してさらなる構造的完全性を提供する。結果として、植物または植物部分は、水、栄養分および他の必須構成成分をより良好に保持することができ、より良好な全体的な品質および健康状態につながる。収穫した植物部分（例えば、果物、野菜、塊茎および切り花）に関して、このことはまた、老化プロセスの遅延または延期をもたらし、したがってそれらの貯蔵寿命および保管寿命を延長させる。生存植物および植物部分に関して、このことにより、より良好に成長することができるようになり、例えば、より大きくかつより重い製品をもたらすことができる。さらに、改善された構造的完全性および重要な構成成分を保持する能力は、結実の増加および落果の低減をもたらすことができる。さらに、植物または植物部分は、様々なストレス状況により良好に抵抗することができる。
【００１８】
本明細書中で使用する場合、「修飾レシチン」という用語は、植物成長を改質させる化合物のその支持物質を濃縮するように修飾されたレシチンを意味し、具体的にＥＭＬ、ＡＣＬ、ＨＤＬならびに特定の修飾レシチンであるＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬに関して本明細書中に開示する植物成長の有益な効果を有する他の類似の修飾レシチンを含む。以下の実施例としてＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬに関して記載する効果を用いて、当業者は、本明細書中に記載する技法を使用して、本明細書中に開示し、また以下の実施例で実証される有益な効果に関して、他の修飾レシチンを試験することができる。特定の修飾レシチンの正確な有効性が以下の実施例で実証されない程度まで、実施例に記載する系または当業者が精通する他の系を用いて、ルーチンな実験により当業者は有効性を容易に確定することができる。例えば、当業者は、実施例１に記載するダイコンの子葉の系を使用して、リグニン堆積、またはＰＡＬ、ＰＯＤ、ＰＰＯおよびＩＡＡオキシダーゼ酵素活性の少なくとも１つのいずれかを測定することができる。修飾レシチンが測定したリグニン堆積または酵素活性を増加させる場合、修飾レシチンは、本発明の範囲内である。
【００１９】
商業上、レシチンは、各種商業製品において湿潤剤および乳化剤として一般的に使用される動物組織または植物組織に由来する複合生成物を指し、通常植物において生物学的効果を有すると予測されていない。レシチンは、アセトン不溶性リン脂質（ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、ホスファジン酸（ＰＡ）、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）および他のリン脂質を含む）、糖質、糖脂質、ならびにトリグリセリド、脂肪酸およびコレステロールのような幾つかの他の物質を含有する。精製等級のレシチンは、使用する分画のタイプに応じて、様々な割合でこれらの構成成分のいずれか、および組合せを含有してもよい。その油を含まない形態では、多数のトリグリセリドおよび脂肪酸が除去され、生成物は、総ホスファチド複合体のすべてのまたはある特定の分画を表す９０％以上のホスファチドを含有する。天然の等級および精製等級の両方のレシチンの粘稠性は、遊離脂肪酸および油含有量、ならびに他の希釈剤の存在または非存在に応じて、プラスチックから液体まで多様であり得る。その色彩は、供給源および（通常過酸化水素および過酸化ベンゾイルにより）漂白されているか否かに応じて、淡黄色から褐色まで多様である。レシチンは、水中では単に部分的に可溶性であるが、容易に水和して、エマルジョンを形成する。油を含まないホスファチドは脂肪酸中に可溶性であるが、固定油中には事実上不溶性である。ホスファチド分画すべてが存在する場合、レシチンは、アルコール中に部分的に可溶性であり、アセトン中には事実上不溶性である。本発明の好ましい実施形態では、食品等級のレシチンを出発材料として使用して、修飾レシチンを作製する。これにより、修飾レシチンを食品に塗布させることに関する安全性および環境問題を最低限に抑える。しかしながら、非食品等級のレシチンもまた使用することができる。現在の定義では、食品等級のレシチン（ＣＡＳ：８００２−４３−５）は、以下の特性を有する：（１）アセトン不溶物（ホスファチド）は５０％以上である、（２）酸価は３６以下である、（３）重金属（Ｐｂのような）は０．００２％以下である、（４）ヘキサン不溶物は０．３％以下である、（５）鉛は１０ｍｇ／ｋｇ以下である、（６）過酸化物価は１００以下である、および（７）水は１．５％以下である。
【００２０】
ＥＭＬは、（例えば、ホスホリパーゼＡ2またはパンクレアチンにより）酵素修飾したレシチンを指し、修飾は、レシチンの界面活性剤特性または乳化特性を増強するようになされる。ホスホリパーゼＡ2により行われる修飾と類似の修飾を行うために、化学的手順もまた使用することができる。好ましい実施形態では、食品等級のＥＭＬを本発明で使用して、安全性および環境問題を最小限に抑える。しかしながら、非食品等級のＥＭＬもまた使用することができる。現在の定義では、食品等級のＥＭＬは、以下の特性を有する：（１）アセトン不溶物（ホスファチド）は５０％以上である、（２）酸価は４０％以下である、（３）鉛は、原子吸光分光分析法により決定する場合に１ｐｐｍ以下である、（４）重金属（Ｐｂのような）は２０ｐｐｍ以下である、（５）ヘキサン不溶物は０．３％以下である、（６）過酸化物価は２０以下である、（７）水は４％以下である、および（８）リゾレシチンは、「Determination of Lysolecithin Content of Enzyme-Modified Lecithin: Method I (1985)」（これは、その全体が参照により援用される）により決定される場合にホスファチド５０〜８０モル％である。
【００２１】
化学的に修飾したレシチンの例としては、ＡＣＬおよびＨＤＬが挙げられる。これらの化学的修飾もまた、レシチンの界面活性剤特性または乳化特性を増強するように意図された。ＡＣＬは、酢酸無水物でレシチンを処理することにより調製することができる。アセチル化は主として、リン脂質をＮ−アセチルリン脂質へと修飾する。ＨＤＬは、過酸化水素、過酸化ベンゾイル、乳酸および水酸化ナトリウムで、あるいは過酸化水素、酢酸および水酸化ナトリウムでレシチンを処理して、出発材料のヨウ素価よりも好ましくは１０％低いヨウ素価を有するヒドロキシル化生成物を生産することにより調製することができる。同様に好ましくは、得られた生成物の分離した脂肪酸分画は、約３０〜約３８のアセチル価を有する。
【００２２】
ＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬは、湿潤剤または乳化剤として一般的に使用され、通常植物において生物学的に活性であるとは予測されない。本発明者等は、ＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬが以下の実施例に記載するように、様々な生物学的効果をもたらすことができることを初めて実証した。未修飾レシチンは同じ効果を引き起こさないことに留意されたい。ＬＰＥのような純粋なリゾリン脂質は、本明細書中に開示するＥＭＬ誘導性の効果の幾つかを引き起こすことができることが当該技術分野で既知である。しかしながら、ＥＭＬと同じ効果は、ＥＭＬ中に含有されるリゾリン脂質では説明することはできなかった。純粋なリゾリン脂質と対比して、ＥＭＬは、多くの他のタイプの分子を含有するかなり複雑な生成物であり、その成分ならびに化学的特徴および物理的特徴に関して、ＥＭＬを全体的に、純粋なリゾリン脂質と異なる生成物となっている。以下の実施例に記載するダイコンの子葉のバイオアッセイでは、２０ｍｇ／Ｌ  ＥＭＬ中のリゾリン脂質の総量が２０ｍｇ／Ｌ  ＬＰＥ中の総量よりもかなり少ないのにもかかわらず、２０ｍｇ／Ｌ  ＥＭＬは、酵素ＰＰＯおよびＩＡＡオキシダーゼの活性化の観点で、過敏応答の誘導に関して、２０ｍｇ／Ｌ  ＬＰＥより効果的あった。これらのデータは、ＥＭＬの１つまたはそれ以上の非リゾリン脂質構成成分あるいは化学／物理特性が、観察される効果にとって重要であることを示す。さらに、リゾリン脂質に富んでいないＡＣＬおよびＨＤＬも、ＩＡＡオキシダーゼの活性を誘導することが可能であったという事実は、修飾レシチンが純粋なリゾリン脂質とは異なって作用するという見解と一致する。
【００２３】
レシチンは、卵黄、大豆、ヒマワリ、ピーナッツ、ゴマおよびカノーラを含む様々な動物供給源および植物供給源から得ることができる。レシチンを生産するための供給源および方法、ならびにレシチンを酵素的に（例えば、ホスホリパーゼＡ2）または化学的に修飾する方法が当該技術分野で既知である。さらに、レシチン、ＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)のような様々な供給業者から市販されている。本発明で使用することができるＥＭＬおよび化学的に修飾したレシチンの例は、Food Chemicals Codex, 4th ed. 1996, pages 198-221ならびに21 C.F.R. sec.184.1063、sec.184.1400およびsec.172.814（これらはともに、それらの全体が参照により本明細書中に援用される）に見出すことができる。
【００２４】
１つの態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物部分を処理することにより、果物、野菜、花および塊茎のような収穫した植物部分の品質を改善する方法に関する。関連態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物部分を処理することにより、収穫した植物部分の老化を遅延し、また貯蔵寿命および保管寿命を増強する方法に関する。これらの用途では、修飾レシチンは、植物部分を収穫する前または後に植物部分に塗布することができる。上述のように、植物部分の品質、老化ならびに貯蔵寿命および保管寿命に対する修飾レシチンの効果は、細胞壁を補強し、また植物組織に対してさらなる構造的完全性を提供するその能力に関すると考えられる。収穫した植物部分は通常、水、栄養分および収穫時に存在したその構造的構成成分を含む他の必須分子に限定される。時間が経つと、これらの分子および構成成分を損失しながら、植物部分は老化プロセスを受けて、植物部分の腐敗および分解を招く。細胞壁を補強し、またより大きな構造的完全性を提供することにより、修飾レシチンは、植物部分が上述の分子および構成成分をより良好に保存することを可能にし、したがって植物部分の品質を改善するのを可能にする。さらに、分解および老化プロセスは、結果として遅延させることができ、植物部分の貯蔵寿命および保管寿命を延長させることができる。茎を水または数種の栄養分溶液中に浸漬させる場合が多い切り花に関しては、処理溶液中に修飾レシチンを含ませることにより、品質をさらに改善されることができ、保管寿命を延長させることができる。
【００２５】
本明細書中で使用する場合、「植物部分の品質」の意味は、問題となる植物部分に依存し、以下の：植物部分の強固さ（膨らみ）、色彩、風味、香りおよび亀裂の少なくとも１つを指す。植物部分がより強固である（より膨らんでいる）場合、かつ／または平均的な消費者にとってより望ましい色彩、風味または香りを有する場合に、植物部分の品質は改善されているとみなされる。果実に関しては、亀裂の低減がまた、品質の改善とみなされる。
【００２６】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで生存植物またはそれらの植物部分を処理することにより、植物部分の大きさ、重量またはその両方を増加する方法に関する。植物部分の大きさは、その容量を指す。当業者は、特定の植物部分の大きさを測定および比較する方法を理解している。例えば、実質的に丸い果実では、直径を果実の大きさの尺度として使用することができる。同様の厚さを有する葉に関しては、表面積を葉の大きさの指標として使用することができる。本発明は、様々な果実、葉、花および塊茎の大きさ、重量またはその両方を増加させるのに特に有用である。以下の実施例で示されるように、大きさの増加の結果として、リンゴの木からの市場向きのリンゴの数が増加した。
【００２７】
関連態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで切り枝を処理することにより、切り枝上の根の根形成および発達を増強する方法に関する。切り枝上の根の根形成および発達を増強することは、修飾レシチンが、根の数、根の全体的な長さまたはその両方を増加させることができることを意味する。根がそれ自体商業製品である場合、上記方法を用いて、根の生産を増加させることができる。そうでなくても、本発明の方法を用いて、植物の成長率および発達度を刺激することができる。特に、修飾レシチンを鉢植え用の土壌培地に添加して、根形成および発達を促進することができる。
【００２８】
別の関連態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで塊茎植物またはその塊茎を処理することにより、塊茎形成を増強する方法に関する。塊茎形成を増強することは、修飾レシチンが塊茎の数を増加させることができることを意味する。
【００２９】
別の関連態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで芝草を処理することにより、芝草の成長を刺激する方法に関する。芝草の成長率は、当業者に精通した任意の方法により測定することができる。例えば、芝草の乾燥重量またはバイオマスを測定することができる。
【００３０】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物または植物部分を処理して、植物または植物部分の全体的な健康状態を改善させることにより、植物または植物部分の美的特性を改善させる方法に関する。理論により限定されることを意図しないが、本発明者等は、修飾レシチンが、植物細胞壁を補強し、また植物組織に対してより大きな構造的完全性を提供することによりこの効果を達成すると考える。修飾レシチンのこの活性は、芝草、花壇用植物ならびに他の機能的植物および観葉植物を消費者にとってより魅力的なものとするのに特に有用である。
【００３１】
別の態様では、本発明は、有効量の修飾レシチンで植物またはその適切な部分を処理することにより、結実を増加し、または落果を低減させる方法に関する。好ましくは、植物全体に修飾レシチンを含有する溶液を噴霧する。結実を増加させることにより、収穫に応じることが可能な果実の数を増加することができる。落果を低減させることにより、果実の損失を低減し、さらに果実の大きさを潜在的に増加させることが可能である。上記方法は、比較的多数の果実が収穫前に落下する傾向にあるリンゴのような果実に関して特に有用である。
【００３２】
別の態様では、本発明は、ストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護する方法に関する。上記方法は、有効量の修飾レシチンを植物または植物部分に塗布させることを包含する。ストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護することは、以下の：（１）損傷の完全な防止、（２）損傷の重症度の低減、（３）より高度な損傷からの回復、および（４）損傷からのより迅速な回復のうちの１つまたはそれ以上を意味する。
【００３３】
本明細書中で使用する場合、「ストレスに関連した損傷」という用語は、非生物的および／または生物的ストレスに起因する損傷を指す。「非生物的ストレス」は、植物または植物部分に１ケ所またはそれ以上の損傷を引き起こすことができる非生存物質または環境因子を指す。非生物的ストレスの例としては、冷害、凍結、風、霰、水害、干ばつ、暑さ、土壌圧縮、土壌痂皮および農薬（例えば、殺虫剤、防虫剤、殺真菌剤、除草剤および肥料）が挙げられるが、これらに限定されない。「生物的ストレス」は、植物または植物部分に１ケ所またはそれ以上の損傷を引き起こす生存物質を指す。生物的ストレスの例としては、病原体（例えば、真菌、細菌およびウイルス）、昆虫、線虫、カタツムリ、ダニ、雑草、ならびにヒトおよびヒト以外の動物により引き起こされる物理的損害（例えば、牧草を食すること、および踏みつけること）が挙げられるが、これらに限定されない。ストレスに関連した損傷から植物または植物部分を保護するために、以下の段階：（１）ストレスに曝露させる前、（２）ストレスに曝露中、および（３）ストレスに曝露した後の１つまたはそれ以上で、修飾レシチンを塗布させることができる。さらに、修飾レシチンは、植物成長調節因子、殺虫剤、防虫剤、殺真菌剤、除草剤、肥料および人々が一般的に植物に使用する他の農薬（ここで、使用することにより植物にストレスをもたらし得る）用の補助剤として使用することができる。
【００３４】
本発明を実施する際に、当業者は、修飾レシチンをある特定の植物部分のみまたは植物全体に塗布するかどうかを容易に決定することができる。例えばストレスに関連した損傷保護を使用して、ストレス状態がある特定の植物部分のみに影響を及ぼし、その特定部分を保護することが目標である場合、その特定の植物部分を修飾レシチンで処理すれば十分であり得る。
【００３５】
植物または植物部分を修飾レシチンで処理する任意の適した方法を本発明で使用することができ、当業者はこれらの方法に精通している。好ましくは、植物または植物部分は、修飾レシチンを含有する溶液で処理される。本発明の目的で修飾レシチンに好ましい溶媒は水である。しかしながら、有機溶媒のような他の適した溶媒もまた使用することができる。修飾レシチンを含有する溶液で植物または植物部分を処理するためには、植物または植物部分に溶液を噴霧することができるか、あるいは植物または植物部分を溶液に漬けるかまたは浸すことができる。植物または植物部分を修飾レシチンに曝露させる他の適切な方法もまた使用することができる。特に切り花に関して、植物または植物部分は、修飾レシチン含有溶液中に茎の切断末端を漬けることにより処理することができる。地下の根または塊茎を処理する場合、修飾レシチンを土壌に含ませることができる。
【００３６】
特定の用途に関して塗布されるべき修飾レシチンの投与量および処理期間は、処理される植物または植物部分のタイプ、修飾レシチンを塗布する方法、処理目的および他の要因に依存する。当業者は、適切な処理条件を容易に決定することができる。一般的に言えば、ＥＭＬのような修飾レシチンが溶液中で標的植物または植物部分に送達される場合、その濃度は、約１ｐｐｍ〜約２０，０００ｐｐｍ、約１０ｐｐｍ〜約１０，０００ｐｐｍ、あるいは約２５ｐｐｍ〜約５，０００ｐｐｍの範囲であり得る。「約」という用語は、明細書および特許請求の範囲において、列挙した濃度からわずかに逸脱するが、列挙した濃度の本質的な機能を保持する濃度を網羅するのに使用される。
【００３７】
修飾レシチンのほかに、湿潤性、修飾レシチンの取り込みおよび有効性を増強する１つまたはそれ以上の添加剤を、本発明を実施する際に修飾レシチンと一緒に使用することができる。本発明の方法で使用することができる添加剤の例としては、エタノールおよび農業補助剤（例えば、Ｔａｃｔｉｃ（商標）(Loveland Industries, Inc., Greeley, CO)）が挙げられるが、これらに限定されない。添加剤は、処理組成物または配合物中で約０．００５％〜約５％（ｖ／ｖ）、約０．０２５％〜約１％（ｖ／ｖ）、または約０．０３％〜約０．５％（ｖ／ｖ）の量で存在し得る。
【００３８】
例として、本発明の実施例を以下に記載するが、これらに限定されない。
【実施例１】
【００３９】
子葉の展開および過敏応答酵素に対するＥＭＬの効果
材料および方法
この実施例で使用する大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））、ＡＣＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１４０（商標））およびＨＤＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１２０（商標））は、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から購入した。卵ＥＭＬは、Primera Foods, Cameron, WIから購入した。
【００４０】
ダイコン(Raphanus sativus L. cv.Cherry-Blue)の種子を、蒸留水で湿らせた濾紙を含んだペトリ皿中で、２４℃で４０時間、暗所にて発芽させた。２つの子葉のうちの小さい方を切除して、生重量を決定して、１０枚の子葉を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、２ｍＭ、ｐＨ６．０）７．５ｍＬおよび２０ｍｇ／Ｌで試験されるべき化合物を含有するペトリ皿中の濾紙上に葉の表側を下にして置いた。続いて、２４℃または２５℃で最大７２時間、連続照明下で子葉をインキュベートして、生重量の増加を確実にした。クロロフィル含有量は、Lichtenthaler, HK(Methods in Enzymology 148:350-382, 1987)によって記載されるように、８０％ＥｔＯＨ（ブチル化ヒドロキシトルエン１０ｍｇ／Ｌを含有する）へ組織を抽出した後決定し、方程式Ｃｈｌ  ａ＝（１３．９５Ａ６６３）−（６．８８Ａ６４７）およびＣｈｌ  ｂ＝（２４．９６Ａ６５２）−（７．３２Ａ６６３）を用いて定量化した。ＩＡＡオキシダーゼ、ＰＡＬ、ＰＰＯおよびＰＯＤ活性は、Kato, M. et al. (Plant and Cell Physiology 41:440-447, 2000)およびLi. X et al.(Plant Science 164：549-556, 2003)によって記載されるように決定した。
【００４１】
結果
おそらく子葉中の根由来のサイトカインの濃度の一時的変化に起因したバイオアッセイ由来のばらつきを除去するために、バックグラウンドにおいて０．２ｍｇ／Ｌ（およそ１μＭ）カイネチンを日常的に含むようにバイオアッセイ手順を変更させた。
【００４２】
子葉展開成長率：展開成長率に対するカイネチン存在下での大豆ＥＭＬの効果を研究し、結果を表１に示す。カイネチン存在下では、大豆ＥＭＬは、対照に対して、子葉展開成長率の増加をもたらした。
【００４３】
【表１】
2006512085.tif 000003
【００４４】
キュウリの子葉を用いた類似の実験では、子葉展開成長率に対するＥＭＬの効果を、大豆ＥＭＬおよび卵ＥＭＬの両方で試験した。表２に示すように、大豆ＥＭＬおよび卵ＥＭＬはともに、子葉展開成長率を増加させた。
【００４５】
【表２】
2006512085.tif 000004
【００４６】
別の実験で、子葉展開成長率に対するＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬの影響を試験した。これらの修飾レシチンはすべて、子葉展開成長率を増加させた（表３）。
【００４７】
【表３】
2006512085.tif 000005
【００４８】
ＰＡＬ（ＥＣ  ４．３．１．５）活性：エチレンは、創傷を含む各種ストレスに応答して植物により生産される(Kato, M et al. Plant and Cell Physiology 41: 440-447, 2000)。ストレスが十分な強度および期間であると仮定すれば、植物はまた老化の徴候を示し始める。これにもかかわらず、ストレスは、植物の成長および発達の一般的な日常的な特徴であり、植物は一般的に不動であるため、植物が「標準的な」日々のストレスに対処するためのメカニズムを必要とする。これは、本来備わっている防御メカニズムの系により達成される。これらの系の１つは、ＰＡＬ（ＥＣ  ４．３．５．１）を包含し、この酵素の活性は、植物が傷付けられるか、あるいは病原体および／または誘発因子に曝露されると増加する。ＰＡＬの活性はまた光によって調節され、したがって暗所で成長させた苗を明所に移すことにより、効果活性が増加すると予測される。ＥＭＬが過敏型応答において誘発因子として作用するかどうかを決定するために、大豆ＥＭＬへの曝露後のダンコンの子葉におけるＰＡＬの活性を研究し、結果を図１に示す。
【００４９】
ＥＭＬは、カイネチン処理した子葉で観察されるのと同様に、タンパク質含有量の迅速であるが、一過性の増加を引き起こした。この処理では、タンパク質含有量は、６時間後に減少し始めた。ＡＣＣ処理子葉では、タンパク質の蓄積は遅れ、光に曝露した２４時間後にやっと最大限に達した。すべての場合において、タンパク質の蓄積は、ＰＡＬ活性の増加を伴った。
【００５０】
ＥＭＬ処理した子葉では、ＰＡＬ活性の増加は急激であったのに対して、ＡＣＣ、対照およびカイネチン処理した子葉では、ＰＡＬ活性の増加は、漸次遅延した。この観察は、ＰＡＬを刺激することが可能な誘発因子としてのＥＭＬの役割に関する強力な徴候を提供する。
【００５１】
大豆ＥＭＬによるＰＡＬ誘導の短期間の動態により、ＰＡＬ活性がＥＭＬ処理子葉で増加されたことが確認される（図２）。したがって、ＥＭＬは、ＰＡＬを活性化し、成長中のダイコンの子葉のフェニルプロパノイド含有量を増加させる可能性が高い。したがって、リグニン堆積の増加を予測することができ、クロロフィル蓄積に影響を及ぼすことなく、展開成長の遅延をもたらす。この可能性を試験するために、ＥＭＬと一緒にカイネチンを子葉に供給し（展開を促進するため）、リグニン含有量を決定した。リグニンは、Chen, M and McClure, JW(Phytochemistry 53: 365-370, 2000)によって記載されるように、ＥＭＬで処理した子葉または未処理の子葉から調製される抽出なしの組織サンプル中のリグノチオグリコール酸（ＬＴＧＡ）の量を測定することにより定量化した。図３の結果は、７２時間までにＥＭＬ処理した子葉が実質的により多くのＬＴＧＡを含有したことを示す。
【００５２】
これらの結果は、ＰＡＬ（図１および図２）およびＰＯＤ（図４）活性を誘導すると共にに、ＥＭＬは誘発因子として作用し、組織のフェノール性エステルおよびリグニンの生合成を増加させるという見解を支持する。
【００５３】
ＰＯＤ（ＥＣ  １．１１．１．７）活性：ＰＯＤ（ＥＣ  １．１１．１．７）は、モノリグノールの重合の工程でのリグニン形成(Grisebach, H, Lignins, In: The Biochemistry of Plants Vol 7, Secondary Plant Products, Conn EE (ed) Academic Press, New York, pp 457-478, 1981)を示し、かつ創傷に引き続きＰＯＤ活性を誘導することで、多数の種に関して実証された後の(Kato, M et al., Plant and Cell Physiology 41:440-447, 2000、およびそこに含まれる参照文献）に関与している。ＰＯＤの導入に対するＥＭＬの効果を決定するために、大豆ＥＭＬ（２０ｍｇ／ｌ）への曝露後の７２時間のインキュベーション期間中、この酵素の活性をモニタリングして、結果を図４に示す。ＥＭＬは、インキュベーションの最初の６時間以内におよそ１５％（対照に対して）ＰＯＤ活性を増加させた。その後、ＰＯＤ活性は、すべての処理において減少した。４８時間および７２時間でのＰＯＤ活性の増加は、展開成長において標準的な事象であり、器官の成熟の開始および老化の始まりを示す。この発達段階で、ＰＯＤ活性は、カイネチン処理した子葉で最低であり、その後ＥＭＬで処理した子葉が続いた。最高のＰＯＤ活性は、対照およびＡＣＣ処理した子葉で測定された。これは、ＥＭＬが子葉の葉の発達の老化段階への進行を遅らせることができることを示唆する。
【００５４】
上述の結果は、ＥＭＬによる過敏応答経路の構成成分の誘導を指摘するが、上述の結果は、全身性メカニズムの兆しを付与しない。事実上応答が全身性であるかどうかを決定するために、ＥＭＬ溶液を蒸散流によりグリーンビーンズの苗に供給し、最大７２時間インキュベートして、子葉の葉のＰＡＬ活性を決定した。図５の結果は、蒸散流によりグリーンビーンズの苗をＥＭＬで処理しても、葉におけるＰＡＬ活性は変化しなかったことを示す。したがって、本発明者等は、ＥＭＬは、典型的な全身型応答を誘導しないと結論付けることができる。
【００５５】
ＰＰＯ（ＥＣ  １．１４．１８．１）：ＰＡＬおよびＰＯＤと同様に、ＰＰＯは、植物においてリグニン生合成を触媒する重要な酵素である。ダイコン系では、ＰＡＬおよびＰＯＤは、大豆ＥＭＬへの曝露により誘導され、図６に示すように、ＰＰＯもまた誘導され、活性は、処理の４８時間後に最大であった。対比して、ＬＰＥは、ＥＭＬほどＰＰＯ活性を誘導せず、ＡＣＣは、ＰＰＯ活性を抑制するようであった。未処理の子葉およびカイネチン処理した子葉では、酵素活性は、経時的に徐々に増加するようであった。
【００５６】
ＩＡＡオキシダーゼ活性：ＩＡＡ恒常性は、植物の成長率および発達の相関的な制御に寄与する重要なプロセスである。概して、ＩＡＡは、頂部および芽で合成され、頂部に由来するＩＡＡが底部に輸送される。ＩＡＡの底部への移動は、頂芽優勢、異常な位置に生じた発芽、屈性応答等のようなプロセスを調節する。大豆ＥＭＬの存在下では、ＩＡＡオキシダーゼの活性は増加するのに対して、ＬＰＥは、この活性に対して明らかな効果が見られない。
【００５７】
ＰＯＤ活性およびＩＡＡオキシダーゼは、それぞれリグニン生合成およびオーキシン代謝に関与する。多数の成長遅延剤が、ＰＯＤおよびＩＡＡオキシダーゼ活性に影響を与えることにより伸長成長を低減させることが示されている。さらに、ＩＡＡオキシダーゼ活性の増加が、病原体に曝露させた組織で観察されている。したがって、図７のデータは、ＥＭＬが誘発因子として作用し、おそらく増加されたフェノール酸生産および／または木質化に寄与し、ＩＡＡオキシダーゼに影響を及ぼすことにより内因性ＩＡＡを調節することを示す。この効果が親レシチンの酵素修飾に起因したかどうかを決定するために、未修飾（大豆レシチン）および修飾（ＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬ）レシチンを比較した。
【００５８】
図８のデータは、ＥＭＬ、ＡＣＬおよびＨＤＬが、ＩＡＡオキシダーゼ活性の非常に有効な誘導物質であったことを示す。未修飾レシチンはほとんど、またはまったくＩＡＡオキシダーゼ活性に影響を及ぼさなかったようだ。 
【実施例２】
【００５９】
ブドウおよびリンゴの強固さ（膨らみ）に対するＥＭＬの影響
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００６０】
図９は、２０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬ水溶液の、収穫前に塗布した場合のブドウの果実の強固さを改善する能力を示す。２０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬの塗布は、流れ落ちることなく果実にしっかりと付着する小滴によりブドウの房を完全に覆うように手動ミストボトル噴霧を用いて２００３年の４月に行った。収穫は、塗布のおよそ２週後に行った。各房から２５個の実を、花軸（ステムキャップがついたまま）の所定の領域から取り出し、Ｆｉｒｍｔｅｃｈ強固さおよび直径分析器(BioWorks, Stillwater, Oklahoma)を用いて強固さを測定した。図９に示すように、ＥＭＬ処理は、ブドウの強固さを増加させた。
【００６１】
図１０は、２０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬ水溶液の、収穫前に塗布した場合のリンゴの果実の強固さを改善する能力を示す。２０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬの塗布は、流れ落ちることなく果実にしっかりと付着する小滴によりリンゴの房を完全に覆うように市販用エアブラスト噴霧機を用いて２００３年９月１８日に行った。収穫は、塗布のおよそ２週後に行った。収穫した房から２０個のリンゴを無作為に選択し、Ｆｉｒｍｔｅｃｈ強固さおよび直径分析器(BioWorks, Stillwater, Oklahoma)を用いて強固さを測定した。図１０に示すように、ＥＭＬ処理は、リンゴの強固さを増加させた。
【実施例３】
【００６２】
トマトの貯蔵寿命に対するＥＭＬの影響
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００６３】
図１１は、１,０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬ水溶液の、収穫前に塗布した場合の完熟トマトの果実の貯蔵を改善する能力を示す。１,０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬの塗布は、流れ落ちることなく果実にしっかりと付着する小滴によりトマトの果実を完全に覆うようにＣＯ2バックパック噴霧機噴霧を用いて成熟した青いトマトに、２００３年７月に行った。収穫は、塗布のおよそ７日後に行った。完熟した果実を収穫後２０日間、光条件および室温下にとどめ、専門家が市場に不向きの果実（水浸状態、酸腐敗臭のある腐敗および／またはかびを示す果実）を除去した。図１１に示すように、ＥＭＬ処理は、総市場向き果実の割合を増加させた。
【実施例４】
【００６４】
果物および野菜の大きさ、色彩ならびに重量に対するＥＭＬの効果
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００６５】
図１２〜図１６は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングおよび色彩への影響を示す。１,０００ｐｐｍの水溶液を、果実を完全に覆うように手動ミストボトル噴霧機を用いて塗布した。塗布は、２００３年６月２５日に行い、２００３年７月８日に収穫した。色彩および大きさの測定は、カリフォルニア州フレズノのUC-Davis Kearney Agricultural Stationにある光学的分別ラインを用いて決定した。
【００６６】
これは、単一ラテン方格法であり、各処理は、１度だけ各利用可能な処理位置を占有した。１つのスカフォールドまたは大枝を処理に割り当てた。処理はすべて、４本の木それぞれに対して１度行われた。処理は、夕方近くに行われた。収穫は、２００３年７月８日に行った。収穫者は、各スカフォールドから処理した果実すべてを取り出し、それらをカリフォルニア州フレズノのthe Kearney Agricultural Stationに輸送した。光学的分別ラインによりそれぞれ繰り返し実施して、色彩および大きさで果実を分けた。大きさは、１〜１０の範囲に及び、１が最小であり、直径がおよそ１．５インチのほとんど市場に不向きの果実であり、１０が最大であり、直径が３．５インチを上回る。
【００６７】
大きさ３、大きさ６〜７、および大きさ９のピーチの割合に対する大豆ＥＭＬの効果を、それぞれ図１２、図１３および図１４に示す。処理した果実は、低い大きさカテゴリー（＃３）においてより少ない割合、およびより大きな大きさカテゴリー（＃６−９）において非常に多い割合を示した。特に＃６〜７の中程度から大きな範囲の範疇にある場合、より大きな果実はより有価である。色彩もまた市場性を決定する。処理した果実は、中程度の赤み（４０〜１００％）（図１５）表面および高度な赤み（６０〜８０％）（図１６）表面を有する果実の高い割合を示す。
【００６８】
図１７〜図１９は、赤ピーマンに対する、２００３年７月２３日にカリフォルニア州メンドタにおいておよそ１０％の色割れに塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。５００ｐｐｍの水溶液を、果実を完全に覆うように手動ミストボトル噴霧機を用いて塗布した。これは、８回の反復実験を伴った完全乱塊法であった。塗布は、日の出後の早朝に行った。温度は、およそ７２°Ｆであり、湿度はおよそ５０％であった。小滴滞留時間は３０分を超えた。図１７〜図１９からわかるように、処理した果実は、対照果実よりも長く、幅広く、かつ重かった。
【００６９】
図２０および図２１は、ウィスコンシン州ゲイズミルズにおけるマッキントッシュリンゴに対する、収穫するおよそ３週前に塗布した大豆ＥＭＬの重量およびサイジングの影響を示す。１,０００ｐｐｍの水溶液を、果実を完全に覆うように手動ミストボトル噴霧機を用いて塗布した。塗布は、２００３年９月９日に行い、２００３年９月３０日に収穫した。これは、単一ラテン方格法であり、各処理は、木における４回の反復それぞれにおいてただ１つの四分円を占有して行った。
【００７０】
塗布は、空気温度およそ６８°Ｆおよび晴天で、昼下がりに行った。小滴滞留時間は３０分を超えた。処理した果実は、対照果実よりも大きく（より大きな直径を有し）かつ重かった。それぞれ図２０および図２１に示されるように、大豆ＥＭＬ処理は、マッキントッシュリンゴの重量および直径の増加をもたらした。
【実施例５】
【００７１】
ＥＭＬは、塊茎の大きさおよび収量を高める
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００７２】
ジャガイモの塊茎の大きさおよび収量に対するＥＭＬの効果を決定するために、現地試験を行った。ウィスコンシン州ミルズ湖付近の黒泥土上でMuck Farmsにて成長させたダーク・レッド・ノーランドジャガイモ植物に３倍レベルのＥＭＬ水溶液を噴霧した。噴霧塗布時、つるが枯れる２週前および収穫の４週間後の作物の成長は優れていた。塊茎は、栄養分の迅速な蓄積の段階にあり、大きさが迅速に増幅していた。
【００７３】
現地プロットデザイン：道路または他の交通から離れた現地の一様な場所をこれらの実験に関して選択した。２０フィート長の単一の行プロットを使用した。各処理に関して５回の反復が存在し、プロットは、単一の未処理行で分けて、任意のスプレーのドリフトを回避した。
【００７４】
試験したＥＭＬレベルおよびスプレーパラメータ：３つのＥＭＬレベル、すなわちＥＭＬ１００ｐｐｍ、２５０ｐｐｍおよび１,０００ｐｐｍを植物の葉に塗布した。補助剤は使用しなかった。スプレー塗布は２回行った。最初の塗布は、つるが枯れる約２週前であり、ここで第２の塗布は、この１０日後、つるが枯れるほんの５日前であった。
【００７５】
微細小滴サイズを提供するノズルを用いたＣＯ2を動力としたバックパック噴霧機を使用した。液体を２０ガロン／エーカーで塗布した。それにより良好な葉の被覆率が可能であった。
【００７６】
つる枯れ：収穫の約２週前に、植物にＰａｒａｑｕａｔ除草剤を噴霧して、つるを枯らして、収穫の準備をした。
【００７７】
収穫：各プロットの中心の１５フィートを手で収穫して、ジャガイモの収量を決定した。塊茎はすべて収集し、ほこりを払って、秤量した。洗浄および乾燥後、それらの大きさに基づいて、ジャガイモを４オンス未満、４〜１０オンス、および１０オンス超過に分類した。大きさの各クラスをさらに、それらの皮の色彩に基づいて、優（premium)、良（acceptable)および可（poor)に視覚的に分けた。各クラスのジャガイモを計数して、秤量した。次に、任意の腐敗または損傷したジャガイモを廃棄した。
【００７８】
表４に示すように、試験した３つのＥＭＬレベルはすべて、ジャガイモの塊茎の収量を増加させた。ＥＭＬ１００ｐｐｍは、最大の市場向き収量の増加３６．８％を提供した。
【００７９】
表５に示すように、試験した３つのＥＭＬレベルはすべて、ジャガイモの塊茎の大きさを増加させた。ＥＭＬ１００ｐｐｍは、最大の増加を提供した。
【００８０】
【表４】
2006512085.tif 000006
【００８１】
【表５】
2006512085.tif 000007
【実施例６】
【００８２】
ＥＭＬは、根塊数を高める
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００８３】
この実施例は、ＥＭＬの、水栽培状況に置く前に芝土に組み込んだ場合の根の成長を促進する能力を示す。２００３年７月１２日に、芝マットからの３つの同様な６インチ×１２インチの断面スライスを、粉末状大豆ＥＭＬ床上に入れて、根塊を被覆した。つづいて、マットを１／２強度のＨｏａｇｌａｎｄ溶液を有する水栽培溶液中に、通気しながら１４日間入れた。１４日後、マットを溶液から取り出して、３つの１インチスライスを、各マットの中央部分から取り出した。土壌を根から洗い流し、根部分のみが残されるように、根と芽の境界面で芽部分を刈った。根塊を風乾燥した後、重量を計った。結果を表６に示した。
【００８４】
表６では、各反復実験は、水栽培溶液中の６インチ×１２インチのマットからの芝の３つの１インチ×６インチの断面スライスから構成される。各反復実験の数字は、芝の６インチ四方のグラムでの根塊の生データの平均である。３つの反復実験すべてにおいて、ＥＭＬ処理は、芝の根塊を増加させた。
【００８５】
【表６】
2006512085.tif 000008
【実施例７】
【００８６】
根形成に対するＥＭＬの影響
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００８７】
図２２〜図２４は、グリーンビーンズの根形成に対する２０ｐｐｍの大豆ＥＭＬ溶液の影響を示す。３．５ｃｍの切り枝を、溶液を含有する６インチの試験管中に、定常光およびおよそ７０°Ｆ下で４日間入れた。４日後、新たに形成した根を計数した。続いて、反復実験を行った。図２２および図２３は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理した根の写真である。図２４は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理群における根の平均数を示す。処理したグリーンビーンズの切り枝は、処理の４日後に根の数のおよそ５０％の増加を示した（図２４）。
【実施例８】
【００８８】
ＥＭＬは、大豆において一連のさやおよび種子収量を高める
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【００８９】
大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  Ｌ）では、生産された花の４３〜８１％が、受粉前の落花、あるいは受粉した未成熟さやの落下に起因して、成熟さやを生産することができない(Hansen and Shibles, Agronomy Journal, Vol. 70, January-Febrary, 1978)。長年にわたって、ＡＢＡ、ＩＡＡ、ＢＡＰおよびＧＡ３のような様々な成長ホルモンが、様々なレベルの成功を伴って、一連のさやの数を高めることが試験されている(Mosjidis et al., Annals of Botany 71:193-199, 1993)。
【００９０】
大豆の一連のさやおよび種子の収量に対するＥＭＬの効果を決定するために、Ｇｌｙｃｉｎｅ  ｍａｘ  Ｌの大豆を用いて１０回の現地試験を行った。これらのうち、２回は、広大な農場での現地試験であり、他はすべて、狭小の反復現地試験であった。幾つかの種々の栽培品種を使用した。試験場は、多様な生育状態を有しており、テキサス州ブラウンズビルからアイオワ州シーダーフォールズに及び、大豆を小面積のみで生育している地域に加え大豆地帯も網羅している。
【００９１】
テキサス州ブラウンズビルでの現地試験では、植物発達の開花前、開花段階初期および開花のピーク時に、水溶液中の様々なレベルのＥＭＬを植物に噴霧した。続く現地試験では、これらのデータに基づいて、植物成長の開花ピーク時の単一スプレーを塗布した。
【００９２】
現地プロットデザイン：現地試験では、可能な限り、現地の一様な場所を実験に関して選択した。２５〜３０フィート長の４つの行プロットを使用した。各処理に関して５回の反復実験を行った。隣接するプロットに対するＥＭＬドリフトを回避するために、中心の２つの行のみを処理して、これによるすべてのデータを記録するのに使用した。農場での現地試験では、プロットの大きさは、２エーカーから８エーカーまで多様であった。
【００９３】
試験したＥＭＬレベル、およびスプレーパラメータ：０、１０、５０、１００および５００ｐｐｍのＥＭＬレベル、を植物の葉に塗布した。補助剤は使用しなかった。
【００９４】
微細小滴サイズを提供するノズルを用いたＣＯ2を動力としたバックパック噴霧機を使用した。液体を１５〜５０ガロン／エーカーで塗布した。それにより良好な葉の被覆率を可能にした。
【００９５】
一連のさやデータ：一連のさやデータは、ＥＭＬスプレーの約４週後に、各反復において無作為に１０種の植物に関して記録された。選択した植物それぞれに関する成長中のさやをすべて計数した。
【００９６】
種子収量データ：種子収量データに関して、ＥＭＬで処理した２つの中心の行をコンバイン収穫機を用いて収穫した。データは、プロットの大きさに基づいて算出し、未処理の対照と比較した。
【００９７】
１０回の現地試験すべてにおいて、大豆ＥＭＬは、大豆の一連のさやを増加させるのに有効であった。特定の栽培品種に応じて、有効であるＥＭＬ濃度は幾らか変化した。例として、アイオワ州シーダーフォールズで実施した試験からの結果を表７および表８に示す。表７に示されるように、一連のさやの割合の増加は、栽培品種Ｋｒｕｇｅｒ  Ｋ−２６９よりも栽培品種Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９２Ｂ３８に関して高かった。試験したＥＭＬの濃度はすべて、栽培品種Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９２Ｂ３８の一連のさやを増加させた。栽培品種ＫｒｕｇｅｒＫ−２６９に関して、１０ｐｐｍ、５０ｐｐｍおよび１００ｐｐｍのＥＭＬは一連のさやを増加したのに対して、５００ｐｐｍのＥＭＬは増加しなかった。
【００９８】
表８に示すように、栽培品種Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９２Ｂ３８に対する１０ｐｐｍのＥＭＬを除いて、試験したＥＭＬの濃度はすべて、栽培品種Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９２Ｂ３８およびＫｒｕｇｅｒＫ−２６９の種子収量を増加させた。
【００９９】
【表７】
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【０１００】
【表８】
2006512085.tif 000010
【実施例９】
【０１０１】
落果に対するＥＭＬの効果
この実施例で使用するＥＭＬは、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から入手した大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））であった。
【０１０２】
図２５はウィスコンシン州ゲイズミルズにおいてマッキントッシュリンゴに対して収穫のおよそ３週前に塗布した場合の落果に対する大豆ＥＭＬの影響を示す。１,０００ｐｐｍの大豆ＥＭＬ水溶液を、果実を完全に覆うように手動ミストボトル噴霧機を用いて塗布した。塗布は、２００３年９月９日に行い、２００３年９月３０日に収穫した。これは、単一ラテン方格法であり、各処理は、木における４回の反復それぞれにおいてただ１つの四分円を占有した。
【０１０３】
塗布は、空気温度およそ６８°Ｆおよび晴天で、昼下がりに行った。小滴滞留時間は３０分を超えた。マッキントッシュリンゴの木は、それらの果実の大部分を落下させる場合が多い。図２５に示されるように、処理した果実は、相当低い落果比率を示した。
【実施例１０】
【０１０４】
ストレスに関連した損傷からの植物の保護
材料および方法
実験は、the University of Wisconsin Biotron Facility(2115 Observatory Drive, Madison, WI 53706)に位置する成長室で行った。各成長室は、１０フィート×１０フィートであり、そこでは温度、光量および光周期が制御された。光は、床の約８フィート上に設置した。蛍光灯の連続列(solid bank)により照明を提供する一方で、加湿は、ドアに隣接した壁上で天井のおよそ１フィート下にある吸気口に注入した蒸気パイプにより提供された。流出ダクトを、床からおよそ１フィート離れて吸気口の下に直接位置させた。これらの成長室内では、植物は、床からおよそ３．５フィート離れたベンチ上で成長させた。
【０１０５】
記述した植物はすべて、別記しない限り、各個々の実験で示されるように、幾つかの土壌未含有培地の１つを有するおよそ６インチの深さの６インチ四方のプラスチック（ＨＤＰＥ）鉢中で成長させた。種子は、ＦａｆａｒｄのＳｕｐｅｒ  Ｆｉｎｅ  Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ  Ｍｉｘ土壌未含有培地(Fafard Corp., 1471 Amity Road, Anderson, SC 2961)へ、鉢の各隅に均一に鉢１つにつき４個ずつ植えた。いったん植えたら、相対湿度（ＲＨ）８０％、２５℃＋／−２℃、光周期１６時間および天蓋の頂上での光４００ｕＥに設定した成長室に入れた。
【０１０６】
大豆ＥＭＬ（Ｐｒｅｃｅｐｔ（商標）８１６０（商標））は、Solae, LLC(Fort Wayne, IN)から購入した。ＥＭＬ含有溶液は、ＥＭＬが完全に溶解または懸濁するまで、強攪拌しながら水中でＥＭＬを混合することにより調製した。表９〜表１２に示すような特定濃度のＥＭＬを含有する溶液を用いて、以下に記載するように植物を処理した。
【０１０７】
大豆ＥＭＬを用いて、成長中の植物の栄養部分に直接塗布する溶液を作製した。標準的な水道水中に見られるカルシウムを模倣するために、ＥＭＬ含有溶液にはすべて、ＣａＣｌ2  １ｍＭを含有させた。場合によっては、０．０３２％  Ｔａｃｔｉｃ（商標）Loveland Industries, Inc., Greeley, CO)、オルガノシリコーンおよび合成ラテックスの組合せ、ならびに他にはエタノールをＥＭＬ含有溶液にさらに添加して、溶液による植物表面の湿潤を促進させた。溶液は、家庭用洗剤を分注に使用するのに類似した手持ち式の手動スプレーボトルで噴霧することにより植物に塗布した。
【０１０８】
結果
ＥＭＬのストレス前の塗布によるフィールドコーンにおける冷害ストレスの軽減：Ｇｏｌｄｅｎ  Ｈａｒｖｅｓｔフィールドコーン（Ｆ−１ハイブリッド、Ｈ−２３８７）の４つの種子を、６インチ四方のプラスチック（ＨＤＰＥ）鉢に植えた。植えてから１４日後に、各鉢中の４つの植物すべてに、任意の補助剤なしのＥＭＬ溶液５００ｐｐｍ、あるいは対照として作用する水を噴霧した。各反復に関して、成長率および発達度が対等な植物を有する鉢を選択した。統計学的妥当性を確実にするために、対照および処理を無作為に鉢に割り当てた。噴霧後、植物を外気条件下に６時間置いた後、低温ストレスに曝露させた。低温ストレスは、温度を０℃に降下させることにより夜間の初めに開始して、日中の温度は、２５℃に加温した。この日中／夜間の温度（２５／０℃）を４日間繰り返した。４回の周期の最後に、植物をそれらの本来の成長条件（２５／２１℃、日中／夜間温度）に戻して、さらに５日間成長させて、成長率および活力に対する冷害の影響を決定した。成長の５日後に、植物を外科用メスで土壌表面にて収穫して、各処理の生重量を計り、対照鉢の生重量と比較した。この実験では、５００ｐｐｍのＥＭＬを用いた場合に、対照に対して５．３％の生重量の増加が観察された。これは、低温ストレスの緩和、すなわち軽減を示し、処理植物をより迅速に正常な成長速度へと回復させる。
【０１０９】
低温ストレスを軽減するためのＥＭＬによる大豆植物の処理：この実験では、大豆栽培品種ＫＢ２４１(Kaltenberg Seed Farms, 5506 State Road 19, PO Box 278, Waunakee, WI 53597)を使用した。４つの隅に関して均一に間隔を空けて１隅当たりに２個ずつ鉢１つにつき８個の植物である以外は上述のように、大豆を６インチの鉢中に植えた。植物は、Ｓｃｏｔｔの３６６−Ｐ土壌未含有成長培地(Scott's Corp., 14111 Scottslawn Road, Marysville, OH 43041)中で、成長室にて条件：ＲＨ８０％、２５℃および１４時間の光周期に関して光４００ｕＥ下で成長させた。植えてから６日後に、「Chilling
Stress Alleviation in Field Corn with a Pre-stress Application of EML（ＥＭＬのストレス前塗布によるフィールドコーンにおける冷害ストレスの軽減」に記載されるような様式で、植物をＥＭＬで処理した。ＥＭＬおよびＣａＣｌ2のほかに、一般的スプレー補助剤であるＴａｃｔｉｃを０．０３２％で添加して、スプレー溶液による葉の表面の湿潤性を改善させた。この実験では、各鉢の半分、すなわち４つの植物を対照スプレーで処理して、残りの４つを処理剤（ＥＭＬ  ５００ｐｐｍ）で処理した。鉢の半分における植物および鉢の残り半分における植物は、大きさ、成長率および発達度に関して対等であった。処理および対照の割り当ては無作為に行った。これまでの実験と一致して、塗布を行った６時間後に、冷却に曝露し、その後鉢を冷却（０℃）条件下で７２時間、成長室に移動した。ＲＨは８０％、１４時間の光周期に関して光４００ｕＥであった。３日目の最後に、植物を２５℃＋／−２℃、ＲＨ８０％および光４００ｕＥでのそれらの本来の成長条件に戻して、成長の１３日後に収穫した。収穫は、「Chilling Stress Alleviation in Field Corn with a Pre-stress Application of EML（ＥＭＬのストレス前塗布によるフィールドコーンにおける冷害ストレスの軽減」に記載するもの：外科用メスによる土壌表面での植物の栄養部分の切断および植物の生重量の測定と一致していた。この実験では、冷害ストレス前のＥＭＬ処理が、水で処理した対の対照に対して２２％の生重量の増加をもたらした。この増加は、冷却期間中のストレスの軽減およびストレス後の活力の増加を示す。
【０１１０】
干ばつストレスを軽減するためのフィールドコーン植物の処理：６インチ四方のプラスチック（ＨＤＰＥ）鉢中に植えたＧｏｌｄｅｎ  Ｈａｒｖｅｓｔフィールドコーン（Ｆ１ハイブリッド、Ｈ−２３８７）を使用した。種子は、Ｓｃｏｔｔの３６６−Ｐ土壌未含有成長培地(Scott's Corp. 14111 Scottslawn Road, Marysville, OH 43041)中に、鉢の各隅に均一に、鉢１つにつき４個植えた。植物は、温室中で２０日間、正常な成長条件（日中２７℃＋／−２℃で１４時間、および夜間２３℃＋／−２℃）で成長させた。湿度は制御せず、成長ベンチのおよそ４．５フィート上に６個の６００Ｗの高圧ナトリウムランプを置いて、補助照明を提供した。これらの温室は、the University of Wisconsin Biotron (2115 Observatory Drive, Madison, WI 53706)に位置する。鉢中での植物成長の２０日後に、しおれの視覚的症状が現れた２日後まで、鉢への水を抑えることにより干ばつストレスを開始させた。この時点で、各鉢を２つの植物の２つの隣り合った組に分け、一方の側をＥＭＬで処理して、他方の側を水で処理した（対照）。鉢に完全に水をやり、植物のストレスを解放して、良好な水条件下で９日間保持した。続いて、植物を収穫して、生重量を記録した。表９に示すように、干ばつ後の１００ｐｐｍおよび５００ｐｐｍのＥＭＬ処理は、水で処理した対の対照に対して、それぞれ６．１％および１０．３％の生重量の増加をもたらした。
【０１１１】
【表９】
2006512085.tif 000011
【０１１２】
トウモロコシ植物に対する干ばつストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス中期の塗布：６インチ四方のプラスチック（ＨＤＰＥ）鉢中に植えたＧｏｌｄｅｎ  Ｈａｒｖｅｓｔフィールドコーン（Ｆ１ハイブリッド、Ｈ−２３８７）を使用した。種子は、Ｓｃｏｔｔの３６６−Ｐ土壌未含有成長培地(上述の「干ばつストレスを軽減するためのフィールドコーン植物の処理」の詳細を参照)中に、鉢の各隅に均一に、鉢１つにつき４個植えた。この実験の詳細はすべて、「干ばつストレスを軽減するためのフィールドコーン植物の処理」において上述するのと同じであるが、但し、ＥＭＬスプレー塗布は、「干ばつストレスを軽減するためのフィールドコーン植物の処理」ではしおれの２日後であるのとは対照的に、視覚的なしおれが見られた１日後に行った。水分ストレスの解放２日後に植物を収穫した。表１０に示すように、干ばつストレス後の５００ｐｐｍのＥＭＬ処理は、水で処理した対の対照に対して１９．５％の生重量の増加をもたらした。
【０１１３】
【表１０】
2006512085.tif 000012
【０１１４】
トウモロコシにおける干ばつストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス中期およびストレス後期の塗布：「干ばつストレスを軽減するためのフィールドコーン植物の処理」における上記実験を、Ｇｏｌｄｅｎ  ＨａｒｖｅｓｔおよびＳｙｎｇｅｎｔａ  Ｎ６０−Ｎ２フィールドコーン植物を用いて繰り返した。実験およびストレス条件の詳細は同じであった。
【０１１５】
２１日齢のＧｏｌｄｅｎ  ＨａｒｖｅｓｔおよびＳｙｎｇｅｎｔａ  Ｎ６０−Ｎ２フィールドコーン植物を、干ばつストレス中期、干ばつストレスの直前および干ばつストレスの最後に５００ｐｐｍのＥＭＬで処理した。ストレス中期の塗布は、植物がしおれの徴候を最初に示したときから見積もって干ばつストレスの１日後に行った。ストレス後期の塗布は、植物がしおれの徴候を最初に示したときから見積もって干ばつストレスの２日後に行った。最後の処理の塗布の１時間以内に、植物に水をやった。実験は、各実験に関して４つの反復であった。ストレスを緩和した８日後に、植物を収穫して、データを収集した。
【０１１６】
表１１に示すように、ＥＭＬ塗布は、Ｇｏｌｄｅｎ  ＨａｒｖｅｓｔおよびＳｙｎｇｅｎｔａ  Ｎ６０−Ｎ２トウモロコシの両方においてバイオマスを増加させた。この増加は、Ｓｙｎｇｅｎｔａ  Ｎ６０−Ｎ２トウモロコシ植物において顕著であった。干ばつ期間中期または干ばつ期間後期での塗布は効果的であった。
【０１１７】
【表１１】
2006512085.tif 000013
【０１１８】
キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス前の塗布：１５日齢のＤａｓｈｅｒ品種のキュウリを５００ｐｐｍのＥＭＬおよび１,０００ｐｐｍのＥＭＬで処理した後に、植物を低温ストレスに曝露させた。植物は６インチ四方のプラスチック（ＨＤＰＥ）鉢中に入れ、鉢中に２つの植物を、鉢の反対の隅で互いに対角線に置いた。鉢中の両方の植物に同じ処理を噴霧した。各処理に関して６つの反復を行った。植物に処理または水を噴霧して、乾燥させた後、the University of Wisconsin Biotron(room 251B)における１〜２℃の低温室中に１４〜１６時間入れた。低温処理後に、植物を正常な温度条件下で８日間成長させた。続いて、植物を収穫して、データを収集した。冷害ストレス前の５００ｐｐｍおよび１,０００ｐｐｍでのＥＭＬによるキュウリ植物の処理は、水で処理した対照植物と比較して、それぞれ３．５％および１６．３％の生重量の増加を付与した。
【０１１９】
キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス後の塗布：ＥＭＬの塗布を冷却ストレス後に行い、低温処理が２４時間であった以外は、「キュウリにおける低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス前の塗布」における実験を繰り返した。
【０１２０】
２２日齢のＤａｓｈｅｒ品種のキュウリ植物を、the University of Wisconsin Biotron(room 251B)における１〜２℃の低温室中に２４時間入れることにより、低温ストレスを与えた。低温室から取り出した直後に、植物に処理または水対照を噴霧した。処理の２０日後に、植物を収穫して、データを収集した。収穫時に、損害および再成長の度合いは、多様であった。しかしながら、ＥＭＬ処理（５００ｐｐｍ）は、水処理した対照植物と比較した場合に、９０．３％のバイオマスの増加を提供した。
【０１２１】
メロンにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス前および後の塗布：「キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス前の塗布」および「キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス後の塗布」を、メロンを用いて繰り返した。
【０１２２】
低温ストレスに曝露させる前または曝露した後に、３０日齢のＰｒｉｍｏメロンを５００ｐｐｍのＥＭＬで処理した。処理時に、植物は、１枚の完全に幅広い葉と１枚の小さな葉を有していた。低温ストレスの前に、あるいは低温ストレスの直後に、植物に処理溶液を噴霧した。低温ストレスは、植物を１〜２℃に１２時間曝露させた。植物は６インチ四方のＨＤＰＥ鉢中に入れ、鉢中に２つの植物を、鉢の反対の隅で互いに対角線に置いた。鉢中の両方の植物に同じ処理を噴霧した。各処理に関して３つの反復を行った。処理の８日後に、植物を収穫して、データを収集した。収穫時に、損害および再成長の度合いは、多様であった。収穫時に、古い葉はすべて、ほとんど損害を示さないか、全く損害を示さず、植物はすべて、２〜３枚の新しい葉を有しており、すべてが健常であり、かつ頂端分裂組織から成長しているように見え、花芽が、植物すべてにおいて形成し始めていた。５００ｐｐｍでのＥＭＬは、低温ストレス曝露後に塗布を行った場合にストレスからの回復に効果的であった（表１２）。
【０１２３】
【表１２】
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【０１２４】
トマト植物における低温ストレスの軽減：「キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス前の塗布」および「キュウリにおいて低温ストレスを軽減するためのＥＭＬのストレス後の塗布」を、トマトを用いて繰り返した。
【０１２５】
５２日齢のＦｌｏｒｉｄａ４７トマトを５００ｐｐｍのＥＭＬまたは１,０００ｐｐｍのＥＭＬで処理した後、低温ストレスに曝露させた。処理時に、植物は約４２〜４８ｃｍ高であった。植物は、反復で並べた：反復１は、最も進歩しており（開花段階にある）、かつ最も高く、反復４は、進歩が最少であり、かつ最も低かった。反復２および反復３は、その中間であった。水対照に関して対の４つの反復実験が存在した。噴霧後、植物を乾燥させて、１〜２℃の低温室に２５時間入れた。低温ストレス後、植物を数日間、正常な成長条件にさせた。収穫時に、植物は約５５〜６５ｃｍ高であった。より底部の（成長が古い）葉はすべて、非常に損害を受け、多くは落ちていたが、植物はすべて、かなり新規の成長が見られた。５００ｐｐｍおよび１,０００ｐｐｍで塗布したＥＭＬは、それぞれ対照に対する植物バイオマスにおいて４．４％および１２．７％の増加を提供した。
【０１２６】
本発明は、特定の実施例に関連させて記載してきたが、併記の特許請求の範囲の範疇にある当業者に明らかなかかる修正および変形を包含する。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１】図１は、すべて２０ｍｇ／Ｌで、１−アミノシクロプロパン−１−カルボン酸（ＡＣＣ、エチレンに対する前駆体）、カイネチンおよびＥＭＬに曝露させたダイコンの子葉におけるタンパク質含有量およびＰＡＬ活性の変化を示す。
【図２】図２は、ＥＭＬ処理したダイコンの子葉におけるＰＡＬ活性の短期間の動態を示す。
【図３】図３は、カイネチン誘導性の膨張しているダイコンの子葉におけるリグニン含有量に対するＥＭＬの効果を示す。
【図４】図４は、ＡＣＣ、カイネチンまたはＥＭＬに曝露したダイコンの子葉におけるＰＯＤ活性の変化を示す。
【図５】図５は、蒸散流によりＥＭＬで処理またはＥＭＬで未処理の場合で処理した（ともに２０ｍｇ／Ｌ）グリーンビーンズの苗の葉におけるＰＡＬ活性を示す。
【図６】図６は、ダイコンの子葉におけるＰＰＯ活性に対するＬＰＥおよびＥＭＬの効果を示す。
【図７】図７は、ダイコンの子葉におけるＩＡＡオキシダーゼ活性に対するＬＰＥおよびＥＭＬの効果を示す。
【図８】図８は、膨張しているダイコンの子葉におけるＩＡＡオキシダーゼの活性に対するレシチンの効果を示す。
【図９】図９は、ブドウの強固さに対する大豆ＥＭＬの影響を示す。
【図１０】図１０は、りんごの強固さに対する大豆ＥＭＬの影響を示す。
【図１１】図１１は、１,０００ｐｐｍ大豆ＥＭＬ水溶液の、収穫前に塗布した場合に完熟トマト果実の貯蔵を改善する能力を示す積極限生存フィット生存プロットである。
【図１２】図１２〜図１４は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図１３】図１２〜図１４は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図１４】図１２〜図１４は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図１５】図１５および図１６は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬの色彩の影響を示す。
【図１６】図１５および図１６は、サマースイートピーチに対する、カリフォルニア州ファウラーで収穫するおよそ２週前に塗布した大豆ＥＭＬの色彩の影響を示す。
【図１７】図１７〜図１９は、赤ピーマンに対する、カリフォルニア州メンドタにおいておよそ１０％の色割れに塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図１８】図１７〜図１９は、赤ピーマンに対する、カリフォルニア州メンドタにおいておよそ１０％の色割れに塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図１９】図１７〜図１９は、赤ピーマンに対する、カリフォルニア州メンドタにおいておよそ１０％の色割れに塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図２０】図２０および図２１は、ウィスコンシン州ゲイズミルズにおけるマッキントッシュリンゴに対する、収穫するおよそ３週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図２１】図２０および図２１は、ウィスコンシン州ゲイズミルズにおけるマッキントッシュリンゴに対する、収穫するおよそ３週前に塗布した大豆ＥＭＬのサイジングの影響を示す。
【図２２】図２２〜図２４は、グリーンビーンズの発根に対する２００ｐｐｍ大豆ＥＭＬ溶液の根形成の影響を示す。図２２および図２３は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理した根の写真である。図２４は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理群における根の平均数を示す。
【図２３】図２２〜図２４は、グリーンビーンズの発根に対する２００ｐｐｍ大豆ＥＭＬ溶液の根形成の影響を示す。図２２および図２３は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理した根の写真である。図２４は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理群における根の平均数を示す。
【図２４】図２２〜図２４は、グリーンビーンズの発根に対する２００ｐｐｍ大豆ＥＭＬ溶液の根形成の影響を示す。図２２および図２３は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理した根の写真である。図２４は、実験の終了時での対照およびＥＭＬ処理群における根の平均数を示す。
【図２５】図２５は、ウィスコンシン州ゲイズミルズで行ったマッキントッシュリンゴの落果に対する大豆ＥＭＬの影響を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【国際調査報告】
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