(57)【要約】開示されているのは、なかでも、血清タンパク質および血清タンパク質に物理的に会合された１つ以上の化合物を含む試料を評価する方法である。本方法は、血清タンパク質およびその会合された化合物により形成された複合体を分析するために、血清タンパク質と特異的に相互作用するペプチドリガンドを使用することを含むことができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料を評価する方法であって：
（ｉ）血清アルブミン、（ｉｉ）血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）抗原−結合免疫グロブリン可変ドメインを含まない血清アルブミン−結合剤、を含んでなる試料を提供し；
血清アルブミン−結合剤を血清アルブミンに結合させて複合体を形成させ；
試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして
１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項２】
試料を評価する方法であって：
（ｉ）血清アルブミン、（ｉｉ）血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）独立して血清アルブミンへ結合するペプチドを含んでなる血清アルブミン−結合剤、を含んでなる試料を提供し；
血清アルブミン−結合剤を血清アルブミンに結合させて複合体を形成させ；
試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして
１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項３】
血清アルブミン−結合剤が５μＭより小さい値の親和性で血清アルブミンを結合する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ペプチドが３０アミノ酸長より短い、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
ペプチドが分子内ジスルフィド結合を含んでなる、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
ペプチドが、ＤＸ−２３６またはＤＸ−３２１、または４アミノ酸置換より少ない程度までＤＸ−２３６またはＤＸ−３２１と異なったアミノ酸配列を含んでなる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
血清アルブミン−結合剤が不溶性支持体につながれている、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
血清アルブミン−結合剤が多数の種からの血清アルブミンへ結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの評価された、物理的に会合された化合物が、血清アルブミンと非共有結合的に会合されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
１つ以上の物理的に会合された化合物を血清アルブミンから分離することをさらに含んでなる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
１つ以上の物理的に会合された化合物を、血清アルブミンから分離することが、評価することに先立っている、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
評価することに先立って、少なくとも１つの非共有結合的に会合された化合物を、血清アルブミンから分離することをさらに含んでなる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１３】
血清アルブミンから分離することが、血清アルブミンを不溶性支持体へ共有結合的に付着させることを含んでなる、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
共有結合的な付着が、血清アルブミンの遊離システインへ対するものである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
試料を評価する方法であって、
（ｉ）血清アルブミン、（ｉｉ）血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）血清アルブミン−結合剤、を含んでなる試料を提供し；
血清アルブミン−結合剤を血清アルブミンに結合させて複合体を形成させ；
試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；
血清アルブミンを不溶性マトリックスへ共有結合的に付着させ；そして
血清アルブミンから血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物の少なくとも１つを分離する、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項１６】
共有結合的の付着が、血清アルブミンの遊離システインへ対するものである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
血清アルブミンから分離されることになる、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価することをさらに含んでなる、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
共有結合的な付着が、チオール反応性基を使用して形成される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
チオール反応性基がハロゲン誘導体を含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
チオール反応性基がヨードアセトアミドを含んでなる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
チオール反応性基がマレイミドを含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
チオール反応性基がチオール交換試薬を含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
チオール交換試薬がピリジル  ジスルフィドである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
分離することが、血清アルブミンを変性することを含んでなる、請求項１３または１５に記載の方法。
【請求項２５】
少なくとも１つの評価された、共有結合的に会合された化合物が非タンパク質性である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
評価することが１つ以上の：ゲル電気泳動、質量分光法、クロマトグラフィーおよびタンパク質配列決定を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
評価することが、既定の化合物に特異的な親和性試薬を使用して、既定の化合物を検出することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項２８】
親和性試薬が抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
評価することが、脂肪酸、ヘマチンおよびビリルビン以外の化合物を検出することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
評価することが、ポリペプチドを検出することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
評価することが、複合体と血清アルブミン上のエピトープに特異的な合成親和性リガンドを接触させることにより、会合された化合物を血清アルブミンから溶出することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３２】
評価することが、複合体と血清アルブミンへ結合する天然化合物を接触させることにより、会合された化合物を溶出することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
天然化合物が、脂肪酸、ヘマチンおよびビリルビンからなる群より選択された成分を含んでなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
天然化合物が、５００ダルトンより小さな分子量を有している、陰性に荷電された芳香族基を含んでなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
血清アルブミンがヒト血清アルブミンである、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
血清アルブミンが天然に存在する血清アルブミンの人工突然変異体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
（ｉ）評価された１つ以上の物理的に会合された化合物の中で、既定の化合物の存在または不在を示す、または（ｉｉ）１つ以上の物理的に会合された化合物を記述する、デジタル的記録情報をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
第２の試料を提供し、そして第２の試料中の１つ以上の物理的に会合された化合物を評価することをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
第１の試料に対して、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価した結果を、第２の試料と比較することをさらに含んでなる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
第１の試料が第１の被験者からであり、そして第２の試料は第２の被験者からである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
第１の被験者が剤で処置され、そして第２の被験者は剤で処置されない、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
第１の被験者および第２の被験者が異なった環境条件にさらされる、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
血清アルブミン−結合剤および血清アルブミンがｐＨ８より上では、優先的に溶液中で解離する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４４】
試料が被験者から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項４５】
被験者がヒトである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
試料が血液または血清を含んでなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
試料がバイオプシから得られる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
試料が腫瘍または腫瘍の５ｍｍ以内の領域から得られる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
被験者が、試料を得ることに先立って、治療組成物で処置される、請求項４５に記載の方法。
【請求項５０】
１つ以上の評価された、物理的に会合された化合物が内在性化合物である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
１つ以上の評価された、物理的に会合された化合物が治療組成物の成分である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
試料を評価する方法であって、
（ｉ）少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む可溶性免疫グロブリンタンパク質、（ｉｉ）免疫グロブリンタンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）抗原結合部位以外の部位で免疫グロブリンタンパク質へ特異的に結合するペプチドを含んでなる免疫グロブリン−結合剤を、含んでなる試料を提供し；
免疫グロブリン−結合剤を可溶性免疫グロブリンタンパク質へ結合させて、可溶性免疫グロブリンタンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物を含む複合体を形成させ；
試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして
１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項５３】
可溶性免疫グロブリンタンパク質が天然に存在するタンパク質である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
可溶性免疫グロブリンタンパク質がＩｇＧである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
１つ以上の物理的に会合された化合物が抗原を含んでなる、請求項５２に記載の方法。
【請求項５６】
試料が、感染を有している被験者から得られる、請求項５２に記載の方法。
【請求項５７】
試料が、免疫学的障害を有している被験者から得られる、請求項５２に記載の方法。
【請求項５８】
免疫学的障害が自己免疫障害である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
ペプチドが３０アミノ酸長より短い、請求項５２に記載の方法。
【請求項６０】
ペプチドが分子内ジスルフィド結合を含んでなる、請求項５２に記載の方法。
【請求項６１】
試料を評価する方法であって、
（ｉ）可溶性血清タンパク質、（ｉｉ）可溶性血清タンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）血清タンパク質へ特異的に結合するペプチドを含んでなる血清タンパク質−結合剤を、含む試料を提供し；
血清タンパク質−結合剤を可溶性血清タンパク質へ結合させて、可溶性血清タンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物を含む複合体を形成させ；
試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして
１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項６２】
血清タンパク質が血清アルブミンである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
血清タンパク質が、血液血清中のタンパク質分画の少なくとも０．０１％である、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
血清タンパク質が、トランスフェリン、マクログロブリン、フェリチン、アポリポタンパク質、トランスサイレチン、血清中に見出されたプロテアーゼ阻害剤、レチノール結合タンパク質、チオスタチン、α−フェトプロテイン、ビタミン−Ｄ結合タンパク質またはアファミンから成る群より選択される、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
血清アルブミンおよび会合された化合物間の物理的相互作用の地図を作製する方法であって：
血清アルブミンおよび会合された化合物を含んでなる複合体を提供し；
複合体へのリガンド（例えば、本明細書に記載したペプチドリガンド）の結合を評価する、ここにおいて、リガンドは血清アルブミンへ５μＭより小さい値の親和性で結合し、リガンドは免疫グロブリン可変ドメインを含んでなく、および複合体への非抗体リガンドの結合は、会合された化合物が、非抗体リガンドにより結合されたエピトープと重複しているエピトープには結合しないことを示している、
ことを含んでなる、前記方法。
【請求項６６】
複合体へのリガンドの結合を評価することをさらに含んでなり、ここにおいて、第２のリガンドは血清アルブミンへ５μＭより小さい値の親和性で結合する、請求項６５に記載の方法。
【請求項６７】
第１および第２の非抗体リガンド結合の１つが、複合体への結合から妨げられている、請求項６５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２００２年６月１４日に提出の、米国仮特許出願第６０／３８８，６４２号、その開示全体が本明細書において援用される、に優先権の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
本出願は、血清タンパク質を含む、タンパク質の分析に関している。血清は、血液が凝固した後に残る、血液由来の液体である。より豊富な血清タンパク質には、血清アルブミンおよび抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）が含まれる。血清中に存在可能な他のタンパク質には：トランスフェリン、α−マクログロブリン、フェリチン、アポリポタンパク質、トランスサイレチン、プロテアーゼ阻害剤、レチノール結合タンパク質、チオスタチン、α−フェトプロテイン、ビタミン−Ｄ結合タンパク質およびアファミンが含まれる（例えば、米国特許第５，７６７，２４３号を参照されたい）。
【０００３】
哺乳動物種の循環血中で、最も豊富なタンパク質成分は血清アルブミンであり、それは通常、１００ｍｌの全血当たり、約３から４．５グラムの濃度で存在している。血清アルブミンは、約７０キロダルトンの血液タンパク質であり、循環系において、いくつかの重要な機能を提供している。例えば、それは、血液中に見いだされる多様な有機分子の輸送体として、脂肪酸、ヘマチンおよびビリルビンのごとき多様な代謝物の主輸送体として、およびその豊富さのため、循環血の浸透圧制御因子として、機能する。それはまた、小さな、陰性に荷電した芳香族化合物に対する広範な親和性を有している。これらの結合機能は、さもなければ循環血漿に不溶性である脂肪酸の主要な坦体として、血清アルブミンが働くことを可能にしている。同様に、それは酸素フリーラジカルを隔離することができ、ビリルビンのごとき毒性の脂溶性代謝物を不活性化する。それはまた、リン酸ピリドキサール、システイン、グルタチオン、およびＣｕ（ＩＩ）、Ｎｉ（ＩＩ）、Ｈｇ（ＩＩ）、Ａｇ（ＩＩ）およびＡｕ（Ｉ）のごとき多様な金属イオンと共有結合的付加体を形成することが可能である。
【０００４】
血清アルブミンはまた、体内に存在する薬剤（ｄｒｕｇ）へも結合できる。実際、薬剤有効性の１つの指標は、血清アルブミンまたは他の血清タンパク質に対する親和性である。血清アルブミンへの結合は、多くの薬剤の、全体の分布、代謝および生物学的利用能に影響することが可能である。少なくともいくつかの場合には、血清アルブミンに対する普通ではないほどの高親和性が、候補薬剤の不首尾に関連していた。
【０００５】
薬剤の半減期および分布を伸ばすため、血清アルブミンへ薬剤をコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）することも知られている。最近、ＨＳＡ−ＣＤ４およびＨＳＡ−Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドディスムターゼのごときキメラアルブミン分子が、半減期および分布を増加させるため、およびこれらの潜在的タンパク質治療剤の免疫原性を減少させるために、利用されてきた。
【発明の開示】
【０００６】
概要
１つの様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：（ｉ）血清アルブミン、（ｉｉ）血清アルブミンと物理的に会合（ａｓｓｏｃｉａｔｅ）された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）血清アルブミン−結合剤を含む試料を提供し；血清アルブミン−結合剤を血清アルブミンに結合させて複合体を形成させ；試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する。本方法は、試料を評価するために使用することが可能である。本方法はさらに、例えば、評価することに先立って、血清アルブミンから１つ以上の物理的に会合された化合物を分離することを含むことが可能である。１つの態様において、血清アルブミンはヒト血清アルブミンである。
【０００７】
１つの態様において、血清アルブミン−結合剤は、１つ以上の以下の特性を有している：合成されたものである；抗体または抗体誘導体以外のタンパク質を含む；天然に存在しない；免疫グロブリン可変ドメインを含まない；独立して血清アルブミンへ結合するペプチドを含む。
【０００８】
最後の場合には、ペプチドは少なくとも１つの分子内ジスルフィド結合、例えば、１つまたは２つの分子内ジスルフィド結合を含むことが可能である。ペプチドは、本明細書に記載するペプチド、例えば、ＤＸ−３２１、ＤＸ−３２１−Ａ、ＤＸ−３２１−Ｂ、ＤＸ−２３６、ＤＸ−２３６−ＡまたはＤＸ−２３６Ｂ、またはその変異体（ｖａｒｉａｎｔ）、または米国公開出願第２００３／００６９３９５号；第１０／０９４，４０１号；第６０／３３１，３５２号；または第６０／２９２，９７５号に記載されているペプチド、またはその変異体、を含むことが可能である。特別の変異体には以下のものが含まれる：１から６の間（例えば、１および４の間、例えば、１、２、３または４）の置換（例えば、保存的置換）、切り詰め、化学的に修飾された形、ペプチド模倣体、および天然に存在しない残基による置換、を有する機能性変異体。ペプチドはまた、１から４の間（例えば、１、２、３または４）の挿入または欠失を有する機能性変異体であることを含むことができる。ペプチドは、血清アルブミンへの結合に対して本明細書に記載するリガンドと競合するペプチドリガンド、または本明細書に記載するリガンドにより結合されたエピトープと重複するエピトープを結合するリガンドであることも可能である。ペプチドリガンドは、ディスプレイライブラリーのスクリーニングにより単離されたリガンドであることも可能である。独立して血清アルブミンへ結合するペプチドは、３２、２８、２４、２０または１６アミノ酸長未満、または１２から３２、８から１６または１２から２４の間のアミノ酸長であることが可能である。
【０００９】
１つの態様において、血清アルブミン−結合剤は不溶性支持体、例えば、ビーズ（磁気ビーズのごとき）、マトリックス（クロマトグラフィーマトリックス、アガロースまたは多孔性材料のごとき）または平面表面、へ結合されている。例えば、支持体は平面表面を含むことができ、血清アルブミン−結合剤は、平面表面上の別個の位置に固定化される。平面表面はまた、第２の別個の位置に、第２の結合剤、例えば、別の血清アルブミン−結合剤または異なった血清タンパク質へ結合する剤を含むことが可能である。
【００１０】
血清アルブミン−結合剤は、５、４、２、１、０．５、０．１μＭより小さい、または５０、１０、５または０．５ｎＭより小さい、および／または０．０５、０．５、５または５０ｎＭ、０．００１、０．１または０．１μＭより大きな値、およびこれらの値間の範囲、の結合親和性（ＫD）を有することが可能である。１つの態様において、血清アルブミン−結合剤は、生理的条件下で血清アルブミンへ結合する。１つの態様において、血清アルブミン−結合剤および血清アルブミンは、少なくともｐＨ８、８．５または９より上、例えば、ｐＨ８から１１の間；ｐＨ８から１０．５の間；ｐＨ８から１０の間；ｐＨ８．５から１０の間；またはｐＨ８．７から９．５の間の溶液中で、優先的に解離する。別の態様において、血清アルブミン−結合剤および血清アルブミンは、少なくともｐＨ６、５．５または６より下、例えば、ｐＨ４から６の間；ｐＨ４．６から６．５の間；ｐＨ５から６．５の間；またはｐＨ４．７から６．０の間の溶液中で、優先的に解離する。
【００１１】
１つの態様において、血清アルブミン−結合剤は７、５、３または２ｋＤａより小さい分子量、または１．５から７、または２から６ｋＤａの間の分子量である。
血清アルブミン−結合剤は、多数の種、例えば、多数の哺乳動物種、例えば、ヒトおよびマウス、からの血清アルブミンへ結合することができる。別の態様において、血清アルブミン−結合剤はヒト血清アルブミンへ結合するが、マウス血清アルブミンおよびウシ血清アルブミンとは結合しない。
【００１２】
１つの態様において、少なくとも１つの評価された、物理的に会合された化合物は、血清アルブミンと非共有結合的に会合されている。こういう化合物は、血清アルブミンと直接的にまたは間接的に会合されている。間接相互作用は、１つ以上の化合物による架橋であることができ、その少なくとも１つは、血清アルブミンと直接会合している。別の態様において、少なくとも１つの評価された、物理的に会合された化合物は、血清アルブミンと共有結合的に会合されることができる。いくつかの態様において、少なくとも１つの評価された、物理的に会合された化合物は、血清アルブミンと共有結合的に会合されており、少なくとももう１つは非共有結合的に会合されている。
【００１３】
本方法はさらに、例えば、評価することに先立って、血清アルブミンから少なくとも１つの非共有結合的に会合された化合物を分離することを含むことが可能である。血清アルブミンから分離することは、血清アルブミンを不溶性支持体、例えば、マトリックス、粒子または表面、へ共有結合で付着することを含むことが可能である。例えば、共有結合的付着は、血清アルブミンの遊離システインへ行うことが可能である。共有結合的付着は、チオール反応性基、例えば、ハロゲン誘導体（ヨードアセトアミドのごとき）、マレイミドまたはチオール交換試薬（例えば、ピリジル  ジスルフィド）、を使用して形成できる。
【００１４】
分離することは、例えば、カオトロープ、有機溶剤、高または低ｐＨ、または熱を使用して、血清アルブミンを変性すること、を含むことが可能である。別の態様において、少なくとも１つの評価された、共有結合的に会合された化合物がプロテアーゼ抵抗性である場合（例えば、非タンパク質性成分を含んで）、分離することは、例えば、プロテアーゼを使用して、血清アルブミンを分解することを含むことが可能である。
【００１５】
評価することは、下記の工程の１つ以上を含むことが可能である：ゲル電気泳動、質量分析、クロマトグラフィー、タンパク質配列決定、標識の検出（例えば、放射活性、蛍光、酵素または化学標識）、既定の化合物に特異的な親和性試薬を使用する既定の化合物の検出、または本明細書に記載されているその他の方法。親和性試薬は抗体であることができる。例えば、検出することは、免疫ブロットまたは免疫沈降を実施することを含むことが可能である。評価することからの情報は、機械読み取り可能媒体上へ記録されるか、コンピューターネットワークを通して伝達するか、またはデータベースに保存することが可能である。
【００１６】
評価することの対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）は、タンパク質性または非タンパク質性化学化合物を含むことが可能である。例えば、対象はペプチド、ポリペプチド、タンパク質複合体または薬剤を含むことが可能である。１つの態様において、化合物は表１または表２の１つ以上の化合物以外、例えば、脂肪酸、ヘマチン、ビリルビンまたは外来性化合物以外であろう。
【００１７】
１つの態様において、評価することは、血清アルブミンのエピトープまたは血清アルブミンへ結合する天然の化合物（例えば、脂肪酸、ヘマチンおよびビリルビン）に対して特異的な合成親和性リガンドを使用する競合により、血清アルブミンから会合された化合物を溶出することを含んでいる。天然の化合物は、５００ダルトンより小さな分子量を有している、陰性に荷電した芳香族基を含むことが可能である。
【００１８】
１つの態様において、血清アルブミンは天然に存在する血清アルブミンの人工突然変異体である。例えば、血清アルブミンを異種ポリペプチドと融合させるか、または治療剤（例えば、細胞毒性薬剤）へ共有結合でつなぐことが可能である。
【００１９】
本方法はさらに、（ｉ）評価された１つ以上の物理的に会合された化合物の中で、既定の化合物の存在または不在を示す、または（ｉｉ）１つ以上の物理的に会合された化合物を記述する、デジタル的記録情報を含むことが可能である。
【００２０】
１つの態様において、試料は被験者（ｓｕｂｊｅｃｔ）、例えば、ヒト、例えば、患者、から得られる。試料は血液または血清を含むことができる。別の態様において、試料はバイオプシから得られ、例えば、腫瘍、腫瘍に近接した領域、またはリンパ節から得られる。被験者は、試料を得ることに先立って、治療組成物で処置される。
【００２１】
１つの態様において、１つ以上の物理的に会合された化合物は、内在性化合物である。別の態様において、１つ以上の物理的に会合された化合物は、治療組成物の成分である。
１つの態様において、本方法はさらに、第２の試料を提供し、そして第２の試料中の１つ以上の物理的に会合された化合物を評価することを含んでいる。本発明はさらに、第１の試料および第２の試料の、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価した結果を比較することを含むことが可能である。
【００２２】
１つの態様において、第１および第２の試料は、各々第１および第２の被験者から得られる。１つの例において、第１の被験者および第２の被験者は、各々、剤（例えば、小分子）で処置され、および剤で処置されない。別の例において、第１の被験者および第２の被験者は、異なった環境条件におかれる。さらに別の例において、第１の被験者は対照被験者であり、そして第２の被験者は実験被験者である。別の例において、第１の被験者は対照被験者であり、そして第２の被験者は影響を受けたおよび／または病気にかかった被験者である。さらに別の例において、第１および第２の試料は、同一の被験者から、例えば、異なった時間に、例えば、処置間の異なった時点で得られる。
【００２３】
結果は、器械または器械−読み取り可能媒体に記録することが可能である。例えば、結果はコンピューターデータベースに保存される。
１つの態様において、第１および第２の試料の結果を、対照試料と比較する。１つの態様において、第１および第２の試料の結果を、試料のための記録（各々の試料記録は試料についての情報（例えば、起源、疾患、環境条件、生理学的条件など）と結びつけられている）、を含むデータベースと比較する。
【００２４】
別の態様において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：血清アルブミン、血清アルブミンと会合された１つ以上の化合物、および血清アルブミンと会合しない成分、を含む試料を提供し；試料を、血清アルブミンに特異的である親和性リガンドと接触させ；そして、血清アルブミンおよび１つ以上の会合された化合物を含む組成物から、非会合成分を分離し、それにより、血清アルブミン会合化合物を提供する。本方法は、血清アルブミン会合化合物を提供するために使用することが可能である。本方法は本明細書に記載した他の特色を含むことが可能である。本発明はまた、上記の方法または本明細書に記載された方法により調製された組成物を提供する。
【００２５】
本方法はさらに、血清アルブミンから会合された化合物を分離して、血清アルブミンを含まない調製試料を提供することを含むことが可能である。本発明はまた、上記の方法または本明細書に記載された別の方法に従って調製された、血清アルブミンを含まない調製試料も特色としている。
【００２６】
別の様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：各々が血清タンパク質（例えば、血清アルブミン、可溶性免疫グロブリンまたは他の血清タンパク質）を含む、第１および第２の試料を提供し（例えば、受け取りまたは手に入れ）；もし存在するなら、各々の試料の会合された化合物（類）を評価し、例えば、本明細書に記載された方法に従って；そして、第１および第２の試料の、評価された結果を比較する。本方法はさらに、評価することに先立って、各々の試料から、血清タンパク質および血清タンパク質に会合された化合物を分離することを含んでいる。分離することは、血清タンパク質を不溶性マトリックスに共有結合で付着させることを含むことが可能である。血清タンパク質とは、豊富な血清タンパク質、例えば、血清の少なくとも０．００１、０．０５または０．１％を形成している血清タンパク質であろう。
【００２７】
１つの態様において、第１および第２の試料は、各々第１および第２の被験者から得られる。１つの例において、第１の被験者および第２の被験者は、各々、剤（例えば、小分子）で処置され、および剤で処置されない。別の例において、第１の被験者および第２の被験者は、異なった環境条件におかれる。さらに別の例において、第１の被験者は対照被験者であり、そして第２の被験者は実験被験者である。別の例において、第１の被験者は対照被験者であり、そして第２の被験者は影響を受けたおよび／または病気にかかった被験者である。
【００２８】
１つの態様において、第１および第２の試料の結果を、対照試料と比較する。１つの態様において、第１および第２の試料の結果を、試料のための記録（各々の試料記録は試料についての情報（例えば、起源、疾患、環境条件、生理学的条件など）と結びつけられている）、を含むデータベースと比較する。
【００２９】
本方法はまた、本明細書に記載された他の特色を含むことが可能である。
別の様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：（ｉ）少なくとも１つの免疫グロブリンドメインを含む可溶性免疫グロブリンタンパク質（ｉｉ）可溶性免疫グロブリンタンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）ペプチド免疫グロブリン−結合剤を含む試料を提供し；免疫グロブリン−結合剤を可溶性免疫グロブリンタンパク質へ結合させて、可溶性免疫グロブリンタンパク質と物理的に会合された１つ以上の化合物を含む複合体を形成させ；試料の１つ以上の成分から複合体を分離し；そして、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する。本方法は、試料を評価するために使用することが可能である。
【００３０】
１つの態様において、可溶性免疫グロブリンタンパク質は天然に存在するタンパク質、例えば、ＩｈＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩｇＤである。別の態様において、可溶性免疫グロブリンタンパク質はＦａｂまたは単鎖抗体である。こういうタンパク質は、少なくとも１つの合成相補性決定領域（ＣＤＲ）を含むことができる。
【００３１】
１つの態様において、１つ以上の物理的に会合された化合物は、病原体の抗原を含んでいる。
試料は、感染、免疫学的障害（例えば、自己免疫障害）または遺伝子障害を有している被験者から得ることが可能である。被験者はまた、正常被験者であることもできる。
【００３２】
１つの態様において、免疫グロブリン−結合剤は、１つ以上の以下の特性を有している：合成されたものである；抗体または抗体誘導体以外のタンパク質を含む；天然に存在しない；免疫グロブリン可変ドメインを含まない；独立して免疫グロブリンへ結合するペプチドを含む。免疫グロブリン−結合剤は、Ｆｃ領域、定常ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４またはＣＬ）、または可変ドメインのフレームワーク領域へ結合することが可能である。主要な態様において、免疫グロブリン−結合剤は、免疫グロブリンの抗原結合部位へは結合しない。
【００３３】
ペプチドは少なくとも１つの分子内ジスルフィド結合、例えば、１つまたは２つの分子内ジスルフィド結合を含むことが可能である。Ｆｃ領域へ結合する免疫グロブリン−結合剤の場合、ペプチドは本明細書に記載するペプチド、例えば、ＤＸ２４９、ＤＸ２４９−Ａ、ＤＸ２４９−Ｂ、ＤＸ２５３、ＤＸ２５３−Ａ、ＤＸ２５３−Ｂ、ＤＸ３９８、ＤＸ３９８−Ａ、ＤＸ３９８−Ｂまたはその変異体、または２００２年４月１８日に提出の、第１０／１２５，８６９号に記載されている化合物またはその変異体を含むことが可能である。
【００３４】
変異体の例には以下のものが含まれる：１から６の間（例えば、１および４の間、例えば、１、２、３または４）の置換（例えば、保存的置換）、切り詰め、化学的に修飾された形、ペプチド模倣体、および天然に存在しない残基による置換、を有する機能性変異体。ペプチドは、免疫グロブリンへの結合に対して本明細書に記載するリガンドと競合するペプチドリガンド、または本明細書に記載するリガンドにより結合されたエピトープと重複するエピトープを結合するリガンドであることも可能である。ペプチドリガンドは、ディスプレイライブラリーのスクリーニングにより単離されたリガンドであることも可能である。独立して免疫グロブリンへ結合するペプチドは、３２、２８、２４、２０または１６アミノ酸長未満、または１２から３２、８から１６または１２から２４の間のアミノ酸長であることが可能である。
【００３５】
１つの態様において、免疫グロブリン−結合剤は不溶性支持体、例えば、ビーズ（磁気ビーズのごとき）、マトリックス（クロマトグラフィーマトリックスのごとき）または平面表面、へ結合されている。例えば、支持体は平面表面を含むことができ、免疫グロブリン−結合剤は、平面表面上の別個の位置に固定化される。平面表面はまた、第２の別個の位置に、第２の結合剤、例えば、別の免疫グロブリン−結合剤または異なった血清タンパク質へ結合する剤を含むことが可能である。
【００３６】
免疫グロブリン−結合剤は、５、４、２、１、０．５、０．１μＭより小さい、および／または０．００１、０．１または０．１μＭより大きな値、およびこれらの値間の範囲、の結合親和性（ＫD）を有することが可能である。１つの態様において、免疫グロブリン−結合剤は、生理的条件下で免疫グロブリンへ結合する。
【００３７】
１つの態様において、免疫グロブリン−結合剤は７、５、３または２ｋＤａより小さい分子量、または１．５から７、または２から６ｋＤａの間の分子量である。
免疫グロブリン−結合剤は、多数の種、例えば、多数の哺乳動物種、例えば、ヒトおよびマウス、からの免疫グロブリンへ結合することができる。別の態様において、免疫グロブリン−結合剤はヒト免疫グロブリンへ結合するが、マウス免疫グロブリンとは結合しない。
【００３８】
１つの態様において、少なくとも１つの評価された、物理的に会合された化合物は、免疫グロブリンと非共有結合的に会合されている。こういう化合物は、免疫グロブリンと直接的にまたは間接的に会合されている。間接相互作用は、１つ以上の化合物による架橋であることができ、その少なくとも１つは、免疫グロブリンと直接会合している。１つの態様において、会合された化合物は、免疫グロブリンにより認識される抗原である。例えば、抗原は病原体、例えば、ウイルスまたは細菌、例えば、複製可能ウイルスまたは生きている細菌、の成分である。
【００３９】
本方法はさらに、例えば、評価することに先立って、血清アルブミンから少なくとも１つの非共有結合的に会合された化合物を分離することを含むことが可能である。血清アルブミンから分離することは、血清アルブミンを不溶性支持体、例えば、マトリックス、粒子または表面、へ共有結合で付着することを含むことが可能である。
【００４０】
分離することは、例えば、カオトロープ、有機溶剤、高または低ｐＨ、または熱を使用して、血清アルブミンを変性すること、を含むことが可能である。別の態様において、少なくとも１つの評価された、共有結合的に会合された化合物がプロテアーゼ抵抗性である場合（例えば、非タンパク質性成分を含んで）、分離することは、免疫グロブリンを分解することを含むことが可能である。
【００４１】
評価することは、下記の工程の１つ以上を含むことが可能である：ゲル電気泳動、質量分析、クロマトグラフィー、タンパク質配列決定、標識の検出（例えば、放射活性、蛍光、酵素または化学標識）、既定の化合物に特異的な親和性試薬を使用する既定の化合物の検出、または本明細書に記載されているその他の方法。親和性試薬は抗体であることができる。例えば、検出することは、免疫ブロットまたは免疫沈降を実施することを含むことが可能である。
【００４２】
評価することは、免疫グロブリンに会合された病原体（例えば、ウイルスまたは細菌）を培養することを含むことが可能である。
評価することの対象は、タンパク質性または非タンパク質性化学化合物を含むことが可能である。例えば、対象はペプチド、ポリペプチド、タンパク質複合体または薬剤を含むことが可能である。１つの態様において、化合物は抗原以外の化合物であり、例えば、化合物は、ＣＤＲ領域の外側での相互作用により、免疫グロブリンと会合されている。
【００４３】
１つの態様において、評価することは、免疫グロブリンのエピトープまたは抗原に対して特異的な合成親和性リガンドを使用する競合により、免疫グロブリンから会合された化合物を溶出することを含んでいる。天然の化合物は、５００ダルトンより小さな分子量を有している、陰性に荷電した芳香族基を含むことが可能である。
【００４４】
１つの態様において、血清アルブミンは天然に存在する血清アルブミンの人工突然変異体である。例えば、血清アルブミンを異種ポリペプチドと融合させるか、または治療剤（例えば、細胞毒性薬剤）へ共有結合でつなぐことが可能である。
【００４５】
本方法はさらに、（ｉ）評価された１つ以上の物理的に会合された化合物の中で、既定の化合物の存在または不在を示す、または（ｉｉ）１つ以上の物理的に会合された化合物を記述する、デジタル的記録情報を含むことが可能である。
【００４６】
１つの態様において、本方法はさらに、第２の試料を提供し、そして第２の試料中の１つ以上の物理的に会合された化合物を評価することを含んでいる。本発明はさらに、第１の試料および第２の試料の、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価した結果を比較することを含むことが可能である。
【００４７】
１つの態様において、試料は被験者、例えば、ヒト、例えば、患者、から得られる。試料は血液または血清を含むことができる。別の態様において、試料はバイオプシから得られ、例えば、腫瘍、腫瘍に近接した領域、またはリンパ節から得られる。被験者は、試料を得ることに先立って、治療組成物で処置される。
【００４８】
１つの態様において、１つ以上の物理的に会合された化合物は、内在性化合物である。別の態様において、１つ以上の物理的に会合された化合物は、治療組成物の成分である。
さらに別の様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：血清アルブミンおよび会合された化合物を含んでいる複合体を提供し；複合体に対する非抗体リガンド（例えば、本明細書に記載するペプチドリガンド）の結合を評価し、ここで非抗体リガンドは血清アルブミンに結合する、例えば、５、３、２、１、０．５または０．１μＭより小さい値の親和性で、および複合体に対する非抗体リガンドの結合は、会合された化合物が、非抗体リガンドにより結合されたエピトープと重複しているエピトープには結合しないことを示している。本方法は、血清アルブミンおよび会合された化合物間の、物理的相互作用の地図を作る（ｍａｐ）ために使用することが可能である。本方法はまた、例えば、第１にリガンドを結合させ、次ぎに会合された化合物を結合させることにより、変化させることが可能である。
【００４９】
本方法はさらに、複合体へのリガンドの結合を評価すること含む方法を特色としており：ここにおいて、第２のリガンドは血清アルブミンへ、例えば、５、３、２、１、０．５または０．１μＭより小さい値の親和性で、結合する。例えば、第２のリガンドは抗体以外である（例えば、ペプチドリガンド）。１つの態様において、第１および第２の非抗体リガンド結合の１つは、複合体への結合から妨げられている。例えば、会合された化合物は、血清アルブミンへの非抗体リガンドの結合を立体的に邪魔しており、または、血清アルブミンに対する非抗体リガンドの結合部位をふさいでいる。本方法はまた、例えば、第１にリガンドを結合させ、次ぎに会合された化合物を結合させることにより、変化させることが可能である。
【００５０】
関連する様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：血清アルブミンおよび非抗体リガンドを含んでいる複合体を提供し、そして、複合体に対する、既定の化合物の結合を評価する。既定の化合物は血清アルブミンへ結合することが知られている化合物、または血清アルブミンに会合して試料から単離された（例えば、本明細書に記載されているように）化合物であることが可能である。本方法は、血清アルブミンおよび既定の化合物間の、物理的相互作用の地図を作るために使用することが可能である。
【００５１】
本方法は、第２のリガンドのために繰り返すことが可能である。１つの態様において、第２のリガンドは、抗原結合免疫グロブリンドメインを含んでいない。
本方法は、第２の既定の化合物のために繰り返すことが可能である。
【００５２】
本方法は、本明細書に記載する他の特色を含むことが可能である。
別の様相において、本発明はデータベースを特色としており、前記データベースは（ｉ）試料中の血清タンパク質に会合された化合物を記述しているデータ；および（ｉｉ）試料についての情報を示しているデータを含んでおり、ここにおいて、（ｉ）の実例は、（ｉｉ）の実例に結びつけられている。データは、本明細書に記載する方法の結果から得ることが可能である。
【００５３】
別の様相において、本発明は以下の工程を含む方法（例えば、器械に基づいた方法）を特色としている：既定試料中の、血清タンパク質に会合された化合物についての情報を受け取り；受け取った情報により示された、化合物または試料についての情報を位置づけるため、多数の照合試料中の、血清タンパク質に会合された化合物についての情報を含むデータベースと情報を比較し；そして、位置づけされた情報または位置づけされた情報に対する照合を、ユーザーに提供する。本方法は、本明細書に記載する他の特色を含むことが可能である。
【００５４】
さらに別の様相において、本発明は、本明細書に記載する組成物中の化合物を分離する、分離プロセスを示している情報、および／または血清アルブミン（例えば、血清アルブミンまたは免疫グロブリン）に会合された化合物の特性（例えば、物理的特性、化学構造など）を示している情報が、その上にコードされた器械−読み取り可能媒体を特色としている。
【００５５】
本発明はまた、本明細書に記載する組成物を分離する、２次元ゲルのイメージを特色としている。各々のイメージが本明細書に記載する組成物の２次元ゲル分離に対応する、多数のイメージを含んでいる、データベースも特色としている。
【００５６】
本明細書に記載する組成物で検出された多数の化合物の特性を示している情報が、その上にコードされている、器械−読み取り可能媒体も特色としている。特性の例には、分子量、等電点、配列、化学組成、存在量、タンパク質分解断片プロフィールなどが含まれる。
【００５７】
別の様相において、本発明は、（ｉ）血清タンパク質、（ｉｉ）血清タンパク質と物理的に会合された、１つ以上の化合物、および（ｉｉｉ）血清タンパク質−結合剤、を含む試料を含み；血清タンパク質−結合剤を血清タンパク質と結合させて、複合体を形成させ；試料の１つ以上の成分から、前記複合体を分離し；そして、１つ以上の物理的に会合された化合物を評価する、方法を特色としている。血清タンパク質の例には、血清アルブミン、抗体（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）、トランスフェリン、α−マクログロブリン、フェリチン、アポリポタンパク質、トランスサイレチン、プロテアーゼ阻害剤、レチノール結合タンパク質、チオスタチン、α−フェトプロテイン、ビタミン−Ｄ結合タンパク質およびアファミンが含まれる。本方法は、例えば、本明細書の前および別の所で記載した、他の特色を含むことが可能である。
【００５８】
１つの態様において、本方法は被験者から試料を得ることを含んでいる。例えば、被験者は、代謝的障害を有していてもよいし、そして血清タンパク質は１つ以上の代謝物のための非アルブミンキャリアタンパク質である。
【００５９】
別の関連する様相において、本発明は以下の工程を含む方法を特色としている：血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物を有している血清アルブミンを含んでなる試料を提供し；血清アルブミンを結合する親和性試薬を使用して、血清アルブミンと血清アルブミンと物理的に会合された１つ以上の化合物を分離し；そして、１つ以上の物理的に会合された化合物を検出する。本方法は、血清アルブミン会合化合物を検出するために使用することが可能である。
【００６０】
１つの態様において、親和性試薬には、抗原結合免疫グロブリンドメインを有していないタンパク質性リガンドが含まれる。例えば、タンパク質性リガンドとは、例えば、５、４、２、１、０．５または０．１μＭより小さな値の親和性で、血清アルブミンを結合するペプチドリガンドである。親和性試薬は、本明細書に記載したような１つ以上のペプチドリガンド（例えば、ＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１）を含むことが可能である。１つの態様において、親和性試薬は、異なったエピトープを結合する、２つのリガンドを含んでいる。本方法は、例えば、本明細書の前および別の所で記載した、他の特色を含むことが可能である。
【００６１】
さらに別の様相において、本発明は、被験者に化合物を含んでなる組成物を投与し、そして、被験者の血清タンパク質と化合物の会合を決定すること、を含む方法を特色としている。決定することは、被験者からの血清タンパク質（例えば、血清アルブミン）を親和性試薬（例えば、本明細書に記載したリガンド）へ共有結合でまたは非共有結合で結合させることを含むことが可能である。本方法は、本明細書に記載した１つ以上の他の特色を含むことが可能である。
【００６２】
別の様相において、本発明は、血清アルブミンを既定の化合物へ接触させ；血清アルブミンを本明細書に記載した親和性試薬へ結合させ；そして、血清アルブミンに対する既定の化合物の会合を決定すること、を含む方法を特色としている。本方法は、本明細書に記載した１つ以上の他の特色を含むことが可能である。
【００６３】
本方法は、血清タンパク質と天然の化合物間の会合、および同様に、血清タンパク質と、医薬のような非天然の化合物間の会合を見出すために使用することが可能である。本方法はまた、既定の血清タンパク質（例えば、血清アルブミン）に会合された化合物のプロフィールにより、被験者（例えば、ヒト患者または動物）を特徴付けるために使用することが可能である。
【００６４】
いくつかの態様において、ペプチドリガンドを、血清タンパク質を結合するための、親和性試薬として使用する。ペプチドリガンドはいくつかの利点を与える。例えば、結合部位当たりの大きさが小さく、例えば、こういう低分子量ペプチドドメインは、抗体のごときより大きなタンパク質よりも、グラム当たりでより高い結合活性を示すことができる。小さな表面のみが利用可能であるので、非特異的結合の可能性が減少する。ペプチドは、例えば、合成的方法により、Ｎ末端ＳｅｒまたはＴｈｒ残基、または末端単または多リジンセグメントのごとき、独特の繋ぎ止め部位を有するように、設計することが可能である（Ｎ末端ＳｅｒまたはＴｈｒは、高い特異性で他の分子へ繋ぐことが可能な、アルデヒドへ特異的に酸化できる）。さらに、いくつかの態様で使用されるように、束縛されたペプチド構造は、多様な状況において、その機能性を保持するようである。
【００６５】
本発明はまた、血清アルブミンに会合された内因性化合物の、単離された調製試料も特色としている。調製試料は、本明細書に記載された方法により単離することが可能である。調製試料は、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０または９５％純粋（重量／容量）でもある、単一化学種を含むことが可能である。化学種は、図１の単離された化学種に従った、等電点および分子量を有することが可能である。
【００６６】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｃｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｃｙｓ（配列番号１）
式中、Ｘａａ1はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ2はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；Ｘａａ3はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；およびＸａａ4はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒである。
【００６７】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｃｙｓ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10（配列番号２）
式中、Ｘａａ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ3はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ5はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ7はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；Ｘａａ8はＧｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、ＳｅｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ9はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；およびＸａａ10はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、ＴｙｒまたはＶａｌである。
【００６８】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｃｙｓ−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（配列番号３）
式中、Ｘａａ1はＡｓｎ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ3はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｈｉｓ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ5はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、ＬｅｕまたはＬｙｓであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ7はＡｓｐ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；Ｘａａ8はＧｌｕ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、ＳｅｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ9はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；およびＸａａ10はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｐｒｏ、ＴｙｒまたはＶａｌである。
【００６９】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｃｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｃｙｓ（配列番号４３１）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；Ｘａａ2はＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ3はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ4はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、ＰｒｏまたはＴｒｐであり；Ｘａａ5はＡｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；およびＸａａ6はＧｌｎ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌである。
【００７０】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｃｙｓ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12（配列番号９９）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ2はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｓｎ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；Ｘａａ5はＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ6はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ7はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、ＰｒｏまたはＴｒｐであり；Ｘａａ8はＡｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ9はＧｌｎ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ10はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＳｅｒであり；Ｘａａ11はＧｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；およびＸａａ12はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＰｒｏまたはＳｅｒである。
【００７１】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｃｙｓ−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（配列番号１００）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ｇｌｎ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ2はＡｓｎ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｓｎ、Ｇｌｙ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり；Ｘａａ5はＩｌｅ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ6はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｌｙｓ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ7はＡｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、ＰｒｏまたはＴｒｐであり；Ｘａａ8はＡｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ9はＧｌｎ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ10はＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、ＰｒｏまたはＳｅｒであり；Ｘａａ11はＧｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；およびＸａａ12はＡｌａ、Ａｓｎ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＰｒｏまたはＳｅｒである。
【００７２】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｃｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｃｙｓ（配列番号１０１）
式中、Ｘａａ1はＧｌｎ、Ｇｌｕ、ＰｈｅまたはＭｅｔであり；Ｘａａ2はＡｓｐ、ＰｒｏまたはＴｈｒであり；Ｘａａ3はＩｌｅ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ4はＨｉｓ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＰｒｏであり；Ｘａａ5はＡｓｎ、ＬｅｕまたはＴｈｒであり；Ｘａａ6はＡｒｇ、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｈｒであり；Ｘａａ7はＡｒｇ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；およびＸａａ8はＡｓｐ、Ｇｌｙ、ＰｈｅまたはＴｒｐである。
【００７３】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｃｙｓ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14（配列番号１０２）、
式中、Ｘａａ1はＡｒｇＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ2はＡｒｇ、Ｌｅｕ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｓｎ、Ａｓｐ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ4はＧｌｎ、Ｇｌｕ、ＰｈｅまたはＭｅｔであり；Ｘａａ5はＡｓｐ、ＰｒｏまたはＴｈｒであり；Ｘａａ6はＩｌｅ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ7はＨｉｓ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＰｒｏであり；Ｘａａ8はＡｓｎ、ＬｅｕまたはＴｈｒであり；Ｘａａ9はＡｒｇ、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｈｒであり；Ｘａａ10はＡｒｇ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ11はＡｓｐ、Ｇｌｙ、ＰｈｅまたはＴｒｐであり；Ｘａａ12  はＡｌａ、ＡｓｎまたはＡｓｐであり；Ｘａａ13はＡｒｇ、Ｐｈｅ、ＰｒｏまたはＴｙｒであり；およびＸａａ14はＡｒｇ、Ｈｉｓ、ＰｈｅまたはＳｅｒである。
【００７４】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｃｙｓ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ａｌａ−Ｐｒｏ（配列番号１０３）
式中、Ｘａａ1はＡｒｇ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ2はＡｒｇ、Ｌｅｕ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｓｎ、Ａｓｐ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ4はＧｌｎ、Ｇｌｕ、ＰｈｅまたはＭｅｔであり；Ｘａａ5はＡｓｐ、ＰｒｏまたはＴｈｒであり；Ｘａａ6はＩｌｅ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ7はＨｉｓ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＰｒｏであり；Ｘａａ8はＡｓｎ、ＬｅｕまたはＴｈｒであり；Ｘａａ9はＡｒｇ、Ａｓｎ、ＨｉｓまたはＴｈｒであり；Ｘａａ10はＡｒｇ、Ｍｅｔ、ＰｈｅまたはＴｙｒであり；Ｘａａ11はＡｓｐ、Ｇｌｙ、ＰｈｅまたはＴｒｐであり；Ｘａａ12はＡｌａ、ＡｓｎまたはＡｓｐであり；Ｘａａ13はＡｒｇ、Ｐｈｅ、ＰｒｏまたはＴｙｒであり；およびＸａａ14はＡｒｇ、Ｈｉｓ、ＰｈｅまたはＳｅｒである。
【００７５】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｃｙｓ−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｃｙｓ（配列番号４）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ3はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ5はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ7はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ9はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ10はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌである。
【００７６】
天然に存在しない血清アルブミン−結合剤の別の例は、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドである：
Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｃｙｓ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16（配列番号５）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ5はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ7はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ9はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ10はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ11はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ12はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ13はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ14はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ15はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；およびＸａａ16はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒである。
【００７７】
上記配列番号５の構造を有する血清アルブミン−結合リガンドのさらなる例には、アミノ酸配列（Ａ）または（Ｂ）を含んでなるポリペプチドが含まれる：
（Ａ）Ｘａａ1−Ａｒｇ−Ｘａａ2−Ｃｙｓ−Ｘａａ3−Ｔｈｒ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｐｒｏ−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｃｙｓ−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13（配列番号４２５）
式中、Ｘａａ1はＡｓｎ、ＬｅｕまたはＰｈｅであり、好ましくはＬｅｕ；Ｘａａ2はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ3はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ5はＰｈｅ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり、好ましくはＴｒｐ；Ｘａａ6はＨｉｓまたはＰｈｅであり、好ましくはＰｈｅ；Ｘａａ7はＡｓｐ、ＧｌｕまたはＴｈｒであり；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ9はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ10はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ11はＰｒｏまたはＳｅｒであり；Ｘａａ12はＡｓｎまたはＰｒｏであり；およびＸａａ13はＡｓｎまたはＰｒｏである；または
（Ｂ）Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｘａａ4−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｃｙｓ−Ｘａａ10−Ａｓｎ−Ｘａａ11（配列番号４２６）
式中、Ｘａａ1はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3がＧｌｕ、ＬｅｕまたはＭｅｔであり、好ましくはＭｅｔ；Ｘａａ4はＴｒｐまたはＴｙｒであり、好ましくはＴｒｐ；Ｘａａ5はＧｌｎ、ＧｌｕまたはＬｙｓであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ7はＭｅｔ、ＰｒｏまたはＳｅｒであり、好ましくはＰｒｏ；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ9はＨｉｓまたはＰｒｏであり、好ましくはＰｒｏ；Ｘａａ10はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；およびＸａａ11はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒである。
【００７８】
さらに他の天然に存在しない血清アルブミン−結合リガンドには、下式のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドが含まれる：
Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｘａａ0−Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｃｙｓ−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ（配列番号６）
式中、Ｘａａ0はＡｌａまたはＡｓｐであり；Ｘａａ1はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒであり；Ｘａａ2はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、ＳｅｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ3はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ4はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ5はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ6はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ7はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ9はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ10はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｈｒまたはＴｒｐであり；Ｘａａ11はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＶａｌであり；Ｘａａ12はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ13はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、ＴｙｒまたはＶａｌであり；Ｘａａ14はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ15はＡｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；Ｘａａ16はＡｌａ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、ＴｒｐまたはＴｙｒであり；およびＸａａ17はＡｌａまたはＡｓｐである。
【００７９】
さらなる態様において、本発明は下式からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる、天然に存在しない血清アルブミン−結合剤を提供する：
ＰＴＶＶＱＰＫＦＨＡＦＴＨＥＤＬＬＷＩＦ（配列番号１０４）、
ＬＫＳＱＭＶＨＡＬＰＡＡＳＬＨＤＱＨＥＬ（配列番号１０５）および
ＳＱＶＱＧＴＰＤＬＱＦＴＶＲＤＦＩＹＭＦ（配列番号１０６）。
【００８０】
血清アルブミン−結合剤の例には、下式からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれる（２０の普通のＬ−アミノ酸の標準１文字略語を使用して示されている）：
ＣＴＩＦＬＣ  （配列番号７）、
ＣＥＧＫＤＭＩＤＷＶＹＣ  （配列番号８）、
ＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣ  （配列番号９）、
ＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＡＣ  （配列番号４１）、
ＣＤＲＩＡＷＹＰＱＡＬＣ  （配列番号４２）、
ＣＤＲＩＡＷＹＰＡＨＬＣ  （配列番号４３）、
ＣＤＲＩＡＷＹＡＱＨＬＣ  （配列番号４４）、
ＣＤＲＩＡＷＡＰＱＨＬＣ  （配列番号４５）、
ＣＤＲＩＡＡＹＰＱＨＬＣ  （配列番号４６）、
ＣＤＲＡＡＷＹＰＱＨＬＣ  （配列番号４７）、
ＣＤＡＩＡＷＹＰＱＨＬＣ  （配列番号４８）、
ＣＡＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣ  （配列番号４９）、
ＣＥＰＷＭＬＲＦＧＣ  （配列番号１０）、
ＣＤＱＷＦＣ  （配列番号１１）、
ＣＮＮＡＬＣ  （配列番号１２）、
ＣＤＨＦＦＣ  （配列番号１３）、
ＣＷＨＦＳＣ  （配列番号１４）、
ＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣ  （配列番号１５）、
ＣＶＴＤＷＡＮＲＨＱＨＣ  （配列番号１６）、
ＣＶＫＤＷＡＮＲＲＲＧＣ  （配列番号１７）、
ＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣ  （配列番号１８）、
ＣＱＴＴＷＰＦＴＭＭＱＣ  （配列番号１０７）、
ＣＶＴＭＷＰＦＥＱＩＦＣ  （配列番号１０８）、
ＣＦＴＹＹＰＦＴＴＦＳＣ  （配列番号１０９）、
ＣＷＴＫＦＰＦＤＬＶＷＣ  （配列番号１１０）、
ＣＶＳＹＷＰＨＦＶＰＶＣ  （配列番号１１１）、
ＣＹＩＳＦＰＦＤＱＭＹＣ  （配列番号１１２）、
ＣＳＶＱＹＰＦＥＶＶＶＣ  （配列番号１１３）、
ＣＷＴＱＹＰＦＤＨＳＴＣ  （配列番号１１４）、
ＣＩＴＷＰＦＫＲＰＷＰＣ  （配列番号１１５）、
ＣＩＳＷＰＦＥＭＰＦＨＣ  （配列番号１１６）、
ＣＩＴＷＰＦＫＲＰＷＰＣ  （配列番号１１７）、
ＣＩＴＹＰＦＨＥＭＦＰＣ  （配列番号１１８）、
ＣＩＴＷＰＦＱＴＳＹＰＣ  （配列番号１１９）、
ＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣ  （配列番号１２０）、
ＣＷＩＶＤＥＤＧＴＫＷＣ  （配列番号１２１）、
ＣＤＳＡＹＷＱＥＩＰＡＣ  （配列番号１２２）、
ＣＬＷＤＰＭＬＣ  （配列番号１２３）、
ＣＥＨＰＹＷＴＥＶＤＫＣ  （配列番号１２４）、
ＣＤＴＰＹＷＲＤＬＷＱＣ  （配列番号１２５）、
ＣＱＬＰＹＭＳＴＰＥＦＣ  （配列番号１２６）、
ＣＧＲＧＦＤＫＥＳＩＹＣ  （配列番号１２７）、
ＣＶＴＹＩＧＴＷＥＴＶＣ  （配列番号１２８）、
ＣＴＤＴＮＷＳＷＭＦＤＣ  （配列番号１２９）、
ＣＴＬＥＩＧＴＷＦＶＦＣ  （配列番号１３０）、
ＣＫＩＡＬＦＱＨＦＥＶＣ  （配列番号１３１）、
ＣＩＫＬＹＧＬＧＨＭＹＣ  （配列番号１３２）、
ＣＥＭＱＳＩＩＰＷＷＥＣ  （配列番号１３３）、
ＣＶＥＫＹＹＷＤＶＬＩＣ  （配列番号１３４）、
ＣＰＨＧＲＹＳＭＦＰＣ  （配列番号１３５）、
ＣＮＶＲＷＴＤＴＰＹＷＣ  （配列番号１３６）、
ＣＴＹＤＰＩＡＤＬＬＦＣ  （配列番号１３７）、
ＣＭＤＷＰＮＨＲＤＣ  （配列番号１３８）、
ＣＦＰＩＨＬＴＭＦＣ  （配列番号１３９）、
ＣＱＴＳＦＴＮＹＷＣ  （配列番号１４０）、
ＣＭＥＦＧＰＤＤＣ  （配列番号１４１）、
ＣＳＷＤＰＩＦＣ  （配列番号１４２）、
ＣＡＷＤＰＬＶＣ  （配列番号１４３）、
ＣＨＩＹＤＷＦＣ  （配列番号１４４）、
ＣＬＷＤＰＭＩＣ  （配列番号１４５）、
ＣＳＰＰＧＫＴＣ  （配列番号１４６）、
ＣＴＦＷＱＹＷＣ  （配列番号１４７）、
ＣＭＦＥＬＰＦＣ  （配列番号１４８）、
ＣＦＳＫＰＤＱＣ  （配列番号１４９）、
ＣＦＹＱＷＷＧＣ  （配列番号１５０）、
ＣＴＷＤＰＩＦＣ  （配列番号１５１）、
ＣＷＬＹＤＣ  （配列番号１５２）、
ＣＤＫＹＧＣ  （配列番号１５３）および
ＣＳＫＤＴＣ  （配列番号１５４）。
【００８１】
血清アルブミン−結合剤の追加の例は、下式からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである：
ＡＤＦＣＥＧＫＤＭＩＤＷＶＹＣＲＬＹ  （配列番号２７）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号２８）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＡ  （配列番号５０）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＡＬ  （配列番号５１）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＡＦＬ  （配列番号５２）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＡＣＥＦＬ  （配列番号５３）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＡＬＣＥＦＬ  （配列番号５４）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＡＨＬＣＥＦＬ  （配列番号５５）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＡＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号５６）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＡＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号５７）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＡＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号５８）、
ＦＷＦＣＤＲＡＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号５９）、
ＦＷＦＣＤＡＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号６０）、
ＦＷＦＣＡＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号６１）、
ＦＷＡＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号６２）、
ＦＡＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号６３）、
ＡＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬ  （配列番号６４）、
ＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＧＰ  （配列番号２９）、
ＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＡＬ  （配列番号３０）、
ＤＷＤＣＶＴＤＷＡＮＲＨＱＨＣＷＡＬ  （配列番号３１）、
ＤＷＱＣＶＫＤＷＡＮＲＲＲＧＣＭＡＤ  （配列番号３２）、
ＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡ  （配列番号３３）、
ＬＲＤＣＱＴＴＷＰＦＭＭＱＣＰＮＮ  （配列番号１５５）、
ＮＲＥＣＶＴＭＷＰＦＥＱＩＦＣＰＷＰ  （配列番号１５６）、
ＬＲＳＣＦＴＹＹＰＦＴＴＦＳＣＳＰＡ  （配列番号１５７）、
ＬＳＨＣＷＴＫＦＰＦＤＬＶＷＣＤＳＰ  （配列番号１５８）、
ＬＲＭＣＶＳＹＷＰＨＦＶＰＶＣＥＮＰ  （配列番号１５９）、
ＬＲＤＣＹＩＳＦＰＦＤＱＭＹＣＳＨＦ  （配列番号１６０）、
ＦＲＨＣＳＶＱＹＰＦＥＶＶＶＣＰＡＮ  （配列番号１６１）、
ＬＲＮＣＷＴＱＹＰＦＤＨＳＴＣＳＰＮ  （配列番号１６２）、
ＤＳＭＣＩＴＷＰＦＫＲＰＷＰＣＡＮ  （配列番号１６３）、
ＡＦＭＣＩＳＷＰＦＥＭＰＦＨＣＳＰＤ  （配列番号１６４）、
ＤＳＭＣＩＴＷＰＦＫＲＰＷＰＣＡＮＰ  （配列番号１６５）
ＷＤＬＣＩＴＹＰＦＨＥＭＦＰＣＥＤＧ  （配列番号１６６）、
ＧＧＥＣＩＴＷＰＦＱＴＳＹＰＣＴＮＧ  （配列番号１６７）、
ＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡ  （配列番号１６８）、
ＦＳＬＣＷＩＶＤＥＤＧＴＫＷＣＬＰ  （配列番号１６９）、
ＲＷＦＣＤＳＡＹＷＱＥＩＰＡＣＡＲＤ  （配列番号１７０）、
ＲＷＹＣＬＷＤＰＭＬＣＭＳＤ  （配列番号１７１）、
ＡＷＹＣＥＨＰＹＷＴＥＶＤＫＣＨＳＳ  （配列番号１７２）、
ＳＤＦＣＤＴＰＹＷＲＤＬＷＱＣＮＳＰ  （配列番号１７３）、
ＬＰＷＣＱＬＰＹＭＳＴＰＥＦＣＩＲＰ  （配列番号１７４）、
ＹＨＶＣＧＲＧＦＤＫＥＳＩＹＣＫＦＬ  （配列番号１７５）、
ＳＦＣＶＴＹＩＧＴＷＥＴＶＣＫＲＳ  （配列番号１７６）、
ＮＤＧＣＴＤＴＮＷＳＷＭＦＤＣＰＰＬ  （配列番号１７７）、
ＷＲＤＣＴＬＥＩＧＴＷＦＶＦＣＫＧＳ  （配列番号１７８）、
ＳＰＹＣＫＩＡＬＦＱＨＦＥＶＣＡＡＤ  （配列番号１７９）、
ＲＨＷＣＩＫＬＹＧＬＧＨＭＹＣＮＲＳ  （配列番号１８０）、
ＤＨＡＣＥＭＱＳＩＩＰＷＷＥＣＹＰＨ  （配列番号１８１）、
ＰＲＳＣＶＥＫＹＹＷＤＶＬＩＣＧＦＦ  （配列番号１８２）、
ＦＨＴＣＰＨＧＲＹＳＭＦＰＣＤＹＷ  （配列番号１８３）、
ＨＧＷＣＮＶＲＷＴＤＴＰＹＷＣＡＦＳ  （配列番号１８４）、
ＹＲＶＣＴＹＤＰＩＡＤＬＬＦＣＰＦＮ  （配列番号１８５）、
ＲＳＦＣＭＤＷＰＮＨＲＤＣＤＹＳ  （配列番号１８６）、
ＦＷＤＣＦＰＩＨＬＴＭＦＣＤＲＦ  （配列番号１８７）、
ＹＬＹＣＱＴＳＦＴＮＹＷＣＡＦＨ  （配列番号１８８）、
ＧＬＹＣＭＥＦＧＰＤＤＣＡＷＨ  （配列番号１８９）、
ＫＮＦＣＳＷＤＰＩＦＣＧＩＨ  （配列番号１９０）、
ＫＷＹＣＡＷＤＰＬＶＣＥＩＦ  （配列番号１９１）、
ＷＴＴＣＨＩＹＤＷＦＣＳＳＳ  （配列番号１９２）、
ＱＷＹＣＬＷＤＰＭＩＣＧＬＩ  （配列番号１９３）、
ＱＴＮＣＳＰＰＧＫＴＣＤＫＮ  （配列番号１９４）、
ＡＩＣＴＦＷＱＹＷＣＬＥＰ  （配列番号１９５）、
ＦＥＷＣＭＦＥＬＰＦＣＳＷＰ  （配列番号１９６）、
ＱＥＧＣＦＳＫＰＤＱＣＫＶＭ  （配列番号１９７）、
ＬＥＹＣＦＹＱＷＷＧＣＰＨＡ  （配列番号１９８）、
ＹＱＦＣＴＷＤＰＩＦＣＧＷＨ  （配列番号１９９）、
ＬＷＤＣＷＬＹＤＣＥＧＮ  （配列番号２００）、
ＶＨＳＣＤＫＹＧＣＶＮＡ  （配列番号２０１）、
ＦＥＨＣＳＫＤＴＣＳＧＮ  （配列番号２０２）、
ＶＡＷＣＴＩＦＬＣＬＤＶ  （配列番号２０３）、
ＦＫＩＣＤＱＷＦＣＬＭＰ  （配列番号２０４）、
ＨＶＧＣＮＮＡＬＣＭＱＹ  （配列番号２０５）、
ＷＫＶＣＤＨＦＦＣＬＳＰ  （配列番号２０６）、
ＮＨＧＣＷＨＦＳＣＩＷＤ  （配列番号２０７）、
ＦＲＮＣＥＰＷＭＬＲＦＧＣＮＰＲ  （配列番号２０８）、
ＡＤＦＣＥＧＫＤＭＩＤＷＶＹＣＲＬＹ  （配列番号２０９）、
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤ  （配列番号２１０）、
ＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＧＰ  （配列番号２１１）、
ＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＡＬ  （配列番号２１２）、
ＤＷＤＣＶＴＤＷＡＮＲＨＱＨＣＷＡＬ  （配列番号２１３）、
ＤＷＱＣＶＫＤＷＡＮＲＲＲＧＣＭＡＤ  （配列番号２１４）、
ＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰ  （配列番号２１５）。
【００８２】
血清アルブミン−結合剤の追加の例は、下式からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドである：
ＡＥＧＴＧＤＡＤＦＣＥＧＫＤＭＩＤＷＶＹＣＲＬＹＤＰＥ  （配列番号３４）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号３５）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＡＰＥ  （配列番号６５）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＡＤＰＥ  （配列番号６６）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＡＬＤＰＥ  （配列番号６７）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＡＦＬＤＰＥ  （配列番号６８）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＡＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号６９）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＡＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７０）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＡＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７１）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＡＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７２）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＡＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７３）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＡＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７４）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＡＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７５）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＡＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７６）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＡＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７７）、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＡＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７８）、
ＡＥＧＴＧＤＦＡＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号７９）、
ＡＥＧＴＧＤＡＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号８０）、
ＡＥＧＴＧＡＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥ  （配列番号８１）、
ＡＥＧＴＧＤＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＧＰＤＰＥ  （配列番号３６）、
ＡＥＧＴＧＤＤＷＤＣＶＴＲＷＡＮＲＤＱＱＣＷＡＬＤＰＥ  （配列番号３７）、
ＡＥＧＴＧＤＤＷＤＣＶＴＤＷＡＮＲＨＱＨＣＷＡＬＤＰＥ  （配列番号３８）、
ＡＥＧＴＧＤＤＷＱＣＶＫＤＷＡＮＲＲＲＧＣＭＡＤＤＰＥ  （配列番号３９）、および
ＡＥＧＴＧＤＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰＥ  （配列番号４０）。
【００８３】
血清アルブミン−結合剤の特別の例には、下式の化合物が含まれる：
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ  （配列番号１９）。このペプチドはＤＸ−２３６と名付けられた。
【００８４】
ＤＸ−２３６は哺乳動物血清アルブミンを結合し、適切な条件下、「全哺乳動物」血清アルブミン−結合剤として有用である。１から５の間、例えば、１から３の間または１または２、のアミノ酸変化（置換、挿入または欠失）；または、１から６の間、例えば、１から４、１から３、または１から２の間、の保存的アミノ酸置換を含む；および血清アルブミンに結合する、ＤＸ−２３６変異体もまた使用することが可能である。以下の２つのＤＸ−２３６変異体を使用することが可能である：ペプチド配列ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤ（配列番号２１０）を含むＤＸ−２３６Ａ、およびＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣ（配列番号９）を含むＤＸ−２３６Ｂ。
【００８５】
ＤＸ−２３６はまた、追加の化学修飾を含むことができる：例えば、Ａｃ−ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号１９）、式中、ＡｃはＮ末端アセチルキャッピング基を示しており、および−ＮＨ2はＣ末端アミドキャッピング基を示している。ＤＸ−２３６変異体の例には、以下の配列を含む化合物が含まれる：
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＡＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＡＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＡＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＡＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＡＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＡＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＡＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＡＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＡＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＡＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＡＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＡＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＡＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＷＡＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＦＡＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、
ＡＥＧＴＧＤＡＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、および
ＡＥＧＴＧＡＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ−、（各々、配列番号８２から９８）。
【００８６】
変異体はさらに、ＮまたはＣ末端修飾を含むことが可能である。変異体の例は１から６、１から５、１から４、または１から３の間のアミノ酸置換、例えば、１または２のアミノ酸置換を有している。他の変異体は、１、２、３または５より少ないアミノ酸挿入、欠失または置換を含んでいる。
【００８７】
追加の血清アルブミン−結合剤には以下のものが含まれる：
ＧＤＬＲＤＣＱＴＴＷＰＦＴＭＭＱＣＰＮＮＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＮＲＥＣＶＴＭＷＰＦＥＱＩＦＣＰＷＰＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＬＲＳＣＦＴＹＹＰＦＴＴＦＳＣＳＰＡＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＤＳＭＣＩＴＷＰＦＫＲＰＷＰＣＡＮＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＦＳＬＣＷＩＶＤＥＤＧＴＫＷＣＬＰＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＲＷＦＣＤＳＡＹＷＱＥＩＰＡＣＡＲＤＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＳＤＦＣＤＴＰＹＷＲＤＬＷＱＣＮＳＰＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＳＦＣＶＴＹＩＧＴＷＥＴＶＣＫＲＳＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＮＤＧＣＴＤＴＮＷＳＷＭＦＤＣＰＰＬＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＳＰＹＣＫＩＡＬＦＱＨＦＥＶＣＡＡＤＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＤＰＲＳＣＶＥＫＹＹＷＤＶＬＩＣＧＦＦＤＰＧＧＧＫ−、
ＧＳＲＳＦＣＭＤＷＰＮＨＲＤＣＤＹＳＡＰＧＧＧＫ−、
ＡＧＫＷＹＣＡＷＤＰＬＶＣＥＩＦＧＴＧＧＧＫ−、
ＡＧＷＴＴＣＨＩＹＤＷＦＣＳＳＳＧＴＧＧＧＫ−、
ＡＧＬＥＹＣＦＹＱＷＷＧＣＰＨＡＧＴＧＧＧＫ−、
ＡＧＹＱＦＣＴＷＤＰＩＦＣＧＷＨＧＴＧＧＧＫ−、および
ＧＳＬＷＤＣＷＬＹＤＣＥＧＮＡＰＧＧＧＫ−、（各々、配列番号２１６から２３３）。
【００８８】
別の特別な血清アルブミン−結合剤は：ＡＥＧＴＧＤＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰＥ（配列番号２０）を含む化合物である。この結合部分は、ポリペプチド化合物ＤＸ−３２１と名付けられた。ＤＸ−３２１はまた、例えば、下記のように修飾することが可能である：
Ａｃ−ＡＥＧＴＧＤＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰＥ−Ｘ−Ｋ−ＮＨ2  （配列番号２４）、式中、ＡｃはＮ末端アセチルキャッピング基を示しており、Ｘ（上記）はポリペプチド連結６−アミノヘキサン酸基を示しており、および−ＮＨ2はＣ末端アミドキャッピング基を示している。ＤＸ−３２１は、適切な条件下、他の種からの血清アルブミンよりもヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を優先的に結合する。ＤＸ−３２１は特異的にＨＳＡを検出または単離するための試薬として有用である。いくつかの態様において、化合物はＮ末端アセチルキャッピング基を含んではおらず、そしてＣ末端アミドキャッピング基を含んでいても、または含んでいなくてもよい。
【００８９】
１から５の間、例えば、１から３の間または１または２、のアミノ酸変化（置換、挿入または欠失）；または、１から６の間、例えば、１から４、１から３、または１から２の間、の保存的アミノ酸置換を含む；および血清アルブミンに結合する、ＤＸ−３２１変異体もまた使用することが可能である。以下のＤＸ−３２１もまた使用することが可能である：ペプチド配列ＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡ（配列番号４３０）を含むＤＸ−３２１−Ａ；およびペプチド配列ＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣ（配列番号１２０）を含むＤＸ−３２１−Ｂ。
【００９０】
具体的な免疫グロブリン結合分子（免疫グロブリンのＦｃ領域を結合する）の例には、以下の４つの一般式のアミノ酸を含んでなるポリペプチドが含まれる：
Ｉ．  Ｚ１−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｗ−Ｃ−Ｚ２（配列番号２３４）；
式中、Ｚ１は少なくとも６アミノ酸のポリペプチドであり；Ｘ１はＧ、Ｈ、Ｎ、ＲまたはＳであり；Ｘ２はＡ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｉ、ＭまたはＳであり；Ｘ３はＡ、Ｉ、Ｌ、ＭまたはＶであり；Ｘ４はＩ、Ｍ、ＴまたはＶであり；Ｚ２は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドであるか、または不在であり；およびＺ１は、不変異体システイン残基とのジスルフィド結合の形成が、１２アミノ酸の環状ペプチドを形成するように、少なくとも１つのシステイン残基を含んでいる。
【００９１】
ＩＩ．  Ｚ１−Ｘ−Ｗ−Ｚ２−Ｗ−Ｚ３（配列番号２３５）；
式中、Ｚ１は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドであるか、または不在であり；ＸはＦまたはＹであり；Ｚ２はトリペプチドであり；およびＺ３は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドであり；
式中、ポリペプチドＺ１、Ｚ２およびＺ３の少なくとも２つは、そのシステイン残基間のジスルフィド結合で７−１２アミノ酸の環状ペプチドを形成するように、システイン残基を含んでいる。
【００９２】
前記式ＩＩのポリペプチドにおいて、Ｚ２は式（ＩＩＡ）を有することができる：
Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３（ＩＩＡ）、
式中、Ｘ１はＡ、Ｃ、Ｆ、Ｋ、Ｐ、Ｒ、ＷまたはＹであり；Ｘ２はＣ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＹであり；およびＸ３はＡ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、ＶまたはＹである；ただし、多くてＸ１、Ｘ２およびＸ３の１つはＣであることが可能である。いくつかの実行において、Ｘ２がＣである場合は、Ｘ１はＹである。いくつかの実行において、Ｘ１はＣである。
【００９３】
ＩＩＩ．  Ｚ１−Ｗ−Ｚ２−Ｗ−Ｗ−Ｚ３（配列番号２３６）；
式中、Ｚ１は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドであり；Ｚ２はトリペプチドであり；およびＺ３は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドである；式中、ポリペプチドＺ１、Ｚ２およびＺ３の少なくとも２つは、そのシステイン残基間のジスルフィド結合で８−１２アミノ酸の環状ペプチドを形成するように、システイン残基を含んでおり、ただし、Ｚ１がシステインを含んでいる場合、Ｚ２はシステインを含んでおらず、およびＺ２がシステインを含んでいる場合、それはトリペプチドの真ん中の残基であり、およびＺ３もまたシステインを含んでいる。
【００９４】
いくつかの場合において、式ＩＩＩのポリペプチドについて、Ｚ１およびＺ３が各々システイン残基を含んでいる場合、Ｚ１のシステインは不変異体トリプトファン（Ｗ）に隣接しており、Ｚ２の第１のアミノ酸はリジンであり、およびＺ３の第２のアミノ酸はアスパラギン酸（Ｄ）である。
【００９５】
ＩＶ．  Ｚ１−Ｐ−Ｘ１−Ｗ−Ｘ２−Ｃ−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５（配列番号２３７）；
式中、Ｚ１は少なくとも１アミノ酸のポリペプチドであり、およびシステイン残基を含んでおり；Ｘ１はＡ、Ｅ、Ｒ、ＳまたはＴであり；Ｘ２はＦ、ＷまたはＹであり；Ｘ３はＤ、Ｅ、Ｌ、ＭまたはＱであり；Ｘ４はＨ、ＷまたはＹであり；Ｘ５はＦまたはＹである；および式中、Ｚ１中のシステイン残基、およびＸ２およびＸ３間のシステイン残基は、１０−１２アミノ酸の環状ペプチドを形成する。
【００９６】
免疫グロブリン結合ポリペプチドの例には、下式から成る群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる、ポリペプチドが含まれる：
Ｒ−Ｒ−Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号２３８）
Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｃ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｌ  （配列番号２３９）
Ｓ−Ｓ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｆ−Ｄ−Ｐ−Ｍ−Ｇ−Ａ−Ｖ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｙ−Ｄ  （配列番号２４０）
Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−Ａ−Ｙ−Ｎ−Ｔ−Ｓ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｇ−Ｓ  （配列番号２４１）
Ｐ−Ｄ−Ｄ−Ｃ−Ｓ−Ｉ−Ｈ−Ｆ−Ｓ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ｐ−Ｌ  （配列番号２４２）
Ｌ−Ｇ−Ｅ−Ｃ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｌ  （配列番号２４３）
Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｃ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｈ  （配列番号２４４）
Ｄ−Ｈ−Ｍ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｄ−Ｈ  （配列番号２４５）
Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｃ−Ｔ−Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｇ−Ｌ  （配列番号２４６）
Ｃ−Ｒ−Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｐ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号２４７）
Ｒ−Ｒ−Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号２４８）
Ｌ−Ｈ−Ａ−Ｃ−Ａ−Ｆ−Ｄ−Ｐ−Ｍ−Ｇ−Ａ−Ｖ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｙ−Ｄ  （配列番号２４９）
Ｄ−Ｈ−Ｍ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｍ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号２５０）
Ｐ−Ｐ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｗ−Ｄ−Ｗ−Ｑ−Ｇ−Ｉ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｇ−Ｈ  （配列番号２５１）
Ｓ−Ｎ−Ｋ−Ｃ−Ｓ−Ｎ−Ｔ−Ｗ−Ｄ−Ｇ−Ｓ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ａ−Ｎ  （配列番号２５２）
Ｆ−Ｐ−Ｅ−Ｃ−Ｔ−Ｆ−Ｄ−Ｍ−Ｅ−Ｇ−Ｆ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｓ−Ｆ  （配列番号２５３）
Ｈ−Ｄ−Ｌ−Ｃ−Ａ−Ｑ−Ａ−Ｐ−Ｆ−Ｇ−Ｄ−Ａ−Ｔ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｌ−Ｒ  （配列番号２５４）
Ｐ−Ｎ−Ｈ−Ｃ−Ｓ−Ｙ−Ｎ−Ｌ−Ｋ−Ｓ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｄ−Ｌ  （配列番号２５５）
Ｐ−Ｌ−Ｄ−Ｃ−Ａ−Ｒ−Ｄ−Ｉ−Ｈ−Ｎ−Ｓ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｌ−Ｇ  （配列番号２５６）
Ｇ−Ｓ−Ｅ−Ｃ−Ｓ−Ｗ−Ｔ−Ｓ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｈ−Ｗ  （配列番号２５７）
Ｗ−Ｐ−Ｄ−Ｃ−Ｓ−Ｆ−Ｔ−Ｖ−Ｑ−Ｒ−Ｄ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ａ−Ｌ  （配列番号２５８）
Ｓ−Ｈ−Ｓ−Ｃ−Ａ−Ｙ−Ｄ−Ｙ−Ａ−Ｈ−Ｍ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｈ−Ｆ  （配列番号２５９）
Ｄ−Ｈ−Ｍ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号２６０）
Ｒ−Ｐ−Ｎ−Ｃ−Ｔ−Ｆ−Ａ−Ａ−Ｓ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｍ−Ｈ−Ｙ  （配列番号２６１）
Ｗ−Ｗ−Ｇ−Ｃ−Ｑ−Ｆ−Ｄ−Ｗ−Ｒ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ｐ−Ｙ−Ｌ  （配列番号２６２）
Ｇ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｓ−Ｙ−Ｓ−Ｇ−Ｍ−Ｇ−Ｅ−Ｉ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ｒ−Ｗ−Ｆ  （配列番号２６３）
Ａ−Ｌ−Ｍ−Ｃ−Ｓ−Ｈ−Ｄ−Ｍ−Ｗ−Ｇ−Ｓ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｈ−Ｆ  （配列番号２６４）
Ｗ−Ｗ−Ｎ−Ｃ−Ｈ−Ｎ−Ｇ−Ｗ−Ｔ−Ｗ−Ｔ−Ｇ−Ｇ−Ｗ−Ｃ−Ｗ−Ｗ−Ｆ  （配列番号２６５）
Ｙ−Ｈ−Ｖ−Ｃ−Ａ−Ｒ−Ｄ−Ｓ−Ｗ−Ｄ−Ｑ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ａ−Ｆ  （配列番号２６６）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｆ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−Ｐ−Ｔ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｌ  （配列番号２６７）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｆ−Ｓ−Ｅ−Ｓ−Ａ−Ｓ−Ｃ−Ｓ−Ｓ−Ｒ  （配列番号２６８）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｆ−Ｅ−Ｄ−Ｋ−Ｈ−Ｐ−Ｃ−Ｄ−Ｓ−Ｓ  （配列番号２６９）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｓ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ｄ−Ｒ−Ｐ−Ｄ−Ｃ−Ｐ−Ｌ−Ｙ  （配列番号２７０）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｖ−Ｗ−Ｌ−Ｌ−Ｇ−Ｄ−Ｖ−Ｃ−Ｒ−Ｓ−Ｈ  （配列番号２７１）
Ｌ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｈ−Ｖ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ｑ−Ｈ−Ａ−Ｗ−Ｑ−Ｃ−Ｋ−Ｙ−Ｐ  （配列番号２７２）
Ｙ−Ｗ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｍ−Ｐ−Ｗ−Ｍ−Ｃ−Ｇ−Ｆ−Ｄ  （配列番号２７３）
Ｄ−Ｄ−Ｈ−Ｃ−Ｙ−Ｗ−Ｆ−Ｒ−Ｅ−Ｗ−Ｆ−Ｎ−Ｓ−Ｅ−Ｃ−Ｐ−Ｈ−Ｇ  （配列番号２７４）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｉ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｈ−Ｇ−Ｃ−Ｎ−Ｓ−Ｈ  （配列番号２７５）
Ｙ−Ｗ−Ｆ−Ｃ−Ｑ−Ｗ−Ｆ−Ｓ−Ｑ−Ｎ−Ｈ−Ｔ−Ｃ−Ｆ−Ｒ−Ｄ  （配列番号２７６）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ａ−Ｐ−Ａ−Ｃ−Ｑ−Ｆ−Ｒ  （配列番号２７７）
Ｓ−Ｇ−Ｄ−Ｃ−Ｇ−Ｆ−Ｗ−Ｐ−Ｒ−Ｉ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｍ−Ｄ−Ｎ  （配列番号２７８）
Ｆ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｆ−Ｙ−Ｅ−Ｄ−Ａ−Ｑ−Ｃ−Ｓ−Ｈ−Ｄ  （配列番号２７９）
Ｙ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｐ−Ｄ−Ｑ  （配列番号２８０）
Ｓ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｉ−Ｗ−Ｄ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｑ−Ｓ  （配列番号２８１）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｌ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ａ−Ｎ  （配列番号２８２）
Ｑ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｙ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｇ−Ａ−Ｎ  （配列番号２８３）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｎ−Ｇ−Ｓ  （配列番号２８４）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｖ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｅ−Ｓ  （配列番号２８５）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｍ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｇ−Ｗ−Ｅ  （配列番号２８６）
Ｈ−Ｆ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｐ−Ｓ−Ｉ  （配列番号２８７）
Ｑ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｔ−Ｎ−Ｖ  （配列番号２８８）
Ａ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｑ−Ｇ−Ｅ  （配列番号２８９）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｌ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ａ−Ｎ  （配列番号２９０）
Ｑ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｌ−Ｐ−Ｓ  （配列番号２９１）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｉ−Ｃ−Ｅ−Ｒ−Ｐ  （配列番号２９２）
Ｒ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｉ−Ｗ−Ｄ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｅ−Ｑ  （配列番号２９３）
Ｑ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｈ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｇ−Ｋ−Ｙ  （配列番号２９４）
Ｔ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｐ−Ｈ−Ｎ  （配列番号２９５）
Ｆ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ａ−Ｐ−Ｐ  （配列番号２９６）
Ｇ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｅ  （配列番号２９７）
Ｒ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｇ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｅ−Ｉ−Ｄ  （配列番号２９８）
Ｋ−Ｆ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｉ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｈ−Ｍ−Ｐ  （配列番号２９９）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｉ−Ｃ−Ｅ−Ｒ−Ｐ  （配列番号３００）
Ｒ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｉ−Ｗ−Ｄ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｅ−Ｑ  （配列番号３０１）
Ｆ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｋ−Ｙ−Ｄ  （配列番号３０２）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｃ−Ｌ−Ｍ−Ｓ  （配列番号３０３）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｔ−Ｄ  （配列番号３０４）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｌ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｄ−Ｉ−Ｎ  （配列番号３０５）
Ｒ−Ｆ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ａ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ａ  （配列番号３０６）
Ｓ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｉ−Ｗ−Ｄ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｑ−Ｓ  （配列番号３０７）
Ｑ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｉ−Ｗ−Ｋ−Ｖ−Ｃ−Ｐ−Ｇ−Ｒ  （配列番号３０８）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｅ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ａ−Ｃ−１−Ｎ−Ｄ  （配列番号３０９）
Ｅ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−Ｖ−Ｈ−Ｒ  （配列番号３１０）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｋ−Ｃ−Ｄ−Ｋ−Ｑ  （配列番号３１１）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｆ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｑ−Ｃ−Ｋ−Ｔ  （配列番号３１２）
Ｒ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｆ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ａ−Ｎ  （配列番号３１３）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｈ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｍ−Ｃ−Ｌ−Ｄ−Ｈ  （配列番号３１４）
Ｙ−Ｗ−Ｆ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ｓ−Ｑ−Ｃ−Ｑ−Ｆ−Ｍ  （配列番号３１５）
Ａ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｋ−Ｃ−Ｑ−Ｌ−Ｇ  （配列番号３１６）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｆ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−Ｋ−Ｖ−Ｇ  （配列番号３１７）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｅ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｎ−Ｋ  （配列番号３１８）
Ｓ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｔ−Ｃ−Ｅ−Ｔ−Ｈ  （配列番号３１９）
Ｅ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｒ−Ｉ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｑ−Ｃ−Ｎ−Ｍ−Ｖ  （配列番号３２０）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｆ−Ｎ  （配列番号３２１）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｑ−Ｃ−Ｐ−Ｈ−Ｓ  （配列番号３２２）
Ｆ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｅ−Ｃ−Ｉ−Ｈ−Ｓ  （配列番号３２３）
Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｑ−Ｑ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｍ−Ｃ−Ｆ−Ｅ−Ｔ  （配列番号３２４）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｒ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｍ−Ｃ−Ｎ−Ｇ−Ｇ  （配列番号３２５）
Ａ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｍ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｐ−Ｃ−Ｉ−Ｓ−Ｗ  （配列番号３２６）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｋ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｆ−Ｎ  （配列番号３２７）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｑ−Ｃ−Ｐ−Ｄ−Ｓ  （配列番号３２８）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｓ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｑ−Ｃ−Ｐ−Ｈ−Ｓ  （配列番号３２９）
Ｌ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｑ−Ｋ−Ｄ  （配列番号３３０）
Ｔ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｈ−Ｋ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｋ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｔ  （配列番号３３１）
Ｔ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｆ−Ｗ−Ｅ−Ｌ−Ｐ−Ｃ−Ｄ−Ｐ−Ａ  （配列番号３３２）
Ｋ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｋ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｃ−Ｅ−Ｅ−Ｖ  （配列番号３３３）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｈ−Ｆ−Ｗ−Ｑ−Ｖ−Ｐ−Ｃ−Ｌ−Ｅ−Ｑ  （配列番号３３４）
Ｔ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｖ−Ｖ−Ｗ−Ｎ−Ｖ−Ｐ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｄ  （配列番号３３５）
Ｎ−Ｆ−Ｗ−Ｃ−Ｈ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｑ−Ｃ−Ｎ−Ｄ−Ｌ  （配列番号３３６）
Ｆ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｙ−Ｗ−Ｆ−Ｎ−Ｅ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｔ−Ｐ  （配列番号３３７）
Ｇ−Ｆ−Ｗ−Ｃ−Ｔ−Ｆ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｅ−Ａ−Ｇ  （配列番号３３８）
Ｐ−Ｈ−Ｎ−Ｃ−Ｄ−Ｄ−Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｋ−Ｗ−Ｆ  （配列番号３３９）
Ｅ−Ｍ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｓ−Ｈ−Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｔ−Ｗ−Ｍ  （Ｓ配列番号３４０）
Ｈ−Ｉ−Ｄ−Ｃ−Ｋ−Ｔ−Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｗ−Ｃ−Ｒ−Ｗ−Ｔ  （配列番号３４１）
Ｅ−Ｍ−Ｒ−Ｃ−Ｇ−Ｑ−Ｈ−Ｆ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｅ−Ｗ−Ｆ  （配列番号３４２）
Ｎ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｎ−Ｆ−Ｗ−Ｑ−Ｌ−Ｐ−Ｔ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｌ  （配列番号３４３）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｑ−Ｗ−Ｆ−Ｑ−Ｅ−Ｖ−Ｎ−Ｋ−Ｃ−Ｆ−Ｎ−Ｓ  （配列番号３４４）
Ｙ−Ｙ−Ｗ−Ｃ−Ｒ−Ｈ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ｄ−Ｆ−Ｄ−Ｃ−Ｖ−Ｈ−Ｓ  （配列番号３４５）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｓ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ｄ−Ｒ−Ｐ−Ｄ−Ｃ−Ｐ−Ｌ−Ｙ  （配列番号３４６）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｖ−Ｗ−Ｆ−Ｄ−Ｎ−Ａ−Ｄ−Ｑ−Ｃ−Ｖ−Ｈ−Ｈ  （配列番号３４７）
Ａ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｔ−Ｓ−Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｙ−Ｑ−Ｗ−Ｆ−Ｃ−Ｔ−Ｄ−Ｓ  （配列番号３４８）
Ｙ−Ｗ−Ａ−Ｃ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｌ−Ｋ−Ｓ−Ｃ−Ｖ−Ｄ−Ｒ  （配列番号３４９）
Ｙ−Ｗ−Ｒ−Ｃ−Ｖ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ａ−Ｓ−Ｃ−Ｐ−Ｔ  （配列番号３５０）
Ｄ−Ｗ−Ｑ−Ｃ−Ｌ−Ｗ−Ｗ−Ｇ−Ｎ−Ｓ−Ｆ−Ｗ−Ｐ−Ｙ−Ｃ−Ａ−Ｎ−Ｌ  （配列番号３５１）
Ｆ−Ｗ−Ｒ−Ｃ−Ｈ−Ｗ−Ｗ−Ｐ−Ｅ−Ｒ−Ｃ−Ｐ−Ｖ−Ｄ  （配列番号３５２）
Ｎ−Ｐ−Ｍ−Ｃ−Ｗ−Ｋ−Ｋ−Ｓ−Ｗ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ａ−Ｙ−Ｃ−Ｉ−Ｎ−Ｈ  （配列番号３５３）
Ｓ−Ｗ−Ｖ−Ｃ−Ｗ−Ｋ−Ａ−Ｋ−Ｗ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ｋ−Ｒ−Ｃ−Ａ−Ｐ−Ｆ  （配列番号３５４）
Ｓ−Ｒ−Ｑ−Ｃ−Ｗ−Ｋ−Ｅ−Ｌ−Ｗ−Ｗ−Ｔ−Ｄ−Ｑ−Ｍ−Ｃ−Ｌ−Ｄ−Ｌ  （配列番号３５５）
Ｓ−Ｆ−Ｒ−Ｃ−Ｑ−Ｓ−Ｓ−Ｆ−Ｐ−Ｓ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｄ−Ｙ−Ｙ  （Ｓ配列番号３５６）
Ｓ−Ｗ−Ｈ−Ｃ−Ｑ−Ｎ−Ｔ−Ｙ−Ｐ−Ｅ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｑ−Ｗ−Ｙ  （配列番号３５７）
Ｇ−Ｓ−Ｋ−Ｃ−Ｋ−Ｑ−Ｔ−Ｇ−Ｆ−Ｐ−Ｒ−Ｗ−Ｗ−Ｃ−Ｅ−Ｈ−Ｙ  （配列番号３５８）
Ｄ−Ｇ−Ｖ−Ｃ−Ｇ−Ｐ−Ｒ−Ｇ−Ｆ−Ｇ−Ｐ−Ａ−Ｗ−Ｆ−Ｃ−Ｍ−Ｈ−Ｙ  （配列番号３５９）
Ｙ−Ｓ−Ｈ−Ｃ−Ａ−Ｔ−Ｈ−Ｙ−Ｐ−Ｔ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｌ−Ｈ−Ｆ  （配列番号３６０）
Ｆ−Ｃ−Ｎ−Ｃ−Ｗ−Ｇ−Ｓ−Ｈ−Ｅ−Ｆ−Ｔ−Ｆ−Ｃ−Ｖ−Ｄ−Ｄ  （配列番号３６１）
Ｐ−Ｇ−Ｗ−Ｃ−Ｙ−Ｓ−Ｄ−Ｉ−Ｗ−Ｇ−Ｆ−Ｋ−Ｈ−Ｆ−Ｃ−Ｎ−Ｌ−Ｄ  （配列番号３６２）
Ｄ−Ｓ−Ｓ−Ｃ−Ｉ−Ｋ−Ｈ−Ｈ−Ｎ−Ｋ−Ｖ−Ｔ−Ｃ−Ｆ−Ｆ−Ｐ  （配列番号３６３）
Ｒ−Ｗ−Ｓ−Ｃ−Ｗ−Ｇ−Ｖ−Ｗ−Ｇ−Ｃ−Ｖ−Ｗ−Ｖ  （配列番号３６４）
Ｐ−Ｖ−Ｄ−Ｃ−Ｋ−Ｈ−Ｈ−Ｆ−Ｗ−Ｗ−Ｃ−Ｙ−Ｗ−Ｎ  （配列番号３６５）
Ｓ−Ｗ−Ｎ−Ｃ−Ａ−Ｆ−Ｈ−Ｈ−Ｎ−Ｅ−Ｍ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｄ−Ｇ  （配列番号３６６）
Ｙ−Ｗ−Ｙ−Ｃ−Ｗ−Ｆ−Ｐ−Ｄ−Ｒ−Ｐ−Ｅ−Ｃ−Ｐ−Ｌ−Ｙ  （配列番号３６７）
Ｎ−Ｐ−Ｍ−Ｃ−Ｗ−Ｒ−Ａ−Ｓ−Ｗ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ａ−Ｙ−Ｃ−Ｉ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４０９）
Ｎ−Ｐ−Ｍ−Ｃ−Ｗ−Ｒ−Ａ−Ｈ−Ｗ−Ｗ−Ｅ−Ｄ−Ａ−Ｙ−Ｃ−Ｉ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１０）
Ｅ−Ｈ−Ｍ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１１）
Ａ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１２）
Ｔ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１３）
Ｅ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１４）
Ｖ−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１５）
［Ｎｌｅ］−Ｃ−Ｖ−Ｙ−Ｔ−Ｔ−Ｗ−Ｇ−Ｅ−Ｌ−Ｉ−Ｗ−Ｃ−Ｄ−Ｎ−Ｈ  （配列番号４１６）
Ｓ−Ｒ−Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４１７）
Ｅ−Ｒ−Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４１８）
Ａ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４１９）
Ｔ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４２０）
Ｅ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４２１）
Ｖ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４２２）および
Ｇ−Ｃ−Ｓ−Ｒ−Ｄ−Ｗ−Ｓ−Ｇ−Ａ−Ｌ−Ｖ−Ｗ−Ｃ−Ａ−Ｇ−Ｈ  （配列番号４２３）。
【００９７】
上記Ｆｃ領域結合ポリペプチドのＮ末端および／またはＣ末端切り詰め体、特に、抗体Ｆｃ領域に対する結合親和性を保持しているもの、もまた使用することが可能である。
上記の式に従ったＦｃ領域結合分子は、以下のものを含むことができる：式Ｉのポリペプチド、式中、Ｘ１はＧであり；Ｘ２はＡまたはＥであり；Ｘ３はＬであり；およびＸ４はＩまたはＶである；式ＩＩのポリペプチド、式中、ＸはＦまたはＹであり；および式ＩＩＡのトリペプチドにおいて、Ｘ１はＣまたはＹであり；Ｘ２はＣ、Ｋ、ＮまたはＴであり；およびＸ３はＦ、Ｉ、Ｋ、ＱまたはＶである。
【００９８】
免疫グロブリン結合分子の具体的例には、以下のポリペプチドを含むタンパク質が含まれる：
ＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨ  （配列番号２３８）；
ＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ  （配列番号２６０）；
ＫＹＷＣＳＦＷＧＬＱＣＫＴ  （配列番号３１２）；
ＰＶＤＣＫＨＨＦＷＷＣＹＷＮ  （配列番号３６５）；
ＤＤＨＣＹＷＦＲＥＷＦＮＳＥＣＰＨＧ  （配列番号２７４）；
ＹＹＷＣＮＹＷＧＬＣＰＤＱ  （配列番号２８０）；
ＰＨＮＣＤＤＨＹＷＹＣＫＷＦ  （配列番号３３９）；
ＳＹＷＣＫＩＷＤＶＣＰＱＳ  （配列番号２８１）；
ＫＹＷＣＮＬＷＧＶＣＰＡＮ  （配列番号２８２）；
ＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳ  （配列番号３４８）；
ＴＹＷＣＴＦＷＥＬＰＣＤＰＡ  （配列番号３３２）；
ＹＷＹＣＷＦＰＤＲＰＥＣＰＬＹ  （配列番号３６７）；
ＳＷＶＣＷＫＡＫＷＷＥＤＫＲＣＡＰＦ  （配列番号３５４）；
ＮＰＭＣＷＫＫＳＷＷＥＤＡＹＣＩＮＨ  （配列番号３５３）；および
ＳＷＮＣＡＦＨＨＮＥＭＶＷＣＤＤＧ  （配列番号３６６）。
【００９９】
さらに他のポリペプチドの例は以下の配列を有しており、そして随意のアミノ末端（例えば、アセチル化）およびカルボキシ末端修飾（例えば、アミド化）を含むことができる：
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３６８、ＤＸ２４９と名付けられた）；
ＡＧＫＹＷＣＳＦＷＧＬＱＣＫＴＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７０、ＤＸ２５０と名付けられた）；
ＡＧＰＶＤＣＫＨＨＦＷＷＣＹＷＮＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７７、ＤＸ２５１と名付けられた）；
ＧＤＤＤＨＣＹＷＦＲＥＷＦＮＳＥＣＰＨＧＥＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３７８、ＤＸ２５２と名付けられた）；
ＧＤＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３６９、ＤＸ２５３と名付けられた）；
ＡＧＹＹＷＣＮＹＷＧＬＣＰＤＱＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７９、ＤＸ２５４と名付けられた）；
ＡＧＰＨＮＣＤＤＨＹＷＹＣＫＷＦＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７４、ＤＸ３８９と名付けられた）；
ＡＧＳＹＷＣＫＩＷＤＶＣＰＱＳＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７１、ＤＸ３９２と名付けられた）；
ＡＧＫＹＷＣＮＬＷＧＶＣＰＡＮＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７２、ＤＸ３９５と名付けられた）；
ＡＧＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７５、ＤＸ３９８と名付けられた）；
ＡＧＴＹＷＣＴＦＷＥＬＰＣＤＰＡＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７３、ＤＸ４０４と名付けられた）；
ＡＧＹＷＹＣＷＦＰＤＲＰＥＣＰＬＹＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３７６、ＤＸ４１３と名付けられた）；
ＧＤＳＷＶＣＷＫＡＫＷＷＥＤＫＲＣＡＰＦＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８０、ＤＸ５９５と名付けられた）；
ＧＤＮＰＭＣＷＫＫＳＷＷＥＤＡＹＣＩＮＨＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８１、ＤＸ５９６と名付けられた）；
ＧＤＳＷＮＣＡＦＨＨＮＥＭＶＷＣＤＤＧＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８２、ＤＸ５９７と名付けられた）；
ＧＤＷＧＥＣＴＶＴＳＹＧＥＬＩＷＣＧＧＬＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８３、ＤＸ１０７０と名付けられた）；
ＧＤＮＰＭＣＷＲＡＳＷＷＥＤＡＹＣＩＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８４、ＤＸ１０７１と名付けられた）；
ＧＤＮＰＭＣＷＲＡＨＷＷＥＤＡＹＣＩＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３８５、ＤＸ１０７２と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３８６、ＤＸ８７７と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧ−Ｊ−Ｓｕ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３８７、ＤＸ８７８と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧ−Ｊ−Ｚ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３８８、ＤＸ９０５と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３８９、ＤＸ９０７と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ−Ｊ−Ｓｕ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３９０、ＤＸ９０９と名付けられた）；
ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ−Ｊ−Ｚ−Ｊ−ＮＨ2  （配列番号３９１、ＤＸ９１１と名付けられた）；
ＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９２、ＤＸ１０６２と名付けられた）；
ＥＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９３、ＤＸ１０６３と名付けられた）；
ＡＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９４、ＤＸ１０６４と名付けられた）；
ＴＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９５、ＤＸ１０６５と名付けられた）；
ＥＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９６、ＤＸ１０６６と名付けられた）；
ＶＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９７、ＤＸ１０６７と名付けられた）；
Ａｃ−［Ｎｌｅ］ＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９８、ＤＸ１０６８と名付けられた）；
ＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号３９９、ＤＸ１０６９と名付けられた）；
ＳＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４００、ＤＸ１１３９と名付けられた）；
ＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０１、ＤＸ１１４２と名付けられた）；
ＥＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０２、ＤＸ１１４１と名付けられた）；
ＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０３、ＤＸ１１４２と名付けられた）；
ＴＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０４、ＤＸ１１４３と名付けられた）；
ＥＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０５、ＤＸ１１４４と名付けられた）；
ＶＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０６、ＤＸ１１４５と名付けられた）；
ＧＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ  （配列番号４０７、ＤＸ１１４６と名付けられた）；および
ＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2  （配列番号４０８、ＤＸ１１４７と名付けられた）。
【０１００】
上記のポリペプチドに関して、ポリペプチドはさらに化学修飾を含むことが可能である、例えば、Ｎ末端アセチル化および／またはＣ末端アミド化：以下の１つ：−Ｊ−ＮＨ2はＣ末端基−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＨ2を表し、−Ｊ−Ｓｕ−Ｊ−ＮＨ2はＣ末端基−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ：Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−Ｃ：Ｏ−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＨ2を表し、−Ｊ−Ｚ−Ｊ−ＮＨ2はＣ末端基−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＨ−Ｃ：Ｏ−ＣＨ2−Ｏ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2−Ｃ：Ｏ−ＮＨ−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−ＣＨ2ＣＨ2−ＮＨ2を表し、および［Ｎｌｅ］はノルロイシンを表している。
【０１０１】
免疫グロブリン結合ポリペプチドは、ヒトＦｃポリペプチドまたは特定のＩｇＧアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３および／またはＩｇＧ４）に対して高い親和性（例えば、１０μＭから０．０１μＭの範囲、より好適には０．１μＭから０．０１μＭの範囲のＫD）を有することが可能である。いくつかのポリペプチドもまた種特異性を示す（例えば、ヒトＩｇＧには結合するが、他の哺乳動物ＩｇＧには結合しない）。例えば：
ＤＸ２４９は、ヒトＩｇＧ１に対して、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、およびｐＨ７．４で０．５μＭより小さな解離定数（ＫD）を示し；
ＤＸ２５２は、ヒトＩｇＧ３に対して、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、およびＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に対して、ｐＨ７．４で〜２．１μＭから〜３．４μＭの範囲の解離定数（ＫD）を示し；
ＤＸ２５３は、緩衝液およびタバコ抽出物からのＦｃタンパク質の定量的結合を示し（捕捉効率は全添加量の＞９０％）；
ＤＸ２５４は、ヒトＩｇＧ１に対して、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、ｐＨ７．４で０．５μＭより小さな、およびｐＨ９．３で１．０μＭより小さな解離定数（ＫD）を示し；
ＤＸ３０１は、ヒトＦｃ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４に対し、約１０μＭより下の解離定数を示し；および
ＤＸ３００は、ヒトＩｇＧ３に対して４．１±４．６の解離定数を示す。セグメントＤＸ−２４９−Ａ、ＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ（配列番号２６０）；セグメントＤＸ２５３−Ａ、ＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨ（配列番号２３８）；およびＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳ（配列番号３４８）が含む上記のペプチドの変異体もまた使用することが可能である。
【０１０２】
用語「会合された（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」とは、化合物間の直接的または間接的な、物理的付着を指している。付着は、共有結合的または非共有結合的相互作用により媒介される。間接的な、物理的付着とは、例えば、２つの化合物はお互いに直接的な接触ではないが、各々が１つ以上の媒介化合物と接触している場合を指している。
【０１０３】
用語「ポリペプチド」とは、３つ以上のアミノ酸がペプチド結合により連結されているポリマーを指している。ポリペプチドは１つ以上の非天然アミノ酸を含むことができる。典型的には、ポリペプチドは天然のアミノ酸のみを含んでいる。用語「ペプチド」とは、３から３２の間のアミノ酸長であるポリペプチドを指している。タンパク質は１つ以上のポリペプチド鎖を含むことができる。
【０１０４】
本明細書において、用語「抗体」とは、免疫グロブリン分子またはその免疫学的に活性な部分、即ち、抗原結合部分を指している。抗体は少なくとも１つの、および好適には２つの重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書においてはＶＨと略記される）、および少なくとも１つの、および好適には２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書においてはＶＬと略記される）を含むことができる。ＶＨおよびＶＬ領域はさらに、散在する、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と名付けられた、超可変性の領域、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と名付けられた、より保存的である領域に副分割できる。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は正確に決定されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健社会福祉省，ＮＩＨ出版番号第９１−３２４２号，およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，を参照されたい）。各々のＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へ以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４、で配列された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されている。
【０１０５】
本明細書において、用語「免疫グロブリン」とは、免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされている１つ以上のポリペプチドから成るタンパク質を指している。いくつかのヒト免疫グロブリン遺伝子は、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子、ならびに種々の免疫グロブリン可変領域遺伝子を含んでいる。完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤａまたは２１４アミノ酸）はＮＨ2−末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ−末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子によりコードされている。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤａまたは４４６アミノ酸）は同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および他の前記定常領域遺伝子の１つ、例えば、ガンマ（約３３０アミノ酸をコードしている）によりコードされている。
【０１０６】
本明細書において、用語、抗体の「抗原結合断片」（または単に「抗体部分」または「断片」）とは、抗原に特異的に結合する能力を保持している、完全長抗体の１つ以上の断片を指している。抗原結合断片の例には、限定されるわけではないが、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインから成っている１価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結されている、２つのＦａｂ断片を含んでなる２価断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインから成っているＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインから成っているＦｖ断片；（ｖ）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、（１９８９）  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、それはＶＨドメインから成っている；および（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、が含まれる。
【０１０７】
さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは別々の遺伝子によりコードされているが、組換え法を使用し、ＶＬおよびＶＨ領域が対をなして１価分子を形成する、単一タンパク質鎖のごとくそれらを作り上げることを可能にする合成リンカーにより、それらをつなぎ合わせることが可能である（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら、（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３、を参照されたい）。こういう単鎖抗体もまた、用語、抗体の「抗原結合断片」に包含されている。これらの抗体断片は、当業者には既知である通常の技術（免疫化、ファージディスプレイおよびＣＤＲ移植を含んで）を使用して得られ、そして、断片を、無傷の抗体と同一の様式で、有用性についてスクリーニングする。
【０１０８】
「単離された組成物」とは、単離された組成物を得ることができる天然試料の少なくとも１つの成分の少なくとも９０％が除去されている組成物を指している。
本発明は、配列および１つ以上の置換、例えば、１から６の間の置換を含む変異体、を含んでいる。特定の置換が許容されるであろうにせよ、即ち、所望の生物学的特性に不利に影響しないあろうので、結合活性は、Ｂｏｗｉｅら、（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４７：１３０６−１３１０、に記載されているように決定することが可能である。１つ以上の、またはすべての置換は保存的であることができる。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有しているアミノ酸残基で置き換えられることである。類似の側鎖を有しているアミノ酸残基のファミリーは、当該分野で定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ−分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が含まれる。さらに他の置換を天然に存在しないアミノ酸に挿入することもできる。
【０１０９】
本明細書で引用した、すべての特許出願、特許および参考文献は、その全体が本明細書において援用される。従って、２００１年３月９日に提出された米国仮出願第６０／３３１，３５２号、２００１年３月２３日に提出された第６０／２９２，９７５号、２００１年４月１８日に提出された第６０／２８４，５３４号、２００２年３月８日に提出された第１０／０９４，４０１号、および２００２年４月１８日に提出された第１０／１２５，８６９号、米国公開出願第２００３／００６９３９５号は、すべての目的のためその全体が、本明細書において援用される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１１０】
発明の詳細な説明
血清タンパク質は循環系の重要な成分であり、そして生理学に、および、役割の中でも、免疫応答において広範囲な機能を有している。血清タンパク質に会合されている化合物の特性付けは、被験者を研究する、診断するおよびモニターすることのための有用な指標を提供する。血清タンパク質は、親和性試薬を使用して単離することが可能である。単離された血清タンパク質に共有結合で、または非共有結合で会合されている化合物を、例えば、その同一性および／または存在量を決定するために分析する。
血清アルブミンおよび会合されている化合物の単離
１つの実行において、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を試料、例えば、血液、血漿または血清から単離する。血清アルブミンに会合されている化合物を次に分析する。
【０１１１】
１．第１の例においては、血清試料を、１つ以上のＨＳＡのための親和性リガンドを含む不溶性マトリックスに応用する。親和性リガンドの例には、以下に説明するようなペプチドリガンドが含まれる。マトリックスを生理学的強度の緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、またはよりストリンジェントな緩衝液（例えば、より高いイオン強度、界面活性剤、カオトロープ、などを含んでいる）で洗浄する。
【０１１２】
ＨＳＡおよびそれに会合されている化合物をマトリックスから溶出し、そして回収する。溶出は、例えば、親和性リガンドからのＨＳＡの解離を有利にする適切な緩衝液を応用することにより、もしくは不溶性マトリックスから親和性リガンドを分離することにより、達成することが可能である。
【０１１３】
溶出された材料において、血清アルブミンは、精製された組成物の実質的分画を代表することができる（例えば、図１および実施例１を参照されたい）。この故に、会合された化合物は、試料の１０％より少なくてもよい。会合された化合物の少なくとも一部はタンパク質性、例えば、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質複合体であることができる。例えば、タンパク質複合体の場合、会合された化合物の少なくとも一部は、ＨＳＡと間接的に会合されていることができる。他の化合物は代謝物、小分子（例えば、５０００または１０００ダルトンより小さな分子量を有している）であることができる。
【０１１４】
２．第２の例においては、試料を、ＨＳＡに対する１つ以上の親和性リガンドを含む不溶性マトリックスへ応用する。マトリックスを生理学的強度の緩衝液（例えば、リン酸緩衝化食塩水）で洗浄するが、しかしよりストリンジェントな緩衝液では洗浄しない。
【０１１５】
ＨＳＡおよびそれに会合されている任意の化合物は、マトリックスから親和性リガンドを分離することにより（例えば、親和性リガンドは共有結合によりマトリックスへ結合でき、それを切断する）、マトリックスから除去される。
【０１１６】
この調製試料を次ぎに、チオール反応性基、例えば、活性化マレイミドまたはヨードアセトアミド（また、下記「チオール反応性化合物」を参照されたい）を含む不溶性マトリックスへ応用する。例えば、活性化マレイミドはＨＳＡの遊離システイン（システイン３４）と反応する。血清から単離された場合または酸化された試料からの、他の豊富なタンパク質は、遊離システインをほとんど含んでいない。反応後、ＨＳＡへ会合されていないタンパク質および他の化合物を除去するため、マトリックスを洗浄する。
【０１１７】
ＨＳＡへ会合されている化合物は、１つ以上の以下のプロセスにより、マトリックスから放出させることが可能である：
（ａ）ＨＳＡはカオトロープまたは他の変性条件で変性させることが可能である。変性されたＨＳＡはマトリックスへ共有結合的に結合されたまま残存するが、一方、非共有結合的に会合された化合物はマトリックスから放出される。変性剤はマトリックスへ、例えば、段階的にまたは連続的勾配で増加させることにより、マトリックスへ応用できる。
【０１１８】
カオトロープの例には、グアニジウムＨＣｌ（例えば、＞４、５または６Ｍ）、または尿素（例えば、＞６または８Ｍ）が含まれる。他の変性条件には、酸（例えば、リン酸、ｐＨ１）、イオン性界面活性剤（例えば、１％以上の濃度のＳＤＳ）、加熱（例えば、＞６０℃）、煮沸または有機溶媒（例えば、アセトニトリル）が含まれる。
【０１１９】
（ｂ）会合された化合物は、ＨＳＡへ結合する親和性リガンド（例えば、抗体、ペプチドリガンド、またはＨＳＡへ結合することが知られている化合物、例えば、長鎖脂肪酸、薬剤、例えば、表１に掲げられている薬剤、または内在性化合物、例えば、表２に掲げられている内在性化合物）を使用する競合により溶出することが可能である。このプロセスは、ＨＳＡの特定のエピトープと会合している化合物を特異的に溶出することができる。
【０１２０】
（ｃ）会合された化合物は、例えば、溶液パラメーターを変化させる（例えば、イオン強度、ｐＨ、カオトロープ濃度）、段階的または勾配的溶出を使用する、選択的溶出により、お互いから分離することが可能である。分画を集め、個々に分析することが可能である。例えば、このプロセスは、会合された化合物のサブセットを含む調製試料を得るために使用することが可能である。
【０１２１】
溶出した会合された化合物の分画は、追加の精製工程、例えば、Ｓｃｏｐｅｓ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ニューヨーク：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇに記載されている調製または分析プロセス、を行うことが可能である。
【０１２２】
本明細書に記載した方法は、他の種、例えば、非ヒト哺乳動物種および非哺乳動物種、から血清アルブミンを単離するために使用することも可能である。
血清アルブミンを結合するペプチドリガンド
いくつかの態様において、血清アルブミンおよび会合されたタンパク質を単離するために、ペプチドリガンドを使用する。２００１年３月９日に提出された仮特許出願第６０／３３１，３５２号および２００１年５月２３日に提出された仮特許出願第６０／２９２，９７５号は、血清アルブミンへ結合する多くのペプチドリガンドの例を記載している。ペプチドリガンドのいくつかの例には、ＤＸ−３２１、ＤＸ−３２１−Ａ、ＤＸ−３２１−Ｂ、ＤＸ−２３６、ＤＸ−２３６−ＡおよびＤＸ−２３６Ｂが含まれる。
【０１２３】
ＤＸ−３２１はペプチド配列：
ＡＥＧＴＧＤＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡＤＰＥ（配列番号４０）を含んでいる。ＤＸ−３２１は、ヒト血清アルブミンへ結合し、ヒト血清アルブミンおよび会合された化合物を単離するために有用である。
【０１２４】
ＤＸ−３２１−Ａはペプチド配列：
ＲＮＭＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣＡＲＡ（配列番号２１５）を含んでいる。
ＤＸ−３２１−Ｂはペプチド配列：
ＣＫＦＳＷＩＲＳＰＡＦＣ（配列番号１２０）を含んでいる。
【０１２５】
ＤＸ−２３６はペプチド配列：
ＡＥＧＴＧＤＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤＰＥＧＧＧＫ（配列番号１９）を含んでいる。ＤＸ−２３６は、多くの哺乳動物血清アルブミンへ少なくとも結合し、適切な条件下、多くの種からの血清アルブミンへ結合する血清アルブミン−結合剤として有用である。
【０１２６】
ＤＸ−２３６Ａはペプチド配列：
ＦＷＦＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣＥＦＬＤ（配列番号２１０）を含んでいる。
ＤＸ−２３６Ｂはペプチド配列：
ＣＤＲＩＡＷＹＰＱＨＬＣ（配列番号９）を含んでいる。
【０１２７】
１つの実行において、血清アルブミンを精製するための親和性マトリックスは、複数の結合リガンド、例えば、血清アルブミン上の異なったエピトープに特異性を有している結合リガンドを含んでいる。例えば、ＨＳＡを結合するための親和性マトリックスは、ＨＳＡ結合ペプチドの２つの異なった化学種、例えば、ＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１、を含むことが可能である。
【０１２８】
ペプチドリガンドに加え、より大きなポリペプチドリガンド、例えば、少なくとも１つの免疫グロブリンドメイン（例えば、抗体または抗体断片）を含むタンパク質を使用することが可能である。
血清アルブミンに会合された化合物の例
多くの内在性および外来性化合物は、血清アルブミンと会合することが知られている。本明細書に記載された方法は、１つ以上のこういう化合物（例えば、表１または表２の化合物）が、単離された血清アルブミンと会合するかどうかを決定することを含むことが可能である。血清アルブミン以外の化合物もまた評価することが可能である。
【０１２９】
【表１】
2006507477.tif 000002
【０１３０】
【表２】
2006507477.tif 000003
【０１３１】
チオール反応性化合物
上に説明したように、チオール反応性基を、遊離システインを含む血清タンパク質を固定するために使用することが可能である。特に、血清アルブミンは、遊離システインを含む豊富な血清タンパク質である。例えば、典型的にはＨＳＡのシステイン３４がカップリンに利用可能である。チオール反応性基の例には以下のものが含まれる。
【０１３２】
ハロゲン誘導体。ハロアセチル化合物およびベンジルハライド、特に、ヨードおよびブロモ誘導体がシステインと反応可能である。例えば、ヨード酢酸がシステインと反応させるために使用可能である。もし、アルカリ性ｐＨ下、ヨード酢酸が利用可能なスルフヒドリルの数に関連して限定された量で存在するとしたら、反応はより特異的である。
【０１３３】
マレイミド。マレイミド（マレイン酸イミド）の２重結合は、スルフヒドリル基とアルキル化反応を行うことが可能で、チオエーテル結合を生じる。マレイミドは、ｐＨ６．５から７．５の間で、スルフヒドリルに特に特異的である。
【０１３４】
チオール−ジスルフィド交換試薬。システインはまた、ジスルフィド結合を有する化合物を使用して架橋することが可能であり、血清タンパク質上の遊離システインとジスルフィド交換を行う。例えば、ピリジルジスルフィドは、２−イミノチオランと４，４’ジピリジルジスルフィドとの反応により発生することが可能である。
【０１３５】
さらに別のチオール反応性化合物には、アジリジン、アクリロイル誘導体およびアリール化試薬（２，４−ジニトロフルオロベンザインのごとき）が含まれる。また、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓの「第２節：チオール反応性化学反応」，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、も参照されたい。
免疫グロブリンへ結合するペプチドリガンド
別の実行において、可溶性免疫グロブリンが、試料（例えば、血液、血漿または血清）から単離される。免疫グロブリンに会合されている化合物をその後で分析する。
【０１３６】
ペプチドリガンドを、可溶性免疫グロブリンを単離するために使用することが可能である。ＷＯ  ２００２／０８６０７０および２００１年４月１８日に提出された仮特許出願第６０／２８４，５３４号は、免疫グロブリンのＦｃ領域に結合する多くのペプチドリガンドの例を記載している。例えば：
ＤＸ２４９、ＧＤＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３６８）、これはヒトＩｇＧ１に対して、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、およびｐＨ７．４で０．５μＭより小さな解離定数（ＫD）を示す、セグメントＤＸ２４９−Ａ、ＤＨＭＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣＤＮＨ（配列番号２６０）またはセグメントＤＸ−２４９−Ｂ、ＣＶＹＴＴＷＧＥＬＩＷＣ（配列番号４２７）；
ＤＸ２５３、ＧＤＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨＥＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３６９）、Ｆｃタンパク質の定量的結合を示す（捕捉効率、全添加量の＞９０％）、セグメントＤＸ２５３−Ａ、ＲＲＡＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣＡＧＨ（配列番号２３８）またはセグメントＤＸ２５３−Ｂ、ＣＳＲＤＷＳＧＡＬＶＷＣ（配列番号４２８）；
ＤＸ３９８、ＡＧＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３７５）、ＤＸ３９８−Ａ：ＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳ（配列番号３４８）またはＤＸ３９８−Ｂ：ＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣ（配列番号４２９）；
ＤＸ２５２、ＧＤＤＤＨＣＹＷＦＲＥＷＦＮＳＥＣＰＨＧＥＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３７８）、ヒトＩｇＧ３に対し、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、およびＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４に対し、ｐＨ７．４で〜２．１μＭから〜３．４μＭの範囲の解離定数（ＫD）を示す；および
ＤＸ２５４、ＡＧＹＹＷＣＮＹＷＧＬＣＰＤＱＧＴＰＧＰＥＧＧＧＫ（配列番号３７９）、ヒトＩｇＧ１に対して、ｐＨ５．７で０．１μＭより小さな、ｐＨ７．４で２．０μＭより小さな、およびｐＨ９．３で１．０μＭより小さな解離定数（ＫD）を示す。
【０１３７】
１つの実行においては、試料を、免疫グロブリンへ結合するリガンドを含む親和性マトリックスに接触させる。免疫グロブリンおよび会合された化合物を単離する。１つの例において、例えば、免疫グロブリンに会合された抗原を特性付けるため、単離した材料を分析する。別の例において、例えば、免疫グロブリンに結合された病原体を同定するため、単離した材料を培養する。
会合された化合物の分析
血清タンパク質および会合された化合物の分画は、多くのプロセスにより分析することが可能である。血清タンパク質に会合されたタンパク質性化合物を分析するための方法の例には、以下の方法が含まれる：ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、２−Ｄゲル電気泳動（等電点およびＰＡＧＥ）、ＨＰＬＣ、ＦＰＬＣ（イオンクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水的相互作用クロマトグラフィーなど）免疫分析（例えば、免疫ブロット、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降など）、質量分析法、およびタンパク質配列決定。
【０１３８】
血清タンパク質に会合された非タンパク質性化合物を分析するための方法の例には、以下の方法が含まれる：質量分析法（例えば、ＧＣ−質量分析法またはＧＣ／ＭＳ）、薄層クロマトグラフィー、および他の化学検出法。
【０１３９】
１−Ｄゲル。タンパク質をそのアクリルアミドゲル中での見掛けの／近似の分子量により分離するために、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを使用できる。アクリルアミドの濃度は、予想されるサイズに従って変化させることが可能であり、またはアクリルアミド濃度の濃度勾配を使用することが可能である。電気泳動後、クーマシーブルーを含む多様な色素、銀染色、Ｓｙｐｒｏ  Ｒｅｄ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）のごとき蛍光色素を使用して、タンパク質を染色することが可能である。アクリルアミドゲルは、例えば、タンパク質の分離されたバンドの相対的濃度を決定するため、イメージ化することが可能である。イメージはコンピューターデータベースに保存することが可能である。
【０１４０】
２−Ｄゲル。この方法は２つの特性、等電点（ｐＩ）および見掛けの分子量（ＭＷ）、に従ってポリペプチドを分離するために使用することが可能である。タンパク質は最初にｐＩにより分離し（等電点電気泳動）、そして次ぎにＳＤＳ−ＰＡＧＥにより見掛けの分子量に従って分離する。２Ｄゲルを染色し、イメージ化する。検出されたタンパク質の「スポット」は、同一性、修飾状態および各々のタンパク質の相対的存在比についての情報を提供する。タンパク質はまた、スポットから切り出し、そして質量分析法またはタンパク質配列決定により、さらに特性付けることが可能である。
【０１４１】
１次元目のための等電点電気泳動は、ポリカルボン酸両性電解質が固定されている、固定化ｐＨ濃度勾配ストリップを利用することが可能である。ストリップは、所望のｐＨ範囲（ナロウおよびワイドの両方）内に焦点を合わせるように製造することが可能である。ストリップは、適切な分離度で選択することが可能である。
【０１４２】
等電点電気泳動後、ストリップ中のタンパク質を、例えば、ＳＤＳおよびチオール還元剤を使用して、変性および還元する。ストリップをＳＤＳ−ＰＡＧＥスラブゲルへ付着させ、タンパク質を分子量により分離する。
【０１４３】
免疫検出。抗体（特性付けられたまたは特性付けられていない）を血清タンパク質に会合された化合物を同定するために使用することが可能である。抗体は、分離された試料（例えば、電気泳動した試料、ウェスタンブロットにおける）または全体としての試料（例えば、ＥＬＩＳＡ）へ応用することが可能である。抗体はまた、化合物を免疫沈降させるためにも使用することが可能である。抗体は、化合物の検出を可能にする標識または信号発生基とカップルさせることが可能である。抗体断片および他の誘導体もまた使用することが可能である。
【０１４４】
質量分析法。飛行時間型質量分析法（ＴＯＦ−ＭＳ）およびエレクトロスプレー質量分析法を、血清タンパク質に会合された化合物を特性付けるために使用することが可能である。ＴＯＦ−ＭＳは高感度で、高精度で、および迅速である（Ｒ．Ｊ．Ｃｏｔｔｅｒ，（１９９２）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．６４：１０２７）。例えば、ＴＯＦ−ＭＳは、ミリ秒時間尺度で完全質量スペクトルを記録することが可能である。
【０１４５】
１つの普通のＴＯＦ−ＭＳ法は、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）（ＫａｒａｓおよびＨｉｌｌｅｎｋａｍｐ，Ａｎａｌ．Ｃｌｉｅｎｔ．６０，２２９９（１９８８））である。この方法は、オリゴヌクレオチドおよび核酸に対して質量分析法を受け入れることを可能にしている。一般的には、Ｐ．Ｌｉｍｂａｃｈら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ中の、「質量分析法によるオリゴヌクレオチドおよび核酸の特性付け」，６，９６−１０２（１９９５）を参照されたい。
【０１４６】
質量分析法は、タンパク質のタンパク分解性断片の正確な分子量を決定するために、プロテアーゼ消化と組み合わせることが可能である。この情報を、タンパク質の配列を推論するために、コンピューター配列データベースと比較することが可能である。例えば、データベースは、ゲノム配列からの予想タンパク質配列を含むことが可能である。例えば、ＺｈａｎｇおよびＣｈａｉｔ（２０００）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７２：２４８２、を参照されたい。質量分析法はまた、タンパク質の修飾状態（例えば、酸化、グリコシル化）を決定するためにも使用することが可能である。
【０１４７】
タンパク分解性断片の地図作製のためのプロテアーゼの例には、以下のものが含まれる：エラスターゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパインおよびＧｌｕ−Ｃ。特定の化学剤、例えば、ギ酸および臭化シアン、もまた使用することが可能である。
【０１４８】
マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法（ＭＡＬＤＩ−ＭＳまたはＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）のためには、タンパク分解試料をマトリックス（例えば、α−シアノ−４−ヒドロキシケイ皮酸、シナピン酸またはゲンチシン酸）と混合し、質量分析プレート上で乾燥させる。次ぎにプレートを質量分析計中のタンパク質断片がイオン化される場所に設置し、次ぎに飛行時間を分析する。正確な分子量がこれらの測定から決定される。
【０１４９】
タンパク質配列決定。精製したタンパク質（例えば、２から５ピコモルのタンパク質）のＮ末端を、エドマン分解により配列決定することが可能である。このプロセスは自動化することが可能である。タンパク質を明確に同定するため、Ｎ末端配列情報を、質量分析法情報および包括的データベースと組み合わせることが可能である。
ペプチドおよびタンパク質アレイ
いくつかの実行において、その少なくとも１つが血清タンパク質に結合する、タンパク質および／またはペプチドリガンドのアレイを使用することが可能である。例えば、アレイは本明細書に記載した１つ以上のペプチドリガンドを含むことが可能である。特別の例において、アレイは、血清アルブミンへ結合する少なくとも２つの異なったペプチドリガンドを含んでいる。
【０１５０】
一般には、試料をアレイと接触させ、そして、例えば、血清結合タンパク質の異なった複合体が異なったリガンドにより単離されるように、試料内の複合体をアレイ上のリガンドへ結合させるようにする。各々の別個のアドレスは、別々に評価することが可能である。
【０１５１】
ポリペプチドアレイを製造する方法は、Ｄｅ  Ｗｉｌｄｔら、（２０００）Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：９８９−９９４；Ｌｕｅｋｉｎｇら、（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：１０３−１１１；  Ｇｅ（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２８，ｅ３，Ｉ−ＶＩＩ；ＭａｃＢｅａｔｈおよびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８９：１７６０−１７６３；ＵＳ２００２−１９２６７３  ＷＯ  ０１／９８５３４、ＷＯ０１／８３８２７、ＷＯ  ０２／１２８９３、ＷＯ  ００／６３７０１、ＷＯ  ０１／４０８０３およびＷＯ  ９９／５１７７３、に記載されている。いくつかの実行において、ポリペプチド（ペプチドを含んで）は、例えば、例えばＧｅｎｅｔｉｃ  ＭｉｃｒｏＳｙｓｔｅｍｓまたはＢｉｏＲｏｂｏｔｉｃｓから商業的に入手可能なロボット装置を使用して、例えば高速で、別個のアドレスにスポットされる。アレイ基質は、例えば、ニトロセルロース、プラスチック、ガラス（例えば、表面修飾ガラス）であることが可能である。アレイはまた、例えば、アクリルアミド、アガロースまたは他のポリマーのような多孔性マトリックスを含むことが可能である。
【０１５２】
ペプチドのアレイは同様に製造することが可能である。加えて、ペプチドは、例えば、米国特許第５，１４３，８５４号に従って、アレイ様式に直接合成することが可能である。また、血清タンパク質および会合された複合体を単離するため、リガンドとして核酸アプタマー（ａｐｔａｍｅｒ）を使用することもできる。
変化したまたは異常な状態の分析
本明細書に記載された方法は、被験者の変化したまたは異常な状態を特性付けるために使用することが可能である。例えば、１つ以上の血清タンパク質へ会合されている化合物のプロフィールは、１つ以上の例で、被験者のために決定することが可能である。被験者は、病気にかかった被験者、遺伝子が変化している被験者、遺伝子障害に苦しめられている被験者、毒素（例えば、環境毒素、麻薬など）に暴露された被験者、または処置を受けている被験者であることが可能である。例えば、被験者の処置をモニターしている場合においては、プロフィールは処置に先立って、および処置後に規則的な間隔で決定することが可能である。プロフィールは、被験者の病理学（例えば、もし病気にかかっているならば）、投与された薬剤の存在量、または被験者の血清中の薬剤副産物、そのレベルが処置により影響されるかもしれない天然の成分についての情報を提供することができる。
薬剤試験
本明細書に記載された方法は、血清成分に対する試験化合物（例えば、薬剤）の親和性を試験するためにも使用することが可能である。血清タンパク質が潜在的医薬と相互作用するかどうかについての情報は、治療剤としてのその効能および有用性を特性付けるために有用である。
【０１５３】
例えば、試験化合物は、血液または血清、または少なくとも部分的に精製された血清タンパク質（例えば、組換え血清タンパク質）のごとき生物学的試料と混合することが可能である。インキュベーション後、１つ以上の血清タンパク質が、例えば、親和性試薬、例えば、本明細書に記載したようなペプチドリガンドを含む試薬、を使用して、試料から分離する。単離された血清タンパク質への試験化合物の結合は、例えば、血清タンパク質と単離された試験化合物の量を定量することにより決定することが可能である。試験化合物は標識されていなくてもまたは標識されていても（例えば、放射活性標識または蛍光標識を使用して）よい。標識された試験化合物は、例えば、シンチレーション近接アッセイまたは蛍光アッセイを使用して、直接的に検出することが可能である。
【０１５４】
非標識化合物もまた検出することが可能である。例えば、質量分析法を、非標識化合物を検出するために使用することが可能である。別の例において、非標識化合物は競合アッセイで検出することが可能である。血清タンパク質に結合された非標識化合物を血清タンパク質から分離し、結合反応液（例えば、マイクロタイタープレートのウェル中の）へ添加する。結合反応液は、非標識化合物へ結合する抗体および既知の量の標識化合物を含んでいる。存在する非標識化合物の量は、抗体に結合された標識化合物の量を測定することにより決定される。非標識化合物による競合は、結合された標識化合物の量を減少させる。
【０１５５】
関連した方法は、被験者（例えば、動物モデル）へ試験化合物を投与することを含んでいる。１つ以上の適切な間隔後、被験者から血液または血清試料を抽出する。血清タンパク質に会合された試験化合物の量は、例えば、前記のように決定することが可能である。もし被験者が非ヒト哺乳動物であるならば、種特異的ではない親和性リガンドを使用することが可能である。
血清タンパク質との相互作用を変調する化合物
血清タンパク質結合化合物および血清タンパク質（例えば、血清アルブミン）の相互作用を変調する、変調化合物をスクリーニングすることもまた可能である。例えば、天然に存在するタンパク質および血清タンパク質間の相互作用を破壊（または促進）する化合物のための高スループットスクリーニングを使用することが可能である。
【０１５６】
スクリーニングの１つの方法は以下の工程を含んでいる：候補変調化合物を、血清タンパク質結合化合物および血清タンパク質を含む複合体に接触させ；そして血清タンパク質結合化合物および血清タンパク質間の相互作用を評価する。１つの実行において、血清タンパク質を親和性試薬（例えば、ペプチドリガンド）へ結合させ、そして単離する。単離された材料を分析して、血清タンパク質結合化合物の存在および／または量を決定する。血清タンパク質結合化合物および血清タンパク質の相互作用を破壊する変調化合物は、血清タンパク質結合化合物の単離を減少または阻止することができる。
【０１５７】
スクリーニングの関連した方法は、血清タンパク質を候補変調化合物と接触させ、そして続いて、血清タンパク質結合化合物を添加して、候補変調剤が血清タンパク質および血清タンパク質結合化合物間の相互作用を損なったか促進したかどうかを決定することを含んでいる。同様に、３つすべての成分を一緒に合わせ、次ぎに分析することも可能である。
血清タンパク質に対する結合リガンドの同定
血清タンパク質へ結合するリガンドは、ディスプレイライブラリーのスクリーニングを含んでいる多様な方法により同定することが可能である。例えば、ファージディスプレイが、既定の血清タンパク質へ結合するペプチドに対して、直線状または環状ペプチドのライブラリーをスクリーニングするために使用することが可能である。加えて、免疫グロブリンドメインを含むリガンド、例えば、抗体を発生させることが可能である（例えば、免疫化、またはディスプレイライブラリースクリーニングにより）。
【０１５８】
ヒト血清アルブミンおよび免疫グロブリンのＦｃ領域へ結合するペプチドリガンドが本明細書および２００１年３月９日に提出された米国仮出願第６０／３３１，３５２号、２００１年５月２３日に提出された第６０／２９２，９７５号、２００１年４月１８日に提出された第６０／２８４，５３４号に記載されている。同様に、トランスフェリン、α−マクログロブリン、フェリチン、アポリポタンパク質、トランスサイレチン、血清中に観察されるプロテアーゼ阻害剤、レチノール結合タンパク質、チオスタチン、α−フェトプロテイン、ビタミン−Ｄ結合タンパク質またはアファミンのごとき血清タンパク質へ結合するリガンドを単離することが可能である。
【０１５９】
血清タンパク質の結合リガンドを同定する１つの方法は、ディスプレイライブラリーをスクリーニングすることである。ディスプレイライブラリーは実体の収集である：各々の実体は、到達できるポリペプチド成分、およびポリペプチド成分をコードするまたは同定する回収可能な成分を含んでいる。ポリペプチド成分は、例えば、３アミノ酸から３００を超えるアミノ酸の長さであることが可能である。選択において、ライブラリーの各々のメンバーのポリペプチド成分は、血清タンパク質で探索され、もしポリペプチド成分がタンパク質へ結合すれば、ディスプレイライブラリーメンバーが同定される（典型的には支持体上の保持により）。
【０１６０】
ディスプレイライブラリーのスクリーニングは好都合であり、そこでは潜在的結合剤の非常に多くのメンバー（例えば、５×１０9）が試験でき、成功した結合剤が短時間で単離される。さらに免疫化と異なり、異なった種間で保存されている、血清タンパク質のエピトープへ結合するリガンドを同定することが可能である。
【０１６１】
保持されたディスプレイライブラリーメンバーを支持体から回収し、そして分析する。分析は、増幅、および同様のまたは異なった条件下での続いての選択を含むことが可能である。例えば、陽性および陰性選択が交互に可能である。分析はまた、ポリペプチド成分のアミノ酸配列の決定、および詳細な特性付けのためのポリペプチド成分の精製も含むことが可能である。
【０１６２】
多様な様式がディスプレイライブラリーに使用することが可能である。例には以下のものが含まれる。
ファージディスプレイ。１つの様式は、ウイルス、特にバクテリオファージを利用する。この様式は「ファージディスプレイ」と名付けられている。ポリペプチド成分は、典型的にはバクテリオファージコートタンパク質へ、共有結合で連結されている。結合は、コートタンパク質へ融合されたポリペプチド成分をコードしている核酸の翻訳を生じる。結合は、可動性ペプチドリンカー、プロテアーゼ部位、または終止コドンの抑制の結果として取り込まれたアミノ酸を含むことが可能である。ファージディスプレイは、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５，２２３，４０９号；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１３１５−１３１７；ＷＯ  ９２／１８６１９；ＷＯ  ９１／１７２７１；ＷＯ  ９２／２０７９１；ＷＯ  ９２／１５６７９；ＷＯ  ９３／０１２８８；ＷＯ  ９２／０１０４７；ＷＯ  ９２／０９６９０；ＷＯ  ９０／０２８０９；ｄｅ  Ｈａａｒｄら、（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  ２７４：１８２１８−３０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ２：３７１−８；Ｆｕｃｈｓら、（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７０−１３７２；Ｈａｙら、（１９９２）Ｈｕｍ  Ａｎｔｉｂｏｄ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ  ３：８１−８５；Ｈｕｓｅら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、（１９９３）ＥＭＢＯ  Ｊ  １２：７２５−７３４；Ｈａｗｋｉｎｓら、（１９９２）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２２６：８８９−８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８；Ｇｒａｍら、（１９９２）ＰＮＡＳ  ８９：３５７６−３５８０；Ｇａｒｒａｒｄら、（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：１３７３−１３７７；Ｒｅｂａｒら、（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６７：１２９−４９；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（１９９１）Ｎｕｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓ  １９：４１３３−４１３７；およびＢａｒｂａｓら、（１９９１）ＰＮＡＳ  ８８：７９７８−７９８２、に記載されている。
【０１６３】
ファージディスプレイシステムは、繊維状ファージ（ファージｆ１、ｆｄおよびＭ１３）ならびに他のバクテリオファージ（例えば、Ｔ７バクテリオファージおよびラムダ字形ファージ：例えば、Ｓａｎｔｉｎｉ  （１９９８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８２：１２５−１３５；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら、（１９９６）Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ  ６：１−６；Ｈｏｕｓｈｍら、（１９９９）Ａｎａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２６８：３６３−３７０を参照されたい）に対して開発されている。繊維状ファージディスプレイシステムは、典型的には、遺伝子ＩＩＩタンパク質のごとき副コートタンパク質、および遺伝子ＶＩＩＩタンパク質（主コートタンパク質）への融合を使用するが、遺伝子ＶＩタンパク質、遺伝子ＶＩＩタンパク質、遺伝子ＩＸタンパク質またはそれらの断片のごとき他のコートタンパク質への融合もまた使用することが可能である（例えば、ＷＯ  ００／７１６９４を参照されたい）。好適な態様において、融合は遺伝子ＩＩＩタンパク質のドメイン、例えば、アンカードメインまたは「スタンプ（ｓｔｕｍｐ）」に対するものである（例えば、遺伝子ＩＩＩタンパク質アンカードメインの記述は米国特許第５，６５８，７２７号を参照されたい）。ポリペプチド成分の結合価はまた制御することが可能である。ポリペプチド成分をコードしている配列の、完全ファージゲノム内へのクローニングは、遺伝子ＩＩＩタンパク質のすべての複製がポリペプチド成分へ融合されるので、多価ディスプレイを生じる。結合価を減少させるには、ファージミドシステムを利用することが可能である。このシステムにおいて、遺伝子ＩＩＩへ融合されたポリペプチド成分をコードしている核酸は、プラスミド上に提供され、典型的には７００ヌクレオチドより短い長さである。プラスミドは、プラスミドを運んでいる細菌細胞がヘルパーファージ（例えば、Ｍ１３Ｋ０１）で感染された場合にプラスミドがバクテリオファージ内へ取り込まれるように、複製のファージ起点を含んでいる。ヘルパーファージは、遺伝子ＩＩＩの無傷のコピーおよびファージ複製および組み立てに必要とされる他のファージ遺伝子を提供する。ヘルパーファージは、野生型起点を有するプラスミドと比較して、ファージ粒子内へヘルパーファージゲノムが効率よく取り込まれないように、欠陥のある起点を有している。
【０１６４】
ポリペプチド成分を表示しているバクテリオファージは、増殖することが可能であり、そして標準ファージ準備法（例えば、増殖培地からのＰＥＧ沈殿）を使用して採取することが可能である。
【０１６５】
個々のディスプレイファージの選択後、選択されたファージを使用して細胞を感染させることにより、選択されたポリペプチド成分をコードしている核酸を増幅する。個々のコロニーまたはプラークを選び取ることが可能であり、核酸を単離しおよび配列決定する。
【０１６６】
細胞に基づいたディスプレイライブラリー
さらに別の様式においては、ライブラリーは細胞ディスプレイライブラリーである。
タンパク質は細胞、例えば、真核生物または原核生物細胞の表面上に示されている。原核生物細胞の例には大腸菌細胞、Ｂ．サブチリス細胞、胞子が含まれる（例えば、Ｌｕら，（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３：３６６を参照されたい）。真核生物細胞の例には酵母（例えば、サッカロミセス  セレビジエ、シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）  ポムベ、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）、またはピキア  パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｓ））が含まれる。酵母表面ディスプレイは、例えば、ＢｏｄｅｒおよびＷｉｔｔｒｕｐ（１９９７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：５５３−５５７、およびＷＯ  ０３／０２９，４５６に記載されている。この出願は、Ｆａｂ断片のごとき免疫グロブリンタンパク質を示すために使用できる酵母ディスプレイシステム、および重および軽鎖の組合わせを発生させるための接合の使用を記載している。
【０１６７】
１つの態様において、斑入り（ｖａｒｉｅｇａｔｅ）核酸配列が、酵母ディスプレイのためのベクター内へクローン化される。クローニングは、斑入り核酸と、酵母細胞表面タンパク質のドメイン（または完全）、例えば、Ａｇａ２、Ａｇａ１、Ｆｌｏ１またはＧａｓ１をつなぎ合わせる。これらのタンパク質のドメインは、斑入り核酸配列により、膜貫通ドメイン（例えば、Ｆｌｏ１）により、またはリン脂質２重層への共有結合により（例えば、Ｇａｓ１）、コードされたポリペプチドを繋ぎ止めることが可能である。ベクターは、鎖の１つが酵母細胞表面タンパク質に連結されるように、細胞表面上の２つのポリペプチド鎖を発現させるために形成することが可能である。例えば、２つの鎖は免疫グロブリン鎖であろう。
【０１６８】
リボソームディスプレイ。ＲＮＡおよびＲＮＡによりコードされているポリペプチドは、ＲＮＡを翻訳している、および新生ポリペプチドがまだ付着している安定化リボソームにより物理的に会合することが可能である。典型的には高い２価Ｍｇ2+濃度および低温を使用する。例えば、Ｍａｔｔｈｅａｌｄｓら、（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１：９０２２およびＨａｎｅｓら、（２０００）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２８７−９２；Ｈａｎｅｓら、（２０００）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３２８：４０４−３０およびＳｃｈａｆｆｉｔｚｅｌら、（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ．２３１（１−２）：１１９−３５、を参照されたい。
【０１６９】
ペプチド−核酸融合。別の様式はペプチド−核酸融合を利用する。ポリペプチド−核酸融合物は、例えば、ＲｏｂｅｒｔｓおよびＳｚｏｓｔａｋ（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｓ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２２９７−１２３０２および米国特許第６，２０７，４４６号、に記載されているように、共有結合で付着されたピューロマイシン基を含むｍＲＮＡのインビトロ翻訳により発生させることが可能である。ｍＲＮＡは次ぎにＤＮＡへ逆転写され、そしてポリペプチドへ架橋される。
【０１７０】
他のディスプレイ様式。さらに別の様式は、ポリペプチド成分が、ポリペプチドを同定する非核酸タグへ付着された、非生物学的ディスプレイである。例えば、タグは、ポリペプチドを示すビーズへ付着された化学的タグ、または高周波タグであることが可能である（例えば、米国特許第５，８７４，２１４号を参照されたい）。
【０１７１】
足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）。ディスプレイのための足場は以下のものを含むことが可能である：抗体（例えば、Ｆａｂ断片、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦＶ）、単一ドメイン抗体、ラクダ抗体、およびラクダ化抗体）；Ｔ細胞レセプター；ＭＨＣタンパク質；細胞外ドメイン（例えば、フィブロネクチンタイプＩＩＩリピート、ＥＧＦリピート）；プロテアーゼ阻害剤（例えば、クニッツ（Ｋｕｎｉｔｚ）ドメイン、エコチン、ＢＰＴＩなど）；ＴＰＲリピート；トリフォイル（ｔｒｉｆｏｉｌ）構造；ジンクフィンガードメイン；ＤＮＡ結合タンパク質；特に単量体ＤＮＡ結合タンパク質；ＲＮＡ結合タンパク質；酵素、例えば、プロテアーゼ（特に不活性化プロテアーゼ）、ＲＮａｓｅ；シャペロン、例えば、チオレドキシンおよび熱ショックタンパク質；および細胞内シグナル伝達ドメイン（ＳＨ２およびＳＨ３ドメインのごとき）。
【０１７２】
足場材料ドメインの別の有用な型は免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメインである。ディスプレイのために免疫グロブリンドメインを使用する方法も既知である（例えば、Ｈａａｒｄら、（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１８２１８−３０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１−２０およびＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｔｏｄａｙ  ２１：３７１−８、を参照されたい）。
【０１７３】
合成ペプチド。結合リガンドは、合成リガンド（例えば、３０アミノ酸またはそれ未満の人工ペプチド）を含むことが可能である。合成ペプチドは、１つ以上のジスルフィド結合を含むことが可能である。別の合成ペプチド、いわゆる「直線状ペプチド」は、システインが欠けている。合成ペプチドは、溶液中では構造をほとんどまたは全く有しておらず（例えば、未構造化）、不均一構造（例えば、別のコンホメーションまたは「ゆるく」構造化された）、またはまれな（ｓｉｎｇｕｌａｒ）天然構造（例えば、協同的に折り畳まれた）を有していてもよい。いくつかの合成ペプチドは、標的分子に結合した場合、特定の構造を採用する。いくつかの合成ペプチドの例は、いわゆる「環状ペプチド」であり、それは少なくともジスルフィド結合、そして、例えば、約４から１２の非システイン残基のループを有している。
【０１７４】
分子標的に結合するペプチド配列は、ファージディスプレイライブラリーから選択する。同定後、そのようなペプチドは、合成的にまたは組換え法により製造することが可能である。配列は、より長い配列内へ取り込むことが（例えば、挿入されて、付け加えて、または付着させて）可能である。
結合ペプチドを同定するためのファージディスプレイライブラリーの例
組換えファージまたは他の遺伝子パーケージ（細菌、酵母、その他の宿主細胞）の表面上に、斑入り異種ペプチドを示しているディスプレイライブラリーは、当該分野で知られている、いくつかの任意の方法で調製することができる。例えば、Ｋａｙら、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，サンディエゴ  １９９６）および米国特許第５，２２３，４０９号（Ｌａｄｎｅｒら）、を参照されたい。
【０１７５】
下記のものは、本明細書に記載した、少なくともいくつかのポリペプチドリガンドを発見するためにスクリーニングすることが可能である、ファージライブラリーの６つの例である。各々のディスプレイは、Ｍ１３の表面上に、短い、斑入りの外来性ペプチドを示している。ライブラリーの５つのペプチドディスプレイは、システイン残基が隣接した、各々４、５、６、７、８または１０アミノ酸のセグメントを有する親ドメインに基づいていた。システインの対は、安定なジスルフィド結合を形成し、環状ディスプレイライブラリーを生じていると信じられる。環状ペプチドは、ファージ表面上のタンパク質ＩＩＩのアミノ末端に示されている。ライブラリーはＴＮ６／６、ＴＮ８／９、ＴＮ９／４、ＴＮ１０／９およびＴＮ１２／１と名付けられた。２０アミノ酸直線状ディスプレイを有するファージライブラリーもまたスクリーニングした：このライブラリーはＬｉｎ２０と名付けられた。
【０１７６】
ＴＮ６／６ライブラリーは、１２アミノ酸斑入り鋳型に含まれている単一環状ペプチドを示すために構築した。ＴＮ６／６ライブラリーは、Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｃｙｓ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12（配列番号２１）（式中、鋳型のアミノ酸配列中の各々の可変アミノ酸位は添字整数により示されている）の鋳型配列を利用した。鋳型中の各々の可変アミノ酸位（Ｘａａ）は、以下の置換を許容するために、独立して変化させた：残基Ｘａａ1およびＸａａ12は、任意の以下の１４アミノ酸を含むように変化させた：Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、ＴｒｐおよびＴｙｒ；および残基Ｘａａ2、Ｘａａ3、Ｘａａ5、Ｘａａ6、Ｘａａ7、Ｘａａ8、Ｘａａ10およびＸａａ11は、システイン（Ｃｙｓ）を除く任意の通常のα−アミノ酸を含むように独立して変化させた。潜在的設計配列の数は３．３×１０12であり；２．０×１０8の独立した形質転換体がライブラリー中に含まれていた。
【０１７７】
ＴＮ８／９ライブラリーは、１４アミノ酸鋳型に含まれている単一結合ループを示すために構築した。ＴＮ８／９ライブラリーは、Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｃｙｓ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14（配列番号２５）の鋳型配列を利用した。鋳型中のアミノ酸位１、２、３、５、６、７、８、９、１０、１２、１３および１４は、システイン（Ｃｙｓ）を除く任意のアミノ酸を許容するように変化させた。
【０１７８】
ＴＮ９／４ライブラリーは、１５アミノ酸鋳型に含まれている単一結合ループを示すために構築した。ＴＮ９／４ライブラリーは鋳型配列、Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｃｙｓ−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15（配列番号４２４）を利用した。鋳型中のアミノ酸位１、２、３、５、６、７、８、９、１０、１１、１３、１４および１５は、システイン（Ｃｙｓ）を除く任意のアミノ酸を許容するように変化させた。
【０１７９】
ＴＮ１０／９ライブラリーは、１６アミノ酸斑入り鋳型に含まれている単一環状ペプチドを示すために構築した。ＴＮ１０／９ライブラリーは鋳型配列、Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｃｙｓ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16（配列番号２２）（式中、鋳型のアミノ酸配列中の各々の可変アミノ酸位は添字整数により示されている）を利用した。鋳型中の各々の可変アミノ酸位（Ｘａａ）は、以下の置換を許容するために、独立して変化させた。鋳型のアミノ酸位Ｘａａ1、Ｘａａ2、Ｘａａ15およびＸａａ16は、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＴｒｐおよびＴｙｒから成る１０アミノ酸の群から選択された各々のアミノ酸を許容するように、独立して変化させた；鋳型中のアミノ酸位Ｘａａ3およびＸａａ14のアミノ酸は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、ＴｒｐおよびＴｙｒから成る１４アミノ酸の群から選択された各々のアミノ酸を許容するように、独立して変化させた；アミノ酸位Ｘａａ5、Ｘａａ6、Ｘａａ7、Ｘａａ8、Ｘａａ9、Ｘａａ10、Ｘａａ11およびＸａａ12（即ち、鋳型中の４および１３位の不変システイン残基間）のアミノ酸は、システイン（Ｃｙｓ）を除く通常のα−アミノ酸の各々を許容するように、独立して変化させた。潜在的設計配列の数は３．０×１０16であり；約２．５×１０8の独立した形質転換体がライブラリー中に含まれていた。
【０１８０】
ＴＮ１２／１ライブラリーは、１８アミノ酸鋳型に含まれている単一環状ペプチドを示すために構築した。ＴＮ１２／１ライブラリーは鋳型配列、Ｘａａ1−Ｘａａ2−Ｘａａ3−Ｃｙｓ4−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10−Ｘａａ11−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｃｙｓ15−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ｘａａ18（配列番号２３）（式中、鋳型のアミノ酸配列中の各々の可変アミノ酸位は添字整数により示されている）を利用した。鋳型中のアミノ酸位Ｘａａ1、Ｘａａ2、Ｘａａ17およびＸａａ18は、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｌｅｕ、Ａｓｎ、Ｐｒｏ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、ＴｒｐおよびＴｙｒから成る１２アミノ酸の群から選択された各々のアミノ酸を許容するように、独立して変化させた。鋳型のアミノ酸位Ｘａａ3、Ｘａａ5、Ｘａａ6、Ｘａａ7、Ｘａａ8、Ｘａａ9、Ｘａａ10、Ｘａａ11、Ｘａａ12、Ｘａａ13、Ｘａａ14、Ｘａａl6は、システインを除く通常のα−アミノ酸の各々を許容するように、独立して変化させた。
【０１８１】
Ｌｉｎ２０ライブラリーは、２０アミノ酸鋳中の単一直線状ペプチドを示すために構築した。鋳型中の各々の位でのアミノ酸は、システイン（Ｃｙｓ）を除く任意のアミノ酸を許容するように変化させた。
【０１８２】
Ｋａｙら、Ｐｈａｇｅ  Ｄｉｓｐｌａｙ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，サンディエゴ  １９９６）および米国特許第５，２２３，４０９号に議論されている技術は、選択された親鋳型に対応する潜在的結合剤のライブラリーを調製するために有用である。上に記載したライブラリーは、そのような技術に従って調製することが可能であり、固体表面上に固定された、または溶液中で自由な、血清タンパク質に対する結合ペプチドをスクリーニングした。
血清タンパク質結合ペプチドのためのファージディスプレイライブラリーのスクリーニング
典型的スクリーニングにおいては、ファージライブラリーを標的化合物（例えば、目的の血清タンパク質）またはその特定の断片または副成分と接触させ、そして結合させる。スクリーニング過程において、結合剤および非結合剤の分離を容易にするため、標的化合物を固体支持体上に固定化することがしばしば都合がよいが、しかしながら、最初に溶液中で標的化合物と結合することを許容し、次ぎに、標的化合物の支持体へのカップリングにより、非結合剤から結合剤を隔離することも可能である。実例として、標的の存在下でインキュベートした場合、標的結合部分を運んでいるファージは、固体支持体上に固定化された標的化合物と複合体を形成するが、一方、非結合ファージは溶液中に残存し、そして緩衝液で洗い流すことができる。結合されたファージは次ぎに、緩衝液を比較的高い酸性または塩基性ｐＨ（例えば、ｐＨ２または１０）へ変更する、緩衝液のイオン強度を変更する、変性剤を添加する、または既知の他の手段のごとき、多くの手段により、標的から遊離させることができる。
【０１８３】
例えば、ＨＳＡ結合リガンドを同定するためには、ＨＳＡを、マルチウェルアッセイプレート中のウェルのプラスチック表面のごとき固体表面に吸着でき（例えば、受動的固定化により）、次ぎに、ｐＨ６−７のごとき、固定化されたＨＳＡおよびファージの構造を維持する適切な条件下で、ウェルへファージディスプレイライブラリーの一部を加えた。固定化ＨＳＡを結合するペプチドループ構造を示すライブラリー中のファージは、ウェルの表面へ接着しているＨＳＡへ結合されて維持され、そして非結合ファージは除去することが可能である。固定化ＨＳＡへ結合されたファージは次ぎに、比較的強い酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ２）、またはアルカリ性ｐＨ（例えば、ｐＨ８−９）を有している緩衝溶液で洗浄することにより溶出することができる。ＨＳＡから溶出された、回収されたファージの溶液は次ぎに、もし望むなら、血清アルブミン結合ペプチドを示しているファージの濃縮混合ライブラリー集団としてプールしてもよい。もしくは、各々のライブラリーからの溶出されたファージは、ＨＳＡ結合剤のライブラリー−特異的濃縮集団として別々に保存することもできる。血清アルブミン結合ペプチドを示しているファージの濃縮集団は次ぎに、さらなるラウンドのスクリーニングのために、および／またはファージ上に示されたペプチド分析のために、および／または示された結合ペプチドをコードしているＤＮＡの配列決定のために、標準法により増殖させることもできる。
【０１８４】
多くの可能な代替スクリーニングプロトコールの１つは、ビオチニル化されたＨＳＡ標的分子を使用しており、それは例えば、粒子上に被覆されたストレプトアビジンへの結合により捕捉することが可能である。下記の実施例に記載されているように、温度−誘発変性およびタンパク分解性攻撃に対してＨＳＡを安定化することが知られている、０．１％トゥーン２０非イオン性界面活性剤およびまた０．１％カプリル酸ナトリウムを補給したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）のｐＨ７．４の溶液中で、ＨＳＡ結合ペプチドを示しているファージがカプリル酸−ビオチニル化−ＨＳＡへ結合されるようなプロトコールにおいて、ＨＳＡ結合ペプチドを示しているファージをライブラリーから選択した。溶液中のカプリル酸−ビオチニル化−ＨＳＡ複合体は次ぎに、ストレプトアビジン−被覆磁気ビーズ上に捕捉した。ファージは続いて、さらなる研究のため、ビーズから溶出した。
【０１８５】
回収されたファージは次ぎに、細菌細胞の感染により増幅することができ、そして、非ＨＳＡ結合剤が枯渇され、およびＨＳＡ結合剤が濃縮されている、新しいファージのプールを用いてスクリーニングプロセルを繰り返すことができる。ほんの少しの結合ファージの回収でも、プロセスを完了させるまで行うのに十分である。数ラウンドの選択後、結合プール中の選択されたファージクローンから誘導された、結合部分をコードしている遺伝子配列を、通常の方法により決定し、標的へのファージの結合親和性を与えるペプチド配列を明らかにする。選択の各々のラウンド後に回収されたファージ数の増加、および密接に相関した配列の回収は、所望の特性を有しているライブラリーの配列へ、スクリーニングが収束していることを示している。
【０１８６】
結合ポリペプチドの組が同定された後、配列情報は、追加の所望の特性を有しているメンバーのための偏った、他の、２次ライブラリーを設計するために使用することができる。
【０１８７】
ディスプレイ技術はまた、標的の特定のエピトープへ結合するリガンド（例えば、抗体リガンドまたはペプチドリガンド）を得るために使用することが可能である。このことは、例えば、特定のエピトープを欠く、またはエピトープ内が変異されている（例えば、アラニンで）、競合的非標的分子を使用することにより行うことが可能である。こういう非標的分子は、以下に説明するようなネガティブ選択法において、例えば、標的に特異的ではないディスプレイライブラリーメンバーを、解離している洗浄溶液中で捕捉するため、ディスプレイライブラリーを標的に結合させる時の競合分子として、または前溶出剤として使用できる。
【０１８８】
血清タンパク質を結合するリガンドの結合特質は、多様なアッセイ様式を使用して容易に評価することが可能である。例えば、リガンドの結合特質は、１つ以上の種からの血清アルブミンに対する、結合部分の解離定数（ＫD）を決定するための便利でおよび正確な方法を提供する、蛍光異方性により、溶液中で測定することが可能である。１つのこういう手法においては、本明細書に記載した結合部分を、フルオレセインで標識する。フルオレセイン標識結合部分は次ぎに、マルチウェルアッセイプレートのウェル中で、多様な濃度の血清アルブミンの特定の種と混合する。次ぎに蛍光異方性測定を、蛍光偏光プレートリーダーを使用して実施する。血清タンパク質および非共有結合で会合された化合物間の結合相互作用は、同様に特性付けすることが可能である。結合特質を研究するための他の溶液測定には、蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）およびＮＭＲが含まれる。
【０１８９】
結合特質はまた、１つの結合相手が固定化されている方法を使用して特性付けることも可能である。こういう方法には、ＥＬＩＳＡおよび表面プラスモン共鳴が含まれる。
血清結合タンパク質リガンド変異体
本明細書に記載されている、または本明細書に記載されている方法により単離された、血清結合タンパク質リガンドの変異体を使用することも可能である。多数の変異体が可能である。変異体は調製することが可能で、そして次ぎに、例えば、上記の結合アッセイ（蛍光異方性のような）を使用して試験することが可能である。もし変異体が機能するならば、血清タンパク質および会合された化合物を単離するための親和性試薬として使用することが可能である。
【０１９０】
変異体の１つの型は、本明細書に記載されている、または本明細書に記載されている方法により単離された、リガンドの切り詰め体である。この例において、変異体は、ＮまたはＣ末端から除去可能な、リガンドの１つ以上のアミノ酸残基を除去することにより調製する。いくつかの場合において、一連のそのような変異体を調製し、試験した。一連の変異体を試験した情報は、血清タンパク質を結合するために必須であるリガンドの領域を決定するために使用した。一連の内部欠失または挿入が、同様に構築でき、そして試験することが可能である。
【０１９１】
変異体の別の型は置換である。１つの例において、結合活性に寄与する残基を同定するため、リガンドをアラニンスキャニングにかけた。別の例において、１つ以上の位置での置換のライブラリーを構築した。ライブラリーは偏ってはおらず、特にもし多数の位置が変化されていれば、本来の残基に向かって偏らせることができる。
【０１９２】
変異体の関連した型は、１つ以上の天然には存在しないアミノ酸を含むリガンドである。こういう変異体リガンドは、化学合成により製造することが可能である。１つ以上の位置を天然には存在しないアミノ酸で置換することが可能である。いくつかの場合において、置換されたアミノ酸は本来の天然に存在する残基に化学的に関連させることができ（例えば、脂肪族、荷電、塩基性、酸性、芳香族、親水性）、または本来の残基のアイソスター（ｉｓｏｓｔｅｒｅ）であることができる。
【０１９３】
また、非ペプチド結合および他の化学修飾を含むようにすることも可能である。例えば、リガンドの一部または全部を、ペプチド模倣体、例えば、ペプトイド（例えば、Ｓｉｍｏｎら、（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：９３６７−７１およびＨｏｒｗｅｌｌ（１９９５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：１３２−４、を参照されたい）として合成することもできる。
【０１９４】
例えば、血清アルブミン結合リガンド（ＤＸ−３２１、ＤＸ−３２１−Ａ、ＤＸ−３２１−Ｂ、ＤＸ−３６、ＤＸ−２３６−ＡおよびＤＸ−２３６Ｂのごとき）および免疫グロブリン結合リガンド（ＤＸ２４９、ＤＸ２４９−Ａ、ＤＸ２５３、ＤＸ−２５３−１、ＤＸ３９８およびＤＸ３９８−Ａのごとき）の変異体を使用することが可能である。
ヒト血清タンパク質の配列
ヒト血清タンパク質のアミノ酸配列はよく知られており、公共配列貯蔵所、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（国立バイオテクノロジー情報センター、国立保健研究所、ベセスダ、ＭＤ）で見ることが可能である。さらに、ヒト集団において、天然遺伝子変異が、個体の中での血清タンパク質間のアミノ酸相違を生じさせることが可能である。
【０１９５】
下記の配列は、特定の個体からの、少なくともいくつかのヒト血清タンパク質アミノ酸配列の例である。
多くの個体において、ＨＳＡは、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔエントリー：Ｐ０２７６８および／または成熟後、に掲げられたアミノ酸配列を有している。
【０１９６】
ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ（配列番号２６）。
【０１９７】
ヒト血清アルブミン変異体の例には、Ｈ２７Ｑ、Ｈ２７Ｙ、Ｅ１０６Ｋ、Ｒ１２２Ｓ、Ｅ３７８Ｋ、Ｅ４００ＫおよびＥ５２９Ｋ（プロセシングされていない配列を使用して番号付けた、ここにおいて、配列番号２６の最初のＤは、プロセシングされていない配列の残基２５に対応している）が含まれる。
自動化された方法および情報管理
血清タンパク質分析プラットフォームの任意のおよび全ての様相は、自動化することが可能である。自動化は、例えば、多数の異なった試料を自動的に処理するために使用することが可能である。液体取り扱いユニットは、試料から血清タンパク質で会合された化合物を単離するために使用することが可能であり、そして単離された化合物を、電気泳動および／または質量分析法のごとき分析法に自動的にかけることが可能である。
【０１９８】
機器。多様なロボット的装置を自動化プロセスにおいて用いることが可能である。これらには、マルチウェルプレート運搬システム、磁気ビーズ粒子プロセッサー、および液体取り扱いユニットが含まれる。これらの装置は、注文設計書で組み上げるか、またはＡｕｔｏｇｅｎ（フラミンガム  ＭＡ）、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ（ＵＳＡ）、Ｂｉｏｒｏｂｏｔｉｃｓ（ウォバーン  ＭＡ）、Ｇｅｎｅｔｉｘ（ニューミルトン、ハンプシャー  ＵＫ）、Ｈａｍｉｌｔｏｎ（リーノー  ＮＶ）、Ｈｕｄｓｏｎ（スプリングフィールド  ＮＪ）、Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ（ヘルシンキ、フィンランド）、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（メリデン  ＣＴ）およびＴｅｃａｎ（マンドルフ、スイス）のような商業的供給元から購入することが可能である。
【０１９９】
情報管理。プラットフォームにより発生した情報は、コンピューターデータベースに保存することが可能である（例えば、デジタルの形で）。血清タンパク質に会合された化合物の特性付けを記載した情報を含んでいる情報は、中央データベースに保存する。例えば、データベースは、会合された化合物の特質（例えば、タンパク質配列、化学構造、存在量、修飾状態その他）を記載している情報、および試料（例えば、その起源の同一性、日付、処理法、病理学、処置その他）を記載している情報、を含むことが可能である。情報のこれらの項目は、お互いに関連付けることが可能である。例えば、特定の状態（例えば、特定の疾患または処置）についてのクエリー（ｑｕｅｒｙ）は、その状態で観察された会合された化合物の特質を同定するために使用することが可能である。同様に、１つ以上の会合された化合物の特定の特質は、その特質が優勢である状態を同定するためのクエリーとして使用することが可能である。
【０２００】
データベースはまた、プロフィール、例えば、特定の状態における試料からの、多数の会合された化合物の記述、を含むことも可能である。プロフィールを比較するため、例えば、プロフィールの収集物との比較により既定の試料を評価するため、ソフトウェアを使用することが可能である。１つ以上の同様のプロフィールは、試料についての情報を推論するために使用することが可能である（例えば、診断を行うため）。
【０２０１】
データベースサーバーもまた、装置が解釈可能であるコマンドおよび他の信号を使用し、各々の装置と交信するように形づくることも可能である。システムのコンピューターに基づいた様相は、デジタル電気回路において、またはコンピューターハードウェア、ファームウェア、ソフトウェアまたはその組み合わせにおいて、実行することが可能である。本発明の機器、例えば、データベースサーバーは、プログラム可能なプロセッサーにより実行するため、機械が読み取り可能な記憶装置内に具体的に組み入れられた、コンピュータープログラム製品において実行することが可能である；そして、インプットデータおよび発生しているアウトプットに影響を及ぼすことにより、本明細書に記載された機能を実行するために、命令のプログラムを実行しているプログラム可能なプロセッサーにより、測定行為を実行することが可能である。実行環境の１つの非制限的例には、ウィンドウＮＴ４．０またはそれ以降（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）、またはソラリス２．６またはそれ以降（Ｓｕｎ  Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）のオペレーションシステムが走っているコンピューターが含まれる。
【０２０２】
データベースサーバーはまた、ネットワーク（例えば、イントラネットまたはインターネット）とインターフェースで連結することも可能である。サーバーは遠隔システムからクエリーを受け、要求しているシステムへ情報（例えば、血清タンパク質に会合された化合物のプロフィールについての）を送ることが可能である。
【０２０３】
クエリーに対する既定の許容に匹敵する記録を同定するため、クエリーは、データベースをフィルターするために使用することが可能である。例えば、質量分光法ピークの組は、クエリーを定式化するために使用することが可能である。フィルターは、クエリー中に存在する、１つ以上の（例えば、全部の）ピークを含む記録を探し当てる（および任意に示す）ことができる。
ＮＨＳ−セファロース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）樹脂上でのペプチド固定化
固定化ペプチドを有しているマトリックスを製造するための１つの方法は以下のようである。
【０２０４】
５マイクロモルの各々のペプチドを、最少量のＤＭＳＯに溶解し、次ぎに、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で１度洗浄されている、１ｍｌのＮＨＳ−セファロースアフィニティークロマトグラフィー樹脂（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ，ピスカタウェイ，ニュージャージー）へ添加した。固定化反応は、２％（容量／容量）までジイソプロピルエチルアミンを添加することにより開始した。室温において、振盪台上で４時間ゆっくりと混合した後、等量の０．５Ｍヒドロキシルアミン水溶液、ｐＨ８，を添加することにより反応をクエンチさせた。ｉｖＤｄｅ保護内部リジンを有するペプチドに対しては、ヒドロキシルアミンクエンチ処理はまた、ｉｖＤｄｅ保護基を除去する。完全な保護基除去を行うため、クエンチした反応液を室温で、１夜インキュベートした。クエンチし、および脱保護したら、溶媒および非結合ペプチドを除去するため、固定化されたペプチド−セファロース樹脂を少なくとも３回、水で洗浄した。非特異的に結合されているペプチドは、３０ｍＭリン酸、ｐＨ２、中で、少なくとも３回樹脂を洗浄することにより、樹脂から溶出させた。加水分解後はＮＨＳ−セファロース樹脂表面が陰性に荷電されるようになるため、酸性洗浄液が表面を中和し、そして静電的相互作用を経て、表面に非共有結合的に結合されているペプチドを除去する。洗浄後、樹脂を５０％ｖ／ｖ混合物として水に再懸濁した。５０μｌの分割量を、定量的アミノ酸分析で樹脂上のリガンド密度の決定するために使用した。最後に、分析試験のため、樹脂スラリーを０．３５ｍｌのＯＭＮＩＦＩＴTMガラスカラム（３ｍｍ×５０ｍｍ）へ充填した。
【０２０５】
より大きな分取用カラムのためには、ペプチドおよびセファロースの量を比例してスケールアップし、そして最終ペプチドセファロースバッチをより大きなＯｍｎｉｆｉｔカラム（直径１０ｍｍ）へ充填した。
【実施例１】
【０２０６】
血清からのＨＳＡの精製
ヒト血清試料を、ペプチドリガンドＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１を含んだＨＳＡ−結合ペプチドマトリックスと接触させた。マトリックスをＰＢＳでよく洗浄し、そして塩基性溶液、１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、で溶出した。溶出された物質は、迅速に緩衝液で中和した。この物質の一定分量を分析した。図１は、この物質を分離した２−Ｄゲルである。
【０２０７】
この物質の別の一定分量を、活性化マレイミドを含む、クロマトグラフィー樹脂へ接触させた。樹脂と反応しない分画は、ｐＨ９．１での溶出の間に、ＨＳＡから解離した化合物を含むことができる。マレイミドはＨＳＡ上の遊離システインと反応し、そして樹脂にＨＳＡを共有結合で結合する。樹脂を変性剤（例えば、８Ｍ尿素）で処理し、そして溶出液を集め、分析した。
【０２０８】
特に、溶出液は、ｐＩおよび見掛けの分子量による２−Ｄ電気泳動により、分離することが可能である。２−Ｄゲルを染色し、個々のタンパク質染色スポットを切り出し、プロテアーゼで消化し、そしてＭＡＬＤＩ−ＭＳで分析した。各々のスポットの分析は、データベースに保存した。
【実施例２】
【０２０９】
血清からのＨＳＡの精製
ＨＳＡを、分取用ＤＸ−２３６−セファロースカラム（１０ｍｌ、０．３μモル／ｍｌ）を使用して、血液血清から精製した。カラムおよび血清試料の両方を、３ｍＭリン酸ナトリウム、２０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．１％トウィーン−２０、ｐＨ６．２、で交換した。カラムへの非特異的タンパク質結合を最少にするため、結合緩衝液に２０ｍＭ  ＮａＣｌを加えた。１００μｌの分割量（約５ｍｇ  ＨＳＡ）を、前もって透析に使用したものと同一の緩衝液で平衡化したＤＸ−２３６−セファロースカラムへ加えた。２０から４４ｍＭの間の塩濃度勾配を行い、ＨＳＡを１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、で溶出した。精製プロセスの結果が表３に示されている。
【０２１０】
【表３】
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【０２１１】
表６に示されているように、０．１ｍｌ血清注入（総計〜５ｍｇ  ＨＳＡ）でカラムは本質的に全てのＨＳＡを結合し、１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、洗浄で本質的に全ての結合されたＨＳＡを放出した（表６）。
【実施例３】
【０２１２】
ＨＳＡ−結合マトリックス
ＤＸ−２３２、ＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１結合ペプチドをアフィニティークロマトグラフィー展開に使用した。各々のペプチドは、前に概説した方法を使用して、ＮＨＳ−セファロース樹脂上に高密度で固定化した。ペプチドはＣ末端リジンを経て固定化した。定量的アミノ酸分析により決定されたごとく、ＤＸ−３２１−セファロース、ＤＸ−２３６−セファロースおよびＤＸ−２３２−セファロースカラムのリガンド密度は、各々、３．２、０．８および２．４μモル／ｍｌであった。各々のカラムは、結合緩衝液（３ｍＭリン酸ナトリウム、０．１％トウィーン−２０界面活性剤、ｐＨ６．２）中で、ＨＳＡ結合（１ｍｇ注入）を試験した。ペプチドのいくつかは、ｐＨを９．１へ増加させると、ＫDの鋭い増加を示したので、１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、緩衝液を、これらのカラムからＨＳＡを溶出させるために使用することが可能である。
【０２１３】
分析用アフィニティーカラム試験のため、アルブミンを１ｍｇ／ｍｌの濃度で、３ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２、０．１％トウィーン−２０非イオン性界面活性剤（平衡化緩衝液）に溶解した。１ミリリットルのアルブミン溶液を、前もって平衡化緩衝液で平衡化した、各々のカラム（０．３５ｍｌ）を通過させた。カラムを同一の平衡化緩衝液で洗浄し、次ぎに１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、で溶出した（全ての工程に対し、流速、０．５ｍｌ／分）。カラムクロマトグラフィーは、この試験を通じてＢＩＯ−ＲＡＤＢＩＯＬＯＧＩＣTMモニタリングシステム（ヘルキュレス，ＣＡ）を使用して実施し、２８０ｎｍでの吸光度モニタリングを行った。
【０２１４】
分取用ＤＸ−２３６−セファロースアフィニティーカラム（１０ｍｌ）試験のためには、ヒト血清を３ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２、２０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％トウィーン−２０非イオン性界面活性剤（平衡化緩衝液）、に対して透析した。１００マイクロリットル（１００μｌ）の透析血清を、前もって緩衝液で平衡化した分取用ＤＸ−２３６−セファロースクロマトグラフィーカラムへ注入した。カラムを同一の緩衝液、続いて２０から４４ｍＭ  ＮａＣｌの間の濃度勾配で洗浄し、そして最後に１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、でＨＳＡを溶出した。全ての工程に対し、流速は０．５ｍｌ／分であった。
【０２１５】
各々のカラムは、最初のＨＳＡ結合試験において異なって機能した。可溶性ＤＸ−２３２はＨＳＡを最も高い親和性で結合するが、セファロースカラムへ固定化されたＤＸ−２３２は検出可能なＨＳＡを捕捉しなかった。一方、ＤＸ−２３６−セファロースは最良の実行者（ｐｅｒｆｏｒｍｅｒ）であり、全１ｍｇ注入を定量的に結合した（全収容力≧２．７ｍｇ／ｍｌ）（下記表４を参照されたい）。
【０２１６】
【表４】
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【０２１７】
より高いＨＳＡ添加では、同じＤＸ−２３６カラムは、少なくとも４ｍｇのＨＳＡを結合することが可能であり、それは１１ｍｇ／ｍｌより高い全収容力に相当した。ＤＸ−３２１−セファロースは中間の実行者であり、全物質の分画を結合した（全収容力≧１．１ｍｇ／ｍｌ）。トリス溶出緩衝液は、ＤＸ−２３６−およびＤＸ−３２１−セファロースカラムの両方から、全ての結合されたＨＳＡを溶出した。
【実施例４】
【０２１８】
単離されたＨＳＡ結合剤の種特異性
ＨＳＡ以外の他のアルブミンに対するＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１の結合特異性を試験するため、３ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２、中およびＰＢＳ（１０ｍＭリン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）中の両方で、一団の哺乳動物アルブミンに対するその解離定数（ＫD）を決定した。結果は表５に示されている。
【０２１９】
【表５】
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【０２２０】
３ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２緩衝液において、標識ＤＸ−２３６は、マウス血清アルブミン（ＭＳＡ）を除いて、試験された全てのアルブミンに対して高い親和性で結合した。ＰＢＳにおいては、同じ親和性傾向がＤＸ−２３６で現れたが、ただし、全てのＫD値は、低塩、ｐＨ６．２条件よりも高かった。
【０２２１】
標識ＤＸ−３２１は、各々の哺乳動物アルブミンを、低塩、ｐＨ６．２緩衝液中でのＨＳＡと比較してかなり高いＫDで結合した。特に、ＭＳＡは、ＤＸ−３２１をマイクロモル以下のＫDで結合するＨＳＡと比較して、２００μＭより大きなＫDでＤＸ−３２１を結合した。全ての他の非ヒトアルブミンもまた、ＤＸ−３２１へ弱く結合し、ＨＳＡよりも少なくとも１０倍より大きなＫD値を有していた。ＰＢＡにおいては、しかしながら、ＨＳＡおよび他のアルブミン間の、ＤＸ−３２１親和性の相違は、ｐＨ６．２の結果と比較すると、明白さが減少した。陰性対照として、各々のペプチド（ＤＸ−２３６およびＤＸ−３２１）はまた、両方の組の緩衝液中で、ニワトリ卵白アルブミンへの結合も試験し、両方のペプチドとも有意な結合を示さないことが観察された（表５）。ニワトリ卵白アルブミンは、配列アラインメント分析により決定されたように、ＨＳＡと相同的ではない。この分析は、固定化されたＤＸ−２３６は、他の哺乳動物アルブミンを精製するために使用することが可能であることを示している。
【０２２２】
この特質を示すため、同一のＤＸ−２３６−およびＤＸ−３２１−セファロースカラムを、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヤギ血清アルブミン（ＧＳＡ）およびマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）に対して、ｐＨ６．２緩衝液中で試験した。１ｍｇの各々の型のアルブミンを、前もって３ｍＭリン酸塩、ｐＨ６．２、０．０１％トウィーン−２０、で平衡化された、各々のカラム（０．３５ｍｌ）上へ注入した。カラムを平衡化緩衝液で洗浄し、次ぎに、１００ｍＭトリス、ｐＨ９．１、で溶出した。（流速、１ｍｌ／分）。下記表６に示したように、ＤＸ−２３６−セファロースは、ＨＳＡ同様に、３つ全てのアルブミンを定量的に捕捉した。
【０２２３】
【表６】
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【０２２４】
ＤＸ−２３６−セファロースは、血清からの、ほとんどの哺乳動物アルブミンのアフィニティー精製のための、「全アルブミン」結合剤として使用することが可能である。これらの結果は、ＤＸ−２３６はまた、他の分析に先だって、血清試料からアルブミンを枯渇させるためにも使用できることを示している。
【０２２５】
表６のデータはまた、ＤＸ−３２１−セファロースは、表４に示された溶液親和性データに基づいて予想されるように、３つの非ヒトアルブミンを弱くしか捕捉しないことも示している。３つの非ヒトアルブミンの内、ＢＳＡがＤＸ−３２１−セファロース樹脂により最も有効に捕捉された。出発物質中に存在する約１５％のＢＳＡが捕捉され、そして、ＤＸ−２３６−セファロース樹脂では定量的捕捉を与える同一クロマトグラフィー条件下で、続いて溶出された。ヤギ血清アルブミン（ＧＳＡ）およびマウス血清アルブミン（ＭＳＡ）は、ＤＸ−３２１−セファロースカラムでは、ＢＳＡよりもさらに有効性が低下して捕捉された。それ故、ＤＸ−３２１−セファロースカラムは、非ヒト血清アルブミンを含んでいる溶液から、ＨＳＡを精製するために都合よく使用することができる。
【実施例５】
【０２２６】
免疫グロブリン結合ペプチド
下記の免疫グロブリン結合ペプチドの解離定数が決定され、それらは各々、配列番号Ｂ５７、Ｂ５８、Ｂ１０８、Ｂ１１５、Ｂ１２４およびＢ１４３のＦｃ領域結合ペプチドを使用して製造した：
Ａｃ−ＡＧＳＹＷＣＫＩＷＤＶＣＰＱＳＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号３７１、ＤＸ３９２と名付けられた）；
Ａｃ−ＡＧＫＹＷＣＮＬＷＧＶＣＰＡＮＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号３７２、ＤＸ３９５と名付けられた）；
Ａｃ−ＡＧＴＹＷＣＴＦＷＥＬＰＣＤＰＡＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号３７３、ＤＸ４０４と名付けられた）；
Ａｃ−ＡＧＰＨＮＣＤＤＨＹＷＹＣＫＷＦＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号３７４、ＤＸ３８９と名付けられた）；
Ａｃ−ＡＧＡＡＴＣＳＴＳＹＷＹＹＱＷＦＣＴＤＳＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（配列番号７５、ＤＸ３９８と名付けられた）；および
Ａｃ−ＡＧＹＷＹＣＷＦＰＤＲＰＥＣＰＬＹＰＧＰＥＧＧＧＫ−ＮＨ2（Ｓ配列番号３７６、ＤＸ４１３と名付けられた）。
【０２２７】
ペプチドはＢＡＣＨＥＭにより合成され、そしてオレゴングリーン標識し、ＨＰＬＣ精製した。結合研究は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍから得た、ヒト血漿ＩｇＧアイソフォーム：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４、を使用して実施した。
【０２２８】
結合研究は、下記の緩衝液中、塩とまたな塩なしで、ｐＨ４．０、７．５かまたは９．５で実行した：
１）１０ｍＭクエン酸ナトリウム、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ４．０；
２）１０ｍＭクエン酸ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ４．０；
３）１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ７．５；
４）１０ｍＭトリス−ＨＣｌ、５００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ７．５；
５）１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ９．５；
６）１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム、５００ｍＭ塩化ナトリウム、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ９．５；または
７）ＴＢＳ、０．０１％トウィーン２０、ｐＨ７．５。
【０２２９】
結合研究の結果は、表７に示されている。
【０２３０】
【表７】
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【０２３１】
表７に示された結果は、ＤＸ３８９は、中程度の親和性で（ＫＤ≒２μＭ）、塩の存在下または不在下、ｐＨ４．０にてＩｇＧ３を特異的に結合することを示している。この相互作用は、塩の存在下または不在下、ｐＨ７．５かまたは９．５では、観察されなかった。
【０２３２】
ペプチドＤＸ３９２は、高い親和性で（ＫＤ≒０．３−０．６μＭ）、塩の存在下または不在下の両方で、ｐＨ４．０にてＩｇＧ３を特異的に結合した。この相互作用は、塩の存在下、ｐＨ７．５およびｐＨ９．５ではより低く、塩不在下では両方のｐＨで観察されなかった。
【０２３３】
ペプチドＤＸ３９５は、中程度の親和性で（ＫＤ≒１−２μＭ）、塩の存在下または不在下、ｐＨ４．０にてＩｇＧ３を特異的に結合した。親和性は、塩存在下ではほとんど同じであった（ＫＤ≒１．９μＭ）。この相互作用は、塩存在下、ｐＨ９．５では弱くなり、塩不在下、ｐＨ７．５または９．５では、観察されなかった。
【０２３４】
ペプチドＤＸ３９８は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４に対して中程度の親和性で（ＫＤ≒２μＭ）、ＩｇＧ３に対して高い親和性で（ＫＤ≒０．０２μＭ）、塩不在下、ｐＨ４．０にて４つすべてのＩｇＧアイソフォームを結合した。塩存在下でのｐＨ４．０では、ペプチドＤＸ３９８はＩｇＧ３に対する高い親和性を維持していたが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４とは相互作用しなかった。
【０２３５】
ｐＨ７．５にては、ＤＸ３９８は、塩不在下のみで、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４を結合し、そして塩存在下では、ＩｇＧ３のみを結合した。ｐＨ９．５にては、このペプチドはＩｇＧ３のみを結合し、相互作用は、イオン強度を増加させることにより強くなった。
【０２３６】
ペプチドＤＸ４０４は、中程度の親和性で（ＫＤ≒２μＭ）、塩の存在下または不在下、ｐＨ４．０にてＩｇＧ１およびＩｇＧ２を結合し、ＩｇＧ３に対してはより高い親和性（ＫＤ≒．０１μＭ）を有していた。塩存在下では、ＩｇＧ３に対する親和性が０．２μＭへ増加した。ＩｇＧ１およびＩｇＧ２に対する親和性は、塩不在下、ｐＨ７．５で減少し、塩存在下またはｐＨ９．５では観察されなかった。ｐＨ７．５および９．５でのＩｇＧ３結合は、塩存在下で強くなった。
【０２３７】
ペプチドＤＸ４１３は、中程度の親和性で（ＫＤ≒１．０μＭ）、塩の存在下または不在下、ｐＨ４．０にてＩｇＧ３のみに結合した。
表７のデータは、ペプチドが、ｐＨおよび塩−依存性様式で、アイソフォーム特異性を変化させながら、ＩｇＧを結合することを示している。一般に、表７のペプチドは、その特異性および相互作用の様式に基づいて、２つの「クラス」へグループ分けできる：
クラス１はＤＸ３８９、ＤＸ３９２、ＤＸ３９５およびＤＸ４１３を含んでいる。本質的に、これらのペプチドはすべてＩｇＧ３に対して主な特異性を示すようである。加えて、相互作用は低ｐＨおよび高イオン強度が好まれるようである。結合は、高ｐＨおよび低塩で最も弱い。
【０２３８】
クラス２はＤＸ３９８を含んでいる。このペプチドは、イオン強度により変更可能である、アイソフォーム特異性を示している。塩不在下、低ｐＨでは、このペプチドはすべてのＩｇＧアイソフォームを結合するが、しかし塩存在下では、ｐＨ４．０、７．５および９．５にて、非常に強い親和性（ＫＤ≒．０４−０．３μＭ）でＩｇＧ３のみを結合する（表７を参照されたい）。ＤＸ４０４はＤＸ３９８と似ているが、しかしながら、このペプチドはＤＸ３９８と異なり、ｐＨ４．０では塩依存性ＩｇＧ３特異性を示さないが、ｐＨ７．５および９．５では、塩依存性ＩｇＧ３特異性を強く示した。
【０２３９】
他の態様は付随する特許請求の範囲内である。
【図面の簡単な説明】
【０２４０】
【図１】図１はアフィニティー−精製血清アルブミンおよび会合されたタンパク質分画中のタンパク質の、２次元ゲルのイメージである。
【配列表】
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【図１】
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【国際調査報告】
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