(57)【要約】非原核生物微小藻類を用いる、有機化合物のバイオトランスフォーメーションのための方法が開示されている。本方法は、化学前駆体化合物、好ましくはヘテロ環状化合物を、化学的に異なる最終産物へバイオトランスフォームするために有用であり、たとえば薬理学、農業、栄養補助食品、環境保護、有害廃棄物、食品香味料、または食品添加物の適用において有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
前駆体化合物のバイオトランスフォーメーションのための工程であって、
（Ａ）進化的および生態学的に多様である、異なる非原核生物微細藻類のパネルを得ること、
（Ｂ）前記非原核生物微細藻類のパネルの、各メンバーを、前駆体化合物に対する溶媒に曝露すること、および前記溶媒の存在下で増殖する非原核生物微細藻類のサブセットを選択すること、
（Ｃ）得られたサブセットの各原核生物微細藻類を、前駆体化合物に曝露すること、およびその増殖が、前記前駆体化合物の存在下で、阻害されるか、または増大される、非原核生物微細藻類のさらなるサブセットを選択すること、
（Ｄ）前記前駆体化合物の存在下で、得られたさらなる非原核生物微細藻類のサブセットを増殖させ、前記前駆体化合物をトランスフォームして、前記前駆体化合物の代謝物を産出すること、および前記非原核生物微細藻類の細胞バイオマスと培養上清を得ること、
（Ｅ）得られた培養上清から、得られた細胞バイオマスを分離すること、および場合により、得られた分離細胞バイオマスを、前記溶媒で抽出して、前記前駆体化合物の前記代謝物を得ること、および場合により、
（Ｆ）得られた培養上清または得られたバイオマスの溶媒抽出液から、前記代謝物を精製すること、および前記代謝物を解析して、前記前駆体化合物中の前記代謝物の構造および改変を同定すること、
を含む工程。
【請求項２】
前記パネルが、カロフィタ（Ｃｈａｒｏｐｈｙｔａ）、クロロフィタ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）、ダイアトムス（Ｄｉａｔｏｍｓ）、ロードフィタ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）、クリプトフィタ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｔａ）、クロララクニオフォタ（Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｐｈｙｔａ）、ハプトフィタ（Ｈａｐｔｏｐｈｙｔａ）、ユーグレノフィタ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｔａ）およびヘテロコンタ（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択された、非原核生物微細藻類からなる、請求項１に記載の工程。
【請求項３】
前記カロフィタが、ジゲネマトフィセアエ（Ｚｙｇｅｎｅｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、メソスチグマトフィセアエ（Ｍｅｓｏｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、クロロキボフィセアエ（Ｃｈｌｏｒｏｋｙｂｏｐｈｙｃｅａｅ）、コレオカエトフィセアエ（Ｃｏｌｅｏｃｈａｅｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、およびクレブソルミジオフィセアエ（Ｋｌｅｂｓｏｒｍｉｄｉｏｐｈｙｃｅａｅ）からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項４】
前記ジゲネマトフィセアエが、アクチノタエニウム（Ａｃｔｉｎｏｔａｅｎｉｕｍ）、アルスロデスムス（Ａｒｔｈｒｏｄｅｓｍｕｓ）、バンブシナ（Ｂａｍｂｕｓｉｎａ）、クロステリウム（Ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ）、コスマリウム（Ｃｏｓｍａｒｉｕｍ）、コスモクラジウム（Ｃｏｓｍｏｃｌａｄｉｕｍ）、デスミジウム（Ｄｅｓｍｉｄｉｕｍ）、ユーアストラム（Ｅｕａｓｔｒｕｍ）、ゲニクラリア（Ｇｅｎｉｃｕｌａｒｉａ）、ゴナトザイゴン（Ｇｏｎａｔｏｚｙｇｏｎ）、ヘイマンシア（Ｈｅｉｍａｎｓｉａ）、ヒアロセカ（Ｈｙａｌｏｔｈｅｃａ）、メソタエニウム（Ｍｅｓｏｔａｅｎｉｕｍ）、ミクラステリアス（Ｍｉｃｒａｓｔｅｒｉａｓ）、モウゲオチア（Ｍｏｕｇｅｏｔｉａ）、ネトリウム（Ｎｅｔｒｉｕｍ）、オニコネマ（Ｏｎｙｃｈｏｎｅｍａ）、ペニウム（Ｐｅｎｉｕｍ）、フィマトドシス（Ｐｈｙｍａｔｏｄｏｃｉｓ）、プレウロタエニウム（Ｐｌｅｕｒｏｔａｅｎｉｕｍ）、ローヤ（Ｒｏｙａ）、スファエロゾスマ（Ｓｐｈａｅｒｏｚｏｓｍａ）、スピロギラ（Ｓｐｉｒｏｇｙｒａ）、スポンジロシウム（Ｓｐｏｎｄｙｌｏｓｉｕｍ）、スタウラストラム（Ｓｔａｕｒａｓｔｒｕｍ）、スタウロデスムス（Ｓｔａｕｒｏｄｅｓｍｕｓ）、テイリンギア（Ｔｅｉｌｉｎｇｉａ）、トリプロセラス（Ｔｒｉｐｌｏｃｅｒａｓ）、キサンチジウム（Ｘａｎｔｈｉｄｉｕｍ）、ザイグネマ（Ｚｙｇｎｅｍａ）およびザイゴゴニウム（Ｚｙｇｏｇｏｎｉｕｍ）からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択される、請求項３に記載の工程。
【請求項５】
前記メソスチグマトフィセアエが、カエトスファエリジウム（Ｃｈａｅｔｏｓｐｈａｅｒｉｄｉｕｍ）およびメソトスチグマ（Ｍｅｓｏｔｓｔｉｇｍａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーから選択される、請求項３に記載の工程。
【請求項６】
前記クロロキボフィセアエが、クロロキブス（Ｃｈｌｏｒｏｋｙｂｕｓ）である、請求項３に記載の工程。
【請求項７】
前記コレオカエトフィセアエが、コレオカエーテ（Ｃｏｌｅｏｃｈａｅｔｅ）である、請求項３に記載の工程。
【請求項８】
前記クレブソルミジオフィセアエが、クレブソルミジウム（Ｋｌｅｂｓｏｒｍｉｄｉｕｍ）である、請求項３に記載の工程。
【請求項９】
前記クロロフィタが、クロロフィセアエ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、ウルボフィセアエ（Ｕｌｖｏｐｈｙｃｅａｅ）、トレボウキシオフィセアエ（Ｔｒｅｂｏｕｘｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、プラシニオフィセアエ（Ｐｒａｓｉｎｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、およびカロフィセアンズ（Ｃｈａｒｏｐｈｙｃｅａｎｓ）からなる群の、少なくとも１つのメンバーから選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項１０】
前記クロロフィセアエが、アセタブラリア（Ａｃｅｔａｂｕｌａｒｉａ）、アシキュラリア（Ａｃｉｃｕｌａｒｉａ）、アクチノクロリス（Ａｃｔｉｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アンフィクリコス（Ａｍｐｈｉｋｒｉｋｏｓ）、アナドヨメン（Ａｎａｄｙｏｍｅｎｅ）、アンキストロデスムス（Ａｎｋｉｓｔｒｏｄｅｓｍｕｓ）、アンキラ（Ａｎｋｙｒａ）、アファノカエーテ（Ａｐｈａｎｏｃｈａｅｔｅ）、アスコクロリス（Ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アステロコッカス（Ａｓｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、アステロモナス（Ａｓｔｅｒｏｍｏｎａｓ）、アストレホメネ（Ａｓｔｒｅｐｈｏｍｅｎｅ）、アトラクトモルファ（Ａｔｒａｃｔｏｍｏｒｐｈａ）、アキシロコッカス（Ａｘｉｌｏｃｏｃｃｕｓ）、アキシロスファエラ（Ａｘｉｌｏｓｐｈａｅｒａ）、バシクラミス（Ｂａｓｉｃｈｌａｍｙｓ）、バシクラジア（Ｂａｓｉｃｌａｄｉａ）、ビヌクレアリア（Ｂｉｎｕｃｌｅａｒｉａ）、ビペジノモナス（Ｂｉｐｅｄｉｎｏｍｏｎａｓ）、ブラストフィサ（Ｂｌａｓｔｏｐｈｙｓａ）、ボエルゲセニア（Ｂｏｅｒｇｅｓｅｎｉａ）、ボードレア（Ｂｏｏｄｌｅａ）、ボロジネラ（Ｂｏｒｏｄｉｎｅｌｌａ）、ボロジネロプシス（Ｂｏｒｏｄｉｎｅｌｌｏｐｓｉｓ）、ボトリオコッカス（Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ）、ブラチオモナス（Ｂｒａｃｈｉｏｍｏｎａｓ）、ブラクテアコッカス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ）、ブルボカエーテ（Ｂｕｌｂｏｃｈａｅｔｅ）、カエスピテラ（Ｃａｅｓｐｉｔｅｌｌａ）、カプソシホン（Ｃａｐｓｏｓｉｐｈｏｎ）、カルテリア（Ｃａｒｔｅｒｉａ）、セントロスファエラ（Ｃｅｎｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、カエトモルファ（Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａ）、カエトネマ（Ｃｈａｅｔｏｎｅｍａ）、カエトペルティス（Ｃｈａｅｔｏｐｅｌｔｉｓ）、カエトフォラ（Ｃｈａｅｔｏｐｈｏｒａ）、カルマシア（Ｃｈａｌｍａｓｉａ）、カマエトリコン（Ｃｈａｍａｅｔｒｉｃｈｏｎ）、カラシオクロリス（Ｃｈａｅｃｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、カラシオシフォン（Ｃｈａｒａｃｉｏｓｉｐｈｏｎ）、カラシウム（Ｃｈａｒａｃｉｕｍ）、クラミデラ（Ｃｈｌａｍｙｄｅｌｌａ）、クラミドボトリス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｂｏｔｒｙｓ）、クラミドカプサ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｃａｐｓａ）、クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）、クラミドポディウム（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｏｄｉｕｍ）、クロラノマラ（Ｃｈｌｏｒａｎｏｍａｌａ）、クロラシドリジオン（Ｃｈｌｏｒａｃｈｙｄｒｉｄｉｏｎ）、クロロキトリウム（Ｃｈｌｏｒｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、クロロクラダス（Ｃｈｌｏｒｏｃｌａｄｕｓ）、クロロクロステル（Ｃｈｌｏｒｏｃｌｏｓｔｅｒ）、クロロコッコプシス（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｏｐｓｉｓ）、クロロコッカム（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、クロロゴニウム（Ｃｈｌｏｒｏｇｏｎｉｕｍ）、クロロモナス（Ｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ）、クロロフィサリス（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｓａｌｉｓ）、クロロサルシナ（Ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃｉｎａ）、クロロサルシノプシス（Ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃｉｎｏｐｓｉｓ）、クロロスファエラ（Ｃｈｌｏｒｏｓｐｈａｅｒａ）、クロロスファエロプシス（Ｃｈｌｏｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ）、クロロテトラエドロン（Ｃｈｌｏｒｏｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、クロロセシウム（Ｃｈｌｏｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）、コダテラ（Ｃｈｏｄａｔｅｌｌａ）、コリシスティス（Ｃｈｏｒｉｃｙｓｔｉｓ）、クラドホラ（Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａ）、クラドホロプシス（Ｃｌａｄｏｐｈｏｒｏｐｓｉｓ），クロニオホラ（Ｃｌｏｎｉｏｐｈｏｒａ）、クロステリオプシス（Ｃｌｏｓｔｅｒｉｏｐｓｉｓ）、コッコボトリス（Ｃｏｃｏｂｏｔｒｙｓ）、コエラステレラ（Ｃｏｅｌａｓｔｒｅｌｌａ）、コエラステロプシス（Ｃｏｅｌａｓｔｒｏｐｓｉｓ）、コエラストラム（Ｃｏｅｌａｓｔｒｕｍ）、コエノクロリス（Ｃｏｅｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、コレオクラミス（Ｃｏｌｅｏｃｈｌａｍｙｓ）、コロナストラム（Ｃｏｒｏｎａｓｔｒｕｍ）、クルシゲニア（Ｃｒｕｃｉｇｅｎｉａ）、クルシゲニエラ（Ｃｒｕｃｉｇｅｎｉｅｌｌａ）、セテノクラダス（Ｃｔｅｎｏｃｌａｄｕｓ）、シリンドロカプサ（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｐｓａ）、シリンドロカプソプシス（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｐｓｏｐｓｉｓ）、シリンドロシスティス（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｙｓｔｉｓ）、シモポリア（Ｃｙｍｏｐｏｌｉａ）、シストコッカス（Ｃｙｓｔｏｃｏｃｃｕｓ）、シストモナス（Ｃｙｓｔｏｍｏｎａｓ）、ダクチロコッカス（Ｄａｃｔｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ダシクラダス（Ｄａｓｙｃｌａｄｕｓ）、デアソニア（Ｄｅａｓｏｎｉａ）、デルベシア（Ｄｅｒｂｅｓｉａ）、デスマトラクタム（Ｄｅｓｍａｔｒａｃｔｕｍ）、デスモデスムス（Ｄｅｓｍｏｄｅｓｍｕｓ）、デスモテトラ（Ｄｅｓｍｏｔｅｔｒａ）、ディアカントス（Ｄｉａｃｎｔｈｏｓ）、ディセルラ（Ｄｉｃｅｌｌｕｌａ）、ディクロスタ（Ｄｉｃｌｏｓｔｅｒ）、ディクラノカエテ（Ｄｉｃｒａｎｏｃｈａｅｔｅ）、ディクチオクロリス（Ｄｉｃｔｙｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ディクチオコッカス（Ｄｉｃｔｙｏｃｏｃｃｕｓ）、ディクチオスファエリア（Ｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉａ）、ディクチオスファエリウム（Ｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉｕｍ）、ジダイモシスティス（Ｄｉｄｙｍｏｃｙｓｔｉｓ）、ジダイモジーンズ（Ｄｉｄｙｍｏｇｅｎｅｓ）、ジラビフィルム（Ｄｉｌａｂｉｆｉｌｕｍ）、ジモルホコッカス（Ｄｉｍｏｒｐｈｏｃｏｃｃｕｓ）、ジプロスファエラ（Ｄｉｐｌｏｓｐｈａｅｒａ）、ドラパルンルディア（Ｄｒａｐａｒｎａｌｄｉａ）、ダナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）、ダイスモルホコッカス（Ｄｙｓｍｏｒｐｈｏｃｏｃｃｕｓ）、エチノコレウム（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｌｅｕｍ）、エラカトスリックス（Ｅｌａｋａｔｏｔｈｒｉｘ）、エナラックス（Ｅｎａｌｌａｘ）、エントクラジア（Ｅｎｔｏｃｌａｄｉａ）、エントランシア（Ｅｎｔｒａｎｓｉａ）、エレモスファエラ（Ｅｒｅｍｏｓｐｈａｅｒａ）、エッチリア（Ｅｔｔｌｉａ）、ユードリナ（Ｅｕｄｏｒｉｎａ）、ファソシクロクロリス（Ｆａｓｃｉｃｕｌｏｃｈｌｏｒｉｓ）、フェルナンジネラ（Ｆｅｒｎａｎｄｉｎｅｌｌａ）、ホリクラリア（Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｉａ）、ホッテア（Ｆｏｔｔｅａ）、フランセイア（Ｆｒａｎｃｅｉａ）、フリエドマニア（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎｉａ）、フリチェラ（Ｆｒｉｔｓｃｈｉｅｌｌａ）、フソーラ（Ｆｕｓｏｌａ）、ゲミネラ（Ｇｅｍｉｎｅｌｌａ）、グロエオコッカス（Ｇｌｏｅｏｃｏｃｃｕｓ）、グロエオシスティス（Ｇｌｏｅｏｃｙｓｔｉｓ）、グロエオデンドロン（Ｇｌｏｅｏｄｅｎｄｒｏｎ）、グロエオモナス（Ｇｌｏｅｏｍｏｎａｓ）、グロエオチラ（Ｇｌｏｅｏｔｉｌａ）、ゴレンキニア（Ｇｏｌｅｎｋｉｎｉａ）、ゴングロシラ（Ｇｏｎｇｒｏｓｉｒａ）、ゴニウム（Ｇｏｎｉｕｍ）、グラエシエラ（Ｇｒａｅｓｉｅｌｌａ）、グラニュロシスティス（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｓｔｉｓ）、ギオルフィアナ（Ｇｙｏｒｆｆｉａｎａ）、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ハゼニア（Ｈａｚｅｎｉａ）、ヘリコジクティオン（Ｈｅｌｉｃｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ヘミクロリス（Ｈｅｍｉｃｈｌｏｒｉｓ）、ヘテロクラミドモナス（Ｈｅｔｅｒｏｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）、ヘテロマスティックス（Ｈｅｔｅｒｏｍａｓｔｉｘ）、ヘテロテトラシスティス（Ｈｅｔｅｒｏｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、ホルミジオスポラ（Ｈｏｒｍｉｄｉｏｓｐｏｒａ）、ホルミジウム（Ｈｏｒｍｉｄｉｕｍ）、ホルモチラ（Ｈｏｒｍｏｔｉｌａ）、ホルモチロプシス（Ｈｏｒｍｏｔｉｌｏｐｓｉｓ）、ヒアロコッカス（Ｈｙａｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ヒアロジスカス（Ｈｙａｌｏｄｉｓｃｕｓ）、ヒアロゴニウム（Ｈｙａｌｏｇｏｎｉｕｍ）、ヒアロラフィジウム（Ｈｙａｌｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ）、ヒドロジクチオン（Ｈｙｄｒｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ヒプノモナス（Ｈｙｐｎｏｍｏｎａｓ）、イグナチウス（Ｉｇｎａｔｉｕｓ）、インターフィルム（Ｉｎｔｅｒｆｉｌｕｍ）、ケントロスファエラ（Ｋｅｎｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、ケラトコッカス（Ｋｅｒａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ケルマチア（Ｋｅｒｍａｔｉａ）、キルキネリエラ（Ｋｉｒｃｈｎｅｒｉｅｌｌａ）、コリエラ（Ｋｏｌｉｅｌｌａ）、ラゲルヘイミア（Ｌａｇｅｒｈｅｉｍｉａ）、ラウトスファエリア（Ｌａｕｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）、レプトシロプシス（Ｌｅｐｔｏｓｉｒｏｐｓｉｓ）、ロボシスティス（Ｌｏｂｏｃｙｓｔｉｓ）、ロボモナス（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ）、ローラ（Ｌｏｌａ）、マクロクロリス（Ｍａｃｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、マルバニア（Ｍａｒｖａｎｉａ）、ミクラクチニウム（Ｍｉｃｒａｃｔｉｎｉｕｍ）、ミクロジクチオン（Ｍｉｃｒｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ミクロスポラ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）、モノラフィジウム（Ｍｏｎｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ）、ムリエラ（Ｍｕｒｉｅｌｌａ）、ミコナステス（Ｍｙｃｈｏｎａｓｔｅｓ）、ナノコロラム（Ｎａｎｏｃｈｌｏｒｕｍ）、ノートコッカス（Ｎａｕｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ネグレクテラ（Ｎｅｇｌｅｃｔｅｌｌａ）、ネオクロリス（Ｎｅｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ネオデスムス（Ｎｅｏｄｅｓｍｕｓ）、ネオメリス（Ｎｅｏｍｅｒｉｓ）、ネオスポンギオコッカム（Ｎｅｏｓｐｏｎｇｉｏｃｏｃｃｕｍ）、ネフロクラミス（Ｎｅｐｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ）、ネフロシチウム（Ｎｅｐｈｒｏｃｙｔｉｕｍ）、ネフロジエラ（Ｎｅｐｈｒｏｄｉｅｌｌａ）、オエドクラジウム（Ｏｅｄｏｃｌａｄｉｕｍ）、オエドゴニウム（Ｏｅｄｏｇｏｎｉｕｍ）、ウーシステラ（Ｏｏｃｙｓｔｅｌｌａ）、ウーシスティス（Ｏｏｃｙｓｔｉｓ）、オーネフリス（Ｏｏｎｅｐｈｒｉｓ）、オウロコッカス（Ｏｕｒｏｃｏｃｃｕｓ）、パチクラデラ（Ｐａｃｈｙｃｌａｄｅｌｌａ）、パルメラ（Ｐａｌｍｅｌｌａ）、パルメロコッカス（Ｐａｌｍｅｌｌｏｃｏｃｃｕｓ）、パルメロプシス（Ｐａｌｍｅｌｌｏｐｓｉｓ）、パルモジクチオン（Ｐａｌｍｏｄｉｃｔｙｏｎ）、パンドリナ（Ｐａｎｄｏｒｉｎａ）、パラドキシア（Ｐａｒａｄｏｘｉａ）、パリエトクロリス（Ｐａｒｉｅｔｏｃｈｌｏｒｉｓ）、パシェリナ（Ｐａｓｃｈｅｒｉｎａ）、パウルスクルジア（Ｐａｕｌｓｃｈｕｌｚｉａ）、ペクトジクチオン（Ｐｅｃｔｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ペジアストラム（Ｐｅｄｉａｓｔｒｕｍ）、ペジノモナス（Ｐｅｄｉｎｏｍｏｎａｓ）、ペジノペラ（Ｐｅｄｉｎｏｐｅｒａ）、パークルサリア（Ｐｅｒｃｕｒｓａｒｉａ）、ファコトゥス（Ｐｈａｃｏｔｕｓ）、ファエオフィラ（Ｐｈａｅｏｐｈｉｌａ）、フィソラチウム（Ｐｈｙｓｏｃｙｔｉｕｍ）、ピリナ（Ｐｉｌｉｎａ）、プランクトネマ（Ｐｌａｎｃｔｏｎｅｍａ）、プランクトスファエリア（Ｐｌａｎｋｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）、プラチドリナ（Ｐｌａｔｙｄｏｒｉｎａ）、プラチモナス（Ｐｌａｔｙｍｏｎａｓ）、プレオドリナ（Ｐｌｅｏｄｏｒｉｎａ）、プレウラストラム（Ｐｌｅｕｒａｓｔｒｕｍ）、プレウロコッカス（Ｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｓ）、プロエオチラ（Ｐｌｏｅｏｔｉｌａ）、ポリエドリオプシス（Ｐｏｌｙｅｄｒｉｏｐｓｉｓ）、ポリフィサ（Ｐｏｌｙｐｈｙｓａ）、ポリトーマ（Ｐｏｌｙｔｏｍａ）、ポリトメラ（Ｐｏｌｙｔｏｍｅｌｌａ）、プラシノクラダス（Ｐｒａｓｉｎｏｃｌａｄｕｓ）、プラシノコッカス（Ｐｒａｓｉｎｏｃｏｃｃｕｓ）、プロトデルマ（Ｐｒｏｔｏｄｅｒｍａ）、プロトシフォン（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈｏｎ）、シューデンドクロニオプシス（Ｐｓｅｕｄｅｎｄｏｃｌｏｎｉｏｐｓｉｓ）、シュードカラシウム（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｒａｃｉｕｍ）、シュードクロレラ（Ｐｓｅｕｄｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、シュードクロロコッカム（Ｐｓｅｕｄｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、シュードコッコミキサ（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｏｍｙｘａ）、シュードジクチオスファエリウム（Ｐｓｅｕｄｏｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉｕｍ）、シュードジジモシスティス（Ｐｓｅｕｄｏｄｉｄｙｍｏｃｙｓｔｉｓ）、シュードキルクネリエラ（Ｐｓｅｕｄｏｋｉｒｃｈｎｅｒｉｅｌｌａ）、シュードプレウロコッカス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードスキゾメリス（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｈｉｚｏｍｅｒｉｓ）、シュードスクロエデリア（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｈ
ｒｏｅｄｅｒｉａ）、シュードスチココッカス（Ｐｓｅｕｄｏｓｔｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードテトラシスティス（Ｐｓｅｕｄｏｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、シュードテトラエドロン（Ｐｓｅｕｄｏｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、シュードテレボウキシア（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｅｂｏｕｘｉａ）、プテロモナス（Ｐｔｅｒｏｍｏｎａｓ）、プルクラスファエラ（Ｐｕｌｃｈｒａｓｐｈａｅｒａ）、ピラミモナス（Ｐｙｒａｍｉｍｏｎａｓ）、ピロボトリス（Ｐｙｒｏｂｏｔｒｙｓ）、クアドリグラ（Ｑｕａｄｒｉｇｕｌａ）、ラジオフィルム（Ｒａｄｉｏｆｉｌｕｍ）、ラジオスファエラ（Ｒａｄｉｏｓｐｈａｅｒａ）、ラフィドセリス（Ｒａｐｈｉｄｏｃｅｌｉｓ）、ラフィドネマ（Ｒａｐｈｉｄｏｎｅｍａ）、ラフィドネモプシス（Ｒａｐｈｉｄｏｎｅｍｏｐｓｉｓ）、リゾクロニウム（Ｒｈｉｚｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ローパロソレン（Ｒｈｏｐａｌｏｓｏｌｅｎ）、サプロカエテ（Ｓａｐｒｏｃｈａｅｔｅ）、シーンデスムス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ）、スキゾクラミス（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｌａｍｙｓ）、スキゾメリス（Ｓｃｈｉｚｏｍｅｒｉｓ）、スロエデリア（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒｉａ）、スロエデリエラ（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒｉｅｌｌａ）、スコチエロプシス（Ｓｃｏｔｉｅｌｌｏｐｓｉｓ）、シデロシストプシス（Ｓｉｄｅｒｏｃｙｓｔｏｐｓｉｓ）、シフォノクラダス（Ｓｉｐｈｏｎｏｃｌａｄｕｓ）、シロゴニウム（Ｓｉｒｏｇｏｎｉｕｍ）、ソラストラム（Ｓｏｒａｓｔｒｕｍ）、スペルマトゾプシス（Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏｐｓｉｓ）、スファエレラ（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌａ）、スファエレロシスティス（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌｏｃｙｓｔｉｓ）、スファエレロプシス（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌｏｐｓｉｓ）、スファエロシスティス（Ｓｐｈａｅｒｏｃｙｓｔｉｓ）、スファエロプレア（Ｓｐｈａｅｒｏｐｌｅａ）、スピロタエニア（Ｓｐｉｒｏｔａｅｎｉａ）、スポンギオクロリス（Ｓｐｏｎｇｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、スポンギオコッカム（Ｓｐｏｎｇｉｏｃｏｃｃｕｍ）、ステファノプテラ（Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｔｅｒａ）、ステファノスファエラ（Ｓｔｅｐｈａｎｏｓｐｈａｅｒａ）、スチゲオクロニウム（Ｓｔｉｇｅｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ストルベア（Ｓｔｒｕｖｅａ）、テトメモルス（Ｔｅｔｍｅｍｏｒｕｓ）、テトラバエナ（Ｔｅｔｒａｂａｅｎａ）、テトラシスティス（Ｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、テトラデスムス（Ｔｅｔｒａｄｅｓｍｕｓ）、テトラエドロン（Ｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、テトララントス（Ｔｅｔｒａｌｌａｎｔｏｓ）、テトラセルミス（Ｔｅｔｏｒａｓｅｌｍｉｓ）、テトラスポラ（Ｔｅｔｒａｓｐｏｒａ）、テトラストラム（Ｔｅｔｒａｓｔｒｕｍ）、トレウバリア（Ｔｒｅｕｂａｒｉａ）、トリプロセロス（Ｔｒｉｐｌｏｃｅｒｏｓ）、トロキスシア（Ｔｒｏｃｈｉｓｃｉａ）、トロキスシオプシス（Ｔｒｏｃｈｉｓｃｉｏｐｓｉｓ）、ウルバ（Ｕｌｖａ）、ウロネマ（Ｕｒｏｎｅｍａ）、バロニア（Ｖａｌｏｎｉａ）、バロニオプシス（Ｖａｌｏｎｉｏｐｓｉｓ）、ベントリカリア（Ｖｅｎｔｒｉｃａｒｉａ）、ビリジエラ（Ｖｉｒｉｄｉｅｌｌａ）、ビトレオクラミス（Ｖｉｔｒｅｏｃｈｌａｍｙｓ）、ボルボックス（Ｖｏｌｖｏｘ）、ボルブリナ（Ｖｏｌｖｕｌｉｎａ）、ウエステラ（Ｗｅｓｔｅｌｌａ）、ウィレア（Ｗｉｌｌｅａ）、ウイスロウキエラ（Ｗｉｓｌｏｕｃｈｉｅｌｌａ）、ズークロレラ（Ｚｏｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、ザイグネモプシス（Ｚｙｇｎｅｍｏｐｓｉｓ）、ヒアロセカ（Ｈｙａｌｏｔｈｅｃａ）、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、シュードプレウロコッカム（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｍ）およびローパロシスティス（Ｒｈｏｐａｌｏｃｙｓｔｉｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項９に記載の工程。
【請求項１１】
前記ウルボフィセアエが、アクロカエテ（Ａｃｒｏｃｈａｅｔｅ）、ブリオプシス（Ｂｒｙｏｐｓｉｓ）、セファレウロス（Ｃｅｐｈａｌｅｕｒｏｓ）、クロロシスティス（Ｃｈｌｏｒｏｃｙｓｔｉｓ）、エンテロモルファ（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ）、グロエオチロプシス（Ｇｌｏｅｏｔｉｌｏｐｓｉｓ）、ハロクロロコッカム（Ｈａｌｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、オストレオビウム（Ｏｓｔｒｅｏｂｉｕｍ）、ピルラ（Ｐｉｒｕｌａ）、ピソホラ（Ｐｉｔｈｏｐｈｏｒａ）、プラノフィラ（Ｐｌａｎｏｐｈｉｌａ）、シューデンドクロニウム（Ｐｓｅｕｄｅｎｄｏｃｌｏｎｉｕｍ）、トレンテポホリア（Ｔｒｅｎｔｅｐｏｈｌｉａ）、トリコサルシナ（Ｔｒｉｃｈｏｓａｒｃｉｎａ）、ウロスリックス（Ｕｌｏｔｈｒｉｘ）、ボルボコレオン（Ｂｏｌｂｏｃｏｌｅｏｎ）、カエトシフォン（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ）、ユーゴモンチア（Ｅｕｇｏｍｏｎｔｉａ）、オルトマンシエロプシス（Ｏｌｔｍａｎｎｓｉｅｌｌｏｐｓｉｓ）、プリングシエミエラ（Ｐｒｉｎｇｓｈｅｉｍｉｅｌｌａ）、シュードデンドロクロニウム（Ｐｓｅｕｄｏｄｅｎｄｒｏｃｌｏｎｉｕｍ）、シューデュルベラ（Ｐｓｅｕｄｕｌｖｅｌｌａ）、スポロクラドプシス（Ｓｐｏｒｏｃｌａｄｏｐｓｉｓ）、ウロスポラ（Ｕｒｏｓｐｏｒａ）、およびウィットロキエラ（Ｗｉｔｔｒｏｃｋｉｅｌｌａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項９に記載の工程。
【請求項１２】
前記トレボウキシオフィセアエが、アパトコッカス（Ａｐａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、アステロクロリス（Ａｓｔｅｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アウキセノクロレラ（Ａｕｘｅｎｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、コッコミキシア（Ｃｏｃｃｏｍｙｘａ）、デスモコッカス（Ｄｅｓｍｏｃｏｃｃｕｓ）、ジクチオクロロプシス（Ｄｉｃｔｙｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）、エリプトクロリス（Ｅｌｌｉｐｔｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ジャーギエラ（Ｊａａｇｉｅｌｌａ）、レプトシラ（Ｌｅｐｔｏｓｉｒａ）、ロボコッカス（Ｌｏｂｏｃｏｃｃｕｓ）、マキノエラ（Ｍａｋｉｎｏｅｌｌａ）、ミクロサムニオン（Ｍｉｃｒｏｔｈａｍｎｉｏｎ）、ミルメシア（Ｍｙｒｍｅｃｉａ）、ナノクロリス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、オーシスティス（Ｏｏｃｙｓｔｉｓ）、プラシオラ（Ｐｒａｓｉｏｌａ）、プラシオロプシス（Ｐｒａｓｉｏｌｏｐｓｉｓ）、プロトセカ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ）、スチチオコッカス（Ｓｔｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、テトラクロレラ（Ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、トレボウキシア（Ｔｒｅｂｏｕｘｉａ）、トリコフィルス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｉｌｕｓ）、ワタナベア（Ｗａｔａｎａｂｅａ）およびミルメシア（Ｍｙｒｍｅｃｉａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項９に記載の工程。
【請求項１３】
前記プラシニオフィセアエが、バチコッカス（Ｂａｔｈｙｃｏｃｃｕｓ）、マントニエラ（Ｍａｎｔｏｎｉｅｌｌａ）、ミクロモナス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎａｓ）、ネフロセルミス（Ｎｅｐｈｒｏｓｅｌｍｉｓ）、シュードスコウルフィエルディア（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｏｕｒｆｉｅｌｄｉａ）、シェルフェリア（Ｓｃｈｅｒｆｆｅｌｉａ）、ピコシスティス（Ｐｉｃｏｃｙｓｔｉｓ）、ペトロスペルマ（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍａ）およびフィシノコッカス（Ｐｙｃｎｏｃｏｃｃｕｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項９に記載の工程。
【請求項１４】
前記カロフィセアンズが、ザイゴゴニウム（Ｚｙｇｏｇｏｎｉｕｍ）である、請求項９に記載の工程。
【請求項１５】
前記ダイアトムスが、ボリドフィセアエ（Ｂｏｌｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、コスシノジスコフィセアエ（Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｏｐｈｙｃｅａｅ）、ジノフィセアエ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）およびアルベオラテス（Ａｌｖｅｏｌａｔｅｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項１６】
前記ボリドフィセアエが、ボリドモナス（Ｂｏｌｉｄｏｍｏｎａｓ）、クリソフィセアエ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｃｅａｅ）、ギラウジオプシス（Ｇｉｒａｕｄｙｏｐｓｉｓ）、グロッソマスティックス（Ｇｌｏｓｓｏｍａｓｔｉｘ）、クロモフィトン（Ｃｈｒｏｍｏｐｈｙｔｏｎ）、クリサモエバ（Ｃｈｒｙｓａｍｏｅｂａ）、クリソカエテ（Ｃｈｒｙｓｏｃｈａｅｔｅ）、クリソジジムス（Ｃｈｒｙｓｏｄｉｄｙｍｕｓ）、クリソルエピドモナス（Ｃｈｒｙｓｏｌｅｐｉｄｏｍｏｎａｓ）、クリソサッカス（Ｃｈｒｙｓｏｓａｃｃｕｓ）、クリソスファエラ（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｈａｅｒａ）、クリソキシス（Ｃｈｒｙｓｏｘｙｓ）、シクロネキシス（Ｃｙｃｌｏｎｅｘｉｓ）、ジノブリオン（Ｄｉｎｏｂｒｙｏｎ）、エピクリシス（Ｅｐｉｃｈｒｙｓｉｓ）、エピピキシス（Ｅｐｉｐｙｘｉｓ）、ヒベルディア（Ｈｉｂｂｅｒｄｉａ）、ラギニオン（Ｌａｇｙｎｉｏｎ）、レポクロムリナ（Ｌｅｐｏｃｈｒｏｍｕｌｉｎａ）、モナス（Ｍｏｎａｓ）、モノクリシス（Ｍｏｎｏｃｈｒｙｓｉｓ）、パラフィソモナス（Ｐａｒａｐｈｙｓｏｍｏｎａｓ）、ファエオプラカ（Ｐｈａｅｏｐｌａｃａ）、ファエオスキゾクラミス（Ｐｈａｅｏｓｃｈｉｚｏｃｈｌａｍｙｓ）、ピコファガス（Ｐｉｃｏｐｈａｇｕｓ）、プレウロクリシス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ）、スティコグロエア（Ｓｔｉｃｈｏｇｌｏｅａ）およびウログレナ（Ｕｒｏｇｌｅｎａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項１５に記載の工程。
【請求項１７】
前記コスシノジスコフィセアエが、バクテリアストラム（Ｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒｕｍ）、ベレロケア（Ｂｅｌｌｅｒｏｃｈｅａ）、ビドルフィア（Ｂｉｄｄｕｌｐｈｉａ）、ブロックマニエラ（Ｂｒｏｃｋｍａｎｎｉｅｌｌａ）、コレスロン（Ｃｏｒｅｔｈｒｏｎ）、コスチノジスカス（Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｕｓ）、エウカンピア（Ｅｕｃａｍｐｉａ）、エキシチューボセルルス（Ｅｘｔｕｂｏｃｅｌｌｕｌｕｓ）、グイナルジア（Ｇｕｉｎａｒｄｉａ）、ヘリコセカ（Ｈｅｌｉｃｏｔｈｅｃａ）、レプトシリンドラス（Ｌｅｐｔｏｃｙｌｉｎｄｒｕｓ）、レイアネラ（Ｌｅｙａｎｅｌｌａ）、リソデスミウム（Ｌｉｔｈｏｄｅｓｍｉｕｍ）、メロシラ（Ｍｅｌｏｓｉｒａ）、ミニジスカス（Ｍｉｎｉｄｉｓｃｕｓ）、オドンテラ（Ｏｄｏｎｔｅｌｌａ）、プランクトニエラ（Ｐｌａｎｋｔｏｎｉｅｌｌａ）、ポロシラ（Ｐｏｒｏｓｉｒａ）、プロボスシア（Ｐｒｏｂｏｓｃｉａ）、リゾソレニア（Ｒｈｉｚｏｓｏｌｅｎｉａ）、ステラリマ（Ｓｔｅｌｌａｒｉｍａ）、サラシオネマ（Ｔｈａｌａｓｓｉｏｎｅｍａ）、ビコソエシド（Ｂｉｃｏｓｏｅｃｉｄ）、シムビオモナス（Ｓｙｍｂｉｏｍｏｎａｓ）、アクチノシクラス（Ａｃｔｉｎｏｃｙｃｌｕｓ）、アンホーラ（Ａｍｐｈｏｒａ）、アルコセルルス（Ａｒｃｏｃｅｌｌｕｌｕｓ）、デトヌラ（Ｄｅｔｏｎｕｌａ）、ディアトーマ（Ｄｉａｔｏｍａ）、ジチルム（Ｄｉｔｙｌｕｍ）、フラギルアリオフィセアエ（Ｆｒａｇｉｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｓｅ）、アステリオネロプシス（Ａｓｔｅｒｉｏｎｅｌｌｏｐｓｉｓ）、デルフィネイス（Ｄｅｌｐｈｉｎｅｉｓ）、グラマトホラ（Ｇｒａｍｍａｔｏｐｈｏｒａ）、ナノフルスタラム（Ｎａｎｏｆｒｕｓｔｕｌｕｍ）、シネドラ（Ｓｙｎｅｄｒａ）およびタブラリア（Ｔａｂｕｌａｒｉａ）からなる群より選択される、請求項１５に記載の工程。
【請求項１８】
前記ジノフィセアエが、アデノイデス（Ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、アレキサンドリウム（Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ）、アンフィジニウム（Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ）、セラチウム（Ｃｅｒａｔｉｕｍ）、セラトコリス（Ｃｅｒａｔｏｃｏｒｙｓ）、クーリア（Ｃｏｏｌｉａ）、クリプセコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）、エキシウビアエラ（Ｅｘｕｖｉａｅｌｌａ）、ガンビエルジスカス（Ｇａｍｂｉｅｒｄｉｓｃｕｓ）、ゴニアウラックス（Ｇｏｎｙａｕｌａｘ）、ギムノジニウム（Ｇｙｍｎｏｄｉｎｉｕｍ）、ギロジニウム（Ｇｙｒｏｄｉｎｉｕｍ）、ヘテロカプサ（Ｈｅｔｅｒｏｃａｐｓａ）、カトジニウム（Ｋａｔｏｄｉｎｉｕｍ）、リングロジニウム（Ｌｉｎｇｕｌｏｄｉｎｉｕｍ）、フィエステリア（Ｐｆｉｅｓｔｅｒｉａ）、ポラレラ（Ｐｏｌａｒｅｌｌａ）、プロトセラチウム（Ｐｒｏｔｏｃｅｒａｔｉｕｍ）、フィロシスティス（Ｐｙｒｏｃｙｓｔｉｓ）、スクリプシエラ（Ｓｃｒｉｐｐｓｉｅｌｌａ）、シンビオジニウム（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ）、セカジニウム（Ｔｈｅｃａｄｉｎｉｕｍ）、ソラコスファエラ（Ｔｈｏｒａｃｏｓｐｈａｅｒａ）およびゾオキサンセラ（Ｚｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項１５に記載の工程。
【請求項１９】
前記アルベオラテスが、シストジニウム（Ｃｙｓｔｏｄｉｎｉｕｍ）、グレノジニウム（Ｇｌｅｎｏｄｉｎｉｕｍ）、オキシルヒス（Ｏｘｙｒｒｈｉｓ）、ペリジニウム（Ｐｅｒｉｄｉｎｉｕｍ）、プロロセントリラム（Ｐｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍ）およびウォロスジンスキア（Ｗｏｌｏｓｚｙｎｓｋｉａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項１５に記載の工程。
【請求項２０】
前記ロードフィタが、アクロカエチウム（Ａｃｒｏｃｈａｅｔｉｕｍ）、アガルドヘイラ（Ａｇａｒｄｈｉｅｌｌａ）、アンチタムニオン（Ａｎｔｉｔｈａｍｎｉｏｎ）、アンチタムニオネラ（Ａｎｔｉｔｈａｍｎｉｏｎｅｌｌａ）、アステロシサイティス（Ａｓｔｅｒｏｃｙｔｉｓ）、オウドウイネラ（Ａｕｄｏｕｉｎｅｌｌａ）、バルビアニア（Ｂａｌｂｉａｎｉａ）、バンギア（Ｂａｎｇｉａ）、バトラコスペルマム（Ｂａｔｒａｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ）、ボネマイソニア（Ｂｏｎｎｅｍａｉｓｏｎｉａ）、ボストリキア（Ｂｏｓｔｒｙｃｈｉａ）、カリサムニオン（Ｃａｌｌｉｔｈａｍｎｉｏｎ）、カログロッサ（Ｃａｌｏｇｌｏｓｓａ）、セラミウム（Ｃｅｒａｍｉｕｍ）、チャンピア（Ｃｈａｍｐｉａ）、クロオダクチロン（Ｃｈｒｏｏｄａｃｔｙｌｏｎ）、クロオセセ（Ｃｈｒｏｏｔｈｅｃｅ）、コンプソポゴン（Ｃｏｍｐｓｏｐｏｇｏｎ）、コンプソポゴノプシス（Ｃｏｍｐｓｏｐｏｇｏｎｏｐｓｉｓ）、クマグロイア（Ｃｕｍａｇｌｏｉａ）、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）、シストクロニウム（Ｃｙｓｔｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ダスヤ（Ｄａｓｙａ）、ジゲニア（Ｄｉｇｅｎｉａ）、ジキソニエラ（Ｄｉｘｏｎｉｅｌｌａ）、エリスロクラディア（Ｅｒｙｔｈｒｏｃｌａｄｉａ）、エリスロロバス（Ｅｒｙｔｈｒｏｌｏｂａｓ）、エリスロトリキア（Ｅｒｙｔｈｒｏｔｒｉｃｈｉａ）、フリンチエラ（Ｆｌｉｎｔｉｅｌｌａ）、ガルデイリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）、ゲリジウム（Ｇｅｌｉｄｉｕｍ）、グラウコスファエラ（Ｇｌａｕｃｏｓｐｈａｅｒａ），ゴニオトリクム（Ｇｏｎｉｏｔｒｉｃｈｕｍ）、グラシラリア（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ）、グラテロウピア（Ｇｒａｔｅｌｏｕｐｉａ）、グリフィスシア（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉａ）、ヒルデンブランディア（Ｈｉｌｄｅｎｂｒａｎｄｉａ）、ヒメノクラジオプシス（Ｈｙｍｅｎｏｃｌａｄｉｏｐｓｉｓ）、ヒプネア（Ｈｙｐｎｅａ）、ラインギア（Ｌａｉｎｇｉａ）、メンブラノプテラ（Ｍｅｍｂｒａｎｏｐｔｅｒａ）、ミリオグラム（Ｍｙｒｉｏｇｒａｍｍｅ）、ネマリオン（Ｎｅｍａｌｉｏｎ）、ネマリオノプシス（Ｎｅｍａｌｉｏｎｏｐｓｉｓ）、ネオアガルドヘイラ（Ｎｅｏａｇａｒｄｈｉｅｌｌａ）、パルマリア（Ｐａｌｍａｒｉａ）、フィロホラ（Ｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａ）、ポリネウラ（Ｐｏｌｙｎｅｕｒａ）、ポリシホニア（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａ）、ポルフィラ（Ｐｏｒｐｈｙｒａ）、ポルフィリジウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、シュードチャントランシア（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｎｔｒａｎｓｉａ）、プテロクラジア（Ｐｔｅｒｏｃｌａｄｉａ）、プゲチア（Ｐｕｇｅｔｉａ）、ローデラ（Ｒｈｏｄｅｌｌａ）、ロードカエテ（Ｒｈｏｄｏｃｈａｅｔｅ）、ロードコルトン（Ｒｈｏｄｏｃｈｏｒｔｏｎ）、ロードソルス（Ｒｈｏｄｏｓｏｒｕｓ）、ロードスポラ（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒａ）、ロージメニア（Ｒｈｏｄｙｍｅｎｉａ）、セイロスポラ（Ｓｅｉｒｏｓｐｏｒａ）、セレナストラム（Ｓｅｌｅｎａｓｔｒｕｍ）、シロドチア（Ｓｉｒｏｄｏｔｉａ）、ソリエリア（Ｓｏｌｉｅｒｉａ）、スペルモタムニオン（Ｓｐｅｒｍｏｔｈａｍｎｉｏｎ）、スピリジア（Ｓｐｙｒｉｄｉａ）、スチロネマ（Ｓｔｙｌｏｎｅｍａ）、トレア（Ｔｈｏｒｅａ）、トライリエラ（Ｔｒａｉｌｉｅｌｌａ）およびツオメヤ（Ｔｙｏｍｅｙａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項２１】
前記クリプトフィタが、カムピロモナス（Ｃａｍｐｙｌｏｍｏｎａｓ）、シロモナス（Ｃｈｉｌｏｍｏｎａｓ）、クロオモナス（Ｃｈｒｏｏｍｏｎａｓ）、クリプトチリシス（Ｃｒｙｐｔｏｃｈｒｙｓｉｓ）、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）、ゴニオモナス（Ｇｏｎｉｏｍｏｎａｓ）、グイラルディア（Ｇｕｉｌｌａｒｄｉａ）、ハヌシア（Ｈａｎｕｓｉａ）、ヘミセルミス（Ｈｅｍｉｓｅｌｍｉｓ）、プラギオセルミス（Ｐｌａｇｉｏｓｅｌｍｉｓ）、プロテオモナス（Ｐｒｏｔｅｏｍｏｎａｓ）、ピレノモナス（Ｐｙｒｅｎｏｍｏｎａｓ）、ロードモナス（Ｒｈｏｄｏｍｏｎａｓ）およびストロレアチュラ（Ｓｔｒｏｒｅａｔｕｌａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項２２】
前記クロララクニオフォタが、クロララクニオン（Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｎ）、ロタレラ（Ｌｏｔｈａｒｅｌｌａ）およびカットネラ（Ｃｈａｔｔｏｎｅｌｌａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項２３】
前記ハプトフィタが、パブロボフィセアエ（Ｐａｖｌｏｖｏｐｈｙｃｅａｅ）およびピリムネシオフィセアエ（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｏｐｈｙｃｅａｅ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項２４】
前記パブロボフィセアエが、アピストネマ（Ａｐｉｓｔｏｎｅｍａ）、クリソクロムリナ（Ｃｈｒｙｓｏｃｈｒｏｍｕｌｉｎａ）、コッコリソホラ（Ｃｏｃｃｏｌｉｔｈｏｐｈｏｒａ）、コルコントクリシス（Ｃｏｒｃｏｎｔｏｃｈｒｙｓｉｓ）、クリコスファエラ（Ｃｒｉｃｏｓｐｈａｅｒａ）、ジアクロネマ（Ｄｉａｃｒｏｎｅｍａ）、エヌイリアナ（Ｅｍｉｌｉａｎａ）、パブロバ（Ｐａｖｌｏｖａ）、およびルッテネラ（Ｒｕｔｔｎｅｒａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２１に記載の工程。  
【請求項２５】
前記ピリムネシオフィセアエが、クルシプラコリサス（Ｃｒｕｃｉｐｌａｃｏｌｉｔｈｕｓ）、ピルムネシウム（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｕｍ）、イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）、カリプトロスファエラ（Ｃａｌｙｐｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、クリソチラ（Ｃｈｒｙｓｏｔｉｌａ）、コッコリサス（Ｃｏｃｃｏｌｉｔｈｕｓ）、ジクラテリア（Ｄｉｃｒａｔｅｒｉａ）、ヘテロシグマ（Ｈｅｔｅｒｏｓｉｇｍａ）、ヒメノモナス（Ｈｙｍｅｎｏｍｏｎａｓ）、イマントニア（Ｉｍａｎｔｏｎｉａ）、ゲフィロカプサ（Ｇｅｐｈｙｒｏｃａｐｓａ）、オクロスファエラ（Ｏｃｈｒｏｓｐｈａｅｒａ）、ファエオシスティス（Ｐｈａｅｏｃｙｓｔｉｓ）、プラチクリシス（Ｐｌａｔｙｃｈｒｙｓｉｓ）、シュードイソクリシス（Ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）、シラコスファエラ（Ｓｙｒａｃｏｓｐｈａｅｒａ）およびプレウロクリシス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２１に記載の工程。
【請求項２６】
前記ユーグレノフィタが、アスタシア（Ａｓｔａｓｉａ）、コラシウム（Ｃｏｌａｃｉｕｍ）、シクリジオプシス（Ｃｙｃｌｉｄｉｏｐｓｉｓ）、ジスチグマ（Ｄｉｓｔｉｇｍａ）、ユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）、ユートレプチア（Ｅｕｔｒｅｐｔｉａ）、ユートレプチエラ（Ｅｕｔｒｅｐｔｉｅｌｌａ）、ギロパイグネ（Ｇｙｒｏｐａｉｇｎｅ）、ヒアロファクス（Ｈｙａｌｏｐｈａｃｕｓ）、カウキネア  アスタシア（Ｋｈａｗｋｉｎｅａ  Ａｓｔａｓｉａ）、レポシンクリス（Ｌｅｐｏｃｉｎｃｌｉｓ）、メノイジウム（Ｍｅｎｏｉｄｉｕｍ）、パルミジウム（Ｐａｒｍｉｄｉｕｍ）、ファカス（Ｐｈａｃｕｓ）、ラブドモナス（Ｒｈａｂｄｏｍｏｎａｓ）、ラブドスピラ（Ｒｈａｂｄｏｓｐｉｒａ）、テトルエトレプチア（Ｔｅｔｒｕｅｔｒｅｐｔｉａ）およびトラケロモナス（Ｔｒａｃｈｅｌｏｍｏｎａｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。    
【請求項２７】
前記ヘテロコンタが、ファエオフィセアエ（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ）、ペラゴフィセアエ（Ｐｅｌａｇｏｐｈｙｃｅａｅ）、キサントフィセアエ（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｃｅａｅ）、エウスチグマトフィセアエ（Ｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、シアヌロフィセアエ（Ｓｙａｎｕｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、ファエオサムニオフィセアエ（Ｐｈａｅｏｔｈａｍｎｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、およびラフィドフィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２に記載の工程。
【請求項２８】
前記ファエオフィセアエが、アスコセイラ（Ａｓｃｏｓｅｉｒａ）、アステロクラドン（Ａｓｔｅｒｏｃｌａｄｏｎ）、ボダネラ（Ｂｏｄａｎｅｌｌａ）、デスマレスチア（Ｄｅｓｍａｒｅｓｔｉａ）、ジクチオカ（Ｄｉｃｔｙｏｃｈａ）、ジクチオタ（Ｄｉｃｔｙｏｔａ）、エクトカルプス（Ｅｃｔｏｃａｒｐｕｓ）、ハロプテリス（Ｈａｌｏｐｔｅｒｉｓ），ヘリバウジエラ（Ｈｅｒｉｂａｕｄｉｅｌｌａ）、プレウロクラジア（Ｐｌｅｕｒｏｃｌａｄｉａ）、ポロテリネマ（Ｐｏｒｔｅｒｉｎｅｍａ）、ピライエラ（Ｐｙｌａｉｅｌｌａ）、ソロカルプス（Ｓｏｒｏｃａｒｐｕｓ）、スペルマトクナス（Ｓｐｅｒｍａｔｏｃｈｎｕｓ）、スファセラリア（Ｓｐｈａｃｅｌａｒｉａ）およびワエルニエラ（Ｗａｅｒｎｉｅｌｌａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項２９】
前記ペラゴフィセアエが、アウレオコッカス（Ａｕｒｅｏｃｏｃｃｕｓ）、アウレオウンブラ（Ａｕｒｅｏｕｍｂｒａ）、ペラゴコッカス（Ｐｅｌａｇｏｃｏｃｃｕｓ）、ペラゴモナス（Ｐｅｌａｇｏｍｏｎａｓ）、プルビナリア（Ｐｕｌｖｉｎａｒｉａ）およびサルシノクリシス（Ｓａｒｃｉｎｏｃｈｒｙｓｉｓ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３０】
前記キサントフィセアエが、アステロシフォン（Ａｓｔｅｒｏｓｉｐｈｏｎ）、ボトリジオプシス（Ｂｏｔｒｙｄｉｏｐｓｉｓ）、ボトリジウム（Ｂｏｔｒｙｄｉｕｍ）、ブミレリア（Ｂｕｍｉｌｌｅｒｉａ）、ブミレリオプシス（Ｂｕｍｉｌｌｅｒｉｏｐｓｉｓ）、キャラシオプシス（Ｃｈａｒａｃｉｏｐｓｉｓ）、コレレリジウム（Ｃｈｌｏｒｅｌｌｉｄｉｕｍ）、クロロボトリス（Ｃｈｌｏｒｏｂｏｔｒｙｓ）、ゴニオコロリス（Ｇｏｎｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ヘテロコッカス（Ｈｅｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ヘテロスリックス（Ｈｅｔｅｒｏｔｈｒｉｘ）、ヘテロトリケラ（Ｈｅｔｅｒｏｔｒｉｃｈｅｌｌａ）、ミスココッカス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、オフィオシチウム（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ）、プレウロクロリデラ（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｌｌａ）、プレウロクロリス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、シュードブミレリオプシス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｍｉｌｌｅｒｉｏｐｓｉｓ）、スファエロソルス（Ｓｐｈａｅｒｏｓｏｒｕｓ）、トリボネマ（Ｔｒｉｂｏｎｅｍａ）、ヴァウケリア（Ｖａｕｃｈｅｒｉａ）およびキサントネマ（Ｘａｎｔｈｏｎｅｍａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３１】
前記エウスチグマトフィセアエが、クロリデラ（Ｃｈｌｏｒｉｄｅｌｌａ）、エリプソイジオン（Ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｉｏｎ）、エウスティグマトス（Ｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｓ）、モノドプシス（Ｍｏｎｏｄｏｐｓｉｓ）、モノダス（Ｍｏｎｏｄｕｓ）、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）、ポリエドリエラ（Ｐｏｌｙｅｄｒｉｅｌｌａ）、シュードキャラシオプシス（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｒａｃｉｏｐｓｉｓ）、シュードスタウラストラム（Ｐｓｅｕｄｏｓｔａｕｒａｓｔｒｕｍ）およびビスチェリア（Ｖｉｓｃｈｅｒｉａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３２】
前記シアヌロフィセアエが、マロモナス（Ｍａｌｌｏｍｏｎａｓ）、シヌラ（Ｓｙｎｕｒａ）およびテッセラリア（Ｔｅｓｓｅｌｌａｒｉａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３３】
前記ファエオサムニオフィセアエが、ファエオボトリス（Ｐｈａｅｏｂｏｔｒｙｓ）およびファエオサムニオン（Ｐｈａｅｏｔｈａｍｎｉｏｎ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３４】
前記ラフィドフィセアエが、オリスソジスカス（Ｏｌｉｓｔｈｏｄｉｓｃｕｓ）、バキュオラリア（Ｖａｃｕｏｌａｒｉａ）およびフィブロカプサ（Ｆｉｂｒｏｃａｐｓａ）からなる群の少なくとも１つのメンバーより選択される、請求項２７に記載の工程。
【請求項３５】
前記前駆体化合物が、ラセミ混合体であり、前記代謝物が、前記前駆体化合物の１つのエナンチオマーの、光学的に純粋な誘導体である、請求項１に記載の工程。
【請求項３６】
前駆体化合物の代謝物を得るための方法であって、
（Ａ）前記前駆体化合物の存在下での、請求項１のステップ（Ｃ）にて得られた、非原核生物微小藻類のさらなるサブセットのメンバーを培養すること、
（Ｂ）前記メンバーの細胞抽出物またはそこより精製された酵素を、前記前駆体化合物と接触させること、および培養上清またはバイオマスから、または前記細胞抽出物または酵素から得られた代謝物を精製すること、
を含む方法。
【請求項３７】
哺乳動物を、請求項３６の工程によって得られた代謝物と接触させること、および前記哺乳動物での、前記代謝物の毒性に関してアッセイすることを含む方法であって、前記前駆体化合物が、医薬品、食物添加物または有害廃棄物である、方法。
【請求項３８】
前記前駆体化合物が、そのヘテロ環状環が、２〜７個の炭素原子と、それぞれが酸素、硫黄および窒素からなる群より選択された１〜３個のヘテロ原子を含む、ヘテロ環状化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
前記前駆体化合物が、そのヘテロ環状環が、２個の炭素原子と、酸素および窒素からなる群より選択される１個のヘテロ原子を含む、ヘテロ環状化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
前記ヘテロ環状化合物が、
【化１】
2006519615.tif 000028
によって表されるオキサゾリジンであって、
式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたホスホ、場合により置換されたアルキル（Ｃ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（Ｃ１〜２０）、場合により置換された芳香族（Ｃ５〜２０）および場合により置換されたヘテロ環状（Ｃ３〜２０）基からなる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記前駆体化合物が、その骨格が、４〜１２個の炭素原子、および窒素、酸素、リンまたは硫黄からなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子からなる、ヘテロ鎖化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
前記ヘテロ鎖化合物が、
【化２】
2006519615.tif 000029
によって表されるＮ−置換アミニドであって、
式中Ｒ４およびＲ５がそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたホスホ、場合により置換されたアルキル（Ｃ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（Ｃ１〜２０）、場合により置換された芳香族（Ｃ５〜２０）および場合により置換されたヘテロ環状（Ｃ３〜２０）基からなる群より選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミド
【請求項４４】
Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システイン
【請求項４５】
Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミドを調製するための方法であって、
（Ａ）ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在下で、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）を培養すること、または
（Ｂ）クリプトモナスの細胞抽出物、またはそこより精製した酵素を、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）と接触させることを含み、それによってＮ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミドを産出するための方法。
【請求項４６】
前記クリプトモナスが、クリプトモナス  オバタ（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ  ｏｖａｔａ）である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインを調製するための方法であって、    
（Ａ）ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在下で、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）を培養すること、または
（Ｂ）クリプトモナスの細胞抽出物、またはそこより精製した酵素を、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）と接触させることを含み、それによってＳ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインを産出するための方法。
【請求項４８】
前記クリプトモナスが、クリプトモナス  オバタ（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ  ｏｖａｔａ）である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−１−アミノ−２−ヒドロキシカルボン酸を調製するための方法であって、
（Ａ）（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸の存在下で、クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）を培養すること、または
（Ｂ）クラミドモナスの細胞抽出物またはそこから精製した酵素を、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸と接触させること
を含む、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸を産出するための方法。
【請求項５０】
前記クラミドモナスが、クラミドモナス  レインハルディティ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）システイン、またはエチル基に置換基を含むその誘導体を調製するための方法であって、
（Ａ）オキシランまたはその２−置換誘導体の存在下で、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）を培養すること、または
（Ｂ）クリプトモナスの細胞抽出物、またはそこから精製した酵素を、２−オキシランまたはその２−置換誘導体と接触させること、
を含む、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）システイン、またはエチル基に置換基を含むその誘導体を産出するための方法。
【請求項５２】
前記クリプトモナスが、クリプトモナス  オバタ（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ  ｏｖａｔａ）である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミドを調製するための方法であって、
（Ａ）ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在下で、ブラクテアコッカス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ）を培養すること、または
（Ｂ）ブラクテアコッカスの細胞抽出物、またはそこより精製した酵素を、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）と接触させることを含み、それによってＮ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミドを産出するための方法。
【請求項５４】
前記ブラクテアコッカスが、ブラクテアコッカス  シンニバリナス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ  ｃｉｎｎｉｂａｒｉｎｕｓ）である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインを調製するための方法であって、
（Ａ）ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在下で、ブラクテアコッカス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ）を培養すること、または
（Ｂ）ブラクテアコッカスの細胞抽出物、またはそこより精製した酵素を、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）と接触させること、を含み、それによってＳ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインを産出するための方法。
【請求項５６】
前記ブラクテアコッカスが、ブラクテアコッカス  シンニバリナス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ  ｃｉｎｎｉｂａｒｉｎｕｓ）である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）システイン、またはエチル基に置換基を含むその誘導体を調製するための方法であって、
（Ａ）オキシランまたはその２−置換誘導体の存在下で、ブラクテアコッカス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ）を培養すること、または
（Ｂ）ブラクテアコッカスの細胞抽出物またはそこから精製した酵素を、２−オキシランまたはその２−置換誘導体と接触させること、
を含む、Ｓ−（２−ヒドロキシエチル）システイン、またはエチル基に置換基を含むその誘導体を産出するための方法。
【請求項５８】
前記ブラクテアコッカスが、ブラクテアコッカス  シンニバリナス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ  ｃｉｎｎｉｂａｒｉｎｕｓ）である、請求項５７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば薬理学、農薬、栄養補助食品、環境保護、食品香味料、または食品添加物への適用に有用である代謝産物を産生するための、非原核微細藻類を用いた化合物のバイオトランスフォーメーションに関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオトランスフォーメーションは、化学者が研究室で達成しがたい、または別の生物系において機能的に活性な産物を得ることが望ましい化学反応を、生物を用いて行なう方策である。その生物系に対して、単一の、または多数の前駆体分子が提供され、代謝が起こるまで時間が経った後、単一の、または少数の、前駆体分子の酵素的修飾物からなる産物、または産物群を培地またはバイオマスから単離する。バイオトランスフォーメーション・ステップを利用するための、第１の商用過程のひとつは、１９５２年のＲｈｉｚｏｐｕｓによるＣ２１ステロイドのヒドロキシル化である（Ｍｕｒｒａｙら、米国特許第２，６０２，７６９号）。このような手法により、５０年以上の歴史にわたり、ある分子から他への生物変換の有用性が証明されてきた（例えば、Ｂｏｍｂａｒｄｅｌｌｉら、米国特許第６，３７２，４５８号、Ｂｕｒｎｓら、同第６，３６１，９７９号、Ｃｈａｒｔｒａｉｎら、同第５，８４９，５６８号、Ｈｏｕら、同第５，８５２，１９６号、Ｌｅｓａｇｅ―Ｍｅｓｓｅｎら、同第５，８６６，３８０号、およびＴａｋａｓｈｉｍａら、同第６，３６５，３９９号）。
【０００３】
上記参考文献に見られるように、バイオトランスフォーメーションに対する最適な生物は伝統的に細菌または菌類である。この理由は単純である。最も単純な生物についてさえも、全容および可能性は（いまだに少数の場合を除いて）知られておらず、試験有機体の選択は培養物の多様性および容易さの関係で決定された。細菌および菌類は通常研究室で培養するのが非常に容易であり、純培養のように増殖し（純培養増殖）、速やかに分裂し、続いて行なう化学操作を簡単に、したがって費用を少なくするように決められた組成の簡単な培地を用いて培養できる。細菌および菌類はまた、進化的および生態学的に多様性がある。事実上、全ての環境に細菌が存在し、またほとんどの環境に菌類が存在するので、これらの２つの群のメンバーは、天然に存在する有機化合物の全てに遭遇し、それらを作りだす、修飾する、または分解する酵素的機構を生み出すというのがバイオトランスフォーメーションの社会通念となっている。
【０００４】
１３７以上の機能性有機化合物群が自然界で発見されている（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ  Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ／Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ  Ｄａｔａｂａｓｅ（ＵＭ―ＢＢＤ）、ｈｔｔｐ：／／ｕｍｂｂｄ．ａｈｃ．ｕｍｎ．ｅｄｕ、およびＷａｃｋｅｔｔら、「生物解析および生物分解（Ｂｉｏｃａｔａｌｙｓｉｓ  ａｎｄ  Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）」、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｔｒａｎｓｆｏｍｒａａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、ＡＳＭ  Ｐｒｅｓｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．（２００１））。これらのうちいくつかは非生物学的工程、例えばライトニングまたは発火の結果であるが、ほとんどのこれらの機能的な群は微生物により産生された。したがって、酵素によってそれらの機能的な群が作り出されたに違いない。さらに、環境に存在する生物は、発火などの物理的な工程により産生された化学基だけでなく、酵素により産生された化学基にも遭遇する。結果として、少なくともいくつかの生物が酵素的機構を生み出して生物学的に産生された群と、物理的に産生された群との両方を分解している確率が高い。現在のところ、既知の天然の機能的な有機化合物群の約４０％が、細菌または菌類により分解されることが知られている。
【０００５】
バイオテクノロジー産業への信頼が高まることにより、細菌および菌類中の有用な酵素を発見しようとする試みが増加した。しかしながら、図１に示すように、付与されたバイオトランスフォーメーション特許の調査によると、付与されたバイオトランスフォーメーション特許は少数であることが明らかである。バイオトランスフォーメーションを含む分野の特許中の、付与された特許数の増加を背景として見ると、傾向はさらに顕著である。バイオテクノロジー特許の数が拡大する中でのバイオトランスフォーメーション特許数の減少は、新規な手法の必要性を示唆している。この結論は、バイオトランスフォーメーションに適用されている新しい方策の数によって支持される。例えば、大腸菌（Ｅｓｈｅｒｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）およびサッカロマイセス  セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｖｉｓｅｒｉｉ）などの少数の単純な細菌および酵母の代謝について、ほぼ完全な情報が入手可能である。一部の研究者はバイオトランスフォーメーションの効果を高めるために、細菌または酵母の代謝を設計している、または特定のバイオトランスフォーメーションを行なうために、さまざまな細胞を他の生物由来の遺伝子で形質転換させている（Ｇｒａｂｌｅｙら、「天然からのドラックディスカバリー（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｆｒｏｍ  Ｎａｔｕｒｅ）」、ｅｄｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ‐Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ（１９９９）、およびＷａｒｄら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１８：２５〜８３  （１９９８））。しかしながら、代謝および遺伝子設計は従来のバイオトランスフォーメーション方策に比べ非常に時間がかかり、また費用がかかる。さらに、一部の会社（例えば、ディバーサ（Ｄｉｖｅｒｓａ  Ｃｏｒｐ．））は酵素の発見のために、環境ＤＮＡライブラリーを使用している。
【０００６】
このようなライブラリーは一般に、遺伝子にイントロンが含まれず、オリゴヌクレオチドでプローブする必要がある生物（ほとんどが細菌）に限定されており、そのためそれらは新しい酵素の発見とは対称的に、既知酵素の変異体の発見に最も適している。
【０００７】
他の群は、通常の培養条件下では、細胞の潜在代謝反応の一つのサブセットのみしか起こらないという事実を利用してきた。細胞は、特定の酵素を特定の環境条件下でのみ発現させる。このような代謝経路の模範的な例は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）のｌａｃオペロンである。この細菌はグルコースが存在せず、ラクトース（または類似分子）が存在する条件でなければ、β−ガラクトシドを修飾する酵素を産生しない。したがって、バイオトランスフォーメーションの可能性を高めるためのひとつの手法は、様々な、異なる培養条件下で、所定の実験装置で用いる微生物のそれぞれを増殖させることである（Ｇｒａｂｌｅｙら、上記、およびＳａｔｔｌｅｒら、「天然からのドラックディスカバリー（Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ｆｒｏｍ  Ｎａｔｕｒｅ）」、ｅｄｓ、Ｇｒａｂｌｅｙら、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ‐Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ、１９１〜２１４ページ  （１９９９））。この手法では、バイオトランスフォーメーションの従来の方策に比べて、スクリーニングする培養液の数が非常に増え、費用も高い。
【０００８】
バイオトランスフォーメーションのために使用可能な生化学的反応の数を増加させるための他の方策は、バイオトランスフォーメーションに使用する生物集団の多様性を増加させることである。例えば、哺乳類および植物などの多細胞生物の、様々な組織由来の培養細胞が、バイオトランスフォーメーションに使用されている（Ｂａｌａｎｉら、米国特許第５，３８７，５１２号、Ｌａｂｕｄａら、同第５，２７９，９５０号、およびＭａｎｇｏｌｄ、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、８：２６０〜２６７（１９８９））。これらの手法により多くの有用な結果が得られたが、一方で高等多細胞生物の細胞の培養は設備と培地のどちらについても非常に高価である。さらに、このような細胞は通常複雑な培地を必要とし、それにより続いて行なう修飾前駆体分子の分析がはるかに困難になり、したがって非常に高費用となる。
【０００９】
つまり、細菌および菌類を用いたバイオトランスフォーメーションの新しい方策は従来の方法よりも費用が多くかかり、有用な反応の範囲を十分に増加させることができない。したがって、効率よく、適度に低費用な、バイオテクノロジーに使用可能な酵素反応の範囲を増加させるための新規な手法が必要である。本発明は非原核動物微細藻類（以下「微細藻類（ｍｉｃｒｏａｌｇａｅ）」と称する）を用いることにより、バイオトランスフォーメーションの有用性および範囲を増加させて、前駆体分子を変換させるための、簡単で費用効率が高い方法を提供する。上記で考察したように、細菌および菌類以外の微生物をバイオトランスフォーメーションに使用することは当技術分野で確立された見解に逆行する。
【００１０】
微細藻類は、以下に考察するように、進化的、代謝的、および生態学的に多様性がある。さらに、多くの微細藻類は所定の単純な培地中で増殖することができ、それにより続いて行なう単離が容易になり、修飾された前駆体を低費用で同定することができる。微細藻類は並外れて多様性のある多系統生物群である。微細藻類の分類法はまだ明確になっていないが、当局は微細藻類の起源を４つもの界の１２〜１４個の門としている（Ｇｒａｈａｍら、Ａｌａｇｅ、Ｐｒｉｎｃｅ  Ｈａｌｌ、ＮＪ（２０００）、Ｓａｕｎｄｅｒｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、９２：２４４〜２４８（１９９５）、およびＷａｉｎｒｉｇｈｔら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２６０：３４０〜３４２（１９９３））。比較のために、菌類は通常ただ１つの界に分類される。微細藻類の多様性の他の証明は、その細胞の特性から得られる。それらは単核、多核、または管状でありうる。微細菌類のいくつかの群は真の真核生物であるが、他の群は中核生物であり（Ｂｏｌｄら、「藻類へのイントロダクション（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ａｌｇａｅ）」、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ−Ｈａｌｌ，Ｉｎｃ．、Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ  Ｃｌｉｆｆｓ、ＮＪ（１９８５））、原核生物から真核生物への進路における進化的派生である。中核生物は、例えば、真の真核生物の、染色体のヒストンが欠損している。
【００１１】
その進化的多様性に加えて、微細藻類は広範囲の生態的多様性も示す。種は海水、淡水および土壌の生息環境に住んでいる。グレートソルトレイク（Ｌｅｅ、Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ、２ｎｄｅｄｎ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  ＵＫ（１９８９））、砂漠、さらには岩石の中（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｅｃｏｌ．、１６：２７１〜２８９（１９８８））などの、地球上の最も極端な環境のいくつかにも微細藻類が存在する。一部の種は独立栄養性であって、エネルギー源および有機炭素源として光とＣＯ２を利用しており、また一方で他の種は従属栄養性であって、エネルギー経路と合成経路の両方のために環境由来の有機炭素化合物を代謝する。どちらの成長様式も通性的でありえ、必要な場合のみ切り替えられる。一部の藻類は混合栄養性でさえあって、従属栄養による炭素固定を補う一方で光合成をする（Ｇｒａｈａｍら、上記）。
【００１２】
藻類の代謝における広い多様性の別の証明は、それらが他の分類群では合成されない化合物を産生することからも得られる。例えば、ある藻類はエイコサペンタノン酸などの非常に長鎖の多価不飽和脂肪酸を合成する（Ｐｏｈｌ、Ｉｎ：Ｚａｂｏｒｓｋｙ，ｅｄ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｂｉｏｓｏｌａｒ  Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＬ．、３８３〜４０４ページ（１９８２）、およびＳｈｉｍｏｄａら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｔａｌｙｓｉｓ  ｂ、Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ、８：２５５〜２６４（２０００））。他の藻類は、パラミロンおよびクリソラミナランなどの珍しい貯蔵分子（Ｇｒａｈａｍら、上記）ならびに特異な糖分子（単糖類と多糖類の両方）（Ｏ’Ｃｏｌｌａ、Ｉｎ：Ｌｅｗｉｎ、Ｒ．Ａ．（ｅｄ．）、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ａｌａｇａｅ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、３３７〜３５６ページ（１９６２））を合成する。特異な糖類は特に注目すべきである。なぜなら糖類を含有する分子は医薬品においてますます重要になってきているからである（Ｇｒａｂｌｅｙら、上記およびＳａｔｔｌｅｒら、上記）。
【００１３】
以前に、微細藻類中で見られる生化学反応の多様性を利用しようとする試みがいくつかなされてきた。特に、様々なグループが置換芳香族アルデヒドに集中した。芳香族アルデヒド、特に３つ以上の縮合環を有する芳香族は、化石燃料消費を主な理由として蓄積された有害な環境汚染物質の類を含み（Ｃｅｒｎｉｇｌｉａ、Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、３：３５１〜３６８（１９９２））、一般に細菌または菌類による生体内分解に対して不応性である。飽和芳香族アルデヒドに対する生物分解系を開発するための第１のステップは、不飽和の芳香族アルデヒドの分解である。ナフタレンから１−ナフトールへの微細藻類による分解が、１９７０年後半に最初に示された（Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら、Ａｐｐｌ．  Ｅｎｖ．  Ｍｉｃｒｏｂ．、３４：３６３〜３７０（１９７７））、Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら、Ｊ．  Ｇｅｎ．  Ｍｉｃｒｏｂ．、１１６：４９５〜５００（１９８０ａ）、Ｓｏｔｏら、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｂ．、５３：１０９〜１１７（１９７５ａ）、Ｓｏｔｏら、Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｊ．  Ｍｉｃｒｏｂ．、５３：１１８〜１２６（１９７５ｂ）、およびＷｉｎｔｅｒｓら、Ｍａｒｉｎｅ  Ｂｉｏｌ．、３６：２６９〜２７６（１９７６））。以来多くの同族のアルデヒドの、対応するアルコールへの分解が示されてきた（すなわち、Ｃｅｒｎｉｇｌｉａ、Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、３：  ３５１〜３６８  （１９９２）、Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら（１９８０ａ）、上記、Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら、Ａｒｃｈ．  Ｍｉｃｒｏｂ．、１２５：２０３〜２０７（１９８０ｂ）、Ｈｏｏｋら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５１：６２１〜６２７（１９９９）、Ｎｏｍａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３１：５１５〜５１７（１９９２ａ）、Ｎｏｍａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３１：２００９〜２０１１（１９２２ｂ）Ｎｏｍａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０：１１４７〜１１５１（１９９０）、Ｎｏｍａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０：２９６９〜２９７２（１９９１）、Ｓｈｉｍｏｄａら、上記、およびＷａｒｓｈａｗｓｋｙら、Ｃｈｅｍｉｃｏ‐ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ、９７：１３１〜１４８（１９９５））。Ｋｎｉｅｆｅｌとその同僚は、置換芳香族の１−ナフタレンスルホン酸がシーンデスムス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ）によって１−ヒドロキシ−２−ナフタレンスルホン酸に変換されうることを明らかにした（Ｋｎｅｉｆｅｌら、Ａｒｃｈ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、１６７：３２〜３７（１９９７））。Ｇｕｔｅｎｋａｕｆとその同僚は、クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）内での４−クロロ−３，５−ジニトロ安息香酸のバイオトランスフォーメーションを研究して、それが部分的に３，５−ジニトロ安息香酸に変換されることを発見した（Ｇｕｔｅｎｋａｕｆら、Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ、９：２３５９〜２３６８（１９９８））。
【００１４】
１９８６年に、Ａｂｕｌ‐ＨａｊｊとＱｉａｎは、非置換の芳香族アルデヒドを還元させる微細藻類の能力に着目し、同様に芳香族アルデヒドであるステロイドもまた微細藻類によって還元されうると結論付けた（Ａｂｕｌ‐Ｈａｊｊら、Ｊ．  Ｎａｔ．  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、４９：２４４〜２４８（１９８６）。彼らは一部の藻類が、４‐アンドロステン−３，１７−ジオンおよび１７−β−ヒドロキシ−４−アンドロステン−３−オンを、１７位の酸素を還元することによって、またはそのステロイドを６−βまたは１４−αの位置で水酸化することによって修飾できることを実証した。この研究はイタリアのグループ（Ｄｅｌｌａ  Ｇｒｅｃａら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４１：１５２７〜１５２９（１９９６））、Ｄｅｌｌａ  Ｇｒｅｃａら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５３：８２７３（１９９７）、Ｇｒｅｃａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１９：１１２３〜１１２４（１９９７）、Ｇｒｅｃａら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、１８：６３９〜６４２（１９９６）、およびＰｏｌｌｉｏら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３７：１２６９〜１２７２（１９９４）、ならびに米国の営利グループによりさらに研究され、テストステロン５‐αリダクターゼの阻害剤であるテストステロン誘導体の生産に対する特許が付与された（Ａｒｉｓｏｎら、米国特許第５，２１５，８９４号）。
【００１５】
いくつかの藻類が、他の特異的なバイオトランスフォーメーションにも使用されている。例えば、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）はシクロヘキサン酢酸をモノヒドロキシシクロヘキサン酢酸へ変換するのに使用されている（Ｙｏｓｈｉｚａｋｏら、Ｊ．  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７２：３４３〜３４６（１９９１））。同様に、セレナストリウム  カプリコルナタム（Ｓｅｌｅｎａｓｔｒｕｍ  ｃａｐｒｉｃｏｒｎｕｔｕｍ）は、テストステロン５‐αレダクターゼの別の阻害剤であるフィナステリドのバイオトランスフォーメーションに使用されている（Ｖｅｎｋａｔａｒａｍａｎｉら、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．、７４５：５１〜６０（１９９４））。この変換は、ヒドロキシル基の導入が、先のアルデヒドのカルボニルの変換によって行なわれるのではなく、むしろ水素原子の置換によって行なわれることから、特に興味深い。芳香族アルデヒドの還元に加え、微細藻類は新規の長鎖多価不飽和脂肪酸の産生にも使用されている（Ｃｅｒｔｉｋら、Ｊ．  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、８７：１〜１４（１９９９）、およびＦａｕｃｏｎｎｏｔら、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４７：１４６５〜１４７１（１９９８））。
【００１６】
このように、微細藻類は未開拓の生化学反応の有用な宝庫を提供する（Ｒａｄｍｅｒら、Ｊ．  Ａｐｐｌ．  Ｐｈｙｃｏｌｏｇｙ、６：９３〜９８（１９９４））。それにもかかわらず、微細藻類の能力は一般に十分に活用されておらず、特に、微細藻類のバイオトランスフォーメーションの能力は評価されていない。微細藻類を用いて化学合成のステップを実施する一般的な方策は、特定の藻類における既知の特定の化学反応を調べて、藻類が類似基質をバイオトランスフォーメーションさせることができるかを確かめるものである（すなわち、Ｄｅｌｌａ  Ｇｒｅｃａら（１９９６）、上記、Ｄｅｌｌａ  Ｇｒｅｃａら（１９９７）、上記、Ｆａｕｃｏｎｎｏｔら、上記、Ｇｒｅｃａら（１９９７）、上記、Ｇｒｅｃａら（１９９６）、上記、Ｋｎｅｉｆｅｌら、上記、Ｎｏｍａら（１９９２ａ）、上記、Ｎｏｍａら（１９９２ｂ）、上記、Ｎｏｍａら（１９９０）、上記、Ｐｏｌｌｉｏら（１９９６）、上記、およびＳｈｉｍｏｄａら、上記）。少数の研究で微細藻類のパネルが用いられているが（Ａｂｕｌ‐Ｈａｊｊら、上記、Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら（１９８０ａ）、上記、Ｈｏｏｋら、上記、およびＰｏｌｌｉｏら（１９９４）、上記）、しかしこれらの研究は常に、藻類に広く分布していることが以前から既知の生化学反応である、芳香族アルデヒドの芳香族アルコールへの変換において、変換体を探索している（Ｃｅｒｎｉｇｌｉａら（１９９７）、上記、Ｓｏｔｏら（１９７５ａ）、Ｓｏｔｏら（１９７５ｂ）、上記、およびＷｉｎｔｅｒｓら、上記）。
【００１７】
微細藻類を含む微生物は、新規な化学成分の産生に使用することができ、また使用されているが、微細藻類については十分に探究されていないことが、上記から明らかである。それらが天然産生物、または既知の酵素活性物に関して研究されているが、今日まで、高価値な化学構成要素の産出における、新規の中間体の発見および開発のための微小藻類パネルの、系統的な適用は報告されていない。
【００１８】
図２は、天然由来の化合物であって、任意の既知酵素の基質でないものの一部を示す。酵素的変換に対して非常に不応性である天然に存在する化合物には、複素環および非複素環化合物を含む、多くの種類の化合物が含まれる。過去５０年間、細菌および菌類の中から、これらの分子を修飾することができる酵素を発見する試みに非常な努力がなされてきた。一部の細菌および菌類は環境中でこれらの化合物と遭遇し、それらを分解するいくつかの方法を発展させるだろうという議論にもかかわらず、このような微生物は現時点で発見されていない。本発明において、微細藻類が、有機分子を修飾する、または分解するための潜在的な酵素の大きな未開拓宝庫を含むことが発見された。微細藻類は他の生物では見られない有機化合物を合成することから（すなわち、Ｏ’Ｃｏｌｌａら、上記）、それらはまた、本発明において、複雑なキラル薬剤の合成を補助する酵素の貴重な資源であると信じられている。微細藻類はまた、特異なポリマーの合成も行なうので（Ｇｒａｈａｍら、上記、Ｐｏｈｌ、上記およびＳｈｉｍｏｄａら、上記）、本発明においてさらに、石油産物、またはある種のプラスチックなどの、長い炭素骨格を有する分子を分解または改変するための酵素の重要な供給源であると信じられている。固有の微細藻類由来の酵素の発見には、微細藻類のパネルを系統的に、および効率的にスクリーニングする方法が必要である。したがって、バイオトランスフォーメーションに微細藻類のパネルを使用することを含む方法は、現在は不可能である様式での医薬品および他の高価値産物の生産に重要であることが分かる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
今日まで、藻類のバイオトランスフォーメーションは限定された、所定の反応および産物が探索されてきた。本発明は無作為を系統的に利用する、異なる、独特の手法をとる。この工程では、微細藻類のパネル（シリーズ）を使用して既知の化合物を、所定でない新規な化合物にバイオトランスフォーメーションする。新規な化合物が続いて同定され、潜在的な応用について試験される。本発明の主要な利点は、微細藻類のパネルを、バイオトランスフォーメーション反応の能力について効率的に、および費用効率よく、ならびに細菌および菌類を含むバイオトランスフォーメーション系を使用することで得られるよりも広い範囲のバイオトランスフォーメーションにわたって、スクリーニングできることである。本発明のさらなる特徴および利点は、下記の詳細な説明で説明され、詳細な説明から明らかになるか、または本発明の実施により確認される。
【００２０】
これらの、または他の利点を得るために、および本発明の目的にしたがって、具体的に、および広範に記載したように、本発明は部分的に、微細藻類のパネルがキラルおよび非キラル有機化合物を非常に効率よく効果的にバイオトランスフォーメーションできるという発見に基づいている。本発明は、微細藻類生物内での、前駆体化合物から、例えば薬理学的、農薬、栄養補助食品、環境、食品香味料、および食品添加物への適用に有用である、化学的に異なる最終産物へのバイオトランスフォーメーションのためのプロセスを提供する。本発明はまた、微細藻類生物内での、前駆体化合物のラセミ混合物から、例えば薬理学的、農薬、栄養補助食品、環境保護、食品香味料、および食品添加物への利用において有用である、さらに化学的に純粋な化合物へのバイオトランスフォーメーションのためのプロセスを提供する。
【課題を解決するための手段】
【００２１】
一実施形態において、本発明は、
（Ａ）進化的および生態学的に多様である、異なる非原核生物微細藻類のパネルを得ること、
（Ｂ）前記非原核生物微細藻類のパネルの、各メンバーを、前駆体化合物に対する溶媒に曝露すること、および前記溶媒の存在下で増殖する非原核生物微細藻類のサブセットを選択すること、
（Ｃ）得られたサブセットの各原核生物微細藻類を、前駆体化合物に曝露すること、およびその増殖が、前記前駆体化合物の存在下で、阻害されるか、または増大される、非原核生物微細藻類のさらなるサブセットを選択すること、
（Ｄ）前記前駆体化合物の存在下で、得られたさらなる非原核生物微細藻類のサブセットを増殖させ、前記前駆体化合物をトランスフォームして、前記前駆体化合物の代謝物を産出すること、および前記非原核生物微細藻類の細胞バイオマスと培養上清を得ること、
（Ｅ）得られた培養上清から、得られた細胞バイオマスを分離すること、および場合により、得られた分離細胞バイオマスを、前記溶媒で抽出して、前記前駆体化合物の前記代謝物を得ること、および場合により、
（Ｆ）得られた培養上清または得られたバイオマスの溶媒抽出液から、前記代謝物を精製すること、および前記代謝物を解析して、前記前駆体化合物中の前記代謝物の構造および改変を同定すること、
を含む、前駆体化合物のバイオトランスフォーメーションのための工程に関する。
【００２２】
本発明はさらに、前記前駆体化合物の存在下で、非原核生物微細藻類の前記さらなるサブセットのメンバーを培養し、その結果生じた培養物から得られた代謝物を精製することによって、前記代謝物を得るための工程を含む。
【００２３】
本発明はまた、さらに、前記工程によって得ることができる、代謝物を含む。
【００２４】
本発明はまた、そのようにして得られた代謝物を、哺乳動物と接触させること、および前記哺乳動物内の前記代謝物の毒性に関してアッセイすることを含む方法を提供し、そこで、前記前駆体化合物が医薬品、食物添加物または有害廃棄物である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
用語「バイオトランスフォーメーション（ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ）」は、微小生物、具体的には非原核生物微細藻類を、前駆体化合物に曝露することで、そこで前記化合物は、正常の微細藻類増殖基質とは考えられず、また、前記非原核生物微小藻類の増殖の後に、前駆体化合物上での、１つまたは非常に少数の酵素の、活性の結果である、前駆体化合物の改変物である産物、すなわち代謝物を同定することの工程を意味するために、本明細書で使用する。代謝物は、ラセミ前駆体化合物の光学的に純粋な形態であり得る。
【００２６】
微小藻類の初期パネルの大きさは、本発明では重要ではない。たとえば、パネルは、７〜５０の異なる微小藻類株、好ましくは１５〜３０の異なる微小藻類株を含みうる。
【００２７】
Ａ．非原核生物微小藻類株
パネルのために選択された非原核生物藻類の特定の種は、本発明の性質に重要ではない。微小藻類候補は、進化的多様性および生態学的多様性を考慮することによって選択しうる。たとえば、候補は、広範囲な微小藻類門を提示するように選択可能である。１つの例は、それぞれ門カロフィタ（Ｃｈａｒｏｐｈｙｔａ）、クロララクニオフォタ（Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｐｈｙｔａ）、クロロフィタ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）、クリプトフィタ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｔａ）、ダイアトムス（Ｄｉａｔｏｍｓ）、ユーグレノフィタ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｔａ）、ハプトフィタ（Ｈａｐｔｏｐｈｙｔａ）、ヘテロコンタ（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔａ）、ロードフィタ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）から、少なくとも１つの候補を選択しうる。生態学的多様性がまた好ましくは最大化される。したがって、選択される門株には、制限はしないが、淡水底生、着生、プランクトン種（居住、例えば、自噴供給源、アルカリ性小川、富栄養湖および池、または高山湖および池）、海洋藻（熱帯、深海底の温暖および冷水変異体、および着生およびプランクトン生息、沿岸近く、外洋、海洋、好塩基性環境での生息を含む）、および南極藻類、砂漠生息藻類および土壌藻類のような非原核生物微小藻類、ならびに、外部寄生性藻類および温泉、雪および他の極端な環境からの、極所藻類が含まれる。パネルを選択するために使用しうる他の考慮としては、限定はしないが、選択した前駆体化合物と類似の化合物が、藻類内に存在するか、または藻類によって産出されるかの知識、および従属栄養性、自己栄養性または混合栄養性のような、代謝の型があげられる。
【００２８】
初期パネルで使用される、特定の非原核生物微小藻類は、本発明では重要ではない。本発明の使用可能な微小藻類の例には、（アクチノタエニウム（Ａｃｔｉｎｏｔａｅｎｉｕｍ）、アルスロデスムス（Ａｒｔｈｒｏｄｅｓｍｕｓ）、バンブシナ（Ｂａｍｂｕｓｉｎａ）、クロステリウム（Ｃｌｏｓｔｅｒｉｕｍ）、コスマリウム（Ｃｏｓｍａｒｉｕｍ）、コスモクラジウム（Ｃｏｓｍｏｃｌａｄｉｕｍ）、デスミジウム（Ｄｅｓｍｉｄｉｕｍ）、ユーアストラム（Ｅｕａｓｔｒｕｍ）、ゲニクラリア（Ｇｅｎｉｃｕｌａｒｉａ）、ゴナトザイゴン（Ｇｏｎａｔｏｚｙｇｏｎ）、ヘイマンシア（Ｈｅｉｍａｎｓｉａ）、ヒアロセカ（Ｈｙａｌｏｔｈｅｃａ）、メソタエニウム（Ｍｅｓｏｔａｅｎｉｕｍ）、ミクラステリアス（Ｍｉｃｒａｓｔｅｒｉａｓ）、モウゲオチア（Ｍｏｕｇｅｏｔｉａ）、ネトリウム（Ｎｅｔｒｉｕｍ）、オニコネマ（Ｏｎｙｃｈｏｎｅｍａ）、ペニウム（Ｐｅｎｉｕｍ）、フィマトドシス（Ｐｈｙｍａｔｏｄｏｃｉｓ）、プレウロタエニウム（Ｐｌｅｕｒｏｔａｅｎｉｕｍ）、ローヤ（Ｒｏｙａ）、スファエロゾスマ（Ｓｐｈａｅｒｏｚｏｓｍａ）、スピロギラ（Ｓｐｉｒｏｇｙｒａ）、スポンジロシウム（Ｓｐｏｎｄｙｌｏｓｉｕｍ）、スタウラストラム（Ｓｔａｕｒａｓｔｒｕｍ）、スタウロデスムス（Ｓｔａｕｒｏｄｅｓｍｕｓ）、テイリンギア（Ｔｅｉｌｉｎｇｉａ）、トリプロセラス（Ｔｒｉｐｌｏｃｅｒａｓ）、キサンチジウム（Ｘａｎｔｈｉｄｉｕｍ）、ザイグネマ（Ｚｙｇｎｅｍａ、ザイゴゴニウム（Ｚｙｇｏｇｏｎｉｕｍ）、（クロロキバス（Ｃｈｌｏｒｏｋｙｂｕｓ）を含む）クロロキボフィセアエ（Ｃｈｌｏｒｏｋｙｂｏｐｈｙｃｅａｅ）を含む）ジゲネマトフィセアエ（Ｚｙｇｅｎｅｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、（カエトスファエリジウム（Ｃｈａｅｔｏｓｐｈａｅｒｉｆｉｕｍ）およびメソトスチグマ（Ｍｅｓｏｔｓｔｉｇｍａ）を含む）メソスチグマトフィセアエ（Ｍｅｓｏｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、（クロロキブス（Ｃｈｌｏｒｏｋｙｂｕｓ）を含む）メソスチグマトフィセアエ（Ｍｅｓｏｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、（コレオカエーテ（Ｃｏｌｅｏｃｈａｅｔｅ）を含む）コレオカエトフィセアエ（Ｃｏｌｅｏｃｈａｅｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、（クレブソルミジウム（Ｋｌｅｂｓｏｒｍｉｄｉｕｍ）を含む）クレブソルミジオフィセアエ（Ｋｌｅｂｓｏｒｍｉｄｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アセタブラリア（Ａｃｅｔａｂｕｌａｒｉａ）、アシキュラリア（Ａｃｉｃｕｌａｒｉａ）、アクチノクロリス（Ａｃｔｉｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アンフィクリコス（Ａｍｐｈｉｋｒｉｋｏｓ）、アナドヨメン（Ａｎａｄｙｏｍｅｎｅ）、アンキストロデスムス（Ａｎｋｉｓｔｒｏｄｅｓｍｕｓ）、アンキラ（Ａｎｋｙｒａ）、アファノカエーテ（Ａｐｈａｎｏｃｈａｅｔｅ）、アスコクロリス（Ａｓｃｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アステロコッカス（Ａｓｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、アステロモナス  グラシリス（Ａｓｔｅｒｏｍｏｎａｓ  ｇｒａｃｉｌｉｓ）、アストレホメネ（Ａｓｔｒｅｐｈｏｍｅｎｅ）、アトラクトモルファ（Ａｔｒａｃｔｏｍｏｒｐｈａ）、アキシロコッカス（Ａｘｉｌｏｃｏｃｃｕｓ）、アキシロスファエラ（Ａｘｉｌｏｓｐｈａｅｒａ）、バ��クラミス（Ｂａｓｉｃｈｌａｍｙｓ）、バシクラジア（Ｂａｓｉｃｌａｄｉａ）、ビヌクレアリア（Ｂｉｎｕｃｌｅａｒｉａ）、ビペジノモナス（Ｂｉｐｅｄｉｎｏｍｏｎａｓ）、ブラストフィサ（Ｂｌａｓｔｏｐｈｙｓａ）、ボエルゲセニア（Ｂｏｅｒｇｅｓｅｎｉａ）、ボードレア（Ｂｏｏｄｌｅａ）、ボロジネラ（Ｂｏｒｏｄｉｎｅｌｌａ）、ボロジネロプシス（Ｂｏｒｏｄｉｎｅｌｌｏｐｓｉｓ）、ボトリオコッカス（Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ）、ブラチオモナス（Ｂｒａｃｈｉｏｍｏｎａｓ）、ブラクテアコッカアス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ）、ブルボカエーテ（Ｂｕｌｂｏｃｈａｅｔｅ）、カエスピテラ（Ｃａｅｓｐｉｔｅｌｌａ）、カプソシホン（Ｃａｐｓｏｓｉｐｈｏｎ）、カルテリア（Ｃａｒｔｅｒｉａ）、セントロスファエラ（Ｃｅｎｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、カエトモルファ（Ｃｈａｅｔｏｍｏｒｐｈａ）、カエトネマ（Ｃｈａｅｔｏｎｅｍａ）、カエトペルティス（Ｃｈａｅｔｏｐｅｌｔｉｓ）、カエトフォラ（Ｃｈａｅｔｏｐｈｏｒａ）、カルマシア（Ｃｈａｌｍａｓｉａ）、カマエトリコン（Ｃｈａｍａｅｔｒｉｃｈｏｎ）、カラシオクロリス（Ｃｈａｅｃｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、カラシオシフォン（Ｃｈａｒａｃｉｏｓｉｐｈｏｎ）、カラシウム（Ｃｈａｒａｃｉｕｍ）、クラミデラ（Ｃｈｌａｍｙｄｅｌｌａ）、クラミドボトリス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｂｏｔｒｙｓ）、クラミドカプサ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｃａｐｓａ）、クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）、クラミドポディウム（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｏｄｉｕｍ）、クロラノマラ（Ｃｈｌｏｒａｎｏｍａｌａ）、クロラシドリジオン（Ｃｈｌｏｒａｃｈｙｄｒｉｄｉｏｎ）、クロロキトリウム（Ｃｈｌｏｒｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）、クロロクラダス（Ｃｈｌｏｒｏｃｌａｄｕｓ）、クロロクロステル（Ｃｈｌｏｒｏｃｌｏｓｔｅｒ）、クロロコッコプシス（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｏｐｓｉｓ）、クロロコッカム（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、クロロゴニウム（Ｃｈｌｏｒｏｇｏｎｉｕｍ）、クロロモナス（Ｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ）、クロロフィサリス（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｓａｌｉｓ）、クロロサルシナ（Ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃｉｎａ）、クロロサルシノプシス（Ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃｉｎｏｐｓｉｓ）、クロロスファエラ（Ｃｈｌｏｒｏｓｐｈａｅｒａ）、クロロスファエロプシス（Ｃｈｌｏｒｏｓｐｈａｅｒｏｐｓｉｓ）、クロロテトラエドロン（Ｃｈｌｏｒｏｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、クロロセシウム（Ｃｈｌｏｒｏｔｈｅｃｉｕｍ）、コダテラ（Ｃｈｏｄａｔｅｌｌａ）、コリシスティス（Ｃｈｏｒｉｃｙｓｔｉｓ）、クラドホラ（Ｃｌａｄｏｐｈｏｒａ）、クラドホロプシス（Ｃｌａｄｏｐｈｏｒｏｐｓｉｓ），クロニオホラ（Ｃｌｏｎｉｏｐｈｏｒａ）、クロステリオプシス（Ｃｌｏｓｔｅｒｉｏｐｓｉｓ）、コッコボトリス（Ｃｏｃｏｂｏｔｒｙｓ）、コエラステレラ（Ｃｏｅｌａｓｔｒｅｌｌａ）、コエラステロプシス（Ｃｏｅｌａｓｔｒｏｐｓｉｓ）、コエラストラム（Ｃｏｅｌａｓｔｒｕｍ）、コエノクロリス（Ｃｏｅｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、コレオクラミス（Ｃｏｌｅｏｃｈｌａｍｙｓ）、コロナストラム（Ｃｏｒｏｎａｓｔｒｕｍ）、クルシゲニア（Ｃｒｕｃｉｇｅｎｉａ）、クルシゲニエラ（Ｃ��ｕｃｉｇｅｎｉｅｌｌａ）、セテノクラダス（Ｃｔｅｎｏｃｌａｄｕｓ）、シリンドロカプサ（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｐｓａ）、シリンドロカプソプシス（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｐｓｏｐｓｉｓ）、シリンドロシスティス（Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃｙｓｔｉｓ）、シモポリア（Ｃｙｍｏｐｏｌｉａ）、シストコッカス（Ｃｙｓｔｏｃｏｃｃｕｓ）、シストモナス（Ｃｙｓｔｏｍｏｎａｓ）、ダクチロコッカス（Ｄａｃｔｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ダシクラダス（Ｄａｓｙｃｌａｄｕｓ）、デアソニア（Ｄｅａｓｏｎｉａ）、デルベシア（Ｄｅｒｂｅｓｉａ）、デスマトラクタム（Ｄｅｓｍａｔｒａｃｔｕｍ）、デスモデスムス（Ｄｅｓｍｏｄｅｓｍｕｓ）、デスモテトラ（Ｄｅｓｍｏｔｅｔｒａ）、ディアカントス（Ｄｉａｃａｎｔｈｏｓ）、ディセルラ（Ｄｉｃｅｌｌｕｌａ）、ディクロスタ（Ｄｉｃｌｏｓｔｅｒ）、ディクラノカエテ（Ｄｉｃｒａｎｏｃｈａｅｔｅ）、ディクチオクロリス（Ｄｉｃｔｙｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ディクチオコッカス（Ｄｉｃｔｙｏｃｏｃｃｕｓ）、ディクチオスファエリア（Ｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉａ）、ディクチオスファエリウム（Ｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉｕｍ）、ジダイモシスティス（Ｄｉｄｙｍｏｃｙｓｔｉｓ）、ジダイモジーンズ（Ｄｉｄｙｍｏｇｅｎｅｓ）、ジラビフィルム（Ｄｉｌａｂｉｆｉｌｕｍ）、ジモルホコッカス（Ｄｉｍｏｒｐｈｏｃｏｃｃｕｓ）、ジプロスファエラ（Ｄｉｐｌｏｓｐｈａｅｒａ）、ドラパルンルディア（Ｄｒａｐａｒｎａｌｄｉａ）、ダナリエラ（Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ）、ダイスモルホコッカス（Ｄｙｓｍｏｒｐｈｏｃｏｃｃｕｓ）、エチノコレウム（Ｅｃｈｉｎｏｃｏｌｅｕｍ）、エラカトスリックス（Ｅｌａｋａｔｏｔｈｒｉｘ）、エナラックス（Ｅｎａｌｌａｘ）、エントクラジア（Ｅｎｔｏｃｌａｄｉａ）、エントランシア（Ｅｎｔｒａｎｓｉａ）、エレモスファエラ（Ｅｒｅｍｏｓｐｈａｅｒａ）、エッチリア（Ｅｔｔｌｉａ）、ユードリナ（Ｅｕｄｏｒｉｎａ）、ファソシクロクロリス（Ｆａｓｃｉｃｕｌｏｃｈｌｏｒｉｓ）、フェルナンジネラ（Ｆｅｒｎａｎｄｉｎｅｌｌａ）、ホリクラリア（Ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｉａ）、ホッテア（Ｆｏｔｔｅａ）、フランセイア（Ｆｒａｎｃｅｉａ）、フリエドマニア（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎｉａ）、フリチェラ（Ｆｒｉｔｓｃｈｉｅｌｌａ）、フソーラ（Ｆｕｓｏｌａ）、ゲミネラ（Ｇｅｍｉｎｅｌｌａ）、グロエオコッカス（Ｇｌｏｅｏｃｏｃｃｕｓ）、グロエオシスティス（Ｇｌｏｅｏｃｙｓｔｉｓ）、グロエオデンドロン（Ｇｌｏｅｏｄｅｎｄｒｏｎ）、グロエオモナス（Ｇｌｏｅｏｍｏｎａｓ）、グロエオチラ（Ｇｌｏｅｏｔｉｌａ）、ゴレンキニア（Ｇｏｌｅｎｋｉｎｉａ）、ゴングロシラ（Ｇｏｎｇｒｏｓｉｒａ）、ゴニウム（Ｇｏｎｉｕｍ）、グラエシエラ（Ｇｒａｅｓｉｅｌｌａ）、グラニュロシスティス（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｓｔｉｓ）、ウーシスティス（Ｏｏｃｙｓｔｉｓ）、グラニュロシストプシス（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｓｔｏｐｓｉｓ）、ギオルフィアナ（Ｇｙｏｒｆｆｉａｎａ）、ヘマトコッカス（Ｈａｅｍａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ハゼニア（Ｈａｚｅｎｉａ）、ヘリコジクティオン（Ｈｅｌｉｃｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ヘミクロリス（Ｈｅｍｉｃｈｌｏｒｉｓ）、ヘ��ロクラミドモナス（Ｈｅｔｅｒｏｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ）、ヘテロマスティックス（Ｈｅｔｅｒｏｍａｓｔｉｘ）、ヘテロテトラシスティス（Ｈｅｔｅｒｏｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、ホルミジオスポラ（Ｈｏｒｍｉｄｉｏｓｐｏｒａ）、ホルミジウム（Ｈｏｒｍｉｄｉｕｍ）、ホルモチラ（Ｈｏｒｍｏｔｉｌａ）、ホルモチロプシス（Ｈｏｒｍｏｔｉｌｏｐｓｉｓ）、ヒアロコッカス（Ｈｙａｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ヒアロジスカス（Ｈｙａｌｏｄｉｓｃｕｓ）、ヒアロゴニウム（Ｈｙａｌｏｇｏｎｉｕｍ）、ヒアロラフィジウム（Ｈｙａｌｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ）、ヒドロジクチオン（Ｈｙｄｒｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ヒプノモナス（Ｈｙｐｎｏｍｏｎａｓ）、イグナチウス（Ｉｇｎａｔｉｕｓ）、インターフィルム（Ｉｎｔｅｒｆｉｌｕｍ）、ケントロスファエラ（Ｋｅｎｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、ケラトコッカス（Ｋｅｒａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ケルマチア（Ｋｅｒｍａｔｉａ）、キルキネリエラ（Ｋｉｒｃｈｎｅｒｉｅｌｌａ）、コリエラ（Ｋｏｌｉｅｌｌａ）、ラゲルヘイミア（Ｌａｇｅｒｈｅｉｍｉａ）、ラウトスファエリア（Ｌａｕｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）、レプトシロプシス（Ｌｅｐｔｏｓｉｒｏｐｓｉｓ）、ロボシスティス（Ｌｏｂｏｃｙｓｔｉｓ）、ロボモナス（Ｌｏｂｏｍｏｎａｓ）、ローラ（Ｌｏｌａ）、マクロクロリス（Ｍａｃｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、マルバニア（Ｍａｒｖａｎｉａ）、ミクラクチニウム（Ｍｉｃｒａｃｔｉｎｉｕｍ）、ミクロジクチオン（Ｍｉｃｒｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ミクロスポラ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ）、モノラフィジウム（Ｍｏｎｏｒａｐｈｉｄｉｕｍ）、ムリエラ（Ｍｕｒｉｅｌｌａ）、ミコナステス（Ｍｙｃｈｏｎａｓｔｅｓ）、ナノコロラム（Ｎａｎｏｃｈｌｏｒｕｍ）、ノートコッカス（Ｎａｕｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ネグレクテラ（Ｎｅｇｌｅｃｔｅｌｌａ）、ネオクロリス（Ｎｅｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ネオデスムス（Ｎｅｏｄｅｓｍｕｓ）、ネオメリス（Ｎｅｏｍｅｒｉｓ）、ネオスポンギオコッカム（Ｎｅｏｓｐｏｎｇｉｏｃｏｃｃｕｍ）、ネフロクラミス（Ｎｅｐｈｒｏｃｈｌａｍｙｓ）、ネフロシチウム（Ｎｅｐｈｒｏｃｙｔｉｕｍ）、ネフロジエラ（Ｎｅｐｈｒｏｄｉｅｌｌａ）、オエドクラジウム（Ｏｅｄｏｃｌａｄｉｕｍ）、オエドゴニウム（Ｏｅｄｏｇｏｎｉｕｍ）、ウーシステラ（Ｏｏｃｙｓｔｅｌｌａ）、オーネフリス（Ｏｏｎｅｐｈｒｉｓ）、オウロコッカス（Ｏｕｒｏｃｏｃｃｕ
ｓ）、パチクラデラ（Ｐａｃｈｙｃｌａｄｅｌｌａ）、パルメラ（Ｐａｌｍｅｌｌａ）、パルメロコッカス（Ｐａｌｍｅｌｌｏｃｏｃｃｕｓ）、パルメロプシス（Ｐａｌｍｅｌｌｏｐｓｉｓ）、パルモジクチオン（Ｐａｌｍｏｄｉｃｔｙｏｎ）、パンドリナ（Ｐａｎｄｏｒｉｎａ）、パラドキシア（Ｐａｒａｄｏｘｉａ）、パリエトクロリス（Ｐａｒｉｅｔｏｃｈｌｏｒｉｓ）、パシェリナ（Ｐａｓｃｈｅｒｉｎａ）、パウルスクルジア（Ｐａｕｌｓｃｈｕｌｚｉａ）、ペクトジクチオン（Ｐｅｃｔｏｄｉｃｔｙｏｎ）、ペジアストラム（Ｐｅｄｉａｓｔｒｕｍ）、ペジノモナス（Ｐｅｄｉｎｏｍｏｎａｓ）、ペジノペラ（Ｐｅｄｉｎｏｐｅｒａ）、パークルサリア（Ｐｅｒｃｕｒｓａｒｉａ）、ファコトゥス（Ｐｈａｃｏｔｕｓ）、ファエオフィラ（Ｐｈａｅｏｐｈｉｌａ）、フィソラチウム（Ｐｈｙｓｏｃｙｔｉｕｍ）、ピリナ（Ｐｉｌｉｎａ）、プランクトネマ（Ｐｌａｎｃｔｏｎｅｍａ）、プランクトスファエリア（Ｐｌａｎｋｔｏｓｐｈａｅｒｉａ）、プラチドリナ（Ｐｌａｔｙｄｏｒｉｎａ）、プラチモナス（Ｐｌａｔｙｍｏｎａｓ）、プレオドリナ（Ｐｌｅｏｄｏｒｉｎａ）、プレウラストラム（Ｐｌｅｕｒａｓｔｒｕｍ）、プレウロコッカス（Ｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｓ）、プロエオチラ（Ｐｌｏｅｏｔｉｌａ）、ポリエドリオプシス（Ｐｏｌｙｅｄｒｉｏｐｓｉｓ）、ポリフィサ（Ｐｏｌｙｐｈｙｓａ）、ポリトーマ（Ｐｏｌｙｔｏｍａ）、ポリトメラ（Ｐｏｌｙｔｏｍｅｌｌａ）、プラシノクラダス（Ｐｒａｓｉｎｏｃｌａｄｕｓ）、プラシノコッカス（Ｐｒａｓｉｏｃｏｃｃｕｓ）、プロトデルマ（Ｐｒｏｔｏｄｅｒｍａ）、プロトシフォン（Ｐｒｏｔｏｓｉｐｈｏｎ）、シューデンドクロニオプシス（Ｐｓｅｕｄｅｎｄｏｃｌｏｎｉｏｐｓｉｓ）、シュードカラシウム（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｒａｃｉｕｍ）、シュードクロレラ（Ｐｓｅｕｄｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、シュードクロロコッカム（Ｐｓｅｕｄｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、シュードコッコミキサ（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｏｍｙｘａ）、シュードジクチオスファエリウム（Ｐｓｅｕｄｏｄｉｃｔｙｏｓｐｈａｅｒｉｕｍ）、シュードジジモシスティス（Ｐｓｅｕｄｏｄｉｄｙｍｏｃｙｓｔｉｓ）、シュードキルクネリエラ（Ｐｓｅｕｄｏｋｉｒｃｈｎｅｒｉｅｌｌａ）、シュードプレウロコッカス（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードスキゾメリス（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｈｉｚｏｍｅｒｉｓ）、シュードスクロエデリア（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｈｒｏｅｄｅｒｉａ）、シュードスチココッカス（Ｐｓｅｕｄｏｓｔｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードテトラシスティス（Ｐｓｅｕｄｏｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、シュードテトラエドロン（Ｐｓｅｕｄｏｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、シュードテレボウキシア（Ｐｓｅｕｄｏｔｒｅｂｏｕｘｉａ）、プテロモナス（Ｐｔｅｒｏｍｏｎａｓ）、プルクラスファエラ（Ｐｕｌｃｈｒａｓｐｈａｅｒａ）、ピラミモナス（Ｐｙｒａｍｉｍｏｎａｓ）、ピロボトリス（Ｐｙｒｏｂｏｔｒｙｓ）、クアドリグラ（Ｑｕａｄｒｉｇｕｌａ）、ラジオフィルム（Ｒａｄｉｏｆｉｌｕｍ）、ラジオスファエラ（Ｒａｄｉｏｓｐｈａｅｒａ）、ラフィドセリス（Ｒａｐｈｉｄｏｃｅｌｉｓ）、ラフィドネマ（Ｒａｐｈｉｄｏｎｅｍａ）、ラヒドネモプシス（Ｒａｐｈｉｄｏｎｅｍｏｐｓｉｓ）、リゾコニウム（Ｒｈｉｚｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ローパロソレン（Ｒｈｏｐａｌｏｓｏｌｅｎ）、サプロカエテ（Ｓａｐｒｏｃｈａｅｔｅ）、シーンデスムス（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓ）、スキゾクラミス（Ｓｃｈｉｚｏｃｈｌａｍｙｓ）、スキゾメリス（Ｓｃｈｉｚｏｍｅｒｉｓ）、スロエデリア（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒｉａ）、スロエデリエラ（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒｉｅｌｌａ）、スコチエロプシス（Ｓｃｏｔｉｅｌｌｏｐｓｉｓ）、シデロシストプシス（Ｓｉｄｅｒｏｃｙｓｔｏｐｓｉｓ）、シフォノクラダス（Ｓｉｐｈｏｎｏｃｌａｄｕｓ）、シロゴニウム（Ｓｉｒｏｇｏｎｉｕｍ）、ソラストラム（Ｓｏｒａｓｔｒｕｍ）、スペルマトゾプシス（Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏｐｓｉｓ）、スファエレラ（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌａ）、スファエレロシスティス（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌｏｃｙｓｔｉｓ）、スファエレロプシス（Ｓｐｈａｅｒｅｌｌｏｐｓｉｓ）、スファエロシスティス（Ｓｐｈａｅｒｏｃｙｓｔｉｓ）、スファエロプレア（Ｓｐｈａｅｒｏｐｌｅａ）、スピロタエニア（Ｓｐｉｒｏｔａｅｎｉａ）、スポンギオクロリス（Ｓｐｏｎｇｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、スポンギオコッカム（Ｓｐｏｎｇｉｏｃｏｃｃｕｍ）、ステファノプテラ（Ｓｔｅｐｈａｎｏｐｔｅｒａ）、ステファノスファエラ（Ｓｔｅｐｈａｎｏｓｐｈａｅｒａ）、スチゲオクロニウム（Ｓｔｉｇｅｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ストルベア（Ｓｔｒｕｖｅａ）、テトメモルス（Ｔｅｔｍｅｍｏｒｕｓ）、テトラバエナ（Ｔｅｔｒａｂａｅｎａ）、テトラシスティス（Ｔｅｔｒａｃｙｓｔｉｓ）、テトラデスムス（Ｔｅｔｒａｄｅｓｍｕｓ）、テトラエドロン（Ｔｅｔｒａｅｄｒｏｎ）、テトララントス（Ｔｅｔｒａｌｌａｎｔｏｓ）、テトラセルミス（Ｔｅｔｒａｓｅｌｍｉｓ）、テトラスポラ（Ｔｅｔｒａｓｐｏｒａ）、テトラストラム（Ｔｅｔｒａｓｔｒｕｍ）、トレウバリア（Ｔｒｅｕｂａｒｉａ）、トリプロセロス（Ｔｒｉｐｌｏｃｅｒｏｓ）、トロキスシア（Ｔｒｏｃｈｉｓｃｉａ）、トロキスシオプシス（Ｔｒｏｃｈｉｓｃｉｏｐｓｉｓ）、ウルバ（Ｕｌｖａ）、ウロネマ（Ｕｒｏｎｅｍａ）、バロニア（Ｖａｌｏｎｉａ）、バロニオプシス（Ｖａｌｏｎｉｏｐｓｉｓ）、ベントリカリア（Ｖｅｎｔｒｉｃａｒｉａ）、ビリジエラ（Ｖｉｒｉｄｉｅｌｌａ）、ビトレオクラミス（Ｖｉｔｒｅｏｃｈｌａｍｙｓ）、ボルボックス（Ｖｏｌｖｏｘ）、ボルブリナ（Ｖｏｌｖｕｌｉｎａ）、ウエステラ（Ｗｅｓｔｅｌｌａ）、ウィレア（Ｗｉｌｌｅａ）、ウイスロウキエラ（Ｗｉｓｌｏｕｃｈｉｅｌｌａ）、ズークロレラ（Ｚｏｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、ザイグネモプシス（Ｚｙｇｎｅｍｏｐｓｉｓ）、スペルマトゾプシス（Ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏｐｓｉｓ）、ヒアロセカ（Ｈｙａｌｏｔｈｅｃａ）、プレウラストラム（Ｐｌｅｕｒａｓｔｒｕｍ）、クロロコッカム（Ｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、シュードプレウロコッカム（Ｐｓｅｕｄｏｐｌｅｕｒｏｃｏｃｃｕｍ）、コエラストラム（Ｃｏｅｌａｓｔｒｕｍ）およびローパロシスティス（Ｒｈｏｐａｌｏｃｙｓｔｉｓ）を含む）クロロフィセアエ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アクロカエテ（Ａｃｒｏｃｈａｅｔｅ）、ブリオプシス（Ｂｒｙｏｐｓｉｓ）、セファレウロス（Ｃｅｐｈａｌｅｕｒｏｓ）、クロロシスティス（Ｃｈｌｏｒｏｃｙｓｔｉｓ）、エンテロモルファ（Ｅｎｔｅｒｏｍｏｒｐｈａ）、グロエオチロプシス（Ｇｌｏｅｏｔｉｌｏｐｓｉｓ）、ハロクロロコッカム（Ｈａｌｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｍ）、オストレオビウム（Ｏｓｔｒｅｏｂｉｕｍ）、ピルラ（Ｐｉｒｕｌａ）、ピソホラ（Ｐｉｔｈｏｐｈｏｒａ）、プラノフィラ（Ｐｌａｎｏｐｉｌａ）、シューデンドクロニウム（Ｐｓｅｕｄｅｎｄｏｃｌｏｎｉｕｍ）、トレンテポホリア（Ｔｒｅｎｔｅｐｏｈｌｉａ）、トリコサルシナ（Ｔｒｉｃｈｏｓａｒｃｉｎａ）、ウロスリックス（Ｕｌｏｔｈｒｉｘ）、ボルボコレオン（Ｂｏｌｂｏｃｏｌｅｏｎ）、カエトシフォン（Ｃｈａｅｔｏｓｉｐｈｏｎ）、ユーゴモンチア（Ｅｕｇｏｍｏｎｔｉａ）、オルトマンシエロプシス（Ｏｌｔｍａｎｎｓｉｅｌｌｏｐｓｉｓ）、プリングシエミエラ（Ｐｒｉｎｇｓｈｅｉｍｉｅｌｌａ）、シュードデンドロクロニウム（Ｐｓｅｕｄｏｄｅｎｄｒｏｃｌｏｎｉｕｍ）、シューデュルベラ（Ｐｓｅｕｄｕｌｖｅｌｌａ）、スポロクラドプシス（Ｓｐｏｒｏｃｌａｄｏｐｓｉｓ）、ウロスポラ（Ｕｒｏｓｐｏｒａ）、およびウィットロキエラ（Ｗｉｔｔｒｏｃｋｉｅｌｌａ）を含む）ウルボフィセアエ（Ｕｌｖｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アパトコッカス（Ａｐａｔｏｃｏｃｃｕｓ）、アステロクロリス（Ａｓｔｅｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、アウキセノクロレラ（Ａｕｘｅｎｏｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、コッコミキシア（Ｃｏｃｃｏｍｙｘａ）、デスモコッカス（Ｄｅｓｍｏｃｏｃｃｕｓ）、ジクチオクロロプシス（Ｄｉｃｔｙｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）、エリプトクロリス（Ｅｌｌｉｐｔｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ジャーギエラ（Ｊａａｇｉｅｌｌａ）、レプトシラ（Ｌｅｐｔｏｓｉｒａ）、ロボコッカス（Ｌｏｂｏｃｏｃｃｕｓ）、マキノエラ（Ｍａｋｉｎｏｅｌｌａ）、ミクロサムニオン（Ｍｉｃｒｏｔｈａｍｎｉｏｎ）、ミルメシア（Ｍｙｒｍｅｃｉａ）、ナノクロリス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｉｓ）、オーシスティス（Ｏｏｃｙｓｔｉｓ）、プラシオラ（Ｐｒａｓｉｏｌａ）、プラシオロプシス（Ｐｒｏｓｉｏｌｏｐｓｉｓ）、プロトセカ（Ｐｒｏｔｏｔｈｅｃａ）、スチチオコッカス（Ｓｔｉｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、テトラクロレラ（Ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｅｌｌａ）、トレボウキシア（Ｔｒｅｂｏｕｘｉａ）、トリコフィルス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｉｌｕｓ）、ワタナベア（Ｗａｔａｎａｂｅａ）およびミルメシア（Ｍｙｒｍｅｃｉａ）を含む）トレボウキシオフィセアエ（Ｔｒｅｂｏｕｘｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、（バチコッカス（Ｂａｔｈｙｃｏｃｃｕｓ）、マントニエラ（Ｍａｎｔｏｎｉｅｌｌａ）、ミクロモナス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎａｓ）、ネフロセルミス（Ｎｅｐｈｒｏｓｅｌｍｉｓ）、シュードスコウルフィエルディア（Ｐｓｅｕｄｏｓｃｏｕｒｆｉｅｌｄｉａ）、シェルフェリア（Ｓｃｈｅｒｆｆｅｌｉａ）、ピコシスティス（Ｐｉｃｏｃｙｓｔｉｓ）、ペトロスペルマ（Ｐｔｅｒｏｓｐｅｒｍａ）およびフィシノコッカス（Ｐｙｃｎｏｃｏｃｃｕ）を含む）プラシニオフィセアエ（Ｐｒａｓｉｎｉｏｐｈｙｃｅａｅ）および（ザイゴゴニウム（Ｚｙｇｏｇｏｎｉｕｍ）を含む）カロフィセアンズ（Ｃｈａｒｏｐｈｙｃｅａｎｓ）などのクロロフィタ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔａ）、（ボリドモナス（Ｂｏｌｉｄｏｍｏｎａｓ）、クリソフィセアエ（Ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｃｅａｅ）、ギラウジオプシス（Ｇｉｒａｕｄｙｏｐｓｉｓ）、グロッソマスティックス（Ｇｌｏｓｓｏｍａｓｔｉｘ）、クロモフィトン（Ｃｈｒｏｍｏｐｈｙｔｏｎ）、クリサモエバ（Ｃｈｒｙｓａｍｏｅｂａ）、クリソカエテ（Ｃｈｒｙｓｏｃｈａｅｔｅ）、クリソジジムス（Ｃｈｒｙｓｏｄｉｄｙｍｕｓ）、クリソルエピドモナス（Ｃｈｒｙｓｏｌｅｐｉｄｏｍｏｎａｓ）、クリソサッカス（Ｃｈｒｙｓｏｓａｃｃｕｓ）、クリソスファエア（Ｃｈｒｙｓｏｓｐｈａｅｒａ）、クリソキシス（Ｃｈｒｙｓｏｘｙｓ）、シクロネキシス（Ｃｙｃｌｏｎｅｘｉｓ）、ジノブリオン（Ｄｉｎｏｂｒｙｏｎ）、エピクリシス（Ｅｐｉｃｈｒｙｓｉｓ）、エピピキシス（Ｅｐｉｐｙｘｉｓ）、ヒベルディア（Ｈｉｂｂｅｒｄｉａ）、ラギニオン（Ｌａｇｙｎｉｏｎ）、レポクロムリナ（Ｌｅｐｏｃｈｒｏｍｕｌｉｎａ）、モナス（Ｍｏｎａｓ）、モノクリシス（Ｍｏｎｏｃｈｒｙｓｉｓ）、パラフィソモナス（Ｐａｒａｐｈｙｓｏｍｏｎａｓ）、ファエオプラカ（Ｐｈａｅｏｐｌａｃａ）、ファエオスキゾクラミス（Ｐｈａｅｏｓｃｈｉｚｏｃｈｌａｍｙｓ）、ピコファガス（Ｐｉｃｏｐｈａｇｕｓ）、プレウロクリシス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ）、スティコグロエア（Ｓｔｉｃｈｏｇｌｏｅａ）およびウログレナ（Ｕｒｏｇｌｅｎａ）を含む）ボリドフィセアエ（Ｂｏｌｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、（バクテリアストラム（Ｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒｕｍ）、ベレロケア（Ｂｅｌｌｅｒｏｃｈｅａ）、ビドルフィア（Ｂｉｄｄｕｌｐｈｉａ）、ブロックマニエラ（Ｂｒｏｃｋｍａｎｎｉｅｌｌａ）、コレスロン（Ｃｏｒｅｔｈｒｏｎ）、コスチノジスカス（Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｕｓ）、エウカンピア（Ｅｕｃａｍｐｉａ）、エキシチューボセルルス（Ｅｘｔｕｂｏｃｅｌｌｕｌｕｓ）、グイナルジア（Ｇｕｉｎａｒｄｉａ）、ヘリコセカ（Ｈｅｌｉｃｏｔｈｅｃａ）、レプトシリンドラス（Ｌｅｐｔｏｃｙｌｉｎｄｒｕｓ）、レイアネラ（Ｌｅｙａｎｅｌｌａ）、リソデスミウム（Ｌｉｔｈｏｄｅｓｍｉｕｍ）、メロシラ（Ｍｅｌｏｓｉｒａ）、ミニジスカス（Ｍｉｎｉｄｉｓｃｕｓ）、オドンテラ（Ｏｄｏｎｔｅｌｌ
ａ）、プランクトニエラ（Ｐｌａｎｋｔｏｎｉｅｌｌａ）、ポロシラ（Ｐｏｒｏｓｉｒａ）、プロボスシア（Ｐｒｏｂｏｓｃｉａ）、リゾソレニア（Ｒｈｉｚｏｓｏｌｅｎｉａ）、ステラリマ（Ｓｔｅｌｌａｒｉｍａ）、サラシオネマ（Ｔｈａｌａｓｓｉｏｎｅｍａ）、ビコソエシド（Ｂｉｃｏｓｏｅｃｉｄ）、シムビオモナス（Ｓｙｍｂｉｏｍｏｎａｓ）、アクチノシクラス（Ａｃｔｉｎｏｃｙｃｌｕｓ）、アンホーラ（Ａｍｐｈｏｒａ）、アルコセルルス（Ａｒｃｏｃｅｌｌｕｌｕｓ）、デトヌラ（Ｄｅｔｏｎｕｌａ）、ディアトーマ（Ｄｉａｔｏｍａ）、ジチルム（Ｄｉｔｙｌｕｍ）、フラギルアリオフィセアエ（Ｆｒａｇｉｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｓｅ）、アステリオネロプシス（Ａｓｔｅｒｉｏｎｅｌｌｏｐｓｉｓ）、デルフィネイス（Ｄｅｌｐｈｉｎｅｉｓ）、グラマトホラ（Ｇｒａｍｍａｔｏｐｈｏｒａ）、ナノフルスタラム（Ｎａｎｏｆｒｕｓｔｕｌｕｍ）、シネドラ（Ｓｙｎｅｄｒａ）およびタブラリア（Ｔａｂｕｌａｒｉａ）を含む）コスシノジスコフィセアエ（Ｃｏｓｃｉｎｏｄｉｓｃｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アデノイデス（Ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、アレキサンドリウム（Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ）、アンフィジニウム（Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ）、セラチウム（Ｃｅｒａｔｉｕｍ）、セラトコリス（Ｃｅｒａｔｏｃｏｒｙｓ）、クーリア（Ｃｏｏｌｉａ）、クリプセコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）、エキシウビアエラ（Ｅｘｕｖｉａｅｌｌａ）、ガンビエルジスカス（Ｇａｍｂｉｅｒｄｉｓｃｕｓ）、ゴニアウラックス（Ｇｏｎｙａｕｌａｘ）、ギムノジニウム（Ｇｙｍｎｏｄｉｎｉｕｍ）、ギロジニウム（Ｇｙｒｏｄｉｎｉｕｍ）、ヘテロカプサ（Ｈｅｔｅｒｏｃａｐｓａ）、カトジニウム（Ｋａｔｏｄｉｎｉｕｍ）、リングロジニウム（Ｌｉｎｇｕｌｏｄｉｎｉｕｍ）、フィエステリア（Ｐｆｉｅｓｔｅｒｉａ）、ポラレラ（Ｐｏｌａｒｅｌｌａ）、プロトセラチウム（Ｐｒｏｔｏｃｅｒａｔｉｕｍ）、フィロシスティス（Ｐｙｒｏｃｙｓｔｉｓ）、スクリプシエラ（Ｓｃｒｉｐｐｓｉｅｌｌａ）、シンビオジニウム（Ｓｙｍｂｉｏｄｉｎｉｕｍ）、セカジニウム（Ｔｈｅｃａｄｉｎｉｕｍ）、ソラコスファエラ（Ｔｈｏｒａｃｏｓｐｈａｅｒａ）およびゾオキサンセラ（Ｚｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａ）を含む）ジノフィセアエ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）、および（シストジニウム（Ｃｙｓｔｏｄｉｎｉｕｍ）、グレノジニウム（Ｇｌｅｎｏｄｉｎｉｕｍ）、オキシリヒス（Ｏｘｙｒｒｈｉｓ）、ペリジニウム（Ｐｅｒｉｄｉｎｉｕｍ）、プロロセントリウム（Ｐｒｏｒｏｃｅｎｔｒｕｍ）およびウォロスジンスキア（Ｗｏｌｏｓｚｙｎｓｋｉａ）を含む）アルベオレーテス（Ａｌｖｅｏｌａｔｅｓ）などのダイアトムス（Ｄｉａｔｏｍｓ）、（アクロカエチウム（Ａｃｒｏｃｈａｅｔｉｕｍ）、アガルドヘイラ（Ａｇａｒｄｈｉｅｌｌａ）、アンチタムニオン（Ａｎｔｉｔｈａｍｎｉｏｎ）、アンチタムニオネラ（Ａｎｔｉｔｈａｍｎｉｏｎｅｌｌａ）、アステロシサイティス（Ａｓｔｅｒｏｃｙｔｉｓ）、オウドウイネラ（Ａｕｄｏｕｉｎｅｌｌａ）、バルビアニア（Ｂａｌｂｉａｎｉａ）、バンギア（Ｂａｎｇｉａ）、バトラコスペルマム（Ｂａｔｒａｃｈｏｓｐｅｒｍｕｍ）、ボネマイソニア（Ｂｏｎｎｅｍａｉｓｏｎｉａ）、ボストリキア（Ｂｏｓｔｒｙｃｈｉａ）、カリサムニオン（Ｃａｌｌｉｔｈａｍｎｉｏｎ）、カログロッサ（Ｃａｌｏｇｌｏｓｓａ）、セラミウム（Ｃｅｒａｍｉｕｍ）、チャンピア（Ｃｈａｍｐｉａ）、クロオダクチロン（Ｃｈｒｏｏｄａｃｔｙｌｏｎ）、クロオセセ（Ｃｈｒｏｏｔｈｅｃｅ）、コンプソポゴン（Ｃｏｍｐｓｏｐｏｇｏｎ）、コンプソポゴノプシス（Ｃｏｍｐｓｏｐｏｇｏｎｏｐｓｉｓ）、クマグロイア（Ｃｕｍａｇｌｏｉａ）、シアニジウム（Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ）、シストクロニウム（Ｃｙｓｔｏｃｌｏｎｉｕｍ）、ダスヤ（Ｄａｓｙａ）、ジゲニア（Ｄｉｇｅｎｉａ）、ジキソニエラ（Ｄｉｘｏｎｉｅｌｌａ）、エリスロクラディア（Ｅｒｙｔｈｒｏｃｌａｄｉａ）、エリスロロバス（Ｅｒｙｔｈｒｏｌｏｂａｓ）、エリスロトリキア（Ｅｒｙｔｈｒｏｔｒｉｃｈｉａ）、フリンチエラ（Ｆｌｉｎｔｉｅｌｌａ）、ガルデイリア（Ｇａｌｄｉｅｒｉａ）、ゲリジウム（Ｇｅｌｉｄｉｕｍ）、グラウコスファエラ（Ｇｌａｕｃｏｓｐｈａｅｒａ），ゴニオトリクム（Ｇｏｎｉｏｔｒｉｃｈｕｍ）、グラシラリア（Ｇｒａｃｉｌａｒｉａ）、グラテロウピア（Ｇｒａｔｅｌｏｕｐｉａ）、グリフィスシア（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉａ）、ヒルデンブランディア（Ｈｉｌｄｅｎｂｒａｎｄｉａ）、ヒメノクラジオプシス（Ｈｙｍｅｎｏｃｌａｄｉｏｐｓｉｓ）、ヒプネア（Ｈｙｐｎｅａ）、ラインギア（Ｌａｉｎｇｉａ）、メンブラノプテラ（Ｍｅｍｂｒａｎｏｐｔｅｒａ）、ミリオグラム（Ｍｙｒｉｏｇｒａｍｍｅ）、ネマリオン（Ｎｅｍａｌｉｏｎ）、ネマリオノプシス（Ｎｅｍａｌｉｏｎｏｐｓｉｓ）、ネオアガルドヘイラ（Ｎｅｏａｇａｒｄｈｉｅｌｌａ）、パルマリア（Ｐａｌｍａｒｉａ）、フィロホラ（Ｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａ）、ポリネウラ（Ｐｏｌｙｎｅｕｒａ）、ポリシホニア（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａ）、ポルフィラ（Ｐｏｒｐｈｙｒａ）、ポルフィリジウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）、シュードチャントランシア（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｎｔｒａｎｓｉａ）、プテロクラジア（Ｐｔｅｒｏｃｌａｄｉａ）、プゲチア（Ｐｕｇｅｔｉａ）、ローデラ（Ｒｈｏｄｅｌｌａ）、ロードカエテ（Ｒｈｏｄｐｃｈａｅｔｅ）、ロードコルトン（Ｒｈｏｄｏｃｈｏｒｔｏｎ）、ロードソルス（Ｒｈｏｄｏｓｏｒｕｓ）、ロードスポラ（Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒａ）、ロージメニア（Ｒｈｏｄｙｍｅｎｉａ）、セイロスポラ（Ｓｅｉｒｏｓｐｏｒａ）、セレナストラム（Ｓｅｌｅｎａｓｔｒｕｍ）、ポルフィラ（Ｐｏｒｐｈｙｒａ）、シロドチア（Ｓｉｒｏｄｏｔｉａ）、ソリエリア（Ｓｏｌｉｅｒｉａ）、スペルモタムニオン（Ｓｐｅｒｍｏｔｈａｍｎｉｏｎ）、スピリジア（Ｓｐｙｒｉｄｉａ）、スチロネマ（Ｓｔｙｌｏｎｅｍａ）、トレア（Ｔｈｏｒｅａ）、トライリエラ（Ｔｒａｉｌｉｅｌｌａ）およびツオメヤ（Ｔｕｏｍｅｙａ）を含む）ロードフィセアエ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｃｅａｅ）などのロードフィタ（Ｒｈｏｄｏｐｈｙｔａ）、（カムピロモナス（Ｃａｍｐｙｌｏｍｏｎａｓ）、シロモナス（Ｃｈｉｌｏｍｏｎａｓ）、クロオモナス（Ｃｈｒｏｏｍｏｎａｓ）、クリプトチリシス（Ｃｒｙｐｔｏｃｈｒｙｓｉｓ）、クリプトモナス（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ）、ゴニオモナス（Ｇｏｎｉｏｍｏｎａｓ）、グイラルディア（Ｇｕｉｌｌａｒｄｉａ）、ハヌシア（Ｈａｎｕｓｉａ）、ヘミセルミス（Ｈｅｍｉｓｅｌｍｉｓ）、プラギオセルミス（Ｐｌａｇｉｏｓｅｌｍｉｓ）、プロテオモナス（Ｐｒｏｔｅｏｍｏｎａｓ）、ピレノモナス（Ｐｙｒｅｎｏｍｏｎａｓｕ）、ロードモナス（Ｒｈｏｄｏｍｏｎａｓ）およびストロレアチュラ（Ｓｔｒｏｒｅａｔｕｌａ）を含む）クリプトフィセアエ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｅａｅ）などのクリプトフィタ（Ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｔａ）、クロララクニオン（Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｎ）、ロタレラ（Ｌｏｔｈａｒｅｌｌａ）およびカットネラ（Ｃｈａｔｔｏｎｅｌｌａ）などのクロララクニオフォタ（Ｃｈｌｏｒａｒａｃｈｎｉｏｐｈｙｔａ）、（アピストネマ（Ａｐｉｓｔｏｎｅｍａ）、クリソクロムリナ（Ｃｈｒｙｓｏｃｈｒｏｍｕｌｉｎａ）、コッコリソホラ（Ｃｏｃｃｏｌｉｔｈｏｐｈｏｒａ）、コルコントクリシス（Ｃｏｒｃｏｎｔｏｃｈｒｙｓｉｓ）、クリコスファエラ（Ｃｒｉｃｏｓｐｈａｅｒａ）、ジアクロネマ（Ｄｉａｃｒｏｎｅｍａ）、エヌイリアナ（Ｅｍｕｉｌｉａｎａ）、パブロバ（Ｐａｖｌｏｖａ）、およびルッテネラ（Ｒｕｔｔｎｅｒａ）を含む）パブロボフィセアエ（Ｐａｖｌｏｖｏｐｈｙｃｅａｅ）および（クルシプラコリサス（Ｃｒｕｃｉｐｌａｃｏｌｉｔｈｕｓ）、ピルムネシウム（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｕｍ）、イソクリシス（Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）、カリプトロスファエラ（Ｃａｌｙｐｔｒｏｓｐｈａｅｒａ）、クリソチラ（Ｃｈｒｙｓｏｔｉｌａ）、コッコリサス（Ｃｏｃｃｏｌｉｔｈｕｓ）、ジクラテリア（Ｄｉｃｒａｔｅｒｉａ）、ヘテロシグマ（Ｈｅｔｅｒｏｓｉｇｍａ）、ヒメノモナス（Ｈｙｍｅｎｏｍｏｎａｓ）、イマントニア（Ｉｍａｎｔｏｎｉａ）、ゲフィロカプサ（Ｇｅｐｈｙｒｏｃａｐｓａ）、オクロスファエラ（Ｏｃｈｒｏｓｐｈａｅｒａ）、ファエオシスティス（Ｐｈａｅｏｃｙｓｔｉｓ）、プラチクリシス（Ｐｌａｔｙｃｈｒｙｓｉｓ）、シュードイソクリシス（Ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ）、シラコスファエラ（Ｓｙｒａｃｏｓｐｈａｅｒａ）およびプレウロクリシス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｒｙｓｉｓ）を含む）ピリムネシオフィセアエ（Ｐｒｙｍｎｅｓｉｏｐｈｙｃｅａｅ）などのハプトフィタ（Ｈａｐｔｏｐｈｙｔａ）、（アスタシア（Ａｓｔａｓｉａ）、コラシウム（Ｃｏｌａｃｉｕｍ）、シクリジオプシス（Ｃｙｃｌｉｄｉｏｐｓｉｓ）、ジスチグマ（Ｄｉｓｔｉｇｍａ）、ユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）、ユートレプチア（Ｅｕｔｒｅｐｔｉａ）、ユートレプチエラ（Ｅｕｔｒｅｐｔｉｅｌｌａ）、ギロパイグネ（Ｇｙｒｏｐａｉｇｎｅ）、ヒアロファクス（Ｈｙａｌｏｐｈａｃｕｓ）、カウキネア  アスタシア（Ｋｈａｗｋｉｎｅａ  Ａｓｔａｓｉａ）、レポシンクリス（Ｌｅｐｏｃｉｎｃｌｉｓ）、メノイジウム（Ｍｅｎｏｉｄｉｕｍ）、パルミジウム（Ｐａｒｍｉｄｉｕｍ）、ファカス（Ｐｈａｃｕｓ）、ラブドモナス（Ｒｈａｂｄｏｍｏｎａｓ）、ラブドスピラ（Ｒｈａｂｄｏｓｐｉｒａ）、テトルエトレプチア（Ｔｅｔｒｕｅｔｒｅｐｔｉａ）およびトラケロモナス（Ｔｒａｃｈｅｌｏｍｏｎａｓ）を含む）ユーグレノフィセ��エ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｃｅａｅ）などのユーグレノフィタ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｔａ）、および（アスコセイラ（Ａｓｃｏｓｅｉｒａ）、アステロクラドン（Ａｓｔｅｒｏｃｌａｄｏｎ）、ボダネラ（Ｂｏｄａｎｅｌｌａ）、デスマレスチア（Ｄｅｓｍａｒｅｓｔｉａ）、ジクチオカ（Ｄｉｃｔｙｏｃｈａ）、ジクチオタ（Ｄｉｃｔｙｏｔａ）、エクトカルプス（Ｅｃｔｏｃａｒｐｕｓ）、ハロプテリス（Ｈａｌｏｐｔｅｒｉｓ），ヘリバウジエラ（Ｈｅｒｉｂａｕｄｉｅｌｌａ）、プレウロクラジア（Ｐｌｅｕｒｏｃｌａｄｉａ）、ポロテリネマ（Ｐｏｒｔｅｒｉｎｅｍａ）、ピライエラ（Ｐｙｌａｉｅｌｌａ）、ソロカルプス（Ｓｏｒｏｃａｒｐｕｓ）、スペルマトクナス（Ｓｐｅｒｍａｔｏｃｈｎｕｓ）、スファセラリア（Ｓｐｈａｃｅｌａｒｉａ）およびワエルニエラ（Ｗａｅｒｎｉｅｌｌａ）を含む）ファエオフィセアエ（Ｐｈａｅｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アウレオコッカス（Ａｕｒｅｏｃｏｃｃｕｓ）、アウレオウンブラ（Ａｕｒｅｏｕｍｂｒａ）、ペラゴコッカス（Ｐｅｌａｇｏｃｏｃｃｕｓ）、ペラゴモナス（Ｐｅｌａｇｏｍｏｎａｓ）、プルビナリア（Ｐｕｌｖｉｎａｒｉａ）およびサルシノクリシス（Ｓａｒｃｉｎｏｃｈｒｙｓｉｓ）を含む）ペラゴフィセアエ（Ｐｅｌａｇｏｐｈｙｃｅａｅ）、（アステロシフォン（Ａｓｔｅｒｏｓｉｐｈｏｎ）、ボトリジオプシス（Ｂｏｔｒｙｄｉｏｐｓｉｓ）、ボトリジウム（Ｂｏｔｒｙｄｉｕｍ）、ブミレリア（Ｂｕｍｉｌｌｅｒｉａ）、ブミレリオプシス（Ｂｕｍｉｌｌｅｒｉｏｐｓｉｓ）、キャラシオプシス（Ｃｈａｒａｃｉｏｐｓｉｓ）、コレレリジウム（Ｃｈｌｏｒｅｌｌｉｄｉｕｍ）、クロロボトリス（Ｃｈｌｏｒｏｂｏｔｒｙｓ）、ゴニオコロリス（Ｇｏｎｉｏｃｈｌｏｒｉｓ）、ヘテロコッカス（Ｈｅｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ヘテロスリックス（Ｈｅｔｅｒｏｔｈｒｉｘ）、ヘテロトリケラ（Ｈｅｔｅｒｏｔｒｉｃｈｅｌｌａ）、ミスココッカス（Ｍｉｓｃｈｏｃｏｃｃｕｓ）、オフィオシチウム（Ｏｐｈｉｏｃｙｔｉｕｍ）、プレウロクロリデラ（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｌｌａ）、プレウロクロリス（Ｐｌｅｕｒｏｃｈｌｏｒｉｓ）、シュードブミレリオプシス（Ｐｓｅｕｄｏｂｕｍｉｌｌｅｒｉｏｐｓｉｓ）、スファエロソルス（Ｓｐｈａｅｒｏｓｏｒｕｓ）、トリボネマ（Ｔｒｉｂｏｎｅｍａ）、ヴァウケリア（Ｖａｕｃｈｅｒｉａ）およびキサントネマ（Ｘａｎｔｈｏｎｅ
ｍａ）を含む）キサントフィセアエ（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｃｅａｅ）、（クロリデラ（Ｃｈｌｏｒｉｄｅｌｌａ）、エリプソイジオン（Ｅｌｌｉｐｓｏｉｄｉｏｎ）、エウスティグマトス（Ｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｓ）、モノドプシス（Ｍｏｎｏｄｏｐｓｉｓ）、モノダス（Ｍｏｎｏｄｕｓ）、ナンノクロロプシス（Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ）、ポリエドリエラ（Ｐｏｌｙｅｄｒｉｅｌｌａ）、シュードキャラシオプシス（Ｐｓｅｕｄｏｃｈａｒａｃｉｏｐｓｉｓ）、シュードスタウラストラム（Ｐｓｅｕｄｏｓｔａｕｒａｓｔｒｕｍ）およびビスチェリア（Ｖｉｓｃｈｅｒｉａ）を含む）エウスチグマトフィセアエ（Ｅｕｓｔｉｇｍａｔｏｐｈｙｃｅａｅ）、（マロモナス（Ｍａｌｌｏｍｏｎａｓ）、シヌラ（Ｓｙｎｕｒａ）およびテッセラリア（Ｔｅｓｓｅｌｌａｒｉａ）を含む）シアヌロフィセアエ（Ｓｙａｎｕｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、（ファエオボトリス（Ｐｈａｅｏｂｏｔｒｙｓ）およびファエオサムニオン（Ｐｈａｅｏｔｈａｍｎｉｏｎ）を含む）ファエオサムニオフィセアエ（Ｐｈａｅｏｔｈａｍｎｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、および（オリスソジスカス（Ｏｌｉｓｔｈｏｄｉｓｃｕｓ）、バキュオラリア（Ｖａｃｕｏｌａｒｉａ）およびフィブロカプサ（Ｆｉｂｒｏｃａｐｓａ）を含む）ラフィドフィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）などのヘテロコンタ（Ｈｅｔｅｒｏｋｏｎｔａ）が含まれる。
【００２９】
パネルはまた、類トレボウキシオフィセアエ（Ｔｒｅｂｏｕｘｉｏｐｈｙｃｅａｅ）、クロロフィセアエ（Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｃｅａｅ）、クリプトモニデアエ（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎｉｄｅａｅ）、ユーグレノフィタ（Ｅｕｇｌｅｎｏｐｈｙｔａ）、ラフィドフィセアエ（Ｒａｐｈｉｄｏｐｈｙｃｅａｅ）、ジアトマチデアエ（Ｄｉａｔｏｍａｔｉｄｅａｅ）およびプラシノフィセアエ（Ｐｒａｓｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）も含みうる。
【００３０】
本技術分野でよく知られている従来の方法によって調製可能である、上記微小藻類から得た、部分的にまたは全体として精製された酵素または細胞抽出物をまた、所望の代謝物を得るために、前駆体化合物と接触させることも可能である（Ｈｅｌｌｅｂｕｓｔ  ａｎｄ  Ｃｒａｉｇｉｅ，ｅｄｓ．，「藻学法のハンドブック：ｐｈｓｉｏｌｏｇｉｃａｌおよび生化学的方法（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈｙｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｐｈｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ）」，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９７８）」）。
【００３１】
Ｂ．前駆体化合物
前駆体化合物は、ラセミ混合物を含む、任意の有機分子であり得る。前駆体化合物として本発明で利用される特定の化合物は、重要ではない。
【００３２】
好ましい実施形態において、前駆体化合物は、そのヘテロ環状環が、好ましくは３〜１０員ヘテロ環状環、より好ましくは、４〜８員ヘテロ環状環、もっとも好ましくは５〜６員ヘテロ環状環を含む、置換または未置換ヘテロ環状化合物である。ヘテロ環状環は好ましくは、ヘテロ原子として窒素、酸素または硫黄原子を持つ。ヘテロ環状環は、脂肪族環、芳香族環または他のヘテロ環状環と縮合しうる。より好ましくは、ヘテロ環状環は、２〜７炭素原子と、それぞれ、酸素、窒素および硫黄からなる群より選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。ヘテロ環状分子上に１以上の置換基が存在しうる。置換基の性質は、本発明では重要ではない。本発明の好ましい実施形態において、ヘテロ環状化合物は、それぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたホスホ、場合により置換されたアルキル（好ましくはＣ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（好ましくはＣ１〜２０）、場合により置換された芳香族（好ましくはＣ５〜２０）および場合により置換されたヘテロ環状（好ましくはＣ３〜２０）基からなる群より選択される、１〜４置換基を持つ。
【００３３】
ハロゲン原子置換として、塩素、臭素、ヨウ素またはフッ素が言及されうる。
【００３４】
場合により置換されたアミノ基のための置換基として、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。場合により置換されたアミノ基の典型的な例には、未置換アミノ基、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基で置換されたアミノ基（たとえばメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノなど）、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、で置換されたアミノ基（たとえば、ベンジルアミノ基など）、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基で置換されたアミノ基（たとえば、ホルミルアミノ、アセチルアミノ、バレリルアミノ、イソバレリルアミノ、ピバロイルアミノなど）、芳香族環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基で置換されたアミノ基（たとえば、ベンゾイルアミノ基）、ヘテロ環状環を持つ場合により置換されたアシル基で置換されたアミノ基（たとえばニコチノイルアミノ基など）、置換カルボキシル基で置換されたアミノ基（たとえばアセチルアミノ−メチルカルボニルアミノ、アアセチルアミノエチルカルボニルアミノ、ヒドロキシメチルカルボニルアミノ、ヒドロキシエチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ基など）が言及されうる。
【００３５】
場合により置換されたニトロ基の例として、未置換ニトロ、ニトロソ、ニトロソオキシおよびイソチオシアナト基が言及されうる。ニトロ基のための置換基（群）の例として、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、エチル（ヒドロキシ）オキソアンモニウム、１−（３−カルボキシフェニル）トリアザ−１，２−ジエン−２−イウム、３−フリル−Ｎ−ニトロソメタンアンモニウムおよび［（２Ｅ）−ブチ−２−エニルオキシ］（ヒドロキシ）オキソアンモニウムが含まれる。
【００３６】
場合により置換されたスルホ基の例として、未置換スルホ、スルフィノ、スルファモイル、スルファトおよびスルホンアミノ基が言及される、スルホ基置換基の例には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ７〜２０アラアルキルオキシ基、ベンゾイル基、Ｃ１〜４アルキルチオ基およびハロゲン原子で置換されうる、Ｃ１〜２０アルキルスルホニル基（たとえばメタンスルホニル、エタンスルホニル、プロパンスルホニル、ブタンスルホニル、トリクロロメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニルなど）、ベンゼンスルホニル、ｍ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−クロロベンゼンスルホニル、ｐ−ブロモベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、ナフタレン−スルホニルなどのような、たとえばＣ１〜２０アルキル基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基またはハロゲン原子によって置換されうる、Ｃ６〜２０アリールスルホニル基を含む、場合により置換されたアリールスルホニル基が含まれる。
【００３７】
場合により置換されたホスホ基の例として、未置換ホスファト、ヒスフィノ、ジエチルホスホノおよびペンタフルオロホスファト基が言及される。ホスホ基の任意の置換基には、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、ヒドロキシ（１−メチルブチル）オキソホスホニウム、ヒドロキシ（１Ｈ−インデン−１−イルメチル）オキソホスホニウム、｛［２−（クロロメチル）−２−メチルブト−３−エチル］オキシ｝（ヒドロキシ）オキソホスホニウムまたはアデノシンホスファチジル基が含まれる。
【００３８】
１〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基が言及されうる。Ｃ１〜２０アルキル基に対する置換基（類）の例には、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ベンゾイル基、Ｃ２〜２０アリル基（たとえばブタジエニル基）、置換基（たとえばＣ１〜２０アルコキシ基など）によって置換されうるＣ６〜１２アリール基（たとえばフェニル基）、Ｃ１〜２０アルキルチオ基およびハロゲン原子が含まれる。このような置換Ｃ１〜２０アルキル基の例として、ヒドロキシル基（類）によって置換されたＣ１〜２０アルキル基（たとえば、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、１，２−ジヒドロキシエチル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル基など）、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メトキシメチル、エトキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、１−エトキシエチル、２−メトキシエチル基など）、フェナシル基、Ｃ１〜２０アルキルチオ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メチルチオメチル、エチルチオメチル基などのようなＣ１〜２０アルキルチオメチル）、クロロメチル、２−クロロエチル、３−クロロプロピル、４−クロロブチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエチルなどのような、１以上のハロゲン原子を持つＣ１〜２０ハロアルキル基が言及されうる。
【００３９】
場合により置換されたシクロ脂肪族基として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが言及されうる。場合により置換されたシクロ脂肪族基のための置換基の例として、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアリル基、場合により置換されたシクロアルキル基、場合により置換されたヘテロ環状基、および場合により置換されたアラルキル基が言及されうる。
【００４０】
場合により置換されたアルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基のような、たとえば、１〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアルキル基が含まれる。Ｃ１〜２０アルキル基のための置換基には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシ基、およびＣ７〜２０アラアルキルオキシ基が含まれる。
【００４１】
アリル基のための置換基には、たとえば、以上で言及したＣ１〜２０アルキル基のための置換基が含まれる。
【００４２】
場合により置換されたシクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロベプチル、シクロオクチル、シクロノニルおよびシクロ−デシル基のような、３〜１０個の炭素原子を含むシクロアルキル基が含まれる。シクロアルキル基のための置換基（群）には、たとえば、ハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基およびヒドロキシル基が含まれる。
【００４３】
場合により置換されたヘテロ環状基として、たとえば、炭素原子以外に、ヘテロ原子（類）として、１〜３個の酸素、硫黄または窒素の原子を持つ、場合により置換された３〜１０−員ヘテロ環状環が言及される。場合により置換されたヘテロ環状環は、しばしば、非芳香族ペルヒドロへテロ環状環である。５−または６−員環ヘテロ環状基には、たとえばテトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、テトラヒドロピラニルおよびテトラヒドロチオピラニル基が含まれる。ヘテロ環状環のための置換基の例には、ハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシおよびｔ−ブトキシのようなＣ１〜２０アルコキシ基、アルキル基のために上述したような置換基が含まれる。
【００４４】
場合により置換されたヘテロ環状基の好ましい例には、場合により置換されたテトラヒドロピラニル基（たとえば、テトラヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロピラニル、４−メタンキシテトラヒドロピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロチオピラニル基（たとえば、テトラヒドロチオピラニル、３−ブロモテトラヒドロチオピラニル、４−エトキシテトラヒドロチオピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロフラニル基（たとえば、テトラヒドロフラニルなど）、および場合により置換されたテトラヒドロチオフラニル基（たとえば、テトラヒドロチオフラニル）が含まれる。
【００４５】
場合により置換されたアラルキル基の例には、７〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアラルキル基（たとえばベンジルなど）が含まれる。アラルキル基のための置換基には、たとえば、Ｃ１〜２０アルキル基、フェニル基のようなＣ６〜１２アリール基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基およびハロゲン原子が含まれる。
【００４６】
場合により置換されたアラルキル基には、ベンジル、ｏ−クロロベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−クロロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メチルベンジル、ｐ−ニトロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、トリチルなどが含まれる。
【００４７】
ヘテロ環状化合物には、市販されている重要な分子の種類が含まれる。多くの薬物、染料類、ビタミン類、さらなる栄養補助食品類は、その構造内にヘテロ環状環を持つ（Ｗａｃｋｅｔｔら，上記、また、Ｄｅｌｇａｄｏら、ら、Ｗｉｌｓｏｎ  ａｎｄ  Ｇｉｓｖｏｌｄ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ，Ｍｅｄｉｃａｌ，  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ（１９９８）を参照のこと）。市販されている有用なヘテロ環状化合物の例には、ビタミンであるビオチン、抗新生物剤である８−アザグアニン、抗生物質であるペニシリンおよび産業溶媒であるテトラヒドロフランが含まれる。ヘテロ環状環を産出し、開裂するための改善された方法が、これらの合成、ならびにこれらの生態学的に安全な処分において、有用である。
【００４８】
特に好ましいヘテロ環状化合物は、
【化３】
2006519615.tif 000002
によって表されるオキサゾリジン類であり、式中Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたホスホ、場合により置換されたアルキル（Ｃ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（Ｃ１〜２０）、場合により置換された芳香族（Ｃ５〜２０）および場合により置換されたヘテロ環状（Ｃ３〜２０）基である。
【００４９】
ハロゲン原子置換基として、塩素、臭素、ヨウ素またはフッ素が言及されうる。
【００５０】
場合により置換されたアミノ基のための置換基として、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。場合により置換されたアミノ基の典型的な例には、アミノ基、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基にて置換されるアミノ基（たとえば、メチルアミノ、エチルアミノ、プロポキシアミノ、ｔ−ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノなど）、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基にて置換されるアミノ基（たとえば、ベンジルアミノ基など）、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基にて置換されるアミノ基（たとえば、ホルミルアミノ、アセチルアミノ、バレリルアミノ、イソバレリルアミノ、ピバロイルアミノなど）、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基によって置換されるアミノ基（たとえばベンゾイルアミノ基など）、ヘテロ環状環を持つ場合により置換されたアシル基によって置換されたアミノ基（たとえばニコチノイルアミノ基など）、置換カルボキシル基によって置換されるアミノ基（たとえば、アセチルアミノ−メチルカルボニルアミノ、アセチルアミノエチルカルボニルアミノ、ヒドロキシメチルカルボニルアミノ、ヒドロキシエチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ基など）が含まれる。
【００５１】
場合により置換されたニトロ基の例として、未置換ニトロ、ニトロソ、ニトロソオキシ、およびイソチオシアナト基が言及されうる。ニトロ基のための置換基（類）として、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、エチル（ヒドロキシ）オキソアンモニウム、１−（３−カルボキシフェニル）トリアザ−１，２−ジエン−２−イウム、３−フリル−Ｎ−ニトロソメタンアンモニウムおよび［（２Ｅ）−ブト−２−エニルオキシ］（ヒドロキシ）オキソアンモニウムが含まれる。
【００５２】
場合により置換されたスルホ基の例として、スルホ、スルフィノ、スルファモイル、スルファトおよびスルホアミノ基が言及されうる。スルホ基置換基の例には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ７〜２０アラルキルオキシ基、ベンゾイル基、Ｃ１〜４アアルキルチオ基およびハロゲン原子で置換されうる、Ｃ１〜２０アルキルスルホニル基（たとえば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、プロパンスルホニル、ブタンスルホニル、トリクロロ、メタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニルなど）、ベンゼンスルホニル、ｍ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−クロロベンゼンスルホニル、ｐ−ブロモベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、ナフタレン−スルホニルなどのような、たとえばＣ１〜２０アルキル基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基またはハロゲン基によって置換されうるＣ６〜２０アリールスルホニル基を含む、場合により置換されたアリールスルホニル基が含まれる。
【００５３】
場合により置換されたホスホ基の例として、ホスホ、ホスファト、ホスフィト、ジエチルホスホノおよびペンタフルオロホスファト基が言及されうる。ホスホ基のための任意の置換基には、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ場合により置換されたアシル基、および置換されたカルボニル基が含まれる。このような置換されたカルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、ヒドロキシ（１−メチルブチル）オキソホスホニウム、ヒドロキシ（１Ｈ−インデン−１−イルメチル）オキソホスホニウム、｛［２−（クロロメチル）−２−メチルブト−３−エニル］オキシ｝（ヒドロキシ）オキソホスホニウム、またはアデノシンホスファチジル基が含まれる。
【００５４】
１〜２０個の炭素原子を持つ、場合により置換されたアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基が言及されうる。Ｃ１〜２０アルキル基のための置換基（群）の例には、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ベンゾイル基、Ｃ２〜２０アリル基（たとえばブタジエニル基）、置換基（たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基など）で置換されうるＣ６〜１２アリール基（たとえばフェニル基）、Ｃ１〜２０アルキルチオ基およびハロゲン原子が含まれる。このような置換Ｃ１〜２０アルキル基の例として、ヒドロキシル基（群）によって置換されたＣ１〜２０アルキル基（たとえば、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、１，２−ジヒドロキシエチル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル基など）、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メトキシメチル、エトキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、１−エトキシエチル、２−メトキシエチル基など）、フェナシル基、Ｃ１〜２０アルキルチオ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メチルチオメチル、エチルチオメチル基などのようなＣ１〜２０アルキルチオメチル）、クロロメチル、２−クロロエチル、３−クロロプロピル、４−クロロブチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエチルなどのような、１以上のハロゲン原子を持つＣ１〜２０ハロアルキル基が含まれる。
【００５５】
場合により置換されたシクロ脂肪族基として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが言及されうる。場合により置換されたシクロ脂肪族基のための置換基類の例として、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアリル基、場合により置換されたシクロアルキル基、場合により置換されたヘテロ環状基、および場合により置換されたアラルキル基が含まれる。
【００５６】
場合により置換されたアルキル基には、たとえば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基のような、１〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアルキル基が含まれる。Ｃ１〜２０アルキル基のための置換基類には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシＣ１〜２０アルコキシ基、およびＣ７〜２０アラルキルオキシ基が含まれる。
【００５７】
アリル基のための置換基には、たとえば、以上で言及した、Ｃ１〜２０アルキル基のための置換基が含まれる。
【００５８】
場合により置換されたシクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロベプチル、シクロオクチル、シクロノニルおよびシクロデシル基のような、３〜１０個の炭素原子を持つシクロアルキル基が含まれる。シクロアルキル基のための置換基（類）には、たとえばハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基およびヒドロキシル基が含まれる。
【００５９】
場合により置換されたヘテロ環状基として、たとえば、炭素原子以外に、ヘテロ原子（類）として、１〜３個の、酸素、硫黄または窒素の原子を持つ、場合により置換された３〜１０−員ヘテロ環状基が言及されうる。場合により置換されたヘテロ環状基は、非芳香族ペルヒドロヘテロ環状環でありうる。５−または６−員ヘテロ環状基には、たとえば、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、テトラヒドロピラニルおよびテトラヒドロチオピライル基が含まれる。ヘテロ環状基のための置換基類の例には、ハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシおよびｔ−ブトキシのようなＣ１〜２０アルコキシ基、およびアルキル基のために上述したような置換基類が含まれる。
【００６０】
場合により置換されたヘテロ環状基の好ましい例には、場合により置換されたテトラヒドロピラニル基（たとえばテトラヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロピラニル、４−メテニキシテトラヒドロピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロチオピラニル基（たとえば、テトラヒドロチオピラニル、３−ブロモテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロフラニル基（たとえば、テトラヒドロフラニルなど）、および場合により置換されたテトラヒドロチオフラニル基（たとえばテトラヒドロチオフラニル）が含まれる。
【００６１】
場合により置換されたアラルキル基の例には、７〜２０個の炭素原子を持つ、場合により置換されたアラルキル基（たとえばベンジルなど）が含まれる。アラルキル基のための置換基には、たとえば、Ｃ１〜２０アルキル基、フェニル基のようなＣ６〜１２アリール基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基およびハロゲン原子が含まれる。
【００６２】
場合により置換されたアラルキル基の例には、ベンジル、ｏ−クロロベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−クロロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メチルベンジル、ｐ−ニトロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、トリチルなどが含まれる。
【００６３】
前駆体化合物として本発明で利用可能な、ヘテロ環状化合物の特定の非限定例には、酸素、窒素および硫黄からなる群より選択される２つのヘテロ原子を含む、置換５−員環が含まれ、好ましくは、イミダゾリジン類、オキサゾリジン類またはチアゾリジン類が含まれ、そこで、置換基類は以上で定義されたものである。さらに、酸素および窒素からなる群より選択された１つのヘテロ原子を含む置換３−員環、好ましくは２−置換オキシラニル化合物が、前駆体化合物として利用可能であり、そこで、置換基類は、以上で定義されたものである。
【００６４】
他の好ましい実施形態において、前駆体化合物は、その骨格が、４〜１２個の炭素原子と、１〜３個のヘテロ鎖、好ましくは窒素、酸素、リンまたは硫黄（本明細書以下では、「ヘテロ鎖（ｈｅｔｅｒｏｃｈａｉｎ）」と呼ぶ）を含む、置換または未置換ヘテロ鎖化合物である。ヘテロ鎖は、脂肪族環、芳香族環またはヘテロ環状環と縮合されうる。もっとも好ましくは、ヘテロ鎖は、３〜６個の炭素原子と、酸素、窒素および硫黄からなる群よりそれぞれ選択された１〜４ヘテロ原子類を含む。前駆体分子上に、１以上の置換基が存在しうる。置換基の性質は、本発明に重要ではない。
【００６５】
置換基は、独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたアルキル（好ましくはＣ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（好ましくはＣ１〜２０）、場合により置換された芳香族（好ましくはＣ５〜２０）、および場合により置換されたヘテロ環状（好ましくはＣ３〜２０）基からなる群より選択される。
【００６６】
ハロゲン原子置換基として、塩素、臭素、ヨウ素またはフッ素が言及されうる。
【００６７】
場合により置換されたアミノ基のための置換基として、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。場合により置換されたアミノ基の典型的な例には、未置換アミノ基、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基で置換されたアミノ基（たとえばメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジブチルアミノなど）、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、で置換されたアミノ基（たとえば、ベンジルアミノ基など）、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基で置換されたアミノ基（たとえば、ホルミルアミノ、アセチルアミノ、バレリルアミノ、イソバレリルアミノ、ピバロイルアミノなど）、芳香族環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基で置換されたアミノ基（たとえば、ベンゾイルアミノ基）、ヘテロ環状環を持つ場合により置換されたアシル基で置換されたアミノ基（たとえばニコチノイルアミノ基など）、置換カルボキシル基で置換されたアミノ基（たとえばアセチルアミノ−メチルカルボニルアミノ、アアセチルアミノエチルカルボニルアミノ、ヒドロキシメチルカルボニルアミノ、ヒドロキシエチルカルボニルアミノ、メトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニルアミノ基など）が言及されうる。
【００６８】
場合により置換されたニトロ基の例として、未置換ニトロ、ニトロソ、ニトロソオキシおよびイソチオシアナト基が言及されうる。ニトロ基のための置換基（群）の例として、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、エチル（ヒドロキシ）オキソアンモニウム、１−（３−カルボキシフェニル）トリアザ−１，２−ジエン−２−イウム、３−フリル−Ｎ−ニトロソメタンアンモニウムおよび［（２Ｅ）−ブト−２−エニルオキシ］（ヒドロキシ）オキソアンモニウムが含まれる。
【００６９】
場合により置換されたスルホ基の例として、未置換スルホ、スルフィノ、スルファモイル、スルファトおよびスルホンアミノ基が言及される、スルホ基置換基の例には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ７〜２０アラアルキルオキシ基、ベンゾイル基、Ｃ１〜４アルキルチオ基およびハロゲン原子で置換されうる、Ｃ１〜２０アルキルスルホニル基（たとえばメタンスルホニル、エタンスルホニル、プロパンスルホニル、ブタンスルホニル、トリクロロメタンスルホニル、トリフルオロメタンスルホニルなど）、ベンゼンスルホニル、ｍ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−ニトロベンゼンスルホニル、ｐ−クロロベンゼンスルホニル、ｐ−ブロモベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニル、ナフタレン−スルホニルなどのような、たとえばＣ１〜２０アルキル基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基またはハロゲン原子によって置換されうる、Ｃ６〜２０アリールスルホニル基を含む、場合により置換されたアリールスルホニル基が含まれる。
【００７０】
場合により置換されたホスホ基の例として、未置換ホスファト、ヒスフィノ、ジエチルホスホノおよびペンタフルオロホスファト基が言及される。ホスホ基の任意の置換基には、たとえば、場合により置換されたＣ１〜２０アルキル基、場合により置換されたＣ７〜２０アラルキル基、場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、芳香環を持つ場合により置換されたＣ１〜２０アシル基、以上で例示したような、ヘテロ環状基を持つ、場合により置換されたアシル基、および置換カルボニル基が言及されうる。このような置換カルボニル基として、たとえば、場合により置換されたアシル基およびカルボキシル基が言及されうる。好ましい例には、ヒドロキシ（１−メチルブチル）オキソホスホニウム、ヒドロキシ（１Ｈ−インデン−１−イルメチル）オキソホスホニウム、｛［２−（クロロメチル）−２−メチルブト−３−エチル］オキシ｝（ヒドロキシ）オキソホスホニウムまたはアデノシンホスファチジル基が含まれる。
【００７１】
１〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基が言及されうる。Ｃ１〜２０アルキル基に対する置換基（類）の例には、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ベンゾイル基、Ｃ２〜２０アリル基（たとえばブタジエニル基）、置換基（たとえばＣ１〜２０アルコキシ基など）によって置換されうるＣ６〜１２アリール基（たとえばフェニル基）、Ｃ１〜２０アルキルチオ基およびハロゲン原子が含まれる。このような置換Ｃ１〜２０アルキル基の例として、ヒドロキシル基（類）によって置換されたＣ１〜２０アルキル基（たとえば、ヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチル、１，２−ジヒドロキシエチル、２，２−ジヒドロキシエチル、３，３−ジヒドロキシプロピル基など）、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メトキシメチル、エトキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、１−エトキシエチル、２−メトキシエチル基など）、フェナシル基、Ｃ１〜２０アルキルチオ−Ｃ１〜２０アルキル基（たとえば、メチルチオメチル、エチルチオメチル基などのようなＣ１〜２０アルキルチオメチル）、クロロメチル、２−クロロエチル、３−クロロプロピル、４−クロロブチル、ジクロロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２−トリクロロエチル、２，２，２−トリフルオロエチル、１，１，２，２，２−ペンタフルオロエチルなどのような、１以上のハロゲン原子を持つＣ１〜２０ハロアルキル基が言及されうる。
【００７２】
場合により置換されたシクロ脂肪族基として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが言及されうる。場合により置換されたシクロ脂肪族基のための置換基の例として、場合により置換されたアルキル基、場合により置換されたアリル基、場合により置換されたシクロアルキル基、場合により置換されたヘテロ環状基、および場合により置換されたアラルキル基が言及されうる。
【００７３】
場合により置換されたアルキル基には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル基のような、たとえば、１〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアルキル基が含まれる。Ｃ１〜２０アルキル基のための置換基には、たとえば、Ｃ１〜２０アルコキシ基、Ｃ１〜２０アルコキシ−Ｃ１〜２０アルコキシ基、およびＣ７〜２０アラアルキルオキシ基が含まれる。
【００７４】
アリル基のための置換基には、たとえば、以上で言及したＣ１〜２０アルキル基のための置換基が含まれる。
【００７５】
場合により置換されたシクロアルキル基の例には、シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロベプチル、シクロオクチル、シクロノニルおよびシクロ−デシル基のような、３〜１０個の炭素原子を含むシクロアルキル基が含まれる。シクロアルキル基のための置換基（群）には、たとえば、ハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基およびヒドロキシル基が含まれる。
【００７６】
場合により置換されたヘテロ環状基として、たとえば、炭素原子以外に、ヘテロ原子（類）として、１〜３個の酸素、硫黄または窒素の原子を持つ、場合により置換された３〜１０−員ヘテロ環状環が言及される。場合により置換されたヘテロ環状環は、しばしば、非芳香族ペルヒドロへテロ環状環である。５−または６−員環ヘテロ環状基には、たとえばテトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、テトラヒドロピラニルおよびテトラヒドロチオピラニル基が含まれる。ヘテロ環状環のための置換基の例には、ハロゲン原子、Ｃ１〜２０アルキル基、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシおよびｔ−ブトキシのようなＣ１〜２０アルコキシ基、アルキル基のために上述したような置換基が含まれる。
【００７７】
場合により置換されたヘテロ環状基の好ましい例には、場合により置換されたテトラヒドロピラニル基（たとえば、テトラヒドロピラニル、３−ブロモテトラヒドロピラニル、４−メタンキシテトラヒドロピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロチオピラニル基（たとえば、テトラヒドロチオピラニル、３−ブロモテトラヒドロチオピラニル、４−エトキシテトラヒドロチオピラニルなど）、場合により置換されたテトラヒドロフラニル基（たとえば、テトラヒドロフラニルなど）、および場合により置換されたテトラヒドロチオフラニル基（たとえば、テトラヒドロチオフラニル）が含まれる。
【００７８】
場合により置換されたアラルキル基の例には、７〜２０個の炭素原子を持つ場合により置換されたアラルキル基（たとえばベンジルなど）が含まれる。アラルキル基のための置換基には、たとえば、Ｃ１〜２０アルキル基、フェニル基のようなＣ６〜１２アリール基、ヒドロキシル基、Ｃ１〜２０アルコキシ基、ニトロ基およびハロゲン原子が含まれる。
【００７９】
場合により置換されたアラルキル基には、ベンジル、ｏ−クロロベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−クロロベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メチルベンジル、ｐ−ニトロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ジフェニルメチル、トリチルなどが含まれる。
【００８０】
特に好ましいヘテロ鎖化合物は、一般式
【化４】
2006519615.tif 000003
のＮ−置換アミド類であり、式中Ｒ４およびＲ５はそれぞれ独立して、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、場合により置換されたアミノ、場合により置換されたニトロ、場合により置換されたスルホ、場合により置換されたホスホ、場合により置換されたアルキル（Ｃ１〜２０）、場合により置換されたシクロ脂肪族（Ｃ１〜２０）、場合により置換された芳香族（Ｃ５〜２０）、および場合により置換されたヘテロ環状（Ｃ３〜２０）基からなる群より選択される。
【００８１】
以上で言及した置換基類として、同様の基が、オキサゾリジン置換基類のために記述される。
【００８２】
ヘテロ鎖化合物は、市販されている重要な化合物の一種類を含む。たとえば、これらには、ジペプチドＮｕｔｒａｓｗｅｅｔのようなペプチド、および溶媒エーテルが含まれる。さらに、これらは、工業化学物質および医薬品の合成のための、有用な開始化合物である。これらはしばしば、ＡＩＤＳプロテアーゼの対称性阻害剤の合成で、開始点として使用される（すなわちＫｅｍｐｆ  ら、，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９２：２４８４（１９９５））。特定の例には、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤であるリトナビル、抗腫瘍薬であるミトグアゾン、好ムスカリンレセプターである塩化ベタネコール、および抗トリパノソーマ病特性も持つ（Ｄｅｌｇａｄｏら上記）血糖降下薬ガレギンおよびシンタリンが含まれる。
【００８３】
Ｃ．溶媒
本発明の方法において、藻類を、前駆体化合物のための溶媒を含む培地中でのその増殖特性に基づいて、初期パネルから除去する。
【００８４】
各藻類を、後の実験で使用すべき、前駆体化合物のための同量の溶媒の存在する場合、またはしない場合で増殖させる。培養培地中の溶媒の最終濃度は、本発明では重要ではなく、好ましくは、０〜１０％の範囲内であり、より好ましくは０〜１．０％である。種々の溶媒およびインキュベーション条件を、微小藻類の増殖を最適化するために、試験可能である。
【００８５】
使用される特定の溶媒は、本発明に対して重要ではない。それぞれの溶媒の例には、ジメチルホルムアミド、メタノールおよびベンゼンが含まれる。水およびメタノールが、好ましい溶媒である。
【００８６】
Ｄ．藻類増殖培地
使用する特定の藻類増殖培地は、本発明に対して重要ではない。このような増殖培地の例には、藻類および原虫の培養コレクション（Ｔｈｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｇａｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｚｏａ）、ｗｗｗ．ｉｆｅ．ａｃ．ｕｋ／ｃｃａｐ／ｍｅｄｉａｒｅｃｉｐｅｓ（すなわち２ＡＳＷ（二重強度人工海水（Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ））、２ＳＮＡ（Ｓａｌｉｎｅ  Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａｒ）、ＡＪＳ（Ａｃｉｄｉｆｉｅｄ  ＪＭ：ＳＥ）、ＡＮＴ（Ａｎｔｉａ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＡＳＷ（Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ）、ＡＳＷ＋オオムギ（Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ＋オオムギ穀物）、ＡＳＷ：ＢＧ、ＡＳＷ：ＳＥＳ、ＡＳＷＰ（原虫用Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ）、ＢＢ（Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＢＢ：Ｍｅｒｄｓ、ＣＨ（Ｃｈａｌｋｌｅｙ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＣＨＭ（Ｃｈｉｌｏｍｏｎａｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＣＭＡ（Ｃｏｒｎ  Ｍｅａｌ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ａｇａｒ）、ＤＭ（Ｄｉａｔｏｍ  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｅ２７（Ｅ２７  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｅ３１（Ｅ３１  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｅ３１：ＡＮＴ、ＥＧ（Ｅｕｇｌｅｎａ  Ｇｒａｃｉｌｉｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＥＧ：ＪＭ、Ｍｉｎｅｒａｌｓを含むＥｕｇｌｅｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ、ｆ／２＋Ｓｉ（ｆ／２  Ｍｅｆｉｕｍ＋メタケイ酸ナトリウム）、ＨＳＭ（Ｊｏｎｅｓ’ｓ  Ｈｏｒｓｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＪＭ（Ｊａｗｏｒｓｋｉ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＪＭ：ＳＥ、Ｋ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＭＣ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｈａｎｇ’ｓ  Ｓｅｒｕｍ−Ｃａｓｅｉｎ−Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ（１）Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＣＨ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｈａｌｋｌｅｙ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＥｒｄｓ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｆφｙｎｓ  Ｅｒｄｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＥｒｄｓ／ＭＹ７５Ｓ、ＭＰ（Ｃｈａｐｍａｎ−Ａｎｄｒｅｓｅｎ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｐｒｉｎｇｓｈｅｉｍ’ｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ＭＷ（Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｗａｔｅｒ）、ＭＷＣ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｗｏｏｄｓ  Ｈｏｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＭＹ７５Ｓ（Ｍａｌｔ  ＆  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃ−７５％  Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ａｇａｒ）、ＮＮ  （Ｎｏｎ−Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  （Ａｍｏｅｂａ  Ｓａｌｉｎｅ）  Ａｇａｒ）、ＮＳＷ  （Ｎａｔｕｒａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ）、ＰＣ  （Ｐｒｅｓｃｏｔｔ’ｓ  ａｎｄ  Ｃａｒｒｉｅｒ’ｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ＰＥ  （Ｐｌｙｍｏｕｔｈ  Ｅｒｄｓｃｈｒｅｉｂｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＰＥＲ  （Ｐｅｒａｎｅｍａ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＰＪ  （Ｐｒｅｓｃｏｔｔ’ｓ  ＆  Ｊａｍｅｓ’ｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ）、ＰＪ／ＮＮ、ＰＰ  （Ｐｒｏｔｅｏｓｅ  Ｐｅｐｔｏｎｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＰＰＧ  （Ｐｒｏｔｅｏｓｅ  Ｐｅｐｔｏｎｅ  Ｇｌｕｃｏｓｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＰＰＹ  （Ｐｒｏｔｅｏｓｅ  Ｐｅｐｔｏｎｅ  Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｓ／Ｗ  （Ｓｏｉｌ／Ｗａｔｅｒ  Ｂｉｐｈａｓｉｃ  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｓ／Ｗ＋ＡＭＰ  （Ｓｏｉｌ／Ｗａｔｅｒ  Ｂｉｐｈａｓｉｃ  Ｍｅｄｉｕｍ＋ａｍｍｏｎｉｕｍ  ｍａｇｎｅｓｉｕｍ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、Ｓ／Ｗ＋���ａ  （Ｓｏｉｌ／Ｗａｔｅｒ  Ｂｉｐｈａｓｉｃ  Ｍｅｄｉｕｍ＋ｃａｌｃｉｕｍ  ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、Ｓ７５Ｓ  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｒｅａｌ  Ｌｅａｆ−７５％  Ｓｅａｗａｔｅｒ）、Ｓ７５Ｓ：ＮＳＷ、Ｓ７７＋ｖｉｔａｍｉｎｓ  （Ｓ７７  Ｍｅｄｉｕｍ＋ｖｉｔａｍｉｎｓ）、Ｓ８８＋ｖｉｔａｍｉｎｓ  （Ｓ８８  Ｍｅｄｉｕｍ＋ｖｉｔａｍｉｎｓ）、ＳＥ  （Ｓｏｉｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ）、ＳＥ１  （Ｓｏｉｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ  １）、ＳＥ２  （Ｓｏｉｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ  ２）、ＳＥＳ  （Ｓｏｉｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ  ｗｉｔｈ  Ａｄｄｅｄ  Ｓａｌｔｓ）、ＳＥＳ：ＭＰ、ＳＮＡ  （Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａｒ）、ＳＮＡ／５  （Ｂｒａｃｋｉｓｈ  Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａｒ）、ＳＰＡ  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｒｅａｌ  Ｌｅａｆ−Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  Ａｇａｒ）、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＳＰＬ  （Ｓｉｇｍａ  Ｃｅｒｅａｌ  Ｌｅａｆ−Ｐｒｅｓｃｏｔｔ  Ｌｉｑｕｉｄ）、ＳＰＬ／０．０１％  ＳＰＡ、ＳＰＬ：ＭＰ、ＳＰＬ：ＰＪ、ＳＰＬ：ＰＪ／０．０１％  ＳＰＡ、ＵＭ  （Ｕｒｏｎｅｍａ  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｗａｌｎｅ’ｓ  （Ｗａｌｎｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）およびＹＥＬ  （Ｙｅａｓｔ  Ｅｘｔｒａｃｔ−Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ｍｅｄｉｕｍ）、トロント大学培養メンテナンス（Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  Ｕ  Ｔｏｒｏｎｔｏ）、ｗｗｗ．ｂｏｔａｎｙ．ｕｔｏｒｏｎｔｏ／ｕｔｃｃ／．ｃａ  （すなわち、ＢＢＭ、ＣＨＵ−１０、ＥＳＡＷ、ｆ／２  ＶＩＴＡＭＩＮおよびＭｏｄｉｆｉｅｄ  Ａｃｉｄ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ＵＴＥＸ：Ｔｈｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｇａｅ、ｗｗｗ．ｂｉｏ．ｕｔｅｘａｓ．ｅｄｕ／ｒｅｓｅａｒｃｈ／ｕｔｅｘ／ｍｅｄｉａ（すなわち、１／２ＥＳ−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、２／３ＥＳ−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、２Ｘ−ｓｅａｗａｔｅｒ、Ａｌｌｅｎ  ｍｅｄｉｕｍ、Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  ｓｅａｗａｔｅｒ、ＡＳ１００、Ｂｏｌｄ  １ＮＶ、Ｂｏｌｄ  ３ＮＶ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−ＮａＣｌ、Ｂｒｉｓｔｏｌ’ｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ／Ｍｅｄｉｕｍ、Ｃｈｕ、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ、Ｃｙａｎｏｐｈｙｃｅａｎ、Ｄｅｓｍｉｄ、ＤＹＩＩＩ、Ｅｒｄｓｃｈｒｉｅｂｅｒ、ＥＳ／１０−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、ＥＳ／２−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、ＥＳ／４−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、ＥＳ−Ｅｎｒｉｃｈｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、Ｅｕｇｌｅｎａ、ＨＥＰＥＳ−ｖｏｌｖｏｘ、Ｊ  ｍｅｄｉｕｍ、ＬＤＭ、Ｍａｌｔ、ＭＥＳ−Ｖｏｌｖｏｘ、ＮＢＢ、Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐ４９、Ｐａｓｔｅｕｒｉｚｅｄ  ｓｅａｗａｔｅｒ、Ｐｏｌｙｔｏｍｅｌｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｒｏｔｅｏｓｅ、Ｓｏｉｌ  ｅｘｔｒａｃｔ、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＢＡＲ）、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＧＲ−）上清、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＧＲ＋）、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＧＲ＋）上清、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＰＥＡ）、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（Ｐｅａｔ）、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ（ＶＴ）、Ｓｏｉｌｗａｔｅｒ＋ｓｅａｗａｔｅｒ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＴＥＳ−Ａ��ｔｒｅｐｈｏｍｅｎｅ、ＴＥＳ−Ｎ／２０、Ｔｒｅｂｏｕｘｉａ、Ｖｏｌｖｏｃａｃｅａｎ、Ｖｏｌｖｏｃａｃｅａｎ（３Ｎ）、Ｖｏｌｖｏｘ、Ｖｏｌｖｏｘ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ、Ｗａｒｉｓ、Ｗａｒｉｓ＋ＳＥ  ａｎｄ  ＹＴ２０）、Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｌｇａｅ  ａｔ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、ｗｗｗ．ｇｗｄｇ／ｄｅ／〜ｅｐｓａｇ／Ｗｅｂ／ｅｉｎｓｔｉｅｇ（すなわち、Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ  Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎｓ、Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｎ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｂａｃｉｌｌａｒｉｏｐｈｙｃｅａｎ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎｓ、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  １０％  Ｅｕｇｌｅｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ  ａｎｄ  Ｖｉｔａｍｉｎｓ、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｂｅｅｆ  Ｅｘｔｒａｃｔ、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｈ２ＳＯ４、Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｐｅｐｔｏｎｅ、Ｂｅｇｇｉａｔｏａ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  ｔｒｉｐｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ、Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎｓ、Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎｓ  ａｎｄ  ｔｒｉｐｌｅ  Ｎｉｔｒａｔｅ、Ｂｒａｃｋｉｓｈ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｂｒａｃｋｉｓｈ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｌｅｎｉｔｅ、Ｂｒａｃｋｉｓｈ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｓｉｌｉｃａｔｅ、Ｃｈｉｌｏｍｏｎａｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ（＝Ａｃｉｄ  Ａｌｇａ  Ｍｅｄｉｕｍ）、Ｃｙａｎｉｄｉｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ＋Ｂ１、Ｄｅｓｍｉｄｉａｃｅａｎ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｄｅｓｍｉｄｉａｃｅａｎ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｂ１、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌａ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌａ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｄｕｎａｌｉｅｌｌ、Ｍｅｄｉｕｍ、Ｅｕｇｌｅｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｅｕｇｌｅｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ、ｆ／２  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｈａｌｆ−ｓｔｒｅｎｇｔｈ  Ｅｕｇｌｅｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｍｉｎｅｒａｌｓ、Ｋｕｈｌ−Ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  Ｕｎｉｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｇｒｅｅｎ  Ａｌｇａｅ、Ｍａｌｔ  Ｐｅｐｔｏｎｅ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｂｏｌｄ’ｓ  Ｂａｓａｌ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｆｏｒ  Ｈｅｔｅｒｏｔｒｏｐｈｓ、Ｏｃｈｒｏｍｏｎａｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｏｌｙｔｏｍａ  Ｇｌｕｃｏｓｅ、Ｐｏｌｙｔｏｍａ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｏｌｙｔｏｍｅｌｌａ、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｒｏｖａｓｏｌｉ’ｓ  ｅｎｒｉｃｈｅｄ  Ｓｅａｗａｔｅｒ、Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｓｅｌｅｎｉｔｅ、Ｓｅａｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｓｉｌｉｃａｔｅ、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉａ、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｂａｒｌｅｙ（＝ＧｅｒｓｔＥ）、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  ＣａＣＯ３、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  ＮＨ４ＭｇＰＯ４、Ｓｏ���ｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｐｅａ、およびＬｏａｍｙ  Ｓｏｉｌ  ｗｉｔｈ  Ｓａｎｄ（＝Ｅｒｂｓ  ＭＳ）、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｐｅａ（＝ＥｒｂｓＥ）、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｐｅａ  ａｎｄ  ｗｉｔｈ  Ｓａｎｄ（＝Ｅｒｂｓ  Ｓ）、Ｓｏｉｌ  Ｗａｔｅｒ  Ｍｅｄｉｕｍ  ｗｉｔｈ  Ｗｈｅａｔ、Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＴＯＭ、Ｖｏｌｖｏｘ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＷＣ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＷＥＥＳ  Ｍｅｄｉｕｍ  ａｎｄ  ＷｅｉｚｅｎＥ）、および  Ｐｒｏｖａｓｏｌｉ−Ｇｕｉｌｌａｒｄ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｍａｒｉｎｅ  Ｐｈｙｔｏｐｌａｎｋｔｏｎ、ｃｃｍｐ．ｂｉｇｅｌｏｗ．ｏｒｇ（すなわち、Ａｌｋａｌｉｎｅ  Ｓｏｉｌ  Ｅｘｔｒａｃｔ、ＣＣＭＰ’ｓ  Ｌ／２０  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ、ＣＣＭＰ’ｓ  Ｌ／２０  Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＣＭＰ’ｓ  Ｌ／２０／４＋Ｖａ、ＤＣＭ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＤＹＩＶ  Ｍｅｄｉｕｍ  （Ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ）、ｆ／２  Ｍｅｄｉｕｍ、ｆ／２  （３５％  ＳＷ）、ｆ／２＊  （７５％  ＳＷ）、ｆ／２＊、ｆ／２＋Ｏｒｇ、ｆ／２０−Ｓｉ、ｆ／２０−Ｓｉ＋ＥＤＴＡ、ｆ／２−Ｓｉ、ｆ／２−Ｓｉ  （７５％  ＳＷ）、ｆ／４  （５０％  ＳＷ）、ｆ／４−Ｓｉ、ｆ／５０−Ｓｉ、ｈ／２  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｋ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｌ１  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｌ１−Ｓｉ、Ｌ１−Ｓｉ  （８０％  ＳＷ）、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ＳＮ  Ｍｅｄｉｕｍ  （ＣＣＭＰ  ｒｅｃｉｐｅ）、ＰＣ  （Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｃｏｃｃｕｓ）  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｒｏｖ  Ｍｅｄｉｕｍ、Ｐｒｏｖ５０、Ｐｒｏｖ５０＋Ｏｒｇ、ＳＮ  Ｍｅｄｉｕｍ、ＴＢＴ  Ｍｅｄｉｕｍ、ａｎｄ  ＷＣｇ  Ｍｅｄｉｕｍ  （Ｆｒｅｓｈｗａｔｅｒ））から得たものが含まれる。
【００８７】
Ｅ．培養変量
以下の表１は、藻類の活発な増殖を産出するために、本発明で使用しうるインキュベーション条件を定義する、培養変量の非限定リストを含んでいる。
【表１】
2006519615.tif 000004
【００８８】
培養のインキュベーションは、個々の株に依存して、２〜１００℃、好ましくは１０〜３０℃の範囲の温度で実施しうる。
【００８９】
使用した培養培地は、本発明に対して重要ではない。このような培養培地の例については上記に示している。
【００９０】
培養のために使用しうるかき混ぜ量は、かき混ぜ無しから、１秒間に４サイクルのような、激しく回転または振動させるシェイキングまで変化可能である。好ましくは、かき混ぜは、緩やか（１秒あたり１サイクル以下）、または行わない。
【００９１】
曝気は、空気、純粋な酸素、または酸素と不活性気体の組み合わせを用いて、実施可能である。
【００９２】
同様に、ＣＯ２バブリングを、純粋なＣＯ２で、またはＣＯ２と空気または不活性気体の混合物で、実施可能である。いずれかの場合で、曝気のための好ましい物理的方法は、１分あたり１リットルの気体以下での、穏やかなバブリングである。しかしながら、より迅速なバブリング、スパーギング、または、１分間あたり５リットルの気体までの気体変換の他の方法もまた使用可能である。
【００９３】
照明サイクルは、インキュベーションの１００％の間暗から、インキュベーションの１００％の間明まで選択しうる。
【００９４】
好ましくは、照明サイクルは、明暗の期間を１２時間変化させることからなる。
【００９５】
照明のために使用した光の波長は、たとえば、２００ナノメーターから９００ナノメーターの範囲でありえ、狭いスペクトルであるか、または天然の太陽光のような混合のいずれかでありうる。好ましくは、照明は、可視範囲、４００〜７００ナノメーターの波長の混合を含む。この光の強度は、たとえば０〜１００Ｍ−２秒−１以上、好ましくは８０〜９０Ｍ−２秒−１まで、変化可能である。
【００９６】
使用した特定の抗生物質は、本発明に対して重要ではない。使用可能な抗生物質の例には、それぞれ１００ユニット／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌでの、ペニシリンおよびストレプトマイシンが含まれる。好ましい実施形態において、抗生物質は使用しない。
【００９７】
使用した特定の界面活性剤は、本発明に対して重要ではない。使用可能である界面活性剤の例には、０．０１％（ｖ／ｖ）以下の濃度での、Ｔｗｅｅｎ２０またはＮｏｎｉｄｅｔのような、穏やかな非イオン性界面活性剤が含まれる。
【００９８】
使用した特定の培養容器は、本発明に対して重要ではなく、様々な形状であってよい。たとえば、キャピラリー、シートまたはチューブ配座中の市販されている生物反応器でよい。好ましい培養容器は、可視光に対して透過性の物質でできている、エルレンマイヤー（Ｅｈｒｌｅｎｍｅｙｅｒ）フラスコまたは培養チューブである。
【００９９】
Ｆ．前駆体化合物との相互作用に基づく、非原核生物微小藻類のさらなるサブ選択
バイオトランスフォーメーションを得る効率を最大化するために、前駆体化合物のための溶媒の存在下で増殖しない藻類をまず除去した後、その代謝物が、前駆体化合物に相互作用しそうにない藻類を次に除去する。特に、各藻類の培養を、たとえば数日から数週間、種々の異なる濃度の前駆体化合物（たとえば、５〜５００μｇ／ｍｌ、好ましくは２０〜１５０μｇ／ｍｌ）が存在する場合、および存在しない場合で、増殖させる。定期的に、細胞増殖を決定するために、細胞濃度を測定する。
【０１００】
一実施形態において、細胞計数を、死細胞からではなく、生細胞から除外した生株が存在する場合、または存在しない場合で、血球計算板中で計数することによって、日々測定する。コールター（Ｃｏｕｌｔｅｒ）計数、光スカッタリング測定、濁度測定、タンパク質、ＤＮＡまたはＲＮＡ濃度、または当業者がよく知っている他の方法を含むがこれに限定されない、細胞増殖を測定するための他の方法を、本発明で使用可能である。
【０１０１】
前駆体化合物がある状態で、ない状態よりも、よりゆっくり、またはより速く増殖する株を、さらなる実験のために選択する。その増殖特性が、前駆体化合物の存在にて変化する株を、その増殖が影響を受けないものよりも、前駆体化合物と、細胞の生化学的機構との間の相互作用を持ちうると仮定する。さらに、適切な増殖を可能にする、前駆体化合物のもっとも高い濃度を、好ましくは、次のステップにおける各株に対して選択する。その細胞数が、開始細胞濃度に比べて減少する藻類株であるので、その増殖が影響を受けない藻類をすてる。
【０１０２】
Ｇ．前駆体化合物の存在下での増殖
さらに以上で記述したようにサブ選択したパネルの各藻類を、上記Ｅで記述したような条件を用いて、前駆体化合物の存在下で増殖させる。さらに、各藻類株を、増殖対照として、前駆体化合物がない状態で増殖させる。前駆体化合物をまた、各培地と同様の濃度で、各培養培地中に溶解し、同様の培養条件下で、藻類なしでインキュベートした（バイオトランスフォーメーション対照）。さらに、細胞をまず、安定期まで増殖させ、ついで、最小細胞部分で、前駆体化合物とともにインキュベートする。２、３日〜数週間、好ましくは４〜１０日間の間で変化可能な、２〜１００℃、好ましくは１０〜３０℃でのインキュベーション時間の後、各培養液を、培養上清および細胞バイオマスに分離する。種々の周知の分離方法のいずれかを、培養上清から藻類細胞を分離するために使用可能である。これらの方法は、濾過、遠心分離、および沈降を含むがこれに限らない。
【０１０３】
Ｈ．解析および精製
各細胞マスおよび／または上清を、ベンゼンまたは酢酸エチルのような不混和性溶媒で抽出し、代謝物を含む溶媒抽出物を得ることができる。一実施形態において、上清は抽出せずに、直接使用する。ついで、溶媒抽出物または上清を、当業者によく知られている種々の解析科学の技術によって解析しうる。解析有機化学の適用可能な技術の例には、制限はしないが、高圧液体クロマトグラフィー、低圧液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィーおよび薄層クロマトグラフィーが含まれる。各実験試料からの解析結果を、相当する増殖対照およびバイオインフォーメーション対照と比較して、相当する増殖対照またはバイオトランスフォーメーション対照試料内ではなく、実験試料中で存在する分子からのシグナルを発見可能である。
【０１０４】
さらに、溶媒抽出物または上清を、多数の解析有機化学の方法によって場合により処置し、部分的または完全に、代謝物を精製しうる。使用する特定の精製方法は、本発明に対して重要ではない。このような精製法の例には、高圧液体クロマトグラフィー、低圧液体クロマトグラフィー、相分離およびガスクロマトグラフィーが、単独または組み合わせのいずれかで含まれる。
【０１０５】
ついで、好ましい代謝物候補物を、構造解析のための解析有機または生物解析化学の分野の当業者に周知である、質量分析（ＭＳ）または核磁気共鳴（ＮＭＲ）のような、有機化学の方法を用いて同定可能である。
【０１０６】
以下の実施例は、例示の目的のみに規定され、本発明の範囲を制限する意図はない。
【実施例１】
【０１０７】
本実施例は、前駆体化合物、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸の、
【化５】
2006519615.tif 000005
代謝物、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−１−アミノ−２−ヒドロキシカルボン酸
【化６】
2006519615.tif 000006
へのバイオトランスフォーメーションを示している。（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸は、β−ラクタム抗生物質の合成のための、有用な構築ブロックであり、同時に、ジアステレオ選択性ミカエル添加およびディース−アルダー反応による、多くのキラル化合物の合成のための有用な開始薬剤である。その代謝物は、保護キラルα−アミノ酸であり、多くの他のキラル合成のための有用な開始点でもある（Ａｇｅｒ  ら、，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９６：８３５（１９９６））。
【０１０８】
（Ａ）非原核生物微小藻類株
微小藻類の初期パネルは、以下の表２（２−１，２−２）にて列記した株からなった。これらの株の進化、生態学および代謝の多様性の特性を、以下の表２（２−１，２−２）に示している。パネルには、トレボウキシオフィセアエ、クロロフィセアエ、クリプトモニデアエ、ユーグレモフィタ、ラフィドフィセアエ、ジアトマチアエ、プラシノフィセアエ等の種からの代表を含んでいる。生態学的地位には、限定はしないが、（深海底、着生およびプランクトン、近沿岸および外洋、汽水および好塩基性、熱帯および温暖を含む）海洋、（アルカリ性小川、富栄養湖および池、貧栄養湖および池、または高山湖および池を含む）淡水底生、着生、プランクトン、および非水性（温暖土壌、熱帯土壌、冷土壌および浮遊）が含まれた。代謝の型には、光合成無機栄養生物、従属栄養生物および混合栄養生物が含まれた。
【表２−１】
2006519615.tif 000007
【表２−２】
2006519615.tif 000008
【０１０９】
（Ｂ）溶媒の存在下での、増殖特性に基づくサブ選択
以上表２（２−１，２−２）にて示した各藻類の１５ｍｌ培養液を、前駆体化合物、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸のための溶媒として、０．４％（ｖ／ｖ）メタノールの存在する状態、またはしない状態で、以下の表３で示した種々の条件下、増殖させた。藻類の複数の株が、溶媒によって強く影響を受け、すなわち、培養の細胞数が、実際に、時間とともに減少し、視覚検査によって、対照と比較して、多数の死細胞、または瀕死の細胞の数が明らかになった。これらの株を、バイオトランスフォーメーションのためには好適でないと判断した。他は、非常にゆっくりな増殖のような好適ではない増殖特性、または共培養細菌の汚染を含んだ。これらの株を捨て、以下の表３で示した株のサブセットを産出した。
【表３】
2006519615.tif 000009
【０１１０】
（Ｃ）前駆体化合物との各株の相互作用に基づくさらなるサブ選択
以上の表３で列記した各藻類の３つの１５ｍｌ培養液を、３０ｍｌフラスコで増殖させた。増殖対照培養は、藻類と培地のみを含んだ。溶媒の存在下での増殖対照培地は、藻類、培地および０．０６ｍｌメタノール、前駆体化合物のために選択した溶媒が含まれた。実験培養液には、藻類、培地および０．０６ｍｌの、メタノール中に溶解させた（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸（前駆体化合物）２５ｍｇ／ｍｌ溶液が含まれ、最終濃度１００μｇ／ｍｌであった。この培養液を、以上の表３で示した条件下でインキュベートした。細胞計数を、０、２、４および７日で血球計数板を用いて実施した。結果の選択を図３で示している。
【０１１１】
いくつかの場合、前駆体化合物が、増殖に強力に影響を与え、したがって、実験の過程の間のいずれかの増殖対照のものよりも、細胞濃度がわずかに増加するか、または実際時間をおって減少し、これは、前駆体化合物が細胞死を引き起こしていたことを示唆している。図３で示したプラチオモナスでの試験は、細胞死を引き起こしている前駆体化合物の例である。増殖対照と比較して増殖の増加を示した（たとえば、図３のクロレラおよびボトリジウム）、または増殖対照と比較して、穏やかではあるが、急激ではない増殖の減少を示した（たとえば、図３のクラミドモナスおよびフェオダクチルム）微小藻類株が、最終パネルのために選択された。以下の表４は、前駆体化合物によって増殖における影響が示された微小藻類を列記している。
【表４】
2006519615.tif 000010
【０１１２】
（Ｄ）前駆体化合物の存在下での増殖
表５は、最終パネル中の各微小藻類、その開始細胞濃度、増殖培地中の前駆体化合物の濃度、開始および最終細胞数、培養上清からの得られたバイオマスの分離の方法を列記している。藻類株の最終パネルを、得られたバイオマスを培養上清より分離する前に、前駆体化合物の存在下で、上記表３で列記した条件下で、７日間増殖させた。細胞数は、表５で列記した株に関して、すべての場合では測定されなかった。
【表５】
2006519615.tif 000011
【０１１３】
（Ｅ）精製、解析および同定
本実施例において、培養上清は、有機溶媒で抽出しなかった。しかしながら、たとえば、水に混和しない当量の有機溶媒を添加すること、よく混合して、この混合物を乳化させること、ついで遠心によって、または分液漏斗内で、または他の方法によって、２つの液体相を分離すること、によって上清を抽出可能である。好適な有機溶媒の例には、限定はしないが、ベンゼンおよび酢酸エチルが含まれる。
【０１１４】
培養上清を、溶媒伝達系、溶媒デガッサー、温度調節カラムコンパートメント、試料自動注入器およびダイオードアレイ検出器を備えた、ヒューレット・パッカード・ハイ・プレッシャー・リキッド・クロマトグラフ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｈｉｇｈ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ（ＨＰＬＣ））、Ｍｏｄｅｌ１１００または１０５０上で解析した。さらに、Ｍｏｄｅｌ１１００は、質量選択検出器を持つ。使用したカラムは、ヒューレット・パッカード・ゾルバックス・エクリプス（Ｈｅｗｌｉｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ）ＸＤＢ−Ｃ８、５ミクロン、４．６ｍｍ×１５０ｍｍであった。流速は１．０ｍｌ／分であった。抽出分液５．０μｌを注入し、カラムを、以下の表６中にて示した勾配で進めた。
【表６】
2006519615.tif 000012
【０１１５】
溶出液を、８ｎｍのバンド幅での、２１０ｎｍで解析した。培養上清の各クロマトグラフを、培養増殖対照の、そしてバイオトランスフォーメーション対照上清の、クロマトグラフと比較した。藻類および前駆体化合物と共にインキュベートした培養液の上清のクロマトグラフではみられ、しかし、対照試料のクロマトグラフでは見られないピークが、改変前駆体化合物（代謝物）に対する考えられる候補であり、さらなる研究のために選択した。試験した１６の株のうち、５株、すなわち、アンフィポラ、クリプトチシス、クラミドモナス、シーンデスムスおよびおクリプトモナスそれぞれが、１つの候補ピークを持った。クラミドモナスおよびシーンデスムスからの候補ピークに関する溶出時間はほぼ同一であり、同一の前駆体トランスフォーメーションを示唆していると考えられる。
【０１１６】
図４Ａは、クラミドモナスからの溶媒抽出物を用いた、代表的なＨＰＬＣクロマトグラフを示しており、候補ピークを記録している。図４Ｂは、図４Ａでの記録したピーク周辺のＨＰＬＣクロマトグラフの領域を示している（解析度を増加させて示した）。
【０１１７】
図４Ｂ中で記録したピークを、さらに質量分析（ＭＳ）による解析にかけた。培地を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３  マイクロ  フェニル−ヘキシルカラム、１５０ｍｍ×２．０ｍｍを用いる、混合液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によって解析した。カラムを、以下の表７で示した溶媒プログラムで、３０℃にて、０．４０ｍｌ／分で進めた。
【表７】
2006519615.tif 000013
【０１１８】
質量分析に関して、イオン化モードは、ＥＳＰポジティブであり、２５ボルトのコーン電圧であった。質量領域は、６０〜５００ａｍｕであり、供給源温度は１５０℃であり、時間ウインドは、０〜１５分であった。ＥＳＩネブライザー気体は、２０ｌ／時間で、窒素であり、バス気体もまた窒素であったが、３５０ｌ／時間であった。質量分析器は、Ｆｉｓｏｎｓ  ＶＧ  Ｑｕａｔｔｒｏであった。
【０１１９】
前駆体化合物は、７．６３分で溶出され、２５２の質量を持った。候補ピークは、７．５８分で溶出され、２４０の質量を持った。
【０１２０】
推定代謝物の構造を決定するために、２−次元質量分析に連結した液体クロマトグラフィー（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を、図４Ｂにて記録したＨＰＬＣピークからの物質、ならびに親分子にて実施し、前駆体および候補代謝物の娘断片を解析した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを、検出器波長を２１０ｎｍに、衝突気体をアルゴン、衝突エネルギーを７ｅＶとした以外、ＬＣ／ＭＳと同様の条件下で実施した。結果を、ＭａｓｓＬｙｎｘ  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．４（マイクロマス（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ））ソフトウェアを用いて解析した。結果を、図５Ａ〜５Ｄに示す。
【０１２１】
図５Ａおよび５Ｃに示すように、親分子は、２５２のプロトン化重量、および２９３のプロトン化親およびアセトニトリル間の付加化合物重量を持つ。これは９１と２０８の質量の主要断片である。図５Ｂおよび５Ｄに示すように、２４０のプロトン化重量は未知であり、親から１２の質量差である。これは９１と１９６の質量の主要な断片を持つ。１９６での未知の断片は、１２少ない質量であり、質量２０８の親中の主要な断片であり、これは、この断片が、トランスフォーメーションを含むことを示唆している。質量９１の断片が、両方に存在し、このことは、これが、未知中で改変されなかった分子の一部分から由来することを示唆している。
【０１２２】
図６Ａは、前駆体化合物の構造を示しており、図６Ｂは、図５中で示した断片化パターンから推定した代謝物の予測構造を示している。この特定のバイオトランスフォーメーションにおいて、１つの炭素断片が、オキサゾリン環より切断され、環が開裂し、結果としてアルコールとなることが明らかである。
【実施例２】
【０１２３】
本実施例は、第二前駆体化合物、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）
【化７】
2006519615.tif 000014
のバイオトランスフォーメーションを示している。
【０１２４】
ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）、本明細書では以下、前駆体２と呼ぶものは、その種類に、限定はしないが多くのＨＩＶプロテアーゼ阻害剤を含む、ヒドロキシエチルアミンジペプチド等量式の合成のための、きわめて重要な構築ブロックである。
【０１２５】
前駆体２は、システイン部位を、２つの可能性ある位置の１つに添加することによってバイオトランスフォーメーションされ、仮定される代謝物、Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミド
【化８】
2006519615.tif 000015
または仮定される代謝物、Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システイン
【化９】
2006519615.tif 000016
のいずれかが産出される。
【０１２６】
誘導されたシステインアミド代謝物は、同一の窒素原子を共有している２つの鏡面イメージペプチド結合を含み、したがって、ホモ二量体タンパク質の可能性のある対照阻害剤のための、優れた合成経路である。アミノジオール種の非常に関連した化合物が、抗−ＨＩＶ活性を持つことが示された（Ｃｈｅｎ  ら、，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３９（１０）：１９９１−２００７（１９９６））。
【０１２７】
Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインは、非タンパク質性アミノ酸であり、タンパク質を合成するために天然で使用されないアミノ酸である。非タンパク質性アミノ酸は、特定のタンパク質−タンパク質相互作用の阻害剤の合成のために有用である。このような相互作用を阻害するための共通の方策には、非タンパク質性アミノ酸を含むもののような、基質結合部位を模倣するが、同一ではないペプチドの設計が含まれる。また、システインの非タンパク質性誘導体が、システインプロテアーゼの阻害剤として有用であると考えられる（Ａｌｂｅｃｋ  ら、，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３４６：７１−７６（２０００））。これらの阻害化合物種の両方が、医薬業界および農業界で有用である。一般的に、このような化合物は、複雑な工程によって、より最近では、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）の遺伝的に改変した株を用いる発酵によって合成される（米国特許公開第２００２／００３９７６７号）。
【０１２８】
Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインは、システイニルロイコトリエン（ＬＴｓ）、Ｃ４、Ｄ４、Ｅ４およびＦ４によって共有されるモチーフを含む。システイニルロイコトリエン類は、アナフィラキシーの遅延反応基質の成分であり（Ｈａｍｍａｒｓｔｒｏｍ  ら、，Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，９２：９４６（１９８０））、喘息の原因に強く関与してきた（Ｌａｍ  ら、，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｙ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６１（２）：Ｓ１６−Ｓ１９（２０００））。ＬＴｓはまた、組織傷害の部位への、細胞性走化性を促進すると考えられている（Ｄｅｌｇａｄｏ  ら、，上記）。
【０１２９】
システイニルＬＴを以下に示す。ＲはＨまたはグリシンであり、Ｒ’はＨまたはγ−グルタミン酸のいずれかでありうる。
【０１３０】
共有モチーフを以下に示している。ＲおよびＲ’は、以上で記述したとおりであり、
【化１０】
2006519615.tif 000017
Ｒ’’およびＲ’’’は、未特定化学基である。
【化１１】
2006519615.tif 000018
【０１３１】
システイニルロイコトリエン類は、ロイコトリエンＡ４上のグルタチオンとエポキシド環間の縮合によって、天然に合成される（Ｄｅｌｇａｄｏ  ら、，上記、およびＬａｍら，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６１（２）：Ｓ１６−Ｓ１９（２０００））。本反応に関連する酵素、ＬＴＣ４シンターゼは、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＨトランスフェラーゼ）の一例である。ＬＴＣ４シンターゼは、その基質親和性が、非常に特異的であって、ＬＴＣ４を産出するために、グルタチオンのみを認識する。他のシステイニルロイコトリエン類は、ＬＴＣ４のグルタチオン部位の選択的開裂によって産出される（前章）。さらに、ＬＴＣ４シンターゼは、その基質が、反応の間に開裂されるエポキシド部位である、他の既知のグルタチオンＳ−トランスフェラーゼとは異なる。ＬＴＡ４に対して、グルタチオンの代わりにシステインを直接結合させることができる酵素が、３段階（グルタチオンとの結合と、それに続く２回の加水分解開裂）とは対称的に、１段階で、ＬＴＥ４を産出しうる。さらに、このような酵素は、たとえば喘息ならびに他の疾患および疾病の治療において、使用すべき、可能性のあるＬＴ膜レセプター阻害物としての、システイニルロイコトリエン類似体の合成に有用であり得る。
【０１３２】
（Ａ）微小藻類株
微細藻類株の初期パネルは、上記表２（２−１，２−２）で列記した株からなった。これらの株の分類的および生態学的多様性の特徴も、表２（２−１，２−２）で示している。パネルは、種トレボウキシオフィセアエ、クロロフィセアエ、クリプトモニデアエ、ユーグレノフィタ、ラフィドフィセアエ、ジアトマチアエ、プラシノフィセアエなどからの代表を含んだ。生態学的地位には、限定はしないが、（深海底、着生およびプランクトン、近沿岸および外洋、汽水および好塩基性、熱帯および温暖を含む）海洋、（アルカリ性小川、富栄養湖および池、貧栄養湖および池、または高山湖および池を含む）淡水底生、着生、プランクトン、および非水性（温暖土壌、熱帯土壌、冷土壌および浮遊）が含まれた。代謝の型には、光合成無機栄養生物、従属栄養生物および混合栄養生物が含まれた。
【０１３３】
（Ｂ）溶媒の存在下での、増殖特性に基づくサブ選択
上記表２（２−１，２−２）にて示した各藻類の１５ｍｌ培養液を、前駆体２、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）のための溶媒として、０．４％（ｖ／ｖ）メタノールの存在する状態、または存在しない状態で、上記の表３で示した種々の条件下、増殖させた。藻類の複数の株が、溶媒によって強く影響を受け、すなわち、培養の細胞数が、実際に、時間とともに減少し、視覚検査によって、対照と比較して、多数の死細胞、または瀕死の細胞の数が明らかになった。これらの株を、バイオトランスフォーメーションのためには好適でないと判断した。他は、非常にゆっくりな増殖のような好適ではない増殖特性、または共培養細菌の汚染を含んだ。これらの株を捨て、以下表８で示した株のサブセットを産出した。
【表８】
2006519615.tif 000019
【０１３４】
（Ｃ）前駆体２との各株の相互作用に基づくさらなるサブ選択
上記の表８で列記した各藻類の３つの１５ｍｌ培養液を、３０ｍｌフラスコで増殖させた。増殖対照培養は、藻類と培地のみを含んだ。溶媒の存在下での増殖対照培地には、藻類、培地および０．０６ｍｌメタノール、前駆体２のために選択した溶媒が含まれた。実験培養液には、藻類、培地および０．０６ｍｌの、メタノール中に溶解させたｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）（前駆体化合物）２５ｍｇ／ｍｌ溶液が含まれ、最終濃度１００μｇ／ｍｌであった。この培養液を、以上の表３で示した条件下でインキュベートした。細胞計数を、０、２、４および７日で血球計数板を用いて実施した。結果の選択を図７で示している。
【０１３５】
いくつかの場合、前駆体２が、増殖にほとんどわずかにしか影響を与えなかった。たとえば、図７は、オリストジスカス（Ｏｌｉｓｔｈｏｄｉｓｃｕｓ）の増殖は、前駆体２によって、有意に影響を受けなかったことを示している。他の場合、前駆体２は、細胞の増殖率を減少させた。図７は、たとえばプラシノクラダス（Ｐｒａｓｉｎｏｃｌａｄｕｓ）、ファエオダクチラム（Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ）およびクロロサルシノプシス（Ｃｈｌｏｒｏｓａｒｃｉｎｏｐｓｉｓ）が、存在しない場合と比較して、前駆体が存在する場合に、よりゆっくりと増殖したことを示している。２，３の場合で、藻類の増殖速度が、実際に、対照と比較して、前駆体の存在する場合に増加した。図７において、クロレラ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ）の増殖は、対照培養中よりも、この前駆体が存在する場合により速い。比較の方法によって、図４で示されたように、クロレラの増殖は、実施例１で使用した前駆体２によって陰性に影響を受けたと言及しうる（上記を参照のこと）。増殖速度の変化を示している藻類株（増殖対照と比較して、増殖が非常に減少したもの以外）を、最終パネルのために選択した。表９は、最終パネル中のこれらの藻類を列記している。
【表９】
2006519615.tif 000020
【０１３６】
（Ｄ）前駆体化合物の存在下での増殖
表１０は、最終パネル中の各微小藻類、その開始細胞濃度、増殖培地中の前駆体化合物の濃度、開始および最終細胞数、培養上清からの得られたバイオマスの分離の方法を列記している。藻類株の最終パネルを、得られたバイオマスを培養上清より分離する前に、前駆体２の存在下で、上記表８で列記した条件下で、７日間増殖させた。細胞数は、表１０で列記した株に関して、すべての場合では測定されなかった。
【表１０】
2006519615.tif 000021
【０１３７】
（Ｅ）精製、解析および同定
（１）安定性研究
前駆体２の解析のためのクロマトグラフィー条件は、溶媒伝達系、溶媒デガッサー、温度調節カラムコンパートメント、試料自動注入器およびダイオードアレイ検出器を備えた、ヒューレット・パッカード・ハイ・プレッシャー・リキッド・クロマトグラフ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｈｉｇｈ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ（ＨＰＬＣ））、Ｍｏｄｅｌ１１００または１０５０上で実施した。さらに、Ｍｏｄｅｌ１１００は、質量選択検出器を持つ。使用したカラムは、Ｈｅｗｌｉｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ８、５ミクロン、４．６ｍｍ×１５０ｍｍであった。流速は１．０ｍｌ／分であり、カラムを、以下表１１で示した勾配で実施した。
【表１１】
2006519615.tif 000022
【０１３８】
溶出液を、８ｎｍのバンド幅での、２１０ｎｍで解析した。
【０１３９】
初期実験を、前駆体２の安定性を試験するために実施した。前駆体２を、水および２つの異なる培養培地、ユーグレナ（Ｅｕｇｌｅｎａ）培地、およびカルツおよびマイヤー培地（Ｋｒａｔｚ  ａｎｄ  Ｍｅｙｅｒｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）中に溶解し、１００μｇ／ｍｌの溶液を作製した。この溶液を、室温にて３日間インキュベートし、それぞれ５μｌをカラムに注入し、新鮮に調製した、水中に溶解させた前駆体２の試料と比較した。前駆体２が、１０．３分で溶出された。前駆体の回収は、水中で事実上定量的に、カルツおよびマイヤー培地中で９３．１％であったが、ユーグレナ培地中では３１．１％であった。後者の場合、単一の新たなピークが２．０分で観察された。さらに、同様の安定性試験を、ｐＨ４およびｐＨ９にて、水中の前駆体２で実施した。前駆体の回収は、ｐＨ４で低下したが、ｐＨ９ではしなかった。
【０１４０】
前駆体２とその推定分解物の両方を含む５．０μｌの溶液を、電子噴霧インターフェース（ＡＰＩ）を備える１１００ＨＰＬＣ内に注入し、親および未知のピークの質量スペクトルを測定した。この実験で使用した条件を表１２で列記している。
【表１２】
2006519615.tif 000023
【０１４１】
図８Ａは、典型的な実験からの、ＨＰＬＣ−ＭＳクロマトグラフィーを示しており、図８Ｂは、２．１分の時点で溶出されているピークの、ポジティブモード質量スペクトルを示している。推定分解物の質量およびその断片の質量は、本来の親分子のエステル結合の酸触媒加水分解と互換性があり、四級ブタノールおよび（オキシラニル−２−フェニルエチル）カルバミン酸が産出される。本解釈と一致して、１０．３および２分ピークからの総ＵＶ吸収の合計が、開始前駆体２の濃度に関して直線であったことが発見された。加水分解工程が、単一の反応であり、四級ブタノールおよび（オキシラニル−２−フェニルエチル）カルバミン酸が産出されると結論づけられる。バイオトランスフォーメーション実験からのＨＰＬＣ結果の解析が、エステル結合の可能性のある非生物学的加水分解を考慮に入れて解釈される。
【０１４２】
（２）精製
本実施例において、培養上清は、有機溶媒で抽出されなかった。しかしながら、たとえば、水に混和しない当量の有機溶媒を添加すること、よく混合して、この混合物を乳化させること、ついで遠心によって、または分液漏斗内で、または他の方法によって、２つの液体相を分離すること、によって上清を抽出可能である。好適な有機溶媒の例には、限定はしないが、ベンゼンおよび酢酸エチルが含まれる。
【０１４３】
（３）解析
培養上清を、溶媒伝達系、溶媒デガッサー、温度調節カラムコンパートメント、試料自動注入器およびダイオードアレイ検出器を備えた、ヒューレット・パッカード・ハイ・プレッシャー・リキッド・クロマトグラフ（Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｈｉｇｈ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ（ＨＰＬＣ））、Ｍｏｄｅｌ１１００または１０５０上で解析した。さらに、Ｍｏｄｅｌ１１００は、質量選択検出器を持つ。使用したカラムは、Ｈｅｗｌｉｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ＸＤＢ−Ｃ８、５ミクロン、４．６ｍｍ×１５０ｍｍであった。流速は１．０ｍｌ／分であった。抽出分液５．０μｌを注入し、カラムを、以下の表１３中にて示した勾配で進めた。
【表１３】
2006519615.tif 000024
【０１４４】
溶出液を、８ｎｍのバンド幅での、２１０ｎｍで解析した。培養上清の各クロマトグラフを、培養増殖対照の、そしてバイオトランスフォーメーション対照上清の、クロマトグラフと比較した。藻類および前駆体化合物と共にインキュベートした培養液の上でのクロマトグラフではみられ、しかし、対照試料のクロマトグラフでは見られないピークが、改変前駆体２（代謝物）に対する考えられる候補であり、さらなる研究のために選択した。試験した１２の株のうち、株ブラクテアコッカス  シンニバリナス（Ｂｒａｃｔｅａｃｏｃｃｕｓ  ｃｉｎｎｉｂａｒｉｎｕｓ）は、２つの候補ピークを持ち、クリトモナス  オヴァタ（Ｃｒｙｔｏｍｏｎａｓ  ｏｖａｔａ）は、３つの推測代謝物ピークを示した。ブラクテアコッカス  シンニバリナス培養液からの、より大きな候補ピークに関する溶出時間は、クリトモナス  オヴァタでの候補ピークの１つとほぼ同一であり、おそらく、前駆体の同一のトランスフォーメーションを示している。
【０１４５】
図９Ａは、クリトモナス  オヴァタからの溶媒抽出物を用いた、代表的なＨＰＬＣクロマトグラフを示しており、候補ピークを記録している。図９Ｂは、図９Ａでの記録したピークの１つの周辺のＨＰＬＣクロマトグラフの領域を示している（解析度を増加させて示した）。
【０１４６】
図９Ｂ中で、約２．４分にて記録したピークを、さらに、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３マイクロフェニル−ヘキシルカラム、１５０ｍｍ×２．０ｍｍを用いる、混合液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ／ＭＳ）によって解析した。カラムを、以下の表１４で示した溶媒プログラムで、３０℃にて、０．４０ｍｌ／分で進めた。
【表１４】
2006519615.tif 000025
【０１４７】
質量分析に関して、イオン化モードは、ＥＳＰポジティブであり、１５または２８ボルトのコーン電圧であった。質量領域は、６０〜５００ａｍｕであり、供給源温度は１３０℃であり、時間ウインドは、０〜１２分であった。ＥＳＩネブライザー気体は、１５ｌ／時間で、窒素であり、バス気体もまた窒素であったが、３５０ｌ／時間であった。質量分析器は、ＥＳＰ  Ｚ−スプレー源を備えるＭｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑｕａｔｔｒｏ  ＩＩであった。
【０１４８】
前駆体化合物は、１０．１１分にて、ＬＣカラムより溶出された。図１０Ａは、そのピークの質量スペクトルグラフを示している。親分子は、２６４のプロトン化質量を持ち、３０５の、プロトン化親とアセトニトリル間の付加に対する質量を持つ。２８１にて主要なピークがあり、これは、エポキシド間の加水分解と一致する。さらに、２０８での主要なピークが、プロトン化と、ｔ−ブチル基の欠損と一致し、２４９での主要なピークが、２０８ピークの分子とのアセトニトリル付加と一致する。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ解析（図１０Ｂ）は、図１１で示した断片化スキームと一致する。
【０１４９】
図１２は、７．０９分で溶出される、候補ピークに関するＬＣ／ＭＳスキャンを示している。候補ピークは、２つの質量成分を持ち、３８５の質量による主要なピーク、および５９２の質量のマイナーなピークである。後者のピークは、質量３８５の種と、質量２０７の分子間の重合化産物と一致する。親化合物は、以上で示したように、その四級ブチル基の欠損を介して、２０７の分子量へ分解することが予想される。
【０１５０】
ＭＷ３８５の種の構造を決定するために、２−次元質量分析を伴う液体クロマトグラフィー（ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）を実施した。ＬＣ／ＭＳ／ＭＳは、衝突気体をアルゴン、衝突エネルギーを１５または２５ｅＶとした以外、ＬＣ／ＭＳと同様の条件下で実施した。結果を、ＭａｓｓＬｙｎｘ  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．４（マイクロマス（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）ソフトウェアを用いて解析した。図１３は、ｍ／ｚ  ３８５に対する、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳスキャンを示している。
【０１５１】
３８５のプロトン化質量を持つ、３８４の分子量を持つものが未知として現れている。ｍ／ｚ  ３８５、３８６および３８７間のプロトン化分子イオンの分布は、１つの硫黄原子の存在と一致する。Ｃ１２、Ｃ１３、Ｓ３２およびＳ３４の本来の度数に基づく分子モデリングが、ｍ／ｚ３８５の２２％であるｍ／ｚ  ３８６に対して、およびｍ／ｚ  ３８５の８．７２％であるｍ／ｚ３８７に対してのピーク高を予測する。２１％および８．９％の実際の値は、本モデルに非常に一致する。さらに、ｍ／ｚ３２９と２８５におけるイオンが、ｔ−ブチル基が存在し、カルボキシル基に接着することを示唆している。さらに、等しい分子量が、等しい数の窒素原子が存在することを示唆している。さらに、等しい分子量が、等しい数の窒素原子が存在することを示唆している。親分子は、１つの窒素を持ち、クリプトモナス藻類が、親分子と１つの硫黄を持ち、１２１の質量、奇数の窒素の基間の付加物を構築し、おそらく、質量制限によるものである。もっともありうる候補はシステインである。断片化パターンによって、親分子中のエポキシド環が開裂し、ヒドロキシル基が加わることが示唆されている。エポキシド環でのヒドロキシルの添加によって、システインと前駆体２間の付加が、脱水反応であることを示唆している。
【０１５２】
代謝物の構造をさらに解明するために、定量的飛行時間質量分析を行い、Ｑ−Ｔｏｆ  ｍｉｃｒｏ（商標）システム（マイクロマス（Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ）を用いて実施した。電子噴霧ＬＣ／ＭＳを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ３ミクロン  フェニル−ヘキシルカラム、１００ｍｍ×４．６ｍｍを用いて実施した。カラムを、以下の表１５で示した溶媒プログラムにて、流速０．３５ｍｌ／分で実施した。
【表１５】
2006519615.tif 000026
【０１５３】
質量分析に関して、イオン化モードは陽イオンであり、１５Ｖのコーン電圧である。供給源温度は１３５℃であり、脱溶媒温度は３２５℃であり、ネブライザー気体は、１７ｐｓｉにてアルゴンであった。３８５ＭＷ代謝物は、１１．８分にてカラムより溶出され、３８５．１７８８のより正確な質量を持ち、分子式Ｃ１８Ｈ２９Ｎ２Ｏ５Ｓの０．９ミリダルトン内に相当することが測定された。これは、以上で議論したように、クワドロポールＬＣ／ＭＳの解釈と一致する。
【０１５４】
３８５ＭＷ代謝物をさらに、Ｑ−Ｔｏｆ  ｍｉｃｒｏ（商標）システムを用いて、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳにかけた。条件は、衝突エネルギーが１５Ｖまたは２５Ｖのいずれかであったことを除いて、Ｑ−Ｔｏｆ  ＬＣ／ＭＳのために使用したものと同一であった。３８５ＭＷ代謝物から産出された主要な断片の分子量および可能性ある式を、以下の表１６で列記している。全ての場合で、２つの異なる衝突エネルギーによって、同様の実際の質量および可能性のある式が産出される。
【表１６】
2006519615.tif 000027
【０１５５】
２つの陽性の構造、Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミド、およびＳ−｛２−ヒドロキシ−３−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システイン、が結果と一致した。
【０１５６】
娘ピークが、それぞれ図１４および図１５で示した、仮定される分子の断片パターンと一致した。
【０１５７】
本発明は、詳細に記述され、その特定の実施形態に関連して記述されたが、当業者には、種々の変更および改変を、本発明の目的および範囲を逸脱することなしに、実施可能であることが明白である。
【図面の簡単な説明】
【０１５８】
【図１】図１は、最近５年間の間に付与されたバイオトランスフォーメーション特許における傾向を示している。米国特許商標局のデータベースを、バイオトランスフォーメーション特許に関して、ならびにそれらのサブクラスの全ての特許に関して、クラス４３５、サブクラス４３〜６７での特許に関して検索した。１つ以上のサブカテゴリーにて表示される特許に関して訂正をした。バイオトランスフォーメーション特許を、手動で調査し、装置設計に関する特許など的外れな結果を削除した。
【図２】図２は、細菌および真菌によって改変されるとは知られていない、天然に見られる、化学基の例を示している。
【図３】図３は、時間経過における、１００μｇ／ｍｌの（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸の存在下で増殖した、種々の藻類の増殖（細胞数）を示している。
【図４】図４Ａ〜４Ｂは、１００μｇ／ｍｌの（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸の存在する場合、またはしない場合でインキュベートした、クラミドモナス  レインハルディティ（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ  ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ）の細胞上清の溶媒抽出物の、ＨＰＬＣ解析を示している。図４Ａは、実験試料および対照試料のＨＰＬＣ結果を示している。実験試料では存在するが、対照培養上清では存在しない新たなピークを記録している。図４Ｂは、図４Ａで記録したピーク周辺のクロマトグラムの面積である（解析度を上げて示している）。さらに、図４Ｂにおいて、細胞と共にインキュベートしなかった培養培地のＨＰＬＣ解析を示している。
【図５】図５Ａ〜５Ｄは、図４Ｂで記録したＨＰＬＣピークからの、（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸（前駆体化合物）および物質の、ＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。図５Ａは、前駆体化合物のＬＣ／ＭＳを示している。図５Ｂは、図４Ａで記録したピークからの物質のＬＣ／ＭＳを示している。図５Ｃは、前駆体化合物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。図５Ｄは、図４Ｂで記録したピークからの物質のＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、前記対化合物（Ｓ）−（−）−３−（ベンジルオキシカルボニル）−４−オキサゾリジンカルボン酸（図６Ａ）およびその代謝物、すなわち（Ｓ）−（−）−３−（ベンゾイルカルボニル）−１−アミノ−２−ヒドロキシカルボン酸（図６Ｂ）の構造を示している。
【図７】図７は、時間経過における、１００μｇ／ｍｌのｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在下で増殖した、種々の藻類の増殖（細胞数）を示している。
【図８】図８Ａ〜８Ｂは、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の自己分解の、ＬＣ（図８Ａ）およびＭＳ（図８Ｂ）を示している。
【図９】図９Ａ〜９Ｂは、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の存在する場合、およびしない場合で増殖させた、クリプトモナス  オバタ（Ｃｒｙｐｔｏｍｏｎａｓ  ｏｖａｔａ）の細胞上清の溶媒抽出物の、ＨＰＬＣの解析を示している。図９Ａは、実験試料および対照試料のＨＰＬＣ結果を示している。実験試料では存在するが、対照培養上清では存在しない新たなピークを記録している。図９Ｂは、図９Ａで記録したピーク周辺のクロマトグラムの面積である（解析度を上げて示している）。さらに、図９Ｂにおいて、細胞と共にインキュベートしなかった培養培地のＨＰＬＣ解析を示している。
【図１０】図１０Ａ〜１０Ｂは、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）（前駆体化合物）のＬＣ／ＭＳおよびＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。図１０Ａは、前駆体化合物のＬＣ／ＭＳを示している。図１０Ｂは、前駆体化合物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。
【図１１】図１１は、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の提案された断片化パターンを示している。
【図１２】図１２は、ｔｅｒｔ−ブチル［Ｓ−（Ｒ＊−Ｒ＊）］−（−）−（１−オキシラニル−２−フェニルエチルカルバメート）の代謝物のＬＣ／ＭＳを示している。
【図１３】図１３は、ｍ／ｚ  ３８５代謝物のＬＣ／ＭＳ／ＭＳを示している。
【図１４】図１４は、仮定代謝物、Ｎ１−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ１−［１−フェニル（２，３−ジヒドロキシプロピル）メチル］システインアミドの提案された断片化パターンを示している。
【図１５】図１５は、他の仮定代謝物、Ｓ−｛２−ヒドロキシ−３−［〔ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−４−フェニルブチル｝システインの提案された断片化パターンを示している。
【図１】
2006519615.tif 000030
【図２】
2006519615.tif 000031
【図３】
2006519615.tif 000032
【図４】
2006519615.tif 000033
【図５】
2006519615.tif 000034
【図６】
2006519615.tif 000035
【図７】
2006519615.tif 000036
【図８】
2006519615.tif 000037
【図９】
2006519615.tif 000038
【図１０】
2006519615.tif 000039
【図１１】
2006519615.tif 000040
【図１２】
2006519615.tif 000041
【図１３】
2006519615.tif 000042
【図１４】
2006519615.tif 000043
【図１５】
2006519615.tif 000044
【国際調査報告】
2006519615.tif 000045
2006519615.tif 000046
2006519615.tif 000047
2006519615.tif 000048