(57)【要約】本発明は、芳香族ポリケチド中間体の、医薬の製造における新規な用途に関し、具体的には、このような化合物を用いた抗ウイルス薬や抗癌薬の開発に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として用いるか、医薬の製造に用いるための、下記式（１）で表される化合物Ｓ２５０２および下記式（２）で表される化合物Ｓ２５０７、またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩。
【化１】
2006508146.tif 000006
【化２】
2006508146.tif 000007
【請求項２】
人体または動物体に対する予防的処置に用いることを特徴とする、請求項１の化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、あるいはそれらの化合物の構造類似体またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩。
【請求項３】
請求項１の化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、あるいはそれらの化合物の構造類似体またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩を用いる、ウイルス感染症の治療薬の製造方法。
【請求項４】
請求項１の化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、あるいはそれらの化合物の構造類似体またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩を用いる、癌の治療薬の製造方法。
【請求項５】
請求項１の化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、ならびにそれらの化合物の構造類似体およびそれらの化合物の薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる１種を、薬学的に許容される担体と共に包含する医薬組成物。
【請求項６】
治療を要する癌患者に、請求項５の医薬組成物を有効量投与することを包含する、癌の治療方法。
【請求項７】
治療を要するウイルス感染症患者に、請求項５の医薬組成物を有効量投与することを包含する、ウイルス感染症の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、芳香族ポリケチド中間体の、医薬の製造における新規な用途に関し、具体的には、このような化合物を用いた抗ウイルス薬や抗癌薬の開発に関する。
【背景技術】
【０００２】
「芳香族ポリケチド」という用語には、微生物由来の多様な化合物が含まれる。このような化合物の生合成経路およびゲノム的特徴には共通点が存在する。これらの化合物は、ＩＩ型ポリケチドとも呼ばれる。典型的な芳香族ポリケチドは、生物活性を有し、広汎にわたり種々の作用機序を示す。それ故に、このようなクラスに属する化合物は毒性を有するのが一般的である。さらなる詳細については、Thomas (2001)の総論およびそこに挙げられている参考文献を参照されたい。
【０００３】
芳香族ポリケチドは、半世紀以上に渡って細菌感染および癌の治療に用いられている。この化合物が、上記の２種の治療分野でのみ実用に達した理由は、細菌感染および癌に対するスクリーニングが行われてきたためであり、芳香族ポリケチドの生物活性プロファイルによれば、他の治療分野における用途の可能性を示している。しかしながら、その毒性にかかわる特性は、医療における使用を妨げる。臨床で使用されている古典的な芳香族ポリケチドの例としては、癌治療に用いるドキソルビシンや細菌感染治療に用いるテトラサイクリンが挙げられる。Gewirtz (1999)やChopra et al. (1992)などの文献を参照されたい。
【０００４】
芳香族ポリケチドは縮合環化合物であり、小さい炭素鎖単位の会合とポリ−β−ケトアシル中間体のフォールディングを触媒するポリケチド合成酵素（ＰＫＳ）の作用によって形成される。ポリケチドのクラスの膨大な多様性は、ポリケチド経路に様々な可能性があることと、さらにはポリケチド生成後の修飾（post-polyketide modifications）に基づくものである。非常に典型的な構造的特徴はキノン構造（quinonic substructure）であり、これら化合物に見られる毒性の原因の１つであるとも考えられる。キノン構造の生成反応の一部は、ポリケチド構造体（polyketide assembly）にカルボニル基を加える酸素付加反応である。芳香族ポリケチドの初期中間体は多少不安定であるため、このような化合物の生物活性に関する研究は多くはない。しかし、芳香族ポリケチド産生細菌の遺伝子工学により中間体の単離が可能となり、中間体産生に関与する生合成工程に対する理解も深まった。生合成中間体に関する文献（Thomas, 2001とそこに挙げられている参考文献）を参照されたい。
【０００５】
Streptomyces nogalaterは、アントラサイクリン系化合物に属する芳香族ポリケチドであるノガラマイシンを産生する。ドキソルビシンに代表される複数のアントラサイクリンが、癌治療のために臨床で使用されている。ノガラマイシンのポリケチド経路に関与する生合成遺伝子（sno）は、米国特許第５，９８６，０７７号に開示されている。典型的な実験株であるStreptomyces lividansは、芳香族ポリケチド抗生物質であるアクチノロージンと胞子色素（spore pigment）を内生的に産生するが、この株にsno遺伝子を導入すると、sno遺伝子とS. lividans遺伝子との共動作用により、生合成中間体とハイブリッド産物（hybrid products）が共に検出された。化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７と命名された２種の化合物はハイブリッド産物であり、それぞれに固有の化学的性質を示した（Kunnari et al., 1999）。上記化合物の化学構造は、これらが生物活性のない化合物であることを示唆した。しかし、ヒトウイルスおよびいくつかの癌細胞系に対する化合物のスクリーニングの結果、驚くべきことに、上記化合物の有用な生物活性プロファイルが明らかになった。
【０００６】
化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７に類似した化学的性質を有する化合物を表１に示す。
【０００７】
【表１】
2006508146.tif 000002
【０００８】
Hanumaiah et al. (1985)によって発見された化合物は、複数の位置で化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７と異なる。構造体の主要な相違は、第一芳香環のキノン構造、Ｃ８位とＣ１１位のケト基、そしてＣ１７位のケト基である（番号を付した下記構造式を参照）。
【０００９】
Streptomyces nogalaterから得た生合成遺伝子（近年、snoa1-3、rA、aB、aC、aD、aEおよびgF と命名されたもの）（Ylihonko et al., 1996）を、S. lividans TK24に導入した。回収した化合物は下記式（１）および（２）で表される化合物からなるハイブリッド化合物である：
【化３】
2006508146.tif 000003
【化４】
2006508146.tif 000004
【００１０】
Kunnari et al. (1999) に発表されているように、（３位と１５位の炭素の間の）“−Ｏ−”結合は、アクチノロージンの生合成（actVI遺伝子）に由来することが示唆された。上記２種の化合物は、途中で停止した経路の産物であることが明らかであり、キノン構造がないことから、非活性であると考えられた。実施した典型的な細胞毒性スクリーニング法（細胞系：MES-SAおよびMES-SA/Dx5）により、上記化合物が抗癌活性を示さないという仮定が裏付けられた。しかし、後にこれらの化合物をパルボウイルスのエンドサイトーシスを研究するためのウイルスモデルに対して用いたところ、驚くべきことに、化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７は、感染していない細胞に影響を与えることなく、パルボウイルスに対して著しい抗ウイルス活性を示した。この知見は、生物活性に関するさらなる研究を促進した。
【００１１】
発明の概要 
従って、本発明は、医薬、特に癌またはウイルス感染症の治療方法で用いる、芳香族ポリケチド系化合物であるＳ２５０２とＳ２５０７、およびそれらの化合物の構造類似体またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩に関する。これらは、抗ウイルス薬や抗癌薬の開発において、中間体として用いることもできる。
【００１２】
本発明のさらなる１つの目的は、化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、あるいはそれらの化合物の構造類似体またはそれらの化合物の薬学的に許容される塩を用いた、癌の治療薬またはウイルス感染症の治療薬の製造方法を提供することである。
【００１３】
本発明のさらなる他の１つの目的は、化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７、ならびにそれらの化合物の構造類似体およびそれらの化合物の薬学的に許容される塩からなる群より選ばれる１種を、薬学的に許容される担体と共に包含する医薬組成物を提供することである。本発明はまた、治療を要する患者に、上記の医薬組成物を有効量投与することを包含する、癌またはウイルス感染症の治療方法に関する。
【００１４】
発明の詳細の説明 
本発明は、抗ウイルス薬または抗癌薬を開発するための、２種の芳香族ポリケチド中間体に関する。本発明の化合物は、芳香族ポリケチドの生合成に関与する遺伝子によって生成されたものであるにもかかわらず、その化学的性質からは芳香族ポリケチドとはいえない。実際、これらの化合物が分類される化学クラスは、ナフトキノン ラクトンクラスである。化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７を、プラスミドpSY15を保有する細菌株S. lividans TK24から単離した。しかし、化合物の力価が低いことによって精製工程が妨げられたので、短期間で菌株を改良して、化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７を産生するS. lividans TK24/pSY15-B4株を調製した。B4株は、培地１リットルに対して数百ミリグラムの所望の化合物を産生することができる。上記２種の化合物を単離し、バイオアッセイを行うために精製した。この２種の関連した化合物は、いずれも抗ウイルス活性および特異的抗癌活性を示す。
【００１５】
上記化合物の化学的性質は生物活性があることを示さなかったが、ポリケチドに関する研究では明らかにされなかった特有の化学構造が、当業界で有効なアッセイにこれらの化合物を用いることを後押しした。これら化合物の化学的性質は生物活性を示唆しないものの、様々な治療分野に対してスクリーニングを行うことができる。初めに、化合物Ｓ２５０７を、一本鎖ＤＮＡゲノムを有するパルボウイルスに対する効果を調べるために用いた。研究に用いた濃度は５ｎＭから５００ｎＭであり、驚くべきことに、全ての希釈率で効果が見られた。興味深いことに、化合物Ｓ２５０７は、研究で用いた最も高い濃度、即ち、５００ｎＭ、でも細胞毒性を示さなかった。
【００１６】
化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７は構造的に非常に類似しており、唯一の違いは、化合物Ｓ２５０７が酸であるのに対し、化合物Ｓ２５０２は化合物Ｓ２５０７のメチルエステル型であるということである。いずれの化合物も、S. lividans TK24/pSY15-B4の発酵によって産生される。化合物Ｓ２５０２はｐＨ７の水に不溶であり、化合物２５０７は同じｐＨでわずかに溶解する。いずれの化合物も茶色がかった黄色で、精製工程およびバイオアッセイで用いられる一般的な条件において安定である。
【００１７】
パルボウイルスモデルから得た結果は、ヒトウイルスを標的とした生物活性試験を実施することを後押しした。次のＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスを試験のために選択した：単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、インフルエンザＢ、ＲＳウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）およびＣＢＶ5ウイルス。ウイルス試験の結果、ＣＭＶに対しては化合物Ｓ２５０２のみが活性を示したが、化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７のいずれもがその他のウイルスの全てに対して活性を示した。試験した濃度は、１μＭおよび１００μＭであった。１μＭの濃度では、化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７には細胞毒性効果は見られなかった。そのかわりに、化合物Ｓ２５０２は、１００μＭでＣＢＶ5感染およびＨＳＶ感染に用いた細胞に対して毒性を示し、化合物Ｓ２５０７は、１００μＭでＨＳＶ感染に用いた細胞に対して毒性を示した。
【００１８】
ＮＣＩ（米国立癌研究所）は、６０種のヒト癌細胞系からなる細胞パネルに対して化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７を試験した。その結果によると、これらの化合物はいくつかのメラノーマ細胞系に対して活性であった。
【００１９】
本発明の化合物は、現在、医薬候補への開発が進行中である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本実施例で用いた栄養培地および溶液の組成は、米国特許第５，９８６，０７７号に実質的に記載されており、この記載によって本明細書に組み込まれているものとする。
【００２１】
実施例１：化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７の製造および精製 
Streptomyces lividans TK24/pSY15（DSM 9436）（Ylihonko et al., 1996）を、化学変異原であるＮＴＧ（Ｎ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン）（Sigma製）で変異させることにより、TK24/pSY15-B4株を得た。変異を誘導するために、S. lividans TK24/pSY15を２５０ｍｌの三角フラスコ内の５０ｍｌのＴＳＢ培地で培養し、培養中に菌糸体を分散させるために、フラスコの底に糸を入れておいた。上記株は、振とう機中で、３０℃、３３０ｒｐｍの条件下で２日間培養した。得られた培養液の１ｍｌを、５０ｍｌのＴＳＢの入った次の培養用のフラスコに接種して、１日（３０℃、３３０ｒｐｍ）培養を続けた。こうして得た培養時間の短い方の培養液のｐＨを２％ＮａＯＨでｐＨ８．５に調整し、８００μｇ／ｍｌのＮＴＧを添加して、細胞に３７℃で２０分間作用させた。上記株の変異処理をした培養液を２本の試験管に分け、それぞれ遠心分離（３００ｒｐｍ、１０分間）でペレット化した。得られたペレットを合わせて、５０ｍｌのＴＳＢ培地に接種するのに用いた。１日後（３０℃、３３０ｒｐｍ）、得られた細胞懸濁液の力価を、適切な希釈率（１：１０〜１：１０００００）でＩＳＰ４−プレート上で培養することによって測定した。変異処理をした培養液のコロニーを野生型（TK24/pSY15）のコロニーと比較し、TK24/pSY15よりも高い力価を示したコロニーを、培養を繰り返し行うのに選択した。このようにして得られた株のうち最も優良だったのがB4株であり、一般的な実験条件で上記２種の化合物を約１００〜５００ｍｇ／リットル産生する。
【００２２】
TK24/pSY15-B4を振とうフラスコ中のＥ１培地で２日間予備培養し、１０リットルのジャーファーメンター（２５℃、通気量：１０リットル／分、攪拌：２８０ｒｐｍ）に接種した。この培養方法により、化合物Ｓ２５０２に対するＳ２５０７の産生量が最大になる。７日後、塩酸で培養液を酸性化し、ｐＨを３にした。２５０ｇのＸＡＤ−７吸収材（アンバーライトＸＡＤ−７；米国、フィラデルフィア、Rohm and Haas製）を培養液に添加し、１時間攪拌した。細胞と吸収材を、クロスフロー濾過で上清から分離し、上清は廃棄した。続いて、分離した細胞と吸収材を、１．５リットルのメタノールによる抽出を３回行った。得られたメタノール抽出物を合わせて、ガラス製の漏斗で濾過した。２リットルの水と２リットルの石油エーテル（沸点：８０〜１１０℃）を濾過後のメタノールに添加した後、ｐＨを７．５に調整した。得られた有機相を１リットルの水で洗浄した。水相を合わせ、それを０．５リットルの石油エーテルで２回洗浄した。得られた水相を濾過し、ｐＨを４．０に調整し、続いて１リットルのトルエンによる抽出を２回行った。有機相を濾過し、乾燥物を得るまで真空下で溶媒を蒸発させた。得られた黄色い残渣を１００ｍｌのメタノールに溶解し、ｐＨを３．０に調整し、５ｍｌの水を加えた。得られた溶液を５０ｍｌに濃縮することで化合物Ｓ２５０７を沈殿させた。沈殿を含む混合物を４℃で２４時間静置した後、黄色い沈殿を回収し、真空下で乾燥させた。この残渣の純度は９０％を超えていた。
【００２３】
実施例２：化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７の物性 
化合物Ｓ２５０７は、融点が２５０℃を超える黄色い固体化合物である。弱酸性の化合物であり、ｐＫa値は酢酸（約４．６）に匹敵する。メタノール、酢酸エチルおよびクロロフォルムに溶解し、水およびトルエンにはわずかに溶解する。通常の実験条件下において安定で、非反応性である。
【００２４】
化合物Ｓ２５０２は、融点が２５０℃を超える黄色い固体化合物である。この化合物は、酸である化合物Ｓ２５０７のメチルエステルである。メタノール、酢酸エチルおよびクロロフォルムに溶解し、水およびヘキサンには溶解しない。通常の実験条件下において安定で、非反応性である。
【００２５】
上記の物性（特に溶解性と非反応性）は、本願の化合物を先導化合物（lead compounds）とした医薬の製造を支持している。
【００２６】
実施例３：抗ウイルス活性 
３．１  動物ウイルスモデルに対する化合物Ｓ２５０７と化合物Ｓ２５０２の生物活性 
初めに、化合物２５０７と化合物２５０２をパルボウイルスに対して試験した。上記２種の化合物から同等の結果が得られた。この２種の化合物はいずれも、用いた試験系において細胞の感染を部分的に阻害することができた。図１のグラフは、負の対照および正の対照（バフィロマイシン）と比較した、化合物Ｓ２５０７の結果を示す。化合物Ｓ２５０７は、治療用濃度範囲である５００ｎＭ〜５ｎＭにおいて、投与量と活性に相関関係があることも示した。
【００２７】
３．１．１  ウイルスの産生 
イヌパルボウイルス２型（ＣＰＶ−ｄ）のプラスミドクローンから誘導したウイルスを、１７５ｃｍ2の細胞培養フラスコ（デンマーク国、ロスキルド、Nunc製）中のＮＬＦＫ細胞を用いて５〜７日間生育し、その後−２０℃で保存した。３００ｍｌのウイルス培養培地を遠心分離で精製し、透明になった上澄を限外濾過（３０ｋＤａフィルター；米国、マサチューセッツ州、ベッドフォード、Millipore Corporation製）により濃縮した。ＣＰＶは、１７３,０００ｇで１時間超遠心分離に付すことでペレット化し、０．９ｍｌのＰＢＳ（ｐＨ７．４）に再懸濁した。得られた懸濁液を低出力で超音波処理し、クロロフォルム抽出に付した。
【００２８】
３．１．２  感染力のスクリーニング 
感染力のスクリーニングを研究するために、カバーガラス（直径１３ｍｍ）上で集密度８０％まで生育させた細胞にＣＰＶを接種した。薬物（１μＭまたは５００ｎＭ、ＤＭＥＭで希釈し、各濃度につきカバーガラス２枚）をＣＰＶと同時に添加し、感染過程中、薬物が存在するようにした。対照サンプルは薬物なしでインキュベートした。感染後（post-infection、ｐ．ｉ．）２４時間で、カバーガラスをｐＨ７．４のリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に浸し、ＰＢＳを用いた４％パラホルムアルデヒド溶液で固定した。固定後のカバーガラスを透過処理用緩衝液（１％ＢＳＡ、１％TritonX-100および０．０１％アジ化ナトリウムを含むＰＢＳ溶液）による処理に１５分間付し、透過処理用緩衝液で希釈した抗ＣＰＶ一次抗体（Cornell #2；米国、ニューヨーク州、イサカ、コーネル大学、Colin Parrish氏より寄贈）と共に室温で４５分間インキュベートし、数回リンスした。次にカバーガラスを、Alexa488結合抗ウサギ抗体（米国、オレゴン州、ユージーン、Molecular Probes製）およびテキサスレッド−Ｘ結合小麦胚芽凝集素（ＷＡＧ）と共に４５分間インキュベートした。得られたカバーガラスは、退色防止剤であるＤＡＢＣＯ（３０ｍｇ／ｍｌ；Sigma製）を加えたモヴィオール（Mowiol）で包埋する前に、数回リンスした。このようにして得たサンプルを、使用した色素に適した励起／発光条件でレーザー走査型蛍光顕微鏡（Axiovert 100M, LSM 510；Zeiss製）で観察した。感染力は、ｐ．ｉ．２４時間に、（テキサスレッド−Ｘ結合小麦胚芽凝集素で染色した）全細胞の数（ｎ＝３００）に対する、蛍光性核を有する細胞の割合を、ＣＰＶに対するポリクローナル抗体（Cornell #2）の免疫蛍光に基づいて計測することにより求めた。
【００２９】
３．２  ヒトウイルスモデルに対する化合物Ｓ２５０７と化合物Ｓ２５０２の生物活性 
化合物Ｓ２５０７と化合物Ｓ２５０２を次のヒトウイルスモデルを用いてさらに試験した：単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、インフルエンザＢ、ＲＳウイルス、サイトメガロウイルスおよびＣＢＶ5ウイルス。化合物は１００μＭおよび１μＭの試験濃度において幅広い活性スペクトルを示した。上記２種の化合物は、感染と同時に投与した場合のみならず、感染前投与（予防的処置）および感染の３０分後に投与した場合にも活性であった。ウイルスなしの対照培養は、使用した薬物濃度に充分な耐性を示した。しかし、ＨＳＶ感染に用いた細胞に対しては１００μＭの濃度は毒性であった。全てのウイルスにおいて、１μＭの濃度で感染が１０％未満になった。
【００３０】
ヒトウイルスに対する活性試験の結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
2006508146.tif 000005
【００３２】
実施例４  抗癌活性 
米国立癌研究所（ＮＣＩ）は、６０種の細胞系からなるパネル（60-cell line panel）に対して化合物Ｓ２５０２および化合物Ｓ２５０７を試験した（この試験の報告書の写は入手可能である）。ＮＣＩは、４８時間継続薬物暴露プロトコール（48-hour continuous drug exposure protocol）を用いた。細胞の生存率および増殖能は、スルホローダミンＢ（ＳＲＢ）タンパク質アッセイを用いて評価した。このスクリーニングについては、次のウェブサイトに記載がある：http://dtp.nci.nih.gov. 。上記化合物は、ウイルスパネルで用いる治療用濃度をかなり上回る濃度でも、大部分の細胞系に対して非常に弱い細胞毒性しか示さなかった。しかし、いくつかのメラノーマ細胞系（MAL-ME-3M、M14、SK-MEL-5）に対するＥＤ50の平均値は、マイクロモルの範囲内であった。驚くべきことに、得られた結果は特異的な作用機序を示唆するものであった（実施例６を参照）。
【００３３】
実施例５  In vivo毒性 
毒性効果を考慮した、投与量範囲を見つけるための予備研究を、化合物Ｓ２５０７を用いて行った。化合物Ｓ２５０７の原液をエタノールで調製し、水で希釈した。化合物Ｓ２５０７の溶解性は非常に低いので、全ての希釈液は濁っていた。薬物投与量を１００、５０、２５、１２．５および６．２５ｍｇ／ｋｇとし、各投与量につき２匹のマウスに腹腔内投与（i.p.）を１回行った。２週間にわたり、薬物を投与したマウスを毎日観察し、３〜５日ごとに体重を測定した。試験した濃度では、薬物はマウスの体重に影響を与えなかった。また、一般的な病気を示す外見的な兆候も見られなかった。
【００３４】
実施例６  作用機序の研究 
化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７は、ＲＮＡウイルスおよびＤＮＡウイルスのいずれに対しても活性がある。化合物Ｓ２５０２と化合物Ｓ２５０７の抗ウイルス活性が、これら化合物によるエンドサイトーシスへの影響を反映していると、このような結果は示唆している。
【００３５】
抗癌活性の機序を理解するために、化合物Ｓ２５０２によるトポイソメラーゼの阻害を調べた。トポイソメラーゼ アッセイは、ヒト トポイソメラーゼＩ型酵素およびヒト トポイソメラーゼＩＩ型酵素（ｐ１７０型）をそれぞれ使用する、トポイソメラーゼＩドラッグスクリーニングキットおよびトポイソメラーゼＩＩドラッグスクリーニングキット（Topoisomerase I and II drug screening kits；米国、オハイオ州、コロンブス、TopoGEN, Inc製）を用いて、製造者の説明書に従って行った。化合物Ｓ２５０２は、トポイソメラーゼＩおよびＩＩのいずれも阻害した。阻害最低濃度は、トポイソメラーゼＩに対しては２５μＭ、トポイソメラーゼＩＩに対しては５０μＭであった。
【００３６】
トポイソメラーゼの阻害は、特定のメラノーマ細胞系に対する細胞毒性濃度と関連する。しかし、トポイソメラーゼ試験は選択的ではないことから、化合物がトポイソメラーゼ阻害物質だとしても、所望の生物活性プロファイルを司る、より適切な他の機序が存在する可能性を示唆している。
【００３７】
参考文献 
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Gewirtz, D.A. 1999. A critical evaluation of the mechanisms of action proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics adriamycin and daunorubicin. Biochem. Pharmacol. Apr 1;57(7):727-741. Review. 
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【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】化合物Ｓ２５０７（１）、バフィロマイシン（２）および対照（３）の、異なる濃度における、百分率で示した感染率。
【図１】
2006508146.tif 000008
【国際調査報告】
2006508146.tif 000009
2006508146.tif 000010
2006508146.tif 000011