(57)【要約】本発明は、神経成長因子アンタゴニストの一定量およびオピオイド鎮痛薬の一定量を併用することにより効果的な鎮痛を提供するように投与することを含む疼痛を処置し、または予防する方法を特徴とする。本発明は、神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を含む組成物、および同じ組成物を含むキットをさらに特徴とする。ＮＧＦのアンタゴニストとオピオイド鎮痛薬とを併用する処置により、一般に、同程度の疼痛軽減および／またはオピオイド疼痛処置効果の増強などの形態を達成するために、オピオイド鎮痛薬の投与量を減少することが可能となる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体の疼痛を処置する方法であって、該方法は、ある量の神経成長因子（ＮＧＦ）アンタゴニストおよびある量のオピオイド鎮痛薬を該個体に投与する工程を包含し、該ＮＧＦアンタゴニストおよび該オピオイド鎮痛薬の併用により、効果的な鎮痛を提供する、方法。
【請求項２】
前記オピオイド鎮痛薬は、モルヒネ、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニル、スフェンタニル、メペリジン、メサドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、およびペンタゾシンから成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記オピオイド鎮痛薬がモルヒネである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ＮＧＦアンタゴニストが抗ＮＧＦ抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＮＧＦアンタゴニストが抗ＮＧＦ抗体である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記抗ＮＧＦ抗体がヒトＮＧＦと結合する、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗ＮＧＦ抗体は約１０ｎＭあるいは約１０ｎＭ未満の結合親和性でヒトＮＧＦと結合する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗ＮＧＦ抗体がヒト抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＮＧＦ抗体がヒト化抗体である、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記疼痛が術後疼痛である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記疼痛が術後疼痛である、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
ＮＧＦアンタゴニストの有効量、および薬学的に受容可能な担体を含む、疼痛の処置に使用される薬学的組成物であって、該使用はオピオイドアンタゴニストの同時あるいは連続投与を含む、薬学的組成物。
【請求項１３】
前記ＮＧＦアンタゴニストが抗ＮＧＦ抗体である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
ＮＧＦアンタゴニストと、疼痛の効果的な処置ために該ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を同時にあるいは連続して投与するための説明書とを含む、疼痛を処置するためのキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００２年１０月８日に出願された米国仮特許出願第６０／４１７，３４７号明細書の優先権を主張するものであり、その内容を参照によってその内容全体を本願明細書に引用したものとする。
【０００２】
（連邦政府支援研究または開発に関する申立て）
本発明は、ＤＡＲＰＡにより与えられた米国政府の支援の契約番号ＤＡＡＤＩ９−０３−Ｃ−０００６の下で作成された。米国政府は、本発明のある一定の権利を有する場合がある。
【０００３】
（本発明の技術分野）
本発明は、神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の併用投与により、患者の疼痛を予防し、または処置するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００４】
（本発明の背景技術）
激痛は、一般にオピオイド鎮痛薬で処置されるが、残念ながら胃運動性減少、腎疝痛、精神の混濁、および呼吸抑制を含む多くの好ましくない副作用を有する。神経成長因子（ＮＧＦ）は同定された最初のニューロトロフィンであり、末梢性および中枢ニューロンの両方の発生および生存におけるその役割は十分に評価されている。ＮＧＦは、末梢性交感神経性  および胚性感覚ニューロン、および基底前脳コリン作動性ニューロンの発達に不可欠な生存および維持因子であることが示されている（Ｓｍｅｙｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：２４６−２４９（１９９４年）；Ｃｒｏｗｌｅｙら、Ｃｅｌｌ、７６：１００１−１０１１（１９９４年））。ＮＧＦは、神経ペプチドの発現を上方制御し（Ｌｉｎｄｓａｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３７：３６２−３６４（１９８９））、その活性は２つの異なる膜結合型レセプター、ＴｒｋＡチロシンキナーゼレセプターおよびｐ７５レセプターにより媒介される。これは腫瘍壊死因子レセプターファミリーの他のメンバーと構造的に関連する（Ｃｈａｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３２：５１８−５２１（１９８６））。
【０００５】
神経系におけるその効果に加えて、ＮＧＦは神経系以外のプロセスが増加している。例えば、外因的に投与されたＮＧＦは、血管透過性を亢進し（Ｏｔｔｅｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０６：１９９−２０１（１９８４年））、ＴおよびＢ細胞免疫応答を増強し（Ｏｔｔｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：１００５９−１００６３（１９８９年））、リンパ球分化および肥満細胞増殖を誘起し、肥満細胞からの可溶性生物学的信号の遊離を引き起こす（Ｍａｔｓｕｄａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：６５０８−６５１２（１９８８年）、Ｐｅａｒｃｅら、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．３７２：３７９−３９３（１９８６年）、Ｂｉｓｅｈｏｆｆら、Ｂｌｏｏｄ、７９：２６６２−２６６９（１９９２年）、Ｈｏｒｉｇｏｍｅら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１４８８１−１４８８７（１９９３年））ことが示された。
【０００６】
ＮＧＦは、肥満細胞（Ｌｅｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３７３９−３７４３（１９９４年）、Ｂリンパ球（Ｔｏｒｃｉａら、Ｃｅｌｌ、８５：３４５−３５６（１９９６年）、ケラチノサイト（Ｄｉ  Ｍａｒｃｏら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：２２８３８−２２８４６））、平滑筋細胞（Ｕｅｙａｍａら、Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ、１１：１０６１−１０６５（１９９３年）、線維芽細胞（Ｌｉｎｄｈｏｌｍら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２：７９５−８０１（１９９０年））、気管支上皮細胞（Ｋａｓｓｅｌら、Ｃｌｉｎ，Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ、３１：１４３２−４０（２００１年））、腎メサンギウム細胞（Ｓｔｅｉｎｅｒら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６１：Ｆ７９２−７９８（１９９１年））、および骨格筋筋管（Ｓｃｈｗａｒｔｚら、Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ  ６６：１９５−２００（２００２年））などの多数の細胞系により産生される。ＮＧＦレセプターは、神経系の外側の種々の細胞系列上で見いだされた。例えば、ＴｒｋＡはヒトの単球、ＴおよびＢリンパ球、および肥満細胞上で発見された。
【０００７】
増加したＮＧＦレベルと様々な炎症性状態との間の関連性が、ヒト患者ならびにいくつかの動物モデルで観察された。これらには、全身性エリテマトーデス（Ｂｒａｃｃｉ−Ｌａｕｄｉｅｒｏら、Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ  ４：５６３−５６５（１９９３年））、多発性硬化症（Ｂｒａｃｃｉ−Ｌａｕｄｉｅｒｏら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｌｅｔｔ．１４７：９−１２（１９９２年））、乾癬（Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉら、Ａｃｔａ  Ｄｅｒｍ．ｌ’ｅｎｅｒｅｏｌ．７８：８４−８６（１９９８年））、関節炎（Ｆａｌｃｉｍｉら、Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．５５：７４５−７４８（１９９６年）、間質性膀胱炎（Ｏｋｒａｇｌｙら、Ｊ．Ｕｒｏｌｏｇｙ、１６１：４３８−４４１（１９９９年））、および喘息（Ｂｒａｕｎら、Ｅｕｒ．Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：３２４０−３２５１（１９９８年））などが含まれる。
【０００８】
一貫して、末梢組織中の高レベルのＮＧＦは、痛覚過敏および炎症と関係があり、多数の関節炎形態において観察されている。関節リウマチに罹患した患者の関節滑膜では、高レベルのＮＧＦを発現するが、一方、非炎症性関節滑膜では、ＮＧＦは検出不可能であることが報告されている（Ａｌｏｅら、Ａｒｃｈ．Ｒｈｅｕｍ．３５：３５、１−３５５（１９９２年））。実験的に関節リウマチ誘発させたラットで同様の結果が認められた（Ａｌｏｅら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１０：２０３−２０４（１９９２年））。遺伝子導入関節炎マウスにおいて、高レベルのＮＧＦは肥満細胞数の増加と共に報告された（Ａｌｏｅら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｔｉｓｓｕｅ  Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ−Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ａｓｐｅｃｔｓ  １５：１３９−１４３（１９９３））。
【０００９】
各々異なる機序によって作用し、異なる効果を有する疼痛の処置のための２種の一般的なカテゴリーの薬剤がある。第１のカテゴリーは、穏やかな疼痛を処置するために使用される非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）があるが、その処置的使用は、長期使用による胃粘膜糜爛、十二指腸および大腸の消化性潰瘍の形成または炎症、および腎毒性など胃腸への望ましくない影響により制限される。第２のカテゴリーは、中等度の疼痛から激痛の処置に使用されるモルヒネおよび関連したオピオイドであるが、その処置的使用は、便秘、鎮静、錯乱、呼吸抑制、精神の混濁、腎疝痛、長期使用に対する耐性、耽溺のリスクなどの望ましくない効果により制限される。したがって、疼痛を処置するのに副作用のより少ないまたは副作用のない有用な化合物が必要である。
【００１０】
オピオイド鎮痛薬は、十分確立されたクラスの鎮痛薬である。それらは時にオピエートとも呼ばれる。用語オピオイド（あるいは「オピオイド鎮痛薬」と呼ぶ）は、一般的な意味ではモルヒネ状の作用を伴う天然または合成のすべての薬剤を指すことが一般に容認されている。合成および半合成のオピオイド鎮痛薬は、フェナントレン、フェニルヘプチルアミン、フェニルピペリジン、モルフィナン、およびベンゾモルファンの５つの化学的クラスの化合物の誘導体である。薬理学的にこれらの化合物は多様な活性を有し、したがって、いくつかはオピオイドレセプター（例えばモルヒネ）への強い作動薬であり、他のものは中等度から軽度の作動薬（例えばコデイン）、さらに他のものは混合した作動薬−アンタゴニスト活性（例えばナルブフィン）を示し、さらに他のものは部分作動薬（例えばナロルフィン）である。ナロルフィン（モルヒネのＮ−アルキル類似体）などのオピオイド部分作動薬は、モルヒネの鎮痛効果に拮抗し、単独で与えられた場合、優れた強力な鎮痛性を示す。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
全てのオピオイド鎮痛薬のうち、モルヒネが最も広く使用されている。残念ながら、その有用な処置特性とは別に、モルヒネは多くの副作用も有する。別の残念な特性は、このような化合物の臨床使用を制限する耐性および身体的依存性の発生である。したがって、より低い投与量のモルヒネなどのオピオイド鎮痛薬を使用して処置する方法を開発する必要があり、これにより副作用の発生率を下げ、耐性および依存性の可能性を減少させ、これにより投与の中止に関係する禁断の主問題が回避される。オピオイド疼痛処置の増強に関する他の形態を開発する必要性が高い。
【００１２】
特許出願明細書および出版物を含む本明細書に引用された全ての参考文献は、その内容全体を参照により引用する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（本発明の概要）
本発明は、ＮＧＦのアンタゴニストが、オピオイド鎮痛薬と併用して疼痛を処置することが有効であるという発見に基づいている。このような処置により、一般に、同程度の疼痛軽減および／またはオピオイド疼痛処置効果の増強などのの形態を達成するために、オピオイド鎮痛薬の投与量を減少することが可能となる。
【００１４】
第１の態様では、本発明は、効果的な鎮痛を提供することに関連するように神経成長因子アンタゴニストの一定量およびオピオイド鎮痛薬の一定量を投与することを含む疼痛を処置する（あるいは、他の実施態様において防止する）方法を提唱する。ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の相対量および比率は異なっていてもよい。いくつかの実施態様において、少なくとも約５０％と同程度の疼痛寛解を達成するために必要なオピオイド鎮痛薬の規定投与量の減少が可能なように十分なＮＧＦアンタゴニストが投与される。いくつかの実施態様において、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、あるいは少なくとも約９０％、あるいはそれ以上の疼痛寛解を達成するために必要とされるオピオイド鎮痛薬の規定投与量の減少が可能となるように、十分なＮＧＦアンタゴニストが投与される。
【００１５】
別の態様において、本発明はＮＧＦアンタゴニストの有効量と併用してオピオイド鎮痛薬の有効量を投与することを含むオピオイド鎮痛薬疼痛処置を増強する方法を提供する。本明細書に使用された併用投与は、同時投与および／または異なる時間での投与を含む。併用投与は、混合製剤としての投与（すなわちＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬が同じ組成物に存在する（併用された））および／または別個の組成物としての投与をさらに含む。本明細書で使用される「併用して投与」は、個体にオピオイド鎮痛薬およびＮＧＦアンタゴニストが有効量で投与される任意の環境を含むことを意味する。本明細書でさらに述べるように、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は異なる投薬頻度および／または間隔で投与することができることが分かる。例えば、抗ＮＧＦ抗体は毎週投与することができ、一方オピオイド鎮痛薬はより頻繁に投与することができる。ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を同じ投与ルートあるいは異なる投与ルートを使用して投与することができ、（複数の）投与期間全体にわたり種々の投薬計画を変更してもよいことが分かる。投与は疼痛の発症の前でもよい。
【００１６】
別の態様において、本発明は、個体における疼痛の発生を減少させ、疼痛を緩和し、疼痛を軽減し、および／または疼痛の発生または悪化を遅延させる方法を提供し、この方法はＮＧＦアンタゴニストの有効量と併用してオピオイド鎮痛薬の有効量を投与することを含む。
【００１７】
本発明の方法は、オピオイド鎮痛薬の使用が一般に処方される疼痛、例えば、膵炎、腎結石、頭痛、ジスメノルヒア（ｄｉｓｍｅｎｎｏｒｈｅａ）、筋骨格痛（例えば下背痛）、捻挫、内臓痛、卵巣嚢胞、前立腺炎、膀胱炎、化学熱傷または熱傷、あるいは癌（骨に転移された前立腺癌、骨に転移した乳癌、骨に転移した肺癌、膵癌など）を含む任意の病因学の任意の疼痛を処置または予防することに適する。
【００１８】
本発明の方法で使用するのに適するＮＧＦアンタゴニストは、直接的にあるいは間接的に減少したＮＧＦ生物活性を生じることのできる任意の薬剤である。いくつかの実施態様において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）は、ＮＧＦと結合し（物理的に相互作用し）、ＮＧＦレセプター（ｔｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターなど）に結合し、および／または下流のＮＧＦレセプター情報伝達（例えばリン酸化酵素情報伝達の阻害薬）を減少させる（ブロックおよび／または妨害する）。したがって、いくつかの実施態様では、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦと結合する（物理的に相互作用する）。別の実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦレセプター（ｔｒｋＡレセプターあるいはｐ７５など）に結合する。他の実施態様では、ＮＧＦアンタゴニストは下流のＮＧＦレセプター情報伝達（例えばリン酸化酵素情報伝達の阻害薬）を減少させる（ブロックおよび／または妨害する）。他の実施態様では、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦ合成および／または遊離を阻害する（減少させる）。別の実施態様では、ＮＧＦアンタゴニストはＴｒｋＡ免疫付着因子である。いくつかの実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦにに向けたアンチセンス分子（ＮＧＦを符号化する核酸に向けたアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦレセプター（Ｔｒｋ  Ａおよび／またはｐ７５など）に向けたアンチセンス分子、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦ構造類似体、ＮＧＦと結合するＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターのドミナントネガティブ突然変異、抗−ＴｒｋＡ抗体、抗−ｐ７５抗体およびリン酸化酵素阻害薬の任意の１つ以上から選択される。別の実施態様では、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体である。さらに別の実施態様において、抗ＮＧＦ抗体はヒトのＮＧＦを認識する。またさらに他のの実施態様では、抗ＮＧＦ抗体は特異的にヒトＮＧＦと結合する。さらに別の実施態様では、この抗体は、ＭＡｂ９１１、ＭＡｂ９１２、およびＭＡｂ９３８のマウスモノクローナル抗体の任意の１つ以上から選択される抗体と同じＮＧＦエピトープ６と本質的に結合する（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５−２２７（２０００年）を参照）。いくつかの実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦ（ｈＮＧＦなど）と結合するが、ＮＴ−３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦなどの関連するニューロトロフィンと有意に結合しない。さらに別の実施態様において、抗ＮＧＦ抗体はヒト化されている（本明細書に記載された抗体Ｅ３など）。さらに別の実施態様において、抗ＮＧＦ抗体は抗体Ｅ３（本明細書で述べたように）である。他の実施態様では、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（いくつかの実施態様において、Ｅ３由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、あるいは全ての６つのＣＤＲなど）を含む。他の実施態様では、抗体はヒトである。さらに別の実施態において、抗ＮＧＦ抗体は、表１に示す（配列番号：１）重鎖可変領域のアミノ酸配列、および表２に示す（配列番号：２）軽鎖可変領域のアミノ酸配列を有する。さらに別の実施態様において、抗体は、例えば、補体媒介性溶解を誘発しない、または抗体依存性細胞媒介性���胞障害（ＡＤＣＣ）を刺激しないなどの免疫学的に不活性の定常領域などの改質された定常領域を有する。他の実施態様では、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９年）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号明細書、および／または英国特許出願公開第９８０９９５１．８号明細書で述べたように、定常領域が改質されている。
【００１９】
いくつかの実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦ分子に結合する。さらに別の実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストは、特異的にＮＧＦに結合する（ヒトのＮＧＦなど）抗体である。しかしながら、ＮＧＦアンタゴニストは代わりにｔｒｋＡレセプターに結合する。ＮＧＦアンタゴニストは、ｈＮＧＦと結合し、ｈＮＧＦのヒトＴｒｋＡ（ｈＴｒｋＡ）への結合を効果的に阻害、および／またはＴｒｋＡレセプターの活性化を効果的に阻害することのできる抗ヒトのＮＧＦ（抗−ｈＮＧＦ）モノクローナル抗体でもよい。
【００２０】
ＮＧＦ（ｈＮＧＦなど）への抗ＮＧＦ抗体の結合親和性は、約０．１０ｎＭから約０．８０ｎＭまで、約０．１５から約０．７５ｎＭまで、および約０．１８から約０．７２ｎＭまでが可能である。一実施態様において、結合親和性は約２ｐＭと２２ｐＭの間である。いくつかの実施態様において、結合親和性は約１０ｎＭである。他の実施態様では、結合親和性は約１０ｎＭ未満である。他の実施態様では、結合親和性は約０．１ｎＭあるいは約０．０７ｎＭである。他の実施態様では、結合親和性は約０．１ｎＭ未満、あるいは約０．０７ｎＭ未満である。他の実施態様では、結合親和性は約１００ｎＭ、５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、あるいは約５０ｐＭの任意から、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、あるいは４０ｐＭのうちの任意である。いくつかの実施態様において、結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、あるいは約５０ｐＭの、あるいは約５０ｐＭ未満のいずれかである。いくつかの実施態様において、結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、あるいは５０ｐＭのうちのいずれか未満である。さらに別の実施態様において、結合親和性は、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、あるいは約４０ｐＭを越えるものである。当業者において公知であるように、結合親和性はＫＤ、すなわち解離定数として表現でき、増加した結合親和性はＫＤの減少に相当する。ヒトＮＧＦへの抗ＮＧＦマウスモノクローナル抗体９１１（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５−２２７（２０００年））の結合親和性は、約１０ｎＭであり、ヒトＮＧＦへのヒト化抗ＮＧＦ抗体Ｅ３（本明細書に記載された）の結合親和性は、約０．０７ｎＭである。
【００２１】
ＮＧＦアンタゴニストが抗体である場合、この抗体はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖフラグメント、二重特異性抗体、抗体フラグメントから形成された単鎖抗体分子および多重特異性抗体、および単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子から成る群から選択される抗体フラグメントを含む抗体フラグメントである。
【００２２】
オピオイド鎮痛薬は、モルヒネ様生物活性を示す任意の化合物でもよい。いくつかの実施態様において、オピオイド鎮痛薬は、モルヒネ、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニル、スフェンタニル、メペリジン、メサドン、ナルブフィン、プロポキシフェンおよびペンタゾシン、あるいはそれらの薬学的に受容可能な塩の１つ以上である。
【００２３】
ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬は、任意の適切な経路を介して個体に投与することができる。例えば、これらは一緒に、または別々に、および／または同時におよび／または連続して、経口的に、静脈内に、舌下に、皮下に、動脈内に、直腸に、筋肉内に、胸郭内に、脊髄内に、腹腔内に、脳室内に、舌下に、経皮的に、あるいは吸入により投与することができる。投与は全身投与、例えば静脈内、または局所投与が可能である。
【００２４】
第２の態様では、本発明は、神経成長因子アンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬を含む組成物を特徴とする。神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、１つ以上の薬学的に容認できる担体または賦形剤と一緒に、あるいは別々の組成物にしてもよい。別の態様では、本発明は、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の相乗効果を有する組成物を提供する。
【００２５】
第３の態様では、本発明は、本明細書に開示した任意の方法で使用するためのキットを特徴とし、このキットはＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬を含む。このキットは、本明細書で記載した任意の方法に関する説明書をさらに備える。その説明書には、オピオイドと併用したＮＧＦアンタゴニストの投与（すなわち、同時投与および／または異なる時間に投与）を備える。いくつかの実施態様において、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は一緒にパッケージにされるが、それらは同じ容器内にあっても、なくてもよい。したがって、いくつかの実施態様では、キットは同じ容器内にあるＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬、および本明細書に記載された任意の方法における使用説明書を有する。他の実施態様では、キットは、別々の容器内に存在するＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドを有する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
（本発明の詳細な説明）
オピオイド鎮痛薬と併用してＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）の有効量を投与することにより、疼痛を処置または予防することができる可能性があることを発見した。一般にオピオイド鎮痛薬の使用が処方される場合、本発明の方法および組成物は疼痛の処置または予防に有用である。本発明に従って併用する神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の使用により、現在では低投与量のオピオイド鎮痛薬による疼痛の処置を行うことができ、これによりオピオイド鎮痛薬の使用に関連した副作用（例えば、呼吸抑制、便秘、腎疝痛、悪心嘔吐、また許容範囲および依存性および休薬に関連した問題）の可能性を低減させることができる。いくつかの実施形態において、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、あるいは少なくとも約９０％、あるいはそれ以上と同程度の疼痛寛解を達成するために必要とされるオピオイド鎮痛薬の規定投与量の減少が可能となるように、十分なＮＧＦアンタゴニストが投与される。
【００２７】
ＮＧＦアンタゴニストと併用したオピオイド鎮痛薬の投与により、本明細書で述べたようにオピオイド鎮痛薬による疼痛の処置も増強することができる。
【００２８】
一態様において、本発明は、オピオイド鎮痛薬の有効量と併用しＮＧＦアンタゴニストの有効量を投与することを含む個体（ヒトおよびヒト以外の両方を含む哺乳類）の疼痛を処置しまたは予防する方法を提供する。別の態様において、本発明は、オピオイド鎮痛薬の有効量と併用してＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）の有効量を投与することを含むオピオイド鎮痛薬処置を増強する方法、あるいは個体における疼痛の予防を提供する。別の態様では、本発明は、予防し、寛解し、および／または疼痛の発生または悪化を防止する方法を提供する。
【００２９】
いくつか実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦと結合し、生体内でＮＧＦがそのＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターに結合することを阻害し、および／またはＮＧＦがそのＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターを効果的に活性化することを阻害することができる。
【００３０】
別の態様において、本発明は、疼痛の発生を寛解し、遅延し、および／または疼痛の悪化を予防する方法を提供する。
【００３１】
本発明の代表的なオピオイド鎮痛薬は、モルヒネ、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル（ａｌｆｅｎｔａｎｉｌ）、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニル、スフェンタニル（ｓｕｆｅｎｔａｎｙｌ）、メペリジン、メサドン、ナルブフィン、プロポキシフェンおよびペンタゾシン、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩などを含むが、これに限定されない。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬はモルヒネ、あるいはその薬学的に受容可能な塩である。
【００３２】
本発明において有用なオピオイド鎮痛薬の代表的な塩は、硫酸モルヒネ、塩酸モルヒネ、酒石酸モルヒネ、リン酸コデイン、硫酸コデイン、酒石酸水素ジヒドロコデイン、塩酸ジアセチルモルヒネ、酒石酸水素ヒドロコドン、塩酸ヒドロモルフォン、酒石酸レボルファノール、塩酸オキシモルフォン、塩酸アルフェンタニル、塩酸ブプレノルフィン、酒石酸ブトルファノール、クエン酸フェンタニル、塩酸メペリジン、塩酸メタドン、塩酸ナルブフェン、塩酸プロポキシフェン、プロポキシフェンナプシレート（２−ナフタレンスルホン酸（１：１）一水和物）および塩酸ペンタゾシンなどが含まれる。一実施形態において、オピオイド鎮痛薬は硫酸モルヒネである。
【００３３】
本発明の方法および組成物は、急性および慢性痛、炎症性成分によるあらゆる疼痛、およびオピオイド鎮痛薬が通常処方されるあらゆる疼痛をはじめとするあらゆる病因による疼痛の処置に有用である。疼痛の事例としては、術後痛（歯痛を含む）、片頭痛、頭痛、三叉神経痛、火傷、創傷、または腎結石に関連した疼痛、外傷（外傷性頭部損傷を含む）に関連した疼痛、神経障害性疼痛、関節リウマチなどの筋骨格障害、骨関節炎、膀胱炎、膵炎、炎症性腸疾患、強直性脊椎炎、血清陰性（非リウマチ様）関節症、非関節リウマチ、および関節周囲障害に関連した疼痛、および癌（「破綻疼痛」および末期癌に関連した疼痛を含む）、末梢性ニューロパチー、およびヘルペス後神経痛に関連した疼痛などが含まれる。炎症性成分（上述したもののうちのいくつかに加えて）による疼痛の実例としては、リウマチ痛、粘膜炎、および月経困難症に関連した疼痛などが含まれる。いくつかの実施形態において、本発明の方法および組成物は、術後疼痛および癌性疼痛の処置あるいは予防に使用される。
【００３４】
ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬は、個体に任意の適切な投与経路で投与することができる。例えば、それらは一緒に、あるいは別々に、および／または同時に、および／または連続的に、経口的に、静脈内に、舌下に、皮下に、動脈内に、直腸内に、筋肉内に、胸郭内に、脊髄内に、腹腔内に、脳室内に、舌下に、経皮的に、あるいは吸入により投与することができる。投与は全身投与、例えば静脈内または局所投与も可能である。
【００３５】
別の態様において、本発明は、本明細書に記載された方法のうちの任意の方法で使用に適したＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体、抗ＮＧＦモノクローナル抗体など）および／またはオピオイド鎮痛薬を含む疼痛を処置するための組成物、およびキットを提供する。いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、ＮＧＦがそのＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターと結合することを効果的に阻害することができ、および／またはＮＧＦがそのＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターを活性化することを阻害することができる。
【００３６】
（一般的な技術）
本発明の実施は、他に説明のない限り、当業者の範囲内にある分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学に関する従来技術を使用するものとする。このような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８年）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ；（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７年）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ、およびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８年）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  （Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編集、１９９３−８年）Ｊ．Ｗｉｌｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ社）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）、Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｂｏｓ編、１９８７年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、編、１９８７年）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４年）、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１年）、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９９年）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ、およびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７年）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７年）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬＰｒｅｓｓ、１９８８−１９８９年）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ、およびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００年）、Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  （Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９９９年）、Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ、およびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５年）などの文献で詳細に説明されている。
【００３７】
（定義）
「抗体」（複数形での使用と交換可能）は、免疫グロブリン分子の可変領域に位置した少なくとも１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することが可能な免疫グロブリン分子である。本明細書で使用されるこの用語は、完全なポリクローナル性またはモノクローナル抗体のみではなく、そのフラグメント（Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を有する融合蛋白質、ヒト化抗体、キメラ抗体、ジアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）直鎖状抗体、単鎖抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、および必要な特異性の抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子の他の任意の改質された構造も含まれる。抗体には、ＩｇＧ、ＩｇＡ、あるいはＩｇＭ（あるいはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体が含まれるが、抗体は任意の特別のクラスである必要はない。そのＨ鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを種々のクラスに割り当てることができる。５つの主要なクラスの免疫グロブリンが存在し：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、および１ｇＭ、これらのいくつかはさらにサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２に分類される。異なるクラスの免疫グロブリンに相当するＨ鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は公知である。
【００３８】
「モノクローナル抗体」は、モノクローナル抗体が抗原の選択的結合に関係するアミノ酸（天然および非天然物）で構成される均質な抗体集団を指す。モノクローナル抗体の集団は、単一抗原部位に向けられており、高度に特異的である。用語「モノクローナル抗体」は、完全なモノクローナル抗体および完全長モノクローナル抗体のみではなく、そのフラグメント（Ｆａｂ，Ｆａｂ’，Ｆ（ａｂ’）２，Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を有する融合蛋白質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、必要な特異性、および抗原に結合することのできる抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子の他の任意の改質された構造も含まれる。抗体源、またはそれを作成する方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え型発現、遺伝子導入動物など）に関して制限することは意図していない。
【００３９】
「ヒト化」抗体は、非ヒトの種からの免疫グロブリン、およびヒト免疫グロブリンの構造および／またはシーケンスに基づくこの分子の残留する免疫グロブリン構造に実質的に由来する抗原結合部位を有する分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合した可変ドメイン、または可変ドメインの適切なフレームワーク領域上にグラフトされた相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを有してもよい。抗原結合部位は、野生型、あるいは１つ以上のアミノ酸置換によって改質された、例えば、ヒト免疫グロブリンにより類似するように改質されたものでもよい。ヒト化抗体のいくつかの形態では、全てのＣＤＲシーケンス（例えば、マウス抗体からの全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保持する。ヒト化抗体の他の形態は、オリジナル抗体に関して変化された１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有する。いくつかの実施形態では、フレームワーク領域（ＦＲ）残基、あるいはヒト免疫グロブリンの他の残基は、相当する非ヒト残基と交換されている。更に、ヒト化抗体は、レセプター抗体またはドナー抗体中では認められない残基を有してもよい。
【００４０】
本明細書で使用される用語「神経成長因子」および「ＮＧＦ」は、ＮＧＦの活性の少なくとも一部を保持する神経成長因子およびその変異体を指す。本明細書で使用されるＮＯＦは、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、あるいはウシを含む、天然シーケンスＮＧＦの全ての哺乳類種を含む。
【００４１】
「ＮＧＦレセプター」は、ＮＧＦによって結合されるか、または活性化されるポリペプチドを指す。ＮＧＦレセプターは、これに限定されないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、霊長類、あるいはウシなどを含む任意の哺乳類種のＴｒｋＡレセプターおよびｐ７５レセプターが含まれる。
【００４２】
「ＮＧＦアンタゴニスト」は、ＮＧＦに対する細胞反応のレセプター結合および／または誘発などのＮＧＦ情報伝達により媒介された下流経路を含むＮＧＦ生物活性を（顕著に）ブロックし、抑制し、減少させあらゆる分子のことを指す。用語「アンタゴニスト」は、生物学的作用の特定の機序をまったく意味しておらず、直接的または間接的に、あるいはＮＧＦによる、レセプターによる、または他の機序を介して相互作用することのいずれかで、ＮＧＦによる全ての可能性のある薬理学的、生理的、および生化学的相互作用を明らかに含むと考えられ、多様に異なり、化学的に多岐にわたる組成物により達成することができるその結果を意味する。代表的なＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦに向けたアンチセンス分子（ＮＧＦを符号化する核酸へ向けたアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦ構造類似薬、ＮＧＦと結合するＴｒｋＡレセプターのドミナントネガティブ突然変異体、ＴｒｋＡ免疫付着因子、抗−ＴｒｋＡ抗体、抗−ｐ７５抗体、およびリン酸化酵素阻害薬などが含まれるが、これに限定されるものではない。本発明の目的において、用語「アンタゴニスト」は、全ての事前に特定された用語、表題、およびＮＯＦ自体、ＮＧＦ生物活性（疼痛の任意の態様を仲介する能力を含むが、これに限定されない）、または生物活性の結果による機能的状態および特性は、任意の意味のある程度に実質的に無効にされ、減少され、中和されていることを含むことが明示的に理解される。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）は、ＮＧＦと結合し（物理的に相互作用し）、ＮＧＦレセプター（ｔｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターなどの）に結合し、下流のＮＧＦレセプター情報伝達を減少させ（妨害および／またはブロックさせ）、および／またはＮＧＦ合成、産生あるいは遊離を阻害する（減少させる）。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦと結合し、ＴｒｋＡレセプター二量体化および／またはＴｒｋＡ自己リン酸化を防止する。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦ合成および／または産生（遊離）を阻害するか減少させる。ＮＧＦアンタゴニストの種類に関する事例は本明細書に提供される。
【００４３】
本明細書で使用される「抗ＮＧＦ抗体」は、ＮＧＦに結合し、さらにＮＧＦ生物活性および／またはＮＧＦ情報伝達によって媒介された下流の経路を阻害することのできる抗体を指す。
【００４４】
「ＴｒｋＡ免疫付着因子」は、ＴｒｋＡレセプターの結合特異性を保持するＴｒｋＡレセプターのフラグメント、例えばＴｒｋＡレセプターの細胞外ドメインおよび免疫グロブリンシーケンスを有する可溶性キメラ分子を指す。
【００４５】
ＮＧＦの「生物活性」は、一般にＮＧＦレセプターと結合する、および／またはＮＧＦレセプター信号伝達経路を活性化する能力を指す。制限なしで、生物活性は、ＮＧＦレセプター（ｐ７５および／またはＴｒｋＡなど）と結合する機能、ＴｒｋＡレセプターの二量体化および／または自己リン酸化を促進する能力、ＮＧＦレセプター情報伝達経路を活性化する能力、細胞分化、増殖、生存、成長、および神経形態学上の変化（ニューロンの場合には末梢および中枢ニューロンを含む）、シナプス形成、シナプス機能、神経伝達物質および／または神経ペプチドの遊離、および損傷後の再生などの細胞生理学におけるその他の変化を促進する能力、および疼痛を媒介する能力、などの任意の１つ以上の能力を含んでいる。
【００４６】
用語「エピトープ」は、タンパク質抗原上の（モノクローナルまたはポリクローナル性）抗体のための結合部位を参照するために使用される。
【００４７】
本明細書で使用される「処置」は、有益なあるいは所望の臨床結果を得るためのアプローチである。本発明の目的において、有益なあるいは所望の臨床結果は、急性、慢性、炎症性、神経障害性、あるいは術後疼痛を含む疼痛の任意の態様の改善または緩和を含むが、これに限定されるものではない。本発明の目的において、重症度の軽減、疼痛の任意の態様を含み疼痛に関連した１つ以上の症状の緩和（疼痛の持続時間の短縮、および／または疼痛感度の減少など）など、有益なあるいは所望の臨床結果を１つ以上含むが、これに限定されるものではない。
【００４８】
疼痛の「発生率を減少させること」は、重症度（この状態で一般に使用される他の薬剤および／または処置の必要性、および／または量（例えば暴露させること）を減少させることを含む）、持続時間、およびまたは頻度（例えば、個体における疼痛に対する時間を遅延させるか、または増加させることを含む）を任意に減少させることを意味する。当業者に理解されるように、個体は処置に対する反応性により変動する可能性があり、またこのような事例として例えば、「個体における痛みの発生率を減少させる方法」は、そのような投与により、その特定の個体における発生率を減少させるようなことを引き起こす可能性があるという合理的な期待値に基づいて、本明細書で述べたようにオピオイド鎮痛薬と併用して本明細書に記載されたＮＧＦアンタゴニストを投与することに反映される。
【００４９】
疼痛あるいは疼痛の１つ以上の症状を「緩和する」とは、オピオイド鎮痛薬と併用してＮＧＦアンタゴニストを投与しない場合と比較して、疼痛の１つ以上の症状の減少あるいは改善を意味する。「緩和する」は、症状の持続時間の短縮または減少をさらに含んでいる。
【００５０】
疼痛あるいは疼痛の１つ以上の症状を「軽減する」とは、本発明に従って、オピオイド鎮痛薬と併用してＮＧＦアンタゴニストにより処置された個体または個体の集団における疼痛の１つ以上の望ましくない臨床症状の範囲を減少させることを意味する。
【００５１】
本明細書で使用される疼痛の発生を「遅延させる」とは、疼痛の悪化を遅らせ、妨害し、遅くし、遅延させ、安定化させ、および／または引き延ばすことを意味する。この遅延では病歴および／または処置される個体により時間の長さを変化させることができる。当業者に明らかであるように、十分または有意な遅延は、その個体が疼痛を発症しないという予防を実質的に含むことができる。症状の発生を「遅延させる」方法は、本発明による方法を使用しない場合と比較して、与えられた時間枠において症状が発生する確率を減少させ、および／または与えられた時間枠内で症状の範囲を減少させる方法である。このような比較は、統計学的に有意な数の被験者を使用する臨床研究に一般に基づく。
【００５２】
疼痛の「発生」あるいは「悪化」は、最初症状発現および／または障害の悪化に続いて起こる事象を意味する。疼痛の発生は検出可能であり、当技術分野において公知の標準的な臨床技術を使用して評価することができる。しかしながら、発生は検出不可能な場合がある悪化も含む。本発明の目的において、発生または悪化は、症状の生物学的経過を指す。「発生」は、出現、再発、および発症を含む。本明細書で使用される、疼痛の「発症」あるいは「出現」は最初の発症および／または再発を含む。
【００５３】
「有効量」とは、痛覚の緩和あるいは減少を含む有益なまたは所望の臨床結果をもたらすのに十分な量である。本発明の目的において、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドの有効量は、急性、慢性、炎症性、神経障害性、あるいは術後疼痛などを含む任意の種類の疼痛（痛覚および疼痛の感覚を含む）を処置し、緩和し、強度を減少させ、あるいは予防するのに十分な量を含んでいる。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬およびＮＧＦアンタゴニストの有効量は、外部刺激に対して感覚閾値を健康な被験者で観察された閾値と同等なレベルまで変調することができるＮＯＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の量である。他の実施形態では、このレベルは健康な被験者で観察されたものと同等ではないが、併用療法を受けていない被験者と比較して減少した。本明細書で述べたように、ＮＧＦアンタゴニストの有効量は、疼痛のオピオイド処置（処置効果）を増強する、あるいは本明細書で述べたように疼痛の処置または予防に必要なオピオイドの投与量を減少させるのに十分なＮＧＦアンタゴニストの量も含まれる。当業者において理解されるように、疼痛のタイプ、（および患者の病歴、ならびに、タイプ（および／または投与量）、または使用するＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイドなどのその他の因子に特に依存し、オピオイドと併用したＮＧＦアンタゴニストの有効量は、異なる場合がある。本発明の前後関係において、有効量は相乗作用が達成されるＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドのアンタゴニストの量でもよい。本発明の前後関係において、アンタゴニストの有効量は、疼痛に関するオピオイドの処置効果の増強効果を示す（それは結果的に、投与量が減少され、および／またはその他の何らかの有用な効果が観察されることを意味する）、および／またはオピオイドを単独と比較して有用な効果を示すのに十分な量を一般に意味する。ＮＯＦアンタゴニストあるいはオピオイドを単独で投与する場合と比較すると、ＮＧＦアンタゴニストの「有効量」はさらに相乗効果に帰着できる。いくつかの実施形態において、「有効量」は疼痛の発生を遅延させるのに十分な量である。
【００５４】
「個体」は、脊椎動物であり、好ましくは哺乳類、より好ましくはヒトである。哺乳類としては、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、ウマ、雌ウシ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットなどが含まれるが、これに限定されない。
【００５５】
用語「オピオイド鎮痛薬」は、モルヒネ様作用を有する天然または合成の全ての薬剤を指す。合成および半合成オピオイド鎮痛薬は、フェナントレン類、フェニルヘプチルアミン類、フェニルピペリジン類、モルフィナン類、およびベンゾモルファン類の５種の化学分類の化合物の誘導体である（これらの全てはこの用語の範囲内である）。代表的なオピオイド鎮痛薬には、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルフォン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニル、スフェンタニル、メペリジン、メサドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、およびペンタゾシン、あるいはこれらの薬学的に受容可能な塩類などが含まれる。
【００５６】
本明細書で使用される「併用して」投与は、同時投与および／または異なる時間での投与を含む。併用して投与は、共同製剤（ｃｏｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）（すなわち、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドは同じ組成物中に存在する）として投与、あるいは個別の組成物として投与をさらに含む。本明細書で使用される併用して投与は、同時におよび／または別々に投与するケースが発生しうるオピオイドおよびＮＧＦアンタゴニストが個体に投与される任意の環境を含むことを意味する。本明細書でさらに述べるように、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドは異なる投与頻度あるいは間隔で投与することができることが分かる。例えば、抗ＮＧＦ抗体は毎週投与することができ、一方、オピオイドはより頻繁に投与できる。ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、同じ投与ルートまたは異なる投与ルートをを使用して投与することができることが分かる。
【００５７】
「術後疼痛」（「切開後」または「外傷後疼痛」という用語と交換可能）は、個体の組織内への切断、穿刺、切開、断裂、または創傷など（侵襲性あるいは非侵襲性の全ての外科手術手順より生じるものを含む）の外傷により生じ、あるいはその結果生じた疼痛を指す。本明細書で使用される術後疼痛は、外部の身体的な外傷なしで生じる（起こる、または始まる）疼痛を含まない。いくつかの実施形態において術後疼痛は、内部あるいは外部（末梢性を含む）疼痛であり、創傷、切断、外傷、断裂、あるいは切開が偶発的に（外傷性創傷のように）あるいは故意に（外科的切開のように）発生した場合でもよい。本明細書で使用される「疼痛」は痛覚と疼痛の感覚を含み、また疼痛は疼痛スコア、および当業者において公知の他の方法を使用して、客観的および主観的に評価できる。本明細書に使用されたように、術後疼痛は異痛症（すなわち、正常非侵害刺激に対する増加した反応）、および痛覚過敏（すなわち、正常に侵害性または不快な刺激に対する増加した反応）を含み、その結果性質上、熱的または機械的（触覚）である。いくつかの実施形態において、疼痛は、温熱感受性、機械的感度、および／または静止時疼痛によって特徴づけられる。いくつかの実施形態において、術後疼痛は、機械的に誘発された疼痛あるいは静止時疼痛を含む。他の実施形態では、術後疼痛は静止時疼痛を有する。当業者において公知であるように、疼痛は一次あるいは二次痛覚である。
【００５８】
オピオイド処置の態様が改善される場合（ＮＧＦアンタゴニストを投与せずに、オピオイドを投与する場合と比較して）、疼痛のオピオイド処置が「増強される」。例えば、ＮＧＦアンタゴニストの非存在下におけるオピオイド鎮痛薬の効力と比較して、疼痛のオピオイド処置の効力はＮＧＦアンタゴニストの存在下で増加する。別の事例として、オピオイドによる疼痛の処置あるいは予防が、その使用によりより良好な鎮痛軽減が可能な場合（例えば、疼痛の効果的な処置あるいは予防が困難だるオピオイド投与量が使用される場合）、オピオイド鎮痛薬と併用したＮＧＦアンタゴニストの使用により「増強され」る。
【００５９】
（本発明の方法）
本明細書に記載した全ての方法に関して、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬に関して、これらの薬剤の１つ以上を有する組成物をさらに含む。本発明は、全ての哺乳類、ヒトおよび非ヒトの両方を含む個体の疼痛を処置することに有用である。
【００６０】
一態様において、本発明は、オピオイド鎮痛薬の有効量と併用してＮＧＦアンタゴニストの有効量を投与することを含む個体における疼痛を処置する方法を提供する。いくつかの実施形態において、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、あるいは少なくとも約９０％、あるいはそれ以上と同程度の疼痛寛解を達成するために必要とされるオピオイド鎮痛薬の規定投与量の減少が可能となるように、十分なＮＧＦアンタゴニストが投与される。
【００６１】
別の態様において、本発明は、オピオイド鎮痛薬の有効量と併用してＮＧＦアンタゴニストの有効量を投与することを含む個体における疼痛のオピオイド鎮痛薬処置を増強する方法を提供する。
【００６２】
いくつかの実施形態において、疼痛は、急性および／または慢性痛、炎症性成分による任意の疼痛、術後疼痛、術後痛（歯痛を含む）、片頭痛、頭痛および三叉神経痛、火傷、創傷、または腎結石に関連した疼痛、外傷（外傷性頭部損傷を含む）に関連した疼痛、神経障害性疼痛、および、癌（「破綻疼痛」および末期癌に関連した疼痛を含む）に関連した疼痛のうち任意の１つ以上を含む。他の実施形態では、疼痛は、例えば、膵炎、腎結石、頭痛、ジスメノルヒア、筋骨格痛（例えば下背痛）、捻挫、内臓痛、卵巣嚢胞、前立腺炎、膀胱炎、化学的あるいは温熱性火傷、癌（骨に転移した前立腺癌、骨に転移した乳癌、骨に転移した肺癌、膵癌）などの一般にオピオイド鎮痛薬（モルヒネなどの）により処置される任意の疼痛である。
【００６３】
別の態様において、本発明は、疼痛の発生または悪化を防止し、緩和し、および／または予防する方法を提供する。したがって、いくつかの実施形態において、疼痛イベント（手術など）に先立ち、抗ＮＧＦ抗体などのＮＧＦアンタゴニスト、および／またはオピオイド鎮痛薬が投与される。例えば、ＮＧＦアンタゴニストは、３０分、１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、あるいは１日、数日などさらにそれ以上、または１週、２週、３週などさらにそれ以上、さらに疼痛を引き起こす結果、または危険性を生じる可能性のある活動に先立って投与することができる。
【００６４】
疼痛の処置あるいは予防は、当業者において公知の方法を使用して評価される。評価は、刺激に対する反応、表情、および類似の反応など行動の観察等の客観的な尺度に基づいて行なわれる。評価は、様々な疼痛スケールを使用する疼痛の患者特性などの自覚的な尺度にも基づく。例えば、Ｋａｔｚら、Ｓｕｒｇ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．（１９９９年）７９号（２）ページ２３１−５２、Ｃａｒａｃｅｎｉら、Ｊ  Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇｅ（２００２年）２３号（３）ページ２３９−５５参照。
【００６５】
一つのあるいは別々の組成物として、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を併用して投与する場合、神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、所望の効果の発現と一致する比率で表されることが分かる。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬に対する神経成長因子アンタゴニストの重量比率は、およそ１対１である。いくつかの実施形態において、この比率は、約０．００１から約１までの間、および約１から約１０００までの間、あるいは約０．０１から約１まで、および約１００から約１までの間でもよい。その他の比率も考慮される。
【００６６】
疼痛の処置または予防に使用するために必要な神経成長因子（ＮＧＦ）アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の量は、選択された特定の化合物または組成物によるのみではなく、投与経路、処置されている条件の特性、および年齢および患者の状態に応じてに変動すると予想され、最終的には担当の医師の自由裁量によることが分かるであろう。
【００６７】
（ＮＧＦアンタゴニスト）
本発明の方法ではＮＧＦアンタゴニストを使用するが、これはレセプター結合および／またはＮＧＦに対する細胞反応の誘発などのＮＧＦ情報伝達により媒介された下流経路を含むＮＧＦ生物活性をブロックし、抑制し、または減少させる（有意にを含む）任意の分子を指す。用語「アンタゴニスト」は、生物学的作用の特定の機序をまったく意味しておらず、ＮＧＦによる全ての可能性のある薬理学的、生理的、および生化学的相互作用、ならびに多様な種々の、化学的に多岐にわたる組成物により達成することができるその結果を明らかに含むと考えられる。代表的なＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦに向けたアンチセンス分子（ＮＧＦを符号化する核酸に向けたアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦレセプターに向けたアンチセンス分子（ＴｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターなど）、（ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５を符号化する核酸に向けたアンチセンス分子を含む）、ＮＧＦ阻害化合物、ＮＧＦ構造類似体、ＮＧＦと結合するＴｒｋＡレセプターのドミナントネガティブ突然変異体、ＴｒｋＡ免疫付着因子、抗−ＴｒｋＡ抗体、抗−ｐ７５抗体、およびリン酸化酵素阻害薬などがあるが、これに限定されない。
本発明の目的において、用語「アンタゴニスト」は、全ての事前に特定された用語、表題、およびＮＯＦ自体、ＮＧＦ生物活性（疼痛の任意の態様を仲介する能力を含むが、これに限定されない）、または生物活性の結果による機能的状態および特性は、任意の意味のある程度に実質的に無効にされ、減少され、中和されていることを含むことが明示的に理解される。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗体）は、ＮＧＦと結合し（物理的に相互作用し）、ＮＧＦレセプター（ｔｒｋＡレセプターおよび／またはｐ７５レセプターなどの）に結合し、下流のＮＧＦレセプター情報伝達を減少させる（妨害および／またはブロックさせる）。したがって、いくつかの実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦと結合する（物理的に相互作用する）。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＮＧＦレセプター（ｔｒｋＡレセプターあるいはｐ７５など）に結合する。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは下流のＮＧＦレセプター情報伝達（例えば、リン酸化酵素情報伝達阻害薬）を減少させる（妨害および／またはブロックする）。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦ合成および／または遊離を阻害する（減少させる）。別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストはＴｒｋＡ免疫付着因子である。別の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体以外である。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストはＮＧＦ（ｈＮＧＦなど）と結合し、ＮＴ−３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦなどの関連したニューロトロフィンには有意に結合しない。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体である。さらに他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体はヒト化されている（本明細書に記載された抗体Ｅ３など）。いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は（本明細書で述べたように）抗体Ｅ３である。他の実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（いくつかの実施態様において、Ｅ３由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、あるいは全ての６つのＣＤＲなど）を含む。他の実施形態では、抗体はヒトである。さらに他の実施形態では、抗ＮＧＦ抗体は、表１（配列番号：１）に示す重鎖可変領域のアミノ酸配列、および表２（配列番号：２）に示す軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態において、抗体は、免疫学的に不活性な、例えば、補体媒介性溶解を引き起こさない、あるいは抗体依存性細胞媒介性細胞障害性（ＡＤＣＣ）を刺激しない定常領域などの改質された定常領域を備える。他の実施形態において、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９年）２９：２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号明細書、および／または英国特許出願第９８０９９５１．８号明細書で記載されるように定常領域は改質される。
【００６８】
（抗ＮＧＦ抗体）
本発明のいくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体を含む。抗ＮＧＦ抗体は、（ａ）ＮＧＦへの結合、（ｂ）ＮＧＦ生物活性、あるいはＮＧＦ情報伝達関数により媒介された下流経路を阻害する、（ｃ）特にオピオイド鎮痛薬と併用して、疼痛の任意の態様が処置または予防されること、（ｄ）ＮＧＦレセプター活性化（ＴｒｋＡレセプター二量体化および／または自己リン酸化を含む）をブロックあるいは減少させること、（ｅ）ＮＧＦクリアランスの増加、（ｆ）ＮＧＦ合成、産生、または遊離を阻害する（減少させる）、（ｇ）疼痛のオピオイド処置を増強する特性のうち任意の１つ以上の特性を示す必要がある。
【００６９】
抗ＮＧＦ抗体は当業者において公知である。例えば、ＰＣＴ出願番号、国際公開第０１／７８６９８号パンフレット、国際公開第０１／６４２４７号パンフレット、米国特許第５，８４４，０９２号明細書、５，８７７，０１６号明細書、および６，１５３，１８９号明細書、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９号、２１５−２２７（２０００年）、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．１３号、５５９−５６８（１９９３年）、ＧｅｎＢａｎｋ目録、第Ｕ３９６０８号、Ｕ３９６０９号、Ｌ１７０７８号、あるいはＬ１７０７７号参照。
【００７０】
いくつかの実施形態において、抗ＮＧＦ抗体は、抗体「Ｅ３」と命名されたヒト化されたマウス抗ＮＧＦモノクローナル抗体であり、これはＡ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１（野生型ＩｇＧ２ａシーケンスを基準として番号付けされたアミノ酸、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９年）２９号、２６１３−２６２４参照）まで、ヒトＬ鎖κ定常領域、および表１および２に示すＨ鎖および軽鎖可変領域の変異を含むヒトＨ鎖ＩｇＧ２ａ定常領域を有する。
表１：重鎖可変領域
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＦＳＬＩＧＹＤＬＮＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧＩＩＷＧＤＧＴＴＤＹＮＳＡＶＫＳＲＶＴＩＳＫＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＧＹＷＹＡＴＳＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶ（配列番号：１）。
表２：軽鎖可変領域
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＮｗＹＱＱＫＰＧＫＡＰ  ＫＬＬＩＹＹＴＳＲＦＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＥＨＴＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲＴ（配列番号：２）。
【００７１】
Ｅ３  重鎖可変領域あるいはＥ３  軽鎖可変領域を符号化する以下のポリヌクレオチドが、２００３年１月８日にＡＴＣＣに蓄積された。
【００７２】
【表１】
2006517524.tif 000002
ベクターＥｂ．９１１．３Ｅは、表２に示す軽鎖可変領域を符号化するポリヌクレオチドである。ベクターＥｂ．ｐｕｒ．９１１．３Ｅは、表２に示す軽鎖可変領域を符号化するポリヌクレオチドである。また、ベクターＤｂ．９１１．３Ｅは、表１に示す重鎖可変領域を符号化するポリヌクレオチドである。
【００７３】
別の実施形態では、抗ＮＧＦ抗体は、抗体Ｅ３の１つ以上のＣＤＲ（いくつかの実施態様において、Ｅ３由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、あるいは全ての６つのＣＤＲなど）を有する。ＣＤＲ領域の判定は当業者において熟知されている。
【００７４】
本発明に有用な抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、二重特異性抗体、ヘテロ共役抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を有する融合蛋白質、ヒト化抗体、および抗体の糖鎖形成変異体、抗体のアミノ酸配列変異体、および共有結合的に改質された抗体を含み、必要とされた特異性の抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子の他の任意の改質された構造などが含まれる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、あるいは他の起源（キメラあるいはヒト化抗体を含む）でもよい。本発明の目的において、抗体はＮＴＧＦをに阻害する様式でＮＧＦと、および／またはＮＧＦ情報伝達機能により媒介された下流経路と反応する。一実施形態において、抗体はヒトＮＧＦの上の１つ以上のエピトープを認識するヒト化抗体である。別の実施形態では、抗体は、ヒトＮＧＦの上の１つ以上のエピトープを認識するマウスまたはラット抗体である。別の実施形態では、抗体は、霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、およびウシから成る群から選択されるＮＧＦ上の１つ以上のエピトープを認識する。他の実施形態では、抗体は、免疫学的に不活性な、例えば、補体媒介性溶解を引き起こさないか、または抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）を刺激しない定常領域などの改質された定常領域を有する。ＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号明細書に開示された方法を使用して評価できる。他の実施形態において、定常領域はＥｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９年）２９号、２６１３−２６２４、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１、および／または英国特許第９８０９９５１．８号明細書で記載されるように改質される。
【００７５】
ＮＧＦ（ｈＮＧＦなど）への抗ＮＧＦ抗体の結合能は、約０．１０から約０．８０ｎＭまで、０．１５から約０．７５ｎＭ、および約０．１８から約０．７２ｎＭまでである可能性がある。いくつかの実施形態において、結合能は約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、あるいは約４０ｐＭより高い。一実施形態において、結合能は、約２ｐＭと２２ｐＭとの間にある。他の実施形態では、結合能は約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、約５０ｐＭ、約１０ｐＭ未満である。いくつかの実施形態において、結合能は約１０ｎＭである。他の実施形態では、結合能は約１０ｎＭ未満である。他の実施形態では、結合能は約０．１ｎＭ、あるいは約０．０７ｎＭである。他の実施形態では、結合能は、約０．１ｎＭ未満、あるいは約０．０７ｎＭ未満である。他の実施形態では、結合能は約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、あるいは約５０ｐＭのいずれかから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、あるいは約４０ｐＭのうちいずれかまでである。いくつかの実施形態において、結合能は約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、あるいは約５０ｐＭの、あるいは約５０ｐＭ未満のいずれかである。さらに他の実施形態において、結合能は約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、あるいは約４０ｐＭ以上である。
【００７６】
ＮＧＦへの抗体の結合能を測定する一つの方法は、抗体の単官能Ｆａｂフラグメントの親和性を測定することによる。単官能Ｆａｂフラグメントを得るために、抗体（例えばＩｇＧ）をパパインで切断するか、あるいは組み換え的に発現させることができる。抗体の抗ＮＧＦ  Ｆａｂフラグメントの親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（登録商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、ＢＩＡコア社ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｐｉｓｃａｗａｙ、ニュージャージー州）により決定することができる。ＣＭ５チップは、製造者の説明に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイニド（ｃａｒｂｏｄｉｉｎｉｄ）塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化することができる。ヒトＮＧＦを１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．０で希釈し、０．００５ｍｇ／ｍＬの濃度で活性化されたチップ上に注入することができる。個々のチップチャネル全体にわたって可変流時間を使用すると、２つの範囲の抗原密度、すなわち詳細な動態検査における１００〜２００反応単位（ＲＵ）、およびスクリーニング検査における５００〜６００ＲＵを達成することができる。このチップはエタノールアミンでブロックすることができる。再生試験の結果、ピアス溶出緩衝液（製品番号２１００４、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、イリノイ州ロックフォード）および４ＭＮａＣｌ（２：１）の混合物は、２００回以上の注入の間、チップ上のｈＮＧＦ活性を維持しながら結合Ｆａｂを効率的に除去することが分かった。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、および０．１５ＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２９）は、ランニング緩衝液としてＢＩＡｃｏｒｅ分析に使用される。精製Ｆａｂ試料の連続的希釈（０．１〜１０ｘ推定ＫＤ）は、１００μｌ／分で１分間注入され、また２時間までの解離時間が可能である。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として既知濃度（アミノ酸分析により測定する場合と同様に）のＦａｂを使用して、ＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動法によって定量される。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、ＢＩＡ評価基本規定を使用して、データを１：１ラングミュア結合モデルにフィッティングさせることにより同時に得られる（Ｋａｒｌｓｓｏｎ、Ｒ．Ｒｏｏｓ、Ｈ．Ｆａｇｅｒｓｔａｍ、Ｌ．Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ、Ｂ．（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｏｌｏｇｙ  ６、９９−１１０）。平衡解離定数（ＫＤ）値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算することができる。本プロトコルは、このプロトコルは、ヒトＮＧＦ、別の脊椎動物のＮＧＦ（いくつかの実施形態では哺乳類）（マウスＮＧＦ、ラットＮＧＦ、霊長類ＮＧＦなど）を含む任意の種のＮＧＦ抗体の結合親和性を測定するために使用すること、ならびに、関連したニューロトロフィンＮＴ３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦなどのその他のニューロトロフィンとともに使用することに適している。
【００７７】
いくつかの実施形態において、抗体はヒトＮＧＦと結合し、別の脊椎動物種（いくつかの実施形態において哺乳類）由来のＮＧＦとは結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＮＧＦならびに別の脊椎動物種（いくつかの実施形態では哺乳類）由来の１つ以上のＮＧＦと結合する。さらに別の実施形態において、抗体はＮＧＦと結合するが、他のニューロトロフィン（関連したニューロトロフィン、ＮＴ３、ＮＴ４／５、および／またはＢＤＮＦなど）とは有意に交差反応しない。いくつかの実施形態において、抗体はＮＧＦならびに少なくとも１つの他のニューロトロフィンと結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ウマ、イヌなどの哺乳類種のＮＧＦと結合するが、他の哺乳類のＮＧＦとは有意に結合しない。
【００７８】
このエピトープ（複数）は、連続的または非連続的である可能性がある。一実施形態において、抗体は、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５−２２７（２０００年）に記載されたような、ＭＡｂ９１１、ＭＡｂ９１２、およびＭＡｂ９３８から成る群から選択される抗体と本質的に同一のｈＮＧＦエピトープと結合する。別の実施形態では、抗体はＭＡｂ９１１と本質的に同じｈＮＧＦエピトープと結合する。さらに別の実施形態では、抗体はＭＡｂ９０９と本質的に同じエピトープと結合する。上述のＨｏｎｇｏら。例えば、エピトープは、ｈＮＧＦの可変領域１（アミノ酸２３〜３５）内の残基Ｋ３２、Ｋ３４、およびＥ３５、ｈＮＧＦの可変領域４（アミノ酸８１〜８８）内の残基Ｆ７９およびＴ８１、可変領域４以内の残基Ｈ８４およびＫ８８、ｈＮＧＦの可変領域５（アミノ酸９４〜９８）とｈＮＧＦのＣ末端（アミノ酸１１１〜１１８）との間の残基Ｒ１０３、ｈＮＧＦの全可変領域１（アミノ酸１０〜２３）内の残基Ｅ１１、ｈＮＧＦの可変領域２（アミノ酸４０〜４９）とｈＮＧＦの可変領域３（アミノ酸５９〜６６）との間のＹ５２、ｈＮＧＦのＣ末端の内の残基Ｌ１１２およびＳ１１３、ｈＮＧＦの可変領域３内の残基Ｒ５９およびＲ６９、あるいはｈＮＧＦの前可変領域１内の残基Ｖ１８、Ｖ２０およびＧ２３の１つ以上を有してもよい。さらに、エピトープは、可変領域１、可変領域３、可変領域４、可変領域５、Ｎ末端領域、および／またはｈＮＧＦのＣ末端の１つ以上を含むことができる。さらに別の実施態様において、この抗体は、ｈＮＧＦの残基Ｒ１０３の溶解能を有意に減少させる。上述のエピトープはヒトＮＧＦに関連するが、当業者はヒトＮＧＦの構造を他の種のＮＧＦと整合させることができ、これらのエピトープに対応すると考えられる物を同定することができることが分かる。
【００７９】
一態様において、ＮＧＦを阻害することができる抗体（例えば、ヒト、ヒト化、マウス、キメラ）は、ＮＧＦの完全長あるいは部分配列を発現する免疫原の使用により作成してもよい。別の態様では、ＮＧＦを過剰発現する細胞を有する免疫原を使用してもよい。使用することができる免疫原の別の実施例は、完全長ＮＧＦあるいはＮＧＦタンパク質の一部を含むＮＧＦタンパク質である。
【００８０】
抗ＮＧＦ抗体は、当業者において公知の任意の方法により作成される。本明細書にさらに記載されるように、宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは、一般に抗体刺激および産生のための確立された従来技術に準拠する。ヒトおよびマウスの抗体産生のための一般的な技術は、当業者において公知であり、本明細書に記載されている。
【００８１】
ヒトを含む任意の哺乳類検体またはその検体由来の抗体産生細胞を処理し、ヒトを含む哺乳類のハイブリドーマ細胞系の産生のためのベースとして寄与することができると考えられる。一般に、宿主動物は、本明細書で述べたものを含み、腹腔内に、筋肉内に、経口的に、皮下に、足底内に、および／または免疫原量で皮内に接種される。
【００８２】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ、およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５年）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７、あるいはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ  Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７−３８１（１９８２年）で修正されたように、一般的な体細胞ハイブリッド形成技術を使用するリンパ球および不死化された骨髄細胞から調製することができる。Ｘ６３−Ａｇ８．６５３、およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、カリフォルニア州、サンディエゴ、米国より供給される同種のものなどがこれらに限定されずに含まれる入手可能な骨髄腫ラインが、ハイブリッド形成法に使用される。一般に、この技術は、ポリエチレングリコールなどの融合剤を使用し、あるいは当業者において公知である電気的手段により、骨髄細胞とリンパ球を融合することを含んでいる。融合の後、細胞は融合培地から分離され、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択成長培地中で成長され、ハイブリッド形成されていない親細胞を除去する。血清の補充されたまたは血清の補充されていない本明細書で述べた任意の培地を、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマの培養に使用することができる。細胞融合技術の別の代わりとして、ＥＢＶに不死化されたＢ細胞を使用して、本発明の抗ＮＧＦモノクローナル抗体を産生してもよい。ハイブリドーマは、必要に応じ、拡張され、サブクローン化され、さらに上澄を従来の免疫測定法（例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素免疫測定法、あるいは蛍光免疫測定法）により、抗免疫原活性を分析する。
【００８３】
抗体の源として使用されるハイブリドーマは、全ての誘導体、ＮＧＦに特異的なモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの娘細胞、あるいはそれらの一部が含まれる。
【００８４】
このような抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を使用してインビトロまたはインビボで成長させてもよい。必要に応じ、硫安塩析、ゲル電気泳動法、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手法により、モノクローナル抗体を培地または体液から単離してもよい。好ましくない活性が存在する場合は、固相に付着させた免疫原で作成された吸着剤上に調製液を通過させること、あるいは免疫原から所望の抗体を溶出させることにより除去することができる。ヒトＮＧＦ、あるいは免疫化される種における免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、あるいは二官能性試薬または誘導体化試薬、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基による接合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基による）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、あるいはＲとＲ１が異なるアルキル基であるＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲを使用する大豆トリプシン阻害因子に接合された標的アミノ酸配列を含むフラグメントによる宿主動物の免疫化により、抗体（例えばモノクローナル抗体）の集団を産出することができる。
【００８５】
必要に応じ、対象となる抗ＮＧＦ抗体（モノクローナルまたはポリクローナル性）はシーケンスされ、続いてポリヌクレオチドシーケンスは、発現または増殖のためにベクター内にクローン化される。対象の抗体を符号化するシーケンスは、宿主細胞中のベクター中で維持され、続いてその後の使用のために宿主細胞を拡張し、凍結することができる。あるいは、ポリヌクレオチドシーケンスを遺伝子操作のため、あるいは抗体を「ヒト化する」あるいは抗体の親和性またはその他の特性を改善するために使用してもよい。例えば、この抗体が臨床試験およびヒトの処置に使用される場合に、免疫応答を回避するためヒトの定常領域により類似させるために定常領域を工学的に改良してもよい。抗体シーケンスを遺伝学的に操作し、ＮＧＦに対するより高い親和性およびＮＧＦを阻害する際により大きな効力を得ることが望ましい。抗ＮＧＦ抗体における１つ以上のポリヌクレオチドを変化させることができ、またそれでもそのＮＧＦへ結合能を維持することができることは当業者において明白であろう。
【００８６】
モノクローナル抗体をヒト化する一般的な４つのステップがある。これらは、（１）ヌクレオチドおよび開始抗体Ｌ鎖およびＨ鎖可変ドメインの予想されたアミノ酸配列を決定すること、（２）ヒト化抗体を設計すること、すなわちヒト化プロセスの間にどの抗体フレームワーク領域を使用するかを決定すること、（３）実際のヒト化するための方法論／技術、および（４）ヒト化抗体の形質移入および発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、第５，８０７，７１５号明細書、第５，８６６，６９２号明細書、第６，３３１，４１５号明細書、第５，５３０，１０１号明細書、第５，６９３，７６１号明細書、第５，６９３，７６２号明細書、第５，５８５，０８９号明細書、および第６，１８０，３７０号明細書を参照。
【００８７】
非ヒト免疫グロブリンに由来した抗原結合性部位を有する多数の「ヒト化」抗体分子が議論されているが、齧歯類動物あるいは改質された齧歯類動物可変領域、およびヒト定常ドメインに融合するこれと関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）を有するキメラ抗体が含まれる。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３−２９９（１９９１年）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０−４２２４（１９８９年），Ｓｈａｗら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４−４５３８（１９８７年），およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７−３５８３（１９８７年）を参照。別の参考文献では、適切なヒト化抗体定常ドメインによる融合前に、ヒトの支持フレームワーク領域（ＦＲ）内に移植した齧歯類ＣＤＲについて述べている。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、３３２：３２３−３２７（１９８８年）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４−１５３６（１９８８年）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５（１９８６年）を参照。別の参考文献は、組み換えベニア齧歯類フレームワーク領域で支援された齧歯類ＣＤＲについて述べている。例えば、欧州特許第５１９，５９６号明細書を参照。これらの「ヒト化」分子は、ヒトのレセプターにおけるこれらの成分の処置適用期間および有効性を制限する齧歯類抗ヒト化抗体分子への不要な免疫学的応答を最小化するように設計されている。利用される可能性がある、抗体をヒト化するその他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９：２４７１−２４７６（１９９１年）、および米国特許第６，１８０，３７７号明細書、第６，０５４，２９７号明細書、第５，９９７，８６７号明細書、第５，８６６，６９２号明細書、第６，２１０，６７１号明細書、第６，３５０，８６１号明細書、およびＰＣＴ国際公開第０１／２７１６０号パンフレットにより開示されている。
【００８８】
さらに別の変更では、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように設計された市販のマウスの使用により完全ヒト化抗体が得られる。より好ましい（例えば、完全ヒト化抗体）、あるいはより堅牢な免疫応答を生成するようにデザインされた遺伝子導入動物をヒト化またはヒト抗体の産生に使用してもよい。このような技術事例は、アブゲニクスＡｂｇｅｎｉｘ社（カリフォルニア州、フリーモント）のキセノマウスＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）、およびメダレックスＭｅｄａｒｅｘ社（ニュージャージー州、プリンストン）のＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（登録商標）である。
【００８９】
上記の議論はヒト化抗体に関係するが、議論された一般的な原理は、例えばイヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシにおいて、使用の際にカスタマイズすることが可能であることは明白である。本明細書に記述された抗体を、例えばＣＤＲ移植、フレームワーク変異、ＣＤＲ変異などのヒト化する１つ以上の態様を併用してもよいことはさらに明白である。
【００９０】
あるいは、抗体は組み換えにより作成してもよく、当業者において公知の方法を使用して、発現させてもよい。別の変更形態では、抗体は、ファージディスプレイ技術により組み換えにより作成してもよい。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号明細書、第５，５８０，７１７明細書、第５，７３３，７４３明細書、第６，２６５，１５０明細書、およびＷｉｎｔｅｒらＡｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４年）参照。あるいは、免疫化されていないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリから、インビトロでヒト抗体および抗体フラグメントを産生するために、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０年））を使用することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子は、Ｍ１３またはｆｄなどの糸状バクテリオファージのメインまたはマイナーのいずれかのコートタンパク質遺伝子内のフレーム内にクローン化され、ファージ粒子の表面の官能性抗体フラグメントとして発揮する。線維状粒子はファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能特性に基づいた選択により、これらの性質を示す抗体を符号化する遺伝子の選択もなされる。したがって、このファージはＢ細胞の特性のうちのいくつかを模倣する。ファージディスプレイは種々のフォーマットで行なうことができる。解説は、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．Ｃｈｉｓｗｅｌｌ、Ｄａｖｉｄ  Ｊ、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ３、５６４−５７１（１９９３年）などを参照。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかのソースはファージディスプレイに使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１年）は、免疫化マウスの脾臓に由来したＶ遺伝子の小さなランダムな組合わせライブラリから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。免疫化されていないヒトドナーからのＶ遺伝子のレパートリを構築することができ、さらに抗原（自己抗原を含む）の多様なアレイ抗体は、Ｍａｒｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１年）、またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３年）で述べた技術に従って本質的に単離することができる。
自然な免疫応答では、抗体遺伝子は高い割合で変異（体細胞超変異）を蓄積する。導入されたいくつかの変化は、より高い親和性を与えると予想され、高親和性表面免疫グロブリンを呈するＢ細胞は、優先的に複製され、後続の抗原攻撃により分化する。このナチュラルプロセスは、「鎖混合」として知られる技術の使用により模倣することができる。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９−７８３（１９９２年））この方法では、ファージディスプレイによって得られた「一次」ヒト抗体の親和性は、Ｈ鎖およびＬ鎖Ｖ領域遺伝子を、免疫化されていないドナーから得られたＶドメイン遺伝子の自然発生変異体（レパートリ）のレパートリと連続的に交換することにより改善することができる。この技術により、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性を備えた抗体および抗体フラグメントの産生を可能となる。非常に大きなファージ抗体レパートリ（「全ての母ライブラリ（ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ  ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」として知られる）を作るための方法は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｉ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６（１９９３年）によって議論された。遺伝子混合は、齧歯類抗体からヒト抗体を引き出すためにも使用することができ、ここでヒト抗体は開始する齧歯類抗体と同様な親和性および特異性を有する。この方法（これは「エピトープ刷り込み（ｅｐｉｔｏｐｅｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）」とも呼ばれる）により、ファージディスプレイ技術によって得られた齧歯類抗体のＨ鎖、またはＬ鎖Ｖドメイン遺伝子は、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリと交換され、齧歯類−ヒトのキメラが形成される。抗原の選択により、機能的（官能性）抗原結合性部位を回復することができるヒト可変領域が単離される。すなわち、エピトープはパートナーの選択を支配する（刷り込む）。残りの齧歯類Ｖドメインを置換するためにこのプロセスを反復すると、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に刊行されたＰＣＴ特許出願国際公開第９３０６２１３号パンフレットを参照）。ＣＤＲ移植による齧歯類抗体の従来のヒト化と異なり、この技術は完全ヒト抗体を提供し、これには齧歯類起源のフレームワークまたはＣＤＲ残基を持たない。上記の議論はヒト化抗体に関するが、議論された一般原理は、例えばイヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシにおける使用のために抗体をカスタマイズすることが可能であることは明白である。
【００９１】
宿主動物から抗体および抗体産生細胞を最初に単離し、遺伝子配列を得て、この遺伝子配列を使用することにより宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）中の抗体を組み換え的に発現させることにより、抗体を組み換え的に作成してもよい。使用してもよい別の方法は、植物（例えばタバコ）あるいは遺伝子導入乳中の抗体シーケンスを発現させることである。植物または乳中で抗体を組み換え的に発現させる方法が開示された。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら、Ｖａｃｃｉｎｅ１９：２７５６（２００１年）、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎ．およびＤ．ＨｕｓｚａｒＩｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１３：６５（１９９５年）、およびポラックら、Ｊ  ｌｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７（１９９９年）を参照。例えばヒト化、単鎖などの抗体の誘導体を作成方法は当業者において公知である。
【００９２】
免疫測定法および蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリーソート技術も、ＮＧＦに特異的な抗体を単離するために使用することができる。
【００９３】
抗体は多くの様々な担体と結合することができる。担体は活性および／または不活性なタイプが可能である。よく知られた担体の実例としては、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然または改質セルロース類、ポリアクリルアミド、アガロースおよび磁鉄鉱などがある。担体の性質は、本発明の目的には可溶あるいは不溶性でもよい。当業者は結合抗体に適した担体を把握しており、あるいはルーチンの実験法を使用し、このような担体を確認することができるであろう。
【００９４】
モノクローナル抗体を符号化するＤＮＡは、従来手法を用いて容易に単離され、配列決定される（例えば、モノクローナル抗体のＨ鎖およびＬ鎖を符号化する遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用による）。ハイブリドーマ細胞は、このようなＤＮＡの好ましいソースとして有用である。一度単離されると、このＤＮＡは発現ベクター（国際公開第８７／０４４６２号パンフレットに開示された発現ベクターなど）に配置され、続いて、大腸菌細胞、サルのコス細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、あるいは免疫グロブリンタンパク質を産生することを除く骨髄細胞などの宿主細胞内に形質移入され、組み換え宿主細胞中のモノクローナル抗体が合成される。例えば、ＰＣＴ特許出願公開第８７／０４４６２号明細書を参照。例えば、同種マウスシーケンスの代わりにヒトＨ鎖およびＬ鎖定常ドメインコード配列を用いることにより、モリソンＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４年）、あるいは非免疫グロブリンポリペプチドにおけるコード配列の全てまたは一部である免疫グロブリンコード配列と共有結合することによりＤＮＡを改質してもよい。このように、本明細書の抗ＮＧＦモノクローナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」あるいは「ハイブリッド」抗体が調製される。
【００９５】
当業者において公知の方法を使用して、抗ＮＧＦ抗体を評価してもよい。例えば、１つの方法は、それが結合するエピトープを同定すること、すなわち「エピトープマッピング」である。例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ニューヨークＮｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９９年の第１１章に記載されているように、抗体抗原複合体の結晶構造の解明、競合分析、遺伝子フラグメント発現分析、および合成ペプチドに基づいた分析などを含むタンパク質上のエピトープの位置をマッピングし評価するための当業者において公知の多くの方法がある。補足例において、エピトープマッピングを使用し、抗ＮＧＦ抗体が結合するシーケンスを決定することができる。エピトープマッピングは、例えば、ペプスキャンＰｅｐｓｅａｎシステム社（Ｅｄｅｌｈｅｒｔｗｅｇ  １５、８２１９  ＰＨ  Ｌｅｌｙｓｔａｄ、オランダ）など様々な供給業者より市販されている。エピトープはアミノ酸の単一ストレッチ内に含まれるいわゆる線状エピトープ、あるいは単一ストレッチ内に必ずしも含まれていないアミノ酸の三次元相互作用により形成された高次構造エピトープが可能である。可変長のペプチド（例えば、少なくとも４〜６アミノ酸長）を単離または合成する（例えば、組み換えにより）ことができ、抗ＮＧＦ抗体による結合分析に使用することができる。別の実施例において、ＮＧＦシーケンスに由来した重複ペプチドを使用すること、および抗ＮＧＦ抗体により結合を判定することにより、抗ＮＧＦ抗体が結合するエピトープを系統的スクリーニングにて決定することができる。遺伝子フラグメント発現分析によると、ＮＧＦを符号化するこの読取枠は、無作為あるいは特定の遺伝的構成にいずれかにより断片化され、さらに試験されるべき抗体によるＮＧＦの発現フラグメントの反応性により判定される。遺伝子フラグメントは、例えば、放射性アミノ酸の存在下で、ＰＣＲにより産生され、続いてインビトロで転写され、タンパク質に翻訳される。さらに、放射性ラベル化ＮＧＦフラグメントへの抗体の結合が、免疫沈降法とゲル電気泳動法により決定される。ファージ粒子（ファージライブラリ）の表面に表示されたランダムなペプチドシーケンスの大きなライブラリの使用により、特定のエピトープも同定することができる。あるいは、重複ペプチドフラグメントにより、単純な結合分析において試験抗体へ結合することを検査することができる。補足例において、抗原結合領域の変異原性、ドメインスワッピング試験、およびアラニン走査変異原性試験を行い、エピトープ結合に必要とされ、十分な、および／または必須の残基を同定することができる。例えば、ドメインスワッピング試験は、ＮＧＦポリペプチドの種々のフラグメントが密接に関連しているが、抗原的には別個のタンパク質由来（ニューロトロフィンタンパク質ファミリーの別のメンバーなど）のシーケンスと置換され（スワップされ）ている変異体ＮＧＦを使用して行なうことができる。変異体ＮＧＦへの抗体結合の評価により、抗体結合に対する特定のＮＧＦフラグメントの重要性を評価することができる。
【００９６】
抗ＮＧＦ抗体を評価するために使用することができるさらに別の方法は、同じ抗原に結合することが知られている他の抗体、すなわちＮＧＦ上の種々のフラグメントとの競合分析を使用し、抗ＮＧＦ抗体が他の抗体と同じエピトープに結合するか否かを判定することである。競合分析は当業者において公知である。本発明において競合分析に使用することができる抗体例は、Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１９：２１５−２２７（２０００年）に記載されるように、ＭＡｂ９１１、９１２，および９３８などである。
【００９７】
（他のＮＧＦアンタゴニスト）
抗ＮＧＦ抗体以外のＮＧＦアンタゴニストを使用してもよい。本発明のいくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、官能性ＮＧＦの発現をブロッキングまたは減少させることが可能な少なくとも１つのアンチセンス分子を含む。ＮＧＦのヌクレオチド配列は公知であり、公的に利用できるデータベースから容易に入手可能である。例えば、Ｂｏｒｓａｎｉら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９９０年，１８，４０２０、登録番号ＮＭ００２５０６、Ｕｌｉｒｉｃｈら、Ｎａｔｕｒｅ  ３０３：８２１−８２５（１９８３年）参照。他のポリヌクレオチドと交差反応せずに特異的にＮＧＦｍＲＮＡと結合すると予想されるアンチセンスオリゴヌクレオチド分子を調製することが一般的である。ターゲティングの代表的な部位は、開始コドン、５’制御領域、コード配列、および３’未翻訳領域などがあるがこれに限定されない。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、長さ約１０〜１００ヌクレオチド、長さ１５〜５０ヌクレオチド、長さ約１８〜２５ヌクレオチドあるいはそれ以上である。例えば当業者において公知のホスホロチオネート結合および２’−Ｏ糖改質などのバックボーン改質を含むことができる。代表的なアンチセンス分子は、米国特許出願公開第２００１００４６９５９号明細書に記載されたＮＧＦアンチセンス分子などがある。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｎａ−ｔｅｃ．ｃｏｍ／ｒｅｐａｉｒ．ｈｔｍも参照。
【００９８】
他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは、官能性ＮＧＦレセプター（ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５など）の発現をブロックまたは減少させることのできる少なくとも１つのアンチセンス分子を有する。Ｗｏｏｌｆら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅ（２００１年）２１（３）：１０４７−５５、Ｔａｇｌｉａｌｅｔｅｌａら、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ（１９９６年）６６（５）：１８２６−３５。ＴｒｋＡおよびｐ７５のヌクレオチド配列は公知であり、公的に利用可能なデータベースから容易に入手できる。
【００９９】
あるいは、ＮＧＦ発現および／または遊離は、当業者において公知の遺伝子ノックダウン、モルホリノオリゴヌクレオチド、ＲＮＡｉ、あるいはリボザイム法を使用して減少させることができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｃａｌｅｓｔｅｒ．ｅｄｕ／〜ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ／ＲＮＡｉ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｐｕｂ３２．ｅｚｂｏａｒｄ．ｃｏｍ／ｆｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｓｆｒｍ１  ９．ｓｈｏｗＭｅｓｓａｇｅ？ｔｏｐｉｃＩＤ＝６．ｔｏｐｉｃ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｉｇｈｖｅｌｄ．ｃｏｍ／ｒｉｂｏｚｙｍｅ．ｈｔｍｌを参照。
【０１００】
他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、少なくとも１つのＮＧＦ阻害化合物を有する。本明細書で使用される、「ＮＧＦ阻害化合物」は、ＮＧＦ生物活性を直接的にあるいは間接的に、減少させるか、抑制するか、中和するか、無効にする抗ＮＧＦ抗体以外の化合物のことを指す。ＮＧＦ阻害化合物は、以下の特性のうちの１つ以上を呈する必要がある。すなわち、（ａ）ＮＧＦへの結合すること、（ｂ）ＮＧＦ生物活性および／またはＮＧＦ情報伝達機能により媒介された下流経路を阻害すること、（ｃ）特にオピオイド鎮痛薬と併用して、疼痛の任意の態様を処置するかまたは予防すること、（ｄ）（ｔｒｋＡレセプター二量体化および／または自己リン酸化を含む）ＮＧＦレセプター活性をブロックあるいは減少させること、（ｅ）ＮＧＦクリアランスを増加させること、（ｆ）ＮＧＦ合成、産生、あるいは遊離を阻害する（（減少させる）こと、（ｇ）疼痛のオピオイド処置を増強すること。代表的なＮＧＦ阻害化合物は、米国特許出願公開第２００１００４６９５９号明細書に記載された低分子ＮＧＦ阻害薬、ＰＣＴ特許出願国際公開第００／６９８２９号パンフレットに記載のＮＧＦのｐ７５への結合を阻害する化合物、ＰＣＴ特許出願国際公開第９８／１７２７８号パンフレットに記載のＮＧＦのＴｒｋＡ／ｐ７５への結合を阻害する化合物などが含まれる。ＮＧＦ阻害化合物の追加例としては、ＰＣＴ特許出願公開第０２／１７９１４号パンフレット、国際公開第０２／２０４７９号パンフレット、米国特許第５，３４２，９４２号明細書、第６，１２７，４０１号明細書、および第６，３５９，１３０号明細書に記載された化合物などがある。さらに代表的なＮＧＦ阻害化合物は、ＮＧＦの拮抗阻害薬である化合物であり、米国特許第６，２９１，２４７号明細書を参照。更に、当業者はその他の低分子ＮＧＦ阻害化合物を調製することができる。
【０１０１】
いくつかの実施形態において、ＮＧＦ阻害化合物はＮＧＦと結合する。ターゲティング（結合）の代表的な部位は、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターに結合するＮＧＦ部分、およびレセプターを結合する領域に隣接する、およびレセプター結合部分の適切な三次元形状と部分的に関連する複数のＮＧＦ部分など含むが、これに限定されない。別の実施形態では、ＮＧＦ阻害化合物はＮＧＦレセプター（ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５などの）と結合し、ＮＧＦ生物活性を阻害する。ターゲティングの代表的な部位は、ＮＧＦに結合するＴｒｋＡおよび／またはｐ７５部分を含む。
【０１０２】
低分子を有する実施形態では、低分子は、１００〜２０，０００ダルトン、５００〜１５，０００ダルトン、または１０００〜１０，０００ダルトンのうちの任意のおよその分子量を有することができる。低分子のライブラリは市販されている。低分子は、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、皮下に、くも膜下腔内に、脳室内に、経口的に、経腸的に、非経口的に、鼻腔内に、あるいは経皮的に投与する方法を含む当業者において公知の任意の手段を使用して投与することができる。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストが低分子である場合は、１〜３回またはそれ以上の投与量に分割された患者の体重当たり０．１〜３００ｍｇ／ｋｇの割合で投与される。標準体重の成人患者の場合、１回の投与量当たり１ｍｇ〜５ｇの範囲の投与量を投与することができる。
【０１０３】
他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは少なくとも１つのＮＧＦ構造類似体を有する。本発明における「ＮＧＦ構造類似体」は、ＮＧＦの一部として同様な３次元構造を有し、インビトロあるいはインビボの生理学的条件下でＮＧＦレセプターへ結合する化合物を指す。一実施形態において、ＮＧＦ構造類似体はＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターに結合する。代表的なＮＧＦ構造類似体は、ＰＣＴ特許出願公開第９７／１５５９３号パンフレットに記載の２環式ペプチド、米国特許第６，２９１，２４７号明細書番に記載された２環式ペプチド、米国特許第６，０１７，８７８号明細書に記載された環状化合物、およびＰＣＴ特許出願公開第８９／０９２２５号パンフレットに記載されたＮＧＦ由来のペプチドなどがあるが、これに限定されない。適切なＮＧＦ構造類似体は、例えばＰＣＴ特許出願公開第９８／０６０４８号パンフレットに記載された方法により、ＮＧＦレセプター結合の分子モデリングによりデザインし合成することもできる。ＮＧＦ構造類似体は、改善された親和性および生物学的作用を得るためにｍ同じまたは別の構造の任意の所望の組み合わせのモノマーあるいは二量体／オリゴマーが可能である。
【０１０４】
他の実施形態において、本発明は、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプターの少なくとも１つのドミナントネガティブ変異体を有するＮＧＦアンタゴニストを提供する。当業者は、例えば、レセプターがＮＧＦと結合し、このためＮＧＦを捕捉する「シンク」として作用するようなＴｒｋＡレセプタードミナントネガティブ変異体を調製することができる。しかしながら、ドミナントネガティブな変異体は、ＮＧＦに結合することでレセプター（ＴｒｋＡレセプターなどの）の正常な生理活性を保有しないと予想される。代表的なドミナントネガティブな変異体は、以下の参考文献に記載された変異体などがあるが、これに限定されない。すなわち、各々はその内容全体を参照によって本明細書に引用されている、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９８年、９５、１０８８４、Ｅｉｄｅら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１９９６年、１６、３１２３、Ｌｉｕら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  １９９７年、１７、８７４９、Ｃｌｉｎら、Ｃｅｌｌ  １９９０年、６１、６４７、Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａら、Ｎｅｕｒｏｎ  １９９３年、１０，９６３、Ｔｓｏｕｌｆａｓら、Ｎｅｕｒｏｎ  １９９３年、１０、９７５、およびＬａｍｂａｌｌｅら、ＥＭＢＯＪ  １９９３年、１２、３０８３である。ドミナントネガティブ変異体は、タンパク質形状で、あるいはインビボでドミナントネガティブ変異体（例えば、変異体ＴｒｋＡレセプター）を発現するような発現ベクターの形態で投与することができる。タンパク質または発現ベクターは、腹腔内に、静脈内に、筋肉内に、皮下に、くも膜下腔内に、脳室内に、経口的に、経腸的に、非経口的に、鼻腔内に、経皮的に、あるいは吸入により投与する方法などの当業者において公知の任意の手段を使用して投与することができる。例えば、発現ベクターの投与では、注射、経口投与、粒子銃、あるいはカテーテル投与、および局所投与をはじめとする局所または全身投与を含む。当業者は、インビボで外因性のタンパク質の発現を得るための発現ベクターの投与に精通している。例えば、米国特許第６，４３６，９０８号明細書、第６，４１３，９４２号明細書、第６，３７６，４７１号明細書を参照。
【０１０５】
アンチセンスポリヌクレオチド、発現ベクター、あるいはサブゲノムポリヌクレオチドを含む処置組成物の標的化伝達も使用することができる。レセプター媒介ＤＮＡ伝達技術は、例えば、Ｆｉｎｄｅｉｓら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９３年）１１：２０２、Ｃｈｉｏｕら、Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  Ｏｆ  Ｄｉｒｅｃｔ  Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ、（Ｊ．Ａ．Ｗｏｌｆｆ編）（１９９４年）、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９８８年）２６３：６２１、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９４年）２６９：５４２、Ｚｅｎｋｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９０年）８７：３６５５、Ｗｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９１年）２６６：３３８で述べられている。遺伝子処置プロトコルにおいて、ポリヌクレオチドを含む処置組成物は、局所投与では約１００ｎｇ〜約２００ｍｇ（あるいはそれ以上）のＤＮＡ範囲で投与される。いくつかの実施形態において、遺伝子処置プロトコルにおいて、ＤＮＡの約５００ｎｇ未満、約５００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μｇ〜約１００μｇ、またはそれ以上の濃縮範囲も使用することができる。本発明の処置ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは、遺伝子伝達媒体を使用して伝達することができる。遺伝子伝達媒体は、ウイルス性または非ウイルス性起源が可能である。（一般に、Ｊｏｌｌｙ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、（１９９４年）１：５１、Ｋｉｍｕｒａ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９４年）５：８４５、Ｃｏｎｎｅｌｌｙ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ（１９９５）１：１８５、およびＫａｐｌｉｔｔ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（１９９４）６：１４８を参照）。そのようなコード配列の発現は、内在性哺乳類あるいは異種性プロモータおよび／またはエンハンサーを使用して誘発することができる。コード配列の発現は、構成的または制御的のいずれかが可能である。
【０１０６】
所望のポリヌクレオチドの伝達、および所望の細胞の発現のためのウイルスをベースとするベクターは、当業者において公知である。代表的なウイルスをベースとした媒体は、組換え型レトロウイルス（例えば、ＰＣＴ特許出願公開第９０／０７９３６号パンフレット、国際公開第９４／０３６２２号パンフレット、国際公開第９３／２５６９８号パンフレット、国際公開第９３／２５２３４号パンフレット、国際公開第９３／１１２３０号パンフレット、国際公開第９３／１０２１８号パンフレット、国際公開第９１／０２８０５号パンフレット、米国特許第５，２１９，７４０号明細書、第４，７７７，１２７号明細書、英国特許出願第２，２００，６５１号明細書、欧州特許出願公開第０３４５２４２号明細書参照）、アルファウイルスベースのベクター（例えば、シンドビスウイルスベクター、セムリキ森林熱ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリバーウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６）およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＡＴＣＣ  ＶＲ−９２３、ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０、ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９、ＡＴＣＣ  ＶＲ−５３２）、およびアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＰＣＴ特許出願公開第９４／１２６４９号パンフレット、国際公開第９３／０３７６９号パンフレット、国際公開第９３／１９１９１号パンフレット、国際公開第９４／２８９３８号パンフレット、国際公開第９５／１１９８４号パンフレット、および国際公開第９５／００６５５号パンフレット参照）などがあるが、これに限定されない。Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７で述べたように、不活化アデノウイルスに結合したＤＮＡの投与も使用することができる。
【０１０７】
非ウイルス性伝達手段および方法も使用することができ、これには、単独の不活化アデノウイルスに結合または非結合のポリカチオン性濃縮ＤＮＡ（例えば、Ｃｕｒｉｅｌ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．（１９９２）３：１４７参照）、配位子結合ＤＮＡ（例えばＷｕ、Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．（１９８９）２６４：１６９８５参照）、真核細胞伝達媒体細胞（例えば米国特許第５，８１４，４８２号明細書、ＰＣＴ特許出願国際公開第９５／０７９９４号パンフレット、国際公開第９６／１７０７２号パンフレット、国際公開第９５／３０７６３号パンフレット、および国際公開第９７／４２３３８号パンフレット参照）、細胞膜との核酸電荷の中和または融合などがあるが、これに限定されない。裸のＤＮＡも使用することができる。代表的な裸のＤＮＡ導入方法は、ＰＣＴ特許出願公開第９０／１１０９２号パンフレット、および米国特許第５，５８０，８５９号明細書に記載されている。遺伝子送達媒体として作用することができるリボソームが、米国特許第５，４２２，１２０号明細書、ＰＣＴ特許出願公開第９５／１３７９６号パンフレット、国際公開第９４／２３６９７号パンフレット；  国際公開第９１／１４４４５号パンフレット、および欧州特許出願公開第０  ５２４  ９６８号明細書に記載されている。さらなるアプローチがＰｈｉｌｉｐ、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．（１９９４年）１４：２４１１、およびＷｏｆｆｅｎｄｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（１９９４年）９１：１５８１に記載されている。
【０１０８】
さらに、発現ベクターを使用し、本明細書に記載されたタンパク質ベースのＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体、ＴｒｋＡ免疫付着因子など）のうちの任意の発現をの指図することができることも明白である。例えば、ＮＧＦおよび／またはＮＧＦ生物活性をブロッくする（部分的から完全なブロッキングまで）ことができる他のＴｒｋＡレセプターフラグメントは、当業者において公知である。
【０１０９】
別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは少なくとも１つのＴｒｋＡ免疫付着因子を含む。本明細書に使用されるＴｒｋＡ免疫付着因子は、ＴｒｋＡレセプターの結合特異性を保持し（いくつかの実施形態において、本質的に結合特異性を保持する）、ＮＧＦに結合することができるＴｒｋＡレセプター（あるいはその一部）および免疫グロブリンシーケンスの細胞外ドメインを有する可溶性キメラ分子を指す。本明細書で述べたように、ｔｒｋＡ免疫付着因子は、ＮＧＦ生物活性をブロック（減少および／または抑制）することができる。
【０１１０】
ＴｒｋＡ免疫付着因子は当業者において公知であり、ＴｒｋＡレセプターへのＮＧＦの結合をブロック（減少または抑制）することが分かった。例えば、米国特許第６，１５３，１８９号明細書参照。一実施形態において、ＴｒｋＡ免疫付着因子は、ＮＧＦと結合可能なＴｒｋＡレセプターアミノ酸配列（あるいはｔｒｋＡレセプターの結合特異性を本質的に保持するアミノ酸配列）、および免疫グロブリンシーケンス（あるいはＴｒｋＡレセプターの結合特異性を本質的に保持するアミノ酸）の融合を含む。いくつかの実施形態において、ＴｒｋＡレセプターはヒトＴｒｋＡレセプターシーケンスであり、またこの融合は免疫グロブリン定常ドメインシーケンスを有する。他の実施形態では、免疫グロブリン定常ドメインシーケンスは、免疫グロブリンＨ鎖定常ドメインシーケンスである。他の実施形態において、（例えば、ジスルフィド結合（複数）による共有結合を介した）２つのＴｒｋＡレセプター−免疫グロブリンＨ鎖融合体の会合により、ホモ二量体性免疫グロブリン様構造を生じる。免疫グロブリンＬ鎖は、ジスルフィド結合化二量体中のＴｒｋＡレセプター免疫グロブリンキメラの１つまたは両方とさらに会合し、ホモ三量体またはホモ四量体構造を生成することができる。好ましいＴｒｋＡ免疫付着因子の実例は、米国特許第６，１５３，１８９号明細書において記載されたものが含まれる。
【０１１１】
別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡレセプターおよび／または下流の情報伝達とのＮＧＦの物理的相互作用をブロックし、抑制し、変化させ、および／または減少させることのできる少なくとも１つの抗−ＴｒｋＡ抗体を含み、これによりＮＧＦ生物活性が減少および／またはブロックされる。抗−ＴｒｋＡ抗体は当業者において公知である。代表的な抗−ＴｒｋＡ抗体は、ＰＣＴ特許出願国際公開第９７／２１７３２号パンフレット、国際公開第００／７３３４４号パンフレット、国際公開第０２／１５９２４号パンフレット、および米国特許出願公開第２００１００４６９５９号明細書に記載されたものが含まれる。別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ｐ７５レセプターおよび／または下流情報伝達とのＮＧＦの物理的相互作用をブロックし、抑制し、および／または減少させることのできる少なくとも１つ抗−ｐ７５抗体を含み、これによりＮＧＦ生物活性が減少および／またブロックされる。
【０１１２】
別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、ＴｒｋＡおよび／またはｐ７５レセプター活性に関連した下流のリン酸化酵素情報伝達を抑制することができる少なくとも１つのリン酸化酵素阻害薬を含む。代表的なリン酸化酵素阻害薬は、Ｋ２５２ａまたはＫ２５２ｂであり、これらは当業者において公知であり、Ｋｎｕｓｅｌら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ、５９：７１５−７２２（１９９２年）、Ｋｎｕｓｅｌら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、５７：９５５−９６２（１９９１年）、Ｋｏｉｚｕｍｉら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、８：７１５−７２１（１９８８年）、Ｈｉｒａｔａら、Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ１１１：７２８、ＸＰ００２０４１３５、アブストラクトおよび１２巻Ｃｏｌｌｅｃｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ  Ｉｎｄｅｘ、ｐ３４２３７、ｃ．３（５−７）、５５−６０、６６−６９、ｐ．３４２３８、ｃ．１（４１−４４）、ｃ．２（２５−２７と３２−３３）、ｐ．３４２３、ｃ．３（４８−５０と５２−５３）参照、米国特許第６，３０６，８４９号明細書に記載されている。
【０１１３】
臨床医によって探究さると、多数の他のカテゴリーのＮＧＦアンタゴニストが同定されると期待される。
【０１１４】
（ＮＧＦアンタゴニストの同定）
抗ＮＧＦ抗体および他のＮＧＦアンタゴニストは、当業者において公知の方法を使用して、同定しまたは評価することができ、これによりＮＧＦ生物活性の減少、改善、あるいは中和が検出、および／または測定される。例えば、米国特許第５，７６６，８６３号明細書および第５，８９１，６５０号明細書に記載されたリン酸化酵素レセプター活性化（ＫＩＲＡ）分析を使用して、ＮＧＦアンタゴニストを同定することができる。このＥＬＩＳＡ型分析は、レセプターたんぱくチロシンキナーゼ（以後「ｒＰＴＫ」）例えば、ＴｒｋＡレセプターのリン酸化酵素ドメインの自己リン酸化の測定により、リン酸化酵素活性化の定性的あるいは定量的測定、ならびに選択されたｒＰＴＫ、例えばＴｒｋＡの潜在的アンタゴニストの同定および評価に適している。この分析の第１ステージは、リン酸化酵素レセプター、例えばＴｒｋＡレセプターのリン酸化酵素ドメインのリン酸化を含み、このレセプターは、真核細胞の細胞膜の中に存在する。レセプターは内因性レセプターあるいはレセプターを符号化する核酸、すなわち細胞内で形質転換されるレセプター構成物でもよい。一般に、第１の固相（例えば、最初の分プレートのウェル）は、細胞が固相に付着するような請求（通常、哺乳動物細胞ライン）の本質的に均質な集団で被覆される。多くの場合、この細胞は粘着性で、このため自然に第１の固相に接着する。「レセプター構成物」が使用される場合、これは、通常リン酸化酵素レセプターおよびフラグポリペプチドの融合を含む。分析のＥＬＩＳＡ部分において、フラグポリペプチドは、捕捉薬、時に捕捉抗体により認識される。続いて、抗ＮＧＦ抗体候補、あるいは他のＮＧＦアンタゴニストなどの分析物は、チロシンキナーゼレセプター（例えば、ＴｒｋＡレセプター）が、ＮＧＦおよび分析物に曝露される（あるいは接触する）ように、接着細胞を含むウェルにＮＧＦと一緒に加えられる。この分析により、その配位子ＮＧＦによるＴｒｋＡの活性化を阻害する抗体（あるいは他のＮＧＦアンタゴニスト）の同定が可能となる。ＮＧＦおよび分析物への接触に続いて、（可溶化する洗浄剤を有する）溶解緩衝液および穏やかな攪拌を使用してこの接着細胞が可溶化され、これにより細胞溶解物の濃縮または分類の必要なしに、分析のＥＬＩＳＡパートに直接供することができる細胞溶解物が遊離される。
【０１１５】
このように調製された細胞溶解物は、次に分析のＥＬＩＳＡステージに供する準備ができている。ＥＬＩＳＡステージの第一段階として、第２の固相（通常ＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートのウェル）は、チロシンキナーゼレセプター、あるいはレセプター構成物の場合には、フラグポリペプチドに特異的に結合する捕捉薬（しばしば捕捉抗体）で被覆される。捕捉薬が第２の固相に付着するように、第２の固相の被覆が行われる。捕捉薬は一般にモノクローナル抗体であるが、本明細書の実施例において記述されるように、ポリクローナル抗体も使用される。続いて、レセプターまたはレセプター構成物が第２の固相に接着する（あるいは捕捉される）ように、得られた細胞溶解物を接着している捕捉薬に曝露するかまたは接触させる。次に、捕捉されたレセプターまたはレセプター構成物を残して、未結合の細胞溶解物を除去するように洗浄ステップを実施する。その後、接着または捕捉されたレセプターあるいはレセプター構成物は、チロシンキナーゼレセプター中のリン酸化チロシン残基を同定する抗ホスホチロシン抗体に曝露または接触される。一実施形態において、抗ホスホチロシン抗体は、非放射性発色試薬の色変化を触媒する酵素に（直接または間接的に）接合される。従って、このレセプターのリン酸化は、その後の試薬の色変化により測定することができる。この酵素は、抗ホスホチロシン抗体に直接結合させることができ、あるいは、接合分子（例えばビオチン）は、抗ホスホチロシン抗体に接合させることができ、続いて酵素を抗ホスホチロシン抗体に接合分子を介して結合させることができる。最終的に、捕捉されたレセプターあるいはレセプター構成物の抗ホスホチロシン抗体の結合は、例えば、発色試薬の色変化によって測定される。
【０１１６】
ＮＧＦアンタゴニストも、ＮＧＦとともに候補薬剤をインキュベートし、任意の１つ以上の以下に示す特性をモニターすることにより同定することができる。すなわち、（ａ）ＮＧＦに結合する特性、（ｂ）ＮＧＦ情報伝達機能により媒介されるＮＧＦ生物活性あるいは下流経路を阻害する特性、（ｃ）（ＴｒｋＡ二量体化および／または自己リン酸化を含む）ＮＧＦレセプター活性化をブロックあるいは減少する特性、（ｄ）ＮＧＦのクリアランスを増加させる特性、（ｅ）疼痛（オピオイド鎮痛薬と併用して特に）の任意の態様を処置し、緩和し、または予防する特性、（ｆ）ＮＧＦ合成、産生、あるいは遊離を阻害（減少）させる特性、（ｇ）疼痛のオピオイド処置を増強する特性である。いくつかの実施形態では、ＮＧＦのアンタゴニストは、ＮＧＦとともに候補薬剤をインキュベートし、結合および付随する減少、あるいはＮＧＦの生物活性の中和をモニタリングすることにより同定される。結合分析は、（複数の）精製ＮＧＦポリペプチドで、あるいは細胞の自然発現により、または（複数の）ＮＧＦポリペプチドを発現するために形質移入させることにより行ってもよい。一実施形態において、結合分析は競合結合測定法であり、この方法では、ＮＧＦ結合のための既知のＮＧＦアンタゴニストと競合する候補抗体の能力が評価される。分析はＥＬＩＳＡフォーマットを含む多様なフォーマットで行なわれる。他の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、候補薬剤をＮＧＦとインキュベートし、ＴｒｋＡレセプター二量体化および／または自己リン酸化の付随する阻害をモニタリングすることにより同定される。
【０１１７】
最初の同定に続き、候補抗ＮＧＦアンタゴニスト活性は、標的とする生物活性を試験するために知られた生物検定によってさらに確認し精製することができる。あるいは、生物検定を使用し、候補薬を直接スクリーンニングすることができる。例えば、ＮＧＦは、応答細胞における多くの形態学的に認識しうる変化を促進する。これらには、ＰＣ１２細胞の分化を促進し、さらにこれらの細胞からの神経突起の成長を増強すること（Ｕｒｆｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、３６：４７７５−４７８１（１９９７年）、Ｔｓｏｕｌｆａｓら、Ｎｅｕｒｏｎ、１０：９７５−９９０（１９９３年））、応答性知覚神経節および交感神経節の外植体からの神経突起成長を促進すること（Ｌｅｖｉ−Ｍｏｎｔａｌｃｉｎｉ、ＲおよびＡｎｇｅｌｅｔｔｉ、Ｐ．Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ、４８、５３４−５６９、１９６８年）、および胚性後根神経節、三叉神経節、あるいは交感神経節ニューロンなどのＮＧＦ依存性ニューロンの生存を促進すること（例えば、ＣｈｕｎおよびＰａｔｔｅｒｓｏｎ，Ｄｃｖ．Ｂｉｏｌ．７５：７０５−７１１（１９７７年）、ＢｕｃｈｍａｎおよびＤａｖｉｅｓ、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、１１８：９８９−１００１（１９９３年）などがあるがこれに限定されない。したがって、ＮＧＦ生物活性の阻害に関する分析では、ＮＧＦプラス抗ＮＧＦ抗体候補あるいはＮＧＦアンタゴニスト候補などの分析物とともにＮＧＦ応答性細胞を培養することが必要である。適切な時間の後、細胞応答が分析される（細胞分化、神経突起成長、あるいは細胞生存）。
【０１１８】
Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１９：２１５−２２７（２０００年）に記述されるように、胚性ラット後根神経節生存率生物検定において、ＮＧＦを媒介する生存を阻害する能力モニターすることにより、ＮＧＦアンタゴニスト候補のＮＧＦの生物活性をブロックまたは中和する能力も評価することができる。
【０１１９】
（組成物）
本明細書の様々な実施形態において記載されたように、本発明の組成物は、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体などの）および／またはオピオイド鎮痛薬の有効量を含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、薬剤的に認容される賦形剤をさらに含む。いくつかの実施形態において、この組成物は、（術後疼痛を処置する方法などの）本明細書に記載された方法のうちの任意の使用を目的とする。このような組成物の実施例、ならびに配合方法も従前の章および後続の章に記載される。ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイドは、単一の組成物中に存在してもよく、または別個の組成物として存在してもよい。従って、いくつかの実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は同じ組成物中に存在する。他の実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は別個の組成物に存在する。
【０１２０】
別の態様において、本発明は、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の相乗効果組成物を提供する。
【０１２１】
いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛（術後疼痛などの）の処置で使用されるＮＧＦアンタゴニストを有する薬学的組成物を提供し、この使用ではオピオイド鎮痛薬の同時および／または連続的投与を備える。いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛の処置で使用されるオピオイド鎮痛薬を有する薬学的組成物を提供し、この使用ではＮＧＦアンタゴニストの同時および／または連続的投与を備える。いくつかの実施形態において、本発明は、疼痛の処置のための別個に、同時に、および／または連続的使用のためのＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を有する薬学的組成物を提供する。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは、抗ＮＧＦ抗体（本明細書で述べた抗体Ｅ３など）である。他の実施形態では、オピオイド鎮痛薬はモルヒネである。さらに別の実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体でり、オピオイド鎮痛薬はモルヒネである。
【０１２２】
組成物は１つを越えるＮＧＦアンタゴニストを有することができることが分かる。例えば、組成物は、異なるクラスのＮＧＦアンタゴニスト（例えば、抗ＮＧＦ抗体およびＮＧＦ阻害化合物）のメンバーと同様に、ＮＧＦアンタゴニストのクラスの１つを越えるメンバー（例えば、ＮＧＦの異なるエピトープを認識する抗ＮＧＦ抗体の混合物）を含むことができる。その他の代表的な組成物は、同じエピトープを認識する１つを越える抗ＮＧＦ抗体、ＮＧＦの異なるエピトープに結合する抗ＮＧＦ抗体の異なる種、あるいは異なるＮＧＦ阻害化合物を有する。他の実施形態では、組成物は、ＮＧＦと結合する（物理的相互作用する）アンタゴニスト（例えば抗体）、ＮＧＦレセプター（ＴｒｋＡレセプターあるいはｐ７５レセプターなど）に結合するアンタゴニスト、および／または下流のＮＧＦレセプター情報伝達を減少（妨害および／またはブロック）するアンタゴニストから成る群から選択される１つ以上のＮＧＦアンタゴニストを有する。
【０１２３】
本発明において使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形で、薬学的に受容可能な担体、賦形剤、あるいは安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、（２０００年）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ、Ｗｉｌｌｉａｍｓ、およびＷｉｌｋｉｎｓ編、Ｋ．Ｅ．フーバー）をさらに含む。容認できる担体、賦形剤、あるいは安定剤は、その投与量および濃度で受容者に対して無毒であり、リン酸、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸およびメチオニンなどの抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラオキシ安息香酸エステル類などのアルキルパラオキシ安息香酸エステル類、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、またはデキストランなどのその他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート薬、ショ糖、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩を生ずる対イオン、金属錯体（例えば亜鉛−タンパク質錯体）、および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでもよい。薬学的に受容可能な賦形剤は、本明細書にさらに記載される。
【０１２４】
本明細書に記載された組成物は、疼痛の処置に有用な既知の添加化合物を含んでもよい。ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬、およびその組成物は、薬剤の有効性を増強および／または補間する役目を有する他の薬剤と併用して使用することもできる。
【０１２５】
（キット）
本発明は、簡易法において使用されるキットを提供する。本発明のキットは、ＮＧＦアンタゴニスト（本明細書に記載されたヒト化抗体Ｅ３などの抗ＮＧＦ抗体など）および／またはオピオイド鎮痛薬を含む１つ以上の容器を含み、またいくつかの実施形態において、本明細書に記載された方法のうちの任意の方法に従った使用説明書をさらに備える。いくつかの実施形態において、キットは抗ＮＧＦ抗体（本明細書に記載された抗体Ｅ３などの）を有する。他の実施形態では、キットは、抗体Ｅ３（いくつかの実施態様において、Ｅ３由来の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、あるいは全ての６つのＣＤＲなど）の１つ以上のＣＤＲを含む抗ＮＧＦ抗体を有する。このキットは、その個体が疼痛を有するかどうか、またはその個体が疼痛のリスクを有するかどうかを同定することに基づいた処置に適した個体の選択に関する記載をさらに備える。いくつかの実施形態において、本発明は本明細書に記載された方法のうちの任意の方法を使用するためのキットを提供し、このキットはＮＧＦアンタゴニストを有する。さらに別の実施形態において、キットは（本明細書に記載された抗体Ｅ３などの）ヒト化抗体を備える。さらに別の実施形態において、その説明書には、任意の疼痛（術後疼痛など）を処置し、予防し、および／または緩和するために、オピオイド鎮痛薬と併用してＮＧＦアンタゴニストを投与する説明書を含む。
【０１２６】
いくつかの実施形態において、このキットは、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）、オピオイド鎮痛薬、および疼痛の効果的な処置のために、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を同時におよび／または連続的に投与するための説明を有する。別の実施形態では、このキットは、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）、および疼痛の効果的な処置のために、ＮＧＦ抗体およびオピオイド鎮痛薬を同時におよび／または連続的に投与するための説明を有する。他の実施形態では、このキットは、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）およびオピオイド鎮痛薬（モルヒネなど）、および疼痛の効果的な処置のために、ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を別々に、同時に、および／または連続的に投与するための説明を有する。
【０１２７】
いくつかの実施形態において、このキットは抗ＮＧＦ抗体を含む。他の実施形態では、抗ＮＧＦ抗体は、表１に示される重鎖可変領域、および表２に示される軽鎖可変領域を有する抗体である。さらに別の実施形態において、本明細書で述べたように、抗ＮＧＦ抗体は抗体Ｅ３である。
【０１２８】
（抗ＮＧＦ抗体などの）ＮＧＦアンタゴニスト、およびオピオイド鎮痛薬は、個別の容器あるいは単一の容器に存在することができる。キットは、１つの別個の組成物、または２つ以上の組成物を含み、１つの組成物はＮＧＦアンタゴニストを有し、１つの組成物はオピオイド鎮痛薬を有することが分かる。
【０１２９】
本発明のキットは適切なパッケージングにある。適切なパッケージングは、バイアル、ビン、ジャー、軟包装（例えば、封着されたマイラーまたはプラスチック袋）、および類似物などを含むがこれに限定されない。キットは、緩衝液および解釈情報などの追加成分を任意に提供してもよい。
【０１３０】
ＮＧＦアンタゴニストの使用に関連する説明は、一般に処置を意図した場合の投与量、服薬スケジュール、および投与経路に関する情報が含まれる。容器は、単位投与量、バルクパッケージ（例えば、マルチ投与パッケージ）またはサブユニット投与量でもよい。本発明のキットで供給された説明は、一般にラベルまたは添付文書での書面による説明書（例えば、キットに含まれる紙シート）であるが、機械可読の説明（例えば、磁気ディスクあるいは光記憶装置ディスク上に記録された説明）も許容される。
【０１３１】
ラベルまたは添付文書は、組成物が術後疼痛を処置し、緩和し、および／または予防するために使用されることを示す。説明は本明細書に記載された方法のうちの任意の方法を実行するために提供してもよい。
【０１３２】
本発明のキットは適切なパッケージングにある。適切なパッケージングは、バイアル、ビン、ジャー、軟包装（例えば、封着されたマイラーまたはプラスチック袋）、およびその類似物などを含むがこれに限定されない。さらに、吸入器、鼻投与装置（例えば噴霧器）、またはミニポンプなどの輸液用器具などの特定の装置との組み合わせも考慮される。キットは無菌アクセスポートを有する（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパを有する静脈用注射液バッグあるいはバイアルでもよい）。容器は、無菌のアクセスポートさらに有する（例えば、容器は、皮下注射針により貫通可能なストッパを有する静脈用注射液バッグあるいはバイアルでもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、抗ＮＧＦ抗体などのＮＧＦアンタゴニストである。容器は第２の薬剤的に活性な薬剤をさらに備える。
【０１３３】
キットは、緩衝液および解釈情報などの追加成分を任意に提供する。通常はこのキットは、容器、およびこの容器上あるいはそれに付随するラベルまたは添付文書を備える。
【０１３４】
（ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の投与、および処置の評価）
ＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、任意の適切な経路を介して個体に投与することができる。例えば、それらは共にまたは別々に、経口的に、静脈内に、舌下に、皮下に、動脈内に、直腸に、筋肉内に、胸郭内に、脊髄内に、腹腔内に、脳室内に、舌下に、経皮的に、あるいは吸入により投与することができる。それらは、当業者により認知された手順により調製された錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、オブラート、チューインガム、ロリオポップスｌｏｌｌｉｏｐｏｐｓ、坐薬、またはその類似の形態で経口的に投与することができる。本明細書に記載された実施例は、制限のためではなく利用可能な技術の明示のためであることは当業者において明白であろう。
【０１３５】
したがっていくつかの実施形態では、抗ＮＧＦ抗体などのＮＧＦアンタゴニストは、静脈内投与、例えば、ボーラスとしてあるいは長時間にわたる持続注入による、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、腱骨液鞘内、くも膜下腔内、経口、吸入、または局所経路によるなどの既知の方法に従って個体に投与される。ジェット噴霧器および超音波噴霧器を含む液剤製剤用の市販の噴霧器が投与に有用である。液体製剤は直接噴霧され、凍結乾燥された粉末は再構成後に噴霧することができる。あるいは、ＮＧＦアンタゴニストは、フルオロカーボン製剤および計量式吸入器を使用してエアロゾル化し、あるいは凍結乾燥されミルにかけられた粉末として吸入させることができる。
【０１３６】
部位特異性、あるいは標的化局所伝達テクニックも投与に有用である。部位特異性または標的化局所伝達技術の実例は、ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬の多様な移植可能な貯蔵物源、あるいは注入カテーテル、留置カテーテル、または針カテーテルなどの局所伝達カテーテル、人工血管移植、外膜ラップ、バイパス形成、およびステント、あるいはその他の他の移植用デバイス、部位特異性担体、直接注入、患者管理鎮痛（ＰＣＡ）技術または装置、および／または直接塗布などがある。例えば、ＰＣＴ特許出願公開第００／５３２１１号パンフレット、および米国特許第５，９８１，５６８号明細書参照。
【０１３７】
抗ＮＧＦ抗体などのＮＧＦアンタゴニストの様々な製剤を投与に使用してもよい。いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストはそのまま投与される。いくつかの実施形態では、ＮＧＦアンタゴニストは抗ＮＧＦ抗体を含み、薬剤的に容認可能な賦形剤を含む配合物を有する多様な製剤でもよい。薬学的に受容可能な賦形剤は、当業者において公知であり、薬理学的有効物質の投与を促進する比較的不活性の物質である。例えば、賦形剤は、成型または硬さを与えるか、あるいは希釈剤として作用することができる。適切な賦形剤には、安定化剤、湿潤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変化させるための塩、封入薬、緩衝液、および皮膚浸透エンハンサーなどがあるがこれに限定されない。非経口的および非非経口的薬剤伝達のための賦形剤ならびに製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎら、調剤の科学と実際Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００年）に記載される。
【０１３８】
いくつかの実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストは注射による投与（例えば、腹腔内に、静脈内に、皮下に、筋肉内になど）のために処方される。したがってこれらの薬剤は、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖溶液、およびその類似物などの薬学的に受容可能な媒体と併用することができる。特定の投与計画、すなわち投与量、タイミング、および反復は、特定の個体およびその個体の病歴に依存すると予想される。投薬計画（使用されるＮＧＦアンタゴニストを含む）は、時間により変動する可能性がある。
【０１３９】
抗ＮＧＦ抗体は、注射（例えば腹腔内に、静脈内に、皮下に、筋肉内になど）によるなどの任意の適切な方法を使用して投与することができる。本明細書で述べたように、抗ＮＧＦ抗体は吸入により投与することもできる。一般に、抗ＮＧＦ抗体の投与の場合、最初の候補投与量は約２ｍｇ／ｋｇである。いくつかの実施形態において、代表的な１日投与量は、約３μｇ／ｋｇから３０μｇ／ｋｇまで、３００μｇ／ｋｇまで、３ｍｇ／ｋｇまで、３０ｍｇ／ｋｇまで、１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の任意の範囲であってもよい。数日以上にわたる連続投与の場合、条件に依存して、症状の所望の抑制が生じるまで、あるいは疼痛を軽減するために十分な処置のレベルが達成されるまで、その処置は継続される。代表的な投薬計画は、約２ｍｇ／ｋｇの初回量を投与し、その後、約１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体の週間維持量を投与するか、あるいは一週おきに約１ｍｇ／ｋｇの維持量を投与することを含む。しかしながら、開業医が達成したいと考える薬物動態学的減衰のパターンに依存して、他の投与計画も有用である。例えば、週１〜４回の投薬が考慮される。他の投薬計画は、一日に１回以内、週に週１〜４回、あるいはより少ない頻度の計画が含まれる。いくつかの実施形態において、この化合物は、およそ週１回、月約１〜４回投与される。抗ＮＧＦ抗体の投与量は本明細書に記載される。この処置の経過は、従来技術および分析により容易にモニターされる。
【０１４０】
いくつかの実施形態において、それが抗体でない場合、本発明によるＮＧＦアンタゴニストは、（いくつかの実施形態では）患者の体重の０．１〜３００ｍｇ／ｋｇの割合で１〜３回に分割し、または本明細書に開示されたように投与してもよい。標準体重の何名かの成人患者では、約０．３から５．００ｍｇ／ｋｇまでの範囲の投与量が投与される。特定の投与計画、すなわち、投与量、タイミング、反復は、特定個体およびその個体の病歴、あるいは個々の薬剤の特性（薬剤の半減期、および当業者において公知の他の配慮事項など）に依存すると予想される。
【０１４１】
オピオイド鎮痛薬は、このような鎮痛薬における従来の投与量レベルまでの投与量レベルで投与してもよい。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬は減少されたレベルで投与される。適切な投与量レベルは選択されたオピオイド鎮痛薬の鎮痛効果に依存するが、一般に、適切なレベルは１日当たり約０．００１〜２５ｍｇ／ｋｇ、１日当たり約０．００５〜１０ｍｇ／ｋｇ、あるいは１日当たり０．０５〜１ｍｇ／ｋｇ、またはそれ未満であると予想される。この化合物は、１日当たり６回まで（またはそれ以上）、１日当たり１〜４回の計画で投与してもよく、あるいはより間隔を開けて投与してもよい。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬は連続的に、あるいはきわめて頻繁に（例えばＰＣＡによる場合）投与される。
【０１４２】
単一または別個の（複数の）組成物のいずれかで併用して投与された場合、神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、所望の効果の発現と一致する比率で存在する。いくつかの実施形態において、オピオイド鎮痛薬に対する神経成長因子アンタゴニストの重量比率は、およそ１対１であると予想される。いくつかの実施形態において、この比率は約０．００１対約１および約１０００対約１の間、あるいは約０．０１対約１および約１００対約１の間でもよい。他の比率も考慮される。
【０１４３】
疼痛の処置または予防に使用するために必要な神経成長因子アンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬の量は、選択された特定の化合物あるいは組成物だけでなく、投与経路、処置されている条件の特性、および患者の年齢と状態、処置のコースまたはステージにより変動し、さらに最終的に担当医の自由裁量によるものと認識されるであろう。例えば、ＮＧＦアンタゴニスト（抗ＮＧＦ抗体など）の適切な投与量は、使用された（複数の）ＮＧＦアンタゴニスト（あるいはその組成物）、処置される疼痛の種類と重症度、薬剤が予防または処置目的で投与されるかどうか、以前の処置、患者の臨床歴および薬剤に対する反応、および主治医の自由裁量に依存すると予想される。一般に、臨床医は、所望の結果を達成する投与量に達するまで、抗ＮＧＦ抗体などのＮＧＦアンタゴニストを投与すると予想される。
【０１４４】
半減期などの経験的な配慮は、一般に投与量の決定に寄与すると予想される。例えば、ヒト化抗体あるいは完全ヒト化抗体などのヒトの免疫系と適合する抗体を使用し、抗体の半減期を延長し、さらにこの抗体が宿主の免疫系によって攻撃されることが防止される。一般に、必須ではないが、疼痛の処置および／または抑制および／または改善および／または遅延に基づいて、処置の間に投与の頻度を決定し、調整してもよい。あるいは、ＮＧＦアンタゴニストおよび／またはオピオイド鎮痛薬の持効性連続遊離（徐放）製剤が好ましい。徐放を達成するための多様な配合物および装置は当業者において公知である。
【０１４５】
一実施形態において、ＮＧＦアンタゴニストの投与量は、疼痛を処置するために１回以上のＮＧＦアンタゴニストの投与を受けた個体において経験的に決定してもよい。個体は、オピオイド鎮痛薬と併用してＮＧＦアンタゴニスト（例えば抗ＮＧＦ抗体）の投与量を徐々に増加して投与される。この処置の効果を評価するために、疼痛の指標に従うことができる。
【０１４６】
本発明中の方法に従ったＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬は、例えば、投与が処置目的か予防目的かにかかわらず、患者の生理的状態、および当該開業医で公知のその他の因子に依存して、連続的または間欠的な投与が可能である。ＮＧＦアンタゴニストの投与は、あらかじめ選ばれた期間の間、本質的に連続的でもよく、あるいは一連の一定間隔をあけた例えば、疼痛の発生前か、発生中、または発生後のいずれか、疼痛の発生前後、発生中とその後、発生前と発生中、発生中、および発生後に投与してもよい。例えば、創傷、切開、外傷、手術、および疼痛を生じさせる可能性のあるその他のイベント前、中、および／または後に投与することができる。
【０１４７】
いくつかの実施形態において、抗体などの１種を越えるＮＧＦアンタゴニストが提供される。このアンタゴニストは互いに同一または異なるものが可能である。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、あるいは少なくとも５種以上の異なるＮＧＦアンタゴニストが提供できる。一般に、これらのＮＧＦアンタゴニストは互いに逆効果を及ぼさずに相補的活性を有する。ＮＧＦアンタゴニストは、この薬剤の有効性を増強し、および／または補足する役目を有する他の薬剤と併用して使用することができる。
【０１４８】
いくつかの実施形態において、抗体などの１種を越えるオピオイド鎮痛薬が提供される。このオピオイド鎮痛薬は互いに同一または異なるものが可能である。少なくとも１種、少なくとも２種、少なくとも３種、少なくとも４種、あるいは少なくとも５種以上の異なるオピオイド鎮痛薬が提供できる。一般に、これらのオピオイド鎮痛薬は互いに逆効果を及ぼさずに相補的活性を有する。オピオイド鎮痛薬は、この薬剤の有効性を増強し、および／または補足する役目を有する他の薬剤と併用して使用することができる。
【０１４９】
本発明に従って使用されるＮＧＦアンタゴニスト（抗体など）およびオピオイド鎮痛薬の処置製剤は、所望の純度を有する抗体の任意の薬学的に受容可能な担体、賦形剤、あるいは安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、マーク出版（２０００年））との混合により、凍結乾燥製剤または水溶液の形で貯蔵用に調製される。容認できる担体、賦形剤あるいは安定剤は使用された投与量と濃度において受容者に対して無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝液、塩化ナトリウムなどの塩、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラオキシ安息香酸エステル類などのアルキルパラオキシ安息香酸エステル類、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、あるいは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、あるいはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、あるいはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート薬、ショ糖、マンニトール、トレハロース、あるいはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩を生ずる対イオン、金属錯体（例えば亜鉛タンパク質複合体）、および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）、あるいはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含んでもよい。
【０１５０】
ＮＧＦアンタゴニスト（抗体などの）を含むリボソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ８２：３６８８（１９８５年）、Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．，ＵＳＡ  ７７：４０３０（１９８０年）、および米国特許第４，４８５，０４５号明細書および第４，５４４，５４５号明細書などの当業者において公知の方法により調製される。循環時間の増強されたリボソームは、米国特許第５，０１３，５５６号明細書に開示されている。特に有用なリボソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成による逆相蒸発法によって産生することができる。リボソームは、規定された細孔径のフィルタにより押し出され、所望の直径を有するリボソームが得られる。
【０１５１】
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術、あるいは界面重合法により調製された、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース、あるいはゼラチンマイクロカプセルおよびポリメチルメタクリレートマイクロカプセルなどのマイクロカプセル内に、コロイド状薬物伝達システム内（例えば、リボソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル剤）に、あるいはマクロエマルジョン内に取り込まれる。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、マーク出版（２０００年）に開示されている。
【０１５２】
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の適切な例は、抗体を含む固体の疎水性ポリマーの半透性基質などがあり、この基質は、例えばフィルムまたはマイクロカプセルなどの造形品の形態を有する。徐放性行列の事例は、ポリエステル類、ヒドロゲル類（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、または「ポリ（Ｖニルアルコール））、ポリ乳酸（米国特許第３，７７３，９１９号明細書）、Ｌ−グルタミン酸および７−エチルＬ−グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（登録商標）（乳酸グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅからなる注射用微小球）などの分解性乳酸グリコール酸共重合体、ショ糖酢酸イソ酪酸塩、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸などがある。
【０１５３】
インビボでの投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、例えば濾過滅菌膜による濾過によって容易に達成される。例えば、処置用抗ＮＧＦ抗体組成物は、一般に無菌のアクセスポート、例えば静脈用注射液バッグ、あるいは皮下注射針により貫通可能なストッパを有するバイアルを有する容器に入れられる。
【０１５４】
本発明による組成物は、経口、非経口、あるいは直腸内投与、または吸入または通気法による投与のための錠剤、丸剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、溶液または懸濁液、あるいは坐薬などの単位剤形でもよい。
【０１５５】
錠剤などの固体組成物の調製の場合、主要な活性成分は医薬用担体、例えばコーンスターチ、ラクトース、ショ糖、ソルビトール、滑石、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸２カルシウム、ガム、および例えば水などのその他の医薬用希釈剤などの従来の錠剤化成分で混合され、本発明の化合物の均一な混合物を含む固体の予備処方組成物、あるいはこれらの無毒な薬学的に受容可能な塩が形成される。均質なものとしてこれらの予備処方組成物を参照する場合、組成物が錠剤、丸剤、およびカプセルなどの有効単位剤形内に容易に等しく細分されるように、活性成分が組成物の全体にわたって均等に分散されていることを意味する。続いて、この固体予備処方組成物は、本発明の活性成分の約０．０１ｍｇから約０．１ｍｇまで、約５００ｍｇまでを含む上述の種類の単位剤形へ細分される。新規な組成物の錠剤または丸剤は被覆し、あるいは調合し、持続性作用の利点を供与する剤形を提供することができる。例えば、錠剤あるいは丸剤は、後者は前者と比較して外皮形態である内部投与および外部投与成分を有することができる。この２つの成分は、胃内での崩壊に抵抗する役割を果たす腸溶層によって分離し、内部成分を十二指腸へ無損傷で通過させ、あるいは遊離を遅延させることができる。このような腸溶層あるいはコーティングには種々の材料を使用することができ、このような材料には、多数の高分子酸およびシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料による高分子酸の混合物などがある。
【０１５６】
本発明の組成物における液体様式は、水溶液、適切に風味づけされたシロップ剤、水性またはオイル懸濁液、綿実油、胡麻油、やし油、あるいは落花生油などの食用油を有する風味づけされた乳剤、ならびにエリキシル剤、および同様の賦形薬を含む経口的投与剤あるいは注射剤として処方してもよい。好ましい分散あるいは水性懸濁液用懸濁剤は、トラガカントゴム、アカシア、アルギン酸塩、デキストラン、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンあるいはゼラチンなどの合成および天然ゴム類などがある。活性成分も、ショ糖酢酸イソ酪酸塩またはその他のものなどの高度に粘稠性の徐放生成物中に処方されてもよい。これらの製剤は経口投与あるいは注射のいずれに使用してもよい。この注射剤は、１日から３カ月の間に局所的に遊離される薬剤の局所貯蔵物となることも可能である。
【０１５７】
注射による投与用組成物は、界面活性剤（すなわち湿潤剤または界面活性剤）、あるいは乳剤の形態（水中油型または油中水型乳剤として）と共に、活性成分としてＮＧＦアンタゴニストおよびオピオイド鎮痛薬を有する組成物を含む。
【０１５８】
好ましい界面活性剤は、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）２０、４０、６０、８０または８５）およびその他のソルビタン（例えばスパン（登録商標）２０、４０、６０、８０または８５）などの非イオン性薬剤などがある。界面活性薬剤との組成物は、０．０５〜５％、あるいは０．１〜２．５％の界面活性剤を含むことが好ましい。必要に応じて、その他の成分、例えばマンニトール、または他の薬学的に受容可能な媒体を添加してもよいことが分かる。
【０１５９】
好ましい乳剤は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（登録商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（登録商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（登録商標）およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（登録商標）などの市販の脂肪乳剤を使用して調製してもよい。この活性成分はあらかじめ混合された乳剤組成物の中に溶解されるか、あるいはオイル（例えばダイズ油、サフラワー油、綿実油、胡麻油、トウモロコシ油、または扁桃油）およびリン脂質（例えば卵リン脂質、大豆リン脂質、または大豆レシチン）および水に混合することで形成された乳剤中に溶解してもよい。他の成分、例えばギルセロールｇｙｌｃｅｒｏｌあるいはグルコースを添加し、乳剤の張度を調整してもよいことが分かる。乳剤は一般にオイル２０％まで、例えば５と２０％の間を含むことが好ましい。脂肪乳剤は、０．１〜１．０μｍの間、特に０．１〜０．５μｍの脂肪滴を有し、また５．５〜８．０の範囲のｐＨ値を有する。
【０１６０】
いくつかの実施形態において、エマルジョン組成物は、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（登録商標）あるいはそれらの成分（ダイズ油、卵リン脂質、グリセリンおよび水）により神経成長因子アンタゴニストを混合することにより調製された組成物である。
【０１６１】
吸入または通気用組成物は、薬剤的に容認可能な水性あるいは有機溶剤、またはこれらの混合物および粉末中の溶液および懸濁液を含む。液体または固体組成物は、上述のような適切な薬学的に受容可能な賦形剤を含む。この組成物は、局所または全身作用のため経口あるいは鼻の呼吸器経路により投与される。適切に無菌化された薬学的に受容可能な溶媒中の組成物を気体の使用によって噴霧してもよい。霧状となった溶液は噴霧器により直接吸入してもよく、あるいは噴霧器をフェイスマスク、栓塞杵、または間欠的陽圧呼吸機械に接続してもよい。溶液、懸濁液、あるいは粉末組成物は、適切な方法で製剤を伝達する装置から投与（経口的または経鼻的投与を含む）される。
【０１６２】
処置の有効性は、当業者において公知の方法により評価することができる。
【０１６３】
次の実施例は、例示のために提供されるが、本発明を制限するものではない。
【実施例】
【０１６４】
（実施例１  術後疼痛の処置のためのオピオイド鎮痛薬と併用した抗ＮＧＦモノクローナル抗体による処置）
発明者らは、術後疼痛を模倣した疼痛モデルを使用し、オピオイド鎮痛薬、すなわちモルヒネと併用した抗ＮＧＦ抗体の効力を評価した。それぞれの実験は、１６頭の動物（１群当たりｎ＝８）を含めた。
【０１６５】
動物。各実験において、体重２００−２２０ｇの間の１６匹の雄成体ＳＤラット（Ｈａｒｌａｎ、インディアナ州、インディアナポリス）を、使用に先立ち、適宜食物および水を与え少なくとも１週間通常の照明条件下で収容した。手術の前日に試験室内で２時間の順化させた後、ラットを１つは手術前に１５時間抗体を受ける群、もう１つはその時間に賦形剤（５％デキストロース／０．４５％ＵＳＰ生理食塩水）を受ける２つの群に分割した。抗ＮＧＦアンタゴニスト抗体Ｍａｂ９１１（Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１９：２１５−２２７（２０００年）を参照）を、腹腔内（ｉ．ｐ．）に０．３から２０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与した。硫酸モルヒネを皮下（ｓ．ｃ．）に０．１、０．３、１、および３ｍｇ／ｋｇの範囲の多様な濃度で手術２４時間後に全ての動物に投与した。２回をこえるモルヒネ投与を受けた動物はおらず、投与は少なくとも２時間間隔をあけ、２回目のとき常により高用量を投与した。例えば、代表的な実験では、動物の半分を手術の１５時間前に腹腔内（ｉ．ｐ．）に抗ＮＧＦ抗体を投与し、この動物の後足に手術を行い、回復するまで放置した。手術２２時間後、このラットについて「ベースライン」静止時疼痛の試験を行い、さらに２時間後に低用量のモルヒネ（通常０．３ｍｇ／ｋｇ）を投与した。モルヒネ投与の３０分後に、以前のように静止時疼痛を判定し、さらに最初のモルヒネ投与の２時間後に、より高用量を投与した（通常１．０ｍｇ／ｋｇ）。さらに３０分後、静止時疼痛を以下のように再び判定した。
【０１６６】
手術はＢｒｅｎｎａｎら、Ｐａｉｎ、６４：４９３−５０１（１９９６年）により記載された手順に基づいた。ノーズコーンを介して手術中は、動物に２％イソフルランおよび空気を混合した維持麻酔を行った。右後肢の足底面をポビドンヨードパッドで準備し、皮膚および筋膜を含み１ｃｍの中央の長軸方向の切開を踵の縁から０．５ｃｍより切開を開始し、つま先の方へ拡張して行った。測定は、曲がった位置に足を保持したルーラーにより行った。湾曲鉗子を使用して足底筋を上げ、長軸方向に切開した。筋肉は原点と挿入との間で十分な深さで切開された。ガーゼパッドに圧力を加えることより手術全体にわたって出血をコントロールした。創傷は２本のふとんとじ縫合糸で（５−０エチロンブラックモノフィラメント）閉鎖した。これらの縫合では、最初の結紮は緩く縛り５〜６回結紮された。創傷部位はバシトラシン溶液を塗布した。動物は回復させ、清潔なケージ中で行動性試験を開始する前に、少なくとも２時間休息させた。
【０１６７】
静止時疼痛の評価。累積疼痛スコアを使用し、体重負荷に関連した疼痛を評価した。動物を透明なプラスチックケージ中のプラスチックメッシュ（格子：８ｍｍ２）に置き、足の下面を検査できるようにプラットフォーム上で上昇させた（ｈ：１８”）。２０分の順化後、０〜２のスケールで体重負荷を評価した。足が白化した場合、またはメッシュに圧着した場合、スコア０が与えられ、全体重に耐えられることを示す。皮膚がメッシュに触れた直後、皮膚の白化または凹みがなく、足をかばう場合はスコア１が与えられた。足が完全にメッシュから離れた状態である場合は、スコア２が与えられた。ラットがまだ休息している場合に、足を引っ込める場合はスコア２と判断した。それぞれの動物は３０分間に５分ごとに１分間観察された。１／２時間の間に得られた６スコア（０−１２）の総和を使用し、切開された足の疼痛の評価を行った。スコア２の頻度も計算し、激痛の発生率を評価し、あるいは動物による足の警戒度を合計するために使用した。それぞれの動物は手術２４時間前（ベースライン）、手術後２時間および２４時間に試験を行った。体重負荷は、どの程度自発的に動物が肢を使用するかと良好な関連性を示し、したがって鎮痛の有効な尺度であった。
【０１６８】
図１、２、および３に示された実験に以下のプロトコルが使用された。動物は２つの群（対照群および抗体処置群）に分割された。マウス抗−ＮＵＦ抗体Ｍａｂ９１１（Ｈｏｎｇｏら、上述）を、手術１５時間前にｉ．ｐ．（実験に依存して０．３ｍｇ／ｋｇ体重、および／または１ｍｇ／ｋｇ体重）にて投与した。本明細書で述べたように、対照動物では、抗体投与を受けないが、０．３ｍｇ／ｋｇあるいは１ｍｇ／ｋｇのモルヒネのいずれの投与も受けなかった。上述のように手術を行い、手術２２時間後に両群において静止時疼痛を評価した（「ベースライン」）。手術２４時間後に、全ての動物をモルヒネ０．３ｍｇ／ｋｇで処置し、モルヒネ処置３０分後に静止時疼痛を評価した。手術２６時間後にさらに１．０ｍｇ／ｋｇのモルヒネを投与し、最後のモルヒネ投与３０分後に静止時疼痛を再度評価を開始した。全てのモルヒネ処置は動物の首筋の下の皮下に投与した。これらの実験の結果は、図１、２、および３に示す。
【０１６９】
図１は、０．３ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体９１１および０、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは１．０ｍｇ／ｋｇ体重のモルヒネ投与を受けた動物で測定された静止時疼痛スコアを示す。この実験は、ＮＧＦアンタゴニスト、すなわち抗ＮＧＦ抗体９１１と併用したモルヒネにより処置された動物は、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独で処置された動物と比較して累積疼痛スコアが減少したことを示す。したがって、モルヒネによる処置と併用した抗ＮＧＦ抗体による処置は、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独よりも静止時疼痛を軽減させることにより有効であった。これらの結果は、術前の０．３ｍｇ／ｋｇでのＮＧＦアンタゴニスト単独での処置は、０．３ｍｇ／ｋｇのモルヒネ単独による処置よりも静止時疼痛を軽減する場合により効果的であることもさらに示された。
【０１７０】
図２は、１．０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体９１１および０、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは１．０ｍｇ／ｋｇ体重のモルヒネ投与を受けた動物で測定された静止時疼痛スコアを示す。この実験は、ＮＧＦアンタゴニストと併用したモルヒネにより処置された動物は、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独で処置された動物と比較すると累積疼痛スコアが減少したことを示す。したがって、抗ＮＧＦ抗体＋モルヒネは、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独よりも静止時疼痛を軽減させることにより有効であった。これらの結果は、術前の１ｍｇ／ｋｇでのＮＧＦアンタゴニスト単独での処置は、０．３ｍｇ／ｋｇのモルヒネ単独による処置よりも静止時疼痛を軽減する場合により効果的であることもさらに示された。
【０１７１】
図３は、上述の手順による０．３ｍｇ／ｋｇまたは１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体および０、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、あるいは１．０ｍｇ／ｋｇ体重のモルヒネにより処置した後の静止時疼痛スコアを示す。０．３ｍｇ／ｋｇ抗ＮＧＦ抗体あるいは１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体と併用した０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネによる処置は、０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネ単独による処置と比較して、鎮痛を有意に改善した。図３に示す結果により、０．３ｍｇ／ｋｇあるいは１ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体単独による処置（すなわちモルヒネ処置なし）は、モルヒネ０．３ｍｇ／ｋｇの投与量による処置後の鎮痛効果と同等の鎮痛効果を提供することも示された。さらに、０．３ｍｇ／ｋｇのモルヒネによる処置と併用した１．０ｍｇ／ｋｇの抗ＮＧＦ抗体をによる処置により、１ｍｇ／ｋｇモルヒネ単独により得られた鎮痛効果と少なくとも同等の効果が得られた。これらの結果により、抗ＮＧＦ抗体による処置は、効果的な鎮痛に必要とされるモルヒネの投与量を減少させることが実証された。
【０１７２】
これらの実験は、抗ＮＧＦ抗体＋モルヒネによる処置は、モルヒネ単独または抗体単独による処置よりも静止時疼痛を軽減するのによる有効であることを示す。
【０１７３】
以上、分かりやすさおよび理解のために、説明および例を通して幾分か詳細に本発明を説明したが、この説明と実施例は本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきものではない。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１】図１は、ＮＧＦアンタゴニスト、マウス抗ＮＧＦ抗体９１１と併用したモルヒネにより処置された動物において、累積疼痛スコアが減少したことを示す。Ｈｏｎｇｏら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ、１９：２１５−２２７（２０００年）。抗ＮＧＦ抗体（「９１１」）単独０．３ｍｇ／ｋｇによる術前処置では、モルヒネ単独０．３ｍｇ／ｋｇよりも静止時疼痛を軽減するのにより有効であり、モルヒネと併用する抗ＮＧＦ抗体による処置は、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独よりも静止時疼痛を軽減するのにより有効であった。
【図２】図２は、ＮＧＦアンタゴニスト、抗ＮＧＦ抗体９１１と併用したモルヒネにより処置された動物において、累積疼痛スコアが減少したことを示す。抗ＮＧＦ抗体＋モルヒネによる処置は、モルヒネ単独または抗ＮＧＦ抗体単独よりも静止時疼痛を軽減するのにより有効であった。
【図３】図３は、手術および抗ＮＧＦ抗体および／またはモルヒネによる処置後に観察した静止時疼痛スコアを示す。動物は術前１５時間にＮＧＦアンタゴニスト、抗ＮＧＦ抗体９１１により処置され、手術後１日の疼痛行動について検査した。動物は、モルヒネなし（実線）、０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネ（破線）あるいは１．０ｍｇ／ｋｇモルヒネ（点線）で試験された。０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネ単独による処置と比較すると、０．３ｍｇ／ｋｇ抗ＮＧＦ抗体あるいは１ｍｇ／ｋｇ抗ＮＧＦ抗体と併用した０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネでは、鎮痛が有意に改善された（すなわち静止時疼痛が軽減された）。さらに、抗ＮＧＦ抗体処置のみでは、０．３ｍｇ／ｋｇの投与量のモルヒネと同等の鎮痛効果を示した。１．０ｍｇ／ｋｇ抗ＮＧＦ抗体＋０．３ｍｇ／ｋｇモルヒネによる処置では、１ｍｇ／ｋｇモルヒネ単独で得られた効果と同等の鎮痛効果を示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年12月5日(2005.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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