(57)【要約】治療を要する被験者の、疾患に対する治療方法を開示している。本方法は、抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物の治療有効量を被験者に提供し、その結果、治療を必要とする該被験者の該疾患を治療することを含んでいる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療を要する被験者の疾患に対する治療方法において、抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物の治療有効量を被験者に提供し、治療を必要とする該被験者の該疾患を治療する
ことを特徴とする治療方法。
【請求項２】
前記化合物の被験者への提供は、被験者への前記化合物の投与により、および／または被験者内で前記化合物を発現させることにより行われる
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項３】
前記化合物が、
(a) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合可能な分子、
(b) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子を切断可能な酵素、
(c) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、
(d)    前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAまたはDNAを切断できるDNA酵素、
(e) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクレオチド、
(f) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAを切断できるリボザイム、
(g) 前記AMPまたはAMP類似分子の最小機能性部分の無機能性相似体、
(h) 前記AMPまたはAMP類似分子の活性化または配位子結合を阻害できる分子、
(i) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、
を含むグルプーから選択される
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項４】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合できる分子が、抗体または抗体断片である
ことを特徴とする請求項3記載の方法。
【請求項５】
前記抗体断片が、単鎖Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項4記載の方法。
【請求項６】
1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度範囲の前記化合物を含む担体に暴露するように、被験者を位置させることにより、前記化合物の被験者への前記投与を実行する
ことを特徴とする請求項2に記載の方法。
【請求項７】
前記化合物の被験者への前記投与を、被験者に前記化合物を2回から30回複数投与することにより実施し、該複数投与の各投与間隔が、約2.4時間から約30日までの範囲から選択される
ことを特徴とする請求項2記載の方法。
【請求項８】
前記化合物の被験者への前記投与を、局所、鼻腔、経皮、皮内、口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路からなるグループから選択された経路を通して実施することを特徴とする請求項2記載の方法。
【請求項９】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子からなるグループから、選択される
ことを特徴とする請求項1記載の方法
【請求項１０】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１１】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１２】
前記生物の過程が、増殖、分化、炎症、転移、脈管形成からなるグループから選択され、疾患が、細胞および／または組織内の生物の過程に関連する
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項12記載の方法。
【請求項１４】
前記被験者が、ヒトである
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１５】
前記疾患が、腫瘍、自己免疫疾患、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸疾患、内皮疾患からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１６】
前記疾患が、上皮腫瘍、上皮創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、内皮腫瘍、固形腫瘍、転移性腫瘍、皮膚自己免疫疾患、悪性腫瘍からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１７】
前記疾患が、乾せん症または皮膚癌である
ことを特徴とする請求項1記載の方法。
【請求項１８】
包装材料と薬剤成分を含む医薬品において、細胞および／または組織中の生物学的過程、すなわち増殖、分化、炎症、転移、脈管形成からなるグループから選ばれる生物的過程に関連した疾患の治療として確認される医薬品。つまり、薬剤的条件にあった担体および、有効成分として抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物を含む
ことを特徴とする医薬品。
【請求項１９】
前記化合物が、
(a) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合可能な分子、
(b) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子を切断できる酵素、
(c) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、
(d)    前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAまたはDNAを切断できるDNA酵素、
(e) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクレオチド、
(f) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAを切断できるリボザイム、
(g) 前記AMPまたはAMP類似分子の最小機能性部分の無機能性相似体、
(h) 前記AMPまたはAMP類似分子の活性化または配位子結合を阻害できる分子、
(i) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２０】
前記AMPと結合できる前記分子が、抗体または抗体断片である
ことを特徴とする請求項19記載の医薬品。
【請求項２１】
前記抗体断片が、単鎖Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項20記載の医薬品。
【請求項２２】
局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路からなるグループから選ばれた経路を通し、薬剤成分の投与を可能にするように、前記薬剤的条件にあった担体が、選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２３】
液剤、懸濁剤、乳剤、またはゲル剤として前記薬剤成分が、製剤化される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。 
【請求項２４】
1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度範囲の前記化合物に、疾患被験者の細胞および／または組織が、暴露可能となるように、前記薬剤成分が、調合される
ことを特徴とする請求項18の医薬品。
【請求項２５】
前記薬剤成分が、被験者に2回から30回複数投与されることが追加確認され、該複数投与の各投与間隔が、約2.4時間から約30日までの範囲から選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２６】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPおよびヒトAMP類似分子からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２７】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２８】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL‐37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項２９】
前記細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項３０】
前記疾患が、腫瘍、自己免疫疾患、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸
疾患、内皮疾患、ヒト疾患からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項３１】
前記疾患が、上皮腫瘍、上皮創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、内皮腫瘍、固形腫瘍、転移性腫瘍、皮膚自己免疫疾患、悪性腫瘍からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項３２】
前記疾患が、乾せん症または皮膚癌である
ことを特徴とする請求項18記載の医薬品。
【請求項３３】
細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する方法において、抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物に、細胞および／または組織を暴露させる
ことを特徴とする細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する方法。
【請求項３４】
細胞および／または組織の前記化合物への暴露が、前記化合物を被験者に提供することにより実施される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物の被験者への前記提供が、前記化合物の被験者への投与および／または被験者内で前記化合物を発現することにより実施される
ことを特徴とする請求項34記載の方法。
【請求項３６】
前記化合物が、
(a) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合可能な分子、
(b) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子を切断できる酵素、
(c) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、
(d)    前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAまたはDNAを切断できるDNA酵素、
(e) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクレオチド、
(f) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAを切断できるリボザイム、
(g) 前記AMPまたはAMP類似分子の最小機能性部分の無機能性相似体、
(h) 前記AMPまたはAMP類似分子の活性化または配位子結合を阻害できる分子、
(i) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成オリゴヌクレオチド
から選択される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項３７】
前記分子が、前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合できる抗体または抗体断片である
ことを特徴とする請求項36記載の方法。
【請求項３８】
前記抗体断片が、単鎖Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項37記載の方法。
【請求項３９】
細胞および／または組織の前記化合物への前記暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度の前記化合物に細胞および／または組織を暴露させることにより実施される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４０】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPおよびヒトAMP類似分子からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４１】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４２】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2とLL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４３】
前記生物学的過程が、増殖、分化、炎症、転移、脈管形成からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４４】
前記細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４５】
前記細胞および／または組織が、悪性腫瘍および／または角化細胞であり、前記化合物の細胞およびまたは組織への前記暴露が、1ミリリットル当たり約0.4マイクログラムから約200マイクログラムの濃度範囲の前記化合物に細胞および／または組織を暴露することにより実施され、前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、カセリシジン（cathelicidin）である
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４６】
前記細胞および／または組織が、悪性腫瘍および／または角化細胞であり、前記化合物の細胞およびまたは組織への前記暴露が、1ミリリットル当たり約0.1マイクログラムから約50マイクログラムの濃度範囲の前記化合物に細胞および／または組織を暴露することにより実施され、前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、カセリシジン（cathelicidin）である
ことを特徴とする請求項33記載の方法。 
【請求項４７】
前記細胞および／または組織が、胃腸および／または内皮の細胞および／または組織であり、前記化合物の細胞およびまたは組織への前記暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記化合物に細胞および／または組織を暴露することにより実施され、前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、カセリシジン（cathelicidin）である
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞および／または組織が、表皮の細胞および／または組織であり、      前記化合物の細胞およびまたは組織への前記暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記化合物に細胞および／または組織を暴露することにより実施され、
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、カセリシジン（cathelicidin）である
ことを特徴とする請求項33記載の方法。
【請求項４９】
細胞および／または組織が、ヒトから得られる
ことを特徴とする請求項33の方法 
【請求項５０】
細胞および／または組織内の生物学的過程を調節可能な化合物を識別する方法において、
(a)  細胞および／または組織が、
(i)  抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の活性度および／または濃度を減少させる化合物、
および／または
(ii)  前記AMPおよび／またはAMP類似分子、である試験化合物に細胞および/または組織を暴露し、
および
(b)  前記化合物の、細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する能力を評価し、その結果、による細胞および／または組織内の生物学的過程を調整できる化合物を識別する
ことを特徴とする細胞および／または組織内の生物学的過程を調節可能な化合物を識別する方法。
【請求項５１】
前記細胞および／または組織が、培養細胞および／または組織である
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５２】
前記細胞および／または組織が、ヒトに由来する
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５３】
前記試験化合物への細胞および／または組織の前記露出が、被験者への前記試験化合物を提供することにより実施される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５４】
前記試験化合物を産生する細胞に細胞および／または組織を暴露させることにより、細胞および／または組織の前記試験化合物への前記暴露が、実施される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５５】
前記試験化合物を作り出す前記細胞が、B細胞ハイブリドーマである
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５６】
前記試験化合物の被験者への提供が、前記試験化合物の前記被験者への投与、および／または前記被験者内で前記化合物を発現することにより実施されることを特徴とする請求項53記載の方法。 
【請求項５７】
前記試験化合物の前記被験者への前記投与が、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路からなるグループから選ばれた経路を通して実施される
ことを特徴とする請求項56記載の方法。
【請求項５８】
前記試験化合物が、
(a) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合可能な分子、
(b) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子を切断できる酵素、
(c) 前記AMPおよび／またはAMP類似分子をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、
(d) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAまたはDNAを切断できるDNA酵素、
(e) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクレオチド、
(f) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAを切断できるリボザイム、
(g) 前記AMPまたはAMP類似分子の最小機能性部分の無機能性相似体、
(h) 前記AMPまたはAMP類似分子の活性化または配位子結合を阻害できる分子、
(i) 前記AMPまたはAMP類似分子をコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成性オリゴヌクレオチド、
から選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項５９】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子と結合できる前記化合物が、抗体または抗体断片である
ことを特徴とする請求項58記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体断片が、単鎖Fv、Fab、Fab′F(ab′)2からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項６１】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項６２】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項50記載の方法。 
【請求項６３】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項６４】
前記細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。 
【請求項６５】
前記生物学的過程が、増殖、分化、炎症、脈管形成からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項50記載の方法。
【請求項６６】
治療を要する被験者に対する疾患の治療方法において、治療上有効量の抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子を被験者に提供する
ことを特徴とする治療を要する被験者の疾患を治療する方法。
【請求項６７】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への前記提供が、前記AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への投与、および／または被験者内で前記AMPおよび／またはAMP類似分子を発現することにより実施される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項６８】
1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10ミリグラムの濃度範囲の前記化合物を含む担体に暴露するように、被験者を位置させることにより、前記化合物の被験者への前記投与を実施する
ことを特徴とする請求項67に記載の方法。
【請求項６９】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への投与が、局所、鼻腔、経皮、皮内、口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路からなるグループから選ばれた経路を通し、行われる
ことを特徴とする請求項67記載の方法。
【請求項７０】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７１】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７２】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７３】
前記被験者が、ヒトである
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７４】
前記疾患が、細胞および／または組織内の生物の過程に関連しており、その生物学的過程が、増殖、分化、炎症、脈管形成からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７５】
上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、腫瘍細胞および／または組織からなるグループから、前記細胞および／または組織が、選択される
ことを特徴とする請求項74記載の方法。
【請求項７６】
前記疾患が、腫瘍、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸疾患、内皮疾患からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７７】
前記疾患が、上皮腫瘍、上皮の創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、悪性腫瘍からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項66記載の方法。
【請求項７８】
包装材料と薬剤成分を含む医薬品において、細胞および／または組織中の生物学的過程、すなわち増殖、分化、炎症、転移、脈管形成からなるグループから選ばれる生物的過程に関連した疾患の治療として確認され、製剤的条件にあった担体および、有効成分として抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子を含む
ことを特徴とする医薬品。
【請求項７９】
局所、鼻腔、経皮、皮内、口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路からなるグループから選ばれた経路を通し、薬剤成分の投与ができるように、前記薬剤条件にあった担体が、選択される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８０】
液剤、懸濁剤、乳剤、またはゲル剤として薬剤成分が、製剤化される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８１】
１ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記化合物に、疾患のある被験者の細胞および／または組織が、暴露されるように、薬剤成分が、調合される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８２】
デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子からなるグループから、前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、選択される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８３】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８４】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８５】
上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、腫瘍細胞および／または組織からなるグループから、前記細胞および／または組織が、選択される
ことを特徴とする請求項78の医薬品。
【請求項８６】
前記疾患が、腫瘍、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸疾患、内皮疾患からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８７】
前記疾患が、上皮腫瘍、上皮の創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、悪性腫瘍からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項78記載の医薬品。
【請求項８８】
細胞および／または組織内の生物学的過程の調節方法において、細胞および／または組織を抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子に暴露する
ことを特徴とする細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する方法。
【請求項８９】
前記細胞および／または組織の前記AMPおよび／またはAMP類似分子への前記暴露が、前記AMPおよび／またはAMP類似分子を被験者に提供することにより、実施される
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９０】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への前記提供が、 前記AMPおよび／またはAMP類似分子を被験者に投与すること、および／または被験者内で前記化合物を発現することにより実施される
ことを特徴とする請求項89記載の方法。
【請求項９１】
細胞および／または組織の前記AMPおよび／またはAMP類似分子への前記露出が、１ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記AMPおよび／またはAMP類似分子を細胞および／または組織に暴露することにより、実施される
ことを特徴とする請求項88の方法。
【請求項９２】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン（cathelicidin）、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子からなるグループから、選択される
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９３】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシンである
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９４】
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９５】
前記細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、角化細胞および／または組織、腫瘍細胞および／または組織からなるグループから、選択される
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９６】
前記生物学的過程が、増殖、分化、炎症、脈管形成からなるグループから選択される
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９７】
前記細胞および／または組織が、悪性腫瘍であり、
前記AMPおよび／またはAMP類似分子への細胞およびまたは組織の前記暴露が、1ミリリットル当たり約0.1マイクログラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記AMPおよび／またはAMP類似分子に細胞および／または組織を暴露させることにより実施され、
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシンである
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９８】
前記細胞および／または組織が、ケラチン生成細胞であり、
前記AMPおよび／またはAMP類似分子への細胞およびまたは組織の前記暴露が、1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の前記AMPおよび／またはAMP類似分子に細胞および／または組織を暴露させることにより実施され、
前記AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシンである
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【請求項９９】
前記細胞および／または組織が、ヒトに由来する
ことを特徴とする請求項88記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗菌ペプチド(AMP)および／または抗AMP類似分子(AML)阻害剤を使用した疾患治療方法、AMP／AMLを使用した疾患治療方法、および疾患治療を可能にするためにAMP／AMLの作用／濃度を減少できる化合物を同定する方法に関するものである。もっと詳しく言えば、本発明は、カセリシジン（cathelicidin）／β-デフェンシンの濃度／作用を阻害できる化合物を使う事により、炎症、調節不能の細胞増殖／分化、血管形成 および／または 転移と関連した、乾癬等の自己免疫疾患、と癌等の悪性疾患等を含む疾患治療方法である。つまり、β-デフェンシン使用による上皮増殖の治療上の刺激を要する上皮創傷等の疾患治療方法、そして炎症、調節不能の細胞増殖／分化、血管形成 および／または 転移と関連した乾癬などの自己免疫疾患や癌等の悪性疾患等を含む疾患治療を可能にするためにAMPの作用／濃度を減少できる化合物を同定する方法、に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症、調節不能の細胞増殖／分化, 調節不能の細胞増殖／分化の均衡, 血管形成, および転移等の生物の過程に関連した悪性、自己免疫、アレルギーおよび創傷関連の疾患には、非常に体を衰弱させるおよび／または 致死的な病態や多大な経済的影響のある病態など広大な範囲の病態を含み、それらは現在十分な治療ができていない。
【０００３】
例えば自己免疫疾患は主要な臨床上および経済的影響のある疾患の代表である。これらは十分な治療法のない乾癬、リュウマチ性関節症, I型糖尿病, 炎症性腸疾患, および多発性硬化症等の主要な疾患を含む。同様に、皮膚癌、乳癌、大腸癌、頭部および頸部癌、肝臓癌、肺癌、腎臓細胞癌、膀胱癌およびその他の悪性疾患は十分な治療法のない多くの致命的な疾患の代表である。上皮創傷に関連した疾患には、消化性潰瘍, 潰瘍性大腸炎,および糖尿病関連の皮膚潰瘍形成のような創傷治癒不全等の主要な疾患が含まれ、多大な臨床的および経済的影響があり、十分な治療法がない。季節ごとの花粉、ブタクサ, ダニ, ペットの毛, 化粧品, および 様々な食べ物に対するアレルギー等のアレルギー性疾患は、多くの人々をとても衰弱させ、致死的にもなり、アレルギー薬の市場は大きいため経済的に非常に重要である。
【０００４】
それ故、炎症、調節不能の細胞／組織増殖／分化、調節不能の細胞／組織の増殖／分化均衡、血管形成、転移、および／または上皮創傷に関連した前述の疾患に対する最善な治療法への緊急かつ長年の切実なニーズがある。
【０００５】
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【特許文献２】米国特許第５，１８９，１７８号明細書
【特許文献３】米国特許第５，２３９，０７８号明細書
【特許文献４】米国特許第４，０３６，９４５号明細書
【特許文献５】米国特許第４，３３１，６４７号明細書
【特許文献６】米国特許第４，９４６，７７８号明細書
【特許文献７】米国特許第４，８１６，５６７号明細書
【特許文献８】米国特許第５，５４５，８０７号明細書
【特許文献９】米国特許第５，５４５，８０６号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，５６９，８２５号明細書
【特許文献１１】米国特許第５，６２５，１２６号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，６３３，４２５号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，６６１，０１６号明細書
【特許文献１４】米国特許第６，３２６，１７４号明細書
【特許文献１５】米国特許第５，７２１，１３８号明細書
【特許文献１６】米国特許第４，６６６，８２８号明細書
【特許文献１７】米国特許第４，６８３，２０２号明細書
【特許文献１８】米国特許第４，８０１，５３１号明細書
【特許文献１９】米国特許第５，１９２，６５９号明細書
【特許文献２０】米国特許第５，２７２，０５７号明細書
【特許文献２１】米国特許第３，７９１，９３２号明細書
【特許文献２２】米国特許第３，８３９，１５３号明細書
【特許文献２３】米国特許第３，８５０，７５２号明細書
【特許文献２４】米国特許第３，８５０，５７８号明細書
【特許文献２５】米国特許第３，８５３，９８７号明細書
【特許文献２６】米国特許第３，８６７，５１７号明細書
【特許文献２７】米国特許第３，８７９，２６２号明細書
【特許文献２８】米国特許第３，９０１，６５４号明細書
【特許文献２９】米国特許第３，９３５，０７４号明細書
【特許文献３０】米国特許第３，９８４，５３３号明細書
【特許文献３１】米国特許第３，９９６，３４５号明細書
【特許文献３２】米国特許第４，０３４，０７４号明細書
【特許文献３３】米国特許第４，０９８，８７６号明細書
【特許文献３４】米国特許第４，８７９，２１９号明細書
【特許文献３５】米国特許第５，０１１，７７１号明細書
【特許文献３６】米国特許第５，２８１，５２１号明細書
【０００６】
皮膚、胃腸管、および気管支樹の上皮内層では、先天的ホスト防御および適応免疫反応の両方に関係していると思われる、抗菌ペプチド(AMP) と呼ばれる抗菌作用を有する多数のペプチドが生成される(非特許文献１)。AMP は組織起点中で優性な条件下で、生理的濃度において抗菌作用を発揮するカチオン性ペプチドである。AMP合成および放出は、細菌の信号、発生的および分化的信号、サイトカインによって、時には組織特有な方法で神経内分泌信号により調整される。それらの作用の仕組みは不明ではあるが、主要な理論として、ターゲット膜の易透化性がAMPを介在する抗菌作用と細胞毒性作用において重要なステップであるとされている。デフェンシンは、ヒトにおいて2つの主要なグループに分類される。カセリシジン（cathelicidin）とデフェンシンである。AMP類には、共通の特徴があるように思われる。つまり、必ずしも配位子-受容体経路によって作用しない方法で哺乳類の細胞に影響を与えること、また、小分子で非常にイオン性または疎水性または構造的に両親媒性であるAMPは哺乳類の細胞膜と結合できるということである。AMPは細胞膜を通り細胞質へと貫通できる。例えば、グラニュライシンは負電荷に依存して、ヒトの細胞膜を貫通し損傷させることが証明された(非特許文献２)。高濃度では、AMPは細胞にとって毒性であり、膜を貫いて破壊し、細胞溶解またはアポトーシス（細胞自滅）を引き起こす。同様に、それらは電荷を持ち、小さく、細胞膜の外部表面から膜周囲に分散しているという事実により、内部膜の電荷密度を変える事ができる。
【０００７】
カセリシジンには保護された“カセリン”先駆体ドメインが含まれている。それらの構成は、N末端基シグナルペプチド、高度に保存されたシグナルペプチド（prosequence）、およびC末端基可変構造のカチオン性ペプチドから成る。シグナルペプチドは、カテプシンLの阻害剤(故にカテリンと呼ばれる)として本来ブタの好中球から分離されたタンパク質であるカテリンに類似している。37個のアミノ酸からなるヒト・カセリシジンであるLL-37/hCAP18は、特に陰電荷脂質の共存下ではαヘリックス構造の疎水性N末端基ドメインを持つ。その活性化に不可欠なステップで、LL-37は、好中球性エラスターゼおよびプロテイナー3等の酵素によって、hCAP18先駆体のC末端で開裂する。LL-37は他のAMPと協力作用し、直接にホスト細胞を活性化できる。LL-37のようなカセリシジンが有する、殺菌能力や免疫反応調整能力は多くのAMPの特徴である。ペプチドは様々な細胞の相互作用を通してホスト免疫反応に影響を与える事ができる。例えば、ホルミルペプチド受容体類似物質1(FPRL-1)との結合によって、化学誘引物質としての可能性が提起されている。LL-37は肥満細胞を取り入れ、肥満細胞により生成され細菌を殺すことができる。
【０００８】
デフェンシンはAMPの大きなファミリーの代表であり、顆粒球の抗菌作用、小腸の粘膜ホスト防御および皮膚や他の部分の上皮ホスト防御に寄与する (非特許文献３)。デフェンシンは微生物の細胞質膜を分裂する事によりホスト防御に関与していると考えられている。デフェンシンは、胃腸および尿生殖器系、気管気管支樹、および角質細胞の上皮細胞内層によっても、食細胞およびリンパ細胞によっても作り出される。デフェンシンのいくつかは構成的に生成され、他は炎症誘発性のサイトカインと微生物生成物との反応によって生成される。先天的なホスト防御中に生成されたデフェンシンは、適応可能な免疫性のホスト防御を開始し、可動させ、増幅させるシグナルとして働く。これらのペプチドはカチオン性で、ジスルフィド架橋を形成する6-8個のシステイン残基を含んでいる。哺乳類のデフェンシンは3つの異なるサブファミリーに分類される。α-デフェンシンおよびβ-デフェンシン、そしてヒトには欠落しているθ-デフェンシンである。
【０００９】
α-デフェンシンには1-6位、2-4位、3-5位の3つのジスルフィド架橋がある。ヒトの好中球は4つの異なるα-デフェンシンを発現する。α-デフェンシン-1から-4であり、ヒト好中球ペプチド(HPN-1から-4)とも呼ばれ、およそ3kDaの完全に処理された十分発達したペプチドとして好中球のアズール顆粒中に保存されている。小腸陰窩パネート細胞、および女性の尿生殖路上皮細胞において、更に2つのα-デフェンシンであるヒトデフェンシン(HD)-5および-6が発現される。好中球と異なり、パネート細胞はプロペプチドとしてα-デフェンシンを保存する。カセリシジンと同様に、α-デフェンシンは微生物およびホスト両方に作用を発揮する。例えば、HNP1-3は、細菌(黄色ブドウ状球菌)によって活性化されたヒト単核細胞中の腫瘍壊死因子(TNF)-αおよびインターロイキン(IL)-1の発現を増加させるか、またはTNF-αによって活性化されたヒト臍静脈内皮細胞における血管接着分子-1(VCAM-1)の発現を減少させる事が示されている。
【００１０】
β-デフェンシンはC1-C5位、C2-C4位、および C3-C6位で3つのジスルフィド架橋により結合された6つのシステインモチーフを持つことにより特徴づけれる。β-デフェンシンは、上皮細胞および好中球を含む数多くの細胞タイプ中で確認される。ヒトでは4つのタイプが知られており、ヒトβデフェンシン-1、-2、-3、および-4と呼ばれている。ゲノム解析は、数多くのβデフェンシン遺伝子が未だ発見されていないことを示唆している。βデフェンシンは抗菌作用および免疫細胞に関連した追加作用の広域スペクトルを示す。例えば、ヒトβ-デフェンシン-2は、ケモカイン受容体CCR6と結合し、樹状細胞および T-細胞に対し走化性であり、肥満細胞においてヒスタミン放出とプロスタグランジンD2生成を誘発する能力がある。このように、β-デフェンシンはアレルギー反応において役割を果たすと提起されている。デフェンシンは、樹状細胞およびT 細胞上のCCR6等のケモカイン受容体を利用し、適応抗菌免疫の調節に関わると考えられている。(非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６)。
【００１１】
AMPは、個々にまたは複数のAMPとしてその効果を発揮する。例えば、月経周期において月々の周期に依存して様々なAMPが発現される(非特許文献７)。例えば、月経過程におけるβデフェンシン、増殖過程におけるβデフェンシン-4、初期分泌過程におけるβデフェンシン-3、中期分泌過程におけるβ-デフェンシン-1、および後期分泌過程におけるβ-デフェンシン-3の、各月経周期中により高い発現がある。正常な増殖、分化および発生に対する特定な月経周期例において、AMP中の均衡を保つことは不可欠であると提起されている。
【００１２】
ケモカインのような抗菌ペプチド類似分子(AML)、特にケモカインまたはサイトカインとして２つの機能を有するAMPは、炎症中白血球漸増の調整に重要な役割を果たす。モノクローナル抗体 およびケモカイン拮抗薬、例えばTNF, IFN-γ, ロイコトリエン受容体拮抗薬, IL-8, 抗-IgE および 抗-IL 受容体拮抗薬等は、すでに特許がとられており、臨床的に使用されている。しかし、これらの物質には、通常の成長および 物質代謝においてこれらのケモカインが二重に作用するという事実により、一般的に主要な副作用がある。故に、それらの作用を阻害すると、体細胞の正常な成長をも阻害することになる。
【００１３】
しかし、AMPは、その抗菌性および抗ウイルス性とは別に、疾患の病態を強める幾つかの役割を果たす。AMPは個々に、またはケモカイン、サイトカイン、増殖および超増殖生物膜誘発物質、細菌-細胞結合および接着促進物質、炎症促進物質、間接的単球鉄保持調節物質プロテアーゼ阻害物質、血管形成促進物質、コルチコスタチン類似分子と協力して作用し、その分解を調節する細胞外マトリックス沈着を促進する。最も重要な事は、下記に詳細に述べられているように、AMPが幾つかの慢性疾患において増加し、慢性炎症および疾患病態において主要な役割を果たし、様々なメカニズムによって細胞分化および増殖に影響を及ぼすことである。
【００１４】
一般的にAMPは、現行治療によって阻害されるサイトカインおよび ケモカインに対し、アップストリーム(非特許文献１２、非特許文献１３)およびダウンストリーム(非特許文献８、非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１)に作用する。AMPは、炎症反応の活性化物質であり、インターロイキン1 α (IL-1 α), 腫瘍壊死因子α (TNF-α)などの炎症誘発性刺激への反応として説明される。
【００１５】
TNF-αおよび IL-1等のサイトカインに対するAMPアップストリームおよびダウンストリームの二重作用のため、AMPにより誘発される病態は、TNF-αとIL-1が非制御下で生成される自己持続性サイクルに入り、その結果、悪化性/慢性炎症が起こる。これは、AMPが過剰発現され、AMP遺伝子のコピー数が多くなるか、または過剰活性化遺伝子多型になる状況で、特に顕著である。TNF-α拮抗薬 IL-1受容体拮抗薬, IL-10 阻害剤, および T-細胞阻害剤を使い、この炎症周期の破砕は達成されている。しかし、副作用を最小にする必要があるため、これらのAMP作用の阻害、特に二次的なサイトカイン作用を阻害することが、炎症性および自己免疫の慢性／急性病状の治療に対する、安全でより効果的な好ましいアプローチであることを立証している。
【００１６】
この様に、炎症性, 調節不能細胞 増殖／分化, 血管形成転移, および／または 上皮創傷に関連する数多くの疾患は、影響される細胞／組織において調節不能のAMP濃度に関連しているかのように見える(例、次の文献でレビューされている。非特許文献１４、非特許文献１５)。
【００１７】
乾癬およびその他の皮膚病態に関しては、乾癬病変ではLL-37 および βデフェンシン-2 の濃度が上昇する一方、アトピー性皮膚炎患者の皮膚中には皆無または少量であり、これらAMPは、乾癬患者ではアトピー性皮膚炎患者の皮膚の少なくとも10倍存在していることが証明されている (非特許文献１６)。更に、乾癬を引き起こすことで知られている皮膚の創傷は、LL-37 および βデフェンシン-2の放出を誘発し、その創傷は回復不可能な乾癬病変に発展する場合もある。そして、AMP増加に関連した他の皮膚病態もある。座瘡生検の多くは、病変位置またはその周りの上皮細胞にデフェンシン-2 免疫反応性の発現が著しく上昇し（得に膿疱中で）、およびデフェンシン-1 免疫反応性の発現の上昇はより少ない(非特許文献１７)。
【００１８】
乾癬は、鍵となる役割を果たす先天的免疫のあるT-細胞が媒介する自己免疫疾患として確立されている。乾癬は、細菌性の超抗原による(非特許文献１９)自己免疫活性化により(非特許文献１８)誘引された皮膚の欠損の結果である。組織学的に、乾癬は、好中球、リンパ球、マクロファージおよび肥満細胞により表皮および真皮が異常に分化および浸潤した、角質および繊維芽細胞の増加／分化均衡における異常性を特徴とする。自然キラー(NK) およびNK-T細胞は乾癬の病因に関係し、乾癬プラークに存在する(非特許文献２０)。AMPは、ヒトT細胞および自然キラー(NK)細胞のエフェクター分子であり、NK 細胞によるAMP放出が疾患病態において一部役割を果たしている。ヒトAMP LL-37およびαデフェンシンは特定のリンパ球および単核細胞の集団により発現される(非特許文献２１)。
【００１９】
現在まで、最適ではないが新規な全身性介入方法が乾癬治療に使用されている。それは主にT細胞をターゲットとした治療法、ケモカイン腫瘍壊死要素に対するモノクロナール抗体およびサイトカインをターゲットとした治療法を含む。
【００２０】
モノクロナール抗体およびサイトカインをターゲットとした治療法を含む。
乾癬の治療法には、レチノイド - ビタミンA - 相似体といった細胞増殖／分化調節因子の局所適用があり、それはアポトーシスを誘発させその結果増殖数を制限し(非特許文献２２)、表皮の細胞の分化および増殖を調節または変化させる方法である。さらにアポトーシスを誘発し細胞が増殖する機会を減らすUV 治療 (非特許文献２３)もある。アポトーシスは、アニオン性 DNAを放出させ、それによりカチオン性AMPの共存下で束状構造を形成し、その結果コルチコステロイド・クリームおよび軟膏剤および合成ビタミンD3など、配位子-細胞受容体の結合を通し、抗菌作用およびダウンストリーム要素の阻害を可能にする。これらの局所的治療は表皮の後期炎症反応の調節だけが狙いであり、初期の過程を妨げることはない。
【００２１】
病的増殖に導くシグナルを送る多くの経路がある。乾癬における増殖／分化バランスの異常性は、例えば乾癬皮膚においてダウンレギュレートされるTGFβシグナル経路、成長調節において機能性の減少のような他の経路(非特許文献２４)によって、AMP経路において過剰発現が起こる結果である。事実、LL-37、ヒトβデフェンシン-3、好中球ゼラチナーゼ関連リポカリンおよび分泌白血球プロテアーゼ抑制剤のようなAMPは、ヒトケラチンノサイト中のインスリン類似成長因子1 および TGF-α等の創傷治癒に重要な成長因子によりもダウンストリームで作用するように見える(非特許文献２５)。
【００２２】
αデフェンシンは、様々な慢性炎症肺疾患者の気道分泌物中に蓄積する事が証明され、気道上皮細胞に対し細胞毒性であり、いくつかの細胞タイプにおいて病原性ケモカインの分泌を誘発することが実証されている。具体的には, αデフェンシンは、鼻炎および上気道黄色ブドウ状球菌感染により影響を受け炎症を起こした組織において増殖することが証明されている。βデフェンシンは副鼻腔炎患者の炎症を起こした副鼻洞液中に過剰発現する。カセリシジンおよびβデフェンシンは、肺炎患者の炎症を起こした気管支中に必要以上に発現されることが証明されている。上昇したAMP濃度は、IL-8 および 好中球のような可溶性な細胞炎症媒介物質の濃度と相関あることが明らかになっている。α および βデフェンシンは、マイコバクテリウムに感染した患者の炎症気道において高濃度で発現されると実証されている。高濃度デフェンシンは、急性呼吸促拍症候群(ARDS)、びまん性汎呼吸細気管支炎のような突発性炎症性肺疾患および突発性肺繊維症の損傷した組織に関連していることが明らかにされている。好中球性デフェンシン は、病原性の肺上皮細胞増殖および付随的な肺リモデリングを誘発する可能性が提起されている。気道分泌物中の増加したAMP濃度は、嚢胞性線維症の慢性炎症に関連があることが明らかにされている。αデフェンシンは、細菌の生体外上皮細胞への接着を促進することが明らかであり、ペプチドが慢性閉塞性肺疾患および嚢胞性線維症などの疾患病態において役割を果たすことを提起されている。好中球の数の増加は、喘息患者の気道でも起こり、好中球がこの疾患の病因に係わっていることを提起している。デフェンシンが肥満細胞によりヒスタミンを放出し、故に気道過敏症を増強する能力があるため、その分子が喘息病因に関与している可能性がある。 マウスを使った実験で、AMP発現の調節障害がその疾患病因に関連しているかもしれないという考えを裏付ける。例えば、デフェンシンの気管内への導入は、急性肺機能障害、好中球侵入の結果、またTNF-αおよびマクロファージ炎症蛋白質 (MIP)-2等、炎症媒介物質の気管支への放出の結果生じることが証明された。
【００２３】
胃腸の病理学的観察では、ヘリコバクターピロリによって誘発された胃炎または胃癌患者の炎症した胃の上皮で、βデフェンシンの構成した発現が報告されている。高濃度のαおよびβデフェンシンが、クローン病または活性潰瘍性大腸炎を抱える患者の炎症した結腸上皮中に観察されている。
【００２４】
尿生殖器疾患の場合、AMP 生成の促進が、尿生殖器管感染の炎症を起こした組織において報告されている。βデフェンシン-2発現の誘発が、慢性腎盂腎炎の腎尿細管上皮における炎症組織において生じることが証明されている。トリコモナス原虫、淋菌、クラミジアトラコーマへの二次感染疾患である、骨盤内炎症疾患を持つ女性は、子宮内膜炎の発生に強く原因するレベルで、膣中に好中球デフェンシンの高い発現濃度を示した。 
【００２５】
悪性疾患において、生体外および生体内での研究結果は、αデフェンシンが、腫瘍増殖に直接影響する可能性のある腎臓細胞癌において、悪性上皮細胞に頻繁に見られるペプチド構成成分であることを示唆している(非特許文献２６)。
【００２６】
病態に寄与するAMPの過剰発現は、遺伝子コピー数多形 (非特許文献２７)、そのプロモーター遺伝子の位置、その過剰発現または過剰活性化に導く蛋白質における遺伝子多形、などのメカニズムによって起こることが考えられる。
【００２７】
それ故に、 炎症、調節不能細胞増殖／分化, 調節不能細胞増殖／分化バランス、血管形成転移、および／または上皮創傷に関連した疾患病因におけるAMP／AMLの明白な役割を考慮し、本発明者は、そのような疾患の治療の最適のストラテジーがAMP／AMLの濃度／作用を低下に関係した方法、および／またはそのAMP／AML投与に関係した方法を通して行われると仮定した。
【００２８】
これらの方法に関連した当分野での前アプローチは、作用不明および疾患病因との関係不明な、新規な推定されるAMP類似分子をコード化する遺伝子配列をコンピューターによって同定することを含み、疾患治療のためその分子の濃度を調節する試行を提起している(U.S. 特許出願書 No. 20030044907)。
【００２９】
しかし、前アプローチには大きな欠陥がある。いづれの疾患病因においても新規な推定されるAMP類似分子の役割がはっきりしていないため、疾患患者への投与時に、推定されるAMP類似分子の濃度を調節することが、治療上効果があるとは合理的に期待できない。更に、前アプローチは試行された事がなく、その為、疾患治療の可能性は実証されていない。重要なことは、 前アプローチでは、βデフェンシン-2またはLL-37などのAMP阻害剤を使用する、疾患治療方法を提起していないことである。 
【００３０】
それ故、前アプローチは AMP／AMP類似分子の濃度／作用を低下することによる疾患治療の適切な解決法の提供に失敗している。
【００３１】
故に、炎症、調節不能細胞増殖／分化、血管形成転移および／または上皮創傷に関連した疾患治療における上述の制限を解消する方法は、広く認識されたニーズがあり、非常に有益なのである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００３２】
本発明の特徴の1つは、治療を要する被験者の疾患に対する方法であって、抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物の治療有効量を被験者に提供し、その結果、治療を必要とする被験者の疾患を治療する方法である。
【００３３】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴は、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度範囲の化合物を含む基材に暴露するように被験者を位置させることにより、化合物の被験者への前記投与を実行することである。
【００３４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、化合物の被験者への投与を被験者に化合物を2回から30回複数投与することにより効果的であり、複数投与の各投与間隔が約2.4時間から約30日までの範囲から選ばれることである。
【００３５】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 化合物の被験者への投与を、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路から成るグループから選択された経路を通して実施することである。
【００３６】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 生物学的過程が増殖、分化、炎症、転移、血管形成から成るグループから選択され、疾患が細胞および／または組織内の生物学的過程に関連していることである。
【００３７】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、被験者がヒトであることである。
【００３８】
本発明の別の特徴は、包装材料と薬剤成分を含む製造品目であって、細胞および／または組織中の生物学的過程、すなわち増殖、分化、炎症、転移、血管形成から成るグループから選ばれる生物学的過程に関連した疾患の治療として確認される製造品目が提供されることである。つまり、薬剤的条件にあった基材および、有効成分として抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物を含む薬剤成分である。
【００３９】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴によると、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路から成るグループから選ばれた経路を通し、薬剤成分の投与を可能にするように、薬剤的条件にあった基材が選択される。
【００４０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、液剤、懸濁剤、乳剤、またはゲル剤として薬剤成分が製剤化されることである。
【００４１】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度範囲の化合物に、疾患被験者の細胞および／または組織が暴露可能となるように、薬剤成分が調合されることである。
【００４２】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 薬剤成分が被験者に2回から30回複数投与されることが追加確認され、該複数投与の各投与間隔が約2.4時間から約30日までの範囲から選ばれることである。
【００４３】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、ケラチノサイトおよび／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織から成るグループから選択されることである。
【００４４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、疾患が、腫瘍、自己免疫疾患、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸疾患、内皮疾患、ヒト疾患から成るグループから選択されることである。
【００４５】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、疾患が、上皮腫瘍、上皮創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、内皮腫瘍、固形腫瘍、転移性腫瘍、皮膚自己免疫疾患、悪性腫瘍から成るグループから選択されることである。
【００４６】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 疾患が乾癬または皮膚癌である。
【００４７】
本発明の別の特徴は、細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する方法であって、抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の作用および／または濃度を減少させる化合物に細胞および／または組織を暴露させ、その結果、細胞および／または組織内の生物学的過程を調節することからなる方法である。
【００４８】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴は、細胞および／または組織の化合物への暴露が、化合物を被験者に提供することにより実施される
【００４９】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、化合物の被験者への提供が化合物の被験者への投与および／または被験者内で化合物を発現することにより実施されることである。
【００５０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織の化合物への暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約1ミリグラムの濃度範囲の化合物に細胞および／または組織を暴露させることにより実施されることである。
【００５１】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織が悪性腫瘍および／またはケラチノサイトであり、化合物の細胞およびまたは組織への暴露が、1ミリリットル当たり約0.4マイクログラムから約200マイクログラムの濃度範囲の化合物に細胞および／または組織を暴露することにより実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がカセリシジンであることである。
【００５２】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織が悪性腫瘍および／またはケラチノサイトであり、細胞および／または組織の化合物への暴露は、1ミリリットル当たり約0.1マイクログラムから約50マイクログラムの濃度範囲の化合物によって実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がカセリシジンであることである。
【００５３】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織が、胃腸および／または内皮の細胞および／または組織であり、化合物への細胞および／または組織の暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の化合物より実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がカセリシジンであることである。
【００５４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織が内皮細胞および／または組織であり、化合物への細胞およびまたは組織の暴露が、1ミリリットル当たり約50ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の化合物により実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がデフェンシンである。
【００５５】
本発明の別の特徴によると、細胞および／または組織内の生物学的過程を調節可能な化合物を識別する方法であって、
(a) 細胞および／または組織が、
(i) 抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子の活性度および／または濃度を減少させる化合物、
および／または
(ii) AMPおよび／またはAMP類似分子
である試験化合物に細胞および／または組織を暴露し、
および
(b) 細胞および／または組織内の生体過程を調節する試験化合物の能力を評価し、その結果による細胞および／または組織内の生物学的過程を調節できる化合物を同定することを含む方法である。
【００５６】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織が培養細胞および／または組織であることである。
【００５７】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織がヒトに由来することである。
【００５８】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 試験化合物への細胞および／または組織の前記露出が、被験者への試験化合物を提供することにより実施されることである。
【００５９】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、試験化合物への細胞および／または組織の暴露は、試験化合物を産生する細胞に細胞および／または組織を暴露して実施することである。
【００６０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、試験化合物を作り出す細胞がB細胞ハイブリドーマであることである。
【００６１】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、試験化合物の被験者への提供を、試験化合物の被験者への投与および／または被験者内で試験化合物を発現することにより実施することである。
【００６２】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、試験化合物の被験者への投与が、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路から成るグループから選ばれた経路を通して実施されることである。
【００６３】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、試験化合物が、
(a) AMPおよび／またはAMP類似分子と結合可能な分子、
(b) AMPおよび／またはAMP類似分子を切断できる酵素、
(c) AMPおよび／またはAMP類似分子をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、
(d) AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAまたはDNAを切断できるDNA酵素、
(e) AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクレオチド、
(f) AMPまたはAMP類似分子をコード化するmRNAを切断できるリボザイム、
(g) AMPまたはAMP類似分子で少なくとも機能性を有する部分の
非機能性相似体、
(h) AMPまたはAMP類似分子の活性化または配位子結合を阻害できる分子、
(i) AMPまたはAMP類似分子をコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成オリゴヌクレオチド
からなるグループから選択されることである。
【００６４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 AMPおよび／またはAMP類似分子と結合できる分子が、抗体または抗体断片であることである。
【００６５】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 抗体断片が単鎖Fv、Fab、Fab′F(ab′)2から成るグループから選択されることである。
【００６６】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子が、デフェンシン、カセリシジン、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子から成るグループから選択されることである。
【００６７】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子がβデフェンシンであることである。
【００６８】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子が、βデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37から成るグループから選択されることである。
【００６９】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織が、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、ケラチノサイトおよび／または組織、胃腸細胞および／または組織、内皮細胞および／または組織から成るグループから選択されることである。
【００７０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、生物学的過程が、増殖、分化、炎症、血管形成から成るグループから選択されることである。
【００７１】
本発明の別の特徴は、治療を要する被験者に対する疾患の治療方法であって、治療上有効量の抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子を被験者に提供し、その結果、治療を要する被験者の疾患を治療する方法である。
【００７２】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴は、1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10ミリグラムの濃度範囲のAMPおよび／またはAMP類似分子を含む基材に暴露するように被験者を位置させることにより、AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への投与を実施することである。
【００７３】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路から成るグループから選ばれた経路を通し、AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への投与を実施することである。
【００７４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、被験者がヒトであることである。
【００７５】
本発明の別の特徴は、包装材料と薬剤成分を含む製造品目であって、細胞および／または組織中の生物学的過程、すなわち増殖、分化、炎症、転移、血管形成から成るグループから選ばれる生物的過程に関連した疾患の治療として確認される製造品目である。つまり、製剤的条件にあった基材および有効成分として抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子を含む薬剤成分である。
【００７６】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴は、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸、吸入経路から成るグループから選ばれた経路を通し、薬剤成分の投与ができるように薬剤条件にあった基材が選択されることである。
【００７７】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、液剤、懸濁剤、乳剤、またはゲル剤として薬剤成分が製剤化されることである。
【００７８】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲の化合物に、疾患のある被験者の細胞および／または組織が暴露されるように、薬剤成分が調合されることである。
【００７９】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、疾患が、腫瘍、上皮疾患、皮膚疾患、胃腸疾患、内皮疾患から成るグループから選択されることである。
【００８０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、疾患が、上皮腫瘍、上皮の創傷、皮膚腫瘍、皮膚創傷、消化管腫瘍、胃腸創傷、悪性腫瘍から成るグループから選択されることである。
【００８１】
本発明の別の特徴は、細胞および／または組織内の生物学的過程の調節方法であって、細胞および／または組織を抗菌ペプチド（AMP）および／またはAMP類似分子に暴露し、その結果、細胞および／または組織内の生物学的過程を調節する方法である。
【００８２】
下記に記述された発明の好ましい実施例においての更なる特徴は、細胞および／または組織のAMPおよび／またはAMP類似分子への暴露が、AMPおよび／またはAMP類似分子を被験者に提供することにより実施されることである。
【００８３】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子の被験者への提供が、 AMPおよび／またはAMP類似分子を被験者に投与することおよび／または被験者内でAMPおよび／またはAMP類似分子を発現することにより実施されることである。
【００８４】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲のAMPおよび／またはAMP類似分子を細胞および／または組織に暴露することにより、細胞および／または組織のAMPおよび／またはAMP類似分子への露出が実施されることである。
【００８５】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、デフェンシン、カセリシジン、カチオン性ペプチド、疎水性ペプチド、ヒトAMPとヒトAMP類似分子から成るグループからAMPおよび／またはAMP類似分子が選択されることである。
【００８６】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子がβデフェンシンである。
【００８７】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、AMPおよび／またはAMP類似分子がβデフェンシン‐1、βデフェンシン‐2、LL-37から成るグループから選択されることである。
【００８８】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、上皮細胞および／または組織、皮膚細胞および／または組織、ケラチノサイトおよび／または組織、腫瘍細胞および／または組織から成るグループから細胞および／または組織が選択されることである。
【００８９】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、生物学的過程が、増殖、分化、炎症、血管形成から成るグループから選択されることである。
【００９０】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織が悪性腫瘍であり、AMPおよび／またはAMP類似分子への細胞および／または組織の暴露が、1ミリリットル当たり約0.1マイクログラムから約10マイクログラムの濃度範囲のAMPおよび／またはAMP類似分子に細胞および／または組織を暴露させることにより実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がデフェンシンであることである。
【００９１】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、細胞および／または組織がケラチン生成細胞および／または組織であり、AMPおよび／またはAMP類似分子への細胞および／または組織の暴露が、1ミリリットル当たり約2ナノグラムから約10マイクログラムの濃度範囲のAMPおよび／またはAMP類似分子に細胞および／または組織を暴露させることにより実施され、AMPおよび／またはAMP類似分子がデフェンシンであることである。
【００９２】
記述された好ましい実施例においての引き続く更なる特徴は、 細胞および／または組織がヒトに由来することである。
【００９３】
本発明は、(i) AMP および／またはAMP相似分子の濃度／作用を減少能力を有する化合物を使うことによる、および／またはAMP および／またはAMP相似分子を使用することによる、増殖、分化、炎症、血管形成および／またはアポトーシスなど細胞／組織中の生物学的過程に関連する疾患治療方法；(ii)そのような化合物を含み、そのような疾患治療がラベル表示された製造品目；および(iii)そのような化合物の同定方法、を提供する事により、現在知られている構造の欠点にうまく対処している。
【００９４】
別に定義されない限り、本文で使用されている全ての専門的および科学的用語は、この発明が属する分野において通常の知識を持つ者によって一般的に理解されている意味と同じである。本文で説明されているものと類似または同様の手段および材料が、本発明の実践または試験において使用可能ではあるが、適切な手段および材料は下記に記述されている。本文に記述されている全ての出版物、特許出願書, 特許、およびその他の文献全てを参考文献として挙げてある。矛盾が起こった場合、定義を含み特許詳述に従う。また、材料、手段、および実施例は実例にしかすぎず、これだけに限るものではない。
【実施例】
【００９５】
本発明は、抗菌ペプチド(AMP)／抗菌ペプチド類似分子(AMLs)の作用／濃度を減少させる化合物を使用する方法であり、増殖、分化、増殖／分化均衡、炎症、転移および血管形成などの細胞／組織の生物学的過程における調節にAMP やAMLsを使用する方法である。すなわち、その生物学的過程に関連した疾患治療のためにそのような分子を使用する方法で、化合物を使用および／またはその生物学的過程の調節を通した治療に敏感に反応する方法、その分子を含みそのような疾患の治療に適用することがレベルに表示された製造品目、およびAMP/AMLの作用／濃度を減少できる化合物の同定とAMP/AMLを同定する方法である。具体的には、本発明は、炎症性疾患／乾癬等の細胞の増殖／分化不均衡に関連した疾患、創傷に関連した疾患、および転移性／悪性腫瘍等の腫瘍を含む生物学的過程に関連した疾患の広範囲で適切な治療として使用することができる。
【００９６】
図と付随する説明を参考にし、本発明の仕組みと作用をより深く理解できる。
【００９７】
本発明の少なくとも1つの実例を詳細に説明する前に、この発明は、下記の説明によって示されるか、実施例によって例示された詳細において、その適用が制限されないことを理解する必要がある。この発明は、様々な方法での他の具体化、実践または実行が可能である。また、本文で使用される語法および用語は説明を目的とし、制限についてでないことを理解する必要がある。
【００９８】
炎症、調節不能細胞／組織の増殖／分化、調節不能細胞／組織の増殖／分化均衡、血管形成、および／または転移に関連した疾患は、医学的および／または経済的に多大な影響を与え、十分な治療法のない多数の疾患が含まれる。  この発明者は、本発明を思いつく一方、AMP／AMLがこれらの疾患の病因に関連していること、および／またはそれ故に作用／濃度の減少させる、および／またはこの化合物を投与する方法がその疾患治療のために使用できると仮定している。
【００９９】
そのような方法に関係する事前の技術的アプローチは、作用が不明でかつ疾患病因との関係不明な、新規な推定上の AMP類似分子をコード化する遺伝子配列をコンピューターによって同定することを含み、疾患治療のためのそのよう分子の使用または調節を試行する非常に推論的および理論的な方法を提案している (U.S. 特許出願書 No. 20030044907)。
【０１００】
前アプローチは、しかしながら大きな欠陥がある。どの疾患の病因においても推定上のAMP類似分子の役割がはっきりしていないため、推定上のAMP類似分子濃度を調節することが、疾患患者への投与時に治療上の効果があるとは合理的に期待できない。そのように、前アプローチは、疾患治療するためのその推定のAMP類似分子の使用または調節の理論的方法に制限がある。前アプローチは、他の前文書中に, それが提案する疾患治療方法の実験的裏付けをなにも提供せず、認めていない。前アプローチが、炎症性疾患または腫瘍など特定の疾患治療を説かないように、本発明方法を用いて疾患治療をする動機を専門家に提供しない。更に、前アプローチは、どの疾患治療においてβデフェンシン-2またはLL-37などの代表的AMP抑制剤を使用する手段を提案していない。
【０１０１】
別の前アプローチは、遺伝子配列に補足的なアンチセンスポリヌクレオチドを使用し、および理論的な投与方法に従ってそのアンチセンスポリヌクレオチドを投与する疾患治療を提案している。
【０１０２】
しかし、前技術的アプローチは、(i) 疾患病因においてのその推定上のAMP類似分子の役割に対し非常に推理的な部分を使用していること; (ii) 信頼できない抗体生成方法の使用を必要としていること; (iii) 推定上の治療物質の治療上の投与措置を使用していること ; および (iv) 試行されたことがなく、それ故に治療上応用の可能性が証明されたことがないなど、致命的な不利益を与えている。
【０１０３】
このように、 前アプローチは、疾患治療の為のAMP/AMP類似分子の濃度／作用の調節を含む現実的な手段の提供に失敗している。
【０１０４】
本発明の実践を減少させる一方、抗-AMP 抗体を使用し次のこができることが明らかになった。つまり、培養されたヒト悪性腫瘍細胞の基質付着の成長および減少を有意に抑制すること、培養された 初期ヒトケラチノサイトの成長を阻害／誘発すること、代表的な培養された3Ｄの皮膚モデルにおいてヒト上皮細胞／組織増殖／分化不均衡を効果的に修復すること、 ヒト被験者中の乾癬を効果的に治療すること、培養されたヒトの胃腸上皮細胞成長を有意に阻害／誘発すること、およびヒトの内皮細胞の成長を効果的に阻害すること、である。
【０１０５】
本発明の実践を減少させる一方、培養されたヒトの上皮細胞の成長のアップレギュレードおよびダウンレギュレートにAMPが使用できることも見出された。
【０１０６】
このように、前技術との鮮明な比較において、本発明による手段は、AMP/AMLの濃度／作用を減少させる化合物の使用、および／または成長、分化、炎症、転移および血管形成等の生物学的過程の調節においてのAMP／AMLの使用が可能とし、さらに悪性転移性皮膚癌等の癌、潰瘍性疾患等の創傷に関連した疾患、および自己免疫疾患／乾癬等の調節不能な細胞増殖／分化に関連した疾患を含む炎症、調節不能な細胞増殖／分化、血管形成および／または転移に関連した疾患のような数々の疾患の治療を可能にする。
【０１０７】
このように、本発明は、細胞／組織内の生物学的過程を調節する手段を提供する。この方法は、細胞および組織の抗菌ペプチド(AMP)および／またはAMP類似分子(AML)の作用および／または濃度を減少できる化合物、AMP、および／または AMLに細胞／組織を曝露させることにより実施される。
【０１０８】
この方法は、成長、分化、炎症、血管形成、および／または転移等の細胞／組織中での生物学的過程の調節に使用できる。細胞／組織中でのそのような生物学的過程の調節ができるという長所によって、この方法は、下記に詳細が説明されているように、生物学的過程に関連した疾患治療と調節因子の同定するに使用できる。そのような生物学的過程に関連する疾患として、例えば自己免疫疾患、調節不能細胞／組織増殖／分化均衡に関連した疾患、創傷関連疾患および腫瘍を含む。 
【０１０９】
本文書で使用されている、“調節因子”と呼ばれる用語は、本発明のあらゆる実用化に使用されるAMP/AMLの作用／濃度を減少できる化合物、AMP、および／またはAMLのことを言う。
【０１１０】
本文で使用されるように、“化合物”、“本発明の化合物”、および “AMP/AML 阻害因子”といったフレーズは、AMP/AMLの作用／濃度を減少できる化合物のことをいう。
【０１１１】
AMP/AML阻害因子の様々なタイプのどれもが応用と目的に従って、生物学的過程の調節に対する本発明の指導の基に使用される。
【０１１２】
本文書で使用されるように、 “AMP”という用語はデフェンシン、 カセリシジン、および／またはトロンボシジン、またはそれらの分子の自然変異体／多型性変異体／アレレ等のその分子のあらゆる自然に存在する分子、またはその分子のあらゆる合成変異体を含む。
【０１１３】
本文で使用されるように、 “AML”には、デフェンシン、カセリシジンおよび／またはトロンボシジンの分子に実質的に似た生物的作用を持つあらゆる分子、デフェンシン、カセリシジンおよび／またはトロンボシジンの生物的作用を実質的に促進するあらゆる分子、デフェンシン、カセリシジンおよび／またはトロンボシジンと実質的に構造が一致するあらゆる分子が含まれる。
【０１１４】
この方法は、本発明の単調節因子を使い、または本発明の複数調節因子のあらゆる組み合わせを使い実施される。
【０１１５】
AMP／AML阻害剤はおそらく、AMP／AMLとの結合可能な分子、AMP/AMLを切断できる酵素、AMP/AML をコード化するmRNAの分解を誘発できるsiRNA分子、 AMP/AML をコード化するmRNA または DNAを切断できるDNA酵素、AMP/AML をコード化するmRNAとハイブリッドできるアンチセンスポリヌクリオチド、 AMP/AML をコード化するmRNA を切断できるリボザイム、 AMP／AMLの最小機能性部分の非機能性相似体、 AMP/AML の活性化または配位子結合を阻害できる分子、 およびAMP/AMLをコード化するDNAとハイブリッドできる三重鎖形成性オリゴヌクレオチドなど、である。
【０１１６】
そのようなAMP/AML阻害剤を入手し、使用するための豊富な指針は本文書のこれ以降に、およびその技術分野の文献にて (例えば、参照により本文に取り組まれたU.S. 特許出願書 No. 20030044907)提供される。
【０１１７】
AMP/AML阻害剤は、あらゆる小さい分子, AMP/AML優性阻害型、または疾患を誘発することなく同族細胞受容体をAMPと競うポリペプチドである。 例えば、AMP/AML阻害剤は抗菌力を保持し化学的引き付ける能力を失うように設計されたAMP/AMLのトポロジー（位相幾何的）相似体である場合がある。ジスルフィド架橋の設計し、ヒトβデフェンシン-3などのAMP/AMLの抗菌および走化性作用を分析することは、先の説明のように実行することができる(非特許文献２８)。
【０１１８】
AMP/AML阻害剤は、複数のペプチドループが分子の骨組に付着する人工の交代模擬物質であることもある (特許文献１にて説明される) 。
【０１１９】
そのようなAMP／AML模擬物質は、例えば、分子インプリンティングにより得られる。この技術は、“テンプレート分子” (AMP/AML)の周りの単量体を架橋することにより重合体を作成することにより実施される。このテンプレート分子は単量体の重合後に取り除かれ、そのサイズ、形、化学的作用は重合体中に表示される。テンプレート分子が取り除かれた場所は“インプリント・サイト”と呼ばれる。このサイトはテンプレート分子または構造的に似た分子を認識させる。自然の抗体のように、分子的にインプリントされた重合体は、人工の結合模擬物質として 作用することができる。
【０１２０】
AMP/AML の活性化または配位子結合を阻害できる分子は、AMP/AMLの受容体との結合により媒介された生物学的過程を阻害するためにAMP/AMLと結合する白血球等の細胞上に発現された受容体の結合を都合よく阻害する場合もある。 
そのようなAMP/AMLの例およびその同族の受容体は表1に示されている。
【表１】
2006514106.tif 000002
表１：AMP/AMLと同族細胞受容体、およびその二者間の相互作用に起因する疾患
【０１２１】
ケモカイン等のAMP／AMLの受容体、その受容体が発現する細胞、およびそのAMP／AMLとその受容体の間の相互作用が関わる疾患の更なる例は、非特許文献２９の中で提供される。
【０１２２】
LL-37 (非特許文献３０), デフェンシン-3, ラクトフェリンおよびIL-8 (非特許文献３１)の作用は、F-アクチンにより阻害され、故にAMP/AML 阻害剤はF-アクチンである場合もある。ポリカチオン性インターロイキンIL-8の共存下で、F-アクチン は束状構造を形成し、それ故にF-アクチンは、LL-37とインターロイキン IL-8両方の配位子-受容体接続性に対するダウンストリーム要素の阻害剤である。LL-37 およびデフェンシン-3はゲルソリンにより阻害され、故にAMP/AML 阻害剤はゲルソリンの場合もある。セルピンおよびその相似体または断片は、AMPと複合体を形成することにより(非特許文献３２; alpha-1 antichymotrypsin, the antimicrobial proteins alpha PI, SLPI and elafin are serpins that form complexes with other AMPs)、特定のタイプの炎症を減少し(非特許文献３３)、AMPの不活性化物質になる。それ故にAMP/AML阻害剤がセルピンおよびその相似体または断片である場合がある。AMP/AML 阻害剤は、抗細菌ペプチドを不活性化する連鎖球菌化膿素が分泌したたんぱく質のSICである場合がある。 
【０１２３】
AMP/AMLと結合できる望ましい分子は抗体または抗体断片である。
【０１２４】
あるいは、AMP/AMLと結合できる分子は非免疫グリブリンペプチドおよびポリペプチドを含む分子の様々なタイプのいづれかの場合がある。
【０１２５】
好ましい抗体断片は、単鎖Fv、Fab、Fab'、およびF(ab')2から成るグループから選択される。
【０１２６】
本文で使用される “抗体”という用語は、実質的に無傷の抗体分子を意味する。
【０１２７】
本文で使用される “抗体断片”という用語は、AMP/AMLと結合できる抗体の機能的断片のことを言う。
【０１２８】
本発明を実行するにあたり適切な抗体断片は、免疫グロブリン軽鎖 (本文では “軽鎖”と呼ばれる)の相補性決定領域(CDR) 、免疫グロブリン重鎖(本文では “重鎖”と呼ばれる)のCDR、軽鎖の可変領域、重鎖の可変領域、軽鎖、重鎖、Fd断片、およびFv、単鎖Fv、 Fab、Fab’、および F(ab’)2等の軽鎖および重鎖の本質上無傷な可変領域から成る抗体断片を含む。 
【０１２９】
軽鎖および重鎖両方の無傷なまたは本質的に無傷な可変領域から成る機能性抗体断片は下記のように定義される。
(i)  2つの鎖として発現される軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域から成る遺伝子的に処理された断片と定義されるFv;
(ii) 適切なポリペプチド・リンカーにより連結される軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む遺伝子的に処理された単鎖分子である単鎖Fv (“scFv”)。
(iii)  酵素パパインと無傷の抗体処理し、無傷の軽鎖および可変とCH1ドメインから成る重鎖のFd 断片を収穫することによって得られる、抗体分子の一価性抗原-結合部分を含む抗体分子断片であるFab、 
(iv)  酵素ペプシンと無傷の抗体を処理し還元 (2個のFab’断片 が抗体分子毎に得られる) する事により得られる抗体分子の一価性抗原-結合部分を含む抗体分子断片であるFab’、 および
(v) 無傷の抗体を酵素ペプシン (i.e., 2つのジスルフィド結合により結合されるFab’断片の2量体) と処理することにより得られる抗体分子の一価性抗原-結合部分を含む抗体分子断片であるF (ab’)2
【０１３０】
抗体(i.e.,単クローン性 および多クローン性)生成の方法は、当分野において広く知られている。抗体は当分野で知られているどの方法を使用しても生成可能で、その方法では、抗体分子の生体内生成の誘発、免疫グロブリン-ライブラリーの識別(非特許文献３４; 非特許文献３５)、または培養中の連続性細胞株による単クローン性の生成を利用する場合がある。それらは、ハイブリドーマ技術、ヒトB細胞ハイブリドーマ技術、およびエプステイン・バー・ウイルス(EBV)-ハイブリドーマ技術を含むが、それらに限定されない (非特許文献３６; 非特許文献３７; 非特許文献３８; 非特許文献３９)。
【０１３１】
生体内抗体生成時に、適切な免疫原性反応を誘発するには標的抗原が小さ過ぎる場合、その抗原(ハプテン)を、キーホール・リンペット（スカシ貝ヘモシニアン(KLH)または血清アルブミン[例えば、ウシ血清アルブミン (BSA)] 担体等の抗遺伝子的中性担体に結合させる事ができる (例えば、特許文献２および３を参照] 。担体とハプテンの結合は当分野で広く知られている方法を使用し実行できる。例えば、アミノグループへの直接結合の実行後、形成されたイミノ連鎖の還元を任意に実施できる。あるいは、担体は、ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはその他のカルボジイミド脱水剤等の縮合剤を使用し結合できる。結合を実行するのにリンカー化合物を使用できる。つまり同種二機能性および異種二機能性リンカーはPierce Chemical Company, Rockford, Illにて入手できる。その結果の免疫原性複合体は、マウス、ラビット等の適切な哺乳類被験者に注入できる。適切な実験計画には、血清中の抗体生成を促進する計画に従い補助剤の共存下、免疫原性の複数回注入操作が含まれる。免疫血清の滴定濃度は、当分野で広く知られた免疫学的測定法を使用し容易に測定できる。 
【０１３２】
得られた抗血清は直接使用でき、またはモノクロナール抗体は上記に説明されたように得られることがある。
【０１３３】
抗体断片は、当分野で広く知られている方法を使い得られる。 [(例えば非特許文献４０を参照]。例えば、本発明においての抗体断片は、抗体タンパク質分解性加水分解により、あるいは、大腸菌またはその断片をコード化するDNAの哺乳類細胞(例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞培養または他のタンパク質発現システム)中に暴露することにより作成できる。
【０１３４】
あるいは、抗体断片は、従来法の無傷の抗体のペプシンまたはパパイン分解消化 により得られる。上記に説明されているように、(Fab’)2抗体断片は、ペプシンと酵素により抗体を切断し5S 断片を提供することによって生成させることができる。 この断片は、チオール還元剤、およびジスルフィド連鎖の切断し3.5S Fab’一価性断片を生成する結果生ずるスルフヒドリル基を保護する基をオプションとして使用し、更に切断する事ができる。あるいは、ペプシンを使った酵素による切断は、2個の一価性Fab’断片およびFc 断片を直接生成する。そのような方法を実践するのに十分な指針は、その分野の文献にて提供される。 (例えば、: 特許文献４および５;非特許文献４１を参照)。その断片が無傷抗体により認識される抗原に結合する限り、抗体を切断する他の方法、つまり一価性軽重鎖断片を形成する重鎖の分離、断片の更なる切断、または他の酵素的、化学的または遺伝子の技術、等も使用できる。
【０１３５】
上記に説明されているように、Fvは対になった重鎖可変および軽鎖可変ドメインから成る。会合性は、非共有結合性である場合がある (例えば 非特許文献４２を参照) 。あるいは、上記に説明されているように、可変ドメインは、分子間のジスルフィド結合により単鎖Fv生成をするために連結でき、またはその代わりとしてその鎖はグルタルアルデヒド等の化学物質により架橋される時もある。
【０１３６】
好ましいFvは、単鎖Fvである。
【０１３７】
単鎖Fvは、ペプチドリンカーをコード化するオレゴヌクレオチドにより結合した、重鎖可変 および軽鎖可変ドメインをコード化するDNA配列 を含む構造遺伝子を構築することにより生成される。構造遺伝子は、大腸菌等のホスト細胞中に実質的に導入される発現ベクトルに挿入される。組み換え型ホスト細胞は、2つの可変ドメインをペプチド架橋するリンカーを持つ単一ポリペプチド鎖を合成する。単鎖Fvを生成するための十分な手引きは当分野の文献にて提供される (例えば: 非特許文献４３; 非特許文献４４; 非特許文献４５; 特許文献６を参照) 。
【０１３８】
孤立した相補性決定領域ペプチドは、関心のある抗体の相補性決定領域をコード化する遺伝子を構築することにより得られる。例えば、その遺伝子は、抗体生成細胞のmRNAのRT-PCRにより生成できる。その方法を実施するための十分な手引きは、当分野の文献にて提供される(例えば、非特許文献４６を参照) 。
【０１３９】
ヒトの治療または診断において、ヒト化抗体を好んで使用することが高く評価されるであろう。非ヒト(例えば、.マウスの)抗体のヒト化形態は、非ヒト抗体を一部として（できれば最小限の）持つ遺伝的に処理されたキメラ抗体または抗体断片である。ヒト化抗体は、ヒト抗体(受容体抗体)の相補性決定領域 が望ましい機能性を持つマウス、ラット、ラビット等の非ヒト種(供与体抗体)の相補性決定領域 の残基に置き換えられた抗体を含む。幾つかの例では、ヒト抗体のFv基質残基は対応する非ヒト残基に置き換えられる。ヒト化された抗体は、受容体抗体にまたは受け入れられた相補性決定領域または 基質配列に見られない残基から成る。一般的に、ヒト化された抗体は少なくとも1つのおよび典型的には2つの可変ドメインの実質的な全てから成り立ち、そこでは、相補性決定領域の全てまたは実質的全てが非ヒトの領域に相当し、そして基質領域の全てまたは実質的全てが関連のあるヒトの共通配列の基質領域に相当する。最適なヒト化抗体はまた、典型的にヒト抗体から得られるFc領域などの抗体不変部領域の最小部分が含まれる (例えば非特許文献４７; 非特許文献４８; 非特許文献４９を参照) 。
【０１４０】
非ヒトの抗体をヒト化する方法は、当分野では広く知られている。一般的にヒト化された抗体は、非ヒト供与源からその抗体に導入される1個またはそれ以上のアミノ酸残基を持つ。時には、これらの非ヒトアミノ酸残基は、典型的には移入された可変ドメインから獲得した移入残基として知られる。説明されているように、ヒト化はヒトの相補性決定領域を対応する齧歯動物相補性決定領域に置き換えることよって本質上実施される(例えば: 非特許文献５０; 非特許文献５１; 非特許文献５２; 特許文献７を参照) 。したがって、そのヒト化された抗体は、キメラ抗体であり、その中で、無傷のヒト可変ドメインよい実質的に少ないものが、、非ヒト種から得られる対応する配列に置き換えられる。実践において、ヒト化抗体は、いくつかの相補性決定領域残基、およびおそらくいくつかの基質残質が齧歯動物抗体中の類似部位残基に置き換えられる代表的なヒト抗体であることがある。
【０１４１】
ヒトの抗体はまた、ファージ・ディスプレイ・ライブラリーを含む当分野において広く知られた様々な方法を使って生成できる[例えば、 非特許文献５３; 非特許文献５４; 非特許文献５５; 非特許文献５６を参照) 。ヒト化抗体はまた、ヒトの免疫グロブリン遺伝子座をコード化する配列を遺伝子導入した動物、 例えば内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性化されたマウス中に、挿入することにより生成される。抗原投与において、ヒト抗体の生成は、遺伝子再構成、 鎖会合体および抗体レパートリーを含むあらゆる点で、ヒト中に見られるものに類似した動物中に観察される。そのようなアプローチを実践するための十分な手引きは当分野の文献中に提供される(例えば、: 特許文献８，９，１０，１１，１２，１３; 非特許文献５７，５８，５９，６０，６１，６２，６３を参照) 。 
【０１４２】
一度抗体が得られたら、例えばELISAを通してその作用がテストされる。
【０１４３】
適切な抗体は、多くの場合Pharmingen, Dako, Becton-Dickinson, Sigma-Aldrichなどの供給会社からすぐ使える状態で購入できる。藻類は、抗体を工業大量生産するために使用できる(非特許文献６４)。
【０１４４】
上記に説明されているように、AMP/AML阻害剤は、低分子干渉RNA (siRNA)分子である場合がある。 RNA干渉の過程には2つのステップがある。開始ステップと呼ばれる第一ステップでは、インプットdsRNAは、ATPに依存する方法で(直接挿入またはトランスジーンまたはウイルスを通した)dsRNAを処理する(切断する)、ダイサー（Dicer）と呼ばれるdsRNA特定のＲＮＡ分解酵素のRNase IIIファミリーメンバーの作用により、21-23ヌクレオチド(nt)低分子干渉RNA (siRNA)に分解消化される。成功する切断事象は、そのRNAを19-21 bp二本鎖(siRNA)に解体し、各二本鎖は2-ヌクレオチド3’オーバーハング（突出）がある [非特許文献６５，６６]。
【０１４５】
エフェクターの段階では、2体鎖siRNAが、RNA誘発サイレンシング複合体 (RISC)を形成するため、ヌクレアーゼ複合体と結合する。2体鎖siRNA のATPに依存する巻き戻しは、RISCの活性化のために必要不可欠である。そして、活動性RISCは、塩基対合相互作用による相同性転写を標的にし、そしてsiRNA の3’末端からmRNAを12ヌクレオチド断片に切断する[非特許文献６５，６７，６８] 。  切断の仕組みは、未だ解明されていないが、研究結果は、各RISCが1個のシングル siRNAとRNaseを含むと示唆する [非特許文献６５]。
【０１４６】
RNAi が著しい作用強度を発揮するのため、RNAi経路中に増幅ステップが存在することが示されている。増幅はsiRNAを更に生成するインプット dsRNAsの複写により、または形成されたsiRNA の複製により起こり得る 。代替的に、または追加的に、増幅は、RISC の多発性ターンオーバーにより実施し得る [非特許文献６５，６７，６８]。RNAiの情報については、下記のレビューを参照する。 非特許文献６９，７０，７１。
【０１４７】
本発明との使用上に適切なRNAi分子の合成は下記のように実施できる。初めに、AMP/AML mRNA配列は、AAジヌクレオチド配列のAUG開始コドンのダウンストリームにスキャンされる。各AAおよび3’位隣接の19位の ヌクレオチドの発生はsiRNA標的可能な部位として記録される。非転移領域(UTR)調節タンパク質結合部位により富んでいるため、望ましいsiRNA標的部位は転写解読枠から選択される。UTR結合性タンパク質および/または転移開始複合物は、siRNAエンドヌクレアーゼ複合物の結合に干渉する場合がある[非特許文献６９]。しかし、GAPDHにおいて、siRNA が5’位UTRを仲介する細胞のGAPDH mRNAのおよそ90 %減少を誘導し、タンパク質レベルを完全に破壊する(非特許文献７２)と実証された結果、非転移領域に誘導されたsiRNAが効果的であるという事が認識されるであろう。
【０１４８】
上記に使用されている“およそ”という言葉はプラス/マイナス10 %を意味する。
【０１４９】
第二に、可能な標的部位は、NCBIサーバーにて入手できる BLASTソフトウェア(非特許文献７３)などの配列位ソフトウェアを使用し、適切なゲノムのデータベース(例えば、ヒト、マウス、ラット等)と比較される。他の暗号配列との本質的相同性を陳列する推定上の標的部位は濾過して取り除かれる。
【０１５０】
認定標的配列は、siRNA 合成のテンプレートとして選ばれる。望ましい配列は、媒介する遺伝子サイレンシングにおいて、55％以上のG/C 含量と比較するする場合より効果的であると証明されている、低いG/C含量を含む配列である。望ましい標的部位のいくつかは、価値判断のため標的遺伝子の長さに沿って選択される。選択されるsiRNAs のより良い価値判断のため、望ましくは、陰性コントロールが結合において使用される。望ましい陰性コントロールsiRNAは、siRNAと同じヌクレオチド構成を含むが、ゲノムとの本質的な相同性に欠く。そのように、siRNAのつぶれたヌクレオチド配列が望ましくは使用され、他の遺伝子とのあらゆる本質的相同性を表示しないよう提供される。
【０１５１】
上記に説明されているように、AMP/AML阻害剤は、特にmRNA転写またはAMP/AMLのDNA配列を切断できる DNA酵素分子である時がある。 DNA酵素は、1本鎖および2本鎖の標的配列を切断できる1本鎖ポリヌクレオチドである (非特許文献７４，７５)。DNA酵素の一般的なモデル("10-23"モデル)が提案されている。"10-23” DNA酵素は、各7から9個のデオキシリボヌクレオチドの2個の基質認識ドメインに接する15個のデオキシリボヌクリオチドの触媒的ドメインを持つ。このタイプのDNA酵素は、プリン:ピリミジン連結部においてそのRNA基質を効果的に切断できる(非特許文献７６; DNA酵素のレビューは非特許文献７７を参照]。 
【０１５２】
1本鎖および2本鎖の標的切断部位を認識する合成処理されたDNA酵素 の構造および増幅の例は、特許文献１４にて発表されている。 
【０１５３】
上記に説明されているように、AMP/AML阻害剤は、AMP/AML をコード化するmRNA転写産物と明確にハイブリッドできる、アンチセンスポリヌクレオチドである場合がある。
【０１５４】
AMP/AMLの濃度/作用を効果良く減少させるのに使用できるアンチセンス分子の実験計画は、アンチセンスアプローチに重要な二つの観点に注意を払って実行しなければならない。１つは、オリゴヌクリオチドの適切な細胞の細胞形質への摘出であり、2つ目はその翻訳を阻害するような方法で、細胞内の指定mRNA に特異的に 結合するオリゴヌクレオチドの設計である。
【０１５５】
以前の技術は、効率良くオリゴヌクレオチドを、多種類の細胞タイプに摘出するのに使用できる多数の摘出方法を説明している。 [例えば 非特許文献７８，７９，８０，８１，８２を参照]。 
【０１５６】
さらに、標的mRNAおよびオリゴヌクレオチド両方の構造変化を、エネルギー学的に説明する熱力学サイクルに基づいて、最も高く予測された標的mRNAの結合能を用い、それらの配列を同定するアリゴリズムもまた利用可能である [例えば、非特許文献８３を参照]。
【０１５７】
そのアリゴリズムは、細胞中のアンチセンスアプローチを実行するのに上手く使用されている。例えば、ウォルトンとその同僚により開発されたアリゴリズムは、 科学者がラビット・βグロビン(RBG)およびマウス腫瘍壊死因子アルファ(TNF アルファ)転写のアンチセンスオリゴヌクレオチド を上手く設計させる。
最近、同研究グループは更に、細胞培養における3つの標的モデルmRNA (ヒト乳酸脱水素酵素 AとB およびラットgp130)に対し合理的に選択されたオリゴヌクレオチドのアンチセンス作用を、動体学的PCR技術により検討した時、リン酸ジエステルおよびホスホロチオ酸オリゴヌクレオチド化学を用いた2種細胞中の3つの異なる標的に対するテストを含むほとんど全ての場合に、効果的であることが証明されたと報告した。
【０１５８】
更に、生体内のシステムを使用し特定のオリゴヌクレオチドの効率を設計し予測するための幾つかのアプローチが発表された (非特許文献８４）。
【０１５９】
臨床試験のいくつかは、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの安全性、実施可能性、および作用を実証している。例えば、癌治療に適切なアンチセンス・オリゴヌクレオチドが、効率よく使われており[非特許文献８５]、c-myb遺伝子、p53およびBcl-2を標的にしたアンチセンス・オリゴヌクレオチドを通した血液癌の治療は臨床試験に入り、患者に忍容性があると明らかにされている[非特許文献８６]。
【０１６０】
更に最近では、ヒトのヘパラナーゼ遺伝子発現のアンチセンスを介在する抑止作用が、マウス実験においてヒトの癌細胞の胸膜の転移を抑制すると報告されている [非特許文献８７]。
【０１６１】
このように、上記に説明されているように、アンチセンス技術の分野においての最近の開発が、非常に正確な アンチセンス設計アリゴリズムおよび幅広い多様のオリゴヌクレオチド伝達システムの生成に導き、専門家が不当な試験および誤差実験することなく既知の配列発現のダウンレギュレートに適したアンチセンスアプローチの設計および実施できるようになったことは、最近の合意点である。
【０１６２】
上記に説明されているように、AMP/AML阻害剤は、AMP/AML をコード化するmRNA転写産物を的確に切断できるリボザイム分子である場合がある。リボザイムは、興味対象のタンパク質をコード化するmRNAを切断することによって、遺伝子発現の特定配列を阻害する際に、ますます使用されている[非特許文献８７] 。特定の標的RNAを切断するリボザイムを設計する可能性は、基礎研究および治療応用での役立つ道具となるように貢献している。 治療分野では、リボザイムは、感染性疾患のウイルス性RNA、癌中の優性発癌遺伝子、および遺伝子障害における特定の体細胞突然変異を標的にするため利用されている[非特許文献８８] 。特に、HIV患者のリボザイム遺伝子治療実験計画のいくつかは、すでに第Ｉ相臨床試験に入っている。もっと最近では、リボザイムは、遺伝形質転換動物研究、遺伝子標的確認、および経路解明に使用されている。リボザイムのいくつかは、臨床試験の様々な段階にある。アンジオザイム（Angiozyme）は、ヒト臨床試験で研究された最初の化学的に合成されたリボザイムであった。アンジオザイムは、血管形成経路において鍵となる構成要素であるV例えば、F-r (血管内皮増殖因子受容体)の形成を特に阻害する。他の会社同様、Ribozyme Pharmaceuticals, Inc.は、動物のモデルにおいての非血管形成治療の重要性を実証している。Ｃ型肝炎ウイルス (HCV) RNAを選択的に破壊するよう設計されたリボザイムであるヘプタザイム（Heptazayme）は、細胞培養アッセイにおいてＣ型肝炎ウイルスRNAの減少に効果的であることが明らかとなった (非特許文献８９)。
【０１６３】
上記に説明されているように、AMP/AML阻害剤は、3重形成オリゴヌクレオチド(TFO)である場合がある。TFOは、細胞中のAMP/AML遺伝子の発現を調節するのに使用できる。最近の研究では、配列-特異性な方法で2重鎖ヘリックスDNA中のポリプリン/ポリピリミジン領域を認識し結合できるように、TFOを、設計できることを明らかにしている。非特許文献９１，９２，９３，９４，９５にて、これらの認識規定は概説される。 干渉物質およびバックボーン置換物の導入等のオリゴヌクレオチドの改変、および結合状態の最適化 (pHおよびカチオン濃度)は、電荷相反および不安定性などのTFO作用への固有の障害を克服するのに役立ち、合成オリゴヌクレオチドを特定の配列に標的できることが最近明らかとなった(最近のレビュー非特許文献９６を参照)。  
【０１６４】
一般的には、3重鎖形成性オリゴヌクレオチドは：オリゴ、3'--A G G T; 2体鎖、5'--A G C T; および2体鎖、3'--T C G A：の配列対応性を持つ。
【０１６５】
しかし、A-ATおよびG-GCの3重鎖が最も高い3重へリックスの安定性を持つということが明らかとなった (非特許文献９７)。同著者は、A-ATおよびG-GC規定に従い設計されたTFOが非特異性の3重鎖を形成せず、つまり実際に3重鎖形成は配列に特異であることを証明した。
【０１６６】
このように、AMP/AML 遺伝子中のどの配列においての3重鎖形成配列は考案される可能性がある。好ましい3重鎖形成性オリゴヌクレオチドは、少なくとも15 bp、より好ましくは25 bp、もっと好ましくは30 bpまたはそれ以上、50 bpまたは100bpまでの長さのヌクレオチドである。
【０１６７】
TFOによる細胞の形質移入 (例えばカチオン性リポソームを介した)および標的DNA との3重へリックス構造の形成によって、立体的および作用的変化、転写開始および伸長の阻害、内因性DNA 内での望ましい配列変化の挿入許可、および結果として遺伝子発現の特定のダウンレギュレーションが誘発される。TFOで処理した細胞中の遺伝子発現のそのような抑止例は、哺乳類細胞中のエピソームsupFG1 と 内因性HPRT 遺伝子のノックアウト (非特許文献９８，９９), そして前立腺癌疫学に重要なEts2転写要素の発現の配列および標的物質特異性抑制(非特許文献１００)と炎症誘発性ICAM-1遺伝子(非特許文献１０１)を含む。更に、VuyisichとBealは、配列に特定特異性のTFOがdsRNAと結合でき、その結果RNAに依存するキナーゼなどのdsRNA次第の酵素の作用を阻害することを最近明らかにした。 (非特許文献１０２)。
【０１６８】
更に、上述の原理により設計されたTFOは、DNA修復を実行でき、それ故に内因性遺伝子の発現のダウンレギュレーションとアプレギュレーションを提供できる誘導された突然変異生成を誘発できる (非特許文献９６)。効果的なTFOの設計、合成と投与の詳細は、U.S. 特許出願書 No. 2003 017068 と 2003 0096980 to Froehler et al, と 2002 0128218 と 2002 0123476 to Emanuele et al, および 特許文献１５にて見出される。
【０１６９】
その分子の細胞または細胞構造へ投与する技術は、専門家により日常に実施され、そのような投与の十分な手引きは当分野の文献にて提供される。(例えば、上記に参照される分子に関係した参考文献と参考文献により本文に含まれた U.S. 特許出願書 No. 20030044907を参照)。
【０１７０】
上記に説明されたように、本発明の生物学的過程を調節する方法は、細胞/組織の調節剤への暴露のステップから成る。 
【０１７１】
細胞/組織の調節剤への暴露は、適用法と目的によって様々な方法で実行される。 細胞/組織がヒトまたは動物の被験対象の部分を形成する場合には、望ましい細胞/組織の調節剤への暴露は、被験対象への調節剤の提供により実行される。
【０１７２】
被験対象への調節剤の投与は、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸および 吸入経路から成るグループから選択された経路を含む調節剤への細胞/組織の暴露を促進するあらゆる適切な経路を通して実施される。
【０１７３】
望ましくは、生理食塩溶液中の調節剤の皮下のおよび/または局所注入が関節症などの疾患治療に使用される。
【０１７４】
望ましくは、脂質または生理食塩溶液中、または皮膚上のクリーム中の調節剤の局所への使用が乾癬疾患などの皮膚の疾患の治療に使用される。
【０１７５】
望ましくは、嚢胞性線維症および喘息などの呼吸器病の治療に、調節剤を液中に溶解し、吸入器を使い投与される。
【０１７６】
あるいは、ヒトまたは動物中の調節剤を発現することにより、細胞は調節剤に暴露される。細胞/組織が培養された細胞/組織である場合には、細胞/組織への調節剤の暴露が望ましくは標準の組織培養法を使い、調節剤の試験管中の細胞/組織への提供により実施される。望ましい生体内の細胞/組織への調節剤の提供は、下記にある実施例セクションに説明されているように実施される。
【０１７７】
調節剤は、被験者への適切に生体内の調節剤が発現するように構成された核酸構造の直接投与により被験者中に発現されることができる。あるいは、調節剤の発現のため核酸構造は、適切な遺伝子伝達媒介体/方法を通し (形質移入、形質導入、相同性組み換え等)、そして必要に応じて適切な遺伝子発現システムを使い、適切な生体外細胞に挿入される場合もある。改変細胞は培養において拡大され、それらが生体内の調節剤を生成する被験者に投与される場合がある。調節剤の細胞発現をさせるため、調節剤をコード化する望ましい核酸構造は少なくとも1つのシス作動性調節要素、最も望ましくは変換された特定の細胞集団において活性な促進剤を含む。核酸構造は促進剤配列と隣接できまたは遠隔でいられる増強構造をさらに含む事ができ、そこから転写の促進において機能する事ができる。
【０１７８】
適切な生体内核酸転送技術は、アデノウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスI ウイルスまたはアデノ関連性ウイルス (AAV)および脂質に基づくシステム、ポリリジンに基づくシステムおよびデンドリマーなどのウイルスまたは非ウイルス構造との形質移入を含む。遺伝子の脂質を介在する転移の役立つ脂質は、例えば、DOTMA、DOPE、およびDC-Chol [非特許文献１０３]である。遺伝子療法においての使用上最も望ましい構造はウイルス、最も好ましくはアデノウイルス、AAV、レンチウイルス、またはレトロウイルスである。レトロウイルスなどのウイルス構造は、少なくとも1つの転写促進剤/増強剤または遺伝子座により定められる要素、または代替えスプライシング、 核RNA搬出またはメッセンジャーの転移後修正など、他の方法によって遺伝子発現を調節する他の要素を含む。そのような媒介構造は、パッケージングシグナル、長末端反復配列 (LTRs)またはその部分、およびウイルスの構造中にすでに現存しない限り、使用されたウイルスに適切な（＋）および（−）鎖プライマー結合部位を含む。その構造は、1つまたはそれ以上の制限部位および転移終結配列と同様にポリアデニル化導くシグナルを含む場合がある。例えば、その構造は、5' LTR、tRNA結合部位、パッケージングシグナル、二次鎖DNA合成の開始点および3' LTRまたはその一部分を典型的に含む。
【０１７９】
本発明の様々な性質は、適用法および目的により様々なタイプのAMP/AMLの作用/濃度を使用によりおよび/または減少により実践される。
【０１８０】
望ましいAMP/AMLはカチオン性および/または疎水性ペプチドである。
【０１８１】
本文で使われる“ペプチド”という用語は ( “抗菌ペプチド”または“抗菌類似ペプチド”というフレーズの前後関係においての用語は例外)51以下ののアミノ酸残基から成るポリペプチドのことをいう。
【０１８２】
望ましいAMP/AMLはデフェンシンまたはカセリシジン（cathelicidin）である。
【０１８３】
望ましいデフェンシンはβデフェンシン、最も望ましくはβデフェンシン-1またはβデフェンシン-2である。
【０１８４】
望ましいカセリシジン（cathelicidin）はLL-37である。
【０１８５】
望ましいAMP/AMLは、ヒトが起源である。あるいは、ヒトでない場合は、哺乳類の起源が望ましい。
【０１８６】
本発明の様々な性質を実施するために使用され、および/またはその作用/濃度が減少されるAMP/AMLの数多くの例の詳細が下記に説明される。
【０１８７】
本発明の様々な細胞/組織中の生物学的過程を調節するために、その方法は実施される。
【０１８８】
望ましい方法は、上皮細胞/組織、内皮細胞/組織、胃腸組織、および/または腫瘍細胞/組織においての生物学的過程を調節するために使用される。
【０１８９】
望ましい細胞/組織は外皮、皮膚、内皮、胃腸、および/または腫瘍細胞/組織である。
【０１９０】
その方法は、様々なタイプの皮膚細胞/組織において生物学的過程を調節するために使用される。
【０１９１】
望ましい皮膚細胞/組織はケラチノサイト/組織である。
【０１９２】
望ましい胃腸細胞/組織は胃腸外皮細胞/組織である。
【０１９３】
望ましい腫瘍細胞/組織は悪性細胞/組織である。あるいは、腫瘍細胞/組織は良性腫瘍細胞/組織である。
【０１９４】
望ましい腫瘍細胞/組織は転移性腫瘍細胞/組織である。
【０１９５】
その方法は様々なタイプの細胞/組織の腫瘍細胞/組織においての生物学的過程を調節するために使用される。
【０１９６】
望ましい悪性細胞/組織は皮膚細胞/組織である。
【０１９７】
その方法は、応用法と目的によっては、様々な濃度の調節剤への細胞/組織の暴露により実施される。
【０１９８】
望ましくは、生物学的過程を調節するために本発明のAMP/AML阻害剤使用時に、AMP/AML阻害剤への細胞/組織の暴露は、1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ1ミリグラムから選ばれた濃度のAMP/AML阻害剤への細胞/組織の暴露により実施される。
【０１９９】
AMP/AML阻害剤への細胞/組織の暴露は、用途と目的によって、1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ100マイクログラムからおよそ200マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ200マイクログラムからおよそ300マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ300マイクログラムからおよそ400マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ400マイクログラムからおよそ500マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ500マイクログラムからおよそ600マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ600マイクログラムからおよそ700マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ700マイクログラムからおよそ800マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ800マイクログラムからおよそ900マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ900マイクログラムからおよそ1ミリグラムの濃度範囲のAMP/AML阻害剤への細胞/組織の暴露することにより都合良く実施される。 
【０２００】
望ましくは、生物学的過程を調節するために本発明のAMP/AMLを使用する時、AMP/AMLへの細胞/組織の暴露が、およそ1ミリリットルあたり2ナノグラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲のAMP/AMLに細胞/組織を暴露することにより実施される。
【０２０１】
AMP/AML阻害剤への細胞/組織の暴露は、応用法と目的によっては、1ミリリットルあたりおよそ2ナノグラムからおよそ1マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ1マイクログラムからおよそ2マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ2マイクログラムからおよそ3マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ3マイクログラムからおよそ4マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ4マイクログラムからおよそ5マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ5マイクログラムからおよそ6マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ6マイクログラムからおよそ7マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ7マイクログラムからおよそ8マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ8マイクログラムからおよそ9マイクログラムの濃度範囲、1ミリリットルあたりおよそ9マイクログラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲のAMP/AML阻害剤に細胞/組織を暴露することにより都合良く実施される。
【０２０２】
その方法は、細胞/組織内において増殖、分化、炎症、転移、および/または血管形成などの生物学的過程を調節するために使用できる。
【０２０３】
外皮、皮膚、および/または胃腸細胞/組織においての増殖を調節するため、調節剤は、都合良く本発明のAMP/AML 阻害剤および/または本発明のAMP/AML である場合がある。 
【０２０４】
外皮、皮膚および/または胃腸細胞/組織においての増殖を誘発するために、使用される望ましい調節剤は本発明のデフェンシン阻害剤および/または本発明のカセリシジン（cathelicidin）阻害剤である。
【０２０５】
本文で使用されるように“デフェンシン阻害剤”という用語は、デフェンシンの作用/濃度を減少できる本発明の化合物のことをいう。
【０２０６】
本文で使用されるように、“カセリシジン（cathelicidin）阻害剤”という用語はカセリシジン（cathelicidin） の作用および/または濃度を減少できる本発明の化合物のことをいう。
【０２０７】
望ましくは、外皮および/または皮膚細胞/組織において増殖を誘発するため望ましいAMP/AMLはデフェンシンである。望ましいデフェンシンは、その目的のために1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムから10マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度で使用される。
【０２０８】
下記の実施例セクションの例1(図1)にあるように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度でβデフェンシン-1またはβデフェンシン-2は、ヒトの皮膚細胞/組織において増殖を誘発するために使用される事ができる。
【０２０９】
望ましくは、外皮、皮膚、および/または胃腸細胞/組織において増殖を誘発するため、デフェンシン阻害剤は1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ50マイクログラムの濃度範囲で使用される。望ましくは、その目的のため使用されるデフェンシン阻害剤は、本発明のβ-デフェンシン-2阻害剤である。
【０２１０】
本文で使用される“βデフェンシン-2阻害剤”という用語は、βデフェンシン-2の作用および/または濃度を減少できる本発明の化合物のことをいう。
【０２１１】
望ましくは、皮膚および/またはケラチノサイト/組織において増殖を誘発するため、デフェンシン阻害剤は1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムから10マイクログラムの濃度範囲、最ものぞましくは1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図3)の例2にあるように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの抗βデフェンシン-2抗体は、一次ヒト皮膚細胞の増殖を誘発するために使用されることができる。
【０２１２】
望ましくは、皮膚および/またはケラチノサイト/組織において増殖を誘発するため、カセリシジン阻害剤は1ミリリットルあたりおよそ0.4マイクログラムからおよそ40マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ4マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図3)の例2にあるように、1ミリリットルあたり4マイクログラムの濃度の抗LL-37抗体は一次ヒト皮膚細胞の増殖を誘発するために使用されることができる。
【０２１３】
望ましくは、胃腸細胞/組織において増殖を誘発するため、デフェンシン阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ5マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ0.5マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図6)の例4にあるように、1ミリリットルあたりおよそ0.5マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体はヒトの胃腸外皮細胞/組織の増殖を誘発するために使用されることができる。
【０２１４】
腫瘍、外皮、皮膚および/または胃腸細胞/組織において増殖を阻害するため使用される調節剤は、本発明のデフェンシン阻害剤および/または本発明のカセリシジン阻害剤である場合がある。その目的のための望ましいデフェンシン阻害剤は、本発明のβデフェンシン-2阻害剤である。
【０２１５】
望ましくは、腫瘍細胞/組織において増殖を阻害するため、デフェンシン阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲、更に望ましくは1ミリリットルあたりおよそ1マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図2)の例1にあるように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、悪性皮膚癌細胞/組織の増殖を阻害するために使用されることができる。
【０２１６】
望ましくは、皮膚および/またはケラチノサイト/組織において増殖を阻害するため、デフェンシン阻害剤は1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ50マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ5マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図3)の例2にて示されているように、1ミリリットルあたり5マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、一次ヒト皮膚細胞の増殖を阻害するために使用されることができる。
【０２１７】
望ましくは、皮膚およびケラチノサイト/組織において増殖を阻害するため、カセリシジン（cathelicidin）阻害剤は1ミリリットルあたりおよそ2マイクログラムからおよそ200マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ20マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図3)の例2にて示されているように、1ミリリットルあたり20マイクログラムの濃度の抗カセリシジン（cathelicidin）抗体は、一次ヒト皮膚細胞の増殖を阻害するために使用できる。
【０２１８】
望ましくは、胃腸細胞/組織において増殖を阻害するため、デフェンシン阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ1マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図6)の例4に示されているように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体はヒトの胃腸外皮細胞/組織の増殖を阻害するために使用できる。
【０２１９】
血管形成/内皮細胞/組織増殖を阻害するため、使用される望ましい調節剤はデフェンシン阻害剤である。その目的のために使用される望ましいデフェンシン阻害剤は本発明のβデフェンシン-2阻害剤である。望ましいデフェンシン阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲、もっと望ましくは1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ5マイクログラムの濃度範囲、そして最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ0.5マイクログラムの濃度で使用される。実施例セクション(図7)の例5に示されているように、1ミリリットル0.5または1マイクログラム(特に1ミリリットルあたり0.5マイクログラム)の濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、血管形成/ヒトの内皮細胞/組織増殖を阻害するために使用できる。
【０２２０】
腫瘍細胞/組織において転移を阻害するため、使用される調節剤は望ましくは本発明のデフェンシン阻害剤である。その目的のための望ましいデフェンシン阻害剤は本発明のβデフェンシン-2阻害剤である。望ましいデフェンシン阻害剤は、その目的のため1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムからおよそ10マイクログラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ1マイクログラムの濃度で使用される。
【０２２１】
下記の実施例セクションの例1で説明されるように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、ヒトの悪性皮膚腫瘍細胞/組織の基質剥離を阻害するために使用できる。
【０２２２】
外皮および/または皮膚細胞/組織において調節不能増殖/分化均衡を補正するため、望ましい調節剤はデフェンシン阻害剤である。望ましくは、その目的のために使用されるデフェンシン阻害剤は、本発明のβデフェンシン-2阻害剤である。望ましくは、βデフェンシン-2阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ0.1マイクログラムからおよそ1ミリグラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ1マイクログラムまたは100マイクログラムの濃度でその目的のために使用される。
【０２２３】
下記の実施例セクションの例3(図4 a-c)に示されているように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、ヒト皮膚に対する本物に近い器官型生体外3Ｄモデルにおいて、増殖/分化の不均衡を補正するために使用できる。(図5 a-d)に続く実施例セクションの例3に示されているように、1ミリリットルあたり100マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、ヒトの乾癬疾患において剥離を阻害、皮膚細胞/組織増殖/分化不均衡の補正をするために使用できる。
【０２２４】
細胞/組織において炎症を阻害するため、使用される望ましい調節剤は本発明のデフェンシン阻害剤である。その目的に望ましいデフェンシン阻害剤は、本発明のβデフェンシン-2阻害剤である。望ましくは、デフェンシン阻害剤は、1ミリリットルあたりおよそ50ナノグラムからおよそ1ミリグラムの濃度範囲、最も望ましくは1ミリリットルあたりおよそ0.5マイクログラムまたはおよそ100マイクログラムの濃度でその目的のために使用される。
【０２２５】
下記の実施例セクションの例3(図5 a-d)に示されているように、1ミリリットルあたり1マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体はヒトの組織において自己免疫炎症を抑制するために使用できる。(図7)に続く実施例セクションの例5にさらに示されているように、1ミリリットルあたり0.5マイクログラムの濃度の抗βデフェンシン-2抗体は、調節剤による血管形成の阻害能力を示し、ヒトの内皮細胞/組織増殖を阻害する場合に使用することができる。ヒト組織において炎症を抑制できるという長所により、および血管形成を阻害できるという長所により、本文で説明されている方法が炎症を強力に抑制できるということが認識されるであろう。
【０２２６】
上記に説明されているように、本発明は、増殖、分化、炎症、転移、および血管形成などの生物学的過程を調節するために使用できる。そのような生物学的過程が数多くの疾患の病因に関連し、および本発明にあるその生物学的過程の調節がそのような疾患治療に使用できることが認識されるであろう。
【０２２７】
このように本発明の性質の1つによると、その治療を要する被験者の疾患治療の方法がある。その方法は、AMP および/またはAMP類似分子(AML)の作用と濃度を減少できる化合物の治療有効量を被験者への提供することにより実施される。
【０２２８】
本文で使用される “疾患”という用語は、あらゆる医学的疾患、障害、状態、または症候群、またはあらゆる好ましくないおよび/または異常な生理形態学上、美容上および/または身体上の状態および/または状況のことをいう。
【０２２９】
本文にある“治療”という用語は、疾患進行の停止、実質的阻害、遅延、 または逆転、疾患の臨床病状の実質的改善、または疾患臨床病状の発現の実質的予防を含む。
【０２３０】
本方法は様々な疾患の治療に使用できる。
【０２３１】
特に、(i) 腫瘍; (ii) 炎症; (iii) 上皮創傷; (iv) 細胞/組織の調節不能増殖/分化; (v) 調節不能細胞/組織の増殖/分化均衡; および (vi) 血管形成に由来する疾患等、に関連した様々な疾患のどの治療にも使用できる。
【０２３２】
本発明を通した治療法に敏感に反応するそのような疾患およびその他の例は、下記に一覧されている。
【０２３３】
医師、最も望ましくはその疾患専門の医師などの当分野で専門家は、本発明に従った必要な疾患治療法の専門知識を持つ。
【０２３４】
本文で使用される“治療を必要とする被験者”というフレーズは、その疾患を持つ被験者のことをいう。
【０２３５】
望ましい被験者は哺乳類、最も望ましくはヒトである。
【０２３６】
上皮、皮膚および/または胃腸細胞/組織の増殖の誘導が明らかに可能であるため、そのような増殖を誘導する上述の方法は、そのような組織の増殖が治療対象となる様々な疾患治療に特に適する。そのような疾患は特に、上皮、皮膚、および/または胃腸創傷に関連した疾患を含む。
【０２３７】
悪性、上皮、皮膚、および/または胃腸細胞/組織の増殖阻害が明らかに可能であるため、そのような増殖を阻害するための上述の方法は、調節不能/過度の増殖、悪性、上皮、皮膚、および/または胃腸細胞/組織に関連したあらゆる様々な疾患治療に特に適する。そのような疾患は特に一般的腫瘍、胃腸腫瘍、および特に悪性皮膚癌を含む。
【０２３８】
内皮細胞/組織の増殖阻害が明らかに可能であるため、そのような増殖を阻害するための上述の方法は、内皮細胞/組織の調節不能/過度の増殖に関連したあらゆる様々な疾患治療に特に適し、その結果、血管形成に関連したあらゆる様々な疾患治療に使用できる。 そのような疾患は特に固形腫瘍、内皮腫瘍、および乾癬などの自己免疫疾患を含む炎症性疾患を含む。
【０２３９】
生体外器官型皮膚3Dモデル、および生体内の調節不能の均衡に関連した炎症病変中で、上皮および/または皮膚組織での増殖/分化均衡の調節不能の修正が明らかに可能であるため、上述の方法は、特に、その調節不能の均衡に関連したあらゆる様々な疾患の治療に適切である。その疾患は特に乾癬および頭部ふけ症を含む。
【０２４０】
ヒト組織での自己免疫炎症の阻害が明らかに可能なため、その炎症を阻害するための上述の方法は、特にその炎症に関連した様々な疾患の治療に適切である。そのような疾患は、特に乾癬および胃腸自己免疫疾患等の自己免疫疾患を含む。
【０２４１】
ヒトの腫瘍および/または皮膚細胞/組織での基質剥離の阻害が明らかに可能なため、その剥離を阻害するための上述方法は、特にそのような剥離に関連した様々な疾患の治療に適切である。そのような疾患は、特に転移性癌、特に転移性悪性皮膚癌などの転移性腫瘍を含む。
【０２４２】
疾患治療のために調節剤は様々な適切な措置を通し投与される。
【０２４３】
望ましい被験者への調節剤の投与は、被験者に複数回投与するが、AMP/AML 阻害剤の投与回数は2回から30回の範囲から選び、投与間隔は約2.4時間から約30日までの範囲から選んで実施される。
【０２４４】
適用法および目的に依存して、投与回数は、約2回から5回の範囲、約5回から10回の範囲、約10回から15回の範囲、約15回から20回の範囲、約20回から25回の範囲、約25回から30回の範囲、または約30回から35回の範囲から都合よく選択される。
【０２４５】
望ましい被験者への調節剤の投与は、被験者へのAMP/AML阻害剤の3回投与することにより実施される。
【０２４６】
適用法および目的次第では、複数投与の各投与間隔は約2.4時間から約3日の範囲、約3日から約6日の範囲、約6日から約9日の範囲、約9日から約12日の範囲、約12日から約15日の範囲、約15日から約18日の範囲、約18日から約  21日の範囲、約21日から約24日の範囲、約24日から約27日の範囲、または約27日から約30日の範囲から都合よく選択される。
【０２４７】
望ましい複数回投与における投与間隔は約1日である。
【０２４８】
下記の実施例セクションの例3に説明されているように、被験者に1日の投与間隔で本発明の調節剤を3回投与する方法は、ヒト被験者の乾癬などの疾患を効果的に治療するのに使用できる。 
【０２４９】
疾患治療は、タンパク質分解酵素阻害剤、セルピンセリンプロテアーゼ阻害因子成分(アルファ-1 PI) およびα1抗キモトリプシン (非特許文献３２)、BAPTA-AM (細胞内 Ca(2+)キレート剤)、百日咳毒素およびU-73122 (ホスホリパーゼC阻害因子; 非特許文献１０４)、T細胞を標的にした療法、ケモカイン腫瘍壊死因子に対するモノクロナール抗体およびシトキンを標的にした療法、繊維芽細胞増殖要素阻害剤などのペプチド阻害剤と関連した調節剤の投与による多療法により実施される。例えば、局所の治療は、表皮の細胞分化を調節し変換するレチノイド-ビタミンA-相似体などの細胞増殖調節剤を都合よく含む。そのような多療法は、乾癬または他の自己免疫疾患の再発に対する予防対策として抗炎症薬/治療法を使用し実施される。そのような薬/治療法には、タザロテン、メトトレキサート、アシトレチン、ベクサロテーネ、プロラレム、エトレチレート、コルチコステロイドのクリームおよび軟膏剤、合成ビタミンD3, IL-10, IL-4およびIL-1RA (受容体拮抗剤)を含む。
【０２５０】
疾患の治療を可能にするため、望ましい調節剤は、適切な基材を含み、疾患治療のために適切に包装されラベルの貼られた薬剤成分の有効成分として含まれる。
【０２５１】
本発明による調節剤は被験者に投与でき、適切な基材または賦形剤と混ぜられた薬剤成分としても投与できる。
【０２５２】
本文に使用される “薬剤成分”は、生理的に適切な基材および賦形剤などその他の化学物質と共に本文で説明された1個またはそれ以上の有効成分の製剤をいう。薬剤成分の目的は、生物への有効成分の投与を促進するためである。
【０２５３】
本文の“有効成分”という用語は、生物的効果を及ぼす本発明の調節剤のことをいう。
【０２５４】
これ以後の本文で互換的に使用されるフレーズ“生理的条件にあった基材”および“薬剤的条件に合った基材”は、生物に多大な刺激を引き起こさず、有効成分の投与の生物の作用および特性を廃止しない基材または希釈剤のことをいう。補助剤はこれらのフレーズの下に含まれる。
【０２５５】
本文の“賦形剤”という用語は、有効成分の投与をさらに促進するため薬剤成分に加えられた非活性の物質のことをいう。賦形剤の例は、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖および様々な澱粉、セルロース、誘導体、ゼラチン、植物油、およびポリエチレングレコールを含むがそれらに制限はされない。
【０２５６】
薬の調製および投与の技術は、本文の参考文献に含まれている非特許文献１０５最新版にて見付けられる。
【０２５７】
適切な投与経路は、例えば、経口、直腸、経粘膜、経鼻、腸管、または筋肉内,皮下および骨髄注入を含む腸管外の送達、さらにくも膜下腔内、直接心室内、静脈内、腹膜内、鼻腔内または眼内注入などが含まれる。
【０２５８】
あるいは、薬剤成分を全身法よりむしろ局所法、例えば患者の組織領域への直接の薬剤成分の注入にて投与できる。
【０２５９】
本発明の薬剤成分は、当分野で広く知られた工程、例えば、従来の混合、溶解、顆粒化、糖剤生成,湿式粉砕、乳状化、カプセル化、混入、凍結乾燥処理方法で、製造できる。
【０２６０】
そのように、本発明に従って使用する薬剤成分は、有効成分を薬剤的に使用できるように製剤化するのに役立つ賦形剤および補助剤から成る1個またはそれ以上の生理的条件に合った基材を使用した従来の方法で調製できる。適切な調製は、選択された投与経路次第である。
【０２６１】
注入において、薬剤成分の有効成分は、水溶液、望ましくはハンクス液、リンゲル液、または生理的食塩緩衝液などの生理的に互換性あるバッファー中で調製される。経粘膜投与においては、浸透される障壁に適切な浸透剤が調製に使用される。そのような浸透剤は、当分野では一般的に知られている。
【０２６２】
経口投与の場合、薬剤成分は、有効成分を当分野で広く知られている薬剤的条件に合った基材と組み合わせることにより直ちに調製できる。患者による経口摂取において、そのような基材は、薬剤成分を錠剤、丸剤、糖剤、カプセル、液状、ゲル剤、シロップ剤、泥状液体、 懸濁剤やその他の形状として調製させることができる。経口使用の製剤は、固体賦形剤を使用し、望む場合は、錠剤または糖衣錠を得るために適切な補助剤を加えた後で、オプションとして得られた混合物をすり潰し、顆粒剤の混合物を処理し、実施できる。適切な賦形剤は、特にラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤、例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、イモ澱粉,ゼラチン、トラガカントゴム,メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース製剤、 および/または、ポリビニルピロリドン (PVP)などの生理的条件に合った重合体である。望む場合は、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどの塩など、分解剤が加えられる。
【０２６３】
糖衣錠は、適切なコーティング剤によって提供される。この目的のため、濃度の高い糖溶液が使われることがあり、それは、オプションとしてアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポル・ゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物などを含む。有効成分投与量の異なる組み合わせを識別または特徴付けるために、染料または色素が、錠剤または糖衣錠剤皮に加えられる。
【０２６４】
経口的に使用できる薬剤成分は、ゼラチンから作られた押し込み式カプセルと同様にグリセロールまたはソルビトールなどのゼラチンおよび可塑剤から作られ、密封された軟カプセルを含む。押し込み式カプセル錠は、ラクトースなどの充填剤、澱粉などの結合剤、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、オプションとして安定剤など、それらの混合物中に有効成分を含む。軟カプセルには、有効成分が、脂肪油、流動パラフィンまたは液状ポリエチレングリコールなどの適切な液状に溶解または懸濁される。さらに、安定剤が加えられる。経口投与のためのあらゆる調製は、選択された投与の経路に従い適切な投与量であるべきである。
【０２６５】
舌下投与においては、構成成分は、従来の方法で調製された錠剤またはトローチ剤形態を取れる。
【０２６６】
鼻の吸入による投与においては、本発明に従った有効成分の使用は、高圧パックまたは適切な噴霧剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素、を使用した噴霧器などエアロゾルスプレーの形態で、都合よく実施される。 高圧エアロゾルの場合には、投与量単位は、計られた量を伝達するバルブの提供により決定される。  ディスペンサーを使用するゼラチンのカプセルおよび薬包は、有効成分とラクトースまたは澱粉などの適切な粉末ベースの粉末混合物を含み調製される。
【０２６７】
本文で説明されている薬剤成分は、例えば、ボーラス注射または連続性注入により腸管外の投与のために調製される。注入のための調製は、投与量単位の形態、例えば、アンプルまたはオプションとして加えられた保存剤を含む複投与容器、で実施される。成分は、油または水溶媒介体中の懸濁剤、液剤、または乳剤であり、および懸濁、安定、および/または分散剤 などの調製剤が含まれている場合がある。
【０２６８】
腸管外の投与のための薬剤成分は水溶性形態での有効製剤の水溶液を含む。さらに、有効成分の懸濁剤は、適切な油または水に基づいた注入懸濁剤として調製できる。適切な親油性溶媒または媒介体は、ごま油などの脂肪油、またはオレイン酸エチル、トリグリセリドまたはリポソームなどの合成の脂肪酸エステルを含む。水溶注入懸濁剤は、カルボキシメチルナトリウムセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどの懸濁剤の粘性上げる物質を含む場合がある。オプションとして、懸濁剤は、濃度の高い溶液の製剤を考慮に入れる有効成分の溶解性を上げる適切な安定剤または作用因子を含む場合もある。 クリーム溶液は、いかなる脂質または有機アルコールまたは例えばベンジルアルコール、マクロゴール、ヘキシレングリコール、カルボマー、アスコルビン酸、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、エデト酸ニナトリウム、水、トロメタモール、ポクソアマー（poxoamer）、を含む化学物質を含む事ができる。
【０２６９】
あるいは、使用前の有効成分は、適切な媒体、例えば、滅菌、無発熱物質不含水をベースとした溶液など、を構成成分とする粉状形態である場合がある。
【０２７０】
本発明の薬剤成分は、例えば、カカオ脂またはその他のグリセリドなどの従来の座薬ベースを使用し 、座薬または保持浣腸剤などの直腸の構成物質を調節する場合もある。
【０２７１】
本発明の使用法に適した薬剤成分は、実際に目的を達成する効果的量の有効成分が含まれている構成内容を含む。もっと具体的には、治療有効量とは、障害(例えば、 乾癬または癌)の症状を予防し、緩和し、または改善する、または治療された被験者の生存延長するのに効果的な有効成分の量 (本発明の調節因子)を意味する。
【０２７２】
特に本文で提供された詳細な発表を考慮すれば、治療有効量を決定することは当分野の専門家の能力範囲内である。 
【０２７３】
本発明の方法で使用されるあらゆる製剤において、治療有効量または投与量は、生体内および細胞培養アッセイから始めに推定できる。例えば、投与量は、望ましい濃度または力価濃度に到達する動物のモデルから処方される。そのような情報は、ヒトに役立つ投与量をより正確に決定するのに使用できる。
【０２７４】
本文で説明される有効成分の毒性および治療効果は、生体内、細胞培養または実験動物における標準薬剤手順により決定できる。これらの生体内と細胞培養アッセイ、および動物実験から得られたデータは、ヒトへの使用時に投与量の範囲を処方するのに使用できる。投与量は、使用される投与形態と使用される投与経路により変わる。正確な処方、投与経路、および投与量は、患者の状態を考慮して、個々の医師により選択される(例えば、非特許文献１０６参照) 。
【０２７５】
投与量および投与間隔は、望まれる治療効果を達成するのに十分 (最小限有効濃度、MEC)である有効成分の血漿または脳のレベルを提供するため個々に調節される。MECは各製剤によって異なるが、生体内のデータから推定できる。 MECを達成するのに必要な投与量は、個人の性質および投与経路に依存する。検出アッセイは、血漿濃度を決定するのに使用できる。
【０２７６】
治療される状態重症度および反応性によって、数日から数週間継続するか、または治療が効果的になるまで、または疾患状態の低減が達成されるまで、治療過程における投与回数は一回または複数回である。
【０２７７】
投与される各薬剤量は、もちろん、治療される被験者、重症度、投与方法、処方する 医師の判断などによる。
【０２７８】
望む場合には、本発明の薬剤成分は、有効成分を含む 1単位以上の投与形態を含むFDA 承認済みのキットなど、つまりパックまたは ディスペンサー装置において提示される。例えば、パックは、ブリスター包装などの金属またはプラスチック箔から構成される。パックまたはディスペンサー装置は、投与の説明書と提供される。そして、パックまたはディスペンサーは、薬剤の製造、使用、販売を管理する政府機関により規定された形態の容器に関する注意書と共に提供され、その注意書は、構成成分の形式、またはヒトまたは動物の投与の形式に対する政府機関の承認を反映している。そのような注意書は、例えば、処方薬が米国食品薬品局により承認されたラベル、または承認された製品の添付文書である場合がある。互換性のある薬剤基材において考案された本発明の製剤から成り立つ構成は、上記に更に詳しく説明されているように、調製され、適切な容器に入れられ、表示された適応症の治療のためのレベルを貼られる。
【０２７９】
このように、本発明は、疾患治療について識別された包装材料から成る製造品目、および薬剤的条件に合った基材および有効成分として調節剤を含む薬剤成分を提供する。
【０２８０】
望ましい薬剤成分は、液剤、懸濁剤、乳剤、またはゲル剤として調節される。
【０２８１】
望ましい薬剤条件に合った基材は、局所、鼻腔、経皮、皮内、経口、舌下、腸管外、直腸および吸入経路からなるグループから選ばれる経路を通して薬剤成分の投与ができるように選ばれる。
【０２８２】
望ましい薬剤成分は、上記に説明されているように、疾患治療のため適切な濃度の調節剤への疾患を持つ被験者の侵された細胞/組織の露出ができるように調合される。
【０２８３】
望ましくは、上記に説明されているように、薬剤成分は適切な措置に従い、被験者への投与のため更に識別される。
【０２８４】
このように、本発明は細胞/組織中の生物学的過程を調節できる化合物を同定する方法を提供する。その方法の最初のステップは、抗菌ペプチド (AMP) および/または AMP類似分子(AML)の作用および/または濃度減少できる化合物; および/または 、AMPおよび/または AMLそれ自体など、試験化合物に細胞/組織を暴露することにより実施される。その方法の次のステップは、細胞/組織中の生物学的過程を調節する試験化合物の能力評価により実施される。
【０２８５】
化合物を同定する方法が、生物学的過程を調節する望ましい能力を持つ化合物を同定するために複数の化合物をスクリーニングするのに使用できることが認識されるであろう。
【０２８６】
望ましくは、その方法は、生物学的過程の調節の本発明方法の特徴について上記に説明されているように、生物学的過程を調節できる化合物を同定するために使用される。
【０２８７】
望ましくは、生物学的過程を調節する本発明の方法の特徴について上記に説明されているように、試験化合物は調節剤である。
【０２８８】
望ましくは、生物学的過程を調節する本発明の方法の特徴について上記に説明されているように、下記の実施例セクションにて説明されているように、その方法は細胞/組織中の生物学的過程を調節できる化合物を同定するために使用される。生物学的過程を調節する方法の特徴について上記に説明されているように、そして下記の実施例セクションにて説明されているように、望ましくは、その手段は、上皮、皮膚、角化および/または胃腸細胞/組織においての増殖を誘発、腫瘍、外皮、皮膚、角化および/または胃腸細胞/組織においての増殖を阻害、血管形成/内皮細胞/組織の増殖を阻害;腫瘍細胞/組織においての転移を阻害、外皮、角化および/または皮膚細胞/組織においての増殖/分化の調節不能な均衡を修正、 および/または外皮、角化および/または皮膚細胞/組織においての炎症を阻害、できる化合物を同定するために使用される。 
【０２８９】
識別方法は、ハイ・スループット方法論を使い、都合よく実施される。ハイ・スループット方法論に関連した実践のための十分な手引きは、当分野の文献にて提供される(例えばU.S.特許申請書No. 20030044907を参照) 。
【０２９０】
試験化合物は様々な方法で細胞/組織に曝露される可能性がある。望ましくは、下記の実施例セクションに説明されているように、試験化合物は生体内の細胞/組織に曝露される。あるいは、試験化合物は、培養細胞/組織への試験化合物の曝露により細胞/組織に曝露できる。
【０２９１】
望ましい試験化合物を生成する細胞は、B細胞ハイブリドーマである。または、試験化合物を生成する細胞は、適用法および目的次第で、様々なタイプから成る。
【０２９２】
B細胞ハイブリドーマは細胞が生成する抗体、そのためB細胞ハイブリドーマへの細胞/組織の曝露が生物学的過程を調節できる抗体を発現するB細胞ハイブリドーマを識別するのに使用できる、ということが認識されるであろう。
【０２９３】
試験化合物への細胞/組織の露出は、細胞/組織を含む被験者(生体内モデル)への試験化合物の提供により実施される。望ましくは、試験被験者への試験化合物の提供が、被験者への調節剤の提供の点で上記に説明されているように、実施される。
【０２９４】
同定方法は、乾癬病変および本発明に含まれる外皮創傷に関連した様々な疾患の病変、 乾癬動物モデルにおいての乾癬病変、 または乾癬を持つヒトにおいての乾癬病変、 AMPまたは遺伝子と促進剤の多形性のある疾患およびない疾患に苦しむ患者の血漿とリンパ球を含む臓器型の培養内に維持された通常または病因に関連した障害のヒトの生検、 および/または疾患誘導性アイソフォルムがApoE4であり非誘導性アイソフォルムがApoE3である疾患の細胞/組織などを、試験化合物に曝露することにより実施できる。
【０２９５】
同定方法は、動物に移植されたヒトの乾癬病変生検(異種移植片モデル) への試験化合物の露出により実施できる。その生検は、説明に基づく患者の同意の下に取られる。その生検は、免疫不全マウス(例えば、NIHS-bg-nu-xidまたはBNX)に移植される場合がある。そのような異種移植モデルを確立するため、PBMCは、生検ドナーから得られ、活性化(例えば、超抗原を使用)された血液、および活性化されたPBMCを注入された動物から分離できる。そのような動物モデルを使用した識別方法を実施するための十分な手引きは、下記の実施例セクションの例6-8および当分野の文献にて提供される(例えば、U.S. 特許申請書 No. 20030044907を参照) 。
【０２９６】
活性化された免疫システムに加え、乾癬において、最も侵された組織は皮膚である。皮膚を構成する主要な細胞は、表皮ケラチノサイトおよび真皮繊維芽細胞である。他の細胞は、内皮細胞、メラニン形成細胞、毛包細胞、汗腺細胞および免疫システム細胞を含む。そのような細胞は都合よく識別方法の実施に使用される。
【０２９７】
その同定方法により達成される生物学的過程の調節の評価は、専門家が熟知している様々な適切な方法を使用し実施できる。
望ましいそのような評価は、下記の例の関連セクションに説明されているように、実施される。
【０２９８】
生体内モデル、細胞数、または組織学的評価の使用時に、生物学的過程の調節の評価は、表皮の厚さの量的評価を使用し実行される。
【０２９９】
望ましいその評価から得られるデータは、できる限りの情報を得るために統計分析およびANOVAを使用し処理される。
【０３００】
実施例の一つにおいては、同定方法は培養された微生物/細菌への試験化合物の曝露に関連し、生物学的過程の調節の評価は微生物/細菌の生存率の測定により実施される。これは、記述されているように(臨床サンプルより単離された)黄色ブドウ球菌, GAS (NZ131)、および腸内侵入性大腸菌O29 (非特許文献１０７)と施行されたコロニー形成単位アッセイによって実施される。分析前に、培養中の細菌の濃度は、異なる細菌希釈溶液を平板培養する事により決定される。下記のように実験計画は、実施される。細胞は10ｍMのリン酸ナトリウム緩衝溶液(20 mM NaH2PO4・H2O, 20 mM Na2HPO4・7H2O)を使い洗浄され、リン酸緩衝液中で1ミリリットルあたり2,000,000細胞(黄色ブドウ球菌、GAS)または1ミリリットルあたり200,000個の細胞(大腸菌)濃度に希釈される。黄色ブドウ球菌および大腸菌は、96個の孔のある丸底組織培養プレート内の50 マイクロリットルの緩衝剤中において、異なる濃度の試験化合物の共存下、異なる濃度のAMP/AMLと一緒に摂氏37度の温度で4時間培養される (Costar 3799, Corning inc., NY)。その緩衝剤中でのGASの増殖機能が低いため、GASは1時間培養される。培養後、細胞は10x から100,000xの範囲で希釈され、20mlの各溶液は、トリプシン性大豆培養液(黄色ブドウ球菌の場合)およびトッド・ヘヴィット（Todd Hewitt broth）培養液(GASおよび大腸菌の場合)で3回平板培養され、コロニーの平均値が決定される。1ミリリットルあたりのcfuの数は計算され、下記の通りに細胞の作用を妨げる試験化合物の阻害作用が計算される。つまり、 (AMP/AML培養後の生存細胞数)/(AMP/AML不在の培養後の生存細胞数)x100は、生存する細胞のパーセントを表示し、(AMP/AML+試験化合物培養後の生存細胞数)/(試験化合物だけでの培養後の生存細胞数)x100は、生存しない細胞のパーセントを表示する。
【０３０１】
同定されたあらゆる化合物は、1つまたは全ての下記効果について調べられる。つまり、そのAMPに対して提起された化合物のAMPの抗菌作用を阻害する能力、増殖または分化、あるいは、通常または疾患の個人またはモデルから元々単離された、影響を受けた標的組織（例えば乾癬スクリーニング様のHaCaT、初期ヒトまたはマウスのケラチノサイトまたは繊維芽細胞など）の培養細胞の他の細胞過程に影響を与える能力、 免疫システムの活性化における阻害剤の効能である。
【０３０２】
同定された化合物は、望まれた生体影響または生体影響の組み合わせを効果的に阻害できる阻害剤を同定するために、器官共生培養および動物モデルにおいての影響を更に調べられる。これは、AMP/AML の増殖/分化均衡への影響を阻害する一方、その抗細菌菌/抗微生物作用を維持する適切で識別する化合物を含む。
【０３０３】
試験化合物または調節剤は、合成小分子/非ポリペプチド分子などの様々なタイプの分子から選ばれる。
【０３０４】
試験化合物または調節剤は、ペプチド、タンパク質またはグリコシルコ化したタンパク質である。
【０３０５】
様々な適切なタイプの本発明の試験化合物および調節剤は、例えば、Merck、Glaxo Welcome、Bristol Meyers Squib、Monsanto/Searle、Eli Lilly、Novartis、Pharmacia UpJohnとその他の大きな化学薬品会社により提供される市販の化学物質ライブラリーなどから得られる。様々な適切なタイプの本発明の試験化合物および調節剤は、Chemcyclopedia (http://www.mediabrains.com/client/chemcyclop/BG1/search.asp)などの会社を通し  ワールド・ワイド・ウェブ(インターネット)にて注文できる。あるいは、様々な適切なタイプの本発明の試験化合物および調節剤は、標準の化学および/または生物合成技術を使い、合成できる。様々な適切なタイプの本発明の試験化合物および調節剤として使用するのに適切な分子の合成の十分な手引きは、当分野の文献にて提供される。例えば、ポリペプチドおよび核酸などの分子の生物学合成については、非特許文献１０８および下記の実施例セクションの関連参考文献を参照できる。例えば、分子の化学合成に関する手引きについては、アメリカ化学会提供の広範囲なガイドライン(非特許文献１０９)を参照できる。当分野の専門家、例えば、化学者は適切な試験化合物の化学的合成において必要な専門知識を持つ。
【０３０６】
AMP/AMLと結合できる小分子の設計において、抗体、受容体、配位子、および関連ある生化学物質の構造および生物学データなどのいくつかの特性が考慮される。その特性は、エネルギー最小化および分子動力学, およびエネルギー最小化および分子動力学が後に続く比較性モデリングを使用するデノボ・フォールディング設計を含む。この2つのアプローチは、試験または最初の構造の開発においてだけ異なる。フォールディングパターンは、エネルギー最小化および分子動力学を使用し研究される。
【０３０７】
本文に使用されている “ペプチド”という用語は、天然ペプチド(分解生成物、合成的に合成されたペプチドまたは組み換え型ペプチド)、および例えば体内においてより安定し、または標的細胞へ浸透できるペプチドに修飾されたペプチド相似体であるペプトイドおよびセミペプドイドペプチド擬態 (典型的に合成的に合成されたペプチド)を含む。その修飾は、N末端基修飾、C末端基修飾、CH2-NH、CH2-S、CH2-S=O、O=C-NH、CH2-O、CH2-CH2、S=C-NH、CH=CHまたはCF=CHを含む、それに制限されないペプチド結合修飾、バックボーン修飾、および残基修飾を含むが、それらに限定された。ペプチド擬態の化合物を生成する方法はその分野で広く知られており、例えば、非特許文献１１０にて具体化されている。
【０３０８】
例えば、ペプチド内のペプチド結合(-CO-NH-)は、N-メチル結合(-N(CH3)-CO-)、エステル結合 (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-)、ケトメチレン結合(-CO-CH2-)、α-アザ結合(-NH-N(R)-CO-)（Rはメチルなどのアルキルである）、カルバ結合(-CH2-NH-)、ヒドロキシエチレン結合(-CH(OH)-CH2-)、チオアミド結合(-CS-NH-)、オレフィン二重結合 (-CH=CH-)、レトロアミド結合(-NH-CO-)、ペプチド誘導体 (-N(R)-CH2-CO-)（Rは"標準"側鎖であり本来炭素原子上に位置する）などによって置換できる。
【０３０９】
これらの修飾は、ペプチド鎖に沿ったあらゆる結合において生じ、いくつかの(2-3)結合において同時にさえ生じる。
【０３１０】
自然の芳香族アミノ酸、Trp、TyrおよびPheは、 TIC, ナフチレラニン (Nol), Pheの環メチル誘導体、Pheのハロゲン誘導体、またはo-メチル-Tyrなどの合成された非天然の酸に置換できる。
【０３１１】
上記に加え、本発明のペプチドは、1つまたはそれ以上の修飾アミノ酸または1つまたはそれ以上の非アミノ酸単量体 (例えば、脂肪酸、炭水化物複合体etc)を含む。
【０３１２】
詳細におよび下記の特許請求セクションにおいて、本文で使用されている “アミノ酸”という用語は、20の自然に生じるアミノ酸、転移後に生体内でしばしば修飾されるアミノ酸 例えばヒドロキシプロリン、ホスホセリンおよびホスホトレオニンなど、2-アミノアジピン酸、ヒドロキシリジン、イソデスモシン、ノル-バリン、ノル-ロイシン およびオルニチンを含むおよび他の特殊アミノ酸を意味するが、これだけに限定されない。さらに、“アミノ酸”という用語はD-およびL-アミノ酸両方を含む。
【０３１３】
下記の表2と3は、天然（生体内）アミノ酸(表2)および本発明にて使用できる特殊または修飾アミノ酸(表3) を記載する。
【表２】
2006514106.tif 000003
（表３）  特殊または修飾アミノ酸
異常アミノ酸            コード              異常アミノ酸                コード
α-アミノ酪酸           Abu            L-N-メチルアラニン              Nmala
α-アミノ-α-酪酸メチル   Mgabu          L-N-メチルアルギニン           Nmarg
アミノシクロプロパン-   Cpro           L-N-メチルアスパラギン           Nmasn
カルボン酸塩                              L-N-メチルアスパラギン酸        Nmasp
アミノイソ酪酸           Aib            L-N-メチルシステイン           Nmcys
アミノノルボルニル-       Norb            L-N-メチルグルタミン            Nmgin
カルボン酸塩                              L-N-メチルグルタミン酸          Nmglu
シクロヘキシルアラニン    Chexa          L-N-メチルヒスチジン              Nmhis
シクロペンチルアラニン    Cpen            L-N-メチルイソロイシン          Nmile
D-アラニン                Dal            L-N-メチルロイシン                Nmleu
D-アルギニン              Darg            L-N-メチルリジン                Nmlys
D-アスパラギン酸          Dasp            L-N-メチルメチオニン            Nmmet
D-システイン              Dcys            L-N-メチルノルロイシン          Nmnle
D-グルタミン              Dgln            L-N-メチルノルバリン            Nmnva
D-グルタミン酸            Dglu            L-N-メチルオルニチン            Nmorn
D-ヒスチジン              Dhis            L-N-メチルフェニルアラニン      Nmphe
D-イソロイシン            Dile            L-N-メチルプロリン              Nmpro
D-ロイシン                Dleu            L-N-メチルセリン                Nmser
D-リジン                  Dlys            L-N-メチルトレオニン            Nmthr
D-メチオニン              Dmet            L-N-メチルトリプトファン        Nmtrp
D-オルニチン              Dorn            L-N-メチルチロシン              Nmtyr
D-フェニルアラニン        Dphe            L-N-メチルバリン                Nmval
D-プロリン                Dpro            L-N-メチルエチルグリシン        Nmetg
D-セリン                  Dser            L-N-メチル-t-ブチルグリシン      Nmtbug
D-トレオニン              Dthr            L-ノルロイシン                    Nle
D-トリプトファン          Dtrp            L-ノルバリン                      Nva
D-チロシン                Dtyr            α-メチル-アミノイソ酪酸塩        Maib
D-バリン                  Dval            α-メチル-α-アミノ酪酸塩        Mgabu
D-α-メチルアラニン      Dmala        α-メチルシクロヘキシルアラニン    Mchexa
D-α-メチルアルギニン    Dmarg        α-メチルシクロペンチルアラニン    Mcpen
D-α-メチルアスパラギン  Dmasn        α-メチル-α-ナフチルアラニン        Manap
D-α-メチルアスパラギン酸塩  Dmasp      α- メチルペニシルアラニン        Mpen
D-α-メチルシステイン    Dmcys          N-(4-アミノブチル)グリシン          Nglu
D-α-メチルグルタミン    Dmgln          N-(2-アミノエチル)グリシン          Naeg
D-α-メチルヒスチジン    Dmhis          N-(3-アミノプロピル)グリシン        Norn
D-α-メチルイソロイシン  Dmile          N- アミノ-α-メチル酪酸塩        Nmaabu
D-α-メチルロイシン      Dmleu            α-ナフチルアラニン              Anap
D-α-メチルリジン        Dmlys            N-ベンジルグリシン              Nphe
D-α-メチルメチオニン    Dmmet          N-(2-カルバミルエチル)グリシン    Ngln
D-α-メチルオルニチン    Dmorn          N-(カルバミルメチル)グリシン      Nasn
D-α-メチルフェニルアラニン  Dmphe      N-(2-カルボキシエチル)グリシン    Nglu
D-α-メチルプロリン      Dmpro          N-(カルボキシメチル)グリシン      Nasp
D-α-メチルセリン        Dmser            N-シクロブチルグリシン          Ncbut
D-α-メチルトレオニン    Dmthr            N-シクロヘプチルグリシン        Nchep
D-α-メチルトリプトファン  Dmtrp          N-シクロヘキシルグリシン        Nchex
D-α-メチルチロシン      Dmty              N-シクロデキルグリシン        Ncdec
D-α-メチルバリン        Dmval            N-シクロドデシルグリシン        Ncdod
D-α-メチルアラニン      Dnmala            N-シクロオクチルグリシン        Ncoct
D-α-メチルアルギニン    Dnmarg            N-シクロプロピルグリシン      Ncpro
D-α-メチルアスパラギン  Dnmasn          N-シクロウンデシルグリシン      Ncund
D-α-メチルアスパラギン酸塩  Dnmasp    N-(2,2-ジフェニルエチル)グリシン    Nbhm
D-α-メチルシステイン    Dnmcys      N-(3,3-ジフェニルプロピル)グリシン    Nbhe
D-N-メチルロイシン      Dnmleu        N-(3-インドリルエチル) グリシン      Nhtrp
D-N-メチルリジン        Dnmlys            N-メチル-α-アミノ酪酸塩      Nmgabu
N-メチルシクロヘキシルアラニン  Nmchexa      D-N-メチルメチオニン      Dnmmet
D-N-メチルオルニチン    Dnmorn          N-メチルシクロペンチルアラニン  Nmcpen
N-メチルグリシン Nala              D-N-メチルフェニルアラニン    Dnmphe
N-メチルアミノイソ酪酸塩  Nmaib                D-N-メチルプロリン        Dnmpro
N-(1-メチルプロピル)グリシン  Nile                D-N-メチルセリン        Dnmser
N-(2-メチルプロピル)グリシン  Nile                D-N-メチルセリン        Dnmser
N-(2-メチルプロピル)グリシン  Nleu              D-N-メチルトレオニン      Dnmthr
D-N-メチルトリプトファン  Dnmtrp          N-(1-メチルエチル)グリシン        Nva
D-N-メチルチロシン        Dnmtyr            N-メチル-ナフチルアラニン    Nmanap
D-N-メチルバリン          Dnmval   N-メチルペニシラミン            Nmpen
α-アミノ酪酸              Gabu        N-(p-ヒドロキシフェニル)グリシン    Nhtyr
L-t-ブチルグリシン          Tbug                N-(チオメチル)グリシン      Ncys
L-エチルグリシン            Etg                  ペニシラミン                Pen
L-ホモフェニルアラニン      Hphe              L-α-メチルアラニン          Mala
L-α-メチルアルギニン      Marg              L-α-メチルアスパラギン        Masn
L-α-メチルアスパラギン酸塩  Masp          L-α-メチル-t-ブチルグリシン    Mtbug
L-α-メチルシステイン      Mcys              L-メチルエチルグリシン        Metg
L-α-メチルグルタミン      Mgln            L-α-メチルグルタミン酸塩        Mglu
L-α-メチルヒスチジン      Mhis        L-α-メチルホモフェニルアラニン    Mhphe
L-α-メチルイソロイシン    Mile          N-(2-メチルチオエチル)グリシン    Nmet
D-N-メチルグルタミン      Dnmgln        N-(3-グアニジノプロピル)グリシン  Narg
D-N-メチルグルタミン酸塩  Dnmglu          N-(1-ヒドロキシエチル)グリシン    Nthr
D-N-メチルヒスチジン      Dnmhis            N-(ヒドロキシエチル)グリシン    Nser
D-N-メチルイソロイシン    Dnmile          N-(イミダゾリルエチル)グリシン    Nhis
D-N-メチルロイシン        Dnmleu          N-(3-インドリルエチル)グリシン  Nhtrp
D-N-メチルリジン          Dnmlys            N-メチル-α-アミノ酪酸塩    Nmgabu
N-メチルシクロヘキシルアラニン  Nmchexa        D-N-メチルメチオニン    Dnmmet
D-N-メチルオルニチン      Dnmorn        N-メチルシクロペンチルアラニン  Nmcpen
N-メチルグリシン          Nala              D-N-メチルフェニルアラニン  Dnmphe
N-メチルアミノイソ酪酸塩  Nmaib                  D-N-メチルプロリン      Dnmpro
N-(1-メチルプロピル)グリシン  Nile                  D-N-メチルセリン      Dnmser
N-(2-メチルプロピル)グリシン  Nleu                D-N-メチルトレオニン    Dnmthr
D-N-メチルトリプトファン    Dnmtrp          N-(1-メチルエチル)グリシン      Nval
D-N-メチルチロシン          Dnmtyr          N-メチル-ナフチルアラニン    Nmanap
D-N-メチルバリン          Dnmval                N-メチルペニシラミン    Nmpen
α-アミノ酪酸            Gabu          N-(p-ヒドロキシフェニル)グリシン    Nhtyr
L-t-ブチルグリシン        Tbug                  N-(チオメチル)グリシン      Ncys
L-エチルグリシン          Etg                      ペニシラミン              Pen
L-ホモフェニルアラニン    Hphe                  L-α-メチルアラニン        Mala
L-α-メチルアルギニン      Marg                L-α-メチルアスパラギン      Masn
L-α-メチルアスパラギン酸塩  Masp            L-α-メチル-t-ブチルグリシン  Mtbug
L-α-メチルシステイン      Mcys                L-メチルエチルグリシン      Metg
L-α-メチルグルタミン      Mgln                L-α-メチルグルタミン酸塩    Mglu
L-α-メチルヒスチジン      Mhis          L-α-メチルホモフェニルアラニン  Mhphe
L-α-メチルイソロイシン    Mile            N-(2-メチルチオエチル)グリシン  Nmet
L-α-メチルロイシン        Mleu                    L-α-メチルリジン        Mlys
L-α-メチルメチオニン      Mmet                L-α-メチルノルロイシン      Mnle
L-α-メチルノルバリン      Mnva                  L-α-メチルロルニチン      Morn
L-α-メチルフェニルアラニン  Mphe                  L-α-メチルプロリン      Mpro
L-α-メチルセリン          Mser                  L-α-メチルトレオニン      Mthr
L-α-メチルバリン          Mtrp                  L-α-メチルチロシン        Mtyr
L-α-メチルロイシン      Mval Nnbhm    L-N-メチルホモフェニルアラニン    Nmhphe
N-(N-(2,2-ジフェニルエチル)                N-(N-(3,3-ジフェニルプロピル)
カルバミルメチル-グリシン  Nnbhm          カルバミルメチル (1)グリシン    Nnbhe
1-カルボキシ-1-(2,2-ジフェニルエチルアミノ)シクロプロパン
Nmbc
【０３１４】
本発明のペプチドは、直鎖状または環状形態にて使用できる。
【０３１５】
ペプチドは、環状形態にて合成されるか、または適切な状態において環状形態をとるように形成される。
【０３１６】
例えば、本発明によるペプチドは、ペプチド配列コアの側面に並ぶ少なくとも2つのシステイン残基を含む事ができる。この場合には、環化は、2個のCys残基の間のS-S結合形成を通して生成できる。側鎖から側鎖への環化は、例えば、CysまたはホモCysの混合およびSH遊離グループの、例えば、 ブロモアセチル化したLys、Orn、DabまたはDap、との反応を通し可能である、-(-CH2-)n-S-CH-2-C-；n = 1または2；の相互作用結合の形成を通し生成できる。さらに、例えば、環化は、例えば、., Glu、Asp、Lys、Orn、ジアミノ酪酸(Dab)、ジアミノプロピオン酸 (Dap)を鎖(-CO-NHまたは -NH-CO結合)の様々な位置において結合する事による、アミド結合形成を通し得る事ができる。バックボーン対バックボーン環化は、H-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-COOHまたはH-N((CH2)n-COOH)-C(R)H-NH2、の修飾したアミノ酸の結合を通して得る事ができ、n = 1-4であり、Rはアミノ酸のあらゆる自然または不自然の側鎖である。
【０３１７】
用途および目的に依存して、あらゆるAMP/AMLは、本発明の様々な具体化を実施するために使用および/または調節される。本発明の使用に適切な数多くのAMP/AMLは、非特許文献１１１のインターネット/ワールドワイドウェブにて一覧され、および下記に説明される。
【０３１８】
AMP/AMLの例は、デフェンシン、カセリシジン、およびトロンボシジン(あるいは、 “血小板 殺菌性タンパク質[PMPs]”とも呼ばれる)を含む。
【０３１９】
デフェンシンの例は、αデフェンシン、βデフェンシン、および好中球デフェンシンを含む。
【０３２０】
αデフェンシンの例は、αデフェンシン-1から-6を含む(非特許文献１１２，１１３)。
【０３２１】
βデフェンシンの例は、βデフェンシン-1(非特許文献１１３，１１４，１１５，１１６，１１７)、βデフェンシン-2(非特許文献１１８，１１９，１１７)、βデフェンシン-3 (非特許文献１２０，１２１，１２２，１１７)、βデフェンシン-4 (非特許文献１２３)、βデフェンシン-5 (非特許文献１２４，１２５)、およびβデフェンシン-6 (非特許文献１２６，１２７)を含む。
【０３２２】
βデフェンシンは、コンピュータ検索ストラテジーを使用し同定された5つの保護されたβデフェンシン遺伝子集団によりコード化されたものを含む。 (非特許文献１２８)
【０３２３】
好中球デフェンシンの例は、好中球αデフェンシンおよび好中球βデフェンシンを含む。
【０３２４】
好中球αデフェンシンの例は、好中球αデフェンシン-1//ヒト好中球ペプチド(HNP)-1 (非特許文献１２９，１１７)、好中球αデフェンシン-2/HNP-2 (非特許文献１２９，１１７)、好中球αデフェンシン-3/HNP-3 (非特許文献１２９，１１７)、好中球αデフェンシン-4/HNP-4 (非特許文献１１２)、ヒト・デフェンシン-5 (HD-5; 非特許文献１３０，１２５，非特許文献１３１，１３２，１２６，１３３，１１７)、およびヒト・デフェンシン-6 (HD-6; 非特許文献１１２)、ヒト・デフェンシン-5 (HD-5; 非特許文献１３０，１２５，１３１，１３２，１２６，１３３，１１７)を含む。
【０３２５】
カセリシジン(cathelicidin)の例は、ヒトのLL-37/hCAP18 (LL-37) （非特許文献１３４，１３５，１１７）を含む。LL-37は、その前駆体hCAP18/ヒトカセリシジン抗菌ペプチドタンパク質のアミノ酸残基座標134-170に対応する37アミノ酸残基である(GenBank: ACCESSION NP_004336; VERSION NP_004336.2 GI:39753970; REFSEQ: accession NM_004345.3)。LL-37の増殖および血管形成の経路は、GTP結合蛋白質連結受容体の阻害剤である百日咳毒素を使い、阻害できる。(非特許文献１３６)。類似したAMP/AMLは、下記の特許申請書に一覧され: US 2003120037、US 200309626、US20020141620、US20020507、CA 2383172、US 20020072495、そして本文の参考文献に含まれる。ヒト抗菌カセリシジン（cathelicidin）前駆体hCAP-18は、骨髄球および後骨髄球にて合成され、好中球の特定の顆粒に局所化する(非特許文献１３７)。
【０３２６】
AMP類似分子の例は、ケモカインまたはその断片を含む。
【０３２７】
そのケモカインの例は、CC ケモカインおよび CXCケモカインを含む。ケモカインとAMP作用の多くの共通点が実証され(非特許文献１３８)、ある種のケモカインとデフェンシンは同じケモカイン受容体、CCR6と結合する事が明らかになった。デフェンシンとある種のケモカインは、サイズ、ジルフィド結合、インターフェロン (IFN)誘導性、カチオン性電荷、とその他を含む類似した性質を著しく共有する。ケモカインとAMP間の関連類似点は、文献において説明されている(例えば、非特許文献１３９を参照) 。そのような様々なケモカインとそのケモカインに特定の抗体は、本発明の様々な適用法において使用される。 
【０３２８】
そのようなCCケモカインの例は、CCL1、CCL5/RANTES (非特許文献１４０，１４１)、CCL8、CCL11、CCL17、CCL18、CCL19、CCL20/活性化調節ケモカイン (LARC)/大食細胞炎症性タンパク質-3α(MIP-3α)/エクソダス-1/Scya20 (非特許文献１４２)、CCL21、CCL22、CCL25、CCL27/CTACK、およびCCL28 (非特許文献１４３，１４４)、を含む。CCLケモカインは、非特許文献１４２において説明されている。
【０３２９】
そのようなCXCケモカインの例は、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4 (PF-4)、CXCL7/NAP-2、CXCL8/IL-8、CXCL9 (MIG;非特許文献１４２)、CXCL10/IP-10 (非特許文献１４５)、CXCL11/ IP-9/I-TAC (非特許文献１４５)、CXCL12/SDF-1 (非特許文献１４２)、CXCL13、CXCL14、ペプチド3を活性化する結合組織(CTAP-3;非特許文献１４０，１４１)、およびCTAP-3塩基性タンパク質を含む。CXCケモカインは非特許文献１４２において説明されている。
【０３３０】
繊維素ペプチドの例は、繊維素ペプチドA (非特許文献１４０，１４１)、繊維素ペプチドB (非特許文献１４０，１４１)を含む。
【０３３１】
AMP/AMLの例は、XCL1(非特許文献１４２)、MIP-1β(非特許文献１４２)をも含む。  
【０３３２】
AMP/AMLのその他の例は、アドレノメデュリン (非特許文献１４６，１４７)、ホルモンを活性化するαメラニン形成細胞 (非特許文献１４８，１４９)、アンギオゲニン (非特許文献１５０)、アンギオゲニン4 (非特許文献１５０)、抗細菌ペプチドB/エンケリティン (非特許文献１５１)、抗ロイコプロテアーゼ (ALP; 非特許文献１５２，１５３)、リンフォカイン活性化キラー細胞誘導抗菌ペプチド、血小板由来抗菌ペプチド、抗菌ペプチドPR39、アポリポタンパク質、アポリポタンパク質C、アポリポタンパク質C2 (非特許文献１５４，１５５)、アポリポタンパク質C3 (非特許文献１５４，１５５)、アポリポタンパク質E (非特許文献１５４，１５５)、アポリポタンパク質E2 (非特許文献１５６，１５７，１５８)、殺菌性/透過性増加タンパク質(非特許文献１１７，１５９，１６０)、骨形成タンパク質(BMP)、BMP-2/4, BMP-5、ブフォリン、カルシテルミン (非特許文献１６１)、カテプシン、カテプシンB、カテプシンG、カテプシンK、リソソーム・カテプシン、クロモグラニン (非特許文献１６２)、クロモグラニンA (非特許文献１６２)、クロモグラニンB (非特許文献１６２)、キマーゼ(非特許文献１６３)、ペプチド-3を活性化する結合組織、シスタチン (非特許文献１６４，１６５)、DCD-1 (非特許文献１６６)、デルミシジン (非特許文献１６７)、エラスターゼ特有阻害剤/SKALP (皮膚由来抗ロイコプロティナーゼ)/エラフィン(非特許文献１６８，１６９)、eNAP-1、好酸球カチオン性タンパク質 (非特許文献１７０，１７１，１４１，１７０，１７２)、ESC42、ESkine、FALL-39 (非特許文献１７３)、Fas配位子 (FasL; 非特許文献１７４)、フラクタルカイン、グリコサミノグリカン、グラニュライシン(非特許文献１７６，１７６，１７７)、グランザイムB (非特許文献１７４)、HAX-1、ヘパリン結合タンパク質/CAP37 (非特許文献１１７，１７８)、ヘプシジン (非特許文献１７９，１８０)、HE2、HE2α (非特許文献１８１)、HE2αC末端断片(非特許文献１８１)、HE2β1(非特許文献１８１)、HE2-遺伝子由来転写産物、ヒスタチン (非特許文献１８２，１８３)、ヒストン、ヒストンH2A、ヒストンH-2b (非特許文献１７０，１７１，１４１)、HMG-17、HtpG、HtpG 相同体、HS1 結合タンパク質、インターロイキン8、ラクトフェリン (非特許文献１８４，１１７，１８５)、リンフォカイン活性化キラー(LAK)細胞AMP (非特許文献１８６)、リソゾーム(非特許文献１１７，１８７)、大食細胞炎症性タンパク質 (MIP), MIP-1α、MIP-1β、MIP-3α、肥満細胞顆粒セリンプロティナーゼ (非特許文献１６３)、マトリックス・メタロプロティナーゼ (MMP)、MMP-2、MMP-7 (非特許文献１１７)、遊走阻止因子(非特許文献１８８，１８９)、MMP-9、MRP8 (非特許文献１９０)、MRP14 (非特許文献１９０)、好中球 ゼラチナーゼ関連リポカリン (NGAL; 非特許文献１９１，２７２)、好中球リソゾーム (非特許文献１９２)、オピオイドペプチド、パーフォリン(非特許文献１７４)、ホスホリパーゼA(2) (PLA(2);非特許文献１７０，１７２)、血小板塩基タンパク質 (非特許文献１４０，１４１)、血小板因子-4、ソライアシン（psoriasin） (非特許文献１９３，１９４)、レトロサイクリン(非特許文献１９５)、分泌性白血球プロティナーゼ阻害剤(SLPI; 非特許文献１９６，１６８，１６９)、分泌性ホスホリパーゼA(2) (非特許文献１７０，１７１，１４１，１１７)、物��P、S100カルシウム結合性タンパク質、S100A7、S100A8、S100A9、サイモシン、サイモシンβ-4 (非特許文献１４０，１４１，１４０，１４１)、胸腺および活性化調節ケモカイン (TARC)、TL1A、トリプターゼ(非特許文献１６３)、ウビクイシジン(ubiquicidin) (非特許文献１８４，１９７，１９８)、およびウロキナーゼ-型プラスミノゲン活性因子を含む。 
【０３３３】
AMP/AMLは、コンピューターによって発見されたデフェンシン類似ペプチドの28の可能な候補物質のどれにでもなり得る(非特許文献１９９)。
【０３３４】
上記に説明されているように、本発明は、(i) 腫瘍; (ii) 炎症; (iii) 上皮創傷; (iv) 細胞/組織の増殖/分化の調節不能; (v) 細胞/組織の増殖/分化均衡の調節不能; および/または (vi) 血管形成；に関連するあらゆる疾患の治療に使用されることができる。 
【０３３５】
本発明に従い治療できる疾患の例は、U.S. 特許出願書No. @@@にて   記載される。
【０３３６】
本発明に従い治療できる疾患の例は下記の通りである。   
【０３３７】
腫瘍の例は、皮膚腫瘍、ケラチノサイト腫瘍、胃腸腫瘍、癌、黒色腫、扁平上皮腫瘍、経口扁平上皮癌、リンパ腫、悪性腫瘍、良性腫瘍、固形腫瘍、転移性腫瘍、および非固形腫瘍を含む。
【０３３８】
経口扁平上皮癌中のヒトβ-デフェンシン-2の濃度は、通常の経口上皮細胞中よりも非常に高い(非特許文献２００) 。細胞の増殖と腫瘍の間には、遺伝子的つながりがある。増殖と分化の調節の機能障害は、腫瘍成長に導く。腫瘍の成長は、癌性になるために隣接した 細胞の助けを必要とする。サイトカイン の過剰発現または過剰活動は、これらの過程編成に関連する。慢性炎症による持続性攻撃は、細胞の癌化の一因にもなる。血管形成は、癌の成長に重要な過程である。AMPは、血管形成の誘導剤である (非特許文献１３６) 。そのため、AMPとサイトカインへの拮抗剤による血管形成と同様、分化と増殖の阻害は、癌治療に使用されることができる。ウロキナーゼ型プラスミノゲン活性剤(uPA)は、抗菌の性質を持ち (非特許文献２０１) 、悪性細胞の拡散移動に関与している。生体内および生体内での発見は、αデフェンシンが腫瘍増殖において可能な直接的影響をもつ腎細胞癌中の悪性外皮細胞の常習的ペプチド成分であると示唆する (非特許文献２６) 。ある抗血管形成の化合物は、生体内実験研究において強力な抗癌性質を持つと発覚した。そのために、LL-37などの血管形成的AMPの阻害は、癌治療の1つの方法である。マトリックス・メタロプロテイナーゼ (MMPs)が、腫瘍侵襲と転移の過程の間の細胞外でのマトリックスリモデリングにおいて重要な役割を果たすと知られている。MMP-2とMMP-9タンパク質の過剰発現は、腫瘍細胞細胞質と間質要素に局所化された多くの割合のESCC腫瘍にて観察された(非特許文献２０２)。
【０３３９】
BMPR-IAは除外されるが、BMP-2/4とBMP-5は、経口癌細胞の転移に関与している可能性がある (非特許文献２０３) 。
【０３４０】
上皮創傷の関連する疾患の例は、治癒欠陥、潰瘍、皮膚潰よう、褥瘡、胃潰瘍、消化性潰瘍、バッカル潰瘍、鼻咽頭潰瘍、食道潰瘍、十二指腸潰瘍、および糖尿に関連した治癒の欠損を含む。 
【０３４１】
疾患の例は、突発性/炎症性疾患、慢性/炎症性疾患、急性/炎症性疾患、 炎症性/皮膚疾患、炎症性/胃腸疾患、炎症に関連した腫瘍、アレルギー性疾患、自己免疫疾患、感染性疾患、悪性疾患、移植関連疾患、炎症性/退行性疾患、炎症に関連した創傷、過敏症に関連した疾患、炎症性/心血管疾患、炎症性/腺状疾患、炎症性/肝臓疾患、炎症性/神経性疾患、炎症性/筋肉-骨格疾患、炎症性/腎臓疾患、炎症性/生殖疾患、炎症性/全身性疾患、炎症性/結合組織疾患、炎症性/神経変性疾患, 壊死、移植片に関連した炎症性疾患、炎症性/血液疾患、炎症性/眼疾、炎症性/呼吸器病を含む。
【０３４２】
皮膚/炎症性疾患の例は、乾癬、頭部ふけ症、尋常性天疱瘡, 扁平苔癬, アトピー性皮膚炎, 強皮症, 皮膚筋炎, 脱毛症, 眼瞼炎, 皮膚癌、黒色腫, 扁平上皮癌, 尋常性座瘡, 新生児中毒性紅斑, 毛包炎, 皮膚のしわ, 自己免疫水疱性皮膚疾患, 水疱性類天疱瘡, 落葉状天疱瘡, 皮膚炎, および薬疹を含む。
【０３４３】
頭部ふけ症は、炎症性異常増殖または異常分化疾患として分類され、乾癬のようにLL-37やデフェンシンなどのAMPの過度反応性により引き起こされた増殖/分化均衡におく異常性 により頭皮のはがれやすい皮膚が突き出す。スウェーデン住民においての統計調査は、頭部ふけ症と乾癬の間の相互関係を明らかにした。乾癬を発病する遺伝的危険度(家族歴)を持つ人々は、頭部ふけ症患者の非常に高い比例率を持つ。それゆえに、本発明により説明されている乾癬治療方法は、乾癬治療に適用できる。  
【０３４４】
胃腸/炎症性疾患の例は、クローン病、慢性自己免疫胃炎、自己免疫萎縮性胃炎、原発性硬化性胆管炎、自己免疫無酸症、大腸炎、回腸炎、慢性炎症腸疾患、炎症性腸症候群、慢性炎症性腸疾患、セリアック病、摂食障害、胆石および胃腸潰瘍を含む。
【０３４５】
クローン病は炎症性腸疾患である。腸は外の環境に曝されているため、肌の中と同じくして、防御及び通常の細胞制御の一部としてのAMPの意義は大きく、また、AMPの作用はこれらの組織中で、病的状態である場合と同様に通常の生理機能でも重要な役割を果たしている。AMPの発現及び／もしくは作用における異常は、これらの組織の中で病状の一因となる。パネート細胞（腸内のある特定の細胞）は、細菌と相互して正常な脈管形成促進を助勢するために必要であり、パネート細胞を欠如するマウスは適切な血管形成を行うことができない。注目すべきことに、正常なマウス及びヒトの腸内に一般的に見られる、Bacteroides thetaiotaomicronもしくはB. thetaiotaomicronと呼ばれる、ある特定の型のバクテリアによるコロナイゼーションは、微生物社会全体を移植するのと同等に効率的に血管形成の進行を促す。つまり、B. thetaiotaomicro及びパネート細胞は連携して生後の血管形成を促進するのである。自然及び適応免疫系細胞の化学誘引物質として作用するAMPの力は、胃腸管内の慢性炎症を永続させる上で大きな比重を占めている（非特許文献２０４)。AMP LL-37、βデフェンシン、ヒトαデフェンシン、βデフェンシン（HD5を含む）、HN-6、リゾチーム、並びに分泌型PLA2及びTL1Aはパネート細胞及び腸、小腸内の分泌上皮細胞で発現する（非特許文献２０５，２０６)。αデフェンシンが過剰発現している場合は、ナイーブT、未熟樹状細胞、樹状細胞、単球が化学誘引される。(非特許文献２０７，２０８，２０９)。その他のAMP同様ヒトαデフェンシンは、自然免疫の一部として局所腸生体防御の一因となっており、また微生物感染及び慢性炎症性腸疾患に大いに関連する可能性がある（非特許文献２１０)。αデフェンシン、例えば、ヒト多形核白血球の抗走化剤として作用するαデフェンシン1／ヒト好中球タンパク質1は、ヒト多形核白血球の走化性をダウンレギュレートすることで急性炎症を慢性炎症に変える。慢性炎症は、増強された細胞増殖、結合組織、ならびに多形核白血球よりむしろリンパ球及び形質細胞を含む滲出物が見られることで一般的に特徴付けられることが知られている。従って、かかるAMP／AMLの適切な制御を炎症性腸疾患等の疾患治療に利用することが可能である。 
【０３４６】
胃炎は胃の炎症状態である。胃炎には、AとBの二つの主要な型がある。A型胃炎は自己免疫過程の中で発現するとされている。双方の型で、ヘロリバクター・ピロリ等の感染体が関係している。AMPは両過程に関与している。デフェンシンは胃炎の病原に関与している（非特許文献２１１)。従って、かかるAMP／AMLの適切な制御を胃炎等の疾患の治療に利用することが出来る。
【０３４７】
アレルギー性／炎症性疾患の例としては、喘息、発疹、蕁麻疹、花粉アレルギー、チリダニアレルギー、毒物アレルギー、化粧品アレルギー、ラテックスアレルギー、化学物質アレルギー、薬品アレルギー、虫刺されアレルギー、動物鱗屑アレルギー、スティングプラントアレルギー、ツタウルシアレルギー、アナフィラキシー・ショック、アナフィラキシー、アトピー性アレルギー及び食物アレルギー等が挙げられる。
【０３４８】
過敏症の例としては、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時型過敏症、抗体関与型過敏症、免疫複合体関与型過敏症、Tリンパ球関与型過敏症、遅延型過敏症、ヘルパーTリンパ球関与型過敏症、細胞傷害性リンパ球関与型過敏症、Th1型リンパ球関与型過敏症、Th2型リンパ球関与型過敏症等が挙げられる。
【０３４９】
心血管疾患／炎症性及び／もしくは炎症性疾患／血液学的疾患の例としては、アテローム性動脈硬化症、高安動脈炎、結節性多発動脈炎、レイノー現象、側頭動脈炎、炎症性貧血、炎症性リンパ球減少、悪性貧血、閉塞性疾患、心筋梗塞、血栓症、ヴェーゲナー肉芽腫症、リンパ腫、白血病、川崎症、抗因子ＶＩＩＩ自己免疫疾患、懐死性小血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、pauci-immune型巣状性懐死性腎炎、半月体形成性糸球体腎炎、抗リン脂質症候群、抗体誘引性心不全、血小板減少版紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、心臓自己免疫、シャーガス病、鉄欠乏性貧血、抗ヘルパーTリンパ球自己免疫等が挙げられる。
【０３５０】
炎症は病理学的過程の一部であり、アテローム性動脈硬化症へとつながる。その他の各微生物同様クラミジア肺炎は、潜在的病因要素として作用し、炎症及びアテローム性動脈硬化症へとつながる。炎症は、いくつかの中枢神経系病理の結果であると同時に素因でもある。炎症は、頭部外傷やクモ膜下出血といったその他の中枢神経系病理と同様、虚血性脳卒中における脳虚血の発症後に起こる病態生理学的プロセスの一部である。加えて、中枢神経もしくはその抹消での炎症は、脳虚血の発現を引き起こす危険因子として考えられている。内皮細胞はAMPを発現、分泌する。ヘパリン結合タンパク質としても知られる37kDa陽性抗菌タンパク質（CAP37）は、元来人間の好中球から単離されたものだが、重大な多機能性炎症媒体であり、アテローム斑に関わる血管内皮内に発現する（非特許文献２１２)。ヒトβデフェンシン2は星状細胞によって発現し、その発現はサイトカインとリポ多糖体に反応して増加する（非特許文献２１３）。したがって、AMP抑制をこれらの症状の治療もしくは予防に利用することが可能である。
【０３５１】
炎症性／慢性疾患に関連する貧血は、病原体が摂取できる細胞内の鉄分を減少させることで病原体と戦う、体が持つ方法の一つである。鉄は好中球に吸収される。時として、慢性炎症は病原体の存在なくして発現することもある。慢性炎症的症状下では、サイトカインがhypoferremiaへとつながる鉄の流れ転換を誘引する。慢性細菌性心内膜炎、骨髄炎、若年性関節リュウマチ、リュウマチ熱、クローン病、潰瘍性大腸炎及び慢性腎不全等である。トランスフェリン結合鉄が単球に運搬され、貧血を引き起こす。この「運搬」はAMP作用に関与すると考えられている。サイトカインIL-1及びIL-6、並びにTNF-βはデフェンシンの産生を引き起こし、デフェンシンはサイトカインの産生を引き起こし、結果、単球により鉄が過剰吸収される。サイトカインによる鉄運搬制御が慢性疾患の貧血の主な発生機序である（非特許文献２１４）。したがって、AMPの制御を鉄レベル恒常性の制御に利用することが可能である。ヘプシジンAMPは鉄摂取を制御することで知られており、したがって、ヘプシジンの抑制を鉄吸収増加に利用することが可能である（非特許文献２１５）。しかしながら、デフェンシンやLL-37等、鉄制御に間接的に関与するその他のAMPも存在する。HNP-1は、好中球内に存在する非特異性防御ペプチドであるため、口腔扁平苔癬、白板症、舌炎等の鉄欠乏に関わる疾患からの保護に重要な役割を担っている（非特許文献２１６）。同様に、AMPに由来する全ての陽性好中球は、過剰発現すると、鉄hypoferremiaを誘引する。したがって、これらのAMPの抑制をかかる疾患治療に利用することが可能である。 
【０３５２】
白血球SLPI (secretory leukocyte proteinase inhibitor (SLPI)、分泌性白血球蛋白分解酵素阻害因子)の発現は、活動性ヴェーゲナー肉芽腫症でアップレギュレートされていると思われ、したがって、その作用抑制をヴェーゲナー肉芽腫症及びその他タイプの脈管炎等の疾患治療に利用することが可能である。
【０３５３】
腺性／炎症性疾患の例としては、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、B型インスリン耐性、クッシング症候群、甲状腺中毒症、良性前立腺過形成、膵疾患、橋本甲状腺炎、特発性副腎萎縮、グレーブス病、男性ホルモン性脱毛症、甲状腺疾患、甲状腺炎、自発性自己免疫性甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣自己免疫、自己免疫性抗精子生殖不能、自己免疫性前立腺炎、アジソン病、自己免疫性多腺性症候群Ｉ型等が挙げられる。
【０３５４】
糖尿病は数種の重大な合併症を伴う全身疾患であり、生活の質と寿命の双方に影響を与える。これら合併症の一つには、歯周病（歯周炎）がある。 歯周炎は単に限局的口腔感染であるだけではない（非特許文献２１７）。糖尿病の治療中は、歯根尖端周囲の、及びその他の組織障害は、非糖尿病者と同様、容易に治癒する（非特許文献２１８）。インスリン不応症に関係する疾患（例えば、肥満症、ＩＩ型糖尿病及びアテローム性動脈硬化症）における最近の調査でもまた、サイトカイン産生及び炎症マーカーの増加が示されている。現在の証拠は、慢性炎症が慢性インスリン不応症を誘引し、その逆の状況はないことを示している（非特許文献２１９）。最近の人間に対する研究では、高血清脂質値と歯周病の関係が立証された。原因の可能性としては、高血糖値（糖尿病の高血糖症等）と、血糖値がうまく制御されている時ですら低比重リポタンパクコレステロール及びトリグリセリド（DL／TRG）が上がる傾向にある重い糖尿病患者に見られるような加算されたLDL値であり、これはAMP過剰発現を誘引するLPSのような結合物へとつながる。したがって、本発明は、糖尿病ならびに、歯周炎及び治癒欠乏症に関連する糖尿病等、糖尿病に関連する疾患の治療に利用することが可能である。 
【０３５５】
増殖性網膜症は、糖尿病の慢性合併症の一つである。その過程には、網膜剥離及び失明を引き起こしかねない異常血管形成が含まれる。LL37及びその他のAMPは血管形成に関与し（非特許文献１３６）、したがって、LL-37に対する抗体及び抑制因子は新しく形成された血管の発達防止に利用することが可能であり、故に、糖尿病に関係する眼疾患予防に利用することが可能である。
【０３５６】
肝性／炎症性疾患の例としては、原発性胆汁性肝硬変、活動性慢性肝炎、ルポイド肝炎、自己免疫性肝炎、肝硬変等が挙げられる。
【０３５７】
神経性／炎症性疾患の例としては、神経変性疾患、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、重症筋無力症、非対称性運動神経障害、ギラン・バレー症候群、自己免疫性神経障害、ランバート・イートン筋無力症候群、腫瘍随伴性神経系疾患、腫瘍随伴性小脳萎縮症、非腫瘍随伴性スティフマン症候群、進行性小脳萎縮症、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シデナム舞踏病、ギルス・デ・ラ・トレット症候群、自己免疫性多腺性内分泌不全症、免疫異常による神経障害、後天性神経性筋強直、多発性関節拘縮症、視神経炎、海綿状脳症、片頭痛、頭痛、群発性頭痛、スティフマン症候群等が挙げられる。
【０３５８】
多発性硬化症（MS）に関して、デフェンシン及びラクトフェリンは脳脊髄液（CSF)に存在する。これらのペプチドには肺炎、髄膜炎等のいくつかの疾患において抗菌発現があり、それによって経路が生まれる可能性がある。MSへの経路は、関節の周りにある関節液中にAMPが存在する関節リウマチと類似しているようである。関与するペプチドは、中でもIP-10、デフェンシン及びラクトフェリン、CAP37である。
【０３５９】
アポリポタンパク質E2アポ（a）遺伝子座の多型とアルツハイマー病には関連性がある（非特許文献２２０，２２１）。アポEには殺菌作用があるため、この分子を調整することによってアルツハイマー病の治療に使用可能である。本質的には、このペプチドの全ての多型は何らかの形でその疾患の病因に関連しているが、e4イソフォームはよりアクティブである。e4/e4の遺伝子型を持つ人はリスクが最も高いが、e2/e4あるいはe3/e4の遺伝子型を持つ人にもその疾患が発現する可能性はある。アポE e4対立遺伝子によってより高いリスクが確定される一方、e4のみの存在では症状の発現前に疾患を予測することはできない。なぜなら、アルツハイマー病患者の40％しか対立遺伝子を持たないからである。また、e4対立遺伝子は、コレステロール吸収の増加に関連し、血液中のコレステロール値がより高くなる。e4/e4の遺伝子型は、西洋化した人々の1〜3パーセントのみに認められる。しかし、e4/e4の遺伝子型を持つ西洋化した個人がアルツハイマー病になる確率は60パーセントであり、男性より女性のほうがリスクが高い。高コレステロールの食事を摂取する人にとっては、e4対立遺伝子を持つことによっても冠動脈疾患のリスクが増加する場合がある。アポEとの錯体形成によって可溶性無βの末端への吸収を内部化することが強化される。アポE遺伝子導入マウスのLPSによって誘発するアストログリオーシスは、アポE4ではなく特異的にアポE3によってイソフォームが調整され、同様のメカニズムがAD及びその他の神経変性疾患におけるアポE4の遺伝子型の形質発現を媒介する可能性があること示唆している。したがって、このタンパク質多型に対して特異的な本発明の阻害因子は、アルツハイマー病の発現を防ぐ、または遅らせることが可能である（非特許文献２２２）。有益な侵襲性のアポE2及びE3は、アルツハイマー病発現の原因となる特定部位（アナログ）の「悪い」異性体、イソザイム、多型タンパク質に対する単クローン抗体、抑制因子と連結して置換体として（注射、あるいは別の方法で）導入される（非特許文献２２３）。対照ではなくADにおいて、脳の微小循環はヘパリン結合タンパク質である炎症メディエーターAMP CAP37を発現する（非特許文献２２４）。したがって、CAP37に対する抗体及び抑制因子もアルツハイマー病の治療に利用可能である（非特許文献２２５，２２６）。ゆえに、LL-37受容体であるFPRL1はアルツハイマー病に対する治療薬の開発のための分子標的を構成する（非特許文献２２７）。LL-37は、同じGタンパク質共役化学誘引物質受容体FPR-Like-1を活性化する上で、無（β）ペプチドと並行して作用する（非特許文献２２８）。
【０３６０】
結合組織性／炎症性疾患の例としては、関節炎、関節リュウマチ、化膿性関節炎、混合性結合組織系の障害、コレステリン腫、再発性多発性軟骨炎、自己免疫性筋炎、原発性シェーグレン症候群、平滑筋の自己免疫疾患、筋炎、腱炎、靱帯の炎症、軟骨炎、関節の炎症、滑膜炎、手根管症候群、変形性関節症、強直性脊椎炎、骨格の炎症、自己免疫性耳疾患、骨粗鬆症、線維筋痛、歯周炎、内耳の自己免疫疾患等が挙げられる。
【０３６１】
関節炎等の疾患に関して、AMPは正常なヒト滑膜及び炎症を起こしているヒト滑膜に発現、発生する。AMPリゾチーム、ラクトフェリン、分泌系ホスホリパーゼA2（sPA（2））、マトリリシン（MMP7）、ヒト好中球αデフェンシン1、2、3、ヒトβデフェンシン1、2の蓄積は免疫組織化学によって決定された。AMP殺菌性透過亢進タンパク質（BPI）、ヘパリン結合タンパク質、LL37、ヒトαデフェンシン5、ヒトαデフェンシン6、ヒトβデフェンシン1、2、3に対するmRNAの発現が、逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）によって分析された。RT-PCRは正常な滑膜のサンプルにおいてCAP37及びヒトβデフェンシン1のmRNAを示した。さらに、ヒトβデフェンシン3及びLL37のmRNAは化膿性関節炎（PA）、変形性関節症（OA）あるいは関節リュウマチ（RA）を持つ患者の滑膜サンプルにおいて検出された。免疫組織化学ではA種の滑膜細胞の全サンプルにおいてリゾチーム、ラクトフェリン、（sPA（2））及びMMP7が同定された。ヒトβデフェンシン1はB種のいくつかの滑膜細胞サンプルのみに存在が認められた。免疫反応性ヒトβデフェンシン1はいくつかの炎症を起こしているサンプルだけに現れた。HNP1-3は正常な滑膜でも炎症を起こしている滑膜でも検出された。データはヒト滑膜がAMPを広範囲で引き起こすということを示唆している。炎症状態では、ヒトβデフェンシン1のダウンレギュレートのみならずPA（RAにおけるLL37；OAにおけるヒトβデフェンシン3及びLL37）におけるヒトβデフェンシン1の誘導によって発現パターンは変化する（非特許文献２２９，２０４）。このように、1つあるいは2つ以上のこれらのタンパク質またはその活性を妨げると、関節炎等の疾患における病理学的過程は抑制される。
【０３６２】
コレステリン腫における微生物の混合ケラチンバイオフィルムは過剰に発現したAMPによって引き起こされ（非特許文献２３０，２３１）、LL-37等のAMP、あるいはその他のデフェンシン、あるいは他のAMPが関与している。したがって、そのようなAMPの適切な調整を、コレステリン腫等の疾患の治療に利用することができる。
【０３６３】
炎症性／腎疾患の例としては糖尿病性ネフロパシー等が挙げられる。
【０３６４】
高い数値がある糖尿病患者等におけるLDL値が追加された高い血糖値（糖尿病患者の高血糖等）は、血糖値がよく管理されている場合でも、低密度リポ・タンパク・コレステロール及びトリグリセリド（LDL/TRG）を増加し、AMPの過剰発現を誘発するLPSのような結合成形を引き起こす傾向がある。βデフェンシン1のｍRNAの過剰発現は糖尿病性ネフロパシーに影響を与える（非特許文献２３２）。デフェンシンの細胞毒性はデフェンシンが慢性糸球体腎炎と腎盂人炎の病因の一因となる腎臓の炎症部位と相関関係があり得る（非特許文献２３３）。したがって、そのようなAMPの抑制を糖尿病性ネフロパシーの治療に利用することができる。
【０３６５】
炎症性／生殖疾患の例としては、反復性の胎児流産、卵巣嚢胞、月経関連疾患等が挙げられる。
【０３６６】
炎症性／全身疾患の例としては、全身性紅斑性狼瘡、全身性硬化症、敗血性ショック、毒素性ショック症候群、ライター症候群、悪液質等が挙げられる。
【０３６７】
炎症性／伝染性疾患の例としては、カンジダ症、真菌感染症、菌状息肉腫、慢性感染症、亜急性感染症、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原虫性疾患、寄生虫症、マイコプラズマ病、壊疽、敗血症、プリオン病、インフルエンザ、結核症、細菌性肺炎、マラリア、エイズ、慢性疲労症候群、重症急性呼吸器症候群等が挙げられる。
【０３６８】
LL-37は菌類及び細菌性LPSの表面タンパクに結合する。LL-37は食塩水の中では菌類に敵対しない（非特許文献２３４）。同様に、全てのAMPがカンジダ菌に敵対するというわけではない。したがって、LL-37の抑制及び菌類に敵対しない他のAMPを抑制して菌類の細胞への付着を防止することができるため、真菌病の治療に対しても利用可能である。
【０３６９】
移植関連／炎症性疾患の例としては、組織不適合性、慢性組織不適合性、亜急性組織不適合性、急性組織不適合性、超急性組織不適合性、移植片の拒絶反応、移植片対宿主拒絶反応等が挙げられる。
【０３７０】
移植の例としては、歯科用インプラント、豊胸手術、シリコーン移植、人工歯根、ペニス整形、心臓移植、人工関節、骨折修整装置、骨交換移植、薬物送達のための移植、カテーテル、ペースメーカー、人工心臓、人工心臓弁、薬の放出のための移植、電極移植、レスピレータチューブ等が挙げられる。
【０３７１】
けが、炎症の例としては、皮膚創傷、表皮剥離、打撲、切り傷、刺創、裂傷、打撃による外傷、脳震盪、打撲傷、熱傷、凍傷、化学火傷、日光皮膚炎、乾燥、放射線による火傷、放射能による火傷、気道熱傷、筋断裂、肉離れ、腱切断、腱損傷、靱帯損傷、靱帯切断、過伸展、軟骨骨折、骨折、神経の収縮、射創等が挙げられる。
【０３７２】
炎症性、呼吸器系疾患の例としては、喘息、アレルギー喘息、びまん性汎細気管支炎、気腫、特発性肺線維症、嚢胞性線維症、インフルエンザ、副鼻腔炎、慢性閉塞性肺疾患等が挙げられる。
【０３７３】
文献は、喘息、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、副鼻腔炎等の疾患を治療するために本発明を使用することが可能であることを証明している。炎症はAMPによって誘発される（呼吸上皮、内皮、気管支、喉頭、腎臓、線維芽細胞、その他の上皮細胞）。さらに、気管支上皮細胞へのインフルエンザ菌の付着は炎症を起こしている間に活性化した好中球から放出されるデフェンシンによって増強する（非特許文献２３５）。上皮細胞、線維芽細胞のような細胞、内皮細胞等の様々な種類へのインフルエンザ菌の付着はデフェンシンによって著しく増強した。デフェンシンはカタル性モラクセラ、髄膜炎菌、非被包性肺炎連鎖球菌の付着も促進した（非特許文献２３６）。嚢胞性繊維症（CF）の慢性炎症は気道分泌におけるAMPの増加する値に関与する。しかし、CFの気道表面液の細菌を殺す能力は衰える。この問題は慢性あるいは高度のコロナイゼーション、及び緑膿菌等の有機体によって発症する反復性肺炎に反映する。塩濃度が正常に戻るとCF気道表面液の殺菌作用は回復し、これは欠陥のあるCF膜貫通型伝導レギュレータによって生じた異常に高い塩濃度が影響する可能性があるということを示唆している。ヒトβデフェンシン及びカテリシジン等の上皮で生成されたAMPの殺菌作用は高い塩濃度によって不活性化し、これは先天性免疫防御のこの要素にある欠陥にはCF患者で見られる慢性肺感染が関与している可能性があるということを示唆している。カンジダ菌でも見られるように、高い濃度の食塩水でのAMPは病原体を細胞表面の粘膜に付着させることによって発病活動を促す。高い濃度のデフェンシンは慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、感染症が増加、疾患が増悪した患者の化膿した気道分泌で認められている。したがって、デフェンシン1〜6に対する抗体は感染及び炎症を減少させることが可能である。マイコプラズマ肺炎菌の感染は末梢気道におけるケモカインRANTESの誘導によって気道の異なるレベルで慢性喘息の病原の一因となる。RANTESの抑制が必要である。したがって、これらの、あるいは他のAMPの発現を阻止することは疾患の進行の阻止、あるいは治療において有利である。デフェンシンを気管支内に点滴することによって、急性の肺の炎症及び機能障害を引き起こす。これは、気道での高濃度のデフェンシンは炎症性肺疾患の病原に大きな影響を与える可能性があるということを示唆している（非特許文献２３７）。それらは、嚢胞性線維症、びまん性汎細気管支炎、特発性肺線維症、急性呼吸窮迫症候群、及び感染症において過剰発現する（非特許文献２３８）。それらの抗菌性に加え、ヒト好中球デフェンシンもT細胞及び樹枝状細胞を結集することによって適応免疫を促進する（非特許文献２０７）。
【０３７４】
ヒトβデフェンシン2は鼻粘膜に発現し、膿瘻の慢性炎症の状態でアップレギュレートする（非特許文献２３９）。したがって、ヒトβデフェンシン2のダウンレギュレーションは、副鼻腔炎等の疾患の治療に利用することができる。
【０３７５】
炎症性／眼疾患の例としては、眼乾燥症、水晶体起因性ブドウ膜炎、眼瞼炎、交感性眼炎等が挙げられる。
【０３７６】
眼乾燥症は慢性炎症性眼疾患である。これは更年期後の女性、高齢者、シェーグレン症候群、関節リュウマチ、狼瘡、糖尿病等の全身疾患を持つ患者に対して特に問題である（37%の糖尿病患者がこの疾患を患い、28%の成人がこの疾患を持つ）。デフェンシンはT細胞に対してケモカインのように作用する（非特許文献２４０）。ヒトβデフェンシン2等のAMPのアップレギュレーションは眼乾燥症の特徴である。ヒトβデフェンシン2は中等度の眼乾燥症患者の結膜上皮で発現した（非特許文献２４１）。したがって、AMP／AML（特にヒトβデフェンシン2）生成及び活動の抑制は、眼乾燥症等の眼疾患の治療に利用することができる。
【０３７７】
新生児中毒性紅斑は、病変での活性化した免疫細胞の蓄積を特徴とする健康な新生児に起こる一般的な炎症性皮膚反応である。その病因学的及び生理学的な重要性は未だ不明である。最近、乾癬の染色が表皮層全体に見られた（非特許文献２４２）。したがって、このタンパク質を抑制することはこの症状を治療するにあたり有益となり得る。
【０３７８】
多くの座瘡生検では、病変周囲及び病変の上皮において（特に膿胞において）、デフェンシン2免疫活性の明確なアップレギュレーション及びデフェンシン1免疫活性のそれほど明確ではないアップレギュレーションが示されている（非特許文献２４３）。
【０３７９】
毛嚢炎は、丘疹及び小膿疱として臨床的に発症した毛包の炎症を伴う一般的な皮膚疾患である。最近、表皮の毛嚢炎の病変においてヒト好中球ペプチド（HNP）及びヒトβデフェンシン2が非常に多く存在しているということが、免疫組織化学によって明らかになった。毛包間の部分で浸潤しているPMN白血球及び小膿疱においてHNPに対する免疫活性が認められた。一方、冒された毛包の病変周囲及び病変の上皮では、ヒトβデフェンシン2に対する免疫活性が認められた。ヒトβデフェンシン2の分散パターンは尋常性座瘡の病変の分散パターンと類似している（非特許文献２４４）。
【０３８０】
発現の増加も、βデフェンシンの増加と関連性のある扁平苔癬及びLL-37の増加と関連性のあるサルコイドーシス等の疾患の病原に関与していると思われる。カテリシジンのレベルは新生児中毒性紅斑の炎症性皮膚病変において増加し、明らかに炎症性、活性化した好中球、好酸球、樹枝状細胞と関係があると認められた。また、尋常性疣贅及び尖圭コンジロームの発症の間に、表皮において高レベルのLL-37も証明された。
【０３８１】
疾患の例としては、老化及び加齢関連疾患等が挙げられる。下記の実施例の項では、ケラチノサイトの増殖／分化のバランスが抗菌ペプチドの濃度の影響を受けるということを明らかにしている。三次元の器官型皮膚共培養モデルでのヒトβデフェンシン2の過剰発現は、ケラチノサイト及び線維芽細胞の組織化されていない増殖を引き起こした。皮膚やその他の体内組織の老化には多くの原因がある。しわ及び皮膚の老化の大きな要因のひとつはコラーゲンタンパク質の不一致及び組織崩壊の蓄積である。線維芽細胞は細胞を囲むコラーゲン基質を生成する細胞であるから、線維芽細胞の密度が増加するということはコラーゲン産生の増加を意味し、その結果、皮膚が活性化する。下記の実施例の項で説明されているように、三次元の器官型皮膚共培養モデルでのヒトβデフェンシン2の抗体は、線維芽細胞の増殖だけではなく、ケラチノサイトの増殖による分化の増加を示した。これにより、無治療対照（普通肌）より高密度な線維芽細胞の部位とよりきめの整った皮膚がもたらされる。ケラチノサイト及び線維芽細胞の双方は、対照の無治療皮膚よりも組織化され、正常化した表皮の厚さに明らかな増大が見られた。下記の結果データは、AMPが分化／増殖のバランスを調整し、そうすることにより、皮膚での濃度レベルが細胞がどの程度組織化しているかが決定されるということを示す。これは、ケラチノサイトの組織及び皮膚の老化防止治療、しわ取り治療に関して、AMPの重要性、線維芽細胞に対するAMPの阻害因子の重要性、そして同様にコラーゲンの重要性を証明している。この老化防止治療はAMPが存在する多くの体内組織に対しては正確なものである。
【０３８２】
フィブリル及びプロトフィブリルのAMPとの錯化もしくは架橋結合は、加齢関連疾患の病因に関与している。AMP阻害因子は、その他の慢性炎症性疾患と同じくして、炎症ならびに、糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病及び海綿状脳症につながる組織形態変化を予防することが出来る。糖尿病の第一段階は、膵臓組織内の形態変化に帰するAMPの過剰発現につながる高インスリン値から始まる。この結果、全身インスリン発現不足となる。さらに、プロトフィブリルのAMPとの錯化は、ＩＩ型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病、海綿状脳症及びその他プリオン病等の加齢関連疾患、及び2型糖尿病に関連を持つ。アミロイドフィブリルとして知られる異常な折り畳み構造のタンパク質凝集塊は、当該の疾患においての細胞破壊に関与する。成熟フィブリルに先立って形成される、より小さな構造（プロトフィブリル）は、細胞膜を通過する可能性が高いため、フィブリルよりも更に有毒となり得る。治療上での取り組みは、これらの沈着物を崩壊することに重点が置かれてきた。これらの沈着物は、アルツハイマー病ではアミロイド斑と呼ばれ、パーキンソン病ではレビー小体と呼ばれ、ＩＩ型糖尿病では膵島アミロイド沈着物と呼ばれ、これはインスリンが産生され、制御される膵臓内の部分、「ランゲルハンス島」内で起こる。ＩＩ型糖尿病は、最も一般的なアミロイド関連疾患の一つである。プロトフィブリル形成初期段階における抑制は、加齢関連疾患予防の上で不可欠である。例えばアルツハイマー病といった慢性炎症性疾患は、AMPのコロナイゼーションをアミロイド斑に関与させる（非特許文献２２５）。AMPはプロトフィブリルと錯体を形成すると仮定されている。錯体形成は、疎水性及び静電気相互作用の非常に均衡の取れた相互作用によって統制されているが、これら二つの相互作用はどちらも単体としてはこれらの極性状況では錯化を確実にする程の力を持たない。これは、高位に陽性の低分子タンパク質デフェンシンがフィブリルからアミロイドAタンパク質と共に隔離された際に証明された（非特許文献２４５）。同様に、抗菌タンパク質アポE4イソフォームは、アルツハイマーに関連する更に高い危険を持ち、また、アポEの異なるイソフォーム全ての中で最も陽性であり、アポE3とはチャージユニット一つ異なり、アポE2とは二つ異なる（非特許文献２４６，２４７）。本発明者らは、硫酸化プロテオグリカンとAAアミロイドフィブリルとの間の超微細構造的密接関係（非特許文献２４８）をふまえ、（高位に陽性なその他物質及び小ペプチドに囲まれた状態の）AMPがアミロイドタンパク質と共に触媒もしくは架橋開始剤として作用すると仮定する。本発明者らは更に、本錯体がプロトフィブリルを形成する炎症過程を通して直接的もしくは間接的に開始剤を結合させ、AMPがプロトフィブリル細胞膜付着を促進すると仮定する。同様に、陽性小分子もまた、フィブリル成長を誘引する。例えば、ヘパリン及びグリコサミノグリカンは、陽性小ペプチドと同じ方法にて、体外でα-シヌクレンからアミロイドフィブリルの形成を誘引する（非特許文献２４９）。従って、AMPのダウンレギュレーションを加齢関連性疾患の予防に利用することが可能である。デフェンシンは炎症のためアルツハイマー病におい���過剰発現する（非特許文献２５０）。高濃度のデフェンシン、特にαデフェンシンはヒト細胞にとって細胞毒性となり得、アルツハイマー病、多発性硬化症及び糖尿病に見られる細胞死へとつながる。小膠細胞もまた、アルツハイマー病において活性化されおり、CAP37といったAMPを放出する。「Secreted Protein of Streptococcus pyogenes That Inactivates Antibacterial Peptides」（SIC; 非特許文献２５１）のタンパク質はAMPを不活性化させ、そしてそれ故にアルツハイマー病及びその他の炎症性疾患の治療に利用することが可能なのである。デフェンシンは補体（特にC1補体）に接着する。この補体−AMP接着物は、アルツハイマー斑の中に見られる（非特許文献２５２）。
【０３８３】
上記の通り、AMP／AMLの同属受容体への結合防止は、AMP／AMLの受容体への結合によって介された生物学的過程制御に利用されてもよい。そこから、50以上のAMP／AML及び20以上の受容体が疾患病因に関与し、従って、リガンドと受容体の適切な結合物に照準を当てて抑制することは、当該疾患治療に不可欠である。かかるAMP／AML及び同属受容体、ならびにこのアプローチで治療可能な疾患の種類を表１に示す。
【０３８４】
本発明における実施方法及び技術、ならびに本発明の実施に用いられた物質の入手及び使用についての手引きは、本技術の文献中に十分記載されている（例として、米国特許出願番号20030044907参照）。
【０３８５】
従って、本発明は、従来の技術と比して初めて、AMP／AML及び／もしくはその阻害因子使用により、異常制御された成長／分化、異常制御された成長／分化バランス、炎症、転移及び血管形成等の細胞／組織における生物学的過程に関連する、前立腺炎及び腫瘍等の各疾患全ての治療を可能にするものである。本発明はまた、従来の技術と比して初めて、かかるAMP／AML及び／もしくはその阻害因子の特定を可能にするものである。 
【０３８６】
本特許の存続期間内に、関連する薬剤スクリーニング技術が開発されると期待され、また「化合物の同定法」という表現の範囲は、当該の全ての推測的新技術を含むことを意図されている。 
【０３８７】
本発明の追加の目的、利点、及び革新的特徴は、限定を意図しない以下の実施例を考察していく上で、本技術分野において通常の技能を有する者にとって明白なものとなる。さらに、前述で描写され、下記請求項で請求される本発明の各実施形態及び側面は、以下の実施例において実験に基づき裏付けされる。
【０３８８】
実施例
次に以下の実施例を参照するが、これは前記述と共に、本発明を限定しない方法にて例証するものである。
【０３８９】
概して、ここに使用される名称及び本発明で使用される検査法は、分子、生化学、微生物学、及び遺伝子組み替えに関する技術を含む。当該技術は文献にて詳細に説明される。例えば、非特許文献２５３，２５４，２５５，２５６，２５７，２５８、米国特許記載の方法論、特許文献１６，１７，１８，１９，２０、非特許文献２５９，２６０，２６１を参照されたく、また利用可能な免疫学的測定は特許及び科学的文献にて広く記載されており、例えば、特許文献２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０，３１，３２，３３，３４，３５，３６、非特許文献２６３，２６４，２６５，２６６，２６７，２６８，２６９，２７０を参照されたいが、これら全ては、参照することにより本書に完全に記載されているものとして組み込まれる。その他一般的参照文献は本書を通じて記載されている。それらの手順は当技術分野では周知であり、読者の便のために記載されるものである。
【０３９０】
別段の定めのない限り、本書の専門用語及び科学用語は、本発明の属する技術分野において通常の技能を有する者により一般的に理解されるのと同じ意味を有するものとする。本書記載の手法及び物質に類似もしくは同等の方法及び物質を本発明の実施または検査において使用することは可能であるが、適当な手法及び物質を以下に記す。
【０３９１】
実施例１
癌細胞増殖抑制及び基質接着損失における抗AMP抗体利用：
背景：転移性悪性皮膚癌腫等、転移性悪性癌腫の治療における最適な治療法は存在しない。当該疾患の治療に最適な戦略は、癌細胞の成長及び基質接着の損失誘引に関与する因子の特定、ならびに、かかる成長及び基質結合接着の損失を抑制するために、当該因子を抑制する力を持つ化合物を特定することである。本発明を実践に活用する上で、以下に記載の通り、癌腫増殖促進及び基質接着損失におけるAMPの重要な役割が特定され、そして転移性悪性皮膚癌腫等の癌腫の最適な治療を可能にするためにかかる成長及び基質接着損失を抑制する抗AMP抗体の能力が示され、それによって従来の技術の制限が克服された。
【０３９２】
物質及び方法：
抗菌ペプチド（AMP）：抗菌ペプチドであるヒトβデフェンシン1及びヒトβデフェンシン2は、Sigma社より購入した（カタログ番号はそれぞれ D9565及びD9690）。
【０３９３】
抗体：使用された抗ヒトβデフェンシン2抗体は、純度98％以上の組換え型ヒトβデフェンシン2（GenBank: ACCESSION AAC33549; VERSION AAC33549.1  GI:3510600; DBSOURCE: accession AF040153.1)との免疫化により、及び固定化したヒトβデフェンシン2マトリックスを使用の上、血清のアフィニティークロマトグラフィー精製によって得られた、多クローン性ヤギ抗ヒトβデフェンシン2抗体である。 
【０３９４】
チミジン取り込み細胞増殖試験：細胞増殖は、DNAへの［3H］チミジン取込みを測定することにより評価した。細胞は、［3H］チミジン（1μCi/mL, ICN, Irvine, CA)に一時間、摂氏37度で適用した。培養後は、細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて三度洗浄し、5％トリクロロ酢酸で15分間室温にて培養し、1％トリトンX-100で可溶化した。細胞に取込まれた放射能は、Tricarb 液体シンチレーションカウンターの[3H]ウィンドウで測定した。各実験に対し、各実験条件下での3つのサンプルの測定値に基づき平均値を決定した。チミジン取込みはタンパク質１ｍｇあたりの崩壊数／分（DPM）で決定した。
【０３９５】
実験結果：
皮膚癌細胞はＡＭＰによって有意に増殖誘引されている：AMPがもたらす悪性ケラチノサイト成長への影響を調査するため、ヒト表皮ケラチノサイト細胞株を長期にわたってAMPで処置し、その増殖を観察した。これらの細胞株には、不死化のもの（HaCaT及びclone 6細胞株）、軽度悪性細胞（A-5及びI-5細胞株）、強度悪性細胞（II-4及びRT-3細胞株）が含まれる。図1に示されるように、AMPに暴露された全ての皮膚表皮細胞内では、細胞増殖においてかなりの増加が見られ、また細胞接着においてはかなりの減少が見られた。このデータは、転移に関連するとともに細胞の過剰増殖に関連して、AMPが、皮膚癌腫等の癌腫における病因に関与している可能性があることを証明するものである。 
【０３９６】
抗AMP抗体による皮膚癌細胞成長の抑制及び基質接着の損失：培養された、不死化ヒトケラチノサイト、中度悪性ヒトケラチノサイトまたは強度悪性ヒトケラチノサイト（それぞれHaCaT、A-5及びRT-3）を培地に乗せ、接着可能な状態で、濃度1.0μg/mlの抗ヒトβデフェンシン2抗体存在下で48時間培養し、［3H］チミジン取込み試験によって評価した。図2に示されるように、悪性ケラチノサイトの成長の有意な抑制が1.0μg/mlの抗ヒトβデフェンシン2抗体によって誘引された。また抗体処置によって細胞の基質接着が有意に強化されたことも認められた。これらの結果より、当該抗AMP抗体処置を転移性悪性皮膚癌腫等癌腫の治療に利用することが可能であることが証明された。 
【０３９７】
結論：上述の結果は、ヒトβデフェンシン1及びヒトβデフェンシン2等のAMPが、転移性悪性癌細胞等、癌細胞の病原性増殖促進に関与していることを明確に証明するものであり、また、抗AMP抗体等のAMP作用を抑制する力を持つ化合物が、転移性悪性皮膚癌腫等、癌腫の最適な治療に利用することが可能であることを初めて証明するものである。
【０３９８】
実施例２
皮膚細胞増殖の制御における抗AMP抗体利用： 
皮膚創傷、火傷、及び皮膚腫瘍等、皮膚成長の治療的制御を必要とする疾患のための最適治療方法 
背景：皮膚創傷や火傷等、皮膚成長の治療的制御を必要とする各疾患の治療における最適な治療法は存在しない。当該疾患の治療に最適な戦略は、皮膚成長防止に関与する因子の作用を抑制することである。本発明を実践に活用する上で、以下に記載の通り、皮膚創傷及び火傷等の疾患に対する最適な処置を可能にするために、皮膚成長をアップレギュレートもしくはダウンレギュレートする特定濃度の抗AMP抗体の能力が示され、それによって従来の技術の制限が克服された。
【０３９９】
物質及び方法：
抗体：使用された抗ヒトβ-デフェンシン2抗体は、純度98％以上の組換え型ヒトβデフェンシン2（GenBank: ACCESSION AAC33549; VERSION AAC33549.1  GI:3510600; DBSOURCE: accession AF040153.1)との免疫化により、及び固定化したヒトβデフェンシン2マトリックスを使用の上、血清のアフィニティークロマトグラフィー精製によって得られた、多クローン性ヤギ抗ヒトβデフェンシン2抗体である。使用された抗LL-37抗体は、37アミノ酸残基長LL-37ペプチド［アミノ酸残基は134〜170のhCAP18／ヒトcathelicidin抗菌ペプチド前駆タンパク質を配位結合させる(GenBank: ACCESSION NP_004336; VERSION NP_004336.2 GI:39753970; REFSEQ: accession NM_004345.3)］との免疫化によって作られた、タンパク質A精製の多クローン性ウサギ抗ヒトLL-37抗体である。
【０４００】
チミジン取り込み細胞増殖試験：細胞増殖は、DNAへの［3H］チミジン取込みを測定することにより評価した。細胞は、［3H］チミジン（1μCi/mL, ICN, Irvine, CA)に一時間、摂氏37度で適用した。培養後は、細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて三度洗浄し、5％トリクロロ酢酸で15分間室温にて培養し、1％トリトンX-100で可溶化した。細胞に取込まれた放射能は、Tricarb 液体シンチレーションカウンターの[3H]ウィンドウで測定した。各実験に対し、各実験条件下での3つのサンプルの測定値に基づき平均値を決定した。チミジン取込みはタンパク質ｍｇあたりの崩壊数／分（DPM）で決定した。
【０４０１】
実験結果：
抗AMP抗体によるプライマリーケラチノサイトの濃度比例アップレギュレーションまたはダウンレギュレーション：抗AMP抗体の皮膚成長における効果を調査するため、培養されたプライマリーケラチノサイトを、4（“1x”）もしくは20（“5x”)μg/mlの濃度でLL-37に対する抗体（青線）にて、または1 (“1x”) もしくは5 (“5x”)μg/mlの濃度で抗ヒトβデフェンシン2抗体（黄線）にて処理し、そして細胞増殖を測定した。図3に示されるように、それぞれ4または1μg/mlの抗LL-37またはヒトβデフェンシン2抗体での処理は、ケラチノサイト増殖の有意な誘発に帰したが、一方、5倍の濃度であるそれぞれ20または5μg/mlのかかる抗体での処理は、意外なことに有意なケラチノサイト成長抑制に帰した。
【０４０２】
結論：上述の結果は、ヒトβデフェンシン2及びLL-37等のAMPに特定の抗体を皮膚成長の正及び負の制御に利用することが可能であり、そしてそれ故に、例えば皮膚創傷や火傷等の、治療的皮膚成長を必要とするような疾患の最適な治療として利用することが可能であることを、従来の技術に比して初めて、明白に証明するものである。
【０４０３】
実施例３
乾癬等、炎症、自己免疫及び／または皮膚細胞／組織増殖／分化平衡異常に関わる疾患への最適治療における抗AMP抗体の利用
背景：乾癬及びふけ症等、炎症、自己免疫及び／または皮膚細胞／組織増殖／分化平衡異常に関わる疾患に対する最適な治療法は存在しない。乾癬皮膚に通常見られる血管形成及び上皮形成はLL-37等のAMPによって高められる（非特許文献１３６，２７１）。当該疾患の治療に最適な戦略は、皮膚細胞／組織増殖／分化に関与する因子の特定、ならびに、かかる疾患を治療するために、当該因子の作用を抑制する力を持つ化合物を特定することである。しかしながら、かかる化合物は未だ特定されていない。乾癬に関与するAMP／AMLには、psoriasin、デフェンシン、LL-37、CTACK／CCL27、CCL28、fractalkine、neutrophil gelatinase-associated lipocalin（NGAL)等がある（非特許文献１９１）。したがって、本発明者らは、かかるAMP／AML 制御抑制が乾癬の治療として利用可能であると仮定した。本発明を実践に活用する上で、以下に記載の通り、乾癬等、炎症、自己免疫及び／または皮膚細胞／組織増殖／分化平衡異常に関わる疾患を有する人間への最適治療における抗AMP抗体の利用方法が初めて示され、それによって従来の技術の制限が克服された。
【０４０４】
物質及び方法：
抗菌ペプチド（AMP）：抗菌ペプチドであるヒトβデフェンシン2が採用された（Sigma社カタログ番号D9690)。
【０４０５】
抗体：使用された抗ヒトβ-デフェンシン2抗体は、純度98％以上の組換え型ヒトβデフェンシン2（GenBank: ACCESSION AAC33549; VERSION AAC33549.1  GI:3510600; DBSOURCE: accession AF040153.1)との免疫化により、及び固定化したヒトβデフェンシン2マトリックスを使用の上、血清のアフィニティークロマトグラフィー精製によって得られた、多クローン性ヤギ抗ヒトβデフェンシン2抗体である。使用された抗LL-37抗体は、37アミノ酸残基長LL-37ペプチド［アミノ酸残基は134〜170のhCAP18／ヒトcathelicidin抗菌ペプチド前駆タンパク質を配位結合させる(GenBank: ACCESSION NP_004336; VERSION NP_004336.2 GI:39753970; REFSEQ: accession NM_004345.3)］との免疫化によって作成された、タンパク質A精製の多クローン性ウサギ抗ヒトLL-37抗体である。
【０４０６】
三次元器官試験管内皮膚培養：器官培養のための皮膚相当物は、0.1％の酢酸でラット尾腱から抽出したネイティブＩ型コラーゲンにて調製された。凍結乾燥コラーゲンは0.1％の酢酸にて1ミリリットルあたり4ミリグラムの最終濃度に再融解された。1容量の10×ハンク緩衝生理食塩水に8容量の氷温コラーゲン溶液を混合し、その後2モルNaOHで中和した。1容量のウシ胎仔血清（FCS）を懸濁したネズミ線維芽細胞（継代5〜8）に加えてよく混ぜ、最終濃度を1ミリリットルあたりコラーゲン3.2ミリグラム及び1ミリリットルあたり細胞100,000とした。この混合物から2.5ミリリットルアリコートをポリカーボネート細胞膜フィルターインサート（Falcon no.  3501, Becton Dickinson, Heidelberg, Germany）に注ぎ、特深の6ウェルトレー（Becton Dickinson)に設置し、摂氏37度で凝固させた。グラスリング（外径24mm、内径20mm）をゲル上に乗せて加圧し、ケラチノサイト接種のために平らな中央部を作成した。ゲルは10％FCS及び1ミリリットルあたり50mgのL-アスクロビン酸を加えたDMEM（Biological Industries, Israel)に釣り合わせた。次の日、1,000,000のHaCatヒト培養非悪性ケラチノサイト（2.5〜3.5×105平方センチメートル）を、コラーゲンマトリックス上の、10％FCS及びミリリットルあたり50mgのL-アスクロビン酸を加えたDMEMに接種した。培地に沈めて一晩培養させた後、培養物は、培地の高さを下げることにより、空気と培地の界面まで引き上げられた。2〜3日に一度培地を変えて、培養物を更に培養した。
【０４０７】
ヒト体内乾癬病変治療 ：1％BSAを含むPBSで希釈した抗LL-37抗体（100 μg/ml）もしくは負制御の無抗体バッファキャリアーを盲検法で被験者の病変部に適用した。
【０４０８】
実験結果：
抗AMP（ヒトβデフェンシン2）抗体による皮膚増殖／分化平衡異常矯正：皮膚細胞／皮膚の増殖−分化平衡異常におけるAMPの効果を調査するため、また、AMP作用抑制が当該の平衡異常を矯正する可能性を調査するため、独自の三次元器官皮膚共培養を確立した。プライマリーヒトケラチノサイトをマウス線維芽細胞入りコラーゲンゲル皮層相当物に接種した。上述の成長条件下において、数週間以内に、三次元器官共培養は、ケラチン形成のみならず皮膚表皮を含む、体内の皮膚組織の組織学的構造を模倣して組織化した。ケラチノサイト及び線維芽細胞の適当な増殖−分化は、器官皮膚共培養の完全な組織化のための必須条件である。いかなる平衡異常も、表皮細胞の生長しきって完全に発達した皮膚相当物形成不能へとつながる。
【０４０９】
皮膚細胞／皮膚の成長／分化平衡におけるAMPの影響を検査するために、培養された皮膚を20 ng/mlのヒトβデフェンシン2に曝した。図4bで示されるように、ヒトβデフェンシン2へのかかる暴露によって、ケラチノサイトの正常な表皮層を形成する力は無処理のもの（図4a）と比較して低下した。しかしながら、1μg/mlの抗ヒトβデフェンシン2抗体での処理は、培養皮膚の正常な組織的分化が証明するように、意外なことに増殖／分化平衡異常の有意な回復へとつながった。
【０４１０】
したがって、これらの結果は、抗AMP抗体を、皮膚細胞／組織の増殖／分化平衡異常に関係する、乾癬及びふけ症等の疾患治療に利用することが可能であることを強く示唆するものである。
【０４１１】
本発明考案中に、本発明者らは、癌は外膜デフェンシン1（ダウンレギュレートされた）及びデフェンシン2（アップレギュレートされた）の比率における平衡異常によって引き起こされる、増殖／分化経路間の恒久的平衡異常であり、それ故に現在記載の方法は癌治療に利用することができると理論付けた。
【０４１２】
抗AMP（LL-37）抗体による体内ヒト乾癬皮膚傷の効果的な治療：炎症、自己免疫及び／または皮膚細胞／組織の増殖／分化平衡異常に関連する、乾癬等の疾患治療における抗AMP抗体使用の可能性を調査するために、体内ヒト乾癬傷を抗AMP（LL-37）抗体で処置した。処置は盲検法を用いて、乾癬病変部に100 μg/ml濃度の抗LL-37抗体を3日間局部適用して行い、病変部の様子を10時間後に、及びその後14日間にわたって観察した。対照として、非特異性抗体を同被験者の隣接する病変部に適用した。盲検法で適用された処置液剤は処置の10時間後に特定された（データ表示無し）。抗体での処置は意外なことに、明確に、たった10時間後に処置された病変部の有意な治癒に帰した。図5a-dに示されるように、抗AMP抗体処置への反応としての病変部の治癒は、処置3日後に炎症及び落屑の有意な減少と帰した。処置の効果は処置後少なくとも二週間続いた（データ表示無し）。実験は異なる傷病変部にて4度行われたが、いずれも同じ結果となった。
【０４１３】
結論：上述の結果は、抗AMP抗体を用いての疾患治療について、従来の技術に比して初めて明確に示すものである。具体的には、上述の結果は、抗AMP抗体を用いて、炎症及び／または皮膚細胞／組織の増殖／分化平衡異常に関連する、乾癬等の疾患の被験者における最適な体内治療について、従来の技術に比して初めて明確に示すものである。
【０４１４】
実施例４
抗AMP抗体を用いての胃腸上皮細胞増殖制御：
炎症性腸疾患等、胃腸細胞過剰増殖に関連する疾患、ヘリコバクター関与胃腸疾患、及び胃腸癌腫における最適治療法
背景：炎症性腸疾患等、胃腸上皮細胞増殖異常制御に関連する疾患、ヘリコバクター関与胃腸疾患、及び胃腸癌腫処置における最適な治療法は存在しない。本発明を実践に活用する上で、以下に記載の通り、炎症性腸疾患等、胃腸上皮細胞増殖異常制御に関連する疾患、ヘリコバクター関与胃腸疾患、及び胃腸癌腫への最適治療を可能にするための、胃腸上皮細胞の成長を抑制する抗AMP抗体の力が示され、それによって従来の技術の制限が克服された。
【０４１５】
物質及び方法：
抗体：使用された抗ヒトβデフェンシン2抗体は、純度98％以上の組換え型ヒトβデフェンシン2（GenBank: ACCESSION AAC33549; VERSION AAC33549.1  GI:3510600; DBSOURCE: accession AF040153.1)との免疫化により、及び固定化したヒトβデフェンシン2マトリックスを使用の上、血清のアフィニティークロマトグラフィー精製によって得られた、多クローン性ヤギ抗ヒトβデフェンシン2抗体である。 
【０４１６】
チミジン取り込み細胞増殖試験：細胞増殖は、DNAへの［3H］チミジン取込みを測定することにより評価した。細胞は、［3H］チミジン(1μCi/mL, ICN, Irvine, CA)に一時間、摂氏37度で適用した。培養後は、細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて三度洗浄し、5％トリクロロ酢酸で15分間室温にて培養し、1％トリトンX-100で可溶化した。細胞に取込まれた放射能は、Tricarb 液体シンチレーションカウンターの[3H]ウィンドウで測定した。各実験に対し、各実験条件下での3つのサンプルの測定値に基づき平均値を決定した。チミジン取込みはタンパク質１ｍｇあたりの崩壊数／分（DPM）で決定された。
【０４１７】
実験結果：
抗AMP（ヒトβデフェンシン2）抗体による胃腸上皮細胞増殖の有意な濃度比例負または正制御：胃腸上皮細胞／上皮の増殖における抗AMP抗体の効果を調査するため、培養Caco2ヒト胃腸上皮細胞を濃度0.5もしくは1.0μg/mlの抗ヒトβデフェンシン2で48時間処理し、増殖を［3H］チミジン取込み試験にて測定した。抗体は意外なことに、細胞成長において、有意に濃度比例的な制御影響を及ぼすことが発見された。図6に示されるように、濃度1μg/mlの抗体では胃腸上皮細胞成長に抑制的影響があり、一方、低い方の濃度0.5μg/mlでは、抗体は細胞増殖強化を誘発した。
【０４１８】
結果：上述の結果は、抗AMP抗体を胃腸上皮細胞のアップレギュレーション及びダウンレギュレーションに利用できることを、従来の技術に比して初めて明確に示すものである。従って、上述の結果は、炎症性腸疾患等、胃腸上皮細胞成長の異常制御に関連する胃腸疾患、ヘリコバクター感染関与の疾患、及び胃腸癌腫の最適な治療法を提供するものである。
【０４１９】
実施例５
抗AMP抗体を用いての上皮細胞増殖抑制：
固形悪性腫瘍、乾癬、自己免疫疾患及び上皮腫瘍等、上皮過剰増殖／血管形成及び／または炎症に関連する疾患における最適治療法
背景：固形悪性腫瘍、上皮腫瘍、自己免疫疾患及び乾癬等、上皮過剰増殖／血管形成及び／または炎症に関連する疾患処置における最適な治療法は存在しない。本発明を実践に活用する上で、以下に記載の通り、固形悪性腫瘍、乾癬、自己免疫疾患及び上皮腫瘍等、上皮過剰増殖／血管形成及び／または炎症に関連する疾患への最適治療を可能にするための、上皮細胞の成長／血管形成を抑制する抗AMP抗体の力が示され、それによって従来の技術の制限が克服された。
【０４２０】
物質及び方法：
抗体：使用された抗ヒトβデフェンシン2抗体は、純度98％以上の組換え型ヒトβデフェンシン2（GenBank: ACCESSION AAC33549; VERSION AAC33549.1  GI:3510600; DBSOURCE: accession AF040153.1)との免疫化により、及び固定化したヒトβデフェンシン2マトリックスを使用の上、血清のアフィニティークロマトグラフィー精製によって得られた、多クローン性ヤギ抗ヒトβデフェンシン2抗体である。 
【０４２１】
チミジン取り込み細胞増殖試験：細胞増殖は、DNAへの［3H］チミジン取込みを測定することにより評価した。細胞は、［3H］チミジン（1μCi/mL, ICN, Irvine, CA)に一時間、摂氏37度で適用した。培養後は、細胞をリン酸緩衝生理食塩水にて三度洗浄し、5％トリクロロ酢酸で15分間室温にて培養し、1％トリトンX-100で可溶化した。細胞に取込まれた放射能は、Tricarb液体シンチレーションカウンターの[3H]ウィンドウで測定した。各実験に対し、各実験条件下での3つのサンプルの測定値に基づき平均値を決定した。チミジン取込みはタンパク質１ｍｇあたりの崩壊数／分（DPM）で決定された。
【０４２２】
実験結果：
抗AMP（ヒトβデフェンシン2）抗体による上皮細胞増殖の有意な抑制： 上皮細胞の増殖における抗AMP抗体の効果を調査するため、ウシプライマリー上皮細胞を濃度0.5もしくは1.0μg/mlの抗ヒトβデフェンシン2で48時間処理し、増殖を［3H］チミジン取込み試験にて測定した。図7に示されるように、抗体処理は特に濃度0.5μg/mlで、上皮細胞増殖に抑制の影響を与えることが発見された。
【０４２３】
結果：上述の結果は、かかる抗ヒトβデフェンシン2抗体等の抗AMP抗体を、上皮増殖／血管形成及び／または炎症の有意な抑制に利用することができ、そしてそれ故に、固形悪性腫瘍、上皮腫瘍、自己免疫疾患及び乾癬等、上皮過剰増殖／血管形成及び／または炎症に関連する疾患への最適治療を提供するものであることを、従来の技術に比して初めて明確に示すものである。
【０４２４】
実施例６
細胞培養及びタンパク質溶解物調製
細胞培養及びタンパク質溶解物準備：ヒト及びネズミのプライマリーケラチノサイトもしくは細胞株、並びにヒト及びネズミ線維芽細胞が前記の通り調製され、維持された（非特許文献２７３）。
【０４２５】
ケラチノサイト：一時的に、新たに隔離されたケラチノサイトが10%のキレックスしたウシ胎仔血清(Biological Industries, Beit Haemek, Israel)、1%の抗生物質、及び濃度が0.05mMに調整されたCa2+と共にEagle培地（Biological Industries, Beit Haemek, Israel）の中で培養された。培養5日後、分化を誘導するため、成長培地が特定の濃度のCa2+（増殖相で0.05mM、分化誘導で0.12 mM、末端分化で1.0 mM）を含む培地と交換された。48時間後、特に指定の無い限り、細胞はリーシスバッファ［1%トリトン X-100を含むリン酸緩衝生理食塩水（PBS）、1mMのEDTA、10 mMのフッ化ナトリウム、ナトリウム200マイクロモルorthovanadate、及びプロテアーゼ阻害因子混合物］に削り落とすことにより採取された。溶解物は最大速度でマイクロ遠心分離にかけられ、トリトン溶性の上清は更にSDS-PAGE及び免疫ブロット法で分析された。トリトン非溶性ペレットは、細胞骨格タンパク質分析のために下記のように保存された。タンパク質濃度は改良ローリー分析法（Bio-Rad DC Protein Assay Kit)にて測定された。
【０４２６】
ケラチン発現分析用細胞骨格タンパク質サンプル調製：上述で得られたトリトン非溶性分画（ペレット）は、βメルカプトエタノール（20%）及びSDS（5%）を含む特別なリーシスバッファで30分間培養された。サンプルは最大速度で30分間マイクロ遠心分離され、溶解物は、更にSDS-PAGE及びウェスタンブロット分析にて標準手順に従い分析された。
【０４２７】
実施例７
走化性試験
走化性試験：0.5％ のBSA（Sigma-Aldrich）を含むRPMI培地（Beit Haemek）に収められた細胞（例として好中球、単球、T細胞、HEK293。比重1.0〜3.0×106 cells/mlで25マイクロリットル）を、ポアサイズ5ミクロンの96ウェルChemoTx使い捨て走化性装置（Neuroprobe）の上に乗せる。0.5％BSAを含む、もしくは含まないRPMI培地の検査試薬の10倍希釈をチャンバーのボトムウェルに置く。装置を二酸化炭素5％の大気中にて37℃で60〜600分間培養し、化学誘引物質各濃度での遊走細胞を、倒立顕微鏡を用いて測定する。
【０４２８】
細胞（1×107/mL）を0.25％のBSA、145 mMのNaCl、5mMのKCl、10mMのNa/MOPS、1mMのCaCl2、1mMのMgCl2、10mMのグルコース、10mMのHEPES（全てSigma-Aldrichより）を含むpH7.4の緩衝液に懸濁させ、2マイクロモルのFura-2-AM（Molecular Probes, Eugene, OR）で40分間室温でインキュベートした。細胞を一度洗浄し、0.25%のBSAを含む緩衝液中に再び懸濁させ、室温で保管した。使用直前に、数アリコートの細胞（4×105）を洗浄し、0.05%のBSAを含む緩衝液2mlで、攪拌キュベットの中にて37℃で再び懸濁させる。細胞内のCa2+濃度測定及び走化性試験を、前述の方法にて行う（非特許文献２７４）。
【０４２９】
実施例8
乾癬の動物モデル
ヒト乾癬皮膚-SCIDマウス移植モデル：ヒト皮膚を免疫力のないマウス（先天性無胸腺（ヌード）マウスあるいは重症複合型免疫不全（SCID）のマウスのどちらか）に移植することによって、乾癬の研究方法を一つ得ることができる。
【０４３０】
SCIDマウス（CB-17 strain; Taconic Farms Inc., Germantown, New York）は組織の受容体として使用される。20ｍLの血液と同様に正常あるいは乾癬のボランティアからケラトムで切り取った組織サンプルを1×1cmの切片に切り取る。関連のある主要血液成分はナチュラルキラー細胞である。細胞組織の可用性によって、2〜4匹のマウスに左右対称に各ヒト皮膚サンプルを移植する。マウスに麻酔（ナトリウムペントバルビタール；25ｇの体重につき1.8 mg（腹腔内））を施した後、各マウスの背部を左右対称に剃る。マウスの皮膚を適切な大きさで摘出し、ヒト組織と置き換える。移植組織は吸収性縫合糸でマウスの後部に固定される（4-0 Dexon "S"; Davis-Geck, Manati, Puerto Rico）。さらに5日間、組織をXeroformワセリン包帯で巻く。動物は準備、治療段階を通して無菌環境のなかで管理される。PBMCは得られた血液から隔離する。いくつかの動物においては、乾癬はドナーの活性化したPBMC（超抗原）を異種異変腫に注入することによって、増強あるいは維持する（非特許文献２７５）。
【０４３１】
移植から3〜5週間後に、抗体スクリーニングを開始する。
【０４３２】
薄片状皮膚（fsn）マウスモデル：試験を行う他のモデルは薄片状皮膚（fsn）の突然変異等の乾癬状の表現型を発現するマウスモデルである。つがいのCBy.A fsn/Jマウス（The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME）を使用する。薄片状皮膚の表現型をもたらす遺伝的欠陥は不明であり、同型接合体突然変異のマウスには繁殖力がないため、CBY（FSN/fsn）マウスの子孫が全ての実験に使用される。CBy.Aの背景において、赤血球扁平上皮の皮膚の病変は生後5〜6週間で容易に認められ、野生型同腹子あるいは異型接合の同腹子からfsn/fsnマウスは分化する。抗体治療の研究に関しては、生後12〜16週のマウス（ほとんどの場合同腹子）が使用される（この期間内で表現型が安定した状態を保つと立証されてから）。 
【０４３３】
動物の治療プロトコール：動物は治療グループ（ビヒクル及び試薬）あるいは対照グループ（ビヒクルのみ）に分類される。100マイクロリットルのPBS（体重１ｋあたり6mg）の中の単クローン抗体あるいは阻害因子を初期濃度として使用され、局所、皮内あるいは腹腔内に投与される。これは結果によって調整する。対照マウスはPBSのみを使用して治療される。治療は14日間継続する。
【０４３４】
表皮の厚さの定量的評価：治療段階後、マウスは殺され、移植したヒト組織が摘出され3％の濃度のホルマリンで固定される。パラフィン包埋の後、5ミクロンの厚さの切片を各組織から1〜3つ切り取り、顕微鏡用スライドにのせ、ヘマトキシリン及びエオシンで染色する。NIH Imageのソフトウェアを使用して、上皮部分を単位長当たりの表皮の厚さの変化の関数として測定する（National Institutes of Health, Bethesda, Maryland）。具体的には、無作為に選択した組織切片の部分を10倍に拡大して光学顕微鏡で観察する。このレベルの倍率では、各組織切片の表皮部分全体は同じ断片（標準的な組織切片で3〜4の断片）で「捕らえる」ことができ、各断片の部分をNIH Imageの解析プログラムで計測可能である。各ドナーの治療グループ1つ当たり、2〜4匹のマウスの両側にある移植からの複数の部分が、100以上の測定点を与えるためにこのように定量される。これらの値によって平均的な表皮部分を決定する。ヒト乾癬皮膚-SCIDマウス移植モデルに関して、追加の対照値を設定し、移植前に、各ドナーからの小片の組織を3％の濃度の緩衝ホルマリンに固定し、表皮の厚さの時間基点評価に使用する。 
【０４３５】
組織学及び免疫組織化学の評価：治療の効果を評価するために乾癬の他のいくつかの組織学的特徴を追求する。これには表皮過形成、リンパ球及び好中球の皮膚浸潤及び表皮内浸潤が含まれる。このために、5ミクロンの厚さの切片を各組織片から取得し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色し、顕微鏡で評価することが可能である。 
【０４３６】
統計的分析：ペアの両側スチューデントt-検定によって統計的有意性を評価し、P<0.05が有意であるとする。さらに、各グループの表皮の厚さ測定はANOVA及び対のグループの比較によって分析する。分析は混合したモデル方法を使用してそれぞれ個々の組織に対する治療前の値と治療後の値の相互関係を明らかにする。
【０４３７】
本発明の特定の特徴、具体的には、別個の実施形態の文脈に記載されている特徴は、ひとつの実施形態において組み合わせて記載されていてもよい。逆に、略してひとつの実施形態の文脈に記載されている本発明の様々な特徴は、別個にもしくは相応の部分的組み合わせに記載されていてもよい。
【０４３８】
本発明は特定の実施形態に関連して記述されてはいるが、多数の代替、修正、変化型が本技術に精通する者にとって明白であることは確実である。従って、添付の請求項の精神と幅広い範囲に含まれる、かかる全ての代替、修正、変化型を包含することが意図されている。本明細書言及の、登録番号で特定されている全ての出版物、特許、ならびに特許出願及び結果は、参照することにより、全体として本明細書の一部を構成するものであり、参照することにより本書の一部を構成するために、登録番号で特定されている個々の出版物、特許、または特許出願もしくは結果が具体的に、そして個々に示されていると同等である。加えて、本申請書中のいかなる参照文献の引用文もしくは識別番号も、かかる参照文献が本発明の従来の技術として有効であるという承認としては解釈されないものとする。
【０４３９】
以上の説明は、本発明の一実施例に関するもので、この技術分野の当業者であれば、本発明の種々の変形例を考え得るが、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。特許請求の範囲の構成要素の後に記載した括弧内の番号は、図面の部品番号に対応し、発明の容易なる理解の為に付したものであり、発明を限定的に解釈するために用いてはならない。また、同一番号でも明細書と特許請求の範囲の部品名は必ずしも同一ではない。これは上記した理由による。
【図面の簡単な説明】
【０４４０】
【図１】図1は、AMPヒトβデフェンシン-1およびヒトβデフェンシン-2による悪性ケラチノサイトの多大な増殖の刺激作用を描写している一連の顕微写真である。培養されたヒトケラチノサイト(HaCaT, クローン6, A-5, I-5, II-4 および RT-3) は、１プレートにつき50,000個の細胞がある24個のシャーレにおいて平板培養された。付着後、1ミリリットルあたり1マイクログラムの最終濃度のヒトβデフェンシン-1またはヒトのβデフェンシン-2が培地に加えられ、細胞は更に48時間培養され、典型的な培地の写真が撮られた(x20)。
【図２】図2は、1ミリリットルにつき1.0マイクログラムの抗ヒトβデフェンシン-2抗体による悪性ヒトケラチノサイトの成長の多大な抑制を描写しているヒストグラム である。培養され、不死化な中等度に悪性なまたは非常に悪性なヒトケラチノサイト (HaCaT, A-5, and RT-3)を、平板培養し、付着させ、1ミリリットルあたり1.0マイクログラムの濃度の反ヒトβデフェンシン-2抗体と共に48時間培養し、そして細胞増殖は[3(H)]-チミジン混合アッセイを通して推定された。グラフの縦軸は、チミジン含有量（ＤＰＭ／ｍｇ  プロテイン）を表し、横は、セル・ライン・タイプを表す。グラフ右上の枠内は、上段がコントロール、下段が抗体ＨＢＤ−２である。
【図３】図3は、初期の皮膚ケラチノサイトにおける抗-LL-37および 抗ヒトβデフェンシン-2抗体の成長の、濃度に依存するプラスとマイナスの調節を描写しているヒストグラムである。培養されたケラチノサイトは、1ミリリットルあたり4 (“1x”) または 20 (“5x”)マイクログラム濃度でLL-37抗体(青の棒)と、または1ミリリットルあたり1 (“1x”) または 5 (“5x”)マイクログラムの濃度で抗ヒトβデフェンシン-2抗体(黄色の棒) と48時間処理された。細胞増殖は[3(H)]-チミジン混合を測定することにより推定され、コントロールである処理されていない細胞のパーセントとして表示される。典型的実験が示される。各バーは、三倍の平均値± SE を表す。グラフの縦軸は、［３（Ｈ）］チミジン含有量（％）を表し、横は治療である。棒グラフの左側がコントロール、右２つが相対的抗体濃度である。
【図４】図4a-cは、器官生体外3-Ｄ皮膚モデルにおいて、AMPによって誘発された皮膚分化の調節不能を、抗-AMP(ヒトβデフェンシン-2) 抗体が修正するのを描写している顕微写真である。図 4aは処理されていないコントロールを使い手に入れた結果を描写し、図4b はヒトβデフェンシン-2との処理後の結果を描写し、図4cは抗ヒトβデフェンシン-2抗体との処理後の結果を描写している。説明にあるように、非悪性HaCaTヒトケラチノサイトを有するマウスの表皮区画を接種24時間後に、1ミリリットルあたり1マイクログラム濃度の抗ヒトβデフェンシン-2抗体または1ミリリットルあたり20ナノグラム濃度のヒトβデフェンシン-2 が成長培地に加えられた。 コントロールとして、同量の0.1%のBSA が加えられた。 共同培養は2-3日毎に処理され、そして2週間後に回収され、4 %のパラホルムアルデヒドで固定され、パラフィンに包埋され、区分された (6ミクロン)。  標準の手順に従い、ヘマトキシリンとエオシン(H&E)によって区分が色分けされた。表示されているのは、オリンパス光学顕微鏡を使い記録された代表的な領域の明視野顕微写真である。
【図５】図5a-d は、抗-LL-37 抗体による乾癬皮膚病変の効果的治療を描写している写真である。図5a および 5bは、それぞれ処理されていないコントロールの病変および処理0日すなわち治療に先立って抗-LL-37 抗体で処理された病変を描写する。図5c および 5d は、処理されていないコントロールの病変および3日目の抗-LL-37 抗体で処理された病変を描写する。皮膚細胞／組織増殖／分化の不均衡の修正を示す、抗体処理病変における剥離の欠如に注目すること。
【図６】図6は、ヒトβデフェンシン-2に特有な抗体による、胃腸上皮細胞増殖の明らかな濃度依存性調節（マイナスまたはプラス）を描写しているヒストグラムである。培養された Caco2 ヒトの胃腸上皮細胞 は、1ミリリットルあたり0.5マイクログラム(青／薄い棒) または1ミリリットルあたり1.0マイクログラム(赤／濃い棒)の抗ヒトβデフェンシン-2抗体と一緒に48時間処理された。細胞増殖は、[3(H)]-チミジン混合の測定により推定され、コントロールの未処理細胞のパーセントとして表示される。代表的な実験が表示されている。各バーは3倍の平均値± SEを表している。グラフの縦軸は、［３（Ｈ）］チミジン含有量（％）を表す。
【図７】図7 は、初期の内皮細胞増殖の抗ヒトβデフェンシン-2抗体による明らかな阻害を描写している ヒストグラムである。ウシの一次内皮細胞は、1ミリリットルあたり0.5マイクログラム(青／薄い棒)または1ミリリットルあたり1.0マイクログラム(赤／濃い棒)の抗ヒトβデフェンシン-2抗体と一緒に48時間処理された。細胞増殖は [3(H)]-チミジン混合の測定により推定され、コントロールの未処理細胞のパーセントとして表示されている。代表的的実験が表示されている。各バーは3倍の平均値± SEを表している。グラフの縦軸は、［３（Ｈ）］チミジン含有量（％）を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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