(57)【要約】本発明は、Ｋ−２５２ａの合成のための方法及び本方法に有用な中間体を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）式（Ｉ）
【化１】
2006519237.tif 000009
の化合物を水酸化物塩基水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を結晶化することと；及び
（ｃ）段階（ｂ）の生成物を単離することと、
を含む、式（ＩＩ）
【化２】
2006519237.tif 000010
（式中、Ｘは、Ｎａ、ＮＨ４、Ｌｉ及びＫからなる群から選択される。）の化合物を調製するための方法。
【請求項２】
前記水酸化物塩基水溶液が、最大２５％の有機溶媒を含有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記水酸化物塩基水溶液が、２０％のアセトンを含有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記水酸化物塩基水溶液が、水酸化ナトリウムである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記水酸化物塩基水溶液が、水酸化アンモニウムである、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
（ａ）式（Ｉ）の化合物を水酸化ナトリウム水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を冷却することと；
（ｃ）必要に応じて、段階（ｂ）の生成物を部分的に濃縮することと；
（ｄ）段階（ｂ）又は段階（ｃ）の生成物を濾過により単離することと、
を含む、式（ＩＩ）の化合物を調製するための方法。
【請求項７】
（ａ）式（ＩＩ）
【化３】
2006519237.tif 000011
の化合物を溶媒中に溶解することと；
（ｂ）必要に応じて、段階（ａ）の溶液を塩基で処理することと；
（ｃ）段階（ａ）又は段階（ｂ）の溶液をｐ−トルエンスルホン酸メチルで処理することと；及び
（ｄ）段階（ｃ）の生成物を単離することと、
を含む、式（ＩＩＩ）
【化４】
2006519237.tif 000012
の化合物を調製するための方法。
【請求項８】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記塩基が、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム及び炭酸カリウムからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前記塩基が、重炭酸ナトリウムである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
（ａ）式（Ｉ）
【化５】
2006519237.tif 000013
の化合物を水酸化物塩基水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を結晶化することと；
（ｃ）段階（ｂ）の生成物を単離することと；
（ｄ）段階（ｃ）の生成物を溶媒中に溶解することと；
（ｅ）必要に応じて、段階（ｄ）の溶液を塩基で処理することと；及び
（ｆ）段階（ｄ）又は段階（ｅ）の生成物をメチル化剤と反応させることと、
を含む、式（ＩＩＩ）
【化６】
2006519237.tif 000014
の化合物を調製するための方法。
【請求項１３】
前記水酸化物塩基水溶液が、最大２５％の有機溶媒を含有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記水酸化物塩基水溶液が、最大２０％のアセトンを含有する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記水酸化物塩基が、水酸化ナトリウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記水酸化物塩基が、水酸化アンモニウムである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記塩基が、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及び炭酸カリウムからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項２０】
前記塩基が、重炭酸ナトリウムである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記メチル化剤が、ｐ−トルエンスルホン酸メチルである、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｋ−２５２ａの合成のための方法及びこの方法に有用な中間体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
Ｋ−２５２ａ（メチル（１５Ｓ，１６Ｒ，１８Ｒ）−１６−ヒドロキシ−１５−メチル−３−オキソ−２８−オキサ−４，１４，１９−トリアザオクタシクロ［１２．１１．２．１１５，１８．０２，６．０７，２７．０８，１３．０１９，２６．０２０，２５］オクタコサ−１，６，８，１０，１２，２０，２２，２４，２６−ノナエン−１６−カルボキシレート）は、タンパク質キナーゼＣ活性に対する阻害能等、様々な薬理学的特性を示す微生物により産生される生理活性物質である。以前に開示した微生物からのＫ−２５２ａ単離方法は、大量の材料で行う場合、非効率的であることが明らかとなっており、また、最終生成物の純度が低いことも分かっている。
【０００３】
あるいは、未精製Ｋ−２５２ａを加水分解してＫ−２５２ｂ（これはより容易に精製される。）を得て、その後、アルキル化を行い高純度のＫ−２５２ａを得ることができる。しかし、カラムクロマトグラフィーが必要であり、毒性が高いジメチル硫酸をアルキル化剤として用いるため、この方法も大量の物質生成を行う場合には実用的でないことが分かっている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これらの例から示されるように、大スケール生産を行いやすい、高純度Ｋ−２５２ａを調製する方法が引き続き求められている。本発明は、カラムクロマトグラフィー及びジメチル硫酸使用の両方を必要としない、Ｋ−２５２ａの調製を開示する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
その主な実施形態において、本発明は、
（ａ）式（Ｉ）
【０００６】
【化７】
2006519237.tif 000002
の化合物を、水酸化物塩基水溶液、好ましくは最大２５％までの有機溶媒を含有する水酸化物塩基水溶液で、さらに好ましくは２０％のアセトンを含有する水酸化物塩基水溶液で、最も好ましくは２０％のアセトンを含有する水酸化ナトリウム水溶液又は水酸化アンモニウム水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を結晶化することと；
（ｃ）段階（ｂ）の生成物を単離することと、及び
を含む、式（ＩＩ）
【０００７】
【化８】
2006519237.tif 000003
（式中、Ｘは、Ｎａ、ＮＨ４、Ｌｉ及びＫからなる群から選択される。）の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【０００８】
別の実施形態において、本発明は、
（ａ）式（Ｉ）の化合物を水酸化ナトリウム水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を冷却することと；
（ｃ）場合によっては、段階（ｂ）の生成物を部分的に濃縮することと；
（ｄ）段階（ｂ）又は段階（ｃ）の生成物を濾過により単離することと、及び
を含む、式（ＩＩ）の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【０００９】
別の実施形態において、本発明は、
（ａ）式（ＩＩ）
【００１０】
【化９】
2006519237.tif 000004
の化合物を溶媒中、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、最も好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中で溶解することと；
（ｂ）場合によっては、段階（ａ）の溶液を塩基、好ましくは重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム又は炭酸カリウム、最も好ましくは重炭酸ナトリウムで処理することと；
（ｃ）段階（ａ）又は段階（ｂ）の溶液をｐ−トルエンスルホン酸メチルで処理することと；及び
（ｄ）段階（ｃ）の生成物を単離することと、
を含む、式（ＩＩＩ）
【００１１】
【化１０】
2006519237.tif 000005
の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【００１２】
別の実施形態において、本発明は、
（ａ）式（Ｉ）
【００１３】
【化１１】
2006519237.tif 000006
の化合物を水酸化物塩基水溶液で、好ましくは最大２５％までの有機溶媒を含有する水酸化物塩基水溶液で、より好ましくは２０％のアセトンを含有する水酸化物塩基水溶液で、最も好ましくは２０％のアセトンを含有する水酸化ナトリウム水溶液又は水酸化アンモニウム水溶液で処理することと；
（ｂ）段階（ａ）の生成物を結晶化することと；
（ｃ）段階（ｂ）の生成物を単離することと；
（ｄ）段階（ｃ）の生成物を溶媒中、好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド又はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、最も好ましくはＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中で溶解することと；
（ｅ）必要に応じて、段階（ｄ）の溶液を塩基、好ましくは炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又は炭酸カリウム、最も好ましくは重炭酸ナトリウムで処理することと；及び
（ｆ）段階（ｄ）又は段階（ｅ）の生成物をメチル化剤、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸メチルと反応させることと、
を含む、式（ＩＩＩ）
【００１４】
【化１２】
2006519237.tif 000007
の化合物を調製するためのプロセスを提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明は、Ｋ−２５２ａ（メチル（１５Ｓ，１６Ｒ，１８Ｒ）−１６−ヒドロキシ−１５−メチル−３−オキソ−２８−オキサ−４，１４，１９−トリアザオクタシクロ［１２．１１．２．１１５，１８．０２，６．０７，２７．０８，１３．０１９，２６．０２０，２５］オクタコサ−１，６，８，１０，１２，２０，２２，２４，２６−ノナエン−１６−カルボキシレート）の調製及びこのプロセスに有用な中間体に向けられる。本明細書中で使用される場合、次の用語は指定された意味を有する。
【００１６】
本明細書中で使用される場合、「水溶液」という用語は、最大３０％までの有機溶媒を含有し、残りの液が水である溶液を意味する。好ましい水溶液は、最高２５％までの有機溶媒を含有し、より好ましい水溶液は最大２０％までの有機溶媒を含有する。最も好ましい水溶液は、２０％のアセトンを含有する。
【００１７】
「塩基」という用語は、本明細書中で使用される場合、反応過程中でプロトンを受容可能な試薬を意味する。塩基の例には、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム及び炭酸セシウム；フッ化セシウム等のハロゲン化物；リン酸カリウム、リン酸二水素カリウム及びリン酸水素カリウム等のリン酸塩；水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム及び水酸化カリウム等の水酸化物；ヘキサメチルジシラジドリチウム、ヘキサメチルジシラジドカリウム及びヘキサメチルジシラジドナトリウム等のジシリルアミド；トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン及びジイソプロピルエチルアミン等のトリアルキルアミン；イミダゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン及びピラジン等の複素環アミン；ＤＢＮ（１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン）及びＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン）等の二環式アミン；及び水素化リチウム、水素化ナトリウム及び水素化カリウム等の水素化物が含まれる。特定の変換に対して選ばれる塩基は、出発物質の性質、その反応を行う溶媒及びその反応を行う温度に依存する。
【００１８】
「水酸化物塩基」という用語は、本明細書中で使用される場合、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は水酸化アンモニウムを意味する。
【００１９】
「溶媒」という用語は、本明細書中で使用される場合、約２０℃から約３５℃で液体であり、出発物質、試薬、中間体又は生成物と、所望する生成物の回収に悪影響を与えるような相互作用を行わない有機物質を意味する。
【００２０】
本発明の全方法は、連続方法として行うことができる。「連続方法」という用語は、本明細書中で使用される場合、中間体の分離を行わずに遂行される段階を表す。
【００２１】
合成プロセス
【００２２】
【化１３】
2006519237.tif 000008
スキーム１は、式（ＩＩＩ）（Ｋ−２５２ａ）の化合物の合成を示す。式（Ｉ）の化合物（Ｋ−２５２ｂ；Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９８６，３９，１０５９−１０６５及びＢｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８，６２，１６２７−１６２９に記載されている手段の改変法に従って調製。）を水酸化物塩基水溶液で処理して、式（ＩＩ）の化合物を得ることができる。好ましくは、本水酸化物水溶液は、水酸化ナトリウム又は水酸化アンモニウムである。この反応で使用される溶媒の例には、水、アセトン及びそれらの混合物が含まれる。本反応は通常、約２０℃から約５５℃の間の温度で行われ（使用する溶媒系に依存する。）、次に、結晶化を誘導するために約−５℃から約５℃の間の温度に冷却される。次に、得られた結晶化物を濾過により単離し、式（ＩＩ）の化合物を得る。反応時間は通常、約１０時間から約２４時間である。好ましい実施形態において、式（Ｉ）の化合物を水酸化ナトリウム水溶液で処理し、室温にて１時間撹拌し、アセトンで処理して、約１９時間、約０℃に冷却し、部分的に濃縮し、濾過して、式（ＩＩ）の化合物を得る。
【００２３】
メチル化剤、好ましくはｐ−トルエンスルホン酸メチルを用いて、場合によっては塩基存在下（反応系中に残存する不必要な式（Ｉ）の化合物を全て脱プロトン化するため）で処理することにより、式（ＩＩ）の化合物を式（ＩＩＩ）の化合物（Ｋ−２５２ａ）に転換することができる。この反応で使用される代表的な塩基には、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム及び炭酸カリウムが含まれる。ｐ−トルエンスルホン酸メチルを使用する際、あらゆる残存試薬を分解するために酢酸ナトリウムを添加する。この反応で使用される溶媒の例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド及びＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドが含まれる。好ましい溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミドである。本反応は通常、約３５℃から約４５℃で遂行され、次に、約５℃から約３０℃の間の温度に冷却される。本生成物を沈殿させるために水を添加し、次にそれを濾過により単離して、式（ＩＩＩ）の化合物を得る。反応時間は通常、約６時間から約１２時間である。
【００２４】
ある一定の好ましい実施形態と関連させて本発明をここで記載するが、これは本発明の範囲を限定するものではない。一方、本発明は、本範囲内に含まれ得るものとして全ての代替物、変更及び同等物をカバーする。従って、好ましい実施形態を含む次の実施例は、本発明の好ましい実施を説明するものであり、本実施例が一定の好ましい実施形態を説明する目的のものであり、最も有用でありその手段及び概念的局面が容易に理解されると信じるものを与えるために提供されると理解されたい。本明細書を通して引用する全参考文献、特許及び公開特許明細書は、本明細書により参考として援用される。
【実施例１】
【００２５】
Ｋ−２５２ｂナトリウム塩の調製
Ｋ−２５２ｂ（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９８６，３９，１０５９−１０６５及びＢｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８，６２，１６２７−１６２９に記載の手段に従って調製；３００Ｌ）を逆浸透を用いて４倍濃縮し、次に、ＨＣｌでｐＨ３．０に調整した。得られた沈殿物を濾過により単離した。濾過した沈殿物の試料（５０６．６ｇ；４７．６グラム活性）を次のように結晶化した：本試料を０．２５Ｍ  ＮａＯＨ  ３．５Ｌで処理し、およそ１１ｇから１２ｇ活性／Ｌの濃度を得た。その混合物を室温にて約１時間撹拌し、懸濁液を調製した。その懸濁液をアセトン  ７００ｍｌで処理し、０℃にて、結晶が形成される時間、６時間にわたり、得られた溶液を冷却した。本混合物をさらに１３時間、０℃にて保持した。真空にしてゆっくりと撹拌しながらアセトンを除去した。アセトン除去後、その固形物を濾過し、週末の間乾燥させ、所望する生成物  ２５．３７ｇを得た。
【実施例２】
【００２６】
Ｋ−２５２ｂアンモニウム塩の調製
Ｋ−２５２ｂ（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９８６，３９，１０５９−１０６５及びＢｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８，６２，１６２７−１６２９に記載の手段に従って調製；３００Ｌ）を逆浸透を用いて４倍濃縮し、次に、ＨＣｌでｐＨ３．０に調整した。得られた沈殿物を濾過により単離した。濾過した沈殿物の試料（１０．１１ｇ）を次のように結晶化した：本試料を０．３Ｍ  ＮＨ４ＯＨ  ４００ｍｌで処理し、固形物が完全に溶解するまで温めた。得られた溶液を４８時間冷蔵し、濾過した。濾過ケーキを真空下で乾燥させ、所望する生成物  ３１６ｍｇを得た（ピークエリアによる純度  ９６．４％）。
【実施例３】
【００２７】
Ｋ−２５２ｂナトリウム塩の代替調製法
Ｋ−２５２ｂ（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  １９８６，３９，１０５９−１０６５及びＢｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９９８，６２，１６２７−１６２９に記載の手段に従って調製；３００Ｌ）を逆浸透を用いて４倍濃縮し、次に、ＨＣｌでｐＨ３．０に調整した。得られた沈殿物を濾過により単離した。濾過した沈殿物の試料（１５０ｇ；１２．６８ｇ活性）を次のように結晶化した：０．２５Ｍ  ＮａＯＨ  １５００ｍｌを含有する反応容器に本試料を添加した。溶液が得られるまでその混合物を約５３℃に加熱した。本混合物を７時間にわたり０℃に冷却し、０℃にて１３時間保持した。本混合物を濾過し、濾過ケーキを乾燥させ、所望する生成物  １１．３ｇ（ピークエリアによる純度  ９７．８％において、〜９０％回収率）を得た。
【実施例４】
【００２８】
Ｋ−２５２ｂナトリウム塩からのＫ−２５２ａの調製
濃縮器、Ｊ−ｋｅｍ  プローブ及び追加の漏斗を取り付けた、１Ｌの３ネックのジャケット付きフラスコに、実施例１（５ｇ；９．７８ｍｍｏｌ）、重炭酸ナトリウム（０．５５ｇ；６．５４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２３．３ｇ）を添加した。その反応系を４０℃に加熱し、ｐ−トルエンスルホン酸メチル（２．３６ｇ、１２．６７ｍｍｏｌ）で処理し、４０℃にて約３時間から約４時間撹拌した。その反応系を酢酸ナトリウム（１ｇ）で処理し、４時間撹拌し、室温に冷却し、水（８５ｍｌ）でゆっくりと処理した。得られた沈殿物をろ過し、その濾過ケーキを水（６０ｍｌ）で洗浄し、風乾させて所望する生成物  ４．５ｇを得た。
【実施例５】
【００２９】
Ｋ−２５２ｂアンモニウム塩からのＫ−２５２ａの調製
実施例４において実施例１の代わりに実施例２を用いて調製を行うことにより、所望する生成物を調製することができる。
【国際調査報告】
2006519237.tif 000015
2006519237.tif 000016