(57)【要約】  主成分としてレスベラトロルを、１次安定化剤としてシクロデキストリン、ポリエチレングリコール類またはこれらの混合物をさらに含んでなり、或いは１次安定化剤に加えて、２次安定化剤としてα−リポ酸、水溶性美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物、またはこれらの混合物をさらに含んでなることを特徴とする、安定化した皮膚美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物、及びその製造方法が提供される。当該化粧料組成物は、少量でも長期間、優れた皮膚美白及び抗酸化効果を提供する。さらに、レスベラトロル及びα−リポ酸のポリオールやエタノールに対する溶解度を向上させ、これにより過多の溶媒の使用による使用感の低下及び皮膚刺激を改善する。また、低温での結晶析出、日光への露出による変臭及び変色の問題を解決できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
レスベラトロルを含有する、美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項２】
前記レスベラトロルの含量は、化粧料組成物の全体に対して０．００１〜１０．０重量％であることを特徴とする、請求項１に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項３】
前記レスベラトロルを含有する化粧料組成物は、シクロデキストリン、ポリエチレングリコール類及びそれらの混合物からなる群から選択される１次安定化剤をさらに含んでなることを特徴とする、請求項１に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項４】
前記１次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．１〜５０重量％であることを特徴とする、請求項３に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項５】
前記化粧料組成物は、α−リポ酸、水溶性美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びそれらの混合物からなる群から選択される２次安定化剤をさらに含んでなることを特徴とする、請求項３に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項６】
前記２次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．０１〜１５．０重量％であることを特徴とする、請求項５に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項７】
前記水溶性美白組成物は、チンピエキス、アミノエチルホスフィン酸、ワルセリアインディカ葉抽出物、グアバフェノン、加水分解酵母水溶液及びそれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項５に記載の美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物。
【請求項８】
（ａ）溶媒及び１次安定化剤を混合するステップと、
（ｂ）前記（ａ）ステップの混合物にレスベラトロルを添加して混合するステップと、及び
（ｃ）前記（ｂ）ステップの混合物にα−リポ酸、水溶性美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びそれらの混合物からなる群から選択される２次安定化剤を混合するステップと、
を含んでなることを特徴とする、美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レスベラトロルを含有する美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物、並びにその製造方法に関し、さらに詳細には、主成分としてレスベラトロルを、１次安定化剤としてシクロデキストリン、ポリエチレングリコール類、又はそれらの混合物を含むか、或いは２次安定化剤としてα−リポ酸、水溶性混合美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物、及びそれらの混合物から選択された１種以上を含有する化粧料組成物、並びにその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、外部環境と直接接触しつつ、人体を保護し、かつ生化学的／物理的な機能を有している非常に重要な組織である。この組織は、大きく３つの部分、すなわち、表皮、真皮及び皮下組織に分けられる。人間の皮膚色は、主に皮膚細胞内に含まれているメラニンを含有するメラノソームの数、サイズ、種類及び分布により、異なって現れる。メラノソームはメラニン細胞によって生成され、メラニンは表皮に生成される黒い色素であり、メラノサイトという細胞で生成される。
【０００３】
メラニンは、日光のうち紫外線の光エネルギーを吸収して、さらに深いところに存在する細胞を紫外線による損傷から保護する役割を行う。しかし、メラニンの生成が異常なほどに少ない場合は白斑病のような皮膚病変が誘発され、逆に、紫外線によるメラニンの過度な合成は、皮膚に損傷を与えるだけでなく、しみ及び雀斑を形成し、そのような病変は皮膚癌の原因となることもある。
【０００４】
レスベラトロルは、裸子植物及び被子植物に広く分布しており、植物体内では遊離状態で存在することもあるが、多くは糖類と結合した配糖体の形態で存在する（非特許文献１）。また、レスベラトロルにはシス型及びトランス型があり、自然界では、一部を除いては、多くは安定したトランス異性体として存在する（非特許文献２）。
レスベラトロルは、葡萄、特に葡萄の皮、種子、茎、葡萄の葉に多く存在し、ビティスビニフェラ（Vitis vinifera）、ビティスロツンディフォリア（Vitis rotundifolia）及びビティスラブルスカ（Vitis labrusca）種の葡萄に多く含まれており、それら葡萄から得た葡萄酒及び前述した天然物の抽出物及び粉末に見られる。また、ポリゴヌムクスピダツム（Polygonum cuspidatum）及びポリゴヌムムルチフロルム（Polygonum multiflorum）のような多数のポリゴヌム種（タデ科（Polygonaceae family））の根に存在する。
【０００５】
本発明において「レスベラトロル」が意味するものは、下記の化学式１で表されるトランス−３，４，５−トリヒドロキシスチルベン（すなわち、適したレスベラトロル）及びシス異性体、それぞれの配糖体、及び任意の適した植物種から得られたレスベラトロル含有抽出物及び粉末を表す。
【化１】
2006528239.tif 000002
トランス−レスベラトロルは、抗癌作用（非特許文献３）だけでなく、抗血栓作用（非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７）、抗炎症作用（非特許文献８）及び 高脂血症に予防効果（非特許文献９）がある生理活性物質としてよく知られている。
【０００６】
特に、最近、トランス−レスベラトロルは、女性ホルモンであるエストロゲンに対する類似作用が明らかにされつつあり、フィトエストロゲンとして注目されている（非特許文献１０）。特許文献１、２、３及び４は、葡萄抽出物を含有する化粧制組成物を開示しており、また、特許文献５はレスベラトロルを使用した化粧料組成物を開示しており、それは、α−ヒドロキシ酸によって引き起こされる角質細胞の増殖を抑制する、角質細胞の分化を抑制する、又は皮膚刺激を予防する化粧料組成物に関する。しかし、化粧品に溶媒として使われるポリオール及びエタノールに対するレスベラトロル自体の低い溶解度特性のため、過度なポリオールやエタノールが使用されることによる、使用感の低下及び皮膚刺激、低温での結晶析出、日光での変臭及び変色といった問題を解決できる方法については、報告されていない。
【０００７】
実際に、レスベラトロルのかかる優れた美白及び抗酸化効果にも拘わらず、レスベラトロルは、ポリオールやエタノールにはよく溶解されるが、化粧品に適用するときに水が添加されれば、結晶が析出されるという問題点があり、エタノールやポリオールを多量に使用せねばならない。すなわち、レスベラトロルを０．１重量％で含有させるためには、１０重量％のポリオールの溶媒を使用せねばならないので、レスベラトロルを高含量に使用できない。高含量での使用は、実質的に水が使われていない化粧品組成物においてのみ可能であるが、水を含まないエタノールやポリオール溶媒のみで構成された化粧品組成物は、刺激が強く、かつ使用感が低下するので、ほとんど利用されていない。特に、組成物として安定化が難しいビタミンＣの場合、‘シリコン中のポリオール’又は‘ポリオール中のシリコン’として、処方し製造しているが、使用感が悪く、製造工程が難しく、かつ製造コストが高くて非常に限られた製品にのみ利用されている。
【０００８】
また、本発明で使われるα−リポ酸は、それ自体が強力な抗酸化活性を有しており、体内のさらに他の抗酸化物質であるグルタチオンの生成を促進させるか、又はビタミンＥ及びビタミンＣの機能及び再生を助けて体内の抗酸化作用を強化させる役割を担うと知られている。
【０００９】
このようなα−リポ酸の作用を利用して、現在、糖尿病、神経疾患、白内障、心臓発作、粥状動脈硬化症などの治療に使われており、セラマイドの生成を促進して保湿に優れた効果を示すこと（特許文献６参照）、皮膚炎症、壊死、腫瘍及びアレルギーに効果があること（特許文献７参照）、アレルギー、炎症、日焼けに対する治療効果があること（特許文献８参照）、皮膚美白及びチロシナーゼ抑制効果があること（特許文献９参照）、生体の恒常性を正常に維持して、にきびの予防及び緩和に効果があること（特許文献１０）が知られているが、化粧品に使われるポリオールに対するα−リポ酸の低い溶解特性のため、過多のポリオールが使用され、これにより使用感の低下、硫黄成分による固有臭及び日光によるチオールの結合／分離による変臭及び変色といった問題を有する。
【００１０】
従って、従来では使用し難かったレスベラトロルを製品中に容易に使用し、刺激などの副作用のない、美白及び抗酸化作用の化粧料組成物を開発した。
【特許文献１】特許第０６３３６４２１号公報
【特許文献２】米国特許第５６８３６８３号明細書
【特許文献３】米国特許第５４３９６７２号明細書
【特許文献４】米国特許第５１７１５７７号明細書
【特許文献５】国際出願第ＰＣＴ／ＥＰ９８／０４２２３号
【特許文献６】米国特許第５４７２６９８Ａ号明細書
【特許文献７】ドイツ特許第４４１７０８Ａ号明細書
【特許文献８】国際公開第９５０８５６４Ａ号公報
【特許文献９】特許第６３００８３１５Ａ号公報
【特許文献１０】韓国特許公開第１９９９−０２５８４８号明細書
【非特許文献１】Gorham, J., Prog. Phytochem., 6: 203〜209, 1980
【非特許文献２】Trela, B. C. & Waterhouse, A, L., J. Agric. Food Chem., 44(5): 1253〜1257, 1996
【非特許文献３】Jang M., et al., Sci., 275: 218〜220, 1997
【非特許文献４】Chung, M. L. et al., Planta Med., 58: 274〜276, 1992
【非特許文献５】Frankel, E. N. et al., Lancet, 341: 1103〜1104, 1993
【非特許文献６】Bertrilli, A. A. E. et al., Int. J. Tissue React., 17: 1〜3, 1995
【非特許文献７】Pae-Asciak, C. R. et al., Clin. Chim. Acta., 235: 207〜219, 1995
【非特許文献８】Kimura, Y. et al., Biochim. Biophys. Acta., 834: 275〜278, 1985
【非特許文献９】Arichi, H., et al, chem., Pharm. Bull., 30(5): 1766〜1770, 1982
【非特許文献１０】Gehm, B. D. et al., Proc. Nasl. Acad. Sci., 4: 14138〜14143, 1997
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
前記問題点を解決するために、本発明は、皮膚美白及び抗酸化作用に優れているレスベラトロルを含有した化粧料組成物及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の前記目的及びその他の目的は、後述する本発明によって何れも達成されうる。
前記目的を達成するために、本発明は、レスベラトロルを含有する美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物を提供する。
【００１３】
前記レスベラトロルの含量は、化粧料組成物の全体に対して０．００００１〜１０．０重量％でありうる。
【００１４】
また、本発明は、前記レスベラトロルを含有する化粧料組成物に、シクロデキストリン、ポリエチレングリコール類及びこれらの混合物からなる群から選択される１次安定化剤をさらに含んでなる、美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物を提供する。
【００１５】
前記１次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．１〜５０重量％でありうる。
【００１６】
また、本発明は、前記レスベラトロル及び１次安定化剤を含んでなる化粧料組成物にα−リポ酸、水溶性の美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びこれらの混合物からなる群から選択される２次安定化剤をさらに含んでなる、美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物を提供する。
【００１７】
前記２次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．０１〜１５．０重量％でありうる。
【００１８】
前記水溶性の美白組成物は、チンピエキス（温州ミカンピール抽出物）、アミノエチルホスフィン酸、ワルセリアインディカ（Waltheria indica）葉抽出物、グアバフェノン、加水分解酵母水溶液及びこれらの混合物からなる群から選択されうる。
【００１９】
また、本発明は、（ａ）溶媒及び１次安定化剤を混合するステップと、（ｂ）前記（ａ）ステップの混合物にレスベラトロルを添加して混合するステップと、（ｃ）前記（ｂ）ステップの混合物にα−リポ酸、水溶性の美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びこれらの混合物からなる群から選択される２次安定化剤を混合するステップと、を含んでなる美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物の製造方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明について、次の通りに詳細に説明する。
本発明は、皮膚美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物を提供する。詳細には、本発明は、安定化されたレスベラトロルに、１次安定化剤としてシクロデキストリン、ポリエチレングリコール類又はこれらの混合物をさらに含んでなる化粧料組成物を提供する。前記シクロデキストリンは、好ましくは、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンであり、前記ポリエチレングリコール類は、好ましくは、ポリエチレングリコール４００又はポリエチレングリコール３２である。
【００２１】
前記レスベラトロル及び１次安定化剤を含んでなる化粧料組成物は、α−リポ酸、水溶性の美白組成物、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びこれらの混合物からなる群から選択される２次安定化剤を、さらに含みうる。
【００２２】
前記水溶性混合美白組成物（ホワイトジェニック、韓国特許出願番号１０−２００２−０００９５０３号）は、チンピエキス、アミノエチルホスフィン酸、ワルセリアインディカ葉抽出物、グアバフェノン、加水分解酵母水溶液及びこれらの混合物からなる群から選択されうる。
【００２３】
さらに具体的に、前記安定化されたレスベラトロルを含有する組成物は、レスベラトロルの含量が、組成物全体に対して０．００１〜１０．０重量％、好ましくは、０．１〜５．０重量％である。シクロデキストリン、ポリエチレングリコール類又はこれらの混合物から選択される１次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．１〜５０重量％、好ましくは、１．０〜２０．０重量％である。水溶性混合美白組成物、α−リポ酸、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物及びこれらの混合物から選択される２次安定化剤の含量は、化粧料組成物の全体に対して０．０１〜１５．０重量％、望ましくは、０．１〜１０．０重量％である。
【００２４】
前記安定化されたレスベラトロルを含有する組成物において、有効成分であるレスベラトロル、１次安定化剤又は２次安定化剤を除く残りは、ポリオール及びエタノールと水とを含む溶媒で構成される。
【００２５】
本発明で抗酸化作用を有するさらに他の有効成分として使われるα−リポ酸は、下記化学式２で表され、α−リポ酸、チオクト酸、チオクタン、１，２−ジチオラン−３−ペンタノ酸などを含み、微生物から人間に至るまで、エネルギー代謝過程及び細胞呼吸で必須的に作用する補助因子であり、１９５０年代に分離同定された後、これまでその作用を研究してきた結果、強力な抗酸化剤としての役割が認められている物質である。
【化２】
2006528239.tif 000003
α−リポ酸は、化粧品に一般的に使われるエタノールやポリオールにはよく溶解されるが、溶液中で下記化学式３で表されるジヒドロリポ酸に転換されて、臭いを発生するという問題をもたらし、使用するのに問題点を有する。
【化３】
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本発明による安定化されたレスベラトロルを含有する化粧料組成物は、レスベラトロルを化粧料組成物の全体に対して、０．００１〜１０．０重量％で含有するところ、この有効成分の含量が０．００１重量％未満である場合、所望の抗酸化作用が得られず、１０．０重量％以上を含有する場合、これら有効成分の増加によるコスト上昇に比べて、抗酸化作用の向上が微小である。
【００２６】
本発明で利用される溶媒としては、化粧品分野で一般的に使われる溶媒であるエタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ペンチレングリコール、グリセリンなどが使用され、エタノールは、高含量となれば、アルコール特有の臭いが発生し、刺激が強くて、約１０重量％程度で使われることが一般的であり、敏感な皮膚用化粧品では、ほとんど使われていないのが実情である。そして、ポリオールは、高含量で使われる場合、粘着性が残り使用感が低下するので、１０重量％程度で使われるのが一般的である。
【００２７】
本発明で安定化剤の一種として使われる黄柏抽出物は、黄柏をエタノール又は１，３−ブチレングリコール溶媒で抽出したものであって、黄柏は、芸香科（Phellodendron amurense Ruprecht又はRutaceae）植物である黄柏の樹皮が使用され、その性質は、冷たくて、味が苦く、かつ毒がない。五臓腸胃中の熱と黄疸、腸痔などの除去に主に効果があり、下痢と疫痢、赤白帯下、飲食瘡を治し、疳虫を殺し、湿疥、目に熱を持ち広がったときの痛さ、口内のただれを治し、骨蒸労熱を除去するとして、従来より皮膚での抗菌、抗炎症、抗ウイルス効果については公知であるが、日光などの生活紫外線により製品内の変色及び変臭が発生するのを緩和させる機能については未知であり、本発明によって、日光から製品内の有効成分の相安定性を向上させうるということが確認された。黄柏抽出物は、日本のコーエー（Ｋｏｅｉ）社から‘Phellodendron Bark BG’という商品名で商業的に購入できる。
【００２８】
本発明でさらに他の安定剤として使われうるアルテロモナス発酵抽出物は、海洋水深３０００ｍ、気圧３００ｂａｒほどの極限環境の中で棲息する微生物である、アルテロモナスマクレオジーの発酵産物の多糖類である１１個のグルコシドからなるディープサン（Deepsane）であって、その分子量が１．８×１０６ ダルトンであり、皮膚に誘発される刺激を緩和させうる効果があることが本発明によって明確になった。アルテロモナス発酵抽出物は、フランスのラナテック（Lanatech）社から‘Abyssine 657’という商品名で商業的に購入できる。
【００２９】
本発明で、水溶性の美白組成物、α−リポ酸、黄柏抽出物とアルテロモナス発酵抽出物、及びこれらの混合物から選択される２次安定化剤は、化粧料組成物の全体に対して０．０１〜１５重量％の範囲で使用されうる。１５重量％以上で使われる場合、使用量の増加による効果の向上が、コストの上昇に比べて微小である。
【００３０】
本発明のレスベラトロルを含有する化粧料組成物において、１次安定化剤として使われるシクロデキストリン又はポリエチレングリコール類は、次の化学式で表され、好ましくは、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール３２のうち１種以上が選択されて使用されうる。
【化４ａ】
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【化４ｂ】
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シクロデキストリン又はポリエチレングリコール類の含量は、有効成分対比５〜２０倍の重量比、又は安定化されたレスベラトロルを含有する安定化された化粧料組成物の全体重量を基準として、０．１〜５０重量％の範囲で使用せねばならず、有効成分対比重量比が２０以上である場合、１次安定化剤の過剰使用によるコストの増加及び使用感の低下をもたらす。
【００３１】
本発明の安定化されたレスベラトロルを含有する化粧料組成物は、持続的に優れた美白及び抗酸化作用を提供するだけでなく、製造過程又は製品の保管中に生じる変色、変臭、結晶析出などの相安定性の経時変化などの問題を克服し、皮膚の刺激を減らすという効果がある。
【００３２】
本発明による安定化されたレスベラトロルを含有する組成物の製造方法は、次のステップを含む：
ａ）溶媒及び１次安定化剤を含むステップと、
ｂ）レスベラトロルを前記ａ）で製造した混合物に添加して混合するステップと、
ｃ）水溶性の美白組成物、α−リポ酸、黄柏抽出物、アルテロモナス発酵抽出物又はこれらの混合物を含む２次安定化剤を、ステップｂ）で製造した混合物に添加して混合するステップ。
【００３３】
前記レスベラトロルを含有する化粧料組成物の製造方法において、溶媒は、ポリオール、エタノール及び水を含みうる。
【００３４】
前記レスベラトロル及びα−リポ酸を含む組成物の製造方法のステップａ）において、１次安定化剤は、シクロデキストリン又はポリエチレングリコール類、好ましくは、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン、ポリエチレングリコール３２、ポリエチレングリコール４００、又はこれらの混合物から選択される。
【００３５】
前記レスベラトロルを含有する化粧料組成物の製造方法は、一般的には室温及び大気圧下で行われるが、必要に応じて加熱してもよい。
【００３６】
本発明の安定化されたレスベラトロルを含有する安定化化粧料組成物は、１次安定化剤を化粧料組成物の全体重量を基準として、１．０〜５０．０重量％の範囲で含む。
本発明の化粧料組成物は、これに限定されるものではないが、可溶化、乳化又は分散方法で製造されうる全ての剤型、例えば、スキン、ローション、クリーム、エッセンス、サンクリーム、フォームクリーンシング、クリーンシングクリーム又はパック剤型でありうる。
【００３７】
実験例
本発明者は、抗酸化などの優れた効果にも拘わらず、化粧料として適用し難かったレスベラトロルの低溶解度、長期保存時の変色、変臭及び結晶析出の問題などの問題点を解決するために、そして、１次安定化剤及び２次安定化剤で安定化させたレスベラトロルを含有する化粧料組成物の経時的な有効性の持続効果を調べるために、以下の実験例で、代表的に抗酸化作用の持続性についてラジカル消去能力を測定し、皮膚安定性の確認のために正常な成人皮膚を対象としてパッチ試験を行って皮膚刺激性の実験を行い、製品内の相安定性を、４０℃、４℃及び日光で経時的な色相の変化及び析出状態を測定して、確認した。
【００３８】
レスベラトロルを含有した安定化された化粧料組成物の美白生理活性を確認するための実験は、次のように行われた。まず、メラニン形成過程で最も重要な役割を行うチロシナーゼ酵素の活性抑制能及びラジカル消去能力を測定して美白効果を確認し、生体レベルと類似したメラニン細胞の培養による増殖阻害効果を測定することによって、実際の美白効果を測定した。
【００３９】
このような実験結果により、本発明によるレスベラトロル、又はそれと並行して１次安定化剤又は２次安定化剤を選択して含有する皮膚美白用の化粧料組成物は、従来より商業的に使用されてきた美白剤であるアルブチン、コジック酸と比較して、優れた美白効果を有しつつ、製品内の相安定性及び皮膚安定性を向上させることが判明し、美白化粧料として効果的に使用されうる。
【００４０】
以下、下記の実施例を通じて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲は、実施例に限定されない。
【００４１】
［実験例１］チロシナーゼ抑制効果の試験
メラニン合成の主要ステップに関与するチロシナーゼ酵素に対するレスベラトロルの阻害力を測定して美白能力を評価し、その結果を下記の表１に示した。
メラニン合成の主要ステップにおいて、基質として使われるチロシンとマッシュルームチロシナーゼ又はメラニン細胞から分離したチロシナーゼ分画を添加し、サンプルと一定時間反応させた後、反応生成物であるドパクロムの吸収波長で吸光度を測定することによって、原料及び製品の美白能力を評価した。
チロシナーゼ阻害活性度（％）＝１００−（（ＯＤｅｘｐ．−ＯＤｃｏｎ．）／ＯＤｓｔｄ．×１００）
ＯＤｅｘｐ．：サンプル実験値、チロシナーゼ含有時の測定値
ＯＤｃｏｎ．：サンプル実験値、チロシナーゼ非含有時の測定値
ＯＤｓｔｄ．：サンプルがない場合、チロシナーゼ含有時の測定値
【００４２】
【表１】
2006528239.tif 000007
前記表１に示したように、レスベラトロル及びコジック酸がチロシナーゼ阻害活性に優れた成分であることが確認できた。
【００４３】
［実験例２］フリーラジカル消去力試験
レスベラトロルの抗酸化作用を調べるために、次のようにフリーラジカル消去力試験を実施し、その結果を下記の表２に示した。
サンプルがメタノールに溶解されて、生成した比較的安定した青藍色ＤＰＰＨ（1,1-diphenyl-2-hydrzyl）ラジカルを消去することにより、澄明な溶液に変わり、この場合の波長５１６ｎｍでの吸光度の低下度を測定した。
フリーラジカル消去力（％）＝１００−（（ＯＤｅｘｐ．−ＯＤｃｏｎ．）／ＯＤｓｔｄ．×１００）
ＯＤｅｘｐ．：サンプル実験値、ＤＰＰＨ含有時の測定値
ＯＤｃｏｎ．：サンプル実験値、ＤＰＰＨ非含有時の測定値、
ＯＤｓｔｄ．：サンプルがない場合、ＤＰＰＨ含有時の測定値
【００４４】
【表２】
2006528239.tif 000008
前記表２に示したように、ビタミンＣ及びレスベラトロルがフリーラジカル消去力に優れた成分であることが確認できた。
【００４５】
［実験例３］皮膚メラニン細胞培養を利用した美白効果試験
レスベラトロルを、正常人のメラニン細胞を利用したメラニン生成阻害率について試験し、その結果を下記の表３に示した。
皮膚メラニン細胞培養を利用した美白効果試験は、下記のような方法によって実施した。
１．人間由来の皮膚メラニン細胞をＭＧＭ（Melanocyte Growth Media，Clonetics社）培地で３７℃、５％のＣＯ２培養器で培養維持した。
２．実験のために、一定数の細胞（２×１０６個）を、７５Ｔ培養フラスコに培養して細胞の付着を確認した後、細胞培養液に一定濃度の試験物質を加えて、２〜３日間培養した。
３．培養液を除去した後、リン酸塩緩衝溶液（ＰＢＳ）で洗浄し、トリプシン溶液を加えて細胞を収穫した。
４．遠心分離して細胞のペレットを得た後、色相を観察し、１Ｎ ＮａＯＨに溶解させて４７５ｎｍ波長で吸光度を測定した。
５．メラニン標準物質から求めた吸光度を利用してメラニン量を計算し、メラニン細胞の全蛋白質量で値を補正して、蛋白質当たりのメラニン量で表示した。
メラノマ生成阻害率（％）＝［（Ａ−Ｂ）／Ａ］×１００
Ａ：対照群のメラニン量／蛋白質量
（対照群：サンプルで処理せず、培養培地で正常に育ったメラニン細胞）
Ｂ：各サンプルを処理したメラニン量／蛋白質量
【００４６】
【表３】
2006528239.tif 000009
前記表３に示したように、レスベラトロル及び水溶性混合美白剤（ホワイトジェニック）がメラニン阻害率に優れた成分であることが確認できた。
前記実験例で得られた結果に基づいて、レスベラトロルの美白効果を安定に維持及び上昇させうる化粧料組成物を製造して、皮膚安全性、製品の相安定性をさらに向上させながら皮膚美白作用を維持させうるか否かを、同じメラニン細胞培養を利用して美白効果実験を行った。
【００４７】
［実施例１〜７及び比較例１〜８］高濃縮安定化化粧料組成物の製造
レスベラトロルの溶解性及び相安定性の増進効果を調べるために、次の表４に示した組成で安定化化粧料組成物（実施例１〜７、表４Ａ及び比較例１〜５、表４Ｂ）を製造した。各実施例及び比較例の化粧料組成物の製造方法は、次の通りである。
【００４８】
まず、表４Ａ及び表４Ｂの１次安定化剤を含む溶媒剤を十分に攪拌して透明に維持した後、有効成分レスベラトロルをそれぞれ室温で徐々に添加して、３０〜６０分ほど攪拌して完全に溶解させた。有効成分が完全に溶解された後、２次安定化剤の一部を徐々に添加した後、１０〜２０分ほどさらに混合して安定化されたレスベラトロル含有化粧料組成物の製造し完成した。
【００４９】
【表４Ａ】
2006528239.tif 000010
【表４Ｂ】
2006528239.tif 000011
【００５０】
［実験例４］溶解性及び相安定性の実験
本発明による安定化されたレスベラトロルの溶解性及び相安定性を、従来の一般的な溶媒剤の精製水、ポリオール及びエタノールに溶解した場合と比較して、溶解性及び変臭、変色、有効性の維持の有無を確認するために、製造直後及び所定期間に保管した後の溶解状態、臭い及び色合いを観察して、次の表５及び表６に示した。
【００５１】
【表５】
2006528239.tif 000012
表５の結果から分かるように、本発明による安定化された化粧料組成物は、有効成分（レスベラトロル）混合物の濃度が１５重量％となっても完全に溶解され、１ケ月が経過した後にも結晶が析出されないことが分かった。また、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンは、有効成分対比５〜２０の重量比だけ使用せねばならず、有効成分対比重量比５以下である場合、完全に抱接されず、結晶が残っており（比較例１参照）、重量比２０以上である場合、抱接剤の過剰使用によるコスト増加及び使用感の低下をもたらす恐れがあるので、適当量を取らねばならないということが分かった。
【００５２】
【表６】
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表６から分かるように、溶媒としてヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン又はポリエチレングリコール類を使用しなかった場合、レスベラトロルの場合は、低温で結晶析出現象が発生し（比較例３及び５参照）、α−リポ酸の場合は、二硫黄（disulfur）による変臭発生が激しかった（比較例５参照）。また、それと同時に安定化剤が含まれていない場合（比較例４参照）、含まれていた場合（実施例４参照）より、日光でさらに渇変現象が発生することが分かった。これは、安定化剤として使用された黄柏抽出物の紫外線遮断効果に起因するものと考えられる。黄柏の皮膚での抗菌、抗炎症、抗ウイルス効果については広く知られていたが、日光などの生活紫外線による変色及び変臭の発生を緩和させる機能は、まだ知られておらず、本発明によって日光から製品内の有効成分の相安定性を向上させうることを確認した。
【００５３】
［実験例５］長期保存率の実験
本発明による安定化された化粧料組成物の有効成分の長期保存率を調べるために、実施例４及び比較例５の組成物を、室温及び４０℃、４℃の恒温槽で３ケ月間保管した後、有効成分についてＨＰＬＣ定量分析を実施し、有効成分の長期保存性を確認し、レスベラトロルの長期保存率の実験結果を表７に示した。
【００５４】
【表７】
2006528239.tif 000014
レスベラトロルの長期保存率実験に利用されたＨＰＬＣ分析条件は、次の通りである。
１）分析カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ  Ｃ８，１２０Ａ、５μｍ、４．６×１５０ｍｍ（ＧＬ  ｓｃｉｅｎｃｅ）
２）移動相：移動相１；２５ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４，移動相２；アセトニトリル
【表８】
2006528239.tif 000015
３）カラムオーブンの温度：室温
４）測定波長：３１０ｎｍ 
５）注入量：１０μｌ
表８に示したように、レスベラトロルの場合は、一般的な溶媒に溶解時（比較例５参照）に、低温では結晶析出の問題によって、そして高温では不安定性によって、製品内の長期保存性が劣ることが分かったが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンにホウ抱接した場合（実施例４参照）は、長期保存率に優れることが分かった。
【００５５】
α−リポ酸の長期保存率の実験結果は、以下の表９の通りである。 
【表９】
2006528239.tif 000016
α−リポ酸の長期保存率の実験に利用されたＨＰＬＣ分析条件は、次の通りである：
１）分析カラム：Ｎｏｖａｐａｋ  Ｃ１８，１２０Ａ，５μｍ，４．６×１５０ｍｍ（ＧＬ  ｓｃｉｅｎｃｅ）
２）移動相：移動相１；０．１％のトリフルオロ酢酸  ｐＨ２．４，移動相２；アセトニトリル
【００５６】
【表１０】
2006528239.tif 000017
３）カラムオーブンの温度：室温
４）測定波長：３３３ｎｍ
５）注入量：２０μｌ
表９に示したように、α−リポ酸の場合は、一般的な溶媒に溶解時に（比較例５参照）、高温であるほど、組成物内での相不安定性によって製品内の長期保存率が劣ることが分かったが、ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリンに抱接した場合（実施例４参照）は、長期保存率に優れるていることが分かる。
【００５７】
［実験例６］皮膚刺激性の実験
本発明に対する皮膚安定性を確認するために、実施例４、５及び比較例４、５の組成物に対して正常人の皮膚を利用したパッチ実験を行い、その結果を以下の表１１に示した。実験方法及び判定基準は、前記実験例４の通りである。
【００５８】
【表１１】
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表１１に示したように、実施例４及び５の結果から本発明による１次安定化剤を使用する時、より皮膚に安全であるということが分かり、実施例５及び比較例４の結果を比較すると、本発明によって安定化剤として使われた黄柏抽出物の場合は、従来より知られているように抗炎症効果により優れた刺激緩和効果を示した。また、安定化剤の一つの成分であるアルテロモナス発酵抽出物を併用するとき、皮膚刺激をさらに緩和させることが確認できた。
【００５９】
［実験例７］抗酸化作用の持続性実験
本発明による安定化された化粧料組成物の長期の効果持続性を確認するために、レスベラトロル及びα−リポ酸の抗酸化作用の持続性について、フリーラジカル消去力テストを実施し、その結果を表１２に示した。
フリーラジカル消去力実験は、次のように実施した。本発明による実施例４、比較例４及び比較例５の混合物について、製造初期、１ケ月及び３ケ月経過後、それぞれの組成物のサンプルを得て、エタノールに１０ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させた後、必要に応じてエタノールでさらに希釈してサンプル溶液を製造し、そのサンプル溶液１ｍｌに、実験直前に製造したメタノールに溶解させた比較的安定した約０．１ｍＭの濃度の青藍色のＤＰＰＨラジカル溶液１ｍｌを添加し、約１０分間激しく撹拌した後、３７℃で３０分間インキュベーションした後、吸光度を測定した。ＤＰＰＨラジカルが消去されれば、溶液が青藍色から澄明な溶液に変わり、波長５１６ｎｍで吸光度が低下するので、スペクトロフォトメータを使用して吸光度（ＯＤｅｘｐ）を測定した。そして、各組成物のサンプルに対してＤＰＰＨ溶液を含有していないサンプルを対照サンプルとして吸光度（ＯＤｃｏｎ）を測定し、各組成物なしにＤＰＰＨのみを含有した標準サンプルの吸光度（ＯＤｓｔｄ）も測定した。
各吸光度の測定値からフリーラジカル消去率を計算し、フリーラジカル消去率が５０％となる濃度、すなわち、ＩＣ５０を計算した。計算方法は、前記実験例２と同一である。ＩＣ５０値が小さいほどフリーラジカル消去能力に優れることを表す。
【００６０】
【表１２】
2006528239.tif 000019
前記表１２の結果から分かるように、抗酸化作用に優れるが、長期の効果持続性が相対的に劣るレスベラトロル及びα−リポ酸を、本発明によって１次安定化剤及び２次安定化剤を使用して安定化させた実施例４の場合は、そうでない比較例４及び５に比べて、その作用が長期間維持されうることが分かる。
【００６１】
［実験例８］皮膚メラニン細胞培養を利用した美白効果の試験
美白作用を試験するために、正常人のメラニン細胞を使用したメラニン生成阻害率を、実施例７及び比較例６〜８について試験し、その結果を下記の表１３に示した。
【００６２】
【表１３】
2006528239.tif 000020
【００６３】
［実施例８］化粧水の製造
次の表１４に示した組成比で、２成分の水相部分と５成分のアルコール部分とをそれぞれ室温でイージーミキサーで混合した後、アルコール部分を徐々に水相部分に混合しながら可溶化させた。アルコール部分を何れも添加した後、１０〜２０分ほどさらに混合して化粧水を製造した。
【００６４】
【表１４】
2006528239.tif 000021
【００６５】
［実施例９］ローションの製造
次の表１５で示した組成比で、５つの成分の水相部分と９つの成分の油相部分とをそれぞれ７５〜８０℃まで加熱して完全溶解させた後、水相部分に油相部分を徐々に添加した後、７５〜８０℃でホモミキサーで３０００ｒｐｍで５分間、乳化させた。乳化途中に１５．の中和剤を添加して中和した。１次乳化の終了後、冷却し、５０〜５５℃で添加剤として使われた香料を添加して、ホモミキサーで３０００ｒｐｍで３分間、２次乳化した後、２７〜３０℃に冷却して、ローションを製造した。
【００６６】
【表１５】
2006528239.tif 000022
【００６７】
［実施例１０］クリームの製造
次の表１６に示した組成比で、１．〜５．の水相部分と、６．〜１４．の油相部分とをそれぞれ７５〜８０℃まで加熱して完全溶解させた後、水相部分に油相部分を徐々に添加した後、７５〜８０℃でホモミキサーで３０００ｒｐｍで５分間、乳化させた。乳化途中に中和剤を添加して中和させた。１次乳化が終了後、冷却し、５０〜５５℃で添加剤として使われる香料を添加し、ホモミキサーで３０００ｒｐｍで３分間、２次乳化した後、２７〜３０℃に冷却し、クリームを製造した。
【００６８】
【表１６】
2006528239.tif 000023
【００６９】
［実施例１１］美容液の製造
次の表１７に示した組成比で、５つの成分の水相部分と、５つの成分の油相部分とをそれぞれ７５〜８０℃まで加熱して完全溶解させた後、水相部分に油相部分を徐々に添加した後、７５〜８０℃でホモミキサーで３０００ｒｐｍで５分間、乳化させた。乳化途中に中和剤を添加して中和させた。１次乳化の終了後、冷却し、５０〜５５℃で添加剤として使われる香料を添加してホモミキサーで３０００ｒｐｍで３分間、２次乳化した後、２７〜３０℃に冷却して美容液を製造した。
【００７０】
【表１７】
2006528239.tif 000024
【００７１】
［実験例９］人体に対する美白効果の臨床実験結果
２０人の健康な２０歳以上の男性／女性を対象として、６週間、背中の部位に紫外線照射装置を利用して人為的に黒化を誘発させた後、１日１回ずつ対照製品及び試験製品を適当量を取って、よく吸収されるように塗布して、皮膚の白黒の程度をChromameter CR-300（ミノルタ，ＣＲ−３００，Ｊａｐａｎ）を使用して、効果を判定した。皮膚美白効果の測定は、色素沈着された部位のＬ、ａ、及びｂ値の変化を測定して評価し、評価は、紫外線３回照射後（０Ｗ）、１週経過後（１Ｗ）、２週経過後（２Ｗ）、３週経過後（３Ｗ）、４週経過後（４Ｗ）、６週経過後（６Ｗ）の被検者を対象としてChromameter CR-300のＬ、ａ、ｂ値を測定した。Chromameterは、人間によって認知される色を３つの因子で構成されたデジタルコードに転換する装置であって、化粧品の研究において、皮膚色の測定に広く使われている。（Muizzuddin N., Marenus K., Maes D., Smith W. P., Use of a chromameter in assessing the efficacy of anti-irritants and tanning accelerators, Journal of the Society of Cosmetic Chemists, 1990; 41: 369〜378参照）また独立したt検定により、対照製品と試験製品との間の有意性の有無を仮平均差５％で確認した。
【００７２】
【表１８】
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前記表１８に示したように、本発明による実施例８の場合は、比較例９に比べて統計的に有意な水準（ｐ＜０．０５）の皮膚美白効果を示し、相対的に非常に優れた美白効果を有することが分かった。
【００７３】
上述から明らかな通り、本発明は、記載された具体例を中心に詳細に説明されたが、本発明の範囲及び技術思想の範囲内で多様な変形及び修正が可能であることは、当業者において明白なものであり、このような変形及び修正が特許請求の範囲に属することも当然である。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明によるレスベラトロルを含有した美白及び抗酸化作用を有する化粧料組成物は、少量でも非常に優れた美白及び抗酸化効果を提供するだけでなく、レスベラトロルを安定的に剤型内に含有させ、長期間、組成物内での変色、変臭及び結晶析出などの問題を解決し、長期間持続的に優れた美白及び抗酸化効果を提供でき、皮膚への刺激を減らすことが可能となる。
【国際調査報告】
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