(57)【要約】本発明は治療上有効なペプチド、とりわけＰＡＣＡＰ  ６６の安定化された製剤に関する。本発明の製剤は、最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチド、遷移金属塩および有機溶媒を包含する。上の製剤は、最低１個のアスパラギン残基を有するペプチドを含有してよく、そして製剤の製造前に酸性化かつ（噴霧乾燥もしくは凍結乾燥のような）乾燥される。本発明の他の製剤は、遷移金属塩を含むかもしくは含まない、酸性化かつ（噴霧乾燥もしくは凍結乾燥のような）乾燥されるＰＡＣＡＰ  ６６もしくはアスパラギン残基を含有するペプチドの安定化された製剤に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチド；
（ｂ）遷移金属塩；および
（ｃ）製薬学的に許容できる有機溶媒
を含んでなる、溶液もしくは懸濁液いずれか中の安定化されたペプチド製剤。
【請求項２】
前記ペプチドが、ＰＡＣＡＰ、ＰＡＣＡＰ様ペプチド、ＶＩＰ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、セクレチン、ヘロデルミン、エキセンジン−４およびそれらの機能上同等な変異体を含有するペプチドホルモンのスーパーファミリーよりなる群から選択される、請求項１記載の製剤。
【請求項３】
前記ペプチドがＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）である、請求項１記載の製剤。
【請求項４】
前記ヒスチジン残基が末端ヒスチジン残基である、請求項１記載の製剤。
【請求項５】
前記ペプチドが、副腎皮質刺激ホルモン、アンジオテンシン、レニン基質テトラデカペプチド、ナトリウム利尿ペプチド、消化管ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモンおよびニューロテンシン、ならびに副甲状腺ホルモンよりなる群から選択される、請求項１記載の製剤。    
【請求項６】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項１記載の製剤。
【請求項７】
前記遷移金属塩が亜鉛塩である、請求項６記載の製剤。
【請求項８】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される、請求項１記載の製剤。
【請求項９】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される２種もしくはそれ以上の有機溶媒の混合物である、請求項１記載の製剤。
【請求項１０】
前記有機溶媒がＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドンもしくはプロパノールである、請求項８記載の製剤。
【請求項１１】
（ａ）ＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）および／もしくはその塩；
（ｂ）ＺｎＣｌ２；ならびに
（ｃ）製薬学的に許容できる有機溶媒
を含んでなる、溶液もしくは懸濁液いずれか中の安定化されたペプチド製剤。
【請求項１２】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される、請求項１１記載の安定化されたペプチド製剤。
【請求項１３】
前記有機溶媒がＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドンもしくはプロパノールである、請求項１２記載の安定化されたペプチド製剤。
【請求項１４】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される２種もしくはそれ以上の有機溶媒の混合物である、請求項１１記載の製剤。
【請求項１５】
前記ＺｎＣｌ２が前記有機溶媒中で０．１より上のＺｎＣｌ２：ペプチドのモル比である、請求項１１記載の製剤。
【請求項１６】
前記ＰＡＣＡＰ  ６６および／もしくはその塩が前記有機溶媒１ｍＬあたり０．１ｍｇより上の濃度である、請求項１１記載の製剤。
【請求項１７】
酸および最低１個のアスパラギン残基を含有するペプチドの乾燥混合物を含んでなる安定化されたペプチド製剤。
【請求項１８】
前記ペプチドがＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）である、請求項１７記載の製剤。
【請求項１９】
前記酸が無機酸である、請求項１７記載の製剤。
【請求項２０】
前記無機酸がＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４から選択される、請求項１９記載の製剤。
【請求項２１】
前記酸がＴＦＡである、請求項１７記載の製剤。
【請求項２２】
前記製剤が凍結乾燥もしくは噴霧乾燥される、請求項１７記載の製剤。
【請求項２３】
遷移金属塩をさらに含んでなる、請求項１７記載の製剤。
【請求項２４】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項２３記載の製剤。
【請求項２５】
前記遷移金属が亜鉛である、請求項２４記載の製剤。
【請求項２６】
酸ならびにＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）および／もしくはその塩の乾燥混合物を含んでなる安定化されたペプチド製剤。
【請求項２７】
前記酸がＴＦＡである、請求項２６記載の製剤。
【請求項２８】
前記酸が無機酸である、請求項２６記載の製剤。
【請求項２９】
前記無機酸がＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４から選択される、請求項２８記載の製剤。
【請求項３０】
前記ＰＡＣＡＰ  ６６および／もしくはその塩に対する前記酸のモル比が０．１より上である、請求項２６記載の製剤。
【請求項３１】
遷移金属塩をさらに含んでなる、請求項２６記載の製剤。
【請求項３２】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項３１記載の製剤。
【請求項３３】
前記遷移金属が亜鉛である、請求項３２記載の製剤。
【請求項３４】
遷移金属塩および最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチドの乾燥混合物を含んでなる安定化されたペプチド製剤。
【請求項３５】
製薬学的に許容できる有機溶媒をさらに含んでなる、請求項３４記載の製剤。
【請求項３６】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される、請求項３５記載の製剤。
【請求項３７】
前記有機溶媒がＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドンもしくはプロパノールである、請求項３６記載の製剤。
【請求項３８】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される２種もしくはそれ以上の有機溶媒の混合物である、請求項３５記載の製剤。
【請求項３９】
前記ペプチドが、ＰＡＣＡＰ、ＰＡＣＡＰ様ペプチド、ＶＩＰ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、セクレチン、ヘロデルミン、エキセンジン−４およびそれらの機能上同等な変異体を含有するペプチドホルモンのスーパーファミリーよりなる群から選択される、請求項３４記載の製剤。
【請求項４０】
前記ペプチドがＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）である、請求項３４記載の製剤。
【請求項４１】
前記ペプチドが、副腎皮質刺激ホルモン、アンジオテンシン、レニン基質テトラデカペプチド、ナトリウム利尿ペプチド、消化管ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモンおよびニューロテンシン、ならびに副甲状腺ホルモンよりなる群から選択される、請求項３４記載の製剤。
【請求項４２】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項３４記載の製剤。
【請求項４３】
前記遷移金属塩が亜鉛塩である、請求項４２記載の製剤。
【請求項４４】
（ａ）酸および水の酸溶液を調製する段階；
（ｂ）前記酸溶液を室温より下に冷却する段階；
（ｃ）前記冷却酸溶液、および最低１個のアスパラギン残基を含有するペプチドを混合して冷却混合物を創製する段階；ならびに
（ｄ）前記冷却混合物を乾燥する段階
を含んでなる、安定化されたペプチド製剤の製造方法。
【請求項４５】
前記酸が無機酸である、請求項４４記載の方法。
【請求項４６】
前記無機酸がＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４から選択される、請求項４５記載の方法。  
【請求項４７】
前記酸がＴＦＡである、請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
前記ペプチドがＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）および／もしくはその塩である、請求項４４記載の方法。
【請求項４９】
前記ＰＡＣＡＰ  ６６および／もしくはその塩に対する前記酸のモル比が０．１より上である、請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
前記乾燥段階が凍結乾燥もしくは噴霧乾燥である、請求項４４記載の方法。
【請求項５１】
前記冷却混合物を乾燥する前に前記冷却混合物に遷移金属塩を添加することをさらに含んでなる、請求項４４記載の方法。
【請求項５２】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
前記遷移金属が亜鉛である、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
（ａ）遷移金属塩を含有する水性溶液を、最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチドと混合する段階；および
（ｂ）前記混合物を乾燥する段階
を含んでなる、安定化されたペプチド製剤の製造方法。
【請求項５５】
前記ペプチドが、ＰＡＣＡＰ、ＰＡＣＡＰ様ペプチド、ＶＩＰ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、ＧＲＦ、セクレチン、ヘロデルミン、エキセンジン−４およびそれらの機能上同等な変異体を含有するペプチドホルモンのスーパーファミリーよりなる群から選択される、請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
前記ペプチドがＰＡＣＡＰ  ６６（配列番号１）である、請求項５４記載の方法。
【請求項５７】
前記ペプチドが、副腎皮質刺激ホルモン、アンジオテンシン、レニン基質テトラデカペプチド、ナトリウム利尿ペプチド、消化管ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモンおよびニューロテンシン、ならびに副甲状腺ホルモンよりなる群から選択される、請求項５４記載の方法。
【請求項５８】
前記遷移金属塩が、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトよりなる群から選択される遷移金属の塩である、請求項５４記載の方法。
【請求項５９】
前記遷移金属塩が亜鉛塩である、請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
製薬学的に許容できる有機溶媒を前記乾燥混合物に添加する段階をさらに含んでなる、請求項５４記載の方法。
【請求項６１】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される、請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
前記有機溶媒が、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリステートよりなる群から選択される２種もしくはそれ以上の有機溶媒の混合物である、請求項６０記載の方法。
【請求項６３】
前記有機溶媒がＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドンもしくはプロパノールである、請求項６１記載の方法。
【請求項６４】
前記ヒスチジン残基が末端ヒスチジン残基である、請求項５４記載の方法。
【請求項６５】
前記乾燥段階が凍結乾燥もしくは噴霧乾燥である、請求項５４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は全般的に製薬学的製剤の分野に関する。より具体的には、本発明は有機溶媒中、有機溶媒に基づく懸濁液中、または凍結乾燥もしくは噴霧乾燥のような乾燥状態の治療上有効なペプチドの安定化された製剤に向けられる。
【背景技術】
【０００２】
治療的ペプチドは長時間、水性溶液中で保存される場合に凝集および／もしくは化学的分解を受けやすい。凝集もしくは分解するペプチドのこの傾向は一般に「不安定性」として特徴づけられ、そしてＵＶ／ＶＩＳ分光測光法、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）、キャピラリー電気泳動（ＣＥ）などのような多くの異なる分析方法により測定しうる。水性溶液中のペプチドの不安定性は多様な戦略により最小限にしうる。非特許文献１；非特許文献２。２種のしばしば使用される戦略は、適正な量の安定剤（１種もしくは複数）とともにペプチドを処方すること、または長期貯蔵のためペプチドを乾燥（噴霧乾燥、凍結乾燥のような）することである。
【０００３】
長期貯蔵のための希なペプチド安定化方法は非水性有機溶媒とペプチドを混合することである。有機溶媒は、二次構造の形成を促進すること（非特許文献３；非特許文献４）、および加水分解のようなある種の化学反応を阻害すること（非特許文献５）によりペプチドの安定性を向上させうる。ペプチドの脱アミド化は、グリセロール（非特許文献６）およびエタノールもしくはジオキサン（非特許文献５）のような有機溶媒の添加に際して水性溶液中で穏やかに阻害され得る。例えば、９アミノ酸のペプチドホルモンリュープロリドの安定性は、水中よりもジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で全体的なより良好な安定性を有する。非特許文献７；非特許文献８。
【０００４】
天然の下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）は４０未満のアミノ酸をもつペプチドホルモンである。非特許文献９。その配列に基づき、ＰＡＣＡＰは、血管作用性腸ペプチド（ＶＩＰ）、グルカゴン、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）およびセクレチンを包含するペプチドホルモンの１スーパーファミリーのメンバーである（非特許文献９、上記）。異なる受容体に結合することによりＰＡＣＡＰは多様な薬理学的活性を開始し、その１つがインスリン分泌の刺激である。関連出願（特許文献１、特許文献２）で論考されるとおり、修飾を伴わないＰＡＣＡＰは、重大な副作用が発生しうるためＩＩ型糖尿病を治療するのに適しない。ＩＩ型糖尿病を治療するのに安全に使用し得るＰＡＣＡＰ様ペプチド（１種もしくは複数）の探索において多様なＰＡＣＡＰ類似物が合成され、そしてＰＡＣＡＰ  ６６が同定された。ＰＡＣＡＰ  ６６は、特許文献１および特許文献２（その双方は引用することにより本明細書に組み込まれる）に開示される「Ｒ３Ｐ  ６６」と同一の分子である。ＰＡＣＡＰ  ６６のペプチド配列は
ＨＳＤＡＶＦＴＤＮＹＴＲＬＲＫＱＶＡＡＫＫＹＬＱＳＩＫＮＫＲＹ（配列番号１）である。
【０００５】
ＰＡＣＡＰ  ６６の不安定性の程度は、しかしながら一般にあるペプチドに期待されるものよりはるかにより大きいことが見出された。その安定性の評価において、われわれはＰＡＣＡＰ  ６６が水性環境中で十分に安定でないことを見出した。さらに、潜在的製剤安定剤の添加はその安定性を向上させなかった。われわれが試験した賦形剤は亜鉛、マグネシウムもしくはカルシウムのような多様な金属イオンなどであったが、しかしこれらのイオンのいずれも該ペプチドの安定性を向上させなかった（図１を参照されたい。）。
この安定性の障壁を克服し、そして順に製品の貯蔵寿命を増大させるために、有機溶媒中のペプチドの製剤を作成した。幸運なことに、該ペプチドは数種の有機溶媒に容易に溶解したが、しかし、驚くべきことに、これらの有機溶媒中での本ペプチドの安定性は、水性環境中と同じくらい乏しいかもしくはなおより悪かった（比較のため図１および図２を参照されたい）。糖のような水性溶液中の多くの潜在的ペプチド安定剤は有機溶媒に容易に可溶性でなく、そして従って使用し得なかった。ペプチド安定化のための多数の他の既知の戦略を試みたが成功を伴わなかった。ＰＡＣＡＰ  ６６の安定化のための新規方法および製剤が従って必要とされた。こうした方法は他のペプチドに拡大可能である新規製剤および方法を生じた。本発明は従って有機溶媒中、有機溶媒に基づく懸濁液中および乾燥状態のペプチドの不安定性の新規制御方法を提供する。
【特許文献１】共有の同時係属中の米国特許出願第０９／６７１，７７３号明細書
【特許文献２】第ＷＯ  ０１／２３４２０号明細書
【非特許文献１】Ｗａｎｇ、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１８５：１２９−８８（１９９９）
【非特許文献２】Ａｒａｋａｗａら、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．４６：３０７−２６（２００１）
【非特許文献３】ＺｏｕとＳｕｇｉｍｏｔｏ、Ｂｉｏｍｅｔａｌｓ、１３：３４９−５９（２０００）
【非特許文献４】Ｋｏｚｉｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２５８：９５９−６４（２００１）
【非特許文献５】ＢｒｅｎｎａｎとＣｌａｒｋｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．、２：３３１−３８（１９９３）
【非特許文献６】Ｌｉら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．５６：３２６−３４（２０００）
【非特許文献７】Ｈａｌｌら、Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｒｅｓ．、５３：４３２−４１（１９９９）
【非特許文献８】Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、１９１：１１５−２９（１９９９）
【非特許文献９】Ｖａｕｄｒｙら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．、５２：２６９−３２４（２０００）
【発明の開示】
【０００６】
［発明の要約］
本発明は、遷移金属塩、酸もしくは双方により安定化される懸濁液もしくは溶液中、または凍結もしくは噴霧乾燥のいずれかのペプチドの製剤を提供する。本発明の一態様において、懸濁液もしくは溶液中または乾燥されたのいずれかの製剤は、最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチドおよび遷移金属塩を包含する。遷移金属塩は、亜鉛、銅、鉄、マンガン、ニッケルもしくはコバルトから選択される遷移金属の塩であることができ、そして好ましくは亜鉛である。該ペプチドのヒスチジン残基は末端ヒスチジン残基であってよい。ペプチドは好ましくはＰＡＣＡＰ  ６６であるが、しかし例えばＰＡＣＡＰ、ＰＡＣＡＰ様ペプチド、ＶＩＰ、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、ＧＲＦ、セクレチン、ヘロデルミン、エキセンジン−４およびそれらの機能上同等な変異体のような他のペプチドを包含してよい。副腎皮質刺激ホルモン、アンジオテンシン、レニン基質テトラデカペプチド、ナトリウム利尿ペプチド、消化管ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモンおよびニューロテンシン、ならびに副甲状腺ホルモンもまた包含してよい。
【０００７】
別の態様において、本発明のこうした製剤は有機溶媒を包含する。有機溶媒は、例えば、ＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドン、プロパノール、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００およびイソプロピルミリルテートであってよいか、またはこれらの溶媒の２種もしくはそれ以上の混合物であってよい。有機溶媒は、好ましくはＤＭＳＯ、１−メチル−２−ピロリニドンもしくはプロパノールである。本発明の一態様において、有機溶媒中のペプチドに対する亜鉛塩のモル比は０．１より上である。
【０００８】
本発明の別の態様において、本発明の製剤は、最低１個のアスパラギン残基を有するペプチドおよび酸を含有する乾燥製剤を包含する。酸はＴＦＡであってよいか、もしくは例えばＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４のような無機酸である。こうした製剤は噴霧もしくは凍結乾燥してよい。こうした製剤は上述されたところの遷移金属塩もまた含有してよい。本製剤の一態様において、ペプチドはＰＡＣＡＰ  ６６および／もしくはその塩である。最後に、こうした製剤は上述されたところの有機溶媒もまた含有してよい。
【０００９】
本発明はまた上で詳述された製剤の製造方法にも関する。こうした方法は、水中で酸溶液を調製すること、該酸溶液を室温より下に冷却すること、上述されたところの最低１個のアスパラギン残基を含有するペプチドと該冷却された溶液を混合すること、およびその後生じる混合物を好ましくは噴霧もしくは凍結乾燥により乾燥することを包含する。上述されたところの遷移金属塩は乾燥する前に冷却された溶液に添加してもよい。本発明の方法での使用のための酸およびペプチドは上述されたとおりである。
【００１０】
本発明の別の方法において、上述されたところの遷移金属塩を、上述されたところの最低１個のヒスチジン残基を含有するペプチドと混合し、そしてその後好ましくは噴霧もしくは凍結乾燥により乾燥する。上述されたところの有機溶媒を該混合物に添加してもまたよい。
【００１１】
本発明は以下の図面、記述および請求の範囲により下により詳細に記述される。
［発明の詳細な記述］
本発明は安定化されたペプチド製剤に関する。本発明のペプチド製剤は、金属イオンの添加、ペプチドの酸性化および乾燥、もしくは該２方法の組合せにより安定化される有機、無水溶液、懸濁液もしくは乾燥固体を包含する。本発明の特定の態様はＰＡＣＡＰ  ６６すなわち「Ｒ３Ｐ  ６６」（配列番号１）の安定化された製剤を包含する。
【００１２】
ＰＡＣＡＰ  ６６は水性環境中で安定でない。亜鉛、マグネシウムもしくはカルシウムのような多様な金属の添加はその安定性を向上させない（図１）。これは、緊密に関連するペプチドＶＩＰでみられたとおり、ペプチドの自己消化により引き起こされるようである。Ｍｏｄｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．、４４、４４１−４４７（１９９４）。ＰＡＣＡＰ  ６６の安定化方法の追求において、われわれは有機溶媒中での本ペプチドの安定性を評価した。われわれは最初に、数種の有機溶媒中での本ペプチドの安定性が不満足、すなわち水性環境中で観察されたものよりなお悪かったことを見出した（比較のため図１および図２を参照されたい。）。
これらの有機溶媒中でのＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を向上させるために、われわれは多様な安定化戦略を設計し、そしてこれらのいくつかが予期せぬことに有効であることが判明した。これらは、該ペプチドの安定化において非常に有効であることが判明した２つのアプローチ、すなわち（１）有機溶媒中での例えば塩化亜鉛のような金属塩の添加、および（２）水性溶液中でのペプチドの酸性化、次いで乾燥を包含する。亜鉛塩による有機溶媒中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化は、数種の金属塩が水性溶液中でＰＡＣＡＰ  ６６を安定化することに失敗したため、驚くべきことであった（例えば図１を参照されたい。）。該ペプチドを酸性化かつ乾燥した後に該ペプチドが有機溶媒中ではるかにより安定であったことを見出すこともまた驚くべきことであった、ペプチド溶液の酸性化は通常ペプチドの増大された加水分解につながるためである。これらの安定化戦略は、貯蔵の間に有機溶媒に基づく懸濁液中および乾燥状態でもまた有効であることが見出された。以下の節において、これらの成功裏の戦略およびそれらを成功裏にした安定化機構をより完全に記述する。これらの知見および該製剤の可能な医学的使用の意味もまた下述する。
有機溶媒中でのペプチドの安定化における戦略
（１）特定の金属イオンの使用  
ＺｎＣｌ２、ＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２を包含する多様な金属塩を１ｍＭで非水性有機溶媒ＤＭＳＯに個別に溶解した。その後ＰＡＣＡＰ  ６６を２ｍｇ／ｍＬでこれらの溶液に溶解した。バルク溶液を２ｍＬスクリューキャップ付（Ｏリング付）滅菌ポリプロピレンバイアルに等分した。これらの安定性サンプルを４０℃でインキュベートし、そして予め決められた間隔で分析した。  
【００１３】
図２は、多様な金属塩の存在下４０℃でのペプチド回収率（ＲＰ−ＨＰＬＣ）および純度（ＣＥ）により測定されるところのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。ＰＡＣＡＰ  ６６の７０％以上がＲＰ−ＨＰＬＣにより４０℃で４週間にＤＭＳＯ中で分解されたが、しかし、同一貯蔵条件下で１ｍＭ  ＺｎＣｌ２の存在下でわずかおよそ１０％のＰＡＣＡＰ  ６６が分解された。ＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２を含有する他のサンプルは対照と比較した場合にいかなる有意の安定化効果も有しなかった。ＣＥの結果はＲＰ−ＨＰＬＣ分析からの知見と同様であった。ＣＥによる４週間の対照サンプル中のＰＡＣＡＰ  ６６の純度はＲＰ−ＨＰＬＣによる回収率より高く、ある種のＰＡＣＡＰ  ６６分解産物が異なるＵＶ応答を有するかもしれないか、もしくはＣＥにより主ピークから良好に分離されなかったことを示唆する。
（２）ＰＡＣＡＰ  ６６の酸性化および凍結乾燥
ＨＣｌ、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）およびＨ３ＰＯ４を包含する数種の酸溶液を０．１％で調製しそして２〜８℃に冷却した。その後、冷酸溶液を１：１０のＰＡＣＡＰ  ６６：酸のモル比でＰＡＣＡＰ  ６６と混合した。混合した後に、予冷した凍結乾燥機の内部に冷ＰＡＣＡＰ  ６６溶液を即座に入れかつ凍結乾燥した。凍結乾燥された物質は、凍結乾燥ペプチドから付加的な水分を吸収させるためにＰ２Ｏ５を含有するデシケーター中で最低１日間さらに平衡化させた。酸性化かつ乾燥された物質をその後２ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解し、そして上の節に記述されたとおり安定性を実施した。
【００１４】
図３はＤＭＳＯ中の酸性化かつ凍結乾燥されたＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。対照サンプル中では４０℃で２週間の貯蔵後に未処理のＰＡＣＡＰ  ６６の５０％以上が分解された一方、より低い分解の割合すなわち１０％未満が酸性化かつ凍結乾燥されたＰＡＣＡＰ  ６６を含有するサンプルについて観察された。これらの酸による相対的安定化効果は、見かけの減少する酸性度の順序でＨＣｌ＞ＴＦＡ＞Ｈ３ＰＯ４であった。２週間の期間の終了時のＨＣｌで酸性化されたＰＡＣＡＰ  ６６の回収率はＲＰ−ＨＰＬＣにより９７％であった。しかしながら、サンプル中の対応するＰＡＣＡＰ  ６６の純度がＲＰ−ＨＰＬＣにより８９％にすぎなかったため、該回収率はわずかに高く見積もられた可能性がある。
【００１５】
われわれはペプチドが水性溶液中で酸性条件下に容易に加水分解され得ることを理解している。ＰＡＣＡＰ様ペプチドセクレチンはｐＨ４の水性溶液中で容易に分解され得る。ＰＡＣＡＰ  ６６の酸性化において、酸性化されたＰＡＣＡＰ  ６６溶液のｐＨはＴＦＡの添加後に２．２であることが測定された。このｐＨでＰＡＣＡＰ  ６６は迅速に加水分解されるはずである。しかしながら、酸性化過程を低温で実施し、次いで即座に凍結乾燥し、そしてＰＡＣＡＰ  ６６の検出可能な加水分解は観察されなかった。
【００１６】
ＤＭＳＯ中でのＰＡＣＡＰ  ６６の分解機構の検討において、われわれは本ペプチドの主要分解経路が二量体化であったことを見出した。該ペプチドの二量体は、該ペプチド中のアスパラギン残基上の環状イミド中間体を介して形成された。Ｓｅｖｅｒｓら、“Ｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ  ｏｆ  Ａｓｐａｒａｇｉｎｅ  ａｎｄ  Ａｓｐａｒｔｉｃ  Ａｃｉｄ  ｏｆ  ａ  Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｉｎ  ＤＭＳＯ”、ＷＣＢＰ、７ｔｈ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｆａｃｅ  ｏｆ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、カリフォルニア州サンフランシスコ（２００３）。従って該ペプチドの酸性化はＤＭＳＯ中でこれらのアミノ酸残基による二量体化を阻害した。（上のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化の機構もまた参照されたい）。
（３）他の有機溶媒中、有機溶媒懸濁液中および凍結乾燥状態での高濃度のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化
金属塩が有機溶媒中で高ペプチド濃度のＰＡＣＡＰ  ６６を安定化することができるかどうかを試験するためには、固定した比の金属およびペプチドが安定化に必要とされると想定すると、高濃度の金属塩が必要とされるとみられる。しかしながら金属塩は有機溶媒中で制限された溶解性を有する。従って、上記ＰＡＣＡＰ  ６６の酸性化および凍結乾燥で記述されたのと類似の製造方法を高濃度のペプチド−金属混合物のサンプル調製に採用した。簡潔に述べると、金属塩およびペプチドを最初に水性溶液に固定されたモル比で溶解した。その後、該溶液を固定容量で３ｍＬガラスバイアル中に等分しかつ凍結乾燥した。安定性サンプルは、固定量の有機溶媒をバイアル中に添加することにより調製した。その後サンプルバイアルに栓をし、封止しかつ４０℃でインキュベートした。安定性サンプルは最初に、ＲＰ−ＨＰＬＣもしくはＣＥによる分析前に理にかなった濃度に希釈した。同様に、凍結乾燥混合物を含有するサンプルバイアル中で適正量の有機溶媒を混合することによりペプチド懸濁液を調製し、そして４０℃でインキュベートした。固体のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性は、凍結乾燥混合物を含有するサンプルバイアルを４０℃でインキュベートすることにより直接評価した。
【００１７】
図４はＤＭＳＯ中４０℃での３００ｍｇ／ｍＬのＰＡＣＡＰ  ６６溶液の安定性を示す。サンプル中のＰＡＣＡＰ  ６６をＺｎＣｌ２の非存在および存在下で酸性化した。該ペプチドのおよそ７０％が２３週間の貯蔵後に対照サンプル中で分解された一方、およそ２０％がＺｎＣｌ２の存在もしくは非存在下の酸性化サンプル中で分解された。
【００１８】
図５は１−メチル−２−ピロリニドン中４０℃での２０ｍｇ／ｍＬのＰＡＣＡＰ  ６６溶液の安定性を示す。サンプル中のＰＡＣＡＰ  ６６をＺｎＣｌ２の非存在および存在下で酸性化した。該ペプチドは９週間の貯蔵後に対照サンプル中で非検出可能レベルまで分解された一方、該ペプチドの８０％以上が酸性化サンプル中に留まった。ＺｎＣｌ２の添加はより高い程度までＰＡＣＡＰ  ６６を安定化すると思われる。
【００１９】
図６は２−プロパノール中４０℃での２０ｍｇ／ｍＬのＰＡＣＡＰ  ６６懸濁液の安定性を示す。ＺｎＣｌ２の添加はＰＡＣＡＰ  ６６の貯蔵安定性を有意に向上させた。
【００２０】
図７は４０℃での凍結乾燥状態のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。酸性化は貯蔵の間該ペプチドを有意に安定化した。ＺｎＣｌ２の添加はより高い程度まで該ペプチドを安定化すると思われる。
ＰＡＣＡＰ  ６６の安定化の機構
（１）金属イオン誘発性のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化
該結果は、ＺｎＣｌ２がＤＭＳＯ中でＰＡＣＡＰ  ６６を安定化した一方、ＭｇＣｌ２およびＣａＣｌ２はしなかったことを示す。これは、金属イオンが単純にイオン性相互作用によりＰＡＣＡＰ  ６６を安定化しないことを示唆する。従って、われわれは、亜鉛およびＰＡＣＡＰ  ６６がＮ末端ヒスチジン残基を介してキレート錯体を形成してそれがそれ自身の分解を妨げると提案した。われわれの仮説を証明するため、われわれは、１ｍＭ  ＺｎＣｌ２の非存在および存在下のＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６のＮＭＲスペクトルを測定した（図８）。１ｍＭ  ＺｎＣｌ２の存在下のスペクトルの最も劇的な差異は、幅広いアミドの背景中のヒスチジンＨ２およびＨ４のシグナルの消失である。これは末端ヒスチジン残基とのＺｎＣｌ２の相互作用をはっきりと示唆する。他方、Ｄ２Ｏ中のＰＡＣＡＰ  ６６のスペクトルはＺｎＣｌ２の非存在もしくは存在下で本質的に同一である（データは示されない）。従って、これらの結果は、ペプチドとＺｎの相互作用が水性溶液中でなく有機溶媒中でのみ存在することを示し、そして、１０ｍＭの酸化亜鉛が水性溶液中でＰＡＣＡＰ  ６６を安定化しなかった理由を説明する（図１）。
【００２１】
Ｚｎ誘発性のペプチドの安定化の機構についての上の結論はいくつかの参考文献からのデータにより支持される。第一に、金属−ペプチド錯体の形成がＰＡＣＡＰ関連ペプチドで観察された。１つの研究は、数種のＰＡＣＡＰフラグメントが水性溶液中で銅（ＩＩ）と錯体を形成し得たことを示した。Ｋｏｗａｌｉｋ−Ｊａｎｋｏｗｓｋａら、Ｊ．Ｉｎｏｒｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、７６：６３−７０（１９９９）。これらのフラグメントの１つはＨＳＤＧＩ−ＮＨ２であり、そして最初の３アミノ酸（ＨＳＤ）がＰＡＣＡＰ  ６６のＮ末端配列に対応する。本ＰＡＣＡＰフラグメントは、ｐＨ５ないし８の間で二量体錯体（Ｃｕ２−Ｌ２）、およびｐＨ８より上で単量体錯体（Ｃｕ−Ｌ）を１：１の結合比で形成する。第三のアスパラギン酸残基が該錯体を劇的に安定化したことが示された。これらの銅錯体が同定されたとは言え、該錯体がこれらのペプチドフラグメントの安定性を高めるかもしくは損なうかどうかは言及されなかった。第二に、亜鉛はペプチド中のヒスチジン残基と錯体を形成して変えられた安定性挙動をもたらすことが可能である。Ｚｎ２＋はアミロイドβ−ペプチド中のＨｉｓ１３およびＨｉｓ１４と特異的に相互作用することが示されており、そして、該相互作用は該ペプチドの二次構造およびその凝集挙動を変えた。Ｙａｎｇら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２６７：６６９２−９８（２０００）。より最近の研究は、１：１および１：２の比（ペプチド／亜鉛）のアミロイドβ−ペプチド（１−１６）へのＺｎ２＋の結合が二次構造の変化（より秩序正しい）を引き起こしてより安定な錯体に至ることを示した。Ｋｏｚｉｎら、上記。再度、該ペプチドの化学的安定性は予測し得なかった。第三に、ＰＡＣＡＰ  ６６の第二の残基はセリンであり、これは亜鉛−ペプチド錯体の形成に参画することが示されており（Ｃｕｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３：５５７４−８０（１９８８））、そして最後に、亜鉛−ペプチド錯体の形成は該ペプチドを剛直性にしてその安定性に影響を及ぼしうる。Ｈａｒａｎら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔ．Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．、２０：３８０−８６（１９８２）。
（２）酸性化誘発性のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化
われわれが前に論考したとおり、ＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６の主要分解経路は環状イミド中間体の形成を介する二量体化である。環状イミドの形成は、アスパラギン側鎖のカルボニル基へのバックボーン窒素の分子内求核攻撃で開始することが公知である。環状イミドの形成は、塩基性条件がバックボーン窒素の脱プロトン化に有利でありまた脱プロトン化された窒素がより高い求核性を有するため、一般に塩基性条件下で加速される。逆に、ペプチドの酸性化はバックボーン窒素のプロトン化に有利でありかつ該反応を遅らせるとみられる。同時に酸性化は一般にペプチド加水分解を助長する。しかしながら、該ペプチドは非水性溶液、懸濁液中もしくは乾燥状態にあったため、これはＰＡＣＡＰ  ６６の場合には当てはまらなかった。
現在の知見の意味
【００２２】
われわれは、初めて、有機溶媒中、有機溶媒に基づく懸濁液中もしくは乾燥状態のペプチドを安定化させるための製剤の賦形剤としてＺｎＣｌ２を使用し得ることを示した。ＰＡＣＡＰ  ６６はその配列分析に基づけばペプチドホルモンの１スーパーファミリーのメンバーであるため、ＺｎＣｌ２がそれらの構造類似性によりＤＭＳＯ中でこのスーパーファミリーのいかなるメンバーも安定化するとみられることが予期される。これらのメンバーのペプチドは、血管作用性腸ペプチド（ＶＩＰ）、グルカゴン、グルカゴン様ペプチド、成長ホルモン放出因子（ＣＲＦ）、セクレチン、ヘモデルミンおよびエキセンジン−４を包含する。該安定化機構のわれわれの分析に基づけば、ＺｎＣｌ２は、副腎皮質刺激ホルモン、アンジオテンシン、レニン基質テトラデカペプチド、ナトリウム利尿ペプチド、消化管ペプチド、黄体化ホルモン放出ホルモン、メラノサイト刺激ホルモンおよびニューロテンシン、ならびに副甲状腺ホルモンのような最低１個のヒスチジン残基を含有するＤＭＳＯ中に溶解したいかなるペプチドもまた安定化することができる。
【００２３】
亜鉛は水性溶液もしくは懸濁液中の六量体の形態のおよびインスリンの貯蔵の間のインスリンのコンホメーションの完全性において明瞭な役割を演じているため、亜鉛が、有機溶媒中、溶媒混合物中、有機溶媒に基づく懸濁液中もしくは乾燥状態のインスリンおよび他の構造的に異なるポリペプチドを安定化することができることがありそうである。
【００２４】
数種のＰＡＣＡＰフラグメントが水性溶液中で銅（ＩＩ）と錯体を形成し得たことが観察されている。これは、亜鉛に加えて他の遷移金属イオンが有機溶媒中、溶媒混合物中、有機溶媒に基づく懸濁液中もしくは乾燥状態のＰＡＣＡＰ  ６６を安定化しうることを示唆する。これらの遷移金属イオンは、限定されるものでないが銅、鉄、マンガン、ニッケルおよびコバルトを挙げることができる。これらの金属による相互作用および安定化はまた、上で論考されたとおり他の類似のもしくは異なるペプチドにも応用可能であるかもしれない。
【００２５】
本出願において、われわれは、金属イオンによる２種の異なる有機溶媒中の多様な濃度のＰＡＣＡＰ  ６６の安定化を示した。ＰＡＣＡＰ  ６６ならびに類似のもしくは異なるペプチドの亜鉛もしくは他の金属誘発性の安定化が、プロピレングリコール、グリセロールアセテート、モノチオグリセロール、酢酸、ジエタノールアミン、ベンジルアルコール、乳酸エチル、グリセロールホルマル、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール４００、イソプロピルミリステートおよび他のアルコールを包含する他の有機溶媒もしくは溶媒の混合物中でもまた操作可能であることが非常にありそうである。
【００２６】
本出願において、われわれはまた、有機溶媒中、有機溶媒に基づく懸濁液中もしくは乾燥状態の酸性化もしくは酸性化および金属イオンの使用の組合せによるＰＡＣＡＰ  ６６の安定化も立証する。ＰＡＣＡＰ  ６６もしくは他のペプチド（前述の）が、同一の戦略により多様な有機溶媒（前述の）中、多様な溶媒の混合物中、他の有機溶媒の懸濁液中および乾燥状態で安定化されることが考えられる。乾燥ペプチドは、いずれかの他の製剤の賦形剤、送達ベヒクルもしくは他の必要な成分との混合物であってよい。酸性化がＰＡＣＡＰ  ６６中のアスパラギン残基を安定化したため、アスパラギン残基を含有する他のペプチドが有機溶媒中、有機溶媒の混合物中、有機溶媒に基づく懸濁液中もしくは乾燥状態における酸性化により安定化されることが考えられる。
使用方法
本発明の製剤は、安定化されるペプチドの性質および役割に依存して多様な疾患および状態を治療するのに使用してよい。ＰＡＣＡＰ  ６６の安定化された製剤は、とりわけ糖尿病および関連状態の治療で使用してよい。ＰＡＣＡＰ  ６６の製剤は単独でもしくは他の既知の糖尿病治療と組合せで使用してよい。さらに、ＰＡＣＡＰ  ６６の製剤は、肥満、脂質障害および／もしくは高血圧のような、糖尿病および関連障害とともにしばしば発生する疾患もしくは状態を治療するための他の療法と組合せで使用してよい。
【００２７】
本発明の組合せ剤および製剤を用いる糖尿病の状態もしくは障害を予防する、治療する、それらからの緩和を与える、もしくは軽減する、または糖尿病の状態に対し別の方法で保護するかもしくは治療する投薬量レジメンは多様な因子に従って選択される。これらの因子は、限定されるものでないが被験体の型、齢、重量、性別、食餌および医学的状態、疾患の重症度、投与経路、使用される特定の阻害剤の活性、有効性、薬物動態および毒物学プロフィルのような薬理学的考慮、薬物送達系を利用するかどうか、ならびに該製剤が他の有効成分とともに投与されるかどうかを挙げることができる。従って、実際に使用される投薬量レジメンは広範に変動してよく、そして従って本明細書に示される好ましい投薬量レジメンから逸脱してもよい。
【００２８】
各薬物の総１日用量は単一用量でもしくは複数の下位用量で患者に投与し得る。典型的には、下位用量は１日あたり２ないし６回、好ましくは１日あたり２ないし４回、およびなおより好ましくは１日あたり２ないし３回投与し得る。用量は、糖尿病の状態を制する所望の管理を得るのに十分に有効な即時放出形態もしくは持続性の形態にあることができる。
【００２９】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤は２型糖尿病を包含する糖尿病のような疾患を治療するのに使用してよい。こうした方法はまた糖尿病の発症および糖尿病の合併症を遅らせるかもしれない。本発明の製剤を使用して治療もしくは予防されるかもしれない他の疾患および状態は：若年性成人発症型糖尿病（ＭＯＤＹ）（Ｈｅｒｍａｎら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４３：４０（１９９４））、成人性潜在型糖尿病（ＬＡＤＡ）（Ｚｉｍｍｅｔら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｄ．１１：２９９（１９９４））、耐糖能異常（ＩＧＴ）（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２２（Ｓｕｐｐ．１）Ｓ５（１９９９））、空腹時血糖異常（ＩＦＧ）（Ｃｈａｒｌｅｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４０：７９６（１９９１））、妊娠糖尿病（Ｍｅｔｚｇｅｒ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、４０：１９７（１９９１）および代謝性シンドロームＸを包含する。
【００３０】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤は糖尿病の二次的原因を治療するのにもまた使用してよい（Ｅｘｐｅｒｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｌｌｉｔｕｓ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２２  （Ｓｕｐｐ．１）、Ｓ５（１９９９））。こうした二次的原因は、糖質コルチコイド過剰、成長ホルモン過剰、褐色細胞腫および薬物誘発性糖尿病を包含する。糖尿病を誘発するかもしれない薬物は、限定されるものでないがピリミニル、ニコチン酸、糖質コルチコイド、フェニトイン、甲状腺ホルモン、β−アドレナリン作動薬、α−インターフェロンおよびＨＩＶ感染症を治療するのに使用される薬物を挙げることができる。
【００３１】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤は、単独でまたは糖尿病および関連する障害の治療の当業者に既知の付加的な療法および／もしくは化合物と組合せで使用してよい。あるいは、本明細書に記述される製剤は部分的にもしくは完全に併用療法で使用してよい。
【００３２】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤はまた、ＰＰＡＲアゴニスト、スルホニル尿素薬、非スルホニル尿素分泌促進薬、α−グルコシダーゼ阻害剤、インスリン感作薬、インスリン分泌促進薬、肝のグルコース排出量を低下させる化合物、インスリンおよび抗肥満薬を包含する糖尿病の治療のための他の既知の療法と組合せでも投与してよい。こうした療法は、ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤の投与の前、同時にもしくは後に投与してよい。インスリンはインスリンの長および短時間作用型双方の形態および製剤を包含する。ＰＰＡＲアゴニストはＰＰＡＲサブユニットもしくはそれらの組合せのいずれかのアゴニストを包含してよい。例えばＰＰＡＲアゴニストはＰＰＡＲ−α、ＰＰＡＲ−γ、ＰＰＡＲ−δ、またはＰＰＡＲのサブユニットの２もしくは３種のいかなる組合せのアゴニストも包含してよい。ＰＰＡＲアゴニストは例えばロシグリタゾンおよびピオグリタゾンを包含する。スルホニル尿素薬は例えばグリブリド、グリメピリド、クロルプロパミドおよびグリピジドを包含する。ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤とともに投与される場合に糖尿病の治療において有用であるかもしれないα−グルコシダーゼ阻害剤はアカルボース、ミグリトールおよびボグリボースを包含する。ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤とともに投与される場合に糖尿病の治療において有用であるかもしれないインスリン感作薬はチアゾリジリンジオンおよび非チアゾリジリンジオンを包含する。ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤とともに投与される場合に糖尿病の治療において有用であるかもしれない肝のグルコース排出量を低下させる化合物は、グルコファージ（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）およびグルコファージ（Ｇｌｕｃｏｐｈａｇｅ）ＸＲのようなメトホルミンを包含する。ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤とともに投与される場合に糖尿病の治療において有用であるかもしれないインスリン分泌促進薬はスルホニル尿素および非スルホニル尿素薬、すなわちＧＬＰ−１、ＧＩＰ、ＰＡＣ／ＶＰＡＣ受容体アゴニスト、セクレチン、ナテグリニド、メグリチニド、レパグリニド、グリベンクラミド、グリメピリド、クロルプロパミド、グリピジドを包含する。ＧＬＰ−１は例えば脂肪酸誘導体化ＧＬＰ−１およびエキセンジンのような天然のＧＬＰ−１より長い半減期をもつＧＬＰ−１の誘導体を包含する。本発明の一態様において、ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤は、インスリン分泌促進薬に対する膵β細胞の感受性を増大させるためにインスリン分泌促進薬と組合せで使用する。
【００３３】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤はまた抗肥満薬と組合せで本発明の方法で使用してもよい。抗肥満薬はβ−３アゴニスト、ＣＢ−１アンタゴニスト、例えばシブトラミン（メリジア（Ｍｅｒｉｄｉａ））のような食欲抑制剤、および例えばオルリスタット（ゼニカル（Ｘｅｎｉｃａｌ））のようなリパーゼ阻害剤を包含する。
【００３４】
ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤はまた、糖尿病患者における脂質障害を治療するのに普遍的に使用される薬物と組合せで本発明の方法で使用してもよい。こうした薬物は、限定されるものでないがＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ニコチン酸、胆汁酸捕捉剤およびフィブリン酸誘導体を挙げることができる。ＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤はまた、例えばβ−遮断薬およびＡＣＥ阻害剤のような降圧薬と組合せで使用してもよい。  
【００３５】
こうした補助療法（ｃｏ−ｔｈｅｒａｐｙ）は２種もしくはそれ以上の薬物のいかなる組合せで投与してもよい（例えば、インスリン感作薬および抗肥満薬と組合せのＰＡＣＡＰ  ６６を含有する本発明の製剤）。こうした補助療法は製薬学的組成物の形態で投与してよい。
【００３６】
本発明はその技術思想もしくは不可欠の特徴から離れることなく他の特定の形態で例示してよい。前述の例は具体的説明としてのみ包含される。従って、本発明の範囲は付属として付けられる請求の範囲の範囲によってのみ制限される。
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】多様な金属イオンの存在下の４０℃での水性溶液中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。
【図２Ａ】ＲＰ−ＨＰＬＣにより分析されたところの多様な金属イオンの存在下の４０℃でのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。
【図２Ｂ】ＣＥにより分析されたところの多様な金属イオンの存在下の４０℃でのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。
【図３】ＤＭＳＯ中４０℃での酸性化された凍結乾燥されたＰＡＣＡＰ  ６６の安定性を示す。
【図４】４０℃でのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性に対するＨＣｌもしくはＨＣｌおよびＺｎＣｌ２の組合せの効果を示す。
【図５】４０℃での１−メチル−２−ピロリニドン中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性に対するＨＣｌもしくはＨＣｌおよびＺｎＣｌ２の組合せの効果を示す。
【図６】４０℃での２−プロパノール中のＰＡＣＡＰ  ６６の安定性に対するＺｎＣｌ２の効果を示す。
【図７】４０℃での凍結乾燥されたＰＡＣＡＰ  ６６の安定性に対するＨＣｌもしくはＨＣｌおよびＺｎＣｌ２の組合せの効果を示す。
【図８Ａ】ＺｎＣｌ２の非存在下でのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６のＮＭＲスペクトルを示す。
【図８Ｂ】ＺｎＣｌ２の存在下でのＤＭＳＯ中のＰＡＣＡＰ  ６６のＮＭＲスペクトルを示す。
【配列表】
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【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【国際調査報告】
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