(57)【要約】【課題】新規なＡ−ｎ−ステロイドと、それを含み、同様な活性または相乗活性を有する別の有効成分を含むことができる、賦形剤またはビヒクルと混合した医薬組成物と、その骨芽細胞のカルシウム固定促進剤としての使用。【解決手段】  一般式Ｉを有する新規なＡ−ｎ−ステロイド：2006528652.tif 000006（Ｒは水素、１〜７個の炭素原子を有する低級アルキル基、３〜７個の炭素原子を有する低級シクロアルキル基、５〜１０個の炭素原子を有するアリール基、アルキル基が１〜６個の炭素原子を有するアリールアルキル基または脂肪族カルボン酸、シクロアルキルカルボン酸またはアリールカルボン酸から得られるアシル基）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）を有する新規なステロイド：
【化１】
2006528652.tif 000005
（ここで、Ｒは水素、１〜７個の炭素原子を有する低級アルキル基、３〜７個の炭素原子を有する低級シクロアルキル基、５〜１０個の炭素原子を有するアリール基、アルキル基が１〜６個の炭素原子を有するアリールアルキル基または脂肪族カルボン酸、シクロアルキルカルボン酸またはアリールカルボン酸から得られるアシル基である）
【請求項２】
請求項１に記載の新規なステロイドの互変異性型。
【請求項３】
Ｒが水素である請求項１に記載の化合物の金属錯体。
【請求項４】
ケトン官能基がケタール、チオケタール、ヘミチオケタール、オキシムまたは光学活性またはラセミ体の（ジカルボキシアルキレン）ケタールの形でブロックされている請求項１に記載の一般式Ｉのステロイドのブロッキング化合物。
【請求項５】
２−オキソ３−ヒドロキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エンである請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
２−オキソ−３−アセトキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エンである請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
２−オキソ３−メトキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エンである請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒがアルキル、アラルキル、シクロアルキルまたはアリール基である請求項１〜７のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物の製造方法において、
ハロゲン化物、サルフェートまたはアルキル、シクロアルキル、アリールまたはアリールアルキルトシレートの不活性溶媒中で３−ヒドロキシ誘導体をジアゾアルカンと反応させることを特徴とする方法。
【請求項９】
Ｒが脂肪族カルボン酸、シクロアルキルカルボン酸、アリールカルボン酸またはアリールアルキルカルボン酸から得られるアシル基である請求項１〜８のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物の製造方法において、
アシル化触媒の存在下、極性非プロトン溶媒中で、Ｒが水素である化合物をアシル化剤と反応させることを特徴とする方法。
【請求項１０】
有効成分として少なくとも一種の一般式（Ｉ）の化合物を含み、薬学上許容される無毒な不活性賦形剤またはビヒクルと混合または組み合わされた医薬組成物。
【請求項１１】
経口、非経口、直腸または局所投与に適した賦形剤またはビヒクルである請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
単位投与量当たりの一般式（Ｉ）の化合物の量が５０ｎｇ〜２０ｍｃｇである請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
単位投与量当たりの一般式（Ｉ）の化合物の量が５０ｎｇ〜５００ｎｇである請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
類似または相乗な作用する別の活性化合物をさらに含む請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は化学の分野、特に有機化学の分野に関するものである。
本発明はＡ−ｎ−ステロイド類（Ａ−nor Steroides）に属する半合成の新規ステロイドを対象とする。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
本発明の対象は下記一般式（Ｉ）を有する新規ステロイドにある：
【化１】
2006528652.tif 000002
【０００３】
（ここで、Ｒは水素、１〜７個の炭素原子を有する低級アルキル基、３〜７個の炭素原子を有する低級シクロアルキル基、５〜１０個の炭素原子を有するアリール基、アルキル基が１〜６個の炭素原子を有するアリールアルキル基、または、脂肪族カルボン酸、シクロアルキルカルボン酸またはアリールカルボン酸から得られるアシル基である）
【０００４】
その化学名は２−オキソ３−ＯＲ  Ａ−ｎ−２５エチリデン  コレスト３−エンである。
【０００５】
この化合物はケト−エノール構造によって錯体、例えば、鉄、銅または亜鉛との錯体が形成できる。
Ｒが水素である式（Ｉ）の化合物は媒体およびｐＨ値に応じたケト−エノール型の互変異性型の一つの形で存在できる。ケトン型はそれをほぼ完全にエノール化することでケトン／エノール混合物か完全にエノール化されたエノール＋ケトン混合物かのいずれかを得ることができる。
【０００６】
アルカリ媒体または極性溶媒の使用はエノール化に好ましいファクターであり、分子の完全なエノール化によって純粋かつ安定な２−ケト３−エノール化合物が得られる。
一般式（Ｉ）の化合物の中では特に下記化合物が好ましい：
（１）２−オキソ３−ヒドロキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エン（Ｒ＝Ｈ）
（２）２−オキソ３−アセトキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エン（Ｒ＝ＣＨ3ＣＯ）
（３）２−オキソ３−メトキシ２５−エチリデンＡ−ｎ−コレスト−３−エン（Ｒ＝ＣＨ3）
【０００７】
さらに、酸性媒体中でのジヒドロピランの反応でテトラヒドロピラニルエーテルにすることができ、ジメチルホルムアミドの存在下での塩化ベンジルまたは塩化ニトロベンジルの反応でベンジル型エーテルにすることもできる。
また、種々のカルボン酸エステル（例えば、プロピオン酸、吉草酸、安息香酸、ナフトエ酸、ナフタレン酸、コハク酸、マロン酸、ニコチン酸、グルクロン酸またはラクトビオン酸のエステル等）を製造することもできる。
【０００８】
一般式（Ｉ）の化合物はフコステロール（fucosterol）から半合成によって製造できる。すなわち、フコステロールを酸化してコレステン−５  ３−オンにした後、ＤＤＱによる酸化でコレスト−５−エン−２，３−ジオンにし、アルカリ媒体中で転位させて２−ケト３−ヒドロキシＡ−ｎ−コレスト−３−エンにすることができる。
３−水酸化化合物から始まるエーテルの製造はイソプロピルエーテルまたはテトラヒドロフランのような不活性溶媒中でジアゾアルカンを用いるか、塩基性媒体中でアルキル化剤を用いて行われる。
【０００９】
アルキル化剤はハロゲン化物、硫酸塩、アルキルトシレート、シクロアルキルハロゲン化物、アリールアルキルハロゲン化物またはアリールハロゲン化物が好ましい。
反応はピリジン、ルチジン、コリジン、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミドの存在下または４−ジメチルアミノピリジンの存在下で行う。
一般式（Ｉ）の化合物のエステルは３−水酸化化合物に４−ジメチルアミノピリジンまたは４−ヒドロキシベンゾトリアゾールのようなアシル化用触媒の存在下、極性非プロトン溶媒中で、有機カルボン酸、酸ハロゲン化物または混合酸無水物の官能性誘導体のようなアシル化剤を作用させて調製できる。
【００１０】
式（Ｉ）の化合物の構造はＮＭＲスペクトルで確認でき、特に、高分解能機器（５００ＭＨｚ）（ＨＭＢＣ、ＮＯＥ、ＴＯＣＳＹ、ＮＭＲ−ＬＣ）でプロトン［1Ｈ］ＮＭＲ、炭素13ＣＮＭＲのＮＭＲスペクトルを求めて確認できる。
プロトン［1Ｈ］ＮＭＲを用いた追加の分析で、ＣＤ3ＯＤ中で低温に維持した化合物は分解しないことが示される。
【００１１】
Ｒが水素である一般式（Ｉ）の化合物は鉄、ニッケル、銅、亜鉛、マンガンまたはクロムようなＩＩ価、ＩＩＩ価またはＩＶ価の金属との金属錯体を形成できる。これらの錯体はその物理分析で式（Ｉ）の化合物の同定、精製または分離のための手段として用いることができる。
式（Ｉ）の化合物から遊離ケトン官能基の誘導体、例えばケタール、チオケタール、ヘミチオケタール、オキシム、ｏ−カルボキシメチルオキシム、あるいは、光学活性またはラセミのジカルボキシアルキレンケタールを作ることもできる。
【００１２】
一般式Ｉの化合物は７つの不斉中心を有し、従って、互いに異なる空間構造で存在することができる。従って、Ｂ環とＣ環との結合は合成条件に応じて自然配置の９β−８αか、その正反対の配置９α−８βをとることができる。
側鎖の２０位にメチル化合物のある配置は基本的にβである。この配向は必要に応じて反転させることができる。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は２２０ｎｍと２４０ｎｍに強い吸光度を示す紫外スペクトルの性質によって定義することもできる。酸を添加しても紫外吸光のピークは変わらない。炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、水酸化リチウムのようなアルカリ化合物は２４０ｎｍから２５５ｎｍへのシフトを引き起こす。
本発明化合物は別の分析法、例えば円二色性、乾燥状態またはＮｕｊｏｌ中へ分散させた状態での赤外スペクトル、薄層クロマトグラフィ、高速液体クロマトグラフィーあるいはエタノール中での旋光能を利用してさらに特徴付けることができる。
【００１４】
式（Ｉ）の化合物は商品としてはマルタジオロン（Maltadiolone）およびそのエステルとよばれている。下記の基本分子（Ｒ＝Ｈ）がマルタジオロンとよばれる。
【化２】
2006528652.tif 000003
【００１５】
マルタン（maltane）骨格は下記である：
【化３】
2006528652.tif 000004
【００１６】
一般式（Ｉ）の化合物は重要な生物学的特性を有し、医薬の有効成分として利用される。
本発明の物質は硫酸のような腐食剤の存在下でも皮膚のデスモソーム（desmosomiales）プロテインおよびサイトケラチン(cytokeratines)のような結合性分子の合成に影響する。
一般式（Ｉ）の化合物の顕著な特色は細胞外基質の修復特性にあり、コラーゲンの合成を助け、有害物質（例えばインターロイキン、主としてインターロイキンＩＬ−１）の存在下でもグリコサミノグリカンの合成を促進する。
【００１７】
例えば、１０ｎｇのマルタジオロンで処理した骨細胞（ＵＭＲ１０６またはＧ２９２株）の培養物は未処理の対照細胞と比較して固定カルシウム量が増加することがわかっている。
例えば、骨細胞（ＵＭＲ１０６またはＧ２９２株）の培養物を５μｇ（すなわち１ｍｌ当たり１ｎｇ）のインターロイキン−Ｉ（ＩＬ−１）で処理すると、細胞外基質内の結合カルシウムの原子分光測光分析から対照細胞では７００ｎｇ／ｍｌであることがわかる。この値はＩＬ−１の存在下で２５ｎｇ／ｍｌまで下がる。
【００１８】
同じ条件下で上記細胞を１０μｇのベラパミル（Verapamil）またはその他の任意のカルシウム阻害剤、例えばシンコニン(Cinchonine)またはジルチアゼム(Diltiazem)で処理すると、骨芽細胞の細胞外基質内の固定カルシウム量はインターロイキンで処理した細胞の場合と等しいことが確認されている。
同じ条件下で１μｇのＩＬ−１と１０μｇの本発明マルタジオロンとの両方で処理した細胞はカルシウム阻害剤で処理していない細胞の場合に等しいカルシウム固定活性度を回復する。
上記と同じ条件下で細胞外基質でのカルシウム固定回復活性度は１０ｎｇ／ｍｌから検出できることが確認されている。
【００１９】
本発明はさらに、Ｒが上記の意味を有する少なくとも一種の一般式（Ｉ）の化合物を有効成分として含み且つ経口、非経口、経直腸または局所投与に適した薬学上許容される無毒な不活性賦形剤またはビヒクルと混和または混合した医薬組成物にも関するものである。
経消化系投与では一般式（Ｉ）の化合物はコーティングされた（またはコーティングされていない）錠剤、糖衣錠、丸薬、着香または未着香の粉末、ゼラチン質の軟カプセルまたはカプセルの形にすることができる。
【００２０】
非経口投与では一般式（Ｉ）の化合物は注射剤、注射懸濁剤、注射分散剤、水中油または油中水乳剤の形にすることができる。特に適したビヒクルはイントラリピド（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）の名称で市販の中程度の鎖を有する脂肪酸の乳剤である。
本発明の医薬組成物は本発明と同様または相乗的なカルシウム調節作用を有する他の有効成分、例えばエストロゲン化合物、例えばエストラジオール（estradiol）、エストラジオールのエステルまたはエストラジオールのエーテル、例えばメストラノール(Mestranol)またはキンゲスタノール(Quingestanol)またはＳＥＲＭをさらに含むことができる。
【００２１】
一般式（Ｉ）の化合物は低用量で高レベルの活性を示し、毒性が弱い点で公知のものと異なっている。一般式（Ｉ）の化合物の通常の薬量は１０ｎｇ〜５０ｍｃｇ／ｍｌ、好ましくは５０ｎｇ〜５００ｎｇ／ｍｌである。毒性症状は５０ｍｃｇ／ｍｌ以上の高い用量でのみ現れ、むしろ、化合物の過活性が示される。
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明が下記実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２２】
実施例Ｉ
２−オキソ  ３−ヒドロキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンの錠剤：
有効成分                    １００μｇ
ラクトース                  １００ｇ
微結晶セルロース              ２５ｇ
ポリビニルピロリドンＫ３０      ５ｇ
ソルビトール                  １０ｇ
硫酸カルシウム                ２５ｇ
（１０００錠当たり）
【００２３】
実施例ＩＩ
２−オキソ  ３−ヒドロキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンの錠剤：
有効成分                      ２．２５ｍｇ
マンニトール                  ５ｇ
シュガーシロップ            １０ｇ
炭酸マグネシウム          ５００ｇ
タルク                      １５ｇ
粉末をＳＴＯＫＥＳ回転機で圧縮して７０ｍｇの錠剤を製造する。
【００２４】
実施例ＩＩＩ
２−オキソ  ３−メトキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンの錠剤：
有効成分                          ２５０μｇ
炭酸カルシウム                    ３００ｇ
微結晶セルロース                    ２０ｇ
ポリ（酸化エチレン）  ２０ｇ
（商品名Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ８８で市販）
コロイドシリカ                      １５ｇ
（１０００錠当たり）
【００２５】
実施例ＩＶ
２−オキソ  ３−アセトキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンの注射溶液：
２−オキソ  ３−メトキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト−３−エン  ５ｍｇ
イントラリピド（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）      ２５０ｍｌ
蒸留水                                      ５００ｍｌ
この溶液を２ｍｌのアンプルに入れる。膜で濾過し、１２０℃で１０分間滅菌する。
アンプルを先端が下を向いたリジッドケースに分配する。アンプルに真空充填し、拭き、乾燥させ、先端を無菌雰囲気下で密封する。
【００２６】
実施例Ｖ
２−オキソ−３−ヒドロキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンの鉄錯体の錠剤：
０．８２ｇの２−オキソ  ３−ヒドロキシ  ２５−エチリデン  Ａ−ｎ−コレスト  ３−エンを２５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶かす。得られた溶液を等量の水で希釈した後、直ちに硫酸鉄(ＩＩ)の５％希硫酸溶液１０ｍｌを添加する。混合物全体を激しく攪拌し、一晩放置する。
生成した沈殿物をフリットガラスのるつぼに分離し、水で数回洗浄した後、アセトンで２回続けて洗浄する。回収した１．０２ｇの鉄錯体は８０℃の換気オーブンで乾燥する。
一晩置いた後、濃褐色の結晶の形をした錯体を回収する。
０．１００ｇの鉄錯体と５００ｇのラクトースとを秤量し、慎重に均質化した後、４０ｇの微結晶セルロースと、２５ｇのコロイドシリカ（アエロジル、Ａｅｒｏｓｉｌ２００）と、最後に４ｇのステアリン酸マグネシウムとを添加する。均質化後、粉末を２００メッシュの篩に通す。得られた粉末を用いて単位投与量当たり４ｍｃｇの有効成分を含むゼラチン軟カプセルを製造する。
【国際調査報告】
2006528652.tif 000007
2006528652.tif 000008
2006528652.tif 000009
2006528652.tif 000010
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