(57)【要約】本発明は、水溶性ポリマーを薬物担体として用いるワートマニンの可溶性誘導体に関し、明細書中に記載のような構造を有する化合物を包含する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｐ−Ｘ−Ｄ
［式中、
Ｐは水溶性ポリマーであり；
Ｄはワートマニン誘導体であり；および
Ｘは、水溶性ポリマーとワートマニン誘導体との間の共有結合である］
を有する水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項２】
請求項１記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートおよび医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項３】
請求項１記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの有効量を哺乳動物に提供することを特徴とする、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害を治療または阻害する方法。
【請求項４】
水溶性薬物−ポリマーの有効量が１０〜１０００ｍｇ／ｋｇである請求項３記載の方法。
【請求項５】
水溶性薬物−ポリマーの有効量が０．５〜１０ｍｇ／ｋｇである請求項３記載の方法。
【請求項６】
治療または阻害がＰＩ３キナーゼまたはＴＯＲキナーゼの阻害からなる請求項３〜５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
病理学的状態が非小細胞肺癌、脳腫瘍、虚血性心臓病、再狭窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸障害、ＨＩＶおよび骨吸収である請求項３〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
有効量の提供が単独、または成長因子シグナル伝達、サイトカイン応答、および細胞周期制御を調節する他の薬剤と組み合わせて行われる請求項３〜７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
薬剤がインターフェロン−αまたはｐｅｇ化ラパマイシンである請求項８記載の方法。
【請求項１０】
薬剤が細胞毒である請求項８記載の方法。
【請求項１１】
式Ｉ
【化１】
2006524289.tif 000036
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ａ）
【化２】
2006524289.tif 000037
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項１２】
式Ｉ：
【化３】
2006524289.tif 000038
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化４】
2006524289.tif 000039
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項１３】
式ＩＩ
【化５】
2006524289.tif 000040
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化６】
2006524289.tif 000041
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキル、またはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項１４】
式ＩＩＩ：
【化７】
2006524289.tif 000042
［式中、ｎは１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項１５】
式ＩＶ：
【化８】
2006524289.tif 000043
［式中、ｎ＝１−１０００］
で示されるコンジュゲート。
【請求項１６】
ｎが２５０−４００である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項１７】
ｎが５０−１５０である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項１８】
ポリマーの分子量が約４００〜約８０，０００である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項１９】
ポリマーの分子量が約１０００〜約８０００である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項２０】
ポリマーの分子量が約４０００〜約６０００である請求項１１〜１５のいずれか１項記載の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート。
【請求項２１】
請求項１１〜２０のいずれか１項記載のコンジュゲートおよび医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２２】
請求項１１〜２０のいずれか１項記載のコンジュゲートの有効量を哺乳動物に提供することを特徴とする、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害を治療または阻害する方法。
【請求項２３】
コンジュゲートの有効量が１０〜１０００ｍｇ／ｋｇである請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
コンジュゲートの有効量が０．５〜１０ｍｇ／ｋｇである請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
治療または阻害がＰＩ３キナーゼまたはＴＯＲキナーゼの阻害からなる請求項２２〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
病理学的状態が非小細胞肺癌、脳腫瘍、虚血性心臓病、再狭窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸障害、ＨＩＶおよび骨吸収である請求項２２〜２５のいずれか１項記載の方法。
【請求項２７】
有効量の提供が単独、または成長因子シグナル伝達、サイトカイン応答、および細胞周期制御を調節する他の薬剤と組み合わせて行われる請求項２２〜２６のいずれか１項記載の方法。
【請求項２８】
薬剤がインターフェロン−αまたはｐｅｇ化ラパマイシンである請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
薬剤が細胞毒である請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
ａ．１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンに溶媒を加えて溶液を得；
ｂ．第３級アミンまたは重炭酸ナトリウムを該溶液に加え；
ｃ．ｍＰＥＧ−スルフヒドリル５０００を工程（ｂ）の溶液に加え；
ｄ．工程（ｃ）の溶液を３０分間攪拌し；
ｅ．エーテルを該攪拌溶液に加え；
ｆ．固体を収集し；次いで
ｇ．収集した固体をエーテルで洗浄して、ｐｅｇ化ワートマニン誘導体を得る
ことを特徴とする請求項１４記載のコンジュゲートの製造法。
【請求項３１】
式Ｖａ：
【化９】
2006524289.tif 000044
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または単一非反復性の式（Ｂ）
【化１０】
2006524289.tif 000045
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項３２】
式Ｖｂ：
【化１１】
2006524289.tif 000046
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ａ）
【化１２】
2006524289.tif 000047
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであるか；または式（Ｂ）
【化１３】
2006524289.tif 000048
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示されるコンジュゲート。
【請求項３３】
請求項１３記載のコンジュゲートにアミンを添加して所望の生産物を得ることを特徴とする請求項３１記載のコンジュゲートの製造法。
【請求項３４】
請求項１１または請求項１２記載のコンジュゲートにアミンを添加して所望の生産物を得ることを特徴とする請求項３２記載のコンジュゲートの製造法。
【請求項３５】
アミンがジエチルアミンからなる請求項３３または請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
式  Ｐ−ＸＨ
［式中、ＰおよびＸは、請求項１に記載のとおりである］
で示されるポリマーを式  ＤＸ
［式中、Ｘはハロゲンである］
で示される化合物と反応させて所望の生産物を得ることを特徴とする請求項１〜１０のいずれか１項記載のコンジュゲートの製造法。
【請求項３７】
式
【化１４】
2006524289.tif 000049
または式
【化１５】
2006524289.tif 000050
［式中：
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００であり；および
Ｘは、ハロゲンである］
で示される化合物を式
ＨＲ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒ１
または式
ＨＲ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒ２Ｈ
［式中、Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
ｎは、１−１０００であり、および
Ｒ１は、アルキル、あるいは式（Ａ）
【化１６】
2006524289.tif 000051
または式（Ｂ）
【化１７】
2006524289.tif 000052
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびｎは上記のとおりである）
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートである］
で示される化合物と反応させて所望の生産物を得ることを特徴とする請求項１１〜１４のいずれか１項記載のコンジュゲートの製造法。
【請求項３８】
ａ）１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンに溶媒を加えて溶液を得；
ｂ）第３級アミンを該溶液に加え；
ｃ）ｍＰＥＧ−スルフヒドリル５０００を工程（ｂ）の溶液に加え；
ｄ）工程（ｃ）の溶液を３０分間攪拌し；
ｅ）エーテルを該攪拌溶液に加え；
ｆ）固体を収集し；次いで
ｇ）収集した固体をエーテルで洗浄して、ｐｅｇ化ワートマニン誘導体を得る
ことを特徴とする請求項１５記載のコンジュゲートの製造法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の背景
ワートマニン（Wortmannin）は、シグナル変換経路内におけるホスファチジルイノシトール−３（ＯＨ）−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）およびＴＯＲキナーゼ機能の強力な触媒作用阻害剤であることが見出された真菌の代謝産物である（Norman, Bryan H.ら、(1996) 「ワートマニンおよび関連類似体によるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害剤の機構の研究（Studies on the Mechanism of the Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and Related Analogs）」 J. Med. Chem., 39, 1106-111 および Creemer, Lawrence C. (1996) 「新規ワートマニンエステル：ホスファチジルイノシトール３−キナーゼの強力な阻害剤の合成およびイン・ビトロ評価（Synthesis and in Vitro Evaluation of New Wortmannin Esters: Potent Inhibitors of Phosphatidylinositol 3-Kinase）」 J. Med. Chem, 39, 5021-5024）。
【０００２】
クラス−１ａ  ＰＩ３Ｋ（ＰＩ３Ｋという）は、ｐ８５調節サブユニットおよびｐ１１０触媒サブユニットからなるヘテロ二量体酵素である。成長因子受容体刺激に応答して、ＰＩ３Ｋは、細胞膜で脂質第２メッセンジャー  ホスファチジルイノシトール−３，４，５−トリホスフェート（ＰＩＰ３）の産生を触媒する。ＰＩＰ３は、次に、広範な下流の細胞基質の活性化に寄与する。ＰＩ３Ｋの下流にある最も重大なシグナル伝達メディエーターには、セリン／スレオニンキナーゼＡＫＴおよびラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）がある。ＡＫＴは、優勢な生存シグナルを与え、複数の細胞死／アポトーシス蛋白質および細胞周期因子の直接的なリン酸化を介して増殖を促進する。ｍＴＯＲは、細胞蛋白質翻訳の調節による細胞成長の中心的レギュレーターである。かくして、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＴＯＲ経路は、細胞増殖、成長、生存および脈管形成に重要である。ヒトの癌において、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ＴＯＲ経路における脱制御は、全ての主要なヒト腫瘍において起こる最も頻度の高い事象の１つである。腫瘍抑制遺伝子ＰＴＥＮ、ＰＩＰ３ホスファターゼ、およびＰＩ３Ｋシグナル伝達の負のレギュレーターの遺伝学的喪失は、肺癌、前立腺癌、乳癌、脳腫瘍、腎臓癌、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌およびリンパ性癌を包含する全てのヒト癌の３０−５０％において起こると推定される。さらに、ＰＩ３Ｋ発現の構成的増加は、肺、卵巣および膵臓癌に関係している。最後に、Ｈｅｒ−２、ＥＧＦＲおよびＲａｓなどの細胞表面腫瘍形成遺伝子は、胸部、前立腺、結腸および肺腫瘍における構成的ＰＩ３Ｋシグナル伝達を引き起こす。これらの臨床データは、新規な抗癌剤としてＰＩ３Ｋ阻害剤を探求するための強力な理論的根拠を提供する（Cantley, L. および Neel, B. (1999) 「腫瘍抑制への新規な洞察：ＰＴＥＮは、ホスホイノシチド３−キナーゼ／ＡＫＴ経路を制止することによって、腫瘍形成を抑制する（New Insights into Tumor Suppression: PTEN Suppresses Tumor Formation by Restraining the Phosphoinositide 3-kinase/AKT pathway）」 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96, 4240-4245）。ＰＩ３キナーゼおよびＴＯＲキナーゼは、癌（Vivanco, I. および Sawyer, C. (2002) 「ヒト癌におけるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ−ＡＫＴ経路（The phosphatidylinositol 3-kinase-AKT Pathway in Human Cancer）」 Nature Reviews Cancer, 2, 489-501）、虚血性心臓病および再狭窄（Shiojima, I. および Walsh, K. (2002) 「脈管ホメオスタシスおよび脈管形成におけるＡｋｔシグナル伝達の役割（Role of Akt Signaling in Vascular Homeostasis and Angiogenesis）」 Circulation Research, 90, 1243-1250 および Ruygrok P.ら、(2003) 「心血管系内科におけるラパマイシン（Rapamycin in Cardiovascular Medicine）」 Intern Med J., 33, 103-109）、炎症（Wymann, M.ら、(2003) 「ホスホイノシチド３−キナーゼガンマ：炎症およびアレルギーにおける重要な調節因子（Phosphoinostide 3-kinase gamma: A Key Modulator in Inflammation and Allergy）」 Biochem Soc Trans, 31, 275-280 および Kwak, Yong-Geunら、(２００３年４月) 「気管支喘息における気道過敏反応性および炎症に対するＰＴＥＮの関与（Involvement of PTEN in airway hyperresponsiveness and inflammation in bronchial asthma）」 The Journal of Clinical Investigation, 111:7, 1083-1092）、血小板凝集（Watanabe, N.ら、 (２００３年３月) 「ＧＰ ＶＩ刺激に対する応答阻���によって特徴付けられるホスホイノシチド３−キナーゼｐ８５（アルファ）無効血小板の機能的表現型（Functional Phenotype of Phosphoinositide 3-kinase p85 (alpha) Null Platelets Characterized by an Impaired Response to GP VI Stimulation）」 Blood (epub)）、硬化症（Kenerson, H.ら、(2002) 「結節硬化症複合型腎腫瘍の病因における活性化されたラパマイシンの哺乳動物標的（Activated Mammalian Target of Rapamycin in the Pathogenesis of Tuberous Sclerosis Complex Renal Tumors）」 Cancer Res., 62, 5645-5650）、呼吸障害（Kitaura, J.ら、(2000)「マスト細胞におけるＡＫＴ−依存性サイトカイン産生（AKT-dependent Cytokine Production in Mast Cells）」 J. Exp. Med., 192, 729-739 および Stewart A. (2001) 「気管壁リモデリングおよび過敏反応性：イン・ビトロおよびイン・ビボでのモデリングリモデリング（Airway Wall Remodeling and Hyper-responsiveness: Modeling Remodeling in vitro and in vivo）」 Pulm Pharmacol Ther, 14, 255-265）、ＨＩＶ（Francois, F. および Klotman, M.「ホスファチジルイノシトール３−キナーゼは、初代ＣＤ４（＋）Ｔリンパ球およびマクロファージへのウイルス侵入後のヒト免疫不全ウイルス１型複製を調節する（Phosphatidylinositol 3-kinase Regulates Human Immunodeficiency Virus Type-1 Replication Following Viral Entry in Primary CD4(+) T Lymphocytes and Macrophages）」 J. Virol., 77, 2539-2549）、および骨吸収（Pilkington, M.ら、(1998) 「ワートマニンは、イン・ビトロでラット破骨細胞の拡散および走化性を阻害する（Wortmannin Inhibits Spreading and Chemotaxis of Rat Osteoclasts in vitro）」 J Bone Miner Res, 13, 688-694）において活性であることが示されている。
【０００３】
ＰＩ３−キナーゼは、８５ｋＤａ調節サブユニットおよび１１０ｋＤａ触媒サブユニットの堅く結合したヘテロ二量体として存在し、ほとんど全てのリガンド−活性化成長因子受容体および腫瘍形成遺伝子蛋白質チロシンキナーゼとの細胞性複合体において見出される（Cantley, L.C.ら、Cell, 64:281-302 (1991)）。８５ｋＤａ調節サブユニットは、明らかに、ＰＩ３−キナーゼのアダプターとして作用して、成長因子受容体およびチロシンリン酸化蛋白質と相互作用する（Margolis, C. Cell Growth Differ., 3:73-80 (1992)）。
【０００４】
ＰＩ３−キナーゼは、シグナル変換において重要な酵素であるようであるが、細胞の有糸分裂生起および悪性形質転換に関連した特定の影響で、ほんの限られた数の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートだけがＰＩ３−キナーゼに対する阻害活性を有すると確認されているのみである（例えば、Matter, W.F.ら、Biochem. Biophys, Res. Commun., 186:624-631 (1992) 参照）。本発明の方法に用いられる水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの選択的ＰＩ３−キナーゼ活性とは対照的に、Matterらによって使用されたバイオフラビノイド水溶性薬物−ポリマーコンジュゲート、特に、ケルセチンおよびその特定の類似体は、ＰＩ３−キナーゼならびにプロテインキナーゼＣおよびＰＩ４−キナーゼなどの他のキナーゼを阻害する（同上）。
【０００５】
１９９５年１月３日に発行された米国特許番号第５，３７８，７２５号は、ワートマニンまたはその特定の類似体の１つを用いて哺乳動物においてＰＩ３−キナーゼを阻害する方法を提供した。ワートマニンの欠点の１つは、生物に対するその毒性である。低投与量であっても、純粋形態のワートマニンは、しばしば、実験動物に限定して全身投与される。
【０００６】
ワートマニンの生合成産生は、当該分野でよく知られており、その誘導体は、ワートマニンから合成される（Dewald, Beatriceら、(1988) 「２つの変換配列は、受容体アゴニストによる好中球活性化に必要である（Two Transduction Sequences Are Necessary for Neutrophil Activation by Receptor Agonists）」 The Journal of Biological Chemistry, Vol. 263, １１月５日発行, pp 16179-16184; Norman, Bryan H.ら、(1996) 「ワートマニンおよび関連類似体によるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害機構の研究（Studies on the Mechanism of Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and Related Analogs）」 J. Med. Chem., 39, pp 1106-1111; Varticovski, L.ら、(2001) 「水溶性ＨＰＭＡコポリマー−ワートマニンコンジュゲートは、ホスホイノシチド３−キナーゼ阻害活性をイン・ビトロおよびイン・ビボで保持する（Water-soluble HPMA copolymer-wortmannin conjugate retains phosphoinositide 3-kinase inhibitory activity in vitro and in vivo）」 Journal of Controlled Release, 74, pp 275-281（全て、出典明示により、本明細書の一部とされる））。
【０００７】
ジボランを用いるワートマニンの還元から調製されたワートマニン誘導体  １７β−ヒドロキシワートマニンは、ワートマニンと比べて１０倍の活性増加を示し、ＰＩ３Ｋ  ＩＣ５０がナノモル濃度以下の範囲になり、０．５０ｎＭのＩＣ５０を有した。しかしながら、１７β−ヒドロキシワートマニンのＣ３Ｈ乳癌モデルにおける抗腫瘍活性は、０．５（ｍｇ／ｋｇ）投与量で阻害を示さず、１．０ｍｇ／ｋｇ投与量で毒性を示した。これらの知見は、「ワートマニンおよび関連類似体の親電子的Ｃ−２１位に対する求核付加が阻害力および抗腫瘍活性に必要である。不運にも、該機構は、観察される毒性に結びつくようである」という結論に著者らを導く（Norman, Bryan H.ら、(1996) 「ワートマニンおよび関連類似体によるホスファチジルイノシトール３−キナーゼ阻害機構の研究（Studies on the Mechanism of Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and Related Analogs）」 J.Med.Chem., 39, 1106-1111,1109-1110）。
【０００８】
Ｃ−１７ヒドロキシル基でアセチル化したワートマニン誘導体は、顕著な活性喪失を示し、それにより、「活性部位は、Ｃ−１７での脂肪親和性または立体的なかさを受け入れられない」という結論に著者らを導いた（Creemer, Lawrence C.ら、(1996) 「新規なワートマニンエステル：ホスファチジルイノシトール３−キナーゼの強力な阻害剤の合成およびイン・ビトロでの評価（Synthesis and in Vitro Evaluation of New Wortmannin Esters: Potent Inhibitors of Phosphatidylinositol 3-Kinase）」 J. Med. Chem., 39, 5021-5024, 5022）。該結論は、その後に解明されたワートマニンに結合したＰＩ３ＫのＸ線結晶構造と一致する（Walker, Edward H.ら、(2000) 「ワートマニン、ＬＹ２９４００２、ケルセチン、ミリセチンおよびスタウロスポリンによるホスホイノシチド３−キナーゼ阻害の構造決定（Structural Determinants of Phosphoinositide 3-Kinase Inhibition by Wortmannin, LY294002, Quercetin, Myricetin, and Staurosporine）」 Molecular Cell 6(4), 909-919）。
【０００９】
ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）の付加は、薬物の水溶性および投与の改善のために医薬品化学において首尾よく用いられてきた（同上）。しかしながら、ＰＥＧの共有結合は、必ずしも、その結合された薬物の水溶性および利用性の改善を提供するわけではない（Bebbington, Davidら、(2002) 「二重作用抗酸化剤／鉄キレーターの可溶化のためのプロドラッグおよび共有結合リンカー法（Prodrug and Covalent Linker Strategies for the Solubilization of Dual-Action Antioxidants/Iron Chelators）」 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 12, 3297-3300, 3299およびFeng, Xiaら、(2002) 「水溶性パクリタキセルプロドラッグの合成および評価（Synthesis and Evaluation of Water-Soluble Paclitaxel Prodrugs）」 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 12, 3301-3303, 3302）。
【００１０】
ＰＥＧ薬物の概観において、２０年にわたって調製されてきた低分子量（＜２０，０００）ＰＥＧ小分子薬物コンジュゲートは、臨床的に認可される生産物に至っていない（Greenwald, R.B. (2001) 「ＰＥＧ薬：概観（PEG drugs: an overview）」 Journal of Controlled Release, 74, pp 159-171, 要約）。実際に、持続性結合でＰＥＧとコンジュゲート形成させた小型有機分子抗癌剤は、ほんのわずかであり、それらは、臨床的に優れた水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートに至らなかった（Greenwald, R.B.ら、(2003) 「ＰＥＧ化薬物コンジュゲートによる効果的な薬物送達（Effective Drug Delivery by PEGylated Drug Conjugates）」 Advanced Drug Delivery Reviews, 55, pp 217-250, 220）。ＰＥＧ−ＣＰＴを用いると、致死率は、ＰＥＧ−ＣＰＴ  ４０，０００、２０，０００および８，０００構築物の場合、約５０％、１０％および０％であることが明らかになった。表面上は、ＭＷ５０００のポリマーを用いて薬物とコンジュゲート形成させると、イン・ビボでの効果がわずかであるか、またはイン・ビボでの効果がない種が迅速に排出された（同上、２２５）。腫瘍中に蓄積する能力を有するＰＥＧ４０，０００を結合すると、自動的に、薬物により大きな抗腫瘍活性を持たせることができるというわけではない（同上、２３５）。
【００１１】
本発明において、ワートマニン誘導体を水溶性形態で送達するために、水溶性ポリマーをワートマニン誘導体に結合させ、その結果得られたポリマー−薬物コンジュゲートは可溶性であった。本発明のＰＥＧなどの水溶性ポリマーを水不溶性または水難溶性分子に結合させることは、それらを水溶性にし、その毒性を低下させる。
【００１２】
発明の簡単な概要
本発明は、水溶性ポリマーを薬物担体として用いるワートマニンの可溶性誘導体に関する。
【００１３】
本発明によると、式Ｐ−Ｘ−Ｄ（式中、Ｐは、水溶性ポリマーであり；Ｄは、ワートマニン誘導体であり；およびＸは、水溶性ポリマーとワートマニン誘導体との間の共有結合である）で示される水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートが提供される。
【００１４】
本発明の一の具体例において、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体は、式Ｉ
【化１】
2006524289.tif 000002
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ａ）
【化２】
2006524289.tif 000003
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキルｒ、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示される構造を有する。
【００１５】
本発明の一の具体例において、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体は、式Ｉ
【化３】
2006524289.tif 000004
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化４】
2006524289.tif 000005
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示される構造を有する。
【００１６】
本発明の別の具体例において、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体は、式ＩＩ
【化５】
2006524289.tif 000006
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化６】
2006524289.tif 000007
で示される水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキル、またはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示される構造を有する。
【００１７】
本発明の一の具体例において、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体は、式ＩＩＩ
【化７】
2006524289.tif 000008
［式中、ｎは１−１０００である］
で示される構造を有する。
【００１８】
本発明の一の具体例において、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体は、式ＩＶ：
【化８】
2006524289.tif 000009
［式中、ｎ＝１−１０００］
で示される構造を有する。
【００１９】
本明細書中で使用される場合、
【化９】
2006524289.tif 000010
で示される基は、
【化１０】
2006524289.tif 000011
で示される構造を示す。
【００２０】
本明細書中で使用される場合、
【化１１】
2006524289.tif 000012
で示される基は、
【化１２】
2006524289.tif 000013
で示される構造を示す。
【００２１】
本発明のさらなる具体例において、
ａ）１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンに溶媒を加えて溶液を得；
ｂ）第３級アミンまたは重炭酸ナトリウムを該溶液に加え；
ｃ）ｍＰＥＧ−スルフヒドリル５０００を工程（ｂ）の溶液に加え；
ｄ）工程（ｃ）の溶液を３０分間攪拌し；
ｅ）エーテルを該攪拌溶液に加え；
ｆ）固体を収集し；次いで
ｇ）収集した固体をエーテルで洗浄して、ｐｅｇ化（peglyated）ワートマニン誘導体を得る
ことを特徴とする式（ＩＩＩ）の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの製造法が開示される。
【００２２】
本発明のさらなる具体例において、
ａ）１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンに溶媒を加えて溶液を得；
ｂ）第３級アミンまたは重炭酸ナトリウムを該溶液に加え；
ｃ）ｍＰＥＧ−スルフヒドリル５０００を工程（ｂ）の溶液に加え；
ｄ）工程（ｃ）の溶液を３０分間攪拌し；
ｅ）エーテルを該攪拌溶液に加え；
ｆ）固体を収集し；次いで
ｇ）収集した固体をエーテルで洗浄して、ｐｅｇ化ワートマニン誘導体を得る
ことを特徴とする式（ＩＶ）の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの製造法が開示される。
【００２３】
本発明の具体例において、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、式Ｖ：
【化１３】
2006524289.tif 000014
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または単一非反復性の式（Ｂ）
【化１４】
2006524289.tif 000015
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］
で示される構造を有する。
【００２４】
本発明の別の具体例は、式（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶ）の化合物にアミンを添加して式（Ｖ）の化合物またはその対応する開環構造を得ることを特徴とする式（Ｖ）の化合物の製造法を包含する。好ましい具体例において、アミンは、ジエチルアミンである。
【００２５】
本発明は、また、式
【化１５】
2006524289.tif 000016
または式
【化１６】
2006524289.tif 000017
［式中：
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００であり；および
Ｘは、ハロゲン、例えば、Ｂｒ、ＣｌまたはＩである］
で示される化合物を式
ＨＲ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒ１
または式
ＨＲ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒ２Ｈ
［式中、Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
ｎは、１−１０００であり、
Ｒ１は、アルキル、あるいは式（Ａ）
【化１７】
2006524289.tif 000018
または式（Ｂ）
【化１８】
2006524289.tif 000019
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびｎは、上記のとおりである）
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートである］
で示される化合物と反応させて所望のコンジュゲートを得ることを特徴とする上記のコンジュゲートの製造法を提供する。
【００２６】
本発明は、さらに、式Ｐ−Ｘ−Ｄ：
［式中：
Ｐは、水溶性ポリマーであり；
Ｄは、ワートマニン誘導体であり；および
Ｘは、水溶性ポリマーとワートマニン誘導体との間の共有結合である］
で示される化合物またはポリマーの製造法であって、式Ｐ−ＸＨ（式中、ＰおよびＸは上記のとおりである）で示されるポリマーを式ＤＸ（式中、Ｘはハロゲン、例えば、Ｂｒ、ＣｌまたはＩである）で示される化合物と反応させて所望の生産物を得ることを特徴とする方法を提供する。
【００２７】
本発明のコンジュゲートは、好ましくは、水溶性コンジュゲートであり、より好ましくは、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートである。
【００２８】
発明の詳細な記載
下記の実験詳細は、本発明の理解を助けるために示され、いかなる方法においても、特許請求の範囲に示される本発明を限定しようとするものではなく、また限定するものとして解釈されるべきではない。
【００２９】
本発明は、水溶性ポリマーを用いるワートマニン誘導体の知見に関する。
【００３０】
本発明は、水溶性薬物ポリマーに関する。構造ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を有する水溶性ポリマーは、種々の分子量において入手可能な直鎖または分枝鎖の天然ポリマーであり、水およびほとんどの有機溶媒に溶解できる。ＰＥＧは、１０００未満の分子量で、粘性の無色液体であり、高分子量ＰＥＧは、ロウ質の白色コロイドである。該固体の融点は、分子量に比例し、６７℃で水平に近づく。分子量は、数百から約８０，０００の範囲である。薬物送達能を上げるために使用されうる水溶性ポリマーの例は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧメチルエーテル、ＰＥＧ−ブロック−ＰＥＧ−ブロック−ＰＥＧ、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチル、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸、ポリエチルオキサゾリン、ポリビニルピロリドン、およびポリサッカライドを包含する。本発明の好ましい具体例において、１〜１０００個のモノマーを含有する水溶性ポリマーをワートマニン誘導体に結合させる。より好ましいモノマー数は、２５０〜４００、最も好ましい数は、５０〜１５０である。結合させる水溶性ポリマーの分子量は、約４００〜約８０，０００の範囲であることができる。好ましい具体例において、分子量は、約１０００〜約８０００の範囲であり、最も好ましい具体例は、約４０００〜約６０００の範囲にある。
【００３１】
水溶性ポリマーは、共有結合によって、ワートマニン誘導体に結合させる。該共有結合は、エステル、ジエステル、ウレタン、アミド、第２級または第３級アミン、エーテル、または水不溶性もしくは水難溶性薬物を可溶性形態で哺乳動物の体内に送達可能にするいずれかの共有結合によることができる。
【００３２】
本発明のワートマニン誘導体は、下記の構造：
【化１９】
2006524289.tif 000020
［式中、
Ｒ１は、アルキル、または式（Ａ）
【化２０】
2006524289.tif 000021
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］、
【００３３】
【化２１】
2006524289.tif 000022
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化２２】
2006524289.tif 000023
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ６は、＝ＯまたはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］、
【００３４】
【化２３】
2006524289.tif 000024
［式中：
Ｒ１は、アルキル、または式（Ｂ）
【化２４】
2006524289.tif 000025
で示される薬物−ポリマーコンジュゲートであり；
Ｒ２は、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｒ３は、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり；
Ｒ４は、Ｈ、＝Ｏ、−Ｏ−ＣＯＣ４Ｈ９またはＯＲ７であり；
Ｒ７は、Ｈ、ＣＯＲ９またはアルキルであり；
Ｒ８は、アルキルまたはＨであり；
Ｒ９は、アルキル、Ｈ、アリールまたは−ＣＨ２Ａｒであり；および
ｎは、１−１０００である］、
【００３５】
【化２５】
2006524289.tif 000026
［式中、          ｎは１−１０００である］、
【００３６】
【化２６】
2006524289.tif 000027
［式中、ｎ＝１−１０００］
を有する水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートを包含する。
【００３７】
本発明の目的の場合、「アルキル」なる語は、直鎖および分枝鎖アルキル基の両方を包含し、好ましくは１〜８個の炭素原子からなる置換または非置換の基であってもよい。「シクロアルキル」なる語は、３〜１２個の炭素原子を有する脂肪族炭化水素基をいい、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはノルボルニルを包含する。
【００３８】
本発明の目的の場合、「アリール」または「Ａｒ」なる語は、芳香族炭化水素基として定義され、置換または非置換であってもよい。アリールは、限定するものではないが、フェニル基から選択されてもよい。
【００３９】
本発明の目的の場合、「アシル」は、式−（Ｃ＝Ｏ）−アルキルまたは−（Ｃ＝Ｏ）−ペルフルオロアルキル（ここに、アルキル基またはペルフルオロアルキル基は、１〜７個の炭素原子からなる）であり；好ましい例は、限定するものではないが、アセチル、プロピオニル、ブチリル、トリフルオロアセチルを包含する。
【００４０】
本発明の目的の場合、「溶媒」は、ＰＥＧＳＨが溶解できる極性化合物であり、例えば、ジオキサン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を包含する。
本発明の目的の場合、「第３級アミン」は、例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンを包含する。
【００４１】
本発明の目的の場合、第３級アミンではないアミンは、限定するものではないが、アルキル、ヘテロアリール、アリール、ピペリジン、ピペラジン、ジ−アミノプロパン、アミノ酸、またはいずれかの第１級もしくは第２級アミンを包含することができる。
【００４２】
Ｒ１は、好ましくはメチルである。Ｒ２は、好ましくはＳである。Ｒ３は、好ましくは、−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−である。Ｒ４は、好ましくは、−ＯＲ７である。Ｒ６は、好ましくは＝Ｏである。Ｒ７は、好ましくはＣＯ９である。Ｒ  Ｒ８は、好ましくは、メチルである。Ｒ９は、好ましくは、メチルである。本発明の一の具体例は、Ｒ１がメチルであり；Ｒ２がＳであり；Ｒ３が−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−であり；Ｒ４が−ＯＲ７であり；Ｒ７が−ＣＯＲ９であり；Ｒ８がメチルであり、Ｒ９がメチルである化合物を含む。本発明のさらなる具体例は、Ｒ１がメチルであり；Ｒ２がＳであり；Ｒ３が−ＣＨ２−または−ＣＨ２−ＣＨ２−であり；Ｒ６がＯであり、Ｒ８がメチルである化合物を含む。ｎは、１−１０００、好ましくは５０−４００であり、５０−１５０および２５０−４００の範囲を包含する。
【００４３】
本発明の一の具体例において、置換されたアリールは、所望により、限定するものではないが、アルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロプロピル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨアルキル、−ＳＯ２Ｎ（アルキル）２、−ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２ＮＨ２、ＣＯ２ＮＨアルキルおよび−ＣＯ２Ｎ（アルキル）２からなる群から選択される置換基で一、二、三または四置換されていてもよい。
【００４４】
別の具体例において、本発明は、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害の治療または予防法を提供する。本発明は、したがって、哺乳動物に、本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートを医薬上許容される担体と組み合わせて、または該担体と共に含んでなる医薬組成物を提供する。本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、単独あるいは哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害の治療または予防のための他の治療上有効な化合物または療法と組み合わせて投与されうる。
【００４５】
哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害を治療または阻害するとき、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、好ましくは、経口または皮下に提供される。該水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、病巣内、腹腔内、筋内または静脈内注射；注入：リポソーム媒介性送達：局所的、鼻腔、肛門、膣、舌下、尿道、経皮、髄腔内、眼内または耳送達によって提供されうる。本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの提供における一貫性を得るために、本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートが単位投与量の形態であることが好ましい。適当な単位投与形態は、錠剤、カプセルおよびサシェまたはバイアル中の粉末を包含する。かかる単位投与形態は、本発明の水溶性薬物−ポリマーに結合したワートマニン誘導体を０．１〜１００ｍｇ、好ましくは２〜５０ｍｇ含有しうる。またさらに好ましい単位投与形態は、本発明の水溶性薬物−ポリマーに結合したワートマニン誘導体を５〜２５ｍｇ含有する。本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、約１０〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの投与量で経口投与することができる。かかる水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、１日に１〜６回、より普通には、１日に１〜４回投与されうる。有効量は、当業者に既知であり、またそれは、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの形態に依存するであろう。当業者は、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの生物活性をバイオアッセイにおいて決定し、かくして、投与すべき用量を決定するための経験的活性試験をルーチンに実施することができた。
【００４６】
本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、慣用的な賦形剤、例えば、増量剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、フレーバー剤、着色添加物または担体と共に処方されうる。担体は、例えば、希釈剤、エーロゾル、局所担体、水性溶液、非水性溶液または固形担体であってもよい。担体は、ポリマーまたは練り歯磨きであってもよい。本発明における担体は、標準的な医薬上許容される担体、例えば、リン酸緩衝化セーライン溶液、酢酸緩衝化セーライン溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン、種々の湿潤剤、錠剤、被覆錠剤およびカプセルのいずれをも包含する。
【００４７】
経口または局所的に提供される場合、かかる水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、種々の担体における送達によって、対象に提供されるであろう。典型的には、かかる担体は、賦形剤、例えば、デンプン、ミルク、砂糖、ある種の粘土、ゼラチン、ステアリン酸、タルク、植物性油脂、ゴムまたはグリコールを含有する。所望の送達方法に基づいて、特定の担体が選択される必要があり、例えば、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）は、静脈内または全身送達のために使用でき、植物性油脂、クリーム、膏薬、軟膏またはゲルは、局所的送達のために使用されうる。
【００４８】
本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害の治療または予防において有用な適当な希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と共に送達されうる。かかる組成は、液体、または凍結乾燥もしくは別法で乾燥させた処方であり、種々のバッファー内容物（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ強度およびイオン強度の希釈剤、表面に対する吸着を防ぐためのアルブミンまたはゼラチンなどの添加剤、界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、ＢＨＡおよびＢＨＴ、アスコルビン酸、メタ重硫酸ナトリウム）、保存料（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、増量（bulking）物質または張性修飾剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリエチレングリコールなどのポリマーの共有結合、金属イオンとの錯体形成、あるいはヒドロゲルの粒子調製物またはリポソーム、ミクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多重膜小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト中または上への水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの取り込みを包含する。かかる組成は、該水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートまたは組成物の物理的状態、可溶性、安定性、イン・ビボでの放出速度、およびイン・ビボでのクリアランス速度に影響を及ぼすであろう。組成の選択は、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害を治療または阻害することのできる水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの物理的および化学的性質に依存するであろう。
【００４９】
本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、該水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートの一定期間にわたる抑制された放出を可能にするカプセルを介して、局所的に送達されてもよい。放出制御または抑制組成物は、脂肪親和性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油）中における処方を包含する。
【００５０】
本発明の目的の場合、哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害は、健康な哺乳動物において見出されるよりも高いレベルでＰＩ３キナーゼおよび／またはＴＯＲキナーゼを発現するいずれの状態をも包含する。本発明の水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、ＰＩ３キナーゼおよびＴＯＲキナーゼの阻害剤として使用される。ＰＩ３キナーゼおよびＴＯＲキナーゼの阻害剤が治療または阻害において有効な哺乳動物にて媒介される病理学的状態または障害は、虚血性心臓病、再狭窄、炎症、血小板凝集、硬化症、呼吸障害、ＨＩＶ、骨吸収、非小細胞肺癌、および脳腫瘍である。
【００５１】
本発明の化合物は、単一の化合物として、または他の化合物と組み合わせて提供されうる。
【００５２】
ＰＩ３Ｋの阻害は、成長因子シグナル伝達、サイトカイン応答および細胞周期制御を調節する他の薬剤の治療活性を増強することが予想されるかもしれない。ワートマニン誘導体は、腫瘍緩解の誘導およびｐｅｇ化ラパマイシン、ｍＴＯＲキナーゼの特異的阻害剤の抗癌活性の増強において、インターフェロン−αと相乗作用する。
【００５３】
ＰＩ３ＫまたはＡＫＴの細胞性阻害は、生存率の減少、すなわち、多くの標準的な癌治療の抗癌活性の基礎となる重大な工程を導く。しかしながら、多くの場合、腫瘍細胞は、迅速に化学耐性を発現する。ある細胞性耐性機構は、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路の構成的増加に関連する。かくして、細胞毒とＰＩ３Ｋ阻害剤との組み合わせ治療は、初期療法における効力をさらに増大させる可能性があり、また、反復療法における化学的感受性の回復に役立つかもしれない。ワートマニン誘導体は、肺癌およびグリオーマにおいて、パクリタキセル抗癌効果を強化することが示される（図３および４参照）。
【００５４】
１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンの調製
１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、４−ジメチルアミノピリジンおよびワートマニンは、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Milwaukee, WI）から購入した。平均分子量５０００のメトキシ−ＰＥＧ−ＳＨ（ｍＰＥＧ−ＳＨ  ５０００）は、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．（Huntsville, Al）から購入した。全ての溶媒は、ＨＰＬＣ等級であり、全ての他の化学物質は、分析試薬等級またはそれと同等であった。分取高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Ｒａｉｎｉｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  Ｉｎｃ．（Woburn, MA）の２つのＤｙｎａｍａｘ溶媒デリバリーシステム（モデルＳＤ−１）および１つのＤｙｎａｍａｘ吸光度検出器（モデルＵＶ−１）から構成された。付加的な装置は、Ｓａｖａｎｔ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．（Holbrook, NY）の自動スピードバック（speed-vac）濃縮機（Ｓａｖａｎｔ，モデルＡＳ１６０）およびＢｕｃｈｉ（Flawil, Switzerland）のＢＵＣＨＩロータリーエバポレーションシステム（ＲＥ２６０およびＲ１２４）を包含した。１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ＣＤＣｌ３を溶媒として用いる４００ＭＨｚ  ＮＭＲ分光光度計にて記録された。
【００５５】
ＨＰＬＣ法−分取ＨＰＬＣは、Ｐｒｅｐ  Ｎｏｖａ−ｐａｋ  ＨＲ  Ｃ１８カラム（３００ｘ１９ｍｍ，Waters）にて、８０％Ａおよび２０％Ｂで最初に５分間維持し、３０分で８０％Ａおよび２０％Ｂから３０％Ａおよび７０％Ｂにする勾配法を用いて実施した。バッファーＡは、９０％水および１０％アセトニトリルであった。バッファーＢは、１０％水および９０％アセトニトリルであった。流速は、２０ｍＬ／分であり、ＵＶは２５４ｎｍであった。２７分（水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＩＩ）または１５分（水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＶ）でフラクションを収集し、塩化メチレンで抽出し、後処理した。ＨＰＬＣから収集したフラクションを塩化メチレンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、後処理した。ＨＰＬＣから収集したフラクションを塩化メチレンで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機溶媒をロータリーエバポレーションシステムを用いて除去した。残渣を小さなバイアル中に移し、スピードバック中で一晩乾燥させた。
【００５６】
６０ｍｇワートマニン（０．１４ｍｍｏｌ，Aldrich）の１２ｍＬテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中溶液を０℃氷浴中、窒素下で冷却した。ＴＨＦ中における１Ｍボラン溶液（１３４μＬ，０．１４ｍｍｏｌ，Aldrich）を加え、反応混合物を０℃で３．５時間攪拌した。反応を１ｍＬの水でクエンチした。室温に加温後、反応混合物を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。後処理後、約６０ｍｇ（ＨＰＬＣにより９０％純度の１７−ヒドロキシ−ワートマニン）の固体を得た。該固体（約０．１２６ｍｍｏｌ  １７−ヒドロキシ−ワートマニン）を１５ｍＬの塩化メチレン中に溶解し、ヨード酢酸（２４ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２７ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）および４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（０．１ｍｇ，触媒として）と反応させた。該反応混合物を室温で１時間維持した。後処理後、約７５ｍｇの粗生産物（黄色固体）を得た。純粋な１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンを分取ＨＰＬＣによって単離した。全量５４ｍｇの白色固体を得た。
ｍ／ｚ５９９にて［Ｍ＋Ｈ］およびｍ／ｚ６１６にて［Ｍ＋ＮＨ４］，［Ｍ＋Ｈ］イオンの正確な質量：５９９．０７５８Ｄａ，Ｃ２５Ｈ２８Ｏ９Ｉの計算質量：５９９．０７７２Ｄａ。
1H-NMR(CDCl3) δ 0.94 (s, 3H), 1.54 (dd, J=12.16, 10.06, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.69 (m, 3H), 1.78 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.31 (m, 1H), 2.56 (dd, J=12.16, 7.36, 1H), 2.63 (ddd, J=2.7, 1H), 2.85 (ddd, J=20.12, 9.91, 2.7, 1H), 2.99 (dd, J=11.11, 7.21, 1H), 3.19 (s, 3H), 3.46 (dd, J=11.11, 1.8, 1H), 3.69 (d, J=10.6, 1H), 3.72 (d, J=10.6, 1H), 4.76 (dd, J=7.21, 1.8, 1H), 4.87 (dd, J=7.51, 9.46, 1H), 6.10 (ddd, J=10.06, 7.36, 3.0, 1H), 8.23 (s, 1H). 13C-NMR δ -5.62, 12.79, 21.14, 24.65, 26.58, 27.04, 40.11, 40.72, 44.07, 44.99, 59.44, 72.90, 88.88, 114.25, 141.11, 142.72, 144.93, 148.68, 149.84, 157.66, 168.94, 169.54, 172.77．
【００５７】
Ｍ−ＰＥＧ−ＳＨ５０００および１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンのコンジュゲート（ＩＩＩ）の調製
４０ｍｇ（０．０６７ｍｍｏｌ）の１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンを１５ｍＬのアセトニトリルおよび１０ｍＬの０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中に窒素下で溶解した。全量で３４５ｍｇのＭ−ＰＥＧ−ＳＨ−５０００（０．０６９ｍｍｏｌ）を１時間以内に加えた（４バッチ）。室温でさらに１時間攪拌後、反応混合物を塩化メチレンで抽出し、後処理した。約３２０ｍｇの粗生産物を得た。分取ＨＰＬＣ後、２６０ｍｇの粗生産物から、全量で２０９ｍｇの純粋な水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＩＩを得た。
1H-NMR (CDCl3) δ 0.92 (s, 3H), 1.53 (dd, 1H), 1.68 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.77 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.32 (m, 1H), 2.53 (dd, 1H), 2.63 (s, 1H), 2.85 (overlap, 1H), 2.85 (t, J=6.56, 2H), 2.99 (dd, J=11.03, 7.3, 1H), 3.2 (s, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.47 (dd, J=11.03, 1.79, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.64 (m), 3.7 (s, 2H), 4.76 (dd, J=7.3, 1.79, 1H), 4.86 (dd, 1H), 6.15 (s, 1H), 8.24 (s, 1H).
13C-NMR δ 12.85, 21.11, 24.68, 26.48, 27.39, 34.01, 40.19, 40.68, 44.05, 44.81, 59.03, 59.42, 70.3, 70.35, 70.57, 70.88, 71.93, 72.88, 80.69, 88.86, 114.21, 141.19, 142.68, 144.92, 148.63, 149.88, 157.63, 169.58, 170.52, 172.75.
【００５８】
１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンの調製
４２ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）の１１−Ｏ−デスアセチルワートマニン（ワートマニンから調製，J. Med Chem, 1996, 39, 5021）を８ｍＬの塩化メチレン中に溶解し、ヨード酢酸（２４ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（２７ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（０．１ｍｇ，触媒として）と反応させた。反応混合物を室温で２時間維持した。後処理後、約８０ｍｇの粗生産物（黄色固体）を得た。純粋な１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンを分取ＨＰＬＣによって単離した。全量で４１ｍｇの黄色がかった固体を得た。
ｍ／ｚ５５５にて［Ｍ＋Ｈ］および５７２にて［Ｍ＋ＮＨ４］，［Ｍ＋ＮＨ４］イオンの正確な質量：５７２．０７８３Ｄａ，Ｃ２３Ｈ２７Ｏ８ＮＩの計算質量：５７２．０７７５Ｄａ。
1H-NMR (CDCl3) δ 0.97 (s, 3H), 1.66 (dd, J=12.84, 8.80 Hz, 1H), 1.75 (s, 3H), 2.06 (ddd, J=22.25, 12.72, 8.93 Hz, 1H), 2.27 (dt, J=19.68, 8.93 Hz, 1H), 2.65 (dd, J=12.84, 7.58 Hz, 1H), 2.61-3.18 (m, 2H), 2.92 (ddd, J=12.72, 5.99, 2.57 Hz, 1H), 3.01 proR (ddd, J=11.25, 6.72 Hz, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.46 proS (dd, J=11.25, 1.59 Hz, 1H), 3.65 (d, J=9.9 Hz, 1H), 3.89 (d, J=9.9 Hz, 1H), 4.83 (dd, J=6.72, 1.59 Hz, 1H), 6.15 (ddd, J=8.8, 7.58, 2.57 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H).  13C-NMR δ -6.68, 14.65, 22.93, 26.48, 35.05, 35.74, 40.87, 44.11, 49.04, 59.69, 71.84, 73.31, 88.54, 114.28, 140.92, 142.74, 144.81, 148.77, 150.09, 157.52, 167.8, 172.48, 215.89.
【００５９】
Ｍ−ＰＥＧ−ＳＨ  ５０００および１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンのコンジュゲート（ＩＶ）の調製
３０ｍｇ（０．０５４ｍｍｏｌ）の１１−デスアセチル−１１−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンを１５ｍＬのアセトニトリルおよび１０ｍＬの０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中に窒素下で溶解した。全量で３００ｍｇのＭ−ＰＥＧ−ＳＨ−５０００（０．０６０ｍｍｏｌ）を１時間以内に加えた（３バッチ）。室温でさらに１時間攪拌後、反応混合物を塩化メチレンで抽出し、後処理した。約２７４ｍｇの粗生産物を得た。全量で１７２ｍｇの純粋な水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＶを分取ＨＰＬＣ後に得た。
1H-NMR (CDCl3) δ 0.98 (s, 3H), 1.64 (dd, J=12.88, 8.87, 1H), 1.74 (s, 3H), 2.06 (ddd, J=22.25, 12.72, 9.03, 1H), 2.27 (dd, J=19.58, 9.37, 1H), 2.6 (dd, J=19.58, 8.53, 1H), 2.63 (dd, J=12.88, 7.53, 1H), 2.84 (t, J=6.36, 2H), 2.91 (ddd, J=12.72, 5.86, 2.68, 1H), 3.01 proR (dd, J=11.38, 6.36, 1H), 3.16 (s, 3H), 3.19 (m, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.46 proS (dd, J=11.38, 6.36, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.65 (m), 3.7 (s, 2H), 3.34 (d, J=9.87, 2H), 4.91 (dd, J=6.36, 1.84, 1H), 6.15 (ddd, J=8.87, 7.53, 2.68, 1H), 8.27 (s, 1H).
13C-NMR δ 14.6, 22.93, 26.51, 31.99, 33.64, 35.72, 35.76, 40.82, 44.08, 49.1, 59.02, 59.47, 70.36, 70.55, 70.87, 71.18, 71.92, 73.05, 88.35, 114.35, 140.52, 142.97, 144.74, 149.08, 150.07, 157.68, 169.02, 172.52, 215.97.
【００６０】
【化２７】
2006524289.tif 000028
Ｘは、Ｂｒ、ＣｌまたはＩであり、Ｒ１０は、（ＣＨ２）ｎまたは
【化２８】
2006524289.tif 000029
であり、ここに、ｎは０−５である。
【００６１】
【化２９】
2006524289.tif 000030
Ｘは、Ｂｒ、ＣｌまたはＩであり、Ｒ１０は、（ＣＨ２）ｎまたは
【化３０】
2006524289.tif 000031
であり、ここに、ｎは０−５である。
【００６２】
ｍＰＥＧＳＨ５０００および１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニンのコンジュゲート（ＩＩＩ）（ｐｅｇ化ワートマニン誘導体）の別の調製法
【化３１】
2006524289.tif 000032
１７−ジヒドロ−１７−（１−ヨードアセチル）−ワートマニン（２１５ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１５０ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を加え、次いで、ＰＥＧ−（スルフヒドリル）２５０００（ＰＥＧＳＨ，７８０ｍｇ）を加えた。次いで、混合物を３０分間攪拌し、エーテル（４００ｍＬ）を加え、固体をブフナー漏斗で収集し、エーテルで洗浄し、ＰＥＧ−ジ−ワートマニンコンジュゲート生産物をオフホワイト色の固体として得た。
【００６３】
コンジュゲートＶの調製
コンジュゲートＩＩＩ（ｎ＝１００−１１０）（３ｇ）のジクロロメタン（１２ｍＬ）中溶液に、ジエチルアミン（２００μＬ）を加えた。１８時間後、揮発性物質を真空下で除去した。得られた黄色固体を最少量のジクロロメタン中に溶解した、ジエチルエーテルを加え、得られた黄色粉末をろ過によって収集した。表題化合物を黄色粉末として得た（２．８ｇ）。
質量スペクトルｍ／ｚ：ｎ＝１０９の場合の計算値；５５２６，実測値＝５５２６
【００６４】
【化３２】
2006524289.tif 000033
【００６５】
イン・ビボ異種移植研究
Ｂａｌｂ／ｃ  ｎｕ／ｎｕ（無胸腺）マウスをＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ（ＡＡＬＡＡＣＣ）の基準にしたがって、実験で使用する少なくとも１週間前から飼育した。該動物をマイクロアイソレーター・ケージ中に収容し、層流フード中においてだけ取り扱った。全ての食餌および水はオートクレーブで処理した。マウスの左横腹に、２５−２６ゲージの滅菌ニードルおよびシリンジを用いて、２００μＬ容量の細胞懸濁を接種した。細胞は、完全成長培地で再懸濁し、マウス１匹につき一千万個の細胞を送達させた。その結果得られた腫瘍がステージングに適当な大きさに達したとき、マウスを再編成して、ｎ＝１０の等しい大きさの群を作った。ステージングするとすぐに、滅菌蒸留水中に再懸濁した水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＩおよび水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートＩＶを０．２ｃｃ、マウスにｉｖ投与した。ワートマニンおよび他の非ｐｅｇ化水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートは、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中１０ｍｇ／ｍｌで調製し、マウスに注射する直前に、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）で希釈した。処理は、腫瘍が動物の体重の１０％に達するまで、２週間毎に繰り返される５日間毎日投与する計画として管理された。固形腫瘍の成長は、実験期間中、週２回モニターした。腫瘍の大きさは、スライディング・バーニア・カリパスを用いて定量し、質量は、式（Ｌ ｘ Ｗ）／２を用いてｍｍで計算された。立方ｍｍからｍｇへの変換は、単位密度を仮定して行った。腫瘍は、マウスの体重の１５％より大きく成長させることはせず、その時点で、マウスを安楽死させた。
【００６６】
【表１】
2006524289.tif 000034
【００６７】
ワートマニン誘導体の細胞培養および増殖アッセイ
Ａ５４９（ヒト非小細胞肺癌）およびＨ−１５７細胞系統は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）（Rockville, MD）から購入した。細胞を１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するＲＰＭＩ培地１６４０中、５％ＣＯ２を含有する３７℃インキュベーター中において培養した。全ての細胞培養試薬は、Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ（Grand Island, NY）から購入した。細胞を９６−ウェル培養プレートに、約３０００細胞／ウェルにて播種した。播種の１日後、水溶性薬物−ポリマーコンジュゲートまたはビヒクル対照を細胞に加えた。増殖アッセイは、処理開始後、３日行った。非放射性細胞増殖アッセイの場合、生存細胞密度は、染料ＭＴＳタトラゾリウム（tatrazolium）色素の代謝的変換（生存細胞による）を測定することによって、当業者に既知の細胞増殖アッセイ（ＭＴＳアッセイ）、以前に確立された細胞増殖アッセイによって決定された。該アッセイは、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．（Madison, WI）から購入されたアッセイキットを用いて行われた。アッセイプレートを１−２時間インキュベートし、結果を９６−ウェルフォーマットプレートリーダーにおいて、４９０ｎｍで吸光度を測定することによって読み取った。チミジン取込アッセイの場合、細胞を［メチル−３Ｈ］−チミジン（PerkinElmer Life Sciences, Boston, MA）で５時間標識した。次いで、細胞をガラス−ファイバーフィルター膜上に採取し、Ｗａｌｌａｃ  １２０５ベータプレート液体シンチレーションカウンター中でカウントした。各薬物処理の影響は、同一プレート中で生育させたビヒクル−処理細胞から得られた対照細胞成長のパーセンテージとして計算した。
【００６８】
【表２】
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【図面の簡単な説明】
【００６９】
【図１】図１は、ｐｅｇ化−１７−ヒドロキシ−ワートマニン 対 非ｐｅｇ化−１７−ヒドロキシ−ワートマニンの抗腫瘍活性を示す。脳腫瘍の腫瘍細胞系統ＰＴＥＮ（−／−）Ｕ８７ＭＧグリオーマをマウスに移植した。０−４日目に、該マウスにＩＶ投与した。グラフは、ビヒクル、１５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇのｐｅｇ化−１７−ヒドロキシ−ワートマニン、１ｍｇ／ｋｇおよび０．５ｍｇ／ｋｇの非ｐｅｇ化−１７−ヒドロキシ−ワートマニン（ｘ−軸）の投与時の相対的腫瘍成長（ｙ軸）（１、１．５、２、２．５、３、３．５および４ｍｍ）を示す。
【図２】図２は、ＰＴＥＮ（−／−）Ｕ８７ＭＧグリオーマに対するワートマニン誘導体のイン・ビボ抗腫瘍活性を示す。該実験において、ヌードマウスにおける皮下異種移植を０日目に実施し、０−４日目に、０．１５、０．５、１．５、５および１５ｍｇ／ｋｇ／用量の本発明のワートマニン誘導体を投与したときのＵ８７ＭＧグリオーマ成長をみる。図２に示されるように、最少有効投与量（ＭＥＤ）は、０．５ｍｇ／ｋｇ／用量（ＭＥＤ）であり、それは、７日目に腫瘍成長の５０％阻害を達成した。用量依存的な抗癌活性のさらなる増加が明白であった。該実験における最大耐量（ＭＴＤ）は、１５ｍｇ／ｋｇ／用量であった。
【図３】図３は、Ｕ８７ＭＧグリオーマモデルにおけるワートマニン誘導体およびパクリタキセルの抗腫瘍活性の組み合わせを示す。図３に示されるＵ８７ＭＧグリオーマ研究において、本発明のワートマニン誘導体は、０−４日目にＩＶ投与された。パクリタキセルは、０および７日目にＩＰ投与された。パクリタキセルのＭＴＤは、１週投与計画後、６０ｍｇ／ｋｇ／用量である。本発明のワートマニン誘導体１ｍｇ／ｋｇ／用量、パクリタキセル３０および６０ｍｇ／ｋｇ／用量、または本発明のワートマニン誘導体１ｍｇ／ｋｇ／用量とパクリタキセル３０ｍｇ／ｋｇ／用量の組み合わせでマウスを処理した。本発明のワートマニン誘導体単独では、パクリタキセル３０ｍｇ／ｋｇ／用量と等しく活性であった。両薬剤の組み合わせは、いずれかの薬剤単独よりも効力があった。組み合わせ群における腫瘍抑制は、パクリタキセル６０ｍｇ／ｋｇ／用量によって達成されるのと同様であった。
【図４】図４は、ＮＳＣＬＣ  Ａ５４９モデルを用いる２つの実験からのプールしたデータを示す。ワートマニン誘導体は、０−４、１４−１８日目にＩＶ投与された。パクリタキセルは、０、７および１４日目にＩＰ投与された。ワートマニン誘導体５ｍｇ／ｋｇ／用量、パクリタキセル３０ｍｇ／ｋｇ／用量、またはその２つの組み合わせでマウスを処理した。ワートマニン誘導体単独５ｍｇ／ｋｇ／用量は、パクリタキセル３０ｍｇ／ｋｇ／用量と同様に活性であった。その組み合わせ処理が最も興味深い抗腫瘍活性をもたらし、ここに、腫瘍成長の完全な阻止が達成されたことは、明らかである。
【図５】図５は、Ｕ８７ＭＧグリオーマモデルにおけるｐｅｇ化−ラパマイシン（Ｐｅｇ−ｒａｐａ）、ＴＯＲの強力な阻害剤との組み合わせ抗腫瘍活性の評価を示す。ワートマニン誘導体１ｍｇ／ｋｇ／用量およびＰｅｇ−ｒａｐａ０．１ｍｇ／ｋｇ／用量は、０−４日目に、単独または組み合わせてＩＶ投与された。図５におけるデータは、該組み合わせ処理が明らかに、いずれかの薬剤単独時よりも良好な抗腫瘍活性をもたらしたことを示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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