(57)【要約】KSPの活性をモジュレートすることによる細胞増殖性疾患および障害の治療に有用な化合物が開示されている。【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
2006508030.tif 000080
［式中、
R1は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R2およびR2’は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択されるか；または、R2およびR2’は、一緒になって、場合により置換されている3〜7員の環を形成し；
R4およびR5は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル-、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル-、アルキルスルホンアミド、アルキルスルファニル-、カルボキシアルキル-、カルボキシアミド、アミノカルボニル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル、および場合により置換されているヘテロアリール-から選択されるか；または、R4およびR5は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている５、６もしくは７員の脂肪族炭素環を形成し；
R3は、場合により置換されているイミダゾリル-、場合により置換されているイミダゾリニル-、-NHR6；-N(R6)(COR7)；-N(R6)(SO2R7a)；および-N(R6)(CH2R7b)からなる群から選択され；
R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、R8O-、およびR14-NH-から選択され；
R7aは、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、およびR14-NH-から選択され；
R7bは、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロシクリル-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R8は、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R14は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-または場合により置換されているヘテロアラルキル-である]
を有する、単一の立体異性体および立体異性体の混合物を含む化合物、
式Iの化合物の薬学的に許容される塩；
式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または
式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物。
【請求項２】
R1が、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、および場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
R1が、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル-、場合により置換されているフェニル-C1-C4アルキル-、場合により置換されているナフタレニルメチル-、場合により置換されているフェニル-、およびナフチル-から選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
R1が、場合により置換されているフェニル-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-、またはナフタレニルメチル-である、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
R1が、ナフチル-、フェニル-、ブロモフェニル-、クロロフェニル-、メトキシフェニル-、エトキシフェニル-、トリル-、ジメチルフェニル-、クロロフルオロフェニル-、メチルクロロフェニル-、エチルフェニル-、フェネチル-、ベンジル-、クロロベンジル-、メチルベンジル-、メトキシベンジル-、シアノベンジル-、ヒドロキシベンジル-、ジクロロベンジル-、ジメトキシベンジル-、またはナフタレニルメチル-である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
R2およびR2’が、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択されるか；または、R2およびR2’が、一緒になって、場合により置換されている3〜7員の環を形成する、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
R2が場合により置換されているC1-C4アルキル-であり、R2’が水素または場合により置換されているC1-C4アルキル-である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
R2’が水素であり、R2が場合により置換されているC1-C4アルキル-である、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
R2が、メチル-、エチル-、プロピル-、ブチル-、メチルチオエチル-、メチルチオメチル-、アミノブチル-、(CBZ)アミノブチル-、シクロヘキシルメチル-、ベンジルオキシメチル-、メチルスルファニルエチル-、メチルスルファニルメチル-、およびヒドロキシメチル-から選択され、R2’が水素である、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
R2’が水素であり、R2がエチルまたはプロピルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
R2がi-プロピルである、請求項10に記載の化合物。
【請求項１２】
R2またはR2’のいずれか一方が水素である場合は、他方が水素ではない、請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
R2およびR2’の両者が水素である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
R4が水素；アシル-；アルコキシ；シアノ；カルボキシ、カルボキシアミド；アミノカルボニル-；低級アルキル-；１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されている低級アルキル；フェニル-；または１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されているフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
R4が水素、シアノ、または１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されているメチルである、請求項14に記載の化合物。
【請求項１６】
R5が、水素；アシル-、カルボキシ；カルボキシアミド、シアノ；低級アルキル；ハロ；ベンジル-；ピペロニル-；ナフチル-；フリル-；チエニル-；インドリル-；モルホリニル-；フェニル-；ベンゾジオキソリル-；または、１個以上の次の置換基：場合により置換されているアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ-、シアノ、ハロ、場合により置換されている低級アルキル-、場合により置換されている低級アルコキシ、場合により置換されている低級アルキルスルファニル、ヒドロキシもしくはチオで置換されているフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１７】
R5が、メチル-；エチル-；ブロモ；カルボキシ；シアノ；フェニル-；ハロフェニル-；低級アルキルフェニル-；トリフルオロメチルフェニル-；低級アルコキシフェニル-；ジ(低級アルコキシ)フェニル-；ポリハロフェニル-；ハロ低級アルキルフェニル；フリル-；チエニル-；低級アルキルスルファニルフェニル-；チオフェニル-；アミノフェニル-；アミノカルボニルフェニル-；シアノフェニル-；ジ(低級アルキル)アミノフェニル-；ジ(低級アルキル)フェニル-；アセチルアミノフェニル-；アミノ置換低級アルキルフェニル-；ヒドロキシ置換低級アルキルフェニル-；ピペロニル-；ナフチル-；カルバモイル-；低級アルキルカルバモイル-；ベンジルカルバモイル-；フェニルカルバモイル-；メトキシメチルカルバモイル-；メトキシエチルカルバモイル-；ヒドロキシメチルカルバモイル-；ヒドロキシエチルカルバモイル-；インドリル-；オキザリル-；モルホリニル-；シアノ；カルボキシ；およびモルホリノカルボニル-である、請求項16に記載の化合物。
【請求項１８】
R5が、水素、メチルまたはシアノである、請求項17に記載の化合物。
【請求項１９】
R4およびR5が、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている５、６もしくは７員の脂肪族炭素環を形成している、請求項１に記載の化合物。
【請求項２０】
R3が場合により置換されているイミダゾリル-であり、R3が、式：
【化２】
2006508030.tif 000081
［式中、
R9は、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルコキシ、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルコキシ、および場合により置換されているヘテロアリール-から選択され；
R10およびR11は、独立して、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、または場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-である］
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
R9が、C1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているフェニル；フェニル-；ベンジル-；チオフェニル-；またはC1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているチオフェニル-である、請求項20に記載の化合物。
【請求項２２】
R9が、１個以上のハロおよび／またはメチルで置換されているフェニルである、請求項21に記載の化合物。
【請求項２３】
R11が水素であり、R10が置換C1-C4アルキル-である、請求項20に記載の化合物。
【請求項２４】
R11が水素であり、R10が、アミノメチル-、アミノエチル-、アミノプロピル-、アセチルアミノ-メチル-、アセチルアミノエチル-、ベンジルオキシカルボニルアミノ-メチル-またはベンジルオキシカルボニルアミノ-エチル-である、請求項23に記載の化合物。
【請求項２５】
R3がイミダゾリンであり、かつ、式：
【化３】
2006508030.tif 000082
［式中、
R9は、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-から選択され；
R12、R12’、R13およびR13’は、独立して、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、および場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-から選択される]
を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項２６】
R9が、メチレンジオキシフェニル-；C1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているフェニル；フェニル-；ベンジル-；チオフェニル-；またはC1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているチオフェニル-である、請求項25に記載の化合物。
【請求項２７】
R9が、メチレンジオキシフェニル-；フェニル-；トリル-；メトキシフェニル-；またはハロメチルフェニル-である、請求項26に記載の化合物。
【請求項２８】
R12、R12’、R13’およびR13が、独立して、水素または場合により置換されているC1-C4アルキル-である、請求項25に記載の化合物。
【請求項２９】
R13’およびR13が水素である、請求項28に記載の化合物。
【請求項３０】
R3が、-NHR6、-NR6(COR7)または-NR6(CH2R7b)であり、R6が、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３１】
R6がR16-アルキレン-であり、R16が、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、ヒドロキシル-、およびN-ヘテロシクリル-から選択される、請求項30に記載の化合物。
【請求項３２】
R6が、場合により置換されている低級アルキル-、場合により置換されているシクロヘキシル-；ヒドロキシ、低級アルコキシもしくは低級アルキル-で置換されているフェニル；ベンジル-；ヘテロアリールメチル-；ヘテロアリールエチル-；ヘテロアリールプロピル-から選択される、請求項30に記載の化合物。
【請求項３３】
R6が、メチル-、エチル-、プロピル-、ブチル-、シクロヘキシル-、カルボキシエチル-、カルボキシメチル-、メトキシエチル-、ヒドロキシエチル-、ヒドロキシプロピル-、ジメチルアミノエチル-、ジメチルアミノプロピル-、ジエチルアミノエチル-、ジエチルアミノプロピル-、アミノプロピル-、メチルアミノプロピル-、2,2-ジメチル-3-(ジメチルアミノ)プロピル-、1-シクロヘキシル-4-(ジエチルアミノ)ブチル-、アミノエチル-、アミノブチル-、アミノペンチル-、アミノヘキシル-、アミノエトキシエチル-、イソプロピルアミノプロピル-、ジイソプロピルアミノエチル-、1-メチル-4-(ジエチルアミノ)ブチル-、(t-Boc)アミノプロピル-、ヒドロキシフェニル-、ベンジル-、メトキシフェニル-、メチルメトキシフェニル-、ジメチルフェニル-、トリル-、エチルフェニル-、(オキソピロリジニル)プロピル-、(メトキシカルボニル)エチル-、ベンジルピペリジニル-、ピリジニルエチル-、ピリジニルメチル-、モルホリニルエチルモルホリニルプロピル-、ピペリジニル-、アゼチジニルメチル-、アゼチジニルエチル-、アゼチジニルプロピル-、ピロリジニルメチル-、ピロリジニルエチル-、ピロリジニルプロピル-、ピペリジニルメチル-、ピペリジニルエチル-、イミダゾリルプロピル-、イミダゾリルエチル-、(エチルピロリジニル)メチル-、(メチルピロリジニル)エチル-、(メチルピペリジニル)プロピル-、(メチルピペラジニル)プロピル-、グアニジノ-エチル-、グアニジノ-プロピル-、フラニルメチルおよびインドリルエチル-から選択される、請求項32に記載の化合物。
【請求項３４】
R3が-NR6(COR7)であり、R7が、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-、R8O-およびR14-NH-［式中、R8は、場合により置換されているアルキルおよび場合により置換されているアリールから選択され、R14は、水素、場合により置換されているアルキルおよび場合により置換されているアリールから選択される］から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３５】
R7が、場合により置換されているアルキル-；アリール-；置換アリール-；ベンジル-；および場合により置換されているヘテロアリール-から選択される、請求項34に記載の化合物。
【請求項３６】
R7が、エチル-、プロピル-、クロロプロピル-、ブトキシ、ヘプチル-、ブチル-、オクチル-、トリデカニル-、(エトキシカルボニル)エチル-、ジメチルアミノエチル-、ジメチルアミノメチル-、フェニル-、ナフチル-、ハロフェニル-、ポリハロフェニル-、シアノフェニル-、ヒドロキシメチルフェニル-、ハロ(トリフルオロメチル)フェニル-、クロロフェノキシメチル-、メトキシフェニル-、カルボキシフェニル-、エチルフェニル-、トリル-、ヒドロキシメチルフェニル-；エチルフェニル-；ビフェニリル-、メチレンジオキシフェニル-、メチルスルホニルフェニル-、メトキシクロロフェニル-、クロロナフチル-、アセチルフェニル-、メチルハロフェニル-、トリフルオロメチルフェニル-、トリフルオロメトキシフェニル-、ブチルフェニル-、ペンチルフェニル-、メチルニトロフェニル-、フェノキシメチル-、ジメトキシフェニル-、フェニルビニル-、ニトロクロロフェニル-、ニトロフェニル-、ジニトロフェニル-、ビス(トリフルオロメチル)フェニル-、ベンジルオキシメチル-、ベンジル-、フラニル-、ベンゾフラニル-、ピリジニル-、ピリジル-、インドリル-、メチルピリジニル-、メチルピリジル-、(3-カルバモイル)ピリジニル-[ニコチンアミド]、3-カルバモイル-6-メチルピリジニル-、キノリニル-、ピコリニル-、ピラゾリル-、ピラジニル-、メチルピラジニル-、モルホリノメチル-、メチルチオメチル-、メトキシメチル-、イミダゾリル-；イソキサゾリル-、メチル-イソキサゾリル-；ベンゾチアジアゾリル-；メチレンジオキシフェニル-、チエニル-、メチルチエニル-、メチル-ニコチンアミジル-；メチル-ピラジニル；ベンゾジオキソリル；およびメチル-チオフェニル-から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３７】
R7が、トリル-、ハロフェニル-、ハロメチルフェニル-、ヒドロキシメチルフェニル-、メチレンジオキシフェニル-、ホルミルフェニルまたはシアノフェニル-である、請求項36に記載の化合物。
【請求項３８】
R3が-NR6(CH2R7b)であり、R7bが、C1-C13アルキル-；置換低級アルキル-；フェニル-；ナフチル-；シアノ、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；ビフェニリル-、ベンジルおよびヘテロシクリル-から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３９】
R7bが、１個以上のハロ、メチル-、シアノ、トリフルオロメチル-、トリフルオロメトキシ、カルボキシもしくはメトキシカルボニル基で置換されているフェニル；ピペリジニル-；およびナフチル-から選択される、請求項38に記載の化合物。
【請求項４０】
R7bが、ハロフェニル-、メチルハロフェニル-、ポリハロフェニル-、トリル-、ジメチルフェニル-、メトキシフェニル-、ジメトキシフェニル-、シアノフェニル-、トリフルオロメチルフェニル-、トリフルオロメトキシフェニル-、ビス(トリフルオロメチル)フェニル-、カルボキシフェニル-、t-ブチルフェニル-、メトキシカルボニルフェニル-、ピペリジニル-、およびナフチル-である、請求項39に記載の化合物。
【請求項４１】
R3が-NR6(SO2R7a)であり、R7aが、C1-C13アルキル-；フェニル-；ナフチル-；シアノ、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；ビフェニリルおよびヘテロアリール-から選択される、請求項39に記載の化合物。
【請求項４２】
R7aが、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、シアノ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；およびナフチル-から選択される、請求項41に記載の化合物。
【請求項４３】
R2およびR2'が、それぞれ、R立体配置を有する立体中心に結合している請求項1〜42のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項４４】
塩酸塩、リン酸塩またはシュウ酸塩である、請求項1〜43のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項４５】
医薬品添加物と、請求項1〜44のいずれか一項に記載の化合物、その塩もしくは溶媒和物とを含む組成物。
【請求項４６】
式Iの化合物またはその薬学的な塩もしくは溶媒和物以外の化学療法剤をさらに含む、請求項45に記載の組成物。
【請求項４７】
タキサンをさらに含む、請求項46に記載の組成物。
【請求項４８】
ビンカアルカロイドをさらに含む、請求項46に記載の組成物。
【請求項４９】
トポイソメラーゼI阻害剤をさらに含む、請求項46に記載の組成物。
【請求項５０】
KSPキネシンの活性をモジュレートする方法であって、そのキネシンを、請求項1〜44のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させることを含む上記方法。
【請求項５１】
KSPを阻害する方法であって、そのキネシンを、請求項1〜44のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の有効量と接触させることを含む上記方法。
【請求項５２】
細胞増殖性疾患の治療方法であって、それが必要な被験体に、請求項1〜44のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物を投与することを含む上記方法。
【請求項５３】
細胞増殖性疾患の治療方法であって、それが必要な被験体に、請求項45〜49のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む上記方法。
【請求項５４】
疾患が、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害および炎症からなる群から選択される、請求項52または53に記載の方法。
【請求項５５】
細胞増殖性疾患を治療するための薬剤の製造における、請求項1〜44のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項５６】
KSPキネシン活性に関連する障害を治療するための薬剤を製造するための、請求項55で規定される化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連特許出願の相互参照
本出願は、2002年5月9日に出願された米国仮特許出願60/379,658に基づく優先権を主張する。この出願をすべての目的のために参照により本明細書に組み入れる。
【０００２】
発明の分野
本発明は、有糸分裂キネシンKSPの阻害剤であり、細胞増殖性疾患、例えば、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害、真菌障害および炎症の治療に有用な化合物に関する。
【背景技術】
【０００３】
癌を治療するために用いられる治療薬の中に、微小管に作用するタキサンおよびビンカアルカロイドがある。微小管は有糸分裂紡錘体の一次構造要素である。有糸分裂紡錘体は、細胞分裂により生じる２つの娘細胞のそれぞれのゲノムの複製コピーの分布に関与している。これらの薬物による有糸分裂紡錘体の破壊が、癌細胞の分裂の阻害および癌細胞の死の誘導につながると推定されている。けれども、微小管は、他のタイプの細胞構造、例えば、神経過程における細胞内輸送のためのトラックを形成する。これらの薬剤は有糸分裂紡錘体を特異的に標的にするわけではないので、これらは副作用を有し、その有用性が制限される。
【０００４】
癌を治療するために用いられる薬剤の投与に伴う副作用を低減することができれば治療上有益なので、これらの薬剤の特異性の改良には高い関心が向けられている。伝統的に、癌の治療における劇的な改良は、新規のメカニズムにより作用する治療薬の同定に伴うものである。この例には、タキサンのみでなく、トポイソメラーゼI阻害剤のカンプトテシン類が含まれる。これらの両方の観点から、有糸分裂キネシンは新規の抗癌剤の興味ある標的である。
【０００５】
有糸分裂キネシンは、有糸分裂紡錘体の集合および機能に必須の酵素であるが、神経過程のような他の微小管構造に一般的に関与してはいない。有糸分裂キネシンは有糸分裂のすべての相の間、必須の役割を果たす。これらの酵素は、ATPの加水分解により放出されるエネルギーを、細胞の運搬物を微小管に沿って一定方向に動かす機械的な力に変換する「分子モーター」である。この仕事に十分な触媒ドメインは、およそ340アミノ酸の小型の構造である。有糸分裂の間、キネシンは微小管を二極性の構造、すなわち、有糸分裂紡錘体に組織する。キネシンは染色体の紡錘体微小管に沿っての動き、ならびに有糸分裂の特定の相に関連する有糸分裂紡錘体における構造的変化を仲介する。有糸分裂キネシンの機能を実験的に混乱させると、有糸分裂紡錘体の形成異常または機能不全を起こし、しばしば細胞周期の停止および細胞の死につながる。
【０００６】
同定された有糸分裂キネシンの１つがKSPである。KSPは、逆平行ホモ二量体からなる二極ホモ四量体に集合するプラス端指向性微小管モーターの進化的に保存されたキネシンサブファミリーに属する。有糸分裂の間、KSPは有糸分裂紡錘体の微小管と会合する。KSPに対する抗体をヒト細胞にマイクロインジェクションすると、前中期の間の紡錘体極分離が妨害され、単極紡錘体が形成されて、有糸分裂の停止およびプログラムされた細胞の死が誘導される。KSPおよび他の非ヒト生物における関連するキネシンは、逆平行微小管を束ね、これらを相互に対してスライドさせることにより、２つの紡錘体極を分離させる。KSPはまた、後期Ｂにおける紡錘体の延長を仲介し、微小管を紡錘体極に集中させる。
【０００７】
ヒトKSP（HsEg5とも呼ばれる）については、すでに文献に記載されている（Blangyら、Cell, 83:1159-69 (1995); Whiteheadら、Arthritis Rheum., 39:1635-42 (1996); Galgioら、J. Cell Biol., 135:339-414 (1996); Blangyら、J. Biol. Chem., 272:19418-24 (1997); Blangyら、Cell Motil Cytoskeleton, 40:174-82 (1998); WhiteheadおよびRattner, J. Cell Sci., 111:2551-61 (1998); Kaiserら、JBC 274:18925-31 (1999); GenBank登録番号：X85137, NM004523およびU37426）。また、KSP遺伝子(TRIP5)の断片についても記載されている（Leeら、Mol Endocrinol., 9:243-54 (1995); GenBank登録番号：L40372）。アフリカツメガエルKSP同族体(Eg5)、およびショウジョウバエKLP61 F/KRP1 30についても報告されている。
【０００８】
KSPを含む有糸分裂キネシンは、新規の抗有糸分裂化学療法薬の発見および開発にとって興味ある標的である。したがって、本発明の目的は、KSPの阻害に有用な化合物、組成物および方法を提供することである。
【発明の開示】
【０００９】
上に述べた目的に従って、本発明は細胞増殖性疾患を治療するために使用することができる化合物を提供する。上記化合物は、KSP阻害剤、特に、ヒトKSP阻害剤である。本発明はまた、細胞増殖性疾患を治療するために用いることができる、上記化合物を含む組成物、および上記化合物または組成物を利用する方法を提供する。
【００１０】
１つの態様において、本発明は細胞増殖性疾患を治療する方法、およびKSPの活性を阻害することにより障害を治療する方法に関する。上記方法は、下記の式I：
式I
【化１】
2006508030.tif 000002
【００１１】
［式中、
R1は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R2およびR2’は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択されるか；または、R2およびR2’は、一緒になって、場合により置換されている3〜7員の環を形成し；
R3は、場合により置換されているイミダゾリル-、場合により置換されているイミダゾリニル-、-NHR6；-N(R6)(COR7)；-N(R6)(SO2R7a)；および-N(R6)(CH2R7b)からなる群から選択され；
R4およびR5は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル-、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル-、アルキルスルホンアミド、アルキルスルファニル-、カルボキシアルキル-、カルボキシアミド、アミノカルボニル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル、および場合により置換されているヘテロアリール-から選択されるか；または、R4およびR5は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている５、６もしくは７員の脂肪族炭素環を形成し；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロシクリル-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、R8O-、およびR14-NH-から選択され；
R7aは、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、およびR14-NH-から選択され；
R7bは、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R8は、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R14は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択される]
を有する化合物（式Iは単一の立体異性体および立体異性体の混合物を含む）、
式Iの化合物の薬学的に許容される塩；
式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または
式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物を使用する。
【００１２】
１つの態様において、本発明は、治療上有効な量の式Iの化合物、式Iの化合物の薬学的に許容される塩、式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物、または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物を投与することにより、細胞増殖性疾患およびKSPの阻害により治療することができる他の障害を治療する方法に関する。このような疾患および障害には、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害、真菌障害および炎症が含まれる。
【００１３】
別の態様において、本発明は、KSPキネシンを阻害するために有用な化合物に関する。上記化合物は、上記式Iに示した構造、式Iの化合物の薬学的に許容される塩、式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物、または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物である。本発明はまた、治療上有効な量の式Iの化合物、式Iの化合物の薬学的に許容される塩、式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物、または式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物、および少なくとも１つの医薬品添加物を含む。別の態様において、組成物はさらに本発明の化合物以外の化学療法剤を含む。
【００１４】
別の態様において、本発明は、KSPキネシンに結合する化合物、例えば、本発明の化合物の結合と置換または競合する化合物をスクリーニングする方法を提供する。上記方法は、標識された本発明の化合物、KSPキネシン、および少なくとも１つの候補の物質を混合し、候補の物質のKSPキネシンへの結合を測定することからなる。
【００１５】
さらに別の態様において、本発明はKSPキネシン活性のモジュレーターをスクリーニングする方法を提供する。上記方法は、本発明の化合物、KSPキネシン、および少なくとも１つの候補の物質を混合して、KSPキネシン活性に対する候補の物質の効果を測定することからなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
定義
本明細書において、一般的に以下の用語および表現を、これらが文脈上別の意味で用いられた場合を除き、下記の意味を有するものとして用いる。
【００１７】
Ac     =    アセチル
BNB    =    4-ブロモメチル-3-ニトロ安息香酸
Boc    =    t-ブチルオキシカルボニル
Bu     =    ブチル
c-     =    シクロ
CBZ    =    カルボベンゾキシ  ＝  ベンジルオキシカルボニル
DBU    =    ヂアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ-7-エン
DCM    =    ジクロロメタン  ＝  塩化メチレン  ＝  CH2Cl2
DCE    =    ジクロロエタン
DEAD   =    ジエチルアゾジカルボキシレート
DIC    =    ジイソプロピルカルボジイミド
DIEA   =    N,N-ジイソプロピルエチルアミン
DMAP   =    4-N,N-ジメチルアミノピリジン
DMF    =    N,N-ジメチルホルムアミド
DMSO   =    ジメチルスルホキシド
DVB    =    1,4,-ジビニルベンゼン
EEDQ   =    2-エトキシ-1-エトキシカルボニル-1,2-ジヒドロキノリン
Et     =    エチル
ETOH   =    エタノール
Fmoc   =    9-フルオレニルメトキシカルボニル
GC     =    ガスクロマトグラフィー
HATU   =    O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウム
ヘキサフルオロホスフェート
HMDS   =    ヘキサメチルジシラザン
HOAc   =    酢酸
HOBt   =    ヒドロキシベンゾトリアゾール
Me     =    メチル
mesyl  =    メタンスルホニル
MTBE   =    メチルt-ブチルエーテル
NMO    =    N-メチルモルホリンオキシド
PEG    =    ポリエチレングリコール
Ph     =    フェニル
PhOH   =    フェノール
PfP    =    ペンタフルオロフェノール
PPTS   =    ピリジニウムp-トルエンスルホネート
Py     =    ピリジン
PyBroP =    ブロモ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
rt     =    室温
sat’d   =    飽和
s-     =    第２級
t-     =    第３級
TBDMS  =    t-ブチルジメチルシリル
TES    =    トリエチルシリル
TFA    =    トリフルオロ酢酸
THF    =    テトラヒドロフラン
TMOF   =    オルトギ酸トリメチル
TMS    =    トリメチルシリル
tosyl  =    p-トルエンスルホニル
Trt    =    トリフェニルメチル
アルキルは、直鎖、分枝鎖、または環状脂肪族炭化水素構造およびそれらの組合せを含むものとし、これらの構造は飽和または不飽和であってよい。低級アルキルは1〜5炭素原子、好ましくは1〜4炭素原子のアルキル基を指す。低級アルキル基の例には、メチル-、エチル-、プロピル-、イソプロピル-、ブチル-、s-およびt-ブチル等が含まれる。好ましいアルキル基はC20以下のものである。より好ましいアルキル基はC13以下のものである。シクロアルキルはアルキルの部分集合であり、3〜13炭素原子の環状脂肪族炭化水素基を含む。シクロアルキル基の例には、c-プロピル-、c-ブチル-、c-ペンチル-、ノルボルニル-、アダマンチル等が含まれる。シクロアルキルアルキルはアルキルの別の部分集合であり、環状でないアルキル-を介して親構造に結合するシクロアルキルを指す。シクロアルキルアルキルの例には、シクロヘキシルメチル-、シクロプロピルメチル-、シクロヘキシルプロピル-等が含まれる。この適用において、アルキルはアルカニル-、アルケニル-およびアルキニル残基を含む。すなわち、ビニル-、アリル-、イソプレニル等を含む。特定の数の炭素を有するアルキル残基を指定する場合、その数の炭素を有するすべての幾何異性体が含まれるものとする。したがって、例えば、「ブチル」は、n-ブチル、sec-ブチル、イソブチルおよびt-ブチルを含むことを意味し、「プロピル」は、n-プロピル、イソプロピルおよびc-プロピルを含む。
【００１８】
アルキレン、アルケニレンおよびアルキニレンはアルキル-の別の部分集合であり、アルキル-と同一の残基を含むが、化学構造内に２つの結合点を有する。アルキレンの例には、エチレン(-CH2CH2-)、プロピレン(-CH2CH2CH2-)、ジメチルプロピレン(-CH2C(CH3)2CH2-)およびシクロヘキシルプロピレン(-CH2CH2CH(C6H13)-)が含まれる。同様に、アルケニレンの例には、エテニレン(-CH=CH-)、プロペニレン(-CH=CH-CH2-)、およびシクロヘキシルプロペニレン(-CH=CHCH(C6H13)-)が含まれる。アルキニレンの例には、エチニレン(-C≡C-)およびプロピニレン(-CH≡CH-CH2-)が含まれる。
【００１９】
シクロアルケニルはアルキルの別の部分集合であり、3〜13炭素原子の不飽和環状炭化水素基を含む。シクロアルケニル基の例には、c-ヘキセニル-、c-ペンテニル等が含まれる。
【００２０】
アルコキシまたはアルコキシルは、好ましくは1〜8炭素原子を含み、直鎖、分枝鎖または環状配置またはそれらの組合せを有する、酸素を介して親構造に結合するアルキル基（すなわち、アルキル-O-基）を指す。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシ等が含まれる。低級アルコキシとは、1〜4の炭素を含むアルコキシ基を指す。
【００２１】
アシルは、1〜8炭素原子の直鎖、分枝鎖または環状配置またはそれらの組合せの、カルボニル官能基を介して親構造に結合する基を指す。上記の基は飽和または不飽和であってよく、脂肪族または芳香族であってよい。親構造への結合点がカルボニルである限り、アシル残基中の１つ以上の炭素が、酸素、窒素（例えば、カルボキシアミド）または硫黄で置き換えられていてもよい。例としては、アセチル-、ベンゾイル-、プロピオニル-、イソブチリル-、オキサリル-、t-ブトキシカルボニル-、ベンジルオキシカルボニル、モルホリニルカルボニル等が含まれる。低級アシルとは、1〜4の炭素を含むアシル基を指す。
【００２２】
アミノは、-NH2基を指す。「置換アミノ」という用語は、-NHRまたは-NRR基（式中、それぞれのRは、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアミノカルボニル、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロシクリル-、アシル-、アルコキシカルボニル-、スルファニル-、スルフィニルおよびスルホニル-から独立して選択される）、例えば、ジエチルアミノ、メチルスルホニルアミノ、フラニルオキシスルホンアミノを指す。
【００２３】
アミノカルボニルは、-NRcCORb、-NRcCO2Rb、または-NRcCONRbRc基を指し、
式中、
Raは、場合により置換されているC1-C6アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、またはヘテロアリール-C1-C4アルキル-基であり；
Rbは、Hまたは場合により置換されているC1-C6アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、またはヘテロアリール-C1-C4アルキル-基であり；および
Rcは、水素またはC1-C4アルキル-であり；そして、
それぞれの場合により置換されているRb基は、独立して、置換されていないか、またはC1-C4アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル-、-OC1-C4アルキル、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロゲン、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4フェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-S2O (フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、および-NHSO2(C1-C4ハロアルキル)から独立して選択される１つ以上の置換基により置換される。
【００２４】
抗有糸分裂薬とは、例えば中期の停止を引き起こすことにより、有糸分裂を阻害または妨害する薬物を指す。いくつかの抗腫瘍薬は増殖を遮断し、抗有糸分裂薬であると考えられている。
【００２５】
アリールおよびヘテロアリールは、それぞれO、NまたはSから選択される0または1〜4のヘテロ原子を含む5または6員芳香族環または芳香族複素環；それぞれO、NまたはSから選択される0または1〜4（またはそれ以上）のヘテロ原子を含む二環式の9または10員芳香族環または芳香族複素環系；または、それぞれO、NまたはSから選択される0または1〜4（またはそれ以上）のヘテロ原子を含む三環式の12〜14員芳香族環または芳香族複素環系を意味する。芳香族6〜14員炭素環には、例えば、フェニル-、ナフチル-、インダニル-、テトラリニル-およびフルオレニルが含まれ、5〜10員芳香族複素環には、例えば、イミダゾリル-、ピリジニル-、インドリル-、チエニル-、ベンゾピラノニル-、チアゾリル-、フラニル-、ベンズイミダゾリル-、キノリニル-、イソキノリニル-、キノキサリニル-、ピリミジニル-、ピラジニル-、テトラゾリルおよびピラゾリル-が含まれる。
【００２６】
アラルキルは、アリール基がアルキル残基を介して親構造に結合する残基を指す。例としてはベンジル-、フェネチル-、フェニルビニル-、フェニルアリル等が含まれる。ヘテロアラルキルはヘテロアリール基がアルキル残基を介して親構造に結合する残基を指す。例としては、フラニルメチル-、ピリジニルメチル-、ピリミジニルメチル等が含まれる。
【００２７】
アルアルコキシは、-O-アラルキル基を指す。同様に、ヘテロアルアルコキシは、-O-ヘテロアラルキル基を指し、アリールオキシは、-O-アリール基を指し、アシルオキシは、-O-アシル基を指し、ヘテロアリールオキシは、-O-ヘテロアリール基を指し、ヘテロシクリルオキシは、-O-ヘテロシクリルを指す（すなわち、アラルキル-、ヘテロアラルキル-、アリール-、アシル-、ヘテロシクリル-またはヘテロアリールが、酸素を介して親構造に結合している）。
【００２８】
カルボキシアルキル-は、-アルキル-COOH基を指す。
【００２９】
カルボキシアミドは、-CONRbRc基を指し、式中、
Rbは、Hまたは場合により置換されているC1-C6アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、またはヘテロアリール-C1-C4アルキル基であり；
Rcは、水素またはC1-C4アルキルであり；および
それぞれの場合により置換されているRb基は、独立して、置換されていないか、または、C1-C4アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル-、-OC1-C4アルキル-、-OC1-C4アルキルフェニル、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル、ハロゲン、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、-CO2H、-C(O)OC1-C4アルキル、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル、-C(O)C1-C4フェニル、-C(O)C1-C4ハロアルキル、-OC(O)C1-C4アルキル、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、およびNHSO2(C1-C4ハロアルキル)から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されている。カルボキシアミドは、カルバモイル；低級アルキルカルバモイル；ベンジルカルバモイル；フェニルカルバモイル；メトキシメチル-カルバモイル等を含むことを意味する。
【００３０】
ハロゲンまたはハロは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。フッ素、塩素および臭素が好ましい。ジハロアリール-、ジハロアルキル-、トリハロアリール等は、指定された数のハロゲン（ここでは、それぞれ2、2および3）により置換されたアリールおよびアルキルを指すが、複数の同じハロゲンである必要はない。したがって、4-クロロ-3-フルオロフェニルはジハロアリール-の範囲に含まれる。
【００３１】
ヘテロシクリルは、1〜4個の炭素が酸素、窒素または硫黄のようなヘテロ原子により置き換えられているシクロアルキルまたはアリール残基を意味する。本発明の範囲に含まれるヘテロシクリルの例には、アゼチジニル-、イミダゾリニル-、ピロリジニル-、ピラゾリル-、ピロリル-、インドリル-、キノリニル-、イソキノリニル-、テトラヒドロイソキノリニル-、ベンゾフラニル-、ベンゾジオキサニル-、ベンゾジオキシル（置換基として存在する場合には、通常メチレンジオキシフェニル-と呼ばれる）、テトラゾリル-、モルホリニル-、チアゾリル-、ピリジニル-、ピリダジニル-、ピペリジニル-、ピリミジニル-、チエニル-、フラニル-、オキサゾリル-、オキサゾリニル-、イソキサゾリル-、ジオキサニル-、テトラヒドロフラニル等が含まれる。「N-ヘテロシクリル」は、窒素を含むヘテロシクリルを指す。ヘテロシクリルの用語は、ヘテロシクリル-の部分集合であるヘテロアリール-を含む。N-ヘテロシクリル残基の例には、アゼチジニル-、4-モルホリニル-、4-チオモルホリニル-、1-ピペリジニル-、1-ピロリジニル-、3-チアゾリジニル-、ピペラジニルおよび4-(3,4-ジヒドロベンズオキサジニル)が含まれる。置換されたヘテロシクリルの例には、4-メチル-1-ピペラジニルおよび4-ベンジル-1-ピペリジニル-が含まれる。
【００３２】
脱離基または原子は、反応条件下で出発物質から開裂することにより特定の位置における反応を促進する基または原子である。このような基の好適な例は、他に特定しない限り、ハロゲン原子、メシルオキシ、p-ニトロベンゼンスルホニルオキシおよびトシルオキシ基である。
【００３３】
「場合により」または「〜てもよい」とは、記載された事柄または状態が起こっても起こらなくてもよいこと、およびその記載が上記の事柄または状態が起こった場合の例および起こらなかった場合の例を含むことを意味する。例えば、「場合により置換されているアルキル」は、本明細書に定義される「アルキル」および「置換されたアルキル」を含む。当業者は、１つ以上の置換基を有する基に関して、このような基が立体的に実現不可能および/または合成不可能および/または本質的に不安定である置換または置換のパターンを導入することを意図するものではないことを理解するであろう。
【００３４】
置換アルコキシは、アルキル部分が置換されたアルコキシ（すなわち、-O-(置換アルキル)）を指す。１つの好適な置換アルコキシ基は、「ポリアルコキシ」または-O-(場合により置換されているアルケン)-(場合により置換されているアルコキシ)であって、-OCH2CH2OCH3のような基、およびポリエチレングリコールのようなグリコールエステルの残基、および-O(CH2CH2O)xCH3（式中、xは約2〜20、好ましくは約2〜10、より好ましくは約2〜5の整数である）を含む。別の好適な置換アルコキシ基は、ヒドロキシアルコキシまたは-OCH2(CH2)yOH（式中、yは約1〜10、好ましくは約1〜4の整数である）である。
【００３５】
置換されたアルキル-、アリール-およびヘテロアリール-は、それぞれ、１つ以上（約5まで、好ましくは約3まで）の水素原子が下記の群から独立して選択される置換基により置き換えられているアルキル、アリールおよびヘテロアリールを指す：すなわち、
-Ra、-ORb、-O(C1-C2アルキル)O-（アリールの置換基として）、-SRb、グアニジン、１つ以上のグアニジン水素が低級アルキル基で置換されたグアニジン、-NRbRc、ハロゲン、シアノ、ニトロ、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Rb、-OCONRbRc、-NRcCORb、-NRcCO2Rb、-NRcCONRbRc、-CO2Rb、-CONRbRc、-NRcCORb、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRbRc、および-NRcSO2Ra、
式中、
Raは、場合により置換されているC1-C6アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、またはヘテロアリール-C1-C4アルキル-であり；
Rbは、Hまたは場合により置換されているC1-C6アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、またはヘテロアリール-C1-C4アルキル-基であり；
Rcは、水素またはC1-C4アルキル-であり；また、
それぞれの場合により置換されているRa基およびRb基は、独立して、置換されていないか、または、C1-C4アルキル-、アリール-、ヘテロアリール-、アリール-C1-C4アルキル-、ヘテロアリール-C1-C4アルキル-、C1-C4ハロアルキル-、-OC1-C4アルキル-、-OC1-C4アルキルフェニル-、-C1-C4アルキル-OH、-OC1-C4ハロアルキル-、ハロゲン、-OH、-NH2、-C1-C4アルキル-NH2、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-NH(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキルフェニル)、-NH(C1-C4アルキルフェニル)、シアノ、ニトロ、オキソ（ヘテロアリールの置換基として）、-CO2H、-C(O)C1-C4アルキル-、-CON(C1-C4アルキル)(C1-C4アルキル)、-CONH(C1-C4アルキル)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4アルキル)、-NHC(O)(フェニル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(C1-C4アルキル)、-N(C1-C4アルキル)C(O)(フェニル)、-C(O)C1-C4アルキル-、-C(O)C1-C4フェニル-、-C(O)C1-C4ハロアルキル-、-OC(O)C1-C4アルキル-、-SO2(C1-C4アルキル)、-SO2(フェニル)、-SO2(C1-C4ハロアルキル)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4アルキル)、-SO2NH(フェニル)、-NHSO2(C1-C4アルキル)、-NHSO2(フェニル)、およびNHSO2(C1-C4ハロアルキル)から独立して選択される１つ以上の置換基により置換されている。
【００３６】
スルファニルは、-S-(場合により置換されているアルキル)、-S-(場合により置換されているアリール)、-S-(場合により置換されているヘテロアリール)、および-S-(場合により置換されているヘテロシクリル) 基を指す。
【００３７】
スルフィニルは、-S(O)-H、-S(O)-(場合により置換されているアルキル)、-S(O)-(場合により置換されているアリール)、-S(O)-(場合により置換されているヘテロアリール)、-S(O)-(場合により置換されているヘテロシクリル)、および-S(O)-(場合により置換されているアミノ)基を指す。
【００３８】
スルホニルは、-S(O2)-H、-S(O2)-(場合により置換されているアルキル)、-S(O2)-(場合により置換されているアリール)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロアリール)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロシクリル)、-S(O2)-(場合により置換されているアルコキシ)、-S(O2)-(場合により置換されているアリールオキシ)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロアリールオキシ)、-S(O2)-(場合により置換されているヘテロシクリルオキシ)、および-S(O2)-(場合により置換されているアミノ)基を指す。
【００３９】
薬学的に許容される塩は、遊離の化合物の生物学的有効性を保持しており、生物学的に望ましくない点がないか、または薬学的使用に不適当でない、適切な酸または塩基と共に形成された塩を指し、薬学的に許容される酸付加塩および塩基付加塩を含む。薬学的に許容される酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等のような無機酸に由来するもの、および酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸等のような有機酸に由来するものが含まれる。
【００４０】
薬学的に許容される塩基付加塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅、マンガン、アルミニウム塩等のような無機塩基に由来するものが含まれる。特定の実施形態では、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、カルシウム、およびマグネシウム塩である。塩基付加塩にはまた、第１、第２，および第３アミン、置換アミン、例えば、天然に存在する置換アミン、環状アミンおよび塩基性イオン交換樹脂の塩を含む、薬学的に許容される有機非毒性塩基、例えば、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、およびエタノールアミンに由来するものが含まれる。
【００４１】
保護基は、有機合成に関して一般的に用いられる意味で、多官能化合物における１つ以上の反応部位を選択的に遮断する基で、それにより化学反応が別の保護されていない反応部位で選択的に行われ、また上記基は選択的反応が終了した後に容易に除去することができるものである。さまざまな保護基が、例えば、T.H.GreeneおよびP.G.M.Wuts, 「有機合成における保護基」(Protective Groups in Organic Synthesis)、第３版、John Wiley & Sons, New York (1999)に開示されている。この文献全体を参照により本明細書に組み入れる。例えば、ヒドロキシ保護型は、化合物中に存在する少なくとも１つのヒドロキシ基がヒドロキシ保護基により保護されているものである。また、アミンおよび他の反応性基も同様に保護される。
【００４２】
溶媒和物は、溶媒と式Iの化合物またはその塩の相互作用により形成される化合物を指す。式Iの化合物またはその塩の好ましい溶媒和物は、水和物を含む、薬学的に許容される溶媒和物である。
【００４３】
本明細書に記載される化合物の多くが１つ以上の不斉中心（例えば、R2およびR2’が結合しており、R2がR2’と異なるような炭素）を有し、そのためエナンチオマー、ジアステレオマー、および絶対立体化学の用語で(R)-または(S)-として定義される他の立体異性体を与える。本発明は、ラセミ混合物、光学的に純粋な形および中間の混合物を含む、上記の可能な異性体のすべてを含むことを意味する。光学活性な(R)-および(S)-異性体はキラルシントンまたはキラル試薬を用いて調製、または通常の技術を用いて分割することができる。本明細書に記載された化合物がオレフィンの二重結合または他の幾何非対称の中心を有する場合、他に特に記載されない限り、化合物はEおよびZ幾何異性体の両方を含むものとする。同様に、すべての互変異性体および回転異性体もまた含まれるものとする。
【００４４】
必要ならば、R-およびS-異性体を当業者に公知の方法により分割してもよい。上記方法の例としては、例えば結晶化により分離することができるジアステレオマー塩または複合体の形成；例えば結晶化、ガス-液体もしくは液体クロマトグラフィーにより分離することができるジアステレオマー誘導体の形成；例えば酵素的酸化または還元のようなエナンチオマー特異的試薬との一方のエナンチオマーの選択的反応の後、修飾されたおよび修飾されないエナンチオマーを分離すること；または、キラルな環境、例えば、キラルリガンドが結合したシリカのようなキラル支持体上またはキラル溶媒の存在下におけるガス-液体または液体クロマトグラフィーが挙げられる。望まれるエナンチオマーを上記の分離方法の１つにより別の化学物質に変えた場合には、望まれるエナンチオマーの形を遊離させるための付加的な段階が必要となることは理解されるであろう。あるいは、光学活性な試薬、基質、触媒または溶媒を用いる不斉合成により、または不斉変換によって一方のエナンチオマーを他方のものに変換することにより特定のエナンチオマーを合成してもよい。
【００４５】
本発明の化合物
本発明は、１つ以上の有糸分裂キネシンの阻害剤である、ピリミジノン誘導体と表記することができる新規の化合物のクラスに関する。有糸分裂キネシンを阻害し、他のキネシン（例えば、輸送キネシン）を阻害しないことにより、細胞増殖の特異的阻害が達成される。理論に拘束されることを目的としないが、本発明は、有糸分裂キネシン機能の混乱が有糸分裂紡錘体の形成異常または機能不全を起こし、しばしば細胞周期の停止および細胞の死をもたらすという知見を利用している。本発明の一実施形態によれば、本明細書に記載される化合物は有糸分裂キネシン、KSP、特にヒトKSPを阻害する。別の実施形態によれば、上記化合物は有糸分裂キネシン、KSPを阻害すると同時に、HSET（米国特許第6,361,993号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；MCAK（米国特許第6,331,424号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；CENP-E（PCT公開番号WO 99/13061を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Kif4（米国特許第6,440,684号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；MKLP1（米国特許第6,448,025号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Kif15（米国特許第6,355,466号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Kid（米国特許第6,387,644号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Mppl、CMKrp、KinI-3（米国特許第6,461,855号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Kip3a（PCT公開番号WO 01/96593を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；Kip3d（米国特許第6,492,151号を参照されたい。この文献を参照により本明細書に組み入れる）；およびRabK6からなる群より選択される１つ以上のヒト有糸分裂キネシンをモジュレートする。
【００４６】
有糸分裂キネシンを阻害する方法は、本発明の阻害剤をキネシン、特にヒトキネシン、好ましくはヒトKSPまたはその断片および変異体と接触させることからなる。阻害は、有糸分裂紡錘体を崩壊させるような、KSPキネシンのATP加水分解活性に対するものおよび/または有糸分裂紡錘体形成活性に対するものであり得る。減数分裂紡錘体もまた崩壊する。
【００４７】
本発明は、細胞増殖と関連する障害の治療のための、有糸分裂キネシン、特にKSP、より特定的にはヒトKSPの阻害剤を提供する。本明細書に記載される化合物、組成物および方法は、その選択性が異なっている可能性があり、好ましくは、癌、過形成、再狭窄、心肥大、免疫障害、真菌障害および炎症を含むが、これらに限定されない細胞増殖性疾患を治療するために使用される。
【００４８】
したがって、本発明は、式I：
式I
【化２】
2006508030.tif 000003
【００４９】
［式中、
R1は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R2およびR2’は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択されるか；または、R2およびR2’は、一緒になって、場合により置換されている3〜7員の環を形成し；
R3は、場合により置換されているイミダゾリル-、場合により置換されているイミダゾリニル-、-NHR6；-N(R6)(COR7)；-N(R6)(SO2R7a)；および-N(R6)(CH2R7b)からなる群から選択され；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロシクリル-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、R8O-、およびR14-NH-から選択され；
R7aは、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、およびR14-NH-から選択され；
R7bは、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R8は、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され；
R14は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択され、
R4およびR5は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル-、ニトロ、シアノ、ジアルキルアミノ、アルキルスルホニル-、アルキルスルホンアミド、アルキルスルファニル-、カルボキシアルキル-、カルボキシアミド、アミノカルボニル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル、および場合により置換されているヘテロアリール-から選択されるか；または、R4およびR5は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている５、６もしくは７員の脂肪族炭素環を形成する]
を有する、単一の立体異性体および立体異性体の混合物を含む化合物、
式Iの化合物の薬学的に許容される塩；
式Iの化合物の薬学的に許容される溶媒和物；または
式Iの化合物の薬学的に許容される塩の薬学的に許容される溶媒和物
を使用する方法に関する。
【００５０】
命名法
式Iの化合物は、以下に記載の方法に従って（例えば、ISIS-DRAWまたはChemDrawのAutoNom version 2.1を用いて）、命名および番号付けすることができる。例えば、化合物：
【化３】
2006508030.tif 000004
【００５１】
すなわち、R1がベンジルであり、R2がプロピル(またはi-プロピル)であり、R2’が水素であり;R3が-N(R6)(COR7)であり;R4がメチル-であり;R5が水素であり;R6がアミノプロピル-であり;およびR7がp-トリルである式Iの化合物は、N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミドと命名することができる。
【００５２】
同様に、化合物：
【化４】
2006508030.tif 000005
【００５３】
すなわち、R1がベンジル-であり、R2がエチル-であり、R2’が水素であり;R3が置換イミダゾリル-であり;およびR4およびR5が水素である式Iの化合物は、3-ベンジル-2-[1-(2-メチル-イミダゾール-1-イル)-プロピル]-3H-ピリミジン-4-オンと命名することができる。
【００５４】
化合物：
【化５】
2006508030.tif 000006
【００５５】
すなわち、R1がベンジル-であり、R2がi-プロピル-であり、R2’が水素であり;R3が-N(R6)(COR7)であり;R6がアミノプロピル-であり;R7がp-トリル-であり;およびR4およびR5,がそれらが結合している炭素と一緒になって、6員の炭素環を形成している式Iの化合物は、N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(3-ベンジル-4-オキソ-3,4,5,6,7,8-ヘキサヒドロ-キナゾリン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミドと命名することができる。
【００５６】
合成反応のパラメータ
式Iの化合物は、以下の反応スキームを参照しながら記載された方法に従って製造することができる。
【００５７】
他に特定しない限り、「溶媒」、「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」の用語は、これと関連して記載される反応条件下で不活性な溶媒を意味し、たとえば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン(“THF”)、ジメチルホルムアミド(“DMF”)、クロロホルム、塩化メチレン（またはジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジン等を含む。別に特定しない限り、本発明の反応に用いられる溶媒は不活性有機溶媒である。
【００５８】
“q.s.”の用語は、記載された機能を達成するために、たとえば、溶液を所望の体積（すなわち100%）にするために、十分な量を加えることを意味する。
【００５９】
一般的に、カルボン酸のエステルは、通常のエステル化方法により調製される。たとえば、アルキルエステルは、要求されるカルボン酸を、一般的に酸性条件下で適当なアルカノールにより処理することにより調製される。同様に、アミドは通常のアミド化方法を用いて調製される。たとえば、アミドは、活性化したカルボン酸を適切なアミンにより処理することによって調製される。あるいは、Tetrahedron Lett. 48, 4171-4173, (1977)に記載される方法に従って、酸のメチルエステルのような低級アルキルエステルを、必要に応じてトリメチルアルミニウムの存在下でアミンにより処理して要求されるアミドを得てもよい。カルボキシル基はアルキルエステル、たとえばメチルエステルとして保護してもよい。このエステルは、通常の方法を用いて調製および除去することができるが、カルボメトキシをカルボキシルに変換する１つの便利な方法は、水酸化リチウム水溶液を用いるものである。
【００６０】
本明細書に記載される化合物の塩および溶媒和物は、必要に応じて当業者が通常行う方法により作られる。たとえば、本発明の化合物が酸である場合、アミン（第１，第２および第３）、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物等のような無機または有機塩基により遊離の酸を処理することにより所望の塩基付加塩が調製される。適当な塩の例には、グリシンおよびアルギニンのようなアミノ酸；アンモニア；第１、第２および第３アミン；エチレンジアミン、およびシクロヘキシルアミン、ピペリジン、モルホリン、およびピペラジンのような環状アミンに由来する有機塩、ならびに、ナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、およびリチウムに由来する無機塩が含まれる。
【００６１】
化合物が塩基である場合、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等のような無機酸により、または酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、グルクロン酸またはガラクツロン酸のようなピラノシジル酸、クエン酸または酒石酸のようなアルファヒドロキシ酸、アスパラギン酸またはグルタミン酸のようなアミノ酸、安息香酸またはケイ皮酸のような芳香族酸、p-トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸のようなスルホン酸等のような有機酸により遊離の塩基を処理することを含む、当業者に公知の適当な方法により、所望の酸付加塩が調製される。
【００６２】
本明細書に記載される化合物および中間物質の単離および精製は、必要ならば、たとえば、濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーもしくは厚層クロマトグラフィー、またはこれらの方法の組合せのような適当な分離または精製法により行ってもよい。適当な分離および単離法の具体的な説明は下記の実施例に記載する。けれども、他の同等の分離または単離法ももちろん使用することができる。
【００６３】
式Iの化合物の合成
式Iの化合物は、後記の反応スキームを参照しながら、次の手順により製造できる。
【００６４】
反応スキームの簡単な説明
反応スキーム１は、R3が-N(R6)(COR7)である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００６５】
反応スキーム２は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式205の化合物の合成を説明するものである。
【００６６】
反応スキーム３は、R3が-N(R6)(SO2R7a)である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００６７】
反応スキーム４は、R3が-N(R6)(CH2R7b)である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００６８】
反応スキーム５は、R3が場合により置換されているイミダゾリル-である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００６９】
反応スキーム６は、R3が場合により置換されているイミダゾリル-である式Iの化合物の別の合成を説明するものである。
【００７０】
反応スキーム７は、R3が場合により置換されているイミダゾリニル-である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００７１】
反応スキーム８は、R3が場合により置換されているイミダゾリニル-である式Iの化合物の別の合成を説明するものである。
【００７２】
反応スキーム９は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式907の化合物の合成を説明するものである。
【００７３】
反応スキーム10は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式907の化合物の別の合成を説明するものである。
【００７４】
反応スキーム11は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式1103の化合物の合成を説明するものである。
【００７５】
反応スキーム12は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式1203の化合物の合成を説明するものである。
【００７６】
反応スキーム13は、R4が-(CO)NH2または-CNである式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００７７】
反応スキーム14は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式1405の化合物の合成を説明するものである。
【００７８】
反応スキーム15は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式1505の化合物の合成を説明するものである。
【００７９】
反応スキーム16は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式1605の化合物の合成を説明するものである。
【００８０】
反応スキーム17は、R5がブロモまたはフェニルである式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８１】
反応スキーム18は、R5が-CNまたは-(CH2)NH(CO)CH3である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８２】
反応スキーム19は、R3が-N(R6)(COR7)であり、R7が-OR9である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８３】
反応スキーム20は、R3が-N(R6)(COR7)であり、R7が-NHR14である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８４】
反応スキーム21は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式2103の化合物の合成を説明するものである。
【００８５】
反応スキーム22は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式2205の化合物の合成を説明するものである。
【００８６】
反応スキーム23は、式Iの化合物の合成における中間体として有用な式2305の化合物の合成を説明するものである。
【００８７】
反応スキーム24は、R3が-N(R6)(COR7)である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８８】
反応スキーム25は、R3が-N(R6)(COR7)である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００８９】
反応スキーム26は、R3が場合により置換されているイミダゾリニルである式Iの化合物の別の合成を説明するものである。
【００９０】
反応スキーム27は、R3が場合により置換されているイミダゾリル-である式Iの化合物の別の合成を説明するものである。
【００９１】
反応スキーム28は、R5が場合により置換されているアミノ基である式Iの化合物の合成を説明するものである。
【００９２】
出発物質
場合により置換されている式101のβ-ケトアミドおよび他の反応物は、例えばAldrich Chemical Company（Milwaukee, WI）から販売されているか、あるいは、当業者であれば一般に用いられる合成方法を用いて容易に製造することができる。
【００９３】
反応スキーム１
【化６】
2006508030.tif 000007
2006508030.tif 000008
【００９４】
式103の製造
反応スキーム1のステップ１を参照すると、不活性有機溶媒（例えばキシレン）中の場合により置換されているアセトアセトアミド（式101の化合物）またはアセトアセテートエステルの混合物を、ドライアイス還流冷却器を備えたフラスコに添加する。得られた混合物を加熱還流し、約３時間にわたり気体アンモニアで連続的にパージし、次に室温まで冷却する。この反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。場合により置換されているβ-アミノクロトンアミド（式103の化合物）を単離し、精製する。
【００９５】
式105の製造
反応スキーム１のステップ２を参照すると、新たに生成させたナトリウムエトキシドを、エタノール中の式103の化合物とわずかに過剰（好ましくは約1.1当量）の適切に保護したα-アミノ酸エステル（式104の化合物、好ましくは保護基（PG）がBocであるもの）との混合物に添加する。得られた溶液を数時間にわたり加熱還流する。生成物である式105のピリミジノンを単離し、精製する。
【００９６】
式106の製造
反応スキーム1のステップ３を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジオキサン）中の式105のピリミジノンの溶液に、室温で維持しながら、過剰（好ましくは約1.2当量）の水素化リチウムを添加する。得られた懸濁液を約15分間撹拌し、続いてわずかに過剰（好ましくは約1.1当量）の構造R1-X［式中、Xは脱離基、好ましくはトシレートであり、R1は上記で定義したとおりである］を有する化合物を添加する。反応混合物を約20〜24時間にわたり加熱還流する。生成物である式106のピリミジノンを単離し、精製する。
【００９７】
式107の製造
反応スキーム1のステップ４を参照すると、式106の化合物のアミノ保護基を除去する。例えば、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式106のピリミジノン［式中、アミノ保護基（PG）はBocである］の溶液に、温度を約０℃に維持しながら、トリフルオロ酢酸を添加する。次に、得られた溶液を室温で１時間撹拌し、減圧濃縮する。生成物である式107の化合物を単離し、さらに精製せずに次のステップで使用する。当業者であれば、他の保護基の除去は当業界で公知の条件を用いて達成できることが容易に理解されよう。例えば、Greeneら（前掲）を参照されたい。
【００９８】
式109の製造
反応スキーム1のステップ５を参照すると、式107のピリミジノンの溶液に、わずかに過剰（好ましくは約1.２当量）のR6’を含むアルデヒド（すなわち、式R6’CHO［式中、R6’CH2-はR6と同等であり、R6は上記で定義したとおりであるか、そのような置換基の保護された前駆体である］を有する化合物であり、例えば(3-オキソ-プロピル)-カルバミン酸tert-ブチルエステルである）および還元剤（例えばトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を順次添加する。得られた混合物を数時間撹拌する。生成物である式109のピリミジノンを単離し、精製する。
【００９９】
式110の製造
反応スキーム１のステップ６を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式109のピリミジノンおよびアミン塩基（例えばジイソプロピルエチルアミン）の溶液に、R7アシル塩化物（例えばCl-C(O)-R7［式中、R7は上記に記載されているとおりである］）を添加する。得られた溶液を、窒素下で、室温にて数時間撹拌する。生成物である式110のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１００】
式111の製造
次に、場合によっては、式110の化合物の保護基を除去する。例えば、R6が保護したアミンを含み、その保護基がBoc基である場合、反応スキーム１のステップ７を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式110のピリミジノンの溶液に、反応物を室温付近に維持しながら、トリフルオロ酢酸を添加する。反応は、例えばTLCによりモニターする。完了したら、生成物である式111のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１０１】
式107の光学活性化合物の製造
本発明の特定の化合物では、R2が結合している立体中心において特定の立体構造（例えば(R)異性体）が好ましいことがある。この光学的に活性な化合物は、当業界で公知の方法により製造できる。例えば、式107のアミンを不活性有機溶媒（例えばIPA）に溶解し、60℃まで温める。別の容器で、分割剤（例えばジベンゾイル-D-酒石酸）を好ましくは温めた同じ溶媒に溶解し、次に温めた上記のアミン溶液に（撹拌しながら）素早く添加する。反応混合物を撹拌を続けながら16時間にわたり室温まで冷却することにより結晶化させる。目的とする異性体（例えば(R)異性体）を単離し、精製する。
【０１０２】
式Iの化合物の合成の残りの記載を簡略化するために、単一の異性体または異性体の混合物のいずれかを用いても、対応する生成物を得ることができることを理解すべきである。
【０１０３】
反応スキーム２
【化７】
2006508030.tif 000009
【０１０４】
式203の製造
反応スキーム２のステップ１を参照すると、不活性有機溶媒（例えばキシレン）中の場合により置換されている式201のβ-ケトアミドの混合物を、ドライアイス還流冷却器を備えたフラスコに加える。得られた混合物を加熱還流し、気体アンモニアで約５時間にわたり連続的にパージし、次に室温まで冷却する。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。生成物である場合により置換されている式203の化合物を単離し、さらに精製せずに次のステップで用いる。
【０１０５】
式205の製造
反応スキーム２のステップ２を参照すると、新たに生成させたナトリウムエトキシドを、エタノール中の式203の化合物とわずかに過剰（好ましくは約1.1当量）の適切に保護したαアミノ酸エステル（式204の化合物、さらに好ましくはPGがBocである式204の化合物）との混合物に添加する。得られた溶液を数時間にわたり加熱還流する。生成物である式205のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１０６】
反応スキーム３
【化８】
2006508030.tif 000010
【０１０７】
反応スキーム３を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式109のピリミジノンおよびアミン塩基（例えばジイソプロピルエチルアミン）の溶液に、式Cl-S(O)2-R7aまたはO-(S(O)2-R7a)2［式中、R7aは上記で記載されているとおりである］を有する化合物を添加する。得られた溶液を、窒素下で室温にて数時間撹拌する。生成物である式302のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１０８】
反応スキーム４
【化９】
2006508030.tif 000011
【０１０９】
反応スキーム４を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式109のピリミジノンおよびアミン塩基（例えばジイソプロピルエチルアミン）の溶液に、式X-CH2-R7[式中、R7は上記で記載したとおりであり、Xは脱離基（好ましくはハライド）である]を有する化合物を添加する。得られた溶液を窒素下で室温または加熱しながら数時間撹拌する。生成物である式402のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１１０】
反応スキーム５
【化１０】
2006508030.tif 000012
【０１１１】
式503の製造
反応スキーム５のステップ１を参照すると、塩基（例えば炭酸カリウム）の存在下で極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中に溶解させた場合により置換されている式107の化合物に、１当量の場合により置換されている適切に保護したアルデヒド（ここでは、そのようなアルデヒドは、さらに脱離基、好ましくはハライドを含む）を添加する。この溶液を加熱還流し、反応の完了を（例えばTLCにより）モニターする。反応混合物を冷却し、場合により置換されている対応の式503のピリミジノンを単離し、精製する。
【０１１２】
式505の製造
反応スキーム５のステップ２を参照すると、約1.5モル当量のアミン塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下で不活性溶媒（例えばジクロロメタン）中の場合により置換されている式503の化合物に、約1.5モル当量のR9酸塩化物（例えばCl-C(O)-R9［式中、R9は本明細書中に記載されているとおりである］）を添加する。反応は、室温にて、４〜24時間にわたり、撹拌しながら行う。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式505の化合物を単離し、精製する。
【０１１３】
式507の製造
反応スキーム５のステップ３を参照すると、酢酸中の式505の化合物および過剰の酢酸アンモニウムの溶液を1〜4時間にわたり加熱還流する。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式507の化合物を単離し、精製する。
【０１１４】
反応スキーム６
【化１１】
2006508030.tif 000013
2006508030.tif 000014
【０１１５】
式603の製造
反応スキーム６のステップ１を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中の式107の化合物、式R10(CO)CH2X［式中、Xはハライドである］のα-ハロケトン試薬および約１当量の塩基（例えば炭酸カリウム）の懸濁液を室温で撹拌する。反応物を水で希釈し、得られた固体の式603の化合物をさらに精製せずに次のステップで使用する。
【０１１６】
式605の製造
反応スキーム６のステップ２を参照すると、有機溶媒（例えば塩化メチレン）中の式603の化合物、約１当量のアミン塩基（例えばトリエチルアミン）および約１当量の酸塩化物（例えば式R9-COClの化合物）の溶液を、室温で数時間にわたり撹拌する。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式605の化合物を単離し、精製する。
【０１１７】
式607の製造
反応スキーム6のステップ３を参照すると、酢酸中の式605の化合物および過剰の酢酸アンモニウムの溶液を、Dean-Starkトラップおよび冷却器を用いて加熱還流する。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式607の化合物を単離し、精製する。
【０１１８】
式609の製造
反応スキーム6のステップ４を参照すると、607がフタリミドとして保護されている場合、極性でプロトン性の溶媒（例えばエタノール）中の式607の化合物および過剰の無水ヒドラジンの溶液を加熱還流する。反応物を約５℃まで冷却し、析出物を濾別する。濾液を減圧濃縮し、精製して、式609の化合物を得る。
【０１１９】
反応スキーム７
【化１２】
2006508030.tif 000015
2006508030.tif 000016
【０１２０】
式703の製造
反応スキーム７のステップ１を参照すると、式107のアミン（WO 0130768に記載のようにして製造したもの）の、場合により置換されているアルデヒド含有カルバミン酸エステル（Sekiら, Chem. Pharm. Bull. 1996, 44, 2061）による還元アミノ化により、ウレタン中間体が得られる。Boc保護基を除去して、式705のアミンが得られる。
【０１２１】
さらに具体的に述べると、ジクロロメタン中の式107の化合物および１当量の適切に保護したアルデヒド（Sekiら, Chem. Pharm. Bull. 1996, 44, 2061）の溶液に、わずかに過剰の還元剤（例えばトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム）を添加する。得られた濁りのある混合物を周囲温度にて維持する。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式703の化合物を単離し、精製せずに次のステップで使用する。
【０１２２】
式705の製造
反応スキーム４のステップ２を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式703の化合物の溶液に、強酸（例えばトリフルオロ酢酸）を添加する。得られた溶液を周囲温度にて一晩維持し、減圧下で濃縮する。残渣を単離して式705の化合物を得て、これを精製せずに次のステップで使用する。
【０１２３】
式707の製造
反応スキーム４のステップ３を参照すると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式705の化合物の溶液に、過剰（好ましくは約２当量）のアミン塩基（例えばトリエチルアミン）を添加し、続いて約１当量またはわずかに過剰の酸塩化物を添加する。得られた溶液を周囲温度にて約３時間撹拌する。完了は、例えばTLCによりモニターする。対応する式707の化合物を単離し、精製する。
【０１２４】
式709の製造
反応スキーム７のステップ４を参照すると、過剰のオキシ塩化リン中の式707の化合物の溶液を加熱還流する。８時間後、反応混合物を周囲温度まで放置冷却し、減圧下で濃縮する。対応する式709の化合物を単離し、精製する。
【０１２５】
反応スキーム８
【化１３】
2006508030.tif 000017
【０１２６】
式709の製造
反応スキーム７のステップ３および４の別法として、式705の第一級アミンのアシル化、およびそれに続く酢酸仲介環化を、中間体であるアミドを単離せずに進行させて、目的とする式709の化合物を得る。この経路を反応スキーム８に示す。
【０１２７】
さらに具体的に述べると、極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中の式705の化合物の溶液に、過剰（好ましくは約２当量）のアミン塩基（例えばトリエチルアミン）を添加し、続いて約１当量の酸塩化物を添加する。得られた溶液を周囲温度にて２時間撹拌し、次に減圧下で蒸発させる。得られた固体を氷酢酸で処理し、次に得られた懸濁液を約48時間にわたり加熱還流する。反応物を周囲温度まで放置冷却し、次に減圧下で蒸発させる。対応する式709の化合物を単離し、精製する。
【０１２８】
反応スキーム９
【化１４】
2006508030.tif 000018
【０１２９】
式903の化合物の製造
反応スキーム９のステップ１を参照すると、非極性で非プロトン性の無水溶媒（例えばテトラヒドロフラン）中の式901の化合物および過剰（好ましくは約1.4当量）のN-メチルモルホリンの０℃溶液に、過剰（好ましくは約1.3当量）のイソ-ブチルクロロホルメートを添加する。得られた混合物を室温で約４時間撹拌する。次に、フラスコにドライアイス還流冷却器を装備し、気体アンモニアで約２時間にわたり連続的にパージする。次に、得られた反応混合物を室温で一晩撹拌する。生成物である式903の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１３０】
式905の化合物の製造
反応スキーム９のステップ２を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばジオキサン）中の式903の化合物の室温溶液に、過剰（好ましくは約2.5当量）のピリジンおよび過剰（好ましくは約２当量）の無水トリフルオロ酢酸を順次添加する。得られた溶液を、出発物質が存在しなくなるまで、約４時間撹拌する。生成物である式905の化合物を単離し、精製する。
【０１３１】
式907の化合物の製造
反応スキーム9のステップ３を参照すると、極性でプロトン性の溶媒（例えばエチレングリコール）中の式905の化合物およびN-アセチルシステインの室温溶液に、固体の酢酸アンモニウムを添加する。得られた溶液を約100℃まで約48時間にわたり加熱する。エチレングリコールの大部分を減圧下で留去する。生成物である式907の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１３２】
反応スキーム１０
【化１５】
2006508030.tif 000019
【０１３３】
式909の化合物の製造
反応スキーム10のステップ１を参照すると、メタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（好ましくは約２当量の0.5M溶液）を式905の化合物に添加する。得られた反応混合物に、過剰（好ましくは約２当量）の塩酸ヒドロキシルアミンを添加する。次に、反応混合物を約50℃まで一晩加熱する。生成物である式909の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１３４】
式907の化合物の製造
酢酸中の式909の化合物の室温溶液に、過剰（好ましくは約1.5当量）の無水酢酸およびPd/Cを添加する。反応混合物を水素雰囲気下で約24時間撹拌し、次にセライトで濾過する。生成物である式907の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１３５】
反応スキーム１１
【化１６】
2006508030.tif 000020
【０１３６】
式1103の化合物の製造
反応スキーム11を参照すると、式1102の化合物と式907の化合物との溶液に、メタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（好ましくは約2.4当量の0.5M溶液）を添加する。得られた溶液を約60℃まで約30分間加熱する。生成物である式1103の化合物を単離し、精製する。
【０１３７】
反応スキーム１２
【化１７】
2006508030.tif 000021
【０１３８】
式1203の化合物の製造
反応スキーム12を参照すると、無水エタノール中の式907の化合物と約１当量のジイソプロピルエチルアミンの室温溶液に、約１当量の式1202の化合物を添加する。得られた混合物を約70℃まで約16時間加熱する。生成物である式1203の化合物を単離し、精製する。
【０１３９】
反応スキーム１３
【化１８】
2006508030.tif 000022
【０１４０】
式1303の化合物の製造
反応スキーム13のステップ１を参照すると、極性でプロトン性の溶媒（例えばエタノール）中の式1301の化合物の室温溶液に、濃アンモニア水を添加する。得られた混合物を室温で約24時間撹拌する。生成物である式1303の化合物を単離し、精製する。
【０１４１】
式1305の化合物の製造
反応スキーム13のステップ２を参照すると、ピリジン中の式1303の化合物の室温溶液に、過剰の塩化チオニルを添加する。生成物である式1305の化合物を単離し、精製する。
【０１４２】
反応スキーム１４
【化１９】
2006508030.tif 000023
【０１４３】
式1403の化合物の製造
反応スキーム14のステップ１を参照すると、無水酢酸中の式1401のシアン酢酸メチルと過剰（好ましくは約1.1当量）のオルト酢酸トリエチルの溶液を約３時間にわたり加熱還流する。生成物である式1403の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１４４】
式1405の化合物の製造
反応スキーム14のステップ２を参照すると、極性でプロトン性の溶媒（例えばメタノール）中の式1403の化合物と過剰（好ましくは約３当量）の式907の化合物の溶液に、メタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（好ましくは0.5M溶液として）を添加する。得られた溶液を、窒素雰囲気下で約60℃にて約30分間撹拌する。生成物である式1405の化合物を単離し、精製する。
【０１４５】
式1405の化合物の別の製造
反応スキーム14のステップ２を参照すると、別法として、極性でプロトン性の溶媒（例えばエタノール）中の式907の化合物の撹拌溶液に、約１当量の式1403の化合物を添加する。反応混合物を約18時間還流し、室温まで冷却する。生成物である式1405の化合物を単離し、精製する。
【０１４６】
反応スキーム１５
【化２０】
2006508030.tif 000024
【０１４７】
式1503の化合物の製造
反応スキーム15のステップ１を参照すると、メタノール中の式1502の化合物（例えば、場合により置換されているマロン酸ジアルキル）と過剰（好ましくは約1.5当量）の式907の化合物の室温溶液に、メタノール中の過剰のナトリウムメトキシドの溶液（好ましくはメタノール中の0.5M溶液として）を添加する。得られた溶液を約60℃まで約４時間加熱する。生成物である式1503の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１４８】
式1505の化合物の製造
反応スキーム15のステップ２を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中の式1503の化合物の溶液に、炭酸水素ナトリウムおよび硫酸ジメチルを添加する。得られた溶液を約０℃で約４時間撹拌する。生成物である式1505の化合物を単離し、精製する。
【０１４９】
反応スキーム１６
【化２１】
2006508030.tif 000025
【０１５０】
式1603の化合物の製造
反応スキーム16のステップ１を参照すると、メタノール中のシアン酢酸メチル（すなわち、式1401の化合物）と過剰（好ましくは約1.5当量）の式907の化合物の室温溶液に、メタノール中のナトリウムメトキシドの溶液（好ましくは、約1.8当量のメタノール中0.5M溶液）を添加する。得られた溶液を約60℃まで約４時間加熱する。生成物である式1603の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１５１】
式1605の化合物の製造
非極性で非プロトン性の溶媒（例えばテトラヒドロフラン）中の式1603の化合物の約０℃溶液に、ジイソプロピルエチルアミンおよび過剰（好ましくは約２当量）の酸塩化物（例えば塩化アセチル）を順次添加する。得られた溶液を約０℃で約６時間撹拌する。生成物である式1605の化合物を単離し、精製する。
【０１５２】
反応スキーム１７
【化２２】
2006508030.tif 000026
2006508030.tif 000027
【０１５３】
式1703の化合物の製造
反応スキーム17のステップ１を参照すると、四塩化炭素中の式1701の化合物の室温溶液に、約１当量のN-ブロモスクシンイミドを添加する。得られた混合物を約85℃まで約１時間加熱する。生成物である式1703の化合物を単離し、精製する。
【０１５４】
式1705の化合物の製造
反応スキーム17のステップ２を参照すると、式1703の化合物、約0.2当量の2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)ビフェニル、約0.1当量の酢酸パラジウム、過剰（好ましくは約1.5当量）のフェニルホウ酸および過剰（好ましくは約３当量）のフッ化カリウムを、再封止可能なシュレンク（Schlenk）チューブに入れる。このチューブを脱気し、窒素を数回にわたり逆充填する。次に、トルエンをシリンジで添加し、得られた混合物を約80℃まで約72時間加熱する。生成物である式1705の化合物を単離し、精製する。
【０１５５】
式1705の化合物の別の製造
再び反応スキーム17のステップ２を参照すると、10mL容のスミス（Smith）マイクロ波反応バイアルに、式1703の化合物、約１当量の3-クロロボロン酸、Na2CO3およびPdCl2(PPh3)2を投入し、続いてMeCN-H2O（１：１）を投入する。混合物をアルゴンガスでパージし、封止し、マイクロ波反応装置に約150℃で約５分間かける。生成物である式1705の化合物を単離し、精製する。
【０１５６】
反応スキーム１８
【化２３】
2006508030.tif 000028
【０１５７】
式1805の化合物の製造
反応スキーム18のステップ１を参照すると、厚肉ガラスチューブ内の無水エタノール中の式1703の化合物の溶液に、約0.25当量の1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン、過剰のトリエチルアミンおよび約0.2当量の酢酸パラジウムを添加する。このチューブを脱気し、一酸化炭素を３回にわたり逆充填し、次に一酸化炭素で加圧した（約30psi）。混合物を約70℃まで約48時間加熱する。生成物である式1805の化合物を単離し、精製する。
【０１５８】
式1807の化合物の製造
反応スキーム18のステップ２を参照すると、テトラヒドロフランおよびメタノール中の式1805の化合物の室温溶液に、水酸化カリウム水溶液を添加する。得られた混合物を約70℃まで約４時間加熱する。生成物である式1807の化合物を単離し、さらに精製せずに使用する。
【０１５９】
式1809の化合物の製造
反応スキーム18のステップ３を参照すると、無水テトラヒドロフラン中の式1807の化合物の室温溶液に、過剰（好ましくは約３当量）のジイソプロピルエチルアミンおよび過剰（好ましくは約1.２当量）のイソブチルクロロホルメートを順次添加する。得られた混合物を室温にて窒素雰囲気下で約３時間加熱する。次に、反応物を約０℃まで冷却し、気体アンモニアで約45分間パージする。次に、混合物をさらに45分間にわたり放置して室温まで温める。生成物である式1809の化合物を単離し、精製する。
【０１６０】
式1811の化合物の製造
反応スキーム18のステップ４を参照すると、ピリジン中の式1809の化合物の室温溶液に、塩化チオニルを添加する。反応混合物を室温で約16時間撹拌する。生成物である式1811の化合物を単離し、精製する。
【０１６１】
式1813の化合物の製造
反応スキーム18のステップ５を参照すると、酢酸中の式1811の化合物の撹拌溶液に、10%のPDd/Cを慎重に添加する。反応物を水素のバルーン下で室温に約18時間にわたり水素化し、粗製アミンを単離する。非極性で非プロトン性の溶媒（例えばCH2Cl2）中のこの粗製アミンに、塩基（例えばトリエチルアミン）および無水酢酸を撹拌しながら添加する。室温で約２時間撹拌した後、生成物である式1813の化合物を単離し、精製する。
【０１６２】
反応スキーム１９
【化２４】
2006508030.tif 000029
【０１６３】
式1903の化合物の製造
反応スキーム19を参照すると、式109の化合物を、塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中で、わずかに過剰の式R7O(CO)Clの化合物と反応させる。生成物である式1903の化合物を単離し、精製する。
【０１６４】
反応スキーム２０
【化２５】
2006508030.tif 000030
【０１６５】
式2003の化合物の製造
反応スキーム20を参照すると、式109の化合物を、塩基（例えばトリエチルアミン）の存在下、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロメタン）中で、わずかに過剰のイソシアネートR14-N=C=Oで処理する。生成物である式2003の化合物を単離し、精製する。
【０１６６】
反応スキーム２１
【化２６】
2006508030.tif 000031
【０１６７】
式2103の化合物の製造
反応スキーム21を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばCH2Cl2）中の式903の化合物の撹拌溶液に、過剰（好ましくは約1.05当量）のトリエチルオキソニウムヘキサフルオロホスフェートを添加する。反応物を室温で約48時間撹拌し、分液漏斗に注ぎ、洗浄し、乾燥し、濾過し、減圧濃縮する。残った油状物に、式R1NH2の化合物および極性でプロトン性の溶媒（例えばエタノール）を添加する。反応物を約60℃で約24時間撹拌する。生成物である式2103の化合物を単離し、精製せずに使用する。
【０１６８】
反応スキーム２２
【化２７】
2006508030.tif 000032
【０１６９】
式2203の化合物の製造
反応スキーム22のステップ１を参照すると、極性でプロトン性の溶媒（例えばメタノール）中の式2103の化合物の溶液に、約１当量の式2201の化合物（すなわち、ジメチルエチリデンマロネート）を添加する。反応物を約110℃までゆっくり加熱し、溶媒を留去させる。反応物を約110℃で約５時間撹拌し、次に室温まで放置冷却する。生成物である式2203の化合物を単離し、精製する。
【０１７０】
式2205の化合物の製造
反応スキーム22のステップ２を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばCCl4）中の式2203の化合物の撹拌溶液に、K2CO3、N-ブロモスクシンイミドおよび過酸化ベンゾイルを添加する。反応物を約0.5時間還流し、室温まで冷却する。生成物である式2205の化合物を単離し、精製する。
【０１７１】
反応スキーム２３
【化２８】
2006508030.tif 000033
【０１７２】
式2303の化合物の製造
反応スキーム23のステップ１を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばCH2Cl2）中の式2103の化合物の撹拌溶液に、約0℃で冷却しながら、塩基（例えばEt3N）を、続いて過剰（好ましくは約1.1当量）の式2301の化合物（好ましくは、式中、R5がメチルであるもの）を約15分間かけて滴下する。反応物を放置して室温まで温め、約４時間撹拌する。生成物である式2303の化合物を単離し、精製する。
【０１７３】
式2305の化合物の製造
反応スキーム23のステップ２を参照すると、式2303の化合物の撹拌溶液に、鉱油中のNaHの60％分散液を何回かに分けて添加する。室温で約15分間撹拌した後、過剰（好ましくは約1.1当量）のN-フェニルトリフルオロメタンスルホンイミドを添加する。反応物を室温で約18時間撹拌する。生成物である対応するトリフレートを単離し、精製する。この粗製トリフレートに、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中で撹拌しながら、Zn(CN)2および(PPh3)4Pdを添加する。反応物を不活性雰囲気下で約90℃にて約４時間加熱し、室温まで冷却する。生成物である式2305の化合物を単離し、精製する。
【０１７４】
反応スキーム２４
【化２９】
2006508030.tif 000034
【０１７５】
非極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中の式2401の化合物の溶液に、1H-ピラゾール-1-カルボキサミジン塩酸塩およびジイソプロピルエチルアミンを添加する。反応物を室温で約16時間撹拌する。生成物である2403の化合物を単離し、精製する。
【０１７６】
反応スキーム２５
【化３０】
2006508030.tif 000035
【０１７７】
式2503の化合物の製造
反応スキーム25のステップ１を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばCH2Cl2）中の式107の化合物と塩基（例えばトリエチルアミン）に、式R7-(CO)Clの化合物を添加する。反応物を室温で約48時間撹拌する。生成物である式2503の化合物を単離し、精製する。
【０１７８】
式111の化合物の製造
反応スキーム25のステップ２を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中の式2503の化合物に、塩基（例えば水素化ナトリウム）を添加する。反応物を室温で約15撹拌し、次に式R6-X［式中、Xは脱離基（好ましくはハライド）である］の化合物を添加する。反応物を室温で約24時間撹拌する。生成物である式111の化合物を単離し、精製する。
【０１７９】
反応スキーム２６
【化３１】
2006508030.tif 000036
2006508030.tif 000037
【０１８０】
式2603の化合物の製造
反応スキーム26のステップ１を参照すると、式107の化合物および過剰の式PG-N-CH2CHOの化合物（好ましくは、2H-イソインドール-2-アセトアルデヒド）を非極性で非プロトン性の溶媒（例えばジクロロエタン）に溶解する。氷酢酸を添加し、続いてトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムを添加する。反応物を窒素下で室温にて約3.5時間撹拌する。生成物である式2603の化合物を単離し、精製する。
【０１８１】
式2605の化合物の製造
反応スキーム26のステップ２を参照すると、わずかに過剰（好ましくは約1.1当量）の式R9-(CO)-Clの化合物を非極性で非プロトン性の溶媒（例えばトルエン）に溶解し、塩基（例えば）で処理し、続いて式2603の化合物で処理する。反応物を約110℃で約３時間撹拌する。反応物を室温まで冷却する。生成物である式2605の化合物を単離し、精製する。
【０１８２】
式709の化合物の製造
反応スキーム26のステップ３を参照すると、アミノ官能基がフタリジミド（phthalidmide）として保護されている場合、式2605の保護アミンを、極性でプロトン性の溶媒（例えばエタノール）中でヒドラジン一水和物で約70℃にて約12時間処理する。生成物である式709の化合物を単離し、精製する。
【０１８３】
反応スキーム２７
【化３２】
2006508030.tif 000038
【０１８４】
式2703の化合物の製造
反応スキーム27のステップ１を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばDMF）中の式107の化合物に、式X-CH2-(CO)-R10［式中、Xは脱離基、好ましくはハライドである］の化合物および塩基（例えばN,N-ジイソプロピルエチルアミン）を添加する。反応物を室温で約16時間撹拌する。生成物を単離し、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばトリエチルアミン）および式R9-(CO)-Clの化合物に添加する。反応物を室温で約16時間撹拌する。生成物である式2703の化合物を単離し、精製する。
【０１８５】
式609の化合物の製造
反応スキーム27のステップ２を参照すると、氷酢酸中の式2703の化合物に酢酸アンモニウムを添加し、反応物を約16時間にわたり加熱還流する。生成物である式609の化合物を単離し、精製する。
【０１８６】
反応スキーム２８
【化３３】
2006508030.tif 000039
【０１８７】
式2803の化合物の製造
反応スキーム28を参照すると、非極性で非プロトン性の溶媒（例えばトルエン）中の式1703の化合物に、式H-NRR’のアミン、塩基（例えばNaO-tBu）、Pd2DBAおよび(S)-BINAPを添加する。反応物を約90℃で約72時間撹拌する。生成物である式2803の化合物を単離し、精製する。
【０１８８】
特定のプロセスおよび最後のステップ
式Iの化合物は、場合により、薬学的に許容される酸または塩基と接触させて、対応する酸または塩基付加塩を形成する。
【０１８９】
式Iの化合物の薬学的に許容される酸付加塩は、場合により、塩基と接触させて、対応する式Iの遊離塩基を形成する。
【０１９０】
式Iの化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、場合により、酸と接触させて、対応する式Iの遊離酸を形成する。
【０１９１】
本発明の化合物の特定の実施形態
R1
式Iの化合物を考察すれば、一実施形態では、R1は、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、および場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-（さらに好ましくは、場合により置換されているアリールおよび場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-）から選択される。１つのさらに特定の実施形態では、R1は、水素、場合により置換されているC1-C4アルキル-、場合により置換されているフェニル-C1-C4アルキル-、場合により置換されているナフタレニルメチル-、場合により置換されているフェニル-、およびナフチル-から選択される。一層さらに特には、R1は、場合により置換されているフェニル-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-、またはナフタレニルメチル-である。
【０１９２】
よりさらに特には、R1は、ナフチル-、フェニル-、ブロモフェニル-、クロロフェニル-、メトキシフェニル-、エトキシフェニル-、トリル-、ジメチルフェニル-、クロロフルオロフェニル-、メチルクロロフェニル-、エチルフェニル-、フェネチル-、ベンジル-、クロロベンジル-、メチルベンジル-、メトキシベンジル-、シアノベンジル-、ヒドロキシベンジル-、ジクロロベンジル-、ジメトキシベンジル-、またはナフタレニルメチル-である。さらに好適には、R1は、ベンジル-、シアノベンジル-、メトキシベンジル-、またはナフタレニルメチル-である。最も特には、R1はベンジル-である。
【０１９３】
R2およびR2’
式Iの化合物を考察してみると、当業者であれば理解されるように、本明細書で記載される化合物は、R2とR2'が結合している炭素に、潜在的なキラル中心を有する。R2基とR2'基は、同一であっても異なっていてもよい。異なっている場合、この化合物は、キラルである（すなわち、立体中心を有する）。R2とR2'とが異なる場合、特定の実施形態では、R2'は水素であり、R2は水素以外である。本発明は、純粋なエナンチオマー、およびラセミ混合物を含むエナンチオマーの混合物の使用を想定しているが、実質的に光学的に純粋なエナンチオマーの使用が一般に好ましい。「実質的に純粋な」という用語は、少なくとも約95％の化学的純度を有し、１つの不純物を約１％を超えて含んでいないことを意味する。「実質的に光学的に純粋な」または「エナンチオマー的に純粋な」という用語は、少なくとも約97.5％のエナンチオマー過剰率を有することを意味する。１つの特定の実施形態では、R2およびR2’が結合している立体中心は、R立体配置のものである。
【０１９４】
式Iの化合物を考察してみると、R2およびR2’は、独立して、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアルコキシ、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアラルキル-から選択されるか；または、R2およびR2’は、一緒になって、場合により置換されている3〜7員の環を形成する。
【０１９５】
一実施形態では、R2は、場合により置換されているC1-C4アルキル-であり、R2’は水素または場合により置換されているC1-C4アルキル-である。さらに好適には、R2’は水素であり、R2は場合により置換されているC1-C4アルキル-である。最も特定の一実施形態では、R2は、メチル-、エチル-、プロピル（特に、c-プロピルもしくはi-プロピル）、ブチル（特にt-ブチル）、メチルチオエチル-、メチルチオメチル-、アミノブチル-、(CBZ)アミノブチル-、シクロヘキシルメチル-、ベンジルオキシメチル-、メチルスルファニルエチル-、メチルスルファニルメチル-、およびヒドロキシメチル-から選択され、R2’は水素である。特に選ばれる実施形態は、R2’が水素であり、R2がエチルまたはプロピル（特にc-プロピルもしくはi-プロピル）の場合である。一層さらに特には、R2はi-プロピルであり、よりさらに特には、R2とR2’が結合している立体中心はR立体配置のものである。
【０１９６】
一実施形態では、R2またはR2’の一方が水素である場合、他方は水素ではない。別の実施形態では、R2およびR2’が共に水素である。
【０１９７】
R4およびR5
式Iの化合物を考察してみると、一実施形態では、R4は、水素；アシル-；アルコキシ；シアノ；カルボキシ、カルボキシアミド；アミノカルボニル-；低級アルキル-；１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されている低級アルキル；フェニル-；または、１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されているフェニルである。さらに特には、R4は、水素、シアノ、メチル、または１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシ（特にハロ、例えば-CF3）で置換されているメチルである。
【０１９８】
式Iの化合物を考察してみると、一実施形態では、R5は、水素；アシル-、カルボキシ；カルボキシアミド、シアノ；低級アルキル（特にメチルもしくはエチル)；ハロ（特にブロモ、クロロもしくはフルオロ)；ベンジル-；ピペロニル-；ナフチル-；フリル-；チエニル-；インドリル-；モルホリニル-；フェニル-；ベンゾジオキソリル-；または、１個以上の次の置換基：場合により置換されているアミノ、ジアルキルアミノ、アシルアミノ（例えばアセチルアミノ）、シアノ、ハロ、場合により置換されている低級アルキル-（トリフルオロメチルや、ヒドロキシメチルなどのヒドロキシアルキルを含む）、場合により置換されている低級アルコキシ、場合により置換されている低級アルキルスルファニル（メチルスルファニルを含む）、ヒドロキシもしくはチオで置換されているフェニルである。
【０１９９】
さらに好適には、R5は、メチル-；エチル-；ブロモ；カルボキシ；シアノ；フェニル-；ハロフェニル-；低級アルキルフェニル-；トリフルオロメチルフェニル-；低級アルコキシフェニル-；ジ(低級アルコキシ)フェニル-；ポリハロフェニル-；ハロ低級アルキルフェニル（例えばハロメチルフェニル-）；フリル-；チエニル-；低級アルキルスルファニルフェニル-；チオフェニル-；アミノフェニル-；アミノカルボニルフェニル-；シアノフェニル-；ジ(低級アルキル)アミノフェニル-；ジ(低級アルキル)フェニル-；アセチルアミノフェニル-；アミノ置換低級アルキルフェニル-；ヒドロキシ置換低級アルキルフェニル-（例えばメチルヒドロキシフェニル-）；ピペロニル-；ナフチル-；カルバモイル-；低級アルキルカルバモイル-（例えば、メチル、エチルもしくはプロピルカルバモイル）；ベンジルカルバモイル-；フェニルカルバモイル-；メトキシメチルカルバモイル-；メトキシエチルカルバモイル-；ヒドロキシメチルカルバモイル-；ヒドロキシエチルカルバモイル-；インドリル-；オキザリル-；モルホリニル-；シアノ；カルボキシ；およびモルホリノカルボニル-である。
【０２００】
さらに好適には、R5は、水素、メチルまたはシアノである。
【０２０１】
式Iの化合物を考察してみると、別の実施形態では、R4およびR5は、それらが結合している炭素と一緒になって、場合により置換されている５、６もしくは７員の脂肪族炭素環を形成する。この環は、１個以上の次の置換基：ハロ、場合により置換されている低級アルキル-、場合により置換されている低級アルコキシおよび／またはヒドロキシで場合により置換されている。
【０２０２】
R3が場合により置換されているイミダゾリルである化合物
R3が場合により置換されているイミダゾリル-である場合、特定の実施形態では、R3は、式：
【化３４】
2006508030.tif 000040
【０２０３】
［式中、
R9は、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルコキシ、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルコキシ、および場合により置換されているヘテロアリール-から選択され；
R10およびR11は、独立して、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、または場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-である]
を有する。
【０２０４】
一実施形態によれば、R9は、C1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているフェニル；フェニル-；ベンジル-；チオフェニル-；またはC1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているチオフェニル-である。さらに好適には、R9は、１個以上のハロおよび／またはメチルで置換されているフェニルである。
【０２０５】
別の実施形態によれば、R11は水素であり、R10は置換C1-C4アルキル-である。さらに好適には、R11は水素であり、R10は、アミノメチル-、アミノエチル-、アミノプロピル-、アセチルアミノ-メチル-、アセチルアミノエチル-、ベンジルオキシカルボニルアミノ-メチル-またはベンジルオキシカルボニルアミノ-エチル-である。
【０２０６】
R3が場合により置換されているイミダゾリニルである化合物
R3がイミダゾリンである場合、一実施形態では、R3は、式：
【化３５】
2006508030.tif 000041
【０２０７】
［式中、
R9は、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、および場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-から選択され；
R12、R12’、R13およびR13’は、独立して、水素、場合により置換されているC1-C8アルキル-、場合により置換されているアリール-、および場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-から選択される]
を有する。
【０２０８】
一実施形態では、R9は、メチレンジオキシフェニル-；フェニル-；C1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているフェニル；ベンジル-；C1-C4アルキルで置換されているチエニル；ベンジル；チオフェニル-；またはC1-C4アルキル-、C1-C4アルコキシ-および／もしくはハロで置換されているチオフェニル-である。さらに好適には、R9は、メチレンジオキシフェニル-；フェニル-；トリル-；メトキシフェニル-；またはハロメチルフェニル-である。
【０２０９】
一実施形態では、R12、R12’、R13’およびR13は、独立して、水素または場合により置換されているC1-C4アルキル-である。さらに好適には、R13’およびR13は水素である。
【０２１０】
R3が-NHR6、-NR6(COR7)または-NR6(CH2R7b)である化合物
一実施形態では、R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択される。さらに好適には、R6はR16-アルキレン-であり、R16はアルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、グアニジン、ヒドロキシル-、およびN-ヘテロシクリル-から選択される。
【０２１１】
１つのさらに特定の実施形態では、R6は、場合により置換されている低級アルキル-、場合により置換されているシクロヘキシル-；ヒドロキシ、低級アルコキシもしくは低級アルキル-で置換されているフェニル；ベンジル-；ヘテロアリールメチル-；ヘテロアリールエチル-；およびヘテロアリールプロピル-から選択される。
【０２１２】
最も特定の一実施形態では、R6は、メチル-、エチル-、プロピル-、ブチル-、シクロヘキシル-、カルボキシエチル-、カルボキシメチル-、メトキシエチル-、ヒドロキシエチル-、ヒドロキシプロピル-、ジメチルアミノエチル-、ジメチルアミノプロピル-、ジエチルアミノエチル-、ジエチルアミノプロピル-、アミノプロピル-、メチルアミノプロピル-、2,2-ジメチル-3-(ジメチルアミノ)プロピル-、1-シクロヘキシル-4-(ジエチルアミノ)ブチル-、アミノエチル-、アミノブチル-、アミノペンチル-、アミノヘキシル-、アミノエトキシエチル-、イソプロピルアミノプロピル-、ジイソプロピルアミノエチル-、1-メチル-4-(ジエチルアミノ)ブチル-、(t-Boc)アミノプロピル-、ヒドロキシフェニル-、ベンジル-、メトキシフェニル-、メチルメトキシフェニル-、ジメチルフェニル-、トリル-、エチルフェニル-、(オキソピロリジニル)プロピル-、(メトキシカルボニル)エチル-、ベンジルピペリジニル-、ピリジニルエチル-、ピリジニルメチル-、モルホリニルエチルモルホリニルプロピル-、ピペリジニル-、アゼチジニルメチル-、アゼチジニルエチル-、アゼチジニルプロピル-、ピロリジニルメチル-、ピロリジニルエチル-、ピロリジニルプロピル-、ピペリジニルメチル-、ピペリジニルエチル-、イミダゾリルプロピル-、イミダゾリルエチル-、(エチルピロリジニル)メチル-、(メチルピロリジニル)エチル-、(メチルピペリジニル)プロピル-、(メチルピペラジニル)プロピル-、グアニジノ-エチル-、グアニジノ-プロピル-、フラニルメチルおよびインドリルエチル-から選択される。
【０２１３】
式Iの化合物を考察してみると、１つの特定の実施形態において、R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-、R8O-およびR14-NH-［式中、R8は場合により置換されているアルキル、ならびに場合により置換されているアリールから選択され、R14は、水素、場合により置換されているアルキル、および場合により置換されているアリール-から選択される］から選択される。
【０２１４】
１つのさらに特定の実施形態では、R7がR14NH-でもR8O-でもない場合、R7は、場合により置換されているアルキル-；アリール-（フェニル-、ビフェニル-およびナフチル-を含む）；置換アリール-（１個以上のシアノ、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、ヒドロキシ-低級アルキル-、ニトロ、カルボキシ、メチレンジオキシ、トリフルオロメトキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニルを含む)；ベンジル-；ならびに場合により置換されているヘテロアリール-から選択される。
【０２１５】
最も特定の一実施形態では、R7がR14NH-でもR8O-でもない場合、R7は、エチル-、プロピル-、クロロプロピル-、ブトキシ、ヘプチル-、ブチル-、オクチル-、トリデカニル-、(エトキシカルボニル)エチル-、ジメチルアミノエチル-、ジメチルアミノメチル-、フェニル-、ナフチル-、ハロフェニル-、ポリハロフェニル-、シアノフェニル-、ヒドロキシメチルフェニル-、ハロ(トリフルオロメチル)フェニル-、クロロフェノキシメチル-、メトキシフェニル-、カルボキシフェニル-、エチルフェニル-、トリル-、ヒドロキシメチルフェニル-；エチルフェニル-；ビフェニリル-、メチレンジオキシフェニル-、メチルスルホニルフェニル-、メトキシクロロフェニル-、クロロナフチル-、アセチルフェニル-、メチルハロフェニル-、トリフルオロメチルフェニル-、トリフルオロメトキシフェニル-、ブチルフェニル-、ペンチルフェニル-、メチルニトロフェニル-、フェノキシメチル-、ジメトキシフェニル-、フェニルビニル-、ニトロクロロフェニル-、ニトロフェニル-、ジニトロフェニル-、ビス(トリフルオロメチル)フェニル-、ベンジルオキシメチル-、ベンジル-、フラニル-、ベンゾフラニル-、ピリジニル-、ピリジル-、インドリル-、メチルピリジニル-、メチルピリジル-、(3-カルバモイル)ピリジニル-[ニコチンアミド]、3-カルバモイル-6-メチルピリジニル-、キノリニル-、ピコリニル-、ピラゾリル-、ピラジニル-、メチルピラジニル-、モルホリノメチル-、メチルチオメチル-、メトキシメチル-、イミダゾリル-；イソキサゾリル-、メチル-イソキサゾリル-；ベンゾチアジアゾリル-；メチレンジオキシフェニル-、チエニル-、メチルチエニル-、メチル-ニコチンアミジル-；メチル-ピラジニル；ベンゾジオキソリル；およびメチル-チオフェニル-から選択される。
【０２１６】
さらに好適には、R7は、トリル-、ハロフェニル-、ハロメチルフェニル-、ヒドロキシメチルフェニル-、メチレンジオキシフェニル-、ホルミルフェニルまたはシアノフェニル-である。
【０２１７】
別の特定の実施形態では、R7がR14NH-である場合、R14は、低級アルキル-；シクロヘキシル-；フェニル-；およびハロ、低級アルキル-、低級アルコキシもしくは低級アルキルスルファニル-で置換されているフェニルから選択される。
【０２１８】
別の特定の実施形態では、R7がR14NH-である場合、R14は、イソプロピル-、ブチル-、シクロヘキシル-、フェニル-、ブロモフェニル-、ジクロロフェニル-、メトキシフェニル-、エチルフェニル-、トリル-、トリフルオロメチルフェニルまたはメチルチオフェニル-である。
【０２１９】
１つの特定の実施形態では、R7がR8O-である場合、R8は、低級アルキル-；シクロヘキシル-；フェニル-；およびハロ、低級アルキル-、低級アルコキシもしくは低級アルキルスルファニル-で置換されているフェニルから選択される。
【０２２０】
最も特定の一実施形態では、R7がR8O-である場合、R8は、イソプロピル-、ブチル-、シクロヘキシル-、フェニル-、ブロモフェニル-、ジクロロフェニル-、メトキシフェニル-、エチルフェニル-、トリル-、トリフルオロメチルフェニルまたはメチルチオフェニル-である。
【０２２１】
好適には、R7bは、C1-C13アルキル-；置換低級アルキル-；フェニル-；ナフチル-；シアノ、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；ビフェニリル-、ベンジル、およびヘテロシクリル-から選択される。最も好適には、R7bは、１個以上のハロ、メチル-、シアノ、トリフルオロメチル-、トリフルオロメトキシ、カルボキシもしくはメトキシカルボニル基で置換されているフェニル；ピペリジニル-；およびナフチル-から選択される。さらに一層好適には、R7bは、ハロフェニル-、メチルハロフェニル-、ポリハロフェニル-、トリル-、ジメチルフェニル-、メトキシフェニル-、ジメトキシフェニル-、シアノフェニル-、トリフルオロメチルフェニル-、トリフルオロメトキシフェニル-、ビス(トリフルオロメチル)フェニル-、カルボキシフェニル-、t-ブチルフェニル-、メトキシカルボニルフェニル-、ピペリジニル-、およびナフチル-である。
【０２２２】
R3が-NR6(SO2R7a)である化合物
R3が-NR6(SO2R7a)である場合、R6は上記に記載したとおりであり、R7aは、C1-C13アルキル-；フェニル-；ナフチル-；シアノ、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；ビフェニリルおよびヘテロアリール-から選択される。さらに好適には、R7aは、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、シアノ、ニトロ、メチレン(methlene)ジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；およびナフチル-から選択される。
【０２２３】
特定の亜属
式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1は、場合により置換されているアリール-C1-C4アルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-C1-C4アルキル-、またはナフタレニルメチルであり；
R2は、場合により置換されているC1-C4アルキル-であり；
R2’は水素であり；
R4は、水素、シアノ、または１個以上の次の置換基：ハロ、低級アルコキシもしくはヒドロキシで置換されているメチルであり；
R5は、水素、メチル、またはシアノであり；
R3は、場合により置換されているイミダゾリル-、場合により置換されているイミダゾリニル-、-NHR6；-N(R6)(COR7)；-N(R6)(SO2R7a)；および-N(R6)(CH2R7b)である。
【０２２４】
R3が場合により置換されているイミダゾリル-である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R9は、１個以上のハロおよび／またはメチルで置換されているフェニルであり；
R11は、水素であり、R10は、置換C1-C4アルキル-（特にアミノメチル-、アミノエチル-、アミノプロピル-、アセチルアミノ-メチル-、アセチルアミノエチル-、ベンジルオキシカルボニルアミノ-メチル-もしくはベンジルオキシカルボニルアミノ-エチル-)である。
【０２２５】
R3が場合により置換されているイミダゾリニル-である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R9は、メチレンジオキシフェニル-；フェニル-；トリル-；メトキシフェニル-；またはハロメチルフェニル-であり；
R12、R12’、R13’およびR13は、独立して、水素、または場合により置換されているC1-C4アルキル-である。さらに特には、R13’およびR13は水素である。
【０２２６】
R3が-NHR6である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択される。
【０２２７】
R3が-NR6(COR7)である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択され；
R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-、R8O-およびR14-NH-［式中、R8は、場合により置換されているアルキルおよび場合により置換されているアリールから選択され、R14は、水素、場合により置換されているアルキル、および場合により置換されているアリールから選択される］から選択される。
【０２２８】
さらに特には、R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、R16-アルキレン-であり、R16は、アルコキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、カルボキシ、ヒドロキシル-、およびN-ヘテロシクリル-から選択され（特に、R6は、場合により置換されている低級アルキル-、場合により置換されているシクロヘキシル-；ヒドロキシ、低級アルコキシもしくは低級アルキル-で置換されているフェニル；ベンジル-；ヘテロアリールメチル-；ヘテロアリールエチル-；ヘテロアリールプロピル-から選択され）；
R7は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、場合により置換されているヘテロアリール-、場合により置換されているアリール-、R8O-およびR14-NH-［式中、R8は、場合により置換されているアルキルおよび場合により置換されているアリールから選択され、R14は、水素、場合により置換されているアルキル、および場合により置換されているアリールから選択される］から選択される。
【０２２９】
R3が-NR6(COR7)である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択され；
R7は、場合により置換されているアルキル-；アリール-；置換アリール-；ベンジル-；および場合により置換されているヘテロアリール-から選択される。
【０２３０】
R3が-NR6(COR7)である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4、R5およびR6は、上記で定義したとおりであり；
R7は、トリル-、ハロフェニル-、ハロメチルフェニル-、ヒドロキシメチルフェニル-、メチレンジオキシフェニル-、ホルミルフェニル、またはシアノフェニル-である。
【０２３１】
R3が-N(R6)(CH2R7b)である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択され；
R7bは、１個以上のハロ、メチル-、シアノ、トリフルオロメチル-、トリフルオロメトキシ、カルボキシもしくはメトキシカルボニル基で置換されているフェニル；ピペリジニル-；およびナフチル-から選択される。
【０２３２】
R3が-NR6(SO2R7a)である式Iの化合物の１つの特定の亜属において、
R1、R2、R2’、R4およびR5は、上記で定義したとおりであり；
R6は、水素、場合により置換されているアルキル-、場合により置換されているアリール-、場合により置換されているアラルキル-、場合により置換されているヘテロアラルキル-、および場合により置換されているヘテロシクリル-から選択され；
R7aは、ハロ、低級アルキル-、低級アルコキシ、シアノ、ニトロ、メチレンジオキシもしくはトリフルオロメチル-で置換されているフェニル；およびナフチル-から選択される。
【０２３３】
特に挙げられる化合物としては、次のものが含まれる。  
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-エチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-フルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-クロロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-ブロモ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-トリフルオロメチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-トリフルオロメトキシ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-クロロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-シアノ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-フルオロ-3-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-クロロ-4-フルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-フルオロ-3-トリフルオロメチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3,4-ジフルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-シアノ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3,4-ジメトキシ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-(2-ピロリジン-1-イル-エチル)-ベンズアミド；
N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-ピロリジン-3-イルメチル-ベンズアミド；
N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-ピロリジン-2-イルメチル-ベンズアミド；
N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-ピペリジン-4-イルメチル-ベンズアミド；
N-アゼチジン-3-イルメチル-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(2-アミノ-エチル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-(2-グアニジノ-エチル)-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-(3-メトキシ-ベンジル)-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
3-ベンジル-5,6-ジメチル-2-[2-メチル-1-(2-p-トリル-4,5-ジヒドロ-イミダゾール-1-イル)-プロピル]-3H-ピリミジン-4-オン；
1-ベンジル-5-メチル-2-[2-メチル-1-(2-p-トリル-4,5-ジヒドロ-イミダゾール-1-イル)-プロピル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-4-カルボニトリル；
N-[1-(5-アセチル-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸アミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸メチルアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸ベンジルアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸フェニルアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸(アセチルアミノ-メチル)-アミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸メトキシメチル-アミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸ヒドロキシメチル-アミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-4-メチル-5-(モルホリン-4-カルボニル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
(2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-イル)-オキソ-酢酸；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-フェニル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-フェニル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-フルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-クロロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-m-トリル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-メトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-(3-トリフルオロメチル-フェニル)-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-フルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-p-トリル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-クロロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-メトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-フラン-2-イル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-フラン-3-イル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-チエン-3-イル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-4-メチル-5-(4-メチルスルファニル-フェニル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-シアノ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-エトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-エトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-{1-[5-(3-アミノ-フェニル)-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-o-トリル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-{1-[5-(3-アセチルアミノ-フェニル)-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-シアノ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-ジメチルアミノ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2-メトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2-エトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2-フルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3,4-ジフルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2,3-ジフルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2,4-ジフルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2,5-ジフルオロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(2,5-ジメチル-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3,4-ジメチル-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3,4-ジメトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-フルオロ-3-メチル-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-{1-[5-(3-アミノ-4-メチル-フェニル)-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(4-ヒドロキシメチル-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(3-メトキシ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{1-[1-ベンジル-5-(ピペロニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-5-ナフタレン-1-イルメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-フルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-エチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-トリフルオロメチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-トリフルオロメトキシ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-クロロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-シアノ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-4-トリフルオロメチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3,4-ジフルオロ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3,4-ジメトキシ-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-6-オキソ-4-フェニル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-6-オキソ-4-プロピル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-イソプロピル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メトキシメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-ヒドロキシメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-6-オキソ-4-トリフルオロメチル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メトキシ-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-4-カルボン酸エチルエステル；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-4-カルボン酸アミド；
N-[1-(4-アセチルアミノ-1-ベンジル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-イソプロピル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-フルオロ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-5-ブロモ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1,5-ジベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-フェニル-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
2-{1-[(3-アミノ-プロピル)-(4-メチル-ベンゾイル)-アミノ]-2-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メトキシ-ベンズアミド；
ベンゾ[1,2,3]チアジアゾール-5-カルボン酸(3-アミノ-プロピル)-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-アミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-シアノ-ベンズアミド；
ベンゾ[1,3]ジオキソール-5-カルボン酸(3-アミノ-プロピル)-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-アミド；
N-(2-アミノ-エチル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-3-フルオロ-4-メチル-ベンズアミド；
N-(2-アミノ-エチル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-シアノ-ベンズアミド；
5-メチル-チオフェン-2-カルボン酸(2-アミノ-エチル)-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-アミド；
5-メチル-イソキサゾール-3-カルボン酸(3-アミノ-プロピル)-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-アミド；
5-メチル-ピラジン-2-カルボン酸(3-アミノ-プロピル)-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-アミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-2-メトキシ-アセトアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(4,5-ジメチル-1-ナフタレン-1-イルメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-2-メトキシ-アセトアミド；
2-{1-[4-(2-アミノ-エチル)-2-p-トリル-イミダゾール-1-イル]-2-メチル-プロピル}-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン；
3-ベンジル-5,6-ジメチル-2-[2-メチル-1-(2-p-トリル-4,5-ジヒドロ-イミダゾール-1-イル)-プロピル]-3H-ピリミジン-4-オン；
3-ベンジル-5,6-ジメチル-2-{2-メチル-1-[2-(5-メチル-チオフェン-2-イル)-4,5-ジヒドロ-イミダゾール-1-イル]-プロピル}-3H-ピリミジン-4-オン；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンゼンスルホンアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(3-ベンジル-4-オキソ-3,4,5,6,7,8-ヘキサヒドロ-キナゾリン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；
N-(3-アミノ-プロピル)-N-[1-(3-ベンジル-4-オキソ-4,5,6,7-テトラヒドロ-3H-シクロペンタピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド；および
2-(1-アミノ-2-メチル-プロピル)-3-ベンジル-3,5,6,7-テトラヒドロ-シクロペンタピリミジン-4-オン。
【０２３４】
有用性、試験および投与
一般的有用性
製造された後、本発明の化合物には、有糸分裂の改変に関するさまざまな適用への使用法が見いだされる。当業者に理解されるように、有糸分裂はさまざまな方法で改変することができる。すなわち、有糸分裂経路における構成成分の活性を増加または減少させることにより、有糸分裂に影響を与えることができる。言い換えれば、有糸分裂は、ある構成成分を阻害するか活性化するかのいずれかにより平衡を妨害することにより、影響（たとえば、崩壊）され得る。同様のアプローチを、減数分裂を改変するために用いることができる。
【０２３５】
好ましい実施形態において、本発明の化合物は、有糸分裂紡錘体の形成を阻害するために用いられ、それにより、有糸分裂における延長された細胞周期の停止を引き起こす。ここで、「阻害」は、有糸分裂紡錘体の形成を減少または妨害すること、または有糸分裂紡錘体の機能不全を起こすことを意味する。本明細書において、「有糸分裂紡錘体の形成」とは、有糸分裂キネシンによる微小管の二極構造への組織化を意味する。本明細書において、「有糸分裂紡錘体の機能不全」とは、有糸分裂の停止および単極の紡錘体の形成を意味する。
【０２３６】
本発明の化合物は、有糸分裂キネシン、KSPに結合する、および/またはその活性を阻害するために有用である。本発明の化合物は他の生物のKSPキネシンに結合する、またはその活性を阻害するために用いることができるが、好ましい実施形態において、KSPはヒトKSPである。ここで、「阻害する」とは、紡錘体極の形成異常、すなわち分離を起こす、あるいは、有糸分裂紡錘体の形態学的混乱を起こす、紡錘体極分離の増加または減少のいずれかを意味する。これらの目的のために、KSPの定義には、KSPの変異体および/または断片をも含む。たとえば、米国特許第6,437,115号を参照されたい。この文献を全体として参照により本明細書に組み入れる。本発明の化合物はKSPに特異性を有することが示されている。けれども、本発明は、上記化合物を他の有糸分裂キネシンに結合させる、またはそれらをモジュレートするために使用することを含む。
【０２３７】
本発明の化合物は、細胞増殖性疾患を治療するために使用される。本発明により提供される化合物、組成物および方法により治療することができる疾病の状態には、癌（下でさらに論じる）、自己免疫疾患、真菌障害、関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、医学的処置、たとえば、手術、血管形成等（これらに限定されない）の後に誘導される細胞増殖が含まれるが、これらに限定されない。治療には細胞増殖の阻害が含まれる。また、細胞は異常な状態ではないが、それでも治療を必要とすると判断される場合がある。したがって、一実施形態において、本発明は、これらの障害または状態の１つに冒されている、または冒される危険のある細胞または個体への適用を含む。
【０２３８】
本発明により提供される化合物、組成物および方法は、特に、皮膚、乳、脳、頚癌、睾丸癌等のような固形腫瘍を含む癌の治療に有用であると考えられる。より詳細には、本発明の化合物、組成物および方法により治療される癌には、心臓：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫および奇形腫；肺：気管支癌（扁平上皮細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（気管支）癌、気管支腺種、肉腫、リンパ腫、軟骨腫様過誤腫、中皮腫；胃腸管：食道（扁平上皮癌、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（癌、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管腺癌、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、カルチノイド、ビポマ(vipoma)）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）；尿生殖器官：腎臓（腺癌、ヴィルムス種（腎芽細胞腫）、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行細胞癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、睾丸（精上皮腫、奇形腫、胎生期癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、間隙細胞癌、線維腫、線維腺腫、類腺腫瘍、脂肪腫）；肝臓：肝癌（肝細胞癌）、胆管癌、肝芽細胞腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；骨：骨原性肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、オステオクロンフローマ（osteochronfroma）（骨軟骨外骨腫）、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液線維腫、類骨骨腫および巨細胞腫瘍；神経系：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫（松果体腫）、多形膠芽腫、乏突起膠腫、神経線維腫、網膜芽腫、先天性腫瘍）、脊髄（神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、、肉腫）；婦人科学：子宮（子宮内膜癌）、頸（子宮頸癌、前腫瘍子宮頸部形成異常）、卵巣（卵巣癌（漿液性嚢包腺癌、ムチン性嚢包腺癌、非分類癌）、顆粒膜-包膜細胞腫、Sertoli-Leydig細胞腫、未分化胚細胞腫、悪性奇形腫）、外陰（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、黒色腫）、膣（明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫（胎児性横紋筋肉腫）、ファローピウス管（癌）；血液学：血液（骨髄性白血病（急性および慢性）、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発骨髄腫、脊髄形成異常症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（悪性リンパ腫）；皮膚：悪性黒色腫、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫、色素性母斑形成異常母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；および副腎：神経芽腫が含まれるが、これらに限定されない。したがって、本明細書において「癌細胞」という用語は、上に記載した状態のいずれか１つに冒された細胞を含む。
【０２３９】
試験
KSPをモジュレートする活性のアッセイのために、一般的に、KSPまたは本発明の化合物のいずれかを、分離されたサンプル受容領域を有する不溶性支持体（たとえば、マイクロタイタープレート、アレイ(array)等）に拡散しないように結合する。不溶性支持体は、サンプルが結合することができる組成物で作られるが、可溶性の材料から容易に分離し、また、スクリーニング法全体に適合するものである。上記の支持体の表面は固体または多孔性であって、使用に便利な形状である。適当な不溶性支持体の例には、マイクロタイタープレート、アレイ、膜およびビーズが含まれる。これらは典型的にはガラス、プラスチック（たとえば、ポリスチレン）、多糖、ナイロンまたはニトロセルロース、テフロン（登録商標）等で作られる。マイクロタイタープレートおよびアレイは、少量の試薬およびサンプルを用いて多くのアッセイを同時におこなうことができるので、特に便利である。具体的なサンプルの結合方法は、それが本発明の試薬および全体の方法に適合し、サンプルの活性を維持し、拡散しないものである限り、いかなるものであってもよい。結合の好ましい方法には、抗体の使用（タンパク質が支持体に結合した時に、リガンド結合部位または活性化配列のいずれをも立体的に遮断しないもの）、「粘着性」またはイオン性支持体への直接的結合、化学的架橋、表面上におけるタンパク質または試薬の合成等が含まれる。サンプルを結合した後、過剰な結合していない物質を洗浄により除去する。次に、サンプルが結合した領域を、ウシ血清アルブミン(BSA)、カゼインまたは他の無害なタンパク質または他の基と共にインキュベートすることにより遮断する。
【０２４０】
本発明の化合物は、単独で使用して有糸分裂キネシン、特にKSPの活性を阻害し得る。一実施形態において、本発明の化合物をKSPと混合し、KSPの活性をアッセイする。キネシン（KSPを含む）の活性は当業者に公知であり、１つ以上のキネシンの活性を含む。キネシンの活性には、ATPの加水分解に影響を与える能力；微小管の結合；滑走および重合/解重合（微小管動力学への効果）；紡錘体の他のタンパク質への結合；細胞周期制御に関与するタンパク質への結合；キナーゼまたはプロテアーゼのような他の酵素の基質となること；および紡錘体極分離のような特異的なキネシンの細胞活性が含まれる。
【０２４１】
運動性アッセイをおこなう方法は当業者に周知である（たとえば、Hallら、(1996), Biophys. J., 71:3467-3476; Turnerら、1996, AnaL Biochem. 242(1):20-5; Gittesら、1996, Biophys. J. 70(1):418-29; Shirakawaら、1995, J. Exp. BioL 198: 1809-15; Winkelmannら、1995, Biophys. J. 68:2444-53; Winkelmannら、1995, Biophys. J. 68:72Sを参照されたい）。
【０２４２】
当分野で公知のATPアーゼ加水分解活性を測定する方法もまた用いることができる。好適には、溶液を基礎とするアッセイを利用する。米国特許第6,410,254号にこのようなアッセイが記載されており、この文献全体を参照により本明細書に組み入れる。あるいは、従来の方法が用いられる。たとえば、キネシンからのPi放出を定量することができる。１つの好ましい実施形態において、ATPアーゼ加水分解活性のアッセイは、0.3M PCA（過塩素酸）およびマラカイトグリーン試薬（8.27mM モリブデン酸(II)ナトリウム、0.33mM マラカイトグリーンシュウ酸塩および0.8mM Triton X-1 00）を利用する。アッセイをおこなうために、10μLの反応混合物を、90μLの冷0.3M PCA中で冷却する。リン酸標準液を用いて、データを放出された無機リン酸のmMに変換することができる。すべての反応液および標準液をPCA中に冷却し終わったら、100μLのマラカイトグリーン試薬を、たとえばマイクロタイタープレートの測定するウェルに加える。混合物を10〜15分間現像して、プレートの650nmの吸収を測定する。リン酸標準液を用いる場合には。吸収の値をmM Piに変換して時間に対してプロットすることができる。これに加えて、当業者に公知のATPアーゼアッセイにはルシフェラーゼアッセイが含まれる。
【０２４３】
また、キネシン運動ドメインのATPアーゼ活性を薬物の効果をモニターするために用いることができ、これは当業者に公知である。一実施形態において、キネシンのATPアーゼアッセイは微小管が存在しない状態でおこなわれる。別の実施形態において、ATPアーゼアッセイは微小管の存在下でおこなわれる。上記のアッセイでは、異なるタイプの薬物が検出される。好ましい実施形態において、薬物の効果は微小管及びATPの濃度に依存しない。別の実施形態において、薬物のキネシンATPアーゼに対する効果は、ATP、微小管またはその両方の濃度が増加すると減少する。さらに別の実施形態において、薬物の効果は、ATP、微小管またはその両方の濃度が増加すると増加する。
【０２４４】
次に、in vitroでKSPの生化学的活性を阻害する化合物について、in vivoでスクリーニングをおこなう。in vivoスクリーニング法には、細胞周期の分布、細胞の生存度、または有糸分裂紡錘体の存在、形態学、活性、分布もしくは数のアッセイが含まれる。たとえば、フローサイトメトリーによる細胞集団の細胞周期分布をモニターする方法は、細胞の生存度を測定する方法と共に当業者に公知である。たとえば、米国特許第6,437,115号を参照されたい。この文献全体を参照により本明細書に組み入れる。紡錘体の形成および形成異常をモニターするための顕微鏡的方法は当業者に公知である（たとえば、WhiteheadおよびRattner (1998), J. Cell Sci. 111:2551-61; Galgioら、(1996) J. Cell Biol., 135:399-414を参照されたい。両方の文献を全体として参照により本明細書に組み入れる）。
【０２４５】
本発明の化合物はKSPキネシンを阻害する。阻害の１つの尺度はIC50であり、これは、KSPの活性が対照と比較して50%減少する化合物の濃度と定義される。好ましい化合物は約1mM未満のIC50を有し、好ましい実施形態においては約100μM未満のIC50を有し、より好ましい実施形態においては約10μM未満のIC50を有し、さらに好ましい実施形態においては約1μM未満のIC50を有し、特に好ましい実施形態においては約100nM未満のIC50を有し、最も好ましい実施形態においては約10nM未満のIC50を有する。IC50の測定は、本明細書に記載されるようなATPアーゼアッセイを用いておこなわれる。
【０２４６】
阻害の別の尺度はKiである。1μM未満のIC50を有する化合物について、KiまたはKdが、本明細書に記載される化合物とKSPの相互作用の解離速度定数として定義される。好ましい化合物は約100μM未満のKiを有し、好ましい実施形態においては約10μM未満のKiを有し、より好ましい実施形態においては約1μM未満のKiを有し、特に好ましい実施形態においては約100nM未満のKiを有し、最も好ましい実施形態においては約10nM未満のKiを有する。
【０２４７】
ある化合物のKiは３つの仮定およびミヒャエーリス-メンテン式に基づいてIC50から決定される。第１に、ただ１つの化合物分子が酵素に結合し、共動性は存在しない。第２に、活性な酵素および試験される化合物の濃度は知られている（すなわち、試料の中に有意な量の不純物または不活性型は存在しない）。第３に、酵素-阻害剤複合物の酵素速度はゼロである。速度（すなわち、化合物濃度）データを下記の式に当てはめる。  
2006508030.tif 000042
【０２４８】
［式中、Vは観察された速度、Vmaxは遊離の酵素の速度、I0は阻害剤濃度、E0は酵素濃度、およびKdは酵素-阻害剤複合体の解離定数である。］
【０２４９】
阻害の別の尺度はGI50であって、これは、細胞増殖の速度を50%減少させる化合物の濃度と定義される。好ましい化合物は約1mM未満のGI50を有する。約20μM未満のGI50を有するものがより好ましく、約10μM未満のGI50を有するものがより好ましく、約1μM未満のGI50を有するものがより好ましく、約100nM未満のGI50を有するものがより好ましく、約10nM未満のGI50を有するものがさらに好ましい。GI50の測定は、本明細書に記載されるような細胞増殖アッセイを用いておこなわれる。このクラスの化合物は細胞増殖を阻害することが見いだされた。
【０２５０】
小分子阻害剤のin vitroの効力は、たとえばヒト卵巣癌細胞(SKOV3)を、化合物の９点連続希釈(9-point dilution series)に72時間曝した後の生存度についてアッセイすることにより決定される。細胞生存度は、市販されている試薬であるMTS/PMSの生物学的還元により形成される生成物であるホルマゾンの吸収を測定することにより決定する。用量反応曲線のそれぞれの点を、72時間後の処理されていない対照細胞からバックグラウンドの吸収（完全な細胞の死）を引いたもののパーセントとして計算する。
【０２５１】
癌治療の臨床に適用することに成功した抗増殖性化合物（癌化学療法剤）は、非常にさまざまなGI50を有する。たとえば、A549細胞において、パクリタキセルのGI50は4nM、ドキソルビシンは63nM、5-フルオロウラシルは１μM、ヒドロキシ尿素は500μMである（データは国立癌研究所(National Cancer Institute)、治療プログラム開発(Developmental Therapeutic Program)、http://dtp.nci.nih.gov/により提供された）。したがって、細胞増殖を阻害する化合物は、阻害を示す濃度に関わらず、臨床上有用である可能性がある。
【０２５２】
本発明の化合物をKSPキネシンに結合する化合物をスクリーニングする方法に使用するために、KSPを支持体に結合し、本発明の化合物をアッセイに加える。あるいは、本発明の化合物を支持体に結合し、KSPを加える。新規の結合物質が見つかる可能性のある化合物のクラスには、特異的抗体、化学ライブラリーのスクリーニングにおいて同定される非天然結合物質、ペプチド類似物等が含まれる。特に興味深いのが、ヒト細胞への毒性の低い候補の物質のスクリーニングアッセイである。標識されたin vitroタンパク質-タンパク質結合アッセイ、電気泳動移動度シフトアッセイ、タンパク質結合に対するイムノアッセイ、機能アッセイ（リン酸化アッセイ等）等を含む、さまざまなアッセイがこの目的のために用いられる。
【０２５３】
本発明の化合物のKSPに対する結合の測定は、多くの方法によりおこなうことができる。一実施形態において、化合物を、たとえば螢光または放射性基により標識し、結合を直接測定する。たとえば、これは、すべてのまたは一部のKSPを固体の支持体に結合させ、標識された試験化合物（たとえば、少なくとも１つの原子を検出可能な同位体に置き換えた本発明の化合物）を加え、過剰な試薬を洗い流し、固体の支持体上に存在する標識の量を測定することによりおこなわれる。
【０２５４】
本明細書において、「標識された」とは、化合物が、検出可能なシグナルを提供する標識、たとえば、放射性同位元素、螢光タグ、酵素、抗体、磁気粒子のような粒子、化学発光タグ、または特異的結合分子等により、直接的または間接的に標識されることを意味する。特異的結合分子には、ビオチンとストレプタビジン、ジゴキシンとアンチジゴキシン等のような対が含まれる。特異的結合のメンバーに対して、相補的なメンバーは、通常、検出を可能にする分子により、上に記載されたような公知の方法に従って標識される。標識は直接または間接的に検出可能なシグナルを提供する。
【０２５５】
ある実施形態において、複数の成分のうちの１つのみが標識される。たとえば、キネシンタンパク質を、125Iを用いて、または発蛍光団によりチロシン位置で標識する。あるいは、異なる標識により１つ以上の成分を標識してもよい。たとえば、タンパク質には125Iを、抗有糸分裂剤には発蛍光団を用いる。
【０２５６】
本発明の化合物はまた、別の薬物候補をスクリーニングするための競合剤として用いてもよい。本明細書において用いられる「候補の物質」または「薬物候補」または文法的に等しい用語は、生物活性を試験されるすべての分子、たとえば、タンパク質、オリゴペプチド、小さい有機分子、多糖、ポリヌクレオチド等を表わす。これらは細胞増殖の表現型、または核酸配列およびタンパク質配列の両方を含む細胞増殖配列の発現を、直接または間接的に改変することができる。別の場合には、細胞増殖タンパク質の結合および/または活性の改変をスクリーニングする。この種のスクリーニングは、微小管が存在する、または存在しない状態で実施される。タンパク質の結合または活性がスクリーニングされる場合、特定の実施形態において、既にその特定のタンパク質に結合することが知られている分子、たとえば、微小管のようなポリマー構造、およびATPのようなエネルギー源が除外される。本明細書のアッセイの特定の実施形態には、本明細書において「外因性」物質と呼ばれる、その内因性の天然の状態において細胞増殖タンパク質に結合しない候補の物質が含まれる。別の実施形態において、外因性物質からは、さらにKSPに対する抗体が除外される。
【０２５７】
候補の物質は、多くの化学的なクラスを包含するが、典型的にはそれらは有機分子、好ましくは100ダルトンより大きく約2,500ダルトンよりも小さい分子量を有する小さい有機化合物である。候補の物質はタンパク質との構造的な相互作用、特に水素結合および疎水性結合に必要な官能基を有し、典型的には少なくとも１つのアミン、カルボニル-、ヒドロキシル-、エーテルまたはカルボキシル基を含み、好ましくは上記の官能基を少なくとも２つ含む。候補の物質はしばしば、上記の官能基の１つ以上により置換された環状炭素または複素環構造および/または芳香族または多環芳香族構造を有する。候補の物質はまた、ペプチド、サッカリド、脂肪酸、ステロイド、プリン、ピリミジンそれらの誘導体、構造的類似物または組合せを含む生体分子から見いだされる。
【０２５８】
候補の物質は、合成または天然化合物のライブラリーを含むさまざまな供給源から入手される。たとえば、ランダム化されたオリゴヌクレオチドの発現を含む、さまざまな有機化合物および生体分子のランダムな、および管理された合成のために、多くの手段が利用できる。あるいは、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形の天然化合物のライブラリーを利用できる、または容易に作ることができる。さらに、天然の、または合成により作られたライブラリーおよび化合物は、通常の化学、物理および生化学的手段により容易に修飾される。公知の薬理作用を有する物質に対して、構造的類似体を作るために、アシル化、アルキル化、エステル化、および/またはアミド化のような管理された、またはランダムな化学的修飾をおこなうことができる。
【０２５９】
第１のサンプルとしてKSPおよび薬物候補を混合することにより、競合的スクリーニングアッセイをおこなう。第２のサンプルは、本発明の化合物、KSPおよび薬物候補からなる。これは微小管を存在させて、または存在させずに実施する。両方のサンプルについて薬物候補の結合を測定し、２つのサンプルの間に結合の変化または差異があれば、KSPへの結合が可能で、その活性を阻害する可能性のある薬物候補が存在することを示している。すなわち、薬物候補の結合が、第１のサンプルと比較して第２のサンプルで異なっていれば、その薬物候補はKSPに結合することができる。
【０２６０】
特定の実施形態において、候補の物質のKSPへの結合は、競合的結合アッセイを用いて測定される。この実施形態において、競合物質は、抗体、ペプチド、結合相手、リガンド等のような、KSPに結合することが知られている結合基である。ある環境下で、候補の物質と結合基の間に競合的結合が存在し、結合基が候補の物質に置き換わる可能性がある。
【０２６１】
一実施形態において、候補の物質は標識される。候補の物質、または競合剤、またはその両方のいずれかをまずKSPに加えて、もし存在するなら結合するのに十分な時間をおく。最適な活性を促進するような温度で、典型的には４から40℃の間でインキュベーションをおこなってもよい。
【０２６２】
インキュベーション時間は最適な活性を得るように選択されるが、また、迅速で効率の高いスクリーニングを促進するように最適化される。典型的には0.1から１時間の間で十分である。一般的に、過剰な試薬を除去または洗い流す。次に第２の成分を加え、次いで、結合を示すために標識された成分が存在するか否かを測定する。
【０２６３】
別の実施形態において、競合物質を先に加えて、次に候補の物質を加える。競合物質の置き換えは、候補の物質がKSPに結合すること、および、それによりKSPに結合可能であり、KSPの活性を阻害する可能性を有することを示す。この実施形態において、どちらの成分を標識してもよい。したがって、たとえば、競合物質を標識した場合には、洗浄溶液中の標識の存在が候補の物質による置き換えを示す。あるいは、候補の物質を標識した場合には、支持体上の標識の存在が置き換えを示す。
【０２６４】
別の実施形態において、候補の物質を先に加えて、インキュベーションおよび洗浄をおこなった後に、競合物質を加える。競合物質による結合が存在しない場合には、候補の物質が高い親和性でKSPに結合することを示している。したがって、候補の物質を標識した場合には、支持体上の標識の存在が、競合物質が結合しないことに対応し、候補の物質がKSPに結合できることを示す。
【０２６５】
阻害は、候補の物質を上記のようにKSPと混合し、KSPの生物学的活性の変化を測定する段階からなる、KSPの活性を阻害することができる候補の物質のスクリーニングにより試験される。そこで、この実施形態において、候補の物質は、KSPに結合すること（これは必要でないかもしれないが）、および、その本明細書に定義されるような生物学的または生化学的活性を改変することの両方をしなければならない。上記方法には、上で一般的に記載したような、in vitroスクリーニング法、および細胞周期の分布、細胞生存度の改変、または有糸分裂紡錘体の存在、形態学、活性、分布、もしくは量についての細胞のin vivoのスクリーニングの両方が含まれる。
【０２６６】
あるいは、天然のKSPに結合するが、修飾したKSPに結合できない薬物候補を同定するために、示差スクリーニング(differential screening)を用いてもよい。
【０２６７】
上記アッセイには正の対照および負の対照を用いる。好適には、すべての対照および試験サンプルについて、統計的に有意な結果を得るために少なくとも３回ずつアッセイをおこなう。すべてのサンプルのインキュベーションは、物質がタンパク質に結合するのに十分な時間をかけておこなう。インキュベーションの後、すべてのサンプルを洗浄して非特異的に結合した物質を除去し、結合した、一般的には標識された物質の量を測定する。たとえば、放射性標識を用いた場合には、サンプルをシンチレーションカウンターでカウントして結合した化合物の量を測定する。
【０２６８】
スクリーニングアッセイには、さまざまな他の試薬を加えてもよい。これらには、塩、中性タンパク質、たとえば、アルブミン、界面活性剤等のような、最適なタンパク質-タンパク質結合を促進するため、および/または非特異的またはバックグラウンドの相互作用を減少させるために用いられる試薬が含まれる。プロテアーゼ阻害剤、ヌクレアーゼ阻害剤、抗菌剤等の、別の方法でアッセイの効率を改善する試薬を用いてもよい。成分の混合物は、必要な結合を与えるようないかなる順番で加えてもよい。
【０２６９】
投与
上記のように、本発明の化合物は細胞に投与される。本明細書において、「投与」とは、治療上有効な用量の本発明の化合物を、細胞培養または患者のいずれかの細胞に投与することを意味する。本明細書において、「治療上有効な用量」とは、それが投与された目的である効果を生じさせるような用量を意味する。正確な用量は治療の目的に依存し、当業者が公知の技術を用いて確定することができる。当業者に知られているように、全身送達か局所送達かの調整、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食餌、投与の時間、薬物相互作用、および症状の重篤度が必要であり、当業者により通常の実験により確定される。本明細書において、「細胞」とは、有糸分裂または減数分裂を改変することができるすべての細胞を意味する。
【０２７０】
本発明の目的のために、「患者」という用語は、ヒトおよび他の動物、特に哺乳類、および他の生物を含む。したがって、上記の方法は、ヒトの治療および獣医学的応用の両方に適用できる。好ましい実施形態において、患者は哺乳類であり、最も好ましい実施形態において、患者はヒトである。
【０２７１】
望まれる薬理活性を有する本発明の化合物を、本明細書に記載されるように、好ましくは医薬品添加物を含む薬学的に許容される組成物として患者に投与する。導入の方法に応じて、組成物は下で論じるようなさまざまな方法で製剤される。製剤中の治療活性化合物の濃度は、約0.1〜100重量%の間で変化する。
【０２７２】
薬物は単独で、または他の治療、すなわち、放射線照射、または微小管形成に作用すると思われるタキサン類の薬物、またはトポイソメラーゼI阻害剤であるカンプトテシン類のような他の化学療法剤と併用して投与される。他の化学療法剤を使用する場合、これらは本発明の化合物の投与の前、同時、または後に投与される。発明の１つの態様において、本発明の化合物は、１つ以上の他の化学療法剤と共投与される。「共投与」とは、本発明の化合物および共投与される化合物が、これらの化合物が実際にいつ投与されたかにかかわらず、同時に患者の血流に見いだされるように、本発明の化合物を患者に投与することを意味し、同時に投与することを含む。
【０２７３】
本発明の化合物および組成物の投与は、経口、皮下、静脈内、鼻内、経皮、腹腔内、筋内、肺内、鞘内、直腸、眼内を含むが、これらに限定されないさまざまな方法によりおこなうことができる。ある例において、たとえば、傷および炎症の治療において、上記化合物または組成物は溶液またはスプレーとして直接適用される。
【０２７４】
医薬剤形は、一般式Iの化合物またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物または塩の溶媒和物、および１つ以上の医薬品添加物を含む。当業者に公知なように、医薬品添加物は、さまざまな剤形（たとえば、錠剤、カプセル、および液剤のような経口製剤、皮膚、眼科用、および耳用のような局所用製剤；坐剤；注射用；呼吸器用製剤等）において、薬物または医薬品の送達を可能にするまたは増大する機能を有する二次的な成分である。医薬品添加物には、活性成分の医学的効果に実質的に寄与する、不活性な、作用を示さない材料、相乗剤または化学物質が含まれる。たとえば、医薬品添加物は、流動特性、製品の均一性、安定性、味、または外観を改良する、薬物の取り扱いおよび投与を容易にして使用の便利さを増す、またはバイオアベイラビリティーを制御する機能を有する。医薬品添加物は通常不活性または作用を示さないと記載されるが、医薬品添加物の性質とそれを含む剤形の間には関係があると当業者に理解されている。
【０２７５】
担体および希釈剤として使用するのに適した医薬品添加物は当業者に公知であり、さまざまな製剤に用いられる。たとえば、「Remingtonの薬学」(Remington’s Pharmaceutical Sciences)、第18版、A.R.Gennaro編、Mack Publishing Company (1990)；Remington：「薬学の科学および実践」(The Science and Practice of Pharmacy)、第20版、A.R.Gennaro編、Lippincott Williams & Wilkins (2000)；「医薬品添加物ハンドブック」(Handbook of Pharmaceutical Excipients)、第３版、A.H.Kibbe編、American Pharmaceutical AssociationおよびPharmaceutical Press (2000)；「医薬品添加物ハンドブック」(Handbook of Pharmaceutical Additives)、MichaelおよびIrene Ash編集、Gower (1995)を参照されたい。これらの文献をすべての目的のために参照により本明細書に組み入れる。
【０２７６】
錠剤のような経口用の固体の剤形は、典型的には、たとえば満足できる加工および圧縮特性を与える、または錠剤に付加的な望まれる物理的特性を与える、１つ以上の医薬品添加物を含む。上記の医薬品添加物は希釈剤、結合剤、流動促進剤、滑沢剤、崩壊剤、色素、着香剤、甘味料、ポリマー、ワックスまたは他の溶解抑制物質から選択される。
【０２７７】
静脈内投与用の組成物は、一般的に静脈内用の液体、すなわち、循環系により容易に運ばれ、吸収されることができる、糖、アミノ酸または電解質のような単純な化学物質の無菌溶液を含む。このような液体は米国薬局方の注射用水を用いて調製される。
【０２７８】
通常静脈内への使用のために用いられる液体は、Remington：「薬学の科学および実践」(The Science and Practice of Pharmacy)（上に引用）に開示されており、以下のものを含む。
【０２７９】
アルコール（たとえば、デキストロースおよび水（“D/W”）[たとえば5%デキストロース]または正常な生理食塩水（“NSS”）中のデキストロースおよび水[たとえば、5%デキストロース]中で；たとえば、5%アルコール）；
アミノシン(Aminosyn)、フレアミン(FreAmine)、トラバソール(Travasol)のような合成アミノ酸、たとえば、それぞれ、3.5または７；8.5；3.5、5.5または8.5%;
塩化アンモニウム、たとえば、2.14%;
デキストラン40、NSS中、たとえば10%、またはD5/W中、たとえば10%；
デキストラン70、NSS中、たとえば6%、またはD5/W中、たとえば6%；
デキストロース（グルコース、D5/W）、たとえば2.5〜50%；
デキストロースおよび塩化ナトリウム、たとえば5〜20%デキストロースおよび0.22〜0.9% NaCl；
乳酸を加えたリンガー液（Hartmannの）、たとえば、NaCl 0.6%、KCl 0.03%、CaCl2 0.02%；
乳酸 0.3%；
マンニトール、たとえば5%、必要に応じてデキストロース、たとえば10%、またはNaCl、たとえば、15または20%と組み合わせて；
さまざまな組合せの電解質、デキストロース、フルクトース、転化糖リンガー液、たとえば、NaCl 0.86%、KCl 0.03%、CaCl2 0.033%を含む多電解質溶液；
炭酸水素ナトリウム、たとえば5%；
塩化ナトリウム、たとえば0.45、0.9、3または5%；
乳酸ナトリウム、たとえば1/6M；および
注射用無菌水。
【０２８０】
上記の液体のpHはさまざまであるが、典型的には、当分野で公知なように、3.5から８である。
【０２８１】
以下の実施例は、上記の発明を使用する方法をより完全に説明すると共に、本発明のさまざまな態様を実施する上で最も良いと考えられる方式を説明するためのものである。これらの実施例は、本発明の本来の範囲を限定するためではなく、説明の目的で提供されるものと理解される。本明細書において引用した、特許および特許出願を含むが、これらに限定されないすべての文献を、個々の文献について、本明細書に完全に記載されているように、参照により本明細書に組み入れると特定的に及び個別に指示されているのと同様に、参照により本明細書に組み入れる。
実施例
【０２８２】
すべての無水溶媒は、Aldrich Chemical Companyより、SureSeal（登録商標）容器に入ったものを購入した。
【実施例１】
【０２８３】
アプローチA
【化３６】
2006508030.tif 000043
【０２８４】
アセトアセトアミド２(12.0g, 0.119mol)およびキシレン(200mL)を、ドライアイス還流冷却器を取り付けた500mLの３口丸底フラスコに加えた。得られた混合物を115℃に加熱してアンモニアガスを３時間連続的にパージした後、室温に冷却した。反応混合物を濾過して、濾液を減圧濃縮した。残った白色の固体は、1H NMR分析により、純粋な目的の生成物３(1.491g, 14.9mmol)であると決定された。濾過により得られた残った固体の残渣に200mLの蒸留水を加えた。この水溶液を酢酸エチル(3×100mL)、および熱いクロロホルム(3×100mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮して、追加の目的の生成物３(3.628g, 36.2mmol)を得た。上記反応の全体の収率は47.4%であった。
【０２８５】
金属ナトリウム(1.0g)を無水エタノール(50mL)に室温で注意深く加えることによりナトリウムエトキシドを生成し、すぐに使用した。β-アミノクロトンアミド３(1.389g, 13.87mmol)およびエステル４(3.744g, 15.26mmol)の混合物を250mLのフラスコに入れ、ナトリウムエトキシドの無水エタノール(50mL)溶液を室温で加えた。得られた溶液を80℃に加熱し、窒素雰囲気下で２時間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、減圧濃縮した。残った残渣に50mLの蒸留水を加えて、1M HCl水溶液により中和した。次にこれを酢酸エチル(3×40mL)および熱いクロロホルム(3×40mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮した。黄色の残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、溶離液として酢酸エチルおよびヘキサンの混合物を用いて精製した。目的の生成物５(1.261g, 32.3%)を、1H-NMRおよびLC/MS(LRMS (MH) m/z 282.2)により確認した。
【０２８６】
ピリミジノン５(506mg, 1.80mmol)のジオキサン(30mL)溶液に、水素化リチウム(17mg, 2.16mmol)を室温で加えた。得られた懸濁液を室温で15分間撹拌した後、トシル化ベンジル(519mg, 1.98mmol)を加えた。反応混合物を窒素雰囲気下、65℃で20時間撹拌した。ジオキサンを減圧除去し、残渣を酢酸エチル(50mL)および蒸留水(50mL)により希釈した。有機層を分離して、水相を酢酸エチル(3×25mL)によりさらに抽出した。有機層を合わせて食塩水により洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残ったアモルファス状の固体をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、溶離液として酢酸エチルおよびヘキサンの混合物を用いて精製した。純粋な目的の生成物６(388mg, 58.1%)が白色の固体として単離され、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 372.2)を用いて完全に確認された。
【０２８７】
ピリミジノン６(388mg, 1.04mmol)のジクロロメタン(15mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(15mL)を０℃で加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣を酢酸エチル(25mL)に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(25mL)により中和した。有機層を分離し、水相を酢酸エチル(3×25mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮して目的の生成物７(245mg, 88.0%)をオイルとして得た。これをLC/MS分析(LRMS (MH) m/z 272.2)により確認して、それ以上精製を行わずに次のステップに用いた。
【０２８８】
ピリミジノン７(245mg, 0.903mmol)のジクロロメタン(20mL)溶液に、室温で、アルデヒド８(188mg, 1.084mmol)およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(230mg, 1.084mmol)を順に加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下で３時間撹拌した後、水(40mL)を加えた。有機層を分離して、水相をジクロロメタン(3×40mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、溶離液として酢酸エチルおよびヘキサンの混合物を用いて精製し、目的の生成物９(250mg, 64.5%)を白色の固体として得た。これは、1H NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 429.6)を用いて確認された。
【０２８９】
ピリミジノン９(250mg, 0.583mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(90mg, 0.700mmol)のジクロロメタン(20mL)溶液に、０℃で、塩化p-トルオイル(108mg, 0.700mmol)を加えた。得られた溶液を窒素雰囲気下、室温で４時間撹拌し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(20mL)により反応を止めた。有機層を分離して水相をジクロロメタン(3×25mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水により洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、溶離液として酢酸エチルおよびヘキサンの混合物を用いて精製し、純粋な生成物10 (191mg, 60.0%)をアモルファス性の固体として単離した。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 547.7)を用いて確認された。
【０２９０】
ピリミジノン10 (67mg, 0.12mmol)のジクロロメタン(10mL)溶液に、トリフルオロ酢酸(10mL)を室温で加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣を高真空で乾燥し、酢酸エチル(25mL)に溶解した。これを飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(25mL)により中和して、水相を酢酸エチル(3×25mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（溶離液として、NH4OH/MeOH/DCM 0.1:1:10）により精製した。目的の生成物１(52mg, 90.0%)をガラス状の固体として単離した。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析 (LRMS (MH) m/z 447.3)により完全に確認された。
【０２９１】
アプローチB
【化３７】
2006508030.tif 000044
【０２９２】
ドライアイス還流冷却器を取り付けた500mLの３口丸底フラスコに、β-ケトアミド11  (13.0g, 68.0mmol)およびキシレン(200mL)を加えた。混合物を115℃に加熱して、アンモニアガスを５時間連続的にパージした後、室温に冷却した。得られた混合物を濃縮して残った白っぽい残渣を高真空で12時間乾燥した。1H-NMRは残渣が88%の目的の生成物12 (11.4g)を含むことを示していた。粗生成物を、それ以上精製を行わずに次のステップに使用した。
【０２９３】
金属ナトリウム(1.0g)を無水エタノール(50mL)に室温で注意深く加えることによりナトリウムエトキシドを生成し、すぐに使用した。β-アミノアミド12(813mg, 4.27mmol)およびエステル４(1.258g, 5.12mmol)の混合物を250mLのフラスコに入れ、ナトリウムエトキシドの無水エタノール(50mL)溶液を室温で加えた。得られた溶液を80℃に加熱し、窒素雰囲気下で３時間撹拌した。次いで、混合物を室温に冷却し、減圧濃縮した。残渣に蒸留水(50mL)を加えて、1M HCl水溶液により中和した後、これを酢酸エチル(3×40mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。黄色の残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより、溶離液として酢酸エチルおよびヘキサンの混合物を用いて精製した。目的の生成物６(10mg, 1.0%)が単離され、1H-NMRおよびLC/MS(LRMS (MH) m/z 372.2)により確認したところアプローチAにより得られた生成物と同一であることが見いだされた。
【実施例２】
【０２９４】
N-Boc-Val-アミジンの調製
【化３８】
2006508030.tif 000045
【０２９５】
N-Boc-DL-Val-OH（化合物13, 11.0g, 50.0mmol）およびN-メチルモルホリン(7.5mL, 70.0mmol)の無水テトラヒドロフラン(300mL)溶液に、０℃でクロロギ酸イソブチル(8.5mL, 66.0mmol)を加えた。得られた混合物を室温で４時間撹拌した。次に、フラスコにドライアイス還流冷却器を取り付けて、アンモニアガスを２時間連続的にパージした。次いで、得られた反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶媒の大部分を蒸発させた後、残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により希釈し、酢酸エチルにより抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、溶媒を蒸発させた。1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 216.28)により判定したところ、残渣(10.8g)が目的のアミド14 であることを確認した。アミド14を、精製を行わずに次の反応に用いた。
【０２９６】
アミド14 (1.2g, 5.0mmol)のジオキサン(20mL)溶液に、室温でピリジン(1.0mL, 12.5mmol)および無水トリフルオロ酢酸(1.41mL, 10.0mmol)を順に加えた。得られた溶液を出発物質がなくなるまで４時間撹拌した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により反応を止め、酢酸エチル(3×100mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン/酢酸エチル）により精製して、化合物15 (1.0g)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 198.26)により確認された。
【０２９７】
ニトリル15 (14.0g, 71.0mmol)およびN-アセチルシステイン(230mg, 1.4mmol)のエチレングリコール(200mL)溶液に、室温で、固体の酢酸アンモニウム(17.8g, 231.0mmol)を加えた。得られた溶液を100℃で48時間加熱した。大部分のエチレングリコールを減圧蒸留した。得られた残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(100mL)に溶解し、ジエチルエーテルおよびヘキサンの混合物(3×50mL)により抽出した。次に水相を塩化ナトリウムにより飽和して、テトラヒドロフラン(4×100mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮して残渣16(4.5g)を得た。これは次の反応に使用するのに十分に純粋であると判定された(1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 217.20))。
【０２９８】
ニトリル15 (1.0g, 5.0mmol)を100mLのフラスコに入れた。次に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(20.0mL, 10.0mmol, 0.5M)をフラスコに加えた。得られた反応混合物に塩酸ヒドロキシルアミン(690mg, 10.0mmol)を加えた。次いで、反応混合物を50℃で一晩加熱した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣を飽和塩化ナトリウム溶液に溶解し、テトラヒドロフラン(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。化合物17 (960mg)は、それ以上精製を行わずに次の反応に用いるのに十分に純粋であると判定された(LC/MS (LRMS (MH) m/z 232.29))。
【０２９９】
中間物質17 (462mg, 2.0mmol)の酢酸(5.0mL)溶液に、室温で、無水酢酸(300μL, 3.0mmol)およびPd/C (10重量%, 65mg)を加えた。反応混合物を水素雰囲気下で24時間撹拌した後、セライトにより濾過した。セライト栓を追加のメタノールにより洗浄した。溶媒を蒸発させた後、残渣を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液(20mL)に溶解し、ジエチルエーテル/ヘキサンの混合物(3×10mL)により抽出した。次に、水相を塩化ナトリウムにより飽和して、テトラヒドロフラン(4×50mL)により抽出した。テトラヒドロフラン層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。アミジン16 (315mg)は、次の反応に用いるのに十分に純粋であると判定された(1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z 217.20))。
【実施例３】
【０３００】
N-Boc-Val-アミジン(4)のピリミジノンコアの調製
【化３９】
2006508030.tif 000046
【０３０１】
酢酸エチル(1.11mL, 11.34mmol)をナトリウムメトキシド(416mg, 7.70mmol)と混合し、得られた懸濁液を５分間撹拌し、10℃に冷却した。次いで、ギ酸メチル(250μL, 4.05mmol)を滴下して加えた。得られた黄色のペーストを、窒素雰囲気下、室温で16時間撹拌した。得られたアルデヒド18を、それ以上精製を行わずに直接次のステップに使用した。
【０３０２】
アルデヒド18 (523mg, 4.05mmol)および未精製のアミジン16 (872mg, 4.05mmol)の溶液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(20mL, 10.00mmol, 0.5M)を加えた。得られた溶液を60℃で30分間加熱した。大部分のメタノールを減圧除去して、残渣を酢酸エチル(20mL)および蒸留水(20mL)により希釈した。層を分離し、水相を酢酸エチル(3×20mL)により抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮して褐色のアモルファス状の固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルおよびヘキサン）により精製して、目的のピリミジノン19を白色の泡状の固体(477mg)として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 267.32)により確認された。
【０３０３】
β-ケトエステル20 (238mg, 1.65mmol)および粗アミジン16 (355mg, 1.65mmol)のメタノール溶液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(10mL, 5.00mmol, 0.5M)を加えた。得られた溶液を60℃で30分間加熱した。大部分のメタノールを減圧除去して、残渣を酢酸エチル(20mL)および蒸留水(20mL)により希釈した。層を分離し、水相を酢酸エチル(3×20mL)により抽出した。次に、有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮して褐色のアモルファス状の固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルおよびヘキサン）により精製して、目的のピリミジノン21を白色の泡状の固体(98mg)として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 295.38)により確認された。
【０３０４】
アミジン16 (3.17g, 14.7mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(2.56mL, 14.7mmol)の無水エタノール(75mL)溶液に、室温で、エステル22 (2.98g, 14.7mmol)を加えた。得られた混合物を70℃で16時間加熱した。大部分のエタノールを減圧除去し、残渣を酢酸エチル(50mL)および水(50mL)により希釈した。層を分離して、水相を酢酸エチル(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を減圧下で蒸発させた後、残った黄色のアモルファス状の固体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルおよびヘキサン）により精製して、目的のピリミジノン23 (936mg)を白色の固体として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 353.41)により確認された。
【０３０５】
シアノ酢酸メチル24 (1.673g, 16.88mmol)およびオルト酢酸トリエチル(3.424mL, 18.57mmol)の無水酢酸(30mL)溶液を、3時間加熱還流した。得られた溶液を室温に冷却し、大部分の無水酢酸を減圧除去した。残渣を３日間放置して結晶を形成させた。結晶25を濾過により単離して次の反応に直接使用した。
【０３０６】
エステル25 (51mg, 0.28mmol)およびアミジン16 (20mg, 0.90mmol)のメタノール溶液に、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(3mL, 1.5mmol, 0.5M)を加えた。得られた溶液を窒素雰囲気下、60℃で30分間撹拌した。大部分のメタノールを減圧除去し、残渣を酢酸エチル(50mL)および水(50mL)により希釈した。層を分離し、水相を酢酸エチル(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルおよびヘキサン）により精製して、目的のピリミジノン26 (27mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 306.36)を用いて確認された。
【０３０７】
マロン酸ジエチル(27, 1.6mL, 10.0mmol)および未精製のアミジン16 (2.5g, 15mmol)のメタノール溶液に、室温で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(35.0mL, 17.5mmol, 0.5Mメタノール溶液)を加えた。得られた溶液を60℃で、４時間加熱した。次に、反応混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧除去した。得られた残渣を蒸留水(15mL)に溶解し、塩化ナトリウムにより飽和した。水溶液をテトラヒドロフラン(3×100mL)により抽出し、有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。減圧濃縮した後、残渣28をそれ以上精製を行わずに次のステップに用いた。化合物28は、LC/MS (LRMS (MH) m/z: 283.32)により確認された。
【０３０８】
未精製の28 (2.0g)のジメチルホルムアミド(100mL)溶液に、０℃で、炭酸水素ナトリウム(4.0g)および硫酸ジメチル(0.8mL)を加えた。得られた溶液を、LC/MC分析がモノメチル化物29が主生成物となっていることを示すまで、０℃で４時間撹拌した。次に、水(100mL)により反応を止め、ジクロロメタン(3×60mL)および酢酸エチル(3×60mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。減圧濃縮した後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン/メタノール）により精製して、目的のピリミジノン29 (855mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 297.35)により確認された。
【０３０９】
シアノ酢酸メチル(24, 0.8mL, 8.0mmol)および未精製のアミジン16 (2.0g, 12mmol)のメタノール溶液に、室温で、ナトリウムメトキシドのメタノール溶液(30.0mL, 15.0mmol, 0.5Mメタノール溶液)を加えた。得られた溶液を60℃で４時間加熱した。反応液を室温に冷却した後、溶媒を減圧除去し、残渣を蒸留水(15mL)に溶解し、塩化ナトリウムにより飽和した。水溶液をテトラヒドロフラン(3×100mL)により抽出し、有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、化合物30 (1.4g)を、それ以上精製を行わずに次のステップに使用した。化合物30は、LC/MS (LRMS (MH) m/z: 282.34)を用いて確認された。
【０３１０】
未精製のアミン30 (400mg, 1.42mmol)のテトラヒドロフラン(60mL)溶液に、０℃で、ジイソプロピルエチルアミン(1.0mL)および塩化アセチル(0.24mL, 2.82mmol)を順に加えた。得られた溶液を０℃で６時間撹拌した。次いで、炭酸水素ナトリウム水溶液により反応を止めて、ジクロロメタン(3×60mL)および酢酸エチル(3×60mL)により抽出した。次に、有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン/メタノール）により精製して、目的のピリミジノン31 (265mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 324.38)により確認された。
【実施例４】
【０３１１】
【化４０】
2006508030.tif 000047
【０３１２】
ピリミジノン32 (4.66g, 16.6mmol)の四塩化炭素(75mL)溶液に、室温で、N-ブロモコハク酸イミド(2.95g, 16.6mmol)を加えた。得られた混合物を85℃で１時間加熱した。次に、反応混合物に水(50mL)を加えて反応を止め、ジクロロメタン(3×25mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルおよびヘキサン）により精製して、臭化物33を白色の固体(3.24g)として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 360.25)により確認された。
【実施例５】
【０３１３】
所望のピリミジノンを調製する一般的方法
【化４１】
2006508030.tif 000048
【０３１４】
ピリミジノン21 (670mg, 2.27mmol)のジオキサン(30mL)溶液に、室温で、水素化リチウム(23mg, 2.27mmol)を加えた。得られた懸濁液を15分間撹拌した。次に、トシル化ベンジル(774mg, 2.95mmol)を加え、反応混合物を、窒素雰囲気下、60℃で16時間加熱した。大部分のジオキサンを減圧除去し、残渣を酢酸エチル(50mL)および蒸留水(50mL)により希釈した。層を分離して、水相を酢酸エチル(3×25mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジエチルエーテルおよびジクロロメタン）により精製して目的の生成物34 (686mg)を白色の固体として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 385.50)により確認された。
【０３１５】
ピリミジノン34 (99mg, 0.26mmol)のジクロロメタン(5mL)溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸(5mL)を加えた。得られた溶液を室温で１時間撹拌した。次に、大部分の溶媒を減圧除去した後、残渣を高真空で１時間乾燥した。次いで、得られた物質を酢酸エチル(50mL)により希釈して、飽和炭酸水素ナトリウム溶液(25mL)により洗浄した。水相を酢酸エチル(3×25mL)により抽出して、有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、アミン35 (65mg)を、それ以上精製を行わずに次のステップに使用した。化合物35は、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 285.38)により確認された。
【０３１６】
アミン35 (744mg, 2.61mmol)のジクロロメタン(25mL)溶液に、室温で、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(718mg, 3.39mmol)およびアルデヒド36 (587mg, 3.39mmol)を順に加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下、室温で、出発物質がほとんどなくなるまで３時間撹拌した。次に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により反応を止め、水相をジクロロメタン(3×60mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。得られた残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン/メタノール）により精製して、目的の生成物37 (1.038g)を得た。これは、LC/MS (LRMS (MH) m/z: 442.59)により確認された。
【０３１７】
ピリミジノン37 (1.038g, 2.35mmol)のジクロロメタン(25mL)溶液に、０℃で、ジイソプロピルエチルアミン(1.0mL)および塩化p-トルオイル(434mg, 2.81mmol)を順に加えた。得られた溶液を、窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次に、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により反応を止めて、得られた水相をジクロロメタン(4×50mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥した。溶媒を蒸発させた後、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンおよびメタノール）により精製して、生成物38 (943mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 560.73)により確認された。
【０３１８】
ピリミジノン38 (72mg, 0.13mmol)のジクロロメタン(10mL)溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸(10mL)を加えた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、減圧濃縮した。次に、残渣を高真空で１時間乾燥し、酢酸エチル(25mL)に溶解した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により洗浄し、水相を酢酸エチル(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、メタノール/ジクロロメタン）により精製して、目的の生成物39 (57mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析 (LRMS (MH) m/z: 460.61)により完全に確認された。
【０３１９】
上記の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【表１】
2006508030.tif 000049
2006508030.tif 000050
【実施例６】
【０３２０】
【化４２】
2006508030.tif 000051
【０３２１】
ピリミジノン40 (238mg, 0.385mmol)のエタノール(3mL)溶液に、室温で、濃アンモニア水(5mL)を加えた。得られた混合物を室温で24時間撹拌した。次に、エタノールを減圧除去して、残った水層を酢酸エチル(3×10mL)により抽出した。有機層を合わせて食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を蒸発させた後、得られたアモルファス状の固体をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、41 (135mg)を白色の固体として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 589.73)により確認された。
【０３２２】
ピリミジノン41 (76mg, 0.128mmol)のピリジン(5mL)溶液に、室温で、塩化チオニル(200μL, 1.03mmol)を加えた。反応混合物を室温で16時間撹拌した。次に、溶媒を減圧除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、ニトリル42 (46mg)を白色の固体として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS (LRMS (MH) m/z: 571.71)により確認された。
【０３２３】
ピリミジノン42 (46mg, 0.08mmol)のジクロロメタン(5mL)溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸(5mL)を加えた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣を高真空で１時間乾燥した後、酢酸エチル(25mL)に溶解した。得られた溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により洗浄し、水相を酢酸エチル(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、メタノール/ジクロロメタン）により精製して、目的の生成物43 (27mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 471.59)により確認された。
【０３２４】
上記の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【表２】
2006508030.tif 000052
【実施例７】
【０３２５】
【化４３】
2006508030.tif 000053
【０３２６】
ピリミジノン44 (375mg, 0.599mmol)、2-(ジシクロヘキシルホスフィノ)ビフェニル(4.0mg, 0.012mmol)、酢酸パラジウム(1.3mg, 0.006mmol)、フェニルボロン酸(110mg, 0.899mmol)およびフッ化カリウム(104mg, 1.798mmol)を再密閉可能なシュレンク管に入れた。管を排気して窒素を満たすことを３回繰り返した。次に、シリンジを用いてトルエ(3mL)を加え、得られた混合物を80℃で72時間加熱した。次に、反応混合物をジエチルエーテル(15mL)により希釈し、水酸化カリウム水溶液(20mL, 1M)により洗浄した。水層をジエチルエーテル(2×15mL)により抽出し、有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、目的の生成物45 (160mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 622.80)により完全に確認された。
【０３２７】
ピリミジノン44 (750mg, 1.20mmol)の無水エタノール(5mL)溶液を壁厚のガラス管に入れて、1,3-ビス(ジフェニルホスフィノ)プロパン(124mg, 0.30mmol)、トリエチルアミン(1.673mL, 12.0mmol)および酢酸パラジウム(51mg, 0.23mmol)を加えた。管を排気して一酸化炭素で満たすことを３回繰り返した後、一酸化炭素で加圧した(30psi)。混合物を70℃で48時間加熱した。エタノールを蒸発させ、残渣を酢酸エチル(20mL)および水(20mL)により希釈した。層を分離して、水相を酢酸エチル(3×10mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、46 (357mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 618.76)により確認された。
【０３２８】
エステル46 (382mg, 0.617mmol)のテトラヒドロフラン(10mL)およびメタノール(5mL)中の溶液に、室温で、水酸化カリウム水溶液(2.5mL, 1.0M)を加えた。得られた混合物を70℃で４時間加熱した。反応液を室温に冷却し、溶媒を減圧除去した。残渣を酢酸エチルにより希釈して、塩酸(1.0M)により酸性化した。水層を酢酸エチル(3×15mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した。酸47 (320mg)を、それ以上精製を行わずに次のステップに使用した。化合物47は、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 590.71)により確認された。
【０３２９】
酸47 (310mg, 0.53mmol)の無水テトラヒドロフラン(5mL)溶液に、室温で、ジイソプロピルエチルアミン(274μL, 1.58mmol)およびクロロギ酸イソブチル(83μL, 0.63mmol)を順に加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した。次に、反応液を０℃に冷却して、アンモニアガスを45分間パージした。次に、混合物をさらに45分間放置して室温に戻した。溶媒を減圧除去し、残渣を酢酸エチル(15mL)および水(15mL)により希釈した。層を分離して、水相を酢酸エチル(2×15mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、生成物48 (156mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 589.73)により確認された。
【０３３０】
ピリミジノン48 (105mg, 0.178mmol)のピリジン(10mL)溶液に、室温で、塩化チオニル(250μL, 1.25mmol)を加えた。反応混合物を室温で16時間撹拌した。次に溶媒を減圧除去し、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル/ヘキサン）により精製して、49 (65mg)をガラス状の固体として得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS(LRMS (MH) m/z: 571.71)により確認された。
【０３３１】
ピリミジノン49 (65mg, 0.08mmol)のジクロロメタン(5mL)溶液に、０℃で、トリフルオロ酢酸(5mL)を加えた。得られた溶液を室温で２時間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣を高真空で１時間乾燥した後、酢酸エチル(25mL)に溶解した。得られた溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液により洗浄し、水相を酢酸エチル(3×50mL)により抽出した。有機層を合わせて硫酸ナトリウムにより乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、メタノール/ジクロロメタン）により精製して、目的の生成物50 (37mg)を得た。これは、1H-NMRおよびLC/MS分析(LRMS (MH) m/z: 471.59)により完全に確認された。
【０３３２】
上記の方法を用いて、以下の化合物を調製した。
【表３】
2006508030.tif 000054
【実施例８】
【０３３３】
【化４４】
2006508030.tif 000055
【０３３４】
条件：a) iBuOCOCl, Et3N, THF; NH4OH; b) Et3O・PF6, CH2Cl2; R1PhCH2NH2, EtOH, 60℃, 24時間
[(R)-1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
a) Boc-D-バリンアミド
Boc-D-バリン(25g, 115mmol)のTHF (300mL)溶液を撹拌しながら、０℃で、N-メチルモルホリン(15mL, 136mmol)を加えた後、クロロギ酸イソブチル(18mL, 139mmol)を５分間かけて滴下した。反応液を０℃で30分間撹拌した後、反応液に30重量% NH4OH (50mL, 385mmol)溶液をすばやく注いだ。（激しい気体の発生が見られ、２、３分後に収まった。）反応液を室温に戻し、４時間撹拌した。反応液をロータリーエバポレーターにより、ほとんどの生成物が沈殿するような量まで減圧濃縮した。濃い白色のスラリーを同量の水で希釈し、濾過し、水で洗浄し、圧縮して乾燥した後、減圧で乾燥し、表題の化合物(22.56g, 91%)を白色の固体として得た。1H NMR (400MHz, CDCl3) δ6.17(br s, 1H), 5.75(br s, 1H), 5.12(d, 1H), 4.00(app. t, 1H), 2.13(m, 1H), 1.44(s, 9H), 0.99(d, 3H), 0.94(d, 3H)。
【０３３５】
b) [(R)-1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
Boc-D-バリンアミド(10g, 46mmol)のCH2Cl2 (200mL)溶液を撹拌しながら、ヘキサフルオロリン酸トリエチルオキソニウム(13.0g, 48mmol)を加えた。（反応の初めには懸濁液であったが、次第に透明になった。）反応液を室温で48時間撹拌し、分液漏斗に注ぎ込んで、1N Na2CO3により洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過および減圧濃縮した。残ったオイルにベンジルアミン(5.0mL, 23mmol)およびEtOH (20mL)を加えた。反応液を60℃で24時間撹拌した。室温に冷却した後、反応液を減圧下で蒸発させた。精製を行わずに、表題の化合物(14.16g, LCMSにより95%以上純粋)を得た。これは淡黄色のオイルであったが、後にワックス状の固体に固化した。MS (ES) m/e 306.4(M+H)+。
【実施例９】
【０３３６】
【化４５】
2006508030.tif 000056
【０３３７】
条件：a) オルト酢酸トリエチル、HOAc、蒸留；b) EtOH、還流、18時間
[1-(3-ベンジル-5-シアノ-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
a) エチル2-エトキシエチリデンシアノアセテート
シアノ酢酸エチル(46.8g, 414mmol)およびオルト酢酸トリエチル(84.4g, 520mmol)の溶液を、短経路蒸留塔(short path distillation head)を取り付けた250mLの丸底フラスコに入れて、撹拌しながら、HOAc (1.2mL, 21mmol)を加えた。反応液をゆっくり加熱して135℃にして、生成したエチルアルコールが蒸留により除去されるように、この温度を維持した。（蒸留は約106℃で始まった。）HOAc (1.2mL, 21mmol)をさらに３回、15分間隔で反応液に加えた。次いで、反応液をゆっくりと150℃に加熱した後、約80℃に冷却した。高真空での短経路蒸留（沸点128℃、HV）により、表題の生成物(62.64g, 82%)が淡黄色の結晶性の固体として得られた。（注：詰まるのを防ぐため冷却器を冷却しなかった。）1H NMR (400MHz, CDCl3) δ4.27(q, 2H), 4.22(q, 2H), 2.61(s, 3H), 1.43(t, 3H), 1.31(t, 3H)。
【０３３８】
b) [1-(3-ベンジル-5-シアノ-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
[(R)-1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル(14.16g, 46mmol)のEtOH (50mL)溶液を撹拌しながら、エチル2-エトキシエチリデンシアノアセテート(8.4g, 46mmol)を加えた。反応液を18時間還流し、室温に冷却して減圧濃縮した。シリカゲル(5% EtOAc、CH2Cl2)を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製した後、EtOAc、ヘキサンおよびEt2O、石油エーテルから結晶化して表題の化合物(8.03g, 44%)を白色の固体として得た。MS (ES) m/e 397.2 (M+H)+。
【実施例１０】
【０３３９】
【化４６】
2006508030.tif 000057
【０３４０】
条件：a) ジメチルエチリデンマロネート、MeOH；b) NBS、過酸化ベンゾイル（触媒量）、K2CO3, CCl4還流
1-ベンジル-2-(1-t-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸メチルエステル
a) 1-ベンジル-2-(1-t-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-4-メチル-6-オキソ-1,4,5,6-テトラヒドロピリミジン-5-カルボン酸メチルエステル
[(R)-1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル(7.08g, 23mmol)のMeOH (15mL)溶液に、ジメチルエチリデンマロネート(3.64g, 23mmol)を加えた。反応液をゆっくりと加熱して110℃にして、MeOHが蒸留により減少するままにした。反応液を110℃で５時間撹拌した後、室温に冷却するまで放置した。フラッシュクロマトグラフィー(25% EtOAc、ヘキサン)により精製して、表題の化合物(6.37g, 64%)をオイルとして得た。LCMSによれば、約3:1のジアステレオマーの混合物であった。MS (ES) m/e 432.2および432.4 (M+H)+。
【０３４１】
b) 1-ベンジル-2-(1-t-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸メチルエステル
1-ベンジル-2-(1-t-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-4-メチル-6-オキソ-1,4,5,6-テトラヒドロピリミジン-5-カルボン酸メチルエステル(6.37g, 14.8mmol)のCCl4 (150mL)溶液を撹拌しながら、K2CO3 (4.0g, 29mmol)、N-ブロモコハク酸イミド(2.63g, 14.8mmol)および過酸化ベンゾイル(0.18g, 0.74mmol)を加えた。反応液を0.5時間還流し、室温に冷却し、セライト（登録商標）のパッドを通して濾過し、CH2Cl2によりすすいだ。濾液を減圧濃縮してフラッシュクロマトグラフィー（CH2Cl2中の０から5% EtOAcの段階勾配）により精製した。得られた半精製生成物を20% EtOAc-ヘキサン溶液(10mL)中に入れると、その時点で生成物は結晶化し始めた。混合物を10%Et2O-石油Et2O溶液(50mL)により希釈して、磨砕し、濾過し、減圧で乾燥して表題の化合物(2.56g, 40%)を白色の固体として得た。MS (ES) m/e 432.2および430.2 (M+H)+。
【実施例１１】
【０３４２】
【化４７】
2006508030.tif 000058
【０３４３】
条件：a) 2-クロロカルボニルプロピオン酸エチルエステル、Et3N、CH2Cl2；DMF 100℃ 18時間；b) NaH, DMF; PhN(Tf)2; Zn(CN)2, (PPh3)4Pd, DMF, 90℃ 4時間
[1-(3-ベンジル-5-メチル-6-シアノ-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
a) [1-(3-ベンジル-5-メチル-6-ヒドロキシ-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
[(R)-1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル(16.37g, 53.6mmol)のCH2Cl2 (150mL)溶液を０℃に冷却し、撹拌しながらEt3N (9mL, 64.3mmol)を加え、次いで2-クロロカルボニルプロピオン酸エチルエステル(10g, 60.8mmol)を15分間かけて滴下した。反応液を室温に戻し、４時間撹拌し、分液漏斗に注ぎ込み、水、食塩水により洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、減圧下で蒸発乾固させた。未精製のアシルアミジン（LCMSによれば約90%純粋、MS (ES) m/e (M+H)+ 434.4）をDMF (150mL)に入れ、撹拌しながら18時間100℃に加熱した。反応液を減圧濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(90:10:1, CH2Cl2:EtOAc:HOAc)、次いで、30:70:1, EtOAc:ヘキサン:HOAc)により精製して、表題の化合物(8.42g, 41%)を白っぽい固体として得た。MS (ES) m/e 388.2 (M+H)+。
【０３４４】
b) [1-(3-ベンジル-5-メチル-6-シアノ-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル
[1-(3-ベンジル-5-メチル-6-ヒドロキシ-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸t-ブチルエステル(8.42g, 21.7mmol)のDMF (150mL)溶液を撹拌しながら、NaHの鉱油中の60%分散物(0.95g, 24mmol)を、何回かに分けて加えた。室温で15分間撹拌した後、N-フェニルトリフルオロメタンスルホンイミド(8.6g, 24mmol)を加えた。反応液を室温で18時間撹拌し、減圧濃縮し、EtOAcに取り、飽和NH4Clにより洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、減圧下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（CH2Cl2中、０〜5% EtOAcの段階勾配、次いで10% EtOAc/ヘキサン）により精製して、半精製されたトリフレート(11.70g)（MS (ES) m/e 520.2 (M+H)+、LCMSによれば、23%のPhNHSO2CF3を含んでいた。）を白色の固体として得た。
【０３４５】
粗トリフレートをDMF (150mL)中で撹拌しながら、Zn(CN)2 (2.6g, 22.2mmol)および(PPh3)4Pd (2.6g, 2.3mmol)を加えた。反応液をアルゴン雰囲気下、90℃で４時間加熱し、室温に冷却し、減圧下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー（CH2Cl2中、０〜5% EtOAcの段階勾配）により精製して、表題の化合物(7.11g, 82%)を白色の固体として得た。MS (ES) m/e 520.2 (M+H)+。
【実施例１２】
【０３４６】
【化４８】
2006508030.tif 000059
【０３４７】
条件：a) 1N KOH, THF, MeOH, 60℃；b) RR’NH, EDC, HOBt, TEA, CH2Cl2, 周囲温度；次いでTFA
2-{(R)-[(3-アミノプロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルアミド
a) 1-ベンジル-2-{(R)-[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸
1-ベンジル-2-{(R)-[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸メチルエステル(2.75g, 4.55mmol)のTHF (60mL)溶液に、MeOH (30mL)、次いで1N KOH (18.2mL, 18.2mmol)を加えた。得られた溶液を60℃で３時間加熱した後、減圧濃縮した。残渣をH2O (75mL)により希釈し、1N HClによりpHを約7に調整し、EtOAc (3×75mL)により抽出した。抽出物をNa2SO4により乾燥し、濾過および減圧濃縮して、2.69g (100%)の1-ベンジル-2-{(R)-[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸をオイルとして得た。これを、精製を行わずに次のステップに使用した。MS (ES) m/e 591.4 (M+H)+。
【０３４８】
b) 2-{(R)-[(3-アミノプロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルアミド
1-ベンジル-2-{(R)-[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸(100mg, 0.169mmol)のCH2Cl2 (1.7mL)溶液に、EDC (36mg, 0.186mmol)、HOBt (25mg, 0.186mmol)、TEA (28μL, 0.203mmol)を加え、次いでエチルアミン(2.0M THF溶液を85μL, 0.169mmol)を加えた。反応混合物を室温で16時間撹拌した後、TFA (1mL)を加えた。３時間後、反応混合物を減圧濃縮し、残渣を逆相HPLCにより精製して47mg (53%)の2-{(R)-[(3-アミノプロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルアミドを淡黄色の固体として得た。MS (ES) m/e 518.4 (M+H)+。
【実施例１３】
【０３４９】
【化４９】
2006508030.tif 000060
【０３５０】
条件：a) エトキシメチレンマロン酸ジエチル、MeOH；b) 4M HCl/ジオキサン、次いで1M NaOH水溶液；OHC(CH2)2NHBoc, NaB(OAc)3H, CH2Cl2；c) R7COCl, DIEA, CH2Cl2；d) 4M KOH, EtOH/H2O；e) RR’NH2, EDC/HOBt, DMF；次いで4M HCl/ジオキサン
2-{[(3-アミノプロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-1-ベンジル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸フェニルアミドヒドロクロリド
a) 1-ベンジル-2-(1-tert-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル
Veale, J. Org. Chem., 58, 4490 (1993)の方法に従って、メタノール(160mL)中の [1-(N-ベンジル-カルバムイミドイル)-2-メチル-プロピル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(10.86g, 35.6mmol)に、エトキシメチレンマロン酸ジエチル(7.7g, 35.6mmol)を加えた。反応はDean-Starkトラップを取り付けて行った。反応液を100℃に加熱して、すべての溶媒を除去した。残渣を塩化メチレンに溶解し、1N HClおよび水により洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濃縮した。得られた淡黄色のシロップを、それ以上精製を行わずに次のステップに用いた。
【０３５１】
b) 1-ベンジル-2-[1-(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピルアミノ)-2-メチル-プロピル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル
1-ベンジル-2-(1-tert-ブトキシカルボニルアミノ-2-メチル-プロピル)-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル(前のステップの生成物を14.22g)に、4M HCl 1,4-ジオキサン溶液(50mL, 200mmol)を加えて、反応液を室温で2.0時間撹拌した。反応液を減圧濃縮して、残渣を水に溶かしてエーテルにより洗浄した。水層を1N NaOHにより塩基性にして、エーテルにより抽出した。エーテル層を水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濃縮して橙色の結晶性の固体を得た。この固体(7.08g, 21.5mmol)を、無水CH2Cl2 (100mL)に溶かして、ここに(3-オキソプロピル)-カルバミン酸tert-ブチルエステル(3.076g, 17.76mmol)の無水CH2Cl2 (50mL)溶液を加えた後、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(5.65g, 26.64mmol)を何回かに分けて加えた。反応液を窒素雰囲気下、室温で72時間撹拌した後、反応液を飽和炭酸水素ナトリウムにより塩基性にした。層を分離して、水層を塩化メチレンにより抽出し、有機層を合わせて食塩水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、蒸発乾固させた。残渣をシリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィー(1:1 ヘキサン：EtOAc)により精製して、表題の化合物を淡黄色の泡として得た(5.59g, 32%, 3段階)。MS (ES+) m/e 487 [M+H]+。
【０３５２】
c) 1-ベンジル-2-{[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチルプロピル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル
1-ベンジル-2-[1-(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピルアミノ)-2-メチル-プロピル]-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル(1.45g, 2.98mmol)、N,N-ジイソプロピルエチルアミン(1.93g, 14.91mmol)、および塩化p-トルオイル(1.38g, 8.95mmol)をCH2Cl2 (30mL)中、室温で24時間撹拌した。反応液を1N HClおよび食塩水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、蒸発乾固させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(2:1 ヘキサン：EtOAc)により精製して、表題の化合物を白色の固体(1.22g, 68%)として得た。MS(ES+) m/e 605 [M+H]+。
【０３５３】
d) 1-ベンジル-2-{[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチルプロピル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸
1-ベンジル-2-{[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチルプロピル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸エチルエステル(1.22g, 2.02mmol)のEtOH (18mL)溶液に、水酸化カリウム(0.453g, 8.068mmol)の水(2mL)溶液を加えて、反応液を室温で24時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣を水に溶かして、1N HClによりpH2に酸性化した。生成した沈殿をEtOAcに溶かして、水および食塩水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濃縮して、表題の化合物を白色の固体(1.124g, 96%)として得た。MS(ES+) m/e 577 [M+H]+。
【０３５４】
e) 2-{[(3-アミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-メチル-プロピル}-1-ベンジル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸フェニルアミドヒドロクロリド
1-ベンジル-2-{[(3-tert-ブトキシカルボニルアミノ-プロピル)-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-メチル-プロピル}-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-5-カルボン酸(0.171g, 0.297mmol)のDMF(3mL)溶液に、EDCI (0.0568g, 0.297mmol)、HOBt一水和物(0.04g, 0.297mmol)およびアニリン(0.0276g, 0.297mmol)を加えて、反応液を室温で24時間撹拌した。水を加えて反応を止め、CH2Cl2により抽出し、乾燥(Na2SO4)し、濃縮した。得られた残渣に過剰な4M HClジオキサン溶液を加えて室温で２時間撹拌した。反応液を減圧濃縮し、ジエチルエーテルを加えて磨砕し、濾過して表題の化合物を黄褐色の固体として得た(0.086g, 50%, 2段階)。MS(ES+) m/e 552 [M+H]+。
【実施例１４】
【０３５５】
【化５０】
2006508030.tif 000061
【０３５６】
条件：a) H2, 10% Pd/C, HOAc; Ac2O, Et3N, CH2Cl2 b) 4N HCl, ジオキサン
N-{1-[5-(アセチルアミノ-メチル)-3-ベンジル-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-N-(3-アミノ-プロピル)-4-メチル-ベンズアミドHCl塩
a) {1-[{1-[5-(アセチルアミノ-メチル)-3-ベンジル-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-プロピル}-カルバミン酸tert-ブチルエステル
{1-[{1-[5-シアノ-3-ベンジル-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-プロピル}-カルバミン酸tert-ブチルエステル(350mg, 0.6mmol)のHOAc (10mL)溶液を撹拌しながら、10% Pd/C (150mg)を注意深く加えた。室温で18時間、 H2のバルーンにより水素化を行い、セライト（登録商標）のパッドで濾過し、HOAcによりすすぎ、減圧下で蒸発させた。粗アミン(LCMSによれば約34%純粋、MS (ES) m/e 576.4 (M+H)+)をCH2Cl2 (10mL)中で撹拌しながら、Et3N (280μL, 2mmol)およびAc2O (114μL, 1.2mmol)を加えた。室温で２時間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し、EtOAcに取り、1N Na2CO3、1N HCl、食塩水により洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、減圧下で蒸発させた。フラッシュクロマトグラフィー(80% EtOAc/ヘキサン)により精製して、表題の化合物(0.10g, 27%)を白っぽい固体として得た。MS (ES) m/e 618.4 (M+H)+。
【０３５７】
b) N-{1-[5-(アセチルアミノ-メチル)-3-ベンジル-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-N-(3-アミノプロピル)-4-メチル-ベンズアミドHCl塩
{1-[{1-[5-(アセチルアミノ-メチル)-3-ベンジル-6-メチル-4-オキソ-3,4-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-(1-p-トリル-メタノイル)-アミノ]-プロピル}-カルバミン酸tert-ブチルエステル(0.10g, 0.16mmol)に、4N HCl ジオキサン溶液(20mL)を加えた。反応液を室温で１時間撹拌した後、減圧下で蒸発させた。Et2Oを加えて磨砕し、濾過し、減圧で乾燥させて、表題の化合物(54mg, 61%)を白っぽい固体として得た。MS (ES) m/e 518.6 (M+H)+。
【実施例１５】
【０３５８】
【化５１】
2006508030.tif 000062
【０３５９】
条件：a) Na2CO3, PdCl2(PPh3)2, MeCN-H2O, マイクロ波、５分間
N-(3-アミノプロピル)-N-{(R)-1-[1-ベンジル-5-(3-クロロ-フェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド
a) N-(3-アミノプロピル)-N-{(R)-1-[1-ベンジル-5-(3-クロロフェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド
10mLのSmithマイクロ波反応バイアルにN-(3-アミノ-プロピル)-N-[(R)-1-(1-ベンジル-5-ブロモ-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド(50mg, 0.095mmol)、3-クロロボロン酸(14.9mg, 0.095mmol)、Na2CO3 (20.1mg, 0.190mmol)、PdCl2(PPh3)2 (3.3mg, 0.005mmol)を入れ、次いでMeCN-H2O (1:1, 0.4ml)を加えた。混合物にアルゴンガスをパージし、密閉して、150℃で５分間マイクロ波反応器にかけた。残渣を逆相HPLCにより精製して、27.5mg (51%)のN-(3-アミノプロピル)-N-{(R)-1-[1-ベンジル-5-(3-クロロフェニル)-4-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミドを黄色の固体として得た。MS (ES) m/e 557.4 (M+H)+。
【実施例１６】
【０３６０】
【化５２】
2006508030.tif 000063
【０３６１】
条件：a) 塩酸1H-ピラゾール-1-カルボキシアミジン、DIEPA, DMF, 室温
N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-(2-グアニジノ-エチル)-4-メチル-ベンズアミド
N-[1-(1-ベンジル-4-シアノ-5-メチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-(2-アミノエチル)-4-メチル-ベンズアミド(75mg, 0.16mmol)のDMF(1.5mL)溶液に、1H-ピラゾール-1-カルボキシアミジンヒドロクロリド(25mg, 0.17mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(57μL, 0.33mmol)を加えた。反応液を室温で16時間撹拌し、水(2mL)を加えて反応を止め、塩化メチレン(2mL)により希釈した。水層をpH7に調整して、塩化メチレン(2×5mL)により抽出した。有機層を合わせて乾燥(Na2SO4)し、濾過し、溶媒を蒸発させた。残渣を逆相HPLCにより精製して、表題の化合物(38mg, 37%)を白色の粉末として得た。MS (ES) m/e 500.4 (M+H)+。
【実施例１７】
【０３６２】
【化５３】
2006508030.tif 000064
【０３６３】
条件：a) R7COCl、トルエチルアミン、ジクロロメタン、室温；b) C4H8NCH2CH2Cl、水素化ナトリウム、N,N-ジメチルホルムアミド、周囲温度
N-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-(2-ピロリジン-1-イルエチル)-ベンズアミド
a) N-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド
2-((R)-1-アミノ-2-メチル-プロピル)-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン(50mg, 0.175mmol)およびトリエチルアミン(49μL, 0.350mmol)のCH2Cl2溶液に、塩化4-メチル-ベンゾイル(21μL, 0.157mmol)を加えた。反応液を室温で48時間撹拌し、水を加えて反応を止め、酢酸エチル(3×20mL)により抽出した。有機層を合わせて乾燥(Na2SO4)し、濾過し、溶媒を蒸発させて表題の化合物(50mg, 72%)を無色のオイルとして得た。MS (ES) m/e 404.2 (M+H)+。
【０３６４】
b) N-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-N-(2-ピロリジン-1-イルエチル)-ベンズアミド
DMF中のN-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-4-メチル-ベンズアミド(50mg, 0.123mmol)に、水素化ナトリウム(5mg, 0.147mmol)を加えた。反応液を室温で15撹拌した後、1-(2-クロロエチル)-ピロリジン(20mg, 0.135mmol) (Tilfordら、J. Am. Chem. Soc.; 70; 1948; 4001)を加えた。反応液を室温で24時間撹拌し、水を加えて反応を止め、酢酸エチル(3×20mL)により抽出した。有機層を合わせて水(1×20mL)、食塩水(1×20mL)で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、蒸発させて表題の化合物(30mg, 49%)を無色のオイルとして得た。MS (ES) m/e 501.4 (M+H)+。
【実施例１８】
【０３６５】
【化５４】
2006508030.tif 000065
【０３６６】
条件：a) NaBH(AcO)3, AcOH, DCE, 室温；b) R9COCl, DIEPA, トルエン, 100℃；c) ヒドラジン, EtOH, 70℃
3-ベンジル-5,6-ジメチル-2-[(R)-2-メチル-1-(2-p-トリル-4,5-ジヒドロイミダゾール-1-イル)-プロピル]-3H-ピリミジン-4-オン
a) 2-{2-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピルアミノ]-エチル}-イソインドール-1,3-ジオン
2-((R)-1-アミノ-2-メチル-プロピル)-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン(0.500g, 1.75mmol)および2H-イソインドール-2-アセトアルデヒド[2913-97-5] (0.661g, 3.50mmol)をジクロロエタン(20mL)に溶解した。氷酢酸(0.400mL, 0.70mmol)、次いでトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(0.942g, 4.40mmol)を加えた。反応液を、窒素雰囲気下、室温で3.5時間撹拌した。NaHCO3（飽和水溶液）により反応を止め、EtOAc (3×)により抽出した。有機層を減圧下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキサン  50-95%勾配)により精製して、表題の化合物(420mg, 0.92mmol)を得た。MS (ES) m/e 459 (M+H)+。
【０３６７】
b) N-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-イソインドール-2-イルエチル)-4-メチル-ベンズアミド
塩化p-トルオイル(0.033mL, 0.25mmol)をトルエン(2mL)に溶解して、DIPEA (0.093mL, 0.53mmol)、次いで2-{2-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピルアミノ]-エチル}-イソインドール-1,3-ジオン(0.100g, 0.22mmol)により処理した。反応液を110℃で３時間撹拌した。反応液を室温に冷却し、減圧下で蒸発させ、フラッシュクロマトグラフィー(EtOAc/ヘキサン 0〜55%勾配)により精製して、表題の化合物(0.075g, 0.13mmol)を得た。MS (ES) m/e 577 (M+H)+。
【０３６８】
c) 3-ベンジル-5,6-ジメチル-2-[(R)-2-メチル-1-(2-p-トリル-4,5-ジヒドロイミダゾール-1-イル)-プロピル]-3H-ピリミジン-4-オン
フタルイミド保護アミン、N-[(R)-1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-[2-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-イソインドール-2-イル)-エチル]-4-メチル-ベンズアミド(0.075g, 0.13mmol)を、70℃で12時間、ヒドラジン一水和物(0.013mL, 0.26mmol)のエタノール(1mL)溶液により処理した。反応液を濾過し、減圧濃縮し、トルエン(1mL)に溶解して、120℃で20時間加熱した。反応液を減圧濃縮し、CH3CNに取り、逆相HPLC (YMC, ODS-A, 20分、5〜90%勾配、CH3CN:H2O, 0.1% TFA)により精製した。画分を集めて溶媒を蒸発させ、表題の化合物(0.016g)を透明なオイルとして得た。MS (ES) m/e 429.4 (M+H)+。
【実施例１９】
【０３６９】
【化５５】
2006508030.tif 000066
【０３７０】
条件：a) DIPEA, DMF, 室温；b) R9COCl, Et3N, CH2Cl2, 室温；c) NH4OAc, AcOH, 還流；d) ヒドラジン, EtOH, 室温
2-{1-[4-(2-アミノ-エチル)-2-p-トリル-イミダゾール-1-イル]-2-メチル-プロピル}-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン
a) 2-{4-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピルアミノ]-3-オキソ-ブチル}-イソインドール-1,3-ジオン
DMF (15mL)中の2-(1-アミノ-2-メチル-プロピル)-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン(0.66g, 2.33mmol)に、2-(4-ブロモ-3-オキソ-ブチル)-イソインドール-1,3-ジオン(0.69g, 2.33mmol, WO 89/10360に記載される方法により調製した)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.301g, 2.33mmol)を加えた。反応液を室温で16時間撹拌し、減圧濃縮し、EtOAc/H2Oに溶解し、水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、溶媒を蒸発させて、表題の化合物を白色の泡として得た(1.04g, 89%)。MS (ES+) m/e 501 [M+H]+。
【０３７１】
b) N-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-[4-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-イソインドール-2-イル)-2-オキソ-ブチル]-4-メチル-ベンズアミド
CH2Cl2 (14mL)中の2-{4-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピルアミノ]-3-オキソ-ブチル}-イソインドール-1,3-ジオン(1.024g, 2.046mmol)に、トリエチルアミン(0.31g, 3.069mmol)および塩化p-トルオイル(0.474g, 3.069mmol)を加えた。反応液を室温で16時間撹拌し、水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、蒸発乾固させた。残渣を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィー(1:1 ヘキサン：EtOAc)により精製して、表題の化合物を白色の泡として得た(0.885g, 70%)。MS (ES+) m/e 619 [M+H]+。
【０３７２】
c) 2-(2-{1-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-2-p-トリル-1H-イミダゾール-4-イル}-エチル)-イソインドール-1,3-ジオン
氷酢酸(15mL)中のN-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-N-[4-(1,3-ジオキソ-1,3-ジヒドロ-イソインドール-2-イル)-2-オキソ-ブチル]-4-メチル-ベンズアミド(0.884g, 1.62mmol)に、酢酸アンモニウム(6.22g, 80.8mmol)を加えて、反応液を16時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、残渣を飽和NaHCO3により塩基性にしてEtOAcにより抽出し、水および食塩水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、蒸発乾固した。残渣をシリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィー(3:1 EtOAc：ヘキサン)により精製して、表題の化合物を淡黄色の泡として得た(0.371g, 38%)。MS (ES+) m/e 600 [M+H]+。
【０３７３】
d) 2-{1-[4-(2-アミノ-エチル)-2-p-トリル-イミダゾール-1-イル]-2-メチル-プロピル}-3-ベンジル-5,6-ジメチル-3H-ピリミジン-4-オン
EtOH (14mL)中の2-(2-{1-[1-(1-ベンジル-4,5-ジメチル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル)-2-メチル-プロピル]-2-p-トリル-1H-イミダゾール-4-イル}-エチル)-イソインドール-1,3-ジオン(0.371g, 0.619mmol)に、ヒドラジン一水和物(0.138g, 2.48mmol)を加えて、反応液を室温で72時間撹拌した。反応液を濾過して濾液を濃縮、乾固した。残渣を、シリカゲルを用いたフラッシュクロマトグラフィー(90:9:1 CH2Cl2:MeOH:NH4OH)により精製して、表題の化合物を白色の固体として得た(0.209g, 72%)。MS (ES)+ m/e 470 [M+H]+。
【実施例２０】
【０３７４】
【化５６】
2006508030.tif 000067
【０３７５】
条件：a) RR’NH, ナトリウムt-ブトキシド、Pd2dba3, (S)-BINAP, CH3CN, 90℃
N-(3-アミノ-プロピル)-N-{(R)-1-[1-ベンジル-4-メチル-6-オキソ-5-フェニルアミノ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド
トルエン(0.30mL)中のN-(3-アミノプロピル)-N-{(R)-1-[1-ベンジル-5-ブロモ-4-イル-6-オキソ-1,6-ジヒドロ-ピリミジン-2-イル]-2-メチル-プロピル}-4-メチル-ベンズアミド(0.060g, 0.1mmol)に、アニリン(0.011mL, 0.12mmol)、NaO-tBu (0.013g, 0.14mmol)、Pd2DBA (0.003g, 0.0003mmol)および(S)-BINAP (0.005g, 0.0008mmol)を加えた。反応液を90℃で72時間撹拌し、減圧濃縮し、CH3CNに取り、逆相HPLC (YMC, ODS-A, 20分、5〜90%勾配、CH3CN:H2O, 0.1% TFA)により精製した。画分を集めて溶媒を蒸発させ、4N HCl/ジオキサンにより１時間処理して、逆相HPLC (YMC, ODS-A, 20分、5〜90%勾配、CH3CN:H2O, 0.1% TFA)により精製し、溶媒を蒸発させて、表題の化合物を透明な半固体として得た(0.008g)。MS (ES) m/e 538 (M+H)+。
【実施例２１】
【０３７６】
以下の化合物は、記載の方法によって製造することができる：
【化５７】
2006508030.tif 000068
【表４】
2006508030.tif 000069
【０３７７】
2006508030.tif 000070
【化５８】
2006508030.tif 000071
【表５】
2006508030.tif 000072
【化５９】
2006508030.tif 000073
【表６】
2006508030.tif 000074
【化６０】
2006508030.tif 000075
【表７】
2006508030.tif 000076
【化６１】
2006508030.tif 000077
【表８】
2006508030.tif 000078
【実施例２２】
【０３７８】
KSP阻害剤で処理された腫瘍細胞株における細胞生存の阻害
材料および溶液：
・細胞：SKOV3、卵巣癌（ヒト）。
【０３７９】
・培地：フェノールレッドを含まないRPMI＋5%ウシ胎仔血清＋2 mM L-グルタミン。
【０３８０】
・細胞生存を測定する比色分析試薬：Promega MTS テトラゾリウム化合物。
【０３８１】
・最大細胞殺の対照化合物：トポテカン、1μM。
【０３８２】
手順：第1日−細胞プレーティング：
粘着性のSKOV3細胞を10 ml PBSで洗浄した後、2 mlの0.25%トリプシンを添加して37℃にて5分間インキュベートする。細胞をフラスコから、8 mlの培地（フェノールレッドを含まないRPMI＋5%FBS）を用いてすすぎ落とし、新しいフラスコに移す。細胞濃度をコールターカウンター（Coulter counter）によって測定し、1000細胞／100μlとするために適当な細胞の量を算出する。培地細胞懸濁液（1000細胞／100μl）100μlを96ウェルプレートの全ウェルに入れ、続いて18〜24時間37℃にて湿度100%、CO2 5%でインキュベートし、細胞をプレートに付着させる。
【０３８３】
手順：第2日−化合物の添加：
高圧滅菌済みアッセイブロックの縦1列のウェルに、求められる最高濃度の400倍のテスト化合物の最初の2.5μlを入れる。400倍濃度の（400μM）トポテカン1.25μlを他のウェルに入れる（これらのウェルから得られる光学濃度は死滅細胞および溶媒のバックグラウンド吸光度として差し引くために用いられる）。DMSOを含まない培地500μlを、テスト化合物を入れたウェルに添加し、250μlをトポテカンのウェルに加える。培地＋0.5% DMSOを残るすべてのウェルに250μl添加し、その中にテスト化合物を段階希釈して入れる。横列ごとに化合物含有培地をアッセイブロックから対応する細胞プレートへ（2連で）レプリカプレーティングする。細胞プレートを37℃、湿度10%、CO2 5%にて72時間インキュベートする。
【０３８４】
手順：第4日−MTS添加およびOD読みとり：
プレートをインキュベーターから取り出し、40μl MTS/PMSを各ウェルに添加する。その後、プレートを37℃、湿度10%、CO2 5%にて120分間インキュベートし、続いて96ウェル分光光度計で5秒の振盪サイクル後に490 nmでODを読み取る。
【０３８５】
データ解析
対照（吸光度-バックグラウンド）に対して標準化された％を算出し、XLfitを用いて用量反応曲線を作成し、その曲線から、生存を50%まで阻害するために必要な化合物の濃度を決定する。本発明の化合物は上記の方法でテストした場合、活性を示す。
【実施例２３】
【０３８６】
エナンチオマー分離
一般的に、上記の方法は、適切なR-またはS-立体配置の出発アミノ酸を選択することにより、実質的に純粋なまたは富化されたR-またはS-エナンチオマーを製造するために使用することができる。本発明のより好ましい化合物は、R2が結合している立体中心においてR-立体配置を有する化合物である。R:S混合物は、当業者に周知の方法によって、その構成要素である純粋なエナンチオマーに分離することができる。これには、光学的に純粋な酸（例えばジベンゾイル酒石酸）との反応によって生成するものなどのジアステレオマー誘導体の生成および分離が含まれる。あるいは、分離は、例えば以下の条件を使用するような、キラルクロマトグラフィーによって実施することができる：
カラム： Chiralcel OD 20 x 250 mm; 
0.01% イソプロピルアミンを含む1:2 エタノール:ヘキサン中に約100 mg mL-1でサンプルをロード; 
クロマトグラフィー条件: 0.01% イソプロピルアミンを含む1:2 エタノール:ヘキサンを用いた流速15 mL/分のアイソクラチック溶出;
254 nmでUV検出
例えば、富化されたエナンチオマーの3:1のR:S混合物を以下の条件を用いたキラルクロマトグラフィーによって純粋なエナンチオマーに分離した。
【０３８７】
Chiralpak AD, 250 x 4.6 mm (Diacel Inc.)。サンプル−1:1のi-PrOH:ヘキサン中に22.5 mg/ml。条件−ヘキサン中の50% i-PrOHを用い、アイソクラチックで40分、(S)-エナンチオマーは18.35分に溶出し、(R)-エナンチオマーは26.87分に溶出する。(R)-エナンチオマーは、(S)-エナンチオマーより有意により優勢であった。
【実施例２４】
【０３８８】
KSP阻害剤を加えた後の単極紡錘体形成
ヒト腫瘍細胞Skov-3（卵巣）を、ウェル当たり4.00細胞の密度で96ウェルプレートに蒔き、24時間付着させておいて、さらに24時間さまざまな濃度のピリミジノン誘導体で処理した。細胞を4% ホルムアルデヒドで固定し、抗チューブリン抗体（蛍光標識された二次抗体によって後に認識される）およびHoechst色素（DNAを染色する）によって染色した。
【０３８９】
目視検査から、化合物は有糸分裂の前中期の段階で細胞周期の停止を引き起こすことが明らかになった。DNAは凝縮し、紡錘体形成はすでに始まったが、停止した細胞は一様に単極紡錘体を示し、これにより紡錘体極分離の阻害が見られることが示された。抗KSP抗体のマイクロインジェクションも有糸分裂の停止を引き起こし、停止細胞は単極紡錘体を示す。
【実施例２５】
【０３９０】
KSP阻害剤で処理した腫瘍細胞株における細胞増殖の阻害
96ウェルプレートのウェル当たり1000-2500細胞の密度で細胞を96ウェルプレートに蒔き、24時間付着／増殖させた。その後、これをさまざまな濃度の薬物で48時間処理した。化合物を添加した時をT0と見なす。3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-5-(3-カルボキシメトキシフェニル)-2-(4-スルホフェニル)-2H-テトラゾリウム（MTS）試薬（特許第5,185,450号）（Promega 製品カタログ #G3580, CeIlTiter 96（商標） AQueous  One Solution Cell Proliferation Assayを参照されたい）を用いた、テトラゾリウムに基づくアッセイを使用して、T0での生存細胞の数、および48時間化合物に接触させた後に生き残った細胞数を測定した。48時間後に生残する細胞数を薬物添加時の生存細胞数と比較して、増殖阻害を算出することができた。
【０３９１】
溶媒のみ（0.25% DMSO）で処理した対照ウェルの細胞の48時間の増殖を100%増殖とみなして、化合物を入れたウェルの細胞増殖をこれと比較する。
【０３９２】
化合物の濃度をμMとして、処理ウェルの細胞増殖パーセンテージに対してプロットしてGi50を算出した。化合物に関して算出されたGi50は、対照と比較して50%まで増殖を阻害する推定濃度であり、すなわちその濃度では：
100 x [(Treated48 - T0) / (Control48 - T0)] = 50
となるが、ここで式中Treated48は処理された細胞の48時間での値であり、Control48は対照集団の48時間での値である。
【０３９３】
全濃度の化合物を2連でテストし、対照は12ウェルを平均する。非常によく似た96ウェルプレートレイアウトおよびGi50計算法が国立癌研究所によって使用されている（Monks, et al., J. NatI. Cancer Inst. 83:757-766 (1991)を参照されたい）。しかしながら、国立癌研究所が細胞数を計測する方法はMTSを使用せず、その代わりに別の方法を使用する。
【０３９４】
上記実施例1-13の化合物は、ヒト卵巣腫瘍細胞株（SKOV-3）において、細胞増殖を阻害した。
【実施例２６】
【０３９５】
IC50の計算：
化合物のKSP活性に対するIC50の測定は、ATPアーゼアッセイを使用する。次の溶液を使用する：溶液1は3 mM ホスホエノールピルビン酸カリウム塩(Sigma P-7127)、2 mM ATP (Sigma A-3377)、1 mM IDTT (Sigma D-9779)、5μM パクリタキセル(Sigma T-7402)、10 ppm 消泡剤289 (Sigma A-8436)、25 mM Pipes/KOH pH 6.8 (Sigma P6757)、2 mM MgC12 (VWR JT4003-01)、および1 mM EGTA (Sigma E3889)で構成される。溶液2は1 mM NADH (Sigma N8129)、0.2 mg/ml BSA (Sigma A7906)、ピルビン酸キナーゼ 7U/ml、L-乳酸デヒドロゲナーゼ 10 U/ml (Sigma P0294)、100 nM KSP モータードメイン、50 μg/ml 微小管、1 mM DTT (Sigma D9779)、5 μM パクリタキセル(Sigma T-7402)、10 ppm 消泡剤289 (Sigma A-8436)、25 mM Pipes/KOH pH 6.8 (Sigma P6757)、2 mM MgC12 (VWR JT4003-01)、および1 mM EGTA (Sigma E3889)からなる。溶液1を用いて化合物の段階希釈（8-12 二倍希釈）を96ウェルマイクロタイタープレート（Corning Costar 3695）に作製する。段階希釈した後に、各ウェルに溶液1が50μl入っている。各ウェルに溶液2を50μl添加して反応を開始する。これは、手動でマルチチャンネルピペッターを用いて行っても、自動液体処理装置を用いて行ってもよい。その後マイクロタイタープレートをマイクロプレート吸光度リーダーに移し、340 nmでの多数の吸光度の数値を、各ウェルについて速度の形式で記録する。観測された変化の速度はATPアーゼの速度に比例するが、これを化合物濃度の関数としてプロットする。取得されたデータは、非線形フィッティングプログラム（たとえばGrafit 4）を用いた下記の4パラメーターの等式により、標準的なIC50測定に適している：
2006508030.tif 000079
ここでyは観測された速度であり、xは化合物濃度である。
【国際調査報告】
2006508030.tif 000083
2006508030.tif 000084
2006508030.tif 000085