(57)【要約】前立腺癌（例えば臨床上局所的な前立腺癌）の患者の予後のための方法を提供する。本発明は、治療後の前立腺癌患者の進行のリスクを決定するための方法であって、  （ａ）臨床上局所的な前立腺癌に対する治療の前に、患者から得られた血液試料中のＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭの量またはレベルを検出または測定すること、および（ｂ）該ＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭの量またはレベルを進行のリスクと関連づけることを含む、方法にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療後の前立腺癌患者の進行のリスクを決定するための方法であって、
（ａ）臨床上局所的な前立腺癌に対する治療の前に、患者から得られた血液試料中のＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭの量またはレベルを検出または測定すること、および
（ｂ）該ＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭの量またはレベルを進行のリスクと関連づけること
を含む、方法。
【請求項２】
治療後の前立腺癌患者の進行のリスクを決定するための方法であって、
（ａ）臨床上局所的な前立腺癌に対する治療の前に、患者から得られた血液試料中のＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベル、ならびに患者から得られた前立腺試料におけるグリーソンスコアを検出または測定すること、および
（ｂ）該ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベル、ならびに前立腺試料における該グリーソンスコアを進行のリスクと関連づけること
を含む、方法。
【請求項３】
治療後の前立腺癌患者の予後を判断するための方法であって、
（ａ）臨床上局所的な前立腺癌に対する治療の前に、患者から得られた血液試料中のＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベル、ならびに患者から得られた前立腺試料におけるグリーソンスコアを検出または測定すること、および
（ｂ）該ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベル、ならびに前立腺試料における該グリーソンスコアを非前立腺限局疾患のリスクと関連づけること
を含む、方法。
【請求項４】
該患者の臨床病期がＴ３ａ、Ｔ３、Ｔ２ｃ、Ｔ２ｂ、Ｔ２ａ、Ｔ２、Ｔ１ｃ、Ｔ１ｂ、Ｔ１ａ、またはＴ１である、請求項１、２、または３の方法。
【請求項５】
該治療が原発性療法である、請求項１、２、または３の方法。
【請求項６】
該治療が、手術、根治的前立腺切除術、放射線療法、または放射性種注入である、請求項１、２、または３の方法。
【請求項７】
該患者は、ホルモン療法を受けたことがない、請求項１、２、または３の方法。
【請求項８】
ＶＥＧＦに結合する作用物質を用いてＶＥＧＦの量またはレベルを検出または測定する、請求項１の方法。
【請求項９】
該作用物質は抗体である、請求項８の方法。
【請求項１０】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項９の方法。
【請求項１１】
ｓＶＣＡＭに結合する作用物質を用いてｓＶＣＡＭの量またはレベルを検出または測定する、請求項１の方法。
【請求項１２】
該作用物質は抗体である、請求項１１の方法。
【請求項１３】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項１２の方法。
【請求項１４】
ＵＰＡＲに結合する作用物質を用いてＵＰＡＲの量またはレベルを検出または測定する、請求項１の方法。
【請求項１５】
該作用物質は抗体である、請求項１４の方法。
【請求項１６】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項１５の方法。
【請求項１７】
ＵＰＡに結合する作用物質を用いてＵＰＡの量またはレベルを検出または測定する、請求項１の方法。
【請求項１８】
該作用物質は抗体である、請求項１７の方法。
【請求項１９】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項１８の方法。
【請求項２０】
ＴＧＦ−β１に結合する作用物質を用いてＴＧＦ−β１の量またはレベルを検出または測定する、請求項２または３の方法。
【請求項２１】
該作用物質は抗体である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項２１の方法。
【請求項２３】
ＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６に結合する作用物質を用いてＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベルを検出または測定する、請求項２または３の方法。
【請求項２４】
該作用物質は抗体である、請求項２３の方法。
【請求項２５】
該作用物質は、検出可能に標識されているか、または、検出可能な標識と結合するものである、請求項２４の方法。
【請求項２６】
該関連づけはコンピュータにより行う、請求項１、２または３の方法。
【請求項２７】
該血液の血漿試料は、血小板が少ない血漿試料である、請求項２または３の方法。
【請求項２８】
該血液試料は血漿試料である、請求項１の方法。
【請求項２９】
第二のグリーソンスコアを検出または測定することをさらに含む、請求項２または３の方法。
【請求項３０】
臨床病期を検出または測定することをさらに含む、請求項２または３の方法。
【請求項３１】
哺乳動物から得られた一つ以上の試料におけるＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭのレベルまたは量を含むテスト情報を入力するための、データ入力手段、および
該一つ以上の試料におけるＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭのレベルまたは量を解析するためのソフトウェアを実行する、プロセッサーを備え、
そこにおいて、該ソフトウェアは、該一つ以上の試料におけるＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭのレベルまたは量を解析し、かつ、該哺乳動物における前立腺疾患進行のリスクを知らせる、装置。
【請求項３２】
哺乳動物から得られた一つ以上の試料におけるＵＰＡＲまたはＵＰＡのレベルまたは量を含むテスト情報を入力するための、データ入力手段、および
該一つ以上の試料におけるＵＰＡＲまたはＵＰＡのレベルまたは量を解析するためのソフトウェアを実行する、プロセッサーを備え、
そこにおいて、該ソフトウェアは、一つ以上の試料におけるＵＰＡＲまたはＵＰＡのレベルまたは量を解析し、かつ、該哺乳動物における非前立腺限局疾患のリスクを知らせる、装置。
【請求項３３】
哺乳動物から得られた一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびにグリーソンスコアを含むテスト情報を入力するための、データ入力手段、および
該一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびにグリーソンスコアを解析するためのソフトウェアを実行する、プロセッサーを備え、
そこにおいて、該ソフトウェアは、該一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびに該グリーソンスコアを解析し、かつ、該哺乳動物における前立腺疾患進行のリスクを知らせる、装置。
【請求項３４】
哺乳動物から得られた一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびにグリーソンスコアを含むテスト情報を入力するための、データ入力手段、および
該一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびにグリーソンスコアを解析するためのソフトウェアを実行する、プロセッサーを備え、
そこにおいて、該ソフトウェアは、該一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびに該グリーソンスコアを解析し、かつ、該哺乳動物における非前立腺限局疾患のリスクを知らせる、装置。
【請求項３５】
該量またはレベルおよびスコアを、該データ入力手段を用いて、手で入力するものである、請求項３１、３２、３３または３４の装置。
【請求項３６】
該ソフトウェアは、該テスト情報のデータベースを構築する、請求項３１、３２、３３または３４の装置。
【請求項３７】
該情報は、第二のグリーソンスコアをさらに含む、請求項３３または３４の装置。
【請求項３８】
該情報は、臨床分類をさらに含む、請求項３３または３４の装置。
【請求項３９】
治療後の前立腺癌患者の予後を判断するための方法であって、
（ａ）テスト情報をデータ入力手段に入力すること（そこにおいて、該情報は、前立腺癌患者から得られた一つ以上の試料におけるＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、またはｓＶＣＡＭのレベルまたは量を含む）、
（ｂ）該テスト情報を解析するためのソフトウェアを実行すること、および
（ｃ）該テスト情報を解析して、該患者における疾患の進行または非前立腺限局疾患のリスクを求めること
を含む、方法。
【請求項４０】
治療後の前立腺癌患者の予後を判断するための方法であって、
（ａ）テスト情報をデータ入力手段に入力すること（そこにおいて、該情報は、前立腺癌患者から得られた一つ以上の試料におけるＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルまたは量ならびにグリーソンスコアを含む）、
（ｂ）該テスト情報を解析するためのソフトウェアを実行すること、および
（ｃ）該テスト情報を解析して、該患者における疾患の進行または非前立腺限局疾患のリスクを求めること
を含む、方法。
【請求項４１】
根治的前立腺切除術の後の患者における前立腺癌再発の確率を予測するための方法であって、
（ａ）該患者についての術前の因子の組合せを、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについて測定された術前の因子の組合せの関数的表現と関連づけ、該患者についての総ポイントに対して値を得ること（複数の者のそれぞれについての因子の組合せは、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけられ、そこにおいて、術前の因子の組合せは、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルを含み、さらに、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上を含むものであり、そこにおいて、該関数的表現は、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含むものであり、そこにおいて、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについてのスケール、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該ポイントスケールについての値と関連づけることができるスケールについての値を有するものであり、かつ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールについての値と関連づけることができる値を有するものである）、および
（ｂ）該患者の総ポイントスケールについての値を、該予測因子スケールについての値と関連づけて、根治的前立腺切除術後の該患者における前立腺癌再発の量的確率を予測すること
を含む、方法。
【請求項４２】
該関数的表現はノモグラムである、請求項４１の方法。
【請求項４３】
該ノモグラムは、コックス比例ハザード回帰モデルを用いて作成される、請求項４２の方法。
【請求項４４】
該患者は、手術を受ける可能性のある者である、請求項４１の方法。
【請求項４５】
該前立腺癌再発の確率は、根治的前立腺切除術の後５年間前立腺癌がない状態が続く確率である、請求項４１の方法。
【請求項４６】
前立腺癌再発の特徴を、増加した血清ＰＳＡのレベルとする、請求項４１の方法。
【請求項４７】
該増加した血清ＰＳＡのレベルは０．２ｎｇ／ｍＬ以上である、請求項４６の方法。
【請求項４８】
前立腺癌再発の特徴を、陽性の生検、骨のスキャン、または、癌のその後の再発の確率が高いためにさらに適用される前立腺癌の治療とする、請求項４１の方法。
【請求項４９】
該複数の者は、臨床上局所的な前立腺癌の者であって、以前に放射線療法、ホルモン療法または寒冷療法を受けたことがなく、その後に根治的前立腺切除術を受けた者からなる、請求項４１の方法。
【請求項５０】
該術前の因子の組合せは、臨床病期、治療前のＶＥＧＦレベル、治療前のｓＶＣＡＭレベル、治療前のＵＰＡＲレベル、または治療前のＵＰＡレベルをさらに含む、請求項４１の方法。
【請求項５１】
根治的前立腺切除術後の前立腺癌患者における疾患再発の確率を予測するための装置であって、
（ａ）以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについての術前の因子の組合せを、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけたもの（そこにおいて、該術前の因子の組合せは、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルを含み、さらに、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上を含むものである）、および
（ｂ）前立腺癌を有すると診断された患者から測定した術前の因子の同じ組合せを、該関連づけたものと比較して、根治的前立腺切除術後の該患者における前立腺癌再発の量的確率を予測するための手段
を備える、装置。
【請求項５２】
前立腺癌の患者が根治的前立腺切除術の後に疾患のない状態を維持する量的確率をグラフまたは図表で表現するためのノモグラムであって、
複数のスケールおよび固体支持体を含み、
該複数のスケールは該支持体上に配置されており、かつ、該複数のスケールは、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含むものであり、そこにおいて、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについてのスケール、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該スケールについての値を有するものであり、かつ、そこにおいて、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについてのスケール、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールは、該ポイントスケールに対して該固体支持体上に配置されており、それにより、該治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについての値のそれぞれ、および、必要に応じて、該治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についての値のそれぞれは、該ポイントスケールについての値と関連づけることができ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該総ポイントスケールについての値を有し、かつ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールに対して固体支持体上に配置されており、それにより、該総ポイントスケールについての値は、該予測因子スケールについての値と関連づけることができ、それにより、該患者の治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベル、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上と関連する該ポイントスケールについての値を、一緒に加えて総ポイント値を得ることができ、かつ、該総ポイント値を、該予測因子スケールと関連づけて、再発の量的確率を予測することができる、ノモグラム。
【請求項５３】
該固体支持体はラミネート加工したカードである、請求項５２のノモグラム。
【請求項５４】
患者における術前の予後を予測するための方法であって、
患者について術前の因子の組合せを決定すること（該組合せは、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベル、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上を含む）、
該治療前の因子を、請求項５２のノモグラムのスケールについての値と照合すること、
該術前の因子のそれぞれについて、個々のポイント値を決定すること、
該個々のポイント値を一緒に加えて総ポイント値を得ること、および
該総ポイント値を該ノモグラムの予測スケールについての値と関連づけて、該患者の術前の予後を求めること
を含む、方法。
【請求項５５】
根治的前立腺切除術の後の前立腺癌患者における疾患再発の確率を予測するための装置であって、
治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含み、
そこにおいて、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについてのスケール、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該スケールについての値を有するものであり、かつ、
そこにおいて、治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについてのスケール、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についてのスケールは、該治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベルについての値のそれぞれ、および、必要に応じて、該治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上についての値のそれぞれが、該ポイントスケールについての値と関連づけることができるように配置されており、
そこにおいて、該総ポイントスケールは、該総ポイントスケールについての値を有し、かつ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールに対して固体支持体上に配置されており、それにより、該総ポイントスケールについての値は、該予測因子スケールについての値と関連づけることができ、それにより、該患者の治療前のＴＧＦ−β１のレベルおよび治療前のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６のレベル、および、必要に応じて、治療前のＰＳＡのレベル、原発性グリーソン分類または続発性グリーソン分類の一つ以上と関連する該ポイントスケールについての値を、一緒に加えて総ポイント値を得ることができ、かつ、該総ポイント値を、該予測因子スケールと関連づけて、再発の量的確率を予測することができる、装置。
【請求項５６】
治療後の前立腺癌患者の進行のリスクを求めるための方法であって、
（ａ）（ｉ）治療後の患者から得られた血漿試料中のＴＧＦ−β１の量またはレベル、（ｉｉ）病理学的グリーソンスコア、および（ｉｉｉ）必要に応じて、治療前の患者から得られた血液試料中のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上の量またはレベルを知ること、および
（ｂ）治療後のＴＧＦ−β１の量またはレベル、病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上の量またはレベルを、進行のリスクと関連づけること
を含む、方法。
【請求項５７】
哺乳動物から得られた一つ以上の試料における、治療後のＴＧＦ−β１のレベルまたは量、病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて、治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上のレベルまたは量を含むテスト情報を入力するための、データ入力手段、および
治療後のＴＧＦ−β１のレベルまたは量、病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上のレベルまたは量を解析するためのソフトウェアを実行するプロセッサーを含み、
そこにおいて、該ソフトウェアは、該一つ以上の試料における、治療後のＴＧＦ−β１のレベルまたは量、病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上のレベルまたは量を解析し、かつ、該哺乳動物における前立腺疾患の進行のリスクを知らせる、装置。
【請求項５８】
治療後の前立腺癌患者の予後を判断するための方法であって、
（ａ）データ入力手段にテスト情報を入力すること（そこにおいて、該情報は、前立腺癌患者から得られた試料における、治療後のＴＧＦ−β１のレベルまたは量、病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて、治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡの一つ以上のレベルまたは量を含む）、
（ｂ）該テスト情報を解析するためのソフトウェアを実行すること、および
（ｃ）該テスト情報を解析して、該患者における疾患の進行または非前立腺限局疾患のリスクを求めること
を含む、方法。
【請求項５９】
根治的前立腺切除術の後の患者における前立腺癌再発の確率を予測するための方法であって、
（ａ）該患者についての因子の組合せを、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについて測定された因子の組合せの関数的表現と関連づけ、該患者についての総ポイントに対して値を得ること（複数の者のそれぞれについての因子の組合せは、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけられ、そこにおいて、該因子の組合せは、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上を含み、そこにおいて、該関数的表現は、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上のそれぞれについてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含むものであり、そこにおいて、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについてのスケール、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該ポイントスケールについての値と関連づけることができるスケールについての値を有するものであり、かつ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールについての値と関連づけることができる値を有するものである）、および
（ｂ）該患者の総ポイントスケールについての値を、該予測因子スケールについての値と関連づけて、根治的前立腺切除術後の該患者における前立腺癌再発の量的確率を予測すること
を含む、方法。
【請求項６０】
根治的前立腺切除術後の前立腺癌患者における疾患再発の確率を予測するための装置であって、
（ａ）以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについての因子の組合せを、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけたもの（そこにおいて、該因子の組合せは、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上を含むものである）、および
（ｂ）前立腺癌を有すると診断された患者から測定した因子の同じ組合せを、該関連づけたものと比較して、根治的前立腺切除術後の該患者における前立腺癌再発の量的確率を予測するための手段
を備える、装置。
【請求項６１】
前立腺癌の患者が根治的前立腺切除術の後に疾患のない状態を維持する量的確率をグラフまたは図表で表現するためのノモグラムであって、
複数のスケールおよび固体支持体を含み、
該複数のスケールは該支持体上に配置されており、かつ、該複数のスケールは、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上のそれぞれについてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含むものであり、そこにおいて、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについてのスケール、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該スケールについての値を有するものであり、かつ、そこにおいて、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについてのスケール、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についてのスケールは、該ポイントスケールに対して該固体支持体上に配置されており、それにより、該治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについての値のそれぞれ、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についての値のそれぞれは、該ポイントスケールについての値と関連づけることができ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該総ポイントスケールについての値を有し、かつ、そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールに対して該固体支持体上に配置されており、それにより、該総ポイントスケールについての値は、該予測因子スケールについての値と関連づけることができ、それにより、該患者の治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上と関連するポイントスケールついての値を、一緒に加えて総ポイント値を得ることができ、かつ、該総ポイント値を、該予測因子スケールと関連づけて、再発の量的確率を予測することができる、ノモグラム。
【請求項６２】
患者における術後の予後を予測するための方法であって、
患者についての因子の組合せを決定すること（該組合せは、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上を含む）、
該治療前の因子を、請求項６１のノモグラムのスケールについての値と照合すること、
該因子のそれぞれについて、個々のポイント値を決定すること、
該個々のポイント値を一緒に加えて総ポイント値を得ること、および
該総ポイント値を該ノモグラムの予測スケールについての値と関連づけて、該患者の術後の予後を求めること
を含む、方法。
【請求項６３】
根治的前立腺切除術の後の前立腺癌患者における疾患再発の確率を予測するための装置であって、
治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアのそれぞれについてのスケールを含み、必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上のそれぞれについてのスケールを含み、さらにポイントスケール、総ポイントスケールおよび予測因子スケールを含み、
そこにおいて、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについてのスケール、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についてのスケールは、それぞれ、該スケールについての値を有するものであり、かつ、
そこにおいて、治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについてのスケール、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についてのスケールは、該ポイントスケールに対して配置されており、それにより、該治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコアについての値のそれぞれ、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上についての値のそれぞれは、該ポイントスケールについての値と関連づけることができ、
そこにおいて、該総ポイントスケールは、該総ポイントスケールについての値を有し、かつ、
そこにおいて、該総ポイントスケールは、該予測因子スケールに対して配置されており、それにより、該総ポイントスケールについての値は、該予測因子スケールについての値と関連づけることができ、それにより、該患者の治療後のＴＧＦ−β１のレベルおよび病理学的グリーソンスコア、および必要に応じて治療前のＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６またはＰＳＡのレベルの一つ以上と関連するポイントスケールついての値を、一緒に加えて総ポイント値を得ることができ、かつ、該総ポイント値を、該予測因子スケールと関連づけて、再発の量的確率を予測することができる、装置。
【請求項６４】
システマティック１２コア生検からのグリーソンスコア、陽性コア数、陽性の隣接するコアの数、癌の合計長、隣接するコアにおける癌の合計、および／または腫瘍浸潤のパーセントの一つを、進行または非前立腺限局疾患のリスクと関連づけることをさらに含む、請求項１、２、３１、３９、４０、４１、５４、５６、５８、５９、または６２の方法。
【請求項６５】
システマティック１２コア生検からのグリーソンスコア、陽性コア数、陽性の隣接するコアの数、癌の合計長、隣接するコアにおける癌の合計、および／または腫瘍浸潤のパーセントの一つを、進行または非前立腺限局疾患のリスクと関連づけることをさらに含む、請求項３１、３２、３３、３４、５１、５５、５７、６０または６３の装置。
【請求項６６】
再発の量的確率を予測するため、システマティック１２コア生検からのグリーソンスコア、陽性コア数、陽性の隣接するコアの数、癌の合計長、隣接するコアにおける癌の合計、および／または腫瘍浸潤のパーセントの一つを、進行または非前立腺限局疾患のリスクと関連づけることをさらに含む、請求項５２または６１のノモグラム。
【請求項６７】
治療後の前立腺癌患者の進行のリスクを求めるための方法であって、
（ａ）（ｉ）治療前の患者から得られた血漿試料中のＴＧＦ−β１の量またはレベル、（ｉｉ）治療前の患者から得られた血液試料中のＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベル、および（ｉｉｉ）前立腺試料におけるグリーソンスコアを知ること、および
（ｂ）ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲまたはＩＬ６の量またはレベルならびに前立腺試料におけるグリーソンスコアを、非前立腺限局疾患のリスクと関連づけること
を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、米国出願連続番号第６０／３６４，６５８号（２００２年３月１４日出願）および米国出願連続番号第６０／４１２，０８５号（２００２年９月１８日出願）の出願日の利益を主張するものであり、それらの開示は、この引用により本明細書に記載されたものとする。
【０００２】
政府の権利の主張
本発明は、少なくとも一部、アメリカ合衆国政府からの補助金（国立衛生研究所からの認可番号ＣＡ５８２０３）によりなされたものである。政府は本発明に対し所定の権利を有する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
前立腺癌は、米国において、最も一般的に診断される癌であり、男性の癌死の二番目に多い原因である。１９９９年、約１７９，３００人の男性が前立腺癌と診断され、３７，０００人がこの病気で死亡した。前立腺癌についていくつかの新しい可能性のあるバイオマーカー（例えばｐ５３、ｐ２１、ｐ２７、およびＥ−カドヘリン）が見出されているにもかかわらず、以前として、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）および組織学的グリーソン（Ｇｌｅａｓｏｎ）スコアが、最も一般的に使用される前立腺癌生物学の予測因子である。事実、過去１０年、ＰＳＡに基づくスクリーニングの広範な使用により、臨床上局所的な前立腺癌について診断および治療をうける男性の数が劇的に増えた。付随して、初期診断時に臨床上転移性疾患とされる率は大幅に低下し、それに伴って前立腺癌による致死率は全体的に減少している（Ｍｅｒｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０００４】
長期の癌抑制のかなりの割合において、臨床上局所的な前立腺癌の患者は、根治的前立腺切除術または放射線治療を受ける余裕があったとしても、これら患者の約３０％が治療に失敗し、検出可能なＰＳＡまたはＰＡＳの上昇が認められるようになる。それは、しばしば、最初の治療の前に、微細な転移性疾患が早くから内転移していることに起因する（Ｐｏｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。従来の病期を知るモダリティー、例えば骨のスキャン、ＣＴスキャン、およびＭＲＩは、臨床上局所的な前立腺癌を有する患者の病期を知るには、役割に限界がある。というのも、初期の体積の小さい転移を検出するには、それらの性能は低いからである（Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｅｎｇｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。確立したマーカー（例えばＰＳＡ）、臨床病期、および生検グリーソン（Ｇｌｅａｓｏｎ）スコアを考慮する術前のノモグラムによれば、結節転移または病気再発のリスクを推定することができる。しかし、それらは、個々の患者の病理学的病期または予後を判定するにはいまだ不完全である（Ｐａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｋａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。目に見えない転移性疾患を有する患者（効果的な局所治療にもかかわらず疾患が進行する可能性の高い患者）を術前に特定することが向上すれば、根治的前立腺切除術または放射線療法（効果的でないか、ネオアジュバント療法（新補助療法）またはアジュバント療法（補助療法）の臨床試験に最も適した患者を選ぶことになる可能性がある）の罹患率から患者を救うのに役立つはずである。
【０００５】
癌との関係について研究されている分子の一例がトランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦ−β１）（細胞増殖、走化性、細胞分化、免疫反応、および血管形成を制御する多面的増殖因子）である。ＴＧＦ−β１の阻害作用に対する応答が失われることが、癌の進行に関係している。例えば、ＴＧＦ−β１の局所的発現が増加することは、前立腺癌の患者において、腫瘍の程度、病理学的病期、およびリンパ節転移に関係している（Ｓｔｅｉｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２；Ｅａｓｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｔｒｕｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。また、ＴＧＦ−β１の循環レベルの上昇が種々の異なる腫瘍の患者において認められている（Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｓｈｉｒａｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｅｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｊｕｎｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。より高いレベルの循環ＴＧＦ−β１と前立腺癌の浸潤との関係（Ｉｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）およびより高いレベルの循環ＴＧＦ−β１と前立腺癌の転移との関係（Ｉｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｋａｋｅｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）を示す研究もあるが、そのような関係がないことを示す研究もある（Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｐｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。従って、循環ＴＧＦ−β１のレベルが前立腺癌の浸潤と転移に関係しているかどうかははっきりしない。
【０００６】
インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）は、細胞の成長および増殖を促進する強い分裂促進因子である。ＩＧＦ−Ｉシグナル経路のパラ分泌刺激が前立腺癌の進行に関係している。ＩＧＦ結合性タンパク質類（ＩＧＦ  ＢＰｓ）は、ＩＧＦの生物学的利用能を制御することにより間接的に機能するが、直接的なＩＧＦに依存しない作用も有する。ＩＧＦ  ＢＰ−２の循環レベルの上昇が前立腺癌において認められており、低いＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルが前立腺癌のリスク増加と関係している。しかし、前立腺癌において、ＩＧＦ類およびＩＧＦ  ＢＰ類の全身レベルの相対的な重要性は、いまだにはっきりしていない。
【０００７】
インターロイキン−６（ＩＬ−６）は、前立腺癌腫を含む種々のタイプの悪性腫瘍の増殖および分化を制御する分子である。ＩＬ−６の循環レベルの上昇が、局所的に進行した転移性の前立腺癌を有する患者において見出されている。ＩＬ−６シグナリングは、特異的な受容体およびシグナル変換コンポーネント（ｇｐ１３０）からなる受容体複合体を介して、起こる。可溶型のＩＬ−６受容体（ＩＬ６ｓＲ）（膜結合ＩＬ−６受容体のタンパク質分解性開裂により生じる）は、ＩＬ−６／ＩＬ６ｓＲ複合体の膜結合ｇｐ１３０への結合を促進することにより、ＩＬ−６誘導シグナリングを増加させることができる。
【０００８】
血管新生（血管形成）は、前立腺腫瘍の増殖および転移に中心的な役割を果たしている。トランスジェニックマウスのモデルからのデータおよび種々のヒト腫瘍からのデータが示唆するところによれば、血管新生の表現型への切り替わりは、腫瘍の増殖および進行において、比較的初期に起こっている（Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｍａｃｌｅｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。前立腺癌において、血管新生の表現型への変換は、腫瘍形成と関係しており（Ａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｈｕｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）、また、後期の腫瘍進行と関係している（Ｖｏｌａｖｓｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｇａｒｃｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。免疫組織化学的な微細血管密度により判定されるような腫瘍血管新生は、生物学的に攻撃性の前立腺癌、疾患の進行および転移の臨床的特徴および病理学的特徴と関係している（Ｗｅｉｄｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｂｏｓｔｗｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｓｉｌｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｍｅｈｔａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０００９】
免疫組織化学では、内皮細胞抗原に対する抗体を用いた染色の後、腫瘍を除去し、微細血管の密度を数えることが必要である。巧妙なコンピュータ化したイメージングシステムを用いたとしても、この手法は、労力が非常にかかるものである。さらに、抗体の違い、解釈および層別化の基準の変動、標本の取り扱い、ならびに専門的な手順のため、臨床環境において血管新生の免疫組織化学的評価を用いることには限界がある。さらに、循環する腫瘍細胞は、血管内異物侵入および血管外遊出により、内皮細胞との相互作用を介してそれ自身の転移を促進させると考えられているが、そのメカニズムはまだはっきりしていない。
【００１０】
ＶＥＧＦは、ほとんどすべての型の細胞によって生産されるホモ二量体のヘパリン結合性糖タンパク質である。ＶＥＧＦ類は、関連するタンパク質類の一つのファミリーであって、その６つが今日までに同定されている。ＶＥＧＦ類は、いくつかの受容体を介してその活性を調節する。ＶＥＧＦ、その親化合物は、多数の多様な機能（例えば、内皮細胞の有糸分裂誘発および生存（抗−アポトーシス作用）、走化性作用、血管透過性の上昇、抗原提示樹状細胞の成熟阻害を介する免疫作用、および血管拡張）を有する。正常な前立腺上皮細胞は、悪性の前立腺組織と同様に、定常的にＶＥＧＦを発現することが明らかにされている（Ｂｅｎｊａｍｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。しかし、他の研究が明らかにしたところによれば、良性前立腺過形成に由来する組織に比べて、悪性の前立腺組織は、有意により高いレベルのＶＥＧＦを生産する（Ｆｅｒｒｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。転移性前立腺癌の患者においてＶＥＧＦの血漿レベルが増加するという報告もある（Ｄｕｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。さらに、治療前の血漿ＶＥＧＦレベルがより高いことが、それ自体で、ホルモン耐性前立腺癌の患者の生存率が低くなることと関係することも明らかにされている（Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【００１１】
ＶＣＡＭ−１は、９０−ｋｄの膜貫通型糖タンパク質であり、それは、血管内皮増殖因子および他のサイトカイン類に応答して、活性化された血管内皮細胞上で一時的に発現される。炎症性の細胞が、しばしば、サイトカイン類を生産する腫瘍を取り囲む。ＶＣＡＭ−１の内皮発現は、炎症の内皮細胞に白血球が付着するのに主要な役割を果たしている。しかし、細胞接着マーカー類は、炎症に関係しているだけでなく、主要の転移にも関係している（Ｚｅｔｔｅｒ，１９９３）。ＴＮＦ−α（前立腺ストロマ細胞と上皮細胞との相互作用に関係していることがわかっているサイトカイン）は、腫瘍細胞において２倍ＶＣＡＭを増加させること（Ｓｉｍｉａｎｔｏｎａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）および前立腺癌においてもＶＣＡＭを増加させること（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）が明らかにされている。さらに、ＶＣＡＭ−１を発現する内皮細胞は、黒色腫細胞株を結合させる。これは、ＶＣＡＭ−１が転移を促進する接着分子として機能しうることを示唆している（Ｌａｎｇｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。ＶＣＡＭ−１の局所的発現が上昇することは、前立腺癌患者の臨床的病期が進むこと関係があった（Ｗｉｋｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【００１２】
ＶＣＡＭ−１は、可溶性の形態でも放出される。血清可溶性のＶＣＡＭ−１（ｓＶＣＡＭ−１）は、腫瘍の標本において微細血管の密度と密接に相関することがわかっており、また、乳癌の病期、進行およびホルモン治療に対する反応と強く関係していることがわかっている（Ｂｙｒｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。前立腺癌において、ｓＶＣＡＭ−１の血清レベルは、前立腺癌を良性前立腺過形成と区別するための、進行を予測するための、転移の可能性を明らかにするための、あるいは、治療をモニターするための、バイオマーカーとして臨床上有用ではないといわれた（Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。腫瘍の浸潤は、おそらく、細胞接着分子によって媒介され、転移の開始に必要であるが、それは、血管新生を通じての新しい血管形成なしでは、成功できない。
【００１３】
近年、治療前のＰＳＡレベル（再発を予測する手段の大部分における主要な予測パラメーター）は、前立腺癌よりむしろ良性前立腺過形成（ＢＰＨ）の存在を第一に反映しうることがわかってきた。Ｓｔａｍｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）の最近の報告によれば、ＰＳＡのレベルが９ｎｇ／ｍＬ以下の患者にとって、根治的前立腺切除術の後、ＰＳＡは、病気進行のリスクをあまり反映しなかったが、根治的前立腺切除術による標本の全体積とは有意に相関していた（存在するＢＰＨの程度を直接反映）。大多数のより古い研究における患者よりＰＳＡレベルのメジアンが低い、根治的前立腺切除術を受けている、臨床上局所的な前立腺癌の患者の、より現代的なコホートを含んだ研究において、いくつかは、術前のＰＳＡに対し、疾患の進行を予測する独立した値を検出することができなかった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
ＰＳＡ以外の多くの分子が前立腺癌に関係している中で、それらの分子のどれが、あるいは、どの分子の組み合わせが、病気の結果を予測するのに有用であるか、はっきりしていない。従って、前立腺に関連する疾患の患者、例えば、臨床上局所的な前立腺癌であると診断された患者、そして、特に、ＰＳＡのレベルが低いと診断された患者において、結果の予測を向上させるため、生物学的に攻撃性の前立腺癌に特異的に関係する新規なマーカーを含むノモグラムを提供することが、差し迫った要求として存在している。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
発明の概要
本発明は、治療後、例えば、根治的前立腺切除術、外部ビーム照射療法、近接照射療法、または他の前立腺癌に対する局所的な療法、例えば寒冷療法の後、前立腺癌患者の状態（例えば、治癒した状態）を予測するための、方法、装置およびノモグラムを提供する。該方法は、生検、例えば１２コア生検セット、前立腺切除の最終的な病理学（病変）、および／または他のマーカー、例えば生理学的体液試料に存在するマーカー、例えば血液中に存在するあるタンパク質、からの値またはスコアを用いて、患者の結果を予測する。該生検または生理学的体液、例えば血液試料は、前立腺癌の治療の前および／または後に、患者から得ることができる。治療の「後」に試料を採取する場合、それは、治療後、最高で５〜６ヶ月の時点、例えば、治療後約１、２、３、４ヶ月、またはそれ以上の月、例えば７、８、９、１０または１１ヶ月の時点で、採取することができ、それには、治療後約１、２、３、４または５日、最高で治療後約１、２、３、４、５、または６週間も含まれる。他の実施形態において、試料は、治療後数年で採取してもよく、例えば、治療後約１、２、３、４、５、６、または７年で採取してもよい。一実施形態において、試料は、治療の後、例えば、ＰＳＡのレベル（濃度）または量がモニターされているとき、または、ＰＳＡのレベル（濃度）または量が経時的に上昇しているとき、採取される。
【００１６】
一実施形態において、本発明は、種々のマーカー（例えばタンパク質マーカー）、生検のデータ（例えば１２コアシステマティック生検のデータ）、および／または必要に応じて前立腺切除の最終的な病理学（病変）からの値またはスコアを、例えば、ノモグラムにおいて、関係づけ、それにより、例えば、患者の結果、進行、臓器限局疾患のリスク、被膜外への広がり、精嚢浸潤、および／またはリンパ節転移を予測することを含む。他の実施形態において、本発明は、転移性疾患を有する患者、ホルモン感受性またはホルモン耐性のいずれかの転移性疾患を有する患者から得られる、種々のマーカー（例えば、血液中に存在するタンパク質マーカー）からの値またはスコア、生検データ（例えば１２コアシステマティック生検のデータ）からの値またはスコア、および／または必要に応じて前立腺切除の最終的な病理学（病変）からの値またはスコアを、関係づけ、それにより、該疾患の攻撃性および／または死に至る時期を予測することを含む。
【００１７】
例えば、該方法、装置、ノモグラムは、前立腺癌の局所的治療の前に用いて、例えば、進行のリスクを予測するか、あるいは、臓器限局疾患を予測することができ、例えばＰＳＡ再発の患者における前立腺癌の治療後に用いて、例えば、再発の攻撃性、転移に至る時期、および／または死に至る時期を予測することができ、あるいは、転移性疾患またはホルモン耐性の転移性疾患の患者に用いて、例えば、疾患の攻撃性および／または死に至る時期を予測することができる。
【００１８】
本発明の一実施形態において、該方法は、臨床上局所的な前立腺癌の治療の前または後の患者からの生理学的体液試料を、複合体を形成するために、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させることを含む。従って、本発明の一実施形態において、該方法は、前立腺癌の治療の後の患者、例えば、臨床的上局所的な前立腺癌を有する患者または≦Ｔ３ａの臨床病期（Ｔ３ａまたはそれ以前の臨床病期）を有する患者からの生理学的体液試料を、複合体を形成するために、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成の量またはレベルを、患者における前立腺非限局疾患のリスクまたは疾患の進行と関連づける。一実施形態において、体液試料は血液試料であり、より好ましくは血漿試料である。一実施形態において、該試料は、前立腺癌についてのいかなる治療（例えば、ホルモン療法、放射線療法または近接照射療法）もあらかじめ受けていない患者から得られたものである。ＴＧＦ−β１に結合する好ましい因子には、ＴＧＦ−β１に特異的な抗体およびＴＧＦ−β１受容体タンパク質（例えばタイプＩまたはＩＩ）があるが、それらに限定されるものではない。ここで使用する「生理学的体液」の試料には、血液、血漿、血清、精液、尿、唾液、痰、精液類、胸水、膀胱洗浄液、肺胞上皮洗浄液、脳脊髄液などがあるが、これらに限定されるものではない。ここで使用する用語「臨床上局所的な前立腺癌」の患者（を有する患者）は、臨床上検出可能な転移、例えば、ＭＲＩ、骨のスキャン、ＣＴスキャン、またはＰＥＴスキャンによって検出可能な転移、を有さない患者を意味する。
【００１９】
本明細書で説明するように、術前または術後の血小板が少ない血漿のＴＧＦ−β１レベルと前立腺癌の浸潤、転移および疾患進行の確立したマーカーとの間の関係を、前立腺癌の患者（例えば、根治的前立腺切除術を受けた患者）の大きな継続的コホートにおいて、求めた。一つの研究群は、１２０人の継続的患者（臨床上局所的な前立腺癌について根治的前立腺切除術を受けた患者（追跡検査の中央値は５３．８ヶ月））からなっていた。術前の血小板の少ない血漿のＴＧＦ−β１レベルを、測定し、臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターと関係づけた。また、ＴＧＦ−β１レベルを、いかなる癌もない４４人の健常な男性、前立腺癌が所属リンパ節に転移した１９人の男性、および前立腺癌が骨に転移した１０人の男性において、測定した。試料採取の前にホルモン療法または放射線療法で治療された患者はいなかった。
【００２０】
リンパ節転移の患者における血漿ＴＧＦ−β１レベル（１４．２±２．６ｎｇ／ｍＬ）および骨転移の患者における血漿ＴＧＦ−β１レベル（１５．５±２．４ｎｇ／ｍＬ）は、根治的前立腺切除術を受けた患者におけるレベル（５．２±１．３ｎｇ／ｍＬ）および健常者におけるレベル（４．５±１．２ｎｇ／ｍＬ）よりも有意に高かった（Ｐ値＜０．００１）。術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルおよび生検グリーソン（Ｇｌｅａｓｏｎ）分類は、ともに、臓器限局疾患の有意な独立予測因子（それぞれＰ＝０．００６とＰ＝０．００６）であり、かつ、ＰＳＡの進行の有意な独立予測因子（それぞれＰ＜０．００１とＰ＝０．０２１）であった。各病理学的病期内で、生物化学的な進行を発生させた患者のＴＧＦ−β１レベルは、術後の疾患のない状態を維持した患者のレベルより有意に高かった（Ｐ値＜０．００１）。進行した患者において、術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、局所のみに対して離れていると推定された疾患（ｐｒｅｓｕｍｅｄ  ｄｉｓｔａｎｔ  ｖｅｒｓｕｓ  ｌｏｃａｌ−ｏｎｌｙ  ｆａｉｌｕｒｅ）の患者において有意により高かった（Ｐ値＝０．０１９）。転移について臨床的または病理学的な証拠のなかった男性において、術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、術後の生物化学的進行の最も有力な予測因子であった。それは、おそらく、根治的前立腺切除術の時点で存在する目に見えない転移性疾患との関連によるものである。
【００２１】
従って、本発明は、前立腺癌の術後における患者の進行のリスクおよび／または前立腺非限局疾患のリスクを決定する方法を提供する。該方法は、前立腺癌の治療前の、例えば臨床上局所的な前立腺癌に対する根治的前立腺切除術の前の、患者から得られた血漿試料を、複合体を形成するために、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成の量またはレベルを、進行のリスクおよび／または前立腺非限局疾患のリスクと関連づける。
【００２２】
本明細書で説明するように、４６８人の根治的前立腺切除術の患者の大きなコホートを用いて、マーカーの相互作用を研究した。これらの患者のうち、２７８人は、根治的前立腺切除術の後６〜８週間で試料が利用可能であった。これらの患者の臨床病期は、≦Ｔ３ａ（４７％のｃＴ１、４９％のｃＴ２および４％のｃＴ３ａ）であった。これらの患者のＰＳＡのメジアンは８．２ｎｇ／ｍＬ（０．２〜６０ｎｇ／ｍＬの範囲）であった。これら患者の年齢のメジアンは、６３歳（４０〜８１歳の範囲）であり、その追跡検査のメジアンは約５１ヶ月であった。１４％（６３／４６８）がＰＳＡ再発を呈した。術後の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、前立腺癌の進行についての予後マーカーとして有用であることがわかった。かくして、継続的に測定するＴＧＦ−β１は、ＰＳＡの継続的測定と同様、治療（例えば、手術、放射線、ホルモン療法、または近接照射療法）の結果をモニターするのに特に有用でありうる。さらに、多変量コックス（Ｃｏｘ）比例ハザードモデルにおいて、ＴＧＦ−β１の治療後の測定値は、ＴＧＦ−β１の治療前の測定値よりも有力な予測因子であることがわかった。
【００２３】
かくして、本発明は、前立腺癌の治療後の患者について進行のリスクを決定するための方法を提供する。該方法は、前立腺癌の治療後の患者から得られた血漿試料を、複合体を形成するために、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成の量またはレベルを、進行のリスクと関連づける。
【００２４】
従って、ヒトの体液中のＴＧＦ−β１のレベルは、予後にとって有用であり、そして、新生物性疾患に対する他のマーカー（例えば前立腺癌に対する他のマーカー）（例えば、尿プラスミノーゲン活性化因子（ＵＰＡ）、尿プラスミノーゲン活性化因子受容体（ＵＰＡＲ）、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤１（ＰＡＩ−１）、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ｐ５３、Ｋｉ−６７、ｐ２１、Ｅ−カドヘリン、およびＰＳＡ、ならびにＶＥＧＦ、ＶＣＡＭ（例えばｓＶＣＡＭ）、グリーソンスコアおよび／またはコアデータ）と共に、例えば、ノモグラムにおいて、ヒトの体液中のＴＧＦ−β１のレベルを必要に応じて用い、病期および／または結果（例えば臓器限局疾患の被膜外への広がり、精嚢浸潤、および／またはリンパ節転移のリスクを、前立腺癌の患者において、予測することができる。一実施形態において、予後は、前立腺癌についての一つ以上のマーカーに対する量、レベルまたは他の値（スコア）のデータのコンピュータによる解析に基づく。データは、手動で入力してもよいし、一つ以上のマーカーの量またはレベルを測定する装置から自動的に獲得してもよい。
【００２５】
かくして、本発明は、ノモグラムを提供し、それは、前立腺癌の標準的な臨床的尺度および病理学的尺度の一つ以上のほかに、血清／血漿タンパク質（例えば、ＴＧＦ−β１、ＩＬ６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、ＰＳＡ、ＶＥＧＦ、および／またはｓＶＣＡＭを含むが、これらに限定されるものではない）の一つ以上を用いて、前立腺癌患者（前立腺切除術の前、前立腺切除術の後、放射線療法の前、放射線療法の後、原発性療法の後の再発（例えば、手術または放射線療法の後の上昇するＰＳＡ）、および転移性疾患を含む）のための臨床的症状における結果を予測することができるものである。一実施形態において、該方法は、ＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲおよびグリーソンスコア（分類）（例えば、原発性グリーソンスコアおよび／または第二グリーソンスコア）、および／または必要に応じて臨床病期を用いる。従って、本発明のこの実施形態において、該方法は、前立腺癌の治療の前または後の患者から得られた血漿試料中のＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲの量またはレベル、および該患者から得られた前立腺細胞を含む試料からのグリーソンスコアを、与えること、検出すること、または測定することを含む。次いで、結果を、治療後の進行のリスクと関連づける。
【００２６】
また本発明は、予後の方法を提供する。該方法は、臨床上局所的な前立腺癌の原発性療法の前または後の患者からの生理学的体液試料を、複合体を形成するために、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体の形成を検出または測定し、複合体形成の量またはレベルを用いて、例えば、治療の後または治療が無い場合の、患者の最終的な病理学的病期および／または生化学的進行を予測する。該試料は、血液試料が好ましく、血漿試料がより好ましい。
【００２７】
本明細書でさらに説明するように、術前または術後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルを、臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターと関連づけることができる。骨転移した患者中の血漿ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、健常者、前立腺切除の患者、またはリンパ節転移した患者におけるレベルよりも有意に高い（Ｐ値＜０．００１）。パルチン（Ｐａｒｔｉｎ）ノモグラムの変数に加えてＩＬ−６またはＩＬ６ｓＲを含んだ術前のモデルにおいて、術前の血漿ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、および生検グリーソンスコアは、臓器限局疾患（Ｐ値≦０．０１）およびＰＳＡの進行（Ｐ値≦０．０２８）の独立予測因子であった。しかし、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの両方を含んだ他のモデルにおいては、術前の血漿ＩＬ６ｓＲのみが、ＰＳＡの進行の独立予測因子として残った（Ｐ＝０．０３８）。かくして、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、骨に転移する前立腺癌の男性において上昇する。臨床上局所的な前立腺癌の患者において、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルは、より攻撃的な前立腺癌のマーカーと関係し、手術後の生化学的進行の予測因子である。
【００２８】
よって、本発明によりさらに提供される方法では、臨床上局所的な前立腺癌の原発性療法の前または後の患者からの生理学的体液試料（例えば、血清または血漿）を、複合体を形成するために、ＩＬ−６またはＩＬ６ｓＲに結合する作用物質と接触させる。次いで、複合体形成の量またはレベルを、前立腺非限局疾患のリスク（疾患の進行）、最終的な病理学的病期および／または生物化学的な進行と関連づける。かくして、ヒトの体液中のＩＬ−６および／またはＩＬ６ｓＲのレベルは、予後に有用であり、そして、新生物性疾患に対する他のマーカー（例えば前立腺癌に対する他のマーカー）（例えば、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＰＡＩ−１、ＴＧＦ−β１、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ｐ５３、ｐ２１、Ｅ−カドヘリン、およびＰＳＡ、ならびにＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭ、グリーソンスコアおよび／またはコアデータ）と共に、例えば、ノモグラムにおいて、ヒトの体液中のＩＬ−６および／またはＩＬ６ｓＲのレベルを必要に応じて用い、前立腺癌の患者における病期および結果を予測することができる。一実施形態において、予後は、前立腺癌についての一つ以上のマーカーに対する量、レベルまたは他の値のデータのコンピュータによる解析に基づいてもよい。データは、手動で入力してもよいし、自動的に獲得してもよい。
【００２９】
さらに、術前および術後のＴＧＦ−β１のレベルが、進行した病期（前立腺外への広がり、精嚢への浸潤、およびリンパ節への転移を含む）の患者において有意に上昇していることがわかった。一方、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、腫瘍の体積、前立腺切除のグリーソン合計、およびリンパ節への転移と有意に関連したが、術後のレベルは、いかなる臨床的または病理学的パラメーターとも関連しなかった。術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲを含み、さらに標準的な術後のパラメーターを含む術後のモデルにおいて、術後のＴＧＦ−β１および前立腺切除のグリーソン合計は、全体的かつ攻撃的な疾患の進行の有意な予測因子であった。すべての患者について、三つのすべてのマーカーの血漿レベルは、前立腺除去の後、有意に減少したが、疾患の進行を経験した患者では、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルだけが有意に低下した。かくして、根治的前立腺切除術を受けている患者では、術前のＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルが、所属リンパ節への転移、原発性療法時の推定した目に見えない転移、および疾患の進行と関連している。前立腺除去の後は、術後のＴＧＦ−β１のレベルのみ、疾患進行の予測についての術前のレベルに対し、値が増加する。
【００３０】
従って、本発明は、前立腺癌の治療の後、患者の進行のリスクを決定するための方法を提供する。該方法は、前立腺癌の治療の前の患者から得られた血漿試料を、複合体を形成するため、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させること、前立腺癌の治療の後の患者から得られた血漿試料を、複合体を形成するため、ＴＧＦ−β１に結合する作用物質と接触させること、および、前立腺癌の治療の前の患者から得られた血漿試料を、複合体を形成するため、ＩＬ６ｓＲに結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、治療前および治療後のＴＧＦ−β１のレベルならびに治療前のＩＬ６ｓＲレベルに対応する複合体形成の量またはレベルを、例えばノモグラムにおいて、進行のリスクと関連づける。
【００３１】
さらに本明細書で説明するように、術前または術後のＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、およびＩＧＦ  ＢＰ−３の血漿レベルを測定し、臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターと関連づけてもよい。１２０人の患者、４４人の癌のない健常な男性、１９人の所属リンパ節に転移した前立腺癌の男性、および１０人の骨に転移した前立腺癌の男性（上述）において、前立腺切除の患者およびリンパ節転移または骨転移の患者における血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、健常者のレベルよりも有意に高いことがわかった（Ｐ値≦０．００６）。リンパ節転移および骨転移の患者における血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルは、前立腺切除の患者および健常者のレベルよりも有意に低かった（Ｐ値≦０．０３１）。術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２および生検グリーソンスコアは、ともに、臓器限局疾患の独立予測因子（それぞれＰ＝０．００１とＰ＝０．００５）であり、かつ、ＰＳＡ進行の独立予測因子（それぞれＰ＝０．０４９とＰ＝０．０３５）であった。ＩＧＦ  ＢＰ−２に合わせたとき、ＩＧＦ  ＢＰ−３はＰＳＡ進行の独立予測因子であった（Ｐ＝０．０４０）。かくして、血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルが前立腺癌の男性において上昇する一方、ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルが所属リンパ節および骨に転移した前立腺癌の男性において減少する。臨床上局所的な前立腺癌の患者において、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、より攻撃性の前立腺癌のマーカーと関連しており、手術後の生物化学的進行の予測因子である。
【００３２】
かくして本発明が提供する方法は、臨床上局所的な前立腺癌の原発性療法の前または後の患者からの生理学的体液試料（例えば血清または血漿）を、複合体を形成するために、ＩＧＦ  ＢＰ−２に結合する作用物質および必要に応じてＩＧＦ  ＢＰ−３に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成を、検出または測定し、前立腺非限局疾患のリスク、最終的な病理学的病期および／または生物化学的な進行と関連づける。上記の方法と同様に、ヒトの体液中のＩＧＦ  ＢＰ−２および／またはＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルは、予後に有用であり、そして、新生物性疾患に対する他のマーカー（例えば前立腺に対する他のマーカー）と共に、ヒトの体液中のＩＧＦ  ＢＰ−２および／またはＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルを必要に応じて用い、例えば、前立腺癌についての一つ以上のマーカーに対する量、レベルまたは他の値のデータのコンピュータによる解析を利用して、前立腺癌の患者における病期および結果を予測することができる。
【００３３】
また、本明細書で説明するように、ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルを、臨床上局所的な疾患に対する根治的前立腺切除術を受けている２１５人の患者および治療していない骨に転移した前立腺癌の９人の男性から術前に得られた血漿試料において、測定した。血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、骨転移の患者において最も高かった（Ｐ＜０．００１）。前立腺切除の患者の群内において、術前の血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１レベルは、所属リンパ節に転移した患者において上昇した（Ｐ＜０．００１）一方、より高いＶＥＧＦレベルのみが、より高い生検および最終的グリーソン合計と関連し（それぞれＰ＝０．０３６とＰ＝０．０４０）、前立腺外への広がりと関連した（Ｐ＝０．０４７）。より高い術前のＶＥＧＦレベルは、標準的な術前の特徴の効果に合わせたとき、リンパ節転移および生化学的進行と関連した（それぞれＰ＝０．０４３とＰ＝０．０２０）。かくして、血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、転移性の前立腺癌を有する男性において顕著に上昇する。さらに、それらは両方とも、根治的前立腺切除術後の生化学的進行の独立予測因子である。これはおそらく、手術時にすでに存在する微細な転移性疾患との関連によるものである。
【００３４】
かくして本発明は、前立腺癌の治療後の患者の進行のリスクを決定するための方法を提供する。該方法は、前立腺癌の治療前の患者からの生理学的体液試料（例えば血清または血漿）を、複合体を形成するために、ＶＥＧＦおよび／またはｓＶＣＡＭ−１に結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成の量またはレベルを進行のリスクと関連づける。
【００３５】
また本明細書で説明するように、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、およびＰＡＩ−１の血漿レベルを、臨床上局所的な疾患について根治的前立腺切除術を受けた１２０人の継続的患者において術前に測定し、それらの患者の５１人において術後にも測定した。ＰＡＩ−１のレベルではなく、ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、健常者と比較して、前立腺癌の患者において上昇し（それぞれＰ＝０．００６とＰ＝０．０２１）、骨転移の患者において最も高かった。上昇したＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、前立腺外への疾患と関連し（それぞれＰ＝０．０４６とＰ＝０．０５０）、精嚢への浸潤と関連した（それぞれＰ＝０．０４１とＰ＝０．０４８）。上昇したＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、前立腺腫瘍の体積と相関した（それぞれＰ＝０．０３６とＰ＝０．０３０）。多変量解析において、術前の血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲレベルは、生検グリーソン合計とともに、前立腺癌の進行の独立予測因子であった（それぞれＰ＝０．０３４、Ｐ＝０．０４０およびＰ＝０．０４８）。疾患が進行した患者において、術前の血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲレベルは、攻撃的でない疾患の特徴を有する患者においてよりも、攻撃的な疾患の特徴を有する患者においてより高かった（それぞれＰ＝０．０５０とＰ＝０．０３１）。従って、他の臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターと組み合わせれば、血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、臨床的なネオアジュバント療法およびアジュバント療法の試行に登録すべき患者を選択するのに有用でありうる。
【００３６】
従って、本発明は、前立腺癌の治療の後の患者の進行のリスクを決定するための方法を提供する。該方法は、前立腺癌の治療の前（例えば、臨床上局所的な前立腺癌に対する根治的前立腺切除術の前）の患者から得られた生理学的体液試料（例えば、血清または血漿試料のような血液試料）を、複合体を形成するために、ＵＰＡＲまたはＵＰＡに結合する作用物質と接触させることを含む。次いで、複合体形成の量またはレベルを進行のリスクと関連づける。
【００３７】
また、本発明が提供する装置は、哺乳動物から得た試料中の少なくとも一つのタンパク質のレベルまたは量を含むテスト情報を入力するためのデータ入力手段（ここで、該タンパク質には、ＴＧＦ−β１、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＰＳＡ、ＶＥＧＦ、および／またはｓＶＣＡＭがあるがこれらに限定されない）と、該試料中の該少なくとも一つのタンパク質のレベルまたは量を解析するためのソフトウェアを実行するプロセッサーとを備えるものであり、ここで、該ソフトウェアは、該試料中の該少なくとも一つのタンパク質のレベルまたは量を解析し、そして、該哺乳動物における進行、前立腺非限局疾患、疾患の被膜外への広がり、精嚢への浸潤、および／またはリンパ節転移のリスクを定めるものである。
【００３８】
さらに本明細書で説明するように、以前に前立腺生検の履歴がない１７８人の患者（最初のシステマティック（系統的）１２コア（Ｓ１２Ｃ）生検において前立腺癌と診断され、その後に根治的前立腺切除術を受けた患者）が研究された。比較の群には、６つの標準的セクスタントコア（Ｓ６Ｃ）のサブセット、６つの外側コア（Ｌ６Ｃ）のセット、および完全な１２コアのセット（Ｓ１２Ｃ）（６つの標準的セクスタントコアと６つの外側コアの両方を含んだもの）が含まれた。生検グリーソンスコア、陽性コアの数、癌の合計長、および生検セットにおける腫瘍のパーセントを検討し、被膜外への広がり、全腫瘍体積、および病理学的グリーソンスコアを予測できる可能性をさぐった。スピアマン（Ｓｐｅａｒｍａｎ）のロー相関および多変量回帰分析を用いて、解析を行った。一変量解析において、Ｓ６ＣまたはＬ６Ｃと比べ、Ｓ１２Ｃが、被膜外への広がりの存在および全腫瘍体積と最も強く相関した。多変量解析において、Ｓ６ＣおよびＬ６Ｃはともに、前立腺切除術後の病理学的パラメーターの独立予測因子であった。従って、６つの系統的に得られる外側コアを標準的な６ヶ所（セクスタント）生検に加えることで、統計的予測的に有意な差で病理学的特徴を予測できる能力が向上する。かくして、１２の系統的なセクスタントコアおよび外側生検コアすべてからのデータを用いる術前ノモグラムによれば、前立腺切除術後の病理学（例えば、無痛性の癌または被膜外への広がりの存在）を予測する能力を向上させることができる。一実施形態において、グリーソンスコア、陽性コアの数、陽性の隣接するコアの数、癌の合計長、隣接するコアにおける癌の合計長、および／または腫瘍転移のパーセントを、前立腺切除術後の病理学と関連づける。さらに、Ｓ１２Ｃが陰性の患者において、初期直腸指診状態および／または前立腺上皮内新形成の存在が、再生検（例えば、第二のＳ１２Ｃの実行）を示唆した。
【００３９】
前立腺癌と診断される男性により良い助言をするために、臨床上の変数（血清ＰＳＡ、臨床病期、前立腺生検グリーソン分類、および超音波体積）ならびに系統的な生検の解析から得られる変数に基づいて癌の存在および広がりを正確に予測する統計モデルを開発した。解析に含まれたのは、系統的な針生検により臨床病期Ｔ１ｃ〜Ｔ３  ＮＯまたはＮＸおよびＭＯまたはＭＸの前立腺癌と診断され、単に根治的前立腺切除術によって治療された１０２２人の患者であった。全体で１０５人（１０％）の患者が無痛性の癌を有していた。ノモグラムは、０．８２〜０．９０の範囲の種々のモデルに対する識別度で無痛性癌の存在を予測した。従って、治療前の変数（臨床病期、グリーソン分類、ＰＳＡ、および／または系統的生検の標本における癌の量）を組み込んだノモグラムにより、前立腺癌の男性が無痛性の腫瘍を有する確率を予測することができる。
【００４０】
本発明は、前立腺癌の治療前の患者において、無痛性癌のリスクまたは前立腺癌の後ろ外側被膜外への広がりのリスクを決定するための方法を提供する。該方法は、患者からの、治療前のＰＳＡ、ＴＧＦ−β１、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、および／もしくはｓＶＣＡＭの一つ以上、臨床病期、生検グリーソンスコア、陽性コアの数、癌の合計長、ならびに／または前立腺生検の１２コアセットにおける腫瘍のパーセントを、無痛性癌および／または後ろ外側被膜外への広がりのリスクと関連づけることを含む。そのような情報は、治療の決定を強化することができる。
【００４１】
従って、本発明はさらに、無痛性の前立腺腫瘍の存在を予測するための方法を提供する。一実施形態において、該方法は、根治的前立腺切除術の患者についての因子の組合せを、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の患者のそれぞれについて測定された因子（例えば、治療前のＰＳＡレベル、臨床病期、グリーソン分類、癌性組織のサイズ、非癌性組織のサイズ、および／または超音波または経直腸的超音波（Ｕ／Ｓ）体積）の組合せの関数的表現と関連づけることを含む。次いで、該患者の各因子についての値を、予測因子スケール上の値と関連づけて、該患者における無痛性前立腺腫瘍の存在を予測する。
【００４２】
被膜外へ広がる側を予測するノモグラムを開発するため、臨床病期Ｔ１ｃ〜Ｔ３の前立腺癌を有し、系統的生検により診断され、その後、根治的前立腺切除術によって治療された７６３人の患者を研究した。研究された変数には、ＤＲＥについての異常度、最も悪いグリーソンスコア、癌を有するコアの数、各側の生検標本における癌のパーセント、および血清ＰＳＡレベルが含まれた。ＥＣＥの側の予測において、ＤＲＥ、生検グリーソン合計およびＰＳＡの曲線の下の面積は、それぞれ０．６４８および０．６２７であり、これらのパラメーターを組み合わせた場合、０．７６３であった。さらに、これは、癌のパーセントを用いて系統的生検の情報を加えることにより高められた（最高値０．７８７）。従って、前立腺の各側についての治療前の変数を組み込んだノモグラムにより、前立腺生検標本において被膜外へ広がる側を正確に予測することができる。
【００４３】
本発明は、根治的前立腺切除術の標本において被膜外へ広がる側を予測するための方法を提供する。一実施形態において、該方法は、根治的前立腺切除術の患者についての因子の組合せを、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の患者のそれぞれについて測定された因子（例えば、治療前のＰＳＡおよび生検における因子、最も悪いグリーソンスコア、癌を有するコアの数、および／または各側における生検標本中の癌のパーセントを含む因子）の組合せの関数的表現と関連づけることを含む。次いで、患者の各因子についての値を、予測因子スケール上の値と関連づけて、患者の前立腺において被膜外へ広がる側を予測する。
【００４４】
前立腺切除術後の生化学的再発に対するサルベージ放射線療法（ＸＲＴ）の後、ＰＳＡ進行がなくなることを予測する精度を向上させるノモグラムを開発するため、サルベージＸＲＴを受けた３０３人の患者についての前立腺切除術前および後の臨床−病理学的データおよび疾患追跡検査を、コックス（Ｃｏｘ）比例ハザード回帰分析を用いて、モデル化した。ＸＲＴ前のＰＳＡおよびグリーソン分類が、治療成功の最も有力な予測因子であることがわかった。かくして、少数の患者は、疑わしい局所的再発に対するサルベージ放射線療法から、永続性のある恩恵を得ることができる。従って、ノモグラムは、サルベージＸＲＴを受けるべき最も適当な患者を識別するのに、助けとなることができる。
【００４５】
従って、根治的前立腺切除術によって治療された前立腺癌の患者において生化学的再発の後のサルベージ放射線療法の結果を予測するための方法がさらに提供される。一実施形態において、該方法は、根治的前立腺切除術の患者についての因子の組合せを、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の患者のそれぞれについて測定された因子（例えば、治療前のＰＳＡレベル、サルベージ放射線療法の前のＰＳＡレベル、グリーソン合計、病理学的病期、サルベージ放射線療法前のＰＳＡ倍増時間、陽性の切除縁、生化学的再発に至る時期、およびサルベージ放射線療法前のネオアジュバントホルモン療法）の組合せの関数的表現と関連づけることを含む。次いで、患者の各因子についての値を、予測因子スケール上の値と関連づけて、根治的前立腺切除術により治療された前立腺癌患者において生化学的再発後のサルベージ放射線療法の結果を予測する。
【００４６】
また本発明は、前立腺癌が進行した患者の死に至る時期を予測するためにノモグラムを用いることを含む。一実施形態において、該ノモグラムは、ホルモン感受性の転移性前立腺癌を有する患者の死に至る時期を予測する。他の実施形態において、該ノモグラムは、ホルモン耐性の前立腺癌を有する患者の死に至る時期を予測する。ノモグラムは、生理学的体液中に存在するマーカー、例えば、ＴＧＦ−β１、ＵＰＡ、ＶＥＧＦなどや、標準的な臨床パラメーター（Ｓｍａｌｅｔｚ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）に記載されるパラメーターを含む（その内容はこの引用により本明細書に具体的に記載されたものとする））を含むことができる。さらに、原発性療法後の所定のマーカーの存在（例えば、原発性療法後のＰＳＡ再発）を利用して、再発の攻撃性、転移に至る時期、および／または死に至る時期を予測することができる。
【００４７】
移行領域体積（ＴＺＶ）および全前立腺体積（ＴＰＶ）がＰＳＡの独立予測因子であるかどうか判定するため、超音波誘導下で行われた系統的１２コア生検を受けた５６０人の男性からの結果を解析した。線形回帰を用いて人種、年齢、および生検の状態をコントロールする場合、ＴＺＶおよびＴＰＶはそれぞれ、ＰＳＡの別々の有意な予測因子である（各Ｐ＜０．０００１）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
発明の詳細な説明
本発明は、以下を予測するための方法、すなわち、臓器限局（局所的）前立腺疾患の状態、原発性療法の後の前立腺癌の進行の可能性（例えば、目に見えない転移の存在、前立腺癌が被膜外へ広がる側および範囲（程度）、神経血管束の領域における被膜外への広がり（後ろ外側）のリスク、および／または患者における無痛性前立腺腫瘍の存在）；ＰＳＡ再発の患者における疾患の攻撃性、転移に至る時期および／または死に至る時期；ならびに転移した患者（例えばホルモン耐性疾患を有するまたは有さない患者）における疾患の攻撃性および／または死に至る時期を予測するための方法を含む。一実施形態において、該方法は、前立腺癌に対する原発性療法の後の前立腺癌再発のリスクについて患者を評価するため、特に有用である。具体的には、術前または術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのレベルを、単独で、または、前立腺の１２コア系統的生検から得られるパラメーター、最終的病理学、あるいは前立腺癌についてのさらなる他のマーカーと組合せて、検出することは、例えば、臓器限局疾患の状態または臨床上局所的な前立腺癌の患者における進行の可能性を予測するのに、有用でありうる。
【００４９】
ヒトを含む哺乳動物の体液中のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのレベルを検出および／または定量するため、本発明により非侵襲的予後アッセイが提供される。そのようなアッセイは、前立腺癌の予後に有用である。さらに、そのようなアッセイは、前立腺癌の状態をモニターする有用な手段を提供する。予測の向上に加えて、疾患状態の情報は、担当医師が個々の患者に対して最も適切な療法を選ぶことを可能にする。例えば、再発の可能性が高い患者を厳格に治療することができる。前立腺切除術と同様、より積極的な療法によれば患者の苦痛は深刻なものになるため、前立腺切除術から恩恵を受けると同様に、積極的な治療を必要とする患者を高い確実性で弁別することが望ましい。
【００５０】
本発明の方法によるＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのアッセイで生理学的試料として特に重要な体液には、血液、血清、精液、唾液、痰、尿、血漿、胸水、膀胱洗浄液、気管支肺胞洗浄液、および脳脊髄液がある。血液、血清および血漿が好ましく、血漿、例えば血小板の少ない血漿が、本発明の方法に使用するのにより好ましい試料である。
【００５１】
哺乳動物体液中のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのレベルを検出および／または定量するための具体的手段には、アフィニティークロマトグラフィー、ウェスタンブロット解析、免疫沈降分析、ならびに免疫検定法（ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）、ＲＩＡ（放射線免疫検定法）、競合ＥＩＡまたは二重抗体サンドイッチ検定法を含む）がある。そのような免疫検定法において、結果の解釈は、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡ結合性因子（例えば、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡ特異抗体）が、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡと関連のない、試料中に存在する他のタンパク質およびタンパク質フラグメントと交差反応しないという仮定に基づいている。好ましくは、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのレベルを検出するため使用される方法は、少なくとも一つのＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡ特異的結合性分子（例えば、これらの分子のいずれかに対する抗体またはリガンドの少なくとも一部）を用いる。免疫検定法は、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡを検出するための好ましい手段である。典型的な免疫検定法では、哺乳動物体液中のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡを検出および／または定量するためのモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を少なくとも一つ使用することが必要である。該アッセイに使用される抗体または他の結合性分子は、標識（ラベル）されていてもよいし、標識されていなくともよい。標識されていない抗体は、凝集法に用いることができる。標識された抗体または他の結合性分子は、多種多様な標識を用いる多種多様なアッセイに用いることができる。
【００５２】
適当な検出手段には、標識、例えば、放射性ヌクレオチド、酵素、蛍光体、化学発光体、酵素基質もしくは補因子、酵素阻害剤、粒子、色素などを用いるものがある。そのような標識試薬は、種々の周知のアッセイに使用することができる。例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、３，７９１，９３２号、３，８１７，８３７号、および４，２３３，４０２号を参照されたい。
【００５３】
さらに、例えば、競合アッセイ法において、標識したＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのペプチドおよび／またはポリペプチドを、哺乳動物体液中のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡをそれぞれ検出および／または定量するために用いることができる。またその代わりに、そのような典型的な競合アッセイにおける標識ペプチドおよび／またはポリペプチドの代わりとして、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡに反応性の抗体に対して調製された標識抗イディオタイプ抗体を用いることができる。
【００５４】
当然のことながら、ＴＧＦ−β１のような所定の分子は、種々の形態（例えば、潜在的形態または活性形、さらにはその断片）で存在することができ、もし、それらが各結合性因子によって認識されるエピトープを一つ以上含むならば、それら種々の形態は本発明の方法によって検出および／または定量することができる。例えば、二つの抗体をそれぞれ捕獲抗体および検出抗体として用いるサンドイッチ検定法において、それらの抗体によって認識される両方のエピトープが、例えばＴＧＦ−β１の少なくとも一つの形態上に存在すれば、その形態は、そのような免疫検定法によって検出および／または定量されるはずである。本発明の方法によって検出および／または定量されるそのような形態は、試料中の活性形の存在を示すものである。
【００５５】
例えば、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡのレベルは、「サンドイッチ」酵素結合免疫検定法のような免疫検定法によって検出してもよい（Ｄａｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｌｕｃａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０；Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９；およびＦｌａｎｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９参照）。生理学的体液試料を、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡに特異的な少なくとも一つの抗体と接触させ、該抗体とＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡとで複合体を形成する。次いで、複合体形成の量を測定することにより、試料中のＴＧＦ−β１の量を測定する。ＥＬＩＳＡテストの一種の典型的な方法では、固体表面（例えばマイクロタイタープレート）をＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡに対する抗体で被覆し、患者の血漿試料を該マイクロタイタープレートのウェルに加える。なんらかの抗原を該抗体に結合させるインキュベーション期間の後、該プレートを洗浄し、もう一つのセットのＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡの抗体（例えば、酵素のような検出可能な分子と結合した抗体）を加え、インキュベートして反応を起こさせ、そして、該プレートを再度洗浄する。その後、酵素基質を該マイクロタイタープレートに加えてある時間インキュベートし、検出可能な生成物の合成を該酵素が触媒できるようにする。そして、該生成物（例えば該生成物の吸光度）を測定する。
【００５６】
当業者に明らかなとおり、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡに対する複数の抗体の組み合わせを用いて、患者体液中のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡの存在を検出および／または定量することができる。そのような実施形態で、競合免疫検定法を用い、そこにおいて、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡを標識し、そして体液を加え、標識したＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡの、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡに特異的な抗体への結合に対する競合を行う。そのようなアッセイは、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭまたはＰＳＡを検出および／または定量するのに用いることができる。
【００５７】
かくして、一旦、適当な特異性を有する結合性因子が調製あるいは入手できたら、特定の複合体の形成を測定するため、多種多様なアッセイ法が利用可能になる。非常に多くの競合および非競合タンパク質結合アッセイ法が、科学文献および特許文献に記載されており、また、多数のそのようなアッセイが市販されている。例えば、血清抗原を検出するのに適当な免疫検定法には、米国特許第３，７９１，９３２号、３，８１７，８３７号、３，８３９，１５３号、３，８５０，７５２号、３，８５０，５７８号、３，８５３，９８７号、３，８６７，５１７号、３，８７９，２６２号、３，９０１，６５４号、３，９３５，０７４号、３，９８４，５３３号、３，９９６，３４５号、４，０３４，０７４号、および４，０９８，８７６号に記載されたものがある。ＴＧＦ−β１のレベルを検出するための方法およびＴＧＦ−β１結合性分子は、当該技術においてよく知られている（例えば、米国特許第５，２１６，１２６号、５，２２９，４９５号、５，５７１，７１４号、および５，５７８，７０３号、ＷＯ９１／０８２９１号、ＷＯ９３／０９２２８号、ＷＯ９３／０９８００号、およびＷＯ９６／３６３４９号を参照）。
【００５８】
本発明の方法は、疾患のない状態のより良い予測のため、あるいは病期についてのより良い予測のため、前立腺癌生物学の他の尺度（基準）とともに用いることができる。例えば、以下の臨床病期診断および病理学的病期診断の基準、例えば、臨床病期または病理学的病期、ＰＳＡレベル、グリーソン値（例えば原発性グリーソン分類、続発性グリーソン分類、またはグリーソン合計（スコア）および／またはコアデータ）を用いることができるが、他の基準を用いることも、本発明の技術的範囲を逸脱するものではない。
【００５９】
Ｔ０  前立腺腫瘍の形跡なし。
【００６０】
Ｔ１  臨床上明らかでない腫瘍、触診できず、画像化によって見えない。
【００６１】
Ｔ１ａ  腫瘍は、３個以下の微細な病巣がある偶発的な組織学的所見。触診できず、５％以下のＴＵＰＲチップ（尿道を横切って切除した前立腺組織）が癌について陽性。
【００６２】
Ｔ１ｂ  腫瘍は、３個より多い微細な病巣がある偶発的な組織学的所見。触診できず、５％より多いＴＵＰＲチップ（尿道を横切って切除した前立腺組織）が癌について陽性。
【００６３】
Ｔ１ｃ  腫瘍は、触診できず、針生検診断により一つまたは両方の葉に認められる。
【００６４】
Ｔ２  腫瘍は前立腺内に限定される。
【００６５】
Ｔ２ａ  腫瘍は、臨床上または肉眼で見て前立腺に限定して存在し、腫瘍の最大寸法は１．５ｃｍ以下であり、少なくとも３つの側には正常な組織がある。触診可能であり、１葉の半分以下。
【００６６】
Ｔ２ｂ  腫瘍は、臨床上または肉眼で見て前立腺に限定して存在する。腫瘍は、最大寸法で１．５ｃｍより大きいか、一葉のみに存在する。触診可能であり、１葉の半分より大きいが、両葉ではない。
【００６７】
Ｔ２ｃ  腫瘍は、臨床上または肉眼で見て前立腺に限定して存在する。腫瘍は、最大寸法で１．５ｃｍより大きく、かつ両葉に存在する。触診可能であり、両葉に伴う。
【００６８】
Ｔ３  腫瘍が前立腺被膜を通って広がっている。
【００６９】
Ｔ３ａ  触診可能な腫瘍が、片側において前立腺被膜中に広がるか、または前立腺被膜を越えて広がる。しかし、精嚢への浸潤またはリンパ節転移はない。触診可能であり、片側の被膜貫通がある。
【００７０】
Ｔ３ｂ  触診可能な腫瘍が、両側において前立腺被膜中に広がるか、または前立腺被膜を越えて広がる。しかし、精嚢への浸潤またはリンパ節転移はない。触診可能であり、両側の被膜貫通がある。
【００７１】
Ｔ３ｃ  触診可能な腫瘍が、片側においておよび／または両側において前立腺被膜を越えて広がり、精嚢への浸潤および／またはリンパ節転移がある。触診可能であり、精嚢への浸潤またはリンパ節転移がある。
【００７２】
Ｔ４  腫瘍が、精嚢またはリンパ節以外の隣接組織に定着するか浸潤している。
【００７３】
Ｔ４ａ  腫瘍が、膀胱頚、外部括約筋、直腸のいずれかに浸潤している。
【００７４】
Ｔ４ｂ  腫瘍が、挙筋に浸潤しているか、かつ／または、骨盤の壁に定着している。
【００７５】
【表１】
2006524315.tif 000002
†  グリーソン分類１〜２は良好な分化、３は中位の分化、４〜５は低い分化である。
【００７６】
【表２】
2006524315.tif 000003
‡  全患者についての前立腺特異的抗体（ＰＳＡ）の血清レベルの中央値。６．８ｎｇ／ｍＬ（範囲０．１〜１００．０ｎｇ／ｍＬ）。全患者についての血清ＰＳＡレベルの平均値、９．９ｎｇ／ｍＬ（９５％信頼区間＝９．２４〜１０．５４ｎｇ／ｍＬ）。
【００７７】
術前の変数を用いる具体的な方法、装置およびノモグラム
本発明が提供する方法、装置およびノモグラムは、手術前に入手可能な因子を用いて疾患の再発を予測するためのものであり、臨床上局所的な前立腺癌を治療するための根治的前立腺切除術を考慮する患者を支援するためのものであり、さらには、前立腺癌患者においてサルベージ放射線療法の後の疾患再発を予測するためのものであり、前立腺癌患者における被膜外への広がりを予測するためのものであり、前立腺癌患者における前立腺上皮内新形成を予測するためのものであり、および／または、前立腺癌患者における無痛性癌を予測するためのものである。一実施形態において、術前のノモグラムは、術前の因子を用いて、局所的な前立腺癌（ｃＴ１〜Ｔ３ａ  Ｎ０またはＮＸ  Ｍ０またはＭＸ）に対する根治的前立腺切除術の後の疾患再発の確率を予測し、根治的前立腺切除術が受け入れ可能な治療の選択肢の一つかどうか決定するのに、医師および患者を支援する。本発明はまた、選択した変数を用いる術後のノモグラムを提供する。そのようなノモグラムは、臨床医と患者とが臨床上の判断を行うのに用いることができ、また、ネオアジュバント療法のプロトコルから利益を受けうる疾患再発のリスクが高い患者を識別するのに用いることができる。
【００７８】
従って、本発明の一実施形態による方法は、前立腺癌を有すると診断された患者において根治的前立腺切除術の後の前立腺癌再発の確率を予測するためのものである。該方法は、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについて測定された術前の因子の選ばれた組合せを、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけ、該関連を関数的に表現することを含む。該選ばれた組合せの術前の因子には、例えば、治療前の血液のＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ｓＶＣＡＭ、ＶＥＧＦ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、および／もしくはＰＳＡ、生検標本における原発性グリーソン分類、生検標本における続発性グリーソン分類、グリーソン合計、根治的前立腺切除術の前の治療（例えばホルモン療法または放射線療法）、ならびに／または臨床病期があり、そして、前立腺癌を有すると診断された患者から測定した術前の因子の同じ組合せを、該関数的表現と照合し、根治的前立腺切除術の後の該患者における前立腺癌の再発の確率、臓器限局疾患、被膜外への広がり、精嚢への浸潤、およびリンパ節の状態を予測する。他の実施形態において、複合グリーソン分類（ｃｏｍｂｉｎｅｄ  Ｇｌｅａｓｏｎ  ｇｒａｄｅ）を、原発性および続発性グリーソン分類の代わりに用いてもよい。生検標本における複合分類（Ｂｘグリーソン分類）は、生検標本に存在する前立腺癌の最も優勢なパターンのグリーソン分類（原発性グリーソン分類）と、二番目に優勢なパターンのグリーソン分類（続発性グリーソン分類）とを加えたもの含む。なお、この場合、そのようなパターンは、少なくとも５％の癌の推定領域または組織学的セクションを含む。用語「関連」、「関連づける」および「関連づけ」は、因子と結果とを統計的に結びつけることを意味し、統計的相関係数の算出に相当してもよいし、相当しなくともよい。
【００７９】
一実施形態において、関連づけは、選ばれた組合せの因子を記憶する記憶装置（メモリー）にアクセスすることを含む。他の実施形態において、関連づけは、関数的に表現することと、関数的表現をディスプレイに表示することとを含む。一実施形態において、表示は、関数的表現をソースから送ることを含む。一実施形態において、関連づけは、プロセッサーまたは仮想コンピュータプログラムにより実行される。他の一実施形態において、関連づけは、術前の因子の選ばれた組合せを決定することを含む。一実施形態において、決定は、患者からの因子の組合せを記憶する記憶装置にアクセスすることを含む。他の実施形態において、該方法は、前立腺癌再発の定量的な確率を伝達することをさらに含む。さらに他の実施形態において、該方法は、関数的表現をディスプレイに表示することをさらに含む。さらに他の実施形態において、該方法は、一つの入力装置内で患者についての因子の同じ組合せを入力することをさらに含む。他の実施形態において、該方法は、因子の組合せのいずれかを記憶装置またはデータベースに記憶させることをさらに含む。
【００８０】
一実施形態において、関数的表現はノモグラムであり、患者は、前立腺癌に対する治療を以前に受けたことのない患者を含む術前の候補者（手術の候補者）である。一実施形態において、複数の者は、以前に放射線療法、寒冷療法および／またはホルモン療法による治療を受けたことがない臨床上局所的な前立腺癌の者であって、その後に根治的前立腺切除術を受けたことがある者からなる。この実施形態において、前立腺癌の再発の確率は、根治的前立腺切除術の後５年間前立腺癌がない状態が続く確率である。疾患の再発は、増加した血清ＰＳＡレベル（好ましくは０．４ｎｇ／ｍＬ以上）により特徴づけることができる。一方、疾患の再発は、陽性の生検、骨のスキャンまたは他の画像化テストもしくは臨床パラメーターによって特徴づけてもよい。一方、その後の癌再発の確率が高いため、再発を、癌のさらなる治療の必要性または適用により特徴づけてもよい。
【００８１】
一実施形態において、ノモグラムは、コックス（Ｃｏｘ）比例ハザード回帰分析を用いて生成させる（Ｃｏｘ，１９７２、この引用によりその開示が具体的に本明細書に記載されたものとする）。この方法は、複数の予測因子変数を用いて生存タイプの結果を予測する。コックス比例ハザード回帰法は、経時的に、所定の終点（例えば疾患の再発）に到達する確率を推定する。他の実施形態において、ノモグラムは、ニューラルネットワークモデルを用いて生成させてもよい（Ｒｕｍｅｌｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６、この引用によりその開示が具体的に本明細書に記載されたものとする）。これは、予測エラーを逆伝播させる層状ニューロンの非線形フィード・フォワードシステムである。他の実施形態において、ノモグラムは、再帰分割モデルを用いて生成させてもよい（Ｂｒｅｉｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４、この引用によりその開示が具体的に本明細書に記載されたものとする）。さらに他の実施形態において、ノモグラムは、サポートベクターマシンテクノロジーを用いて生成される（Ｃｒｉｓｔｉａｎｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｈａｓｔｉｅ，２００１）。さらなる実施形態において、例えばホルモン耐性の患者に対し、加速度故障時間モデルを用いてもよい（Ｈａｒｒｅｌｌ，２００１）。当業者に知られた他のモデルを代わりに用いてもよい。一実施形態において、本発明は、再発、疾患に特異的な生存、疾患のない生存、および／または総合的な生存を予測するために、コックス回帰モデルまたはサポートベクターマシンを実行するソフトウェアを使用することを含む。
【００８２】
ノモグラムは、根治的前立腺切除術後の前立腺癌の患者における疾患再発の確率を予測するための装置を含んでもよい。該装置は、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについて測定された術前の因子を、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけること（該術前の因子は、治療前の血漿のＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ｓＶＣＡＭ、ＶＥＧＦ、ＰＳＡ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、および／もしくはＰＳＡ、生検標本における原発性グリーソン分類、生検標本における続発性グリーソン分類、ならびに／または臨床病期を含む）と、前立腺癌を有すると診断された患者から測定した術前の因子の同じ組合せを、該関連づけと照合し、根治的前立腺切除術の後の該患者における前立腺癌の再発の確率を予測するための手段とを含む。
【００８３】
本発明の他の実施形態による術前のノモグラムは、治療前の血漿のＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ｓＶＣＡＭ、ＰＳＡ、ＵＰＡＲ、ＵＰＡ、ＶＥＧＦ、および／もしくはＰＳＡ、生検標本におけるグリーソン分類、生検標本における続発性グリーソン分類、ならびに／または臨床病期を組み込むとともに、以下のさらなる因子の一つ以上を組み込む：１）生検コアにおける癌の合計長、２）陽性コアの数、および３）１２コア生検セットにおける腫瘍のパーセント、ならびに他の日常的に測定される臨床因子。例えば、限定されることなく、術前に入手可能であれば、因子ｐ５３、Ｋｉ−６７、ｐ２７、またはＥ−カドヘリンの一つ以上を含めることができる（Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【００８４】
生検コアにおける癌の合計長に関し、前立腺の各領域を系統的に代表する複数のコアを採取するのが、前立腺の生検において通例である。癌性組織のパーセントに関し、その百分率は、コア中の癌のミリメートルの総数を採取した組織のミリメートルの総数で割ったものとして算出される。
【００８５】
さらに本発明は、患者の術前における予後を予測するための方法を含む。該方法は、術前の因子の患者に特有の組合せ、例えば、治療前の血漿のＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ｓＶＣＡＭ、ＰＳＡ、ＶＥＧＦ、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、生検標本における原発性グリーソン分類、生検標本における続発性グリーソン分類、および／または臨床病期を照合することと、該患者の術前における予後を決定することとを含む。
【００８６】
ノモグラムまたは関数的表現は、任意の形態を想定することができ、例えば、コンピュータプログラムとして、例えばハンドヘルド装置、ワールドワイドウェブページ（例えばＦＬＡＳＨで書かれたもの）、カード（例えばラミネート加工したカード）において、想定できる。任意の他の適当な表現、画像、描写、または例示を用いることができる。ノモグラムは、グラフまたは図表による表現からなってもよいし、および／または、データベースまたは記憶装置（例えば、ランダムアクセスメモリー、リードオンリーメモリー、ディスク、仮想メモリーまたはプロセッサー）に格納してもよい。
【００８７】
ノモグラムを含む該装置はさらに、記憶機構（そこにおいて該記憶機構はノモグラムを記憶する）と、患者から測定された因子の同じ組合せを該装置に入力する入力装置と、ディスプレイ機構（そこにおいて、該ディスプレイ機構は、前立腺癌再発の定量的確率を表示する）とを含むことができる。該記憶機構は、ランダムアクセスメモリー、リードオンリーメモリー、ディスク、仮想メモリー、データベース、またはプロセッサーとすることができる。該入力装置は、キーパッド、キーボード、格納されたデータ、タッチスクリーン、音声駆動システム、ダウンロード可能なプログラム、ダウンロード可能なデータ、デジタルインターフェース、ハンドヘルド装置、または赤外線信号装置とすることができる。該ディスプレイ機構は、コンピュータモニター、陰極線管（ＣＲＴ）、デジタルスクリーン、発光ダイオード（ＬＥＤ）、液晶表示装置（ＬＣＤ）、Ｘ線、圧縮デジタル化画像、ビデオ画像、またはハンドヘルド装置とすることができる。該装置はさらに、前立腺癌の再発の定量的確率を表示するディスプレイを含んでもよく、例えば、該ディスプレイは、前立腺癌の再発の定量的確率を該ディスプレイが受け取るよう、該プロセッサーから分離されたものとすることができる。該装置はまた、データベースを含むことができ、そこにおいて該データベースは、因子の関連づけを保存するものであり、該プロセッサーによってアクセス可能なものである。該装置はさらに、前立腺癌を有すると診断された患者から測定された因子の同じ組合せを該装置に入力する入力装置を含むことができる。該入力装置は、該プロセッサーによってアクセス可能な記憶機構に、該同じ組合せの因子を格納する。該装置はさらに、因子の選ばれた組合せを伝達するための伝達媒体を含むことができる。該伝達媒体は、プロセッサーにつながれ、因子の関連づけにつながれる。該装置はさらに、前立腺癌を有すると診断される患者から測定した因子の同じ組合せを伝達するための伝達媒体を含むことができ、好ましくは、該伝達媒体は、プロセッサーにつながれ、因子の関連づけにつながれる。該プロセッサーは、多目的のものであってもよいし、専用のプロセッサーであってもよい。該プロセッサーは、ライブラリーを有するオブジェクト指向のプログラムを含み、該ライブラリーは、因子の該関連付けを格納している。
【００８８】
一実施形態において、該ノモグラムは、前立腺癌の患者が根治的前立腺切除術の後に疾患のない状態を維持する確率をグラフまたは図表で表したものを含み、それは、基材または固体支持体と、該基材または固体支持体上の表示の組合せとを含むものであり、該表示は、治療前のＴＧＦ−β１レベルのライン、治療前のＩＬ６ｓＲレベルのライン、治療前のｓＶＣＡＭレベルのライン、治療前のＶＥＧＦレベルのライン、治療前のＰＳＡレベルのライン、治療前のＵＰＡＲレベルのライン、治療前のＵＰＡレベルのライン、臨床病期レベルのライン、生検ラインにおける原発性グリーソン分類および／または生検ラインにおける続発性グリーソン分類、ポイントライン、総ポイントライン、ならびに予測因子ラインの一つ以上を含み、そこにおいて、該治療前のＴＧＦ−β１レベルのライン、該治療前のＩＬ６ｓＲレベルのライン、該治療前のｓＶＣＡＭレベルのライン、該治療前のＶＥＧＦレベルのライン、該治療前のＰＳＡレベルのライン、該治療前のＵＰＡＲレベルのライン、該治療前のＵＰＡレベルのライン、該臨床病期レベルのライン、該生検ラインにおける原発性グリーソン分類および／または該生検ラインにおける続発性グリーソン分類は、それぞれ、該ポイントラインについてのスケール上の値と関連づけることができるスケール上の値を有する。該総ポイントラインは、該予測因子ラインについてのスケール上の値と関連づけることができるスケール上の値を有し、それにより、該表示と関連する該ポイントのそれぞれの値は、総ポイント値をもたらすように互いに加えることができ、そして、該総ポイント値を該予測因子ラインと関連づけて再発の確率を予測する。該固体支持体は、人が簡単に運ぶことができるラミネート加工したカードであることが好ましい。
【００８９】
癌の患者を治癒させるように計画した根治的前立腺切除術の後、血清ＰＳＡは検出できなくなるはずである（Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）。術後の測定可能なレベルのＰＳＡは、数ヶ月から数年先の局所的または離れた所での再発の検出をもたらしうる疾患再発の証拠となる（Ｐａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。追跡検査が十分に長ければ、上昇したＰＳＡレベルは、根治的前立腺切除術によって前立腺癌の患者が治癒したかどうか評価する一つの尺度となる。この関連づけは、進行した前立腺癌に対する非ホルモン全身治療の後ＰＳＡが上昇する患者に対して実証されてきており、例えば、そこにおいて、癌の再発がＰＳＡの上昇によって裏付けられる男性は、ＰＳＡが上昇しない男性よりも早く前立腺癌で死ぬ可能性が高くなる（Ｓｒｉｄｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。根治的前立腺切除術の後の血清ＰＳＡは、治療の失敗を予測するモデルを作るため、治療効果についての終点として用いられている。二種類のＰＳＡが０．０３、０．１または０．２ｎｇ／ｍＬに等しいかそれより多くかつ上昇するという再発の判断ルールは、相対的に偽陽性の表示（患者によって特に好ましくない）が避けられるとき、用いることができる。さらに、一つの結果として特定のレベルのＰＳＡを用いることは、モデル化されるように、ＰＳＡ追跡検査データが右打ち切り（最後の追跡検査の後は単純に未知）ではなく任意打ち切り（二つの時点の間で起こる）（Ｄｏｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）であることを示している。しかし、アジュバント療法の判断は、しばしば、認められるＰＳＡ再発に基づいており、従って、この終点は、真のＰＳＡ再発時点よりも、臨床上より有用である。
【００９０】
治療の適当なコースを選択する際に患者および医師を支援するのに加えて、本発明のノモグラムはまた、臨床試験において、試験に適当な患者を特定するため、ベースラインリスクに対して期待される利益を定量化するため、ランダム化の有効性を確認するため、必要なサンプルサイズを減らすため、および研究を通じての比較を容易にするため、有用である。
【００９１】
術前および術後の変数を用いる具体的な方法、装置およびノモグラム
上述した、術前のノモグラムの種々の実施形態および該ノモグラムを用いる方法に加えて、本発明はさらに、術後のノモグラムおよびそれらのノモグラムを利用して根治的前立腺切除術後の疾患再発の確率を予測するための方法に関する。他にも理由があるが、この予後は、根治的前立腺切除術後の患者において、アジュバント療法の有用性を判断するのに利用することができる。
【００９２】
従って、本発明のさらなる実施形態は、臨床上局所的な前立腺癌に対する根治的前立腺切除術の後の癌再発の確率を予測するため、術後の因子を含む因子を組み込んだノモグラムを含む。このノモグラムは、臨床上局所的な前立腺癌を治療するため根治的前立腺切除術を受けた患者についての因子を用いて、疾患再発の確率を予測する。
【００９３】
本発明の一実施形態は、以前に根治的前立腺切除術を受けた患者において前立腺癌再発の確率を予測するための術後の方法に関し、該方法は、以前に前立腺癌と診断された複数の者のそれぞれについて測定された因子の組合せを、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけて、該関連づけを関数的に表現することを含む。他の実施形態において、以下の因子の任意の一つ以上からなる一つ以上のサブグループを除外してもよい。因子の該組合せは、以下のもの（１）術後のＴＧＦ−β１レベル、（２）術前のＰＳＡレベル、（３）術前のＴＧＦ−β１レベル、（４）前立腺被膜浸潤のレベル（ＥＣＥＬＥＶ）、（５）病理学的グリーソンスコア、（６）切除縁の状態、（７）精嚢への浸潤、（８）リンパ節の状態、（９）術前のＩＬ６ｓＲレベル、（１０）以前の治療、の一つ以上を含み、そこにおいて、該複数の者は、根治的前立腺切除術を受けた男性からなり、そして、患者から測定された因子の同じ組合せを、該関数的表現と照合し、患者についての前立腺癌の再発の確率を予測する。一実施形態において、切除縁の状態は、陰性または陽性として報告される。その代わりに、切除縁の状態は、陰性、クローズ、または陽性として報告してもよい。一実施形態において、前立腺被膜浸潤のレベルは、なし、被膜に浸潤、限局または定着として報告される。
【００９４】
精嚢病変または精嚢への浸潤は、有りまたは無しで報告することが好ましい。その代わりに、それを、陽性もしくは陰性、または、不在もしくは存在で、分類してもよい。もし存在するのであれば、精嚢への浸潤は、代わりに、タイプＩ、ＩＩ、Ｉ＋ＩＩ、またはＩＩＩ（Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）のレベルにより分類することができる。さらに他の実施形態において、もし存在するのであれば、精嚢浸潤を、代わりに、タイプＩ、ＩＩ、またはＩＩＩのレベルによって分類してもよい（Ｗｈｅｅｌｅｒ，１９８９；Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。リンパ節の状態は、陽性または陰性のいずれかで記録することが好ましい。
【００９５】
他の実施形態において、因子の選ばれた組合せはさらに、以下のもの、癌の体積（総腫瘍体積）、腫瘍が認められる前立腺の区域（癌の位置の区域）、被膜外への広がりのレベル、治療前のＵＰＡＲのレベル、治療前のＵＰＡのレベル、Ｐ５３、Ｋｉ−６７、ｐ２７、ＤＮＡ倍数性の状態、臨床病期、リンパ管浸潤、および他の日常的に測定される病理学的因子（Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９６２；Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｓｔａｐｌｅｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）の一つ以上を含んでもよい。
【００９６】
前立腺外への広がりのレベルは、陰性、レベル１、レベル２、レベル３限局、またはレベル３定着（Ｓｔａｍｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｒｏｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２）として評価してもよい。代わりに、前立腺外への広がりのレベルは、陰性、レベル１、レベル２、またはレベル３限局として評価してもよい。代わりに、前立腺外への広がりのレベルは、レベル０または１（被膜の浸潤なしまたは前立腺の外への広がりなし）、レベル２（被膜中への浸潤はあるが被膜を通過していない）、レベル３Ｆ（被膜を通過する限局的で微細な広がりであり、すべての組織断面について２以下の強拡大視野からなる）、またはレベル３Ｅ（レベル３Ｆよりも広範囲な被膜を通過する定着した広がり）（Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２；Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１；およびＯｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）として評価してもよい。
【００９７】
前立腺癌再発の確率には、根治的前立腺切除術後５年前立腺癌がない状態を維持する確率がある。再発は、上昇した血清ＰＳＡのレベルにより特徴づけることができ、あるいは、陽性の生検、骨のスキャン、または他の適当なイメージングテストもしくは臨床パラメーターにより特徴づけることができる。一方、癌のその後の再発の確率が高くなることから、再発は、陽性の生検、骨のスキャンまたは前立腺癌に対するさらなる治療の開始または利用により特徴づけてもよい。
【００９８】
一実施形態において、関数的表現はノモグラムである。ノモグラムは、コックス比例ハザード回帰モデル（Ｃｏｘ，１９７２）を用いて生成させることができる。代わりに、ノモグラムは、ニューラルネットワークモデルを用いて生成させてもよい（Ｒｕｍｅｌｈａｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８６）。他の実施形態において、ノモグラムは、再帰分割モデルを用いて生成される（Ｂｒｅｉｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４）。さらに他の実施形態において、ノモグラムは、サポートベクターマシンテクノロジーを用いて生成される（Ｃｒｉｓｔｉａｎｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。さらなる実施形態において、例えばホルモン耐性の患者に対し、加速度故障時間モデルを用いてもよい（Ｈａｒｒｅｌｌ，２００１）。当業者に知られた他のモデルを代わりに用いてもよい。一実施形態において、本発明は、再発、疾患に特異的な生存、疾患のない生存、および／または総合的な生存を予測するために、コックス回帰モデルまたはサポートベクターマシンを実行するソフトウェアを使用することを含む。
【００９９】
本発明の一実施形態において、本発明は、根治的前立腺切除術の後の患者において術後の予後を予測するための方法に関し、該方法は、患者の術前のＰＳＡ、ＴＧＦ−β１もしくはＩＬ６ｓＲのレベル、術後のＴＧＦ−β１のレベル、病理学的グリーソンスコア、前立腺被膜浸潤のレベル、切除縁の状態、精嚢浸潤の存在、およびリンパ節の状態を含む因子の患者特有の組合せを照合することと、患者の予後を判定することとを含む。
【０１００】
本発明のさらに他の実施形態は、根治的前立腺切除術後の患者においてアジュバント療法の必要性を決定するための方法に関し、該方法は、該患者について臨床的因子および病理学的因子の組合せを測定する工程（該因子の組合せは、患者の術前のＰＳＡ、ＴＧＦ−β１もしくはＩＬ６ｓＲのレベル、術後のＴＧＦ−β１のレベル、病理学的グリーソンスコア、前立腺被膜浸潤のレベル、切除縁の状態、精嚢浸潤の存在、およびリンパ節の状態を含む）と、該因子の組合せを照合して、再発の確率の観点から該アジュバント療法が必要であるかどうか決定する工程とを含む。該アジュバント療法は、放射線療法、化学療法、ホルモン療法（例えば、抗アンドロゲンホルモン療法）、寒冷療法、組織内放射性種注入、外部ビーム照射療法、発熱療法、遺伝子治療、細胞治療、腫瘍ワクチン、または全身的に配達される生物学的作用物質または医薬を含むことができる。
【０１０１】
本発明の他の実施形態は、根治的前立腺切除術後の前立腺癌の患者において疾患再発の確率を予測するための装置に関する。該装置は、以前に前立腺癌と診断されかつ根治的前立腺切除術により治療された複数の者のそれぞれについて測定された臨床的因子および病理学的因子を、該複数の者のそれぞれについての前立腺癌の再発率と関連づけることを含む。因子の選ばれた組合せは、術前のＰＳＡ、術前のＴＧＦ−β１、術前のＩＬ６ｓＲのレベル、術後のＴＧＦ−β１のレベル、病理学的グリーソンスコア、前立腺被膜浸潤のレベル、切除縁の状態、精嚢浸潤の存在、およびリンパ節の状態を含み、そして、前立腺癌を有すると診断された患者から測定された因子の同じ組合せを該関連づけと照合するための手段を含み、根治的前立腺切除術後の患者において前立腺癌再発の確率を予測する。
【０１０２】
本発明の他の実施形態は、前立腺癌の患者が根治的前立腺切除術の後に疾患のない状態を維持する確率をグラフまたは図表で表すためのノモグラムに関する。該ノモグラムは、固体支持体上の表示の組合せを含むものであり、該表示は、術前のＰＳＡレベルのライン、術前のＴＧＦ−β１レベルのライン、術前のＩＬ６ｓＲレベルのライン、術後のＴＧＦ−β１レベルのライン、病理学的グリーソン合計のライン、前立腺被膜浸潤のレベルのライン、切除縁の状態のライン、精嚢浸潤の存在のライン、リンパ節の状態のライン、ポイントライン、総ポイントライン、および予測因子ラインを含み、そこにおいて、術前のＰＳＡレベルのライン、術前のＴＧＦ−β１レベルのライン、術前のＩＬ６ｓＲレベルのライン、術後のＴＧＦ−β１レベルのライン、病理学的グリーソン合計のライン、前立腺被膜浸潤のレベルのライン、切除縁の状態のライン、精嚢浸潤の存在のライン、およびリンパ節の状態のラインは、それぞれ、該ポイントラインについてのスケール上の値と関連づけることができるスケール上の値を有し、かつ、該総ポイントラインは、該予測因子ラインについてのスケール上の値と関連づけることができるスケール上の値を有し、それにより、該患者の術前のＰＳＡレベル、標本のグリーソン合計、前立腺被膜浸潤のレベル、切除縁の状態、精嚢浸潤の存在、およびリンパ節の状態と関連する該ポイントのそれぞれの値は、総ポイント値をもたらすように互いに加えることができ、そして、該総ポイント値を該予測因子ラインと関連づけて再発の確率を予測することができる。該固体支持体は、任意の適当な形態（例えばラミネート加工したカード）を想定することができる。任意の他の適当な表現、画像、描写、または例示を用いることができる。
【０１０３】
本発明は、以下の例によって説明されるが、それらによって限定されるものではない。
【実施例】
【０１０４】
実施例１
材料と方法
患者の個体群
４４人の癌のない健常な患者、１９人の前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性、および１０人の骨のスキャンによって転移が明らかになった前立腺癌の患者において、血漿ＴＧＦ−β１レベルを測定した。血漿採取前、リンパ節に転移した疾患の患者および骨に転移した疾患の患者のいずれも、ホルモン療法も放射線療法も受けていなかった。癌のない健常な群は、Ｂａｙｌｏｒ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃｅｎｔｅｒの週単位の前立腺癌スクリーニングプログラムに継続的に出た患者の３つの組からなった。彼らは、いかなる癌や慢性疾患の履歴もなく、直腸指診は正常であり、２．０ｎｇ／ｍＬ未満のＰＳＡであり、スクリーニングから最初の４年で前立腺癌が検出される推定確率が１％未満であるＰＳＡ範囲（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）であった。
【０１０５】
また、研究した１２０人の継続的な患者は、テキサス州ヒューストンのＴｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌで臨床上局所的な前立腺癌（臨床病期Ｔ１〜Ｔ２）に対して根治的前立腺切除術を受けたものであった。術前にホルモン療法または放射線療法のいずれかをうけたことがある患者はいなかった。また、なんらかの続発性癌を有する患者もいなかった。この臨床病期は、１９９２ＴＮＭシステムに従って、手術外科医により付与されたものである。この研究における患者の平均年齢は６１．８±７．２歳（中央値６３．０、範囲４０〜７６）であった。血清の前立腺特異抗原は、Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｔａｎｄｅｍ−Ｒアッセイ（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって測定した。
【０１０６】
ＴＧＦ−β１の測定
血清および血漿の試料は、歩行可能な人を対象に、前立腺の経直腸誘導針生検の後、少なくとも４週間で、採取し、典型的な術前一夜の絶食の後の手術予定日の朝、通常行った。血液を、１Ｍクエン酸ナトリウム抗凝血剤０．１ｍＬを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に採取し、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離した。血漿に相当する最上層を、滅菌したトランスファーピペットを用いて静かに移し、直ちに冷凍し、ポリプロピレン低温保存バイアル（Ｎａｌｇｅｎｅ  Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中−８０℃で保存した。測定に先立って、さらに血漿の遠心分離工程を１０，０００×ｇで１０分間、室温において、完全な血小板除去のために行った。血小板の少ない血漿および血清のＴＧＦ−β１レベルを定量的に測定するため、定量的サンドイッチ酵素免疫検定（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標）、ヒトＴＧＦ−β１  Ｅｌｉｓａキット，Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた。それは、ＴＧＦ−β１に特異的であり、ＴＧＦ−β２またはＴＧＦ−β３と交差反応しないものである。組換えＴＧＦ−β１を標準として用いた。すべての試料を二連で行い、その平均をデータ解析に用いた。二つの測定値の差は、アッセイ間の精度係数の偏差がわずかに４．７３±１．８７％であったことから、最小限であった。
【０１０７】
ＴＧＦ−β１採取法
予備研究において、４４人の健常なスクリーニング患者のうち１０人から得た三つの同時採取血液試料から、ＴＧＦ−β１のレベルを測定した。０．０５７ｍＬの１５％Ｋ３ＥＤＴＡ溶液を含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）５ｍＬチューブおよびクエン酸ナトリウムを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて、血漿を分離した。Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｂｒａｎｄ  ＳＳＴ  Ｓｅｒｕｍ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（商標）チューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて、血清を分離した。試料を、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離し、血漿または血清を、静かに別の容器に移して測定まで−８０℃で冷凍した。アッセイに先立ち、さらに遠心分離を１０，０００×ｇで１０分間、室温にて行った。採取法の性質は、調査者には伏せられた。分散分析を用いて、採取法がＴＧＦ−β１の測定レベルに有意に影響したかどうか判断した。
【０１０８】
病理学的検査
前立腺切除術のすべての標本を、一人の病理医（臨床の結果は知らなかった）が病理学的に検査した。手術において骨盤リンパ節を標準的な実施形態で除き、転移性前立腺癌の存在について顕微鏡検査した。根治的前立腺切除術の標本は、ホール・マウント法により加工し、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）に記載されるように病理学的パラメーターを求めた。
【０１０９】
術後の追跡検査
各患者は、術後、直腸指診および血清ＰＳＡの検査を、最初の１年間は３ヶ月ごとに、２年目から５年目までは半年ごとに、それ以降は１年ごとに受けた。骨のスキャン、前立腺シンチグラフィー（Ｐｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ）、またはＰＳＡ倍増時間の計算を含む病期診断を、サルベージ放射線療法またはサルベージホルモン療法を行う前にＰＳＡ進行があった１５人の患者のうち１１人において行った。生化学的進行は、２回以上のＰＳＡ＞０．２ｎｇ／ｍＬの継続的上昇により定義した。進行の日は、値が初めて＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日とした。２人（１．７％）の患者は、根治的前立腺切除術時にリンパ節陽性の疾患を有し、そのため手術は、前立腺除去の前に中止された。これらの患者は、術後の日から失敗として類別された。２人（１．７％）の患者は、陽性の切除縁のため、生化学的進行の前にアジュバント放射線療法を受けた。そのうち１人は、その後、ＰＳＡ再発を経験し、最初の値＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日から進行を有するとして類別された。１２０人の男性のうち１７人が失敗であった。１４人の患者において、ＰＳＡ再発が唯一進行を示すものであった。一方、３人は、進行の生化学的証拠に加えて、臨床的な進行を有した。生化学的進行を有し、かつ進行の日の後、少なくとも３回以上ＰＳＡを測定した患者について、進行後の血清ＰＳＡの倍増時間を次の式を用いて算出した。ＤＴ＝ｌｏｇ（２）×Ｔ／［ｌｏｇ（最後のＰＳＡ）−ｌｏｇ（最初のＰＳＡ）］（式中、ＤＴは血清ＰＳＡの倍増時間であり、Ｔは最初のＰＳＡレベルと最後のＰＳＡレベルとの間の時間であり、最後のＰＳＡは照射前のＰＳＡレベルであり、かつ、最初のＰＳＡは術後の生化学的再発の時点で記録されたＰＳＡのレベルである）。すべての対数変換において自然対数を用いた。進行した患者の８人（５３％）は、Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌにおいて前立腺窩に限定して外部ビーム照射療法を受けた。１５〜２０ＭＶフォトンで照射を行い、カスタマイズしたフィールドサイズの４フィールド法（前から後／後から前および対向する横方向）を用いた。１日あたりフラクションに与えられた総放射線用量は６０〜６６Ｇｙであった。血清ＰＳＡの検出できないレベルが達成され維持されたとき、サルベージ放射線療法への完全な応答とした。もし、照射後の血清ＰＳＡレベルが検出できないレベルまで落ちずにとどまれば、放射線療法は失敗したとみなされた。
【０１１０】
統計分析
分散分析を用いてＴＧＦ−β１レベルの差を評価した。全体試験が有意である場合、多重比較を行った（一元配置分散分析（ｏｎｅ  ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）の後フィッシャーの最小有意差法）。術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布（非対称分布）を有し、従って、対数変換によりモデル化された。臨床病期は、Ｔ１対Ｔ２として評価され、生検グリーソンスコアは、分類２〜６対分類７〜１０として評価された。おそらく離れた位置に疾患を有する患者とおそらく局所のみに疾患を有する患者との間のＴＧＦ−β１レベルの差は、マン−ウィットニー（Ｍａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ）検定によりテストした。スピアマンの順位相関係数を用いて、順序変数および連続変数を比較した。二元の結果因子の多変量解析には、ロジスティック回帰を用いた。カプラン−マイヤー法を用いて生存時間関数を計算し、ログランク統計量（ｌｏｎｇ  ｒａｎｋ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）により差を評価した。多変量生存時間解析を、コックス比例ハザード回帰モデルを用いて行った。本研究における統計的有意性は、Ｐ＜０．０５に設定した。すべての記載されるＰ値は、両側検定のものである。すべての解析は、ＳＰＳＳ統計パッケージ（Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＳＰＳＳバージョン１０．０）を用いて行った。
【０１１１】
結果
採取法のＴＧＦ−β１レベルへの影響
最初に、採取法のＴＧＦ−β１レベルへの影響を調べた。１０人の継続的で健常なスクリーニング患者の同時に採取した複数の血液試料からのＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸塩による血漿、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３  ＥＤＴＡによる血漿、およびＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＢｒａｎｄＳＳＴ（商標）による血清において測定したＴＧＦ−β１レベルの平均は、それぞれ、４．２１±１．１６ｎｇ／ｍＬ、８．３４±２．９４ｎｇ／ｍＬ、および２３．８９±５．３５ｎｇ／ｍＬであった（表３）。血清中の測定されたＴＧＦ−β１レベルは、クエン酸塩による血小板の少ない血漿中の測定されたレベルよりも３倍高く、ＥＤＴＡによる血小板の少ない血漿中の測定されたレベルよりも６倍高かった。分散分析により、ＴＧＦ−β１の採取法間の差は統計的に有意（Ｐ値＜０．００１）であることがわかったが、３つの採取法すべてにより採取された試料中の測定されたＴＧＦ−β１レベルは、互いに高い相関関係を有する（Ｐ値＜０．００１）ことがわかった。しかし、２つの血小板が少ない血漿の方法からの試料において測定されたＴＧＦ−β１のレベルは、最も高い相関関係を有した（ＣＣ＝０．９８７）。Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸ナトリウムチューブからの血小板の少ない血漿を、以下に述べる研究においてＴＧＦ−β１の測定に用いた。
【０１１２】
【表３】
2006524315.tif 000004
2006524315.tif 000005
＊  ＳＤ＝標準偏差
†  Ｐ値（両側検定）は、ＴＧＦ−β１レベルの採取法による差異の評価のため、完全乱塊法の分散分析に基づき算出した。
【０１１３】
‡  異なる採取法間の関係を評価するため、スピアマンの相関係数を用いた。
【０１１４】
臨床的特徴および病理学的特徴
すべての患者は、臨床上局所的な（Ｔ１またはＴ２）疾患であり、術前のＴＧＦ−β１レベルおよびＰＳＡレベルの平均は、それぞれ５．４±２．０ｎｇ／ｍＬ（中央値４．９、範囲１．６６〜１５．１）と９．５±６．３ｎｇ／ｍＬ（中央値８．２、範囲２．１〜４９．０）であった。９人（７．５％）の患者はＰＳＡレベルが４ｎｇ／ｍＬ未満であり、７５人（６２．５％）の患者はＰＳＡレベルが４ｎｇ／ｍＬ以上で１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、そして、３６人（３０．０％）はＰＳＡレベルが１０ｎｇ／ｍＬ以上であった。臨床的特徴および病理学的特徴を表４に列挙している。単変量解析において、治療前のＴＧＦ−β１レベルは、術前のＰＳＡレベルと相関し（Ｐ＝０．０１９）、かつ病理学的病期と相関していた（Ｐ＜０．００１）（表５）。
【０１１５】
【表４】
2006524315.tif 000006
ＥＣＥ＝被膜外への広がり
ＳＶＩ＋＝精嚢浸潤
ＬＮ＋＝リンパ節陽性
ＳＭ＋＝陽性の切除縁
＊  ２人の患者（手術時に骨盤リンパ節の著しい陽性のため前立腺切除術を受けなかった）に対してグリーソン腫瘍分類は得られなかった。
【０１１６】
【表５】
2006524315.tif 000007
＊  ＴＧＦ−β１レベルと臨床病理的パラメーターとの関係を評価するため、スピアマンの相関係数を用いた。
【０１１７】
†  スピアマン相関のＰ値（両側検定）は、ウィルコクソンの（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ’ｓ）順位和により求めた。
【０１１８】
ＴＧＦ−β１および他のパラメーターの関数としての最終的な病理学的病期および進行
術前のＴＧＦ−β１、術前のＰＳＡ、臨床病期、および生検グリーソンスコアを含む単変量ロジスティック回帰分析および多変量ロジスティック回帰分析の両方において、血漿ＴＧＦ−β１レベル（Ｐ＝０．００６、ハザード比０．６１６、９５％ＣＩ  ０．４３６〜０．８６９）および生検グリーソン分類（Ｐ＝０．００６、ハザード比３．６７１、９５％ＣＩ  １．４６１〜９．２１９）は、臓器限局疾患の有意な予測因子であった。全体で、１４％の患者（１２０人中１７人）のみが、癌の進行を有し、術後の追跡検査の中央値は５３．８ヶ月（範囲１．１６〜６３．３）であった。全体のＰＳＡ進行のない生存率は、３年で９０．７±５．３％（９５％ＣＩ）であり、５年で８４．６±６．８％（９５％ＣＩ）であった。ログランク（対数順位）検定を用いて明らかになったことは、血漿ＴＧＦ−β１レベルが中央値（４．９ｎｇ／ｍＬ）より高い患者はＰＳＡ進行の確率が有意に高いことであった（Ｐ＝０．０１０５、図１）。単変量コックス比例ハザード回帰分析において、血漿ＴＧＦ−β１は、ＰＳＡ進行のリスクと関連がある（Ｐ＜０．００１）とともに、生検グリーソンスコアと関連があった（Ｐ＝０．００５、表６）。術前のＴＧＦ−β１、術前のＰＳＡ、臨床病期、および生検グリーソンスコアを含む術前の多変量モデルにおいて、血漿ＴＧＦ−β１レベルおよびグリーソンスコア（Ｐ＜０．００１）はともに、疾患進行の独立予測因子であった。
【０１１９】
【表６】
2006524315.tif 000008
＊  術前のＰＳＡレベルは対数変換した。
【０１２０】
†  生検グリーソンスコアは、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０１２１】
‡  臨床病期はＴ１対Ｔ２として分類した。
【０１２２】
疾患が進行する患者の特徴
進行した１７人の患者のうち２人（１２％）が、根治的前立腺切除術の時点でリンパ節陽性の疾患であった。ＰＳＡの倍増時間が１２ヶ月より長いこと（ｎ＝３、中央値１９．６、範囲１５．８〜２１．６）または局所的サルベージ放射線療法に対する完全な応答（ｎ＝２）に基づき、５人の患者を限局疾患であると推定した。転移の精密検査（陽性の骨のスキャンまたは前立腺シンチグラフィー（ｐｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ）、ｎ＝３）、１０ヶ月未満のＰＳＡ倍増時間（ｎ＝７、中央値６．６、範囲１．９７〜９．８０）、または局所的サルベージ放射線療法に対する不十分な応答（ｎ＝１）に基づき、８人の患者を遠隔転移性の疾患であると推定した。術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、遠隔転移性の疾患と推定された患者（中央値８、範囲６．５〜８．９）において、局所的疾患と推定した患者（中央値５．５、範囲４．３〜８．３、Ｐ＝０．０１９）よりも有意に高かった。
【０１２３】
健常な患者と転移性の患者におけるＴＧＦ−β１
４４人の健常なスクリーニング患者、１９人の前立腺癌が所属リンパ節に転移した患者、および１０人の転移性前立腺癌の患者において、ＴＧＦ−β１レベルの平均値は、それぞれ４．５±１．２ｎｇ／ｍＬ（中央値４．７０、範囲１．０〜６．６）、１４．２４±２．６ｎｇ／ｍＬ（中央値１４．９５、範囲８．０〜１９．２）、および１５．５１±２．４ｎｇ／ｍＬ（中央値１５．２０、範囲１２．４〜１９．３）であった。リンパ節転移および骨転移の患者における血漿ＴＧＦ−β１レベルは、１２０人の前立腺切除の患者および健常者の最初のコホートにおけるレベルよりも有意に高かった（Ｐ値＜０．００１）。しかし、１２０人の前立腺切除の患者の初期コホートにおける血漿ＴＧＦ−β１レベルは、健常者におけるレベルより有意に高いわけではなかった（Ｐ＝０．０５３）。同様に、骨転移の患者における血漿ＴＧＦ−β１レベルは、リンパ節転移の患者におけるレベルと有意に異なるわけではなかった（Ｐ＝０．１０８）。
【０１２４】
ＴＧＦ−β１と前立腺癌の病期および進行
図２は、少なくとも４８ヶ月の追跡検査を受けた前立腺切除の継続的な患者１２０人のうち１０９人におけるＴＧＦ−β１レベルのボックスプロットを示しており、それは、４８ヶ月における進行の状態により、４４人の癌のない健常男性、１９人の前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性、および１０人の前立腺癌が骨に転移した男性に分類されている。、健常な男性、進行がなかった臓器限局疾患の患者、および進行のなかった被膜外への広がりの患者の間で、ＴＧＦ−β１レベルは差がなかった（Ｐ値＞０．２２９）。しかし、その３つの群におけるＴＧＦ−β１レベルは、臓器限局疾患、被膜外への広がり、または精嚢浸潤を有した生化学的進行の患者におけるレベルよりも有意に低く、あるいは、リンパ節転移の患者または骨転移の患者におけるレベルよりも有意に低かった（Ｐ値＜０．００５）。リンパ節転移または骨転移の患者の群は、同様のＴＧＦ−β１レベルを有し（Ｐ＝０．２７１）、それは、他の群のいずれのレベルよりも有意に高かった（Ｐ値＜０．００１）。
【０１２５】
考察
確認されたことは、非転移性の前立腺癌の患者または健常者に比べて、所属および遠隔の転移を有する患者では、ＴＧＦ−β１レベルが大幅に上昇することである。根治的前立腺切除術後の長期追跡検査を受けた継続的患者の大きなコホートにおいて、術前の血小板の少ない血漿のＴＧＦ−β１レベルと生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカー（例えば術前の血清ＰＳＡレベルおよび最終的な病理学的病期）との間には、有意な関連性が認められた。さらに、臨床上局所的な前立腺癌の患者において、術前の血漿ＴＧＦ−β１は、最終的な病理学的病期および疾患進行の強力な独立予測因子であることがわかった。各病理学的病期において、疾患の進行が起こった患者は、進行のない対応する同類の患者よりも有意に高いＴＧＦ−β１レベルを有した。さらに、進行した患者では、術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、遠隔転移性の疾患が推定された患者において、局所のみの疾患が推定された患者よりも有意に高かった。
【０１２６】
根治的前立腺切除術を受けた患者において、血漿ＴＧＦ−β１レベルは、ＰＳＡおよび病理学的病期（生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカー２つ）と強く関連した。しかし、術前のモデルにおいて、ＴＧＦ−β１および生検腫瘍分類（しかしＰＳＡではない）は、それぞれ、進行した病理学的病期の予測因子であった。ＴＧＦ−β１レベルの上昇と局所的に進行する前立腺癌との関連は、すでに報告されている（Ｉｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）。小さな準備的な研究において、Ｉｖａｎｏｖｉｃ他が明らかにしたところによれば、病理学的病期が進行した患者は、限局疾患の患者および健常な対照に対し、それぞれ２倍および４倍、ＴＧＦ−β１レベルを上昇させている。しかし、臓器限局の被膜外の疾患で精嚢への浸潤まで有する患者の大部分（陰性の切除縁によって証明されるようにその局所的腫瘍は完全に取り除かれている）は、長期にわたって生化学的進行がない（Ｍａｒｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｔｅｆｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。一方、すべてではないとしても、リンパ節への浸潤を有するほとんどの患者は、局所的疾患根絶の成功にもかかわらず、遠隔転移を生じさせることにより局所治療が最終的にうまくいかなくなる（Ｅａｓｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｃａｔａｌｏｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）。前立腺癌に対する根治的前立腺切除術を受けている患者において、最終的な病理学的特徴よりむしろ疾患の進行を予測できるバイオマーカーからなるノモグラムは、前立腺癌の患者を扱う上で、臨床上より大きな効果があるはずである。
【０１２７】
循環ＴＧＦ−β１レベルと根治的前立腺切除術後の疾患の進行との間には、強い関連性が認められた。根治的前立腺切除術の標本を加工するため、ホールマウント・ステップセクション法（陽性の切除縁を検出し、病理学的病期を決定するのに最も正確な方法であるといわれている（Ｗｈｅｅｌｅｒ，１９８９））を用いた。本研究において、陽性縁の割合は１３．３％であった（これに対し、臨床上局所的な前立腺癌の患者において他の報告された陽性縁の割合は１６％〜４６％であった（Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｊｏｎｅｓ，１９９０））。陽性の切除縁は、手術において局所的腫瘍が残存することを示唆し得、それは、局所的再発の強い予測因子であることが示されている（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。陽性切除縁のより低い割合（１３．３％）と１０ヶ月未満のＰＳＡ倍増時間に基づく推定遠隔転移性疾患の高い割合（６７％）（Ｐｏｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、局所的サルベージ放射線療法に対する失敗、または陽性の転移を示す精密検査が示唆するところによれば、それらの患者における術前のＴＧＦ−β１レベルと疾患の進行との関係は、治癒できる可能性のある疾患の不完全な切除よりむしろ、手術時に存在する目に見えない転移性疾患の存在との関係による可能性がより高い。おそらく遠隔転移性の疾患でうまくいかなかった患者のＴＧＦ−β１レベルが、局所的にうまくいかなかった患者のレベルより有意に高かったという知見は、ＴＧＦ−β１が手術時の目に見えない転移と関係があるという仮説を支持するものである。この仮説をさらに検討するため、少なくとも４８ヶ月の追跡検査を受けた前立腺切除の継続的な患者１２０人中１０９人において、ＴＧＦ−β１レベルを分析した（患者は４８ヶ月による進行の状態により分類した）。そして、病理学的病期にかかわらず生化学的進行がある患者においてはＴＧＦ−β１レベルが有意に上昇することが明らかになった。かくして、ＴＧＦ−β１は、進行の予測のため、術前のノモグラムに含めることができる（Ｋａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０１２８】
ＴＧＦ−β１と転移との関連をさらに評価するために、骨のスキャンによって立証された転移疾患の患者１０人、前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性１９人、および癌のない健常な男性４４人において、ＴＧＦ−β１レベルを測定した。一つを除くすべての以前の報告と一致して、ＴＧＦ−β１のレベルの劇的な上昇が、遠隔転移の前立腺癌の患者に認められた（Ｉｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｋａｋｅｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。ＴＧＦ−β１レベルと転移のいかなる関係も認めなかった唯一の研究は、血清試料（それは、異常なＴＧＦ−β１レベルをもたらしうる）に基づくものであった（Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。さらに、Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）は、転移の患者のいずれかがアンドロゲン遮断療法を受けていたかどうか明らかにしていない。本研究は、ホルモン療法を含むいかなる治療にも先立って、転移性前立腺癌の患者を評価している。今まで、わずか一つの他のグループが、所属リンパ節転移を有する患者におけるＴＧＦ−β１のレベルを研究していた。本知見と一致して、Ｋａｋｅｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）は、前立腺癌が所属リンパ節に転移した患者においてＴＧＦ−β１のレベルが有意に上昇したことを認めている。しかし、以前の研究（Ｉｖａｎｏｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｋａｋｅｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）とは対照的に、局所的転移または遠隔転移の患者のＴＧＦ−β１レベルと、局所的または進行した前立腺癌の患者もしくは対照のＴＧＦ−β１レベルとの間に、部分的な重なりは認められなかった。転移性疾患の臨床的または病理学的証拠のある患者間でＴＧＦ−β１レベルが完全に分離していることは、臨床上意義のある患者の病理学的層別化をもたらしうる前立腺癌の病期診断マーカーとして、血漿ＴＧＦ−β１を用いることができる可能性を裏付けるものである。逆に、以前の研究と一致して、病理学的に局所的な前立腺癌の患者と癌のない健常者との間で、血漿ＴＧＦ−β１レベルについて、統計的に有意な差は認められなかった。これは、局所的前立腺癌の早期検出用診断ツールとしてのＴＧＦ−β１の価値を限定するものである（Ｋａｋｅｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６；Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｐｅｒｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０１２９】
ＴＧＦ−β１レベルは、血小板の少ない血漿と比べて、血清中で測定したとき３〜６倍高いことがわかった。ＴＧＦ−β１は血小板顆粒に存在し、血小板活性化時に放出される。従って、血清中の高く上昇したＴＧＦ−β１レベルは、前立腺からではなく損傷した血小板から由来する可能性が高く、血清中のＴＧＦ−β１の定量は、前立腺から生じるあるいは前立腺によって誘発されるＴＧＦ−β１の上昇について誤ったものとなる可能性が高い。血小板の完全な除去を確実にするため、Ａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）が勧めるように、本研究では、さらなる遠心分離を行い、ほとんど同じ量の血漿ＴＧＦ−β１が認められた。予想どおり、血清法におけるＴＧＦ−β１値は、血漿法による値と弱く相関した（相関係数０．７９および０．８０）だけであったが、血漿法同士は互いに強く相関した（相関係数０．９９）。ＥＤＴＡによる血漿採取法に比べてクエン酸塩による血漿で得られたＴＧＦ−β１値が２倍低いのは、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）チューブにおいて主に０．１ｍｏｌ／Ｌクエン酸ナトリウム抗凝血剤１．０ｍＬにより最上血漿層を希釈したためであると考えられる。
【０１３０】
この研究は、追跡検査の中央値５３．８ヶ月後の患者のコホートにおいて低率の疾患進行（１４％）により限定され、５年間進行のない確率の推定値が８５％となっている。上述した個体群における低い進行率の原因には、一般大衆において前立腺癌に対する意識が高まり、そして、ＰＳＡに基づくスクリーニング（Ｆａｒｋａｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）が広く利用できるようになったことに伴い、より最近の外科統計で見られる癌の病期および体積はより軽くなっていることが考えられる。他の報告された統計では、根治的前立腺切除術を受けている男性の約４４％〜４７％が病理学的に臓器非限局疾患であった（Ｐａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。これに対し、本コホートにおいては、癌の３４．２％のみが臓器限局でなかった。前立腺癌の病理学的病期は、根治的前立腺切除術後の進行の有力な予測因子であることが知られている（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。それにもかかわらず、臨床上局所的な前立腺癌に対して根治的前立腺切除術を受けている患者を代表して、今回の患者の９２．５％が術前に４ｎｇ／ｍＬより高い術前のＰＳＡレベルを有し、３２．５％がその前立腺切除の病理学的標本中に前立腺外への広がりを有し、そして、５０％が７およびそれ以上の最終的な病理学的グリーソンスコアを有した。上述した研究のコホートにおいて病理学的パラメーターのプロファイルが若干より好ましいのに加え、より低い進行率は、外科手術法の違いにも起因しうる（Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。本統計における陽性切除縁の割合は１３．３％であり、これに対し、他の報告では、臨床上局所的な前立腺癌の患者において陽性切除縁の割合は１６％〜４６％であった（Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｊｏｎｅｓ，１９９０）（従って、局所的疾患による進行の率を減らすことができたはずである。）
まとめると、血漿ＴＧＦ−β１レベルは、前立腺癌が所属リンパ節および骨に転移した男性において顕著に上昇する。転移について臨床的証拠または病理学的証拠がない男性では、術前の血漿ＴＧＦ−β１レベルが、術後の生化学的進行についての最も有力な予測因子である。これは、根治的前立腺切除術時に存在する目に見えない転移性疾患との関連によるものであると考えられる。
【０１３１】
実施例２
材料と方法
患者の個体群
４４人の癌のない健常な患者、１９人の前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性、および１０人の骨のスキャンによって前立腺癌の転移が明らかになった患者において、血漿のＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルを測定した。血漿採取前、リンパ節に転移した疾患の患者および骨に転移した疾患の患者のいずれも、ホルモン療法も放射線療法も受けていなかった。癌のない健常な群は、週単位の前立腺癌スクリーニングプログラムに参加した継続的な患者の３つの組からなった。彼らは、いかなる癌や慢性疾患の履歴もなく、直腸指診は正常であり、２．０ｎｇ／ｍＬ未満のＰＳＡであり、スクリーニングから最初の４年で前立腺癌が検出される推定確率が１％未満であるＰＳＡ範囲（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）であった。
【０１３２】
また、研究した１２０人の継続的な患者は、臨床上局所的な前立腺癌（臨床病期Ｔ１〜Ｔ２）に対して根治的前立腺切除術を受けたものであり、血漿試料が入手可能な者であった。術前にホルモン療法または放射線療法のいずれかをうけたことがある患者はいなかった。また、なんらかの続発性癌を有する患者もいなかった。この臨床病期は、１９９２ＴＮＭシステムに従って、手術外科医により付与されたものである。この研究における患者の平均年齢は６１．８±７．２歳（中央値６３．０、範囲４０〜７６）であった。血清の前立腺特異抗原は、Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｔａｎｄｅｍ−Ｒアッセイ（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって測定した。
【０１３３】
ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の測定
血清および血漿の試料は、歩行可能な人を対象に、前立腺の経直腸誘導針生検の後、少なくとも４週間で、採取し、典型的な術前一夜の絶食の後の手術予定日の朝、通常行った。血液を、１Ｍクエン酸ナトリウム抗凝血剤０．１ｍＬを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に採取し、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離した。血漿に相当する最上層を、滅菌したトランスファーピペットを用いて静かに移し、直ちに冷凍し、ポリプロピレン低温保存バイアル（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中−８０℃で保存した。血清および血漿のＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの定量的測定には、ＤＳＬ−１０−５６００ＡＣＴＩＶＥ（登録商標）ＩＧＦ−Ｉ  ＥｌｉｓａキットおよびＤＳＬ−１０−６６００ＡＣＴＩＶＥ（登録商標）ＩＧＦ−ＢＰ−３  Ｅｌｉｓａキット（ＤＳＬ，Ｗｅｂｓｔｅｒ，ＴＸ）をそれぞれ用いた。血清および血漿のＩＧＦ  ＢＰ−２レベルの定量的測定には、ＤＳＬ−７１００  ＩＧＦ  ＢＰ−２ラジオイムノアッセイキット（ＤＳＬ）を用いた。すべての試料を二連で行い、その平均をデータ解析に用いた。二つの測定値の差は、アッセイ間の精度係数の偏差がわずかに４．７３±１．８７％（ＩＧＦ−Ｉに対し）、６．９５±３．８６％（ＩＧＦ  ＢＰ−２に対し）、８．７８±４．０７％（ＩＧＦ  ＢＰ−３に対し）であったことから、最小限であった。
【０１３４】
ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の採取法
予備研究において、４４人の健常なスクリーニング患者のうち１０人から得た三つの同時採取血液試料において、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルを測定した。０．０５７ｍＬの１５％Ｋ３ＥＤＴＡ溶液を含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）５ｍＬチューブおよびクエン酸ナトリウムを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて、血漿を分離した。Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｂｒａｎｄ  ＳＳＴ  Ｓｅｒｕｍ  Ｓｅｐａｒａｔｏｒ（商標）チューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）を用いて、血清を分離した。試料を、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離し、血漿または血清を、静かに別の容器に移して測定まで−８０℃で冷凍した。採取法の性質は、調査者には伏せられた。分散分析を用いて、採取法がＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の測定レベルに有意に影響したかどうか判断した。
【０１３５】
病理学的検査
前立腺切除術のすべての標本を、一人の病理医（臨床の結果は知らなかった）が病理学的に検査した。手術において骨盤リンパ節を標準的な実施形態で除き、転移性前立腺癌の存在について顕微鏡検査した。根治的前立腺切除術の標本は、ホール・マウント法により加工し、前述のように（Ｗｈｅｅｌｅｒ，１９９４）病理学的パラメーターを評価した。
【０１３６】
術後の追跡検査
各患者は、術後、直腸指診および血清ＰＳＡの検査を、最初の１年間は３ヶ月ごとに、２年目から５年目までは半年ごとに、それ以降は１年ごとに受けるように予定された。骨のスキャン、前立腺シンチグラフィー（Ｐｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ）および／またはＰＳＡ倍増時間の計算を含む病期診断を、サルベージ放射線療法またはサルベージホルモン療法を行う前にＰＳＡ進行があった１５人の患者のうち１１人において行った。生化学的進行は、２回以上のＰＳＡ＞０．２ｎｇ／ｍＬの継続的上昇により定義した。進行の日は、値が初めて＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日とした。２人（１．７％）の患者は、根治的前立腺切除術時にリンパ節陽性の疾患を有し、そのため手術は、前立腺除去の前に中止された。これらの患者は、術後の日から失敗として類別された。２人（１．７％）の患者は、陽性の切除縁のため、生化学的進行の前にアジュバント放射線療法を受けた。そのうち１人は、その後、ＰＳＡ再発を経験し、最初の値＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日から進行を有するとして類別された一方、もう１人は、最後の追跡検査の日に打ち切られた。１２０人の男性のうち１７人が失敗であった。１４人の患者において、ＰＳＡ再発が唯一進行を示すものであった。一方、３人は、進行の生化学的証拠に加えて、臨床的な進行を有した。
【０１３７】
統計分析
分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの差を評価した。全体試験が有意である場合、多重比較を行った（一元配置ＡＮＯＶＡの後フィッシャーの最小有意差法）。スピアマンの順位相関係数を用いて、順序変数および連続変数を比較した。二元の結果因子の多変量解析には、ロジスティック回帰を用いた。カプラン−マイヤー法を用いて生存時間関数を計算し、ログランク統計量（ｌｏｎｇ  ｒａｎｋ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）により差を評価した。多変量生存時間解析を、コックス比例ハザード回帰モデルを用いて行った。術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布（非対称分布）を有し、従って、対数変換によりモデル化された。臨床病期は、Ｔ１対Ｔ２として評価され、生検グリーソンスコアは、分類２〜６対分類７〜１０として評価された。本研究における統計的有意性は、Ｐ＜０．０５に設定した。すべての記載されるＰ値は、両側検定のものである。すべての解析は、ＳＰＳＳ統計パッケージ（Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＳＰＳＳバージョン１０．０）を用いて行った。
【０１３８】
結果
採取法のＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルへの影響
最初に、採取法のＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルへの影響を調べた。１０人の継続的で健常なスクリーニング患者の同時に採取した複数の血液試料からのＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸塩による血漿、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３  ＥＤＴＡによる血漿、およびＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＢｒａｎｄＳＳＴ（商標）による血清において測定したＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの平均を、表７に示す。クエン酸塩による血漿において測定したＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルは、ＥＤＴＡによる血漿において測定されたものよりそれぞれ２６％および２８％低く、血清において測定したものよりそれぞれ３７％および３９％低かった。分散分析により、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の採取法間の差は統計的に有意（Ｐ値＜０．００１）であることがわかったが、３つの採取法すべてにより採取された試料中の測定されたＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルは、互いに高い相関関係を有する（Ｐ値＜０．００１）ことがわかった。ＩＧＦ−Ｉに関する以前の結果（Ｓｈａｒｉａｔ，２０００）と同様、異なる採取法において測定されたＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の絶対レベルにおいて統計的に有意な差が認められた一方、３つのすべての採取法は互いに高い相関を示した。Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸ナトリウムチューブからの血漿を、以下に述べる研究においてＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の測定に用いた。
【０１３９】
【表７】
2006524315.tif 000009
＊  ＳＤ＝標準偏差
†  Ｐ値（両側検定）は、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの採取法による差異の評価のため、完全乱塊法の分散分析に基づき算出した。
【０１４０】
‡  異なる採取法間の関係を評価するため、スピアマンの相関係数を用いた。
【０１４１】
臨床的特徴および病理学的特徴
すべての患者は、臨床上局所的な（Ｔ１またはＴ２）疾患であり、術前のＴＧＦ−β１レベルおよびＰＳＡレベルの平均は、それぞれ５．４±２．０ｎｇ／ｍＬ（中央値４．９、範囲１．６６〜１５．１）と９．５±６．３ｎｇ／ｍＬ（中央値８．２、範囲２．１〜４９．０）であった。９人（７．５％）の患者はＰＳＡレベルが４ｎｇ／ｍＬ未満であり、７５人（６２．５％）の患者はＰＳＡレベルが４ｎｇ／ｍＬ以上で１０ｎｇ／ｍＬ未満であり、そして、３６人（３０．０％）はＰＳＡレベルが１０ｎｇ／ｍＬ以上であった。臨床的特徴および病理学的特徴を表８に列挙している。単変量解析（表９）において、治療前のＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは病理学的病期と相関し（Ｐ＜０．００１）、また分類と相関した（Ｐ＝０．０２５）。そして、ＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルは、ＩＧＦ−１のレベルと相関した（Ｐ＜０．００１）。
【０１４２】
【表８】
2006524315.tif 000010
ＥＣＥ＝被膜外への広がり
ＳＶＩ＋＝精嚢浸潤
ＬＮ＋＝リンパ節陽性
ＳＭ＋＝陽性の切除縁
＊  ２人の患者（手術時に骨盤リンパ節の著しい陽性のため前立腺切除術を受けなかった）に対してグリーソン腫瘍分類は得られなかった。
【０１４３】
【表９】
2006524315.tif 000011
＊  スピアマンの相関係数を用いてＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルとＩＧＦ−Ｉレベルおよび臨床病理学的パラメーターとの関係を評価した。
【０１４４】
ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３および他のパラメーターの関数としての最終的な病理学的病期および進行
多変量ロジスティック回帰分析において、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベル（Ｐ＝０．００１）、術前の血漿ＰＳＡレベル（Ｐ＝０．０３４）および生検グリーソン分類（Ｐ＝０．００５）は、臓器限局疾患の有意な予測因子であった。全体で、１４％の患者（１２０人中１７人）のみが、癌の進行を有し、術後の追跡検査の中央値は５３．８ヶ月（範囲１．１６〜６３．３）であった。全体のＰＳＡ進行のない生存率は、３年で９０．７±５．３％（９５％ＣＩ）であり、５年で８４．６±６．８％（９５％ＣＩ）であった。ログランク（対数順位）検定を用いて明らかになったことは、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルが中央値（４３７．４ｎｇ／ｍＬ）より低い患者はＰＳＡ進行の確率が有意に高くなることであった（Ｐ＝０．０３１０、図３）。しかし、ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの中央値（３２３９ｎｇ／ｍＬ、Ｐ＝０．０５８７）によって分けられた患者間でＰＳＡ進行のない生存率（図４）に有意な差はなかった。単変量コックス比例ハザード回帰分析（表１０）において、血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２は、ＰＳＡ進行のリスクと関連がある（Ｐ＝０．０１５）とともに、生検グリーソンスコアと関連があった（Ｐ＝０．００５）。術前のＩＧＦ  ＢＰ−２、術前のＰＳＡ、臨床病期、および生検グリーソンスコアを含む術前の多変量モデルにおいて、血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルおよび生検グリーソンスコアはともに、疾患進行の独立予測因子であった（それぞれＰ＝０．０４９、Ｐ＝０．０３５）。ＩＧＦ  ＢＰ−２をＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−３またはそれら両方に置換えた代わりのモデルにおいては、形成グリーソンスコアが、ＰＳＡ進行の唯一の独立予測因子であった（Ｐ値≦０．０９）。しかし、ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルをＩＧＦ  ＢＰ−２レベルに対して調整した場合、ＩＧＦ  ＢＰ−３は疾患進行の独立予測因子となり（Ｐ値≦０．０４０）、そして、ＩＧＦ  ＢＰ−２の前立腺進行のリスクとの関連は強まった（Ｐ値≦０．０３９）。ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２、および  ＩＧＦ  ＢＰ−３の３つすべてが互いに対して調整された場合、ＩＧＦ  ＢＰ−２、ＩＧＦ  ＢＰ−３、および生検グリーソンスコアが、疾患進行の独立予測因子であった（それぞれＰ＝０．０３１、Ｐ＝０．０３５、およびＰ＝０．０３６、表１０）。
【０１４５】
【表１０】
2006524315.tif 000012
＊  術前のＰＳＡレベルは対数変換した。
【０１４６】
†  生検グリーソンスコアは、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０１４７】
‡  臨床病期はＴ１対Ｔ２として分類した。
【０１４８】
疾患が進行する患者の特徴
進行した１７人の根治的前立腺切除術の患者のうち２人（１２％）が、根治的前立腺切除術の時点でリンパ節陽性の疾患であった。ＰＳＡの倍増時間が１２ヶ月より長いこと（ｎ＝３、中央値１９．６、範囲１５．８〜２１．６）または局所的サルベージ放射線療法に対する完全な応答を達成したこと（ｎ＝２）に基づき、５人の患者を限局疾患であると推定した。転移の精密検査（陽性の骨のスキャンまたは前立腺シンチグラフィー（ｐｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ）、ｎ＝３）、１０ヶ月未満のＰＳＡ倍増時間（ｎ＝７、中央値６．６、範囲１．９７〜９．８０）、または局所的放射線療法に対する不十分な応答（ｎ＝４）に基づき、８人の患者を遠隔転移性の疾患であると推定した。術前の血漿のＩＧＦ−Ｉレベル、ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルおよびＩＧＦ  ＢＰ−３レベルは、遠隔転移性の疾患と推定された患者と限局疾患の患者とで有意に異なることはなかった（それぞれＰ＝０．８９８、Ｐ＝０．６００およびＰ＝０．０５９）。
【０１４９】
健常な患者と転移性の患者におけるＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３
前立腺癌が所属リンパ節に転移した１９人の患者の血漿ＩＧＦ−Ｉレベル（中央値１５６ｎｇ／ｍＬ、範囲１００〜２８１）、前立腺癌が骨に転移した１０人の患者の血漿ＩＧＦ−Ｉレベル（中央値１５３ｎｇ／ｍＬ、範囲２９〜３６０）、前立腺切除の患者１２０人のコホートにおける血漿ＩＧＦ−Ｉレベル（中央値１５１ｎｇ／ｍＬ、範囲４２〜４５１）および健常なスクリーニング患者４４人における血漿ＩＧＦ−Ｉレベル（中央値１７１ｎｇ／ｍＬ、範囲６２〜３４６）は、互いに有意差がなかった（Ｐ＝０．４１３）。しかし、前立腺切除の患者の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベル（中央値４３７ｎｇ／ｍＬ、範囲２０９〜８７１）、リンパ節転移の患者の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベル（中央値４３７ｎｇ／ｍＬ、範囲２９９〜５３２）、および骨転移の患者の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベル（中央値４０７ｎｇ／ｍＬ、範囲２４１〜５９２）は、健常者のレベル（中央値３４０ｎｇ／ｍＬ、範囲２３７〜４９５、Ｐ値＜０．００６）より有意に高かった。臨床上局所的な患者、リンパ節転移の患者、および骨転移の患者における血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、互いに有意差がなかった（Ｐ値＞０．４１３）。リンパ節転移の患者の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベル（中央値２６８９ｎｇ／ｍＬ、範囲１６１３〜３６５５）および骨転移の患者の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベル（中央値２５５５ｎｇ／ｍＬ、範囲１５４９〜３２１３）は、前立腺切除の患者１２０人のコホートにおけるレベル（中央値３２１７ｎｇ／ｍＬ、範囲１２４４〜５４５２）および健常者のレベル（中央値３３４４ｎｇ／ｍＬ、範囲１７６１〜５０２０、Ｐ値＜０．０３１）より有意に低かった。しかし、前立腺切除の患者における血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルは、健常者のレベルに対して有意差がなかった（Ｐ＝０．５７５）。
【０１５０】
考察
ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、健常者のレベルに比べ、非転移性前立腺癌の患者および転移性前立腺癌の患者において上昇した。術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルと、生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカー（例えば、臨床上局所的な前立腺癌の患者における最終的な病理学的病期および分類）との間には、有意な関連性が認められた。さらに、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２は、根治的前立腺切除術後に長期の追跡検査をうけた継続的患者の大きなコホートにおいて、最終的な病理学的病期および疾患進行の強力な独立予測因子であった。しかし、進行した患者において、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、遠隔転移性と推定された患者と、局所のみの疾患と推定された患者との間で、有意差はなかった。血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルは、前立腺癌が所属リンパ節に転移した患者および前立腺癌が骨に転移した患者において、非転移性前立腺癌の患者および健常者におけるレベルよりも有意に低かった。術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルと生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカーまたは疾患進行との間には、有意な関連性が認められなかった一方、ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルに対して調整した場合、血漿ＩＧＦ  ＢＰ−３は、独立して前立腺癌の進行と関連性があった。
【０１５１】
循環ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、循環ＩＧＦ−Ｉレベルと相関していない。というのも、９０％以上の循環ＩＧＦ−Ｉ分子は、ＩＧＦ  ＢＰ−３および酸不安定性サブユニットと呼ばれる糖タンパク質と複合しているからである。循環ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ  ＢＰ−３のほとんどは肝臓によって生産され、成長ホルモンがＩＧＦ−ＩとＩＧＦ  ＢＰ−３の両方の生産を刺激する（Ｊｏｎｅｓ，１９９５）。ＩＧＦ−ＩとＩＧＦ  ＢＰ−３両方の肝臓による放出がこの成長ホルモンによって調節されるということによって、認められた有意性は高いが中位の相関（ｒ＝０．６１）を部分的に説明することができる。他の研究もほとんど同じ相関係数を見出している。
【０１５２】
ＰＳＡは、ＩＧＦ  ＢＰ−３プロテアーゼであり、ＩＧＦ  ＢＰ−３の存在下、ＩＧＦ類とともにコマイトジェンとして作用することができるものである（Ｃｏｈｅｎ，１９９２）。ＰＳＡによるＩＧＦ  ＢＰ−３タンパク質分解（Ｃｏｈｅｎ，１９９４）およびカテプシンＤによるＩＧＦ  ＢＰ−３タンパク質分解（Ｎｕｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）は、全身作用よりもむしろ局所作用を示す可能性が高く、前立腺または転移性の病巣内で局所的進行または転移増殖をもたらすものである。血清ＰＳＡレベルの上昇は、ＩＧＦ  ＢＰ−３の減少と相関している（Ｋａｎｅｔｙ，１９９３）。
【０１５３】
所属リンパ節転移の患者におけるＩＧＦ−Ｉレベルの測定値と同様、癌のない対照の数を倍に増やした追跡調査において、ＩＧＦ−ＩおよびＢＰＨは増加する。循環ＩＧＦ−Ｉのレベルと、生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカー、疾患の進行または転移との間には、以前、関連性が認められなかった。種々の独立した研究において、ＩＧＦ−Ｉのレベルは、前立腺癌の患者と健常男性との間で差が認められなかった。さらに、ＰＳＡに基づくスクリーニング陽性個体群においてＩＧＦ−Ｉレベルを調べた最近の研究も、ＩＧＦ−Ｉが前立腺癌のスクリーニングにとって有用なマーカーではないことを認めており、その結論によれば、循環ＩＧＦ−Ｉの高いレベルは、ＢＰＨおよび前立腺肥大に関連する可能性がより高く（Ｆｉｎｎｅ，２０００）、しかし、前立腺癌のリスク（初期の無症状疾患）に関連する可能性がある一方、癌の生物学および予後（ＩＧＦ類または他の成長因子の細胞生理機能の破壊をもたらす可能性が高い）には関連しないようである。
【０１５４】
前立腺癌の発生率は、先端巨大症の患者においては増加しない一方、ＢＰＨまたは前立腺肥大の発生率は増加する（Ｃｏａｌｏ，１９９８）。成長ホルモンが上昇した患者で治療がうまくいったものは正常な前立腺体積を有し、成長ホルモン不全の対象は前立腺の体積が減少した。さらに、ＩＧＦ−Ｉは、インビトロで、ＢＰＨ由来ストロマ細胞の増殖を刺激することが認められた（Ｓｕｔｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。
【０１５５】
Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸塩による血漿において測定したＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３のレベルは、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３ＥＤＴＡによる血漿において測定されたものよりそれぞれ２６％および２８％低く、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＢｒａｎｄＳＳＴ血清において測定したものよりそれぞれ３７％および３９％低かった。各アッセイについての３つの採取法間で、測定された相対的差に一貫性があることと、以前に認められたＩＧＦＦ−Ｉについての２７％と４２％の相対的差（Ｓｈａｒｉａｔ，２０００）に似ていることから支持されることは、用いた測定法は一貫性があり、３つのマーカーの相対変化のレベルは比較ができるということである。さらにこのことが支持するように、Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）クエン酸塩による血漿で得られたＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の値がＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）Ｋ３ＥＤＴＡによる血漿の採取法に比べて低いのは、上の血漿層が主に０．１Ｍクエン酸ナトリウム抗凝血剤１．０ｍＬによって希釈されたためである。しかし、異なる採取法を用いて血清および血漿で測定されたＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３の絶対レベルが統計的に有意に異なるにもかかわらず、３つのすべては、互いに高く相関し、従って、研究を通じて同じ採取法を用いるかぎり、同じように有効である。
【０１５６】
ＩＧＦ軸の複雑な性質のため、この系の生物学的活性を十分に評価するには、複数の因子を同時に測定する必要があるかもしれない。他のＩＧＦ  ＢＰ類を測定すれば、前立腺癌におけるＩＧＦ類の生物学的関連性が高まる可能性がある。他のＩＧＦ  ＢＰ類、例えば、ＩＧＦ  ＢＰ−４およびＩＧＦ  ＢＰ−５は、前立腺の標本において、腫瘍の分類と関連性があり、患者において腫瘍の病期および血清ＰＳＡのレベルと関連性がある。同様に重要なＩＧＦ−Ｉ受容体は、ＩＧＦ類の有糸分裂促進作用のほとんどを媒介し、ＩＧＦ−Ｉ受容体の実験的な阻害は、前立腺癌の接着、浸潤および転移の抑制をもたらした（Ｋａｐｌａｎ，１９９９）。最近の研究が示唆するところによれば、ＩＧＦ類の循環レベルは、組織の生理活性を決定する因子ではなく、むしろ、組織内の自己分泌（オートクリン）またはパラ分泌（パラクリン）発現と平行して変化するようである（Ｙａｋａｒ，１９９９）。肝臓のＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ  ＢＰ−３が、これら２つのＩＧＦの循環レベルを主に決めているため、これらの分子の全身レベルの変化は、他の組織（例えば前立腺）で生じる重要な自己分泌およびパラ分泌の生産を反映できない可能性がある。
【０１５７】
まとめると、血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２のレベルは、前立腺癌の男性において顕著に上昇する。転移について臨床的または病理学的証拠のない男性において、術前の血漿ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルは、術後の最終的な病理学的病期および生化学的進行の有力な予測因子である。しかし、この関連性は、根治的前立腺切除術時に存在する目に見えない転移性疾患との関連によるものではないようである。一方、術前の循環ＩＧＦ  ＢＰ−３およびＩＧＦ−１のレベルは、生物学的に攻撃性の前立腺癌の確立したマーカーまたはＰＳＡ進行のない生存と独立して関連性があるわけではない。より攻撃性の前立腺癌のマーカーと関連性がないこと、あるいは、前立腺癌の進行と関連性がないことにより、ＩＧＦ−ＩおよびＩＧＦ  ＢＰ−３の前立腺癌に対する腫瘍マーカーとしての臨床的有用性は限られたものとなりうる。
【０１５８】
実施例３
同じような解析をＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲについて行った（ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲについてそれぞれ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅキット、カタログ番号ＤＲ６０５０およびＤＲ６００を用いた）。そして、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの術前の血漿レベルが、根治的前立腺切除術を受けた１２０人の患者において臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターと関連することがわかった（図６〜９および表１１〜１２）。骨転移の患者における血漿ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、健常者、前立腺切除の患者、またはリンパ節転移の患者におけるレベルよりも有意に高かった（Ｐ値＜０．００１）。Ｐａｒｔｉｎノモグラム変数に加えてＩＬ−６またはＩＬ６ｓＲを含む術前のモデルにおいて、術前の血漿ＩＬ−６、ＩＬ６ｓＲ、および生検グリーソンスコアは、臓器限局疾患（Ｐ値≦０．０１）およびＰＳＡ進行（Ｐ値≦０．０２８）の独立予測因子であった。ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの両方を含む他のモデルでは、術前の血漿ＩＬ６ｓＲだけが、依然としてＰＳＡ進行の独立予測因子であった（Ｐ＝０．０３８）。かくして、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、前立腺癌が骨に転移した男性において上昇する。臨床上局所的な前立腺癌の患者において、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの術前の血漿レベルは、より攻撃的な前立腺癌のマーカーと関連があり、手術後の生化学的進行の予測因子である。
【０１５９】
【表１１】
2006524315.tif 000013
＊  術前のＰＳＡレベルは対数変換した。
【０１６０】
†  生検グリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０１６１】
‡  臨床病期はＴ１対Ｔ２として分類した。
【０１６２】
【表１２】
2006524315.tif 000014
＊  術前のＰＳＡレベルは対数変換した。
【０１６３】
†  生検グリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０１６４】
‡  臨床病期はＴ１対Ｔ２として分類した。
【０１６５】
実施例４
対象と方法
患者の個体群
すべての研究は、Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅにおけるｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｕｂｊｅｃｔｓのためのｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄの許可および指導管理の下に着手された。Ｓｃｏｔｔ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙの外科医による根治的前立腺切除術によってその臨床上局所的な前立腺癌（ｃＴ１ｃ〜３ａ、ＮＸ、Ｍ０）を治療する目的でＴｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに収容された５１１人すべての患者が、この解析の可能な候補者であった。臨床病期は、１９９２ＴＮＭシステムに従って、手術外科医により付与された。同意を得た後、術前および術後の血漿試料を、これらの男性のうち３５７人について得た。最初にホルモン療法を受けた３５人の男性、限定的な放射線療法を受けた１１人、および術前に寒冷療法を受けた２人は、この解析から除いた。疾患の追跡情報が入手できなかった７人の男性も除いた。解析に残ったのは３０２人の男性であった。この研究における患者の平均年齢は６１．８±７．３歳（中央値６２．６、範囲４０〜８０）であった。血清の前立腺特異抗原は、Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｔａｎｄｅｍ−Ｒアッセイ（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって測定した。
【０１６６】
ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの測定
術前の血清および血漿の試料は、前立腺の経直腸誘導針生検の後、少なくとも４週間で、典型的には、術前一夜の絶食の後の手術日の朝、採取した。術後の血漿試料は、手術後６〜８週間の間に採取した。試料の採取と測定は、以前にＳｈａｒｉａｔ他（２００１ａ）およびＳｈａｒｉａｔ他（２００１ｂ）に記載されるとおりとした。簡単に説明すると、血液を、１Ｍクエン酸ナトリウム０．１ｍＬを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に採取し、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離した。血漿に相当する最上層を、滅菌したトランスファーピペットを用いて静かに移し、直ちに冷凍し、ポリプロピレン低温保存バイアル（ＮａｌｇｅＮｕｎｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中−８０℃で保存した。ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルを定量的に測定するため、定量的免疫検定法（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた。以前より明らかなところによれば、ＴＧＦ−β１レベルは、血漿において測定するときよりも血清において測定したとき３〜６倍高い（Ｓｈａｒｉａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１ｂ）。ＴＧＦ−β１は血小板顆粒に存在し、血小板活性化時に放出される。従って、血清中のより高いレベルのＴＧＦ−β１は、損傷した血小板からの放出に少なくとも一部起因する可能性が高く、これは、血小板以外に由来するＴＧＦ−β１の定量を不正確にする。従って、前の研究と同様、ＴＧＦ−β１について、測定の前に、血小板の完全な除去のため、血漿をさらに遠心分離する工程を１０，０００×ｇで室温において１０分間行った。すべての試料を２連で行い、平均を用いた。２つの測定値間の差は、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ−６ｓＲについて最小限であった（アッセイ間精度係数の偏差はそれぞれ５．４３±２．０１％、４．３７±２．３９％、および４．９８±３．２４％）。
【０１６７】
病理学的検査
前立腺切除術のすべての標本を、一人の病理医（臨床の結果は知らなかった）が病理学的に検査した。根治的前立腺切除術の標本は、ホール・マウント法により加工し、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）に記載される実施形態で、病理学的パラメーターを求めた。３０２人の前立腺切除の患者のうち２５５人についてホール・マウント切片からコンピュータ処理による面積測定を行うことにより、総腫瘍体積を算出した（Ｇｒｅｅｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。
【０１６８】
術後の追跡検査
患者は、通常、術後、直腸指診および血清ＰＳＡの検査を、最初の１年間は３ヶ月ごとに、２年目から５年目までは半年ごとに、それ以降は１年ごとに受けた。生化学的進行は、２回以上のＰＳＡ＞０．２ｎｇ／ｍＬの継続的上昇により定義した。生化学的進行の日は、値が初めて＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日とした。骨盤リンパ節の切開をすべての男性において行った。手術時に凍結切片分析によって節転移を有することがわかった患者６人中２人は、根治的前立腺切除術を中止した。これらの男性は解析から除外されている。所属リンパ節に転移した患者のすべては、手術後の日から進行のある患者として類別された。６人（２％）の患者は、陽性の切除縁のため、生化学的進行の前にアジュバント放射線療法を受けた。そのうち３人は、その後、ＰＳＡ再発を経験し、最初の値＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日から疾患の進行を有するとみなされた。一方、残りの３人は、最後の追跡検査の日に打ち切られた。根治的前立腺切除術を受けた３０２人の患者のうち、４３人に疾患の進行があった。骨のスキャン、Ｐｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ（登録商標）スキャン、および／またはＰＳＡ倍増時間の計算を含む病期診断を、サルベージ放射線療法またはサルベージホルモン療法を行う前に生化学的進行があった３７人の患者のうち３５人において行った。生化学的進行を有し、かつ進行の日の後、少なくとも３回ＰＳＡ測定を行った患者について、進行後の血清ＰＳＡの倍増時間を次の式を用いて算出した。ＤＴ＝ｌｏｇ（２）×Ｔ／［ｌｏｇ（最後のＰＳＡ）−ｌｏｇ（最初のＰＳＡ）（Ｓｃｈｍｉｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）（式中、ＤＴは血清ＰＳＡの倍増時間であり、Ｔは最初のＰＳＡレベルと最後のＰＳＡレベルとの間の時間であり、最後のＰＳＡは照射前のＰＳＡレベルであり、かつ、最初のＰＳＡは術後の生化学的進行の時点で記録されたＰＳＡのレベルである）。すべての対数変換において自然対数を用いた。生化学的進行のあった患者３７人中１９人（５１％）は、Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌにおいて前立腺窩に限定して外部ビーム照射療法を受けた。１５〜２０ＭＶフォトンで照射を行い、カスタマイズしたフィールドサイズの４フィールド法を用いた。１日あたりフラクションに与えられた総放射線用量は６０〜６６Ｇｙであった。血清ＰＳＡの検出できないレベルが達成され維持されたとき、サルベージ放射線療法への完全な応答とした。もし、照射後の血清ＰＳＡレベルが検出できないレベルまで落ちずにとどまれば、放射線療法は失敗したとみなされた（Ｋａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｌｅｖｅｎｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．２００１）。
【０１６９】
統計分析
臨床的特徴および病理学的特徴によるＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲレベルの差は、マン・ウィットニー（Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ−検定によりテストした。スピアマンの順位相関係数を用いて、順序変数および連続変数を比較した。二元の結果因子の多変量解析には、ロジスティック回帰を用いた。多変量生存時間解析を、コックス比例ハザード回帰モデルを用いて行った。術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布（非対称分布）を有し、従って、対数変換によりモデル化された。臨床病期は、Ｔ１対Ｔ２対Ｔ３ａとして評価された。生検および根治的前立腺切除術のグリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として評価された。術前と術後の試料によるＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲレベルの差は、ウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）の符号付き順位検定により検定した。本研究における統計的有意性は、Ｐ＜０．０５に設定した。すべての記載されるＰ値は、両側検定のものである。すべての解析は、ＳＰＳＳ統計パッケージ（Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＳＰＳＳバージョン１０．０）を用いて行った。
【０１７０】
結果
術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルと臨床的特徴および病理学的特徴との関連性
前立腺切除の継続的患者３０２人の臨床的特徴および病理学的特徴と、術前および術後の血漿ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲレベルとの関連性を表１３に示す。
【０１７１】
【表１３】
2006524315.tif 000015
2006524315.tif 000016
ＲＰ＝根治的前立腺切除術
ＣＣ＝相関係数
＊  マン・ウィットニーのＵ検定
†  ＲＰの被膜外への広がりの状態、ＲＰの精嚢への浸潤の状態、ＲＰの切除縁の状態、およびＲＰのグリーソン合計は、２人の患者（手術時に陽性の骨盤リンパ節であったため、前立腺切除術を受けなかった）について、得られなかった。
【０１７２】
‡  ＤＮＡ倍数性は４８人の患者について得られなかった。
【０１７３】
§  スピアマンの相関係数
||  根治的前立腺切除術の腫瘍体積は４７人の患者について得られなかった。
【０１７４】
術前および術後の血漿ＴＧＦ−β１レベルは、前立腺外への広がりを有する患者において上昇し（それぞれＰ＝０．０２８とＰ＜０．００１）、精嚢への浸潤の患者において上昇し（それぞれＰ＝０．０２９とＰ＝０．０２３）、そして所属リンパ節転移の患者において上昇した（それぞれＰ＜０．００１とＰ＜０．００１）。術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、前立腺切除術のグリーソン合計≧７の患者において上昇し（それぞれＰ＝０．０１４とＰ＝０．０３４）、所属リンパ節転移の患者において上昇した（それぞれＰ＝０．００５とＰ＜０．００１）。術前のＰＳＡの平均は８．９±７．０ｎｇ／ｍＬ（中央値７．１、範囲０．２〜５９．９）であった。治療前のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、術前のＰＳＡのレベルと正の相関関係にあった（それぞれＰ＝０．００４、Ｐ＜０．００１、Ｐ＝０．０１１）。治療前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルはまた、前立腺腫瘍体積と正の相関関係にあった（それぞれＰ＝０．０１８、Ｐ＝０．０１６）。術後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、臨床的パラメーターまたは病理学的パラメーターのいずれとも関連性がなかった。
【０１７５】
単変量ロジスティック回帰分析において、術前のＴＧＦ−β１レベルは、臓器限局疾患を予測した（Ｐ＝０．０１７、ハザード比０．９０２、９５％ＣＩ０．８２８〜０．９８２）が、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲは予測しなかった（それぞれＰ＝０．１１８、Ｐ＝０．０７９）。術前の多変量モデルにおいて、術前のＰＳＡの効果（Ｐ＝０．０８７）、術前のＴＧＦ−β１の効果（Ｐ＝０．１１２）、術前のＩＬ−６の効果（Ｐ＝０．６３９）、および術前のＩＬ６ｓＲの効果（Ｐ＝０．７２５）に対して調整した場合、臨床病期（Ｐ＝０．０３５）および生検グリーソン合計（Ｐ＜０．００１）は、臓器限局疾患の単独の予測因子であった。
【０１７６】
術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルと前立腺癌の進行との関連性
全体で、１４％の患者（３０２人中４３人）のみが、癌の進行を有し、術後の追跡検査の中央値は５０．７ヶ月（範囲１．２〜７３．５）であった。全体のＰＳＡ進行のない生存率は、３年で８８．８±１．５％（標準誤差、ＳＥ）であり、５年で８５．１±１．９％（ＳＥ）であった。単変量コックス比例ハザード回帰分析（表１４）において、術前および術後のＴＧＦ−β１は癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、術前のＩＬ−６は癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、術前のＩＬ６ｓＲは癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、術前のＰＳＡは癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、生検および前立腺切除術のグリーソン合計は癌の進行と関連があり（それぞれＰ＜０．００１とＰ＜０．００１）、前立腺外への広がりは癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、精嚢への浸潤は癌の進行と関連があり（Ｐ＜０．００１）、そして、切除縁の状態は癌の進行と関連があった（Ｐ＜０．００１）。しかし、術後のＩＬ−６は癌の進行と関連がなく（Ｐ＝０．１６２）、術後のＩＬ６ｓＲは癌の進行と関連がなく（Ｐ＝０．０７９）、そして、臨床病期は癌の進行と関連がなかった（Ｐ＝０．１０３）。
【０１７７】
【表１４】
2006524315.tif 000017
ＲＰ＝根治的前立腺切除術
＊  術前のＰＳＡレベルは傾斜分布（非対称分布）を有し、従って、対数変換によりモデル化された。
【０１７８】
†  根治的前立腺切除術のグリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として評価された。
【０１７９】
術前の多変量モデルにおいて、術前のＴＧＦ−β１（Ｐ＝０．０１０、ハザード比１．７１０、９５％ＣＩ  １．０７８〜２．４７０）、ＩＬ６ｓＲ（Ｐ＝０．０３８、ハザード比１．５１５、９５％ＣＩ  １．０１１〜２．０６１）、および生検グリーソン合計（Ｐ＜０．００１、ハザード比２．８９６、９５％ＣＩ  １．６３０〜５．１４５）は、術前のＰＳＡ（Ｐ＝０．０５８）、術前のＩＬ−６（Ｐ＝０．０６２）、および臨床病期（Ｐ＝０．８３７）の効果に対して調整したとき、癌の進行と関連があった。
【０１８０】
術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲを、別の術後の多変量コックス比例ハザード回帰分析（これは、さらに被膜外への広がり、精嚢への浸潤、切除縁の状態、病理学的グリーソン合計、および術前のＰＳＡを含んだ）において、解析した。候補のマーカーの術前のレベルを含む第１のモデルにおいて、術前のＴＧＦ−β１（Ｐ＜０．００１）およびＩＬ６ｓＲ（Ｐ＝０．０４５）は、前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＜０．００１）、精嚢への浸潤（Ｐ＝０．０２０）、および切除縁の状態（Ｐ＝０．００９）とともに、癌の進行と関連があった。候補のマーカーの術後のレベルを含む第２のモデルにおいては、術後のＴＧＦ−β１（Ｐ＜０．００１）および前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＜０．００１）だけが、疾患の進行と関連があった。術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルを含む第３のモデルにおいては、術後のＴＧＦ−β１（Ｐ＝０．０１３）および前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＝０．００５）だけが前立腺癌の進行と関連があった。
【０１８１】
術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルと攻撃的前立腺癌進行の特徴との関連性
１９人の患者が、非攻撃的前立腺癌進行の特徴を有するとして分類された。その理由は、彼らのＰＳＡ倍増時間が１０ヶ月以上（ｎ＝１８、中央値２３、範囲１２〜２２４）であったか、かつ／または彼らが局所的サルベージ放射線療法に完全な応答を示した（ｎ＝５）からであった。２４人の患者が、攻撃的癌進行の特徴を有するとして分類された。その理由は、根治的前立腺切除術時に陽性のリンパ節が見つかった（ｎ＝６）か、精密検査で転移が陽性であった（骨またはＰｒｏｓｔａｓｃｉｎｔ（登録商標）スキャン、ｎ＝４）か、そのＰＳＡ倍増時間が１０ヶ月未満であった（ｎ＝２３、中央値７、範囲１〜９）か、かつ／または局所的放射線療法がうまくいかなかった（ｎ＝１４）かである。術前および術後のＴＧＦ−β１レベル（それぞれＰ＜０．００１とＰ＜０．００１）、術前のＩＬ−６レベル（Ｐ＜０．００１）および術前のＩＬ６ｓＲレベル（Ｐ＜０．００１）は、攻撃性疾患の特徴を有する患者において、非攻撃性疾患の特徴を有する患者よりも高かった。一方、術後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、攻撃性疾患の特徴を有する患者と非攻撃性疾患の特徴を有する患者との間で差がなかった（それぞれＰ＝０．０６２とＰ＝０．０７５）。術前の多変量コックス比例ハザード回帰分析において、術前の血漿ＴＧＦ−β１（Ｐ＜０．００１、ハザード比１．２９８、９５％ＣＩ  １．０９３〜１．７１６）、術前のＩＬ６ｓＲ（Ｐ＝０．０２１、ハザード比１．３１２、９５％ＣＩ  １．０９９〜１．８３７）、および生検グリーソン合計（Ｐ＝０．０１０、ハザード比３．１１２、９５％ＣＩ  １．１２２〜８．５３４）は、術前のＩＬ−６（Ｐ＝０．０５８）、術前のＰＳＡ（Ｐ＝０．０８６）、および臨床病期（Ｐ＝０．４３２）の効果に対して調整したとき、攻撃的前立腺癌の進行と関連があった。
【０１８２】
術前および術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲを、別の術後の多変量コックス比例ハザード回帰分析（これは、さらに被膜外への広がり、精嚢への浸潤、切除縁の状態、病理学的グリーソン合計、および術前のＰＳＡを含んだ）において、解析した（表１５）。候補のマーカーの術前のレベルを含む第１のモデルにおいて、術前のＴＧＦ−β１（Ｐ＝０．０１３）およびＩＬ６ｓＲ（Ｐ＝０．０４２）は、前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＝０．００９）および精嚢への浸潤（Ｐ＝０．０２７）とともに、攻撃的癌の進行と関連があった。候補のマーカーの術後のレベルを含む第２のモデルにおいては、術後のＴＧＦ−β１（Ｐ＝０．０１２）、精嚢への浸潤（Ｐ＝０．０４４）、および前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＝０．０２１）だけが、攻撃的疾患の進行と関連があった。術前および術後の候補マーカーのレベルを含む第３のモデルにおいては、術後のＴＧＦ−β１（Ｐ＝０．０４３）、前立腺切除術のグリーソン合計（Ｐ＝０．０３７）、および精嚢への浸潤（Ｐ＝０．０４９）だけが攻撃的前立腺癌の進行と関連があった。
【０１８３】
【表１６】
2006524315.tif 000018
＊  ウィルコクソンの符号付き順位検定
前立腺切除術の前対後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲレベル
全体で、術後のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルはすべて、術前のレベルより低かった（それぞれＰ＝０．０２９、Ｐ＝＜０．００１、Ｐ＜０．００１、表１６）。疾患の進行があった患者のサブグループにおいて、術後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、ともに、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルより低かった（それぞれＰ＜０．００１とＰ＜０．００１）。しかし、術後のＴＧＦ−β１レベルは、術前のＴＧＦ−β１レベルと差がなかった（Ｐ＝０．０７４）。癌の進行がなかった患者のサブグループにおいて、術前のＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、手術後に下がった（それぞれＰ＜０．００１、Ｐ＝０．０４２、Ｐ＝０．０３４）。
【０１８４】
考察
本研究は、以前に報告された知見（Ｓｈａｒｉａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１ａ；Ｓｈａｒｉａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１ｂ）を確認するものであった。すなわち、ＴＧＦ−β１、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの術前の血漿レベルは、原発性療法時に臨床上明らかで目に見えない転移がありかつ結果として疾患が進行した攻撃的原発性前立腺癌の確立した特徴と関連があった。これらのマーカーの３つすべてが、明らかなリンパ節への転移性疾患と関連があった一方、局所的腫瘍の他の臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターとこれらのマーカーとの関連性は、明らかにまちまちであった。例えば、術前のＴＧＦ−β１の血漿レベルは、局所的な浸潤性の疾患（例えば、前立腺外への広がりおよび精嚢浸潤）と関連があったが、疾患の組織学的分類とは関連がなかった。一方、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血漿レベルは、疾患の病理学的分類（すなわちグリーソン合計）と関連があったが、前立腺外への広がりや精嚢浸潤とは関連がなかった。また、術前のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲのレベルは、局所的腫瘍の体積と正の相関関係にあったが、ＴＧＦ−β１レベルは相関しなかった。
【０１８５】
予想どおり、すべての患者において評価した場合、３つのマーカーすべての血漿レベルは、前立腺除去の後、顕著に減少した。これは、癌の進行がなかった患者にもやはりあてはまった。興味深いことに、癌の進行がなかった患者におけるＴＧＦ−β１レベルの減少は、すべての患者に比べて大きく（３３％対１８％）、ＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの減少は相対的に顕著ではなかった（それぞれ１８％対２１％と１７％対２２％）。対照的に、疾患の進行があった患者において、前立腺を除去した術後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲレベルの低下は顕著であった（それぞれ３０％と２７％）一方、術後のＴＧＦ−β１レベルは最小限にしか低下せず（９％）、術前のＴＧＦ−β１レベルと有意差がなかった。これらの知見は、他の外科治療した悪性腫瘍について報告された知見と類似する（報告された知見では、最終的な手術の後明らかに治癒した患者においてのみＴＧＦ−β１が減少し、手術後にリンパ節転移または遠隔性の転移および／または疾患の残存が明らかになった患者では、そのままＴＧＦ−β１が上昇した（Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｋｏｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｔｓｕｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。さらに、本知見と一致するように、Ｔｓｕｓｈｉｍａ他（２００１）が明らかにしたところによれば、結腸直腸癌について結腸の一部切除を受けた患者において、年齢、術前および術後の癌胚性抗原レベル、性別、ならびに臨床的な腫瘍分類および病期の効果に対して制御する場合、術前と術後のＴＧＦ−β１レベルの両方が肝臓転移の発生と関連があった。一方、手術によって治癒したかどうかにかかわらず、ＩＬ−６の循環レベルは、手術後、顕著に減少することが報告されている（Ｇａｌｉｚｉａ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。
【０１８６】
さらに、これらのデータは、癌患者においてＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの血液レベルが主に原発性前立腺癌の腫瘍細胞によってもたらされることを示唆する。さらに、ＩＬ−６の循環レベルおよびその溶解性受容体は、前立腺癌の転移する可能性に単に関連するようであり、転移そのものには関連しないようである。これに対し、ＴＧＦ−β１の循環レベルは、転移のプロセスにより密接に関連しているようであり、それは、転移性腫瘍の病巣からの直接的な放出または癌の浸潤および伝播に対する宿主反応のいずれかに起因するものと考えられる。患者の本コホートにおいて前立腺癌進行を予測するための術後の多変量解析において見られる術後ＴＧＦ−β１レベルの増加した予測値は、この考えを支持する。３つの候補マーカーの術前のレベルを含む標準的な術後のモデルにおいて、術前のＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１の両方が前立腺癌の進行と関連した一方、３つの候補マーカーの術後のレベルのみがモデルに含まれる場合、術後のＴＧＦ−β１が癌の進行と関連づけるべき唯一の候補マーカーであった。さらに、３つのすべての候補マーカーの術前および術後の両方のレベルが同じ標準的モデルに含まれる場合、やはり、術後のＴＧＦ−β１レベルのみが前立腺癌進行との関連性を維持し、原発性腫瘍除去後のＩＬ−６およびＩＬ６ｓＲの予測に対する価値の低下が再度明らかになる一方、前立腺癌進行の予測について、術前のレベルに対し、術後のＴＧＦ−β１レベルの予測に対する価値が上がることが明らかになった。
【０１８７】
本知見は、以前の研究を確認するものであった。以前の研究の示すところによれば、術前のＩＬ６ｓＲ（術前のＩＬ−６ではなく）は、標準的な術前の多変量解析において合わせてモデル化した場合、癌進行の独立予測因子であった（Ｓｈａｒｉａｔ  ｅｔ  ａｌ．，２００１ａ）。ＩＬ−６は、ヘキサメトリック（ｈｅｘａｍｅｔｒｉｃ）なサイトカイン受容体複合体を介して作用する。該複合体は、ＩＬ−６特異的受容体サブユニットおよびシグナルトランスデューサーｇｐ１３０（これは他のサイトカイン受容体にも利用される）から構成される（Ｈｉｒａｎｏ，１９９８）。ＩＬ−６のｇｐ１３０への結合により、Ｊａｎｕｓキナーゼ／ＳＴＡＴ３シグナル伝達カスケードが活性化され、そこで、ＳＴＡＴ因子が核に転位し、核において該因子は、細胞の生存、Ｇ１／Ｓ−期細胞周期の移行、細胞移動、および細胞分化に重要な役割を果たすターゲット遺伝子の転写を活性化する（Ｈｉｒａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｈｅｉｎｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。Ｈｏｂｉｓｃｈ他（２０００）が免疫組織化学により明らかにしたところによれば、ＩＬ−６およびＩＬ−６受容体の両方が、臨床上局所的な前立腺癌において過剰に発現される。一方、Ｇｉｒｉ他（２００１）が最近明らかにしたところによれば、多くの前立腺癌の症例において、ＩＬ−６またはＩＬ−６受容体の一方が増加しており、これは、下流シグナル伝達カスケード活性化の増加を引き起こす独立した２つの実施形態を示唆する。ＩＬ−６と共同的に作用することに加えて、ＩＬ６ｓＲ（細胞表面ＩＬ−６受容体のタンパク質分解開裂（Ｍｕｌｌｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）または交互スプライシング（Ｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）によって生じる）は、ＩＬ−６細胞表面受容体発現を欠く細胞において、ＩＬ−６応答の強い制御因子であることが見出されている（Ｔａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｐｅｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。例えば、細胞結合ＩＬ−６受容体を欠く前立腺上皮内新形成細胞においてＩＬ−６がＳｔａｔシグナルカスケードを活性化するのにＩＬ６ｓＲの存在が必要であるといわれている（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。前立腺癌の進行に関し、術前のＩＬ６ｓＲがＩＬ−６よりも予測についてより高い価値を有するということは、ＩＬ６ｓＲがＩＬ−６機能のアゴニスト制御因子としての役割を有するということを支持するものであり、そして、前立腺癌の患者において予後の目的に対しＩＬ−６よりも優れていることには生物学的メカニズムが背後にあることを示唆している。
【０１８８】
興味深いことに、切除縁の状態は、攻撃的前立腺癌の進行以外のすべてと関連性があった。攻撃的前立腺癌の進行の特徴には、転移陽性の精密検査またはそれに代わる転移を示唆する終点のいずれか、あるいは、臨床上転移性の疾患への急速な進行（すなわち、１０ヶ月未満のＰＳＡ倍増時間（Ｌｅｖｅｎｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｐｏｕｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｒｏｂｅｒｔｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１））、およびサルベージ局所放射線療法に対して反応がないこと（Ｋａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｌｅｖｅｎｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）があった。全体的な進行の他の予測因子（精嚢への浸潤、病理学的グリーソン合計、術前のＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１）は、攻撃的前立腺癌の進行に対する予測について価値を維持した。これらのデータは、精嚢への浸潤、病理学的グリーソン合計、術前のＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１のレベルが、確立した転移性疾患または目に見えない転移性疾患のいずれかと、あるいは、転移が生じる傾向と、関連がある一方、陽性の切除縁は、一般に非攻撃性である局所的再発と関連があるという考え方を支持するものである。この知見と一致するように、Ｅｐｓｔｅｉｎ他（１９９６）は、切除縁の状態が、根治的前立腺切除術後の局所的再発の有力な予測因子であることを報告している。これらのデータは、陽性の切除縁は手術で残った局所的腫瘍に関連し、外科医による前立腺の不完全な切除の結果であるという考えを支持するものである。
【０１８９】
まとめると、本知見は、根治的前立腺切除術後の再発を予測するための標準的な術前ノモグラムにＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲの術前のレベルを含めることを支持するものである（例５および図１２参照）。本知見の他の癌への一般化可能性によって示唆されることは、ここでの所見および勧告が種々の他の癌および癌治療のモダリティ（すなわち放射線療法または化学療法）に広く適用できるということである。さらに、術後の早期のＴＧＦ−β１は、前立腺癌進行の有力な予測因子であり、そして、前立腺癌の原発性療法後の進行について予測する他の標準的モデルに含めるべき、優れたマーカー候補である（図１６Ａ〜Ｃ）。
【０１９０】
実施例５
臨床上局所的な疾患に対する根治的前立腺切除術を受けた患者において、術前の血漿ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲは、臨床病期、生検グリーソン合計、および術前のＰＳＡの効果に対して調整すると、最終的な前立腺癌進行と関連があった。さらに、これらのマーカーの術前の血漿レベルは、攻撃的疾患の進行と関連があり、この関連性が手術時にすでに存在する目に見えない微小癌組織の転移によるものであることを示唆した。以下に説明するとおり、ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲを、前立腺疾患の他のマーカーとともに使用してノモグラムを調製した。
【０１９１】
材料と方法
患者
常勤の職員による根治的恥骨後方前立腺切除術によってその臨床上局所的な前立腺癌（ｃＴ１ｃ〜３ａ、ＮＸ  Ｍ０）を治療する目的でＴｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに収容された８１４人すべての患者が、この解析の可能な候補者であった。血清、血漿、および同意をこれらの男性のうち８００人について得た。各患者の臨床病期は、１９９２ＴＮＭ（すなわち腫瘍−節−転移）分類体系（Ｔ１  前立腺に限定された触診できない腫瘍、Ｔ２  触診可能であるか画像化によって見ることができる限局的腫瘍、Ｔ３ａ  前立腺の被膜の片側を通過して広がる触診可能なまたは見ることが可能な腫瘍、ＮＸ  臨床上測定されない所属節転移、Ｍ０  遠隔性転移の証拠なし）に従って決めた。すべての男性において、骨盤リンパ節の切開を行った。手術時に凍結切片分析によって節転移を有することがわかった患者１７人中２人は、根治的前立腺切除術を中止した。これらの男性は解析から除外されている。はじめに最終的放射線療法を受けた２６人の男性（２３人は外部ビーム放射線療法、３人は寒冷療法）と、根治的手術の前にネオアジュバントホルモン療法を受けた５６人は、この解析から除外した。以下の欠測値が１つ以上ある５人の患者を除外した（ＰＳＡ  Ｎ＝１、生検グリーソン分類  Ｎ＝３、臨床病期  Ｎ＝１、疾患の追跡検査の状態  Ｎ＝１）。これにより７１３人の男性が解析に残った。
【０１９２】
すべての患者の年齢の中央値は６２歳（範囲４０〜８１歳）であり、患者の８６％が白人であった。治療前のＰＳＡはＨｙｂｒｉｔｅｃｈ  Ｔａｎｄｅｍ−Ｒアッセイ（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって測定した。各腫瘍のグリーソン分類は、一人の病理学者によって付与された。コア陽性のパーセントは、取り出された総コアに対する陽性コアの比をとり、１００をかけて算出した。ＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１は上述した（例１〜２）ように測定した。血清および血漿の試料は、前立腺の経直腸誘導針生検の後少なくとも４週間で、術前一夜の絶食の後の手術日の朝、採取した。血液を、１Ｍクエン酸ナトリウム０．１ｍＬを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴ  ８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に採取し、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離した。血漿に相当する最上層を、滅菌したトランスファーピペットを用いて静かに移し、直ちに冷凍し、ポリプロピレン低温保存バイアル（Ｎａｌｇｅｎｅ，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中−８０℃で保存した。ＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１のレベルを定量的に測定するため、定量的免疫検定法（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた。ＴＧＦ−β１について、測定の前に、血小板の完全な除去のため、血漿をさらに遠心分離する工程を１０，０００×ｇで室温において１０分間行った。組換えＴＧＦ−β１を標品として用いた。すべての試料を２連で行い、平均をデータ解析に用いた。２つの測定値間の差は最小限であった。臨床上の特徴は表１７に示すとおりである。
【０１９３】
【表１７】
2006524315.tif 000019
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治療の失敗
治療が失敗に終わる時期は、術後の血清ＰＳＡレベルが０．２ｎｇ／ｍＬに上昇した最初の日として規定した。手術の後、記録された再発の前にホルモン療法を受けた患者はいなかった。アジュバント放射線療法は失敗とみなさなかった。１つ以上のリンパ節における転移性疾患のため根治的前立腺切除術を中止した患者は、術後の日から治療が失敗したものとみなした。
【０１９４】
統計分析
再発のない状態を維持する確率の推定値は、カプラン−マイヤー法を用いて算出した。多変量解析は、コックス比例ハザード回帰によって行い、それはノモグラムの基礎となった。比例ハザード推定は、時間との相関の検定および残りのプロットの検査によって検証した。ＰＳＡおよびＴＧＦ−β１は、傾斜分布（非対称分布）を有し、そして、対数変換した。すべての非公称変数は、制限三次スプラインとあわせ、可能な非線形効果を与えた。
【０１９５】
ノモグラムの妥当性検査のため、識別能力と較正能力の両方を評価した。識別とは、失敗のリスクが高い患者において失敗の可能性がより高くなるように患者をそのリスクによって分類する能力をさす。識別を評価した理由は、それが一致指数を用いて簡単に定量できるからである。一致指数は、受診者動作特性曲線の下の面積に似ている（事象までの時間のデータ（ｔｉｍｅ−ｕｎｔｉｌ−ｅｖｅｎｔ  ｄａｔａ）に対するものであることを除いて）。ノモグラムの較正は、予測した確率に対して実際の確率をプロットしたものを目で検査することにより、評価した。予測される将来のパフォーマンスのより一般化可能な評価（推定値）を得るために、ブートストラッピングを用いた。すべての統計分析は、Ｓ−Ｐｌｕｓソフトウェア（ＰＣバージョン２０００  Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ，Ｒｅｄｍｏｎｄ，ＷＡ）と追加機能（Ｄｅｓｉｇｎと呼ぶ）を用いて行った。すべてのＰ値は両側統計検定を用いた結果である。
【０１９６】
結果
解析に用いることができた７１３人の患者のうち７９人が、根治的前立腺切除術の後、治療失敗の証拠を示した。疾患再発のない患者について、追跡検査の中央値は４９ヶ月（範囲０．３〜８９．５ヶ月）であり、その２８％は、この解析の１年以内にその疾患の状態を確認された。少なくとも６０ヶ月の追跡検査で疾患のなかった患者が１６６人いた。全体で再発のない確率は５年で８６％（９５％ＣＩ＝８３％〜８９％）であった（図１３）。多変量コックスモデルにおいて、ＰＳＡ（Ｐ＝０．００１）、ＩＬ６ｓＲ（Ｐ＜０．００１）、ＴＧＦ−β１（Ｐ＜０．００１）、原発性グリーソン分類（Ｐ＝０．０１６）、および続発性グリーソン分類（Ｐ＝０．０３７）は、ＰＳＡ再発と関連があった一方、臨床病期は関連がなかった（Ｐ＝０．７６６）。
【０１９７】
ノモグラムをコックスモデルに基づき構成した。それを図１２に示す。ノモグラムを用いて、まず患者の状態を各予測因子変数のスケール（ＰＳＡ〜ＴＧＦ−β１）上に位置づける。各スケールの位置は、対応する予後ポイント（上の軸）を有する。例えば、１０のＰＳＡは約２１ポイントに相当する。これは、ＰＳＡ軸上の１０の値の位置とその上にあるポイントスケールとを比べ、２つの軸間に垂直な線を引くことにより決定される。すべての臨床予測因子変数についてのポイント値を、同様にして決め、合計して総ポイント値を得る。この値を、総ポイント軸（下から２番目）上にプロットする。この総ポイント軸から６０ヶ月ＰＳＡ進行のない確率の軸に、垂直な線をまっすぐにおろせば、生存していると仮定した場合に患者が５年間癌再発のない状態を維持する確率がわかる。
【０１９８】
患者の再発リスクの中での識別能力についてノモグラムを評価した。これは、検証したデータについての受診者動作特性曲線の下の面積として測定された。この面積は、２人（１人は再発し、もう１人はより長い追跡検査）の患者を無作為に選んだ場合に、最初に失敗した患者がより悪い予後を有した（ノモグラムから）確率を表している。この値は、０．５（偶然と同じ）〜１．０（完全な識別能力）の範囲をとることができる。新規患者に対するノモグラムの予測されるパフォーマンスの評価を得るために、ブートストラッピング（サンプリング、ノモグラム構築およびノモグラム評価を多数回繰り返す統計的手法）を行った。ブートストラッピングを用いた結果、受診者動作特性曲線の下の面積は０．８４であると見積もられた。比較の目的のため、ＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１を除いたモデルについてブートストラップを行った。このモデルは、０．７５の一致指数を有した。
【０１９９】
図１４は、ノモグラムからの予測値を７１３人についての実際の結果と比較する方法を示す。ｘ軸は、ノモグラムを用いて算出した予測値であり、ｙ軸は、実際に癌再発がない患者についてである。点線は、理想的なノモグラムの性能を示し、そこにおいて、予測結果は、実際の結果に完全に一致する。ここに説明するノモグラムの性能は、点（データセット内のサブコホート（予測リスクに基づく）に対応する）をつないだ実線で描かれている。注目すべきことに、丸印は相対的に点線に近く、このノモグラムを用いて算出した予測値は、実際の結果を近似している。Ｘ印は、ブートストラップにより補正した疾患再発がないことを予測した推定値を示し、予測された精度のより適当な推定値である。Ｘ印のほとんどが丸印に近く、本ノモグラムおよびモデル化データ（丸印）の使用に基づく予測値は、新規データ（Ｘ印）の使用から予測されたものに近いことを示している。図１４の垂直な棒は、ブートストラップ分析に基づく９５％信頼区間を示す。概して、このノモグラムの性能は、明らかに実際の結果の９％以内であり、予測確率が非常に高くなると、おそらく若干より正確になる。
【０２００】
７１３人中３５人において陽性コアのパーセントがなかった。この変数について値があった６７８人の患者のサブセットを調べた結果、陽性コアのパーセントは、コックスモデルに加えたとき、ＰＳＡ再発と関連がない（Ｐ＝０．０９５）ことが明らかになった。この知見だけでは最終的なモデルおよびノモグラムから陽性コアのパーセントを排除することを正当化できないが、陽性コアのパーセントを予測因子として含むモデルは、陽性コアのパーセントを排除した省略型のモデルよりも低い一致指数を示した（０．８３対０．８４、両者ともブートストラップにより補正）。このことは、コア陽性のパーセントを含むモデルのサンプルサイズが小さかったことに起因するようである。従って、モデルは、予測因子としてのコア陽性のパーセントを排除している。
【０２０１】
図１５は、ここに記載のノモグラムの予測値を、危険群解析により得られた予測値と比較している。この図について、最近公開されたリスク階層化法を用い、各患者が「低」リスクにあるかまたは「高」リスクにあるかを決定した。図１５は、各リスク群内の患者について、ノモグラムにより予測された確率のヒストグラムである。
【０２０２】
考察
２つの新しい分子マーカー（ＩＬ−６可溶性受容体とＴＧＦ−β１）を臨床変数のコアグループに加えた予後ノモグラムを構築した。このノモグラムは、臨床上局所的な前立腺癌に対する根治的前立腺切除術後５年において疾患進行のリスクをより良く予測する。これら２つの予測因子を加えることによって、識別能力が実質的に向上し、ブートストラップにより補正した一致指数は０．７５から０．８４に上昇した。
【０２０３】
ＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１を選んだ理由は、転移のより明らかな臨床的証拠が出る前のもっとも早い病期において、それらが、前立腺癌の攻撃性および転移性の特徴と、強く、特異的にかつ補完的に関連しているからであった。前立腺癌の浸潤、進行、および転移についての可能性のあるバイオマーカー（インスリン様成長因子Ｉおよびその結合性タンパク質タイプ２および３、血管内皮細胞増殖因子および可溶性血管細胞接着マーカータイプＩ、ならびにインターロイキン−６を含む）の宿主の能力を広範に評価した。
【０２０４】
ＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１-の前立腺癌との関連性をさらにテストするため、根治的前立腺切除術を受けた３０２人の患者の継続的コホートにおいて、術前および術後のＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲのレベルを測定した。ＴＧＦ−β１およびＩＬ６ｓＲの術前の血漿レベルが、攻撃性の原発性前立腺癌の確立した特徴と強く関連し、原発性治療の時に存在する臨床上明らかで目に見えない転移と強く関連し、かつ最終的な疾患の進行と強く関連することが確認された。これらのマーカーの両方がリンパ節への転移が明らかな疾患と関連した一方、これらのマーカーの他の臨床的パラメーターおよび病理学的パラメーターとの関連性は互いにはっきり異なることが明らかになった。例えば、術前のＴＧＦ−β１の血漿レベルは、局所的に浸潤する疾患（例えば、前立腺外への広がりおよび精嚢浸潤）の特徴と関連する一方、疾患の組織学的分類とは関連しなかった。一方、術前のＩＬ６ｓＲの血漿レベルは、疾患の病理学的分類（すなわちグリーソン合計）と関連がある一方、前立腺外への広がりや精嚢浸潤とは関連がなかった。さらに、術前のＩＬ６ｓＲのレベルは局所的腫瘍の体積と正の相関関係にあったのに対し、ＴＧＦ−β１はそうではなかった。さらに、疾患が進行した患者において、術後のＴＧＦ−β１のレベルは最小限（９％）にしか低下せず、術前のＴＧＦ−β１レベルと有意差がなかった。一方、前立腺除去の後、血漿ＩＬ６ｓＲレベルは、疾患が進行した患者および進行しなかった患者の両方において有意に低下した。全体的にみて、これらのデータが示唆するところによれば、ＩＬ−６およびその可溶性受容体の循環レベルは、前立腺癌が転移する可能性と関連があると思われる一方、転移自体とは関連がないと考えられる。一方、ＴＧＦ−β１の循環レベルは、転移のプロセスにより密接に関連していると考えられる。これは、転移性腫瘍の病巣からの直接的な放出または癌の浸潤および転移に対する宿主の応答のいずれかに起因すると考えられる。
【０２０５】
他の研究者により、前立腺癌に対する原発性療法の後、失敗のリスクに関して患者を分類するため予測パラメーターを用いることの価値が明らかされてきた。これらのアプローチは、臨床パラメーター（例えば治療前のＰＳＡレベルまたは生検グリーソン合計）を用いて患者を「低」「中」「高」のリスク群に分類することに主に注目してきた。表面的に、このアプローチはあまり煩雑でないように見られる一方、ノモグラムに維持される連続的なリスク変数を規定したリスクカテゴリーに減らすことは、予測精度のレベルを実質的に低下させることになる。例えば、患者を「低」リスクまたは「高」リスクとして分類する患者のコホートからのデータを用いることは、０．７３の一致指数しかもたらさず、０．８４のノモグラムによる一致指数と比べて、かなり識別力が低いものである。臨床的に見て、この一致指数の低下は、この疾患に直面する患者に対して、大きく異なる予測結果をもたらすことにつながる。例えば、図１５は、以前報告された高リスク群と低リスク群に類別される患者に対しノモグラム予測をプロットすることにより、２つのアプローチの予測値を比較している。注目すべきことに、「高リスク」群の患者のほとんどは、実際に、非常に良好で可変性の予測値をノモグラムから得ている。前立腺癌の患者に「高リスク群」であることを知らせるよりは、選択した治療形態の後に再発のない状態が続く確率の予測値を最善の実施形態で推定したものを患者に提供するほうが有用である。どの予測方法も最も良い基準になるとはいいがたいが、ここに説明するノモグラムは、より良好な識別を行えるようであり、臨床的重要度によるリスク群のアプローチとは異なる予測をもたらすと考えられる。
【０２０６】
標準的な臨床因子のみに基づく一致指数は０．７５であった。この知見は、手術、外部ビーム放射線療法、および近接照射療法に対するノモグラムを用いた以前の研究と整合しており、従って、標準的臨床因子のみでは、約０．７５をこえる一致指数を達成することはできないようである。分子マーカーを加えることは、予測精度の量的上昇に影響があるようであり、一致指数を０．８４にすることができる。
【０２０７】
臨床上局所的な前立腺癌に対する治療結果の予測能力を向上させることは、重要なことである。この疾患において、治療の選択は、治療結果の予測に基づいて決断を強いられる個々の患者の好みにあうようにしつらえる必要がある。未治療の癌に対する進行のリスクおよび積極的な治療によって進行を遅らせるまたは阻止する能力と、合併症のリスクとを比較考量する必要がある。Ｐａｒｔｉｎとその同僚は、最終的な病理学的病期を予測することによってこの状況で使用するためのノモグラムを最初に提供した。この研究は、ＰＳＡ再発（最終的な病理学的病期より明確な終点）を予測することにまで拡張されてきた。疾患再発の見込みが最小限になるような治療方法を選ぶことよりも、治療の意思決定のほうが実質的によりやっかいであるが、ＰＳＡ再発の予測は、この疾患に対して、意思決定の貴重な要素である。
【０２０８】
予後ツールとしての役割に加えて、図１４のノモグラムは、基礎となるコックスモデルを解釈するのに有用である。しかし、直感に反するような割り当てがある（例えばＴ２ｂ＞Ｔ２ｃ）が、これらの差異は、係数推定値の変動を反映しており、統計的に常に有意なわけではない（両側検定Ｐ＞０．０５）。さらに、１つの変数（例えば臨床病期）の複数のレベルにわたってポイントを比較する場合、他の変数（例えばＩＬ６ｓＲ）の可能な変化を考慮することも重要である。すなわち、１つの軸にそって患者を動かすことは、その患者を他の軸上で同様に動かすこととなる可能性が高い。
【０２０９】
根治的前立腺切除術によって治療された患者の個体群において、ノモグラムを開発した。例えば、それは、手術の対象となりそうな患者（必ずしもすべての患者が前立腺癌と診断されていなくともよい）に有用である。さらに、該ノモグラムは、ＰＳＡ再発を終点として予測する。生化学的に不全となる患者が、すべてその疾患で死ぬわけではなく、また、すべてが転移に進行するわけでもない。生化学的再発は、治療が必ずしも有効ではなかったことを知らせる早期の警告である。生化学的再発（すなわち生化学的に不全となる１００％の確率）につながることになるような積極的な治療は、転移やさらなる続発症との関連性が低いとしても、患者はだれも選ぶことはないだろうし、医師もすすめることはないだろう。さらに、疾患関連症状を有していなくとも、生化学的に不全の患者は、生活の質が低くなる。
【０２１０】
まとめると、局所的前立腺癌（臨床病期Ｔ１ｃ〜Ｔ３ａ  ＮＸ  Ｍ０）に対する根治的前立腺切除術の後の癌再発の確率を、臨床病期、グリーソン分類、血清ＰＳＡレベル、ならびにＩＬ６ｓＲおよびＴＧＦ−β１の血漿レベルから予測することを可能にするノモグラムを開発した。該ノモグラムは、根治的前立腺切除術が受け入れ可能な治療の選択肢の一つかどうか決定するのに、医師および患者を支援することができる。また、該ノモグラムは、ネオアジュバント治療のプロトコルから恩恵をうけうる、疾患再発のリスクが高い患者を特定するのに有用でありうる。さらに、これらの分子マーカーを組み込むことは、他の前立腺癌治療のモダリティーに対しても同様に予後ツールを向上させることができる。
【０２１１】
実施例６
対象と方法
患者の個体群
すべての研究は、Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅにおけるｔｈｅ  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｕｂｊｅｃｔｓのためのｔｈｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｂｏａｒｄの許可および指導管理の下に着手された。Ｓｃｏｔｔ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙの外科医による根治的前立腺切除術によってその臨床上局所的な前立腺癌（ｃＴ１ｃ〜３ａ、ＮＸ、Ｍ０）を治療する目的でＴｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌに収容された３０１人すべての患者が、この解析の可能な候補者であった。臨床病期は、１９９２ＴＮＭシステムに従って、手術外科医により付与された。同意を得た後、術前および術後の血漿試料を、これらの男性のうち２５２人について得た。最初にホルモン療法を受けた１６人の男性、限定的な放射線療法を受けた５人、および術前に寒冷療法を受けた１人は、この解析から除いた。疾患の追跡情報が入手できなかった１５人の男性も除いた。こうして解析に残ったのは２１５人の男性であった。この研究における患者の平均年齢は６１．８±７．３歳（中央値６２．６、範囲４０〜８０）であった。血清の前立腺特異抗原は、Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ（登録商標）Ｔａｎｄｅｍ−Ｒアッセイ（Ｈｙｂｒｉｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）によって測定した。
【０２１２】
また、血漿のＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルを、癌のない健常な患者４０人において測定した。この群は、２組の前立腺癌スクリーニングプログラムに参加した継続的患者を含んだ。彼らは、癌や慢性疾患の病歴がなく、直腸指診は正常であり、２ｎｇ／ｍＬ未満の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）であった。このＰＳＡ範囲は、スクリーニングから最初の４年で前立腺癌が検出される推定確率が１％未満であることに対応する（Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。
【０２１３】
ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の測定
血漿の試料は、前立腺の経直腸誘導針生検の後、少なくとも４週間で、術前一夜の絶食の後の手術日の朝、採取した。血液を、１Ｍクエン酸ナトリウム０．１ｍＬを含むＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）ＣＰＴ（商標）８ｍＬチューブ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）に採取し、室温で２０分間、１５００×ｇにて遠心分離した。血漿に相当する最上層を、滅菌したトランスファーピペットを用いて静かに移した。血漿を直ちに冷凍し、ポリプロピレン低温保存バイアル（Ｎａｌｇｅｎｅ，Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ，Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）中−８０℃で保存した。以前より明らかなところによれば、ＶＥＧＦレベルは、血漿において測定するときよりも血清において測定したとき高い。ＶＥＧＦは血小板顆粒に存在し、血小板活性化時に放出される。従って、血清中のより高いレベルのＶＥＧＦは、損傷した血小板からの放出に少なくとも一部起因する可能性が高く、これは、血小板以外に由来するＶＥＧＦの定量を不正確にする（Ｓｐｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。従って、ＶＥＧＦについて、測定の前に、血小板の完全な除去のため、血漿をさらに遠心分離する工程を１０，０００×ｇで室温において１０分間行った（Ａｄａｍｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１レベルの定量的測定のため、定量的免疫検定法（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた。すべての試料を２連で行い、平均を用いた。２つの測定値間の差は、ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の両方について最小限であった（アッセイ間精度係数の偏差はそれぞれ８．４９±１１．１０％および４．８６±６．３１％）。
【０２１４】
病理学的検査
前立腺切除術のすべての標本を、一人の病理医（臨床の結果は知らなかった）が病理学的に検査した。根治的前立腺切除術の標本は、ホール・マウント法により加工し、以前報告された実施形態（Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９９４）で、病理学的パラメーターを求めた。２１５人の前立腺切除の患者のうち１８４人についてホール・マウント切片からコンピュータ処理による面積測定を行うことにより、総腫瘍体積を算出した（Ｏｈｏｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。
【０２１５】
術後の追跡検査
患者は、術後、直腸指診および血清ＰＳＡの検査を、最初の１年間は３ヶ月ごとに、２年目から５年目までは半年ごとに、それ以降は１年ごとに受けるようスケジュールが組まれた。生化学的進行は、２回以上のＰＳＡ＞０．２ｎｇ／ｍＬの継続的上昇により定義した。生化学的進行の日は、値が初めて＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日とした。骨盤リンパ節の切開をすべての男性において行った。手術時に凍結切片分析によって節転移を有することがわかった患者１１人中２人は、根治的前立腺切除術を中止した。これらの男性は解析から除外されている。所属リンパ節に転移した２人の患者（その前立腺を除去しなかった）は、手術後の日から進行のある患者として類別された。６人（３％）の患者は、陽性の切除縁のため、生化学的進行の前にアジュバント放射線療法を受けた。そのうち３人は、その後、ＰＳＡ再発を経験し、最初の値＞０．２ｎｇ／ｍＬとなった日から疾患の進行を有するとみなされた。一方、残りの３人は、最後の追跡検査の日に打ち切られた。根治的前立腺切除術を受けた２１５人の患者のうち、４２人に疾患の進行があった。
【０２１６】
統計分析
臨床的特徴および病理学的特徴による血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１レベルの差は、マン・ウィットニー（Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ）のＵ−検定およびクルスカル・ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ  Ｗａｌｌｉｓ）検定により検定した。スピアマンの順位相関係数を用いて、順序変数および連続変数を比較した。二値の結果変数の多変量解析には、ロジスティック回帰を用いた。多変量生存時間解析を、コックス比例ハザード回帰モデルを用いて行った。術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布（非対称分布）を有し、従って、対数変換によりモデル化された。生検および根治的前立腺切除術のグリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として評価された。本研究における統計的有意性は、Ｐ＜０．０５に設定した。すべての記載されるＰ値は、両側検定のものである。すべての解析は、ＳＰＳＳ統計パッケージのＷｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用バージョン１１（ＳＰＳＳ，Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を用いて行った。
【０２１７】
結果
前立腺癌が転移した患者における血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ
骨のスキャンによって転移性の前立腺癌が明らかになった患者９人、および臨床上局所的な前立腺癌と診断された患者２１５人において、血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルを測定した。血漿採取の前、いずれの患者もホルモン療法も放射線療法も受けていなかった。前立腺癌が骨に転移した患者における血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベル（それぞれ、中央値３１．３、範囲１５．３〜２２７．１と中央値６４８．７、範囲５２４．８〜１９０７．１）は、臨床上局所的な疾患の患者におけるレベル（それぞれ、中央値９．９、範囲２．０〜１６６．９と中央値５８１．８、範囲９９．０〜２０６８．３）より高かった（Ｐ値＜０．００１）。健常な対照についての血漿レベルは、ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の両方について、ＥＬＩＳＡ社が報告する通常範囲内であった（それぞれ、中央値２．２４、範囲１．６〜３．０と中央値５５５．０、範囲３９８．０〜７１２．０、Ｐ値＜０．００１）。
【０２１８】
術前の血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１と前立腺癌の臨床的特徴および病理学的特徴との関連性
前立腺切除の患者２１５人の臨床的特徴および病理学的特徴、ならびに術前の血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルとの関連性を表１８に示す。術前のＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルはともにリンパ節浸潤の患者において上昇した（それぞれＰ＜０．００１およびＰ＝０．０１２）。しかし、生検および最終のグリーソン合計≧７（それぞれＰ＝０．０３６とＰ＝０．０４０）でかつ前立腺外への広がり（Ｐ＝０．０４７）の患者において、術前の血漿ＶＥＧＦのみが上昇した。術前ＰＳＡの平均は９．１５±１．０１ｎｇ／ｍＬ（中央値７．３、範囲１．１〜６０．１）であった。６２人の患者（２８％）が１０ｎｇ／ｍＬ以上のＰＳＡレベルであった。単変量ロジスティック回帰分析において、術前の血漿ＶＥＧＦレベルは、臓器限局疾患（ハザード比０．９９１、９５％ＣＩ  ０．９８３〜０．９９８、Ｐ＝０．０１６）およびリンパ節浸潤（ハザード比１．０３３、９５％ＣＩ  １．０１９〜１．０４７、Ｐ＜０．００１）と関連があった一方、術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１のレベルはそれらと関連がなかった（それぞれＰ＝０．３６７とＰ＝０．０６３）。単変量ロジスティック回帰分析（表１９）において、術前の血漿ＶＥＧＦは、標準的な術前の特徴および術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１の効果に対して調整した場合、リンパ節の前立腺癌浸潤とは関連があった（Ｐ＜０．００１）が、癌の前立腺への限局とは関連がなかった（Ｐ＝０．５２８）。
【０２１９】
【表１８】
2006524315.tif 000022
2006524315.tif 000023
ＲＰ＝根治的前立腺切除術
ＣＣ＝相関係数
‡  ＲＰの被膜外への広がりの状態、ＲＰの精嚢への浸潤の状態、ＲＰの切除縁の状態、およびＲＰのグリーソン合計は、２人の患者（手術時に陽性の骨盤リンパ節であったため、前立腺切除術を受けなかった）について、得られなかった。
【０２２０】
§  スピアマンの相関係数
□  根治的前立腺切除術の腫瘍体積は、前立腺切除の患者６１人について得られなかった。
【０２２１】
【表１９】
2006524315.tif 000024
＊  術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布を有したため、対数変換によりモデル化した。
【０２２２】
†  生検グリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０２２３】
術前の血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の、根治的前立腺切除術後の生化学的進行との関連性
全体で、２０％の患者（２１５人中４２人）が、癌の進行を有し、術後の追跡検査の中央値は６０．１ヶ月（範囲２．５〜８６．３）であった。全体のＰＳＡ進行のない生存率は、３年で８６．０±２．４％（標準誤差、ＳＥ）であり、５年で７９．３±３．０％（ＳＥ）であり、７年で７６．９±３．３％（ＳＥ）であった。単変量および多変量のコックス比例ハザード回帰分析（表２０）において、術前のより高い血漿ＶＥＧＦ（それぞれＰ＝０．００５とＰ＝０．０４３）は、生検グリーソン合計3７（それぞれＰ＝０．００１とＰ＝０．０１５）および術前の血清ＰＳＡ（それぞれＰ＜０．００１とＰ＜０．００１）と同様に、臨床病期および術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１の効果に対して調整したとき、ＰＳＡ進行のリスクと関連があった。
【０２２４】
【表２０】
2006524315.tif 000025
＊  術前のＰＳＡレベルは、傾斜分布を有したため、対数変換によりモデル化した。
【０２２５】
†  生検グリーソン合計は、分類２〜６対分類７〜１０として分類した。
【０２２６】
考察
前立腺癌が骨に転移した患者は、臨床上局所的な疾患の患者または正常な健常者の対照と比べて、術前のＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の血漿レベルが有意に上昇した。ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の両方の術前の血漿レベルは、ともに、リンパ節浸潤の患者において有意に上昇したが、生検および最終のグリーソンスコア（合計？）≧７で前立腺外への広がりの患者においては、術前のＶＥＧＦのみが上昇した。単変量ロジスティック回帰分析において、術前の血漿ＶＥＧＦレベルは、臓器限局疾患およびリンパ節への浸潤と関連があった一方、術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１は関連がなかった。多変量ロジスティック回帰分析において（表１８）、術前の血漿ＶＥＧＦは、標準的な術前の特徴および術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１の効果に対して調整した場合、リンパ節の前立腺癌浸潤と関連があったが、癌の前立腺への限局とは関連がなかった。単変量および多変量のコックス比例ハザード回帰分析（表１７）において、より高い術前の血漿ＶＥＧＦは、生検グリーソン合計3７および術前の血清ＰＳＡと同様に、臨床病期および術前の血漿ｓＶＣＡＭ−１の効果に対して調整した場合、ＰＳＡ進行のリスクと関連があった。
【０２２７】
研究の示すところによれば、局所および循環のＶＥＧＦレベルは、病理学的病期が進んだ前立腺癌の患者において増加する（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｋｕｎｉｙａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。Ｄｕｑｕｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）と一致するように、前立腺癌が転移した患者においてＶＥＧＦの顕著な増加が本研究において認められた。
【０２２８】
ＶＥＧＦは、リンパ節に浸潤した患者において有意に上昇した。生検グリーソン分類3７、最終的グリーソン分類3７、および前立腺外への広がりの患者において、ＶＥＧＦは上昇した。根治的前立腺切除術の後、臓器に限定された被膜外疾患を有し、精嚢浸潤までも有する患者（陰性の切除縁によって証明されるとおり、その局所的腫瘍は完全に取り除かれている）の大部分は、生化学的進行のない状態が長期間つづく（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｔｅｆｉｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０２２９】
ＶＥＧＦは、根治的前立腺切除術後の生化学的進行の独立予測因子であった。リンパ節に浸潤したほとんどの患者において、再発に対する局所療法は、最終的にうまくいかず、遠隔転移の部位を生じさせる（Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｃａｔａｌｏｎａ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，１９９８）。前立腺癌に対する根治的前立腺切除術を受ける患者において単なる病理学的特徴よりもむしろ疾患の進行を予測できるノモグラム（バイオマーカーを組み込んだもの）が、前立腺癌の患者の治療に最も有用であると考えられる（Ｋａｔｔａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。
【０２３０】
ｓＶＣＡＭは、前立腺癌の標本（Ｗｉｋｓｔｒｏｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）および血清（Ｌｙｎｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）において、主に小さな血管（おそらく、腫瘍起因性血管形成）を特徴づけるものであることが示されている。ｓＶＣＡＭ−１は、前立腺癌が骨に転移した患者において顕著に高いことがわかった。ｓＶＣＡＭ−１は、根治的前立腺切除術後の生化学的進行の独立予測因子である。これは、おそらく、手術時にすでに存在する微小な転移性疾患との関連によるものである。
【０２３１】
血漿のＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、骨転移の患者において最も高かった。Ｋｕｎｉｙａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）に一致するように、前立腺切除術の標本におけるＶＥＧＦのレベルは、高い組織学的分類と同様に、病理学的に進行した前立腺癌において最も高いことがわかった。ホルモン耐性の前立腺癌において、Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）は、疾患の程度のマーカーに対して制御を行う多変量解析においてＶＥＧＦのデータがより有意であったなら、上昇した血漿ＶＥＧＦレベルは、単に疾患の広がりのマーカーではなく、むしろ、特定の生物学的表現形を規定する可能性があることを示唆した。
【０２３２】
前立腺切除術の患者群の中で、術前の血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、所属リンパ節に転移した患者において上昇した一方、より高いＶＥＧＦレベルのみが、より高い生検および最終のグリーソン合計と前立腺外への広がりとに関連があった。より高い術前のＶＥＧＦレベルは、標準的な術前の特徴の効果に対して調整したとき、リンパ節への浸潤および生化学的進行と関連があった。
【０２３３】
本研究の患者が動脈硬化症を併発していて、その罹患率が一般の男性個体群の範囲内であるならば、本研究において可能性のある交絡因子は、ｓＶＣＡＭ−１の血清レベルが動脈硬化症の程度に関連があると思われるように、ｓＶＣＡＭ−１が動脈硬化症の患者において上昇すると報告されていることである（Ｄｅ  Ｃａｔｅｒｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７；Ｐｅｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）。しかし、この主張に異議を唱える研究者もいる（Ｂｌａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；ｄｅ  Ｌｅｍｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）。
【０２３４】
本研究は、追跡検査の中央値６０．１ヶ月後の患者のコホートにおいて低率の疾患進行（２０％）により部分的に限定され、５年間進行のない確率が７９．３％となっている。研究した個体群における低い進行率の原因には、ＰＳＡに基づくスクリーニングが広く利用できるようになったことに伴い、より最近の外科統計で見られる癌の病期および体積がより軽くなっていることが考えられる。他の報告された統計では、根治的前立腺切除術を受けている男性の約４４％〜４７％が病理学的に非臓器限局疾患であった（Ｐａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３；Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。これに対し、本コホートにおいては、癌の３６．７％のみが臓器限局でなかった。前立腺癌の病理学的病期は、根治的前立腺切除術後の進行の有力な予測因子であることが知られている（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。それにもかかわらず、研究の対象となった患者の３４．７％が１０ｎｇ／ｍＬより高い術前のＰＳＡレベルを有し、３４．４％がその前立腺切除の病理学的標本中に前立腺外への広がりを有し、そして、５７．３％が７またはそれ以上の最終的な病理学的グリーソン合計を有した。それは、臨床上局所的な前立腺癌に対して根治的前立腺切除術を現在受けている患者を代表するものである。本統計における陽性切除縁の割合は、わずかに１５．５％であり、それは、局所的疾患に起因する進行の割合を減少させることができた可能性がある。術前のＰＳＡは、本研究において疾患の進行と関連があった。多くの高い範囲の術前ＰＳＡ（＞第三四分位数、１１．３ｎｇ／ｍＬ）を含めることで、根治的前立腺切除術の患者について以前の研究で報告されたように（Ｃａｔａｌｏｎａ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，１９９８）、予測における術前ＰＳＡの価値が高まったと考えられる。
【０２３５】
他の癌についてなされた同様の所見を考えると、これらのデータは、高い循環ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルと転移性癌（特に骨への転移）との関係を支持するものである。微小転移巣の生物学的な予後に関するかかわりをより正確に規定することが必要である。上昇したＶＥＧＦおよびおそらくｓＶＣＡＭ−１は、生物学的に活性で臨床上重要な疾患と関連があると考えられる。ｓＶＣＡＭ−１の循環レベルは、転移の可能性が生じる間のより複雑な関係と関連性があり得、そして、ＶＥＧＦは、腫瘍マーカーとしてのその古典的な役割に加えて、離れた転移の部位における新生血管形成の確立に重要であり得る。生物学的に攻撃性の疾患の他の腫瘍特異的マーカー（例えば、グリーソン分類、腫瘍侵襲性、およびＰＳＡ）に対して制御した場合でも、循環ＶＥＧＦレベルの予測における価値は大きいままである。また、ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、臨床上検出されない低体積の転移の存在とも関連があると考えられる。ＶＥＧＦまたはｓＶＣＡＭ−１の循環レベルが、宿主の因子（例えば、浸潤に対する離れた臓器による応答）によって生じるのか、それとも、本来の腫瘍細胞の生物活性の結果によって生じるのか、依然として明らかになっていない。転移性癌の患者における循環ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１の上昇について生物学的メカニズムがよりはっきりすれば、おそらく、それらの患者の臨床管理は向上するはずであり、また、治療のための新しいターゲットと、抗−血管形成の療法をモニターするためのマーカーが提供できるはずである（Ｍｉｌｌｅｒ，２００２）。
【０２３６】
前立腺癌が所属リンパ節および骨に転移した男性において、血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは顕著に上昇する。臨床上または病理学的に転移の証拠が認められない男性において、術前の血漿ＶＥＧＦレベルは、術後の生化学的進行の有力な予測因子である。これは、おそらく、根治的前立腺切除術時に存在する目に見えない転移性疾患との関連性によるものである。
【０２３７】
結論
血漿ＶＥＧＦおよびｓＶＣＡＭ−１のレベルは、転移性前立腺癌の男性において顕著に上昇する。さらに、両者は、根治的前立腺切除術後の生化学的進行の独立予測因子である。これは、おそらく、手術時にすでに存在する微小な転移性疾患との関連性によるものである。
【０２３８】
実施例７
いくつかの研究が最終的に示したところによれば、標準的な６ヶ所（セクスタント）生検（Ｓ６Ｃ）は、さらに外側の生検コアを含む生検テンプレートに比べて、検出する前立腺癌が少ない（Ｃｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｃｈａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。例えば、Ｃｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）が明らかにしたところによれば、システマティック１２コア生検（Ｓ１２Ｃ）法（標準的Ｓ６Ｃの他に、前立腺の基底、中央部および先端にそれぞれ１つずつ、６つの外側コアをさらに含む）によって特定される癌の６９％しか、６ヶ所（セクスタント）生検では検出されない。Ｓ６Ｃは、存在する癌の約３分の１を検出できないため、根治的前立腺切除術後の前立腺の病理学的特徴を予測するのに、Ｓ６Ｃは不十分であると考えられる。実際、多くの研究によって、前立腺切除術後の病理を予測するのにＳ６Ｃの能力が不十分であることが確かめられている。これらの研究は、前立腺切除術の標本の病理学的特徴を予測する際に、種々の生検パラメーター（生検ＧＳ、陽性コアの数、生検標本における腫瘍のパーセント、およびＳ６Ｃセットにおける癌の合計長を含む）の予測上の価値を評価している。Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）は、癌についての陽性コアのパーセントおよび６ヶ所（セクスタント）生検の生検グリーソンスコアが、腫瘍体積の有意な独立予測因子であることを報告した。しかし、その研究において、相関係数は、それぞれ２７％と１１．６％（１００を掛けたＲ２）であった。他の研究において、癌の体積は、陽性生検の数、陽性生検のパーセント、生検標本における癌の合計長、およびグリーソン分類４／５と相関したが、すべての相関係数は、１０％未満であった（Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０２３９】
Ｓ６Ｃ生検パラメーターと前立腺切除術の病理学との間に存在するこれらの有意な関連性にもかかわらず、被膜外への広がり（ＥＣＥ）（Ｅｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）、腫瘍体積（Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）および病理学的グリーソンスコア（ｐＧＳ）（Ｎａｒａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）を予測するためＳ６Ｃ生検パラメーターを含む信頼できるアルゴリズムは、出現していない。Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）は、６つのシステマティックな生検および根治的前立腺切除術の標本の病理学的特徴のすべてに対し、相関関係が弱く、期待はずれのものだったことを報告している。Ｃｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）もまた、根治的前立腺切除術の標本の病理学的パラメーターを予測するのに、Ｓ６Ｃ生検の能力が不十分であることを明らかにしている。
【０２４０】
材料と方法
患者の個体群
単一の病院（Ｓｃｏｔｔ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｕｒｏｌｏｇｙ，Ｂａｙｌｏｒ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓ）でＳ１２Ｃ生検をうけ、その後、常勤の職員によって根治的恥骨後方前立腺切除術をうけた患者２２８人すべてが、この解析の可能な候補者であった。Ｓ１２Ｃ生検は、ｔｈｅ  Ｂａｙｌｏｒ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆａｃｕｌｔｙの標準的な初期生検法となったものである。最初に限定的な放射線療法を受けた２人の男性およびこのＳ１２Ｃ生検の前に前立腺生検の履歴があった４８人は、除外した。これで解析に残ったのは、１７８人の男性であった。
【０２４１】
前立腺の針生検法
Ｓ１２Ｃ針生検法を、すでに報告された（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）ように行った。簡単に説明すると、Ｈｏｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）の記載のように標準的な６ヶ所（セクスタント）生検を行い、さらに、周辺領域の外側生検を、前立腺の基底、中心および先端において行った（図１７）。各生検コアを、４−標本カップ法（４−ｓｐｅｃｉｍｅｎ  ｃｕｐ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）を用い、赤、緑および青のインクを用いて、その出所位置（基底、中心、または先端；右または左；６ヶ所（セクスタント）または外側）につき、それぞれ識別した。泌尿器科医のスタッフの指示で行ったさらなる超音波、指、または移行領域方向の生検コアは、本研究から除外した。すべての生検は、一つの標準化した実施形態で、１人の泌尿器科医スタッフが、２人の超音波技術者（すべての患者にわたって生検テンプレートを標準化するのを手伝った）の１人とともに行った。グレイスケール経直腸超音波検査法を、Ｈｉｔａｃｈｉ  ＥＵＢ−Ｖ３３Ｗ  ６．５  ＭＨｚ  エンドファイアー（ｅｎｄ−ｆｉｒｅ）プローブ（Ｈｉｔａｃｈｉ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）を用いて行った。生検コアは、ＰｒｏＭａｇ  ２．２  バネ押し銃（Ｍａｎａｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎｏｒｔｈｂｒｏｏｋ，ＩＬ）にて１８ゲージ針を用いて採取した。前立腺全体および移行領域を、三次元測定し、その体積を長楕円式を用いて推定した。
【０２４２】
病理学的標本
各生検標本において、常勤職の病理学者が、以下の変数を測定し、記録した。各コアの癌浸潤の全ミリメートル（ｍｍ）、各コアの合計長ｍｍ、および腫瘍を有するコアにおいて特定される腫瘍のＧＳ。根治的恥骨後方前立腺切除術を、２つの大学付属病院の１つ、すなわちＳｔ．Ｌｕｋｅ’ｓ  Ｅｐｉｓｃｏｐａｌ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  （ｎ＝４２），Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴｅｘａｓまたはＴｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  （ｎ＝１３６），Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘａｓのいずれかにおいて、行った。Ｔｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｉｓｔ  Ｈｏｓｐｉｔａｌでの前立腺切除術の標本を、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ａｎｄ  Ｌｅｂｏｗｉｔｚ  （１９９４）においてすでに報告されているように、固定し、５ｍｍの横断面によるホール・マウント法において加工した。Ｓｔ．Ｌｕｋｅ’ｓ  Ｈｏｓｐｉｔａｌでの前立腺切除術の標本は、複数のレベルに連続的に切断し、次いで、２つまたは４つの切片にさらに分割し、そのまま供した。断面を調査した後、ｐＧＳを付与した。各癌の病巣の程度を特定した後、ＥＣＥを、２値のカテゴリー変数（陽性とみなされるＬ３ＥとＬ３Ｆ、Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８参照）として記録した。ホール・マウント工程によって切断した前立腺切除術の標本すべてについて、Ｂｉｏｓｃａｎイメージ解析システムを用い、Ｏｐｔｉｍａｓ  ソフトウェアによるコンピュータ処理面積測定法を用いて、総腫瘍体積（ＴＴＶ）を算出した。
【０２４３】
予後変数および統計
比較の生検セットの群には、セクスタント（図１７、Ｓ６Ｃ＝Ｘ）、外側のシステマティックな６つのコア（図１７、Ｌ６Ｃ＝Ｏ）、および全Ｓ１２Ｃ生検セット（図１７、Ｓ１２Ｃ＝Ｘ＋Ｏ）が含まれた。生検セットあたりの腫瘍浸潤のパーセントは、式（（コア１における腫瘍の全パーセント）＋（コア２における腫瘍の全パーセント）＋（コア３における腫瘍の全パーセント）＋・・・／（セットにおけるコアの総数））×１００を用いて、得た。生検セットの癌の合計長は、その特定の生検セットにおけるすべての癌のｍｍの合計であった。生検ＧＳは、生検セットについての最大の原発性グリーソン分類および続発性グリーソン分類の合計として求めた。各生検セット群における生検ＧＳ、陽性コアの数、癌の合計長、および腫瘍のパーセントを、スピアマンのロー相関係数を用いて、ＥＣＥ、ＴＴＶ、およびｐＧＳを予測するその能力について検査した。
【０２４４】
前立腺切除術の病変の独立予測因子を決定するため、段階的多重回帰分析を行った。Ｌ６ＣおよびＳ６Ｃの両方のセットからの生検パラメーターをこの分析に含めた。Ｓ１２Ｃセットの生検予測因子は、この分析に含めなかった。その理由は、これらのパラメーターが、Ｓ６Ｃおよび６ＬＣのパラメーターから独立しておらず、それらを数学的操作したものにすぎないからである。例えば、Ｓ１２Ｃの陽性コアの数および癌の合計長は、Ｌ６ＣとＳ６Ｃのパラメーターの和であり、腫瘍浸潤のパーセントは、Ｌ６ＣとＳ６Ｃの腫瘍浸潤のパーセントの和を２で割ったものであり、Ｓ１２Ｃ生検のＧＳは、Ｌ６ＣおよびＳ６Ｃのセットに含まれる原発性分類および続発性分類の最大値の合計である。本研究における統計的有意性は、Ｐ＜０．０５に設定した。記載したすべてのＰ値は、両側検定のものである。すべての解析は、ＳＰＳＳ統計パッケージ（Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）用ＳＰＳＳバージョン１０．０）を用いて行った。
【０２４５】
ＥＣＥ、ｐＧＳ、およびＴＴＶの独立生検予測因子を用いて、Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）の説明に規定されるように、重要でない癌の存在について、感度、特異性、ならびに陽性および陰性の適中率（予測値）を評価するためのテストを構築した。具体的には、重要でない腫瘍は、＜０．５ｃｍ３の腫瘍体積を有し、前立腺に限局しており、かつ７未満のｐＧＳを有するものとして、定義した。バイアスを最小限にするため、生検予測因子変数の得られる中央値をカットポイント値として用いた。
【０２４６】
結果
研究コホートの年齢の中央値は６２歳であった。そして、全ＰＳＡの中央値および遊離ＰＳＡ％の中央値は、それぞれ、５．８ｎｇ／ｍｌと２４．７であった。ＴＴＶの中央値は０．５６ｃｃであった。患者の２４．７％はＥＣＥであった（表２１）。
【０２４７】
Ｓ１２Ｃセット由来のパラメーターは、ＥＣＥおよびＴＴＶを予測する際に最高の相関係数を示した（表２２）。６ヶ所（セクスタント）セットのグリーソンスコアが、最もうまくｐＧＳを予測し、Ｓ１２Ｃセットのグリーソンスコアがそれに次いだ。生検セットのそれぞれについて、ＴＴＶを予測するため最も大きな係数は、癌の合計長であった（Ｓ１２Ｃ＞Ｌ６Ｃ＞Ｓ６Ｃ）。Ｓ１２Ｃにおける腫瘍浸潤のパーセント、癌の合計長、および陽性コアの数は、Ｌ６ＣまたはＳ６Ｃのセットから得られるいずれの生検パラメーターよりも、好ましいＥＣＥの予測因子であった。Ｓ６ＣまたはＬ６Ｃに由来するパラメーターと比較したとき、全体として、Ｓ１２Ｃに由来するパラメーターとＴＴＶおよびＥＣＥの両方との優れた関連性が相関解析によって明らかになった。
【０２４８】
【表２１】
2006524315.tif 000026
【０２４９】
【表２２】
2006524315.tif 000027
＊  病理学的グリーソンスコアは、＜７対≧７として分類した。
【０２５０】
セクスタントおよびＬ６Ｃセットの生検パラメーターに対して制御した多変量解析において、Ｓ６ＣおよびＬ６Ｃセットの両方からの寄与が、ＴＴＶ、ＥＣＥ、およびｐＧＳ７以上と関連があった（表２３）。Ｓ６Ｃのグリーソンスコアおよび陽性の外側コアの数は、それぞれ、ＥＣＥを予測するオッズが２倍よりも大きかった。Ｓ６Ｃのグリーソンスコアは、ＰＧＳを予測するオッズ比が１２倍あり、これは、Ｌ６Ｃ（２倍）またはＳ６Ｃ（１．５倍未満）の陽性コアの数よりはるかに大きかった。Ｓ６Ｃの腫瘍浸潤パーセントおよびＬ６Ｃの癌の合計長は、それぞれ、独立してＴＴＶを予測した。
【０２５１】
本研究における患者の３３人（２０．１％）は、重要でない腫瘍について、Ｅｐｓｔｅｉｎの基準（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）を満たした。Ｓ６Ｃパラメーターから得られる検定を用いると、４５人の患者が、誤って、重要でない癌を有すると類別された（表２４）。しかし、Ｌ６Ｃのパラメーターを加えることにより、１０人の患者のみが、誤って、重要でない癌を示唆する病理学的特徴を有すると類別された。従って、Ｓ６ＣとＬ６Ｃのパラメーターを組み合わせることで、陰性の適中率（％）をわずか１１％の減少にとどめて、陽性の適中率を３９％から５２％に増加させた。一方、Ｓ６Ｃの生検に基づく検定は、４９（２９．９％）の腫瘍の有意性（重要度）を誤って類別し、これに対し、Ｓ１２Ｃに基づく検定は、３２（１９．５％）の腫瘍のみを誤って類別した。
【０２５２】
【表２３】
2006524315.tif 000028
●  病理学的グリーソンスコアは、＜７対≧７として分類した。
【０２５３】
【表２４】
2006524315.tif 000029
考察
重要な結果と密接に関連する変数が、より大きな識別力と較正が備わったノモグラムの開発の基礎となる。この分野の以前の研究（Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４；Ｇｒｏｓｓｋｌａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）に基づいて、より広い領域の生検におけるデータが、前立腺切除術後の病理予測を向上させることができるかどうか、検討した。外側の生検を標準的なシステマティック６ヶ所（セクスタント）生検に加えることにより、ユニークな前立腺切除術後の病理予測値が得られるという仮説をたてた。ここに記載した分析により、外側の生検コアは、ユニークな情報を含み、セクスタントのセットからの生検情報を含む多変量解析において、前立腺切除術標本でのＥＣＥ、ｐＧＳ、およびＴＴＶの予測を向上させるということが実証された。このことは、前立腺病理学における生検予測因子の把握の進歩を意味するとともに、将来の予測モデルおよびノモグラムにより広い領域の生検を組み込むことへの合理的根拠となる。
【０２５４】
本研究の個体群は、Ｓ１２Ｃ生検で検出された臨床上局所的な前立腺癌の患者の最近のコホートを代表するものである。セクスタント生検に対するＳ１２Ｃの卓越性が認められるようになってきている一方、根治的前立腺切除術後の最終的な病理学的パラメーターの予測において、種々の生検テンプレートのそれぞれの能力を取り扱った研究はほとんどない。Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）は、最近、より多くの重要な癌（＜０．２ｃｃでなく、臓器限局で、かつｐＧＳ＜７として定義）がより広い領域の生検で検出されることを報告している。Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）は最近、１９９５年３月〜１９９６年４月に診断された平均６．２コアの前立腺癌の患者において、２０．８％が０．５ｃｃ未満の腫瘍体積を有したことを報告している。本コホートにおいて、半分近くの患者が、０．５ｃｃ未満の腫瘍体積を有しており、それにもかかわらず、最終的ＧＳが3７の者がその中にいた。より小さな腫瘍が検出される割合が高くなったのは、おそらく、本研究の個体群がシステマティック１２コア生検を受けたことによる。より最近に診断された患者のコホートにおいては、より小さく、あまり進行していない腫瘍に病期が移行し続けていることが、複数の研究者によって明らかにされている。さらに、外側のコアを加えることによって、小さな腫瘍を検出する確率は上昇し得る。しかし、我々のコホートにおいて、ＥＣＥの割合は、Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）の報告よりもわずかに低いだけである（２４．７％対２６．６％）。該コホートの年齢およびＰＳＡの中央値は、最近の報告（患者が平均１０以上のコア生検を受けたもの）（Ｓａｎ  Ｆｒａｎａｓｃｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｐｒｅｓｔｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）と類似している。全体として、これらのデータから、平均すると、Ｓ１２Ｃによって診断されるより小さな腫瘍が示す攻撃性癌の特徴は、セクスタント生検により診断されるものに類似する割合であることが示唆される。
【０２５５】
ＴＴＶ、ｐＧＳ、およびＥＣＥを結果変数として選んだ。その理由は、精嚢浸潤またはリンパ節浸潤のない患者において、それらが、前立腺癌の再発および無痛性について、最もよい病理学的予測因子となるからである（Ｗｈｅｅｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８；Ｋｏｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，２０００；Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３）。ここ数年にわたって、種々のグループが、生検中の癌のパーセントが前立腺切除術後の病理学的知見にとって最も良い予測因子であるということを示唆してきた（Ｇｒｏｓｓｋｌａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）一方、前立腺の病理を最も良く示すものは、陽性コア数であると示唆するもの（Ｗｉｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）や生検標本中の癌の総ｍｍであると示唆するもの（Ｇｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）もあった。これらの相反する知見を考慮して、広い範囲の生検予測因子（すなわち、陽性コア数、癌浸潤のパーセント、癌の合計長、および生検グリーソンスコア）を評価することに決めた。本研究を設計するにあたって、Ｌ６Ｃのセットの予測能力に偏向するバイアスを最小限にすることを試みた。従って、このＳ１２Ｃセットの前に生検の履歴がある患者を排除した。その理由は、それらの患者の多くが、以前には陰性のセクスタント生検であったはずだからである。
【０２５６】
単変量相関解析において、Ｓ１２Ｃ、Ｓ６Ｃ、およびＬ６Ｃのセットからの生検パラメーターすべてが、有意に、ＴＴＶ、ＥＣＥ、および病理学的ＧＳと関連した。仮説と一致して、ＴＴＶおよびＥＣＥを予測するため最も高い係数をもたらしたのは、Ｓ１２Ｃのセットであった。これは、Ｓ１２Ｃのセットに含まれる情報が、前立腺切除術の標本に見出されるものをよりよく代表していることを示唆している。Ｓ１２Ｃがより優れているが、有意な関連性がＳ６Ｃと最終病理学的パラメーターとの間に認められ、これは、セクスタント生検を受けた患者に主として基づく以前の研究と一致した。例えば、Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）は、単変量解析において、陽性生検コアの数および癌の合計長が、癌の体積および陽性切除縁の割合と有意に関連があることを明らかにしている。Ｓｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）は、根治的前立腺切除術を受けた２１０人の患者を分析し、腫瘍浸潤のパーセントおよび生検ＧＳが病理学的病期の有意な予測因子であることを見出している。
【０２５７】
さらに、生検に基づくパラメーターのどれが、多変量解析において前立腺病理の独立予測因子であるか調べた。Ｓ６ＣおよびＬ６Ｃのセットの両方がＥＣＥ、ｐＧＳ（＜７対3７）、およびＴＴＶの予測に有意に寄与することがわかった。有意なＳ６Ｃセットの生検パラメーター（多変量解析において明らかになったもの）は、領域を広げていない生検スキームに基づく以前の報告と矛盾しないものであった。Ｇｉｌｌｉｌａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）は、生検グリーソンスコアが独立してＥＣＥの状態を予測することを報告しており、本Ｓ６Ｃセットのグリーソンスコアと合致する知見である。ｐＧＳは、１２倍より大きいオッズでＳ６Ｃグリーソンスコアによって最も良く予測された。興味深いことに、ｐＧＳの予測において、２分の１未満のオッズ比が陽性Ｓ６Ｃコアの数と関連があった。このことは、他のすべてが同じに維持されるならば、陽性セクスタントコアのより大きな数が、より低い病理学的グリーソンスコアを予測することを意味する。この知見は、Ｌ６ＣのセットにおけるよりむしろＳ６Ｃにおける移行領域のより大きなサンプリングによって説明できる可能性がある。移行領域の腫瘍は、生物学的攻撃性が低く、そして、周辺領域の腫瘍よりも、診断の時点でより低いグリーソンスコアと一般に関連がある（Ｍａｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。
【０２５８】
Ｌ６Ｃの陽性コアの数は、特に、ＥＣＥおよびｐＧＳの予測において、２倍より大きなオッズを付加した。Ｓ６Ｃセットの腫瘍浸潤パーセントはＴＴＶを予測した。これは、Ｇｒｏｓｓｋｌａｕｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）およびＳｅｂｏ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）の知見と合致している。Ｌ６Ｃの癌の合計長は、Ｓ６Ｃの腫瘍浸潤パーセントとは無関係に、ＴＴＶの予測に寄与した。Ｈｏｄｇｅによって説明されるもともとのシステマティックなセクスタント法と比べて、外側の生検を伴う生検法は、周辺領域（癌を潜伏させる可能性がより高い領域）をさらにサンプリングする。特に、Ｓ１２Ｃセットは、外側先端および外側基底のような最も高い癌検出部位（Ｇｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）を含んだため、存在する前立腺腫瘍のより良い評価がもたらされる可能性が高い。
【０２５９】
Ｓ１２Ｃセットに含まれる値を予め洞察するのに、リスク階層化モデルよりもノモグラムのほうが優れた性能を有することを示すはっきりした証拠（Ｅａｓｔｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）があるが、Ｅｐｓｔｅｉｎの基準（Ｅｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４）に基づき、腫瘍の非重要性に対してテスト（検定）を構築した。明らかなところによれば、外側の生検データをそのようなテストに加えることによって、その特異度および陽性の適中率は向上し、腫瘍の重要性の誤った類別化は１０．４％減少する。この知見が示唆するところによれば、Ｓ１２Ｃに基づくパラメーターを用いることにより、重要な腫瘍の患者を不十分に治療するリスクを最小限にしながら、重要でない腫瘍の負担を有する患者を医師が識別できるようになるはずである。臨床およびバイオマーカーのデータを付加したより広い領域の生検セットに基づき、ノモグラムの信頼性を向上させることができる可能性がある。
【０２６０】
結論
本研究が提供する証拠によれば、生検コアの総数と各コアが得られる位置は、前立腺切除術後の病理に対する生検予測因子の正確さに、大きく影響する。本コホートにおいて、Ｓ６ＣおよびＬ６Ｃのセットの両方が、独立して、病理学的グリーソンスコア、総腫瘍体積、および被膜外への広がりの予測に寄与した。Ｓ１２Ｃデータを用いかつセクスタント生検コアおよび外側生検コアから得られる生検パラメーターを指定する術前のノモグラムは、明らかに、前立腺切除術後の病理（例えば、無痛性の癌または被膜外への広がりの存在）を予測する能力を向上させる可能性が高い。
【０２６１】
実施例８
遊離ＰＳＡパーセント（％ｆＰＳＡ）およびＰＳＡ密度（ＰＳＡＤ）について確認した切断点（カットポイント）は、セクスタント生検を主に用いた癌検出に基づく。標準的セクスタントと６つの外側生検とをあわせて含むシステマティック１２コア（Ｓ１２Ｃ）生検は、前立腺癌についての検出率を有意に上昇させ、そして、小体積癌をより大きな割合で検出しうる。これらの患者において生検をうながすＰＳＡの上昇は、癌よりむしろ、良性前立腺増殖症（ＢＰＨ）に起因しうる。
【０２６２】
方法
本研究では、ＰＳＡが４〜１０（ｎｇ／ｍｌ）の範囲であり、Ｓ１２Ｃ生検を受けた３３６人の継続的男性を評価した。中央の６コア生検（Ｍ６Ｃ）と完全Ｓ１２Ｃのセットとで、研究群を構成した。指および超音波誘導の生検コアは、除外した。ＰＳＡＴＺＤ（ＰＳＡ移行領域密度）、ＰＳＡＤ（ＰＳＡ密度）、総ＰＳＡ（ｔＰＳＡ）、複合ＰＳＡ（ｃＰＳＡ）、および％ｆＰＳＡについてのＲＯＣ曲線を、癌診断に基づき構築し、ＡＵＣ類を比較した。さらに、それらのそれぞれの切断点および特異度での９０％感度を算出した。
【０２６３】
結果
Ｓ１２ＣおよびＭ６Ｃ生検セットについて、癌の検出率はそれぞれ３７．７％および２８．４％であった。注目すべきことに、両方の生検研究群について、ＰＳＡＴＺＤがＰＳＡＤよりも良く、そして、％ｆＰＳＡよりＰＳＡＤのほうがよかった。Ｓ１２ＣおよびＭ６Ｃ群についてＡＵＣ類および９０％感度の値を以下に示す。
【０２６４】
【表２５】
2006524315.tif 000030
最大のＡＵＣ、ＰＳＡＴＺＤ、ＰＳＡＤ、および％ｆＰＳＡによる３つの血清テストの能力は、従来のセクスタント検定と比べて、Ｓ１２Ｃ生検により低下するようである。
【０２６５】
実施例９
最初にＳ１２Ｃを受けて前立腺癌の証拠がなかった患者において第２のシステマティック１２コア生検（Ｓ１２Ｃ）での前立腺癌の予測因子を調べるため、最初にＳ１２Ｃ生検を受けた１０４７人の継続的患者を研究において評価した。これらの患者のうち１４４人が、Ｓ１２Ｃを受けて、前立腺癌の証拠がなく、さらにＳ１２Ｃ生検を繰り返しうけた。これらの患者のうち９５人が、最初の生検において２．５〜１０ｎｇ／ｍｌの前立腺血清抗原（ＰＳＡ）を有し、最終的に本研究の個体群を構成した。評価したパラメーターには、最初と再度の生検ＰＳＡ、最初と再度の遊離ＰＳＡパーセント（％ｆＰＳＡ）、最初と再度の生検の直腸指診（ＤＲＥ）の状態（正常  対  異常）、最初の生検時の高グレード前立腺上皮内新形成（ＰＩＮ）の存在、最初の生検時の異型小腺房増殖（ＡＳＡＰ）の存在、悪いＤＲＥ変化（最初の正常→再度の異常）、ＰＳＡ倍増時間（ＰＳＡｄｔ＝ｌｏｇ（２）*（ＰＳＡ測定間の日数）／［ｌｏｇ（再度のＰＳＡ）−ｌｏｇ（最初のＰＳＡ）］）、および１年あたりの生検間のＰＳＡの変化（ｙｉｂＰＳＡ＝［（再度のＰＳＡ）−（最初のＰＳＡ）］／（ＰＳＡ測定間の日数）*３６５）が含まれた。統計法には、マン−ウィットニーのＵ検定、ピアソン（Ｐｅａｒｓｏｎ）のカイ二乗検定、および多変量ロジスティック回帰分析が含まれた。
【０２６６】
結果
多変量解析において、ＰＳＡｄｔ、ｙｉｂＰＳＡ、最初および再度のＰＳＡ、最初および再度の％ｆＰＳＡ、悪いＤＲＥ変化、再度のＤＲＥ状態、およびＡＳＡＰの存在は、再度の生検において前立腺癌の有意な予測因子ではなかった。しかし、最初のＤＲＥ状態（Ｐ＝０．０３４）およびＰＩＮの存在（Ｐ＝０．０１０）は、再度の生検において前立腺癌の有意な予測因子であった。多変量ロジスティック回帰分析においては、ＰＩＮの存在のみが依然として前立腺癌の有意な予測因子であった（Ｐ＝０．０１２）。
【０２６７】
結論
これらの結果が示唆するところによれば、ＰＳＡが２．５〜１０ｎｇ／ｍｌで最初のＳ１２Ｃ生検がＰＩＮを含む一方、癌がなかった患者にとって、ＰＩＮの存在のみが、再度の生検の指標となっている。
【０２６８】
実施例１０
生検を通じて得られるデータが、側面に特有の後外側ＥＣＥを予測するのに有用であり得るかどうか、そして、１２コア生検法（Ｓ１２Ｃ）がＳ６Ｃより優れているかどうかを調べるため、Ｓ１２Ｃを受け、その後、根治的恥骨後方前立腺切除術（ＲＲＰ）を受けた１８１人の継続的患者を分析した。ＲＲＰの標本をホール・マウント法により加工した。ＰＳＡ、ＤＲＥ、生検グリーソン分類の最大値（ｍＧＧ）、陽性コア数（ＰＣ）、隣接する陽性コアの数（ＣＰＣ）、および癌を有する生検材料のパーセント（％ＣＡ）を、多変量ロジスティック回帰分析およびピアソンのカイ二乗検定を用いて、それらの後外側ＥＣＥ予測能力について検定した。
【０２６９】
結果
後外側ＥＣＥのデータセットにおける患者の大部分は、その前立腺癌の唯一悪い病理学的特徴として後外側ＥＣＥを有するものであった。１９％（９５％ＣＩ＝１〜３３％）のみが陽性リンパ節ＳＶＩ、または膀胱の頚部または尖部のＥＣＥを有した。ＰＳＡ≦１０ｎｇ／ｍｌおよび生検ＧＳ≦７に限定したとき、８％（ＣＩ＝２〜２５％）のみが悪い病理学的特徴をさらに有した。ＤＲＥおよびｍＧＧついて制御を行う多変量解析において、セクスタントコアにおけるＰＣの数、％ＣＡ、およびＣＰＣの数は、すべてＥＣＥの予測因子であった。しかし、Ｓ１２Ｃデータから相当するパラメーターを加えたとき、それらの予測因子はもはや有意ではなかった。このことは、これら３つのパラメーターのそれぞれについて、Ｓ１２Ｃデータの方がセクスタントコアのデータより優れていたことを意味している。１２ＣＲ％ＣＡのＡＵＣは０．８８（９５％ＣＩ＝０．８２〜９３）であった。Ｓ１２ＣのＣＰＣおよびＰＣの数は、％ＣＡに匹敵する感度および特異度を有した。
【０２７０】
従って、Ｓ１２Ｃ生検を通じて得られたデータは、後外側ＥＣＥの独立予測因子であり、かつ類似するセクスタント生検データより優れたものであった。
【０２７１】
実施例１１
ＲＰにおいてＥＣＥの側を予測するためのノモグラムを作るため、臨床病期がＴ１Ｃ〜Ｔ３の前立腺癌で、システマティック生検で診断した後ＲＰを受けた７６３人の患者を調査した。ＲＯＣ分析を行い、各変数単独のまたはその組合せの予測値（診断価値）を評価した。変数には、ＤＲＥについての異常度、最も悪いグリーソンスコア（任意の一つのコアにおける最も悪いグリーソンスコア）、癌を有するコアの数、各サイドにおける生検標本中の癌のパーセント（ＰＥＲＣＡ）および血清ＰＳＡレベルが含まれた。
【０２７２】
結果
全体で、患者の３１％がＥＣＥを有し、前立腺の１５２６のサイドの１７％がＥＣＥを有した。ＤＲＥについての触診可能な異常のない８１２のサイドのうち、９５（１１．５％）がＥＣＥを同側サイドで有し、これに対し、Ｔ３の小節を有する３４のサイドのうち２０（５８．８％）がそうであった。生検において癌がなかった（グリーソン合計０として記録）５００のサイドのうち３０（６％）が、ＥＣＥを同側サイドで有し、これに対し、グリーソン合計が７（４＋３）１０の癌の１２２のサイドのうち６４（５２．４％）がそうであった。ＥＣＥの側の予測において、ＤＲＥ、生検グリーソン合計およびＰＳＡの曲線（ＡＶＣ）下の面積は、それぞれ、０．６４８、０．７２４、および０．６２７であり、そして、これらのパラメーターを合わせた場合、０．７６３であった。さらに、これは、システマティック生検の情報を加えることにより高められ、癌のパーセントにより、０．７８７の最高値であった。回帰分析に基づき、ノモグラムを作成し（図１８）、このノモグラムの精度（正確さ）は内部校正により確かめられた。
【０２７３】
結論
前立腺の各側（サイド）での治療前の変数を組み込んだノモグラムにより、ＲＰ標本におけるＥＣＥの側を正確に予測することができる。従って、このノモグラムは、根治的前立腺切除術に先立って、臨床上の決定（例えば神経血管束の切除か温存か）を支援することができる。
【０２７４】
実施例１２
根治的前立腺切除術（ＲＰ）に続いて生化学的再発（ＢＣＲ）に対するサルベージ外部ビーム放射線療法（ＸＲＴ）を受けた後にＰＳＡ進行がないことを予測する精度を高めるためのノモグラムを作るため、サルベージＸＲＴを受けた３７５人の患者について、前立腺切除術の前および後の臨床病理学的データおよび疾患追跡調査を、コックス比例ハザード回帰分析を用いてモデル化した。サルベージＸＲＴを適当とすべき症状には、前立腺切除術後に持続的に上昇するＰＳＡ（ｎ＝１０８）と、臨床上明らかなＬＲ（局所再発）を伴うまたは伴わないＢＣＲ（ＰＳＡ＞０．１、Ｎ＝２６７）とが含まれた。０．１より大きなＰＳＡの上昇が２回続けて起こったとき、サルベージＸＲＴ後の生化学的進行とした。ノモグラムに使用するため、放射線療法の前の変数を選んだ。それらには、術前のＰＳＡ、ＸＲＴ前のＰＳＡ、ＸＲＴ前のＰＳＡ倍増時間、グリーソン合計、病理学的病期、切除縁の状態、ＲＰからＢＣＲまでの時間、ネオアジュバントホルモン療法、およびＸＲＴ線量が含まれた。
【０２７５】
結果
ＸＲＴ後の追跡調査の中央値は３５．８ヶ月であった。全体で、サルベージＸＲＴ後の、２年および５年の生命表法による進行のない確率（ＰＦＰ）は、それぞれ５７％と３１％であった。進行のない期間の中央値は３２．２ヶ月であった。ＸＲＴ後の再発に対する時間の中央値は１１．６ヶ月であった。多変量コックス回帰分析によって明らかになったことは、グリーソン合計（ＨＲ  １３．９、Ｐ＝０．０００２）、ＸＲＴ前のＰＳＡ（ＨＲ  ２．２、Ｐ＝０．００１）、ＰＳＡ倍増時間（ＨＲ  ０．４５、Ｐ＝０．００２）、陽性の切除縁（ＨＲ  ０．５４、Ｐ＝０．００３）、およびネオアジュバントホルモン療法（ＨＲ  ０．５４、Ｐ＝０．００３）が有意な予後変数であるということであった。２年の進行のない確率を予測するためのノモグラムを、予め選んだ変数すべてを用いて作成した（図１９）。該ノモグラムは、０．７３のブートストラップ補正一致指数を有した。
【０２７６】
本コホートにおいてサルベージ放射線療法から長続きする恩恵を受ける患者が少数であることと、罹患率とを考えると、この療法を考慮するとき、患者の選択が重要であることは明らかである。このノモグラムは、サルベージ放射線療法を受けるべき最も適当な患者を特定するのに役に立つ一つのツールである。ＸＲＴ前のＰＳＡ＜２ｎｇ／ｍＬ、ＰＳＡＤＴ＞１０ヶ月、グリーソン合計２〜７、およびサルベージ放射線療法後のｐＴ３ａ前立腺癌である典型的な患者に対し、本ノモグラムは、２年のＰＦＰを６５〜９５％であると予測する。
【０２７７】
実施例１３
移行領域体積（ＴＺＶ）および全前立腺体積（ＴＰＶ）がＰＳＡの独立予測因子であるかどうか調べるため、超音波誘導下で行ったシステマティック１２コア生検を受けた５６０人の男性を分析した。それは、レトロスペクティブ・コホート分析における男性の総数（ｎ＝１０４７）から陽性の前立腺生検のあった及びなかった多人種の個体群に属するものであった。エントリーの基準は、総血清ＰＳＡおよび遊離血清ＰＳＡの測定のため、生検の前に血清を採取・分析していることであった。ＴＺＶおよびＴＰＶを、標準的な楕円式＝高さ×幅×長さ×０．５２４を用いて算出した。多変量ロジスティック回帰分析および多変量線形回帰分析を用いて、人種、年齢、ＴＺＶ、およびＴＰＶが総ＰＳＡ、遊離ＰＳＡおよび総ＰＳＡの最高四分位数の独立予測因子およびリスク因子であるかどうかを決定した。
【０２７８】
結果
５６０人の男性のうち、８０％が白人、４％がアフリカ系アメリカ人（黒人）、５．２％がスペイン系、９％がアジア系、そして１４．８％が混血または「その他」と指定されたものであった。
【０２７９】
【表２６】
2006524315.tif 000031
線形回帰分析を用いて人種、年齢および生検の状態に対し制御する場合、システマティック１２コア生検が陽性または陰性のいずれかであった男性において、ＴＺＶおよびＴＰＶはそれぞれ別々にＰＳＡの有意な予測因子であった（それぞれＰ＜０．０００１）。この研究群において、人種は、ＰＳＡの独立予測因子であることが証明されなかった。
【０２８０】
実施例１４
臨床上局所的な前立腺癌と診断される男性には、治療についていくつかの可能な選択肢（注意深く様子を見る、根治的前立腺切除術、および放射線療法を含む）がある。血清ＰＳＡ試験が広く利用されるようになったため、前立腺癌は、その自然な経過の中、初期の時点で診断されており、多くの腫瘍が、小さくかつ少なくとも短期間においては患者の健康にあまりリスクがない状態である。前立腺癌と診断される男性により良い助言をするため、統計モデルを開発した。その統計モデルは、臨床変数（血清ＰＳＡ、臨床病期、前立腺生検グリーソン分類、および超音波体積）ならびにシステマティック生検の解析から得られる変数に基づき、癌の存在を正確に予測するものである。
【０２８１】
材料と方法
解析には、１０２２人の患者が含まれた。該患者は、システマティックな針生検によって臨床病期Ｔ１ｃ〜Ｔ３  ＮＯまたはＮＸ、およびＭＯまたはＭＸの前立腺癌と診断され、２つの病院のうちの１つで根治的前立腺切除術のみの治療を受けたものである。さらなる生検の特徴には、癌および悪性度の高い癌に関する生検コアの数および百分率が含まれ、さらに、関連する生検コアの合計長が含まれた。無痛性の癌は、病理学的に臓器限局の癌で、体積が０．５ｃｃ以下であり、かつ分化が不十分な要素がないものとして定義した。ロジスティック回帰を用いて、いくつかの予測モデルおよびそれによるノモグラムを構築した。
【０２８２】
結果
全体で、患者の１０５人（１０％）が無痛性の癌を有した。ノモグラム（図２０）は、種々のモデルについて、０．８２〜０．９０の範囲の識別度（受診者動作特性曲線下の面積）で、無痛性癌の存在を予測した。該モデルの較正は良好であると思われた。
【０２８３】
結論
治療前の変数（臨床病期、グリーソン分類、ＰＳＡ、およびシステマティック生検標本中の癌の量）を組み込んだノモグラムにより、前立腺癌の男性が無痛性腫瘍を有する確率を予測することができる。これらのノモグラムは、識別力に優れ、較正が良好であり、そして、前立腺癌について種々の治療の選択肢を考慮するとき、患者および医師の両方に利益をもたらし得る。
【０２８４】
実施例１５
ＲＰ標本における＋ＳＭの部位の予後に対する有意性を査定するため、２人の外科医によってＲＰを受けた１３６８人の継続的患者について調べた。癌の詳細な病理学的特徴は、１人の病理学者によって評価された。ＰＳＡ再発の前のアジュバント放射線療法は、ＰＳＡ進行のない確率（ＰＦＰ）を分析するため、時間依存性共変量として評価した。追跡検査の中央値は４８ヶ月であった。
【０２８５】
結果
全体で、１７９人の患者（１３％）が＋ＳＭであった。＋ＳＭ部位の詳細な結果がある１６９人の患者のうち、１２２人（７３％）が単一の＋ＳＭ部位のみを有し、３２人（１９％）が２つの＋ＳＭ部位を有し、１４人（８％）が２より多い＋ＳＭ部位を有した。単一または２つの＋ＳＭ部位を有する患者について５年でのＰＦＰは、７１％と７４％であり、２つより多い＋ＳＭ部位を有する患者の３６％より有意に良好であった（それぞれｐ＝０．００６とｐ＝０．０２）。合計２４６の＋ＳＭ部位のうち、３０％は先端の切片標本にあり、２９％は尖部（最初の２つのホール・マウント工程の切片）にあり、２４％は中間部にあり、９％は基底部の切片標本（最後の２つの切片）にあり、６％は膀胱頚部にあり、そして２％は精嚢にわたってあった。横断面の分析において、２４％は腹側（前方）にあり、１９％は後外側にあり、１４％は背側にあり、５％は外側にあった。単一の＋ＳＭを有する患者に対して５年でのＰＦＰは、＋ＳＭが先端にある場合６９％であり、尖部にある場合８４％であり、これらは、単一の＋ＳＭが基底部にある場合の２７％より、有意に良かった（それぞれｐ＝０．００８とｐ＝０．０１）。一方、＋ＳＭが中間部または膀胱頚部にある患者は、中間のＰＦＰを有した。癌は、＋ＳＭが先端（８３％）または尖部（７４％）にある場合、＋ＳＭが基底部にある場合（１４％）よりも、より多く前立腺に限局していた。単一の＋ＳＭである患者に対して５年でのＰＦＰは、＋ＳＭが背側にある場合４８％であり、これは、＋ＳＭが腹側にある患者の７９％より、有意に悪かった（ｐ＝０．０３３）。種々のモデル対するコックスハザード回帰分析において、他の確立した病理学的特徴および血清ＰＳＡレベルを制御した場合、先端の＋ＳＭが唯一、ＰＳＡ進行の有意な予測因子であった（ｐ＝０．００２１）。＋ＳＭの割合は、前立腺あたりの＋ＳＭ部位の数と同様に、時間が経つにつれて有意に減少した（ｐ＜０．００５）。また、先端または尖部の全＋ＳＭの比率は、有意に増加した（ｐ＜０．００５）。
【０２８６】
結論
予後についての＋ＳＭの有意性は、ＲＰ標本における＋ＳＭの位置に依存しうる。基底および／または背側に＋ＳＭがある患者は、他の＋ＳＭの位置に比べて、ＰＦＰが悪かったが、先端の切片標本における＋ＳＭ（有意に増加しているもの）のみが、多変量解析において有意な予測因子であった。従って、先端の切片標本における＋ＳＭについてより多くの注意を払うべきである。
【０２８７】
実施例１６
種々の癌において、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化カスケードは、悪い臨床結果と密接に関係してきた。以下の仮説を検証した。「ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化カスケードの主要成分（ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子、ＵＰＡ；ＵＰＡ受容体、ＵＰＡＲ；およびその阻害物質、ＰＡＩ−１）の術前の血漿レベルにより、根治的前立腺切除術を受けている患者において、癌の存在、病期および疾患の進行を予測できるはずである（図２１）。」
臨床上局所的な疾患に対し根治的前立腺切除術を受けた１２０人の継続的患者において、ＵＰＡ、ＵＰＡＲ、およびＰＡＩ−１の血漿レベルを、術前に測定し、さらに、それらの患者のうち５１人において、術後に測定した。マーカーのレベルを、健常な男性４４人、所属リンパ節に転移した患者１９人、および骨に転移した患者１０人において、測定した。
【０２８８】
ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、健常者に比べて前立腺癌の患者で上昇した（それぞれＰ＝０．００６とＰ＝０．０２１）が、ＰＡＩ−１のレベルはそうではなく、また、ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、骨転移の患者において最も高かった。上昇したＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、前立腺外への疾患と関連があり（それぞれＰ＝０．０４６とＰ＝０．０５０）、また、精嚢への浸潤と関連があった（それぞれＰ＝０．０４１とＰ＝０．０４８）。上昇したＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、前立腺腫瘍の体積と関連があった（それぞれＰ＝０．０３６とＰ＝０．０３０）。多変量解析において、術前の血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、生検グリーソン合計とともに、前立腺癌進行の独立予測因子であった（それぞれＰ＝０．０３４、Ｐ＝０．０４０、Ｐ＝０．０４８）。疾患が進行した患者において、術前の血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、攻撃的な疾患の特徴を有する患者において、非攻撃的な疾患の特徴を有する患者よりも、高かった（それぞれＰ＝０．０５０とＰ＝０．０３１）。
【０２８９】
血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、健常な男性に比べて、前立腺癌の男性において上昇した一方、それらのレベルは、骨転移の男性において最も劇的に上昇した。術前のＵＰＡおよびＵＰＡＲの血漿レベルは、生物学的に攻撃性の前立腺癌および疾患の進行の確立した特徴と関連があった。多変量解析において、術前のＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、根治的前立腺切除術を受ける男性において、疾患進行の独立予測因子であった。他の臨床パラメーターおよび他の病理学的パラメーターと組み合わせた場合、血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルは、臨床ネオアジュバント療法および臨床アジュバント療法を試みるべき患者を選ぶ際に、有用でありうる。
【０２９０】
実施例１７
原発性療法またはその後の療法時に転移がある患者において死に至る進行を予測するのに有用なノモグラムを得るため、カルノフスキーの一般状態（Ｋａｒｎｏｆｓｋｙ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｓｔａｔｕｓ）、ヘモグロビン、ＰＳＡ、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、およびアルブミンのような因子とともに、血清マーカーを使用して、死に至る時期（中央値、１年および２年の生存確率を含む）を予測することができる（図２２）。一実施形態において、ホルモン感受性前立腺癌の患者の死に至る時期を予測するため、該ノモグラムを用いる。他の実施形態において、ホルモン耐性前立腺癌の患者の死に至る時期を予測するため、該ノモグラムを用いる。一実施形態において、ＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭ、ＵＰＡ、またはＵＰＡＲのレベルまたは量の一つ以上を、カルノフスキーの一般状態、ヘモグロビン、ＰＳＡ、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、およびアルブミンとともに用いる。他の実施形態において、ＴＧＦ−β１、ＩＬ６ｓＲ、ＩＬ６、ＶＥＧＦ、ｓＶＣＡＭ、ＵＰＡ、またはＵＰＡＲのレベルまたは量の一つ以上を、カルノフスキーの一般状態、ヘモグロビン、ＰＳＡ、乳酸デヒドロゲナーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、およびアルブミンの一つ以上の代わりに用いる。
【０２９１】
引用により、すべての刊行物、特許および特許出願の内容が、本明細書に記載されたものとする。以上、本明細書に、特定の好ましい実施形態について本発明を記載してきたが、多くの詳細は例示を目的として提示されたものであり、当業者には当然のことながら、本発明は、さらなる他の実施形態が可能であり、また、ここに記載される詳細のあるものは、本発明の基本的原理から逸脱することなく、多くの変更が可能である。
【図面の簡単な説明】
【０２９２】
【図１】根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＴＧＦ−β１レベルの中央値４．９ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン（Ｋａｐｌａｎ）−マイヤー（Ｍｅｉｅｒ）推定である。
【図２】ＴＧＦ−β１レベルについての分布解析のボックスプロットであり、４８ヶ月での進行の状態によって分けられており、癌のない健常な男性（ｎ＝４４）、病理学的病期（ＯＣ＝臓器限局、ＥＣＥ＝被膜外への広がり、ＳＶＩ＝精嚢への浸潤、ＬＮ  Ｍｅｔｓ＝リンパ節転移）に従う根治的前立腺切除術の継続的患者で追跡検査が少なくとも４８ヶ月のもの（ｎ＝１０９）、前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性（ＬＮ  Ｍｅｔｓ、ｎ＝１９）、および前立腺癌が骨に転移した男性（Ｂｏｎｅ  Ｍｅｔｓ、ｎ＝１０）におけるものである。データは、中央値、四分位範囲、および全範囲として示される。
【図３】根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＧＦ  ＢＰ−３レベルの中央値３２３９．８ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定である。
【図４】根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＧＦ  ＢＰ−２レベルの中央値４３７．４ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定である。
【図５Ａ】ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３についての術前および術後の値である。
【図５Ｂ】ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３についての術前および術後の値である。
【図５Ｃ】ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ  ＢＰ−２およびＩＧＦ  ＢＰ−３についての術前および術後の値である。
【図６Ａ】（Ａ）根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＬ−６レベルの中央値１．９ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定と、（Ｂ）根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＬ−６レベルの中央値１．９ｐｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定である。
【図６Ｂ】（Ａ）根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＬ−６レベルの中央値１．９ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定と、（Ｂ）根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＬ−６レベルの中央値１．９ｐｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定である。
【図７】根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な前立腺癌の患者１２０人（ＩＬ６ｓＲレベルの中央値２５．４ｎｇ／ｍＬより上と下のグループに分類）についてのＰＳＡ進行がない確率のカプラン−マイヤー推定である。
【図８】ＩＬ−６レベルについての分布解析のボックスプロットであり、４８ヶ月での進行の状態によって分けられており、癌のない健常な男性（ｎ＝４４）、追跡検査が少なくとも４８ヶ月の病理学的病期に従う根治的前立腺切除術の継続的患者（ｎ＝１０９）、前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性（ｎ＝１９）、および前立腺癌が骨に転移した男性（ｎ＝１０）におけるものである。データは、中央値、四分位範囲、および全範囲として示される。
【図９】ＩＬ６ｓＲレベルについての分布解析のボックスプロットであり、４８ヶ月での進行の状態によって分けられており、癌のない健常な男性（ｎ＝４４）、追跡検査が少なくとも４８ヶ月の病理学的病期に従う根治的前立腺切除術の継続的患者（ｎ＝１０９）、前立腺癌が所属リンパ節に転移した男性（ｎ＝１９）、および前立腺癌が骨に転移した男性（ｎ＝１０）におけるものである。データは、中央値、四分位範囲、および全範囲として示される。
【図１０】ＴＧＦ−βの中央値による生存解析（ＤＭＯＳ＝手術からの追跡検査時間）である。
【図１１】ＩＬ６ｓＲの中央値による生存解析（ＤＭＯＳ＝手術からの追跡検査時間）である。
【図１２】臨床上局所的な前立腺癌の患者における再発を予測するための術前のノモグラムである。
【図１３】根治的前立腺切除術により治療された臨床上局所的な（Ｔ１〜３ａ、ＮＸ  Ｍ０）前立腺癌の患者７１３人についての９５％信頼域による疾患のない確率のカプラン−マイヤー推定である。月数の上の数字は、再発リスクのある患者数を示す。
【図１４】ノモグラムの較正を示す。点線は、理想的なノモグラムが位置しうる参照線である。実線は、現行のノモグラムのパフォーマンスである。丸はデータセットのサブコホートである。Ｘはノモグラムパフォーマンスのブートストラップ補正推定である。垂直な棒は９５％信頼区間である。
【図１５Ａ】古典的な「低」リスク群および「高」リスク群内におけるノモグラム予測の分布を示す。まず患者はＤ’Ａｍｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．により規定されるリスク群により分類される。各リスク群内はノモグラムからの予測された確率のヒストグラムである。
【図１５Ｂ】古典的な「低」リスク群および「高」リスク群内におけるノモグラム予測の分布を示す。まず患者はＤ’Ａｍｉｃｏ  ｅｔ  ａｌ．により規定されるリスク群により分類される。各リスク群内はノモグラムからの予測された確率のヒストグラムである。
【図１６Ａ】術後の血液マーカーすなわちＴＧＦ−β１を含むノモグラムである。ＥＣＥＬＥＶ＝被膜外への広がりのレベル、０＝被膜に達していない、１＝隣接するが被膜に浸潤していない、２＝浸潤しているが被膜を通過していない、４＝限局的な被膜外への広がり、５＝広範囲な被膜外への広がり。
【図１６Ｂ】術後の血液マーカーすなわちＴＧＦ−β１を含むノモグラムである。ＥＣＥＬＥＶ＝被膜外への広がりのレベル、０＝被膜に達していない、１＝隣接するが被膜に浸潤していない、２＝浸潤しているが被膜を通過していない、４＝限局的な被膜外への広がり、５＝広範囲な被膜外への広がり。
【図１６Ｃ】術後の血液マーカーすなわちＴＧＦ−β１を含むノモグラムである。ＥＣＥＬＥＶ＝被膜外への広がりのレベル、０＝被膜に達していない、１＝隣接するが被膜に浸潤していない、２＝浸潤しているが被膜を通過していない、４＝限局的な被膜外への広がり、５＝広範囲な被膜外への広がり。
【図１７】系統的１２コア生検の位置がマークされた前立腺の後面図である。冠状図。内部の丸は前立腺の移行領域を示している。内部の楕円は移行領域を示している。Ｘは６ヶ所（セクスタント）の位置、Ｏは外側の位置、ＭＬは中線、Ｂは基底、Ｍは中央、Ａは先端である。丸は、中位のＢＰＨを有する患者における移行領域の前後および左右の広がりを示す。
【図１８】根治的前立腺切除術の標本において被膜外へ広がる側を予測するためのノモグラムである。ＢＸＴＧＳ＝生検の総グリーソンスコア、ＣＳＴＡＧＥ＝臨床病期、ＰＥＲＣＡ＝生検標本中の癌のパーセント。
【図１９】放射線療法後の進行のない確率を予測するためのノモグラムである。
【図２０】無痛性前立腺腫瘍の存在を予測するためのノモグラムである。
【図２１Ａ】種々の患者個体群における血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルを示す。
【図２１Ｂ】種々の患者個体群における血漿ＵＰＡおよびＵＰＡＲのレベルを示す。
【図２２】フローチャートである。
【図２３】ホルモン耐性疾患の患者のためのノモグラムである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２】
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【図２３】
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【国際調査報告】
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