(57)【要約】本発明は、下記配列：      Ｘ１ＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＸ２ＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＦＸ３ＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＦＬＸ４ＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＦＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ      ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９（Ｘは、任意のアミノ酸残基であり、該ポリペプチドは抗血管新生活性を有する。）のいずれか１つを含むフィブリノーゲンから誘導されるポリペプチドおよび修飾ポリペプチドに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列：
Ｘ１ＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＸ２ＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＸ３ＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＸ４ＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
（Ｘは、任意のタンパク質構成または非タンパク質構成アミノ酸残基である。）
からなる群から選択される配列を含む１５以下のアミノ酸残基からなり、抗血管新生活性を有するポリペプチド。
【請求項２】
１以上のアミノ酸が、保存的タンパク質構成または非タンパク質構成アミノ酸によって置換されている、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
Ｘ１が酸性アミノ酸であり、またはＸ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５がグリシンまたはアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリンからなる群から選択され、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８が任意のアミノ酸であり、Ｘ９が非極性アミノ酸である、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
Ｘ１がアスパラギン酸であり、Ｘ２がフェニルアラニンであり、Ｘ３がロイシンであり、Ｘ４がアラニンであり、Ｘ５がグルタミン酸であり、Ｘ６、Ｘ７およびＸ８がグリシンであり、Ｘ９がバリンである、請求項１、２または３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項５】
１以上のアミノ酸残基のＸ１およびＸ５が、好ましくは、γ-カルボキシ-Ｌ-グルタミン酸、Ｌ−２-アミノアジピン酸、Ｌ−３-アミノアジピン酸および（＋／−)-イミノシクロペンタン-cis-１,３-ジカルボン酸からなる群から選択される酸性非タンパク質構成アミノ酸によって置換されている、請求項１〜４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項６】
Ｘ２がＬ−２-ナフチルアラニン、Ｌ−１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸および４,４’-ビフェニルアラニンからなる群から選択されている、請求項１〜５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項７】
１以上のアミノ酸残基Ｘ３、Ｘ４またはＸ９が、好ましくは、１-アミノシクロプロパンカルボン酸、３-アミノペンタン-３-カルボン酸、Ｒ-２-アミノ-２-シクロヘキシル-プロパン酸からなる群から選択される疎水性非タンパク質構成アミノ酸によって置換されている、請求項１〜６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
配列:
ＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
ＥＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
ＧＥＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８およびＸ９は、各々上記のとおりに定義される。）からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項９】
配列:
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｒ
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＲＧ
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＲＧＰ
（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８およびＸ９は、各々上記のとおりに定義される）からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１０】
１以上の残基Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９が可とう性化学リンカーによって置換されている、請求項１〜９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１１】
該リンカーが３〜４０個の原子を含むバックボーンを有している、請求項１０記載のポリペプチド。
【請求項１２】
該ポリペプチドが、９、１０、１１、１２、１３または１４個のアミノ酸残基長を有する、請求項１〜１１のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１３】
該ポリペプチドが、配列ＸａＦＬＡＥＧＧＧＶＸｂＧ（Ｘは任意のアミノ酸である。）のアミノ酸配列を含む、請求項９記載のポリペプチド。
【請求項１４】
Ｘａが酸性アミノ酸であり、Ｘｂが塩基性アミノ酸である、請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１５】
Ｘｂが、Ｌ−２,４-ジアミノ酪酸、Ｒ−アミノカルニチン、Ｌ−α-アミノ-γ-グアニジノ酪酸およびオルニチンからなる群から選択されている、請求項１４のポリペプチド。
【請求項１６】
ｉ）配列：
ＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
（Ｘは任意のアミノ酸残基である。）またはその一部を有するペプチド、
ｉｉ）アミノ酸残基Ｘが、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリンからなる群から選択されている (ｉ)に記載のペプチド、
および
ｉｉｉ）抗血管新生活性を有する(ｉ)または(ｉｉ)に記載のペプチド、
からなる群から選択されるポリペプチド。
【請求項１７】
配列：
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＲＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＸＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＸＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＸＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＶＸＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＸＸＰＲＶＶＸＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ、
（Ｘは任意のアミノ酸残基である。）
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、
請求項１６のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項１８】
Ｘが、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンまたはプロリンからなる群から選択されるアミノ酸残基である、請求項１６または１７記載のポリペプチド。
【請求項１９】
該ポリペプチドがＮ末端で修飾されている、請求項１〜１８のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２０】
該修飾が、カルボキシアミド、カルバメート、尿素、スルホンアミド、アセチル化およびアルキル化からなる群から選択されている、請求項１９記載のポリペプチド。
【請求項２１】
該ポリペプチドがＣ末端で修飾されている、請求項１〜２０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２２】
該修飾が、アミデート、カルボン酸、エステル、カルボキシアミドおよびアルコールからなる群から選択されている、請求項２１記載のポリペプチド。
【請求項２３】
該ポリペプチドが、該Ｎ末端および該Ｃ末端で修飾されている、請求項１〜２２のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２４】
該ポリペプチドの１以上のＬ−アミノ酸が対応するＤ-アミノ酸によって置換されている、請求項１〜２３のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２５】
該ポリペプチドの１以上のアミノ酸が、α-メチル誘導体および／またはＮ-メチル誘導体によって置換されている、請求項１〜２４のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２６】
該ポリペプチドが環化により修飾されている、請求項１〜２５のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２７】
該環化が、頭部と尾部の環化、側鎖と側鎖の環化、側鎖と末端の環化、分枝環化またはバックボーンとバックボーンの環化である、請求項２６記載のポリペプチド。
【請求項２８】
該ポリペプチドが１以上のバックボーンの化学的修飾を含む、請求項１〜２７のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項２９】
該修飾バックボーンが、βペプチドバックボーン、ジデプシ(depsi)ペプチドバックボーン、オリゴスルホンアミドバックボーン、オリゴウレアおよびチオウレアバックボーン、オリゴカルバメートバックボーン、ペプトイドバックボーンおよびアザペプチドバックボーンの群から選択される、請求項２８記載のポリペプチド。
【請求項３０】
該ポリペプチドが該配列を含む、請求項１〜２９のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３１】
該ポリペプチドが、増殖アッセイにおいて該ポリペプチドを含まない対照に対して、細胞増殖を少なくとも１０％阻害する、請求項１〜３０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３２】
該ポリペプチドが、該ポリペプチドを含まない対照に対して、腫瘍増殖を少なくとも１０％阻害する、請求項１〜３０のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項３３】
請求項１〜３２のいずれかに記載のポリペプチドを含む、医薬組成物。
【請求項３４】
該薬剤が抗血管新生活性を有する、請求項１〜３２のいずれか記載の２以上のポリペプチドを含む医薬組成物。
【請求項３５】
２以上のポリペプチドが、リンカー分子によって結合されている、請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３６】
該医薬組成物が複数のポリペプチドを含んでいる、請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３７】
該医薬組成物が、オリゴマーポリペプチドととして相互に結合された、３、４、５、６、７、８、９または１０個のポリペプチドを含んでいる、請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３８】
該医薬組成物が、２つのポリペプチドのダイマーである、請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３９】
癌処置において使用するための医薬品を製造するための、請求項１〜３２のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【請求項４０】
請求項１〜４、８、９、１２〜１４、１６〜１８および３０〜３２のいずれかに記載のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列からなる単離核酸分子。
【請求項４１】
請求項４０に記載の配列に対して、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でアニーリングする、単離核酸分子。
【請求項４２】
プロモーターに作動可能に結合している、請求項４０または４１に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項４３】
原核生物または真核生物細胞発現に適合した発現ベクターである、請求項４２記載のベクター。
【請求項４４】
請求項４０または４１記載の核酸または請求項４２または４３記載のベクターで、形質転換／トラスフェクトされた細胞。
【請求項４５】
請求項１〜４、８、９、１２〜１４、１６〜１８および３０〜３２のいずれかに記載のポリペプチドの製造方法：
ｉ）請求項４４記載の細胞を用意すること;
ｉｉ）該ポリペプチドの製造を誘導する条件を用意すること；および
ｉｉｉ）該ポリペプチドを細胞または細胞培養環境から精製すること。
【請求項４６】
該動物が、請求項１〜４、８、９、１２〜１４、１６〜１８および３０〜３２のいずれかに記載のポリペプチドをコードする核酸分子を含んでいることを特徴とする、非ヒト、トランスジェニック動物。
【請求項４７】
ｉ）請求項１〜３２のいずれかに記載のポリペプチドの有効量を処置すべき動物に投与すること；
ｉｉ）血管新生阻害に関する該ポリペプチドの効果をモニターすること、
を含む血管新生阻害が有益である動物を処置する方法。
【請求項４８】
ｉ）請求項３３〜３８のいずれかに記載の医薬組成物の有効量を処置すべき動物に投与すること；
ｉｉ）血管新生阻害に関する該薬剤の効果をモニターすること、
を含む血管新生の阻害が有益である動物を処置する方法。
【請求項４９】
ｉ）請求項４０または４１の核酸分子または請求項４２または４３に記載のベクターの有効量を処置すべき動物に投与すること、
ｉｉ）血管新生阻害に関する該核酸または該ベクターの効果をモニターすること、
を含む血管新生阻害が有益である動物を処置する方法。
【請求項５０】
請求項１〜３２のいずれかに記載のポリペプチドを含むイメージング剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、抗血管新生（anti-angiogenic）ポリペプチドおよび該ポリペプチドのオリゴマーを包含するフィブリノーゲンから誘導される修飾ポリペプチドに関する。
【０００２】
血管新生、即ち存在する血管床からの新規血管の発達は、細胞外マトリックスの成分の分解、次いで、細管および最終的に新規血管を形成するための、内皮細胞の移動、増殖および分化を包含する複雑な多段階過程である。血管新生は、これらに限らないが、例えば、胚着床、胚形成および発達および創傷治癒などを包含する正常な生理学的過程に重要である。過剰な血管新生は、病理学的症状、例えば、腫瘍細胞増殖および非癌性症状、例えば、血管新生緑内障、リウマチ様関節炎、乾癬および糖尿病網膜症にも関与する。
【０００３】
血管内皮は、通常無活動性である。しかし、一旦活性化されると内皮細胞は、増殖し、移動して、最終的に毛細血管床を形成する微小管を形成し、発達中の組織や、当然、増殖中の腫瘍に血液を供給する。内皮細胞を促進／活性化し、血管新生を進行させる数多くの増殖因子が同定されてきた。これらは、血管内皮増殖因子(ＶＥＧＦ)、転換成長因子(ＴＧＦｂ)、酸性および塩基性繊維芽細胞増殖因子(ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ)および血小板由来増殖因子(ＰＤＧＦ)(１,２)を含むが、これらに限定されない。
【０００４】
ＶＥＧＦは内皮細胞-特異的増殖因子であり、これは非常に特異的な作用点、すなわち、内皮細胞の増殖、移動および分化の促進を有する。ＶＥＧＦは、２つの同じ２３ｋＤのポリペプチドを含む二量体複合体である。ＶＥＧＦの単量体形態は、異なる分子量の４つの各ポリペプチドとして存在し得、各ポリペプチドは、それぞれにスプライシングされたｍＲＮＡから誘導される。４つのモノマー形態のうち、二つは膜結合ＶＥＧＦとして存在し、二つは可溶性である。ＶＥＧＦは、胚組織、増殖性ケラチン生成細胞、マクロファージ、腫瘍細胞を包含する広範な種々の細胞/組織型によって発現される。試験（２）は、神経膠腫およびＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫を包含する多くの腫瘍細胞系において発現が高いことが示されている。ＶＥＧＦ活性は、内皮細胞および腫瘍細胞によって発現されたＶＥＧＦ特異的受容体によって媒介される。実際には、ＶＥＧＦ受容体は、腫瘍に浸潤し、それによって腫瘍細胞増殖を促進し、内皮細胞中でアップレギュレートされる。
【０００５】
ｂＦＧＦは、繊維芽細胞および内皮細胞の増殖を刺激するように機能する増殖因子である。ｂＦＧＦは、１６.５Ｋｄの分子量を持つ１本鎖ポリペプチド鎖である。ｂＦＧＦの幾つかの分子形態は、そのアミノ末端領域の長さにおいて異なることが明らかとなった。しかし、様々な分子形態の生物学的機能は同じであることがわかった。ｂＦＧＦは、下垂体によって産生され、ヒト染色体４上に位置する１本鎖遺伝子によってコードされる。
【０００６】
血管新生に関する数多くの内因性阻害剤が発見され、その中の例としては、アンギオスタチンおよびエンドスタチンであり、これらはプラスミノゲンおよびコラーゲンＸＶＩＩＩ各々のタンパク質分解によって形成される。これらの因子の両方は、前血管新生（pro-angiogenic）増殖因子、例えば、血管ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦの活性を抑制することが示されてきた。両方とも、イン・ビトロでのＶＥＧＦおよびｂＦＧＦに対する内皮細胞応答を抑制し、動物モデルにおける血管形成および実験的腫瘍増殖を低下させる。
【０００７】
フィブリンの可溶性循環性前駆体であるフィブリノーゲンは、同一でない鎖(すなわち、α、βおよびγ鎖)の対を含有する二量体分子である。これらは、３つの別々のドメインとして、すなわち２つの外側のＤ−ドメインおよび中心のＥドメイン(４)として配置されている。フィブリノーゲンは、プラスミンまたはトロンビンいずれかによって分解され得る。
【０００８】
フィブリノーゲンのプラスミン分解における最初のステップは、α鎖のＣ末端ドメインの分解である。次いで、プラスミンは、１つのＥドメイン（ジスルフィド結合によって一緒に保持されたα、βおよびγ鎖のＮＨ２末端領域からなる）から、２つのＤドメインと短いペプチド、β１-４２(β鎖のアミノ末端)(５)を包含する多数の小さなフラグメントが開裂される。一方、トロンビンは、フィブリンモノマーおよびフィブリノペプチドＡおよびＢ（４）の２つの複製物を生成する。フィブリノーゲンは、臓器腫瘍（５）において漏出性血管の周辺に蓄積することが示されており、フィブリノーゲンは、宿主-腫瘍界面で重合して、内皮細胞の癒着、移動、増殖および分化（７）をサポートすることによって腫瘍血管新生を促進するフィブリンネットワークを形成することが示されている。
【０００９】
該フィブリンＥ−フラグメント(ＦｎＥ−フラグメント)は、フィブリンのタンパク質分解によって産生され、漿尿膜アッセイ（８）中で血管新生を刺激する。さらに、侵襲性乳癌に存在するこのタンパク質の量は、腫瘍の血管分布(５)の程度と正の相関を示す。
【００１０】
フィブリノーゲンの５０ｋＤａのタンパク質分解フラグメントである血管新生の強力な、新規阻害剤は、我々の同時継続出願、ＷＯ０１/８８１２９に開示されている。我々は、より大きなフィブリノーゲンＥフラグメントと同じ抗血管新生活性を有するフィブリノーゲンＥフラグメント内のドメインも同定した。該ドメインは、α鎖のアミノ末端に位置し、α１−２４として引用されており、我々の同時継続出願ＷＯ０２/１８４４０に開示されている。ドメインから誘導されたペプチドおよびペプチド変異体は、抗血管新生活性を有する。ＷＯ０２/１８４４０、即ち図５Ａに開示されているＤＮＡ配列、図５Ｂおよび３、４および５頁に開示されている該ペプチドおよびペプチド変異体に関して、我々はこれらについて権利請求を放棄する。
【００１１】
驚くべきことに、我々は、本発明に従って、ここでα１-２４のペプチドの短い配列モチーフを含むフラグメントが、該抗血管新生活性について十分なものであることを見いだした。従って、本発明は、配列:
Ｘ１ＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＸ２ＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＸ３ＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＸ４ＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＸ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｖ
ＤＦＬＡＥＸ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
（Ｘは、任意のアミノ酸残基である。）
のうちの１つを含む１５以下のアミノ酸残基からなり、抗血管新生活性を有するポリペプチドを、第一の態様において提供する。本明細書において、下付番号を持つＸは、特定の位置での可変性アミノ酸残基を意味し、下付番号のないＸは、その位置に拘束されない可変性アミノ酸残基を示し、また全ての下付番号を持つＸを示し得る。Ｘはタンパク質構成または非タンパク質構成アミノ酸であり得る。
【００１２】
さらに以下に示すように、アミノ酸残基は、抗血管新生活性を実質的に低下することなく置換され得る。好ましくは、少なくとも９０％の抗血管新生活性が保持され、より好ましくは少なくとも８０％、または少なくとも７０％、または少なくとも６０％、または少なくとも５０％が保持される。
【００１３】
本発明の好ましい実施態様において、Ｘ１は酸性アミノ酸であり、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリンからなる群から選択され、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８は任意のアミノ酸であってよく、タンパク質構成（proteinogenic）または非タンパク質構成（non-proteinogenic）アミノ酸であってよく、Ｘ９は非極性アミノ酸である。特に好ましい実施態様において、該ポリペプチドは配列ＤＦＬＡＥＧＧＧＶを含む。
【００１４】
当業者には明らかであるように、そして以下に記載するように、ペプチドは、該ペプチドの生物学的活性に関して効果の低下を伴わずに、「非タンパク質構成」アミノ酸の導入により薬理学的特性を改良するために修飾され得る。従って、本発明の好ましい実施態様において、アミノ酸残基Ｘ１およびＸ５の１つまたは両方は、γ-カルボキシ-Ｌ-グルタミン酸、Ｌ−２-アミノアジピン酸、Ｌ−３-アミノアジピン酸または(＋／−)-イミノシクロペンタン-cis-１,３-ジカルボン酸である。さらに、またはこれに代えて、Ｘ２は、Ｌ−２-ナフチルアラニン、Ｌ−１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸および４,４’-ビフェニルアラニンからなる群から選択されるアミノ酸残基である。さらに、これに代えて、１以上のアミノ酸残基Ｘ３、Ｘ４またはＸ９が、１-アミノシクロプロパンカルボン酸、３-アミノペンタン-３-カルボン酸、Ｒ-２-アミノ-２-シクロヘキシル-プロパン酸からなる群から選択される。
【００１５】
上記局面の別の実施態様において、本発明は、
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９Ｒ
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＲＧ
Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＲＧＰ
（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８およびＸ９は、各々上記のとおりに定義される。）
からなる群から選択される配列を含む１５以下のアミノ酸残基のポリペプチドを提供する。
【００１６】
上記局面の別の実施態様において、本発明は、
ＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
ＥＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
ＧＥＧＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９
（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、Ｘ７、Ｘ８およびＸ９は、各々上記のとおりに定義される。）
からなる群から選択される配列を含む１５以下のアミノ酸残基のポリペプチドを提供する。
【００１７】
本発明の別の局面によれば、アミノ酸残基Ｘ７、Ｘ８およびＸ９は、抗血管新生活性を実質的に低下させずに可とう性（flexible）化学リンカーで置換され得ることがわかった。従って、本発明は、１以上のアミノ酸残基Ｘ７、Ｘ８およびＸ９が可とう性化学リンカーによって置換されているポリペプチドを提供する。好ましくは、該リンカーは、フランキングアミノ酸を結合する３〜４０個、好ましくは４〜３０個、より好ましくは５〜１５個、最も好ましくは６〜１２個の原子を持つバックボーンを含有する。該バックボーン原子は、好ましくはＣ原子であるが、ヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｎ、ＰまたはＳを含有してもよい。該バックボーンは、さらに、アルキル、アリールまたはアルコキシ基またはハロゲンでさらに置換され得る。可とう性化学リンカーは、例えば、-(ＣＨ２-ＣＨ２-ＣＨ２)x、(ＣＲ１Ｒ２-ＣＲ３Ｒ４)x、(ＣＨ２ＣＨ２Ｏ)x-、(ＮＨ−ＣＲ１Ｒ２-ＣＲ３Ｒ４-ＣＯ)x、（ここで、ｘ＝１〜１０であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、例えば、水素、ハロゲン、アルキル、アリール、アリ−ルアルキルまたはアルコキシ基であり、同一もしくは異なってもよく、さらにヘテロ原子を含んでもよい。）を包含するが、これらに限定するものではない。好ましい化学リンカーは、１以上のエチレングリコールまたはβ-アミノ酸またはγ-アミノ酸部分のバックボーンを含む。また、環状リンカーも同様に試用されてよい。環状リンカーについての例は、３-アミノ-４-ピラゾールカルボン酸、４-アミノ-５-カルボキシ-２-ヒドロキシピリミジン、アントラニル酸誘導体、３-アミノ-１-インダンカルボン酸を包含するが、これらに限定するものではない。
【００１８】
上記局面の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、９、１０、１１、１２、１３または１４アミノ酸残基長を有する。より好ましいのは、９または１０アミノ酸残基長である。
【００１９】
上記局面の別の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは上記のアミノ酸からなる。
【００２０】
抗血管新生活性の指標は、ここで開示されるアッセイ法によって決定される。例えば、本発明のポリペプチドは、内皮細胞媒介細管形成の阻害、内皮細胞移動の阻害、ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦで誘導される内皮細胞増殖の阻害および内皮細胞毒性アッセイを包含するイン・ビトロ・アッセイによって試験される。好ましい態様において、本発明の抗血管新生化合物は、本明細書中に記載のアッセイにおいて該ポリペプチドを含まない対照に対して少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％および最も好ましくは少なくとも５０％まで、細管形成、細胞移動または細胞増殖を阻害する。より好ましい態様において、該アッセイは、下記実施例に記載の増殖アッセイである。
【００２１】
また、ポリペプチドは、本明細書に開示したようなネズミ腫瘍モデルを用いてイン・ビボで試験され得る。好ましい態様において、本発明の抗脈管形成性化合物は、該ポリペプチドを含まない対照に対して少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％および最も好ましくは少なくとも５０％、腫瘍増殖を阻害する。
【００２２】
変異体、すなわちフラグメントポリペプチドと対照ポリペプチドは、全ての組み合わせで存在し得る１以上の置換、付加、削除、欠落（truncations）によって、アミノ酸配列において異なっていてもよい。好ましい変異体には、保存的アミノ酸置換により対照ポリペプチドから変化したものがある。この置換は、与えられたアミノ酸を、類似特性を有する他のアミノ酸によって置換するものである。次の非制限的リストのアミノ酸は保存的置換体（類似）と考えられる：ａ）セリンとスレオニン；ｂ）グルタミン酸とアスパラギン酸；ｃ）アスパラギンとグルタミンｄ）アルギニンとリジン；ｅ）イソロイシン、ロイシン、メチオニンとバリンおよびｆ）フェニルアラニン、ヒスチジン、チロシンとトリプトファン。最高に好ましいものは、変化させる前の対照ポリペプチドと同じ生物学的機能および活性を保持する変異体である。
【００２３】
本発明の機能的に等価なポリペプチドは、ポリペプチド中の１以上のアミノ酸残基が、保存的または非保存的アミノ酸残基で置換された変異体か、または１以上のアミノ酸残基が置換基を含有する変異体である。保存的置換とは、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅのいずれかを他で置き換える置換；ヒドロキシル残基であるＳｅｒおよびＴｈｒの相互交換；酸性残基であるＡｓｐおよびＧｌｕの交換；アミド残基であるＡｓｎおよびＧｌｎ間の置換；塩基性残基であるＬｙｓおよびＡｒｇの交換；および芳香族残基であるＰｈｅ、Ｈｉｓ、ＴｙｒおよびＴｒｐ間の置換、である。
【００２４】
さらに、本発明は、本明細書中で開示されるようなポリペプチド配列と少なくとも７５％の同一性を有するポリペプチド配列、またはそのフラグメントおよびその機能的に等価なポリペプチドを特徴とする。ある実施態様において、該ポリペプチドは、本明細書に記載のアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性、より好ましくは少なくとも９０％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９５％の同一性、さらにより好ましくは少なくとも９７％の同一性、最も好ましくは少なくとも９９％の同一性を有する。
【００２５】
本発明のポリペプチドは、α-アミノ酸残基を含むのが好ましい。しかし、本発明は、α-アミノ酸残基を含むポリペプチドに限定するものではなく、他の型の残基、例えば、β-またはγ-アミノ酸残基を含むポリペプチドも本発明によって意図されている。適当な残基の全ての型がポリペプチドを必要とされる生物学的に活性な３次元の立体構造をとる能力を失わない限り、本発明に従って使用され得る。
【００２６】
本発明のある局面によれば、少なくとも１つのアミノ酸残基の削除、添加または置換によって修飾されたもので、該修飾ポリペプチドが抗血管新生活性を有し、Ｆｉｇ１に提示された配列によって示されるようなアミノ酸配列を含む、ポリペプチドまたはその一部が提供される。
【００２７】
本発明の別の局面によれば、
ｉ）下記配列のペプチドまたはその部分:
ＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
（Ｘは任意のアミノ酸残基である。）、
ｉｉ）アミノ酸残基Ｘがアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリンから選択されている（ｉ）で示されるペプチド
および
iii）抗血管新生活性を有する(ｉ)または(ｉｉ)に示されるペプチド、
からなる群から選択されるアミノ酸を含むポリペプチドを提供する。
【００２８】
本発明の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、下記配列：
ＳＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
からなるアミノ酸配列もしくはその部分を含む。
【００２９】
本発明の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、下記配列：
ＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＶＸＲ
によって示されるようなアミノ酸配列を含む。
【００３０】
本発明の別の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、下記配列：
ＧＥＧＸＦＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＶＸＲ
によって示されるようなアミノ酸配列を含む。
【００３１】
本発明のさらに別の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、下記配列:
ＧＥＧＸＦＬＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸＸ
によって示されるようなアミノ酸配列を含む。
【００３２】
本発明の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、表１に示した該配列によって示されるようなアミノ酸配列を含む。該配列を含む好ましい該ポリペプチドは、抗血管新生活性を有する。
【００３３】
本発明のさらに好ましい別の実施態様において、該ポリペプチドは下記配列:
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＲＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＸＧＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＸＰＲＶＶＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＸＥＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＶＲＧＰＲＶＶＸＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＸＸＰＲＶＶＸＲ
ＧＥＧＤＦＬＡＥＧＧＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
Ｘは、任意のアミノ酸残基、または好ましくは、Ｘはアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンまたはプロリンからなる群から選択される。より好ましくは、Ｘはアラニンである。
【００３４】
本発明のさらに別の好ましい態様において、該ペプチドは、表１に示される２つのフラグメントのオーバーラップ部分に示されるようなアミノ酸配列を含む。より好ましい実施態様において、該ペプチドは、表１中の該ペプチドＡＨＩ-４０１およびＡＨＩ−３７８のオーバーラップ部分から誘導される。好ましくは、ＡＨＩ-４０１およびＡＨＩ−３７８のオーバーラップ部分から誘導される該ペプチドは、Ｎ末端で１つの付加アミノ酸残基を含む。
【００３５】
すなわち、本発明の好ましい方法において、該ペプチドは、下記配列:
ＸＦＬＡＥＧＧＧＶＸＧ
（Ｘは、Ａ、Ｒ、Ｎ、Ｄ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、Ｋ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、Ｙ、Ｖからなる群から選択された任意のアミノ酸残基である。好ましいＸは、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩおよびＰからなる群から選択され、より好ましいＸは、Ｈ、ＲおよびＫからなる群から選択される塩基性アミノ酸、またはＤおよびＥからなる群から選択される酸性アミノ酸である。）
によって示されるアミノ酸配列を包含する。
【００３６】
別の好ましい実施態様において、Ｎ末端のＸはＤおよびＥからなる群から選択され、一方Ｃ末端のＸはＨ、ＲおよびＫからなる群から選択され、または該Ｎ末端アミノ酸はＨ、ＲおよびＫからなる群から選択され、一方Ｃ末端のＸはＤおよびＥからなる群から選択される。特に好ましい実施態様において、該Ｎ末端のＸはＤであり、該Ｃ末端ＸはＲである。
【００３７】
別の好ましい実施態様において、該Ｃ末端のＸは、Ｌ−２，４-ジアミノ酪酸、Ｒ−アミノカルニチン、Ｌ−α-アミノ-γ-グアニジノ酪酸またはオルニチンからなる群から選択される。
【００３８】
本発明のさらなる実施態様において、その当該部分は、アミノ酸配列:
ＳＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
の＋１〜＋１５のアミノ酸配列によって示される
【００３９】
本発明のさらなる好ましい実施態様において、その当該部分は、下記アミノ酸配列:
ＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
の＋６〜＋２１のアミノ酸配列によって示される。
【００４０】
本発明の別の好ましい実施態様において、その当該部分は、下記アミノ酸配列：
ＸＸＸＸＸＬＸＥＸＸＧＸＸＸＰＲＶＸＸＲ
の＋６〜＋１５のアミノ酸配列によって示される。
【００４１】
本発明のさらなる好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、本明細書中に開示されるペプチドアミノ酸配列からなる。
【００４２】
本発明のさらなる好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３アミノ酸残基長さであって、本発明のアミノ酸配列を包含する。
【００４３】
本発明のポリペプチドのアミノ酸配列に対する修飾は、その標的配列に関してポリペプチドの結合および／または安定性を増強し得ることは当業者には明らかである。さらに、ポリペプチドの修飾は、ポリペプチドの薬理特性、例えばイン・ビボの安定性を増加し、それにより、血管新生を阻害するのに必要なポリペプチドの有効量を低減させる。これは、イン・ビボで発生し得る望ましくない副作用を有利に低下させる。
【００４４】
ポリペプチドの薬理特性を増強するのに適切な多数のペプチド修飾は、当業者には既知である。例えば、ペプチド・バックボーンが化学的に修飾され得る、例えばGilles Guichard、Solid-phase synthesis of pseudopeptides and oligomeric peputide backbone mimetics, in Solid-phase synthesis-実施ガイド；Steven A. KatesまたはFernando Albericio編、Marcell Dekker, New York - Basel, pp 649- 703, 2000に記載され、その内容は出典明示により本明細書の一部とする。バックボーン修飾の例は、βペプチド、デプシペプチド、オリゴスルホンアミド、オリゴ尿素およびチオウレア、オリゴカルバメート、ペプトイドおよびアザペプチドを包含するが、これに限定されるものではない。
【００４５】
適当な修飾の別の例は、本発明のペプチドの環化である。該環化は、頭部から尾部への環化、側鎖から側鎖への環化、側鎖から末端への環化、分枝環化、またはバックボーンからバックボーンへの環化であってよい。ペプチドの環化は、例えば、次に記す文献に記載されており、これらの内容は出典明示により本明細書の一部とする：Paolo Rovero, Homodetic cyclic peptides, in Solid-phase synthesis - A practical guide,; edited by Steven A. Kates and Fernando Albericio, Marcell Dekker, New York - Basel, pp 331- 364, 2000. SA Kates, NA Sole, F Albericio, G. Barany, in C. Basava, GM Anantharamaiah, eds. Peptides: design, synthesis, and biological activity. Boston, Birkhauser, 1994, pp 39-58。
【００４６】
他の適当な修飾は、「非タンパク質アミノ酸」の導入を包含する。本明細書中で使用される、用語「アミノ酸」または「タンパク質構成アミノ酸」は、タンパク質の天然構築単位であるアミノ酸、すなわち、遺伝子コードをタンパク質に翻訳する過程で、タンパク質に組み込まれるアミノ酸を指す。これと置き換えて用いられる用語「非タンパク質アミノ酸」、「非タンパク質構成アミノ酸」または「非コードアミノ酸」には、アミノ酸と類似する化学的構造を有する全ての化合物が包含されるが、遺伝子コードをタンパク質に翻訳する過程で天然では利用されない。
【００４７】
従って、タンパク質構成アミノ酸は、例えば、α-メチル誘導体またはα-エチル誘導体によって置換される。好ましい実施態様において、該ペプチドは、α-メチル-Ｌ-アラニン、α-メチル-Ｌ-アルギニン、α-メチル-Ｌ-アスパラギン、α-メチル-Ｌ-アスパラギン酸、α-メチル-Ｌ-システイン、α-メチル-Ｌ-グルタミン酸、α-メチル-Ｌ-グルタミン、α-メチル-Ｌ-グリシン、α-メチル-Ｌ-ヒスチジン、α-メチル-Ｌ-イソロイシン、α-メチル-Ｌ-ロイシン、α-メチル-Ｌ-リジン、α-メチル-Ｌ-メチオニン、α-メチル-Ｌ-フェニルアラニン、α-メチル-Ｌ-プロリン、α-メチル-Ｌ-セリン、α-メチル-Ｌ-スレオニン、α-メチル-Ｌ-トリプトファン、α-メチル-Ｌ-チロシンおよびα-メチル-Ｌ-バリン、からなる群から選択されるαメチル誘導体を含む。
【００４８】
適当な修飾に関する別の例は、アミノ酸の置換、例えば、Ｎ-メチル誘導体またはＮ-エチル誘導体による置換であってもよい。別の好ましい実施態様において、該ペプチドは、Ｎ-メチル-Ｌ-アラニン、Ｎ-メチル-Ｌ-アルギニン、Ｎ-メチル-Ｌ-アスパラギン、Ｎ-メチル-Ｌ-アスパラギン酸、Ｎ-メチル-Ｌ-システイン、Ｎ-メチル-Ｌ-グルタミン酸、Ｎ-メチル-Ｌ-グルタミン、Ｎ-メチル-Ｌ-グリシン、Ｎ-メチル-Ｌ-ヒスチジン、Ｎ-メチル-Ｌ-イソロイシン、Ｎ-メチル-Ｌ-ロイシン、Ｎ-メチル-Ｌ-リジン、Ｎ-メチル-Ｌ-メチオニン、Ｎ-メチル-Ｌ-フェニルアラニン、Ｎ-メチル-Ｌ-プロリン、Ｎ-メチル-Ｌ-セリン、Ｎ-メチル-Ｌ-スレオニン、Ｎ-メチル-Ｌ-トリプトファン、Ｎ-メチル-Ｌ-チロシンおよびＮ-メチル-Ｌ-バリン、から選択されるＮ-メチル誘導体を含む。
【００４９】
類似の特性を有するアミノ酸の群（例えば、疎水性アミノ酸）は、類似の特性を有する「非タンパク質」アミノ酸によって置換されるのが好ましいことが当業者には明らかであり、保存的アミノ酸置換として当業者に知られているものと類似している。本明細書で使用されている、「保存的」アミノ酸は、類似特性を有するタンパク質構成および非タンパク質構成アミノ酸の両方を包含する。このように、疎水性タンパク質構成アミノ酸は、疎水性非タンパク質構成アミノ酸によって交換され、極性タンパク質構成アミノ酸は、極性非タンパク質構成アミノ酸などによって交換され得る。
【００５０】
従って、疎水性アミノ酸は、α,α-二置換の直鎖または環状アミノ酸によって置換され得る。これらの例によって拘束される意図はないが、疎水性アミノ酸、例えば、グリシン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニンまたはプロリンは、１-アミノシクロプロパンカルボン酸、３-アミノペンタン-３-カルボン酸、Ｒ-２-アミノ-２-シクロヘキシル-プロパン酸によって置換され得るし、酸性アミノ酸、例えば、グルタミン酸またはアスパラギン酸は、γ-カルボキシ-Ｌ-グルタミン酸、Ｌ−２-アミノアジピン酸、Ｌ−３-アミノアジピン酸または（＋／−）-イミノシクロペンタン-cis-１,３-ジカルボン酸によって置換され得る。さらなる例は、Ｃｈａ、Ｏ−Ｎａｌ、Ａｉｂ(アミノイソ酪酸)、Ａｃｎｃ（α,α-２置換されたアミノ酸、ｎは両端を含んで３〜７であり、ｎは環中の炭素数を示す）、Ａｂｕ(２-アミノ酪酸)、Ｎｌｅ、Ｎｖａ［ノルバリン(norvaline)］、Ｂｐａ(ｐ−ベンゾイル-フェニルアラニン)、ｈＰｈｅ(ホモ-Ｐｈｅ)、ｈＰｒｏ(ホモ-Ｐｒｏ)、１−Ｎａｌ(ｐ−(１−ナフチル)アラニン)、２-Ｎａｌ［３-(２-ナフチル)アラニン］、Ｏｉｃ(オクタヒドロインドン-２-カルボン酸)、Ｔｉｃ(１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸)、Ｐｅｎ(ペニシラミン)、Ｐｈｇ(フェニルグリシン)、Ｔｌｅ(tert-ロイシン)、ｐ−Ｘ−Ｐｈｅ (Ｘ＝Ｂｒ、Ｆ、Ｉ、Ｃｌ、フェニル、ＣＮ、ＮＯ２)、Ｔhi α-(２-チエニル)-アラニン)、およびそれらのホモログを包含する。
【００５１】
さらに、１つのタンパク質構成アミノ酸は、構造的に類似の「非タンパク質」アミノ酸誘導体によって置換され得る。与えられたタンパク質構成アミノ酸に対する構造的に類似の誘導体は、当業者には既知である。例えば、アルギニンは、Ｌ−２,４-ジアミノ酪酸、Ｒ−アミノカルニチン、Ｌ−α-アミノ-γ-グアニジノ酪酸またはオルニチンによって置換され得るし、フェニルアラニンは、Ｌ−２-ナフチルアラニン、Ｌ−１,２,３,４-テトラヒドロイソキノリン-３-カルボン酸または４,４'-ビフェニルアラニン、ｐ-ベンゾイル-フェニルアラニン、ｈＰｈｅによって置換され得るし、プロリンは、３-ヒドロキシプロリン、４-ヒドロキシプロリンによって置換され得るし、リジンは、５-ヒドロキシリジン、アロ-ヒドロキシリジン、Ｎ６-アセチルリジン、Ｎ６-メチルリジン、Ｎ６,Ｎ６-ジメチルリジン、Ｎ６,Ｎ６,Ｎ６-トリメチルリジンによって置換され得るし、アラニンは、シクロヘキシルアラニンによって置換され得る。他の修飾は、ハロ(例えば、Ｆ、Ｂｒ、Ｉ)、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ４アルコキシから選択される１、２または３個の置換基によって所望により置換されているＣ２、Ｃ３またはＣ４アルキルＲ基を持つアミノ酸を包含する。
【００５２】
本発明のペプチドに関する別の適当な修飾は、対応するＤ-アミノ酸による１以上のＬ−アミノ酸の置換である。タンパク質構成または「非タンパク質」Ｌ−アミノ酸は、共に、対応するＤ-アミノ酸によって置換されてもよい。
【００５３】
さらに、本発明の適当なペプチド誘導体は、次の文献に記載されているレトロ−インベルソ。ペプチド類似体（retro-inverso peptidomimetic）であり、出典明示により本明細書の一部とする：M. Goodman, M. Chorev Acc Chem Res 12, 1-7, 1979, M. Chorev, M. Goodman Acc Chem Res 26, 266 - 273, 1993 and M. Chorev, M. Goodman Trend Biotechnol 13, 438 - 445, 1995.
【００５４】
本発明の別の実施態様において、Ｃ末端が修飾される。Ｃ末端修飾は、例えば、カルボン酸、エステル、カルボキシアミドまたはアルコールを包含するが、これに限定されるものではない。好ましい実施態様において、Ｃ末端修飾は、メチル、エチル、プロピル、ブチルまたはイソプロピル-エステルである。別の好ましい実施態様において、Ｃ末端修飾は、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＣＨ３(メチルアミド)またはＣＯＮ（ＣＨ３）２(ジメチルアミド)である。別の好ましい実施態様において、Ｃ末端修飾はＣＨ２ＯＨである。
【００５５】
本発明の別の実施態様において、Ｎ末端が修飾される。Ｎ末端の修飾は、例えば、カルボキシアミド、カルバメート、尿素、スルホンアミド、アセチル化およびアルキル化を包含するが、これらに限定されない。
【００５６】
本発明の別の好ましい実施態様において、該ポリペプチドは、Ｃ末端およびＮ末端の両方で修飾される。
【００５７】
あるいは、また好ましくは、該修飾は、本発明のポリペプチドの組換え体または合成体の製造において修飾アミノ酸の使用を包含する。
【００５８】
本発明の別の好ましい実施態様において、本発明に従って少なくとも１つの修飾アミノ酸を含むポリペプチドが提供され、Ｘは当該ポリペプチドにおける該修飾アミノ酸の位置を示す。
【００５９】
修飾アミノ酸の導入は、本発明のポリペプチドに対して有利な特性を付与し得る。例えば、修飾アミノ酸の導入は、その結合部位に対するポリペプチドの親和性を増加させ得るか、または修飾アミノ酸は、ポリペプチドに対して、増加したイン・ビボ安定性を付与することができるので、患者に投与される治療的ポリペプチドの有効量を低減させ得る。
【００６０】
抗血管新生活性を保持するポリペプチドのフラグメントが、例えば、タンパク質分解酵素を用いてインタクトなポリペプチドを分画することによって回収され得ることは当業者に明らかである。一方、フラグメントは、新規（デ・ノボ）合成および例えば環化によっても修飾されることができる。環化は当業者には既知である［Scott et al Chem Biol (2001), 8:801-815; Gellerman et al J. Peptide Res (2001),  57: 277-291; Dutta et al J. Peptide Res (2000), 8: 398-412; Ngoka and Gross J Amer Soc Mass Spec (1999), 10:360-363を参照されたい］。
【００６１】
本発明の好ましい実施態様において、本発明のポリペプチドは環化によって修飾される。
【００６２】
本発明の別の局面によれば、本発明のポリペプチドまたはその一部を含む医薬組成物が提供される。
【００６３】
本発明の別の局面によれば、本発明の２以上のポリペプチドを含む医薬組成物が提供され、該医薬組成物は抗血管新生活性を有する。
【００６４】
本発明の好ましい実施態様において、該２以上のポリペプチドは、リンカー分子によって結合される。該リンカー分子は可とう性リンカーであるのが好ましい。
【００６５】
本発明の別の好ましい実施態様において、該医薬組成物は、本発明の複数のポリペプチドを包含する。該医薬組成物は、オリゴマーペプチドと共に結合された３、４、５、６、７、８、９または１０のポリペプチドを有するのが好ましい。該ポリペプチドは、本発明の１０以上のポリペプチドを有するのが好ましい。
【００６６】
本発明のさらなる実施態様において、該医薬組成物は、本発明による２つのポリペプチドのダイマーである。
【００６７】
本発明の別の好ましい実施態様において、該リンカーは、ポリペプチドを結合する分子である。本発明の好ましい実施態様において、該ポリペプチドを結合する分子は、少なくとも２つの本発明によるポリペプチドを結合する少なくとも１つのアミノ酸残基を含む。
【００６８】
本発明の別の好ましい実施態様において、該ポリペプチドを結合する分子は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０のアミノ酸残基を含む。本発明の別の実施態様において、該結合分子は１０以上のアミノ酸残基を含む。
【００６９】
本発明の別の実施態様において、該ポリペプチドは、本発明によるポリペプチドのインフレーム・トランスレーション・フュージョンを含む融合タンパク質である。
【００７０】
本発明は、本発明による同一のポリペプチドを含むオリゴマーポリペプチドの形成を含んでおり、明細書中でホモオリゴマーと称するが、それと同様に、異なった修飾ポリぺプチドを含むポリペプチドをヘテロオリゴマーと称することが明らかである。
【００７１】
ポリペプチドを結合するのに、別のリンカー、例えば、化学的タンパク質クロスリンカーが使用され得るこのとは当業者に明らかである。ホモ-二官能クロスリンカー、例えば、ジスクシンイミジル-スベリミデート-ジヒドロクロリド、ジメチル-アジピミデート-ジヒドロクロリド、１,５,−２,４ジニトロベンゼンまたはヘテロ-二官能クロスリンカー、例えば、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミジル２,３-ジブロモプロピオネート、１-エチル-３-[３-ジメチルアミノプロピル]カルボジイミドヒドロクロリド、スクシンイミジル４-[ｎ-マレイミドメチル]-シクロヘキサン-１-カルボキシレートがある。
【００７２】
投与される場合、本発明の医薬組成物は、医薬的に許容し得うる製剤で投与される。このような製剤は、通常、医薬的に許容し得うる濃度の塩、緩衝剤、保存剤、並存し得る担体、補助的免疫強化剤、例えば、アジュバンドおよびサイトカインおよび、所望により、他の治療剤、例えば化学療法剤を含む。
【００７３】
本発明の医薬組成物は、注射または時間をかける点滴を含む全ての既存経路によって投与され得る。該投与は、例えば、経口、静脈内、腹膜内、筋肉内、腔内、皮下または経皮であり得る。
【００７４】
本発明の該組成物は有効量で投与される。「有効量」とは、単独または、他の薬剤と共に、所望の応答を実現させる組成物の量である。特定の疾患、例えば癌を処置する場合において、所望の応答は、該疾患の進行を阻害することである。これは、該疾患の進行を一時的に遅延させることを含むが、該疾患の進行を永続的に停止させることを含むのがより好ましい。これは常法によりモニターされ得る。
【００７５】
このような量は、もちろん、処置される特定症状、症状の重篤度、年齢、身体状況、身長および体重を包含する個々の患者のパラメーター、処理の期間、併行治療(もし、あれば)の性質、特定の投与経路および医療従事者の知識と経験の範囲内での類似の因子に依存する。これらの因子は、当業者には既知であり、常套的な実験を超えない範囲で対応可能である。
【００７６】
前記処置方法で用いられた該医薬組成物は、滅菌されるのが好ましく、そして患者に投与するために適当な重量または容量の単位で所望の応答を生成するために、有効量のポリペプチド、オリゴマー剤または該ポリペプチドまたはオリゴマー剤をコードする核酸を含有する。
【００７７】
患者に投与されるペプチド/オリゴマーまたはポリペプチド/オリゴマーの核酸をコードしている該用量は、特に用いられる投与様式および患者の状態に応じて様々なパラメーターによって選択され得る。他の因子には、所望の治療期間が含まれる。患者における応答が適用された初期用量で不十分である場合は、高用量を(または、有効なより高用量を、より極限的な送達経路で)、患者の耐容性が許す限り、用いてもよい。
【００７８】
投与に際しては、本発明の処置用製剤は、処置上許容し得る量で、かつ医薬的に許容し得る組成物の形態で適用される。該用語「医薬的に許容し得る」とは、活性成分の生物学的活性の有効性と干渉しない非毒性物質を意味する。かかる製剤は、通常、塩、緩衝剤、保存剤、適合性担体を含有し、また所望により他の治療剤を含む。医薬品に使用される場合、該塩は、医薬的に許容し得うるものであるべきだが、薬学的に許容されない塩が便宜的にそれらの医薬的に許容し得る塩を製造するために使用されてもよく、本発明の範囲から排除されない。
【００７９】
ペプチド/オリゴマーポリペプチド組成物は、所望であれば、医薬的に許容し得る担体と組み合わせることも可能である。本明細書中で使用されるような用語「医薬的に許容し得る担体」は、ヒトへの投与に適当である１以上の適合性固体または液体増量剤、希釈剤または抱合性物質を意味する。用語「担体」は、活性成分がその適用を容易にするために組み合わされる、有機または無機成分、天然または合成のものを示す。
【００８０】
該医薬組成物は、塩形態における酢酸、塩形態におけるクエン酸、塩形態におけるホウ酸、および塩形態におけるリン酸を包含する適当な緩衝剤を含有し得る。
【００８１】
該医薬組成物は、また、所望により、適当な保存剤、例えば、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、パラベンおよびチメロサールを含有し得る。
【００８２】
該医薬組成物は、便宜上単位用量形態で提供され、製剤の分野では既知の方法のいずれかによって製造され得る。全ての方法は、活性成分を１以上の付属成分を含む担体と混合する工程を包含する。一般的に、該組成物は、活性化合物を均一かつ緊密に、液体担体、微粉砕された固体担体またはその両方と混合し、その後に必要ならば製品を成形することによって製造される。
【００８３】
経口投与に適当な組成物は、個別の単位、例えば、活性化合物の前もって定められた量を各々含有する、カプセル、錠剤、ロゼンジとして提供され得る。他の組成物は、水性液体または非水性液体中の懸濁液、例えば、シロップ、エリキシルまたはエマルジョンを包含する。
【００８４】
非経腸投与に適当な組成物は、ポリペプチド/オリゴマーまたは核酸の滅菌した水性または非水性製剤を通常含み、これは患者の血液と等張であるのが好ましい。この製剤は、適当な分散または湿潤剤および懸濁剤を用いる既知の方法に従って製剤され得る。滅菌した注射製剤は、非毒性の非経腸的に許容し得る希釈剤または溶媒、例えば、１,３-ブタンジオール中の溶液のような、滅菌した注射用溶液または懸濁液でもあり得る。使用される許容し得るビヒクルおよび溶媒には、水、リンゲル（Ringer's）溶液、および等張塩化ナトリウム溶液がある。さらに滅菌した固定油（fixed oils）は、溶媒または懸濁媒体として通常用いられる。この目的のためには、合成モノまたはジグリセリドを包含する刺激のないあらゆる固定油を用い得る。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸は、注射可能な製剤に使用され得る。
【００８５】
経口、皮下、静脈内、筋肉内などの投与に適切な担体組成物は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PAに見いだされ得る。
【００８６】
本発明の好ましい実施態様において、該医薬組成物は血管新生を調節する。好ましくは、該調節は血管新生の阻害である。好ましくは、該阻害は内皮細胞の刺激による血管新生に関する。
【００８７】
あるいは、または好ましくは、該阻害は、マクロファージおよび／または腫瘍細胞の刺激による血管新生の阻害である。
【００８８】
本発明の別の好ましい実施態様において、該阻害は、前血管新生因子の阻害によって媒介される。理想的には、これらは細胞内または細胞表面受容体のいずれかである。
【００８９】
さらに好ましくは、該阻害は、前血管新生増殖因子の活性の阻害を介して媒介される。理想的には、該増殖因子は、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、aＦＧＦ、ＴＧＦ、ＰＤＧＦから選択される。
【００９０】
本発明のさらなる局面によれば、癌の処置で使用するための医薬品の製造のための、本発明のポリペプチド、またはその一部および／またはオリゴマーの使用を提供する。
【００９１】
本発明の別の局面によれば、
ｉ）図２に示されるＤＮＡ配列、
ｉｉ)本発明の修飾ペプチドをコードする少なくとも１つのコドンのうち少なくとも１つのヌクレオチド塩基の付加、削除、または置換によって修飾されている図２に示されるＤＮＡ配列、
ｉｉｉ）抗血管新生活性を有するペプチドをコードする図２に示した配列とハイブリダイズするＤＮＡ配列、および
ｉｖ）(ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）で定義されたＤＮＡ配列に対する遺伝子コードの結果として縮重されるＤＮＡ配列、 
から選択されるＤＮＡ配列を含む核酸分子を提供する。
【００９２】
本発明の好ましい実施態様において、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、上記（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）に記載の配列とアニーリングする単離された核酸分子を提供する。
【００９３】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション/洗浄条件は当業者には既知である。例えば、核酸ハイブリドは、０.１ｘＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ、６０℃の洗浄後に安定である。至適ハイブリダイゼーション条件は、核酸の配列が既知であれは、計算できることが知られている。通常、ハイブリダイゼーション条件は、４−６ｘＳＳＰＥ(１７５.３g ＮａＣｌ、８８.２ｇ ＮａＨ２ＰＯ４ Ｈ２Ｏおよび７.４ g ＥＤＴＡを含有する２０ｘＳＳＰＥを１ litreに溶解し、該ｐＨを７.４に調整した）、５-１０ｘ Denhardts 溶液(５０ｘ Denhardts 溶液は、５g Ficoll (Type 400, Pharmacia)、５g ポリビニルピロリドン および ５g ウシ血清アルブミン、１００μg-１.０mg/ml 超音波処理したサケ/ニシンＤＮＡ、０.１-１.０％ドデシルスルフェートナトリウム、所望により、４０-６０％脱イオン化形態のアミドを用いる。ハイブリダイゼーション温度は、核酸標的配列のＧＣ含量に依存して変化するが、典型的には４２-６５℃である。
【００９４】
本発明は、別の好ましい実施態様において、本明細書に開示される、１以上のペプチドアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列からなる単離された核酸分子をさらに提供する。
【００９５】
本発明のポリペプチドは、標準的なペプチド合成技術を用いるイン・ビトロペプチド合成によって製造されうる。あるいは、または好ましくは、ポリペプチドは、当業者には既知の組換技術によって製造され得る。
【００９６】
本発明の別の局面に従って、ベクターが提供される。該ベクターは、本発明のポリペプチドおよび／またはオリゴマーをコードする核酸分子を包含する。好ましい実施態様において、該ベクターは、本明細書中に記載の１以上のペプチドアミノ酸配列をコードする。
【００９７】
一方、該ポリペプチドをコードする核酸を包含するベクター(群)は、組換体発現に適用され得る。
【００９８】
本発明の好ましい実施態様において、該ベクターは、原核生物または真核生物細胞の発現に適合させた発現ベクターである。該真核生物ベクターは、遺伝子治療に適合されているのが好ましい。
【００９９】
通常、該適合は、例えば、細胞/組織特異的発現を媒介する転写制御配列(プロモーター配列)の提供を包含するが、これに限定するものではない。これらのプロモーター配列は、細胞/組織特異的、誘導性または構成的であり得る。
【０１００】
プロモーターは、当業者に認識される用語であり、明確にするために、以下の特徴を包含するが、これは単なる例示であって、これに限定されるものではない。エンハンサー要素は、遺伝子の転写開始部位の５’で頻繁に見いだされるcis作用の核酸配列である（エンハンサーは、遺伝子配列の３’でも見出され、またイントロン配列中にも位置しているため、位置非依存的である。)。エンハンサーは、該エンハンサーが結合している遺伝子の転写速度を増加させるように機能する。エンハンサー活性は、エンハンサーエレメントに特異的に結合することが示されているtrans作用転写因子(ポリペプチド)に応答性である。転写因子の結合/活性（真核生物転写因子、David S Latchman, Academic Press Ltd, San Diegoを参照されたい。)は、中間代謝物または環境エフェクター（限定でなく、例示の意味で）を包含する数多くの環境的信号に応答性である。
【０１０１】
プロモーターエレメントには、転写開始の部位を選択するように機能するいわゆるＴＡＴＡボックスおよびＲＮＡポリメラーゼ開始セクション（ＲＩＳ）配列も包含される。これらの配列はまた、とりわけ、ＲＮＡポリメラーゼによる転写開始選択を促進するように機能するポリペプチドにも結合される。
【０１０２】
適合には、該真核生物細胞または原核生物宿主のいずれかにおいて該ベクターの維持を容易にする選択性マーカーおよび自己複製配列の供給を包含する。自律的に維持されるベクターは、エピソームベクターと称される。
【０１０３】
ベクターをコードした遺伝子の発現を促進する適合は、転写停止/ポリアデニル化配列の供給を包含する。また、これは、バイシストロン（bicistronic）または多重シストロン発現カセットに配置されたベクターをコードした遺伝子の発現を最高とするように機能する内部リボゾームエントリー部位(ＩＲＥＳ)の供給を包含する。
【０１０４】
これらの適合は当分野でよく知られている。広く、発現ベクター構築体および組え換体ＤＮＡ技術に関して、大量の公開された文献が存在する。次に記す文献をを参照されたい。Sambrook et al (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, Cold Spring Harbour, NY and references therein; Marston, F (1987) DNA Cloning Techniques: A Practical Approach Vol III IRL Press, Oxford UK; DNA Cloning: F M Ausubel et al, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc.(1994)。
【０１０５】
本発明のさらに別の好ましい実施態様において、本発明の核酸を含む遺伝子治療用ベクターが提供される。 
【０１０６】
遺伝子治療ベクターの送達が、腫瘍近傍に対してなされ、本発明によるポリペプチドの産生を標的とし、それにより該ポリペプチドの抗血管新生効果を増加増加させることは当業者に明らかであろう。
【０１０７】
本発明の別の実施態様によれば、本発明の核酸で形質転換/トランスフェクトされた細胞が提供される。理想的には、該核酸は本発明のベクターである。
【０１０８】
本発明のさらなる別の局面によれば、
ｉ）本発明の細胞を提供すること、
ｉｉ）本発明のポリペプチドの製造を誘導する条件を提供すること、そして
ｉｉｉ）該ポリペプチドを細胞または細胞培養環境から精製すること、
を含む発明のポリペプチドの製造方法が提供される。
【０１０９】
本発明のさらなる他の局面に従って、非ヒト、トランスジェニック動物を提供し、該動物は本発明のポリペプチドをコードする核酸分子をそのゲノム中に含んでいることを特徴とする。
【０１１０】
本発明のポリペプチドをコードするトランスジーンの供給によって遺伝的に修飾されている非ヒトトランスジェニック動物の提供は、活性なペプチドの別の供給源であることは当業者に明らかである。トランスジェニック動物が、様々な治療用ポリペプチドを製造するために使用され得ることは当業者によく知られている。
【０１１１】
本発明の好ましい実施態様において、該トランスジーンはヒト起源である。
【０１１２】
本発明の別の局面において、
ｉ）本発明のポリペプチドを含む薬剤の有効量を、処置されるべき動物に投与すること、
ｉｉ）血管新生の阻害に関する該薬剤の効果をモニターすること、
を含む血管新生の阻害が有益である動物を処置する方法が提供される。
【０１１３】
本発明の好ましい方法において、該処置は腫瘍発達を阻害することである。
【０１１４】
別の処置方法において、本発明のポリペプチドは、ポリペプチド/オリゴマーの抗血管新生効果を増加させる薬剤と、さらに結合、会合もしくは架橋させられる。
【０１１５】
典型的には、該薬剤は、細胞毒性剤、他の抗血管新生剤、プロドラッグ活性化酵素剤、化学療法剤、前凝固剤または免疫調節因子でありうる。
【０１１６】
これらの例は、当業者には既知であり、例えば、細胞毒素、例えば、リシンＡ鎖またはジフテリア毒、腫瘍における重要な前血管新生因子のアンタゴニスト(例えば、ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＴＮＦα、ＰＤＧＦ)が、包含される。これらの因子に対する中和抗体または受容体、またはそれら受容体に対するチロシンキナーゼ阻害剤(例えば、ＶＥＧＦ受容体に対するＰＴＫ７８７、Ｆｌｋ−１／ＫＤＲ)、プロドラッグを活性化するプロドラッグ活性化酵素、例えば、ヒト単一のウイルス-チミジンキナーゼＨＳＶ−ＴＫ、そこで全身投与される場合のガンシクロビル、化学治療剤、例えば、ネオカルジノスタチン；シスプラチン、カルボプラチン、シクロスフォスファミド、メルファラン、カルムスリン（carmusline）、メトトレキセート、５-フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ビンブラスチン、ビンクラスチン、ダクチノマイシン（アクチノマイシン）、マイトマイシンＣ、タキソール、Ｌ−アルパラギナーゼ、Ｇ-ＣＳＦ、エンジイン（enediyne）、例えば、カリケアナイシン（chalicheamicin）またはエスペラマイシン（esperamicin）、クロラムブシル（chlorambucil）、ＡＲＡ-Ｃ、ビンデシン（vindesine）、ブレオマイシン（bleomycin）；およびエトポシドであるが、これらに限定されない。
【０１１７】
さらに、あるいは、ヒト組織因子の細胞表面ドメイン(組織因子(ｔＴＦ)のトランケート形態）は、本発明のポリペプチドと結合し得る。循環中に遊離している場合、トランケートされたＴＦは限られた抗内皮活性を有するに過ぎないが、腫瘍内皮細胞の表面に標的化された場合に、有効で選択的なトロンボゲン(例えば、血管中で広範な血栓および凝固を生じる)となる。
【０１１８】
免疫調節因子の例は、ヒトＩｇＧ１のＦｃエフェクタードメインである。これは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と、また補体カスケードを開始するＣ１ｑタンパク質と結合する。次いで、ＮＫ細胞および補体は、標的とする内皮細胞に対して強力な細胞溶解応答を活性化する。
【０１１９】
ポリペプチドおよび治療剤の上記組み合わせが、血管新生に依存する他の症状/疾患の処置に関して利益を有することは、明らかである。例えば、血管新生緑内障、リウマチ様関接炎、乾癬および糖尿病網膜症である。
【０１２０】
処置方法のさらに別の方法において、該遺伝子治療用ベクターは、本発明のポリペプチドをコードする該核酸を、該ポリペプチドの抗血管新生効果を増強する薬剤をコードする核酸と共に含有する。
【０１２１】
本発明のさらなる別の局面に従って、本発明のポリペプチドを含むイメージング剤を提供する。適当なイメージング剤の例には、コントラスト剤、磁気共鳴造影剤、常磁性アイソトープ、重金属またはラジオアイソトープを包含するが。これらに限定されない。
【０１２２】
本発明のポリペプチドは、イメージング剤を、例えば腫瘍に標的化し、それによって発達中の腫瘍を同定し、腫瘍の成長を阻害する処置の効果をモニターするように使用し得ることが当業者に明らかである。ポリペプチドおよび別の抗血管新生剤の両方を含む組合せ治療用組成物は、イメージング剤とさらに組合せて治療用組成物の分布をモニターし、かつ／あるいは該組合せ物の効果をモニターし得ることが明らかである。
【０１２３】
イメージング剤を検出するのに使用される方法は、当業者によく知られており、例えば、Ｆ１８およびＣ１１化合物の陽電子放射断層撮影法による検出を包含するが、これに限定されるものではない。
【０１２４】
本発明の別の局面に従って、本発明のポリペプチド/オリゴマーとビトロネクチン受容体との相互作用を調節するリガンドを同定するスクリーニング方法を提供する。
【０１２５】
本発明の好ましい方法において、該方法は、
ｉ）図３に示したアミノ酸配列またはその活性な結合フラグメントを含むポリペプチドを提供すること、
ｉｉ）本明細書中で開示された配列から選択されるアミノ酸配列を含む少なくとも１つのポリペプチドまたは薬剤を提供すること、
ｉｉｉ）試験される少なくとも１つのリガンドを提供すること、 
ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）の製剤を形成すること、および
ｖ）(ｉ)のポリペプチドと(ｉｉ)のポリペプチドまたは薬剤との相互作用に対する(ｉｉｉ)中のリガンドの効果を検出または測定すること、
を包含する。
【０１２６】
本発明の別の好ましい実施態様において、該リガンドは(ｉｉ)のポリペプチドまたは薬剤の添加前に(ｉ)のポリペプチドと、プレインキュベートされる。
【０１２７】
本発明の別の好ましい実施態様において、該リガンドは、(ｉ)のポリペプチドに加える前の(ｉｉ)のポリペプチドまたは薬剤とプレインキュベーションされる。
【０１２８】
本発明の別の好ましい方法において、該ビトロネクチン受容体は、可溶性形態でまたは細胞によって提示される。好ましくは、該細胞は、天然でビトロネクチン受容体を発現する。ビトロネクチン受容体を天然で発現する細胞の例は、内皮細胞、平滑筋細胞、破骨細胞および腫瘍細胞である。別法では、該細胞はビトロネクチン受容体を天然には発現せず、その場合、該細胞がビトロネクチン受容体を発現するように遺伝子的に設計されるのが好ましい。
【０１２９】
本発明の別の局面に従って、本発明のスクリーニング方法によって同定される薬剤が提供される。好ましくは、該薬剤は、ビトロネクチン受容体結合活性で、ポリペプチド/オリゴマーの相互作用と干渉する。あるいは、該薬剤は、ビトロネクチン受容体結合活性で、ポリペプチドの相互作用を促進する。
【０１３０】
本発明の実施態様は、単なる例示として、下記図を参照して記載される。
図１は、α１−２４のアミノ酸配列を示す。
図２は、α１−２４をコードする該核酸配列を示す。
図３は、本明細書中で開示されるポリペプチドの抗血管新生活性の要約を示す。
図４および５は、本発明のペプチドの細管形成活性を示す。
【０１３１】
材料および方法
成人ヒト皮膚微小管内皮細胞(ＨｕＤＭＥＣ)を入手し(TCS Biologicals, Buckinghamshire, United Kingdom)、微小管内皮細胞増殖培地(ＥＧＭ)中で培養した。この培地は、ヘパリン(10ng/ml)、ヒドロコルチゾン、ヒト表皮増殖因子(10ng/ml)、ヒト繊維芽細胞増殖因子(10ng/ml)（このような内皮増殖因子は培養物中でＨｕＤＭＥＣの通常の継代培養に必要である）およびジブチリル環状ＡＭＰを含む。これを、５％の熱不活性化ＦＣＳ、５０μg/mlゲンタマイシンおよび５０ng/mlアンフォテリシンＢ（TCS Biologicals, United Kingdom）により補足した。ネズミ内皮細胞（ＳＶＥＣ４-１０）をＡＴＣＣから得、ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ中で培養した。細胞を、３７℃、気相で５％ＣＯ２を有する１００％の湿度にしたインキュベーター中で増殖させ、マイコプラズマについて常套的にスクリーニングした。下記アッセイにおいて使用前に、ＨｕＤＭＥＣを８０％のコンフルエンシーまで増殖させ、ＤＭＥＭ＋１％ＦＣＳ中で２時間インキュベートし、次いで０.０５％トリプシン溶液を用いて回収し、２回洗浄し、各々アッセイに必要な該細胞密度(下記参照)に再懸濁した。
【０１３２】
ペプチド合成および分析
分析用ＨＰＬＣのための実験条件
勾配１：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１：４９〜３：２の直線勾配、流速４.０mL/分、２１５ｎｍで検出、ＳＢ−Ｃ１８ＺＯＲＢＡＸカラム３.５μm、５０ｘ４.６mm。
勾配２：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１：４９〜１：０の直線勾配、流速４.０mL/分、２１５ｎｍで検出、ＳＢ−Ｃ１８ＺＯＲＢＡＸカラム、３.５μm、５０x４.６mm。
勾配３：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１：４９〜３：２の直線勾配、流速４.０mL／分、２１５ｎｍで検出、Nucleosil Ｃ８カラム、５.０μm、１２５x４.０mm。
勾配４：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１：４９〜３：２の直線勾配、流速４ml/分；２１５ｎｍで検出、Chromolith SpeedROD C18 カラム、５０x４.６mm。
【０１３３】
勾配５：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１:４９〜１：０の直線勾配、流速４ml/分；２１５ｎｍで検出、Chromolith SpeedROD C18 カラム、５０x４.６mm。
勾配６：１.７５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１:４９〜１：０の直線勾配そして１：０で０.７５分、流速４ml/分、２１５ｎｍで検出、Chromolith SpeedROD C18 カラム、５０x４.６mm。
勾配７：２.５分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１:４９〜１：０の直線勾配、流速４ml/分；２１５ｎｍで検出、UP50DB-5M Uptisphere C18 カラム、５.０μm、５０x４.６mm。
勾配８：７分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１:４９〜１：０の直線勾配、そして１：０で３分間、流速２.０mL/分、２１５ｎｍで検出、SMT C18 カラム、５.０μm、２５０x４.６mm。
勾配９：１０分の間、ＭｅＣＮ／０.０９％ＴＦＡとＨ２Ｏ／０.１％ＴＦＡで１:４９〜１：０の直線勾配、流速２.０mL/分、２１５ｎｍで検出、ＳMT C18 カラム、５.０μm、２５０x４.６mm。
ｔＲ：保持時間
【０１３４】
ＮＶＰ−ＡＦＣ７７１−ＡＩ-１７/ＣＧＥ−３１３３
実施例１．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
表題のペプチドを、Ｃ末端カルボキシアミドを確立するためにＦｍｏｃ−ＰＡＬ−ＰＥＧ−ＰＳ樹脂(参照、Albericio, F. et al, J. Org. Chem., 55 (1990) 3730-3743)を用いて開始し、フルオレニルメトキシカルボニル化学(参照、E. Atherton and R.C. Sheppard, in Solide-phase Peotideynthesis-A Practical Approach, eds: R. Rickwood and B.D. Hames, IRL Press at Oxford University Press, Oxford, 19989)に基づく化学的プロトコールを用いて、Milligen 9050 自動ペプチド合成機(連続フロー；Millipore, Bedford, MA, USA)で合成した。所望のＦｍｏｃ−アミノ酸(３等量)を、それらの２,４,５-トリクロロフェニルエステル(シングルカップリング)と、３０分間の最小反応時間(参照：9050 Plus PepSynthesizer User's Guide, Millipore Corporation, Bedford, MA, 1992)で導入した。側鎖を、アスパラギン酸、グルタミン酸およびセリンに対してはtert-ブチル、アルギニンに対しては２,２,５,７,８-ペンタメチル-クロマン-６-スルホニルおよびヒスチジンに対してはトリチルで保護した。必要なら、ダブルカップリングを、ジイソプロピルエチルアミン(６等量)の存在下で、Ｆｍｏｃ−アミノ酸(３等量)およびＯ−(１，２-ジヒドロ-２-オキソ-１-ピリジル)−１,１,３,３-テトラメチルウロニウムテトラフルオロ ホウ酸塩（３等量）を用いて行った。最後のカップリング反応後に得た完成ペプチド樹脂を、一斉に脱保護し、３時間、室温でトリフルオロ酢酸/水(９５：５、v/v)を用いる処理により開裂した。開裂反応からの濾物を、ジイソプロピルエーテル-石油エーテル(１：１、v/v)中、０℃で沈殿させ、該沈殿物を濾取した。該粗製ペプチドを、Ｃ１８カラムを用いる逆相中速（中圧）液体クロマトグラフィーにより、０.１％トリフルオロ酢酸（Merck LICHROPREP RP-18、15-25.0μmのビース直径、Ｃ１８誘導体シリカゲルを基にした逆相カラム材（Merck, Darmstadt, FRG）、カラム長46cm、径3.6cm、流速53.3 ml/分、215ｎｍで検出）を含有するアセトニトリル-水の勾配で溶出して、精製した。精製化合物の質量分光分析(マトリックス支援イオン化-飛行時間型質量分析, ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ)から、０.１％の予測値内(負イオンモード)の分子量が明らかとなった：２４６３.３ (計算値２４６３.７、Ｃ１０４Ｈ１６５Ｎ３６Ｏ３４）。表題化合物の精製度を、逆相分析ＨＰＬＣによって評価した：ｔＲ＝１.８１分(勾配１)、ｔＲ＝１.４１分(勾配２)およびｔＲ＝２.０８分(勾配３)でシングルピーク。
【０１３５】
下記ペプチドを、実施例１に記載のとおりに合成した。
ＮＶＰ−ＡＦＣ７５９−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３１３２
実施例２．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４９１.８(計算値２４９１.７、Ｃ１０５Ｈ１６５Ｎ３６Ｏ３５)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８３分(勾配１)、ｔＲ＝１.４１分(勾配２)およびｔＲ＝２.０８分(勾配３)。
【０１３６】
ＮＶＰ−ＡＦＣ７５７−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１３１
実施例３．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５２１.８(計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８４分(勾配１）、ｔＲ＝１.４２分(勾配２）およびｔＲ＝２.１０分(勾配３）。
【０１３７】
ＮＶＰ−ＡＦＣ７５６−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３１３０
実施例４．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４４９.６(計算値２４４９.７、Ｃ１０３Ｈ１６３Ｎ３６Ｏ３４）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８４分（勾配１）、ｔＲ＝１.４１分(勾配２）およびｔＲ＝２.０９分(勾配３)。
【０１３８】
ＮＶＰ-ＡＦＣ７５３-ＡＩ-１/ＣＧＥ-３１２９
実施例５．Ａｃ-Ａｌａ-Ａｓｐ-Ｓｅｒ-Ｇｌｙ-Ｇｌｕ-Ａｌａ-Ａｓｐ-Ｐｈｅ-Ｌｅｕ-Ａｌａ-Ｇｌｕ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｖａｌ-Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ｐｒｏ-Ａｒｇ-Ｖａｌ-Ｖａｌ-Ｇｌｕ-Ａｒｇ-Ｈｉｓ-ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード): ２５２２.０（計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８５分（勾配１）、ｔＲ＝１.４３分（勾配２）およびｔＲ＝２.１１分（勾配３）。
【０１３９】
ＮＶＰ−ＡＦＣ７２３−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３１２８
実施例６．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４６３.１(計算値２４６３.７、Ｃ１０４Ｈ１６５Ｎ３６Ｏ３４）。
分析用ＨＰＬＣ:ｔＲ＝１.８２分(勾配１)、ｔＲ＝１.４１分(勾配２)およびｔＲ＝２.０７分(勾配３)。
【０１４０】
ＮＶＰ−ＡＦＣ７７９−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１２７
実施例７．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ 塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４３１.７(計算値２４３１.６、Ｃ９９Ｈ１６１Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.６６分(勾配１）およびｔＲ＝１.９４分(勾配３)。
【０１４１】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８３２−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１２１
実施例８．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４６５.６(計算値２４６５.６、Ｃ１０２Ｈ１５９Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.６６分(勾配１）およびｔＲ＝１.９４分(勾配３)。
【０１４２】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８２８−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１２０
実施例９．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４４９.１(計算値２４４９.７、Ｃ１０３Ｈ１６３Ｎ３６Ｏ３４）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９１分(勾配１)、ｔＲ＝１.８３分(勾配４)およびｔＲ＝１.４４分(勾配５)。
【０１４３】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８２６−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１１９
実施例１０．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５２１.７(計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８５分(勾配１)、ｔＲ＝１.８８分(勾配４)およびｔＲ＝１.４７分（勾配５)。
【０１４４】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８２３−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１１５
実施例１１．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５２１.７(計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８２分(勾配１)、ｔＲ＝１.８４分(勾配４)およびｔＲ＝１.４４分(勾配５)。
【０１４５】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８２１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１１４
実施例１２．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５２１.７(計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８０ 分 (勾配１)、ｔＲ＝１.８３分（勾配４)およびｔＲ＝１.４３分(勾配５）。
【０１４６】
ＮＶＰ−ＡＦＢ８１８−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１１３
実施例１３．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４７９.７(計算値２４７９.７、Ｃ１０３Ｈ１６１Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７６分(勾配１)、ｔＲ＝１.７８分(勾配４）およびｔＲ＝１.４１分(勾配５）。
【０１４７】
ＮＶＰ−ＡＦＢ５０４−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１１０
実施例１４．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４２２.６(計算値２４２２.６、Ｃ１０２Ｈ１５８Ｎ３３Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７９分（勾配４)およびｔＲ＝１.４３分(勾配５）。
【０１４８】
ＮＶＰ−ＡＦＢ５０３−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１０９
実施例１５．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５２１.１(計算値２５２１.７、Ｃ１０６Ｈ１６７Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７７分（勾配４)およびｔＲ＝１.４１分(勾配５）。
【０１４９】
ＮＶＰ−ＡＦＢ５０２−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１０８
実施例１６．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４８０.１（計算値２４８１.７、Ｃ１０３Ｈ１６３Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７４分（勾配４）およびｔＲ＝１.４０分（勾配５）。
【０１５０】
ＮＶＰ−ＡＦＢ５０１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１０５
実施例１７．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４２２.３（計算値２４２２.６、Ｃ１０２Ｈ１５８Ｎ３３Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７６分（勾配１）、ｔＲ＝１.７９分（勾配４)およびｔＲ＝１.４３分（勾配５）。
【０１５１】
ＮＶＰ−ＡＦＢ５００−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１０４
実施例１８．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４８１.０（計算値２４７９.７、Ｃ１０３Ｈ１６１Ｎ３６Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７２分（勾配４)およびｔＲ＝１.３８分（勾配５）。
【０１５２】
ＮＶＰ−ＡＦＢ４９０−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１０３
実施例１９．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４８１.７(計算値２４７９.７、Ｃ１０３Ｈ１６１Ｎ３６Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７２分（勾配４)およびｔＲ＝１.３８分（勾配５）。
【０１５３】
ＮＶＰ−ＡＦＢ４００−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３１００
実施例２０．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４５０.０（計算値２４４９.７、Ｃ１０３Ｈ１６３Ｎ３６Ｏ３４）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７７分（勾配４)およびｔＲ＝１.４０分（勾配５）。
【０１５４】
ＮＶＰ−ＡＦＢ３７６−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３０９９
実施例２１．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（負イオンモード)：２４２１.０（計算値２４２２.６、Ｃ１０２Ｈ１５８Ｎ３３Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７８分（勾配４)およびｔＲ＝１.４３分（勾配５）。
【０１５５】
ＮＶＰ−ＡＦＢ３５８−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３０９８
実施例２２．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４４２.１（計算値２４４１.７、Ｃ１０２Ｈ１６３Ｎ３４Ｏ３６)。 
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７９分（勾配４）およびｔＲ＝１.４４分（勾配５）。
【０１５６】
ＮＶＰ−ＡＥＺ７７２−ＡＩ−１／２／ＣＧＥ−２９４３
実施例２３．ビオチン−８−アミノ-３，６-ジオキサオクタノイル-Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
Ｆｍｏｃ−８-アミノ-３，６-ジオキサオクタン酸（３等量、Neosystem, Strasbourg, France）を、ジイソプロピルエチルアミン（６等量）存在下に、Ｏ−(１，２-ジヒドロ-２-オキソ−１−ピリジル)−１，１，３，３-テトラメチルウロニウムテトラフルオロ ホウ酸塩（３等量、シングルカップリング）を用いて導入した。（＋）-ビオチン（３等量、Fluka, Buchs, Switzerland）を、ジイソプロピルエチルアミン（６等量）の存在下でＯ−(１，２−ジヒドロ-２-オキソ-１-ピリジル)-１,１,３,３-テトラメチルウロニウム テトラフルオロ ホウ酸塩（３等量、第一カップリング）およびＮ-[(ジメチルアミノ)-１Ｈ−１,２,３,-トリアゾール-［４,５ｂ］ピリジン-１-イル-メチレン]-Ｎ-メチルメタンアンモニウム ヘキサフルオロホスフェート Ｎ-オキシド（３等量、第２カップリング）を用いてカップリングした。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード):２８３７.１（計算値２８３７.１、Ｃ１１９Ｈ１８８Ｎ３９Ｏ４０Ｓ１）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７４分（勾配４)；およびｔＲ＝１.４２分（勾配５）。
【０１５７】
ＮＶＰ−ＡＥＺ７７５−ＡＩ−１／２／３／ＣＧＥ−２９４４
実施例２４．フルオレスセイン-８-アミノ-３,６-ジオキサオクタノイル-Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
Ｆｍｏｃ−８−アミノ-３,６-ジオキサオクタン酸（３等量、Neosystem, Strasbourg, France）を、ジイソプロピルエチルアミン（６等量）存在下に、Ｏ−(１,２-ジヒドロ-２-オキソ−１−ピリジル)-１,１,３,３-テトラメチルウロニウム テトラフルオロ ホウ酸塩（３等量、シングルカップリング）を用いて導入した。フルオレスセインイソチオシアネート アイソマーＩ（３等量、Fluka, Buchs, Switzerland）を、ジイソプロピルエチルアミン（６等量）存在下、Ｎ末端アミノ基に導入した。カップリングを、Ｎ-メチル-２-ピロリドン中にビルディング・ブロックおよび該塩基を溶解し、該混合物を樹脂に加え、室温で２１時間振とうして達成した。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：３０００.６（計算値３０００.２,Ｃ１３０Ｈ１８５Ｎ３８Ｏ４３Ｓ１）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝２.００分（勾配４)；およびｔＲ＝１.６３分（勾配５）。
【０１５８】
ＮＶＰ−ＡＥＺ７７６-ＡＩ-１／ＣＧＥ−２９５７
実施例２５．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１３５８.３（計算値１３５８.６、Ｃ５７Ｈ９７Ｎ２４Ｏ１５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.４６分（勾配４）；およびｔＲ＝１.１３分（勾配６）。
【０１５９】
ＮＶＰ−ＡＥＺ９９１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９５９
実施例２６．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１４１５.８（計算値１４１５.６、Ｃ５９Ｈ１００Ｎ２５Ｏ１６）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.４５分（勾配４）およびｔＲ＝１.１１分（勾配６）。
【０１６０】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０１１-ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６０
実施例２７．Ａｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：１５４６.８（計算値１５４６.７，Ｃ６４Ｈ１０９Ｎ２６Ｏ１９）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.４５分（勾配４)およびｔＲ＝１.１１分（勾配６）。
【０１６１】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０１４−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６１
実施例２８．Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：１６１７.５（計算値１６１７.８、Ｃ６７Ｈ１１４Ｎ２７Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.４７分（勾配４）およびｔＲ＝１.１１分（勾配６）。
【０１６２】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０１７−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６２
実施例２９．Ａｃ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：１７３１.６(計算値１７３１.０、Ｃ７２Ｈ１２５Ｎ２８Ｏ２１)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.６５分（勾配４）およびｔＲ＝１.２１分（勾配６）。
【０１６３】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０２０−ＡＩ-１／ＣＧＥ−２９６３
実施例３０．Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：１８７８.２（計算値１８７８.２、Ｃ８２Ｈ１３４Ｎ２９Ｏ２２）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８２分（勾配４）およびｔＲ＝１.３２分（勾配６）。
【０１６４】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０２２−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６４
実施例３１．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１９９０.９（計算値１９９１.２、Ｃ８６Ｈ１３７Ｎ３０Ｏ２５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８６分（勾配４)およびｔＲ＝１.３１分（勾配６）。
【０１６５】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０２３−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６５
実施例３２．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：２０４９.７（計算値２０５０.３、Ｃ８８Ｈ１４２Ｎ３１Ｏ２６）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８３分（勾配４)およびｔＲ＝１.３０分（勾配６）。
【０１６６】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０２７−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６６
実施例３３．Ａｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：２１７９.３（計算値２１７９.４、Ｃ９３Ｈ１４９Ｎ３２Ｏ２９）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８１分（勾配４）；およびｔＲ＝１.２９分（勾配６）。
【０１６７】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０３０−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６７
実施例３４．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析（陽イオンモード)：２２３４.５（計算値２２３４.５、Ｃ９５Ｈ１５０Ｎ３３Ｏ３０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７９分（勾配４）およびｔＲ＝１.２７分（勾配６）。
【０１６８】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０３１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２９６８
実施例３５．Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２３２１.０（計算値２３２１.５、Ｃ９８Ｈ１５５Ｎ３４Ｏ３２）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７９分（勾配４）およびｔＲ＝１.２６分（勾配６）。
【０１６９】
ＮＶＰ−ＡＦＡ０３６-ＡＩ-１／ＣＧＥ−２９６９
実施例３６．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２４３６.３（計算値２４３６.６、Ｃ１０２Ｈ１６０Ｎ３５Ｏ３５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７８分（勾配４）およびｔＲ＝１.２７分（勾配６）。
【０１７０】
ＮＶＰ−ＡＥＺ５７０-ＡＩ-１／ＣＧＥ−２８０９ 
実施例３７．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５７６.５（計算値１５７６.６、Ｃ６５Ｈ９９Ｎ２０Ｏ２６）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.５２分（勾配７）およびｔＲ＝５.０８分（勾配８）。
【０１７１】
ＮＶＰ−ＡＥＺ５７２-ＡＩ−１／２／ＣＧＥ−２８１０
実施例３８．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２５０７.７（計算値２５０７.７、Ｃ１０５Ｈ１６５Ｎ３６Ｏ３６)。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８７分（勾配４）およびｔＲ＝１.４９分（勾配５）。
【０１７２】
ＮＶＰ−ＡＥＺ５７５−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２８１１
実施例３９．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＧｌＮ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：２８９８.０（計算値２８９７.１、Ｃ１１９Ｈ１８８Ｎ４１Ｏ４２Ｓ１）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝５.０１分（勾配８）およびｔＲ＝５.７６分（勾配９）。
【０１７３】
ＮＶＰ−ＡＥＺ５７６−ＡＩ−１／ＣＧＥ−２８２７
実施例４０．（Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−ＮＨ２）ＳＳ（Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−ＮＨ２) ＴＦＡ塩
実施例３９に記載の該ペプチド（５０ mg)を、１％の炭酸ナトリウム (５００μl）溶液に溶解し、室温で終夜攪拌した。これ以後、該粗製ペプチドを、実施例１に記載のとおりに精製した。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：５７９５.１（計算値５７９３.３、Ｃ２３８Ｈ３７５Ｎ８２Ｏ８４Ｓ２）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９８分（勾配４）およびｔＲ＝１.５６分（勾配５）。
【０１７４】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３６１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３４８
実施例４１．Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−ＮＨ２
ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１６１５.８（計算値１６１５.８、Ｃ６７Ｈ１１２Ｎ２７Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.５８分（勾配４）およびｔＲ＝１.２９分（勾配５）。
【０１７５】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３６６−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３４９
実施例４２．Ａｃ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５９１.４（計算値１５９１.８、Ｃ６７Ｈ１１６Ｎ２５Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.７６分（勾配４）およびｔＲ＝１.３７分（勾配５）。
【０１７６】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３７８−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３３５０
実施例４３．Ａｃ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−ＮＨ２ ＴＦＡ 塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５８２.６（計算値１５８２.８、Ｃ７０Ｈ１１３Ｎ２２Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝２.０３分（勾配４)およびｔＲ＝１.５９分（勾配５）。
【０１７７】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３９６−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５１
実施例４４．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＮＨ２ ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５６８.０（計算値１５６８.８、Ｃ６９Ｈ１１１Ｎ２２Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝２.０３分（勾配４)およびｔＲ＝１.５５分（勾配５）。
【０１７８】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３９８−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５２
実施例４５．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５２６.５（計算値１５２６.７、Ｃ６６Ｈ１０５Ｎ２２Ｏ２０）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９６分（勾配４)およびｔＲ＝１.５０分（勾配５）。
【０１７９】
ＮＶＰ−ＡＨＩ３９９-ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５３
実施例４６．Ａｃ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５５６.３（計算値１５５６.７、Ｃ６７Ｈ１０５Ｎ２１Ｏ２２）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８６分（勾配４）およびｔＲ＝１.４８分（勾配５）。
【０１８０】
ＮＶＰ−ＡＨＩ４００−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５４
実施例４７．Ａｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１４５７.３（計算値１４５７.６、Ｃ６２Ｈ９４Ｎ１９Ｏ２２）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８９分（勾配４）およびｔＲ＝１.５０分（勾配５）。
【０１８１】
ＮＶＰ−ＡＨＩ４０１−ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５５
実施例４８．Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１４４７.３（計算値１４４７.５、Ｃ６０Ｈ９２Ｎ１９Ｏ２３）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８３分（勾配４)およびｔＲ＝１.４６分（勾配５）。
【０１８２】
ＮＶＰ−ＡＨＩ４０２-ＡＩ−１／ＣＧＥ−３３５６
実施例４９．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１５０５.１（計算値１５０５.６、Ｃ６２Ｈ９４Ｎ１９Ｏ２５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８４分(勾配４)およびｔＲ＝１.４９分(勾配５）。
【０１８３】
ＮＶＰ−ＡＨＩ７９３−ＡＩ-１／ＣＧＥ−３３５７
実施例５０．Ａｃ−Ａｌａ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１４２０.６（計算値１４２０.５、Ｃ５９Ｈ８７Ｎ１６Ｏ２５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８６分（勾配４）およびｔＲ＝１.４８分（勾配５）。
【０１８４】
ＮＶＰ−ＡＮＨ４１９−ＡＩ−１、ＣＧＥ−３４５９
実施例５１．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１１１７.２（計算値１１１７.２、Ｃ４８Ｈ７４Ｎ１５Ｏ１６）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９４分（勾配４）、ｔＲ＝１.５８分（勾配５）。
【０１８５】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６３９−ＮＸ−１、ＣＧＥ−３６３９
実施例５２．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−ＮＨ２
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：９０３.６（計算値９０４.０、Ｃ４０Ｈ５９Ｎ１０Ｏ１４）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９７分（勾配４)、ｔＲ＝１.５６分（勾配５）。
【０１８６】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６４０−ＮＸ−１、ＣＧＥ−３６４０
実施例５３．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＮＨ２
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：８０４.５（計算値８０４.８、Ｃ３５Ｈ５０Ｎ９Ｏ１３）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.８７分（勾配４）、ｔＲ＝１.５０分（勾配５）。
【０１８７】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６４８−ＡＩ−１、ＣＧＥ−３６５０
実施例５４．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
Ｆｍｏｃ−８-アミノ-３,６-ジオキサオクタン酸をNeosystem (Strasbourg, France)から入手した。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１０９０.７（計算値１０９１.２、Ｃ４８Ｈ７６Ｎ１３Ｏ１６）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝２.０３分（勾配４)、ｔＲ＝１.５９分（勾配５）。
【０１８８】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６５５−ＡＩ−１、ＣＧＥ−３６５１
実施例５５．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−βＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
Ｆｍｏｃ−β-アラニンをFluka(Buchs, Switzerland)から入手した。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１０１７.４（計算値１０１７.１、Ｃ４５Ｈ７０Ｎ１３Ｏ１４）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９９分（勾配４）、ｔＲ＝１.５７分（勾配５）。
【０１８９】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６５８-ＡＩ−１、ＣＧＥ−３６５２
実施例５６．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−βＡｌａ−βＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
Ｆｍｏｃ−β-アラニンをFluka(Buchs, Switzerland)から入手した。
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１０８８.４（計算値１０８８.２、Ｃ４８Ｈ７５Ｎ１４Ｏ１５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９５分（勾配４)、ｔＲ＝１.５４分（勾配５）。
【０１９０】
ＮＶＰ−ＡＭＬ６３２−ＡＩ−１、ＣＧＥ−３６３８
実施例５７．Ａｃ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＮＨ２  ＴＦＡ塩
標題化合物：質量分光分析(負イオンモード)：１０６０.１（計算値１０６０.２、Ｃ４６Ｈ７１Ｎ１４Ｏ１５）。
分析用ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１.９４分（勾配４）、ｔＲ＝１.５４分（勾配５）。
【０１９１】
細管形成アッセイ
２４ウェルプレートを、増殖因子を減少させた（ＧＦ減少）Matrigel(Becton Dickinson Labware, Bedford, MA)の３０μｌ／ウェルで被覆した。このマトリックス上に播種した内皮細胞は、移動して前記(１４)のとおりに播種６時間以内で細管へ分化する。ＨｕＤＭＥＣまたはＳＶＥＣ４−１０細胞を、４x１０４細胞/mlの密度で播き、フィブリノーゲンＥ−フラグメント、フィブリンＥ−フラグメント、ＦｐＡまたはα１−２４の存在下もしくは非存在下で、ＤＭＥＭ＋１％ＦＣＳ単独（対照）、またはこの培地±１０ｎｇ/ml ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦ、いずれか５００μｌ中で６時間インキュベーションした。細管形成の評価は、４℃、１５分間、７０％エタノール中に該細胞調製物を固定し、ＰＢＳで洗浄し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色することを包含する。各試験条件について３回繰返すウェルにおいて３つのランダムなフィールド（視野）を、低倍率(ｘ４０倍率)下で可視化し、カラー画像をPentium IIIコンピューター（frame grabber boardを含有する）と連結したFujiデジタルカメラを用いてとらえた。細管形成を、Scion Imageによって提供される画像分析用ソフトウエアを用いて各視野において細管分岐の数および細管に覆われた全面積を計測することによって評価した。
【０１９２】
移動アッセイ
Boyden chamber 技術を(１３)から採用し、ＶＥＧＦ(１０ng/ml)またはｂＦＧＦ(１０ng/ml)いずれかの濃度勾配に対して多孔性膜を通過するＨｕＤＭＥＣ移動を評価するために使用した。Neuro Probe４８ウェルミクロ化学走性チャンバー(Neuro Probe Inc, Cabin John, MD)を１００μｇ/mlのコラーゲン型ＩＶで被覆した８μm孔サイズのポリカーボネート膜(Neuro Probe Inc, Cabin John, MD)と共に使用した。１０ng/mlのＶＥＧＦまたはｂＦＧＦ単独、または様々な濃度のフィブリノーゲンＥ−フラグメント、フィブリンＥ−フラグメント、ＦｐＡまたはα１-２４と共に、ＤＭＥＭ＋１％ＦＣＳに溶解し、低部のウェルに静置した。次いで、コラーゲンを被覆した膜をこの上に置き、５０μlの２５ｘ１０４ ＨｕＤＭＥＣｓ／ｍｌ(１％ＦＣＳを含有するＤＭＥＭ中)をチャンバー上部へ添加した。次いで、該チャンバーを、３７℃、４.５時間でインキュベートした。次いで、該チャンバーの覆いを除き、該膜を除去し、移動しなかった細胞を表面上部から取り去った。低部表面上で移動した細胞をメタノールで固定し、Ｈｅｍａ“Ｇurr”の即時染色キット(Merck, Leics, United Kingdom)で染色し、ウェルあたり、３つのランダムフィールドを光学顕微鏡（x１６０倍率）で計測した。各試験条件を３-６回繰返すウェルで実施し、各試験を３回繰り返した。
【０１９３】
増殖アッセイ
ＭＴＴ(３-[４,５−ジメチルチアゾール-２-イル]-２,５-ジフェニルテトラゾリニウム臭化物)アッセイを、前記（１２）と同様に使用し、フィブリノーゲンＥ−フラグメント、フィブリンＥ−フラグメント、ＦｐＡまたはα１−２４の非存在下もしくは存在下に、ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦによって誘導されたＨｕＤＭＥＣ増殖を評価した。ＨｕＤＭＥＣを、ＤＭＥＭ＋１％ＦＣＳ±１０ng/ml ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦの試験溶液中、３ｘ１０３細胞/１００μlで、４.５および６時間、９６ウェル・マイクロタイター・プレートに播いた。この時点で、４分の１の容積のＭＴＴ溶液（２mg ＭＴＴ／ｍｌ ＰＢＳ）を、各ウェルに添加し、各ウェルプレートを、４時間、３７℃でインキュベートし、不溶性のパープルホルマザン生成物を得た。該培地を、アスピレートし、該沈殿物をｐＨ１０.５で緩衝する１００μｌＤＭＳＯに溶解した。次いで、吸光度を５４０nmでＤｙｎｅｘ ＥＬＩＳＡプレート・リーダーで読んだ。
【０１９４】
細胞毒性アッセイ
ＨｕＤＭＥＣを、フィブリノーゲンＥ−フラグメント、フィブリンＥ−フラグメント、ＦｐＡまたはα１-２４の非存在下または存在下で、２４ウェルプレートにおいてウェルあたり１-２ｘ１０５の細胞密度で播種した。６時間後、生存（トリプシン化によって除去する）および死(浮遊)細胞の両方を回収し、存在する全細胞の生存能を、４８８ｎｍで１５ｍＷのブルー・レーザー励起を備えたＦＡＣＳcan（Becton Dickinson）を用いて、処置あたり３回の各試験において５０００個の細胞をヨウ化プロピジウム染色により評価した。該データを集め、Cell Quest software(Becton Dickinson)を用いて分析した。
【０１９５】
イン・ビボでのペプチドの効果
試験を、Sheffield Field Laboratoriesから入手した体重１５gの６週令のＢａｌｂ／Ｃマウスで行った。全試験は、Home Office Project Licence Number PPL50/1414によりて認可された。
【０１９６】
腫瘍細胞培養
該ＣＴ２６細胞系を、１０％胎児ウシ血清、１％ペニシリンおよびストレプトマイシンを含有するDulbecco's Minimal Eagles培地中のイン・ビトロの継代培養によって維持し、３７℃、空気中５％のＣＯ２の湿気を含む大気中で維持した。該細胞系を、マイコプラズマを含まないことを確認するためにチェックした(Mycoplasma rapid detection system, Gena-Probe Incorporated, U.S.A.)。
【０１９７】
皮下腫瘍移植
動物を、１：１の割合のジアゼパム(０.５mg/ml, Dumex Ltd.)およびヒプノルム（hypnorm）(クエン酸フェンタニル０.０３１５mg/mlおよびフルアニゾン１mg/ml, Janssen Pharmaceutical Ltd.)を０.１ml/２００g体重の容積で腹膜内注射により麻酔し、必要に応じて補足して、十分な麻酔を維持した。Naieve Balb/c マウスを、右脇腹中の皮下に免疫化し、続いて毛を除去した。腫瘍細胞を、１００μlの血清を含まない培地に懸濁して、３ｘ１０５の生存ＣＴ２６細胞/動物の濃度で注射した。次いで、動物を元に戻した。腫瘍の成長および動物の体重を毎日モニターした。
【０１９８】
ペプチドの投与
腫瘍の成長を毎日測定し、コホート中の動物の大部分が、＞１００ｍｍ３〜＜３５０ｍｍ３の腫瘍体積を持った時に、動物を実験群および対照群に分けた。これは、腫瘍細胞懸濁液の移植後１４〜１８日の間で生じた。次いで、動物を活性な薬物（ペプチドα１−２４  １００ｍＭ；１００μl）またはビヒクル（リン酸緩衝生理食塩水、１００μｌ）のいずれかを腹膜内（ip）注射により与えた。毎日の注射を、対照群において、腫瘍の成長がHome Office legislationに従い最も重篤な負担に達するまで続けた。
【０１９９】
腫瘍の成長の評価
腫瘍体積を、垂直直径のカリパス測定によって評価し、体積を下式を用いて評価した：  体積＝（ａ２ｘｂ）／２
（式中、ａはより小さく、ｂはより大きな直径である）
毎日の基準として動物の体重を測定し、総体的な健康状態をモニターした。
【０２００】
統計学的分析
全ての試験を少なくとも３回行い、データを、Mann-WhitneyのU検定、分析データにおけるガウス分布を考慮しない非パラメーター検定を用いて分析した。Ｐ＜０.０５を有意と考える。
【０２０１】
引例
１．Folkman J Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease. Nature Medicine, 1: 27-31, 1995.
２．Leek R, Harris AL, and Lewis CE Cytokine networks in solid human tumours: regulation of angiogenesis. J. Leuk. Biol., 56: 423-35, 1994.
３．Cao Y Endogenous angiogenesis inhibitors: angiostatin, endostatin, and other proteolytic fragments. Prog Mol Subcell Biol., 20:161-76, 1998. 
４．Doolittle R Fibrinogen and Fibrin. Scientific American, 245: 92-101, 1981.
５．Costantini V, Zacharski LR, Memoli VA, Kisiel W, Kudryk BJ, and Rousseau SM  Fibrinogen deposition without thrombin generation in primary human breast cancer tissue. Cancer Res., 51:349-53, 1991.
６．Dvorak HF, Nagy JA, Feng D, Brown LF, and Dvorak AM Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor and the significance of microvascular hyperpermeability in angiogenesis. Curr Top Microbiol Immunol, 237:97-132, 1999.
７．Thompson WD, Wnag JEH, Wilson SJ, and Ganesalingham N Angiogenesis and fibrin degradation in human breast cancer.  Angiogenesis: Molecular Biology, Clinical Aspects, 245-251, 1994.
８．Thompson WD, Smith EB, Stirk CM, Marshall FI, Stout AJ, and Kocchar A Angiogenic activity of fibrin degradation products is located in fibrin fragment E.  J.Pathol, 168: 47-53, 1992.
９．Malinda KM, Ponce L, Kleinman HK, Shackelton LM, and Millis AJ Gp38k, a protein synthesized by vascular smooth muscle cells, stimulates directional migration of human umbilical vein endothelial cells. Exp Cell Res 250:168-73, 1999. 
１０．Shen J, Ham RG, Karmiol S Expression of adhesion molecules in cultured human pulmonary microvascular endothelial cells. Microvasc Res., 50:360-72, 1995.
１１．Liu J, Kolath J, Anderson J, Kolar C, Lawson TA, Talmadge J, and Gmeiner WH Positive interaction between 5-FU and FdUMP[10] in the inhibition of human colorectal tumour cell proliferation. Antisense Nucleic Acid Drug Dev., 9(5):481-6, 1999.
１２．Dejano E, Languino LR, Polentarutti N, Balconi G, Ryckewaert JJ, Larrieu MJ, Donati MB, Mantovani A, and Marguerie G Interaction between fibrinogen and cultured endothelial cells.  J.Clin.Invest., 75: 11-18, 1985.
１３．Bootle-Wilbraham CA, Tazzyman S, Marshall JM, Lewis CE.  Fibrinogen E-fragment inhibits the migration and tubule formation of human dermal microvascular endothelial cells in vitro.  Cancer Research (2000) 60: 4719-4724
１４．Marsh HC, Meinwald YC, Lee S, Martinelli RA, Scheraga HA.  Mechanism of action of thrombin on fibrinogen: NMR evidence for a beta-bend at or near fibrinogen A alpha Gly(P5)-Gly(P4).  Biochemistry (1985) 24: 2806-2812.
１５．Gellman S.H., Acc. Chem. Res. (1998) 31: 173-180
【図面の簡単な説明】
【０２０２】
【図１】図１は、α１−２４のアミノ酸配列を示す。
【図２】図２は、α１−２４をコードする該核酸配列を示す
【図３】図３は、本明細書中で開示されるポリペプチドの抗血管新生活性の要約を示す。
【図４】図４は、本発明のペプチドの細管形成活性を示す。
【図５】図５は、本発明のペプチドの細管形成活性を示す。
【図１】
2006500906.tif 000002
【図２】
2006500906.tif 000003
【図３】
2006500906.tif 000004
【図４】
2006500906.tif 000005
【図５】
2006500906.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成16年11月12日(2004.11.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2006500906000001.app
【国際調査報告】
2006500906.tif 000007
2006500906.tif 000008
2006500906.tif 000009
2006500906.tif 000010
2006500906.tif 000011
2006500906.tif 000012