(57)【要約】  本発明は、水性媒体に入った抗原および炭水化物を含む、非経口および粘膜投与に適した新規抗原組成物であって、該炭水化物が酸性部分を呈示する誘導体の形態、好ましくはそのカルボン酸の誘導体の形態にある、新規抗原組成物に関する。抗原組成物は、安定した固体形態にあり、液体賦形剤またはアジュバントでの再構成、そして非経口または粘膜経路を経た投与の後、体液中で急速に溶解して、再構成ワクチンを身体に放出する。具体的には、凍結乾燥形態は、乾燥または昇華(好ましくは凍結乾燥による昇華)により液体溶液または懸濁液から形成される、好ましくは非晶質(ガラス質)状態で抗原を含む粉末またはケークから構成され得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性媒体に入った抗原と、炭水化物と、任意に保存剤とを含む、凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥または真空乾燥に適した抗原組成物であって、該炭水化物が酸性部分を呈示する誘導体の形態である、抗原組成物。
【請求項２】
前記炭水化物がそのカルボン酸誘導体の形態である、請求項１に記載の抗原組成物。
【請求項３】
前記カルボン酸誘導体が、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸およびガラクタル酸からなる群より選択される、請求項２に記載の抗原組成物。
【請求項４】
前記水性媒体が少なくとも30mMの濃度のNaClを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項５】
噴霧乾燥、真空乾燥または凍結乾燥形態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項６】
再構成形態にある、請求項５に記載の抗原組成物。
【請求項７】
前記再構成された組成物がアジュバントを含む、請求項６に記載の抗原組成物。
【請求項８】
前記アジュバントが、水中油型エマルジョン、3D-MPL、CpG、QS21、またはこれらの２種以上の混合物から選択される、請求項７に記載の抗原組成物。
【請求項９】
前記抗原または抗原組成物が、ヒト免疫不全ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヒトサイトメガロウイルス、デングウイルス、Ａ、Ｂ、ＣもしくはＥ型肝炎、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、Hib、髄膜炎ウイルス、サルモネラ、ナイセリア、ボレリア、クラミジア、ボルデテラ、プラスモジウム、トキソプラズマ、スタンワース(stanworth)デカペプチド；または腫瘍関連抗原(TMA)、MAGE、BAGE、GAGE、MUC-1、Her-2 neu、LnRH、CEA、PSA、KSA、PRAME、クリプト(Cripto)、HASH2、プロスターゼ、プロステインからなる群より誘導される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項１０】
組成物の成分を混合するステップ、および該混合物を凍結乾燥、真空乾燥または噴霧乾燥手順に供するステップを含む、請求項１〜４の抗原組成物の調製方法。
【請求項１１】
組成物の成分を混合するステップ、およびそれらを凍結してその凍結混合物を乾燥させるか、またはそれらを噴霧するステップを含む、請求項４の抗原組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性媒体に入った抗原および炭水化物を含む、非経口および粘膜投与に適した新規抗原組成物に関し、該炭水化物は酸性部分を呈示する誘導体の形態、好ましくはそのカルボン酸誘導体の形態にある。抗原組成物は安定した固体形態(solid form)にあり、液体賦形剤またはアジュバントで再構成し(reconstituted)、次いで非経口または粘膜経路で投与した後、体液中で急速に溶解して、再構成ワクチンを身体に放出する。具体的には、凍結乾燥形態は、乾燥または昇華(好ましくは凍結乾燥による昇華)により液体溶液または懸濁液から形成される好ましくは非晶質(ガラス質)状態の抗原を含む粉末またはケークから構成され得る。
【背景技術】
【０００２】
現在、医薬領域において、加工および保存の段階におけるタンパク質の安定性が確実な製剤に多大な関心が寄せられている。水性液体製剤は、製造の間の扱いが最も簡単かつより経済的であり、エンドユーザにとっても最も便利が良い。しかし、化学的または物理的分解は、液体剤形でよく生じる現象で、これは変性および分解等のタンパク質の損傷につながり、多くは不可逆的である。
【０００３】
これらの問題は、安定したタンパク質混合物、特に安定した凍結乾燥タンパク質混合物(ただし、これに限らない)の乾燥固体を使用することにより克服できる。安定した凍結乾燥製剤およびそれらの調製の間に生じうる問題が記載されている(Carpenter, J. 1997, Pharmaceutical Res. 14, 969-975)。製剤は、タンパク質安定性を確実にし、所望の製品構造、製品毒性(特に、非経口投与のため)を考慮し、エレガントな固形構造を呈するように、設計されなければならない。同様の考慮は、真空乾燥または噴霧乾燥(spray-dried)された粉末等の他の固体形態にも適用される。いくつかの要件が考慮されなければならず、重要なもののひとつは、特に製品が１つのバイアル当たり比較的少量のタンパク質を有する場合(通常バイアル当たり約50μgのタンパク質を含み、合計約15mgであるワクチン製剤の場合など)に、非経口投与にとって重要な等張性(isotonicity)を確実にすることである。塩、特にNaClを使用して、混合液の等張性(tonicity)が改変されてきたが、溶液の凝固点を低下させるため、製剤を凍結しにくくする可能性があり(低凝固点のため)、昇華による水分の除去にさらに時間がかかることになる。マンニトールまたはラクトース等の多価アルコールおよび炭水化物も使用されており、混合物の等張性を考慮しつつ強いケークを得る成果をあげている(M.C. LaiおよびE.M. Topp, J. of Pharm. Sci., 1999, 88, 489-500)。
【０００４】
例えば、高濃度の塩の存在下で実行される精製プロセスから生じるタンパク質の場合のように、高濃度の塩を含む混合物について凍結乾燥プロセスを行わなければならない場合に１つの重要な問題が生じる。あるいはまた、場合によっては、タンパク質は、溶液中に維持されるためならびに/または凝集および沈降を避けるために高い塩濃度を必要とし得る。これらの問題は、塩がNaClの場合に特に課題となる。なぜなら、NaClは、溶液中に存在する場合、共晶融点を比較的低くし、製剤が適正に凍結乾燥するのを困難にするからである。
【０００５】
いくつか溶液が提案されているが、これらは満足いくものではない。炭水化物濃度の上昇は、i)浸透圧の上昇、ii)非経口投与との不適合性、およびiii)再構成自体の問題(例えば、再構成液体が既にそれ自体で等浸透圧である場合)を伴う。別の代替法である製剤への少量のマンニトールの添加は、結晶化し易くし、ケーク中で一種の強い結晶網を形成させるが(Kim, A.ら J. Pharmaceutical Sc. 1998, 87, 931-935)、15mM、そして当然約30mMを超えるNaCl濃度等、非常に高い塩濃度には適合しない。Taylor, L.およびZographi, G., J. Pharmaceutical Sc. 1998, 87, 1615-1621に記載されたような、製剤への非生分解性高分子量ポリマー物質の添加は、医薬組成物またはワクチン安全性の問題に適応しないかもしれない。
【発明の開示】
【０００６】
本発明は、上記一覧した短所に煩わされないこれらの製剤の代替物を提供する。本発明は、許容可能な構造の乾燥粉末または凍結乾燥固形の形成を通常であれば妨げる高濃度の塩が存在するにも関わらず、安定した固定形態の抗原組成物の供給が可能であるという発見に基づく。特に、本発明は、高濃度のNaClを含む(特に約30mMを超える濃度のNaClを含む)抗原混合物の乾燥または凍結乾燥に適応する充填剤(bulking agent)と称する適切な賦形剤の発見に基づく。本発明にしたがって使用される賦形剤または充填剤は有利である。というのは、高濃度のNaClの存在下で、賦形剤または充填剤が担持するイオン電荷を介して充填剤分子間の分子間相互作用を助け、さらには高めることでケーク形成を生じさせ、長期にわたり安定性を維持させるからである。
【０００７】
本発明は、凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥または真空乾燥形態等の固体形態、および再構成された液体形態の抗原組成物をさらに提供する。本発明によれば、組成物の成分を混合するステップ、およびそれらを凍結させてその凍結混合物を乾燥させるか、それらを(例えば、温風に)噴霧するか、それらを真空乾燥させるか、または噴霧凍結乾燥させるステップのいずれかを含む、本発明による組成物の調製方法をさらに提供する。
【０００８】
一実施形態では、本発明の固体形態は、「ケーク(cake)」と称する凍結乾燥された多孔形態、またはそれらの粉砕形態であり、これらは、加工および保存の間安定しており、非経口投与に適合し、残留水分が低い。本発明のワクチンケークは、ワクチンの液体溶液または懸濁液から昇華により形成され、本発明の好適な形態では昇華は凍結乾燥により行われる。
【０００９】
別の実施形態では、本発明の固体形態は、残留水分が低い、乾燥粉末、特に噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥または真空乾燥させた粉末である。
【００１０】
従って、本発明の目的は、水性媒体に入った抗原と、酸性部分を呈示する炭水化物またはその誘導体と、任意に保存剤とを含む、凍結乾燥、噴霧乾燥または真空乾燥に適した新規抗原組成物を提供することである。好適な実施形態では、水性抗原媒体は、少なくとも15mM、好ましくは少なくとも30mMの濃度のNaClを含む。典型的には、水性抗原溶液または懸濁液は、緩衝化されるか、または非経口もしくは粘膜投与に適合するpHにpH調節される。固体形態は、少なくとも１種の抗原を約0.00001％重量〜約5％重量含むことが好ましい。抗原は約0.001％重量〜約1％重量の量であることがより好ましい。抗原の量は0.01％〜約0.05％の範囲にあることがさらに好ましい。典型的に、溶液のNaCl濃度は、約15mM〜約150mMにわたる。より好ましくはNaCl濃度は少なくとも20mM、最も好ましくは少なくとも約30mMである。充填剤は、約50％〜約99.99999％重量の量であることが好ましく、60％〜約90％であることがより好ましい。
【００１１】
本発明の充填剤は、高濃度のNaClの存在下でケークに対して化学的安定性および物理的安定性の両方を与え、ケークが崩れるのも防ぐ。本発明の充填剤は、抗原に対する保護も提供する。充填剤は、好ましくは非晶質または結晶質状態、好ましくは非晶質状態にある、炭水化物またはその誘導体である。本発明による好ましい炭水化物は、高い分子間相互作用(例えば炭水化物の融点により評価する場合、炭水化物の融点が高いほど結晶中の分子間相互作用が大きい)を得ることができ、よって固体形態(特にケーク構造)が凍結乾燥の間の崩壊現象に対してより耐性であるようにすることができる炭水化物またはその誘導体に関する。高分子量の炭水化物を使用することが好ましい。
【００１２】
例えばアミノ部分または酸性部分等の反応性官能基を呈示する炭水化物誘導体が好ましい。従って、酸性部分(すなわち、プロトン供与体として作用する部分)を呈示する炭水化物誘導体を使用することは、本発明の好ましい態様である。酸性部分は、一酸性またはポリ酸性であり得る。言及され得る具体的な酸性部分としては、-O-P(O)(OH)2(リン酸エステル)、-O-P(O)-O-P(O)(OH)2(二リン酸エステル)、-O-P(O)-O-P(O)-O-P(O)(OH)2(三リン酸エステル)、-SO4H(硫酸エステル)、および-CO2H(カルボン酸)が挙げられる。酸性部分はカルボン酸であることが好ましい。炭水化物誘導体は、任意に、炭水化物(例えば、ショ糖等)と併せて使用され得る。
【００１３】
炭水化物または炭水化物誘導体は、任意に一水和または多水和(二水和、三水和等)され得る。さらに好ましい実施形態では、炭水化物は、そのカルボン酸誘導体の形態で使用される。炭水化物は、カルボン酸自体の塩誘導体の形態で使用される。従って、一態様では、本発明は、水性媒体に入った抗原と、カルボン酸誘導体の形態にある炭水化物と、任意に保存剤とを含む、凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥、または真空乾燥に適した抗原組成物を提供する。
【００１４】
最も好ましくは、炭水化物誘導体は、それらの塩、好ましくはカルシウムまたはナトリウム塩、最も好ましくはナトリウム塩の形態で使用される。
【００１５】
本発明の目的を果たす適切な炭水化物の限定しない例としては、以下のカルボン酸誘導体が挙げられる：すなわち、ショ糖、マルトース、トレハロース、ラフィノース、ラクトース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、マルツロース、イソ-マルツロース、およびラクツロース、またはデキストロース。好ましい充填剤は、ラクチトール、ソルビトール、グルコース、ガラクトース、およびガラクチトールのカルボン酸誘導体(すなわち、それぞれラクトビオン酸、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸、およびガラクタル酸)である。これらは、非水和または水和形態で存在し得る(表１を参照)。より好ましくはラクトビオン酸(図１に示す)、グルクロン酸、グルコン酸、およびラクトビオン酸が使用され、最も好ましくは、糖-糖分子間相互作用に好都合である塩形態で使用される。ナトリウムまたはカルシウム塩が好ましい。最も好ましい充填剤は、ラクトビオン酸ナトリウムである。典型的には、カルボン酸炭水化物誘導体を、約80mM以上の濃度(凍結乾燥前の製剤化液体混合液の濃度)で使用する。これにより、許容可能なケーク構造が得られ、長期にわたる構造の安定性が確実になる。
【００１６】
表１．炭水化物、ならびにそれらのカルボン酸および塩誘導体
表１は、結晶固体状態ドメインにおいて、イオン分子の方が対応する非イオン分子と比べて分子間相互作用が高い(高い融点から分かる)ことを示す。
【表１】
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【００１７】
許容可能なケーク構造とは、以下の基準のいずれか(好ましくは全て)を意味する：
−凍結乾燥ステップ前の出発液体の容量と同様のケーク容量；
−凍結乾燥ステップ前の液体と同様の大きさを有するケーク。換言すると、凍結乾燥ステップ前の最初の液体と比べた大きさの収縮ができるだけ少ないケーク；
−目視で均質な様相を示すケーク。
【００１８】
ケークの大きさおよび容量は、実施例の3.2節以下に記載している手順に従って決められる。
【００１９】
さらに、許容可能なケーク構造は、37℃にて１週間の促進型(accelerated)安定性テストを経た後、または少なくとも６ヶ月、好ましくは少なくとも１年間、そして理想的には少なくとも２年間の実時間安定性の間、形状、大きさおよび色にいかなる変化も示さないケークであるとも理解される。
【００２０】
保存剤は、抗酸化剤、フリーラジカルスカベンジャーおよび還元剤から選択される。好ましいのは、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ノルジヒドログアヤレト酸およびトコフェロール、アスコルビン酸、イソアスコルビン酸、亜硫酸のカリウムおよびナトリウム塩、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、クエン酸、エデト酸およびその塩、レシチン、酒石酸、チオジプロイオン酸(thiodiproionic acid)等の抗酸化剤である。
【００２１】
本発明による抗原組成物の調製方法は、医薬領域においてよく使用される凍結乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥技術のいずれかを採用して適切に実施される。例えば、凍結乾燥の技術、および他の適切な賦形剤の詳細は、Cameronら, "Good Pharmaceutical freeze-drying Practice", Interpharm, Buffalo Grove (1997)から分かる。従って、さらなる態様では、本発明は、NaCl含有抗原溶液、充填剤ならびに任意に緩衝液および保存剤を混合するステップ、ならびに該混合液を凍結乾燥、真空乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥手順に供するステップを含む、本明細書で定義する抗原組成物を調製する方法を提供する。本発明による好ましい方法は、バイアル凍結乾燥法であるが、周囲温度蒸発は本発明に包含される。このような方法は、滅菌バイアルへの抗原組成物の滅菌濾過溶液の無菌充填、その後の凍結乾燥による昇華を含む。滅菌凍結乾燥ゴム栓をバイアルに部分的に挿入し、その後バイアルを凍結し(例えば、-195.8℃〜-5℃、好ましくは-80℃〜-10℃の温度にて)、その後凍結状態で真空乾燥させる。乾燥後、栓を完全に挿入してから、凍結乾燥ユニットからバイアルを取り出す。
【００２２】
本発明による好ましい方法は、同軸の加圧空気(または不活性ガス)を加えるかまたは加えずに液体組成物を噴霧ノズルに送り込むことにより組成物の小滴を得る噴霧乾燥プロセスである。このような小滴は、蒸発プロセスにより急速に乾燥されるように(+20℃〜+250℃の温度にて)広く通気された領域で形成される。サイクロン分離の後に乾燥粉末が得られる。
【００２３】
本発明による別の好ましい方法は、同軸の加圧空気(または不活性ガス)を加えるかまたは加えずに液体組成物を噴霧ノズルに送り込むことにより組成物の小滴を得る噴霧凍結乾燥プロセスである。このような小滴は、小滴が急速に凍結されるように非常に冷たい(-5℃〜195.8℃)チャンバ内で形成する。この凍結物質の乾燥は、標準的な凍結乾燥法に従って得る。
【００２４】
本発明の別の好ましい方法は、真空乾燥法である。このようなプロセスは、組成物の滅菌濾過溶液で滅菌バイアルを滅菌充填することを含む。滅菌凍結乾燥ゴム栓をバイアルに部分的に挿入してから、容器を制御した真空状態におき、最終的な乾燥まで蒸発が続くようにする。乾燥後、栓を完全に挿入してから、バイアルを乾燥ユニットから取り出す。
【００２５】
凍結乾燥または乾燥プロセスを制御して、ケーク中の残留水分を確実に３％未満、好ましくは２％未満、より好ましくは約１％以下にする。この中にカプセル化された抗原は、投与の際に生物学的に活性なまま、つまり宿主において免疫応答を誘導可能なままである。
【００２６】
本発明の組成物を使用して、幅広い由来源から誘導した抗原を含むワクチンを製剤化することが予測される。例えば、抗原は、ヒト、細菌またはウイルス核酸、病原体から誘導される抗原または抗原調製物、腫瘍誘導型抗原または抗原調製物、宿主誘導型抗原(GnRHおよびIgEペプチド等)、組換え生成されたタンパク質またはペプチド、ならびにキメラ融合タンパク質を含み得る。
【００２７】
本発明のワクチン製剤は、ヒト病原体に対して免疫応答を引き出すことが可能な抗原または抗原組成物を含むことが好ましい。この抗原または抗原組成物は、HIV-1(Tat、nef、gp120もしくはgp160等)、ヒトヘルペスウイルス(gDもしくはその誘導体等)、または前初期タンパク質(HSV1もしくはHSV2に由来するICP27等)、サイトメガロウイルス((特にヒト)(gBもしくはその誘導体等)、エプスタイン・バーウイルス(gp350もしくはその誘導体等)、水痘-帯状疱疹ウイルス(gpI、IIおよびIE63等)、またはＢ型肝炎ウイルス(例えば、Ｂ型肝炎表面抗原もしくはその誘導体)、Ａ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルスおよびＥ型肝炎ウイルス等の肝炎ウイルス、またはパラミクソウイルス等の他のウイルス病原体：呼吸器合胞体(Respiratory Syncytial)ウイルス(ＦおよびＧタンパク質もしくはそれらの誘導体)、パラインフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス(例えば、HPV6、11、16、18、...)、フラビウイルス(例えば、黄熱病ウイルス、デングウイルス、ダニ媒介脳炎ウイルス、日本脳炎ウイルス)、またはインフルエンザウイルス(全生存もしくは不活化ウイルス、卵巣もしくはMDCK細胞、またはベロ細胞もしくは全インフルエンザ人工ウイルス粒子(virosome)(R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, 915-920に記載)で培養される分離インフルエンザウイルス、またはその精製もしくは組換えタンパク質(HA、NP、NA、Mタンパク質、もしくはそれらの組合せ)、または淋病菌(N. gonorrhea)および髄膜炎菌(N. meningitidis)(例えば、カプセル多糖類およびそれらのコンジュゲート、トランスフェリン結合タンパク質、ラクトフェリン結合タンパク質、PilC、付着因子)を含むナイセリア属；Ａ群溶血性連鎖球菌(S. pyogenes)(例えば、Ｍタンパク質もしくはその断片、C5Aプロテアーゼ、リポタイコ酸)、Ｂ群溶血性連鎖球菌(S. agalactiae)、口腔連鎖球菌(S. mutans)；軟性下疳菌(H. ducreyi)；ブランハメラ・カタラーリス(Branhamella catarrhalis)としても知られるM.カタラーリス(M catarrhalis)を含むモラクセラ属(例えば、高分子量および低分子量付着因子およびインベーシン(invasins))；百日咳菌(B. pertussis)(例えば、パータクチン(pertactin)、百日咳毒素もしくはそれらの誘導体、線維状赤血球凝集素、アデニル酸シクラーゼ、線毛(fimbriae))、バラ百日咳(B. parapertussis)および気管支敗血症菌(B. bronchiseptica)を含むボルデテラ属；結核菌(M. tuberculosis)(例えば、ESAT6、抗原85A、-Bもしくは-C)、ウシ結核菌、らい菌(M. leprae)、M.アビウム(M. avium)、ヨーネ菌(M. paratuberculosis)、恥垢菌(M. smegmatis)を含むマイコバクテリウム属；L.ニューモフィラ(L. pneumophila)を含むレジオネラ属；毒素原性大腸菌(enterotoxic E. coli)(例えば、コロニー集合因子(colonization factors)、易熱性毒素もしくはその誘導体、熱安定性毒素もしくはその誘導体)、腸管出血性大腸菌(enterohemorragic E. coli)、腸管病原性大腸菌(enteropathogenic E. coli)(例えば、志賀毒素様毒素もしくはその誘導体)を含むエシェリキア属；V.コレラ(例えば、コレラ毒素もしくはその誘導体)を含むビブリオ属；Ｄ群赤痢菌(S. sonnei)、Ａ群赤痢菌(S. dysenteriae)、Ｂ群赤痢菌(S. flexnerii)を含む赤痢菌属；Y.エンテロコリティカ(Y. enterocolitica)(例えば、Yopタンパク質)、ペスト菌(Y. pestis)、Y.シュードツベルクロシス(Y. pseudotuberculosis)を含むエルシニア属；C.ジュジュニ(C. jejuni)(例えば、毒素、付着因子およ���インベーシン)ならびにC.コリ(C. coli)を含むカンピロバクター属(Campylobacter spp)；チフス菌(S. typhi)、パラチフス菌(S. paratyphi)、S.コレラスイス(S. choleraesuis)、S.エンテリチジス(S. enteritidis)を含むサルモネラ属；L.モノサイトゲネス(L. monocytogenes)を含むリステリア属；H.ピロリ(H. pylori)(例えば、ウレアーゼ、カタラーゼ、細胞空胞化致死毒素(vacuolating toxin)を含むヘリコバクター属(Helicobacter spp)；緑膿菌(P. aeruginosa)を含むシュードモナス属；黄色ブドウ球菌(S. aureus)、表皮ブドウ球菌(S. epidermidis)を含むスタフィロコッカス属；大便連鎖球菌(E. faecalis)、E.フェシウム(E. faecium)を含むエンテロコッカス属；破傷風菌(C. tetani)(例えば、破傷風毒素(tetanus toxin)およびその誘導体)、ボツリヌス菌(C. botulinum)(例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体)、C.ディフィシル(C. difficile)(例えば、クロストリジウム毒素ＡもしくはＢ、およびそれらの誘導体)を含むクロストリジウム属；炭疽菌(B. anthracis)(例えば、ボツリヌス毒素およびその誘導体)を含むバチラス属(Bacillus spp.)；ジフテリア菌(C. diphtheriae)(例えば、ジフテリア毒素およびその誘導体)を含むコリネバクテリウム属；B.ブルグドルフェリ(B. burgdorferi)(例えば、OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.ガリニ(B. garinii)(例えば、OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.アフゼリ(B. afzelii)(例えば、OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.アンダーソニー(B. andersonii)(例えば、OspA、OspC、DbpA、DbpB)、B.ヘルムシィ(B. hermsii)を含むボレリア属；E.エキ(E. equi)およびヒト顆粒球エーリキア(Human Granulocytic Ehrlichiosis)の作用物質を含むエーリキア属(Ehrlichia spp.)；R.リケッチー(R. rickettsii)を含むリケッチア属；C.トラコーマチス(C. trachomatis)(例えば、MOMP、ヘパリン結合タンパク質)、C.ニューモニエ(C. pneumoniae)(例えば、MOMP、ヘパリン結合タンパク質)、オウム病クラミジア(C. psittaci)を含むクラミジア属；L.インテロガン(L. interrogans)を含むレプトスピラ属(Leptospira spp.)；梅毒トレポネーマ(T. pallidum)(例えば、稀(rare)外膜タンパク質)、T.デンティコーラ(T. denticola)、ブタ赤痢菌(T. hyodysenteriae)を含むトレポネーマ属等の細菌病原体から誘導されるか；または熱帯熱マラリア原虫(P. falciparum)を含むマラリア原虫(Plasmodium spp.)；T.ゴンディ(T. gondii)(例えば、SAG2、SAG3、Tg34)を含むトキソプラズマ属；赤痢アメーバ(E. histolytica)を含むエンタメーバ属(Entamoeba spp.)；B.ミクロティ(B. microti)を含むバベシア属(Babesia spp.)；T.クルーズ(T. cruzi)を含むトリパノソーマ属(Trypanosoma spp.)；G.ランブリア(G. lamblia)を含むジアルジア属(Giardia spp.)；L.メジャー(L. major)を含むリーシュマニア属(Leshmania spp.)；P.カリニ(P. carinii)を含むニューモシスチス属(Pneumocystis spp.)；膣トリコモナス(T. vaginalis)を含むトリコモナス属；マンソン住血吸虫(S. mansoni)を含むシソストーマ属(Schisostoma spp.)等の寄生動物から誘導されるか、またはC.アルビカンス(C. albicans)を含むカンジダ属；C.ネオフォルマンス(C. neoformans)を含むクリプトコッカス属等の酵母から誘導される。本発明の好適な態様では、経口投与用の急速に溶解するワクチンケークはロタウイルスを含まない。
【００２８】
好ましい細菌ワクチンは、S.ニューモニエ(S. pneumoniae)(例えば、莢膜多糖類(capsular polysaccharides)およびそのコンジュゲート、PsaA、PspA、ストレプトリシン、コリン結合タンパク質)、ならびにタンパク質抗原ニューモリシン(Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007; Rubinsら, Microbial Pathogenesis, 25, 337-342)、ならびにその変異型無毒化誘導体(WO 90/06951；WO 99/03884)を含むストレプトコッカス属から誘導される抗原を含む。他の好ましい細菌ワクチンは、Ｂ型インフルエンザ菌(H. influenzae)(例えば、PRPおよびそのコンジュゲート)を含むヘモフィルス属(Haemophilus spp.)、タイプ分け不可能なインフルエンザ菌(non typeable H. influenzae)、例えば、OMP26、高分子量付着因子、P5、P6、タンパク質Ｄおよびリポタンパク質Ｄ、ならびにフィンブリンおよびフィンブリン誘導型ペプチド(米国特許第5,843,464号)、または多コピー変異体もしくはその融合タンパク質から誘導される抗原を含む。他の好ましい細菌ワクチンは、モラクセラ・カタラーリス(Morexella Catarrhalis)(その外膜小胞、およびOMP106(WO97/41731)を含む)、ならびにＢ型髄膜炎菌(Neisseria mengitidis B)(その外膜小胞、およびNspA(WO 96/29412)を含む)から誘導された抗原を含む。
【００２９】
Ｂ型肝炎表面抗原の誘導体は当該分野で周知であり、とりわけ、欧州特許出願公開EP-A-414 374；EP-A-0304 578およびEP 198-474に記載されているPreS1、PreS2 S抗原が挙げられる。一好適態様では、本発明のワクチン製剤は、HIV-1抗原、gp120、特にCHO細胞で発現されるものを含む。さらなる実施形態では、本発明のワクチン製剤は、上記定義したgD2tを含む。
【００３０】
本発明のワクチンの好適な実施形態では、ワクチンは、生殖器疣(genital warts)に関与すると考えられているヒトパピローマウイルス(HPV)(HPV 6またはHPV 11等)、および子宮頸癌(cervical cancer)に関与するHPVウイルス(HPV16、HPV18等)から誘導される抗原を含む。
【００３１】
特に好ましい形態の生殖器疣予防または治療ワクチンは、L1粒子またはキャプソメア(capsomers)、ならびにHPV 6およびHPV 11タンパク質E6, E7, L1およびL2から選択される１つ以上の抗原を含む融合タンパク質を含む。最も好ましい形態の融合タンパク質は：WO 96/26277に開示されるL2E7、およびGB 9717953.5(PCT/EP98/05285)に開示されるタンパク質Ｄ(1/3)-E7である。
【００３２】
好ましいHPV子宮頚部の感染または癌の予防または治療ワクチン組成物は、HPV 16または18抗原を含み得る。例えば、L1もしくはL2抗原モノマー、またはL1もしくはL2抗原は、一緒になって、ウイルス様粒子(VLP)を呈されるか、またはL1単独タンパク質は単独でVLPもしくはキャプソメア構造を呈する。このような抗原、ウイルス様粒子およびキャプソメアはそれ自体で知られている。例えば、WO94/00152、WO94/20137、WO94/05792、およびWO93/02184を参照。追加の初期タンパク質は、単独で、または融合タンパク質として含まれ得る(例えば、好ましくはE7、E2もしくはE5)；この特に好ましい実施形態は、L1E7融合タンパク質を含むVLPを含む(WO 96/11272)。
【００３３】
特に好ましいHPV 16抗原は、タンパク質Ｄキャリアと融合してHPV16からタンパク質D-E6もしくはE7融合体を形成する初期タンパク質E6もしくはE7、またはそれらの組合せ；またはE6もしくはE7とL2との組合せ(WO 96/26277)を含む。あるいはまた、HPV 16または18初期タンパク質E6およびE7は、単一分子、好ましくはタンパク質D-E6/E7で提供される。このようなワクチンは、任意に、HPV 18に由来するE6およびE7タンパク質の一方または両方を、好ましくはタンパク質D-E6もしくはタンパク質D-E7融合タンパク質、またはタンパク質D E6/E7融合タンパク質で含み得る。
【００３４】
本発明のワクチンは、他のHPV株、好ましくはHPV 6、11、31、33または45株に由来する抗原を追加的に含み得る。
【００３５】
本発明のワクチンは、マラリアの原因になる寄生動物から誘導される抗原をさらに含む。例えば、熱帯熱マラリア原虫に由来する好ましい抗原としては、RTS,SおよびTRAPが挙げられる。RTSは、Ｂ型肝炎表面抗原のpreS2部分の４つのアミノ酸を介して、Ｂ型肝炎ウイルスの表面(S)抗原に連結された熱帯熱マラリア原虫のスポロゾイド周囲タンパク質(circumsporozoite)(CS)の実質的に全てのＣ末端部分を含むハイブリッドタンパク質である。その完全な構造は、英国特許出願第9124390.7号の優先権を主張する第WO 93/10152号として公表された国際特許出願第PCT/EP92/02591号に開示されている。酵母で発現される場合にはRTSがリポタンパク質粒子として産生され、HBV由来のS抗原と同時発現される場合にはRTS,Sとして知られる混合粒子を産生する。TRAP抗原は、第WO 90/01496号として公表された国際特許出願第PCT/GB89/00895号に記載されている。本発明の好適な実施形態は、抗原調製物がRTS,SおよびTRAP抗原の組合せを含むマラリアワクチンである。多段階(multistage)マラリアワクチンの構成成分の候補である可能性が高い他のプラスモジウム抗原は、熱帯熱マラリア原虫MSP1、AMA1、MSP3、EBA、GLURP、RAP1、RAP2、セキストリン(Sequestrin)、PfEMP1、Pf332、LSA1、LSA3、STARP、SALSA、PfEXP1、Pfs25、Pfs28、PFS27/25、Pfs16、Pfs48/45、Pfs230およびそれらのプラスモジウム属での類似体である。
【００３６】
製剤はまた、抗腫瘍抗原を含んで、免疫療法治療癌にも有用であり得る。例えば、アジュバント製剤は、前立腺癌、乳癌、結腸直腸癌、肺癌、膵臓癌、腎臓癌、または黒色腫等のための腫瘍拒絶抗原に利用性がある。抗原の例としては、MAGE 1およびMAGE 3、黒色腫の治療のための他のMAGE抗原、PRAME、BAGEまたはGAGEが挙げられる(RobbinsおよびKawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, pps 628-636；Van den Eyndeら, International Journal of Clinical & Laboratory Research (submitted 1997)；Correaleら (1997), Journal of the National Cancer Institute 89, p293)。実際、これらの抗原は、黒色腫、肺癌、肉腫および膀胱癌等の幅広い種類の腫瘍において発現される。他の腫瘍特異的抗原としては、前立腺特異的抗原(PSA)、Her-2/neu、KSA (GA733)、MUC-1、PRAME、癌胎児抗原(CEA)、PSCA (PNAS 95(4) 1735-1740 1998)、PSMA、PS108としても知られているP501S(WO98/37814の配列番号113)、またはプロステイン(prostein)(WO 98/50567)が挙げられるがこれらに限定されない。別の腫瘍抗原は、Fergusonら (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96, 3114-3119)および国際特許出願第WO 98/12302号(および対応する取得特許US 5,955,306)、WO 98/20117(および対応する取得特許US 5,840,871およびUS 5,786,148)(前立腺特異的カリクレイン)ならびにWO 00/04149(P703P)に開示される前立腺特異的セリンプロテアーゼ(トリプシン様)であるプロスターゼ(prostase)である。他の前立腺特異的抗原はWO98/37418およびWO/004149で知ることができる。別の抗原は、STEAP PNAS 96 14523 14528 7 -12 1999である。本発明の内容に有用な他の腫瘍関連抗原としては:Plu-1 J Biol. Chem 274 (22) 15633 -15645, 1999、HASH-2 (WO 01/62778)、クリプト(Cripto)(Salomonら、Bioessays 199, 21 61-70、米国特許第5654140号) Criptin米国特許第5 981 215号が挙げられる。さらに、癌を治療するためのワクチンに特に関係する抗原は、チロシナーゼおよびサルビビン(survivin)を含む。
【００３７】
他の腫瘍特異的抗原も本発明における使用に適しており、GM2およびGM3、またはそれらとキャリアタンパク質とのコンジュゲート等の腫瘍特異的ガングリオシドが挙げられるがこれらに限定されない；または該抗原は、多くの癌の治療または免疫去勢(immunocastration)に有用な10アミノ酸の短いペプチドである全長ゴナドトロピンホルモン放出ホルモン(GnRH、WO 95/20600)等の自己ペプチドホルモンであり得る。
【００３８】
本発明の組成物を使用して、ボレリア属から誘導した抗原を含むワクチンを製剤化できることが予測できる。例えば、抗原は、核酸、病原体由来抗原または抗原調製物、組換え生成タンパク質またはペプチド、およびキメラ融合タンパク質を含み得る。特に、抗原はOspAである。OspAは、(Lipo-OspA)と称する宿主細胞(大腸菌)の効力による脂質付加形態の完全成熟タンパク質であるか、または非脂質付加誘導体であり得る。このような非脂質付加誘導体は、インフルエンザウイルスの非構造タンパク質(NS1)の最初の81のＮ末端アミノ酸および完全OspAタンパク質を有する非脂質付加NS1-OspA融合タンパク質を含み、別のものとしてMDP-OspAは、３つの付加Ｎ末端アミノ酸を担持するOspAの非脂質付加形態である。
【００３９】
本発明のワクチンをアレルギーの予防または治療に使用してもよい。このようなワクチンは、アレルゲン特異的抗原(例えば、Der p1)およびアレルゲン非特異的抗原(例えば、スタンワースデカペプチド(EP 0 477 231 B1)が挙げられるがこれに限定されないヒトIgEから誘導されたペプチド)を含み得る。
【００４０】
投与前の使用時に、本発明の組成物は、一般的に製薬上許容可能な希釈剤または担体中で再構成される。製薬上許容可能な希釈剤としては、水および生理食塩水が挙げられる。組成物またはワクチンの再構成は、組成物を患者に投与する直前に行われることが好ましい。ケークの溶解時間は10秒未満であることが好ましく、５秒未満であることがより好ましく、３秒未満であることが好ましく、１秒未満であることが最も好ましい。
【００４１】
本発明の一部の実施形態では、抗原は、製薬担体と共に製剤化される。本発明によるワクチンにおいて使用されるのに適切な製薬担体としては、特に小児への経口投与に適していることが当該分野で知られているものが挙げられる。
【００４２】
本発明のウイルスを、人工ウイルス粒子もしくはリポソーム等の脂質基質型ビヒクル中、水中油型エマルジョン中、または担体粒子と共に製剤化することも都合が良い。
【００４３】
都合良く含まれうるさらなる免疫刺激剤は、QS21およびモノホスホリル脂質Ａ、特に3-デ-O-アシル化モノホスホリル脂質Ａ(3D-MPL)等のサポニン誘導体である。アジュバントとしての精製サポニンはWO 98/56415に記載されている。サポニンおよびモノホスホリル脂質Ａは、別個でまたは組み合わせて採用され得(例えば、WO 94/00153)、他の作用物質と共にアジュバント系中で製剤化され得る。3D-MPLは、Ribi Immunochem, Montana製の周知のアジュバントであり、その製造はGB 2122204に記載されている。
【００４４】
水酸化アルミニウムは、本発明のワクチン組成物の特に好ましい成分である。
【００４５】
再構成後に得られる本発明の抗原組成物の溶液は、等浸透圧溶液である。好適な実施形態では、本発明の組成物のpHは、約6〜約10、好ましくは約7〜約9である。本発明の抗原組成物は、再構成されると、粘膜投与または非経口投与、好ましくは非経口投与、最も好ましくは静脈内、皮下または筋内注射される。しかし、このような製剤は、必要に応じて別の適切な投与形態(例えば、鼻腔スプレーおよび他の粘膜用形態)としてもよい。
【００４６】
非経口投与用の本発明の組成物は、希釈液または担体の添加によって患者への即時投与に適した形態での活性成分の水溶液のin situ調製が可能なように、適切に適用した製薬投与デバイス、例えば、シリンジ、バイアルまたはアンプルにパッキングされ得る。このようなデバイスは、本発明のさらなる態様を構成する。粘膜投与のためには、凍結乾燥または乾燥させた製剤が、医薬ブリスター包装された錠剤形態で都合良く提供され得る。
【００４７】
別の態様では、本発明は、生存弱毒化細菌もしくはウイルス、または生存ウイルスもしくは細菌ベクターを含み、レシピエントに投与されるとすぐに溶解可能な本発明の凍結乾燥させた固体または乾燥させた固体である組成物を提供する。
【００４８】
本発明のワクチンは、適切な量の生存ウイルスを使用して、典型的なワクチンとして有害な副作用を有意にもたらすことなく感染に対する有効な保護を得るために、公知技術により製剤化および投与され得る。適切な量の生存ウイルスは、通常104〜107ffu/用量である。典型的な用量のワクチンは、105〜106ffu/用量を含み、長期間にわたり数回用量で(例えば、２ヶ月間隔で２回の用量で)与えられ得る。しかし、特に発展途上国においては、２回を上回る用量(例えば３または４回の用量)の投与計画により便益が得られ得る。投薬の間隔は２ヶ月以上でも以下でもよい。単一用量または多数回用量投与計画のための生存ウイルスの最適量、および用量の最適なタイミングは、被検体における抗体力価および他の応答の観察を伴う標準的な調査により確認することができる。
【００４９】
各ワクチン用量中のタンパク質の量は、典型的なワクチンとして有害な副作用を有意にもたらさずに免疫保護応答を誘発する量として選択される。このような量は、具体的にどの免疫原を採用し、どのようにそれを提供するかに応じて変わり得る。一般的に、各用量は1〜1000μg、好ましくは1〜500μg、好ましくは1〜100μg、最も好ましくは1〜50μgのタンパク質を含むと予想される。特定のワクチンの最適な量は、被検体において適切な免疫応答を観察することを伴う標準的な調査により確認できる。最初のワクチン化の後、被検体は１回から、十分に間隔をあけられた数回のブースター免疫化を受けることができる。
【００５０】
本発明の以下の実施例により例示する。
【実施例】
【００５１】
（実施例１）
標準的な凍結乾燥糖を使用して、許容可能な凍結乾燥ケークを提供する最大PO4-NaCl緩衝液濃度
1.1. 序
標準的な凍結乾燥サイクルに対して、様々なリン酸(PO4)/NaCl緩衝液濃度を提示した。
【００５２】
リン酸-NaCl緩衝液を、単純リン酸緩衝液(NaClを含まない)と比較した。
【００５３】
これらの調製物において、濃度を調節して、同様の希釈のために各緩衝液で匹敵する等浸透圧を得た(炭水化物の浸透圧寄与を含む)。以下に示す全ての表では、凍結乾燥ステップ直前の最終的な製剤中に存在する濃度を報告している。
【表２】
2006500358.tif 000003
【００５４】
1.2. 結果
ケークの様相を、実施例の3.2に一覧する基準により評価した。
【００５５】
1.2.1. ショ等(3.15％)組成物
【表３】
2006500358.tif 000004
【表４】
2006500358.tif 000005
【００５６】
1.2.2. マルトース(3.15%)組成物
【表５】
2006500358.tif 000006
【表６】
2006500358.tif 000007
【００５７】
1.2.3. トレハロース(3.15%)組成物
【表７】
2006500358.tif 000008
【表８】
2006500358.tif 000009
【００５８】
1.2.4. ラフィノース(3.15%)組成物
【表９】
2006500358.tif 000010
【表１０】
2006500358.tif 000011
【００５９】
1.2.5  結論
製剤中のリン酸(PO4)/NaClの存在は、凍結乾燥に適さない。実際、得られたケーク構造は、2 mM PO4/30 mM NaClを上回る濃度を使用する場合には許容できない。ショ糖、マルトース、トレハロースおよびラフィノースは、PO4/NaCl緩衝液を使用する場合には同じ結果を生じる。
【００６０】
NaClは凍結乾燥の間の有害な結果に明らかに関与している。実際、PO4(NaClを含まない)緩衝液では、はるかに高い濃度が得られる：
-  ラフィノースでは120 mM PO4まで
-  ショ糖では90 mM PO4まで
-  マルトースおよびトレハロースでは60 mM PO4まで。
【００６１】
1.3.  ショ糖分子配置の模式図(Artistic view)
図２は、NaClの不在下にある非晶質ショ糖分子配置の模式図を示す。残りの水分子は示していない。
【００６２】
凍結乾燥ケーク構造は、「ショ糖-ショ糖」分子相互作用に本質的に基づいて構築される。これらの分子間相互作用は、分子配向、分子構造、および構成原子の原子半径の結果生じるものである。
【００６３】
非晶質構造(分子間の無秩序性が高い)により、結晶質構造において通常見とめられるもの(分子間の秩序性が高い)と比較すると分子間相互作用が弱い。
【００６４】
比較のために、図３は、60 mM NaClの存在下での約90 mMショ糖の非晶質分子配置の模式図を示す。残りの水分子は示していない。
【００６５】
「ショ糖-ショ糖」分子相互作用は、塩化ナトリウムのイオン相互作用により摂動される(perturbed)。実施例１で示す実験結果は、NaClの存在により「糖-糖」分子間相互作用が低下することを示す。
【００６６】
（実施例２）
PO4(4mM)-NaCl(60mM)の所与の固定濃度にて許容可能な凍結乾燥されたケークをもたらすいくつかの炭水化物(または賦形剤)の評価
これらの実験のための標的値をPO4(6mM)-NaCl(60mM)の濃度に設定した。このNaCl濃度は、実施例１に示すように、許容可能でない凍結乾燥ケーク構造をもたらし、精製後の最終的な抗原溶液でこの濃度に達することが多い。
【００６７】
（実験１）
従来のショ糖に加えてカルボン酸官能基を呈示する炭水化物分子を使用することによるケーク構造の強化(consolidation)
ラクトビオン酸を図１に例示している。
【表１１】
2006500358.tif 000012
【００６８】
（実験２）
ショ糖の不在下でカルボン酸官能基を呈示する炭水化物分子を使用することによるケーク構造の強化
従って、ラクトビオン酸シリーズにおいて、塩(Na、CaまたはTris対イオン)の性質は、「糖-糖」相互作用において重要な役割を果たす。Tris分子は(Naと比べて)大きいため、「炭水化物」分子を互いから離すように押し、(Naと比べて)「糖-糖」相互作用を低減する。
【００６９】
固定NaCl濃度にて：
【表１２】
2006500358.tif 000013
【００７０】
低NaCl濃度にて：
【表１３】
2006500358.tif 000014
【００７１】
（実験３）
炭水化物の異なるカルボン酸誘導体を使用して、カルボン酸官能基を呈示する炭水化物分子を使用することによるケーク構造の強化
【表１４】
2006500358.tif 000015
【００７２】
（実施例３）
材料および方法
1.  抗原組成物の調製
正確な量の滅菌水、滅菌濃縮炭水化物溶液、滅菌濃縮緩衝溶液、滅菌濃縮塩溶液、および滅菌濃縮抗原溶液を一つずつ逐次的に無菌で添加および混合することにより製剤化バルク混合液を調製する。
【００７３】
製剤化バルク混合液は、凍結乾燥用バイアルに分配する(典型的に0.5mlの製剤化バルクで満たされた3mlシリコン(siliconed)ガラスバイアル)。
【００７４】
バイアルに凍結乾燥ゴム栓をする(部分的に閉じる)。
【００７５】
2. 凍結乾燥
(0.5ml)の製剤化ワクチンを含むバイアルを予め冷却した(-69℃)凍結乾燥器(Martin-ChristまたはUsifroid)に入れ、凍結乾燥状態をモニタリングおよび調節して、以下の時間-温度曲線にできるだけ近似して従うようにした： 
【表１５】
2006500358.tif 000016
【００７６】
真空下でのプロセスの終了後、栓を完全に押し入れてバイアルを閉めた。
【００７７】
次いで、栓をアルミニウムカプセルで密封する。
【００７８】
凍結乾燥バイアルを＋４℃にて分析または利用時まで保存する。
【００７９】
3. ケーク様相の検査
3.1. 37℃での促進型安定性
各製剤の10の凍結乾燥バイアルを、37℃に調節した通風オーブンに一週間入れてから、＋４℃にて保存した。その後、ケークを検査する。
【００８０】
3.2.  ケーク検査
凍結乾燥ケークを、凍結乾燥の直後、および促進型安定性テスト(37℃にて７日間)の後に、肉眼で検査する。
【００８１】
収縮％は、ケークの大きさを測定することにより推測し、種々のカテゴリーのうちの１つに分類した：
-収縮とは、ケークの最初の大きさ(高さまたは直径)が少なくとも20％小さくなったことを意味する。
【００８２】
-僅かに収縮とは、ケークの最初の大きさ(高さまたは直径)が高くても20％しか小さくならなかったことを意味する。
【００８３】
-合格とは、凍結乾燥直後および37℃にて１週間後に、ケークの最初の大きさ(高さまたは直径)が多くて20％しか小さくならず、かつ37℃にて１週間後に色の変化が生じなかったなったことを意味する。
【００８４】
-不合格とは、凍結乾燥直後もしくは37℃にて１週間後に、ケークの最初の大きさ(高さまたは直径)が少なくとも20％小さくなったか、または37℃にて１週間後に色の変化が生じたことを意味する。
【００８５】
ケーク側の測定は、バイアルの底に目盛り付き定規を当てて、ガラスを介してケークの直径(または高さ)を測定することによって行う。
【００８６】
4. 緩衝液
リン酸-NaCl緩衝液(「リン酸10-150」としても家庭で知られている)を選択する。なぜなら、ほとんどの抗原がこの緩衝液中で精製されるからである。NaH2PO4+K2HPO4の組合せを使用したことを付記しておく。選択したpH値は、正確なNaH2PO4/K2HPO4の割合に計量することで得ることができる。従って、HClもNaOHも使用せずに緩衝液のpHを調節する。
【００８７】
量の低減: 製剤化の間、0.4、0.3、0.2、0.1および0.05 mlの緩衝液を使う。最終的な充填用量は常に0.5 mlである。
【００８８】
リン酸緩衝液(NaClを含まない)を、リン酸-NaCl緩衝液と比較するために選択する。
【００８９】
150 mM溶液から始めて、低減した量(0.4、0.3、0.2、0.1および0.05 ml)の緩衝液を製剤化の間に使用する。
【００９０】
浸透圧
フィスケ110型(Friske Type one-ten)浸透圧計で測定した。
【図面の簡単な説明】
【００９１】
【図１】ラクトビオン酸を示す図である。
【図２】NaClの不在下にある非晶質ショ糖分子配置の模式図である。
【図３】60mM NaClの存在下での約90mMショ糖の非晶質分子配置の模式図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【手続補正書】
【提出日】平成16年9月27日(2004.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性媒体に入った抗原と、炭水化物と、任意に保存剤とを含む、凍結乾燥、噴霧乾燥、噴霧凍結乾燥または真空乾燥に適した抗原組成物であって、該炭水化物が酸性部分を呈示する誘導体の形態であり、水性媒体が15mM以上の濃度のNaClを含む、抗原組成物。
【請求項２】
前記炭水化物がそのカルボン酸誘導体の形態である、請求項１に記載の抗原組成物。
【請求項３】
前記カルボン酸誘導体が、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルクロン酸、ガラクツロン酸およびガラクタル酸からなる群より選択される、請求項２に記載の抗原組成物。
【請求項４】
前記水性媒体が少なくとも30mMの濃度のNaClを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項５】
噴霧乾燥、真空乾燥または凍結乾燥形態である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項６】
再構成形態にある、請求項５に記載の抗原組成物。
【請求項７】
前記再構成された組成物がアジュバントを含む、請求項６に記載の抗原組成物。
【請求項８】
前記アジュバントが、水中油型エマルジョン、3D-MPL、CpG、QS21、またはこれらの２種以上の混合物から選択される、請求項７に記載の抗原組成物。
【請求項９】
前記抗原または抗原組成物が、ヒト免疫不全ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、ヒトサイトメガロウイルス、デングウイルス、Ａ、Ｂ、ＣもしくはＥ型肝炎、呼吸器合胞体ウイルス、ヒトパピローマウイルス、インフルエンザウイルス、Hib、髄膜炎ウイルス、サルモネラ、ナイセリア、ボレリア、クラミジア、ボルデテラ、プラスモジウム、トキソプラズマ、スタンワース(stanworth)デカペプチド；または腫瘍関連抗原(TMA)、MAGE、BAGE、GAGE、MUC-1、Her-2 neu、LnRH、CEA、PSA、KSA、PRAME、クリプト(Cripto)、HASH2、プロスターゼ、プロステインからなる群より誘導される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗原組成物。
【請求項１０】
組成物の成分を混合するステップ、および該混合物を凍結乾燥、真空乾燥または噴霧乾燥手順に供するステップを含む、請求項１〜４の抗原組成物の調製方法。
【請求項１１】
組成物の成分を混合するステップ、およびそれらを凍結してその凍結混合物を乾燥させるか、またはそれらを噴霧するステップを含む、請求項４の抗原組成物の調製方法。
【国際調査報告】
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