(57)【要約】前立腺癌の存在の検出および決定をするためのアッセイが提供される。前記アッセイは、全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比が著しく高い男性の集団における前立腺癌を検出できる。前記アッセイは、少ない量、すなわち、２ないし４ｎｇ／ｍＬの範囲内の全ＰＳＡを有する男性の集団における前立腺癌を検出できる。本発明の１つの実施態様によると、前記アッセイは、（ａ）患者由来の生物学的試料に含まれる全ＰＳＡ量を決定するステップと、（ｂ）前記試料中の遊離ＰＳＡ量を決定し、該遊離ＰＳＡの前記全ＰＳＡに対する比を計算するステップと、（ｃ）前記試料中のｐＰＳＡ量を決定するステップと、（ｄ）ｐＰＳＡ量を全ＰＳＡレベルと遊離ＰＳＡの百分率との両方に基づいて癌および良性疾患の診断が知られた対照試料で確立された予め定められた値と、前記ｐＰＳＡ量とを比較することによって、前記ｐＰＳＡ量を前記試料中に含まれるｐＰＳＡ量を前記患者における前立腺癌の存在と関係づけるステップとを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者の前立腺癌の存在の検出または決定を補助する方法であって、
（ａ）前記患者由来の生物学的試料中に含まれる全ＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｂ）前記試料中の遊離ＰＳＡ量を決定し該遊離ＰＳＡの前記全ＰＳＡに対する比を計算するステップと、
（ｃ）前記試料中のｐＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｄ）ｐＰＳＡ量を全ＰＳＡレベルと遊離ＰＳＡの百分率との両方に基づいて癌および良性疾患の診断が知られた対照試料で確立された予め定められた値と、前記ｐＰＳＡ量とを比較することによって、前記試料中に含まれるｐＰＳＡ量を前記患者での前立腺癌の存在と関係づけるステップとを含む、患者の前立腺癌の存在の検出または決定を補助する方法。
【請求項２】
前記試料は血清または血漿である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＰＳＡは２．５ないし１０ｎｇ／ｍＬであり、全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は２０％を超え、予め定められた値より上の前記ｐＰＳＡ量は前立腺癌が存在することの指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
全ＰＳＡは４ないし１０ｎｇ／ｍＬである、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は２５％を超える、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記全ＰＳＡは２．５ないし１０ｎｇ／ｍＬであり、前記全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は５％と２５％との間の百分率から選択され、予め定められた値より上の前記ｐＰＳＡ量は前立腺癌が存在することの指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記全ＰＳＡは４ないし１０ｎｇ／ｍＬである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ｐＰＳＡは、［−２］ｐＰＳＡ、［−４］ｐＰＳＡ、［−５］ｐＰＳＡ、および［−７］ｐＰＳＡからなるグループから選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ｐＰＳＡは、［−２］ｐＰＳＡ、［−４］ｐＰＳＡ、［−５］ｐＰＳＡ、および［−７］ｐＰＳＡからなるグループから選択されるいずれかの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ｐＰＳＡは［−２］ｐＰＳＡである、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記全血清ＰＳＡは、２．５ないし４ｎｇ／ｍＬである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は５％と２５％との間の百分率から選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は１５％未満であるる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記全ＰＳＡは、２．０から１０ｎｇ／ｍＬまでの濃度のいずれかの組み合わせから選択される範囲にある、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、タンパク質の検出および同定と、診断マーカーとしての潜在的な有用性を有するタンパク質のさまざまな型（ｆｏｒｍ）およびサブユニットとに関する。具体的には本発明は、血清中の前立腺特異抗原の不活性前駆体型の検出と、改良された前立腺癌検出方法とに関する。
【０００２】
血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の決定は、前立腺癌のスクリーニングおよび早期検出のために広く用いられている（非特許文献１−３、文献表の文献１−３）。最新の臨床免疫アッセイで決定可能な血清ＰＳＡは主に、遊離の「非複合体」型（遊離ＰＳＡ）か、α１−アンチキモトリプシン（ＡＣＴ）との複合体として存在する（非特許文献４−５、文献表の文献４−５）。血清中の全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比が、ＢＰＨからのＰＣａの鑑別を著しく改善し、比が高いほど前立腺癌のリスクが低いことが証明されている（非特許文献６−７、文献表の文献６−７）。
【非特許文献１】Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｓ．、Ｒａｔｌｉｆｆ．Ｔ．Ｌ．、Ｄｏｄｄｓ、Ｋ．Ｍ．．Ｃｏｐｌｅｎ．Ｄ．Ｅ．．Ｙｕａｎ．Ｊ．Ｊ．．Ｔｅｔｒｏｓ．Ｊ．Ａ．、ａｎｄ  Ａｎｄｒｉｏｌｅ．Ｇ．Ｌ．、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２４：１１５６−１１６１、１９９１．
【非特許文献２】Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ、Ｊ．Ｅ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．．１４５：９０７−９２３、１９９１．
【非特許文献３】Ｌａｂｉｌｅ、Ｆ．、Ｄｕｐｏｎｔ、Ａ．、Ｓｕｂｕｒｕ、Ｒ．、Ｃｕｓａｎ．Ｌ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ．Ｍ．、Ｇｏｍｅｚ、Ｊ．Ｌ．．およびＥｍｏｎｄ、Ｊ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、１４７：８４６−８５１、１９９２
【非特許文献４】Ｌｉｌｊａ、Ｈ．、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ、Ａ．、Ｄａｈｌｅｎ、Ｕ．、Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ、Ｍ．Ｔ．、Ｎｉｌｓｓｏｎ、Ｏ．、Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ、Ｋ．、ａｎｄ  Ｌｏｖｇｒｅｎ、Ｔ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ、３７：１６１８−１６２５、１９９１
【非特許文献５】Ｓｔｅｎｍａｎ、Ｕ．Ｈ．、Ｌｅｉｎｏｎｅｎ、Ｊ．、Ａｌｆｔｈａｎ、Ｈ．、Ｒａｎｎｉ’ｋｋｏ、Ｓ．、Ｔｕｈｋａｎｅｎ、Ｋ．、ａｎｄ  Ａｌｆｔｈａｎ、Ｏ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５１：２２２−２２６、１９９１
【非特許文献６】Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．、Ｐａｒｔｉｎ、Ａ．Ｗ．、Ｓｌａｗｉｎ、Ｋ．Ｍ．、Ｂｒａｗｅｒ、Ｍ．Ｋ．、Ｆｌａｎｉｇａｎ、Ｒ．Ｃ．、Ｐａｔｅｌ、Ａ．、Ｒｉｃｈｉｅ、Ｊ．Ｐ．、ｄｅＫｅｍｉｏｎ、Ｊ．Ｂ．、Ｗａｌｓｈ、Ｐ．Ｃ．、Ｓｃａｒｄｉｎｏ、Ｐ．Ｔ．、Ｌａｎｇｅ、Ｐ．Ｈ．、Ｓｕｂｏｎｇ、Ｅ．Ｎ．、Ｐａｒｓｏｎ、Ｒ．Ｅ．、Ｇａｓｉｏｒ、Ｇ．Ｈ．、Ｌｏｖｅｌａｎｄ、Ｋ．Ｇ．、ａｎｄ  Ｓｏｕｔｈｗｉｃｋ、Ｐ．Ｃ．ＪＡＭＡ、２７９：１５４２−１５４７，１９９８
【非特許文献７】Ｗｏｏｄｒｕｍ、Ｄ．Ｌ．、Ｂｒａｗｅｒ、Ｍ．Ｋ．、Ｐａｒｔ’ｉｎ、Ａ．Ｗ．、Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．、ａｎｄ  Ｓｏｕｔｈｗｉｃｋ、Ｐ．Ｃ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、１５９：５−１２、１９９８
【０００３】
血清中の遊離ＰＳＡのレベルが変動する生物学的なメカニズムは不明である。複合体を形成した血清ＰＳＡは、酵素活性がある無傷のＰＳＡを表すので、比較的均質であるらしい。前立腺癌（ＰＣａ）および良性前立腺過形成（ＢＰＨ）の血清中でＰＳＡ−ＡＣＴ複合体から放出されたＰＳＡは精漿ＰＳＡと区別できないことがわかり、この仮説を確認する（非特許文献８、文献表の文献８）。遊離ＰＳＡはよりよい生化学的な洞察を提供し、遊離ＰＳＡの分子型の特徴付けがその前立腺起源と血清中への放出メカニズムを解明するのを助けるかもしれないということになる。しかし、診断上関連のある、１０ｎｇ／ｍＬ付近の範囲での血清から低レベルＰＳＡを精製し特徴付ける試みは、現在の技術で一般的には容易とはみなされていない。これまでのところ、研究は主に、数百ないし数千ｎｇ／ｍＬの異常な高レベルのＰＳＡを有する男性由来の血清に焦点があてられてきた。我々は６３ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを含みＰＣａ血清のプールでのプロＰＳＡの短縮型（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ  ｆｏｒｍ）（ｐＰＳＡ）の存在を報告した（非特許文献９、文献表の文献９）。しかし他のグループは、もっと高レベルのＰＳＡを含む血清中のｐＰＳＡを同定できなかった。高レベルの血清ＰＳＡを用いる研究は示唆的であるが、これらは、このＰＳＡが本疾患の初期段階で典型的に存在する１０ｎｇ／ｍＬ以下のＰＳＡの種類または百分率を反映しないかもしれないという、共通の欠点を有する。大きな原発腫瘍病巣または転移した疾患から放出されたＰＳＡは、初期で、おそらく悪性度の低い疾患から放出されたＰＳＡとは異なる生化学的特性を有するかもしれない。したがって初期前立腺癌の臨床的検出の補助として有用であるためには、短縮型ｐＰＳＡが診断上関連のあるレベルの１０ｎｇ／ｍＬ付近の全ＰＳＡで血清中に有意なレベル存在しなければならないであろう。
【非特許文献８】Ｐｅｔｅｒ、Ｊ．、Ｕｎｖｅｒｚａｇｔ、Ｃ．、ａｎｄ  Ｈｏｅｓｅｌ、Ｗ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、４６：４７４−４８２、２０００
【非特許文献９】Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｈｉｌｌ、Ｔ．Ｍ．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．、ａｎｄ  Ｓａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ．Ｕｒｏｌｏｇｙ、５０：７１０−７１４、１９９７
【０００４】
全ＰＳＡのレベルが１０ｎｇ／ｍＬ付近のとき、遊離ＰＳＡの割合または百分率が高い男性ほど良性の疾患を有する可能性が高い。複数の研究がこれらのレベルの遊離ＰＳＡを特徴づけて、例えば、全ＰＳＡの２５％を超える遊離ＰＳＡを有する男性は、このような症例では癌の可能性が８％しかないため、癌生検をしないよう推奨している。しかし８％の癌の可能性を有する前記男性の集団における前立腺癌のさらなる検出の補助として利用可能な既知の診断方法はない。さらに、全ＰＳＡが２．５−４ｎｇ／ｍＬの範囲内のとき、多くの癌は存在するが全ＰＳＡが４−１０ｎｇ／ｍＬの範囲内のときより発生頻度は低い。前記２．５−４ｎｇ／ｍＬの範囲での癌検出を改善するために遊離ＰＳＡの比を用いるこれまでの試みは診断値を確立するに至っていない。
【０００５】
したがって患者の初期前立腺癌の検出および決定を改善するためのアッセイを開発する必要性が存在する。
【０００６】
本発明は、例えば［−２］ｐＰＳＡのようなｐＰＳＡアイソフォームが、全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比が有意に高い特定のサブ集団の男性、特に、遊離ＰＳＡが２５％を超える男性では高い癌の予測値を有するという予想外の発見に基づく。さらに、患者の試料中の全ＰＳＡが２ないし４ｎｇ／ｍＬという、多くの癌が低い発生頻度でしか存在しない範囲内のとき、ｐＰＳＡが前立腺癌の男性の高い割合を同定するうえで効果的であることが本発明の発見である。したがって本発明は、癌の頻度がもっと低く、免疫アッセイを用いる前立腺癌の検出方法が現在はない、まさにそのような男性の集団での前立腺癌の検出の補助手段を提供する。
【０００７】
したがって本発明の発見に基づいて、本発明の１つの側面は、被検者の前立腺癌の存在を検出および決定することを補助するか、あるいは、被検者の前立腺癌を良性前立腺過形成から区別することを補助する診断方法を提供する。本発明の実施態様によると、かかる方法は、
（ａ）患者由来の生物学的試料に含まれる全ＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｂ）前記試料中の遊離ＰＳＡ量を決定し、全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比を計算するステップと、
（ｃ）前記試料中のｐＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｄ）前記全ＰＳＡのレベルと遊離ＰＳＡの百分率の両方に基づいて、前記ｐＰＳＡ量を癌および良性疾患の診断が知られた対照試料で確立された予め定められた値と比較することによって、前記試料中に含まれるｐＰＳＡ量を前記患者の前立腺癌の存在と関係づけるステップとを含む。
【０００８】
本発明の実施態様によると、全ＰＳＡは２ないし１０の範囲内の場合がある。全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は、１０％ないし２５％より大きい場合がある。代替的には全ＰＳＡは２．５ないし４ｎｇ／ｍＬの範囲内で、遊離ＰＳＡの比は１５％未満の場合がある。前記ｐＰＳＡは、［−２］ｐＰＳＡ、［−４］ｐＰＳＡまたは［−５／−７］ｐＰＳＡの場合がある。特に前記ｐＰＳＡは［−２］ｐＰＳＡの場合がある。前記試料は血清または血漿の場合がある。
【０００９】
前立腺癌を診断しＢＰＨから鑑別するためのキットも本発明の事務所とに含まれる。
【００１０】
本発明の１つの側面は、被検者の前立腺癌の存在を検出および決定することを補助するか、あるいは、被検者の前立腺癌を良性前立腺過形成から区別することを補助する診断方法を提供する。本発明の実施態様によると、かかる方法は、
（ａ）患者由来の生物学的試料に含まれる全ＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｂ）前記試料中の遊離ＰＳＡ量を決定し、全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比を計算するステップと、
（ｃ）前記試料中のｐＰＳＡ量を決定するステップと、
（ｄ）前記全ＰＳＡのレベルと遊離ＰＳＡの百分率の両方に基づいて、前記ｐＰＳＡ量を癌および良性疾患の診断が知られた対照試料で確立された予め定められた値と比較することによって、前記試料中に含まれるｐＰＳＡ量を前記患者の前立腺癌の存在と関係づけるステップとを含む。
【００１１】
全ＰＳＡおよび遊離ＰＳＡの決定方法は当業者に周知であるから、ここでは繰り返さない。本発明の目的のためには、「全ＰＳＡ」という用語は、遊離ＰＳＡと、ＡＣＴとのＰＳＡ複合体とを含むＰＳＡの全ての免疫学的に利用可能な型を指す。ここで用いられるところの「遊離ＰＳＡ」という用語は、他のいずれのタンパク質との複合体を形成せず、溶液中に３０ｋＤａタンパク質としてみられるＰＳＡを指す。
【００１２】
ここで用いられるところの「プロＰＳＡ」、「ｐＰＳＡ」、「プロＰＳＡポリペプチド」および「ｐＰＳＡポリペプチド」という用語は互換的に用いられ、好ましくは［−２］プロＰＳＡ、［−４］プロＰＳＡまたは［−５／−７］プロＰＳＡを含むが、これらに限定されない、全ての不活性型のＰＳＡの前駆型を含む。
【００１３】
ｐＰＳＡ量は、ここで説明する方法か、当業者に知られた方法か、その後に開発された方法かのいずれで決定されても、かかる決定が可能であるかぎり、かまわない。本発明の１つの実施態様によると、試料中に含まれるｐＰＳＡは、プロＰＳＡと、該プロＰＳＡ特異的に結合する試薬とを含む２分子複合体の形成を可能にする条件下で、前記プロＰＳＡと前記試薬とを接触させるステップと、前記複合体の量を検出し決定するステップとを含む。
【００１４】
本発明の目的のためには、試薬は、十分な特異性でｐＰＳＡと結合できるいかなる分子種であってもかまわない。結合特異性は、前記結合が、前記試薬およびｐＰＳＡを含む複合体の形成と、前記複合体の量の決定とを可能にする場合に十分であるとされる。潜在的な分子種の例は、抗体と、該抗体由来の抗原結合断片と、アプタマー等のような、しかしこれらに限定されない、抗体の均等物とを含むがこれらに限定されない。本発明の目的のためには、ｐＰＳＡに特異的な試薬は、当業者に知られた方法で選択される場合がある。例えば、いずれかの特定の試薬の特異的結合活性を決定するためにいかなる既知の結合アッセイが用いられてもよい。
【００１５】
本発明の実施態様によると、プロＰＳＡは免疫アッセイで決定される場合がある。本発明のプロＰＳＡ量を決定するために用いられてもよい抗体および免疫アッセイは、同時係属中の米国特許出願第０９／２５１，６８６号、第０９／３０２，９６５号、第０９，７９２，６９２号および第０９，７９２，５３４号明細書に説明されており、これらは引用によりここにその全てが取り込まれている。具体的には、ほ乳類細胞でＰＳＡを発現すること、および、ＰＳＡ特異的抗体を作成することの詳細は、同時継続中の米国特許出願第０９／２５１，６８６号および第０９／３０２，９６５号明細書に提供される。前記同時継続出願に説明されるとおり、プロＰＳＡポリペプチドまたはプロＰＳＡ領域に対応するペプチドが発現され、ほ乳類細胞から単離される場合がある。単離されると、前記プロＰＳＡペプチドは抗ｐＰＳＡ抗体を作成するのに用いられる場合がある。
【００１６】
抗ｐＰＳＡ抗体の作成法の詳細は同時係属中の米国特許出願第０９，７９２，６９２号明細書に説明されている。簡潔には、本発明による抗体を作成するために用いられるプロＰＳＡポリペプチドは、−７、−５、−４および−２プロＰＳＡを含むがこれらに限定されない。前記プロＰＳＡに対応するペプチドは、抗ｐＰＳＡ抗体を作成するのに用いられ、前記ＰＳＡポリペプチドのいずれかの部分を含む全てのペプチドを含むことがある。これらのペプチドは、約８ないし１５個のアミノ酸を含み、免疫原性エピトープを含むことが好ましい。本発明の実施態様によると、本発明によって作成される抗体は、本発明のプロＰＳＡと特異的な免疫反応をして、結合することが好ましい。ここで用いられるところの「特異的な免疫反応をして、結合する」という文言は、切断型（ｃｌｉｐｐｅｄ  ｆｏｒｍ）、あるいは、切断されない成熟型プロＰＳＡのような他の型のＰＳＡとの交差反応性が１０％未満で本発明の抗体が、プロＰＳＡを認識し結合するを意味する。プロＰＳＡと特異的に結合するモノクローナル抗体の例は、ＰＳＩＺ１３４、ＰＳＩＺ１２０、ＰＳＩＺ１２５、ＰＳＩＺＳ０、ＰＳ２Ｐ２０６、ＰＳ２Ｐ３０９、ＰＳ２Ｐ４４６、ＰＳ２Ｘ０９４、ＰＳ２Ｘ３７３、ＰＳ２Ｖ４１１およびＰＳ２Ｖ４７６を含むがこれらに限定されない。例えば、ＰＳ２Ｐ４４６は［−７］／［−４］ｐＰＳＡに特異的である。ＰＳ２Ｘ３７３は［−２］ｐＰＳＡに特異的である。ＰＳ２Ｖ４７６は［−４］ｐＰＳＡに特異的である。
【００１７】
本発明の抗体は試料中のプロＰＳＡの存在を検出しその量を決定するために用いられる場合がある。本発明の抗体は、試料中のプロＰＳＡ異なる型の存在を検出しその量を決定するためにも用いられる場合がある。試料中のプロＰＳＡまたはその異なる型の存在を検出しその量を決定するための免疫アッセイの詳細な説明は、同時係属中の米国特許出願０９，７９２，５３４号明細書に提供されており、ここでは繰り返さない。
【００１８】
生物学的試料中に含まれるいずれかの関心のあるＰＳＡ量を決定するための典型的な本発明の免疫アッセイは、（ａ）関心のあるＰＳＡと、該ＰＳＡに特異的に結合する抗体とを含む２分子複合体の形成を可能にする条件下で、前記ＰＳＡに前記抗体を接触させるステップと、（ｂ）前記複合体を検出し決定するステップとを含む。本発明の目的のためには、プロＰＳＡとの検出可能な複合体を形成可能ないかなる試薬でも前記抗体の均等物とされる。
【００１９】
典型的には、試料中の本発明のいかなるＰＳＡの定性的および／または定量的な決定でも、直接的または間接的なフォーマットのいずれかの競合的または非競合的免疫アッセイの手順で達成される場合がある。かかる免疫アッセイの例は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）およびサンドイッチ（イムノメトリック）アッセイである。本発明のモノクローナル抗体を用いる抗原検出は、前進、後退または同時モードのいずれかで実行される免疫アッセイを用いて行われることがある。当業者は、過度の実験を伴うことなく、他の免疫アッセイを知り、あるいは、容易にわかる。
【００２０】
「イムノメトリックアッセイ」または「サンドイッチアッセイ」という用語は、同時サンドイッチ法、正方向（ｆｏｒｗａｒｄ）サンドイッチ法および逆方向（ｒｅｖｅｒｓｅ）サンドイッチ法免疫アッセイを含む。これらの用語は当業者によく理解されている。当業者は、本発明の抗体が現在知られているか、あるいは、将来開発されるかもしれないアッセイの他の変法および形式において有用であることを理解するであろう。
【００２１】
本発明の目的のためには、前記生物学的試料は、本発明のプロＰＳＡを含むいかなるヒト生理学的液体試料であってもよい。前記ヒト生理学的液体試料は、血清、精液、尿および血漿を含むが、これらに限定されない。さらに、本発明によって提供される抗原に必要な特異性を有するかぎり、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体の両方を用いてもよい。モノクローナル抗体を用いるのが好ましい。
【００２２】
本発明の実施態様によると、前記免疫アッセイは、［−２］ｐＰＳＡ、［−４］ｐＰＳＡおよび［−５／−７］ｐＰＳＡを含む。ｐＰＳＡの前記特異的な型は前立腺癌またはＢＰＨであると知られている男性の血清中で決定され、これらの被検体のレベルが、良性前立腺過形成から前立腺癌を鑑別するアルゴリズムを開発するために用いられる。本発明の免疫アッセイは、前立腺癌を診断し監視するのを補助するために、血清および組織のようなヒト生理学的試料中のｐＰＳＡを検出するのに用いられる場合がある。本発明のアッセイは、良性前立腺過形成から前立腺癌を鑑別するのを補助するために用いられる場合もある。
【００２３】
ｐＰＳＡ、例えば、４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡと、２０％を超え、特に２５％を超える遊離ＰＳＡの百分率とを含む血清検体を分析するとき、［−２］ｐＰＳＡまたは［−２］、［−４］および［−５／−７］ｐＰＳＡの合計が有意に高い癌の予測値を有することは本発明の不意打ちの発見である。さらに、２．５ないし４ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを有する血清検体において、前記ｐＰＳＡは１５％未満の遊離ＰＳＡを有する試料中では癌の予測値の増加を示す。したがって、前記ｐＰＳＡアイソフォームは全ＰＳＡおよび遊離ＰＳＡの百分率の特定のサブ集団では癌の予測値の著しい増加を示す場合がある。この効果は選択された遊離ＰＳＡの百分率の範囲または判断値（ｃｕｔｏｆｆ）を選ぶとき、著しく増大する。以下に説明する実施例は、一定の判断値より上の［−２］ｐＰＳＡの百分率が、２５％を超える遊離ＰＳＡを有する血清中で見逃された１３例の癌のうち１１例を検出できることを示す。
【００２４】
したがって本発明の実施態様によると、試料の全ＰＳＡは約２から１０ｎｇ／ｍＬまでの範囲内の場合がある。試料中の全ＰＳＡに対する遊離ＰＳＡの比は、全ＰＳＡ量が２ないし４ｎｇ／ｍＬに範囲内のとき、１０ないし２５％より大きいか、あるいは、１５％未満である。
【００２５】
本発明の目的のためには、患者の試料中で検出されるｐＰＳＡ量は、前立腺癌の存在を決定する診断値を作成するいかなるやり方で前立腺癌の存在と関係づけられてもかまわない。本発明の実施態様によると、ｐＰＳＡ量は、前立腺癌の存在を決定するための予め定められた値と比較される。本発明の開示内容を考慮すると、当業者はルーティン化した実験を通じて、前記「予め定められた値」（すなわち閾値）その他の分析パラメーターであって、前立腺癌の存在を決定するために前記ｐＰＳＡのレベルを用いることを可能にするために必要なパラメーターを容易に決定できる。例えば、前立腺癌と診断された人と、前立腺癌でないか、あるいは良性前立腺過形成であるヒトとのｐＰＳＡの上記の比を比較して前記判断値を決定してもよい。受信者操作特性（ＲＯＣ）解析が、要求される特異度および感度を有する判断値を決定するために用いられることがある。ＲＯＣ解析は当業者に知られており、詳細はｈｔｔｐ  ：／／ｗｗｗ．ａｍｄｍ．ｏｒｇ／ＡＭＤＭ／ＮｅｗｓｌｅｔｔｅｒＶ  １２−２−２．ｈｔｍｌで入手可能な、Ｄａｗｓｏｎ．Ｊ．Ｍ．、１９９９．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ：ＡｎａｌｙｓｉｓおよびＰｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ、Ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  ２６ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒｓ（以下の文献表の文献１３）に詳細に説明されており、関連する内容は引用によりここに取り込まれる。それから、前記の比または試料中のｐＰＳＡ量が、被検者での前立腺癌の存在を決定するための予め定められた判断値と比較され、ｐＰＳＡのレベルのほうが高いことが前立腺癌の指標の場合がある。この方法および必要な特異度および感度を有する判断値を決定する他の方法は当業者に周知で繰り返す必要はない（文献１４−２１）。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本発明は以下の実施例を参照してさらに説明される。
【実施例１】
【００２７】
４ないし１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを含む癌および良性疾患の男性の血清の分析
材料および方法
ｐＰＳＡに対するモノクローナル抗体の開発
［−２］および［−４］ｐＰＳＡに対するモノクローナル抗体がアオガイヘモシアニン（Ｋｅｙｈｏｌｅ  Ｌｉｍｐｅｔ  Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）に付着したペプチドで免疫されたマウスによって作成された。［−２］ｐＰＳＡについてはプロペプチドはＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫで、［−４］ｐＰＳＡについては前記ペプチドはＩＬＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫであった。ハイブリドーマは通常の方法（文献１９）によって作成され、抗体クローンは上記それぞれのペプチドとの反応性によって選択され、成熟ＰＳＡについての対照ペプチドであるＩＶＧＧＷＥＣＥＫとの反応性はなかった。前記クローンはさらに、ウェスタンブロット上の精製［−２］および［−４］ｐＰＳＡタンパク質を認識する能力で選択された。ＳＤＳ−ＰＡＧＥが還元条件下で泳動されるとき、ＰＳ２Ｘ３７３は、ウェスタンブロット法で前記成熟ＰＳＡタンパク質との約２０％の交差反応性を示した。しかし、非還元条件下では交差反応性は５％以下に下がったので、以下の結果ではこれらの条件が［−２］ｐＰＳＡの検出に用いられた。ペプチド免疫原を用いて作成されたクローンは、マイクロタイタープレートでの標準的な免疫アッセイによっては溶液中のネイティブの［−２］または［−４］ｐＰＳＡタンパク質を認識できなかった。
【００２８】
完全長［−７］ｐＰＳＡに対するモノクローナル抗体は、ヒトカリクライン２１６，２０につながれたＰＳＡのプレプロリーダーペプチドからなる精製組換えキメラタンパク質で免疫されたマウスによって得られた。クローンはネイティブの組換えｐＰＳＡは認識するがネイティブの成熟ＰＳＡは認識しないことでスクリーニングされた。これらのモノクローナル抗体は、免疫アッセイによって［−７］ｐＰＳＡａおよび［−５］ｐＰＳＡの両方を認識することがわかったので、アッセイフォーマットでのこれらの抗体は、それぞれ［−７］ｐＰＳＡまたは［−５／−７］ｐＰＳＡについてのアッセイという。
【００２９】
ほ乳類細胞からの組換えｐＰＳＡの単離
組換えＰＳＡはほ乳類のＡＶ１２細胞で発現された。使用後の培養液は前記ＰＳＡ特異的モノクローナル抗体のＰＳＭ７７３結合カラムを通された。ＰＳＭ７７３は、成熟型、短縮型及び前駆体型のＰＳＡに対する特異性があることが示されている（文献１０−１１２）。前記カラムはその体積の４０倍の０．１％還元Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００を含むＰＢＳで洗浄され、結合タンパク質は２００ｍＭ塩化ナトリウムを含む１００ｍＭグリシンｐＨ２．５で溶出された。前記溶出液は体積百分率１０％の１Ｍ  ＴｒｉｓｐＨ８．０ですぐに中和された。前記精製ＰＳＡは成熟ＰＳＡは含まないが、ＨＩＣ−ＨＰＬＣで精製された［−５／−７］、［−４］および［−２］ｐＰＳＡのｐＰＳＡのアイソフォームを含んでいた（文献１２）。
【００３０】
ＰＳＡの免疫アッセイ
血清中のＰＳＡおよび精製標品の濃度はＴａｎｄｅｍ（登録商標）−ＭＰ  ＰＳＡおよびＴａｎｄｅｍ（登録商標）−ＭＰ  遊離ＰＳＡアッセイ（ハイブリテク、カリフォルニア州、サンジエゴ、ベックマン・コールター、カリフォルニア州、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ）によって決定された。
【００３１】
［−２］、［−４］および［−５／−７］  ｐＰＳＡの免疫アッセイ
ｐＰＳＡの複数の型の決定用に発明者が開発した免疫アッセイは、以下のとおりである。Ｔａｎｄｅｍ（登録商標）ＰＳＡ  ｚｅｒｏ  ｃａｌ希釈液中の５μｇ／ｍｌ  ビオチン化抗ＰＳＡ抗体ＰＳＭ７７３の５０μＬが、ＥＧ＆Ｇ  Ｗａｌｌａｃのストレプトアビジンでコーティングされたマイクロプレートに転化され、室温で振盪しながら１時間反応させられた。それから前記プレートはＴａｎｄｅｍ（登録商標）Ｅ洗浄液で５回洗浄された。つぎに、５０μＬのＴａｎｄｅｍ（登録商標）ＰＳＡｚｅｒｏ  ｃａｌ希釈液が前記プレートに添加された後、５０μＬのテストされるべき血清または抗原が添加された。甲号液は室温で２時間上記のとおり反応させられる。それから、前記プレートはＴａｎｄｅｍ（登録商標）Ｅ洗浄液で５回洗浄された。ｐＰＳＡのそれぞれの型の所期の決定用の適当なユーロピウム標識検出モノクローナル抗体のＩｍＡ溶液１００μＬが前記プレートに添加される。［−２］ｐＰＳＡについてはＰＳ２Ｘ３７３で、［−４］ｐＰＳＡについてはＰＳ２Ｖ  ４１１で、  ［−５／−７］ｐＰＳＡについてはＰＳ２Ｐ３０９である。前記混合液は室温で１時間上記のとおり反応させられる。その後、前記プレートはＴａｎｄｅｍ（登録商標）Ｅ洗浄液で５回洗浄され、ＥＧ＆Ｇ  Ｗａｌｌａｃ  Ｖｉｃｔｏｒ装置で読みとられた。
【００３２】
受信者操作特性（ＲＯＣ）曲線解析
ＲＯＣ解析およびグラフはＭｅｄＣａｌｃソフトウェアプログラム（ＭｅｄＣａｌｃ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ、ベルギー、（ｉｎｆｏ＠ｍｅｄｃａｌｃ．ｂｅ））を用いて作成された。理論と実際は、ＺｗｉｅｇおよびＣａｍｐｂｅｌｌ、Ｒｅｃｅｉｖｅｒ−ｏｐｅｒａｔｉｎｇ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ  （ＲＯＣ）  ：ａ  ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｔｏｏｌ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｏｙ、３９、５６１−５７７、１９９３に説明されている。
【００３３】
全ＰＳＡと、遊離ＰＳＡと、［−２］ｐＰＳＡ、［−４］ｐＰＳＡおよび［−５／−７］ｐＰＳＡの免疫アッセイの計測は、１０７例の癌および１９７例の良性疾患の既知の診断を含む３０３例の血清試料について実行された。各成分の値が計算され、血清中のｎｇ／ｍＬ単位で発現された。各ＰＳＡアイソフォームについての血清の値が、ＲＯＣ曲線解析を作成するためにＭｅｄＣａｌｃプログラムに入力された。ＲＯＣは、コホートにおける各試料について癌の陽性および陰性の予測値を割り当てる統計的方法で、癌の予測方法としてのＰＳＡおよび遊離ＰＳＡのアッセイの価値および性能を評価するための最も広範に用いられる方法である。最も簡単に述べると、各ＲＯＣ解析について曲線下面積ＡＵＣがアッセイの予測値を評価するために用いられる。ＡＵＣ値が高いほど、全体の予測値が良いことを示す。ＲＯＣ値は０．５（ランダムな偶然からの改善なし）から、１．０（予測値１００％の完璧なアッセイ）までの範囲にある。
【００３４】
たいていの場合ＲＯＣ解析の目的は、癌である男性の鑑別を最大化し、癌でない男性、すなわち偽陽性の生検を最少にすることである。血清中のＰＳＡのような生物学的試料を解析するとき、真陽性および偽陽性の検出の間にバランスがある。例えば所望の結果に応じて、癌の９５％を検出することが最も望ましい場合があり、この場合には良性疾患の男性についての偽陽性が高いことを伴うことが避けられない。例えば遊離ＰＳＡの％の場合には、癌の９５％を検出するためには、遊離ＰＳＡが２５％未満の全ての男性の生検を必要とする。しかしこれは、８０％の偽陽性の割合を伴う。異なる状況下では、偽陽性の割合を最小限にすることが最も望ましい場合があり、その場合には、真の癌はほんの少ししか検出されない。この第２のパラダイムは、比較的低頻度の癌の大集団を扱うときには望ましいかもしれない。集団全体の生検を行うことは実施できないかもしれないので、バランスをとって、一定数の生検でできるだけ多くの癌を検出する。これらの仮定の例は、ＲＯＣ解析の評価および価値が絶対的なものではなく、ｐＰＳＡについての本発明の場合では、実際に用いられる正確なパラメーターを確立する実験を必要とすることを証明するためのものである。しかし本発明の開示内容を考慮すると、当業者は過度の実験を要することなく必要なパラメーターを容易に決定できるはずである。以下の実施例は、一定の基準の下で一定集団での癌の検出におけるｐＰＳＡの価値および有効性を証明することを目的とするが、ｐＰＳＡの使用および判断値はこれらの実施例に限定されない。
【００３５】
ＰＳＡテストの分野において、４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡの初期癌検出範囲では全ＰＳＡ単独に比べて遊離ＰＳＡの百分率のほうが癌検出を改善することが知られている。図１に示す試料セットでは、遊離ＰＳＡの百分率のほうがＰＳＡよりも予測値が高いので、これらの試料でのｐＰＳＡ決定値が遊離ＰＳＡの百分率と比べて癌予測値を改善できるかどうかについて評価された。図１はＦの百分率（遊離ＰＳＡの百分率または遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ）と、［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率（全ての型のｐＰＳＡの和を前記遊離ＰＳＡで除算したもの、すなわち、遊離ＰＳＡに対する全ての型のｐＰＳＡの百分率）との比較を示す。この場合では［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率のＡＵＣ０．６９８がＦの百分率のＡＵＣ０．６３１に比べて高いことからわかるとおり、［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率はＦの百分率に比べて緩やかな改善を示す。
【００３６】
図２は、少し異なるパラダイムを用いて、個別のｐＰＳＡの成分［−２］ｐＰＳＡの百分率をＦの百分率と比較する。この比較についてのＡＵＣは、両方の被検体がほとんど同じ癌予測能力を有することを示す。図３はＦの百分率に対する［−２］ｐＰＳＡの比較を示す。この場合には、［−２］ｐＰＳＡはこのプロ型の血清中のｎｇ／ｍＬを表し、遊離ＰＳＡの百分率ではない。前記ＡＵＣ解析は、［−２］ｐＰＳＡ自体は遊離ＰＳＡの百分率よりも癌予測能が低いことを示す。
【００３７】
図４では、３０３例の試料集団全体の部分集団が分析された。遊離ＰＳＡの百分率が２０％を超える男性だけがＲＯＣ解析に選ばれた。これは前記３０３例の試料のうち１２０例を表す。全集団は３５％の癌を含むが、この１２０例の試料の部分集団は２３％の癌しか含まず、Ｆの百分率が増加すると癌の相対的な割合が減るという全体の傾向を矛盾しない。図４では、遊離ＰＳＡが２０％を超える男性では、ＡＵＣが０．５０４で、Ｆの百分率の決定はほとんど癌予測能がない。これに対し、この同じ範囲では［−２］ｐＰＳＡは、０．６７４のＡＵＣによって示されるとおり、癌予測能が著しく増大する。したがって［−２］ｐＰＳＡは、癌の頻度がより低く検出がより困難な、遊離ＰＳＡの百分率が高い集団ではもっと高い癌検出特異度を示す。
【００３８】
この現象のもっと劇的で実用的な応用が図５に見られる。この図では２５％を超える遊離ＰＳＡの百分率の男性だけが分析された。真にランダムにスクリーニングする集団では、２５％を超える遊離ＰＳＡの男性は、癌がみつかる確率が約８％しかないので、癌の生検は推奨されない。したがってこのグループでの癌を予測するルーティン化した血液テストがないため、このグループの男性での癌は正常の状況では検出されないままになる傾向がある。図５は、［−２］ｐＰＳＡはＡＵＣ０．７４３で、このグループでの癌についての予測値が非常に高いことを示す。２５％を超える遊離ＰＳＡでの［−２］ｐＰＳＡについてのＡＵＣは、２０％の判断値を超える遊離ＰＳＡでの［−２］ｐＰＳＡについてのＡＵＣよりも高いという事実は、遊離ＰＳＡの百分率が増大するほど［−２］ｐＰＳＡがより癌の予測指標となるといる全体的な観察を確認する。ｐＰＳＡの型が、遊離ＰＳＡの百分率の特定の範囲または判断値において選択的な癌予測を示すことは予想外であった。
【００３９】
ｐＰＳＡアッセイがいかに用いられるかの実施例が、図５を作成したのと同じプログラムからプロットされた図５の個々の値についてのドットプロットを示す図６に見られる。２５％を超える遊離ＰＳＡの集団では、１３例の癌と、主にＢＰＨとみられる癌でない症例５１例とがある。０．０５３ｎｇ／ｍＬの判断値を用いると、前記１３例の癌のうち１１例（感度８５％）を検出する一方、このグループでの癌でない症例５１例のうちの１７例（特異度６７％）だけしか生検をしない。また、これはいかにｐＰＳＡが前立腺癌を検出するのに用いられるかの例として示されるが、これは０．０５３ｎｇ／ｍＬの［−２］ｐＰＳＡがこのタイプの試料について用いられる究極的な判断値であることは意味しない。癌およびＢＰＨであることが知られたより大きな対照集団でのより広範な解析が適当な判断値を決定するために有用であろう。以前に述べたとおり、これは患者の異なる集団で望ましい唯一のアプローチではない。
【００４０】
２５％を超える遊離ＰＳＡの試料について示されてはいないが、［−２］ｐＰＳＡの百分率、［−２］ｐＰＳＡ／全ＰＳＡ、［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率その他のような他のｐＰＳＡの計量値もＦの百分率と比べて改善したＲＯＣのＡＵＣを示した。
【実施例２】
【００４１】
２．５ないし４ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを含む癌および良性疾患の男性の血清の分析
実施例１と同じ一連のＰＳＡアッセイが、２．５−４ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡ値を有するこのコホートの患者で決定された。１０９例の癌と１７７例の良性疾患との合計２８６例の試料があった。２．５−４ｎｇ／ｍＬの範囲は、多くの癌が存在するが、ランダムにスクリーニングする集団で４−１０ｎｇ／ｍＬの範囲におけるよりも発生頻度が低い領域である。Ｆの百分率を用いてこの領域での癌検出を改善する現在の試みは、まだ診断上の価値を確立しなければならない。
【００４２】
図７は、［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率のＦの百分率とのＲＯＣ比較を示す。［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率は著しく改善された癌の予測値を示す。図８では、１５％未満の遊離ＰＳＡを有する試料だけがＲＯＣ解析に供された。前記［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率はＦの百分率に比べてもっと顕著なＡＵＣの増大を示し、癌予測値が改善されたことを表した。癌の確率が低い大集団が存在する場合の１つの例であり、この場合には、癌の確率が非常に高い、すなわち特異度が高い男性のみを選択するパラメーターを設定することによって、偽陽性を最少にすることが最も望ましい場合がある。
【００４３】
これらの実施例は、遊離ＰＳＡ全体に対して遊離ＰＳＡのｐＰＳＡアイソフォームが癌検出用の独立したマーカーとして機能する。これは現在関心のあるＰＳＡの診断範囲を通じて正しい。１９９９年４月３０日に出願した米国特許出願第０９／３０２，９６５号（該出願は、１９９７年４月３０日出願の米国特許出願第０８／８４６，４０８号の一部継続出願の１９９９年２月１７日出願の米国特許出願第０９／２５１，６８６号のさらに一部継続出願である。）明細書で提唱したとおり、ｐＰＳＡアイソフォームの合計、あるいは、ｐＰＳＡの個別のアイソフォームが患者集団での癌検出を改善する。
【００４４】
しかし劇的に増大した予測値がＦの百分率によって階層化された試料において非常に顕著であることは予想外であった。これは新規な知見で、ｐＰＳＡと遊離ＰＳＡ全体の百分率との間の複雑な関係を示唆する。ｐＰＳＡの決定は、癌検出を改善し不必要な生検を減らすために、初期の診断範囲の２−１０ｎｇ／ｍＬを通じて適用できる。前記結果に示された実施例は、ｐＰＳＡアイソフォームの前立腺癌検出に向けた適用可能性を証明し、これらのうちの一部の関連する実施例を示唆するためのものであるが、これらの実施例はＰＳＡ、遊離ＰＳＡの百分率またはＰＳＡ判断値の異なる範囲での応用の他の可能性を制限することを意味するものではない。
【００４５】
文献表
１．      Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｓ．、Ｒａｔｌｉｆｆ．Ｔ．Ｌ．、Ｄｏｄｄｓ、Ｋ．Ｍ．．Ｃｏｐｌｅｎ．Ｄ．Ｅ．．Ｙｕａｎ．Ｊ．Ｊ．．Ｔｅｔｒｏｓ．Ｊ．Ａ．，およびＡｎｄｒｉｏｌｅ．Ｇ．Ｌ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ａｓ  ａ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３２４：１１５６−１１６１、１９９１．
２．    Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ、Ｊ．Ｅ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ：ａ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍｏｓｔ  ｕｓｅｆｕｌ  ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．．１４５：９０７−９２３、１９９１．
３．    Ｌａｂｉｌｅ、Ｆ．、Ｄｕｐｏｎｔ、Ａ．、Ｓｕｂｕｒｕ、Ｒ．、Ｃｕｓａｎ．Ｌ．、Ｔｒｅｍｂｌａｙ．Ｍ．、Ｇｏｍｅｚ、Ｊ．Ｌ．．およびＥｍｏｎｄ、Ｊ．Ｓｅｒｕｍ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｓ  ｐｒｅ−ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  ｔｅｓｔ  ｆｏｒ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、１４７：８４６−８５１、１９９２．
４．    Ｌｉｌｊａ、Ｈ．、Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｓｏｎ、Ａ．、Ｄａｈｌｅｎ、Ｕ．、Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ、Ｍ．Ｔ．、Ｎｉｌｓｓｏｎ、Ｏ．、Ｐｅｔｔｅｒｓｓｏｎ、Ｋ．，およびＬｏｖｇｒｅｎ、Ｔ．Ｐｒｏｓｔａｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  Ｓｅｒｕｍ  Ｏｃｃｕｒｓ  Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙ  ｉｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘ  ｗｉｔｈ  ｃ  ｌ−ａｎｔｉｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ、３７：１６１８−１６２５、１９９１．
５．    Ｓｔｅｎｍａｎ、Ｕ．Ｈ．、Ｌｅｉｎｏｎｅｎ、Ｊ．、Ａｌｆｔｈａｎ、Ｈ．、Ｒａｎｎｉ’ｋｋｏ、Ｓ．、Ｔｕｈｋａｎｅｎ、Ｋ．，およびＡｌｆｔｈａｎ、Ｏ．Ａ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎおよびｃ−ａｎｔｉｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ  ｉｓ  ｔｈｅ  ｍａｊｏｒ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｉｎ  ｓｅｒｕｍ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ：ａｓｓａｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｆｏｒ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５１：２２２−２２６、１９９１．
６．    Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．、Ｐａｒｔｉｎ、Ａ．Ｗ．、Ｓｌａｗｉｎ、Ｋ．Ｍ．、Ｂｒａｗｅｒ、Ｍ．Ｋ．、Ｆｌａｎｉｇａｎ、Ｒ．Ｃ．、Ｐａｔｅｌ、Ａ．、Ｒｉｃｈｉｅ、Ｊ．Ｐ．、ｄｅＫｅｍｉｏｎ、Ｊ．Ｂ．、Ｗａｌｓｈ、Ｐ．Ｃ．、Ｓｃａｒｄｉｎｏ、Ｐ．Ｔ．、Ｌａｎｇｅ、Ｐ．Ｈ．、Ｓｕｂｏｎｇ、Ｅ．Ｎ．、Ｐａｒｓｏｎ、Ｒ．Ｅ．、Ｇａｓｉｏｒ、Ｇ．Ｈ．、Ｌｏｖｅｌａｎｄ、Ｋ．Ｇ．，およびＳｏｕｔｈｗｉｃｋ、Ｐ．Ｃ．Ｕｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ  ｏｆ  ｆｒｅｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｔｏ  ｅｎｈａｎｃｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｆｒｏｍ  ｂｅｎｉｇｎ  ｐｒｏｓｔａｔｉｃ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ．ＪＡＭＡ、２７９：１５４２−１５４７，
１９９８．
７．    Ｗｏｏｄｒｕｍ、Ｄ．Ｌ．、Ｂｒａｗｅｒ、Ｍ．Ｋ．、Ｐａｒｔ’ｉｎ、Ａ．Ｗ．、Ｃａｔａｌｏｎａ、Ｗ．Ｊ．，およびＳｏｕｔｈｗｉｃｋ、Ｐ．Ｃ．Ｉｎｔｅｒｐｒｅｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｆｒｅｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．、１５９：５−１２、１９９８．
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９．    Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｈｉｌｌ、Ｔ．Ｍ．、Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ、Ｒ．Ｌ．，およびＳａｅｄｉ、Ｍ．Ｓ．Ａ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ＰＳＡ  ｛．ｐＰＳＡ）  ｉｓ  ａ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｒｅｅ  ＰＳＡ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｓｅｒｕｍ．Ｕｒｏｌｏｇｙ、５０：７１０−７１４、１９９７．
１０．  Ｗａｎｇ、Ｔ．Ｊ．、Ｌｉｎｔｏｎ、Ｈ．Ｊ．、Ｓｏｋｏｌｏｆｆ、Ｒ．Ｌ．．Ｇｒａｕｅｒ、Ｌ．Ｓ．、Ｒｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ．Ｈ．Ｇ．，およびＷｏｌｆｅｒｔ．Ｒ．Ｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ＰＳＡおよびＰＳＡ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ  ｂｙ  ＳＤＳ−ＰＡＧＥ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ｂｌｏｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｕｍｏｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０：７５−７８、１９９７．
１１．  Ｆｉｎｌａｙ、Ｊ．Ａ．、Ｄａｙ、Ｊ．Ｒ．，およびＲｉｔｔｅｎｈｏｕｓｅ、Ｈ．Ｇ．ＰｏｌｖｃｌｏｎａｌおよびＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｏ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｇｅｎ  ｃａｎ  Ｃｒｏｓｓ−Ｒｅａｃｔ  ｗｉｔｈ  Ｈｕｍａｎ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ２およびＨｕｍａｎ  Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  １．Ｕｒｏｌｏｇｙ、５３：７４６−７５１、１９９９．
１２．  Ｋｕｍａｒ、Ａ．、Ｍｉｋｏｌａｊｃｚｙｋ、Ｓ．Ｄ．、Ｇｏｅｌ、Ａ．Ｓ．、Ｍｉｌｌａｒ、Ｌ．Ｓ．，およびＳａｅｄｉ．Ｍ．Ｓ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏ  ｆｏｒｍ  ｏｆ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｂｙ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓおよびｉｔｓ  ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ  ｔｏ  ｍａｔｕｒｅ、ａｃｔｉｖｅ  ｆｏｒｍ  ｂｙ  ｈｕｍａｎ  ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ  ２．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５７：３１１１−３１１４、１９９７．
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１５．  Ｌｉｎｎｅｔ、Ｋ．１９９３．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ  ｆｏｒ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、３９：４２４−３２．
１６．  Ｂｌａｎｄ、Ｊ．Ｍ．、Ａｌｔｍａｎ、Ｄ．Ｇ．１９８６．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  ａｓｓｅｓｓｉｎｇ  ａｇｒｅｅｍｅｎｔ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｗｏ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ．Ｌａｎｃｅｔ、ｉ：３０７−１０．
１７．  Ｒｅｉｄ、Ｍ．Ｃ．、Ｌａｃｈｓ、Ｍ．Ｓ．、Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ  Ａ．Ｒ．１９９５．Ｕｓｅ  ｏｆ  ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃ  ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ｉｎ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｔｅｓｔ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｇｅｔｔｉｎｇ  ｂｅｔｔｅｒ  ｂｕｔ  ｓｔｉｌｌ  ｎｏｔ  ｇｏｏｄ．ＪＡＭＡ、２７４：６４５−５１．
１８．  Ｋｒｏｕｗｅｒ、Ｊ．Ｓ．Ｃｕｍｕｌａｔｉｖｅ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｇｒａｐｈｓ−−ａｎ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｔｏ  ＲＯＣ  ｃｕｒｖｅｓ  ［Ｔｅｃｈ  Ｂｒｉｅｆ］．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．、３３：２３０５−６．
１９．  Ａｌｂｅｒｔ、Ａ．１９８２．Ｏｎ  ｔｈｅ  ｕｓｅおよびｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ  ｒａｔｉｏｓ  ｉｎ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．２８：１１１３−９．
２０．  Ｓｏｌｂｅｒｇ、Ｈ．Ｅ．１９７８．Ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｎｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．、９：２０９−４２．
２１．  Ｍａｔｔｈｅｗｓ、Ｊ．Ｎ．Ｓ．、Ａｌｔｍａｎ、Ｄ．Ｇ．、Ｃａｍｐｂｅｌｌ、Ｍ．Ｊ．、Ｒｏｙｓｔｏｎ、Ｐ．１９９０．Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｅｒｉａｌ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｂｒ．Ｍｅｄ．，Ｉ．、３００：２３０−５．
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［２，４，５，７］ｐＰＳＡ／遊離ＰＳＡ（［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率、すなわち、［−２］ｐＰＳＡ＋［−４］ｐＰＳＡ＋［−５］ｐＰＳＡ＋［−７］ｐＰＳＡの合計）の受信者操作特性（ＲＯＣ）解析を示すグラフ。
【図２】４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［−２］ｐＰＳＡ／遊離ＰＳＡ（［−２］ｐＰＳＡの百分率）のＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図３】４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［−２］ｐＰＳＡのＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図４】２０％を超える遊離ＰＳＡと４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡとを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［−２］ｐＰＳＡのＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図５】２５％を超える遊離ＰＳＡと４−１０ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡとを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［−２］ｐＰＳＡのＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図６】０．０５３ｎｇ／ｍＬの判断値を示す、図５由来の［−２］ｐＰＳＡのデータのドットプロット図。
【図７】２．５−４ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［２，４，５，７］ｐＰＳＡ／遊離ＰＳＡ（［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率、すなわち、［−２］ｐＰＳＡ＋［−４］ｐＰＳＡ＋［−５］ｐＰＳＡ＋［−７］ｐＰＳＡの合計）のＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図８】２．５−４ｎｇ／ｍＬの全ＰＳＡとを有する、癌およびＢＰＨの男性での遊離ＰＳＡ／全ＰＳＡ（Ｆの百分率）と比較した、［２，４，５，７］ｐＰＳＡ／遊離ＰＳＡ（［２，４，５，７］ｐＰＳＡの百分率、すなわち、［−２］ｐＰＳＡ＋［−４］ｐＰＳＡ＋［−５］ｐＰＳＡ＋［−７］ｐＰＳＡの合計）のＲＯＣ解析を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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