(57)【要約】本発明は、個体、特に血清MBLレベルが正常から低い個体の重症急性呼吸器症候群(SARS)の予防および／または治療処置におけるマンナン-結合レクチン(MBL)などのコレクチンおよび／またはフィコリンのサブユニットおよびオリゴマーの使用に関係する。更に、本発明は、個体における血清MBLレベルを測定すること、および適切であるならば該個体にMBLを投与することを含むSARSを治療する方法に関係する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
重症急性呼吸器症候群の予防および／または処置のための医薬の製造における、
少なくとも１つのコレクチンおよび／またはフィコリンサブユニット、例えば、マンナン-結合レクチン(MBL)サブユニット、またはコレクチンおよび／またはフィコリンサブユニットを含む少なくとも１つのコレクチンおよび／またはフィコリンオリゴマー、例えば、少なくとも１つのマンナン-結合レクチン(MBL)サブユニットを含むマンナン-結合レクチン(MBL)オリゴマーを含む組成物
の使用。
【請求項２】
組成物が、少なくとも１つのマンナン-結合レクチン(MBL)サブユニットを含む少なくとも１つのマンナン-結合レクチン(MBL)オリゴマーを含む、請求項１の使用。
【請求項３】
オリゴマーは、好ましくは、テトラマー、ペンタマーおよび／またはヘキサマーからなるオリゴマーの群から選択される、請求項２の使用。
【請求項４】
個体が、10 ng/ml 血清を超える血清MBLレベルを有する、請求項１の使用。
【請求項５】
個体が、50 ng/ml 血清を超える血清MBLレベルを有する、請求項１の使用。
【請求項６】
血清MBLレベルが、機能性血清MBLレベルである、請求項４または５の何れかの使用。
【請求項７】
キットパーツを得るために微生物種を弱毒化および／または排除することが可能である抗菌性医薬の製造を更に含む、請求項１の使用。
【請求項８】
キットパーツを得るために細菌を弱毒化および／または排除することが可能である抗菌性医薬の製造を更に含む、請求項７の使用。
【請求項９】
MBL サブユニットまたはMBL オリゴマーが天然宿主生体において作成される、請求項１の使用。
【請求項１０】
天然宿主生体が、MBL サブユニットまたはMBL オリゴマーを天然で発現するヒト細胞である、請求項９の使用。
【請求項１１】
MBL サブユニットまたはMBL オリゴマーが、MBL ポリペプチドを天然では発現しない宿主生体により作成される、請求項１の使用。
【請求項１２】
MBL サブユニットまたはMBL オリゴマーが、少なくとも１つの工程のインビトロの組み換えDNA技術を含む方法により作成される、請求項１の使用。
【請求項１３】
MBL サブユニット または MBL オリゴマーの作成が、MBL ポリペプチド発現と天然では関連しない発現制御配列により制御される、請求項１１または１２の使用。
【請求項１４】
MBL サブユニット または MBL オリゴマーが宿主生体から単離される、請求項９から１３の何れかの使用。
【請求項１５】
MBL サブユニット または MBL オリゴマーが、親和性クロマトグラフィーを含む少なくとも１つの工程を含む方法により単離される、請求項１４の使用。
【請求項１６】
親和性クロマトグラフィー工程が、付加的なMBL オリゴマーおよび／またはMBL サブユニットを更に含む組成物からMBL テトラマー、ペンタマーおよび／またはヘキサマーを単離できる、請求項１３の使用。
【請求項１７】
MBL サブユニットおよび／またはMBL オリゴマーが、天然の宿主生体中で作成されると天然でMBLと結合する不純物を全く含まない、請求項１１から１６の何れかの使用。
【請求項１８】
MBL サブユニットが哺乳類 MBL サブユニットである、請求項１の使用。
【請求項１９】
哺乳類 MBL サブユニットがヒト MBL サブユニットである、請求項１８の使用。
【請求項２０】
医薬を、他の処置前に個体に投与する、請求項１の使用。
【請求項２１】
処置が予防処置である、請求項１から２０の何れかの使用。
【請求項２２】
医薬が、事前に決定した最小血清MBLレベル10 ng/mlを超える血清MBLレベルを有する個体における血清MBLレベルのブースターである、請求項１から２１の何れかの使用。
【請求項２３】
個体が、事前に測定した最大血清MBLレベル500 ng/ml未満の血清MBLレベルを有する、請求項２２の使用。
【請求項２４】
個体が、75 ng/mlを超える血清MBLレベルを有する、請求項１または２３の使用。
【請求項２５】
個体が、100 ng/mlを超える血清MBLレベルを有する、請求項１または２３の使用。
【請求項２６】
個体が、150 ng/mlを超える血清MBLレベルを有する、請求項１または２３の使用。
【請求項２７】
個体が、500 ng/ml未満の血清MBLレベルを有する、請求項１または２４の使用。
【請求項２８】
個体が、400 ng/ml未満の血清MBLレベルを有する、請求項１または２４の使用。
【請求項２９】
個体が、300 ng/ml未満の血清MBLレベルを有する、請求項１または２４の使用。
【請求項３０】
個体におけるMBLの血清または血漿レベルは、定量的分析により測定する、請求項１から２９の何れかの使用。
【請求項３１】
分析が、少なくとも１つのELISA、TRIFMA、RIAまたは比濁分析を含む、請求項３０の使用。
【請求項３２】
個体においてSARSを予防および／または軽減するためにMBL 組成物を使用する方法であって、以下の工程を含む該方法:
a)個体における血清MBLレベルを測定すること、
b)個体における重要な臨床的SARSの発生の可能性を評価すること、および所望により、
c)MBL 組成物を該個体に投与すること。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、個体の重症急性呼吸器症候群(SARS)の予防および／または治療処置におけるマンナン-結合レクチン(MBL)などのコレクチン(collectin)および／またはフィコリン(ficolin)のサブユニットおよびオリゴマーの使用に関係する。
【０００２】
SARS 感染は、高熱、空咳、筋痛症(myalgin)(筋肉痛)および咽喉炎の徴候を示す。SARSを患う殆どの個体では呼吸困難となり、結局は、ベンチレーターのサポートを必要とし、重篤な血小板減少症となる。SARSを患う個体の5-10 パーセントが、最終的には、その疾患が原因で死亡する。
【０００３】
SARSの原因はまだ知られていない。SARSは、ウイルスが原因であるかもしれないと推測されており、これらのうちで、コロナウイルスおよびパラミキソウイルスについて述べられている。
【０００４】
SARSの徴候は、感染(exposure)後2-14日に発症するとと思われる。
【０００５】
発明の概要
本発明により、コレクチンおよび／またはフィコリンを用いる重症急性呼吸器症候群の処置および／または予防を提案する。
【０００６】
コレクチンでは、すべて以下の構造が見られる: それらは、鎖間ジスルフィド結合を形成することが明らかなN-末端システイン-リッチ領域、続くコラーゲン-様領域、α-らせん状コイルドコイル領域、そして最後に、パターン認識領域であり炭水化物認識ドメイン(CRD)として称せられるC-型レクチンドメインを有する。コレクチンという名前は、コラーゲンおよびレクチンドメインの両方の存在に由来する。α-らせん状コイルドコイル領域は、各ポリペプチドの三量体形成を開始し、コラーゲントリプルコイルを形成し、それにより、コレクチンサブユニットを生ずる。それらは各々、3つのポリペプチドからなるが、N-末端領域はサブユニットのオリゴマー形成の仲介をする。種々のコレクチンが、特有のより高次の構造を示し、典型的には、サブユニットの四量体かまたはサブユニットの六量体の何れかである。それぞれの各CRDでは炭水化物に対して固有の親和性が比較的低いにもかかわらず、大多数の結合ドメインが集まることにより、コレクチンと微生物の細胞壁とを高親和性(high avidity)で結合させ得る。
【０００７】
C型CRDは、系統および機能の両方の点において、広範にタンパク質中で見られる。種々のコレクチンの種々のCRDにより、種々の微生物上にある一連の固有の微生物表面コンポーネントが認識され得る。末端のCRDは、結合部位のあるドメイン標的表面の３つすべてが約５３Åの間隔を有するように分布する(Sheriff et AL., 1994; Weis & Drickamer, 1994)。「パターン認識」のこの特徴は、更に、微生物表面の選択的結合に関連し得る。コラーゲン領域、または恐らくはコレクチンN-末端テイルは、食細胞の特異的レセプターにより認識され、かつそれはCRDドメインと標的との結合における補体カスケードの開始によって活性化される関連プロテアーゼの結合部位である。
【０００８】
フィコリンは、MBLと同様にコラーゲン様領域を含むレクチンである。しかし、MBLとは異なり、それらは、フィブリノーゲンβ-およびγ-鎖に類似するフィブリノーゲン様ドメインを有する。フィコリンはまた構造サブユニットのオリゴマーを形成し、それらはそれぞれ、３つの同一の35kDaポリペプチドからなる。それぞれのサブユニットは、アミノ末端のシステインリッチ領域、Gly-Xaa-Yaaの３つの配列(ここで、XaaおよびYaaは任意のアミノ酸を示す)のタンデムリピートからなるコラーゲン様領域、ネック領域およびフィブリノーゲン様ドメインからなる。フィコリンのオリゴマーは、２つ以上のサブユニットを含み、特に、フィコリンの四量体形態が観察されている。
【０００９】
フィコリンには、実質的にMBLと同様の方法で補体系の活性化を引き起こすものもある。補体系のこの活性化により、上記のような新規のセリンプロテアーゼ(MASP)が活性化されることとなる。
【００１０】
幾つかのレクチンのフィブリノーゲン様ドメインは、MBLを含むC-型レクチンのCRDと同様の機能を有し、それにより、パターン認識レセプターとして機能し、自己と病原体とを識別する。
【００１１】
血清フィコリンは、GlcNAc (N-アセチル-グルコサミン)、エラスチンまたはGalNAc (N-アセチル-ガラクトサミン)に対する共通の結合特異性を有する。フィブリノーゲン様ドメインは炭水化物結合を生ずる。ヒト血清では、L-フィコリン(P35、フィコリンL、フィコリン2またはフコリン(hucolin))およびH-フィコリン(Hakata抗原、フィコリン3または熱不安定性b2-マクログリコプロテイン)として知られる２つのタイプのフィコリンが同定されており、それらは２つともレクチン活性を有する。L-フィコリンはGlcNAcを認識し、H-フィコリンはGalNAcを認識する。M-フィコリンとして知られる他のフィコリン(P35-関連タンパク質、フィコリン1またはフィコリンA)は血清タンパク質とは考えられてはおらず、白血球および肺で見られる。L-フィコリンおよびH-フィコリンはMASPと関連するレクチン補体経路を活性化する。M-フィコリン、L-フィコリンおよびH-フィコリンはカルシウム非依存レクチン活性を有する。
【００１２】
マンノース結合レクチン、マンナン結合タンパク質またはマンノース結合タンパク質(MBP)と同義語であるマンナン結合レクチン(MBL)は、コレクチンと称せられるC-型レクチンのサブグループに属する。というのは、これらの可溶性タンパク質は、コラーゲン性ストーク2に結合した３つのCRDのあるサブユニットから構成されているからである。MBLは、広範の微生物により提示された炭水化物と相互作用し、蓄積された証拠により、それは、先天性免疫防御3で重要な役割をすることが示されている。炭水化物に結合すると、MBLは、補体系を活性化できる。
【００１３】
補体系は３つの経路により活性化され得る: その古典経路(classical pathway)、副経路(alternative pathway)、および新たに記載した第三の経路、すなわち、マンナン-結合レクチン(MBL)経路であり、そのMBL経路は、微生物により提示された炭水化物に対するMBLの結合により開始される。副経路およびMBL経路のコンポーネントは、先天性免疫防御(天然または非クローナル免疫防御とも称せられる)の一部である。一方、古典経路には、特異的免疫防御4の抗体との協同がある。
【００１４】
ヒト MBL タンパク質は、18以下の同一の32 kDa ポリペプチド鎖27で構成されており、該鎖はそれぞれ、３つのシステイン残基を含む21 アミノ酸の短いN-末端セグメント、それに続く、Gln 残基が介在するコラーゲン性モチーフ Gly-X-Yの7のリピート、それに続く、他の12のGly-X-Y リピートを含む。わずか34 残基の'ネック-領域'は、その分子28のコラーゲン性部分により93 アミノ酸のC-末端 Ca2+-依存レクチンドメインと結合する。
【００１５】
３つのポリペプチド鎖のコラーゲン性領域が組み合わさって、ジスルフィド架橋により共有結合し安定したサブユニットを形成する。各サブユニットは、ジスルフィド架橋によりおよび非-共有結合性相互作用27により結合する。
【００１６】
ヒト血清中のMBL濃度は、主として、遺伝的に決定されるが、急性期反応8のときには３倍にまで増加すると報告されている。構造的変化の要因となる３つの変異およびプロモーター領域中の２つの変異が、MBL 欠損9と関連する。
【００１７】
広範囲のオリゴサッカライドがMBLに結合し得る。標的となる糖は、通常、哺乳類細胞表面上で、高密度でさらされることはないので、MBLは、通常、自己決定因子(self-determinants)を認識することはない。しかし、特に、反復性炭水化物決定因子を提示する微生物の細胞表面との相互作用には非常に適している。
【００１８】
このため、本発明は、天然源から、または組み換え技術によりまたは任意の他の適当なMBL-産生細胞系により産生される物質から精製したMBLの使用であって、SARSの予防および／または処置のためのMBLの使用を特徴とする。MBLは、医療処置の開始前後であって適当と思われる期間の間、与えられ得る。
【００１９】
MBLは、主に、そのオプソニン化活性によりその抗-SARS活性を発揮すると考えられる(食作用のための微生物の準備)。この活性は、微生物の表面へのMBLの結合後の補体の活性化、および微生物へのC4bおよびC3bのデポジションに依存する。MBLはまた、補体の最終溶菌経路(terminal lytic pathway)の活性化および膜への細胞膜傷害複合体(MAC)の挿入を介する、微生物の直接補体仲介死滅を促進し得る。この機構はあまり重要でないと考えられる。
【００２０】
本発明により、予防的にSARSを処置することが可能となる。MBLの予防処置により、今後、SARSを予防することが可能となるか、または個体がSARSにかかるリスクを低減することが可能となる。
【００２１】
他の態様では、本発明は、少なくとも１つのマンナン-結合レクチン(MBL)サブユニット、または少なくとも１つのマンナン-結合レクチン(MBL)サブユニットを含む少なくとも１つのオリゴマーを含む組成物の使用であって、個体におけるSARSの予防、改善または治療の処置のための医薬の製造における該使用に関係する。ここで、その個体は、最初、MBLの血漿レベルは低く、例えば、約 0 mg/mlの血漿レベル、または10 ng/を超える血漿レベルである。特に、その個体は、遺伝的にMBL 欠損であり得るかまたはMBL 欠損となって感染のリスクが増大し得る。従って、本発明はまた、MBL産生および／またはMBL機能における任意の欠損を含むマンナン-結合レクチン(MBL)欠損の個体におけるSARSの処置に関する。特に、SARSを有するかSARSを有すると疑われる個体における処置に関する。
【００２２】
また他の態様では、個体におけるSARSの重篤な症状の発生の可能性を評価するための方法であって、個体から得た血漿または血清中のMBLの濃度を測定する工程、およびその測定濃度に基づき該可能性を評価する工程を含む該方法を提供する。
【００２３】
また、対象の個体を遺伝子型決定することにより、可能性を評価することが可能となる。
【００２４】
本発明の詳細な説明
SARSは、血清コレクチンおよび／またはフィコリンレベル、例えば、MBLレベルとは独立して、個体において予防および／または治療され得る。
【００２５】
本発明のコレクチンは、個体においてSARSを予防または治療できる任意のコレクチンであり得る。
【００２６】
従って、コレクチンは、MBL(マンノース-結合レクチン)、SP-A (肺サーファクタントタンパク質A)、SP-D (肺サーファクタントタンパク質D)、BK (またはBC、ウシコングルチニン)、CL-L1 (Ohtani et al. 1999, Molecular cloning of a novel human collectin from liver (CL-L1), J. Biol. Chem. 274:13681-89)、CL-P1 (Ohtani et al. 2001. The membrane-type collectin CL-P1 is a scavenger receptor on vascular endothelial cells. J. Biol. Chem. 276:44222-28)、およびCL-43 (コレクチン-43)からなる群から選択され得る。最も好ましくは、コレクチンはMBLである(Holmskov et al. 2003, Annu Rev. Immunol. 21:547-78)。
【００２７】
特に好ましい実施態様では、コレクチンは、以下に列挙の配列のうちの１つである。そのデータベースおよび受け入れ番号参照のこと。
【００２８】
コレクチン
1: Q9NPY3 
Complement component C1q receptor precursor (Complement component 1, q
subcomponent, receptor 1) (C1qRp) (C1qR(p)) (C1q/MBL/SPA receptor) (CD93
antigen) (CDw93)
gi|21759074|sp|Q9NPY3|CD93_HUMAN[21759074]
2: BAC05523 
collectin placenta 1 [Mus musculus]
gi|21901969|dbj|BAC05523.1|[21901969]
3: AAM34743 
46-kDa collectin precursor [Bos taurus]
gi|21105687|gb|AAM34743.1|AF509590_1[21105687]
4: AAM34742 
46-kDa collectin precursor [Bos taurus]
gi|21105685|gb|AAM34742.1|AF509589_1[21105685]
5: XP_139613 
similar to collectin sub-family member 10; collectin liver 1; collectin 34 [Mus
musculus]
gi|20903807|ref|XP_139613.1|[20903807]
6: XP_123211 
similar to collectin sub-family member 12 [Mus musculus]
gi|20876566|ref|XP_123211.1|[20876566]
7: NP_571645 
mannose binding-like lectin [Danio rerio]
gi|18858997|ref|NP_571645.1|[18858997]
8: NP_569057 
collectin sub-family member 12, isoform I; scavenger receptor with C-type
lectin; collectin placenta 1 [Homo sapiens]
gi|18641360|ref|NP_569057.1|[18641360]
9: NP_110408 
collectin sub-family member 12, isoform II; scavenger receptor with C-type
lectin; collectin placenta 1 [Homo sapiens]
gi|18641358|ref|NP_110408.2|[18641358]
10: NP_569716 
collectin sub-family member 12 [Mus musculus]
gi|18485494|ref|NP_569716.1|[18485494]
11: AAL61856 
43kDa collectin precursor [Bos taurus]
gi|18252111|gb|AAL61856.1|[18252111]
12: AAL61855 
43kDa collectin precursor [Bos taurus]
gi|18252109|gb|AAL61855.1|[18252109]
13: BAB22581 
data source:SPTR, source key:Q9Y6Z7, evidence:ISS~homolog to COLLECTIN
34~putative [Mus musculus]
gi|12833584|dbj|BAB22581.1|[12833584]
14: NP_034905 
mannose binding lectin, liver (A) [Mus musculus]
gi|6754654|ref|NP_034905.1|[6754654]
15: NP_034906 
mannose binding lectin, serum (C) [Mus musculus]
gi|6754656|ref|NP_034906.1|[6754656]
16: NP_006429 
collectin sub-family member 10; collectin liver 1; collectin 34 [Homo sapiens]
gi|5453619|ref|NP_006429.1|[5453619]
17: BAB72147 
collectin placenta 1 [Homo sapiens]
gi|17026101|dbj|BAB72147.1|[17026101]
18: AAF63470 
mannose binding-like lectin precursor [Carassius auratus]
gi|7542474|gb|AAF63470.1|AF227739_1[7542474]
19: AAF63469 
mannose binding-like lectin precursor [Danio rerio]
gi|7542472|gb|AAF63469.1|AF227738_1[7542472]
20: AAF63468 
mannose binding-like lectin precursor [Cyprinus carpio]
gi|7542470|gb|AAF63468.1|AF227737_1[7542470]
21: AAK97540 
surfactant protein A precursor [Gallus gallus]
gi|15420996|gb|AAK97540.1|AF411083_1[15420996]
22: LNMSMC 
mannose-binding lectin C precursor - mouse
gi|7428747|pir||LNMSMC[7428747]
23: LNMSMA 
mannose-binding lectin A precursor - mouse
gi|625320|pir||LNMSMA[625320]
24: JN0450 
conglutinin precursor - bovine
gi|346501|pir||JN0450[346501]
25: A57250 
mannan-binding protein - chicken (fragment)
gi|1362725|pir||A57250[1362725]
26: A53570 
collectin-43 - bovine
gi|1083017|pir||A53570[1083017]
27: AAF28384 
lung surfactant protein A [Sus scrofa]
gi|6782434|gb|AAF28384.1|AF133668_1[6782434]
28: AAF22145 
lung surfactant protein D precursor; SPD; SP-D; CP4 [Sus scrofa]
gi|6760482|gb|AAF22145.2|AF132496_1[6760482]
29: P41317 
MANNOSE-BINDING PROTEIN C PRECURSOR (MBP-C) (MANNAN-BINDING PROTEIN)
(RA-REACTIVE FACTOR P28A SUBUNIT) (RARF/P28A)
gi|1346477|sp|P41317|MABC_MOUSE[1346477]
30: P39039 
MANNOSE-BINDING PROTEIN A PRECURSOR (MBP-A) (MANNAN-BINDING PROTEIN)
(RA-REACTIVE FACTOR POLYSACCHARIDE-BINDING COMPONENT P28B POLYPEPTIDE) (RARF
P28B)
gi|729972|sp|P39039|MABA_MOUSE[729972]
31: P42916 
COLLECTIN-43 (CL-43)
gi|1168967|sp|P42916|CL43_BOVIN[1168967]
32: CAB56155 
DMBT1/8kb.2 protein [Homo sapiens]
gi|5912464|emb|CAB56155.1|[5912464]
33: BAA81747 
collectin 34 [Homo sapiens]
gi|5162875|dbj|BAA81747.1|[5162875]
34: AAB94071 
mannan-binding lectin; collectin [Gallus gallus]
gi|2736145|gb|AAB94071.1|[2736145]
35: AAB36019 
mannan-binding protein, MBP=lectin {N-terminal} [chickens, serum, Peptide
Partial, 30 aa] [Gallus gallus]
gi|1311692|gb|AAB36019.1|[1311692]
36: AAB27504 
conglutinin (N) {N-terminal} [cattle, Peptide Partial, 60 aa] [Bos taurus]
gi|386660|gb|AAB27504.1|[386660]
37: CAA53511 
collectin-43 [Bos taurus]
gi|499385|emb|CAA53511.1|[499385]
38: AAA82010 
mannose-binding protein C [Mus musculus]
gi|773288|gb|AAA82010.1|[773288]
39: AAA82009 
mannose-binding protein A [Mus musculus]
gi|773280|gb|AAA82009.1|[773280]
【００２９】
肺サーファクタントタンパク質
1: 1KMRA 
Chain A, Solution Nmr Structure Of Surfactant Protein B (11-25) (Sp- B11-25)
gi|22219056|pdb|1KMR|A[22219056]
2: P50404 
Pulmonary surfactant-associated protein D precursor (SP-D) (PSP-D)
gi|1709879|sp|P50404|PSPD_MOUSE[1709879]
3: P06908 
Pulmonary surfactant-associated protein A precursor (SP-A) (PSP-A) (PSAP)
gi|1172693|sp|P06908|PSPA_CANFA[1172693]
4: P35247 
Pulmonary surfactant-associated protein D precursor (SP-D) (PSP-D)
gi|464486|sp|P35247|PSPD_HUMAN[464486]
5: P12842 
Pulmonary surfactant-associated protein A precursor (SP-A) (PSP-A) (PSAP)
gi|131413|sp|P12842|PSPA_RABIT[131413]
6: NP_033186 
surfactant associated protein D [Mus musculus]
gi|6677921|ref|NP_033186.1|[6677921]
7: 1B08C 
Chain C, Lung Surfactant Protein D (Sp-D) (Fragment)
gi|6573321|pdb|1B08|C[6573321]
8: 1B08B 
Chain B, Lung Surfactant Protein D (Sp-D) (Fragment)
gi|6573320|pdb|1B08|B[6573320]
9: 1B08A 
Chain A, Lung Surfactant Protein D (Sp-D) (Fragment)
gi|6573319|pdb|1B08|A[6573319]
10: NP_060049 
deleted in malignant brain tumors 1 isoform c precursor [Homo sapiens]
gi|8923740|ref|NP_060049.1|[8923740]
11: NP_015568 
deleted in malignant brain tumors 1 isoform b precursor [Homo sapiens]
gi|6633801|ref|NP_015568.1|[6633801]
12: NP_004397 
deleted in malignant brain tumors 1 isoform a precursor [Homo sapiens]
gi|4758170|ref|NP_004397.1|[4758170]
13: LNBOC1 
pulmonary surfactant protein C - bovine
gi|7428752|pir||LNBOC1[7428752]
14: LNDGC1 
pulmonary surfactant protein C - dog
gi|7428750|pir||LNDGC1[7428750]
15: JN0450 
conglutinin precursor - bovine
gi|346501|pir||JN0450[346501]
16: A45225 
pulmonary surfactant protein D precursor - human
gi|346375|pir||A45225[346375]
17: LNHUC 
pulmonary surfactant protein C precursor, long splice form - human
gi|71983|pir||LNHUC[71983]
18: LNDGPS 
pulmonary surfactant protein A precursor - dog
gi|71970|pir||LNDGPS[71970]
19: LNHUPS 
pulmonary surfactant protein A precursor (genomic clone) - human
gi|71967|pir||LNHUPS[71967]
20: A53570 
collectin-43 - bovine
gi|1083017|pir||A53570[1083017]
21: S33603 
surfactant protein D - bovine
gi|423283|pir||S33603[423283]
22: AAF28384 
lung surfactant protein A [Sus scrofa]
gi|6782434|gb|AAF28384.1|AF133668_1[6782434]
23: AAF22145 
lung surfactant protein D precursor; SPD; SP-D; CP4 [Sus scrofa]
gi|6760482|gb|AAF22145.2|AF132496_1[6760482]
24: P15783 
PULMONARY SURFACTANT-ASSOCIATED PROTEIN C (SP-C) (PULMONARY
SURFACTANT-ASSOCIATED PROTEOLIPID SPL(VAL))
gi|131422|sp|P15783|PSPC_BOVIN[131422]
25: P35246 
PULMONARY SURFACTANT-ASSOCIATED PROTEIN D PRECURSOR (SP-D) (PSP-D)
gi|464485|sp|P35246|PSPD_BOVIN[464485]
26: P42916 
COLLECTIN-43 (CL-43)
gi|1168967|sp|P42916|CL43_BOVIN[1168967]
27: CAB56155 
DMBT1/8kb.2 protein [Homo sapiens]
gi|5912464|emb|CAB56155.1|[5912464]
28: AAD49696 
gp-340 variant protein [Homo sapiens]
gi|5733598|gb|AAD49696.1|AF159456_1[5733598]
29: AAD31380 
surfactant protein D precursor [Mus musculus]
gi|4877556|gb|AAD31380.1|AF047742_1[4877556]
30: B61249 
pulmonary surfactant protein C - dog
gi|539712|pir||B61249[539712]
31: S00609 
pulmonary surfactant protein C - bovine
gi|89749|pir||S00609[89749]
32: A43628 
pulmonary surfactant protein A - human (fragments)
gi|280854|pir||A43628[280854]
33: AAB48076 
Surfactant protein B (SP-B) [Oryctolagus cuniculus]
gi|1850933|gb|AAB48076.1|[1850933]
34: 1901176A 
surfactant protein A
gi|382753|prf||1901176A[382753]
35: CAA53510 
lung surfactant protein D [Bos taurus]
gi|415939|emb|CAA53510.1|[415939]
36: CAA53511 
collectin-43 [Bos taurus]
gi|499385|emb|CAA53511.1|[499385]
37: CAA46152 
lung surfactant protein D [Homo sapiens]
gi|34767|emb|CAA46152.1|[34767]
38: AAA92788 
lung surfactant protein C [Rattus norvegicus]
gi|595282|gb|AAA92788.1|[595282]
39: AAA31468 
surfactant protein A [Oryctolagus cuniculus]
gi|431446|gb|AAA31468.1|[431446]
【００３０】
マンノース結合レクチン
1: Q9NPY3 
Complement component C1q receptor precursor (Complement component 1, q
subcomponent, receptor 1) (C1qRp) (C1qR(p)) (C1q/MBL/SPA receptor) (CD93
antigen) (CDw93)
gi|21759074|sp|Q9NPY3|CD93_HUMAN[21759074]
2: O89103 
Complement component C1q receptor precursor (Complement component 1, q
subcomponent, receptor 1) (C1qRp) (C1qR(p)) (C1q/MBL/SPA receptor) (CD93
antigen) (Cell surface antigen AA4) (Lymphocyte antigen 68)
gi|21541998|sp|O89103|CD93_MOUSE[21541998]
3: P09871 
Complement C1s component precursor (C1 esterase)
gi|115205|sp|P09871|C1S_HUMAN[115205]
4: NP_036204 
complement component 1, q subcomponent, receptor 1; complement component C1q
receptor [Homo sapiens]
gi|6912282|ref|NP_036204.1|[6912282]
5: NP_000233 
soluble mannose-binding lectin precursor; mannose-binding lectin; mannose
binding protein; Mannose-binding lectin 2, soluble (opsonic defect) [Homo
sapiens]
gi|4557739|ref|NP_000233.1|[4557739]
6: AAM94381 
lectin precursor [Zephyranthes candida]
gi|22212748|gb|AAM94381.1|AF527385_1[22212748]
7: AAH21762 
mannose binding lectin, liver (A) [Mus musculus]
gi|18256010|gb|AAH21762.1|[18256010]
8: AAH10760 
Similar to mannose binding lectin, serum (C) [Mus musculus]
gi|14789670|gb|AAH10760.1|[14789670]
9: P11226 
Mannose-binding protein C precursor (MBP-C) (MBP1) (Mannan-binding protein)
(Mannose-binding lectin)
gi|126676|sp|P11226|MABC_HUMAN[126676]
10: NP_034897 
mannan-binding lectin serine protease 2 [Mus musculus]
gi|6754642|ref|NP_034897.1|[6754642]
11: Q9ET61 
Complement component C1q receptor precursor (Complement component 1, q
subcomponent, receptor 1) (C1qRp) (C1qR(p)) (C1q/MBL/SPA receptor) (CD93
antigen) (Cell surface antigen AA4)
gi|21541989|sp|Q9ET61|CD93_RAT[21541989]
12: NP_006601 
mannan-binding lectin serine protease 2, isoform 1 precursor; MBL-associated
plasma protein of 19 kD; small MBL-associated protein [Homo sapiens]
gi|21264363|ref|NP_006601.2|[21264363]
13: NP_631947 
mannan-binding lectin serine protease 2, isoform 2 precursor; MBL-associated
plasma protein of 19 kD; small MBL-associated protein [Homo sapiens]
gi|21264361|ref|NP_631947.1|[21264361]
14: NP_624302 
mannan-binding lectin serine protease 1, isoform 2, precursor; protease, serine,
5 (mannose-binding protein-associated); manan-binding lectin serine protease-1;
Ra-reactive factor serine protease p100 [Homo sapiens]
gi|21264359|ref|NP_624302.1|[21264359]
15: NP_001870 
mannan-binding lectin serine protease 1, isoform 1, precursor; protease, serine,
5 (mannose-binding protein-associated); manan-binding lectin serine protease-1;
Ra-reactive factor serine protease p100 [Homo sapiens]
gi|21264357|ref|NP_001870.3|[21264357]
16: XP_122683 
similar to mannose binding lectin, liver (A) [Mus musculus]
gi|20872845|ref|XP_122683.1|[20872845]
17: AAM21196 
C-type mannose-binding lectin [Oncorhynchus mykiss]
gi|20385163|gb|AAM21196.1|AF363271_1[20385163]
18: AAD45377 
mannose-binding lectin [Sus scrofa]
gi|5566370|gb|AAD45377.1|AF164576_1[5566370]
19: NP_034905 
mannose binding lectin, liver (A) [Mus musculus]
gi|6754654|ref|NP_034905.1|[6754654]
20: NP_034906 
mannose binding lectin, serum (C) [Mus musculus]
gi|6754656|ref|NP_034906.1|[6754656]
21: AAL14428 
dendritic cell-specific ICAM-3 grabbing nonintegrin [Macaca nemestrina]
gi|16118455|gb|AAL14428.1|AF343727_1[16118455]
22: AAF63470 
mannose binding-like lectin precursor [Carassius auratus]
gi|7542474|gb|AAF63470.1|AF227739_1[7542474]
23: AAF63469 
mannose binding-like lectin precursor [Danio rerio]
gi|7542472|gb|AAF63469.1|AF227738_1[7542472]
24: AAF63468 
mannose binding-like lectin precursor [Cyprinus carpio]
gi|7542470|gb|AAF63468.1|AF227737_1[7542470]
25: AAF21018 
mannose-binding lectin 2 [Sus scrofa]
gi|6644342|gb|AAF21018.1|AF208528_1[6644342]
26: AAK30298 
mannose-binding lectin precursor protein [Gallus gallus]
gi|13561409|gb|AAK30298.1|[13561409]
27: LNMSMC 
mannose-binding lectin C precursor - mouse
gi|7428747|pir||LNMSMC[7428747]
28: LNMSMA 
mannose-binding lectin A precursor - mouse
gi|625320|pir||LNMSMA[625320]
29: LNRTMA 
mannose-binding lectin A precursor - rat
gi|71975|pir||LNRTMA[71975]
30: LNRTMC 
mannose-binding lectin C precursor - rat
gi|71974|pir||LNRTMC[71974]
31: LNHUMC 
mannose-binding lectin precursor - human
gi|71973|pir||LNHUMC[71973]
32: BAA86864 
complement C1s [Homo sapiens]
gi|6407558|dbj|BAA86864.1|[6407558]
33: P49329 
MANNOSE-SPECIFIC LECTIN (AGGLUTININ)
gi|1346426|sp|P49329|LEC_ALOAR[1346426]
34: CAB56124 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911809|emb|CAB56124.1|[5911809]
35: CAB56123 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911807|emb|CAB56123.1|[5911807]
36: CAB56122 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911798|emb|CAB56122.1|[5911798]
37: CAB56121 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911796|emb|CAB56121.1|[5911796]
38: CAB56045 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911794|emb|CAB56045.1|[5911794]
39: CAB56120 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911792|emb|CAB56120.1|[5911792]
40: CAB56044 
mannose-binding lectin [Homo sapiens]
gi|5911790|emb|CAB56044.1|[5911790]
41: AAB53110 
C1qR(p) [Homo sapiens]
gi|2052498|gb|AAB53110.1|[2052498]
【００３１】
コレクチンは、好ましくは、コレクチンまたは該コレクチンの変異体もしくは相同体の少なくとも10、少なくとも12など、例えば、少なくとも15、少なくとも20など、例えば、少なくとも25、少なくとも30など、例えば、少なくとも35、少なくとも40など、例えば、少なくとも50の連続アミノ酸残基を含む。かかる変異体または相同体は、好ましくは、コレクチンと少なくとも70%、80%など、例えば、90%、95%などの同一性がある。
【００３２】
フィコリン
本発明のフィコリンは、L-フィコリン、H-フィコリンもしくはM-フィコリンまたはそれらの変異体もしくは相同体であり得る。好ましい実施態様では、フィコリンはL-フィコリンである。
【００３３】
特に好ましい実施態様では、フィコリンは、以下に列挙の配列のうちの１つを有する。そのデータベースおよび受け入れ番号を参照のこと。各配列で、システインリッチ領域およびコラーゲン-様領域について述べられている。
【００３４】
NP_003656. ficolin 3 precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing) 3 (Hakata antigen) [Homo sapiens] [gi:4504331]
90..299 /region_name="pfam00147, fibrinogen_C, Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain"
90..299 /region_name="smart00186, FBG, Fibrinogen-related domains (FReDs); Domain present at the C-termini of fibrinogen beta and gamma chains, and a variety of fibrinogen-related proteins, including tenascin and Drosophila scabrous" 
1 mdllwilpsl wllllggpac lktqehpscp gpreleaskv vllpscpgap gspgekgapg
61 pqgppgppgk mgpkgepgdp vnllrcqegp rncrellsqg atlsgwyhlc lpegralpvf 
121 cdmdtegggw lvfqrrqdgs vdffrswssy ragfgnqese fwlgnenlhq ltlqgnwelr 
181 veledfngnr tfahyatfrl lgevdhyqla lgkfsegtag dslslhsgrp fttydadhds 
241 snsncavivh gawwyascyr snlngryavs daaahkygid wasgrgvghp yrrvrmmlr 
XP_116792. similar to Ficolin 2 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 2) (Ficolin-B) (Ficolin B) (Serum lectin P35) (EBP-37) (Hucolin) (L-Ficolin) [Homo sapiens] [gi:20477458]
91..168 /region_name="pfam00147, fibrinogen_C, Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain"
91..168 /region_name="smart00186, FBG, Fibrinogen-related domains (FReDs); Domain present at the C-termini of fibrinogen beta and gamma chains, and a variety of fibrinogen-related proteins, including tenascin and Drosophila scabrous" 
1 mgpallalsf lwtmaltedt cpamleyval nsepgmaskn psrrhglsll vvdqgpgarg 
61 vrtdqgpsga dpgslelhge cpifpseqvi lthhnnypfs tedqdndrda encavhyqga 
121 wwyaschlsh lngvylggar dsftnginwk sgkgnnysyk vsemkvrpt 
O00602. Ficolin 1 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 1) (Ficolin-A) (Ficolin A) (M-Ficolin) [gi:20455484]
1..29 /gene="FCN1" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
30..326 /gene="FCN1" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 1." 
55..93 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
133 /gene="FCN1" /region_name="Conflict" /note="T -> N (IN REF. 1)." 
144..290 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
287 /gene="FCN1" /region_name="Conflict" /note="N -> S (IN REF. 1)." 
305 /gene="FCN1" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 melsgatmar glavllvlfl hiknlpaqaa dtcpevkvvg legsdkltil rgcpglpgap 
61 gpkgeagvig ergerglpga pgkagpvgpk gdrgekgmrg ekgdagqsqs catgprnckd 
121 lldrgyflsg whtiylpdcr pltvlcdmdt dgggwtvfqr rmdgsvdfyr dwaaykqgfg 
181 sqlgefwlgn dnihaltaqg sselrvdlvd fegnhqfaky ksfkvadeae kyklvlgafv 
241 ggsagnsltg hnnnffstkd qdndvsssnc aekfqgawwy adchasnlng lylmgphesy 
301 anginwsaak gykysykvse mkvrpa // 
O75636. Ficolin 3 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 3) (Collagen/fibrinogen domain-containing lectin 3 P35) (Hakata antigen) [gi:13124185]
1..21 /gene="FCN3" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
22..299 /gene="FCN3" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 3." 
48..80 /gene="FCN3" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
50 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
53 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
59 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
65 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
68 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
77 /gene="FCN3" /site_type="hydroxylation" 
119..265 /gene="FCN3" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
189 /gene="FCN3" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 mdllwilpsl wllllggpac lktqehpscp gpreleaskv vllpscpgap gspgekgapg 
61 pqgppgppgk mgpkgepgdp vnllrcqegp rncrellsqg atlsgwyhlc lpegralpvf 
121 cdmdtegggw lvfqrrqdgs vdffrswssy ragfgnqese fwlgnenlhq ltlqgnwelr 
181 veledfngnr tfahyatfrl lgevdhyqla lgkfsegtag dslslhsgrp fttydadhds 
241 snsncavivh gawwyascyr snlngryavs daaahkygid wasgrgvghp yrrvrmmlr 
XP_130120. similar to Ficolin 2 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 2) (Ficolin-B) (Ficolin B) (Serum lectin P35) (EBP-37) (Hucolin) [Mus musculus] [gi:20823464]
59..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391" 
59..89 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
60..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
60..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
60..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
60..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
60..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
61..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
61..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
61..95 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
103..312 /region_name="Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain" /note="fibrinogen_C" /db_xref="CDD:pfam00147"
103..312 /region_name="Fibrinogen-related domains (FReDs)" /note="FBG" /db_xref="CDD:smart00186" 
1 malgsaalfv ltltvhaagt cpelkvldle gykqltilqg cpglpgaagp kgeagakgdr 
61 gesglpgipg kegptgpkgn qgekgirgek gdsgpsqsca tgprtckell tqghfltgwy 
121 tiylpdcrpl tvlcdmdtdg ggwtvfqrrl dgsvdffrdw tsykrgfgsq lgefwlgndn 
181 ihalttqgts elrvdlsdfe gkhdfakyss fqiqgeaeky klilgnflgg gagdsltphn 
241 nrlfstkdqd ndgstsscam gyhgawwysq chtsnlngly lrgphksyan gvnwkswrgy 
301 nysckvsemk vrli 
NP_056654. ficolin 2 isoform d precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2 (hucolin); ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2; hucolin [Homo sapiens] [gi:8051590]
39..95 /region_name="collagen-like domain" 
1 meldravgvl gaatlllsfl gmawalqaad tcpevkmvgl egsdkltilr gcpglpgapg 
61 dkgeagtngk rgergppgpp gkagppgpng apgepqpclt gd 
NP_056653. ficolin 2 isoform c precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2 (hucolin); ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2; hucolin [Homo sapiens] [gi:8051588]
39..95 /region_name="collagen-like domain"
102..143 /region_name="Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain" /note="fibrinogen_C" /db_xref="CDD:pfam00147"
102..143 /region_name="Fibrinogen-related domains (FReDs)" /note="FBG" /db_xref="CDD:smart00186" 
1 meldravgvl gaatlllsfl gmawalqaad tcpevkmvgl egsdkltilr gcpglpgapg 
61 dkgeagtngk rgergppgpp gkagppgpng apgepqpclt gprtckdlld rghflsgwht 
121 iylpdcrplt vlcdmdtdgg gwtvsvglgr ggqpgspggq aahlvgehtl efsillvgds 
181 qr 
NP_056652. ficolin 2 isoform b precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2 (hucolin); ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2; hucolin [Homo sapiens] [gi:8051586]
sig_peptide 1..25 
mat_peptide 26..275
60..275 /region_name="FBG domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology" 64..275 /region_name="Fibrinogen-related domains (FReDs)" /note="FBG" /db_xref="CDD:smart00186" 
64..274 /region_name="Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain" /note="fibrinogen_C" /db_xref="CDD:pfam00147" 
1 meldravgvl gaatlllsfl gmawalqaad tcpgergppg ppgkagppgp ngapgepqpc 
61 ltgprtckdl ldrghflsgw htiylpdcrp ltvlcdmdtd gggwtvfqrr vdgsvdfyrd 
121 watykqgfgs rlgefwlgnd nihaltaqgt selrvdlvdf ednyqfakyr sfkvadeaek 
181 ynlvlgafve gsagdsltfh nnqsfstkdq dndlntgnca vmfqgawwyk nchvsnlngr 
241 ylrgthgsfa nginwksgkg ynysykvsem kvrpa 
NP_001994. ficolin 1 precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing) 1 [Homo sapiens] [gi:8051584]
sig_peptide 1..27
mat_peptide 28..326 
40..108 /region_name="collagen-like domain" 
50..105 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
51..107 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
52..106 /region_name="Collagen triple helix repeat (20 copies)" /note="Collagen" /db_xref="CDD:pfam01391"
115..326 /region_name="FBG domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology" 115..326 /region_name="Fibrinogen-related domains (FReDs)" /note="FBG" /db_xref="CDD:smart00186" 
115..325 /region_name="Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain" /note="fibrinogen_C" /db_xref="CDD:pfam00147" variation 315 /db_xref="dbSNP:1128428" variation 316 /db_xref="dbSNP:1128429" variation 317 /db_xref="dbSNP:1128430" 
1 melsgatmar glavllvlfl hiknlpaqaa dtcpevkvvg legsdkltil rgcpglpgap 
61 gpkgeagvig ergerglpga pgkagpvgpk gdrgekgmrg ekgdagqsqs catgprnckd 
121 lldrgyflsg whtiylpdcr pltvlcdmdt dgggwtvfqr rmdgsvdfyr dwaaykqgfg 
181 sqlgefwlgn dnihaltaqg sselrvdlvd fegnhqfaky ksfkvadeae kyklvlgafv 
241 ggsagnsltg hnnnffstkd qdndvsssnc aekfqgawwy adchasnlng lylmgphesy 
301 anginwsaak gykysykvse mkvrpa 
NP_004099. ficolin 2 isoform a precursor; ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2 (hucolin); ficolin (collagen/fibrinogen domain-containing lectin) 2; hucolin [Homo sapiens] [gi:4758348]
sig_peptide 1..25
mat_peptide 26..313
39..95 /region_name="collagen-like domain"
98..313 /region_name="FBG domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology" 102..313 /region_name="Fibrinogen-related domains (FReDs)" /note="FBG" /db_xref="CDD:smart00186"
102..312 /region_name="Fibrinogen beta and gamma chains, C-terminal globular domain" /note="fibrinogen_C" /db_xref="CDD:pfam00147
1 meldravgvl gaatlllsfl gmawalqaad tcpevkmvgl egsdkltilr gcpglpgapg 
61 dkgeagtngk rgergppgpp gkagppgpng apgepqpclt gprtckdlld rghflsgwht 
121 iylpdcrplt vlcdmdtdgg gwtvfqrrvd gsvdfyrdwa tykqgfgsrl gefwlgndni 
181 haltaqgtse lrvdlvdfed nyqfakyrsf kvadeaekyn lvlgafvegs agdsltfhnn 
241 qsfstkdqdn dlntgncavm fqgawwyknc hvsnlngryl rgthgsfang inwksgkgyn 
301 ysykvsemkv rpa 
Q9WTS8. Ficolin 1 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 1) (Ficolin-A) (Ficolin A) (M-Ficolin) [gi:13124116]
1..22 /gene="FCN1" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
23..335 /gene="FCN1" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 1." 
50..88 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
152..298 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
271 /gene="FCN1" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 mwwpmlwafp vllclcssqa lgqesgacpd vkivglgaqd kvaviqscps fpgppgpkge 
61 pgspagrger glqgspgkmg ppgskgepgt mgppgvkgek gergtasplg qkelgdalcr 
121 rgprsckdll trgifltgwy tiylpdcrpl tvlcdmdvdg ggwtvfqrrv dgsinfyrdw 
181 dsykrgfgnl gtefwlgndy lhlltangnq elrvdlrefq gqtsfakyss fqvsgeqeky 
241 kltlgqfleg tagdsltkhn nmafsthdqd ndtnggknca alfhgawwyh dchqsnlngr 
301 ylpgshesya dginwlsgrg hrysykvaem kiras 
Q15485. Ficolin 2 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 2) (Ficolin-B) (Ficolin B) (Serum lectin P35) (EBP-37) (Hucolin) (L-Ficolin) [gi:13124203]
1..25 /gene="FCN2" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
26..313 /gene="FCN2" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 2." 
54..92 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
131..277 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
240 /gene="FCN2" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
300 /gene="FCN2" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 meldravgvl gaatlllsfl gmawalqaad tcpevkmvgl egsdkltilr gcpglpgapg 
61 dkgeagtngk rgergppgpp gkagppgpng apgepqpclt gprtckdlld rghflsgwht 
121 iylpdcrplt vlcdmdtdgg gwtvfqrrvd gsvdfyrdwa tykqgfgsrl gefwlgndni 
181 haltaqgtse lrvdlvdfed nyqfakyrsf kvadeaekyn lvlgafvegs agdsltfhnn 
241 qsfstkdqdn dlntgncavm fqgawwyknc hvsnlngryl rgthgsfang inwksgkgyn 
301 ysykvsemkv rpa 
O70497. Ficolin 2 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 2) (Ficolin-B) (Ficolin B) (Serum lectin P35) (EBP-37) (Hucolin) [gi:13124181]
<1..15 /gene="FCN2" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
16..>306 /gene="FCN2" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 2." 
41..79 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
130..276 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
299 /gene="FCN2" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 lgsaalfvlt ltvhaagtcp elkvldlegy kqltilqgcp glpgaagpkg eagakgdrge 
61 sglpgipgke gptgpkgnqg ekgirgekgd sgpsqscatg prtckelltq ghfltgwyti 
121 ylpdcrpmtv lcdmdtdggg wtvfqrrldg svdffrdwts ykrgfgsqlg efwlgndnih 
181 alttqgtsel rvdlsdfegk hdfakyssfq iqgeaekykl ilgnflggga gdsltphnnr 
241 lfstkdqdnd gstsscamgy hgawwysqch tsnlnglylr gphksyangv nwkswrgyny 
301 sckvse 
O70165. Ficolin 1 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 1) (Ficolin-A) (Ficolin A) (M-Ficolin) [gi:13124179]
1..22 /gene="FCN1" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
23..334 /gene="FCN1" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 1." 
50..88 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
152..298 /gene="FCN1" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
261 /gene="FCN1" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 mqwptlwafs gllclcpsqa lgqergacpd vkvvglgaqd kvvviqscpg fpgppgpkge 
61 pgspagrger gfqgspgkmg pagskgepgt mgppgvkgek gdtgaapslg ekelgdtlcq 
121 rgprsckdll trgifltgwy tihlpdcrpl tvlcdmdvdg ggwtvfqrrv dgsidffrdw 
181 dsykrgfgnl gtefwlgndy lhlltangnq elrvdlqdfq gkgsyakyss fqvseeqeky 
241 kltlgqfleg tagdsltkhn nmsftthdqd ndansmncaa lfhgawwyhn chqsnlngry 
301 lsgshesyad ginwgtgqgh hysykvaemk iras 
P57756. Ficolin 2 precursor (Collagen/fibrinogen domain-containing protein 2) (Ficolin-B) (Ficolin B) (Serum lectin P35) (EBP-37) (Hucolin) [gi:13124114]
1..22 /gene="FCN2" /region_name="Signal" /note="POTENTIAL."
23..319 /gene="FCN2" /region_name="Mature chain" /note="FICOLIN 2." 
48..86 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="COLLAGEN-LIKE." 
137..283 /gene="FCN2" /region_name="Domain" /note="FIBRINOGEN C-TERMINAL." 
306 /gene="FCN2" /site_type="glycosylation" /note="N-LINKED (GLCNAC...) (POTENTIAL)." 
1 mvlgsaalfv lslcvteltl haadtcpevk vldlegsnkl tilqgcpglp galgpkgeag 
61 akgdrgesgl pghpgkagpt gpkgdrgekg vrgekgdtgp sqscatgprt ckelltrgyf 
121 ltgwytiylp dcrpltvlcd mdtdgggwtv fqrridgtvd ffrdwtsykq gfgsqlgefw 
181 lgndnihalt tqgtnelrvd ladfdgnhdf akyssfqiqg eaekyklilg nflgggagds 
241 ltsqnnmlfs tkdqdndqgs sncavryhga wwysdchtsn lnglylrglh ksyangvnwk 
301 swkgynysyk vsemkvrli 
JC5980. ficolin-A precurs  mouse [gi:7513652]
1..21 /region_name="domain" /note="signal sequence"
50..64 /region_name="domain" /note="collagen-like" 
68..106 /region_name="domain" /note="collagen-like" 
123..334 /region_name="domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology #label FBG" 
1 mqwptlwafs gllclcpsqa lgqergacpd vkvvglgaqd kvvviqscpg fpgppgpkge 
61 pgspagrger gfqgspgkmg pagskgepgt mgppgvkgek gdtgaapslg ekelgdtlcq 
121 rgprsckdll trgifltgwy tihlpdcrpl tvlcdmdvdg ggwtvfqrrv dgsidffrdw 
181 dsykrgfgnl gtefwlgndy lhlltangnq elrvdlqdfq gkgsyakyss fqvseeqeky 
241 kltlgqfleg tagdsltkhn nmsftthdqd ndansmncaa lfhgawwyhn chqsnlngry 
301 lsgshesyad ginwgtgqgh hysykvaemk iras 
S61517. ficolin-1 precurs- human [gi:2135116]
1..326 /note="36K HLA-cross-reactive plasma protein; hucolin, 35K"
1..22 /region_name="domain" /note="signal sequence" 
52..108 /region_name="region" /note="collagen-like" 
115..326 /region_name="domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology #label FBG" 
305 /site_type="binding" /note="carbohydrate (Asn) (covalent)" 
1 melsgatmar glavllvlfl hiknlpaqaa dtcpevkvvg legsdkltil rgcpglpgap 
61 gpkgeagvig ergerglpga pgkagpvgpk gdrgekgmrg ekgdagqsqs catgprnckd 
121 lldrgyflsg whniylpdcr pltvlcdmdt dgggwtvfqr rmdgsvdfyr dwaaykqgfg 
181 sqlgefwlgn dnihaltaqg sselrvdlvd fegnhqfaky ksfkvadeae kyklvlgafv 
241 ggsagnsltg hnnnffstkd qdndvsssnc aekfqgawwy adchasslng lylmgphesy 
301 anginwsaak gykysykvse mkvrpa 
A47172. transforming growth factor-beta 1-binding protein homolog ficolin-alpha  pig [gi:423206]
112..323 /region_name="domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology #label FBG" 
1 mdtrgvaaam rplvllvafl ctaapaldtc pevkvvgleg sdklsilrgc pglpgaagpk 
61 geagasgpkg gqgppgapge pgppgpkgdr gekgepgpkg esweteqclt gprtckellt 
121 rghilsgwht iylpdcqplt vlcdmdtdgg gwtvfqrrsd gsvdfyrdwa aykrgfgsql 
181 gefwlgndhi haltaqgtne lrvdlvdfeg nhqfakyrsf qvadeaekym lvlgafvegn 
241 agdsltshnn slfttkdqdn dqyasncavl yqgawwynsc hvsnlngryl ggshgsfang 
301 vnwssgkgyn ysykvsemkf rat 
JC4942. ficolin-1 precursor  human [gi:2135117]
1..22 /region_name="domain" /note="signal sequence"
45..101 /region_name="region" /note="collagen-like" 
108..319 /region_name="domain" /note="fibrinogen beta/gamma homology #label FBG"
111..315 /region_name="region" /note="fibrinogen-like" 
298 /site_type="binding" /note="carbohydrate (Asn) (covalent)" 
1 marglavllv lflhiknlpa qaadtcpevk vvglegsdkl tilrgcpglp gapgpkgeag 
61 vigergergl pgapgkagpv gpkgdrgekg mrgekgdagq sqscatgprn ckdlldrgyf 
121 lsgwhtiylp dcrpltvlcd mdtdgggwtv fqrrmdgsvd fyrdwaaykq gfgsqlgefw 
181 lgndnihalt aqgsselrvd lvdfegnhqf akyksfkvad eaekyklvlg afvggsagns 
241 ltghnnnffs tkdqdndvss sncaekfqga wwyadchasn lnglylmgph esyanginws 
301 aakgykysyk vsemkvrpa 
AAF44911. symbol=BG:DS00929...[gi:7287873]
1 mkscffvlfl wtllfevgqs sphtcpsgsp ngihqlmlpe eepfqvtqck ttardwiviq 
61 rrldgsvnfn qswfsykdgf gdpngeffig lqklylmtre qphelfiqlk hgpgatvyah 
121 fddfqvdset elyklervgk ysgtagdslr yhinkrfstf drdndesskn caaehgggww 
181 fhsclsr
【００３５】
フィコリンは、好ましくは、上記と同一のフィコリンまたは該フィコリンの変異体もしくは相同体の少なくとも10、少なくとも12など、例えば、少なくとも15、少なくとも20など、例えば、少なくとも25、少なくとも30など、例えば、少なくとも35、少なくとも40など、例えば、少なくとも50の連続アミノ酸残基を含む。その変異体または相同体は、好ましくは、補体活性化タンパク質に対して少なくとも70%、80%など、例えば、90%、95%などの同一性がある。
【００３６】
以下、本発明を、実施例のように、MBLに関して記載する:
SARSは、MBLをこれらの個体に投与すると予防され得、ここで、該個体は10 ng/ml血清を超えるMBLレベルを有する。また、50 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体は、処置の必要があり得、例えば、そのような個体は、100 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体、および150 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体である。
【００３７】
また、SARSのMBL 処置は、関連の抗生物質、抗-ウイルス剤または抗-真菌剤と組み合わせて、MBLをこれらの個体に投与することにより行い得る。
【００３８】
特に、SARSにかかるリスクのある個体は、MBLによる予防的処置で利点となる。
【００３９】
一般的に、SARS 患者に接するすべての個体は、特定のMBLレベルとは関係なくMBLで処置されるべきである。というのは、SARSがMBL枯渇を生じ得、それ故、MBLレベルを最初に増加するMBL“ブースター”は、欠乏レベル未満のレベルにまでMBLが枯渇するリスクを減らし、これらの患者の免疫防御は、組み換えまたは天然血漿由来MBLの投与により増強され得るからである。特に、SARSは、10 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体にMBLを投与すると予防され得る。また、50 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体は処置をする必要があり得、その個体は例えば100 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体、および150 ng/ml 血清を超えるMBLレベルを有する個体である。
【００４０】
本願発明者はまた、特に、500 ng/ml未満の血清MBLレベルを有する個体は、MBL 処置で利点が得られる点を本明細書で示している。よって、特に、400 ng/ml未満のMBLレベルを有する個体には利点があり、そのような個体は、例えば、300 ng/ml未満のMBLレベルを有する個体、250 ng/ml未満のMBLレベルを有する個体、200 ng/ml未満のMBLレベルを有する個体である。
【００４１】
このため、好ましい実施態様では、本発明は、血清中、10-500 ng/mlの範囲、例えば、50-500 ng/mlの範囲のMBLレベルを有する個体のSARSの処置および／または予防処置用の医薬の製造のためのMBLの使用に関係する。
【００４２】
SARSを予防および／または処置するためにMBL 処置の必要のある個体の一群は、そのMBLレベルとは無関係の機能性MBLレベルの低い個体である。これは以下の事実によるものである。MBLの幾つかの変異ゆえ、MBL サブユニットおよびそのオリゴマーは血清中で発現するが、その機能性は低いということが判った。MBLの機能性または機能活性は、補体系を活性化するMBL/MASP複合体を形成するその能力により評価され得る。C4がMBL/MASPにより切断されると、活性化チオール-エステルがさらされ、C4は、求核基近辺に共有結合する。このため、C4bの本質的部分は、被覆化プラスチックウェルに結合し、抗-C4 抗体により検出され得る。
【００４３】
MBL 機能活性用の定量的TRIFMAは以下の工程により構成する：1) 100 ml 緩衝液中の1 mg マンナンでマイクロタイターウェルを被覆すること; 2) Tween-20でブロックすること; 3) 試験サンプル、例えば、希釈MBL調製物を適用すること; 4) MBL欠失血清を適用すること(これにより、MBL/MASP複合体が形成される); 代わりになるものとして、MBLおよびMBL欠失血清は適用前にマイクロタイターウェルを用いて混合され得る; 5) 精製補体因子 C4を5 mg/mlで適用すること; 6) １時間、37℃でインキュベートすること; 7) Eu-標識化抗-C4 抗体を適用すること; 8) 促進溶液を適用すること; および9) 時間分解フルオロメトリーによりEuを読み取ること。各工程の間、プレートは室温にてインキュベートし、洗浄する。但し、工程8と9との間は除く。
【００４４】
ELISAによる評価は同様に行い得る。例えば、工程 7においてビオチン-標識化抗-C4を適用すること; 8) アルカリホスファターゼ-標識化アビジンを適用すること; 9) 基質を適用すること; および10) 色密度(colour intensity)を読み取ることによる。
【００４５】
機能性は、MBLの比活性度として表し得、例えば、1ユニットは ng MBLあたりのMBL活性である。非-機能性MBLは、50 %未満の血漿 MBL 比活性度を有するMBLとして定義され得、例えば、25 %未満の血漿 MBL 比活性度であり、ここで、その血漿 MBLはMBL変異を全く生じていない個体から精製する。特に、参照血漿 MBLは血漿プール LJ 6.57 28/04/97である。
【００４６】
このため、本発明はまた、MBL発現および／または非-機能性MBL発現を減少する、MBL 遺伝子における変異を有する個体におけるSARSの予防および／または処置に関連する。
【００４７】
特に、MBL 遺伝子におけるその変異は、アミノ酸番号52(MBLのリーダーペプチドを含むナンバリング)においてアルギニンからシステインへ、アミノ酸番号54においてグリシンからアスパラギン酸へ、またはアミノ酸番号75においてグリシンからグルタミン酸への変化を生じ得る。
【００４８】
また、MBL 遺伝子のプロモーター領域における変異はMBLレベルを低下し得る。特に、-221位の変異はMBLの発現に影響する。
【００４９】
MBL 配列は、swiss.protに、受け入れ番号:11226で見られ得る。
MBL 医薬の製造に使用されるMBL 組成物は、利用可能な任意のMBL源から作成され得る。該MBL源は天然MBLであり得、それにより、そのMBLは天然宿主生体で作成され、これは、MBLがMBLを正常に発現する細胞により作成されることを意味する。MBL 組成物を作成する１つの通常方法は、ヒトの体液、例えば、血清または血漿からのMBLの抽出によるが、MBLはまた、肝細胞の培養物から回収され得る。
【００５０】
他の態様では、MBL オリゴマーは、天然ではMBL ポリペプチドを発現しない宿主生体により、例えば、組み換え技術により、作成される。
【００５１】
第一の実施態様では、MBL源は血清であり得、その血清から、MBL 組成物は、適当な精製方法により、例えば、炭水化物-誘導体化マトリクス、例えばマンノースまたはマンナン結合マトリクスを用いる親和性クロマトグラフィーにより、血清、血漿、乳汁、初乳などの精製により得られる。その方法は、WO99/64453に考察されているが、ここで、MBL源から感染体(infectious agents)を除くため、精製過程の後にウイルス-除去工程を行う。体液(body liquids)から精製するタンパク質に伴う主要な問題の１つに、所望のタンパク質と共に感染体が入るというリスクがあるからである。WO99/64453は引用により本明細書に含める。
【００５２】
MBL 医薬の製造に使用するMBL 組成物は、好ましくは、血清中のMBLの粒度分布と実質的に同一な粒度分布を有するMBL オリゴマーを含む。例えば、粒度分布プロファイルは、血清中のMBLの粒度分布プロファイルと少なくとも50 %同一である。同一が意味するのは、少なくとも50 %のオリゴマーが、SDS-PAGEおよび／またはウエスタンブロットで分析すると、200 kDaよりも明かに大きい分子量を有することである。
【００５３】
より好ましい実施態様では、粒度分布プロファイルは、血清中のMBLの粒度分布プロファイルと少なくとも75 %同一であり、例えば、血清中のMBLの粒度分布プロファイルと少なくとも90 %同一であり、より好ましくは、血清中のMBLの粒度分布プロファイルと少なくとも95 %同一である。
【００５４】
最初に他の粒度分布プロファイルを有するMBL源から精製するとき、好ましいのは、MBL源からの精製に使用する親和性クロマトグラフィーは、明かに200 kDaよりも高い分子量を有するオリゴマーの精製に好都合である点である。これは、MBLのサブユニットおよび／またはダイマーに対し実質的に親和性を有さない炭水化物-誘導化マトリックスを用いることにより得られる。好ましくは、炭水化物-誘導化マトリックスは、実質的にテトラマー、ペンタマーおよび／またはヘキサマー組み換えMBLのみに対し親和性を有する。
【００５５】
マトリックスは、任意の炭水化物または炭水化物混合物で誘導され得、それにMBLが結合し、より大きなオリゴマーのMBLの結合には都合がよい。その炭水化物-誘導化マトリックスは、好ましくは、ヘキソース-誘導化マトリックス、例えば、マンノース-またはN-アセチル-グルコサミン誘導化マトリックス、例えば、最も好ましくは、マンノース-誘導化マトリックスである。
【００５６】
炭水化物-誘導化マトリックスの選択性は、確実に、マトリックス自体、すなわち、非-誘導化マトリックスなどがMBL ポリペプチドに対し実質的に非親和性、特に、MBLトリマーまたはより小さいオリゴマーに対し非親和性となることにより得られる。これは、そのようなマトリックスが炭水化物-フリー(free)であるとき、確実となり得る。特に、該マトリックスは、セファロースなどを全く含んでいない。該マトリックスは、ポリマー物質、Fractogel(登録商標)TSKビーズなどを含む非-炭水化物からなることが好ましい。
該マトリックスは、クロマトグラフィーに適当な任意の形態、最も適当には、ビーズの形態、例えば、プラスチックビーズであり得る。
【００５７】
MBL源の適用後、カラムを、好ましくは、より大きなオリゴマーのMBLは溶出せずにタンパク質を溶出する組成、pHおよびイオン強度を有する非-変性緩衝液を用いることにより、洗浄する。そのような緩衝液はTBSであり得る。MBLの溶出は、大きなオリゴマーのMBLを効果的に溶出できる選択的脱着剤、TBSに含まれる脱着剤、例えばEDTA (例えば、 5 mM EDTA)またはマンノース(例えば、 50 mM マンノース)などで行う。そしてMBL オリゴマーを回収する。その精製方法は、同時係属国際特許出願番号WO 00/70043に記載されている。
【００５８】
好ましい態様では、臨床品質のMBL 組成物が、組み換え技術により作成されるMBL源を使用することにより得られる。ここで、該MBL源は、MBL産生細胞を培養する培養培地である。
【００５９】
故に、本発明は、組み換えマンナン結合レクチン(MBL)を産生する方法であって、以下の工程を含む該方法により産生したMBLを含む: 
-MBL ポリペプチドまたはその機能的等価物をコードするDNA 配列を含む遺伝子発現コンストラクトを作成すること、
-宿主細胞培養物を該コンストラクトで形質転換すること、
-該宿主細胞培養物を培養し、それにより、発現および培養培地中へのポリペプチドの分泌が生ずること、そして、
-ヒト組み換えMBLを含む培養培地を得ること。
【００６０】
次いで、ヒト組み換えMBLポリペプチドを含む該培養培地は、MBLの精製のために、上記のように処理され得る。
【００６１】
MBL ポリペプチドは、好ましくは、哺乳類 MBL ポリペプチド、例えば、より好ましくは、ヒト MBL ポリペプチドである。その遺伝子発現コンストラクトは、当業者に周知の通常の方法により作成され得る。例えば、米国特許番号5,270,199に記載されている。
【００６２】
他の実施態様では、その遺伝子発現コンストラクトは、WO 00/70043に記載のように調製される。
【００６３】
発現は、好ましくは、例えば、哺乳類細胞で行われ、本発明の調製は、MBL 遺伝子由来のイントロン配列および少なくとも１つのエキソン配列を含む発現ベクターの使用により行う。発現系としてのトランスジェニック動物に関して、この用語は、文脈上、ヒトMBL遺伝子またはそのフラグメントもしくは模倣体を含みかつ発現するように遺伝学的に修飾された動物をいう。
【００６４】
該精製方法に加えて、遺伝子発現コンストラクトおよび宿主細胞はまた、より大きなオリゴマーの作成に好都合であることが好ましく、それは、ヒト MBL 遺伝子またはその機能的等価物由来の少なくとも１つのイントロン配列を含む遺伝子発現コンストラクトを用いることにより可能となることが判った。
哺乳類(malian)細胞および昆虫由来細胞。
【００６５】
それ故、MBL 組成物は、個体におけるSARSの予防および／または処置に使用し得る。ここで、微生物種は、真菌、酵母、原生動物、寄生虫および／または細菌である。
【００６６】
医薬は、親和性クロマトグラフィーなどから得られる溶出液を用いることにより作成され得る。しかし、該溶出液は、使用前に更なる精製工程に供されることが好ましい。
【００６７】
MBL オリゴマーに加えて、医薬は、医薬的に許容される担体物質および／またはビヒクルを含み得る。特に、安定化剤が添加され、MBL タンパク質を安定化し得る。該安定化剤は、糖アルコール、サッカライド、タンパク質および／またはアミノ酸であり得る。安定化剤の例は、マルトースまたはアルブミンであり得る。
【００６８】
他の通常の添加物は、例えば、投与形態に依存して医薬に加えられ得る。１つの実施態様では、該医薬は注射に適当な形態である。通常の担体物質、例えば、等張性の生理食塩水が使用され得る。
【００６９】
他の実施態様では、医薬は、肺(pulmonal)投与に適当な形態、例えば、吸入に適当な粉末の形態、または局所適用に適当なクリームもしくは液体の形態である。
【００７０】
投与の経路は任意の適当な経路、例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与または皮内投与であり得る。肺または局所投与も本発明で意図される。
【００７１】
通常、用量あたり1-100 mg、例えば2-10 mg、殆どの場合、処置する個体に応じて用量あたり5-10 mgを投与する。例えば、約 0.1 mg/体重kgを投与する。
【００７２】
医薬の製造のためのMBL 組成物の使用はまた、更に、キットパーツ(kit-of-parts)を得るための他の医薬、例えば、抗-真菌性、抗-酵母性、抗-細菌性および／または抗-ウイルス性の医薬の製造を含み得る。
【００７３】
抗-ウイルス性医薬は、ウイルスを弱毒化および／または排除(elimination)できる医薬であり得る。
【００７４】
本発明はまた、SARSにかかった個体のリスクについての予後(prognostic)マーカーとしてMBLレベルの測定に使用し、それにより、処置の必要性を示す態様に関係する。特に、500 ng/ml未満のMBLレベルは、MBLによる処置の指標となる予後マーカーである。
【００７５】
このため、本発明はまた、個体においてSARSを予防および／または処置するためのMBL 組成物を使用する方法であって、以下の工程を含む該方法に関係する:
i)個体におけるMBLの血清レベルを測定すること、
ii)個体における重要な臨床的SARSの発生の可能性を評価すること、および所望により、
MBL 組成物を該個体に投与すること。
【００７６】
MBLレベルは、血清または血漿において測定し、時間分解免疫蛍光アッセイ(TRIFMA)、ELISA、RIAまたは比濁分析により測定し得る。
【００７７】
また、MBLレベルは、MBLレベルを減少するMBLの変異と関連して、上記のようなMBL 遺伝子の遺伝子型の分析から推定され得る。
【００７８】
本発明は、以下の実施例において解説される。
【実施例】
【００７９】
実施例 1
SARSを患う患者におけるMBL 血清レベル
患者は、上記のような臨床的に顕著なSARSを示す個体から選択する。患者は、患者のデータベースの過去のコンピューターサーチにより特定される。
【００８０】
処置に入る前に、血液を、EDTA(最終濃度約 10 mM)を含む真空ガラス管中に採取する。血漿をアリコートとし、アッセイまで-80℃で保存する。血漿サンプルを、同様に、健常者である血液ドナーから得る。その患者は、血液サンプリング時には感染してない。
【００８１】
MBLの濃度を、時間分解免疫蛍光アッセイ(TRIFMA)により測定する。マイクロタイターウェル(fluoroNunc, Nunc, Kamstrup, Denmark)を、室温にて一夜インキュベーションすることにより抗体で被覆する。そのインキュベーションは、100 μl PBS (0.14 M NaCl、10 mM ホスフェート、pH 7.4)中の500 ng 抗-ヒト MBL 抗体 (Mab 131-1, Statens Serum Institut, Copenhagen, Denmark)を伴い行う。Tween-含有緩衝液(TBS、0.14 M NaCl、10 mM トリス/HCl、7.5 mM NaN3、pH 7.4、0.05% Tween 20を伴う)による洗浄後、試験サンプル(血漿 1/20)およびキャリブレーター希釈物を、0.5 Mまでの更なるNaClおよび10 mM EDTAを有するTBS/Tweenに加える。
【００８２】
4℃での一夜のインキュベーションおよび洗浄後、開発されているユーロピウム-標識化抗体(Eu-含有キレート、イソチオシアナトベンゾイル-ジエチレン-トリアミン-テトラ酢酸により標識した12.5 ng Mab 131-1、製造者Wallac, Turku, Finlandによる)を、25 μM EDTAを有するTBS/Tweenに加える。
【００８３】
２時間のインキュベーションおよび洗浄後、蛍光促進溶液を添加し(Wallac)、そのプレートを時間分解フルオロメトリー(Delfia 1232, Wallac)で読み取る。較正曲線は、アリコートとされ-80℃で保存されている１つの血漿の希釈物を用い作成する。
【００８４】
上記概略の方法に基づき、SARS患者と非-SARS患者とのMBL 血清レベルを比較する。
【００８５】
実施例 2
SARS-関連コロナウイルス(SARS-CoV) 伝染力におけるMBLの効果
本実施例において、以下の物質を用いた:
HBSS = ハンクスバランス塩溶液
PBS = リン酸緩衝性生理食塩水
【００８６】
ウイルス調製物および細胞
プロトタイプSARS-CoV HKU39849は、胎児アカゲザル腎臓細胞(FRhK-4)(ATCC)で増殖した。該細胞は、10% 胎児ウシ血清を有するMEM培地中で増殖させた。
【００８７】
ウイルス力価(TCID50)を、FRhK-4 細胞の段階的な10倍希釈物の力価測定(titration)により測定した。
【００８８】
SARS-CoV 株に対するMBLの結合評価
組み換えヒト MBL (Natimmune A/S)を用いた。
【００８９】
SARS-CoV株に対するMBLの結合を、ELISAで試験した。ここで、PBSで希釈したウイルス (103 から105 TCID50)の懸濁液を、96-ウェルプレートにおいて4℃で一夜インキュベートし、その後、洗浄およびMBLとともにインキュベーションした。
【００９０】
MBLの添加前に、プレートを、PBS中のBSAおよびゼラチンでブロックし、HBSS+0.05% Tween20で洗浄した。
【００９１】
次いで、Ca2+を含むHBSSで希釈したMBL (0から10 μg/mL)を添加し、ウイルスと共に2 時間インキュベートし得、その後、洗浄で非結合レクチンを除き得る(HBSSで三回)。対照実験を、MBL含有ウェルの幾つかにEDTAまたはマンナンを添加することにより行った。
【００９２】
結合MBLの存在は、HBSS/ Ca2+中に希釈したビオチン化モノクローナル抗-MBL(HYB131-01, Antibody shop)により検出した。ビオチンは、セイヨウワサビペルオキシダーゼおよびテトラメチルベンジジ('TMB')基質に結合したストレプトアビジンで検出した。その反応は、0.5 M H2SO4で停止した。吸光度は、ELISAリーダーで測定した。各個々のデータ取得(data point)は三重に行った。ウイルスを含まないウェルへのMBLのバックグラウンド結合は最小であった。
【００９３】
該実験は、SARS-CoVに対するMBLの特異的結合を示す。
【００９４】
SARS-CoV伝染力のアッセイ
胎児アカゲザル腎臓細胞系(FRhK-4)単層を、96-ウェルプレート中に作成し、コンフルエンスにまで増殖させた。次いで、これらの層を、MBL(0から10 μg/mL)で2 時間、37 ℃で事前に処理したSARS-CoV (100 TCID50)で感染させた。2-3日後、該単層を、光学顕微鏡でサイトファティック効果(cythophatic effect)(CPE)について試験した。
【００９５】
該実験は、SARS-CoVに対する伝染力のMBL 濃度依存阻害を示した。
【００９６】
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