(57)【要約】【課題】本発明の主な目的は、肝保護用相乗的処方物を開発することである。【解決手段】トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で含む相乗的処方物に関し、肝保護に有用で；さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む肝保護に有用な相乗的処方物を調製する製法に関し、前記製法は、ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕し、さらに１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で前記微細粒子を混合することおよび前記混合物を粉砕して処方物を得る段階を含み、さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法に関し、前記方法は、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で含み肝保護に有用な相乗的処方物。
【請求項２】
ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：１（ｗ／ｗ）である請求項１記載の相乗的処方物。
【請求項３】
前記処方物の構成成分がハーブであるかまたは合成であることができる請求項１記載の相乗的処方物。
【請求項４】
前記処方物が、４０を超える治療インデックスを示す請求項１記載の相乗的処方物。
【請求項５】
肝保護に有用なトランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を調製する製法で、前記製法は、
ａ．ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕すること、
ｂ．前記微細粒子を１：７乃至７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で混合すること、および
ｃ．前記混合物を粉砕して処方物を得ること、
の段階を含む。
【請求項６】
前記粒子を約２０分間約１００−１２０回転／分で粉砕することを含む請求項５記載の製法。
【請求項７】
前記混合物を約１５分間約７０−８０回転／分で粉砕することを含む請求項５記載の製法。
【請求項８】
前記処方物が、約１００メッシュ未満のメッシュサイズを示す請求項５記載の製法。
【請求項９】
前記処方物の構成成分がハーブであるか合成である請求項５記載の製法。
【請求項１０】
トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法で、前記方法が、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。
【請求項１１】
ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：７乃至７：１（ｗ／ｗ）である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：１（ｗ／ｗ）である請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
前記処方物がＰ．Ｏ．（経口）経路で投与される請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
前記処方物がｔ−ＴＣＡおよびＡＰそれぞれに比べて、優れた肝保護性を有する請求項１０記載の方法。
【請求項１５】
投与量が５乃至７５ｍｇ／ｋｇ体重の間である請求項１０記載の方法。
【請求項１６】
投与量が約５０ｍｇ／ｋｇである請求項１０記載の方法。
【請求項１７】
前記処方物が安全で、無毒で、副作用がなく、４０を超える治療インデックスを有する請求項１０記載の方法。
【請求項１８】
前記処方物の相乗活性が、活性パラメータの広いスペクトルで示される請求項１０記載の方法。
【請求項１９】
前記処方物が組織再生を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２０】
前記処方物が小葉中心肝細胞壊死に対して肝保護を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２１】
前記処方物が、架橋壊死に対して保護を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２２】
前記処方物がスポット壊死に対して保護を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２３】
前記処方物が小葉ジスアレイに対して保護を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２４】
前記処方物が肝細胞気球状変性に対して保護を示す請求項１０記載の方法。
【請求項２５】
前記処方物が血清ＧＰＴの高いレベルを約８２％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項２６】
前記処方物が血清ＧＯＴの異常に高いレベルを約７２％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項２７】
前記処方物が、血清ＬＤＨの異常に高いレベルを約８３％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項２８】
前記処方物が、血清ＡＬＰの異常に高いレベルを約８５％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項２９】
前記処方物が、血清ＴＧの異常に高いレベルを約６２％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項３０】
前記処方物が、血清アルブミンの異常に高いレベルを約９０％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項３１】
前記処方物が、脂質パーオキシダーゼ（ＬＰ）の異常に高いレベルを約７８％低下させる請求項１０記載の方法。
【請求項３２】
前記処方物が、還元グルタチオン（ＧＳＨ）の異常に低いレベルを約７５％増加させる請求項１０記載の方法。
【請求項３３】
前記処方物が、たんぱく質の異常に低いレベルを約５８％増加させる請求項１０記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で含む相乗的処方物に関し、肝保護に有用で；さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む肝保護に有用な相乗的処方物を調製する製法に関し、前記製法は、ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕し、さらに１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で前記微細粒子を混合することおよび前記混合物を粉砕して処方物を得る段階を含み、さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法に関し、前記方法は、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。
【背景技術】
【０００２】
文献調査によれば、初期報告が例えばＳｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｓｉｓ（シモンズシアチネシス）種子のようなホホバオイル中にトランス−テトラコス−１５−エン酸が存在している（０．６２−１．１１％）ことを示していることが明らかとなり、この酸のシス異性体がＭｉｃｒｏｕｌａ  ｓｉｋｋｉｍｅｎｓｉｓ（ミクロウラシキメンシス）の種子オイルの脂肪酸類で報告されている（１．２％）［非特許文献１、非特許文献２］。これらの報告では、前記構成成分類の単離については言及しておらず、含量推定は、ＧＬＣデータに基づいている。Ｉｎｄｉｇｏｆｅｒａ  ｔｉｎｃｔｏｒｉａ（インジゴフェラチンクトリア）は、癲癇、神経疾患および気管支炎で地方固有の医療システムで使用されてきた［非特許文献３］。前記植物はまた、創傷、昔からあった潰瘍、および痔に軟膏としても使用されている［非特許文献４］。
【０００３】
前記植物類の葉は、肝治癒に使用されてきた［非特許文献５］。前記植物の葉の抽出物は、ウサギ、ラットおよびマウスにおいてＲＲＬ−ＪａｍｍｕにおいてＣＣｌ4誘発肝傷害に顕著な肝保護性効果を示す［非特許文献６、非特許文献７］。前記植物抽出物とさらに生物活性を指標にした分画の肝保護効果についてのＲＲＬ  Ｊａｍｍｕにおける最近の研究も報告されており、その結果、活性主成分としてのトランス−テトラコス−１５−エン酸が同定された。［特許文献１，非特許文献８］。トランス−テトラコス−１５−エン酸が合成され、市販のシリマリンを参考物質として用い肝毒物としてのガラクトサミン、パラセタモールおよびＣＣｌ4に対して用量関連肝保護効果を有することがわかった［特許文献２］。
【０００４】
アンドログラホライドは主要な２環性ジテルペノイドラクトンで、ヘキソバルビタールまたはフェノバルビタールの睡眠時間を短くするなど複数の薬理活性を有していることが明らかとなり［非特許文献９、非特許文献１０］。アンドログラホライドは植物Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（アンドログラフィスパニキュラタ）から単離された活性構成成分であり、単離したラット肝細胞のエクスビボ調製物におけるパラセタモール誘発毒性に対して有意な用量依存性保護活性を示した。
【０００５】
アンドログラホライドは、標準的な肝保護剤であるシリマリンよりもより強力であることがわかっている［非特許文献１１］。アンドログラフィス処置対象における風邪の頻度は、対照群の６２％に比べて３０％であった。［非特許文献１２］。５００名を超える対象によるコントロール試験で、アンドログラフィスパニキュラタが風邪と鼻炎の罹患率およびひどさを低下させ症状の持続期間を短くさせる点で有効であることを示している［非特許文献１３、非特許文献１４］。
【０００６】
アンドログラフィスは免疫ブースターであり、それがマウスにおいて数種の免疫パラメータを刺激するという事実によって裏付けられた可能性である。結果は、抽出物が精製されたアンドログラホライドよりも強力であることを示唆している［非特許文献１５］。研究から、アンドログラホライド類が、直接的抗ウイルス効果と直接的抗寄生体効果を有しているが抗菌効果は有していないことが示唆された。［非特許文献１６、非特許文献１７、非特許文献１８］。アンドログラホライドは動物モデルにおいて、血管形成術後の再梗塞頻度と重篤性を防止する点で魚油の２倍も有効であることが示された。［非特許文献１９］。
【０００７】
前記機構はアンドログラフィスの抗血清形成効果であろうが、それは、トロンボキサンと血小板凝集低下の結果として起こり得る［非特許文献２０］。アンドログラフィスパニキュラタはまた、肝保護物質であることが明らかとなっている。アンドログラフィスは、両者ともに極めて毒性の高い化合物類であるＣＣｌ4またはｔｅｒｔ−ブチルハイドロパーオキサイドで処置したマウスにおいて肝保護性である。アンドログラフィスはまた、パラセタモール毒性に対しておよびパラセタモールおよびガラクトサミンに対して肝臓を保護する点においてシルマリンよりも優れていることがわかった。［非特許文献２１、非特許文献２２］。［非特許文献２３］。
【０００８】
アンドログラホライド類は、ヒトで極めて生体利用可能性が高い［非特許文献２４］。標識アンドログラホライドは、全身に容易に分布する。７２時間後、アンドログラホライド類のおよそ９０％がほとんど尿排泄によって排泄される［非特許文献２５］。高用量のアンドログラフィスパニキュラタを動物とヒトに投与した中国医学文献報告がある。
【０００９】
［非特許文献２６］。ヒトでは長期全身研究は行なわれていないが、推奨投与量のアンドログラフィスを投与された対象で肝または腎機能、血球数または血液化学に全く変化がなかった［非特許文献２７］。Ｂａｒｉｌｌａによれば、ヒトに高レベルを投与した［非特許文献２８］。アンドログラフィスは、雄性および雌性の両者において実験動物で明らかな抗妊娠効果を有している。雄性ラットは、２０ｍｇ／日摂取により不妊となり、雌性ラットは、より高用量で不妊となる。［非特許文献２９、非特許文献３０、非特許文献３１］。
【特許文献１】３７９／ＤＥＬ／２０００
【特許文献２】３６／ＤＥＬ／２０００
【非特許文献１】Ｗａｎｇ，Ｈｕｉｙｉｎｇ；Ｙｕ，Ｘｕｅｊｉａｎ；ｙｉ，ＹｕａｎｆｅｎおよびＤｉｎｇ，Ｊｉｎｇｋａｉ、Ｙｕｎｎａｎ  Ｚｈｉｗｕ  Ｙａｎｊｉｕ  １９８９、１１（Ｉ）、６０−４（Ｃｈ）
【非特許文献２】Ｌｉ，Ｊｉｎｇｍｉｎ；Ｗａｎｇ  Ｊｉｎｇｐｉｎ，Ｙｕ，Ｆｅｎｇｌａｎ．Ｚｈｉｗｕ  Ｘｕｅｂａｏ，１９８９，３１（１），５０−３（Ｃｈ．）
【非特許文献３】Ｗｅａｌｔｈ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａ，ｖｏｌ．５、（Ｃｏｕｎｃｉｌ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ａｎｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｎｅｗ  Ｄｅｌｈｉ）１８２，（１９５９）
【非特許文献４】Ｒ．Ｎ．Ｃｈｏｐｒａ，Ｓ．Ｌ．Ｎａｙａｒ，およびＩ．Ｃ．Ｃｈｏｐｒａ，Ｇｌｏｓｓａｒｙ  ｏｆ  Ｉｎｄｉａｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ｐｌａｎｔｓ，１４１（１９５６）
【非特許文献５】Ｎａｄｋａｒｎｉ，Ｋ．Ｍ．，Ｉｎｄｉａｎ  Ｍａｔｅｒｉａ  Ｍｅｄｉｃａ，Ｖｏｌ．１（Ｐｏｐｕｌａｒ  Ｂｏｏｋ  Ｄｅｐｏｔ，Ｂｏｍｂａｙ），６８０（１９５４）
【非特許文献６】Ｋ．Ｋ．Ａｎａｎｄ，Ｄｅｗａｎ  Ｃｈａｎｄ，Ｂ．Ｊ．Ｒａｙ，Ｇｈａｔａｋ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｅｘｐｌ．Ｂｉｏｌ．，１７，６８５，（１９７９）
【非特許文献７】Ｋ．Ｋ．Ａｎａｎｄ，Ｄｅｗａｎ  Ｃｈａｎｄ，Ｂ．Ｊ．Ｒａｙ，Ｇｈａｔａｋ  ａｎｄ  Ｒ．Ｋ．Ａｒｙａ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｅｘｐｌ．Ｂｉｏｌ．，１９，２９８（１９８１）
【非特許文献８】Ｂ．Ｓｉｎｇｈ，Ａ．Ｋ．Ｓａｘｅｎａ，Ｂ．Ｋ．Ｃｈａｎｄａｎ，Ｖ．Ｂｈａｒｄｗａｊ，Ｖ．Ｎ．  Ｇｕｐｔａ  ａｎｄ  Ｏ．Ｐ．Ｓｕｒｉ，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｒｅｓ．，１５，２９４−２９７，（２００１）
【非特許文献９】Ｂ  Ｒ  Ｃｈａｕｄｈａｒｙ，Ｓ  Ｊ  Ｈａｇｕｅ，  ａｎｄ  Ｍ  Ｋ  Ｐｏｄｄａｒ；Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，５３，１３５−１４０（１９８７）
【非特許文献１０】Ｂ  Ｒｏｙ，Ｍ  Ｋ．  Ｐｏｄｄａｒ，Ｂ．Ｓｈｕｋｌａ，Ｐ  Ｋ  Ｓ  Ｖｉｓｅｎ，  Ｇ  Ｋ  Ｐａｔｎａｉｋ，ａｎｄ  Ｂ  Ｎ  Ｄｈａｗａｎ，Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，５８，１４６−１４９（１９９２）
【非特許文献１１】Ｐ．Ｋ．Ｖｉｓｅｎ，Ｂ  Ｓｈｕｋｌａ，Ｇ  Ｋ  Ｐａｔｎａｉｋ，Ｂ．Ｎ．Ｄｈａｗａｎ  Ｊ  Ｅｔｈａｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，４０（２）、１３１−１３６（１９９３）
【非特許文献１２】Ｄ．Ｄ．Ｃａｃｅｒｓ，Ｊ．Ｌ．Ｈａｎｃｋｅ，Ｒ．Ａ．Ｂｕｒｇｏｓ  ａｎｄ  Ｇ．Ｋ．Ｗｉｋｍａｎ，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ４（２）、１０１−１０４（１９９７）
【非特許文献１３】Ｊ  Ｍｅｌｃｈｉｏｒ、  Ｓ  Ｐａｌｍ  ａｎｄ  Ｇ．Ｗｉｋｍａｎ；Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，３（４）、３１５−３１８、（１９９６）
【非特許文献１４】Ｄ．Ｄ．Ｃａｃｅｒｅｓ，Ｊ．Ｌ．Ｈａｎｃｋｅ，Ｒ．Ａ．Ｂｕｒｇｏｓら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６（４）、２１７−２２３（１９９９）
【非特許文献１５】Ａ  Ｐｕｒｉ，Ｒ  Ｓａｘｅｎａ，Ｒ．Ｐ．Ｓａｘｅｎａら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．５６、９９５−９９９（１９９３）
【非特許文献１６】Ｒ  Ｓ  Ｃｈａｎｇ，Ｌ  Ｄｉｎｇ，  Ｇ．Ｃｈｅｍら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐｌ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１９７、５９−６６（１９９１）
【非特許文献１７】Ｒ．Ｋ．Ｒａｊ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，１９、（１）、（１９７５）
【非特許文献１８】Ａ  Ｌｅｅｌａｒａｓａｍｅｅ，Ｓ．Ｔｒａｋｕｌｓｏｍｂｏｏｎ，Ｎ．Ｓｉｔｔｉｓｏｍｗｏｎｇ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．Ｔｈａｌ，７３、２９９−３０４（１９９０）
【非特許文献１９】Ｄ．Ｗ．Ｗａｎｇ，Ｈ．Ｙ．Ｊｈａｏ，Ｊ．Ｔｏｎｇｊｉ，Ｍｅｄ．Ｕｎｉｖ．１３（４）、１９３−１９８（１９９３）
【非特許文献２０】Ｈｙ  ＺｈａｏおよびＷｙ．Ｆｅｎｇ  Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ．Ｊ（Ｅｎｇｌ．）１０４（９）、７７０−７７１（１９９１）
【非特許文献２１】Ａ．Ｋａｐｉｌ，Ｉ．Ｂ．Ｋｏｕｌ，Ｓ．Ｋ．Ｂａｎｅｒｊｅｅ  Ｂ．Ｄ．Ｇｕｐｔａ，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，４６（Ｉ）１８２−１８５、１９９３
【非特許文献２２】Ｐ．Ｋ．Ｖｉｓｅｎ，Ｂ．Ｓｈｕｋｌａ、Ｇ．Ｋ．Ｐａｔｎａｉｋ，Ｂ．Ｎ．Ｄｈａｗａｎ，Ｊ．Ｅｔｈａｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，４０（２）１３１−１３６、（１９９３）
【非特許文献２３】Ｓ．Ｓ．ＨａｎｄａおよびＡ．Ｓｈａｒｍａ，Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．９２，２８４−２９２、（１９９０）
【非特許文献２４】Ａ．Ｐａｎｎｏｓｓｉａｎら、Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，７（５）、３５１−３６４、（２０００）
【非特許文献２５】Ｗｕｘｉ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｕｓｈｏｗ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ，Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  ｓｉｎｉｃａ，１１、１９７９（ページ数は表示されていない）
【非特許文献２６】Ｆ．Ｓａｎｄｂｅｒｇ  Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ  Ｈｅｒｂａ  Ｃｈｕａｎｚｉｎｌｉａｎ  Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ（１９９４）
【非特許文献２７】Ｊ．Ｈａｎｃｋｅ，Ｒ．Ｂｕｒｇｏｓ，Ｄ．Ｃａｃｅｒｅｓ，Ｇ．Ｗｉｌｋｍａｎ、Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、９、５５９−５６２（１９９５）
【非特許文献２８】Ｊ．Ｂａｒｉｌｌａ，Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ．Ｋｅａｔｓ  ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、Ｌｏｓ  Ａｎｇｅｌｏｓ，ＣＡ  ＵＳＡ（１９９９）
【非特許文献２９】Ｍ．Ａｋｂａｒｓｈａ，Ｂ．Ｍａｎｉｖａｎｎａｎ、Ｈ．Ｋ．Ｓｈａｈｕｌら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．２８、４２１−４２６（１９９０）
【非特許文献３０】Ｍ．Ｓ．Ｚｏｈａ，Ａ．Ｈ．Ｂ．Ｈｕｓｓａｉｎ，Ｓ．Ａ．Ｒ．Ｃｈｏｕｄｈａｒｙ，Ｂａｎｇｌａｄｅｓｈ，Ｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｃｏｕｎｃｉｌ  Ｂｕｌｌ、１５、３４−３７（１９８９）
【非特許文献３１】Ｆ．Ｓａｎｄｂｅｒｇ，Ａｎｄｒｏｇｒａｐｈｉｓ  ｈｅｒｂａ  Ｃｈｕ  ａｎｘｉｎｌｉａｎ，Ａ  Ｒｅｖｉｅｗ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｔａｎｉｃａｌ  Ｃｏｕｎｃｉｌ，Ａｕｓｔｉｎ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ（１９９４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の主な目的は、肝保護用相乗的処方物を開発することである。
本発明の別の目的は、肝保護用相乗的処方物の調製製法を開発することである。
本発明のさらに別の目的は、肝保護のため対象を治療する方法を開発することである。
本発明のさらにもうひとつの目的は、安全かつ効率的肝保護処方物を開発することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で含む相乗的処方物に関し、肝保護に有用で；さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む肝保護に有用な相乗的処方物を調製する製法に関し、前記製法は、ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕し、さらに１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で前記微細粒子を混合することおよび前記混合物を粉砕して処方物を得る段階を含み、さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法に関し、前記方法は、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。
【発明の効果】
【００１２】
市場で得られる肝保護ハーブ調製物／処方物のほとんどは、化学的にも生物学的にも標準化されていない。前記ハーブ処方物の有効性は、前記処方物の二次代謝物に依存していることが公知であり、処方物の信頼性は、バッチ毎の（化学的かつ薬理学的）標準化を実施してはじめて確認できる。
本発明の発明において、
ａ）処方物の化学組成が充分に説明され、従って、再現性ある生物学的活性が保証される。
ｂ）前記処方物の薬理評価データから前記処方物の構成成分の相乗的作用が明らかに示されている。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
従って、本発明は、トランス−テトラコス−１５−エン酸（trans-tetracos-15-enoic acid（ｔ−ＴＣＡ））およびアンドログラホライド（andrographolide（ＡＰ））を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で含む相乗的処方物に関し、肝保護に有用で；さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む肝保護に有用な相乗的処方物を調製する製法に関し、前記製法は、ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕し、さらに１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率で前記微細粒子を混合することおよび前記混合物を粉砕して処方物を得る段階を含み、さらに、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法に関し、前記方法は、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。
【００１４】
本発明の１態様において、相乗的処方物がトランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲の比率を含み、肝保護に有用である。
別の本発明の態様において、前記ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：１（ｗ／ｗ）である。
さらに本発明の別の態様において、前記処方物の構成成分がハーブであるかまたは合成である。
さらに本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が４０を超える治療インデックスを示す。
【００１５】
さらに本発明のもうひとつの態様において、肝保護に有用なトランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を調製する製法が、
＊ｔ−ＴＣＡとＡＰの粒子を微細粒子に粉砕すること、
＊前記微細粒子を比率１：７から７：１（ｗ／ｗ）の範囲で混合すること、
＊前記混合物を粉砕して処方物を得ること、
の段階を含む。
【００１６】
本発明のさらにもうひとつの態様において、前記粒子の粉砕が約２０分間かつ約１００−１２０回転／分で行なわれる。
本発明のもうひとつの態様において、前記混合物の粉砕が約１５分間かつ約７０−８０回転／分で行なわれる。
【００１７】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が約１００メッシュ未満のメッシュサイズを示す。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物の構成成分がハーブであるか合成である。
【００１８】
本発明のもうひとつの態様において、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含む相乗的処方物を用いて対象の肝保護を行なう方法に関し、前記方法は、前記処方物を前記対象に投与する段階を含む。
【００１９】
本発明のもうひとつの態様において、前記ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：７乃至７：１（ｗ／ｗ）である。
さらに本発明の別の態様において、前記ｔ−ＴＣＡとＡＰの比率が１：１（ｗ／ｗ）である。
【００２０】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物がＰ．Ｏ．（経口）経路で投与される。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物がｔ−ＴＣＡおよびＡＰそれぞれに比べて、優れた肝保護性を有する。
【００２１】
本発明のもうひとつの態様において、投与量が５乃至７５ｍｇ／ｋｇ体重の間である。
本発明のもうひとつの態様において、投与量が約５０ｍｇ／ｋｇである。
【００２２】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が安全で、無毒で、副作用がなく、４０を超える治療インデックスを有する。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物の相乗活性が、広いスペクトルの活性パラメータで示される。
【００２３】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が組織再生を示す。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が小葉中心肝細胞壊死に対して肝保護を示す。
【００２４】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、架橋壊死に対して保護を示す。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、スポット壊死に対して保護を示す。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が小葉ジスアレイに対して保護を示す。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が肝細胞気球状変性に対して保護を示す。
【００２５】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が血清ＧＰＴ高レベルを約８２％低下させる。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が血清ＧＯＴの異常に高いレベルを約７２％低下させる。
【００２６】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、血清ＬＤＨの異常に高いレベルを約８３％低下させる。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、血清ＡＬＰの異常に高いレベルを約８５％低下させる。
【００２７】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、血清ＴＧの異常に高いレベルを約６２％低下させる。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、血清アルブミンの異常に高いレベルを約９０％低下させる。
【００２８】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、脂質パーオキシダーゼ（ＬＨ）の異常に高いレベルを約７８％低下させる。
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、還元グルタチオン（ＧＳＨ）の異常に低いレベルを約７５％増加させる。
【００２９】
本発明のもうひとつの態様において、前記処方物が、たんぱく質の異常に低いレベルを約５８％増加させる。
【００３０】
植物起源の化学成分に基づいて肝保護組成物を開発する。それらのうちのひとつすなわちトランス−テトラコス−１５−エン酸は、肝毒物によりレベルが変化したトランスアミナーゼ類、ビリルビン、トリグリセリド類、ＡＬＰおよびＧＳＨの回復に有意な活性を示し、他者は、ヘキサバルビタールまたはフェノバルビタール睡眠時間の減少、肝臓における抗過酸化能のような複数の薬理活性を有している。これらの研究は、アンドログラホライドの治療能力を実証した。前記混合物において、肝保護活性の両面ともに強化され、それは、表（１−４）を見れば明らかに証明され、その表は、肝毒物のひとつで本検討で用いたパラセタモール効果の可逆性を示している。種々の肝疾患に使用する化学的に明らかにされた薬物を提供するため。
【００３１】
本発明は、トランス−テトラコス−１５−エン酸（ｔ−ＴＣＡ）およびアンドログラホライド（ＡＰ）を含有する相乗的肝保護組成物の開発のための製法に関する。本発明は特に、合成または植物起源のトランス−テトラコス−１５−エン酸およびアンドログラホライドを、７：１のトランス−テトラコス−１５−エン酸からアンドログラホライド１：７の範囲で混合することに関する。
【００３２】
したがって、本発明は、ｔ−ＴＣＡとアンドログラホライドを７：１乃至１：７の比率で混合することを含む相乗的肝保護薬剤組成物の製法を提供する。前記処方物が開発され、従って、肝治癒において潜在的治療適用となろう。
【００３３】
我々は、本発明の態様において、ｔ−ＴＣＡとアンドログラホライドをそれぞれ７：１乃至１：７の比率で混合した相乗的肝保護処方物の製法を述べる。
【００３４】
本発明のもうひとつの態様において、ｔ−ＴＣＡおよびアンドログラホライドというそれぞれの構成成分よりも高い肝保護活性を示す処方物を調製した。
【００３５】
本発明のさらに別の態様において、本文に記載した処方物は、シリマリンのような確立された肝保護剤よりもより優れた広いスペクトルの肝保護活性を示す。
【００３６】
薬理学的検討により、前記処方物が、広いスペクトルの肝保護活性パラメータにおいて相乗作用を有していることを明らかにするが、その作用は、シリマリンを参考物質として用いて肝毒物としてのパラセタモール（paracetamol）に対する一連の生化学推定値としてモニターした。
【００３７】
公知の肝保護剤シリマリン、天然のｔ−テトラコス−１５−エン酸およびアンドログラホライドの比較により、前記処方物ＨＶ−３９２が前記のそれぞれよりも高い肝保護能を示すことが明らかになり、そのことは、脂質過酸化物の分解産物形成、グルタミントランスアミラーゼ（ＧＰＴおよびＧＯＴ）の放出、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）ビリルビン、トリグリセライド類（ＴＧ）および還元グルタチオン（ＧＳＨ）状態に及ぼすその効果に関して（表３乃至４）を見れば容易に実証できる。
肝毒物としてパラセタモールを用いて前記処方物で実験動物を処理し、血清ＧＰＴ、ＧＯＴ，ＡＬＰ、ビリルビン、Ｔ．Ｇ高レベルを低下させおよびＧＳＨレベルを増加させた。
【００３８】
前記処方物が各構成成分５０ｍｇ／ｋｇ投与量で観察されたよりも、各構成成分２５ｍｇを有する５０ｍｇ／ｋｇ投与量で肝毒物作用をより良好に可逆化することが明らかになったと言える。
【００３９】
列挙した物質は全て、５０ｍｇ／ｋｇ−１の均一投与量レベルでＰ．Ｏ．経路で投与した。処方物は極めて安全で、治療インデックス＞４０を有している。マウスにおいて投与量２ｇ／ｋｇ／ｐ．ｏ．（経口投与）まで死亡は全く記録されなかった。
【実施例】
【００４０】
本発明を下記の実施例を参考に述べるが、これは、本発明の範囲を限定するものではない。
【００４１】
実施例１：
処方物の調製
前記化合物類トランス−テトラコス−１５−エン酸（ＴＣＡ）およびアンドログラホライドを乳鉢で２０分間１００−１２０回転／分で粉砕し、７：１乃至１：７（ｗ／ｗ）の所望の比率で混合し、それぞれ、ＨＶ−４０７乃至ＨＶ−４１２とコード番号を付し、１：１（ｗ／ｗ）はＨＶ−３９２とし、７０−８０回転／分で１５分間、粉砕した。処方物を、１００メッシュの篩を通過させ均一にした。
【００４２】
実施例２：
処方物ＨＶ−４０７の薬理評価データ（表１）
肝毒物としてパラセタモール（ＡＰＡＰ）を用いて前記処方物で実験動物を処理し、血清ＧＰＴ、ＧＯＴ，ＡＬＰ、アルブミン、ＴＧおよび脂質過酸化高レベルを、５１．８６、５４．０４、５６．７５、４４．７７、５５．２４％および４５．９９％低下させ、ＧＳＨレベルを６０．６０に増加させた。シリマリンに対応するパラメータは、５８．０９、５４．０６、５４．２０、５０．２６、５０．６０、５５．７８および５１．９８であり、アンドログラホライドでは、５４．１５、６０．１４、５４．９７、６３．８８、６６．４１、５８．７０、５８．３５、および５７．３５であり、トランス−テトラコス−１５−エン酸では、それぞれ７５．００、６２．００、８２．３５、５６．３５、６６．４５、６４．１５、および５３．１５％であった。上述の比率の前記処方物は、各化合物類に比較して、試験した血清レベルをはるかに小さく低下させた。
【００４３】
実施例３：
処方物ＨＶ−４０８（表１）
毒物としてパラセタモールによる血清レベル変化を前記処方物投与後に記録し、それらはそれぞれ、ＧＰＴ（４９．４６％）、ＧＯＴ（４４．１４％），ＡＬＰ（４８．５７％）、アルブミン（５１．７３％）、ＴＧ（４０．１４％）、ＬＰ（５１．２３％）およびＧＳＨ（５０．０２％）であった。シリマリン(1)、アンドログラホライド(2)およびｔ−ＴＣＡ(3)に対応するパラメータは、下記のようであった（表１，２）。
（１）５８．９、５４．０６、５４．２０、５０．２６、５０．２６、５０．６０、５７．５８、５１．９８
（２）５４．１５、６０．１４、６６．４１、５８．７０、５５．３５、５７．３５
（３）７５．００、６２．００、８２．３５、５６．３５、６６．４５、６４．１５、５３．１５
【００４４】
実施例４：
処方物ＨＶ−４０９
肝毒物としてパラセタモールを用いて前記処方物で実験動物を処理し、血清ＧＰＴ（３４．６１％）、ＧＯＴ（３９．７６％），ＡＬＰ（３８．６４％）、アルブミン（２８．０２％）、ＴＧ（２７．８５％）、ＬＰ（３１．３１％）の高レベルを低下させ、ＧＳＨ低レベルは５２．８２％だけ増加し、一方、シリマリン、トランス−テトラコス−１５−エン酸およびアンドログラホライドでは、表（１＆２）に示したような対応するパラメータが観察された。
【００４５】
実施例５：
処方物ＨＶ−３９２（表２，３および４）
肝毒物としてのパラセタモールによる血清レベル変化を前記処方物投与後に記録し、それらは：ＧＰＴ（８０．９２％）、ＧＯＴ（７０．９９％），ＩＤＨ（８１．０１％），ＡＬＰ（８４．７７％）、ＴＧ（５９．７４％）、アルブミン（８８．４５％）、ＬＰ（７６．９８％）、ＧＳＨ（７３．９９％）およびたんぱく質（５６．０３％）であった。シリマリン(1)、アンドログラホライド(2)およびｔ−ｔｃａ(3)による対応するパラメータは、下記のようであった。
それぞれ、
１）５９．６４、５６．６４、５７．６９、５１．４９、５４．４６、４８．４６、５６．４２、５４．８２および４６．７９
２）５４．１５、６０．１４、５４．９７、６３．８８、５８．７０、６６．４１、５８．３５、５７．３５、５２．２７
３）５７．９９、５４．９２、５２．９６、５６．３５、６６．０５、５５．４８および４２．３５
しかし、各構成成分５０ｍｇ／ｋｇ投与量に比較して、１：１処方物（ｗ／ｗ）が投与量５０ｍｇ／ｋｇで、肝毒物（パラセタモール）作用の可逆化に最も優れていた。
【００４６】
相乗的肝保護処方物の生理効果
治癒群において、中等度から顕著な肝障害が全症例で観察された（ＡＰＡＰを最初に投与）が、再生の証拠は、低投与量６．２５ｍｇ／ｋｇの１：１肝保護混合物では観察されなかった。２５ｍｇ／ｋｇの投与量で、ぎりぎりの再生が観察された。また、ＴＣＡ＋アンドログラホライドの１：１肝保護混合物を投与量５０ｍｇ／ｋｇで投与すると再生が観察された。このことは、再生肝細胞の軽度増加した好塩基球、２核形成、多核形成および有糸分裂として確認した。この領域の再生は、小葉中心肝細胞壊死部位に限局したままであった。
【００４７】
組織病理パラメータ類
１．腺房細胞領域３中すなわち中心静脈付近における肝細胞のピースミール壊死（またｋ／ａ小葉中心肝細胞壊死）。これは、パラセタモール投与による特徴的肝障害である。
２．架橋壊死すなわち広いバンド上の壊死肝細胞が２個の隣接する中心静脈または隣接する静脈と門脈領域に架橋を形成すること。
３．スポット壊死。
４．肝細胞の気球状変性。
５．小葉ジスアレイ。
６．慢性炎症細胞浸潤。
パラセタモールが原因の肝障害を、顕著、中等度、低度、ゼロの重篤性の高い順に評価した。
予防研究群では、上記パラメータの可逆化をＴＣＡとアンドログラホライド（１：１ｗ／ｗ）の肝保護混合物を治療量で投与処置し、検討した。
治癒研究群では、肝保護混合物の再生効果を、同様の条件下で評価した（表５および図１乃至６）。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
【表２】
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【００５０】
【表３】
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【００５１】
【表４】
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【００５２】
【表５】
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【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】架橋壊死の低倍率１０倍像
【図２】架橋壊死の高倍率４０倍像
【図３】小葉中心肝細胞壊死の高倍率４０倍像
【図４】小葉中心肝細胞壊死の低倍率１０倍像
【図５】高用量の肝保護処方物とともに投与したパラセタモールの肝臓に及ぼす効果
【図６】細胞質粗化クリアリングとともに細胞の気球状変性
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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