(57)【要約】生体サンプル、特に全血を収集するための収集コンテナおよび方法は、アポトーシスを抑制するのに有効な量の少なくとも一つの安定化エージェントを含む。その安定化エージェントは、一以上のカスパーゼ阻害剤を備えるか、あるいはそれからなる。
2006502415.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体サンプルを収容するための器具であって、
該サンプルを受け取るために貯蔵部分を有するコンテナと、そして
該コンテナの該貯蔵部分の、カスパーゼ阻害剤を備える安定化エージェントと、
を備えることを特徴とする器具。
【請求項２】
前記コンテナは、管、クローズドシステムの血液収集装置、収集袋、注射器、予め充填された注射器、カテーテル、マイクロタイタープレート、マルチウェル収集装置、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラー・ボトル、ガラス瓶、ピペット、ピペット先端、並びに、組織および他の生体サンプルの収集コンテナからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項３】
前記コンテナが、第１の端部と第２の端部とを有する管であることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項４】
前記コンテナに配置される分離部材をさらに備えることを特徴とする請求項３に記載の器具。
【請求項５】
前記分離部材は、機械的分離要素であることを特徴とする請求項４に記載の器具。
【請求項６】
前記機械的分離要素は、少なくとも一つの前記安定化エージェントが少なくとも部分的に塗られていることを特徴とする請求項５に記載の器具。
【請求項７】
前記機械的分離要素は、前記安定化エージェントに対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項５に記載の器具。
【請求項８】
前記分離部材がゲルであることを特徴とする請求項４に記載の器具。
【請求項９】
前記ゲルの分離部材は、前記安定化エージェントから物理的に隔てられていることを特徴とする請求項８に記載の器具。
【請求項１０】
前記安定化エージェントは、溶液、懸濁液あるいは他の液体、小丸薬、錠剤、カプセル、吹き付け乾燥された物質、冷凍乾燥された物質、粉末、粒子、ゲル、結晶あるいは凍結乾燥された物質からなる群から選ばれた形態であることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１１】
前記安定化エージェントは、凍結乾燥されていることを特徴とする請求項１０に記載の器具。
【請求項１２】
前記カスパーゼ阻害剤は、一以上のシスチニルアスパラギン酸プロテアーゼを抑制することを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１３】
前記安定化エージェントは、三以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１４】
キャリアー・メディアをさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１５】
安定させたメディアをさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１６】
前記安定させたメディアは、トレハロースであることを特徴とする請求項１５に記載の器具。
【請求項１７】
少なくとも一つの酸化防止剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１８】
少なくとも一つの還元剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項１９】
少なくとも一つの中和剤をさらに備えることを特徴とする請求項１に記載の器具。
【請求項２０】
前記第１の端部をふさぐための密閉手段をさらに備えることを特徴とする請求項３に記載の器具。
【請求項２１】
前記管は、部分的に真空にされていることを特徴とする請求項２０に記載の器具。
【請求項２２】
前記安定化エージェントは、凍結乾燥されていることを特徴とする請求項２１に記載の器具。
【請求項２３】
前記安定化エージェントは、三以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項２２に記載の器具。
【請求項２４】
前記管は、抗凝血剤をさらに備えることを特徴とする請求項２３に記載の器具。
【請求項２５】
前記抗凝血剤は、内壁の少なくとも一部分上に吹き付け乾燥されていることを特徴とする請求項２４に記載の器具。
【請求項２６】
前記抗凝血剤は、ＥＤＴＡの塩を備えることを特徴とする請求項２５に記載の器具。
【請求項２７】
前記抗凝血剤は、ヘパリンを備えることを特徴とする請求項２４に記載の器具。
【請求項２８】
生体サンプルを収集して、安定させるための管であって、
第１の端部と、第２の端部と、そして前記サンプルを受け取るための貯蔵部分を区画形成する少なくとも一つの内壁と、
前記コンテナの前記貯蔵部分の少なくとも一つの安定化エージェントであって、カスパーゼ阻害剤を備える安定化エージェントと、
前記貯蔵部分のチキソトロピーのポリマー・ゲルと、そして、
前記安定化エージェントおよび前記ゲルの分離を維持するための要素と、
を備えることを特徴とする管。
【請求項２９】
分離を維持するための前記要素は、カプセルであることを特徴とする請求項２８に記載の管。
【請求項３０】
前記第１の端部をふさぐための密閉手段をさらに備えることを特徴とする請求項２９に記載の管。
【請求項３１】
前記密閉手段は、前記サンプルを前記管に供給するための針によって貫通可能であることを特徴とする請求項３０に記載の管。
【請求項３２】
前記管は、部分的に真空にされていることを特徴とする請求項３０に記載の管。
【請求項３３】
前記安定化エージェントは、凍結乾燥されていることを特徴とする請求項３２に記載の管。
【請求項３４】
前記安定化エージェントは、三以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項３３に記載の管
【請求項３５】
前記管は、前記内壁の少なくとも一部分に吹き付け乾燥された抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項３３に記載の管。
【請求項３６】
生体サンプルを収集して、安定させるための管であって、
第１の端部と、第２の端部と、そして前記サンプルを受け取るための貯蔵部分を区画形成する少なくとも一つの内壁と、
前記管の前記貯蔵部分の少なくとも一つの安定化エージェントであって、カスパーゼ阻害剤を備える安定化エージェントと、
前記貯蔵部分の機械的分離要素と、
を備えることを特徴とする管。
【請求項３７】
前記機械的分離要素は、前記安定化エージェントに対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項３６に記載の管。
【請求項３８】
前記第１の端部をふさぐために密閉手段をさらに備えることを特徴とする請求項３６に記載の管。
【請求項３９】
前記密閉手段は、前記サンプルを前記管に供給するため、針によって貫通可能であることを特徴とする請求項３８に記載の管。
【請求項４０】
前記管は、部分的に真空にされていることを特徴とする請求項３８に記載の管。
【請求項４１】
前記安定化エージェントは、凍結乾燥されていることを特徴とする請求項４０に記載の管。
【請求項４２】
前記安定化エージェントは、三以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項４１に記載の管
【請求項４３】
前記管は、前記内壁の少なくとも一部分に吹き付け乾燥された抗凝固剤をさらに備えることを特徴とする請求項４１に記載の管。
【請求項４４】
後のテストのために生体サンプルを収集し、そして保管するためのキットであって、
中に分離要素を有する主収集管と、
副管と、を備え
前記主収集管と前記副管が一以上の安定化エージェントを含み、該安定化エージェントは一以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とするキット。
【請求項４５】
前記分離要素は、機械的分離要素であることを特徴とする請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
前記機械的分離要素は、前記一以上の安定化エージェントで少なくとも部分的に表面が覆われていることを特徴とする請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
前記機械的分離要素は、前記一以上の安定化エージェントに対して実質的に不活性であることを特徴とする請求項４６に記載のキット。
【請求項４８】
前記分離要素はゲルであり、該ゲルは前記安定化エージェントから物理的に隔てられていることを特徴とする請求項４４に記載のキット。
【請求項４９】
管対管の切換装置をさらに備えることを特徴とする請求項４４に記載のキット。
【請求項５０】
前記第２の管は、管対管の前記切換装置を介して、前記第２の管へ前記第１の管から前記サンプルを吸い込むための圧力に維持されていることを特徴とする請求項４９に記載のキット。
【請求項５１】
生体サンプルを安定させるための方法であって、
サンプル収集コンテナを用意する工程と、
前記サンプルがカスパーゼ阻害剤を備える安定化エージェントと接触するように、前記生体サンプルを前記収集コンテナへ処理する工程と
を備えることを特徴とする方法。
【請求項５２】
前記サンプル収集コンテナは、前記生体サンプルを収集する前に前記安定化エージェントを含有することを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記生体サンプルを前記コンテナへ処理する前記工程と、前記サンプルを前記安定化エージェントと接触させる前記工程とは、同じ収集コンテナで行われることを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記収集コンテナは真空にされ、所定の量の前記サンプルを前記収集コンテナへ引き込むのに十分な所定の内部圧力を有することを特徴とする請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記収集コンテナは、管、クローズドシステムの血液収集装置、収集袋、注射器、マイクロタイタープレート、マルチウェル収集装置、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラー・ボトル、そしてガラス瓶からなる群から選ばれることを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
前記安定化エージェントは、三以上のカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５７】
前記生体サンプルは、全血あるいはそれの成分、臍帯血あるいは胎盤血、濃縮赤血球、濃縮血小板、濃縮白血球、血漿、血清、尿、骨髄穿刺液、脳脊髄液、組織、細胞、糞便、唾液および口の分泌物、鼻の分泌物、およびリンパ液からなる群から選ばれることを特徴とする請求項５１に記載の方法。
【請求項５８】
前記生体サンプルは、全血であることを特徴とする請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記全血は、前記収集コンテナへ直接に患者から収集されることを特徴とする請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記収集コンテナは、前記血を前記患者から収集する前に前記安定化エージェントを含有することを特徴とする請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
生体サンプルを収集するための収集コンテナを作るための方法であって、
収集コンテナを準備する工程と、
該コンテナへ少なくとも一つのカスパーゼ阻害剤を備える安定化エージェントを配置する工程と、
該安定化エージェントを凍結乾燥する工程と、
前記コンテナを真空にしてふさぐ工程と、
前記コンテナを殺菌する工程と、
を備えることを特徴とする方法。
【請求項６２】
前記収集コンテナは、管であることを特徴とする請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記管へ分離部材を配置する工程をさらに備えることを特徴とする請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記分離部材は、機械的分離要素であることを特徴とする請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記分離部材は、ゲルであることを特徴とする請求項６３に記載の方法。
【請求項６６】
造血幹細胞を備える細胞集団を収集して、該細胞集団が一以上のカスパーゼ阻害剤を備えるコンテナに収集される工程と、そして、
患者へ収集された細胞集団の少なくとも一部分を投与する工程と、
を備えることを特徴とする処置のための方法。
【請求項６７】
臍帯血あるいは胎盤血が、前記コンテナへ収集されることを特徴とする請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記一以上のカスパーゼ阻害剤の少なくとも一部分が、前記収集された細胞集団の前記少なくとも一部分と共に、前記患者へ投与されることを特徴とする請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記収集された細胞集団を冷凍保存し、前記投与のステップに先立って、前記収集された細胞集団を解凍する工程をさらに備えることを特徴とする請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記コンテナは、少なくとも二つのカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記冷凍保存の工程に使われる冷凍保存の少なくとも一部分は、
前記一以上のカスパーゼ阻害剤の少なくとも一部分および前記収集された細胞集団の少なくとも一部分と共に、前記患者へ投与されることを特徴とする請求項６９に記載の方法。
【請求項７２】
造血幹細胞を備える細胞集団を収集して、白血球アフェレーシス過程を実行する工程であって、該細胞集団が一以上のカスパーゼ阻害剤を備えるコンテナに収集される工程と、そして、
患者へ前記収集された細胞集団の少なくとも一部分を投与する工程と、
を備えることを特徴とする処置のための方法。
【請求項７３】
前記一以上のカスパーゼ阻害剤は、前記収集された細胞集団の少なくとも一部分と共に、前記患者へ投与されることを特徴とする請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
前記収集された細胞集団を冷凍保存し、前記投与する工程に先立って、前記収集された細胞集団を解凍する工程をさらに備えることを特徴とする請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
前記コンテナは、少なくとも二つのカスパーゼ阻害剤を備えることを特徴とする請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
前記患者に投与される際、前記冷凍保存の工程に使われる冷凍保存の少なくとも一部分は、前記一以上のカスパーゼ阻害剤の少なくとも一部分および前記収集された細胞集団の少なくとも一部分と共に、前記患者へ投与されることを特徴とする請求項７４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、患者から直接に生体サンプルを収集し、そして安定させるための、および／または動物あるいは人間のいずれかの培養細胞を収集し、そして安定させるための方法および装置に向けられている。
【背景技術】
【０００２】
臨床の診断と臨床研究のセッティングでは、後の分析か生体外の培養用の様々なコンテナあるいは管に、全血、濃縮赤血球、濃縮血小板、濃縮白血球、組織、骨髄気息音、大脳の脊髄分泌液、糞便、尿、唾液、口の分泌物、鼻の分泌物および同種のもののような生体サンプルを集めることが多くの場合必要であった。その後、典型的には、サンプルは、人員が特定のテストを処理するか、将来の試験あるいは注入のためにそのサンプルを処理する研究所のような異なる位置へ輸送されなければならなかった。
【０００３】
一般に、相当な量の時間が、サンプルを得て、それを分析したり、処理したりする間に経過する。従って、共通のおよび再発する問題は、試験片としての生体サンプルの分析あるいは注入に先行するその取り扱いおよび／または前処理中に、肝心な材料の劣化、変化あるいは破壊を防ぐ方法において生体サンプルを維持することである。
【発明の開示】
【０００４】
全ての細胞および組織は、不要な細胞や加齢細胞を取り去るために発達と形態形成での自然なプロセスとして、アポトーシスのプロセスを経るか、あるいはプログラム化した細胞死を経ることになる（カー、ワイリィ、およびカリー、１９７２Ｂｒｉｔ  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２６：２３９）。アポトーシスを経る細胞は、細胞への深刻な傷と結びつく壊死に含ませられる細胞と、形態的に且つ生化学的に区別がつく。アポトーシスは、核染色質濃縮、ＤＮＡ崩壊、細胞膜変質、カスパーゼ活動、細胞質の縮み、拡大した小胞体および細胞膜水疱によって特徴づけられる。
【０００５】
アポトーシスな死は、種々様々の刺激が引き金となって起き得、すべてのセルが必ず同じ刺激に応じて死ぬとは限らないであろう。もっと故意の死刺激の中には、癌化学療法のために使用された放射あるいは薬によるＤＮＡ損傷がある。他の細胞の種類では刺激されるかもしれないが、コルチコステロイドのようないくつかのホルモンは特別の細胞(例えば、胸腺細胞)に死をもたらす。アポトーシスは、静脈切開によって集められた血液サンプルと組織のサンプルとにおいて明らかである。
【０００６】
これらの形態的な特徴についての生化学的な相関物は、この現象に関するその後何年にも続く研究の間、出現し続けている。１番目、そして最も劇的なのは、ＤＮＡ崩壊であり、それは１９８０年にウイリィによって記述されたものである。アポトーシスに死ぬ細胞からのＤＮＡがアガロース・ゲル電気泳動にさらされた時、生来の染色質のヌクレオソーム中のヒストン保護に対応して、〜２００塩基対（ｂｐ）を備えた梯子が繰り返し観察された。後のパルス・フィールド・ゲル技術は、より広範囲に断片的に初期のＤＮＡ分裂パターンを明らかにした。二、三の二本鎖のＤＮＡ破損は、細胞に、有糸分裂を成功裡に経ることができないことを与えるので、そのようなＤＮＡ破損は生化学上の死の定義と見なすことができる。
【０００７】
アポトーシスな細胞の細胞膜の変化は、活性化されていないマクロファージによって、食細胞運動を誘発する。二分子層の外面に、通常内部へ面するホスファチジル基セリンが露出することによって明示されるように、アポトーシスな細胞はそれらの血漿細胞膜の中の正常なリン脂質非対称を失う。マクロファージは、未知の受容器によってこの露出された脂質ヘッドグループを認識し、有機体からの損傷した細胞についての食細胞運動および除去を引き起こし得る。
【０００８】
全血サンプル・ポスト静脈切開の中にある顆粒細胞中のアポトーシスは、この重要なセル・タイプのキー特徴の損失によって明示される。ＣＤ１６ｂ(顆粒細胞表面マーカー)、酸化の爆発機能、細胞膜脂質極性および低二倍性は全て低下し、分析のためのサンプルの質が下がる。従って、これらの細胞要因に依存する常軌を逸しているか不正確な分析的な検査結果が、静脈切開の時から８時間の後に分析された全血サンプルで生じ得る。
【０００９】
アポトーシスな死の別の生化学的な顕著な特徴は、カスパーゼの活性化であり、それらは、線虫シノラブディス・エレガンスのｃｅｄ−３、「死遺伝子」と関係するシステイン・プロテアーゼである。カスパーゼは、ほとんどの細胞に不活発なプロ酵素形式で広く明示されているように見える。異なるカスパーゼは周辺のアミノ酸の認識を含む、異なる素晴らしい特異性を持つが、それらの蛋白質分解を生ずる活動は、アスパラギン酸残留物で蛋白質を裂くそれらの異常な能力によって特徴づけられている。活発なカスパーゼは、しばしばプロテアーゼカスケードのイニシエーションを許容し、他のプロカスパーゼを活動的にすることがしばしばできる。これらのプロテアーゼがアポトーシスな細胞死のほとんどの例に関係するという説得力のある証拠は、カスパーゼ ３、８および９を欠くノックアウト・ハツカネズミが正常な胎児の発達を達成されないという実証からも、特定のカスパーゼ阻害剤が細胞死を妨げるという能力に由来する。
【００１０】
血液収集のエリアにおいて、細胞層に血液を分けるべく、遠心力を作用させる前に、血液サンプルに一般に使用される共通の添加物は、血液凝固阻止添加物である。典型的には、血液凝固阻止添加物は、エチレン・ジアミン無四肢症酸(ＥＤＴＡ)のカリウムまたはナトリウムの塩、緩衝材で処理されたクエン酸塩、あるいは収集容器の内部の水溶液か結晶化被服物のヘパリンである。抗凝血剤を含んでいる血液収集管は営利上製造され、売られている。そのような管の例は、スミス等への米国特許第５，６６７，９６３号明細書に開示されている。これらの添加物は特にアポトーシスを食い止めず、細胞の形態も機能も保護することをしない。
【００１１】
従って、本発明は、細胞の形態、生存可能性および機能を保つことを目的として、生体サンプルを集めるための方法と装置に向けられる。より特に、本発明は、収集コンテナ、および、生体サンプルを集めて、その生体サンプル中の細胞の後の分析かあるいは生体外での培養のために内生のカスパーゼを抑制する安定用添加物あるいは複合添加物と、そのサンプルと、を直に接する方法に向けられる。本発明の単数あるいは複数の安定化エージェントは、生体サンプルの保存あるいは培養中に、アポトーシスやアポトーシスな事象の発生を抑制するか、防ぐか、あるいは低減することができる、適切な混合物である。
【００１２】
従って、本発明の主要な特徴は、形態の分析や、全細胞、細胞成分あるいは組織の機能の分析のため、内生のカスパーゼを抑制することができる、安定剤や安定剤の混合物の存在しているところへ、患者か動物から直接に生体サンプルを集め、細胞や組織の生体外での培養において同じ生存可能性を維持するための方法および装置を提供することである。安定用添加物は、その生体サンプルを安定させて、かつ細胞、細胞成分、組織あるいは培養の分析のために内生のカスパーゼを抑制する有効な量が含有される。望ましくは、サンプルは全血あるいは組織サンプルである。
【００１３】
本発明の一つの特徴は、細胞の形態、機能あるいは構成物の悪化が有るか無いかの時間を、長時間にするために、室温で安定する生体サンプルを準備することである。従って、方法は、形態の変化、細胞膜劣化、ＤＮＡ分裂あるいは細胞の機能や生存可能性の損失の発生が有るか無いかの時間を、長時間にするために、室温で安定する生体サンプルを作り出すために提供される。
【００１４】
本発明のさらなる特徴は、形態の変化、細胞膜劣化、ＤＮＡ分裂あるいは細胞の機能や生存可能性の損失の発生を抑制するかなくす方法および装置を提供することである。
【００１５】
本発明の別の特徴は、収集コンテナが、正確な量の安定化エージェントやエージェントの混合物であらかじめ満たされている所へ、生体サンプルを受け取り、集めるために、その収集コンテナを提供することである。安定化エージェントは、コンテナの任意の表面に、液体、液体か固体のエアゾール、ペレット、粉末あるいはゲルの形で供給されると良い。
【００１６】
本発明のさらなる特徴は、サンプルが様々な温度で保存される場合に、サンプルの劣化を抑制するか防ぐために、患者から収集する際に直ちに、生体サンプル、特に全血あるいはそれの成分を安定化するための方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の特徴は、有効な量の安定化エージェントが供給される空にされたコンテナであって、そのコンテナに所定の量の生体サンプルを引き込むのに十分低い内部圧力を有するところのコンテナを提供することである。
【００１８】
なおかつ、本発明の別の特徴は、サンプルの細胞の形態や機能の分析、あるいはサンプルの生体外での培養が、その後になって行われ得るようなサンプルの悪化を防ぐことによって、安定する血液サンプルを作り出すために、収集する時点で、かなりの量の血液を集め、その血液を安定化エージェントあるいはエージェントの混合物と混ぜるための血液収集コンテナを提供することである。
【００１９】
本発明のその特徴は、生体サンプルを集めるための器具を提供することにより達成される。その器具は、一般に、かなりの量の生体サンプルを収容するための貯蔵部分と、この貯蔵部分に通じる少なくとも一つの開口とを区画形成する少なくとも一つの内壁を備えるコンテナを含む。このコンテナは、生体サンプルを保ち、形態の変化、細胞膜劣化、ＤＮＡ分裂あるいは細胞の機能や生存可能性の損失の発生を防ぐか抑制するかをなくすのに有効な量の、少なくとも一つの安定化エージェントを含む。好ましくは、そのコンテナは、サンプルの収集前に、安定化エージェントで前処理される。
【００２０】
本発明のその特徴は、サンプル収集コンテナを準備する工程を備え、安定した生体サンプルを処理する方法を提供することによって達成される。望ましくは、そのコンテナは、そのコンテナの内部に、形態の変化、細胞膜劣化、ＤＮＡ分裂あるいは細胞の機能や生存可能性の損失の発生を防ぐかなくすのに十分な量の、少なくとも一つの安定化エージェントを含まれるところの、内部チャンバを区画形成する側壁と底部を有する。そのコンテナは、生体外の細胞培養の促進と関わり合いを持つ特性を有しても良い。生体サンプルは、そのコンテナへ調達され、且つ直接に導入され、そして、その生体サンプルは安定化された生体サンプルを形成するように安定化エージェントと混ぜられる。
【００２１】
本発明のその特徴は、全血サンプルを収集して安定化させる方法を提供することによっても達成される。その方法は、内部チャンバを形成する側壁および底部を有するサンプル収集コンテナを提供する工程を備える。そのコンテナには、全血サンプルの細胞を安定するために、有効な量の安定化エージェントが提供される。その内部チャンバは、大気圧よりも低い圧力を有する。全血サンプルは、患者から直接に収集コンテナへ収集され、その血液サンプルは安定した全血サンプルを形成するべく安定化エージェントと混ぜられる。その生体サンプルは、収集装置に引き込まれるに伴い、直に安定化エージェントにさらされ、細胞の形態、細胞膜の健全性、および機能を保護する過程がそのサンプルの導入に基づいて直に始まるだろう。
【００２２】
本発明の特徴は、組織、あるいは骨髄、あるいは体液気息音サンプルを集めて安定させる方法の提供によっても、達成される。その方法は、内部チャンバを形成する側壁および底部を有するサンプル収集コンテナを提供する工程を含む。組織か気息音サンプル中の細胞を安定させるために、コンテナには、有効な量の安定化エージェントかエージェントの混合物が供給される。組織あるいは骨髄あるいは体液気息音サンプルは、収集コンテナに患者から直接集められ、そのサンプルは安定した生体サンプルを形成するために、安定化エージェントと混ぜられる。生体サンプルが収集装置へ導入されると、それは安定化エージェントに直ちにさらされ、そして細胞の形態、細胞膜の健全性および機能を保護する過程が、サンプルの導入で直ちに始まるだろう。コンテナには、細胞の培養や成長を促進する特性が提供されても良い。これらの特性は、コンテナの内部の表面の表面チャージ、多孔性の細胞膜、セル栄養素メディアあるいは人工足場構造を含むが、それらに限定されない。
【００２３】
本発明の方法および収集装置はいくつかの独特な利点を有する。収集装置の一の利点は、システムの提供であり、好ましくは、安定化エージェントを含み、有害な暴露からサンプルを保護するクローズドシステムの提供である。なおさらに、別の利点は、そのような収集装置の型通りのライン生産であり、それによって品質管理が評価され、手順が製品に適用される。さらに、別の利点は、業界基準が現在存在しないところでの、そのような収集装置の標準化である。さらに、細胞や組織の研究と、分析との関連は、可能な限り生体内の状態に近づいた状態で、細胞を保ち、そしてそれらを特徴づけて研究することにより増加させられる。
【００２４】
本発明のこれらの特徴、利点、および他の顕著な特性は、本発明の後述の詳細な説明から、特に図面との関連において考えられるとき、より明らかになるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
本発明が様々な形式の実施形態によって満たされる一方、本開示が本発明の理念に典型的なものとして考慮され、そして本発明を図示され且つ記述された実施形態に制限されることが意図されない理解を含んで、ここに詳細に本発明の好ましい実施形態が記述されるだろう。多数のバリエーションは、発明の精神からの逸脱なしに、当業者によってなされ得る。本発明の範囲は添付された請求項およびそれらの等価物によって判断されるだろう。
【００２６】
本発明は、よりよく細胞と組織の分析およびこれらの生体外の培養を可能にするために、生体サンプルを安定させる方法および装置に向けられる。より特に、本発明は、保存または培養中に生体サンプル中のアポトーシスを抑制する方法および装置に向けられる。本発明によれば、装置は、生体サンプルの収集の際、生体サンプルと直ちに混合するための多くの安定化エージェントを含むコンテナを備える。さらに、本発明によれば、その方法は、アポトーシスを抑制するのに十分な量の安定化エージェントを含むサンプル収集コンテナを提供する工程と、そのコンテナに生体サンプルを加える工程とを備える。
【００２７】
生体サンプルは患者から回収された任意の体液や組織のサンプルである。典型的には、生体サンプルは臍帯血あるいは胎盤血を含む全血あるいはそれの成分である。他の生体サンプルの例には、濃縮赤血球、濃縮血小板、濃縮白血球、尿、骨髄気息音、大脳の脊髄分泌液、組織、細い針器官や病巣の気息音、糞便、唾液および口の分泌物、鼻の分泌物、リンパ液および同種のもののような細胞含有成分が含まれる。
【００２８】
本発明のサンプル収集システムは、試験管および遠心分離管のような管、収集袋のようなクローズドシステムの血液収集装置、注射器、特に予め充填された注射器、カテーテル、マイクロタイタープレートおよび他のマルチウェルプレート、アレイ、管材料、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラー・ボトル、ガラス瓶、顕微鏡用スライド、顕微鏡用スライド組立体、カバーグラス、フィルム、および多孔性の基板や組立体のような実験容器、ピペットおよびピペット先端など、あるいは生体サンプルを保持するのにふさわしい他のコンテナに限定されず、如何なる収集装置をも含み得る。その容器の内部は安定化エージェントで処理されると良い。
【００２９】
プラスチックまたはガラスは、本発明の中で使用される収集装置を製造するためにしばしば使用される。収集装置を製造するために使用されるいくつかの好ましい材料にはポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネートおよびセルロース化合物が含まれる。ポリテトラフルオロエチレンおよび他のフッ素で処理されたポリマーのようなより高価なプラスチックも使用されてもよい。上述された材料に加えて、本発明の中で使用される収集装置用の他の適切な材料の例には、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリエステル、シリコーン、ポリウレタン、エポキシ樹脂、アクリル、ポリアクリレート、ポリスルフホン、ポリメタアクリレート、ＰＥＥＫ、ポリイミド、およびＰＴＦＥテフロン（登録商標）、ＦＥＰ テフロン（登録商標）、Ｔｅｆｚｅｌ（登録商標）、ポリビニリデン・フッ化物、ＰＶＤＦおよびペルフルオロアルコキシ樹脂のようなフッ素共重合体が含まれる。石英ガラスを含むガラス製品も収集装置を製造するために使用される。１つの典型的なガラス製品はＰＹＲＥＸ（登録商標）（コーニングガラス（コーニング、ニューヨーク)から利用可能)である。セラミックの収集装置は本発明の実施形態によって使用され得る。 紙および強化紙のコンテナのようなセルロースの製品も本発明に係る収集装置を形成するために使用され得る。
【００３０】
本発明の安定化エージェントは生体サンプルの保管中に、カスパーゼ活性および合成アポトーシス事象を抑制することを可能にする適切なエージェントである。そのエージェントは、生体サンプルにあるアポトーシスを抑制するか防ぐ安定した構成物を生産するために、血液サンプルのような生体サンプルを安定させる。本発明に従って、収集装置は、好ましくはメーカーによって、安定化エージェントで前処理され、使用する準備ができている形式でパッケージ化される。典型的には、包装された収集装置は無菌で、無菌の荷造り用資材で包まれる。
【００３１】
臨床の研究所、製薬会社、バイオテクノロジー会社、契約調査機関、大学研究者、研究病院、および細胞または組織の研究か分析に関係のあるすべての団体および個人によって本発明は使用され得るだろう。本発明は研究者と実験者に、下流の分析に対して、都合よくそして容易に細胞のサンプルを保護することを可能にするだろう。本発明に係る収集装置は、フローサイトメトリー、多重化したビーズ分析の細胞表面マーカー識別および分析、ＣＢＣおよび白血球の差異を含むお決まりの血液分析、ＨＬＡタイピング、臍帯血収集および幹細胞の取入、骨髄気息音収集および分析、不朽になっていない細胞の培養、血小板の生存可能性の保護、およびＤＮＡ完全性の保存に限られずに加えることを共に含む、分析的な処理目的を援助するフロントエンドのサンプル収集装置として役立つだろう。
【００３２】
望ましくは、安定化エージェントは、少なくとも1つのカスパーゼ阻害剤、例えば任意のあるいはすべてのシスチニルアスパラギン酸プロテアーゼ(カスパーゼ １−１４)を抑制するカスパーゼ阻害剤を含むか、それから成る。カスパーゼ阻害剤は、米国特許第６，１５３，５９１号明細書、米国特許第６，１８４，２１０号明細書、米国特許第６，０４５，９９０号明細書、米国特許第６，３５５，６１８号明細書、米国特許第６，１９７，７５０号明細書、米国特許第５，８６９，５１９号明細書、米国特許第６，２００，９６９号明細書および米国特許第６，２４２，４２２号明細書、並びに米国特許出願２００２／００４５６２３号に例えば示されているように、その技術分野では知られていて、これにより、それらの開示は、言及することによって組込まれる。安定化エージェントは、溶液、懸濁液あるいは他の液体、小丸薬、錠剤、吹き付け乾燥された形式、冷凍乾燥された形式、粉末、粒子、ゲル、結晶あるいは凍結乾燥された形式に限定されないが、それらを含むあらゆる適切な形式である。後述されるように、カスパーゼ阻害剤は、他の添加物と組み合わされても良い。多くの阻害剤の半減期は短いかもしれないので、安定化エージェントは、阻害剤の貯蔵寿命を最適化するために、そのような形式で収集装置内へ望ましくは導入される。凍結乾燥は、それがよい安定を提供し、さらに後の殺菌を可能にするという点で、特に有用に見え、それらの両者はオートメーションと標準化の見地からキーである。
【００３３】
安定化エージェントは、収集装置の任意の表面に位置付けられても良い。安定化エージェントは、そのような装置を閉じたり、機械的に閉じたりするストッパーやシールに位置付けられても良いし、あるいはそのような装置内に置かれる他のもの、すなわち挿入物に位置付けられても良い。望ましくは、カスパーゼ阻害剤かそれの混合物は、収集装置の少なくとも1つの内壁に沿ったいかなる場所、あるいは貯蔵部分内のいかなる場所にも位置付けられる。さらに、いくつかの阻害剤は、光感受性を示し得る。したがって、光からエージェントを保護することが望ましいだろう。そのような阻害剤にとっては、不透明な管、例えばあめ色の管の使用が有利であろう。代替的に、光の照射からそのエージェントを保護するために、例えば粉にされた形状で、カプセル内にそれを置き、そして管内にそのカプセルを置くことはこの問題に対しても処置を施すことになるだろう。エージェントをカプセルに入れることは、そのエージェントとコンテナ中の他の要素との間の他の不適当な相互作用を防ぐだろう。サンプル収集で溶けるカプセル材料はこの技術分野においてよく知られている。
【００３４】
そのカスパーゼ阻害剤かそれの混合物は、いくつもの方法によって収集装置に付されるだろう。例えば、そのカスパーゼ阻害剤かそれの混合物は、収集装置の内壁の表面に関して、吹き付け乾燥され、大まかに分配され、あるいは凍結乾燥され得る。代替的に、安定化エージェントが、例えばゲル状、あるいは液状のとき、収集装置か培養装置の貯蔵部分に位置付けられても良い。
【００３５】
そのカスパーゼ阻害剤かそれの混合物の量および配置は、使用される特定のカスパーゼ阻害剤あるいはそれらの混合物であるか、収集装置の内部体積および内部圧力、ならびにコンテナへ引き込まれた生体サンプル、あるいはさもなければそこへ導入された生体サンプルの量および種類などの適用の様式を含む、幾つかの変数によって決定される。
【００３６】
そのカスパーゼ阻害剤かそれの混合物の集中は、そのカスパーゼを抑制して、かつそのような阻害剤のない同一の装置と比較してサンプルの劣化を防ぐのに十分である。安定化エージェントに加えて、本発明の装置は、生体サンプルを扱うため、キャリアー・メディア(例えば、水、アルコール、ジメチルスルホキシド)、安定されたメディア(例えば、ポリビニルピロリドン、トレハロース、マンニトール、ブドウ糖)あるいは一以上の他の添加物をも含んでいても良い。適当な添加物には、分析のために生体サンプルを扱うために通常使用される、アルコール、アルデヒド、ケトン、有機酸、有機酸の塩類、ハロゲン化物のアルカリ金属塩類、有機的なキレート試薬、蛍光性の染料、抗体、拘束力のあるエージェント、クエン酸ナトリウム、ヘパリン、ＥＤＴＡのカリウムまたはナトリウムの塩類およびその他同種のもののような抗凝血剤、密度勾配メディアおよび他の試薬、あるいは試薬の化合物が含まれるが、それらに限定されない。望ましくは、キャリアーおよび添加物は、細胞機能を抑制しないか、あるいは細胞の生存可能性を減少させない。そのカスパーゼ阻害剤かそれの混合物が錠剤の形である場合、必要に応じて、製薬の錠剤の分解した材料が含まれ得る。
【００３７】
本発明の方法は、生体サンプルを得て、カスパーゼ阻害剤を含んでいるコンテナへ、そのサンプルを取り入れることにより実行される。好ましい実施形態では、生体サンプルが、いかなる介在工程段階なしに、収集コンテナへ直接に患者から回収される。全血サンプルを集めるときのように、患者から直接に生体サンプルを収集し、安定化エージェントを含んでいるコンテナへ直接にサンプルを取り入れることは、サンプルがカスパーゼ阻害剤と組み合わされる前にサンプルが蓄えられるとき別のやり方で起こるアポトーシスを実質上防止する。本発明の方法は、開いた収集システム、およびその開口部が閉鎖手段によって閉じられた閉じた収集システムの両方で有用である。
【００３８】
１つの実施形態では、本発明の収集装置は、収集の時点でアポトーシスを直ちに抑制するために、患者から直接に全血サンプルを回収するためにある。その装置は、血液を収集するために、真空にされた、部分的に真空にされた、あるいは真空にされていないシステムであっても良い。真空にされたシステムの適切な例は、閉じられた管である。手動の注射器の引き付けるものは、部分的に真空にされたシステムおよび真空にされていないシステムの両方の適切な例である。真空にされていないシステムは、自動的に引き付けるシステムをも含むことができる。真空にされたシステムは、特に好まれる。
【００３９】
同様の参照文字が幾つかの図面にわたって同種の部品に付されている図面を参照しつつ、図１は、チャンバ１４を区画形成するコンテナ１２を含む、典型的な血液収集装置１０を示す。図解された実施形態において、コンテナ１２は、側壁１６、閉じられた底部１８、および開いた頂部２０を有する中空の管である。状況に応じて、分離部材１３は、コンテナのチャンバ１４内に提供される。分離部材１３は、例えば遠心分離によって、サンプルの成分を分離するのを支援する働きをする。コンテナ１２は、適切な量の生体液、好ましくは血液を収集するために特定の寸法に合わせられている。コンテナ１２を閉じるために開いた端部２０をカバーするための密閉手段２２が、無菌の製品が要求される場合必要である。従来の管では、ねじ蓋が通常十分である。真空にされた収集管では、きつくフィットする、エラストマーのプラグが、要求された貯蔵の間、真空を有するために一般に使用される。好ましくは、密閉手段２２は、有効にコンテナ１２を閉じることができ、チャンバ１４の生体サンプルを保持することができるシールを形成する。密閉手段２２は、ゴム閉鎖、金属のシール、金属で巻かれたコムのシール、異なるポリマーおよびデザインのシールを含む、様々な様式の内の一つで良いが、それらに限定されない。保護シールド２４を、密閉手段２２の上に覆い被せても良い。コンテナ１２は、本発明に従って安定化エージェントをも含む。
【００４０】
コンテナ１２は、ガラス、プラスチックあるいは他の適切な材料で作られ得る。望ましくは、コンテナ１２は透明である。コンテナ１２の適切な透明な熱可塑性の材料の限定されない例は、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレンおよびポリエチレンテレフタレートである。プラスチック材は酸素を通さない材料でありえるか、あるいは酸素を通さない、すなわち半浸透性の層を含むことができる。代替的に、コンテナ１２は、水および空気浸透性のプラスチック材で作られ得る。カスパーゼ阻害剤かそれの混合物は任意の適切な手段を使用して、コンテナに供給され得る。一の態様では、カスパーゼ阻害剤は溶液であり、コンテナに入れられる。続いて、その溶液は、その技術分野で知られている例えば真空凍結乾燥のような方法によって凍結乾燥され得る。例えば、溶液を凍結し、次に、同時に真空にしながら、凍結後にゆっくり暖めることによって、冷凍乾燥された粉末は、収集チューブに残る。その結果生じた安定化エージェントがコンテナの中で小球化されるように、ＰＶＰやトレハロースなどの賦形剤のような添加物も、真空凍結乾燥に先立ったカスパーゼ阻害剤の溶液に加えられても良い。真空乾燥は、安定化溶液を加えた後に使用され得る。別の態様では、カスパーゼ阻害剤かそれの混合物が液体か固体のエアゾールにされ、コンテナの内部の一以上の表面上に吹き付けられる。
【００４１】
チャンバ１４の圧力は、チャンバ１４に規定の量の生体サンプルを引き込むために選択される。望ましくは、密閉手段２２は、大気圧と、大気圧未満の圧力間の内部圧力差を維持することができる、弾力のある材料で作られる。密閉手段２２は、その技術分野で知られているように、生体サンプルをコンテナ１２へ導くために、針２６あるいは他のカニューレによって突き通され得るものである。望ましくは、密閉手段２２は封じ直すことができるものである。密閉手段２２用の適切な材料には、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、スチレン−ブタジエンゴム、エチレンプロピレン共重合体およびポリクロロプレンが含まれる。
【００４２】
コンテナ１２の適切な例には、単一の壁および多重層の管が含まれる。適切なコンテナ１２のより特有の例は、コーエンへの米国特許第５，８６０，９３７号明細書に開示されていて、これによりそれは言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００４３】
述べられたように、コンテナ１２は、ゲル、機械的または他の分離部材（例えば、ろ紙または同種のもの)を含んでも良い。そのような場合、安定化エージェントは分離メディアの外表面上に吹き付け乾燥されるか、または凍結乾燥されても良い。コンテナ１２は血漿準備用の収集装置でも良い。そのような収集装置は、安定化エージェントに加えて、人間や動物の全血から、血漿分離のための構成要素を含む。全血からの血漿分離用の構成要素は、ゲル製剤あるいは機械的メディアのような分離部材であり得る。ゲルは望ましくは、チキソトロピーの重合体のゲル製剤である。ゲルはホモポリマーあるいは共重合体であるかもしれないし、例えばポリシロキサンのようなシリコーン基のゲル、あるいは例えばポリアクリル酸、ポリエステル、ポリオレフィン、酸化シス・ポリブタジエン、ポリブテンのような有機的な炭化水素基のゲル、エポキシ化大豆油のブレンド、塩素化炭化水素、二価酸とプロパンジオールとの共重合体、水素化シクロペンタジエン、ジアルキルマレエートを備えたアルファオレフィンの共重合体を含んでも良い。ゲルは、密度分離メディアとして役立つことにより、管中の血液サンプルの細胞から望ましいように血漿を分離する。適切な血漿準備管の例は、キャロル等への米国特許第５，９０６，７４４号明細書に開示されていて、これによりそれは言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。このように、安定化は、血液から血漿を分ける遠心分離前、遠心分離中、そして遠心分離後に提供され得る。ゲル分離材料の場合には、安定化エージェントとゲルとの間の物理的/化学的な分離、例えば上述のようなカプセルの使用、を提供することが望ましいかもしれない。例えば、エージェントの一部分がゲルへ合同されるか、ゲルと反応する場合、そのエージェントの有効性は低減されるかもしれない。同じ理由のために、機械的分離構成要素が使用される場合、その要素は安定化エージェントに実質的に不活性であることが望ましく、これはそのようなセパレータの重要な利点を反映する。分離する要素なしに、遠心させるのに対して、血漿管に分離要素を提供することは、特に有利である。特に、細胞溶解がアポトーシスを引き起こすプロテアーゼを自由にするかもしれないので、細胞(すなわち、血餅)と血漿との間の分離が良好になるほど、血漿サンプル中の蛋白質の安定性が増すだろう。有用な機械的なセパレータは、例えば米国特許第６，５１６，９５３号明細書、米国特許第６，４０６，６７１号明細書、米国特許第６，４０９，５２８号明細書、および米国特許第６，４９７，３２５号明細書に見出され、これによりその内容は言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００４４】
コンテナ１２は、安定化エージェントに加えて、液体密度傾斜メディア、および遠心分離に先立った液体密度傾斜メディアの血液サンプルとの混合を防ぐための手段を含み、全血のサンプルのより重い相から、遠心分離によりリンパ細胞と単球を分けるための収集管であり得る。適切なリンパ細胞/単球収集管の例は、ルデラー等への米国特許第５，０５３，１３４号明細書に開示されていて、これによりそれは言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００４５】
本発明で使用するにふさわしい他の商業上利用可能な血液収集管には、下記、すなわちそれらのすべては、ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーが所有している、すべての登録および商標を備えたフランクリンレイクス、ニュージャージーのベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニーによって売られているのが含まれる。それらは、カタログ番号３６７６５０−１、３６７６６１、６４０５、６３８５、６５６４、３６７６５３、３６７６６５、３６７６５８、３６７６６９、６４５０−８、６５３５−３７および３６７６６２のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）の血液学管、カタログ番号３６７８４１−２、３６７８５６および３６７８６１のＶＡＣＵＴＡ１ＮＥＲ（登録商標）のＫ２ＥＤＴＡ管、カタログ番号３６７７９３−４、６６９８、６５９５および６６７２のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）のＰＳＴ管、カタログ番号３６２７５３および３６２７６０−１のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）のＣＰＴ管、カタログ番号３６７７８２−８９、６５０９−１７および６５９０−９２のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）のＳＳＴ管、およびカタログ番号３６７７５６、３６４０１２および４８１６のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ(登録商標)のＡＣＤ管である。
【００４６】
別の実施形態では、本発明は、一以上の安定化エージェントを含む少なくとも二つのコンテナを有するキットを提供する。例えば、そのキットは、主収集管、例えば中に分離用要素を有する血漿分離用管、そしてテスト用の副管、例えば中へ収集された血漿を注ぐ、さもなければそれを分注するための管を備える。両者は、その中に安定化エージェントを有するだろう。状況に応じて、そのキットは、注ぐことの必要性や他の危険な移す手法の必要性を避けるべく、管対管の切換装置を含むことが出来、その場合、副管は血漿を減圧して吸い込むだろう。そのようなキットを使用することによって、主管にサンプルが収集され、遠心分離機にかけられ、副テスト用管に所定のサンプルが移送され、そしてテストが行われるだろう。その副テスト管は、目的とするテストにも依るだろうが様々なサイズであり得る。
【００４７】
実施形態において、コンテナは、その上に密閉手段を有する二つの開口端を備える管である。そのような管は、一つにサンプルを割り当て、例えば中に分離要素を有する血漿分離用管に、血漿サンプルまたは凝血塊サンプルのいずれかを割り当てる。
【００４８】
別の実施形態において、本発明の収集装置は、例えば、単一のあるいはマルチウェルプレート、マイクロタイタープレート、組織培養プレートかフラスコ、あるいはその他同種のもののような組織培養容器を含む。典型的なテスト・プレートは、一般に一以上の入れ物、望ましくは円筒状である入れ物を含む。図２に示されるように、テスト・プレート３０は、上面３２および下面３４を含んでいる。テスト・プレート３０は、プレートの上面３２からプレートの下面３４に延びる側壁３８を各々備えている多くの入れ物３６をさらに含んでいる。各々の入れ物は、頂部４０と底部４４を含んでいる。頂部４０は、閉じられた端部４６を備える底部４４まで延びる開口端４２を備えている。底部分４４は水平でも、(先のとがった)円錐形でも、丸くされていてもよい。各々の入れ物３６の容量は、通常、数ミリリッター（ｍｌ）から約０．５ｍｌ未満までの範囲である。入れ物３６には、本発明による安定化エージェントが中に収容されていると良い。
【００４９】
テスト・プレート３０の入れ物３６の数は重要でない。６、１２、２４、４８および９６個の入れ物のテスト・プレートが、一般に知られており利用可能であるけれども、入れ物の数はいずれであっても良い。図２では、単に典型的なものを意図して、６つの入れ物のテスト・プレートが描かれており、本発明は入れ物の数によらない。最も標準のマルチウェルプレートは、使用されている個々の入れ物を明白に識別することができるように、直角の列およびカラムの中に配列された入れ物を有している。もちろん、入れ物のどんな配置も本発明によって考えられるので、テスト・プレート３０内の入れ物の配置は本発明の本質的な制限ではない。
【００５０】
プレート３０は、真空成形加工、シート造形法、射出成形あるいは他の同様の技術によって熱可塑性の材料から形成されても良い。適切な熱可塑性の材料にはポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレートおよびその他同種のものが含まれるが、これらに制限されない。望ましくは、プレート３０は透明である。
【００５１】
入れ物を囲み、テスト・プレート３０の外部の境界を形成するのは、側壁３８である。本実施形態では、テスト・プレート３０は６つの側壁を有している。本発明の目的のために、プレートは任意の実用的な配置に作られるかもしれないが、入れ物の周知のテスト・プレートは、長方形か、あるいは四辺形に形作られる。複数の入れ物を含んでいる適切なテスト・プレートの例はティンドルフ等への米国特許第５，８８２，９２２号明細書、ヘンダーソンへの米国特許第５，８０１，０５５号明細書、およびブライアン等への米国特許第５，６８１，７４３号明細書に開示されていて、これによりそれらの各々は言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００５２】
さらに別の実施形態では、本発明による収集装置は生体サンプルを収集し、移し、そして分配するためのサンプル収集組立体であり得る。収集組立体は、一般に、個々の生体サンプルを収集するために、複数のサンプル入れ物を含んでいる。サンプル入れ物は、相隔たる位置付けに、サンプル・トレーに支持されている。サンプル・トレーは、そのサンプル・トレーを囲み、サンプル入れ物の安全で効率的な移送を可能にするケース内に支持されても良い。サンプル・トレーは、複数のサンプル入れ物を囲む第１の位置と、サンプルがトレーから手動で分配され得るように、サンプル入れ物の中の、外にアクセス可能な一つを提供する第２の位置との間の移動のため、ケース内に移動可能に収容される。
【００５３】
図３ａおよび３ｂに示されるように、サンプル・トレー５０は試料収集入れ物５２を形成する、複数の縦に間隔を空けられた凹部を含んでいる。サンプル・トレー５０は適切に変形可能なプラスチック材から作られ得る。入れ物５２は底５４および開口端５６を有する。サンプル入れ物は、開口式のコップ状部材の形状であり得る。入れ物５２は適切な量の生体サンプルを保持するために、十分な深さを有するように構成されている。入れ物５２には、各々、本発明に従って安定化エージェントがその中に収容されると良い。本発明のトレー５０が、その中に単一の列の入れ物５２が形成されるように示されている一方、本発明は、入れ物が特別のテスト状況にとって望ましい任意の数あるいは任意の配列に提供されても良いことを意図する。サンプル収集組立体はサンプル収集ケース５７を含み得る。入れ物５２内の生体サンプルの収集に際して、サンプル・トレー５０は、サンプル収集ケース５７の開口端５８に挿入され、その後入れ物５２のすべてがその中に囲まれるまで、サンプル収集ケース５７の内部５９内に挿入されるだろう。適切なサンプル収集組立体は、ライネンへの米国特許第６，３５７，５８３号明細書に開示されていて、これによりそれは言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００５４】
本発明の別の実施形態によれば、収集装置は注射器、より好ましくはあらかじめ充填された注射器を備える。典型的な注射器は、生体サンプルのような物質を受け取るために、反対の基端部と末端部とを有する概して円筒状の注射外筒を備え、その端部間に少なくとも一のチャンバが形成されている。プランジャーは注射外筒内に典型的に封が出来るように配置され、それに関して移動可能であり、シーリング手段は注射外筒の末端部の近くに封ができるように配置され得る。図４を参照すると、開いた基端部６４と末端部６６とを有する細長い注射外筒、つまりシリンダ６２を含む注射器６０が示されていて、少なくとも一つの中空のチャンバ６８が生体サンプルを受け取るために基端部と末端部との間に形成されている。図示された実施形態では、末端部６６がニードルガード７０を含んでいる。ニードルガードは、保管中、針ばかりか注射器も無菌に保つ。
【００５５】
注射器の注射外筒は安定化エージェントを含んでいる。好ましくは、注射器の注射外筒は、安定化エージェントで予め満たされている。あらかじめ満たされた注射器は、その表現がその技術分野で知られているように、メーカーによって満たされ、使用の準備ができているヘルスケア供給者に送られる注射器である。
【００５６】
プランジャー７２は開いた基端部６４に位置され得る。プランジャー７２は、例えばねじで取り付けられることにより、プランジャーに固定されているプランジャーロッド７４によって移動され得る。プランジャーが位置されているのと同じ端部に、注射外筒は、いわゆるスナップキャップ原理に従って注射外筒に固定されたフィンガーグリップ７６を有し得る。フィンガーグリップ７６は、好ましくは、わずかに弾力のある材料、例えばプラスチックから成る。別の実施形態(不図示)では、フィンガーグリップは放射状に外側へ突き出る注射外筒のフランジ状の部分である。もちろん、その技術分野の当業者に知られている他の構成は可能である。
【００５７】
注射外筒を閉じるストッパー７８は、プランジャーから遠く離れた注射外筒の端部に位置されると良い。プランジャーおよびストッパーは、弾性の材料から好ましくは作られ、最も好ましくは製薬品質のゴムから作られる。
【００５８】
図示された実施形態では、注射針８０はニードルホルダー８２によって注射外筒に固定される。ニードルホルダーは、針、シャフト８６およびカラー８８を支えるネック８４を有する。ニードルホルダーは、好ましくは、例えばプラスチックのような変形に対する抵抗力を持っているわずかに弾力のある材料から作られ、スナップキャップ構成によって注射外筒の端部に固定される。別の方法では、ニードルホルダーは、ねじで締めているか粘着性の接続によって、注射外筒に固定され得、あるいは注射外筒がカラーも備えるときは締め付けリングによって固定され得、後者の実施形態において、ニードルホルダーは注射外筒のカラー回りにフランジが付けられても良い。
【００５９】
この実施形態で図示されている注射器の注射外筒はロックするルアータイプのカラー８８を含んでいるが、それは、カラーのない注射器の注射外筒、偏心的に位置したノズルを有する、また常時あるあるいは取り外しの出来るかのいずれかである、針カニューレあるいは針カニューレ組立体を受け入れるのに適応された様々な他のノズル状の構造を有する注射器の注射外筒を含むことは、本発明の範囲内である。注射器の注射外筒の内部との流体伝達状態で、注射器の注射外筒の末端部上に、器具があることは単に必要とされる。
【００６０】
一以上のスロット９０により、シャフト８６の内壁およびネック８４の後面に凹所が作られ得る。スロットまたは複数のスロットは、カニューレの後端へ延びている。断面では、スロットが円の一部分であり得るが、もしそのサイズが十分な噴射液体が容易に通ることができるようなものならば、他の形状も可能であり、スロットの直径あるいはスロットの全面的な断面がカニューレのそれと少なくとも同じくらい大きいならば、その噴射液体が容易に通ることが達成される。ストッパー７８が軸方向に前にスライドする場合、それが摩擦で、シャフトによって受け取られるように、ニードルホルダー８２のシャフト８６が構成されていて、それ故、シャフトの奥まったところに位置されたスロット９０とは別に、シャフトの内部の直径は、注射外筒６２のそれとほぼ同じくらい大きい。ニードルホルダー８２のシャフト８６は、ストッパーがニードルホルダーのネックの後壁に対して前進させられる場合、注射外筒に隣接するスロットの一部９２がフリーなように、ストッパー７８よりもわずかに長い。必要に応じて、ニードルガード７０はさらにプランジャーロッドとして役立つために設計されても良い。その場合では、注射器の使用に先立って、ニードルガードが針から取り外され、それは注射器の一方の端にプランジャーに対して取り付けられる。
【００６１】
一般に、針プロテクターを含む注射器は、針プロテクターが以前に取り外されたかどうか示す安全部材を有する。キャップの形をしているそのような安全部材は、例えば米国特許第３，９９５，６３０号明細書に開示されている。
【００６２】
さらなる実施形態では、注射器は所定の位置に針を備えて保管されず、換言すると、それは、その技術分野で知られているような針がない注射器である。これは図５に図示されている。そのような注射器と一体になるように、使用の前に、針は、針ハブによるニードルホルダー８２のネック８４に位置される。いわゆるルアー円錐は、この接続のために好んで使用される。この実施形態では、ニードルホルダーのネックの器具９４が、ニードルホルダーと同様に注射器の無菌を保証する保護キャップ９６によって外面から見ると閉じられる。ニードルホルダーに奥まったところに位置されたスロット９０は、ネックの器具の端部に突き出ている。
【００６３】
適切な注射器の例は、バレル等への米国特許第６，０２７，４８１号明細書に開示されていて、これによりそれは言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。適切な注射器の他の例は、例えばシュワルツへの米国特許第４，９６４，８６６号明細書、インバート等への米国特許第４，９８６，８１８号明細書、チボー等への米国特許第５，６０７，４００号明細書、オデル等への米国特許第６，２６３，６４１号明細書に開示されていて、これによりそれらの各々は言及することによってそっくりそのまま組み入れられる。
【００６４】
本発明の収集装置はさらに、例えば血液収集袋、血漿袋、軟膜袋、血小板袋または同種のもののような生体サンプルを保持するのにふさわしい収集袋を備えても良い。記述のしやすさのため、血液収集袋が、図６を参照して記述されるだろう。
【００６５】
図６には、集めた血液を収容するための血液収集袋３００が図示されている。血液収集袋３００は、それは下文にさらに具体的に記述され、樹脂からならシート材料の、一組の全く同じにカットされた切れ端を重ね合わせ、そして柔軟性を有し、シート材料の断片の各々をシール部材３０４の周囲を互いに融合し（すなわち、熱融合、高周波融合あるいはその他同種のもの)、あるいは粘着的につなぐことによって形成された本体３０２を有する。収集された血液が収容される血液収容用部分３０６は、本体３０２のシール部分３０４で取り囲まれた内側の部分に形成される。血液収集袋３００は、本発明に従って安定化エージェントを好ましくは含む。
【００６６】
血液収容用部分３０６に通じている柔軟管３０８の一端は、それの上部で本体３０２と接続されている。血液収集用針３１０は、ハブ３１２を介して柔軟管３０８の他端に取り付けられている。血液収集用針３１０を覆うためのキャップ３１４は、ハブ３１２に取り付けられ得る。皮タブで各々がシールされる二つの開口３１６と３１８は、それらが開かれ得るように本体３０２の上部に形成され得る。
【００６７】
血液収集用袋３００のシート構成用本体３０２の材料の構成物、特性、および同種のものは、指定されたものに限定されない。この場合、血液収集用袋３００を構成するシート材料として、それらの主要な構成要素として、柔らかいポリ塩化ビニルあるいはその柔らかいポリ塩化ビニルを含む材料が、好ましくは使用される。例えば、その主要な構成要素として柔らかいポリ塩化ビニルを含む共重合体、少量の巨大分子材料、ポリマー・ブレンド、ポリマーアロイおよび同種のものが使用され得る。柔らかいポリ塩化ビニルのための可塑剤として、ジオクチルフタレート(DEHP、(di(2-ethylhexyl)phthaldte)や、(DnDP、(di(n-decyl)phthalate))が好ましくは使用され得る。ポリ塩化ビニル中のそのような可塑剤の容量は、ポリ塩化ビニルの重量で１００パーツをベースにして、重量で３０から７０パーツのおおよその範囲であるのが好ましい。
【００６８】
血液収集袋３００のシート材料として有効に使用可能な他の物質は、ポリオレフィン、すなわち、エチレン、プロピレン、ブタジエンおよびイソプレンのような、オレフィンあるいはジオレフィンのホモポリマー化の生成物あるいは共重合の生成物である。典型的な例として、ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン酢酸ビニル共重合体(EVA)、EVAおよび様々な熱可塑性エラストマーの間で形成されたポリマー・ブレンド、およびそれの任意の化合物が言及され得る。その上、ポリエチレンテレフタレート(PET)、ポリブチレン  テレフタル酸塩(PBT)、ポリ-1、4-のシクロヘキサン・ジメチル・テレフタル酸塩(PCHT)およびポリ塩化ビニリデンのようなポリエステルは、さらに使用可能である。
【００６９】
さらに別の実施形態では、本発明の収集装置はカスパーゼ阻害剤あるいはそれの混合物を含んでいる研究用容器であり得る。本発明に従って使用され得る特別の容器は、例えば、ガラス瓶、フラスコ、スピナーフラスコ、ローラー・ボトル、顕微鏡用スライド、顕微鏡用スライド組立体、分析装置用のサンプルチャンバー、テープ、ラミネート、アレイ、カテーテル、ピペット、管およびその他同種のものを含む。本発明による研究用容器は少なくとも1つの操作上の表面を有している。本発明による多くの容器は少なくとも１つの内壁を有し、それは、生体サンプルを含むための貯蔵部分と、そしてその貯蔵部分に通じる少なくとも１つの開口を区画形成する。
【００７０】
プラスチックまたはガラスは研究用容器を製造するためにしばしば使用される。研究用容器を製造するために使用されるいくつかの好ましい材料には、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリスチレン、ポリカーボネートおよびセルロース化合物が含まれる。ポリプロピレンが安いので、それは微少なそして正確な量の生体サンプルを扱い、そしてそれを輸送するために使用される研究用容器のための特に好ましい材料である。
【００７１】
本発明の研究用容器のための他の適切な材料の例には、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリエステル、シリコーン、ポリウレタン、エポキシ樹脂、アクリル、ポリアクリレート、ポリエステル、ポリスルフホン、ポリメタアクリレート、ＰＥＥＫ、ポリイミドおよびフッ素共重合体が含まれる。石英ガラスを含むガラス製品も研究用容器を製造するために使用される。
【００７２】
別の実施形態では、本発明の項目および／またはプロセスによって安定させられた細胞が、療法のときに使用される。例えば、臍帯血からの細胞は、療法のとき、例えば遺伝子障害あるいは血液障害を持っている患者に副細胞を移すことによって使用されている。臍帯血で見つかった幹細胞は、受取人の機能しない細胞あるいは悪い機能をする細胞を取り替えるか補足すると信じられている。さらにそのような幹細胞が被害を受けた組織を再生成することを支援するだろうと信じられている。
【００７３】
本発明によれば、上述されたように、臍帯血(あるいは胎盤血)は、一以上のカスパーゼ阻害剤を含むコンテナの使用によって収集時に安定させられる。その後、凍結保存された後の血液か新鮮な血液のいずれかのその血液が、人間に移される。(低温保存技術はその技術分野の当業者に知られている。)
同様に、一以上のカスパーゼ阻害剤を含むコンテナに白血球アフェレーシスで作った生成物を収集し、凍結保存された後のものか新鮮なもののいずれかの生成物を再び患者へ投与することが可能である。(白血球アフェレーシスは、その技術分野で知られていて、血液が取られ、特定の細胞の生成物が分離させられ、そして、血液の残りが被験者に返されるプロセスのことである。)
一以上のカスパーゼ阻害剤を含む収集コンテナを使用することによって、そのようなカスパーゼ阻害剤のない同一のコンテナに比べて、幹細胞の安定性が改善すると予想されるだろう。その結果、安定した生成物を用いた治療効果が、同様によくなると予想されるだろう。都合の良いことに、カスパーゼ阻害剤は低温保存工程を有害にもたらさず、それは注入の際人体に本質的に良性である。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】典型的な血液収集管の透視図である。
【図２】組織培養容器の透視図である。
【図３ａ】サンプル収集組立体を示す図である。
【図３ｂ】サンプル収集組立体を示す図である。
【図４】注射器の縦断面図である。
【図５】別の実施形態の注射器の縦断面図である。
【図６】血液収集袋を例示する透視図である。
【図１】
2006502415.tif 000003
【図２】
2006502415.tif 000004
【図３ａ】
2006502415.tif 000005
【図３ｂ】
2006502415.tif 000006
【図４】
2006502415.tif 000007
【図５】
2006502415.tif 000008
【図６】
2006502415.tif 000009
【国際調査報告】
2006502415.tif 000010
2006502415.tif 000011
2006502415.tif 000012