(57)【要約】本発明は画像診断の分野に関する。一態様では、本発明は合成マクロファージスカベンジャー受容体（ＭＳＲＡ）拮抗薬を含む新規造影剤に関するものであり、本造影剤は循環器疾患の画像診断に有用である。本発明の好適な合成ＭＳＲＡ拮抗薬はスルホンアミドベンズアミド化合物である。また、本発明の新規造影剤を含む医薬組成物も本発明の一つの態様をなすが、本医薬組成物はヒトの循環器疾患の画像診断に有用である。本発明の別の態様は本発明の医薬組成物の調製に有用なキットである。循環器疾患の画像診断における本発明の造影剤の使用も本発明の一つの態様をなす。【特許請求の範囲】
【請求項１】
造影成分で標識された合成ＭＳＲＡ拮抗薬を含んでなる造影剤であって、合成ＭＳＲＡ拮抗薬がスルホンアミドベンズアミド化合物であり、造影成分が該標識合成ＭＳＲＡ拮抗薬の哺乳類生体内への投与後に外部から非侵襲的に検出できる、造影剤。
【請求項２】
前記スルホンアミドベンズアミド化合物が次の式（II）のものである、請求項１記載の造影剤。
【化１】
2006514945.tif 000011
式中、ｚは０、１又は２であり、
Ｒ１〜Ｒ１４は独立にＲ基であって、Ｒは水素、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、ニトロ、シアノ、アミノ、ハロゲン、Ｃ６−１４アリール、Ｃ２−７アルケニル、Ｃ２−７アルキニル、Ｃ１−６アシル、Ｃ７−１５アロイル、Ｃ２−７カルボアルコキシ、Ｃ２−１５カルバモイル、Ｃ２−１５カルバミル、Ｃ１−６アルキスルフィニル、Ｃ６−１４アリールスルフィニル、Ｃ６−１２アリールアルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ６−１４アリールスルホニル、Ｃ６−１２アリールアルキルスルホニル、スルファミル、Ｃ６−１４アリールスルホンアミド又はＣ１−６アルキルスルホンアミドである。
【請求項３】
各Ｒ１〜Ｒ１４が造影成分、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ又はハロゲンから選択される、請求項２記載の造影剤。
【請求項４】
式（II）のＲ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ８及びＲ１２の１つが造影成分であり、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ８及びＲ１２基が独立に水素、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ又は塩素、臭素、フッ素もしくはヨウ素から選択されるハロゲンから選択される、請求項２又は請求項３記載の造影剤。
【請求項５】
Ｒ３、Ｒ８及びＲ１２が各々独立に塩素、臭素、フッ素又はヨウ素から選択されるハロゲンである、請求項２乃至請求項４のいずれか１項記載の造影剤。
【請求項６】
造影成分が以下の（ｉ）〜（vii）から選択される、請求項１乃至請求項５のいずれか１記載の造影剤。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ii）常磁性金属イオン、
（iii）γ放出型放射性ハロゲン、
（iv）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（vi）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（vii）血管内検出に適したβ放出体。
【請求項７】
放射性金属イオンがγ放出体又は陽電子放出体である、請求項６記載の造影剤。
【請求項８】
放射性金属イオンが、９９ｍＴｃ、９４ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、４８Ｖ、５２Ｆｅ及び５５Ｃｏから選択される、請求項７記載の造影剤。
【請求項９】
常磁性金属イオンがＧｄ、Ｍｎ及びＦｅの常磁性イオンから選択される、請求項６記載の造影剤。
【請求項１０】
常磁性金属イオンがＧｄ（III）である、請求項７記載の造影剤。
【請求項１１】
γ放出型放射性ハロゲンがヨウ素の放射性同位体である、請求項６記載の造影剤。
【請求項１２】
ヨウ素の放射性同位体が１２３Ｉ又は１３１Ｉから選択される、請求項１１記載の造影剤。
【請求項１３】
陽電子放出型放射性非金属が１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、１２４Ｉ、７５Ｂｒ及び７５Ｂｒから選択される、請求項６記載の造影剤。
【請求項１４】
陽電子放出型放射性非金属が１８Ｆである、請求項１３記載の造影剤。
【請求項１５】
過分極ＮＭＲ活性核種が１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐから選択される、請求項６記載の造影剤。
【請求項１６】
過分極ＮＭＲ活性核種が１３Ｃである、請求項１５記載の造影剤。
【請求項１７】
造影成分が放射性又は常磁性金属イオンであって、該金属イオンが金属錯体の一部としてＭＳＲＡ拮抗薬に結合して次の式（III）のコンジュゲートを形成する、請求項６乃至請求項１０のいずれか１記載の造影剤。
［｛ＭＳＲＡ拮抗薬｝−（Ｌ）ｘ］ｙ−［金属錯体］            （III）
式中、−（Ｌ）ｘ−はリンカー基であって、各Ｌは独立に−ＣＺ２−、−ＣＺ＝ＣＺ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＺ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＺ２−、−ＮＺＣＯ−、−ＣＯＮＺ−、−ＮＺ（Ｃ＝Ｏ）ＮＺ−、−ＮＺ（Ｃ＝Ｓ）ＮＺ−、−ＳＯ２ＮＺ−、−ＮＺＳＯ２−、−ＣＺ２ＯＣＺ２−、−ＣＺ２ＳＣＺ２−、−ＣＺ２ＮＺＣＺ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構築ブロックであり、
Ｚは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｘは０〜１０の整数であり、
ｙは１、２又は３である。
【請求項１８】
金属錯体が放射性金属イオン又は常磁性金属イオンと１以上の配位子との配位錯体である、請求項１７項の造影剤。
【請求項１９】
１以上の配位子がジアミンジオキシム、Ｎ３Ｓ配位子、Ｎ２Ｓ２配位子、Ｎ４配位子及びＮ２Ｏ２配位子から選択されるキレート剤である、請求項１８記載の造影剤。
【請求項２０】
次の式（IIIａ）の造影剤前駆体。
［｛ＭＳＲＡ拮抗薬｝−（Ｌ）ｘ］ｙ−［配位子］          （IIIａ）
式中、−（Ｌ）ｘ−はリンカー基であって、Ｌは請求項１７で定義した通りであり、
ｘは０〜１０の整数であり、
ｙは１、２又は３である。
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１９のいずれか１記載の造影剤を生体適合性の担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含んでなる、医薬組成物。
【請求項２２】
循環器疾患の画像診断用の、請求項２１記載の医薬組成物。
【請求項２３】
アテローム硬化性プラーク、冠動脈疾患、血栓症、一過性虚血又は腎疾患の画像診断用の、請求項２１又は請求項２２記載の医薬組成物。
【請求項２４】
アテローム硬化性プラークの画像診断用の、請求項２３記載の医薬組成物。
【請求項２５】
アテローム硬化性不安定プラークの画像診断用の、請求項２４記載の医薬組成物。
【請求項２６】
請求項１乃至請求項１９のいずれか１記載の造影剤の前駆体を含んでなる、請求項２１乃至請求項２７のいずれか１記載の医薬組成物の調製用キット。
【請求項２７】
前駆体が請求項２０記載の式（IIIａ）のものである、請求項２６記載のキット。
【請求項２８】
医薬組成物の調製が放射性金属イオン又は常磁性金属イオンと式（IIIａ）の前駆体との反応を含む、請求項２７記載のキット。
【請求項２９】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ及び６８Ｇａから選択される、請求項２８記載のキット。
【請求項３０】
放射性金属イオンが９９ｍＴｃである、請求項２８又は請求項２９記載のキット。
【請求項３１】
常磁性金属イオンがＧｄ、Ｍｎ及びＦｅから選択される、請求項２８記載のキット。
【請求項３２】
常磁性金属イオンがＧｄ（III）である、請求項３１記載のキット。
【請求項３３】
循環器疾患の画像診断のための請求項１乃至請求項２０のいずれか１記載の造影剤の使用。
【請求項３４】
循環器疾患がアテローム性動脈硬化症である、請求項３３記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はインビボ画像診断の分野に関する。特に、本発明はマクロファージスカベンジャー受容体拮抗薬を含んでなるインビボ画像診断に有用な新規造影剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
循環器疾患（ＣＶＤ）は西洋社会における死因の第一位であり、脳や心臓その他の重要器官のような身体の生命維持領域に酸素を供給する心臓、動脈、静脈及び肺の機能不全状態が包含される。こうした病態としては、冠動脈心疾患（ＣＨＤ）、冠動脈疾患（ＣＡＤ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、アテローム性動脈硬化症及び血栓症が挙げられ、心筋梗塞（ＭＩ）、肺塞栓症（ＰＥ）及び脳卒中のような生死にかかわる病気を起こす危険性がある。これらの病気すべてに共通した要因はマクロファージが関与していることである。
【０００３】
ＣＨＤは最も一般的な循環器疾患である。１９９８年の推計では、ＣＨＤは全世界で７百万人の死因となった。ＣＡＤはＣＨＤに先行し、大半の症例では根本原因はアテローム性動脈硬化症である。アテローム性動脈硬化症は、アテローム硬化性プラークが粥状になって症状が現れるまで何十年もかかる良性の疾患である。プラークは血流を阻害して、動脈の狭窄を生じ、冠動脈の場合は急性心筋虚血を起こしかねない。さらに、アテローム硬化性プラークが大きくなると、破裂して血栓形成性脂質を放出する可能性があり、このプラーク成分が血栓を形成して動脈を完全に詰まらせるおそれがある。狭心症はＣＨＤの一般的な症状であって、不安定狭心症、心筋梗塞、突然心臓死を始めとする急性冠症候群のようなさらに重度の合併症の前兆である。プラークの破裂は大多数の臨床事象の前兆であり、プラークの脆弱性は臨床転帰を予測するものとして最も重要な判断材料である。
【０００４】
マクロファージスカベンジャー受容体（ＭＳＲ）は、肺、肝臓、脾臓などの組織中の常在性マクロファージで発現され、修飾形の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を認識する。ＭＳＲは循環細胞では発現されない。クラスＡのＭＳＲ（ＭＳＲＡ）はアテローム性動脈硬化症のプラークの発達に関与していることが知られており、ＭＳＲＡ−Ｉ及びＭＳＲＡ−IIはマクロファージによる酸化ＬＤＬ及びアセチル化ＬＤＬの取込みの原因となる。ＭＳＲＡ発現はマクロファージの脂質負荷の指標であり、従ってアテローム硬化性プラークの不安定性の指標となり得る。
【０００５】
一群のＭＳＲＡ拮抗薬がＣＶＤの治療に有用であると報告されている。その例としては、サリチルアニリド誘導体（国際公開第９９／０７３８２号）、イソフタル酸誘導体（国際公開第００／０６１４７号）、フェニレンジアミン（国際公開第００／０３７０４号）及びスルホンアミドベンズアニリド誘導体（国際公開第００／７８１４５号及び国際公開第０１／９８２６４号）が挙げられる。上記引用文献には、これらの化合物を含有するヒトのＣＶＤ治療用の医薬組成物が開示されている。上記引用文献には、ＣＶＤの治療に有用であるだけでなく、これらの化合物が動物中のＭＳＲＡを拮抗する方法並びにマクロファージ由来の泡沫細胞中での脂質の蓄積を阻害する方法にも使用し得ると開示されている。
【０００６】
国際公開第０２／０６７７６１号には、ＣＶＤの診断及びモニタリングに有用な検出可能な標識ＭＳＲＡ拮抗薬が開示されている。国際公開第０２／０６７７６１号のＭＳＲＡ拮抗薬は、サリチルアニリド誘導体、イソフタル酸誘導体及びフェニレンジアミン誘導体である。スルホンアミドベンズアミド化合物であるＭＳＲＡ拮抗薬は開示されていない。国際公開第０２／０６７７６１号の化合物のＩＣ５０値は結合／取込みアッセイで＜１００ｍＭであると開示されている。試験した具体的化合物の具体例は記載されていない。本発明の化合物は、国際公開第０２／０６７７６１号に記載されたものに比べ、優れた結合特性を示すことが判明した。
【特許文献１】国際公開第９９／０７３８２号パンフレット
【特許文献２】国際公開第００／０６１４７号パンフレット
【特許文献３】国際公開第００／０３７０４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第００／７８１４５号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０１／９８２６４号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０２／０６７７６１号パンフレット
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
今回、ＣＶＤ並びにミクログリアの関与する神経疾患の診断及びモニタリングに関して、先行技術の化合物よりも優れた特性を有する合成ＭＳＲＡ拮抗薬を含む新規造影剤が発見された。
【０００８】
ＭＳＲＡ拮抗薬は造影成分に結合しており、造影成分は公知のイメージングモダリティを用いたＭＳＲＡ拮抗薬のインビボでの検出に適している。本発明の好適な合成ＭＳＲＡ拮抗薬はスルホンアミドベンズアミド化合物である。本発明の造影剤は先行技術の化合物よりも優れた造影特性を示す。
【０００９】
本発明では、本発明の新規造影剤を含んでなる医薬組成物及び該医薬組成物の調製用キットについても開示する。さらに、本発明の新規造影剤を用いたＣＶＤの撮像法についても本発明で開示する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の化合物はＣＶＤの画像診断に有用である。本発明における「ＣＶＤ」の定義には、アテローム性動脈硬化症、ＣＡＤ、血栓症、一過性虚血及び腎疾患のような疾患が包含される。本発明の化合物は、アルツハイマー病、パーキンソン病、多発性硬化症及び脳炎などの、ミクログリアと呼ばれる単球由来の神経系細胞の関与する神経系疾患の画像診断にも有用である。
【００１１】
本発明の第一の態様は、造影成分で標識された合成ＭＳＲＡ拮抗薬を含んでなる造影剤であって、該合成ＭＳＲＡ拮抗薬がスルホンアミドベンズアミド化合物であり、該造影成分が該標識合成ＭＳＲＡ拮抗薬の哺乳類生体内への投与後に外部から非侵襲的に検出できる、造影剤である。
【００１２】
本発明の適当なスルホンアミドベンズアミド化合物は次の式（Ｉ）のものである。
【００１３】
【化１】
2006514945.tif 000002
【００１４】
式中、Ｒ２１〜Ｒ２６は独立に水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１４アリール、カルボキシ、アミノ、ヒドロキシ又はメトキシから選択されるが、Ｒ２２〜Ｒ２５の１以上はハロゲンであってもよい。
【００１５】
本発明の好ましいスルホンアミドベンズアミド化合物は式（II）のものである。
【００１６】
【化２】
2006514945.tif 000003
【００１７】
式中、ｚは０、１又は２であり、
Ｒ１〜Ｒ１４は独立にＲ基であって、Ｒは水素、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−６アルキル、ニトロ、シアノ、アミノ、ハロゲン、Ｃ６−１４アリール、Ｃ２−７アルケニル、Ｃ２−７アルキニル、Ｃ１−６アシル、Ｃ７−１５アロイル、Ｃ２−７カルボアルコキシ、Ｃ２−１５カルバモイル、Ｃ２−１５カルバミル、Ｃ１−６アルキスルフィニル、Ｃ６−１４アリールスルフィニル、Ｃ６−１２アリールアルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ６−１４アリールスルホニル、Ｃ６−１２アリールアルキルスルホニル、スルファミル、Ｃ６−１４アリールスルホンアミド又はＣ１−６アルキルスルホンアミドである。
【００１８】
本発明の好ましい造影剤は、式（II）において各Ｒ１〜Ｒ１４が造影成分、水素、Ｃ１−６アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、アミノ又はハロゲンから選択されるものである。
【００１９】
本発明の最も好ましい造影剤は、式（II）においてＲ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ８及びＲ１２の１つが造影成分であり、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ８及びＲ１２基が独立に水素、Ｃ１−６アルキル、カルボキシ又は塩素、臭素、フッ素もしくはヨウ素から選択されるハロゲンから選択されるものである。
【００２０】
本発明の特に好ましい造影剤は式（II）においてＲ３、Ｒ８及びＲ１２がすべてハロゲンであり、その少なくとも１つが造影成分であるものである。
【００２１】
本発明のスルホンアミドベンズアミド化合物は国際公開第００／７８１４５号のスキーム１に記載の通り調製できる。ｚ＝０である式（II）の化合物の合成を図１に例示する。Ｒ１〜Ｒ１４は上記の式（II）で定義した通りある。ｚ＝１及びｚ＝２である式（II）の化合物の調製には、同様の合成法を使用し得る。
【００２２】
単独又は他の基の一部として用いる「アルキル」は本明細書では直鎖、枝分れ又は環状の飽和又は不飽和ＣｎＨ２ｎ＋１基と定義され、特記しない限り、ｎは１〜６の整数である。アルキルという用語は本発明では、ヒドロキシアルキル、ハロアルキル、アミノアルキル、カルボキシアルキル及びアルコキシアルキルのような置換アルキルも包含した意味で用いる。
【００２３】
単独又は他の基の一部として用いる「アリール」は本明細書では単環式又は多環式芳香族炭化水素由来のＣ６−１４分子断片又は基と定義される。本発明の適当なアリール基としては、特に限定されないが、ハロアリール、アルキルアリール、アリールカルバミル、フェニルアゾ、アリールアミノ、アリールチオ、トルエン、安息香酸、フェノール、アリールフルフィニル、アリールスルホニル、アリールスルホンアミド、ベンゾチオフェン、ナフタレン、キノリン、イソキノリン、ピリジン、ピリミジン及びピラジンが挙げられる。
【００２４】
「ハロゲン」という用語はフッ素、塩素、臭素、ヨウ素又はその同位体から選択される基を意味する。
【００２５】
「造影成分」は好ましくは以下の（ｉ）〜（vii）から選択される。
（ｉ）放射性金属イオン、
（ii）常磁性金属イオン、
（iii）γ放出型放射性ハロゲン、
（iv）陽電子放出型放射性非金属、
（ｖ）過分極ＮＭＲ活性核種、
（vi）インビボ光学イメージングに適したレポーター、
（vii）血管内検出に適したβ放出体。
【００２６】
造影成分が放射性金属イオン、即ち放射性金属である場合、適当な放射性金属は、６４Ｃｕ、４８Ｖ、５２Ｆｅ、５５Ｃｏ、９４ｍＴｃ又は６８Ｇａのような陽電子放出体、或いは９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１３ｍＩｎ又は６７Ｇａなどのγ放出体のいずれかである。好ましい放射性金属は、９９ｍＴｃ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎである。最も好ましい放射性金属はγ放出体、特に９９ｍＴｃである。
【００２７】
造影成分が常磁性金属イオンである場合、かかる金属イオンの適当なものとして、Ｇｄ（III）、Ｍｎ（II）、Ｃｕ（II）、Ｃｒ（III）、Ｆｅ（III）、Ｃｏ（II）、Ｅｒ（II）、Ｎｉ（II）、Ｅｕ（III）又はＤｙ（III）が挙げられる。好ましい常磁性金属イオンはＧｄ（III）、Ｍｎ（II）及びＦｅ（III）であり、Ｇｄ（III）が特に好ましい。
【００２８】
造影成分がγ放出型放射性ハロゲンである場合、放射性ハロゲンは１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ又は７７Ｂｒから好適に選択される。好ましいγ放出型放射性ハロゲンは１２３Ｉである。
【００２９】
造影成分が陽電子放出型放射性非金属である場合、かかる陽電子放出体の適当なものとして、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１７Ｆ、１８Ｆ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ又は１２４Ｉが挙げられる。好ましい陽電子放出型放射性非金属は１１Ｃ、１３Ｎ及び１８Ｆであり、特に好ましくは１１Ｃ及び１８Ｆであり、最も好ましくは１８Ｆである。
【００３０】
造影成分が過分極ＮＭＲ活性核種である場合、かかるＮＭＲ活性核種はゼロ以外の核スピンを有するもので、１３Ｃ、１５Ｎ、１９Ｆ、２９Ｓｉ及び３１Ｐが挙げられる。これらのうち、１３Ｃが好ましい。「過分極」という用語はＮＭＲ活性核種の分極の程度がその平衡分極を超えていることを意味する。１３Ｃの天然の存在量は（１２Ｃに対して）約１％であり、適当な１３Ｃ標識化合物は過分極する前に存在量が５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは９０％以上となるように濃縮される。本発明のスルホンアミドベンズアミド化合物の１以上の炭素原子は好適には１３Ｃで濃縮され、これを次いで過分極させる。
【００３１】
造影成分がインビボ光学イメージングに適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング法で直接又は間接的に検出できる部分であればよい。レポーターは光散乱体（例えば着色又は無着色粒子）、光吸収体又は光放射体とし得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような色素である。色素は紫外乃至近赤外域の波長を有する電磁スペクトルの光と相互作用する色素であればよい。最も好ましくはレポーターは蛍光特性を有する。
【００３２】
好ましい有機発色団及び蛍光団レポーターとしては、広範囲に非局在化した電子系を有する基、例えばシアニン、メロシアニン、インドシアニン、フタロシアニン、ナフタロシアニン、トリフェニルメチン、ポルフィリン、ピリリウム色素、チアピリリウム色素、スクアリリウム色素、クロコニウム色素、アズレニウム色素、インドアニリン、ベンゾフェノキサジニウム色素、ベンゾチアフェノチアジニウム色素、アントラキノン、ナフトキノン、インダスレン、フタロイルアクリドン、トリスフェノキノン、アゾ色素、分子内及び分子間電荷移動色素及び色素鎖体、トロポン、テトラジン、ビス（ジチオレン）鎖体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）鎖体、ヨードアニリン色素、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）鎖体が挙げられる。蛍光タンパク質、例えば緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び吸収／発光特性の異なるＧＦＰの修飾物も有用である。ある種の希土類金属（例えばユーロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の鎖体も、蛍光ナノ結晶（量子ドット）のような特定の状況で用いられる。
【００３３】
使用し得る発色団の具体例としては、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（テキサスレッド）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｍａｒｉｎａ  Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ８８、Ｏｒｅｇｏｎ  Ｇｒｅｅｎ  ５１４、テトラメチルローダミン、及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ３５０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４３０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５３２、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５４６、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５６８、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５９４、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６３３、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６４７、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６６０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ６８０、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７００及びＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ７５０が挙げられる。
【００３４】
特に好ましいのは、４００ｎｍ〜３μｍ、特に６００〜１３００ｎｍの可視又は近赤外域に吸収極大を有する色素である。
【００３５】
光学イメージングモダリティ及び測定手法としては、特に限定されないが、ルミネセンスイメージング、内視鏡、蛍光内視鏡、光干渉断層撮影、透過イメージング、時間分解透過イメージング、共焦点イメージング、非線形顕微鏡分析、光音響イメージング、音響光学型イメージング、分光法、反射分光法、干渉分析法、コヒーレンス干渉法、拡散光トモグラフィ及び蛍光拡散光トモグラフィ（連続波、時間ドメイン及び周波数ドメインシステム）並びに光散乱、吸収、偏光、発光、蛍光寿命、量子収率及び消光の測定などが挙げられる。
【００３６】
造影成分が血管内検出に適したβ放出体である場合、かかるβ放出体の適当なものとして、放射性金属６７Ｃｕ、８９Ｓｒ、９０Ｙ、１５３Ｓｍ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ又は１９２Ｉｒ及び非金属３２Ｐ、３３Ｐ、３８Ｓ、３８Ｃｌ、３９Ｃｌ、８２Ｂｒ及び８３Ｂｒが挙げられる。
【００３７】
造影成分を上記のいずれから選択するにしても、好ましくは造影剤の前駆体と反応させる。造影剤前駆体は本発明の第二の態様をなす。かかる前駆体と適当な化学的形態の造影成分との反応で造影剤が得られる。本発明で定義される「前駆体」は、造影成分を容易に（好ましくは１段階プロセスで）結合することができるＭＳＲＡ拮抗体化合物である。本発明の適当な前駆体の一例は、金属キレート剤に結合したＭＳＲＡ拮抗薬であり、金属イオンである造影成分の結合に適している。本発明の適当な前駆体の別の例としては、例えば（ａ）非放射性ハロゲン原子、（ｂ）活性化アリール環、（ｃ）有機金属前駆体化合物、又は（ｄ）トリアゼンなどの有機前駆体のような基が挙げられる。かかる前駆体は放射性ハロゲンである造影成分の導入に適している。これらの前駆体化合物及び得られる造影剤については、以下の項でさらに詳しく説明する。
【００３８】
造影成分が金属イオンを含む場合、金属イオンは式（III）の金属錯体の一部としてＭＳＲＡ拮抗薬に結合する。
【００３９】
［｛ＭＳＲＡ拮抗薬｝−（Ｌ）ｘ］ｙ−［金属錯体］            （III）
式中、−（Ｌ）ｘ−はリンカー基であって、各Ｌは独立に−ＣＺ２−、−ＣＺ＝ＣＺ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＺ２ＣＯ２−、−ＣＯ２ＣＺ２−、−ＮＺＣＯ−、−ＣＯＮＺ−、−ＮＺ（Ｃ＝Ｏ）ＮＺ−、−ＮＺ（Ｃ＝Ｓ）ＮＺ−、−ＳＯ２ＮＺ−、−ＮＺＳＯ２−、−ＣＺ２ＯＣＺ２−、−ＣＺ２ＳＣＺ２−、−ＣＺ２ＮＺＣＺ２−、Ｃ４−８シクロヘテロアルキレン基、Ｃ４−８シクロアルキレン基、Ｃ５−１２アリーレン基、Ｃ３−１２ヘテロアリーレン基、アミノ酸又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構築ブロックであり、
Ｚは独立にＨ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニル、Ｃ２−４アルキニル、Ｃ１−４アルコキシアルキル又はＣ１−４ヒドロキシアルキルから選択され、
ｘは０〜１０の整数であり、
ｙは１、２又は３である。
【００４０】
「金属錯体」という用語は金属イオンと１以上の配位子の配位錯体を意味する。
金属錯体が「キレート交換耐性」であること、つまり金属配位部位に対する他の潜在的競合配位子との配位子交換を起こしにくいことが極めて好ましい。潜在的競合配位子としては、合成ＭＳＲＡ拮抗薬自体の他にインビトロ標品中の賦形剤（例えば、標品に用いられる放射線防御剤又は抗菌防腐剤）、又はインビボ内在性化合物（例えば、グルタチオン、トランスフェリン又は血漿タンパク質）が挙げられる。「リンカー基」（Ｌ）ｘは式（IIIａ）について下記に定義される。
【００４１】
式（III）の金属錯体は、次の式（IIIａ）の配位子コンジュゲートである前駆体から簡便に調製される。
【００４２】
［｛ＭＳＲＡ拮抗薬｝−（Ｌ）ｘ］ｙ−［配位子］          （IIIａ）
式中、（Ｌ）ｘ、ｘ及びｙは上記の式（III）で定義した通りある。
【００４３】
式（III）及び（IIIａ）において、ｙは好ましくは１又は２であり、最も好ましくは１である。
【００４４】
本発明でキレート交換耐性の金属錯体の形成に用いる適当な配位子には、（炭素原子又は非配位ヘテロ原子の非配位骨格で金属供与原子を連結することによって）５員環又は６員環キレートが形成されるように２〜６個、好ましくは２〜４個の金属供与原子が配置されたキレート剤が挙げられる。キレート剤の一部として金属に良好に結合する供与原子の例は、アミン、チオール、アミド、オキシム及びホスフィンである。ホスフィン類は強い金属錯体を形成し、単座又は二座ホスフィンであっても適当な金属鎖体を形成する。イソニトリル及びジアゼニドは直線的な幾何構造をとるので、キレート剤への導入が難しく、通例、単座配位子として使用される。適当なイソニトリルの例としては、ｔｅｒｔ−ブチルイソニトリルのような単純なアルキルイソニトリル、及びＭＩＢＩ（即ち、１−イソシアノ−２−メトキシ−２−メチルプロパン）のようなエーテル置換イソニトリルが挙げられる。適当なホスフィンの例としては、テトロホスミン及び単座ホスフィン類、例えばトリス（３−メトキシプロピル）ホスフィンが挙げられる。適当なジアゼニドの例としては、ＨＹＮＩＣ系の配位子、つまりヒドラジン置換ピリジン又はニコチンアミドが挙げられる。
【００４５】
テクネチウムの適当なキレート剤で、キレート交換耐性の金属鎖体を形成するものの例として、特に限定されないが、以下の（ｉ）〜（ｖ）がある。
【００４６】
（ｉ）式（IV）のジアミンジオキシム。
【００４７】
【化３】
2006514945.tif 000004
【００４８】
式中、Ａ１〜Ａ６は各々独立にＡ基であって、各ＡはＨ又はＣ１−１０アルキル、Ｃ３−１０アルキルアリール、Ｃ２−１０アルコキシアルキル、Ｃ１−１０ヒドロキシアルキル、Ｃ１−１０フルオロアルキル、Ｃ２−１０カルボキシアルキル又はＣ１−１０アミノアルキルであるか、或いは２個以上のＡがそれらと結合した原子と一緒に炭素環、複素環、飽和又は不飽和の環を形成するもので、Ａ基の１個以上はＭＳＲＡ拮抗薬とコンジュゲートしており、
Ｑは式−（Ｊ）ｍ−の橋かけ基であって、ｍは３、４又は５であり、各Ｊは独立に−Ｏ−、−ＮＡ−又は−Ｃ（Ａ）２−であるが、ただし−（Ｊ）ｍ−が−Ｏ−又は−ＮＡ−であるＪ基を最大１個含むことを条件とする。
【００４９】
好ましいＱ基は以下のものである。
Ｑ＝−（ＣＨ２）（ＣＨＡ）（ＣＨ２）−、即ちプロピレンアミンオキシムつまりＰｎＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２（ＣＨＡ）（ＣＨ２）２−、即ちペンチレンアミンオキシムつまりＰｅｎｔＡＯ誘導体、
Ｑ＝−（ＣＨ２）２ＮＡ（ＣＨ２）２−。
【００５０】
Ａ１〜Ａ６は、好ましくはＣ１−３アルキル、アルキルアリール、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、フルオロアルキル、カルボキシアルキル又はアミノアルキルから選択される。最も好ましくは、各Ａ１〜Ａ６基はＣＨ３である。
【００５１】
合成ＭＳＲＡ拮抗薬は好ましくはＡ１又はＡ６のいずれか、又はＱ部分のＡ基のいずれかでコンジュゲートする。最も好ましくは、ＭＳＲＡ拮抗薬はＱ部分のＡ基にコンジュゲートする。ＭＳＲＡ拮抗薬がＱ部分のＡ基にコンジュゲートする場合、そのＡ基は好ましくは橋頭位置にある。かかる場合、Ｑは好ましくは−（ＣＨ２）（ＣＨＡ）（ＣＨ２）−、−（ＣＨ２）２（ＣＨＡ）（ＣＨ２）２−又は−（ＣＨ２）２（ＮＡ）（ＣＨ２）２−であり、最も好ましくは−（ＣＨ２）２（ＣＨＡ）（ＣＨ２）２−である。
【００５２】
特に好ましい二官能性ジアミンジオキシムキレート剤は式（Ｖ）のものである。
【００５３】
【化４】
2006514945.tif 000005
【００５４】
このキレート剤は「キレート剤１」とも呼ばれる。合成ＭＳＲＡ拮抗薬は、橋頭ＮＨ２基を介してキレート剤１にコンジュゲートする。
【００５５】
（ii）ＭＡＧ３のようなチオールトリアミドドナーセットを有するＮ３Ｓ配位子及び関連配位子、又はＰＩＣＡのようなジアミドピリジンチオールドナーセットを有するもの。
【００５６】
（iii）ジアミンジチオールドナーセットを有するＮ２Ｓ２配位子、例えばＢＡＴ又はＥＣＤ（すなわちエチルシステイネート二量体）又はアミドアミンジチオールドナーセットを有するもの、例えばＭＡＭＡ。
【００５７】
（iv）テトラミン、アミドトリアミン又はジアミンジアミンドナーセットを有する開環又はマクロ環状配位子であるＮ４配位子、例えばサイクラム、モノオキソサイクラム又はジオキソサイクラム。
【００５８】
（ｖ）ジアミンジフェノールドナーセットを有するＮ２Ｏ２配位子。
【００５９】
上述の配位子は特にテクネチウム、例えば９４ｍＴｃ又は９９ｍＴｃとの錯形成に適しており、Ｊｕｒｉｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ［Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，９９，２２０５−２２１８（１９９９）］にさらに詳細に説明されている。これらの配位子は、銅（６４Ｃｕ又は６７Ｃｕ）、バナジウム（例えば４８Ｖなど）、鉄（例えば５２Ｆｅ）、コバルト（例えば５５Ｃｏ）のような他の金属にも有用である。他の適当な配位子としては、Ｓａｎｄｏｚの国際公開第９１／０１１４４号に記載されたものがあり、インジウム、イットリウム及びガドリニウムに特に適した配位子、特にマクロ環アミノカルボキシレート及びアミノホスホン酸配位子が挙げられる。ガドリニウムの非イオン性（すなわち中性）金属鎖体を形成する配位子は公知であり、米国特許第４８８５３６３号に記載されている。放射性金属イオンがテクネチウムである場合は、配位子は好ましくは４座キレートである。テクネチウムに対する好ましいキレート剤はジアミンジオキシム又は上記Ｎ２Ｓ２又はＮ３Ｓのドナーセットを有するものである。テクネチウムに対する特に好ましいキレート剤はジアミンジオキシムである。
【００６０】
式（III）及び（IIIａ）のリンカー基−（Ｌ）ｘ−の役割は、金属の配位で得られる比較的嵩高い金属錯体をＭＳＲＡ拮抗薬の活性部位から離隔して、ＭＳＲＡへの拮抗薬の結合が損なわれないようにすることである。これは、嵩高い基が活性部位から遠ざかる自由度をもつようにするための柔軟性（例えば単純なアルキル鎖）及び／又は金属錯体を活性部位から遠ざけるシクロアルキル又はアリールスペーサーのような剛直性の組合せによって達成することができる。
【００６１】
リンカー基の性状はコンジュゲートの金属錯体の生体分布を変化させるのにも使用できる。例えば、リンカーにエーテル基を導入すると、血漿タンパク質の結合を最小限にするのに役立つ。好ましいリンカー基は、２〜１０原子、最も好ましくは２〜５原子、特に２又は３原子の−（Ｌ）ｘ−基をなす連結原子の骨格鎖を有する。２原子の最小のリンカー基骨格鎖は配位子がＭＳＲＡ拮抗薬から十分に離れて相互作用が最小限に押さえられるという利点を与える。
【００６２】
アルキレン基又はアリーレン基のような非ペプチド系リンカー基は、それらがコンジュゲートしたＭＳＲＡ拮抗薬と有意の水素結合相互作用をもたず、ＭＳＲＡ拮抗薬にリンカーが巻きつかないという利点を有する。好ましいアルキレンスペーサー基は−（ＣＨ２）ｑ−であり、ｑは２〜５である。好ましいアリーレンスペーサーは式（VI）のものである。
【００６３】
【化５】
2006514945.tif 000006
【００６４】
式中、ａ及びｂは独立に０、１又は２である。
【００６５】
金属錯体はその結合が血中で容易に代謝されないように結合するのが極めて好ましい。さもないと、造影剤が所望の生体内標的部位に達する前に金属錯体が切断されてしまうからである。金属錯体は好ましくは容易に代謝されない共有結合で結合する。
【００６６】
造影成分が放射性ハロゲンである場合、好ましくはヨウ素の放射性同位体である。放射性ヨウ素原子は好ましくは共有結合によってベンゼン環のような芳香族環又はビニル基に直接結合する。飽和脂肪族系に結合したヨウ素原子はインビボ代謝を受けやすく、放射性ヨウ素が失われやすいことが知られているからである。
【００６７】
造影成分がヨウ素のような放射性ハロゲンである場合、造影剤の適当な前駆体としては、ヨウ化アリール又は臭化アリールのような非放射性ハロゲン（放射性ヨウ素交換を可能とするため）、活性化アリール環（例えばフェノール基）、有機金属前駆体化合物（例えばトリアルキルスズ又はトリアルキルシリル）、トリアジンのような有機前駆体その他当業者に公知の成分が挙げられる。放射性ハロゲン（例えば１２３Ｉ及び１８Ｆ）の導入法はＢｏｌｔｏｎ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）］に記載されている。
【００６８】
放射性ハロゲン、特にヨウ素を結合することができる適当なアリール基を以下に示す。
【００６９】
【化６】
2006514945.tif 000007
【００７０】
両者共に芳香族環で容易に放射性ヨウ素置換できる置換基を含んでいる。放射性ヨウ素を有する別の置換基は、以下に示すような放射性ハロゲン交換による直接ヨウ素化によって合成できる。
【００７１】
【化７】
2006514945.tif 000008
【００７２】
造影成分がフッ素の放射性同位体（例えば１８Ｆ）を含む場合、放射性ヨウ素原子は、臭化アルキル、アルキルメシレート又はアルキルトシレートのような良好な脱離基を有する適当な前駆体との１８Ｆ−フッ化物との反応を用いた直接標識によって実施し得る。
１８Ｆは、１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ（Ｍｓはメシレート）のようなアルキル化剤でのアミン前駆体のＮ−アルキル化によるＮ−（ＣＨ２）３１８Ｆの形成、或いは１８Ｆ（ＣＨ２）３ＯＭｓ又は１８Ｆ（ＣＨ２）３Ｂｒでのヒドロキシル基のＯ−アルキル化によって導入することもできる。アリール系の場合は、アリールジアゾニウム塩からの窒素の１８Ｆ−フッ化物置換がアリール−１８Ｆ誘導体への良好な経路である。１８Ｆ−標識誘導体の合成経路については、Ｂｏｌｔｏｎ，  Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，４５，４８５−５２８（２００２）を参照されたい。
【００７３】
本発明の第三の態様では、本発明の造影剤を生体適合性の担体と共に哺乳類への投与に適した形態で含む医薬組成物について開示する。
【００７４】
「医薬組成物」とは、本発明では、本発明の造影剤又はその塩をヒトへの投与に適した形態で含む製剤と定義される。本発明の医薬組成物は好ましくは非経口的、即ち注射によって投与され、最も好ましくは水溶液として投与される。かかる製剤は、適宜、緩衝剤、薬学的に許容される可溶化剤（例えばシクロデキストリン、又はＰｌｕｒｏｎｉｃ、Ｔｗｅｅｎのような界面活性剤又はリン脂質）、薬学的に許容される安定剤又は酸化防止剤（アスコルビン酸、ゲンチシン酸、パラアミノ安息香酸など）などの追加成分を含んでいてもよい。
【００７５】
本発明の第四の態様では、本発明の医薬組成物の調製用キットであって、本発明の造影剤前駆体を含むキットについて開示する。かかるキットは例えば血流中への直接注射によるヒトへの投与に適した滅菌製剤を与えるように設計され、造影剤の前駆体を含んでいる。
【００７６】
好ましくは、キットは、造影成分が放射性金属イオン、常磁性金属イオン又は放射性ハロゲンから選択される造影剤を含む医薬組成物を調製するためのものである。各々の前駆体については、例えば式（IIIａ）で金属イオンに関して説明した通りである。
【００７７】
放射性金属が９９ｍＴＣである場合、キットは好ましくは凍結乾燥したもので、９９ｍＴｃ放射性同位体発生装置からの滅菌９９ｍＴｃ−パーテクネテート（ＴｃＯ４−）で再構成すればそれ以上操作しなくてもヒトへの投与に適した溶液を与えるように設計される。適当なキットは、遊離塩基又は酸塩の形態のＭＳＲＡ拮抗薬−キレートコンジュゲートを、亜ジチオン酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、ホルムアミジンスルフィン酸、第一スズイオン、Ｆｅ（II）又はＣｕ（Ｉ）のような生体適合性の還元剤をと共に、収容した容器（例えばセプタム密封バイアル）を備える。或いは、キットは適宜放射性金属の添加により所望の生成物を与える金属転移反応（すなわち金属交換）を起こす金属鎖体を含有する。生体適合性の還元剤は好ましくは塩化第一スズ又は酒石酸第一スズのような第一スズ塩である。或いは、キットは適宜金属錯体を含んでいてもよく、放射性金属の添加時にトランスメタレーション（金属交換）を起こして所望の生成物を与える。
【００７８】
本発明の造影剤調製用キットは、適宜、トランスキレート剤、放射線防護剤、抗菌防腐剤、ｐＨ調節剤又は充填剤のような追加成分をさらに含んでいてもよい。「トランスキレート剤」は、テクネチウムと迅速に反応して弱い錯体を形成し、後でジアミンジオキシムで置換される化合物である。これは、テクネチウム錯形成反応と競合する過テクネチウム酸の急速な還元による還元加水分解テクネチウム（ＲＨＴ）の形成の危険性を最小限に抑える。かかるトランスキレート剤として適当なものは、弱有機酸（即ち３〜７の範囲のｐＫａを有する有機酸）と生体適合性カチオンとの塩である。かかる弱有機酸として適当なものは、酢酸、クエン酸、酒石酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、フェノール又はホスホン酸である。従って、適当な塩は、酢酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩、フェノラート又はホスホン酸塩である。かかる塩として好ましいのは、酒石酸塩、グルコン酸塩、グルコヘプトン酸塩、安息香酸塩又はホスホン酸塩であり、最も好ましくはホスホン酸塩、特にジホスホンサン塩である。好ましいトランスキレート剤は、ＭＤＰ（メチレンジホスホン酸）と生体適合性カチオンとの塩である。
【００７９】
「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解で生じる含酸素ラジカルのような高反応性ラジカルを捕捉することにより、酸化還元プロセスなどの分解反応を阻害する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸）、ゲンチシン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）、並びにかかる酸と上述の生体適合性カチオンとの塩から選択される。
【００８０】
「抗菌防腐剤」という用語は、細菌、酵母又はカビなどの有害微生物の増殖を阻害する薬剤を意味する。抗菌防腐剤は、用量に応じてある程度の殺菌作用を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、再構成後の医薬組成物（即ち、造影剤自体）における微生物の増殖を阻害することである。ただし、抗菌防腐剤は、適宜、再構成前の本発明のキットの１以上の成分中での有害微生物の増殖を阻害するために使用してもよい。適当な抗菌防腐剤としては、パラベン類、即ちメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン又はこれらの混合物、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールが挙げられる。好ましい抗菌防腐剤はパラベンである。
【００８１】
「ｐＨ調節剤」という用語は、再構成されたキットのｐＨが、ヒト又は哺乳類投与に許容できる範囲（約ｐＨ４．０〜１０．５）に確実に収まるように用いられる化合物又は化合物の混合物を意味する。かかるｐＨ調節剤の適当なものとして、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ（即ち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）などの薬学的に許容できる緩衝剤、並びに炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物などの薬学的に許容できる塩基が挙げられる。ＭＳＲＡ拮抗薬−キレート剤コンジュゲートを酸の塩の形態で用いる場合、ｐＨ調節剤は適宜、キットのユーザーが多段階操作法の一部としてｐＨを調節できるように別個のバイアル又は容器で提供してもよい。
【００８２】
「充填剤」という用語は、製造時及び凍結乾燥時の材料の取扱いを容易にする薬学的に許容される増量剤を意味する。適当な充填剤としては、塩化ナトリウムのような無機塩及び水溶性糖類又は糖アルコール、例えばスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースが挙げられる。
【００８３】
本発明の第五の態様は、ＣＶＤの画像診断に本発明の医薬組成物を使用することである。好ましくは、本発明の医薬品用組成物は、アテローム硬化性プラーク、冠動脈疾患、血栓症、一過性虚血又は腎疾患の画像診断に使用される。最も好ましくは、本発明の医薬組成物はアテローム硬化性プラークの画像診断に使用される。本発明の医薬組成物の特に好ましい用途は、アテローム硬化性不安定プラークの画像診断用である。
【００８４】
本発明の医薬組成物の別の用途は、例えばアルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病及び脳炎など、ミクログリアが関与する神経系疾患の画像診断にある。
【実施例】
【００８５】
実施例の簡単な説明
以下の非限定的な実施例で、本発明の様々な実施形態を説明する。
【００８６】
実施例１は、実施例２における前駆体１の調製に用いるキレート剤１の合成に関する。前駆体１は金属イオン、好ましくは９９ｍＴＣを結合させるのに適した化合物であり、その結合については実施例５で説明する。実施例３及び４は前駆体２及び３の合成について説明したもので、共に９９ｍＴＣでの標識に適している。
【００８７】
実施例６は、放射性ハロゲンでの直接置換に適した化合物の前駆体４の合成について説明したものである。前駆体４を放射性ヨウ素で処理して造影剤２を形成する方法については実施例７で説明する。
【００８８】
実施例８は、放射性フッ素での処理に適した前駆体５の合成について説明したものである。実施例９は、前駆体５から１８Ｆ化合物を調製する方法について説明したものである。
【００８９】
実施例１０及び実施例１１は、造影剤２及び３の非放射性参照標品の調製方法について説明したものである。これらの非放射性参照標品は、放射性ヨウ素化造影剤２及び３と結合特性が等しいはずであるので、スカベンジャー受容体結合アッセイに用いた。
【００９０】
実施例１２は本発明の化合物の結合特性の評価に用いた方法の概略について述べる。造影剤２及び３の非放射性参照標品の結合アッセイでＩＣ５０値＜４０μＭであることが判明した。
【００９１】
実施例１３及び実施例１４は、ＭＳＲＡ発現細胞への１２５Ｉ造影剤２の結合性の評価に用いた細胞結合アッセイについて説明したものである。実施例１３では、１２５Ｉ造影剤２はＴＨＰ−１細胞及びＣＨＯ−ＳＲＡ細胞に存在するＭＳＲＡに結合することが判明した。ＴＨＰ−１への１２５Ｉ造影剤２の飽和結合を、単一部位結合曲線にフィットさせて解析したところ、Ｋｄは６．７４μＭと算出された。従って、競合データとは対照的に、１２５Ｉ造影剤２はμＭ親和力で結合するようである。実施例１４では、１２５Ｉ造影剤２の結合を非放射性１２７Ｉ造影剤２及びＡｃＬＤＬと競合させ、造影剤がＭＳＲＡに特異的に結合することが実証された。
【００９２】
実施例１５は、マウス腫瘍モデルにおける１２５Ｉ造影剤２のインビボ特性について説明したものである。結果は注射後４時間まで約２０％の最小限のインビボ脱ヨウ素化を示した。排出速度が遅くて血中保持率は終始高く、ＧＩ排出は高かった（図８Ａ及び８Ｂ）。腫瘍組織への１２５Ｉ造影剤２の取込みは最初は低かったが、注射後６０分でピークに達し、そのまま一定となった。血中保持率が注射後５〜６０分から減少したので、腫瘍部位での１２５Ｉ造影剤２の増加は特異的である可能性が高い。良好な腫瘍／筋肉比が得られ、最適比は注射後６０分で認められた（図８ａ）。
【００９３】
実施例１：キレート剤１の合成
工程１（ａ）：３（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル
トルエン（６００ｍｌ）中のカルボメトキシメチレントリフェニルホスホラン（１６７ｇ、０．５モル）をジメチル３−オキソグルタレート（８７ｇ、０．５モル）で処理し、反応混合物を窒素雰囲気下１２０℃の油浴上で１００℃に３６時間加熱した。反応混合物を次いで減圧濃縮して、油状残留物を４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１：１、６００ｍｌで倍散した。トリフェニルホスフィンオキシドが析出し、上清をデカント／濾過した。真空蒸発後の残留物を高真空下（オーブン温度１８０〜２００℃、０．２ｔｏｒｒ）でクーゲルロール蒸留して８９．０８ｇ（２６７ｍＭ、５３％）の３（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステルを得た。
【００９４】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）：δ  ３．３１（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、３．７（９Ｈ，ｓ，３×ＯＣＨ３）、３．８７（２Ｈ，ｓ，ＣＨ２）、５．７９（１Ｈ，ｓ，＝ＣＨ）ｐｐｍ。
【００９５】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ  ３６．５６（ＣＨ３）、４８．７（２×ＣＨ３）、５２．０９及び５２．５（２×ＣＨ２）、１２２．３及び１４６．１６（Ｃ＝ＣＨ）、１６５．９，１７０．０及び１７０．５（３×ＣＯＯ）ｐｐｍ。
【００９６】
工程１（ｂ）：３−（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステルの水素化
メタノール（２００ｍｌ）中の３（メトキシカルボニルメチレン）グルタル酸ジメチルエステル（８９ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を水素ガス雰囲気（５０ｐｓｉ）下（木炭担持１０％パラジウム：５０％水）（９ｇ）と共に３０時間振盪した。溶液を珪藻土で濾過し、減圧濃縮し、３−（メトキシカルボニルメチル）グルタル酸ジメチルエステルを油状物（８４．９ｇ、９４％）として得た。
【００９７】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ（１２Ｈ，ｍ，４×ＣＨ３）、（２Ｈ，ｍ，２×ＣＨ２）（１Ｈ，６重線，ＣＨ）３．７（１Ｈ，２重線，ＣＨ）、（８Ｈ，２  ４重線，４×ＣＨ２Ｏ）。
【００９８】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ及び２×ＣＨ３，ＣＨ，２×ＣＨ２，ＣＨ；及び２×ＣＨ２−Ｏ，１６８．２及び１７１．５  ２×ＣＯＯ。
【００９９】
工程１（Ｃ）：トリメチルエステルの還元及びエステル化によるトリアセテートの形成
窒素雰囲気下の２リットル三首丸底フラスコ中で、テトラヒドロフラン（４００ｍｌ）中の水酸化アルミニウム（２０ｇ、５８８ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２００ｍｌ）中のトリ（メチルオキシカルボニルメチル）メタン（４０ｇ、２１２ｍｍｏｌ）で注意深く１時間処理した。強い発熱反応が起こり、溶媒の強い還流が起きた。反応混合物を９０℃の油浴上還流条件下で３日間加熱した。水素の発生が止まるまで酢酸（１００ｍｌ）を注意深く滴下することによって反応を奪活した。穏やかな還流が起こるような速度で攪拌反応混合物を無水酢酸溶液（５００ｍｌ）で注意深く処理した。フラスコに蒸留装置を取り付け、攪拌し、９０℃（油浴温度）で加熱してテトラヒドロフランを留去した。追加の無水酢酸（３００ｍｌ）を添加し、反応を還流条件に戻し、攪拌し、１４０℃の油浴で５時間加熱した。反応を冷却し濾過した。酸化アルミニウム析出物を酢酸エチルで洗浄し、一緒にした濾液を、ロータリーエバポレーターで水浴温度５０℃、真空中（５ｍｍＨｇ）で濃縮して油状物を得た。油状物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に取り、炭酸カリウム飽和水溶液で洗浄した。酢酸エチル溶液が分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮して、油状物を得た。この油状物を高真空下でクーゲルロール蒸留して、トリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３１３ｇ、９５．９％収率、０．１６５ｍｏｌ）を油状物として得た。０．１ｍｍＨｇにおける沸点２２０℃。
【０１００】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ  １．６６（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ）、２．０８（１Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）；４．１（６Ｈ，ｔ  ３×ＣＨ２Ｏ）。
【０１０１】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ   ２０．９（ＣＨ３）、２９．３４（ＣＨ）、３２．１７（ＣＨ２）、６２．１５（ＣＨ２Ｏ）、１７１（ＣＯ）。
【０１０２】
工程Ｉ（ｄ）：トリアセテートからの酢酸基の除去
メタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アセトキシエチル）メタン（４５．３ｇ、１６５ｍＭ）及び８８０アンモニア（１００ｍｌ）を８０℃の油浴上で２日間加熱した。反応混合物を追加の８８０アンモニア（５０ｍｌ）で処理し、油浴中８０℃で２４時間加熱した。さらに追加の８８０アンモニア（５０ｍｌ）を添加して、反応混合物を８０℃で２４時間加熱した。反応混合物を減圧濃縮し、溶剤をすべて除去して油状物を得た。これを８８０アンモニア（１５０ｍｌ）に取り、８０℃で２４時間加熱した。次に、反応混合物を減圧濃縮し、溶剤をすべて除去して油状物を得た。クーゲルロール蒸留で０．２ｍｍにおける沸点１７０〜１８０℃のアセトアミドを得た。アセトアミドの入ったフラスコをきれいに洗浄して、蒸留を続けた。０．２ｍｍ、沸点２２０℃でトリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（２２．５３ｇ、１５２ｍｍｏｌ、９２．１％）が留出した。
【０１０３】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ  １．４５（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２，）、２．２（１Ｈ，５重線，ＣＨ）；３．７（６Ｈ，ｔ  ３×ＣＨ２ＯＨ）；５．５（３Ｈ，ｂｒｓ  ３×ＯＨ）。
【０１０４】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ   ２２．１３（ＣＨ）、３３．９５（３×ＣＨ２）、５７．８（３×ＣＨ２ＯＨ）。
【０１０５】
工程１（ｅ）：トリオールのトリス（メタンスルホネート）への転化
ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のトリス（２−ヒドロキシエチル）メタン（１０ｇ、０．０６７６ｍｏｌ）の攪拌氷冷溶液に、窒素気流下で、ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のメタンスルホニルクロライド（４０ｇ、０．３４９ｍｏｌ）の溶液を温度上昇が１５℃を超えないような速度で滴下した。次に、ジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶解したピリジン（２１．４ｇ、０．２７ｍｏｌ、４当量）を、温度上昇が１５℃を超えないような速度で、発熱反応に滴下した。反応混合物を室温で２４時間攪拌し続け、次いで５Ｎ塩酸溶液（８０ｍｌ）で処理し、層分離させた。水性層を追加のジクロロメタン（５０ｍｌ）で抽出して、有機抽出液を一緒にし、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、過剰のメタンスルホニルクロライドが夾雑したトリス（２−（メチルスルホニルオキシ）エチル）メタンを得た。理論収量は２５．８ｇであった。
【０１０６】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ  ４．３（６Ｈ，ｔ，２×ＣＨ２）、３．０（９Ｈ，ｓ，３×ＣＨ３）、２（１Ｈ，６重線，ＣＨ，）、１．８５（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１０７】
工程１（ｆ）：１，１，１−トリス（２−アジドエチル）メタンの調製
乾燥ＤＭＦ（２５０ｍｌ）中のトリス（２−（メチルスルホニルオキシ）−エチル）メタン（工程１（ｅ）で得たもので、過剰の塩化メチルスルホニルが夾雑したもの）（２５．８ｇ、６７ｍｍｏｌ、理論値）の攪拌溶液を窒素下で、アジ化ナトリウム（３０．７ｇ、０．４７ｍｏｌ）で１５分間にわたり少量ずつ処理した。発熱が観測され、反応混合物を氷浴上で冷却した。３０分後、反応混合物を５０℃の油浴上で２４時間加熱した。反応混合物は茶色に変色した。反応混合物を放冷して、希炭酸カリウム溶液（２００ｍｌ）で処理し、４０／６０石油エーテル／ジエチルエーテル１０：１（３×１５０ｍｌ）で３回抽出した。有機抽出物を水（２×１５０ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した。石油／エーテル溶液にエタノール（２００ｍｌ）を添加してトリアジドを溶液のまま保ち、真空下で２００ｍｌ以上まで体積を減少させた。エタノール（２００ｍｌ）を添加し、真空中で再度濃縮して、痕跡量の石油を除去して、２００ｍｌ以上のエタノール溶液を残した。
【０１０８】
注意：アジ化物は爆発のおそれがあるので、溶剤をすべて除去せずに、常に希釈液中に保つべきである。
【０１０９】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ  ３．３５（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２）、１．８（１Ｈ，６重線，ＣＨ，）、１．６（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１１０】
工程１（ｇ）：１，１，１−トリス（２−アミノエチル）メタンの調製
エタノール（２００ｍｌ）中のトリス（２−アジドエチル）メタン（１５．０６ｇ、０．０６７６ｍｏｌ）（上記の反応での収率を１００％と仮定）を、木炭担持１０％パラジウム（２ｇ、５０％水）で処理して１２時間水素化した。反応容器は２時間毎に減圧して反応で発生した窒素を除去し、水素を再充填した。試料を採取してＮＭＲ分析し、トリアジドが完全にトリアミンに転化したことを確認した。
【０１１１】
警告：未還元のアジ化物は蒸留の際に爆発するおそれがある。
【０１１２】
反応混合物をセライトパッドで濾過して触媒を除去し、減圧濃縮して、トリス（２−アミノエチル）メタンを油状物として得た。これを、沸点１８０−２００℃、０．４ｍｍ／Ｈｇのクーゲルロール蒸留でさらに精製して、無色の油状物を得た（８．１ｇ、５５．９ｍｍｏｌ、トリオールからの総収量８２．７％）。
【０１１３】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、２．７２（６Ｈ，ｔ，３×ＣＨ２Ｎ）、１．４１（Ｈ，７重線，ＣＨ）、１．３９（６Ｈ，ｑ，３×ＣＨ２）。
【０１１４】
ＮＭＲ  １３Ｃ（ＣＤＣｌ３）、δ  ３９．８（ＣＨ２ＮＨ２）、３８．２（ＣＨ２．）、３１．０（ＣＨ）。
【０１１５】
工程１（ｈ）：ビス［Ｎ−（１，１−ジメチル−２−Ｎ−ヒドロキシイミンプロピル）２−アミノエチル］−（２−アミノエチル）メタン（キレート剤１）
無水エタノール（３０ｍｌ）中のトリス（２−アミノエチル）メタン（４．０４７ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下室温で激しく攪拌しながら、無水炭酸カリウム（７．７ｇ、５５．８ｍｍｏｌ、２当量）を添加した。３−クロロ−３−メチル−２−ニトロソブタン（７．５６ｇ、５５．８ｍｏｌ、２当量）の溶液を無水エタノール（１００ｍｌ）に溶解して、溶液７５ｍｌを反応混合物にゆっくりと滴下した。次に、反応混合物をシリカＴＬＣにかけて、１００／３０／５のジクロロメタン、メタノール、濃縮（比重０．８８）アンモニアで展開し、ニンヒドリンを噴霧し、加熱してＴＬＣプレートを発色させた。モノ−、ジ−及びトリ−アルキル化生成物が観察され、この順にＲｆ値が増加した。ＲＰＲ逆相カラムを用いて３％アンモニア水溶液中７．５〜７５％のアセトニトリル勾配で分析ＨＰＬＣを行った。反応混合物を減圧濃縮してエタノールを除去し、水に再懸濁した（１１０ｍｌ）。水性スラリーをエーテル（１００ｍｌ）で抽出して、若干のトリアルキル化化合物と親油性不純物を除去し、水層にモノアルキル化生成物と所望のジアルキル化生成物が残った。良好なクロマトグラフィーを担保すべく、水溶液に緩衝剤として酢酸アンモニウム（２当量、４．３ｇ、５５．８ｍｍｏｌ）を加えた。水溶液を４℃で一晩保存してから、自動化調製用ＨＰＬＣで精製した。
【０１１６】
収量（２．２ｇ、６．４ｍＭ、２３％）。
【０１１７】
質量分析：陽イオン１０Ｖコーン電圧。観測値：３４４、計算値Ｍ＋Ｈ＝３４４。
【０１１８】
ＮＭＲ  １Ｈ（ＣＤＣｌ３）、δ  １．２４（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、１．３（６Ｈ，ｓ，２×ＣＨ３）、１．２５〜１．７５（７Ｈ，ｍ，３×ＣＨ２，ＣＨ）、（３Ｈ，ｓ，２×ＣＨ２）、２．５８（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ）、２．８８（２Ｈ，ｔ  ＣＨ２Ｎ２）、５．０（６Ｈ，ｓ，ＮＨ２，２×ＮＨ，２×ＯＨ）。
【０１１９】
ＮＭＲ  １Ｈ（（ＣＤ３）２ＳＯ）δ  １．１  ４×ＣＨ；１．２９，３×ＣＨ２；２．１（４Ｈ，ｔ，２×ＣＨ２）。
【０１２０】
ＮＭＲ  １３Ｃ（（ＣＤ３）２ＳＯ）、δ  ９．０（４×ＣＨ３）、２５．８（２×ＣＨ３）、３１．０（２×ＣＨ２）、３４．６（ＣＨ２）、５６．８（２×ＣＨ２Ｎ）、１６０．３（Ｃ＝Ｎ）。
【０１２１】
ＨＰＬＣ条件：２５ｍｍ  ＰＲＰカラムを用いて流速８ｍｌ／分。
【０１２２】
Ａ＝３％アンモニア溶液（比重＝０．８８）／水。
【０１２３】
Ｂ＝アセトニトリル。
【０１２４】
【表１】
2006514945.tif 000009
【０１２５】
１回のラン当たり３ｍｌの水溶液をローディングし、１２．５〜１３．５分の時間枠で回収。
【０１２６】
実施例２：キレート剤１と４−カルボキシ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（４−クロロフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドとの結合による前駆体１の形成
図２に示す反応スキームの工程１によって、キレート剤１を４−カルボキシ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（４−クロロフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドに結合させた。
【０１２７】
ジクロロメタン（２ｍｌ）中の４−カルボキシ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（４−クロロフェニルスルホニルアミド）ベンズアミド（１ｍｇ）の溶液に室温で４当量のＴＢＴＵ及び１．１当量の式（Ｖ）のキレート剤１を添加し、３当量のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を窒素雰囲気下で２４時間添加した。粗混合物をＨＰＬＣで精製した。
【０１２８】
質量分析の結果：ＥＳ［Ｍ＋Ｈ］ｍ／ｚ８３６。
【０１２９】
実施例３：キレート剤１と４−ブロモ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（４−カルボキシフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドとの結合による前駆体２の形成
実施例２に記載の方法を用いて、キレート剤１を４−ブロモ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（４−カルボキシフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドに結合させて、図３に示す前駆体２を形成した。
【０１３０】
実施例４：キレート剤１と４−ブロモ−Ｎ−（４−カルボキシフェニル）−２−（４−クロロフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドとの結合による前駆体３の形成
実施例２に記載の方法を用いて、キレート剤１を４−ブロモ−Ｎ−（４−カルボキシフェニル）−２−（４−クロロフェニルスルホニルアミド）ベンズアミドに結合させ、図３に示す前駆体３を形成した。
【０１３１】
実施例５：前駆体１の９９ｍＴｃ標識による造影剤１の形成
図２に示す反応スキームの工程２に従って、前駆体１を９９ｍＴｃで標識して造影剤１を調製した。
【０１３２】
１０ｍｇのＳｎＣｌ２と９０ｍｇのＭＤＰを１００ｍｌの窒素パージ塩水に溶解して、ＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液を調製した。前駆体１の１ｇ／ｍｌメタノール溶液５０μｌに、（１）０．７ｍｌのメタノール、（２）０．５ｍｌの０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液、（３）０．５ｍｌの５００ＭＢｑ／ｍｌのＴｃＯ４及び（４）１００μｌのＳｎＣｌ２／ＭＤＰ溶液を添加した。反応混合物を３７℃で３０分間加熱して造影剤１を形成した。溶液の活性は１８５ＭＢｑであった。
【０１３３】
シリカゲルプレートとＭｅＯＨ／（ＮＨ４ＯＡｃ０．１Ｍ）１：１の移動相を用いたＩＴＬＣ（インスタント薄層クロマトグラフィー）は、原点に３％のＲＨＴ（還元加水分解テクネチウム）を示した。ＨＰＬＣ分析は８８％の造影剤１を示し、８５％のＲＣＰが得られた。造影剤１の保持時間は１６．６分であった。
【０１３４】
ＨＰＬＣ分析は、０．０６％のＮＨ４ＯＨの水性移動相（溶剤Ａ）とアセトニトリルの有機移動相（溶剤Ｂ）を用いて流速１ｍｌ／分でＸｔｅｒｒａ  ＲＰ１８（３．５μｍ、４．６×１５０ｍｍ）カラムを用いて行った。使用した典型的な勾配は次の通りであった：０〜５分（１０〜３０％Ｂ）、５〜２０分（３０％Ｂ）、２０〜２１分（３０〜１００％Ｂ）、２１〜２５分（１００％Ｂ）及び２５〜２７分（１００〜１０％Ｂ）。
【０１３５】
実施例６：前駆体４の合成
図４に示す反応スキームの工程１を用いて前駆体４を調製する。１．５当量のトリエチルアミンの存在下で、４−ｎ−トリブチルチンアニリンをＤＣＭ中の５−ブロモ−２−（４−クロロフェニルスルホンアミド）安息香酸と結合させて前駆体４を得る。
【０１３６】
実施例７：前駆体４の放射性ヨウ素化による造影剤２の形成
図４のスキームの工程２に従って、前駆体４を放射性ヨウ素化によって造影剤２を形成する。
【０１３７】
０．４ｍｌのＤＭＦ、０．１ｍｌ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４，０．２Ｍ）及び０．０５ｍｌのクロラミン−Ｔ溶液（０．２２μＭ）の存在下で、１０μＭの前駆体４を０．０５ｍｌのＮａＩ液（放射性ヨウ素（Ｉ＊）全量約０．１６７μＭ）と反応させる。５分後に、０．５ｍｌのＨ２Ｏを添加する。粗混合物を次にＨＰＬＣで分離して、純粋な造影剤２を得る。
【０１３８】
実施例８：前駆体５の合成
図５に示す反応スキームの工程１で、３−クロロ−４−ニトロベンゼンスルホン酸をＰＯＣｌ３と反応させて、３−クロロ−４−ニトロベンゼンスルホニルクロライドを形成し、これをＮ−（４−ブロモフェニル）−２−アミノ−５−ブロモベンズアミドと反応させて、４−ブロモ−Ｎ−（４−ブロモフェニル）−２−（３−クロロ−４−ニトロ−フェニルスルホンアミド）ベンズアミドを形成する（工程２）。次いで、ニトロ基をＳｎＣｌ２・２Ｈ２Ｏで還元し、アミンを得る（工程３）。次に、工程４で、アミンを亜硝酸（ＨＯＮＯ）で処理してジアゾニウム化合物に転化して、前駆体５を形成する。
【０１３９】
実施例９：造影剤３の合成
図４に示すスキームの工程５で、１８Ｆをジアゾニウム化合物と反応させて造影剤３を得る。
【０１４０】
実施例１０：非放射性造影剤２の調製
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のＮ−（４−ヨードフェニル）−２−アミノ−５−ブロモベンズアミド（３ｍｍｏｌ）、４−クロロベンゼンスルホニルクロライド（３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１２ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で１８時間攪拌した。溶剤を真空下で除去し、残留物をメタノールに溶解した。精製はＨＰＬＣで行った（Ｃ１８、２０〜９５％アセトニトリル−０．１％トリフルオロ酢酸水溶液）。
【０１４１】
ＨＰＬＣで精製した後、生成物は所要の１Ｈ  ＮＭＲ及びＭＳ分析結果を示した。
【０１４２】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．３２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．５９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ）、７．６５〜７．７０（３Ｈ，ｍ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ）。
【０１４３】
ＭＳ（ＥＳ−ｖｅ）ｍ／ｚ＝５９１。
【０１４４】
実施例１１：非放射性造影剤３の調製
ジクロロメタン（２０ｍｌ）中のＮ−（４−ブロモフェニル）−２−アミノ−５−ブロモベンズアミド（３ｍｍｏｌ）、３−クロロ−４−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１２ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下で１８時間攪拌した。溶剤を真空下で除去し、残留物をメタノールに溶解した。精製はＨＰＬＣで行った（Ｃ１８、２０〜９５％アセトニトリル−０．１１％トリフルオロ酢酸水溶液）。
【０１４５】
ＨＰＬＣで精製した後、生成物は所要の１Ｈ  ＮＭＲ分析結果を示した。
【０１４６】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ  ７．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ）、７．４６〜７．５９（６Ｈ，ｍ）、７．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３及び６Ｈｚ）、７．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４及び４．８Ｈｚ）、７．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ）。
【０１４７】
実施例１２：スカベンジャー受容体結合アッセイ
アッセイは、Ｌｙｓｋｏ  ｅｔ  ａｌ．［１９９９  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ  ２８９（３）；１２７７−１２８５］に記載のアッセイに基づいて開発した。アッセイで使用した細胞はマウスＪ７７４．１又はヒトＴＨＰ−１であった。Ｊ７７４．１細胞は、アッセイの２４時間前に、ペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン及び１０％ウシ胎児血清を添加したダルベッコ最小必須培地に１×１０５細胞／ウェル／ｍｌで播種した。ＴＨＰ−１細胞は、アッセイの４〜６日前に、ペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン及び１０％ウシ胎児血清を４００ｎｇ／ｍｌの酢酸ミリスチン酸ホルボールと共に添加したＲＰＭＩ−１６４０培地に１×１０５細胞／ウェル／ｍｌで播種した。アッセイのため、プレートから培地をデカントして、プレートをウェル当たり１ｍｌの２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ含有氷冷リン酸緩衝食塩水で洗浄した。ウェルに以下の試薬を添加した（すべてμｌ）。
【０１４８】
【表２】
2006514945.tif 000010
【０１４９】
アッセイ緩衝液は、ペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭのグルタミン及び２ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを添加したダルベッコ最小必須培地であった。ＡｃＬＤＬはＢｉｏｇｅｎｅｓｉｓ社から入手した（カタログ番号５６８５−３４０４）。［１２５Ｉ］ａｃＬＤＬ（Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ社製、カタログ番号５６８５−３５０２）のアッセイでの使用量はウェル当たり１５００００ｃｐｍであった（約１．５μｇ／ｍｌ）。
【０１５０】
プレートを３７℃で３時間インキュベートした後、試薬を除去し、プレートを予冷した洗浄緩衝液で洗浄した（２：０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４）。次いでプレートを予冷洗浄緩衝液で１０分間氷上でインキュベートし、この工程を繰り返した。さらに、別の洗浄用緩衝液（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４）でさらに急速洗浄をしてから、室温で３０分間５００μｌのＮａＯＨを加えた。ウェルの内容物をＳａｒｓｔｅｄｔ管に移して、Ｗａｌｌａｃ  １４８０  Ｗｉｚａｒｄ自動γ線計数器で放射能を計測した。
【０１５１】
ウェル内の細胞被覆度を評価してアッセイ中に細胞が失われなかったことを示すため、９５％メタノール中３００μｌの２％クリスタルバイオレット染色液をウェルに加えて室温で３０分間インキュベートした。
【０１５２】
非放射性造影剤２のＩＣ５０は２５．２μＭであったが、化学的に同一の放射性ヨウ素化化合物も同様の値を示すはずである。非放射性造影剤３のＩＣ５０は２５．９μＭであったが、化学的に同一の１８Ｆ標識の化合物も同様の値を示すはずである。
【０１５３】
実施例１３：スパイク飽和結合アッセイ
実験はＴＨＰ−１細胞で実施した。ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球ＥＣＡＣＣ）は懸濁細胞であり、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｐ４４５８）、２ｍＭのグルタミン（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｇ７５１３）及び１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｆ−７５２４）を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｒ０８８３）で培養した。細胞は１６２ｃｍ２フラスコで２×１０５細胞／ｍｌで定期的に継代した。１２５Ｉ−ＡｃＬＤＬでのアッセイには、アッセイの４〜６日前に、細胞を２４ウェルプレートに１×１０５細胞／ウェル／ｍｌで播種し、４００ｍｇ／ｍｌのミリスチン酸酢酸ホルボール（ＰＭＡ）を添加してＴＨＰ−１細胞を分化させた。細胞は付着性となってＭＳＲＡを発現した。１２５Ｉ造影剤２でのアッセイには、４００ｎｇ／ｍｌのＰＭＡでのアッセイの４〜６日前に、ＴＨＰ−１細胞を１．５×１０５の細胞／ウェル／ｍｌで播種した。
【０１５４】
１２５Ｉ造影剤２をアッセイ緩衝液で濃度４０００００ｃｐｍ／５０μｌに希釈した。非放射性造影剤２は実施例１０に記載の方法に従ってアッセイ緩衝液中１２．５％ＤＭＳＯ溶液中の１ｍｇ／ｍｌ保存液で調製した。非特異的結合（ＮＳＢ）測定用に、この保存液の１：２希釈液を調製した。
【０１５５】
スパイク試料用に、非放射性造影剤２の希釈系列を２通り用意した。系列Ａでは、出発濃度０．１２５ｍｇ／ｍｌ（又は０．０３１ｍｇ／ｍｌ／ウェル）を調製し、さらに順次２倍希釈の１５種類の希釈液を調製した。系列Ｂでは、出発濃度０．１８８ｍｇ／ｍｌ（又は０．０４７ｍｇ／ｍｌ／ウェル）を調製し、さらに順次２倍希釈の１５種類の希釈液を調製した。
【０１５６】
プレートから培地をデカントして、ウェルを１ｍｌ／ウェルの氷冷ＰＢＳで洗浄した。ＰＢＳをデカントして除き、残った液をピペットチップで取り除いた。
【０１５７】
次に、以下の通りアッセイ用試薬を添加した。
・１００μｌのアッセイ緩衝液（非放射性造影剤２を含まないウェルを除く。この場合、１５０μｌのアッセイ緩衝液を添加。）、
・５０μｌの非放射性造影剤２（適当な希釈率）、
・５０μｌの１２５Ｉ造影剤２。
【０１５８】
プレートを３７℃で３時間インキュベートした。アッセイ用試薬をピペットチップで除き、ウェルを１ｍｌの予冷洗浄緩衝液１で２度洗浄した。次に、プレートを１ｍｌ／ウェルの予冷洗浄緩衝液１で１０分間氷上でインキュベートした。洗浄緩衝液をデカントし、洗浄緩衝液１でさらに１０分間氷上でインキュベートした。次に、氷上で１ｍｌ／ウェルの予冷洗浄緩衝液２で急速洗浄を行った。次いで、各ウェルにトリパンブルー（ＰＢＳ中１：５希釈液２００μｌ）を添加して毒性を検査した。０．１ＭのＮａＯＨを５００μｌ添加して、プレートを室温で３０分間放置した。次に、ウェルの内容物をＳａｒｓｔｅｄｔ管に移し、Ｗａｌｌａｃ  Ｗｉｚａｒｄで計測した。
【０１５９】
実施例１４：１２５Ｉ造影剤２での細胞競合アッセイ
ＡｃＬＤＬ、ｏｘＬＤＬ及び非放射性造影剤２による１２５Ｉ造影剤２の結合に対する競合を評価するための実験をＴＨＰ−１及びＣＨＯ−ＳＲＡ細胞で行った。
【０１６０】
ＴＨＰ−１細胞は上記の実施例１３に記載の通り培養した。
【０１６１】
ＣＨＯ−ＳＲＡ細胞はヒトＳＲ−Ａを発現する付着性のハムスター卵巣細胞であり、ペニシリン／ストレプトマイシン、２ｍＭグルタミン、ＨＥＰＥＳ緩衝液（７ｍｌ／５００ｍｌ培地）、３％フィルター滅菌リポタンパク除去血清（ＬＰＤＳ；Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｓ５３９４）、４０μＭコンパクチン／メバスタチン（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｍ２５３７）、２５０μＭメバロン酸ラクトン（Ｓｉｇｍａ社製、カタログ番号Ｍ４６６７）及び３μｇ／ｍｌアセチル化ＬＤＬ（ＡｃＬＤＬ、Ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ社製、カタログ番号５６８５−３４０４）を添加したＨａｍｓ  Ｆ−１２培地で培養した。１２５Ｉ−ＡｃＬＤＬでのアッセイには、アッセイの２４時間前に細胞を２４ウェルプレートに１×１０５細胞／ウェル／ｍｌで播種した。１２５Ｉ造影剤２でのアッセイには、アッセイの２４時間前にＣＨＯ−ＳＲＡ細胞を１．５×１０５細胞／ウェル／ｍｌで播種した。
【０１６２】
ＴＨＰ−１細胞では、非放射性造影剤２は２部位キネティクスで１２５Ｉ造影剤２の結合と競合した（図６Ａ）。７９±２０ｎＭ（ｎ＝３）及び１４．５±５．８μＭ（ｎ＝３）の平均ＩＣ５０値が得られた。しかし、ＣＨＯ−ＳＲＡ細胞では、単一部位の競合が観察され、平均ＩＣ５０値は３０±１２μＭ（ｎ＝３）であった。
【０１６３】
ＡｃＬＤＬ（図６Ｂ）及びｏｘＬＤＬ（図６Ｃ）は共に、ＴＨＰ−１細胞及びＣＨＯ−ＳＲＡ細胞での１２５Ｉ造影剤２の結合に対して単一部位競合を示した。ＡｃＬＤＬの平均ＩＣ５０値はＴＨＰ−１細胞では約２８１μｇ／ｍｌ（ｎ＝３）であり、ＣＨＯ−ＳＲＡ細胞では１９２μｇ／ｍｌ（ｎ＝２）であった。ｏｘＬＤＬの平均ＩＣ５０値はＴＨＰ−１細胞では約３６９μｇ／ｍｌ（ｎ＝２）であり、ＣＨＯ−ＳＲＡ細胞では１１２μｇ／ｍｌ（ｎ＝１）であった。
【０１６４】
実施例１５：造影剤２のインビボ評価
Ｊ７７４細胞は、ＭＳＲＡ及びＭＳＲＢ（マクロファージスカベンジャー受容体Ｂ）を発現するマウスのマクロファージ細胞である。ＭＳＲＡ標的ベクターのスクリーニングに、Ｊ７７４腫瘍モデルを利用した。この細胞はＢＡＬＢ／Ｃマウスにインビボ腫瘍を発生させるために利用されている（Ｒａｌｐｈ  ｅｔ  ａｌ、１９７５  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１４（２）８９８−９０５頁）。Ｊ７７４腫瘍をＢＡＬＢ／Ｃ雄マウスに皮下接種し、接種後２４〜２８日間生体分布の研究を行った。
【０１６５】
腫瘍マウスに尾静脈から０．１ｍｌの１２５Ｉ造影剤２をボーラス静脈内注射し、注入後５分、３０分、６０分、１２０分、２４０分毎にマウスを安楽死させた。
【図面の簡単な説明】
【０１６６】
【図１】本発明のスルホンアミドベンズアミド化合物の一般的合成法を示す。
【図２】前駆体１及び９９ｍＴＣ標識造影剤１の合成法を示す。
【図３】前駆体２及び前駆体３の化学構造を示し、いずれも９９ｍＴＣでの標識に適している。
【図４】前駆体４及び放射性ヨウ化造影剤２の合成法を示す。
【図５】前駆体５及び１８Ｆ標識造影剤３の合成法を示す。
【図６】１２５Ｉ造影剤２のＴＨＰ−１及びＣＨＯ−ＳＲＡ細胞への結合に対する各種薬剤の競合を示す。各種薬剤は（Ａ）非放射性造影剤２、（Ｂ）ＡｃＬＤＬ及び（Ｃ）ＯｘＬＤＬである。
【図７】スパイクアッセイフォーマットを用いた１２５Ｉ造影剤２のＴＨＰ−１への結合を示す。
【図８】ラットにおける１２５Ｉ造影剤２の生体内分布を注射後（ｐ．ｉ．）４時間の期間にわたって示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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