(57)【要約】パーキンソン病の治療を必要としているヒトの一方又は両方の被殻に、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）が長期的に直接投与される、ヒトのパーキンソン病を治療する方法が開示される。本発明の一つの側面において、ＧＤＮＦは、移植可能なポンプに接続された一以上の実質内脳留置カテーテルを通じて、一方又は両方の被殻内に直接注入される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
パーキンソン病の治療を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのパーキンソン病を治療する方法。
【請求項２】
ヒトの一方又は両方の被殻におけるドーパミン機能を術前に評価することと、
一方又は両方の被殻内の少なくとも一つのドーパミン機能障害部位を同定することと、
ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を、前記部位の一又は複数に投与することと、
必要に応じて、前記部位の一又は複数におけるドーパミン機能を、術後に、少なくとも一回評価することと、
を含む、ヒトのパーキンソン病を治療する方法。
【請求項３】
ドーパミン作動性神経細胞の機能の増強を必要としているヒトの一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのドーパミン作動性神経細胞の機能を増強する方法。
【請求項４】
ドーパミン作動性神経細胞によるドーパミンの取り込みの増強を必要としているヒトの一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、少なくとも一つの薬学的に許容される、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのドーパミン作動性神経細胞によるドーパミンの取り込みを増強する方法。
【請求項５】
ドーパミン作動性神経細胞の再生を必要としているヒトの一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのドーパミン作動性神経細胞を再生する方法。
【請求項６】
変性しやすいドーパミン作動性神経細胞の保護を必要としているヒトの一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、変性しやすいヒトのドーパミン作動性神経細胞を保護する方法。
【請求項７】
パーキンソン病の治療を必要としているヒトの少なくとも一つの被殻の中央領域に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのパーキンソン病を治療する方法。
【請求項８】
パーキンソン病の治療を必要としているヒトの少なくとも一つの被殻の後背側領域に、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのパーキンソン病を治療する方法。
【請求項９】
前記ビヒクル、賦形剤又は希釈剤が塩化ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含む、請求項１から８の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＧＤＮＦタンパク質産物がｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦである、請求項１から９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ドーパミン機能の評価がドーパミンの取り込み又はドーパミンの貯蔵を評価することを含む、請求項１から１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ドーパミン機能障害部位が、一方又は両方の被殻の後背側領域である、請求項２、９又は１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ドーパミン機能障害部位が、一方又は両方の被殻の中央領域である、請求項２、９又は１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）ＧＤＮＦタンパク質産物と、薬学的に許容される、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物の一又は複数の補給品と、
（ｂ）移植された薬物送達装置に前記薬学的組成物を補充するための一又は複数の供給品と、
を備える、キット。
【請求項１５】
前記ＧＤＮＦタンパク質産物がｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦである、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
前記ビヒクル、賦形剤又は希釈剤が、塩化ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含む、請求項１４に記載のキット。
【請求項１７】
（ａ）ＧＤＮＦタンパク質産物と、薬学的に許容される、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物の一又は複数の補給品と、
（ｂ）移植された薬物送達装置に前記薬学的組成物を補充するための一又は複数の供給品と、
（ｃ）必要に応じて備えられる、前記薬物送達装置を補充するための説明書と、
を備える、キット。
【請求項１８】
前記ＧＤＮＦタンパク質産物がｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦである、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記ビヒクル、賦形剤又は希釈剤が、水性緩衝液を含む、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
前記水性緩衝液が、塩化ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含む、請求項１９に記載のキット。
【請求項２１】
前記薬物送達装置を補充するための前記供給品が、一又は複数のシリンジである、請求項２０に記載のキット。
【請求項２２】
前記薬物送達装置を補給するための前記供給品が、薬学的に許容される希釈剤の一又は複数の補給品である、請求項２１に記載のキット。
【請求項２３】
前記希釈剤が、ｐＨ約４．５から約５．５の、クエン酸塩で緩衝された生理的食塩水である、請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記クエン酸塩で緩衝された生理的食塩水が、１５０ｍＭ  塩化ナトリウムと１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０を含む、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記薬学的組成物、前記希釈剤及び前記シリンジが無菌である、請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
パーキンソン病の治療を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、パーキンソン病を治療するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項２７】
ドーパミン作動性神経細胞の機能の増強を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、ドーパミン作動性神経細胞の機能を増強するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項２８】
ドーパミン作動性神経細胞によるドーパミンの取り込みの増強を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、ドーパミン作動性神経細胞によるドーパミンの取り込みを増強するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項２９】
ドーパミン作動性神経細胞の再生を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、ドーパミン作動性神経細胞を再生するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項３０】
変性しやすいドーパミン作動性神経細胞の保護を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、変性しやすいドーパミン作動性神経細胞を保護するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項３１】
パーキンソン病の治療を必要とするヒトの少なくとも一つの被殻の中央領域に投与される、パーキンソン病を治療するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項３２】
パーキンソン病の治療を必要とするヒトの少なくとも一つの被殻の後背側領域に投与される、パーキンソン病を治療するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦタンパク質産物の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用。
【請求項３３】
前記ビヒクル、賦形剤又は希釈剤が塩化ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含む、請求項２６から３２の何れか一項に記載の使用。
【請求項３４】
前記ＧＤＮＦタンパク質産物がｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦである、請求項２６から３３の何れか一項に記載の使用。
【請求項３５】
前記薬学的組成物が、一方又は両方の被殻内の一又は複数のドーパミン機能障害部位に投与するための薬学的組成物であり、一方又は両方の被殻内の前記ドーパミン機能障害部位が、該部位におけるドーパミンの取り込み又はドーパミンの貯蔵を評価することによって術前に同定される、請求項２６から３４の何れか一項に記載の使用。
【請求項３６】
前記ドーパミン機能障害部位が、一方又は両方の被殻の後背側領域である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記ドーパミン機能障害部位が、一方又は両方の被殻の中央領域である、請求項３５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的には、神経生物学の分野に関する。より具体的には、本発明は、ヒトのパーキンソン病を治療する方法に関し、萎縮性ドーパミン作動性神経細胞を回復させ、変性のリスクがあるドーパミン作動性神経細胞を保護する関連方法も記載されている。
【背景技術】
【０００２】
突発性パーキンソン病（ＰＤ）は、ドーパミン作動性神経細胞の特定集団、特に、黒質の緻密部内のドーパミン作動性神経細胞が進行性に死滅して、線条体ドーパミンレベルが減少することを特徴とする、神経変性疾患である。若い成人の黒質の緻密部には、特化したドーパミン作動性細胞が約５０万個存在する。ドーパミン作動性神経支配の７５から８０％が破壊されると、パーキンソン病の症候が発生する。その結果生じる、臨床診断の基礎となる主要な特徴は、振戦、硬直及び無動症／運動緩徐である（Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８）。報告によれば、北アメリカには１００万人を超える患者が存在し（Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８）、ヨーロッパ内での推定総合有病率は、６５歳以上人口１００人当り１．６人である（ｄｅ  Ｒｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。罹患者の死亡率は、同じ年齢の非罹患者に比べて、２から５倍高く（Ｂｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ｍｏｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ｌｏｕｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）、平均余命は、著しく減少する（Ｍｏｒｅｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。本疾病に対する最も一貫性のある単一の危険因子は年齢であり、先進国の人口動態の変化に鑑みれば、本疾病が先進国社会に対して及ぼす負担は増大するものと思われる。経口投与されたＬ−ドーパ（ドーパミンの中間前駆体で、小腸から吸収され、ドーパミン自体とは異なり、血液脳関門を横切ることができる。）は、芳香族アミノ酸脱炭酸酵素阻害剤と併用すると、現在でもなお、最も有効な治療であり、パーキンソン病のために現在広く使用されている（Ｋｏｌｌｅｒ，  ２０００；  Ｊａｎｋｏｖｉｃ，  ２００２）。Ｌ−ドーパはＰＤの症候を緩和するが（実際、患者の９０％超が示す、Ｌ−ドーパへの反応性は、本疾病の特性のひとつである［Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８］。）、その使用には、問題がないわけではない。ドーパミンアゴニストに共通し、治療の数年後にさらに明確となるＬ−ドーパの主要な限界は、患者の反応性にばらつきが増加することであり、特徴的な「ウェアリング・オフ（ｗｅａｒｉｎｇ−ｏｆｆ）」及び「オン・オフ（ｏｎ−ｏｆｆ）」現象という形態をとる運動変動を呈する（Ｎｕｔｔ  ａｎｄ  Ｈｏｌｆｏｒｄ，  １９９６：  Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８；  Ｋｏｌｌｅｒ，  ２０００；  Ｊａｎｋｏｖｉｃ，  ２００２）。「薬効時間短縮（ｅｎｄ  ｏｆ  ｄｏｓｅ  ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ）」とも記載される「ウェアリング・オフ」は、長期間の間に起こる、Ｌ−ドーパの投薬に対する応答の比較的ゆっくりとした予測可能な減退を示す用語であり、これは、Ｌ−ドーパの投薬とは明確な相関がない、運動能力の「オン・オフ」変動とは対照的である。運動変動の初期段階では、Ｌ−ドーパの作用を延長するアプローチ（例えば、該分子の徐放製剤又はカテコール−Ｏ−メチルトランスフェラーゼ阻害剤の同時投与）又は作用期間が延長された合成ドーパミンアゴニストの使用によって、運動変動は緩和され得るが、これらの介入は、最終的な予測不能性の増大、運動変動の調節の低下、「オン」期間における運動障害の発生の増加を防ぐことはできない（Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８；  Ｋｏｌｌｅｒ，  ２０００；  Ｊａｎｋｏｖｉｃ，  ２００２）。
【０００３】
神経栄養因子は、神経支配する神経細胞の発達、誘導及び維持に必要とされる、標的組織によって分泌される分子である。神経細胞の細胞体への特異的逆行性輸送が、異なる神経栄養因子への神経細胞の反応性の特徴である（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，  １９８９；１９９１）。各神経栄養因子は、神経細胞の特定集団の発達及び維持に影響を与え、一部の神経細胞は、２以上の神経栄養因子に対して応答する。神経栄養因子は、発育の様々な段階において、神経系の様々な領域中に発現される（Ｅｒｎｆｏｒｓ  ａｎｄ  Ｐｅｒｓｓｏｎ，  １９９１；  Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０；  Ｓｃｈｅｃｔｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｂｏｔｈｗｅｌｌ，  １９９２）。それらの特異性故に、神経栄養因子は、神経細胞の特異的集団に影響を与える神経変性疾患を治療するための薬物の候補として魅力的なものとなっている（Ｏｌｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２；Ｆｏｒａｎｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６；  Ａｒｅｎａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。
【０００４】
グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）は、解離されたラット胚性中脳培養内のドーパミン作動性神経細胞に対して相対的な特異性を有すると記載された強力な神経栄養因子として、ラットのグリア細胞株の培地から初めて単離された（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；  Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４）。細胞内プロセッシングを受けた後、ＧＤＮＦは、１３４アミノ酸残基のグリコシル化された成熟タンパク質として分泌される。その活性型では、ＧＤＮＦは、分子量３２ｋＤａから４２ｋＤａの、ジスルフィド結合されたホモ二量体である（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４）。ヒトＧＤＮＦ遺伝子はクローニングされており、完全な生物活性を示す組換えヒトＧＤＮＦが、Ｅ．コリ中に発現されている（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３）。
【０００５】
細胞培養（Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；Ｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；Ｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）及びＰＤのげっ歯類モデル（Ｈｏｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９４；  Ｂｏｗｅｎｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｔｏｍａｃ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５ａ，  Ｋｅａｒｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）で収集されたデータに基づき、ＧＤＮＦは、パーキンソン病（ＰＤ）及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）の治療に対して大きな治療上の可能性を有すると考えられた（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。しかしながら、ＧＤＮＦのＰＤ及び他の神経疾患への治療適用に対する重要な障害に遭遇した。第一に、ＧＤＮＦは、血液脳関門を通過することのできない巨大分子であるため、ＧＤＮＦを脳へ治療的に送達することが困難である。第二に、脳の相対的なサイズが著しく異なるので、ヒトの症状との関連性において、動物モデルには限界がある。ＧＤＮＦの脳室内注入が、事実、ＰＤ患者に試みられたが、治療上の有用性は得られなかった。より具体的には、突発性ＰＤの被験者に対する４つの臨床試験（５３人の被験者；このうち５０人が、二重盲検プラセボ対照化試験に登録され、５０人のうち３８人が試験薬を受けた。）及びＡＬＳの被験者に対する２つの臨床試験（２４人の被験者；全員が、二重盲検プラセボ対照化試験に登録された。）。これらの試験では、毎月の大量瞬時投与（２５から４０００μｇ／投薬）又は長期注入（３から５０μｇ／日）によって、脳室（ＩＣＶ）に送達されたＧＤＮＦは、臨床的な効力を発揮することができなかった。すなわち、ＰＤ又はＡＬＳの徴候又は症候に、臨床的又は統計的に有意な改善は観察されなかった。さらに、ほぼ全ての被験者（９２％から１００％）が、試験中に、少なくとも一つの副作用を経験した。軽度ないし中度の吐き気が、最も多く報告された副作用であった（全試験を通じて、約７０％から９０％の発生率）。軽度から中度の知覚異常が、全研究を通じて、被験者の３０％から８０％に報告された。体重減少が、全研究を通じて、被験者の１４％から６３％に報告された。深刻な副作用が、全研究を通じて、被験者の２１％から４４％に報告された。
【０００６】
臨床試験が奏功しなかったＰＤを治療するために有望と思われる別のアプローチは、ＰＤ患者の脳内に胚性ドーパミン作動性神経細胞を移植することであった。患者が培養された胚性中脳組織の被殻内移植を受け、又は患者が硬膜を貫通しない偽手術を行われた、無作為二重盲検試験において、６０歳を超える患者への移植の結果、手術から一年後に、臨床的な改善は観察されず、６０歳以下の患者で、中度の改善が見られるにすぎなかった（Ｆｒｅｅｄ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。移植を受けた患者を１２から３６ヶ月継続的に追跡する間に、数多くの患者に、筋緊張異常と運動障害が発生したが、その全てが、手術の時点で年齢が６０歳未満であり、移植後最初の年には、各人が臨床的な改善を経験していた。本研究の調査者らは、後に、ドーパミン機能の不均衡な増加が、パーキンソン病に対して、神経細胞移植の望ましくない結果をもたらしたことを示唆する知見を報告した（Ｍａ，  Ｙ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。
【０００７】
基底核の病態生理に対する理解の深まりと神経外科的手術手技の精緻化の結果、神経外科的切除技術に対する新たな関心が発生し、患者の症状が薬物のみを用いて管理することが次第に困難になった場合に、淡蒼球切除術と視床切除術が選択肢として再び広く考慮されるようになっている（Ｌａｎｇ  ａｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８；Ｊａｎｋｏｖｉｃ，  ２００２）。これまでのところ、このような技術の成否に関わらず、このような技術の性質ゆえに、かかる介入から生じる副作用は何れも、不可逆的なものとなる可能性が極めて高い。損傷効果を刺激する、これより不可逆性が低い別のアプローチは、深部脳刺激療法（ＤＢＳ）である。この手法では、移植された深部脳電極を通じて、電気刺激が長期的に与えられ、切除病変で観察されるものと類似した、運動機能の改善がもたらされるものと思われる。この改善が生じる機序は、十分には理解されていないが、神経細胞活動の阻害又は破壊が関わっている可能性がある（Ｌａｎｇ  ａｎｄ  Ｌｏｚａｎｏ，  １９９８）。しかしながら、ＤＢＳは、神経保護的でもなく、神経回復的でもないので、残存するドーパミン神経細胞の持続的な喪失を停止させず、又は既に失われたドーパミン作動性神経細胞を再生することもない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
ヒト患者におけるパーキンソン病（パーキンソニズム）などの、神経障害によって引き起こされる損傷を抑制又は修復するための十分な方法は存在しない。従って、ヒトのＰＤを治療及び予防するための、安全で、効果的な方法が、長年にわたって、必要とされ続けている。理想的には、このような方法は、重大な副作用を伴わずに、変性疾患の進行を停止させ、損傷を受けた神経細胞の再生を促進する場合さえあるであろう。従って、ＧＤＮＦの長期的な、被殻内注入を含む、ヒトのＰＤを治療するこのような方法を提供することが、本発明の目的である。この目的及び他の目的は、本開示から、当業者にとって自明であろう。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の第一の側面は、パーキンソン病の治療を必要とするヒトＰＤ患者の一方又は両方の被殻に、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）タンパク質産物の薬学的に有効な量を含む薬学的組成物を投与することを含む、ヒトのパーキンソン病を治療する方法に関する。ＧＤＮＦタンパク質産物には、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ（以下の表１に示されているアミノ酸配列を有する二量体タンパク質）又はそのバリアント及び／又は誘導体の薬学的に有効な量が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明は、移植可能なポンプと１以上の留置カテーテルとを用いて、ＰＤ患者の一方又は両方の被殻にｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを継続的に送達すると、ＰＤの非ヒト霊長類モデル及びＰＤに罹患したヒト患者の両方において、劇的な抗パーキンソン病及び抗運動障害効果がもたらされ、さらに、著しい再神経支配及び／又は送達前にはドーパミンが欠乏していた神経細胞へのドーパミン貯蔵の回復を伴うという驚くべき発見に基づいている。
【００１０】
本出願人は、パーキンソン病の治療を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与される、パーキンソン病を治療するための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦの薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用も本明細書に開示する。
【００１１】
本発明の方法は、パーキンソン病を有する患者において、神経細胞機能を回復するものと推測される。さらに、本明細書に記載されている方法は、ヒトのパーキンソン病によって損傷された神経経路を回復させるのに有用である。具体的には、本明細書に開示されている方法は、損傷を受けたヒトの脳組織へのドーパミン作動性神経細胞の再神経支配など、神経再生を刺激することができる。好ましい実施形態において、ドーパミン作動性神経細胞の機能の増強を必要とするヒト患者の一方又は両方の被殻にｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの薬学的に有効な量を投与することを含む、ドーパミン作動性神経細胞の機能を増強する方法が提供される。
【００１２】
本発明は、ドーパミン作動性神経細胞の機能の増強を必要とするヒトの一方又は両方の被殻に投与するための、ドーパミン作動性神経細胞の機能を増強する薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦの薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用にも関する。
【００１３】
さらに、認知疾患の治療を必要とするヒト患者の一方又は両方の被殻にｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの薬学的に有効な量を投与することを含む、ヒトの認知疾患を治療する方法が提供される。
【００１４】
本発明のさらに別の実施形態において、ＰＤ又は認知疾患の治療を必要とするヒトの一方又は両方の被殻にｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの薬学的に有効な量を投与することを含む、ＰＤ又は認知疾患を治療する方法は、術前に、及び、必要に応じて術後に定期的に、前記ヒトの脳のドーパミン作動性機能を評価することをさらに含む。
【００１５】
本明細書に開示されている一方又は両方の被殻にＧＤＮＦを投与する方法は、ヒトにおいて予防的機能を提供することもできる。予防的投与は、パーキンソン病を有するヒト又はパーキンソン病を有するリスクがあるヒトにおいて、ドーパミン作動性神経細胞の細胞機能を保持する効果を有し得る。本発明によれば、ヒト被殻へのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの投与は、ヒト脳内の黒質線条体経路の完全性を保持するものと推測される。本発明に従って、予防的に投与されるｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、パーキンソン病に伴う黒質線条体経路の変性又は機能的なドーパミン作動性活性の喪失を予防又は治療する方法としても想定される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、ＰＤの非ヒト霊長類モデル及びヒトＰＤ患者の両方に移植可能なポンプ及び少なくとも一つの留置カテーテルを用いて、一方又は両方の被殻に、ＧＤＮＦを直接、継続的に送達することによって、驚くほど劇的な抗パーキンソン病及び抗運動障害効果がもたらされ、送達前にはドーパミンが欠乏していた神経細胞に目覚しい再神経支配及びドーパミン貯蔵の回復が伴うという発見に基づいている。
【００１７】
ＰＤの霊長類モデルでは、大量瞬時投与を用いた研究で観察されたものに比べて、運動緩徐、硬直及び姿勢の安定性という、ＰＤの３つの主要な特徴の改善の度合いを大きくするために、継続的な注入（脳室内と実質内の両方）によって、ＧＤＮＦが投与された。ＰＤの終末段階のモデルとなる、神経が欠乏した１３匹の雌の成体アカゲザルの研究では、プログラム可能なポンプを用いた、側脳室又は線条体中への５又は１５μｇ／日のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの長期投与によって、黒質線条体のドーパミン作動系の回復が促進され、運動機能が著しく改善された。機能的な改善には、黒質のドーパミン神経細胞及び線条体を神経支配するそれらの突起の顕著な上方制御及び再生が伴った。さらに、長期的なｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ処理は、Ｌ−ドーパの長期投与に一般的に付随する副作用を誘導しなかった。これらの知見は、黒質線条体経路中のドーパミン作動性神経細胞に対するｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの再生効果と合致しており、この効果は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦのＩＣＶ毎月大量投与後には観察されなかった効果である。
【００１８】
さらに、２年間、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを被殻に直接送達された５人のＰＤ患者の５７％がパーキンソン病統一スケール（ＵＰＤＲＳ）の投薬停止時運動サブスコアに改善を示し、６３％が日常生活の活動に改善を示した。薬物によって誘導される運動障害は６０％低下し、長期ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ送達の間の薬物停止時には見られなかった。
【００１９】
１８Ｆ−ドーパ  ＰＥＴによって、１８ヶ月の時点で被殻ドーパミン貯蔵が２８％と大幅に増加することが示され、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦのドーパミン機能に対する直接的効果を示唆している。反復多変量分散分析（ＭＡＮＯＶＡ）によって、後部被殻において、ベースラインスキャンと全ての術後スキャンの間で、１８Ｆ−ドーパの取り込み定数（Ｋｉ）に有意な差（ｐ＜０．００１）があることが明らかとなった。この増加は、２４月の時点で最も顕著であった（６０％、ｐ＜０．００１）。
【００２０】
従って、ヒトのパーキンソン病の病理的特質を治療又は予防する、他に類のない有効な、長く必要とされていた方法、及びＰＤの症候を壊滅する方法が、本発明によって提供される。
【００２１】
本明細書において使用されるセクションの見出しは、整理の目的のためにのみ設けられており、記載されている主題を限定することを意図するものではない。
【００２２】
略号
前述の説明及び以降の実験の開示では、以下の略号が使用される。
【００２３】
６−ＯＨＤＡ      ６−ヒドロキシドーパミン
ＡＬＳ            筋萎縮性側索硬化症
ＡＳＡ            急性全身性アナフィラキシー
ＡＵＣ            濃度対時間曲線下面積
ＣＡＰＩＴ        脳内移植のための中核的評価計画
ＣＡＰＳ          ３−（シクロヘキシルアミノ）−１−プロパンスルホン酸
ＣＨＯ            チャイニーズハムスター卵巣
ＣＩ              継続的注入
ＣＳＦ            脳脊髄液
ＣＴ              コンピュータ断層撮影法
ＤＡ              ドーパミン、ドーパミン作動性
ＤＯＰＡＣ        ３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸
Ｅ．コリ          Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ
ＦＣＡ            フロイントの完全アジュバント
ＧＤＮＦ          グリア細胞株由来神経栄養因子
ＧＬＰ            優良実験室規範
ＨＰＬＣ          高性能液体クロマトグラフィー
ＨＶＡ            ホモバニリン酸
ＩＣＶ            脳室内
ＩＭ              筋肉内
ＩＳＮ            黒質内
ＩＴ              くも膜下内
ＩＶ              静脈内
Ｌ−ドーパ        ３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（レボドーーパ）
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ    組換えメチオニルヒトＧＤＮＦ
ＭＰＴＰ          １−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン
ＰＤ              パーキンソン病
ＰＥＴ            ポジトロン放出断層撮影
ｐｍｎ            進行性運動神経障害
Ｒｅｔ            受容体チロシンキナーゼ
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ    組換えメチオニルヒトＧＤＮＦ
ＳＣ              皮下
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ  ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
ＳＥＭ            標準誤差
ＴＧＦ            トランスフォーミング成長因子
ＴＨ              チロシン水酸化酵素
ＴＨ＋            チロシン水酸化酵素陽性
ＵＰＤＲＳ        パーキンソン病統一スケール
定義
別段の記載がなければ、技術用語は、慣用的な用法に従って使用される。本開示において使用される場合、以下の用語は、以下の意味を有するものとして理解されなければならない。
【００２４】
本明細書において、「カテーテル」という用語は、治療剤の注射を可能とするために、生きた哺乳動物の腔、組織、臓器又はそれらの任意の亜構造中に挿入するための、あらゆる管状医療用具を表す。本明細書で具体的に使用される場合、カテーテルは、脳又は被殻などの脳の亜構造に、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを送達するために使用される。「留置」カテーテルとは、埋め込まれ、１５分又はそれ以上など、長期間にわたって放置されるカテーテルをいう。
【００２５】
本明細書において使用される「カテーテル系」という用語は、少なくとも一つのカテーテルと、アンカー、スタイレット、導管、誘導線又はこれらの組合せを含む（これらに限定されない。）、少なくとも一つの補助装置との組合せを表す。
【００２６】
「継続的送達」又は「長期的注入」は互換的に使用され、該操作が「大量瞬時」送達と区別されるように、一定期間にわたって物質を送達することを意味するものとする。継続的送達では、一般的に、中断せずに、一定期間にわたって、物質を送達する。送達の速度は一定である必要はなく、送達の期間は極めて長い必要はない。すなわち、定常送達の期間は、おそらく、半時間又は一時間又は数時間にわたる期間とすることができるが、日、週、月にわたる期間とすることもでき、又は年にわたる期間とし得る場合さえある。
【００２７】
本明細書において使用される「混合する」とは、一又は複数の乾燥試薬の、溶液若しくは懸濁液中の試薬との混合又は試薬の水性調合物の混合などによって、目的のポリペプチドに賦形剤を添加することを表す。
【００２８】
本明細書において使用される「賦形剤」とは、所望の稠度又は安定化効果を与えるために、薬学的組成物に添加される非治療剤を表す。
【００２９】
「移植された」とは、体内に配置され、かなりの長期間にわたって、その場所に維持されることを意味する。本明細書において使用される場合、移植された物体が所定位置に維持される期間は、薬物などの物質を大量瞬時導入するために一般に必要とされる期間より、かなり長いのが一般的であろう。例えば、本発明の方法において使用されるカテーテルは、このようにして移植されたカテーテルが、かなり長期間にわたって、移植部位に留まるように、組織又は臓器内に配置され得る。本発明の方法に使用し得る薬物送達装置の幾つか、例えば、薬ポンプ及び／又はカテーテルは、一月より長い期間、場合によっては何年もの間、移植され、この期間中、薬物を送達するように設計されている。薬物送達装置は、例えば、皮下に、又は組織若しくは臓器内に、又は腹腔、鎖骨下空間、胸腔、骨盤腔、若しくは目的物質の送達に便利な任意のその他の腔又は部位などの体腔内に、移植することができる。カテーテルは、組織、例えば、脳組織中に移植することができ、接着剤若しくはネジ、鉗子、縫合又は他の任意の適切な固定手段を使用して、骨（例えば、頭蓋骨又は軟骨）などの他の組織にカテーテルを固定することによって、定位置に取り付けることができる。
【００３０】
「ドーパミン機能障害」、「ドーパミン調節不全」、「ドーパミン変性」、「ドーパミン枯渇」、「ドーパミン欠乏」又はこれらの文法的均等表現は、本明細書において、互換的に使用され得る。このような用語は全て、以下の症状又は疾患のうち少なくとも一つを包含するものとする。パーキンソン病、神経細胞のドーパミン欠乏、ドーパミン作動性神経細胞の欠乏、ドーパミン作動性神経細胞の病変、ドーパミン神経支配の低下、ドーパミン合成の不能、ドーパミン貯蔵の不能、ドーパミン輸送の不能又はドーパミン取り込みの不能。ドーパミン機能障害は、以下のものなどの因子（これらに限定されない。）を分析することによって、明らかにすることができる。１）ＴＨ発現神経細胞の数、２）ドーパミン神経細胞のサイズ、３）ドーパミン代謝産物のレベル、４）ドーパミンの取り込み、５）ドーパミンの輸送、６）神経細胞のドーパミンの取り込み、７）ドーパミン輸送体の結合、８）終末ドーパミン放出の素量的サイズ、９）ドーパミン代謝回転の速度、１０）ＴＨ＋細胞の計測数、１１）ＴＨ＋神経支配の密度及び１２）ＴＨ＋繊維の密度。
【００３１】
「標的部位」という用語又はそれらの文法的変形表現は、薬物などの物質の意図された送達を行う部位を表す。本発明の特定の実施形態において、好ましい標的部位は、パーキンソン病に冒されたヒトの脳内にある、ドーパミン変性又はドーパミン機能障害の領域である。さらに好ましくは、前記標的部位は、被殻の中心領域である。さらに好ましくは、前記標的部位は、被殻の後部領域である。最も好ましくは、前記標的部位は、被殻の後背側領域である。さらに、具体的な標的部位は、脳の半球の片側又は両側を標的とすることができる。
【００３２】
「近位末端」とは、相対的な用語であり、操作者（すなわち、執刀医）に最も近く、且つ処置部位から最も離れた、カテーテルなどの装置の末端を総称する。本発明において、カテーテルは、アクセスポート又は薬物送達装置（ポンプなど）又はタンクに、連絡可能に取り付けることができる近位末端を有する。
【００３３】
「チロシン水酸化酵素陽性」又は「ＴＨ＋」とは、チロシン水酸化酵素、チロシン水酸化酵素をコードするｍＲＮＡ又はチロシン水酸化酵素活性を検出及び／又は測定するための手段として本分野において公知の任意の技術から得られた結果によって示されたところにより、表記された神経組織中にチロシン水酸化酵素が存在することを表すものとする。
【００３４】
「遠位末端」とは、相対的な用語であり、操作者（すなわち、執刀医）から最も離れており、且つ処置部位に最も近い、カテーテルなどの装置の末端を総称する。本発明において、カテーテルの遠位末端は、標的部位への薬物の送達を可能とする開口部に連絡可能に取り付けることができる。
【００３５】
本明細書において使用される「薬物送達装置」には、あらゆる種類の薬物タンク及び／又は薬物ポンプ、例えば、浸透ポンプ、電気機械的ポンプ、電気浸透ポンプ、発泡性ポンプ、水圧ポンプ、圧電ポンプ、弾性ポンプ、蒸気圧ポンプ又は電解ポンプが含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、このようなポンプは、体内に移植される。
【００３６】
本明細書を通じて、「ＧＮＤＦ」という用語又は「ＧＤＮＦタンパク質産物」又は「ＧＤＮＦポリペプチド」という表記は、全て互換的に使用され、マウス、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、トリ、及び好ましくはヒトを含む、任意の種に由来し、固有の配列の、又は生物学的に活性なその断片、類縁体、バリアント（挿入、置換及び欠失バリアントを含む。）及び誘導体を含む（これらに限定されない。）、遺伝子工学によって改変されたバリアント形態の、天然、合成又は組換えによって産生される任意の取得源から得られるグリア細胞由来神経栄養因子を表す。
【００３７】
本発明において有用なＧＤＮＦポリペプチドの例には、米国特許第５，７３１，２８４号、第６，３６２，３１９号、第６，０９３，８０２号及び第６，１８４，２００号（全て、参照により、その内容全体が本明細書に組み込まれる。）に記載されているＧＤＮＦタンパク質産物の全てが含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明の方法に使用するのに好ましいＧＤＮＦタンパク質産物には、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ、アミノ末端メチオニンの付加によって固有の成熟ヒトＧＤＮＦと同一のアミノ酸配列を有する、Ｅ．コリ中で産生される組換えＧＤＮＦタンパク質が含まれるが、これらに限定されるものではない。このように、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、１３５個のアミノ酸からなる。アミノ酸のうち７つはシステインであり、１つの分子間ジスルフィド結合及び３つの分子内ジスルフィド結合に関与している。その活性型において、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、ジスルフィド結合されたホモ二量体である。単量体ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの一次アミノ酸配列が、表１に記載されている。
【００３８】
【表１】
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【００３９】
本発明において有用なＧＤＮＦタンパク質産物は、当業者に公知の任意の手段によって、単離し、又は生成することができる。好ましくは、ＧＤＮＦは、組換え的に製造される。好ましい方法において、ＧＤＮＦはクローニングされ、例えば、哺乳類細胞又は細菌細胞中でそのＤＮＡが発現される。本発明において有用なＧＤＮＦタンパク質産物を製造する方法の例が、米国特許第６，３６２，３１９号、第６，０９３，８０２号及び第６，１８４，２００号に記載されている（全て、参照により、その内容全体が本明細書に組み込まれる。）。
【００４０】
ＧＤＮＦ薬学的組成物は、典型的には、少なくとも一つのＧＤＮＦタンパク質産物の治療的に有効な量と、薬学的及び生理的に許容される一又は複数の製剤因子とを含む。適切な製剤因子には、抗酸化剤、防腐剤、着色剤、着香剤及び希釈剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、充填剤、バルク剤、緩衝剤、ビヒクル、希釈剤、賦形剤及び／又は薬学的佐剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。例えば、適切なビヒクルは、生理的食塩水溶液、クエン酸で緩衝された生理的食塩水、又は人工ＣＳＦであり得、非経口投与用組成物に一般に加えられる他の物質が補充されるであろう。中性の緩衝された生理的食塩水又は血清アルブミンと混合された生理的食塩水は、さらに例として挙げられるビヒクルである。当業者であれば、前記組成物に使用できる様々な緩衝剤及び本発明に使用される剤形は自明であろう。典型的な緩衝剤には、薬学的に許容される、弱酸、弱塩基又はそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されるものではない。好ましくは、緩衝成分は、リン酸、酒石酸、乳酸、コハク酸、クエン酸、酢酸、アスコルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、及びそれらの塩など、水溶性物質である。
【００４１】
ビヒクル中の主要溶媒は、性質が水性又は非水性であり得る。さらに、ビヒクルは、ｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明度、色、無菌性、安定性、溶解速度又は製剤の臭いを改変又は維持するための、薬学的に許容される他の賦形剤を含有することができる。ＧＤＮＦの好ましい薬学的組成物は、少なくとも一つのＧＤＮＦタンパク質の治療的に有効な量と、薬学的に許容されるビヒクルとを含む。より好ましくは、前記薬学的に許容されるビヒクルは、水性緩衝剤である。より好ましくは、前記ビヒクルは、約１００ｍＭから約２００ｍＭの濃度の塩化ナトリウム及び約５ｍＭから約２０ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウムを含む。さらに好ましくは、前記ビヒクルは、約１２５ｍＭから約１７５ｍＭの濃度の塩化ナトリウム及び約７．５ｍＭから約１５ｍＭの濃度のクエン酸ナトリウムを含む。さらに好ましくは、前記ビヒクルは、それぞれ、約１５０ｍＭ及び約１０ｍＭの濃度の、塩化ナトリウム及びクエン酸ナトリウムを含む。最も好ましくは、前記ＧＤＮＦ薬学的組成物は、１０ｍＭのクエン酸ナトリウムと１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む、ｐＨ５．０の液体として調合される。
【００４２】
ＧＤＮＦ薬学的組成物は、ＧＤＮＦタンパク質産物の放出の速度を改変又は維持するための、薬学的に許容されるさらに別の調合剤を含有してもよい。このような調合剤は、徐放製剤の調合において当業者に公知の物質である。薬学的及び生理的に許容される調合剤に関する、さらなる参考文献については、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｎｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １８ｔｈ  Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．  ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．  １８０４２）  ｐａｇｅｓ  １４３５−  １７１２」（参照により、その開示内容は、本明細書に組み込まれる。）を参照されたい。
【００４３】
一旦、治療用組成物が調合されたら、この治療用組成物は、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体、又は脱水若しくは凍結乾燥された粉末として、無菌バイアル中に、保存することができる。このような製剤は、即時使用形態、使用前に再構成を必要とする凍結乾燥形態、又は使用前に希釈を必要とする液体形態のうち、何れの形態で保存することもできる。好ましくは、ＧＤＮＦ薬学的組成物は、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で、無菌の使い捨てバイアル中に与えられ、使用まで、−２から８℃の温度で、凍結して保存される。投与の直前に、ＧＤＮＦタンパク質産物を融解し、１５０ｍＭの塩化ナトリウムと１０ｍＭのクエン酸ナトリウムからなる、クエン酸塩で緩衝された無菌の生理的食塩水（ｐＨ５．０）で適切に希釈すべきである。
【００４４】
本発明の方法において、ＧＤＮＦは、移植可能なポンプ及び一又は複数のカテーテルを用いて、ヒトの脳内のドーパミン機能障害部位に、長期的に投与される。好ましくは、ＧＤＮＦの長期送達の標的とされる、ＰＤ患者の脳の領域は、ＴＨ発現ニューローンの数、２）ドーパミン神経細胞細胞のサイズ、３）ドーパミン代謝産物のレベル、４）ドーパミンの貯蔵、５）ドーパミンの輸送、６）神経細胞のドーパミンの取り込み、７）ドーパミン輸送体の結合、８）終末ドーパミン放出の素量的サイズ、９）ドーパミン代謝回転の速度、１０）ＴＨ＋細胞の計測数、１１）ＴＨ＋神経支配の密度及び１２）ＴＨ＋繊維の密度を含む（これらに限定されない。）、ＰＤ疾病の生物マーカー又は疾病の進行を評価することによって決定される。さらに好ましくは、ＧＤＮＦは、ドーパミンが著しく枯渇した、ヒト脳の領域中に、長期的に直接注入される。さらに好ましくは、ドーパミンが著しく枯渇し、それ故、ＧＤＮＦの慢性送達の目標とされる、ＰＤ患者の脳の領域は、脳又はその領域の神経撮像によって決定される。さらに好ましくは、ＧＤＮＦの長期注入部位を決定するために使用される前記神経撮像技術は、１８Ｆ−フルオロドーパ陽電子放射型断層撮影法（１８Ｆ−ドーパＰＥＴ）１３及び単一光子放射型断層撮影法上での１２３Ｉ−２β−カルボキシメトキシ−３β−（４−ヨードフェニル）トロパンの取り込み（１２３Ｉ−β−ＣＩＴ  ＳＰＥＣＴ）でのからなる群から選択される。本発明のさらに好ましい実施形態において、ＧＤＮＦは、ＰＤ患者の少なくとも一つのドーパミン機能障害性被殻に、長期的に直接注入される。さらに好ましくは、ＧＤＮＦは、ＰＤ患者の少なくとも一つのドーパミン機能障害性被殻の後部領域に、長期的に直接注入される。最も好ましくは、ＧＤＮＦは、ＰＤ患者の少なくとも一つのドーパミン機能障害性後背側被殻に、長期的に直接注入される。
【００４５】
体内の特定の部位に医学的物質を分配するために、数多くの薬物送達装置、カテーテル、カテーテル系及びそれらの組合せが開発されており、本発明の方法で使用するために、当業者は全て容易に入手することができる。従って、特定の濃度で、及び／又は特定の時間に、及び／又は異なる送達速度で、患者の脳の標的部位に、ＧＤＮＦ組成物を送達するために、従来技術の薬物送達装置、カテーテル及びカテーテル系を使用することができる。一例として、本発明の方法では、米国特許公開ＵＳ２００３０１２０２６２、ＵＳ２００３０２０８１８４若しくはＵＳ２００３０２２５３７２、又は米国特許第４，９３１，０５０号、第４，８３８，８８７号、５，２０７，６６６号、第４，７１４，４６２号、第５１７６，６４１号；第３，９２３，０６０号、第４，００３，３７９号、第４，５８８，３９４号、第４，４４７，２２４号、第５，５７５，７７０号、第４，９７８，３３８号、第５，９０８，４１４号、第５，６４３，２０７号、第６，５８９，２０５号若しくは第６，５９２，５７１号に記載されている技術を使用することができるが、これらに限定されない。これらの各米国特許出願及び米国特許の開示内容全体は、参照により、本明細書に組み込まれる。本発明において有用な、好ましい薬物送達装置には、米国特許第５，７５２，９３０号又は米国特許出願第ＵＳ２００３０２１６７１４号に記載されているものが含まれる（それらの全体は、参照により、本明細書に組み込まれる。）。本発明において有用な、さらに好ましい薬物送達装置には、米国特許第６，６２０，１５１号に記載されているものが含まれる（その全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）。本発明において有用な、さらに好ましい薬物送達装置には、米国特許出願第ＵＳ２００３０２１６７１４号に記載されているものが含まれる（その全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）。本発明において使用される、最も好ましい薬物送達装置は、米国特許第４，１４６，０２９号、第４，０１３，０７４号又は第４，６９２，１４７号（それらの全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）に記載されているものであり、それらの市販の実施形態には、Ｓｙｎｃｈｒｏｍｅｄ（Ｒ）Ｉ、Ｓｙｎｃｈｒｏｍｅｄ（Ｒ）ＥＬ、及びＳｙｎｃｈｒｏｍｅｄ（Ｒ）  ＩＩ注入ポンプ（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ，  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  Ｍｉｎｎ）が含まれるが、これらに限定されない。
【００４６】
本発明の別の実施形態では、上記及び下記実施形態の何れかと組み合わせて、薬物などの薬剤を、体内の特定の部位に分配するために、数多くのカテーテル及びカテーテル系が開発されており、本発明の方法で使用するために、当業者は全て容易に入手することができる。一例として、本発明の方法では、米国特許公開ＵＳ２００３０２１６７００、ＵＳ２００３０１９９８３１若しくはＵＳ２００３０１９９８２９、又は米国特許第６，３１９，２４１号に記載されている技術を使用することができる、これらに限定されない。これらの米国特許出願及び米国特許の開示内容全体は、参照により、本明細書に組み込まれる。本発明において有用な好ましいカテーテル又はカテーテル系には、国際特許公開ＷＯ  ０２／０７８１０若しくはＷＯ  ０３／００２１７０又は米国特許第５，７２０，７２０号、第６，５５１，２９０号若しくは第６，６０９，０２０号に記載されている実質内注入カテーテル又はカテーテル系が含まれるが、これらに限定されるものではない。これらの各特許出願及び米国特許の開示内容全体は、参照により、本明細書に組み込まれる。本発明において有用な、さらに好ましいカテーテル又はカテーテル系には、国際特許公開ＷＯ  ０３／０７７７８５号（その内容全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）に記載されている実質内注入カテーテル又はカテーテル系が含まれるが、これらに限定されるものではない。本発明において有用な、最も好ましいカテーテル又はカテーテル系は、米国特許第６，０９３，１８０号に記載されている実質内注入カテーテル又はカテーテル系である（その全体が、参照により、本明細書に組み込まれる。）。
【００４７】
上記又は下記実施形態の何れかと併用された、本発明の方法の別の実施形態において、ＧＤＮＦの治療的に有効な用量が、ヒトＰＤ患者の一方又は両方の被殻に直接長期的に注入される。本明細書において互換的に使用される「治療的に有効な用量」又は「薬学的に有効な用量」という用語は、当業者によって、ＰＤを含む（これに限定されない。）神経変性疾患に一般的に付随する任意の生物的症候に、何らかの改善、妨害、抑制又は改変をもたらすのに十分な、ＧＤＮＦの量を表す。上記又は下記実施形態の何れかと併用された、本発明の方法の好ましい実施形態において、ＧＤＮＦは、約１μｇ／被殻／日から約１００μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。より好ましくは、ＧＤＮＦは、約５μｇ／被殻／日から約５０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。さらに好ましくは、ＧＤＮＦは、約１０μｇ／被殻／日から約７５μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。さらに好ましくは、ＧＤＮＦは、約１５μｇ／被殻／日から約５０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。さらに好ましくは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、約２０μｇ／被殻／日から約４０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。さらに好ましくは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、約２５μｇ／被殻／日から約３０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。さらに好ましくは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、約１５μｇ／被殻／日から約３０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。最も好ましくは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、約２５μｇ／被殻／日から約３０μｇ／被殻／日の用量で、ヒトの被殻中に、直接長期的に注入される。
【００４８】
本出願人は、認知障害を治療すること又はＰＤ及び痴呆を含む（これらに限定されない。）神経変性疾患に伴う認知力の低下を抑えることが必要とされるヒトの一方又は両方の被殻に投与される、認知障害を治療するための、又はＰＤ及び痴呆を含む（これらに限定されない。）神経変性疾患に伴う認知力の低下を抑えるための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦ（ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを含むが、これに限定されない。）の薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との使用も本明細書に開示する。認知障害を治療するための、又はＰＤ及び痴呆を含む（これらに限定されない）神経変性疾患に伴う認知力の低下を抑えるための薬学的組成物の調製における、ＧＤＮＦの薬学的に有効な量と、薬学的に許容される少なくとも一つの、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤との好ましい使用において、前記組成物は、認知障害を治療すること又はＰＤ及び痴呆を含む（これらに限定されない。）神経変性疾患に伴う認知力の低下を抑えることが必要とされるヒトの一方又は両方の被殻内に存在するドーパミン機能障害部位に投与される。このような使用の場合、ドーパミン機能障害は、術前に存在する。上記又は下記実施形態の何れかとともに併用される、本発明の実施形態において。
【００４９】
本発明の方法は、パーキンソン病患者に対して適用すると、パーキンソン病の症候を著しく弱め、その結果、少なくとも３０ヶ月間にわたって、患者の症状が改善される。特に、運動作用（ｍｏｔｏｒｉｃｉｔｙ）、微細な運動作用及び微細な器用さに関する限り、本発明の方法によって、疾病特異的な症候の明確な改善が得られた。さらに、運動性及び集中力が増加し、反応時間が減少した。発音、顔の表現力、姿勢、嗅覚、性欲、性機能及び感情状態が改善され、精神状態が明るくなった。
【００５０】
本発明のさらに別の実施形態において、ＧＤＮＦは、特に痴呆若しくは外傷の後遺症として、学習を増強するための、又は、例えば、ＰＤ患者における認知力の低下及び／又は痴呆を抑えるための認知増強剤として使用することができる。国立老化研究所によって、高齢者の痴呆の５０％超を占めることが明らかとされたアルツハイマー病も、６５歳を超えるアメリカ人の死因の上位４位又は５位である。４００万人のアメリカ人、８５歳を超えるアメリカ人（米国の集団の中で最も速く増加している区分）の４０％がアルツハイマー病に罹っている。パーキンソン病の全患者のうち２５％は、アルツハイマー病様の痴呆にも罹患している。出願人は、ＧＤＮＦの長期被殻内投与が、ヒトの認知障害の治療又は予防に適用できることを、本明細書において、初めて示した。特に、ＧＤＮＦの被殻内投与は、ＰＤに伴う認知障害及び／又はアルツハイマー病様痴呆の治療又は予防に適用できる。
【００５１】
本発明は、
（ａ）ＧＤＮＦタンパク質産物と、薬学的に許容される、ビヒクル、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物の一又は複数の補給品と、
（ｂ）移植された薬物送達装置に前記組成物を補充するための一又は複数の補給品と、
を備える、キットにも向けられる。
【００５２】
該キットの好ましい実施形態において、前記ＧＤＮＦタンパク質産物がｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦである。別の好ましい実施形態において、前記キットは、少なくとも一つのシリンジをさらに備える。別の好ましい実施形態において、前記キットは、薬学的に許容される希釈剤の一又は複数の補給品をさらに含む。さらに好ましくは、薬学的に許容される希釈剤は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び約１０ｍＭのクエン酸ナトリウムからなる、クエン酸塩によって緩衝されたｐＨ約４．５から５．５の生理的食塩水である。さらに好ましくは、薬学的に許容される希釈剤は、１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び１０ｍＭのクエン酸ナトリウムからなる、クエン酸塩によって緩衝されたｐＨ５．０の生理的食塩水である。さらに好ましくは、前記キットは、薬学的組成物を希釈剤で希釈するための説明書をさらに備える。さらに好ましくは、前記キットは、前記薬物送達装置を補充するための説明書をさらに備える。
【００５３】
幾つかの実施例において、前記キットは、薬学的組成物、希釈剤、又は移植された薬物送達装置に前記組成物を補充するために与えられる補給品を含有する、取り外し可能な密閉容器などの（これに限定されない。）複数の密閉容器、を備える。複数の容器は、同一の供給物を含有することができる。さらに、一つの容器が、二以上の供給物を含有することができる。
好ましくは、前記薬学的組成物、希釈剤、及び移植された薬物送達装置にＧＤＮＦ薬学的組成物を補充するために与えられる補給品は、キット中の密封容器に無菌で与えられる。
【００５４】
キットの幾つかの実施形態において、前記薬学的組成物は、粉末又はその他の乾燥形態で与えられる。粉末又はその他の乾燥形態は、前記移植された薬物送達装置を補充する際に使用するために、前記薬学的組成物を液体形態に再構成する目的で、希釈剤などの（これに限定されない。）液体と組み合わせることができる。
【００５５】
（実施例）
実施された実験及び得られた結果を含む、以下の実施例は、例示の目的でのみ記載されており、本発明を限定するものと解釈してはならない。
【実施例１】
【００５６】
脳内への制御された長期ｒ−ｍｅｔＧＤＮＦ注入による、非ヒト霊長類における進行したパーキンソン病様神経欠乏の治療
神経保護が僅かな役割しか果たさない条件下での、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの回復作用を評価するために、神経毒１−メチル−４−フェニル−１，２，３，６−テトラヒドロピリジン（ＭＰＴＰ）によって誘導される、安定した状態の進行した半身パーキンソン病の特徴を有するアカゲザルを用いて、ヒトＰＤの後期段階のモデルを作製した（Ｂａｎｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３；  Ｅｍｂｏｒｇ−Ｋｎｏｔｔ  ａｎｄ  Ｄｏｍｉｎｏ，  １９９８）。このモデルでは、右頚動脈を通じたＭＰＴＰの注入によって、表現型マーカーである、右黒質中のチロシン水酸化酵素（ＴＨ）を発現するドーパミン神経細胞の約７５％が失われ、右被殻中のドーパミンの９９％超が枯渇する（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。これらの減少は、典型的には、細胞計測数が黒質ドーパミン神経細胞の６０から７０％の喪失を示し（Ｊｅｌｌｉｎｇｅｒ，  １９８６）、被殻中の９９％のドーパミンが枯渇する（Ｋｉｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８）、進行したヒトのパーキンソン病と同等である。線条体に隣接した右側脳室中又は両側性に線条体中に移植されたカテーテルに接続されている、皮下に移植されたプログラム可能なポンプを使用して、ＭＰＴＰで傷害された黒質線条体系に、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ又はビヒクルの制御された用量を継続的に送達した。行動的な回復は、ビデオテープに録画した標準化された検査を用いて、定量した。黒質線条体のドーパミン系の再生は、定量的形態学及びドーパミンレベルの高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）測定によって分析した。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦが促進する黒質線条体系の再生及び運動回復のレベルは、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）及びＨＰＬＣによって定量した。
【００５７】
動物の取り扱い
全ての操作は、実験動物の飼養に対する評価及び認定を行うための国際協会（ＡＡＡＬＡＣＩ、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ）から完全に認定を受けている、ケンタッキー大学の実験動物施設において行った。非ヒト霊長類の健康管理及び飼育に習熟した獣医師が、全ての動物の飼育を監督した。ケンタッキー大学の動物使用委員会は、全てのプロトコールを認可した。
【００５８】
継続的に発現されるパーキンソン病の特徴を誘導するために、１３匹の雌の成体（１３±０．６年齢）アカゲザル（Ｍａｃａｃａ  ｍｕｌａｔｔａ）に、０．４ｍｇ／ｋｇのＭＰＴＰの右頚動脈内注入を行った（Ｏｖａｄｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８５）。発現されたパーキンソン病の特徴が安定していることを確かめるために、少なくとも二ヶ月の間、動物をモニターした。この時点で、磁気共鳴影像法によって誘導された定位的手法を用いて、カテーテル（１ｍｍ  Ｏ．Ｄ．，  Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）を、線条体に隣接した右側脳室（ｎ＝８）の中に、又は被殻の中央部の中に両側性に（ｎ＝５）、外科的に移植した。次いで、柔軟なポリウレタンチューブを介して、側方腹部領域中に皮下移植されたプログラム可能なポンプ（ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄＴＭ  ｍｏｄｅｌ  ８６１６−１０；  Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｉｎｃ．，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，  ＭＮ）に、カテーテルを接続した（Ｇｒｏｎｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。黒質神経細胞に対して生じる可能性がある脳室送達の両側性効果を模倣するために、カテーテルは、被殻の中に、両側性に移植した（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。カテーテルの配置は、磁気共鳴影像法によって確認した。これらの手法の間、動物は、イソフルラン（１から３％）で麻酔した。手術後最初の月の間には、１３匹の動物全てに、ビヒクル（１０ｍＭ  クエン酸塩、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ緩衝液）を毎日注入し、５匹の対照動物では、さらに３ヶ月間、継続した（ｎ＝３  脳室内、ｎ＝２  被殻内）。残りの８匹の動物には、同じ３ヶ月の期間にわたって、一日当り名目上７．５μｇのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ（Ａｍｇｅｎ，  Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，  ＣＡ）を注入した（ｎ＝５  脳室内、ｎ＝３  被殻内）。この動物のうち４匹が、この用量に対して反応した。動物間の行動的な改善のレベルを同じように達成するために（評定尺度で２以上）、他の４匹の動物では、一日用量を名目上２２．５μｇに増加させた（ｎ＝２  脳室内、ｎ＝２被殻内）。皮膚を通じて、注入口に注射することによって、４週毎に、ポンプに、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ又はビヒクルを補充した（Ｇｒｏｎｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００１）。脳内に長期的に注入されたｒ−ｍｅｔ  ＨｕＧＤＮＦの実際の用量レベルを推測するために、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の４週、８週及び１２週の時点で、３匹の動物のポンプから、残存しているｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ溶液を取り出した。ポンプへの吸着によるタンパク質の喪失は、ＥＬＩＳＡエッセイ（Ａｍｇｅｎ，  Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，  ＣＡ）によって推測し、３７℃（体温）のポンプ中における、４週後の、ｒｍｅｔＨｕＧＤＮＦの安定性は、逆相ＨＰＬＣによって測定した。
【００５９】
運動機能は、ヒトのパーキンソン病統一スケールを模倣した、以前に公表された非ヒト霊長類パーキンソン病スケールを用いて評価した（Ｏｖａｄｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。毎週標準化された２時間の検査を、処置前と処置後に行い、符号化されたビデオテープから評価した（Ｏｖａｄｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。広く使用されているこのアプローチの総説は、他の文献に公表されている（Ｉｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。さらに、動物が、この処置から副作用を示しているかどうかを決定するために、テープを分析した（Ｍｉｙｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。ＭＰＴＰ後／ベースラインスコアは、ポンプを移植する前に実施された、２つのビデオテープ撮影セッションの平均スコアとして定義した。評定尺度は非線形であるので、対照及びｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントで毎週得られた累積スコアは、関連標本に対するノンパラメトリックＦｒｉｅｄｍａｎ検定後に、関連標本の対に対するノンパラメトリックＷｉｌｃｏｘｏｎの符号付き順位検定による後知恵解析を使用して、解析した。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦに対する行動応答をさらに詳しく分析するために、評定尺度を、その異なる成分（すなわち、姿勢、平衡、硬直、振戦及び運動緩徐）に分解した。評価付けされた各カテゴリーに対して、ＭＰＴＰ後／ベースラインスコアと被処理群における最大効果で得られたスコアを、関連標本の対に対するＷｉｌｃｏｘｏｎの符号付き順位検定を用いて比較した。各動物は、それ自体の対照として使用された。
【００６０】
ケタミン塩酸塩（２０〜２５ｍｇ／ｋｇ）の初回投与を受けた後、ペントバルビタールナトリウム（２０ｍｇ／ｋｇ）を用いて、動物に深く麻酔をかけ、ヘパリン処理された氷冷生理的食塩水を経心臓的に灌流した。次いで、脳を取り出し、氷冷した脳の鋳型を用いて、４ｍｍ厚の冠状切片に切断した。ＨＰＬＣによるドーパミン、ホモバニリン酸（ＨＶＡ）及び３，４−ジヒドロキシ−フェニル酢酸（ＤＯＰＡＣ）測定のために、尾状核（１０から１５パンチ）、被殻（１０パンチ）及び側坐核（５パンチ）にわたる単一切片から、脳の両側に対して、複数の脳組織パンチを採取した（Ｃａｓｓ，  １９９６）。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの局所的効果を評価するために、組織パンチに使用された冠状脳切片中の左及び右線条体をそれぞれ、側脳室から被殻の外側縁に広がる、各々約４ｍｍ（内側、中間、外側）の３つの領域に分割した（図２ｊ）。ある領域中で採取された全てのパンチを平均し、領域ごと、動物ごとの、ドーパミン、ＤＯＰＡＣ又はＨＶＡの単一指標を得た。各半球について、対照とｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ処理群の動物間での、ドーパミン、ＤＯＰＡＣ又はＨＶＡレベルの差を推測するために、独立標本ｔ検定を使用した（不等分散を仮定した。）。類似の解析のために、脳の両側の淡蒼球の切片からも、５つの組織パンチを採取した。
【００６１】
全中脳とともに、無処置の４ｍｍ厚冠状線条体切片を、４℃の４％パラホルムアルデヒド溶液中に浸漬固定し、線条体及び黒質を通じて、スライド式ナイフミクロトーム上で、４０μｍ厚の切片が切断できるように、加工した。他の文献に記載されているように（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）、ＴＨの免疫化学的染色を行うために、この切片をさらに加工した（モノクローナル抗体、１：１０００；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｃ．，  Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）。ＴＨ＋中脳ドーパミン作動性神経細胞の数及び神経細胞体の大きさは、無作為立体的細胞計数のための光学的分画装置法を使用して、推測した（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。この分析には、腹側被蓋野は含めなかった。各半球について、対照とｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ処理群の動物間での、黒質細胞数又は細胞サイズに対するｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの効果を分析するために、独立標本ｔ検定を使用した（不等分散を仮定）。さらに、線条体の４０μｍ厚切片上で、脳の両側に対して、ＴＨ＋繊維密度の定量分析を実施した。側脳室を基準点として用いて、１．２×１．２ｍｍの格子を使用して、背側から腹側へ、線条体切片を定量した（ピクセルの数、Ｂｉｏｑｕａｎｔ  Ｉｍａｇｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ）。側脳室から一定の距離で、背側から腹側に測定された全てのデータを平均して、１．２ｍｍ幅の背側腹側領域当り、動物当りの、単一指標を得た。側脳室からの距離の被験動物内因子及び処置群の被験動物間因子に対する、分散分析（ＡＮＯＶＡ）検定を使用して、データを解析した（ビヒクル対ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ）。ＡＮＯＶＡの後に、独立標本ｔ検定を行った（不等分散を仮定）。半球（左対右）及び領域（内側、中間、外側）の被験動物内因子並びに処置群（ビヒクル対ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ）及び注入経路（脳室内対被殻内）の被験動物間因子に対する、最初のＡＮＯＶＡ検定によって、以下の指標について、注入の経路に関する主要な効果は存在しないことが明らかとなった。ＴＨ＋繊維密度、黒質細胞の大きさと数、線条体及び淡蒼球中のドーパミン及びドーパミン代謝産物レベル。同様に、ノンパラメトリックＭａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ−Ｕ検定は、注入経路については、各処置群の毎週の行動スコアに対する効果がないことを示した。このため、以前に公表されたデータ（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）に従って、全てのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントは一つの群として取り扱った。Ｐ≦０．０５は、全ての解析において、有意だと考えられた。混合された群データ解析に加えて、各動物から得られたデータが、行動、神経化学及び組織学について表されている。
【００６２】
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの安定性と用量レベル
ポンプ中のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの名目濃度は、２５μｇ／ｍＬであった。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の４週、８週及び１２週の時点で取り出された残存ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ溶液では、それぞれ１０．０、１８．３及び１４．５μｇ／ｍＬのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレベルがＥＬＩＳＡによって測定された。別の測定によって、サンプル採取技術（ポンプからｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを回収するために使用されたシリンジへの吸着及び保存に使用されるバイアル）が、３．２μｇ／ｍＬのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの喪失を占めることが明らかとなった。これをＥＬＩＳＡ測定値に加算し直すと、３７℃のポンプ中における、４週後のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの概算レベルは、名目値の５６から８６％にわたった。逆相ＨＰＬＣは、４週後にポンプ中に残存しているタンパク質の９４％がＧＤＮＦ固有ピーク中に溶出されたことを示し、喪失は主に吸着によるものであって、残存タンパク質はほとんど分解しないことを示唆している。名目レベルの７１％及び固有タンパク質の９４％レベルという平均ＥＬＩＳＡ測定値に基づいて、７．５μｇ／日及び２２．５ｇ／日の名目一日用量は、控え目に見積もって、それぞれ、少なくとも５μｇ／日及び１５μｇ／日の、脳内に注入されるｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦに相当するものと推測された。
【００６３】
パーキンソン病の特徴及び黒質線条体系前ＧＤＮＦ処置
ＭＰＴＰ投与から４５日後の時点で、カテーテル移植の前に、群の累積身体障害スコアが同等となるように、動物を、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ（ｎ＝８）又はビヒクル（ｎ＝５）試験群の何れかに割り振った（図１ａ）。身体障害の改善をよりよく反映させるために、データは、ＭＰＴＰ／ベースラインスコアと処置後スコア間のポイント差として表した。１３匹全てのサルのパーキンソン病の特徴は、ＭＰＴＰ投与後、４５から６０日にわたって、安定した状態（有意な変化がない。）を保っていた（０時点、図１ａ）。カテーテルは、６０日の時点で移植した。全ての動物は、偶発的な事後のカテーテル配置なしに回復し、４ヶ月の研究の間に、死亡は見られなかった。ビヒクル注入の４週の期間を通じて、有意な行動の変化は、全く見られなかった（表２）。その後、パーキンソン病の特徴は、研究の残りの三ヶ月にわたって、５匹のビヒクルレシピエントにおいて、同じレベルで発現され続けた。
【００６４】
研究の終結時にビヒクルのみのレシピエントでは、著しく病変された右線条体中のドーパミンの総組織レベルは、脳の左側のレベルの３％であり（図２）、脳室周囲尾状核及び側坐核からなる内側線条体領域で、残存レベルが最も高かった（１１％）（表３）。最もドーパミンレベルが低かった（＜１％）のは、被殻を含有する線条体の中間領域及び外側領域であった。ドーパミン代謝物ＤＯＰＡＣとＨＶＡのレベルも、内側線条体で最も高かった（表３）。ＭＰＴＰも、ビヒクル処理動物におけるドーパミンの淡蒼球レベル及び関連代謝産物を有意に減少させた。左の淡蒼球における組織レベルと比較すると、ビヒクルレシピエントの右淡蒼球では、ドーパミン（１９４±１６対３８±７）、ＨＶＡ（９１±１１対２０±７）及びＤＯＰＡＣ（９００３±９９０対１８８０±２５０）が平均８０％枯渇していた。
【００６５】
ビヒクルレシピエントの右線条体におけるＴＨ＋繊維密度の内側から外側プロファイルは、ドーパミンレベルに酷似していた（図３ａ、３ｂ及び４）。全体的な右線条体ＴＨ＋繊維の染色は、左の線条体におけるレベルの３％であった。最高繊維密度のレベル（最大８％）は、脳室に直接隣接している線条体の領域であり、最少レベル（約２％）は、脳室の遠位に見出された。右線条体におけるＴＨ＋繊維の減少と合致して、ビヒクルレシピエントの右黒質中のＴＨ＋神経細胞の数は、反対側に見られたＴＨ＋神経細胞の数の１７．５％まで減少し、神経細胞は、約１００μｍ２小さかった。
【００６６】
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の抗パーキンソン病効果
ビヒクルの長期注入は、運動機能に対して全く効果がなかったのに対して、ｒ−ｍｅｔＧＤＮＦ注入後の最初の月の間に、処置された動物では、定常的な改善が観察され、評定尺度で平均２．５ポイントに達した（図１ａ）。行動の改善のこのレベルは、その後、さらに２ヶ月の間、維持され、研究の終了まで、平均３．５ポイントであった。これは、身体障害の総合的な３６％の改善に相当する。処置された動物では、最大６０％の一貫した改善が、ピーク効果時の運動緩徐、硬直、平衡及び姿勢に見られた（図１ｂ）。硬直は、四肢の伸長及び／又は使用の減少として定義された（Ｏｖａｄｉａ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５）。運動障害、自傷又は嘔吐などの観察可能な副作用を一切誘導しなかったので、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの長期注入は、全ての動物によって十分に耐容された。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの急性注射時に観察された副作用である、体重減少（Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）は、４ヶ月の研究の間、長期ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントでは顕著でなかった（データは図示せず。）。
【００６７】
ＧＤＮＦ処理後の、黒質線条体ドーパミン作動系の上方制御
ビヒクルレシピエントに比べて、ドーパミン及びその代謝産物ＤＯＰＡＣは、処置動物の病変右側の脳室周囲線条体で、それぞれ、有意に２３３％及び１８０％増加した（図２ａ及び２ｄ）。しかしながら、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ処理から得られる効果は、右線条体の、除神経の度合いが高い中間及び外側部分では、一定しなかった。左側では、ＨＶＡレベルは，ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントで、それぞれ、線条体の脳室周囲、中間及び外側部分では、７２％、７０％及び７３％、有意に増加していた（図２ｇ−ｉ）。ビヒクルレシピエントの病変が生じた右側の淡蒼球における組織レベルと比べると、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントの右側淡蒼球では、ドーパミン、ＤＯＰＡＣ及びＨＶＡレベルは、それぞれ、１５５％、１９０％及び４７％、有意に増加していた。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントの左側淡蒼球では、ＨＶＡレベルのみが、有意に６７％増加していた。
【００６８】
ビヒクルレシピエントに見られるように、右頚動脈を通じたＭＰＴＰの直接注入によって、右線条体中のＴＨ＋繊維がほぼ消失したが、左の線条体中のＴＨ＋繊維の多くは残存した（図３ａ及びｂ）。高倍率では、ビヒクルレシピエントの右線条体中には、２、３のＴＨ＋繊維が残存しているのが同定されたが（図３ｆ及びｇ）、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの注入を受けた動物の脳室周囲線条体領域中では、ＴＨ＋繊維が増加していた（矢印、図３ｈ、ｉ及びｊ）。線条体中に存在するＴＨ＋繊維の定量分析によって、ビヒクルレシピエントと比較して、右線条体の脳室周囲領域中のＴＨ＋繊維密度が５倍増加していることが明らかとなった（図４）。ＴＨ＋繊維密度は、線条体の脳室辺縁に沿って最も顕著であり、脳室から深部の実質への勾配で、徐々に小さくなっていた（ｐ＜０．０２５、線形回帰分析）。線条体のドーパミン繊維の顕微鏡写真（図３）と定量測定（図４）の両者から明らかなように、脳室周囲のＧＤＮＦ応答は、一部の動物ではＴＨ＋繊維の増加が緩やかであり、残りのサルの脳室周囲線条体では、繊維のネットワークが密であった。右線条体とは対照的に、左線条体では、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦとビヒクルレシピエントには、繊維密度に有意な差は存在しなかった。
【００６９】
しかしながら、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの黒質ドーパミン神経細胞に対する効果は、両側性であった。ＴＨを発現しているドーパミン作動性神経細胞の数は、左側及び損傷を受けた右側の両方で、有意に、２０％超増加していた。同様に、ドーパミン作動性神経細胞の神経細胞体の大きさは、左及び右の黒質中で、有意に、３０％超増加していた。
【００７０】
結論
パーキンソン病が進行した脳の側脳室又は線条体の何れかへの、５又は１５μｇ／日のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの長期注入は、黒質線条体のドーパミン作動系の回復を促進し、アカゲザルの運動機能を大幅に改善する。行動の改善は、レボドーパに対する同じモデル系で以前に見られたものと同等であるか、又は優れており、長期レボドーパ投与に付随する副作用を誘導しない（Ｍｙｉｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。機能的改善には、黒質のドーパミン神経細胞及び線条体を神経支配するそれらの突起の著しい乗法制御と再生が伴った。これは、１）ドーパミンマーカーであるＴＨを発現する黒質神経細胞の数が、両側で、２０％超増加したこと、２）黒質のドーパミン神経細胞の大きさが、両側で、３０％超増加したこと、３）線条体及び淡蒼球のドーパミン代謝産物レベルが、両側で、７０％超及び５０％超増加したこと、４）損傷を受けた側の、脳室周囲線条体領域及び淡蒼球のドーパミンレベルが、それぞれ、２３３％及び１５５％増加したこと、並びに５）損傷を受けた右側で、脳室周囲線条体のＴＨ＋繊維密度が５倍増加したこと、によって裏付けられた。
【００７１】
非ヒト霊長類で行われた他の唯一の、ＧＤＮＦの長期送達試験は、パーキンソン病に罹患した高齢のアカゲザルの線条体及び黒質にＧＤＮＦ遺伝子を形質移入するためのレンチウイルスベクターを用いて、Ｋｏｒｄｏｗｅｒら（２０００）によって報告された。ＭＰＴＰ毒性から一週後に、ＧＤＮＦが送達されたので、Ｋｏｒｄｏｗｅｒらは、パーキンソン病の動物における試験結果（本発明者らと同様である。）を、神経保護を示すものと解釈した。しかしながら、ＭＰＴＰに対する傷害の後遺症は、ＭＰＴＰ処理直後の週には、いまだ発展しつつあるので（Ｈｅｒｋｅｎｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，  １９９１）、ＧＤＮＦの回復作用と保護作用が何れも関与した可能性がある。Ｋｏｒｄｏｗｅｒらの研究での、形質移入された細胞によって産生されたＧＤＮＦレベルは、明確でなかったが、ＧＤＮＦの線条体レベルは、レンチウイルスによるＧＤＮＦ送達から８ヵ月後に、ＥＬＩＳＡによって測定可能であった（Ｋｏｒｄｏｗｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。本研究において、ＭＰＴＰ誘導性の黒質線条体損傷から３ヶ月（この時点で、パーキンソン病の特徴は、安定的に発現される（Ｂａｎｋｉｅｗｉｃｚ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３；  Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３）。）まで、ＧＤＮＦは投与されなかったので、結果は、主に、ＧＤＮＦの回復作用を原因とするものである。
【００７２】
ビヒクルレシピエントでは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントにおいてドーパミン繊維の顕著な再生とドーパミンレベルの増加が認められた領域である線条体の脳室周囲領域中に、最高レベルのドーパミン繊維及びドーパミンが存在していた。このように、黒質線条体繊維の残存要素が濃縮されている部位である、線条体の損傷を受けた右側に対するｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの効果が生じた。線条体のドーパミン作動性神経支配を回復する上でのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの作用は、本研究で見られた回復の主要な要素の一つであり得る。
【００７３】
黒質も、運動機能を制御する上で、重要な構造である。ＰＤの動物モデルを用いた以前の研究と同じく（Ｔｏｍａｃ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５ａ；  Ｇａｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）、出願人は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの長期注入から得られる、黒質のドーパミン神経細胞の顕著な両側性変化を観察したが、損傷を受けていない左側にある、正常と思われる黒質の神経細胞に対する効果を示唆している。これらの効果は、線条体及び淡蒼球のドーパミン代謝産物レベルの両側性増加とともに、脳内に注射されたＧＤＮＦの広範な分布を裏付けるものであり、ラット及びサルの両方で、側脳室又は線条体から黒質へのＧＤＮＦの拡散及び／又は逆行性輸送と合致する（Ｔｏｍａｃ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５ｂ；Ｌａｐｃｈａｋ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）。証拠は、ドーパミン作動性表現型の喪失が、ＰＤの動物モデルでの黒質神経細胞の死滅に先行し、静止状態又は萎縮性のドーパミン作動性神経細胞がもたらされることを示唆する（Ｂｏｗｅｎｋａｍｐ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。このため、ＴＨなどのマーカーを用いて可視化することができないＧＤＮＦ反応性細胞集団が存在し、脳内のＧＤＮＦ作用の標的としての役割を果たしている可能性があり得る。
【実施例２】
【００７４】
２４時間の、被殻内へのＧＤＮＦの直接注入による、ヒトのパーキンソン病の治療
研究デザイン
最善の医学的療法で十分に管理されない、Ｌ−ドーパ反応性の突発性ＰＤに罹った５人の患者が特定された。第一の患者（Ｐ１）は、左側を冒す片側性の疾病を主に有しており、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ送達用カテーテルとポンプの反対側被殻への移植を行った。残りの患者（Ｐ２−５）は両側性の疾患を有しており、送達システムを両側被殻に移植した。注入の標的とすべき背側被殻の正確な領域は、１８Ｆ−ドーパ  ＰＥＴ及びＭＲ画像を用いた共存検査によって決定した。ＭＲＩによる誘導下で、１８Ｆ−フルオロドーパシグナルの喪失が最も高かった部位である背側被殻中に、単一ポートのカテーテルを配置した（全ての被験者で、ＰＥＴにより確認）。ポンプの配置と定位手術は、全ての患者によって、良好に耐容された。しかしながら、幾つかの問題が存在した。Ｐ１は、手術中に、正しく背側被殻内の中心にカテーテルを配置し直す必要があった。これは、手術操作中に、別の流路に対して、首尾よく行われた。さらに、患者４が、ポンプ及び接続チューブに関連する創感染を発症したが、４週以内に、頭蓋外装置の外移植、抗生物質及び再移植を行うことによって、首尾よく処置された。
【００７５】
患者
５人のＰＤ患者が、本予備研究に参加した。Ｆｒｅｎｃｈａｙ  Ｈｏｓｐｉｔａｌとｔｈｅ  Ｈａｍｍｅｒｓｍｉｔｈ  Ｈｏｓｐｉｔａｌｓ  Ｔｒｕｓｔｓの施設内倫理委員会から、倫理的な承認を取得し、全ての参加者が完全な同意書に署名した。全ての患者は、標準的な基準（ｂｒａｉｎ  ｂａｎｋ  ｃｒｉｔｅｒｉａ）に従って、突発性ＰＤに罹患していると診断された。最善の医学的療法にもかかわらず、著しい機能障害に苦しんでいる場合には、患者に手術が選択された。除外基準には、出産適齢期の女性、６５歳を超える年齢の者、臨床的に著しいうつ病の存在、又は全身疾患若しくは長期の追跡に応じることができない者若しくは応じようとしない者が含まれた。
【００７６】
手術
厳格な定位条件下で得られた高解像度のＭＲ画像を用いて、皮質下核の位置を特定し、標的とした。全身麻酔下で、眼窩外耳面に平行に、改変Ｌｅｋｓｅｌｌ定位フレームを取り付けた。前交連（ＡＣ）及び後交連（ＰＣ）を、中間矢状プラニングスキャンで特定した。２ｍｍ厚の軸位像を、ＡＣ−ＰＣ平面と平行に取得し、次いで、これらと直角に、冠状像を得た。ＭＲＩスキャンの拡大されたハードコピーを使用して、反転したＴ２像を反転回復スキャンに重ね合わせて、両平面中の被殻辺縁の明瞭さを増大させた。ＰＥＴ像を用いて、１８Ｆ−ドーパの取り込みが最も少ない後背側被殻の領域を注入の標的とし、定位標的座標を記録して、軌道を計画した。翌日、全身麻酔下で、手術を行った。定位条件下で、誘導棒上の被殻標的上にある点に、直径１ｍｍの誘導管を移植した。０．６ｍｍの誘導線を、標的に誘導するための誘導管の下に導入した後、標的の位置を確認するために、ＭＲ／ＣＴ画像診断を繰り返し患者に行った。次いで、この誘導線は、標的に誘導するために導入される直径０．６ｍｍのカテーテルと交換した。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦが装填されたＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄポンプ（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｉｎｃ，  Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）を、第一の患者には皮下から、残りの患者には筋膜下（前腹直筋鞘の下）から、上腹部領域中に移植した。筋膜下配置は、腹部でのポンプの側面を減少させ、見かけ上の体裁を向上させた。カテーテルにトンネルを開け、０．６ｍｍの実質内脳留置カテーテルにポンプを接続した。
【００７７】
手術操作は良好に耐容されたが、治療に関連した深刻な副作用（抗生物質治療と再移植を必要とするカテーテル周囲及びポンプ周囲の感染）が一度だけ生じた。
【００７８】
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの製造及び注入
組換えメチオニルヒトグリア細胞由来神経栄養因子（ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ）は、Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．によって調製された。このタンパク質は、アミノ末端のメチオニンが付加された成熟ヒトＧＤＮＦをコードするＤＮＡインサートを有する発現プラスミドを含有するＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ細胞中で、産生された。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム及び１５０ｍＭ  塩化ナトリウムとともに、ｐＨ５．０で、液体調合された。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、使い捨てバイアル中に、１０ｍｇ／ｍＬの濃度で与えられた。移植後、６μＬ／時の速度で、１４．４μｇのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ／被殻／日の連続注入を送達するように、ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄポンプをプログラムした。このポンプに、新鮮な溶液を毎月補充した。低濃度のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを、８週間にわたって維持した。２ヶ月の時点で、ポンプに、さらに高濃度の新鮮な溶液を補充し、６μＬ／時の速度で、４３．２μｇのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ／被殻／日を送達するように、ポンプをプログラムした。良好な耐用性が得られ、副作用がなかったので、試験の間、この用量が持続される予定であった。しかし、重要性が不確かな高シグナルのＭＲＩ変化が発生したために、安全且つ臨床的に有効なパラメータを確立することを目指して、これより少ない用量（１０．８から１４．４μｇのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ）を、より遅い速度で（２から６μＬ／時間）、送達するように、注入パラメータを変更し、一定間隔で、ＭＲＩのモニタリングを反復した。１２ヶ月と１８ヶ月の間、６μＬ／時の速度で、１４．４μｇのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ／被殻／日を、全ての患者に連続注入した。１８ヶ月の時点で、ＧＤＮＦの用量を、６μＬ／時の速度で、２８．８μｇ／被殻／日に増やし、２０ヶ月の時点で１４．４μｇに戻されたＰ４を除き、２４ヶ月まで、これを継続した。
【００７９】
臨床評価及び追跡調査
突発性ＰＤの外科治療を評価するための妥当性が実証されたプロトコールである、脳内移植のための中核的評価計画（ＣＡＰＩＴ、Ｃｏｒｅ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ）（Ｌａｎｇｓｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９２）に基づいて、臨床評価を行った。全ての患者は、パーキンソン病統一スケール（ＵＰＤＲＳ）で評価し、ベースライン、３、６、１２、１８及び２４ヶ月の時点で、時限運動試験を実施した。評価は、オフ及びオン投薬状態の両方で行った。投薬停止状態で評価する前に、患者は絶食し、一晩投薬を停止した。次いで、患者が「投薬を受けた」時点で、Ｌ−ドーパを投与した後に、同じ評価を繰り返した。
【００８０】
健康関連のＱＯＬの結果の測定及び追跡調査
手術前、手術後３ヶ月、６ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月及び２４ヶ月後に、患者には、妥当性が実証されたＱＯＬ質問票を用いた評価も行った。３９項目からなるパーキンソン病質問票（ＰＤＱ  ３９）と３６項目からなるＭＯＳ  ＳＦ健康調査票（ＳＦ−３６）を使用した。各変数に対して、記述的統計指標（平均、標準偏差、レンジ、９５％信頼区間）を得た。経時的な比較は、対応のある標本によるＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて行った。
【００８１】
神経心理学的な評価及び追跡評価
投薬（Ｌ−ドーパ均等物）の必要性及び神経心理学的な変化も評価した。これには、以前に記載したような、言語的な知力、言語及び視覚的な記憶、注意力、実行機能、不安及び鬱の検査が含まれた（ＭｃＣａｒｔｅｒ，  Ｒ．  Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２０００）。使用した一連の認知検査は、運動の遅さと運動の困難さが認知検査の結果に及ぼし得る交絡的な影響を最小限に抑えるように設計された。
【００８２】
評定尺度の経時的な変化の有意性を評価するために、Ｆｒｉｅｄｍａｎの関連標本検定を使用した。全ての解析は、ＳＰＳＳで行った。患者のうち４人（両側症例の全員）には、神経心理学的な術前評価を実施した。５人の患者全員が、移植から１２ヶ月及び２４ヶ月後に、評価を受けた。認知検査の成績の変化の有意性は、ベースラインにおける予測された真正スコア周囲の、予測の標準誤差から得られる信頼区間を使用して（Ｌｏｒｄ  ａｎｄ  Ｎｏｖａｃｋ，  １９６８；Ａｔｋｉｎｓｏｎ，  Ｌ．，  １９９１）、評価された。１２又は２４時間の何れかの時点におけるスコアが、ベースラインスコアの信頼区間の外側にあれば、有意な変化であると推測した（片側性の症例の場合、ベースラインスコアは１２ヶ月の時点であり、変化スコアは、２４時間の時点での成績に対して推測された。）。さらに、１２ヶ月の期間にわたる、反復認知評価の効果を確立するために、ＰＤに対する他の形態の手術を行った１８人の患者からなるＰＤ対照群を使用した。この群に属する各患者に対しては、２つの術後神経心理学的評価が利用可能であった。この対照群は、教育年数、手術時の年齢、手術時点でのＰＤへの罹患期間及びＮＡＲＴによって推測されるＦＳＩＱが、ＧＤＮＦ患者群と同等であった（ｐ＞０．０５）。
【００８３】
スキャン操作と画像解析
１８Ｆ−ドーパは、シナプスのアミノ酸脱炭酸酵素（ＡＡＤＣ）活性の指標となるので、ドーパミン貯蔵及びドーパミン末端の機能的な完全性のインビボマーカーとして作用する。以前のヒト及び動物の損傷研究から、線条体の１８Ｆ−ドーパ  ＰＥＴは、黒質の細胞数、線条体末端のドーパミン含量（Ｇａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３；  Ｍａｒｔｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９；  Ｂｒｏｏｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０（ｂ）；  Ｐａｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９３）及び投薬停止時のＵＰＤＲＳ（Ｍｏｒｒｉｓｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８）、特に運動緩徐及び硬直サブスコア（Ｏｔｓｕｋａ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）と相関があることが実証されている。さらに、時間が経過するにつれて、ＰＤ患者中で、線条体の１８Ｆ−ドーパの取り込みが次第に低下することを実証することが可能である（Ｍｏｒｒｉｓｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８；  Ｍｏｒｒｉｓｈ，  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。ここでは、長期線条体内ＧＤＮＦ注入を受けている５人のＰＤ患者における、線条体ドーパミン終末機能を評価するために、１８Ｆ−ドーパ  ＰＥＴを使用した。
【００８４】
投薬を少なくとも１２時間停止してから、３Ｄ収集モードで、ＥＣＡＴ  ＥＸＡＣＴ  ＨＲ＋＋カメラ（ＣＴＩ／Ｓｉｅｍｅｎｓ  ９６６；Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，  ＴＮ）を用いて、術前に、並びに術後６、１２、１８及び２４ヶ月の時点に、患者に１８Ｆ−ドーパ  ＰＥＴを行った。患者には、１５０ｍｇのカルビドーパと４００ｍｇのエンタカポンを与え、１時間後に、スキャニングの開始時点で、静脈内大量瞬時投与として、通常の生理的食塩水中の１８Ｆ−ドーパの１１１ＭＢｑを投与した。画像は、９４．５分にわたる、２６のタイムフレームとして、３Ｄモードで収集した（１×３０秒、４×１分、３×２分、３×３分及び１５×５分）。１８Ｆ−ドーパ流入定数（Ｋｉ）のパラメトリック画像は、ＰａｔｌａｋとＢｌａｓｂｅｒｇのＭＴＧＡアプローチに基づいて（Ｐａｔｌａｋ，  Ｃ．Ｓ．  ＆  Ｂｌａｓｂｅｒｇ，  Ｒ．Ｇ．，  １９８５）、社内ソフトウェア（Ｂｒｏｏｋｓ，  Ｄ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０；  Ｒａｋｓｈｉ，  Ｊ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）を用いて、注入後２５．５から９４．５分までのタイムフレームから取得した。組織基準入力関数を生成させるために、同じタイムフレームから得られた後頭部の計測数を使用した。Ｋｉ画像を標準的な定位ＭＮＩ空間に変換するために必要とされるパラメータを特定するために、積算された画像（タイムフレーム２５．５から９４．５）を使用した。次いで、Ｋｉ画像に対して、変換行列を適用した。正規化の後、ガウスフィルター（６×６×６ｍｍ）を適用した。皮質のシグナルを除去して、統計的な比較の数を減らすためのマスクを与えた後、ＳＰＭ９９での、対応のあるＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いて、ベースライン、術後６ヶ月及び１２ヶ月の時点で、中脳及び基底核全体にわたって、正規化されたＫｉ画像の平均ボクセル値を比較した。続いて、１８Ｆ−ドーパの取り込みのあらゆる局所的な増加は、目的の容量として定義することが可能であり、これらの容量に対する平均Ｋｉ値を、適切なＳＰＭツールを用いて推定した（Ｂｒｅｔｔ，  Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）。
【００８５】
続いて、目的領域（ＲＯＩ）解析のために、積算された画像を各患者のＭＲＩスキャンに同時登録した。全てのＭＲＩは、ＡＣ−ＰＣ平面中に予め再フォーマットした。次いで、各Ｋｉ画像を各ＭＲＩ空間中に変換するために、その後の変換行列を各Ｋｉ画像に適用した。目的領域（ＲＯＩ）をＭＲＩ上に透写し、尾状核の頭部及び前半と後半に分割された背側被殻を含めた。カテーテルの先端の位置も、ＡＣ−ＰＣ線に対して計算され、楕円の目的領域（６ｍｍ×１２ｍｍ）は軸平面中の先端位置を中心とした。次いで、スライスの何れかの側が前記計算された先端位置を含有する、２つの平面上にＲＯＩを複写し、カテーテル先端に中心が位置する、目的の１２ｍｍ×６ｍｍ×５ｍｍ（０．３６ｃｃ）容量を作出した。次いで、パラメトリック画像上の１８Ｆ活性を採取するために、目的領域を使用した。両側性に手術された４人の患者では、左及び右の目的領域の平均Ｋｉ値を平均して、１回のスキャンで得られる５つのＲＯＩのそれぞれに対して１つのＫｉ値を得た。片側性手術を受けた患者の手術された右側から得られたＲＯＩのみを、解析に含めた。次いで、対応のあるＳｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定に、患者のＫｉ値を供した。
【００８６】
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の副作用の不存在
驚くべきことに、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入自体を原因とする副作用は、極めて限定的であった。以前行われた脳室内試験（Ｋｏｒｄｏｗｅｒ，  Ｊ．Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）で報告された、悪心、食欲不振、嘔吐又は体重減少は存在しなかった。血液学又は血液化学的異常は存在しなかった。高用量（４３．２μｇ／被殻／日）では、３人の被験者が味及び匂い（石鹸又は金属的）に異常を報告し、２人の被験者が、夢が異常なほど明瞭になったと報告し、４人の被験者がレールミット現象（首から腕にかけて走り、時には、胴及び足にまで及ぶ、首の屈曲によって誘発される刺痛）を記録した。これらの効果は何れも、即座に投薬を中止又は減量することを要せず、ＭＲＩ上に高密度シグナルが発生した後に実施された（３ヶ月目の後期）、以下に記載されている用量変更後には、（時折生じる、穏やかなレールミット徴候を除き）全て軽減した。レールミット現象は、軽度で、断続的で、苦痛を伴わず、用量を上げると最も頻繁に起こり、実際、「気持ちよい」と記載されることが多かった。
【００８７】
全ての患者において、Ｔ２  ＭＲ画像は、カテーテルの先端周囲に、高シグナル強度の領域を示した。この反応は、患者間で一定せず、両側性の移植が行われた患者の２つの半球間でさえ相違していた。シグナルの変化は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの用量を上昇させた後に、最も顕著であった。これらの変化の妥当性が不確実であるため、３から６ヶ月の間に、全ての患者について、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ送達を１４．４μｇ／被殻／日まで再度減少させると、高シグナルが相当減少した。
【００８８】
ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の効力
患者のパーキンソン病の症候及び徴候の改善は、注入を開始してから３ヶ月以内に明瞭となり、研究全体を通じて改善が続いた。患者の日記から、重度の不動（手術前の覚醒している日の約２０％を占める、ＰＤの主要な特徴の１つ）は、６ヶ月のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入によって、完全に消失した。２４ヶ月の時点で、運動障害の持続時間が７３％と大幅に減少し（ｐ＜０．０５）、性質も全て軽度と報告された（表３）。本発明者らは、実際的に定義されたオフ状態で、Ｐ４に、軽度の運動障害を観察した。Ｐ４は、軽度の短いｅａｒｌｙ  ｍｏｒｎｉｎｇ  ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｓがまれに起こることも報告した。これらの変化は、投薬の増加によるものではなかった。試験プロトコールは、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ治療の最初の年を通じて、投薬を変化させずに維持することを目標とした。しかしながら、試験の開始時に無動症が頻発したために、Ｐ３は、要求に応じて服薬し、Ｐ３の症候が改善されるにつれて、服薬を減少する必要があった（表７）。患者Ｐ５は、ＧＤＮＦ注入後に、Ｌ−ドーパに対する感受性が増加し、同じく、投薬量を減少させる必要があった。他の３人の患者は、Ｌ−ドーパ均等物の摂取を僅かに増加することを必要とした。２４ヶ月の時点で、Ｌ−ドーパ均等物の平均一日用量は、２６％減少した（Ｐａｈｗａ，  ｅｔ  ａｌ．，（１９９７）によって表された式に基づく。）。
【００８９】
ＰＤの機能的変化を評価するために、最も広く使用され、妥当性が評価されている尺度は、パーキンソン病統一スケール（ＵＰＤＲＳ）である。全ての患者において、症候改善の速度は、ＧＤＮＦ注入の最初の３ヶ月に最大であり、その後、速度は遅くなったが、追跡調査した２４ヶ月を通じて改善が持続した。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入開始後１２ヶ月を評価した際の臨床上定義された「オフ」フェーズにおける総合ＵＰＤＲＳスコアは、ベースライン値から４８％減少したことが示された（図６ａ）。これは患者のうちごく少数の集団ではあったが、ノンパラメトリック有意差検定を行ったところ、この減少が３つの時点にわたり非常に有意であったことが示された（Ｐ＜０．００５；フリードマン検定）。最大の効果が見られたのは最初の３ヶ月間であったが、その効果は試験期間を通して持続した。１２ヶ月までの臨床上定義した「オン」フェーズにおけるトータルＵＰＤＲＳスコアも４５％減少し、時間と共に同様のパターンを示した（Ｐ＜０．００２；フリードマン検定；図６ａ）。Ｐ４の最終スコアは、まだベースライン値以下であり（図６ａ）、この患者は１２ヶ月評価の際に症状の悪化を示したが、これは関係のない介入感染によるものであり得た。
【００９０】
フォローアップの最初の１２ヶ月にわたり、患者の「オフ期間」トータルＵＰＤＲＳが平均４１％改善した（ｐ＜０．００１）。結果を分析したところ、「オフ」フェーズ中のトータルＵＰＤＲＳにおけるこれらの効果が、日常生活動作（ＡＤＬ）ＵＰＤＲＳ  下位尺度  ＩＩ（Ｐ＜０．００２；フリードマン検定；図６ａ）及び運動ＵＰＤＲＳ下位尺度  ＩＩＩスコア（Ｐ＜０．００２；フリードマン検定；図６ａ）両方の改善が反映されたものであることが明らかであった。患者において、「オフ期間」パートＩＩＩ運動ＵＰＤＲＳスコアが平均４４％改善した（ｐ＜０．０００１）。
【００９１】
１８ヶ月における症状的効果は、１２ヶ月の時点から幾分低下したので、ＧＤＮＦ注入用量を増加させた。２４ヶ月の時点において、１２ヶ月の時点と比較して、非投薬状態におけるスコアがベースラインの最高投薬状態の値に近づく傾向があり、連続的な利益があった。全体的なＵＰＤＲＳスコアは、非投薬及び投薬状態両方において、それぞれ５７％（ｐ＜０．００５）及び５２％（ｐ＜０．００５）、連続的に改善した（図６ａ、ｂ）。非投薬及び投薬状態両方において、それぞれ５７％（ｐ＜０．００１）及び４８％（ｐ＜０．０１）スコアが減少したというように、患者の運動パフォーマンス（ＵＰＤＲＳ  パートＩＩＩ）に対する２４ヶ月ＧＤＮＦ注入の効果は有意であった（図６ｂ）。日常生活動作スコア（ＵＰＤＲＳ  パートＩＩ）の活動により示されるように、ＧＤＮＦ注入により患者の機能的パフォーマンスが有意に向上し、２４ヶ月の時点では、非投薬及び投薬状態両方で、それぞれ６３％（ｐ＜０．００５）及び５８％（ｐ＜０．０５）減少した（図６ｂ）。
【００９２】
不随意運動（つまり、ジスキネジー）は、ＰＤにおいて共通する問題であり、試験開始時点で１名の患者を除き全員がこの症状を呈していた。全体的なジスキネジースコア（ＵＰＤＲＳ  下位尺度  ＩＶａ）が、１２ヶ月のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入後の投薬において有意に低下した（ｐ＜０．０１；フリードマン検定）。非投薬の状態で、これらの患者においてジスキネジーは見られなかった。定期運動テスト（Ｔｉｍｅｄ  ｍｏｔｏｒ  ｔｅｓｔｓ）を評価し、Ｃｏｒｅ  ｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＣＡＰＩＴ）（Ｌａｎｇｓｔｏｎ，Ｊ．Ｗ．ら、１９９２）に概略が示されているプロトコールに従った。「非投薬」及び「投薬」状態の両方においてこれらも改善していた。定期運動テスト（Ｔｉｍｅｄ  ｍｏｔｏｒ  ｔｅｓｔｓ）全てにおいて、非投薬状態でＧＤＮＦにより顕著な改善が示された（図６ａ、ｂ）。ある患者は、術前の非投薬状態では、スタンドウォークテスト（ｓｔａｎｄ−ｗａｌｋ  ｔｅｓｔ）を行った際、何度もすくみ運動が起こり、支持なしでは完了することができなかったが、ＧＤＮＦ注入１２ヵ月後には、非投薬状態において、すくみ運動や支持なしにそのテストを成し遂げることができるようになった。長期注入の結果、患者を非投薬状態でテストした際、無運動、硬直及び振戦に対するスコア、椅子からの立ち上がり、歩行及び姿勢の不安定性の障害が連続的に改善した。ＧＤＮＦ注入により、治療スコア（ＵＰＤＲＳ  パートＩＶ）を合わせたものを基にしてレボドーパ誘導性ジスキネジー及び運動変動が低下し、２４ヶ月の時点では、それぞれ６０％及び２９％改善した（図６ｂ）。
クオリティオブライフ測定におけるＧＤＮＦ注入の効果
術前及び術後３、６、１２、１８及び２４ヶ月後に、Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＰＤＱ−３９）（Ｐｅｔｏ，  Ｖ．，１９９５）及び３６項目のＭｅｄｉｃａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅｓ  Ｓｔｕｄｙ  ｓｈｏｒｔ  ｆｏｒｍ  ｈｅａｌｔｈ  ｓｕｒｖｅｙ（ＳＦ−３６）を用いて患者の機能状態を評価した。全てのＰＤＱ−３９領域において長期にわたる改善が示された。ベースラインにおいて、スコアは中等度の疾患（Ｈｏｅｌｍ及びＹａｈｒ  ＩＩＩ）の対照ＰＤ集団と同様であり、１２ヶ月及び２４ヶ月では、これらのスコアは、軽度疾患の対照集団（Ｈｏｅｌｍ及びＹａｈｒ  Ｉ）に近づく傾向があった（図５ａ）。１２ヶ月において、全範囲で状態は改善し、身体的な不快症状が顕著に改善した（ｐ＜０．０５）。２４ヶ月において、社会的支援を除く全ての状況が改善し、日常生活動作、不名誉感（ｓｔｉｇｍａ）及び認知が有意に改善した（ｐ＜０．０５）（図５ａ）。１２ヶ月及び２４ヶ月の両方で、全ＳＦ−３６の領域が改善した。時間経過に従い、スコアは年齢に即した健常集団に近い値へと改善した（図５ｂ）。１２ヶ月において、身体機能及び体力に関するスコアが有意に改善した（ｐ＜０．０５）（図５ｂ）。
【００９３】
神経心理学的測定におけるＧＤＮＦ注入の効果
反復測定ｔ検定を用いて、１２ヶ月の期間にわたるＰＤ対照群の再テストパフォーマンスを評価した。テストパフォーマンスにおいて有意な向上は観察されなかった。ＷＡＩＳ−Ｒの計算テスト部分、短い話の即時想起及び遅延想起、ＲＡＶＬＴ学習及びロンドン塔テストにおいて得られたエラー数に関して、１２ヶ月の期間にわたる平均テストパフォーマンスにおける有意な低下が見られた。
【００９４】
各ＧＤＮＦ患者のベースラインスコアの９０％信頼区間を用いたところ、患者のテストスコアの大部分が１２ヶ月及び２４ヶ月両方で変化しないままであることがわかった。しかし、１２ヶ月において、９０％信頼水準において顕著に改善したテストスコアが２つあり、１つはＶＩＱのスコアで他方はＲＡＶＬＴ学習のスコアであった。これらの低下は、別々の患者で得られたものであった。さらに１２ヶ月において、顕著に改善したテストスコアが２つあり、１つはＶＩＱのスコアであり、他方は話の遅延想起のスコアであった。この場合も、これらの顕著な変化は２人の別々の患者で得られたものであった。２４ヶ月において、１２ヶ月よりもテストパフォーマンスにおける変化が顕著であった。１２ヶ月の場合と同様に、ＶＩＱ及びＲＡＶＬＴ学習における２つのスコアが減少していた。この場合も、これらの減少は２人の別々の患者で起こったものであった。２４ヶ月におけるＶＩＱの減少は、１２ヶ月で顕著な減少を示した患者と同一の患者であった。
【００９５】
２４ヶ月のテストパフォーマンスにおいて、ＶＩＱ、短い話の即時想起及び遅延想起、ＲＡＶＬＴ学習及びＲＡＶＬＴの短期遅延想起で有意な改善が起こった。これらの顕著な改善の多くも９５％の信頼区間で明らかであった。これらの変化のうち、話の即時想起及び遅延想起における改善がある１人の患者で起こり、話の遅延想起における改善が別の患者において起こった。ある患者でＶＩＱの改善が示された。２人の患者においてＲＡＶＬＴ学習の改善が示され、そのうち１人においてＲＡＶＬＴの短期遅延想起でさらに改善が示された。
【００９６】
１８Ｆ−ｄｏｐａ  ＰＥＴスキャンの変化
１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みの陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンにより、脳内のドーパミン貯蔵を直接示すことができるが、この方法はＰＤにおけるドーパミン変化を評価するために広く使用されてきた（Ｍｏｒｒｉｓｈ，Ｐ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９６）。ベースラインスキャンにより、全患者において被殻の後部で１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが低下していることが明らかとなった。ドーパミン貯蔵が低下しているこれらの領域を、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ送達用のカテーテル留置に最適の部位を確立するために使用した。６ヶ月の時点で、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦは、各カテーテルのチップ周辺の０．３６ｃｃ  オボイド体積中、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みを２４．５％（０−４９％）増加させることが示された。ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入から１２ヶ月及び１８ヶ月後においても、同じ分析をおこなったところ、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが上昇していることが明らかになった。しかし、これは、１２ヶ月の第３回目のスキャン中に患者２がかなり動き、それによりその患者の本当の１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが推定値となったという事実により複雑なものとなった。１８ヶ月における１８Ｆ−ｄｏｐａ増加は、このような上昇が仮定される領域におけるＳｔｕｄｅｎｔ’ｓ両側ｔ検定を用いたところ有意であった（ｐ＝０．０２１）。
【００９７】
各カテーテルのチップ周辺の単一ボリュームを調べることにより、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みの局所的な変化が明らかとなり得るが、被殻又は中脳における他所の変化はこの技術を用いて示されない。統計学的画像解析（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｐａｒｍｅｔｒｉｃ  ｍａｐｐｉｎｇ、ＳＰＭ）は、脳全体にわたるスキャン間の１８Ｆ−ｄｏｐａ貯蔵の顕著な変化を見つけ出すが、ドーパミン作動性機能の変化の検出（Ｂｒｏｏｋｓ，Ｄ．Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，  １９９０；Ｒａｋｓｈｉ，Ｊ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９９）及びＰＤ進行の追跡（Ｗｈｏｎｅ，Ａ．Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．，  ２００２）に有用な方法であることが最近示された。術前及び６ヶ月のＫｉ像をＳＰＭ  ３領域により調べたが、それにより、（ｉ）右側後部背側被殻（＋１７．９％）、（ｉｉ）左側内側背側被殻（＋２５．３％）及び（ｉｉｉ）右側黒質（＋１６％）で１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが局限的に増加していることが分かった。１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが増加している領域の正確な位置は、５名の患者の個々のＴ１加重ＭＲＩから構築した平均ＭＲＩテンプレートにおけるＳＰＭの重ねあわせにより同定した。１２ヶ月スキャン中に患者２が動いたことにより、これも同様に、この小さい試料の解釈が非常に困難となった。このようなことにもかかわらず、群としてのこれらの患者において、右側黒質領域内の１８Ｆ−ｄｏｐａが顕著に増加することが継続的に示された（＋２６％；対応のあるｔ検定；ｐ＜０．０５  集団レベルで非補正）。
１８Ｆ−ｄｏｐａ  ＰＥＴ：利益分析の領域
後部被殻において、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込み定数（Ｋｉ）について、ベースラインスキャンと術後の全スキャンとの間で、反復多変量分散分析（ＭＡＮＯＶＡ）により有意差が示された（ｐ＜０．００１）。この上昇は、ほとんどが２４ヶ月において示された（６０％、ｐ＜０．００１）。Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ多重比較検定を用いた術後Ｋｉ値の事後比較から、後部被殻において、２４ヶ月の１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが６、１２及び１８ヶ月よりも有意に高いことが示された（６ヶ月対２４ヶ月に対してｐ＜０．００１、１２ヶ月対２４ヶ月に対してｐ＜０．０５、１８ヶ月対２４ヶ月に対して、ｐ＜０．０１）。
【００９８】
測定対象とする領域をカテーテルチップを取り囲む被殻の体積に限定したところ、同様の結果が得られたが、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込み増加率が大幅に上昇した（２４ヶ月において８３％）。反復測定分散分析からも、被殻全体において１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みに有意差があることが分かった（ｐ＝０．０２３７）が、しかし、ベースラインと２４ヶ月との間の有意な増加を示すことができたのは事後分析のみであった。本試験期間にわたり、尾状核頭又は背側被殻の前半部のいずれかにおける１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みの何らかの顕著な変化を同定することはできなかった。
【００９９】
１８Ｆ−ｄｏｐａ  ＰＥＴ：ＳＰＭ
１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込み定数（Ｋｉ  ｍａｐｓ）の術前及び術後２４ヶ月の像をＳＰＭ９９で調べた。２つの領域、左側後部背側被殻（ｐ＜０．０００１  集団補正、Ｚスコア  ３．０１）及び右側後部背側被殻（ｐ＜０．０００１  集団補正、Ｚスコア  ３．７４）で、１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みの有意な上昇が示された。ベースライン像を６、１２及び１８ヶ月Ｋｉ  ｍａｐｓと比較した際、有意性は小さいが、右側後部背側被殻も１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込み上昇領域として同定された。左側後部背側被殻は、ベースラインスキャンを６及び１８ヶ月Ｋｉ  ｍａｐｓと比較したところ、ＳＰＭ９９により１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みが有意に上昇した領域として同定された。初期ＳＰＭ比較、つまりベースライン対６ヶ月及びベースライン対１２ヶ月の比較により、右側黒質を含む第３の１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込み上昇領域の場所が特定された。ＳＰＭ９９では、１８ヶ月又は２４ヶ月における右側黒質の１８Ｆ−ｄｏｐａ取り込みの上昇は確認できなかった。
【０１００】
結論
本出願人らは、初めて、ＰＤ患者への直接的被殻内ＧＤＮＦ注入が安全であり、少なくとも２年間耐用性があり得、ヒトのＰＤを効果的に治療すると思われることを示した。さらに、本出願人らは、初めて、患者への被殻内ＧＤＮＦ直接注入により、被殻におけるドーパミン取り込みが持続的に上昇することを示した。５名の患者のうち３名で、Ｌ−ドーパ均等物が本試験を通して維持されたが、投薬の間、６０％以上、ジスキネジー運動が著しく低下し、サルにおけるＧＤＮＦの脳内注入後にも報告されている（Ｍｉｙｏｓｈｉ，Ｙら、（１９９７））が、非投薬の場合にジスキネジー運動がなくなった。この結果は、非投薬の際に原因不明のジスキネジーが起こる患者がいるという最近の胎児移植試験と対照的である（Ｆｒｅｅｄ，Ｃ．ら、２００１；Ｈａｇｅｌｌ，Ｐ．ら、２００２）。この知見は重要な意味を持ち、ＰＤ患者にとって驚くべき恩恵を与え、ＧＤＮＦが線条体中でドーパミン産生、放出及び代謝を制御するよう作用し得る、つまり運動出力のより生理的な処理を可能にすることが示唆される。従って、被殻にＧＤＮＦを直接投与されたＰＤ患者において、以前に報告されていたものよりも、「オン」の時間の質が飛躍的に良くなる。
【０１０１】
治療から２４ヶ月後に「オフ」ＵＰＤＲＳスコアが全体として５７％減少したことは非常に驚くべきことである。症状改善は連続的であり、１２ヶ月の「オフ」期間ではベースラインの最高の「オン」期間スコアに近づく傾向が見られた。ほとんどのＣＡＰＩＴ定期テスト（ｔｉｍｅｄ  ｔｅｓｔｓ）において低下が見られたことにより、全体的な自覚的改善を実証するさらなる証拠が付加される。「オン」臨床フェーズでＵＰＤＲＳスコアがベースラインの５２％まで顕著に減少したという所見は、前例のないものである。ＰＤに対する手術治療後（Ｔｈｅ  Ｄｅｅｐ−Ｂｒａｉｎ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｔｕｄｙ，Ｇｒｏｕｐ．，Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ３４５，９５６−９６３，２００１）又は胎児ドーパミンニューロンの移植後（Ｌｉｎｄｖａｌｌ，Ｏ．＆Ｈａｇｅｌｌ，Ｐ．，２０００）、「オン」状態においてこのような改善がないということが以前報告されていた。
【０１０２】
ＰＤは、嗅覚機能低下と関連することも多い（Ｑｕｉｎｎ，Ｎ．Ｐ．ら、１９８７）がこれは、嗅球及び嗅覚皮質におけるレービー小体が原因であると考えられる（Ｄａｎｉｅｌ，Ｓ．Ｅ．ら、１９９２）。ＰＤの場合によくあることであるが、実際に、３名の患者において長年にわたり嗅覚及び味覚が喪失していた。驚くべきことに、３名の患者においてｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入後に嗅覚が回復したことが報告された。これらの症状は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入の３週間から６週間の間に大幅に改善又は完全に解決した（図７）。しかし、この回復とともに、「金属的な味」又は「石鹸のような味」が報告され、味覚異常が断続的に現れた。
【０１０３】
最高用量のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦにおいて、関心及び能力の点で、３名の患者で正常な性機能の回復も報告された。この回復は、用量が減少すると弱まった。
【０１０４】
日常生活動作スコアが顕著に改善したことにより示されるように、注入により、患者の機能的パフォーマンスが改善した（ＵＰＤＲＳ  パートＩＩ及びＰＤＱ−３９  ＡＤＬの側面）。
【０１０５】
神経心理学的データから、認知に対してＧＤＮＦ注入が有害な影響を与えなかったことは明らかであった。認知テストの結果、ＧＤＮＦ注入から２４ヶ月後、一部の患者で言語前向性記憶機能が改善した証拠が得られた。２４ヶ月において記憶機能が改善したという所見は、練習によるものではない。１８名のＰＤ患者の同程度の対照群では、１２ヶ月の間隔後の記憶機能の顕著な改善が見られず、実際には言語前向性記憶機能の測定数が顕著に減少したことが分かった。記憶機能において観察された改善は、統計的な偽陽性の誤差によるものでもないと思われる。行った５４の統計的検定から、偶然のみにより５つの有意な結果が予想される（ｐ＝０．１による。）。しかし、２４ヶ月において、９個の有意な変化が見られ、このうち２個がネガティブな変化であり、７個がポジティブな変化であった。観察されたポジティブな変化のうち６個が前向性言語記憶機能の測定におけるものであった。
【０１０６】
臨床的改善に加えて、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの継続的注入は、全体の被殻１８Ｆ−ドーパ取り込み能の飛躍的な向上と関連する。先行試験において、被殻１８Ｆ−ドーパ取り込みの年間の低下はＰＤ患者におけるベースライン値の１０％前後になると推定されていた（Ｍｏｒｒｉｓｈ，Ｐ．Ｋ．ら、１９９６；Ｗｅｎｎｉｎｇ，Ｇ．Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９７）。一方、本発明者らは、後部被殻への２年のＧＤＮＦ注入後のトータルの被殻１８Ｆ−ドーパ取り込みが２３．５％増加することを報告する。トータルの被殻１８Ｆ−ドーパ取り込み及び貯蔵が増加したのは完全に、被殻の後半部、さらに具体的にはカテーテルチップに隣接する被殻において上昇したこによるものである（それぞれ６０％及び８３％（ｐ＜０．０１）。一方、被殻の前半部における１８Ｆ−ドーパ取り込み上昇はわずか６．８％であった（ｐ＝０．２２３）。さらに、ＧＤＮＦを片側性に与えた患者において、２年間の追跡調査の経過にわたり、トータルの被殻１８Ｆ−ドーパ取り込みが７％低下したことが分かった。従って、ドーパミンの終末機能における顕著な変化を誘導するのに十分な濃度のＧＤＮＦの拡散が限られたものであることはこれらの試験から非常に明らかである。これらの結果は、片側性のＭＰＴＰ病変を与えたアカゲザルに対するＧＤＮＦの方側性の投与の結果、反対側のドーパミン代謝物及び黒質細胞数が顕著に増加するといういくつかの以前の動物実験と矛盾する（Ｇｒｏｎｄｉｎら、２００２；Ｇａｓｈら、１９９６）。本実験のＧＤＮＦ活性が比較的限られた部位に広がっている場合と、先行研究のようにより広い範囲にＧＤＮＦの効果が広がっている場合との違いはおそらく脳の大きさによるものである。アカゲザルの脳は、ヒトの１２分の１から１５分の１の大きさである。結果として、特に黒質内投与後、片方の半分からもう片方の半分へと拡散しても比較的短い距離となる。本実験において拡散が限定していることが観察されたことは、高齢のアカゲザルに２４時間につき２２．５μｇのＧＤＮＦを片側性に線条体内に注入した最近のある霊長類実験と一致する。この実験では、カテーテルチップからの最大拡散距離が１１ｍｍであったことが報告された。ヒトにおいて治療上有効な量を送達するためにＧＤＮＦの脳への長期投与が正確に局在化されなければならないことが本実験から明らかに示される。
【０１０７】
黒質のレベルにおけるドーパミン貯蔵の増加から、局所的な黒質ドーパミン終末又はニューロン細胞体のいずれかもまた、おそらくその逆行性輸送を介して被殻神経終末へ送達されたｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦに応答することが示唆され、一方、初期の嗅覚の変化及び３ヶ月におけるＵＰＤＲＳの全体的な低下から、被殻内でのｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの少なくとも初期の薬理作用が示唆される。これはおそらく、げっ歯類モデルにおいて示されるように、ある部分、ドーパミン放出に対する直接的な刺激作用に関与することである（Ｈｏｆｆｍａｎ，Ａ．Ｆ．ら、１９９７）。
【０１０８】
参考文献
Ａｉ  Ｙ，  Ｍａｒｋｅｓｂｅｒｙ  Ｗ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｇｒｏｎｄｉｎ  Ｒ，  Ｅｌｓｅｂｅｒｒｙ  Ｄ，  Ｇｅｒｈａｒｄｔ，  ＧＡ，  Ｇａｓｈ，  Ｄ．  Ｉｎｔｒａｐｕｔａｍｅｎａｌ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＤＮＦ  ｉｎ  ａｇｅｄ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ：  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．  ４６１：  ２５０−２６１  （２００３）．
Ａｒｅｎａｓ，  Ｅ．，  Ａｋｅｒｕｄ，  Ｐ．，  Ｗｏｎｇ，  Ｖ．，  Ｂｏｙｌａｎ，  Ｃ．，  Ｐｅｒｓｓｏｎ，  Ｈ．，  Ｌｉｎｄｓａｙ，  Ｒ．Ｍ．，  Ａｌｔａｒ，  Ｃ．Ａ．  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ＢＤＮＦ  ａｎｄ  ＮＴ−４／５  ｏｎ  ｓｔｒｉａｔｏｎｉｇｒａｌ  ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ  ｏｒ  ｎｉｇｒａｌ  ＧＡＢＡ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ８：  １７０７−１７１７（１９９６）．
Ａｔｋｉｎｓｏｎ  Ｌ．  Ｔｈｒｅｅ  ｓｔａｎｄａｒｄ  ｅｒｒｏｒｓ  ｏｆ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｗｅｃｈｓｌｅｒ  Ｍｅｍｏｒｙ  Ｓｃａｌｅ−Ｒｅｖｉｓｅｄ．  Ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｒｔ：  Ａ  ｊｏｕｒ７１ａｌ  ｏｆ  ｃｏｒｓｕｌｔｉｎｇ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｓｙｃｈｏｌｏｇｙ，  ３：  １３６−１３８（１９９１）．
Ｂｈａｔｉａ，  Ｋ．Ｐ．  ＆  Ｍａｒｓｄｅｎ，  Ｃ．Ｄ．  Ｔｈｅ  ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ  ａｎｄ  ｍｏｔｏｒ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｆｏｃａｌ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂａｓａｌ  ｇａｎｇｌｉａ  ｉｎ  ｍａｎ．  Ｂｒａｉｎ，  １１７  （Ｐｔ  ４），  ８５９−８７６  （１９９４）．
Ｂａｎｋｉｅｗｉｃｚ  ＫＳ，  Ｏｌｄｆｉｅｌｄ  ＥＨ，  Ｃｈｉｕｅｈ  ＣＣ，  Ｄｏｐｐｍａｎ  ＪＬ，  Ｊａｃｏｂｏｗｉｔｚ  ＤＭ，  Ｋｏｐｉｎ  ＩＪ．  Ｈｅｍｉｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ａｆｔｅｒ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｃａｒｏｔｉｄ  ａｒｔｅｒｙ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  １−ｍｅｔｈｙｌ−４−ｐｈｅｎｙｌ−１，２，３，６−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ．  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，  ３９：  ７−１６  （１９８６）．
Ｂｅｎｓａｄｏｕｎ  Ｊ−Ｃ，  Ｄｅｇｌｏｎ  Ｎ，  Ｔｓｅｎｇ  ＪＬ，  Ｒｉｄｅｔ  ＪＬ，  Ｚｕｒｎ  ＡＤ，  Ａｅｂｉｓｃｈｅｒ  Ｐ．  Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ａｓ  ａ  ｇｅｎｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｕｓｅ  ｍｉｄｂｒａｉｎ：  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ  ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ６−ＯＨＤＡ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｕｓｉｎｇ  ＧＤＮＦ．  Ｅ．  ｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  １６４：  １５−２４  （２０００）．
Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ａ，  Ｋｉｒｉｋ  Ｄ，  Ｒｏｓｅｎｂｌａｄ  Ｃ，  Ｇｅｏｒｇｉｅｖｓｋａ  Ｂ，  Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  Ｃ，  Ｍａｎｄｅｌ  ＲＪ．  Ｔｏｗａｒｄｓ  ａ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｕｓｅ  ｏｆａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ，  ＡＡＶ  ａｎｄ  ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ＧＤＮＦ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ  ｍｏｄｅｌ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ８８６：  ８２−９８  （２０００ａ）．
Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ａ，  Ｌｉｎｄｖａｌｌ  Ａ．  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｍｏｖｅｓ  ｔｏｗａｒｄｓ  ｔｈｅ  ｃｌｉｎｉｃ．  ［Ｌｅｔｔｅｒ］．  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．，  ６：  １２０７−１２０８  （２０００ｂ）．
Ｂｏｗｅｎｋａｍｐ  ＫＥ，  Ｄａｖｉｄ  Ｄ，  Ｌａｐｃｈａｋ  ＰＬ，  Ｈｅｎｒｙ  ＭＡ，  Ｇｒａｎｄｈｏｌｍ  ＡＣ，  Ｈｏｆｆｅｒ  Ｂ．  Ｊ．  ６−Ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｈｅ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ  ｎｉｇｒａ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ：  ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｃｉｒｃｕｉｔ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｅｘｐ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｚ，，  １１１：  １−７（１９９６）．
Ｂｒｅｔｔ，  Ｍ．  ，  Ａｎｔｏｎ，  Ｊ．，  Ｖａｌａｂｒｅｇｕｅ，  Ｒ．，  ＆  Ｐｏｌｉｎｅ，  Ｊ．  Ｒｅｇｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｅｓｔ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  ＳＰＭ  ｔｏｏｌｂｏｘ．  ＮｅｕｒｏＩｍａｇｅ，  １６  （２００２）．
Ｂｒｏｏｋｓ，  Ｄ．  Ｊ．  Ｔｈｅ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ，  ａｕｔｏｎｏｍｉｃ  ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｔｒｏｐｈｙ，  ｐｕｒｅ  ａｕｔｏｎｏｍｉｃ  ｆａｉｌｕｒｅ，  ａｎｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，  ｓｔｕｄｉｅｄ  ｗｉｔｈ  ＰＥＴ．  Ｂｒａｉｎ，  １１３  （Ｐｔ  ５）  １５３９−１５５２  （１９９０ａ）．
Ｂｒｏｏｋｓ  ＤＪ，  Ｉｂａｎｅｚ  Ｖ，  Ｓａｗｌｅ  ＧＶ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉｆｆｅｒｉｎｇ  ｐａｔｔｅｒｎｓ  ｏｆ  ｓｔｒｉａｔａｌ  １８Ｆ−ｄｏｐａ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ａｔｒｏｐｈｙ，  ａｎｄ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｓｕｐｒａｎｕｃｌｅａｒ  ｐａｌｓｙ．  ［ｃｏｍｍｅｎｔ］．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ２８：  ５４７−５５５（１９９０ｂ）．
Ｃａｓｓ  Ｗ．  Ａ．  ＧＤＮＦ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｏｖｅｒ  ｓｅｒｏｔｏｎｉｎ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｅｔｈａｍｐｈｅｔａｍｉｎｅ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  １６：  ８１３２−８１３９（１９９６）．
Ｃｈｏｉ−Ｌｕｎｄｂｅｒｇ  ＤＬ，  Ｌｉｎ  Ｑ，  Ｃｈａｎｇ  Ｙ−Ｎ，  Ｃｈｉａｎｇ  ＹＬ，  Ｈａｙ  ＣＭ，  Ｍｏｈａｊｅｒｉ  Ｈ．  Ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ  ｆｒｏｍ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｂｙ  ＧＤＮＦ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２７５：  ８３８−８４１（１９９７）．
Ｃｏｎｎｏｒ  Ｂ，  Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉ  ＤＡ，  Ｓｃｈａｌｌｅｒ  Ｔ，  Ｔｉｌｌｅｒｓｏｎ  ＪＬ，  Ｄａｖｉｄｓｏｎ  ＢＬ，  Ｂｏｈｎ  ＭＣ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  （ＧＤＮＦ）  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ａｎｄ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ  ｎｉｇｒａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｇｅｄ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｒａｔ．  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  ６：  １９３６−１９５１  （１９９９）．
Ｃｏｓｔａ  Ｓ，  Ｍａｈｍｏｕｄ  Ｍ，  Ｐｅａｒｃｅ  ＲＫＢ，  Ｊｅｎｎｅｒ  Ｐ．  Ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ  ｉｍｐｒｏｖｅｓ  ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  ｍｏｔｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ＭＰＴＰ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｃｏｍｍｏｎ  ｍａｒｍｏｓｅｔｓ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，  ４１２：  ４５−５０  （２００１）．
Ｄａｎｉｅｌ，  Ｓ．Ｅ．  ＆  Ｈａｗｋｅｓ，  Ｃ．  Ｈ．  Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｂｙ  ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｂｕｌｂ  ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．  Ｌａｎｃｅｔ，  ３４０，１８６（１９９２）．
Ｅｍｂｏｒｇ−Ｋｎｏｔｔ，  ＭＥ，  Ｄｏｍｉｎｏ  ＥＦ．  ＭＰＴＰ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｈｅｍｉｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｎｏｎｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｔｅｓ  ６−８  ｙｅａｒｓ  ａｆｔｅｒ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｉｎｔｒａｃａｒｏｔｉｄ  ｄｏｓｅ．  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．，  １５２：  ２１４−２２０  （１９９８）．
Ｆｒｅｅｄ  Ｃ．  Ｒ．，  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐ．  Ｅ．，  Ｂｒｅｅｚｅ  Ｒ．  Ｅ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｆｏｒ  ｓｅｖｅｒｅ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎ．  Ｅｎｇｔ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３４４：  ７１０−７１９  （２００１）．
Ｆｏｒａｎｄｅｒ，  Ｐ．  ，  Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ，  Ｓ．，  Ｈｕｍｐｅｌ，  Ｃ．，  Ｓｔｒｏｍｂｅｒｇ，  Ｉ．  Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎｔｏ  ｒａｔ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｉｎｃｒｅａｓｅｓ  ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ  ｒａｔｅ．  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ８：  １８２２−１８３２  （１９９６）．
Ｇａｒｎｅｔｔ  ＥＳ，  Ｆｉｒｎａｕ  Ｇ，  Ｎａｈｍｉａｓ  Ｃ．  Ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂａｓａｌ  ｇａｎｇｌｉａ  ｏｆ  ｌｉｖｉｎｇ  ｍａｎ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３０５：  １３７−１３８  （１９８３）．
Ｇａｓｈ  ＤＭ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｃａｓｓ  ＷＡ，  Ｏｖａｄｉａ  Ｌ，  Ｓｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｌ，  Ｍａｒｔｉｎ  Ｄ．  Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｉｎｔｒａｎｉｇｒａｌｌｙ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ＧＤＮＦ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ｊ．  
Ｃｏｍｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ３６３：３４５−３５８（１９９５）．
Ｇａｓｈ  ＤＭ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｏｖａｄｉａ  Ａ，  Ｃａｓｓ  ＷＡ，  Ｙｉ  Ａ，  Ｓｉｍｍｅｒｍａｎ  Ｌ．  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｉｎ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ＧＤＮＦ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３８０：  ２５２−２５５  （１９９６）．
Ｇａｓｈ  ＤＭ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ＧＡ．  Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｎｅｕｒｏｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  ＧＤＮＦ．  ［Ｒｅｖｉｅｗ］．  Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ４４：  Ｓ１２１−Ｓ１２５（１９９８）．
Ｇｒｏｎｄｉｎ  Ｒ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｅｌｓｂｅｒｒｙ  ＤＤ，  Ｇｅｒｈａｒｄｔ  ＧＡ，  Ｇａｓｈ  ＤＭ．  Ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｖｉａ  ａ  ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ  ｐｕｍｐ  ａｓ  ａ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ．  Ｉｎ：  Ｍｏｕｒａｄｉａｎ  ＭＭ，  ｅｄｉｔｏｒ．  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．  Ｔｏｔｏｗａ，  Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ：  Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  （２００１）  ｐ．２５７−２６７．
Ｇｒｏｎｄｉｎ，  Ｒ．，  Ｚｈａｎｇ，  Ｚ．，  Ｙｉ，  Ａ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｈｒｏｎｉｃ，  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ＧＤＮＦ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  ［ｃｏｍｍｅｎｔ］．  Ｂｒａｉｎ，  １２５：  ２１９１−２２０１  （２００２）．
Ｈａｇｅｌｌ，  Ｐ．  Ｄｙｓｋｉｎｅｓｉａｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｎｅｕｒａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎａｔ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ５：６２７−６２８（２００２）．
Ｈｅｒｋｅｎｈａｍ，  Ｍ，  Ｌｉｔｔｌｅ  ＭＤ，  Ｂａｎｋｉｅｗｉｃｚ  Ｋ，  Ｔａｎｇ  ＳＣ，  Ｍａｒｋｅｙ  ＳＰ，  Ｊｏｈａｎｎｅｓｓｅｎ  ＪＮ．  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ＭＰＰ＋  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｓｙｓｔｅｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｂｒａｉｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ＭＰＴＰ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ：  Ａｎ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ａｕｔｏｒａｄｉｏｇｒａｐｈｉｃ  ｓｔｕｄｙ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ４０：  １３３−１５８  （１９９１）．
Ｈｏｆｆｍａｎ，  Ａ．  Ｆ．，  ｖａｎ  Ｈｏｒｎｅ，  Ｃ．Ｇ．，  Ｅｋｅｎ，  Ｓ．，  Ｈｏｆｆｅｒ，  Ｂ．  Ｊ．，  ＆  Ｇｅｒｈａｒｄｔ，  Ｇ．  Ａ．  Ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｍｉｃｒｏｄｉａｌｙｓｉｓ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｓｏｍａｔｏｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ  ｎｉｇｒａ：  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ６−ＯＨＤＡ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ａｎｄ  ＧＤＮＦ．  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  １４７：  １３０−１４１（１９９７）．
Ｈｏｕ，  Ｊ−Ｇ．Ｇ．，  Ｌｉｎ  Ｌ−Ｆ．Ｈ．，  Ｍｙｔｉｌｉｎｅｎｏｕ，  Ｃ．，  Ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｅｘｅｒｔｓ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｔｈｅｉｒ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｒｅｇｒｏｗｈｔ  ａｆｔｅｒ  ｄａｍａｇｅ  ｂｙ  １−ｍｅｔｈｙｌ−４−ｐｈｅｎｙｌｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，  ６６：  ７４−８２（１９９６）．
Ｉｍｂｅｒｔ  Ｃ，  Ｂｅｚａｒｄ  Ｅ，  Ｇｕｉｔｒａｕｄ  Ｓ，  Ｂｏｒａｕｄ  Ｔ，  Ｇｒｏｓｓ  ＣＥ．  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｅｉｇｈｔ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｒａｔｉｎｇ  ｓｃａｌｅｓ  ｕｓｅｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ＭＰＴＰ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍａｃａｑｕｅ  ｍｏｎｋｅｙ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．  Ｍｅｔｈ，  ９６：  ７１−７６（２０００）．
Ｊｅｌｌｉｎｇｅｒ  Ｋ．  Ｏｖｅｒｖｉｅｗ  ｏｆ  ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｃｈａｎｇｅｓ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｄｖ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  ４５  （１９８６）．
Ｋｅａｒｎｓ  Ｃ，  Ｇａｓｈ，  ＤＭ．  ＧＤＮＦ  ｐｒｏｔｅｃｔｓ  ｎｉｇｒａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｎｅｕｒｏｎｓ  ａｇａｉｎｓｔ  ６−ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ６７２：  １０４−１１１（１９９５）．
Ｋｉｒｉｋ  Ｄ，  Ｒｏｓｅｎｂｌａｄ  Ｃ，  Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ａ，  Ｍａｎｄｅｌ  ＲＪ．  Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｒＡＡＶ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ＧＤＮＦ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｍｏｄｅｌ：  Ｉｎｔｒａｓｔｒｉａｔａｌ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎｔｒａｎｉｇｒａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｌｅｓｉｏｎｅｄ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｓｙｓｔｅｍ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２０：  ４６８６−４７００  （２０００）．
Ｋｉｒｉｋ  Ｄ，  Ｇｅｏｒｇｉｅｖｓｋａ  Ｂ，  Ｒｏｓｅｎｂｌａｄ  Ｃ，  Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ａ．  Ｄｅｌａｙｅｄ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｆ  ＧＤＮＦ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｍｏｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐａｒｔｉａｌ  ｌｅｓｉｏｎ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  １３：  １５８９−１５９９  （２００１）．
Ｋｉｓｈ  ＳＪ，  Ｓｈａｎｎａｋ  Ｋ，  Ｈｏｒｎｙｋｉｅｗｉｃｚ  Ｏ．  Ｕｎｅｖｅｎ  ｐａｔｔｅｒｎ  ｏｆ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｌｏｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｒｉａｔｕｍ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．  Ｎ．  Ｅｎｇ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３１８：８７６−８８０（１９８８）．
Ｋｏｒｄｏｗｅｒ  ＪＨ，  Ｐａｌｆｉ  Ｓ，  Ｃｈｅｎ  Ｅ−Ｙ，  Ｓｈｕａｎｇ  Ｙ，  Ｍａ  Ｙ，  Ｓｅｎｄｅｒａ  Ｔ．  Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｇｌｉａｌ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｉｎ  ａ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｗｉｔｈ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ４６：  ４１９−４２４  （１９９９）．
Ｋｏｒｄｏｗｅｒ  ＪＨ，  Ｅｍｂｏｒｇ  ＭＥ，  Ｂｌｏｃｈ  Ｊ，  Ｍａ  ＳＹ，  Ｃｈｕ  Ｙ，  Ｌｅｖｅｎｔｈａｌ  Ｌ．  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ  ｂｙ  ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ＧＤＮＦ  ｉｎ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９０：  ７６７−７７３  （２０００）．
Ｌａｎｇ  ＡＥ，  Ｌｏｚａｎｏ  ＡＭ．  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｆｉｒｓｔ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｒｔｓ．  ［Ｒｅｖｉｅｗ］．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  Ｍｅｄ．，  ３３９：  １０４４−１０５３  （１９９８ａ）．
Ｌａｎｇ  ＡＥ，  Ｌｏｚａｎｏ  ＡＭ．  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｓｅｃｏｎｄ  ｏｆ  ｔｗｏ  ｐａｒｔｓ．  ［Ｒｅｖｉｅｗ］．  Ｎ．  Ｅｎｇｌ．  Ｊ．  
Ｍｅｄ．，  ３３９：  １１３０−１１４３  （１９９８ｂ）．
Ｌａｎｇｓｔｏｎ，  Ｊ．  Ｗ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｒｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ  （ＣＡＰＩＴ）．  Ｍｏｖ  Ｄｉｓｏｒｄ．，  ７，２−１３  （１９９２）．
Ｌａｐｃｈａｋ  ＰＡ，  Ａｒａｕｊｏ  ＤＭ，  Ｈｉｌｔ  ＤＣ，  Ｊｉａｏ  Ｓ，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｆ，  Ｍｉｙｏｓｈｉ  Ｙ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｏｐｏｇｒａｐｈｉｃａｌ  ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ［１２５Ｉ］−ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｕｎｌｅｓｉｏｎｅｄ  ａｎｄ  ＭＰＴＰ−ｌｅｓｉｏｎｅｄ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙ  ｂｒａｉｎ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ａ  ｂｏｌｕｓ  ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，  ７８９：  ９−２２  （１９９８）．
Ｌｉｎｄｎｅｒ  ＭＤ，  Ｗｉｎｎ  ＳＲ，  Ｂａｅｔｇｅ  ＥＥ，  Ｈａｍｍａｎｇ  ＪＰ，  Ｇｅｎｔｉｌｅ  ＦＴ，  Ｄｏｈｅｒｔｙ  Ｅ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  ｃａｔｅｃｈｏｌａｍｉｎｅ  ａｎｄ  ＧＤＮＦ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｗｉｔｈ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｄｅｐｌｅｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ．  Ｅｘｐ．  Ｎｅｕｒｏ．，  １３２：  ６２−７６  （１９９５）．
Ｌｉｎｄｖａｌｌ，  Ｏ．  ＆  Ｈａｇｅｌｌ，  Ｐ．  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ  ａｆｔｅｒ  ｎｅｕｒａｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｐｒｏｇ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．，  １２７：  ２９９−３２０（２０００）．
Ｌｉｎ  Ｌ−Ｆ．Ｈ．，  Ｄｏｈｅｒｔｙ  Ｄ．Ｈ．，  Ｌｉｌｅ  Ｊ．Ｄ．，  Ｂｅｋｔｅｓｈ  Ｓ．，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｆ．，  ＧＤＮＦ：  Ａ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｍｉｄｂｒａｉｎ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎｓ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２６０：  １１３０−１１３２（１９９３）．
Ｌｉｎ  Ｌ−Ｆ．Ｈ．，  Ｚｈａｎｇ  Ｔ．Ｊ．，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｆ．，  Ａｒｍｅｓ  Ｌ．Ｇ．，  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｉｔｉａｌ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  Ｂ４９  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，  ６３：７５８−７６８（１９９４）．
Ｌｏｒｄ  ＦＭ，  Ｎｏｖｉｃｋ，  Ｍ．Ｒ．  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｔｈｅｏｒｉｅｓ  ｏｆ  ｍｅｎｔａｌ  ｔｅｓｔ  ｓｃｏｒｅｓ．  Ｒｅａｄｉｎｇ，  ＭＡ：  Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，  １９６８．
Ｍａ，  Ｙ．，  Ｆｅｉｇｉｎ，  Ａ．，  Ｄｈａｗａｎ，  Ｖ．，  Ｆｕｋｕｄａ，  Ｍ．，  Ｓｈｉ，  Ｑ．，  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐ．，  Ｂｒｅｅｚｅ，  Ｒ．，  Ｆａｈｎ，  Ｓ．，  Ｆｒｅｅｄ，  Ｃ．，  Ｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，  Ｄ．  Ｄｙｓｋｉｎｅｓｉａ  ａｆｔｅｒ  ｆｅｔａｌ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ：  ａ  ＰＥＴ  ｓｔｕｄｙ  （２００２）．
Ｍａｒｔｉｎ  ＷＲ，  Ｐａｌｍｅｒ  ＭＲ，  Ｐａｔｌａｋ  ＣＳ，  Ｃａｌｎｅ  ＤＢ．  Ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎｓ  ｓｔｕｄｉｅｄ  ｗｉｔｈ  ｐｏｓｉｔｒｏｎ  ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ２６：５３５−５４２（１９８９）．
ＭｃＣａｒｔｅｒ，  Ｒ．  Ｊ．，  Ｗａｌｔｏｎ，  Ｎ．  Ｈ．，  Ｒｏｗａｎ，  Ａ．  Ｆ．，  Ｇｉｌｌ，  Ｓ．  Ｓ．，  ＆  Ｐａｌｏｍｏ，  Ｍ．  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ  ａｆｔｅｒ  ｓｕｂｔｈａｌａｍｉｃ  ｎｕｃｌｅｏｔｏｍｙ  ｆｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ６９：６０−６６（２０００）．
Ｍｉｙｏｓｈｉ  Ｙ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｏｖａｄｉａ  Ａ，  Ｌａｐｃｈａｋ  ＰＡ，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｆ，  Ｈｉｌｔ  Ｄ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ−ｌｅｖｏｄｏｐａ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｉｄｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ４２：  ２０８−２１４  （１９９７）．
Ｍｏｒｒｉｓｈ，  Ｐ．Ｋ．，  Ｓａｗｌｅ，  Ｇ．Ｖ．，  Ｂｒｏｏｋｓ，  Ｄ．Ｊ．  Ａｎ  ［１８Ｆ］  ｄｏｐａ−ＰＥＴ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｂｒａｉｎ，  １１９  （Ｐｔ  ２），  ５８５−５９１（１９９６）．
Ｍｏｒｒｉｓｈ，  Ｐ．Ｋ．，  Ｒａｋｓｈｉ，  Ｊ．Ｓ．，  Ｂａｉｌｅｙ，  Ｄ．  Ｌ．  Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｒａｔｅ  ｏｆ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｗｉｔｈ  ［１８Ｆ］  ｄｏｐａ  ＰＥＴ．  ［ｃｏｍｍｅｎｔ］．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ＆  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ６４：  ３１４−３１９（１９９８）．
Ｏｌｓｏｎ，  Ｌ．，  Ｎｏｒｄｂｅｒｇ，  Ａ．，  ｖｏｎ  Ｈｏｌｓｔ，  Ｈ．，  Ｂａｃｋｍａｎ，  Ｔ．，  Ｅｂｅｎｄａｌ，  Ｔ．，  Ａｌａｆｕｚｏｆｆ，  Ｉ．，  Ａｍｂｅｒｌａ，  Ｋ．，  Ｈａｒｔｖｉｇ，  Ｐ．，  Ｈｅｒｌｉｔｚ，  Ａ．，  Ｌｉｌｊａ，  Ａ．，  Ｌｕｎｄｑｖｉｓｔ，  Ｈ．，  Ｌａｎｇｓｔｒｏｍ，  Ｂ．，  Ｍｅｙｅｒｓｏｎ，  Ｂ．  ，  Ｐｅｒｓｓｏｎ，  Ａ．，  Ｖｉｉｔａｎｅｎ，  Ｍ．，  Ｗｉｎｂｌａｄ，  Ｂ．，  ａｎｄ  Ｓｅｉｇｅｒ，  Ａ．  Ｎｅｒｖｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｆｆｅｃｔｓ  １１Ｃ−ｎｉｃｏｔｉｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ，  ｂｌｏｏｄ  ｆｌｏｗ，  ＥＥＧ，  ａｎｄ  ｖｅｒｂａｌ  ｅｐｉｓｏｄｉｃ  ｍｅｍｏｒｙ  ｉｎ  ａｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔ  （Ｃａｓｅ  Ｒｅｐｏｒｔ）．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ  ［Ｐ−Ｄ  Ｓｅｃｔ］，  ４：７９−９５（１９９２）．
Ｏｌｓｏｎ  Ｌ．  Ｃｏｍｂａｔｉｎｇ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ−ｓｔｅｐ  ｔｈｒｅｅ．  ［Ｒｅｖｉｅｗ］．  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２９０：７２１−７２４（２０００）．
Ｏｔｓｕｋａ，  Ｍ．，  Ｉｃｈｉｙａ，  Ｙ．，  Ｋｕｗａｂａｒａ，  Ｙ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒｅｄｕｃｅｄ  １８Ｆ−Ｄｏｐａ  ｕｐｔａｋｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｃａｕｄａｔｅ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｕｔａｍｅｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｔｈｒｅｅ  ｍａｉｎ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ．  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  １３６：  １６９−１７３  （１９９６）．
Ｏｖａｄｉａ  Ａ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｇａｓｈ  ＤＭ．  Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ  ｔｏ  ＭＰＴＰ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｍｉｄｄｌｅ−ａｇｅｄ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．  Ａｇｉｎｇ，  １６：９３１−９３７（１９９５）．
Ｐａｔｅ  ＢＤ，  Ｋａｗａｍａｔａ  Ｔ，  Ｙａｍａｄａ  Ｔ  ｅｔ  ａｌ．  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｆｌｕｏｒｏｄｏｐａ  ｕｐｔａｋｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＭＰＴＰ  ｍｏｎｋｅｙ  ｗｉｔｈ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｉｎｄｉｃｅｓ．  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ３４：３３１−３３８（１９９３）
Ｐａｔｌａｋ，  Ｃ．Ｓ．  ＆  Ｂｌａｓｂｅｒｇ，  Ｒ．Ｇ．  Ｇｒａｐｈｉｃａｌ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ−ｔｏ−ｂｒａｉｎ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｃｏｎｓｔａｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｔｉｍｅ  ｕｐｔａｋｅ  ｄａｔａ．  Ｇｅｎｅｒａｌｉｚａｔｉｏｎｓ．  Ｊ．  Ｃｅｒｅｂ．  Ｂｌｏｏｄ  Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．  ５：  ５８４−５９０  （１９８５）．
Ｐａｈｗａ  Ｒ，  Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ  Ｓ，  Ｓｍｉｔｈ  Ｄ  ｅｔ  ａｌ．  Ｈｉｇｈ−ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂｕｓ  ｐａｌｌｉｄｕｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ４９：  ２４９−２５３  （１９９７）．
Ｐｅｔｏ，  Ｖ．，  Ｊｅｎｋｉｎｓｏｎ，  Ｃ．，  Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，  Ｒ．，  ＆  Ｇｒｅｅｎｈａｌｌ，  Ｒ．  Ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｓｈｏｒｔ  ｍｅａｓｕｒｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ  ａｎｄ  ｗｅｌｌ  ｂｅｉｎｇ  ｆｏｒ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ  ｗｉｔｈ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｑｕａｌ．  Ｌｉｆｅ  Ｒｅｓ．，  ４：２４１−２４８（１９９５）．
Ｑｕｉｎｎ，  Ｎ．Ｐ．，  Ｒｏｓｓｏｒ，  Ｍ．Ｎ．，  ＆  Ｍａｒｓｄｅｎ，  Ｃ．Ｄ．  Ｏｌｆａｃｔｏｒｙ  ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｊ．  Ｎｅｕｒｏｌ．  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，  ５０：  ８８−８９  （１９８７）．
Ｒａｋｓｈｉ，  Ｊ．  Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｆｒｏｎｔａｌ，  ｍｉｄｂｒａｉｎ  ａｎｄ  ｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  ａｎｄ  ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  Ａ  ３Ｄ  ［（１８）Ｆ］  ｄｏｐａ−ＰＥＴ  ｓｔｕｄｙ．  Ｂｒａｉｎ，  １２２（Ｐｔ  ９）：  １６３７−１６５０（１９９９）．
Ｒｏｓｅｎｂｌａｄ  Ｃ，  Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｓｅｒｒａｎｏ  Ａ，  Ｂｊｏｒｋｌｕｎｄ  Ａ．  Ｉｎｔｒａｓｔｒｉａｔａｌ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ  ｏｆ  ｓｐａｒｅｄ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ａｆｆｅｒｅｎｔｓ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ８２：  １２９−１３７  （１９９８）．
Ｓｍｉｔｈ  ＲＤ，  Ｚｈａｎｇ  Ｚ，  Ｋｕｒｌａｎ  Ｒ，  ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ  Ｍ，  Ｇａｓｈ  ＤＭ．  Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ  ａ  ｓｔａｂｌｅ  ｂｉｌａｔｅｒａｌ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ  ｉｎ  ｒｈｅｓｕｓ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ｒｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，  ５２：  ７−１６  （１９９３）．
Ｓｍｉｔｈ  Ｙ，  Ｋｉｅｖａｌ  ＪＺ．  Ａｎａｔｏｍｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅ  ｓｙｓｔｅｍ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂａｓａｌ  ｇａｎｇｌｉａ．  ［Ｒｅｖｉｅｗ］．  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，  ２３（Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ２８−Ｓ３３（２０００）．
Ｔｈｅ  Ｄｅｅｐ−Ｂｒａｉｎ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ．  Ｄｅｅｐ  ｂｒａｉｎ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｕｂｔｈａｌａｍｉｃ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｏｒ  ｔｈｅ  ｐａｒｓ  ｉｎｔｅｒｎａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｌｏｂｕｓ  ｐａｌｉｄｕｓ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ．  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，  ３４５：９５６−９６３（２００１）．
Ｔｏｍａｃ  Ａ，  Ｌｉｎｄｑｖｉｓｔ  Ｅ，  Ｌｉｎ  Ｌ−ＦＨ，  Ｏｇｒｅｎ  ＳＯ，  Ｙｏｕｎｇ  Ｄ，  Ｈｏｆｆｅｒ  ＢＪ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｐａｉｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ  ｂｙ  ＧＤＮＦ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３７３：３３５−３３９（１９９５ａ）．
Ｔｏｍａｃ  Ａ，  Ｗｉｄｅｎｆａｌｋ，  Ｌｉｎ  Ｌ−ＦＨ，  Ｋｏｈｎｏ  Ｔ，  Ｅｂｅｎｄａｌ  Ｔ，  Ｈｏｆｆｅｒ  ＢＪ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｒｅｔｒｏｇｒａｄｅ  ａｘｏｎａｌ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔ  ｏｆ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ  ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ  ｓｙｓｔｅｍ  ｓｕｇｇｅｓｔｓ  ａ  ｔｒｏｐｈｉｃ  ｒｏｌｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｄｕｌｔ．  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ９２：８２７４−８２７８（１９９５ｂ）．
Ｗｅｎｎｉｎｇ，  Ｇ．  Ｋ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｓｈｏｒｔ−ａｎｄ  ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｉｎｔｒａｓｔｒｉａｔａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｇｒａｆｔｓ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．  Ａｎｎ．  Ｎｅｕｒｏｌ．，  ４２，９５−１０７（１９９７）．
Ｗｈｏｎｅ，  Ａ．  Ｌ．  ｅｔ  ａｌ．  Ｔｈｅ  ＲＥＡＬ−ＰＥＴ  ｓｔｕｄｙ：  Ｓｌｏｗｅｒ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｅａｒｌｙ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒｏｐｉｎｉｒｏｌｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  Ｌ−ｄｏｐａ．  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，  ５８，  Ａ８２−Ａ８３（２００２）．
Ｚｈａｎｇ  Ｚ．，  Ｍｉｙｏｓｈｉ  Ｙ，  Ｌａｐｃｈａｋ  ＰＡ，  Ｃｏｌｌｉｎｓ  Ｆ，  Ｈｉｌｔ  Ｄ，  Ｌｅｂｅｌ  Ｃ，  ｅｔ  ａｌ．  Ｄｏｓｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｉｎｔｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｆａｃｔｏｒ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉａｎ  ｍｏｎｋｅｙｓ．  Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，  ２８２：１３９６−１４０１（１９９７）．
【図面の簡単な説明】
【０１０９】
【図１】図１（ａ）−（ｂ）は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ又はビヒクルの毎日注入に対する行動的応答のグラフを表している。（ａ）ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントのみが、治療期間の間に、パーキンソン病の特徴に著しく且つ持続的な行動の改善を最大３．５ポイント示した。（ｂ）ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントでは、ピーク効果時に、最大６０％の一貫した改善が運動緩徐、硬直、平衡及び姿勢に認められた。＊Ｐ＜０．０５  ｖｓベースライン、同じ動物。ＬＬ、下肢；ＵＬ、上肢；Ｔ、振戦。
【図２】図２（ａ）−（ｉ）は、ドーパミン、ＨＶＡ及びＤＯＰＡＣの線条体レベルのグラフを示している。ビヒクルのレシピテントに見られるように、ＭＰＴＰ投与によって、右線条体の内側（Ｍｅｄ）、中間（Ｉｎｔ）及び外側（Ｌａｔ）の三分の一（ｊ参照）において、ドーパミン、ＨＶＡ及びＤＯＰＡＣ（ａ−ｉ）のレベルが顕著に減少した。これに対して、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエントの、損傷を受けた右側の内側線条体では、ドーパミン及びＤＯＰＡＣレベルが、それぞれ、２３３％及び１８０％顕著に増加した（ａ，ｄ）。ＨＶＡレベルは、左の内側、中間及び外側線条体で、それぞれ、７２％、７０％及び７３％上昇した（ｇ−ｉ）。値は、ｎｇ／組織のｇ湿重量として表されている。＊ｐ＜０．０５、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ対同じ側のビヒクル。Ａｃｂ、側坐核；Ｃｄ、尾状核；ＬＶ、側脳室；Ｐｕｔ、被殻。
【図３】図３（ａ）−（ｊ）は、ＴＨを発現している線条体ドーパミン繊維の定性分析を示している。ビヒクルレシピエントの低倍率（左パネル）と高倍率（右パネル）の顕微鏡写真に見られるように、ＭＰＴＰを片側の頚動脈に注入すると、右線条体中のドーパミン作動性ＴＨ＋繊維が実質的に消失した（ａ、ｂ、ｆ、ｇ）。これに比して、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの長期注入は、右線条体の脳室周囲領域でＴＨ＋繊維を刺激した（ｈ，ｉ，ｊ）。一匹の動物で、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦの脳室注入が、尾状核中にＴＨ＋繊維を著しく刺激した（矢印）。カテーテルの管が、アスタリスク（＊）で示されている。スケールバーは、２ｍｍ又は０．０５ｍｍの距離を表す。Ｃｄ、尾状核；ＬＶ、脳室；Ｐｕｔ、被殻；Ｒ、右側。
【図４】図４は、ＴＨを発現する線条体のドーパミン繊維の定量分析のグラフを表している。ビヒクルレシピエントの右線条体では、２、３の残存ＴＨ＋繊維を定量することができたが、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦを与えた動物の脳室周囲線条体領域中では、ＴＨ＋繊維が大幅に５倍増加していた。ＴＨ＋繊維は、右線条体の脳室辺縁に沿って最も顕著であり、脳室から深部の実質への勾配で、徐々に減少していた。組織の切除に問題があったために、一人のｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦレシピエント（＃２２４ｓ）は、分析から除外された。＊Ｐ＜０．０５、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ対脳室右側。
【図５】図５（ａ）及び５（ｂ）は、妥当性が確認されたＱＯＬの質問票を用いて行われた患者の評価を表している。術前並びに長期ＧＤＮＦ注入から３、６、１２、１８及び２４ヶ月後に、３９項目からなるパーキンソン病の質問票（ＰＤＱ  ３９；図５（ａ））と３６項目からなるＭＯＳＳＦ健康調査（ＳＦ−３６；図５（ｂ））を実施した。
【図６ａ】図６（ａ）は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入から０、３、６、１２、１８及び２４ヵ月後における、患者のＵＰＤＲＳスコアを表している。
【図６ｂ】図６（ｂ）は、ｒ−ｍｅｔＨｕＧＤＮＦ注入から０、３、６、１２、１８及び２４ヵ月後における、患者のＵＰＤＲＳスコアを表している。
【配列表】
2006518747.tif 000003
【図１】
2006518747.tif 000004
【図２】
2006518747.tif 000005
【図３】
2006518747.tif 000006
【図４】
2006518747.tif 000007
【図５】
2006518747.tif 000008
【図６ａ】
2006518747.tif 000009
【図６ｂ】
2006518747.tif 000010
【国際調査報告】
2006518747.tif 000011
2006518747.tif 000012
2006518747.tif 000013
2006518747.tif 000014
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