(57)【要約】  本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとレフルノマイドとを組み合わせてなる関節リウマチの予防及び／又は治療薬を提供する。  本発明の予防及び／又は治療薬は、経口投与が可能で、副作用等が少なく優れた関節炎の抑制作用を示し、関節リウマチの予防及び／又は治療に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとレフルノマイドとを組み合わせてなる関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項２】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである、請求項１記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項３】
経口投与用である請求項１又は２記載の関節リウマチの予防及び／又は治療薬。
【請求項４】
関節リウマチの予防及び／又は治療薬を製造するための２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びレフルノマイドの使用。
【請求項５】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである、請求項４記載の使用。
【請求項６】
関節リウマチの予防及び／又は治療薬が経口投与用である請求項４又は５記載の使用。
【請求項７】
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びレフルノマイドを投与することを特徴とする関節リウマチの予防及び／又は治療方法。
【請求項８】
関節リウマチが関節の炎症を伴うものである、請求項７記載の関節リウマチの予防及び／又は治療方法。
【請求項９】
投与手段が経口投与である請求項７又は８記載の関節リウマチの予防及び／又は治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は関節リウマチの予防及び／又は治療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチは、多関節に腫れや痛みを伴う炎症が起き、長期間にわたって進行すると、非可逆的な関節の変形と機能障害による著しい生活の質（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ：ＱＯＬ）の低下につながる疾患である。日本では人口の０．６％、３０歳以上の人口の１％に相当する患者がおり、特に近年では、高齢者社会の進行に伴い、老年者のリウマチ患者が増加する傾向にある。【０００３】
関節リウマチの病期は、関節痛や関節炎の所見は存在するが、関節リウマチの確定診断がいまだ下せない時期である“初期”、関節リウマチの確定診断が下せるが、いまだ非可逆的変化がないか、あっても軽微な時期である“早期”（早期関節リウマチは一般に発病から１〜２年を指す）、非可逆的変化が出現し、疲労、微熱、体重減少等の全身症状が強く現われてくる“進行期”、関節の炎症はほとんど鎮静化しているが、変形・拘縮などの非可逆的変化が強く残り、疼痛と機能障害が主要症状になる“晩期”の４つに分類することができ、各病期により治療方法が異なっている。関節リウマチの発症については、遺伝的要因や後天的要因（感染症）等が関与するとの研究報告がされているが、依然としてその原因は未解明であるため、完全に治癒させることも予防することもできない。【０００４】
したがって、現時点での治療目標は、関節リウマチを早期に診断し、関節リウマチの炎症を可及的速やかにかつ最大限に抑制して、非可逆的変化の出現を防止、ないしはその進展を阻止して、患者の身体的、精神的、社会的なＱＯＬの向上を図ることにある。したがって、その治療に際しては、患者に対して疾患や治療法に関する十分な説明を行なった上で、理学療法、運動療法、薬物療法、手術療法等様々な手段が用いられている。【０００５】
薬物療法としては、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤｓ）、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤｓ）、ステロイド薬等が臨床の現場で用いられており、最近では炎症性サイトカインをタ−ゲットにした抗体等の生物製剤も用いられている（非特許文献１）。【０００６】
ＤＭＡＲＤｓはその作用機序から免疫調節薬と免疫抑制薬に分類され、その中でも葉酸代謝拮抗作用（ジヒドロ葉酸レダクタ−ゼ阻害作用）を機序とする免疫抑制薬であるメトトレキセート（Ｎ−［４−［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸）や、ピリミジン生合成阻害作用（ジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害作用）を機序とするレフルノマイド（Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−５−メチルイソキサゾール−４−カルボキサミド）に高い抗リウマチ効果が認められている。しかしながらメトトレキセート、レフルノマイドともに、感染症や間質性肺炎を初めとした重篤な副作用を誘発しうることから、投与方法や用量を厳密にコントロールする必要があるのみならず、患者の罹患背景に対しても十分な調査が必要であるといった欠点を有している。【０００７】
また生物製剤は、強力な抗リウマチ作用を有しているものの、高価であるという医療経済的な欠点、さらには注射による投与に限られ、経口投与できないという利便性の面での欠点も併せ持っている。【０００８】
炎症性サイトカインであるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）は、多くの疾患、例えば関節リウマチ、変形性関節症、骨粗鬆症、炎症性大腸炎、免疫不全症候群、敗血症、肝炎、腎炎、虚血性疾患、インスリン依存性糖尿病、動脈硬化、パーキンソン病、アルツハイマー病、白血病等において、その産生亢進が認められ、コラーゲナーゼやＣＯＸ及びＰＬＡ２のような炎症に関与すると考えられている酵素の合成を誘導し、また動物において関節内注射をするとリウマチ様関節炎に非常に似た関節破壊をもたらすことが知られている。このことから、炎症性疾患の治療薬としてＩＬ−１β阻害剤が研究・開発されており、ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（非特許文献２）等の生体成分由来物質、Ｔ−６１４（非特許文献３）、Ｓ−２４７４（非特許文献４）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（特許文献１）、ＦＲ１３３６０５（非特許文献５）等の低分子化合物が知られている。【０００９】
関節リウマチの病態は、年齢、病期、合併症、副作用、ＱＯＬ等の点で患者毎にかなりの違いがある。また、絶対的な治療薬が存在せず、症状をコントロ−ルできている治療薬が突如効果を失っていく“エスケ−プ現象”と呼ばれる現象も存在する。このような背景から、薬物療法を行なう際には薬剤の切替えや併用がしばしば行なわれており、薬物の使用方法に関する臨床研究も盛んに行なわれている。しかしながら、これまで上記ＩＬ−１β阻害作用を示す低分子化合物とピリミジン生合成阻害剤との併用効果については知られていなかった。【００１０】
【特許文献１】国際公開第９９／２５６９７号パンフレット
【非特許文献１】Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６，ｐｐ３２８−３４６，２００２
【非特許文献２】Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４２，ｐｐ４９８−５０６，１９９９
【非特許文献３】Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｂｉｏ−Ｄｙｎ．１１，ｐｐ６４９−６５５，１９９２
【非特許文献４】ＹＡＫＵＧＡＫＵ  ＺＡＳＳＨＩ  １２３，ｐｐ３２３−３３０，２００３
【非特許文献５】Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．２３，ｐｐ１７７８−１７８３，１９９６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の目的は、関節リウマチの治療及び／又は予防の効果が優れた薬剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、斯かる実情に鑑み、鋭意研究した結果、ＩＬ−１β阻害剤である２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとピリミジン生合成阻害剤であるレフルノマイドを併用することにより、優れた関節炎抑制効果が得られることを見出し、本発明を完成した。【００１３】
すなわち、本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンとレフルノマイドとを組み合わせてなる関節リウマチの予防及び／又は治療薬を提供するものである。【００１４】
また、本発明は、関節リウマチの予防及び／又は治療薬を製造するための２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びレフルノマイドの使用を提供するものである。【００１５】
さらに、本発明は、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン及びレフルノマイドを投与することを特徴とする関節リウマチの予防及び／又は治療方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬は、経口投与が可能で、副作用等が少なく優れた関節炎の抑制作用を示し、関節リウマチの予防及び／又は治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】対照群（薬剤非投与群）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（薬剤Ａ）３ｍｇ／ｋｇ投与群、レフルノマイド（薬剤Ｂ）１．５ｍｇ／ｋｇ投与群及び薬剤Ａ、Ｂ併用投与群における、ラットコラーゲン誘発関節炎モデルの初回感作１８日後の両後肢浮腫容積を示す図である。
【図２】対照群（薬剤非投与群）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（薬剤Ａ）３ｍｇ／ｋｇ投与群、レフルノマイド（薬剤Ｂ）１．５ｍｇ／ｋｇ投与群及び薬剤Ａ、Ｂ併用投与群における、ラットコラーゲン誘発関節炎モデルの初回感作２１日後の両後肢浮腫容積を示す図である。
【図３】対照群（薬剤非投与群）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（薬剤Ａ）３ｍｇ／ｋｇ投与群、レフルノマイド（薬剤Ｂ）１．５ｍｇ／ｋｇ投与群及び薬剤Ａ、Ｂ併用投与群における、ラットコラーゲン誘発関節炎モデルの初回感作２６日後の両後肢浮腫容積を示す図である。
【図４】対照群（薬剤非投与群）、２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（薬剤Ａ）３ｍｇ／ｋｇ投与群、レフルノマイド（薬剤Ｂ）１．５ｍｇ／ｋｇ投与群及び薬剤Ａ、Ｂ併用投与群における、ラットコラーゲン誘発関節炎モデルの初回感作３１日後の両後肢浮腫容積を示す図である。
【図５】レフルノマイドの用量反応（０．５、１．５、２．５、５ｍｇ／ｋｇ）の両後肢浮腫容積の経時変化に薬剤Ａ、Ｂ併用投与群の経時変化を重ね合わせた図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬で用いる２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（以下、薬剤Ａと記載することもある）は、公知物質であって、例えば国際公開番号第ＷＯ９９／２５６９７に記載の方法又は類似の方法で製造することができる。すなわち、ｐ−クロロフェニル酢酸とチオアニソ−ルとをポリリン酸等の縮合剤を用いて反応させ、２−（４−クロロフェニル）−４’−（メチルチオ）アセトフェノン（化合物ａ）を得る。化合物ａとカリウムｔ−ブトキシド等の塩基とをテトラヒドロフラン中で反応させ、次いでブロモ酢酸エチルを加えて２−（４−クロロフェニル）−４−［４−（メチルチオ）フェニル］−４−オキソブタン酸エチル（化合物ｂ）を得る。化合物ｂとヒドラジン水和物とをエタノ−ル中で反応させ、５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−４，５−ジヒドロ−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（化合物ｃ）を得る。化合物ｃと臭素を酢酸中で反応して脱水素し、５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（化合物ｄ）を得る。かくして得られた化合物ｄとベンジルブロミドとをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等の溶媒中、炭酸カリウム等の塩基を用いて反応させて、薬剤Ａを製造することができる。【００１９】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬で用いるレフルノマイドは、市販品、例えばＫＥＭＰＲＯＴＥＣ社製のものを用いることができる。【００２０】
後記実施例に示すとおり、薬剤Ａとレフルノマイドの併用投与により、相乗的に両後肢浮腫が抑制され、関節炎が抑制されることが明らかになった。したがって、薬剤Ａとレフルノマイドとを組み合わせてなる薬剤は、関節リウマチ、特に関節の炎症を伴うものである関節リウマチの予防及び／又は治療薬として有用である。【００２１】
本発明の関節リウマチの予防及び／又は治療薬中の薬剤Ａとレフルノマイドの組み合わせ比率は、質量比（薬剤Ａ：レフルノマイド）が、１００：１〜１：１０、特に６０：１〜１：１の範囲であるのが関節炎の抑制作用の観点から好ましい。【００２２】
本発明の関節リウマチ予防及び／又は治療薬は、薬剤Ａを含有してなる薬剤とレフルノマイドを含有してなる薬剤とからなるキットとして、あるいは薬剤Ａとレフルノマイドを含有する配合剤として提供しうる。すなわち、有効成分である薬剤Ａ及びレフルノマイドを含有するそれぞれの医薬製剤を調製し、それを同時又は間隔をおいて投与しても良いし、配合剤として投与しても良い。
本発明の薬剤の投与形態は、特に限定されず治療目的に応じて適宜選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、フィルムコ−ティング剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤等による非経口投与が挙げられるが、経口投与が好ましい。【００２３】
これらの投与形態に適した医薬製剤は、薬学的に許容される担体、例えば、デンプン類、ラクトース、ショ糖、マンニトール、珪酸等の賦形剤や増量剤；寒天、炭酸カルシウム、バレイショもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定の複合珪酸塩等の崩壊剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、アラビアゴム等の結合剤；タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール類、ラウリル硫酸ナトリウム、又はその混合物等の滑沢剤；乳糖、トウモロコシデンプン等の希釈剤；クエン酸、リン酸、酒石酸、乳酸等の有機酸、塩酸等の無機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、ジイソプロパノールアミン等のアミン類等の緩衝剤；パラオキシ安息香酸エステル類、塩化ベンザルコニウム等の防腐剤；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム等の陰イオン性界面活性剤、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム等の陽イオン性界面活性剤、モノステアリン酸グリセリル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル等の非イオン性界面活性剤等の乳化剤；亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エデト酸等の安定化剤の他、必要に応じてさらに矯臭剤、分散剤、保存剤、香料等を適宜組み合わせて用いてもよい。【００２４】
本発明の２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって適宜選択されるが、通常成人の場合、１日当たり、２〜３２０ｍｇ、好ましくは４〜１６０ｍｇであるのが良い。また、レフルノマイドの投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって適宜選択されるが、通常成人の場合、１日当たり、５〜１００ｍｇ、好ましくは１０〜１００ｍｇであるのが良い。さらに、投与は、１日１回、あるいは２回以上に分けて投与してもよい。
【実施例】
【００２５】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
２−ベンジル−５−（４−クロロフェニル）−６−［４−（メチルチオ）フェニル］−２Ｈ−ピリダジン−３−オン（前記方法にて合成したものを用いた）（薬剤Ａ）とレフルノマイド（薬剤Ｂ）の併用投与及びそれぞれの単独投与における両後肢浮腫抑制作用を以下の方法（ラットコラーゲン誘発関節炎モデル）で測定した（ＦＤＡ，ＣＢＥＲ，ＣＤＥＲ，ＣＤＲＨ：Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｓｔｒｙ  −Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｐｒｏｇｒａｍｓ  ｆｏｒ  ｄｒｕｇｓ，ｄｅｖｉｃｅｓ，ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ（ＲＡ）−．（１９９９））。なお、試験動物は、雌性Ｌｅｗｉｓラット（ＬＥＷ／Ｃｒｊ）（日本チャールズリバー(株)）を使用した。【００２６】
８週齢ＬＥＷ／Ｃｒｊラットの両後肢の踝より先端部分の容積（以下両後肢容積）を、小動物用の足容積測定装置（ＴＫ−１０１ＣＭＰ、ユニコム）を用いて測定し、試験開始時の両後肢容積（以下Ｐｒｅ値）とした。このＰｒｅ値を指標として、一変数によるブロック化割付を行なうことにより、各群が均質になるように群分けを行なった。
ラットに関節炎を誘発するために使用する感作用コラーゲンエマルジョンは、タイプIIコラーゲン０．３％液（コラーゲン技術研修会）、Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｐｅｐｔｉｄｅ（ペプチド研究所）及びＡｄｊｕｖａｎｔ  Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ  Ｆｒｅｕｎｄ（ＤＩＦＣＯ）をＨａｎｄｙ  Ｍｉｃｒｏ  Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ（(株)マイクロテック・ニチオン）を用いて氷冷下でホモジナイズすることにより調製した。調製したコラーゲンエマルジョンを、ラットの背部に０．１ｍＬ／ｓｉｔｅで１０ヶ所皮内投与して初回感作を行なった。さらに初回感作の７日後に、同エマルジョン０．１２ｍＬを尾根部に皮内投与して追加感作を行なった。
薬物投与は、初回感作の翌日から２９日後まで行なった。薬剤Ａ単独投与群へは、朝（９：００−１１：００）及び夕（１５：３０−１７：３０）２回、３ｍｇ／ｋｇを経口投与した。また、薬剤Ｂ単独投与群には、昼（１１：３０−１３：３０）に１回、１．５ｍｇ／ｋｇを経口投与した。一方、薬剤Ａと薬剤Ｂの併用投与群には、朝（９：００−１１：００）及び夕（１５：３０−１７：３０）に薬剤Ａ  ３ｍｇ／ｋｇを、昼（１１：３０−１３：３０）に薬剤Ｂ  １．５ｍｇ／ｋｇをそれぞれ経口投与した。
初回感作の１４、１８、２１、２６及び３１日後に、再度両後肢容積を測定し、それぞれの値とＰｒｅ値との差を求め、両後肢浮腫容積を算出した。【００２７】
表１〜４及び図１〜４に、薬剤Ａ単独投与群、薬剤Ｂ単独投与群、及びその併用投与群の初回感作からそれぞれ１８、２１、２６及び３１日後の両後肢浮腫容積を示す。両後肢浮腫容積（ｍＬ）は各群ラット５〜６匹の平均値±標準誤差で表している。また、低下率は（対照群両後肢浮腫容積平均値−各群両後肢浮腫容積平均値）／（対照群両後肢浮腫容積平均値）×１００で、相対指数は（各群両後肢浮腫容積平均値）／（対照群両後肢浮腫容積平均値）で表している。また、図５には、レフルノマイドの用量反応（０．５、１．５、２．５、５ｍｇ／ｋｇ）の経時変化グラフに今回のデータを重ね合わせた図を示す。【００２８】
結果として、薬剤Ａ単独投与群では、強力な浮腫抑制作用を示さず、また、薬剤Ｂ単独投与群では、初回感作１８日後の段階で浮腫抑制効果の低下が認められた。
一方、両薬物併用投与群では、レフルノマイド３ｍｇ／ｋｇに匹敵する浮腫抑制期間の延長が認められた。また、両薬物併用投与群における、初回感作からそれぞれ１８、２１、２６及び３１日後のそれぞれの相対指数は、各単独投与群の相対指数の積よりも小さく、併用による明確な相乗効果が認められた。【００２９】
【表１】
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【００３０】
【表２】
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【００３１】
【表３】
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【００３２】
【表４】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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