【手続補正書】
【提出日】平成30年12月6日(2018.12.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗原結合性タンパク質を作製する方法であって、該方法は、
（ａ）遺伝子改変マウスのＢ細胞からヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を取得するステップであって、
該遺伝子改変マウスは、
（ｉ）該遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムにおいて単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列と、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）各々ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を発現するＢ細胞の集団であって、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインは、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列またはその体細胞超変異バリアントから発現され、該単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、集団と
を含み、該Ｂ細胞は、該Ｂ細胞の集団の一部であり、該Ｂ細胞は、該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む免疫グロブリン重鎖を発現し、該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、ヒトＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−６４、またはその体細胞超変異バリアントを含む、ステップと、
（ｂ）抗原結合性タンパク質の作製において（ａ）のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を使用するステップであって、該抗原結合性タンパク質は、
（ｉ）該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列によってコードされるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖と、
（ｉｉ）該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列またはその体細胞超変異バリアントによってコードされるヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖と
を含む、ステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記集団の前記Ｂ細胞が、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域にコードされるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖を一緒に発現し、該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域は、ＶＨ２−２６またはその体細胞超変異バリアント、ＶＨ３−２１またはその体細胞超変異バリアント、およびＶＨ３−６４またはその体細胞超変異を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記マウスの生殖系列ゲノムにおける前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、
（ａ）再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列である；および／または
（ｂ）マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、
請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、
（ａ）内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように配置されている；
（ｂ）すべての機能的な内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように配置されている；ならびに／あるいは
（ｃ）マウスＣκ領域に作動可能に連結している、
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列であり、該ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントと該ヒトＪκ５遺伝子セグメントとの間のジャンクションにまたがる配列が、配列番号２１に記載の配列を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記マウスの生殖系列ゲノムは、前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列についてホモ接合性である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域が、ヒトＶＨ３−６４またはその体細胞超変異バリアントを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記ヒト重鎖可変領域が
（ａ）ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３またはその組合せをコードするマウス免疫グロブリン重鎖定常（ＣＨ）領域配列に作動可能に連結している；ならびに／あるいは
（ｂ）内因性免疫グロブリン重鎖遺伝子座に存在する、
請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムは、免疫グロブリン軽鎖の発現のために機能的ないかなる内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントを欠いており、前記遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムは、免疫グロブリン軽鎖の発現のために機能的ないかなる内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを欠いている、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
（ａ）遺伝子改変マウスのＢ細胞からヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を取得する前に、前記遺伝子改変マウスを第１の目的の抗原で免疫化するステップをさらに含み、該Ｂ細胞が、該第１の目的の抗原に特異的に結合する第１の抗体を発現する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記遺伝子改変マウスを第２の目的の抗原で免疫化するステップと、
第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が、前記集団の第２のＢ細胞から取得されるように、前記遺伝子改変マウスのＢ細胞からヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を取得するステップであって、該第２のＢ細胞が、該第２の目的の抗原に特異的に結合する第２の抗体を発現する、ステップと、
抗原結合性タンパク質の作製において、該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を使用するステップと
をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が、ヒトＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−６４、またはその体細胞超変異バリアントを含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１および第２の目的の抗原は、異なる抗原である、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記第１および第２の目的の抗原は、同じ抗原であり、前記第１および第２の抗体は、該同じ抗原の異なるエピトープに結合する、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１５】
抗原結合性タンパク質を作製する方法であって、該方法は、
（ａ）第１の遺伝子改変マウスを第１の目的の抗原で免疫化するステップであって、該第１の遺伝子改変マウスは、Ｂ細胞の集団を含み、該集団のＢ細胞は、該第１の目的の抗原に特異的に結合する第１の抗体を発現し、
該第１の遺伝子改変マウスは、
（ｉ）該第１の遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムにおいて単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列と、
（ｉｉ）各々ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を発現するＢ細胞の集団であって、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインは、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列またはその体細胞超変異バリアントから発現され、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、集団と
を含み、該第１の抗体を発現する該Ｂ細胞の集団のＢ細胞は、第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列によってコードされる第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖を発現し、該第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、ヒトＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−６４、またはその体細胞超変異バリアントを含む、ステップと、
（ｂ）第２の遺伝子改変マウスを第２の目的の抗原で免疫化するステップであって、該第２の遺伝子改変マウスは、Ｂ細胞の集団を含み、該集団のＢ細胞は、該第２の目的の抗原に特異的に結合する第２の抗体を発現し、
該第２の遺伝子改変マウスは、
（ｉ）該第２の遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムにおいて単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列と、
（ｉｉ）各々ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖を発現するＢ細胞の集団であって、該ヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインは、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列またはその体細胞超変異バリアントから発現され、該再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、集団と
を含み、該第２の抗体を発現する該Ｂ細胞の集団のＢ細胞は、第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列によってコードされる第２の免疫グロブリン重鎖可変領域ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖を発現する、ステップと、
（ｃ）該第１の抗体由来の該第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む該第１の免疫グロブリン重鎖を選択し、かつ該第２の抗体由来の該第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む該第２の免疫グロブリン重鎖を選択するステップであって、該第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインは異なる、ステップと、
（ｄ）該第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの配列を決定するステップと、
（ｅ）該第１および第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインの配列を使用して、二重特異性抗原結合性タンパク質を作製するステップと
を含む方法。
【請求項１６】
前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、ヒトＶＨ２−２６、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−６４、またはその体細胞超変異バリアントを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記第１のマウスおよび前記第２のマウスは、同じマウスまたは異なるマウスである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１および第２の目的の抗原は同じ抗原であり、前記第１および第２の抗体は、該同じ抗原の異なるエピトープに結合する、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記第１および第２の遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムにおける前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、
（ａ）再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列である；および／または
（ｂ）マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結されている、
請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記第１および第２の遺伝子改変マウスの前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列は、
（ａ）内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように配置されている；
（ｂ）すべての機能的な内因性免疫グロブリンＶκ遺伝子セグメントおよび内因性免疫グロブリンＪκ遺伝子セグメントを置換するように配置されている；ならびに／あるいは
（ｃ）マウスＣκ領域に作動可能に連結している、
請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列が、再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ５配列であり、該ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントと該ヒトＪκ５遺伝子セグメントとの間のジャンクションにまたがる配列は、配列番号２１に記載の配列を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記第１の遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムおよび／または前記第２の遺伝子改変マウスの生殖系列ゲノムは、前記単一の再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列についてホモ接合性である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域および／または前記第２のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域が、ヒトＶＨ３−６４またはその体細胞超変異バリアントを含む、請求項１６〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記抗原結合性タンパク質を作製することは、前記第１のマウスから選択された前記第１のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第１の免疫グロブリン重鎖、および／または前記第２のマウスから選択された前記第２の免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む第２の免疫グロブリン重鎖を、再構成されたヒトＶκ１−３９／Ｊκ配列を含む免疫グロブリン軽鎖も発現する細胞において一緒に発現させることを含む、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記抗原結合性タンパク質は、完全ヒト抗原結合性タンパク質である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗原結合性タンパク質は、二重特異的抗原結合性タンパク質である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。