【手続補正書】
【提出日】令和1年5月17日(2019.5.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  第１の標的抗原を認識し、それに結合することができる抗原結合ドメインを含む第１の重鎖と、
（ｂ）第２の標的抗原を認識し、それに結合することができる抗原結合ドメインを含む第２の重鎖と、
（ｃ）第１または第２の標的抗原を認識し、それに結合することができる共通の軽鎖抗原結合ドメインとを含み、
（ａ）もしくは（ｂ）または（ａ）と（ｂ）の両方の重鎖が、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジアミノ酸配列、および２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジアミノ酸配列ＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３）を含むヒンジを含む重鎖定常領域を含む、
二重特異性抗体。
【請求項２】
（ａ）もしくは（ｂ）または（ａ）と（ｂ）の両方の重鎖が、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ１ドメイン、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ４上部ヒンジ、２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジ、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ２ドメイン、およびヒトＩｇＧ４  ＣＨ３ドメインを含む、キメラＩｇＧ４重鎖定常（ＣＨ）領域を含むか、または
（ａ）もしくは（ｂ）または（ａ）と（ｂ）の両方の重鎖が、ヒトＩｇＧ１  ＣＨ１ドメイン、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ１上部ヒンジ、２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジ、ヒトＩｇＧ４  ＣＨ２ドメイン、およびヒトＩｇＧ１  ＣＨ３ドメインを含む、キメラＩＧ１  ＣＨ領域を含み、
前記二重特異性抗体は、野生型ＩｇＧ１または野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む対応する二重特異性抗体より低い親和性で、ＦｃγＲに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＡまたは場合によりＦｃγＲＩＩＢに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＢへの結合親和性と比較してより高い親和性で、ＦｃγＲＩＩＡに結合することができる二重特異性抗体である、請求項１に記載の二重特異性抗体。
【請求項３】
前記ＩｇＧ２下部ヒンジが、配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項４】
前記上部ヒンジと下部ヒンジが一緒に、配列番号８のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項５】
前記上部ヒンジと下部ヒンジが一緒に、配列番号９のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項６】
前記ＣＨ２ドメインが、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項７】
前記ＣＨ３ドメインが、配列番号１１、配列番号１２、配列番号４１、および配列番号４２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項８】
（ａ）もしくは（ｂ）または（ａ）と（ｂ）の両方の前記重鎖が、配列番号１、配列番号２、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３７、および配列番号３８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖定常領域を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項９】
（ａ）配列番号１、配列番号２、配列番号３０、または配列番号３１を含む第１の重鎖定常領域を含む第１の重鎖、および
（ｂ）配列番号３７または配列番号３８を含む第２の重鎖定常領域を含む第２の重鎖、を含む、請求項２に記載の二重特異性抗体。
【請求項１０】
第１の重鎖が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む定常領域を含み、第２の重鎖が、配列番号３７のアミノ酸配列を含む定常領域を含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
【請求項１１】
第１の重鎖が、配列番号３１のアミノ酸配列を含む定常領域を含み、第２の重鎖が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む定常領域を含む、請求項１に記載の二重特異性抗体。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか1項に記載の二重特異性抗体をコードする、核酸分子。
【請求項１３】
請求項１２に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項１４】
核酸分子が、宿主細胞中での発現に好適な発現制御配列に作動的に連結される、請求項１３に記載のベクター。
【請求項１５】
請求項１２に記載の核酸分子を含む、細胞。
【請求項１６】
哺乳動物細胞、ＣＨＯ細胞、またはＣＨＯ−Ｋ１細胞である、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１７】
抗体を作製する方法であって、
（ａ）宿主細胞を前記抗体の軽鎖をコードする核酸分子を用いてトランスフェクトするステップであって、前記核酸分子が、選択された抗原特異的抗体のＶL領域をコードするヌクレオチド配列およびＩｇの定常ＣL領域をコードするヌクレオチド配列を含み、前記選択された抗原特異的抗体のＶL領域をコードする前記ヌクレオチド配列、および前記ＩｇのＣL領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結される、ステップ、
（ｂ）ステップ（ａ）の宿主細胞を前記抗体の重鎖をコードする核酸分子を用いてトラ
ンスフェクトするステップであって、前記核酸分子が、選択された抗原特異的抗体のＶH領域をコードするヌクレオチド配列、およびヒトＩｇの定常ＣH領域をコードするヌクレオチド配列を含み、前記ＣH領域をコードするヌクレオチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３７または配列番号３８をコードするヌクレオチド配列を含み、前記選択された抗原特異的抗体のＶH領域をコードするヌクレオチド配列、および前記ＩｇのＣH領域をコードするヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結される、ステップ、
（ｃ）前記宿主細胞中で（ａ）および（ｂ）の核酸分子を共発現させることによって前記抗体を作製するステップであって、宿主細胞を培養し、抗体を細胞培地中に分泌する、ステップ；そして、
（ｄ）前記抗体を前記細胞培地から単離するステップであって、前記抗体は、野生型ＩｇＧ１または野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む対応する抗体より低い親和性で、ＦｃγＲに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＡまたは場合によりＦｃγＲＩＩＢに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＢへの結合親和性と比較してより高い親和性で、ＦｃγＲＩＩＡに結合することができる抗体である、ステップ、
を含む方法。
【請求項１８】
前記抗体が、単一特異性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記抗体が、二重特異性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｆｃ融合タンパク質を作製する方法であって、
（ａ）宿主細胞を前記Ｆｃ融合タンパク質をコードする核酸分子を用いてトランスフェクトするステップであって、前記核酸分子が、ヒトＩｇの定常ＣH領域をコードするヌクレオチド配列に融合された、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み、前記ＣH領域をコードするヌクレオチド配列が、配列番号１、配列番号２、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３７または配列番号３８をコードするヌクレオチド配列を含み、前記タンパク質をコードするヌクレオチド配列および前記ＩｇのＣH領域をコードするヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結される、トランスフェクトするステップ、
（ｂ）前記宿主細胞中でステップ（ａ）の核酸分子を発現させることによって前記Ｆｃ融合タンパク質を作製するステップであって、前記宿主細胞を培養し、前記Ｆｃ融合タンパク質を細胞培地中に分泌することで作製するステップ、
（ｃ）Ｆｃ融合タンパク質を前記細胞培地から単離するステップであって、Ｆｃ融合タンパク質は、野生型ＩｇＧ１または野生型ＩｇＧ４重鎖定常領域を含む対応するＦｃ融合タンパク質より低い親和性で、ＦｃγＲに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＡまたは場合によりＦｃγＲＩＩＢに結合することができ、ＦｃγＲＩＩＢへの結合親和性と比較して、より大きい親和性で、ＦｃγＲＩＩＡに結合することができるＦｃ融合タンパク質である、ステップ、
を含む方法。
【請求項２１】
タンパク質が受容体タンパク質である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
宿主細胞が、ＣＨＯ、ＣＯＳ、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ  ５、Ｃｏｌｏ２５、ＨＢ  ８０６５、ＨＬ−６０、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（表皮性）、ＣＶ−１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ−０、ＭＭＴ細胞、腫瘍細胞、およびＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞からなる群から選択される、請求項１７〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
抗体依存性細胞貧食により標的細胞を殺傷するための、抗体を含む医薬組成物であって
、前記抗体は、標的細胞上の抗原に結合する可変領域および重鎖定常領域を含み、前記重鎖定常領域は、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジアミノ酸配列および２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジアミノ酸配列ＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３）を含むヒンジを含む、医薬組成物。
【請求項２４】
標的細胞が腫瘍細胞である、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
可変領域を重鎖定常領域と結合させて、低減した抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を持つ抗体を作製する方法であって、前記重鎖定常領域は、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジアミノ酸配列、および２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジアミノ酸配列ＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３）を含むヒンジを含み、抗体は、１００ｎＭの抗体濃度で、インビトロまたはエクスビボにおける細胞殺傷アッセイで測定したとき、ＡＤＣＣ活性が検出不能である、方法。
【請求項２６】
可変領域を重鎖定常領域と結合させて、ヒトＦｃγＲＩまたはヒトＦｃγＲＩＩＩに結合しない抗体を作製する方法であって、前記重鎖定常領域は、２１６位〜２２７位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジアミノ酸配列、および２２８位〜２３６位（ＥＵ付番）のヒトＩｇＧ２下部ヒンジアミノ酸配列ＰＣＰＡＰＰＶＡ（配列番号３）を含むヒンジを含み、抗体は、２５℃での表面プラズモン共鳴アッセイで測定したとき、Ｈｉｓで捕捉したＦｃγＲＩまたはＦｃγＲＩＩＩへの結合が検出不能である、方法。