(57)【要約】  プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法であって、１つ以上のスポット４を、１つの短冊状基板２上において、その長辺方向に並べて担持させ、それら複数の短冊状基板２を並列に並べて一体にする。
2007145228.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法であって、
１つ以上の前記スポットを、１つの短冊状基板上において、その長辺方向に並べて担持させ、それら複数の前記短冊状基板を並列に並べて一体にするマイクロアレイの作製方法。
【請求項２】
プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法であって、
１つの前記スポットを、１つの単位基板上に担持し、複数の前記単位基板を縦方向と横方向とに並べて一体にするマイクロアレイの作製方法。
【請求項３】
請求項１に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、前記各プローブを含有する複数のプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記複数の各プローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々前記四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して前記複数種類のプローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向に沿い、且つ複数列に切断して、複数のスポットを担持する短冊状基板に切り分ける工程；
（４）別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記短冊状基板を任意に組み合わせて、並列に並べて一体にする工程；
を包含するマイクロアレイの作製方法。
【請求項４】
請求項２に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、前記各プローブを含有する複数のプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記複数の各プローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々前記四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して前記複数種類のプローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（４）別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含するマイクロアレイの作製方法。
【請求項５】
前記工程（２）において、前記四角形基板上に、その横方向に沿って、プローブ溶液に対する親和性の異なる領域を縦方向に交互に帯状に設けてあり、前記プローブ溶液を親和性の高い領域に塗布する請求項３又は４に記載のマイクロアレイの作製方法。
【請求項６】
前記工程（２）において、前記四角形基板上にその横方向に沿った壁部が、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、前記プローブ溶液を隣接する前記壁部どうしの間に塗布する請求項３又は４に記載のマイクロアレイの作製方法。
【請求項７】
前記工程（２）において、前記四角形基板上にその横方向に沿った凸部が、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、前記プローブ溶液を凸部上に塗布する請求項３又は４に記載のマイクロアレイの作製方法。
【請求項８】
請求項１に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）四角形基板と、前記四角形基板上に配置可能であり、且つ横方向に沿った溝部が縦方向に所定の間隔にて複数設けてある型用基板とを、前記溝部を設けた面が内側に位置するように互いに張り合わせて前記溝部によって複数の孔を形成し、前記各孔の中にプローブ合成液を流し、化学反応を生じさせることによって、前記孔毎にその内部でプローブを合成して、前記複数の各孔に対応する複数種類の各プローブを前記四角形基板上に、その縦方向に並列に定着させる工程；
（２）前記型用基板を取り外し、前記四角形基板を縦方向に沿って切断して、複数のスポットを担持する短冊状基板に切り分ける工程；
（３）別の複数種類のプローブを夫々別の四角形基板上に合成するようにして上記工程（１）〜（２）を繰り返す工程；及び
（４）得られた複数の前記短冊状基板を任意に組み合わせて、並列に並べて一体にする工程；
を包含するマイクロアレイの作製方法。
【請求項９】
請求項２に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）四角形基板と、前記四角形基板上に配置可能であり、且つ横方向に沿った溝部を縦方向に所定の間隔にて複数設けてある型用基板とを、前記溝部を設けた面が内側に位置するように互いに張り合わせて前記溝部によって複数の孔を形成し、前記各孔の中にプローブ合成液を流し、化学反応を生じさせることによって、前記孔毎にその内部でプローブを合成して、前記複数の各孔に対応する複数種類の各プローブを前記四角形基板上に、その縦方向に並列に定着させる工程；
（２）前記型用基板を取り外し、前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（３）別の複数種類のプローブを夫々別の四角形基板上に合成するようにして上記工程（１）〜（２）を繰り返す工程；及び
（４）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含するマイクロアレイの作製方法。
【請求項１０】
請求項２に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）プローブを含有するプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記プローブ溶液を四角形基板上に塗布して、前記プローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（４）別の種類のプローブを含有するプローブ溶液について、別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含するマイクロアレイの作製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
マイクロアレイは、特定の物質・部位・状態などを特異的に検出し得るプローブ（例えば核酸分子やタンパク質分子等）を、基板（例えばガラス板等）上に高密度に配置したものであり、創薬研究、疾病の診断・予防法の研究、遺伝子の発現・変異・多型性などの同時解析に非常に有用な技術として多くの研究機関・医療機関・製薬企業等で利用されている。【０００３】
図１２は、従来のマイクロアレイ１を模式的に示したものであり、プローブを含有するスポット４が、一枚の基板１８上に、縦方向と横方向とに整列した状態で多数担持されている（例えば、特許文献１参照）。【０００４】
従来のマイクロアレイの作製方法としては、例えば、所定のプローブを含有する溶液（以下、プローブ溶液と記す）を基板上の所定位置に微量射出してスポットを形成（スポッティング）するインクジェット技術（例えば、特許文献２参照）、あるいは、微細なペン先を基板上の所定位置に接触させて微量のプローブ溶液をスポッティングするメカニカルスポット技術（例えば、特許文献３参照）等が挙げられる。
【特許文献１】特開２００５−７７１５４号公報
【特許文献２】特表平１１−９９０００号公報
【特許文献３】特表平１０−５０３８４１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記従来のマイクロアレイの作製方法では、プローブを含有する多数のスポットを、一定形状かつ高密度に一基板上に配置するのに非常に時間を要していた。また、基板上におけるスポットの配置を変更したり、内容を追加するなどの編纂は事実上不可能であり、各種のマイクロアレイは全て別個に設定して作製していた。【０００６】
このため、一部のプローブが共通する複数のマイクロアレイを作製する場合、作製段階では全く別種のマイクロアレイを作製することとなる。そのため、マイクロアレイの作製を煩瑣なものとしていた。また、作製途中での編纂も不可能である。【０００７】
さらに、そのマイクロアレイのスポットが高集積となるに従い、作製が困難となっていた。このとき、スポットを形成するための装置を、極めて安定かつ精密に制御することが必要とされていた。【０００８】
本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであって、プローブスポット（プローブを含有するスポット）の配置の編纂が可能で、内容の追加が容易なマイクロアレイを、作製装置の負担を軽減しながらも短時間で作製することのできる方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記目的を達成するための本発明のマイクロアレイの作製方法の第一特徴構成は、プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法であって、１つ以上の前記スポットを、１つの短冊状基板上において、その長辺方向に並べて担持させ、それら複数の前記短冊状基板を並列に並べて一体にする点にある。【００１０】
本発明のマイクロアレイの作製方法は、短冊状基板を並列に並べて一体にするものであるため、スポットの配置を変更したり、内容を追加するなどの編纂が短冊状基板を単位に可能であり、各種のマイクロアレイの設定を非常に容易にするものである。【００１１】
例えば、一部のスポットが共通する複数のマイクロアレイを作製する場合、共通部分を構成する短冊状基板、および、非共通部分を構成する短冊状基板を別途に作製し、これらを適宜組み合わせることにより、それぞれのマイクロアレイを作製することができる。仮に、共通部分を構成する短冊状基板が存在する場合は、非共通部分を構成する短冊状基板のみを作製すればよいため、全く別種のマイクロアレイを作製する必要がない。【００１２】
また、マイクロアレイの作製段階で何らかの事情で欠陥を生じた場合にも、短冊状基板の単位で修正が可能となる。【００１３】
さらに、スポットの集積度が高い高集積度のマイクロアレイであっても、スポットの集積度は、短冊状基板の単位で設定することができる。このとき、スポットを形成するための装置の制御負荷は軽減される。【００１４】
本発明の第二特徴構成は、プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法であって、１つの前記スポットを、１つの単位基板上に担持し、複数の前記単位基板を縦方向と横方向とに並べて一体にする点にある。【００１５】
本発明のマイクロアレイの作製方法は、複数の単位基板を縦方向と横方向とに並べて一体にするものであるため、スポットの配置を変更したり、内容を追加するなどの編纂が単位基板を単位に可能であり、各種のマイクロアレイの設定を非常に容易にするものである。【００１６】
例えば、一部のスポットが共通する複数のマイクロアレイを作製する場合、共通部分を構成する短冊状基板、および、非共通部分を構成する短冊状基板を別途に作製し、これらを適宜組み合わせることにより、それぞれのマイクロアレイを作製することができる。仮に、共通部分を構成する短冊状基板が存在する場合は、非共通部分を構成する短冊状基板のみを作製すればよいため、全く別種のマイクロアレイを作製する必要がない。【００１７】
また、マイクロアレイの作製段階で何らかの事情で欠陥を生じた場合にも、単位基板を単位に修正が可能である。【００１８】
さらに、スポットの集積度が高い高集積度のマイクロアレイであっても、スポット形成は単位基板を単位として設定することができる。このとき、スポットを形成するための装置の制御負荷は軽減される。【００１９】
本発明の第三特徴構成は、第一特徴構成に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、前記各プローブを含有する複数のプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記複数の各プローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々前記四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して前記複数種類のプローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向に沿い、且つ複数列に切断して、複数のスポットを担持する短冊状基板に切り分ける工程；
（４）別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記短冊状基板を任意に組み合わせて、並列に並べて一体にする工程；
を包含する点にある。【００２０】
本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、第一特徴構成に記載されるマイクロアレイを容易に作製することができる。【００２１】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する場合、スポットをより高密度に多数配置しようとすれば、各スポットの面積を小さくするために、１つのスポットを形成するのに使用されるプローブ溶液量をより少なくする必要がある。しかし、１スポットあたりに使用されるプローブ溶液量が微量となるに従い、液量誤差が生じ易く、スポット毎の品質（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）に偏差を生じやすくなる。さらに、基板上のスポットが高密度になれば、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、基板上の特定の位置に正確にスポッティングすることもより困難となる。【００２２】
しかしながら、本発明の方法によれば、様々な種類のスポットを、多数高密度、かつ、スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量等における品質偏差が少ない状態で担持しているマイクロアレイを容易に作製することができる。【００２３】
詳細には、上記工程（２）において、複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、その複数のプローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して複数種類のプローブを四角形基板上に定着させる際に、線状塗布部の幅（スポットの縦幅）及び線状塗布部の厚さ（スポットの層の厚さ）が、それぞれ同じとなるように各プローブ溶液を塗布する。【００２４】
さらに、上記工程（３）において、四角形基板を縦方向に沿い、且つ複数列に切断して、短冊状基板に切り分ける際に、その切断幅（スポットの横幅）が同じとなるように切り分ければ、切り分けられた短冊状基板上には、常に一定の横幅・縦幅・厚さを有するスポット、即ち一定の形状・大きさ・プローブ含有量を有し得るスポットが担持される。【００２５】
そして、上記工程（４）において、別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返して、様々な種類のスポットを担持した短冊状基板を作製する。
最後に、上記工程（５）において、得られた複数の上記短冊状基板を任意に組み合わせて並列に並べて一体にすれば、品質偏差の小さい様々な種類のスポットを担持しているマイクロアレイを作製することができる。【００２６】
上記工程（２）及び（３）は、四角形基板上に横方向に沿ってプローブ溶液を塗布した後、その四角形基板を縦方向に沿って複数列に切断することによって個々のスポットを形成するようにしてある。そのため、塗布する際の線の幅（スポットの縦幅）や、切り分ける際の切断幅（スポットの横幅）を小さくすることによって、個々のスポットの面積を容易に小さくすることが可能であり、高密度に配置できる。【００２７】
また、上記工程（２）おいて、短冊状基板上における各スポットの配置関係を変更したり、あるいは上記工程（５）において、短冊状基板の並べ方を調節することによって、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、マイクロアレイ上の特定の位置に、正確且つ容易に配置することができる。【００２８】
本発明の第四特徴構成は、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、前記各プローブを含有する複数のプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記複数の各プローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々前記四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して前記複数種類のプローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（４）別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含する点にある。【００２９】
本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイを容易に作製することができる。【００３０】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する場合、スポットをより高密度に多数配置しようとすれば、各スポットの面積を小さくするために、１つのスポットを形成するのに使用されるプローブ溶液量をより少なくする必要がある。しかし、１スポットあたりに使用されるプローブ溶液量が微量となるに従い、液量誤差が生じ易く、スポット毎の品質（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）に偏差を生じやすくなる。さらに、基板上のスポットが高密度になれば、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、基板上の特定の位置に正確にスポッティングすることもより困難となる。【００３１】
しかしながら、本発明の方法によれば、様々な種類のスポットを、多数高密度、かつ、スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量等における品質偏差が少ない状態で担持しているマイクロアレイを容易に作製することができる。【００３２】
詳細には、上記工程（２）において、複数種類のプローブからなる一つのプローブ群について、その複数のプローブ溶液を、同じ四角形基板上に、夫々四角形基板の横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部を縦方向に並設して複数種類のプローブを四角形基板上に定着させる際に、線状塗布部の厚さ（スポットの層の厚さ）が同じとなるように各プローブ溶液を塗布する。【００３３】
さらに上記工程（３）において、四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、単位基板に切り分ける際に、各スポットの横幅と縦幅が全て同じとなるように、縦方向の切断幅（スポットの横幅）、及び横方向の切断幅（スポットの縦幅）をそろえて切り分ければ、切り分けられた単位基板上には、常に一定の横幅、・幅・厚さを有するスポット、即ち一定の形状・大きさ・プローブ含有量を有し得るスポットが担持される。【００３４】
そして、上記工程（４）において、別の複数種類のプローブからなる複数のプローブ群について、それぞれ別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返して、様々な種類のスポットを担持した単位基板を作製する。
最後に、上記工程（５）において、得られた複数の上記単位基板を任意に組み合わせて、その縦方向と横方向とに並べて一体にすれば、品質偏差の小さい様々な種類のスポットを担持しているマイクロアレイを作製することができる。【００３５】
上記工程（２）及び（３）は、四角形基板上に横方向に沿ってプローブ溶液を塗布した後、その四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断することによって個々のスポットを形成するようにしてある。そのため、切り分ける際の切断幅（スポットの横幅や縦幅）を小さくすることによって、個々のスポットの面積を容易に小さくすることが可能であり、高密度に配置できる。【００３６】
さらに、上記工程（５）において、単位基板の並べ方を調節することによって、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、マイクロアレイ上の特定の位置に、正確且つ容易に配置することができる。【００３７】
本発明の第五特徴構成は、前記工程（２）において、前記四角形基板上に、その横方向に沿って、プローブ溶液に対する親和性の異なる領域を縦方向に交互に帯状に設けてあり、前記プローブ溶液を親和性の高い領域に塗布する点にある。【００３８】
本構成によれば、塗布されたプローブ溶液は、親和性の高い領域に留まり、四角形基板上に並列に塗布された各プローブ溶液が混合してしまうことを防止することができる。【００３９】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する際、その供給ヘッドを交換可能なチップで構成すると、チップの形状が全て同じであるとは限らないので、スポットの形状や大きさが異なり、スポット間の品質偏差が大きくなる虞がある。そのため、プローブ溶液を交換する場合には、充分に校正したチップを用いるか、一度使用したチップを充分に洗浄して使用しなければならず、多くの交換時間を必要としていた。【００４０】
しかしながら、本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、塗布されたプローブ溶液は、親和性の高い領域を自律的に移動して均等な線状塗布部を形成し得る。そのため、たとえ供給ヘッドの形状が異なるものを使用した場合においても、プローブ溶液の塗布量が一定であれば、常に一定の厚さを有する線状塗布部を四角形基板上に形成することが可能である。即ち、スポットの品質偏差（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）を小さくすることが可能である。【００４１】
従って、違う種類のプローブ溶液を使用する場合に、容易にチップを交換することが可能であり、洗浄時間も必要としないので、より短時間でマイクロアレイを作製することができる。【００４２】
本発明の第六特徴構成は、前記工程（２）において、前記四角形基板上にその横方向に沿った壁部が、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、前記プローブ溶液を隣接する前記壁部どうしの間に塗布する点にある。【００４３】
本構成によれば、四角形基板上に設けられた壁部が障壁となることによって、四角形基板上に並列に塗布された各プローブ溶液が混合してしまうことを、より確実に防止することができる。【００４４】
また、従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する際、その供給ヘッドを交換可能なチップで構成すると、チップの形状が全て同じであるとは限らないので、スポットの形状や大きさが異なり、スポット間の品質偏差が大きくなる虞があった。そのため、プローブ溶液を交換する場合には、充分に校正したチップを用いるか、一度使用したチップを充分に洗浄して使用しなければならず、多くの交換時間を必要としていた。【００４５】
しかしながら、本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、塗布されたプローブ溶液は、隣接する壁部どうしの間を自律的に移動して均等な線状塗布部を形成し得る。そのため、たとえ供給ヘッドの形状が異なるものを使用した場合においても、プローブ溶液の塗布量が一定であれば、常に一定の厚さを有する線状塗布部を四角形基板上に形成することが可能である。即ち、スポットの品質偏差（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）を小さくすることが可能である。【００４６】
従って、違う種類のプローブ溶液を使用する場合に、容易にチップを交換することが可能であり、洗浄時間も必要としないので、より短時間でマイクロアレイを作製することができる。【００４７】
本発明の第七特徴構成は、前記工程（２）において、前記四角形基板上にその横方向に沿った凸部が、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、前記プローブ溶液を凸部上に塗布する点にある。【００４８】
本構成によれば、プローブ溶液を、四角形基板の縦方向に所定の間隔で設けられた凸部上に塗布することによって、各プローブ溶液が混合してしまうことを防止することができる。また、上述したように、塗布されたプローブ溶液は、夫々の凸部上を自律的に移動して均等な線状塗布部を形成し得るので、スポットの品質偏差を非常に小さくすることができる。また短時間でマイクロアレイを作製できる。【００４９】
本発明の第八特徴構成は、第一特徴構成に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）四角形基板と、前記四角形基板上に配置可能であり、且つ横方向に沿った溝部が縦方向に所定の間隔にて複数設けてある型用基板とを、前記溝部を設けた面が内側に位置するように互いに張り合わせて前記溝部によって複数の孔を形成し、前記各孔の中にプローブ合成液を流し、化学反応を生じさせることによって、前記孔毎にその内部でプローブを合成して、前記複数の各孔に対応する複数種類の各プローブを前記四角形基板上に、その縦方向に並列に定着させる工程；
（２）前記型用基板を取り外し、前記四角形基板を縦方向に沿って切断して、複数のスポットを担持する短冊状基板に切り分ける工程；
（３）別の複数種類のプローブを夫々別の四角形基板上に合成するようにして上記工程（１）〜（２）を繰り返す工程；及び
（４）得られた複数の前記短冊状基板を任意に組み合わせて、並列に並べて一体にする工程；
を包含する点にある。【００５０】
本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、第一特徴構成に記載されるマイクロアレイを容易に作製することができる。【００５１】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する場合、スポットをより高密度に多数配置しようとすれば、各スポットの面積を小さくするために、１つのスポットを形成するのに使用されるプローブ溶液量をより少なくする必要がある。しかし、１スポットあたりに使用されるプローブ溶液量が微量となるに従い、液量誤差が生じ易く、スポット毎の品質（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）に偏差を生じやすくなる。さらに、基板上のスポットが高密度になれば、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、基板上の特定の位置に正確にスポッティングすることもより困難となる。【００５２】
しかしながら、本発明の方法によれば、様々な種類のスポットを、多数高密度、かつ、スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量等における品質偏差が少ない状態で担持しているマイクロアレイを容易に作製することができる。【００５３】
詳細には、上記工程（１）において、型用基板の縦方向に所定の間隔にて複数設けてある溝部の縦幅を同じ長さとすれば、四角形基板と張り合わせた際に形成される複数の孔は、それぞれ同じ縦幅（スポットの縦幅）を有するものとなる。各孔の中にプローブ合成液を流すと、孔内は均一な反応場に置かれることとなり、各孔の基板面にはそれぞれ均一に反応物が定着する。
さらに、上記工程（２）において、型用基板を取り外し、四角形基板を縦方向に沿って複数列に切断して、短冊状基板に切り分ける際に、その切断幅（スポットの横幅）が同じとなるように切り分ければ、切り分けられた短冊状基板上には常に一定の横幅、縦幅を有するスポット、即ち一定の形状、大きさ、プローブ含有量を有するスポットが担持される。【００５４】
そして、上記工程（３）において、別の複数種類のプローブを、夫々別の四角形基板上に合成するように上記工程（１）〜（２）を繰り返し、様々な種類のスポットを担持した短冊状基板を作製する。
最後に、上記工程（４）によって、得られた複数の短冊状基板を任意に組み合わせて並列に並べて一体にすれば、品質偏差の小さい様々な種類のスポットが担持されているマイクロアレイが作製される。【００５５】
上記工程（１）及び（２）は、四角形基板上に、その横方向に沿ってプローブを合成して定着させた後、その四角形基板を縦方向に沿って複数列に切断することによって、個々のスポットを形成するようにしてある。そのため、型用基板の溝部の縦幅（スポットの縦幅）や、切り分ける際の切断幅（スポットの横幅）を小さくすることによって、個々のスポットの面積を容易に小さくすることが可能であり、高密度に配置させられる。【００５６】
さらに、上記工程（１）おいて、短冊状基板上における各プローブ合成液を流し込む位置を変更したり、あるいは、上記工程（４）において、短冊状基板の並べ方を調節したりすることによって、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、マイクロアレイ上の特定の位置に、正確且つ容易に配置することができる。【００５７】
本発明の第九特徴構成は、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）四角形基板と、前記四角形基板上に配置可能であり、且つ横方向に沿った溝部を縦方向に所定の間隔にて複数設けてある型用基板とを、前記溝部を設けた面が内側に位置するように互いに張り合わせて前記溝部によって複数の孔を形成し、前記各孔の中にプローブ合成液を流し、化学反応を生じさせることによって、前記孔毎にその内部でプローブを合成して、前記複数の各孔に対応する複数種類の各プローブを前記四角形基板上に、その縦方向に並列に定着させる工程；
（２）前記型用基板を取り外し、前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（３）別の複数種類のプローブを夫々別の四角形基板上に合成するようにして上記工程（１）〜（２）を繰り返す工程；及び
（４）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含する点にある。【００５８】
本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイを容易に作製することができる。【００５９】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する場合、スポットをより高密度に多数配置しようとすれば、各スポットの面積を小さくするために、１つのスポットを形成するのに使用されるプローブ溶液量をより少なくする必要がある。しかし、１スポットあたりに使用されるプローブ溶液量が微量となるに従い、液量誤差が生じ易く、スポット毎の品質（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）に偏差を生じやすくなる。さらに、基板上のスポットが高密度になれば、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、基板上の特定の位置に正確にスポッティングすることもより困難となる。【００６０】
しかしながら、本発明の方法によれば、様々な種類のスポットを、多数高密度、かつ、スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量等における品質偏差が少ない状態で担持しているマイクロアレイを容易に作製することができる。【００６１】
詳細には、上記工程（１）において、型用基板の縦方向に所定の間隔にて複数設けてある溝部の縦幅を同じ長さとすれば、四角形基板と張り合わせた際に形成される複数の孔は、それぞれ同じ縦幅（スポットの縦幅）を有するものとなる。そのため、各孔の中にプローブ合成液を流すと孔内は均一な反応場に置かれることとなり、各孔の基板面にはそれぞれ均一に反応物が定着する。
さらに上記工程（２）において、型用基板を取り外し、四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、単位基板に切り分ける際に、各スポットの横幅と縦幅が全て同じとなるように、縦方向の切断幅（スポットの横幅）、及び横方向の切断幅（スポットの縦幅）をそろえて切り分ければ、切り分けられた単位基板上には、常に一定の横幅・縦幅・厚さを有するスポット、即ち一定の形状・大きさ・プローブ含有量を有し得るスポットが担持される。【００６２】
そして、上記工程（３）において、別の複数種類のプローブを夫々別の四角形基板上に合成するように上記工程（１）〜（２）を繰り返し、様々な種類のスポットを担持した単位基板を作製する。
最後に、上記工程（４）において、得られた複数の単位基板を任意に組み合わせて、その縦方向と横方向とに並べて一体にすれば、品質偏差の小さい様々な種類のスポットが担持されているマイクロアレイが作製される。【００６３】
上記工程（１）及び（２）は、四角形基板上に、その横方向に沿ってプローブを合成して定着させた後、その四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断することによって個々のスポットを形成するようにしてある。そのため、切り分ける際の切断幅（スポットの横幅や縦幅）を小さくすることによって、個々のスポットの面積を容易に小さくすることが可能であり、高密度に配置できる。【００６４】
さらに、上記工程（４）において、単位基板の並べ方を調節することによって、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、マイクロアレイ上の特定の位置に、正確且つ容易に配置することができる。【００６５】
本発明の第十特徴構成は、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイの作製方法であって、
（１）プローブを含有するプローブ溶液を調製する工程；
（２）前記プローブ溶液を四角形基板上に塗布して、前記プローブを前記四角形基板上に定着させる工程；
（３）前記四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、１つのスポットを担持する単位基板に切り分ける工程；
（４）別の種類のプローブを含有するプローブ溶液について、別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返す工程；及び
（５）得られた複数の前記単位基板を任意に組み合わせて、縦方向と横方向とに並べて一体にする工程；
を包含する点にある。【００６６】
本発明のマイクロアレイ作製方法によれば、第二特徴構成に記載されるマイクロアレイを容易に作製することができる。【００６７】
従来のインクジェット方式又はメカニカルスポット方式で基板上にスポットを形成する場合、スポットをより高密度に多数配置しようとすれば、各スポットの面積を小さくするために、１つのスポットを形成するのに使用されるプローブ溶液量をより少なくする必要がある。しかし、１スポットあたりに使用されるプローブ溶液量が微量となるに従い、液量誤差が生じ易く、スポット毎の品質（スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量）に偏差を生じやすくなる。さらに、基板上のスポットが高密度になれば、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、基板上の特定の位置に正確にスポッティングすることもより困難となる。【００６８】
しかしながら、本発明の方法によれば、様々な種類のスポットを、多数高密度、かつ、スポットの形状・スポットの大きさ・プローブ含有量等における品質偏差が少ない状態で担持しているマイクロアレイを容易に作製することができる。【００６９】
詳細には、上記工程（２）において、プローブ溶液を四角形基板上に塗布する際に、その厚さ（スポットの層の厚さ）が均一となるようにプローブ溶液を塗布し、さらに、上記工程（３）において、四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断して、単位基板に切り分ける際に、各スポットの横幅と縦幅が全て同じとなるように、縦方向の切断幅（スポットの横幅）、及び横方向の切断幅（スポットの縦幅）をそろえて切り分ければ、切り分けられた単位基板上には常に一定の横幅・縦幅・厚さを有するスポット、即ち一定の形状、大きさ、プローブ含有量を有するスポットが担持される。【００７０】
そして、上記工程（４）において、別の種類のプローブを含有するプローブ溶液について、別の四角形基板を用いて上記工程（１）〜（３）を繰り返し、様々な種類のスポットを担持した単位基板を作製する。
最後に、上記工程（５）において、得られた複数の上記単位基板を任意に組み合わせて、その縦方向と横方向とに並べて一体にすれば、品質偏差の小さい様々な種類のスポットを担持しているマイクロアレイが作製される。【００７１】
上記工程（２）及び（３）は、四角形基板上にプローブ溶液を塗布した後、その四角形基板を縦方向及び横方向に沿って切断することによって、個々のスポットを形成するようにしてある。そのため、切り分ける際の切断幅（スポットの横幅や縦幅）を小さくすることによって、個々のスポットの面積を容易に小さくすることが可能であり、高密度に配置できる。【００７２】
さらに、上記工程（５）において、単位基板の並べ方を調節することによって、特定のスポット（特定のプローブを含有するスポット）を、マイクロアレイ上の特定の位置に、正確且つ容易に配置できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７３】
以下に本発明の実施の形態を図面に基づいて説明する。
〔第１実施形態〕
図１は、本発明のマイクロアレイの作製方法の第１実施形態を示している。図１（ａ）は、マイクロアレイ１を作製するときの様子を概略的に示した斜視図であり、図１（ｂ）は、図１（ａ）の矢視線Ｘ−Ｘにおける短冊状基板２の断面図である。【００７４】
マイクロアレイ１は、縦幅４ａ、横幅４ｂ、厚さ４ｃを有する複数のスポット４を担持する。また、マイクロアレイ１は、短冊状基板２を並列に並べて一体にしたものであり、図１（ｂ）に示されるように、１つの短冊状基板２上には、１つ以上のスポット４をその長辺方向に並んで縞状に担持する構成となっている。以下に、その詳細について説明する。【００７５】
（マイクロアレイの構成）
マイクロアレイ１は、複数の短冊状基板２を並列に並べて、その側面同士を適当な粘着剤等を用いて接着、あるいは圧着等して一体にして構成されている。【００７６】
（短冊状基板）
短冊状基板２は、スポット４を担持する担持面５を有している。担持面５には、その長辺方向に並んで複数のスポット４が担持され得る。担持するスポット４の数は、任意に設定することが可能である。例えば、一つの担持面５には１０個〜２００個のスポットを担持することが好ましい。
短冊状基板２を構成し得る材料としては、例えばガラス・プラスチック・金属素材等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、短冊状基板２の側面を非透光性の物質でコーティングしたり、あるいは短冊状基板２の側面に適当な絶縁体を配設したりするようにしても良い。【００７７】
（スポット）
スポット４は、特定の物質、部位、状態などを特異的に検出し得る核酸分子やタンパク質分子等のプローブを含有しており、担持面５上に縞状に形成される。各スポット４は、それぞれ異なる種類のプローブを含有したものであっても良く、スポットの種類とは、含有するプローブの種類を意味するものとする。マイクロアレイ１に担持するスポット４の種類とその数については、必要に応じて任意に設定することができる。【００７８】
（マイクロアレイ作製方法）
＜作製方法（１−１）＞
図２は、マイクロアレイ１の作製方法（１−１）を概略的に示したフローチャートである。作製方法（１−１）は、図２に示される工程を包含するが、これらの工程の他にも、必要に応じて、例えば、プローブを定着させるための基板修飾や、乾燥・架橋工程などの任意の工程を適宜追加することができる。【００７９】
また、作製方法（１−１）においては、図３に示されるように、含有するプローブの種類（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）がそれぞれ異なる９個のスポット４を担持するマイクロアレイ１を３つ作製する方法を例示して説明する。この場合、マイクロアレイ１は、スポット４を３行３列で担持する。【００８０】
１つのマイクロアレイ１が担持するスポット４の種類と数、及び作製するマイクロアレイ１の数については、これに限定されるものではない。即ち、使用されるプローブの種類数、一体化される短冊状基板２の数、担持面５に担持されるスポット４の数、マイクロアレイ１の作製枚数については、下記に限定されるものではなく、必要に応じて任意に設定することができる。
つまり、スポット４を、Ｎ行Ｍ列で担持するマイクロアレイ１を作製することが可能である。即ち、１つの短冊状基板２の担持面５上にＮ個のスポット４を担持しており、その短冊状基板２をＭ枚使用して一体にすることを意味している。従って、スポット４の数がＮ×Ｍ個となり、担持するスポット４の種類を最大Ｎ×Ｍ種類とすることが可能（Ｎ及びＭは２以上の任意の整数）となる。
スポットの種類と数について、任意のスポット構成をもつマイクロアレイを必要な数だけ作製することができる。【００８１】
１．プローブ溶液調製工程
１つのプローブ群は、複数種類のプローブから構成されている。第１実施形態のマイクロアレイ作製に使用されるプローブ群は３つ（ａ〜ｃ）であり、各プローブ群（ａ〜ｃ）が、それぞれ３種類のプローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）から構成されている。それぞれのプローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）を適当な溶媒（例えば、水等）に含有させて、９つのプローブ溶液（ａ１〜３溶液、ｂ１〜３溶液、ｃ１〜３溶液）を調製する（図示せず）。【００８２】
２．定着工程
図４に示されるように、１つのプローブ群に対応するプローブ溶液（ａ１〜３）が一つの四角形基板６上に塗布される。例えば、１つのプローブ群が、３種類のプローブから構成されているものであれば、一つの四角形基板上には３種類のプローブ溶液が塗布される。
四角形基板６は、スポットを担持し得る担持面５を有しており、四角形基板６を構成し得る材料としては、例えば、ガラス・プラスチック・金属素材等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。担持面５にはあらかじめプローブと結合する官能基を固定しておくこともできる。【００８３】
上記プローブ溶液調製工程にて調製したプローブ溶液（ａ１〜３溶液）について、公知の技術（例えば、インクジェット技術）を使用し、供給ヘッド７からプローブ溶液（ａ１〜３溶液）を吐出することによって、四角形基板６上に、その横方向に沿って線状に塗布すると共に、その線状塗布部１９を縦方向に並設する。その際、線状塗布部の幅（スポットの縦幅４ａに相当し、その大きさは任意に設定することができる）、及び、線状塗布部の厚さ（スポットの層の厚さ４ｃに相当）がそれぞれ同じとなるように、各プローブ溶液（ａ１〜３溶液）を塗布し、プローブを四角形基板６上に定着させる。【００８４】
上述の操作を、別のプローブ群のプローブ溶液（ｂ１〜３溶液、ｃ１〜３溶液）について同様に実施する。尚、本明細書では、便宜的に、図４に示されるように、四角形基板６において複数のプローブ溶液（ａ１〜３溶液）が並列に並ぶ方向を縦方向とし、その縦方向に直行する方向を横方向と規定する。【００８５】
３．切断工程
図３に示されるように、各プローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）を定着させた３つの四角形基板６を、それぞれその縦方向に沿って同じ切断幅で複数列（本実施形態では３列）に切断して、短冊状基板２に切り分ける。このときの切断幅が、スポットの横幅４ｂに相当し、その大きさは任意に設定することができる。各短冊状基板２の担持面上には、３種類（３つ）のスポット４が縞状に担持されている。また、四角形基板６は、予め分離可能に接合された複数の同じ短冊状基板２から構成されたものでも良い。【００８６】
４．一体化工程
次いで、図３に示されるように、それぞれの四角形基板６に由来する短冊状基板２を１つずつ合計３つ取り出して、それら３つの短冊状基板２を、同じ順序に並列に並べて一体にする作業を３回繰り返す。これにより、９種類（９つ）のスポット４を担持した同じマイクロアレイ１を３つ作製することができる。尚、得られた複数の短冊状基板２を一体化する工程は、これに限定されるものではなく、得られた複数の短冊状基板２を任意に組み合わせた任意な並べ方で一体化することができる。
一体化工程は、具体的には、短冊状基板２同士を粘着剤によって接着する、複数の短冊状基板２を束ねてその周縁部を粘着テープで固定して短冊状基板２同士を圧着する、或いは、短冊状基板２同士をボルトによって固定して短冊状基板２同士を圧着する等の手法が例示される。
このとき、各短冊状基板２の接合面に溶液が浸透しないように、各短冊状基板２を密着させる。例えば、上述した圧着する手法によって短冊状基板２同士を一体化する場合、短冊状基板２の接合面にパテ等の隙間充填剤を介在させて、当該接合面に溶液が浸透しないよう構成することが可能である。【００８７】
上述の作製方法では、プローブ溶液調製工程において、一度に９つ全てのプローブ溶液を調製してから、その後の定着工程及び切断工程を実施しているが、この実施方法に限られるものではない。例えば、１つのプローブ群について、プローブ溶液調製工程〜定着工程（又は切断工程）まで実施したのち、別のプローブ群について、プローブ溶液調製工程〜定着工程（又は切断工程）を、それぞれ別の四角形基板を用いて繰り返すように実施しても良い。【００８８】
＜作製方法（１−２）＞
図５は、マイクロアレイ１の作製方法（１−２）を概略的に示したフローチャートである。作製方法（１−２）は、図５に示される工程を包含するが、これらの工程の他にも、必要に応じて、例えば、プローブを定着させるための基板修飾や、乾燥・架橋工程などの任意の工程を適宜追加することができる。
作製方法（１−２）においては、プローブ溶液を調製せず、各プローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）をそれぞれ合成して定着させること（プローブ合成定着工程）以外は全て上記作製方法（１−１）と同様とする。【００８９】
１．プローブ合成定着工程
プローブ合成定着工程においては、図６（ａ）に示される型用基板８を使用する。型用基板８には、横方向に沿った溝部９が、縦方向に所定の間隔にて複数（本実施形態においては３列）設けてある。溝部の縦幅９ａ及び深さ９ｂは任意に設定することができる。９ａはスポットの縦幅４ａに相当する。【００９０】
四角形基板６の担持面５に、合成プローブを担持面５に固定する開始基を修飾しておく。（図示せず）【００９１】
図６（ｂ）に示されるように、型用基板８は、四角形基板６の担持面５上に配置可能であり、溝部９を設けた面を下にして四角形基板６の担持面５上に配置する（即ち、四角形基板６と型用基板８とを、型用基板の溝部９を設けた面が内側に位置するように互いに張り合わせる）ことによって、複数（本実施形態においては３つ）の孔１０を形成し得るように構成されている。尚、このようにして四角形基板６と型用基板８とを張り合わせたものを合板１１と称する。【００９２】
次いで、孔１０の中にプローブ合成液を流し、化学反応を生じさせることによって、孔１０毎にその内部でプローブ（ａ１〜３）をそれぞれ合成して、図６（ｃ）に示されるように、各プローブ（ａ１〜３）を四角形基板６上に、その縦方向に並列に定着させる。尚、逐次反応を用いる場合には必要段数の反応を重ねる。
２．切断工程
型用基板を取り外し、上述の作製方法（１−１）の切断工程と同様に実施する。
３．一体化工程
上述の作製方法（１−１）の一体化工程と同様である。【００９３】
〔第２実施形態〕
図７は、本発明のマイクロアレイの作製方法の第２実施形態を示している。図７（ａ）は、マイクロアレイ１を作製するときの様子を概略的に示した斜視図であり、図７（ｂ）は、図７（ａ）の矢視線Ｘ−Ｘにおける断面図である。【００９４】
マイクロアレイ１は、それぞれ同じ縦幅４ａ、同じ横幅４ｂ、同じ厚さ４ｃを有する複数のスポット４を担持し得る。また、マイクロアレイ１は、単位基板１２を縦方向と横方向とに並べて一体にしたものであり、図７（ｂ）に示されるように、１つの単位基板１２上には、１つのスポット４が担持され得る構成となっている。以下に、その詳細について説明する。【００９５】
（マイクロアレイの構成）
マイクロアレイ１は、複数の単位基板１２を縦方向と横方向とに並べて、その側面同士を適当な粘着剤等を用いて接着、あるいは圧着等して一体にして構成されている。【００９６】
（単位基板）
単位基板１２は、１つのスポット４を担持し得る担持面５を有している。単位基板１２を構成し得る材料としては、例えば、ガラス・プラスチック・金属素材等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、単位基板１２の側面を非透光性の物質でコーティングしたり、あるいは単位基板１２の側面に適当な絶縁体を配設しても良い。【００９７】
（スポット）
スポット４は、特定の物質、部位、状態などを特異的に検出し得る核酸分子やタンパク質分子等のプローブを含有しており、担持面５上に形成される。各スポット４は、それぞれ異なる種類のプローブを含有したものであっても良く、スポットの種類とは、含有するプローブの種類を意味するものとする。マイクロアレイ１に担持するスポット４の種類とその数については、必要に応じて任意に設定することができる。【００９８】
（マイクロアレイ作製方法）
＜作製方法（２−１）＞
マイクロアレイ１の作製方法（２−１）は、短冊状基板２の代わりに単位基板１２を用いて実施すること以外は、上述の作製方法（１−１）とほぼ同様に実施されるため、図２に示される工程を包含する。これらの工程の他にも、必要に応じて、例えば、プローブを定着させるための基板修飾や、乾燥・架橋工程などの任意の工程を適宜追加することができる。【００９９】
また、作製方法（２−１）においては、図８に示されるように、含有するプローブの種類（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）がそれぞれ異なる９個のスポット４を担持するマイクロアレイ１を３つ作製する方法を例示して説明する。この場合、マイクロアレイ１は、スポット４を３行３列で担持する。【０１００】
１つのマイクロアレイ１が担持するスポット４の種類と数、及び作製するマイクロアレイ１の数については、これに限定されるものではない。即ち、使用されるプローブの種類数、一体化される単位基板１２の数、マイクロアレイ１の作製枚数については、下記に限定されるものではなく、必要に応じて任意に設定することができる。
つまり、スポット４を、Ｎ行Ｍ列で担持するマイクロアレイ１を作製することが可能である。即ち、１つのスポット４を担持面５上に担持した単位基板１２を、Ｎ×Ｍ枚使用して一体にすることを意味している。従って、スポット４の数がＮ×Ｍ個となり、担持するスポット４の種類を最大Ｎ×Ｍ種類とすることが可能（Ｎ及びＭは１以上の任意の整数である）となる。
１種類のスポット４から構成されるマイクロアレイ１から、全て違う種類のスポット４から構成されるマイクロアレイ１まで、スポット４の種類と数について、任意のスポット４構成をもつマイクロアレイ１を必要な数だけ作製することができる。【０１０１】
１．プローブ溶液調製工程
上述の作製方法（１−１）のプローブ溶液調製工程と同様である。
２．定着工程
上述の作製方法（１−１）の定着工程と同様である。
３．切断工程
図８に示されるように、各プローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）を定着させた３つの四角形基板６を、それぞれ、その縦方向及び横方向に沿って切断して、９つの単位基板１２に切り分ける。このとき、各スポット４の縦幅４ａと横幅４ｂが全て同じとなるように、縦方向の切断幅（スポット４の横幅４ｂに相当し、その大きさは任意に設定することができる）、及び、横方向の切断幅（スポット４の縦幅４ａに相当し、その大きさは任意に設定することができる）をそろえて切り分ける。
各単位基板１２の担持面上には、１種類のスポット４が担持されている。また、四角形基板６は、予め分離可能に接合された複数の同じ単位基板１２から構成されたものでも良い。
４．一体化工程
次いで、図８に示されるように、それぞれの四角形基板６に由来する単位基板１２を３つずつ合計９つ取り出して、それら９つの単位基板１２を、縦方向と横方向とに同じ順序に並べて一体にする作業を３回繰り返す。これにより、９種類のスポット４を担持した同じマイクロアレイ１を３つ作製することができる。尚、得られた複数の単位基板１２を一体化する工程は、これに限定されるものではなく、得られた複数の単位基板１２を任意に組み合わせた任意な並べ方で一体化することができる。【０１０２】
＜作製方法（２−２）＞
マイクロアレイ１の作製方法（２−２）は、上述の作製方法（１−２）及び（２−１）を組み合わせた作製方法である（図示せず）。【０１０３】
即ち、作製方法（２−２）は、短冊状基板２の代わりに単位基板１２を用いて実施すること以外は、上述の作製方法（１−２）とほぼ同様に実施されるため、図５に示される工程を包含する。尚、図５に示される工程の他にも、必要に応じて、例えば、担持面にプローブと結合する官能基を固定する工程や、乾燥・架橋工程などの任意の工程を適宜追加することができる。【０１０４】
また、作製方法（２−２）においては、プローブ溶液を調製せず、各プローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）をそれぞれ合成して定着させること（プローブ合成定着工程）以外は全て上記作製方法（２−１）と同様であり、プローブ合成定着工程についても上述の作製方法（１−２）のプローブ合成定着工程と同様である。
以上より、作製方法（２−２）は、以下の工程に従って実施される。
１．プローブ合成定着工程
上述の作製方法（１−２）のプローブ合成定着工程と同様である。
２．切断工程
上述の作製方法（２−１）の切断工程と同様である。
３．一体化工程
上述の作製方法（２−１）の一体化工程と同様である。【０１０５】
＜作製方法（２−３）＞
図９は、マイクロアレイ１の作製方法（２−３）を示したものである。
作製方法（２−３）は、図２に示される工程を包含するが、これらの工程の他にも、必要に応じて、例えば、プローブを定着させるための基板修飾や、乾燥・架橋工程などの任意の工程を適宜追加することができる。【０１０６】
また、作製方法（２−３）においては、図９に示されるように、含有するプローブの種類（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）がそれぞれ異なる９個のスポット４を担持するマイクロアレイ１を３つ作製する方法を例示して説明する。この場合、マイクロアレイ１は、スポット４を３行３列で担持する。【０１０７】
１つのマイクロアレイ１が担持するスポット４の種類と数、及び作製するマイクロアレイ１の数については、これに限定されるものではない。即ち、使用されるプローブの種類数、一体化される単位基板１２の数、マイクロアレイ１の作製枚数については、下記に限定されるものではなく、必要に応じて任意に設定することができる。
つまり、スポット４を、Ｎ行Ｍ列で担持するマイクロアレイ１を作製することが可能である。即ち、１つのスポット４を担持面５上に担持した単位基板１２を、Ｎ×Ｍ枚使用して一体にすることを意味している。従って、スポット４の数がＮ×Ｍ個となり、担持するスポット４の種類を最大Ｎ×Ｍ種類とすることが可能（Ｎ及びＭは１以上の任意の整数である）となる。
１種類のスポット４から構成されるマイクロアレイ１から、全て違う種類のスポット４から構成されるマイクロアレイ１まで、スポット４の種類と数について、任意のスポット４構成をもつマイクロアレイ１を必要な数だけ作製することができる。【０１０８】
１．プローブ溶液調製工程
使用されるプローブは９種類（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）であり、各プローブを適当な溶媒（例えば、水等）に含有させて、９つのプローブ溶液（ａ１〜３溶液、ｂ１〜３溶液、ｃ１〜３溶液）を調製する（図示せず）。
２．定着工程
１種類のプローブ溶液を、一つの四角形基板６上に塗布する。
四角形基板６は、スポットを担持し得る担持面を有しており、四角形基板６を構成し得る材料としては、例えば、ガラス・プラスチック・金属素材等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
上記プローブ溶液調製工程にて調製した９種類のプローブ溶液（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３溶液）を、それぞれ公知の技術（例えば、インクジェット技術）を使用し、９つの四角形基板６の担持面全体に塗布する。尚、担持面に形成される層の厚さ（スポットの層の厚さ４ｃに相当）がそれぞれ同じとなるように、各プローブ溶液を各四角形基板６上に塗布して定着させる（図示せず）。
３．切断工程
図９に示されるように、各プローブ（ａ１〜３、ｂ１〜３、ｃ１〜３）を定着させた９つの四角形基板６を、その縦方向及び横方向に沿って切断して、それぞれ９つの単位基板１２に切り分ける。このとき、各スポット４の横幅と縦幅が全て同じとなるように、縦方向の切断幅（スポット４の横幅４ｂに相当し、その大きさは任意に設定することができる）、及び、横方向の切断幅（スポット４の縦幅４ａに相当し、その大きさは任意に設定することができる）をそろえて切り分ける。
各単位基板１２の担持面上には、１種類のスポット４が担持されている。また、四角形基板６は、予め分離可能に接合された複数の同じ単位基板１２から構成されたものでも良い。
４．一体化工程
次いで、図９に示されるように、それぞれの四角形基板６に由来する単位基板１２を１つずつ合計９つ取り出して、それら９つの単位基板１２を、縦方向と横方向とに同じ順序に並べて一体にする作業を３回繰り返す。これにより、９種類のスポット４を担持した同じマイクロアレイ１を３つ作製することができる。尚、得られた複数の単位基板１２を一体化する工程は、これに限定されるものではなく、得られた複数の単位基板１２を任意に組み合わせた任意な並べ方で一体化することができる。【０１０９】
〔その他の実施形態〕
１．図１０は、上記マイクロアレイ１の作製方法（１−１）及び（２−１）を実施する際に使用される四角形基板６の別形態を示したもので、プローブ溶液には水溶液を用いるものとする。【０１１０】
図１０（ａ）は、四角形基板６の担持面にその横方向に沿って、より親水性の高い領域１３と、より疎水性の高い領域１４とを縦方向に交互に帯状に設けてあり、プローブ溶液をより親水性の高い領域１３に塗布するように構成したものである。
両領域の表面は、たとえば素材面・フッソ樹脂処理面・アルキルシラン処理面・アミノシラン処理面・ポリリジン吸着面・ポリエチレンイミン吸着面などから２種類を選択して適宜修飾して構成される。
尚、領域１３と領域１４においては、上記構成に限定されず、領域１３と領域１４とを、それぞれプローブ溶液に対する親和性の異なる領域に形成し、交互に帯状に設ける構成であれば良い。【０１１１】
図１０（ｂ）は、四角形基板６の担持面に、その横方向に沿った壁部１５を、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、プローブ溶液を隣接する壁部１５どうしの間に塗布するように構成したものである。【０１１２】
図１０（ｃ）は、四角形基板６の担持面に、その横方向に沿った凸部２０を、縦方向に所定の間隔にて複数設けてあり、プローブ溶液を凸部２０上に塗布するように構成したものである。尚、隣接する凸部２０間に形成される溝部分の表面のプローブ溶液親和性を、凸部２０のプローブ溶液親和性より低くなるような処理をすることが望ましい。【０１１３】
２．図１１は、上記マイクロアレイ１の作製方法（１−１）を実施する際に使用される四角形基板６の別形態と、その作製方法を示したものであり、この四角形基板６は、分離可能に接合された複数のガラス製の同じ短冊状基板２から構成されている。【０１１４】
図１１に示されるように、まず、短冊状基板２の表面を、撥水性シランを使用して疎水化処理する。次いでこの短冊状基板２を複数束ねて、四角形基板６を構成する。そして、四角形基板６の担持面５となる面を研磨して撥水性シランを除去して、担持面５となるガラス素材を露出させる。次いで、縦方向に所定の間隔にて、横方向に沿って帯状に表面を保護する処理を行い（マスキング部分１７の形成）、帯状の残部を撥水性シラン処理する。最後にマスキング部分１７を除去し、帯状ガラス面１６にプローブ溶液を塗布する。
疎水化された部分と、帯状ガラス面１６とでは親水性が異なるので、プローブ溶液は、帯状ガラス面１６に留まり、四角形基板６上に並列に塗布された各プローブ溶液は互いに混合することはなく、プローブ溶液や各種測定試薬等が隣接する短冊状基板２間に浸透することもない。
尚、使用する短冊状基板の数や、担持面に設ける帯状ガラス面１６の数などについては、図１１に記載される構成に限定されるものではなく、必要に応じて任意の数を設定することが可能である。
また、帯状ガラス面１６と疎水化された部分とを交互に設ける上述の構成に限定されるのではなく、プローブ溶液を塗布する領域と塗布されない領域とを、それぞれ親和性の異なる領域に形成し、交互に帯状に設ける構成であれば良い。【０１１５】
３．上記実施形態においては、複数の短冊状基板２や、単位基板１２を並べて、その側面同士を適当な粘着剤等を用いて接着、あるいは圧着等して一体にする構成が記載されている。しかし、これに限定されるものではなく、複数の短冊状基板２や、単位基板１２を内部に嵌め込んで収容し得る枠体によって一体にするような構成であっても良い。
尚、複数の仕切りが設けてられている枠体において、隣接する仕切り間に短冊状基板２や、単位基板１２を嵌め込んで収容して一体化するような構成である場合は、その仕切りは、非透光性の部材や、絶縁性のある部材等で構成するようにしても良い。
【実施例】
【０１１６】
以下に記載する実施例は、例示用に、小規模にマイクロアレイを製作する例を示すもので、この実施例における記載は、プローブの数、種類、マイクロアレイの構成材料、寸法諸元、表面処理方法、用途、プローブ印字機器などに関しても本発明の趣意を制約するものではない。【０１１７】
（実施例１）
プローブ溶液を親和性の高い領域に塗布してトランスフェクションマイクロアレイを製作した。【０１１８】
（基板素材（短冊状基板））
厚さ０．９ｍｍ、７６ｍｍ×２６ｍｍのスライドグラス（松浪硝子工業株式会社製）３２枚の０．９ｍｍ×７６ｍｍ側の端面を研削して平面とし、アセトンおよびヘキサンで表面を洗浄したのち乾燥して以降の工程に供した。【０１１９】
（表面処理液（アルキルシラン処理液））
２５℃で、精製水９９ｇ、エタノール６８ｇおよび酢酸１．７ｇを混合した溶液を調製し、マグネチックスターラーで強く攪拌した。液中にデシルトリメトキシシラン（商品名ＫＢＭ−３１０３Ｃ  信越化学工業株式会社製）１．７ｇを攪拌中の液が透明性を保つ速度で徐々に滴下した。さらに４５分攪拌を続けてデシルトリメトキシシラン処理液を調製した。【０１２０】
（表面処理）
調製したデシルトリメトキシシラン処理液中に、上記スライドグラス３２枚を３０分間浸漬し、表面のアルキル化を行った。次いでスライドグラスを処理液から引き上げ、乾燥し、乾燥機中に１００℃で１２時間保って処理表面の熟成を進めた。【０１２１】
次いで、３２枚の前記スライドグラスの研削した端面を揃えるようにして束ねて固定し、四角形基板を形成した。基板のプローブ担持面を研磨して担持面のデシルトリメトキシシラン処理部分を除き、ガラス素材面を得た。これを精製水とアセトンで洗浄して乾燥した。担持面の中央部分に縦方向に４５０μｍの間隔で、横方向に沿って幅４５０μｍ６６列の帯状の保護印刷面をシルクスクリーン印刷で形成した（マスキング部分を形成）。
印刷インキには、インキの乾燥後、上記シラン処理液には難溶解で、酢酸エチル溶媒に容易に溶解して除去できる孔版インキ（理想ハイメッシュインク、理想科学工業株式会社製）を用いた。乾燥した担持面をさらに上記シラン処理液に浸漬し、先と同様にして帯状の非マスキング表面をアルキル化した。
次いで帯状のマスキング部分を酢酸エチルで溶解して除去したのち、充分に水洗して乾燥した。
担持面に２種の親水性の異なる領域（４５０μｍ幅のアルキル化領域および４５０μｍ幅のガラス面領域）が６６対設けられた短冊状基板３２枚が得られた。この３２枚の短冊状基板を２分して１６枚の短冊状基板を束ねて構成される二組の四角形基板として、定着以降の工程に供した。【０１２２】
（プローブ溶液調製工程）
ｐＥＧＦＰ−Ｎ１（ＧＦＰ発現ベクター、濃度１ｍｇ／ｍＬ）１．５μＬ、リポフェクタミン２０００（インビトロジェン株式会社）４．０μＬ、フィブロネクチン（４ｍｇ／ｍＬ）５．０μＬを混合し、さらに全量が２５μＬになるようにＤＭＤＥ培地で稀釈して、プローブ溶液１とした。同様にして、ＤｓＲｅｄ発現ベクターを用いたプローブ溶液２を作製した。【０１２３】
（定着工程）
上述の親水性の異なる２つの領域を、その担持面の縦方向に交互に設けてある一組の四角形基板を実験用ＸＹテーブルに載せ、四角形基板の横方向（１６枚の短冊状基板が束ねられている方向）をＸ方向にして固定する。
ＸＹテーブルの上方にピペットチップを装着した生化学用ピペット（ピペットマンＰ２、ギルソン社）を配置し、チップからプローブ溶液を排出しながらテーブルをＸ方向（横方向）に移動することで四角形基板のガラス面領域に線描ができるように設定した。
ピペットにプローブ溶液１の０．７μＬを吸引し、上記位置に固定した。四角形基板上の左端のガラス面領域をピペットチップの下端に合わせ、テーブルをＸ方向に移動するのと同時にプローブ溶液を吐出して第一線を描いた。
四角形基板を９００μｍ（１ピッチ分）Ｙ方向（縦方向）に移動して同様にしてプローブ溶液２で第二線を描いた。
さらに同様にしてプローブ溶液１、２を交互に合計６６本のプローブ溶液の線を描き、四角形基板上にプローブを定着させた。第二組の四角形基板についても、第一線をプローブ溶液２、第二線をプローブ溶液１とする他は第一組と同様にして６６本のプローブ溶液の線を描きプローブを定着させた。【０１２４】
（一体化工程）
次いで、２組の上記四角形基板を解体し、第一組、第二組の四角形基板に由来する短冊状基板を１枚ずつ交互に１６枚重ねて一体にすることで、二種類合計１０５６個（＝６６×１６）のスポットを市松状に交互に担持した、同等のマイクロアレイ二個を作製した。マイクロアレイのスポット密度は、１０５６個／９５０（＝１６×０．９×６６）ｍｍ２であった。【０１２５】
作製されたマイクロアレイは、トランスフェクションマイクロアレイに関する既知の方法（吉川智啓ほか、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｏｎ−ｃｈｉｐ  ｓｉＲＮＡ  ｇｅｎｅ  ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９６（２００４）２２７−２３２）に従ってトランスフェクション実験に供し、各スポットの蛍光発光を観察した。【０１２６】
（実施例２）
凸部を有する短冊状基板を用いて、トランスフェクションマイクロアレイを製作した。レポータープラスミドにはｐＥＧＦＰ−Ｎ１，ｐｄ２ＥＧＦＰ−Ｎ１，ｐＨｃＲｅｄ，ｐＤｓＲｅｄを用いた。アレイ上の試薬パターンは、トランスフェクション後の観察で各々のレポーターが市松状に発現するように配列した。【０１２７】
（基板素材（短冊状基板））
厚さ０．９ｍｍのスライドグラス（ＭＡＴＳＵＮＡＭＩ  ＭｉｃｒｏＳｌｉｄｅ  Ｇｌａｓｓ  Ｓ−７２１３）を実施例１と同じ方法で表面処理した後、５０ｍｍ×５ｍｍの短冊状に切断し、長辺の端面に５００μｍピッチで、深さ３００μｍの溝４０本を回転歯切削で加工した。【０１２８】
上記加工によって得られたガラス板を洗浄し、次いで溝切削を施した面をポリ−Ｌ−リジン化（ＰＬＬ化）した。ＰＬＬ化には０．０１％ＰＬＬ水溶液（ＳＩＧＭＡ  Ｐｏｌｙ−Ｌ−Ｌｙｓｉｎｅ  Ｐ４８３２）に常温で１０分浸漬して処理する方法を用いた。
上記基板を１６枚隣接して並べて端部を固定して、印字定着用基材とした。固定には以降に記載する細胞培養に影響がないことを前以て確認したアルミ箔材接着テープを用いた。印字定着用基材のアレイ面に構成される切削溝に挟まれた線状の凸部を試薬印字位置とした。【０１２９】
（プローブ溶液調製工程）
４種類のレポーター溶液を、実施例１の方法にならって調製して、プローブ溶液とした。【０１３０】
（定着工程）
印字定着用基板のプローブパターンは、製品アレイのパターンに対応して設定した。印字定着用基板を移動台の上に固定した。台の移動する方向をアレイ表面の印字線方向に一致させた。ピペットを基材に垂直に固定して試薬を２．５μＬ定量し、次いで基材の凸部を吐出チップの下方約０．５ｍｍに移動し、試薬を吐出するのと同期して基材を印字線方向に移動することで、基材の凸部に試薬を線状に印字した。吐出された試薬は凸部線上に均等に広がり一様に乾燥する様子が観察された。チップは一本の試薬線を印字するたびに交換して、印字に係わる洗浄を省略した。【０１３１】
（一体化工程）
印字を終了して乾燥させた４種の印字定着用基板を分解して、各々の短冊状基板を順次揃えて１６枚一組の市松模様を呈するアレイを組み立てた。スポットを有しないガラス側板（５０ｍｍ×５ｍｍ×０．９ｍｍ）２枚を保護板として加えて、外形５０ｍｍ×１８ｍｍ×５ｍｍ、スポット数６２４を有する製品アレイを作製した。
作製されたマイクロアレイは、トランスフェクションマイクロアレイに関する既知の方法（吉川智啓ほか、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｏｎ−ｃｈｉｐ  ｓｉＲＮＡ  ｇｅｎｅ  ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ９６（２００４）２２７−２３２）に従ってＨｅＬａ細胞へのトランスフェクション実験に供し、各スポットの蛍光発光を観察した。
【産業上の利用可能性】
【０１３２】
本発明は、プローブを含有するスポットを複数担持し得るマイクロアレイの作製方法に利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１３３】
【図１】本発明のマイクロアレイの作製方法の第１実施形態を模式的に示した斜視図
【図２】マイクロアレイの作製方法（１−１）、（２−１）、及び（２−３）を概略的に示したフローチャート
【図３】マイクロアレイの作製方法（１−１）及び（１−２）における切断工程及び一体化工程を模式的に示した図
【図４】マイクロアレイの作製方法（１−１）及び（２−１）における定着工程を模式的に示した図
【図５】マイクロアレイの作製方法（１−２）及び（２−２）を概略的に示したフローチャート
【図６】マイクロアレイの作製方法（１−２）及び（２−２）におけるプローブ合成定着工程を模式的に示した図
【図７】本発明のマイクロアレイの作製方法の第２実施形態を模式的に示した斜視図
【図８】マイクロアレイの作製方法（２−１）及び（２−２）における切断工程及び一体化工程を模式的に示した図
【図９】マイクロアレイの作製方法（２−３）における切断工程及び一体化工程を模式的に示した図
【図１０】マイクロアレイの作製方法（１−１）及び（２−１）を実施する際に使用される四角形基板の別形態を模式的に示した斜視図
【図１１】マイクロアレイ作製方法（１−１）を実施する際に使用される四角形基板の別形態と、その作製方法を模式的に示した図
【図１２】従来のマイクロアレイを模式的に示した斜視図
【符号の説明】
【０１３４】
１  マイクロアレイ
２  短冊状基板
４  スポット
４ａ  縦幅
４ｂ  横幅
４ｃ  厚さ
５  担持面
６  四角形基板
７  供給ヘッド
８  型用基板
９  溝部
９ａ  溝部縦幅
９ｂ  溝部深さ
１０  孔
１１  合板
１２  単位基板
１５  壁部
１６  帯状ガラス面
１７  マスキング部分
１８  基板
１９  線状塗布部
２０  凸部
【図１】
2007145228.tif 000003
【図２】
2007145228.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2007145228.tif 000008
【図７】
2007145228.tif 000009
【図８】
2007145228.tif 000010
【図９】
2007145228.tif 000011
【図１０】
2007145228.tif 000012
【図１１】
2007145228.tif 000013
【図１２】
2007145228.tif 000014
【国際調査報告】
2007145228.tif 000015
2007145228.tif 000016
2007145228.tif 000017
2007145228.tif 000018
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