(57)【要約】  本発明は、光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬からなる光線力学的療法のためのキット、光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬を含む光線力学的療法のための医薬、血管拡張性麻酔薬からなる光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬からなる、光線力学的療法のためのキット。
【請求項２】
光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、請求項１又は２に記載のキット。
【請求項４】
光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬を含む、光線力学的療法のための医薬。
【請求項５】
光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、請求項４又は５に記載の医薬。
【請求項７】
血管拡張性麻酔薬からなる、光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤。
【請求項８】
光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、請求項７に記載の癌細胞壊死作用増強剤。
【請求項９】
血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、請求項７又は８に記載の癌細胞壊死作用増強剤。
【請求項１０】
光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤の製造のための血管拡張性麻酔薬の使用。
【請求項１１】
光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、請求項１０又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬の有効量を哺乳動物に投与し、その後に光を照射することを含む、癌の治療方法。
【請求項１４】
光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、請求項１３に記載の癌の治療方法。
【請求項１５】
血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、請求項１３又は１４に記載の癌の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光線力学的療法（Photodynamic Therapy：ＰＤＴ）用キット、光線力学的療法用剤及び光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
光線力学的療法とは、薬剤と光によって引き起こされる光化学反応を利用した治療法であり、癌組織中に活性酸素を生成させることによって、癌組織を壊死させるものである。【０００３】
具体的には、癌親和性光感受性薬剤を投与し、当該薬剤を癌組織に選択的に蓄積させ、蓄積された癌組織に特定波長の光を照射することによって光化学反応を起こさせ、標的組織中に活性酸素やラジカルを生成させ、癌細胞を壊死させて癌等の疾患を治療しようとするものである。【０００４】
これらの光感受性薬剤としてはポルフィリン骨格を有する化合物が知られており、これらの化合物は、波長が６３５nm付近の光の照射により１重項基底状態から励起３重項状態となり、活性酸素を生成することにより癌細胞を壊死させる。【０００５】
実際にこのような治療に用いられる光線力学的療法用剤としては、フォトフリン（（登録商標）武田薬品工業）が知られている。【０００６】
フォトフリンは、ヘマトポリフィンがエーテル及びエステル結合したオリゴマー（２−８量体）である。しかし、このフォトフリンを投与された患者は、フォトフリンが患者の体内から排出されるまでに長期間を要するので、フォトフリン処置患者は、フォトフリンが患者の体内から排出されるまでのすくなくとも１ヶ月間は、直射日光などの強い光を浴びることができず、光の少ない場所で過ごさなければならない。【０００７】
また、コプロポルフィリンＩＩＩ亜鉛が細菌によって産生されること及びコプロポルフィリンＩＩＩ亜鉛が光感受性を有すること、光線照射により活性酸素を生じること、そして癌細胞に対する毒性効果がヘマトポルフィリンに比べて優れていることが見出された（特許文献１）。【０００８】
さらに、胎児の便中からコプロポルフィリンＩ亜鉛が見出され、その光感受性やＰＤＴにおける効果が確認されている（特願２００５−００８３４１）。【０００９】
しかし、ＰＤＴ用光感受性薬剤の光感受性から、より低用量での処置が望まれていた。【００１０】
【特許文献１】特開平０５−２２９９４８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、新規な光感受性化合物、その製造方法及びそれを含む光線力学的治療用剤を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者等は、上記の目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、光線力学的療法用剤を血管拡張性麻酔薬と併用することによって光線力学的療法用剤の癌細胞壊死効果が増強されることを見出し、本発明を完成するに至った。【００１３】
したがって、本発明は、下記のとおりである。
１．光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬からなる、光線力学的療法のためのキット、
２．光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、上記１に記載のキット、
３．血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、上記１又は２に記載のキット、
４．光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬を含む、光線力学的療法のための医薬、
５．光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、上記４に記載の医薬、
６．血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、上記４又は５に記載の医薬、
７．血管拡張性麻酔薬からなる、光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤、
８．光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、上記７に記載の癌細胞壊死作用増強剤、
９．血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、上記７又は８に記載の癌細胞壊死作用増強剤、
１０．光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤の製造のための血管拡張性麻酔薬の使用、
１１．光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、上記１０に記載の使用、
１２．血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、上記１０又は１１に記載の使用、
１３．光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬の有効量を哺乳動物に投与し、その後に光を照射することを含む、癌の治療方法、
１４．光線力学的療法用剤が、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンである、上記１３に記載の癌の治療方法、
１５．血管拡張性麻酔薬が、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体又は血管拡張性プロスタグランジンである、上記１３又は１４に記載の癌の治療方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明は、光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用を増強することができ、その結果、光線力学的療法用剤の投与量を低減することができるという効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、光線力学的療法に対する血管拡張性麻酔薬（リドカインゼリー及びリドカインスプレー）の効果である。縦軸は、壊死深度（mm）であり、横軸は、ZnCP-I投与量である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
光線力学的療法（ＰＤＴ）とは、薬剤と光によって引き起こされる光化学反応を利用した治療法であり、癌組織中に活性酸素を生成させることによって、癌組織を壊死させるものである。【００１７】
本発明の光線力学的療法用剤としては、光線力学的療法に用いることができる任意の薬剤を用いることができるが、好ましくは、コプロポルフィリン−Ｉ、コプロポルフィリン−ＩＩＩ、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛、コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛、フォトフリン、レザフリン又は５−ＡＬＡ（アミノレヴリン酸）であり、より好ましくは、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛である。本発明の光線力学的療法用剤は、上記化合物の医薬的に許容されるその塩を含む。【００１８】
コプロポルフィリン−Ｉ及びコプロポルフィリン−ＩＩＩは、フナコシから、フォトフリンは、武田薬品工業から、レザフリンは、明治製菓から、そして５−ＡＬＡはコスモバイオから入手することができる。また、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛及びコプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛又はフォトフリンは、下記の方法によって調製することができる。【００１９】
出発物質であるコプロポルフィリン−Ｉをブタノールに溶解し、得られたブタノール溶液を、酢酸アンモニウム塩水溶液を用いて分別抽出し、コプロポルフィリン−Ｉを含む酢酸アンモニウム塩水溶液を得る。得られたコプロポルフィリン−Ｉ化合物を含む酢酸アンモニウム塩水溶液に塩化亜鉛水溶液を加えることによって、コプロポルフィリン−Ｉ亜鉛を得ることができる。コプロポルフィリン−ＩＩＩ亜鉛についても、同様な方法を用いることによって、調製することができる。なお、上記の操作は、遮光環境で行うことが好ましい。【００２０】
本発明の血管拡張性麻酔剤としては、従来公知の任意の血管拡張性麻酔剤を用いることができるが、好ましくは、リドカイン、ブピバカイン、ＮＯ誘導体（ニトログリセリンなど）又は血管拡張性プロスタグランジンである。これらは、すべて医薬品として市販されている。【００２１】
本発明の光線力学的療法用剤をヒトに投与する場合には、例えば、１回あたり０．１〜１００mg／kg（体重）、好ましくは１回あたり１〜１００mg／kg（体重）、より好ましくは１日あたり１〜５０mg／kg（体重）の投与量で投与することができる。本発明の光線力学的療法用剤の投与量、投与回数及び投与経路は、疾患の種類、症状、年齢、投与方法などにより適宜変更することができる。【００２２】
本発明の血管拡張性麻酔剤をヒトに投与する場合には、例えば、１回あたり１〜１００mg／kg（体重）、好ましくは１回あたり１〜１００mg／kg（体重）、より好ましくは１回あたり１〜５０mg／kg（体重）の投与量で投与することができる。本発明の光線力学的療法用剤の投与量、投与回数及び投与経路は、疾患の種類、症状、年齢、投与方法などにより適宜変更することができる。【００２３】
本発明の光線力学的療法のためのキットは、第一成分として光線力学的療法用剤を、そして第二成分として血管拡張性麻酔薬をそれぞれ独立して含む。また、このキットは、投与量、投与回数及び投与経路等を記載した指示書を含むことができる。【００２４】
本発明の医薬は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などの製剤にして、経口投与してもよいし、注射剤などの製剤にして、腹腔内や静脈内へ注射する、あるいは坐剤などの製剤にして直腸内投与するような態様で非経口投与することもできる。光線力学的療法用剤及び血管拡張性麻酔薬の含有率は、１〜９０重量％の間で変動させることができる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤などの形態をとる場合には、有効成分を５〜８０重量％含有させるのが好ましい。シロップ剤などの液剤の場合には、有効成分を１〜３０重量％含有させるのが好ましい。さらに、非経口投与する注射剤の場合には、有効成分を１〜１０重量％含有させるのが好ましい。【００２５】
本発明の医薬の製剤化は、賦形剤（乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトールなどの糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシなどのデンプン、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウムなどの無機物、結晶セルロースなど）、結合剤（デンプンのり液、アラビアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースなど）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコーン油）、崩壊剤（デンプン、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、ＣＭＣ・Ｎａ、ＣＭＣ・Ｃａ、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウムなど）、矯味矯臭剤 （乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニトール、芳香性精油類など）、溶剤（注射用水、滅菌精製水、ゴマ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油など）、安定剤（窒素、二酸化炭素などの不活性ガス、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸などのキレート剤、亜硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸、ロンガリットなどの還元物質など）、保存剤（パラオキシ安息香酸エステル、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェノール、塩化ベンザルコニウムなど）、界面活性剤（水素添加ヒマシ油、ポリソルベート８０、２０など）、緩衝剤（クエン酸、酢酸、リン酸のナトリウム塩、ホウ酸など）、希釈剤などの製剤添加物を用いて、公知の方法で行うことができる。【００２６】
本発明の血管拡張性麻酔剤は、光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤の製造のために用いることができる。【００２７】
本発明の光線力学的療法用剤は、そのもの自身では、抗細胞活性を示さないが、光照射下において、高い抗細胞活性を示す。したがって、これらの化合物を全身に投与した後、癌組織だけに光照射を行うことで、癌組織を選択的に死滅させ、癌を副作用なく治療することができる。従って、これらの化合物は、光線力学的療法剤として、表存型の癌（例えば、胃癌、肺癌、皮膚癌、食道癌）のみならず、深部型の癌（例えば、乳癌）の治療に用いることができる。
【実施例１】
【００２８】
以下、本発明を実施例および比較例によって具体的に説明する。なお、これらの実施例は、本発明を説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。【００２９】
１．光線力学的療法用キット【００３０】
実験方法
（ＢＡＬＢ／ｃ）ヌードマウスの背部皮内に、ＨｅＬａ細胞５×１０６個／０．ｌmlを移植した。直径が１２〜１７mmに増殖した腫瘍に対し、亜鉛化コプロポルフィリンＩ／生理食塩水を局所注射し、次いで血管拡張性麻酔薬（リドカイン、塩酸リドカイン、塩酸ブピバカイン）又は麻酔薬ロピバカインを投与した。所定時間経過後に１６０mW/cm2、全照射量１００J/cm2で、ハロゲンランプとフィルターを用い、５８０nmの光を照射した。光は、腫瘍の横から水平方向に照射した。壊死層の観察は、ハロゲン光照射２４時間後に、腫瘍を摘出し、２０％のホルマリンで固定し、パラフィン包埋後、切片を作成、ＨＥ染色し、標本を作成し、観察した。【００３１】
実験結果
（１）ZnCP-I／0.125%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
（投与後時間とは、投与から照射までの時間をいう。）
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
9.2       0.02                      13        3.25
9.5       0.02                      12        7.13
15.3       0.01                      12        7.64
（２）ZnCP-I／0.25%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
4.6       0.02                      11        5.78
10.1       0.02                      11        9.63
（３）ZnCP-I／0.5%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
4.7       0.02                      11        0.00
6.2       0.02                      13        2.27
18.8       0.02                      14        7.04
（４）ZnCP-I／0.5%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
5.2       0.02                      10        0.00
9.8       0.02                      11        6.99
（５）ZnCP-I／1.0%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
5.1       0.02                      12        0.00
5.9       0.02                      10        0.00
（６）ZnCP-I／2.0%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
5.1       0.02                      10        0.00
8.0       0.015                     12        1.09
19.1       0.015                     11        7.17
（７）ZnCP-I／0.2%ロピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      ロピバカイン            投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
27.9       0.02                      10        4.42
【実施例２】
【００３２】
２．光線力学的療法用剤
実験方法
（ＢＡＬＢ／ｃ）ヌードマウスの背部皮内に、ＨｅＬａ細胞５×１０６個／０．ｌmlを移植した。直径が１２〜１７mmに増殖した腫瘍に対し、亜鉛化コプロポルフィリンＩ／生理食塩水と血管拡張性麻酔薬（リドカイン、塩酸リドカイン、塩酸ブピバカイン）の１：１の混合液を投与した。所定時間経過後に１６０mW/cm2、全照射量１００J/cm2で、ハロゲンランプとフィルターを用い、５８０nmの光を照射した。光は、腫瘍の横から水平方向に照射した。壊死層の観察は、ハロゲン光照射２４時間後に、腫瘍を摘出し、２０％のホルマリンで固定し、パラフィン包埋後、切片を作成、ＨＥ染色し、標本を作成し、観察した。【００３３】
実験結果
（１）ZnCP-I／0.125%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
3.7       0.0075                     12        4.09
12.3       0.025                      12        8.14
（２）ZnCP-I／0.25%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
2.5       0.005                      12        3.52
4.2       0.01                       14        3.22
6.9       0.015                      16        6.45
12.5       0.025                      10        5.86
（３）ZnCP-I／0.5%塩酸ブピバカイン（局所注射）
ZnCP-I      塩酸ブピバカイン        投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
2.6       0.005                      11        2.31
5.1       0.01                       11        0.89
12.6       0.025                      15        3.34
13.3       0.03                       12        7.35
（４）ZnCP-I／0.5%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
2.4       0.005                      11        2.67
8.1       0.015                      10       10.08
32.7       0.07                       11       11.57
（５）ZnCP-I／1.0%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
3.6       0.0075                    11        4.08
20.9       0.04                      11        4.69
26.6       0.055                     12        5.59
30.7       0.07                      14        9.00
（６）ZnCP-I／2.0%リドカイン（局所注射）
ZnCP-I      リドカイン              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)     (ml)                    (min)        (mm)
13.0       0.025                     13        4.43
16.5       0.03                      11        4.67
23.1       0.05                      12        5.60
（７）ZnCP-Iのみ
ZnCP-I                              投与後時間  細胞壊死深度
(mg/kg)                             (min)        (mm)
4.42                                10        0.00
5.1                                 14        0.00
10.1                                 10        0.67
10.2                                 10        5.77
11.2                                 11        2.97
17.3                                 10        5.25
50.8                                 13        5.78【００３４】
所見
ＨｅＬａ腫瘍にＺｎＣＰ−Ｉ／血管拡張性薬剤混合溶液を局注し、可視光を照射した結果、毛細血管内に血栓が見られ、組織内出血も見られた。ＨｅＬａ細胞に関しては、核がない細胞、クロマチンが凝集した細胞、空胞破壊を生じた細胞等が見られ、壊死したとみられた。血管拡張性薬剤薬量依存的に、細胞壊死深度は著明に深くなっていた。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の光線力学的療法用キット、光線力学的療法用剤及び光線力学的療法用剤の癌細胞壊死作用増強剤は、光線力学的治療に有用である。
【図１】
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【国際調査報告】
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