(57)【要約】  本発明の目的は、肝障害抑制剤、アルコール性肝障害抑制剤等を提供することにある。  本発明によれば、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有する肝障害抑制剤を提供することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有する肝障害抑制剤。
【請求項２】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有するアルコール性肝障害抑制剤。
【請求項３】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である請求項１または２記載の剤。
【請求項４】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、肝障害抑制方法。
【請求項５】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、アルコール性肝障害抑制方法。
【請求項６】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である請求項４または５記載の方法。
【請求項７】
肝障害抑制剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の使用。
【請求項８】
アルコール性肝障害抑制剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の使用。
【請求項９】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である請求項７または８記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有する、肝障害抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肝臓は、3大栄養素である糖質、タンパク質、脂質の代謝調節・貯蔵を行ったり、生体にとって不要な物質を分解・解毒したり等の種々の機能を担っている重要な臓器である。これら機能は、アルコールの過剰摂取、ウイルス感染、乱れた食習慣、ストレス、喫煙等により急性的あるいは慢性的に障害を受けるが、該障害が進行すると、例えば急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化症、アルコール性脂肪肝、Ｂ型ウイルス肝炎、肝臓癌などの疾患となる。【０００３】
肝細胞がウイルス、アルコールなどで障害を受けると、細胞中のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（グルタミン酸−オキサロ酢酸トランスアミナーゼともいう。以下ＧＯＴと略記する。）やアラニンアミノトランスフェラーゼ（グルタミン酸−ピルビン酸トランスアミナーゼともいう。以下、ＧＰＴと略記する。）などの酵素が血液中に出てくるため、これらの酵素活性を示す数値が上昇する。従って、血液中のこれらＧＯＴやＧＰＴ活性は、肝臓の機能障害を示す指標として知られている。【０００４】
肝機能障害の予防または治療に使用される薬剤としては、例えばアシクロビル等の抗ウイルス剤、免疫抑制剤（非特許文献１参照）、グルタチオン（非特許文献２参照）等が知られている。
また、四塩化炭素で誘導した肝障害がＬ-プロリンの投与によって抑制されること（特許文献１参照）、ガラクトサミンで誘導した肝障害がＬ-プロリンの投与によって抑制されること（特許文献２参照）が知られている。プロリンについては、摂取によってアルコール性肝障害が予防されるとされているが（特許文献３参照）、試験例では血清ＧＰＴの上昇抑制は示されておらず、むしろ血中エタノール濃度の上昇を促進する結果となっている。【０００５】
また、ヒドロキシプロリンのアミノ基とα-アミノ酸化合物のカルボキシル基を縮合させたヒドロキシプロリン誘導体が、四塩化炭素またはα-ナフチルイソチオシアネート（α-naphthylisothiocyanate）で誘導した肝障害を抑制することは知られている（特許文献４参照）。
しかし、ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのアミノ基と脂肪酸のカルボキ
シル基を縮合させたＮ−アシル体が肝機能に及ぼす効果については知られていない。
【特許文献１】特開平１０−２９８０７５号公報
【特許文献２】特開平８−２０８４７２号公報
【特許文献３】特開平６−１１６１４４号公報
【特許文献４】特開平１１−２１２９５号公報
【非特許文献１】「医学のあゆみ」、医歯薬出版、１９９４年、第１７１巻、第１４号、ｐ．９５７〜１１５８
【非特許文献２】「蛋白質核酸酵素」、共立出版、１９８８年、第３３巻、第９号、ｐ．１６２５〜１６３１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、肝障害抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下（１）〜（９）に関する。
（１）ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有する肝障害抑制剤。
（２）ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有するアルコール性肝障害抑制剤。
（３）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ
−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である上記（１）または（２）の剤。
（４）ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の有効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、肝障害抑制方法。
（５）ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の有
効量を、必要とする対象に投与することを特徴とする、アルコール性肝障害抑制方法。
（６）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ
−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である上記（４）または（５）の方法。
（７）肝障害抑制剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩の使用。
（８）アルコール性肝障害抑制剤の製造のための、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキ
シプロリンのＮ−アシル体またはその塩の使用。
（９）ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が、Ｎ−アセチル体、Ｎ−プロピオニル体、Ｎ
−ブチリル体またはＮ−イソブチリル体である上記（７）または（８）の使用。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、安全で効果的な肝障害抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】図１は、ヒドロキシプロリン及びアセチルヒドロキシプロリンによるアルコール性肝障害抑制効果を示す図である。第1群はコーンスターチ添加飼料、第２群はL-プロリン添加飼料、第３群はL-ヒドロキシプロリン添加飼料、第４群はアセチルヒドロキシプロリン添加飼料をそれぞれ投与した試験群を示す。グラフの縦軸は、第１群の血中ＧＰＴ濃度を１００とした場合の各群の血中ＧＰＴ濃度の相対値（平均値±標準偏差）を表す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で用いられるヒドロキシプロリンは、いずれのヒドロキシプロリンの立体異性体であってもよい。すなわち、ヒドロキシプロリンのプロリンがＤ体かＬ体か、また水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシスかトランスかによって８種類の立体異性体があるが、いずれの化合物も本発明に用いることができる。【００１１】
具体的なヒドロキシプロリンとしては、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンがあげられる。【００１２】
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸として自然界に広く存在するアミノ酸の一種であり、例えばブタやウシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製することにより製造することができる。
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス（Amycolatopsis）属
またはダクチロスポランジウム（Dactylosporangium）属より単離したプロリン４位水酸
化酵素（特開平７−３１３１７９）を用いて製造することができる。また、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス（Streptomyces）属より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５）を用いて製造することができる（バイオインダストリー, １４巻, ３１号, １９９７年）。【００１３】
上記の微生物由来の酵素を用いて製造されるヒドロキシプロリンは、品質が優れており、本発明で用いるヒドロキシプロリンとしてより好ましい。
本発明で用いられるヒドロキシプロリンのＮ−アシル体としては、上記の各種ヒドロキシプロリンの立体異性体のＮ−アシル体をあげることができる。該Ｎ−アシル体のアシル基としては、直鎖または分岐状の飽和または不飽和のアシル基であればいずれでもよいが、直鎖または分岐状の飽和のアシル基であることが好ましい。アシル基の炭素数としては、炭素数１〜２４が好ましく、炭素数１〜１２がより好ましく、炭素数１〜６が特に好ましい。アシル基としては、例えばホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル等をあげることができ、特にアセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリルが好ましい。【００１４】
本発明で用いられるヒドロキシプロリンのＮ−アシル体は、公知の方法により調製することができる。例えば、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体は、直鎖または分岐状の炭素数１〜２４の飽和または不飽和の脂肪酸を塩化チオニル、ホスゲン等のハロゲン化剤を用いてクロライド、ブロマイド等のハロゲン化物に変換した後、前述のヒドロキシプロリンと縮合させるか、または脂肪酸を酸無水物に変換した後、ヒドロキシプロリンと反応させることにより製造することができる。【００１５】
脂肪酸としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸等の脂肪酸を単独または組合せたものが用いられる。
酸ハロゲン化物を経由するヒドロキシプロリンのＮ−アシル体の製造方法を、以下に例示する。【００１６】
脂肪酸を塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン等の溶媒中に分散し、これに１〜５倍当量のハロゲン化剤を添加して反応させ、脂肪酸ハライドを得る。次に、ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散させ、得られた溶液を５〜７０℃に保ちながら、上記の脂肪酸ハライドをヒドロキシプロリン対して０．３〜３．０倍当量加え、アシル化反応を行うことによりヒドロキシプロリンのＮ−アシル体を製造することができる。【００１７】
アシル化反応に用いられる溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、アセトン、トルエン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等があげられ、これらは単独または混合して用いてもよい。ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散する際、ヒドロキシプロリンに対して０．８〜２．０倍当量の水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ物質を必要に応じて溶媒に溶解または分散させてもよい。【００１８】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体の塩を取得したいとき、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル体が塩の形で得られる場合には、そのまま精製すればよく、遊離の形で得られる場合には、適当な溶媒に溶解または懸濁し、塩基を加えて塩を形成させればよい。
精製は、例えば結晶化、クロマトグラフィー等の通常の方法が用いられる。
具体的なヒドロキシプロリンのＮ−アシル体としては、例えば、Ｎ−アセチル−シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−アセチル−シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−アセチル−シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−アセチル−シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−アセチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−アセチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−アセチル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−アセチル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−プロピオニルトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−プロピオニル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−ブチリル−シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−ブチリル−シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−ブチリル−シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−ブチリル−シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−ブチリル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−ブチリル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−ブチリル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−ブチリル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、Ｎ−イソブチリル−トランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン等をあげることができる。【００１９】
ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体の塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等があげられる。
酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩、オロット酸等の有機酸塩があげられる。【００２０】
金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カ
ルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられる。
アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられ
る。
有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピペリジン等の塩があげられる。【００２１】
アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン
酸等の塩があげられる。
肝障害の抑制とは、肝機能を障害から予防または軽減する作用、障害を受けた肝機能を回復または治癒させる作用等を含む。【００２２】
本発明でいう肝機能とは、肝臓の有する機能をすべて意味しており特に制限はない。具体的な肝機能としては、例えば血液貯蔵（循環量の調整等）、血色素の処理（ヘモグロビンの処理排出等）、胆汁の生成、胆汁色素の腸肝循環、血漿タンパク質（急性期タンパク質、アルブミン、血液凝固因子、ステロイド結合タンパク質、他のホルモン結合タンパク質等）の合成等の血液と循環における機能、栄養素とビタミン（グルコースと他の糖類、アミノ酸、脂質もしくは脂肪酸、コレステロール、リポタンパク、脂溶性ビタミン、水溶性ビタミン等）の代謝等の栄養素の代謝機能、種々の物質（毒素、エストロゲンやアンドロステロンなどのステロイド、他のホルモン等）の不活性化等の解毒または分解機能、および免疫機能等［「生理学展望」、原書１９版（平成１２年３月３１日）、「新しい臨床栄養学」改訂第３版(２０００年５月２０日）］があげられる。これらの肝機能はいずれもアルコールにより障害を受けるものである。【００２３】
本発明の肝障害抑制剤は、既に肝機能に障害を有しているヒトまたは動物に投与することにより、肝機能障害を改善することができる。また本発明の肝障害抑制剤は、肝機能障害が顕在化していないヒトまたは動物に投与することにより、肝機能障害を予防することができる。
本発明の肝障害抑制剤として、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩をそのまま投与することも可能であるが、通常各種の製剤として提供するのが望ましい。【００２４】
製剤は、有効成分としてヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を含有するが、更に任意の他の治療のための有効成分を含有してもよい。また、それら製剤は、有効成分を薬理学的に許容される一種またはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。【００２５】
製剤の投与形態は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口投与または、例えば静脈内、腹膜内もしくは皮下投与等の非経口投与をあげることができるが、経口投与が好ましい。
投与する剤形としては、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、浸剤、煎剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、エリキシル剤、エキス剤、チンキ剤、流エキス剤等の経口剤、注射剤、点滴剤、クリーム剤、坐剤等の非経口剤のいずれでもよいが、経口剤として好適に用いられる。【００２６】
経口剤を製剤化する際には、賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等の添加剤を用いることができる。
経口投与に適当な、例えばシロップ剤のような液体調製物は、水、蔗糖、ソルビット、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を使用して製造できる。
また、錠剤、散剤および顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニット等の賦形剤、澱粉、アルギン酸ソーダ等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニールアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を添加して製剤化することができる。
また、経口投与に適当な製剤には、一般に飲食品に用いられる添加剤、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出等が添加されてもよい。
経口投与に適当な製剤は、そのまま、または例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態のものであってもよい。また、肝障害抑制用の健康食品、機能性食品、栄養補助食品、特定保健用食品等の飲食品として用いてもよい。【００２７】
非経口投与に適当な、例えば注射剤は、好ましくは受容者の血液と等張である、リジンおよびクエン酸を含む滅菌水性剤からなる。例えば、注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩水とブドウ糖溶液の混合物からなる担体等を用いて注射用の溶液を調製する。
また、これら非経口剤においても、経口剤で例示した希釈剤、防腐剤、フレーバー類、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、界面活性剤、可塑剤等から選択される１種またはそれ以上の補助成分を添加することもできる。【００２８】
本発明の製剤中のヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体また
はその塩の濃度は、製剤の種類、当該製剤の投与により期待する効果等に応じて適宜選択されるが、例えば経口剤の場合、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩として、通常は０．１〜９０重量％、好ましくは０．５〜７０重量％、特に好ましくは１〜５０重量％である。
本発明の肝障害抑制剤の投与量は、投与形態、投与される者の年齢、体重等に応じて異なるが、経口投与の場合、成人に対し一日あたりヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩として、通常は１００〜１００００ｍｇ、好ましくは１００〜２０００ｍｇ、特に好ましくは２００〜１０００ｍｇであり、１日に１回または数回に分けて投与する。投与期間は、特に限定はないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ケ月間である。
なお、本発明の経口剤は、ヒトだけでなく、ヒト以外の動物（以下、非ヒト動物と略す）に対しても使用することができる。
非ヒト動物としては、ほ乳類、鳥類、は虫類、両生類、魚類等、ヒト以外の動物をあげることができる。
非ヒト動物に投与する場合の投与量は、動物の年齢、種類等に応じて異なるが、体重１Kg1回当たり、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩として、通常は２〜２０ｍｇ、好ましくは２〜４０ｍｇ、特に好ましくは４〜２０ｍｇとなるように一日一回ないし数回投与する。投与期間は特に限定されないが、通常は１日間〜1年間、好ましくは1週間〜3ヶ月間である。【００２９】
以下に、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体のアルコール
性肝障害抑制効果を調べた試験例を示す。
試験例１
試験には、ＳＤ系雌性ラット（７〜９週齢、体重１５０〜２２０ｇ、日本エスエルシー社より購入）を用いた。飼育条件は、室温２２±２℃、湿度３５±１５％、飼料および水は自由摂取とした。【００３０】
各試験群は６匹のラットで構成し、第１群のラットには市販粉末飼料ＣＥ−２（日本クレア社製）に５重量％のコーンスターチを添加したものを、第２群のラットにはＣＥ−２に５重量％Ｌ-プロリン（協和醗酵工業社製）を添加したものを、第３群のラットにはＣ
Ｅ−２に５重量％のL-ヒドロキシプロリン（協和醗酵工業社製）を添加したものを、第４群のラットにはＣＥ−２に５重量％のアセチルヒドロキシプロリン（協和醗酵工業社製）を添加したものを１３日間与えて飼育した。【００３１】
１４日目に４０％エタノール水溶液を体重あたり４ｇ/ｋｇとなるように経口投与し、その６時間後にリポ多糖（シグマ社製）を体重あたり５ｍｇ/ｋｇとなるように静脈内投与した。リポ多糖投与２２時間後に腹下大動脈より採血し、血中ＧＰＴ濃度を肝障害の指標として測定した。各群の血中ＧＰＴ濃度は、第１群の血中ＧＰＴ濃度を１００とした場合の相対値で表した。なお、血中ＧＰＴ濃度の正常値は５〜２０ＩＵ／Ｌであるのに対して、第１群の血中ＧＰＴ濃度は約３００ＩＵ／Ｌであった。【００３２】
結果を図１に示す。第２群では血中ＧＰＴが第１群と同程度であったのに対して、第３群および第４群では血中ＧＰＴ濃度が低下した。
以上の結果より、プロリンではアルコール性肝障害抑制効果が示されなかったのに対し、ヒドロキシプロリン及びアセチルヒドロキシプロリンによるアルコール性肝障害抑制効果が明らかとなった。【００３３】
以下に、本発明の実施例を示す。
【実施例１】
【００３４】
ヒドロキシプロリンを含む錠剤の製造
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する錠剤を、常法により製造する。すなわち、下記の各成分を均一に混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径５ｍｍ、重量１５ｍｇの錠剤を得る。
【表１】
2007129725.tif 000002
【実施例２】
【００３５】
ヒドロキシプロリンを含有する顆粒剤の製造
実施例１で得られる錠剤を粉砕、製粒し、篩別して２０−５０メッシュの顆粒剤を得る。
【実施例３】
【００３６】
ヒドロキシプロリンを含有するドリンク剤の製造
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有するドリンク剤を、下記の各成分を均一に攪拌溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍｌとすることにより製造する。なお、下記成分中の適量とは、香料、色素に関しては、通常のドリンク剤の製造に用いられる量であり、精製水に関しては、他の成分に加え、全量として１０００ｍｌにするために必要な量のことをいう。
【表２】
2007129725.tif 000003
【実施例４】
【００３７】
Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンを含有する飴の製造
下記の各成分からなるＮ−アセチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する飴を、常法により製造する。
【表３】
2007129725.tif 000004
【実施例５】
【００３８】
ヒドロキシプロリンを含有する動物用配合剤の製造
下記の各成分からなるトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンを含有する動物用配合剤を、常法により製造する。
【表４】
2007129725.tif 000005
【産業上の利用の可能性】
【００３９】
本発明により、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル体またはその塩を有効成分として含有する肝障害抑制剤を提供することができる。
【図１】
2007129725.tif 000006
【国際調査報告】
2007129725.tif 000007
2007129725.tif 000008
2007129725.tif 000009
2007129725.tif 000010
2007129725.tif 000011
2007129725.tif 000012
2007129725.tif 000013