【手続補正書】
【提出日】令和1年8月14日(2019.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子改変を有さない哺乳動物細胞と比較して、低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制を有する、前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞であって、
（ｉ）前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞は、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９５％であるアミノ酸配列を含むヒト白血球抗原−Ｇ（ＨＬＡ−Ｇ）タンパク質をコードする核酸配列；ここで、ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列は、ＨＬＡ−Ｇタンパク質の３３４位アミノ酸としてアラニンを、３３５位アミノ酸としてアラニンをコードする；および
（ｂ）配列番号：３の核酸配列との配列同一性が少なくとも９５％である核酸配列を含む３’非翻訳領域（ＵＴＲ）
を含む、外因性核酸を含み、
（ｉｉ）コードされたＨＬＡ−Ｇタンパク質は、前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞により発現される、遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項２】
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも７週間発現される、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項３】
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも２０週間発現される、請求項２に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項４】
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも５０週間発現される、請求項３に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項５】
前記ＵＴＲは、配列番号：４を含まない、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項６】
延長因子−１アルファ（ＥＦ−１α）プロモーターをさらに含み、前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする前記核酸配列は、作用可能に前記ＥＦ−１αプロモーターに結合する、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項７】
前記ＥＦ−１αプロモーターは、配列番号：６の配列を含む、請求項６に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項８】
前記発現されたＨＬＡ−Ｇが、前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞の細胞表面上に存在する、請求項１に記載の遺伝子改変がされた細胞。
【請求項９】
前記改変がされた哺乳動物細胞は、ヒト細胞である、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１０】
前記遺伝子改変がされた細胞は、幹細胞、前駆細胞、前記幹細胞もしくは前記前駆細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化により得られる細胞、完全に分化した細胞、表皮前駆細胞、膵臓前駆細胞、造血幹細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、肝細胞、間葉系幹細胞、心筋細胞、神経幹細胞、ニューロン、または星状膠細胞である、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１１】
前記遺伝子改変がされた細胞は、ヒト胚性幹細胞、ヒト間葉系幹細胞、ヒト胚性表皮前駆細胞、またはヒト皮膚線維芽細胞である、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１２】
請求項１１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞を含む、皮膚移植、修復、または再生組成物。
【請求項１３】
前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較して、前記遺伝子改変がされた細胞の前記低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制が、（１）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞に対するＮＫ−９２細胞毒性の低減、（２）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ末梢血単核細胞増殖の低減、または（３）ヒト化NOD scid gamma（ＮＳＧ）マウスにおける、前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞による腫瘍形成のサイズおよび重量の増加、のいずれかにより決定される、請求項１に記載の遺伝子改変がされた細胞。
【請求項１４】
請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞を含む人工組織。
【請求項１５】
前記外因性核酸は、発現ベクターである、請求項１に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１６】
前記哺乳動物発現ベクターは、トランスポゾンベクターである、請求項１５に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１７】
前記ベクターは、レポータータンパク質をコードする核酸配列をさらに含む、請求項１５に記載の遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項１８】
必要とする対象に投与される、請求項１に記載の遺伝子改変がされた細胞の集団を含む細胞または組織組成物であって、前記対象に注入され、埋め込まれ、または移植され、前記対象は、前記遺伝子改変がされた細胞の集団と比較して、少なくとも１つのミスマッチ古典的ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩ分子を有し、前記遺伝子改変がされた細胞の集団は、前記遺伝子改変を有さない同じ型の細胞と比較して、低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制を示す、組成物。
【請求項１９】
前記少なくとも１つのミスマッチ古典的ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＲからなる群から選択される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記対象は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＲに関して、前記遺伝子改変がされた細胞とのマッチを有さない、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２１】
前記低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制は、ＮＫ−９２細胞毒性アッセイ、ヒト化ＮＳＧ腫瘍成長アッセイ、および／または末梢血単核細胞増殖アッセイにより決定される、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２２】
前記遺伝子改変がされた細胞の集団は、ヒト皮膚線維芽細胞の集団、ヒト表皮前駆細胞の集団、ヒト胚性幹細胞の集団、またはヒト間葉系幹細胞の集団を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２３】
前記遺伝子改変がされた細胞の集団は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化した遺伝子改変がされたヒト胚性幹細胞を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２４】
前記遺伝子改変がされた細胞の集団は、少なくとも２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、または５２週間、前記対象の免疫系により拒絶されない、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２５】
（ｉ）配列番号：２のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９５％であるアミノ酸配列を含むＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする第１の核酸配列；ここで、ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列は、ＨＬＡ−Ｇタンパク質の３３４位アミノ酸としてアラニンを、３３５位アミノ酸としてアラニンをコードする；および
（ｉｉ）配列番号：３の核酸配列との配列同一性が少なくとも９５％である核酸配列を含む３’ＵＴＲを含む第２の核酸配列
を含む、単離された核酸。
【請求項２６】
前記第２の核酸配列は、配列番号：４を含まない、請求項２５に記載の単離された核酸。
【請求項２７】
請求項２５に記載の単離された核酸および前記第１の核酸配列に作用可能に結合したプロモーターを含む哺乳動物発現ベクターであって、前記プロモーターは、幹細胞内、または前記幹細胞の分化により生成された細胞内でサイレンシングされていない、哺乳動物発現ベクター。
【請求項２８】
前記プロモーターは、チャイニーズハムスターＥＦ−１αプロモーターの核酸配列を含む、請求項２７に記載の哺乳動物発現ベクター。
【請求項２９】
レポータータンパク質をコードする第３の核酸配列をさらに含む、請求項２７に記載の哺乳動物発現ベクター。
【請求項３０】
前記哺乳動物発現ベクターは、トランスポゾンベクターである、請求項２７に記載の哺乳動物発現ベクター。
【請求項３１】
（ａ）チャイニーズハムスターＥＦ−１αプロモーター；
（ｂ）前記プロモーターに作用可能に結合し、配列番号：２のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９５％であるアミノ酸配列を含むＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列；ここで、ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列は、ＨＬＡ−Ｇタンパク質の３３４位アミノ酸としてアラニンを、３３５位アミノ酸としてアラニンをコードする；および
（ｃ）配列番号：３の核酸配列との配列同一性が少なくとも９５％である核酸配列を含む３’ＵＴＲを含む核酸配列
を含む、哺乳動物発現ベクター。
【請求項３２】
請求項３１に記載の哺乳動物発現ベクターを含む、遺伝子改変がされた哺乳動物細胞。
【請求項３３】
遺伝子改変を有さない哺乳動物細胞と比較して、低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制を有する、前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞を製造する方法であって、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも９５％であるアミノ酸配列を含むＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列；ここで、ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする核酸配列は、ＨＬＡ−Ｇタンパク質の３３４位アミノ酸としてアラニンを、３３５位アミノ酸としてアラニンをコードする；および
（ｂ）配列番号：３の核酸配列との配列同一性が少なくとも９５％である核酸配列を含む３’ＵＴＲ
を含む外因性核酸で哺乳動物細胞を遺伝子改変することを含み、
ここで、前記遺伝子改変がされた細胞の前記低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制が、
（１）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞に対するＮＫ−９２細胞毒性の低減、
（２）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞によるｉｎ  ｖｉｔｒｏ末梢血単核細胞増殖の低減、または
（３）ヒト化ＮＳＧマウスにおける、前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変がされた細胞による腫瘍形成のサイズおよび重量の増加
のいずれかにより決定される、方法。
【請求項３４】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞が、ＨＬＡ−Ｇタンパク質を少なくとも７週間発現する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞が、ＨＬＡ−Ｇタンパク質を少なくとも２０週間発現する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞が、ＨＬＡ−Ｇタンパク質を少なくとも５０週間発現する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＵＴＲは、配列番号：４を含まない、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞が、ＨＬＡ−Ｇタンパク質を、前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞の細胞表面上に発現する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞が、ヒト細胞である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
前記遺伝子改変がされた細胞が、幹細胞、前駆細胞、前記幹細胞または前記前駆細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化により得られる細胞、完全に分化した細胞、表皮前駆細胞、膵臓前駆細胞、造血幹細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、肝細胞、間葉系幹細胞、心筋細胞、神経幹細胞、ニューロン、および星状膠細胞からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
前記遺伝子改変がされた細胞が、ヒト胚性幹細胞、ヒト間葉系幹細胞、ヒト胚性表皮前駆細胞、およびヒト皮膚線維芽細胞からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする前記核酸配列を含む核酸が、ＥＦ−１αプロモーターをさらに含み、前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする前記核酸配列が、作用可能に前記ＥＦ−１αプロモーターに結合する、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＥＦ−１αプロモーターが、配列番号：６の配列を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記外因性核酸が、発現ベクターである、請求項３３に記載の方法。
【請求項４５】
前記発現ベクターが、トランスポゾンベクターである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記発現ベクターが、レポータータンパク質をコードする核酸配列をさらに含む、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
請求項３３に記載の方法により製造される遺伝子改変がされた哺乳動物細胞を含む、人工組織、皮膚移植、皮膚修復または皮膚再生組成物を製造する方法。
【請求項４８】
外因性核酸で哺乳動物細胞を遺伝子改変することが、外因性核酸で哺乳動物細胞を一過性にトランスフェクトすることすることを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４９】
外因性核酸で哺乳動物細胞を遺伝子改変することが、外因性核酸で哺乳動物細胞を安定にトランスフェクトすることすることを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項５０】
前記遺伝子改変がされた哺乳動物細胞を、抗生物質耐性および／またはフローサイトメトリーを用いて選択する、請求項３３に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
別の実施形態において、本発明の外因性ヒトβ２−ミクログロブリン（β２ｍ）分子およびｅＨＬＡ−Ｇ導入遺伝子を含む遺伝子改変された哺乳動物細胞の集団を、細胞治療方法を必要とする対象に投与することを含む、細胞治療方法が提供される。
本発明の実施形態を、以下にさらに記載する：
［項１］
遺伝子改変を有さない哺乳動物細胞と比較して、低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制を有する、前記遺伝子改変された哺乳動物細胞であって、
（ｉ）前記遺伝子改変された哺乳動物細胞は、（ａ）コンセンサス野生型ヒトＨＬＡ−Ｇと少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有し、小胞体−ゴルジ再循環経路においてＨＬＡ−Ｇの保持を低減する１つ以上のアミノ酸突然変異を含むＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする、核酸配列と、（ｂ）コンセンサス野生型ヒトＨＬＡ−Ｇ遺伝子の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）配列と少なくとも８５％同一であり、配列番号４を含まない３’非翻訳領域とを含む、外因性核酸を含み、
（ｉｉ）コードされたＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも７週間、前記遺伝子改変された哺乳動物細胞により発現される、遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項２］
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも２０週間発現される、上記項１の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項３］
前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質は、少なくとも５０週間発現される、上記項２に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項４］
小胞体−ゴルジ再循環経路においてＨＬＡ−Ｇの保持を低減する前記１つ以上のアミノ酸突然変異は、Ｋ３３４Ａ突然変異、Ｋ３３５Ａ突然変異、または両方の突然変異を含む、上記項１に記載の遺伝子改変された細胞。
［項５］
前記核酸配列は、配列番号：２のアミノ酸配列を有するＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項６］
延長因子−１アルファ（ＥＦ−１α）プロモーターをさらに含み、前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする前記核酸配列は、作用可能に前記ＥＦ−１αプロモーターに結合する、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項７］
前記ＥＦ−１αプロモーターは、配列番号：７の配列を含む、上記項６に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項８］
前記３’ＵＴＲは、配列番号：３を含む、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項９］
前記核酸配列は、配列番号：２のアミノ酸配列を有するＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードし、前記３’ＵＴＲが、配列番号：３を含み、前記ＨＬＡ−Ｇタンパク質をコードする前記核酸に作用可能に結合した配列番号：７を含むＥＦ−１αプロモーターをさらに含む、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１０］
前記発現されたＨＬＡ−Ｇが、前記遺伝子改変された哺乳動物細胞の細胞表面上に存在する、上記項１に記載の遺伝子改変された細胞。
［項１１］
前記改変された哺乳動物細胞は、ヒト細胞である、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１２］
前記遺伝子改変された細胞は、幹細胞、前駆細胞、前記幹細胞もしくは前記前駆細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ分化により得られる細胞、完全に分化した細胞、表皮前駆細胞、膵臓前駆細胞、造血幹細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、幹細胞、間葉系幹細胞、心筋細胞、神経幹細胞、ニューロン、または星状膠細胞である、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１３］
前記遺伝子改変された細胞は、ヒト胚性幹細胞、ヒト間葉系幹細胞、またはヒト胚性表皮前駆細胞である、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１４］
前記遺伝子改変された細胞は、ヒト皮膚線維芽細胞である、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１５］
前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較して、前記遺伝子改変された細胞の前記低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制が、（１）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変された細胞のＮＫ−９２細胞毒性の低減、（２）前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変された細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ末梢血単核細胞増殖の低減、ならびに（３）ヒト化ＮＳＧマウスにおける、前記遺伝子改変を有さない前記哺乳動物細胞と比較した、前記遺伝子改変された細胞による腫瘍形成のサイズおよび重量の増加により決定される、上記項１に記載の遺伝子改変された細胞。
［項１６］
上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞を含む人工組織。
［項１７］
上記項１３または上記項１４に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞を含む皮膚移植、修復、または再生組成物。
［項１８］
前記外因性核酸は、発現ベクターである、上記項１に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項１９］
前記哺乳動物発現ベクターは、トランスポゾンベクターである、上記項１８に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項２０］
前記ベクターは、レポータータンパク質をコードする核酸配列をさらに含む、上記項１８に記載の遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項２１］
単離された核酸であって、
（ｉ）ヒトＨＬＡ−Ｇと少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列をコードする第１の核酸配列であって、前記アミノ酸配列は、小胞体−ゴルジ再循環経路においてＨＬＡ−Ｇの保持を低減する突然変異を含む、第１の核酸配列と、
（ｉｉ）前記ヒトＨＬＡ−Ｇ遺伝子の３’非翻訳領域配列と少なくとも９５％同一であり、前記第１の核酸配列に作用可能に結合した第２の核酸配列であって、その３’非翻訳領域内に突然変異結合部位を含むｍＲＮＡへの同族ｍｉｃｒｏＲＮＡの結合を阻害する少なくとも１つの突然変異を含む、第２の核酸配列とを含む、単離された核酸。
［項２２］
前記第１の核酸配列は、配列番号：２のアミノ酸配列をコードする、上記項２１に記載の単離された核酸。
［項２３］
前記第２の核酸配列は、配列番号：４を含まない、上記項２１に記載の単離された核酸。
［項２４］
前記第２の核酸配列は、配列番号：３を含む、上記項２１に記載の単離された核酸。
［項２５］
上記項２１に記載の単離された核酸および前記第１の核酸配列に作用可能に結合したプロモーターを含む哺乳動物発現ベクターであって、前記プロモーターは、幹細胞内、または前記幹細胞の分化により生成された細胞内でサイレンシングされていない、哺乳動物発現ベクター。
［項２６］
前記プロモーターは、チャイニーズハムスターＥＦ−１αプロモーターの核酸配列を含む、上記項２５に記載の哺乳動物発現ベクター。
［項２７］
レポータータンパク質をコードする第３の核酸配列をさらに含む、上記項２５に記載の哺乳動物発現ベクター。
［項２８］
前記哺乳動物発現ベクターは、トランスポゾンベクターである、上記項２５に記載の哺乳動物発現ベクター。
［項２９］
（ａ）チャイニーズハムスターＥＦ−１αプロモーター、（ｂ）前記プロモーターに作用可能に結合し、配列番号：２のアミノ酸配列を有するヒトＨＬＡ−Ｇをコードする核酸配列、および（ｃ）配列番号：３を含む３’ＵＴＲ配列を含む、哺乳動物発現ベクター。
［項３０］
上記項２９に記載の哺乳動物発現ベクターを含む、遺伝子改変された哺乳動物細胞。
［項３１］
細胞または組織修復または再生を必要とする対象へのその普遍的方法であって、上記項１に記載の遺伝子改変された細胞の集団を含む細胞または組織組成物を前記対象に注入する、埋め込む、または移植することを含み、前記対象は、前記遺伝子改変された細胞の集団と比較して、少なくとも１つのミスマッチ古典的ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩ分子を有し、前記遺伝子改変された細胞の集団は、前記遺伝子改変を有さない同じ型の細胞と比較して、低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制を示す、普遍的方法。
［項３２］
前記少なくとも１つのミスマッチ古典的ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩ分子は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＲからなる群から選択される、上記項３１に記載の方法。
［項３３］
前記対象は、ＨＬＡ−Ａ、ＨＬＡ−Ｂ、ＨＬＡ−Ｃ、ＨＬＡ−ＤＰ、ＨＬＡ−ＤＱ、およびＨＬＡ−ＤＲに関して、前記遺伝子改変された細胞とのマッチを有さない、上記項３１に記載の方法。
［項３４］
前記低減された免疫原性および／または改善された免疫抑制は、ＮＫ−９２細胞毒性アッセイ、ヒト化ＮＳＧ腫瘍成長アッセイ、および／または末梢血単核細胞増殖アッセイにより決定される、上記項３１に記載の方法。
［項３５］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、ヒト皮膚線維芽細胞の集団を含む、上記項３１に記載の方法。
［項３６］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、ヒト表皮前駆細胞の集団を含む、上記項３１に記載の方法。
［項３７］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、ヒト胚性幹細胞の集団を含む、上記項３１に記載の方法。
［項３８］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、ヒト間葉系幹細胞の集団を含む、上記項３１に記載の方法。
［項３９］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化した遺伝子改変されたヒト胚性幹細胞を含む、上記項３１に記載の方法。
［項４０］
前記遺伝子改変された細胞の集団は、少なくとも２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２４、３６、４８、または５２週間、前記対象の免疫系により拒絶されない、上記項３１に記載の方法。