(57)【要約】（要約）（課題）  マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）によって引き起こされる障害に対して効果が高く、副作用の少ない予防乃至治療剤の提供を主たる目的とする。（解決手段）  チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）が、ＭＩＦに直接結合することによって、ＭＩＦの炎症活性を阻害すること、ＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することを見出したので、ＴＲＸがＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効であるとの結論に達した。  従って、ＴＲＸ及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするＭＩＦによって引き起こされる障害の予防乃至治療剤とする。（選択図）  図１
2007138961.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害の予防乃至治療剤。
【請求項２】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子に直接結合することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の予防乃至治療剤。
【請求項３】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子の細胞内への移行を抑制することを特徴とする請求の範囲第１項又は第２項に記載の予防乃至治療剤。
【請求項４】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子の活性を阻害することを特徴とする請求の範囲第１項乃至第３項いずれか記載の予防乃至治療剤。
【請求項５】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがヒトチオレドキシンである請求の範囲第１項乃至第４項いずれか記載の予防乃至治療剤。
【請求項６】
マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体からなる群より選択されるいずれか一つの細胞又は組織における炎症によるものである請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤。
【請求項７】
マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分による障害である請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤。
【請求項８】
マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、慢性リウマチ様関節炎、動脈硬化、子宮内膜症、急性呼吸急迫症候群、気管支喘息、腎臓移植による障害、急性心筋梗塞、糖尿病、全身性エリテマトーデス、クローン病、アトピー性皮膚炎、腎炎、肝炎、肺炎、関節炎、ＩｇＡ腎症、エンドドキシンショック、感染症による敗血症からなる群より選択されるいずれか１つである請求項の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤。
【請求項９】
チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とし、マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害の予防乃至治療のための製剤。
【請求項１０】
チオレドキシン誘導剤が、スルフォラファンである請求の範囲第９項に記載の製剤。
【請求項１１】
飲食品の形態である請求の範囲９項又は第１０項に記載の製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マクロファージ遊走阻止因子（Macrophage migration inhibitory factor：以下「ＭＩＦ」と略記する）によって引き起こされる障害の予防乃至治療剤に関し、詳しくは、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（以下「ＴＲＸ」と略記する）及びその誘導剤の１種以上を有効成分とする、ＭＩＦによって引き起こされる障害の予防乃至治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、炎症部位中にマクロファージがランダムに遊走するのを阻止する炎症性サイトカインで、全身／局所の炎症と免疫応答に重要な役割を果たす（非特許文献１、２）。
ＭＩＦは、（リンパ球、マクロファージ等の）免疫担当細胞や、脳下垂体などから生体侵襲（例えば、酸化ストレスを引き起こすエンドトキシン、活性酸素、紫外線などの刺激）に即応して産生され、炎症性サイトカインカスケードの上流に位置し、（ＭＩＦが他の炎症性サイトカインの発現を誘導することによって）炎症反応を制御することが報告されている（非特許文献３、４）。
他にも、（ＭＩＦが）グルココルチコイドの抗炎症作用を抑制し、炎症反応促進させること、Ｔリンパ球の活性化促進因子であること、さらにはｐ５３の機能を抑制することや、脂肪細胞・癌細胞等の増殖・分化に関与すること等、様々な生体反応に重要な役割を果たしていることなどが報告されている（非特許文献２、５、６）。【０００３】
しかしながら、ＭＩＦは炎症作用を有する為、その過剰な産生が過度の炎症反応を引き起こし、（炎症を伴う）各種障害の原因となる。
ＭＩＦによって引き起こされる障害（疾病）は多岐に渡り、代表的なものとして、慢性リウマチ様関節炎等の遅延型アレルギー（IV型：細胞免疫性反応）が挙げられるが、近年、その関連疾患は拡大を見せ、動脈硬化、子宮内膜症などへの寄与も明らかにされている。他にも、急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）の肺胞洗浄液、腎臓移植を受けた患者の拒絶反応時における尿、及び急性心筋梗塞、糖尿病、全身性エリテマトーデス、クローン病、アトピー性皮膚炎患者で、血清中のＭＩＦ濃度が健常人と比べて顕著に上昇していることを示した報告などが挙げられる。
加えて、腎炎、肝炎、肺炎、関節炎、エンドドキシンショック等の動物病態モデルでは、抗ＭＩＦ中和抗体の投与群で明らかな改善効果が認められた（非特許文献７）。
このことはＭＩＦの炎症作用がこれら病態の悪化に関与することを示す。【０００４】
ＭＩＦと各種疾患との関係について、詳しく報告された公知文献として、非特許文献８〜１６を例示することができる。
１）非特許文献８
肺障害モデルラットにリポポリサッカライド（ＬＰＳ：lipopolysaccharide）刺激を与えることによって、ＭＩＦのｍＲＮＡが上昇し、好中球や単球の肺胞への浸潤や気管支肺胞洗浄液中への誘導がみられるが、ＬＰＳ投与前に抗ＭＩＦ抗体を投与するとこれらの浸潤や誘導は減少し、肺出血も抑制されたことが確認されている。
このことはＭＩＦ活性の阻害が肺障害の予防乃至治療に有効であることを示す。
又、血小板減少が抑制されたことから、ＭＩＦ活性の阻害が感染症による敗血症治療にも有効であることが示された。
２）非特許文献９
ＢＣＧ（bacilli Calmette Guerin）−ＬＰＳ誘導急性肝炎モデルマウスにおいて、抗ＭＩＦ抗体を投与することにより、生存率の改善やＴＮＦ−αの増加抑制が確認されている。このことはＭＩＦ活性の阻害が急性肝炎の予防乃至治療に有効であることを示す。
３）非特許文献１０及び１１
typeII collagen関節炎や、adjuvant関節炎モデル動物実験において、抗ＭＩＦ抗体による炎症反応の軽減が見られたことから、ＭＩＦ活性の阻害が関節リウマチの予防乃至治療に有効であることが報告されている。
４）非特許文献１２
急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）患者に対し、抗ＭＩＦ抗体を投与することにより、炎症性サイトカインの上昇が抑制されていることが確認されている。
即ち、ＭＩＦ活性の阻害が急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）の予防乃至治療に有効であることが示されている。
５）非特許文献１３
マウス気管支喘息モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害が気管支喘息の予防乃至治療に有効であることが示された。
６）非特許文献１４及び１５
急速進行性糸球体腎炎モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害が急速進行性糸球体腎炎の予防乃至治療に有効であることが示された。
７）非特許文献１６
ＩｇＡ腎症モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害がＩｇＡ腎症の予防乃至治療に有効であることが示された。【０００５】
以上より、ＭＩＦの制御は諸疾患の症状緩和に有益であるので、ＭＩＦをターゲットにした（炎症性）疾患の治療乃至予防薬、言い換えれば、過剰に発現したＭＩＦによる炎症を軽減することができ、且つ副作用のない（ＭＩＦを原因とする）各種障害の治療乃至予防薬の開発が強く求められている。【０００６】
一方、チオレドキシン（Thioredoxin）は、その活性部位配列：−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−：の２つのシステイン残基間でのジスルフィド／ジチオール交換反応による酸化還元（レドックス）活性を有する１２ｋＤａの多機能ポリペプチドである（非特許文献１７）。チオレドキシンは、リボヌクレオチドリダクターゼに対する水素イオン供与体、デオキシリボヌクレオチドの合成に重要な酵素として大腸菌から単離されて以来、多くの原核生物、真核生物から単離同定されてきた。
成人Ｔ細胞白血病誘導因子（ＡＤＦ）は、本発明者らがＨＴＬＶ−１に感染したＴリンパ球によって産生されるＩＬ−２受容体誘導因子として最初に同定したもので、ヒトチオレドキシンである。
細胞内チオレドキシンはラジカル消去や、activator protein‐1（ＡＰ−１）、nuclear factor‐kappa Ｂ（ＮＦ−κＢ）などのレドックスに関する転写因子の制御に重要な役割を果たしている（非特許文献１８）。
ヒトチオレドキシンは、p38 mitogen activating protein kinase（ＭＡＰＫ）やapoptosis signal regulating kinase−1（ＡＳＫ−１）のシグナル伝達を制御する。
チオレドキシンが細胞外に放出され、サイトカインまたはケモカイン作用を示すこと（非特許文献１９）、更には細胞外ＴＲＸが細胞内へ移行すること（非特許文献２０）が本発明者らによって報告されてきた。
しかしながら、ＭＩＦによって引き起こされる疾病と、チオレドキシンとの関係については、現在に至るまで、報告されていない。【０００７】
【非特許文献１】Nishihira J., J Interferon Cytokine Res,(2000)20:751-762
【非特許文献２】Bucala R., FASEB J (1996) 7:19-24
【非特許文献３】Annual Reports in Medicinal Chemistry,第33巻,24頁,1998年
【非特許文献４】Advances in Immunology,第66巻,197頁,1997年
【非特許文献５】Bernhagen J, et al Nature 365: 756-759,1993
【非特許文献６】Calandra T, et al Nature 377: 68-71,1995
【非特許文献７】International Journal of Molecular Medicine, 第2巻,17頁,1998年
【非特許文献８】Makita H, et al Am J Respir Crit Care Med 158:573-579,1998
【非特許文献９】Kobayashi S, et al Hepatology 29:1752-1759,1999
【非特許文献１０】Mikulowaska A, et al J Immunol 158:5514-5517,1997
【非特許文献１１】Ichiyama H, et al Cytokine 26:187-194,2004
【非特許文献１２】Donnelly SC, et al Nat Med 3:320-323,1997
【非特許文献１３】Mizue Y, et al Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:14410-14415,2005
【非特許文献１４】Yang N, et al Mol Med 4:413-424,1998
【非特許文献１５】Lan HY, et al J Exp Med 185:1455-1465,1997
【非特許文献１６】Leung JC, et al Nephrol Dial Transplant 19:36-45,2003
【非特許文献１７】Redox regulation of cellular activation Ann.Rev.Immunol.1997;15:351-369
【非特許文献１８】AP-1 transcriptional activity is regulated by a direct association between thioredoxin and Ref-1 PNAS.1997;94:3633-3638
【非特許文献１９】Circulating thioredoxin suppresses lipopolysaccharide-induced neutrophil chemotaxis PNAS.2001; 98: 15143-15148
【非特許文献２０】Redox-sensing release of thioredoxin from T lymphocytes with negative feedback loops J.Immunol.2004;172:442-448
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、ＭＩＦによって引き起こされる障害（疾患）に対して効果が高く、副作用の少ない予防乃至治療剤の提供を主たる目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、鋭意研究の結果、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）が、ＭＩＦに直接結合することによって、ＭＩＦの活性を抑え、抗炎症作用を発揮することを見出した。
このことからＴＲＸが（ＭＩＦによって引き起こされる）炎症反応を抑制し、（ＴＲＸが）ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効であるとの結論に達した為、本発明を完成するに至った。【００１０】
即ち、請求の範囲第１項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第２項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子に直接結合することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第３項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子の細胞内への移行を抑制することを特徴とする請求の範囲第１項又は第２項に記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第４項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがマクロファージ遊走阻止因子の活性を阻害することを特徴とする請求の範囲第１項乃至第３項のいずれか記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第５項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがヒトチオレドキシンである請求の範囲第１項乃至第４項いずれか記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第６項にかかる発明は、マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体からなる群より選択されるいずれか一つの細胞又は組織における炎症によるものである請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第７項にかかる発明は、マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分による障害である請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第８項にかかる発明は、マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害が、慢性リウマチ様関節炎、動脈硬化、子宮内膜症、急性呼吸急迫症候群、気管支喘息、腎臓移植による障害、急性心筋梗塞、糖尿病、全身性エリテマトーデス、クローン病、アトピー性皮膚炎、腎炎、肝炎、肺炎、関節炎、ＩｇＡ腎症、エンドドキシンショック、感染症による敗血症からなる群より選択されるいずれか１つである請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載の予防乃至治療剤に関する。
請求の範囲第９項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とし、マクロファージ遊走阻止因子によって引き起こされる障害の予防乃至治療のための製剤に関する。
請求の範囲第１０項にかかる発明は、チオレドキシン誘導剤が、スルフォラファンである請求の範囲第９項に記載の製剤に関する。
請求の範囲第１１項にかかる発明は、飲食品の形態である請求の範囲第９項又は第１０項に記載の製剤に関する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明にかかる予防乃至治療剤は、チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするので、ＭＩＦと直接結合し、その活性を喪失させ、また、ＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することで、ＭＩＦによって引き起こされる炎症反応、並びに該炎症反応に起因する組織の繊維化を抑制する効果を発揮することができる。
従って、ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効である。【００１２】
さらに本発明にかかる予防乃至治療剤は、体内でも発現する内因性チオールタンパク質であるＴＲＸ又は体内においてＴＲＸの発現を誘導する物質を有効成分とするため、副作用の心配がない、安全性の高い予防乃至治療剤であるといえる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明者らは、鋭意研究の結果、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）の新たな機能として、炎症作用を有するマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）に直接結合することによって、ＭＩＦの活性を阻害すること、ＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することを解明した。
このことから、ＴＲＸが、ＭＩＦによる炎症反応を抑制する効果、並びに該炎症反応に起因する組織の繊維化を抑制する効果を発揮することができ、ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効であるとの結論に達し、本発明を完成するに至った。
以下、本発明にかかるチオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とする予防乃至治療剤の実施形態について詳説する。【００１４】
［ＴＲＸ］
本発明におけるチオレドキシンとしては、ヒトチオレドキシン以外に「チオレドキシンファミリー」に属するものであればよく、その活性中心に−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有するポリペプチド類を有するものが例示される。
これらの中でも活性中心に配列−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有する「チオレドキシン」又は「チオレドキシン２（ミトコンドリア特異的チオレドキシン）」が好ましく、特に「チオレドキシン」が好ましい。【００１５】
上記の活性中心を有するものであれば、チオレドキシンの由来は特に限定されず、ヒトを含む動物のチオレドキシン（ヒトを含む動物のＡＤＦ）、大腸菌などの細菌のチオレドキシン、酵母のチオレドキシン；ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチド（ヒトＡＤＦＰ）；ヒト，大腸菌等のグルタレドキシン等が含まれる。特にヒトチオレドキシン及び酵母チオレドキシンが好ましい。酵母チオレドキシンは、酵母から単離したものでもよいが、チオレドキシンを多く含む酵母の形態で使用することもできる。【００１６】
本明細書において、ヒトチオレドキシン（ｈＴＲＸ）とは、配列番号１に示される１０５個のアミノ酸からなるポリペプチドを指す。ｈＴＲＸの塩基配列は、配列番号２に示される。【００１７】
また、ＭＩＦに直接結合し得るものであれば、配列番号１のヒトチオレドキシンをもとにして公知の遺伝子工学的手法により作製されたＴＲＸ改変体であってもよい。
該改変体としては、配列番号１の３２位と３５位以外、好ましくは３２位〜３５位以外のアミノ酸の１又は複数個、好ましくは１又は数個が置換、欠失、付加、挿入されているものが挙げられる。【００１８】
上記のチオレドキシンファミリーに属するポリペプチド（ＴＲＸ）を、単独又は２種以上を組み合わせて使用することができる。【００１９】
本発明に係る予防乃至治療剤の投与経路としては、経口及び非経口のいずれでも投与することができ、臨床医によって適宜選択される。また有効成分であるチオレドキシンを単独又は通常使用される担体と共に投与することができる。【００２０】
本発明の予防乃至治療剤を経口投与する場合は、薬剤の形態として、錠剤、丸剤、散剤、被覆錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等の液状製剤、エアゾール剤、アトマイザー、ネブライザー等の吸入剤、及びリポソーム封入剤等が挙げられる。【００２１】
本発明に係る予防乃至治療剤は、上記の有効成分と共に薬学的に許容される製剤担体を用いて、医薬製剤の形態として実用される。該製剤担体としては、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、吸収促進剤、保湿剤、吸着剤、滑沢剤、充填剤、増量剤、付湿剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する塩、緩衝剤等の希釈剤又は賦形剤を例示でき、これらは得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択使用される。【００２２】
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド等の界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。
さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠とすることができる。この剤皮の層の数によって二重錠、多層錠とすることができる。
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。【００２３】
本発明の予防乃至治療剤を非経口投与する場合は、薬剤の形態として静脈注射、皮下注射、皮内注射、筋肉注射及び腹腔内注射などに使用される注射剤（液剤、乳剤、懸濁剤等）、液剤（例えば、点眼剤、点鼻薬等）、懸濁剤、乳剤、点滴剤、吸入剤（エアロゾル剤、粉末吸入剤等）等が挙げられる。【００２４】
本発明の予防乃至治療剤が液剤、乳剤、懸濁剤等の注射剤として調製される場合、これらは殺菌され且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。
尚、この場合、等張性の溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明薬剤中に含有させてもよい。
また、通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。【００２５】
本発明の予防乃至治療剤が液状製剤である場合は、凍結保存又は凍結乾燥等により水分を除去して保存してもよい。凍結乾燥製剤は、使用時に注射用蒸留水等を加え、再度溶解して使用される。【００２６】
本発明の予防乃至治療剤を吸入剤として用いる場合、一般的に使用される従来公知の吸入剤用添加剤を使用して調製すればよい。この様な添加剤としては、例えば、噴射剤；白糖、乳糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の固形賦形剤：プロピレングリコール等の不活性液体のような液状賦形剤；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、白糖等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤；安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤；クエン酸、クエン酸ナトリウム等の安定化剤；メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、レシチン、トリオレイン酸ソルビタン等の懸濁化剤；界面活性剤等の分散剤；水等の溶剤；塩化ナトリウム等の等張化剤；硫酸、塩酸等のｐＨ調整剤；エタノール等の可溶化剤等が挙げられる。【００２７】
さらに、本発明に係る予防乃至治療剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させて調製することもできる。【００２８】
ＴＲＸファミリーに属するポリペプチドの有効量は、当業者が従来の技術を参考に容易に決定することができるが、例えば、成人１人１日あたり０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度である。
これを１日あたり１回又は数回に分けて投与することができるが、各種製剤の形態、患者の性別、年齢、疾患の程度に合わせて適宜調節することが好ましい。【００２９】
［ＴＲＸ誘導剤］
本発明の予防乃至治療剤として、体内でＴＲＸを誘導する物質を用いて、ＭＩＦによって引き起こされる障害を抑制することもできる。この様な物質としては、スルフォラファンが挙げられる。
スルフォラファンは、例えば、キャベツ、ムラサキキャベツ、ブロッコリー、ケール、ロケット菜、カリフラワー、ダイコン、ハクサイ、カブ、コマツナ、チンゲンサイ等に含まれ、これらの植物の新芽を用いることが好ましい。
中でも、スルフォラファンは、ブロッコリーの新芽（ブロッコリースプラウト）、ダイコンの新芽（カイワレダイコン）、ムラサキキャベツの新芽等に多く含まれている。【００３０】
スルフォラファンは、従来公知の抽出方法に従って上記の植物から得ることができ、必要に応じて精製、凍結乾燥等の処理を加えてもよい。
得られたスルフォラファン含有抽出物は、スルフォラファンを０．００１〜２００ｍｇ／ｇ程度、好ましくは０．００５〜８０ｍｇ／ｇ程度、より好ましくは０．０１〜５０ｍｇ／ｇ程度含むことが望ましい。【００３１】
又、摂取されるスルフォラファンの量は、その用法、摂取する人の年齢、性別、体重、健康状態、その他の条件、症状の程度等により適宜選択されるが、成人１人当り１日当り０．００１〜１０００μｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．００５〜２００μｇ／ｋｇ程度、より好ましくは０．０１〜６０μｇ／ｋｇ程度となるようにすることが望ましい。【００３２】
上記のスルフォラファンの他に、ＴＲＸ誘導剤であるゲラニルゲラニルアセトン（ＧＧＡ）を組み合わせて使用することも可能である。【００３３】
上記の抽出物をそのまま使用してもよく、ＴＲＸ誘導剤を有効成分とする医薬製剤の形態で用いてもよい。医薬製剤の形態で使用する場合は、上記［ＴＲＸ］で記載した製剤担体と共に調製することができる。
また、本発明のＴＲＸ誘導剤を有効成分とする製剤を、飲食品の形態で使用することもできる。飲食品の形態で使用する場合には、上記の抽出物に、原料である植物を加えて調製してもよい。【００３４】
飲食品としては、例えば、健康食品、栄養補助食品（バランス栄養食、サプリメント等）、栄養機能食品、特定保健用食品、病者用食品等が挙げられる。これらの食品の製造方法は、チオレドキシン発現の誘導という所期の効果が得られるものであれば特に限定されず、各用途で当業者によって使用されている方法に従えばよい。【００３５】
飲食品としては、例えば、ガム、キャンディー、グミ、錠菓、クッキー、ケーキ、チョコレート、アイスクリーム、ゼリー、ムース、プリン、ビスケット、コーンフレーク、チュアブルタブレット、ウエハース、煎餅等の菓子類；炭酸飲料、清涼飲料、乳飲料、コーヒー飲料、紅茶飲料、果汁飲料、栄養飲料、アルコール飲料、ミネラルウォーター等の飲料類；粉末ジュース，粉末スープ等の粉末飲料；バランス栄養食；粉末、カプセル、錠剤等の形態を有するサプリメント；ドレッシング、ソース等の調味料；パン類；麺類；かまぼこ等の練り製品；ふりかけ等が挙げられる。【００３６】
又、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）とチオレドキシン誘導剤を、組み合わせて本発明の予防乃至治療剤又は製剤として調製してもよい。【００３７】
［マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）］
ＭＩＦは、ヒトをはじめ様々な動物種に存在し、１１４個のアミノ酸残基からなる分子量１２．３ｋＤａタンパク質で、分子内にレドックス活性領域であるＣｙｓ−Ｘ−Ｘ−Ｃｙｓモチーフを有することから、チオレドキシンファミリーに属する。
ＭＩＦは、リンパ球のみならず、脳や腎臓など種々の臓器で発現し、特に腎臓では尿細管上皮細胞、皮膚や角膜では細胞増殖の盛んな基底膜細胞等で発現が強い。
ＭＩＦを発現する細胞・組織としては、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体などを例示することができる。【００３８】
本発明の限定的解釈を望むものではないが、ＴＲＸは炎症作用を有するＭＩＦに直接結合することにより、ＭＩＦの活性を低減させ、ＭＩＦによる炎症（並びに炎症による繊維化）を抑えることができる。詳細には、ＴＲＸがＭＩＦのレドックス活性領域に直接結合することによって、ＭＩＦの活性を阻害するものと考えられる。
また、ＴＲＸはＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することにより、ＭＩＦによる炎症（並びに炎症による繊維化）を抑えることができる。
本発明にかかる予防乃至治療剤は、ＴＲＸ及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするので、ＭＩＦによる炎症を抑制することにより、体内の炎症反応を軽減させ、ＭＩＦによって引き起こされる障害の予防乃至治療に有効である。【００３９】
本発明にかかる予防乃至治療剤が適用可能な疾患（障害）群、即ち、ＭＩＦによって引き起こされる障害について説明する。ＭＩＦによって引き起こされる障害とは、ＭＩＦによって起きる「炎症反応」、並びに炎症反応に引き続く「組織の繊維化」を引き起こすものであれば、特に限られるものではないが、後述する疾患を列挙することができる。【００４０】
［障害／疾患］
本発明の予防乃至治療剤が適用される疾患、即ち、ＭＩＦによって引き起こされる障害としては、ＭＩＦを発現する細胞・組織である、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体などにおける炎症等が挙げられる。
このような障害には、上述したＭＩＦを発現する細胞・組織においてＭＩＦの炎症作用によって直接的に引き起こされる障害、及びＭＩＦによる間接的作用によって各種細胞・組織等において間接的に引き起こされる障害が含まれるものとする。【００４１】
ＭＩＦによって引き起こされる疾患の代表的なものとしては、遅延型アレルギー、慢性リウマチ様関節炎、動脈硬化、子宮内膜症、急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）、気管支喘息、腎臓移植による障害、急性心筋梗塞、糖尿病、全身性エリテマトーデス、クローン病、アトピー性皮膚炎、腎炎（特に急速進行性糸球体腎炎）、ＩｇＡ腎症、肝炎（特に急性肝炎）、肺障害（例えば、好中球や単球の肺胞への浸潤、気管支肺胞洗浄液中への誘導や肺出血による肺障害）、肺炎（例えば、ＢＣＧ−ＬＰＳ誘導急性肝炎）、関節炎、関節リウマチ（特に typeII collagen関節炎及びadjuvant関節炎）、エンドドキシンショック、血小板減少に伴う感染症による敗血症などを列挙することができる。【００４２】
その他、ＭＩＦによって引き起こされる障害の一つに、タバコの煙をはじめとする繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分によって引き起こされる障害が挙げられる。これはタバコ等の煙に含まれる有害成分によってＭＩＦの発現が誘導され、このＭＩＦが炎症反応を引き起こすからである。
ここで、前記有害成分の吸入には、能動的に吸入する場合（例えば、タバコの主流煙の吸入等）及び受動的に吸入する場合（例えばタバコの副流煙の吸入等）の両方が含まれる。また、該有害成分の吸入又は吸収の期間は特に限定されず、１回〜数日程度の急性、１〜３週間程度の亜急性、数ヶ月以上の慢性的に吸入又は吸収することを含む。【００４３】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。
【実施例１】
【００４４】
〔細胞内におけるＴＲＸとＭＩＦの結合確認実験〕
ＡＴＬ２細胞及びＨＬ６０細胞内におけるＴＲＸとＭＩＦの結合を（後述の如く）免疫沈降法によって確認した。【００４５】
〔実験材料〕
ＡＴＬ２細胞  ：ヒト成人型Ｔ白血病細胞株
公開特許公報  昭62-19532、Tagaya, Y., Y. Maeda, A. Mitsui, N. Kondo, H. Matsui, J. Hamuro, N. Brown, K. Arai, T. Yokota, H. Wakasugi, et al 1989. EMBO J. 8:75  参照
ＨＬ６０細胞  ：ヒト急性前骨髄性白血病細胞株
京都大学ウイルス研究所  淀井淳司教授譲渡分
Protein G Sepharose 4 Fast Flow：（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）
抗ＴＲＸ抗体（ＡＤＦ１１抗体）：（レドックスバイオサイエンス社製）
抗ＭＩＦ抗体：（サンタクルズ社製）
抗Ｒａｂｂｉｔ抗体：（ｕｐｓｔａｔｅ社製）【００４６】
〔実験方法〕
細胞は１７５ｃｍ２フラスコで、１０％ ＦＣＳ，１００Ｕ／ｍｌ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ １６４０（シグマ社製）培地で培養した。
１×１０７〜８／ｃｅｌｌの細胞を回収し、１０００ｒｐｍ，４℃，１５分間で遠心後、得られた沈殿をｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒで可溶化し３０分間氷上で静置した。
溶液を１０００ｒｐｍ，４℃，１５分間遠心し、得られた上清を免疫沈降実験に使用した。タンパク質の濃度測定は、ＤＣプロテインアッセイキット（ＢＩＯ ＲＡＤ社製）を用いた。
マイクロチューブに２０μｌのProtein G Sepharose、５００μｇの細胞溶液を加え、ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒで１ｍｌに調整し、小型回転培養機で４℃,３時間反応させた。細胞溶液を１５，０００ｒｐｍ、４℃、２分間遠心し、得られた上精を新しいマイクロチューブに加え、さらに２０μｌのProtein G Sepharose、４μｇ／ｍｌの抗ＭＩＦ抗体を添加した。
また、コントロールには抗ＭＩＦ抗体の代わりに抗Ｒａｂｂｉｔ抗体を加えた。
反応は小型回転培養機を用い、４℃で一晩行った。反応溶液を１５０００ｒｐｍ、４℃、２分間遠心し、沈殿を洗浄ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ ＮＰ４０）で洗浄した。
沈殿にＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒを加え、１５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに供した。泳動後、ウエスタンブロッティングを行い抗ＴＲＸ抗体（ＡＤＦ１１抗体）で確認した（図１）。【００４７】
図１より、ＡＴＬ２細胞及びＨＬ６０細胞内のいずれにおいても、ＴＲＸがＭＩＦに直接結合することが示された。
【実施例２】
【００４８】
〔細胞外におけるＴＲＸとＭＩＦの結合実験〕
ＡＴＬ２細胞外でのＴＲＸとＭＩＦの結合を免疫沈降法によって確認した。【００４９】
〔実験材料〕
ＡＴＬ２細胞  ：ヒト成人型Ｔ白血病細胞株
公開特許公報（特開昭62-19532）、Tagaya, Y., Y. Maeda, A. Mitsui, N. Kondo, H. Matsui, J. Hamuro, N. Brown, K. Arai, T. Yokota, H. Wakasugi, et al 1989. EMBO J. 8:75  参照
Protein G Sepharose 4 Fast Flow：（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）
抗ＴＲＸ抗体（ＡＤＦ１１抗体）：（レドックスバイオサイエンス社製）
抗ＭＩＦ抗体：（サンタクルズ社製）
抗Ｒａｂｂｉｔ抗体：（ｕｐｓｔａｔｅ社製）
amicon ultra-4 (ミリポア社製)【００５０】
〔実験方法〕
１×１０５／ｃｅｌｌのＡＴＬ２細胞を１７５ｃｍ２フラスコで、１００Ｕ／ｍｌ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ １６４０（シグマ社製）培地で３日間培養した。回収し、１００００ｒｐｍ，４℃，１５分間で遠心後、得られた上清を最終濃度が１０％になるようにFCSを加え、amicon ultra-4で濃縮し、得られた濃縮液を免疫沈降実験に使用した。マイクロチューブに２０μｌのProtein G Sepharose、３０μｌの培養上清を加え、ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒで１ｍｌに調整し、小型回転培養機で４℃,３時間反応させた。細胞溶液を１５，０００ｒｐｍ、４℃、２分間遠心し、得られた上精を新しいマイクロチューブに加え、さらに２０μｌのProtein G Sepharose、４μｇ／ｍｌの抗ＭＩＦ抗体を添加した。
また、コントロールには抗ＭＩＦ抗体の代わりに抗Ｒａｂｂｉｔ抗体を加えた。
反応は小型回転培養機を用い、４℃で一晩行った。反応溶液を１５０００ｒｐｍ、４℃、２分間遠心し、沈殿を洗浄ｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ ＮａＣｌ，０．１％ ＮＰ４０）で洗浄した。
沈殿にＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒを加え、１５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルに供した。泳動後、ウエスタンブロッティングを行い抗ＴＲＸ抗体（ＡＤＦ１１抗体）で確認した（図２）。【００５１】
図２より、ＡＴＬ２細胞外でＴＲＸがＭＩＦに直接結合することが示された。
【実施例３】
【００５２】
〔ＴＲＸによるＭＩＦの細胞内への取り込み抑制確認実験〕
ＭＩＦはオートクライン、パラクライン作用により細胞内に取り込まれ、炎症性サイトカインＴＮＦ−ａｌｐｈａ（α）やＩＬ−１の産生を誘導する。そこでＴＲＸによるＭＩＦの細胞内取り込みに対する影響を調べ、炎症応答制御メカニズムの解明を試みた。【００５３】
〔実験材料〕
ＡＴＬ２細胞  ：ヒト成人型Ｔ白血病細胞株、
組換え型ＭＩＦ（ＭＩＦ）：発現ベクターpQE30（キアゲン社）を用いてHis tag付き組換え型ＭＩＦを大腸菌内で発現し、MagneHisTM Protein Purification System（プロメガ社製）によるカラム精製した。
組換え型ＴＲＸ（ＴＲＸ）：（味の素株式会社製）
抗His tag抗体：（プロメガ社製）【００５４】
〔実験方法〕
ＡＴＬ２細胞は、７５ｃｍ２フラスコで１０％ＦＣＳ，１００Ｕ／ｍｌ  ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で培養した。
２４穴プレートにＡＴＬ２細胞を１×１０６／ｃｅｌｌ加え、終濃度０〜２５０μｇ／ｍｌ組換え型ＴＲＸと２５μｇ／ｍｌ組換え型ＭＩＦを加え３７℃、０．５%ＣＯ２条件下で２４時間培養した。
培養後細胞を回収し、沈殿にＳＤＳ−ＰＡＧＥ ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒを加え、１５%ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで電気泳動後、ウエスタンブロッティングを行い抗His tag抗体で細胞内に取り込まれたＭＩＦを検出した。ウエスタンブロッティングによるバンドの変化をデンシトメーターで解析した。測定結果を図３に示す。【００５５】
図３より、ＴＲＸは濃度依存的にＡＴＬ２細胞へのＭＩＦの取り込みを抑制した。
このことから、ＴＲＸはＭＩＦの細胞内取り込みを抑制することにより、炎症応答を抑制することが示唆された。
【実施例４】
【００５６】
〔ＴＲＸによるＭＩＦ活性阻害確認実験〕
ＴＲＸによるＭＩＦの活性阻害実験を（後述の如く）炎症性サイトカインＴＮＦ−αの濃度を測定することによって確認した。【００５７】
〔実験材料〕
ＲＡＷ  ２６４．７細胞：マウス由来マクロファージ細胞株、
現理化学研究所免疫・アレルギー科学総合研究センター  石井保之博士譲渡分
組換え型ＭＩＦ（ＭＩＦ）：（ＡＴＧＥＮ社製）
組換え型ＴＲＸ（ＴＲＸ）：（味の素株式会社製）
ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（ＬＰＳ）:（ＳＩＧＭＡ社製）
ＴＮＦ−α  ＥＬＩＳＡキット：（R&D systems社製）【００５８】
〔実験方法〕
ＲＡＷ  ２６４．７細胞は、７５ｃｍ２フラスコで１０％ ＦＣＳ，１００Ｕ／ｍｌ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，１００μｇ／ｍｌ  ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ  １６４０培地で培養した。２４穴プレートにＲＡＷ  ２６４．７細胞を１×１０６／ｃｅｌｌになるように加え、終濃度１０ｎｇ／ｍｌＭＩＦを加え、０〜５００ｎｇ／ｍｌのＴＲＸを添加し、３７℃，５％ＣＯ２条件下で４時間静置した。
さらに、１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを加え（ＬＰＳ（＋）と表記）、３７℃，５％ＣＯ２条件下で４時間静置した後、培養液を回収した。
産生するＴＮＦ−ａｌｐｈａ（α）の量はＤｕｏ Ｓｅｔ ＥＬＩＳＡ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ ｍｏｕｓｅ ＴＮＦ−αキットにより測定した。
測定方法はキットに添付のプロトコールに従った。測定結果を図４に示す。【００５９】
図４より、ＴＲＸは、濃度依存的にＭＩＦの活性を阻害し、炎症性サイトカインであるＭＩＦ由来のＴＮＦ−ａｌｐｈａの産生を抑制することが確認された。【００６０】
上記実施例１、２及び３の結果から、ＴＲＸはＭＩＦに直接結合することで、ＭＩＦの細胞内への移行を抑制することが確認された。
また、上記実施例４の結果から、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦの細胞内への移行を抑制することでＴＮＦ−ａｌｐｈａの産生を抑制し、炎症応答を抑制することが確認された。
従って、ＴＲＸが、ＭＩＦによって引き起こされる障害に、広く有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】細胞内におけるＴＲＸとＭＩＦの結合を確認した結果である。
【図２】細胞外におけるＴＲＸとＭＩＦの結合を確認した結果である。
【図３】ＴＲＸによるＭＩＦの細胞内への取り込み抑制を確認した結果である。
【図４】ＴＲＸによるＭＩＦの活性阻害をＴＮＦ−ａｌｐｈａ（α）の濃度（ｐｇ／ｍＬ）で確認した結果である。
【図１】
2007138961.tif 000003
【図２】
2007138961.tif 000004
【図３】
2007138961.tif 000005
【図４】
2007138961.tif 000006
【配列表】
2007138961000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月14日(2008.4.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤。
【請求項２】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦに直接結合することを特徴とする、請求の範囲第１項に記載のＭＩＦ阻害剤。
【請求項３】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦの細胞内への移行を抑制することを特徴とする、請求の範囲第１項又は第２項に記載のＭＩＦ阻害剤。
【請求項４】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦの活性を阻害することを特徴とする、請求の範囲第１項乃至第３項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤。
【請求項５】
チオレドキシンファミリーのポリペプチドがヒトチオレドキシンである、請求の範囲第１項乃至第４項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤。
【請求項６】
ＭＩＦによって引き起こされる障害がＴ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体からなる群より選択されるいずれか一つの細胞又は組織における炎症によるものである、請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤。
【請求項７】
ＭＩＦによって引き起こされる障害が、繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分による障害である、請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
［０００１］
本発明は、マクロファージ遊走阻止因子（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｍｉｇｒａｔｉｏｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ｆａｃｔｏｒ：以下「ＭＩＦ」と略記する）阻害剤に関し、詳しくは、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（以下「ＴＲＸ」と略記する）及びその誘導剤の１種以上を有効成分とする、ＭＩＦ阻害剤に関する。
背景技術
［０００２］
マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）は、炎症部位中にマクロファージがランダムに遊走するのを阻止する炎症性サイトカインで、全身／局所の炎症と免疫応答に重要な役割を果たす（非特許文献１、２）。
ＭＩＦは、（リンパ球、マクロファージ等の）免疫担当細胞や、脳下垂体などから生体侵襲（例えば、酸化ストレスを引き起こすエンドトキシン、活性酸素、紫外線などの刺激）に即応して産生され、炎症性サイトカインカスケードの上流に位置し、（ＭＩＦが他の炎症性サイトカインの発現を誘導することによって）炎症反応を制御することが報告されている（非特許文献３、４）。
他にも、（ＭＩＦが）グルココルチコイドの抗炎症作用を抑制し、炎症反応促進させること、Ｔリンパ球の活性化促進因子であること、さらにはｐ５３の機能を抑制することや、脂肪細胞・癌細胞等の増殖・分化に関与すること等、様々な生体反応に重要な役割を果たしていることなどが報告されている（非特許文献２、５、６）。
［０００３］
しかしながら、ＭＩＦは炎症作用を有する為、その過剰な産生が過度の炎症反応を引き起こし、（炎症を伴う）各種障害の原因となる。
ＭＩＦによって引き起こされる障害（疾病）は多岐に渡り、代表的なものとして、慢性リウマチ様関節炎等の遅延型アレルギー（ＩＶ型：細胞免疫性反応）が挙げられるが、近年、その関連疾患は拡大を見せ、動脈硬化、子宮内膜症などへの寄与も明らかにさ
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
症性サイトカインの上昇が抑制されていることが確認されている。
即ち、ＭＩＦ活性の阻害が急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）の予防乃至治療に有効であることが示されている。
５）非特許文献１３
マウス気管支喘息モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害が気管支喘息の予防乃至治療に有効であることが示された。
６）非特許文献１４及び１５
急速進行性糸球体腎炎モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害が急速進行性糸球体腎炎の予防乃至治療に有効であることが示された。
７）非特許文献１６
ＩｇＡ腎症モデルにおいて、抗ＭＩＦ抗体が病態改善に有効であったことから、ＭＩＦ活性の阻害がＩｇＡ腎症の予防乃至治療に有効であることが示された。
［０００５］
以上より、ＭＩＦの制御は諸疾患の症状緩和に有益であるので、過剰に発現したＭＩＦの阻害剤の開発が強く求められている。
［０００６］
一方、チオレドキシン（Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ）は、その活性部位配列：−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−：の２つのシステイン残基間でのジスルフィド／ジチオール交換反応による酸化還元（レドックス）活性を有する１２ｋＤａの多機能ポリペプチドである（非特許文献１７）。チオレドキシンは、リボヌクレオチドリダクターゼに対する水素イオン供与体、デオキシリボヌクレオチドの合成に重要な酵素として大腸菌から単離されて以来、多くの原核生物、真核生物から単離同定されてきた。
成人Ｔ細胞白血病誘導因子（ＡＤＦ）は、本発明者らがＨＴＬＶ−１に感染したＴリンパ球によって産生されるＩＬ−２受容体誘導因子として最初に同定したもので、ヒトチオレドキシンである。
細胞内チオレドキシンはラジカル消去や、ａｃｔｉｖａｔｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ‐１（ＡＰ−１）、ｎｕｃｌｅａｒ  ｆａｃｔｏｒ‐ｋａｐｐａ  Ｂ（ＮＦ−κＢ）などのレドックスに関する転写因子の制御に重要な役割を
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
非特許文献１９：Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ  ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ  ＰＮＡＳ．２００１；９８：１５１４３−１５１４８
非特許文献２０：Ｒｅｄｏｘ−ｓｅｎｓｉｎｇ  ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ  ｆｒｏｍ  Ｔ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｆｅｅｄｂａｃｋ  ｌｏｏｐｓ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；１７２：４４２−４４８
発明の開示
発明が解決しようとする課題
［０００８］
本発明は、ＭＩＦの阻害剤の提供を主たる目的とする。
課題を解決するための手段
［０００９］
本発明者らは、鋭意研究の結果、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）が、ＭＩＦに直接結合することによって、ＭＩＦの活性を抑え、抗炎症作用を発揮することを見出した。
このことからＴＲＸが（ＭＩＦによって引き起こされる）炎症反応を抑制し、（ＴＲＸが）ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効であるとの結論に達した為、本発明を完成するに至った。
［００１０］
即ち、請求の範囲第１項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）阻害剤に関する。
請求の範囲第２項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦに直接結合することを特徴とする、請求の範囲第１項に記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
請求の範囲第３項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦの細胞内への移行を抑制することを特徴とする、請求の範囲第１項又は第２項に記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
請求の範囲第４項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがＭＩＦの活性を阻害することを特徴とする、請求の範囲第１項乃至第３項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
請求の範囲第５項にかかる発明は、チオレドキシンファミリーのポリペプチドがヒトチ
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
オレドキシンである、請求の範囲第１項乃至第４項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
請求の範囲第６項にかかる発明は、ＭＩＦによって引き起こされる障害がＴ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体からなる群より選択されるいずれか一つの細胞又は組織における炎症によるものである、請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
請求の範囲第７項にかかる発明は、ＭＩＦによって引き起こされる障害が、繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分による障害である、請求の範囲第１項乃至第５項いずれか記載のＭＩＦ阻害剤に関する。
発明の効果
［００１１］
本発明にかかるＭＩＦ阻害剤は、チオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするので、ＭＩＦと直接結合し、その活性を喪失させ、また、ＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することで、ＭＩＦによって引き起こされ
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
る炎症反応、並びに該炎症反応に起因する組織の繊維化を抑制する効果を発揮することができる。
従って、ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効である。
［００１２］
さらに本発明にかかるＭＩＦ阻害剤は、体内でも発現する内因性チオールタンパク質であるＴＲＸ又は体内においてＴＲＸの発現を誘導する物質を有効成分とするため、副作用の心配がない、安全性の高いＭＩＦ阻害剤であるといえる。
発明を実施するための最良の形態
［００１３］
本発明者らは、鋭意研究の結果、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）の新たな機能として、炎症作用を有するマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）に直接結合することによって、ＭＩＦの活性を阻害すること、ＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することを解明した。
このことから、ＴＲＸが、ＭＩＦによる炎症反応を抑制する効果、並びに該炎症反応に起因する組織の繊維化を抑制する効果を発揮することができ、ＭＩＦによって引き起こされる障害に広く有効であるとの結論に達し、本発明を完成するに至った。
以下、本発明にかかるチオレドキシンファミリーのポリペプチド及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするＭＩＦ阻害剤の実施形態について詳説する。
［００１４］
［ＴＲＸ］
本発明におけるチオレドキシンとしては、ヒトチオレドキシン以外に「チオレドキシンファミリー」に属するものであればよく、その活性中心に−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｈｉｓ−Ｃｙｓ−、−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有するポリペプチド類を有するものが例示される。
これらの中でも活性中心に配列−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ−を有する「チオレドキシン」又は「チオレドキシン２（ミトコンドリア特異的チオレドキシン）」が好ましく、特に「チオレドキシン」が好ましい。
［００１５］
上記の活性中心を有するものであれば、チオレドキシンの由来は特に限定されず、ヒトを含む動物のチオレドキシン（ヒトを含む動物のＡＤＦ）、大腸菌などの細菌のチオレドキシン、酵母のチオレドキシン；ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチド（ヒトＡＤＦＰ）；ヒト，大腸菌等のグルタレドキシン等が含まれる。特にヒトチオレドキシン及び酵母チ
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
オレドキシンが好ましい。酵母チオレドキシンは、酵母から単離したものでもよいが、チオレドキシンを多く含む酵母の形態で使用することもできる。
［００１６］
本明細書において、ヒトチオレドキシン（ｈＴＲＸ）とは、配列番号１に示される１０５個のアミノ酸からなるポリペプチドを指す。ｈＴＲＸの塩基配列は、配列番号２に示される。
［００１７］
また、ＭＩＦに直接結合し得るものであれば、配列番号１のヒトチオレドキシンをもとにして公知の遺伝子工学的手法により作製されたＴＲＸ改変体であってもよい。
該改変体としては、配列番号１の３２位と３５位以外、好ましくは３２位〜３５位以外のアミノ酸の１又は複数個、好ましくは１又は数個が置換、欠失、付加、挿入されているものが挙げられる。
［００１８］
上記のチオレドキシンファミリーに属するポリペプチド（ＴＲＸ）を、単独又は２種以上を組み合わせて使用することができる。
［００１９］
本発明に係るＭＩＦ阻害剤の投与経路としては、経口及び非経口のいずれでも投与することができ、臨床医によって適宜選択される。また有効成分であるチオレドキシンを単独又は通常使用される担体と共に投与することができる。
［００２０］
本発明のＭＩＦ阻害剤を経口投与する場合は、薬剤の形態として、錠剤、丸剤、散剤、被覆錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の固形製剤、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤等の液状製剤、エアゾール剤、アトマイザー、ネブライザー等の吸入剤、及びリポソーム封入剤等が挙げられる。
［００２１］
本発明に係るＭＩＦ阻害剤は、上記の有効成分と共に薬学的に許容される製剤担体を用いて、医薬製剤の形態として実用される。該製剤担体としては、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、吸収促進剤、保湿剤、吸着剤、滑沢剤、充填剤、増量剤、付湿剤、防腐剤、安定剤、乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節する塩、緩衝剤等の希釈剤又は賦形剤を例示でき、これらは得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択使用される。
［００２２］
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド等の界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。
さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠とすることができる。この剤皮の層の数によって二重錠、多層錠とすることができる。
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
［００２３］
本発明のＭＩＦ阻害剤を非経口投与する場合は、薬剤の形態として静脈注射、皮下注射、皮内注射、筋肉注射及び腹腔内注射などに使用される注射剤（液剤、乳剤、懸濁剤等）、液剤（例えば、点眼剤、点鼻薬等）、懸濁剤、乳剤、点滴剤、吸入剤（エアロゾル剤、粉末吸入剤等）等が挙げられる。
［００２４］
本発明のＭＩＦ阻害剤が液剤、乳剤、懸濁剤等の注射剤として調製される場合、これらは殺菌され且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。
尚、この場合、等張性の溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明薬剤中に含有させてもよい。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
また、通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
［００２５］
本発明のＭＩＦ阻害剤が液状製剤である場合は、凍結保存又は凍結乾燥等により水分を除去して保存してもよい。凍結乾燥製剤は、使用時に注射用蒸留水等を加え、再度溶解して使用される。
［００２６］
本発明のＭＩＦ阻害剤を吸入剤として用いる場合、一般的に使用される従来公知の吸入剤用添加剤を使用して調製すればよい。この様な添加剤としては、例えば、噴射剤；白糖、乳糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の固形賦形剤：プロピレングリコール等の不活性液体のような液状賦形剤；メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、白糖等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム、軽質無水ケイ酸、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑沢剤；安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤；クエン酸、クエン酸ナトリウム等の安定化剤；メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、レシチン、トリオレイン酸ソルビタン等の懸濁化剤；界面活性剤等の分散剤；水等の溶剤；塩化ナトリウム等の等張化剤；硫酸、塩酸等のｐＨ調整剤；エタノール等の可溶化剤等が挙げられる。
［００２７］
さらに、本発明に係るＭＩＦ阻害剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させて調製することもできる。
［００２８］
ＴＲＸファミリーに属するポリペプチドの有効量は、当業者が従来の技術を参考に容易に決定することができるが、例えば、成人１人１日あたり０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ程度、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ程度である。
これを１日あたり１回又は数回に分けて投与することができるが、各種製剤の形態、患者の性別、年齢、疾患の程度に合わせて適宜調節することが好ましい。
［００２９］
［ＴＲＸ誘導剤］
本発明のＭＩＦ阻害剤として、体内でＴＲＸを誘導する物質を用いて、ＭＩＦによって引き起こされる障害を抑制することもできる。この様な物質としては、スルフォラファンが挙げられる。
スルフォラファンは、例えば、キャベツ、ムラサキキャベツ、ブロッコリー、ケール、ロ
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
料、紅茶飲料、果汁飲料、栄養飲料、アルコール飲料、ミネラルウォーター等の飲料類；粉末ジュース，粉末スープ等の粉末飲料；バランス栄養食；粉末、カプセル、錠剤等の形態を有するサプリメント；ドレッシング、ソース等の調味料；パン類；麺類；かまぼこ等の練り製品；ふりかけ等が挙げられる。
［００３６］
又、チオレドキシンファミリーのポリペプチド（ＴＲＸ）とチオレドキシン誘導剤を、組み合わせて本発明のＭＩＦ阻害剤として調製してもよい。
［００３７］
［マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）］
ＭＩＦは、ヒトをはじめ様々な動物種に存在し、１１４個のアミノ酸残基からなる分子量１２．３ｋＤａタンパク質で、分子内にレドックス活性領域であるＣｙｓ−Ｘ−Ｘ−Ｃｙｓモチーフを有することから、チオレドキシンファミリーに属する。
ＭＩＦは、リンパ球のみならず、脳や腎臓など種々の臓器で発現し、特に腎臓では尿細管上皮細胞、皮膚や角膜では細胞増殖の盛んな基底膜細胞等で発現が強い。
ＭＩＦを発現する細胞・組織としては、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体などを例示することができる。
［００３８］
本発明の限定的解釈を望むものではないが、ＴＲＸは炎症作用を有するＭＩＦに直接結合することにより、ＭＩＦの活性を低減させ、ＭＩＦによる炎症（並びに炎症による繊維化）を抑えることができる。詳細には、ＴＲＸがＭＩＦのレドックス活性領域に直接結合することによって、ＭＩＦの活性を阻害するものと考えられる。
また、ＴＲＸはＭＩＦの細胞内への取り込みを抑制することにより、ＭＩＦによる炎症（並びに炎症による繊維化）を抑えることができる。
本発明にかかるＭＩＦ阻害剤は、ＴＲＸ及びその誘導剤の１種以上を有効成分とするので、ＭＩＦによる炎症を抑制することにより、体内の炎症反応を軽減させるのに有効である。
［００３９］
本発明にかかるＭＩＦ阻害剤が適用可能な疾患（障害）群、即ち、ＭＩＦによって引き起こされる障害について説明する。ＭＩＦによって引き起こされる障害とは、ＭＩＦによって起きる「炎症反応」、並びに炎症反応に引き続く「組織の繊維化」を引き起こ
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
すものであれば、特に限られるものではないが、後述する疾患を列挙することができる。
［００４０］
［障害／疾患］
本発明のＭＩＦ阻害剤が適用される疾患、即ち、ＭＩＦによって引き起こされる障害としては、ＭＩＦを発現する細胞・組織である、Ｔ細胞、単球・マクロファージ、樹状細胞、メサンギウム細胞、尿細管上皮細胞、角膜上皮細胞、肝細胞、卵細胞、セルトリ細胞、ケラチノサイト、骨芽細胞、滑膜細胞、脂肪細胞、アストロサイト、癌細胞、粘膜、脳下垂体などにおける炎症等が挙げられる。
このような障害には、上述したＭＩＦを発現する細胞・組織においてＭＩＦの炎症作用によって直接的に引き起こされる障害、及びＭＩＦによる間接的作用によって各種細胞・組織等において間接的に引き起こされる障害が含まれるものとする。
［００４１］
ＭＩＦによって引き起こされる疾患の代表的なものとしては、遅延型アレルギー、慢性リウマチ様関節炎、動脈硬化、子宮内膜症、急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）、気管支喘息、腎臓移植による障害、急性心筋梗塞、糖尿病、全身性エリテマトーデス、クローン病、アトピー性皮膚炎、腎炎（特に急速進行性糸球体腎炎）、ＩｇＡ腎症、肝炎（特に急性肝炎）、肺障害（例えば、好中球や単球の肺胞への浸潤、気管支肺胞洗浄液中への誘導や肺出血による肺障害）、肺炎（例えば、ＢＣＧ−ＬＰＳ誘導急性肝炎）、関節炎、関節リウマチ（特にｔｙｐｅＩＩ  ｃｏｌｌａｇｅｎ関節炎及びａｄｊｕｖａｎｔ関節炎）、エンドドキシンショック、血小板減少に伴う感染症による敗血症などを列挙することができる。
［００４２］
その他、ＭＩＦによって引き起こされる障害の一つに、タバコの煙をはじめとする繊維質の燃焼時に発生する煙に含まれる有害成分によって引き起こされる障害が挙げられる。これはタバコ等の煙に含まれる有害成分によってＭＩＦの発現が誘導され、このＭＩＦが炎症反応を引き起こすからである。
ここで、前記有害成分の吸入には、能動的に吸入する場合（例えば、タバコの主流煙の吸入等）及び受動的に吸入する場合（例えばタバコの副流煙の吸入等）の両方が含まれる。また、該有害成分の吸入又は吸収の期間は特に限定されず、１回〜数日程度の急性、１〜３週間程度の亜急性、数ヶ月以上の慢性的に吸入又は吸収する
【国際調査報告】
2007138961.tif 000007
2007138961.tif 000008
2007138961.tif 000009
2007138961.tif 000010
2007138961.tif 000011
2007138961.tif 000012