(57)【要約】  本発明は、一般式（I）【化１】2007049553.tif 000034（式中、Ｒ１はＣ１〜１０のアルキル基、又はＣ２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩を有効成分とする循環不全治療剤に関する。
2007049553.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007049553.tif 000033
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする循環不全治療剤。
【請求項２】
前記一般式（I）において、Ｒ１が炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、炭素原子数１〜１０のアルコキシ基、炭素原子数２〜１０のアルケニルオキシ基、水酸基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基、或いはカルボキシ基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基であり、他が水素原子である請求項１に記載の循環不全治療剤。
【請求項３】
前記水酸基で置換されたアルコキシ基が、１個乃至２個の水酸基で置換されたアルコキシ基である請求項１又は２に記載の循環不全治療剤。
【請求項４】
循環不全の治療への、請求項１〜３のいずれかに記載の循環不全治療剤の使用。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれかに記載の循環不全治療剤を用いて循環不全を治療する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩（以下、単に「ベンゾピラン誘導体」という）を有効成分として含有する循環不全治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、下記一般式【０００３】
【化１】
2007049553.tif 000003
【０００４】
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基で置換されたアルコキシル基、又はカルボキシル基で置換されたアルコキシル基を表わし、他が水素原子を表わす。）で表わされるベンゾピラン誘導体を有効成分とする抗アレルギー剤が知られている（特許文献１参照）。【０００５】
また、下記一般式【０００６】
【化２】
2007049553.tif 000004
【０００７】
（式中、Ｒ１はアルキル基又はアルケニル基であり、Ｒ２は、水素原子、アルキル基、水酸基を有するアルキル基、アルケニル基、アシル基又はグリコシル基である。）で表わされるベンゾピラン誘導体を有効成分とする心臓疾患治療剤が知られている（特許文献２参照）。【０００８】
しかしながら、これら特許文献１、２には前記ベンゾピラン誘導体が循環不全の治療に有効であり、循環不全治療剤として極めて有用であることは示唆も教示されていなかった。
さらに、以下の構造式【０００９】
【化３】
2007049553.tif 000005
【００１０】
で表わされるベンゾピラン誘導体が、血小板凝集抑制作用を有すること、また、血栓症の治療又は予防剤として有用であることが知られている（例えば、非特許文献１及び特許文献３参照）。しかしながら、これらの化合物の安定性、生体吸収性については具体的な記載はなく、医薬品として好ましい特性を有するか全く不明であった。【００１１】
また、従来より血栓症、閉塞性動脈硬化症等の循環不全に対してアスピリン、シロスタゾール、ベラプロストナトリウム、塩酸チクロピジンなどが抗血小板薬、抗凝固薬等として使用されてきた（例えば、非特許文献２参照）。しかしながら、アスピリン、シロスタゾール、ベラプロストナトリウム、塩酸チクロピジンを末梢循環不全などの治療に使用すると抗血栓作用の副作用として出血傾向が見られるため、出血患者、出血の可能性のある患者、うっ血性心不全患者、重篤な血液異常の患者、重篤な肝障害の患者、手術直後の患者等への使用は禁忌とされている。【００１２】
【特許文献１】特開２００３−８１８２７号
【特許文献２】特開平９−３１５９６７号
【特許文献３】米国特許第４８４５１２１号
【非特許文献１】ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー３１巻，１４３７〜１４４５頁、１９８８年（DonaＬd.T.Witiak, J.Med.Chem., VoＬ.31,P.1437-1445,1988.）
【非特許文献２】「今日の治療薬」、南江堂、４７６〜４７８頁、２００２年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明が解決しようとする課題は、安全性、安定性及び生体吸収性に優れ、出血性の副作用が極めて弱く、かつ循環不全の治療に有効である、極めて有用な循環不全治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
そこで、本発明者らは、上記の課題を解決するために、種々の化合物を合成し、その循環不全改善作用、安全性、安定性、生体吸収性および出血性の評価を実施した結果、前記一般式（Ｉ）で表されるベンゾピラン誘導体が、優れた循環不全改善作用を有し、且つ既存薬に比べて安全性、安定性および生体吸収性に優れ、かつ出血性の副作用が極めて弱いという、優れた特性を有し、循環不全治療剤として極めて有用であることを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は、
一般式（I）【００１５】
【化４】
2007049553.tif 000006
【００１６】
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩を有効成分とする循環不全治療剤を提供する。
また、本発明は、循環不全の治療をするための、前記循環不全治療剤の使用に関する。
さらに、本発明は、前記循環不全治療剤を用いて循環不全を治療する方法を提供する。
【発明の効果】
【００１７】
本発明によれば、前記一般式（Ｉ）で表されるベンゾピラン誘導体を有効成分とすることにより、安全性、安定性、及び生体吸収性が高く、かつ出血性の副作用が極めて弱く、しかも循環不全に対して極めて優れた薬効を示す循環不全治療剤を提供することができる。
また、本発明によれば、前記循環不全治療剤を循環不全の治療に使用することによって、安全、かつ出血性の副作用をほとんど起こさずに、循環不全を効率的に治療することができる。
さらに、本発明の循環不全を治療する方法によれば、前記循環不全治療剤を用いることによって、安全、かつ出血性の副作用をほとんど起こさずに、循環不全を効率的に治療することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
前記一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体において、Ｒ１の炭素原子数１〜１０のアルキル基は、直鎖状のアルキル基でも、分岐したアルキル基でもよい。そのようなアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、２-エチル−プロピル基、ｎ−ヘキシル基、４-メチルペンチル基、ｎ−ヘプチル基、２−エチルヘキシル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基などが挙げられる。【００１９】
また、Ｒ１の炭素原子数２〜１０のアルケニル基は、直鎖状のアルケニル基でも、分岐したアルケニル基でもよい。そのようなアルケニル基としては、例えば、ビニル基、２−プロペニル基、２−ブテニル基、プレニル基、オクテニル基、ゲラニル基などが挙げられる。【００２０】
また、一般式（Ｉ）のＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のいずれか１つが表わす、アルコキシ基としては炭素原子数１〜１０のアルコキシ基が挙げられ、そのようなアルコキシ基としてはメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基、２-エチルプロポキシ基、ヘキシルオキシ基、４-メチルペンチルオキシ基、ヘプチルオキシ基、オクチルオキシ基、２−エチルヘキシルオキシ基、ノニルオキシ基、デシルオキシ基などが挙げられる。これらの中でも炭素原子数２〜８のアルコキシ基が好ましい。
また、アルケニルオキシ基としては、ビニルオキシ基、２−プロペニルオキシ基、２−ブテニルオキシ基、プレニルオキシ基、オクテニルオキシ基、ゲラニルオキシ基などが挙げられる。【００２１】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のいずれか１つが表わす水酸基で置換されたアルコキシ基としては水酸基で置換された炭素原子数１〜１０、好ましくは炭素原子数１〜４のアルコキシ基が挙げられ、そのような例としては、例えば、２−ヒドロキシエトキシ基、３−ヒドロキシプロポキシ基、４−ヒドロキシブトキシ基、２，３−ジヒドロキシプロポキシ基、３，４−ジヒドロキシブトキシ基などが挙げられる。これらの中でも１個乃至２個の水酸基で置換された前記アルコキシ基が特に好ましい。【００２２】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のいずれか１つが表わす、カルボキシ基で置換されたアルコキシ基としてはカルボキシ基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基が挙げられ、そのような例としては、例えば、カルボキシメトキシ基、２−カルボキシエトキシ基、３−カルボキシプロポキシ基、４−カルボキシブトキシ基などが挙げられる。これらの中でも１個のカルボキシ基で置換されたアルコキシ基が特に好ましい。【００２３】
次に、前記一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体の製造は、目的とするベンゾピラン誘導体によって、適宜好ましい製造法を選択して行うことが可能であるが、例えば、特開２００３-８１８２７号に記載された以下の製造法によって行うことができる。
すなわち、下記式で表される反応経路【００２４】
【化５】
2007049553.tif 000007
【００２５】
において、まず、ジヒドロキシアセトフェノン（ａ）の水酸基をベンジル基で保護して化合物（ｂ）を得る。次に、化合物（ｂ）と炭酸ジメチルとの縮合反応を行い、ケトエステル体（ｃ）を得た後、更に過酸化ベンゾイルと反応させて化合物（ｄ）を得る。ここで水酸基の保護基であるベンジル基を水素化分解により脱保護し、酸で処理することによりベンゾイルオキシ体（ｆ）とする。【００２６】
更に、このベンゾイルオキシ体（ｆ）の芳香環上の水酸基をベンジル基で保護して化合物（ｇ）とした後、４位にメトキシメチル基を導入して化合物（ｈ）を得る。化合物（ｈ）を脱ベンゾイル化した後、３位の水酸基をアルキル化して化合物（ｊ）を得る。水酸基のアルキル化はハロゲン化アルキル、硫酸エステル又はアリールスルホン酸エステル等との反応による慣用のアルキル化反応で行なうことができる。次いで芳香環上の水酸基の保護基を脱保護して化合物（ｋ）を得る。【００２７】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のいずれか１つがアルコキシ基、アルケニルオキシ基、又は水酸基或いはカルボキシ基で置換されたアルコキシ基である一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体を得る場合には、化合物（ｋ）又は化合物（ｍ）の芳香環上の水酸基を、アルキル化剤、アルケニル化剤（ハロゲン化アルキル、ハロゲン化アルケニル、硫酸エステル又はアリールスルホン酸エステル等）、或いは水酸基、又はカルボキシ基が保護されたアルキル化剤（ハロゲン化アルキル、硫酸エステル又はアリールスルホン酸エステル等）によりアルキル化し、保護された水酸基、又はカルボキシ基の脱保護反応を行なえばよい。【００２８】
更に、一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体の製造方法を説明するために、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５のいずれか１つが２−ヒドロキシエトキシ基であるベンゾピラン誘導体の製造方法を具体的に説明する。【００２９】
まず、塩基性物質の存在下、有機溶媒中で、化合物（ｋ）に２−アセトキシ臭化エタンを反応させるアルコキシ化反応を行なう。【００３０】
ここで用いられる塩基性物質としては、例えば、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の無機塩類、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ｔ−ブトキシナトリウム、ｔ−ブトキシカリウム等の金属アルコラート類、水素化ナトリウム、水素化カリウム等の金属水素化物等の塩基性物質が挙げられる。【００３１】
ここで用いられる有機溶媒としては、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン等の炭化水素系溶媒、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、１，２−ジメトキシエタン等のエーテル系溶媒、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、１−メチル−２−ピロリジノン等のアミド系溶媒が挙げられる。【００３２】
上記反応における反応温度は、０〜１００℃が好ましく、２０〜５０℃が特に好ましい。また、上記反応における反応時間は、通常１〜５時間である。【００３３】
次に、必要に応じて保護基であるアセチル基の脱保護を行なうが、この反応は、通常の塩基性条件下における脱アセチル化反応を行なえばよい。このようにして、目的とする２−ヒドロキシエトキシ基で置換されたベンゾピラン誘導体を製造することができる。【００３４】
本発明に用いる一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体の具体例としては、例えば、以下の化合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。【００３５】
【表１】
2007049553.tif 000008
【００３６】
【表２】
2007049553.tif 000009
【００３７】
【表３】
2007049553.tif 000010
【００３８】
【表４】
2007049553.tif 000011
【００３９】
【表５】
2007049553.tif 000012
【００４０】
【表６】
2007049553.tif 000013
【００４１】
【表７】
2007049553.tif 000014
【００４２】
【表８】
2007049553.tif 000015
【００４３】
【表９】
2007049553.tif 000016
【００４４】
【表１０】
2007049553.tif 000017
【００４５】
【表１１】
2007049553.tif 000018
【００４６】
【表１２】
2007049553.tif 000019
【００４７】
【表１３】
2007049553.tif 000020
【００４８】
【表１４】
2007049553.tif 000021
【００４９】
【表１５】
2007049553.tif 000022
【００５０】
【表１６】
2007049553.tif 000023
【００５１】
【表１７】
2007049553.tif 000024
【００５２】
【表１８】
2007049553.tif 000025
【００５３】
【表１９】
2007049553.tif 000026
【００５４】
本発明で言う「生理学的に許容される塩」とは、例えば上記化合物のアルカリ付加塩であり、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等の無毒性の塩が挙げられる。一般式（I）で表わされるベンゾピラン誘導体の生理学的に許容される塩は、前記一般式（I）で表わされるベンゾピラン誘導体から、通常の公知の方法により製造することができる。【００５５】
前記一般式（Ｉ）で表されるベンゾピラン誘導体は、後述の実施例に示すように、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー３１巻，１４３７〜１４４５頁、１９８８年（DonaＬd.T.Witiak, J.Med.Chem., VoＬ.31,P.1437-1445,1988.）（非特許文献１）や米国特許第４８４５１２１号（特許文献３）に記載の前記比較化合物Ａ、ＢおよびＣと比較して、安定性、及び生体吸収性において優れており、当該化合物を医薬品として用いる際に、特に好ましい特性を有する優れた有効成分である。【００５６】
また、前記一般式（Ｉ）で表されるベンゾピラン誘導体は、後述の実施例で示すように、低毒性であり、優れた循環不全治療作用を有する。【００５７】
本発明で言う「循環不全」とは、閉塞性または機能性の動脈の疾患、静脈の疾患および複合的な動静脈の疾患が含まれる。例えば、急性動脈閉塞症、慢性動脈閉塞症、機能的循環障害、糖尿病等による二次的な循環障害等が挙げられる。【００５８】
急性動脈閉塞症とは、近位の動脈硬化性プラーク（動脈内膜の脂質沈着で、内皮表面に形成される黄色の粥状物であり、血流を減少または途絶する恐れがある）の破裂や潜在するアテローム動脈硬化（大動脈及び中動脈の内膜に脂質沈着が不規則に分布するのを特徴とする動脈硬化症）による急性血栓症、および心臓や大動脈または他の大型の脈管から飛来した塞栓等が原因となる疾患であり、類似した機序で静脈に発症する静脈血栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓症等も急性の閉塞症に含まれる。また、外傷、手術、経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）および冠動脈バイパス術（ＣＡＧＢ）等より続発する血栓、塞栓および血管狭窄も急性の閉塞症に含まれる。【００５９】
慢性動脈閉塞症は、慢性的な虚血を呈するが、アテローム性プラーク（内膜への脂肪沈着によって生じる、動脈内膜面の黄色の限られた領域又は腫脹）が徐々に拡大することにより発症・進展する疾患である。閉塞性血栓血管炎およびバージャー病も慢性動脈閉塞症に含まれる。【００６０】
機能的循環障害とは、血管攣縮性のレイノー現象、レイノー病および先端チアノーゼ等が含まれる。二次的な循環障害とは、糖尿病、維持透析、膠原病、高血圧および高脂血症等において続発的に発症する循環障害を含む。【００６１】
前記一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体は、上記疾患に伴う、しびれ感、冷感、間欠性跛行、安静時疼痛、潰瘍、四肢潰瘍、皮膚潰瘍、壊疽等の緩和作用および治療作用を有する。加えて、血栓・塞栓性等の虚血性障害を起因とする脳梗塞の発症および再発を防ぐために、予防的に投与することもできる。【００６２】
本発明にいう循環不全改善作用は、特開２００３−８１８２７号（特許文献１）や特開平０９−３１５９６７号（特許文献２）にいう抗アレルギー作用、心臓疾患治療作用とは全く異なる作用である。即ち、特開２００３−８１８２７号（特許文献１）にいう抗アレルギー作用は、外因性又は内因性の抗原により生体の免疫機構が過剰に活性化されて生じるアレルギー性疾患に対する予防又は治療作用であり、アレルギー性疾患とは、例えば、即時型喘息、遅延型喘息、気管支喘息、小児喘息、鼻閉、アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、蕁麻疹、湿疹、アレルギー性結膜炎、アレルギー性鼻炎、花粉症、食物アレルギー、アレルギー性胃腸炎、アレルギー性大腸炎、薬物アレルギー、接触性皮膚炎、自己免疫性疾患などをいい、本発明にいう循環不全とは全く異なる。【００６３】
また、特開平０９−３１５９６７号（特許文献２）にいう心臓疾患とは、上室性期外収縮、発作性上室頻拍、発作性心房細動、慢性心房細動、心房細動、心室性期外収縮、心室性頻拍、心室細動及び房室ブロック等の不整脈、虚血性心疾患（心筋梗塞、狭心症等）に伴う不整脈、急性心筋梗塞、慢性心筋梗塞、心不全、狭心症等であり、本発明にいう循環不全とは全く異なる。【００６４】
前記一般式（Ｉ）で表わされるベンゾピラン誘導体を有効成分とする循環不全治療剤は、経口、又は非経口投与（例えば静脈内投与、皮下投与、経皮投与又は直腸内投与等）することができ、投与に際しては各々の投与法に適した製剤形態に調製することができる。かかる製剤は、その用途に応じて錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、トローチ剤、舌下錠、坐剤、軟膏剤、注射剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、チュアブル剤などの製剤に調製することができる。【００６５】
これらの調製に際しては、例えば、この種の薬剤に通常使用されている無毒性の賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、保存剤、酸化防止剤、等張化剤、緩衝剤、コーティング剤、矯味剤、溶解補助剤、基剤、分散剤、安定化剤、着色剤などの添加剤を使用し慣用の方法により製剤化することができる。これらの無毒性添加剤の具体例を以下に列挙する。【００６６】
まず、賦形剤としては、例えば、でんぷん及びその誘導体（デキストリン、カルボキシメチルスターチ等）、セルロース及びその誘導体（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、糖類（乳糖、白糖、ブドウ糖等）、ケイ酸及びケイ酸塩類（天然ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム）、炭酸塩（炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム等）、水酸化アルミニウム・マグネシウム、合成ヒドロタルサイト、ポリオキシエチレン誘導体、モノステアリン酸グリセリン、モノオレイン酸ソルビタンなどが挙げられる。【００６７】
結合剤としては、例えば、でんぷん及びその誘導体（アルファー化デンプン、デキストリン等）、セルロース及びその誘導体（エチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、アラビアゴム、トラガント、ゼラチン、糖類（ブドウ糖、白糖等）、エタノール、ポリビニルアルコールなどが挙げられる。【００６８】
崩壊剤としては、例えば、でんぷん及びその誘導体（カルボキシメチルスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ等）、セルロース及びその誘導体（カルボキシメチルセルロースナトリウム、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等）、炭酸塩（炭酸カルシウム、炭酸水素カルシウム等）、トラガント、ゼラチン、寒天などが挙げられる。【００６９】
滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸及びその塩類（軽質無水ケイ酸、天然ケイ酸アルミニウム等）、酸化チタン、リン酸水素カルシウム、乾燥水酸化アルミニウムゲル、マクロゴールなどが挙げられる。【００７０】
保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、亜硫酸塩類（亜硫酸ナトリウム、ピロ亜硫酸ナトリウム等）、リン酸塩類（リン酸ナトリウム、ポリリン酸カルシウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム等）、アルコール類（クロロブタノール、ベンジルアルコール等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、クレゾール、クロロクレゾール、デヒドロ酢酸、デヒドロ酢酸ナトリウム、ソルビン酸グリセリン、糖類などが挙げられる。【００７１】
酸化防止剤としては、例えば、亜硫酸塩類（亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム等）、ロンガリット、エリソルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸、システイン、チオグリセロール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、アスコルビン酸パルミテート、ｄＬ−α−トコフェロールなどが挙げられる。【００７２】
等張化剤としては、例えば、塩化ナトリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、デキストリン、グリセリン、ブドウ糖などが挙げられる。【００７３】
緩衝剤としては、炭酸ナトリウム、塩酸、ホウ酸、リン酸塩（リン酸水素ナトリウム等）などが挙げられる。【００７４】
コーティング剤としては、例えば、セルロース誘導体（ヒドロキシプロピルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等）、セラック、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピリジン類（ポリ−２−ビニルピリジン、ポリ−２−ビニル−５−エチルピリジン等）、ポリビニルアセチルジエチルアミノアセテート、ポリビニルアルコールフタレート、メタアクリレート・メタアクリル酸共重合体などが挙げられる。【００７５】
矯味剤としては、例えば、糖類（ブドウ糖、白糖、乳糖等）、サッカリンナトリウム、糖アルコール類等が挙げられる。【００７６】
溶解補助剤としては、例えば、エチレンジアミン、ニコチン酸アミド、サッカリンナトリウム、クエン酸、クエン酸塩類、安息香酸ナトリウム、石鹸類、ポリビニルピロリドン、ポリソルベート類、ソルビタン脂肪酸エステル類、グリセリン、ポリプレングリコール、ベンジルアルコールなどが挙げられる。【００７７】
基剤としては、例えば、脂肪類（豚脂等）、植物油（オリーブ油、ゴマ油等）、動物油、ラノリン酸、ワセリン、パラフィン、ロウ、樹脂、ベントナイト、グリセリン、グリコール油、高級アルコール類（ステアリルアルコール、セタノール等）などが挙げられる。【００７８】
分散剤として、例えば、アラビアゴム、トラガント、セルロース誘導体（メチルセルロース等）、ステアリン酸ポリエステル類、セスキオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸アルミニウム、アルギン酸ナトリウム、ポリソルベート類、ソルビタン脂肪酸エステル類などが挙げられる。【００７９】
安定化剤としては、例えば、亜硫酸塩類（亜硫酸水素ナトリウム等）、窒素、二酸化炭素などが挙げられる。【００８０】
かかる製剤中における一般式（Ｉ）で示されるベンゾピラン誘導体の含有量は、その剤型に応じて異なるが、一般に０．０１〜１００質量％であることが望ましい。【００８１】
本発明の循環不全治療剤の投与量は、対象とする人間をはじめとする温血動物の種類、症状の軽重、医師の判範断等により広範囲に変えることができるが、一般に有効成分として、経口投与の場合、体重１ｋｇ当たり１日に０．０１〜１００ｍｇが好ましく、０．１〜７０ｍｇがより好ましい。また、非経口投与の場合の投与量は、同様に、体重１ｋｇ当たり１日に０．０１〜１００ｍｇが好ましく、０．１〜７０ｍｇがより好ましい。また、上記投与量は１日１回又は数回に分けて投与することができ、患者の症状の軽重、医師の診断に応じて適宜変えることができる。
【実施例】
【００８２】
次に、実施例により本発明を具体的に説明するが、もとより本実施例の範囲に本発明の範囲が限定されるものではない。【００８３】
（実施例１）（ラット急性毒性試験）
本発明に用いるベンゾピラン誘導体（以下「本発明化合物」という）の安全性の確認のため、ラットを用いた急性毒性試験を行った。【００８４】
＜試験方法＞
本発明化合物９、６７、９８、１１８、１１９、１２０、１２１、１２３、１２４、１２５、１３１、１４１、１４４、１７４、１７９、１９６、２１４、２３７、２４４、２６１、２８０、２９５、３３３、３４７、３８８、４２９、４４５、４４９、４５１、４６８、４７７、４８５、４９１、５０６、５２５、５４７、５５１、６３３を０．５（ｗ／ｖ）％メチルセルロース水溶液に加えて調製の上、各化合物が各５００、１０００及び２０００ｍｇ／ｋｇとなるよう、ラット用胃ゾンデを用いて、ラット（ＳＤ系雄性、体重１２０〜２００ｇ、１群５匹）に強制経口投与した。
投与後、ケージ内にて７日間飼育し、死亡動物の有無及び一般状態を観察し、観察終了時のラットの生存率より５０％致死量（ＬＤ５０：ｍｇ／ｋｇ）を推定した。【００８５】
＜試験結果＞
試験化合物のＬＤ５０は何れも２０００ｍｇ／ｋｇ以上であり、本発明化合物の安全性が極めて高いことが確認された。【００８６】
（実施例２）（ラウリン酸誘発循環障害モデルに対する薬理効果）
ラウリン酸を大腿動脈内に投与することにより発現するラットにおける循環不全モデルを用いて、本発明化合物の薬理作用試験を行った。【００８７】
＜試験方法＞
１３週齢Ｗｉｓｔｅｒ系雄性ラット（体重２８０〜３１６ｇ）を１群８匹として使用した。ペントバルビタールナトリウム４０ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与により麻酔したラットを背位に固定後、右大腿部を小切開し、末梢血管の障害により下肢壊疽を誘発するため１０ｍｇ／ｍＬのラウリン酸溶液を大腿動脈に０．１５mＬ投与し、アロンアルファ(登録商標)の滴下により止血後、化膿防止のため抗生物質（ペニシリンＧカリウム溶液）を滴下し、切開部を縫合した。【００８８】
０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース溶液に本発明化合物を加えて、本発明化合物を含有する０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース懸濁液を調製した。これを投与量がいずれの化合物においても３０ｍｇ/ｋｇとなるよう、ラウリン酸投与１時間前及び投与後３時間、その後９日間１日２回（１０：００及び１７：００）の割合で反復経口投与した。陽性対象として０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース溶液に塩酸チクロピジンを加えて、塩酸チクロピジンを含有する０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース懸濁液を調製した。これを投与量が３００ｍｇ/ｋｇとなるよう、ラウリン酸投与前３時間に経口投与した。
なお、病変の進行度の判定は、ラウリン酸投与３日後及び１０日後に行い以下の基準に従った。【００８９】
０：変化なし
１：黒変が爪先部に限られる
２：黒変が指部におよぶ
３：指の壊死
４：指の脱落【００９０】
各指ごとにグレード付けを行い、５本の指のスコアの総和を病変指数とし、さらに障害が足踵部までおよぶ場合は、５ポイントを加え最大２５ポイントとした。【００９１】
＜試験結果＞
コントロール（無処置）群、及び各化合物の薬理効果を以下の表２０に記載した。数値は、得られた結果の平均値を表記した。【００９２】
【表２０】
2007049553.tif 000027
【００９３】
本実施例の結果より、本発明化合物は、コントロール（無処置）群に対して病変指数を低下させ、陽性対照である塩酸チクロピジンとほぼ同等か、それ以上の効果を示し、循環不全治療剤として有用であることが明らかとなった。【００９４】
（実施例３）（ラットを用いた出血時間に及ぼす影響）
＜試験方法＞
５週齢のＳＤ系雄性ラット（体重１３８〜１５２ｇ)を各群６匹として使用した。０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース溶液に、比較対照物質（アスピリン、シロスタゾール、ベラプロストナトリウム、塩酸チクロピジン）または本発明化合物（化合物番号１２５、１４４、４４５、４５１、５２５）を加えて、比較対照物質または本発明化合物を含有する０．５（ｗ/ｖ）％メチルセルロース懸濁液を調製した。これらを投与量が、アスピリンは１００ｍｇ／ｋｇ、シロスタゾールは３００ｍｇ／ｋｇ、ベラプロストナトリウムは１ｍｇ/ｋｇとなるよう、また、本発明化合物（化合物番号１２５、１４４、４４５、４５１、５２５）は、それぞれ３０ｍｇ/ｋｇとなるよう、ラットにそれぞれ経口投与し、５０分後にペントバルビタールナトリウム５０ｍｇ/ｋｇを腹腔内投与した。
但し、比較対照物質である塩酸チクロピジンは、生体内における代謝物が薬効を発現する活性化合物となるため、投与後から尾切断までの時間を長時間とした。即ち、投与２時間５０分後にペントバルビタールナトリウム５０ｍｇ/ｋｇを腹腔内投与し、１０分後にメスを用いて尾を先端から２ｍｍの位置で切断し、直ちに約３７℃に加温した生理食塩液を満たしたガラス容器（マグヌス槽）に入れ、出血が止まるまで観察した。【００９５】
出血時間は尾を切断してから出血が停止するまでの時間とした。尾は予め先端から５ｃｍの位置にマーキングを行い、ガラス容器中の生理食塩液水面から５ｃｍの深さまで入れた。最長観察時間は尾切断後６０分までとした。【００９６】
＜試験結果＞
得られた結果のうち、媒体、及び試験化合物の投与から尾切断までの時間が６０分の結果について、表２１に示した。【００９７】
【表２１】
2007049553.tif 000028
【００９８】
また、得られた結果のうち、媒体、及び試験化合物の投与から尾切断までの時間が１８０分の結果について、表２２に示した。【００９９】
【表２２】
2007049553.tif 000029
【０１００】
これらの結果より、本発明化合物は、従来の治療薬に比較して、出血時間の延長作用が抑制された薬剤であることが明らかとなった。【０１０１】
（実施例４）（安定性に関する試験）
本発明化合物の安定性を明らかにするため、本発明化合物１２５、４５１、５２５と、比較化合物Ａ、Ｂ、及びＣとの酸性溶液中、及び塩基性溶液中における安定性試験を行った。【０１０２】
＜試験方法＞
酸性溶液（ｐＨ３．４リン酸緩衝液）、及び塩基性溶液（ｐＨ７．３リン酸緩衝液）に、１ｍｍｏＬ／Ｌの濃度で試験化合物を溶解させた。溶解直後に、酸性溶液（ｐＨ３．４リン酸緩衝液）、及び塩基性溶液（ｐＨ７．３リン酸緩衝液）を溶離溶媒とする液体クロマトグラフによる分析を行い、試験化合物のピーク面積を測定し、０時間における測定値とした。さらに、経時的に液体クロマトグラフィー分析を行い、それぞれの経過時間におけるピーク面積を測定した。時間経過中の試験物質溶液は、３７℃のインキュベータ中に保存した。測定された試験化合物のピーク面積をもとに、０時間におけるピーク面積を１００（％）として、各測定時におけるピーク面積の百分率を算出し、各試験化合物の半減期（試験化合物の５０％残存率を示す時間）を求め、その半減期の値から安定性を評価した。【０１０３】
＜試験結果＞
結果を表２３に示す。【０１０４】
【表２３】
2007049553.tif 000030
【０１０５】
この結果、本発明化合物は、１００時間経過後でもピーク面積の減少が全く確認されず、分解が認められなかった。従って、本発明化合物は、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー３１巻，１４３７〜１４４５頁、１９８８年（DonaＬd.T.Witiak, J.Med.Chem., VoＬ.31,P.1437-1445,1988.）（非特許文献１）、及び米国特許第４８４５１２１号（特許文献３）に記載の比較化合物Ａ、ＢおよびＣと比較して安定性に優れた薬剤であることが明らかとなった。【０１０６】
（実施例５）（生体吸収性に関する試験）
本発明化合物（化合物４５１）と比較化合物Ａ及びＢとの生体吸収性について比較を行なうため、ラットを用いた経口投与における血漿中濃度測定試験を行った。【０１０７】
＜試験方法＞
１．薬剤の投与と採血
動物は、６週齢ＳＤ系雄性ラット（体重２００〜２３０ｇ）を使用した（１群３匹）。薬剤の必要量を秤量し、メノウ乳鉢で粉砕した後、０．５（ｗ／ｖ）％メチルセルロース溶液を用いて、１０ｍｇ/５ｍＬの濃度に調整し、体重１ｋｇ当たり、５ｍＬ容量を胃ゾンデを用いて一回経口投与した。投与後、０．２５、０．５、１、２、４、６、８、１２、２４時間目にヘパリン処理したガラス管を用いて尾静脈より、約０．３ｍＬ採血した。採血後に、遠心分離を行い、血漿を採取した。【０１０８】
２．試料の調整
得られた血漿１２０μＬにメタノール３０μＬ、アセトニトリル３００μＬを加え、Ｖｏｒｔｅｘミキサーで１５秒間混合した。試料を遠心分離し、上清３００μＬを採取し、乾燥後、溶離溶媒１２０μＬを添加し、Ｖｏｒｔｅｘミキサーで１５秒間混合した。遠心分離を行い、液体クロマトグラフにより、血漿中の各試験化合物の存在量を測定した。【０１０９】
３．液体クロマトグラフによる試験化合物の測定
作製した試料４０μＬを、以下の条件の液体クロマトグラフに注入し、測定を行った。【０１１０】
（１）化合物４５１の液体クロマトグラフ条件
使用カラム：ＩｎｅｒｔｓｉＬ（登録商標）  ＯＤＳ−３  ４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ、
カラム温度：４０℃、
溶離溶媒：Ａ溶液；１０ｍｍｏＬ／Ｌ酢酸アンモニウム：メタノール＝５０：５０、Ｂ溶液；１０ｍｍｏＬ／Ｌ酢酸アンモニウム：メタノール＝１０：９０、グラジエント（溶媒組成）：Ａ溶液→２０分→Ｂ溶液（５分間溶離）→１分→Ａ溶液（１２分間溶離）、
流速：１．０ｍＬ、
検出波長：３１４ｎｍ【０１１１】
（２）比較化合物Ａの液体クロマトグラフ条件
使用カラム：ＩｎｅｒｔｓｉＬ（登録商標）ＯＤＳ−３  ４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ、
カラム温度：４０℃、
溶離溶媒：Ａ溶液；水：メタノール：酢酸＝９０：１０：０．５、Ｂ溶液；水：メタノール：酢酸＝１０：９０：０．５、グラジエント（溶媒組成）：Ａ溶液→２０分→Ｂ溶液（５分間溶離）→１分→Ａ溶液（１２分間溶離）、
流速：１．０ｍＬ、
検出波長：３２３ｎｍ【０１１２】
（３）比較化合物Ｂの液体クロマトグラフ条件
使用カラム：ＩｎｅｒｔｓｉＬ（登録商標）ＯＤＳ−３  ４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ、
カラム温度：４０℃、溶離溶媒：Ａ溶液；ｐＨ＝２．２リン酸緩衝液：アセトニトリル：９０：１０、Ｂ溶液；ｐＨ＝２．２リン酸緩衝液：アセトニトリル：１０：９０、グラジエント（溶媒組成）：Ａ溶液→１０分→Ｂ溶液（２．５分間溶離）→０．５分→Ａ溶液（９分間溶離）、
流速：２．０ｍＬ、
検出波長：３１５ｎｍ【０１１３】
（試験結果）
各試験化合物の１μｇ／ｍＬの血漿溶液の液体クロマトグラフにおけるピーク面積をもとに、各試験化合物の液体クロマトグラフにおけるピーク面積から、各経過時間における血漿中濃度（μｇ/ｍＬ）を算出した。結果を表２４に示す。【０１１４】
【表２４】
2007049553.tif 000031
【０１１５】
また、試験結果を基に算出した各種薬物動態学的パラメータを以下の表２５に示す。
ここで、「Ｃｍａｘ」は血漿中における最高濃度を示し、また、「Ｔｍａｘ」は最高濃度に到達するまでの時間を示し、「ＡＵＣ」は血漿中濃度−時間曲線下面積を表わし、ここでは、各試験化合物投与時から２４時間経過時までの血漿中濃度の総和を示す。【０１１６】
【表２５】
2007049553.tif 000032
【０１１７】
この結果、本発明化合物は、比較化合物Ａ，Ｂに比較し、各経過時間において血漿中における濃度が、約３〜４０倍高く、また、ＡＵＣの算出から、血漿中において長時間にわたり高濃度を保持できることが明らかとなり、生体吸収性に優れた化合物であることが明らかとなった。【０１１８】
以上の（実施例４）及び（実施例５）の結果から、本発明化合物は、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー３１巻，１４３７〜１４４５頁、１９８８年（DonaＬd.T.Witiak, J.Med.Chem., VoＬ.31,P.1437-1445,1988.）（非特許文献１）、及び米国特許第４８４５１２１号（特許文献３）に記載の比較化合物Ａ、ＢおよびＣと比較して、安定性及び生体吸収性に優れ、医薬として優れた特性を有することが明らかとなった。【０１１９】
（実施例６）（１００ｍｇ錠）
化合物４５１が１００ｍｇ、乳糖５０ｍｇ、結晶セルロース２０ｍｇ、クロスカルメロースナトリウム２０ｍｇ、ヒドロキシプロピルセルロース９ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム１ｍｇの合計２００ｍｇ／錠となるように、配合物各々の７５０倍量を用いて、１００ｍｇ錠剤を製造した。【０１２０】
まず、化合物４５１をジェットミル粉砕し、粉砕物を得た。次に、乳糖３７．５ｇ、結晶セルロース１５ｇ、クロスカルメロースナトリウム１５ｇ、得られた化合物４５１粉砕物７５ｇを混合造粒機で混合した後、１０％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液６７．５ｇをスプレーしながら造粒した。乾燥後、ステアリン酸マグネシウム０．７５ｇを加え、カッターミルで粉砕し、更によく混合した後、打錠機により打錠して、目的とする錠剤を得た。【０１２１】
（実施例７）（１０％散剤）
化合物４５１の結晶１００ｍｇを乳鉢で粉砕し、それに乳糖９００ｍｇを添加し、乳棒で粉砕しながら、充分混合し、１０％散剤とした。【０１２２】
（実施例８）（１０％顆粒）
乳鉢内で、３００ｍｇの化合物５２５を３００ｍｇのでんぷんと混合粉砕した。これに２０００ｍｇの乳糖、３７０ｍｇのでんぷんを加え混合した。別にゼラチン３０ｍｇに精製水１ｍＬを加えて、加熱溶解し、冷後かき混ぜながらこれにエタノール１ｍＬを加え、ゼラチン液としたものを調製し、先の混合物にゼラチン液を添加練合し、造粒した後、乾燥して整粒した。
【産業上の利用可能性】
【０１２３】
本発明のベンゾピラン誘導体を有効成分とする薬剤は、循環不全治療薬として、医療上利用することができる。さらに、本発明の前記薬剤の使用、及び前記薬剤を用いた循環不全を治療する方法は、循環不全の治療に極めて有効であり、医療上利用することができる。
【手続補正書】
【提出日】平成19年8月24日(2007.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007049553.tif 000035
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩を有効成分とする循環不全治療剤であって、
前記循環不全治療剤は、閉塞性または機能性の動脈の疾患、静脈の疾患、又は、これらの複合的な動静脈の疾患に起因する末梢血管障害を治療するために用いられることを特徴とする循環不全治療剤。
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、炭素原子数１〜１０のアルコキシ基、炭素原子数２〜１０のアルケニルオキシ基、水酸基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基、或いはカルボキシ基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基であり、他が水素原子である請求項１に記載の循環不全治療剤。
【請求項３】
前記水酸基で置換されたアルコキシ基が、１個乃至２個の水酸基で置換されたアルコキシ基である請求項１又は２に記載の循環不全治療剤。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
請求項１に記載の循環不全治療剤を用いて、閉塞性または機能性の動脈の疾患、静脈の疾患、又は、これらの複合的な動静脈の疾患に起因する末梢血管障害を治療する方法。
【請求項６】
前記末梢血管障害に伴う、しびれ感、冷感、間欠性跛行、安静時疼痛、潰瘍、四肢潰瘍、皮膚潰瘍、及び壊疽からなる群から選ばれる少なくとも１つの症状を治療するために用いられる請求項１〜３のいずれかに記載の循環不全治療剤。
【請求項７】
前記循環不全治療剤が、有効成分として、体重１ｋｇ当たり１日に０．０１〜１００ｍｇの量で投与される請求項１〜３、及び６のいずれかに記載の循環不全治療剤。
【請求項８】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007049553.tif 000036
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩の、請求項１に記載される循環不全治療剤の製造への使用。
【請求項９】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007049553.tif 000037
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩を有効成分とすることを特徴とする末梢循環不全治療剤。
【請求項１０】
前記一般式（Ｉ）において、Ｒ１が炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、炭素原子数１〜１０のアルコキシ基、炭素原子数２〜１０のアルケニルオキシ基、水酸基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基、或いはカルボキシ基で置換された炭素原子数１〜４のアルコキシ基であり、他が水素原子である請求項９に記載の末梢循環不全治療剤。
【請求項１１】
前記水酸基で置換されたアルコキシ基が、１個乃至２個の水酸基で置換されたアルコキシ基である請求項９又は１０に記載の末梢循環不全治療剤。
【請求項１２】
末梢循環不全に伴う、しびれ感、冷感、間欠性跛行、安静時疼痛、潰瘍、四肢潰瘍、皮膚潰瘍、及び壊疽からなる群から選ばれる少なくとも１つの症状を治療するために用いられる請求項９〜１１のいずれかに記載の末梢循環不全治療剤。
【請求項１３】
前記末梢循環不全治療剤が、有効成分として、体重１ｋｇ当たり１日に０．０１〜１００ｍｇの量で投与される請求項９〜１２のいずれかに記載の末梢循環不全治療剤。
【請求項１４】
一般式（Ｉ）
【化１】
2007049553.tif 000038
（式中、Ｒ１は炭素原子数１〜１０のアルキル基、又は炭素原子数２〜１０のアルケニル基を表わす。Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、それらのいずれか１つが水酸基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、水酸基で置換されたアルコキシ基、又はカルボキシ基で置換されたアルコキシ基を表わし、他が水素原子を表わす。）
で表わされるベンゾピラン誘導体又はその生理学的に許容される塩の、末梢循環不全治療剤の製造への使用。
【請求項１５】
請求項９に記載の末梢循環不全治療剤を用いて末梢循環不全を治療する方法。
【国際調査報告】
2007049553.tif 000039
2007049553.tif 000040
2007049553.tif 000041
2007049553.tif 000042
2007049553.tif 000043
2007049553.tif 000044