(57)【要約】  コンフォーメーション病の早期診断に有用なプローブ化合物、それを含むコンフォーメーション病診断用組成物およびキット、ならびにコンフォーメーション病治療および／または予防用医薬組成物などが本発明により提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2007074786.tif 000061
（I）
［式中、ＡはＣＨまたはＮ；
ＤはＳ、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１−３アルキル、ＯまたはＣＨ２であり；
Ｒ１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲａＲｂ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、Ｏ−（ＣＨ２）ｌ−ＯＴｓ、またはＯ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＲｃＲｄまたは
【化２】
2007074786.tif 000062
であり；
隣接するＲ１は一緒になってフェニル環を形成してもよく；
Ｒ２は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル‐ハロゲン、ＯＨまたはＣＮであり；
Ｒ４は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、ピロリジン環、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、または
【化３】
2007074786.tif 000063
であり；
ＲａおよびＲｂは独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
ＲｃおよびＲｄはそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲａＲｂ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝ＯまたはＯＴｓであり；
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
ｋは１ないし４の整数であり；
ｌは１ないし４の整数であり；
ｍは０ないし３の整数であり；
ｍ'は０ないし３の整数であり；
ｍ''は０ないし３の整数であり；
ｎは１ないし４の整数であり；
Ｅはベンゼン環または
【化４】
2007074786.tif 000064
であり、
ＸはＣＨ、Ｓ、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１−３アルキルまたはＯであり；
ＹはＣＨまたはＮであり；
Ｙ'はＣＨまたはＮであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−Ｒｅであり；
Ｒ３はＹとＹ'の両方、または一方がＣＨのときに存在し、水素、Ｃ１−４アルキル、ＯＨまたはハロゲンであり；
Ｒｅは水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置はシス型、トランス型のいずれであってもよい］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項２】
ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−２０７、ＴＨＫ−２８１、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７２７、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３およびＴＨＫ−７６６からなる群より選択される請求項１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項３】
Ｒ４がモルホリン環である請求項１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項４】
ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−５７５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０３、ＴＨＫ−７２６およびＴＨＫ−７２７からなる群より選択される請求項３記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項５】
ＴＨＫ−６８３、ＴＨＫ−７０７、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７１１、ＴＨＫ−７１３、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１およびＴＨＫ−７６３からなる群より選択される請求項１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項６】
標識された請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項７】
放射性標識で標識された請求項６記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項８】
標識が陽電子放出核である請求項７記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物。
【請求項９】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を含有する、コンフォーメーション病診断用組成物。
【請求項１０】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を含有する、コンフォーメーション病を治療および／または予防するための医薬組成物。
【請求項１１】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成要素として含む、コンフォーメーション病診断用キット。
【請求項１２】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成要素として含む、βシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色するための組成物またはキット。
【請求項１３】
画像診断用である、請求項９記載の組成物または請求項１１もしくは１２記載のキット。
【請求項１４】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、対象におけるコンフォーメーション病の治療および／または予防方法。
【請求項１５】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、対象におけるコンフォーメーション病の診断方法。
【請求項１６】
対象におけるコンフォーメーション病の診断用組成物またはキットを製造するための、請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項１７】
対象におけるコンフォーメーション病の治療および／または予防のための医薬組成物を製造するための、請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項１８】
請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を用いて試料を染色することを特徴とする、試料中のβシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色する方法。
【請求項１９】
試料中のβシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色するための組成物またはキットを製造するための、請求項１ないし８のいずれか１項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用。
【請求項２０】
化合物がＴＨＫ−７２７である、請求項１２記載の組成物またはキット、請求項１８記載の方法、あるいは請求項１９記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コンフォーメーション病の診断プローブ、特に画像診断プローブ、詳細には陽電子放出核種により標識されたプローブ、ならびに該プローブを含む画像診断用組成物に関する。さらに本発明は、例えば、脳材料中のアミロイドβ蛋白および神経原線維変化の検出・染色、例えば、アルツハイマー病患者脳における老人斑の検出・染色、ならびにコンフォーメーション病の予防および／または治療用の医薬組成物にも関する。また、本発明は、上記プローブ化合物を含むコンフォーメーション病診断組成物などにも関する。
【背景技術】
【０００２】
コンフォーメーション病特有のβシート構造をとった蛋白が蓄積する疾患には、体内の種々の器官や組織への不溶性原線維性蛋白の沈着を特徴とする種々の疾病がある。これらの疾病には、アルツハイマー病、プリオン病、レビー小体病、パーキンソン病、ハンチントン病、球脊髄性筋萎縮症、歯状核・淡蒼球ルイ体萎縮症、脊髄・小脳変性症、Machado-Joseph Disease、Amyophic Lateral Sclerosis（ALS）、ダウン症候群、ピック病、FTDP-17（Frontotemporal Dementia and Parkinsonism linked to Chromosome 17）、LNTD (Limbic Neurofibrillary Tangle Demetia)、Sudanophilic Leukodystrophy、アミロイドーシス等が含まれる。【０００３】
このうち、アルツハイマー病（ＡＤ）は現在最も治療の困難な疾病の１つとされており、正確な早期診断が望まれている疾病である。アルツハイマー病は主として初老期から老年期に起こる進行性の認知症を特徴とする疾患である。病理学的には大脳の全体的な萎縮、神経細胞の著しい変性と脱落、神経原線維変化と老人斑の出現を特徴とする。アルツハイマー病に代表される認知症の最大のリスクファクターは加齢であることが知られている。したがって、老齢人口の増加に伴う患者数の増加は、特に、高齢化社会となっている日本、アメリカ、ヨーロッパ諸国において顕著であり、それに対する医療コストはこれらの国の医療システムを危機におとしめている。【０００４】
なお、我が国においては、アルツハイマー病患者数は約１００万人と推定され、今後人口の高齢化に伴いその患者数は増大することが確実視されている。アルツハイマー病患者にかかわる費用は介護費用を含めると年間患者１人当たり１００万円から３００万円と考えられていることから、すでに我が国では１兆円から３兆円の社会経済的コストを払っていることになる。アルツハイマー病において症状が顕在化する以前ないしはできるだけ早期に治療を加えることは、大きな医療経済的効果をもたらすことはいまや世界の常識となっている。【０００５】
現在のアルツハイマー病診断方法は各種あるが、我が国においては長谷川式、ＡＤＡＳ、ＭＭＳＥ等の、アルツハイマー病が疑われる個体の認知機能の低下を定量的に評価する方法が一般的であり、まれに画像診断法（ＭＲＩ、ＣＴ等）が補助的に用いられている。しかしこれらの診断法では病気を確定するには不十分であり、確定診断には生前における脳の生検（バイオプシー）、死後脳の病理組織学的検査が必要である。このように、アルツハイマー病の診断法についても精力的な研究が行われているにもかかわらず、それほどの進歩がみられないでいる。多くの研究の結果、最初の臨床症状が現れるかなり前（長い場合は約４０年前）にはすでにアルツハイマー病特徴的な神経変性が始まっていることが判ってきた。また同病においては患者を取り巻く家族または臨床家が最初の臨床症状に気づいた時には、すでに脳内病理像は取り返しのつかない状態まで進行していることが知られている。上述のような病状の進行特性および患者数の激増を考え合わせると、アルツハイマー病の正確な早期診断の必要性ならびに意義は極めて大きい。【０００６】
アルツハイマー病の病理組織像は２つの主徴に代表される。すなわち老人斑および神経原線維変化である。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ（Ａβ）蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたアミロイドβ蛋白である。アルツハイマー病の確定診断はこれらの病理学的特徴が患者脳内に出現することをよりどころとしている。【０００７】
アミロイドβ蛋白はアルツハイマー病を包含するコンフォーメーション病に特徴的であり、密接な関連性を有している。したがって、体内、特に脳内でβシート構造をとったアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、コンフォーメーション病、特にアルツハイマー病の重要な診断方法の１つとなる。アルツハイマー病をはじめとするアミロイドが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳内アミロイドβ蛋白に特異的に結合し、これを染色する物質の検索が従来から行われている。かかる物質としてはコンゴーレッド（非特許文献１参照）およびチオフラビンＳ（非特許文献２参照）、チオフラビンＴ（非特許文献３）ならびにクリサミンＧおよびその誘導体（特許文献１および特許文献２参照）等が知られているが、アミロイドβ蛋白に対する結合特異性、血液−脳関門透過性、溶解度、毒性等の面から問題が少なくない。本発明者らは、アミロイドβ蛋白に対して特異性が高く、血液−脳関門透過性、溶解度が大きく、毒性が小さい等の特徴を有する種々の化合物を見出している（特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６および特許文献７参照）。【０００８】
脳内蛋白がβシート構造をとることによって、その蛋白自身が病因となる疾患が知られている。アルツハイマー病においてはアミロイドβ蛋白およびタウ蛋白がβシート構造をとることによって、蛋白自身が病因または病因の一部となっていると考えられている。Yanknerらはアミロイドβ蛋白にβシート構造をとらせることにより神経細胞毒性を発揮することを初めて報告した（非特許文献４参照）。その後、多くの追試が行われ、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白が、神経細胞毒性を有することが確認された。このようにβシート構造をとったアミロイドβ蛋白、タウ蛋白に神経細胞毒性がみられることから、その細胞毒性を抑制する化合物は蛋白自身がβシート構造をとることによって病因、または病因の一部となる疾患、すなわちコンフォーメーション病、例えばアルツハイマー病の治療薬になりうることが示唆される。しかしながら、かかる治療薬の開発も十分な成果が得られていないのが現状である。【０００９】
したがって、アルツハイマー病をはじめとするコンフォーメーション病の診断、アミロイドβ蛋白の特異的染色剤、ならびにコンフォーメーション病の治療および予防のための、アミロイドβ蛋白に対する特異性の高い化合物に対する必要性が高まっている。【００１０】
アルツハイマー病のもう１つの病理組織学主徴は神経原繊維変化およびその主構成成分である過剰リン酸化されたタウ蛋白であるが、一般的にこれらはアミロイドβ蛋白よりは遅れて発現すると考えられている。しかし、神経原繊維変化はアミロイドβ蛋白に比し痴呆の程度とよく相関すると考えられている（非特許文献５および非特許文献６参照）。【００１１】
また、アルツハイマー病以外にタウ蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病（タウオパチイ）にはピック病、進行性核上性麻痺（PSP）などがあげられる。これらの疾病もコンフォーメーション病に含まれる。【００１２】
このようにタウ蛋白はアルツハイマー病を包含するタウ蛋白が蓄積する疾患に特徴的であり、密接な関連を有している。従って体内、特に脳内でβシート構造をとったタウ蛋白をマーカーとして検出することが、タウが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の重要な診断法の１つとなる。【００１３】
アルツハイマー病をはじめとするタウが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳脊髄液中のタウを定量する方法が２、３のグループから報告されている（非特許文献７および非特許文献８参照）。しかし、非侵襲的にインビボでのタウを定量することを目的としたプローブは世界的にみても全くみあたらない。【００１４】
したがって、アルツハイマー病をはじめとする神経原繊維変化が病因または病因の一部となる疾患の診断や治療のための、あるいは神経原繊維変化を染色するための、神経原繊維変化に対する特異性の高い化合物に対する必要性が高まっている。【００１５】
これまで、アミロイドβ蛋白および神経原繊維変化に対する特異性の高い化合物が報告されてきた（特許文献８、特許文献９、特許文献１０、特許文献１１参照）。これらの化合物をインビボにおいて、特にヒト患者の体内において使用する場合、変異原性が極めて低いか、あるいはないことが望ましい。したがって、変異原性が極めて低いか、あるいはない、コンフォーメーション病診断用プローブとして使用できる化合物の検索が必要である。
【特許文献１】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９１８明細書
【特許文献２】国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０７８８９明細書
【特許文献３】特願平第２０００−０８００８２号明細書
【特許文献４】特願平第２０００−０８００８３号明細書
【特許文献５】特願平第２００１−０７６０７５号明細書
【特許文献６】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０２２０４明細書
【特許文献７】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０１／０２２０５明細書
【特許文献８】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０３／０７１８３明細書
【特許文献９】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０３／１５２６９明細書
【特許文献１０】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ０３／１５２２９明細書
【特許文献１１】国際特許出願ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１５４６明細書
【非特許文献１】Puchtlerら、Journal of Histochemistry and Cytochemistry、第１０巻、３５頁、１９６２年
【非特許文献２】Puchtlerら、Journal of Histochemistry and Cytochemistry、第７７巻、４３１ページ、１９８３年
【非特許文献３】LeVine、Protein Science、２巻、４０４−４１０ページ、１９９３年
【非特許文献４】Yanknerら、Science、2４５巻、４１７−４２０ページ、１９８９年
【非特許文献５】Braak H and Braak E、Acta Neuropathol、８２巻、２３９−２５９ページ、１９９１年
【非特許文献６】Wischikら、“Neurobiology of Alzheimer's Disease”、１０３−２０６ページ、Oxford University Press, Oxford, ２００１年
【非特許文献７】Ishiguroら、Neurosci. Lett、２７０巻、８１−８４ページ、１９９９年
【非特許文献８】Itohら、Ann. Neurol、５０巻、１５０−１５６ページ、２００１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
本発明は、上記事情に鑑み、アミロイドβ蛋白および／または神経原繊維変化に対する特異性が高く、脳移行性が高く、しかも変異原性が低い、あるいはない、コンフォーメーション病の診断プローブとして使用できる物質を提供するものである。また本発明は、コンフォーメーション病の画像診断プローブとして用いられる標識されたかかる物質、ならびにかかるプローブを含む画像診断用組成物およびキットも提供する。さらに本発明は、脳材料中のアミロイドβ蛋白および神経原繊維変化の検出および／または染色方法、そのためのキット、ならびにコンフォーメーション病の予防および／または治療用の医薬組成物も提供する。また、本発明は、コンフォーメーション病の早期診断に有用な化合物、それを含む画像診断用組成物なども提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本明細書中の式（Ｉ）〜式（ＶＩ）で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物が、アミロイドβ蛋白および／または神経原繊維変化に対する特異性が高く、脳移行性が高く、しかも変異原性が低いか、あるいはない、コンフォーメーション病の診断プローブとして使用できることを見出し、本発明を完成するに至った。特に、末端にモルホリン環を有する本発明の化合物は変異原性が極めて低いか、あるいは実施例に示すように変異原性が認められないものである。かかる変異原性の低い、あるいは無い化合物群を包含することは本発明の１の特徴である。それゆえ、本発明の化合物はきわめて安全性の高いものである。また本発明の化合物はアミロイドβ蛋白を特異的かつ鮮明に染色することから、特にアルツハイマー病、ダウン症候群などの正確な早期診断を可能にするものといえる。さらに本発明の化合物は脳移行性、すなわち血液−脳関門透過性も高い。これらの特徴から、本発明の化合物を用いて、インビボにおける、特にヒト患者における非侵襲性の早期診断が可能となる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明は、アミロイドβ蛋白および／または神経原線維変化に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性が高く、しかも変異原性が低いか、あるいはない、極めて安全性の高い化合物を提供する。したがって、本発明の化合物を用いて、コンフォーメーション病の診断、治療および／または予防を行うことができる。また、本発明によれば、コンフォーメーション病の画像診断、特にＰＥＴを用いた画像診断も可能となる。したがって、本発明により、コンフォーメーション病の早期における正確な診断、効果的な治療及び予防が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】図１はアミロイドβ蛋白が蓄積するＴｇマウス（Ｔｇ２５７６）にＴＨＫ−０９７（０．２ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した際の蛍光顕微鏡画像（エクスビボ）である。
【図２】図２はアミロイドβ蛋白が蓄積するＴｇマウス（Ｔｇ２５７６）にＴＨＫ−５２５（４ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した際の蛍光顕微鏡画像（エクスビボ）である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３】図３はアミロイドβ蛋白が蓄積するＴｇマウス（ＡＰＰｓｗｅ２５７６／Ｔａｕ  ＪＰＬ３）にＴＨＫ−７２７（４ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した際の蛍光顕微鏡画像（エクスビボ）である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図４】図４はアミロイドβ蛋白が蓄積するＴｇマウス（Ｔｇ２５７６）にＴＨＫ−７０２（４ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与した際の蛍光顕微鏡画像（上段パネル）および同一切片の抗アミロイド（Ａβ）抗体染色像（下段パネル）。
【図５】図５は図４の拡大顕微鏡像を示す。Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ図４のＡ，Ｂ、Ｃに対応する。白および黒矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図６】図６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−０９７（左パネル）染色像および坑アミロイドβ（Ａβ）抗体染色像（右パネル：左パネルの隣接切片）である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図７】図７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−１８４染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図８】図８はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−１８５染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白、白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図９】図９はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２０３染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１０】図１０はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２０７染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１１】図１１はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２４８染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１２】図１２はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２５４染色像である。白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図１３】図１３はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２５８染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白、白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図１４】図１４はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２６２染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１５】図１５はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２７６染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１６】図１６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−２８１染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１７】図１７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−３０８染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図１８】図１８はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−３１７染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白、白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図１９】図１９はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−３８３染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２０】図２０はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−３８５染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２１】図２１はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−３８６染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白、白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図２２】図２２はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５２５（左パネル）染色像および坑アミロイドβ（Ａβ）抗体染色像（右パネル：左パネルの隣接切片）である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２３】図２３はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５５６染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２４】図２４はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５５８染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２５】図２５はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５５９染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２６】図２６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５６１染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２７】図２７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５６２染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２８】図２８はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５６３染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図２９】図２９はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５６５（左パネル）染色像および坑アミロイドβ（Ａβ）抗体染色像（右パネル：左パネルの隣接切片）である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３０】図３０はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−５８５染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３１】図３１はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７０２染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３２】図３２はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７０８染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３３】図３３はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７２７染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を、白抜きアローヘッドは神経原線維変化を示す。
【図３４】図３４はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７５２染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３５】図３５はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７６１染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３６】図３６はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７６３染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【図３７】図３７はアルツハイマー病患者脳切片におけるＴＨＫ−７６６染色像である。白抜き矢印はアミロイドβ蛋白を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明の化合物は以下に説明する式（Ｉ）〜（ＶＩ）で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。本明細書において、「本発明の化合物」という場合には、特に断らないかぎり、式（Ｉ）〜（ＶＩ）の化合物、ならびにそれらの塩および溶媒和物を包含するものとする。本発明の化合物は当業者に知られた方法により得ることができる。【００２１】
なお、本明細書において、例えば「Ｃ１−４アルキル」とは、炭素数１個ないし４個のアルキル基をいう。他の炭素数のアルキル基につても同様に表し、その意味も上記例に従って解釈される。また例えば「Ｃ１−４アルキル」または「炭素数１〜４個のアルキル」という場合には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、およびこれらの構造異性体を包含するものとする。本明細書において「ハロゲン」という場合、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素をいうものとする。また本明細書において、「アミロイドベータ蛋白」、「アミロイドβ蛋白」、「Ａβ蛋白」、「アミロイドベータ」、「アミロイドβ」、「Ａβ」は同義である。【００２２】
本発明の化合物中の２つの環の間に二重結合が存在する場合には、シス、トランス双方の異性体が存在しうる。【００２３】
本発明の化合物の第１の具体例は、式（Ｉ）：
【化１】
2007074786.tif 000002
［式中、ＡはＣＨまたはＮ；
ＤはＳ、ＮＨ、Ｎ−Ｃ１−３アルキル、ＯまたはＣＨ２であり；
Ｒ１はそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲａＲｂ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、Ｏ−（ＣＨ２）ｌ−ＯＴｓ、またはＯ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨＲｃＲｄまたは
【化２】
2007074786.tif 000003
であり；
隣接するＲ１は一緒になってフェニル環を形成してもよく；
Ｒ２は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル‐ハロゲン、ＯＨまたはＣＮであり；
Ｒ４は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲ５Ｒ６、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、ピロリジン環、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、または
【化３】
2007074786.tif 000004
であり；
ＲａおよびＲｂは独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
ＲｃおよびＲｄはそれぞれ独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲａＲｂ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝ＯまたはＯＴｓであり；
Ｒ５およびＲ６はそれぞれ独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
ｋは１ないし４の整数であり；
ｌは１ないし４の整数であり；
ｍは０ないし３の整数であり；
ｍ'は０ないし３の整数であり；
ｍ''は０ないし３の整数であり；
ｎは１ないし４の整数であり；
Ｅはベンゼン環または
【化４】
2007074786.tif 000005
であり、
ＸはＣＨ、Ｓ、ＮＨ、ＮＣ１−３アルキルまたはＯであり；
ＹはＣＨまたはＮであり；
Ｙ'はＣＨまたはＮであり；
ＺはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−Ｒｅであり；
Ｒ３はＹとＹ'の両方、または一方がＣＨのときに存在し、水素、Ｃ１−４アルキル、ＯＨまたはハロゲンであり；
Ｒｅは水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置はシス型、トランス型のいずれであってもよい］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。【００２４】
第２の具体例は、式（ＩＩ）
【化５】
2007074786.tif 000006
［式中、Ｇはフラン、チオフェン、ピロール、ピリジン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾールまたはインドール環であり；
上記環はハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮまたはＣ＝Ｏで置換されていてもよく；
Ｒ７は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮまたはＣ＝Ｏであり；
Ｒ８は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲｆＲｇ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、ピロリジン環、または
【化６】
2007074786.tif 000007
であり；
ＲｆおよびＲｇは独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
ｐは１ないし４の整数であり；
ＺＩＩはＯ、ＣＨ２、Ｎ−Ｒｅ'であり；
Ｒｅ'は水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよい］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。【００２５】
第３の具体例は、式（ＩＩＩ）
【化７】
2007074786.tif 000008
［式中、ＸＩＩＩおよびＹＩＩＩは独立してＣＨ２またはＣ＝Ｏであり；
Ｒ９は水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲｈＲｉ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮまたはＣ＝Ｏであり；
ＲｈおよびＲｉは独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
＊には下記の部分が結合し：
【化８】
2007074786.tif 000009
【化９】
2007074786.tif 000010
または
【化１０】
2007074786.tif 000011
Ｌは
【化１１】
2007074786.tif 000012
または
【化１２】
2007074786.tif 000013
であり；
ＡＩＩＩおよびＢＩＩＩは独立してＣＨまたはＮであり；
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４は独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲＩＲＩＩ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、ピロリジン環、または
【化１３】
2007074786.tif 000014
であり；
Ｒ１３は水素、ハロゲンまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ１０'、Ｒ１１'、Ｒ１２'、Ｒ１４'は独立して水素、ハロゲンまたはＣ１−４アルキルであり；
ｒは０ないし２の整数であり；
ａ'は１ないし４の整数であり；
ｂ'は１または２の整数であり；
ｃ'は１ないし４の整数であり；
ｄ'は１ないし４の整数であり；
ＺＩＩＩはＯ、ＣＨ２、Ｎ−Ｒｅ''であり；
Ｒｅ''は水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置は、可能な場合はシス型、トランス型のいずれであってもよい］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。【００２６】
第４の具体例は、式（ＩＶ）：
【化１４】
2007074786.tif 000015
［式中、ＸＩＶはＮまたはＮＲＩＶであり；
ＮＲＩＶは水素またはＣ１−４アルキルであり；
ＹＩＶはＣＨまたはＣ＝Ｏであり；
破線は存在してもよい一重結合であり；
＊＊には下記の部分が結合し：
【化１５】
2007074786.tif 000016
【化１６】
2007074786.tif 000017
または
【化１７】
2007074786.tif 000018
ＬＩＶは
【化１８】
2007074786.tif 000019
または
【化１９】
2007074786.tif 000020
であり；
ＡＩＶおよびＢＩＶは独立してＣＨ、ＣＣＨ３またはＮであり；
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９は独立して水素、ハロゲン、ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＮＯ２、ＳＨ、ＮＲｊＲｋ、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、ＣＮ、Ｃ＝Ｏ、ピロリジン環、または
【化２０】
2007074786.tif 000021
であり；
ＲｊおよびＲｋは独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ１８は水素、ハロゲンまたはＣ１−４アルカリであり；
Ｒ１５'、Ｒ１６'、Ｒ１７'、Ｒ１９'は独立して水素、ハロゲンまたはＣ１−４アルカリであり；
ｒ'は０ないし２の整数であり；
ａ''は１ないし４の整数であり；
ｂ''は１または２の整数であり；
ｃ''は１ないし４の整数であり；
ｄ''は１ないし４の整数であり；
ＺＩＶはＯ、ＣＨ２、Ｎ−Ｒｅ'''であり；
Ｒｅ'''は水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置は、可能な場合はシス型、トランス型のいずれであってもよい］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。【００２７】
第５の具体例は、式（Ｖ）：
【化２１】
2007074786.tif 000022
［式中、Ｒ２０は水素またはＣ１−４アルキル、ピロリジン環、または
【化２２】
2007074786.tif 000023
であり；
ＺＶはＯ、ＣＨ２またはＮ−ＲｅVであり；
ＲｅVは水素またはＣ１−４アルキルである］で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。【００２８】
第６の具体例は、式（ＶＩ）：
【化２３】
2007074786.tif 000024
［式中、Ｒ１ＶＩは水素、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、またはＣ１−６アルキル−ハロゲンであり、
Ｒ２ＶＩおよびＲ３ＶＩはそれぞれ独立して水素またはＣ１−６アルキルであり、
Ｒ４ＶＩは水素またはＣ１−６アルキルであり、
ＥＶＩはＣＨ２または不存在であり、
ＡＶＩは５員環または６員環で、下記の構造：
【化２４】
2007074786.tif 000025
または
【化２５】
2007074786.tif 000026
または
【化２６】
2007074786.tif 000027
を有し；
ＸＶＩおよびＹＶＩは独立してＮまたはＣＨであり；
ＺＶＩはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｐＨ２ｐ＋１であり；
ＧＶＩはＮまたはＣＨであり；
ＪＶＩはＯ、Ｓ、ＣＨ２またはＮ−ＣｑＨ２ｑ＋１であり；
Ｒ５ＶＩは水素、Ｃ１−６アルキル、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、またはＮＲＩＶＩＲＩＩＶＩであり、
Ｒ６ＶＩは水素、Ｃ１−６アルキル、またはハロゲンであり、
ＲＩＶＩ、ＲＩＩＶＩはそれぞれ独立して水素またはＣ１−６アルキルであるか、あるいは一緒になってピロリジン環、モルホリン環、ピペリジン環または窒素原子がＣ１−３アルキルで置換されていてもよいピペラジン環を形成し、
ｎ１ＶＩは１ないし４の整数であり；
ｎ１'ＶＩは１ないし４の整数であり；
ｎＶＩは１ないし４の整数であり；
ｐＶＩは１ないし４の整数であり；
ｑＶＩは１ないし４の整数であり；
上の式では２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置がトランス型であるが、この配置はシス型、トランス型のいずれであってもよい］
で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を提供する。【００２９】
本発明の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の例を下表１に示す。
【表１−１】
2007074786.tif 000028
【表１−２】
2007074786.tif 000029
【表１−３】
2007074786.tif 000030
【表１−４】
2007074786.tif 000031
【表１−５】
2007074786.tif 000032
【表１−６】
2007074786.tif 000033
【表１−７】
2007074786.tif 000034
【表１−８】
2007074786.tif 000035
【表１−９】
2007074786.tif 000036
【表１−１０】
2007074786.tif 000037
【表１−１１】
2007074786.tif 000038
【表１−１２】
2007074786.tif 000039
【表１−１３】
2007074786.tif 000040
【表１−１４】
2007074786.tif 000041
【００３０】
本発明の化合物、その塩もしくは溶媒和物のうち好ましいものは式（Ｉ）で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物である。本発明の化合物、その塩もしくは溶媒和物のうち、末端にモルホリン環を有するものがさらに好ましい。末端にモルホリン環を有する化合物は変異原性が極めて低いか、あるいは実施例に示すように変異原性が認められなかった。さらに実施例に示すように、これらの化合物、その塩もしくは溶媒和物はＡβに対する特異性が高く、そのうえ毒性が低く、脳移行性が高いものである。それゆえ、本発明の化合物を、コンフォーメーション病の画像診断のための、安全なプローブとして使用することができる。【００３１】
したがって、本発明は：
（１）上記式（Ｉ）で示される化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（２）ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−２０７、ＴＨＫ−２８１、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７２７、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３およびＴＨＫ−７６６からなる群より選択される（１）項記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（３）Ｒ４がモルホリン環である（１）記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（４）ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−５７５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０３、ＴＨＫ−７２６およびＴＨＫ−７２７からなる群より選択される（３）記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（５）ＴＨＫ−６８３、ＴＨＫ−７０７、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７１１、ＴＨＫ−７１３、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１およびＴＨＫ−７６３からなる群より選択される（１）記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（６）標識された（１）〜（５）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（７）放射性標識で標識された（６）記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（８）標識が陽電子放出核である（７）記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物；
（９）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を含有する、コンフォーメーション病診断用組成物；
（１０）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を含有する、コンフォーメーション病を治療および／または予防するための医薬組成物；
（１１）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成要素として含む、コンフォーメーション病診断用キット；
（１２）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を必須の構成要素として含む、βシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色するための組成物またはキット；
（１３）画像診断用である、（９）記載の組成物または（１１）もしくは（１２）記載のキット；
（１４）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、対象におけるコンフォーメーション病の治療および／または予防方法；
（１５）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、対象におけるコンフォーメーション病の診断方法；
（１６）対象におけるコンフォーメーション病の診断用組成物またはキットを製造するための、（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用；
（１７）対象におけるコンフォーメーション病の治療および／または予防のための医薬組成物を製造するための、（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用；
（１８）（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物を用いて試料を染色することを特徴とする、試料中のβシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色する方法；
（１９）試料中のβシート構造をとった蛋白または神経原線維変化を検出または染色するための組成物またはキットを製造するための、（１）ないし（８）のいずれかに記載の化合物、またはその塩もしくは溶媒和物の使用；
（２０）化合物がＴＨＫ−７２７である、（１２）記載の組成物またはキット、（１８）記載の方法、あるいは（１９）記載の使用
を提供するものである。【００３２】
本発明の化合物についてさらに詳述する。好ましい式（Ｉ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましいＤはＯ、ＳまたはＮＨであり；
好ましいＲ１は水素、メチル、エチル、Ｃ１−６アルキル、Ｏ−Ｃ１−６アルキル、Ｏ−（ＣＨ２）ｌ−ＯＴｓ、またはＯ−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２ＲｃＲｄであり、アルキル基はハロゲンまたはＯＨで置換されていてもよく；また、隣り合う２個のＲ１が一緒になってベンゼン環を形成することも好ましく；
好ましいＲ２は水素またはＣＮである。
好ましいＲ４はピロリジン環、モルホリン環、ピペリジン環、または窒素原子がＣ１−３アルキルで置換されていてもよいピペラジン環であり；
好ましいＲａおよびＲｂは水素またはメチルであり；
好ましいＲｃおよびＲｄは水素、メチル、ハロゲン、ＯＨまたはＯＴｓであり；
好ましいＲ５およびＲ６は水素またはメチルであり；
Ｒ１が水素以外の場合の好ましいｋは１または２であり；
好ましいｌは１または２であり；
好ましいｍは０〜２であり；
好ましいｎは１であり；
好ましいＸはＳまたはＯであり；
好ましいＹはＣＨまたはＮであり；
好ましいＹ'はＣＨまたはＮであり；
好ましいＺはＯ、ＣＨ、Ｎ−Ｒｅであり；
好ましいＲ３は水素であり；
好ましいＲｅは水素またはメチルであり；
またＥがベンゼン環である場合も好ましく；
上記アルキルはフッ素、塩素または臭素にて置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置はシス型、トランス型のいずれであってもよい。【００３３】
式（Ｉ）の化合物のうち、Ｒ４がモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。Ｒ４がモルホリン環である式（Ｉ）の化合物はＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−５７５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０３、ＴＨＫ−７２６、ＴＨＫ−７２７などである。また、式（Ｉ）の化合物のなかでＴＨＫ−６８３、ＴＨＫ−７０７、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７１１、ＴＨＫ−７１３、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３も変異原性が極めて低いか、あるいはないので、これらもまた、より好ましい化合物である。本発明の化合物のうち、変異性が低いか、またはないものとして、さらに好ましい化合物は、本願明細書実施例の変異原性試験の項目に記載された方法に従って試験した場合、Ｓ９ｍｉｘ非存在下で比活性がマイナスであり、かつＳ９ｍｉｘ存在下で比活性がマイナスであるか、または１０４のオーダー以下である化合物である。アミロイドβに対する特異性が高い式（Ｉ）の化合物はＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−２０７、ＴＨＫ−２８１、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７２７、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３、ＴＨＫ−７６６などである。したがって、アミロイドβに対する特異性が高く、変異原性が極めて低いか、あるいは無い式（Ｉ）の化合物は、ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−２０３、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７２７、ＴＨＫ−７５２、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３などである。【００３４】
好ましい式（ＩＩ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましいＧはフラン、チオフェン、ピロール、ピリジン、ベンゾフラン、ベンゾチオフェンまたはインドール環であり；
上記環はハロゲン、Ｃ１−６アルキルまたはＯ−Ｃ１−６アルキルで置換されていてもよく；
好ましいＲ７は水素であり；
好ましいＲ８は水素またはＮＲｆＲｇまたは
【化２７】
2007074786.tif 000042
であり；
好ましいＺＩＩはＯであり；
好ましいＲｆおよびＲｇは独立して水素またはメチルであり；
ｐは１ないし４の整数であり；
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよい。【００３５】
式（ＩＩ）の化合物のうち、Ｒ８がモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。かかる式（ＩＩ）の化合物はＴＨＫ−３８３、ＴＨＫ−３８４、ＴＨＫ−３８５、ＴＨＫ−３８６およびＴＨＫ−３８７などである。アミロイドβに対する特異性が高い式（ＩＩ）の化合物はＴＨＫ−２５８、ＴＨＫ−２６２、ＴＨＫ−３８３、ＴＨＫ−３８５およびＴＨＫ−３８６などである。したがって、アミロイドβに対する特異性が高く、変異原性が極めて低いか、あるいは無い式（ＩＩ）の化合物は、ＴＨＫ−３８３、ＴＨＫ−３８５およびＴＨＫ−３８６などである。【００３６】
好ましい式（ＩＩＩ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましくはＸＩＩＩおよびＹＩＩＩの一方または両方がＣ＝Ｏであり；
好ましいＲ９は水素であり；
＊には下記の部分が結合し：
【化２８】
2007074786.tif 000043
【化２９】
2007074786.tif 000044
または
【化３０】
2007074786.tif 000045
Ｌは
【化３１】
2007074786.tif 000046
または
【化３２】
2007074786.tif 000047
であり；
好ましいＡＩＩＩおよびＢＩＩＩはＣＨであり；
好ましいＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１４は独立して水素、Ｃ１−６アルキルまたはモルホリン環であり；
好ましいＲ１３は水素またはメチルであり；
好ましいＲ１０'、Ｒ１１'、Ｒ１２'、Ｒ１４'は独立して水素またはＣ１−４アルキルであり；
好ましいｒは０または１の整数であり；
置換基が水素以外の場合の好ましいａ'、ｂ'、ｃ'、ｄ'は独立して１または２の整数であり；
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置は、可能な場合にはシス型、トランス型のいずれであってもよい。【００３７】
式（ＩＩＩ）の化合物のうち、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２またはＲ１４がモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。アミロイドβに対する特異性が高い式（ＩＩＩ）の化合物はＴＨＫ−１８４およびＴＨＫ−２４８などである。【００３８】
好ましい式（ＩＶ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましいＸＩＶはＮ、ＮＨまたはＮＣＨ３であり；
好ましいＹＩＶはＣＨまたはＣ＝Ｏであり；
破線は存在してもよい一重結合であり；
＊＊には下記の部分が結合し：
【化３３】
2007074786.tif 000048
【化３４】
2007074786.tif 000049
または
【化３５】
2007074786.tif 000050
ＬＩＶは
【化３６】
2007074786.tif 000051
または
【化３７】
2007074786.tif 000052
であり；
好ましいＡＩＶおよびＢＩＶは独立してＣＨまたはＮであり；
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９は水素、ＮＨ２、Ｎ（ＣＨ３）２またはモルホリン環
であり；
好ましいＲ１８は水素であり；
好ましいＲ１５'、Ｒ１６'、Ｒ１７'、Ｒ１９'は独立して水素またはＣ１−４アルカリであり；
好ましいｒ'は１であり；
ａ''は１ないし４の整数であり；
ｂ''は１または２の整数であり；
ｃ''は１ないし４の整数であり；
ｄ''は１ないし４の整数であり；
ＺＩＶはＯ、ＣＨ２、Ｎ−Ｒｅ'''であり；
Ｒｅ'''は水素またはＣ１−４アルキルであり、
上記アルキルはハロゲンで置換されていてもよく；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置は、可能な場合はシス型、トランス型のいずれであってもよい。【００３９】
式（ＩＶ）の化合物のうち、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７またはＲ１９がモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。かかる式（ＩＶ）の化合物はＴＨＫ−２７６、ＴＨＫ−２７７およびＴＨＫ−３０８などである。アミロイドβに対する特異性が高い式（ＩＶ）の化合物はＴＨＫ−１８５、ＴＨＫ−２５４、ＴＨＫ−２７６、ＴＨＫ−３０８などである。したがって、したがって、アミロイドβに対する特異性が高く、変異原性が極めて低いか、あるいは無い式（ＩＶ）の化合物は、ＴＨＫ−２７６およびＴＨＫ−３０８などである。【００４０】
好ましい式（Ｖ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましいＲ２０は水素、メチルまたはモルホリン環である。Ｒ２０がモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。アミロイドβに対する特異性が高い式（Ｖ）の化合物はＴＨＫ−３１７などである。【００４１】
好ましい式（ＶＩ）の化合物の置換基は以下のとおりである：
好ましいＲ１ＶＩは水素、Ｃ１−３アルキル、フッ素、塩素もしくは臭素であり、
好ましいＲ２ＩＶおよびＲ３ＶＩはメチルであり、
好ましいＲ４ＩＶは水素であり、
ＥＶＩはＣＨ２または不存在であり、
ＡＶＩは５員環または６員環で、下記の構造：
【化３８】
2007074786.tif 000053
または
【化３９】
2007074786.tif 000054
または
【化４０】
2007074786.tif 000055
を有し；
ＸＶＩおよびＹＶＩは独立してＮまたはＣＨであり；
好ましいＺＶＩはＳであり；
ＧＶＩはＮまたはＣＨであり；
好ましいＪＶＩはＯ、ＳまたはＣＨ２であり；
好ましいＲ５ＶＩは水素、Ｎ（ＣＨ３）２またはモルホリン環であり；
好ましいＲ６ＶＩはすべて水素であり；
好ましいｎ６ＶＩは１または２の整数であり；
２つの環部分をつなぐ二重結合まわりの配置はシス型、トランス型のいずれであってもよい。【００４２】
式（ＶＩ）の化合物のうち、Ｒ５ＶＩがモルホリン環であるものは、変異原性が極めて低いか、あるいはないので、より好ましい化合物である。かかる式（ＶＩ）の化合物はＴＨＫ−３３０、ＴＨＫ−３３６、ＨＫ−５３３、ＴＨＫ−６５１、ＴＨＫ−６５２、ＴＨＫ−６５３、ＴＨＫ−６５５などである。アミロイドβに対する特異性が高い式（ＶＩ）の化合物はＴＨＫ−５５６、ＴＨＫ−５５８、ＴＨＫ−５５９、ＴＨＫ−５６１、ＴＨＫ−５６２、ＴＨＫ−５６３、ＴＨＫ−５６５、ＴＨＫ−５８５などである。【００４３】
本発明の化合物の塩も本発明に包含される。本発明の化合物中の窒素原子またはいずれかの官能基とともに塩が形成されてもよい。化合物中にカルボキシル基またはスルホン酸基が存在するような場合、これと金属との間に塩が形成されてもよい。かかる塩の例としては、リチウム、ナトリウム、カリウムのごときアルカリ金属との塩、マグネシウム、カルシウム、バリウムのごときアルカリ土類金属との塩等が挙げられる。本発明の化合物が水酸基を含む場合、その水素がナトリウム、カリウム等の金属となっている化合物も、本発明に包含される。さらに、本発明の化合物と金属塩とで形成される錯体（例えば塩化マグネシウム、塩化鉄のごとき金属塩とで形成される錯体）が存在する場合には、これらも本明細書においては本発明の化合物の塩に含めることとする。対象の体内において本発明の化合物の塩を使用する場合には、それが医薬上許容される塩であることが好ましい。本発明の化合物の医薬上許容される塩としては、例えば、塩素、臭素、ヨウ素のごときハロゲン化物イオンとの塩、あるいはナトリウム、カリウム、カルシウムのごとき金属との塩がある。かかる塩は本発明に包含される。【００４４】
また、本発明の化合物の溶媒和物も本発明に包含される。溶媒和物としては、水和物、メタノール和物、エタノール和物、アンモニア和物等が挙げられる。対象の体内において本発明の化合物の溶媒和物を使用する場合には、それが医薬上許容される溶媒和物であることが好ましい。医薬上許容される溶媒和物としては、水和物、エタノール和物等が挙げられる。本明細書において、「本発明の化合物」または「本発明の化合物」という場合、本発明の化合物、ならびにその塩および溶媒和物を包含するものとする。【００４５】
さらに本発明は、本発明の化合物の合成のための前駆体として使用できる化合物も提供する。当業者は、かかる前駆体を、目的とする本発明の化合物の構造から容易に設計することができ、その合成をすることができる。あるいはかかる前駆体は市販されているものを修飾することによって得ることもできる。【００４６】
コンフォーメーション病の診断においては本発明の化合物を標識せずにプローブとして用いることができる。例えば、生検試料に本発明の化合物を接触させて、染色される部分の有無を調べてもよい。しかしながら、標識した本発明の化合物をコンフォーメーション病の診断用プローブとして使用するのが一般的である。標識には、蛍光物質、アフィニティー物質、酵素基質、放射性核種等がある。コンフォーメーション病の画像診断には通常、放射性核種で標識したプローブを使用する。当該分野においてよく知られた方法により種々の放射性核種で本発明の化合物を標識することができる。例えば、３Ｈ、１４Ｃ、３５Ｓ、１３１Ｉ等は以前から使用されている放射性核種であり、インビトロでの利用例が多い。画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用した陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）またはγ線放出核種によるコンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が用いられるようになってきた。このうち、ＰＥＴは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される２本のγ線を１対の検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得られるので好ましい。ＳＰＥＣＴ用には９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６７Ｇａ、２０１Ｔｌ、１２３Ｉ、１３３Ｘｅ等のγ線放出核種で本発明の化合物を標識することができる。９９ｍＴｃおよび１２３ＩがＳＰＥＣＴによく用いられている。ＰＥＴ用には１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ、６２Ｃｕ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ等の陽電子放出核種で本発明の化合物を標識することができる。陽電子放出核種のなかでも、半減期が適当であること、標識しやすさ等の点から１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆが好ましく、１８Ｆが特に好ましい。放射性核種、例えば陽電子放出核種、γ線放出核種等の放射線放出核種での本発明の化合物の標識位置は、式Ｉ中のいずれの位置であってもよい。あるいは環上の水素が陽電子放出核種、γ線放出核種等の放射線放出核種で置換されていてもよい。本発明の化合物の標識位置はいずれの位置であってもよいが、好ましい標識位置は化合物中のアルキル基および／またはフェニル環上である。このような標識された本発明の化合物も本発明に包含される。例えば、本発明の化合物を１８Ｆで標識する場合、側鎖のいずれかが１８Ｆで標識されていてもよく、あるいは環上の水素が１８Ｆで置換されていてもよい。また例えば、アルキル置換基のいずれかに含まれる水素を１８Ｆ等で置換してもよい。【００４７】
一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置により産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能である。そのようにして産生された核種を用いて本発明の化合物を標識することができる。【００４８】
これらの放射性核種で標識された標識化合物の製造方法は当該分野においてよく知られている。代表的な方法としては、化学合成法、同位体交換法および生合成法がある。化学合成法は従来から広く用いられており、放射性の出発物質を用いること以外は通常の化学合成法と本質的に変わらない。この方法により種々の核種が化合物に導入されている。同位体交換法は、簡単な構造の化合物中の３Ｈ、３５Ｓ、１２５Ｉ等を複雑な構造の化合物中に移して、これらの核種で標識された複雑な構造の化合物を得る方法である。生合成法は１４Ｃ、３５Ｓ等で標識した化合物を微生物等の細胞に与えてこれらの核種が導入された代謝産物を得る方法である。【００４９】
標識位置については、通常の合成と同様に合成スキームを目的に応じて設計することにより、所望位置に標識を導入することができる。かかる設計は当業者によく知られている。【００５０】
また、例えば、比較的半減期の短い１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆ等の陽電子放出核種を用いる場合、病院等の施設内の設置された（超）小型サイクロトロンから所望核種を得て、上記の方法により所望化合物を所望位置で標識して、即座に診断、検査、治療等に使用することも可能となっている。【００５１】
これらの当業者に公知の方法により、本発明の化合物の所望位置に所望核種を導入して標識することができる。【００５２】
本発明標識化合物の対象への投与は局所的であってもよく、あるいは全身的であってもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因により選択できる。本発明プローブを投与して、アミロイドβ蛋白への結合および崩壊のための十分な時間経過後、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ等の手段で検査部位を調べることができる。これらの手段は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。【００５３】
放射性核種で標識された本発明の化合物の用量は、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々である。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。例えば、１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種により標識された本発明の化合物の放射能量は、通常には、３．７メガベクレルないし３．７ギガベクレル、好ましくは、１８メガベクレルないし７４０メガベクレルの範囲である。【００５４】
本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物は、以下に述べるコンフォーメーション病の治療方法、診断方法、治療用組成物、診断用組成物、診断用キット、これらの組成物およびキットを製造するための使用、ならびにその他の使用に適しているが、式（Ｉ）〜（ＶＩ）の化合物に関する上記説明において例示した化合物またはその塩もしくは溶媒和物が好ましく、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物に包含されるものが特に好ましい。本発明の化合物のうち、モルホリン環、特に末端基としてのモルホリン環を有するものは変異原性が無いかあるいは極めて低いので、人体への投与に適している。【００５５】
本発明は、本発明の化合物を含む、コンフォーメーション病の画像診断用組成物を提供する。本発明組成物は、本発明の化合物および医薬上許容される担体を含む。組成物中の本発明の化合物は標識されていることが好ましい。上記のごとき標識法は様々であるが、インビボでの画像診断用途には放射性核種（特にＰＥＴ用には１１Ｃ、１３Ｎ、１５Ｏ、１８Ｆのごとき陽電子放出核種）で標識されていることが望ましい。本発明組成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ましい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましく、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水等のごとき水性溶媒、あるいはポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコール等のごとき非水性溶媒があるが、これらに限らない。担体と本発明の化合物との配合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できるが、通常には１０万対１ないし２対１の比率であり、好ましくは１万対１ないし１０対１の比率である。また、本発明組成物はさらに公知の抗菌剤（例えば、抗生剤等）、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカイン等）、バッファー（例えば、トリス−塩酸バッファー、ヘペスバッファー等）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム等）等を含有していてもよい。【００５６】
さらに本発明は、本発明の化合物を必須の構成成分として含む、コンフォーメーション病の画像診断用キットを提供する。通常には、キットは、本発明の化合物、それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめにしたものである。本発明の化合物は未標識であっても、標識されていてもよい。未標識の場合、上で説明したような通常の方法により、使用前に本発明の化合物を標識することができる。また本発明の化合物は凍結乾燥粉末等の固形として提供してもよく、あるいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明組成物に用いる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明組成物に使用するものと同様のものであってよい。容器は種々のものを適宜選択できるが、本発明の化合物への標識導入操作に適した形状とすることもでき、化合物の性質に応じて遮光性の材質のものとしてもよく、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすることもできる。また、キットは診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいはＰＥＴ装置やＳＰＥＣＴ装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。通常、キットには説明書を添付する。【００５７】
さらに、本発明の化合物がアミロイドβ蛋白に特異的に結合することから、本発明の化合物を未標識のまま、あるいは標識して、インビトロにて試料標本と接触させることにより、標本中のアミロイドβ蛋白の検出、定量等に使用することもできる。例えば、顕微鏡標本のアミロイドβ蛋白染色、試料中のアミロイドβ蛋白の比色定量、あるいはシンチレーションカウンターを用いたアミロイドβ蛋白の定量等に本発明の化合物を使用してもよい。顕微鏡標本の調製ならびに本発明の化合物を用いた染色は、当業者に知られた通常の方法により行うことができる。【００５８】
先にも述べたように、本発明の化合物はアミロイドβ蛋白に特異性が高い。したがって、本発明の化合物は、例えば、アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の研究あるいは生前または死後における診断等に有用であり、例えば、アルツハイマー病患者脳の老人斑の染色剤として有用と考えられる。本発明の化合物を用いた標本、例えば脳切片の染色は、当業者に知られた通常の方法で行うことができる。【００５９】
上述のごとく、本発明の化合物のうち、とりわけ末端基としてモルホリン環を有するものは変異原性が極めて小さいか、あるいは有しないものである。したがって、これらの本発明の化合物は極めて安全なコンフォーメーション病診断プローブであるばかりでなく、後述のような治療薬または予防薬とし用いた場合にも安全性が高い。【００６０】
したがって、本発明は、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を含む試料中のアミロイドβ蛋白の染色用組成物、ならびに本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を必須の構成成分として含む、試料中のアミロイドβ蛋白の染色用キット関する。さらに、本発明は本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする試料中のアミロイドβ蛋白の染色方法にも関する。これらの染色に適した試料は脳切片である。【００６１】
上述のごとく、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白に神経細胞毒性がみられることが判明している。本発明の化合物は、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白に特異的に結合するので、その神経細胞毒性を抑制すると考えられる。したがって、本発明の化合物は、蛋白自身がβシート構造をとることによって病因、または病因の一部となるコンフォーメーション病、例えばアルツハイマー病の治療薬または予防薬になると考えられる。【００６２】
したがって、本発明は、
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を投与することを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療および／または予防方法；
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とするアミロイドβ蛋白蓄積性疾患の診断方法；ならびに
アミロイドβ蛋白蓄積性疾患の治療、予防、または診断するための組成物またはキットを製造するための式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。【００６３】
かかる医薬組成物の形態は特に限定されないが、液体処方が好ましく、特に注射用処方が好ましい。かかる注射用処方を脳内に直接注入することもでき、あるいは、実施例３にて示すように本発明の化合物は血液／脳関門透過性が高いので、上記医薬組成物を静脈注射または静脈点滴用に処方して投与することもできる。かかる液体処方の調製は当該分野にて公知の方法で行うことができる。溶液の調製は、例えば、本発明の化合物を適当な担体、注射用水、生理食塩水、リンゲル液等に溶解し、フィルター等で滅菌し、その後、適当な容器、例えば、バイアルまたはアンプルに充填する。また、溶液を凍結乾燥させ、使用時に適当な担体で再度溶液に復元することも可能である。懸濁液の調製は、例えば、本発明の化合物を例えばエチレンオキサイドにさらすことにより滅菌し、次いで、滅菌済み液体担体に懸濁することにより行うことができる。【００６４】
上記治療方法、予防方法、および使用における本発明の化合物のヒト対象への投与量は、患者の病状、性別、年齢、体重等に左右されるが、一般的には、体重７０ｋｇの成人の場合、１日あたり０．１ｍｇないし１ｇ、好ましくは１ｍｇないし１００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇないし５０ｍｇである。一定期間かかる投与量で処置を行い、結果により投与量を増減することができる。【００６５】
さらに本発明の化合物、その塩もしくは溶媒和物はコンフォーメーション病の診断プローブとして、好ましくは、放射線放出核種にて標識された画像診断プローブとしても使用できる。さらに本発明の化合物はコンフォーメーション病の治療および／または予防にも効果を有する。したがって、本発明は、
コンフォーメーション病の画像診断用プローブとして使用される本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物；
本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含むコンフォーメーション病の画像診断用組成物またはキット；
本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物および医薬上許容される担体を含有する、コンフォーメーション病の予防および／または治療用医薬組成物；
本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする、コンフォーメーション病の診断方法；
コンフォーメーション病を診断するための、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用；
本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物を対象に投与することを特徴とする、コンフォーメーション病の予防および／または治療方法；
コンフォーメーション病を予防および／または治療するための、本発明の化合物またはその医薬上許容される塩もしくは溶媒和物の使用；ならびに
コンフォーメーション病を予防および／または治療するための医薬組成物の製造における、本発明の化合物の使用
にも関する。【００６６】
上記治療方法および予防方法における本発明の化合物のヒト対象への投与量は上述のとおりである。【００６７】
本発明の化合物のうちある種のものは神経原線維変化を認識するので、神経原線維変化の検出用プローブ、あるいは神経原線維変化の染色剤として使用することができる。したがって、本発明は、神経原線維変化の診断プローブ、特に画像診断プローブとしての、本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の用途にも関する。神経原線維変化の染色剤として好ましい本発明の化合物はＴＨＫ−１８５、ＴＨＫ−２４８、ＴＨＫ−２５４、ＴＨＫ−２５８、ＴＨＫ−３１７、ＴＨＫ−３８６、ＴＨＫ−７２７などである。【００６８】
したがって、本発明は：
本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む、神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物；
本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む、神経原線維変化を検出あるいは染色するためのキット；
本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を用いることを特徴とする神経原線維変化を検出あるいは染色する方法；ならびに
神経原線維変化を検出あるいは染色するための組成物を製造するための本発明の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用
を提供する。【００６９】
上記の神経原線維変化を検出あるいは染色における試料標本の調製、染色などの方法は当業者に公知のものを適用することができる。【００７０】
以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、これらの実施例は本発明を何ら限定するものではない。
【実施例１】
【００７１】
アミロイドβ蛋白脳内蓄積モデルにおける検討
アミロイドが脳内に蓄積するトランスジェニック（Ｔｇ）マウスを用いた検討
（１）Ｔｇマウス（Ｔｇ２５７６またはＡＰＰｓｗｅ２５７６  ／Ｔａｕ  ＪＰＬ３）使用した。被験化合物をＴｇマウスの尾静脈より投与し、その１時間後にペントバルビタールＮａ深麻酔下で開胸、経心的に１０％中性緩衝ホルマリンを潅流して固定した。
（２）開頭して脳を摘出し、３０％シュークロースに１２時間以上浸漬させた。次に、摘出された脳を微細に粉砕したドライアイス内で速やかに凍結させ、クリオスタット（Ｂｒｉｇｈｔ社、Ｍｏｄｅｌ−ＯＴ）を用いて、ポリ−Ｌ−リジンコート付きのスライドグラス上に凍結切片を作製した。
（３）作製した脳切片を封入しない状態で、蛍光顕微鏡（ニコン  エクリプス８０ｉ）で鏡検し、デジタルカメラ（ニコンＤｘｍ１２００ＦまたはＰｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ社Ｃｏｏｌ  ＳＮＡＰ  ＥＳ）で写真撮影した。結果を図１−３に示す。静脈内投与されたＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−７２７は血液−脳関門を透過し、Ｔｇマウス脳内アミロイド斑に結合した。【００７２】
同一切片を免疫染色する場合は、以下のように行った。
（１）同一切片に９０％蟻酸を約１５０μｌ滴下し、室温で５分間静置した。水道水で５分間洗浄した後、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に２分間浸漬し、その後、０．０５％トリプシン溶液を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１５分間反応させた。
（２）氷浴中、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させ、余分な水分を除去した後に、アミロイドβ蛋白の特異抗体である４Ｇ８（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社、１：１００希釈）を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１時間反応させた。
（３）さらに冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ヤギ、ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下して、３０分間静置した。再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ  １０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。
結果を図４および図５に示す。ＴＨＫ−７０２は血液−脳関門を透過し、Ｔｇマウスのアミロイド斑に結合し（図３上段パネル）、同結合部位は同一切片の抗Ａβ抗体染色部位と一致していた（図３下段パネル）。図４は図３の強拡大画像を示す。Ａ、Ｂ、Ｃはそれぞれ図３のＡ，Ｂ、Ｃに対応。ＴＨＫ−７０２はＴｇマウスのアミロイド斑に結合し（図４左パネル）、同結合部位は同一切片の抗Ａβ抗体染色部位と完全に一致していた（図４右パネル）。【００７３】
本発明の化合物のアルツハイマー病患者脳切片上での染色性試験の手順について以下に説明する。
（１）病理学的にアルツハイマー病と確定診断された患者および正常高齢者の、側頭葉または海馬における脳標本を使用した。標本は共同研究先である福祉村病院  長寿医学研究所から提供を受け、患者遺族から研究目的での使用に対する承諾を得ている（福祉村病院倫理委員会許可Ｎｏ．２０）。
（２）パラフィン包埋された脳組織は厚さ６μｍあるいは８μｍで薄切し、スライドグラス上に伸展、乾燥させた。パラフィン脳切片はキシレン１０分×２、１００％エタノール５分×２、９０％エタノール５分、流水洗１０分の順で脱パラフィン化した。
（３）本発明化合物による染色の前処理として、リポフスチンによる自己蛍光を除去する処置を行った。はじめに、脱パラフィン化した切片を０．２５％  ＫＭｎＯ４溶液に２０分間浸漬した。ＰＢＳにて２分間×２回洗浄した後、０．１％  Ｋ２Ｓ２Ｏ５／シュウ酸溶液中に約５秒間浸し、さらにＰＢＳにて２分間×３回洗浄を行った。
（４）５０％エタノールに溶解した１００μＭ本発明化合物溶液を約１５０μｌ滴下し、１０分間反応させた。水道水中に５回つけた後、Ｆｌｕｏｒ  Ｓａｖｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  （Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）で封入し、蛍光顕微鏡（ニコン、エクリプス８０ｉ）を用いて鏡検した。画像はデジタルカメラ（ニコンＤｘｍ１２００ＦまたはＰｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ社Ｃｏｏｌ  ＳＮＡＰ  ＥＳ）にて撮影した。【００７４】
免疫染色は以下のように行った。
（ａ）アミロイドβ蛋白の免疫染色方法：
（１）脱パラフィン後、蒸留水中で２分×２で洗浄を行い、イムノペンにより組織を囲んだ後、蟻酸を約１５０μｌ滴下し、室温で５分間静置した。水道水で５分間洗浄した後、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に２分間浸漬し、その後、０．０５％トリプシン溶液を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１５分間反応させた。
（２）氷浴中、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させ、余分な水分を除去した後に、アミロイドβ蛋白の特異抗体である６Ｆ／３Ｄ（ＤＡＫＯ社、１：５０希釈）を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１時間反応させた。
（３）さらに冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ヤギ、ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下して、３０分間静置した。再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ  １０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。【００７５】
（ｂ）神経原線維変化の免疫染色方法：
（１）脱パラフィン処理後、冷却ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させた。余分な水分を除去した後に、タウの特異抗体であるＡＴ−８（Mia Nobels社、１：１００希釈）を２滴滴下して、４℃、１晩反応させた。
（２）翌日、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗ウサギＩｇＧ，ヤギ，ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下し、３０分間静置した。
（３）再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ  １０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。なおブロッキング用血清、抗ウサギＩｇＧ，ヤギ，ビオチン結合溶液、ＡＢＣ溶液はPhosphorylated Tau Immunohistostain Kit(Wako 299-57301)に含まれるものを使用した。【００７６】
本発明の化合物についての上記染色試験の結果を図２〜図２６に示す。ＴＨＫ−０９７はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２）。ＴＨＫ−１８４はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図３）。ＴＨＫ−１８５はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白および神経原線維変化に結合した（図４）。ＴＨＫ−２０３はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図５）。ＴＨＫ−２０７はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図６）。ＴＨＫ−２４８はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図７）。ＴＨＫ−２５４はアルツハイマー病患者脳切片において神経原線維変化に結合した（図８）。ＴＨＫ−２５８はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白および神経原線維変化に結合した（図９）。ＴＨＫ−２６２はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１０）。ＴＨＫ−２７６はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１１）。ＴＨＫ−２８１はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１２）。ＴＨＫ−３０８はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１３）。ＴＨＫ−３１７はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白および神経原線維変化に結合した（図１４）。ＴＨＫ−３８３はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１５）。ＴＨＫ−３８５はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１６）。ＴＨＫ−３８６はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白および神経原線維変化に結合した（図１７）。ＴＨＫ−５２５はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１８）。ＴＨＫ−５５６はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図１９）。ＴＨＫ−５５８はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２０）。ＴＨＫ−５５９はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２１）。ＴＨＫ−５６１はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２２）。ＴＨＫ−５６２はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２３）。ＴＨＫ−５６３はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２４）。ＴＨＫ−５６５はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２５）。ＴＨＫ−５８５はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白に結合した（図２６）。このように、本発明の化合物はアルツハイマー病患者脳切片においてアミロイドβ蛋白および神経原線維変化を特異的に認識することがわかった。また、上記以外の本発明の化合物も特異的にアミロイドβ蛋白に結合することがわかった。【００７７】
以下に本発明の化合物の特性に関する試験方法を説明する。
（Ａ）急性毒性試験
本発明の化合物の急性毒性をマウスを用いて静脈内投与で検討した。Ｃｒｊ：ＣＤ１系雄性マウスを一群４匹として使用した（各群の平均体重は３１〜３２ｇであった）。各化合物は１Ｎ ＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、蒸留水の混合液に溶解、またはＤＭＳＯに溶解後、蒸留水にて希釈し、尾静脈を介して投与し、以後７日まで観察した。結果を表２に示す。
【表２】
2007074786.tif 000056
【００７８】
（Ｂ）脳移行試験
Ｉ．ＨＰＬＣを用いた脳移行試験
マウスに本発明化合物を静脈内投与し、インビボにおける脳移行性を測定した。
（１）マウスは３０〜４０ｇ（ｎ＝３）のＳｌｃ：ＩＣＲ（日本ＳＬＣ）を用いた。
（２）被験化合物は５％Ｔｗｅｅｎ８０−５％エチルアルコール−５％  １Ｎ  ＨＣｌ−生理食塩水溶液の混合液で溶解、して、尾静脈より注入し、投与より２分後に工一テル麻酔下で腹部大動脈からヘパリン処理注射筒を用いての採血、脳の採材をおこなった。
（３）血液は採血後４℃、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を血漿として−８０℃で保存した。脳（小脳を含む）は採材後−８０℃で保存した。
（４）血漿は０．１ｍｌを取り、アセトニトリルを０．３ｍｌ加えｖｏｒｔｅｘした後、４℃、１０，０００Ｇで、５分間遠心した。遠心を終えた上澄み０．２ｍｌをＭｉｎｉ−Ｕｎｉｐｒｅｐ（Ｗｈａｔｍａｎ）に移し２０ｍＭリン酸バッファーを０．２ｍｌ加えろ過した。ろ過した溶液のうち０．２ｍｌをＨＰＬＣ（ＳＨＩＳＥＩＤＯ  ＮＡＮＯＳＰＡＣＥ  ＳＩ−２，ポンプ：３００１、ＵＶ−ＶＩＳ検出器：３００２、カラム恒温槽：３００４、蛍光検出器：３０１３）により分析した。
（５）脳はメタノールを２ｍｌ加えてホモジェナイズし、４℃、３０００または４０００ｒｐｍで１０分間遠心した。遠心を終えた上澄みを５００μｌとり、２０ｍＭリン酸ｂｕｆｆｅｒで１０倍希釈した。固相抽出用カートリッジに（ｉ）アセトニトリル２〜３ｍｌ、（ｉｉ）メタノール２〜５ｍｌ、（ｉｉｉ）超純水４〜６ｍｌの順番で通し、固相抽出用カートリッジ（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ  Ｓｐｅｅｄｉｓｋ）に１０倍希釈した上澄み溶液を通した。固相抽出用カートリッジに空のシリンジで空気を２〜３回通し水分除去した後、アセトニトリルまたはメタノール約５００μｌで溶出、２０ｍＭリン酸ｂｕｆｆｅｒで２倍希釈した。その溶液０．２ｍｌをＨＰＬＣで分析した。
（６）血漿、脳それぞれについて、投与量に対する脳内および血漿の被験化合物含有量（％ＩＤ（ｉｎｊｅｃｔｅｄ  ｄｏｓｅ）／ｇまたはｍｌ）を求めた。【００７９】
表３にマウスにおける被験化合物静脈内投与２分後の脳移行を示した。中枢神経系を対象としたＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ用化合物の脳移行性は０．５％ＩＤ／ｇ以上あれば十分と考えられている。その意味で被験化合物は極めて脳移行性の高い化合物である。
【表３】
2007074786.tif 000057
【００８０】
ＩＩ．［１８Ｆ］標識体を用いた検討
［１８Ｆ］ＴＨＫ５２５の標識合成
サイクロトロンＨＭ１２（住友重機械社製）で加速した１２ＭｅＶの陽子ビームを同位体純度９５％以上の［１８Ｏ］Ｈ２Ｏに３０分間照射して１８Ｆ−を合成した。続いてその溶液を陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８）に通して１８Ｆ−を樹脂上に捕捉し、３３ｍＭ  Ｋ２ＣＯ３溶液で溶出させた。この１８Ｆ−含有Ｋ２ＣＯ３水溶液３００μＬ（３．２８ＧＢｑ）を褐色バイアル（容量１０ｍＬ）にとり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１６ｍｇ）、アセトニトリル（２ｍＬ）を加えてオイルバス（１１０℃）で加熱しながらＨｅガスを吹き付け、水を共沸させながらアセトニトリルを完全に除去した。さらにアセトニトリル（３ｍＬ）を加え同様に加熱条件下でアセトニトリルを除去する操作を３回繰り返して、バイアル内を無水の状態にした。そこに、標識前駆体のＴＨＫ５７５（１．９ｍｇ）を溶解したＤＭＳＯ溶液（０．８ｍＬ）を加え、オイルバス（１１０℃）で１０分間加熱攪拌した。その後、このＤＭＳＯ反応溶液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ａｌｕｍｉｎａカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）とフィルター（０．５μｍ）に通し、得られた濾液をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３（１０×２５０ｍｍ）、移動相：ＥｔＯＨ／ＭｅＣＮ／２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４＝１５／４５／４０、流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ）にかけて、約１１−１２分に溶出する［１８Ｆ］ＴＨＫ５２５由来の放射性ピークを分取した。このフラクションの放射能から求めた減衰補正後の放射化学的収率は４２％で、放射化学的純度は９９％以上であった。【００８１】
［１８Ｆ］ＴＨＫ７０２の標識合成
サイクロトロンＨＭ１２（住友重機械社製）で加速した１２ＭｅＶの陽子ビームを同位体純度９５％以上の［１８Ｏ］Ｈ２Ｏに３０分間照射して１８Ｆ−を合成した。続いてその溶液を陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８）に通して１８Ｆ−を樹脂上に捕捉し、３３ｍＭ  Ｋ２ＣＯ３溶液で溶出させた。この１８Ｆ−含有Ｋ２ＣＯ３水溶液２００μＬ（３．２４ＧＢｑ）を褐色バイアル（容量１０ｍＬ）にとり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１６ｍｇ）、アセトニトリル（３ｍＬ）を加えてオイルバス（１１０℃）で加熱しながらＨｅガスを吹き付け、水を共沸させながらアセトニトリルを完全に除去した。さらにアセトニトリル（３ｍＬ）を加え同様に加熱条件下でアセトニトリルを除去する操作を３回繰り返して、バイアル内を無水の状態にした。そこに、標識前駆体のＴＨＫ７０３（２．２ｍｇ）を溶解したＤＭＳＯ溶液（０．８ｍＬ）を加え、オイルバス（１１０℃）で１０分間加熱攪拌した。その後、反応溶液を蒸留水（８ｍＬ）で希釈してＳｅｐ−Ｐａｋ  ｔＣ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）にロードし、蒸留水でカートリッジを洗浄後、ＥｔＯＨで溶出した溶液をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３（１０×２５０ｍｍ）、移動相：ＭｅＣＮ／２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４＝４０／６０、流速：７．０ｍＬ／ｍｉｎ）にかけて、約１１分に溶出する［１８Ｆ］ＴＨＫ７０２由来の放射性ピークを分取した。このフラクションの放射能から求めた減衰補正後の放射化学的収率は２１％で、放射化学的純度は９９％以上であった。【００８２】
［１８Ｆ］ＴＨＫ７２７の標識合成
サイクロトロンＨＭ１２（住友重機械社製）で加速した１２ＭｅＶの陽子ビームを同位体純度９５％以上の［１８Ｏ］Ｈ２Ｏに３０分間照射して１８Ｆ−を合成した。続いてその溶液を陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８）に通して１８Ｆ−を樹脂上に捕捉し、３３ｍＭ  Ｋ２ＣＯ３溶液で溶出させた。この１８Ｆ−含有Ｋ２ＣＯ３水溶液１００μＬ（１．２７ＧＢｑ）を褐色バイアル（容量１０ｍＬ）にとり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１０ｍｇ）、アセトニトリル（３ｍＬ）を加えてオイルバス（１１０℃）で加熱しながらＨｅガスを吹き付け、水を共沸させながらアセトニトリルを完全に除去した。さらにアセトニトリル（３ｍＬ）を加え同様に加熱条件下でアセトニトリルを除去する操作を３回繰り返して、バイアル内を無水の状態にした。そこに、標識前駆体のＴＨＫ７２６（１．９ｍｇ）を溶解したＤＭＳＯ溶液（０．４ｍＬ）を加え、オイルバス（１１０℃）で１０分間加熱攪拌した。その後、このＤＭＳＯ反応溶液をＳｅｐ−Ｐａｋ（登録商標）Ａｌｕｍｉｎａカートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）とフィルター（０．５μｍ）に通し、さらに追加的にＤＭＳＯ（０．２ｍＬ）を通して得られた濾液をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３（１０×２５０ｍｍ）、移動相：ＭｅＣＮ／２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４＝４０／６０、流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ）にかけて、約２３分に溶出する［１８Ｆ］ＴＨＫ７２７由来の放射性ピークを分取した。このフラクションの放射能から求めた減衰補正後の放射化学的収率は４４％で、放射化学的純度は９９％以上であった。【００８３】
［１８Ｆ］ＴＨＫ７６３の標識合成
サイクロトロンＨＭ１２（住友重機械社製）で加速した１２ＭｅＶの陽子ビームを同位体純度９５％以上の［１８Ｏ］Ｈ２Ｏに３０分間照射して１８Ｆ−を合成した。続いてその溶液を陰イオン交換樹脂（ＡＧ１−Ｘ８）に通して１８Ｆ−を樹脂上に捕捉し、３３ｍＭ  Ｋ２ＣＯ３溶液で溶出させた。この１８Ｆ−含有Ｋ２ＣＯ３水溶液２００μＬ（３．０２ＧＢｑ）を褐色バイアル（容量１０ｍＬ）にとり、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ２２２（１６ｍｇ）、アセトニトリル（３ｍＬ）を加えてオイルバス（１１０℃）で加熱しながらＨｅガスを吹き付け、水を共沸させながらアセトニトリルを完全に除去した。さらにアセトニトリル（３ｍＬ）を加え同様に加熱条件下でアセトニトリルを除去する操作を３回繰り返して、バイアル内を無水の状態にした。そこに、標識前駆体のＴＨＫ７６２（３．１ｍｇ）を溶解したＤＭＳＯ溶液（０．７ｍＬ）を加え、オイルバス（１１０℃）で１０分間加熱攪拌した。その後、反応溶液を蒸留水（７ｍＬ）で希釈してＳｅｐ−Ｐａｋ  ｔＣ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）にロードし、蒸留水およびＭｅＣＮ／２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４（ｖ／ｖ＝３／７、５ｍＬ）で順次カートリッジを洗浄後、ＥｔＯＨで溶出した溶液をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｉｎｅｒｔｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ−３（１０×２５０ｍｍ）、移動相：ＭｅＣＮ／２０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４＝３５／６５、流速：６．０ｍＬ／ｍｉｎ）にかけて、約２４−２５分に溶出する［１８Ｆ］ＴＨＫ７６３由来の放射性ピークを分取した。このフラクションの放射能から求めた減衰補正後の放射化学的収率は３８％で、放射化学的純度は９９％以上であった。【００８４】
標識化合物含有生理食塩液の調製
標識合成により得られた［１８Ｆ］ＴＨＫ５２５、［１８Ｆ］ＴＨＫ７０２、［１８Ｆ］ＴＨＫ７２７、または［１８Ｆ］ＴＨＫ７６３を含有する分取ＨＰＬＣフラクションを蒸留水（約２０ｍＬ）で希釈してＳｅｐ−Ｐａｋ  ｔＣ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）にロードし、蒸留水（５〜１０ｍＬ）でカートリッジを洗浄後、ＥｔＯＨ（３〜５ｍＬ）で標識化合物を溶出した。このＥｔＯＨ溶出液に５％ポリソルベート８０エタノール溶液を適量加えて８０℃で加熱しながらロータリーエバポレーターで溶媒を留去し、得られた標識化合物とポリソルベート８０の混合物を生理食塩液に溶解させることで標識化合物含有生理食塩液を調製した。調製後の薬液の放射化学的純度は９５％以上であった。【００８５】
標識化合物のマウス脳移行性評価
［１８Ｆ］ＴＨＫ５２５、［１８Ｆ］ＴＨＫ７０２、［１８Ｆ］ＴＨＫ７２７、または［１８Ｆ］ＴＨＫ７６３を含有する生理食塩液を雄性ＩＣＲマウス（６〜７週齢）に尾静脈内投与し、２及び３０分後における脳内放射能の集積性から各標識化合物の脳移行性を評価した。使用した標識化合物含有生理食塩液の放射化学的純度は９５％以上、比放射能は１８．５〜１４８ＧＢｑ／μｍｏｌであり、マウス１匹あたり１．１１〜２．２２ＭＢｑの標識化合物を投与した。放射能集積性の評価では、全投与放射能に対する評価組織の単位重量あたりの放射能の割合（％  Ｉｎｊｅｃｔｅｄ  Ｄｏｓｅ／ｇ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ；％ＩＤ／ｇ）を指標とした。放射能の計測には、ガンマーカウンター（１４８０  ＷＩＺＡＲＤ、パーキンエルマー社製）を使用した。実験手順としては、標識化合物を尾静脈内投与して２及び３０分後にエーテル麻酔下でマウスの頸椎脱臼を行い、速やかに心臓から血液を採取したのち全脳（小脳、脳幹含む）を摘出した。そして各サンプルの放射能及び組織重量の計測を行い、そのデータを用いて％ＩＤ／ｇを算出した。【００８６】
表４にマウスにおける［１８Ｆ］標識被験化合物静脈内投与２分後の脳移行を示した。中枢神経系を対象としたＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ用標識化合物の脳移行性は０．５％ＩＤ／ｇ以上あれば十分と考えられている。その意味で下記［１８Ｆ］標識被験化合物は極めて脳移行性の高い［１８Ｆ］標識化合物である。
【表４】
2007074786.tif 000058
【００８７】
変異原性試験
本発明化合物はその用途から、変異原性が無いか、あるいは問題とならないレベルであることが望ましい。本発明化合物の遺伝子突然変異誘発性を検討するため、ヒスチジン要求性のネズミチフス菌（Salmonella typhimurium）ＴＡ１００およぴＴＡ９８株を用いる復帰突然変異試験を行った。試験は用量設定試験と本試験の２回実施した。
以下に試験方法および本発明化合物の変異原性試験を示す。用量設定試験は０．１６０、０．８００、４．００、２０．０、１００および５００μｇ／プレートの６用量（公比５）で実施した。
その結果、変異原性が認められた場合には、正確な用量反応曲線が求められるような用量で本試験を実施した。用量設定試験において変異原性が認められず、試験菌株に対する生育阻害が認められた場合は、生育阻害を示す用量を最高用量とし、生育阻害が認められなかった場合は５０００μｇ／プレートを最高用量として、６用量程度（公比２）で本試験を実施した。【００８８】
まず、被験化合物をＤＭＳＯに溶解または懸濁させた後、順次希釈して各濃度の被験化合物液を調製した。
滅菌した試験管に被験化合物液あるいは陰性対照（ＤＭＳＯ）溶液を１００μ１分注し、次いで、代謝活性化系非存在下（−Ｓ９ｍｉｘ）の場合はＯ．１ｍｏｌ／１ナトリウム・リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を５００μ１、また代謝活性化系存在下（＋Ｓ９ｍｉｘ）の場合はＳ９ｍｉｘを５００μ１分注した。
次いで、３７℃で８時間振盪培養した試験菌株懸濁液を１００μ１加えた後、振盪恒温器を用いて３７℃で２０分間プレインキュベーションした。振盪終了後、トップアガー２ｍ１を添加し、内容物を混合した。
その後、混合液を最少グルコース寒天平板培地（プレート）上に注ぎ一様に広げ、トップアガーを固化させ、プレートを恒温器に移し、３７℃の条件で４８時間培養した。
培養終了後、プレート上の試験菌株の生育状態について、実体顕微鏡を用いて観察し、さらに被験物質の析出状態を肉眼で観察した後、復帰突然変異により生じたコロニー数を計測した。
計測に際しては、コロニーアナライザーを用い、面積補正ならびに数え落とし補正を実施してコ．ロニー数を算出した。被験化合物の析出あるいは生育阻害等により、コロニーアナライザーの使用が不適当な場合、目視で計数した。
復帰突然変異コロニー数が陰性対照の２倍以上に増加し、かつその増加に用量依存性あるいは再現性が認められた場合に陽性と判定した。なお、陽性と判定した場合には、変異原性の強さの相対的比較値である比活性を下式で求めた。
比活性＝
｛（当該濃度におけるプレート当たりのコロニー数）−（陰性対照のプレートあたりのコロニー数）｝／当該濃度値（ｍｇ／プレート）
【００８９】
上で説明した方法により復帰突然変異試験を行った。下表５に被験化合物の変異原性の強さの相対的比較値である比活性値を示した。
ＴＨＫ−０９７、ＴＨＫ−３３６、ＴＨＫ−５２５、ＴＨＫ−６８３、ＴＨＫ−７０２、ＴＨＫ−７０８、ＴＨＫ−７１１、ＴＨＫ−７１３、ＴＨＫ−７２７、ＴＨＫ−７５２はＳ９ｍｉｘ非存在および存在にかかわらず、復帰突然変異コロ二一数が陰性対照の２倍以上に増加せず、その比活性値はマイナスであり、またＳ９ｍｉｘ存在下のＴＨＫ−７０７、ＴＨＫ−７６１、ＴＨＫ−７６３の比活性は弱かったが、一方、ＦＤＤＮＰ（Agdeppaら、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス(J.Neurosci.)、２１巻、ＲＣ１８９ペ一ジ、２００１年）およびＩＭＰＹ（Kungら、ブレイン・リサーチ(Brain Research)、９５６巻、２０２ぺ一ジ、２００２年）のＳ９ｍｉｘ存在下の比活性値は極めて高かった。表５に示す結果から、この試験に供された本発明化合物は変異原性が認められないか、または認められたとしてもその比活性はＦＤＤＮＰおよびＩＭＰＹと比較して極めて弱いことが確かめられた。
【表５】
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１）：復帰突然変異コロニー数が陰性対照の２倍以上に増加せず
２）：ＦＤＤＮＰおよびＩＭＰＹのデータはＰＣＴ／ＪＰ０３／０７１８３（ＷＯ０３／１０６４３９）より引用【００９０】
蛍光コンゴーレッド法
次に本発明化合物のスクリーニング方法について説明する。本発明化合物のなかにはチオフラビンＴ法では蛍光波長がチオフラビンＴと重なるためにスクリーニングが不可能なものがあった。それらの化合物については以下の新規スクリーニングを導入した。
（１）アミロイドβ蛋白１−４０（ペプチド研より購入）はリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶解し３７℃で４日間放置した。
（２）同緩衝液に溶解したコンゴーレッド５０μｌを９６穴マイクロプレートに分注した（最終濃度０．１、０．３、１μＭ）。
（３）アミロイドβ蛋白１００μｌずつを添加（最終濃度５μＭ）し、３０分間放置した。
（４）同緩衝液に溶解した被験化合物を１００μｌずつ添加（最終濃度１０マイクロＭ）し、６０分間放置した。
（５）蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製、Ｓｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  １９０）を用いて、あらかじめ測定してあった、最適励起および測定波長で測定した。
（６）被験化合物とアミロイドβ蛋白とコンゴーレッド共存下の蛍光度をＡ、被験化合物とコンゴーレッド共存下のそれをＢ、被験化合物とアミロイドβ蛋白のそれをＣ、被験化合物単独のそれをＤとすると被験化合のβ構造認識度は以下の式で算出した。
被験化合物β構造認識度（％）＝｛（Ａ―Ｂ）／（Ｃ―Ｄ）｝×１００
（７）このβ構造認識度が大きいほど被験化合物はアミロイドβ蛋白に対する結合特異性が高いといえる。【００９１】
表６に結果を示した。被験化合物のＡβに対する結合はＡβに特異的に結合するコンゴーレッドによって濃度依存的に抑制された。以上より被験化合物はＡβのβ構造を認識していることが明らかとなった。
【表６】
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【産業上の利用可能性】
【００９２】
本発明のコンフォーメーション病診断プローブ用化合物、特に画像診断用プローブ化合物、ならびにそれを含有するコンフォーメーション病治療および／または予防用医薬組成物等は、現在最も難病とされているコンフォーメーション病、例えばアルツハイマー病の早期発見、治療および予防において極めて有用であり、コンフォーメーション病の診断薬や診断キットの製造分野、コンフォーメーション病の治療薬および予防薬の製造分野、コンフォーメーション病の研究等に利用可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
2007074786.tif 000074
【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【国際調査報告】
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