(57)【要約】  本発明は、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含有する組成液に、少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥させるか、或いは該組成液より得た晶析沈殿物を分離し乾燥させることによる安定性に極めて優れたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法、該製造方法によって得られたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物、該組成物より得られた成型体を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥することを特徴とする、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項２】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、硫酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、請求項１に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項３】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、請求項１に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項４】
Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、硫酸又はその塩、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、請求項１に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項５】
得られたＳ-アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対する硫酸又はその塩の量比が０．１〜３倍モルの範囲である、請求項２又は４に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項６】
得られたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対するｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の量比が０．１〜２倍モルの範囲である、請求項３又は４に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項７】
得られたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対するアスコルビン酸類又はその塩の量比が０．１〜２倍モルの範囲である、請求項１〜６の何れかに記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項８】
アスコルビン酸類が、アスコルビン酸、又はアスコルビン酸誘導体である、請求項１に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項９】
アスコルビン酸誘導体が、アスコルビン酸２−グルコシド、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、又はアスコルビン酸ステアリン酸エステルである、請求項８に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜９の何れかに記載の製造方法によって得られた、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物より得られた成型体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以下、ＳＡＭeと記す）の安定化法及びその方法によって安定化されたＳＡＭｅを含む組成物に関する。
更に詳しくは、ＳＡＭeを含む組成液に、少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥することを特徴とする、保存安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物の製造方法、該製造方法で得られたＳＡＭe含有組成物及び該組成物を用いた成型体に関する。
ＳＡＭｅは、生体内における種々のトランスメチラーゼによるメチル化反応のメチル基供与体として重要な役割を演じている水溶性の生理活性物質であり、人体の殆ど全ての細胞に見られ、様々な生化学反応における共同因子として働き、例えば、軟骨の維持や脳内の化合物生成に欠かすことの出来ない物質である。
このようにＳＡＭeは、重要な生理活性物質であり、欧米諸国において鬱病、肝臓疾患、及び関節炎等の治療薬、或いは健康食品として広く利用されている。
【背景技術】
【０００２】
そのため、ＳＡＭｅを簡便かつ経済的な方法で製造し市場に供給することが強く望まれるが、ＳＡＭｅは熱的に不安定で容易に分解する性質を有することから、その対策として、保存安定性の向上を目的とした多くの試みがなされてきた。
従来、ＳＡＭｅの製造方法としては、前駆物質であるＬ−メチオニンを含有させた培地を用いて醗酵生産する方法（例えば、特許文献７〜９、非特許文献１〜５、８、９参照）、酵母などの微生物より単離精製したＳＡＭe合成酵素（メチオニンアデノシルトランスフェラーゼ）を用い、アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ）とＬ−メチオニンを基質としてＳＡＭeを酵素的に合成する方法（例えば、特許文献１、非特許文献６、７、９〜１２参照）、および合成法による方法（例えば、特許文献１０、非特許文献１１参照）で得られたＳＡＭｅの組成物を、クロマトグラフィー等により精製を行い、硫酸やｐ−トルエンスルフォン酸との塩、又はブタンジスルフォン酸との塩等にすることによりＳＡＭｅを安定化する方法が一般的であった（例えば、特許文献２〜９参照）。
しかしながら、前記の方法で調製したＳＡＭe塩でも、比較的安定に保存できる期間は４０℃、湿度７５％の加速試験で約１ヶ月と短く、従って、より長期間にわたって安定に保存できるＳＡＭｅ含有組成物の製造方法、該製造方法で得られたＳＡＭe含有組成物及び該組成物を用いた成型体の提供が強く望まれて来た。【０００３】
【特許文献１】特公昭６１−２２７７９２号公報
【特許文献２】特開昭５９−５１２１３号公報
【特許文献３】特開昭５２−４８６９１号公報
【特許文献４】特開平１−４９２７４号公報
【特許文献５】特公平１−４９２７５号公報
【特許文献６】特公平３−５０１９７０号公報
【特許文献７】特公平４−２１４７８号公報
【特許文献８】特公平６−３０６０７号公報
【特許文献９】欧州特許出願公開第１０９１００１号明細書
【特許文献１０】米国特許出願公開第２００２／０１８８１１６号明細書
【非特許文献１】Ｓｃｈｌｅｎｋ  Ｆ．，ＤｅＰａｌｍａ  Ｒ．Ｅ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２２９，１０３７−１０５０(１９５７)
【非特許文献２】Ｓｈｉｏｚａｋｉ  Ｓ．，ｅｔ  ａｌｌ，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．,５３，３２６９−３２７４(１９８９)
【非特許文献３】Ｓｃｈｌｅｎｋ  Ｆ．，ＤｅＰａｌｍａ  Ｒ．Ｅ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２２９，１０５１−１０５７(１９５７)
【非特許文献４】Ｋｕｓａｋａｂｅ，Ｈ．，Ｋｕｎｉｎａｋａ，Ａ．，Ｙｏｓｈｉｎｏ，Ｈ．，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８，１６６９−１６７２(１９７４)
【非特許文献５】Ｍｕｄｄ  ＳＨ．，Ｃａｎｔｏｎｉ  ＧＬ．，ｅｔ ａｌｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２３１，４８１−４９２(１９５８)
【非特許文献６】Ｍａｒｋｈａｍ  Ｇ．Ｄ．，ｅｔ  ａｌｌ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５５，９０８２−９０９２(１９８０)
【非特許文献７】Ｍａｒｋｈａｍ  ＤＪ．，ＤｅＰａｒｉｓｉｓ  Ｊ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９，１４５０５−１４５０７(１９８４)
【非特許文献８】Ｓｈｉｏｚａｋｉ  Ｓ．，ｅｔ ａｌｌ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．，４，３４５−３５４(１９８６)
【非特許文献９】Ｔｈｏｍａｓ  Ｄ．，Ｓｕｒｄｉｎ−Ｋｅｒｊａｎ  Ｙ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２，１６７０４−１６７０９(１９８７)
【非特許文献１０】Ｔｈｏｍａｓ  Ｄ．，Ｃｈｅｒｅｓｔ  Ｈ．，ｅｔ ａｌｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８，５１３２−５１３９(１９８８)
【非特許文献１１】Ｊｏｓｅ  Ｒ．Ｍａｔｏｒ，Ｆｒａｎｋ  Ｍ．Ｒａｕｓｈｅｌ，Ｃｈｉ−Ｈｕｅｙ  Ｗｏｎｇ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，９，３９−５２(１９８７)
【非特許文献１２】Ｊｅｏｎｇｈｏ Ｐａｒｋ，Ｊｕｎｚｈｅ  Ｔａｉ，Ｃｈａｒｌｅｓ  Ａ．Ｒｏｅｓｓｎｅｒ  ａｎｄ  Ａ．Ｉａｎ  Ｓｃｏｔｔ．，Bｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．１２，２１７９−２１８５(１９９６)
【発明の開示】
【０００４】
従来の方法によって製造されたＳＡＭｅの組成物は、その安定性において、更なる改善の余地があり、十分満足できるものではない。
すなわち、本発明が解決しようとする課題は、簡便にして、従来よりも更に安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物が得られる製造方法を確立するとともに、該製造方法で得られたＳＡＭe含有組成物及び該組成物を用いた成型体を提供することにある。
【０００５】
本発明者等は、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、ＳＡＭｅを含む組成液に、少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液に含まれる溶媒を留去し乾燥させる方法、或いは該組成液をそのまま又は精製や濃縮操作を行った後に溶媒を加える等によりＳＡＭｅ含有組成物を晶析させ、得られた沈殿物を分離し乾燥する方法を取ることによって、ＳＡＭｅ含有組成物の安定性を大幅に向上できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
即ち、本発明は、以下の（１）〜（１１）に示す安定性に優れたＳＡＭe含有組成物の製造方法、該製造方法で得られたＳＡＭe含有組成物及び該組成物を用いた成型体に関するものである。
（１）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥することを特徴とする、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（２）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、硫酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、上記（１）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（３）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、上記（１）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（４）Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを含む組成液に、硫酸又はその塩、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩、及びアスコルビン酸類又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥する、上記（１）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（５）得られたＳ-アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対する硫酸又はその塩の量比が０．１〜３倍モルの範囲である、上記（２）又は（４）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（６）得られたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対するｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の量比が０．１〜２倍モルの範囲である、上記（３）又は（４）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（７）得られたＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物中に含まれるＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンに対するアスコルビン酸類又はその塩の量比が０．１〜２倍モルの範囲である、上記（１）〜（６）の何れかに記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（８）アスコルビン酸類が、アスコルビン酸、又はアスコルビン酸誘導体である、上記（１）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（９）アスコルビン酸誘導体が、アスコルビン酸２−グルコシド、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、又はアスコルビン酸ステアリン酸エステルである、上記（８）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物の製造方法。
（１０）上記（１）〜（９）の何れかに記載の製造方法によって得られた、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物。
（１１）上記（１０）に記載のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン含有組成物より得られた成型体。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明の保存安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物を製造する際に使用するＳＡＭｅは、その製法において特に限定されるものではなく、例えば、微生物を用いて醗酵生産したＳＡＭｅ、微生物酵素を用いる半合成法によって製造したＳＡＭｅ、或いは化学合成法によって製造したＳＡＭｅの何れを用いてもよい。
なお、これらのＳＡＭｅは、ＳＡＭｅ以外の不純物を含むものであっても特に差し支えはないが、必要に応じて、本願発明の安定化法を講じる前に精製操作を加えたものを用いた方が、そのまま製品化できる点で有利であることは言うまでもない。
精製方法としては、イオン交換クロマトグラフィー、キレート樹脂クロマトグラフィー、又は活性炭クロマトグラフィーなどを用いたクロマト分離法、沈殿剤や有機溶媒を用いた分別沈殿法、逆浸透膜やＵＦ膜を用いた膜分離法、或いは遠心分離や濾過を用いた分離法など様々あるが、効果的に精製が行える方法であればどのような方法を用いて精製してもよい。【０００７】
ＳＡＭｅを含む組成液中のＳＡＭｅ濃度は、含まれる溶媒の組成によっても異なるが、該組成液を乾燥するか、得られた晶析沈殿物を分離し乾燥するうえで、５〜２５質量％、好ましくは１０〜２０質量％の範囲が望ましい。
使用する溶媒としては、水を用いることで十分に目的は果たせるが、水にアセトン、エタノール等の有機溶媒が含まれるものであってもよい。
また、組成液のｐＨは、ＳＡＭｅの安定性の観点から１〜５、好ましくは１〜４の範囲が望ましい。
ｐＨが１未満であっても、また５を超えても組成液中でのＳＡＭｅの安定性や、得られるＳＡＭｅ含有組成物の保存安定性が低下するので好ましくない。
なお、ＳＡＭｅを含む組成液を所望する組成にするために、プロトン酸型の塩基性イオン交換樹脂との接触処理による塩交換、或いは電気透析機や逆浸透膜などを用いた透析処理を施すことによってその組成を調整することもできる。【０００８】
ＳＡＭｅを含む組成液に添加するアスコルビン酸類又はその塩の量としては、得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、その量比が０．１〜２倍モル、好ましくは０．５〜１．５倍モルとなるように添加する。
ＳＡＭｅに対する量比が０．１倍モル未満であっても、また２倍モルを超えても得られるＳＡＭｅ含有組成物の保存安定性が低下する。
なお、アスコルビン酸類又はその塩を溶解する際、攪拌することによって溶解に要する時間を短縮できる。
また、溶解時の液温は、ＳＡＭｅの安定性の面からできる限り低いことが好ましいが、ＳＡＭｅの溶解性の面より、通常、５〜３５℃、好ましくは１０〜３０℃の範囲である。【０００９】
本発明で使用するアスコルビン酸類又はその塩としては、アスコルビン酸又はその塩、或いはアスコルビン酸誘導体又はその塩が挙げられる。
アスコルビン酸又はその塩としては、Ｌ−アスコルビン酸又はＬ―アスコルビン酸ナトリウムやＬ―アスコルビン酸カリウムなどのアルカリ金属塩、或いはＬ―アスコルビン酸カルシウムなどのアルカリ土類金属塩等が挙げられる。
そのうち、特に好ましいのは、Ｌ−アスコルビン酸又はＬ−アスコルビン酸ナトリウムである。【００１０】
また、アスコルビン酸誘導体としては、アスコルビン酸２−グルコシド、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステル又はそれらの塩等が挙げられる。
アスコルビン酸類又はその塩は、粉末状、造粒品又は結晶状の形で、医薬品や食品用途で汎用されており、安全に使用することができる。【００１１】
アスコルビン酸類又はその塩に加えて、硫酸又はその塩を併用することもでき、この場合も保存安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物を得ることができる。
添加する硫酸又はその塩としては、得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、量比が、０．１〜３倍モル、好ましくは１．５〜２典倍モルになるように添加する。
ＳＡＭｅに対する量比が０．１倍モル未満では、得られるＳＡＭｅ含有組成物の保存安定性が低下し、３倍モルを超えても保存安定性に対する更なる併用効果は得られず無駄であるばかりか、得られるＳＡＭｅ含有組成物の純度を低下させるので好ましくない。【００１２】
一方、アスコルビン酸類又はその塩に加えて、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩を添加することによっても、保存安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物を得ることができる。
添加するｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の量としては、該ＳＡＭｅ含有組成液より得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、量比が０．１〜２倍モル、好ましくは０．５〜１．５倍モルとなるように添加する。
ＳＡＭｅに対する量比が０．１倍モル未満では、得られるＳＡＭｅ含有組成物の保存安定性が低下し、２倍モルを超えても更なる併用効果は得られず無駄であるばかりか、得られるＳＡＭｅ含有組成物の純度を低下させるので好ましくない。【００１３】
また更に、アスコルビン酸類又はその塩に加えて、硫酸又はその塩、及びｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩を併用することによって、より保存安定性に優れたＳＡＭｅ含有組成物を得ることができる。
添加する硫酸又はその塩の量としては、乾燥又は晶析処理後に得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、量比が０．１〜３倍モル、好ましくは１．５〜２．５倍モルであり、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の量としては、得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、量比が０．１〜２倍モル、好ましくは０．５  〜１．５倍モルである。
これらのうち、より好ましくは、乾燥分離又は晶析後に得られるＳＡＭｅ含有組成物中に含まれるＳＡＭｅに対して、硫酸又はその塩の量比が２倍モル、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の量比が１倍モル、アスコルビン酸又はその塩の量比が０．１〜２倍モル、更に好ましくは０．５〜１．５倍モルとなる組み合わせである。
このように、ＳＡＭｅ含有組成液に、硫酸又はその塩、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩、及びアスコルビン酸又はその塩を添加した後、該組成液を乾燥するか、該組成液から得られる晶析沈殿物を分離し乾燥することによって、アスコルビン酸類又はその塩を添加しない従来組成のＳＡＭｅよりも保存安定性が遙かに優れ、ｐ−トルエンスルフォン酸又はその塩の使用量を節減したＳＡＭｅ含有組成物を得ることができる。【００１４】
なお、前記した添加物質の他に、臭化水素酸又はヨウ化水素酸等のハロゲン酸、塩酸又はリン酸等の鉱酸、メタンスルフォン酸又は１，４-ブタンジスルフォン酸等のスルフォン酸類、或いはこれらの塩より選ばれる１種又は２種以上の経口摂取可能な物質が添加されることを妨げない。【００１５】
本発明のＳＡＭｅ含有組成物を得るには、ＳＡＭｅを含有する組成液から溶媒を留去し乾固する方法や、ＳＡＭｅを含有する組成液又はその濃縮物に有機溶媒を加えＳＡＭｅ含有組成物を晶析分離し乾燥する処理方法などが用いられる。
乾燥方法としては、例えば、スプレードライヤによる噴霧乾燥法、又は凍結乾燥法や減圧真空乾燥法などがある。
なお、晶析分離する処理方法を用いる場合は、ＳＡＭｅ、硫酸、ｐ−トルエンスルフォン酸、アスコルビン酸からなる組成物に対する貧溶媒、例えば、エタノール、ジエチルエーテル等を加えることによって晶析し、濾過、遠心分離等の分離手段によってＳＡＭｅ含有組成物の結晶を得ることができる。
なお、本発明のＳＡＭｅ含有組成物は結晶又は結晶様の粉体であり、保存安定性の観点から、アスコルビン酸類又はその塩を添加していない従来品と同様に水分含量が１．５質量％以下になるようにすることが望ましい。【００１６】
このようにして得られたＳＡＭｅ含有組成物は、例えば、４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下において、従来のＳＡＭｅ含有組成物に比べ著しく優れた保存安定性を示す。
また、本発明のＳＡＭｅ含有組成物は、必要に応じて、他の生理活性成分や賦形剤等の添加剤を加えた後に、圧縮打錠し錠剤状の組成物となし、更には、その表面を被覆したりすることもできるし、粉体を顆粒状に造粒することや、造粒した顆粒を詰めてカプセル化することもできる。
【実施例】
【００１７】
以下、本発明を実施例及び比較例を以てさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
なお、本発明におけるＳＡＭｅの定量分析は、前記した特許文献４、５の条件に従って、液体クロマトグラフィーを用いて行った。
クロマト条件は、カラム：ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．  ＧＬ−ＰＡＣＫ  ＰＡＲＴＩＳＩＬ−１０  ＳＣＸ  ４．６×２５０ｍｍ、溶離液：０．５Ｍギ酸アンモニウム緩衝液(ｐＨ４)、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出器：ＵＶ（２５４ｎｍ）、ＳＡＭｅ保持時間：約４００秒で行った。
実施例１（１−１〜１−６）【００１８】
（ａ）酵母菌体の培養
前記した非特許文献１、２及び８の培養法に従って、Ｌ−メチオニン含有培地２０ｋｇにサッカロマイセス属に属する酵母サッカロマイセス・セレビジエＩＦＯ２３４６を接種し、培養温度２７〜２９℃で好気的に通気攪拌しながら６日間培養した。
その結果、菌体濃度３．５質量％、ＳＡＭｅ含量２０５ｍｇ／ｇ−乾燥酵母の酵母菌体培養液１８ｋｇを得た。
（ｂ）酵母菌体の集菌
上記の酵母菌体培養液１８ｋｇを連続ロータリー型遠心分離機（日立ＨＩＭＡＣ  ＣＥＮＴＲＩＦＵＧＥ  ＣＲ１０Ｂ２）で処理し、乾物換算で濃度１８質量％の酵母菌体濃縮液３．４９ｋｇを得た。
（ｃ）ＳＡＭｅの抽出
上記の酵母菌体濃縮液３．４９ｋｇに酢酸エチル０．３５ｋｇ、蒸留水０．３５ｋｇを加え、攪拌下、室温にて２．５時間抽出した。
この菌体抽出液を上記の遠心分離機で密閉型遠沈管を用いて処理し、更に分離した酵母残渣に蒸留水を加え再分散させた後、同様の遠心分離操作を行うことによって、合わせて６．３６ｋｇのＳＡＭｅ抽出液を得た。
（ｄ）ＳＡＭｅ抽出液の精製
上記（ｃ）で得た抽出液をアンバーライトＩＲＣ-７６（弱酸性イオン交換樹脂）３．５Ｌを充填したカラムに通しＳＡＭｅを一旦樹脂に吸着させた。
次いで、０．００００５ｍｏｌ／ｌ（０．０００１Ｎ）硫酸水溶液５．３Ｌにて該カラムを通液洗浄した後、０．２ｍｏｌ／ｌ（０．４Ｎ）硫酸水溶液１２ＬにてＳＡＭｅ分画を溶出し、ＳＡＭｅ溶出画分１２．５Ｌを得た。
この溶出画分を更にアンバーライトＸＡＤ−４（合成吸着剤）３．５Ｌを充填したカラムに通すことによって不純物を樹脂に吸着させ、精製したＳＡＭｅ含有水溶液１２．５ｋｇを得た。
（e）ＳＡＭｅ含有水溶液の脱塩
上記（ｄ）で得たＳＡＭｅ含有水溶液をアンバーライトＩＲＡ−６７（弱塩基性イオン交換樹脂）２．８Ｌを充填したカラムに通し、過剰分の硫酸イオンを除去したＳＡＭｅを含有する組成液１６ｋｇを得た。
このＳＡＭｅ含有組成液中にはＳＡＭｅに対し、硫酸が１：２のモル比で存在していた。
（ｆ）ＳＡＭｅ含有組成液へのｐ―トルエンスルフォン酸の添加
上記（ｅ）で得たＳＡＭｅ含有組成液にｐ―トルエンスルフォン酸をＳＡＭｅ対して１倍モル加え、室温にて３０分間攪拌し溶解させた。
このようにして得られた溶液をエバポレータにて減圧濃縮し、ＳＡＭｅ含有組成液９５０ｇ得た。
（ｇ）ＳＡＭｅ含有組成液へのアスコルビン酸の添加
上記（ｆ）で得たＳＡＭｅ含有組成液９５０ｇを３Ｌフラスコに移し、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムをＳＡＭｅに対して０．２、０．６、１．０、１．４、１．８、２倍モルになるように加え、室温にて３０分間攪拌し溶解させた。
（ｈ）乾燥
このようにして得られた、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムの添加量を異にするＳＡＭｅ含有組成液１ｋｇを各々凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ガラストレーに流し込み、−５０℃で凍結した後、乾燥後の含水率が１．５質量％以下となるように最終棚段温度２５℃、３６時間の条件で凍結乾燥〔到達真空度１３．３３Ｐａ（０．１Ｔｏｒｒ）〕した。
得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表１に示す。
なお、ＳＡＭｅ残存率は、前記の液体クロマトグラフィーを用いた定量法で、保存安定性試験後の臭気の有無については５名のパネラーによる官能検査にて求めた。
実施例２（２−１〜２−６）【００１９】
実施例１の（ｆ）の操作においてｐ―トルエンスルフォン酸を添加しなかったこと以外は、実施例１と同様に処理して凍結乾燥したＳＡＭｅ含有組成物を得た。
得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表２に示す。
比較例１【００２０】
実施例１の（ｇ）の操作においてＬ−アスコルビン酸ナトリウムを添加しなかったこと以外は、実施例１と同様に処理して凍結乾燥したＳＡＭｅ含有組成物を得た。
得られたＳＡＭｅ含有組成物中の成分モル比は、ＳＡＭｅ：硫酸：ｐ−トルエンスルフォン酸＝１：２：１であった。
得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表１に示す。
比較例２【００２１】
Ｌ−アスコルビン酸ナトリウムを添加しなかったこと以外は、実施例２と同様に処理して、凍結乾燥したＳＡＭｅ含有組成物１４２ｇを得た。
得られたＳＡＭｅ含有組成物中の成分モル比は、ＳＡＭｅ：硫酸＝１：２であった。
得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表２に示す。
比較例３（３−１〜３−２）【００２２】
実施例１と同様にして（ａ）から（ｆ）までの操作を行い、ＳＡＭｅ含有組成液９５０ｇを得た。
この溶液をそのまま凍結乾燥器（日本真空技術株式会社製）の凍結乾燥用ガラストレーに流し込み−５０℃で凍結した後、最終棚段温度２５℃の条件で３６時間凍結乾燥〔到達真空度１３．３３Ｐａ（０．１Ｔｏｒｒ）〕した。
凍結乾燥後、このＳＡＭｅ含有組成物にＬ−アスコルビン酸ナトリウムをＳＡＭｅ対して０．６、１．０倍モル加え、窒素雰囲気下、室温で乳鉢にて攪拌混合した。
このようにして得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表３に示す。
比較例４（４−１〜４−２）【００２３】
（ｆ）の操作において、ｐ―トルエンスルフォン酸を添加しないこと以外は、比較例３と同様に処理してＳＡＭｅ含有組成物を得た。
このようにして得られたＳＡＭｅ含有組成物の質量、組成分のモル比、得られたＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験（ＳＡＭｅ残存率）の結果、官能検査（加速試験７５日後の異臭の有無）の結果を表３に示す。【００２４】
表１．ＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験の結果（ｐ―トルエンスルフォン酸を含むＳＡＭｅ含有組成物）【００２５】
【表１】
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※１：ＳＡＭｅ含有組成物中に含まれる各成分のモル比（ＳＡＭｅ：硫酸：ｐ−トルエンスルフォン酸：Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム）
※２：Ａ；異臭無し、Ｂ；異臭が僅かにする、Ｃ：異臭有り【００２６】
表２．ＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験の結果（ｐ―トルエンスルフォン酸を含まないＳＡＭｅ含有組成物）【００２７】
【表２】
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※１：ＳＡＭｅ含有組成物中に含まれる各成分のモル比（ＳＡＭｅ：硫酸：ｐ−トルエンスルフォン酸：Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム）
※２：Ａ；異臭無し、Ｂ；異臭が僅かにする、Ｃ：異臭有り【００２８】
表３．ＳＡＭｅ含有組成物の密閉ガラス容器中４０℃、ＲＨ７５％の加速条件下での保存安定性試験の結果（Ｌ―アスコルビン酸ナトリウムを凍結乾燥前に添加した場合と凍結乾燥後に添加した場合の比較）【００２９】
【表３】
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※１：ＳＡＭｅ含有組成物中に含まれる各成分のモル比（ＳＡＭｅ：硫酸：ｐ−トルエンスルフォン酸：Ｌ―アスコルビン酸ナトリウム）
※２：実施例１、２…凍結乾燥前にＬ―アスコルビン酸ナトリウムを添加
比較例３、４…凍結乾燥後にＬ―アスコルビン酸ナトリウムを添加
※３：Ａ；異臭無し、Ｂ；異臭が僅かにする、Ｃ：異臭有り
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明により、ＳＡＭｅを含む組成液に少なくともアスコルビン酸類又はその塩を添加し、必要に応じ攪拌し溶解させた後、該組成液を乾燥するか、或いは該組成液から得た晶析沈殿物を分離し乾燥することにより、保存安定性が極めて優れたＳＡＭｅ含有組成物を製造し提供することが可能となる。
また、本発明のアスコルビン酸類又はその塩の添加により、ｐ−トルエンスルフォン酸の添加量を低減させることも可能となる。
更に、保存安定性が向上することによって、分解に伴うイオウ臭の発生を抑えることができ、摂取のし易さが大幅に改善される。
【国際調査報告】
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