(57)【要約】【課題】  臓器一般に適用可能であり生体安全性に優れた臓器保存剤の提供。【解決手段】  白米部分を必須的に含む米原料の水処理物を有効成分として含有することを特徴とする臓器保存剤。【選択図】  図１【特許請求の範囲】
【請求項１】
白米部分を必須的に含む米原料の水処理物を有効成分として含有することを特徴とする臓器保存剤。
【請求項２】
前記米原料が、白米、玄米、発芽米、白糠及びこれらの一種以上の組み合わせである、請求項１記載の臓器保存剤。
【請求項３】
前記水処理物が、前記米原料の水抽出物である、請求項１又は２記載の臓器保存剤。
【請求項４】
前記水処理物が、前記米原料又は前記水抽出物の糖化物である、請求項１〜３のいずれか一項記載の臓器保存剤。
【請求項５】
前記水処理物が、前記米原料、前記水抽出物又は前記糖化物のアルコール発酵物又は有機酸発酵物である、請求項１〜４のいずれか一項記載の臓器保存剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体安全性に優れた、白米由来成分を有効成分として含有する新規な臓器保存剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
臓器移植とは、傷病者における臓器の障害が甚だ大きく通常の治療による回復が見込めない場合における、提供者の臓器を当該傷病者（被提供者）に移植する治療法である。ここで、臓器は、生体から摘出された場合、急速に生存能力を失う。生存能力に劣る臓器を移植すると、たとえ、組織適合性のよい臓器であっても、被提供者の体内で所期の機能を発揮することなく死滅することとなる。したがって、組織適合性のよい臓器の場合、臓器移植が成功するか否かは、臓器の摘出から移植するまでの時間をいかに短縮できるかに依拠する。しかしながら、被提供者に対する提供者の割合が非常に低い現状下では、提供者が被提供者に近接して居住するケースは希有である。そのため、ある程度の時間、臓器の機能を維持するための保存剤が切望されている。ここで、実用化されている臓器保存剤としては、例えば、グルコースと諸種の電解質を含んでなるユーロコリンズ液が知られている。しかしながら、ユーロコリンズ液は、生存能力の高い腎臓には有効であるが、腎臓以外の臓器に対しては、組織・細胞に対する保護効果が充分でないという問題がある。
【特許文献１】米国特許第４８７９２８３号
【特許文献２】米国特許第４８７３２３０号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで、本発明は、臓器一般に適用可能であり生体安全性に優れた臓器保存剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、動植物合和すの観点から、主食であり安全性が最も高い白米を中心に様々な研究を進めている。それらの研究の途中で、偶然、当該原料に所定の処理を施したものに顕著な臓器保存効果があることを発見し、本発明（１）〜（５）を完成させたものである。尚、本発明において、白米由来のどのような成分（又は複数の成分の組み合わせ、或いは所定存在比での複数の成分の組み合わせ）が臓器保存効果を有するのかに関しては、未だ解明されるに至っていない。【０００５】
本発明（１）は、白米部分を必須的に含む米原料の水処理物を有効成分として含有することを特徴とする臓器保存剤である。【０００６】
本発明（２）は、前記米原料が、白米、玄米、発芽米、白糠及びこれらの一種以上の組み合わせである、前記発明（１）の臓器保存剤である。【０００７】
本発明（３）は、前記水処理物が、前記米原料の水抽出物である、前記発明（１）又は（２）の臓器保存剤である。【０００８】
本発明（４）は、前記水処理物が、前記米原料又は前記水抽出物の糖化物である、前記発明（１）〜（３）のいずれか一つの臓器保存剤である。【０００９】
本発明（５）は、前記水処理物が、前記米原料、前記水抽出物又は前記糖化物のアルコール発酵物又は有機酸発酵物である、前記発明（１）〜（４）のいずれか一つの臓器保存剤である。【００１０】
ここで、本明細書における各用語の意味について説明する。尚、説明の都合上、一部の用語の意味については「発明を実施するための最良の形態」の箇所で述べることとする。まず、「水処理物」とは、水を用いた米原料の加工品を指し、例えば、米原料の水抽出物、水存在下での糖化物（例えば、米原料に水を加えて糖化させたもの、米原料の水抽出物を糖化させたもの）、水存在下での発酵物（例えば、米原料に水を加えて発酵させたもの、米原料の水抽出物を発酵させたもの、米原料の水抽出物を糖化させたものを発酵させたもの）を包含する。また、ここでの「水」は、水を必須的に含んでいる水性媒体を意味し、例えば、水や水とアルコールとの混合液を含む。「水抽出物」とは、物理的処理（例えば、圧搾、加熱処理）、化学的処理（例えば、酸やアルカリ処理）、生物的（生化学的）処理（例えば、麹、微生物処理、酵素処理）を単独又は組み合わせて施すことをいう。例えば、米原料に水を加えたもの、米原料を酸又はアルカリで処理したもの、米原料の加水物に酵素又は麹を作用させたもの（抽出前又は抽出と同時）、或いは、これらの処理を加熱又は非加熱下でおこなったものである態様を挙げることができる。尚、上記のように「水抽出物」には、糖化酵素や麹を作用させる態様を包含するので、糖化されたものを含むが、当該「糖化されたもの」は、上記の「糖化物」とは別概念である。【００１１】
「有効成分として含有する」とは、臓器保存効果を奏する程度に当該成分を含有することを意味し、当該成分が臓器保存剤の一部を構成する場合のみならず、当該成分が臓器保存剤のすべてを構成する場合を含む。【００１２】
「臓器」とは、１つの独立した形態をもち、１種以上の組織が組み合わさって特定の機能を営む構造体を形成したものをいう。例えば、胃、肝臓、腸、膵臓、肺、気管、鼻、心臓、動脈、静脈、リンパ節（リンパ管系）、胸腺、卵層、眼、耳、舌、皮膚等を挙げることができる。更に、当該臓器は、どの生物由来の組織（例えば、脊椎動物、無脊椎動物）でもよい。但し、脊椎動物由来の臓器が好適であり、哺乳動物（例えば、霊長類、齧歯類など）由来の臓器がより好適であり、霊長類由来の臓器が特に好適であり、ヒト由来の臓器が最も好適である。【００１３】
「有機酸発酵」とは、例えば、酢酸発酵や乳酸発酵を指す。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、臓器一般に適用可能であると共に、長期間にわたり臓器の形状を維持できるという効果を奏する。更に、白米は、主食として毎日摂取しても危険視する向きも無く、安全性も実証されている。即ち、本発明は、非常に優れた臓器保存効果を持っているばかりでなく、安全性も十分に実証されている。加えて、米の過剰生産といわれている現在、新たな米の利用用途を見出したことと、米のイメージアップによる消費拡大を図り得ることは、極めて有意義なことである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
本発明に係る「白米部分を必須的に含む米原料」とは、白米の少なくとも一部（白糠部分）を含む限り特に限定されず、例えば、白米、玄米及び発芽させた米といった米だけでなく、白糠のみ、白糠と赤糠とのブレンドも含む概念である。ここで、白米及び玄米に関しては、ジャポニカ、インディカ米を問わず、うるち米や餅米等の玄米及び白米を指し、品種、種類は問わない。また、白糠とは、一般に、精白時に出てくる９２％以下の白糠を指し、この範囲内の一部を原料として用いればよい（例えば、９２％以下の白糠すべて、９２〜８０％の白糠のみ、６０％以下の白糠）。赤糠とは、一般に、９２％以上の赤糠を指す。尚、有効成分は、熱及び光に対して安定であるため、上記の原料は、浸漬、蒸煮、焙煎（砂焙り、網焙り、熱風焙煎等全てを指す）、蒸煮焙煎、凍結乾燥等の表面変性、ＵＶ照射等の光変性、パットライス等の加圧焙煎、揚げる等の原料処理をしてもよい。【００１６】
発芽させた米を製造する場合、胚芽のついた米を水に浸漬或いは水を噴霧して発芽させる。発芽させる時の温度は５〜７０℃である。但し、発芽さえすれば、温度及び時間は問わない。また、発芽中に水が腐敗する危険性がある場合は、腐敗しないように水を取り替えるか、何らかの防腐を行うのが好ましい。ここで、発芽とは、発芽する直前から発芽したものまで全てを指す。この発芽させた米をよく洗浄して用いる。この時、乾燥して用いてもよい。【００１７】
水処理（例えば、水抽出）の際、米原料は顆粒又は粉体状であることが好適である。尚、顆粒又は粉体状でない場合には、処理時間を長くする。以下、水処理物の各態様について説明する。【００１８】
まず、水抽出物について詳述する。米原料を水抽出する場合、抽出温度は、高温が効率的であるが、低温でも十分に抽出を行うことができる。但し、４０℃以下の低温の場合は、pHを酸性或いはアルカリ性にするか、防腐剤或いはアルコールを加えて、米原料が腐敗しないように処理することが望ましい。抽出時間は、有効成分さえ抽出できれば、長くても短くてもよく、抽出温度により定めればよい。また、水抽出は、加圧下又は常圧下で行っても、減圧下で行ってもよい。水抽出の場合、最も問題になるのは糊化現象である。糊状になれば、抽出効率が悪くなるばかりでなく、実作業においては困難を極める。これを防ぐためには、アミラーゼを加えて反応させるか、塩酸等で酸性にして澱粉を分解すればよく、この方法を用いることにより、十分に解決でき、実用上も全く問題はない。【００１９】
水抽出物中の有効成分は、酸、アルカリに安定であるためか、酸分解抽出又はアルカリ分解抽出を行うのも有効である。この場合、必要により中和、脱塩を行う。また、米原料を酵素分解又は麹を作用させてもよい。ここでいう酵素分解とは、澱粉分解酵素（液化酵素、糖化酵素）、蛋白分解酵素、脂肪分解酵素、繊維分解酵素、リグニン分解酵素、ペクチン分解酵素等米に働く酵素を１種又は２種以上作用させることをいう。例えば、澱粉分解酵素（液化酵素及び／又は糖化酵素）又は麹を抽出時に作用させて糖化させてもよい。また、麹として麹菌の種類及び米の品種、種類は問わない。尚、抽出を行うに際し、酵素や麹を作用させるタイミングは、抽出の前又は抽出と同時のいずれでもよい。【００２０】
次に、糖化物について詳述する。当該糖化物は、水の存在下で米原料に澱粉分解酵素又は麹を作用させるか、または、前記抽出物に澱粉分解酵素又は麹を作用させたものである。ここで、澱粉分解酵素は、液化酵素及び／又は糖化酵素を指す。また、麹は、上記同様、麹菌の種類及び米の品種や種類は問わない。また、前記抽出物に澱粉分解酵素を作用させる態様には、前記抽出物自体が既に部分的に糖化されているものも含む（例えば、抽出段階で液化酵素を使用している場合）が、これは、当該部分糖化物を更に糖化させることを意味する。【００２１】
次に、発酵物について詳述する。当該発酵物は、水の存在下で米原料を発酵させるか、前記水抽出物を発酵させるか、又は、前記糖化物を発酵させたものである。ここで、当該発酵は、アルコール発酵や有機酸発酵（乳酸発酵等）を指し、また、当該発酵は、上記処理（水抽出処理、糖化処理）の後に限られず同時に行ってもよく、抽出処理と同時に行なう場合は「水の存在下で米原料を発酵させる」に該当し、糖化処理と同時に行なう場合には「前記水抽出物を発酵させる」に相当する。ここで、アルコール発酵法に関しては、より高い臓器保存効果を奏するには、清酒の製造方法である並行複発酵よりも、単行複発酵の方が好適である。尚、酵母による通気発酵、アルコール沈澱等を行なって除糖してもよい。更に、有機酸発酵を行うと、更に臓器保存効果が高まる。特に、乳酸発酵が好適である。【００２２】
以上のようにして得られた本発明に係る臓器保存剤は、残渣と分離することなくそのままの状態で、或いは、圧搾や濾過を行った後、臓器に適用する。ここで、そのまま用いるときは、殺菌或いは除菌を行うことが好適である。尚、用途に応じ、他の配合成分や薬剤を添加してもよい。
【実施例】
【００２３】
製造例１
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物1kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で4時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．５Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２４】
製造例２
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に麹２５０ｇと水３Ｌを添加し、５５℃で１６時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．６Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２５】
製造例３
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に澱粉分解酵素５ｇと水３Ｌを添加し、５５℃で１６時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．５Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２６】
製造例４
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に繊維分解酵素５ｇと水３Ｌを添加し、５０℃で１６時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．２Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２７】
製造例５
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物1kgを得た。この粉砕物に脂肪分解酵素５ｇと水３Ｌを添加し、５０℃で１６時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．１Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２８】
製造例６
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、澱粉分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．６Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００２９】
製造例７
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物1kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、脂肪分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．５Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３０】
製造例８
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、繊維分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．５Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３１】
製造例９
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に１／１０Ｎ塩酸３Ｌを添加し、よく撹拌し２４時間放置した。その後、濾過器を用いて固液分離を行い、苛性ソーダで中和し、２．３Ｌの抽出液を得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３２】
製造例１０
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に９５％エタノール３Ｌを添加し、よく撹拌し４日間放置した。その後、濾過器を用いて固液分離を行い、２Ｌの抽出液を得た。このろ液に水４Ｌを加え、ロータリーエバポレーターでエタノールを留去し２Ｌとした。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３３】
製造例１１
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、澱粉分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後冷却し酵母を加え、１５日間発酵を行った。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．５Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３４】
製造例１２
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、澱粉分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後加熱殺菌し、冷却後乳酸菌を加え、３７℃で２日間発酵を行った。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．３Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３５】
製造例１３
白米を粉砕機にかけ、白米の粉砕物１kgを得た。この粉砕物に液化酵素５ｇと水３Ｌを添加し、６０℃で４時間放置した。その後、加熱昇温させ、冷却した後、澱粉分解酵素５ｇを加え、５５℃で４時間放置した。その後９５％エタノール１５０mLと酢酸菌を加え、１５日間発酵を行った。その後濾過器を用いて固液分離を行い、ろ液２．４Ｌを得た。これを８５℃で３０分加熱して本例品を得た。【００３６】
試験例１（臓器保存試験）
・使用組織：マウス（Std:ddy）６週齢雄の肝臓
・使用培地：DMEM
・使用試料：製造例１２
６週齢雄のマウスを頚椎脱臼にて屠殺し、開腹を行った。肝臓を摘出し、ＰＢＳで洗浄した後、約５mm角に切断し、夫々を所定濃度の試料を添加した培地に浸漬した。３７℃５％ＣＯ２下に静置し、形態の変化を観察した。その結果、図１に示すように、１ヶ月経過した後でも組織の崩壊は観察されず、臓器保存効果を有することが確認された。尚、図１（ａ）は、試料を１％添加した場合の写真であり、図１（ｂ）は、試料を５％添加した場合の写真である。尚、結果は明記しないが他の製造例についても同様の結果を得た。【００３７】
試験例２（細胞生存試験）
・使用細胞：骨芽細胞（mouse Osteoblast MC3T3-E1）
・使用培地：DMEM
・使用試料：製造例１２
６wellマイクロプレートに１０％濃度で骨芽細胞を播種し、細胞が接着するまで３７℃５％ＣＯ２下前培養を行なった。翌日細胞が接着していることを確認した上、培地に対して所定濃度（０．１％、１％）となるように試料を添加し、３７℃５％ＣＯ２下培養を行なった。数日以内にコンフルエントになることを確認した後、どの程度細胞が生存し続けるかをcell densityを目視で測定することにより判定した。その結果を図２に示す。図２から分かるように、０．１％及び１％試料を添加したことにより、有意に保存性が向上することが確認された。尚、結果は明記しないが他の製造例についても同様の結果を得た。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】試験例１における１ヶ月経過後の肝臓の写真である。
【図２】試験例２におけるコンフルエント後のcell densityの経時変化を示した図である。
【図２】
2007004638.tif 000002
【図１】
2007004638.tif 000003
【手続補正書】
【提出日】平成18年11月4日(2006.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３７】
参考例（細胞生存試験）
・使用細胞：骨芽細胞（mouse Osteoblast MC3T3-E1）
・使用培地：DMEM
・使用試料：製造例１２
６wellマイクロプレートに１０％濃度で骨芽細胞を播種し、細胞が接着するまで３７℃５％ＣＯ２下前培養を行なった。翌日細胞が接着していることを確認した上、培地に対して所定濃度（０．１％、１％）となるように試料を添加し、３７℃５％ＣＯ２下培養を行なった。数日以内にコンフルエントになることを確認した後、どの程度細胞が生存し続けるかをcell densityを目視で測定することにより判定した。その結果を図２に示す。図２から分かるように、０．１％及び１％試料を添加したことにより、有意に保存性が向上することが確認された。尚、結果は明記しないが他の製造例についても同様の結果を得た。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
【図１】試験例１における１ヶ月経過後の肝臓の写真である。
【図２】参考例におけるコンフルエント後のcell densityの経時変化を示した図である。
【国際調査報告】
2007004638.tif 000004
2007004638.tif 000005