【事件の表示】
　特願２０１６−５０９１４８「獣医学的デコリン組成物及びそれらの使用」拒絶査定不服審判事件〔平成２６年１０月３０日国際公開、ＷＯ２０１４／１７６１９８、平成２８年　６月３０日国内公表、特表２０１６−５１９１１０〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯 
　本願は、平成２６年　４月２２日（パリ条約による優先権主張外国庁受理　平成２５年　４月２２日　米国）を国際出願日とする出願であって、その手続の経緯は以下のとおりである。 
　　　平成３０年　１月２２日付け：拒絶理由通知書 
　　　　　　同年　７月３０日　　：意見書、手続補正書の提出  
　　　平成３０年１１月２０日付け：拒絶査定 
　　　平成３１年　４月１７日　　：審判請求書、手続補正書の提出 
　　　令和　２年　８月　７日付け：拒絶理由通知書 
　　　令和　３年　１月１８日　　：意見書、手続補正書の提出 
　　 
第２　本願発明 
　本願の請求項１に係る発明（以下、「本願発明」という。）は、令和　３年　１月１８日提出の手続補正書の特許請求の範囲の請求項１に記載された事項により特定される次のとおりのものである。 
「【請求項１】
　それを必要とする獣医学的対象に治療を施す方法における使用のための獣医学的デコリン組成物であって、当該獣医学的デコリン組成物が、有効量における、獣医学的デコリンコアタンパク質分子を含み、
　当該獣医学的デコリンコアタンパク質分子が、
　配列番号４、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと同一であり、
　前記獣医学的対象が、創傷、損傷または疾患を患っており、
　当該創傷、損傷または疾患が、
ａ）前記獣医学的デコリンコアタンパク質が、肉芽形成を阻害するために投与される、肉芽を生じる創傷または他の損傷；
ｂ）眼に対する損傷または疾患；
ｃ）肺疾患；
ｄ）腎疾患；
ｅ）肝疾患
からなる群から選択される、獣医学的デコリン組成物。」 
　　 
第３　当審が通知した拒絶理由
　当審が令和２年　８月　７日付けで通知した拒絶理由は、概略、以下のとおりのものである。 
　　 
１．（進歩性）この出願の下記の請求項に係る発明は、その出願前に日本国内又は外国において、頒布された下記の刊行物に記載された発明又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった発明に基いて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　　 
　　 　　　　　記　　　（引用文献等については引用文献等一覧参照） 
　引用文献２には、「精製デコリンを含む、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状を処置する方法における使用のための組成物」に係る発明（「引用発明」）が記載されているといえる。
　本願発明と引用発明とは、「それを必要とする疾患を患った対象に治療を施す方法における使用のための、デコリン組成物であって、当該デコリン組成物が、有効量における、デコリンタンパク質を含む、デコリン組成物」である点において一致し、以下の２点で相違する。
＜相違点１＞
　本願発明は、治療対象が「獣医学的対象」であり、「獣医学的デコリンコアタンパク質分子を含み、当該獣医学的デコリンコアタンパク質分子が、配列番号４、７、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと少なくとも９５％同一であるが、但し、前記獣医学的デコリンコアタンパク質が、アミノ酸４位で突然変異を含む」のに対して引用発明はかかる特定を有しない点。
＜相違点２＞
　本願発明は、「ａ）前記獣医学的デコリンコアタンパク質が、肉芽形成を阻害するために投与される、肉芽を生じる創傷または他の損傷；ｂ）眼に対する損傷または疾患、眼に対する当該損傷が、好ましくは角膜手術、眼熱傷、眼感染、及び擦傷性損傷の結果である；ｃ）好ましくは間質性肺疾患及び肺線維症からなる群から選択される、肺疾患；ｄ）好ましくは糖尿性腎症及び腎線維症からなる群から選択される、腎疾患；ｅ）好ましくは肝硬変及び肝線維症からなる群から選択される、肝疾患から選択される、神経外傷からなる群から選択される、創傷、損傷または疾患」を対象が患っているのに対して、引用発明は「ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状」を対象が患っている点。
　本願発明と引用発明の相違点１、２は、引用文献１〜３の記載、及び引用文献４〜１０又は１１の開示によって、当業者が容易に想到しうることであり、本願発明の効果は、技術水準から予測される範囲を超えた顕著な効果を奏するものとはいえない。
　したがって、本願発明は、引用発明、引用文献１〜３の記載、及び引用文献４〜１０又は１１の開示に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものである。
＜引用文献等一覧＞
１．国際公開第２０１２／１２５６２６号（拒絶査定において文献１として引用された文献）
２．特表平７−５０４８８６号公報（当審で新たに引用した文献）
３．Ｃｕｒｒ．　Ｍｏｌ．　Ｍｅｄ．、　２０１１年、Ｖｏｌ．１１、　ｐｐ．１１０−１２８
４．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ　ＩＩ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝ＰＧ−Ｓ２；　Ｆｌａｇｓ：　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｐ２８６７５，２０１３年４月６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／１２９９５０？ｓａｔ＝１７＆ｓａｔｋｅｙ＝３４９３８７２１＞（当審で新たに引用した文献）
５．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ　ＩＩ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝ＰＧ−Ｓ２；　Ｆｌａｇｓ：　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｐ２１７９３，２０１３年４月６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／６８８４５４４９？ｓａｔ＝１７＆ｓａｔｋｅｙ＝３３２０７００５＞（当審で新たに引用した文献）
６．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ　ＩＩ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝ＰＧ−Ｓ２；　Ｆｌａｇｓ：　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ２９３９３，２０１３年４月６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／３０２４４０７？ｓａｔ＝１７＆ｓａｔｋｅｙ＝３７８７１６３８＞（当審で新たに引用した文献）
７．ＳｕｂＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｆ２Ｘ２Ｙ７，２０１２年　５月１６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｆ２Ｘ２Ｙ７．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝４＞（当審で新たに引用した文献）
８．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｏ４６５４２，２０１３年　３月　６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｏ４６５４２．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝８４＞（当審で新たに引用した文献）
９．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ９ＸＳＨ４，２０１３年　１月　９日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＸＳＤ９．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝８１＞（当審で新たに引用した文献）
１０．ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ９ＴＴＥ２，２０１２年　３月２１日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＴＴＥ２．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝６７＞（当審で新たに引用した文献）
１１．Ｎａｍｅ：　Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｍ３Ｘ０Ｗ２，２０１３年　５月　１日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｍ３Ｘ０Ｗ２．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝１＞（当審で新たに引用した文献）
第４　当審の判断 
　当審は、上記第３の当審が通知した拒絶理由の理由１のとおり、本願発明は、その出願前に日本国内又は外国において、頒布された引用文献２、４、６、８〜１０に記載された発明又は電気通信回線を通じて公衆に利用可能となった発明に基いて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない、と判断する。
　　 
　その理由は、以下のとおりである。 
　　 
１　引用文献の記載
ア　引用文献２に記載された事項
　引用文献２には、次の事項が記載されている。
（ア）記載事項２−１（特許請求の範囲）
「１．デコリンあるいはデコリンの機能的等価物を創傷に投与することを包含する、はん痕形成を予防あるいは緩和する方法。
……
４．前記はん痕形成が、皮膚はん痕形成である、請求項１に記載の方法。
５．デコリンあるいはその機能的等価物と、薬学的に許容可能な担体とを含有する、薬剤組成物。
……
１０．ＴＧＦ−βと精製ポリペプチドとを接触させることを包含する、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状を処置する方法であって、該ポリペプチドが、タンパク質のＴＧＦ−β結合ドメインを含み、該タンパク質が、約２４のアミノ酸のロイシンリッチ操り返し単位によって特徴づけられ、それによって該病状がもたらされる活性を妨害するかまたは低下させる、方法。
１１．前記タンパク質が、デコリンである、請求項１０に記載の方法。
…… 
１４．前記病状が、慢性関節リウマチ、糸球体腎炎、動脈硬化症、成人呼吸促進症候群、肝硬変、肺線維症、術後心筋梗塞、心臓線維症、血管形成術後再狭窄、腎間質性線維症、あるいは皮膚線維症の症状である、請求項１０に記載の方法。
１５．前記病状が、糸球体腎炎である、請求項１４に記載の方法。」
（イ）記載事項２−２（第６頁左下欄第２２行乃至同右上欄第５行）
「「デコリン」は、未変性の組成物と、機能的特徴を実質的に保持する改変物との両方を称している。デコリンコアタンパク質は、実質的にグリコサミノグリカンとは置換を行わないデコリンを称し、デコリンの定義内に含まれる。デコリンは、変異あるいは他の手段（例えば、グリコサミノグリカン鎖をコアタンパク質に付着させることのできない細胞において、組換デコリンを生成すること）によって、グリコサミノグリカンを取り除く。」
（ウ）記載事項２−３（第７頁左下欄第２行乃至第１６行）
「　さらに本発明は、ＴＧＦ−β−調節活性により生じた病状を処置する方法を提供する。この方法は、ＴＧＦ−βを精製ポリペプチドと接触させることを包含し、ここで、このポリペプチドはタンパク質のＴＧＦ−β結合ドメインを含み、そして、このタンパク質は約２４のアミノ酸のロイシンリッチ繰り返し単位により特徴づけられており、それによって病状がもたらされる活性を妨害するか、あるいは低下させる。本方法は一般的に用いられ得るが、処置され得る病状の特定の例は、癌、線維症の疾病、および糸球体腎炎を含む。例えば、線維症の癌では、デコリンはＴＧＦ−βに結合するために使用され得、癌細胞におけるＴＧＦ−βの増殖刺激活性を破壊する。他の増殖性の病状は、慢性関節リウマチ、動脈硬化症、成人呼吸促進症候群、肝硬変、肺線維症、術後心筋梗塞、心臓線維症、血管形成術後回狭窄、腎間質性線維症、およびケロイドおよびはん痕形成などの特定の皮膚線維症の症状を含む。」
（エ）記載事項２−４（第８頁右上欄第１４行乃至第１０頁左下欄第１１行）
「　　　　　　　　　　　　　　　実施例Ｉ
　　　　　　　　
組換デコリンおよびデコリンコアタンパクの発現
　　　　　　　　　　　　　　　　
および精製
……デコリンコアタンパク質の発現に対して、ｃＤＮＡは変異を生じ、その結果、セリンをコードする４番目のコドン、ＴＣＴが、トレニオンをコードするＡＣＴまたはアラニンをコードするＧＣＴに変化した。これは、Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ　ＵＳＡ　８２：４８８（１９８５）（この開示内容は、本明細書に参考として援用されている）の方法に従って、部位特異的変異誘発によって作製する。適切な変異の存在は、ＤＮＡ配列決定によって確認される。
　哺乳類発現ベクターｐＳＶ２−デコリンおよびｐＳＶ２−デコリン／ＣＰ−ｔｈｒ４コアタンパク質は、デコリンｃＤＮＡまたは変異デコリンｃＤＮＡを、ｐＳＶ２の３．４ｋｂ　
Ｈｉｎ
Ｂａｎ
　ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ｄｈｆｒ）−ネガティブＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ＤＧ４４）を、リン酸カルシウム共沈法によって、ｐＳＶ２−デコリンまたはｐＳＶ２−デコリン／ＣＰおよびｐＳＶ２ｄｈｆで共にトランスフェクトした。ｐＳＶ２−デコリンによってトランスフェクトされたＣＨＯ−ＤＧ４４細胞は、寄託番号ＡＴＣＣ　Ｎｏ．ＣＲＬ１０３３２に基づいて、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託されている。トランスフェクト細胞を、９％の透析ウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補足した、ヌクレオシド非含有α改変最小必須培地（α−ＭＥＭ）（ＧＩＢＣＯ．Ｌｏｎｇ　Ｉｓｌａｎｄ）中で培養した。トランスフェクト細胞から生じるコロニーをクローニングシリンダーを用いて選び取り、膨張させ、３５ＳＯ４で標識した培養の上澄みから免疫沈降させることによって、デコリンの発現を調べる。次いで、実質的な量のデコリンを発現するクローンを、０．６４μＭまで段階的に増加する濃度のメトトレキセート（ＭＴＸ）によって、遺伝子増幅した（ｋａｕｆｍａｎおよびＳｈａｒｐ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１（１９８２）、その開示内容は、本明細書に参考として援用されている）。希釈液を限定するか、または単一ＭＴＸ抵抗性コロニーを選択するかによって、全ての増幅細胞系をクローニングした。これらの樹立細胞系の保存培養を、ＭＴＸ含有培地で維持した。タンパク質生成に使用する前に、細胞を、保存培養からＭＴＸ非含有培地に副次培養し、そして、この培地を少なくとも一度通し、存在し得るＭＴＸ効果を取り除いた。
　一方、ＡｄａｍｓおよびＲｏｓｅ，Ｃｅ１ｌ　４１：１００７、（１９８５）（この開示内容は、本明細書に参考として援用されている）に記載されているように、コアタンパク質をＣＯＳ−１細胞で発現させた。簡潔に言えば、６つのウェルのマルチウェルプレートに、９．６ｃｍ２の増殖面積当り、３〜５×１０５の細胞を接種し、２４時間の間に付着させて増殖させた。培養物は、５０〜７０％集密となったときに、これをプラスミドＤＮＡによってトランスフェクトした。細胞とプレートの剥離を防ぐために、細胞層を、５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣ１（ｐＨ７．２）を含み、１ｍＭのＣａＣｌ２および０．５ｍＭのＭｇＣｌ２を補足したトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）によつて３７℃で短時間で洗浄した。２μｇの閉環形プラスミドＤＮＡおよび平均分子量が５００，０００である０．５ｍｇ／ｍｌのＤＥＡＥ−デキストラン（Ｓｉｇｍａ）を含む上記の水溶液を１ｍｌ用い、３７℃で３０分間、このウェルをインキュベートした。対照として、培養物を、あらゆるデコリン挿入フラグメントが欠如しているｐＳＶ２発現プラスミドによってトランスフェクトすること、またはＤＮＡを用いずに、模擬的にトランスフェクトすることを行った。ＤＮＡ／ＴＢＳ／ＤＥＡＥ−デキストラン溶液を取り除き、ＴＢＳでウェルを洗浄した後、１０％のウシ胎児血清および１００μＭのクロロキン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ改変Ｅａｇｌｅ培地（Ｉｒｖｉｎｅ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、培養物を３７℃で３時間インキュベートした。次いで、細胞層を、２回洗浄し、クロロキンを含まない上記の培地で、約３６時間の間培養した。Ｗ１３８ヒト胎児肺繊維芽細胞を、同じ培地で手順通りに培養した。
　ＣＯＳ−１培養物を、プラスミドＤＮＡによるトランスフェクションの後、３６〜４８時間の間、放射標識した。全ての放射線標識された代謝前駆体は、Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。使用した同位体は、３５Ｓ−硫酸塩（４６０ｍＣｉ／ｍｌ）、Ｌ−［３，４，５−３Ｈ（Ｎ）］−ロイシン（１４０Ｃｉ／ｍｌ）およびＬ　−［１４Ｃ（Ｕ）］−アミノ酸混合物（製品番号４４５Ｅ）であった。１０％の透析ウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミンおよび１ｍＭのピルビン酸を補足した、２００μＣｉ／ｍｌの３５Ｓ−硫酸塩または３Ｈ−ロイシン、または１０μＣｉ／ｍｌの１４Ｃ−アミノ酸混合物を含む、ＨａｍのＦ−１２培地（ＧＩＢＣＯ　Ｌａｂｓ）中で、培養物を２４時間の間標識した。培地を採集し、これに５ｍＭのＥＤＴＡ、０．５ｍＭのフェニルメチルスルフォニルフルオライド、０．０４ｍｇ／ｌのアプロチニンおよび１μｇ／ｍｌのペプスタチンを補足してプロテアーゼの活性を阻害し、２０分間、２，０００×Ｇの遠心分離によって細胞デブリを除去し、−２０℃で貯蔵した。ＴＢＳで細胞層を洗浄し、次いで、ゴム冠ポリスマンによって、１ｍｌ／ウェルの氷冷細胞溶解緩衝液、すなわち、０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ、０．５Ｍ　ＮａＣ１、０．１％ＢＳＡ、１％　ＮＰ−４０、０．５％トリトン　Ｘ−１００、０．１％ＳＤＳ、ＰＨ８．３、中にこすり落とすことによって、細胞抽出物を調製した。その細胞抽出物を、１．５時間、１３，０００×Ｇ、４℃の条件下の遠心分離によって清澄化した。
　ウサギの抗血清を、ヒトのデコリンのコアタンパク質の成熟形態の最初の１５残基（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＩＩｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ）に基づく合成ペプチドに対して調製した。合成ペプチドおよびそれに対する抗血清は、他に記載されている（ＫｒｕｓｉｕｓおよびＲｕｏｓｌａｈｔｉ、１９８６　（前出））。簡潔に言えば、ペプチドを、製造業者によって考案された化学物質を用いて、固相ペプチド合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ　Ｃｉｔｙ，ＣＡ）によって合成した。製造業者の指示に従い、Ｎ−スクシンイシジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，　ＮＪ）を用いて、ペプチドを、キーホールリンぺットヘモシアニンに結合させた。得られた結合体を、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュバント中で乳化し、ウサギに注入した。さらに、１、２、および３力月後に、Ｆｒｅｕｎｄ不完全アジニバント中で結合体を、ウサギに注入した。各注入の投与量は、０．６ｍｇのペプチドに等しい。３回目および４回目の注入の１０日後、血液を採血した。当該技術分野で周知のように、抗血清を、グルタールアルデヒドで架橋したペプチドおよび単離されたデコリンに対して、ＥＬＩＳＡ（Ｅｎｇｖａｌｌ，　Ｍｅｔｈ．　Ｅｎｚｙｍｏｌ．７０：４１９−４３９（１９８０））、免疫沈降、およびイムノブロッティングにおいて、そして蛍光抗体法で細胞を染色することによって、試験した。
　馴化培地、または、２組のウェルから採集した細胞抽出物に、２０μｌの抗血清を添加し、次いで、４℃で一晩かけて混合することによって、免疫沈降を行った。２０μｌの充填されたプロテインＡ−アガロース（Ｓｉｇｍａ）と、４℃で２時間インキュベーションすることによって、免疫複合体を単離した。ビーズを、３つの異なる管を用いて細胞溶解緩衝液で洗浄し、次いで、１０％のメルカプトエタノールを含むゲルの電気泳動試料緩衝液の中で煮沸する前に、リン酸緩衝生理食塩水で２回洗浄した。当該技術分野で周知のように、免疫沈降したタンパク質を、７．５−２０％グラジエントゲルまたは７．５％の非グラジエントゲルのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。フルオログラフィーを、増感スクリーンを用い、Ｅｎｌｉｇｈｔｎｉｎｇ　（Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｎｕｃｌｅａｒ）によって行った。典型的な露光時間は、−７０℃で７〜１０日間である。オートラジオグラフを、ＬＫＢ　Ｕｌｔｒｏｓｃａｎ　ＸＬ　Ｅｎｈａｎｃｅｄ　Ｌａｓｅｒ　Ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒによって走査し、プロテオグリカンバンドの相対強度および移動度を比較した。
　デコリン−ｐＳＶ２構築物によってトランスフェクトされ、３５Ｓ−硫酸塩によって代謝的に放射標識されたＣＯＳ−１細胞から、細胞抽出物および培地をＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析にかけることによって、模擬トランスフェクト細胞中に硫酸化バンドが存在しないことがわかった。デコリンコアタンパク質由来の合成ペプチドに対して生じた抗血清による免疫沈降によって、新たなバンドがデコリンであることがわかった。
　通常は、グリコサミノグリカン（セリン−４）に置換されているセリン残基が、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによってトレオニン残基に置換されたような変異を生じた構築物の発現は、野生型の構築物によって得られるプロテオグリカンのレベルの、約１０％しか表さない。免疫反応性物質の残りは、遊離コアタンパク質の位置に移動する。
　アラニン変異ｃＤＮＡ構築物が、同様の方法で発現されて分析される場合、コアタンパク質のみを得、デコリンのプロテオグリカン型は得られない。図１は、デコリン（レーン１）およびそのトレオニン−４変異コアタンパク質（レーン３）およびアラニン−４変異コアタンパク質（レーン２）の発現は、ＣＯＳ細胞のトランスフェクタント中で発現したことを示す。３５ＳＯ４で標識された（Ａ）および３Ｈ−ロイシンで標識された（Ｂ）培養の上澄みを、ヒトデコリンのＮＨ２−末端に対して調製されたウサギアンチペプチド抗血清を用いて免疫沈降した。
　　　　
培養に使用した後の（ｓｐｅｎｔ）培地からのデコリンおよび
　　　　　　　　　　
デコリンコアタンパク質の精製
　ｐＳＶ２−デコリンベクターでトランスフェクトされ、そして、上記、ならびにＹａｍａｇｕｃｈｉおよびＲｕｏｓｌａｈｔｉがＮａｔｕｒｅ　３６（１９８８）の２４４−２４６ページで記述しているようにして（これらの開示内容は本明細書に参考として援用されている）、増殖した細胞を、９％の透析ウシ胎児血清、２ｍＭのグルタミン、１００ユニット／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補足されたヌクレオシド非含有のα−ＭＥＭの、８個の１７５ｃｍ２の培地フラスコ中で９０％集密まで増殖させた。９０％集密した時点で、培地を、以下のカラムを通過した、６％の透析ウシ胎児血清で補足された、ヌクレオシドを有しないα−ＭＥＭが入ったフラスコ毎に２５ｍｌに変更した：上記カラムは、ｐＨ７．４、０．０５Ｍのリン酸緩衝液中の０．２５ＭのＮａＣｌによって平衡化したＤＥＡＥ−セファロース　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）である。細胞を３日間培養し、培養に使用した後の培地を集め、即座に０．５ｍＭのフェニルメチルスルフォニルフルオライド、１μｇ／ｍｌのペプスタチン、０．０４ｍｇ／ｍｌのアプロチニンおよび５ｍＭのＥＤＴＡで処理した。
　４００ｍｌの上記培養に使用した後の培地を、最初にゼラチン−セファロースに通し、フィブロネクチン、およびセファロースに付着する物質を取り除いた。次いで、その素通り画分を、ｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌおよび０．２ＭのＮａＣｌで前もって平衡化したＤＥＡＥ−セファロースと混合し、そして４℃で緩やかに撹拌しながらバッチ吸着させた。このスラリーを１．６×２４ｃｍのカラムに注ぎ、０．２ＭのＮａＣｌを含有するｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌで十分に洗浄し、ｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ中の、ＮａＣｌの０．２Ｍ−０．６Ｍの直線グラジエントで溶出した。デコリン濃度を、ＹａｍａｇｕｃｈｉおよびＲｕｏｓｌａｈｔｉ（前出）が記述しているような競合ＥＬＩＳＡによって測定した。デコリンを含有する画分を、プールし、さらにＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液中の８Ｍの尿素によって平衡化したＳｅｐｈａｄｅｘゲル濾過カラム上で分画した。デコリンを含有する画分を集めた。
　ｐＳＶ２−デコリン／ＣＰベクター、または、アラニン変性ｃＤＮＡを含有するベクターでトランスフェクトされ、そして上記のように増殖されたクローン細胞系から、コアタンパク質を精製した。これらの細胞を、上記のように集密まで増殖する。集密した時点で、この細胞単層を無血清培地で４度洗浄し、そして２ｍＭのグルタミンで補足されたαＭＥＭ中で２時間インキュベートする。この培養に使用した後の培地を捨てる。細胞を次いで２ｍＭのグルタミンで補足されたαＭＥＭで２４時間インキュベートし、そしてこの培養に使用した後の培地を集め、即座に０．５ｍＭのフェニルメチルスルフォニルフルオライド、１μｇ／ｍｌのペプスタチン、０．０４ｍｇ／ｍｌのアプロチニンおよび５ｍＭのＥＤＴＡで処理し、無血清の培養に使用した後の培地とする。この培養に使用した後の培地を、最初にゼラチン−セファロースに通し、次いでその素通り画分を、０．１ＭのＮａＣｌを含有するｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ中で前もって平衡化した、ＣＭ−セファロース　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，　ＮＪ）にバッチ吸着させる。４℃で終夜インキュベートした後、そのスラリーをカラムに注ぎ、前もって平衡化した緩衝液で十分に洗浄し、ｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ中で、０．１Ｍ−１Ｍの直線グラジエントのＮａＣｌで溶出する。このデコリンを含有する画分をプールし、５０ｍＭのＮＨ４ＨＣＯ３で透析し、そして凍結乾燥する。この凍結乾燥された材料を、８Ｍの尿素を含有するｐＨ７．４、５０ｍＭのＴｒｉｓに溶解し、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ　Ｓ−２００カラム（１．５×１１０ｃｍ）にかける。ＳＤＳ−ポリアクリルアミドの電気泳動によって表わされるようなデコリンコアタンパク質を含有する画分を集め、精製デコリンコアタンパク質を定義する。」
（オ）記載事項２−５（第１０頁左下欄第１２行乃至第１２頁左上欄第１０行）
「　　　　　　　　　　　　　　実施例ＩＩ
　　　　　　　　
ＴＧＦ−βのデコリンへの結合
ａ．　　　
デコリン−Ｓｅｒｈａｒｏｓｅに基づくＴＧＦ−βのアフィニ
　　　　　
ティクロマトグラフィー
……
　コアタンパク質を調製するために、プロテオグリカンをコンドロイチナーゼＡＢＣ（Ｓｅｉｋａｇａｋｕ、　Ｔｏｋｙｏ、　Ｊａｐａｎ）で以下のようにして消化した：５００μｇのプロテオグリカンを、０．１ＭのＴｒｉｓ／Ｃｌ　（ｐＨ８．０）２５０μｌ中のコンドロイチナーゼＡＢＣ　０．８ユニット、３０ｍＭの酢酸ナトリウム、２ｍＭのＰＭＳＦ、１０ｍＭのＮ−エチルマレイミド、１０ｍＭのＥＤＴＡ、および０．３６ｍＭのペプスタチンと共に、３７℃で１時間インキュベートすることによって消化した。組換デコリンおよびウシの皮膚から単離したデコリン（ＰＧＩＩ）は予想通り［１２５Ｉ］−ＴＧＦ−β１の結合を阻害した（図３Ａ）。ウシの関節の軟骨から単離したバイグリカンは、インヒビターとしてデコリンと同様に有効であった。多くの硫酸コンドロイチン鎖を含有するニワトリの軟骨のプロテオグリカンは、阻害効果を全く示さなかったので、デコリンおよびバイグリカンの効果は、グリコサミノグリカンが原因ではないと考えられる。ウシ血清アルブミンは阻害効果を全く示さなかった。この考えは、上記変性デコリンコアタンパク質（図示されていない）およびコンドロイチナーゼＡＢＣ−消化デコリンおよびバイグリカンを用いた競合試験によって、さらに裏付けられた（図３Ｂ）。これらの各タンパク質は阻害性であるが、軟骨のプロテオグリカンコアタンパク質は阻害性ではなかった。上記デコリンおよびバイグリカンコアタンパク質は、元のプロテオグリカンよりもいくらか活性であった。コンドロイチナーゼＡＢＣで処理されたウシ血清アルブミンは、阻害性を全く示さなかった。別の結合試験は、［１２５Ｉ］−ＴＧＦ−β１が、バイグリカンまたはそのコンドロイチナーゼ処理コアタンパク質でコートされたマイクロタイターウェルに結合することを示した。これらの結果は、ＴＧＦ−β１が、デコリンおよびバイグリカンのコアタンパク質に結合すること、ならびに、これらのタンパク質の潜在的な結合部位として機能するロイシンリッチ繰り返し単位を含むことを示す。」
（カ）記載事項２−６（第４頁右上欄第６行乃至第１７行、図３Ａ、図３Ｂ）
「　図３は、プロテオグリカンおよびそのコアタンパク質による、［１２５Ｉ］−ＴＧＦ−β１とデコリンとの結合の阻害を示す。図３Ａは、組換デコリン（●）、ウシの皮膚から単離されたデコリン（ＰＧＩＩ）（■）、ウシの関節軟骨（ＰＧＩ）から単離されたバイグリカン（▲）、ニワトリの軟骨プロテオグリカン（○）、およびＢＳＡ（口）による、［１２５Ｉ］−ＴＧＦ−β１と、デコリンでコートされたマイクロタイターウェルとの結合の競合を示す。各点は、２組の決定群の平均を示す。図３Ｂは、［１２５Ｉ］−ＴＧＦ−β１と、コンドロイチナーゼＡＢＣ処理プロテオグリカンおよびＢＳＡとの結合の競合を示す。競合物質の濃度を、無傷のプロテオグリカンとして表した。シンボルは、図３Ａのシンボルと同一である。」
「
」
（キ）記載事項２−７（第１４頁右下欄第１行乃至第１８行）
「　　　　　　　　　　　　　　　　実施例ＶＩ
　　　　　　　　　　　　　　　　
はん痕形成研究
　成体マウスの剃毛した背中の皮膚に、一対の縦の傷をつけた。処置は、層を貫いて背中の皮膚の骨格筋系まで切開した。切開部分を、１０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸（対照）、または、ＴＢＳ中のデコリン（０．５ｍｇ／ｍｌ）／ヒアルロン酸（１０ｍｇ／ｍｌ）混合物のいずれかの一回投与量２５０μｌで処理した。上記混合物を形成するために、０．５ｍｇ／ｍｌの組換デコリンを１０ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸と混合した。各マウスは、処理しない対照傷および処理された傷を有する。この傷を縫合してふさいだ。１４日後、傷を大まかにモニターし、組織を採取した。対照および処理された傷の部位（４ミクロン）の凍結切片を、Ｍａｓｓｏｎの三色染色法で可視化した標準の組織学的方法を用いて分析した。
　上記ヒアルロン酸対照は、通常の成体の動物に見られるような典型的な皮膚はん痕を阻害した。これに対して、デコリン処理した傷は、検出可能なはん痕の阻害は見られず本質的に組織学的に通常であった。デコリン処理した傷は、第１および第２のトリメスターの胎児の傷に類似した。」
イ　引用文献４に開示された事項
　本願の優先日である２０１３年　４月　２２日より前に電気通信回線を通じて公開された「ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ　ＩＩ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝ＰＧ−Ｓ２；　Ｆｌａｇｓ：　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｐ２８６７５，２０１３年　４月　６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／１２９９５０？ｓａｔ＝１７＆ｓａｔｋｅｙ＝３４９３８７２１＞」以下、「引用文献４」という。）には、次の事項が開示されている。
（ア）開示事項４−１
「DEFINITION RecName: Full=Decorin; AltName: Full=Boneproteoglycan II; AltName:Full=PG-S2; Flags: Precursor.
ACCESSION P28675
…
SOURCE Gallus gallus (chicken)
…… 
　 gene 1..357
 /gene=DCN
 Protein 1..357
 /product=Decorin
 /note=Boneproteoglycan II; PG-S2
 /UniProtKB_evidence=Evidence at protein level
 Region 1..16
 /region_name=Signal
 /experiment=experimentalevidence, no additional details 
 recorded
 Region 17..30
 /region_name=Propeptide
 /experiment=experimental evidence, no additional details 
 recorded
 /note=/FTId=PRO_0000032723.
 Region 31..357
 /region_name=Maturechain
 /experiment=experimental evidence, no additional details
 recorded
 /note=Decorin./FTId=PRO_0000032724.
……ORIGIN 
1 mrlvllfvll lpvclatrfh qkglfdfmie degsadmapt ddpvisgfgp vcpfrcqchl
61 rvvqcsdlgl ervpkdlppd ttlldlqnnk iteikegdfk nlknlhalil vnnkiskisp
121 aafaplkkle rlylsknnlk elpenmpksl qeiraheneisklrkavfng lnqvivlelg
181 tnplkssgie ngafqgmkrl syiriadtni tsipkglpps ltelhldgnk iskidaegls 
241 gltnlaklgl sfnsissven gslnnvphlr elhlnnnelv rvpsglgehk yiqvvylhnn
301 kiasigindf cplgyntkka tysgvslfsn pvqyweiqps afrcihersa vqignyk」
　引用文献４には、３１番目から３５７番目のアミノ酸配列が成熟鎖であることが開示されているから、その４番目のアミノ酸がセリン（S)であるニワトリ由来の成熟デコリンであって、以下のアミノ酸配列からなる成熟デコリンが記載されている。
「31 degsadmapt ddpvisgfgp vcpfrcqchl
61 rvvqcsdlgl ervpkdlppd ttlldlqnnk iteikegdfk nlknlhalil vnnkiskisp
121 aafaplkkle rlylsknnlk elpenmpksl qeiraheneisklrkavfng lnqvivlelg
181 tnplkssgie ngafqgmkrl syiriadtni tsipkglpps ltelhldgnk iskidaegls
241 gltnlaklgl sfnsissven gslnnvphlr elhlnnnelv rvpsglgehk yiqvvylhnn
301 kiasigindf cplgyntkka tysgvslfsn pvqyweiqps afrcihersa vqignyk」
ウ　引用文献６に開示された事項
　本願の優先日である２０１３年　４月　２２日より前に電気通信回線を通じて公開された「ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｂｏｎｅ　ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ　ＩＩ；　ＡｌｔＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝ＰＧ−Ｓ２；　Ｆｌａｇｓ：　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ２９３９３，２０１３年　４月　６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／３０２４４０７？ｓａｔ＝１７＆ｓａｔｋｅｙ＝３７８７１６３８＞」以下、「引用文献６」という。）には、次の事項が開示されている。
（ア）開示事項６−１
「RecName: Full=Decorin;AltName: Full=Bone proteoglycan II; AltName: Full=PG-S2; Flags: Precursor.
ACCESSION Q29393
……
SOURCE Canis lupus familiaris (dog)
……
 gene 1..360
 /gene=DCN
 /gene_synonym=DCN1C
 Protein 1..360
 /product=Decorin
 /note=Boneproteoglycan II; PG-S2
 /UniProtKB_evidence=Evidence attranscript level
 Region 1..16
 /region_name=Signal
 /inference=non-experimental evidence, no additional
 details recorded
 /note=Potential.
 Region 17..30
 /region_name=Propeptide
 /inference=non-experimental evidence, no additional
 details recorded
 /note=By similarity./FTId=PRO_0000032705.
 Region 31..360
 /region_name=Maturechain
 /experiment=experimental evidence, no additional details 
 recorded
 /note=Decorin./FTId=PRO_0000032706.
　　 Site 34
 /site_type=glycosylation
 /inference=non-experimental evidence, no additional
 details recorded
 /note=O-linked(Xyl...) (glycosaminoglycan) (By
 similarity).
……
ORIGIN 
1 mkatiiflll aqvswagpfq qrglfdfmle deasgigped rapdmpdlel lgpvcpfrcq
61 chlrvvqcsd lgldkvpkdl ppdttlldlq nnkiteikdg dfknlknlht lilvnnkisk
121 ispgaftpll klerlylskn hlkelpekmp ktlqelrahe neitkvrkav fnglnqmivv
181 elgtnplkss giengafqgm kklsyiriad tnittipqgl ppsltelhle gnkitkvdas
241 slkglnnlak lglsfnsisa vdngtlantp hlrelhldnn klirvpggla ehkyiqvvyl
301 hnnnisavgs ndfcppgynt kkasysgvsl fsnpvqywei qpstfrcvyv rsaiqlgnyk」
　引用文献６には、３１番目から３６０番目のアミノ酸配列が成熟鎖であることが開示されているから、その４番目のアミノ酸がセリン（S)であるイヌ由来の成熟デコリンであって、以下のアミノ酸配列からなる成熟デコリンが記載されている。
「31 deasgigped rapdmpdlel lgpvcpfrcq
61 chlrvvqcsd lgldkvpkdl ppdttlldlq nnkiteikdg dfknlknlht lilvnnkisk
121 ispgaftpll klerlylskn hlkelpekmp ktlqelrahe neitkvrkav fnglnqmivv
181 elgtnplkss giengafqgm kklsyiriad tnittipqgl ppsltelhle gnkitkvdas
241 slkglnnlak lglsfnsisa vdngtlantp hlrelhldnn klirvpggla ehkyiqvvyl
301 hnnnisavgs ndfcppgynt kkasysgvsl fsnpvqywei qpstfrcvyv rsaiqlgnyk」
エ　引用文献８に開示された事項
　本願の優先日である２０１３年　４月　２２日より前に電気通信回線を通じて公開された「ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｏ４６５４２，２０１３年　３月　６日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｏ４６５４２．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝８４＞」以下、「引用文献８」という。）には、次の事項が開示されている。
（ア）開示事項８−１
「AC O46542;
……
DE RecName: Full=Decorin;
……
OS Equus caballus (Horse)
……
FT SIGNAL 1 16 Potential.
FT PROPEP 17 30 By similarity.
FT /FTId=PRO_0000032707.
FT CHAIN 31 360 Decorin.
FT /FTId=PRO_0000032708.
……
FT CARBOHYD 34 34 O-linked (Xyl...) (glycosaminoglycan) (By
FT similarity).
……
SQ SEQUENCE 360 AA; 39939 MW;2DAE97CDE16F7C45 CRC64;
 MKATIIFLLL AQVSWAGPFQ QRGLFDFMLE DEASGIGPED RIHEVLDLEP LGPVCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLDKVPKDL PPDTTLLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHA LILVNNKISK
 ISPGAFTPLV KLERLYLSKN HLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKAV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPPGL PPSLTELHLD GNKITKVDAA
 SLRGLNNLAK LGLSFNSISA VDNGSLANTP HLRELHLDNN KLIKVPGGLA DHKYIQVVYL
 HNNNISAVGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RSAIQLGNYK」
　引用文献８には、３１番目から３６０番目のアミノ酸配列がシグナル及びプロペプチドが除去されたデコリンであることが開示されているから、その４番目のアミノ酸がセリン（S)であるウマ由来の成熟デコリンであって、以下のアミノ酸配列からなる成熟デコリンが記載されている。
「31 DEASGIGPED RIHEVLDLEP LGPVCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLDKVPKDL PPDTTLLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHA LILVNNKISK
 ISPGAFTPLV KLERLYLSKN HLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKAV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPPGL PPSLTELHLD GNKITKVDAA
 SLRGLNNLAK LGLSFNSISA VDNGSLANTP HLRELHLDNN KLIKVPGGLA DHKYIQVVYL
 HNNNISAVGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RSAIQLGNYK」
オ　引用文献９に開示された事項
　本願の優先日である２０１３年　４月　２２日より前に電気通信回線を通じて公開された「ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ９ＸＳＨ４，２０１３年　１月　９日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＸＳＤ９．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝８１＞」以下、「引用文献９」という。）には、次の事項が開示されている。
（ア）開示事項９−１
「AC Q9XSD9; Q9XSH4;
……
DE RecName: Full=Decorin;
……
OS Sus scrofa (Pig)
……
FT SIGNAL 1 16 Potential.
FT PROPEP 17 30 By similarity.
FT /FTId=PRO_0000032715.
FT CHAIN 31 360 Decorin.
FT /FTId=PRO_0000032716.
……
FT CARBOHYD 34 34 O-linked (Xyl...) (glycosaminoglycan) (By
FT similarity).
……
SQ SEQUENCE 360 AA; 39899 MW;8573DE8DDEBA7509 CRC64;
 MKATIVFLLL AQVSWAGPFQ QKGLFDFMLE DEASGIGPED RFPEVPELEP LGPMCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLDKVPKDL PPDTALLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHT LILINNKISK
 ISPGAFAPLV KLERLYLSKN QLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKAV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPQGL PPSLTELHLD GNKISKVDAA
 SLKGLNNLAK LGLGFNSIST VDNGSLANTP HLRELHLNNN KLNKVPGGLA EHKYIQVVYL
 HNNNISAVGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RSAIQLGNYK」
　引用文献９には、３１番目から３６０番目のアミノ酸配列がシグナル及びプロペプチドが除去されたデコリンであることが記載されているから、その４番目のアミノ酸がセリン（S)であるブタ由来の成熟デコリンであって、以下のアミノ酸配列からなる成熟デコリンが記載されている。
「31 DEASGIGPED RFPEVPELEP LGPMCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLDKVPKDL PPDTALLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHT LILINNKISK
 ISPGAFAPLV KLERLYLSKN QLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKAV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPQGL PPSLTELHLD GNKISKVDAA
 SLKGLNNLAK LGLGFNSIST VDNGSLANTP HLRELHLNNN KLNKVPGGLA EHKYIQVVYL
 HNNNISAVGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RSAIQLGNYK」
カ　引用文献１０に開示された事項
　本願の優先日である２０１３年　４月　２２日より前に電気通信回線を通じて公開された「ＲｅｃＮａｍｅ：　Ｆｕｌｌ＝Ｄｅｃｏｒｉｎ、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ　Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　Ｎｏ．Ｑ９ＴＴＥ２，２０１２年　３月　２１日，［検索日２０２０年７月１０日］インターネット＜ＵＲＬ：ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｑ９ＴＴＥ２．ｔｘｔ？ｖｅｒｓｉｏｎ＝６７＞」以下、「引用文献１０」という。）には、次の事項が開示されている。
（ア）開示事項１０−１ 
「AC Q9TTE2;
……
OS Ovis aries (Sheep).
……
FT SIGNAL 1 16 Potential.
FT PROPEP 17 30 By similarity.
FT /FTId=PRO_0000032721.
FT CHAIN 31 360 Decorin.
FT /FTId=PRO_0000032722.
……
FT CARBOHYD 34 34 O-linked (Xyl...) (glycosaminoglycan) (By
FT similarity).
……
SQ SEQUENCE 360 AA; 39972 MW;0095D0DFDAB88624 CRC64;
 MKATIIFFLV AQVSWAGPFQ QKGLFDFMLE DEASGIGPEE RFHEVPELEP MGPVCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLEKVPKDL PPDTALLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHT LILINNKISK
 ISPGAFAPLV KLERLYLSKN QLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKSV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPQGL PPSLTELHLD GNKITKVDAA
 SLKGLNNLAK LGLSFNSISA VDNGSLANTP HLRELHLNNN KLVKVPGGLA DHKYIQVVYL
 HNNNISAIGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RAAVQLGNYK」
　引用文献１０には、３１番目から３６０番目のアミノ酸配列がシグナル及びプロペプチドが除去されたデコリンであることが記載されているから、その４番目のアミノ酸がセリン（S)であるヒツジ由来の成熟デコリンであって、以下のアミノ酸配列からなる成熟デコリンが記載されている。
「31 DEASGIGPEE RFHEVPELEP MGPVCPFRCQ
 CHLRVVQCSD LGLEKVPKDL PPDTALLDLQ NNKITEIKDG DFKNLKNLHT LILINNKISK
 ISPGAFAPLV KLERLYLSKN QLKELPEKMP KTLQELRVHE NEITKVRKSV FNGLNQMIVV
 ELGTNPLKSS GIENGAFQGM KKLSYIRIAD TNITTIPQGL PPSLTELHLD GNKITKVDAA
 SLKGLNNLAK LGLSFNSISA VDNGSLANTP HLRELHLNNN KLVKVPGGLA DHKYIQVVYL
 HNNNISAIGS NDFCPPGYNT KKASYSGVSL FSNPVQYWEI QPSTFRCVYV RAAVQLGNYK」
２　引用文献２に記載された発明
　引用文献２の特に記載事項２−１の（請求項１０の引用形式で記載される）請求項１１には「ＴＧＦ−βと精製デコリンとを接触させることを包含する、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状を処置する方法であって、それによって該病状がもたらされる活性を妨害するかまたは低下させる、方法」が記載されており、また、精製デコリンを組成物の形態で同方法に用いることも実施例と共に記載されている（記載事項２−１請求項５、記載事項２−７）。
　そうすると、引用文献２には、以下の発明が記載されているといえる。
「精製デコリンを含む、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状を処置する方法における使用のための組成物」
（以下、「引用発明」という。）
３　対比 
　本願発明と引用発明とを対比する。
　引用発明における「精製デコリン」は本願発明における「デコリン」に相当する。
　また、引用発明における「病状を処置する方法」とは、本願発明における、「それを必要とする疾患を患った対象に治療を施す方法」に相当する。
　さらに、引用発明において、デコリンコアタンパク質は、デコリンの定義内に含まれており（記載事項２−２）、「病状を処置する・・・ための組成物」は当然に処置に必要な量のデコリンタンパク質分子を含むものであるから、引用発明における組成物は有効量の精製デコリンタンパク質を含むものである。
　したがって、本願発明と引用発明とは、
「それを必要とする疾患を患った対象に治療を施す方法における使用のための、デコリン組成物であって、当該デコリン組成物が、有効量における、デコリンタンパク質を含む、デコリン組成物」
である点において一致し、以下の２点で相違する。
＜相違点１＞
　本願発明は、治療対象が「獣医学的対象」であり、「獣医学的デコリンコアタンパク質分子を含み、当該獣医学的デコリンコアタンパク質分子が、配列番号４、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと同一であ」るのに対して引用発明はかかる特定を有しない点。
 
＜相違点２＞
　本願発明は、「ａ）前記獣医学的デコリンコアタンパク質が、肉芽形成を阻害するために投与される、肉芽を生じる創傷または他の損傷；ｂ）眼に対する損傷または疾患；ｃ）肺疾患；ｄ）腎疾患；ｅ）肝疾患からなる群から選択される、創傷、損傷または疾患」を対象が患っているのに対して、引用発明は「ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状」を対象が患っている点。
４　判断 
　そこで、上記相違点について検討する。 
（１）相違点１について
　引用文献２には、デコリンおよびバイグリカンの効果は、グリコサミノグリカンが原因ではないと考えられることが記載されているとともに（記載事項２−５及び記載事項２−６）、デコリンの定義に含まれるデコリンコアタンパク質を得るためにグリコサミノグリカンを取り除く手段として変異を導入することが記載されており（記載事項２−２）、具体的には成熟デコリンの４位のセリンをアラニンに変異させることも記載されている（記載事項２−４）。そうすると、記載事項２−５及び記載事項２−６の記載をみた当業者は、引用発明の精製デコリンとして、４位変異デコリン（グリコサミノグリカンを有さない）を用いても、野生型デコリン（グリコサミノグリカンを有する）を用いた場合と同様のＴＧＦ−β１に対する作用が見込まれることを理解するものである
　さらに、引用文献２には、ヒト以外のデコリンであるウシデコリンも記載されており（記載事項２−６及び記載事項２−７）、人畜共通の疾患について、獣医学的な治療を行うことは当然の課題であった。
　そうすると、引用発明において、デコリンとして、引用文献４（本願の配列番号４と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献６（本願の配列番号１０と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献８（本願の配列番号１６と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献９（本願の配列番号１９と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献１０（本願の配列番号２２と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）にそれぞれ開示される獣医学的なデコリンタンパク質の成熟鎖部分のいずれかの４位のセリンをアラニンに変異させてなる変異デコリンを記載事項２−４に例示される周知の技術手段を用いて製造し、これを精製デコリンとして用いることは当業者が容易に想到しうることである。
　　
（２）相違点２について
　引用文献２には、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状として「慢性関節リウマチ、糸球体腎炎、動脈硬化症、成人呼吸促進症候群、肝硬変、肺線維症、術後心筋梗塞、心臓線維症、血管形成術後再狭窄、腎間質性線維症、あるいは皮膚線維症」が記載されており（記載事項２−１）、皮膚線維症の中には肉芽を生じる創傷であることが技術常識である、はん痕やケロイドが挙げられることも記載されるとともに（記載事項２−３）、実際にデコリンの投与によりはん痕の治療を行うことも具体的なデータを以て記載されているから（記載事項２−７）、引用発明において、ＴＧＦ−β調節活性により生じた病状として、腎疾患である腎間質性線維症及び糸球体腎炎、肝疾患である肝硬変、肺疾患である肺線維症、肉芽を生じる創傷または他の損傷であるはん痕跡やケロイド等の皮膚線維症を選択することは、当業者が容易になしうることである。
　
（３）効果について
　本願の発明の詳細な説明には、デコリンのヒトへの治療的使用方法について従来技術が記載されており（段落【０００４】）、獣医学的デコリン組成物の用途、投与方法、用量について一応の記載があるものの（段落【００１５】乃至【００２２】、【００５７】乃至【００６５】）、実施例において示されているのは獣医学的デコリンコアタンパク質に変異を導入し、細胞を用いて前記タンパク質を発現させることに留まり、本願発明について実施例すら存在せず、技術水準から予測される範囲を超えた顕著な効果を奏するものとはいえない。
（４）請求人の主張について
　請求人は令和　３年　１月１８日提出の意見書において、以下の点を主張している。
　補正の結果として、本願の請求項１に係る発明は、配列番号４、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと同一である獣医学的デコリンコアタンパク質分子を含む、獣医学的デコリン組成物に限定された。
　これに対し、いずれの引用文献も、Ｎ末端から４番目のアミノ酸に変異を含めるための、野生型配列と比較した上記配列のうちの変更を、記載も示唆もしていない。
　そこで、上記主張について検討する。
　引用文献２及び引用文献４、６、８〜１０には、配列番号４、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと同一である獣医学的デコリンコアタンパク質は開示されていないものの、上記（１）にて検討したとおり、引用発明において、デコリンとして、引用文献４（本願の配列番号４と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献６（本願の配列番号１０と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献８（本願の配列番号１６と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献９（本願の配列番号１９と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）、引用文献１０（本願の配列番号２２と４番目のアラニンがセリンである点のみで相違する）にそれぞれ開示される獣医学的なデコリンタンパク質の成熟鎖部分のいずれかの４位のセリンをアラニンに変異させてなる変異デコリンを記載事項２−４に例示される周知の技術手段を用いて製造し、これを精製デコリンとして用いることは当業者が容易に想到しうることに過ぎない。また、上記主張は配列番号４、１０、１３、１６、１９、２２、及び２７のうちの１つと同一である獣医学的デコリンコアタンパク質分子を含む、獣医学的デコリン組成物を用いることによる効果等を主張するものでもなく、上記（３）にて検討したとおり、本願発明については、技術水準から予測される範囲を超えた顕著な効果を奏するものとはいえない。
　したがって、請求人による上記主張は採用できない。
（５）まとめ 
　したがって、本願発明は、引用発明、引用文献２の記載、及び引用文献４、６、８〜１０の開示に基づいて、当業者が容易になし得たものである。 
　　 
第５　むすび 
　以上のとおり、本願発明は、引用発明、引用文献２の記載、及び引用文献４、６、８〜１０の開示に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。 
　よって、結論のとおり審決する。