(57)【要約】  アディポサイトカイン、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生を抑制し、インスリン抵抗性に起因する病態の発症を予防又は改善するために、シクロラノスタン骨格を持つ化合物若しくは同化合物を含むユリ科又はイネ科の植物の有機溶媒抽出物、熱水抽出物、又はこれらの分画物を医薬又は飲食品の有効成分とする。
2007043305.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【化１】
2007043305.tif 000024
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【化２】
2007043305.tif 000025
【請求項２】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項１に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【化３】
2007043305.tif 000026
【請求項３】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項２に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項４】
前記化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する請求項１〜３のいずれか一項に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項５】
下記の一般式（１）で表される化合物を含む植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物が下記の一般式（１）で表される化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【化４】
2007043305.tif 000027
【請求項６】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項５に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項７】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項５又は６に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【化５】
2007043305.tif 000028
【請求項８】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項７に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品。
【請求項１０】
前記一般式（１）で示される化合物を０．０００１質量％以上含む請求項９に記載の飲食品。
【請求項１１】
インスリン抵抗性改善剤の製造のための下記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物の使用。
【化６】
2007043305.tif 000029
【請求項１２】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項１１又は１２に記載の使用。
【化７】
2007043305.tif 000030
【請求項１４】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
インスリン抵抗性を改善する方法であって、下記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を、インスリン抵抗性を改善しようとする対象に投与することを特徴とする方法。
【化８】
2007043305.tif 000031
【請求項１６】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項１５又は１６に記載の方法。
【化９】
2007043305.tif 000032
【請求項１８】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項１７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。さらに詳しくは、インスリン抵抗性に関わる病態の発症及び重篤化に関与する因子である遊離脂肪酸、プラスミノーゲン活性化阻止因子、腫瘍壊死因子、モノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１、レジスチン等のアディポサイトカインの産生調節効果を有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島（ラ氏島）内にあるβ細胞から産生されるホルモンの一種であり、骨格筋、肝臓、脂肪等のインスリン標的組織に存在するインスリン受容体を介して、糖代謝のみならず、脂質代謝及び蛋白質代謝に作用し、生体の恒常性の維持に重要な役割を担っている。各標的組織におけるインスリンの作用としては、筋肉細胞や脂肪細胞への血液中のグルコースの取り込み促進や、肝臓および筋肉組織でのグリコーゲン産生の促進、肝臓における糖新生の抑制、脂肪細胞におけるグルコース消費と脂肪酸合成の促進および脂質の分解抑制等が挙げられる。【０００３】
インスリン抵抗性とは、細胞、臓器、個体レベルでインスリンの各種の作用を得るのに通常量以上のインスリンを必要とする状態、すなわち、インスリンに対する感受性が低下したインスリン作用不全状態のことである。これまでの疫学的検討の結果から、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等が、インスリン抵抗性に基づく病態であると考えられている。インスリン抵抗性に陥ると、糖代謝におけるインスリンの作用不足から、血糖維持のための代償性の高インスリン血症を生じ、高血糖や耐糖能障害が引き起こされるとともに、膵β細胞の疲弊により糖尿病が進行する。また高インスリン血症は、交感神経活性亢進や腎臓におけるナトリウム吸収を促進して高血圧を発症させるとともに、食後高脂血症や高尿酸血症、プラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１；plasminogen activator inhibitor-1）の上昇等も誘導する。【０００４】
一方、インスリン抵抗性は、インスリンの作用不足による脂質代謝異常を誘導し、脂肪細胞から放出された遊離脂肪酸（ＦＦＡ；free fatty acid）が肝臓で増加して肝臓におけるトリグリセリド（ＴＧ）の合成が促進され、高ＴＧ血症となる。また、通常はインスリン感受性の高いリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）が、インスリン抵抗性状態では活性が低下することから、ＴＧの分解が減少し、高ＴＧ血症の悪化が進む。さらに、糖尿病の進行に伴い、血管障害による網膜症や腎症、壊疽等の合併症が併発し、動脈硬化性疾患である心筋梗塞、脳梗塞が進展し、また高血圧は循環器疾患を進行させる。以上のことから、インスリン抵抗性が複合的な病態の悪化に大きく関与していると考えられている（非特許文献１）。【０００５】
近年、臓器特異的な遺伝子発現の解析が行われた結果、脂肪組織から様々な生理活性物質が分泌されていることが明らかとなり、脂肪組織は単なるエネルギー貯蔵組織ではなく、生体内最大の内分泌臓器として認識されるようになった。このような脂肪組織由来の内分泌因子は、総称してアディポサイトカインと呼ばれ、代謝における恒常性の維持に重要な役割を果たしているが、肥満すなわち、脂肪蓄積状態においては、その産生・分泌が過剰又は過小となり、バランスが破綻することによって、インスリン抵抗性が引き起こされると考えられている。【０００６】
アディポサイトカインには、インスリン感受性を亢進させるものと、インスリン抵抗性を惹起させるものがあり、前者の代表的なものとして、アディポネクチン、レプチン、ＡＭＰＫ（AMP-dependent protein kinase）等が知られている。特にアディポネクチンについては、インスリン抵抗性の解除作用や、肝臓における糖新生抑制作用が報告されている（非特許文献２）。【０００７】
一方、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインとしては、上記のＦＦＡやＰＡＩ−１の他に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α；tumor necrosis factor-α）、炎症性ケモカインの一種であるモノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１（ＭＣＰ−１；monocyte chemoattractant protein-1）、レジスチン等が挙げられる。なかでも、ＴＮＦ−αは、インスリンシグナル伝達機構における、インスリン受容体及びＩＲＳ１（insulin receptor substrate 1）のチロシンリン酸化を阻害し、インスリン作用を減弱させることにより、インスリン抵抗性を惹起させるという作用機構が報告されている。また、インスリン抵抗性状態においては、ＭＣＰ−１の体内レベルが上昇し、これに伴い、糖輸送担体ＧＬＵＴ４（glucose transporter-4）、核内受容体であるＰＰＡＲγ（peroxisome proliferator-activated receptor γ）、脂肪細胞のβ型カテコールアミン受容体の一種であるβ３ＡＲ（β3-adrenergic receptor）、脂肪酸結合タンパク質ａＰ２（adipocyte fatty-acid-binding protein 2）のｍＲＮＡが低下することが報告されていることから、ＭＣＰ−１がインスリン感受性を低下させる原因物質であると考えられている（非特許文献３、４、５）。【０００８】
インスリン抵抗性を改善する薬剤としては、主に肝臓における糖新生を抑制するビグアナイド剤と筋肉や脂肪組織のインスリン感受性を改善させるチアゾリジン誘導体が開発されている。これらの薬剤は、既に糖尿病治療薬として認可されており、動脈硬化症の治療にも使用されている。トログリタゾンやピオグリタゾンに代表される、チアゾリジン誘導体は、核内受容体型転写因子であるペルオキソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ；peroxysome proliferator-activated receptor）のリガンドとして作用し、脂肪細胞の分化を促進させることによりインスリン抵抗性を改善すると考えられている。【０００９】
このほかにも、アディポネクチン又はそれらの遺伝子を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献１）、ボンベシン受容体サブタイプ３（ＢＲＳ−３）に親和性を有する物質を有効成分とするインスリン抵抗性に起因する疾患の予防及び／治療剤（特許文献２）、ピロール誘導体を有効成分とする遊離脂肪酸（ＦＦＡ）低下剤（特許文献３）等が、それぞれインスリン抵抗性改善剤として開示されている。さらに、食品由来の物質を有効成分とするものとして、酢酸およびそのイオン又は塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善用組成物（特許文献４）、特定のジグリセリド及び／又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献５）等が開示されている。【００１０】
β−シトステロールやカンペステロール、スティグマステロール等の植物ステロール類には、コレステロールの吸収阻害による血中コレステロール低下効果が既に知られており、油脂組成物として食用油に添加するなどの実用化が行われている。また、β−シトステロールやカンペステロールなどの植物ステロール類を出発物質として合成されるコレステノン化合物を有効成分として含有する抗肥満剤及び脂質代謝改善剤が開示されている（特許文献６〜８、非特許文献６）。【００１１】
さらに、米糠、シメジ、キク、ライ麦、シラカバ及び月桃のうち少なくとも一種から抽出された抽出物ならびに、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノール及び／若しくは（２４Ｓ）−２４、２５−ジヒドロキシシクロアルタノールを含有するアディポネクチン分泌促進剤が開示されている（特許文献９）。【００１２】
ユリ科植物であるアロエ属は、アロエベラ（Aloe barbadenisis Miller）やキダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）等を含む植物群であり、様々な効能があることが経験的に知られている。例えば、アロエ抽出物のブタノール画分又はアロインを含有することを特徴とする免疫抑制改善剤（特許文献１０）、血糖値改善に関するもの（特許文献１１〜１４）、及び肥満の予防改善剤（特許文献１５）等が開示されているが、アロエ属植物によるインスリン抵抗性改善作用については、一切報告されていなかった。【００１３】
【特許文献１】国際公開２００３／６３８９４号パンフレット
【特許文献２】特開平１０−２９８１００公報
【特許文献３】特開平８−１２５７３公報
【特許文献４】特開２００２−１９３７９７公報
【特許文献５】特開２００１−２４７４７３公報
【特許文献６】特開平７−１６５５８７号公報
【特許文献７】特開平１１−１９３２９６号公報
【特許文献８】特開２００１−２４０５４４号公報
【特許文献９】特開２００５−６８１３２号公報
【特許文献１０】特開平８−２０８４９５号公報
【特許文献１１】特開昭５９−２１４７４１号公報
【特許文献１２】特開２００３−２８６１８５号公報
【特許文献１３】米国特許第４５９８０６９号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００３／０２０７８１８号明細書
【特許文献１５】特開２０００−３１９１９０号公報
【非特許文献１】インスリン抵抗性と生活習慣病、島本和明編集、診断と治療社、２００３年、第１〜５頁
【非特許文献２】アディポサイエンス（Adiposcience）、第１巻、第３号、２００４年、第２４７〜２５７頁
【非特許文献３】プロシーディングス・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ（Proceedings of the National Academy of Sciences）、第１００巻、２００３年、第７２６５〜７２７０頁
【非特許文献４】ネイチャー（Nature）、第３８９巻、１９９７年、第６１０〜６１４頁
【非特許文献５】ザ・ネザーランズ・ジャーナル・オブ・メディシン（The Netherlands Journal of Medicine）、第６巻、第６号、２００３年、第１９４〜２１２頁
【非特許文献６】ホルモン・メタボリスム・リサーチ（Hormone Metabolism Research）、第３７巻、２００５年、第７９〜８３頁
【発明の開示】
【００１４】
しかしながら、従来のインスリン抵抗性を改善する薬剤であるビグアナイド剤では、胃腸障害やまれに乳酸アシドーシスを起こすことがあった。また、同薬剤であるチアゾリジン誘導体では、体液貯留や体重増加、肝機能障害等の重篤な副作用を起こすことがあるため、使用に際して注意を必要としていた。さらに、糖尿病又は高血糖ではない状態における、インスリン抵抗性に対しては、現実的に糖尿病薬を使用するのは困難であった。このような状況から、安全性に優れ、日常的に摂取でき、可能な限り苦痛を伴うことなく、効率よくインスリン抵抗性を改善できるような機能性素材の開発が切望されていた。
【００１５】
本発明者らは、前記課題に鑑み、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等の生活習慣病に至るインスリン抵抗性について、その疾患のメカニズムと予防・改善等に関与する薬剤、すなわちインスリン抵抗性改善剤について研究する中で、インスリン抵抗性の発症および重篤化に関与する因子であるアディポサイトカインについて着目し、これら因子を制御することによってインスリン抵抗性を改善できる新規機能性素材について鋭意検討した結果、シクロラノスタン骨格を持つ化合物に、遊離脂肪酸、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１等のアディポサイトカインの産生を調節する作用、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生を効果的に低減する作用を見いだし、これによってインスリン抵抗性が改善されることを明らかにした。
【００１６】
このような本発明の作用効果に対して、前記特許文献９においては、上記植物抽出物の培養脂肪細胞の分化予防効果、シクロアルタン型トリテルペン誘導体の合成経路、及びエルゴステロールのアディポネクチンの分泌促進について示されているものの、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノールによるアディポネクチン分泌に関する記載は無く、本発明の有効成分におけるインスリン抵抗性改善作用に関する記述は一切記載も示唆もされていなかった。
【００１７】
また、従来のインスリン抵抗性を評価する方法であるグルコースクランプ法、ＳＳＰＧ（Steady state plasma glucose）法、ミニマルモデル法とは別に、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いて検討したことにより、シクロラノスタン骨格を持つ化合物が、インスリン分泌能等を介さず、インスリン抵抗性をより直接的に改善していることを明らかにした。
【００１８】
このようなインスリントレランステストについては、前記特許文献１〜５には実施されておらず、インスリン分泌能等の影響を受けずにインスリン抵抗性を改善するという、従来のインスリン抵抗性の改善効果に比して極めて有利な効果を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１９】
本発明の目的は、前記シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することである。
【００２０】
前記課題を解決する本願第一の発明は、下記の一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２１】
【化１】
2007043305.tif 000003
【００２２】
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【００２３】
【化２】
2007043305.tif 000004
【００２４】
また、以下の１）〜３）を好ましい態様としている。
１）前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であること、
【００２５】
【化３】
2007043305.tif 000005
【００２６】
２）前記１）の化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールであること、
【００２７】
３）前記１）又は２）の化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％を含有すること。
【００２８】
前記課題を解決する本願第二の発明は、下記の一般式（１）で表される化合物を含む植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物が下記の一般式（１）で表される化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２９】
【化４】
2007043305.tif 000006
【００３０】
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【００３１】
【化５】
2007043305.tif 000007
【００３２】
また、以下の４）〜６）を好ましい態様としている。
４）前記植物がユリ科又はイネ科の植物であること、
【００３３】
５）前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であること、
【００３４】
【化６】
2007043305.tif 000008
【００３５】
６）前記５）の化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールであること。
【００３６】
前記課題を解決する本願第三の発明は、前記第一又は第二の発明に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品である。
また、以下の７)を好ましい態様としている。
７）飲食品が、前記一般式（１）で示される化合物を０．０００１質量％以上含むこと。
【００３７】
前記課題を解決する本願第四の発明は、インスリン抵抗性改善剤の製造のための前記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物の使用である。
【００３８】
前記課題を解決する本願第五の発明は、インスリン抵抗性を改善する方法であって、前記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を、インスリン抵抗性を改善しようとする対象に投与することを特徴とする方法である。
本発明の上記使用及び方法における一般式（１）で表される化合物の好ましい態様は、本願第二の発明と同様である。
【００３９】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、安全に投与又は摂取が可能であって、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の予防効果を有する。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分は、食経験上安全に摂取でき、入手容易であるユリ科植物等、例えばアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）から簡便に製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】インスリン負荷試験における血糖値の変動を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４１】
次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。【００４２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤（以下、「本発明の医薬」ともいう）の有効成分として用いる化合物は、前記一般式（１）で表される構造をもつ化合物であって、インスリン抵抗性改善作用を有する化合物（以下、「本発明の化合物」ともいう）であれば、いずれの誘導体等も有効成分として含まれる。【００４３】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いられる本発明の化合物の純度は、１００％であることが最も好ましいが、インスリン抵抗性を改善する作用を有する範囲で適宜設定することが可能である。【００４４】
また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いる組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）は、前記一般式（１）で表される構造をもつ化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上含む、ユリ科植物又はイネ科植物の抽出物又はその分画物である。本発明の化合物の含有量の上限は特に制限されないが、１０質量％が好ましく、５０質量％若しくは７０質量％、又は９０質量％が例示できる。【００４５】
なお、本発明において乾燥質量とは、第十四改正日本薬局方（平成１３年３月３０日厚生労働省告示第１１１号）における一般試験法「乾燥減量試験法」において規定される乾燥方法によって、化合物を乾燥した後に測定した質量であって、例えば、本発明の化合物を約１ｇ分取し、これを１０５℃で４時間乾燥し、デシケーター内で放冷して、はかりにてその質量を測定することによって規定することが可能である。【００４６】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品の一つの形態は、シクロラノスタン骨格を持つ化合物であって、インスリン抵抗性改善作用を持つ化合物を有効成分として含むものである。シクロラノスタン骨格とは、下記一般式（２）で表される化合物をいう。【００４７】
【化７】
2007043305.tif 000009
【００４８】
シクロラノスタン骨格を持つ化合物として具体的には、前記一般式（１）で表される化合物が挙げられる。シクロラノスタン骨格を持つ化合物に存在する二重結合の数は特に限定されない。また、環内に存在する二重結合の数も限定されず、２個以上の二重結合が存在する場合にはそれらは共役していてもよい。なお、本発明の医薬又は飲食品は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。【００４９】
本発明の化合物は、前記一般式（１）において、Ｒ１は炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはこれらのアルキル基およびアルケニル基の水素原子の１つまたは２つがヒドロキシル基および／またはカルボニル基で置換された置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。【００５０】
【化８】
2007043305.tif 000010
【００５１】
前記一般式（１）において、Ｒ１は、下記式で表される基のいずれかであることが好ましい。【００５２】
【化９】
2007043305.tif 000011
【００５３】
また、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であることが好ましい。前記化合物として最も好ましい化合物は、下記式で表される９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（３））、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（４））である。【００５４】
【化１０】
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【００５５】
【化１１】
2007043305.tif 000013
【００５６】
すなわち、９，１９−シクロラノスタン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であって、Ｒ１が前記式（i）で表される基である。２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であって、Ｒ１が前記式（vi）で表される基である。【００５７】
本発明の化合物は、シクロアルテノール（式（５））、または２４−メチルシクロアルタノール（式（７））であってもよい。これらの化合物はいずれも前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であるが、Ｒ１については、シクロアルテノールが前記式（vii）で表される基であり、２４−メチルシクロアルタノールは前記式（ii）（Ｒａ＝ＣＨ3、Ｒｂ＝Ｈ）で表される基である。【００５８】
本発明の化合物は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。たとえば、シクロアルテノール（式（５））および２４−メチレンシクロアルタノール（２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの慣用名である）（式４）の製造法については特開昭５７−０１８６１７号公報にて開示され、ガンマ−オリザノールからのシクロアルテノールフェルレート（式６）の製造法およびこの加水分解物を出発物質とした化合物の合成法について、特開２００３−２７７２６９号公報に開示されている。また、さらに一般式（１）のＲ１部分に二重結合を含むものは、二重結合部分をオゾン分解反応でアルデヒドにして、それにフォスフォン塩を結合させる手法また、二重結合物に水素添加する手法あるいは、二重結合部分をオゾン酸化を行い、アルデヒドもしくは酸に転換する手法を用いた場合、様々な誘導体化合物の製造が可能になる。また製造方法は化学的な合成方法に限定されるものでなく、微生物等を利用して生物学的に製造してもよい。あるいは微生物由来の酵素を用いて製造しても良い。【００５９】
【化１２】
2007043305.tif 000014
【００６０】
【化１３】
2007043305.tif 000015
【００６１】
【化１４】
2007043305.tif 000016
【００６２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、前記化合物の一種を単独で含んでいてもよく、任意の２種類以上を含んでいてもよい。【００６３】
シクロラノスタン骨格を持つ化合物は、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科およびバショウ科などの植物に含まれていることが知られている（〔フィトケミストリー（Phytochemistry）、米国、１９７７年、第１６巻、第１４０〜１４１ページ〕、〔ハンドブック・オブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants）、１９９２年、米国、シーアールシープレス〕、又は〔ハーゲルズ・ハントブーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis）、第２〜６巻、１９６９〜１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン〕参照）。よって、これらの植物若しくはその一部又はそれらの破砕物から、有機溶媒抽出法または熱水抽出法などの方法を用いて抽出、濃縮することにより、製造することが可能である。【００６４】
具体的には、前記ユリ科に属する植物としては、アロエ属又はアリウム属に属する植物が挙げられる。また、アロエ属植物としては、アロエベラ（Aloe barbadensis Miller）、アロエフェロックスミラー（Aloe ferox Miller）、アロエアフリカーナミラー（Aloe africana Miller）、キダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）、アロエスピカータベイカー（Aloe spicata Baker）等が挙げられる。本発明の化合物又はそれを含む組成物の製造においては、前記植物の全体を用いてもよいが、葉肉（透明ゲル部分）を用いることが好ましい。このような植物又はその一部を、好ましくはホモジナイザー等を用いて破砕して液状化し、有機溶媒又は熱水で抽出する。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ブタノール等のアルコール；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、石油エーテル等のエーテル；ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン等の炭化水素；四塩化炭素、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；ピリジン等の複素環化合物、エチレングリコール等のグリコール；ポリエチレングリコール等のポリアルコール；アセトニトリル等のニトリル溶媒、及びこれらの溶媒の混合液等が挙げられる。また、これらの溶媒は無水であってもよく、含水状態であってもよい。これらの溶媒の中では、酢酸エチル／ブタノール混合液（３：１）またはクロロホルム／メタノール混合液（２：１）が好ましい。【００６５】
抽出方法としては、通常の植物成分の抽出に用いられる方法を用いることができる。通常、新鮮な植物又は乾燥植物１質量部に対し、有機溶媒１〜３００質量部を用いて、撹拌又は振盪しながら、溶媒の沸点以下の温度で加熱還流するか、常温で超音波抽出する方法が挙げられる。抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、不溶物を分離して粗抽出物を得ることができる。【００６６】
抽出物は、各種クロマトグラフィー、例えば順相又は逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、精製することができる。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてクロロホルム／メタノール混合液のグラジエントを用いると、クロロホルム：メタノール＝２５：１程度で本発明の化合物が溶出される。また、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてヘキサン：酢酸エチル混合液（４：１）を用いると、本発明の化合物は最初の方のフラクションとして溶出される。得られたフラクションは、さらにＨＰＬＣ等により精製することができる。【００６７】
また、本発明に用いる化合物は、化学的な合成法、又は、微生物又は酵素等を利用した生物学的方法又は酵素的方法によって製造してもよい。【００６８】
上記のようにして得られる化合物又はそれを含む組成物が、本発明の化合物を含むことは、例えば、マススペクトル法（ＭＳ）及び核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）等によって確認することができる。【００６９】
本発明の化合物は、そのまま本発明のインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用することが可能である。また、本発明の化合物を含む、植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物（以下、「抽出物等」と呼ぶ）をインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用してもよい。なお、植物としてユリ科に属するアロエベラを使用した場合は、アロエベラ葉の外皮に多く含有するアロイン及びアロエエモジンの含有量の合計は、５ｐｐｍ以下であることが好ましい。【００７０】
インスリン抵抗性改善剤に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含んでいることが好ましく、０．０１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．０５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。また、飲食品に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．０００１質量％含んでいることが好ましく、０．００１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．００５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。前記抽出物等は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。また、前記抽出物等は、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存ないし使用することもできる。【００７１】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の組成物をそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。尚、本発明のインスリン抵抗性改善剤において、本発明の化合物は医薬に許容される塩にすることもできる。医薬に許容可能な塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、第１４１８頁、１９８５年」に掲載されているものが例示される。具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩および臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、上記化合物もしくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も本発明に含まれる。【００７２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常のインスリン抵抗性改善用医薬に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等と、他のインスリン抵抗性改善作用を有する医薬とを併用してもよい。【００７３】
本発明のインスリン抵抗性改善剤中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、製剤中に少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１〜１質量％、特に好ましくは０．０５〜１質量％とするのがよい。【００７４】
本発明において、インスリン抵抗性改善作用（インスリン感受性亢進作用）とは、インスリン感受性の低下に起因して導かれる種々の健康への害、例えば生活習慣病等を予防又は改善する作用を意味する。具体的にはプラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１）や遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、ＭＣＰ−１、レジスチン等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの上昇又は産生を効果的に抑制し、インスリン抵抗性に関わる病態のリスク低減、予防、改善、又は治療に効果を有する。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン感受性亢進剤、アディポサイトカイン産生調節剤、特に、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカイン産生抑制剤と定義することが可能である。【００７５】
インスリン抵抗性を評価する方法としては、グルコースクランプ法やＳＳＰＧ（Steady state plasma glucose）法、ミニマルモデル法、空腹時の血糖値と血中インスリン濃度からＨＯＭＡ−ＩＲ（homeostasis model assessment insulin resistance）指数を算出して判定する方法、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）が例示され、いずれの方法であってもインスリン抵抗性を評価することは可能であるが、本発明において、インスリン分泌能等の影響を受けず、インスリン感受性についてより直接的に検討できる、動物を使用したインスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いることが好ましい。【００７６】
本発明の化合物は、インスリン感受性を高める作用を有し、その結果、インスリン抵抗性に起因する病態の予防又は改善をすることが可能である。したがって、インスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として使用することができる。なお、インスリン感受性については、インスリン投与後の血糖値の低下反応を測定することにより評価することも可能である。【００７７】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性に起因する種々の疾病・合併症等の予防および改善、あるいは治療、並びにこれらの疾病・合併症等のリスクを低減することが可能である。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性が健常人より低下した状態の患者に対して、好適に使用することが可能である。なお、インスリン抵抗性とは、一般的には空腹時血漿インスリン値が１０〜１５μＵ／ｍｌ以上、ＨＯＭＡ指数が１．７３以上の状態とされている。【００７８】
かかるインスリン抵抗性に起因する種々の疾病としては、高血圧、高脂血症、糖尿病、耐糖能異常、動脈硬化症、高インスリン血症、肥満等を例示することができる。また、これらの疾患に起因する合併症としては、イ）高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全、ロ）高脂血症による動脈硬化、膵炎、ハ）糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、ニ）動脈硬化症による脳卒中、脳梗塞、狭心症及び心筋梗塞等の心血管疾患、尿毒症、腎硬化症及び腎不全等の腎症等、をそれぞれ例示することができる。尚、本発明者らは、本発明の化合物が、ヘモグロビンＡ１ｃ値を低下させ、高血糖を改善する作用を有することを見出している（国際公開２００６／０３５５２５号）。本発明のインスリン抵抗性改善剤が適用される疾病は、ヘモグロビンＡ１ｃの値が健常人より高い状態にあるものではないことが好ましい。【００７９】
また、本発明においてインスリン抵抗性の改善効果を例示するものとしては、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＦＦＡ等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生・上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイトカインの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、膵炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等を予防及び／又は改善する効果も兼ね備えている。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、前記アディポサイトカインの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生が亢進した状態の患者にも好適に使用することが可能である。【００８０】
本発明の医薬の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。本発明の医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常有効成分としての本発明の化合物の量は、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日での範囲となる量を目安とするのが良い。また、本発明の化合物を含む抽出物等を用いる場合は、抽出物等の乾燥質量として０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日となるような量を目安とするのが良い。いずれの場合も、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。【００８１】
本発明の化合物又はそれを含む組成物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させて、インスリン抵抗性改善効果を有する飲食品とすることが可能である。飲食品としては、前記有効成分の効果を損なわず、経口摂取できるものであれば、形態や性状は特に制限されず、前記有効成分を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。また、本発明の飲食品中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、飲食品中に少なくとも０．０００１質量％、好ましくは０．００１〜１質量％、特に好ましくは０．００５〜１質量％とするのがよい。【００８２】
本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善効果を利用するような種々の用途をとることが可能である。例えば、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の危険要因の低減・除去に役立つ飲食品等の用途を例示することができる。また、本発明の飲食品は、インスリン抵抗性により引き起こされる疾患、例えば高血圧、高脂血症、糖尿病等の予防及びリスクを低減することが可能である。さらに、本発明の飲食品はインスリン抵抗性に起因する種々の合併症、例えば高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全また高脂血症による動脈硬化、膵炎等、糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、さらに、動脈硬化症による脳卒中や脳梗塞、狭心症や心筋梗塞などの心血管疾患、尿毒症、腎硬化症、腎不全などの腎症等、の予防及びリスクを低減することが可能である。【００８３】
また、本発明の飲食品は、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＦＦＡ等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生・上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイトカインの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、膵炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等の予防及びリスクを低減する効果も兼ね備えている。よって、本発明の飲食品は、前記アディポサイトカインの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生が亢進した状態の患者にも好適に摂取することが可能である。【００８４】
本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善のために用いられるものである旨の表示を付した飲食品、例えば「インスリン抵抗性改善用と表示された、インスリン抵抗性改善効果を有する化合物を含有する飲食品」、あるいは「インスリン抵抗性改善用と表示された、植物抽出物を含有する飲食品」、「インスリン抵抗性改善用と記載された、アロエベラ抽出物を含有する飲食品」、等として販売することが好ましい。尚、本発明の化合物又はそれを含む組成物等は、インスリン抵抗性改善作用を有することから、インスリン抵抗性改善の表示には、インスリン感受性を亢進する意味も有すると考えられる。したがって、本発明の飲食品は、「インスリン感受性亢進用」と表示することができる。すなわち、前記インスリン抵抗性改善用の表示とは、このような「インスリン感受性亢進用」の表示であってもよい。【００８５】
尚、以上のような表示を行うために使用する文言は、「インスリン抵抗性改善用」、又は「インスリン感受性亢進用」という文言のみに限られるわけではなく、それ以外の文言であっても、インスリン感受性を亢進させ、又はインスリン抵抗性を予防、改善する効果を表す文言であれば、本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。そのような文言としては、例えば、需要者に対して、インスリン抵抗性改善又はインスリン感受性亢進の効果を認識させるような種々の用途に基づく表示も可能である。例えば、「インスリン抵抗性傾向のある方に適した」、「生活習慣病の危険要因（リスク）の低減・除去に役立つ」等の表示を例示することができる。【００８６】
前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等が例示できる。一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。【００８７】
また、例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。【００８８】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。【００８９】
以下、シクロラノスタン骨格を持つ化合物の製造例を示す。
［製造例１］
９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（３））、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（４））、シクロアルテノール（式（５））、及び２４−メチルシクロアルタノール（式（７））は、以下の方法によって製造した。【００９０】
【化１５】
2007043305.tif 000017
【００９１】
【化１６】
2007043305.tif 000018
【００９２】
【化１７】
2007043305.tif 000019
【００９３】
【化１８】
2007043305.tif 000020
【００９４】
γ−オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水２５０ｍｌ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、エタノール１５０ｍｌ、メタノール１５０ｍｌを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後、反応液を１３００ｍｌの水に注ぎ、生じた白色の析出物を吸引ろ過でろ取した。残存するアルカリを洗浄するために、ろ取した残渣を１０００ｍｌの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇの９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び１５４３ｍｇの２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを得た。【００９５】
得られた９，１９−シクロラノスタン−３−オールを用いて、シクロアルテノールの合成を行った。９，１９−シクロラノスタン−３−オール３０２ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉し、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。攪拌しながら過熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、シクロアルテノール２７５ｍｇを得た。２４−メチルシクロアルタノールの合成は、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを出発物質として行った。２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール７８ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、次いで、これをオートクレーブ内に密閉し、窒素ガスにて置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。そして攪拌しながら加熱し、５０℃となったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を５ｋｇ／ｃｍ2に保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、２４−メチルシクロアルタノール６９ｍｇを得た。【００９６】
ユリ科植物であるアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）を出発原料とした、シクロラノスタン骨格化合物の抽出組成物の製造例を以下示す。
［製造例２］
１００ｋｇのアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）の外皮を取り除いた後、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００リットルの酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液（３：１）を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を回収した。酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を減圧下濃縮して得られた、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む抽出組成物の重量は、１３．５ｇであった。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は１０ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は７０ｍｇであった。【００９７】
［製造例３］
１ｋｇのアロエベラ粉末にクロロホルム／メタノール混合液（２：１）１０リットルを添加し、室温にて一晩浸漬を行った後、クロロホルム／メタノール混合液を回収した。この混合液を２８℃にて有機溶媒を完全に除去して、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む組成物８３ｇを得た。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２５．８ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２４ｍｇであった。
【実施例１】
【００９８】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による血清中の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）量の変化を評価するために行った。【００９９】
（１）試料の調製
前記製造例３で製造した９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールをそれぞれＤＭＳＯに溶解した後、濃度が１μｇ／ｍｌになるように蒸留水にて調製して、それぞれ試験試料１及び試験試料２とした。このときＤＭＳＯの最終濃度は０．２％になるように調整した。また、試験試料を含まない溶液を陰性試料とした。【０１００】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採血し、血清中の遊離脂肪酸量を、NEFA C-テストワコー（和光純薬工業社製）にて測定した。【０１０１】
（３）結果（血中遊離脂肪酸濃度）
表１は、投与開始から６０日目のマウス血清中の遊離脂肪酸濃度を表している。陰性試料投与群に比して、試験試料１および試験試料２を投与することにより、ともに血清中の遊離脂肪酸値が８１．１％に低下する傾向が確認された。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、全身的に遊離脂肪酸濃度が低下し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。【０１０２】
【表１】
2007043305.tif 000021
【実施例２】
【０１０３】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による脂肪組織中の各細胞からのＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の産生量への影響を評価するために行った。【０１０４】
（１）試料の調製
本実施例２の試料には、前記実施例１で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。【０１０５】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採取した精巣周囲の脂肪１ｇに、０．５％ウシ血清アルブミンを含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ１２培地を１．５ｍｌ添加し、３７℃で培養した。培養１時間後に回収した培養上清中のＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の濃度を、ＥＬＩＳＡ法（バイオソース社製）にて測定した。【０１０６】
（３）結果（ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１産生量）
表２は脂肪組織からのＴＮＦ−αの産生量を表している。また、表３は同様にＭＣＰ−１の産生量を表している。いずれの結果からも明らかなとおり、陰性試料投与群に比して試験試料１及び試験試料２を投与した群は、いずれもＴＮＦ−α、及びＭＣＰ−１ともに、有意な産生抑制効果が確認された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、インスリン抵抗性を増悪させる脂肪組織中でのアディポサイトカインの産生が低減し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。なお、表中のｐ値はTukey-Kramer's testによる有意確率を示している。【０１０７】
【表２】
2007043305.tif 000022
【０１０８】
【表３】
2007043305.tif 000023
【実施例３】
【０１０９】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、インスリン負荷試験を行うことにより、本発明のインスリン抵抗性改善剤のインスリン感受性の亢進作用を確認するために行った。【０１１０】
（１）試料の調製
本実施例３の試料には、前記実施例１又は２で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。【０１１１】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から４５日目にインスリン負荷試験を行った。本実施例におけるインスリン負荷試験は、マウスを４時間絶食させた後、ヒト・インスリン（イーライリリー社製）を０．７５Ｕ／ｋｇ体重の用量で腹腔内投与し、インスリン投与開始から６０分経
過時まで経時的に血糖値の変化を測定することにより行った。【０１１２】
（３）結果（インスリン負荷試験）
本実施例の結果は図１に示すとおりである。図１は、インスリン負荷試験の結果を表している。図１から明らかなとおり、陰性試料を投与した群はインスリン投与開始から１５分間は血糖値の低下が認められないのに対し、試験試料１及び試験試料２を投与した群の血糖値は、いずれもインスリン投与開始から血糖値の速やかな低下が観察された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤の投与により、インスリン感受性を亢進させることが判明した。
【産業上の利用の可能性】
【０１１３】
本発明は、副作用を伴わず、インスリン感受性の亢進が可能な安全なインスリン抵抗性改善剤、及び前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することが可能であって、インスリン感受性の低下により引き起こされる疾患、合併症等、例えば高血圧、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等の生活習慣病の改善又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減する効果も兼ね備えている。
【図１】
2007043305.tif 000033
【手続補正書】
【提出日】平成20年1月31日(2008.1.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【化１】
2007043305.tif 000034
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【化２】
2007043305.tif 000035
【請求項２】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項１に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【化３】
2007043305.tif 000036
【請求項３】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項２に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項４】
前記化合物を少なくとも０．００１質量％含有する請求項１〜３のいずれか一項に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項５】
下記の一般式（１）で表される化合物を含む植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物が下記の一般式（１）で表される化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【化４】
2007043305.tif 000037
【請求項６】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項５に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項７】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項５又は６に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【化５】
2007043305.tif 000038
【請求項８】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項７に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか一項に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品。
【請求項１０】
前記一般式（１）で示される化合物を０．０００１質量％以上含む請求項９に記載の飲食品。
【請求項１１】
下記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を配合することを特徴とする、インスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【化６】
2007043305.tif 000039
【請求項１２】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項１１に記載のインスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【請求項１３】
前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基である、請求項１１又は１２に記載のインスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【化７】
2007043305.tif 000040
【請求項１４】
前記化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである、請求項１３に記載のインスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。さらに詳しくは、インスリン抵抗性に関わる病態の発症及び重篤化に関与する因子である遊離脂肪酸、プラスミノーゲン活性化阻止因子、腫瘍壊死因子、モノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１、レジスチン等のアディポサイトカインの産生調節効果を有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島（ラ氏島）内にあるβ細胞から産生されるホルモンの一種であり、骨格筋、肝臓、脂肪等のインスリン標的組織に存在するインスリン受容体を介して、糖代謝のみならず、脂質代謝及び蛋白質代謝に作用し、生体の恒常性の維持に重要な役割を担っている。各標的組織におけるインスリンの作用としては、筋肉細胞や脂肪細胞への血液中のグルコースの取り込み促進や、肝臓および筋肉組織でのグリコーゲン産生の促進、肝臓における糖新生の抑制、脂肪細胞におけるグルコース消費と脂肪酸合成の促進および脂質の分解抑制等が挙げられる。
【０００３】
インスリン抵抗性とは、細胞、臓器、個体レベルでインスリンの各種の作用を得るのに通常量以上のインスリンを必要とする状態、すなわち、インスリンに対する感受性が低下したインスリン作用不全状態のことである。これまでの疫学的検討の結果から、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等が、インスリン抵抗性に基づく病態であると考えられている。インスリン抵抗性に陥ると、糖代謝におけるインスリンの作用不足から、血糖維持のための代償性の高インスリン血症を生じ、高血糖や耐糖能障害が引き起こされるとともに、膵β細胞の疲弊により糖尿病が進行する。また高インスリン血症は、交感神経活性亢進や腎臓におけるナトリウム吸収を促進して高血圧を発症させるとともに、食後高脂血症や高尿酸血症、プラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１；plasminogen activator inhibitor-1）の上昇等も誘導する。
【０００４】
一方、インスリン抵抗性は、インスリンの作用不足による脂質代謝異常を誘導し、脂肪細胞から放出された遊離脂肪酸（ＦＦＡ；free fatty acid）が肝臓で増加して肝臓におけるトリグリセリド（ＴＧ）の合成が促進され、高ＴＧ血症となる。また、通常はインスリン感受性の高いリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）が、インスリン抵抗性状態では活性が低下することから、ＴＧの分解が減少し、高ＴＧ血症の悪化が進む。さらに、糖尿病の進行に伴い、血管障害による網膜症や腎症、壊疽等の合併症が併発し、動脈硬化性疾患である心筋梗塞、脳梗塞が進展し、また高血圧は循環器疾患を進行させる。以上のことから、インスリン抵抗性が複合的な病態の悪化に大きく関与していると考えられている（非特許文献１）。
【０００５】
近年、臓器特異的な遺伝子発現の解析が行われた結果、脂肪組織から様々な生理活性物質が分泌されていることが明らかとなり、脂肪組織は単なるエネルギー貯蔵組織ではなく、生体内最大の内分泌臓器として認識されるようになった。このような脂肪組織由来の内分泌因子は、総称してアディポサイトカインと呼ばれ、代謝における恒常性の維持に重要な役割を果たしているが、肥満すなわち、脂肪蓄積状態においては、その産生・分泌が過剰又は過小となり、バランスが破綻することによって、インスリン抵抗性が引き起こされると考えられている。
【０００６】
アディポサイトカインには、インスリン感受性を亢進させるものと、インスリン抵抗性を惹起させるものがあり、前者の代表的なものとして、アディポネクチン、レプチン、ＡＭＰＫ（AMP-dependent protein kinase）等が知られている。特にアディポネクチンについては、インスリン抵抗性の解除作用や、肝臓における糖新生抑制作用が報告されている（非特許文献２）。
【０００７】
一方、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインとしては、上記のＦＦＡやＰＡＩ−１の他に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α；tumor necrosis factor-α）、炎症性ケモカインの一種であるモノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１（ＭＣＰ−１；monocyte chemoattractant protein-1）、レジスチン等が挙げられる。なかでも、ＴＮＦ−αは、インスリンシグナル伝達機構における、インスリン受容体及びＩＲＳ１（insulin receptor substrate 1）のチロシンリン酸化を阻害し、インスリン作用を減弱させることにより、インスリン抵抗性を惹起させるという作用機構が報告されている。また、インスリン抵抗性状態においては、ＭＣＰ−１の体内レベルが上昇し、これに伴い、糖輸送担体ＧＬＵＴ４（glucose transporter-4）、核内受容体であるＰＰＡＲγ（peroxisome proliferator-activated receptor γ）、脂肪細胞のβ型カテコールアミン受容体の一種であるβ３ＡＲ（β3-adrenergic receptor）、脂肪酸結合タンパク質ａＰ２（adipocyte fatty-acid-binding protein 2）のｍＲＮＡが低下することが報告されていることから、ＭＣＰ−１がインスリン感受性を低下させる原因物質であると考えられている（非特許文献３、４、５）。
【０００８】
インスリン抵抗性を改善する薬剤としては、主に肝臓における糖新生を抑制するビグアナイド剤と筋肉や脂肪組織のインスリン感受性を改善させるチアゾリジン誘導体が開発されている。これらの薬剤は、既に糖尿病治療薬として認可されており、動脈硬化症の治療にも使用されている。トログリタゾンやピオグリタゾンに代表される、チアゾリジン誘導体は、核内受容体型転写因子であるペルオキソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ；peroxysome proliferator-activated receptor）のリガンドとして作用し、脂肪細胞の分化を促進させることによりインスリン抵抗性を改善すると考えられている。
【０００９】
このほかにも、アディポネクチン又はそれらの遺伝子を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献１）、ボンベシン受容体サブタイプ３（ＢＲＳ−３）に親和性を有する物質を有効成分とするインスリン抵抗性に起因する疾患の予防及び／治療剤（特許文献２）、ピロール誘導体を有効成分とする遊離脂肪酸（ＦＦＡ）低下剤（特許文献３）等が、それぞれインスリン抵抗性改善剤として開示されている。さらに、食品由来の物質を有効成分とするものとして、酢酸およびそのイオン又は塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善用組成物（特許文献４）、特定のジグリセリド及び／又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献５）等が開示されている。
【００１０】
β−シトステロールやカンペステロール、スティグマステロール等の植物ステロール類には、コレステロールの吸収阻害による血中コレステロール低下効果が既に知られており、油脂組成物として食用油に添加するなどの実用化が行われている。また、β−シトステロールやカンペステロールなどの植物ステロール類を出発物質として合成されるコレステノン化合物を有効成分として含有する抗肥満剤及び脂質代謝改善剤が開示されている（特許文献６〜８、非特許文献６）。
【００１１】
さらに、米糠、シメジ、キク、ライ麦、シラカバ及び月桃のうち少なくとも一種から抽出された抽出物ならびに、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノール及び／若しくは（２４Ｓ）−２４、２５−ジヒドロキシシクロアルタノールを含有するアディポネクチン分泌促進剤が開示されている（特許文献９）。
【００１２】
ユリ科植物であるアロエ属は、アロエベラ（Aloe barbadenisis Miller）やキダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）等を含む植物群であり、様々な効能があることが経験的に知られている。例えば、アロエ抽出物のブタノール画分又はアロインを含有することを特徴とする免疫抑制改善剤（特許文献１０）、血糖値改善に関するもの（特許文献１１〜１４）、及び肥満の予防改善剤（特許文献１５）等が開示されて
いるが、アロエ属植物によるインスリン抵抗性改善作用については、一切報告されていなかった。
【００１３】
【特許文献１】国際公開２００３／６３８９４号パンフレット
【特許文献２】特開平１０−２９８１００公報
【特許文献３】特開平８−１２５７３公報
【特許文献４】特開２００２−１９３７９７公報
【特許文献５】特開２００１−２４７４７３公報
【特許文献６】特開平７−１６５５８７号公報
【特許文献７】特開平１１−１９３２９６号公報
【特許文献８】特開２００１−２４０５４４号公報
【特許文献９】特開２００５−６８１３２号公報
【特許文献１０】特開平８−２０８４９５号公報
【特許文献１１】特開昭５９−２１４７４１号公報
【特許文献１２】特開２００３−２８６１８５号公報
【特許文献１３】米国特許第４５９８０６９号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００３／０２０７８１８号明細書
【特許文献１５】特開２０００−３１９１９０号公報
【非特許文献１】インスリン抵抗性と生活習慣病、島本和明編集、診断と治療社、２００３年、第１〜５頁
【非特許文献２】アディポサイエンス（Adiposcience）、第１巻、第３号、２００４年、第２４７〜２５７頁
【非特許文献３】プロシーディングス・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ（Proceedings of the National Academy of Sciences）、第１００巻、２００３年、第７２６５〜７２７０頁
【非特許文献４】ネイチャー（Nature）、第３８９巻、１９９７年、第６１０〜６１４頁
【非特許文献５】ザ・ネザーランズ・ジャーナル・オブ・メディシン（The Netherlands Journal of Medicine）、第６巻、第６号、２００３年、第１９４〜２１２頁
【非特許文献６】ホルモン・メタボリスム・リサーチ（Hormone Metabolism Research）、第３７巻、２００５年、第７９〜８３頁
【発明の開示】
【００１４】
しかしながら、従来のインスリン抵抗性を改善する薬剤であるビグアナイド剤では、胃腸障害やまれに乳酸アシドーシスを起こすことがあった。また、同薬剤であるチアゾリジン誘導体では、体液貯留や体重増加、肝機能障害等の重篤な副作用を起こすことがあるため、使用に際して注意を必要としていた。さらに、糖尿病又は高血糖ではない状態における、インスリン抵抗性に対しては、現実的に糖尿病薬を使用するのは困難であった。このような状況から、安全性に優れ、日常的に摂取でき、可能な限り苦痛を伴うことなく、効率よくインスリン抵抗性を改善できるような機能性素材の開発が切望されていた。
【００１５】
本発明者らは、前記課題に鑑み、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等の生活習慣病に至るインスリン抵抗性について、その疾患のメカニズムと予防・改善等に関与する薬剤、すなわちインスリン抵抗性改善剤について研究する中で、インスリン抵抗性の発症および重篤化に関与する因子であるアディポサイトカインについて着目し、これら因子を制御することによってインスリン抵抗性を改善できる新規機能性素材について鋭意検討した結果、シクロラノスタン骨格を持つ化合物に、遊離脂肪酸、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１等のアディポサイトカインの産生を調節する作用、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生を効果的に低減する作用を見いだし、これによってインスリン抵抗性が改善されることを明らかにした。
【００１６】
このような本発明の作用効果に対して、前記特許文献９においては、上記植物抽出物の培養脂肪細胞の分化予防効果、シクロアルタン型トリテルペン誘導体の合成経路、及びエルゴステロールのアディポネクチンの分泌促進について示されているものの、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノールによるアディポネクチン分泌に関する記載は無く、本発明の有効成分におけるインスリン抵抗性改善作用に関する記述は一切記載も示唆もされていなかった。
【００１７】
また、従来のインスリン抵抗性を評価する方法であるグルコースクランプ法、ＳＳＰＧ（Steady state plasma glucose）法、ミニマルモデル法とは別に、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いて検討したことにより、シクロラノスタン骨格を持つ化合物が、インスリン分泌能等を介さず、インスリン抵抗性をより直接的に改善していることを明らかにした。
【００１８】
このようなインスリントレランステストについては、前記特許文献１〜５には実施されておらず、インスリン分泌能等の影響を受けずにインスリン抵抗性を改善するという、従来のインスリン抵抗性の改善効果に比して極めて有利な効果を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１９】
本発明の目的は、前記シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することである。
【００２０】
前記課題を解決する本願第一の発明は、下記の一般式（１）で示される化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２１】
【化１】
2007043305.tif 000041
【００２２】
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【００２３】
【化２】
2007043305.tif 000042
【００２４】
また、以下の１）〜３）を好ましい態様としている。
１）前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であること、
【００２５】
【化３】
2007043305.tif 000043
【００２６】
２）前記１）の化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールであること、
【００２７】
３）前記１）又は２）の化合物を少なくとも０．００１質量％を含有すること。
【００２８】
前記課題を解決する本願第二の発明は、下記の一般式（１）で表される化合物を含む植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物が下記の一般式（１）で表される化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２９】
【化４】
2007043305.tif 000044
【００３０】
（式中、Ｒ１は、炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはヒドロキシル基および／またはカルボニル基を１つまたは２つ含む置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。）
【００３１】
【化５】
2007043305.tif 000045
【００３２】
また、以下の４）〜６）を好ましい態様としている。
４）前記植物がユリ科又はイネ科の植物であること、
【００３３】
５）前記Ｒ１が下記式のいずれかで表され、前記Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であること、
【００３４】
【化６】
2007043305.tif 000046
【００３５】
６）前記５）の化合物が、９，１９−シクロラノスタン−３−オール、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールであること。
【００３６】
前記課題を解決する本願第三の発明は、前記第一又は第二の発明に記載のインスリン抵抗性改善剤を含有する飲食品である。
また、以下の７)を好ましい態様としている。
７）飲食品が、前記一般式（１）で示される化合物を０．０００１質量％以上含むこと。
【００３７】
前記課題を解決する本願第四の発明は、インスリン抵抗性改善剤の製造のための前記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物の使用である。
【００３８】
前記課題を解決する本願第五の発明は、インスリン抵抗性を改善する方法であって、前記の一般式（１）で表される化合物、若しくは該化合物を乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物を、インスリン抵抗性を改善しようとする対象に投与することを特徴とする方法である。
本発明の上記使用及び方法における一般式（１）で表される化合物の好ましい態様は、本願第二の発明と同様である。
【００３９】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、安全に投与又は摂取が可能であって、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の予防効果を有する。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分は、食経験上安全に摂取でき、入手容易であるユリ科植物等、例えばアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）から簡便に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００４１】
本発明のインスリン抵抗性改善剤（以下、「本発明の医薬」ともいう）の有効成分とし
て用いる化合物は、前記一般式（１）で表される構造をもつ化合物であって、インスリン抵抗性改善作用を有する化合物（以下、「本発明の化合物」ともいう）であれば、いずれの誘導体等も有効成分として含まれる。
【００４２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いられる本発明の化合物の純度は、１００％であることが最も好ましいが、インスリン抵抗性を改善する作用を有する範囲で適宜設定することが可能である。
【００４３】
また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いる組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）は、前記一般式（１）で表される構造をもつ化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上含む、ユリ科植物又はイネ科植物の抽出物又はその分画物である。本発明の化合物の含有量の上限は特に制限されないが、１０質量％が好ましく、５０質量％若しくは７０質量％、又は９０質量％が例示できる。
【００４４】
なお、本発明において乾燥質量とは、第十四改正日本薬局方（平成１３年３月３０日厚生労働省告示第１１１号）における一般試験法「乾燥減量試験法」において規定される乾燥方法によって、化合物を乾燥した後に測定した質量であって、例えば、本発明の化合物を約１ｇ分取し、これを１０５℃で４時間乾燥し、デシケーター内で放冷して、はかりにてその質量を測定することによって規定することが可能である。
【００４５】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品の一つの形態は、シクロラノスタン骨格を持つ化合物であって、インスリン抵抗性改善作用を持つ化合物を有効成分として含むものである。シクロラノスタン骨格とは、下記一般式（２）で表される化合物をいう。
【００４６】
【化７】
2007043305.tif 000047
【００４７】
シクロラノスタン骨格を持つ化合物として具体的には、前記一般式（１）で表される化合物が挙げられる。シクロラノスタン骨格を持つ化合物に存在する二重結合の数は特に限定されない。また、環内に存在する二重結合の数も限定されず、２個以上の二重結合が存在する場合にはそれらは共役していてもよい。なお、本発明の医薬又は飲食品は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。
【００４８】
本発明の化合物は、前記一般式（１）において、Ｒ１は炭素原子数６〜８の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基、２重結合を１つまたは２つ含むアルケニル基、もしくはこれらのアルキル基およびアルケニル基の水素原子の１つまたは２つがヒドロキシル基および／
またはカルボニル基で置換された置換アルキル基または置換アルケニル基であり、Ｒ２、Ｒ３は各々独立に水素原子又はメチル基であり、Ｒ４は環を構成する炭素原子とともにＣ＝Ｏを形成するか、又は、下記式のいずれかである。
【００４９】
【化８】
2007043305.tif 000048
【００５０】
前記一般式（１）において、Ｒ１は、下記式で表される基のいずれかであることが好ましい。
【００５１】
【化９】
2007043305.tif 000049
【００５２】
また、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がいずれもメチル基であり、かつ、前記Ｒ４がヒドロキシル基であることが好ましい。前記化合物として最も好ましい化合物は、下記式で表される９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（３））、または２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（４））である。
【００５３】
【化１０】
2007043305.tif 000050
【００５４】
【化１１】
2007043305.tif 000051
【００５５】
すなわち、９，１９−シクロラノスタン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であって、Ｒ１が前記式（i）で表される基である。２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールは、前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であって、Ｒ１が前記式（vi）で表される基である。
【００５６】
本発明の化合物は、シクロアルテノール（式（５））、または２４−メチルシクロアルタノール（式（７））であってもよい。これらの化合物はいずれも前記一般式（１）において、Ｒ２及びＲ３がメチル基であり、Ｒ４がヒドロキシル基であるが、Ｒ１については、シクロアルテノールが前記式（vii）で表される基であり、２４−メチルシクロアルタノールは前記式（ii）（Ｒａ＝ＣＨ3、Ｒｂ＝Ｈ）で表される基である。
【００５７】
本発明の化合物は、公知の製造方法に準じて化学的に製造することができる。たとえば、シクロアルテノール（式（５））および２４−メチレンシクロアルタノール（２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの慣用名である）（式４）の製造法については特開昭５７−０１８６１７号公報にて開示され、ガンマ−オリザノールからのシクロアルテノールフェルレート（式６）の製造法およびこの加水分解物を出発物質とした化合物の合成法について、特開２００３−２７７２６９号公報に開示されている。また、さらに一般式（１）のＲ１部分に二重結合を含むものは、二重結合部分をオゾン分解反応でアルデヒドにして、それにフォスフォン塩を結合させる手法また、二重結合物に水素添加する手法あるいは、二重結合部分をオゾン酸化を行い、アルデヒドもしくは酸に転換する手法を用いた場合、様々な誘導体化合物の製造が可能になる。また製造方法は化学的な
合成方法に限定されるものでなく、微生物等を利用して生物学的に製造してもよい。あるいは微生物由来の酵素を用いて製造しても良い。
【００５８】
【化１２】
2007043305.tif 000052
【００５９】
【化１３】
2007043305.tif 000053
【００６０】
【化１４】
2007043305.tif 000054
【００６１】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、前記化合物の一種を単独で含んでいてもよく、任意の２種類以上を含んでいてもよい。
【００６２】
シクロラノスタン骨格を持つ化合物は、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科およびバショウ科などの植物に含まれていることが知られている（〔フィトケミストリー（Phytochemistry）、米国、１９７７年、第１６巻、第１４０〜１４１ページ〕、〔ハンドブック・オ
ブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants）、１９９２年、米国、シーアールシープレス〕、又は〔ハーゲルズ・ハントブーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis）、第２〜６巻、１９６９〜１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン〕参照）。よって、これらの植物若しくはその一部又はそれらの破砕物から、有機溶媒抽出法または熱水抽出法などの方法を用いて抽出、濃縮することにより、製造することが可能である。
【００６３】
具体的には、前記ユリ科に属する植物としては、アロエ属又はアリウム属に属する植物が挙げられる。また、アロエ属植物としては、アロエベラ（Aloe barbadensis Miller）、アロエフェロックスミラー（Aloe ferox Miller）、アロエアフリカーナミラー（Aloe africana Miller）、キダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）、アロエスピカータベイカー（Aloe spicata Baker）等が挙げられる。本発明の化合物又はそれを含む組成物の製造においては、前記植物の全体を用いてもよいが、葉肉（透明ゲル部分）を用いることが好ましい。このような植物又はその一部を、好ましくはホモジナイザー等を用いて破砕して液状化し、有機溶媒又は熱水で抽出する。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ブタノール等のアルコール；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、石油エーテル等のエーテル；ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン等の炭化水素；四塩化炭素、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；ピリジン等の複素環化合物、エチレングリコール等のグリコール；ポリエチレングリコール等のポリアルコール；アセトニトリル等のニトリル溶媒、及びこれらの溶媒の混合液等が挙げられる。また、これらの溶媒は無水であってもよく、含水状態であってもよい。これらの溶媒の中では、酢酸エチル／ブタノール混合液（３：１）またはクロロホルム／メタノール混合液（２：１）が好ましい。
【００６４】
抽出方法としては、通常の植物成分の抽出に用いられる方法を用いることができる。通常、新鮮な植物又は乾燥植物１質量部に対し、有機溶媒１〜３００質量部を用いて、撹拌又は振盪しながら、溶媒の沸点以下の温度で加熱還流するか、常温で超音波抽出する方法が挙げられる。抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、不溶物を分離して粗抽出物を得ることができる。
【００６５】
抽出物は、各種クロマトグラフィー、例えば順相又は逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、精製することができる。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてクロロホルム／メタノール混合液のグラジエントを用いると、クロロホルム：メタノール＝２５：１程度で本発明の化合物が溶出される。また、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてヘキサン：酢酸エチル混合液（４：１）を用いると、本発明の化合物は最初の方のフラクションとして溶出される。得られたフラクションは、さらにＨＰＬＣ等により精製することができる。
【００６６】
また、本発明に用いる化合物は、化学的な合成法、又は、微生物又は酵素等を利用した生物学的方法又は酵素的方法によって製造してもよい。
【００６７】
上記のようにして得られる化合物又はそれを含む組成物が、本発明の化合物を含むことは、例えば、マススペクトル法（ＭＳ）及び核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）等によって確認することができる。
【００６８】
本発明の化合物は、そのまま本発明のインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用することが可能である。また、本発明の化合物を含む、植物の
有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物（以下、「抽出物等」と呼ぶ）をインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用してもよい。なお、植物としてユリ科に属するアロエベラを使用した場合は、アロエベラ葉の外皮に多く含有するアロイン及びアロエエモジンの含有量の合計は、５ｐｐｍ以下であることが好ましい。
【００６９】
インスリン抵抗性改善剤に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含んでいることが好ましく、０．０１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．０５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。また、飲食品に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．０００１質量％含んでいることが好ましく、０．００１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．００５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。前記抽出物等は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。また、前記抽出物等は、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存ないし使用することもできる。
【００７０】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の組成物をそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。尚、本発明のインスリン抵抗性改善剤において、本発明の化合物は医薬に許容される塩にすることもできる。医薬に許容可能な塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、第１４１８頁、１９８５年」に掲載されているものが例示される。具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩および臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩とすることもできる。また、上記化合物もしくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も本発明に含まれる。
【００７１】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常のインスリン抵抗性改善用医薬に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等と、他のインスリン抵抗性改善作用を有する医薬とを併用してもよい。
【００７２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、製剤中に少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１〜１質量％、特に好ましくは０．０５〜１質量％とするのがよい。
【００７３】
本発明において、インスリン抵抗性改善作用（インスリン感受性亢進作用）とは、インスリン感受性の低下に起因して導かれる種々の健康への害、例えば生活習慣病等を予防又は改善する作用を意味する。具体的にはプラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１）や遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、ＭＣＰ−１、レジスチン等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの上昇又は産生を効果的に抑制し、インスリン抵抗性に関わる病態のリスク低減、予防、改善、又は治療に効果を有する。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン感受性亢進剤、アディポサイトカイ
ン産生調節剤、特に、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカイン産生抑制剤と定義することが可能である。
【００７４】
インスリン抵抗性を評価する方法としては、グルコースクランプ法やＳＳＰＧ（Steady
state plasma glucose）法、ミニマルモデル法、空腹時の血糖値と血中インスリン濃度からＨＯＭＡ−ＩＲ（homeostasis model assessment insulin resistance）指数を算出して判定する方法、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）が例示され、いずれの方法であってもインスリン抵抗性を評価することは可能であるが、本発明において、インスリン分泌能等の影響を受けず、インスリン感受性についてより直接的に検討できる、動物を使用したインスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いることが好ましい。
【００７５】
本発明の化合物は、インスリン感受性を高める作用を有し、その結果、インスリン抵抗性に起因する病態の予防又は改善をすることが可能である。したがって、インスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として使用することができる。なお、インスリン感受性については、インスリン投与後の血糖値の低下反応を測定することにより評価することも可能である。
【００７６】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性に起因する種々の疾病・合併症等の予防および改善、あるいは治療、並びにこれらの疾病・合併症等のリスクを低減することが可能である。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性が健常人より低下した状態の患者に対して、好適に使用することが可能である。なお、インスリン抵抗性とは、一般的には空腹時血漿インスリン値が１０〜１５μＵ／ｍｌ以上、ＨＯＭＡ指数が１．７３以上の状態とされている。
【００７７】
かかるインスリン抵抗性に起因する種々の疾病としては、高血圧、高脂血症、糖尿病、耐糖能異常、動脈硬化症、高インスリン血症、肥満等を例示することができる。また、これらの疾患に起因する合併症としては、イ）高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全、ロ）高脂血症による動脈硬化、膵炎、ハ）糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、ニ）動脈硬化症による脳卒中、脳梗塞、狭心症及び心筋梗塞等の心血管疾患、尿毒症、腎硬化症及び腎不全等の腎症等、をそれぞれ例示することができる。尚、本発明者らは、本発明の化合物が、ヘモグロビンＡ１ｃ値を低下させ、高血糖を改善する作用を有することを見出している（国際公開２００６／０３５５２５号）。本発明のインスリン抵抗性改善剤が適用される疾病は、ヘモグロビンＡ１ｃの値が健常人より高い状態にあるものではないことが好ましい。
【００７８】
また、本発明においてインスリン抵抗性の改善効果を例示するものとしては、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＦＦＡ等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生・上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイトカインの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、膵炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等を予防及び／又は改善する効果も兼ね備えている。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、前記アディポサイトカインの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生が亢進した状態の患者にも好適に使用することが可能である。
【００７９】
本発明の医薬の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。本発明の医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される
。通常有効成分としての本発明の化合物の量は、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日での範囲となる量を目安とするのが良い。また、本発明の化合物を含む抽出物等を用いる場合は、抽出物等の乾燥質量として０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日となるような量を目安とするのが良い。いずれの場合も、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。
【００８０】
本発明の化合物又はそれを含む組成物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させて、インスリン抵抗性改善効果を有する飲食品とすることが可能である。飲食品としては、前記有効成分の効果を損なわず、経口摂取できるものであれば、形態や性状は特に制限されず、前記有効成分を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。また、本発明の飲食品中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、飲食品中に少なくとも０．０００１質量％、好ましくは０．００１〜１質量％、特に好ましくは０．００５〜１質量％とするのがよい。
【００８１】
本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善効果を利用するような種々の用途をとることが可能である。例えば、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の危険要因の低減・除去に役立つ飲食品等の用途を例示することができる。また、本発明の飲食品は、インスリン抵抗性により引き起こされる疾患、例えば高血圧、高脂血症、糖尿病等の予防及びリスクを低減することが可能である。さらに、本発明の飲食品はインスリン抵抗性に起因する種々の合併症、例えば高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全また高脂血症による動脈硬化、膵炎等、糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、さらに、動脈硬化症による脳卒中や脳梗塞、狭心症や心筋梗塞などの心血管疾患、尿毒症、腎硬化症、腎不全などの腎症等、の予防及びリスクを低減することが可能である。
【００８２】
また、本発明の飲食品は、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＦＦＡ等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生・上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイトカインの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、膵炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等の予防及びリスクを低減する効果も兼ね備えている。よって、本発明の飲食品は、前記アディポサイトカインの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生が亢進した状態の患者にも好適に摂取することが可能である。
【００８３】
本発明の飲食品は、インスリン抵抗性改善のために用いられるものである旨の表示を付した飲食品、例えば「インスリン抵抗性改善用と表示された、インスリン抵抗性改善効果を有する化合物を含有する飲食品」、あるいは「インスリン抵抗性改善用と表示された、植物抽出物を含有する飲食品」、「インスリン抵抗性改善用と記載された、アロエベラ抽出物を含有する飲食品」、等として販売することが好ましい。尚、本発明の化合物又はそれを含む組成物等は、インスリン抵抗性改善作用を有することから、インスリン抵抗性改善の表示には、インスリン感受性を亢進する意味も有すると考えられる。したがって、本発明の飲食品は、「インスリン感受性亢進用」と表示することができる。すなわち、前記インスリン抵抗性改善用の表示とは、このような「インスリン感受性亢進用」の表示であってもよい。
【００８４】
尚、以上のような表示を行うために使用する文言は、「インスリン抵抗性改善用」、又は「インスリン感受性亢進用」という文言のみに限られるわけではなく、それ以外の文言であっても、インスリン感受性を亢進させ、又はインスリン抵抗性を予防、改善する効果を表す文言であれば、本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。そのような文言としては、例えば、需要者に対して、インスリン抵抗性改善又はインスリン感受性亢進の
効果を認識させるような種々の用途に基づく表示も可能である。例えば、「インスリン抵抗性傾向のある方に適した」、「生活習慣病の危険要因（リスク）の低減・除去に役立つ」等の表示を例示することができる。
【００８５】
前記「表示」とは、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為を意味し、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為、商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等が例示できる。一方、表示としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、特に包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等への表示が好ましい。
【００８６】
また、例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができ、その他厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。
【００８７】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００８８】
以下、シクロラノスタン骨格を持つ化合物の製造例を示す。
［製造例１］
９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（３））、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（４））、シクロアルテノール（式（５））、及び２４−メチルシクロアルタノール（式（７））は、以下の方法によって製造した。
【００８９】
【化１５】
2007043305.tif 000055
【００９０】
【化１６】
2007043305.tif 000056
【００９１】
【化１７】
2007043305.tif 000057
【００９２】
【化１８】
2007043305.tif 000058
【００９３】
γ−オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水２５０ｍｌ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、エタノール１５０ｍｌ、メタノール１５０ｍｌを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後、反応液を１３００ｍｌの水に注ぎ、生じた白色の析出物を吸引ろ過でろ取した。残存するアルカリを洗浄するために、ろ取した残渣を１０００ｍｌの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇの９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び１５４３ｍｇの２４−メチレン−９，１
９−シクロラノスタン−３−オールを得た。
【００９４】
得られた９，１９−シクロラノスタン−３−オールを用いて、シクロアルテノールの合成を行った。９，１９−シクロラノスタン−３−オール３０２ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉し、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。攪拌しながら過熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、シクロアルテノール２７５ｍｇを得た。２４−メチルシクロアルタノールの合成は、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを出発物質として行った。２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール７８ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、次いで、これをオートクレーブ内に密閉し、窒素ガスにて置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。そして攪拌しながら加熱し、５０℃となったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を５ｋｇ／ｃｍ2に保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、２４−メチルシクロアルタノール６９ｍｇを得た。
【００９５】
ユリ科植物であるアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）を出発原料とした、シクロラノスタン骨格化合物の抽出組成物の製造例を以下示す。
［製造例２］
１００ｋｇのアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）の外皮を取り除いた後、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００リットルの酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液（３：１）を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を回収した。酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を減圧下濃縮して得られた、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む抽出組成物の重量は、１３．５ｇであった。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は１０ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は７０ｍｇであった。
【００９６】
［製造例３］
１ｋｇのアロエベラ粉末にクロロホルム／メタノール混合液（２：１）１０リットルを添加し、室温にて一晩浸漬を行った後、クロロホルム／メタノール混合液を回収した。この混合液を２８℃にて有機溶媒を完全に除去して、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む組成物８３ｇを得た。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２５．８ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２４ｍｇであった。
【実施例１】
【００９７】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による血清中の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）量の変化を評価するために行った。
【００９８】
（１）試料の調製
前記製造例３で製造した９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールをそれぞれＤＭＳＯに溶解した後、濃度が１μｇ／ｍｌになるように蒸留水にて調製して、それぞれ試験試料１及び試験試料２とした。このときＤＭＳＯの最終濃度は０．２％になるように調整した。また、試験試料を含
まない溶液を陰性試料とした。
【００９９】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採血し、血清中の遊離脂肪酸量を、NEFA C-テストワコー（和光純薬工業社製）にて測定した。
【０１００】
（３）結果（血中遊離脂肪酸濃度）
表１は、投与開始から６０日目のマウス血清中の遊離脂肪酸濃度を表している。陰性試料投与群に比して、試験試料１および試験試料２を投与することにより、ともに血清中の遊離脂肪酸値が８１．１％に低下する傾向が確認された。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、全身的に遊離脂肪酸濃度が低下し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。
【０１０１】
【表１】
2007043305.tif 000059
【実施例２】
【０１０２】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による脂肪組織中の各細胞からのＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の産生量への影響を評価するために行った。
【０１０３】
（１）試料の調製
本実施例２の試料には、前記実施例１で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。
【０１０４】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採取した精巣周囲の脂肪１ｇに、０．５％ウシ血清アルブミンを含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ１２培地を１．５ｍｌ添加し、３７℃で培養した。培養１時間後に回収した培養上清中のＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の濃度を、ＥＬＩＳＡ法（バイオソース社製）にて測定した。
【０１０５】
（３）結果（ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１産生量）
表２は脂肪組織からのＴＮＦ−αの産生量を表している。また、表３は同様にＭＣＰ−
１の産生量を表している。いずれの結果からも明らかなとおり、陰性試料投与群に比して試験試料１及び試験試料２を投与した群は、いずれもＴＮＦ−α、及びＭＣＰ−１ともに、有意な産生抑制効果が確認された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、インスリン抵抗性を増悪させる脂肪組織中でのアディポサイトカインの産生が低減し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。なお、表中のｐ値はTukey-Kramer's testによる有意確率を示している。
【０１０６】
【表２】
2007043305.tif 000060
【０１０７】
【表３】
2007043305.tif 000061
【実施例３】
【０１０８】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、インスリン負荷試験を行うことにより、本発明のインスリン抵抗性改善剤のインスリン感受性の亢進作用を確認するために行った。
【０１０９】
（１）試料の調製
本実施例３の試料には、前記実施例１又は２で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。
【０１１０】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から４５日目にインスリン負荷試験を行った。本実施例におけるインスリン負荷試験は、マウスを４時間絶食させた後、ヒト・インスリン（イーライリリー社製）を０．７５Ｕ／ｋｇ体重の用量で腹腔内投与し、インスリン投与開始から６０分経
過時まで経時的に血糖値の変化を測定することにより行った。
【０１１１】
（３）結果（インスリン負荷試験）
本実施例の結果は図１に示すとおりである。図１は、インスリン負荷試験の結果を表している。図１から明らかなとおり、陰性試料を投与した群はインスリン投与開始から１５分間は血糖値の低下が認められないのに対し、試験試料１及び試験試料２を投与した群の血糖値は、いずれもインスリン投与開始から血糖値の速やかな低下が観察された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤の投与により、インスリン感受性を亢進させることが判明した。
【産業上の利用の可能性】
【０１１２】
本発明は、副作用を伴わず、インスリン感受性の亢進が可能な安全なインスリン抵抗性改善剤、及び前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することが可能であって、インスリン感受性の低下により引き起こされる疾患、合併症等、例えば高血圧、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等の生活習慣病の改善又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減する効果も兼ね備えている。
【図面の簡単な説明】
【０１１３】
【図１】インスリン負荷試験における血糖値の変動を示す図である。
【手続補正書】
【提出日】平成20年6月23日(2008.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び／又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【請求項２】
前記化合物を少なくとも０．００１質量％含有する請求項１に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項３】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールのいずれかを含む植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物が９，１９−シクロラノスタン−３−オール又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【請求項４】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの両方を含む植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物が９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥質量で少なくとも０．０１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤。
【請求項５】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項３又は４に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項６】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、又は９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールのいずれかを乾燥質量で少なくとも
０．００１質量％含有する植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を配合することを特徴とする、インスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【請求項７】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、又は９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥重量で合計で少なくとも０．０１質量％含有する植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を配合することを特徴とする、インスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【請求項８】
前記植物がユリ科又はイネ科の植物である請求項６又は７に記載のインスリン抵抗性改善剤の製造方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。さらに詳しくは、インスリン抵抗性に関わる病態の発症及び重篤化に関与する因子である遊離脂肪酸、プラスミノーゲン活性化阻止因子、腫瘍壊死因子、モノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１、レジスチン等のアディポサイトカインの産生調節効果を有するインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンは、膵臓のランゲルハンス島（ラ氏島）内にあるβ細胞から産生されるホルモンの一種であり、骨格筋、肝臓、脂肪等のインスリン標的組織に存在するインスリン受容体を介して、糖代謝のみならず、脂質代謝及び蛋白質代謝に作用し、生体の恒常性の維持に重要な役割を担っている。各標的組織におけるインスリンの作用としては、筋肉細胞や脂肪細胞への血液中のグルコースの取り込み促進や、肝臓および筋肉組織でのグリコーゲン産生の促進、肝臓における糖新生の抑制、脂肪細胞におけるグルコース消費と脂肪酸合成の促進および脂質の分解抑制等が挙げられる。
【０００３】
インスリン抵抗性とは、細胞、臓器、個体レベルでインスリンの各種の作用を得るのに通常量以上のインスリンを必要とする状態、すなわち、インスリンに対する感受性が低下したインスリン作用不全状態のことである。これまでの疫学的検討の結果から、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等が、インスリン抵抗性に基づく病態であると考えられている。インスリン抵抗性に陥ると、糖代謝におけるインスリンの作用不足から、血糖維持のための代償性の高インスリン血症を生じ、高血糖や耐糖能障害が引き起こされるとともに、膵β細胞の疲弊により糖尿病が進行する。また高インスリン血症は、交感神経活性亢進や腎臓におけるナトリウム吸収を促進して高血圧を発症させるとともに、食後高脂血症や高尿酸血症、プラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１；plasminogen activator inhibitor-1）の上昇等も誘導する。
【０００４】
一方、インスリン抵抗性は、インスリンの作用不足による脂質代謝異常を誘導し、脂肪
細胞から放出された遊離脂肪酸（ＦＦＡ；free fatty acid）が肝臓で増加して肝臓におけるトリグリセリド（ＴＧ）の合成が促進され、高ＴＧ血症となる。また、通常はインスリン感受性の高いリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）が、インスリン抵抗性状態では活性が低下することから、ＴＧの分解が減少し、高ＴＧ血症の悪化が進む。さらに、糖尿病の進行に伴い、血管障害による網膜症や腎症、壊疽等の合併症が併発し、動脈硬化性疾患である心筋梗塞、脳梗塞が進展し、また高血圧は循環器疾患を進行させる。以上のことから、インスリン抵抗性が複合的な病態の悪化に大きく関与していると考えられている（非特許文献１）。
【０００５】
近年、臓器特異的な遺伝子発現の解析が行われた結果、脂肪組織から様々な生理活性物質が分泌されていることが明らかとなり、脂肪組織は単なるエネルギー貯蔵組織ではなく、生体内最大の内分泌臓器として認識されるようになった。このような脂肪組織由来の内分泌因子は、総称してアディポサイトカインと呼ばれ、代謝における恒常性の維持に重要な役割を果たしているが、肥満すなわち、脂肪蓄積状態においては、その産生・分泌が過剰又は過小となり、バランスが破綻することによって、インスリン抵抗性が引き起こされると考えられている。
【０００６】
アディポサイトカインには、インスリン感受性を亢進させるものと、インスリン抵抗性を惹起させるものがあり、前者の代表的なものとして、アディポネクチン、レプチン、ＡＭＰＫ（AMP-dependent protein kinase）等が知られている。特にアディポネクチンについては、インスリン抵抗性の解除作用や、肝臓における糖新生抑制作用が報告されている（非特許文献２）。
【０００７】
一方、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインとしては、上記のＦＦＡやＰＡＩ−１の他に、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α；tumor necrosis factor-α）、炎症性ケモカインの一種であるモノサイト・ケモアトラクタント・プロテイン−１（ＭＣＰ−１；monocyte chemoattractant protein-1）、レジスチン等が挙げられる。なかでも、ＴＮＦ−αは、インスリンシグナル伝達機構における、インスリン受容体及びＩＲＳ１（insulin receptor substrate 1）のチロシンリン酸化を阻害し、インスリン作用を減弱させることにより、インスリン抵抗性を惹起させるという作用機構が報告されている。また、インスリン抵抗性状態においては、ＭＣＰ−１の体内レベルが上昇し、これに伴い、糖輸送担体ＧＬＵＴ４（glucose transporter-4）、核内受容体であるＰＰＡＲγ（peroxisome proliferator-activated receptor γ）、脂肪細胞のβ型カテコールアミン受容体の一種であるβ３ＡＲ（β3-adrenergic receptor）、脂肪酸結合タンパク質ａＰ２（adipocyte fatty-acid-binding protein 2）のｍＲＮＡが低下することが報告されていることから、ＭＣＰ−１がインスリン感受性を低下させる原因物質であると考えられている（非特許文献３、４、５）。
【０００８】
インスリン抵抗性を改善する薬剤としては、主に肝臓における糖新生を抑制するビグアナイド剤と筋肉や脂肪組織のインスリン感受性を改善させるチアゾリジン誘導体が開発されている。これらの薬剤は、既に糖尿病治療薬として認可されており、動脈硬化症の治療にも使用されている。トログリタゾンやピオグリタゾンに代表される、チアゾリジン誘導体は、核内受容体型転写因子であるペルオキソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ；peroxysome proliferator-activated receptor）のリガンドとして作用し、脂肪細胞の分化を促進させることによりインスリン抵抗性を改善すると考えられている。
【０００９】
このほかにも、アディポネクチン又はそれらの遺伝子を有効成分とするインスリン抵抗性改善剤（特許文献１）、ボンベシン受容体サブタイプ３（ＢＲＳ−３）に親和性を有する物質を有効成分とするインスリン抵抗性に起因する疾患の予防及び／治療剤（特許文献２）、ピロール誘導体を有効成分とする遊離脂肪酸（ＦＦＡ）低下剤（特許文献３）等が
、それぞれインスリン抵抗性改善剤として開示されている。さらに、食品由来の物質を有効成分とするものとして、酢酸およびそのイオン又は塩を有効成分とするインスリン抵抗性改善用組成物（特許文献４）、特定のジグリセリド及び／又はモノグリセリドを含有する油脂からなるインスリン抵抗性改善剤（特許文献５）等が開示されている。
【００１０】
β−シトステロールやカンペステロール、スティグマステロール等の植物ステロール類には、コレステロールの吸収阻害による血中コレステロール低下効果が既に知られており、油脂組成物として食用油に添加するなどの実用化が行われている。また、β−シトステロールやカンペステロールなどの植物ステロール類を出発物質として合成されるコレステノン化合物を有効成分として含有する抗肥満剤及び脂質代謝改善剤が開示されている（特許文献６〜８、非特許文献６）。
【００１１】
さらに、米糠、シメジ、キク、ライ麦、シラカバ及び月桃のうち少なくとも一種から抽出された抽出物ならびに、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノール及び／若しくは（２４Ｓ）−２４、２５−ジヒドロキシシクロアルタノールを含有するアディポネクチン分泌促進剤が開示されている（特許文献９）。
【００１２】
ユリ科植物であるアロエ属は、アロエベラ（Aloe barbadenisis Miller）やキダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）等を含む植物群であり、様々な効能があることが経験的に知られている。例えば、アロエ抽出物のブタノール画分又はアロインを含有することを特徴とする免疫抑制改善剤（特許文献１０）、血糖値改善に関するもの（特許文献１１〜１４）、及び肥満の予防改善剤（特許文献１５）等が開示されているが、アロエ属植物によるインスリン抵抗性改善作用については、一切報告されていなかった。
【００１３】
【特許文献１】国際公開２００３／６３８９４号パンフレット
【特許文献２】特開平１０−２９８１００公報
【特許文献３】特開平８−１２５７３公報
【特許文献４】特開２００２−１９３７９７公報
【特許文献５】特開２００１−２４７４７３公報
【特許文献６】特開平７−１６５５８７号公報
【特許文献７】特開平１１−１９３２９６号公報
【特許文献８】特開２００１−２４０５４４号公報
【特許文献９】特開２００５−６８１３２号公報
【特許文献１０】特開平８−２０８４９５号公報
【特許文献１１】特開昭５９−２１４７４１号公報
【特許文献１２】特開２００３−２８６１８５号公報
【特許文献１３】米国特許第４５９８０６９号明細書
【特許文献１４】米国特許出願公開第２００３／０２０７８１８号明細書
【特許文献１５】特開２０００−３１９１９０号公報
【非特許文献１】インスリン抵抗性と生活習慣病、島本和明編集、診断と治療社、２００３年、第１〜５頁
【非特許文献２】アディポサイエンス（Adiposcience）、第１巻、第３号、２００４年、第２４７〜２５７頁
【非特許文献３】プロシーディングス・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ（Proceedings of the National Academy of Sciences）、第１００巻、２００３年、第７２６５〜７２７０頁
【非特許文献４】ネイチャー（Nature）、第３８９巻、１９９７年、第６１０〜６１４頁
【非特許文献５】ザ・ネザーランズ・ジャーナル・オブ・メディシン（The Netherlands Journal of Medicine）、第６巻、第６号、２００３年、第１９４〜２１２頁
【非特許文献６】ホルモン・メタボリスム・リサーチ（Hormone Metabolism Research）、第３７巻、２００５年、第７９〜８３頁
【発明の開示】
【００１４】
しかしながら、従来のインスリン抵抗性を改善する薬剤であるビグアナイド剤では、胃腸障害やまれに乳酸アシドーシスを起こすことがあった。また、同薬剤であるチアゾリジン誘導体では、体液貯留や体重増加、肝機能障害等の重篤な副作用を起こすことがあるため、使用に際して注意を必要としていた。さらに、糖尿病又は高血糖ではない状態における、インスリン抵抗性に対しては、現実的に糖尿病薬を使用するのは困難であった。このような状況から、安全性に優れ、日常的に摂取でき、可能な限り苦痛を伴うことなく、効率よくインスリン抵抗性を改善できるような機能性素材の開発が切望されていた。
【００１５】
本発明者らは、前記課題に鑑み、高血圧、糖尿病、高脂血症（高トリグリセリド血症、低ＨＤＬコレステロール血症）、肥満等の生活習慣病に至るインスリン抵抗性について、その疾患のメカニズムと予防・改善等に関与する薬剤、すなわちインスリン抵抗性改善剤について研究する中で、インスリン抵抗性の発症および重篤化に関与する因子であるアディポサイトカインについて着目し、これら因子を制御することによってインスリン抵抗性を改善できる新規機能性素材について鋭意検討した結果、シクロラノスタン骨格を持つ化合物に、遊離脂肪酸、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１等のアディポサイトカインの産生を調節する作用、特にインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生を効果的に低減する作用を見いだし、これによってインスリン抵抗性が改善されることを明らかにした。
【００１６】
このような本発明の作用効果に対して、前記特許文献９においては、上記植物抽出物の培養脂肪細胞の分化予防効果、シクロアルタン型トリテルペン誘導体の合成経路、及びエルゴステロールのアディポネクチンの分泌促進について示されているものの、シクロアルタン型トリテルペン又はその誘導体であるシクロアルテノールによるアディポネクチン分泌に関する記載は無く、本発明の有効成分におけるインスリン抵抗性改善作用に関する記述は一切記載も示唆もされていなかった。
【００１７】
また、従来のインスリン抵抗性を評価する方法であるグルコースクランプ法、ＳＳＰＧ（Steady state plasma glucose）法、ミニマルモデル法とは別に、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いて検討したことにより、シクロラノスタン骨格を持つ化合物が、インスリン分泌能等を介さず、インスリン抵抗性をより直接的に改善していることを明らかにした。
【００１８】
このようなインスリントレランステストについては、前記特許文献１〜５には実施されておらず、インスリン分泌能等の影響を受けずにインスリン抵抗性を改善するという、従来のインスリン抵抗性の改善効果に比して極めて有利な効果を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１９】
本発明の目的は、前記シクロラノスタン骨格を持つ化合物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤を提供することである。また、本発明の他の目的は、前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することである。
【００２０】
前記課題を解決する本願第一の発明は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び／又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２１】
３）前記１）又は２）の化合物を少なくとも０．００１質量％を含有すること。
【００２２】
前記課題を解決する本願第二の発明は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールのいずれかを含む植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物が９，１９−シクロラノスタン−３−オール又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
【００２３】
また、前記植物がユリ科又はイネ科の植物であることを好ましい態様としている。
【００２４】
前記課題を解決する本願第三の発明は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの両方を含む植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を含有するインスリン抵抗性改善剤であって、前記植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物が９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥重量で少なくとも０．０１質量％含有する組成物を有効成分として含有するインスリン抵抗性改善剤である。
また、前記植物がユリ科又はイネ科の植物であることを好ましい態様としている。
【００２５】
前記課題を解決する本願第四の発明は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、又は９，１９−シクロラノスタン−３−オール若しくは２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールのいずれかを乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含有する植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を配合することを特徴とする、インスリン抵抗性改善剤の製造方法である。
【００２６】
前記課題を解決する本願第五の発明は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール、又は９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを乾燥質量で合計で少なくとも０．０１質量％含有する植物の酢酸エチル／ブタノール混合液抽出物、若しくはクロロホルム／メタノール混合液抽出物、又はこれらの分画物を配合することを特徴とする、インスリン抵抗性改善剤の製造方法である。
【００２７】
本発明のインスリン抵抗性改善剤及びこれを含有する飲食品は、安全に投与又は摂取が可能であって、インスリン抵抗性に起因すると考えられる生活習慣病の予防効果を有する。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分は、食経験上安全に摂取でき、入手容易であるユリ科植物等、例えばアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）から簡便に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。
【００２９】
本発明のインスリン抵抗性改善剤（以下、「本発明の医薬」ともいう）の有効成分として用いる化合物は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び／又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールである。
【００３０】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いられる本発明の化合物の純度は、１００％であることが最も好ましいが、インスリン抵抗性を改善する作用を有する範囲で適宜設定することが可能である。
【００３１】
また、本発明のインスリン抵抗性改善剤の有効成分として用いる組成物（以下、「本発明の組成物」ともいう）は、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び／又は２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．１質量％以上含む、ユリ科植物又はイネ科植物の抽出物又はその分画物である。本発明の化合物の含有量の上限は特に制限されないが、１０質量％が好ましく、５０質量％若しくは７０質量％、又は９０質量％が例示できる。
【００３２】
なお、本発明において乾燥質量とは、第十四改正日本薬局方（平成１３年３月３０日厚生労働省告示第１１１号）における一般試験法「乾燥減量試験法」において規定される乾燥方法によって、化合物を乾燥した後に測定した質量であって、例えば、本発明の化合物を約１ｇ分取し、これを１０５℃で４時間乾燥し、デシケーター内で放冷して、はかりにてその質量を測定することによって規定することが可能である。
【００３３】
９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを含むシクロラノスタン骨格を持つ化合物は、ユリ科、マメ科、イネ科、ナス科およびバショウ科などの植物に含まれていることが知られている（〔フィトケミストリー（Phytochemistry）、米国、１９７７年、第１６巻、第１４０〜１４１ページ〕、〔ハンドブック・オブ・フィトケミカル・コンスティチュエンツ・オブ・ＧＲＡＳ・ハーブ・アンド・アザー・エコノミック・プランツ（Handbook of phytochemical constituents of GRAS herbs and other economic plants）、１９９２年、米国、シーアールシープレス〕、又は〔ハーゲルズ・ハントブーフ・デア・ファルマツォイティシェン・プラクシス（Hager's Handbuch der Pharmazeutischen Praxis）、第２〜６巻、１９６９〜１９７９年、ドイツ、シュプリンガー・フェアラークベルリン〕参照）。よって、これらの植物若しくはその一部又はそれらの破砕物から、有機溶媒抽出法または熱水抽出法などの方法を用いて抽出、濃縮することにより、製造することが可能である。
【００３４】
具体的には、前記ユリ科に属する植物としては、アロエ属又はアリウム属に属する植物が挙げられる。また、アロエ属植物としては、アロエベラ（Aloe barbadensis Miller）、アロエフェロックスミラー（Aloe ferox Miller）、アロエアフリカーナミラー（Aloe africana Miller）、キダチアロエ（Aloe arborescen Miller var. natalensis Berger）、アロエスピカータベイカー（Aloe spicata Baker）等が挙げられる。本発明の化合物又はそれを含む組成物の製造においては、前記植物の全体を用いてもよいが、葉肉（透明ゲル部分）を用いることが好ましい。このような植物又はその一部を、好ましくはホモジナイザー等を用いて破砕して液状化し、有機溶媒又は熱水で抽出する。有機溶媒としては、メタノール、エタノール、ブタノール等のアルコール；酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸プロピル、酢酸ブチル等のエステル；アセトン、メチルイソブチルケトン等のケトン；ジエチルエーテル、石油エーテル等のエーテル；ヘキサン、シクロヘキサン、トルエン、ベンゼン等の炭化水素；四塩化炭素、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；ピリジン等の複素環化合物、エチレングリコール等のグリコール；ポリエチレングリコール等のポリアルコール；アセトニトリル等のニトリル溶媒、及びこれらの溶媒の混合液等が挙げられる。また、これらの溶媒は無水であってもよく、含水状態であってもよい。これらの溶媒の中では、酢酸エチル／ブタノール混合液（３：１）またはクロロホルム／メタノール混合液（２：１）が好ましい。
【００３５】
抽出方法としては、通常の植物成分の抽出に用いられる方法を用いることができる。通常、新鮮な植物又は乾燥植物１質量部に対し、有機溶媒１〜３００質量部を用いて、撹拌又は振盪しながら、溶媒の沸点以下の温度で加熱還流するか、常温で超音波抽出する方法が挙げられる。抽出液は、濾過又は遠心分離等の適当な方法により、不溶物を分離して粗抽出物を得ることができる。
【００３６】
抽出物は、各種クロマトグラフィー、例えば順相又は逆相のシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、精製することができる。順相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてクロロホルム／メタノール混合液のグラジエントを用いると、クロロホルム：メタノール＝２５：１程度で本発明の化合物が溶出される。また、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィーにおいては、溶出溶媒としてヘキサン：酢酸エチル混合液（４：１）を用いると、本発明の化合物は最初の方のフラクションとして溶出される。得られたフラクションは、さらにＨＰＬＣ等により精製することができる。
【００３７】
また、本発明に用いる化合物は、化学的な合成法、又は、微生物又は酵素等を利用した生物学的方法又は酵素的方法によって製造してもよい。
【００３８】
上記のようにして得られる化合物又はそれを含む組成物が、本発明の化合物を含むことは、例えば、マススペクトル法（ＭＳ）及び核磁気共鳴スペクトル法（ＮＭＲ）等によって確認することができる。
【００３９】
本発明の化合物は、そのまま本発明のインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用することが可能である。また、本発明の化合物を含む、植物の有機溶媒抽出物、若しくは熱水抽出物、又はこれらの分画物（以下、「抽出物等」と呼ぶ）をインスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として利用してもよい。なお、植物としてユリ科に属するアロエベラを使用した場合は、アロエベラ葉の外皮に多く含有するアロイン及びアロエエモジンの含有量の合計は、５ｐｐｍ以下であることが好ましい。
【００４０】
インスリン抵抗性改善剤に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．００１質量％含んでいることが好ましく、０．０１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．０５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。また、飲食品に含有させる前記抽出物等は、本発明の化合物を、乾燥質量で少なくとも０．０００１質量％含んでいることが好ましく、０．００１〜１質量％含んでいることがより好ましく、０．００５〜１質量％含んでいることが特に好ましい。前記抽出物等は、本発明の化合物を２種類以上含むものであってもよい。また、前記抽出物等は、溶液であってもよく、常法により凍結乾燥または噴霧乾燥して粉末として保存ないし使用することもできる。
【００４１】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の組成物をそのまま、若しくはこれらを製剤学的に許容される製剤担体と組み合わせて、経口的、又は非経口的にヒトを含む哺乳動物に投与することができる。尚、本発明のインスリン抵抗性改善剤において、本発明の化合物は医薬に許容される塩にすることもできる。医薬に許容可能な塩として、金属塩（無機塩）と有機塩との両方が含まれ、それらのリストは「レミントン・ファーマシューティカル・サイエンシーズ（Remington's Pharmaceutical Sciences）、第１７版、第１４１８頁、１９８５年」に掲載されているものが例示される。具体的には塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩、二リン酸塩および臭化水素酸塩などの無機酸塩や、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩、サリチル酸塩及びステアリン酸塩などの有機酸塩が非限定的に含まれる。また、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム等の金属の塩、リジン等のアミノ酸との塩と
することもできる。また、上記化合物もしくはその医薬上許容される塩の水和物等の溶媒和物も本発明に含まれる。
【００４２】
本発明のインスリン抵抗性改善剤の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常のインスリン抵抗性改善用医薬に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。また、本発明の効果を損なわない限り、本発明の化合物又はそれを含む抽出物等と、他のインスリン抵抗性改善作用を有する医薬とを併用してもよい。
【００４３】
本発明のインスリン抵抗性改善剤中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、製剤中に少なくとも０．００１質量％、好ましくは０．０１〜１質量％、特に好ましくは０．０５〜１質量％とするのがよい。
【００４４】
本発明において、インスリン抵抗性改善作用（インスリン感受性亢進作用）とは、インスリン感受性の低下に起因して導かれる種々の健康への害、例えば生活習慣病等を予防又は改善する作用を意味する。具体的にはプラスミノーゲン活性化阻止因子（ＰＡＩ−１）や遊離脂肪酸（ＦＦＡ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、ＭＣＰ−１、レジスチン等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの上昇又は産生を効果的に抑制し、インスリン抵抗性に関わる病態のリスク低減、予防、改善、又は治療に効果を有する。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン感受性亢進剤、アディポサイトカイン産生調節剤、特に、インスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカイン産生抑制剤と定義することが可能である。
【００４５】
インスリン抵抗性を評価する方法としては、グルコースクランプ法やＳＳＰＧ（Steady
state plasma glucose）法、ミニマルモデル法、空腹時の血糖値と血中インスリン濃度からＨＯＭＡ−ＩＲ（homeostasis model assessment insulin resistance）指数を算出して判定する方法、インスリントレランステスト（インスリン負荷試験）が例示され、いずれの方法であってもインスリン抵抗性を評価することは可能であるが、本発明において、インスリン分泌能等の影響を受けず、インスリン感受性についてより直接的に検討できる、動物を使用したインスリントレランステスト（インスリン負荷試験）を用いることが好ましい。
【００４６】
本発明の化合物は、インスリン感受性を高める作用を有し、その結果、インスリン抵抗性に起因する病態の予防又は改善をすることが可能である。したがって、インスリン抵抗性改善剤またはそれを含有する飲食品の有効成分として使用することができる。なお、インスリン感受性については、インスリン投与後の血糖値の低下反応を測定することにより評価することも可能である。
【００４７】
本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性に起因する種々の疾病・合併症等の予防および改善、あるいは治療、並びにこれらの疾病・合併症等のリスクを低減することが可能である。また、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、インスリン抵抗性が健常人より低下した状態の患者に対して、好適に使用することが可能である。なお、インスリン抵抗性とは、一般的には空腹時血漿インスリン値が１０〜１５μＵ／ｍｌ以上、ＨＯＭＡ指数が１．７３以上の状態とされている。
【００４８】
かかるインスリン抵抗性に起因する種々の疾病としては、高血圧、高脂血症、糖尿病、耐糖能異常、動脈硬化症、高インスリン血症、肥満等を例示することができる。また、こ
れらの疾患に起因する合併症としては、イ）高血圧による脳卒中、腎硬化症、腎不全、ロ）高脂血症による動脈硬化、膵炎、ハ）糖尿病による糖尿病性網膜症、腎症、神経障害、糖尿病性壊疽、ニ）動脈硬化症による脳卒中、脳梗塞、狭心症及び心筋梗塞等の心血管疾患、尿毒症、腎硬化症及び腎不全等の腎症等、をそれぞれ例示することができる。尚、本発明者らは、本発明の化合物が、ヘモグロビンＡ１ｃ値を低下させ、高血糖を改善する作用を有することを見出している（国際公開２００６／０３５５２５号）。本発明のインスリン抵抗性改善剤が適用される疾病は、ヘモグロビンＡ１ｃの値が健常人より高い状態にあるものではないことが好ましい。
【００４９】
また、本発明においてインスリン抵抗性の改善効果を例示するものとしては、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＦＦＡ等のインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生・上昇を抑制する効果が期待されることから、前記アディポサイトカインの上昇に起因する疾病として、自己免疫疾患である、関節リューマチ、クローン病、腎炎、膵炎、肝炎、肺炎等の各種臓器における炎症性疾患、血管障害、敗血症、悪性腫瘍における悪液質等を予防及び／又は改善する効果も兼ね備えている。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤は、前記アディポサイトカインの産生が亢進した状態、中でもインスリン抵抗性を惹起させるアディポサイトカインの産生が亢進した状態の患者にも好適に使用することが可能である。
【００５０】
本発明の医薬の投与時期は特に限定されず、対象となる疾患の治療方法に従って、適宜投与時期を選択することが可能である。また、投与形態は製剤形態、患者の年齢、性別、その他の条件、患者の症状の程度等に応じて決定されることが好ましい。本発明の医薬の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件等により適宜選択される。通常有効成分としての本発明の化合物の量は、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ／ｋｇ／日での範囲となる量を目安とするのが良い。また、本発明の化合物を含む抽出物等を用いる場合は、抽出物等の乾燥質量として０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは、１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日となるような量を目安とするのが良い。いずれの場合も、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。
【００５１】
本発明の化合物又はそれを含む組成物は、飲食品（飲料又は食品）に含有させて、インスリン抵抗性改善効果を有する飲食品とすることが可能である。飲食品としては、前記有効成分の効果を損なわず、経口摂取できるものであれば、形態や性状は特に制限されず、前記有効成分を含有させること以外は、通常飲食品に用いられる原料を用いて通常の方法によって製造することができる。また、本発明の飲食品中に含まれる本発明の化合物又はそれを含む抽出物等の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、例えば、本発明の化合物の量として、飲食品中に少なくとも０．０００１質量％、好ましくは０．００１〜１質量％、特に好ましくは０．００５〜１質量％とするのがよい。
【００５２】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５３】
以下、９，１９−シクロラノスタン−３−オール及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの製造例を示す。
［製造例１］
９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（３））、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール（式（４））は、以下の方法によって製造した。
【００５４】
【化１】
2007043305.tif 000062
【００５５】
【化２】
2007043305.tif 000063
【００５６】
γ−オリザノール（オリザ油化社製）８．０ｇに蒸留水２５０ｍｌ、水酸化ナトリウム５０ｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、エタノール１５０ｍｌ、メタノール１５０ｍｌを加え、マントルヒーターを用いて２時間加熱還流を行った。反応後、反応液を１３００ｍｌの水に注ぎ、生じた白色の析出物を吸引ろ過でろ取した。残存するアルカリを洗浄するために、ろ取した残渣を１０００ｍｌの水の中に懸濁させた後、再び吸引ろ過を行った。この操作を２回繰り返し、最終的な残渣を凍結減圧乾燥させることによりオリザノール加水分解物５．９１ｇを得た。当該加水分解物はＨＰＬＣにて精製を行い、２４３５ｍｇの９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び１５４３ｍｇの２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを得た。
【００５７】
得られた９，１９−シクロラノスタン−３−オールを用いて、シクロアルテノールの合成を行った。９，１９−シクロラノスタン−３−オール３０２ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、これをオートクレーブ内で密閉し、窒素ガスで置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。攪拌しながら過熱していき、５０℃になったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、シクロアルテノール２７５ｍｇを得た。２４−メチルシクロアルタノールの合成は、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールを出発物質として行った。２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オール７８ｍｇ、イソプロパノール１５０ｍｌ、および粉末状の５％パラジウム担持炭素触媒１．０ｇを仕込み、次いで、これをオートクレーブ内に密閉し、窒素ガスにて置換した後、水素ガス３ｋｇ／ｃｍ2の圧力をかけながら導入した。そして攪拌しながら加熱し、５０℃となったところで、水素の圧力を５ｋｇ／ｃｍ2とし、吸収された水素を補うことで圧力を５ｋｇ／ｃｍ2に保ちながら６時間反応させた。反応液はろ過により触
媒を除去し、濃縮した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム１００％）により精製を行い、２４−メチルシクロアルタノール６９ｍｇを得た。
【００５８】
ユリ科植物であるアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）を出発原料とした、シクロラノスタン骨格化合物の抽出組成物の製造例を以下示す。
［製造例２］
１００ｋｇのアロエベラ（Aloe barbadensis Miller）の外皮を取り除いた後、ホモジナイザーを用いて液状化し、ここに１００リットルの酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液（３：１）を添加して攪拌した。一晩放置した後、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液と水層を分液して、酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を回収した。酢酸エチルエーテル／ブタノール混合液を減圧下濃縮して得られた、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む抽出組成物の重量は、１３．５ｇであった。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は１０ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は７０ｍｇであった。
【００５９】
［製造例３］
１ｋｇのアロエベラ粉末にクロロホルム／メタノール混合液（２：１）１０リットルを添加し、室温にて一晩浸漬を行った後、クロロホルム／メタノール混合液を回収した。この混合液を２８℃にて有機溶媒を完全に除去して、シクロラノスタン骨格を有する化合物を含む組成物８３ｇを得た。この組成物をＬＣ−ＭＳにて測定した結果、９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２５．８ｍｇ、２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールの含有量は２４ｍｇであった。
【実施例１】
【００６０】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による血清中の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）量の変化を評価するために行った。
【００６１】
（１）試料の調製
前記製造例３で製造した９，１９−シクロラノスタン−３−オール、及び２４−メチレン−９，１９−シクロラノスタン−３−オールをそれぞれＤＭＳＯに溶解した後、濃度が１μｇ／ｍｌになるように蒸留水にて調製して、それぞれ試験試料１及び試験試料２とした。このときＤＭＳＯの最終濃度は０．２％になるように調整した。また、試験試料を含まない溶液を陰性試料とした。
【００６２】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採血し、血清中の遊離脂肪酸量を、NEFA C-テストワコー（和光純薬工業社製）にて測定した。
【００６３】
（３）結果（血中遊離脂肪酸濃度）
表１は、投与開始から６０日目のマウス血清中の遊離脂肪酸濃度を表している。陰性試料投与群に比して、試験試料１および試験試料２を投与することにより、ともに血清中の遊離脂肪酸値が８１．１％に低下する傾向が確認された。よって、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、全身的に遊離脂肪酸濃度が低下し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。
【００６４】
【表１】
2007043305.tif 000064
【実施例２】
【００６５】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、本発明のインスリン抵抗性改善剤による脂肪組織中の各細胞からのＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の産生量への影響を評価するために行った。
【００６６】
（１）試料の調製
本実施例２の試料には、前記実施例１で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。
【００６７】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から６０日目に絶食下で採取した精巣周囲の脂肪１ｇに、０．５％ウシ血清アルブミンを含有するＤ−ＭＥＭ／Ｆ１２培地を１．５ｍｌ添加し、３７℃で培養した。培養１時間後に回収した培養上清中のＴＮＦ−α及びＭＣＰ−１の濃度を、ＥＬＩＳＡ法（バイオソース社製）にて測定した。
【００６８】
（３）結果（ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１産生量）
表２は脂肪組織からのＴＮＦ−αの産生量を表している。また、表３は同様にＭＣＰ−１の産生量を表している。いずれの結果からも明らかなとおり、陰性試料投与群に比して試験試料１及び試験試料２を投与した群は、いずれもＴＮＦ−α、及びＭＣＰ−１ともに、有意な産生抑制効果が確認された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤を投与することにより、インスリン抵抗性を増悪させる脂肪組織中でのアディポサイトカインの産生が低減し、インスリン抵抗性の惹起が予防されることが明らかとなった。なお、表中のｐ値はTukey-Kramer's testによる有意確率を示している。
【００６９】
【表２】
2007043305.tif 000065
【００７０】
【表３】
2007043305.tif 000066
【実施例３】
【００７１】
本実施例は、高脂肪食で飼育することによりインスリン抵抗性が誘導されるＡＫＲマウスを用いて、インスリン負荷試験を行うことにより、本発明のインスリン抵抗性改善剤のインスリン感受性の亢進作用を確認するために行った。
【００７２】
（１）試料の調製
本実施例３の試料には、前記実施例１又は２で調製したものと同様の試験試料１、２及び陰性試料を使用した。
【００７３】
（２）試験方法
６週齢、雄性ＡＫＲマウス（米国ジャクソン社より購入）を高脂肪食（リサーチダイエット社製）を用いて２ヶ月間予備飼育することによりインスリン抵抗性を誘導させた後、１群８匹に群分けした。各群のマウスに、１日１回ゾンデを用いて、試験試料１、試験試料２、又は陰性試料を体重４０ｇにつき１ｍｌずつ（２５μｇ／ｋｇ体重）連日経口投与した。試料の投与開始から４５日目にインスリン負荷試験を行った。本実施例におけるインスリン負荷試験は、マウスを４時間絶食させた後、ヒト・インスリン（イーライリリー社製）を０．７５Ｕ／ｋｇ体重の用量で腹腔内投与し、インスリン投与開始から６０分経過時まで経時的に血糖値の変化を測定することにより行った。
【００７４】
（３）結果（インスリン負荷試験）
本実施例の結果は図１に示すとおりである。図１は、インスリン負荷試験の結果を表している。図１から明らかなとおり、陰性試料を投与した群はインスリン投与開始から１５分間は血糖値の低下が認められないのに対し、試験試料１及び試験試料２を投与した群の血糖値は、いずれもインスリン投与開始から血糖値の速やかな低下が観察された。本実施例の結果から、本発明のインスリン抵抗性改善剤の投与により、インスリン感受性を亢進させることが判明した。
【産業上の利用の可能性】
【００７５】
本発明は、副作用を伴わず、インスリン感受性の亢進が可能な安全なインスリン抵抗性改善剤、及び前記インスリン抵抗性改善剤を含有する特定保健用食品等の機能性飲食品を提供することが可能であって、インスリン感受性の低下により引き起こされる疾患、合併症等、例えば高血圧、糖尿病、高脂血症、動脈硬化等の生活習慣病の改善又は予防、並びにこれら疾病・合併症等のリスクを低減する効果も兼ね備えている。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】インスリン負荷試験における血糖値の変動を示す図である。
【国際調査報告】
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