(57)【要約】（要約）（課題）本発明は、例えば免疫不全状態において、様々な疾病状態を導く原因となるヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に対し、親和性および中和能に優れたヒトのモノクローナル抗体並びにその抗原結合部分の提供を目的とする。（解決手段）ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）と、配列番号２のアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）を有することを特徴とする抗ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）モノクローナル抗体とする。（選択図）なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）と、配列番号２のアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体。
【請求項２】
前記軽鎖（Ｌ鎖）及び／又は重鎖（Ｈ鎖）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体。
【請求項３】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３のアミノ酸配列で示される軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号４のアミノ酸配列で示される重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
前記軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）及び／又は重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第３項に記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項５】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５〜１０からなる群より選択される何れか一つ以上のアミノ酸配列で示される相補性決定領域（ＣＤＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項７】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項８】
前記相補性決定領域（ＣＤＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第５〜７項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
ＨＣＭＶに対する親和性（アフィニティー（Ｍ））が、Ｋd＝１．０×１０−１１（Ｍ）〜１．３×１０−１１（Ｍ）であることを特徴とする請求の範囲第１〜８項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第１〜９項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（κ）であることを特徴とする請求の範囲第１〜１０項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
請求の範囲第１〜１１項いずれか記載のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含む、ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病に対する予防乃至治療薬。
【請求項１３】
前記ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害からなる群より選択される何れか一つである請求の範囲第１２項に記載の予防乃至治療薬。
【請求項１４】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであって、配列番号１〜１０からなる群から選択されたアミノ配列をコードする単離されたＤＮＡ。
【請求項１５】
請求の範囲第１４項に記載のＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離されたＤＮＡ。
【請求項１６】
請求の範囲第１４項又は第１５項に記載の単離ＤＮＡを組込んだベクター（植物発現ベクターを除く）。
【請求項１７】
内部に請求の範囲第１６項の組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞（植物細胞を除く）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はヒトサイトメガロウイルス（human Cytomegalovirus）（以下「ＨＣＭＶ」と称す場合がある）に結合するヒトのモノクローナル抗体、並びにその抗原結合部分に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）は、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ−６）やヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ−７）と同じヘルペスウイルス科βヘルペスウイルス亜科に属し、直径約１８０ｎｍ、２００以上の遺伝子をコードする２３０ｋｂｐからなる２本鎖ＤＮＡウイルスで、ヘルペスウイルス科の中では最大である。
ＨＣＭＶは、種特異性が強いのでヒト以外の動物には感染しないが、ヒトには広く感染し、ヒトの体内においては広汎な組織に親和性がある。
しかも一度感染すると宿主の免疫が確立した後も排除されることなく終生維持されることとなる。【０００３】
一度感染すると生涯にわたって潜状するＨＣＭＶは、成人の９割以上が既に感染してウイルスを保有しているが、健常人には無害なウイルスである。
しかしながら、免疫不全状態にある血液透析者、癌患者、免疫抑制剤使用者、ＨＩＶ感染者、骨髄移植や臓器移植を受けた患者などの免疫不全者が、このＨＣＭＶに感染すると、ＨＣＭＶの再活性化が起こり、間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの致死的な病気が発症する。
又、妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症によって、流産、死産、生後間もない死亡を引き起こし、死亡しない場合も小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害などを引き起こす。【０００４】
上記ＨＣＭＶによる致死的な病態の発症を抑制、若しくはその病態を緩和することができる予防乃至治療薬として、ＨＣＭＶの増殖を抑える抗ウイルス薬『ガンシクロビル』が開発されている（非特許文献１）。
ガンシクロビルはＤＮＡポリメラーゼを阻害することでウイルスＤＮＡの合成を妨害する抗ウイルス薬で、主にエイズなど免疫不全状態におけるサイトメガロウイルス網膜炎の治療や、ＣＤ4リンパ球数１００／ｍｍ３以下の進行したＨＩＶ感染症におけるサイトメガロウイルス網膜炎の発症抑制に使用されており、認可も受けている。
しかしながら、ガンシクロビルには造血阻害など種々の副作用があることが報告されており、その使用態様は上記の如く、極限られたものとなる。【０００５】
ガンシクロビルの副作用として、最も頻度が高く、注意を要するのは、骨髄抑制に伴う血液障害である。白血球や赤血球、血小板が異常に減少し、その初期症状として、発熱や喉の痛み、異常なだるさ、皮下出血等の出血傾向が認められる。場合によっては、精神神経系に異常が見られ、頭痛、目眩、不眠、思考の異常、不安感等を生じる。
又、動物実験では催奇形作用が報告されており、妊娠中は使用することができない。
その他、先天性ＨＣＭＶ感染症の重症例にガンシクロビルを使用することで、神経学的後遺症発現の減少や難聴の進行改善等の効果があるとされているが（非特許文献２）、やはりガンシクロビルの副作用である骨髄抑制、不妊症の問題については十分かつ慎重な検討が必要となる。【０００６】
以上より、上述したＨＣＭＶによる致死的な疾病症状を予防、若しくは緩和することができ、且つ副作用のない予防乃至治療薬の開発が強く望まれていた。
そこで、ＨＣＭＶに結合し、その感染性を中和すること（その生物学的活性を喪失させること）のできる抗体（以下「抗ＨＣＭＶ抗体」と称す場合がある）は、ＨＣＭＶによる致死的な病態の予防乃至治療薬として期待できるので、例えば、免疫不全状態において、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病に対する予防乃至治療戦略上、有用である。
即ち、ＨＣＭＶの活性を喪失させて疾病症状を予防、若しくは緩和するのに、ＨＣＭＶに対して強い親和性及び中和能をもち、且つ拒絶反応を示さない抗ＨＣＭＶ抗体を、所謂「抗体医薬」として投与するのが有効であると考えられた。【０００７】
しかしながら、現在までに報告されているＨＣＭＶ阻害抗体（例えば、特許文献１、２）では、ＨＣＭＶに対して親和性及び中和能の点において十分ではなかったので、天然のＨＣＭＶの生物活性を充分に阻止し、ＨＣＭＶによって引き起こされる様々な疾病症状を予防、若しくは緩和することを期待できるには至らなかった。
その為、異物認識応答を起こさないヒトのモノクローナル抗体であって、ＨＣＭＶに対する親和性、特異性及び中和能に優れ、予防乃至治療薬としてもその活用を期待することのできる抗ＨＣＭＶ抗体、並びにその抗原結合部分の開発が強く望まれていた。【０００８】
【非特許文献１】AIDS/HIV Treatment Directory Vol.5, No.2 (Fall), 1991, pp 43-45.American Foundation for AIDS Research (AmFAR)
【非特許文献２】Whitley RJ, et al. Ganciclovir treatment of symptomatic congenital cytomegalovirus infection:results of a phase II study. National Institute of Allergy and Infectious Diseases Collaborative  Antiviral Study Group.J Infect Dis. 1997;175:1080-6.
【特許文献１】特表平８−５０２４０３号公報
【特許文献２】特表平８−５０６３２５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、例えば免疫不全状態において、様々な疾病状態を導く原因となるＨＣＭＶに対し、親和性および中和能に優れたヒトのモノクローナル抗体並びにその抗原結合部分の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、ＨＣＭＶに対して、親和性および中和能に優れるヒトのモノクローナル抗体を創意工夫により見出し、本発明を完成するに至った。【００１１】
即ち、請求項１に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）と、配列番号２のアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体に関する。
請求項２に係る発明は、前記軽鎖（Ｌ鎖）及び／又は重鎖（Ｈ鎖）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体に関する。
請求項３に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３のアミノ酸配列で示される軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号４のアミノ酸配列で示される重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項４に係る発明は、前記軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）及び／又は重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第３項に記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項５に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５〜１０からなる群より選択される何れか一つ以上のアミノ酸配列で示される相補性決定領域（ＣＤＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項６に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項７に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項８に係る発明は、前記相補性決定領域（ＣＤＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする請求の範囲第５〜７項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項９に係る発明は、ＨＣＭＶに対する親和性（アフィニティー（Ｍ））が、Ｋd＝１．０×１０−１１（Ｍ）〜１．３×１０−１１（Ｍ）であることを特徴とする請求の範囲第１〜８項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項１０に係る発明は、約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第１〜９項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項１１に係る発明は、抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（κ）であることを特徴とする請求の範囲第１〜１０項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項１２に係る発明は、請求の範囲第１〜１１項いずれか記載のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含む、ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病に対する予防乃至治療薬に関する。
請求項１３に係る発明は、前記ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害からなる群より選択される何れか一つである請求の範囲第１２項に記載の予防乃至治療薬に関する。
請求項１４に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであって、配列番号１〜１０からなる群から選択されたアミノ配列をコードする単離されたＤＮＡに関する。
請求項１５に係る発明は、請求の範囲第１４項に記載のＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離されたＤＮＡに関する。
請求項１６に係る発明は、請求の範囲第１４項又は第１５項に記載の単離ＤＮＡを組込んだベクター（植物発現ベクターを除く）に関する。
請求項１７に係る発明は、内部に請求の範囲第１６項の組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞（植物細胞を除く）に関する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、例えば免疫不全状態において、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を喪失（中和）させ、（ＨＣＭＶに対して）優れた親和性および中和能を発揮することができる。又、ヒトのモノクローナル抗体である為、免疫原性を有さず、拒絶反応も見られない。【００１３】
以上の性質より、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣＭＶに対して強い親和性及び中和能をもつ上、拒絶反応も見られないので、
ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの致死的な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害などの予防乃至治療薬として有用であると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下に本願発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分について説明する。【００１５】
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子の他、２本のポリペプチド鎖、１本の重（Ｈ）鎖および１本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子も指すものとする。
抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えばＨＣＭＶ）に特異的に結合する能力を持つ１つ又は複数の抗体のフラグメントを指す。
「ＨＣＭＶ活性を中和し得る抗体」とは、ＨＣＭＶに結合することによってＨＣＭＶの生物学的活性を阻害する抗体を指すものとする。【００１６】
本明細書で使用される、例えば「阻害効果」、「阻害」、「阻害し得る」等々の用語は、源が何であれ、天然のＨＣＭＶの観察される生物活性を約５〜１００％低減させる抗体を称する。好ましくは、治療投与の為には、ＨＣＭＶの観察される生物活性の低減は、約５０〜１００％の範囲にある。【００１７】
本願発明の一態様は、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号１のアミノ酸配列で示される軽鎖と、配列番号２のアミノ酸配列で示される重鎖を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体に関する。
ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であれば、
軽鎖（Ｌ鎖）において、配列番号１のアミノ酸配列から一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有する抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれるし、
重鎖（Ｈ鎖）において、配列番号２のアミノ酸配列から一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有する抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体も本願発明に含まれる。【００１８】
各Ｈ鎖は、Ｈ鎖可変部領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」と称す場合がある）とＨ鎖不変部領域（Ｈ鎖不変部領域は３つのドメインからなり、それぞれ「ＣＨ１」、「ＣＨ２」、「ＣＨ３」と称す場合がある）からなる。
各Ｌ鎖は、Ｌ鎖可変部領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」と称す場合がある）とＬ鎖不変部領域（Ｌ鎖不変部領域は１つのドメインからなり、「ＣＬ」と称す場合がある）からなる。
特にＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは、抗体の結合特異性に関与する点で重要である。【００１９】
そこで本願発明の別の態様としては、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３のアミノ酸配列で示される軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号４のアミノ酸配列で示される重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。【００２０】
ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るものであれば、前記軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）及び重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれるし、前記ＬＣＶＲ、ＨＣＶＲのどちらか一方において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれる。【００２１】
ここで可変部領域のアミノ酸配列は、大半の抗体−抗原相互作用を担っているため、特定の天然発生型の抗体を由来とする可変部領域配列を、異なる性質を持った異なる抗体由来のフレームワーク配列に移植した状態で含有するような発現ベクターを構築すると、特定の天然発生型抗体の性質を模倣する組換え抗体を発現させることができる。
そのために、もとの抗体のものと同様な結合特性を有するインタクト組換え抗体を作り直す際に、特定の抗体の配列全体を得る必要はない。通常、可変部領域にわたる部分的重鎖及び軽鎖配列があれば、この目的にとって充分である。【００２２】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であれば、配列番号３又は４のアミノ酸配列で示される可変部領域を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分は本願発明に含まれるし、前記可変部領域において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれる。【００２３】
抗体はＬＣＶＲ及びＨＣＶＲのアミノ酸残基を主に通じて標的抗原と相互作用するので、可変部領域内のアミノ酸配列は可変部領域の外にある配列よりも個々の抗体間の違いが大きい。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、より一定に保たれたフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができる。
ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、それぞれ３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなり、これらはＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序でアミノ末端からカルボキシ末端まで配列される。【００２４】
そこで、本願発明の更なる別の態様としては、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５〜１０からなる群から選択される何れか一つ以上のアミノ酸配列で示される相補性決定領域（ＣＤＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であれば、前記相補性決定領域（ＣＤＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれる。【００２５】
本願発明の更なる態様として、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であれば、前記軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれる。【００２６】
本願発明の更なる態様として、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ３ドメインとからなる群から選択されたＣＤＲドメインを含むことを特徴とする、抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得るヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であれば、前記重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）において、一個以上のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も本願発明に含まれる。【００２７】
本発明にかかる抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣＭＶ上に存在する特定の抗原決定基（エピトープ）と特異的に結合し、その生物活性を中和し得るものである。【００２８】
以上のとおり、本発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分の特定態様について特記したが、変化、変形をなし得るものであり、これらは本願発明の技術的範囲内に属するものである。
即ち、本願発明の抗体は、完全長の抗体又はその抗原結合部分であってもよく、可変部領域や、相補性決定領域（ＣＤＲ）を示す、配列番号３〜１０のアミノ酸配列をもとにすれば、当該技術分野における周知の技術によって、ＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和し得る組換えヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を得ることができるが、これらは本願発明の技術的範囲内に属するものである。【００２９】
例えば、重鎖及び軽鎖リーダ配列はタンパク質成熟の過程で切断され、最終的な抗体の特性には寄与しないが、欠けている配列を追加するためには、クローン化されたｃＤＮＡ配列を、ライゲーション又はＰＣＲ増幅法により、合成オリゴヌクレオチドに組み合わせることができる。
代替的には、可変領域全体を一組の短い、重複のあるオリゴヌクレオチドとして合成し、ＰＣＲ増幅法で組み合わせて、完全に人工的な可変領域クローンを作製することもできる。【００３０】
そこで本願発明の別の態様としては、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであって、配列番号１〜１０からなる群から選択されたアミノ配列をコードする単離されたＤＮＡに関する。
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであれば、前記ＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離されたＤＮＡも本願発明に含まれる。【００３１】
上記した単離ＤＮＡを組込んだベクター、並びに、該組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞も本願発明に含まれる。
但し、ここでいう組換え発現ベクターおよび宿主細胞は、本願発明の組換えヒト抗体を発現する為のものなので、動物細胞、特に哺乳動物細胞であるのが望ましく、植物発現ベクターや、植物細胞は除かれる。【００３２】
その他、近年開発された、遺伝子工学技術を活用して組み換え抗体（リコンビナント抗体）をファージ表面に発現させる、ファージディスプレイ抗体技術により、人工的にＶＨ、ＶＬ遺伝子をシャッフリングさせ多様化したｓｃＦｖ（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）抗体をファージ融合タンパクとして発現させ、特異抗体を得ることもできる。
該技術は、免疫を回避でき、さらに細胞融合法に変わるヒト化抗体作製技術として高く評価されているが、本願明細書における配列番号１〜１０のアミノ酸配列を参考に作製した特異抗体又はその抗原結合部分であれば、本願発明の技術的範囲内に属する。【００３３】
上述した本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、例えば、免疫不全状態において、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を中和することができるが、とくに高い親和性と中和能を特徴とする。【００３４】
ここで「特異的結合」とは、所定の抗原への抗体の結合を言う。典型的には、抗体は少なくとも約１×１０−７（Ｍ）の親和性で結合し、所定の抗原に対しては、前記所定の抗原又は関係の近い抗原以外の非特異的な抗原（例えばＢＳＡ、カゼイン）に対するその結合親和性よりも少なくとも２倍高い親和性で結合する。
ここで、或ＩｇＧ抗体に対する「高親和性」とは、少なくとも約１×１０−７（Ｍ）、好ましくは少なくとも約１×１０−８（Ｍ）、より好ましくは少なくとも約１×１０−９（Ｍ）、そしてさらにより好ましくは少なくとも約１×１０−１０（Ｍ）の結合親和性を言う。しかしながら、「高親和性」結合は他の抗体 アイソタイプでは様々であり、例えばＩｇＭアイソタイプにとっての「高親和性」結合とは、少なくとも約１×１０−７（Ｍ）の結合親和性を言う。【００３５】
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分の親和性は、解離定数として、通常、Ｋd＝１．０×１０−１１（Ｍ）〜１．３×１０−１１（Ｍ）の性質を有する。
また、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、通常、約１μｇ／ｍＬで、８０％以上の感染阻止率を示すので、有効な中和能を有するといえる。【００３６】
その他、本願発明の一態様として、かかる抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（κ）であることを特徴とする。
ＩｇＧは物質として安定で、親和性が高いことが知られている。
一方、ＩｇＭはすぐに凝集しまい、親和性も低いことが知られている。【００３７】
上述した性質、即ち、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体又はその抗原結合部分は、ＨＣＭＶに対して強い親和性及び中和能をもつので、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの致死的な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害などの予防乃至治療薬としても期待できる。【００３８】
本明細書で使用される「ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病」という用語は、その疾患にかかっている被験対象がＨＣＭＶを持っていることがその疾患の病態生理の原因でありまたはその疾患を悪化させる一因である、ということが示されまたはそうであると考えられる疾病およびその他の疾患を含むものとする。
従って、ＨＣＭＶ活性が害となる疾患は、ＨＣＭＶ活性の阻害によってその疾患の症状および／または進行が緩和されることが予測される疾患である。
このような疾患は、例えば上述の抗ＨＣＭＶ抗体を使用して検出することが可能な、その疾患にかかっている被験対象の生物学的流体中のＨＣＭＶ濃度を高める（例えば、被験対象の血清や血漿、滑液中のＨＣＭＶの濃度を高める）ことによって証明することができる。【００３９】
さらに本発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分は、血清中の抗ＨＣＭＶ抗体が陽性であるヒトの血液から単核球を分離し、その単核球からＴ細胞を除去し、その後にＥＢＶに感染させ、増殖してきた抗体産生細胞から得られたものであるので、完全なヒトのモノクローナル抗体である。
その為、ＨＣＭＶによる致死的な病態の発症を抑制、若しくはＨＣＭＶによる病態を緩和する為の抗体医薬として人体に投与したとしても、免疫原性を有さず、拒絶反応は見られないものと考えられる。
【実施例】
【００４０】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。【００４１】
１．ＨＣＭＶ抗体産生細胞クローンの分離
図１は、抗体産生細胞クローンの分離までのフローチャートである。
血清中の抗ＨＣＭＶ抗体が高値であるヒトの血液から単核球を分離した。
単核球からＴ細胞を除去し、その後ＥＢＶに感染させ増殖してきた細胞を抗体産生細胞ライブラリとした。【００４２】
抗体産生細胞ライブラリは９６ｗｅｌｌプレートに播種し、およそ３〜４週間の培養後、培養上清中の抗ＨＣＭＶ抗体の１ｓｔスクリーニングを行った。
スクリーニングはＨＣＭＶの主要な中和エピトープの1つであるＡＤ１に対する抗体をターゲットにし、ＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ１をコートした９６ｗｅｌｌプレートを用いて、ＥＬＩＳＡ法により行った。
得られた抗体陽性細胞集団は新たな９６ｗｅｌｌプレートに細胞濃度を薄くして播種し、細胞増殖の助けとなるようにフィーダーセルを添加した。
３〜４週間培養した後に抗ＨＣＭＶ抗体の２ｎｄスクリーニングを行った。
得られた抗体陽性細胞集団は新たな９６ｗｅｌｌプレートに限界希釈で播種し、この段階にも細胞増殖の助けとなるようにフィーダーセルを添加した。
３〜５週間培養した後に、抗ＨＣＭＶ抗体の３ｒｄスクリーニングを行った。
得られた抗体陽性細胞集団は限界希釈による培養とスクリーニングを行い、ｗｅｌｌ当たり１個まきのプレートから抗体陽性細胞が得られた。【００４３】
２．抗体アイソタイプの確認
分離した抗体産生細胞クローンについて産生する抗体のアイソタイプを確認した。確認の方法はスクリーニングと同様のＥＬＩＳＡシステムを利用し、２次抗体としてそれぞれのアイソタイプに特異的な抗体を使用した。サンプルはクローン分離後の細胞培養上清を用いた。その結果、得られた抗ＨＣＭＶ抗体はＩｇＧ１、κであった（図２）。【００４４】
３．抗体精製
抗ＨＣＭＶ抗体の精製はProteinAを用いたアフィニティー精製で行った。カラムはHiTrap rProtein A FF（Amersham）のプレパックカラム使用し、精製条件はカラムメーカーの推奨条件とした。
図３はＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果である。
精製後、５０ｋＤａの抗体Ｈ鎖と２５ｋＤａの抗体Ｌ鎖が確認できた。
精製後の抗体はＥＬＩＳＡでＨＣＭＶ抗体活性が保持されていることを確認した。【００４５】
４．抗ＨＣＭＶ抗体の抗原特異性の確認
抗ＨＣＭＶ抗体のスクリーニングにおいては対象抗原のエピトープ部分のみをＧＳＴに融合させたＧＳＴ融合タンパク質を抗原として使用していることから、完全なＨＣＭＶ抗原に対する特異性を確認する必要がある。
そこで、精製した抗ＨＣＭＶ抗体がＨＣＭＶ−ＡＤ１に特異的に結合するかどうかを、ウエスタンブロット法によるＨＣＭＶ−ＡＤ１の検出により確認した。
ＨＣＭＶ−ＡＤ１はＨＣＭＶ−ＡＤ２とともにｇＢ（糖タンパク質Ｂ）を形成し、ＨＣＭＶの主要なエンベロープタンパク質である。
ＨＣＭＶ感染細胞において、ｇＢは細胞膜上に存在していることから、サンプルとしてＨＣＭＶ感染細胞を用意することにした。細胞はヒト胎児肺線維芽細胞（ＨＥＬ）を用い、ＨＣＭＶ（ＡＤ１６９株）を感染させ２日間培養した。
このＨＣＭＶ感染細胞のライセートをＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、ニトロセルロースメンブレンにブロットした。１次抗体として精製ＨＣＭＶ抗体を２次抗体としてペルオキシダーゼ標識されたAnti-human IgG抗体（株式会社医学生物学研究所）を使用した。
検出にはＥＣＬ試薬（アマシャム・バイオサイエンス株式会社）を用いた。
図４は、抗ＨＣＭＶ抗体の抗原特異性をウエスタンブロットで確認した結果である。
未感染ＨＥＬ細胞では全くバンドが検出されなかったが、ＨＣＭＶ感染ＨＥＬ細胞ではＨＣＭＶ−ＡＤ１の分子量５５ｋＤａのところに特異的なバンドが検出された。
この結果から抗ＨＣＭＶ抗体（G3D No.9）はＨＣＭＶ−ＡＤ１に対する特異性を持っていることが確認できた。【００４６】
５．抗ＨＣＭＶ抗体のアフィニティー解析
抗ＨＣＭＶ抗体のアフィニティー解析はビアコア株式会社に依頼した。
解析方法は抗原をセンサーチップに固定化し、抗原固定化表面に抗体を添加して相互作用を測定するものである。
抗原はＧＳＴ融合ＨＣＭＶ−ＡＤ１を、コントロールとしてはＧＳＴを使用した。
その結果、アフィニティーは解離定数として、１．１６×１０−１１（Ｍ）であった。【００４７】
６．抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性評価
抗ＨＣＭＶ抗体（G3D No.9）の有効性評価として中和活性を確認した。中和活性はＨＥＬ（ヒト胎児肺線維芽細胞）に対するＨＣＭＶ（ＡＤ１６９株）感染の抗体による阻止率で評価した。方法はウイルス液と精製抗体（G3D No.9）に補体（５％）を加え３７℃で1時間置き、その後、ＨＥＬ細胞に接種（３７℃、１時間）した。
細胞は洗浄後２日間培養し、ＨＣＭＶの感染早期発現タンパク質であるｐｐ６５を細胞免疫染色により検出するものとした。
図５は、抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性を評価した結果である。G3D No.9抗体は１μｇ／ｍｌで８０％以上の感染阻止率を示し、有効な中和活性を有することが確認できた。【００４８】
７．抗体産生細胞からの抗体遺伝子のクローニング
抗体遺伝子のクローニングはＰＣＲ法により行った。抗ＨＣＭＶ抗体産生細胞クローンからtotal-ＲＮＡを抽出した。抽出したtotal-ＲＮＡからOligo-dT PrimerとReverse Transcriptaseを用いｃＤＮＡ合成を行った。
抗体遺伝子はＨ鎖、Ｌ鎖の何れも５´末端側に可変領域をコードし、抗体によりシークエンスは多様である。３´末端側は定常領域であり、抗体遺伝子間でよく保存されている。抗体遺伝子シークエンスのデータベースをもとに、５´末端側は転写開始点を含むように、３´末端側は転写終結点を含むように以下、表１のprimerを設計し、合成したｃＤＮＡをテンプレートとして抗体遺伝子の増幅を行った。【００４９】
【表１】
2007094423.tif 000002
【００５０】
８．抗体遺伝子の塩基配列に基づく抗体のアミノ酸配列の決定
抗体遺伝子の塩基配列はＡＢＩのシークエンサーを用いて行った。得られた塩基配列に基づく抗ＨＣＭＶ抗体のアミノ酸配列を配列番号１乃至１０に示す。【００５１】
９．得られた抗体遺伝子が抗ＨＣＭＶ抗体をコードしていることの確認
得られた抗体遺伝子（Ｈ鎖・Ｌ鎖）のｃＤＮＡクローンをそれぞれプラスミドベクターｐＳＧ５に挿入した。両プラスミドを２９３Ｔ細胞に導入し、一過性での抗体発現の確認を行った。形質導入はリポフェクタミン（インビトロジェン株式会社）とプラス試薬（インビトロジェン株式会社）による方法を採用した。コントロールとしてｐＥＧＦＰを形質導入し、ＧＦＰ発現細胞を蛍光顕微鏡下で観察することで形質導入の効率を確認した。効率は５０％〜６０％であった。
図６は、形質導入から２日後の２９３Ｔ細胞のライセートを使用し、ヒト抗体を検出したウエスタンブロットの結果である。
検出にはペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ Ｈ＋Ｌ（アマシャム・バイオサイエンス株式会社）を使用し、１ステップで検出した。その結果、形質導入した細胞においてヒト抗体のＨ鎖（５０ｋＤａ）とＬ鎖（２５ｋＤａ）を確認することができた（図６）。【００５２】
次に同様の形質導入試験による抗体の分泌および抗原特異性の保持を確認した。
形質導入から２４時間後および４８時間後の細胞培養上清を採取し、ＥＬＩＳＡによるヒトＩｇＧ抗体の検出およびＨＣＭＶ特異的抗体の検出を行った。
図7は、２９３Ｔ細胞への抗ＨＣＭＶ抗体遺伝子の導入による抗ＨＣＭＶ抗体産生をＥＬＩＳＡ法で確認した結果である。
ＥＬＩＳＡのコントロールとして精製抗体の希釈系列を使用した。
形質導入のコントロールは上記と同様ｐＥＧＦＰを形質導入した細胞の培養上清を使用した。抗体遺伝子を一過性に発現させた細胞の培養上清からはいずれもヒトＩｇＧが確認できた。また、分泌された抗体はいずれもＨＣＭＶに対する特異性を保持していることが確認できた（図７）。【００５３】
このようにして得られた抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を喪失（中和）させ、（ＨＣＭＶに対して）優れた親和性および中和能を発揮することができる。又、ヒトのモノクローナル抗体である為、免疫原性を有さず、拒絶反応も見られない。
以上の性質より、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの致死的な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害などの予防ないし治療薬として有用であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体を産生する抗体産生細胞クローン分離の手順をフローチャートで表した図である。
【図２】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体について、そのアイソタイプをＥＬＩＳＡ法で確認した結果である。
【図３】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体をＳＤＳ−ＰＡＧＥで確認した結果である。
【図４】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体の抗原特異性をウエスタンブロットで確認した結果である。
【図５】本発明にかかる抗ＨＣＭＶ抗体の中和活性を評価した結果である。
【図６】２９３Ｔ細胞への抗ＨＣＭＶ抗体遺伝子の導入による抗ＨＣＭＶ抗体産生をウエスタンブロットで確認した結果である。
【図７】２９３Ｔ細胞への抗ＨＣＭＶ抗体遺伝子の導入による抗ＨＣＭＶ抗体産生をＥＬＩＳＡ法で確認した結果である。
【図１】
2007094423.tif 000003
【図２】
2007094423.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2007094423.tif 000009
【配列表】
2007094423000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月16日(2008.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体であって、配列番号１のアミノ酸配列で示される軽鎖（Ｌ鎖）と、配列番号２のアミノ酸配列で示される重鎖（Ｈ鎖）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３のアミノ酸配列で示される軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号４のアミノ酸配列で示される重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ３ドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ３ドメインを有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項６】
（削除）
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
前記ＣＤＲドメインのいずれかにおいて、一個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第５項記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項９】
ＨＣＭＶに対する親和性（アフィニティー（Ｍ））が、Ｋｄ＝１．０×１０−１１（Ｍ）〜１．３×１０−１１（Ｍ）であることを特徴とする請求の範囲第１，３，５，８項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１０】
約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第１，３，５，９項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１１】
抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（κ）であることを特徴とする請求の範囲第１，３，５，８〜１０項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分。
【請求項１２】
請求の範囲第１，３，５，８〜１１項いずれか記載のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含む、ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病に対する予防乃至治療薬。
【請求項１３】
前記ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害からなる群より選択される何れか一つである請求の範囲第１２項に記載の予防乃至治療薬。
【請求項１４】
ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであって、配列番号１〜４のいずれか一つのアミノ酸配列又は配列番号５〜７の三つのアミノ酸配列又は配列番号８〜１０の三つのアミノ酸配列をコードする単離されたＤＮＡ。
【請求項１５】
請求の範囲第１４項に記載のＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離されたＤＮＡであって、発現ベクターに組み込まれ宿主細胞に導入された場合、該宿主細胞で生産される抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体が約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする単離されたＤＮＡ。
【請求項１６】
請求の範囲第１４項又は第１５項に記載の単離ＤＮＡを組込んだベクター（植物発現ベクターを除く）。
【請求項１７】
内部に請求の範囲第１６項の組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞（植物細胞を除く）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
請求項３に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号３のアミノ酸配列で示される軽鎖可変部領域（ＬＣＶＲ）と、配列番号４のアミノ酸配列で示される重鎖可変部領域（ＨＣＶＲ）を有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項５に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得るヒトのモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号７のアミノ酸配列を有する軽鎖（Ｌ鎖）ＣＤＲ３ドメインと、配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ１ドメインと、配列番号９のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ２ドメインと、配列番号１０のアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ鎖）ＣＤＲ３ドメインを有することを特徴とする抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項８に係る発明は、前記ＣＤＲドメインのいずれかにおいて、一個若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入若しくは付加されたアミノ酸配列を有し、約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第５項記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項９に係る発明は、ＨＣＭＶに対する親和性（アフィニティー（Ｍ））が、Ｋｄ＝１．０×１０−１１（Ｍ）〜１．３×１０−１１（Ｍ）であることを特徴とする請求の範囲第１，３，５，８項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項１０に係る発明は、約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする請求の範囲第１，３，５，９項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
請求項１１に係る発明は、抗体のクラス（サブクラス）がＩｇＧ１（κ）であることを特徴とする請求の範囲第１，３，５，８〜１０項いずれか記載の抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
請求項１２に係る発明は、請求の範囲第１，３，５，８〜１１項いずれか記載のヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を含む、ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病に対する予防乃至治療薬に関する。
請求項１３に係る発明は、前記ＨＣＭＶにより引き起こされる疾病が、（ａ）免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害からなる群より選択される何れか一つである請求の範囲第１２項に記載の予防乃至治療薬に関する。
請求項１４に係る発明は、ＨＣＭＶに結合し、その生物活性を中和し得る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体又はその抗原結合部分をコードするＤＮＡであって、配列番号１〜４のいずれか一つのアミノ酸配列又は配列番号５〜７の三つのアミノ酸配列又は配列番号８〜１０の三つのアミノ酸配列をコードする単離されたＤＮＡに関する。
請求項１５に係る発明は、請求の範囲第１４項に記載のＤＮＡと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離されたＤＮＡであって、発現ベクターに組み込まれ宿主細胞に導入された場合、該宿主細胞で生産される抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体が約１μｇ／ｍＬで、８０％以上のＨＣＭＶ感染阻止率を示すことを特徴とする単離されたＤＮＡに関する。
請求項１６に係る発明は、請求の範囲第１４項又は第１５項に記載の単離ＤＮＡを組込んだベクター（植物発現ベクターを除く）に関する。
請求項１７に係る発明は、内部に請求の範囲第１６項の組換え発現ベクターが導入された、宿主細胞（植物細胞を除く）。
発明の効果
［００１２］
本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、例えば免疫不全状態において、様々な疾病の原因となるＨＣＭＶに特異的に結合し、その生物活性を喪失
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
（中和）させ、（ＨＣＭＶに対して）優れた親和性および中和能を発揮することができる。又、ヒトのモノクローナル抗体である為、免疫原性を有さず、拒絶反応も見られない。
［００１３］
以上の性質より、本発明に係る抗ＨＣＭＶ抗体またはその抗原結合部分は、ＨＣＭＶに対して強い親和性及び中和能をもつ上、拒絶反応も見られないので、
ＨＣＭＶが原因となって引き起こされる様々な疾病、例えば、（ａ）エイズ、癌、臓器移植後、骨髄移植後、血液透析後などの免疫不全状態におけるＨＣＭＶの再活性化による間質性肺炎、網膜炎、胃腸炎、脳炎などの致死的な病気や、（ｂ）妊婦から胎児へＨＣＭＶ感染が波及することによる巨細胞封入体症、（ｃ）前記巨細胞封入体症により引き起こされる流産、死産、生後間もない死亡、（ｄ）前記巨細胞封入体症により死亡しない場合における小頭症、精神発育障害、知能発達遅延や聴覚障害などの予防乃至治療薬として有用であると考えられる。
発明を実施するための最良の形態
［００１４］
以下に本願発明に係る抗ＨＣＭＶモノクローナル抗体またはその抗原結合部分について説明する。
［００１５］
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子の他、２本のポリペプチド鎖、１本の重（Ｈ）鎖および１本の軽（Ｌ）鎖であってジスルフィド結合によって相互接続されたものからなる免疫グロブリン分子も指すものとする。
抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原（例えばＨＣＭ
【国際調査報告】
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