(57)【要約】抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤。
【請求項２】
腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種のペプチドを少なくとも含む請求の範囲第１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項３】
腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドを少なくとも含む請求の範囲第１項又は第２項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項４】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種以上のペプチドである請求の範囲第１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項５】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドである請求の範囲第１項又は第４項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項６】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドである請求の範囲第１項又は第４項のいずれか１項記載のリポソーム製剤。
【請求項７】
各腫瘍組織親和性ペプチドの構成アミノ酸数が３〜１５である請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項８】
脂質成分の少なくとも１種がジパルミトイルホスファチジルコリン又はジステアロイルホスファチジルコリンである請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項９】
抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤の腫瘍の治療のための使用。
【請求項１０】
抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤に含まれる抗腫瘍活性物質の有効量を哺乳動物に投与する腫瘍の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医療上有用な抗腫瘍活性物質を包含するリポソーム製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在までにがん治療のために多くの薬物が開発され、医療に用いられている。しかし、現在に至るまで腫瘍組織に対してのみ選択的に殺細胞効果を示す抗腫瘍活性物質は開発されていない。抗腫瘍活性物質をそのまま血管内に投与した場合、血中から速く消失したり、標的以外の臓器にも分布することがあり、必ずしも効果的にがん組織に集積するとは限らない。このため抗腫瘍活性物質の多くは、がん組織に対する抗腫瘍作用（主作用）を十分に発揮できず、またしばしば望ましくない正常組織への作用（副作用）を伴い、重篤な毒性を引き起こしている。抗腫瘍活性物質の主作用の増強、副作用の軽減は、現在のがん化学療法の重要な課題であり、薬物をがん組織、がん細胞に効率的に集積する薬物送達システム（ＤＤＳ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）の開発が強く求められている。
リポソームは生体成分由来のリン脂質を主成分とする閉鎖小胞であり、生体に投与したときの毒性、抗原性が低い特徴を持つ。またリポソーム内に薬物を封入することにより、その薬物の血中安定性および生体内分布を変化させて標的組織への到達性を改善できることが示されている（例えば、非特許文献１、特許文献１）。またがん組織に多く存在する新生血管の血管壁は既存の血管のそれと比較して透過性が高く、リポソームなどの小胞はがん組織に集積しやすいことが知られている（例えば、非特許文献２）。従って抗腫瘍活性物質をリポソーム内に封入した製剤は主作用を増強し、副作用を軽減することが大いに期待されるＤＤＳのひとつである。
しかし、抗腫瘍活性物質を包含するリポソーム製剤を実際のがん治療に用いる場合、通常のリポソーム組成ではがん組織への選択的な到達性が不十分であり、抗腫瘍効果が十分に発揮されない場合が多い。また、リポソームが標的以外の臓器に多量に分布することによる副作用の発現も問題となる。リポソームの脂質膜を、がん組織に選択的に集まる性質を有するペプチド（以下、腫瘍組織親和性ペプチドという）、蛋白、抗体で物理的あるいは化学的に修飾して、がん組織への移行性をより高くする試みがなされている。
腫瘍組織親和性ペプチドとしては、正常組織には少なく、腫瘍内の新生血管に特異的に発現しているｉｎｔｅｇｒｉｎｓ、ｖａｓｃｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ、ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅｓ、ｈｉｇｈ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎなどに特異的に移行し、結合するものがよく知られている。代表的なものとして、ＲＧＤ配列を含むペプチドがあり、腫瘍新生血管のインテグリンα−ｖ  β−３及びα−ｖ  β−５に選択的に結合することが報告されている（例えば、非特許文献３）。またＰＲＰ配列を含むペプチドは新生血管に特異的に集積することが確認されており、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）受容体の一つであるｆｍｓ−ｌｉｋｅｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅ−１（ｆｌｔ−１）へ親和性を持つことが示唆されている（例えば、非特許文献４、特許文献２）。またＰＬＰＬ配列を含むペプチドはｍｅｍｂｒａｎｅ  ｔｙｐｅ−１  ｍａｔｒｉｘ  ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅｓ（ＭＴ１−ＭＭＰ）に親和性を持つことが確認されている（例えば、非特許文献５）。またＮＧＲ配列を含むペプチドは腫瘍新生血管のアミノペプチダーゼＮに親和性を持つことが確認されている（例えば、非特許文献６）。
【特許文献１】ＷＯ９５／２４２０１号公報
【特許文献２】再公表ＷＯ００／２３４７６号公報
【非特許文献１】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｒｅｓｅｒｃｈ）、４、６６７（１９９４）
【非特許文献２】Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、１４、４３３（１９９９）
【非特許文献３】Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２、２６５（１９９５）
【非特許文献４】Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１、２６６２（２００２）
【非特許文献５】ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ  ＪＯＵＲＮＡＬ  ＯＦ  ＣＡＮＣＥＲ、１０８、３０１（２００４）
【非特許文献６】ＣＡＮＣＥＲ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ、６０、７２２（２０００）
【０００３】
しかしこれらのペプチドを単独でリポソーム脂質膜に修飾した場合、がん組織への選択的な移行性、抗腫瘍効果の増大は認められるものの、不十分であることが多かった。また、多くの場合、抗腫瘍効果が現れる動物種やがん種が限定されていた。ペプチドの種類、修飾量を種々変更しても抗腫瘍効果の増加の程度には限界があり、臨床現場で実用化できる製剤とするためのハードルは高いと考えられていた。
本発明の課題は抗悪性腫瘍活性を有する物質を包含し、高いがん組織到達性を有し、抗腫瘍作用が増強された、リポソーム製剤を提供することにある。
【発明の開示】
【０００４】
本発明は以下の発明に係る。
１．  抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤。
２．  腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種のペプチドを少なくとも含むリポソーム製剤。
３．  腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドを少なくとも含むリポソーム製剤。
４．  腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種以上のペプチドであるリポソーム製剤。
５．  腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドであるリポソーム製剤。
６．  腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドであるリポソーム製剤。
７．  各腫瘍組織親和性ペプチドの構成アミノ酸数が３〜１５であるリポソーム製剤。
８．  脂質成分の少なくとも１種がジパルミトイルホスファチジルコリン又はジステアロイルホスファチジルコリンであるリポソーム製剤。
９．  上記リポソーム製剤の腫瘍の治療のための使用。
１０．  上記リポソーム製剤に含まれる抗腫瘍活性物質の有効量を哺乳動物に投与する腫瘍の治療方法。
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、複数種の腫瘍組織親和性ペプチドを組み合わせて使用することにより、腫瘍組織への移行性、親和性が相乗的に高まる可能性を考案した。実際に、抗悪性腫瘍活性を有する化合物を包含したリポソームの膜表面を複数種の腫瘍組織親和性ペプチドで修飾することによって、これらのペプチドの腫瘍組織親和性作用が相乗的に向上し、血管内に投与したときの抗腫瘍活性が、ペプチド修飾しないリポソーム及び単独の腫瘍組織親和性ペプチドで修飾したリポソームと比較して有意に増大し、かつ毒性の増加は伴わないことを見いだし、本発明を完成するに至った。
本発明のリポソーム製剤に用いられるリポソームとは、前記したように細胞膜を構成しているリン脂質を水中に分散させて形成される脂質二分子膜により囲まれた内水相部分を有する閉鎖小胞であり、そのサイズや脂質二分子の数によって多重相リポソーム（Ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ  Ｖｅｓｉｃｌｅ：  ＭＬＶ）、大きな一枚膜リポソーム（Ｌａｒｇｅ  Ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  Ｖｅｓｉｃｌｅ：  ＬＵＶ）および小さな一枚膜リポソーム（Ｓｍａｌｌ  Ｕｎｉｌａｍｅｌｌａｒ  Ｖｅｓｉｃｌｅ：  ＳＵＶ）の３種類に分類される。本発明ではいずれの種類のリポソームも使用可能である。本発明のリポソームは生体内投与前および投与後に安定なリポソーム構造を形成する。
リポソームを構成する二分子膜の流動性、膜透過性は相転移温度を境として大きく増加するため、一般的には相転移温度が３７℃以上であるリン脂質を用いることが好ましい。このようなリン脂質としては、例えば水素添加精製卵黄ホスファチジルコリン（相転移温度５０〜６０℃、以下ＨＥＰＣとする）、水素添加精製大豆ホスファチジルコリン（相転移温度約５５℃、以下ＨＳＰＣとする）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（相転移温度約４１℃、以下ＤＰＰＣとする）およびジステアロイルホスファチジルコリン（相転移温度約５８℃、以下ＤＳＰＣとする）から選ばれ、より好ましくはＤＳＰＣ及びＤＰＰＣがあげられる。これらは１種または２種以上混合して用いることができる。本発明に用いられるリポソームは、これらリン脂質に加えて、好ましくはリポソームの安定性を改善することが報告されているコレステロール誘導体などの安定化剤と混合して使用される。コレステロール誘導体とリン脂質のモル比は、１：０．３〜３が好ましく、１：１〜２．５がさらに好ましい。
また、等張化剤として、例えば、グリセリン、ブドウ糖、塩化ナトリウムなどの添加も可能である。さらに、パラベン類、クロルブタノール、ベンジルアルコール、プロピレングリコールなどの防腐剤を加えてもよい。
本発明で用いられる腫瘍組織親和性ペプチドとしては、リポソームの表面に結合させたときに腫瘍組織に指向性を示すペプチドであれば特に制限されないが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドが例示できる。なお、上記以外のペプチドも結合していても良い。
さらに、本発明で用いられる腫瘍組織親和性ペプチドとしては、１つのペプチド内に、ＲＧＤ配列、ＰＲＰ配列、ＰＬＰＬ配列及びＮＧＲ配列からなる群から選ばれる２種以上の配列を含むペプチドが例示できる。
本発明で用いられるＲＧＤ配列を含むペプチドは、アルギニン−グリシン−アスパラギン酸のアミノ酸配列を含むペプチドであればよく、ペプチド合成分野において公知の方法により作成することができる。また、本ペプチドは直鎖状であっても環状であってもよい。例えばＧＲＧＤＳ、ＧＲＧＤＬ、ＧＲＧＤＲ、ＧＲＧＤＦを例示することができる。
本発明で用いられるＰＲＰ配列を含むペプチドは、プロリン−アルギニン−プロリンのアミノ酸配列を含むペプチドであればよく、ペプチド合成分野において公知の方法により作成することができる。例えばＡＰＲＰＧ、ＧＰＲＰＬ、ＧＰＲＰＲを例示することができる。
本発明で用いられるＰＬＰＬ配列を含むペプチドは、プロリン−ロイシン−プロリン−ロイシンのアミノ酸配列を含むペプチドであればよく、ペプチド合成分野において公知の方法により作成することができる。例えばＧＰＬＰＬＲ、ＨＰＬＰＬＳ、ＰＶＰＬＰ、ＰＬＰＬＶＲを例示することができる。
本発明で用いられるＮＧＲ配列を含むペプチドは、アスパラギン−グリシン−アルギニンのアミノ酸配列を含むペプチドであればよく、ペプチド合成分野において公知の方法により作成することができる。例えばＣＮＧＲＣ、ＣＮＧＲＧを例示することができる。
後述する実施例の通り、リポソーム膜に２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドを導入することにより、腫瘍組織親和性が向上しており、かつ副作用が低減しているリポソーム製剤を作製することができる。本発明のリポソーム製剤では、２〜４種の腫瘍組織親和性ペプチドを導入することがより好ましい。本発明のリポソーム製剤における２種の腫瘍組織親和性ペプチドの組み合わせとしては、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチド；ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＬＰＬ配列を含むペプチド；ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチド；ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＰＬＰＬ配列を含むペプチド；ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチド；ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドが例示できる。好ましくは、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドである。
本発明のリポソーム製剤における２種の腫瘍組織親和性ペプチドのモル比は、内包する薬剤や治療対象の癌によって任意に設定できるが、例えば、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドを用いる場合、ＲＧＤ配列を含むペプチド：ＰＲＰ配列を含むペプチド＝１：０．１〜１０が好ましく、１：０．３〜３がさらに好ましく、１：１がより好ましい。
また、本発明のリポソーム製剤における３種の腫瘍組織親和性ペプチドの組み合わせとしては、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＰＬＰＬ配列を含むペプチド；ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチド；ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチド；ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドが例示できる。好ましくは、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドである。
本発明のリポソーム製剤における３種の腫瘍組織親和性ペプチドのモル比は、内包する薬剤や治療対象の癌によって任意に設定できるが、例えば、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドを用いる場合、ＲＧＤ配列を含むペプチド：ＰＲＰ配列を含むペプチド：ＮＧＲ配列を含むペプチド＝１：０．１〜１０：０．１〜１０が好ましく、１：０．３〜３：０．３〜３がさらに好ましく、１：１：１がより好ましい。
さらに、発明のリポソーム製剤における４種の腫瘍組織親和性ペプチドの組み合わせとしては、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドが例示できる。
本発明のリポソーム製剤における４種の腫瘍組織親和性ペプチドのモル比は、内包する薬剤や治療対象の癌によって任意に設定できるが、例えば、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドを用いる場合、ＲＧＤ配列を含むペプチド：ＰＲＰ配列を含むペプチド：ＰＬＰＬ配列を含むペプチド：ＮＧＲ配列を含むペプチド＝１：０．１〜１０：０．１〜１０：０．１〜１０が好ましく、１：０．３〜３：０．３〜３：０．３〜３がさらに好ましく、１：１：１：１がより好ましい。
本発明で用いられる腫瘍組織親和性ペプチドの構成アミノ酸数は、抗原性の低さ、リポソームへの修飾の容易さ及び製造コストの低さから、３〜１５が好ましく、４〜１２がさらに好ましく、５〜１０が特に好ましい。本発明で用いられる腫瘍組織親和性ペプチドを構成するアミノ酸の具体例としては、アルギニン、グリシン、アスパラギン酸、プロリン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、ヒスチジン、アスパラギン、システイン等を例示することができる。
本発明で用いられるリン脂質と各腫瘍組織親和性ペプチドの総量とのモル比は、１：０．０１〜０．３が好ましく、１：０．０５〜０．２がさらに好ましく、１：０．１が特に好ましい。
リポソーム膜への腫瘍組織親和性ペプチドの導入方法は、化学的結合による方法と、化学的結合を用いない方法があるが、リポソーム膜の変性などを避けるため、後者の方法を選択することが望ましい。後者の具体的な方法としては、腫瘍組織親和性ペプチドにステアロイル基、アシル基（例えば、特許２６２０７２９号）、コレステリル基（例えば、特許２５７９７３０号）、リン脂質（例えば、特開平０４−０９９７９５）などの疎水性側鎖を結合し、疎水性側鎖を結合した腫瘍組織親和性ペプチドを他の脂質成分と混合してリポソームを調製することにより、リポソームの脂質膜部分に疎水性側鎖が配位し、腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム膜表面に導入されたペプチド修飾リポソームをつくることが可能である。複数種の腫瘍組織親和性ペプチドをリポソーム膜へ導入する場合も、それらのペプチドが物理化学的に不都合な相互作用を示さない限り、単独の腫瘍組織親和性ペプチドの場合と同様にして、上述の方法で調製することができる。疎水性側鎖の結合する方向は任意であり、例えばＲＧＤ配列を含むペプチドの場合、疎水性側鎖はＲ側、Ｄ側のどちらにも結合してもよいが、好ましくはＲ側である。
本発明のリポソーム製剤は公知の方法により調製される。公知のリポソーム製剤の調製方法としては、例えば、逆相蒸発法［プロシーディング・オブ・ザ・ナショナルアカデミー・オブ・サイエンシズ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、７５、４１９４（１９７８）、ＷＯ９７／４８３９８号公報］、凍結融解法［アーチーズ・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ）、２１２、１８６（１９８１）］、ｐＨ勾配法［バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ）、８１６、２９４（１９８５）、特開平７−１６５５６０号公報］などがあげられる。
これらの中で、ｐＨ勾配法は、ｐＨにより溶解度が大きく異なる薬物をリポソーム内に高い包含率で封入する際に有用である。ｐＨ勾配法による本発明のリポソーム製剤の調製方法としては、例えば、脂質成分ならびに疎水性側鎖を結合した腫瘍組織親和性ペプチドをクロロホルム、エーテル、エタノールなどの溶媒に溶解後、ナス型フラスコに入れ、減圧下溶媒留去し脂質薄膜を形成する。次いで、弱酸性緩衝液を薄膜に加え、凍結融解を行い、内水相が弱酸性である大きな多重相リポソーム（ＭＬＶ）を調製する。さらに、エクストルージョン法などにより、小さな一枚膜リポソーム（ＳＵＶ）とした後、中性緩衝液を加えて外水相を中性とする（内水相と外水相のｐＨの差は３以上であることが望ましい）。ここに薬物の水溶液を添加し、脂質二分子膜の相転移温度より約１０℃高い温度でインキュベートする。以上の操作により、薬物をリポソームの内部に高率かつ定量的に封入することができる。
リポソームの粒子サイズは内包されている薬物の生体内分布、腫瘍組織への送達性に大きな影響を与えることが報告されている［バイオロジカル・アンド・ファーマシューティカル・ブレタン（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）、１７、９３５（１９９４）］。従って、本発明においては、薬物内包リポソームの粒子径を適切かつ均一にするために、サイジング処理を行うのが好ましく、例えば、エクストルーダー（リペックスバイオメンブラン社製など）を使用し、適切な孔径のメンブランフィルターに数回通過させることにより、平均粒子径として５０〜２００ｎｍ、好ましくは７５〜１２５ｎｍになるように調節することが望ましい。
またリポソームの膜表面を、必要に応じ、ポリエチレングリコール誘導体などのリガンドで修飾することによって、リポソームを血管内に投与した後の血漿中タンパクとの相互作用を低減し、肝クッパー細胞などの細網内皮細胞への取り込みを抑制することができ、リポソームの腫瘍組織への移行性等をさらに向上させることができる。
以上の操作によって、本発明のリポソーム製剤が調製され、必要に応じ、超遠心処理、ゲル濾過処理、限外濾過処理および透析処理を単独または適宜組み合わせて行うことによって、リポソームに内包されなかった薬物を除去することができる。
上記の方法により得られる本発明のリポソーム製剤はそのままでも使用できるが、保存期間、保存条件などを考慮して、マンニトール、トレハロース、ラクトース、グリシンなどの賦形剤を加えて凍結乾燥することもできる。またグリセリンなどの凍結保存剤を加え、凍結保存してもよい。
本発明のリポソーム製剤に内包する薬剤の種類は特に制限されないが、本発明のリポソーム製剤は優れた腫瘍組織親和性を有するので、腫瘍組織において活性を有するものであればよく、抗腫瘍活性物質が好ましい。具体的な抗腫瘍活性物質としては、特に限定されないが、例えばアルキル化剤、各種代謝拮抗剤、抗腫瘍性抗生物質、その他抗腫瘍剤、抗腫瘍性植物成分、ＢＲＭ（生物学的応答性制御物質）、血管新生阻害剤、細胞接着阻害剤、マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤またはホルモン等が挙げられる。
より具体的には、アルキル化剤として、例えば、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、イホスファミド、メルファラン、シクロホスファミド、クロラムブシル等のクロロエチルアミン系アルキル化剤、；例えば、カルボコン、チオテパ等のアジリジン系アルキル化剤；例えば、ディブロモマンニトール、ディブロモダルシトール等のエポキシド系アルキル化剤；例えば、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ニムスチンハイドロクロライド、クロロゾトシン、ラニムスチン等のニトロソウレア系アルキル化剤；ブスルファン、トシル酸インプロスルファン、ピポスルファン等のスルホン酸エステル類；ダカルバジン；プロカルバジン等が挙げられる。
各種代謝拮抗剤としては、例えば、６−メルカプトプリン、アザチオプリン、６−チオグアニン、チオイノシン等のプリン代謝拮抗剤；フルオロウラシル、テガフール、テガフール・ウラシル、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン、エノシタビン等のピリミジン代謝拮抗剤；メトトレキサート、トリメトレキサート等の葉酸代謝拮抗剤等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
抗腫瘍性抗生物質としては、例えば、ダウノルビシン、アクラルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、エピルビシン等のアントラサイクリン系；アクチノマイシンＤ等のアクチノマイシン系；クロモマイシンＡ３等のクロモマイシン系；マイトマイシンＣ等のマイトマイシン系；ブレオマイシン、ペプロマイシン等のブレオマイシン系等；および、それらの塩もしくは複合体が挙げられる。
その他の抗腫瘍剤としては、例えば、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ＴＡＳ−１０３、タモキシフェン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセブラトン、シゾフィラン、ピシバニール、ウベニメクス、クレスチン等、および、それらの塩もしくは複合体が挙げられる。
抗腫瘍性植物成分としては、例えば、カンプトテシン、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン等の植物アルカロイド類；エトポシド、テニポシド等のエピポドフィロトキシン類；および、その塩もしくは複合体が挙げられる。また、ピポブロマン、ネオカルチノスタチン、ヒドロキシウレア等も挙げることができる。
ＢＲＭとしては、例えば、腫瘍壊死因子、インドメタシン等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
血管新生阻害剤としては、例えばフマギロール誘導体、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
細胞接着阻害剤としては、例えば、ＲＧＤ配列を有する物質、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤としては、例えば、マリマスタット、バチマスタット等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
ホルモンとしては、例えばヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プラステロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、オキシメトロン、ナンドロロン、メテノロン、ホスフェストロール、エチニルエストラジオール、クロルマジノン、メドロキシプロゲステロン等、および、その塩もしくは複合体が挙げられる。
薬剤の形態としては、低分子化合物、ペプチド、蛋白、抗体、ｓｉＲＮＡあるいは遺伝子が例示できる。
本発明のリポソーム製剤は、一般的には、使用時に生理的に許容される水溶液で懸濁または希釈して注射剤（静脈内、筋肉内、皮下投与製剤）として用いられるが、経口剤、点鼻剤、吸入剤、坐剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤などとして使用することもできる。最終製剤は、悪性腫瘍〔ヒトなどの哺乳動物の肺がん、消化器がん（食道がん、胃がん、直腸がん、結腸がんなど）、乳がん、頭頸部がん、肝臓がん、胆嚢がん、膵臓がん、婦人科がん（子宮がん、子宮頸がん、卵巣がんなど）、泌尿器がん（腎がん、膀胱がん、前立腺がんなど）、脳腫瘍、白血病、メラノーマ、悪性リンパ腫など〕の治療、緩解のための有効量が投与されるように設計されていればよい。例えば、静脈内投与リポソーム製剤として抗腫瘍活性物質が０．０１〜１００００ｍｇ含有されていればよい。本発明のリポソーム製剤に含まれる有効成分の投与量は、０．０１〜１０００ｍｇ／ｄａｙとするのが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
図１は試験例３の抗腫瘍効果を示すグラフである。
図２は試験例３のマウスの体重変化を示すグラフである。
図３は試験例４の抗腫瘍効果を示すグラフである。
図４は試験例４のマウスの体重変化を示すグラフである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【０００７】
実施例１（複数のペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３リポソーム製剤）
ＤＳＰＣ４０μｍｏｌ、コレステロール２０μｍｏｌ、ステアロイル化したＰＲＰ配列を含むペプチド（Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ）４μｍｏｌ及びステアロイル化したＲＧＤ配列を含むペプチド（Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ）４μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ／Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ＝１０／５／０．５／０．５）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。エバポレーターで減圧下、クロロホルムを留去し、ナス型フラスコの内壁面に脂質薄膜を形成させた。さらにデシケーター内で１時間真空乾燥した。次に０．３Ｍクエン酸溶液（ｐＨ４．０）１ｍＬで水和後、凍結融解を３回行った。バス型ソニケーターを用いて１０分間超音波処理した後、エクストルーダー（リペックスバイオメンブラン社製）を用い、孔径１００ｎｍのポリカーボネートメンブランフィルター（ヌクレポア）に３回通過させてリポソームの平均粒子径を約１００ｎｍに調節した。次に０．５Ｍ炭酸ナトリウム溶液０．７６７ｍＬを加えてｐＨ７．５とし、さらに２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を加えて全量を２ｍＬとし、得られたリポソーム溶液を６０℃に静置した。
次に、トポイソメラーゼ阻害活性を有する抗腫瘍活性物質ＴＡＳ−１０３（化学名：６−［〔２−（ジメチルアミノ）エチル〕アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２、１−ｃ］キノリン−７−オン・二塩酸塩）を２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液に５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した溶液１ｍＬを加え、６０℃で３０分間振とうインキュベートすることによりＴＡＳ−１０３をリポソーム内に封入した。さらに、封入されていないＴＡＳ−１０３を除去するために、超遠心分離（９００００ｒｐｍ、１５ｍｉｎ、４℃）を３回行い上清を除去した後、リン酸緩衝液〔ＰＢＳ（−）〕を用いて懸濁し、ＡＰＲＰＧペプチド及びＧＲＧＤＳペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３包含リポソーム製剤（ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例１（単独のペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３リポソーム製剤）
ＤＳＰＣ４０μｍｏｌ、コレステロール２０μｍｏｌ、Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ  ４μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ＝１０／５／１）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例１の方法に従い、ＡＰＲＰＧペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３包含リポソーム製剤（ＡＰＲＰＧ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例２（単独のペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３リポソーム製剤）
ＤＳＰＣ４０μｍｏｌ、コレステロール２０μｍｏｌ、Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ  ４μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ＝１０／５／１）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例１の方法に従い、ＧＲＧＤＳペプチドで修飾したＴＡＳ−１０３包含リポソーム製剤（ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例３（ペプチドで修飾していないＴＡＳ−１０３リポソーム製剤）
ＤＳＰＣ４０μｍｏｌ、コレステロール２０μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール＝１０／５）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例１の方法に従い、ペプチドで修飾しないコントロールＴＡＳ−１０３包含リポソーム製剤（ｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
試験例１（リポソームへのＴＡＳ−１０３の封入率）
実施例１及び比較例１〜３で調製したリポソーム溶液の１０倍希釈液１０μＬに１０％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００ｒｅｄｕｃｅｄ溶液２００μＬおよび０．３Ｍクエン酸緩衝液１７９０μＬを加え混合し、さらに超音波処理を行うことによりリポソーム膜を可溶化した。蛍光光度計を用いて励起波長４６８ｎｍ、蛍光波長５６８ｎｍの条件下における混合溶液の蛍光強度を測定し、あらかじめ作成しておいた検量線からリポソーム内のＴＡＳ−１０３量を求めた。その結果、いずれのリポソーム製剤も、リポソーム内へのＴＡＳ−１０３の封入率は９０％以上であり、高い効率で封入されていることが確認された。
試験例２（ＴＡＳ−１０３リポソームの血清中での安定性）
実施例１及び比較例１〜３で調製したリポソーム溶液を３７℃の５０％未非動化ウシ血清−ＰＢＳ（−）で３時間インキュベートし、放出したＴＡＳ−１０３を遠心分離機で除去した後、試験例１の方法でリポソーム内のＴＡＳ−１０３量を求めた。その結果、インキュベート前と比較して９９％以上の封入率を維持しており、血清中で安定であることが確認された。
【表１】
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試験例３（ＴＡＳ−１０３リポソームの抗腫瘍効果と毒性評価）
抗腫瘍効果の評価に用いる高肺転移性腫瘍細胞株Ｌｅｗｉｓ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａを５％ＣＯ２存在下、３７℃１０％ＦＢＳ（Ｆｅｔａｌ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ、ウシ胎児血清）−ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ、ダルベッコ改変イーグル培地）中で培養し、継代した。５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した高肺転移性腫瘍細胞株Ｌｅｗｉｓ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａを６週齢雄性Ｃ５７ＢＬ／６マウスの左腹側部に０．２ｍＬ皮下投与して固形がん担がんマウスを作成した。Ｌｅｗｉｓ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｒｃｉｎｏｍａ移植  ７、１１および１５日後の計３回、コントロールとしてリン酸緩衝液〔ＰＢＳ（−）〕および実施例１ならびに比較例１〜３で調製されたＴＡＳ−１０３封入リポソーム溶液（ＴＡＳ−１０３として２０ｍｇ／ｋｇ）を０．２ｍＬ／ｂｏｄｙ／ｄａｙをマウスの尾静脈内に投与した。がん移植３日後から腫瘍容積を測定することにより、ＴＡＳ−１０３封入リポソーム溶液の抗腫瘍効果を調べた。腫瘍容積は以下の式を用いて算出した。
腫瘍容積（Ｔｕｍｏｒ  Ｖｏｌｕｍｅ）＝０．４×ａ×ｂ２
（ａ：腫瘍部位の長径、ｂ：腫瘍部位の短径）
その結果、図１に示すように、ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３処置群は、ＡＰＲＰＧ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３処置群、ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３処置群及びｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３処置群に比べ有意な腫瘍増殖抑制効果を示した。なお、ｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３の抗腫瘍効果は、リポソーム化していないＴＡＳ−１０３溶液よりも高いことは以前に確認されている。図１において、＊＊は有意差検定の結果がｐ＜０．０１であることを示し、＊は有意差検定の結果がｐ＜０．０５であることを示す。
また副作用の指標として体重変化を調べた。図２に示すように、すべての群において体重の減少が見られたが、ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＴＡＳ−１０３処置群ではその程度が最も小さかった。
実施例２（複数のペプチドで修飾したドキソルビシンリポソーム製剤）
ＤＳＰＣ２０μｍｏｌ、コレステロール１０μｍｏｌ、ステアロイル化したＰＲＰ配列を含むペプチド（Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ）２μｍｏｌ及びステアロイル化したＲＧＤ配列を含むペプチドＣ１８−ＧＲＧＤＳ  ２μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ／Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ＝１０／５／０．５／０．５）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。エバポレーターで減圧下、クロロホルムを留去し、ナス型フラスコの内壁面に脂質薄膜を形成させた。さらにデシケーター内で１時間真空乾燥した。次に０．３Ｍクエン酸溶液（ｐＨ４．０）０．５ｍＬで水和後、凍結融解を３回行った。バス型ソニケーターを用いて１０分間超音波処理した後、エクストルーダー（リペックスバイオメンブラン社製）を用い、孔径１００ｎｍのポリカーボネートメンブランフィルター（ヌクレポア）に３回通過させてリポソームの平均粒子径を約１００ｎｍに調節した。次に０．５Ｍ炭酸ナトリウム溶液０．２ｍＬを加えてｐＨ７．５とし、さらに２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）を加えて全量を１ｍＬとし、調整したリポソーム溶液を６０℃に静置した。
次に、抗腫瘍活性物質  塩酸ドキソルビシンを２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ緩衝液に２ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解した溶液１ｍＬを加え、６０℃で３０分間振とうインキュベートすることによりドキソルビシンをリポソーム内に封入した。さらに、封入されていない薬物を除去するために、超遠心分離（１０００００ｇ、１０ｍｉｎ、４℃）を３回行い上清を除去した後、０．３Ｍスクロースリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を用いて懸濁し、ＡＰＲＰＧペプチド及びＧＲＧＤＳペプチドで修飾したドキソルビシン包含リポソーム製剤（ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例５（単独のペプチドで修飾したリポソーム製剤）
ＤＳＰＣ２０μｍｏｌ、コレステロール１０μｍｏｌ、Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ  ２μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＡＰＲＰＧ＝１０／５／１）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例２の方法に従い、ＡＰＲＰＧペプチドで修飾したドキソルビシン包含リポソーム製剤（ＡＰＲＰＧ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例６（単独のペプチドで修飾したリポソーム製剤）
ＤＳＰＣ２０μｍｏｌ、コレステロール１０μｍｏｌ、Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ  ２μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール／Ｃ１８−ＧＲＧＤＳ＝１０／５／１）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例２の方法に従い、ＧＲＧＤＳペプチドで修飾したドキソルビシン包含リポソーム製剤（ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
比較例７（ペプチドで修飾していないリポソーム製剤）
ＤＳＰＣ２０μｍｏｌ、コレステロール１０μｍｏｌをナス型フラスコに入れ（脂質構成：ＤＳＰＣ／コレステロール＝１０／５）、５ｍＬのクロロホルムを加えた。以下、実施例１の方法に従い、ペプチドで修飾しないコントロールドキソルビシン包含リポソーム製剤（ｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ）を調製した。リポソームの平均粒子径は０．２μｍであった。
試験例４（ドキソルビシンリポソームの抗腫瘍効果と毒性評価）
抗腫瘍効果の評価に用いるマウス大腸がん細胞株Ｃｏｌｏｎ２６ＮＬ１７を５％ＣＯ２存在下、３７℃１０％ＦＢＳ−ＤＭＥＭ／Ｈａｍ  Ｆ１２中で培養し、継代した。５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製したＣｏｌｏｎ２６ＮＬ１７を６週齢雄性Ｂａｌｂ／ｃマウスの左腹側部に０．２ｍＬ皮下投与して固形がん担がんマウスを作成した。Ｃｏｌｏｎ２６ＮＬ１７移植  １０、１３および１６日後の計３回、コントロールとして０．３Ｍスクロースリン酸緩衝液および実施例２で調製されたドキソルビシン封入リポソーム溶液（ドキソルビシンとして５ｍｇ／ｋｇ）を０．２ｍＬ／ｂｏｄｙ／ｄａｙをマウスの尾静脈内に投与した。がん移植８日後から腫瘍容積を測定することにより、ドキソルビシン封入リポソーム溶液の抗腫瘍効果を調べた。評価方法は試験例３と同じである。
その結果、図３に示すように、ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ処置群は、ＡＰＲＰＧ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ処置群、ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ処置群及びｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ処置群に比べ有意な腫瘍増殖抑制効果を示した。なお、ｃｏｎｔ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸの抗腫瘍効果は、リポソーム化していない塩酸ドキソルビシン溶液よりも高いことは以前に確認されている。図３において、＊は有意差検定の結果がｐ＜０．０５であることを示す。
また副作用の指標として体重変化を調べた。図４に示すように、ＡＰＲＰＧ・ＧＲＧＤＳ−ｌｉｐｏ．ＤＯＸ処置群では体重減少は認められなかった。
これらの試験結果より、複数の腫瘍組織親和性ペプチドで修飾した抗腫瘍活性物質封入リポソーム製剤は、リポソーム化していない溶液、通常のリポソーム製剤はもとより単独のペプチドで修飾したリポソームと比較しても有意に抗腫瘍活性を増強し、毒性を軽減することが示された。抗がん活性の増強の原因は、標的分子の異なる複数の腫瘍組織親和性ペプチドが相乗的に寄与することによって、抗腫瘍活性物質の腫瘍組織への到達性、親和性が著しく向上したためと考えられる。
【産業上の利用可能性】
【０００８】
本発明のリポソーム製剤は、内包した抗悪性腫瘍活性を有する物質の効果を増強し、毒性を低下する作用が従来のリポソーム製剤よりも明らかに優れていることが示されたことから、悪性腫瘍の実際の治療において、副作用を軽減しながらがんの進行を抑えることが大いに期待できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年3月24日(2008.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗腫瘍活性物質を内包し、２種以上の腫瘍組織親和性ペプチドがリポソーム表面に結合されたリポソーム製剤。
【請求項２】
腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種のペプチドを少なくとも含む請求の範囲第１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項３】
腫瘍組織親和性ペプチドとして、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドを少なくとも含む請求の範囲第１項又は第２項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項４】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド、ＰＬＰＬ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドからなる群から選ばれる２種以上のペプチドである請求の範囲第１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項５】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド及びＰＲＰ配列を含むペプチドである請求の範囲第１項又は第４項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項６】
腫瘍組織親和性ペプチドが、ＲＧＤ配列を含むペプチド、ＰＲＰ配列を含むペプチド及びＮＧＲ配列を含むペプチドである請求の範囲第１項又は第４項のいずれか１項記載のリポソーム製剤。
【請求項７】
各腫瘍組織親和性ペプチドの構成アミノ酸数が３〜１５である請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【請求項８】
脂質成分の少なくとも１種がジパルミトイルホスファチジルコリン又はジステアロイルホスファチジルコリンである請求の範囲第１〜７項のいずれか１項に記載のリポソーム製剤。
【国際調査報告】
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