(57)【要約】  低コストで環境中に含まれる環境汚染物質である内分泌撹乱物質や一部の発がん物質等を容易に検出でき、かつ継続的にモニタリングを可能とする遺伝子導入非ヒト哺乳動物を提供する。  有害化学物質を含む環境に置かれるとアルカリホスファターゼを体液中に分泌するように、ダイオキシン類高感受性遺伝子（MMTV-DRE）の下流に分泌型アルカリホスファターゼ（SEAP）遺伝子を結合させた遺伝子（MMTV-DRE-SEAP）を非ヒト哺乳動物、例えばマウスに導入する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生する遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項２】
前記有害化学物質は、ダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素である請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項３】
前記マーカータンパクは、分泌型アルカリホスファターゼである請求項１又は請求項２に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項４】
導入遺伝子が、ダイオキシン類高感受性遺伝子（MMTV-DRE）の下流に分泌型アルカリホスファターゼ（SEAP）遺伝子を結合させた遺伝子（MMTV-DRE-SEAP）である請求項１から３のいずれか１項に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項５】
前記非ヒト哺乳動物は、マウス又はラットであることを特徴とする請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項６】
有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生する遺伝子導入非ヒト哺乳動物を評価環境中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるマーカータンパクの活性を指標とし、前記評価環境中に含まれる有害化学物質を定量する環境中有害化学物質の定量方法。
【請求項７】
前記有害化学物質は、ダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素である請求項６に記載の環境中有害化学物質の定量方法。
【請求項８】
前記マーカータンパクは、分泌型アルカリホスファターゼである請求項６又は請求項７に記載の環境中有害化学物質の定量方法。
【請求項９】
有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生する遺伝子導入非ヒト哺乳動物をタバコ煙を主とする汚染空気中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるマーカータンパクの活性を指標とし、タバコ煙の生物学的毒性を評価するタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１０】
前記マーカータンパクは、分泌型アルカリホスファターゼである請求項９に記載のタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１１】
導入遺伝子が、ダイオキシン類高感受性遺伝子（MMTV-DRE）の下流に分泌型アルカリホスファターゼ（SEAP）遺伝子を結合させた遺伝子（MMTV-DRE-SEAP）である請求項９又は請求項１０に記載のタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１２】
前記非ヒト哺乳動物は、マウス又はラットであるタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１３】
請求項６又は請求項７に記載の環境中有害化学物質の定量方法を時系列的に実施し、評価環境中に含まれる有害化学物質をモニタリングする環境中有害化学物質のモニタリング方法。
【請求項１４】
請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物を用いた、芳香族炭化水素受容体機能を促進する促進物質、又は抑制する抑制物質のスクリーニング方法。
【請求項１５】
請求項１４に記載のスクリーニング方法により得られた物質を有効成分として含有する、芳香族炭化水素受容体機能の促進物質、又は抑制物質。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、環境中有害化学物質である、ダイオキシン類、多環芳香族炭化水素などの内分泌撹乱物質や一部の発がん物質等に反応して、分泌型アルカリホスファターゼ（SEAP）を産生・分泌する遺伝子導入非ヒト哺乳動物、およびこれを用いて環境中の有害化学物質を検出・定量、又はモニタリングする環境中有害化学物質のモニタリング法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ダイオキシン類、多環芳香族炭化水素などは、ヒトの健康に様々な影響を及ぼす。それら環境中有害化学物質の作用は、芳香族炭化水素受容体（以下、AhR）と呼ばれる細胞内受容体への結合とその活性化により引き起こされることが知られている。【０００３】
また、タバコ煙の中にはダイオキシン類の他、コプラナーPCBやベンツピレン等の多環芳香族炭化水素など、芳香族炭化水素が多数かつ複合的に含有されており、AhRの活性化がタバコ煙による健康障害においても重要な役割を果たしていることが示唆されている。【０００４】
芳香族炭化水素等の環境中有害化学物質は、極微量で種々の有害作用を惹起する。従って、鋭敏かつ迅速にこれら有害化学物質を検出する方法の確立は、健康障害を予防する上で緊急の課題と言える。【０００５】
現在、ダイオキシン類の検出と定量には公定法である高分解能ガスクロマトグラフ質量分析法が用いられているが、この手法は高精度であるものの、前処理や測定に多大な手間とコストを要する。こうした現状を受けて近年、培養細胞を用いた幾つかの簡易測定法（リポーターバイオアッセイ法等の生物検定法）の報告がなされてきた。【０００６】
2000年米国環境保護庁はこうした手法を環境サンプルのスクリーニング法として採用し、2002年にはEUで食品・飼料のダイオキシン類含量検定のためのスクリーニング法として同様の手法が認定された。こうした現状や上記の公定法による問題点を考慮し、2004年我が国の環境省はダイオキシン類の汚染監視調査において簡易測定法の適用を認め、さらに生物検定法を用いたダイオキシン類の簡易測定法についての検討を進めている。【０００７】
こうした現状を鑑み、発明者はAhRの活性化を指標として、環境中芳香族炭化水素検出のための簡便で高感度なバイオアッセイDRESSA法を開発した（非特許文献１）。この手法は、ダイオキシン応答配列（DRE）と呼ばれるAhRの結合塩基配列をセンサーとし、その下流にSEAP遺伝子を結合させてリポーターとして用いた新しいアッセイ法である。【０００８】
この遺伝子構造をマウスの肝癌細胞に導入し、AhRが芳香族炭化水素により活性化されるとSEAPを発現・分泌するHeDS細胞lを樹立した。このセンサー細胞にダイオキシンを含む試料を添加すると、濃度依存的に培養液中にSEAPが分泌される。従って培養液中のSEAP活性を測定することにより、試料中のダイオキシン類、多環芳香族炭化水素を検出・定量することが可能である。【０００９】
このDRESSA法により、多数の環境サンプルを、極小のスケールで、安価、短時間、かつ高感度にアッセイすることが可能である。また、このシステムはタバコ煙中の芳香族炭化水素にも鋭敏に反応することが確認されている（非特許文献３）。【００１０】
しかし培養細胞を用いたアッセイ系には、幾つかの限界がある。即ち、１）環境サンプルを培養系に添加するためには、環境有害化学物質を抽出・濃縮するという人工的な操作・過程が介在し、未処理のサンプルの直接的な評価が困難であること、２）動物個体における有害化学物質の影響を現実と同じ曝露様式で直接的に検討することができないこと、３）空気・食品・水など複数の経路を介した複合的な有害化学物質への曝露を統合的に評価できないこと、４）慢性長期的な曝露効果が検討できないこと、などである。【００１１】
こうした問題を克服するためには、芳香族炭化水素に曝露されるとマーカー遺伝子が発現する遺伝子組換え動物を樹立し、評価に用いる必要がある。これまで、DREの下流にβ-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んだ遺伝子導入マウスを用いた検討が一例報告されている（非特許文献２）。【００１２】
このシステムの決定的な問題点としては、１）内因性のβ-ガラクトシダーゼの影響を除外できず、定量性に乏しい、２）マーカータンパクが分泌されないため、測定時にマウスを殺さねばならない、３）従って同一の動物個体を再利用できず（即ち同一個体を用いた継続的な評価が出来ず）、環境のモニタリングに用いた場合膨大なコストがかかる、４）アッセイのためには臓器を摘出し、組織を破砕・溶解し、マーカータンパクを抽出する操作が必要で、煩雑かつ時間がかかる、等が挙げられる。これらの問題点は、実際にこうしたマウスを環境のモニタリングに利用することを極めて困難にしている。また、分泌型リポータータンパクを発現・分泌するトランスジェニックリポーターアニマルは、これまでのところない。
【非特許文献１】特願2004-153293
【非特許文献２】Willey JJ, StrippBR, BaggsRB, and GasiewiczTA. Aryl hydrocarbon receptor activation in genital tubercle, palate, and other embryonic tissues in 2,3,7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-responsive lacZ mice. Toxicol Appl Pharmacol151:33-44, 1998.
【非特許文献３】PCT/JP2005/8875
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
そこで本発明は、現実の環境の中で直接的に有害化学物質である、例えば内分泌撹乱物質や一部の発がん物質等を容易に検出でき、かつ複合的な環境中有害化学物質の影響を総合的かつ継続的に評価することを可能とする遺伝子導入非ヒト哺乳動物、およびこれを用いた環境有害化学物質のモニタリング方法等を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生し、体液中に分泌する遺伝子導入非ヒト哺乳動物である。前記環境中有害化学物質としては、ダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素である。また、前記マーカータンパクは、分泌型アルカリホスファターゼであることは好ましい。分泌型アルカリホスファターゼをマーカータンパクとすることで、微量の体液（例えば、血液）の採取のみで評価が可能になり、臓器を摘出し組織を破砕・溶解してタンパクを抽出する必要がない。【００１５】
導入遺伝子は、ダイオキシン類高感受性遺伝子（MMTV-DRE）の下流に分泌型アルカリホスファターゼ（SEAP）遺伝子を結合させた遺伝子（MMTV-DRE-SEAP）であることは好ましい。また、前記非ヒト哺乳動物は、マウス又はラットであることは好ましい。【００１６】
本発明は、有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生する遺伝子導入非ヒト哺乳動物を評価環境中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるマーカータンパクの活性を指標とし、前記評価環境中に含まれる環境中有害化学物質を検出・定量することを特徴とする。【００１７】
前記環境中有害化学物質としては、ダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素であり、前記マーカータンパクが分泌型アルカリホスファターゼであることは好ましい。【００１８】
本発明は、有害化学物質を含む環境に置かれるとマーカータンパクを産生する遺伝子導入非ヒト哺乳動物を、タバコ煙を主とする汚染空気中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるマーカータンパクの活性を指標とし、タバコ煙の生物学的毒性を評価する方法である。前記マーカータンパクは分泌型アルカリホスファターゼであることは好適である。【００１９】
本発明は、上述した環境中有害化学物質測定方法を時系列的に行い、評価環境中に含まれる環境中有害化学物質をモニタリングする環境中有害化学物質のモニタリング方法である。【００２０】
本発明は、上述した遺伝子導入非ヒト哺乳動物を用いて、芳香族炭化水素受容体機能を促進する促進物質、又は抑制する抑制物質のスクリーニング方法である。【００２１】
また、本発明は、上述した芳香族炭化水素受容体機能を促進する促進物質、又は抑制する抑制物質のスクリーニングにより得られた物質を有効成分として含有する、芳香族炭化水素受容体の機能の促進物質、又は抑制物質である。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、現実の環境で直接的に環境中有害化学物質である、例えば内分泌撹乱物質や一部の発がん物質等を容易に検出できる。また、複合的な環境中有害化学物質の影響を統合的に評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２３】
【図１】ダイオキシン類等応答性プラスミド（pDRE-SEAP）の構造図である。
【図２】精製したDNA断片MMTV-DRE-SEAP-polyAの電気泳動像を示した図である。
【図３】産仔のゲノムへのSEAP遺伝子の組み込みを検討した図（PCR法）である。
【図４】ダイオキシン経口投与前、及び投与24時間後の血清SEAP活性を示したグラフ化した図である。
【図５】血中SEAP活性の経時的な変化をグラフ化した図である。
【図６】TCDDの経口投与量を変化させた場合の血中SEAP活性の推移をグラフ化した図である。
【図７】TCDD経口投与前および投与後3日、21日目の肝臓におけるSEAP、 cytochromeP450（CYP1A1）、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)の遺伝子発現をPCR法により観察した結果である。
【図８】TCDDに対するDRESSAマウスの反応性の性差を示した図である。
【図９】DRESSAマウスを一時的にタバコ煙に曝露させ、その後の血中SEAP活性の推移を追ったグラフである。
【符号の説明】
【００２４】
1     HeDS細胞
10    ダイオキシン類応答性プラスミド（pDRE-SEAP）
11    ダイオキシン類高感受性遺伝子配列（MMTV-DRE）
12    分泌型マーカータンパク遺伝子（SEAP）
13    ポリアデニレーションシグナル（polyA）
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
発明を実施するための最良の形態について以下に述べる。【００２６】
図１はダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素反応性プラスミドpDRE-SEAP10の構造図を示したものである。pDRE-SEAP10は、マウス乳ガンウイルスのプロモータ（以下、MMTV）の一部にダイオキシン類応答DNA配列（以下、DRE）を組み込んだダイオキシン類高感受性DNA配列（以下、MMTV-DRE11）およびその下流に位置する分泌型アルカリホスファターゼ（以下、SEAP）遺伝子12と、サルウイルス40（以下、SV40）由来のポリアデニレーションシグナル（以下、polyA13）とにより構成されている。【００２７】
MMTV-DRE11は、ダイオキシン類に応答して活性化されることが知られているDREを4個、MMTVのプロモーターの一部に組み込んだものである。DRE単独のものに比べ強力なダイオキシン類への応答性がある。マーカータンパクとしてはSEAPを用いた。SEAPを含め、これまで分泌型マーカータンパクを用いたダイオキシン類のバイオアッセイ系は確立されていなかった。SEAPはルシフェラーゼと並び高感度に検出しうるマーカータンパクであるが、ルシフェラーゼと異なり細胞外に分泌されるため、細胞を破壊してタンパクを抽出する操作が不要である。【００２８】
pDRE-SEAP10は遺伝子工学的常法により作製する。即ち、制限酵素により切り出し精製したMMTV-DRE11の断片を、プロモーターを持たないSEAPプラスミドのSEAP遺伝子12の上流に、T4DNAリガーゼを用いて組み込めばよい。【００２９】
T4DNAリガーゼは、隣接するDNA鎖の5'末端と3'末端とを連結する酵素である。作製したpDRE-SEAP10は大腸菌に導入して大量に増やし、遺伝子工学的常法によりpDRE-SEAP10を精製する。【００３０】
このpDRE-SEAPを制限酵素MluIおよびSalIにより切断し、3.8 kbのDNA断片MMTV-DRE-SEAP-polyAをアガロースゲルを用いた電気泳動により精製する。これを妊娠マウス（C57BL/6）から採取した受精卵雄性前核に注入し、偽妊娠マウスの卵管に移植する。移植した遺伝子導入受精卵から産仔を得ることで本発明の遺伝子導入マウスを作成することができる。
【実施例】
【００３１】
以下実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。【００３２】
遺伝子工学的常法によりpDRE-SEAP10を作成した。このpDRE-SEAPを制限酵素MluIおよびSalIにより切断し、3.8 kbのDNA断片MMTV-DRE-SEAP-polyAをアガロースゲルを用いた電気泳動により精製した。図２は精製したDNA断片MMTV-DRE-SEAP-polyAの電気泳動像である。DNA断片MMTV-DRE-SEAP-polyAを妊娠マウス（C57BL/6）から採取した受精卵雄性前核に注入し、それを偽妊娠マウスの卵管に移植して産仔を得、26匹の産仔の離乳に成功した。その産仔の尾の一部を採取し、DNAを抽出し、PCR法を行うことにより、5匹の産仔（No.2,5,15,24,25）においてSEAP遺伝子のゲノムへの組み込みを確認した（図３）。これらのマウスのうちNo.25を野生型マウスと交配させ、得られた雄の産仔のうちPCR法によりSEAP遺伝子のゲノムへの組み込みが確認されたものを以下に述べる実験に使用した。【００３３】
樹立した遺伝子導入マウス（以下、DRESSAマウス）および野生型マウス（C57BL/6）の血液を尾静脈から採取した後、胃ゾンデを用いて2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin（TCDD；ダイオキシン）を5 ng/g体重で強制経口投与した。その後24時間毎に採血を行い、血清中のSEAP活性を化学発光のシステムにより測定した。【００３４】
具体的には、5μlの血清に15μlの緩衝液を加え、30分65℃でインキュベートし、内因性のアルカリホスファターゼ活性を失活させた。さらに内因性のアルカリホスファターゼの阻害剤であるL-ホモアルギニンを含む緩衝液を20μl加え5分放置した後、15μlの基質CSPDを加えた。30分暗所にて静置した後、ルミノメーターでSEAP活性を定量した。【００３５】
図４に示す通り、DRESSAマウスにTCDDを投与した場合、血中SEAP活性は24時間後にはTCDD投与前の約12倍に達した。一方、野生型マウスにTCDDを投与した場合、血中SEAP活性の上昇は全く認められなかった。【００３６】
図5はその後の血中SEAP活性の経時的な変化をグラフ化した図である。TCDDの経口単回投与により、その後も血中SEAP活性は上昇を続け、28日をピークとしてその後徐々に低下する推移をとった（●で示す推移）。一方、TCDD非投与のDRESSAマウスには、血中SEAP活性の上昇は全く認められなかった（○で示す推移）。【００３７】
以上のように、DRESSAマウスを用いることにより、血清中のSEAP活性を指標にした環境有害化学物質のモニタリングが可能である。なお、無刺激時のDRESSAマウスの血中SEAP 活性は、野生型マウスのそれの約2.6倍の値を示した。【００３８】
図6は、TCDDの投与量を変化させた場合の血中SEAP活性の推移を示す。TCDDを0.5, 1, 5 ng/g体重で強制経口投与し、その後21日目までの血中SEAP活性を測定した結果を示すグラフである。図6(a)のグラフに示すように、血中SEAP活性はTCDDの投与量に依存して上昇した。図6(b)のグラフに示すように、0.5 ng/g体重の低用量でも、7日目をピークとする一過性のSEAP活性の上昇を認めた（約4倍）。すなわちDRESSAマウスにおける血中SEAP活性は、有害化学物質の曝露量に相関して増加することがわかる。なお、0.1ng/g体重での投与量では、有意なSEAPの上昇は認められなかった。【００３９】
図7は、TCDD投与前および投与後3日、21日目の肝臓におけるSEAP、 cytochrome P450（CYP1A1）、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)の遺伝子発現をPCR法により検討したものである。CYP1A1はTCDDにより誘導されることが知られている酵素、GAPDHはその発現がTCDDにより影響を受けない酵素である。TCDD投与前にはDRESSAマウスの肝臓にSEAP遺伝子の発現は認められないが、TCDD投与後にはSEAP遺伝子の発現誘導が観察され、しかも21日目は3日目よりも高い発現レベルを示した。この経過は、図5に示した血中SEAP活性の推移と極めて良く相関している。このことは、血中SEAP活性がその時々のDREの活性化の程度を良好に反映している事を意味している。【００４０】
図8は、TCDDに対するDRESSAマウスの反応性の性差を見たものである。DRESSA No.25を野生型マウスと交配させ、得られた雌雄のマウスに5 ng/g体重のTCDDを強制経口投与し、その後21日目までの血中SEAP活性を測定した。その結果、雌においても血中SEAP活性の有意な上昇が認められたが、雄に比べその反応性・感度は低く、有害化学物質のモニタリングには雄のDRESSAマウスを用いるべきである事が明らかになった。【００４１】
図9は、タバコ煙中には多種類のAhR活性化物質が含まれている事が知られていることから、DRESSAマウスを一時的にタバコ煙に曝露させ、その後の血中SEAP活性の推移を追ったグラフである。具体的には、500 ml のボトルにマウスを入れ、15分置きに12回、10 mgタールのタバコの主流煙45 mlに曝露させた。その間、ボトルの開口部にはネットを張り、マウスが自由に新鮮な空気を吸入できるようにした（●で示す推移）。対照群として、DRESSAマウスを同様な形でボトルに入れ、15分置きに12回、45 mlの空気に曝露させた（○で示す推移）。タバコ煙への曝露後、 マウスは通常の飼育環境に戻し、連日採血を行なった。図9に示すようにタバコ煙曝露後、血中SEAP活性は12 時間で有意に上昇し、24 時間でピークを示し、その後徐々に値は低下したが、曝露後4日目までSEAP活性の有意な増加が認められた。すなわち、DRESSAマウスにより外気や室内空気の汚染を直接的にモニタリングすることが可能である。【００４２】
本明細書は、２００５年７月１日出願の特願２００５−１９４１８４に基づく。この内容はすべてここに含めておく。
【産業上の利用可能性】
【００４３】
本発明のダイオキシン類をはじめとする芳香族炭化水素等の有害化学物質に反応し、芳香族炭化水素受容体(AhR)の活性化を介してSEAPを産生・分泌する遺伝子導入非ヒト哺乳動物を用いれば、煤煙が問題となる焼却場や工場近隣、排気ガスが問題となる幹線道路沿線等における特定の外気、あるいは喫煙室や喫煙車両等におけるタバコ煙が生物に与える影響について、継続的なモニタリングが可能である。【００４４】
また、食品、飲料水を直接摂取・飲水させることによる有害物質のモニタリングや、環境サンプル、例えば河川水、土壌から抽出した有害化学物質の投与によるモニタリング、あるいはAhRを活性化する化学物質、例えば合成化合物、天然物抽出物質の探索と、その成果の予防医学への応用が可能である。【００４５】
更に、AhRの活性化による有害作用を抑制する物質、例えば合成化合物、天然物抽出物質の探索と、その成果の治療医学への応用、及びタバコ各銘柄の健康への影響度を定量化するための新しいシステムと指標の開発を可能ならしめるものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年4月27日(2007.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マウス乳癌ウイルスのプロモータ（以下、ＭＭＴＶという。）の一部にダイオキシン類及び／又は多環芳香族炭化水素に反応して活性化される遺伝子（以下、ＤＲＥ遺伝子という。）を組み込んだ遺伝子（以下、ＭＭＴＶ−ＤＲＥ）の下流に分泌型アルカリホスファターゼ（以下、ＳＥＡＰ）遺伝子を組み込んだ遺伝子配列が導入され、有害化学物質を含む環境に置かれると、前記ＳＥＡＰが体液中に産生されることを特徴とする遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項２】
（削除）
【請求項３】
（削除）
【請求項４】
（削除）
【請求項５】
前記非ヒト哺乳動物は、マウス又はラットであることを特徴とする請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物。
【請求項６】
請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物を有害化学物質を含む評価環境中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるＳＥＡＰの活性を指標とし、前記評価環境中に含まれる有害化学物質を定量することを特徴とする環境中有害化学物質の定量方法。
【請求項７】
（削除）
【請求項８】
（削除）
【請求項９】
請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物をタバコ煙を主とする汚染空気中で活動させ、前記遺伝子導入非ヒト哺乳動物の体液中に含まれるＳＥＡＰの活性を指標とし、タバコ煙の生物学的毒性を評価するタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１０】
（削除）
【請求項１１】
（削除）
【請求項１２】
前記非ヒト哺乳動物は、マウス又はラットである請求項９に記載のタバコ煙の生物学的毒性評価方法。
【請求項１３】
請求項６に記載の環境中有害化学物質の定量方法を時系列的に実施し、評価環境中に含まれる有害化学物質をモニタリングする環境中有害化学物質のモニタリング方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の遺伝子導入非ヒト哺乳動物を用いた、芳香族炭化水素受容体機能を促進する促進物質、又は抑制する抑制物質のスクリーニング方法。
【国際調査報告】
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