(57)【要約】ヒトや動物の成長を促進し、下痢の発生を防ぎ、各種疾病を予防もしくは改善するために、腸管の好酸球を低減する作用を持つ物質、それを飼料添加物として添加した飼料を提供する。α−結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする腸管内好酸球抑制組成物。本発明の組成物は、糖質に換算して0.01〜10重量％を動物飼料に配合して、腸管内好酸球抑制飼料を提供するのに有用である。
2007138905.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項２】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖が、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜１０の整数）
で示される化合物の一種または二種以上である、請求項１に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項３】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖としての含有量が、全オリゴ糖の10〜100重量％であることを特徴とする、請求項２に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項４】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖が、乳糖を加水分解し、加水分解物から分離したガラクトースをα-ガラクトシダーゼの存在下で縮合反応させることにより調製したものである、請求項２または３に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項５】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖が、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜１０の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは１〜９の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上との混合物である、請求項１に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項６】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖としての含有量が10〜80重量％であり、かつ式（２）のα-ガラクトシルグルコースとしての含有量が10〜70重量％であることを特徴とする、請求項５に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項７】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖が、乳糖を加水分解し、得られたガラクトースおよびグルコースを含む加水分解物をα-ガラクトシダーゼの存在下で縮合反応させることにより調製したものである、請求項５または６に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項８】
整腸剤、成長促進剤、腸管における浮腫・リンパ濾胞腫大の予防・治療剤、およびアレルギー予防・治療剤からなる群の少なくとも一種として使用するための請求項１〜７のいずれか一項に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項９】
動物用である、請求項８に記載の腸管内好酸球抑制組成物。
【請求項１０】
請求項９に記載の腸管内好酸球抑制組成物を添加した動物用の腸管内好酸球抑制飼料。
【請求項１１】
下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上からなる前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して0.01〜10重量％含有することを特徴とする、請求項１０に記載の動物用の腸管内好酸球抑制飼料。
【請求項１２】
下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは１〜９の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上とからなる混合物を含む前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して0.01〜10重量％含有することを特徴とする、請求項１０に記載の動物用の腸管内好酸球抑制飼料。
【請求項１３】
α-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする肝機能改善組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腸管内好酸球抑制組成物に関し、より詳細には、腸管内の好酸球浸潤を抑制して好酸球に関連する各種疾病を予防するための組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の栄養学的な飼養管理技術の向上によって、畜産物製造における飼料転換効率は、優れたものとなった。しかし、有害微生物による感染症の発症は、畜産製造現場にとって深刻な被害をもたらす要因として、現在も未解決の難題である。この感染症を引き起こす原因は、畜産動物の病原性菌との接触によるものであり、したがって畜舎を衛生的に保つことが重要である。【０００３】
ここで、衛生状態を悪化させる要因の一つに、家畜動物の軟便化の問題がある。家畜動物の下痢や軟便といった症状は、畜舎の衛生面のみならず、動物の成長阻害要因にもなる。さらには、糞の廃棄や再利用を目的とした乾燥のためのエネルギーコストの増大なども引き起こすため、近年の畜産業における重大な問題になっている。【０００４】
従来、家畜飼料には、感染症予防を目的として、多くの抗生物質が使用されてきた。最近、抗生物質耐性菌のヒトへの感染が危惧される中で、飼料用途の抗生物質使用の制限する意識が世界的に高まっている。一方で、成長促進用飼料添加物の投与を中止した諸外国で、特に離乳期子豚の下痢や疾病が増加し、かえって治療目的の抗生物質の使用が増えていることも指摘されている。したがって、抗生物質の危険性が完全には払拭されていない状況で、家畜の成長を維持するために抗生物質を使用せざるを得ないのが現状である。
【発明の開示】
【０００５】
正常な哺乳類の腸管内には、通常、好酸球が見られない。しかし、現在の養豚農家で飼育されている健常な豚にも小腸局所的に好酸球が見られることが、最近の研究によって明らかとなった。これらの所見の発症機序は、全く不明であるが、小腸を主要発症部位とする疾病が、近年、特に流行していることから、腸管における好酸球の存在と疾病との関係が疑われる。腸管における好酸球の存在は、下痢症や成長の抑制を引き起こすのみならず、腸管にダメージを与え、感染症をはじめとした様々な疾病の原因ともなる。下痢や軟便を伴う諸症状は、家畜動物のみならず、ヒトや愛玩動物でも起こる重要な問題である。
【０００６】
腸内細菌叢を整える作用などの効用を持つとされるβ−結合ガラクトオリゴ糖を飼料用添加物として利用することが提案されている（特開平０５−１８４３０８、特開昭６２−１３８１４７、特開平５−２１９８９７、特開２００１−１０３９１１、特開平０１−１５１５２０）。これらは、腸管内に自然発症する好酸球を低減する物質ではない。
【０００７】
腸管に存在する好酸球を抑制する物質が全く知られていない現状において、そのような物質を提供することが求められている。そこで、本発明は、腸管内の好酸球を低減する作用を持つ物質とその用途を提供することを目的とする。
【０００８】
本発明者らは、上記課題を鋭意研究努力した結果、α-結合ガラクトオリゴ糖を主成分とする組成物を動物などに投与することで、上記課題が解決されることを見出し、本発明に至った。すなわち、本発明は、α-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする腸管内好酸球抑制組成物を提供する。α-結合ガラクトオリゴ糖には、腸内ビフィズス菌増殖作用や抗う蝕作用があることが知られている（特開平０５−１４０１７８、ＷＯ２００３／１０１４６４、ＷＯ２００２／１８６１４）。このビフィズス菌は、腸内で酪酸、プロピオン酸、酢酸などの短鎖脂肪酸を生産し、腸管内のpHを低下させ、大腸菌などの有害菌の増殖を抑制する。さらに、作られた短鎖脂肪酸が腸管を刺激してぜん動運動が促進され、便秘や下痢を改善するものである。したがって、α-結合ガラクトオリゴ糖が好酸球の腸管内浸潤を抑制する機能があることは、全く知られていなかった。
【０００９】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖は、例えば下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数）
で示される化合物の一種または二種以上である。
【００１０】
その場合、前記α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖（α−（Ｇａｌ）２）としての含有量は、10〜100重量％であることが望ましい。また、前記α-結合ガラクトオリゴ糖は、乳糖を加水分解し、加水分解物から分離したガラクトースをα-ガラクトシダーゼの存在下で縮合反応させることにより調製したものであることが好ましい。
【００１１】
前記α-結合ガラクトオリゴ糖は、また、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは１〜９の整数である）
で示される化合物（以下、α-ガラクトシルグルコースともいう）の一種または二種以上との混合物でもよい。
【００１２】
その場合、前記α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖としての含有量が１0〜80重量％であり、かつ式（２）で示されるα-ガラクトシルグルコースとしての含有量が１0〜70重量％であることが好ましい。また、前記α-結合ガラクトオリゴ糖が、乳糖を加水分解し、ガラクトースおよびグルコースを含む加水分解物をα-ガラクトシダーゼの存在下で縮合反応させることにより調製したものであることが好ましい。
【００１３】
本発明のα-結合ガラクトオリゴ糖組成物は、整腸剤、成長促進剤、腸管における浮腫・リンパ濾胞腫大の予防・治療剤、およびアレルギー予防・治療剤からなる群の少なくとも一種として使用するのに好適である。
【００１４】
本発明のα-結合ガラクトオリゴ糖組成物は、ヒト、愛玩動物、家畜動物などに施用できるが、好ましくは家畜動物用、さらに好ましくは豚用、特に好ましくは幼齢の仔豚用に施用することができる。
【００１５】
したがって、本発明は、α-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする腸管内好酸球抑制組成物を添加した動物用の腸管内好酸球抑制飼料もまた提供する。
【００１６】
前記動物用の腸管内好酸球抑制飼料は、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数）
で示される化合物の一種または二種以上である前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して0.01〜10重量％含有することが好ましい。
【００１７】
また、前記動物用の腸管内好酸球抑制飼料は、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは２〜10の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは１〜９の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上との混合物を含む前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して0.01〜10重量％含有することが好ましい。
【００１８】
本発明者は、α-結合ガラクトオリゴ糖に肝機能を整える作用があることも発見した。したがって、本発明は、α-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする肝機能改善組成物もまた提供する。
【００１９】
本発明のα-結合ガラクトオリゴ糖組成物を、例えば飼料に添加して動物などに投与すると、動物の腸管内の好酸球浸潤を抑制することができる。その結果、下痢、浮腫症、感染症を治療および予防するとともに、動物の成長を促進させる。この効果は、下痢症にかかりやすい幼齢の仔豚に特に有効である。さらには、本発明のα-結合ガラクトオリゴ糖組成物は、肝機能を整え、肝機能に関する疾病などを抑えることが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明の腸管内好酸球抑制組成物および比較組成物をそれぞれ配合した飼料を仔豚に給与し、剖検した際の回腸中央部の好酸球の計数値を示す図である。
【図２】本発明の腸管内好酸球抑制組成物および比較組成物をそれぞれ配合した飼料を仔豚に給与した際のGOTの計測値を示す図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物の有効成分であるα−結合ガラクトオリゴ糖とは、α−ガラクトシル基を有するオリゴ糖を意味する。α−結合ガラクトオリゴ糖は、好ましくは、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは、２〜10の整数、好ましくは２〜８の整数である）
で表される化合物の一種または二種以上である。【００２２】
式（１）の化合物は、天然原料から抽出され、あるいは、ガラクトースをα−ガラクトシダーゼの存在下で縮合させる反応により得られる。後者の場合、通常、α−ガラクトシル二糖、α−ガラクトシル三糖、α−ガラクトシル四糖以上などの複数のオリゴ糖が混在したα−結合ガラクトオリゴ糖が得られる。ガラクトースの結合位置、結合数、これらのオリゴ糖類の比率は、用いた酵素の由来や反応形式によって変わり得る。【００２３】
α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖としての含有量は、30〜100重量％が好ましく、より好ましくは40〜100重量％である。α-ガラクトシル二糖としての含有量が30重量％未満であると、有効量の摂取が難しい場合がある。【００２４】
α−結合ガラクトオリゴ糖は、式（１）の化合物と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは１〜９の整数、好ましくは１〜７の整数である）
で表される化合物の一種または二種以上との混合物でもよい。【００２５】
式（２）の化合物は、天然原料より抽出され、あるいはガラクトースおよびグルコースをα−ガラクトシダーゼの存在下で縮合させる反応により得られる。この縮合反応では、通常、式（１）で示されるオリゴ糖と式（２）で示されるα−ガラクトシルグルコースとが混在したα−結合ガラクトオリゴ糖として得られる。ガラクトースの結合位置、結合数、これらのオリゴ糖類の比率は、原料のガラクトースとグルコースの組成、用いた酵素の由来、反応形式により影響を受ける。【００２６】
上記混合物の場合、前記α-結合ガラクトオリゴ糖のα-ガラクトシル二糖としての含有量は、10〜80重量％であり、かつα-ガラクトシルグルコースとしての含有量が10〜70重量％であることが好ましい。α-ガラクトシルグルコースとしての含有量が10重量％未満であると、十分な効果が得られない場合がある。【００２７】
上記縮合反応の原料となるガラクトースは、メリビオース、マンニノトリオース、ラフィノース、スタキオース、プランテオース、ベルバスコース、ガラクタン、ガラクトマンナン、アラビノガラクタン、ラムノガラクタン、ガラクトリピド、フェルラ酸化ガラクトース、ガラクトピニトール、ガラクトシルグリセロール、ガラクチノール、乳糖、ラクチトール、ラクチュロース、ガラクトオリゴ糖のようなα−ガラクトシル基やβ−ガラクトシル基を有するオリゴ糖、配糖体または多糖からβ−ガラクトシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクタナーゼのような酵素、あるいは塩酸、硝酸、リン酸のような無機酸を用いて加水分解することにより調製することができる。市販のガラクトースを使用してもよい。【００２８】
好ましくは、安価な乳糖にβ−ガラクトシダーゼや上記の酸を作用させて、加水分解することにより加水分解物（ガラクトースおよびグルコースの混合物）を得、そこからガラクトースを分離するか、あるいは混合物をそのまま、上記縮合反応へ供する。乳糖の加水分解は、例えば、市販の乳糖を乳糖濃度10％(w/w)、反応温度50℃、β−ガラクトシダーゼ酵素濃度20 U/g-乳糖の条件で行う。【００２９】
式（１）のα−結合ガラクトオリゴ糖のみを合成するための脱水縮合反応に用いるガラクトースは、乳糖の加水分解物からイオン交換クロマトグラフィーや活性炭カラムなどで分離する。ガラクトース画分は、固形分あたり1％の活性炭を加えて、95℃で1時間加熱し、加圧ろ過機にて清澄液を得る。清澄液を脱塩し、温度55℃の真空結晶缶で濃度54％(w/w)まで濃縮する。ガラクトースの種結晶を加え3時間、55℃に保持後、1℃/時間で40℃まで冷却し、ガラクトースを晶析させる。結晶を遠心分離によって回収し、最終的に高純度のガラクトースを得る。【００３０】
上記で得られた加水分解液に、酵母を固形分に対して2％加え、33℃にて93時間保持することにより、酵母を作用させグルコースを資化させ、ガラクトース純度を上げ、更に結晶化することによって高純度のガラクトースを得てもよい。【００３１】
縮合反応に用いる酵素のα−ガラクトシダーゼは、ガラクトースあるいはガラクトースおよびグルコースを原料として脱水縮合反応して、α−結合ガラクトオリゴ糖を合成できるものであれば、起源などを特に限定しない。α−ガラクトシダーゼの具体例として、Aspergillus niger、Aspergillus oryzae、Aspergillus pulverulentus、Penicillium purpurogenum、Penicillium citrinum、Penicillium multicolor、Trichoderma viride、Mortierella vinacea、S. carlsbergensis、Candida guilliermondiiなどの糸状菌、Pycnoporus cinnabarinusなどの担子菌、Bacillus megaterium、Streptococcus bovis、Pseudomonas fluorescens、Diplococcus pneumoniaeなどの細菌、Saccharomyces cervisiaeなどの酵母、Vicia sativa、コーヒー豆、ヒトの生産するα-ガラクトシダーゼが挙げられる。Aspergillus nigerの生産するα-ガラクトシダーゼが収率などの観点から好ましい。より好ましくは、Aspergillus niger （APC-9319株（ＦＥＲＭ ＢＰ−７６８０）、スミチームAGS-Lなど）由来のα-ガラクトシダーゼである。【００３２】
縮合反応に供するガラクトースと適宜のグルコースの濃度、酵素であるα−ガラクトシダーゼの添加量、ｐH、反応温度などの縮合反応条件は、適宜調整される。ガラクトースの濃度は、通常、5〜90重量％であり、好ましくは40〜70重量％である。酵素濃度は、通常、1〜100 U/g-ガラクトースであり、好ましくは5〜30 U/g-ガラクトースである。ｐHは、通常、pH 3.0〜10.0であり、好ましくは4.0〜8.0の範囲である。反応温度は、通常、20〜90℃であり、好ましくは40〜70℃の範囲である。反応時間は、酵素の使用量によって異なるが、通常、１〜240時間であり、好ましくは24〜90時間である。【００３３】
ガラクトースの濃度を高度に高めてα−結合ガラクトオリゴ糖を効率的に製造するために、ガラクトースにα−ガラクトシダーゼを作用させ、予備反応により脱水縮合反応させた後、その反応溶液を減圧濃縮し、その後、本反応により脱水縮合反応させてもよい。本反応は、濃縮液を取り出して予備反応と別の系で行っても、あるいは濃縮液を取り出すことなく予備反応と同じ系で行ってもよい。【００３４】
縮合反応後の溶液には、α-結合ガラクトオリゴ糖以外に、未反応のガラクトースが含まれる。反応物をそのまま利用してもよいが、これらを分画する方法としては、イオン交換クロマトグラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー、特定の微生物に資化させる、溶解度の違いを利用して固液分離するなどの方法がある。【００３５】
原料に乳糖を用いて、式（１）に示すα−（Gal）ｎ（ｎは２〜10）のみからなるα-結合ガラクトオリゴ糖を調製する場合、乳糖加水分解物からガラクトースを分離し、縮合反応生成物から未反応のガラクトースを除去するなどの工程が必要である。乳糖加水分解後の分画操作を行なわずに、乳糖加水分解物にα-ガラクトシダーゼを直接作用させることによって、式（１）および式（２）に示すα-結合ガラクトオリゴ糖を合成してもよい。この方法は、製造コストアップを招く上記の精製工程を省き、乳糖加水分解物を効率的に利用できる上で、経済性が要求される飼料分野用に好適である。さらに、α-ガラクトシルグルコースを含むα-結合ガラクトオリゴ糖は、低摂取量で幼齢の仔豚の成長を顕著に促進する作用がある点でも好ましい。【００３６】
以上のように製造された本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、シロップ状の液体であり、それをそのまま使用することができる。さらに、食品学・薬理学的に許容される賦形剤（乳糖、ショ糖、ブドウ糖、コーンスターチ、ゼラチン、澱粉、デキストリン、無水珪酸、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、重炭酸ナトリウム、酵母、水、ソルビトール、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、エチレングリコール、ポリエチレングリコール、脂肪油など）、結合剤、崩壊剤、安定剤、滑沢剤、粘滑剤、防腐剤、防カビ剤、抗酸化剤、懸濁剤、溶解補助剤、香味剤、甘味剤などと混合して使用することも可能である。【００３７】
液体または固体の本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、適宜、粉末剤、顆粒剤、錠剤、ビスケット、フレーク、ソフトカプセル剤、ハードカプセル剤、シロップ剤の形態に加工される。【００３８】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、主として、上記形態からなる機能性食品や健康食品、あるいは上記形態の組成物の配合された腸管内好酸球抑制食品や動物用の腸管内好酸球抑制飼料として提供される。【００３９】
上記食品の具体例には、パン、そば、うどん、焼きそば、せんべい、クッキー、ビスケット、飴、スープなどの食品、牛乳、ヨーグルト、アイスクリームなどの乳製品、炭酸飲料、清涼飲料、果汁、薬系ドリンクなどの飲料が挙げられる。【００４０】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、好ましくは動物用飼料に配合される。動物用飼料は、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは、２〜10の整数、好ましくは２〜８の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上からなる前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して、通常、0.01〜10重量％、好ましくは0.01〜5重量％、より好ましくは腸管内好酸球抑制機能とそれに基づく整腸作用、成長促進作用などを最大限に発揮する点で0.025〜2.5重量％含有する。式（１）のα-結合ガラクトオリゴ糖の含有量が、0.01重量％未満であると、有効量に達しない場合があり、逆に10重量％より多すぎると、過剰摂取となる場合がある。【００４１】
より好ましい動物用飼料は、低廉な製造コストで調製できる観点から、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎ                  （１）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、ｎは、２〜10の整数、好ましくは２〜８の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上と、下記式：
α−（Ｇａｌ）ｎＧｌｃ            （２）
（式中、Ｇａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ｎは、１〜９の整数、好ましくは１〜７の整数である）
で示される化合物の一種または二種以上との混合物からなる前記α-結合ガラクトオリゴ糖を、糖質に換算して、通常、0.01〜10重量％、好ましくは0.01〜5重量％、より好ましくは腸管内好酸球抑制機能とそれに基づく整腸作用、成長促進作用などを最大限に発揮する点で0.025〜2.5重量％含有する。式（１）のα-結合ガラクトオリゴ糖の含有量が、0.01重量％未満であると、有効量に達しない場合があり、逆に10重量％より多すぎると、過剰摂取となる場合がある。【００４２】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物を添加する飼料には、通常用いられる飼料用原料を用いればよく、例えば米、玄米、ライ麦、小麦、大麦、トウモロコシ、コーングルテンミール、コーンジャームミール、北洋ミール、マイロなどの穀類；ふすま、脱脂米ぬか、コーングルテンフィードなどのそうこう類；大豆粕、なたね油脂、大豆油脂、粉末精製牛脂、動物性油脂などの油脂類；硫酸マグネシウム、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸亜鉛、ヨウ化カリウム、硫酸コバルト、炭酸カルシウム、リン酸三カルシウム、塩化ナトリウム、リン酸カルシウム、塩化コリンなどの無機塩類；リジン、メチオニンなどのアミノ酸類；ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＤ、ビタミンＥ、パントテン酸カルシウム、ニコチン酸アミド、葉酸などのビタミン類；脱脂粉乳などの人工乳；アルファルファミール；魚粉；乾燥ホエーなどが挙げられる。【００４３】
本発明の組成物を水などで適当に希釈して血中に注射することも可能である。また、本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、α−結合ガラクトオリゴ糖の有する腸管内好酸球抑制効果を失わない限り、他の医薬との混合医薬として供することもできる。【００４４】
本発明のα-結合ガラクトオリゴ糖を有効成分とする腸管内好酸球抑制組成物の摂取量は、整腸剤、成長促進剤、腸管における浮腫・リンパ濾胞腫大の予防・治療剤、およびアレルギー予防・治療剤、肝機能改善剤などの用途、ヒトや動物における年齢、体重、投与方法などによって適宜調整される。ヒトや動物の場合、通常、α-結合ガラクトオリゴ糖として、1 ｍｇ〜20 ｇ／日であり、好ましくは10 ｍｇ〜5 ｇ／日、より好ましくは10 ｍｇ〜４ ｇ／日である。【００４５】
以下に実施例を用いて、本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
〔実施例１および２〕
（α−結合ガラクトオリゴ糖の調製）
α−結合ガラクトオリゴ糖として式（１）のα−結合ガラクトオリゴ糖のみを含むオリゴ糖組成物（以下、α−GOS  Aという）、ならびに式（１）のα−結合ガラクトオリゴ糖と式（２）のα−ガラクトシルグルコースを含むα−結合ガラクトオリゴ糖（以下、α−GOS  Bという）の二種類を、以下の手順で調製した。【００４６】
（α−GOS Aの調製）
乳糖(400 kg)を水に溶解し、10％(w/w)、pH 6.5に調整し、β-ガラクトシダーゼ（製品名  ラクトレスL3、大和化成（株）製）20 U/g-乳糖を加え、50℃で加水分解反応を行った。次いで、酵母を固形分に対し２％加え、33℃にて93時間保持した。【００４７】
反応終了後、固形分あたり１％の活性炭を加え95℃にて1時間加熱し、加圧ろ過機にて清澄液を得、ガラクトース純度77.9％の結晶化原液を調製した。この原液を冷却晶析法により結晶化し、遠心分離機にて糖蜜と結晶の分離を行った後、冷水にて結晶を洗浄したところ、純度97.0％のガラクトース結晶を収率37％で65 kg得ることができた。【００４８】
ガラクトース結晶を75℃で完全に溶解し、65℃まで冷却後、ガラクトース濃度を70％(w/v)に調整し、Aspergillus niger PC-9319株由来のα-ガラクトシダーゼを加え、縮合反応させた。3時間の反応後、65℃に保持しながら減圧し、90％ (w/v)まで濃縮し、さらにAspergillus niger APC-9319株由来のα-ガラクトシダーゼを加え、65℃で40時間反応させた。反応液を95℃で１時間加熱して酵素反応を停止するとともに、固形分あたり2％の活性炭を加えて脱色した。その後、加圧ろ過し、清澄液を得た。清澄液は、脱塩し、エバポレーターで50％(w/v)まで濃縮し、分画原液とした。擬似移動層分画装置によって、α−結合ガラクトオリゴ糖画分を、90％以上の収率で回収した。得られたα−結合ガラクトオリゴ糖画分を、エバポレーターで濃縮し、脱塩後、噴霧乾燥した。【００４９】
（α−GOS  Bの調製）
乳糖30 kgを固形分濃度Bx.8になるように溶解し、pH 6.5に調整した。β-ガラクトシダーゼ（製品名  ラクトレスL3、大和化成（株）製）を203 mL (663,810 U)加え、50℃で94時間加水分解した。反応終了は、活性炭500 g（白鷺A、日本エンバイロケミカル（株）製）を加え、95℃×１時間の加熱により行なった。反応溶液に珪藻土３ kg（ラヂオライト＃100、昭和化学工業（株）製）を加え、加圧ろ過機でろ過した。反応液中の未分解の乳糖は、１％以下であった。【００５０】
得られた乳糖加水分解液をエバポールにて固形分濃度Bx.72まで濃縮した。このうち、固形分20.8 kgを縮合反応に用いた。濃縮した乳糖加水分解液を塩酸でpH 4.5に調整し、Aspergillus niger由来のα-ガラクトシダーゼ（製品名スミチームAGS-L、新日本化学工業（株）製）67.3 mL ( 2,019,000 U )を加え、65℃で49時間、縮合反応を行った。反応終了は、100℃×１時間の加熱により行なった。反応溶液に活性炭500 g（白鷺A）を加え、珪藻土（ラヂオライト＃100）でろ過した。ろ液を、脱塩樹脂（IRA-404, 3.6 L、IR-200C, 1.8 Lオルガノ（株）製）を通過させた後、さらにBx.72まで濃縮した。【００５１】
上記で得たα−GOS  Aおよびα−GOS  Bの組成（単位：重量％）を、表１に示す。
【表１】
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【００５２】
（α−結合ガラクトオリゴ糖を配合した飼料の調製）
上記二種類のオリゴ糖を子豚人工乳前期用飼料（製品名SDS No.１、日本配合飼料株式会社製）に添加することにより、α−結合ガラクトオリゴ糖を配合した飼料（実施例１および２）を、表２に示す配合割合で調製した。対照として、α−結合ガラクトオリゴ糖に代えてショ糖（製品名：グラニュ糖、（株）パールエース製）を用いた配合飼料（比較例１）も調製した。
【表２】
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【００５３】
（供試動物の準備）
21日齢の哺乳期交雑種仔豚９頭を、株式会社京都動物検査センターから入手し、導入時に体重測定を行い、体重が均一になるように配慮しながら３頭×３群に群分けした。【００５４】
（飼料投与）
電気ブルーダーで温度管理されたコンクリート床製オガコ敷き小豚房に、仔豚を群毎に収容した。各被験物質を添加した飼料を、導入時から連続して10日間にわたって、不断給与した。飲水は、試験期間を通して自由摂取とした。試験期間を通じて、各被験物質投与による臨床的な異常は認められず、副作用は認められなかった。【００５５】
１０日間の投与期間中には、毎日、糞便性状を観察し、以下の基準：
正常便：０、軟便：１、泥状便：２、水様性下痢：３
に従ってスコア化した。１０日目に、各群について、スコアの合計値を求めた（表３）。【００５６】
試験開始後０日目、３日目および10日目に、体重および飼料摂取量を測定し、それから増体量および飼料要求率を求めた（表３）。【００５７】
試験後、離乳期仔豚を剖検し、病理組織学的検査、腸管内容物中の有機酸およびイムノグロブリン濃度測定、血中ナチュラルキラー細胞の細胞傷害活性および単球のラテックスビーズ貪食能、血液検査、および血清生化学検査などを実施した。なお、剖検は、対照群の１頭→α−GOS A投与群の１頭→α−GOS B投与群の１頭→対照群の1頭の様に、群間で剖検時刻ができるだけ異ならないよう配慮した。各仔豚にケタラールおよびストレスニルを筋肉注射した後、放血致死させた。放血時に、腹部大動脈から採血を行った。病理組織学的検査、腸管内容物中の有機酸およびイムノグロブリン濃度測定、血中ナチュラルキラー細胞の細胞傷害活性および単球のラテックスビーズ貪食能、血液検査および血清生化学検査は、以下に示す項目を除き、各例に有意差はなかった。【００５８】
（腸管内の好酸球浸潤の抑制作用）
小腸サンプルのルナ染色を行い、好酸球数を計測した（図１および表３）。回腸中央部の平均好酸球数は、比較例１で765.4個/inch2であったところ、実施例１では468.3個/inch2、実施例２で363.9個/inch2と有意差が認められた。回腸中央部の好酸球数は、実施例１（α−GOS A）および実施例２（α−GOS B）で、対照群の比較例１よりも有意に低値を示したことから、α−GOS Aおよびα−GOS B投与によって、小腸への好酸球浸潤が抑制されていることがわかる。離乳期の仔豚は、母豚から強制的に離されるストレスなどから病原性の下痢に陥りやすいので、消化管の免疫機構を活性化させることは特に重要である。好酸球は、喘息などのアレルギー状態で頻繁に認められ、その分泌顆粒は組織傷害を起こすことが知られている。Th1/Th2バランスの観点からも、Th2型である好酸球の大量浸潤は好ましくなく、病原性の下痢の予防には、むしろTh1型の免疫系が消化管で亢進していることが望ましい。本発明を限定する意図ではないが、α−GOS AおよびB投与による好酸球浸潤の抑制は、Th1型の免疫系が亢進されている可能性が考えられる。【００５９】
（整腸・成長促進作用）
α−GOS Aを給与した実施例１では、糞便性状、増体量および飼料要求率の改善が認められた（表３）。α−GOS Bを給与した実施例２では、糞便性状、増体量および飼料要求率において、さらに一層の改善が認められた（表３）。増体量などは、養豚経営で最も重要視されている。【００６０】
（肝機能改善作用）
上記で採取した血液から、全血および血清を分取し、グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（GOT）を測定した（図２および表３）。平均GOT濃度は、比較例１で104.3 IU/Lであり、一方、実施例１では62.0 IU/L、実施例２では43.3 IU/Lと有意差を示した。α−GOS Aおよびα−GOS B投与で血中GOT濃度が有意に低値を示したことから、肝機能改善の可能性が示唆される。【００６１】
【表３】
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【００６２】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、その機能を基にして、ヒトや動物への整腸剤として有用である。下痢症などの治癒は、食欲増進につながるため、本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、成長促進剤としても有用である。特に、下痢を発症しやすい幼齢の仔豚への整腸剤、成長促進剤として有用である。【００６３】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、さらに、アレルギー予防・治療剤、浮腫・リンパ濾胞腫大の予防・治療剤、アレルギー予防剤・治療剤としても好適である。【００６４】
本発明の腸管内好酸球抑制組成物は、また、肝機能改善剤として用いることも可能である。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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