(57)【要約】  簡便な合成で且つ十分な抗腫瘍活性を有する糖−コレスタノール化合物を提供する。  下記式（１）：2007026869.tif 000009で表されるコレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体を有効成分とする抗癌剤。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）：
【化１】
2007026869.tif 000006
で表されるコレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体を有効成分とする抗癌剤。
【請求項２】
請求項１記載のコレスタノール化合物を含有するリポソーム製剤。
【請求項３】
請求項１記載のコレスタノール化合物のシクロデキストリン包接体。
【請求項４】
シクロデキストリンが、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである請求項３記載の包接体。
【請求項５】
抗癌剤を製造するための下記式（１）：
【化２】
2007026869.tif 000007
で表されるコレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体の使用。
【請求項６】
下記式（１）：
【化３】
2007026869.tif 000008
で表されるコレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体を投与することを特徴とする癌の予防又は治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖−コレスタノール化合物を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
コレステロールのＢ環の二重結合が飽和されたコレスタノールにＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−、ＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−Ｇｌｃ−、Ｆｕｃ−Ｇａｌ−、Ｇａｌ−Ｇｌｃ−又はＧａｌ−が結合した糖−コレスタノール化合物は、優れた抗腫瘍活性を有する（特許文献１、２及び３参照）。【０００３】
斯かる糖−コレスタノール化合物は、抗腫瘍活性より糖鎖部分が２個以上のものが主体であるが、糖鎖数が多いことは合成が複雑となりコストがかかるという問題があった。一方、ガラクトースのみを糖部分に有する化合物も報告されているが、活性面から満足行くものではなかった。また、糖−コレスタノール化合物は、総じて水に対して不溶性であるという問題もある。【０００４】
従って、糖鎖数が少なく、且つ十分な抗癌活性を有し、さらに溶解性に優れた糖−コレスタノール化合物が望まれていた。【０００５】
一方、糖鎖部分にＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を持つコレスタノール化合物は既知化合物であるが（非特許文献１）、その生物活性はこれまでに何ら報告されていない。
【特許文献１】特開平１１−６０５９２号公報
【特許文献２】特開２０００−１９１６８５号公報
【特許文献３】国際公開第２００５／００７１７２号パンフレット
【非特許文献１】Ｓｔｕｄｉｅｓ  ｏｎ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ．Ｐａｒｔ  ＣＸＸＸＸＶ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ａｎｄ  ｃｈｏｌｅｓｔａｎｏｌｓ．（１９７９），２７（８），１９２６−３１．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、簡便な合成で且つ十分な抗腫瘍活性を有する糖−コレスタノール化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
糖−コレスタノール化合物は、糖鎖又はコレスタノール単独では全く抗腫瘍活性は認められず、活性発現には糖−コレスタノールの全体構造が必要であるが、構造活性相関から、糖鎖の数又は種類を類推するのは極めて困難であった。しかるところ、本発明者らは、意外にも、ＧｌｃＮＡｃのみを糖部分に有する下記式（１）で表されるコレスタノール化合物が、癌細胞に対し強い増殖抑制活性を有することを見出した。また、当該コレスタノール化合物のシクロデキストリン包接体やリポソーム化製剤においては、不溶性であるという当該化合物の欠点を補うことができ、上記活性を発揮する上で極めて効果的であることを見出した。【０００８】
すなわち、本発明は、以下の発明に係るものである。
１）下記式（１）：【０００９】
【化１】
2007026869.tif 000002
【００１０】
で表されるコレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体を有効成分とする抗癌剤。
２）上記コレスタノール化合物を含有するリポソーム製剤。
３）上記コレスタノール化合物のシクロデキストリン包接体。
４）抗癌剤を製造するための上記コレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体の使用。
５）上記コレスタノール化合物又はそのシクロデキストリン包接体を投与することを特徴とする癌の予防又は治療方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のコレスタノール化合物は、優れた抗腫瘍作用を有し、従来の糖−コレスタノールに比べ簡便に合成できることから、癌の予防又は治療のための医薬品として有用である。また、当該化合物のシクロデキストリン包接体やリポソーム製剤は、溶解性に優れ、抗癌活性を発揮する上で極めて効果的である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明のコレスタノール化合物は、既知化合物（前記非特許文献１）であり、例えば以下の方法により製造することができる。【００１３】
【化２】
2007026869.tif 000003
【００１４】
すなわち、４−メトキシフェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシドより、４工程で本発明のコレスタノール化合物を製造することができる（後記製造例参照）。【００１５】
尚、本発明のコレスタノール化合物の糖鎖部分は、ＧｌｃＮＡｃβ−であるのが好ましく、従って、本発明のコレスタノール化合物としては、５−α−コレスタン−３β−イル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１ａ）が好適である。【００１６】
本発明のコレスタノール化合物は、シクロデキストリン類又はその誘導体により容易に包接化され、複合体を形成することができる。シクロデキストリンは、包接すべきゲスト分子の径、又はゲスト分子とのＶａｎ  ｄｅｒ  Ｗａａｌｓ力やシクロデキストリン由来ヒドロキシル基との水素結合が関与していると考えられているため、不溶性化合物ならすべて適応できるものではないが、本発明のコレスタノール化合物については、良好な包接複合体が形成される。
本発明のシクロデキストリン包接体におけるシクロデキストリンとしては、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等のシクロデキストリン類の他、例えばメチル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、モノアセチル−β−シクロデキストリン、２−ヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン等のシクロデキストリン誘導体が包含される。このうち、溶解性向上の点から、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンが好適である。【００１７】
斯かるシクロデキストリン包接体は、例えばシクロデキストリン類又はその誘導体の適当な水溶液（例えば２０〜４０％）を調製し、これに本発明のコレスタノール化合物を添加し、攪拌することにより調製することができる。【００１８】
ここで用いるコレスタノール化合物の濃度は、コレスタノール化合物がシクロデキストリンと包接体を形成できる濃度であればよく、通常１〜５０質量％、好適には１０〜３０質量％程度である。【００１９】
斯くして得られるシクロデキストリン包接体は、水に易溶性であることから生体内において効率的に効果を発揮できる。また、インビトロの試験系において安定した評価を行うことができるという利点もある。【００２０】
また、本発明のコレスタノール化合物は、リポソーム製剤とすることにより、より効率的に作用発現部位に到達させることが可能となる。また、インビトロの試験系において、安定した評価を行うことも可能である。
斯かるリポソーム製剤は、本発明のコレスタノール化合物、膜成分物質及び脂肪族又は芳香族アミンを含有するリポソームであるのが好ましい。
リポソーム製剤中のコレスタノール化合物の含有量は、膜成分物質１モルに対して、０．３〜２．０モル、好ましくは０．８〜１．５モルであるのが望ましい。【００２１】
膜成分物質としては、リン脂質が挙げられ、例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール及びホスファチジン酸等の天然及び合成のリン脂質類並びにこれらの混合物の他、水性レシチン等の加工した天然リン脂質を好ましく用いることができる。より好適には、ホスファチジルコリン類の１αジパルミトイルフォスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）が挙げられる。【００２２】
脂肪族又は芳香族アミンは、主として脂質膜の表面を正に荷電させるために添加される物質である。斯かるアミンとしては、例えばステアリルアミン、オレイルアミン等の脂肪族アミン、フルオレンエチルアミン等の芳香族アミンが挙げられ、特にステアリルアミンを好適に用いることができる。
当該アミンは、膜成分物質（リン脂質）１モルに対して、０．０４〜０．１５モル、好ましくは０．１〜０．１５モル含有するのが好ましい。【００２３】
当該リポソームには、この他にも膜構造の安定剤としてコレステロール、脂肪酸、ジアセチルホスフェート等を必要に応じて添加してもよい。【００２４】
膜成分を分散させる水溶液としては、水、生理食塩水、各種緩衝液、糖類の水溶液及びこれらの混合物が好ましく用いられる。緩衝液としては、有機系、無期系問わず体液水素イオン濃度付近に緩衝作用を有する緩衝液が好適に用いられ、例えばリン酸緩衝液を挙げることができる。【００２５】
リポソームの調製は、特に限定されるものではなく汎用の方法が使用できるが、例えば特開昭５７−８２３１０号公報、特開昭６０−１２１２７号公報、特開昭６０−５８９１５号公報、特開平１−１１７８２４号公報、特開平１−１６７２１８号公報、特開平４−２９９２５号公報、特開平９−８７１６８号公報、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｎａｌｙｓｉｓ（１９８８）３３，ｐ３３７  或いは「リポソーム」（南江堂）に記載の方法等に従うことができる。
以下に、本発明コレスタノール化合物のリポソーム化の手順を示す。【００２６】
まず、本発明のコレスタノール化合物、上記膜成分物質及び脂肪族又は芳香族アミンと共に有機溶媒及び水を加え混合した後、ロータリーエヴァポレーター等を用い完全に有機溶媒を除去し、次いで水分除去を行なう。【００２７】
膜成分物質、アルキルアミン及びコレスタノール化合物の混合比率は、５２：８：２０（モル比）を例示できるが、その近辺の混合比率であれば特に問題はない。コレスタノール化合物の混合比率が小さい場合は、コレステロールに代表される膜構造安定剤を必要に応じて添加することができるが、該混合比率が高くなれば必ずしも膜構造の安定剤の添加を必要とはしない。【００２８】
有機溶媒は、水に対し不溶性の揮発性有機溶媒であれば特に制限はなく、例えばクロロホルム、クロルメタン、ベンゼン及びヘキサン等を用いることができ、溶解性を考慮する場合は、エタノール或いはメタノール等の比較的極性の高い有機溶媒を適宜添加調製した混合有機溶媒を使用することができる。該混合有機溶媒と水との混合比率は、均一になる比率であれば、特に制限はない。【００２９】
また、水分を添加調製した場合は、水分除去法としては凍結乾燥法がごく一般に用いられるが、これに限定されるものではなく、減圧デシケーター中で乾燥してもよい。水分除去後、前述分散水溶液を添加し、Ｖｏｒｔｅｘミキサー等で浸透することによりリポソーム化が達成される。【００３０】
リポソームのサイズを揃える場合は、例えば超音波処理、多孔質メンブレンフィルターに対する押出し処理、高圧噴射乳化装置による処理、或いはこれらを組み合わせることによってサイズの均一化が可能である。また、より小さいリポソーム粒子を得たい場合は、たとえば超音波処理時間を長くすることにより達成することができる。また、リポソームの粒子径としては、４０ｎｍ〜３００ｎｍであることが好ましい。
一方、本発明コレスタノール化合物を上記リポソーム製剤以外の方法で使用する場合として、各種投与形態に応じて様々な安定化剤を挙げることができる。【００３１】
本発明のコレスタノール化合物、そのシクロデキストリン包接体、当該コレスタノール化合物を含有するリポソーム製剤（以下、「コレスタノール化合物等」ともいう）は、後記実施例に示すように、糖鎖部分にＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ−又はＧａｌ−を有するコレスタノール化合物に比べて遥かに強い細胞増殖阻害効果を示す。従って、これらを有効成分として含有する製剤は、癌の予防又は治療のための医薬として有用である。
本発明の抗癌剤は、治療部位、治療目的に応じて適宜投与形体を選択でき、リポソーム製剤においては、その形状の安定性を損う添加剤等の使用がない限り、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等のいずれをも用いることができ、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。【００３２】
経口用固形製剤を調製する場合は、本発明のコレスタノール化合物等に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。そのような添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示できる。【００３３】
経口用液体製剤を調製する場合は、本発明のコレスタノール化合物等に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。【００３４】
注射剤を調製する場合は、本発明のコレスタノール化合物等に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。この場合のｐＨ調節剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が例示できる。【００３５】
坐剤を調製する場合は、本発明のコレスタノール化合物等に、当業界において公知の製剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等を、更に必要に応じてツイーン（登録商標）のような界面活性剤等を加えた後、常法により製造することができる。【００３６】
軟膏剤を調製する場合は、本発明のコレスタノール化合物等に、通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。基剤としては、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。【００３７】
貼付剤を製造する場合は、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すれば良い。支持体としては、綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルム或いは発泡体シートが適当である。【００３８】
本発明のコレスタノール化合物等の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できないが、通常成人１日あたりコレスタノール化合物（１）として約０．０１〜２００ｍｇ／Ｋｇ、好適には０．１〜５０ｍｇ／Ｋｇとすれば良く、これを１日一回又は２〜４回程度に分けて投与するのが好ましい。
次に、本発明を実施例により具体的に説明する。
【実施例】
【００３９】
製造例１  ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノールの製造
（１）エチル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物（２））の製造
アルゴン雰囲気下、４−メトキシフェニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド（２ｇ，４．１９ｍｍｏｌ）、エタンチオール（０．４０ｍＬ，５．４５ｍｍｏｌ）の乾燥塩化メチレン（３０ｍＬ）溶液を氷冷し，３フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（３．１９ｍＬ，２５．１４ｍｍｏｌ）を滴下後室温で終夜攪拌した。氷冷下反応液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧下留去し、残渣を酢酸エチル−ヘキサンから再結晶して１．６２ｇの標題化合物を得た。【００４０】
性状：白色粉末；
１Ｈ−ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３）δ：１．２２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．８６（３Ｈ，ｓ），２．０４（３Ｈ，ｓ），２．１１（３Ｈ，ｓ），２．６１−２．７６（２Ｈ，ｍ），３．９０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，４．９Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），４．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１２．４Ｈｚ），４．３１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１２．４Ｈｚ），４．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），５．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），５．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），７．７４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，５．４Ｈｚ），７．８６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，５．４Ｈｚ）．【００４１】
（２）５−α−コレスタン−３β−イル−２−デオキシ−２−フタルイミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物（３））の製造
アルゴン雰囲気下、（１）で得られた化合物（２）（４００ｍｇ，０．８３４ｍｍｏｌ）、５−α−コレスタン−３β−オール（３８９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）、活性化モレキュラーシーブス４Ａ（１．８８ｇ）の混合物に乾燥塩化メチレン（４．６ｍＬ）を加え室温で１時間攪拌したのち、トリフルオロメタンスルホン酸メチル（０．２８ｍＬ，２．４８ｍｍｏｌ）を加え終夜攪拌した。反応液にトリエチルアミン（１ｍＬ）を加え３０分攪拌の後、セライト濾過し、濾取物を塩化メチレンで洗浄した。濾液と洗浄液をあわせて溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１、容量比を示す。以下同じ）で精製し５１０ｍｇの標題化合物を得た。【００４２】
性状：白色粉末；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．５１−２．１０（５５Ｈ，ｍ），３．４８−３．５６（１Ｈ，ｍ），３．８５（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，４．９Ｈｚ，１０．３Ｈｚ），４．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１２．２Ｈｚ），４．２６−４．３４（３Ｈ，ｍ），５．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），５．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），５．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１０．８Ｈｚ），７．７４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，５．４Ｈｚ），７．８６（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，５．４Ｈｚ）．【００４３】
（３）５−α−コレスタン−３β−イル−２−アセトアミド−２−デオキシ−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物（４））の製造
（２）で得られた化合物（３）（５１０ｍｇ，０．６３３ｍｍｏｌ）の１−ブタノール（５．０ｍＬ）懸濁液にエチレンジアミン（５．０ｍＬ）を加え１２０℃で終夜攪拌した。反応液を減圧下留去し、残渣にピリジン（５ｍＬ）、無水酢酸（５ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（触媒量）を加え終夜攪拌した。反応液を減圧下留去し、残渣を酢酸エチルに溶かして１Ｍ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で洗浄後、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥、溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：４）で精製し２５０ｍｇの標題化合物を得た。【００４４】
性状：白色粉末；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．５５−２．０７（５８Ｈ，ｍ），３．５２−３．７２（３Ｈ，ｍ），４．１０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１１．３Ｈｚ），４．２６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１２．２Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），５．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，９．７Ｈｚ），５．３５−５．４３（２Ｈ，ｍ）．【００４５】
（４）５−α−コレスタン−３β−イル−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（化合物（１ａ））の製造
（３）で得られた化合物（４）（２５０ｍｇ，０．３４８ｍｍｏｌ）のメタノール（５．０ｍＬ）、塩化メチレン（５．０ｍＬ）混合溶液に２８％ナトリウムメトキシドメタノール溶液（０．０７ｍＬ，０．３６３ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜攪拌した。アンバーリスト１５を加え反応液を中和後、濾過、濾液を減圧下留去し、残渣をメタノールに懸濁、不溶物を濾取、メタノールで洗浄、乾燥し１５９ｍｇの標題化合物を得た。【００４６】
性状：白色粉末；
１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６＋Ｄ２Ｏ）δ：０．６２−１．９４（４９Ｈ，ｍ），２．９９−３．０５（２Ｈ，ｍ），３．２２−３．５０（４Ｈ，ｍ），３．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）．【００４７】
実施例１  リポソーム及びシクロデキストリン包接体の製造
ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノール（化合物（１ａ））及びコレスタノールは、２０μｍｏｌ／ｍＬ（クロロホルム／メタノール＝５／１，ｖ／ｖに溶解）を出発物質として用いた。
（１）リポソーム製剤の作製
１αジパルミトイルフォスファチジルコリン、ステアリルアミン及び糖−コレスタノールを５２／８／２０（モル比）の割合で７００μｌとなるように混合し、次いで有機溶媒（クロロホルム／メタノール＝２／１，Ｖ／Ｖ）３００μｌ及び蒸留水１ｍＬを添加混合した。その後、ロータリーエヴァポレーターにて有機溶媒を完全に除去した後、凍結乾燥操作を行ない、水分を完全に除去した。該凍結乾燥品は、ＰＢＳ１ｍＬ中に溶解し、超音波処理（１５Ｗ，１５分）を行なうことによりリポソームを粒子径４０〜３００ｎｍ程度に均一化し、実施例２に供した。【００４８】
（２）シクロデキストリン包接体の作製
ヒドロキシプロピルβシクロデキストリンの２０％水溶液を調製し、ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノールを添加し、攪拌・混合することによりシクロデキストリンとＧｌｃＮＡｃ−コレスタノール包接体を作製した。ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノールは不溶性のため攪拌することにより可溶化することにより良好な包接体が形成されていることが確認できる。【００４９】
実施例２  ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノールによる細胞増殖阻害効果
培養癌細胞株（ＨＴ−２９（ｈｕｍａｎ））を９６穴プレートに、１×１０４  ｃｅｌｌｓ／１００μｌ／ｗｅｌｌとなるように幡種した後、実施例１にて調製したＧｌｃＮＡｃ−コレスタノール化合物のリポソーム製剤及びシクロデキストリン包接体を添加し、３日間３７℃にてインキュベートした。その後、ＭＴＴアッセイを行ない細胞数を決定した。なお、増殖抑制率は以下の式に従って求めた。結果を表１に示す。
その結果、ＧｌｃＮＡｃ−コレスタノールは、強い細胞増殖阻害効果を示した。【００５０】
【数１】
2007026869.tif 000004
【００５１】
ここで、処理細胞におけるＯＤは４５０ｎｍ、未処理細胞におけるＯＤは６５０ｎｍにて測定した（ＭＴＴアッセイによる）。【００５２】
【表１】
2007026869.tif 000005
【国際調査報告】
2007026869.tif 000010
2007026869.tif 000011
2007026869.tif 000012
2007026869.tif 000013
2007026869.tif 000014
2007026869.tif 000015