【手続補正書】
【提出日】令和1年5月10日(2019.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト重鎖またはラムダ（λ）軽鎖可変ドメイン配列を作製する方法であって、
（ａ）遺伝的に改変されたマウスを抗原で免疫するステップであって、該マウスが：
（ｉ）以下：
（Ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入であって、ここで、該挿入が、内因性マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてマウス重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結され、該挿入は、内因性ＡＤＡＭ６活性を低減または消去させる、挿入と；
（Ｂ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの挿入であって、ここで、該挿入が、カッパ（κ）軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結される、挿入と；
（Ｃ）マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードするヌクレオチド配列の挿入であって、該マウスＡＤＡＭ６タンパク質は、該遺伝的に改変されたマウスにおいて発現され、雄マウスの妊性を回復または向上させる、挿入と
を含むゲノムを有し；
（ｉｉ）該抗原で免疫されたときに抗体を生成し、ここで、該抗体がそれぞれ、マウス重鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒト重鎖可変ドメインを含む重鎖と、カッパ軽鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒトラムダ軽鎖可変ドメインを含む軽鎖とを含み；かつ
（ｉｉｉ）妊性である、ステップと；
（ｂ）該抗原に特異的に結合し、かつ、該遺伝的に改変されたマウスによって作製された抗体のヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと
を包含する、方法。
【請求項２】
ヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップが、該ヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を決定することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ６−１、ＶＨ１−２、ＶＨ１−３、ＶＨ２−５、ＶＨ３−７、ＶＨ１−８、ＶＨ３−９、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１６、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ１−２４、ＶＨ２−２６、ＶＨ４−２８、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３５、ＶＨ３−３８、ＶＨ４−３９、ＶＨ３−４３、ＶＨ１−４５、ＶＨ１−４６、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−４９、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−５３、ＶＨ１−５８、ＶＨ４−５９、ＶＨ４−６１、ＶＨ３−６４、ＶＨ３−６６、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−７２、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７４またはそれらの組み合わせを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、マウスカッパ軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記マウスカッパ軽鎖定常領域遺伝子が、内因性マウスカッパ軽鎖遺伝子座にある、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、少なくとも１２個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ７またはそれらの組み合わせを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、少なくとも４個のヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が：
（ａ）前記内因性マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に存在する；および／または
（ｂ）異所位置に存在する、
請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質が、マウスＡＤＡＭ６ａまたはマウスＡＤＡＭ６ｂである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および／または、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと連続している、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記マウスが、該マウスにおいて再配列して免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成することのできない内因性ＶＬ遺伝子セグメントおよび／または内因性ＪＬ遺伝子セグメントを含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
すべての内因性Ｖκ遺伝子セグメントおよび内因性Ｊκ遺伝子セグメントが、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの挿入で置換される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記マウスがさらに、ヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座由来のヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間領域を含み、該ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間領域が、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントおよび／あるいは１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと連続している、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
完全ヒト重鎖または完全ヒトラムダ（λ）軽鎖を作製する方法であって、
（ａ）遺伝的に改変されたマウスを抗原で免疫するステップであって、該マウスが：
（ｉ）以下：
（Ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入であって、ここで、該挿入が、内因性マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてマウス重鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結され、該挿入は、内因性ＡＤＡＭ６活性を低減または消去させる、挿入と；
（Ｂ）カッパ（κ）軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結される、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの挿入と；
（Ｃ）マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードするヌクレオチド配列の挿入であって、該マウスＡＤＡＭ６タンパク質は、該遺伝的に改変されたマウスにおいて発現され、雄マウスの妊性を回復または向上させる、挿入と
を含むゲノムを有し；
（ｉｉ）該抗原で免疫されたときに抗体を生成し、ここで、該抗体がそれぞれ、マウス重鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒト重鎖可変ドメインを含む重鎖と、カッパ軽鎖定常ドメインに作動可能に連結されたヒトラムダ軽鎖可変ドメインを含む軽鎖とを含み；かつ
（ｉｉｉ）妊性である、ステップと；
（ｂ）該抗原に特異的に結合し、かつ、該遺伝的に改変されたマウスによって作製された抗体のヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと；
（ｃ）該ヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれヒト重鎖または軽鎖定常ドメイン配列に作動可能に連結させて、完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖を形成するステップと
を包含する、方法。
【請求項１６】
前記ヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をそれぞれヒト重鎖または軽鎖定常ドメイン配列に作動可能に連結させるステップが、該ヒト重鎖または軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列をそれぞれ、該ヒト重鎖または軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結させることを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ６−１、ＶＨ１−２、ＶＨ１−３、ＶＨ２−５、ＶＨ３−７、ＶＨ１−８、ＶＨ３−９、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１６、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−２０、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２３、ＶＨ１−２４、ＶＨ２−２６、ＶＨ４−２８、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３５、ＶＨ３−３８、ＶＨ４−３９、ＶＨ３−４３、ＶＨ１−４５、ＶＨ１−４６、ＶＨ３−４８、ＶＨ３−４９、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−５３、ＶＨ１−５８、ＶＨ４−５９、ＶＨ４−６１、ＶＨ３−６４、ＶＨ３−６６、ＶＨ１−６９、ＶＨ２−７０、ＶＨ３−７２、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７４またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、および、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、マウスカッパ軽鎖定常領域遺伝子に作動可能に連結される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記マウスカッパ軽鎖定常領域遺伝子が、内因性マウスカッパ軽鎖遺伝子座にある、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、少なくとも１２個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む、請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ７またはそれらの組み合わせを含む、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記マウスが、少なくとも４個のヒトＪλ遺伝子セグメントを含む、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が：
（ａ）前記内因性マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に存在する；および／または
（ｂ）異所位置に存在する、
請求項１５〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質が、マウスＡＤＡＭ６ａまたはマウスＡＤＡＭ６ｂである、請求項１５〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記マウスＡＤＡＭ６タンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列が、前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、および／または、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと連続している、請求項１５〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記マウスが、該マウスにおいて再配列して免疫グロブリン軽鎖可変領域配列を形成することのできない内因性ＶＬ遺伝子セグメントおよび／または内因性ＪＬ遺伝子セグメントを含む、請求項１５〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
すべての内因性Ｖκ遺伝子セグメントおよび内因性Ｊκ遺伝子セグメントが、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントおよび１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントで置換される、請求項１５〜２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記マウスがさらに、ヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座由来のヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間領域を含み、該ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間領域が、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントおよび／あるいは１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと連続している、請求項１５〜２７のいずれか一項に記載の方法。