(57)【要約】  【課題】細胞毒性を低く抑えた新規抗がん剤を提供すること。  【解決手段】本発明では、「化１」の一般式で表される化合物、若しくはその塩を提供する。この化合物は、ＶＳＴの特定のケトン基に有機基を導入した化合物であり、ＶＳＴと同様、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制する作用を有するため、抗がん剤などとして適用できる可能性がある。また、この化合物は、ＶＳＴよりも毒性が低いため、副作用を低減できる可能性があるという有利性がある。  【化１】2007004621.tif 000025  【選択図】  図５【特許請求の範囲】
【請求項１】
「化１」の一般式で表される化合物、若しくはその塩。
［式中、Ｒは有機基を表す。］
【化１】
2007004621.tif 000018
【請求項２】
Ｒが−Ｏ−Ｒ１であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の化合物。
［式中、Ｒ１は有機基を表す。］
【請求項３】
Ｒ１が、炭化水素基（置換基を有するものを含む。）であることを特徴とする請求の範囲第２項記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が、アミノ基（置換基を有するものを含む。）、複素環基（置換基を有するものを含む。）、脂環式炭化水素基（置換基を有するものを含む。）のいずれか又は複数により化学構造の一部が置換された炭化水素基であることを特徴とする請求の範囲第２項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１が、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ２であることを特徴とする請求の範囲第２項記載の化合物。
［式中、ｎは１以上の整数を、Ｒ２は水素、アミノ基（置換基を有するものを含む。）、複素環基（置換基を有するものを含む。）、脂環式炭化水素基（置換基を有するものを含む。）のいずれかを表す。］
【請求項６】
Ｒ２が、アシルアミノ基（置換基を有するものを含む。）、フェニル基（置換基を有するものを含む。）、モルホリニル基（置換基を有するものを含む。）、トリアジニル基（置換基を有するものを含む。）のいずれかであることを特徴とする請求の範囲第５項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、「化２」〜「化６」で表す化学構造のいずれかであること特徴とする請求の範囲第２項記載のＶＳＴ誘導体、若しくはその塩。
【化２】
2007004621.tif 000019
【化３】
2007004621.tif 000020
【化４】
2007004621.tif 000021
【化５】
2007004621.tif 000022
【化６】
2007004621.tif 000023
【請求項８】
請求の範囲第１項記載の化合物、その塩、若しくはそのプロドラックを少なくとも含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求の範囲第１項記載の化合物、その塩、若しくはそのプロドラックを少なくとも含有する抗がん剤。
【請求項１０】
請求の範囲第１項記載の化合物、その塩、若しくはそのプロドラックを少なくとも含有し、小胞体ストレスによるＧＲＰ７８の発現誘導を抑制するＧＲＰ７８発現誘導抑制剤。
【請求項１１】
「化７」の一般式で表す化合物の特定のケトン基を置換する工程を少なくとも含む請求項１記載の化合物の製造方法。
【化７】
2007004621.tif 000024
【請求項１２】
抗がん剤製造のための、請求の範囲第１項記載の化合物、その塩、若しくはそのプロドラックの使用。
【請求項１３】
請求の範囲第１項記載の化合物、その塩、若しくはそのプロドラックを有効量投与するがん治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、抗がん剤などの医薬組成物、並びにそれらの製造方法などに関する。より詳細には、ｖｅｒｓｉｐｅｌｏｓｔａｔｉｎの化学構造の一部を変換することにより、抗がん活性を保持又は増強しつつ、毒性を低減したｖｅｒｓｉｐｅｌｏｓｔａｔｉｎ誘導体、該化合物を含有する抗がん剤などの医薬組成物、並びにそれらの製造方法などに関する。
【背景技術】
【０００２】
抗がん剤などのターゲットとして、ＧＲＰ７８が注目されている。ＧＲＰ７８（Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ７８−ｋＤ）は、ＨＳＰＡ５（Ｈｅａｔ−Ｓｈｏｃｋ  ７０ｋＤ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ５）若しくはＢＩＰ（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｈｅａｖｙ  ｃｈａｉｎ−Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）とも呼ばれるタンパク質で、ＨＳＰ７０ファミリーに属する、ストレス応答型の分子シャペロンであり、小胞体内に存在する。ＧＲＰ７８は、動物細胞において、グルコース飢餓条件下などにおいて、その発現が誘導されることが知られている（非特許文献１など参照）。【０００３】
固形がんは、一般的に、正常な組織と異なり、グルコース飢餓状態の領域を持つことが知られており（非特許文献２など参照）、また、ＧＲＰ７８の発現が誘導されることが報告されている（非特許文献３など参照）。その他、グルコース飢餓条件下などにおいて、ＧＲＰ７８の発現誘導がアポトーシス誘導を抑制することが報告されている（非特許文献４参照）。前記の各知見は、グルコース飢餓状態において、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制することによりアポトーシスなどを惹起できること、即ち、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制することにより飢餓状態の細胞（がん細胞）を死滅できる可能性を示唆する。そこで、新規抗がん剤として、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制する物質を探索する試みが、各種、行われている（非特許文献２〜非特許文献７など参照）。【０００４】
本発明者は、先般、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制する物質として、ｖｅｒｓｉｐｅｌｏｓｔａｔｉｎ（以下、「ＶＳＴ」とする。）を、新規に見出した（特許文献１参照）。この物質は、下記「化８」の化学式で表されるテトロン酸誘導体で、本発明者は、この物質を、広島県三次市で採取した土壌から分離した放線菌、ストレプトマイセス  バーシペリス  ４０８３−ＳＶＳ６株の培養上清より分離・精製した。ＶＳＴは、前記の通り、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制する作用を有し、抗がん剤として適用できる可能性を有する。
【化８】
2007004621.tif 000002
【０００５】
【特許文献１】ＷＯ２００３／０４４２０９
【非特許文献１】生化学辞典  第３版（東京化学同人）：ｐ４２２（グルコース調節タンパク質の項）、ｐ６０７（ＧＲＰ９４の項）など。
【非特許文献２】Tomida A et al, “Drug resistance mediated by cellular stress response to the microenvironment of solid tumors” Anticancer Drug Des (2): 169-77 (1999)
【非特許文献３】Jamora C, et al, “Inhibition of tumor progression by suppression of stress protein GRP78/Bip induction in fibrosarcoma B/C10ME” Proc Natl Acad Sci USA. (15):7690-4 (1996)
【非特許文献４】Miyake H., et al “Stress protein GRP78 prevents apoptosis induced by calcium ionophore, ionomycin, in human prostate cancer cells” J Cell Biochem. (3):396-408 (2000)
【非特許文献５】Hae-Ryong Park, et al “Versipelostatin, a novel GRP78/Bip molecular chaperone down-regulator of microbial origin” Tetrahedron Letters (43):6941-6945 (2002)
【非特許文献６】Park HR, et al “Effect on tumor cells of blocking survival response to glucose deprivation” J Natl Cancer Inst. (17):1300-10 (2004)
【非特許文献７】Lee AS., et al “The glucose-regulated protein: stress induction and clinical application” Trends Biochem Sci. (8):504-10 (2001)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、抗がん活性を有し、毒性が低い新規抗がん剤を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、ＶＳＴの化学構造中の特定のケトン基を用いて、ＶＳＴに有機基を導入することにより、抗がん活性を保持又は増強し、毒性を低減できることを新規に見出した。そこで、本発明では、「化９」の一般式で表される化合物、若しくはその塩を提供する。なお、式中、Ｒは有機基を表す。
【化９】
2007004621.tif 000003
【０００８】
この化合物は、小胞体ストレスによるＧＲＰ７８の発現誘導を抑制する作用を有し、かつ、ＶＳＴよりも毒性が少ない。加えて、この化合物は、ＶＳＴと同様、グルコース飢餓状態の細胞にはＧＲＰ７８の発現を抑制するが、グルコース代謝が正常の状態の細胞には作用しない可能性が高い。従って、本発明に係る化合物を含有させた医薬組成物は、副作用が少なく、より安全性の高い抗がん剤などとして、適用できる可能性がある。
【発明の効果】
【０００９】
本発明に係る化合物を用いるにより、ＧＲＰ７８の発現誘導を抑制でき、また、毒性をＶＳＴよりも低くできる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
＜本発明に係る化合物について＞
本発明に係る化合物は、上述の「化９」の一般式で表される化合物、並びに医薬上許容されるその塩を広く包含する。【００１１】
「化９」の一般式中、Ｒは有機基を表す。ここで、有機基Ｒは、炭素骨格を有する基（骨格中に、酸素原子、窒素原子、硫黄原子のいずれか又は複数を一又は二以上有するものを含む）、及び、それらの基の骨格以外の化学構造が一又は複数箇所置換されたものなどを広く包含する。【００１２】
有機基Ｒとして、−Ｏ−Ｒ１（式中、Ｒ１は有機基を表す。）が好適である（「化１０」の一般式）。
【化１０】
2007004621.tif 000004
【００１３】
ここで、有機基Ｒ１は、前記と同様、炭素骨格を有する基（骨格中に、酸素原子、窒素原子、硫黄原子のいずれか又は複数を一又は二以上有するものを含む）、及び、それらの基の骨格以外の化学構造が一又は複数箇所置換されたものなどを広く包含する。【００１４】
Ｒ１として、炭化水素基（置換基を有するものを含む。）が好適である。炭化水素基の置換基としては、例えば、アミノ基（置換基を有するものを含む。）、複素環基（置換基を有するものを含む。）、炭化水素環基（置換基を有するものを含む。）などが挙げられる。なお、本発明に係る化合物は、一及び複数の置換基を有するものを包含する。【００１５】
その中で、Ｒ１として、−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ２の構造を有しているものがより好適である。ここで、ｎは１以上の整数を、Ｒ２は水素、アミノ基（置換基を有するものを含む。）、複素環基（置換基を有するものを含む。）、脂環式炭化水素基（置換基を有するものを含む。）のいずれかを表す。【００１６】
Ｒ２としては、アシルアミノ基（置換基を有するものを含む。）、フェニル基（置換基を有するものを含む。）、モルホリニル基（置換基を有するものを含む。）、トリアジニル基（置換基を有するものを含む。）のいずれかが好適である。【００１７】
ここで、本発明における炭化水素基について、以下、例示する。【００１８】
本発明における炭化水素基として、例えば、（１）脂肪族鎖式炭化水素基、（２）脂環式炭化水素基、（３）アリール基などが挙げられる。【００１９】
（１）脂肪族鎖式炭化水素基として、例えば、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基などの直鎖状又は分枝鎖状の脂肪族炭化水素基が挙げられる。【００２０】
ここで、アルキル基としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１−メチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、１,１−ジメチルブチル、２,２−ジメチルブチル、３,３−ジメチルブチル、３,３−ジメチルプロピル、２−エチルブチル、ｎ−ヘプチル、１−メチルヘプチル、１−エチルヘキシル、ｎ−オクチル、１−メチルヘプチル、ノニルなどが挙げられる。【００２１】
アルケニル基としては、例えば、ビニル、アリル、イソプロペニル、２−メチルアリル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１− ペンテニル、２ − ペンテニル、３ − ペンテニル、４ − ペンテニル、４ − メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニルなどが挙げられる。【００２２】
アルキニル基としては、例えば、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル、５−ヘキシニルなどが挙げられる。【００２３】
（２）脂環式炭化水素基として、例えば、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、シクロアルカンジエニル基などの飽和又は不飽和の脂環式炭化水素基が挙げられる。【００２４】
ここで、シクロアルキル基としては、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニルなどが挙げられる。【００２５】
シクロアルケニル基としては、例えば、２−シクロペンテン−１−イル、３−シクロペンテン−１−イル、２−シクロヘキセン−１−イル、３−シクロヘキセン−１−イル、１−シクロブテン−１−イル、１−シクロペンテン−１−イルなどが挙げられる。【００２６】
シクロアルカンジエニル基としては、例えば、２,４−シクロペンタンジエン−１−イル、２,４−シクロヘキサンジエン−１−イル、２,５−シクロヘキサンジエン−１−イルなどが挙げられる。【００２７】
（３）アリール基として、例えば、単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基が挙げられる。【００２８】
ここで、芳香族炭化水素基としては、例えば、フェニル、ナフチル、アントリル、アズレニル、フェナントリル、フェナレニル、フルオレニル、インダセニル、ビフェニレニル、ヘプタレニル、アセナフチレニルなどが挙げられる。【００２９】
続いて、それらの炭化水素基の置換基について、以下、例示する。【００３０】
本発明における炭化水素基の置換基として、例えば、（１）アミノ基（置換基を有するものを含む。）、（２）複素環基（置換基を有するものを含む。）、（３）炭化水素環基（置換基を有するものを含む。）などが挙げられる。【００３１】
（１）アミノ基には、アミノ基自体のほか、置換基を有するものも含まれる。なお、このアミノ基は、置換部位が一箇所の場合にのみ限定されず、１〜３の部位で置換されている場合も含有する。【００３２】
アミノ基の置換基としては、例えば、低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどのＣ１−６アルキルなど）、アシル基（Ｃ１−６アルカノイル（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイルなど）、ベンゾイル、Ｃ１−６アルキルスルホニル（例えば、メタンスルホニルなど）、ベンゼンスルホニルなど）が挙げられる。なお、これらの低級アルキル基には、ハロゲン原子（例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素など）、Ｃ１−６アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ、トリフルオロメトキシ、２，２，２−トリフルオロエトキシ、トリクロロメトキシ、２，２，２−トリクロロエトキシなど。ハロゲン化されたものを含む。）、Ｃ７−１１アルキルアリール基（例えば、o-トルイル、m-トルイル、p-トルイル、キシリル、メシチル、Ｃ１−５アルキル-フェニルなど）のいずれかで置換されたものも含まれる。【００３３】
また、アミノ基の置換基として、例えば、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基（例えば、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、トリフルオロメトキシカルボニル、２，２，２−トリフルオロエトキシカルボニル、トリクロロメトキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルなど。それらがハロゲン化されたものを含む。）、Ｃ１−６アルコキシカルボニル基（例えば、ベンジルオキシカルボニルなど。それらがフェニル基で置換されたものも含む。）、アリール（例えば、フェニル、１−ナフチル、Ｃ６−１０アリール（２−ナフチルなど）など）、アラルキル（例えば、ベンジル、Ｃ７−１０アラルキル（フェネチルなど）、フェニル−Ｃ１−４アルキルなど）、アリールアルケニル（例えば、Ｃ８−１０アリールアルケニル（シンナミルなど）、フェニル−Ｃ２−４アルケニルなど）も挙げられる。【００３４】
また、アミノ基の置換基として、例えば、複素環基も挙げられる。アミノ基を置換する複素環基として、後述する複素環基と同様のものが挙げられる。【００３５】
その他、アミノ基の置換基として、例えば、イミドイル基（例えば、Ｃ１−６アルキルイミドイル（例えば、ホルミルイミドイル、アセチルイミドイルなど）、Ｃ１−６アルコキシイミドイル、Ｃ１−６アルキルチオイミドイル、アミジノなど）も挙げられる。【００３６】
また、２個の置換基が窒素原子と一緒になって環状アミノ基を形成する場合もある。そのような場合の環状アミノ基として、例えば、１−ピペラジニル、１−ピロリル、１−イミダゾリルなどの３〜８員の環状アミノ基が挙げられる。それらは、例えば、１−アゼチジニル、１−ピロリジニル、ピペリジノ、チオモルホリノ、モルホリノ、１−ピペラジニル、４位に低級アルキル（例えば、Ｃ１−６アルキル（メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなど）など）、アラルキル（例えば、ベンジル、Ｃ７−１０アラルキル（フェネチルなど）など）、アリール（例えば、Ｃ６−１０のアリール（フェニル、１−ナフチル、２−ナフチルなど）など）、などを有したものでもよい。【００３７】
（２）複素環基として、例えば、芳香族複素環基、飽和又は不飽和の非芳香族複素環基など、環形を構成する原子として、酸素原子、窒素原子、硫黄原子などのいずれか又は複数を含有するものが挙げられる。なお、この複素環基は、その化学構造の一部が置換されたものを広く包含し、また、置換部位が一箇所の場合にのみ限定されず、複数の部位で置換されている場合も含有する。【００３８】
ここで、芳香族複素環基としては、例えば、５〜６員の単環式芳香族複素環基（例えば、フリル、チエニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−オキサジアゾリル、フラザニル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、１,２,３−トリアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニルなど）、８〜４員の縮合多環式芳香族複素環基（ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、ベンゾ〔ｂ〕チエニル、インドリル、イソインドリル、１Ｈ−インダゾリル、ベンズインダゾリル、ベンゾオキサゾリル、１,２−ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾピラニル、１,２−ベンゾイソチアゾリル、１Ｈ−ベンゾトリアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、プリニル、プテリジニル、カルバゾリル、α−カルボリニル、β−カルボリニル、γ−カルボリニル、アクリジニル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、フェナジニル、フェノキサチイニル、チアントレニル、フェナトリジニル、フェナトロリニル、インドリジニル、ピロロ〔１,２−ｂ〕ピリダジニル、ピラゾロ〔１,５−ａ〕ピリジル、イミダゾ〔１,２−ｂ〕ピリジル、イミダゾ〔１,５−ａ〕ピリジル、イミダゾ〔１,２−ｂ〕ピリダジニル、イミダゾ〔１,２−ａ〕ピリミジニル、１,２，４−トリアゾロ〔４,３−ａ〕ピリジル、１,２,４−トリアゾロ〔４,３−ｂ〕ピリダジニルなど）が挙げられる。【００３９】
非芳香族複素環基としては、例えば、３〜８員の飽和あるいは不飽和の非芳香族複素環基（例えば、オキシラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、テトラヒドロフリル、チオラニル、ピペリジル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニルなど）、単環式芳香族複素環基（１,２,３,４−テトラヒドロキノリル、１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリルなど）、縮合多環式芳香族複素環基の一部又は全部の二重結合が飽和した非芳香族複素環基などが挙げられる。【００４０】
それらの複素環基の置換基としては、例えば、低級アルキル基（例えば、Ｃ１−６アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピルなど）など）、低級アルケニル基（例えば、Ｃ２−６アルケニル（ビニル、アリルなど）など）、低級アルキニル基（例えば、Ｃ２−６アルキニル（チニル、プロパルギルなど）など）、アシル基（例えば、Ｃ１−６アルカノイル（ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイルなど）、ベンゾイルなど）、アミノ基（化学構造の一部が置換されたものを含む。）、水酸基（化学構造の一部が置換されたものを含む。）、ハロゲン原子（例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素など。）、イミドイル基（化学構造の一部が置換されたものを含む。）、アミジノ基（化学構造の一部が置換されたものを含む。）などが挙げられる。【００４１】
（３）炭化水素環基として、例えば、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、シクロアルカンジエニル基など、飽和又は不飽和の脂環式炭化水素基が挙げられる。【００４２】
ここで、シクロアルキル基としては、例えば、Ｃ３−９シクロアルキル（シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニルなど）などが用いられる。【００４３】
シクロアルケニル基としては、例えば、Ｃ３−６シクロアルケニル基（２−シクロペンテン−１−イル、３−シクロペンテン−１−イル、２−シクロヘキセン−１−イル、３−シクロヘキセン−１−イル、１−シクロブテン−１−イル、１−シクロペンテン−１−イルなど）などが用いられる。【００４４】
シクロアルカンジエニル基としては、例えば、Ｃ４−６シクロアルカンジエニル基（２,４−シクロペンタンジエン−１−イル、２,４−シクロヘキサンジエン−１−イル、２,５−シクロヘキサンジエン−１−イルなど）などが用いられる。【００４５】
芳香族炭化水素基としては、例えば、フェニル、ナフチル（１−ナフチル、２−ナフチル）、アントリル（１−アントリル、２−アントリル）、アズレニル、フェナントリル、フェナレニル、フルオレニル、インダセニル、ビフェニレニル、ヘプタレニル、アセナフチレニルなどが挙げられる。【００４６】
以下、本発明に係る化合物の例として、Ｒ１が−（ＣＨ２）ｎ−Ｒ２である化合物の化学構造式を「化１１」〜「化１７」示す。このうち、ｍ−ジトリフルオロフェニル基（「化１７」）は特に好適である。なお、それらの各化合物において、ｎは１〜１５の整数であり、より好適には１〜５である。【００４７】
【化１１】
2007004621.tif 000005
【化１２】
2007004621.tif 000006
【化１３】
2007004621.tif 000007
【化１４】
2007004621.tif 000008
【化１５】
2007004621.tif 000009
【化１６】
2007004621.tif 000010
【化１７】
2007004621.tif 000011
【００４８】
なお、上述の通り、本発明に係る化合物には、医薬上許容されるその塩、溶媒和物なども含まれる。塩としては、例えば、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩など）アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩など）、金属塩（アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩など）、無機塩（酢酸塩、アンモニウム塩など）、有機アミン塩（ジベンジルアミン塩、グルコサミン塩、エチレンジアミン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、ジエタノールアミン塩、テトラメチルアンモニア塩など）、アミノ酸塩（グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩など）などが適用できる。【００４９】
＜本発明に係る化合物の合成方法について＞
本発明に係る化合物の合成方法は、特に限定されないが、例えば、ＶＳＴ生産菌（特許文献１参照）の培養上清からＶＳＴを分離・精製などした後、ＶＳＴの化学構造のうち、特定のケトン基のみを置換することにより（そのケトン基の部位に有機基を導入することにより）、得ることができる。【００５０】
有機基の導入は、公知の手段を用いることにより行うことができ、特に限定されない。例えば、その有機基を有するオキシムアミン誘導体を合成した後、そのオキシムアミン誘導体とＶＳＴとをカップリングさせ、ＶＳＴの特定のケトン基の部位に有機基を導入することにより、本発明に係る化合物を合成することができる。【００５１】
オキシムアミン誘導体とＶＳＴとをカップリング反応は、例えば、有機溶媒にオキシムアミン誘導体とＶＳＴと添加して溶解し、酢酸を少量添加した後、５０℃前後で所定時間放置することにより得ることができる。また、合成する化合物によって、例えば、得られた化合物を溶剤で溶解した後、還元剤などで還元し、最終生成物を得てもよい。得られた生成物は、ＨＰＬＣなどで精製してもよい。【００５２】
なお、オキシムアミン誘導体の合成は、公知技術により行うことができる。例えば、ヘキサデシル、オクタデシルなどのアルキル鎖を有するオキシムアミン誘導体を調製する場合、相当するアルコール体（ヘキサデカノール、オクタデカノール）を出発原料にすることにより、容易に調製できる。【００５３】
＜本発明に係る医薬組成物について＞
本発明に係る医薬組成物は、本発明に係る化合物を少なくとも含有したものであればよい。【００５４】
本発明に係る医薬組成物の剤型は特に限定されない。例えば、固形製剤（錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤など）、液状製剤（シロップ剤、注射剤など）などとして用いることができる。【００５５】
本発明に係る化合物を医薬組成物に配合する際、薬学的に許容される担体を用いてもよい。担体として、製剤素材として慣用されている各種有機あるいは無機担体物質を用いることができる。【００５６】
例えば、固形製剤の場合、本発明に係る化合物及びその担体に、賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などを配合する。液状製剤の場合、本発明に係る化合物及びその担体に、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などを適宜配合する。その他、必要に応じ、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤などの製剤添加物を用いてもよい。【００５７】
賦形剤の好適な例として、例えば、乳糖、白糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸などを用いることができる。【００５８】
滑沢剤の好適な例として、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、タルク、コロイドシリカなどを用いることができる。【００５９】
結合剤の好適な例として、例えば、結晶セルロース、白糖、Ｄ−マンニトール、デキストリン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどを用いることができる。【００６０】
崩壊剤の好適な例として、例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウムなどを用いることができる。【００６１】
溶剤の好適な例として、例えば、注射用水、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、トウモロコシ油などを用いることができる。【００６２】
溶解補助剤の好適な例として、例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、Ｄ−マンニトール、安息香酸ベンジル、エタノール、トリスアミノメタン、コレステロール、トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウムなどを用いることができる。【００６３】
懸濁化剤の好適な例として、例えば、界面活性剤（ステアリルトリエタノールアミン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリルアミノプロピオン酸、レシチン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、モノステアリン酸グリセリンなど）、親水性高分子（ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースなど）などを用いることができる。【００６４】
等張化剤の好適な例として、例えば、塩化ナトリウム、グリセリン、Ｄ−マンニトールなどを用いることができる。【００６５】
緩衝剤の好適な例として、例えば、リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩等の緩衝液などを用いることができる。【００６６】
無痛化剤の好適な例として、例えば、ベンジルアルコールなどを用いることができる。【００６７】
防腐剤の好適な例として、例えば、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェネチルアルコール、デヒドロ酢酸、ソルビン酸などを用いることができる。【００６８】
抗酸化剤の好適な例として、例えば、亜硫酸塩、アスコルビン酸などを用いることができる。【００６９】
その他、この医薬組成物には、他の活性成分、例えば、他の抗がん剤（例えば、化学療法剤、免疫療法剤、細胞増殖因子ならびにその受容体の作用を阻害する薬剤など）を含有させてもよい。【００７０】
なお、剤型、投与方法、担体等により異なるが、本発明に係る医薬組成物は、本発明に係る化合物を製剤全量に対して通常０．１〜９５％（ｗ／ｗ）含有させることにより、常法に従って製造することができる。【００７１】
＜本発明に係る医薬組成物の適用疾患などについて＞
本発明に係る医薬組成物は抗がん剤などに適用できる可能性がある。【００７２】
例えば、本発明に係る医薬組成物は、種々のがん（例えば、乳がん、前立腺がん、膵がん、胃がん、肺がん、結腸がん、直腸がん、食道がん、十二指腸がん、舌がん、咽頭がん、脳腫瘍、神経鞘腫、非小細胞肺がん、肺小細胞がん、肝臓がん、腎臓がん、胆管がん、子宮体がん、子宮頸がん、卵巣がん、膀胱がん、皮膚がん、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺がん、骨腫瘍、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎がん、小児固形がん、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、白血病など）に適用できる可能性がある。【００７３】
本発明に係る医薬組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト、ウマ、ウシ、犬、猫、ラット、マウス、ウサギ、ブタ、サルなど）に対して適用ことができる。【００７４】
この医薬組成物は、例えば、錠剤、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、散剤、顆粒剤などとして経口的に、又は、注射剤、坐剤、ペレットなどとして非経口的に投与できる。非経口投与には、静脈内、筋肉内、皮下、臓器内、鼻腔内、皮内、点眼、脳内、直腸内、膣内、腹腔内、腫瘍内部、腫瘍の近位などへの投与あるいは直接病巣への投与が含まれる。【００７５】
本発明の化合物の投与量は、投与ルート、症状などによって異なるが、患者（体重４０〜８０ｋｇ）に経口投与する場合、例えば、１日０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１日１〜５０ｍｇ／ｋｇ体重である。例えば、この量を１日１回または１〜３回に分けて投与する。【００７６】
なお、この医薬組成物は、目的・用途・症状などに応じて、単独で用いてもよいし、他の抗がん剤などと併用して用いてもよい。
【実施例１】
【００７７】
実施例１では、置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３）の合成を行った。【００７８】
まず、オキシムアミン誘導体を調製した（「化１８」に示す反応式を参照）。
【化１８】
2007004621.tif 000012
【００７９】
出発原料として、３−ｂｒｏｍｏ−１−ｐｒｏｐａｎｏｌ（３．０ｇ、符号１の化合物）、Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅ（３．６ｇ）、ＰＰｈ３（５．７ｇ）を用いた。これらの出発原料を、乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）に溶解し、ｄｉｅｔｈｙｌ  ａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ（３．６ｍｌ）を添加し、一晩撹拌した。反応後、濃縮乾固し、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１、又は、ベンゼン：エーテル＝１０：１）で、精製し、符号２の化合物を得た。【００８０】
次に、符号２の化合物（３．０ｇ）を乾燥ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解し、ＮａＮ３（１．３ｇ）を添加し、２．５時間撹拌した。次に、反応液を蒸留水−酢酸エチルで分配し、有機層をＭｇＳＯ４で脱水後、濃縮乾固した。次に、濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１、又は、ベンゼン：エーテル＝１０：１）で精製し、符号３の化合物を得た。【００８１】
次に、生成物をメタノール（３０ｍｌ）に溶解し、Ｈ２ＮＮＨ２  Ｈ２Ｏ（８５０ｍｇ）で１５分間処理し、濃縮乾固後、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝５：１、又は、３：１）で精製し、オキシムアミン誘導体（３−ａｍｉｎｏｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−１−ａｚｉｄｅ、符号４の化合物）を得た。【００８２】
続いて、ＶＳＴとオキシムアミン誘導体とのカップリング反応により、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位に有機基を導入した（「化１９」に示す反応式を参照）。
【化１９】
2007004621.tif 000013
【００８３】
上記において調製した３−ａｍｉｎｏｏｘｙｐｒｏｐｙｌ−１−ａｚｉｄｅ（２２ｍｇ）とＶＳＴ（２００ｍｇ）とを、メタノール（１０ｍｌ）に溶解し、酢酸を一滴添加し、５０℃で一晩反応させた。次に、濃縮乾固後、ＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、蒸留水を一滴添加し、氷冷した。次に、トリメチルホスフィン（２００μｌ）を添加後、２時間、室温になるまで撹拌し、反応後、逆相ＨＰＬＣ（７５％メタノール）を行うことにより、目的の化合物を得た。【００８４】
得られた化合物について、質量分析を行った。結果を図１に示す。分子量は、１１７１．５０だった。
【実施例２】
【００８５】
実施例２では、置換基Ｒ１として、「化１２」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３）の合成方法の例を示す。【００８６】
出発原料として、相当するアルコール体を用いる。そして、「化２０」に示す反応式の通り、オキシムアミン誘導体を合成する。次に、実施例１と同様の方法により、ＶＳＴとオキシムアミン誘導体とのカップリングを行い、目的の化合物を得る。
【化２０】
2007004621.tif 000014
【実施例３】
【００８７】
実施例３では、置換基Ｒ１として、「化１４」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝２）の合成を行った。【００８８】
まず、「化２１」に示す反応式の通り、オキシムアミン誘導体を合成した。次に、実施例１と同様の方法により、ＶＳＴとオキシムアミン誘導体とのカップリングを行い、目的の化合物を得た。
【化２１】
2007004621.tif 000015
【００８９】
得られた化合物について、質量分析を行った。結果を図２に示す。分子量は１２２７．５６だった。
【実施例４】
【００９０】
実施例４では、置換基Ｒ１として、「化１６」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３）の合成を行った。【００９１】
この化合物の合成は、実施例１と同様に行った。【００９２】
得られた化合物について、質量分析を行った。結果を図３に示す。分子量は１３６８．５８だった。
【実施例５】
【００９３】
実施例５では、置換基Ｒ１として、「化１７」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３）の合成を行った。【００９４】
この化合物の合成は、実施例１と同様に行った。【００９５】
得られた化合物について、質量分析を行った。結果を図４に示す。分子量は１２９２．６３だった。
【実施例６】
【００９６】
実施例６では、ＶＳＴ誘導体にＧＲＰ７８の発現抑制作用があるか、ウエスタンブロット法により調べた。なお、本実験では、ＶＳＴ誘導体として、実施例１で合成した化合物（置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））を用いた。【００９７】
ＧＲＰ７８は、グルコース飢餓条件下で、発現が誘導されることが知られている。そこで、本実験では、グルコース飢餓条件と正常条件の両方において、ＶＳＴ誘導体がＧＲＰ７８発現誘導抑制作用を持つか、調べた。【００９８】
実験の概要は次の通りである。まず、ＨＴ１０８０細胞（がん細胞）をＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。次に、グルコース飢餓条件の場合、同培地を除去し、グルコース（−）ＲＰＭＩ１６４０培地に置換した後、同培地中に、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を各濃度添加し、１８時間培養した（正常条件の場合は、培地交換後、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を各濃度添加した、なお、ＲＰＭＩ１６４０培地は、グルコースを２ｇ／Ｌ含有する）。次に、培養した細胞を集めた後、抗ＧＲＰ７８抗体を用いて、ウエスタンブロットを行い、発現したＧＲＰ７８を検出した。【００９９】
結果を図５に示す。図５は、ＧＲＰ７８の発現量を示すウエスタンブロット写真である。【０１００】
図中、左から１〜５番目のレーンは、コントロール又は比較例である。一番左側のレーンは、グルコースを添加した場合のＧＲＰ７８発現量を示すバンド、左から二番目のレーンは、２−デオキシグルコースを添加することにより、人為的にグルコース飢餓状態にした場合のＧＲＰ７８発現量を示すバンド、左から三番目のレーンは、グルコース非存在下における（グルコース飢餓状態の場合）のＧＲＰ７８発現量を示すバンドである。図５に示す通り、グルコース飢餓状態（左から二番目及び三番目のレーン）の場合、グルコース存在下における場合（一番左側のレーン）と比較して、ＧＲＰ７８の発現が誘導されている。左から四番目及び五番目のレーンは、ＶＳＴを添加した場合のＧＲＰ７８発現量を示すバンドである。左から五番目のレーンが示す通り、ＶＳＴを添加した場合、グルコース飢餓状態でも、ＧＲＰ７８の発現誘導がある程度抑制されている。【０１０１】
左から６番目以降のレーンは、本発明に係るＶＳＴ誘導体を添加した場合における、ＧＲＰ７８発現誘導抑制作用を表す。それらの各レーンのウエスタンブロット写真が示す通り、ＧＲＰ７８の発現量は、グルコース非存在下のレーンにおいても、グルコース存在下のレーンとほぼ同等であった。このことは、本発明に係るＶＳＴ誘導体が、グルコース飢餓条件下において、ＶＳＴと同等に（又はそれ以上に）、ＧＲＰ７８発現誘導を抑制することを示す。また、本実験結果は、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位に有機基を導入したＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴと同様に、ＧＲＰ７８発現誘導作用を有することを示唆する。
【実施例７】
【０１０２】
実施例７では、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位に、様々なスペーサーを有するビオチンを導入した場合に、そのＶＳＴ誘導体にＧＲＰ７８の発現抑制作用があるかを、ウエスタンブロット法により調べた。【０１０３】
まず、実施例１において調製したＶＳＴオキシムアミン誘導体と、「化２２」の一般式で表す各化合物とを、酸又はアルカリ（酢酸、トリエチルアミンなど）存在下で、ＤＭＦ中で反応させ、３種類のＶＳＴビオチン誘導体を得た。
【化２２】
2007004621.tif 000016
【０１０４】
次に、実施例６と同様の手順・条件で培養後、抗ＧＲＰ７８抗体を用いて、ウエスタンブロットを行い、発現したＧＲＰ７８を検出した。【０１０５】
結果を図６〜図８に示す。図６は、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位に、ビオチンを導入した誘導体を用いた場合、図７は、同じく、Ｃ６−ビオチンを導入した誘導体を用いた場合、図８は、同じく、Ｃ１２−ビオチンを導入した誘導体を用いた場合、のウエスタンブロット写真である。なお、実験で用いたＶＳＴビオチン誘導体の各化学構造式についても、それぞれの図中に記載した。その他、図６〜図８において、左から１〜４番目のレーンは、実施例６とほぼ同じ内容のコントロールである。【０１０６】
図６〜図８の左から５番目以降のレーンは、各ＶＳＴ誘導体を添加した場合における、ＧＲＰ７８発現誘導抑制作用を表す。例えば、図６の左から６番目及び８番目のレーンのウエスタンブロット写真は、グルコース飢餓条件下において、ＶＳＴビオチン誘導体が、ＶＳＴと同等にＧＲＰ７８発現誘導を抑制することを示す（図７及び図８でも同様）。また、以上の結果は、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位に有機基を導入したＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴと同様に、ＧＲＰ７８発現誘導作用を有することを強く示唆し、また、その有機基の炭素鎖の長さに関わらず、ＧＲＰ７８発現誘導作用を保持することを示唆する。
【実施例８】
【０１０７】
実施例８では、ＶＳＴ誘導体添加時における細胞の生存率を、ＭＴＴアッセイにより調べた。ＶＳＴ誘導体には、実施例７で調製した３種類のＶＳＴビオチン誘導体を用いた。【０１０８】
実験手順の概要は次の通りである。ＨＴ１０８０細胞の細胞懸濁液（５×１０４／ｍｌ）を９６ウエルプレートの各ウエルに１００μｌ分注し、３７℃、６時間培養した後、各濃度のＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を添加し、２４時間、培養した。また、グルコース飢餓状態にするため、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体の添加時に、２−ＤＧ（デオキシグルコース）２０ｍＭを添加した。次に、２４時間培養した後、各ウエルに０．０５ｇ／ｍｌＭＴＴ溶液を１０μｌ添加し、３７℃、４時間、インキュベートした。次に、培地を除き、ＤＭＳＯを１００μｌ添加した後、５３０ｎｍの吸光度を測定し、生存する細胞数の相対的な値を取得した。【０１０９】
結果を図９〜図１１に示す。図９は、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴの化学構造中、特定のケトン基の部位にビオチンを導入した誘導体を用いた場合、図１０は、同じく、特定のケトン基の部位にＣ６−ビオチンを導入した誘導体を用いた場合、図１１は、同じく、特定のケトン基の部位にＣ１２−ビオチンを導入した誘導体を用いた場合の細胞生存率を表すグラフである。グラフの横軸は、添加したＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体の各濃度（対数）を、縦軸は、ＭＴＴアッセイによる細胞生存率（％）を表す。各グラフにおいて、「ＶＳＴ」は、ＶＳＴを添加した場合の折れ線グラフを、「ＶＳＴ＋２−ＤＧ」は、ＶＳＴと２−ＤＧを添加した場合、即ち、グルコース飢餓状態においてＶＳＴを添加した場合の折れ線グラフを、「ＶＳＴ−Ｂｉｏｔｉｎ」、「ＶＳＴ−Ｂｉｏｔｉｎ−Ｃ６」、「ＶＳＴ−Ｂｉｏｔｉｎ−Ｃ１２」は、それぞれ、各ＶＳＴ誘導体を添加した場合の折れ線グラフを、「ＶＳＴ誘導体＋２−ＤＧ」は、各ＶＳＴ誘導体と２−ＤＧを添加した場合、即ち、グルコース飢餓状態においてＶＳＴ誘導体と２−ＤＧを添加した場合を、それぞれ示す。【０１１０】
本実験において、ＨＴ１０８０細胞に２−ＤＧを２０ｍＭ添加し、グルコース飢餓状態にした場合の細胞生存率は、５０％前後であった（図示せず）。それに対し、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体と２−ＤＧを添加した場合、図９〜図１１のいずれの場合でも、細胞生存率は３０％前後まで低下した。このことは、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体が、がん細胞を抑制することを示唆する。【０１１１】
一方、２−ＤＧを添加しない場合、図９〜図１１に示す通り、ＶＳＴを添加したものでは、ＶＳＴ添加量が２５μＭを超えると、細胞生存率が大幅に低下するのに対し、ＶＳＴ誘導体を添加したものでは、どの誘導体を添加した場合でも、添加量を増大させても、細胞生存率は、特に低下しなかった。このことは、ＶＳＴの特定のケトン基を置換することにより、細胞毒性を大幅に低減できること、即ち、本発明に係るＶＳＴ誘導体は、細胞毒性及び副作用が少なく、安全性が高いことを強く示唆する。
【実施例９】
【０１１２】
実施例９では、ＶＳＴ誘導体がＧＲＰ７８の発現を抑制するかどうかを、ルシフェラーゼアッセイにより調べた。ＶＳＴ誘導体には、それぞれ、実施例１、実施例３、実施例４、実施例５で調製した４種類のＶＳＴ誘導体を用いた。【０１１３】
「ルシフェラーゼアッセイ」の概要について、以下説明する。ルシフェラーゼは、生物発光を触媒する酵素タンパク質である。例えば、所定の遺伝子のプロモーター領域とルシフェラーゼをコードする遺伝子とを連結させた組換え遺伝子を作製し、その組換え遺伝子を培養細胞に組み込んだ場合、その遺伝子の発現が誘導されると、ルシフェラーゼが発現する。そこで、ルシフェラーゼによる生物発光を測定し、ルシフェラーゼの発現レベルを取得することにより、その遺伝子の発現誘導レベルを推定することができる。【０１１４】
実験手順の概要を以下に示す。【０１１５】
まず、ルシフェラーゼ発光ベクターｐＧＬ３  ｂａｓｉｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）に、ＧＲＰ７８のプロモーター領域を組み込んで、組換えベクターを作製した。この組換えベクターは、ＧＲＰ７８のプロモーター領域とルシフェラーゼ遺伝子をコードする領域を有する。【０１１６】
次に、作製した組換えベクターを、培養細胞ＨＴ１０８０にトランスフェクションした。次に、トランスフェクションした培養細胞を、ＶＳＴ誘導体及び２−ＤＧ（２０ｍＭ）存在下で培養し、ルシフェラーゼを発現させた。そして、トランスフェクションの３６時間後に、継代した細胞を集め、溶解させた。【０１１７】
次に、Ｄｕａｌ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて、溶解させた細胞溶液を調製した後、発光強度を測定し、ＧＲＰ７８の発現誘導レベルを取得した。【０１１８】
結果を図１２に示す。図１２は、ＶＳＴ誘導体を添加した場合における蛍光強度を示すグラフである。【０１１９】
グラフの横軸（Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（μＭ））はＶＳＴ誘導体の濃度を、縦軸（Ｒｅｌａｔｉｖｅ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ）は発光強度を、それぞれ表す。なお、発光強度の値は、ルシフェラーゼ遺伝子のみを有するプラスミドを培養細胞に組み込んだ場合の発光強度を「１」とした場合の相対値である。その他、グラフ中、「ｖｓ  ２−ＤＧ」は、２−ＤＧを添加したことを表す。【０１２０】
グラフ中、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ａ（ＣＦ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は実施例４で合成したＶＳＴ誘導体を添加した場合の結果を、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｂ（ｍｅｔｈｏｘｙ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は実施例５で合成したＶＳＴ誘導体を添加した場合の結果を、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｃ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は実施例３で合成したＶＳＴ誘導体を添加した場合の結果を、「Ｃｏｍｐｏｕｎｄ  Ｄ（ａｍｉｎｅ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」は実施例１で合成したＶＳＴ誘導体を添加した場合の結果を、それぞれ表す。【０１２１】
図１２の結果は、ＶＳＴ誘導体が、ＧＲＰ７８の発現を抑制したことを示す。
【実施例１０】
【０１２２】
実施例１０では、培養がん細胞にＶＳＴ誘導体を添加し、細胞レベルにおける抗がん作用などを検討した。【０１２３】
６ｃｍシャーレにＨＴ１０８０細胞を７０％コンフルエントになるように培養した後、グルコース非存在下（グルコース飢餓状態）で、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を１０、３、１μＭ添加し、その作用を調べた。ＶＳＴ誘導体として、実施例１で調製したもの（置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））、及び、実施例７で調製した３種類のＶＳＴビオチン誘導体を用いた。【０１２４】
その結果、グルコース飢餓状態においてＶＳＴ誘導体を添加した場合、いずれの場合も、細胞数の減少が観察された。このことは、ＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴと同様、細胞レベルでも、がん細胞抑制作用があることを示す。
【実施例１１】
【０１２５】
実施例１１では、ＶＳＴ誘導体の毒性などを検討した。【０１２６】
本実施例では、ＶＳＴ誘導体として、実施例１で調製したもの（置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））を用いた。実験手順の概要は、実施例１０とほぼ同様である。本実施例では、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を、１００μＭ添加した。【０１２７】
その結果、正常の培養環境（グルコース存在下）の場合、ＶＳＴを１００μＭ添加すると、細胞数が大幅に減少しているのに対し、ＶＳＴ誘導体を同量添加しても、細胞数の減少は特に観察されなかった。このことは、ＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴよりも細胞毒性が低いことを示す。【０１２８】
一方、培養細胞がグルコース飢餓状態の場合、ＶＳＴ誘導体を添加したものは、ＶＳＴを添加した場合と同様、細胞死が観察された。このことは、ＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴと同様、細胞レベルでも、がん細胞抑制作用があることを示す。
【実施例１２】
【０１２９】
実施例１２では、ＶＳＴの化学構造中のケトン基を、様々なスペーサーを有するビオチンに置換した場合における、ＶＳＴ誘導体の毒性などを検討した。なお、この実施例では、２−デオキシグルコースを添加することにより、培養細胞がグルコース飢餓状態になるようにした。【０１３０】
実験手順は、実施例１０などとほぼ同様である。ＶＳＴ誘導体には、実施例７で調製した３種類のＶＳＴビオチン誘導体を用いた。本実施例では、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を１００μＭ、２−ＤＧを２０ｍＭ、それぞれ添加した。【０１３１】
その結果、正常の培養環境の場合、ＶＳＴを１００μＭ添加すると、実施例１１と同様、細胞数が大幅に減少しているのに対し、各ＶＳＴ誘導体を同量添加しても、細胞数の減少は特に観察されなかった。このことは、ＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴよりも細胞毒性が低いことを示し、また、置換基の炭素鎖の長さに関わらず、毒性を低減できることを示す。【０１３２】
一方、培養細胞がグルコース飢餓状態の場合、ＶＳＴ誘導体を添加したものは、ＶＳＴを添加したものと同様、細胞死が観察された。このことは、ＶＳＴ誘導体が、ＶＳＴと同様、がん細胞抑制作用があることを示唆し、また、置換基の炭素鎖の長さに関わらず、細胞レベルでも、がん細胞抑制作用があることを示唆する。
【実施例１３】
【０１３３】
実施例１３では、マウスを用いて、ＶＳＴ誘導体の毒性試験を行った。【０１３４】
マウスは、ＩＣＲ系の７〜８週齢のオス（チャールズリバー社）を用いた。このマウスに、ＶＳＴ又はＶＳＴ誘導体を、各量、尾静脈投与し、毒性を調べた。なお、本実験では、ＶＳＴ誘導体として、実施例７で調製したＶＳＴビオチン誘導体を用いた。【０１３５】
結果を表１に示す。
【表１】
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【０１３６】
表１に示す通り、ＶＳＴでは、投与量が１８ｍｇ／ｋｇを超えると、全てのマウスが死亡したのに対し、ＶＳＴ誘導体では、４５ｍｇ／ｋｇ投与しても、マウスは死亡しなかった。この実験結果は、個体レベルにおいて、ＶＳＴ誘導体の毒性が、ＶＳＴよりも大幅に低いことを示す。
【産業上の利用可能性】
【０１３７】
本発明に係るＶＳＴ誘導体は、副作用が少なく、より安全性の高い抗がん剤などとして、適用可能性がある。
【図面の簡単な説明】
【０１３８】
【図１】実施例１において調製した化合物（置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））の質量分析結果。
【図２】実施例３において調製した化合物（置換基Ｒ１として、「化１４」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝２））の質量分析結果。
【図３】実施例４において調製した化合物（置換基Ｒ１として、「化１６」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））の質量分析結果。
【図４】実施例４において調製した化合物（置換基Ｒ１として、「化１７」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））の質量分析結果。
【図５】実施例６において、ＶＳＴ誘導体として、実施例１で合成した化合物（置換基Ｒ１として、「化１１」に示す化学構造を有する化合物（ｎ＝３））を用いた場合のＧＲＰ７８発現誘導を示すウエスタンブロット写真。
【図６】実施例７において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をビオチンに置換した誘導体を用いた場合のＧＲＰ７８発現誘導を示すウエスタンブロット写真。
【図７】実施例７において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をＣ６−ビオチンに置換した誘導体を用いた場合のＧＲＰ７８発現誘導を示すウエスタンブロット写真。
【図８】実施例７において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をＣ１２−ビオチンに置換した誘導体を用いた場合のＧＲＰ７８発現誘導を示すウエスタンブロット写真。
【図９】実施例８において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をビオチンに置換した誘導体を用いた場合の細胞生存率を表すグラフ（ＭＴＴアッセイの結果を示すグラフ）。
【図１０】実施例８において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をビオチンに置換した誘導体を用いた場合の細胞生存率を表すグラフ（ＭＴＴアッセイの結果を示すグラフ）。
【図１１】実施例８において、ＶＳＴ誘導体として、ＶＳＴのケトン基をビオチンに置換した誘導体を用いた場合の細胞生存率を表すグラフ（ＭＴＴアッセイの結果を示すグラフ）。
【図１２】実施例９において、ＶＳＴ誘導体を添加した場合における蛍光強度を示すグラフ（ルシフェラーゼアッセイの結果を示すグラフ）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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