【誤訳訂正書】
【提出日】令和1年5月20日(2019.5.20)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
[0063]別の反応において、短い伸長リンカー領域を（Ｎ−末端に）含有する［ｄｅｌ（１−４）、Ａｒｇ６、Ｌｅｕ２７、Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２等の変異型ＩＧＦ２ペプチドを、ヘテロ二官能性架橋剤ＰＥＧ４−ペンタフルオロベンゼン−４−ホルミル安息香酸（ＰＥＧ４−ＰＦＢ）を使用して、ｐＨ約７．５で、２−３時間室温で、化学的に修飾する。この反応において、ＰＥＧ４−ＰＦＢは、短い伸長リンカー領域からの第１アミノ酸のグリシンのα−アミノ基を修飾して、アミノ末端に新規な反応性のアルデヒド化学基を導入する。変異型ＩＧＦ−２ペプチドの化学的修飾は、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによってモニターして、化学的修飾の進行及び完全性を、図５に示すように評価することができる。次いでＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ−２ペプチドを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって精製して、結合のための適当な緩衝液（例えば、５０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．８／１００ｍＭ  ＮａＣｌ／０．０５％ポリソルベート−８０）中の過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去する。次いで最後の反応を行い、Ｓ−Ｈｙｎｉｃ修飾ｒｈＧＡＡを、５０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．８／１００ｍＭ  ＮａＣｌ／０．０５％  ポリソルベート−８０緩衝液中で、２４時間かけて室温で、ＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ−２ペプチドに結合させる。この化学反応（ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）は、Ｓ−Ｈｙｎｉｃ修飾ｒｈＧＡＡからのヒドラジド基を、ＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ２ペプチドからの化学的に活性なアルデヒド基にカップリングして、安定な共有（ヒドラゾン）結合を形成させる。この反応は、カップリングを最適化するために、アニリンの存在下（例えば、１０ｍＭ）で、様々な量のＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ−２ペプチド（例えば、１−１０倍のモル過剰）で行うことができる。次いでＩＧＦ−２ペプチド結合ｒｈＧＡＡを、サイズ排除クロマトグラフィー、又は５０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２／１００ｍＭ  ＮａＣｌ／０．０５％ポリソルベート−８０に対する透析によって、精製して、過剰のＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ−２ペプチドを除去し、そして変異型ＩＧＦ２ペプチド結合ｒｈＧＡＡ（ｖＩＧＦ２−ｒｈＧＡＡ）を、４℃の同じ緩衝液中で、或いは−２０℃又は−７０℃で冷凍して保存する。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
[0065]別の反応において、短い伸長リンカー領域を（Ｎ−末端において）含有する［ｄｅｌ（１−４）、Ａｒｇ６、Ｌｅｕ２７、Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２等の変異型ＩＧＦ−２ペプチドを、３０倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ＰＥＧ４−アジド（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジド）を使用して、第一アミンを欠くｐＨ約７．５の緩衝液（例えば、５０ｍＭリン酸ナトリウム／５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）中で１−３時間室温で化学的に修飾する。この反応において、ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジドの反応性ＮＨＳ基は、短い伸長リンカー領域からのグリシンのα−アミノ基と反応して、Ｎ−末端に新規なアジド化学基を導入する。変異型ＩＧＦ２ペプチドの化学的修飾は、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによってモニターして、化学的修飾の進行及び完全性を評価することができる。次いでＰＥＧ４−アジド修飾ＩＧＦ−２ペプチドを、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによって精製し、そして修飾されたペプチドを、凍結乾燥して、溶媒を除去し、そして乾燥粉末として保存する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
[0068]別の反応において、短い伸長リンカー領域（Ｎ−末端において）を含有する［ｄｅｌ（１−４）、Ａｒｇ６、Ｌｅｕ２７、Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２等の変異型ＩＧＦ−２ペプチドを、３０倍モル過剰のヘテロ二官能性架橋剤Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ＰＥＧ４−アジド（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジド）を使用して、第一アミンを欠くｐＨ約７．５の緩衝液（例えば、５０ｍＭリン酸ナトリウム／５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）中で、１−３時間室温で化学的に修飾する。この反応において、ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジドの反応性ＮＨＳ基は、短い伸長リンカー領域からのグリシンのα−アミノ基と反応して、新規なアジド化学基をＮ−末端に導入する。変異型ＩＧＦ２ペプチドの化学的修飾は、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによってモニターして、化学的修飾の進行及び完全性を評価することができる。次いでＰＥＧ４−アジド修飾ＩＧＦ−２ペプチドを、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによって精製し、そしてペプチドを凍結乾燥し、そして乾燥粉末として保存する。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
実施例４
[0070]哺乳動物製造系から誘導された組換えヒト酸性α−グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）を、修飾ＩＧＦ−２ペプチドへの結合のために使用して、優れたｒｈＧＡＡのＥＲＴを開発するために、改善されたタンパク質ターゲティング及び細胞取込みのために、ＩＧＦ−２／ＣＩ−ＭＰＲに対する親和性を増加させる。この実施例において、Ｎ−末端にシステイン残基を伴う短い伸長リンカー領域を含有する［ｄｅｌ（１−４）、Ａｒｇ６、Ｌｅｕ２７、Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２等の変異型ＩＧＦ−２ペプチドを、ヘテロ二官能性架橋剤ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）で、ｐＨ約６で、３０−６０分間室温で修飾する。この反応において、ＭＢＳからの化学的に反応性のマレイミド基は、Ｎ−末端システインからの遊離のスルフヒドリル基と反応し、一方、ｒｈＧＡＡにカップリングするためにＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル反応性基を保存する。ＭＢＳ修飾ＩＧＦ−２ペプチドを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって急速に精製して、過剰のＭＢＳを除去する。次いでｒｈＧＡＡを、ＭＢＳ修飾ＩＧＦ−２ペプチドへのカップリングのために、ｐＨ７．３のアミン非含有緩衝液中で３０分間室温で加える。この化学反応において、化学的に反応性のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル基（ＭＢＳ修飾ＩＧＦ−２ペプチドから）は、ｒｈＧＡＡ上のＮ−末端の第１アミノ酸残基のα−アミノ基及びリシンのε−アミノ基と反応して、安定な共有結合を形成する。この反応を、様々な量のＭＢＳ修飾ＩＧＦ−２ペプチド（例えば、１−２０倍のモル過剰）を使用して滴定し、ｒｈＧＡＡ上に１−４個のＩＧＦ−２ペプチドをカップリングさせるための、ＭＢＳ修飾ＩＧＦ−２ペプチドのモル過剰を決定する。次いで最適なカップリング条件を、この方法をスケールアップするために使用する。ＩＧＦ−２結合ｒｈＧＡＡを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって精製して、過剰のＩＧＦ−２ペプチドを除去し、そして酸性のｐＨの緩衝液（０．１Ｍクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．５緩衝液）中で保存する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
[0072]別の反応において、短い伸長リンカー領域（Ｎ−末端において）を含有する［ｄｅｌ（１−４）、Ａｒｇ６、Ｌｅｕ２７、Ａｒｇ６５］ＩＧＦ−２等の変異型ＩＧＦ−２ペプチドを、３０倍のモル過剰のヘテロ二官能性架橋剤ＰＥＧ４−ペンタフルオロベンゼン−４−ホルミル安息香酸（ＰＥＧ４−ＰＦＢ）を使用して、第一アミンを欠くｐＨ約７．５の緩衝液（例えば、５０ｍＭリン酸ナトリウム／５０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ７．５）中で、１−３時間室温で化学的に修飾する。この反応において、ＰＥＧ４−ＰＦＢは、短い伸長リンカー領域からのグリシンのα−アミノ基を修飾して、新規なアルデヒド化学基をＮ−末端に導入する。変異型ＩＧＦ２ペプチドの化学的修飾は、Ｃ４逆相クロマトグラフィーによってモニターして、化学的修飾の進行及び完全性を評価することができる。次いでＰＥＧ４−ベンズアルデヒド修飾ＩＧＦ−２ペプチドを、ゲル濾過クロマトグラフィー又は透析によって精製して、結合のための適当な緩衝液（例えば、５０ｍＭ  ＮａＯＡｃ、ｐＨ４．８／１００ｍＭ  ＮａＣｌ／０．０５％ポリソルベート−８０）中で、過剰の架橋剤及び化学的副産物を除去する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させることを含む、組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法であって、ここで、
第１の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、第１の架橋剤で化学的に修飾されたＮ末端、及び一つ又はそれより多い第１の架橋剤で修飾されたリシン残基を有することで特徴づけられる、組換えリソソーム酵素を含み、かつ
一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、アミノ（Ｎ）末端の、５〜２０個のアミノ酸残基を含む短い伸長リンカー内の第２の架橋剤で修飾されたアミノ酸を含む一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含み、ここで
リソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ、ヒト酸性α−ガラクトシダーゼＡ、ヒト酸性β−グルクロニダーゼ、ヒト酸性α−イズロニダーゼＡ、ヒト酸性イズロニデート（ｉｄｕｒｏｎｉｄａｔｅ）２−スルファターゼ、ヒトβ−ヘキソサミニダーゼＡ、ヒトβ−ヘキソサミニダーゼＢ、ヒト酸性α−マンノシダーゼＡ、ヒトβ−グルコセレブロシダーゼ、ヒト酸性リパーゼ、及びこれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択され、かつ
一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、野生型ヒトＩＧＦ−２配列に対し以下の修飾：
６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換；
アミノ酸１〜４及び６の削除；
アミノ酸１〜４、６及び７の削除；
アミノ酸１〜４及び６の削除並びに７位におけるトレオニンのリシンへの置換；
アミノ酸１〜４の削除及び６位におけるグルタミン酸のグリシンへの置換及び７位におけるトレオニンのリシンへの置換；
２７位におけるチロシンのロイシンへの置換；
４３位におけるバリンのロイシンへの置換；
６５位におけるリシンのアルギニンへの置換；
の一つ又はそれ以上を含み、かつ
変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、更に、親和性標識及び／又はＩＧＦ−２に先行する少なくとも５つのアミノ酸のリンカー伸長領域を含む、
方法。
【請求項２】
組換えヒトリソソーム酵素がヒト酸α−ガラクトシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
組換えヒトリソソーム酵素において２つのリシン残基が修飾されている、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
第１の架橋剤がＮ−スクシンイミジル６−ヒドラジノニコチンアミドアセトン（Ｓ−Ｈｙｎｉｃ）を含む、請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項５】
第１の架橋剤がスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン（スルホ−ＮＨＳ−ホスフィン）を含む、請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項６】
第１の架橋剤がＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アセチレン）を含む、請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項７】
第１の架橋剤が、ジフルオロシクロオクチン（ＤＩＦＯ）及びジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）から選択されるヘテロ二官能性架橋剤を含む、請求項１〜３の何れか一項に記載の方法。
【請求項８】
第２の架橋剤がＰＥＧ４−ペンタフルオロベンゼン−４−ホルミル安息香酸（ＰＥＧ４−ＰＦＢ）を含む、請求項１〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項９】
第２の架橋剤がＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ＰＥＧ４−アジド（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アジド）を含む、請求項１〜７の何れか一項に記載の方法。
【請求項１０】
第一アミンの非存在下、ｐＨ約７．３の緩衝液中で、約３０分間概略室温で、組換えヒトリソソーム酵素上のＮ末端及び一つ又はそれより多いリシン残基が修飾される、請求項１〜９の何れか一項に記載の方法。
【請求項１１】
第１の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、第２の架橋剤で修飾された、短いリンカーを含有する変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させる前に、第２の架橋剤で修飾された、短い伸長リンカーを含有する変異型ＩＧＦ−２ペプチドを精製することを更に含む、請求項１〜１０の何れか一項に記載の方法。
【請求項１２】
一より多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドが一つのリソソーム酵素に結合する、請求項１〜１１の何れか一項に記載の方法。
【請求項１３】
第１の架橋剤で修飾された組換えヒトリソソーム酵素を、一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドに結合させることを含む、組換えリソソーム酵素に結合したターゲティングペプチドを製造する方法であって、ここで、
第１の架橋剤で修飾された組換えリソソーム酵素が、第１の架橋剤で化学的に修飾されたＮ末端、及び一つ又はそれより多い第１の架橋剤で修飾されたリシン残基を有することで特徴づけられる、組換えリソソーム酵素を含み、かつ
一つ又はそれより多い第２の架橋剤で修飾された変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、アミノ（Ｎ）末端の、５〜２０個のアミノ酸残基を含む短い伸長リンカー内の第２の架橋剤で修飾されたアミノ酸を含む一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含み、ここで
リソソーム酵素が、ヒト酸性α−グルコシダーゼ、ヒト酸性α−ガラクトシダーゼＡ、ヒト酸性β−グルクロニダーゼ、ヒト酸性α−イズロニダーゼＡ、ヒト酸性イズロニデート（ｉｄｕｒｏｎｉｄａｔｅ）２−スルファターゼ、ヒトβ−ヘキソサミニダーゼＡ、ヒトβ−ヘキソサミニダーゼＢ、ヒト酸性α−マンノシダーゼＡ、ヒトβ−グルコセレブロシダーゼ、ヒト酸性リパーゼ、及びこれらの任意の組み合わせ、からなる群から選択され、かつ
一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、
方法。
【請求項１４】
組換えヒトリソソーム酵素に化学的に結合された、一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドを含む複合体であって、
一つ又はそれより多い変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、配列番号２を含み、又は野生型ヒトＩＧＦ−２配列に対し以下の修飾：
６位におけるグルタミン酸のアルギニンへの置換；
アミノ酸１〜４及び６の削除；
アミノ酸１〜４、６及び７の削除；
アミノ酸１〜４及び６の削除並びに７位におけるトレオニンのリシンへの置換；
アミノ酸１〜４の削除及び６位におけるグルタミン酸のグリシンへの置換及び７位におけるトレオニンのリシンへの置換；
２７位におけるチロシンのロイシンへの置換；
４３位におけるバリンのロイシンへの置換；
６５位におけるリシンのアルギニンへの置換；  
の一つ又はそれ以上を含み、かつ
変異型ＩＧＦ−２ペプチドが、更に、親和性標識及び／又はＩＧＦ−２に先行する少なくとも５つのアミノ酸のリンカー伸長領域を含む、
複合体。
【請求項１５】
組換えヒトリソソーム酵素が、一つ又はそれより多い修飾されたリシン残基、化学的に修飾されたＮ末端、又はこれらの組み合わせを含む、請求項１４に記載の複合体。
【請求項１６】
組換えヒトリソソーム酵素がヒト酸性α−グルコシダーゼ（ｒｈＧＡＡ）である、請求項１４又は１５に記載の複合体。
【請求項１７】
化学的な結合が、アミノ反応性二官能性架橋剤から誘導された架橋剤を介する、請求項１４〜１６の何れか一項に記載の複合体。
【請求項１８】
化学的な結合が、Ｎ−スクシンイミジル６−ヒドラジノニコチン酸アセトン（Ｓ−Ｈｙｎｉｃ）から誘導された架橋剤を介する、請求項１４〜１６の何れか一項に記載の複合体。
【請求項１９】
化学的な結合が、スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−ホスフィン（スルホ−ＮＨＳ−ホスフィン）から誘導された架橋剤を介する、請求項１４〜１６の何れか一項に記載の複合体。
【請求項２０】
化学的な結合が、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル−テトラオキサペンタデカンアセチレン（ＮＨＳ−ＰＥＧ４−アセチレン）から誘導された架橋剤を介する、請求項１４〜１６の何れか一項に記載の複合体。
【請求項２１】
化学的な結合が、ジフルオロシクロオクチン（ＤＩＦＯ）及びジベンゾシクロオクチン（ＤＩＢＯ）から選択されるヘテロ二官能性架橋剤から誘導された架橋剤を介する、請求項１４〜１６の何れか一項に記載の複合体。
【請求項２２】
請求項１４〜２１の何れか一項に記載の複合体を、リソソーム蓄積症を治療するために十分な量で含む、リソソーム蓄積症に罹患した対象を治療するための医薬。
【請求項２３】
リソソーム蓄積症が、ポンペ病、ファブリー病、ゴーシェ病、ＭＰＳ  Ｉ、ＭＰＳ  ＩＩ、ＭＰＳ  ＶＩＩ、テイ・サックス、サンドホフ、α−マンノシドーシス、及びウォルマン病の少なくとも一つである、請求項２２に記載の医薬。