【手続補正書】
【提出日】令和1年5月22日(2019.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１に記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号１記載のアミノ酸配列の以下（ａ）から（ｈ）よりなる群から選択されるアミノ酸の位置に対応する位置で当該アマドリアーゼのアミノ酸配列が１つまたはそれ以上のアミノ酸残基の置換を有し、かつ置換前のアマドリアーゼと比較して、α−フルクトシルバリルヒスチジンに対する反応性に対する、α−フルクトシルヘキサペプチドに対する反応性の割合が向上している改変アマドリアーゼ。
（ｇ）配列番号１の３５５位
（ｅ）配列番号１の１１０位
（ｄ）配列番号１の１０６位
（ｂ）配列番号１の６３位
（ｃ）配列番号１の１０２位
（ｆ）配列番号１の１１３位
（ｈ）配列番号１の４１９位
（ａ）配列番号１の６２位
【請求項２】
アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１に記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号１記載のアミノ酸の以下（a）から（h）よりなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置のアミノ酸に対応する位置のアミノ酸が、以下の各々に記載される置換後のアミノ酸残基へと置換され、置換前のアマドリアーゼと比較して、α−フルクトシルバリルヒスチジンに対する反応性に対する、α−フルクトシルヘキサペプチドに対する反応性の割合が向上している改変アマドリアーゼ。
（g）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、又はプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、又はリジンに置換されている。
（e）配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、又はプロリン、ヒスチジン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グリシン、アラニン、又はフェニルアラニンに置換されている。
（d）配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、アラニン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
（b）配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がアラニン、ヒスチジン又はグリシン、アルギニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、プロリン、バリン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、又はトリプトファンに置換されている。
（c）配列番号１の１０２位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
（f）配列番号１の１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン又はトリプトファンに置換されている。
（h）配列番号１の４１９位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン、プロリン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン酸又はグルタミン酸に置換されている。
（a）配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン、アスパラギン酸、アラニン、セリン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換されている。
【請求項３】
アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１に記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号１記載のアミノ酸の以下（a）から（h）よりなる群から選択される１つまたはそれ以上の位置のアミノ酸に対応する位置のアミノ酸が、以下の各々に記載される置換後のアミノ酸残基へと置換され、置換前のアマドリアーゼと比較して、α−フルクトシルバリルヒスチジンに対する反応性に対する、α−フルクトシルヘキサペプチドに対する反応性の割合が向上している改変アマドリアーゼ。
（g）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、又はプロリンに置換されている。
（e）配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、又はプロリンに置換されている。
（d）配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、アラニン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
（b）配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がアラニン、ヒスチジン又はグリシンに置換されている。
（c）配列番号１の１０２位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
（f）配列番号１の１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニンに置換されている。
（h）配列番号１の４１９位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニンに置換されている。
（a）配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換されている。
【請求項４】
以下からなる群より選択される改変アマドリアーゼ、
(i)  アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、配列番号１に示すアミノ酸配列における３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、又はプロリンであり、かつα−フルクトシルヘキサペプチド（αＦ６Ｐ）に対する活性を有する改変アマドリアーゼ、
(ii)  前記(i)のアマドリアーゼにおいて、配列番号１に示すアミノ酸配列における３５５位に対応する位置以外の位置における１又は数個のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する改変アマドリアーゼ、
(iii)  前記(i)のアマドリアーゼにおいて、配列番号１に示すアミノ酸配列における３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、又はプロリンであり、かつ当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号１のアミノ酸配列と７０％以上の配列同一性を有し、配列番号１の第１０位〜３２位、３６〜４１位、４９〜５２位、５４〜５８位、６３〜６５位、７３〜７５位、８４〜８６位、８８〜９０位、１２０〜１２２位、１４５〜１５０位、１５６〜１６２位、１６４〜１７０位、１８０〜１８２位、２０２〜２０５位、２０７〜２１１位、２１４〜２２４位、２２７〜２３０位、２３６〜２４１位、２４３〜２４８位、２５８〜２６１位、２６６〜２６８位、２７０〜２７３位、２７５〜２８７位、２９５〜２９７位、３０６〜３０８位、３１０〜３１６位、３２４〜３２９位、３３２〜３３４位、３４１〜３４４位、３４６〜３５５位、３５７〜３６３位、３７０〜３８３位、３８５〜３８７位、３８９〜３９４位、４０５〜４１０位及び４２３〜４３１位のアミノ酸配列からなる相同性領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの対応する位置の相同性領域におけるアミノ酸配列とが９０％以上の配列同一性を有し、αＦ６Ｐに対する活性を有する改変アマドリアーゼ、
(iv)  前記(i)のアマドリアーゼにおいて、配列番号１に示すアミノ酸配列における３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、又はプロリンであり、かつ当該アマドリアーゼの全長アミノ酸配列が配列番号１１９のアミノ酸配列と９０％以上の配列同一性を有し、αＦ６Ｐに対する活性を有する改変アマドリアーゼ。
【請求項５】
(i)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における１１０位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、ロイシン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン又はプロリンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
(ii)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における１０６位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、アラニン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
(iii)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
(iv)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における６３位に対応する位置のアミノ酸がアラニン、ヒスチジン又はグリシンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
(v)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における１０２位に対応する位置のアミノ酸がリジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
(vi)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における４１９位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、或いは
(vii)アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、さらに配列番号１に示すアミノ酸配列における６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、アラニン、アスパラギン、セリン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンであり、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼ。
【請求項６】
配列番号１１９、配列番号１、配列番号３８、配列番号４０、配列番号５４、配列番号６２、配列番号８９、配列番号１１３、配列番号１１５、配列番号１１７、配列番号１２１、又は配列番号１２３に示すアミノ酸配列を有し、前記請求項１〜５のいずれかに規定したアミノ酸置換を有し、かつαＦ６Ｐに対する活性を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼ。
【請求項７】
前記アマドリアーゼが、エメリセラ(Emericella)属、コニオカエタ(Coniochaeta)属、ユーペニシリウム(Eupenicillium)属、ピレノケータ(Pyrenochaeta)属、アルスリニウム(Arthrinium)属、カーブラリア(Curvularia)属、ネオコスモスポラ(Neocosmospora)属、クリプトコッカス(Cryptococcus)属、フェオスフェリア(Phaeosphaeria)属、アスペルギルス(Aspergillus)属、ウロクラディウム(Ulocladium)属、ペニシリウム(Penicillium)属、フザリウム(Fusarium)属、アカエトミエラ(Achaetomiella)属、アカエトミウム(Achaetomium)属、シエラビア(Thielavia)属、カエトミウム(Chaetomium)属、ゲラシノスポラ(Gelasinospora)属、ミクロアスカス(Microascus)属、レプトスフェリア(Leptosphaeria)属、オフィオボラス(Ophiobolus)属、プレオスポラ(Pleospora)属、コニオケチジウム(Coniochaetidium)属、ピチア(Pichia)属、デバリオマイセス(Debaryomyces)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属、アグロバクテリウム(Agrobacterium)属、又はアルスロバクター(Arthrobacter)属由来である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼ。
【請求項８】
改変前のアマドリアーゼと比較して、α−フルクトシルバリルヒスチジンに対する反応性に対する、α−フルクトシルヘキサペプチドに対する反応性の割合が向上している、請求項１〜７のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼ。
【請求項９】
配列番号１１９に記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、９０％以上の全長アミノ酸配列同一性を有するアマドリアーゼであって、該アマドリアーゼのアミノ酸配列を、配列番号１に記載のアミノ酸配列とアライメントしたときに、以下に記載したアミノ酸残基の置換を有し、置換前のアマドリアーゼと比較して、α−フルクトシルバリルヒスチジンに対する反応性に対する、α−フルクトシルヘキサペプチドに対する反応性の割合が向上している改変アマドリアーゼ。
（i）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換されている。
（ii）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換されている。（iii）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
（iv）配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換されている。
(v)配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換されている。
(vi)配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換され、配列番号１の１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジンに置換されている。
(vii)配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換され、配列番号１の１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジンに置換され、配列番号１の１０２位に対応する位置のアミノ酸が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換されている。
(viii)配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の１１０位に対応する位置のアミノ酸がロイシン、アルギニン、チロシン、イソロイシン、バリン、メチオニン、システイン、トリプトファン、プロリン又はフェニルアラニンに置換され、配列番号１の１０６位に対応する位置のアミノ酸がアルギニン、アラニン、リジン、ヒスチジン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換され、配列番号１の１１３位に対応する位置のアミノ酸がリジンに置換され、配列番号１の１０２位に対応する位置のアミノ酸が、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、システイン、グリシン又はプロリンに置換され、配列番号１の４１９位に対応する位置のアミノ酸がリジン又はアルギニンに置換されている。
(ix)配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換されている。
(x)配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換されている。
(xi) 配列番号１の３５５位に対応する位置のアミノ酸がセリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、アルギニン、又はプロリンに置換され、配列番号１の６２位に対応する位置のアミノ酸がアスパラギン酸、セリン、アスパラギン、アラニン、スレオニン、グルタミン、グルタミン酸、バリン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システイン、グリシン、プロリン、ヒスチジン、又はリジンに置換され、配列番号１の６３位に対応する位置のアミノ酸がヒスチジン、グリシン又はアラニンに置換されている。
【請求項１０】
(i) 配列番号１３９のアミノ酸配列を有するアマドリアーゼ、或いは
(ii) 配列番号１３９のアミノ酸配列において、１又は数個のアミノ酸が改変若しくは変異、または、欠失、置換、付加および／または挿入されたアミノ酸配列を有し、かつαＦ６Ｐに対する活性を有するアマドリアーゼ。
【請求項１１】
全長アミノ酸配列が配列番号１３９のアミノ酸配列と７５％以上の配列同一性を有し、配列番号１の第１０位〜３２位、３６〜４１位、４９〜５２位、５４〜５８位、６３〜６５位、７３〜７５位、８４〜８６位、８８〜９０位、１２０〜１２２位、１４５〜１５０位、１５６〜１６２位、１６４〜１７０位、１８０〜１８２位、２０２〜２０５位、２０７〜２１１位、２１４〜２２４位、２２７〜２３０位、２３６〜２４１位、２４３〜２４８位、２５８〜２６１位、２６６〜２６８位、２７０〜２７３位、２７５〜２８７位、２９５〜２９７位、３０６〜３０８位、３１０〜３１６位、３２４〜３２９位、３３２〜３３４位、３４１〜３４４位、３４６〜３５５位、３５７〜３６３位、３７０〜３８３位、３８５〜３８７位、３８９〜３９４位、４０５〜４１０位及び４２３〜４３１位のアミノ酸配列からなる相同性領域におけるアミノ酸配列と当該アマドリアーゼの対応する位置の相同性領域におけるアミノ酸配列とが９０％以上の配列同一性を有し、αＦ６Ｐに対する活性を有するアマドリアーゼ。
【請求項１２】
(i)配列番号１４０に示す塩基配列によりコードされ、かつαＦ６Ｐに対する活性を有するアマドリアーゼ、或いは
(ii)配列番号１４０に示す塩基配列に相補的な配列と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列によりコードされ、かつαＦ６Ｐに対する活性を有するアマドリアーゼ。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか1項に記載の改変アマドリアーゼをコードするアマドリアーゼ遺伝子。
【請求項１４】
請求項１３に記載のアマドリアーゼ遺伝子を含む組換えベクター。
【請求項１５】
請求項１４に記載の組換えベクターを含む宿主細胞。
【請求項１６】
以下の工程を含む、アマドリアーゼの製造方法、
（i）請求項１５に記載の宿主細胞を、アマドリアーゼタンパク質を発現しうる条件下で培養する工程、及び
（ii）培養物又は培養液からアマドリアーゼを単離する工程。
【請求項１７】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載のアマドリアーゼを含む、ＨｂＡ１ｃの測定に用いるためのキット。
【請求項１８】
ＨｂＡ１ｃ由来のα−フルクトシルヘキサペプチド（αＦ６Ｐ）を含む試料に請求項１〜１２のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼを作用させ、該アマドリアーゼのＨｂＡ１ｃ由来αＦ６Ｐに対する作用による生成物又は消費物を測定することを特徴とするαＦ６Ｐの測定方法。
【請求項１９】
試料中のＨｂＡ１ｃ由来αＦ６Ｐを定量する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
以下の工程を含む、ＨｂＡ１ｃの測定方法、
(i)ＨｂＡ１ｃを含む試料をプロテアーゼ及び／又はペプチダーゼで処理し、ＨｂＡ１ｃのβ鎖アミノ末端よりαＦ６Ｐを遊離させる工程、及び
(ii)遊離したＨｂＡ１ｃ由来αＦ６Ｐに請求項１〜１２のいずれか１項に記載の改変アマドリアーゼを作用させ、該アマドリアーゼのＨｂＡ１ｃ由来αＦ６Ｐに対する作用による生成物又は消費物を測定する工程。
【請求項２１】
試料中のＨｂＡ１ｃを定量する、請求項２０に記載の方法。