(57)【要約】本発明により、アクリル系多孔質架橋重合体を用いて、ユビキノン−１０を含有する原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法、より好ましくはアクリル系多孔質架橋重合体が充填されている充填床内を溶液が一方向に循環しえる擬似移動床形式のクロマトグラフィー装置に、ユビキノン−１０を含有する原料液を供給し、充填床内の溶離液を一方向に移動させることにより、原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法が提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
アクリル系多孔質架橋重合体を用いて、ユビキノン−１０を含有する原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法。
【請求項２】
アクリル系多孔質架橋重合体が充填されている充填床内を溶液が一方向に循環しえる擬似移動床形式のクロマトグラフィー装置に、ユビキノン−１０を含有する原料液を供給し、充填床内の溶離液を一方向に移動させることにより、該原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法。
【請求項３】
アクリル系多孔質架橋重合体が平均粒径１０〜５００μｍの球状重合粒子である、請求項１または２記載の方法。
【請求項４】
アクリル系多孔質架橋重合体がメタクリル酸エステルとエチレングリコールジメタクリレートの重合体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ユビキノン−１０を含有する原料液がユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物の抽出物、またはユビキノン−１０の粗精製物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
ユビキノン−１０構造類似物質が５−デメトキシユビキノン−１０である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、ユビキノン−１０の精製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】  ユビキノン−１０は広く動植物の組織、微生物の細胞内に存在し、末端電子伝達系の必須成分として重要な働きをしている。またその薬理作用はうつ血性心不全及び冠不全、栄養障害による筋ジストロフィーなどに有効であり、医薬品としても価値の高い物質である。
ユビキノン−１０の製造法としては、ユビキノン−１０の含有率が高い微生物を培養して得られる培養物から抽出する方法、および合成法が知られている。【０００３】  該培養物から抽出したユビキノン−１０を含有する溶液からユビキノン−１０を精製する方法としては、シリカゲルまたは活性アルミナを用いる方法（特許文献１および２参照）が知られている。
しかしながら、上記抽出法で得られる抽出液は、ユビキノン−１０以外にユビキノン−１０構造類似物質を多く含み、該抽出液から晶析法により直接、高純度のユビキノン−１０を精製することは困難である。【０００４】  ユビキノン−１０を含有する培養物から高純度のユビキノン−１０を分離、精製する方法としては、メタノールを用いて抽出した溶液から直接ユビキノン−１０を晶析させる方法が知られている（特許文献３参照）。
しかしながら、シリカゲルまたは活性アルミナを用いた方法では、ユビキノン−１０構造類似物質を多く含む該抽出液を用いた場合、ユビキノン−１０を効率よく分離精製することはできない。さらに、シリカゲルおよび活性アルミナは高価であり、工業規模での製造においては、コスト高につながるという問題がある。またメタノールに対するユビキノン−１０の溶解度は、５ｇ／Ｌ以下と低いため、大量のメタノールを必要とする上記のメタノール抽出法は、環境の面から望ましい方法ではない。【０００５】  メタクリル酸メチルとエチレングルコールジメタクルレートの共重合体を用いて、ユビキノン−１０、ビタミンＫ１およびビタミンＫ２からなる脂溶性物質含有試料から、ユビキノン−１０を分離精製することが可能であることは知られている（非特許文献１）が、該重合体を用いてユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物質を分離し、ユビキノン−１０を精製できることは知られていない。【０００６】  擬似移動床式分離法は２つ以上の成分を含む溶液から各成分の移動速度の差に応じて２つの画分に分離する方法として知られている（非特許文献２）が、擬似移動床分離法によりユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物質が分離できることは知られていない。
【特許文献１】特開昭６３−９１３６０号
【特許文献２】特開平１−１６０９５３号
【特許文献３】国際公開第２００４／０１１６６０号パンフレット
【非特許文献１】ダイヤイオン資料  日本錬水株式会社、三菱化学株式会社
【非特許文献２】高純度化技術、第２巻  分離技術、フジ・テクノシステム
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】  本発明の目的は、ユビキノン−１０の精製法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  本発明は以下の（１）〜（６）に関する。
（１）アクリル系多孔質架橋重合体を用いて、ユビキノン−１０を含有する原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法。
（２）アクリル系多孔質架橋重合体が充填されている充填床内を溶液が一方向に循環しえる擬似移動床形式のクロマトグラフィー装置に、ユビキノン−１０を含有する原料液を供給し、充填床内の溶離液を一方向に移動させることにより、該原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を分離し、除去することを特徴とするユビキノン−１０の精製方法。
（３）アクリル系多孔質架橋重合体が平均粒径１０〜５００μｍの球状重合粒子である、上記（１）または（２）の方法。
（４）アクリル系多孔質架橋重合体がメタクリル酸エステルとエチレングリコールジメタクリレートの重合体である、上記（１）〜（３）のいずれか１つの方法。
（５）ユビキノン−１０を含有する原料液がユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物の抽出物、またはユビキノン−１０の粗精製物である、上記（１）〜（４）のいずれか１つの方法。
（６）ユビキノン−１０構造類似物質が５−デメトキシユビキノン−１０である、上記（１）〜（５）のいずれか１つの方法。
【発明の効果】
【０００９】  本発明により、ユビキノン−１０を効率よく精製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は擬似移動床方式の分離装置を示す図である。
【符号の説明】
【００１１】Ｗ：溶離液の供給管
Ｆ：原料液の供給管
Ｌ：５−デメトキシユビキノン−１０溶液の抜出管
Ａ：ユビキノン−１０溶液の抜出管
Ｗ１〜Ｗ４：バルブ
Ｆ１〜Ｆ４：バルブ
Ｌ１〜Ｌ４：バルブ
Ａ１〜Ａ４：バルブ
Ｒ１〜Ｒ４：逆止弁
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】１．本発明で用いられるアクリル系多孔質架橋重合体
本発明の方法で用いられるアクリル系多孔質架橋重合体としては、ユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物に対して親和性が異なるアクリル系多孔質架橋重合体であれば特に制限はないが、好ましくは平均粒径が１０〜５００μｍ、好ましくは１０〜２００μｍ、より好ましくは１０〜１００μｍの重合体をあげることができる。【００１３】  また、本発明の方法で用いられるアクリル系多孔質架橋重合体としては、メタクリル酸メチルなどのメタクリル酸エステルとエチレングリコールジメタクリレートとの架橋重合体などがあげられ、例えばメタクリル酸メチルとエチレングリコールジメタクリレートとの架橋重合体であるダイヤイオン  ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）などをあげることができる。
２．ユビキノン−１０を含有する原料液
ユビキノン−１０を含有する原料液としては、ユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物とを含む溶液であれば特に制限されないが、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分析したとき、ユビキノン−１０に対するユビキノン−１０構造類似物の重量比が１０％以下、好ましくは５％以下、より好ましくは３％以下、さらに好ましくは２％以下であるユビキノン−１０を含有する原料液をあげることができる。ＨＰＬＣの分析条件としては、以下の４に記載の条件をあげることができる。【００１４】  該ユビキノン−１０を含有する原料液としては、ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物の抽出物およびユビキノン−１０の粗精製物などをあげることができる。
ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物は、ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物を常法により培養することによって取得することができる。【００１５】  ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物としては、該能力を有する微生物であれば、いずれの微生物でもよいが、例えば、ユビキノン−１０を生産する微生物として知られている担子菌、真菌、酵母、および細菌をあげることができる。より具体的には、担子菌としてはＵｓｔｉｌａｇｏ属、真菌としてはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ属、Ｅｘｏｂａｓｉｄｉｕｍ属、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ属、Ｍｏｎａｓｃｕｓ属、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ属、Ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｕｍ属およびＴｉｌｌｅｔｉｏｐｓｉｓ属、酵母としてはＡｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ属、Ｂｒｅｔｔａｎｏｍｙｃｅｓ属、Ｂｕｌｌｅｒａ属、Ｃａｎｄｉｄａ属、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、Ｏｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ属、Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ属、Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属、Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ属、Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ属、Ｔｒｅｍｅｌｌａ属、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ属およびＳｐｏｒｉｄｉｏｂｏｌｕｓ属、細菌としては、Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ属、Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｅｒｙｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ属、Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｍｅｔｈｙｌｏｂａｃｔｅｒ属、Ｍｉｃｒｏｃｙｃｌｕｓ属、Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｈｙｌｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属、Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ属、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍ属、Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ属およびＸａｎｔｏｍｏｎａｓ属に属する微生物等をあげることができ、好ましくはＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ属に属する微生物、より好ましくはＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓをあげることができる。【００１６】  また、遺伝子組換え等の手法により、ユビキノン合成酵素が強化されたＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ属に属する微生物、および該酵素が強化された上記のユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物も本発明の方法に用いることができる。
上記の微生物を培養するための培地としては、該微生物が資化し得る炭素源、窒素源、無機塩類等を含有し、該微生物の培養を効率的に行える培地であれば天然培地、合成培地のいずれを用いてもよい。【００１７】  炭素源としては、該微生物が資化し得るものであればよく、グルコース、フラクトース、スクロース、これらを含有する糖蜜、デンプンあるいはデンプン加水分解物等の炭水化物、酢酸、プロピオン酸等の有機酸、エタノール、プロパノールなどのアルコール類等を用いることができる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等の無機酸もしくは有機酸のアンモニウム塩、その他の含窒素化合物、ならびに、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解物、大豆粕および大豆粕加水分解物、各種発酵菌体およびその消化物等を用いることができる。【００１８】  無機塩としては、リン酸第一カリウム、リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウム等を用いることができる。
培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養などの好気的条件下で行う。培養温度は１５〜４０℃がよく、培養時間は、通常１６時間〜１４日間である。培養中のｐＨは３．０〜９．０に保持することが好ましい。ｐＨの調整は、無機または有機の酸、アルカリ溶液、尿素、炭酸カルシウム、アンモニアなどを用いて行う。【００１９】  培養終了後、培養物、または該培養物を遠心分離して得られる菌体、または該菌体をスプレードライヤー等で乾燥菌体としたものに、溶媒を添加し、ユビキノン−１０を抽出するのに十分な時間、好ましくは１〜３時間撹拌した後、ユビキノン−１０を含む画分を溶媒層、または菌体等の不溶物を除去した溶液層として分離することにより、本発明に用いられるユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物の抽出物を取得することができる。【００２０】  上記の溶媒としては、ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物からユビキノン−１０を抽出することができる溶媒であれば、親油性溶媒、親水性溶媒、またはそれらの混合物のいずれの溶媒であってもよく、親油性溶媒としては、ヘキサン、ヘプタンなど、より好ましくはヘキサンをあげることができ、親水性溶媒としてはメタノール、エタノール、アセトンなど、より好ましくはエタノールをあげることができ、親油性溶媒と親水性溶媒の混合物としては、上記した親油性溶媒と親水性溶媒の任意の組み合わせをあげることができる。【００２１】  親油性溶媒と親水性溶媒の混合物における両者の混合比は、ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物からユビキノン−１０を抽出することができる混合比であれば、いかなる比率であってもよいが、親油性溶媒と親水性溶媒の混合体積比としては、好ましくは１０００：１〜１：１、より好ましくは５００：１〜１：１、さらに好ましくは２００：１〜２：１、特に好ましくは１００：１〜３：１、最も好ましくは５０：１〜４：１の比率をあげることができる。【００２２】  ユビキノン−１０の粗精製物としては、例えば、ユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物を培養して得られる培養物から溶媒等を用いてユビキノン−１０を抽出して得られる抽出液を乾燥または凍結乾燥して得られる乾燥物、または該抽出方法により得られる抽出液を晶析して得られる結晶を、溶媒に溶解して得られる溶液あげることができる。溶解に用いる溶媒としてはユビキノン−１０を溶解することができる溶媒であれば、いずれでもよいが、好ましくは上記したユビキノン−１０を生産する能力を有する微生物の培養物からユビキノン−１０を抽出する際に用いることができる溶媒、より好ましくは、下記の分離液と同じ組成の溶媒をあげることができる。【００２３】  ユビキノン−１０を含有する原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物としては、５−デメトキシユビキノン−１０、６−メトキシー２−ポリプレニル１，４−ベンゾキノン、６−メトキシー２−ポリプレニルフェノールなどをあげることができ、好ましくは５−デメトキシユビキノン−１０をあげることができる。
３．本発明のユビキノン−１０の精製方法
（１）単塔式分離法
分離剤としてアクリル系多孔質架橋重合体を充填した充填床の上端からユビキノン−１０を含有する原料液を供給し、次いで同じく上端から溶離液を供給して、原料液の各成分を相互に分離させると、充填床下部より、まず、分離剤に対して親和力の弱いユビキノン−１０画分を取得でき、次に、ユビキノン−１０よりも分離剤に対して親和力の強い５−デメトキシユビキノン−１０等のユビキノン−１０構造類似物の画分を取得することができる。【００２４】  単塔式分離法を実施するために必要な条件（溶離液の組成、温度など）としては、以下の擬似移動床式分離法に記載の条件をあげることができる。
（２）擬似移動床式分離法
擬似移動床式分離法には、市販の擬似移床動式分離装置、および充填床の前端と後端とが溶液流路で連結されていて、装置内を溶液が循環し得るようになっている擬似移床動式分離装置であれば、いずれも用いることができる。【００２５】  具体的な擬似移動床式装置としては、充填床には溶液の流れに沿って、原料液の供給口、分離剤に対して親和力の弱い成分が濃縮された溶液を抜出す抜出口、溶離液の供給口、および分離剤に対して親和力の強い成分が濃縮された溶液の抜出口の４種の供給口および抜出口が、この順序で設けられていて、充填床内に形成されている各成分の濃度分布の移動につれて、作動する供給口および抜出口がその相対的位置関係を保ったままで、定期的に下流の供給口及び抜出口に切り替えられる装置をあげることができる。【００２６】  擬似移動床の充填床は、分離剤としてはアクリル系多孔質架橋重合体が充填されており、その機能により、原料液の供給口と親和力の弱い成分が濃縮された溶液の抜出口との間を占める吸着帯域、この抜出口と溶離液の供給口との間を占める精製帯域、溶離液の供給口と親和力の強い成分が濃縮された溶液の抜出口との間を占める脱着帯域、この抜出口と原料液の供給口との間を占める濃縮帯域という４つの帯域に分かれており、この４つの帯域が、作動する供給口及び抜出口の切り替えと共に順次下流方向に移動する。【００２７】  本発明で用いられる擬似移動床方式としては、充填床内に常に溶液を循環させることにより各成分を相互に分離させ、かつこの循環流にユビキノン−１０を含有する原料液（以下、単に原料液ともいう）および溶離液を供給し、同時に各抜出口では、この循環流からその一部を抜き出す方式、および溶液の循環による成分の相互分離と、原料液および溶離液の供給、ならびにユビキノン−１０溶液およびユビキノン−１０構造類似物溶液の抜出しとを別個に行う方式（特開平２−４９１５９号公報）などをあげることができるが、好ましくは後者の方式をあげることができる。【００２８】  具体的には、ユビキノン−１０を含有する原料液と溶離液とをそれぞれの供給口から充填床に供給し、かつユビキノン−１０溶液の抜出口の位置に到達した溶液はその一部を充填床から抜出し、ユビキノン−１０構造類似物溶液の抜出口の位置に到達した溶液はその全量を充填床から抜出す供給−抜出しステップと、充填床への原料液および溶離液の供給、ならびに充填床からの溶液の抜出しを行わずに、充填床内の溶液を下流方向に移動させる循環ステップとから成る工程を行い、次いで作動する供給口および抜出口を、その相対的位置関係を維持しながら、下流の供給口および抜出口に切替えて再び上記の工程を行う方式をあげることができる。【００２９】  このように供給−抜出しステップと循環ステップとから成る工程と、作動する供給口および抜出口の切替えとを反復することにより、原料液をユビキノン−１０溶液と、ユビキノン−１０構造類似物溶液とに分離することができる。この方法では、４個の単位充填床から成る擬似移動床のような簡単な装置を用いても、良好な分離成績を達成することができる。【００３０】  いずれの方式による場合でも原料液としてはユビキノン−１０の濃度が１０〜３００ｇ／Ｌ、好ましくは２０〜２００ｇ／Ｌ、より好ましくは３０〜１００ｇ／Ｌ、さらに好ましくは４０〜８０ｇ／Ｌの原料液をあげることができる。また、原料液および溶離液の温度としては、ユビキノン−１０を効率よく精製できる温度であれば特に制限はないが、好ましくは充填床内の溶液の粘度が低く、ユビキノン−１０の結晶が析出しない温度をあげることができ、例えば２０〜５０℃、好ましくは２３〜２８℃、より好ましくは２５℃前後をあげることができる。【００３１】  原料液は、必要に応じてプレカラム処理を行い、アクリル系多孔質架橋重合体に不可逆吸着する物質を除去した溶液として装置に供給するのが好ましい。プレカラム処理に用いるアクリル系多孔質架橋重合体としては、ユビキノン−１０に対する吸着力が弱い重合体であれば、いかなる重合体であってもよいが、好ましくは、後の工程の単塔式分離法または擬似移動床式分離法に用いられるアクリル系多孔質架橋重合体と同一の重合体をあげることができる。【００３２】  溶離液は、原料液に対し通常２〜１０倍、好ましくは３〜５倍の量が用いられる。
溶離液としては、ユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物とを分離できる溶離液であればいかなるものであってもよく、親油性溶媒、親水性溶媒またはそれらの混合物をあげることができる。親油性溶媒としては、ヘキサン、ヘプタンなど、親水性溶媒としては、メタノール、エタノール、アセトンなど、親油性溶媒と親水性溶媒の混合物としては、上記した親油性溶媒と親水性溶媒の任意の組み合わせからなる混合物をあげることができる。【００３３】  ユビキノン−１０構造類似物が５−デメトキシユビキノン−１０である場合、親油性溶媒としては、好ましくはヘキサン、親水性溶媒としては、好ましくはエタノール、親油性溶媒と親水性溶媒の混合物としては、好ましくはヘキサンとエタノールの混合物をあげることができる。
親油性溶媒と親水性溶媒の混合物における両者の混合比は、ユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物を効率よく分離できる混合比であれば、いかなる比率であってもよいが、親油性溶媒と親水性溶媒の混合体積比としては、好ましくは１０００：１〜１：１、より好ましくは５００：１〜１：１、さらに好ましくは２００：１〜２：１、特に好ましくは１００：１〜２：１、最も好ましくは５０：１〜１０：１の比率をあげることができる。【００３４】  親油性溶媒と親水性溶媒の混合物がヘキサンとエタノールの混合物である場合、ヘキサンとエタノールの混合体積比としては、特に好ましくは４０：１〜２０：１をあげることができる。
溶離液の線速度としては、上記分離液を用いてユビキノン−１０とユビキノン−１０構造類似物を効率よく分離できる線速度であれば、いかなる速度であってもよいが、好ましくは０．５〜１０．０ｍ／ｈ、より好ましくは０．７〜５．０ｍ／ｈ、さらに好ましくは１．０〜２．０ｍ／ｈの速度をあげることができる。
４．本発明の方法で得られるユビキノン−１０
本発明の方法で得られるユビキノン−１０としては、以下のＨＰＬＣ条件でユビキノン−１０含有試料を分析したとき、該試料中に含まれる不純物としてのユビキノン−１０構造類似物の重量％が、０．０５％以下、好ましくは０．０３％以下、より好ましくは０．０２％以下であるユビキノン−１０をあげることができる。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム：ＺＯＲＢＡＸ  ＳＩＬ  ４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製）
溶離液組成：シクロヘキサン：ジエチルエーテル＝４：１
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
温度：２５℃
検出：ＵＶ２７５ｎｍ
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００３５】ユビキノン−１０を含有する原料液の調製
以下の表１記載の組成を有する培地をｐＨ９．０に調整し、炭酸カルシウムを１％添加した後、１２１℃で１０分間滅菌した１．８Ｌの培地を入れた３Ｌの発酵槽にユビキノン−１０生産菌であるＲｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ  ＡＴＣＣ２１２８６を植菌し、８日間、２８℃、撹拌回転数４５０ｒｐｍで培養した。表中、トレースエレメントとは、８８ｍｇ／ｌのテトラホウ酸ナトリウム（ホウ砂、Ｎａ２Ｂ４Ｏ７・１０Ｈ２Ｏ）、３７ｍｇ／ｌのモリブデン酸アンモニウム［（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４・４Ｈ２Ｏ］、８．８ｍｇ／ｌの硫酸亜鉛（ＺｎＳＯ４）、２７０ｍｇ／ｌの硫酸銅（ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ）、７．２ｍｇ／ｌの塩化マンガン（ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）および９７０ｍｇ／ｌの塩化第２鉄（ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ）からなる溶液を示す。【００３６】
【表１】
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【００３７】  培養終了後、遠心分離により回収した菌体をスプレードライヤーで乾燥し、ユビキノン−１０を含有する乾燥菌体を取得した。該乾燥菌体に、エタノールを１０倍量添加して、６０℃で３時間攪拌し、ユビキノン−１０を含有するエタノール溶液を取得した。取得したエタノール溶液を濃縮した後、１５℃まで冷却することでユビキノン−１０の結晶を析出させ、ユビキノン−１０含有粗精製物を取得した。【００３８】  該粗精製物をヘキサン：エタノール＝２５：１の溶液に溶解後、メタクリル酸メチルとエチレングリコールジメタクリレートの多孔質架橋重合体（ダイヤイオンＨＰ２ＭＧ）が充填されたプレカラム（三菱化学社製）に通塔して、不可逆的吸着成分を除去して得られた溶液をユビキノン−１０を含有する原料液とした。該原料液を以下の条件でＨＰＬＣ分析したところ、原料液中には、４８ｇ／Ｌのユビキノン−１０および０．４ｇ／Ｌの５−デメトキシユビキノン−１０が含まれていることがわかった。
ＨＰＬＣ分析条件：
カラム：ＺＯＲＢＡＸ  ＳＩＬ  ４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ（ＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）
溶離液組成：シクロヘキサン：ジエチルエーテル＝４：１
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
温度：２５℃
検出：ＵＶ２７５ｎｍ
【実施例２】
【００３９】擬似移動床分離装置を用いたユビキノン−１０の精製
擬似移動床分離装置には、内径２０ｍｍ、充填層高２５０ｍｍの４個の単位充填床から成っており、図１に示す配置に原料液の供給管Ｆ、溶離液の供給管Ｗ、ユビキノン−１０溶液の抜出し管Ａ、およびユビキノン−１０構造類似物である５−デメトキシユビキノン−１０溶液の抜出管Ｌを備えている小型クロマト分離装置Ｌａｂｏ  ｆｉｎｅ（日本錬水社製）を用いた。【００４０】  各単位充填床にはメタクリル酸メチルとエチレングリコールジメタクリレートの多孔質架橋重合体（ダイヤイオンＨＰ２ＭＧ、平均粒径７５μｍ、三菱化学社製）を充填した。
上記した擬似移動床分離装置に、実施例１で得られたユビキノン−１０を含有する原料液、およびヘキサン：エタノール＝２５：１の混合液である溶離液を２５℃で供給し、ユビキノン−１０溶液と５−デメトキシユビキノン−１０溶液を抜出す１１分間の供給−抜出しステップと、供給−抜出しを行わずに内部の溶液を循環的に移動させる１５分間の循環ステップとからなる工程を、供給口及び抜出口を順次直下の単位充填床の対応する供給口及び抜出口に切替えつつ反復することにより行った。従って、工程を４回反復すると、元の状態に復帰する。供給−抜出しステップにおける原料液および溶離液の供給速度、並びに溶液の抜出し速度と、循環ステップにおける循環液の流速（循環ポンプの送液流速）はいずれも３６０ｍｌ／ｈ（線速度１．１５ｍ／ｈ）で行った。【００４１】  ４回の工程の反復により、装置が最初の状態に復帰するまでの間における弁（バルブ）の開閉は、次の表２に示す通りに行った。○は弁の開いた状態を×は閉じた状態を表す。原料液、ならびに３０サイクル運転後のユビキノン−１０溶液および５−デメトキシユビキノン−１０溶液に含まれていたユビキノン−１０および５−デメトキシユビキノン−１０の濃度を表３に示す。なお、ユビキノン−１０および５−デメトキシユビキノン−１０の濃度測定は、実施例１記載のＨＰＬＣ分析と同一の方法で行った。【００４２】
【表２】
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【００４３】
【表３】
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【００４４】  表３に示す通り、本発明の方法により、ユビキノン−１０構造類似物である５−デメトキシユビキノン−１０を含まないユビキノン−１０が収率９９．８％で得られることが明らかとなった。すなわち、本発明の方法は、ユビキノン−１０構造類似物である５−デメトキシユビキノンの除去率が１００％であり、かつユビキノン−１０を効率よく精製できる方法である。
【産業上の利用可能性】
【００４５】  本発明は、ユビキノン−１０を含有する原料液中に含まれるユビキノン−１０構造類似物を高い効率で分離し、除去するために用いることができる。
【図１】
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【国際調査報告】
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