(57)【要約】【課題】本発明は、簡便な実験・アッセイにより最適な送達製剤を設計するための方法およびそれによって製造された送達媒体を探索することを課題とする。【解決手段】本発明は、所望の物質の所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンなどの細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；およびＢ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する、方法を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
所望部位に関連する細胞表面分子との強結合または弱結合に基づく結合を特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項２】
所望部位に関連する細胞表面分子とのローリングモデルに基づく結合を特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項３】
所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、強結合阻害濃度（ＩＣ）の阻害濃度が低いことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項４】
所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、弱結合ＩＣの阻害濃度が高いことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項５】
所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、弱結合ＩＣの阻害濃度が高い、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項６】
所望部位に関連する細胞表面分子とのローリングモデルに基づく結合、並びに、その他の強結合または弱結合に基づく結合の少なくとも１種類の結合を含むことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
【請求項７】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項８】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項９】
前記強結合ＩＣと前記弱結合ＩＣとの境界は、ＩＣｎにおいてｎが３０と３１との間に存在する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項１０】
前記強結合ＩＣは、ＩＣｎにおいてｎが３０以下で測定され、前記弱結合ＩＣはＩＣｎにおいてｎが３１以上で測定される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項１１】
前記強結合ＩＣと前記弱結合ＩＣとの境界は、ＩＣｎにおいてｎが３０と３１との間に存在する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項１２】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下である、請求項３に記載の送達媒体。
【請求項１３】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、請求項４に記載の送達媒体。
【請求項１４】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、かつ、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、請求項５に記載の送達媒体。
【請求項１５】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、前記強結合ＩＣについて、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有し、かつ、前記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有する、請求項１４に記載の送達媒体。
【請求項１６】
前記強結合ＩＣおよび前記弱結合ＩＣの少なくとも１つは、前記条件において少なくとも２つの条件を有することを特徴とする、請求項１５に記載の送達媒体。
【請求項１７】
前記送達媒体は、リポソームである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項１８】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームである、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項１９】
前記ＩＣは、Ｅ−セレクチンとの親和性において測定される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項２０】
前記所望部位は、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項２１】
リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５３、リポソーム番号６９、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５およびリポソーム番号２９５からなる群より選択されるリポソームを含む、請求項１２に記載の送達媒体。
【請求項２２】
リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、請求項１３に記載の送達媒体。
【請求項２３】
リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５３、リポソーム番号６９、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、請求項１４に記載の送達媒体。
【請求項２４】
リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、請求項１５に記載の送達媒体。
【請求項２５】
リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、請求項１６に記載の送達媒体。
【請求項２６】
所望の物質の所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する、方法。
【請求項２７】
前記送達媒体は、リポソームを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記候補は、糖鎖修飾リポソームにおいて複数の糖鎖種類を含む糖鎖修飾リポソームを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類からなる群より選択されるレクチンを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、前記部位は、経口投与、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、肝臓、心臓、膵臓、肺、脳、骨髄、血中、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、前記部位は、腫瘍および炎症部位からなる群より選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３６】
前記親和性は、ｎ％阻害濃度（ＩＣｎ）で示され、ここで、ｎは１〜９９の範囲である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３７】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定と、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３８】
前記親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３９】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４０】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下の候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４１】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４２】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４３】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４４】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４５】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４６】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下で、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４７】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たし、かつ、前記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項２６に記載の方法。
【請求項４８】
前記親和性の測定は、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイおよび結合アッセイからなる群より選択される方法によって行われる、請求項２６に記載の方法。
【請求項４９】
所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；
Ｃ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
【請求項５０】
さらに、前記選択された送達媒体に送達が所望される物質を含ませる工程を包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記送達媒体は、リポソームを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記候補は、糖鎖修飾リポソームにおいて複数の糖鎖種類を含む糖鎖修飾リポソームを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５４】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５５】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５６】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類からなる群より選択されるレクチンを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含む、請求項４９に記載の方法。
【請求項５８】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、前記部位は、経口投与、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、肝臓、心臓、膵臓、肺、脳、骨髄、血中、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項５９】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、前記部位は、腫瘍および炎症部位からなる群より選択される、請求項４９に記載の方法。
【請求項６０】
前記親和性は、ＩＣｎで示され、ここで、ｎは１〜９９の範囲である、請求項４９に記載の方法。
【請求項６１】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定と、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６２】
前記親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項６３】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６４】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下の候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６５】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６６】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６７】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６８】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項６９】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項７０】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下で、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項７１】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たし、かつ、前記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項７２】
前記親和性の測定は、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイおよび結合アッセイからなる群より選択される方法によって行われる、請求項４９に記載の方法。
【請求項７３】
前記組成の分析に加え、該組成の送達媒体の調製法を決定する工程をさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項７４】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、前記組成の分析は、該糖鎖修飾リポソームにおける糖鎖の種類および密度の分析を包含することを特徴とする、請求項４９に記載の方法。
【請求項７５】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、前記組成の分析は、該糖鎖修飾リポソームの製造法を決定することを包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項７６】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、前記組成の分析に代えて、該糖鎖修飾リポソームの製造法を決定することを包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項７７】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、該糖鎖修飾リポソームの生成において、前記組成に基づいて決定された糖鎖の種類および量をリポソームへの結合に適切な条件下で反応させる工程をさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項７８】
前記結合において、リンカーが使用される、請求項５７に記載の方法。
【請求項７９】
前記リンカーは、タンパク質である、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
前記リンカーは、アルブミンである、請求項７８に記載の方法。
【請求項８１】
前記リポソームを親水性化させる工程をさらに包含する、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記選択された送達媒体のインビボでの動態を確認する工程をさらに包含する、請求項４９に記載の方法。
【請求項８３】
所望されない部位への送達がされない送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；および
Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項８４】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
所望されない部位への送達がされない送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；および
Ｃ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
【請求項８７】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項８６に記載の方法。
【請求項８８】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項８６に記載の方法。
【請求項８９】
特異的送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされる部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされない部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；および
Ｃ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、
を包含する、方法。
【請求項９０】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項８９に記載の方法。
【請求項９２】
特異的送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされる部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされない部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｃ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；および
Ｄ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
【請求項９３】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項９２に記載の方法。
【請求項９５】
請求項２６〜９４に記載の方法によって製造された送達媒体。
【請求項９６】
所望部位への薬物の送達を必要とする被験体を予防または処置するための方法であって、該方法は：
Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程；および
Ｃ）該選択された送達媒体を用いて該予防または処置に必要な薬剤を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項９７】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項９６に記載の方法。
【請求項９８】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項９６に記載の方法。
【請求項９９】
所望部位への薬物の送達を必要とする被験体を予防または処置するための方法であって、該方法は：
Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、該部位に関連するｄ細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；
Ｃ）該組成に基づいて、該予防または処置に必要な薬剤を含む、該選択された送達媒体を生成する工程；
Ｄ）該選択された送達媒体を該被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
【請求項１００】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０１】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項９９に記載の方法。
【請求項１０２】
所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置であって、該装置は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段、を備える、装置。
【請求項１０３】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項１０２に記載の装置。
【請求項１０４】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項１０２に記載の装置。
【請求項１０５】
所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置であって、該装置は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段；
Ｃ）選択された該送達媒体の組成を分析する手段；
Ｄ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する手段、
を備える、装置。
【請求項１０６】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項１０５に記載の装置。
【請求項１０７】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項１０５に記載の装置。
【請求項１０８】
所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造のための、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性の使用。
【請求項１０９】
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、請求項１０８に記載の使用。
【請求項１１０】
前記細胞表面分子は、レクチンである、請求項１０８に記載の使用。
【請求項１１１】
予防または処置に使用される薬剤、および請求項１〜２５のいずれか１項に記載の送達媒体または請求項２６〜９４のいずれか１項に記載の方法によって製造された送達媒体を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬品、化粧品をはじめ医学・薬学分野において応用し得る、癌などの標的細胞・組織を認識し局所的に薬剤や遺伝子を患部に送り込むための治療用のドラッグデリバリーシステムや診断用の細胞・組織センシングプローブとして利用できるもののなかから、最適なものをインビトロ実験により選択し、それに基づき、最適なプローブを有する医薬を設計すること、およびそれによって製造された糖鎖修飾リポソーム、およびこれに薬剤あるいは遺伝子等を封入したリポソーム製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
米国の国家ナノテク戦略（ＮＮＩ）によって実現を目指す具体的目標の一例として、「癌細胞や標的組織を狙い撃ちする薬物や遺伝子送達システム（ＤＤＳ：ドラッグデリバリーシステム）」を掲げた。日本の総合科学技術会議のナノテクノロジー・材料分野推進戦略でも、重点領域として「医療用極小システム・材料、生物のメカニズムを活用し制御するナノバイオロジー」があり、その５年間の研究開発目標の１つとして「健康寿命延伸のための生体機能材料・ピンポイント治療等技術の基本シーズ確立」が掲げられている。一方、高齢化社会となるに伴い癌の発症率・死亡率は年々増えており、新規な治療材料である標的指向ＤＤＳの開発が待望されている。その他の病気においても副作用のない標的指向ＤＤＳナノ材料の重要性が注目されており、その市場規模は近い将来に１０兆円を超えると予測されている。また、これらの材料は治療とともに診断への利用においても期待されている。【０００３】
医薬品の治療効果は、薬物が特定の標的部位に到達し、そこで作用することにより発現される。その一方で、医薬品による副作用とは、薬物が不必要な部位に作用してしまうことである。従って、薬物を有効かつ安全に使用するためにもドラッグデリバリーシステムの開発が求められている。その中でも特に標的指向（ターゲティング）ＤＤＳとは、薬物を「体内の必要な部位に」、「必要な量を」、「必要な時間だけ」送り込むといった概念である。そのための代表的な材料としての微粒子性キャリアであるリポソームが注目されている。この粒子に標的指向機能をもたせるために、リポソームの脂質の種類、組成比、粒子径、表面電荷を変化させるなどの受動的ターゲティング法が試みられているが、いまだ本法は不十分であり更なる改良が求められている。【０００４】
一方、高機能のターゲティングを可能にするために、能動的ターゲティング法も試みられている。これは「ミサイルドラッグ」ともよばれ理想的なターゲティング法であるが、国内外においていまだ完成されたものはなく今後の発展が大いに期待されているものである。本法は、リポソーム膜面上にリガンドを結合させ、標的組織の細胞膜面上に存在するレセプターに特異的に認識させることによって、積極的にターゲティングを可能にさせる方法である。この能動的ターゲティング法での標的となる細胞膜面上に存在するレセプターのリガンドとしては、抗原、抗体、ペプチド、糖脂質や糖タンパク質などが考えられる。これらのうち、糖脂質や糖タンパク質の糖鎖は、生体組織の発生や形態形成、細胞の増殖や分化、生体防御や受精機構、癌化とその転移機構などの様々な細胞間コミュニケーションにおいて情報分子としての重要な役割を果たしていることが明らかにされつつある。【０００５】
また、その標的となる各組織の細胞膜面上に存在するレセプターとしてのセレクチン、シグレック、ガレクチンなどの各種のレクチン（糖鎖認識タンパク質）についての研究も進んできたことから、各種の分子構造を有する糖鎖は新しいＤＤＳリガンドとして注目されてきている（非特許文献１および非特許文献２を参照のこと）。【０００６】
外膜表面にリガンドを結合したリポソームについては、癌などの標的部位に選択的に薬物や遺伝子などを送達するためのＤＤＳ材料として多くの研究がなされてきた。しかしながら、それらは、生体外では標的細胞に結合するが、生体内では期待される標的細胞や組織にターゲティングされないものがほとんどである（非特許文献３および非特許文献４を参照のこと）。糖鎖の分子認識機能を利用したＤＤＳ材料の研究開発においても、糖鎖を有する糖脂質を導入したリポソームについて若干の研究が知られているが、それらの機能評価は生体外（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）によるもののみであり、糖鎖を有する糖タンパク質を導入したリポソームの研究はほとんど進んでいない（非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７および非特許文献８）を参照のこと）。したがって、糖脂質や糖タンパク質の多種多様な糖鎖を結合したリポソームについての調製法と生体内動態（ｉｎ  ｖｉｖｏ）解析を含めた体系的な研究は、これまで未開発で今後の進展が期待される重要課題である。さらに新しいタイプのＤＤＳ材料研究として、投与が最も簡便・安価に行える経口投与で使用可能なＤＤＳ材料開発も重要課題である。たとえば、ペプチド性医薬品などは一般的に水溶性で高分子量であり消化管の小腸粘膜透過性が低いため酵素分解を受けるなどにより経口投与してもほとんど腸管吸収されない。そこでこれらの高分子量の医薬品や遺伝子などを腸管から血液中へ送達するためのＤＤＳ材料としてリガンド結合リポソームの研究が注目されつつある（非特許文献９を参照のこと）。【０００７】
特許文献１は、医薬として許容される担体と、セレクチンレセプターに選択的に結合する成分を含む化合物とを有する医薬組成物を開示している。しかし、この医薬組成物は、炎症性疾患および細胞の付着により媒介される他の病気を阻害するための医薬自体として、経口投与を目的とした糖鎖が用いられており、糖鎖修飾リポソームとは異なる。【０００８】
特許文献２は、ポリエチレングリコール誘導体化両親媒性小胞形成脂質と負電荷小胞形成脂質とを含む非電荷小胞形成脂質からなるリポソームを含んでなる、非経口投与用医薬組成物を開示している。しかし、この医薬組成物は非経口投与用であり、本願発明の経口投与に特に適した糖鎖修飾リポソームとは異なる。糖鎖についての記載はない。【０００９】
本発明者らは、糖鎖をリンカータンパク質を介してリポソームに結合させた糖鎖修飾リポソームを開発した（特許文献３）。さらに、糖鎖の種類および糖鎖結合量が各標的細胞または標的組織への指向性に関連するようであることを見出した（特許文献４〜６および非特許文献１０）。しかし、現在までに、種々の応用において利用可能な最適な糖鎖修飾リポソームは開発されていない。また、種々の経路での投与において有用な糖鎖について体系的な研究はなされておらず、具体的にどのような糖鎖を用いればよいかは不明のままであった。【００１０】
従って、簡便な実験・アッセイにより最適な送達製剤を設計するための方法に対する需要が存在する。
【特許文献１】特表平５−５０７５１９公報
【特許文献２】特表２００４−５１７８３５公報
【特許文献３】特開２００３−２２６６３８公報
【特許文献４】特開２００３−２２６６４７公報
【特許文献５】国際公開第２００５／０１１６３２号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００５／０１１６３３号パンフレット
【非特許文献１】Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｊｉｍａ，Ｓ．，Ｂｏｖｉｎ，Ｎ．Ｖ．，Ａｎｄｒｅ，Ｓ．，Ｇａｂｉｕｓ，Ｓ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（２０００）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．４３，２２５−２４４．
【非特許文献２】Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｊｉｇａｍｉ，Ｙ．，Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．，Ｋｏｊｉｍａ，Ｓ（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３，３１９−３２９．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇａｋ．ｃｏ．ｊｐ／ＴＩＧＧ／７１ＰＤＦ／ｙａｍａｚａｋｉ．ｐｄｆ
【非特許文献３】Ｆｏｒｓｓｅｎ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｌｉｓ，Ｍ．（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．２９，２４９−２７１．
【非特許文献４】高橋俊雄・橋田充編（１９９９）、今日のＤＤＳ・薬物送達システム、１５９−１６７頁、医薬ジャーナル社、大阪）
【非特許文献５】ＤｅＦｒｅｅｓ，Ｓ．Ａ．，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｌ．，Ｇｕｏ，Ｌ．ａｎｄ  Ｚａｌｉｐｓｋｙ，Ｓ．（１９９６）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１８，６１０１−６１０４．
【非特許文献６】Ｓｐｅｖａｋ，Ｗ．，Ｆｏｘａｌｌ，Ｃ．，Ｃｈａｒｙｃｈ，Ｄ．Ｈ．，Ｄａｓｑｕｐｔａ，Ｆ．ａｎｄ  Ｎａｇｙ，Ｊ．Ｏ．（１９９６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９，１０１８−１０２０．
【非特許文献７】Ｓｔａｈｎ，Ｒ．，Ｓｃｈａｆｅｒ，Ｈ．，Ｋｅｒｎｃｈｅｎ，Ｆ．ａｎｄ  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｊ．（１９９８）Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ８，３１１−３１９．
【非特許文献８】Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｊｉｇａｍｉ，Ｙ．，Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．，Ｋｏｊｉｍａ，Ｓ（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １３，３１９−３２９．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇａｋ．ｃｏ．ｊｐ／ＴＩＧＧ／７１ＰＤＦ／ｙａｍａｚａｋｉ．ｐｄｆ
【非特許文献９】Ｌｅｈｒ，Ｃ．−Ｍ．（２０００）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ６５，１９−２９
【非特許文献１０】山嵜登（２００５）、アクティブ・ターゲティングＤＤＳナノ粒子の開発、ナノ学会会報、３，９７−１０２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そこで、本発明は、簡便な実験・アッセイにより最適な送達製剤を設計するための方法およびそれによって製造された送達媒体を探索することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記の課題を解決するために、本発明者等は鋭意研究の結果、インビトロアッセイ系における結果を、特定の情報処理によって加工することによって得られた結果に基づいてインビボにおいて有用な送達媒体を一定の確率で製造することができること（以下、ローリングモデルともいう）を見出したことによって、上記課題を解決した。【００１３】
従って、本発明は、以下を提供する。
（１）所望部位に関連する細胞表面分子との強結合または弱結合に基づく結合を特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（２）所望部位に関連する細胞表面分子とのローリングモデルに基づく結合を特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（３）所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、強結合阻害濃度（ＩＣ）の阻害濃度が低いことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（４）所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、弱結合ＩＣの阻害濃度が高いことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（５）所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、弱結合ＩＣの阻害濃度が高い、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（６）所望部位に関連する細胞表面分子とのローリングモデルに基づく結合、並びに、その他の強結合または弱結合に基づく結合の少なくとも１種類の結合を含むことを特徴とする、所望部位への送達を達成するための送達媒体。
（７）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（８）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（９）上記強結合ＩＣと上記弱結合ＩＣとの境界は、ＩＣｎにおいてｎが３０と３１との間に存在する、項目１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（１０）上記強結合ＩＣは、ＩＣｎにおいてｎが３０以下で測定され、上記弱結合ＩＣはＩＣｎにおいてｎが３１以上で測定される、項目１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（１１）上記強結合ＩＣと上記弱結合ＩＣとの境界は、ＩＣｎにおいてｎが３０と３１との間に存在する、項目１〜６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（１２）所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下である、項目３に記載の送達媒体。
（１３）所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、項目４に記載の送達媒体。
（１４）所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、かつ、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、項目５に記載の送達媒体。
（１５）所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、上記強結合ＩＣについて、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有し、かつ、上記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有する、項目１４に記載の送達媒体。
（１６）上記強結合ＩＣおよび上記弱結合ＩＣの少なくとも１つは、上記条件において少なくとも２つの条件を有することを特徴とする、項目１５に記載の送達媒体。
（１７）上記送達媒体は、リポソームである、項目１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（１８）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームである、項目１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（１９）上記ＩＣは、Ｅ−セレクチンとの親和性において測定される、項目１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（２０）上記所望部位は、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、項目１〜１６のいずれか１項に記載の送達媒体。
（２１）リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５３、リポソーム番号６９、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５およびリポソーム番号２９５からなる群より選択されるリポソームを含む、項目１２に記載の送達媒体。
（２２）リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、項目１３に記載の送達媒体。
（２３）リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５３、リポソーム番号６９、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、項目１４に記載の送達媒体。
（２４）リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、項目１５に記載の送達媒体。
（２５）リポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５なる群より選択されるリポソームを含む、項目１６に記載の送達媒体。
（２６）所望の物質の所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する、方法。
（２７）上記送達媒体は、リポソームを含む、項目２６に記載の方法。
（２８）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含む、項目２６に記載の方法。
（２９）上記候補は、糖鎖修飾リポソームにおいて複数の糖鎖種類を含む糖鎖修飾リポソームを含む、項目２６に記載の方法。
（３０）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目２６に記載の方法。
（３１）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目２６に記載の方法。
（３２）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類からなる群より選択されるレクチンを含む、項目２６に記載の方法。
（３３）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含む、項目２６に記載の方法。
（３４）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、上記部位は、経口投与、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、肝臓、心臓、膵臓、肺、脳、骨髄、血中、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、項目２６に記載の方法。
（３５）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、上記部位は、腫瘍および炎症部位からなる群より選択される、項目２６に記載の方法。
（３６）上記親和性は、ｎ％阻害濃度（ＩＣｎ）で示され、ここで、ｎは１〜９９の範囲である、項目２６に記載の方法。
（３７）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定と、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定とを包含する、項目２６に記載の方法。
（３８）上記親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する、項目２６に記載の方法。
（３９）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４０）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下の候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４１）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４２）上記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４３）上記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４４）上記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４５）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４６）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下で、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、項目２６に記載の方法。（４７）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たし、かつ、上記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目２６に記載の方法。
（４８）上記親和性の測定は、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイおよび結合アッセイからなる群より選択される方法によって行われる、項目２６に記載の方法。
（４９）所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された上記送達媒体の組成を分析する工程；
Ｃ）上記組成に基づいて、上記選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
（５０）さらに、上記選択された送達媒体に送達が所望される物質を含ませる工程を包含する、項目４９に記載の方法。
（５１）上記送達媒体は、リポソームを含む、項目４９に記載の方法。
（５２）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含む、項目４９に記載の方法。
（５３）上記候補は、糖鎖修飾リポソームにおいて複数の糖鎖種類を含む糖鎖修飾リポソームを含む、項目４９に記載の方法。
（５４）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目４９に記載の方法。
（５５）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目４９に記載の方法。
（５６）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類からなる群より選択されるレクチンを含む、項目４９に記載の方法。
（５７）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含む、項目４９に記載の方法。
（５８）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、上記部位は、経口投与、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、肝臓、心臓、膵臓、肺、脳、骨髄、血中、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、項目４９に記載の方法。
（５９）上記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、上記部位は、腫瘍および炎症部位からなる群より選択される、項目４９に記載の方法。
（６０）上記親和性は、ＩＣｎで示され、ここで、ｎは１〜９９の範囲である、項目４９に記載の方法。
（６１）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定と、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定とを包含する、項目４９に記載の方法。
（６２）上記親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する、項目４９に記載の方法。
（６３）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６４）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下の候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６５）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６６）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６７）上記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６８）上記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目４９に記載の方法。
（６９）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（７０）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下で、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（７１）上記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、上記選択は、上記強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、上記弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、上記選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たし、かつ、上記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、項目４９に記載の方法。
（７２）上記親和性の測定は、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイおよび結合アッセイからなる群より選択される方法によって行われる、項目４９に記載の方法。
（７３）上記組成の分析に加え、上記組成の送達媒体の調製法を決定する工程をさらに包含する、項目４９に記載の方法。
（７４）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、上記組成の分析は、上記糖鎖修飾リポソームにおける糖鎖の種類および密度の分析を包含することを特徴とする、項目４９に記載の方法。
（７５）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、上記組成の分析は、上記糖鎖修飾リポソームの製造法を決定することを包含する、項目４９に記載の方法。
（７６）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、上記組成の分析に代えて、上記糖鎖修飾リポソームの製造法を決定することを包含する、項目４９に記載の方法。
（７７）上記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、上記糖鎖修飾リポソームの生成において、上記組成に基づいて決定された糖鎖の種類および量をリポソームへの結合に適切な条件下で反応させる工程をさらに包含する、項目４９に記載の方法。
（７８）上記結合において、リンカーが使用される、項目５７に記載の方法。
（７９）上記リンカーは、タンパク質である、項目７８に記載の方法。
（８０）上記リンカーは、アルブミンである、項目７８に記載の方法。
（８１）上記リポソームを親水性化させる工程をさらに包含する、項目７７に記載の方法。
（８２）上記選択された送達媒体のインビボでの動態を確認する工程をさらに包含する、項目４９に記載の方法。
（８３）所望されない部位への送達がされない送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；および
Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する、方法。
（８４）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目８３に記載の方法。
（８５）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目８３に記載の方法。
（８６）所望されない部位への送達がされない送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された上記送達媒体の組成を分析する工程；および
Ｃ）上記組成に基づいて、上記選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
（８７）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目８６に記載の方法。
（８８）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目８６に記載の方法。
（８９）特異的送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記特異的送達がされる部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）上記送達媒体の候補について、上記特異的送達がされない部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；および
Ｃ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、
を包含する、方法。
（９０）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目８９に記載の方法。
（９１）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目８９に記載の方法。
（９２）特異的送達を達成するための送達媒体の製造方法であって、上記製造方法は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記特異的送達がされる部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）上記送達媒体の候補について、上記特異的送達がされない部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｃ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された上記送達媒体の組成を分析する工程；および
Ｄ）上記組成に基づいて、上記選択された送達媒体を生成する工程、
を包含する、方法。
（９３）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目９２に記載の方法。
（９４）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目９２に記載の方法。
（９５）項目２６〜９４に記載の方法によって製造された送達媒体。
（９６）所望部位への薬物の送達を必要とする被験体を予防または処置するための方法であって、上記方法は：
Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程；および
Ｃ）上記選択された送達媒体を用いて上記予防または処置に必要な薬剤を上記被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（９７）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目９６に記載の方法。
（９８）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目９６に記載の方法。
（９９）所望部位への薬物の送達を必要とする被験体を予防または処置するための方法であって、上記方法は：
Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、上記部位に関連するｄ細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された上記送達媒体の組成を分析する工程；
Ｃ）上記組成に基づいて、上記予防または処置に必要な薬剤を含む、上記選択された送達媒体を生成する工程；
Ｄ）上記選択された送達媒体を上記被験体に投与する工程、
を包含する、方法。
（１００）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目９９に記載の方法。
（１０１）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目９９に記載の方法。
（１０２）所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置であって、上記装置は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段、を備える、装置。
（１０３）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目１０２に記載の装置。
（１０４）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目１０２に記載の装置。
（１０５）所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置であって、上記装置は：
Ａ）上記送達媒体の候補について、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段；
Ｃ）選択された上記送達媒体の組成を分析する手段；
Ｄ）上記組成に基づいて、上記選択された送達媒体を生成する手段、
を備える、装置。
（１０６）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目１０５に記載の装置。
（１０７）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目１０５に記載の装置。
（１０８）所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造のための、上記部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性の使用。
（１０９）上記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、項目１０８に記載の使用。
（１１０）上記細胞表面分子は、レクチンである、項目１０８に記載の使用。
（１１１）予防または処置に使用される薬剤、および項目１〜２５のいずれか１項に記載の送達媒体または項目２６〜９４のいずれか１項に記載の方法によって製造された送達媒体を含む、医薬組成物。【００１４】
以下に、本発明の好ましい実施形態を示すが、当業者は本発明の説明および添付の図面、ならびに当該分野における周知慣用技術からその実施形態などを適宜実施することができ、本発明が奏する作用および効果を容易に理解することが認識されるべきである。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によって、糖鎖修飾リポソームなどの有用な送達媒体の設計方法ならびにローリングモデルに基づくその製造法およびその利用法が提供される。本発明の送達媒体は、目的送達部位に所望の薬物を提供することが可能なＤＤＳ製剤開発の幅を大いに広げるものである。本発明により、癌治療、遺伝子治療、再生医療などの各分野での新しい治療を実現させるために必要なデリバリーシステムの開発・実用化が可能となる。このような経口投与に有用な種々の送達媒体は、本発明によって初めて提供されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、本発明において使用され得る糖鎖修飾リポソームの製造模式図である。
【図２】図２は、ＩＣｎを計算するときのグラフである。ここでは、ＩＣ５０を示す。Ｘ軸には、対象となる薬物の濃度がふられ、Ｙ軸には結合したリガンドの量を示す。
【図３】図３は、ＩＣ２０を計算するときのグラフである。ＬＮＴ−４、ＬＹ−１、Ａ６は、リポソームの略称である。
【図４】図４は、ＩＣ３０を計算するときのグラフである。ＬＮＴ−４、ＬＹ−１、Ａ６は、リポソームの略称である。
【図５】図５は、ＩＣ４０を計算するときのグラフである。ＬＮＴ−４、ＬＹ−１、Ａ６は、リポソームの略称である。
【図６】図６は、ＩＣ５０を計算するときのグラフである。ＬＮＴ−４、ＬＹ−１、Ａ６は、リポソームの略称である。
【図７】図７は、ドキソルビシン封入リポソーム番号155の尾静注投与での担癌マウスにおける制癌効果を示す図である。
【図８】図８は、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５の尾静注投与での担癌マウスにおける腫瘍血管から腫瘍組織へのドキソルビシンの集積効果を示す蛍光顕微鏡写真である。左側並びに右側の画像は、同一腫瘍組織のそれぞれ緑色並びに赤色の蛍光顕微鏡写真である。
【図９】図９は、ドキソルビシン封入リポソーム番号237の経口投与での担癌マウスにおける制癌効果を示す図である。
【図１０】図１０は、ドキソルビシン封入リポソーム番号237の経口投与での担癌マウスにおける腫瘍血管から腫瘍組織へのドキソルビシン集積効果を示す蛍光顕微鏡写真である。左側並びに右側の画像は、同一腫瘍組織のそれぞれ緑色並びに赤色の蛍光顕微鏡写真である。
【図１１】図１１は、ローリングモデルにおける代表的な、濃度・阻害率曲線（置換曲線）のグラフを示す。実線は、点線よりもローリングモデルにおいて好ましい曲線例であり、点線は、好ましくない例である(例えば、非特異的結合や抗原抗体反応)。
【図１２】ローリングモデルに基づく送達媒体の作用メカニズムの例１の模式図。
【図１３】ローリングモデルに基づく送達媒体の作用メカニズムの例２の模式図。
【図１４】ローリングモデルに基づく送達媒体の作用メカニズムの例３の模式図。
【図１５】ローリングモデルに基づく送達媒体の作用メカニズムの例４の模式図。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
以下、本発明を最良の形態を示しながら説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の表現は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。従って、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当上記分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。したがって、他に定義されない限り、本明細書中で使用される全ての専門用語および科学技術用語は、本発明の属する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。【００１８】
以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。【００１９】
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を適宜説明しながら本発明の好ましい実施形態を説明する。本発明では、糖鎖修飾リポソームを中心に説明するが、本発明のローリングモデルは、それに限定されないことが理解される。【００２０】
（細胞表面分子を使用したインビトロアッセイ）
本発明は、１つの局面において、所望の物質の所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造方法を提供する。この製造方法は：Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；およびＢ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程を包含する。【００２１】
あるいは、本発明の製造方法は：Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；およびＣ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、を包含する。【００２２】
本明細書において「送達媒体」は、所望の物質の送達を媒介する担体（ビヒクル）をいう。送達される物質が薬物であれば、「薬物送達媒体」という。送達媒体には、脂質担体、リポソーム、脂質ミセル、リポタンパク質ミセル、脂質安定化エマルション、シクロデキストリン、ポリマー性ナノ粒子、ポリマー性微粒子、ブロック共重合体ミセル、ポリマー-脂質ハイブリッド系、誘導体化された一本鎖ポリマーなどが含まれうる。【００２３】
薬物送達システム（Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ、ＤＤＳ）とは、ドラッグデリバリーシステムとも呼ばれ、吸収制御型ＤＤＳ、放出制御型ＤＤＳ、標的指向型ＤＤＳに分類すること  もある。理想的なＤＤＳは、薬物を「体内の必要な部位に」、「必要な量を」、「必要な時間だけ」送り込むシステムである。ターゲティングＤＤＳ（Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＤＤＳと書き、和訳は標的指向性ＤＤＳである。）は、パッシブ・ターゲティング（受動的・標的指向性）ＤＤＳとアクティブ・ターゲティング（能動的・標的指向性）ＤＤＳとに分類される。前者はキャリアー（薬物運搬体）の粒子径や親水性など物理化学的性質を利用して体内挙動を制御する方法である。後者はこれらに特殊な仕組みを付け加えて積極的に標的組織への指向性を制御しようとする方法であり、例えば標的組織を構成する特定細胞の標的分子への特異的分子認識機能を有する抗体や糖鎖などを結合したキャリアーを利用する方法があり“ミサイルドラッグ”と呼ばれることもある。【００２４】
本明細書において「封入（ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ）」とは、送達媒体との安定的な会合のことを意味する。このため、媒体は、インビボで投与された場合に１つまたは複数  の薬剤が媒体と安定的に会合している限り、１つまたは複数の薬剤を取り囲む必要はない。したがって、「〜と安定的に会合した」および「〜中に封入された」または「〜とともに封入された」または「〜の中または〜とともに封入された」は、同義の用語であることを意図している。それらは本明細書において互換的に用いられる。安定的な会合は、送達媒体との共有結合、好ましくは切断可能な結合によるもの、非共有結合、および、薬剤を送達媒体の内部に捕捉することなどを含む、さまざまな手段によって生じさせうる。会合は、薬剤が、それが投与された対象における標的部位に送達されるまで、非拮抗的な比で送達媒体と会合したまま保たれる程度に、十分に安定でなければならない。【００２５】
本明細書において、送達媒体として用いられる物質は、送達される生体に適合する物質（本明細書において「生体適合性物質」という）であれば、どのような物質であっても用いることができることが理解される。好ましくは、そのような生体適合性物質は、好ましくは、生分解性の物質（例えば、生分解性ポリマー）であり得るが、生体に有害な効果を有しない限り、どのような物質あってもよい。そのような物質としては、脂質（リポソームなど）、ポリエステル、シクロデキストリン、ポリアミノ酸、シリコン（例えば、多孔性シリコンまたはバイオシリコン材料、例えばその全体の開示を本明細書において参考として援用するＷＯ９９／５３８９８に記載のものであってもよい。メソ多孔性、マイクロ多孔性または多結晶シリコン）、エチレンビニルアセテートコポリマー、ポリビニルアルコールなどを挙げることができる。生分解性ポリマーは、限定しないが、ポリエステル、例えばポリ乳酸グリコール酸コポリマー（ＰＬＧＡ）等、疎水性ポリアミノ酸、例えばポリアラニン、ポリロイシン等、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリグリセロールセバシン酸（ＰＧＳ）、Ｂｉｏｐｏｌ等によって例示されうる。疎水性ポリアミノ酸は、疎水性アミノ酸から調製されるポリマーを意味する。本発明において適用され得る非生分解性ポリマーは、限定しないが、シリコン、ポリテトラフルオロエチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、例えばポリメチルメタクリラート等、エチレンビニルアセテートコポリマー等によって例示され得る。【００２６】
本発明の送達媒体は、水溶性物質を含んでもよい。水溶性物質は、薬物分散系の内側への水の浸潤を制御する役割を果たす物質である。投与されうる動物またはヒトの体温で固体（調製物の形態として）である限り、水溶性の物質の観点で、且つ、生理学的に許容される水溶性物質の観点で、制限はない。１つの水溶性物質、あるいは２またはそれ以上の水溶性物質の組み合わせも使用され得る。水溶性物質は、具体的には、合成ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリエチレンポリプロピレングリコール）、糖類（例えば、スクロース、マンニトール、グルコース、コンドロイチン硫酸ナトリウム）、多糖類（例えば、デキストラン）、アミノ酸（例えば、グリシンおよびアラニン）、無機塩（例えば、塩化ナトリウム）、有機塩（例えば、クエン酸ナトリウム）およびタンパク質（例えば、ゼラチンおよびコラーゲン並びにそれらの混合物）、から成る群のうちの１または複数のものから選択されうる。更に、水溶性物質が有機溶媒および水の両方の中で溶解する両親媒性物質である場合、それは、例えばその溶解性を変化させることによって親油性医薬の放出を制御する作用を有する。両親媒性物質は、限定しないが、ポリエチレングリコールまたはその誘導体、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールまたはその誘導体、脂肪酸とアルキル硫酸ナトリウムの糖エステル、そして更に具体的には、ポリエチレングリコール、ポリオキシステアラート４０、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレングリコール、脂肪酸のスクロースエステル、ラウリル硫酸ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、デソキシコール酸ナトリウム（デオキシ  コール酸ナトリウム（ＤＣＡ））、から成る群から選択される１または複数のものを含んでもよい。水溶性物質は、水溶性であり、且つｉｎ  ｖｉｖｏでなんらかの活性を有する物質、例えば低分子量薬、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、多糖類、またはワクチンとして使用される抗原性物質、すなわち水溶性薬、を含んでいてもよい。【００２７】
シクロデキストリンは空洞形成性で水溶性の多糖であり、その空洞内に水に溶けない薬剤を収容することができる。当業者に知られた手順を用いて薬剤をシクロデキストリン中に封入することができる。例えば、Ａｔｗｏｏｄら編、「包含性化合物（Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）」第２巻および第３巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ  （１９８４）；Ｂｅｎｄｅｒら、「シクロデキストリンの化学（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ  （１９７８）；Ｓｚｅｉｔｌｉら、「シクロデキストリンおよびその包含複合体（Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  Ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）」、Ａｋａｄｅｍｉａｉ  Ｋｉａｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒｙ（１９８２）および国際公開公報第００／４０９６２号を参照されたい。【００２８】
ナノ粒子および微粒子は、ポリマー性外殻（ナノカプセル）によって囲まれた、またはポリマー基質の全体に固体もしくは液体が分散した（ナノスフェア）、薬剤の濃縮性コアである。ナノ粒子および微粒子の一般的な調製法は、Ｓｏｐｐｉｍａｔｈら（Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ（２００１）７０（１２）：１−２０）に記載されており、これは参照として本明細書に組み入れられる。用いうるその他のポリマー性送達媒体には、親水性外殻によって囲まれた疎水性コアを含む薬剤を含むブロック共重合体ミセルが含まれる；これは一般に、疎水性薬剤のための担体として用いられ、Ａｌｌｅｎら、「コロイドおよび表面Ｂ（Ｃｏｌｌｏｉｄｓ  ａｎｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｂ）、Ｂｉｏｉｎｔｅｒｆａｃｅｓ（１９９９）Ｎｏｖ  １６  （１−４）：３−２７に記載された通りに調製することができる。ポリマー−脂質ハイブリッド系は、脂質単層によって囲まれたポリマー性ナノ粒子からなる。ポリマー粒子は疎水性薬剤の組み入れのための積み荷空間（ｃａｒｇｏ  ｓｐａｃｅ）として働き、脂質単層は疎水性コアと外部水性環境との間の安定化性境界として働く。ポリマーにはポリカプロラクトンおよびポリ（ｄ，ｌ−ラクチド）などを用いることができ、脂質単層は一般に脂質の混合物から構成される。適した調製方法は、ポリマー性ナノ粒子に関する上記の参考文献にあるものと同様である。誘導体化された一本鎖ポリマーとは、生物活性物質との共有結合によってポリマー−薬剤結合物を形成するために適合化されたポリマーである。ポリアミノ酸、多糖類（デキストリンもしくはデキストランなど）および合成ポリマー（Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）共重合体など）を含むさまざまなポリマーが、ポリマー−薬剤結合物の合成用に提唱されている。適した調製法は、ＶｅｒｏｎｅｓｅおよびＭｏｒｐｕｒｇｏ、ＩＬ  Ｆａｒｍａｃｏ  （１９９９）５４（８）：４９７−５１６に詳述されており、これは参照として本明細書に組み入れられる。【００２９】
本明細書において「細胞表面分子」とは、細胞の表面に存在する任意の分子をいい、例えば、レクチン、細胞接着分子、レセプター、タンパク質、脂質、リン脂質、細胞膜貫通ドメイン、細胞外マトリクスなどを挙げることができるがそれらに限定されない。【００３０】
本明細書において、「レクチン」とは、細胞膜複合糖質（糖タンパク質および糖脂質）の糖鎖と結合能を有する物質をいい、細胞凝集，分裂誘発，機能活性化，細胞障害などの効果をおよぼす能力を有する。糖鎖を細胞が発信する情報分子とすれば、レクチンは受信分子であるといえる。一定の性質を有する細胞または組織は、それに相応したレクチンのパターンを有する。レクチンは、感染、生体防御、免疫、受精、標的細胞へのターゲティング、細胞分化、細胞間接着、新生糖タンパク質の品質管理および細胞内選別輸送などを実現する。レクチンは、多用な糖鎖結合性を有し、速やかな結合および解離という固有の物理化学的性質を有することにより厳格に制御されている。糖鎖認識蛋白質とも呼ばれる。植物レクチンについての研究は古く、既に約３００種類が知られている。最近、動物レクチンについても活発に研究が行われており、新規レクチンの発見が続いている。動物細胞膜上に在る主要なレクチンファミリーのレクチン群（約１００種類以上）に基づく多彩な糖鎖認識機能が研究されている。とりわけ、多様な構造をもつ糖鎖リガンドの構造情報を受け取るレセプター（情報受容蛋白質、または、標的分子）としての機能が注目されている。本明細書では、おもにレクチンをもとに説明を行うが、レクチン以外の細胞表面分子でも、同様の説明が成り立つことが理解される。【００３１】
本明細書において「リガンド」とは、生物化学分野において、蛋白質に特異的に結合する物質をいう。例えば、酵素に結合する基質や、細胞膜上に存在する各種の受容体蛋白質（レセプターという）と結合するペプチド、ホルモン、神経伝達物質などをそれぞれの蛋白質に対するリガンドと呼ぶ。そこで、本研究の場合は、標的組織の特定細胞膜上に存在する各種のレクチン蛋白質（レセプターの一種として機能するもの）を標的分子として利用するために、その蛋白質のリガンドである糖鎖をリポソーム表面に導入してアクティブ・ターゲティング機能を付与したＤＤＳナノ粒子の作製を行ったことになる。【００３２】
レクチンは細胞膜表面上に存在し、それを認識する糖鎖が同時に存在する。この場合細胞間相互作用が生じる。レクチン陽性細胞と糖鎖リガンド陽性細胞とが相互作用する場合はもあり得る。レクチン陽性細胞に可溶性糖タンパク質が作用する場合、および糖鎖リガンド陽性細胞に可溶性レクチンが作用する場合もある。【００３３】
糖鎖とレクチンとの結合解離定数（ＫＤ）は、１０−３〜１０−６Ｍ程度であり、抗原抗体反応（ＫＤ：１０−７〜１０−１２）に比べると結合力ははるかに弱い。しかし、細胞間接着、選別においては、結合すべきか否かを弱い結合で認識することが重要であると考えられる。したがって、好ましい実施形態では、細胞表面分子は、この程度の結合解離定数を有するものであることが有利であり得るがそれに限定されない。【００３４】
糖鎖およびレクチンは、１分子中に複数の結合部位を有していたり、分子集合体として存在することもあることから、結合力の弱さの反面、多価性により補完される（１０−８〜１０−１０Ｍ）。結合特異性が厳しいことから、厳密に特定の組織等に物質を送達することなどに利用することができる。【００３５】
本発明の実施において、そのスクリーニングにおいて送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性が測定される。このインビトロ親和性における特定の傾向を有する送達媒体が、インビボにおいて好ましい送達媒体であることを見出した。これを本明細書において「ローリングモデル」という。【００３６】
本発明の「ローリングモデル」は、ＩＣｎにおいてｎが比較的小さな強結合における阻害濃度が低く、ｎが比較的大きな弱結合における阻害濃度が高い送達媒体が、標的臓器または組織において良好な送達を示したことを発見したことに基づき、強結合と弱結合との境界にある閾値付近でなだらかな濃度曲線を示す物質が好ましいことを見出したことによって完成された。そのような物質は、標的臓器または組織において、強固に結合するのではなく、適度に結合しながら回転する（ローリングする）という性質を有するはずであるとの理論を見出し、実際にそのような物質をスクリーニングしてインビボで試験を行ったところ、実質的にすべての物質がインビボで好ましい送達結果を示した。従って、本発明は、ある送達物質が、標的となる臓器または組織において好ましい送達結果を示すかどうかを、インビトロにおける簡易なアッセイを行うことによって決定することができるという画期的なアッセイ系・スクリーニングシステムを提供することになる。【００３７】
従って、本明細書において「強結合」とは、ＩＣｎにおいてｎが比較的小さなＩＣｎにおける結合をいい、具体的には、約ＩＣｎ（ここで、ｎは、代表的に約３０よりも小さい。）における結合をいう。強結合は、比較的強い結合力（例えば、抗原抗体反応が入ると考えられる）をみるのに適しているようである。ここで、「強結合阻害濃度（ＩＣ）」とは、低い阻害率における阻害濃度をいう。【００３８】
従って、本明細書において「弱結合」とは、ＩＣｎにおいてｎが比較的大きなＩＣｎにおける結合をいい、具体的には、約ＩＣｎ（ここで、ｎは、代表的に約３１よりも大きい。）における結合をいう。弱結合は、比較的弱い結合力（例えば、非特異的結合に近い結合が入ると考えられる）をみるのに適しているようである。ここで、「弱結合阻害濃度（ＩＣ）」とは、高い阻害率における阻害濃度をいう。【００３９】
これらの強結合および弱結合は、レクチンのような細胞表面分子によっても異なることが想定され、使用される系によって、当業者は適宜ＩＣｎにおけるｎを決定することができることが理解される。【００４０】
これらの強結合と弱結合との指数を、好ましくは組み合わせてみることによって、本発明は、ローリングするのに適切な送達媒体をインビトロの系で見出すことに成功した。【００４１】
本発明によって、選択された送達媒体は、組織に強固に結合せず、媒体と共に送達された薬剤などの活性成分を効率よく目的とする標的に放出することになるので、組織に強固に結合するような抗原抗体反応よりもはるかに効率のよい送達を達成することになる。そのような送達を理想的に達成する系を簡便に見出すことができるのが本発明の「ローリングモデル」理論である。【００４２】
理論に束縛されることを望まないが、ＤＤＳの技術要素としては、薬剤放出技術、薬剤標的化技術および薬剤吸収制御技術の３つが主に存在すると考えられる。薬剤放出技術には、薬剤を高分子マトリクスなどに分散させて一定量の薬剤を長時間にわたって放出させたりする「放出制御技術」と、水に溶けにくいタンパク質製剤などをリポソームなどの担体に包含させることによって体内で有効に薬効を発現させたりする「効果的放出技術」とがある。【００４３】
薬剤標的化技術には、癌組織を認識するリガンドまたは抗体などを用いて薬剤を積極的に患部に送達する「能動的標的化技術」と、薬剤にポリエチレングリコールなどを結合させることによって、血管に注射された薬剤が肝臓などで代謝されにくくし、体内を長時間循環させることによって、癌などの患部に薬剤を蓄積させる「受動的標的化技術」とが存在する。【００４４】
薬剤吸収制御技術には、粘膜または皮膚などを通して薬剤を吸収させる「薬剤導入技術」と、細胞内に遺伝子を導入して疾患を治療する遺伝子治療などに用いられる「遺伝子導入技術」とが存在する。【００４５】
このうち、本発明のローリングモデルでは、能動的標的化技術と効果的放出技術との最適な組み合わせを簡便に見出すことができることが明らかになった。これは、従来方法では、見出すことができなかった格別の効果であるといえる。【００４６】
本発明において使用され得る細胞表面分子としては、代表的にレクチンが挙げられ、レクチンには、セレクチン（例えば、Ｌ−セレクチン、Ｅ−セレクチン、Ｐセレクチンなど）、糖タンパク質の細胞内輸送選別に関わるレクチン（例えば、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３など）、サイトカイン（インターロイキン類、インターフェロン類、成長因子（増殖因子）類など）、ガレクチン等を挙げることができるがそれらに限定されない。【００４７】
本明細書において「セレクチン」とは、レクチンのうち、糖鎖を認識する細胞接着分子の一群で，Ｎ末端を細胞外にＣ末端を細胞内にもつ膜貫通型の糖タンパク質をいう。末端から順番に，Ｃａ２＋依存的に糖鎖を認識するレクチンドメイン（Ｌ）、３個のジスルフィド結合をもつＥＧＦ（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）様ドメイン（Ｅ）、補体結合タンパク質と相同性をもつ補体結合ドメイン（Ｃ）を細胞外にもつことからこれらの分子はＬＥＣＡＭ（ｌｅｃｔｉｎ−ｔｙｐｅ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ
ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、あるいはＬＥＣＡＭファミリーという名称でよばれることもある。白血球に発現されるＬ−セレクチン（ＬＥＣＡＭ−１），活性化血管内皮細胞に発現されるＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１，ＬＥＣＡＭ−２），活性化血小板・活性化血管内皮細胞に発現されるＰ−セレクチン（ＧＭＰ−１４０，ＬＥＣＡＭ−３）の少なくとも３種類の分子が存在する。【００４８】
Ｌ−セレクチンは、ほとんどの白血球に恒常的に発現している。Ｌ−セレクチンのリガンドとしては、ＧｌｙＣＡＭ−１（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｋｏｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）、ＣＤ３４、ＭＡｄＣＡＭ−１（ｍｕｃｏｓａｌ  ａｄｄｒｅｓｓｉｎ  ｃｅｌｌ  ａｄｈｅｓｉｏｎ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）などが知られている。Ｌ−セレクチンは、シアリル−６−スルホＬｅＸとの結合によって細胞間接着が達成され、血流中のリンパ球が特定のリンパ組織に集まるホーミング現象に関与する。【００４９】
Ｅ−セレクチンは、炎症を起こしている血管内皮細胞上に浴発現しており、これにより、顆粒球、単球などが炎症箇所に集まる。血管内皮細胞が、インターロイキン１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、エンドトキシンなどで刺激されると、数時間以内に発現が誘導される。従って、本発明のローリング理論では、Ｅ−セレクチンとのインビトロ親和性は、血管内皮細胞、炎症部位、腫瘍などへの送達の指標となることが理解される。【００５０】
Ｐ−セレクチンは、血小板のα顆粒および内皮細胞のＷｅｉｂｅｌ−Ｐａｌａｄｅ体に含まれている。トロンビンの刺激により脱顆粒が起こり、細胞表面に移行して発現する。Ｐ−セレクチンは、Ｐセレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ−１）分子のシアリルＬｅＸ糖鎖とＮ末端側の硫酸化チロシン残基を合わせて認識することが知られている。【００５１】
マンノース６リン酸受容体は、高マンノース型糖鎖の非還元末端のマンノース残基の６位にリン酸基が付加された構造を認識する受容体である。これは、トランスゴルジネットワークに存在している。リソソームに局在する酵素群は選別輸送のための標識として特定の糖鎖を有している理由でもある。【００５２】
マンノース６リン酸受容体には、抗親和性を示すＣａ２＋非依存性の受容体と低親和性のＣａ２＋依存性の受容体の２種類存在する。前者は２７５ｋＤａ、後者は４６ｋＤａの巻く貫通型糖タンパク質である。【００５３】
カルネキシンおよびカルレティキュリンは、分子シャペロンの一種であり、Ｇｌｃ１Ｍａｎ５−９ＧｌｃＮＡｃ糖鎖を特異的に結合するレクチンである。【００５４】
ＥＲＧＩＣ−５３（ＥＲ−Ｇｏｌｇｉ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ  ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔ）およびＶＩＰ３６（ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  ｉｎｔｅｇｒａｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ３６）は、糖結合部位とカルシウム結合部位とを含む細胞内レクチンである。ＥＲＧＩＣ−５３およびＶＩＰ３６は、それぞれ小胞体からシスゴルジ、および小胞体から細胞膜に存在する。【００５５】
レクチンと臓器との関係については、以下に説明され得る。生体内の各種組織の細胞膜面上などに存在するレセプターとして、セレクチン、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＣ−ＳＧＮＲ、コレクチン、アシアログリコプロテインレセプターやマンノース結合蛋白質等のＣ−タイプレクチン、シグレック等のＩタイプレクチン、マンノース−６−リン酸受容体などのＰタイプレクチン、Ｒタイプレクチン、Ｌタイプレクチン、Ｍタイプレクチン、ガレクチンなどの各種のレクチン（糖鎖認識蛋白質）についての研究が進んできたことから、これらのレクチンに結合できる各種の分子構造を有する糖鎖は新しいＤＤＳリガンドとして注目されてきている。【００５６】
レクチンと臓器との関係では、例えば、ヒトの組織でのレクチン発現が明らかとなってきているものを列挙すると以下のとおりである。
（１）血球や骨髄細胞には、アシアログリコプロテインレセプター、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３１、ＣＤ６９、ガレクチン−５、ガレクチン−１０、インターロイキン−２、マクロファージマンノースレセプター、Ｎ−ＣＡＭ（ＣＤ５６）、ＮＫＲ−Ｐ１、シアロアドヘシン；
（２）  血漿や血清には、Ｃ−リアクティブプロテイン、Ｐ３５、マンナンバインディングレクチン、セーラムアミロイドＰ；
（３）  骨や軟骨には、アグレカン；
（４）  各種組織の上皮細胞には、アシアログリコプロテインレセプター（肝臓）、Ｃ−リアクティブプロテイン（肝臓）、ガレクチン−２（腸）、ガレクチン−４とガレクチン−６（腸）、ガレクチン−７、ＨＩＰとＰＡＰ（腸、膵臓）、Ｐ３５（肝臓）、セーラムアミロイドＰコンポーネント（肝臓）、サーファクタントプロテインＡ（肺）、サーファクタントプロテインＤ（肺）；
（５）  筋肉では、サルコレクチン；
（６）  神経組織では、ブレビカン、セレベラーソルブルレクチン、ミエリンアソシエイティドグリコプロテイン、Ｎ−ＣＡＭ；
（７）  胎盤では、プラセンタＧｐ１２０レセプター；
組織非特異的に、カルレティクリン、ＣＤ４４、ＣＤ５４、ＥＲＧＩＣ−５３、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−８、ガレクチン−９、インターロイキン１、ホスホマンノシルレセプターＩ、ホスホマンノシルレセプターＩＩ、テトラネクチン、スロンボスポンジン、腫瘍壊死因子、ベルシカン；
レクチンと疾患組織との関係では、炎症性疾患全般（脳炎、網脈絡膜炎、肺炎、肝炎、関節炎など）、並びに、続発的に炎症を引き起こす疾患（悪性腫瘍、リウマチ、脳梗塞、糖尿病、アルツハイマー病など）において、Ｅ−セレクチンやＰ−セレクチンなどの発現が解明されつつある。また、癌や脳疾患や心疾患や動脈硬化などにおいては、Ｅ−セレクチン、セレクチン、ガレクチン、シグレックなどの各種レクチンの発現が報告されている。レクチンと臓器や疾患との関係については、未だに不明な点が多く、今後解明されていくことと期待される。【００５７】
動物レクチンを一次構造で分類すると、例えば、次のような１４種類のファミリーに分けられる。
（１）Ｃ−タイプ、（２）Ｓ−タイプ（ガレクチン）、（２）Ｉ−タイプ（シグレク他）、（４）Ｐ−タイプ（ホスホマンノシルレセプター）、（５）ペントラキシン、（６）エッグレクチン、（７）カルレティキュリンやカルネキシン、（８）ＥＲＧＩＣ−５３やＶＩＰ−３６、（９）ジスコイジン、（１０）フコレクチン、（１１）アネキシンレクチン、（１２）フィコリン、（１３）タキレクチン５Ａや５Ｂ、（１４）ナメクジレクチン、そして、Ｃ−タイプのファミリーは、以下のサブファミリーに分類される。（１）ヒアレクチン、（２）アシアログリコプロテインレセプター、（３）コレクチン、（４）セレクチン、（５）ＮＫグループトランスメンブランレセプター、（６）マクロファージマンノースレセプター、（７）シングルドメインレクチン、さらに、生物学的意義が解明されていないが、糖鎖結合活性を有するオーファンレクチン群として、以下のものが知られている。（１）アンフォテリシン、（２）ＣＤ１１ｂやＣＤ１８、（３）ＣＥＬ−ＩＩＩ、（４）コンプレメントファクターＨ、（５）エントアメーバ接着レクチン、（６）カエルシアル酸結合レクチン、（７）タキレクチン−１やタキレクチン−Ｐ、（８）タキレクチン−２、（９）タキレクチン−３、（１０）スロンボスポンジン、（１１）インターロイキン−１、（１２）インターロイキン−２、（１３）インターロイキン−３、（１４）インターロイキン−４、（１５）インターロイキン−５、（１６）インターロイキン−６、（１７）インターロイキン−７、（１８）インターロイキン−８、（１９）インターロイキン−１２、（２０）腫瘍壊死因子。【００５８】
上記のような多種多様な動物レクチンの臓器や疾患との関連が明らかになるにつれて、本発明の送達媒体（糖鎖修飾リポソームなど）の疾患治療や診断への有用性や応用分野が広がっていくものと予測される。また、多彩な動物レクチンの生物学的意義を解明するためにも、本発明の送達媒体は研究用試薬などとして有用である。【００５９】
ドラッグターゲティングシステム（ＤＤＳ）分野での研究開発は、標的指向性ＤＤＳに関して、パッシブ・ターゲティング（受動的・標的指向性）ＤＤＳとアクティブ・ターゲティング（能動的・標的指向性）ＤＤＳとに分類される。パッシブ・ターゲティングＤＤＳはキャリアー（薬物運搬体）の粒子径や親水性など物理化学的性質を改変して体内挙動を制御する方法である。アクティブ・ターゲティングＤＤＳはこれらに分子認識機能などの特異な仕組みを付け加えて積極的に標的組織への指向性を高めようとする方法である。これまでのアクティブ・ターゲティングの研究では、各種の細胞表面分子と分子認識機能を有する各種のリガンド（抗体、トランスフェリン、葉酸、単糖など）を結合したリポソームなどのＤＤＳナノ粒子について多くの研究がなされてきた。しかしながら、それらは、生体外では標的細胞に結合しても、生体内では期待される標的組織や細胞にターゲティングされないものが多かった（文献１、文献２）。例えば、乳がん細胞表面の細胞表面分子である「ＨＥＲ２」と呼ばれるたんぱく質に対する抗体「ａｎｔｉ‐ＨＥＲ２」をリガンドとして、ａｎｔｉ‐ＨＥＲ２抗体を結合したリポソームと結合しないリポソームのマウス尾静注後の体内分布が調べられた（文献３）。その結果、リポソームのがん組織への集積性はａｎｔｉ‐ＨＥＲ２の結合により向上しなかった。また、他のがん細胞の細胞表面分子である葉酸受容体を標的分子として、葉酸を結合したリポソームと結合しないリポソームのマウス尾静注後の体内分布が調べられた（文献４）。その結果、リポソームのがん組織への集積性は葉酸を結合しても向上しなかった。これら２種類のリガンド結合リポソームの標的は、図３の細胞表面分子(1)のタイプではなくて、いずれも細胞表面分子(2)のタイプであった。
（文献１）Forssen E., Willis M., Adv. Drug Deliv.
Rev., 29, 249-271 (1998).
（文献２）Vyas S.P. et al., Crit. Rev. Ther.
Drug Carrier Syst., 18, 1-76 (2001).
（文献３）Drummond D.C. et
al.,Pharmacological Rev. 51, 691-743 (1999).
（文献４）Gabizon A. et al.,
Adv. Drug Deliv.
Rev., 56,1177-1192 (2004).。【００６０】
本発明において使用され得るリガンドには、各種のレクチン分子と分子認識機能を有する各種の糖鎖リガンド、さらに、多数のレクチン分子も含まれている各種の細胞表面分子と分子認識機能を有する各種のリガンド等を挙げることができるがそれらに限定されない。本発明のDDS送達媒体の標的分子としては、例えば、図１２のレクチン分子（１）のタイプであり、場合によっては更にレクチン分子（２）のタイプの併用も可能である。また、図１３のレクチン分子（１）のタイプであり、場合によっては更に細胞表面分子（２）のタイプの併用も可能である。また、図１４の細胞表面分子（１）のタイプであり、場合によっては更に細胞表面分子（２）のタイプの併用も可能である。また、図１５の細胞表面分子（１）のタイプであり、場合によっては更にレクチン分子（２）のタイプの併用も可能である。【００６１】
レクチン分子については、現在以下の表１Ａのように判明しており、今後さらに解明が進むと考えられ、これらの知識を有する当業者は、本発明の記載に基づいて、種々の実施形態を実施することができることが理解される。【００６２】
［表１Ａ］現在までに解明されたレクチン分子
（文献１）http://www.imperial.ac.uk/research/animallectins/
（文献２）http://www.cermav.cnrs.fr/lectines/
【表１Ａ】
2007018275.tif 000002
2007018275.tif 000003
2007018275.tif 000004
2007018275.tif 000005
2007018275.tif 000006
2007018275.tif 000007
2007018275.tif 000008
2007018275.tif 000009
2007018275.tif 000010
2007018275.tif 000011
2007018275.tif 000012
2007018275.tif 000013
【００６３】
細胞表面分子については、現在以下の表１Ｂのように判明しており、今後さらに解明が進むと考えられ、これらの知識を有する当業者は、本発明の記載に基づいて、種々の実施形態を実施することができることが理解される。
［表１Ｂ］現在までに解明された細胞表面分子
（文献３）http://www.hlda8.org/HLDAtoHCDM.htm
【表１Ｂ】
2007018275.tif 000014
2007018275.tif 000015
2007018275.tif 000016
2007018275.tif 000017
2007018275.tif 000018
2007018275.tif 000019
2007018275.tif 000020
2007018275.tif 000021
2007018275.tif 000022
2007018275.tif 000023
2007018275.tif 000024
2007018275.tif 000025
2007018275.tif 000026
【００６４】
本明細書において使用される「サイトカイン」は、当該分野において用いられる最も広義の意味と同様に定義され、細胞から産生され同じまたは異なる細胞に作用する生理活性物質をいう。サイトカインは、一般にタンパク質またはポリペプチドであり、免疫応答の制禦作用、内分泌系の調節、神経系の調節、抗腫瘍作用、抗ウイルス作用、細胞増殖の調節作用、細胞分化の調節作用などを有する。本明細書では、サイトカインはタンパク質形態または核酸形態あるいは他の形態であり得るが、実際に作用する時点においては、サイトカインは通常はタンパク質形態を意味する。サイトカインの一部は、レクチンとして定義され得る。【００６５】
本明細書において用いられる「増殖因子」または「細胞増殖因子」とは、本明細書では互換的に用いられ、細胞の増殖を促進または制御する物質をいう。増殖因子は、成長因子または発育因子ともいわれる。増殖因子は、細胞培養または組織培養において、培地に添加されて血清高分子物質の作用を代替し得る。多くの増殖因子は、細胞の増殖以外に、分化状態の制御因子としても機能することが判明している。増殖因子もまた、レクチンの一部として定義され得る。【００６６】
サイトカインには、代表的には、インターロイキン類、ケモカイン類、コロニー刺激因子のような造血因子、腫瘍壊死因子、インターフェロン類が含まれる。増殖因子としては、代表的には、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、肝実質細胞増殖因子（ＨＧＦ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のような増殖活性を有するものが挙げられる。【００６７】
サイトカインおよび増殖因子などの生理活性物質は一般に、機能重複現象（redundancy）があることから、他の名称および機能で知られるサイトカインまたは増殖因子であっても、本発明に使用される生理活性物質の活性を有する限り、本発明において使用され得る。また、サイトカインまたは増殖因子は、本明細書における好ましい活性を有してさえいれば、本発明の治療法または医薬の好ましい実施形態において使用することができる。【００６８】
ガレクチンは、βガラクトシドに結合するレクチンの総称である。糖鎖認識部位（ＣＲＤ）のアミノ酸配列に相同性を有するタンパク質群であることが分かっている。少なくとも１４種類のガレクチンが同定されており、分子量は１４−３６ｋＤａであり、ＣＲＤを１−２種類有している。ガレクチンはまく結合領域を持たない可溶性タンパク質であるが、生体内においては種々のリガンドに結合する。β−ガラクトースの水酸基の置換、アグリコン分子に関する結合特異性に関与する。ガレクチンは、細胞質、核、細胞膜、細胞外マトリクスなどにおいて見出されている。ガレクチンは、細胞−基質間相互作用、細胞増殖制御、核からのＲＮＡ輸送制御、細胞骨格形成、アポトーシスの誘導または抑制、神経誘導などに関与するといわれている。ガレクチンは構造によって４つに分類され、ガレクチン１、２および７は同型２量体、ガレクチン５は単量体、ガレクチン４、６、８および９はリンカーペプチドにより繋がった２つの結合領域を有する一本鎖のポリペプチド、ガレクチン３は単一の結合領域を有し短いＮ末端を持つタンパク質である。ガレクチンの種類によって、組織における発現や分布は異なる。ガレクチンの分布は組織特異的である。ヒトにおいては、ガレクチン１は骨格筋、神経細胞、腎臓、胎盤および胸腺、ガレクチン２は腫瘍の肝臓、ガレクチン３は活性化マクロファージ、好酸球、好中球、肥満細胞、小腸、呼吸器官の上皮および感覚神経細胞、ガレクチン４は腸や口腔の上皮、ガレクチン５は赤血球や細網細胞、ガレクチン６は腸管上皮、ガレクチン７はケラチノサイト、ガレクチン８は肺、肝臓、腎臓、心臓および脳、ガレクチン９は肝臓、小腸、腎臓、リンパ組織、肺、心筋および骨格筋において発現している。【００６９】
以下に特異的分布をするレクチンを以下に説明する。【００７０】
マンノース６リン酸受容体は、各細胞のトランスゴルジネットワークに分布し、リソソーム酵素上の高マンノース型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００７１】
カルネキシンは、小胞体に分布し、新生糖タンパク質のαグルコシル化Ｎ型糖類をリガンドとして認識することが知られている。【００７２】
カルテティキュリンは、小胞体に分布し、新生糖タンパク質のαグルコシル化Ｎ型糖類をリガンドとして認識することが知られている。【００７３】
ＥＲＧＩＣ−５３は、小胞体からシスゴルジに分布し、マンノース含有糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００７４】
ＶＩＰ３６は、小胞体から細胞膜に分布し、高マンノース型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００７５】
ガレクチンは、上述のように、組織特異的な分布をしており、β−ガラクトース型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００７６】
Ｓｉｇｌｅｃ１（シアロアドヘシン）は、マクロファージに分布し、Ｓｉａα２−３Ｇａｌをリガンドとして認識することが知られている。【００７７】
Ｓｉｇｌｅｃ２（ＣＤ２２）は、リンパ球（Ｂ細胞）に分布し、Ｓｉａα２−６Ｇａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃをリガンドとして認識することが知られている。【００７８】
Ｓｉｇｌｅｃ３（ＣＤ３３）は、ミエロイド細胞に分布し、Ｓｉａα２−３Ｇａｌをリガンドとして認識することが知られている。【００７９】
Ｓｉｇｌｅｃ４ａ（ＭＡＧ）は、末梢神経に存在し、Ｓｉａα２−３Ｇａｌをリガンドとして認識することが知られている。【００８０】
Ｓｉｇｌｅｃ５（ミエリンタンパク質）は、単球に存在し、シアル酸含有糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００８１】
Ｎ−ＣＡＭは、末梢神経に分布し、高マンノース型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００８２】
Ｐｏ（哺乳類の末梢ミエリン、成熟シュワン細胞上に存在する細胞間接着因子）は、末梢神経に分布し、ＨＮＫ−１抗原をリガンドとして認識することが知られている。【００８３】
Ｌ−セレクチンは、白血球に分布し、血管内皮細胞上のシアリル６−スルホＬｅＸをリガンドとして認識することが知られている。【００８４】
Ｅ−セレクチンは、血管内皮細胞に存在し、リンパ球のシアリルＬｅＸをリガンドとして認識することが知られている。【００８５】
Ｐ−セレクチンは、血管内皮細胞に存在し、リンパ球ＰＳＧＬ−１上のシアリルＬｅＸとチロシン硫酸をリガンドとして認識することが知られている。【００８６】
マンノース結合タンパク質は、リンパ球（ナチュラルキラー細胞）に存在し、Ｎ型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００８７】
アシアロ糖タンパク質受容体は、肝臓に分布し、血清等タンパク質の三本鎖および四本鎖複合型糖鎖をリガンドとして認識する。【００８８】
マクロファージマンノース受容体は、マクロファージに分布し、マンノース含有糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００８９】
アンチトロンビン（血液凝固因子）は血液に存在し、ヘパリンをリガンドとして認識することが知られている。【００９０】
ＦＧＦは血液に分布し、ヘパラン硫酸をリガンドとして認識することが知られている。【００９１】
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、血液に分布し、ＩＬ−２受容体αサブユニット上の高マンノース型糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００９２】
インターロイキン１α（ＩＬ−１α）は、血液に分布し、アシアロ二本鎖糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００９３】
インターロイキン１β（ＩＬ−１β）は、血液に分布し、ＧＰＩアンカー糖鎖糖脂質ＧＭ４をリガンドとして認識することが知られている。【００９４】
インターロイキン３（ＩＬ−３）は、血液に分布し、ヘパラン硫酸をリガンドとして認識することが知られている。【００９５】
インターロイキン６（ＩＬ−６）は、血液に分布し、ＨＮＫ−１抗原をリガンドとして認識することが知られている。【００９６】
インターロイキン７（ＩＬ−７）は、血液に分布し、シアリルＴｎ抗原をリガンドとして認識することが知られている。【００９７】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、血液に分布し、マンノース含有糖鎖をリガンドとして認識することが知られている。【００９８】
本明細書においてインビトロでのレクチンとの「インビトロ親和性」とは、目的とする部位に関連するレクチン（例えば、炎症部位であれば、Ｅ−セレクチンなど）とのインビトロ実験での親和性（例えば、本明細書における実施例７など）を測定することによって決定することができる。この親和性は、例えば、Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．（１９９９）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，１４，４９８−５０５に記載されているように、レクチン固定化マイクロプレートを用いた阻害実験で測定することができる。すなわち、レクチン（例えば、Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．，ＵＳＡ；このレクチンは、目的とする臓器に応じて変更することが可能である。）を９６穴マイクロプレートに固定化する。このレクチン固定化プレートに、比較リガンドであるビオチン化したフコシル化フェチュイン０．１μｇとともに、濃度の異なる各種の糖鎖結合リポソーム複合体（タンパク質量として、０．０１μｇ、０．０４μｇ、０．１１μｇ、０．３３μｇ、１μｇ）を加え、４℃で２時間インキュベートする。ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄する後、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰＯ）結合ストレプトアビジンを添加し、さらに４℃で１時間インキュベート、ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を添加して室温で静置、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で測定することができる。【００９９】
結合定数は、ＩＣｎ（ｎは１〜９９の任意の数、例えば、１０、２０、３０、４０、５０、６０；単位は濃度（Ｍ）））で表すことができる。ここで、ＩＣｎの算出方法は以下の通りである。ここで、ＩＣは阻害濃度（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を指す。【０１００】
まず、種々の濃度での結合指数（割合）を測定する。例えば、ここでは、サンプルＬＹ−１の値を測定する。【０１０１】
その結果を表１に示す。ここでは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのレクチン結合活性は、常法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．（１９９９）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，１４，４９８−５０５）に従いレクチン固定化マイクロプレートを用いた阻害実験で測定した。すなわち、レクチン（例えば、Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．，ＵＳＡ；このレクチンは、目的とする臓器に応じて変更することが可能である。）を９６穴マイクロプレートに固化定した。このレクチン固定化プレートに、比較リガンドであるビオチン化したフコシル化フェチュイン０．１μｇとともに、濃度の異なる各種の糖鎖結合リポソーム複合体（タンパク質量として、０．０１μｇ、０．０４μｇ、０．１１μｇ、０．３３μｇ、１μｇ）を加え、４℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ
７．２）で３回洗浄した後、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰＯ）結合ストレプトアビジンを添加し、さらに４℃で１時間インキュベート、ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を添加して室温で静置、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で測定した。フコシル化フェチュインのビオチン化は、ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ｂｉｏｔｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）処理後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）により精製した。ＨＲＰＯ結合ストレプトアビジンは、ＨＲＰＯの酸化とＮａＢＨ３ＣＮを用いた還元アミノ化法によるストレプトアビジンの結合により調製した。この測定結果を以下のように処理して計算した。【０１０２】
【表１】
2007018275.tif 000027
【０１０３】
【表２】
2007018275.tif 000028
【０１０４】
従って、サンプルＬＹ−１の平均値の比をＷとすると、サンプルＬＹ−１の平均値をＸとし、ｈｏｔをＹ、ｃｏｌｄをＺとしたときの計算式は、
Ｗ＝（Ｘ−Ｚ）／（Ｙ−Ｚ）×１００
と表すことができる。【０１０５】
表１、表２をもとに作成したサンプルＬＹ−１と系列ＩＣ５０のグラフ１を図２に示す。【０１０６】
グラフ１は表１をもとに作成したものである。Ｘ軸は対数メモリになっている。折れ線グラフ上の各点はサンプルＬＹ−１の各濃度（横軸）における測定値の平均の比を示す。サンプルによってコントロールの値が異なるので比較しやすいようにグラフの縦軸をｈｏｔとｃｏｌｄの差を１としてその比で表す。Ｓａｍｐｌｅ  ＬＹ−１のグラフと系列ＩＣ５０のグラフの交点のＸ座標がＩＣ５０の値である。交点は座標１（０．１１，０．５６２）と座標２（０．３３，０．４１４）を含む直線上にありその式はｙ＝−０．６７３ｘ＋０．６３６となる。ｙ＝０．５（系列ＩＣ５０の式）の  ２本の直線の交点のｘ座標は０．２０２となる。この値を蛋白質の分子量６９０００で割り、さらにリポソーム１個あたりの蛋白質の個数３００で割ると９．７６Ｅ−０９となる。【０１０７】
これらの計算は、コンピュータプログラムを用いて自動化することができる。【０１０８】
本明細書では、「インビボ親和性」とは、実際の生体内でのある送達媒体の送達先との親和性であり、各臓器への生態動態を調べることによって決定することができる。そのような具体例としては、例えば、経口投与または静脈投与し、マウスの各臓器へのリポソームの集積を評価することによって調べることができる。静脈注射または経口投与し、その後、全各臓器を摘出する。各臓器は１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶液と、ＨＧ３０ホモゲナイザー（日立工機）を用いて組織ホモジネートとして調製の後、１００％メタノールとクロロホルムを用いて組織ホモジネでトに含まれるリポソームを抽出する。リポソーム量は、リポソームに結合したＦＩＴＣの蛍光強度を蛍光マイクロプレートリーダーＢｉｏｌｕｍｉｎ９６０（モレキュラーダイナミック社）を用いて行い、４９０ｎｍのｅｘｉｔａｔｉｏｎと５２０ｎｍのｅｍｉｓｓｉｏｎで計測する。この方法では、数値で表現することもできるが、相対的に例えば、＋＋＋、＋＋、＋、−などの評価を行うことも可能である。【０１０９】
本発明では、特定のレクチンのような細胞表面分子を用いたインビトロアッセイでのインビトロ親和性をｎ％阻害濃度（ＩＣｎ；ここで、ｎは０〜１００の範囲である）で示し、この数値が予想外にインビボでの親和性（送達特異性）に相関していることを見出したことに一部基づく。この結果、ローリングモデルに基づいて送達媒体を効率よく、簡便に正確に設計することができるようになった。このような簡易な送達媒体の設計は従来の技術では不可能であり、知られていなかった。本発明は、数百という送達媒体の候補を調査し体系的に研究することによって上記理論を確立し、発明を完成させた。【０１１０】
さらに、体系的な研究の結果、インビトロ親和性の測定を、ＩＣ３５〜３０の間の数値（例えば、約ＩＣ３１と約ＩＣ３０との間）を分岐点に、それよりＩＣｎにおけるｎの小さな強結合ＩＣと、ＩＣｎにおけるｎの大きな弱結合ＩＣとをそれぞれ少なくとも１点ずつ測定し、それらを総合して比較することによって、理想的なインビボ親和性を高確率で予測することができることを見出した。その結果、強結合ＩＣでは低濃度の値を示し、弱結合ＩＣでは高濃度の値を示す送達媒体（例えば、糖鎖修飾リポソーム）が、インビボ親和性において高い親和性を示すことが示された。理論に束縛されることを望まないが、このような特性を示す送達媒体は、「ローリング」という観点で好ましい性質を有することが予期される。【０１１１】
従来能動的に所望の物質の送達を行うアクティブターゲティングは、標的細胞に存在する分子に特異性の高い分子を用いて実現させようとしてきた。結合性が高ければ高いほどより十分に選択的に効率よく送達させることができると考えられてきた。しかし、この考えに基づくアクティブターゲティングはうまくいかないことが明らかとなってきた。これは、理論に束縛されることを所望しないが、結合性が高すぎると、送達媒体が標的に結合したままとなり、送達すべき分子が効率よく送達されないことに原因があるようであることが、本発明によって明らかにされた。なぜなら、強結合ＩＣと弱結合ＩＣとの両方が低濃度で競合阻害される場合、最も特異性の高い結合であると考えられるが、この場合の、インビボ親和性はそれほど高くないことが多かった。従って、必ずしも強い結合が良いのではなく、むしろ、強結合ＩＣでは低濃度の値を示し、弱結合ＩＣでは高濃度の値を示す送達媒体が標的部位においてローリングを行い、送達されるべき物質を効率よく送達させることができると考えられる。【０１１２】
好ましくは、本発明におけるインビトロ親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する。ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定においては、その中のＩＣｎの選択は、任意でよいようである。同様にＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定においては、その中のＩＣｎの選択は、任意でよいようである。【０１１３】
１つの実施形態において、インビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、この選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを包含する。この場合、少なくとも一定確率で、ローリングの良い、すなわち、インビボ親和性のよい送達媒体を同定することができる。好ましくは、親和性の測定は、約ＩＣ３１以下の強結合ＩＣでの測定を含み、この選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が代表的には１０−９Ｍ以下の候補を選択する。ここで、ＩＣ３０より小さな結合とは、ＩＣｎにおけるｎが３０より小さな数値を有することをいい、逆にＩＣ３１以上の結合とは、ＩＣｎにおけるｎが３１以上の数値を有することをいう。【０１１４】
好ましい実施形態において、上記選択は、ＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、およびＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下である。【０１１５】
別の実施形態において、本発明におけるインビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、この選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択する。好ましくは、インビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、この選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択する。【０１１６】
好ましい実施形態では、選択は、ＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であり、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であり、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上で行われる。【０１１７】
好ましい実施形態では、本発明におけるインビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする。【０１１８】
さらに好ましい実施形態では、本発明におけるインビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする。【０１１９】
さらに好ましい実施形態では、本発明におけるインビトロ親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする。【０１２０】
一つの好ましい実施形態では、図１１に示すような濃度・阻害率曲線グラフにおいて、実線のようななだらかなカーブを有していることが、ローリングモデルにおいて有利な形状であり得る。点線のようなカーブを有する場合（例えば、抗原抗体反応）、ローリングがうまくいかず、選択的な送達に支障が出ることが本発明において実証された。【０１２１】
上記数値を決めるインビトロ親和性の測定方法としては、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイ、結合アッセイなどによって行われる。【０１２２】
本発明では、好ましい送達媒体がインビトロで決定されると、その組成に基づいてさらに送達媒体を生成することができる。このとき、送達媒体には、送達が所望される物質（例えば、医薬組成物など）を含ませることができる。【０１２３】
ここで、好ましい送達媒体の組成が不明である場合は、必要に応じて、その組成を決定することができる。そのような組成の決定方法としては、当該分野において公知の任意の方法を用いることができる。組成が分析されると、その組成を有する送達媒体の調製法を決定することができる。そのような調製法の決定には、ＷＯ２００２／０８１７２３、特開平９−３１０９５公報、特開平１１−４２０９６公報、特開２００４−１８０６７６公報、畑中研一、西村紳一郎、大内辰郎および小林一清（１９９７）糖質の科学と工業、講談社、東京などを参照することができる。送達媒体が糖鎖修飾リポソームである場合、組成のみならず、糖鎖の種類および密度が重要な役割を果たしていることが本発明において明らかになった。従って、好ましい実施形態では、組成の分析は、糖鎖修飾リポソームにおける糖鎖の種類および密度の分析を包含し得る。一旦、糖鎖の種類および密度が決定されると、当業者は、本発明に記載の手法に従って、糖鎖修飾リポソームの製造法を決定することができる。この様な製造法としては、例えば、糖鎖修飾リポソームの生成において、決定された組成に基づいて決定された糖鎖の種類および量をリポソームへの結合に適切な条件下で反応させることなどを挙げることができる。ここでは、好ましくは、リンカーを用いることができ、リンカーとしては、例えば、アルブミンのようなタンパク質を用いることができる。必要に応じてリポソームを親水性化させても良い。【０１２４】
好ましい実施形態では、本発明の方法では、選択された送達媒体のインビボでの動態を確認する工程がさらに包含される。【０１２５】
別の局面では、所望される部位への送達に類似する方法で、所望されない部位への送達がされない送達媒体の製造方法が本発明において提供される。この方法は、製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する。【０１２６】
あるいは、この製造方法は、Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；Ｃ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、を包含する、方法であり得る。【０１２７】
別の局面において、本発明は、特異的送達を達成するための送達媒体の製造方法を提供する。この製造方法は：Ａ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされる部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされない部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；およびＣ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、を包含する。【０１２８】
あるいは、この方法は、Ａ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされる部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）該送達媒体の候補について、該特異的送達がされない部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｃ）所望部位への送達に対応し、かつ、所望されない部位への不送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；およびＤ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する工程、を包含する、方法であり得る。【０１２９】
このようにして製造された送達媒体もまた、本発明の範囲内に包含される。【０１３０】
（送達方法）
別の局面において、本発明は、生物学的因子を必要とする被験体において、標的部位に該生物学的因子を送達するための方法を提供する。この方法は、本発明の糖鎖修飾リポソームを経口投与する工程を包含し、該糖鎖修飾リポソームは該生物学的因子の有効量を含有する。ここで糖鎖修飾リポソームは、上述の（糖鎖修飾リポソーム）に記載される任意の形態が使用され得る。【０１３１】
（送達媒体の具体的説明）
本明細書において「糖鎖」とは、単位糖（単糖および／またはその誘導体）が１つ以上連なってできた化合物をいう。単位糖が２つ以上連なる場合は、各々の単位糖同士の間は、グリコシド結合による脱水縮合によって結合する。このような糖鎖としては、例えば、生体中に含有される多糖類（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体）の他、分解された多糖、糖タンパク質、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、糖脂質などの複合生体分子から分解または誘導された糖鎖など広範囲なものが挙げられるがそれらに限定されない。したがって、本明細書では、糖鎖は、「多糖（ポリサッカリド）」、「糖質」、「炭水化物」と互換可能に使用され得る。また、特に言及しない場合、本明細書において「糖鎖」は、糖鎖および糖鎖含有物質の両方を包含することがある。代表的には、約２０種類の単糖（グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、キシロース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、シアル酸ならびにそれらの複合体および誘導体など）が鎖状につながった物質で、生体の細胞内外の蛋白質や脂質に付いている。単糖の配列によって機能が異なり、通常は複雑に枝分かれしていて、人体には数百種類以上の多様な構造の糖鎖があると予想されており、さらに、人体において有用な構造は数万種類以上あると考えられている。細胞間での分子・細胞認識機能など蛋白質や脂質が生体内で果たす高次機能に関係していると見られているが、そのメカニズムは未解明の部分が多い。核酸、蛋白質に次ぐ第３の生命鎖として現在のライフサイエンスで注目されている。とりわけ、細胞認識におけるリガンド（情報分子）としての糖鎖の機能が期待され、その高機能材料開発への応用が研究されている。【０１３２】
本明細書において「糖」または「単糖」とは、少なくとも１つの水酸基および少なくとも１つのアルデヒド基またはケトン基を含む、ポリヒドロキシアルデヒドまたはポリヒドロキシケトンをいい、糖鎖の基本単位を構成する。本明細書において、糖はまた、炭水化物ともいい、両者は互換的に用いられる。本明細書において、特に言及するときは、糖鎖は、１つ以上糖が連なった鎖または配列をいい、糖または単糖というときは、糖鎖を構成する１つの単位をいう。【０１３３】
ここで、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９および１０であるものを、それぞれジオース、トリオース、テトロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オクトース、ノノースおよびデコースという。一般に鎖式多価アルコールのアルデヒドまたはケトンに相当するもので、前者をアルドース，後者をケトースという。本発明では、いずれの形式のものでも使用され得る。【０１３４】
本発明において糖を記載するために使用する命名法は、通常の命名法に従う。例えば、ガラクトース【０１３５】
【化１】
2007018275.tif 000029
【０１３６】
は、Ｇａｌ；
Ｎアセチルガラクトサミン【０１３７】
【化２】
2007018275.tif 000030
【０１３８】
は、ＧａｌＮＡｃ；
マンノース【０１３９】
【化３】
2007018275.tif 000031
【０１４０】
は、Ｍａｎ；
グルコース【０１４１】
【化４】
2007018275.tif 000032
【０１４２】
は、Ｇｌｃ；
Ｎアセチルグルコサミン【０１４３】
【化５】
2007018275.tif 000033
【０１４４】
は、ＧｌｃＮＡｃ；
フコース【０１４５】
【化６】
2007018275.tif 000034
【０１４６】
は、Ｆｕｃ；
Ｎアセチルノイラミン酸【０１４７】
【化７】
2007018275.tif 000035
【０１４８】
は、Ｎｅｕ５Ａｃ；
セラミド【０１４９】
【化８】
2007018275.tif 000036
【０１５０】
は、Ｃｅｒ；Ｌ−セリン
ＣＨ２（ＯＨ）ＣＨ（ＣＯＯＨ）ＮＨ２
は、Ｓｅｒにより表す。なお、Ｃｅｒは通常脂質に分類されるが、本明細書では、糖鎖を構成する糖の一種の定義にも入ることから特に言及しない限り、糖として扱う。また、Ｓｅｒは通常アミノ酸に分類されるが、本明細書では、糖鎖を構成する糖の一種の定義にも入ることから特に言及しない限り、糖として扱う。環状の２つのアノマーは、αおよびβにより表す。表示上の理由により、ａまたはｂと表すことがある。従って、本明細書において、αとａ、βとｂは、アノマー表記については交換可能に使用される。【０１５１】
本明細書において、ガラクトースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはβ−Ｄ−ガラクトースであり、特に言及しないときには、β−Ｄ−ガラクトースを指すものとして使用される。【０１５２】
本明細書において、アセチルガラクトサミンとは、任意の異性体を指すが、代表的にはＮ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミンであり、特に言及しないときには、Ｎ−アセチル−α−Ｄ−ガラクトサミンを指すものとして使用される。【０１５３】
本明細書において、マンノースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはα−Ｄ−マンノースであり、特に言及しないときには、α−Ｄ−マンノースを指すものとして使用される。【０１５４】
本明細書において、グルコースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはβ−Ｄ−グルコースであり、特に言及しないときには、β−Ｄ−グルコースを指すものとして使用される。【０１５５】
本明細書において、アセチルグルコサミンとは、任意の異性体を指すが、代表的にはＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンであり、特に言及しないときには、Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミンを指すものとして使用される。【０１５６】
本明細書において、フコースとは、任意の異性体を指すが、代表的にはα−Ｌ−フコースであり、特に言及しないときには、α−Ｌ−フコースを指すものとして使用される。【０１５７】
本明細書において、アセチルノイラミン酸とは、任意の異性体を指すが、代表的にはα−Ｎ−アセチルノイラミン酸であり、特に言及しないときにはα−Ｎ−アセチルノイラミン酸を指すものとして使用される。【０１５８】
本明細書において、セリンとは、任意の異性体を指すが、代表的にはＬ−セリンであり、特に言及しないときにはＬ−セリンを指すものとして使用される。【０１５９】
本明細書において、糖の表示記号、呼称、略称（Ｇｌｃなど）などは、単糖を表すときと、糖鎖中で使用されるときとは、異なることに留意する。糖鎖中、単位糖は、結合先の別の単位糖との間に脱水縮合があるので、相方から水素または水酸基を除いた形で存在することになる。従って、これらの糖の略号は、単糖を表すときに使用されるときは、すべての水酸基が存在するが、糖鎖中で使用されるときは、水酸基が結合先の糖の水酸基とが脱水縮合されて酸素のみが残存した状態を示していることが理解される。【０１６０】
糖が、アルブミンと共有結合されるときには、糖の還元末端がアミノ化され、そのアミン基を介してアルブミンなどの他の成分に結合することができるが、その場合は還元末端の水酸基がアミン基に置換されたものを指すことに留意する。【０１６１】
単糖は一般に、グリコシド結合により結合されて二糖および多糖を形成する。環の平面に関する結合の向きは、αおよびβにより示す。２つの炭素の間の結合を形成する特定の炭素原子も記載する。【０１６２】
本明細書において糖鎖は、【０１６３】
【化９】
2007018275.tif 000037
【０１６４】
により表される。従って、例えば、ガラクトースのＣ−１とグルコースのＣ−４との間のβグリコシド結合は、Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃにより表される。【０１６５】
糖鎖の分岐は、括弧により表し、結合する単位糖のすぐ左に配置して表記する。例えば、【０１６６】
【化１０】
2007018275.tif 000038
【０１６７】
と表され、括弧の中は、【０１６８】
【化１１】
2007018275.tif 000039
【０１６９】
と表記される。従って、例えば、ガラクトースのＣ−１とグルコースのＣ−４との間がβグリコシド結合し、さらにこのグルコースのＣ−３がフコースのＣ−１とαグリコシド結合している場合、Ｇａｌβ１，４（Ｆｕｃα１，３）Ｇｌｃと表される。単糖は、（潜在）カルボニル原子団になるだけ小さい番号を付けることを基本にして表される。有機化学命名法の一般基準では（潜在）カルボニル原子団より優位な原子団が分子中に導入されたときでも、通常上記の番号付けで表される。【０１７０】
【化１２】
2007018275.tif 000040
【０１７１】
【化１３】
2007018275.tif 000041
【０１７２】
本明細書において使用される糖鎖としては、例えば、Ｇａｌ、ＧａｌＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇｌｃ、ＧｌｃＮＡｃ、Ｆｕｃ、Ｎｅｕ５ＡｃおよびＳｅｒからなる群より選択される少なくとも１つまたは少なくとも２つの単位糖を有する糖鎖が挙げられる。２つ以上の組み合わせが使用可能な理由としては、理論に束縛されないが、上記糖の各々が目的の送達部位の組織または細胞に局在するレクチンのような細胞表面分子に対して特異性を有しており、混在してもその特異性を発揮すると考えられるからである。【０１７３】
（リポソーム）
本発明のローリング方法において使用可能な送達媒体は、どのような媒体であっても使用することができるが、特に好ましい例としては、リポソームを利用した送達媒体を挙げることができる。【０１７４】
本明細書において「リポソーム」とは、通常、膜状に集合した脂質層および内部の水層から構成される閉鎖小胞を意味する。代表的に使用されるリン脂質のほか、コレステロール、糖脂質などを組み込ませることも可能である。リポソームは内部に水を含んだ閉鎖小胞であるため、水溶性の薬剤などを小胞内に保持させることも可能である。したがって、このようなリポソームによって、細胞膜を通過しえない薬物や遺伝子などを細胞内に送達するのに使われる。また、生体適合性も良いのでＤＤＳ用のナノ粒子性キャリアー材料としての期待が大きい。【０１７５】
リポソームの調製は、当該分野において公知の任意の手法により製造することができる。例えば、その中でもコール酸透析法による方法が挙げられる。コール酸透析法では、ａ）脂質と界面活性剤の混合ミセルの調製、およびｂ）混合ミセルの透析により製造を実施する。次に本発明の糖鎖リポソームにおいて好ましい実施形態では、リンカーとしてタンパク質を使用することが好ましく、タンパク質に糖鎖が結合した糖タンパク質のリポソームへのカップリングは、以下の２段階反応によって行うことができる。ａ）リポソーム膜上のガングリオシド部分の過ヨウ素酸酸化、およびｂ）還元的アミノ化反応による酸化リポソームへの糖タンパク質のカップリングである。その反応フローの一例を図１に示す。このような手法によって望ましい糖鎖を含む糖タンパク質をリポソームに結合することができ、所望の糖鎖を有する多種多様な糖タンパク質・リポソームコンジュゲートを得ることができる。リポソームの純度や安定性を見るために粒径サイズ分布を調べることが非常に重要である。その方法として、ゲル濾過クロマト法（ＧＰＣ）および走査型電顕（ＳＥＭ）や動的光散乱法（ＤＬＳ）などを使うことができる。ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、コレステロール、ジセチルリン酸（ＤＣＰ）、ガングリオシドのモル比  ３５：４５：５：１５のタイプのリポソームを製造することができる。なお、このリポソームは４℃で数ヶ月保存しても安定である。リポソームのｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性は、マウスを使って調べることができる。リポソームをマウスに静注し、３時間後に採血して血清を調製し、孔径０．０３μｍの膜を用いて限外濾過を行いリポソームを精製し回収する。そのＳＥＭ観察の結果、このリポソームの形態はｉｎ  ｖｉｖｏでの３時間処理・回収前後においても変化がないことを確認することができる。【０１７６】
本発明の糖鎖修飾リポソームを構成する脂質としては、例えば、ホスファチジルコリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジン酸類、長鎖アルキルリン酸塩類、糖脂質類（ガングリオシド類など）、ホスファチジルグリセロール類、スフィンゴミエリン類、コレステロール類等が挙げられる。【０１７７】
ホスファチジルコリン類としては、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン等が挙げられる。【０１７８】
ホスファチジルエタノールアミン類としては、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等が挙げられる。【０１７９】
ホスファチジン酸類としては、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジステアロイルホスファチジン酸が挙げられる。長鎖アルキルリン酸塩類としてはジセチルリン酸等が挙げられる。【０１８０】
糖脂質類としては、ガラクトシルセラミド、グルコシルセラミド、ラクトシルセラミド、ホスフナチド、グロボシド、ガングリオシド類等が挙げられる。ガングリオシド類としては、ガングリオシドＧＭ１（Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（ＮｅｕＡα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１’Ｃｅｒ）、ガングリオシドＧＤｌａ、ガングリオシドＧＴｌｂ等が挙げられる。【０１８１】
ホスファチジルグリセロール類としては、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロ−ル、ジステアロイルホスファチジルグリセロール等が好ましい。【０１８２】
このうち、ホスファチジン酸類、長鎖アルキルリン酸塩類、糖脂質類、およびコレステロール類はリポソームの安定性を上昇させる効果を有するので、構成脂質として添加するのが望ましい。例えば、本発明のリポソームを構成する脂質として、ホスファチジルコリン類（モル比０〜７０％）、ホスファチジルエタノールアミン類（モル比０〜３０％）、ホスファチジン酸類、および長鎖アルキルリン酸塩からなる群から選択される１種以上の脂質（モル比０〜３０％）、糖脂質類、ホスファチジルグリセロール類およびスフィンゴミエリン類からなる群から選択される１種以上の脂質（モル比０〜４０％）、ならびにコレステロール類（モル比０〜７０％）を含むものが挙げられる。ガングリオシドのような糖脂質を含むことが好ましい。アルブミンのようなリンカーの結合が容易になるからである。【０１８３】
好ましい実施形態において、本発明におけるリポソームは、ガングリオシドを含ませてそれにペプチドなどのリンカーを結合させ、糖鎖を結合させることが可能である。【０１８４】
リポソームを作製するときに糖脂質を合わせることによって、この糖脂質中に含まれる糖鎖を構成成分として含む、本発明の糖鎖修飾リポソームを作製することができる。【０１８５】
（糖鎖修飾リポソーム）
１つの局面において、本発明は、糖鎖修飾リポソームを提供する。従来、生体内では所望の標的細胞または組織に十分にターゲティングするものは提供されてこなかった。本発明は、生体内の所望の標的細胞または組織に指向性有する糖鎖修飾リポソームを提供することにより、従来ＤＤＳ材料では不可能であったターゲティングが可能になるという効果を有する。さらに体系的に、このような糖鎖修飾リポソームは、Ｇａｌ、ＧａｌＮＡｃ、Ｍａｎ、Ｇｌｃ、ＧｌｃＮＡｃ、ＦｕｃおよびＮｅｕ５Ａｃからなる群より選択される少なくとも１つの構造を有する糖鎖が結合されている。【０１８６】
本明細書において「糖鎖修飾リポソーム」とは、糖鎖とリポソームとを含む物質をいい、好ましくは、糖鎖が直接または間接的に結合することによって修飾されたリポソームをいう。糖鎖がリポソームに結合した形態を具体的に表すと、
Ｓ−（Ｍ）−Ｌ
（Ｓ：糖鎖、Ｍ：リンカー（あってもなくてもよい）、Ｌ：リポソーム、−：共有結合のような結合または架橋剤（例えば、ＤＴＳＳＰ））
となる。【０１８７】
ガングリオシドをリポソームに入れる場合、本発明の糖鎖修飾リポソームは、
Ｓ−Ｍ−ＧＳ−Ｌ
（ＧＳ：ガングリオシドの糖鎖部分）
で表される。【０１８８】
より具体的に表すと、本明細書において、糖鎖修飾リポソームの「糖鎖のリポソーム近位端」とは、リポソームに対して最も近位にある糖鎖の末端部分をいう。糖鎖が分岐している場合は、該当する末端部分のすべてを近位端と呼ぶ。【０１８９】
「糖鎖のリポソーム最近位端」とは、リポソームに対して最も近位にある糖（単糖）をいう。従って、本明細書において、「糖鎖のリポソーム近位端に二糖以上からなる糖鎖が含まれる」というときは、糖鎖のリポソーム近位端には、糖鎖のリポソーム最近位端にある糖（単糖）のほかに、上記二糖以上からなる糖鎖中に含まれる他の糖（単糖；これは、最近位端の糖と同じであっても異なっていてもよい。）も含まれることが理解される。【０１９０】
本明細書において、糖鎖修飾リポソームの「糖鎖のリポソーム遠位端」とは、リポソームに対して最も遠位にある糖鎖の末端部分をいう。糖鎖が分岐している場合は、該当する末端部分のすべてを遠位端と呼ぶ。【０１９１】
「糖鎖のリポソーム最遠位端」とは、リポソームに対して最も遠位にある糖（単糖）をいう。従って、本明細書において、「糖鎖のリポソーム遠位端に二糖以上からなる糖鎖が含まれる」というときは、糖鎖のリポソーム遠位端には、糖鎖のリポソーム最遠位端にある糖（単糖）のほかに、上記二糖以上からなる糖鎖中に含まれる他の糖（単糖；これは、最遠位端の糖と同じであっても異なっていてもよい。）も含まれることが理解される。【０１９２】
本明細書のローリングモデルに適合するものとしては、例えば、以下の表にあるリポソーム番号（これらは、それぞれ、右の構造に対応する。）【０１９３】
【表３】
2007018275.tif 000042
【０１９４】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として本明細書において便宜的に使用される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明において、送達媒体が糖鎖修飾リポソームである場合は、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下に送達媒体とその臓器指向性を示す。
標的指向性の評価（＋＋、＋）の定義は、以下のとおりである。また、評価（−）はネガティブな結果を表し、NAは未測定を表す。【０１９５】
【表４】
2007018275.tif 000043
【０１９６】
なお、経口では、投与１０分後に腸管により吸収されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の倍数表記として表すこととする
これは、すべてを同じＴｒｉｓを基準にした場合は、以下のように表される。【０１９７】
【表４Ａ】
2007018275.tif 000044
【０１９８】
本発明において、ローリングモデルにより提供される送達媒体は、以下の表に記載される糖鎖密度を含む糖鎖修飾リポソームであってもよい。【０１９９】
【表５】
2007018275.tif 000045
【０２００】
本発明において、代表的な送達媒体である糖鎖修飾リポソームは、以下の方法によって製造され得る。具体的には、この方法は、（ａ）リポソームを提供する工程；（ｂ）該リポソームを親水性化処理する工程；（ｃ）必要に応じて、該親水性化処理されたリポソームにリンカーを結合させて、リンカー結合リポソームを生成する工程；および（ｄ）該リポソームに、上記表３に記載される糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成する工程を包含する。【０２０１】
好ましくは、この方法において工程（ｂ）のリポソームを親水性化処理する工程が、リポソームの脂質膜上またはリンカー上に、直接または間接的に低分子量の親水性化合物を結合することによって実施され、工程（ｃ）において使用されるリンカーが、ヒト由来のタンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）であり、工程（ｄ）において、該リポソームに、直接または間接的に糖鎖を結合させる条件下で、糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成してもよい。【０２０２】
リポソームとリンカー、リンカーと糖鎖とは、二官能性架橋剤（例えば、ＤＴＳＳＰ）などを利用して結合されることが好ましい。【０２０３】
本発明の送達媒体は、薬剤または遺伝子を封入または結合し得る。薬剤としては、例えば、アルキル化系抗癌剤、代謝拮抗剤、植物由来抗癌剤、抗癌性抗生物質、生物学的応答調節剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ：ＢＲＭ）・サイトカイン類、白金錯体系抗癌剤、免疫療法剤、ホルモン系抗癌剤、モノクローナル抗体等の腫瘍用薬剤、中枢神経用薬剤、末梢神経系・感覚器官用薬剤、呼吸器疾患治療薬剤、循環器用薬剤、消化器官用薬剤、ホルモン系用薬剤、泌尿器・生殖器用薬剤、ビタミン・滋養強壮剤、代謝性医薬品、抗生物質・化学療法薬剤、検査用薬剤、抗炎症剤、眼疾患薬剤、中枢神経系薬剤、自己免疫系薬剤、循環器系薬剤、糖尿病、高脂血症のような生活習慣病薬剤、副腎皮質ホルモン、免疫抑制剤、抗菌薬、抗ウイルス薬、血管新生抑制剤、サイトカイン、ケモカイン、抗サイトカイン抗体、抗ケモカイン抗体、抗サイトカイン・ケモカイン受容体抗体、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｍＲＮＡ、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ：ＯＤＮ）またはＤＮＡのような遺伝子治療関連の核酸製剤、神経保護因子、抗体医薬、分子標的薬、骨粗鬆症・骨代謝改善薬、神経ペプチド、生理活性ペプチド・蛋白質が挙げられるが、これらに限定されない。【０２０４】
本明細書において使用される場合、「リンカー」とは、糖鎖とリポソーム表面との結合を介在する分子である。本発明の糖鎖修飾リポソームにおいて、糖鎖はリンカーを介してリポソーム表面に結合してもよい。リンカーは、当業者が適宜選択することができるが、生体適合性であるものが好ましく、より好ましくは、薬学的に受容可能である。本明細書において使用されるリンカーとしては、例えば、生体由来タンパク質、好ましくは、ヒト由来タンパク質、より好ましくは、ヒト由来血清タンパク質、さらにより好ましくは、ヒト血清アルブミンまたはウシ血清アルブミンであり得る。特に、ヒト血清アルブミンを使用する場合は、各組織に対する取り込みが多いことがマウスについての実験により確かめられている。【０２０５】
本明細書において「架橋剤」とは、橋をかけるように，鎖式高分子の分子間で化学結合を形成させることをいう。代表的には、脂質、タンパク質、ペプチド、糖鎖などの高分子と他の分子（例えば、脂質、タンパク質、ペプチド、糖鎖）との間に作用し、分子内または分子間で，共有結合のなかったところを結ぶ共有結合を形成させる薬剤をいう。本明細書においては、リポソームと糖鎖とはこの架橋剤によって共有結合が形成されていてもよく、あるいは、リンカーを介し、かつ、そのリンカーと糖鎖との間、およびリンカーとリポソームとの間が架橋剤によって結合されていてもよい。架橋剤は、架橋を目的とする標的によって変動し、例えば、アルデヒド類（例えば、グルタルアルデヒド）、カルボジイミド類、イミドエステル類など挙げることができるがそれらに限定されない。アミノ基含有物質を架橋する場合、アルデヒド含有基、例えば、グルタルアルデヒドを用いることができる。具体的には、例えば、ビススルホスクシニミジルスベラート、ジスクシニミジルグルタレート、ジチオビススクシニミジルプロピオネート、ジスクシニミジルスベラート、３，３’−ジチオビススルホスクシニミジルプロピオネート、エチレングリコールビススクシニミジルスクシネート、エチレングリコールビススルホスタシニミジルスクシネート等の２価試薬などを使用することができる。【０２０６】
本明細書において使用される用語「タンパク質（蛋白質）」、「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」および「ペプチド」は、本明細書において同じ意味で使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。このポリマーは、直鎖であっても分岐していてもよく、環状であってもよい。アミノ酸は、天然のものであっても非天然のものであってもよく、改変されたアミノ酸であってもよい。この用語はまた、複数のポリペプチド鎖の複合体へとアセンブルされたものを包含し得る。この用語はまた、天然または人工的に改変されたアミノ酸ポリマーも包含する。そのような改変としては、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化または任意の他の操作もしくは改変（例えば、標識成分との結合体化）。この定義にはまた、例えば、アミノ酸の１または２以上のアナログを含むポリペプチド（例えば、非天然のアミノ酸などを含む）、ペプチド様化合物（例えば、ペプトイド）および当該分野において公知の他の改変が包含される。【０２０７】
本明細書では、特に言及するときは、「タンパク質」は、比較的小さな分子量を有するアミノ酸のポリマーまたはその改変体を指し、「ペプチド」というときは、比較的大きな分子量を有するアミノ酸のポリマーまたはその改変体を指すことがあることが理解されるべきである。そのような分子量としては、たとえば、約３０ｋＤａ、好ましくは約２０ｋＤａ、より好ましくは約１０ｋＤａなどを挙げることができるがそれらに限定されない。【０２０８】
本明細書中で使用される場合、「生体由来タンパク質」とは、生物に由来するタンパク質をいい、どの生物（たとえば、任意の種類の多細胞生物（例えば、動物（たとえば、脊椎動物、無脊椎動物）、植物（たとえば、単子葉植物、双子葉植物など）など））由来のタンパク質でもよい。好ましくは、脊椎動物（たとえば、メクラウナギ類、ヤツメウナギ類、軟骨魚類、硬骨魚類、両生類、爬虫類、鳥類、哺乳動物など）由来のタンパク質、より好ましくは、哺乳動物（例えば、単孔類、有袋類、貧歯類、皮翼類、翼手類、食肉類、食虫類、長鼻類、奇蹄類、偶蹄類、管歯類、有鱗類、海牛類、クジラ目、霊長類、齧歯類、ウサギ目など）由来のタンパク質が用いられる。さらに好ましくは、霊長類（たとえば、チンパンジー、ニホンザル、ヒト）由来のタンパク質が用いられる。最も好ましくは投与を目的とする生体由来のタンパク質が用いられる。【０２０９】
本明細書で使用される場合「ヒト由来血清タンパク質」は、ヒトの血液が自然に凝固したときに残る液体部分に含まれるタンパク質をいう。【０２１０】
本明細書で使用される場合、「ヒト血清アルブミン」は、ヒトの血清中に含まれるアルブミンをいい、「ウシ血清アルブミン」は、ウシの血清中に含まれるアルブミンをいう。【０２１１】
本発明における糖鎖修飾リポソームは、リポソーム膜またはリンカーの少なくとも一方が親水性化合物、好ましくは、トリス（ヒドロキシアルキル）アミノアルカンを結合させることにより親水性化されていてもよい。【０２１２】
本明細書中で使用される場合、「親水性化」は、リポソーム表面に親水性化合物を結合させることをいう。親水性化に用いる化合物としては、低分子の親水性化合物、好ましくは少なくとも１つのＯＨ基を有する低分子の親水性化合物、さらに好ましくは、少なくとも２つのＯＨ基を有する低分子の親水性化合物が挙げられる。また、さらに少なくとも１つのアミノ基を有する低分子の親水性化合物、すなわち分子中に少なくとも１つのＯＨ基と少なくとも１つのアミノ基を有する親水性化合物が挙げられる。親水性化合物は、低分子なので、糖鎖に対する立体障害となりにくく標的細胞膜面上のレクチンのような細胞表面分子による糖鎖分子認識反応の進行を妨げることはない。また、親水性化合物には、本発明の糖鎖修飾リポソームにおいて、レクチンのような細胞表面分子等の特定の標的を指向するために用いられるレクチンのような細胞表面分子が結合し得る糖鎖は含まれない。このような親水性化合物として、例えば、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンなどを含むトリス（ヒドロキシアルキル）アミノアルカン等のアミノアルコール類等が挙げられ、さらに具体的には、トリス（ヒドロキシメチル）アミノエタン、トリス（ヒドロキシエチル）アミノエタン、トリス（ヒドロキシプロピル）アミノエタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシエチル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシプロピル）アミノメタン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノプロパン、トリス（ヒドロキシエチル）アミノプロパン、トリス（ヒドロキシプロピル）アミノプロパン等が挙げられる。さらに、ＯＨ基を有する低分子化合物にアミノ基を導入した化合物も本発明の親水性化合物として用いることができる。該化合物は限定されないが、例えば、セロビオース等のレクチンのような細胞表面分子が結合しない糖鎖にアミノ基を導入した化合物が挙げられる。例えば、リポソーム膜の脂質ホスファチジルエタノールアミン上に架橋用の２価試薬とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとを用いてリポソーム表面を親水性化する。親水性化合物の一般式は、下記式（１）、式（２）、式（３）等で示される。
Ｘ−Ｒ１（Ｒ２ＯＨ）ｎ式（１）
Ｈ２Ｎ−Ｒ３−（Ｒ４ＯＨ）ｎ式（２）
Ｈ２Ｎ−Ｒ５（ＯＨ）ｎ式（３）
ここで、Ｒ１、Ｒ３およびＲ５は、Ｃ１からＣ４０、好ましくはＣ１からＣ２０、さらに好ましくはＣ１からＣ１０の直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖を示し、Ｒ２、Ｒ４は存在しないかもしくはＣ１からＣ４０、好ましくはＣ１からＣ２０、さらに好ましくはＣ１からＣ１０の直鎖または分岐鎖の炭化水素鎖を示す。Ｘはリポソーム脂質と直接または架橋用の二価試薬と結合する反応性官能基を示し、例えば、ＣＯＯＨ、ＮＨ、ＮＨ２、ＣＨＯ、ＳＨ、ＮＨＳ−エステル、マレイミド、イミドエステル、活性ハロゲン、ＥＤＣ、ピリジルジスルフィド、アジドフェニル、ヒドラジド等が挙げられる。ｎは自然数を示す。このような親水性化合物で親水性化を行ったリポソームの表面は、薄く親水性化合物で覆われている。但し、その親水性化合物の覆いの厚みは小さいので、リポソームに糖鎖を結合させた場合であっても、糖鎖等の反応性を抑制することはない。【０２１３】
リポソームの親水性化は、従来公知の方法、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、無水マレイン酸共重合体等を共有結合により結合させたリン脂質を用いてリポソームを作成する方法（特開２０００−３０２６８５号（例えば、ＣＮＤＡＣ含有リポソーム製剤ジラウロイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジパ  ルミトイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセ  ロール；スフィンゴミエリン；コレステロール；ポリエチレングリコール部分の分子量が約２０００であるＮ−モノメトキシポリエチレングリコールサクシニル−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（以下、ＰＥＧ２０００−ＤＳＰＥとする。）；ＣＮＤＡＣ塩酸塩、グルコース水溶液およびトレハロース水溶  液を使用し、Ｂａｎｇｈａｍら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８、６６０−６６８（１９６４）参照。）の方法により、多重層リポソームの粗分散液を得た。」と記載されている。））等の方法を採用することによっても行うことができる。このうち、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いてリポソーム表面を親水性化することが特に好ましい。本発明のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いる手法は、ポリエチレングリコールなどを用いる従来の親水性化方法と比較していくつかの点で好ましい。例えば、本発明のように糖鎖をリポソーム上に結合してその分子認識機能を標的指向性に利用するものでは、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンは低分子量物質であるので従来のポリエチレングリコールなどの高分子量物質を用いる方法に比べて、糖鎖に対する立体障害となりにくく標的細胞膜面上のレクチンのような細胞表面分子（糖鎖認識タンパク質）による糖鎖分子認識反応の進行を妨げないので特に好ましい。【０２１４】
また、本発明によるリポソームは該親水化処理後においても粒径分布や成分組成、分散特性が良好であり、長時間の保存性や生体内安定性も優れているのでリポソーム製剤化して利用するために好ましい。トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを用いてリポソーム表面を親水性化するには、例えばジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン等の脂質を用いて、常法により得たリポソーム溶液にビススルフォスクシニミジルスベラート、ジスクシニミジルグルタレート、ジチオビススクシニミジルプロピオネート、ジスクシニミジルスベラート、３，３’−ジチオビススルフォスクシニミジルプロピオネート、エチレングリコールビススクシニミジルスクシネート、エチレングリコールビススルフォスクシニミジルスクシネート等の２価試薬を加えて反応させることにより、リポソーム膜上のジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン等の脂質に２価試薬を結合させ、次いでトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを、該２価試薬の−方の結合手と反応させることにより、リポソーム表面にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合せしめる。【０２１５】
このように、リポソームを親水性化処理したリポソームは、生体内で極めて安定であり、後述のように標的指向性を有する糖鎖を結合しなくても、生体内での半減期が長いためドラッグデリバリーシステムにおけるドラッグ担体として好適に用いることができる。本発明は、表面を低分子化合物で親水性化したリポソームをも包含する。【０２１６】
本明細書において見出されたローリングモデルに基づく送達媒体の設計において、インビトロでの評価基準は、例えば、レクチンの一種（例えば、Ｅ−セレクチン）に対する実験によって決定することができる。その実験の結果は、以下により表すことができる。【０２１７】
【表６Ａ】
2007018275.tif 000046
【０２１８】
【表６Ｂ】
2007018275.tif 000047
【０２１９】
【表６Ｃ】
2007018275.tif 000048
【０２２０】
【表６Ｄ】
2007018275.tif 000049
【０２２１】
【表６Ｅ】
2007018275.tif 000050
【０２２２】
【表６Ｆ】
2007018275.tif 000051
【０２２３】
特に、関連が深い炎症部位および腫瘍部位について、さらに細かく調査した。【０２２４】
炎症部位【０２２５】
【表６Ｇ】
2007018275.tif 000052
【０２２６】
（腫瘍部位）【０２２７】
【表６Ｈ】
2007018275.tif 000053
【０２２８】
本明細書において使用される場合「リポソーム番号」とは、以下の表７、表８、表９、表１０、表１１、表１２に示される糖鎖を結合した糖鎖修飾リポソームを参照する番号である。【０２２９】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば、表７に示される糖鎖が腸管から血中への移行のために適切な密度で含まれ得る。  【０２３０】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表７にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその経口投与（経腸）指向性を示す。  【０２３１】
（表７）  【０２３２】
【表７】
2007018275.tif 000054
【０２３３】
「＋＋」は、糖鎖の代わりにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を経口投与した場合、投与１０分後に腸管により吸収されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の４〜６倍になることを表す。  【０２３４】
「＋」は、糖鎖の代わりにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を経口投与した場合、投与１０分後に腸管により吸収されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の３〜４倍になることを表す。  【０２３５】
好ましくは、本発明の経口投与に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表７に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。  【０２３６】
本発明において使用される経口投与に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号２７、２９、４０、４５、５０、５３、５６、６７、６８、６９、７０、７１、８７、１０５、１１７、１２０、１２５、１３９、１４２、１５０、１５２、１５３、１５４、１７５、１８４、１８６、１９７、２０４、２２４、２２５、２３０、２３６、２３７、２４０、２７３、２８５、２８８または２９０であり得る。 【０２３７】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば表８に示される糖鎖が腫瘍への送達のために適切な密度で含まれ得る。【０２３８】
本明細書で使用される場合、腫瘍への送達とは、線維肉腫、筋肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、リンパ管肉腫、骨膜腫、中皮腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、食道癌、直腸癌、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮癌、頭部および頸部の癌、皮膚癌、脳の癌、扁平上皮癌、脂腺癌腫、乳頭状癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原生癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌腫、絨毛上皮癌、セミノーマ、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣癌、小細胞性肺癌腫、非小細胞性肺癌種、膀胱癌腫、上皮細胞癌腫、グリオーマ、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫、白血病、リンパ腫、カポジ肉腫からなる群より選択される腫瘍への送達をいう。【０２３９】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表８にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその腫瘍指向性を示す。【０２４０】
（表８）【０２４１】
【表８】
2007018275.tif 000055
【０２４２】
「＋＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に腫瘍に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の２〜４倍になることを表す。【０２４３】
「＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に腫瘍に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１〜２倍になることを表す。【０２４４】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋＋」は、静脈注射５分後に腫瘍に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．５〜２．５倍になることを表す。【０２４５】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋」は、静脈注射５分後に腫瘍に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．１〜１．４倍になることを表す。【０２４６】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームは腫瘍指向性をわずかに有するので、基準リポソームとしてＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを使用した。【０２４７】
好ましくは、本発明の腫瘍への送達に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表８に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。【０２４８】
本発明において使用される腫瘍への送達に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号２２、２７、２９、３８、４０、４１、４５、５３、６０、６８、６９、７１、８７、９１、９３、９６、１０５、１０６、１１１、１１６、１１７、１２０、１２５、１３９、１５０、1５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１８４、１８６、１８９、１９１、１９５、１９７、２０４、２０９、２１３、２１８、2２０、２２４、２２５、２２９、２３０、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２４０、２６３、２８５、２８８、２９０、２９２、または２９５であり得る。
【０２４９】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば表９に示される糖鎖が炎症部位への送達のために適切な密度で含まれ得る。  【０２５０】
本明細書で使用される場合、炎症部位への送達とは、物理的、化学的、または生物学的作用物質による損傷や異常刺激によって罹患した血管および隣接する組織に起こる細胞学的・組織学的反応の動的な複合体からなる基本的な病理学上の過程の生じている領域への送達をいう。炎症部位であるかどうかは、炎症性物質（プロスタグランジン類、ロイコトリエン類等）を検出することによって確認することができる。  【０２５１】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表９にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその炎症部位への指向性を示す。  【０２５２】
（表９）  【０２５３】
【表９】
2007018275.tif 000056
「＋＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に炎症部位に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の２〜８倍になることを表す。  【０２５４】
「＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に炎症部位に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１〜２倍になることを表す。  【０２５５】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋＋」は、静脈注射５分後に炎症部位に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．５〜４．９倍になることを表す。  【０２５６】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋」は、静脈注射５分後に炎症部位に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．２〜１．５倍になることを表す。  【０２５７】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームは炎症部位への指向性をわずかに有するので、基準リポソームとしてＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを使用した。  【０２５８】
好ましくは、本発明の炎症部位への送達に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表９に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。  【０２５９】
本発明において使用される炎症部位への送達に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号２２、２７、３８、４０、４１、５０、５３、５６、６０、６８、６９、７０、７１、７６、８７、９１、９３、９６、１０５、１０６、１１１、１１６、１１７、１２０、１２５、１３７、１３９、１４６、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１８３、１８４、１８６、１８９、１９１、１９５、１９７、１９９、２０４、２０９、２１３、２１８、２２０、２２４、２２９、２３０、２３３、２３４、２３５、２３７、２４０、２６３、２８８、２９０、２９２、または２９５であり得る。【０２６０】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば表１０に示される糖鎖が肝臓への送達のために適切な密度で含まれ得る。  【０２６１】
本明細書で使用される場合、肝臓への送達とは、横隔膜の下の右季肋部および心窩部上部にわたる領域への送達をいう。  【０２６２】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表１０にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその肝臓指向性を示す。  【０２６３】
（表１０）  【０２６４】
【表１０】
2007018275.tif 000057
【０２６５】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋＋」は、静脈注射５分後に肝臓に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．５〜２．１倍になることを表す。  【０２６６】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋」は、静脈注射５分後に肝臓に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．２〜１．５倍になることを表す。  【０２６７】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームは肝臓指向性をわずかに有するので、基準リポソームとしてＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを使用した。【０２６８】
好ましくは、本発明の肝臓内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表１０に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。  【０２６９】
本発明において使用される肝臓内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号３、１６、２２、２７、２９、３７、３８、４１、５３、６７、７０、９１、９６、１０６、１１１、１１７、１３０、１３９、１４６、１５０、１５１、１５２、１５４、1７８、１８３、１８４、１９５、１９９、２０９、２１８、２２５、２２９、２３０、２３４、２３６、２３９、２４０、２８５、２９０、または２９２であり得る。【０２７０】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば表１１に示される糖鎖が膵臓内への送達のために適切な密度で含まれ得る。  【０２７１】
本明細書で使用される場合、膵臓への送達とは、十二指腸の弯曲部から脾臓にのびる被膜をもたない長い分葉腺、十二指腸曲内の平らな頭部、腹部を横切る細長い三面体形の体部、および脾臓と接する尾部にわたる領域への送達をいう。  【０２７２】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表１１にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその膵臓内指向性を示す。  【０２７３】
（表１１）  【０２７４】
【表１１】
2007018275.tif 000058
【０２７５】
「＋＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に膵臓内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の２〜４倍になることを表す。  【０２７６】
「＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に膵臓内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１〜２倍になることを表す。  【０２７７】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋＋」は、静脈注射５分後に膵臓内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．５〜２．２倍になることを表す。  【０２７８】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋」は、静脈注射５分後に膵臓内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．２〜１．５倍になることを表す。  【０２７９】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームは膵臓内指向性をわずかに有するので、基準リポソームとしてＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを使用した。  【０２８０】
好ましくは、本発明の膵臓内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表１１に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。  【０２８１】
本発明において使用される膵臓内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号２２、２７、２９、３８、４０、５６、６０、６８、６９、７０、７１、７６、８７、９１、９３、９６、１０５、１０６、１１１、１１６、１１７、１２０、１２５、１２７、１３０、１３７、１３９、１４２、１４６、１５０、１５１、１５２、１５３、１５４、１５５、１７５、１８４、１９１、１９５、１９７、１９９、２０４、２０７、２０９、２１３、２１８、２２０、２２４、２２５、２２９、２３０、２３３、２３４、２３５、２３７、２４９、２７３、２９２、または２９５であり得る。
【０２８２】
本明細書において使用される糖鎖修飾リポソームは、例えば表１２に示される糖鎖が脳内への送達のために適切な密度で含まれ得る。  【０２８３】
本明細書で使用される場合、脳への送達とは、頭蓋内にある中枢神経系全般にわたる領域（大脳、小脳、延髄等）への送達をいう。  【０２８４】
本明細書において使用する場合、「修飾結合密度」とは、糖鎖修飾リポソームを作製する際に使用される糖鎖の量であり、リポソームの脂質１ｍｇあたりに結合した糖鎖の密度（ｍｇ糖鎖／ｍｇ脂質）として表される。本発明の糖鎖修飾リポソームの結合密度は、理論に束縛されることを望まないが、経験的に、調製するときに使用した糖鎖の量は、リポソームに結合した糖鎖の密度にほぼ比例していることが分かっている。従って、本明細書では、特に言及しない限り、調製時に使用した量によって結合密度が確定される。インビトロにおいて、例えば、Ｅ−セレクチンを用いて間接的に決定することができる。本発明の糖鎖修飾リポソームは、リポソームに結合される糖鎖の種類と結合密度を選択することにより、目的の送達部位に対する指向性を制御することができる。以下、表１２にリポソーム番号、糖鎖の構造、修飾結合密度およびその脳指向性を示す。  【０２８５】
（表１２）  【０２８６】
【表１２】
2007018275.tif 000059
【０２８７】
「＋＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に脳内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の３〜７倍になることを表す。  【０２８８】
「＋」は、糖鎖の代わりにＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を静脈注射した場合、静脈注射５分後に脳内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の２〜３倍になることを表す。  【０２８９】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋＋」は、静脈注射５分後に脳内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．７〜３．７倍になることを表す。  【０２９０】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームを基準リポソームとする場合、「＋」は、静脈注射５分後に脳内に送達されたリポソームの平均値が基準リポソームの平均値の１．１〜１．４倍になることを表す。  【０２９１】
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソームは脳指向性をわずかに有するので、基準リポソームとしてＧａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃβ１，４（Ｎｅｕ５Ａｃα２，３）Ｇａｌβ１，４Ｇｌｃβ１，１Ｃｅｒを使用した。  【０２９２】
好ましくは、本発明の脳内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、上記の表１２に示される種類の糖鎖および修飾結合密度ならびにそれらの組み合わせを用いて調製され得る。理論に束縛されないが、一旦標的指向性が＋または＋＋であることがわかれば、２種以上の糖鎖を組み合せても同様の効果が期待できるからである。なぜなら、標的組織または標的細胞のレクチンが好ましいと認識する糖鎖は、組み合せても同様に好ましいと認識されるからである。  【０２９３】
本発明において使用される脳内送達に適する糖鎖修飾リポソームは、好ましくは、リポソーム番号２２、２９、３８、４０、４５、５０、５３、５６、６０、６７、６８、６９、７０、７１、７６、８０、８７、９３、１０５、１０６、１１６、１２０、１２７、１２９、１３７、１４１、１４２、１４６、１５０、１５１、１５２、1５４、１５５、１７５、１７８、１８４、１８６、１８９、１９７、２０７、２０９、２１３、２１８、２２４、２２９、２３０、２３３、２３５、２３７、２４９、２７３、２９０、２９２、または２９５であり得る。【０２９４】
上記の表に記載されるような本発明の好ましい糖鎖修飾リポソームは、以下の方法によって製造され得る。具体的には、この方法は、（ａ）リポソームを提供する工程；（ｂ）該リポソームを親水性化処理する工程；（ｃ）必要に応じて、該親水性化処理されたリポソームにリンカーを結合させて、リンカー結合リポソームを生成する工程；および（ｄ）該リポソームに、上記表3に記載される糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成する
工程を包含する。【０２９５】
好ましくは、この方法において、工程（ｂ）のリポソームを親水性化処理する工程は、リポソームの脂質膜上またはリンカー上に、直接または間接的に低分子量の親水性化合物を結合することによって実施され、工程（ｃ）において使用されるリンカーは、ヒト由来のタンパク質であり、かつ工程（ｄ）において、該リポソームに、直接または間接的に糖鎖を結合させる条件下で、糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成する。【０２９６】
リポソームとリンカー、リンカーと糖鎖とは、二官能性架橋剤（例えば、ＤＴＳＳＰ）などを利用して結合されることが好ましい。【０２９７】
本発明の送達媒体は、薬剤または遺伝子を封入または結合し得る。薬剤としては、例えば、バイオ医薬品またはバイオ治療用物質（例えば、siRNA、shRNA、siRNA誘導体、shRNA誘導体、RNA、RNA誘導体、DNA、DNA誘導体、モノクローナル抗体、ワクチン、インターフェロン、ホルモン、プロスタグランジン、転写因子、組換えタンパク質、抗体医薬、核酸>
医薬、遺伝子治療薬）、アルキル化系抗癌剤、代謝拮抗剤、植物由来抗癌剤、抗癌性抗生物質、生物学的応答調節剤（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ：ＢＲＭ）・サイトカイン類、白金錯体系抗癌剤、免疫療法剤、ホルモン系抗癌剤、モノクローナル抗体等の腫瘍用薬剤、中枢神経用薬剤、末梢神経系・感覚器官用薬剤、呼吸器疾患治療薬剤、循環器用薬剤、消化器官用薬剤、ホルモン系用薬剤、泌尿器・生殖器用薬剤、ビタミン・滋養強壮剤、代謝性医薬品、抗生物質・化学療法薬剤、検査用薬剤、抗炎症剤、眼疾患薬剤、中枢神経系薬剤、自己免疫系薬剤、循環器系薬剤、糖尿病、高脂血症のような生活習慣病薬剤、副腎皮質ホルモン、免疫抑制剤、抗菌薬、抗ウイルス薬、血管新生抑制剤、サイトカイン、ケモカイン、抗サイトカイン抗体、抗ケモカイン抗体、抗サイトカイン・ケモカイン受容体抗体、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡまたはＯＤＮまたはＤＮＡのような遺伝子治療関連の核酸製剤、神経保護因子、抗体医薬が挙げられるが、これらに限定されない。【０２９８】
本発明の送達媒体は、生物学的因子を必要とする被験体へ生物学的因子の経口投与するため、および呼吸器系、循環器系、消化器系、泌尿器・生殖器系、中枢神経系、末梢神経系などの障害を有する哺乳動物を処置するためにも使用され得る。【０２９９】
本発明送達媒体は、送達媒体の特性（例えば、糖鎖の種類による）と結合密度を調節することによって、腸管での吸収制御性、各種臓器への送達特異性を高めることもできる。腸管吸収制御性を高める糖鎖と特定の組織または器官への指向性を有する糖鎖の両方を送達媒体に結合させることにより、特定組織または器官への指向性と腸管吸収制御性の両方の特性を併せ持った送達媒体を作製することも可能である。【０３００】
本発明の送達媒体の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本発明の送達媒体は、薬学的に受容可能なキャリアと配合し、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、粉剤等の固形製剤、シロップ剤、懸濁剤、溶液剤等の液状製剤として経口的に投与することができる。送達媒体は、投与に適した投与形において当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリアを用いて処方され得る。このようなキャリアは、送達媒体が患者による摂取に適した液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁物などに処方されることを可能とする。【０３０１】
本発明の送達媒体は、薬剤または生物学的因子などの有効成分が意図される目的を達成するのに有効な量で、媒体中に含有される組成物を含む。「処置するのに有効な量」は当業者に十分に認識される用語であり、意図される薬理学的結果（例えば、予防、治療、再発防止など）を生じるために有効な薬剤の量をいう。従って、処置有効量は、処置されるべき疾患の徴候を軽減するのに十分な量である。所定の適用のための有効量（例えば、処置有効量）を確認する１つの有用なアッセイは、標的疾患の回復の程度を測定することである。実際に投与される量は、処置が適用されるべき個体に依存し、好ましくは、所望の効果が顕著な副作用をともなうことなく達成されるように最適化された量である。有効用量の決定は十分に当業者の能力内にある。【０３０２】
治療有効量、予防有効量などおよび毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順（例えば、ＥＤ５０、集団の５０％において治療的に有効な用量；およびＬＤ５０、集団の５０％に対して致死的である用量）によって決定され得る。治療効果と毒性効果との間の用量比は治療係数であり、それは比率ＥＤ５０／ＬＤ５０として表され得る。小さな治療係数を呈する薬物送達媒体が好ましい。細胞培養アッセイおよび動物実験から得られたデータが、ヒトでの使用のための量の範囲を公式化するのに使用される。このような化合物の用量は、好ましくは、毒性をほとんどまたは全くともなわないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内にある。この用量は、使用される投与形態、患者の感受性、および投与経路に依存してこの範囲内で変化する。一例として、投与量は、年齢その他の患者の条件、疾患の種類、使用する細胞の種類等により適宜選択される。  【０３０３】
本発明の薬物送達媒体は、当該分野で公知の様式と同様の様式（例えば、混合、溶解など）で製造され得る。【０３０４】
本明細書において「指示書」は、本発明の糖鎖修飾リポソームまたは経口投与用薬物送達媒体などを投与する方法などを医師、患者など投与を行う人、診断する人（患者本人であり得る）に対して記載したものである。この指示書は、本発明の糖鎖修飾リポソームまたは経口投与用薬物送達媒体などを投与する手順を指示する文言が記載されている。この指示書は、本発明が実施される国の監督官庁（例えば、日本であれば厚生労働省、米国であれば食品医薬品局（ＦＤＡ）など）が規定した様式に従って作成され、その監督官庁により承認を受けた旨が明記される。指示書は、いわゆる添付文書（ｐａｃｋａｇｅ  ｉｎｓｅｒｔ）であり、通常は紙媒体で提供されるが、それに限定されず、例えば、電子媒体（例えば、インターネットで提供されるホームページ（ウェブサイト）、電子メール）のような形態でも提供され得る。【０３０５】
本明細書において「被験体」とは、本発明の処置が適用される生物をいい、「患者」ともいわれる。患者または被験体は好ましくは、ヒトであり得る。  【０３０６】
本発明の医薬は、必要に応じて生理学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤（日本薬局方第１４版またはその最新版、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０などを参照）と、所望の程度の純度を有する糖鎖組成物とを混合することによって、凍結乾燥されたケーキまたは水溶液の形態で調製され保存され得る。【０３０７】
本発明の医薬は、経口的または非経口的に投与され得る。あるいは、本発明の医薬は、静脈内または皮下で投与され得る。全身投与されるとき、本発明において使用される医薬は、発熱物質を含まない、薬学的に受容可能な水溶液の形態であり得る。そのような薬学的に受容可能な組成物の調製は、ｐＨ、等張性、安定性などを考慮することにより、当業者は、容易に行うことができる。本明細書において、投与方法は、経口投与、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、粘膜投与、直腸内投与、膣内投与、患部への局所投与、皮膚投与など）であり得る。そのような投与のための処方物は、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。【０３０８】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバント挙げられるがそれらに限定されない。代表的には、本発明の医薬は、単離された多能性幹細胞、またはその改変体もしくは誘導体を、１つ以上の生理的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤とともに含む組成物の形態で投与される。例えば、適切なビヒクルは、注射用水、生理的溶液、または人工脳脊髄液であり得、これらには、非経口送達のための組成物に一般的な他の物質を補充することが可能である。【０３０９】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、そして以下が挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））。【０３１０】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。【０３１１】
本発明が化粧品として使用されるときもまた、当局の規定する規制を遵守しながら化粧品を調製することができる。【０３１２】
本発明の送達媒体または組成物は、農薬の成分としても用いることができる。農薬組成物として処方される場合、必要に応じて、農学的に受容可能なキャリア、賦型剤または安定化剤などを含み得る。【０３１３】
本発明の送達媒体または組成物が、農薬として使用される場合は、除草剤（ピラゾレートなど）、殺虫・殺ダニ剤（ダイアジノンなど）、殺菌剤（プロベナゾールなど）、植物成長調整剤（例、パクロブトラゾールなど）、殺線虫剤（例、ベノミルなど）、共力剤（例、ピペロニルブトキサイドなど）、誘引剤（例、オイゲノールなど）、忌避剤（例、クレオソートなど）、色素（例、食用青色１号など）、肥料（例、尿素など）などもまた必要に応じて混合され得る。【０３１４】
（保健・食品）
本発明はまた、保健・食品分野においても利用することができる。このような場合、上述の経口医薬として用いられる場合の留意点を必要に応じて考慮すべきである。特に、特定保健食品のような機能性食品・健康食品などとして使用される場合には、医薬に準じた扱いを行うことが好ましい。好ましくは、本発明の送達媒体は、低アレルゲン食品としても用いることができる。【０３１５】
本発明の処置方法において使用される組成物の量は、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、細胞の形態または種類などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。本発明の処置方法を被検体（または患者）に対して施す頻度もまた、使用目的、対象疾患（種類、重篤度など）、患者の年齢、体重、性別、既往歴、および治療経過などを考慮して、当業者が容易に決定することができる。頻度としては、例えば、毎日−数ヶ月に１回（例えば、１週間に１回−１ヶ月に１回）の投与が挙げられる。１週間−１ヶ月に１回の投与を、経過を見ながら施すことが好ましい。【０３１６】
別の局面において、本発明は、所望部位への薬物の送達を必要とする被験体を予防または処置するための方法を提供する。この方法は：Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程；およびＣ）該選択された送達媒体を用いて該予防または処置に必要な薬剤を該被験体に投与する工程、を包含する。【０３１７】
あるいは、この方法は、方法は：Ａ）所望部位への送達を達成するための送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択し、選択された該送達媒体の組成を分析する工程；Ｃ）該組成に基づいて、該予防または処置に必要な薬剤を含む、該選択された送達媒体を生成する工程；Ｄ）該選択された送達媒体を該被験体に投与する工程、を包含する。【０３１８】
このような送達媒体としては、例えば、所望部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下である、所望部位への送達を達成するための送達媒体；所望部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、所望部位への送達を達成するための送達媒体；所望部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、かつ、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、所望部位への送達を達成するための送達媒体；所望部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有し、かつ、ＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍであることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有する、所望部位への送達を達成するための送達媒体等を挙げることができるがそれらに限定されない。ここで、このＩＣは、Ｅ−セレクチンとの親和性において測定され得るが、それに限定されない。これらの送達媒体もまた、本発明の範囲内に入ることが理解される。この場合、Ｅ−セレクチンは、少なくとも炎症部位および癌部位と密接に相関することから、これらを炎症部位および癌部位に送達するために用いることができる。【０３１９】
上記条件に入る具体的な糖鎖修飾リポソームとしては、以下を挙げることができる。【０３２０】
【表１３】
2007018275.tif 000060
【０３２１】
好ましくは、送達媒体は、リポソーム（例えば、糖鎖修飾リポソーム）であり得る。【０３２２】
従って、本発明はまた、予防または処置に使用される薬剤、および本発明の送達媒体または本発明の送達媒体製造法によって製造された送達媒体を含む、医薬組成物を提供する。【０３２３】
（改変）
本明細書では、送達媒体は、所望により、実際に測定された媒体に置換を施すことができる。糖鎖である場合、糖鎖の水酸基にメチル基を導入することなどによって、特異性を改変することが可能である。そのような改変により作製された改変体は、本発明のローリングモデルに従って、インビトロでのスクリーニングによってその親和性を測定することができる。【０３２４】
本明細書においては、特に言及がない限り、置換は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上（または数個）の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。【０３２５】
本明細書においては、特に言及がない限り、置換は、ある有機化合物または置換基中の１または２以上の水素原子を他の原子または原子団で置き換えることをいう。水素原子を１つ除去して１価の置換基に置換することも可能であり、そして水素原子を２つ除去して２価の置換基に置換することも可能である。【０３２６】
本発明における置換基としては、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アルコキシ、炭素環基、ヘテロ環基、ハロゲン、ヒドロキシ、チオール、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、アシル、アシルアミノ、チオカルボキシ、アミド、置換されたカルボニル、置換されたチオカルボニル、置換されたスルホニルまたは置換されたスルフィニルが挙げられるがそれらに限定されない。このような置換基は、本発明において、アミノ酸の設計のときに、適宜利用することができる。【０３２７】
好ましくは、置換基は、複数存在する場合それぞれ独立して、水素原子またはアルキルであり得るが、複数の置換基全てが水素原子であることはない。より好ましくは、独立して、置換基は、複数存在する場合それぞれ独立して、水素およびＣ１〜Ｃ６アルキルからなる群より選択され得る。置換基は、すべてが水素以外の置換基を有していても良いが、好ましくは、少なくとも１つの水素、より好ましくは、２〜ｎ（ここでｎは置換基の個数）の水素を有し得る。置換基のうち水素の数が多いことが好ましくあり得る。小さな置換基または極性のある置換基は本発明の効果（特に、アルデヒド基との相互作用）に障害を有し得るからである。従って、水素以外の置換基としては、好ましくは、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ５アルキル、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ２アルキル、メチルなどであり得る。ただし、本発明の効果を増強し得ることもあることから、小さな置換基を有することもまた好ましくあり得る。【０３２８】
本明細書において、Ｃ１、Ｃ２、、、Ｃｎは、炭素数を表す。従って、Ｃ１は炭素数１個の置換基を表すために使用される。【０３２９】
本明細書において「保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を、保護が所望される官能基に付加する反応をいう。保護基により官能基を保護することによって、より反応性の高い官能基の反応を抑制し、より反応性の低い官能基のみを反応させることができる。保護反応は、例えば、脱水反応により行うことができる。【０３３０】
本明細書において「脱保護反応」とは、Ｂｏｃのような保護基を脱離させる反応をいう。脱保護反応としては、Ｐｄ／Ｃを用いる還元反応のような反応が挙げられる。脱保護反応は、例えば、加水分解により行うことができる。【０３３１】
本明細書において「保護基」としては、例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、アセチル基、ベンジル基、ベンゾイル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ｔ−ブチルジメチル基、シリル基、トリメチルシリルエチル基、Ｎ-フタルイミジル基、トリ
メチルシリルエチルオキシカルボニル基、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジル基、２-ニトロ-４，５-ジメトキシベンジルオキシカルボニル基、カルバメート基などが代表
的な保護基として挙げられる。保護基は、例えば、アミノ基、カルボキシル基などの反応性の官能基を保護するために用いることができる。反応の条件や目的に応じ、種々の保護基を使い分けることができる。ヒドロキシ基の保護基にはアセチル基、ベンジル基、シリル基またはそれらの誘導体などが、アミノ基の保護基にはアセチル基のほかベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基またはそれらの誘導体などを使用することができる。アミノオキシ基およびN-アルキルアミノオキシ基の保護基として、トリメチルシリルエチルオキシカルボニル基、２-ニトロ-４，５-ジメトキシベンジルオキシカルボニ
ル基またはそれらの誘導体が好ましい。【０３３２】
本発明の各方法において、目的とする生成物は、反応液から夾雑物（未反応減量、副生成物、溶媒など）を、当該分野で慣用される方法（例えば、抽出、蒸留、洗浄、濃縮、沈澱、濾過、乾燥など）によって除去した後に、当該分野で慣用される後処理方法（例えば、吸着、溶離、蒸留、沈澱、析出、クロマトグラフィーなど）を組み合わせて処理して単離し得る。【０３３３】
本発明では、糖鎖の付加反応は、接触が起こる限り、原理的に進むことが理解されるが、好ましくは、例えば、２５℃〜８０℃で反応が進むことが理解される。適切な温度の上限としては、例えば、８０℃、７０℃、６０℃、５０℃、４２℃、４０℃などが挙げられるがそれらに限定されない。そのような温度は、タンパク質の種類にもより、熱変性しやすいタンパク質は、上限が、例えば、３７℃などであり得る。適切な温度の下限としては、例えば、２５℃、３０℃、３２℃、３７℃などであり得る。適切な温度の下限は、反応速度との関係から、必要な時間を考慮して当業者は適宜決定することができる。【０３３４】
反応時間もまた、当業者が、本明細書の記載を参酌して、適宜決定することができる。そのような時間としては、例えば、６時間〜５日などを挙げることができるがそれらに限定されない。【０３３５】
反応時間の下限としては、例えば、数時間（１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間など）、１日、数日（２−３日）などを挙げることができるが、それらに限定されず、当業者は、反応速度および効率などを考慮して本明細書の記載に基づいて適宜決定することができる。反応時間の上限としては、例えば、数日（２〜３日）、５日、６日、１０日などを挙げることができるがそれらに限定されない。生産された糖タンパク質が分解したり、変性しない程度に反応時間の上限を設定することが望ましい。【０３３６】
（糖鎖修飾リポソームの製造方法）
別の局面において、本発明は、糖鎖修飾リポソームを製造する方法を提供する。この方法は、（ａ）リポソームを提供する工程；（ｂ）該リポソームを親水性化処理する工程；（ｃ）必要に応じて、該親水性化処理されたリポソームにリンカーを結合させて、リンカー結合リポソームを生成する工程；および（ｄ）該リポソームに、糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成する工程を包含する。好ましくは、この方法において、工程（ｂ）のリポソームを親水性化処理する工程は、リポソームの脂質膜上またはリンカー上に、直接または間接的に低分子量の親水性化合物(例えば、トリス(ヒドロキシアルキル）アミノアルカンなど）を結合することによって実施され、工程（ｃ）において使用されるリンカーは、ヒト由来の蛋白質(例えば、ヒト血清アルブミンなど）であり、そして工程（ｄ）
において、該リポソームに、直接または間接的に糖鎖を結合させる条件下で、糖鎖を結合させて糖鎖修飾リポソームを生成する。【０３３７】
別の局面において、本発明は、目的の送達部位に薬物を送達するための糖鎖修飾リポソームの製造方法を提供する。この方法は、（ａ）種々の糖鎖密度を有する、該目的の送達部位への送達を達成する糖鎖修飾リポソームを提供する工程；（ｂ）該糖鎖修飾リポソーム上の糖鎖密度について、該送達部位への最適な送達を達成する密度を決定する工程；および（ｃ）該薬物を決定された最適な糖鎖修飾リポソームに組み込んで薬物含有リポソームを生成する工程を包含する。【０３３８】
（リポソームの製造）
リポソーム自体は、周知の方法に従い製造することができるが、これには、薄膜法、逆層蒸発法、エタノール注入法、脱水−再水和法等を挙げることができる。【０３３９】
また、超音波照射法、エクストルージョン法、フレンチプレス法、ホモジナイゼーション法等を用いて、リポソームの粒子径を調節することも可能である。本発明のリポソーム自体の製法について、具体的に述べると、例えば、まず、ホスファチジルコリン類、コレステロール、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジン酸類、ガングリオシド類、糖脂質類もしくはホスファチジルグリセロール類を配合成分とする脂質と界面活性剤コール酸ナトリウムとの混合ミセルを調製する。とりわけ、ホスファチジン酸類もしくはジセチルホスフェート等の長鎖アルキルリン酸塩類の配合は、リポソームを負に荷電させるために必須であり、ホスファチジルエタノールアミン類の配合は親水性化反応部位として、ガングリオシド類または糖脂質類またはホスファチジルグリセロール類の配合はリンカーの結合部位として必須のものである。ガングリオシド類、糖脂質類、ホスファチジルグリセロール類、スフィンゴミエリン類およびコレステロール類からなる群から選択される少なくとも１種の脂質はリポソーム中で集合し、リンカーを結合させる足場（ラフト）として機能する。本発明のリポソームは、このようなタンパク質を結合させうるラフトが形成されることによりさらに安定化される。すなわち、本発明のリポソームは、リンカーを結合させるためのガングリオシド、糖脂質、ホスファチジルグリセロール類、スフィンゴミエリン類およびコレステロール類からなる群から選択される少なくとも、１種の脂質のラフトが形成されたリポソームを含む。そして、これにより得られる混合ミセルの限外濾過を行うことによりリポソームを作製する。本発明において使用するリポソームは、通常のものでも使用できるが、その表面は親水性化されていることが望ましい。上述のようにしてリポソームを作製した後にリポソーム表面を親水性化する。【０３４０】
本発明は、上記の親水性化化合物を用いて親水性化した糖鎖の結合していないリポソームそのものをも包含する。このような親水性化したリポソームは、リポソーム自体の安定性が高まり、また糖鎖を結合したときに糖鎖の認識性が高まるという利点がある。本発明のリポソームは、例えば、リポソームの構成脂質が、ホスファチジルコリン類（モル比０〜７０％）、ホスファチジルエタノールアミン類（モル比０〜３０％）、ホスファチジン酸類、長鎖アルキルリン酸塩およびジセチルリン酸類からなる群から選択される１種以上の脂質（モル比０〜３０％）、ガングリオシド類、糖脂質類、ホスファチジルグリセロール類およびスフィンゴミエリン類からなる群から選択される１種以上の脂質（モル比０〜４０％）、ならびにコレステロール類（モル比０〜７０％）を含む、リポソームである。【０３４１】
本発明は、さらにリポソームに上記に親水性化化合物を結合させて、リポソームを親水性化する方法をも包含する。また、糖鎖の結合していない親水性化したリポソームをも包含する。糖鎖の結合していないリポソームに糖鎖を結合することにより、本発明の標的指向性リポソームまたは腸管吸収性リポソームを製造することができる。【０３４２】
（糖鎖の合成）
本発明の糖鎖修飾リポソームに使用され得る糖鎖は、一般的な糖鎖合成方法によって合成され得る。これらの方法としては、（１）化学合成による方法、（２）遺伝子組換え細胞あるいは微生物による発酵法、（３）糖加水分解酵素（グリコシダーゼ）を用いて合成する方法、（４）糖転移酵素（グリコシルトランスフェラーゼ）を用いて合成する方法が挙げられる。（ＷＯ２００２／０８１７２３、特開平９−３１０９５公報、特開平１１−４２０９６公報、特開２００４−１８０６７６公報、畑中研一、西村紳一郎、大内辰郎および小林一清（１９９７）糖質の科学と工業、講談社、東京などを参照のこと）。本発明の糖鎖修飾リポソームにおいて使用される糖鎖は、上記の方法により合成された糖鎖であっても、市販の糖鎖であってもよい。【０３４３】
（リポソームへの糖鎖の結合）
本発明においては、上記のようにして作製したリポソームに、上記の糖鎖のいずれかを直接結合させてもよいし、さらに、リンカーを介して糖鎖を結合させてもよい。この際、リポソームに結合させる糖鎖の種類は１種類に限らず、複数の糖鎖を結合させてもよい。この場合の複数の糖鎖は同じ組織または器官の細胞表面に共通して存在する異なるレクチンのような細胞表面分子に対して結合活性を有する複数の糖鎖であってもよいし、異なる組織または器官の細胞表面に存在する異なるレクチンのような細胞表面分子に対して結合活性を有する糖鎖であってもよい。前者のような複数の糖鎖を選択することにより、特定の標的組織または器官を確実に指向することができ、後者のような複数の糖鎖を選択することにより、１種類のリポソームに複数の標的を指向させることができ、マルチパーパスな標的指向性リポソームを得ることができる。【０３４４】
なお、糖鎖をリポソームに結合させるには、リポソームの製造時にリンカーおよび／または糖鎖を混合し、リポソームを製造させつつ糖鎖をその表面に結合させることも可能であるが、あらかじめリポソーム、リンカーおよび糖鎖を別途準備し、製造が完了したリポソームにリンカーおよび／または糖鎖を結合させたほうが望ましい。これは、リポソームにリンカーおよび／または糖鎖を結合させることにより、結合させる糖鎖の密度を制御できるからである。糖鎖のリポソームヘの直接結合は、以下に述べるような方法で行うことができる。【０３４５】
糖鎖を糖脂質として混合してリポソームを製造するか、製造後のリポソームのリン脂質に糖鎖を結合するとともに糖鎖密度を制御する。リンカーを用いて糖鎖を結合させる場合、リンカーとしては、生体由来のタンパク質、特にヒト由来タンパク質を用いるのが好ましい。生体由来のタンパク質は限定されないが、アルブミン等の血液中に存在するタンパク質、その他生体に存在する生理活性物質等が挙げられる。例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）等の動物の血清アルブミンが挙げられるが、特にヒト血清アルブミンを使用する場合は、各組織に対する取り込みが多いことがマウスについての実験により確かめられている。本発明のリポソームは、非常に安定であり、リポソームを形成した後にタンパク質を結合させたり、リンカーを結合させたり、糖鎖を結合させるという後処理が可能である。従って、リポソームを大量に製造した後に、目的に応じてそれぞれ異なるタンパク質を結合させたり、リンカーや糖鎖を結合させることにより、目的に応じた種々のリポソームを製造することが可能である。【０３４６】
本発明のリポソームには、糖鎖がリンカーを介して、あるいはリポソームを構成する脂質に直接結合している。本発明のリポソームは、糖脂質や糖タンパク質等の複合糖質型リガンドを有し、低分子化合物で親水化処理されているリポソームである。【０３４７】
また、後述のように、本発明の標的指向性リポソームを医薬として用いる場合、該リポソームは医薬効果を有する化合物を含んでいる必要がある。該医薬効果を有する化合物は、リポソーム中に封入させるか、あるいはリポソーム表面に結合させればよいが、リンカーとして、医薬効果を有するタンパク質を用いてもよい。この場合、タンパク質がリポソームと糖鎖を結合させるためのリンカーおよび医薬効果を有するタンパク質を兼ねることもある。薬効を有するタンパク質としては、生理活性タンパク質等が挙げられる。【０３４８】
リンカーを介して糖鎖をリポソームへ結合させるには以下に述べる方法で行えばよい。【０３４９】
まずリポソーム表面にタンパク質を結合させる。リポソームを、ＮａＩＯ４、Ｐｂ（Ｏ２ＣＣＨ３）４、ＮａＢｉＯ３等の酸化剤で処理して、リポソーム膜面に存在するガングリオシドを酸化し、次いで、ＮａＢＨ３ＣＮ、ＮａＢＨ４等の試乗を用いて、リンカーとリポソーム膜面上のガングリオシドを、還元的アミノ化反応により結合させる。このリンカーも、親水性化するのが好ましく、これにはリンガータンパク質にヒドロキシ基を有する化合物を結合させるが、例えば、ビススルフォスクシニミジルスベラート、ジスクシニミジルグルタレート、ジチオビススクシニミジルプロピオネート、ジスクシニミジルスベラート、３，３’−ジチオビススルフォスクシニミジルプロピオネート、エチレングリコールビススクシニミジルスクシネート、エチレングリコールビススルフォスクシニミジルスクシネート等の２価試薬を用いて、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の上述の親水性化に用いる化合物をリポソーム上のリンカーと結合させればよい。【０３５０】
これを具体的に述べると、まず、リンカーの全てのアミノ基に架橋用２価試薬の一端を結合する。そして、各種糖鎖の還元末端をグリコシルアミノ化反応して得られる糖鎖グリコシルアミン化合物を調製し、この糖鎖のアミノ基とリポソーム上の上記で結合された架橋２価試薬の一部分の他の未反応末端とを結合する。糖鎖および／または親水性化合物とリポソームとの共有結合、または糖鎖および／または親水性化合物とリンカーとの共有結合は、リポソームが細胞内に取り込まれたときに切断することも可能である。例えば、リンカーと糖鎖がジスルフィド結合を介して共有結合されている場合、細胞内で還元されて糖鎖が切断される。糖鎖が切断されることによりリポソーム表面が疎水性になり、生体膜と結合し膜安定性が乱れリポソーム中に含まれる薬剤が放出される。【０３５１】
次に、このようにして得られる糖鎖結合リポソーム膜面上タンパク質の表面に糖鎖が結合していない未反応で残っている大部分の２価試薬未反応末端を用いて親水性化処理を行う。つまり、このリポソーム上タンパク質に結合している２価試薬の未反応末端とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等の上述の親水性化に用いる化合物との結合反応を行い、リポソーム表面全体を親水性化する。リポソーム表面およびリンカーの親水性化は、各種組織への移行性、および血中における滞留性および各種組織への移行性を向上させる。これは、リポソーム表面およびリンカー表面が親水性化されることによって、糖鎖以外の部分が、各組織等においてはあたかも生体内水分であるかのようにみえ、これにより、標的以外の組織等に認識されず、糖鎖のみがその標的組織のレクチンのような細胞表面分子（糖鎖認識タンパク質）により認識されることに起因するものと思われる。【０３５２】
次いで、糖鎖をリポソーム上のリンカーに結合させる。これには、糖鎖を構成する糖類の還元末端を、ＮＨ４ＨＣＯ３、ＮＨ２ＣＯＯＮＨ４等のアンモニウム塩を用いてグリコシルアミノ化し、次いで、ビススルフォスクシニミジルスベラート、ジスクシニミジルグルタレート、ジチオビススクシニミジルプロピオネート、ジスクシニミジルスベラート、３，３’−ジチオビススルフォスクシニミジルプロピオネート、エチレングリコールビススクシニミジルスクシネート、エチレングリコールビススルフォスタシニミジルスクシネート等の２価試薬を用いて、リポソーム膜面上に結合したリンカーと、上記グリコシルアミノ化された糖類とを結合させ、図１に示されるようなリポソーム複合体を得る。なお、これらの糖鎖は市販されている。【０３５３】
本発明のリポソーム、糖鎖等結合リポソームの粒径は、３０〜５００ｎｍ、好ましくは５０〜３５０ｎｍである。また、本発明のリポソームは、負に荷電していることが望ましい。負に荷電していることにより、生体中の負に荷電している細胞との相互作用を防ぐことができる。本発明のリポソーム表面のゼ−タ電位は、生理食塩水中において、３７℃で、−５０〜１０ｍＶ、好ましくは−４０〜０ｍＶ、さらに好ましくは−３０〜−１０ｍＶである。【０３５４】
本発明の糖鎖修飾リポソームに含ませる薬剤としては、バイオ医薬品またはバイオ治療用物質（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ誘導体、ＲＮＡ、ＲＮＡ誘導体、ＤＮＡ、ＤＮＡ誘導体、モノクローナル抗体、ワクチン、インターフェロン、ホルモン、プロスタグランジン、転写因子、組換えタンパク質、抗体医薬、核酸医薬、遺伝子治療薬）、アルキル化系抗癌剤、代謝拮抗剤、植物由来抗癌剤、抗癌性抗生物質、ＢＲＭ・サイトカイン類、白金錯体系抗癌剤、免疫療法剤、ホルモン系抗癌剤、モノクローナル抗体等の腫瘍用薬剤、中枢神経用薬剤、末梢神経系・感覚器官用薬剤、呼吸器疾患治療薬剤、循環器用薬剤、消化器官用薬剤、ホルモン系用薬剤、泌尿器・生殖器用薬剤、ビタミン・滋養強壮剤、代謝性医薬品、抗生物質・化学療法薬剤、検査用薬剤、抗炎症剤、眼疾患薬剤、中枢神経系薬剤、自己免疫系薬剤、循環器系薬剤、糖尿病、高脂血症のような生活習慣病薬剤、副腎皮質ホルモン、免疫抑制剤、抗菌薬、抗ウイルス薬、血管新生抑制剤、サイトカイン、ケモカイン、抗サイトカイン抗体、抗ケモカイン抗体、抗サイトカイン・ケモカイン受容体抗体、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡまたはＯＤＮまたはＤＮＡのような遺伝子治療関連の核酸製剤、神経保護因子、抗体医薬、分子標的薬、骨粗鬆症・骨代謝改善薬、神経ペプチド、生理活性ペプチド・タンパク質等が挙げられる。例えば、腫瘍用薬剤として、塩酸ナイトロジェンマスタード−Ｎ−オキシド、シクロホスファミド、イホスファミド、プルスファン、塩酸ニムスチン、ミトブロニートール、メルファラン、ダカルバジン、ラニムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウムなどのアルキル化剤、メルカプトプリン、チオイノシン（メルカプトプリンリボシド）、メトトレキサート、エノシタビン、シタラビン、塩酸アンシタビン（塩酸サイクロシチジン）、フルオロウラシル、５−ＦＵ、テガフール、ドキシフルリジン、カルモフールなどの代謝拮抗剤、エトポシド、硫酸ビンプラスチン、硫酸ピンクリスチン、硫酸ビンデシン、パクリタキセル、タキソール、塩酸イリノテカン、塩酸ノギテカンなどのアルカロイド等の植物由来抗癌剤、アクチノマイシンＤ、マイトマイシンＣ、クロモマイシンＡ３、塩酸ブレオマイシン、硫酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシン、塩酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸アクラルビシン（アクラシノマイシンＡ）、塩酸ピラルビシン、塩酸エピルビシン、ネオカルチノスタチンなどの抗癌性抗生物質、その他、塩酸ミトキサントロン、カルボプラチン、シスプラチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、アセグラトン、塩酸プロカルバジン、クエン酸タモキシフェン、ウベニメクス、レンチナン、シゾフィラン、酢酸メドロキシプロゲステロン、ホスフェストロール、メピチオスタン、エピチオスタノール等がある。本発明において、上述の薬剤にはその誘導体も包含される。【０３５５】
上述のような薬剤を含ませることにより、本発明のリポソームを、癌、炎症等の疾患の治療に用いることができる。ここで、癌は、腫瘍や白血病等のあらゆる新生物による疾患を含む。本発明の糖鎖修飾リポソームにこれらの薬剤を含ませて投与した場合、薬剤を単独で投与した場合に比較し、薬剤が癌、炎症部位に集積する。単独投与の場合に比べ、２倍以上、好ましくは５倍以上、さらに好ましくは１０倍以上、特に好ましくは５０倍以上集積し得る。【０３５６】
なお、医薬効果を有する化合物は、リポソームの中に封入させてもよいし、リポソーム表面に結合させてもよい。例えば、タンパク質は上記のリンカーの結合方法と同じ方法で表面に結合させることが可能であり、他の化合物もその化合物が有する官能基を利用することにより、公知の方法で、結合させることができる。また、リポソーム内部への封入は、以下の方法により行う。リポソームへ薬剤等を封入するには、周知の方法を用いればよく、例えば、薬剤等の含有溶液とホスファチジルコリン類、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジン酸類もしくは長鎖アルキルリン酸塩類、ガングリオシド類、糖脂質類もしくはホスファチジルグリセロール類およびコレステロール類を含む脂質を用いてリポソームを形成することにより、薬剤等はリポソーム内に封入される。【０３５７】
したがって、本発明のリポソームに、治療あるいは診断に供しうる薬剤あるいは遺伝子を封入することによって得られるリポソーム製剤は、ガン組織、炎症組織、各種組織への移行性が選択的に制御されたものであり、治療薬剤あるいは診断剤の標的細胞、組織への集中による効力の増強あるいは他の細胞、組織に対する薬剤の取り込みの減少による副作用の軽減化等を図れるものである。【０３５８】
また、本発明の静注投与用並びに経口投与用薬物送達媒体を診断用に用いる場合は、リポソームに蛍光色素、放射性化合物等の標識化合物を封入又は結合させる。該標識化合物結合リポソームが患部に結合し、標識化合物が患部細胞に取り込まれ、該標識化合物の存在を指標に疾患を検出・診断することができる。【０３５９】
本発明を診断として用いる場合は、例えば、ＤＮＡプローブ診断薬、Ｘ線造影剤、放射性試薬、放射性造影剤、放射性診断薬、蛍光試薬、蛍光造影剤、蛍光診断薬、ＣＴ用造影剤、ＰＥＴ用造影剤、ＳＰＥＣＴ用造影剤、ＭＲＩ用造影剤、エイズ診断薬、血液学的検査用試薬、機能検査用試薬、微生物検査用試薬、分子イメージング、インビボイメージング、蛍光イメージング、発光イメージング、セルソーター、ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴ等に用いることができる。研究試薬としては、組換えＤＮＡ技術、イムノアッセイ、ハイブリダイゼーション法、酵素アッセイにおいて使用される試薬などが挙げられる。【０３６０】
本発明の結果、例えば実施例９と実施例１０と実施例２２Ａと実施例２２Ｂ、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである。従って、本発明の糖鎖修飾リポソームは、腫瘍などの標的組織での集積を可視化できるので、治療用薬剤送達媒体としての利用とともに、研究試薬や診断薬などとしての利用への送達媒体をも提供する。【０３６１】
本発明を診断として用いる場合は、例えば、ＤＮＡプローブ診断薬、Ｘ線造影剤、放射性診断薬、蛍光診断薬、ＣＴ用造影剤、ＰＥＴ用造影剤、ＳＰＥＣＴ用造影剤、ＭＲＩ用造影剤、エイズ診断薬、血液学的検査用試薬、機能検査用試薬、微生物検査用試薬、分子イメージング、インビボイメージング、蛍光イメージング、発光イメージング、セルソーター、ＰＥＴおよびＳＰＥＣＴ等に用いることができる。研究試薬としては、組換えＤＮＡ技術、イムノアッセイ、ハイブリダイゼーション法、酵素アッセイにおいて使用される試薬などが挙げられる。【０３６２】
（美容・化粧）
別の実施形態において、本発明は、美容目的の治療、処置または改善を対象とし得る。そのような目的としては、純粋に健常状態への美容・化粧を目的とするのみならず、手術後または外傷後の変形および先天性の変形に対する美容治療も含まれる。例えば、乳房の組織増大術（豊胸術）、頬や上下眼瞼の陥凹に対する組織増大術、顔面半側萎縮症、顔面神経麻痺後の組織萎縮、漏斗胸などへの組織増大を目的として利用しうる。さらに、隆鼻術、整鼻術、オトガイ形成術（組織増大術）、前額形成術（組織増大術）、小耳症など耳介変形・奇形に対する耳介軟骨形成術へも利用できるがそれに限定されない。【０３６３】
本発明が美容・化粧分野において使用される場合、そのような組成物は、薬学的に受容可能なキャリアなどをさらに含み得る。本発明の医薬に含まれる薬学的に受容可能なキャリアとしては、当該分野において公知の任意の物質が挙げられる。【０３６４】
そのような適切な処方材料または薬学的に受容可能なキャリアとしては、抗酸化剤、保存剤、着色料、風味料、および希釈剤、乳化剤、懸濁化剤、溶媒、フィラー、増量剤、緩衝剤、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的アジュバントが挙げられるがそれらに限定されない。【０３６５】
本明細書で使用される受容可能なキャリア、賦形剤または安定化剤は、レシピエントに対して非毒性であり、そして好ましくは、使用される投薬量および濃度において不活性であり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、または他の有機酸；アスコルビン酸、α−トコフェロール；低分子量ポリペプチド；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリジン）；モノサッカリド、ジサッカリドおよび他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）；キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）；糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトール）；塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）；ならびに／あるいは非イオン性表面活性化剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））などが挙げられるがそれらに限定されない。【０３６６】
例示の適切なキャリアとしては、中性緩衝化生理食塩水、または血清アルブミンと混合された生理食塩水が挙げられる。好ましくは、その生成物は、適切な賦形剤（例えば、スクロース）を用いて凍結乾燥剤として処方される。他の標準的なキャリア、希釈剤および賦形剤は所望に応じて含まれ得る。他の例示的な組成物は、ｐＨ７．０−８．５のＴｒｉｓ緩衝剤またはｐＨ４．０−５．５の酢酸緩衝剤を含み、これらは、さらに、ソルビトールまたはその適切な代替物を含み得る。【０３６７】
（保健・食品）
本発明はまた、保健・食品分野においても利用することができる。このような場合、上述の経口医薬として用いられる場合の留意点を必要に応じて考慮すべきである。特に、特定保健食品のような機能性食品・健康食品などとして使用される場合には、医薬に準じた扱いを行うことが好ましい。好ましくは、本発明の糖鎖修飾リポソームに機能性食品、栄養補助食品または健康補助食品を封入または結合させたものを食品組成物として用いることができる。本発明で用い得る機能性食品、栄養補助食品または健康補助食品に限定はなく、摂取されて食品機能を有効に発現するように設計され、加工変換された食品ならばいずれのものも含まれる。【０３６８】
例えば、イチョウ葉、エキナシア、ノコギリヤシ、セントジョーンズワート、バレリアン、ブラックコホッシュ、ミルクシスル、月見草、ブドウ種子エキス、ビルペリー、ナツシロギク、当帰、大豆、フランス海岸松、ガーリック、高麗ニンジン、茶、ショウガ、アガリクス、メシマコブ、紫イペ、ＡＨＣＣ、酵母ベータグルカン、マイタケ、プロポリス、ビール酵母、穀類、梅、クロレラ、大麦若葉、青汁、ビタミン類、コラーゲン、グルコサミン、桑葉、ルイボス茶、アミノ酸、ローヤルゼリー、シイタケ菌糸体エキス、スピルリナ、田七ニンジン、クレソン、植物発酵食品、ＤＨＡ、ＥＰＡ、ＡＲＡ、昆布、キャベツ、アロエ、メグスリノ木、ホップ、カキ肉エキス、ピクジエノール、ゴマ等が本発明に用い得る機能性食品、栄養補助食品または健康補助食品として例示できる。これらは、そのままリポソームに含ませてもよいし、抽出物等の処理物を含ませてもよい。リポソームを含む食品組成物は、経口摂取される。用いるリポソームは、糖鎖が結合していなくてもよく、また腸管吸収を高める糖鎖または特定の組織もしくは器官を標的とした糖鎖が結合していてもよい。本発明のリポソームを食品組成物として投与する場合は、液体飲料、ゲル状食品、固形食品等の食品に加工すればよい。また、錠剤、顆粒等に加工してもよい。本発明の食品組成物は、リポソームが含む食品の種類に応じた機能性食品、栄養補助食品または健康補助食品として用いることができる。例えば、ビタミン、ミネラル、アミノ酸、炭水化物を含む食品であってもよい。【０３６９】
例えば、ＤＨＡを含むリポソームは、軽度老人性痴呆症や記憶改善に効果のある機能性食品、栄養補助食品または健康補助食品として用いることができる。【０３７０】
（製造装置）
別の局面において、本発明は、所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置を提供する。この装置は：Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段、を備える。【０３７１】
あるいは、本発明は、所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造装置を提供する。この装置は：Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する手段；Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する手段；Ｃ）選択された該送達媒体の組成を分析する手段；Ｄ）該組成に基づいて、該選択された送達媒体を生成する手段、を備える。【０３７２】
（使用）
別の局面において、本発明は、所望部位への送達を達成するための送達媒体の製造のための、該部位に関連するレクチンのような細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性の使用を提供する。この使用目的には、種々のものが考慮され、例えば、治療薬のみならず、診断薬（ＭＲＩ造影剤など）、研究試薬（蛍光プローブなど）、化粧品、機能性食品など、医薬品、化粧品・農薬・食品をはじめ農学・医学・薬学分野はいうに及ばず、アッセイのための試薬としても使用可能であり、このような概念は、本発明の開示前には存在しなかったことから、その意義は大きい。【０３７３】
本明細書において引用された、科学文献、特許、特許出願などの参考文献は、その全体が、各々具体的に記載されたのと同じ程度に本明細書において参考として援用される。【０３７４】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【実施例】
【０３７５】
以下、実施例により、本発明の構成をより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下において使用した試薬類は、特に言及した場合を除いて、市販されているものを使用した。【０３７６】
（実施例１．リポソームの調製）
リポソームは既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、改良型コール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇを添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ  ８．４）３ｍｌに懸濁、超音波処理して、透明なミセル懸濁液を得た。さらに、ミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とｐＨ  ７．２のリン酸緩衝液（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｂｕｆｆｒｅｄ  Ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）：Ｎａ２ＨＰＯ４（２５．５５ｇ）／ＫＨ２ＰＯ４（２．７２ｇ）／ＮａＮ３（０．８ｇ）／ＮａＣｌ（３５．４ｇ））を用いた限外濾過にかけ均一リポソーム（平均粒径１００ｎｍ）１０ｍｌを調製した。【０３７７】
（実施例２．リポソーム脂質膜面上の親水性化処理）
実施例１で調製したリポソーム溶液１０ｍｌをＸＭ３００膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）を用いた限外濾過にかけ溶液のｐＨを８．５にした。次に、架橋試薬ｂｉｓ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ３；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１０ｍｌを加え、２５℃で２時間攪拌した。その後、更に７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンとＢＳ３との化学結合反応を完結した。そして、このリポソーム液をＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過にかけた。次に、ＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）１ｍｌに溶かしたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン４０ｍｇをリポソーム液１０ｍｌに加えて、２５℃で２時間攪拌後、７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質に結合したＢＳ３とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとの化学結合反応を完結した。これにより、リポソーム膜の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン上にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの水酸基が配位して水和親水性化された。【０３７８】
（実施例３．リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合）
リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合は、既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、カップリング反応法を用いて行った。すなわち、この反応は２段階化学反応で行い、はじめに、実施例２で得られた１０ｍｌのリポソーム膜面上に存在するガングリオシドを１ｍｌのＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ
８．４）に溶かしたメタ過ヨウ素酸ナトリウム４３ｍｇを加えて室温で２時間攪拌して過ヨウ素酸酸化した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．０）で限外濾過することにより酸化されたリポソーム１０ｍｌを得た。このリポソーム液に、２０ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を加えて２５℃で２時間攪拌し、次にＰＢＳ（ｐＨ  ８．０）に２Ｍ  ＮａＢＨ３ＣＮ  １００μｌを加えて１０℃で一晩攪拌してリポソーム上のガングリオシドとＨＳＡとのカップリング反応でＨＳＡを結合した。そして、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過をした後、ＨＳＡ結合リポソーム液１０ｍｌを得た。【０３７９】
（実施例４．糖鎖の調製）
以下の表４に示される糖鎖を使用した。【０３８０】
各糖鎖の質量を計測し、以下の実施例５において使用するための前処理をした。２つ以上の糖鎖の組み合せを使用する場合、各糖鎖を混合した。【０３８１】
【表１４】
2007018275.tif 000061
【０３８２】
（実施例５．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への糖鎖の結合）
実施例４において調整した各糖鎖５０μｇを、０．２５ｇのＮＨ４ＨＣＯ３を溶かした０．５ｍｌ水溶液に加え、３７℃で３日間攪拌した後、０．４５μｍのフィルターで濾過して糖鎖の還元末端のアミノ化反応を完結して、各糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを得た。次に、実施例３で得たリポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液に上記のグリコシルアミン化合物５０μｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、表２に示される糖鎖とヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリポソーム各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）が得られた。【０３８３】
以下の表１０に、各糖鎖を用いた場合のリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への結合の結果を示す。特に明記しない限り、これらの糖鎖のリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミンへの結合は、実施例５と同様の方法および条件で行った。【０３８４】
【表１５】
2007018275.tif 000062
【０３８５】
（調製例１．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上へのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの結合）
比較試料としてのリポソームを調製するために、実施例３で得たリポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの結合を行った。この工程で既に大過剰である１３ｍｇのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが存在するのでリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上の親水性化処理も同時に完結した。その結果、最終産物である親水性化処理されたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合した比較試料としてのリポソーム（略称：ＴＲＩＳ）２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）が得られた。【０３８６】
（調製例２：糖脂質リポソームの調製）
糖脂質リポソーム（ＦＥＥ，ＥＥで始まるもの、例えば、リポソーム番号３、リポソーム番号３７、リポソーム番号６７、リポソーム番号２１８など）は以下のように調製した。【０３８７】
リポソームはコール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルフォスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルフォスフェート、ガングリオシド（糖脂質糖鎖としてＧＭ１を１００％含むもの）及びジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇ添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）３ｍｌに懸濁、超音波処理し、透明なミセル懸濁液３ｍｌを得た。このミセル懸濁液にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）を加えて１０ｍｌにしてから、このミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，  ＵＳＡ）とＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）を用いた限外濾過にかけ均一な親水性化処理をしてないリポソーム粒子懸濁液１０ｍｌを調製した。このリポソーム液にボルトンハンター試薬（ＢＨＲ  ；  Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，  ＵＳＡ）５ｍｇを加えて、２５℃で２時間、その後７℃で４時間反応させジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをＢＨ化した後、ＰＢＳ緩衝液（ＰＨ７．２）で限外濾過にかけた。その結果、比較試料としてのリポソーム（略称：ＥＥＧＭ１−ＢＨ）１０ｍｌ（総脂質量４５．６ｍｇ、平均粒子径１００ｎｍ）が得られた。【０３８８】
（実施例６．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上の親水性化処理）
実施例５の手段により調製された糖鎖が結合したリポソームについて、それぞれ別々に以下の手順によりリポソーム上のＨＳＡタンパク質表面の親水性化処理を行った。糖鎖結合リポソーム２ｍｌに、別々に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間、その後７℃で一晩攪拌した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過し未反応物を除去して、最終産物である親水性化処理された糖鎖結合リポソーム複合体各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）を得た。【０３８９】
（実施例７．各種の糖鎖結合リポソーム複合体によるレクチン結合活性阻害効果の測定）
実施例５および実施例６の手段により調製した各糖鎖結合リポソーム複合体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでのレクチンのような細胞表面分子の結合活性は、常法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．（１９９９）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，１４，４９８−５０５）に従いレクチン固定化マイクロプレートを用いた阻害実験で測定した。すなわち、レクチン（例えば、Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．，ＵＳＡ；このレクチンは、目的とする臓器に応じて変更することが可能である。）を９６穴マイクロプレートに固化定した。このレクチン固定化プレートに、比較リガンドであるビオチン化したフコシル化フェチュイン０．１μｇとともに、濃度の異なる各種の糖鎖結合リポソーム複合体（タンパク質量として、０．０１μｇ、０．０４μｇ、０．１１μｇ、０．３３μｇ、１μｇ）を加え、４℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄した後、ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＨＲＰＯ）結合ストレプトアビジンを添加し、さらに４℃で１時間インキュベート、ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を添加して室温で静置、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で測定した。フコシル化フェチュインのビオチン化は、ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ｂｉｏｔｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）処理後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）により精製した。ＨＲＰＯ結合ストレプトアビジンは、ＨＲＰＯの酸化とＮａＢＨ３ＣＮを用いた還元アミノ化法によるストレプトアビジンの結合により調製した。この測定結果を以下のように処理して計算した。【０３９０】
ＩＣ２０〜ＩＣ５０についての模式図を図３〜６に示す。グラフ１としてＳａｍｐｌｅＬＹ−１とＩＣ５０の実験結果を図２に示す。【０３９１】
図２に示すグラフは表１６、表１７をもとに作成したサンプルLY-1と系列IC50のグラフである。【０３９２】
【表１６】
2007018275.tif 000063
【０３９３】
【表１７】
2007018275.tif 000064
【０３９４】
グラフ１は表１をもとに作成したものである。Ｘ軸は対数メモリになっている。折れ線グラフ上の各点はサンプルＬＹ−１の各Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ  （横軸）における測定値の平均の比を示す。サンプルによってｃｏｎｔｒｏｌの値が異なるので比較しやすいようにグラフの縦軸をｈｏｔとｃｏｌｄの差を１としてその比で表す。Ｓａｍｐｌｅ  ＬＹ−１のグラフと系列ＩＣ５０のグラフの交点のＸ座標がＩＣ５０の値である。交点は座標１（０．１１，０．５６２）と座標２（０．３３，０．４１４）を含む直線上にありその式はｙ＝−０．６７３ｘ＋０．６３６となる。ｙ＝０．５（系列ＩＣ５０の式）の  ２本の直線の交点のｘ座標は０．２０２となる。この値を蛋白質の分子量６９０００で割り、さらにリポソーム１個あたりの蛋白質の個数３００で割ると９．７６Ｅ−０９となる。【０３９５】
このようにして得られたデータ結果を以下に示す。【０３９６】
【表１８Ａ】
2007018275.tif 000065
【０３９７】
【表１８Ｂ】
2007018275.tif 000066
【０３９８】
【表１８Ｃ】
2007018275.tif 000067
【０３９９】
【表１８Ｄ】
2007018275.tif 000068
【０４００】
【表１８Ｅ】
2007018275.tif 000069
【０４０１】
【表１８Ｆ】
2007018275.tif 000070
【０４０２】
特に、関連が深い炎症部位および腫瘍部位について、さらに細かく調査した。【０４０３】
炎症部位【０４０４】
【表１８Ｇ】
2007018275.tif 000071
【０４０５】
（腫瘍部位）【０４０６】
【表１８Ｈ】
2007018275.tif 000072
【０４０７】
（実施例８．クロラミンＴ法による各種糖鎖結合リポソームの１２５Ｉ標識）
クロラミンＴ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）溶液並びに二亜硫酸ナトリウム溶液をそれぞれ３ｍｇ／ｍｌならびに５ｍｇ／ｍｌとなるように用事調製して用いた。実施例６により調製した糖鎖結合リポソームならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソームを５０μｌずつ別々にエッペンチューブに入れ、続いて１２５Ｉ−ＮａＩ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）を１５μｌ、クロラミンＴ溶液を１０μｌ加え反応させた。５分ごとにクロラミンＴ溶液１０μｌを加え、この操作を２回繰り返した後１５分後に還元剤として二亜硫酸ナトリウム１００μｌを加え、反応を停止させた。次に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０（Ｐｈｒａｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｓｗｅｄｅｎ）カラムクロマト上に乗せ、ＰＢＳで溶出、標識体を精製した。最後に、非標識−リポソーム複合体を添加して比活性（４×１０６  Ｂｑ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を調整して１２５Ｉ標識リポソーム液を得た。【０４０８】
（実施例９．各種の糖鎖結合リポソーム複合体のマウスでの腸管から血中への移行量の測定）
一昼夜水分以外絶食した雄性ｄｄＹマウス（７週齢）に、実施例６により１２５Ｉ標識された糖鎖結合ならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソーム複合体０．２ｍｌをタンパク質量として３μｇ／一匹の割合になるように、マウス用経口ゾンデで腸管内に強制投与した後、１０分後にネンブタール麻酔下で下大動脈より血液１ｍｌを採血した。そして、血中の１２５Ｉ放射能をガンマーカウンター（Ａｌｏｌａ  ＡＲＣ３００）で測定した。さらに、各種のリポソーム複合体の生体内安定性を調べる目的で、各血液の血清をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０で再クロマトしたが、いずれも大半の放射能が高分子量のボイドフラクションにみられ、各種のリポソーム複合体は生体内においても安定性を有していた。なお、腸管から血中への放射能移行量は、投与全放射能に対する血液１ｍｌ当たりの放射能の割合（％投与量／ｍｌ血液）で表示した。この結果を以下の表１９に示す。【０４０９】
【表１９】
2007018275.tif 000073
【０４１０】
（実施例１０．糖鎖修飾リポソームの生体内動態検討）
投与したリポソームは、上記実施例で作製した糖鎖結合リポソームのうち、糖鎖結合リポソーム（以下糖鎖＋リポソーム）および糖鎖の結合していないリポソーム（以下糖鎖−リポソーム）である。正常マウスに対し、糖鎖＋リポソーム、糖鎖−リポソームを、それぞれ静脈注射または経口投与し、マウスの各臓器へのリポソームの集積を評価することを目的として行った。【０４１１】
実験は、正常マウス、並びに、担癌マウスに対して行った。その手順は以下のとおりである。各種の糖鎖修飾リポソーム、並びに、糖鎖修飾無しのリポソームの各組織への分布量の測定は、正常マウス、並びに、Ｅｈｒｌｉｃｈ  ａｓｃｉｔｅｓ  ｔｕｍｏｒ（ＥＡＴ）細胞（約２×１０７個）を雄性ｄｄＹマウス（７週齢）大腿部皮下に移植し、癌組織が０．３〜０．６ｇに発育（６〜８日後）したものを本実験に用いた。これらのマウスに実施例８により１２５Ｉ標識した各種リポソーム０．２ｍｌを蛋白質量として３μｇ／一匹の割合となるように経口投与、又は、尾静脈に注入投与し、１０分、又は、５分後に組織（血液、肝臓、心臓、肺、膵臓、脳、癌組織、癌の周囲の炎症組織、小腸、大腸、リンパ節、骨髄、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉）を摘出、各組織の放射能をガンマカウンタ（Ａｌｏｋａ  ＡＲＣ  ３００）で測定した。なお、各組織への放射能分布量は、投与全放射能に対する各組織１ｇ当たりの放射能の割合（％投与量／ｇ組織）を計測した。そして、糖鎖修飾リポソーム、並びに、糖鎖の代わりにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンを結合させたリポソーム（基準リポソーム）を経口投与、又は静脈投与後に、血中又は各組織に送達された糖鎖修飾リポソームでの４匹の計測平均値と基準リポソームでの４匹の計測平均値との倍率を計算して、経口投与後の血中への移行性、並びに、各臓器への標的指向性を表２０Ａの定義に従って評価した。この結果を以下の表２０Ｂに示す。
【０４１２】
【表２０Ａ】
2007018275.tif 000074
【０４１３】
【表２０Ｂ】
2007018275.tif 000075
【０４１４】
表１４並びに表１５Ｂは、各種の放射性糖鎖修飾リポソームの経口投与並びに静注投与でのマウスにおける各組織への放射性糖鎖リポソームの集積効果を示す評価結果である。これらの結果は、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである。従って、本発明の糖鎖修飾リポソームは、腫瘍などの標的組織での集積を可視化できるので、治療用薬剤送達媒体としての利用とともに、研究試薬や診断薬などとしての利用への送達媒体をも提供する。【０４１５】
（実施例１１．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームの調製）
リポソームは既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、改良型コール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇを添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）１０ｍｌに懸濁、超音波処理し、透明なミセル懸濁液１０ｍｌを得た。このミセル懸濁液にＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）で３ｍｇ／１ｍｌになるよう完全に溶解した抗癌剤ドキソルビシンを撹拌しながらゆっくりと滴下して均一に混合した後、このドキソルビシン入りミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）を用いた限外濾過にかけ均一な抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子懸濁液１０ｍｌを調製した。【０４１６】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４１７】
（実施例１２．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム脂質膜面上の親水性化処理）
実施例１１で調製した抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム溶液１０ｍ１をＸＭ３００膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）を用いた限外濾過にかけ溶液のｐＨを８．５にした。次に、架橋試薬ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ３；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１０ｍ１を加え、２５℃で２時間攪拌した。その後、更に７℃で一晩撹拌してリポソーム膜上の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンとＢＳ３との化学結合反応を完結した。そして、このリポソーム液をＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過にかけた。次に、ＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）１ｍｌに溶かしたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン４０ｍｇをリポソーム液１０ｍｌに加えて、２５℃で２時間撹拌後、７℃で一晩撹拌してリポソーム膜上の脂質に結合したＢＳ３とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとの化学結合反応を完結した。これにより、抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン上にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの水酸基が配位して水和親水性化された。【０４１８】
（実施例１３．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合）
リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合は、既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、カップリング反応法を用いて行った。すなわち、この反応は２段階化学反応で行い、まずはじめに、実施例２で得られた１０ｍｌのリポソーム膜面上に存在するガングリオシドを１ｍ１のＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）に溶かしたメタ過ヨウ素酸ナトリウム４３ｍｇを加えて室温で２時間撹拌して過ヨウ素酸酸化した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ８．０）で限外濾過することにより酸化されたリポソーム１０ｍｌを得た。このリポソーム液に、２０ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を加えて２５℃で２時間撹拌し、次にＰＢＳ（ｐＨ８．０）に２Ｍ  ＮａＢＨ３ＣＮ  １００μ１を加えて１０℃で一晩撹拌してリポソーム上のガングリオシドとＨＳＡとのカップリング反応でＨＳＡを結合した。そして、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過をした後、ＨＳＡ結合抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液１０ｍｌを得た。【０４１９】
（実施例１４．糖鎖の調整）
実施例４と同様の手順により糖鎖を調整した。【０４２０】
（実施例１５．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への糖鎖の結合とリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理）
実施例１４において調整した各糖鎖５０μｇを０．２５ｇのＮＨ４ＨＣＯ３を溶かした０．５ｍｌ水溶液に加え、３７℃で３日間攪拌した後、０．４５μｍのフィルターで濾過して糖鎖の還元末端のアミノ化反応を完結して各糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを得た。次に、実施例１３で得た抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジル）プロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液に上記の糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰに各糖鎖の結合を行った。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をしたリポソームを得た。その結果、各糖鎖とヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をした抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ）が得られた。【０４２１】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４２２】
（比較例．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上へのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの結合によるリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理）
比較試料としての抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームを調製するために、実施例１３で得た抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジル）プロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理リポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間撹拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をした比較試料としての抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム（略称：ＤＸ−ＴＲＩＳ）２ｍ１（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ）が得られた。【０４２３】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４２４】
（実施例１６．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上の親水性化処理）
実施例１５の手段により調製された糖鎖が結合したリポソームについて、以下の手順によりリポソーム上のＨＳＡ蛋白質表面の親水性化処理を行った。糖鎖結合リポソーム２ｍｌに、別々に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間、その後７℃で一晩攪拌した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過し未反応物を除去して、最終産物である親水性化処理された糖鎖結合リポソーム複合体各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）を得た。【０４２５】
（実施例１７．各種の糖鎖結合リポソーム複合体によるレクチン結合活性阻害効果の測定）
実施例１６の手段により調製した各糖鎖結合リポソーム複合体のインビトロでのレクチン結合活性は、常法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．（１９９９）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ
Ｓｙｓｔｅｍ，１４，４９８−５０５）に従いレクチン固定化マイクロプレートを用いた阻害実験で測定した。すなわち、レクチン（Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）を９６穴マイクロプレートに固定化した。このレクチン固定化プレートに、比較リガンドであるビオチン化したフコシル化フェチュイン０．１μｇとともに、濃度の異なる各種の糖鎖結合リポソーム複合体（蛋白質量として、０．０１μｇ、０．０４μｇ、０．１１μｇ、０．３３μｇ、１μｇ）を加え、４℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）結合ストレプトアビジンを添加し、さらに４℃で１時間インキュベート、ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を添加して室温で静置、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で測定した。フコシル化フェチュインのビオチン化は、ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ｂｉｏｔｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）処理後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）により精製した。ＨＲＰＯ結合ストレプトアビジンは、ＨＲＰＯの酸化とＮａＢＨ３ＣＮを用いた還元アミノ化法によるストレプトアビジンの結合により調製した。この測定結果を以下の表２１に示す。【０４２６】
【表２１Ａ】
2007018275.tif 000076
【０４２７】
【表２１Ｂ】
2007018275.tif 000077
【０４２８】
【表２１Ｃ】
2007018275.tif 000078
【０４２９】
【表２１Ｄ】
2007018275.tif 000079
【０４３０】
【表２１Ｅ】
2007018275.tif 000080
【０４３１】
【表２１Ｆ】
2007018275.tif 000081
【０４３２】
特に、関連が深い炎症部位および腫瘍部位について、さらに細かく調査した。【０４３３】
炎症部位【０４３４】
【表２１Ｇ】
2007018275.tif 000082
【０４３５】
（腫瘍部位）【０４３６】
【表２１Ｈ】
2007018275.tif 000083
【０４３７】
（実施例１８．クロラミンＴ法による各種糖鎖結合リポソームの１２５Ｉ標識）
クロラミンＴ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）溶液並びに二亜硫酸ナトリウム溶液をそれぞれ３ｍｇ／ｍｌならびに５ｍｇ／ｍｌとなるように用事調製して用いた。実施例１６により調製した糖鎖結合リポソームならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソームを各５０μｌずつ別々にエッペンチューブに入れ、続いて１２５Ｉ−ＮａＩ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）を１５μｌ、クロラミンＴ溶液を１０μｌ加え反応させた。５分ごとにクロラミンＴ溶液１０μｌを加え、この操作を２回繰り返した後１５分後に還元剤として二亜硫酸ナトリウム１００μｌを加え、反応を停止させた。次に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０（Ｐｈｒａｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｓｗｅｄｅｎ）カラムクロマト上に乗せ、ＰＢＳで溶出、標識体を精製した。最後に、非標識−リポソーム複合体を添加して比活性（４×１０６  Ｂｑ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を調整して１２５Ｉ標識リポソーム液を得た。【０４３８】
（実施例１９．各種の糖鎖結合リポソーム複合体のマウスでの腸管から血中への移行量の測定）
一昼夜水分以外絶食した雄性ｄｄＹマウス（７週齢）に、実施例１７により１２５Ｉ標識された糖鎖結合ならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソーム複合体０．２ｍｌをタンパク質量として３μｇ／一匹の割合になるように、マウス用経口ゾンデで腸管内に強制投与した後、１０分後にネンブタール麻酔下で下大動脈より血液１ｍｌを採血した。そして、血中の１２５Ｉ放射能をガンマーカウンター（Ａｌｏｌａ  ＡＲＣ３００）で測定した。さらに、各種のリポソーム複合体の生体内安定性を調べる目的で、各血液の血清をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０で再クロマトしたが、いずれも大半の放射能が高分子量のボイドフラクションにみられ、各種のリポソーム複合体は生体内においても安定性を有していた。なお、腸管から血中への放射能移行量は、投与全放射能に対する血液１ｍｌ当たりの放射能の割合（％投与量／ｍｌ血液）で表示した。この結果を表２２に示す。【０４３９】
【表２２】
2007018275.tif 000084
【０４４０】
（実施例２０．糖鎖修飾リポソームの生体内動態検討）
投与したリポソームは、上記実施例で作製した糖鎖結合リポソームのうち、糖鎖結合リポソーム（以下、糖鎖＋リポソーム）および糖鎖の結合していないリポソーム（以下、糖鎖−リポソーム）である。正常マウスに対し、糖鎖＋リポソーム、糖鎖−リポソームをそれぞれ経口投与し、マウスの各臓器へのリポソームの集積を評価することを目的として行う。【０４４１】
あらかじめ調製したリポソーム溶液をマウスに経口投与し、その後、全各臓器を摘出する。各臓器は１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ溶液と、ＨＧ３０ホモゲナイザー（日立工機）を用いて組織ホモジネートとして調製の後、１００％メタノールとクロロホルムを用いて組織ホモジネでトに含まれるリポソームを抽出する。リポソーム量は、リポソームに結合したＦＩＴＣの蛍光強度を蛍光マイクロプレートリーダーＢｉｏｌｕｍｉｎ９６０（モレキュラーダイナミック社）を用いて行い、４９０ｎｍのｅｘｉｔａｔｉｏｎと５２０ｎｍのｅｍｉｓｓｉｏｎで計測する。結果は、経口投与については、経口のみについてのデータを示し、他の臓器については、静脈注射のデータを示す。経口についても、経口投与により血中に移行した媒体は静脈注射と同様の傾向を示した。【０４４２】
【表２３】
2007018275.tif 000085
【０４４３】
（実施例２１：抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームの調製）  リポソームはコール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルフォスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇ添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）１０ｍｌに懸濁、超音波処理し、透明なミセル懸濁液１０ｍ１を得た。このミセル懸濁液にＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）で３ｍｇ／１ｍｌになるよう完全に溶解した抗癌剤ドキソルビシンを撹拌しながらゆっくりと滴下して均一に混合した後、このドキソルビシン入りミセル懸濁液をＰＭ１０膜（ＡｍｉｃｏｎＣｏ．，ＵＳＡ）とＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）を用いた限外濾過にかけ均一な抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子懸濁液１０ｍｌを調製した。得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼ一夕電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（ＭｏｄｅｌＮａｎｏＺＳ，ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＬｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４４４】
（実施例２２Ａ．各種の糖鎖結合リポソーム複合体の経口投与による担癌マウスでの制癌効果の測定）
（１）担癌マウスにおける尾静注投与による制癌効果
担癌マウスの作成は、ｄｄＹ系７週齢マウス（雄性、体重３５〜４０ｇ）の背部毛髪を電動バリカンで剃り、皮下にＥｈｒｌｉｃｈ  Ａｓｃｉｔｅｓ  Ｔｕｍｏｒ（細胞約５ｘ１０６個／匹）を移殖した。１０日間程飼育・観察を行い、癌細胞の生着したものを選び実験に用いた。薬物投与並びに癌の体積測定は、投与薬剤として封入されたドキソルビシン濃度を０．０６２５ｍｇ／ｋｇに調製したドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与群とコントロールとして生理食塩水投与群の２種類とし、担癌マウスに尾静脈投与を週４回、２週間投与した。癌細胞移植後１０日目から、週２回の頻度で、４週間、ノギスを用いて癌の長径と短径を測定し、以下の式より癌の増殖体積を算出した。【０４４５】
癌体積（ｍｍ３）＝（長径＋短径２）／２
この結果を図１に示す。ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与群とコントロールとして生理食塩水投与群の腫瘍の増殖体積の変化を各群で比較した結果、極めて少ない投与量にもかかわらず、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与群の癌の増殖抑制効果は、顕著で投与開始から癌の増殖が抑えられた。最終測定日である移植３４日目における癌組織の大きさ（体積）を比較すると、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与群は生理食塩水投与群と比較し有意な抑制作用がみられた。これらの結果は、この制癌剤封入・糖鎖修飾リポソームが、極めて少ない薬剤投与量で強い制癌効果を有することを示すものである（図７）。【０４４６】
図７は、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５の尾静注投与での担癌マウスにおける制癌効果を示す図である。
（２）蛍光顕微鏡を用いた尾静注投与での癌組織へのドキソルビシンの移行の観察
蛍光顕微鏡による観察は、担癌マウスの癌部位の皮膚を切除し、癌組織を露出させスライドガラスに癌部位を固定させた。蛍光顕微鏡のステージ上にマウスを乗せて癌組織周囲血管の探索を行い、血管像が明瞭に観察できる位置を決定した。脂質濃度として２ｍｇ／ｍＬ、ドキソルビシン濃度として０．０２５ｍｇ／ｍＬとしたドキソルビシン封入リポソーム番号１５５を０．２ｍｌ尾静脈内に投与した。投与直後からの癌組織へのドキソルビシンの集積を蛍光顕微鏡で観察した。修飾糖前投与による阻害実験については、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与５分前に修飾糖鎖（α１−６マンノビオース）溶液（６０ｍＭ）を０．２ｍＬ投与し、上記と同様な方法により観察を行った。その結果を写真１に示す。ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与後、直ちに癌組織周辺血管でのドキソルビシンの蛍光が観察された。投与後５分では血管壁部にドキソルビシンの赤色蛍光が観察された。その後、時間の経過と共に組織へのドキソルビシンの移行が観察され、２時間後には、癌血管周囲の腫瘍組織内部にドキソルビシンの蛍光がみられた。修飾糖鎖の前投与により、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５の腫瘍組織への集積が完全にブロックされて、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５投与直後からの血管壁からの蛍光は見られなかった。これらの結果は、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである（図８）。【０４４７】
図８は、ドキソルビシン封入リポソーム番号１５５の尾静注投与での担癌マウスにおける腫瘍血管から腫瘍組織並びに細胞へのドキソルビシンの集積効果を示す蛍光顕微鏡写真である。左側並びに右側の画像は、同一腫瘍組織・細胞のそれぞれ緑色並びに赤色の蛍光顕微鏡写真であって、緑色（左側の画像）は、血管、組織並びに細胞の自然蛍光を示し、赤色（右側の画像）は、蛍光物質であるドキソルビシンの腫瘍組織並びに癌細胞中での蛍光を示す。これらの結果は、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである。従って、本発明の糖鎖修飾リポソームは、腫瘍などの標的組織での集積を可視化できるので、治療用薬剤送達媒体としての利用とともに、研究試薬や診断薬などとしての利用への送達媒体をも提供する。【０４４８】
（実施例２２Ｂ：各種の糖鎖結合リポソーム複合体の経口投与による担癌マウスでの制癌効果の測定）
（１）担癌マウスにおける経口投与による制癌効果
担癌マウスの作成は、ｄｄＹ系７週齢マウス（雄性、体重３５〜４０ｇ）の背部毛髪を電動バリカンで剃り、皮下にＥｈｒｌｉｃｈ  Ａｓｃｉｔｅｓ  Ｔｕｍｏｒ（細胞約５ｘ１０６個／匹）を移殖した。１０日間程飼育・観察を行い、癌細胞の生着したものを選び実験に用いた。薬物投与並びに癌の体積測定は、投与薬剤として封入されたドキソルビシン濃度を０．３７５ｍｇ／ｋｇに調製したドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与群とコントロールとして生理食塩水投与群の２種類とし、担癌マウスに経口投与を週４回、２週間投与した。癌細胞移植後１０日目から、週２回の頻度で、４週間、ノギスを用いて癌の長径と短径を測定し、以下の式より癌の増殖体積を算出した。癌体積（ｍｍ３）＝（長径＋短径２）／２  この結果を図１に示す。ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与群とコントロールとして生理食塩水投与群の腫瘍の増殖体積の変化を各群で比較した結果、極めて少ない投与量にもかかわらず、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与群の癌の増殖抑制効果は、顕著で投与開始から癌の増殖が抑えられた。最終測定日である移植３４日目における癌組織の大きさ（体積）を比較すると、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与群は生理食塩水投与群と比較し有意な抑制作用がみられた。これらの結果は、この制癌剤封入・糖鎖修飾リポソームが、極めて少ない薬剤投与量で強い制癌効果を有することを示すものである（図９）。【０４４９】
図９は、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７の経口投与での担癌マウスにおける制癌効果を示す図である。
（２）蛍光顕微鏡を用いた経口投与での癌組織へのドキソルビシンの移行の観察
蛍光顕微鏡による観察は、担癌マウスの癌部位の皮膚を切除し、癌組織を露出させスライドガラスに癌部位を固定させた。蛍光顕微鏡のステージ上にマウスを乗せて癌組織周囲血管の探索を行い、血管像が明瞭に観察できる位置を決定した。脂質濃度として４ｍｇ／ｍＬ、ドキソルビシン濃度として０．０５０ｍｇ／ｍＬとしたドキソルビシン封入リポソーム番号２３７を０．３ｍｌ経口投与した。投与直後からの癌組織へのドキソルビシンの集積を蛍光顕微鏡で観察した。修飾糖前投与による阻害実験については、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与５分前に修飾糖鎖（α１−３マンノビオース）溶液（６０ｍＭ）を０．３ｍＬ投与し、上記と同様な方法により観察を行った。その結果を写真１に示す。ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与後、時間の経過と共に組織へのドキソルビシンの移行が観察され、６時間後には、癌血管周囲の腫瘍組織内部にドキソルビシンの蛍光がみられた。修飾糖鎖の前投与により、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７の腫瘍組織への集積が完全にブロックされて、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７投与直後からの血管壁からの蛍光は見られなかった。これらの結果は、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである（図１０）。【０４５０】
図１０は、ドキソルビシン封入リポソーム番号２３７の尾静注投与での担癌マウスにおける腫瘍血管から腫瘍組織並びに細胞へのドキソルビシンの集積効果を示す蛍光顕微鏡写真である。左側並びに右側の画像は、同一腫瘍組織・細胞のそれぞれ緑色並びに赤色の蛍光顕微鏡写真であって、緑色（左側の画像）は、血管、組織並びに細胞の自然蛍光を示し、赤色（右側の画像）は、蛍光物質であるドキソルビシンの腫瘍組織並びに癌細胞中での蛍光を示す。これらの結果は、この糖鎖修飾リポソームがリガンドとしての糖鎖の機能を活用して、疾患患部や各種臓器へ薬物や蛍光物質や放射標識物質などをアクティブターゲティングにより高効率に集積・送達することを示すものである。従って、本発明の糖鎖修飾リポソームは、腫瘍などの標的組織での集積を可視化できるので、治療用薬剤送達媒体としての利用とともに、研究試薬や診断薬などとしての利用への送達媒体をも提供する。【０４５１】
（実施例２３：ローリングモデルに基づく投与に適した糖鎖修飾リポソームの調製）
実施例７に基づいて決定されたＥ−セレクチンでの測定結果を、以下に本発明のローリングモデルを用いて、模式化する。【０４５２】
代表的なＩＣ１０、ＩＣ２０、ＩＣ３０、ＩＣ４０、ＩＣ５０、ＩＣ６０について計算するために用いたグラフを示す（代表的には、図２〜６を参照）。【０４５３】
次に、これらで求めたＩＣ１０などをインビボ親和性と比較した。その結果を以下の表に示す。表には、代表的に、腫瘍および炎症部位についての結果を載せる。【０４５４】
その結果、例えば、代表的にＥ−セレクチンの場合約ＩＣ３０〜ＩＣ３１の間に強結合と弱結合との閾値があることが明らかになった。他のレクチンでも同様の閾値があることが期待される。【０４５５】
さらに、所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下（好ましくは、５×１０−１０以下）であり、かつ、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上（好ましくは、５×１０−８Ｍ以上、１０−８Ｍ以上）であることも明らかになった。【０４５６】
Ｅ−セレクチンは、経口投与、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、肝臓、心臓、膵臓、炎症部位および癌部位において発現が顕著であり、特に、炎症部位および癌部位において顕著で特徴的であることから、これらの臓器に対するインビトロの簡易ローリングモデルアッセイにおいてＥ−セレクチンを使用し得ることが明らかになった。これらの結果を元に、以下、送達媒体を作製する。【０４５７】
（１．リポソームの調製）
リポソームは既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、改良型コール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇを添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ  ８．４）３ｍｌに懸濁、超音波処理して、透明なミセル懸濁液を得た。さらに、ミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）を用いた限外濾過にかけ均一リポソーム（平均粒径１００ｎｍ）１０ｍｌを調製した。【０４５８】
（２．リポソーム脂質膜面上の親水性化処理）
上記１．において調製したリポソーム溶液１０ｍｌをＸＭ３００膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）を用いた限外濾過にかけ溶液のｐＨを８．５にした。次に、架橋試薬ｂｉｓ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ３；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１０ｍｌを加え、２５℃で２時間攪拌した。その後、更に７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンとＢＳ３との化学結合反応を完結した。そして、このリポソーム液をＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過にかけた。次に、ＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）１ｍｌに溶かしたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン４０ｍｇをリポソーム液１０ｍｌに加えて、２５℃で２時間攪拌後、７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質に結合したＢＳ３とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとの化学結合反応を完結した。これにより、リポソーム膜の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン上にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの水酸基が配位して水和親水性化された。【０４５９】
（３．リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合）
リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合は、既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、カップリング反応法を用いて行った。すなわち、この反応は２段階化学反応で行い、はじめに、上記２で得られた１０ｍｌのリポソーム膜面上に存在するガングリオシドを１ｍｌのＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ  ８．４）に溶かしたメタ過ヨウ素酸ナトリウム４３ｍｇを加えて室温で２時間攪拌して過ヨウ素酸酸化した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．０）で限外濾過することにより酸化されたリポソーム１０ｍｌを得た。このリポソーム液に、２０ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を加えて２５℃で２時間攪拌し、次にＰＢＳ（ｐＨ  ８．０）に２Ｍ  ＮａＢＨ３ＣＮ  １００μｌを加えて１０℃で一晩攪拌してリポソーム上のガングリオシドとＨＳＡとのカップリング反応でＨＳＡを結合した。そして、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過をした後、ＨＳＡ結合リポソーム液１０ｍｌを得た。【０４６０】
（４．糖鎖の調整）
糖鎖を実施例４と同じ手順で調整した。【０４６１】
（５．１．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への糖鎖の結合）
４．において調整した各糖鎖５０μｇを、０．２５ｇのＮＨ４ＨＣＯ３を溶かした０．５ｍｌ水溶液に加え、３７℃で３日間攪拌した後、０．４５μｍのフィルターで濾過して糖鎖の還元末端のアミノ化反応を完結して、各糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを得た。次に、実施例３で得たリポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液に上記のグリコシルアミン化合物５０μｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、表２に示される糖鎖とヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリポソーム各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）が得られた。特に明記しない限り、これらの糖鎖のリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミンへの結合は、実施例５と同様の方法および条件で行った。【０４６２】
（５．２．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上へのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの結合）
比較試料としてのリポソームを調製するために、実施例３で得たリポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩攪拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。この工程で既に大過剰である１３ｍｇのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが存在するのでリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上の親水性化処理も同時に完結した。その結果、最終産物である親水性化処理されたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合した比較試料としてのリポソーム（略称：ＴＲＩＳ）２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）が得られた。【０４６３】
（６．リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上の親水性化処理）
上記５．１の手段により調製された糖鎖が結合したリポソームについて、それぞれ別々に以下の手順によりリポソーム上のＨＳＡ蛋白質表面の親水性化処理を行った。糖鎖結合リポソーム２ｍｌに、別々に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間、その後７℃で一晩攪拌した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ
７．２）で限外濾過し未反応物を除去して、最終産物である親水性化処理された糖鎖結合リポソーム複合体各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）を得た。【０４６４】
（７．）
上述のようにして作製されたE−セレクチンに対応する臓器への送達に適合した組成物
を作製することができた。これらの組成物は、実際に上記実施例のように試験すると、インビボにおいて所望の臓器に首尾よく送達されることが分かる。【０４６５】
（実施例２５．経口投与に適した抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームの調製）
E-セレクチンは、経口投与による抗癌剤の指標でもあることから、ローリングモデルに基づいて最適な化合物について、以下に抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームを調製し、実際に抗癌作用があるかどうか確認した。【０４６６】
（１．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームの調製）
リポソームは既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、改良型コール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇを添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）１０ｍｌに懸濁、超音波処理し、透明なミセル懸濁液１０ｍｌを得た。このミセル懸濁液にＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）で３ｍｇ／１ｍｌになるよう完全に溶解した抗癌剤ドキソルビシンを撹拌しながらゆっくりと滴下して均一に混合した後、このドキソルビシン入りミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）を用いた限外濾過にかけ均一な抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子懸濁液１０ｍｌを調製した。【０４６７】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４６８】
（２．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム脂質膜面上の親水性化処理）
上記１で調製した抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム溶液１０ｍ１をＸＭ３００膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）を用いた限外濾過にかけ溶液のｐＨを８．５にした。次に、架橋試薬ビス（スルホスクシンイミジル）スベレート（ＢＳ３；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１０ｍ１を加え、２５℃で２時間攪拌した。その後、更に７℃で一晩撹拌してリポソーム膜上の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンとＢＳ３との化学結合反応を完結した。そして、このリポソーム液をＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過にかけた。次に、ＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）１ｍｌに溶かしたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン４０ｍｇをリポソーム液１０ｍｌに加えて、２５℃で２時間撹拌後、７℃で一晩撹拌してリポソーム膜上の脂質に結合したＢＳ３とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとの化学結合反応を完結した。これにより、抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜の脂質ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン上にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの水酸基が配位して水和親水性化された。【０４６９】
（３．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合）
リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合は、既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、カップリング反応法を用いて行った。すなわち、この反応は２段階化学反応で行い、まずはじめに、上記２で得られた１０ｍｌのリポソーム膜面上に存在するガングリオシドを１ｍ１のＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）に溶かしたメタ過ヨウ素酸ナトリウム４３ｍｇを加えて室温で２時間撹拌して過ヨウ素酸酸化した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ８．０）で限外濾過することにより酸化されたリポソーム１０ｍｌを得た。このリポソーム液に、２０ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を加えて２５℃で２時間撹拌し、次にＰＢＳ（ｐＨ８．０）に２Ｍ
ＮａＢＨ３ＣＮ  １００μ１を加えて１０℃で一晩撹拌してリポソーム上のガングリオシドとＨＳＡとのカップリング反応でＨＳＡを結合した。そして、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過をした後、ＨＳＡ結合抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液１０ｍｌを得た。【０４７０】
（４．糖鎖の調整）
実施例４と同様の手順により糖鎖を調整した。【０４７１】
（５．１．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への糖鎖の結合）
上記４において調整した各糖鎖５０μｇを０．２５ｇのＮＨ４ＨＣＯ３を溶かした０．５ｍｌ水溶液に加え、３７℃で３日間攪拌した後、０．４５μｍのフィルターで濾過して糖鎖の還元末端のアミノ化反応を完結して各糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを得た。次に、実施例１３で得た抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジル）プロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液に上記の糖鎖のグリコシルアミン化合物５０μｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰに各糖鎖の結合を行った。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間攪拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をしたリポソームを得た。その結果、各糖鎖とヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をした抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ）が得られた。【０４７２】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４７３】
（５．２．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上へのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの結合）
比較試料としての抗癌剤ドキソルビシン封入リポソームを調製するために、実施例１３で得た抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム液の一部分１ｍｌに架橋試薬３，３’−ジチオビス（スルホスクシンイミジル）プロピオネート（ＤＴＳＳＰ；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１ｍｇを加えて２５℃で２時間、続いて７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ８．５）で限外濾過してＤＴＳＳＰがリポソーム上のＨＳＡに結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理リポソーム１ｍｌを得た。次に、このリポソーム液にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｗａｋｏ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間撹拌し、その後７℃で一晩撹拌し、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．２）で限外濾過してリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン上のＤＴＳＳＰにグリコシル化アミン化合物の結合を行った。その結果、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとヒト血清アルブミンとリポソームとが結合したリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理をした比較試料としての抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム（略称：ＤＸ−ＴＲＩＳ）２ｍ１（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ）が得られた。【０４７４】
得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）の抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（Ｍｏｄｅｌ  Ｎａｎｏ  ＺＳ，Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌｔｄ．，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。【０４７５】
（６．抗癌剤ドキソルビシン封入リポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への糖鎖の結合とリンカー蛋白質（ＨＳＡ）の親水性化処理）
上記５．１の手段により調製された糖鎖が結合したリポソームについて、以下の手順によりリポソーム上のＨＳＡ蛋白質表面の親水性化処理を行った。糖鎖結合リポソーム２ｍｌに、別々に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン１３ｍｇを加えて、２５℃で２時間、その後７℃で一晩攪拌した後、ＸＭ３００膜とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）で限外濾過し未反応物を除去して、最終産物である親水性化処理された糖鎖結合リポソーム複合体各２ｍｌ（総脂質量２ｍｇ、総蛋白量２００μｇ、平均粒径１００ｎｍ）を得た。【０４７６】
（７．各種の糖鎖結合リポソーム複合体によるレクチン結合活性阻害効果の測定）
上記５．1および５．２の手段により調製した各糖鎖結合リポソーム複合体のインビト
ロでのレクチン結合活性は、常法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．（１９９９）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，１４，４９８−５０５）に従いレクチン固定化マイクロプレートを用いた阻害実験で測定した。すなわち、レクチン（Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）を９６穴マイクロプレートに固定化した。このレクチン固定化プレートに、比較リガンドであるビオチン化したフコシル化フェチュイン０．１μｇとともに、濃度の異なる各種の糖鎖結合リポソーム複合体（蛋白質量として、０．０１μｇ、０．０４μｇ、０．１１μｇ、０．３３μｇ、１μｇ）を加え、４℃で２時間インキュベートした。ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰＯ）結合ストレプトアビジンを添加し、さらに４℃で１時間インキュベート、ＰＢＳ（ｐＨ  ７．２）で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ基質を添加して室温で静置、４０５ｎｍの吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ）で測定した。フコシル化フェチュインのビオチン化は、ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ｂｉｏｔｉｎ  ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）処理後、Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ−３０（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）により精製した。ＨＲＰＯ結合ストレプトアビジンは、ＨＲＰＯの酸化とＮａＢＨ３ＣＮを用いた還元アミノ化法によるストレプトアビジンの結合により調製した。【０４７７】
（８．クロラミンＴ法による各種糖鎖結合リポソームの１２５Ｉ標識）
クロラミンＴ（Ｗａｋｏ  Ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，Ｊａｐａｎ）溶液並びに二亜硫酸ナトリウム溶液をそれぞれ３ｍｇ／ｍｌならびに５ｍｇ／ｍｌとなるように用事調製して用いた。６により調製した糖鎖結合リポソームならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソームを各５０μｌずつ別々にエッペンチューブに入れ、続いて１２５Ｉ−ＮａＩ（ＮＥＮ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔ，Ｉｎｃ．ＵＳＡ）を１５μｌ、クロラミンＴ溶液を１０μｌ加え反応させた。５分ごとにクロラミンＴ溶液１０μｌを加え、この操作を２回繰り返した後１５分後に還元剤として二亜硫酸ナトリウム１００μｌを加え、反応を停止させた。次に、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０（Ｐｈｒａｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｓｗｅｄｅｎ）カラムクロマト上に乗せ、ＰＢＳで溶出、標識体を精製した。最後に、非標識−リポソーム複合体を添加して比活性（４×１０６  Ｂｑ／ｍｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）を調整して１２５Ｉ標識リポソーム液を得た。【０４７８】
（９．各種の糖鎖結合リポソーム複合体のマウスでの腸管から血中への移行量の測定）
一昼夜水分以外絶食した雄性ｄｄＹマウス（７週齢）に、実施例１７により１２５Ｉ標識された糖鎖結合ならびにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン結合リポソーム複合体０．２ｍｌを蛋白質量として３μｇ／一匹の割合になるように、マウス用経口ゾンデで腸管内に強制投与した後、１０分後にネンブタール麻酔下で下大動脈より血液１ｍｌを採血した。そして、血中の１２５Ｉ放射能をガンマーカウンター（Ａｌｏｌａ  ＡＲＣ３００）で測定した。さらに、各種のリポソーム複合体の生体内安定性を調べる目的で、各血液の血清をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−５０で再クロマトしたが、いずれも大半の放射能が高分子量のボイドフラクションにみられ、各種のリポソーム複合体は生体内においても安定性を有していた。なお、腸管から血中への放射能移行量は、投与全放射能に対する血液１ｍｌ当たりの放射能の割合（％投与量／ｍｌ血液）で表示した。【０４７９】
この結果、経口投与に最適な糖鎖の種類および結合密度が決定される。【０４８０】
（実施例２２および２３のまとめ）
ローリングモデルによって作製された送達媒体の標的指向性は、インビボでのアッセイ結果がインビトロで忠実に再現された。さらに糖鎖の結合密度を考慮することにより、より適切な送達媒体を選択することができた。この標的指向性は、送達媒体が薬物を含んでいても、含んでいなくても変更されなかった。【０４８１】
（実施例２４．ビタミンＡ封入リポソームの調製と封入薬物定量と保存安定性）
ローリングモデルによって適切であることが明らかになった送達媒体を用いて、次に、栄養素の送達を行った。リポソームはコール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、ガングリオシドおよびジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンをモル比でそれぞれ３５：４０：５：１５：５の割合で合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇ添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解した。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得た。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）３ｍｌに懸濁、超音波処理し、透明なミセル懸濁液１０ｍｌを得た。このミセル懸濁液にＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ８．４）で３ｍｇ／１ｍｌになるよう完全に溶解したビタミンＡを撹拌しながらゆっくりと滴下して均一に混合した後、このビタミンＡ入りミセル懸濁液をＰＭ１０膜（ＡｍｉｃｏｎＣｏ．，ＵＳＡ）とＴＡＰＳ緩衝生理食塩液（ｐＨ８．４）を用いた限外濾過にかけ均一なビタミンＡ封入リポソーム粒子懸濁液１０ｍｌを調製した。得られた生理食塩懸濁液中（３７℃）のビタミンＡ封入リポソーム粒子の粒子径とゼータ電位をゼータ電位・粒子径・分子量測定装置（ＭｏｄｅｌＮａｎｏＺＳ，Ｍａｌｖｅｒｎ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＬｔｄ，，ＵＫ）により測定した結果、粒子径は５０〜３５０ｎｍ、ゼータ電位は−３０〜−１０ｍＶであった。このリポソームの封入薬物量を吸光度２６０ｎｍで測定するとおよそ２８０μｇ／ｍ１の濃度でビタミンＡが封入されていることがわかった。このビタミンＡ封入リポソームは、冷蔵庫中に１年間保存した後にも沈殿や凝集を起こすことなく安定であった。【０４８２】
このようなリポソームを用いて、所望の部位に送達することができるリポソームを作製することができた。【０４８３】
（実施例２５：他の細胞表面分子を用いたローリングモデル）
E-セレクチン以外の細胞表面分子として、Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類を用いて、同様のローリングモデルが作成可能かどうかを確認する。【０４８４】
Ｐ−セレクチン、Ｌ−セレクチン、ガレクチン１、ガレクチン２、ガレクチン３、ガレクチン４、ガレクチン５、ガレクチン６、ガレクチン７、ガレクチン８、ガレクチン９、ガレクチン１０、ガレクチン１１、ガレクチン１２、ガレクチン１３、ガレクチン１４、マンノース６リン酸受容体、カルネキシン、カルレティキュリン、ＥＲＧＩＣ−５３、ＶＩＰ５３、インターロイキン類、インターフェロン類および増殖因子類は、市販のものまたは遺伝子工学手法を用いて製造することができる。【０４８５】
ガレクチン１は骨格筋、神経細胞、腎臓、胎盤および胸腺、ガレクチン２は腫瘍の肝臓、ガレクチン３は活性化マクロファージ、好酸球、好中球、肥満細胞、小腸、呼吸器官の上皮および感覚神経細胞、ガレクチン４は腸や口腔の上皮、ガレクチン５は赤血球や細網細胞、ガレクチン６は腸管上皮、ガレクチン７はケラチノサイト、ガレクチン８は肺、肝臓、腎臓、心臓および脳、ガレクチン９は肝臓、小腸、腎臓、リンパ組織、肺、心筋および骨格筋において発現していることから、これらの臓器への送達媒体の指標として有用である。【０４８６】
マンノース６リン酸受容体は、各細胞のトランスゴルジネットワークに分布することから、これらの細胞部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４８７】
カルネキシンは、小胞体に分布することから、これらの細胞部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４８８】
カルテティキュリンは、小胞体に分布することから、これらの細胞部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４８９】
ＥＲＧＩＣ−５３は、小胞体からシスゴルジに分布することから、これらの細胞部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９０】
ＶＩＰ３６は、小胞体から細胞膜に分布することから、これらの細胞部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９１】
Ｓｉｇｌｅｃ１（シアロアドヘシン）は、マクロファージに分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９２】
Ｓｉｇｌｅｃ２（ＣＤ２２）は、リンパ球（Ｂ細胞）に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９３】
Ｓｉｇｌｅｃ３（ＣＤ３３）は、ミエロイド細胞に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９４】
Ｓｉｇｌｅｃ４ａ（ＭＡＧ）は、末梢神経に存在することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９５】
Ｓｉｇｌｅｃ５（ミエリンタンパク質）は、単球に存在することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９６】
Ｎ−ＣＡＭは、末梢神経に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９７】
Ｐｏ（哺乳類の末梢ミエリン、成熟シュワン細胞上に存在する細胞間接着因子）は、末梢神経に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９８】
Ｌ−セレクチンは、白血球に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０４９９】
Ｐ−セレクチンは、血管内皮細胞に存在することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５００】
マンノース結合タンパク質は、リンパ球（ナチュラルキラー細胞）に存在することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０１】
アシアロ糖タンパク質受容体は、肝臓することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０２】
マクロファージマンノース受容体は、マクロファージに分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０３】
アンチトロンビン（血液凝固因子）は血液に存在することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０４】
ＦＧＦは血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０５】
インターロイキン２（ＩＬ−２）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０６】
インターロイキン１α（ＩＬ−１α）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０７】
インターロイキン１β（ＩＬ−１β）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０８】
インターロイキン３（ＩＬ−３）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５０９】
インターロイキン６（ＩＬ−６）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５１０】
インターロイキン７（ＩＬ−７）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５１１】
腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）は、血液に分布することから、これらの部位へ送達する送達媒体の指標として有用である。【０５１２】
これらの細胞表面分子を実施例７に従って実験し、その結果をローリングモデルとして用いれば、対応する臓器・部位においてインビボで好ましい送達媒体を探索することが可能である。【０５１３】
本実施例において参照される細胞表面分子と臓器との関係については、以下に説明され得る。生体内の各種組織の細胞膜面上などに存在するレセプターとして、セレクチン、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＣ−ＳＧＮＲ、コレクチン、マンノース結合蛋白質等のＣ−タイプレクチン、シグレック等のＩタイプレクチン、マンノース−６−リン酸受容体などのＰタイプレクチン、Ｒタイプレクチン、Ｌタイプレクチン、Ｍタイプレクチン、ガレクチンなどの各種のレクチン（糖鎖認識蛋白質）についての研究が進んできたことから、各種の分子構造を有する糖鎖は新しいＤＤＳリガンドとして注目されてきている。【０５１４】
細胞表面分子と臓器との関係では、例えば、ヒトの組織での細胞表面分子発現が明らかとなってきているものを列挙すると以下のとおりである。
（１）血球や骨髄細胞には、アシアログリコプロテインレセプター、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１８、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３１、ＣＤ６９、ガレクチン−５、ガレクチン−１０、インターロイキン−２、マクロファージマンノースレセプター、Ｎ−ＣＡＭ（ＣＤ５６）、ＮＫＲ−Ｐ１、シアロアドヘシン；
（２）  血漿や血清には、Ｃ−リアクティブプロテイン、Ｐ３５、マンナンバインディングレクチン、セーラムアミロイドＰ；
（３）  骨や軟骨には、アグレカン；
（４）  各種組織の上皮細胞には、アシアログリコプロテインレセプター（肝臓）、Ｃ−リアクティブプロテイン（肝臓）、ガレクチン−２（腸）、ガレクチン−４とガレクチン−６（腸）、ガレクチン−７、ＨＩＰとＰＡＰ（腸、膵臓）、Ｐ３５（肝臓）、セーラムアミロイドＰコンポーネント（肝臓）、サーファクタントプロテインＡ（肺）、サーファクタントプロテインＤ（肺）；
（５）  筋肉では、サルコレクチン；
（６）  神経組織では、ブレビカン、セレベラーソルブルレクチン、ミエリンアソシエイティドグリコプロテイン、Ｎ−ＣＡＭ；
（７）  胎盤では、プラセンタＧｐ１２０レセプター；
組織非特異的に、カルレティクリン、ＣＤ４４、ＣＤ５４、ＥＲＧＩＣ−５３、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−８、ガレクチン−９、インターロイキン１、ホスホマンノシルレセプターＩ、ホスホマンノシルレセプターＩＩ、テトラネクチン、スロンボスポンジン、腫瘍壊死因子、ベルシカン；
細胞表面分子と疾患組織との関係では、炎症性疾患全般（脳炎、網脈絡膜炎、肺炎、肝炎、関節炎など）、並びに、続発的に炎症を引き起こす疾患（悪性腫瘍、リウマチ、脳梗塞、糖尿病、アルツハイマー病など）において、Ｅ−セレクチンやＰ−セレクチンなどの発現が解明されつつある。また、癌組織においては、Ｅ−セレクチンの発現が報告されている。細胞表面分子と臓器や疾患との関係については、未だに不明な点が多く、今後解明されていくことと期待される。【０５１５】
動物レクチンを一次構造で分類すると、例えば、次のような１４種類のファミリーに分けられる。
（１）Ｃ−タイプ、（２）Ｓ−タイプ（ガレクチン）、（２）Ｉ−タイプ（シグレク他）、（４）Ｐ−タイプ（ホスホマンノシルレセプター）、（５）ペントラキシン、（６）エッグレクチン、（７）カルレティキュリンやカルネキシン、（８）ＥＲＧＩＣ−５３やＶＩＰ−３６、（９）ジスコイジン、（１０）フコレクチン、（１１）アネキシンレクチン、（１２）フィコリン、（１３）タキレクチン５Ａや５Ｂ、（１４）ナメクジレクチン、そして、Ｃ−タイプのファミリーは、以下のサブファミリーに分類される。（１）ヒアレクチン、（２）アシアログリコプロテインレセプター、（３）コレクチン、（４）セレクチン、（５）ＮＫグループトランスメンブランレセプター、（６）マクロファージマンノースレセプター、（７）シングルドメインレクチン、
さらに、生物学的意義が解明されていないが、糖鎖結合活性を有するオーファンレクチン群として、以下のものが知られている。（１）アンフォテリシン、（２）ＣＤ１１ｂやＣＤ１８、（３）ＣＥＬ−ＩＩＩ、（４）コンプレメントファクターＨ、（５）エントアメーバ接着レクチン、（６）カエルシアル酸結合レクチン、（７）タキレクチン−１やタキレクチン−Ｐ、（８）タキレクチン−２、（９）タキレクチン−３、（１０）スロンボスポンジン、（１１）インターロイキン−１、（１２）インターロイキン−２、（１３）インターロイキン−３、（１４）インターロイキン−４、（１５）インターロイキン−５、（１６）インターロイキン−６、（１７）インターロイキン−７、（１８）インターロイキン−８、（１９）インターロイキン−１２、（２０）腫瘍壊死因子。【０５１６】
上記のような多種多様な動物レクチンの臓器や疾患との関連が明らかになるにつれて、本発明の送達媒体（糖鎖修飾リポソームなど）の疾患治療や診断への有用性や応用分野が広がっていくものと予測される。また、多彩な動物レクチンの生物学的意義を解明するためにも、本発明の送達媒体は研究用試薬などとして有用である。【０５１７】
（実施例２６．ガングリオシドを含まない糖鎖修飾リポソームの調製）
（１．リポソームの調製）
リポソームは既報の手法（Ｙａｍａｚａｋｉ，Ｎ．，Ｋｏｄａｍａ，Ｍ．ａｎｄ  Ｇａｂｉｕｓ，Ｈ．−Ｊ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４２，５６−６５）により、改良型コール酸透析法を用いて調製した。すなわち、ジパルミトイルホスファチジルコリン、コレステロール、ジセチルホスフェート、及びジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンを合計脂質量４５．６ｍｇになるように混合し、コール酸ナトリウム４６．９ｍｇを添加し、クロロホルム／メタノール溶液３ｍｌに溶解させる。この溶液を蒸発させ、沈殿物を真空中で乾燥させることによって脂質膜を得る。得られた脂質膜をＴＡＰＳ緩衝液（ｐＨ  ８．４）３ｍｌに懸濁、超音波処理して、透明なミセル懸濁液を得る。さらに、ミセル懸濁液をＰＭ１０膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＰＢＳ緩衝液（ｐＨ  ７．２）を用いた限外濾過にかけ均一リポソーム（平均粒径１００ｎｍ）１０ｍｌを調製する。【０５１８】
（２．リポソーム脂質膜面上の親水性化処理）
上記１．において調製したリポソーム溶液１０ｍｌをＸＭ３００膜（Ａｍｉｃｏｎ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）を用いた限外濾過にかけ溶液のｐＨを８．５にする。次に、架橋試薬ｂｉｓ（ｓｕｌｆｏｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ）ｓｕｂｅｒａｔｅ（ＢＳ３；Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｏ．，ＵＳＡ）１０ｍｌを加え、２５℃で２時間攪拌する。その後、更に７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミンとＢＳ３との化学結合反応を完結させる。そして、このリポソーム液をＸＭ３００膜とＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）で限外濾過にかける。次に、ＣＢＳ緩衝液（ｐＨ  ８．５）１ｍｌに溶かしたトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン４０ｍｇをリポソーム液１０ｍｌに加えて、２５℃で２時間攪拌後、７℃で一晩攪拌してリポソーム膜上の脂質に結合したＢＳ３とトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンとの化学結合反応を完結させる。これにより、リポソーム膜の脂質ジパルミトイルフォスファチジルエタノールアミン上にトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンの水酸基が配位して水和親水性化される。【０５１９】
（３．リポソーム膜面上へのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）の結合）
実施例３と同様の手法によりリポソーム膜面上へヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を結合させる処理を行う。その結果、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）は、リポソーム膜面上に結合しないという結果を得る。得られた送達媒体をローリングモデルにより評価することによって、適切な媒体であるかどうかを判断することができる。【０５２０】
（実施例２７：糖鎖修飾リポソーム以外の送達媒体）
次に、糖鎖修飾リポソーム以外の送達媒体についてローリングモデルが適用できるか検証する。【０５２１】
ここでは、脂質（リポソームなど）以外の物質として、ポリエステル、シクロデキストリン、ポリアミノ酸、シリコンを選択して使用する。【０５２２】
得られた送達媒体をローリングモデルにより評価することによって、適切な媒体であるかどうかを判断することができる。【０５２３】
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、この実施形態に限定して解釈されるべきものではない。本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。当業者は、本発明の具体的な好ましい実施形態の記載から、本発明の記載および技術常識に基づいて等価な範囲を実施することができることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。
【産業上の利用可能性】
【０５２４】
本発明は、目的の送達部位に物質を送達することができる送達媒体を自在に設計することができるという有用性を有する。従って、本発明は、送達媒体（例えば、糖鎖修飾リポソーム）に物質（例えば、薬剤や遺伝子）を封入した送達媒体および関連する有用性（例えば、治療、診断、予防、研究など）を提供する。
【図２】
2007018275.tif 000086
【図３】
2007018275.tif 000087
【図４】
2007018275.tif 000088
【図５】
2007018275.tif 000089
【図６】
2007018275.tif 000090
【図７】
2007018275.tif 000091
【図９】
2007018275.tif 000092
【図１】
2007018275.tif 000093
【図８】
2007018275.tif 000094
【図１０】
2007018275.tif 000095
【図１１】
2007018275.tif 000096
【図１２】
2007018275.tif 000097
【図１３】
2007018275.tif 000098
【図１４】
2007018275.tif 000099
【図１５】
2007018275.tif 000100
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月20日(2008.2.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所望部位に関連する細胞表面分子とのインビトロ親和性に関し、強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、弱結合ＩＣの阻害濃度が高い、所望部位への送達を達成するための送達媒体であって、前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される送達媒体。
【請求項２】
送達媒体がリポソームであり、前記強結合ＩＣと前記弱結合ＩＣとの境界は、ＩＣｎにおいてｎが３０と３１との間に存在する、請求項１記載の送達媒体。
【請求項３】
リポソームが糖鎖修飾リポソームである請求項２記載の送達媒体。
【請求項４】
所望部位は、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項５】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下であり、かつ、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項６】
所望部位に関連するレクチンとのインビトロ親和性に関し、前記強結合ＩＣについて、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有し、かつ、前記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項７】
前記ＩＣは、Ｅ−セレクチンとの親和性において測定される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の送達媒体。
【請求項８】
表３、表１４および表１５に記載のリポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５３、リポソーム番号６９、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５およびリポソーム番号２９５からなる群より選択されるリポソームを含む、請求項５に記載の送達媒体。
【請求項９】
表３、表１４および表１５に記載のリポソーム番号３、リポソーム番号１６、リポソーム番号２７、リポソーム番号２９、リポソーム番号３８、リポソーム番号４０、リポソーム番号４１、リポソーム番号４５、リポソーム番号５０、リポソーム番号５３、リポソーム番号５６、リポソーム番号６０、リポソーム番号６８、リポソーム番号６９、リポソーム番号７０、リポソーム番号７１、リポソーム番号７６、リポソーム番号８０、リポソーム番号８７、リポソーム番号９１、リポソーム番号９３、リポソーム番号９６、リポソーム番号１０５、リポソーム番号１０６、リポソーム番号１１１、リポソーム番号１１６、リポソーム番号１１７、リポソーム番号１２０、リポソーム番号１２５、リポソーム番号１２７、リポソーム番号１２９、リポソーム番号１３０、リポソーム番号１３７、リポソーム番号１３９、リポソーム番号１４１、リポソーム番号１４２、リポソーム番号１４６、リポソーム番号１５０、リポソーム番号１５１、リポソーム番号１５２、リポソーム番号１５３、リポソーム番号１５４、リポソーム番号１５５、リポソーム番号１７５、リポソーム番号１７８、リポソーム番号１８３、リポソーム番号１８４、リポソーム番号１８６、リポソーム番号１９１、リポソーム番号１９５、リポソーム番号１９７、リポソーム番号１９９、リポソーム番号２０４、リポソーム番号２０７、リポソーム番号２０９、リポソーム番号２１３、リポソーム番号２１８、リポソーム番号２２０、リポソーム番号２２４、リポソーム番号２２５、リポソーム番号２２９、リポソーム番号２３０、リポソーム番号２３３、リポソーム番号２３４、リポソーム番号２３５、リポソーム番号２３６、リポソーム番号２３７、リポソーム番号２３９、リポソーム番号２４０、リポソーム番号２５４、リポソーム番号２６３、リポソーム番号２７３、リポソーム番号２８５、リポソーム番号２９０、リポソーム番号２９２およびリポソーム番号２９５からなる群より選択されるリポソームを含む、請求項６に記載の送達媒体。
【請求項１０】
所望部位への送達を達成するためのリポソームからなる送達媒体の製造方法であって、該製造方法は：
Ａ）該送達媒体の候補について、該部位に関連する細胞表面分子とのインビトロでのインビトロ親和性を測定する工程；
Ｂ）所望部位への送達に対応するインビトロ親和性を有する送達媒体を選択する工程、
を包含し、
前記細胞表面分子は、レクチン、接着分子、インテグリン、免疫グロブリン、シアロムチン、カドヘリン、タンパク質、脂質、レセプター、抗原、酵素、メタロプロテアーゼ、チロシンフォスファターゼ、糖脂質、糖タンパク質、プロテオグリカン、コスティミュラトリー分子、膜タンパク質および細胞外マトリックスからなる群より選択される、方法。
【請求項１１】
さらに、前記選択された送達媒体に送達が所望される物質を含ませる工程を包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記細胞表面分子は、（１）ヒアレクタン、アシアログリコプロテインレセプター、コレクチン（マンノース結合プロテインＣ、マンノース結合プロテインＡ、サーファクタントプロテインＡ、サーファクタントプロテインＤ、コレクチン-Ｋ１、コレクチン-Ｌ１）、ＤＣ−ＳＩＧＮ、ＤＣ-ＳＩＧＮＲ、セレクチン（Ｅ−セレクチン、Ｐ−セレクチンまたはＬ−セレクチン）、ＮＫグループトランスメンブランレセプター、マクロファージマンノースレセプターおよびシングルドメインレクチンを含むＣ−タイプレクチン、（２）ガレクチン（ガレクチン-１、ガレクチン-２、ガレクチン-３、ガレクチン-４、ガレクチン-５、ガレクチン-６、ガレクチン-７、ガレクチン-８、ガレクチン-９、ガレクチン-１０、ガレクチン-１１、ガレクチン-１２、ガレクチン-１３、ガレクチン-１４、ガレクチン-１５、ガレクチン-1６、チキンガレクチン、コンジェリン-１、コンジェリン-２）を含むＳ−タイプレクチン、（３）シグレク（シグレク-１、シグレク-２、シグレク-３、シグレク-４、シグレク-５、シグレク-６、シグレク-７、シグレク-８、シグレク-９、シグレク-１０、シグレク-１１、シグレク-１２、シグレク-１２ａ、シグレク-１２ｂ、シグレク-１３、シグレク-Ｅ、シグレク-Ｆ、シグレク-Ｇ、シグレク-Ｈ）を含むＩ−タイプレクチン、（４）ホスホマンノシルレセプターを含むＰ−タイプレクチン、（５）ペントラキシン、（６）カルレティキュリンもしくはカルネキシン、（７）ＥＲＧＩＣ−５３もしくはＶＩＰ−３６、（８）ジスコイジン、（９）フコレクチン、（１０）アネキシンレクチン、（１１）フィコリン、（１２）タキレクチン５Ａもしくは５Ｂ、（１３）ＮＣＡＭもしくはミエリンアソシエイティドグリコプロテイン、（１４）アンフォテリシン、（１５）ＣＤ１１ｂもしくはＣＤ１８、（１６）ＣＥＬ−ＩＩＩ、（１７）コンプレメントファクターＨ、（１８）酸化ＬＤＬレセプター、（１９）エンドシアリン、（２０）タキレクチン−１もしくはタキレクチン−Ｐ、（２１）タキレクチン−２、（２２）タキレクチン−３、（２３）スロンボスポンジン、（２４）インターロイキン−１、（２５）インターロイキン−２、（２６）インターロイキン−３、（２７）インターロイキン−４、（２８）インターロイキン−５、（２９）インターロイキン−６、（３０）インターロイキン−７、（３１）インターロイキン−８、（３２）インターロイキン−１２および（３３）腫瘍壊死因子からなる群より選択されるレクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記細胞表面分子は、Ｅ−セレクチンを含み、前記部位は、肝臓、小腸、大腸、リンパ節、心臓、膵臓、肺、脳、骨髄、血中、腎臓、脾臓、胸腺、筋肉、炎症部位および癌部位からなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
前記親和性は、ＩＣｎで示され、ここで、ｎは１〜９９の範囲である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定と、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】
前記親和性の測定は、ＩＣ３０〜ＩＣ１０の間の少なくとも１点での強結合ＩＣでの測定と、ＩＣ４０〜ＩＣ６０の間の少なくとも１点での弱結合ＩＣでの測定とを包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１８】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１９】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下の候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２０】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２１】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２２】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２３】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２４】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣおよび約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定での測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２５】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以下で、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が１０−９Ｍ以上の候補を選択することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２６】
前記親和性の測定は、約ＩＣ３０以下の強結合ＩＣでの測定および約ＩＣ３１以上の弱結合ＩＣでの測定を含み、前記選択は、該強結合ＩＣの阻害濃度が低く、かつ、該弱結合ＩＣの阻害濃度が高い候補を選択することを特徴とし、ここで、該選択は、ＩＣ１０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、ＩＣ２０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であること、およびＩＣ３０の阻害濃度が１０−９Ｍ以下であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たし、かつ、前記弱結合ＩＣについて、ＩＣ４０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、ＩＣ５０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であること、およびＩＣ６０の阻害濃度が１０−９Ｍ以上であることからなる群より選択される少なくとも１つの条件を満たすことをさらに特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２７】
前記親和性の測定は、競合阻害アッセイ、非競合阻害アッセイおよび結合アッセイからなる群より選択される方法によって行われる、請求項１０に記載の方法。
【請求項２８】
前記送達媒体は、糖鎖修飾リポソームを含み、前記組成の分析は、該糖鎖修飾リポソームにおける糖鎖の種類および密度の分析を包含することを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項２９】
リポソームへの糖鎖の修飾において、リンカーが使用される、請求項１０に記載の方法。
【請求項３０】
前記リンカーは、タンパク質である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記リンカーは、アルブミンである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記リポソームを親水性化させる工程をさらに包含する、請求項１０に記載の方法。
【請求項３３】
予防または処置に使用される薬剤、および請求項１〜９のいずれか１項に記載の送達媒体または請求項１０〜３２のいずれか１項に記載の方法によって製造された送達媒体を含む、医薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３７９】
（実施例４．糖鎖の調製）
以下の表１４に示される糖鎖を使用した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８３】
以下の表１５に、各糖鎖を用いた場合のリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）上への結合の結果を示す。特に明記しない限り、これらの糖鎖のリポソーム膜面結合ヒト血清アルブミンへの結合は、実施例５と同様の方法および条件で行った。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８４】
【表１５】
2007018275.tif 000101
【国際調査報告】
2007018275.tif 000102
2007018275.tif 000103
2007018275.tif 000104
2007018275.tif 000105
2007018275.tif 000106
2007018275.tif 000107
2007018275.tif 000108