(57)【要約】担体と、担体の表面上に付着した、担体の表面と接触する接触部分、及び担体の表面と接触しない非接触部分を有する指標物質と、を備え、指標物質が付着する付着部を含む付着領域、及び指標物質が付着しない非付着部を含む非付着領域を有するバイオロジカルインジケータである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
担体と、
前記担体の表面上に付着した、前記担体の表面と接触する接触部分、及び前記担体の表面と接触しない非接触部分を有する指標物質と、を備え、
前記指標物質が付着する付着部を含む付着領域、及び前記指標物質が付着しない非付着部を含む非付着領域を有するバイオロジカルインジケータ。
【請求項２】
前記指標物質のすべてが、前記担体の表面から２μｍの範囲内に存在する請求項１に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項３】
前記付着領域が、ドメイン状に複数存在する請求項１又は２に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項４】
ドメイン状に複数存在する前記付着領域の形状がいずれも略円形であり、
それぞれの前記付着領域内における前記指標物質の密度が、前記付着領域の外周部及びその近傍で高い請求項３に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項５】
前記指標物質が、有芽胞細菌である請求項１〜４のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項６】
９０％以上の前記有芽胞細菌の少なくとも一部分が、前記担体の表面の垂直方向から観察した場合に視認可能である請求項５に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項７】
隣接する前記有芽胞細菌どうしが重なることなく前記担体の表面上に付着している請求項６に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項８】
前記付着領域が、ドメイン状に複数存在するとともに、
前記有芽胞細菌が、一の前記付着領域内に１〜１００個含まれている請求項６又は７に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項９】
前記担体の表面上に、蛋白質及びポリマーの少なくともいずれかが存在する請求項５〜８のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１０】
前記蛋白質が、アルブミンである請求項９に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１１】
前記ポリマーが、カルボキシルメチルセルロース、又はポリエチレングリコールである請求項９に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１２】
前記担体の表面上に付着した前記有芽胞細菌の数が、５×１０５〜２×１０６個である請求項５〜１１のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１３】
前記指標物質が、細菌内毒素である請求項１〜４のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１４】
前記指標物質のすべてが、前記担体の表面から１００ｎｍの範囲内に存在する請求項１３に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１５】
前記担体が、流体が透過不能な不透過性基板、又は流体が透過可能な透過性基板である請求項１〜１４のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１６】
前記担体を構成する材質が、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、又はステンレスである請求項１〜１５のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１７】
面照射される殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解線を用いた殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解装置の効力を評価するために用いられる請求項１〜１６のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータ。
【請求項１８】
請求項１〜１７のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータを製造する方法であって、
指標物質を含有する溶液又は分散液を、インクジェット方式により微小液滴として吐出ユニットから吐出させて担体の表面上に着弾させた後、着弾した前記微小液滴を乾燥させることを含むバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項１９】
前記微小液滴の一滴の量が、１〜５００ｐｌである請求項１８に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項２０】
前記指標物質が有芽胞細菌であり、
前記分散液が、前記有芽胞細菌を１×１０２〜１×１０７個／μｌの濃度で分散させたものである請求項１８又は１９に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項２１】
前記分散液が、前記有芽胞細菌をアルコール溶媒に分散させたアルコール分散液である請求項２０に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項２２】
前記アルコール溶媒が、アルコール濃度が２０〜８０質量％のアルコール水溶液である請求項２１に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項２３】
前記分散液が、前記有芽胞細菌を１×１０３〜１×１０７個／μｌの濃度で分散させたものであり、
前記微小液滴の一滴の量が、５０〜２００ｐｌである請求項２０〜２２のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【請求項２４】
前記吐出ユニットが、
前記溶液又は前記分散液が注入される、フィルタを備えた注入口を有するものである請求項１８〜２３のいずれか一項に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、滅菌装置等の効力を測るために用いられるバイオロジカルインジケータ、及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
医療用道具・容器等の殺菌、滅菌、除菌、及び毒素分解等（以下、単に「滅菌等」ともいう）を行う装置は、その効力を確認、保証等するために恒常的又は定期的に性能検査が行われる。この性能検査の方法としては、近年、装置内の任意の箇所や処理対象となる容器等の中にバイオロジカル（生物学的）インジケータを配置し、滅菌等の処理後におけるバイオロジカルインジケータの滅菌効果を指標にして性能評価を行う方法が採用されている。【０００３】
関連する従来技術として、例えば特許文献１の［従来の技術］の項には、市販製品であるＡＭＳＣＯ社製の商品名「プルーフ・プラス」が、エチレンオキサイド・ガス滅菌の効力を評価するバイオロジカルインジケータとして使用し得ることが記載されている。また、特許文献２の［背景技術］の項には、市販製品である米国３Ｍ社製の商品名「アテスト（登録商標）・ラピッド・リードアウト・バイオロジカル・インジケータ」が、蒸気滅菌プロセスやエチレンオキシド滅菌プロセスの有効性を評価するように設計されたものであることが記載されている。【０００４】
【特許文献１】特開平１０−２０１４６６号公報
【特許文献２】特表２００６−５２１８１８号公報
【発明の開示】
【０００５】
但し、前記市販のバイオロジカルインジケータは、蒸気やエチレンオキシドをはじめとするガス類を使用して対象物を滅菌等する場合の効力を評価することを前提として設計されたものである。このため、面照射されることで対象物を殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解する殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解線（以下、「作用線」ともいう）を用いた殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解システムの効力を、これらのバイオロジカルインジケータで評価すると、必ずしも正確な評価をすることができず、また、評価結果にバラツキ等が出る場合等もあった。即ち、作用線を面照射して滅菌等を行う滅菌装置等の効力を正確に推し測ることが可能なバイオロジカルインジケータは、従来存在しなかった。
【０００６】
また、実際に処理する対象を汚染している物質の量は、一般的には極少量である。このため、その極少量の汚染物質が除去されたか否かを感度良く測定可能なバイオロジカルインジケータは、従来存在しなかった。
【０００７】
本発明は、このような従来技術の有する問題点に鑑みてなされたものであり、その課題とするところは、作用線を面照射して滅菌等を行う滅菌装置等の効力を、高感度かつ正確に推し測ることが可能なバイオロジカルインジケータを提供することにある。また、本発明の課題とするところは、極少量の汚染物質が除去されたか否かを感度良く測定し、滅菌装置等の効力を正しく評価することが可能なバイオロジカルインジケータを提供することにある。さらにまた、そのような滅菌装置等の効力を、高感度かつ正確に推し測ることが可能なバイオロジカルインジケータを簡便に製造し得るバイオロジカルインジケータの製造方法を提供することにある。
【０００８】
本発明者らは、かかる課題を解決すべく鋭意研究したところ、指標菌を塗布する等してシート等の担体表面上に付着させた構成を有する従来のバイオロジカルインジケータにおいては、隣接する指標菌どうしが重なり合うようにして塗布及び付着される等している場合が多いことを見出した。このため、隣接する指標菌の陰に位置する指標菌には作用線が直接的に照射されない場合があり、効力評価を阻害する一因となっている可能性が高いことを見出した。そこで、本発明者らは、以下に示す構成とすることによって上記課題を達成することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
即ち、本発明によれば、以下に示すバイオロジカルインジケータ、及びその製造方法が提供される。
【００１０】
［１］担体と、前記担体の表面上に付着した、前記担体の表面と接触する接触部分、及び前記担体の表面と接触しない非接触部分を有する指標物質と、を備え、前記標物質が付着する付着部を含む付着領域、及び前記指標物質が付着しない非付着部を含む非付着領域を有するバイオロジカルインジケータ。
【００１１】
［２］前記指標物質のすべてが、前記担体の表面から２μｍの範囲内に存在する前記［１］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１２】
［３］前記付着領域が、ドメイン状に複数存在する前記［１］又は［２］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１３】
［４］ドメイン状に複数存在する前記付着領域の形状がいずれも略円形であり、それぞれの前記付着領域内における前記指標物質の密度が、前記付着領域の外周部及びその近傍で高い前記［３］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１４】
［５］前記指標物質が、有芽胞細菌である前記［１］〜［４］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１５】
［６］９０％以上の前記有芽胞細菌の少なくとも一部分が、前記担体の表面の垂直方向から観察した場合に視認可能である前記［５］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１６】
［７］隣接する前記有芽胞細菌どうしが重なることなく前記担体の表面上に付着している前記［６］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１７】
［８］前記付着領域が、ドメイン状に複数存在するとともに、前記有芽胞細菌が、一の前記付着領域内に１〜１００個含まれている前記［６］又は［７］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１８】
［９］前記担体の表面上に、蛋白質及びポリマーの少なくともいずれかが存在する前記［５］〜［８］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００１９】
［１０］前記蛋白質が、アルブミンである前記［９］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２０】
［１１］前記ポリマーが、カルボキシルメチルセルロース、又はポリエチレングリコールである前記［９］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２１】
［１２］前記担体の表面上に付着した前記有芽胞細菌の数が、５×１０５〜２×１０６個である前記［５］〜［１１］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２２】
［１３］前記指標物質が、細菌内毒素である前記［１］〜［４］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２３】
［１４］前記指標物質のすべてが、前記担体の表面から１００ｎｍの範囲内に存在する前記［１３］に記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２４】
［１５］前記担体が、流体が透過不能な不透過性基板、又は流体が透過可能な透過性基板である前記［１］〜［１４］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２５】
［１６］前記担体を構成する材質が、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、又はステンレスである前記［１］〜［１５］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２６】
［１７］面照射される殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解線を用いた殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解装置の効力を評価するために用いられる前記［１］〜［１６］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータ。
【００２７】
［１８］前記［１］〜［１７］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータを製造する方法であって、指標物質を含有する溶液又は分散液を、インクジェット方式により微小液滴として吐出ユニットから吐出させて担体の表面上に着弾させた後、着弾した前記微小液滴を乾燥させることを含むバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００２８】
［１９］前記微小液滴の一滴の量が、１〜５００ｐｌである前記［１８］に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００２９】
［２０］前記指標物質が有芽胞細菌であり、前記分散液が、前記有芽胞細菌を１×１０２〜１×１０７／μｌの濃度で分散させたものである前記［１８］又は［１９］に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００３０】
［２１］前記分散液が、前記有芽胞細菌をアルコール溶媒に分散させたアルコール分散液である前記［２０］に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００３１】
［２２］前記アルコール溶媒が、アルコール濃度が２０〜８０質量％のアルコール水溶液である前記［２１］に記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００３２】
［２３］前記分散液が、前記有芽胞細菌を１×１０３〜１×１０７個／μｌの濃度で分散させたものであり、前記微小液滴の一滴の量が、５０〜２００ｐｌである前記［２０］〜［２２］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００３３】
［２４］前記吐出ユニットが、前記溶液又は前記分散液が注入される、フィルタを備えた注入口を有するものである前記［１８］〜［２３］のいずれかに記載のバイオロジカルインジケータの製造方法。
【００３４】
本発明のバイオロジカルインジケータは、極少量の汚染物質が除去されたか否かを感度良く測定し、滅菌装置等の効力を正しく評価することが可能であるといった効果を奏するものである。
【００３５】
本発明のバイオロジカルインジケータの製造方法によれば、作用線を面照射して滅菌等を行う滅菌装置等の効力を、高感度かつ正確に推し測ることが可能なバイオロジカルインジケータを簡便に製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】本発明のバイオロジカルインジケータの一実施形態を模式的に示す上面図である。
【図２】図１のＡ−Ａ断面図である。
【図３】本発明のバイオロジカルインジケータの付着領域の一例を模式的に示す上面図である。
【図４】実施例１のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×２００）である。
【図５】実施例１のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×１０００）である。
【図６】実施例２のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×２００）である。
【図７】実施例２のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×１０００）である。
【図８】比較例１のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×５０）である。
【図９】比較例１のバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真（×２００）である。
【図１０】プラズマ照射時間（ｍｉｎ）に対して生残菌数（個）をプロットしたグラフである。
【図１１】不活性化処理後におけるエンドトキシン残存率（％）を示すグラフである。
【符号の説明】
【００３７】
１：担体、２：担体表面、３：指標物質、３ａ：接触部分、３ｂ：非接触部分、５：付着領域、６：非付着領域、１０：バイオロジカルインジケータ、１５：付着部、１６：非付着部
【発明を実施するための最良の形態】
【００３８】
以下、本発明の実施の最良の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、当業者の通常の知識に基づいて、以下の実施の形態に対し適宜変更、改良等が加えられたものも本発明の範囲に入ることが理解されるべきである。【００３９】
図１は、本発明のバイオロジカルインジケータの一実施形態を模式的に示す上面図であり、図２は、図１のＡ−Ａ断面図である。図１及び図２に示すように、本実施形態のバイオロジカルインジケータ１０は、担体１と、担体１の表面（担体表面２）上に付着した指標物質３とを備えたものである。担体１を構成する材質の具体例としては、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、及びポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）等の樹脂；ステンレス（ＳＵＳ）等の金属を挙げることができる。これらの樹脂や金属で担体１を構成すると、その表面上に安定した状態で指標物質３を保持することができる。【００４０】
担体１は、通常、その厚みが０．００５〜３ｍｍ、好ましくは０．０１〜１ｍｍのシート状の基板である。このシート状の基板は、気体、液体等の流体が透過することが不可能な不透過性基板、又は気体、液体等の流体が透過することが可能なメンブレン等の透過性基板である。【００４１】
担体１が不透過性基板であると、付着する指標物質３が担体１の陰に隠れることがなく、それぞれの指標物質３に対して均等に作用線が照射されるために好ましい。一方、担体１がメンブレン等の透過性基板であると、指標物質３が付着する担体１の表面積がより大きくなるため、隣接する指標物質３どうしが重なり合うことが容易に回避されるために好ましい。また、指標物質３の分散液を担体表面２上に塗布する場合においても、この分散液に含まれる溶媒が担体１に塗布後速やかに透過され、指標物質３のみその表面に分散された状態で担持されることになり、好ましい。【００４２】
指標物質３の具体例としては、細菌を挙げることができる。好適に用いることのできる細菌の具体例としては、胞子状の休眠状態となった有芽胞細菌を挙げることができる（以下、「細菌」及び「有芽胞細菌」について、「指標菌」ともいう）。このような有芽胞細菌の具体例としては、Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｔｒｏｐｈａｅｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｕｓ．ｖａｒ．ｎｉｇｅｒ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｕｍｉｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍを挙げることができる。これらの有芽胞細菌は、取り扱いが容易であるとともに、必要に応じて活性化することができるために好ましい。なお、これらの有芽胞細菌のなかでもＧｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ、及びＢａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓが更に好ましい。また、指標物質３の別の具体例としては、エンドトキシン等の細菌内毒素を挙げることができる。指標物質３として細菌内毒素を使用すると、特に、作用線としてプラズマを使用する毒素不活性化装置の効果を正確に評価することが可能となる。【００４３】
図２に示すように、担体表面２上に付着する指標物質３は、担体表面２と接触する接触部分３ａと、担体表面２と接触しない非接触部分３ｂとを有するものである。指標物質３を担体表面２上にこのように付着させると、指標物質３がバイオロジカルインジケータ１０の表面に確実に露出することとなるため、面照射される作用線がほとんどの指標物質３に確実に照射されることとなり、滅菌等の効果を正確に評価することが可能となる。【００４４】
図２及び図３に示すように、バイオロジカルインジケータ１０は、指標物質３が付着する付着部１５を含む付着領域５と、指標物質３が付着しない非付着部１６を含む非付着領域６とを有するものである。なお、図３は、付着領域の一例を模式的に示す上面図である。このような付着領域５と非付着領域６を設けることにより、極微量の指標物質３に対する滅菌等の効果を高精度に評価することができるとともに、定量的な評価が可能となる。【００４５】
また、付着領域５は、図１に示すようにドメイン状（島状）に複数存在することが好ましい。付着領域５をドメイン状にして複数存在させると、一の付着領域５内においては指標物質３の付着密度に分布を生ずることとなるが、担体１の全体では指標物質３の付着密度に分布が生ずるのを抑制することができるため、バイオロジカルインジケータの個体差を抑えることができ、滅菌装置等の効力をより正確に評価することが可能となる。【００４６】
なお、ドメイン状の付着領域５の外周形状を、図３に示すような円形をはじめとする略円形とすると、付着領域５を高い密度で担体表面２に形成することができるため、バイオロジカルインジケータ自体をより小型化することが可能となるために好ましい。ここで、本明細書にいう「略円形」には、円形の他、楕円形、長円形、及び一部が歪んだ円形等が概念的に包含される。また、図３に示すように、付着領域５における指標物質３の密度（付着密度）を、付着領域５の外周部とその近傍で高くすることが好ましい。指標物質３の付着密度を付着領域５の外周部とその近傍で高くすることによって、指標物質３の付着状態を略円形として認識し易くなり、バイオロジカルインジケータの製造時に指標物質３の付着状態を検査し易くなる。【００４７】
指標物質３のすべてが、担体表面２から２μｍの範囲内に存在することが好ましい（図２参照）。上記の範囲内に収まるように、担体１に指標物質３を付着させると、面照射される作用線がほぼ全ての指標物質３へ照射されることになり、作用線の効力をより正確に評価することが可能となる。また、指標物質３が細胞内毒素である場合には、指標物質３のすべてが、担体表面２から１００ｎｍの範囲内に存在することが好ましく、５０ｎｍの範囲内に存在することが更に好ましく、１０ｎｍの範囲内に存在することが特に好ましい。上記の範囲内に収まるように、担体１に細胞内毒素を付着させると、実際系での細胞内毒素の汚染状態を十分模擬したものとなり、面照射される作用線がほぼ全ての指標物質３へ照射されることになり、作用線の細胞内毒素の不活性化効力をより正確に評価することが可能となる。【００４８】
担体表面２に付着した指標菌の数は、５×１０５〜２×１０６個であることが好ましい。担体表面２に付着した指標菌の数を上記の数値範囲内とすることにより、滅菌装置等の滅菌効果をより実使用上に近いレベルで正確に評価することができる。なお、担体表面２に付着した指標菌の数を５×１０５個未満とすると、指標菌の数が少なすぎるために、十分な評価をし難くなる場合がある。一方、２×１０６個超とすると、実際に滅菌効果を備えている滅菌装置等を評価に用いた場合に、誤って「効果無し」と誤った判断をしてしまう可能性がある。【００４９】
また、一のドメイン状の付着領域５内に付着した指標菌の数は、１〜１００個であることが好ましく、１〜１０個であることが更に好ましくい。一のドメイン状の付着領域５内に付着した指標菌の数が１００個超であると、一の付着領域５内で指標菌が重ならないようにするためには付着領域５を大きくする必要があるため、指標菌の大幅な密度分布が生じ易くなる傾向にある。一のドメイン状の付着領域５内に付着した指標菌の数が１０個以下であると、一の付着領域５内で指標菌の重なりがより少なくなり好ましい。【００５０】
９０％以上の指標菌の少なくとも一部分が、担体表面２の垂直方向から観察した場合（図１中、紙面上方向から観察した場合）に視認可能であることが好ましく、また、隣接する指標菌どうしが重なることなく担体１の表面上に付着していることが好ましい。指標菌の付着状態を上記のようにすると、作用線が直線的に面照射される場合であってもより多くの指標菌に作用線が当たることとなるため、滅菌装置等の効力を更に正確に評価することが可能となる。なお、担体表面２の垂直方向から観察した場合にその少なくとも一部分を視認可能な指標菌の割合は、９５％以上であることが更に好ましく、９９％以上であることが特に好ましく、１００％であることが最も好ましい。【００５１】
担体１の表面上には、蛋白質及びポリマーの少なくともいずれかが存在していることが好ましい。蛋白質やポリマーを担体１の表面上に存在させることにより、滅菌等の作用に実質的な影響を及ぼすことなく、指標菌を担体表面２上に分散させ、安定した状態で脱落することが少なく付着させることができる。なお、蛋白質の好適例としては、アルブミン等を挙げることができる。また、ポリマーの好適例としては、カルボキシルメチルセルロース、ポリエチレングリコール、等を挙げることができる。【００５２】
本発明のバイオロジカルインジケータは、これまで述べてきた構成を有するものであるため、特に、面照射される殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解線（作用線）を用いた殺菌、滅菌、除菌、又は毒素分解装置の効力を評価するための指標として好適に用いることができる。なお、面照射される作用線の具体例としては、面照射型プラズマ、紫外線、電子線等を挙げることができる。【００５３】
次に、本発明のバイオロジカルインジケータを製造する方法の一実施形態について説明する。本発明のバイオロジカルインジケータを製造するには、先ず、指標物質を含有する溶液又は分散液を調製する。これらの溶液や分散液を調製するために用いられる溶媒としては、例えば、水、アルコール溶媒等を挙げることができる。なお、アルコール溶媒に含まれるアルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等を挙げることができる。調製した溶液又は分散液を、インクジェット方式により微小液滴として吐出ユニットから吐出させ、所定の担体の表面上に着弾させる。好適に用いることのできるインクジェット方式の吐出装置としては、例えば、特開２００１−１２４７８９号公報に記載されたインクジェット式のスポッタ等を挙げることができる。【００５４】
インクジェット方式のスポッタ等を用いると、指標物質を溶解又は分散させた溶液又は分散液を、ｐｌオーダーで一定の量に調整された微小液滴の状態とすることができるとともに、担体表面に均一に数十万ショットもの多回数で吐出することができる。このため、担体の表面上に均一に指標物質を付着させることができる。また、インクジェット方式の吐出装置を用いて、指標菌のような固体を分散させた分散液を微小液滴にして吐出すると、微小液滴に含まれる指標菌が担体表面に着弾した勢いで分散するため、隣接する指標菌どうしの重なり合いを回避しつつ、担体表面上に指標菌を分布及び付着させることができる。【００５５】
なお、メンブレン等の透過基板を担体として用いる場合、固体粒子である指標菌は透過基板を構成する繊維の表面に露出している部分に留まるとともに、溶媒は繊維の内部に速やかに吸収される。このため、担体の表面に着弾した微小液滴に含まれる指標菌は、四方に広がり過ぎることなく、かつ、重なり合いを回避しつつ担体の表面に付着される。また、微小液滴に含まれる指標菌が四方に広がり過ぎないことにより、吐出される微小液滴どうしをより近接した位置とすることができるため、担体全体に付着させることのできる指標菌の密度を上げることができる。【００５６】
吐出ユニットから吐出させる微小液滴の一滴の量は、１〜５００ｐｌであることが好ましく、１０〜３００ｐｌであることが更に好ましく、５０〜２００ｐｌであることが特に好ましい。微小液滴の一滴の量を上記数値範囲内とすると、担体の表面全体により均一に吐出することができる。なお、微小液滴の一滴の量が１ｐｌ未満であると、指標物質が一滴の微小液滴に含まれなくなる場合がある。一方、５００ｐｌ超であると、一回の吐出で多くの液量を排出することになり、吐出ユニットの吐出口での液面（メニスカス）の振幅が大きくなり、吐出口から液が漏れる等、吐出が不安定になる傾向にある。【００５７】
分散液は、細菌（指標菌）を１×１０２〜１×１０７個／μｌの濃度で分散させたものであることが好ましく、１×１０３〜１×１０６個／μｌの濃度であることが更に好ましく、１×１０４〜１×１０６個／μｌの濃度であることが特に好ましい。分散液に含まれる指標菌の濃度が１×１０７個／μｌ超であると、担体表面における指標菌の分散性が低下し、付着される指標菌の密度に偏りを生ずる場合がある。一方、分散液に含まれる指標菌の濃度が１×１０２個／μｌ未満であると、担体表面における指標菌の分散性は良好である反面、吐出させる分散液の量が多くなるため、生産コストが上昇する傾向にある。なお、指標菌が有芽胞細菌である場合には、有芽胞細菌の濃度が上記数値範囲内の分散液（５×１０４個／μｌ）を、一滴の量が上記数値範囲内の微小液滴（５０〜２００ｐｌ）にして吐出すると、一滴の微小液滴に含まれる有芽胞細菌の数を２〜１０個程とすることができる。そうすると、隣接する有芽胞細菌どうしがより重なり難く、多数の有芽胞細菌を担体表面上に均一に付着させることが可能となる。【００５８】
分散液は、指標菌をアルコール溶媒に分散させたアルコール分散液であることが好ましい。このようなアルコール分散液は、数時間経過しても吐出ユニット内で指標菌が沈降し難い。このため、吐出ユニットから吐出される微小液滴に含まれる指標菌の割合が吐出の途中で変化したり、吐出口（ノズル）が目詰まりを生じたりする等の不具合が発生し難い。【００５９】
また、指標菌を分散させるアルコール溶媒は、メタノール等のアルコールの濃度が２０〜８０質量％のアルコール水溶液であることが好ましく、３０〜６０質量％のアルコール水溶液であることが更に好ましい。アルコールの濃度が２０質量％未満であると、指標菌の分散性が低下する場合がある。一方、アルコールの濃度が８０質量％超であると、吐出操作の途中でアルコール分の蒸発量が多くなり易く、指標菌の濃度が不均一となる場合がある。また、アルコールの必要量が多く、コスト面でも不利になる場合がある。【００６０】
なお、指標菌が有芽胞細菌であり、指標菌を分散させる溶媒がアルコール溶媒の場合には、分散液に含まれる有芽胞細菌の割合が１×１０３〜１×１０７個／μｌであることが好ましく、１×１０４〜１×１０６個／μｌであることが更に好ましく、１×１０５〜１×１０６個／μｌであることが特に好ましい。同時に、吐出する微小液滴の一滴の量を５０〜２００ｐｌとすることが好ましい。アルコール溶媒の場合は、溶媒中での有芽胞細菌の分散性が優れており、濃い濃度でも、吐出ユニット中で詰まることなく吐出できる。【００６１】
なお、溶液や分散液を吐出させる吐出ユニットは、溶液や分散液が注入される注入口にフィルタが配設されたものであることが、溶液や分散液に含まれる余分なゴミ等の不純物を除去できるとともに、より確実な吐出が可能となるために好ましい。また、指標菌を分散させた分散液を吐出させる場合においては、このような注入口を有する吐出ユニットを用いると、凝集し易い指標菌を個々に分散することができるため、より容易に担体表面上で隣接する指標菌どうしが重ならない状態とすることが可能となる。なお、指標菌を分散させた分散液を吐出させる場合には、フィルタの細孔径は、指標菌が目詰まりしない大きさとすることが必要である。【００６２】
吐出ユニットから吐出させた微小液滴を担体の表面上に着弾させた後は、着弾した微小液滴を乾燥させれば、本発明のバイオロジカルインジケータを得ることができる。微小液滴を乾燥する方法については特に限定されないが、自然乾燥の他、適当な温度に加温した状態で乾燥を行ってもよい。
【実施例】
【００６３】
以下、本発明を実施例に基づいて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。【００６４】
［芽胞分散液（１）］：Ｒａｖｅｎ社製の商品名「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ  Ｓｐｏｒｅ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ」（１０Ｅ−６、Ｇ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ［ＡＴＣＣ７９５３］、菌数：１×１０６／０．１ｍｌ、水に分散）を「芽胞分散液（１）」として使用した。【００６５】
［芽胞分散液（２）］：Ｓｔｅｒｉｓ社の商品名「Ｓｐｏｒｄｅｘ  Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ」（１０Ｅ−６、Ｇ．ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ［ＡＴＣＣ７９５３］、菌数：２．９×１０６／０．１ｍｌ、４０質量％メタノール水溶液に分散）を「芽胞分散液（２）」として使用した。【００６６】
［エンドトキシン溶解液］：Ｓｉｇｍａ社製の商品名「Ｌ２６３０」（Ｅ．ｃｏｌｉ（Ｏ１１１株）由来）をエンドトキシンフリー水で溶解し、濃度：１．５ｍｇ／ｍｌに調製したものを「エンドトキシン溶解液」として使用した。【００６７】
［担体（１）］：下記のプラズマ処理条件で処理したＰＰシート（フタムラ化学社製、品種「ＦＨＫ２」、番手「５０」、寸法：７０ｍｍ×７０ｍｍ×０．０５ｍｍ）を「担体（１）」として使用した。【００６８】
［担体（２）］：下記のプラズマ処理条件で処理したＰＳシート（大石産業社製、商品名「ＯＳＫ−スチロファン−３０Ｓ−Ｃ」、寸法：１５ｍｍ×１５ｍｍ×０．０３ｍｍ）を「担体（２）」として使用した。【００６９】
＜プラズマ処理条件＞
Ｉｎｐｕｔ  ｐｏｗｅｒ：１６．０ｍＪ／ｐ
Ｖｐ：１９．５ｋＶ
Ｉｐ：１５．６Ａ
Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ：２．５ｋＨｚ
Ｔｅｍｐ．：６０〜６５℃
Ａｒｅａ：３００×３００ｍｍ２
Ｇａｐ：４０ｍｍ
Ｎ２ｆｌｏｗ  ｓｐｅｅｄ：６Ｌ／ｍｉｎ
Ｐｒｅｓｓｕｒｅ：４５ｋＰａ【００７０】
（実施例１）
芽胞分散液（１）を１０倍に濃縮した後、アルブミン水溶液（アルブミン濃度：２ｍｇ／ｍｌ）の等量と混合して吐出用分散液（菌数：５×１０４／μｌ、アルブミン濃度：１ｍｇ／ｍｌ）を得た。特開２００１−１２４７８９号公報に記載されたインクジェット式のスポッタを使用して、得られた吐出用分散液を担体（１）の表面上に、１スポットの量：２００ｐｌ、１スポットに含まれる菌数：１０個、ピッチ：２００μｍ、及びスポット数：１００２００個（３３４×３００）でスポッティングし、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（実施例１）を得た。得られたバイオロジカルインジケータの１シート当たりの菌数は、１×１０６個であった。また、得られたバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真を、図４（×２００）と図５（×１０００）にそれぞれ示す。【００７１】
（実施例２）
芽胞分散液（２）を１０倍に濃縮して、吐出用分散液（菌数：２．９×１０５個／μｌ、４０質量％メタノール水溶液に分散）を得た。特開２００１−１２４７８９号公報に記載されたインクジェット式のスポッタを使用して、得られた吐出用分散液を担体（１）の表面上に、１スポットの量：１００ｐｌ、１スポットに含まれる菌数：２９個、ピッチ：１００μｍ、及びスポット数：４２０００個（６００×７００）でスポッティングし、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（実施例２）を得た。得られたバイオロジカルインジケータの１シート当たりの菌数は、１．２１８×１０６個であった。また、得られたバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真を、図６（×２００）と図７（×１０００）にそれぞれ示す。【００７２】
（比較例１）
１００μｌの芽胞分散液（１）を担体（１）の表面上にスポイトを使用して滴下し、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（比較例１）を得た。得られたバイオロジカルインジケータの１シート当たりの菌数は、１×１０６個であった。また、得られたバイオロジカルインジケータの表面の光学顕微鏡写真を、図８（×５０）と図９（×２００）にそれぞれ示す。【００７３】
［評価（１）］：特願２００５−３１０１９６明細書に記載されたＴＥＳ法滅菌装置を使用し、得られた実施例１、２、及び比較例１のバイオロジカルインジケータを下記の滅菌条件で処理した。滅菌装置から取り出したバイオロジカルインジケータを滅菌水に浸漬し、この滅菌水を適当に稀釈したものをＳＣＤ寒天培地（関東化学社製、コード「ＣＭ０１２９」）上に蒔き、５８℃で４８時間培養した後、生残菌数（個）をカウントした。結果を表１に示す。また、プラズマ照射時間（ｍｉｎ）に対して生残菌数（個）をプロットしたグラフを図１０に示す。【００７４】
＜滅菌条件＞
滅菌パルス電源：ＩＥＳ電源（飯田克二、佐久間健、「ＳＩサイリスタによる極短パルス発生回路（ＩＥＳ回路）」、第１５回ＳＩデバイスシンポジウム講演論文集、ＩＳＳＮ１３４０−５８５３、ＳＳＩＤ−０２−９、ｐｐ．４５−５０（２００２））
パルス印加条件：パルス半値幅＝２００ｎｓ
陰極（試料）〜陽極間距離：４０ｍｍ
処理手順：バイオロジカルインジケータを滅菌装置内の陰極上に載置してプラズマを照射し、所定の処理時間経過後に取り出す。【００７５】
【表１】
2007119857.tif 000002
【００７６】
（考察）
表１及び図１０に示す結果から、実施例１及び２のバイオロジカルインジケータは、比較例１のバイオロジカルインジケータに比して、より短時間のプラズマ照射で指標菌が消滅する（滅菌される）ことが明らかである。なお、図８及び９に示すように、比較例１のバイオロジカルインジケータでは、指標菌が重なり合った部分が濃い灰色で表されている。これに対して、図４〜７に示すように、実施例１及び２のバイオロジカルインジケータでは、指標菌が重なり合わずに均等に分布していることが分かる。【００７７】
（実施例３）
特開２００１−１２４７８９号公報に記載されたインクジェット式のスポッタを使用して、エンドトキシン溶解液を担体（２）の表面上に、１スポットの量：１００ｐｌ、１スポットに含まれるエンドトキシンの量：１５０ｐｇ、ピッチ：１０００μｍ、及びスポット数：１００個（１０×１０）でスポッティングし、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（実施例３）を得た。得られたバイオロジカルインジケータの１シート当たりのエンドトキシンの量は、１５ｎｇであった。【００７８】
（実施例４）
特開２００１−１２４７８９号公報に記載されたインクジェット式のスポッタを使用して、エンドトキシン溶解液を担体（２）の表面上に、１スポットの量：１００ｐｌ、１スポットに含まれるエンドトキシンの量：１５０ｐｇ、ピッチ：５００μｍ、及びスポット数：４００個（２０×２０）でスポッティングし、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（実施例４）を得た。得られたバイオロジカルインジケータの１シート当たりのエンドトキシンの量は、６０ｎｇであった。【００７９】
（比較例２）
エンドトキシン溶解液を担体（２）の表面上にスポイトを使用して滴下し、乾燥して、バイオロジカルインジケータ（比較例２）を得た。【００８０】
［評価（２）］：特願２００５−３１０１９６明細書に記載されたＴＥＳ法滅菌装置を使用し、得られた実施例３、４、及び比較例２のバイオロジカルインジケータを下記の不活性化条件で処理した。滅菌装置から取り出したバイオロジカルインジケータをエンドトキシンフリー水に浸漬し、１５分間の超音波処理を行った。超音波処理後の水０．１ｍｌについて、エンドトキシン測定用専用試薬（商品名「リムルスＥＳ−ＩＩテストワコー」、和光純薬社製）、及びエンドトキシン測定装置（商品名「トキシノメーターＥＴ−２０００」、和光純薬社製）を使用してエンドトキシンの回収量を測定した。結果を表２に示す。また、不活性化処理後におけるエンドトキシン残存率（％）を示すグラフを図１１に示す。【００８１】
＜不活性化条件＞
滅菌パルス電源：ＩＥＳ電源（飯田克二、佐久間健、「ＳＩサイリスタによる極短パルス発生回路（ＩＥＳ回路）」、第１５回ＳＩデバイスシンポジウム講演論文集、ＩＳＳＮ１３４０−５８５３、ＳＳＩＤ−０２−９、ｐｐ．４５−５０（２００２））
パルス印加条件：パルス半値幅＝２００ｎｓ
陰極（試料）〜陽極間距離：４０ｍｍ
処理手順：バイオロジカルインジケータを滅菌装置内の陰極上に載置してプラズマを照射し、１５分間処理した後に取り出す。【００８２】
【表２】
2007119857.tif 000003
【００８３】
（考察）
表２及び図１１に示す結果から、実施例３及び４のバイオロジカルインジケータは、比較例２のバイオロジカルインジケータに比して、より短時間のプラズマ照射でエンドトキシンが分解され易いことが明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明のバイオロジカルインジケータは、作用線を面照射して滅菌等を行う滅菌装置等の効力を評価する指標として好適に使用することができる。
【図１】
2007119857.tif 000004
【図２】
2007119857.tif 000005
【図３】
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【図１０】
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【図１１】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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