【誤訳訂正書】
【提出日】令和1年11月14日(2019.11.14)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
【図１】マウスにおいてガドコレチン酸ナトリウム塩を用いる実施例３のin vivo試験のタイミング。
【図２】顕微鏡画像サンプリングスキーム。
【図３】顕微鏡画像中の血管（１および２）、および蛍光強度を計算する顕微鏡画像のピクセルごとの直近の血管からの距離を示す等距離線を同定する実験的試験に用いる組織学的方法の模式図。例えば、このスキームにおいて、A点は、血管１から20〜30μm離れており、B点は血管２から10〜20μm離れている。C点は、血管２から40〜50μm離れているが、血管１から30〜40μm離れているので、その距離は、直近の血管（血管１）から30〜40μmである。
【図４】血管壁からの特定距離（ｘ）の各ピクセル毎に計算した蛍光強度値から得た蛍光強度減衰曲線。蛍光強度減衰曲線下面積は、選択した間隔、すなわち、血管壁から蛍光がバックグラウンド値に近づく距離で数値的に積分して該強度減衰曲線を計算する。
【図５】実施例３のin vivo試験において、各動物について腫瘍縁において計算したFITC-アルブミン減衰AUC(1〜200μm) (平均値)の組織学的推定値と回帰線でプロットしたktrans mL＼(min x g) x 100の対応値の相関。
【図６】実施例３のin vivo試験において、各動物について腫瘍コアにおいて計算したFITC-アルブミン減衰AUC(1〜200μm) (平均値)の組織学的推定値と回帰線でプロットしたktrans mL＼(min x g) x 100の対応値の相関。
【図７】PTX処理腫瘍のそれぞれコアおよび縁における実施例４にてin vivoでB22956/1について測定した部分血漿量fPVおよび移動係数KtransのDCE-MRI値の増加のグラフ表示（ボックス−プロット）。
【図８】PTX (左画像)およびビークル(右画像)で処置後24時間の病的組織(異種移植腫瘍)で記録された解剖学的MRI画像と重ね合わせた（overimposed）ピクセル毎のDCE-MRI測定Ktrans値を報告する実施例４のin vivo試験から得た比較パラメトリック画像。該画像は、PTXで処理した異種移植腫瘍におけるアルブミンの空間的分布の増加を示す。
【図９】実施例５のin vivo試験から得た組織学的画像。パネルA：FITC-アルブミン染色組織学的画像；パネルB：閾値血管領域；パネルC：直近血管からの距離のマップ；パネルD：Cy5-CTX染色組織学的画像。
【図１０】対応する解剖学的MRI画像と重ね合わせたピクセル毎のDCE-MRI測定Ktrans、fPV、初期AUC比、後期AUC比、平均増強(Avg. Enh.)値を示す実施例５のin vivo試験から得た比較パラメトリック画像。パネルは、筋肉およびAIF (動脈血)部位も示す。該パラメトリック画像において、重ね合わせたピクセルの明度を該パラメーター値の測定値として用い、測定パラメーターの値が高ければ、該画像のピクセルはより明るい。
【図１１】左パネルは、マウスの腹部部位のMRI断面図(矢印は、A431異種移植腫瘍塊を示す)を示し、右パネルは、画像中の白色部位として示されるAVGENH＞57 (57は測定した閾値である)の腫瘍のピクセルと重ね合わせた同じ断面図を示す。図から、腫瘍部位内の「好ましい」または「陽性」ピクセルの量および分布を速やかに理解することができる。
【図１２】PTXまたはビークルで前処置した皮下A431ヒト扁平上皮（hepidermoid）癌異種移植片を有するヌードマウスNCRにCy5-CTXを用いることによる実施例５のin vivo試験において計算した平均蛍光減衰曲線。約20μmの範囲に分割した２つの曲線間の統計的有意差をプロット下の線で示す。
【図１３】DCE-MRIの結果と組織学的推定値に対応する実施例５の比較試験のグラフ表示。さらにスキームは、「好ましい」(すなわち「浸透性」)腫瘍を「好ましくない」(すなわち「非浸透性」)腫瘍とDCE-MRIに基づいて区別した結果、および区別するために用いた選択基準を示す。図において、AVGENH＞57のピクセルの分画 (各腫瘍ROIのすべてのピクセルから計算した)は、fAUC350.550の値との統計的に有意な相関を示した (斜めの線はp値＜0.01、Parson Corr. Test（ピアソン相関検定）)。実際に、「好ましい」腫瘍(白色ドットは、0.5を超えるAVGENH＞57のピクセルの分画であった。)は、「好ましくない」より高いfAUC値を示した（縦線は、カットオフ値を示す）。（発明の詳細な説明）
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
本発明の適切な薬物動態パラメーター（一般的にはｐで表す）の非限定的リストには以下のものが含まれる：
・Ktrans(min-1)：血漿と血管外細胞外腔(EES)の間の容量移動定数（volume transfer constant）である。血管から血管外-細胞外(EES)腔への該物質の浸出に関するものである。
・fPV（部分血漿量）：血液の容量および局所（腫瘍）血管新生の指標をもたらす。
・Kep (min-1)：EESと血漿（より正確にはEESから血液への、したがって溶質の除去）の速度定数であり、関心組織または領域における血管外−細胞外空間の部分（fraction）に関連する。
・AUCt1,t2 (曲線下面積、min x mol/L)：造影剤濃度時間プロフィールの積分値である。例えば、AUC20.30およびAUC10.20は、造影剤注射後20〜30分間および10〜20分間のAUC計算値である。
・AUCEt1,t2 (シグナル増強曲線下面積、min)：MRIシグナル増強時間プロフィールの積分値である。例えば、AUCE20.30およびAUCE10.20は、造影剤注射後20〜30分間および10〜20分間のAUCE計算値である。
・IAUCT (時間-濃度曲線下初期面積、min x mol/L)：造影剤注射後に得られる最初の時点および最終時点Tにわたり計算した造影剤濃度曲線の分析値である。
・IAUCET (時間-シグナル増強曲線下初期面積(min))：造影剤注射後に得られる最初の時点および最終時点Tにわたり計算したシグナル増強曲線の積分値である。
・AVGENH (平均シグナル増強またはAve. Enh.（本明細書では互換性に用いる）：注射後に得られるすべての時点で計算した平均シグナル増強値である。
・EARLYAUCRATIO(または初期AUC比（本明細書では互換性に用いる）：目的とするROI(例えば腫瘍または筋肉)のIAUC1を(造影剤後最初の１分間に計算した)血液のIAUC1で割って計算する。本発明の造影剤のように、注射後最初の１分間の浸出（血管からの）がわずかである造影剤では、EARLYAUCRATIOの値は、腫瘍の部分血漿量に関連する。
・LATEAUCRATIO (後期AUC比、本明細書では互換性に用いる)：注射後20〜30分間(AUC20,30)の関心領域の増強曲線下面積を血液において測定したIAUC1で割って計算する。この量は、浸出した造影剤の量、すなわち、直接ktransおよびkepの値に関連する。
・後期および初期ENHANCEMENTは、後期および初期AUCRATIOと操作上異なるが実質的に等価（すなわち同じ量を表す）である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
一般用語において、本発明のDCE-MRI法の主要工程には以下のものが含まれる：
ａ）病的身体領域または関心領域内の適切な造影剤の移行中に得られるMRI画像を得、得られたMRI画像から造影剤濃度-時間プロフィール（または濃度-時間曲線（本明細書では互換性に用いる）を計算し；
ｂ）計算した濃度-時間プロフィールから病的組織内の造影剤で示された薬物動態に関連する数値ディスクリプタを抽出し；
ｃ）計算したパラメーター値から該組織内の高分子輸送の評価を得る。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
上記方法の要点は、各収集DCEMRI画像内の関心領域の同定を含む。関心領域またはROI（本明細書では互換性に用いる）は、該診断法を適用する身体部位（または組織またはその部分）、すなわち組織レベルで高分子の分布に関連する生理学的特性を観察する特定部位を意味する。典型的には、記録した画像における関心領域 (ROI)は、病的部位(典型的には、腫瘍部位または腫瘍ROI（本明細書では互換性に用いる）)により示されるが、目的とする高分子溶質の浸出が実質的にないかまたは少なくともわずかである健康な筋肉により示される参照領域、および場合により血管領域（または血液部位）も、通常、計算および/または比較のため同定する。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
好ましい態様によれば、本発明のDCE-MRI法は、本質的にDCE-MRI実験で得られたシグナル時間曲線の薬物動態モデリングを利用し、主要工程として以下のものを含む：
i)観察下で病的領域、組織、または塊内への適切な常磁性造影剤の通過中に得られるDCE-MRI画像からシグナル強度曲線、および場合により参照領域 および/または血管部位からの同等の曲線を得、MRIシグナル強度を造影剤濃度に変換して濃度曲線を得、
ii)薬物動態モデルによる濃度曲線を適合させて、該組織、領域、または塊への造影剤の輸送に関連する薬物動態パラメーターpiの推定値を得、
iii)得られた薬物動態パラメーター値から観察下で該組織または領域内の目的とする高分子溶質の送達を評価する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５２】
好ましくは、上記DCE-MRI法は、さらに、例えばダイナミック画像化法を開始する前に、観察下で病的身体領域または部位の形態学的MRI画像を得ることを含んでなり、記録したDCE-MRI画像内で、目的とするROI、典型的には腫瘍部位、参照領域、および場合により血液部位の同定が良好な解剖学的解像度で可能になる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
該方法の工程ｉ）のDCE-MRI画像の収集物は、典型的には1〜30分間の範囲、好ましくは1〜20分間、より好ましくは1〜15分間の造影剤投与後からMRI取得終点Tまでの全取得時間ウィンドウ（T）、あるいはまた造影剤投与からMRI取得終了までを含む任意の連続的、または非連続的な時間ウィンドウについて適切に得ることができる。該方法の工程ii)で得ることができる薬物動態パラメーターの適切な例には、移動係数Ktrans、速度係数Kep、および部分血漿量fPVが含まれる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
したがって、特に好ましい態様において、本発明は、適切な常磁性造影剤を、病的身体領域、部位、組織、または固体塊への目的とする高分子溶質の送達のin vivo推定値を得るために用いる、主要工程として以下の工程を含むDCE-MRI法に関する：
a)目的の病的身体領域、組織、部位、または塊内への造影剤の移行によるDCE-MRI画像、および場合により、良好な解剖学的解像度のさらなるMRI画像のコレクションを得、関心領域、典型的には腫瘍部位、参照領域、および場合により収集したDCE-MRI画像内の血管部位を同定し、同定した部位内のシグナル強度曲線を得、
b)所望により、造影剤投与からMRI取得終了を含む任意の連続的または非連続的な時間ウィンドウにおけるAVGENHおよび/またはAUCE値を決定し、
c)工程a)で得られたMRIシグナル強度値を造影剤濃度値に変換して濃度-時間曲線を作成し、
d)所望により、造影剤投与からMRI取得終了を含む任意の連続的または非連続的な時間ウィンドウにおけるAUG値を決定し、
e)薬物動態モデルによる該得られた濃度曲線を適合させてKtransの推定値を得、
f)評価したパラメーターの得られた推定値から目的とする高分子溶質の送達を評価する。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
この点で、例えば、Ktrans、fPV、AVEGNH、IAUCT IAUCET、AUC、AUCE、LATEAUCRATIOおよび/またはEARLYAUCRATIO、好ましくは、Ktrans、AVEGNH、AUC、およびAUCEを含む各上記DCE-MRI由来薬物動態パラメーターpは、すべての病的領域または腫瘍容積をサンプリングする収集した各DCE-MRI画像の病的(腫瘍)領域および参照領域のそれぞれにおいてピクセル毎に（またはボクセル毎に（該画像または身体容積が２次元か３次元かに応じて））決定される。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
本発明の方法で決定し、対応する解剖学的MRI画像と重ね合わせたKtrans、fPV、EARLYAUCRATIO、LATEAUCRATIO、平均増強(AVEGNH)のピクセル毎のDCE-MRI測定値を示す実施例５のin vivo試験から得られた比較パラメトリック画像を、例えば図１０に示す。パネルは基準（筋肉）およびAIF (動脈血) 部位も示す。該図のパラメトリック画像において、重ね合わせたピクセルの輝度をパラメーター値の尺度として用い、測定したパラメーター値がより高いと、画像中のピクセルはより明るい。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
したがって、２セットのパラメトリック値は、評価した各パラメーター：１つは目的とするROI（すなわち病的部位）由来のものと他方は参照領域由来のものについて時間通りに得られる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
次に、高分子送達の評価は、評価したパラメーター、病的組織または関心領域中の各ピクセル（またはボクセル）で測定した推定値を健康な参照領域で得られた対応する値と比較し、非病的(健康)部位の推定値より統計的に有意に高い値を有するピクセル/ボクセル (病的部位内の)の画分を評価することにより行う。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
この点で、基準(非病的)部位内で決定した薬物動態パラメーター値を用いて、平均(μ)および標準偏差(σ)で特徴づけた基準統計的分布を定義する。次に、各推定薬物動態パラメーターについて、病的ROIからピクセル毎に得た値と参照ROI由来の対応参照統計的分布の比較試験を行い、各記録したDCE-MRI画像の各腫瘍ROIについてμ＋3σ (すなわち、ピクセル/ボクセル（ここで、pi＞μ＋3σ）（ここで、piは、該薬物動態パラメーター(病的ROIの各ピクセル/ボクセル中)の測定値である。μおよびσは、それぞれ対応する参照統計的分布の平均および標準偏差である。）より大きいパラメーター値をもたらすピクセルの分画を同定し、計算する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
より図式的には、工程ｆは、好ましくは以下により実施する：
1. 好ましくは、Ktrans、AVGENH、fPV、AUCE、AUC、EARLYAUCRATIO、およびLATEAUCRATIO、工程a)で収集した各DCE-MRI画像の参照領域においてピクセルベースで決定した値の平均（μ）および標準偏差（σ）から選ばれるパラメーターを含む、目的のDCE-MRIパラメーター pそれぞれを計算し、
2. 該DCE-MRIパラメーターそれぞれについてμ＋3σ閾値を計算し、
3. 回収したDCE-MRI画像それぞれにおいて、目的のパラメーター値 pi＞μ＋3σを示す病的または腫瘍ROI中のピクセルを同定し、
4. 全病的領域または腫瘍容量をサンプリングするすべてのDCE-MRI画像の腫瘍ROIから閾値(μ＋3σ)を超えるパラメーター値を示すピクセルの分画Dを計算し、
5. カットオフ値、例えば0.5を決め、D＞0.5の「浸透性」または「好ましい」病的身体部位または腫瘍を定義する。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１６】
特に、経内皮透過性(KTrans)および部分血漿量(fPV)は、２コンパートメント（bi-compartmental）薬物動態モデルの適用によるダイナミックMRI画像データから計算し、曲線下初期面積(IAUCT)は、典型的には造影剤投与からMRI取得終了までの種々の時間ウィンドウで計算した。次に、腫瘍の高分子浸透性を最終MRIセッション後の尾静脈から投与した蛍光標識ウシ血清アルブミンにより検討した。顕微鏡画像を用い、自動閾値化法により血管密度の尺度として腫瘍中の蛍光アルブミンによる染色領域のパーセンテージを定量した。腫瘍の血管外腔におけるアルブミン浸出を、例えば図２に示す様に腫瘍の縁とコアから得た組織資料から血管外にみられる蛍光に基づいて評価した。特に、アルブミン蛍光を、直近の血管から一定の距離にあるすべてのピクセルについて平均化し、例えば図３に記載の最適化した方法を用いて血管壁からの距離に応じて保存することにより、該腫瘍の血管外腔におけるアルブミンの利用可能性、すなわち浸出したFITC-アルブミンの量の定量と、直近の血管から距離ｘのその濃度、すなわち、細胞外腔内のその実際の分布および希釈の低下(例えば図４に示す)を得る。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２７】
特に、Paclitaxel（登録商標）で前処置した腫瘍で、ビークルのみを投与した腫瘍で測定された値より部分血漿量の％fPV(％)およびKtrans値の統計的に有意な増加がみられ、これは、PTX処置により促進されることが知られている腫瘍環流および透過性の増加と完全に一致する。この点で、PTX処置後24時間の腫瘍縁およびコアで得られたfPV (％)およびKtransのDCE-MRI推定値のボックスプロットを図７に示す。実際に、PTX処置により促進される腫瘍環流の変化と完全に一致して、図7のプロットは、薬物動態パラメーター fPVおよびKtranの中央値がコアと縁の両方ともビークル群で低かったが、このEPR増強剤で促進された腫瘍環流の変化（該環流の増加）と一致してPTX前処置動物で増加が見られたことを示す。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３３】
B22956/1の動力学および分布に対するPTX処置の促進効果を、最初に本発明の方法により測定した。特に、Ktrans、fPV、EARLYAUCRATIO、LATEAUCRATIO、およびAVGENH値を、PTXおよびビークル処置の24時間後にピクセル毎に評価した。PTX処置マウスからピクセル毎に測定し、対応する解剖学的MRI画像と重ね合わせた上記パラメーター値を示すパラメトリック画像を図10に示す（より明るいシグナルはより高いパラメーター値を示す）。結果の統計的評価に用いる筋肉およびAIF（動脈血）領域（ROI)を示すパネルも該図に示す。PTX処置およびコントロールマウスから得た上記薬物動態パラメーターの数値推定値を、実施例の表Gにまとめ、比較しているが、これらは、物質が促進することが知られている組織的（tissutal）拡散性に対する効果と一致する(PTX効果に対する上記引用文献を参照のこと)、Ktrans、LATEAUCRATIO、AUC20-30、およびAVGENHなどのパラメーターの統計的に有意な増加がPTX処置腫瘍で観察されたことを示す。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３７】
この点で、AVGENHを、そのロバスト性および試験しやすさから、本発明の薬物動態パラメーターの非限定的例として選んだ。その値を、全腫瘍容量をサンプリングするMRI画像のそれぞれで得た腫瘍ROIにおいてピクセル毎に測定した。AVGENH＞57のピクセル（ここで、後者の値が記録したMRI画像の基準(筋肉)部位から決定した該パラメーターの閾値である）を「好ましい」または「浸透性」として同定した。AVGENH＞57の腫瘍のピクセルと重ね合わせた解剖学的画像を図11に示す。これは、腫瘍ROI内の「好ましい」ピクセルの量と分布の正しい評価に同意する。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７５】
造影剤濃度の推定
腫瘍部位および血液のプレコントラストR1値を、変動フリップ角FLASH画像から測定した。該方法は、θに応じたS(θ,i,j)の測定値の線形型のピクセル毎の最小二乗フィッティングからなった（ここで、S(θ,i,j)は、θに等しいフリップ角でピクセル (i,j)で測定したシグナルである。）。
腫瘍ROIおよび血液のポストコントラストR1値は、下記式を用いて造影剤投与の前および後に得られたダイナミック3D画像の平均プレコントラストR1値および平均シグナル強度からROIについて計算した。
2018188448.tif 000001
2018188448.tif 000002
［式中、R1(ROI,t)は、ROI ROIについて時間ｔで計算した平均R1である。S(ROI,t)は、ROI ROIについて時間ｔで計算した平均シグナル強度である。Spre(ROI)は、プレコントラスト注射画像からROI ROIにおいて測定した平均シグナルである。R1プレおよびポストコントラストを評価したら、時間に応じた平均CA組織濃度を周知の関係により計算する。
2018188448.tif 000003
［式中、r1,CAはCA緩和能である。CCA(ROI,t)は、時間ｔでROI ROIについて測定した造影剤濃度である。］
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１７８】
血管終末を含む場合の目的とする組織中のCAの動力学的挙動を説明する微分方程式を以下に示す。
2018188448.tif 000004
(1)
３つのパラメーターを解析する微分方程式を以下に示す。
2018188448.tif 000005
［式中、Ctis(t)およびCP(t)は、それぞれ腫瘍組織および血漿中の時間に応じたガドリニウム濃度である。Ktransは移動定数である。Kepは速度定数である。fPVは部分血漿量である。］
Ktrans、Kep、およびfPV値は、常套的線形最小二乗包を用いてDCE-MRIデータから推定することができる(例えば、Kenya Murase、2004、MRM；51：858-862、および上記文献参照)。
この点で、特記しない限り、Ktransは本明細書ではkTranまたはkTrans mL＼(min x g) x 100ともいう（後者は単位測定を表す場合である）。また、fPVは本明細書ではfPVまたはfPV(％)ともいう。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９１】
In vivo DCE-MRI画像化
PTXおよびビークル処置したWM1552/5メラノーマ異種移植保持ヌードマウス(N=4、マウス／群)をPTX投与後24時間にDCE-MRIで分析した。環流および透過性が病変のサイズの影響を受けるのを避けるため、PTXおよびビークル処置腫瘍の体重を一致させた(それぞれ、平均＝603 mgおよび503 mg)。磁気共鳴画像化スキャンを、7 Tesla/30cm磁石および35mmバードケージRFコイルを装着した、小齧歯類専用のBioSpec AVIIIシステム(Bruker BioSpin)を用いて行った。スキャンの継続時間を通して、動物を麻酔制御下においた(約30％ O2、70％ N2、および0.8〜1％イソフルラン)。腫瘍の血管新生を、本発明の造影剤の非限定的例としてB22956/1 (Bracco Imaging SpA) 0.1 mmol/kgを注射した後に得られた、以下のパラメーターを用いる74トランスバーサルFLASH (Fast Low Angle SHot) 2次元(2D) T1強調スキャンを含むダイナミックコントラスト増強(DCE)系により観察した：TR/ TE 100/3.5 ms、フリップ角(FA) 90°、マトリックスサイズ128 x 256、視野2.5 x 2.5 cm2 (面内解像度約200 x 100 mm2に相当する)、6スライス、2 mm厚、取得時間59秒/画像。同じパラメーターを用いる１スキャンをCA注射前に行った。腫瘍中のプレコントラストT1値を、多スライス可変フリップ角FLASHを用いて測定した。すべてのMRI実験の画像2D再構築を、スキャナーソフトウエアParaVisionを用いて行った。画像後処理およびデータ分析は、画像J下で操作する社内開発手順により行った(Abramoff、M.D.、Magalhaes、P.J.、Ram、S.J. 「Image Processing with ImageJ」. Bio光子ics International、volume 11、issue 7、pp. 36-42、2004)。得られた推定値を図7にボックスプロットで示す。図７は、PTX処置腫瘍のコアおよび縁の両方におけるDCE-MRI-推定B22956/1部分血漿量fPVおよび移動係数の増加を示す。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１０】
薬物動態分析
例えば上記実施例３および引用文献に記載の２コンパートメント薬物動態モデルを、腫瘍組織の造影剤の動力学的挙動を説明するため、より正確には腫瘍中の血漿と血管外細胞外腔(EES)の間の交換の動力学を説明するために同様に用いた。同じ微分方程式を、血管終末が含まれる場合に目的とする組織中のCAの動力学的挙動を説明するために用いた。
2018188448.tif 000006
同様にして下記式：
2018188448.tif 000007
を示す［式中、Ctis(t)およびCP(t)は、それぞれ腫瘍組織および血漿における時間に応じたガドリニウム濃度である。Ktransは移動定数である。Kepは速度定数である。fPVは、部分血漿量である。］。次に、Ktrans、Kep、およびfPVの値を、例えば常套的線形最小二乗法を用いてDCE-MRIデータから推定した(これについては上記引用文献参照)。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１１】
動脈流入機能(AIF)、すなわち、時間に応じて表した注射した造影剤B22956/1の濃度を、さらに、血液roiに基づいてMRIシグナルを分析することにより計算した。薬物動態分析に用いるAIFを各動物について測定したAIFを平均して得た(プールAIFまたはポピュレーションに基づくAIF)。
ピクセル毎の分析を、右および左脇腹に接種した腫瘍に対応する目的とする部位ならびに筋肉について行った。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１２】
モデルフリー分析
このアプローチは、簡単、計算が速やか（特に、数千ピクセルにわたりピクセル毎に分析する場合に有益である）、およびロバスト性（最小二乗適合手順に依存しないため）により好都合である。
実際に、時間濃度曲線下面積(AUC)を、造影剤濃度またはシグナル増強曲線を数値的に統合した種々の時間ウィンドウについて計算した。AUC値を下記式により定義する。
2018188448.tif 000008
［式中、AUCはt1〜t2の時間ウィンドウで計算する。F(i)は、時点ｉで測定した造影剤の組織濃度またはシグナル増強である。］
AUCを注射後の最初の時点から出発して計算する場合は、該パラメーターを、濃度曲線下初期面積(IAUCT)（ここで、Tは時間ウィンドウの上限を示す。）という。この実験において、AUC10,20、AUC20,30、およびIAUC1を計算した。すなわち、該曲線下面積を、それぞれ注射後10〜20分、20〜30分、および最初の時点〜第１分の時間ウィンドウで計算した。次に、２つのさらなるパラメーターを、腫瘍と血液で計算したAUC値を組み合わせて計算して得た。特に、EARLYAUCRATIOを、目的とするROIおよび参照領域(腫瘍および筋肉)におけるIAUC1を血液について測定したIAUC1で割って得た。この点で、B22956/1(試験に用いた)の場合のように、注射後最初の１分間以内の造影剤の浸出がごくわずかであるときは、EARLYAUCRATIO値は腫瘍の部分血漿量(fPV)に対応することに注目すべきである。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１８】
閾値を超えるピクセル
上記DCE-MRIパラメーター値を、DCE-MRI画像から病的な関心領域（本実施例では腫瘍部位）においてピクセル毎に計算した。対応する解剖画像と重ね合わせた評価したパラメーターのそれぞれに対するピクセル毎のDCE-MRI分析の結果を示すパラメトリック画像を、例えば図10に示す。
次に、閾値を、未処置マウスの健康筋肉において該パラメーターについてピクセル毎に測定した値の平均（μ）および標準偏差(σ)を考慮することにより、目的とするパラメーター（p）についてピクセル毎に計算した（典型的には閾値μ＋3σとみなす）。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２２】
結果および結論
DCE-MRI パラメーターに対するPTX効果の分析
統計分析は、DCE-MRIデータを用いて行い、PTX処置後24時間の処置および非処置腫瘍を比較した。各腫瘍について、ピクセル毎に計算したDCE-MRI パラメーターの平均値、次いで２処置群の平均の分布を比較した。統計的有意差は、Mann Whitney U検定を用いて試験した。p値＜0.05(5％)を統計的有意差とみなした。
得られた結果を表Gに示す（DCE-MRI パラメーターを得るために用いたCTRLおよびPTX腫瘍の平均、標準偏差、および数を示す）。Mann-Whitney U検定の結果も示す。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３１】
適用した手順は、実質的に以下の工程を含んだ。
１．ROI (下記実施例では皮下移植腫瘍)における造影剤濃度時間プロフィールおよび/またはシグナル増強時間プロフィールを計算するためにMRIシグナル強度時間プロフィールをピクセル毎に分析する。
２．目的とするDCE-MRIパラメーター値をピクセル毎に計算する。下記実施例において、パラメーターAVGENHを、上記理由により本発明の典型的な、非限定的な、DCE-MRIパラメーターとして用いた。
３．参照領域 (下記実施例では背部筋肉)におけるAVGENH値の平均（μAVGENH)および標準偏差(σAVGENH)を計算する。
４．AVGENH＞(μAVGENH＋3σAVGENH)を示すROI (腫瘍)のピクセル (DAVGENH)の分画を同定する。
５．DAVGENH＞0.5を示す各腫瘍を「好ましい」群に割り当て、その他を「好ましくない」群に割り当てる。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高分子薬物またはプロドラッグによる処置に適した癌患者を、そのような処置に抵抗性と思われる患者から区別するための予測方法において使用するための、少なくとも１の常磁性複合体単位と、胆汁酸の残基または環式残基若しくは多環式残基から選択される少なくとも１の脂溶性部分を含んでなり、分子量が800〜3,000Daの、85％またはそれ以上のヒト血清アルブミンHSAとの非共有結合性タンパク質結合を示す常磁性造影剤であって、
該予測方法において、病的な身体領域、部位、組織、または塊への該高分子薬物またはプロドラッグの予測される送達のin vivo非侵襲性の定量的な予測が、DCE-MRI技術を使用するHSAの局所送達のin vivo定量により得られ、該定量的な予測が、
ａ）病的な身体領域、部位、組織、または塊内を該造影剤が通過中に得られるDCE-MRI画像を収集し、収集されたDCE-MRI画像内で少なくとも１つの関心領域と参照領域を同定し、同定された領域内のシグナル強度曲線を得、得られたシグナル強度値を造影剤濃度値に変換して濃度−時間曲線を描き、
ｂ）該濃度−時間曲線から、収集されたDCE-MRI画像の少なくとも１つの関心領域と参照領域における、該造影剤により示される薬物動態に関連するパラメーターの数値をピクセル毎に求め、
ｃ）評価パラメーターの各々について、関心領域および参照領域における各ピクセルで測定された数値を比較することにより、得られたパラメーターの数値から、目的とする高分子薬物またはプロドラッグの期待される輸送を予測する、
ことを含んでなる、
常磁性造影剤。
【請求項２】
ヒト血液循環中の終末相半減期が少なくとも４時間である、請求項１記載の常磁性造影剤。
【請求項３】
評価パラメーターが、fPV、Ktrans、AVGENH、AUC、AUCE、IAUCT、IAUCET、EARLYAUCRATIO、およびLATEAUCRATIOからなる群から選ばれる、請求項１または２に記載の常磁性造影剤。
【請求項４】
評価パラメーターが、Ktrans、AVGENH、AUC、AUCE、またはそれらの組合せから選ばれる、請求項３に記載の常磁性造影剤。
【請求項５】
定量的な予測が、
a)病的な身体領域、組織、部位、または塊内を前記造影剤が通過中のDCE-MRI画像を収集し、および所望により、良好な解剖学的解像度のさらなるMRI画像を得、次いで、収集したDCE-MRI画像において関心領域、参照領域、および所望により血管領域を同定し、および同定した領域内のシグナル強度曲線を得；
b)所望により、造影剤投与からMRI取得終了までの連続的または不連続的な時間ウインドウでのAVGENHおよび/またはAUCEの値を測定し、
c)工程a)で得られたMRIシグナル強度値を造影剤濃度値に変換して濃度−時間曲線を描き、
d)所望により、造影剤投与からMRI取得終了までの連続的または不連続的な時間ウインドウでのAUCの値を測定し、
e)該得られた濃度曲線を薬物動態モデルに適合させてKtransの推定値を得、
f)得られた評価パラメーターの推定値から目的とする高分子薬物またはプロドラッグの期待される送達を、参照領域において測定したパラメーターの各々について閾値を計算し、次いで、収集した各DCE-MRI画像において、決定した閾値を超えるパラメーター値を示す病的領域におけるピクセルを区別することにより予測する、
ことを含む、請求項１〜４のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項６】
工程ｆ）において、目的とする高分子薬物またはプロドラッグの送達の予測が、前記閾値を超えるパラメーター値を示すピクセルの分画Dから計算される、請求項５記載の常磁性造影剤。
【請求項７】
病的な身体領域、部位、または組織が、腫瘍、または癌状塊、または慢性炎症領域である、請求項１〜６のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項８】
高分子薬物またはプロドラッグの分子量が50kDaまたはそれ以上である、請求項１〜７のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項９】
高分子薬またはプロドラッグが高分子抗癌剤またはプロドラッグである、請求項８記載の常磁性造影剤。
【請求項１０】
高分子抗癌剤またはプロドラッグが抗体または抗体断片ベースの抗癌剤である、請求項９記載の常磁性造影剤。
【請求項１１】
高分子抗癌剤が、アレムツズマブ、ベバシズマブ、ブレントキシマブ、ベンドチン、セツキシマブ、ゲムツズマブ、イピリムマブ、パニツムマブ、トラスツズマブ、トシツモマブおよびリツキシマブからなる群から選ばれる請求項９記載の常磁性造影剤。
【請求項１２】
測定されたD値に基づき、高分子薬物またはプロドラッグの浸出および拡散をもたらす送達条件を適切に満している病的組織もしくは領域または腫瘍塊を、高分子薬もしくはプロドラッグを用いる薬理学的処置に浸透抵抗性を示す悪性新生物から区別することをさらに含んでなり、0.5を超えるD値をもたらす病的領域または腫瘍部位が高分子薬に対する適切な浸透を示すとみなされる、請求項６〜１１のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項１３】
治療する病的領域または腫瘍塊への不十分もしくは減少した浸透により高分子薬またはプロドラッグを用いる抗癌療法に対して抵抗性を示す癌患者を層別化するためのプロトコールまたは予測方法に用いるための請求項１〜１２のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項１４】
90％より高いヒト血清アルブミンとの非共有結合性タンパク質結合を示す請求項１記載の常磁性造影剤。
【請求項１５】
ガドコレチン酸、MS325のガドリニウム錯体、およびAAZTA-デオキシコール酸のガドリニウム錯体から選ばれる常磁性キレート錯体の生理学的に許容される塩から選ばれる請求項１〜１４のいずれかに記載の常磁性造影剤。
【請求項１６】
高分子薬物またはプロドラッグによる処置に適した癌患者を、該高分子薬物またはプロドラッグによる抗癌療法に対して抵抗性を示す患者と区別する方法であって、
ａ）請求項１に記載の造影剤が病的身体部位、領域、組織、または固体塊内を通過中に得られるDCE-MRI画像を収集し、収集したDCE-MRI画像において少なくとも１つの関心領域と参照領域を同定し、同定された領域内のシグナル強度曲線を得、
ｂ）工程ａ）で得られたシグナル強度値を造影剤濃度値に変換して濃度−時間曲線を描き、
ｃ）薬物動態モデルにより該濃度−時間曲線を適合させ、
ｄ）収集したDCE-MRI画像の関心領域と参照領域について、ピクセル単位で、該造影剤により示される薬物動態に関連するパラメーターの数値を求め、
ｅ）評価パラメーターの各々について、関心領域および参照領域における各ピクセルで測定された数値を比較することにより、得られたパラメーターの数値から目的とする高分子薬物またはプロドラッグの送達を予測し、
ｆ）予測した期待される送達に基づき、高分子薬物またはプロドラッグによる処置に適した癌患者を、治療する病的領域への不十分もしくは減少した浸透により高分子薬またはプロドラッグを用いる抗癌療法に対して抵抗性を示す癌患者と区別する、
ことを含んでなる方法。
【請求項１７】
病的領域における測定された高分子薬物またはプロドラッグの送達の程度、および適切な比較により、病的組織内の高分子輸送を改善する薬物による該病状の処置により生じる後者の増加または減少の程度を示す像が、決定した閾値を超える目的のパラメーター値を示す病的領域内のピクセルを、対応する形態学的MRI画像と重ね合わせることにより得られる、請求項５〜１２のいずれかに記載の常磁性造影剤。