【手続補正書】
【提出日】令和1年6月27日(2019.6.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体組織からのバイオマトリックス足場の製造方法であって、
a)第1基礎培地で生体組織を灌流するかまたは生体組織をホモジナイズし、ここで前記第1基礎培地の重量オスモル濃度は250mOsm/kg〜350mOsm/kgであり、前記第1基礎培地は無血清かつ中性pHであり;
b)前記第1基礎培地中に洗浄剤およびリパーゼを含む脱脂緩衝液で、段階(a)の生体組織を灌流するかまたは段階(a)のホモジネートを抽出し、ここで前記洗浄剤はドデシル硫酸ナトリウムまたはTritonX-100を含まない；
c)中性pHかつ塩濃度を含む緩衝液で段階(b)の組織を灌流するかまたは段階(b)のホモジネートを抽出し;
d)中性pHかつ無血清であり、250mOsm/kg〜350mOsm/kgの重量オスモル濃度を有する第2培地で段階(c)の組織またはホモジネートをリンスする段階;
を含み、それによって生体組織から、無傷のまたはホモジナイズしたバイオマトリックス足場であって、コラーゲンの少なくとも95%、生体組織のコラーゲン結合性マトリックス成分およびマトリックス結合性増殖因子、ホルモンおよびサイトカインを含む前記足場を製造する前記方法。
【請求項２】
洗浄剤が、非イオン性洗浄剤または双性イオン洗浄剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
非イオン性洗浄剤が、n-デシルα-D-グルコピラノシド、n-デシルβ-D-マルトピラノシド、n-ドデシルβ-D-マルトシド、n-オクチルβ-D-グルコピラノシド、ソルビタンエステル、n-テトラデシルβ-D-マルトシド、トリトン、Nonidet-P-40、またはポロキサマー188を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
双性イオン洗浄剤が、アルキルベタイン、アルキルアミドアルキルベタイン、N-ドデシル-N,N-ジメチル-3-アンモニオ-1-プロパンスルホナートまたはホスファチジルコリンを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
洗浄剤がデオキシコール酸ナトリウムを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
生体組織が、肝臓、肺、甲状腺、皮膚、膵臓、血管、膀胱、腎臓、脳、胆管、十二指腸、腹部大動脈、腸骨静脈、心臓および腸からなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
基礎培地が、RPMI 1640、DME/F12、DME、F12、ウェイマウスおよびウィリアム培地からなる群より選ばれる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
段階(c)の緩衝液の塩濃度が2M NaCl〜5M NaClである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
段階(c)の緩衝液がプロテアーゼインヒビターを更に含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
細胞培養物の製造方法であって、
a)請求項1に記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)段階(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)段階(b)のバイオマトリックス足場に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
【請求項１１】
細胞培養培地が、間質液に存在する成分の少なくとも1つを含み、前記培地の重量オスモル濃度が約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgであり、前記培地が無血清である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
細胞培養培地がRPMI-1640である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞が、バイオマトリックス足場の製造に用いられる生体組織の細胞と同じ型である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
細胞が、胚性幹(ES)細胞、人工多能性幹(iPS)細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞(AFSC)、任意の起源の間葉系幹細胞(MSC)、任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞または成人細胞、成熟細胞、正常細胞、罹患細胞、腫瘍細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
細胞が、肝臓細胞、実質細胞、星細胞、内皮細胞、肝細胞、胆管細胞、胆管細胞ではない胆樹細胞および膵臓細胞からなる群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】
幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる方法であって、請求項１０に記載の方法によって細胞培養物を製造することを含む前記方法において、細胞が幹細胞であり、成熟細胞のための細胞培養培地を処方し、それによって幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる前記方法。
【請求項１７】
細胞が、任意の型の成人細胞であるか、あるいは胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、胚葉幹細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞、間葉系幹細胞、一過性増殖細胞または任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞からなる群から選択される幹細胞または前駆細胞である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
細胞培養培地が、RPMI 1640、DME/F12、DME、F12、ウェイマウスおよびウィリアム培地からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
細胞培養物の製造方法であって、
a)請求項１記載のバイオマトリックス足場を凍結し;
b)段階(a)のバイオマトリックス足場から細胞培養基材として凍結切片を調製し;
c)段階(b)の細胞培養基材と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
d)段階(c)の細胞培養基材に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
【請求項２０】
細胞培養培地が、間質液に存在する成分の少なくとも1つを含み、前記培地の重量オスモル濃度が約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgであり、前記培地が無血清である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
細胞培養培地がRPMI-1640である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
細胞が、バイオマトリックス足場の製造に用いられる生体組織の細胞と同じ型である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
細胞が、胚性幹(ES)細胞、人工多能性幹(iPS)細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞(AFSC)、任意の起源の間葉系幹細胞(MSC)、任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞または成人細胞、成熟細胞、正常細胞、罹患細胞、腫瘍細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
細胞が、肝臓細胞、実質細胞、星細胞、内皮細胞、肝細胞、胆管細胞、胆管細胞ではない胆樹細胞および膵臓細胞からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる方法であって、請求項１９に記載の方法によって細胞培養物を製造することを含む前記方法において、細胞が幹細胞であり、成熟細胞のための細胞培養培地を処方し、それによって幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる前記方法。
【請求項２６】
細胞が、任意の型の成人細胞であるか、あるいは胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、胚葉幹細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞、間葉系幹細胞、一過性増殖細胞または任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞からなる群から選択される幹細胞または前駆細胞である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
細胞培養培地が、RPMI 1640、DME/F12、DME、F12、ウェイマウスおよびウィリアム培地からなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
細胞培養物の製造方法であって、
a)請求項１に記載のバイオマトリックス足場を粉末に粉砕し;
b)培養装置の少なくとも一部に段階(a)の粉末をコーティングして細胞培養基材を製造し;
c)(b)の細胞培養基材と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
d)(c)の細胞培養基材に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
【請求項２９】
バイオマトリックス足場の粉砕が、フリーザーミル内で液体窒素温度またはその付近の温度で行われる、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
系統依存性ウイルスのウイルス粒子の製造方法であって、
a)請求項１記載のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
b)(a)のバイオマトリックス足場に、系統依存性ウイルスに感染されることができる型および系統段階の細胞を播種し;
c)(b)の細胞を系統依存性ウイルスに感染させ;
d)バイオマトリックス足場での感染細胞を培養条件下に維持し;
e)感染細胞内で製造されるウイルス粒子を採取すること;
を含み、それによって系統依存性ウイルスのウイルス粒子を製造する前記方法。
【請求項３１】
系統依存性ウイルスが、C型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、ノロウイルスおよびヒト乳頭腫ウイルスからなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
バイオマトリックス足場の再細胞化によって形成される生物工学的組織の製造方法であって、
a)請求項１に記載のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
b)(a)のバイオマトリックス足場に、バイオマトリックス足場の製造に用いた生体組織と同じ組織型の細胞を播種し;
c)バイオマトリックス足場での細胞を培養条件下に維持し、それによって細胞から生物工学的組織が形成されること;
を含み、それによってバイオマトリックス足場の再細胞化によって形成される生物工学的組織を製造する前記方法。
【請求項３３】
補助デバイスとして使用するために、生物工学的組織を被験者に接触させる段階をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
細胞が肝臓細胞である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
下記の段階 a)〜 f)：
a)第1培地で生体組織を灌流するかまたは生体組織をホモジナイズし、ここで前記第1培地の重量オスモル濃度は約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgであり、前記第1培地は無血清かつ中性pHであり;
b)前記第1培地中にリパーゼおよび／または洗浄剤を含む脱脂緩衝液で、段階(a)の生体組織を灌流するかまたは段階(a)のホモジネートを抽出し、ここで前記洗浄剤はドデシル硫酸ナトリウムまたはTritonX-100を含まない；
c)中性pHかつ約2.0M〜約5.0M NaClの塩濃度を含む緩衝液で段階(b)の組織を灌流するかまたは段階(b)のホモジネートを抽出し;
d)中性pHかつ無血清であり、約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgの重量オスモル濃度を有する第2培地で段階(c)の組織またはホモジネートをリンスする段階であって;それによって生体組織から、無傷のまたはホモジナイズしたバイオマトリックス足場であって、コラーゲンの少なくとも95%および生体組織のコラーゲン結合性マトリックス成分およびマトリックス結合性増殖因子、ホルモンおよびサイトカインの大部分を含む前記足場を製造する段階；
e)前記バイオマトリックス足場を凍結し;
f)段階(e)のバイオマトリックス足場から細胞培養基材として凍結切片を調製する段階
を含む方法により製造される細胞培養基材。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５１】
組織に存在するコラーゲンの型は、宿主の年齢によって異なる。例えば、胎児肝臓は、高濃度のIII、IVおよびV型コラーゲン(4.0Mより上の塩濃度を必要とする)を有するのに対し、成人肝臓は、I、III、IV、V、VIおよびXVIII型コラーゲンの混合物(より低い塩濃度を必要とする)を有する。従って、バイオマトリックス足場の製造に必要な塩濃度は、その組織において優位なコラーゲンのレパートリーによって規定される。さらなる詳細に関しては、実施例1の文献23を参照のこと。
【表２】
2019017393.tif 000001
【表３】
2019017393.tif 000002
【表４】
2019017393.tif 000003
【表５】
2019017393.tif 000004
【表６】
2019017393.tif 000005
【表７】
2019017393.tif 000006
【表８】
2019017393.tif 000007
【表９−１】
2019017393.tif 000008
【表９−２】
2019017393.tif 000009
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕生体組織からのバイオマトリックス足場の製造方法であって、
a)第1培地で生体組織を灌流するかまたは生体組織をホモジナイズし、ここで前記第1培地の重量オスモル濃度は約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgであり、前記第1培地は無血清かつ中性pHであり;
b)前記第1培地にリパーゼおよび/または洗浄剤を含む脱脂緩衝液で段階(a)の生体組織を灌流するかまたは段階(a)のホモジネートを抽出し;
c)中性pHかつ約2.0M NaCl〜約5.0NaClの塩濃度であって、生体組織内で同定されるコラーゲンを不溶性に保つように選択された塩濃度を含む緩衝液で段階(b)の組織を灌流するかまたは段階(b)のホモジネートを抽出し;
d)緩衝液中、RNアーゼおよびDNアーゼで段階(c)の組織を灌流するかまたは段階(c)のホモジネートを抽出し;
e)中性pHかつ無血清であり、約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgの重量オスモル濃度を有する第2培地で段階(d)の組織またはホモジネートをリンスする段階;
を含み、それによって生体組織から、無傷のまたはホモジナイズしたバイオマトリックス足場であって、コラーゲンの少なくとも95%および生体組織のコラーゲン結合性マトリックス成分およびマトリックス結合性増殖因子、ホルモンおよびサイトカインの大部分を含む前記足場を製造する前記方法。
〔２〕第1培地が、塩、ミネラル、アミノ酸、ビタミンおよび糖を含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔３〕第1培地が基礎培地である、前記〔1〕に記載の方法。
〔４〕基礎培地が、RPMI 1640、DME/F12、DME、F12、ウェイマウスおよびウィリアム培地からなる群から選択される、前記〔3〕に記載の方法。
〔５〕第2培地が、間質液に存在する成分の少なくとも1つを含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔６〕段階(b)の脱脂緩衝液が、第1培地に約20単位/L〜約50単位/LのホスホリパーゼA2および約1%のデオキシコール酸ナトリウムを含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔７〕段階(c)の緩衝液の塩濃度が、成人肝臓からの足場製造に用いる場合、約3.4M NaCl〜約3.5M NaClであり、胎児肝臓からの足場製造に用いる場合、約4.0M NaCl〜約4.5M NaClである、前記〔1〕に記載の方法。
〔８〕段階(c)の緩衝液がプロテアーゼインヒビターをさらに含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔９〕プロテアーゼインヒビターが大豆トリプシンインヒビターである、前記〔8〕に記載の方法。
〔１０〕段階(d)の緩衝液がプロテアーゼインヒビターをさらに含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔１１〕プロテアーゼインヒビターが大豆トリプシンインヒビターである、前記〔10〕に記載の方法。
〔１２〕段階(a)〜(e)のすべての培地および緩衝液が、細胞外マトリックス成分を分解する酵素の検出可能な量を含まない、前記〔1〕に記載の方法。
〔１３〕バイオマトリックス足場を滅菌することをさらに含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔１４〕滅菌段階がバイオマトリックス足場のγ線照射を含む、前記〔13〕に記載の方法。
〔１５〕生体組織が肝臓組織、肺組織、膵臓組織、甲状腺組織、腸管組織、皮膚組織、血管組織、膀胱組織、心臓組織および腎組織からなる群から選択される、前記〔1〕に記載の方法。
〔１６〕生体組織が哺乳動物由来である、前記〔1〕に記載の方法。
〔１７〕前記〔1〕〜〔16〕のいずれかに記載の方法によって製造されるバイオマトリックス足場。
〔１８〕コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、ナイドジェン/エンタクチン、エラスチン、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、増殖因子、サイトカインまたはそれらの任意の組み合わせをすべてバイオマトリックス足場の一部として含むバイオマトリックス足場。
〔１９〕細胞培養物の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれかに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)段階(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)段階(b)のバイオマトリックス足場に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
〔２０〕細胞培養物の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれかに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)段階(a)のバイオマトリックス足場を凍結し;
c)段階(b)のバイオマトリックス足場から細胞培養基材として凍結切片を調製し;
d)段階(c)の細胞培養基材と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
e)段階(d)の細胞培養基材に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
〔２１〕細胞培養物の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれかに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)段階(a)のバイオマトリックス足場を粉末に粉砕し;
c)培養装置の少なくとも一部に段階(b)の粉末をコーティングして細胞培養基材を製造し;d)(c)の細胞培養基材と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
e)(d)の細胞培養基材に細胞を播種すること;
を含み、それによって細胞培養物を製造する前記方法。
〔２２〕バイオマトリックス足場の粉砕が、フリーザーミル内で液体窒素温度またはその付近の温度で行われる、前記〔21〕に記載の方法。
〔２３〕細胞培養培地が、間質液に存在する成分の少なくとも1つを含み、前記培地の重量オスモル濃度が約250mOsm/kg〜約350mOsm/kgであり、前記培地が無血清である、前記〔19〕〜〔22〕のいずれかに記載の方法。
〔２４〕培地がRPMI-1640である、前記〔23〕に記載の方法。
〔２５〕細胞が、バイオマトリックス足場の製造に用いられる生体組織の細胞と同じ型である、前記〔19〕〜〔24〕のいずれかに記載の方法。
〔２６〕細胞が、胚性幹(ES)細胞、人工多能性幹(iPS)細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞(AFSC)、任意の起源の間葉系幹細胞(MSC)、任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞または成人細胞、成熟細胞、正常細胞、罹患細胞、腫瘍細胞およびそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、前記〔19〕〜〔24〕のいずれかに記載の方法。
〔２７〕細胞が、肝臓細胞、実質細胞、星細胞、内皮細胞、肝細胞、胆管細胞、胆管細胞ではない胆樹細胞および膵臓細胞からなる群から選択される、前記〔19〕〜〔24〕のいずれかに記載の方法。
〔２８〕胚性幹細胞または人口多能性細胞の特定の運命への分化を促進するための組織特異的バイオマトリックス足場の使用。
〔２９〕羊水由来幹細胞または骨髄、脂肪組織、任意の胎児組織もしくは任意の出生後組織からの間葉系幹細胞または決定された幹細胞の特定の成人運命への分化を促進するための組織特異的バイオマトリックス足場の使用。
〔３０〕前記〔19〕〜〔27〕のいずれかに記載の方法によって製造される細胞培養物。
〔３１〕幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる方法であって、前記〔19〕〜〔27〕のいずれかに記載の方法によって細胞培養物を製造することを含む前記方法において、細胞が幹細胞であり、成熟細胞のための細胞培養培地を処方し、それによって幹細胞および/または前駆細胞の成熟細胞への分化を増進し加速させる前記方法。
〔３２〕細胞が、任意の型の成人細胞であるか、あるいは胚性幹細胞、人工多能性幹細胞、胚葉幹細胞、決定された幹細胞、周産期幹細胞、羊水由来幹細胞、間葉系幹細胞、一過性増殖細胞または任意の組織型の、分化方向を決定された前駆細胞からなる群から選択される幹細胞または前駆細胞である、前記〔31〕に記載の方法。
〔３３〕細胞培養培地が、RPMI 1640、DME/F12、DME、F12、ウェイマウスおよびウィリアム培地からなる群から選択される、前記〔31〕に記載の方法。
〔３４〕被験者に細胞を送達する方法であって、前記〔17〕または〔18〕のいずれかに記載のバイオマトリックス足場に細胞を播種し、次いで、細胞を播種されたバイオマトリックス足場を被験者に移植することを含む前記方法。
〔３５〕組織型における腫瘍細胞の転移能を同定する方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に腫瘍細胞を播種し;
d)(c)のバイオマトリックス足場を培養条件下に維持し;
e)(d)のバイオマトリックス足場での腫瘍細胞の増殖をモニタリングすること;
を含む前記方法において、バイオマトリックス足場での腫瘍細胞の増殖が、バイオマトリックス足場が製造された組織型に腫瘍細胞がin vivoでコロニーを形成することができることを同定し、それによって前記組織型における腫瘍細胞の転移能を同定する前記方法。
〔３６〕抗腫瘍処置に感受性のある腫瘍細胞を同定する方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に腫瘍細胞を播種し;
d)(c)のバイオマトリックス足場を培養条件下に維持し;
e)バイオマトリックス足場での腫瘍細胞に抗腫瘍処置を適用し;
f)(e)のバイオマトリックス足場での腫瘍細胞の増殖をモニタリングすること;
を含む前記方法において、(e)のバイオマトリックス足場での腫瘍細胞の増殖の欠如および/または腫瘍細胞の死が抗腫瘍処置に感受性のある腫瘍細胞を同定する前記方法。
〔３７〕宿主動物への移植のための腫瘍移植片の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に腫瘍細胞を播種し;
d)(c)のバイオマトリックス足場を培養条件下に維持し;
e)(d)のバイオマトリックス足場で腫瘍細胞集団を確立すること;
を含み、それによって宿主動物への移植のための腫瘍移植片を製造する前記方法。
〔３８〕宿主動物に腫瘍移植片を移植する段階をさらに含む、前記〔37〕に記載の方法。
〔３９〕腫瘍移植片が宿主動物に対して同系、同種または異種である、前記〔38〕に記載の方法。
〔４０〕系統依存性ウイルスのウイルス粒子の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に、系統依存性ウイルスに感染されることができる型および系統段階の細胞を播種し;
d)(c)の細胞を系統依存性ウイルスに感染させ;
e)バイオマトリックス足場での感染細胞を培養条件下に維持し;
f)感染細胞内で製造されるウイルス粒子を採取すること;
を含み、それによって系統依存性ウイルスのウイルス粒子を製造する前記方法。
〔４１〕系統依存性ウイルスが、C型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、ノロウイルスおよびヒト乳頭腫ウイルスからなる群から選択される、前記〔40〕に記載の方法。
〔４２〕バイオマトリックス足場の再細胞化によって形成されるオルガノイドの製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に、バイオマトリックス足場の製造に用いた生体組織と同じ組織型の細胞を播種し;
d)バイオマトリックス足場での細胞を培養条件下に維持し、それによって細胞からオルガノイドが形成されること;
を含み、それによってバイオマトリックス足場の再細胞化によって形成されるオルガノイドを製造する前記方法。
〔４３〕補助デバイスとして使用するために、オルガノイドを被験者に接触させる段階をさらに含む、前記〔42〕に記載の方法。
〔４４〕細胞が肝臓細胞である、前記〔42〕に記載の方法。
〔４５〕バイオマトリックス足場で培養された細胞内での目的とするタンパク質の製造方法であって、
a)前記〔1〕〜〔16〕のいずれか1つに記載の方法によってバイオマトリックス足場を製造し;
b)(a)のバイオマトリックス足場と細胞培養培地を培養装置内で接触させ;
c)(b)のバイオマトリックス足場に目的とするタンパク質を製造する細胞を播種し;
d)バイオマトリックス足場での(c)の細胞を培養条件下に維持し;
e)(d)の細胞によって製造される目的とするタンパク質を採取すること;
を含み、それによってバイオマトリックス足場で培養された細胞内で目的とするタンパク質を製造する前記方法。
〔４６〕段階(e)において採取した目的とするタンパク質を精製する段階をさらに含む、前記〔45〕に記載の方法。