【手続補正書】
【提出日】令和1年8月9日(2019.8.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターと、該プロモーターのさらに上流側に連結された配列番号１で示されるシスエレメントとからなるタンパク質発現用塩基配列における該シスエレメントの活性を向上する人工転写因子であって、
転写因子ＫｏｊＲの上流側１〜１１８ａａの塩基配列からなるＤＮＡ結合ドメインと、転写因子ＡｍｙＲの下流側１５０〜６０４ａａの塩基配列からなる活性ドメインとからなり、該ＤＮＡ結合ドメインの下流側に該活性ドメインが連結され、配列番号２で示されることを特徴とする人工転写因子。
【請求項２】
請求項１記載の人工転写因子において、人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記人工転写因子をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターとからなる人工転写因子発現用塩基配列を備えることを特徴とする人工転写因子。
【請求項３】
請求項１記載の人工転写因子において、前記シスエレメントは、前記タンパク質をコードする遺伝子のプロモーターの上流側に１〜１０個の範囲の数が連結されることを特徴とする人工転写因子。
【請求項４】
タンパク質をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターと、該プロモーターのさらに上流側に連結され人工転写因子により活性が向上されるシスエレメントとからなり、該シスエレメントが配列番号１で示されるタンパク質発現用塩基配列を含む発現ベクターであって、
該人工転写因子は、転写因子ＫｏｊＲの上流側１〜１１８ａａの塩基配列からなるＤＮＡ結合ドメインと、転写因子ＡｍｙＲの下流側１５０〜６０４ａａの塩基配列からなる活性ドメインとからなり、該ＤＮＡ結合ドメインの下流側に該活性ドメインが連結され、配列番号２で示されることを特徴とする発現ベクター。
【請求項５】
請求項４記載の発現ベクターにおいて、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記人工転写因子をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターとからなる人工転写因子発現用塩基配列を備えることを特徴とする発現ベクター。
【請求項６】
請求項４記載の発現ベクターにおいて、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記タンパク質をコードする遺伝子のプロモーターの上流側に１〜１０個の範囲の数の前記シスエレメントが連結されることを特徴とする発現ベクター。
【請求項７】
タンパク質をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターと、該プロモーターのさらに上流側に連結され人工転写因子により活性が向上されるシスエレメントとからなり、該シスエレメントが配列番号１で示されるタンパク質発現用塩基配列を含む形質転換体であって、
該人工転写因子は、転写因子ＫｏｊＲの上流側１〜１１８ａａの塩基配列からなるＤＮＡ結合ドメインと、転写因子ＡｍｙＲの下流側１５０〜６０４ａａの塩基配列からなる活性ドメインとからなり、該ＤＮＡ結合ドメインの下流側に該活性ドメインが連結され、配列番号２で示されることを特徴とする形質転換体。
【請求項８】
請求項７記載の形質転換体において、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記人工転写因子をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターとからなる人工転写因子発現用塩基配列を備えることを特徴とする形質転換体。
【請求項９】
請求項７記載の形質転換体において、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記タンパク質をコードする遺伝子のプロモーターの上流側に１〜１０個の範囲の数の前記シスエレメントが連結されることを特徴とする形質転換体。
【請求項１０】
請求項７記載の形質転換体において、麹菌を宿主細胞とすることを特徴とする形質転換体。
【請求項１１】
請求項１０記載の形質転換体において、前記麹菌は、アスペルギルス・オリゼＨＯ２株（独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター、千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、寄託日：平成２５年１１月１２日、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−０１７５０）であることを特徴とする形質転換体。
【請求項１２】
請求項１０記載の形質転換体において、前記麹菌は、アスペルギルス・オリゼＨＯ４株（独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター、千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８  １２２号室、寄託日：平成２６年１２月９日、受託番号：ＮＩＴＥ  ＢＰ−０１９８０）であることを特徴とする形質転換体。
【請求項１３】
タンパク質をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターと、該プロモーターのさらに上流側に連結され人工転写因子により活性が向上されるシスエレメントとからなり、該シスエレメントが配列番号１で示される人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含む形質転換体を培養し、培養後の培地又は該形質転換体内から、該タンパク質発現用塩基配列により発現亢進される遺伝子によりコードされるタンパク質を回収するタンパク質の製造方法であって、
該人工転写因子は、転写因子ＫｏｊＲの上流側１〜１１８ａａの塩基配列からなるＤＮＡ結合ドメインと、転写因子ＡｍｙＲの下流側１５０〜６０４ａａの塩基配列からなる活性ドメインとからなり、該ＤＮＡ結合ドメインの下流側に該活性ドメインが連結され、配列番号２で示されることを特徴とするタンパク質の製造方法。
【請求項１４】
請求項１３記載のタンパク質の製造方法において、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記人工転写因子をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターとからなる人工転写因子発現用塩基配列を備えることを特徴とするタンパク質の製造方法。
【請求項１５】
請求項１３記載のタンパク質の製造方法において、前記人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、前記タンパク質をコードする遺伝子のプロモーターの上流側に１〜１０個の範囲の数の前記シスエレメントが連結されることを特徴とするタンパク質の製造方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】人工転写因子及びタンパク質の製造方法
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、麹菌を用いて糖化酵素等のタンパク質を生産する際に用いられる人工転写因子及びタンパク質の製造方法に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明は、かかる事情に鑑み、特定の遺伝子のプロモーターをさらに活性化して、糖化酵素等のタンパク質の生産量を増加させることができる人工転写因子及びタンパク質の製造方法を提供することを目的とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
前記目的を達成するために、本発明の人工転写因子は、タンパク質をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターと、該プロモーターのさらに上流側に連結された配列番号１で示されるシスエレメントとからなるタンパク質発現用塩基配列における該シスエレメントの活性を向上する人工転写因子であって、転写因子ＫｏｊＲの上流側１〜１１８ａａの塩基配列からなるＤＮＡ結合ドメインと、転写因子ＡｍｙＲの下流側１５０〜６０４ａａの塩基配列からなる活性ドメインとからなり、該ＤＮＡ結合ドメインの下流側に該活性ドメインが連結され、配列番号２で示されることを特徴とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明の人工転写因子によれば、前記プロモーターの上流側に連結された前記配列番号１で示されるシスエレメントの活性が向上され、活性が向上された該シスエレメントにより該プロモーターの活性をさらに向上させることができる。この結果、活性が向上された前記プロモーターにより、前記遺伝子の活性が向上され、該遺伝子にコードされるタンパク質の生産量を増加させることができる。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
また、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列は、配列番号２で示される人工転写因子をコードする遺伝子と、該遺伝子の上流側に連結された該遺伝子のプロモーターとからなる人工転写因子発現用塩基配列を備えることが好ましい。前記人工転写因子発現用塩基配列によれば、前記配列番号２で示される人工転写因子をコードする遺伝子のプロモーターにより該遺伝子の活性が向上され、該遺伝子にコードされた人工転写因子が生産される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
また、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列において、前記配列番号１で示されるシスエレメントは、前記プロモーターの上流側に少なくとも１個連結されていることが必要であり、例えば１〜１０個の範囲の数が連結される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
本発明の発現ベクターは、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含むことを特徴とする。本発明の発現ベクターによれば、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含む形質転換体を製造することができる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
また、本発明の形質転換体は、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含むことを特徴とする。本発明の形質転換体によれば、前記遺伝子にコードされるタンパク質の生産量を増加させることができる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
また、本発明のタンパク質の製造方法は、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含む形質転換体を培養し、培養後の培地又は該形質転換体内から、該タンパク質発現用塩基配列により発現亢進される遺伝子によりコードされるタンパク質を回収することを特徴とする。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列によれば、前述のように前記遺伝子によりコードされるタンパク質の生産量を増加させることができる。そこで、本発明の人工転写因子により活性が向上されるタンパク質発現用塩基配列を含む形質転換体を培養すると、生産されたタンパク質が培養後の培地又は該形質転換体内に蓄積されるので、該タンパク質を回収することができる。