(57)【要約】  本発明の目的は、ペプチドチオエステルの新規な製造方法を提供することである。本発明においては、通常のペプチド合成を固相樹脂上で行い、切り出し後に得られるカルボン酸をp-toluenesulfonyl isocyanate と反応させた後、アルキル化し、チオールと反応させることにより、温和な条件において簡便にチオエステルを合成する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒは炭素数１〜１０のアルキル基、又は置換基を有していてもよいアリール基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；
（２）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Hal−ＣＨ2−Ｘ（式中、Halはハロゲン原子を示し、Ｘは水素原子、−ＣＮ、又は−ＣＯ2Ｒ1を示し、ここでＲ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させるか、又は上記ペプチド又は糖ペプチドとトリメチルシリルジアゾメタン若しくはMe3O？BF4とを反応させることにより、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；及び
（３）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｙ−ＳＨ（式中、Ｙは、炭素数１から１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基、炭素数２から１０のアルキニル基、アリール基  又はそれらの組み合わせからなる基を示し、これらの基は置換基を有していてもよい）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯ−Ｓ−Ｙ（式中、Ｙは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；
を含む、ペプチド又は糖ペプチドのチオエステルを製造する方法。
【請求項２】
Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドが、固相合成により合成されたペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ペプチドの長さが２〜５０アミノ酸残基である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
アミノ基の保護基が、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）、t-ブチルオキシカルボニル（Boc）またはベンジルオキシカルボニル（Cbz）である、請求項１から３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
工程（１）から（３）で使用する塩基が、３級アミン又は無機塩基である、請求項１から４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで表される化合物が、p-トルエンスルホニルイソシアネートである、請求項１から５の何れかに記載の方法。
【請求項７】
式：Hal−ＣＨ2−Ｘで表される化合物が、ヨードメタン（ＣＨ3Ｉ）又はヨードアセトニトリル（ＩＣＨ2ＣＮ）である、請求項１から６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
式：Ｙ−ＳＨで表される化合物が、ベンジルメルカプタン、ＨＳ（ＣＨ2）9ＣＯＯＣＨ3、又はＨＳＣＨ2Ｐ（Ｃ6Ｈ5）2である、請求項１から７の何れかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチドチオエステルの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペプチド合成においてブロック合成あるいはchemical native ligation 法が長鎖ペプチドの合成に有効であることが近年示されてきた。上記の手法においては何れも、ペプチドチオエステルが必須である。【０００３】
固相Fmoc ペプチド合成法によるチオエステル合成法としては、ピペリジンのかわりに弱い塩基を用いてFmoc 基を脱保護する手法（Direct Preparation of Peptide Thioesters Using an Fmoc Solid-Phase Method, X. Li, T. Kawakami, S. Aimoto, Tetrahedron Lett., 1998, 39, 8660-8672）、Kenner のSafety Catch リンカーを用いる手法（樹脂へのリンカーの導入やいちばん初めのアミノ酸残基の導入や切り出しが難しいことが知られており、限られた適用例しかない）（Solid-Phase Synthesis of Peptide C-Terminal Thioesters by Fmoc/tBu Chemistry、 R. Ingenito, E. Bianchi, D. Fattori, A. Pessi, J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, 11369-11374）、Fmoc 法によりペプチド鎖を伸長させ、切り出した後、カルボン酸をMe2AlCl-thiolによってチオエステルへと変換する方法（アミノ酸側鎖官能基が損なわれる場合もある）（Fmoc-Compatible Solid-Phase Peptide Synthesis of Long C-Terminal Peptide Thioesters, A. Sewing, D. Hilvert, Angew. Chem. Int. Ed., 2001, 40, 3395-3398）、並びにチオールを保護する手法(Glyのみに適用可能であり、側鎖保護基を選択的に脱保護できない欠点を持つ）(Fmoc Solid-Phase Synthesis of Peptide Thioesters by Masking as Trithioorthoesters、J. Brask, F. Albericio, K. J. Jensen, Org. Lett., 2003, 5, 2951-2953)が知られている。また、Native Chemical Ligation through in Situ O to S Acyl Shift, P. Botti, M. Villan, S. Manganinello, H. gaertner, Org. Lett., 2004, 6, 4861-4864には、側鎖に保護されたチオール基を持つエステル結合を有する残基を導入し、固相においてペプチド伸長反応を行い、切り出した後にチオール基の保護基を除去して、分子内でのO-からSへのアシルシフトにより、チオエステルを合成する手法が記載されているが、Fmoc 固相ペプチド合成において、Fmoc 脱保護時の塩基性条件におけるエステル部分の安定性については定かでない。さらに、Fmoc-Solid-Phase Synthesis of Peptide Thioesters Using an Intramolecular N, S-Acyl Shift, N. Ollivier, J-B. Behr, O. El-Mahdi, A. Blanpain, O. Melnyk, Org. Lett., 2005, 7, 2647-2650には、保護されたチオール基を持つアルコールを用いることにより、光延反応により窒素上においてアルキル化し、その後、チオール基の保護基を脱保護することにより分子内においてのチオールへのアシルシフトによりチオエステルを合成する方法が記載されているが、光延反応の収率に問題がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
現在ペプチド合成において主流となっている Fmoc 法においては、チオエステルを介して固相樹脂とペプチドを結合させた場合、チオエステル部分が塩基に弱いため、合成に困難が生じていた。本発明は、上記した問題点を解決した、ペプチドチオエステルの新規な製造方法を提供することを解決すべき課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討し、通常Fmoc 法で用いられるリンカー（クロロトリチルリンカー等）を用いて通常のペプチド合成を固相樹脂上で行い、切り出し後に得られるカルボン酸をｐ−トルエンスルホニルイソシアネートと反応させた後、アルキル化し、続いてチオールと反応させることにより、温和な条件において簡便にチオエステルを合成する手法を開発することに成功し、本発明を完成するに至った。【０００６】
即ち、本発明においては、通常のFmoc 法により合成できるペプチドを固相から切り出した後、C-末端カルボン酸を塩基(トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなど)存在下、ｐ−トルエンスルホニルイソシアネートと反応させることにより、トシルアミドとする。さらに、窒素原子上でヨードアセトニトリル又はヨードメタンなどによりアルキル化することにより、求核剤に対して活性化し、チオール類と反応させることにより、チオエステルに変換できる。また、窒素原子上でのアルキル化反応はMicrowave 照射により、著しく加速されることも見出している。またアルキル化は中性条件において光延反応でも行える。本発明の方法の反応は、温和な条件で進行し、側鎖官能基を損なうことがない。また、ペプチド合成後に様々なチオールを反応させることが可能であるので、チオエステルアルキル部又はアリル部の修飾を容易に行うことができる。また、チオエステルを反応させるペプチドについては、化学合成したペプチドを使用してもよいし、生体から単離したペプチド、タンパク質を使用してもよい。糖ペプチドを使用することもできる。【０００７】
即ち、本発明によれば、（１）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒは炭素数１〜１０のアルキル基、又は置換基を有していてもよいアリール基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；
（２）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Hal−ＣＨ2−Ｘ（式中、Halはハロゲン原子を示し、Ｘは水素原子、−ＣＮ、又は−ＣＯ2Ｒ1を示し、ここでＲ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させるか、又は上記ペプチド又は糖ペプチドとトリメチルシリルジアゾメタン若しくはMe3O・BF4とを反応させることにより、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；及び
（３）Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｙ−ＳＨ（式中、Ｙは、炭素数１から１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基、炭素数２から１０のアルキニル基、アリール基  又はそれらの組み合わせからなる基を示し、これらの基は置換基を有していてもよい）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯ−Ｓ−Ｙ（式中、Ｙは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程；
を含む、ペプチド又は糖ペプチドのチオエステルを製造する方法が提供される。【０００８】
好ましくは、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドは、固相合成により合成されたペプチドである。
好ましくは、ペプチドの長さは２〜５０アミノ酸残基である。
好ましくは、アミノ基の保護基は、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）、t-ブチルオキシカルボニル（Boc）またはベンジルオキシカルボニル（Cbz）である。【０００９】
好ましくは、工程（１）から（３）で使用する塩基は３級アミン又は無機塩基である。
好ましくは、式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで表される化合物は、ｐ−トルエンスルホニルイソシアネートである。
好ましくは、式：Hal−ＣＨ2−Ｘで表される化合物は、ヨードメタン（ＣＨ3Ｉ）又はヨードアセトニトリル（ＩＣＨ2ＣＮ）である。
好ましくは、式：Ｙ−ＳＨで表される化合物は、ベンジルメルカプタン、ＨＳ（ＣＨ2）9ＣＯＯＣＨ3、又はＨＳＣＨ2Ｐ（Ｃ6Ｈ5）2である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明の方法は、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチド（カルボン酸）をp-トルエンスルホニルイソシアネートなどの化合物と反応させる工程（工程１）、アルキル化する工程（工程２）、及びチオールと反応させる工程（工程３）より構成される。以下、工程１から３について順番に説明する。【００１１】
（１）工程１
工程１は、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒは炭素数１〜１０のアルキル基、又は置換基を有していてもよいアリール基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程である。【００１２】
本発明で使用するペプチド又は糖ペプチドは、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端にカルボキシル基を有するペプチド又は糖ペプチドである。ペプチド又は糖ペプチドは、化学合成（固相合成など）されたペプチドでよいし、生体から単離した天然のペプチド、タンパク質でもよい。本発明では、糖ペプチドを使用することもできる。Ｏ−結合型糖ペプチドは生体内においてRNA polymerase II の末端に繰り返し構造として存在し、転写過程において重要な役割を果たす。他にもGlcNAc 糖鎖の役割はシグナル伝達や糖尿病との関連が指摘されている。本発明においてペプチドという場合には、糖ペプチドをも含むことを意味する。ペプチドの長さは特に限定されず、２以上のアミノ酸残基を含むペプチドであれば任意のペプチドを使用することができる。ペプチドの長さは好ましくは、２〜５０アミノ酸残基程度である。【００１３】
ペプチドのアミノ基の保護基の種類は特に限定されず、当業者に公知の保護基を用いることができる。アミノ基の保護基の具体例としては、例えば、9-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）、ベンジルオキシカルボニル（Cbz ）、t-ブチルオキシカルボニル（Boc），p-ビフェニルイソプロピロオキシカルボニル等を挙げることができ、特に好ましくは9-フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）、t-ブチルオキシカルボニル（Boc）またはベンジルオキシカルボニル（Cbz）を用いることができる。【００１４】
工程１では、上記したようなペプチド又は糖ペプチドを、式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ（式中、Ｒは炭素数１〜１０のアルキル基、又は置換基を有していてもよいアリール基を示す）で表される化合物と塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒを有するペプチド又は糖ペプチドを合成する。【００１５】
Ｒが示す炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖又は分岐状の何れでもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などを挙げることができる。【００１６】
また、置換基を有していてもよいアリール基におけるアリール基としては、フェニル基又はナフチル基を挙げることができ、アリール基が有していてもよい置換基としては、上記したような炭素数１〜１０のアルキル基を挙げることができ、これらの置換基は１個でも２個以上の何れでもよい。【００１７】
式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで表される化合物の特に好ましい具体例としては、ｐ−トルエンスルホニルイソシアネートを挙げることができる。【００１８】
工程１で使用する塩基の具体例としては、３級アミン又は無機塩基を挙げることができ、好ましくは弱塩基である。３級アミンの具体例としては、トリエチルアミン、及びジイソプロピルエチルアミンなどを挙げることができる。無機塩基の具体例としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどを挙げることができる。【００１９】
工程１では、ペプチド又は糖ペプチド及びトリエチルアミン等の塩基を適当な溶媒（例えば、THF）中に含む溶液に、例えばｐ−トルエンスルホニルイソシアネートなどの式：Ｒ−ＳＯ2−Ｎ＝Ｃ＝Ｏで表される化合物を滴下する。混合物を室温でＮ2雰囲気下で攪拌し、次いでN,N'-ジメチル-1,3-プロパンジアミンを添加して、過剰のイソシアネートを破壊することができる。次いで、混合物をCHCl3などで希釈し、塩酸水溶液で洗浄し、水相をCHCl3で抽出する。合わせた相を洗浄、乾燥後、溶媒を減圧留去させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、反応生成物である、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒを有するペプチド又は糖ペプチドを得ることができる。この反応生成物は、次の工程２の反応に供される。【００２０】
（２）工程２
工程２は、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｒは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Hal−ＣＨ2−Ｘ（式中、Halはハロゲン原子を示し、Ｘは水素原子、−ＣＮ、又は−ＣＯ2Ｒ1を示し、ここでＲ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させるか、又は上記ペプチド又は糖ペプチドとトリメチルシリルジアゾメタン若しくはMe3O・BF4とを反応させることにより、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程である。【００２１】
式：Hal−ＣＨ2−Ｘにおいて、Halはハロゲン原子を示し、Ｘは水素原子、−ＣＮ、又は−ＣＯ2Ｒ1を示し、ここでＲ1は炭素数１〜１０のアルキル基を示す。Halが示すハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を挙げることができ、特に好ましくはヨウ素である。Ｒ1が示す炭素数１〜１０のアルキル基としては、直鎖又は分岐状の何れでもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などを挙げることができる。【００２２】
式：Hal−ＣＨ2−Ｘで表される化合物の具体例としては、ヨードメタン（ＣＨ3Ｉ）又はヨードアセトニトリル（ＩＣＨ2ＣＮ）などを挙げることができる。【００２３】
工程２で使用する塩基の具体例としては、３級アミン又は無機塩基を挙げることができ、好ましくは弱塩基である。３級アミンの具体例としては、トリエチルアミン、及びジイソプロピルエチルアミンなどを挙げることができる。無機塩基の具体例としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどを挙げることができる。工程２で使用する塩基は、工程１で使用する塩基と同一の塩基でもよいし、異なる塩基でもよい。【００２４】
工程２では、工程１の生成物であるＣ末端に−ＣＯＮＨ−ＳＯ2−Ｒ（例えば、トシルアミド基）を有するペプチド又は糖ペプチドを適当な溶媒（例えば、DMFなど）中に含む溶液に、式：Hal−ＣＨ2−Ｘで表される化合物（例えば、ヨードメタン又はヨードアセトニトリルなど）及び塩基を添加する。所定の温度（反応が進行する温度であれば特に制限されないが、例えば、５０から７０℃など）で一定時間反応させた後に、混合物に10％クエン酸水溶液及びCHCl3を添加する。分離後、水相をCHCl3で抽出し、合わせた相を洗浄、乾燥後、溶媒を減圧留去させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、反応生成物である、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを得ることができる。この反応生成物は、次の工程３の反応に供される。【００２５】
（３）工程３
工程３は、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒ（式中、Ｘ及びＲは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドと、式：Ｙ−ＳＨ（式中、Ｙは、炭素数１から１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基、炭素数２から１０のアルキニル基、アリール基  又はそれらの組み合わせからなる基を示し、これらの基は置換基を有していてもよい）で表される化合物とを塩基の存在下において反応させて、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯ−Ｓ−Ｙ（式中、Ｙは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを合成する工程である。【００２６】
式：Ｙ−ＳＨにおいて、Ｙは、炭素数１から１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基、炭素数２から１０のアルキニル基、アリール基  又はそれらの組み合わせからなる基を示し、これらの基は置換基を有していてもよい。Ｙが示す炭素数１から１０のアルキル基としては、直鎖又は分岐状の何れでもよく、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基などを挙げることができる。Ｙが示す炭素数２から１０のアルケニル基、及び炭素数２から１０のアルキニル基としては、上記したアルキル基（但し、メチル基は除く）における単結合を、二重結合又は三重結合に置き換えることにより得られる基を挙げることができる。なお、二重結合又は三重結合の数は１個でもよいし、２個以上の複数でもよい。Ｙが示すアリール基としては、フェニル基又はナフチル基を挙げることができる。Ｙは、炭素数１から１０のアルキル基、炭素数２から１０のアルケニル基、炭素数２から１０のアルキニル基又はアリール基の組み合わせからなる基でもよく、そのような組み合わせからなる基の具体例としては、メチル基とフェニル基の組み合わせであるベンジル基（Ｃ6Ｈ5−ＣＨ2−）を挙げることができる。また、Ｙが示すアルキル基などの基は置換基を有していてもよく、置換基としては、ＣＯＯＣＨ3、又は−Ｐ（Ｃ6Ｈ5）2基などを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。【００２７】
式：Ｙ−ＳＨで表される化合物の具体例としては、ベンジルメルカプタン、ＨＳ（ＣＨ2）9ＣＯＯＣＨ3、又はＨＳＣＨ2Ｐ（Ｃ6Ｈ5）2などを挙げることができる。【００２８】
工程（３）で使用する塩基の具体例としては、３級アミン又は無機塩基を挙げることができ、好ましくは弱塩基である。３級アミンの具体例としては、トリエチルアミン、及びジイソプロピルエチルアミンなどを挙げることができる。無機塩基の具体例としては、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウムなどを挙げることができる。工程（３）で使用する塩基は、工程（１）又は工程（２）で使用する塩基と同一の塩基でもよいし、異なる塩基でもよい。【００２９】
工程３では、工程２の生成物である、Ｃ末端に−ＣＯＮ（ＣＨ2Ｘ）−ＳＯ2−Ｒを有するペプチド又は糖ペプチドを適当な溶媒（例えば、DMFなど）中に含む溶液に、塩基及び式：Ｙ−ＳＨで表される化合物（例えば、ベンジルメルカプタンなど）を室温で添加し、混合物を室温でN2 雰囲気下で所定の時間攪拌する。混合物に、10％クエン酸水溶液及びCHCl3を添加し、分離後、水相をCHCl3で抽出する。合わせた相を洗浄、乾燥後、溶媒を減圧留去させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、反応生成物である、Ｎ末端に保護されたアミノ基を有し、Ｃ末端に−ＣＯ−Ｓ−Ｙ（式中、Ｙは上記と同義である）を有するペプチド又は糖ペプチドを得ることができる。【００３０】
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。
【実施例】
【００３１】
（１）Fmoc 法
NMP（N-メチルピロリドン）で1分（2回）洗浄した後、２５％ピペリジンのNMP溶液で5分、続いて10分処理する。
樹脂上のアミノ基：Fmocアミノ酸：HOBt：HBTU：DIEA（ジイソプロピルエチルアミン）を１：４：４：３．６：８のモル比で反応させる。Fmocアミノ酸、HOBt、HBTUをNMPに溶かし、DIEAを加えて、1から3分攪拌して樹脂に加え、1時間攪拌する。
HOBt、無水酢酸およびDIEAを含むNMP溶液を樹脂１gあたり２０mL程度加え、10分間攪拌する。ニンヒドリン試験などの呈色反応により未反応のアミノ基がないことを確認して、Fmoc基の除去操作に移る。【００３２】
（２）2-クロロトリチル樹脂からの保護ペプチドの切出
よく乾燥させた保護ペプチド樹脂に25％ヘキサフルオロイソプロピルアルコールのDCM（ジクロロメタン） 溶液を加えて60分間攪拌する。  樹脂を炉別し、HFIPのDCM溶液で洗浄する。炉液と洗液を合わせ、減圧下濃縮する。残分に水やエーテルなどを加えペプチドを沈殿させ、租ペプチドを得る。(例えば、Boc-Trp-Ser(t-Bu)-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Pro-OH)【００３３】
（３）液相法によるペプチド合成
Boc ペプチド及びCbzペプチドについては液相において合成を行った。また、固相反応ではFmoc 法で合成し、最後のペプチドにBoc アミノ酸やCbz アミノ酸を使用することによって、合成することも可能である。【００３４】
【化１】
2007049635.tif 000002
【００３５】
酸(1.77 g, 4.96 mmol)及びアミン(1.0 g, 4.96 mmol)を含むCH2Cl2溶液に、EDC (950 mg, 4.96 mmol) 及びHOBt (670 mg, 4.96 mmol)を室温で添加した。30分後、混合物に水を添加した。分離後、水相をCHCl3で抽出し、合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(5％ MeOH/CHCl3)。【００３６】
【化２】
2007049635.tif 000003
【００３７】
t-BuMe2SiH (0.27 ml, 1.65 mmol) 及び Pd(OAc)2 (12.3 mg, 0.055 mmol) 及びEt3N (0.25 ml, 1.76 mmol)のCH2Cl2 (5 ml)懸濁物を、室温でＮ2雰囲気下で攪拌した。15分後、この混合物に、ベンジルエステル(500mg, 1.10 mmol)のCH2Cl2溶液を添加した。2日後、混合物に飽和NH4Cl水溶液を添加した。分離後、水相をエーテルで抽出し、合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(50％酢酸エチル/ヘキサン)。【００３８】
（４）トシルアミドの合成
（例１）
酸（BocThr(Bn)-Gly-OH）(402 mg, 1.10 mmol)及びトリエチルアミン(0.18 mL, 1.32 mmol)のTHF（5 mL）溶液に、p-トルエンスルホニルイソシアネート(0.18 mL, 1.21 mmol)を滴下した。混合物を室温で30分間Ｎ2雰囲気下で攪拌し、次いでN, N'-ジメチル-1,3-プロパンジアミン(0.1 mL)を添加して、過剰のイソシアネートを破壊した。10分後、混合物をCHCl3で希釈し、1M  HCl水溶液で洗浄した。水相をCHCl3で抽出した。合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(10％ MeOH/CHCl3)。【００３９】
【化３】
2007049635.tif 000004
【００４０】
91％; 1H-NMR δ7.78 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.15-7.41 (7H, m), 6.77 (1H, br. s), 5.30 (1H, br. s), 4.53 (1H, d, J = 11.2 Hz), 4.38 (1H, d, J = 11.2 Hz), 4.11 (1H, m), 4.04 (1H, m), 3.80 (1H, dd, J = 5.6, 12.4 Hz), 3.75 (1H, dd, J = 5.6, 12.4 Hz), 3.65 (1H, m), 2.31 (3H, s), 1.36 (9H, s), 1.10 (3H, d, J = 6.8 Hz), [α]27D  +54.0 (c 1.0 CHCl3), MS (TOF) m/z 531 (M++Na),  calcd for C27H29N3O7S C, 57.79; H, 6.40; N, 8.09. found for C, 57.52; H, 6.38; N, 8.05【００４１】
（例２）
酸（BocTrp-Ser(t-Bu)-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(t-Bu)-Pro-OH）(68.3 mg, 0.050 mmol)及びトリエチルアミン(0.010 mL, 0.055 mmol)のTHF（0.10 mL）溶液に、p-トルエンスルホニルイソシアネート(0.010 mL, 0.055 mmol)を滴下した。混合物を室温で30分間Ｎ2雰囲気下で攪拌し、次いでN, N'-ジメチル-1,3-プロパンジアミン(0.1 mL)を添加して、過剰のイソシアネートを破壊した。10分後、混合物をCHCl3で希釈し、1M  HCl水溶液で洗浄した。水相をCHCl3で抽出した。合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(10％ MeOH/CHCl3)。【００４２】
【化４】
2007049635.tif 000005
【００４３】
76％; MS (TOF) m/z 1527 (M++Na)【００４４】
（例３）
カルボン酸(108 mg, 0.071 mg)、トリエチルアミン（0.012mL, 0.085 mmol）をTHF (0.40 mL)に溶解し、p-toluene isocyanate (0.012 mL, 0.079 mmol)を滴下した。溶液を３０分室温にて窒素雰囲気下撹拌した後、N, N'-dimethyl-1,3-propanediamine (0.1 mL)を加えて１０分撹拌し、過剰のイソシアネートをつぶした。クロロホルムで希釈し、１M HClにより洗浄した。水相をクロロホルムにより、抽出し、あわせた有機相を飽和食塩水により洗浄した。あわせた有機相をNa2SO4 により乾燥し、溶媒を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン：酢酸エチル１：４)により精製し、トシルアミドを定量的に得た。【００４５】
【化５】
2007049635.tif 000006
【００４６】
quant.; MS(TOF) m/z 1235 (M++Na)【００４７】
（５）N-アルキルトシルアミドの合成
（例１）
トシルアミド(147 mg, 0.28 mmol)のDMF(3.0 mL)溶液に、ヨードアセトニトリル(0.20 mL, 2.8 mmol)及び炭酸カリウム(58 mg, 0.42 mmol)を60℃で添加した。12時間後、混合物に10％クエン酸水溶液及びCHCl3を添加した。分離後、水相をCHCl3で抽出し、合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(50％酢酸エチル/ヘキサン)。【００４８】
【化６】
2007049635.tif 000007
【００４９】
51％; 1H-NMR δ7.87 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.42 (2H, d, J = 7.2 Hz), 7.23-7.35 (5H, m), 7.13 (1H, br. s), 5.41 (1H, br. s), 4.64 (2H, s), 4.58 (1H, d, J = 11.2 Hz), 4.52 (1H, d, J = 11.2 Hz), 4.48 (2H, m), 4.27 (1H, m), 4.17 (1H, m), 2.45 (3H, s), 1.43 (9H, s), 1.19 (3H, d, J = 5.6 Hz)【００５０】
（例２）
トシルアミド(750 mg, 1.99 mmol)のDMF(15 mL)溶液に、ヨードメタン(1.24 mL, 19.9 mmol)及び炭酸カリウム(411 mg, 2.98 mmol)を室温で添加した。10分後、混合物に10％クエン酸水溶液及びCHCl3を添加した。分離後、水相をCHCl3で抽出し、合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した(60％酢酸エチル/ヘキサン)。【００５１】
【化７】
2007049635.tif 000008
【００５２】
quant.; 1H-NMR δ7.89 (2H, d, J=8.0 Hz), 7.34 (7H, m), 5.34 (1H, br.s), 5.05 (1H, t, J = 6.8 Hz), 3.19 (3H, s), 2.68 (3H, s), 1.43 (3H, d, J = 6.8 Hz)【００５３】
（例３）
PhH及び MeOH (0.5 mL, 1:1)中のスルホンアミド(25.5 mg, 17 μmol)の溶液に、トリメチルシリルジアゾメタン(17μL；ヘキンサン中2 M)の溶液を室温で添加した。混合物を室温で10分間攪拌し、次いで溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。【００５４】
【化８】
2007049635.tif 000009
【００５５】
61％; MS (TOF-MS) m/z 1544 (M++Na)【００５６】
（例４）
スルホンアミド（12mg, 10 mml）のベンゼンー・メタノール（１：１、0.15 mL）溶液に、トリメチルシリルジアゾメタン溶液(17 mL, 2Mヘキサン溶液)  を室温で滴下した。混合物を１０分室温において撹拌後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。【００５７】
【化９】
2007049635.tif 000010
【００５８】
（６）ペプチドチオエステルの合成
（例１）
N-アルキルスルホンアミド(62 mg, 0.11 mmol)のDMF(1.1 mL)溶液に、ジイソプロピルエチルアミン(0.19 mL, 1.1 mmol)及びベンジルメルカプタン(0.13 mL, 1.1 mmol)を室温で添加した。混合物を室温で10分間N2 雰囲気下で攪拌し、10％クエン酸水溶液及びCHCl3を添加した。分離後、水相をCHCl3で抽出し、合わせた相を食塩水で洗浄した。Na2SO4 上で抽出物を乾燥後、溶媒を減圧留去させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。【００５９】
【化１０】
2007049635.tif 000011
【００６０】
82％; 1H-NMR δ7.23-7.28 (10H, m), 7.10 (1H, br. s), 5.47 (1H, br. s), 4.58 (2H, s), 4.15-4.30 (4H, m), 4.11 (1H, d, J = 3.2 Hz), 1.43 (9H, s), 1.19 (3H, d, J = 6.4 Hz), [α]30D  +29.6 (c 0.32, CHCl3), MS (TOF) m/z 495 ( M++Na),  calcd for C27H28N2O5S C, 63.54; H, 6.82; N, 5.93. found for C, 62.88; H, 6.75; N, 5.77.【００６１】
（例２）
N-メチルスルホアミド（15.9 mg, 0.010 mmol）、ベンゼンチオールナトリウム塩(1.9 mg, 0.015 mmol)、ベンジルメルカプタン（0.012mL, 0.10 mmol） をDMF (0.10 mL)に溶解し、窒素雰囲気下１０分撹拌した。１０％クエン酸水溶液を加え、水相をクロロホルムで数回抽出した。有機相をNa2SO4により、乾燥後、濾過し、溶媒を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。収率２５％【００６２】
【化１１】
2007049635.tif 000012
【００６３】
25％; MS (TOF) m/z 1484 ( M++Na)【００６４】
（例３）
N-アルキルスルホンアミド（12mg, 0.010mmol）のDMF (0.15 mL)溶液に、ベンゼンチオールナトリウム塩（1.9mg,0.015 mmol）をベンジルメルカプタン（0.012mL, 0.10 mmol）を室温で添加した。混合物を室温にて窒素雰囲気下１０分撹拌した。１０％クエン酸水溶液を加え、水相をクロロホルムで数回抽出した。有機相をNa2SO4により、乾燥後、濾過し、溶媒を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。収率３０％、【００６５】
【化１２】
2007049635.tif 000013
【００６６】
2 工程で30％(スルホンアミドから)  MS(TOF-MS) m/z 1186 (M++Na)【００６７】
（例４）
N-アルキルスルホアミド(50 mg, 0.12 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン（0.031mL, 0.18 mmol）、及びmethyl 10-mercaptodecanoate (39.4 mg, 0.18 mmol)をDMF (0.2 mL)に溶解し、室温、窒素雰囲気下１０分撹拌した。１０％クエン酸水溶液を加え、水相をクロロホルムで数回抽出した。有機相をNa2SO4により、乾燥後、濾過し、溶媒を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。収率７０％【００６８】
【化１３】
2007049635.tif 000014
【００６９】
70％; 1H-NMR δ7.23-7.31 (5H, m), 5.19 (1H, m), 5.11 (2H, s), 4.45 (1H, t, J = 7.6 Hz), 3.64 (3H, s), 2.85 (2H, t, J = 7.2 Hz), 2.28 (2H, t, J = 7.2 Hz), 1.54 (4H, m), 1.39 (3H, d, J = 7.2 Hz), 1.26 (10H, m), [α]30D  -5.39 (c 1.00 CHCl3), MS (TOF) m/z  444(M++Na), calcd for C22H33NO5S C, 62.38; H, 7.85; N, 3.31. found for C, 62.11; H, 7.74; N, 3.34【００７０】
（例５）
N-アルキルスルホアミド(50 mg, 0.12 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン（0.031mL, 0.18 mmol）、及び2-mercaptomethyldiphnylphosphine (41.9 mg, 0.18 mmol)をDMF (0.2 mL)に溶解し、室温、窒素雰囲気下１０分撹拌した。１０％クエン酸水溶液を加え、水相をクロロホルムで数回抽出した。有機相をNa2SO4により、乾燥後、濾過し、溶媒を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。収率８７％【００７１】
【化１４】
2007049635.tif 000015
【００７２】
87％ ; 1HNMR δ7.41-7.36 (5H, m), 7.32-7.30 (10H, m), 5.23 (1H, br.s), 5.07 (2H, s), 4.40 (1H, t, J = 7.2 Hz), 3.54-3.42 (2H, m), 1.27 (3H, d, J = 7.2 Hz) ,  13CNMR δ199.95 (s), 155.27 (s), 136.56 (s), 136.52 (s), 136.42 (s), 136.38 (s), 135.95 (s), 132.79 (d), 132.73 (s), 132.54 (d), 129.02 (d), 128.60 (s), 128.45 (d), 128.40 (s), 128.38 (d), 128.08 (d), 127.98 (d), 67.09 (t), 56.60 (d), 25.53, 25.29 (t, J = 24 Hz), 18.89 (q), [α]30D  -31.49 (c 1.00, CHCl3), MS (TOF) m/z  460 (M++Na),  calcd for C24H24NO3PS C, 65.89; H, 5.53; N, 3.20. found C, 65.79; H, 5.50; N, 3.15.【００７３】
（７）Ｏ−結合型糖ペプチドの合成
CH2Cl2 (40 mL)中のイミデート(2.79 g, 4.49 mmol)及びFmoc-Thr-OBn (2.13 mg, 4.94 mmol)の溶液に、TMSOTf (0.20 mmol, 1.11 mmol)を−78℃で滴下した。添加後、混合物を−40℃で一晩攪拌した。トリエチルアミン (0.2 mL)を添加した後、混合物をCHCl3 及び飽和NH4Clで希釈した。分離後、水層をCHCl3で抽出した。合わせた層を食塩水で洗浄した。抽出物をNa2SO4上で乾燥した後、溶媒を蒸発により除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (CHCl3:AcOEt 7:3-1:1) により精製することにより、3.82 gの生成物(95%)を無色泡状物として得た。【００７４】
【化１５】
2007049635.tif 000016
【００７５】
1H-NMRδ7.8-7.6 (m, 2H), 7.5 (m, 2H), 7.4-7.24 (m, 9H), 5.74 (m, 1H), 5.14 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 5.03 (bs, 1H), 4.98 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 4.56 (m, 2H), 4.50-4.41 (m, 4H), 4.28-4.20 (m, 3H), 4.18 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.51-3.48 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.22 (d, J = 6.0 Hz, 3H); 13C-NMRδ170.5 (C), 170.4 (C), 169.7 (C), 169.1 (C), 156.6 (C), 153.8 (C), 143.7 (C), 141.1 (C), 135.3 (C), 128.6 (CH), 128.5 (CH), 128.1 (CH), 127.6 (CH), 127.0 (CH), 125.1 (CH), 119.8 (CH), 98.3 (CH), 77.2 (CH), 74.1 (CH), 71.7 (CH), 71.4 (CH), 67.4 (CH2), 61.8 (CH2), 58.6 (CH), 56.4 (CH), 47.2 (CH), 20.8 (CH3), 20.7 (CH3), 17.1 (CH3); [α]24D -2.0 (c = 0.72, CHCl3)【００７６】
Ac2O (15 mL)及びAcOH (30 mL)中のTroc (2.73 g, 3.06 mmol)の溶液に、Zn (15 g) を添加し、混合物を6時間激しく攪拌した。混合物をセライトで濾過し、Zn 粉末をN2 雰囲気下で AcOH 及びCHCl3 で洗浄した。蒸発後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CHCl3: EtOAc 1:1 - EtOAcのみ)で精製することにより、2.32 gのアセトアミド(定量的)を得た。【００７７】
【化１６】
2007049635.tif 000017
【００７８】
1H-NMR δ7.74 (d, J = 8.0 Hz, 3H), 7.62 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.4-7.2 (m, 8H), 5.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.39 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.28 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 5.19 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.97 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.4-4.3 (m, 5H), 4.2-4.0 (m, 4H), 3.65 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.19 (d, J = 6.1 Hz), 13C-NMRδ170.7, 170.4, 170.1, 169.8, 169.1, 156.6, 143.8, 143.5, 141.1, 135.3, 128.4, 128.3, 128.1, 127.5, 127.0, 126.9, 125.1, 119.8, 98.4, 77.2, 74.4, 71.8, 71.6, 68.4, 67.3, 61.8, 588.7, 55.2, 47.2, 23.5, 20.8, 17.1; [α]24D -32.4 (c = 0.79, CHCl3).【００７９】
DMF(25 mL)中のFmoc (1.50 g, 1.97 mmol) の溶液に、ピペリジン(6 mL)を室温で添加した。1時間後、溶媒を蒸発により除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (CHCl3:MeOH 9:1)で精製し、アミノ化合物をCH2Cl2 (15 mL)に溶解した。i-Pr2NEt (0.45 mL)及びBoc2O (560 mg, 2.57 mmol)を添加した後、混合物を3時間攪拌した。混合物をCHCl3で希釈し、10％クエン酸で洗浄した。水層をCHCl3で抽出した。合わせた層を食塩水で洗浄した。抽出物をNa2SO4上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(CHCl3:MeOH 20:1-9:1) で精製することにより、1.25 gの生成物(定量的)が得られた。【００８０】
【化１７】
2007049635.tif 000018
【００８１】
1H-NMR (CD3OD) δ7.4-7.3 (m, 5H), 5.19 (t, J = 10.8 Hz, 1H), 5.16 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 4.92 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.62 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.2 (m, 2H), 3.96 (m, 1H), 3.74 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 3.62 (m, 1H), 1.98 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.91 (s, 3H), 1.18 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 13C-NMRδ173.5 (C), 172.0 (C), 171.5 (C), 171.5 (C), 170.9 (C), 158.1 (C), 137.0 (C), 129.3 (CH), 129.1 (CH), 128.9 (CH), 100.4 (CH), 80.9 (CH), 76.4 (CH), 73.6 (CH), 72.6 (CH), 69.9 (CH), 68.0 (CH2), 63.1 (CH2), 59.9 (CH), 55.5 (CH), 28.7 (CH3), 22.9 (C), 21.7 (CH3), 20.7 (CH3), 20.6 (CH3), 17.6 (CH3); [α]24D -13.4 (c = 1.2, CHCl3).【００８２】
メタノール(50 mL)中のＢｎエステル(1.43 g, 2.24 mmol)及び10％Pd/C (150 mg)の溶液を、Ｈ2雰囲気下で30分間激しく攪拌した。濾過後、触媒をメタノール及びCHCl3で洗浄した。蒸発後、粗生成物(1.23 g, 定量的)は十分な純度を有しており、さらに精製することなく次の工程に使用した。【００８３】
【化１８】
2007049635.tif 000019
【００８４】
（８）糖ペプチドの調製
Ｂｏｃ法を用いた液相ペプチド合成を行った。脱保護は、HCl−ジオキサンを用いて行い、ペプチド結合形成は、CH2Cl2中のジイソプロピルエチルアミンの存在下でＷＳＣＤＩ−ＨＯＢｔを用いて行った。【００８５】
（１）トシルアミドの合成
【化１９】
2007049635.tif 000020
【００８６】
ベンジルエステル（100mg、0.0842mmol） とPd/C (en) (10 mg) をメタノール(1 mL) に懸濁し、水素雰囲気下室温にて８時間撹拌した。触媒をろ紙濾過後、メタノールで洗浄し、ろ液を減圧溜去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール９：１-７：３）で精製し、定量的にカルボン酸(91.2 mg)を得た。そのうちカルボン酸 (75.9 mg, 0.070 mmol) をTHF (0.5 mL) に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン(32μL, 0.184 mmol) とｐ-toluenesulfonyl isocyanate (39μL, 0.256 mmol) をアルゴン雰囲気下加え、１時間撹拌した。N,N'-ジメチル-1,3-プロパンジアミン(0.1 mL) を滴下し、続いて10％クエン酸水溶液を加え、クロロホルムで水層を抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで有機層を乾燥後、溶媒を減圧溜去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール９：１）にて精製し、77.5 mg (87％)のトシルアミドを得た。【００８７】
（２）チオエステルの合成
【化２０】
2007049635.tif 000021
【００８８】
トシルアミド(19.7 mg, 0.0158 mmol) をメタノール（0.5 mL） とベンゼン(0.5  mL)に溶解し、TMSCHN2 溶液(0.5 mL) を加えた。溶媒を減圧溜去し、直ちにDMF (0.5 mL) に溶解し、ベンジルメルカプタン(19 mL. 0.158 mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(27μL, 0.158 mmol) を加えた。１時間後、反応液を直接分子ふるいカラムLH20 (メタノール)で精製し、さらに目的物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール９：１）により精製し、チオエステル (10.8 mg, 57％)を得た。【００８９】
【化２１】
2007049635.tif 000022
m/z 1273 (M++Na)【００９０】
【化２２】
2007049635.tif 000023
m/z 1290 (M++Na)【００９１】
【化２３】
2007049635.tif 000024
m/z 1226 (M++Na)【００９２】
（９）メチル化剤としてMe3O・BF4を用いたトシルスルホンアミドのＮ−メチル化
DMF (0.5 mL)中のCbz-Ala-ONHTs (63.2 mg, 0.168 mmol)の溶液に、i-Pr2NEt (0.24 mL, 1.40 mmol) 及びMe3O・BF4 (206 mg, 1.40 mmol)を室温で添加した。10分後、混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和NaHCO3で洗浄した。水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた層を食塩水で洗浄した。混合物をNa2SO4で乾燥後、溶媒を蒸発した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(hexane:AcOEt 7:3) で精製することにより、62.3 mg (95％)のＮ−メチル化生成物が得られた。【００９３】
【化２４】
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【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明によれば、簡便に、かつ温和な条件下において、Ｃ末端をチオエステル化したペプチドを合成する方法が提供される。本発明の方法は、（１）通常のFmoc 法によりペプチドが合成でき、（２）操作が簡便であり、（３）試薬が比較的安価で入手しやすく、（４）側鎖官能基を保護している限り損なうことがなく、（４）迅速であり、かつ（５）チオエステルアルキル部、又はチオエステルアリール部の様々な修飾が可能である、という利点を有している。
【国際調査報告】
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