(57)【要約】本発明の課題は、血管新生阻害物質の効果を予測する方法を見出すことにある。本発明により、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
周皮細胞で覆われた血管数を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項２】
腫瘍中の血管数を測定する工程と、
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程と、
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の血管数および腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標として、当該癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、前記方法。
【請求項４】
腫瘍が癌患者から採取されたものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
周皮細胞で覆われた血管数の測定が、α−ＳＭＡ、デスミン、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４、カルポニン、カルデスモンおよびＰＤＧＦレセプターからなる群から選択される少なくとも一つの発現を指標に行うものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
周皮細胞で覆われた血管数の測定が、α−ＳＭＡおよび／またはデスミンの発現を指標に行うものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
周皮細胞で覆われた血管数の測定が、免疫化学的方法により行うものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
周皮細胞で覆われた血管数の測定が、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより行うものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
周皮細胞で覆われた血管数の測定が、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより行うものである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
腫瘍中の血管数の測定が、ＣＤ３１、ｗＶＦ、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１４６、ＣＤ１３３、ＫＤＲおよびＫＩＴからなる群から選択される少なくとも一つの発現を指標に行うものである、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１１】
腫瘍中の血管数の測定が、ＣＤ３１の発現を指標に行うものである、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１２】
腫瘍中の血管数の測定が、免疫化学的方法により行うものである、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１３】
腫瘍中の血管数の測定が、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより行うものである、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１４】
腫瘍中の血管数の測定が、定量的ＲＴ−ＰＣＲにより行うものである、請求項２または３に記載の方法。
【請求項１５】
血管新生阻害物質が、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
一般式（Ｉ）
2007015569.tif 000064
［式（Ｉ）中、Ａは、式
2007015569.tif 000065
（式中、Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ａ１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する；
Ｒ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基を意味する；
Ｒ１２は、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する；
Ｖａ１３は、酸素原子または硫黄原子を意味する；
Ａ１１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する；
Ｒ１３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する；
Ｒ１４は、式−Ｖａ１４−Ｖａ１５（式中、Ｖａ１４は、単結合またはカルボニル基を意味する；Ｖａ１５は、水素原子、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、アミノ基、置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ホルミル基、カルボキシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。）で表される基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｘは、酸素原子または硫黄原子を意味する；
Ｙは、式
2007015569.tif 000066
（式中、Ｒ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ９は、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する；
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ４は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する］
で表される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
一般式（ＩＩ）
2007015569.tif 000067
［式（ＩＩ）中、Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｙ１は、式
2007015569.tif 000068
（式中、Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立して水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する］
で表される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
Ｒ１がＣ１−６アルキル基（ただし、Ｒ１はＣ１−６アルキル基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基およびジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい）である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
Ｒ１がメチル基または式
2007015569.tif 000069
（式中、Ｒａ３はメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、メトキシ基、エトキシ基、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルホリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）のいずれかで表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ１がメチル基または２−メトキシエチル基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ２がシアノ基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ２がシアノ基または式−ＣＯＮＨＶａ１６（式中、Ｖａ１６は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。ただし、Ｖａ１６は、ハロゲン原子、シアノ基、水酸基およびＣ１−６アルコキシ基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい。）で表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ２が式−ＣＯＮＨＶａ１７（式中、Ｖａ１７は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基またはＣ１−６アルコキシ基を意味する。）で表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
Ｒ２が式−ＣＯＮＨＶａ１８（式中、Ｖａ１８は、水素原子、メチル基またはメトキシ基を意味する。）で表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
Ｙ１が式
2007015569.tif 000070
（式中、Ｒ７１は、水素原子またはハロゲン原子を意味する。）で表される基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２６】
Ｒ３およびＲ４が水素原子である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ５が水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基またはＣ６−１０アリール基（ただし、Ｒ５は、ハロゲン原子およびメタンスルホニル基からなる群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい）である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ５がメチル基、エチル基またはシクロプロピル基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（２−クロロ−４−（（６−シアノ−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−３−（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシプロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−シクロプロピル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−メトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−フルオロエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−エチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）オキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−エトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（２−フルオロ−４−（（６−カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ６−（２−ヒドロキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（１−プロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（ｃｉｓ−２−フルオロ−シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−（４−モルホリノ）エトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（２−フルオロエチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（（２Ｒ）テトラヒドロ−２−フラニルメチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ′−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（３−（４−モルホリノ）プロポキシ）−４−キノリル）オキシフェニル）−Ｎ′−（３−（メチルスルホニル）フェニル）ウレア、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（（２−フルオロエチルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−エトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（３−エチルウレイド）−３−フルオロ−フェノキシ）−７−メトキシキノリン−６−カルボキシリック  アシッド（２−シアノエチル）アミド
および
Ｎ−（４−（６−（２−シアノエチル）カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ′−シクロプロピルウレア
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項３０】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
および
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項３１】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項３２】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドのメタンスルホン酸塩である、請求項１５に記載の方法。
【請求項３３】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
一般式（ＩＩＩ）
2007015569.tif 000071
［式（ＩＩＩ）中、Ｒ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基を意味する；
Ｒ１２は、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する；
Ｖａ１３は、酸素原子または硫黄原子を意味する；
Ａ１１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する；
Ｒ４は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；
Ｒ９は、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する］
で表される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ１１が置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ１１が以下の置換基群から選ばれる少なくとも一つの置換基を有していてもよい式
2007015569.tif 000072
で表される基からなる群から選ばれるいずれか１の基である、請求項３３に記載の方法。
［置換基群］
水酸基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、式
2007015569.tif 000073
（式中、ＲＮ１およびＲＮ２はそれぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基
【請求項３６】
Ｒ１１が式
2007015569.tif 000074
で表される基からなる群から選ばれるいずれか１の基である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
Ｒ１２が水素原子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
Ｖａ１３が酸素原子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
Ａ１１が炭素原子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４０】
Ｒ４が水素原子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４１】
Ｒ５がＣ１−６アルキル基またはＣ３−８シクロアルキル基である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４２】
Ｒ５がメチル基である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ９が水素原子である、請求項３３に記載の方法。
【請求項４４】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
５−（２−（（（４−ヒドロキシ−４−メチルピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸メチルアミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（４−ヒドロキシピペリジノ）カルボニル）アミノ−４−ピリジル）オキシ−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（（４−（ピペリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド
および
Ｎ４−（４−（１−（メチルアミノ）カルボニル−１Ｈ−５−インドリル）オキシ−２−ピリジル）−４−モルホリンカルボキサミド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項４５】
ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
（１）Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［２−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ］キナゾリン−４−アミン
（２）Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン、
（３）３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン、
（４）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド、
（５）５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド、
（６）Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン３−｛５，６，７，１３−テトラヒドロ−９−［（１−メチルエトキシ）メチル］−５−オキソ−１２Ｈ−インデノ（２，１−ａ）ピロロ（３，４−ｃ）カルバゾール−１２−イル｝プロピルエステル、
（７）３−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−５−［３−（４−ピロリジン−１−イル−ブチル）−ウレイド］−イソチアゾール−４−カルボキシリック  アシッド  アミド、
（８）Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キナゾリニル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−プロピルウレア、
（９）１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン、
（１０）Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア、
（１１）４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン、
（１２）６−［２−（メチルカルバモイル）フェニルスルファニル］−３−Ｅ−［２−（ピリジン−２−イル）エテニル］インダゾール、
（１３）５−（（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル）−Ｎ−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イルプロピル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド、
（１４）３−（（キノリン−４−イルメチル）アミノ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）チオフェン−２−カルボキサミド、
（１５）６−（２，６−ジクロロフェニル）−８−メチル−２−フェニルアミノ−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン、
（１６）２−（（１，６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリジン−３−イルメチル）アミノ）−Ｎ−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−ピリジン−カルボキサミド、
（１７）４−（４−（４−クロロ−フェニルアミノ）−フロ［２，３−ｄ］ピリダジン−７−イルオキシメチル）−ピリジン−２−カルボキシリック  アシッド  メチルアミド、
（１８）Ｎ−（３−トリフルオロメチル−４−クロロフェニル）−Ｎ’−（４−（２−メチルカルバモイルピリジン−４−イル）オキシフェニル）ウレア、
（１９）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン、
（２０）４−（４−（１−アミノ−１−メチル−エチル）−フェニル）−２−（４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−カルボニトリル、
（２１）［６−［４−［（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル］フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）アミン、
（２２）９−（１−メチルエトキシ）メチル−１２−（３−ヒドロキシプロピル）−６Ｈ，７Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，１−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５−オン、
（２３）Ｎ−（２，４−ジフルオロフェニル）−Ｎ’−｛４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）−オキシ］−２−フルオロフェニル｝ウレア、
（２４）Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル］−Ｎ’−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレア、
（２５）２−メチル−６−［２−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ］−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボキシリック  アシッド  メチルアミド、
（２６）（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール、
（２７）（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール）２−アミノプロパノエート、
（２８）３−［（４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ）−メチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン、
（２９）５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］ピリミジン−２−イル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド、
（３０）（３Ｚ）−３−［６−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）キノリン−２（１Ｈ）−イリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン
および
（３１）２−（（２−（（４−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）アニリノ）フェノキシ）−６−メトキシ−７−キノリル）オキシ）エチル）アミノ）−１−エタノール
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項１５に記載の方法。
【請求項４６】
血管新生阻害物質が、抗ＶＥＧＦレセプター抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
抗ＶＥＧＦレセプター抗体が、２Ｃ３  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＩＭＣ−１１２１ｂ、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭＣ−１Ｃ１１およびＩＭＣ−２Ｃ６からなる群から選択される少なくとも一つの抗体である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
血管新生阻害物質が、抗ＶＥＧＦ抗体である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４９】
抗ＶＥＧＦ抗体が、ベバシズマブである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
血管新生阻害物質が、ＰＩ８８、ＡＶＥ−０００５、ＥＧ−３３０６、ＲＰＩ−４６１０、ＮＭ−３、ＶＧＡ−１１５５、ＶＥＧＦ  ｔｒａｐおよびｐｅｇａｐｔａｎｉｂ  ｓｏｄｉｕｍからなる群から選択される少なくとも一つである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
血管新生阻害物質が、ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、抗ＦＧＦレセプター抗体、抗ＰＤＧＦレセプター抗体、抗ＥＧＦレセプター抗体、抗ＦＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦ抗体および抗ＥＧＦ抗体からなる群から選択される少なくとも一つである、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
（１）１−［２−アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）−ピリド（２，３−ｄ）ピリミジン−７−イル］−３−ｔｅｒｔ−ブチルウレア、
（２）１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［２−（４−ジエチルアミノ）ブチルアミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）−ピリド（２，３−ｄ）ピリミジン−７−イル］ウレア、
（３）（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール）２−アミノプロパノエート、
（４）４−［４−［Ｎ−（４−ニトロフェニル）カルバモイル］−１−ピペラジニル］−６，７−ジメトキシキナゾリン、
（５）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン、
（６）２−（（２−（（４−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）アニリノ）フェノキシ）−６−メトキシ−７−キノリル）オキシ）エチル）アミノ）−１−エタノール
および
（７）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
（１）４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−［４−（３−ピリジル）ピリミジン−２−イルアミノ］フェニル］ベンゼンアミド、
（２）６−［２−（メチルカルバモイル）フェニルスルファニル］−３−Ｅ−［２−（ピリジン−２−イル）エテニル］インダゾール、
（３）１−｛２−［５−（２−メトキシ−エトキシ）−ベンゾイミダゾール−１−イル］−キノリン−８−イル｝−ピペリジン−４−イルアミン、
（４）４−［４−［Ｎ−（４−ニトロフェニル）カルバモイル］−１−ピペラジニル］−６，７−ジメトキシキナゾリン、
（５）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン、
（６）（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）｛４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝メタンオン、
（７）５−メチル−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−イソキサゾールカルボキサミド、
（８）ｔｒａｎｓ−４−［（６，７−ジメトキシキノキサリン−２−イル）アミノ］シクロヘキサノール、
（９）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド、
（１０）５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド、
（１１）１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン
および
（１２）Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル］−Ｎ’−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレア
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質が、
（１）４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリノ）プロポキシ−キナゾリン）、
（２）４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−キナゾリン、
（３）Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン、
（４）Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド、
（５）（２Ｅ）−Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド、
（６）［６−［４−［（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル］フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）アミン、
および
（７）（Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド
からなる群から選択される少なくとも一つの化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
抗ＥＧＦレセプター抗体が、セツキシマブ、ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ、ｍａｔｕｚｕｍａｂ、ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂ、ＩＭＣ−１１Ｆ８およびＭＤＸ−４４７からなる群から選択される少なくとも一つの抗体である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキットであって、
抗α−ＳＭＡ抗体、抗デスミン抗体、抗コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４抗体、抗カルポニン抗体、抗カルデスモン抗体および抗ＰＤＧＦレセプター抗体からなる群から選択される少なくとも一つを含む、前記キット。
【請求項５７】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキットであって、
抗α−ＳＭＡ抗体を含む、前記キット。
【請求項５８】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキットであって、
α−ＳＭＡ遺伝子、デスミン遺伝子、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４遺伝子、カルポニン遺伝子、カルデスモン遺伝子およびＰＤＧＦレセプター遺伝子からなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の転写産物であるＲＮＡの少なくとも一部に相補的な配列を含むポリヌクレオチドを含む、前記キット。
【請求項５９】
請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法において使用するためのキットであって、
デスミン遺伝子の転写産物であるＲＮＡの少なくとも一部に相補的な配列を含むポリヌクレオチドを含む、前記キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管新生阻害物質、例えば、血管内皮細胞増殖因子（Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ（以下、「ＶＥＧＦ」と称する場合がある））阻害活性を有する物質（以下、「ＶＥＧＦ  阻害物質」と称する場合がある）の効果を予測する新規方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
臨床試験において、血管新生阻害物質は、抗腫瘍剤として有用であることが明らかにされている。例えば、血管新生因子の中で重要な役割を担っているＶＥＧＦに対する中和抗体製剤であるベバシズマブは、臨床試験において、大腸癌に対して抗腫瘍効果を示したことが報告されている（１）。
また、血管新生阻害物質として、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドが知られている（２および３）。
ところで、血管新生阻害物質の効果を判定すること、血管新生阻害物質の効果を示す濃度を決定すること、血管新生阻害物質の効果を投与前に予測することは、血管新生阻害物質を用いた治療を効率よく進め、患者のＱＯＬ向上に貢献するために、非常に有用である（４）。前二者については現在、数多くの研究がなされている（５）。具体的には、Ｄｙｎａｍｉｃ  Ｃｏｎｔｒａｓｔ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｍａｇｎｅｔｉｃ  Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  Ｉｍａｇｉｎｇ（ＤＣＥ−ＭＲＩ），Ｐｏｓｉｔｒｏｎ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  Ｔｏｍｏｇｒａｐｙ（ＰＥＴ），Ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｓｅｒｕｍ  ＶＥＧＦなどの方法が知られており、中でもＤＣＥ−ＭＲＩは、血管新生阻害物質の効果を判定する方法として有効であるとされつつある（６）。
一方で、血管新生阻害物質の効果を投与前に予測することは、治療を受ける患者にとって無効な薬剤の投与の回避、副作用の軽減などを可能とするために、非常に有益であり、かつ重要事項である（４）。しかしながら、血管新生阻害物質の効果を投与前に予測する方法については、未だ有効な方法は、見つかっていない。
参考文献
（１）Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｐｌｕｓ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ，ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，ａｎｄ  ｌｅｕｃｏｖｏｒｉｎ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００４，３５０，２３３５−４２
（２）国際公開第０２／３２８７２号パンフレット
（３）国際公開第２００４／０８０４６２号パンフレット
（４）Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃａｕｓｅｓ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｆｅｎｅｓｔｒａｔｉｏｎｓ，ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｖｅｓｓｅｌｓ，ａｎｄ  ａｐｐｅａｒａｎｃｅ  ｏｆ  ｂａｓｅｍｅｎｔ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｇｈｏｓｔｓ．Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ．，２００４，１６５，３５−５２
（５）Ｄｉｒｅｃｔ  ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｔｈｅ  ＶＥＧＦ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ  ｈａｓ  ａｎｔｉｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００４，１０，１４５−１４７
（６）Ｄｙｎａｍｉｃ  ｃｏｎｔｒａｓｔ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｉｍａｇｉｎｇ  ａｓ  ａ  ｂｉｏｍａｒｋｅｒ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｏｆ  ＰＴＫ７８７／ＺＫ  ２２２５８４，ａｎ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｌｉｖｅｒ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｔｗｏ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｉｅｓ．，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．，２００３，２１，３９５５−６４．
【発明の開示】
【０００３】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その解決しようとする課題は、血管新生阻害物質の効果を予測する方法を見出すことにある。
本発明者らは、上記課題を解決するため、鋭意検討を重ねた結果、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数と相関することを初めて見出した。そして、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することができることを見出した。
すなわち本発明は、以下に関する。
（１）血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
周皮細胞で覆われた血管数を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、前記方法。
（１）に記載の方法において、腫瘍中の血管数を測定する工程と、腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程とをさらに含んでいてもよい。
（２）血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、
腫瘍中の血管数および腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、
腫瘍中の血管数に対する腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の比率を指標として、当該癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程と、
を含む、前記方法。
（１）または（２）に記載の方法において、腫瘍は、癌患者から採取されたものを使用することができる。
（１）または（２）に記載の方法において、周皮細胞で覆われた血管数の測定は、α−ＳＭＡ、デスミン、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４、カルポニン、カルデスモンおよびＰＤＧＦ  レセプターからなる群から選択される少なくとも一つの発現を指標に行うことができ、中でも、α−ＳＭＡおよび／またはデスミンの発現を指標に行うことが好ましい。周皮細胞で覆われた血管数の測定は、例えば、免疫化学的方法、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたは定量的ＲＴ−ＰＣＲにより行うことができる。
また、（１）または（２）に記載の方法において、腫瘍中の血管数の測定は、ＣＤ３１、ｗＶＦ、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１４６、ＣＤ１３３、ＫＤＲおよびＫＩＴからなる群から選択される少なくとも一つの発現を指標に行うことができ、中でも、ＣＤ３１の発現を指標に行うことが好ましい。腫瘍中の血管数の測定は、例えば、免疫化学的方法、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションまたは定量的ＲＴ−ＰＣＲにより行うことができる。
（１）または（２）に記載の方法において、血管新生阻害物質は、例えばＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質である。ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質の例を以下に示す。
一般式（Ｉ）
2007015569.tif 000002
［式（Ｉ）中、Ａは、式
2007015569.tif 000003
（式中、Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する；
Ａ１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する；
Ｒ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基を意味する；
Ｒ１２は、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する；
Ｖａ１３は、酸素原子または硫黄原子を意味する；
Ａ１１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する；
Ｒ１３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する；
Ｒ１４は、式−Ｖａ１４−Ｖａ１５（式中、Ｖａ１４は、単結合またはカルボニル基を意味する；Ｖａ１５は、水素原子、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、アミノ基、置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ホルミル基、カルボキシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。）で表される基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｘは、酸素原子または硫黄原子を意味する；
Ｙは、式
2007015569.tif 000004
（式中、Ｒ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ９は、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する；
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。）で表される基を意味する；
Ｒ４は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する；
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する］で表される化合物、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物。
（１）または（２）に記載の方法において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物であることが好ましい。
また、（１）または（２）に記載の方法において、血管新生阻害物質は、例えば、抗ＶＥＧＦレセプター抗体、抗ＶＥＧＦ抗体、ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、抗ＦＧＦレセプター抗体、抗ＰＤＧＦレセプター抗体、抗ＥＧＦレセプター抗体、抗ＦＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦ抗体および抗ＥＧＦ抗体からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。
（３）（１）または（２）に記載の方法において使用するためのキットであって、
抗α−ＳＭＡ抗体、抗デスミン抗体、抗コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４抗体、抗カルポニン抗体、抗カルデスモン抗体および抗ＰＤＧＦレセプター抗体からなる群から選択される少なくとも一つを含む、前記キット。
（４）（１）または（２）に記載の方法において使用するためのキットであって、
α−ＳＭＡ遺伝子、デスミン遺伝子、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４遺伝子、カルポニン遺伝子、カルデスモン遺伝子およびＰＤＧＦレセプター遺伝子からなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の転写産物であるＲＮＡの少なくとも一部に相補的な配列を含むポリヌクレオチドを含む、前記キット。
本発明により、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法が提供される。
より詳細には、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することが可能となった。
本発明に係る方法は、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、抗腫瘍効果を予測することが可能となるため、より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択して治療することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
図１は、ヒト癌細胞株移植マウスモデルにおける４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果と腫瘍組織中における周皮細胞で覆われた血管数との相関を示したものである。
図２は、ヒト癌細胞株移植マウスモデルにおける血管新生阻害物質の抗腫瘍効果と周皮細胞で覆われた血管数との関連を示したものである。図２において、化合物１は、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドを、化合物２は、５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミドを示す。
図３は、ヒト癌細胞株皮下移植モデルにおける４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果と腫瘍組織中の周皮細胞のマーカーであるデスミンとの相関を示したものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
以下に本発明の実施の形態について説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、２００５年８月１日に出願し、本願優先権主張の基礎となる特願ＪＰ２００５−２２３４４０号の特許請求の範囲、明細書、図面および要約書の開示内容は、その全体が参照として本明細書に組み入れられる。
本発明は、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法であって、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程と、周皮細胞で覆われた血管数を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程とを含む、前記方法を提供する。
１．腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定する工程
本工程において、腫瘍は、癌患者より取り出された腫瘍が好ましい。そして、癌患者より取り出された腫瘍は、例えば、癌患者より外科的処置（例えば、バイオプシーなど）にて摘出することにより得ることができる。
なお、癌患者から採取される腫瘍の大きさは、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定できる大きさであればよい。例えば、固形癌の場合は、バイオプシーにより採取したときの大きさ（例えば、２〜３ｍｍ）でよく、メスにより組織片を切除したときの大きさ（例えば、米粒大）でもよく、限定されるものではない。
腫瘍の種類は、特に限定されず、例えば、脳腫瘍、頚癌、食道癌、舌癌、肺癌、乳癌、膵癌、胃癌、小腸または十二指腸の癌、大腸癌（結腸癌、直腸癌）、膀胱癌、腎癌、肝癌、前立腺癌、子宮癌、卵巣癌、甲状腺癌、胆嚢癌、咽頭癌、肉腫（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫、カポジ肉腫、筋肉腫、血管肉腫、線維肉腫など）、白血病（例えば、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）など）およびメラノーマなどを挙げることができる。
周皮細胞は、ペリサイト（ｐｅｒｉｃｙｔｅ）ともよばれ、毛細血管や静脈を取り囲むように存在している細胞である。
周皮細胞は、α平滑筋細胞型アクチン（α−ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ａｃｔｉｎ、以下「α−ＳＭＡ」と称する場合がある）、デスミン、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４（以下、「ＮＧ−２」と称する場合がある）、カルポニン、カルデスモン（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌ  ａｎｄ  ｐｅｒｉｃｙｔｅ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｒａｔ  ｒｅｔｉｎａ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ．Ｖｉｓｕａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．４５，２７９５−２８０６，２００４．）、Ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（以下、「ＰＤＧＦレセプター」と称する場合がある）（Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｖｅｓｓｅｌｓ  ａｓ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．１５，１０２−１１１．２００５．）などを発現しており、また、第ＶＩＩＩ因子（Ａ  ｎｅｗ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｍｏｏｔｈ  ｍｕｓｃｌｅ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｈｕｍａｎ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ  ａｒｔｅｒｉｅｓ．Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．５７，２１−２９，１９９７．）およびＧＦＡＰ（Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｒａｉｎ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｌｕｍｉｎａｌ  ａｎｄ  Ａｂｌｕｍｉｎａｌ  Ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ  ｗｉｔｈ  Ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ．ＮｅｕｒｏＲｘ．，２，２７−４３，２００５．）を発現していないため、これらの発現の有無を調べることにより、他の細胞と区別することができる。
「周皮細胞で覆われた血管」とは、周皮細胞によって血管の全部または一部が取り囲まれた血管を意味する。
「周皮細胞で覆われた血管数」は、例えば、腫瘍中の単位面積あたりの周皮細胞で覆われた血管数、腫瘍中の単位体積あたりの周皮細胞で覆われた血管数または単位重量あたりの周皮細胞で覆われた血管数として算出することができる。
本工程では、周皮細胞で覆われた血管数は、例えば、周皮細胞に発現するタンパク質および／またはｍＲＮＡの発現を指標として測定することができる。
周皮細胞に発現するタンパク質および／または遺伝子は、例えば、α−ＳＭＡ、デスミン、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４、カルポニン、カルデスモンおよびＰＤＧＦレセプターなどがあげられ、好ましくはα−ＳＭＡおよびデスミンがあげられる。例えば、患者から採取した腫瘍中のこれらのタンパク質および／またはｍＲＮＡの発現を測定すると、腫瘍中に発現するタンパク質および／または遺伝子の種類、発現の有無、発現量などの情報を得ることができ、この情報を指標に用いて周皮細胞で覆われた血管数を算出することができる。
タンパク質の測定は、例えば、免疫化学的方法（例えば、免疫組織化学的方法、ウエスタンブロットなど）、質量分析による方法などがあげられ、好ましくは免疫化学的方法があげられ、特に好ましくは免疫組織化学的方法があげられる。これらの方法は、常法に従い行うことができる。
一方、ｍＲＮＡの測定は、例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロット解析、ＤＮＡマイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲ、定量的ＲＴ−ＰＣＲなどの方法があげられ、好ましくはｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションおよび定量的ＲＴ−ＰＣＲがあげられる。これらの方法は、常法に従い行うことができる。
Ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーションは、例えば、実験医学別冊  新遺伝子工学ハンドブック  第４章、羊土社、２００３に記載の方法により行うことができる。
以下、周皮細胞で覆われた血管数の測定方法の一例について記載する。
周皮細胞で覆われた血管数は、周皮細胞に特異的に発現するタンパク質の発現を指標として免疫組織化学的方法により測定することができる。
免疫組織化学的方法は、常法に従い行うことができる（細胞工学別冊  目で見る実験ノートシリーズ  バイオ実験イラストレイテッド  ５巻  タンパクなんてこわくない  第５章  免疫染色  ｐ１２７−ｐ１６３、秀潤社、１９９７）。
初めに、癌患者より取り出された腫瘍の組織切片を作製する。組織切片は、例えば、凍結切片、パラフィン切片などがあげられる。
癌患者より取り出された腫瘍は、例えば、未処理でもよく、固定化処理を行ってもよい。また、当該腫瘍は、例えば、ＯＣＴコンパウンドなどにより包埋することができる。
固定化処理には、ホルムアルデヒド、好ましくは４％ＰＦＡ／ＰＢＳ（−）を用いることができ、その後、２０％ショ糖／リン酸緩衝液等で置換することができる。
これらの諸条件は、測定するタンパク質および使用する抗体等に応じて適宜選択することができる。
組織切片は、スライドガラスに保持し、染色が可能な状態に前処理することができる。前処理の方法は、特に限定されず、測定するタンパク質および使用する抗体に応じて適宜選択すればよい。例えば、キシレン、ホルムアルデヒド、アセトン、メタノールなどを含む溶液により組織切片を前処理することができる。また、組織切片は、例えば、ＢＳＡ、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、ｔｗｅｅｎ２０、スキムミルク（ｓｋｉｍ  ｍｉｌｋ）、カゼインなどを含む溶液により前処理することも可能である。
次に、前処理した組織切片に測定するタンパク質を認識する抗体（以下、「一次抗体」と称する場合がある）を接触させる。一次抗体は、市販のものを使用してもよく、作製してもよい。また、一次抗体は、標識物質により標識されていてもよく、標識されていなくてもよい。一次抗体が標識されていない場合には、当該一次抗体を認識する抗体（以下、「二次抗体」と称する場合がある）を接触させることができる。二次抗体は、標識物質により標識されていることが好ましい。標識物質は、例えば、アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼなどの酵素、ＦＩＴＣ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ｉｓｏｔｈｉｏｃｉａｎａｔｅ）、Ａｌｅｘａ４８８、ＰＥ、Ｒｈｏｄａｍｉｎ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ、ＰｈａｒＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ＡｍＣｙａｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ、ＡｓＲｅｄ、ＨｃＲｅｄなどの蛍光物質およびビオチンなどがあげられる。標識物質がビオチンである場合には、さらに、アビジン、ストレプトアビジンなどを接触させることができる。当該アビジン、ストレプトアビジンなどは、標識物質により標識されていることが好ましい。標識物質は、例えば、アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼなどの酵素、ＦＩＴＣ、Ａｌｅｘａ４８８、ＰＥ、Ｒｈｏｄａｍｉｎ、Ｔｅｘａｓ  Ｒｅｄ、Ｃｙ３、Ｃｙ５、Ａｌｌｏｐｈｙｃｏｃｙａｎｉｎ、ＰｈａｒＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ、ＡｍＣｙａｎ、ＺｓＧｒｅｅｎ、ＺｓＹｅｌｌｏｗ、ＡｓＲｅｄ、ＨｃＲｅｄなどの蛍光物質があげられる。反応の諸条件（例えば、反応溶液、抗体濃度、反応時間、反応温度、洗浄操作など）は、測定するタンパク質および使用する抗体等に応じて適宜選択することができる。
標識物質が酵素である場合には、基質および／または発色試薬を組織切片に接触させて発色させ、当該発色を観察することにより、周皮細胞で覆われた血管数を測定することができる。
酵素がペルオキシダーゼの場合は、例えば、基質としてＨ２Ｏ２などを、発色試薬としてジアミノベンジジン（ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ；ＤＡＢ）などを組織切片に接触させることができる。
酵素がアルカリフォスファターゼの場合には、例えば、基質として５−ｂｒｏｍｏ−４−ｃｈｌｏｒｏ−３−ｉｎｄｏｌｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅなどを、発色試薬としてニトロブルーテトラゾリウム（ｎｉｔｒｏｂｌｕｅｔｅｔｒａｚｏｒｉｕｍ）などを組織切片に接触させることができる。また、酵素がアルカリフォスファターゼの場合には、例えば、発色基質としてＣＳＰＤ（ｄｉｓｏｄｉｕｍ  ３−（４−ｍｅｔｈｏｘｙｓｐｉｒｏ｛１，２−ｄｉｏｘｅｔａｎｅ−３，２’−（５’−ｃｈｌｏｒｏ）ｔｒｉｃｙｃｌｏ［３．３．１．１３，７］ｄｅｃａｎ｝−４−ｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）などを組織切片に接触させることにより化学発光反応を行うこともできる。
また、標識物質が蛍光物質の場合には、励起光を組織切片に照射して発光させ、当該蛍光を観察することにより、周皮細胞で覆われた血管数を測定することができる。
また、前記処理をした組織切片は、ヘマトキシリンまたはメチルグリーンにて核染色を行うことができる。
さらに、前記処理をした組織切片は、水溶性封入剤で封入することができる。
このようにして、腫瘍中の単位面積あたりの周皮細胞で覆われた血管数を算出することができる。また、周皮細胞で覆われた血管数は、腫瘍中の単位体積あたりの値または単位重量あたりの値として算出することもできる。
以下、周皮細胞で覆われた血管数の測定方法の別の一例について記載する。
周皮細胞で覆われた血管数は、周皮細胞に特異的に発現するｍＲＮＡの発現を指標として定量的ＲＴ−ＰＣＲにより測定することができる。
初めに、癌患者より取り出された腫瘍からＲＮＡを精製する。
腫瘍に対してＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社）を添加し、腫瘍組織をホモジナイズする。次に、ホモジナイズした腫瘍にクロロホルムを添加する。この溶液を１５秒間激しく振盪、攪拌し、室温で２〜３分間放置後遠心を行う（１２，０００×ｇ、１０分間、４℃）。遠心後、水層を新しいチューブに移し、これにイソプロピルアルコールを加え、室温で１０分間放置後遠心を行う（１２，０００×ｇ、１０分間、４℃）。得られた沈殿を７５％エタノールにて洗浄することにより、ＲＮＡを精製することができる。
定量的ＲＴ−ＰＣＲの方法は、例えば、遺伝子特異的プローブ（ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＡＳＳＡＹＳ−ＯＮ−ＤＥＭＡＮＤ）、アプライドバイオシステムズ社）およびＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて、次のように行うことができる。
操作は、逆転写反応およびＰＣＲ反応の２段階で行うことができる。最初の段階である逆転写反応は、得られたＲＮＡにｄＮＴＰ、ｏｌｉｇｏ  ｄ（Ｔ）１６プライマー、ＲＮａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を加え、２５℃にて１０分間保温後、４８℃にて３０分間加熱することにより行う。反応を９５℃５分間加熱することにより停止させる。
得られたｃＤＮＡを第２段階のＰＣＲ反応に供する。ＰＣＲ反応は、例えば、４ｎｇ  ｃＤＮＡ、１ｘＳＹＢＲ  ＰＣＲ  ｂｕｆｆｅｒ、３ｍＭ  ＭｇＣｌ２、各２００μＭ  ｄＡＴＰ，ｄＣＴＰ，ｄＧＴＰ、４００μＭ  ｄＵＴＰ、２００ｎＭ  ｐｒｉｍｅｒ  ｐａｉｒ、０．０１Ｕ／μｌ  ＡｍｐＥｒａｓｅ  ＵＮＧ、０．０２５Ｕ／μｌ  ＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の反応系で行う。反応条件は、５０℃  ２分間、９５℃  １０分間の反応後、９５℃  ２０秒間・５５℃  ２０秒間・７２℃  ３０秒間のサイクルを４０サイクルで行う。プライマーおよびプローブは、例えば、Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて設計することができる。また、プライマーおよびプローブは、ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＡＳＳＡＹＳ−ＯＮ−ＤＥＭＡＮＤ、アプライドバイオシステムズ社）を用いることもできる。複数検体の比較は、定量値を各検体の転写量に変動の少ないハウスキーピング遺伝子、好ましくはＧＡＰＤＨ、β−ａｃｔｉｎ、１８Ｓ  ｒｉｂｏｓｏｍａｌ  ＲＮＡなどのｍＲＮＡレベルにより補正して行うことができる。
また、血管内皮細胞に特異的に発現するタンパク質および／またはｍＲＮＡの発現を指標として腫瘍中の血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）を測定しておくことが好ましい。血管内皮細胞に特異的に発現するタンパク質および／または遺伝子（ｍＲＮＡ）は、例えば、ＣＤ３１、ｗＶＦ（ｖｏｎ  Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１４６、ＣＤ１３３、ＫＤＲ（ＶＥＧＦ２型受容体）およびＫＩＴ（Ｖａｓｃｕｌａｒ  ａｎｄ  ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌｓ：ｎｏｖｅｌ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｔｈｅｒａｐｙ？Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｃａｎｃｅｒ，２，８２６−３５，２００２．）などがあげられ、好ましくはＣＤ３１があげられる。血管数は、周皮細胞で覆われた血管数の測定方法と同様に、例えば、免疫化学的方法、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、定量的ＲＴ−ＰＣＲなどの方法により算出することができる。
このとき、周皮細胞で覆われた血管数を全体の血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）で補正することにより、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かの判断の精度をより向上することが可能となる。例えば、周辺細胞で覆われた血管数を、全体の血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）で除した値を、当該判断の指標とすることができる。
２．癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断する工程
本工程では、前工程で測定された周皮細胞で覆われた血管数を指標として、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であるか否かを判断することができる。そして、当該感受性の判断結果から、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測することができる。
本工程において、周皮細胞で覆われた血管数としては、例えば、腫瘍中の単位面積あたりの周皮細胞で覆われた血管数、腫瘍中の単位体積あたりの周皮細胞で覆われた血管数、腫瘍中の単位重量あたりの周皮細胞で覆われた血管数、腫瘍中の全体の血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）に対する周皮細胞で覆われた血管数の比率などを指標とすることができる。
腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であると判断することができる。一方、癌患者から採取された腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数が多い場合は、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性でないと判断することができる。
周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合とは、例えば、血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）に対する周皮細胞で覆われた血管数の比率が、２５％以下、好ましくは２０％以下、より好ましくは１５％以下、特に好ましくは１０％以下の場合をいうことができる。周皮細胞で覆われた血管数が多い場合は、例えば、上記の「周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合」に該当しない場合をいうことができる。
本発明において、抗腫瘍効果の予測は、癌患者において血管新生阻害物質がどの程度抗腫瘍効果を奏するかを投与前に予測することを主目的とするものである。
癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性であると判断されたときは、当該血管新生阻害物質は、より抗腫瘍効果を奏すると予測することができる。より抗腫瘍効果を奏する場合として、例えば、同様の症状の患者における平均的な抗腫瘍効果よりも高い抗腫瘍効果を期待できる場合、同一の癌種に罹患した他の患者よりも高い抗腫瘍効果を期待できる場合、または他の癌種に罹患した患者よりも高い抗腫瘍効果を期待できる場合などをあげることができる。
ただし、後述のように、本発明において血管新生阻害物質は、本来血管新生を阻害する作用を有するために、癌患者が血管新生阻害物質に対して高感受性でないと判断されたときであっても、当該血管新生阻害物質が抗腫瘍効果を奏さないと予測されるものではない。
本発明の別の態様として、周皮細胞で覆われた血管数を指標として、血管新生阻害物質に対して高感受性を示す患者を選択する方法をあげることができる。周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、上記の通り、当該患者は、血管新生阻害物質に対して高感受性を示すと判断できる。したがって、このような患者を、血管新生阻害物質に対する高感受性を示す患者として選択することができる。
また、本発明の別の態様として、周皮細胞で覆われた血管数を指標として、血管新生阻害物質に対する感受性を分析し、分析結果によって患者を分類する方法をあげることができる。すなわち、本発明の方法において、上記のように血管新生阻害物質に対する感受性を分析し、この分析結果に基づいて、患者を分類することができる。例えば、周皮細胞で覆われた血管数の多いグループと、周皮細胞で覆われた血管数の少ないグループとに分類することができる。
また、本発明の別の態様として、周皮細胞で覆われた血管数を指標として、血管新生阻害物質の投与対象となる患者を選択する方法をあげることができる。周皮細胞で覆われた血管数の少ない患者は、血管新生阻害物質に対して高感受性を示すと予測されるため、血管新生阻害物質の投与対象となる。
また、本発明の別の態様として、周皮細胞で覆われた血管数を指標として、患者に対する血管新生阻害物質の治療効果を予測する方法をあげることができる。本発明の方法において、周皮細胞で覆われた血管数が少ない場合は、血管新生阻害物質に対して高い感受性を示すと判断できるため、当該患者における血管新生阻害物質の治療効果は高いと予測することができる。
また、本発明には、患者の血管新生阻害物質に対する感受性の程度を予測するために、当該患者由来の周皮細胞で覆われた血管数を評価する方法が含まれる。当該評価方法は、上記１．に示すとおりである。
本工程において、血管新生阻害物質は、後述のとおりであるが、好ましくは４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、もしくはその薬理学的に許容される塩、またはそれらの溶媒和物である。
本発明に係る方法は、血管新生阻害物質を患者に投与する前に、当該患者における血管新生阻害物質の有効性の程度を予測するのに用いることができる。そして、血管新生阻害物質の有する効果をより期待できる患者を選択して、疾患の治療を行うことができる。したがって、本発明は、臨床上非常に有用である。
３．血管新生阻害物質
本発明において、血管新生阻害物質は、血管新生を阻害する活性を有するものであれば、特には限定されない。
血管新生阻害物質は、例えば、
ＶＥＧＦ阻害物質（例えば、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、抗ＶＥＧＦレセプター抗体、抗ＶＥＧＦ抗体（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，５５，５２９６−５３０１，１９９５））、
ＦＧＦ（繊維芽細胞増殖因子：ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）阻害物質（例えば、ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、抗ＦＧＦレセプター抗体、抗ＦＧＦ抗体（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，５１，６１８０−４，１９９１））、
ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子：ｐｌａｔｅｌｅｔ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）阻害物質（例えば、ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質（Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．，１１１，１２８７−９５）、抗ＰＤＧＦレセプター抗体、抗ＰＤＧＦ抗体）、
ＥＧＦ（上皮成長因子：ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ）阻害物質（例えば、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，５１，６１８０−４，１９９１）、抗ＥＧＦレセプター抗体、抗ＥＧＦ抗体）、
インテグリン阻害物質（例えば、αｖβ３インテグリン阻害物質、αｖβ５インテグリン阻害物質（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６，３０５６−６１，２０００））、
内因性阻害物質（例えば、ＩＬ−１２、Ｔｒｏｍｂｏｓｐｏｎｄｉｎ−１，Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ，Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．，７８，３６１−５，１９９８）、ＣＯＸ−２阻害物質（Ａｎｎｕａｌｓ  ｏｆ  Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．，８４−６，１９９９））、
マトリックスメタロプロテイン阻害物質（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．Ｐａｎｃｒｅａｔｏｌ．，２１，１−１２，１９９７）、
その他阻害物質（例えば、ｆａｒｎｅｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ阻害物質、一酸化窒素阻害物質、アンジオテンシン変換酵素阻害物質、ＨＭＧ−ＣｏＡ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ阻害物質、Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔ阻害物質、メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤（Ｓｃｉｅｎｃｅ．，２８２，１３２４−１３２７，１９９８））、
などがあげられ、好ましくはＶＥＧＦ阻害物質であり、より好ましくはＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質、抗ＶＥＧＦレセプター抗体または抗ＶＥＧＦ抗体であり、特に好ましくはＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質である。
（Ａ）化合物の基の定義
本明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。
「ハロゲン原子」の好適な例としては、フッ素原子、塩素原子をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキル基」とは、炭素数が１〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキル基を意味し、具体例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基（ｎ−プロピル基）、２−プロピル基（ｉ−プロピル基）、２−メチル−１−プロピル基（ｉ−ブチル基）、２−メチル−２−プロピル基（ｔ−ブチル基）、１−ブチル基（ｎ−ブチル基）、２−ブチル基（ｓ（ｓｅｃ）−ブチル基）、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基、１−ヘキシル基、２−ヘキシル基、３−ヘキシル基、２−メチル−１−ペンチル基、３−メチル−１−ペンチル基、４−メチル−１−ペンチル基、２−メチル−２−ペンチル基、３−メチル−２−ペンチル基、４−メチル−２−ペンチル基、２−メチル−３−ペンチル基、３−メチル−３−ペンチル基、２，３−ジメチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−１−ブチル基、２，２−ジメチル−１−ブチル基、２−エチル−１−ブチル基、３，３−ジメチル−２−ブチル基、２，３−ジメチル−２−ブチル基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルキル基」の好適な例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基、１−ペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、２−メチル−１−ブチル基、３−メチル−１−ブチル基、２−メチル−２−ブチル基、３−メチル−２−ブチル基、２，２−ジメチル−１−プロピル基をあげることができ、より好適な例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基、２−メチル−１−プロピル基、２−メチル−２−プロピル基、１−ブチル基、２−ブチル基をあげることができ、さらに好適な例としては、メチル基、エチル基、１−プロピル基、２−プロピル基をあげることができ、最も好適な例としては、メチル基、エチル基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキレン基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」からさらに任意の水素原子を１個除いて誘導される二価の基を意味し、具体例としては、メチレン基、１，２−エチレン基、１，１−エチレン基、１，３−プロピレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、ヘキサメチレン基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−６アルケニル基」とは、二重結合を１個有する、炭素数が２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルケニル基を意味し、具体例としては、エテニル基（ビニル基）、１−プロペニル基、２−プロペニル基（アリル基）、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、ペンテニル基、ヘキセニル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−６アルキニル基」とは、三重結合を１個有する、炭素数が２〜６個の直鎖状または分枝鎖状のアルキニル基を意味し、具体例としては、エチニル基、１−プロピニル基、２−プロピニル基、１−ブチニル基、２−ブチニル基、３−ブチニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ３−８シクロアルキル基」とは、炭素数が３〜８個の単環または二環の飽和脂肪族炭化水素基を意味し、具体例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロへプチル基、シクロオクチル基、ビシクロ［２．１．０］ペンチル基、ビシクロ［３．１．０］ヘキシル基、ビシクロ［２．１．１］ヘキシル基、ビシクロ［４．１．０］ヘプチル基、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル基（ノルボルニル基）、ビシクロ［３．３．０］オクチル基、ビシクロ［３．２．１］オクチル基、ビシクロ［２．２．２］オクチル基などがあげられる。
「Ｃ３−８シクロアルキル基」の好適な例としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基をあげることができ、より好適な例としては、シクロプロピル基があげられる。
本明細書において、「Ｃ６−１０アリール基」とは、炭素数が６〜１０個の芳香族性の炭化水素環式基を意味し、具体例としては、フェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、インデニル基、アズレニル基などがあげられる。
「Ｃ６−１０アリール基」の好適な例としては、フェニル基をあげることができる。
本明細書において、「ヘテロ原子」とは、窒素原子、酸素原子または硫黄原子を意味する。
本明細書において、「５〜１０員ヘテロアリール基」とは、環を構成する原子の数が５〜１０個であり、環を構成する原子中に１〜５個のヘテロ原子を含有する芳香族性の環式基を意味し、具体例としては、フリル基、チエニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、フラザニル基、チアジアゾリル基、オキサジアゾリル基、ピリジル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、ピリミジニル基、トリアジニル基、プリニル基、プテリジニル基、キノリル基、イソキノリル基、ナフチリジニル基、キノキサリニル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、フタラジニル基、イミダゾピリジル基、イミダゾチアゾリル基、イミダゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンズイミダゾリル基、インドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、ピロロピリジル基、チエノピリジル基、フロピリジル基、ベンゾチアジアゾリル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ピリドピリミジニル基、ベンゾフリル基、ベンゾチエニル基、チエノフリル基などがあげられる。
「５〜１０員ヘテロアリール基」の好適な例としては、フリル基、チエニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、チアゾリル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、ピリジル基、ピリミジニル基をあげることができる。
本明細書において、「３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基」とは、
（１）環を構成する原子の数が３〜１０個であり、
（２）環を構成する原子中に１〜２個のヘテロ原子を含有し、
（３）環中に二重結合を１〜２個含んでいてもよく、
（４）環中にカルボニル基、スルフィニル基またはスルホニル基を１〜３個含んでいてもよい、
（５）単環式または二環式である非芳香族性の環式基を意味し、環を構成する原子中に窒素原子を含有する場合、窒素原子から結合手が出ていてもよい。
具体例としては、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、アゾカニル基、ピペラジニル基、ジアゼパニル基、ジアゾカニル基、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプチル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、１，１−ジオキソチオモルホリニル基、オキシラニル基、オキセタニル基、テトラヒドロフリル基、ジオキソラニル基、テトラヒドロピラニル基、ジオキサニル基、テトラヒドロチエニル基、テトラヒドロチオピラニル基、オキサゾリジニル基、チアゾリジニル基などがあげられる。
「３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基」の好適な例としては、アジリジニル基、アゼチジニル基、ピロリジニル基、ピペリジニル基、アゼパニル基、ピペラジニル基、ジアゼパニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基、１，１−ジオキソチオモルホリニル基、テトラヒドロフリル基、テトラヒドロピラニル基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルコキシ基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体的としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基（ｎ−プロポキシ基）、２−プロポキシ基（ｉ−プロポキシ基）、２−メチル−１−プロポキシ基（ｉ−ブトキシ基）、２−メチル−２−プロポキシ基（ｔ−ブトキシ基）、１−ブトキシ基（ｎ−ブトキシ基）、２−ブトキシ基（ｓ−ブトキシ基）、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブトキシ基、３−メチル−１−ブトキシ基、２−メチル−２−ブトキシ基、３−メチル−２−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−プロポキシ基、１−ヘキシルオキシ基、２−ヘキシルオキシ基、３−ヘキシルオキシ基、２−メチル−１−ペンチルオキシ基、３−メチル−１−ペンチルオキシ基、４−メチル−１−ペンチルオキシ基、２−メチル−２−ペンチルオキシ基、３−メチル−２−ペンチルオキシ基、４−メチル−２−ペンチルオキシ基、２−メチル−３−ペンチルオキシ基、３−メチル−３−ペンチルオキシ基、２，３−ジメチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−１−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−ブトキシ基、２−エチル−１−ブトキシ基、３，３−ジメチル−２−ブトキシ基、２，３−ジメチル−２−ブトキシ基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルコキシ基」の好適な例としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基、２−メチル−１−プロポキシ基、２−メチル−２−プロポキシ基、１−ブトキシ基、２−ブトキシ基、１−ペンチルオキシ基、２−ペンチルオキシ基、３−ペンチルオキシ基、２−メチル−１−ブトキシ基、３−メチル−１−ブトキシ基、２−メチル−２−ブトキシ基、３−メチル−２−ブトキシ基、２，２−ジメチル−１−プロポキシ基をあげることができ、より好適な例としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基、２−メチル−１−プロポキシ基、２−メチル−２−プロポキシ基、１−ブトキシ基、２−ブトキシ基をあげることができ、さらに好適な例としては、メトキシ基、エトキシ基、１−プロポキシ基、２−プロポキシ基をあげることができ、最も好適な例としては、メトキシ基、エトキシ基をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ１−６アルキルチオ基」とは、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」の末端に硫黄原子が結合した基であることを意味し、具体例としては、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基（ｎ−プロピルチオ基）、２−プロピルチオ基（ｉ−プロピルチオ基）、２−メチル−１−プロピルチオ基（ｉ−ブチルチオ基）、２−メチル−２−プロピルチオ基（ｔ−ブチルチオ基）、１−ブチルチオ基（ｎ−ブチルチオ基）、２−ブチルチオ基（ｓ−ブチルチオ基）、１−ペンチルチオ基、２−ペンチルチオ基、３−ペンチルチオ基、２−メチル−１−ブチルチオ基、３−メチル−１−ブチルチオ基、２−メチル−２−ブチルチオ基、３−メチル−２−ブチルチオ基、２，２−ジメチル−１−プロピルチオ基、１−ヘキシルチオ基、２−ヘキシルチオ基、３−ヘキシルチオ基、２−メチル−１−ペンチルチオ基、３−メチル−１−ペンチルチオ基、４−メチル−１−ペンチルチオ基、２−メチル−２−ペンチルチオ基、３−メチル−２−ペンチルチオ基、４−メチル−２−ペンチルチオ基、２−メチル−３−ペンチルチオ基、３−メチル−３−ペンチルチオ基、２，３−ジメチル−１−ブチルチオ基、３，３−ジメチル−１−ブチルチオ基、２，２−ジメチル−１−ブチルチオ基、２−エチル−１−ブチルチオ基、３，３−ジメチル−２−ブチルチオ基、２，３−ジメチル−２−ブチルチオ基などがあげられる。
「Ｃ１−６アルキルチオ基」の好適な例としては、メチルチオ基、エチルチオ基、１−プロピルチオ基（ｎ−プロピルチオ基）、２−プロピルチオ基（ｉ−プロピルチオ基）、２−メチル−１−プロピルチオ基（ｉ−ブチルチオ基）、２−メチル−２−プロピルチオ基（ｔ−ブチルチオ基）、１−ブチルチオ基（ｎ−ブチルチオ基）、２−ブチルチオ基（ｓ−ブチルチオ基）をあげることができる。
本明細書において、「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」とは、上記定義「Ｃ３−８シクロアルキル基」の末端に酸素原子が結合した基であることを意味し、具体的としては、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基、シクロオクチルオキシ基、ビシクロ［２．１．０］ペンチルオキシ基、ビシクロ［３．１．０］ヘキシルオキシ基、ビシクロ［２．１．１］ヘキシルオキシ基、ビシクロ［４．１．０］ヘプチルオキシ基、ビシクロ［２．２．１］ヘプチルオキシ基（ノルボルニルオキシ基）、ビシクロ［３．３．０］オクチルオキシ基、ビシクロ［３．２．１］オクチルオキシ基、ビシクロ［２．２．２］オクチルオキシ基などがあげられる。
「Ｃ３−８シクロアルコキシ基」の好適な例としては、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基をあげることができ、より好適な例としては、シクロプロポキシ基をあげることができる。
本明細書において、「モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基」とは、アミノ基中の１個の水素原子を、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」で置換した基を意味し、具体例としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、１−プロピルアミノ基（ｎ−プロピルアミノ基）、２−プロピルアミノ基（ｉ−プロピルアミノ基）、２−メチル−１−プロピルアミノ基（ｉ−ブチルアミノ基）、２−メチル−２−プロピルアミノ基（ｔ−ブチルアミノ基）、１−ブチルアミノ基（ｎ−ブチルアミノ基）、２−ブチルアミノ基（ｓ−ブチルアミノ基）、１−ペンチルアミノ基、２−ペンチルアミノ基、３−ペンチルアミノ基、２−メチル−１−ブチルアミノ基、３−メチル−１−ブチルアミノ基、２−メチル−２−ブチルアミノ基、３−メチル−２−ブチルアミノ基、２，２−ジメチル−１−プロピルアミノ基、１−ヘキシルアミノ基、２−ヘキシルアミノ基、３−ヘキシルアミノ基、２−メチル−１−ペンチルアミノ基、３−メチル−１−ペンチルアミノ基、４−メチル−１−ペンチルアミノ基、２−メチル−２−ペンチルアミノ基、３−メチル−２−ペンチルアミノ基、４−メチル−２−ペンチルアミノ基、２−メチル−３−ペンチルアミノ基、３−メチル−３−ペンチルアミノ基、２，３−ジメチル−１−ブチルアミノ基、３，３−ジメチル−１−ブチルアミノ基、２，２−ジメチル−１−ブチルアミノ基、２−エチル−１−ブチルアミノ基、３，３−ジメチル−２−ブチルアミノ基、２，３−ジメチル−２−ブチルアミノ基などがあげられる。
本明細書において、「ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基」とは、アミノ基中の２個の水素原子を、それぞれ同一のまたは異なる、上記定義「Ｃ１−６アルキル基」で置換した基を意味し、具体例としては、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−プロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｉ−プロピルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｎ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｉ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｓ−ブチルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジ−ｔ−ブチルアミノ基、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｎ−プロピル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｉ−プロピル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｎ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｉ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｓ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基、Ｎ−ｔ−ブチル−Ｎ−メチルアミノ基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−７アシル基」とは、上記定義の「Ｃ１−６アルキル基」が結合したカルボニル基であることを意味し、具体例としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基、イソプロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基などがあげられる。
本明細書において、「Ｃ２−７アルコキシカルボニル基」とは、上記定義の「Ｃ１−６アルコキシ基」が結合したカルボニル基であることを意味し、具体例としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、１−プロピルオキシカルボニル基、２−プロピルオキシカルボニル基、２−メチル−２−プロポキシカルボニル基などがあげられる。
本明細書において、「置換基を有していてもよい」とは、「置換可能な部位に、任意に組み合わせて１または複数個の置換基を有してもよい」ことを意味し、置換基の具体例としては、例えば、ハロゲン原子、水酸基、チオール基、ニトロ基、シアノ基、ホルミル基、カルボキシル基、アミノ基、シリル基、メタンスルホニル基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ２−７アシル基またはＣ２−７アルコキシカルボニル基などをあげることができる。ただし、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基、Ｃ１−６アルキルチオ基、Ｃ３−８シクロアルコキシ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、Ｃ２−７アシル基およびＣ２−７アルコキシカルボニル基はそれぞれ独立して下記置換基群からなる群から選ばれる１〜３個の基を有していてもよい。
＜置換基群＞
ハロゲン原子、水酸基、チオール基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ２−６アルケニル基、Ｃ２−６アルキニル基、Ｃ６−１０アリール基、５〜１０員ヘテロアリール基、３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、Ｃ１−６アルコキシ基およびＣ１−６アルキルチオ基。
（Ｂ）ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、
一般式（Ｉ）
2007015569.tif 000005
で表される化合物を挙げることができる。
（ｉ）Ａ
Ａは、式
2007015569.tif 000006
で表される基を意味する。
式中、Ｒ１は、式−Ｖ１−Ｖ２−Ｖ３（式中、Ｖ１は、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキレン基を意味する；Ｖ２は、単結合、酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、スルフィニル基、スルホニル基、式−ＣＯＮＲ６−で表される基、式−ＳＯ２ＮＲ６−で表される基、式−ＮＲ６ＳＯ２−で表される基、式−ＮＲ６ＣＯ−で表される基または式−ＮＲ６−で表される基を意味する（式中、Ｒ６は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。）；Ｖ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。）で表される基を意味する。
Ｒ２は、シアノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、カルボキシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基または置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する；Ｖａ１２は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。）で表される基を意味する。
Ａ１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。
Ｒ１１は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基を意味する。
Ｒ１２は、水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。
Ｖａ１３は、酸素原子または硫黄原子を意味する。
Ａ１１は、置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。
Ｒ１３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基または置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基を意味する。
Ｒ１４は、式−Ｖａ１４−Ｖａ１５（式中、Ｖａ１４は、単結合またはカルボニル基を意味する；Ｖａ１５は、水素原子、水酸基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、アミノ基、置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、置換基を有していてもよいジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基、ホルミル基、カルボキシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。）で表される基を意味する。
（ｉｉ）Ｘ
Ｘは、酸素原子または硫黄原子を意味する。
（ｉｉｉ）Ｙ
Ｙは、式
2007015569.tif 000007
で表される基を意味する。
式中、Ｒ３は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。
Ｒ７およびＲ８は、それぞれ独立して水素原子、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルコキシ基、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキルチオ基、ホルミル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基または式−ＣＯＮＶｄ１Ｖｄ２（式中、Ｖｄ１およびＶｄ２は、それぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基を意味する。
Ｒ９は、水素原子、ハロゲン原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。
Ｗ１およびＷ２は、それぞれ独立して置換基を有していてもよい炭素原子または窒素原子を意味する。
（ｉｖ）Ｒ４
Ｒ４は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−７アシル基または置換基を有していてもよいＣ２−７アルコキシカルボニル基を意味する。
（ｖ）Ｒ５
Ｒ５は、水素原子、置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルケニル基、置換基を有していてもよいＣ２−６アルキニル基、置換基を有していてもよいＣ３−８シクロアルキル基、置換基を有していてもよいＣ６−１０アリール基、置換基を有していてもよい５〜１０員ヘテロアリール基、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基を意味する。
一般式（１）で表される化合物は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第０２／０３２８７２号パンフレット（ＷＯ０２／３２８７２）、国際公開第２００４／０２０４３４号パンフレット（ＷＯ２００４／０２０４３４）、および国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット（ＷＯ２００５／０６３７１３）のいずれかに記載された方法によって製造することができる。
本発明において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、好ましくは、
一般式（ＩＩ）
2007015569.tif 000008
で表される化合物を挙げることができる。一般式（ＩＩ）は、一般式（Ｉ）で表される化合物の好ましい例である。
（ｉ）Ｒ１
Ｒ１は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ１の好適な例としては、Ｃ１−６アルキル基があげられる。例えば、Ｒ１の定義においてＶ１がＣ１−６アルキレン基、Ｖ２が単結合、Ｖ３が水素原子のときは、Ｒ１はＣ１−６アルキル基となる。ただし、この場合、Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基、水酸基、Ｃ１−６アルコキシ基、アミノ基、モノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基およびジ−Ｃ１−６アルキルアミノ基から選ばれる置換基を有していてもよい。
Ｒ１のより好適な例としては、メチル基または式
2007015569.tif 000009
（式中、Ｒａ３はメチル基を意味する；Ｒａ１は水素原子または水酸基を意味する；Ｒａ２は、メトキシ基、エトキシ基、１−ピロリジニル基、１−ピペリジニル基、４−モルホリニル基、ジメチルアミノ基またはジエチルアミノ基を意味する。）のいずれかで表される基があげられる。
Ｒ１のさらに好適な例としては、メチル基または２−メトキシエチル基があげられる。
（ｉｉ）Ｒ２
Ｒ２は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ２の好適な例としては、シアノ基または式−ＣＯＮＶａ１１Ｖａ１２（式中、Ｖａ１１およびＶａ１２は、前記定義と同じ意味である。）で表される基があげられる。
Ｒ２のより好適な例としては、シアノ基または式−ＣＯＮＨＶａ１６（式中、Ｖａ１６は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、Ｃ１−６アルコキシ基またはＣ３−８シクロアルコキシ基を意味する。ただし、Ｖａ１６は、ハロゲン原子、シアノ基、水酸基およびＣ１−６アルコキシ基から選ばれる置換基を有していてもよい。）で表される基があげられる。
Ｒ２のさらに好適な例としては、式−ＣＯＮＨＶａ１７（式中、Ｖａ１７は、水素原子、Ｃ１−６アルキル基またはＣ１−６アルコキシ基を意味する。）で表される基があげられる。
Ｒ２のもっとも好適な例としては、式−ＣＯＮＨＶａ１８（式中、Ｖａ１８は、水素原子、メチル基またはメトキシ基を意味する。）で表される基があげられる。
（ｉｉｉ）Ｙ１
Ｙ１は、式
2007015569.tif 000010
（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｗ１およびＷ２は、前記定義と同じ意味である。）で表される基を意味する。
Ｙ１の好適な例としては、式
2007015569.tif 000011
（式中、Ｒ７１は、水素原子またはハロゲン原子を意味する。）で表される基があげられる。
（ｉｖ）Ｒ３およびＲ４
Ｒ３およびＲ４は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ３およびＲ４の好適な例としては、水素原子があげられる。
（ｖ）Ｒ５
Ｒ５は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ５の好適な例としては、水素原子、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基またはＣ６−１０アリール基（ただし、Ｒ５は、ハロゲン原子およびメタンスルホニル基から選ばれる置換基を有していてもよい）があげられる。
Ｒ５のより好適な例としては、メチル基、エチル基またはシクロプロピル基があげられる。
また、一般式（ＩＩ）で表される化合物の好適な例としては、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（２−クロロ−４−（（６−シアノ−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−３−（ジエチルアミノ）−２−ヒドロキシプロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
Ｎ−（４−（（６−シアノ−７−（（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロピル）オキシ）−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−（４−フルオロフェニル）ウレア、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−シクロプロピル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−メトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−フルオロエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−エチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−ヒドロキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（（２Ｓ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）オキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−エトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（２−フルオロ−４−（（６−カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ）フェニル）−Ｎ’−シクロプロピルウレア、
Ｎ６−（２−ヒドロキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（１−プロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（ｃｉｓ−２−フルオロ−シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（２−メトキシエトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−（２−（４−モルホリノ）エトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（２−フルオロエチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（（２Ｒ）テトラヒドロ−２−フラニルメチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−３−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシプロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（２Ｒ）−２−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジノ）プロポキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メチル−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−（（１−メチル−４−ピペリジル）メトキシ）−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（２−メトキシエトキシ）−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ′−シクロプロピルウレア、
Ｎ−（４−（６−シアノ−７−（３−（４−モルホリノ）プロポキシ）−４−キノリル）オキシフェニル）−Ｎ′−（３−（メチルスルホニル）フェニル）ウレア、
４−（４−（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−フルオロ−４−（（２−フルオロエチルアミノ）カルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−（２−エトキシエチル）−４−（３−クロロ−４−（（（メチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（４−（３−エチルウレイド）−３−フルオロ−フェノキシ）−７−メトキシキノリン−６−カルボキシリック  アシッド（２−シアノエチル）アミド
および
Ｎ−（４−（６−（２−シアノエチル）カルバモイル−７−メトキシ−４−キノリル）オキシ−２−フルオロフェニル）−Ｎ′−シクロプロピルウレア
を挙げることができる。
さらに、一般式（ＩＩ）で表される化合物のより好適な例としては、
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（エチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（シクロプロピルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド、
４−（３−クロロ−４−（メチルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド
および
Ｎ６−メトキシ−４−（３−クロロ−４−（（（エチルアミノ）カルボニル）アミノ）フェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドを挙げることができる。
また、一般式（ＩＩ）で表される化合物のさらに好適な例としては、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（式（ＩＶ）参照）を挙げることができる。ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質の最も好適な例の一つとしては、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドのメタンスルホン酸塩を挙げることができる。
2007015569.tif 000012
一般式（ＩＩ）で表される化合物は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第０２／３２８７２号パンフレット（ＷＯ０２／３２８７２）および国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット（ＷＯ２００５／０６３７１３）のいずれかに記載された方法によって製造することができる。
本発明において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、好ましくは、
一般式（ＩＩＩ）
2007015569.tif 000013
で表される化合物を挙げることができる。一般式（ＩＩＩ）は、一般式（Ｉ）で表される化合物の好ましい例である。
（ｉ）Ｒ１１
Ｒ１１は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ１１の好適な例としては、置換基を有していてもよい３〜１０員非芳香族ヘテロ環式基または置換基を有していてもよいモノ−Ｃ１−６アルキルアミノ基があげられる。
Ｒ１１のより好適な例としては、以下の置換基群から選ばれる置換基を有していてもよい式
2007015569.tif 000014
で表される基から選ばれるいずれか１の基があげられる。
［置換基群］
水酸基、Ｃ１−６アルキル基、Ｃ３−８シクロアルキル基、式
2007015569.tif 000015
（式中、ＲＮ１およびＲＮ２はそれぞれ独立して水素原子または置換基を有していてもよいＣ１−６アルキル基を意味する。）で表される基
Ｒ１１のさらに好適な例としては、式
2007015569.tif 000016
で表される基から選ばれるいずれか１の基があげられる。
（ｉｉ）Ｒ１２
Ｒ１２は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ１２の好適な例としては、水素原子があげられる。
（ｉｉｉ）Ｖａ１３
Ｖａ１３は、前記定義と同じ意味である。
Ｖａ１３の好適な例としては、酸素原子があげられる。
（ｉｖ）Ａ１１
Ａ１１は、前記定義と同じ意味である。
Ａ１１の好適な例としては、炭素原子があげられる。
（ｖ）Ｒ４
Ｒ４は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ４の好適な例としては、水素原子があげられる。
（ｖｉ）Ｒ５
Ｒ５は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ５の好適な例としては、Ｃ１−６アルキル基またはＣ３−８シクロアルキル基があげられる。
Ｒ５のより好適な例としては、メチル基があげられる。
（ｖｉｉ）Ｒ９
Ｒ９は、前記定義と同じ意味である。
Ｒ９の好適な例としては、水素原子があげられる。
また、一般式（ＩＩＩ）で表される化合物の好適な例としては、
５−（２−（（（４−ヒドロキシ−４−メチルピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸メチルアミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（４−ヒドロキシピペリジノ）カルボニル）アミノ−４−ピリジル）オキシ−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（（４−（ピロリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド、
Ｎ１−メチル−５−（２−（（（４−（ピペリジン−１−イル）ピペリジン−１−イル）カルボニル）アミノ）ピリジン−４−イルオキシ）−１Ｈ−１−インドールカルボキサミド
および
Ｎ４−（４−（１−（メチルアミノ）カルボニル−１Ｈ−５−インドリル）オキシ−２−ピリジル）−４−モルホリンカルボキサミド
を挙げることができる。
一般式（ＩＩＩ）で表される化合物は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第２００４／０２０４３４号パンフレット（ＷＯ２００４／０２０４３４）に記載された方法によって製造することができる。
また、本発明において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、
（１）Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［２−（１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）エトキシ］キナゾリン−４−アミン（以下、「ＺＤ４１９０」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６０，９７０−９７５，２０００、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４２：５３６９−５３８９，１９９９．）（式（Ｖ）参照）、
2007015569.tif 000017
（２）Ｎ−（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キナゾリン−４−アミン（以下、「ＺＤ６４７４」および「ｖａｎｄｅｔａｎｉｂ」ともいう。Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，４２，５８３，２００１、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４５：１３００−１３１２，２００２．）（式（ＶＩ）参照）、
2007015569.tif 000018
（３）３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチレン］−２−インドリノン（以下、「ＳＵ５４１６」および「ｓｅｍａｘａｎｉｂ」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，５９，９９−１０６，１９９９、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４１：２５８８−２６０３，１９９８．、ＵＳ５７９２７８３）（式（ＶＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000019
（４）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド（以下、「ＳＵ６６６８」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６０，４１５２−４１６０，２０００、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４２：５１２０−５１３０，１９９９．）（式（ＶＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000020
（５）５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド（以下、「ＳＵ１１２４８」ともいう。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，９，３２７−３３７，２００３、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４６：１１１６−９，２００３．、ＷＯ０１／０６０８１４）（式（ＩＸ）参照）、
2007015569.tif 000021
（６）Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン  ３−｛５，６，７，１３−テトラヒドロ−９−［（１−メチルエトキシ）メチル］−５−オキソ−１２Ｈ−インデノ（２，１−ａ）ピロロ（３，４−ｃ）カルバゾール−１２−イル｝プロピルエステル（以下、「ＣＥＰ−７０５５」ともいう。Ｐｒｏ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４３，１０８０，２００２、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４６：５３７５−８８，２００３．）（式（Ｘ）参照）、
2007015569.tif 000022
（７）３−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−５−［３−（４−ピロリジン−１−イル−ブチル）−ウレイド］−イソチアゾール−４−カルボキシリック  アシッド  アミド（以下、「ＣＰ−５４７，６３２」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．６３：７３０１−９，２００３、ＷＯ  ９９／６２８９０）（式（ＸＩ）参照）、
2007015569.tif 000023
（８）Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キナゾリニル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−プロピルウレア（以下、「ＫＲＮ６３３」ともいう。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．，３：１６３９−４９，２００４．、ＷＯ００／４３３６６）（式（ＸＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000024
（９）１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン（以下、「ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４」および「ｖａｔａｌａｎｉｂ」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，２１７９−２１８９，２０００、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４３：２３１０−２３，２０００．、ＷＯ９８／３５９５８）（式（ＸＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000025
（１０）Ｎ−｛２−クロロ−４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝−Ｎ’−（５−メチル−３−イソキサゾリル）ウレア（以下、「ＫＲＮ９５１」ともいう。ＷＯ０２／０８８１１０）（式（ＸＩＶ）参照）、
2007015569.tif 000026
（１１）４−［（４−フルオロ−２−メチルインドール−５−イル）オキシ］−６−メトキシ−７−［３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ］キナゾリン（以下、「ＡＺＤ２１７１」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．６５：４３８９−４００，２００５、ＷＯ００／４７２１２）（式（ＸＶ）参照）、
2007015569.tif 000027
（１２）６−［２−（メチルカルバモイル）フェニルスルファニル］−３−Ｅ−［２−（ピリジン−２−イル）エテニル］インダゾール（以下、「ＡＧ０１３７３６」ともいう。Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．１６５：３５−５２，２００４．、ＷＯ０１／００２３６９）（式（ＸＶＩ）参照）、
2007015569.tif 000028
（１３）５−（（Ｚ）−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−インドール−３−イリデン）メチル）−Ｎ−（（２Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−モルホリン−４−イルプロピル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド（以下、「ＳＵ１４８１３」ともいう。Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４６，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ２０３１），２００５）（式（ＸＶＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000029
（１４）３−（（キノリン−４−イルメチル）アミノ）−Ｎ−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）チオフェン−２−カルボキサミド（以下、「ＯＳＩ９３０」ともいう。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ．，４：１１８６−１１９７，２００５．）（式（ＸＶＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000030
（１５）６−（２，６−ジクロロフェニル）−８−メチル−２−フェニルアミノ−８Ｈ−ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−オン（以下、「ＴＫＩ−２８」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．，４，２００５．）（式（ＸＩＸ）参照）、
2007015569.tif 000031
（１６）２−（（１，６−ジヒドロ−６−オキソ−ピリジン−３−イルメチル）アミノ）−Ｎ−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）−３−ピリジン−カルボキサミド（以下、「ＡＢＰ３０９」ともいう。ＥＯＲＴＣ−ＮＣＩ−ＡＡＣＲ  Ｓｙｍｐ  Ｍｏｌ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，２，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  １７２），２００４．）（式（ＸＸ）参照）、
2007015569.tif 000032
（１７）４−（４−（４−クロロ−フェニルアミノ）−フロ［２，３−ｄ］ピリダジン−７−イルオキシメチル）−ピリジン−２−カルボキシリック  アシッドメチルアミド（以下、「ＢＡＹ  ５７−９３５２」ともいう。ＷＯ０１／２３３７５）（式（ＸＸＩ）参照）、
2007015569.tif 000033
（１８）Ｎ−（３−トリフルオロメチル−４−クロロフェニル）−Ｎ’−（４−（２−メチルカルバモイルピリジン−４−イル）オキシフェニル）ウレア（以下、「ＢＡＹ  ４３−９００６」および「ｓｏｒａｆｅｎｉｂ」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６４，７０９９−７１０９，２００４，Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  Ｒｅｓ  Ｄｅｖ．，６，７７７−８１，２００２．）（式（ＸＸＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000034
（１９）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（以下、「ＣＨＩＲ２５８」ともいう。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，１１，３６３３−３６４１，２００５．）（式（ＸＸＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000035
（２０）４−（４−（１−アミノ−１−メチル−エチル）−フェニル）−２−（４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−カルボニトリル（以下、「ＪＮＪ１７０２９２５９」ともいう。Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．，６６，６３５−６４７，２００４．）（式（ＸＸＩＶ）参照）、
2007015569.tif 000036
（２１）［６−［４−［（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル］フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）アミン（以下、「ＡＥＥ−７８８」ともいう。Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６４，４９３１−４９４１，２００４．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６４，７９７７−７９８４，２００４．）（式（ＸＸＶ）参照）、
2007015569.tif 000037
（２２）９−（１−メチルエトキシ）メチル−１２−（３−ヒドロキシプロピル）−６Ｈ，７Ｈ，１３Ｈ−インデノ［２，１−ａ］ピロロ［３，４−ｃ］カルバゾール−５−オン（以下、「ＣＥＰ−５２１４」ともいう。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４６，５３７５−５３８８，２００３．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６３，５９７８−５９９１，２００３．）（式（ＸＸＶＩ）参照）、
2007015569.tif 000038
（２３）Ｎ−（２，４−ジフルオロフェニル）−Ｎ’−｛４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）−オキシ］−２−フルオロフェニル｝ウレア（以下、「ＫＩ−８７５１」ともいう。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４８，１３５９−１３６６，２００５．）（式（ＸＸＶＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000039
（２４）Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル］−Ｎ’−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレア（以下、「ＡＢＴ−８６９」ともいう。Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，４６，１４０７，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ５９８１），２００５．）（式（ＸＸＩＸ）参照）、
2007015569.tif 000040
（２５）２−メチル−６−［２−（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ］−ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボキシリック  アシッド  メチルアミド（以下、「ＡＧ−０２８２６２」ともいう。ＷＯ０３／０６４６２、ＵＳ２００４／００９９６５）（式（ＸＸＸ）参照）、
2007015569.tif 000041
（２６）（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール（以下、「ＢＭＳ−５４０２１５」ともいう。Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，４６，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０３３），２００５．）（式（ＸＸＸＩ）参照）、
2007015569.tif 000042
（２７）（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール）２−アミノプロパノエート（以下、「ＢＭＳ−５８２６６４」ともいう。Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，４６，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０３３），２００５．）（式（ＸＸＸＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000043
（２８）３−［（４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ）−メチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン（以下、「ＡＧＮ−１９９６５９」ともいう。ＷＯ２００３／０２７１０２）（式（ＸＸＸＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000044
（２９）５−［［４−［（２，３−ジメチル−２Ｈ−インダゾール−６−イル）メチルアミノ］ピリミジン−２−イル］アミノ］−２−メチルベンゼンスルホンアミド（以下、「ｐａｚｏｐａｎｉｂ」または「ＧＷ−７８６０３４」ともいう。Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３０５４），２００４．）（式（ＸＸＸＩＶ）参照）、
2007015569.tif 000045
（３０）（３Ｚ）−３−［６−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）キノリン−２（１Ｈ）−イリデン］−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−オン（以下、「ＹＭ−２３１１４６」ともいう。Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．２８：２０９６−２１０１，２００５．）（式（ＸＸＸＶ）参照）、
2007015569.tif 000046
（３１）２−（（２−（（４−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）アニリノ）フェノキシ）−６−メトキシ−７−キノリル）オキシ）エチル）アミノ）−１−エタノール（以下、「ＫＩ−２３０５７」ともいう。ＷＯ２００３／０３３４７２）（式（ＸＸＸＶＩ）参照）、
2007015569.tif 000047
などを挙げることができる。
上記ＺＤ４１９０、ＺＤ６４７４、ＳＵ５４１６、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、ＣＥＰ−７０５５、ＣＰ−５４７，６３２、ＫＲＮ６３３、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、ＫＲＮ９５１、ＡＺＤ２１７１、ＡＧ０１３７３６、ＳＵ１４８１３、ＯＳＩ９３０、ＴＫＩ−２８、ＡＢＰ３０９、ＢＡＹ５７−９３５２、ＢＡＹ４３−９００６、ＣＨＩＲ２５８、ＪＮＪ１７０２９２５９、ＡＥＥ−７８８、ＣＥＰ−５２１４、ＫＩ−８７５１、ＡＢＴ−８６９、ＡＧ−０２８２６２、ＢＭＳ−５４０２１５、ＢＭＳ−５８２６６４、ＡＧＮ−１９９６５９、ｐａｚｏｐａｎｉｂ、ＹＭ−２３１１４６およびＫＩ−２３０５７は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
また、本発明において、ＶＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、ＢＩＢＦ１１２０（ＷＯ０１／２７０８１）、ＺＫ３０４７０９（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４６，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ５８４２），２００５．）、Ｅｘｅ１７６４７（ＥＯＲＴＣ−ＮＣＩ−ＡＡＣＲ  Ｓｙｍｐ  Ｍｏｌ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  １３４），２００４．）、ＡＭＧ７０６（ＥＯＲＴＣ−ＮＣＩ−ＡＡＣＲ  Ｓｙｍｐ  Ｍｏｌ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．，２，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  １５１），２００４．）およびＧＷ−６５４６５２（Ｂｌｏｏｄ．，１０３，３４７４−３４７９，２００４．、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４，９，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３９），２００３．、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４，９，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ４０），２００３．）などを挙げることができる。ＢＩＢＦ１１２０、ＺＫ３０４７０９、Ｅｘｅ１７６４７、ＡＭＧ７０６およびＧＷ−６５４６５２は、公知の方法で製造することができる。
（Ｃ）抗ＶＥＧＦレセプター抗体
本発明において、ＶＥＧＦ阻害物質は、例えば、抗ＶＥＧＦレセプター抗体を挙げることができる。抗ＶＥＧＦレセプター抗体は、ＶＥＧＦレセプターまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＶＥＧＦレセプター抗体は、ＶＥＧＦレセプターを認識し結合することで、ＶＥＧＦの活性、例えば、血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＶＥＧＦレセプター抗体の作製は、後述の抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。抗ＶＥＧＦレセプター抗体は、ポリクローナル抗体でも、モノクローナル抗体であってもよい。また、当該抗体のアイソタイプは特に限定されない。また、抗ＶＥＧＦレセプター抗体は、抗体の断片または一本鎖抗体であってもよい（後述の抗ＶＥＧＦ抗体の記載を参照）。
抗ＶＥＧＦレセプター抗体は、好ましくは２Ｃ３  ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＵＳ６５２４５８３，ＵＳ６６７６９４１）、ＩＭＣ−１１２１ｂ（ＵＳ６８１１７７９）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４５，６９４，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３００５），２００４．）、ＩＭＣ−１Ｃ１１（ＵＳ５７４７６５１）、ＩＭＣ−２Ｃ６（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４，１４７９，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ６４５４），２００３．）などを挙げることができる。２Ｃ３  ａｎｔｉｂｏｄｙ、ＩＭＣ−１１２１ｂ、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭＣ−１Ｃ１１、ＩＭＣ−２Ｃ６は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
（Ｄ）その他のＶＥＧＦ阻害物質
本発明において、ＶＥＧＦ阻害物質は、例えば、ＰＩ８８、ＡＶＥ−０００５（Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，（Ａｂｓｔｒａｃｔ  ７７６），２００３．）、ＥＧ−３３０６（Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．，３０２，７９３−７９９，２００３．）、ＲＰＩ−４６１０（Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）、ＵＳ５１８０８１８、ＵＳ６３４６３９８）、２−（８−ハイドロキシ−６−メトキシ−１−オキソ−１Ｈ−２−ベンゾピラン−３−イル）プロピオニック  アシッド（以下、「ＮＭ−３」ともいう。ＷＯ９７／４８６９３）、５−［Ｎ−メチル−Ｎ−（４−オクタデシルオキシフェニル）アセチル］アミノ−２−メチルチオベンゾイック  アシッド（以下、「ＶＧＡ−１１５５」ともいう。Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，２４，３００９−３０１７，２００４．）（式（ＬＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000048
ＶＥＧＦ  ｔｒａｐ（Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ＆  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．８６（７），３３７７−３３８６，２００１．）、ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ  ｓｏｄｉｕｍ（Ｍａｃｕｇｅｎ（登録商標））などを挙げることができる。ＰＩ８８、ＡＶＥ−０００５、ＥＧ−３３０６、ＲＰＩ−４６１０、ＮＭ−３、ＶＧＡ−１１５５およびＶＥＧＦ  ｔｒａｐは、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。また、ｐｅｇａｐｔａｎｉｂ  ｓｏｄｉｕｍは、ファイザー社からＭａｃｕｇｅｎを購入することによって、入手することができる。
（Ｅ）ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、ＦＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、
（１）１−［２−アミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）−ピリド（２，３−ｄ）ピリミジン−７−イル］−３−ｔｅｒｔ−ブチルウレア（以下、「ＰＤ１６６８６６」ともいう。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４０，２２９６−２３０３，１９９７）（式（ＸＸＸＶＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000049
（２）１−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［２−（４−ジエチルアミノ）ブチルアミノ−６−（３，５−ジメトキシフェニル）−ピリド（２，３−ｄ）ピリミジン−７−イル］ウレア（以下、「ＰＤ１７３０７４」ともいう。ＥＭＢＯ  Ｊ．，１７，５８９６−５９０４，１９９８、ＵＳ５７３３９１３）（式（ＸＸＸＶＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000050
（３）（Ｓ）−（（Ｒ）−１−（４−（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イルオキシ）−５−メチルピロロ［１，２−ｆ］［１，２，４］トリアジン−６−イルオキシ）プロパン−２−オール）２−アミノプロパノエート（ＢＭＳ−５８２６６４）（式（ＸＸＸＩＩ）参照）、
（４）４−［４−［Ｎ−（４−ニトロフェニル）カルバモイル］−１−ピペラジニル］−６，７−ジメトキシキナゾリン（以下、「ＣＴ−０５２９２３」ともいう。ＷＯ９８／１４４３７）（式（ＸＸＸＩＸ）参照）、
2007015569.tif 000051
（５）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（ＣＨＩＲ２５８）（式（ＸＸＩＩＩ）参照）、
（６）２−（（２−（（４−（４−（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）アニリノ）フェノキシ）−６−メトキシ−７−キノリル）オキシ）エチル）アミノ）−１−エタノール（ＫＩ−２３０５７）（式（ＸＸＸＶＩ）参照）、
（７）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド（ＳＵ６６６８）（式（ＶＩＩＩ）参照）などを挙げることができる。
ＰＤ１６６８６６、ＰＤ１７３０７４、ＢＭＳ−５８２６６４、ＣＴ−０５２９２３、ＣＨＩＲ２５８、ＫＩ−２３０５７およびＳＵ６６６８は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
（Ｆ）抗ＦＧＦレセプター抗体
本発明において、ＦＧＦ阻害物質は、例えば、抗ＦＧＦレセプター抗体を挙げることができる。抗ＦＧＦレセプター抗体は、ＦＧＦレセプターまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＦＧＦレセプター抗体は、ＦＧＦレセプターを認識し結合することで、ＦＧＦの活性、例えば、血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＦＧＦレセプター抗体の作製は、後述の抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。抗ＦＧＦレセプター抗体は、ポリクローナル抗体でも、モノクローナル抗体であってもよい。また、当該抗体のアイソタイプは特に限定されない。また、抗ＦＧＦレセプター抗体は、抗体の断片または一本鎖抗体であってもよい（後述の抗ＶＥＧＦ抗体の記載を参照）。
（Ｇ）ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、ＰＤＧＦ阻害物質は、例えば、ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質を挙げることができる。ＰＤＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、
（１）４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−［４−（３−ピリジル）ピリミジン−２−イルアミノ］フェニル］ベンゼンアミド（以下、「イマチニブ」ともいう。）（式（ＸＬ）参照）、
2007015569.tif 000052
（２）６−［２−（メチルカルバモイル）フェニルスルファニル］−３−Ｅ−［２−（ピリジン−２−イル）エテニル］インダゾール（ＡＧ０１３７３６）（式（ＸＶＩ）参照）、
（３）１−｛２−［５−（２−メトキシ−エトキシ）−ベンゾイミダゾール−１−イル］−キノリン−８−イル｝−ピペリジン−４−イルアミン（以下、「ＣＰ−６７３４５１」ともいう。ＷＯ２００１／０４０２１７、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６５，９５７−９６６，２００５．）（式（ＸＬＩ）参照）、
2007015569.tif 000053
（４）４−［４−［Ｎ−（４−ニトロフェニル）カルバモイル］−１−ピペラジニル］−６，７−ジメトキシキナゾリン（ＣＴ−０５２９２３）（式（ＸＸＸＩＸ）参照）、
（５）４−アミノ−５−フルオロ−３−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−キノリン−２−オン（ＣＨＩＲ２５８）（式（ＸＸＩＩＩ）参照）、
（６）（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）｛４−［（６，７−ジメトキシ−４−キノリル）オキシ］フェニル｝メタンオン（以下、「ＫＩ−６８９６」ともいう。Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ．，７，２９３５−２９４０，１９９７．）（式（ＸＬＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000054
（７）５−メチル−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−４−イソキサゾールカルボキサミド（以下、「ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ」ともいう。）（式（ＸＬＩＶ）参照）、
2007015569.tif 000055
（８）ｔｒａｎｓ−４−［（６，７−ジメトキシキノキサリン−２−イル）アミノ］シクロヘキサノール（以下、「ＲＰＲ−１２７９６３Ｅ」ともいう。）（式（ＸＬＶ）参照）、
2007015569.tif 000056
（９）（Ｚ）−３−［（２，４−ジメチル−５−（２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−１Ｈ−ピロール−３−イル）−プロピオニック  アシッド（ＳＵ６６６８）（式（ＶＩＩＩ）参照）、
（１０）５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド（ＳＵ１１２４８）（式（ＩＸ）参照）、
（１１）１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジン（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４）（式（ＸＩＩＩ）参照）、
（１２）Ｎ−［４−（３−アミノ−１Ｈ−インダゾール−４−イル）フェニル］−Ｎ’−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレア（ＡＢＴ−８６９）（式（ＸＸＩＸ）参照）などを挙げることができる。
イマチニブ、ＡＧ０１３７３６、ＣＰ−６７３４５１、ＣＴ−０５２９２３、ＣＨＩＲ２５８、ＫＩ−６８９６、ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ、ＲＰＲ−１２７９６３Ｅ、ＳＵ６６６８、ＳＵ１１２４８、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４およびＡＢＴ−８６９は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
また、イマチニブは、ノバルティス社からグリベック（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
（Ｈ）抗ＰＤＧＦレセプター抗体
本発明において、ＰＤＧＦ阻害物質は、例えば、抗ＰＤＧＦレセプター抗体を挙げることができる。抗ＰＤＧＦレセプター抗体は、ＰＤＧＦレセプターまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＰＤＧＦレセプター抗体は、ＰＤＧＦレセプターを認識し結合することで、ＰＤＧＦの活性、例えば、血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＰＤＧＦレセプター抗体の作製は、後述の抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。抗ＰＤＧＦレセプター抗体は、ポリクローナル抗体でも、モノクローナル抗体であってもよい。また、当該抗体のアイソタイプは特に限定されない。また、抗ＰＤＧＦレセプター抗体は、抗体の断片または一本鎖抗体であってもよい（後述の抗ＶＥＧＦ抗体の記載を参照）。
（Ｉ）ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質
本発明において、ＥＧＦ阻害物質は、例えば、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質を挙げることができる。ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、ゲフィチニブおよびその誘導体を挙げることができる。ゲフィチニブとは、４−（３−クロロ−４−フルオロフェニルアミノ）−７−メトキシ−６−（３−（４−モルホリノ）プロポキシ−キナゾリン）をいい、その構造式を以下の式（ＸＬＶＩ）に示す。
2007015569.tif 000057
また、ゲフィチニブの誘導体とは、国際公開第９６／３３９８０号パンフレット（ＷＯ９６／３３９８０）に記載されている化合物を挙げることができる。
ゲフィチニブおよびその誘導体は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第９６／３３９８０号パンフレット（ＷＯ９６／３３９８０）、特許第３０４０４８６号（ＪＰ３０４０４８６）および米国特許第５７７０５９９号明細書（ＵＳ５７７０５９９）のいずれかに記載された方法によって製造することができる。
また、ゲフィチニブは、アストラゼネカ社からＩｒｅｓｓａ（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
本発明において、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、エルロチニブおよびその誘導体を挙げることができる。エルロチニブとは、４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−キナゾリンをいい、その構造式を以下の式（ＸＬＶＩＩ）に示す。
2007015569.tif 000058
また、エルロチニブの誘導体とは、国際公開第９６／３０３４７号パンフレット（ＷＯ９６／３０３４７）に記載されている化合物を挙げることができる。
エルロチニブおよびその誘導体は、公知の方法で製造でき、例えば、国際公開第９６／３０３４７号パンフレット（ＷＯ９６／３０３４７）、特許第３０８８０１８号（ＪＰ３０８８０１８）および特許３４２０５４９号（ＪＰ３４２０５４９）のいずれかに記載された方法によって製造することができる。
また、エルロチニブは、ジェネンテック社（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）からＴａｒｃｅｖａ（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
また、本発明において、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、
（１）Ｎ−［３−クロロ−４−［（３−フルオロベンジル）オキシ］フェニル］−６−［５−［［［２−（メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］フラン−２−イル］キナゾリン−４−アミン
（Ｎ−［３−ｃｈｌｏｒｏ−４−［（３−ｆｌｕｏｒｏｂｅｎｚｙｌ）ｏｘｙ］ｐｈｅｎｙｌ］−６−［５−［［［２−（ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｅｔｈｙｌ］ａｍｉｎｏ］ｍｅｔｈｙｌ］ｆｕｒａｎ−２−ｙｌ］ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ−４−ａｍｉｎｅ）（以下、「ｌａｐａｔｉｎｉｂ」ともいう。国際公開第９９／３５１４６号パンフレット（ＷＯ９９／３５１４６）、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６４，６６５２−６６５９．２００４．）（式（ＸＬＶＩＩＩ）参照）、
2007015569.tif 000059
（２）Ｎ−［４−［Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３−（４−モルホリニル）プロポキシ］キナゾリン−６−イル］アクリルアミド
（Ｎ−［４−［Ｎ−（３−ｃｈｌｏｒｏ−４−ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ａｍｉｎｏ］−７−［３−（４−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｙｌ）ｐｒｏｐｏｘｙ］ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎ−６−ｙｌ］ａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）（以下、「ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ」ともいう。Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，１０：６９１−７００，２００４．、ＷＯ２０００／３１０４８）（式（ＸＬＩＸ）参照）、
2007015569.tif 000060
（３）（２Ｅ）−Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド
（（２Ｅ）−Ｎ−［４−［（３−ｃｈｌｏｒｏ−４−ｆｌｕｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ａｍｉｎｏ］−３−ｃｙａｎｏ−７−ｅｔｈｏｘｙ−６−ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ］−４−（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）−２−ｂｕｔｅｎａｍｉｄｅ）（以下、「ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ」ともいう。ＷＯ２００３／５００９０）（式（Ｌ）参照）
2007015569.tif 000061
（４）［６−［４−［（４−エチルピペラジン−１−イル）メチル］フェニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル］−（（Ｒ）−１−フェニルエチル）アミン（ＡＥＥ−７８８）（式（ＸＸＶ）参照）、
（５）（Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド
（（Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−ｃｈｌｏｒｏ−４−（２−ｐｙｒｉｄｉｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）ａｎｉｌｉｎｏ］−３−ｃｙａｎｏ−７−ｅｔｈｏｘｙ−６−ｑｕｉｎｏｌｉｎｙｌ｝−４−（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）−２−ｂｕｔｅｎａｍｉｄｅ）（以下、「ＨＫＩ−２７２」ともいうＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ．，６４，３９５８−３９６５，２００４．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．，４８，１１０７−１１３１，２００５．）（式（ＬＩ）参照）、
2007015569.tif 000062
などを挙げることができる。
本発明において、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、４−（３−エチニルフェニルアミノ）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−キナゾリン（エルロチニブ：上記式（ＸＬＶＩＩ））であることが好ましい。
ｌａｐａｔｉｎｉｂ、ｃａｎｅｒｔｉｎｉｂ、ｐｅｌｉｔｉｎｉｂ、ＡＥＥ−７８８およびＨＫＩ−２７２は、公知の方法で製造することができ、例えば、それぞれの文献に記載された方法で製造することができる。
また、本発明において、ＥＧＦレセプターキナーゼ阻害物質は、例えば、ＡＲＲＹ−３３４５４３（Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａ３３９９，２００５．）、ＭＰ−４１２（Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａ３３９４，２００５．、Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａ３４０５，２００５．）などを挙げることができる。ＡＲＲＹ−３３４５４３、ＭＰ−４１２は、公知の方法で製造することができる。
（Ｊ）抗ＥＧＦレセプター抗体
本発明において、ＥＧＦ阻害物質は、例えば、抗ＥＧＦレセプター抗体を挙げることができる。抗ＥＧＦレセプター抗体は、ＥＧＦレセプターまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＥＧＦレセプター抗体は、ＥＧＦレセプターを認識し結合することで、ＥＧＦの活性、例えば、血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＥＧＦレセプター抗体の作製は、後述の抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。抗ＥＧＦレセプター抗体は、ポリクローナル抗体でも、モノクローナル抗体であってもよい。また、当該抗体のアイソタイプは特に限定されない。また、抗ＥＧＦレセプター抗体は、抗体の断片または一本鎖抗体であってもよい（後述の抗ＶＥＧＦ抗体の記載を参照）。
本発明において、抗ＥＧＦレセプター抗体は、好ましくはセツキシマブ（ｃｅｔｕｘｉｍａｂ）を挙げることができる。
セツキシマブは、特開２００２−１１４７１０号公報（ＪＰ２００４−１１４７１０）または特開平２−２９１２９５号公報（ＪＰ２−２９１２９５）に記載の方法により入手することができる。
また、セツキシマブは、Ｍｅｒｃｋ社からＥｒｂｉｔｕｘ（登録商標）を購入することによって、入手することができる。
また、本発明において、抗ＥＧＦレセプター抗体は、ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂを挙げることができる。ｎｉｍｏｔｕｚｕｍａｂは、欧州特許第２０３１２６号明細書（ＥＰ２０３１２６）または米国特許第５８９１９９６号明細書（ＵＳ５８９１９９６）に記載の方法により入手することができる。
また、本発明において、抗ＥＧＦレセプター抗体は、ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ（ＣＡＳ３３９１７７−２６−３、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ．２００５；５（１）：２１−３．）、ｍａｔｕｚｕｍａｂ（ＣＡＳ３３９１８６−６８−４、Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ．２００４；６（１）：９６−１０３．）、ＩＭＣ−１１Ｆ８（Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ａ５３５３，２００５．）、ＭＤＸ−４４７（ＡＳＣＯ１８：４３３，１９９９）などを挙げることができる。
（Ｋ）血管新生阻害物質の塩および溶媒和物
本発明において、血管新生阻害物質は、酸または塩基と薬理学的に許容される塩を形成する場合もある。本発明における上記血管新生阻害物質は、これらの薬理学的に許容される塩をも包含する。酸との塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩およびギ酸、酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、ステアリン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸塩などを挙げることができる。また、塩基との塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、アルギニン、リジンなどの有機塩基塩、アンモニウム塩などを挙げることができる。
また、本発明において、血管新生阻害物質は、これら化合物の溶媒和物および光学異性体が存在する場合には、それらの溶媒和物および光学異性体が含まれる。溶媒和物は、例えば、水和物、非水和物などを挙げることができ、好ましくは水和物を挙げることができる。溶媒は、例えば、水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを挙げることができる。
さらに、本発明において、血管新生阻害物質は、結晶でも無結晶でもよく、また、結晶多形が存在する場合には、それらのいずれかの結晶形の単一物であっても混合物であってもよい。
また、本発明において、血管新生阻害物質は、生体内で酸化、還元、加水分解、抱合などの代謝を受ける血管新生阻害物質をも包含する。また、本発明において、血管新生阻害物質は、生体内で酸化、還元、加水分解などの代謝を受けて血管新生阻害物質を生成する化合物をも包含する。
（Ｌ）抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＦＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦ抗体、抗ＥＧＦ抗体
本発明において、抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦを認識し結合することで、ＶＥＧＦの血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。本発明において、抗ＶＥＧＦ抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦＶ）（Ｈｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ｌａ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−８３；Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ（１９９４）ｐｐ．２６９−３１５）、ヒト化抗体、多特異性抗体（ＬｅＤｏｕｓｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌ．７：５８−６２；Ｐａｕｌｕｓ（１９８５）Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｉｎｓｔ．Ｍｉｔｔ．７８：１１８−３２；Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−９；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ（１９８６）Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１０５：１７６−２６０；Ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４３：９４４−９）、ヒト抗体、およびＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｖなどの抗体断片などがあげられ、好ましくはモノクローナル抗体があげられる。さらに、抗ＶＥＧＦ抗体は、必要に応じ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等により修飾されていてもよい。その他、抗ＶＥＧＦ抗体は、β−ガラクトシダーゼ、ＭＢＰ、ＧＳＴ、ＧＦＰ等との融合タンパク質として製造されることができ、ＥＬＩＳＡ法などにおいて二次抗体を用いずに検出できるようにしてもよい。また、抗ＶＥＧＦ抗体は、ビオチン等により抗体を標識することによりアビジン、ストレプトアビジン等を用いて抗体の回収を行い得るように改変されていてもよい。
抗ＶＥＧＦ抗体は、ＶＥＧＦまたはその部分断片、もしくはそれらを発現する細胞を感作抗原として常法に従い製造することができる（「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９８７）Ｓｅｃｔｉｏｎ  １１．４−１１．１３））。この場合、ＶＥＧＦまたはその部分断片は、Ｆｃ領域、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＧＦＰ、ＡＰなどとの融合タンパク質であってもよい。
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体は、当業者に周知の方法で作製することができる（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｄ．Ｌａｎｅ，ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８８））。
ポリクローナル抗体は、例えば、抗原をマウス、ウサギ、ラットなどの哺乳動物に投与し、該哺乳動物から血液を採取し、採取した血液から抗体を分離、精製することにより得ることができる。免疫感作の方法は当業者に公知であり、例えば抗原を１回以上投与することにより行うことができる。また、抗原（ＶＥＧＦまたはその部分断片）は、適当な緩衝液、例えば、完全フロイントアジュバントまたは水酸化アルミニウム等の通常用いられるアジュバントを含有する適当な緩衝液に溶解して用いることができるが、投与経路や条件等に応じてアジュバントを使用しない場合もある。
最後の免疫感作から１〜２ケ月後に当該哺乳動物から血液を採取して、該血液を、例えば、遠心分離、硫酸アンモニウムまたはポリエチレングリコールを用いた沈澱、各種クロマトグラフィー等の常法によって分離、精製することにより、ポリクローナル抗血清として、ポリクローナル抗体を得ることができる。
モノクローナル抗体を産生する方法としては、ハイブリドーマ法を挙げることができる。ハイブリドーマ法は、まず、ポリクローナル抗体の産生と同様に哺乳動物を免疫感作する。免疫後、適当な日数を経過した後に部分採血を行い、ＥＬＩＳＡ法などの公知方法で抗体価を測定することが好ましい。
次いで、感作の終了した免疫動物から脾臓を摘出し、Ｂ細胞を得る。次いで、Ｂ細胞を常法に従いミエローマ細胞と融合させて抗体産生ハイブリドーマを作製することができる。用いられるミエローマ細胞は特に限定されず、公知のものを使用できる。細胞の融合方法は、センダイウイルス法、ポリエチレングリコール法、プロトプラスト法等、当該分野で公知の方法を任意に選択して用いることができる。得られたハイブリドーマは、常法に従い、ＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミジン含有培地）中で適当な期間培養し、ハイブリドーマの選択を行うことができる。次いで、目的とする抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングを行った後、当該ハイブリドーマのクローニングを行うことができる。
スクリーニング法としては、ＥＬＩＳＡ法やラジオイムノアッセイ法などの公知の抗体検出方法を用いることができ、また、クローニング法としては、当該分野で公知の方法を用いることができ、例えば、限界希釈法およびＦＡＣＳ法等を用いることができる。得られたハイブリドーマは、適当な培養液中で培養するか、あるいはハイブリドーマと適合性のある、例えばマウス腹腔内に投与することができる。こうして得られる培養液中または腹水中から、塩析、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、アフィニティークロマトグラフィー等により、所望のモノクローナル抗体を単離精製することができる。
本発明において、抗ＶＥＧＦ抗体は、好ましくはベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）を挙げることができる。ベバシズマブは、ヒト抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体であり、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社からＡｖａｓｔｉｎ（登録商標）として販売されているものである。
ベバシズマブは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社からＡｖａｓｔｉｎを購入することによって、入手することができる。
本発明において、抗ＦＧＦ抗体は、ＦＧＦまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＦＧＦ抗体は、ＦＧＦを認識し結合することで、ＦＧＦの血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＦＧＦ抗体の作製は、前記抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
本発明において、抗ＰＤＧＦ抗体は、ＰＤＧＦまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＰＤＧＦ抗体は、ＰＤＧＦを認識し結合することで、ＰＤＧＦの血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＰＤＧＦ抗体の作製は、前記抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
本発明において、抗ＥＧＦ抗体は、ＥＧＦまたはその部分断片と親和性を有する抗体である。抗ＥＧＦ抗体は、ＥＧＦを認識し結合することで、ＥＧＦの血管内皮細胞増殖活性を阻害する中和抗体であることが好ましい。抗ＥＧＦ抗体の作製は、前記抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。
４．キット
本発明は、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法において使用するための、抗α−ＳＭＡ抗体、抗デスミン抗体、抗コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４抗体、抗カルポニン抗体、抗カルデスモン抗体および抗ＰＤＧＦレセプター抗体からなる群から選択される少なくとも一つを含む、キットを提供する。抗体は、好ましくは抗α−ＳＭＡ抗体である。抗体は、前記抗ＶＥＧＦ抗体の製造方法と同様にして作製することができる。キットに含まれる抗体は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の測定に用いることができる。本発明のキットは、上記抗体に加えて、一般の測定において慣用的な成分を含んでいてもよい。
また、本発明は、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法において使用するための、α−ＳＭＡ遺伝子、デスミン遺伝子、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４遺伝子、カルポニン遺伝子、カルデスモン遺伝子およびＰＤＧＦレセプター遺伝子からなる群から選択される少なくとも一つの遺伝子の転写産物であるＲＮＡの少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドを含む、キットを提供する。遺伝子は、好ましくはデスミン遺伝子である。当該キットの構成成分となるポリヌクレオチドは、例えば、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ノーザンブロット解析、ＤＮＡマイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲ、定量的ＲＴ−ＰＣＲなどに使用されるプライマーおよび／またはプローブであり、例えば、Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて設計することができる。所望のポリヌクレオチドは、公知の方法により作製することができる。キットに含まれるポリヌクレオチドは、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数の測定に用いることができる。本発明のキットは、上記ポリヌクレオチドに加えて、一般の測定において慣用的な成分を含んでいてもよい。
上記遺伝子の塩基配列は、各種データベースに登録されており、例えば、以下のＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号により塩基配列情報を入手することができる。
α−ＳＭＡ遺伝子：ＮＭ＿００１６１３
デスミン遺伝子：ＮＭ＿００１９２７
コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４遺伝子：ＮＭ＿００１８９７
カルポニン遺伝子：ＮＭ＿００１２９９
カルデスモン遺伝子：ＮＭ＿０３３１３８
ＰＤＧＦレセプター遺伝子：ＮＭ＿００２６０９
ＲＮＡの少なくとも一部とは、塩基配列として少なくとも１５塩基、好ましくは１５〜５０塩基、より好ましくは２０〜３５塩基、さらに好ましくは２０〜３０塩基の配列を有するものであり、配列の長さは当業者が適宜設定することができる。
さらに、本発明のキットは、血管内皮細胞に特異的に発現するタンパク質に対する抗体および／または血管内皮細胞に特異的に発現する遺伝子の転写産物であるＲＮＡの少なくとも一部に相補的なポリヌクレオチドを含んでいてもよい。これらの抗体およびポリヌクレオチドは、腫瘍中の血管数（周皮細胞で覆われた血管数および周皮細胞で覆われていない血管数の合計）の測定に用いることができる。血管内細胞に特異的に発現するタンパク質および／または遺伝子は、例えば、ＣＤ３１、ｗＶＦ、ＣＤ３４、ＣＤ１０５、ＣＸＣＲ４、ＣＤ１４６、ＣＤ１３３、ＫＤＲ（ＶＥＧＦ２型受容体）およびＫＩＴなどがあげられる。
以下に、具体的な例をもって本発明を示すが、本発明はこれに限られるものではない。
【実施例１】
【０００６】
ヒト癌細胞株皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における血管新生阻害物質の抗腫瘍効果
ヒト癌細胞株Ａ３７５（大日本製薬より購入）、ＳＥＫＩ、ＨＭＶ−１（以上、独立法人医薬基盤研究所  ＪＣＲＢ  ｃｅｌｌ  ｂａｎｋ  より購入）、ＦＥＭ（Ｔｈｅ  Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ  Ｒａｄｉｕｍｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．Ｄｒ．Ｆｏｄｓｔａｄより譲渡）、ＬＯＸ（ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒより購入）、ＡＺ−５２１（財団法人ヒューマンサイエンス振興財団より購入）、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６、ＳＷ６２０、ＰＣ−３、ＤＵ１４５、ＡｓＰＣ−１、Ｈ５２６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＳＫ−Ｍｅｌ−２、Ｌｏｖｏ、Ａ４３１（以上、ＡＴＣＣより購入）を５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養した。培養後、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、各細胞を回収した。各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬまたは５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ３になった時点から、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（１００ｍｇ／ｋｇ、１日２回、１週間、経口投与）の投与を開始した。なお、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（メタンスルホン酸塩）は、国際公開第０２／３２８７２号パンフレット（ＷＯ０２／３２８７２）および国際公開第２００５／０６３７１３号パンフレット（ＷＯ２００５／０６３７１３）の記載に基づいて製造した。腫瘍長径および短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積およびΔＴ／Ｃを算出した。
腫瘍体積（ＴＶ）＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
ΔＴ／Ｃ＝（化合物投与群のｄａｙ８の腫瘍体積−化合物投与群のｄａｙ１の腫瘍体積）
／（対照群のｄａｙ８の腫瘍体積−対照群のｄａｙ１の腫瘍体積）×１００
式中、ｄａｙ１は、投与開始日を示し、ｄａｙ８は、投与開始日から８日目を示す。
４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果の強さにより、各癌細胞株をそれぞれ縮小株、休止株、増殖株に分類した。なお、分類は、ΔＴ／Ｃ＜−３０％の癌細胞株を縮小株、−３０％＜ΔＴ／Ｃ＜１０％の癌細胞株を休止株、１０％＜ΔＴ／Ｃの癌細胞株を増殖株とした。
【実施例２】
【０００７】
ヒト癌細胞株皮下移植モデルの腫瘍組織切片の作製および染色方法ならびに血管新生阻害物質の抗腫瘍効果と血管数に対する周皮細胞で覆われた血管数の比率との相関
ヒト癌細胞株Ａ３７５（大日本製薬より購入）、ＳＥＫＩ、ＨＭＶ−１（以上、独立法人医薬基盤研究所  ＪＣＲＢ  ｃｅｌｌ  ｂａｎｋ  より購入）、ＦＥＭ（Ｔｈｅ  Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ  Ｒａｄｉｕｍｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．Ｄｒ．Ｆｏｄｓｔａｄより譲渡）、ＬＯＸ（ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒより購入）、ＡＺ−５２１（財団法人ヒューマンサイエンス振興財団より購入）、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６、ＳＷ６２０、ＰＣ−３、ＤＵ１４５、ＡｓＰＣ−１、Ｈ５２６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＳＫ−Ｍｅｌ−２、Ｌｏｖｏ、Ａ４３１（以上、ＡＴＣＣより購入）を５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養した。培養後、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、各細胞を回収した。各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬまたは５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ３になった時点で、マウスをＣＯ２にて致死せしめ、移植ヒト腫瘍を外科手術により摘出した。腫瘍組織の周辺部より約５ｍｍ内側をナイフで切断し、当該腫瘍組織をＯＣＴコンパウンドで包埋した。その後、ドライアイスで凍結し、−８０℃にて凍結組織を作製した。当該腫瘍組織について、厚さ８μｍの切片を作製し、スライドガラスに貼り付けた後、流水洗浄を行い、冷アセトン中に４℃で１０分間静置した。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０含有０．０１Ｍリン酸緩衝液（以下、洗浄用ＰＢＳ）で３回洗浄を行い、ＤＡＫＯビオチンブロッキングキットのアビジンブロッキング溶液にて室温で１０分間反応させた。洗浄用ＰＢＳで３回洗浄後、ＤＡＫＯビオチンブロッキングキットのビオチンブロッキング溶液にて室温で１０分間反応させた。さらに同様に洗浄後、ＶＥＣＴＯＲ  ＳＴＡＩＮ  ＡＢＣペルオキシダーゼ  ラットＩｇＧキット内の正常血清にて室温で２０分間反応させた。溶液を除去後、１％ウシ胎児血清含有０．１Ｍリン酸緩衝液にて６００倍希釈した１次抗体である抗ＣＤ３１抗体（クローン名：ＭＥＣ１３．３、ラットＩｇＧ、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を４℃で一晩反応させた。洗浄後、ＶＥＣＴＯＲ  ＳＴＡＩＮ  ＡＢＣペルオキシダーゼ  ラットＩｇＧキット内のビオチン標識した２次抗体を室温で３０分間反応させ、同様に洗浄を行った後、ＶＥＣＴＯＲ  ＳＴＡＩＮ  ＡＢＣペルオキシダーゼ  ラットＩｇＧキット内のアビジン試薬（試薬ＡとＢの混合液）でさらに室温で３０分間反応させた。０．０１Ｍリン酸緩衝液にて３回洗浄後、ＤＡＢにて発色させ、ＣＤ３１の染色を行った。
次に、サンプルを流水にて水洗後、トリスバッファーにてさらに３回洗浄を行った。トリスバッファーにて１００倍希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗α−ＳＭＡ抗体（クローン名：１Ａ４、マウスＩｇＧ、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ）を室温、１時間反応させた。トリスバッファーにて３回洗浄後、ＤＡＫＯ  ＬＳＡＢキット内のフクシン溶液（溶液３および４をそれぞれ２滴ずつ混合した後、１分間撹拌後、溶液５で２ｍＬにボリュームアップした溶液）にて発色させ、α−ＳＭＡの染色を行った。
染色サンプルを顕微鏡観察下、ＣＣＤカメラＨＹＰＥＲ  ＳＣＯＰＥ（ＫＥＹＥＮＣＥ）にて血管数およびペリサイトで覆われた血管数を１サンプルあたり大よそ５ヶ所測定し、その平均を単位面積辺りの血管数またはペリサイトで覆われた血管数として換算した。また、その血管全体に占めるペリサイトで覆われた血管の割合をそれぞれの癌細胞株で算出し、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果との比較を行った。Ｄｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定にて統計解析を行った。
これらの結果から、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドの抗腫瘍効果は、腫瘍組織中における周皮細胞で覆われた血管数と関連することが明らかになった（表１および図１）。よって、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測することが可能となった。そのため、本発明に係る方法は、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【表１】
2007015569.tif 000063
表１は、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミドのヒト癌細胞株移植マウスモデルにおける抗腫瘍効果、分類および周皮細胞で覆われた血管の割合（％）を示す。
【実施例３】
【０００８】
ヒト癌細胞株皮下移植モデル（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における血管新生阻害物質の抗腫瘍効果
ヒト癌細胞株ＡｓＰＣ−１、Ｈ５２６（いずれもＡＴＣＣより購入）を５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養した。培養後、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、各細胞を回収した。各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、腫瘍体積が約５０−２００ｍｍ３になった時点から、５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド（１００ｍｇ／ｋｇ、１日１回、１週間、経口投与）の投与を開始した。なお、５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミドは、国際公開第０１／０６０８１４号パンフレット（ＷＯ０１／０６０８１４）の記載に基づいて製造した。腫瘍長径および短径をデジマチックキャリパ（Ｍｉｔｓｕｔｏｙｏ）で測定し、以下の式で腫瘍体積、比腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ＴＶ）＝腫瘍長径（ｍｍ）×腫瘍短径２（ｍｍ２）／２
比腫瘍体積（ＲＴＶ）＝測定日の腫瘍体積／投与開始日の腫瘍体積
その結果、（５−（５−フルオロ−２−オキソ−１，２−ジヒドロインドール−３−イリデンメチル）−２，４−ジメチル−１Ｈ−ピロール−３−カルボキシリック  アシッド（２−ジエチルアミノエチル）アミド）（化合物２）投与群では、４−（３−クロロ−４−（シクロプロピルアミノカルボニル）アミノフェノキシ）−７−メトキシ−６−キノリンカルボキサミド（化合物１）投与群と同様に、腫瘍の増殖が、実施例１で休止株に分類されたＡｓＰＣ−１では休止し、また、増殖株に分類されたＨ５２６では遅延した（図２）。すなわち、化合物２では、化合物１と同様の抗腫瘍効果の程度を示すことが示された。したがって、化合物１のみならず他の血管新生阻害物質においても周皮細胞で覆われた血管数を指標として、抗腫瘍効果を予測できることが明らかとなった（図２）。よって、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測することが可能となった。そのため、本発明に係る方法は、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【実施例４】
【０００９】
ヒト癌細胞株皮下移植モデルにおける血管新生阻害物質の抗腫瘍効果と周皮細胞で覆われた血管数の比率との関連（定量的ＲＴ−ＰＣＲ）
１．ヒト癌細胞株皮下移植モデルにおける腫瘍組織中の全ＲＮＡの精製
ヒト癌細胞株ＭＤＡ−ＭＢ−４６８、ＤＬＤ−１、ＨＣＴ１１６、ＳＷ６２０、ＰＣ−３、ＤＵ１４５、ＡｓＰＣ−１、Ｈ５２６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５、ＳＫ−ＯＶ−３、Ｌｏｖｏ、７８６０、２２Ｒｖ（以上、ＡＴＣＣより購入）、ＨＭＶ−１（独立法人医薬基盤研究所ＪＣＲＢ  ｃｅｌｌ  ｂａｎｋより購入）、Ｃｏｌｏ３２０ＤＭ、Ａ５４９、Ａ３７５（大日本製薬より購入）、ＦＥＭ（Ｔｈｅ  Ｎｏｒｗｅｇｉａｎ  Ｒａｄｉｕｍｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ．Ｄｒ．Ｆｏｄｓｔａｄより譲渡）、ＬＯＸ（ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒより購入）を５％炭酸ガスインキュベーター内においてＲＰＭＩ１６４０（１０％ＦＢＳ含）で約８０％コンフルレントとなるまで培養した。培養後、常法に従いトリプシン−ＥＤＴＡにより、各細胞を回収した。各細胞をリン酸緩衝液で懸濁し、１×１０８ｃｅｌｌｓ／ｍＬまたは５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬ懸濁液を調製した。そして、細胞懸濁液を０．１ｍＬずつヌードマウス体側皮下に移植した。移植後、腫瘍体積が約１００−２００ｍｍ３になった時点で、マウスをＣＯ２にて致死せしめ、移植ヒト腫瘍を外科手術により摘出した。腫瘍組織を２つに分け、重量を測定し、一方の腫瘍について、腫瘍重量５０ｍｇに対してＴＲＩＺＯＬ試薬（インビトロジェン社製）１ｍＬを添加し、腫瘍組織をホモジナイズし、−２０℃にて保存した。
次に、ＴＲＩＺＯＬ試薬１ｍＬに対して０．２ｍＬの割合でクロロホルム（純正化学社より購入）を添加した。この溶液を１５秒間激しく振盪、攪拌し、室温で２〜３分間放置後遠心を行った（１２，０００×ｇ、１０分間、４℃）。遠心後水層を新しいチューブに移し、使用したＴＲＩＺＯＬ試薬１ｍＬに対して０．２ｍＬの割合でイソプロピルアルコール（和光純薬社より購入）を加え、室温で１０分間放置後遠心を行った（１２，０００×ｇ、１０分間、４℃）。得られた沈殿を７５％エタノール（和光純薬社より購入）にて洗浄した後風乾した。このようにして得られた全ＲＮＡを以降の測定に供した。
２．ＲＮＡの定量
定量的ＲＴ−ＰＣＲは、遺伝子特異的プローブ（ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＡＳＳＡＹＳ−ＯＮ−ＤＥＭＡＮＤ）、アプライドバイオシステムズ社より購入）およびＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  ７９００  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社より購入）を用いて、以下のように行った。
操作は、逆転写反応およびＰＣＲ反応の２段階で行った。最初の段階である逆転写反応は、得られた１００ｎｇ／μＬのＲＮＡ  ３μＬにｄＮＴＰ  ６μＬ、ｏｌｉｇｏ  ｄ（Ｔ）１６プライマー  １．５μＬ、ＲＮａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ０．６μＬ、Ｍｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  ０．７５μＬ、２５ｍＭ  ＭｇＣｌ２  ６．６μＬ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社より購入）およびＤＥＰＣ  ｗａｔｅｒ  ６μＬを加え、２５℃にて１０分間保温後、４８℃にて３０分間加熱することにより行った。反応液を９５℃５分間加熱することにより反応を停止させ、ＰＣＲ用ｃＤＮＡ液を得た。
得られたｃＤＮＡを第２段階のＰＣＲ反応に供した。ＰＣＲ反応は、ＤＥＰＣ  ｗａｔｅｒで５倍希釈したＰＣＲ用ｃＤＮＡ液５μＬ、ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ  ６．２５μＬ、２００ｎＭ  ＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓプローブ０．６２５μＬ、Ｈ２Ｏ  ０．６２５μＬの反応系で行った。反応条件は、５０℃２分間および９５℃１０分間の反応を行い、次いで、９５℃２０秒間、５５℃２０秒間、７２℃３０秒間を４０サイクル行った。プローブおよびプライマーは、デスミン測定用にはＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＡＳＳＡＹＳ−ＯＮ−ＤＥＭＡＮＤ、Ｍｍ００８０２４５５＿ｓ１、アプライドバイオシステムズ社より購入）を用い、β−ａｃｔｉｎ測定用にはＴａｑＭａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ａｓｓａｙｓ  ｍｉｘｔｕｒｅ（ＡＳＳＡＹＳ−ＯＮ−ＤＥＭＡＮＤ、Ｍｍ００６０７９３９＿ｓ１、アプライドバイオシステムズ社より購入）を用いた。
３．データ解析方法
各遺伝子の定量解析を行なうため、検量線の作成は、ＳＫ−ＯＶ−３のｍＲＮＡサンプルを用いて行なった。各癌細胞株での遺伝子発現量は、検量線からＣｔ（ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  ｃｙｃｌｅ値の略であり、ＰＣＲ産物がある一定の濃度に達するのに必要なＰＣＲのサイクル数である）を算出した。各癌細胞株におけるデスミンの発現量をβ−ａｃｔｉｎ発現量で補正した値を各癌細胞株におけるデスミンの発現量比とし、比較解析に用いた。各細胞株の分類は、実施例１にて行ったものを用いた。なお、縮小株および休止株をまとめた群を感受性株として分類した。
感受性株と増殖株との比較をｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ  ｔｅｓｔにより行い、Ｐ＜０．０５のものを有意差ありと判断した。
その結果、デスミンは、感受性株（２．５）に比べて増殖株（５．６）において有意に発現量が多いことが明らかとなった（図３）。
以上の結果から、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、デスミンなどの周皮細胞のマーカーの発現を指標として腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することが可能となった。
【産業上の利用可能性】
【００１０】
本発明により、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果を予測する方法が提供された。
より詳細には、血管新生阻害物質の抗腫瘍効果は、腫瘍中の周皮細胞で覆われた血管数を測定し、周皮細胞で覆われた血管数を指標とすることにより予測することが可能となった。
本発明に係る方法は、患者に血管新生阻害物質を投与することなく、抗腫瘍効果を予測することが可能となるため、より抗腫瘍効果を期待できる患者を選択することができ、患者のＱＯＬに貢献することが可能となった。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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