(57)【要約】本発明に係る分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする低血糖症状抑制用組成物は、脳細胞内への糖質の取り込みを促進することにより、低血糖症状を抑制することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする低血糖症状抑制用組成物。
【請求項２】
分岐鎖アミノ酸が、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシンから選ばれる少なくとも１種以上の化合物であることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の組成物。
【請求項３】
少なくともＬ−イソロイシンを含有することを特徴とする請求の範囲第２項に記載の組成物。
【請求項４】
Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの含有割合が、モル比で換算して、１：（０〜３）：（０〜２）であることを特徴とする請求の範囲第３項に記載の組成物。
【請求項５】
糖質を更に含有することを特徴とする請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
糖質がブドウ糖であることを特徴とする請求の範囲第５項に記載の組成物。
【請求項７】
低血糖症状が、交感神経刺激症状及び／又は脳症状であることを特徴とする請求の範囲第１〜６項のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項９】
分岐鎖アミノ酸が、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシンから選ばれる少なくとも１種以上の化合物であることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１０】
少なくともＬ−イソロイシンを含有することを特徴とする請求の範囲第９項に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１１】
Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの含有割合が、モル比で換算して、１：（０〜３）：（０〜２）であることを特徴とする請求の範囲第１０項に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１２】
糖質を更に含有することを特徴とする請求の範囲第８〜１１項のいずれかに記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１３】
糖質がブドウ糖であることを特徴とする請求の範囲第１２項に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１４】
注射剤又は顆粒の形態であることを特徴とする請求の範囲第１〜７項のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
注射剤又は顆粒の形態であることを特徴とする請求の範囲第８〜１３項のいずれかに記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤。
【請求項１６】
分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を含有し、低血糖症状抑制又は脳細胞内への糖質取り込みを促進するものであることを特徴とする食品。
【請求項１７】
食品がゼリーであることを特徴とする請求の範囲第１６項に記載の食品。
【請求項１８】
分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を哺乳動物に投与することを特徴とする低血糖症状の抑制方法。
【請求項１９】
分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を哺乳動物に投与することを特徴とする脳細胞内への糖質取り込み促進方法。
【請求項２０】
低血糖症状を抑制する組成物を製造するための分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の使用。
【請求項２１】
脳細胞内への糖質取り込み促進剤を製造するための分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分岐鎖アミノ酸若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの誘導体を有効成分として含有する低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
低血糖症状とは、血中のブドウ糖値の減少に伴って脳内のブドウ糖レベルが低下し、それにより引き起こされる疲労感、全身不快感、不安感、倦怠感、神経過敏、震え、頭痛、脱力感、冷汗、動悸といった症状をいい、更に意識障害、昏睡を引き起こし、重篤な場合は死に至ることもある。【０００３】
低血糖症を引き起こす原因としては、主に以下のケースが挙げられる。
（１）糖尿病患者に血糖低下剤（インスリン等）を過剰投与した場合
（２）ある種の医薬品の副作用が惹起した場合
（３）糖分を多量に摂取する食生活を長く続けた場合
（４）過度のアルコールを摂取した場合
（５）過酷な運動を食事不足の状態で長時間続けた場合
特に（１）や（２）のケースは、薬剤により血糖が強制的に低下させられるので、症状が重篤になる可能性が高く、極めて危険である。【０００４】
従来、低血糖症状を簡易的に予防又は治療するには、ブドウ糖や砂糖、或いは炭水化物を摂取することが一般的に行われていた。しかしながら、糖質を摂ることは、糖尿病患者への治療に悪影響を及ぼしかねないし、健常者にとってもカロリーオーバーになる可能性がある。【０００５】
一方、本発明の有効成分である分岐鎖アミノ酸を含有する薬剤として、分岐鎖アミノ酸を経口摂取することによる筋肉痛、筋肉のこり又ははりの解消剤（特許文献１参照）や分岐鎖アミノ酸を経口摂取することによる運動時の瞬発的又は持久的筋力維持薬（特許文献２参照）が知られている。これらは、ロイシン、イソロイシン又はバリン等の分岐鎖アミノ酸が筋肉を主として、腎等の肝以外の組織で利用される臓器特異性を有することに着目して、筋肉痛や筋肉のこりの改善、あるいは運動時の瞬発的又は持久的筋力維持に役立つことを見いだしたものである。また、分岐鎖アミノ酸を含有することを特徴とする中枢神経系の疲労回復剤（特許文献３参照）等が知られている。これは、中枢神経系の疲労のメカニズムを解明すると共に分岐鎖アミノ酸及び血液脳関門上でのＬ−システムトランスポータの特異的阻害剤である２−ａｍｉｎｏｂｉｃｙｃｌｏ［２，２，１］ｈｅｐｔａｎｅ−２−ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄが中枢神経系の疲労を抑制でき、特にロイシン、イソロイシン又はバリン等の分岐鎖アミノ酸との併用の下ではほぼ完全とも言える抑制が可能なことを論証したものである。また、分岐鎖アミノ酸を含有した脳細胞代謝改善組成物（特許文献７参照）及び抗痴呆薬（特許文献８参照）が知られている。しかし、これらには、分岐鎖アミノ酸が低血糖症状、特に脳細胞等の細胞へのブドウ糖の取り込みを促進することについての言及はない。
また、分岐鎖アミノ酸を含有する製剤としては、服用量が少量化され、風味や喉越しが良好である分岐鎖アミノ酸のみを有効成分とする医薬用ゼリー剤（特許文献４参照）、風味や飲み心地が改善され、懸濁したときに良好な懸濁性を保持できる、分岐鎖アミノ酸、懸濁化剤及び界面活性剤を含有する医薬用ドライシロップ剤（特許文献５参照）や保存時に着色しない保存安定性の良好な分岐鎖アミノ酸を有効成分とするチュアブル剤（特許文献６参照）等が知られている。しかし、これらにも、脳細胞内への糖質の取り込みを促進する旨の記載や低血糖症状を抑制する旨の記載はない。
【特許文献１】特開２０００−２６２８９号公報
【特許文献２】特開２０００−２６２９０号公報
【特許文献３】国際公開第２００２／０３４２５７号パンフレット
【特許文献４】特開２００３−２２１３３０号公報
【特許文献５】特開２００３−２２１３２９号公報
【特許文献６】特開２００３−２２１３２７号公報
【特許文献７】特開平２−１７２９１５号公報
【特許文献８】特開平３−２７５６３１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、脳細胞内への糖質の取り込みを促進することにより、低血糖症状を抑制することができる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題に対して鋭意検討を行った結果、分岐鎖アミノ酸若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの誘導体が、脳細胞内への糖質の取り込みを促進する作用を有することにより、その結果低血糖症状を抑えることができることを見出し、本発明を完成するに至った。【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする低血糖症状抑制用組成物、
（２）分岐鎖アミノ酸が、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシンから選ばれる少なくとも１種以上の化合物であることを特徴とする前記（１）に記載の組成物、
（３）少なくともＬ−イソロイシンを含有することを特徴とする前記（２）に記載の組成物、
（４）Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの含有割合が、モル比で換算して、１：（０〜３）：（０〜２）であることを特徴とする前記（３）に記載の組成物、
（５）糖質を更に含有することを特徴とする前記（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物、
（６）糖質がブドウ糖であることを特徴とする前記（５）に記載の組成物、
（７）低血糖症状が、交感神経刺激症状及び／又は脳症状であることを特徴とする前記（１）〜（６）のいずれかに記載の低血糖症状抑制用組成物、
（８）分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（９）分岐鎖アミノ酸が、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン及びＬ−イソロイシンから選ばれる少なくとも１種以上の化合物であることを特徴とする前記（８）に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１０）少なくともＬ−イソロイシンを含有することを特徴とする前記（９）に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１１）Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン及びＬ−バリンの含有割合が、モル比で換算して、１：（０〜３）：（０〜２）であることを特徴とする前記（８）に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１２）糖質を更に含有することを特徴とする前記（８）〜（１１）のいずれかに記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１３）糖質がブドウ糖であることを特徴とする前記（１２）に記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１４）注射剤又は顆粒の形態であることを特徴とする前記（１）〜（７）のいずれかに記載の組成物、
（１５）注射剤又は顆粒の形態であることを特徴とする前記（８）〜（１３）のいずれかに記載の脳細胞内への糖質取り込み促進剤、
（１６）分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を含有し、低血糖症状抑制又は脳細胞内への糖質取り込みを促進するものであることを特徴とする食品、
（１７）食品がゼリーであることを特徴とする前記（１６）に記載の食品、
（１８）分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を哺乳動物に投与することを特徴とする低血糖症状の抑制方法、
（１９）分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を哺乳動物に投与することを特徴とする脳細胞内への糖質取り込み促進方法、
（２０）低血糖症状を抑制する組成物を製造するための分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の使用、及び
（２１）脳細胞内への糖質取り込み促進剤を製造するための分岐鎖アミノ酸、その薬理学的に許容される塩、及びそれらの誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の使用、
に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、脳細胞内への糖質の取り込みを促進することが可能となるため、脳細胞内の糖質レベルの低下を防ぐことができ、その結果低血糖に伴う症状を抑えることができる。
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、血中の血糖値をほぼ変化させることがないので、特に糖尿病患者の治療に影響を与えることなく、インスリン注射や抗糖尿病薬よって低血糖症状をきたす患者に有効に用いることができる。
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、脳細胞のエネルギー源であるブドウ糖の取り込みを促進し、前記した低血糖に起因する症状だけでなく、血糖値が正常であっても脳内の糖レベルが低下することにより引き起こされる低血糖症状と同様の症状を抑制し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、コントロール群を比較例として、Ｌ−ロイシン又はＬ−イソロイシン経口投与１時間後のラット脳細胞内への糖質の取り込み量を示す図である。図中、縦軸は２ＤＧ−６Ｐ量を、＊はコントロール群に対し有意差（ｐ＜０．０５）のあることを示す。各カラムの値は平均値（ｎ＝６）±標準誤差を示す。
【図２】図２は、コントロール群を比較例として、混合アミノ酸、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン又はＬ−バリン静脈投与２４時間後のラット脳細胞内への糖質の取り込み量を示す図である。図中、縦軸は２ＤＧ−６Ｐ量を示す。各カラムの値は平均値（ｎ＝４）±標準誤差を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下に、本発明における分岐鎖アミノ酸、分岐鎖アミノ酸の薬理学的に許容される塩、及び分岐鎖アミノ酸又はその薬理学的に許容される塩の誘導体から選ばれる少なくとも１種以上の化合物を有効成分として含有することを特徴とする低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤について、詳細に説明する。【００１２】
本発明に使用される分岐鎖アミノ酸は、一般に日本薬局方の規格を満たすものであれば特に限定されず、分岐鎖アミノ酸である限り、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、α−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、天然アミノ酸、合成アミノ酸等のあらゆるアミノ酸を含むが、好ましくは天然のＬ−アミノ酸又はα−アミノ酸である。本発明に使用される分岐鎖アミノ酸としては、特に好ましくはＬ−バリン、Ｌ−ロイシン又はＬ−イソロイシンが挙げられる。また、かかる分岐鎖アミノ酸は、プロテアーゼ等を用いて、作物や動物由来のたんぱく質を加水分解して得られるものであっても、微生物発酵法により生産されるものであってもよいし、また有機酸にアミノ基を導入することにより得られる合成アミノ酸等であってもよい。【００１３】
本発明における分岐鎖アミノ酸の薬理学的に許容される塩としては、酸又は塩基との塩であって特に限定されないが、例えばナトリウム塩又はカリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、塩酸塩等の無機酸塩又は酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられ、好ましくは塩酸塩である。具体的には、例えばＬ−バリン塩酸塩、Ｌ−ロイシン塩酸塩又はＬ−イソロイシン塩酸塩等が挙げられる。【００１４】
本発明に使用される分岐鎖アミノ酸又はその薬理学的に許容される塩の誘導体としては、特に限定されないが、例えばエステル体又はペプチド体等が挙げられる。該エステル体としては、メチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル又はイソプロピルエステル等の低級アルキルエステルであれば特に限定されない。この場合の低級アルキルとしては炭素数１〜６のアルキルが好ましい。好ましいエステル体として具体的には、例えばＬ−バリンエチルエステル、Ｌ−ロイシンエチルエステル又はＬ−イソロイシンエチルエステル等が挙げられる。また該ペプチド体としては、ジペプチド又はトリペプチド等のオリゴペプチドであれば特に限定されないが、好ましいペプチド体として具体的には、例えばＬ−イソロイシル−Ｌ−ロイシン、Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシン、Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニン、グリシル−Ｌ−ロイシン又はＬ−アラニル−Ｌ−グルタミン等が挙げられる。従って、オリゴペプチドを構成する分岐鎖アミノ酸以外のアミノ酸は、どのようなものでもよく、Ｌ−アミノ酸、Ｄ−アミノ酸、α−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、天然アミノ酸、合成アミノ酸等のあらゆるアミノ酸を含む。【００１５】
これらの分岐鎖アミノ酸若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの誘導体は、単独で又は２種以上を混合して用いることができるが、少なくともＬ−イソロイシン若しくはその塩又はその誘導体を含有させることが好ましく、特に少なくともＬ−イソロイシンを含有させることが好ましい。【００１６】
本発明の組成物における分岐鎖アミノ酸若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの誘導体は、単独又は２種以上混合して用いることができる。２種以上混合して用いるときの含有割合は、特に限定されない。具体的には、分岐鎖アミノ酸若しくはその薬理学的に許容される塩又はそれらの誘導体として、例えばＬ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン又はＬ−バリンを用いるとき、これら化合物は単独又は２種以上混合して用いてよく、該化合物の混合割合は、モル比で換算して、Ｌ−イソロイシン：Ｌ−ロイシン：Ｌ−バリン＝約１：（０〜３）：（０〜２）、より好ましくは約１：（０〜２．５）：（０〜１．５）である。なお、例えばＬ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン又はＬ−バリンの塩又はその誘導体を用いるときには、それぞれＬ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン又はＬ−バリンに換算し、上記モル比となる割合とするのが好ましい。【００１７】
本発明において低血糖症状とは、血中のグルコース（ブドウ糖）の濃度が低下するために生じる症状をいう。ブドウ糖は全ての細胞にとって最も重要なエネルギー源であり、特に脳のエネルギーはブドウ糖のみに依存し、また筋肉や他の組織の機能遂行にもブドウ糖は欠かせないので、血中のブドウ糖の濃度が低下すると、脳、及び筋肉や他の組織の機能遂行に好ましくない症状が生じる。該症状としては、特に限定されないが、例えば交感神経刺激症状又は脳症状等が挙げられる。交感神経刺激症状としては、例えば不安感、空腹、ふらつき、めまい、無気力、脱力感、だるさ、生あくび、いらだち、ふるえ、動悸、顔面蒼白、頻脈、発汗又は振戦等が挙げられ、また脳症状としては、例えば頭痛、視力障害、複視、眼のかすみ、集中力や計算力の減退、健忘、嗜眠、意識障害、痙れん、精神若しくは身体異常行動又は昏睡等が挙げられる。
ここで、低血糖としては、血糖値が約６０ｍｇ／ｄＬ以下になった状態が挙げられるが、該血糖値に限定されない。例えば、糖尿病等により血糖の高い人がインスリン注射や血糖降下剤の服用により血糖値が下がる時や、健常人でも空腹や急激な激しい運動等により急に血糖値が下がる時には、１００ｍｇ／ｄＬ程度でも低血糖症状と同じような症状が出ることがあり、このような低血糖症状と同じような症状を引き起こす症状等も本発明に包含される。【００１８】
本発明において低血糖症状抑制用組成物とは、血液中の糖量が低い状態になることによって引き起こされる症状を抑制又は改善するための組成物をいう。
本発明の低血糖症状抑制用組成物は、低血糖症に陥ったときに用いることができるのはもちろんのこと、低血糖症になっていない状態でも予防的に用いることもできる。【００１９】
本発明において脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、脳細胞内への糖質、特に脳内の唯一のエネルギー源であるブドウ糖の取り込みを促進するので、脳内でのぶどう糖の取り込みが抑制された症状、例えば前記の低血糖症状や、何らかの理由により低血糖でないにもかかわらず脳内のブドウ糖レベルが低下し、低血糖症状と同じような症状を引き起こす症状等を抑制できる。
なお、脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、脳以外の細胞、例えば筋肉細胞や神経細胞、その他の細胞への糖質の取り込みも促進すると予想されるので、前記筋肉細胞や神経細胞、その他の細胞の活性化を図ることも期待できる。【００２０】
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤には、更に糖質を含有させることが好ましい。該糖質としては、特に限定されないが、例えばリボース、デオキシリボース、ブドウ糖、果糖又はガラクトース等の単糖類、マルトース、スクロース又はラクトース等の２糖類、あるいはアミロース、アミロペクチン、グリコーゲン等の多糖類等が好ましく挙げられる。糖質の中でも単糖類がより好ましく、生体内ですぐに利用可能なエネルギー源となり得るブドウ糖が特に好ましい。
この場合において、糖質の含有割合は、特に限定されないが、例えば分岐鎖アミノ酸１モルに対して、ブドウ糖に換算して約０．１〜５０モル程度であることが好ましい。【００２１】
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、製剤学的に許容される添加物と共に医薬の形態に又は食品衛生法上認められている添加物と共に食品の形態によって提供することができる。【００２２】
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤を医薬の形態とする場合、例えば経口投与のための内服用固形剤、内服用液剤又は非経口投与のための注射剤（皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内注射等）などとして用いられる。経口投与のための内服用固形剤としては、例えば錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤又は顆粒剤等が挙げられる。【００２３】
内服用固形剤において使用し得る添加剤としては、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤又は湿潤剤が挙げられる。賦形剤としては、特に限定されないが、例えば白糖、乳糖、ブドウ糖、でんぷん又はマンニット等を挙げることができる。結合剤としては、特に限定されないが、例えばアラビアゴム、カルメロース、ゼラチン、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース又はポピドン等を挙げることができる。崩壊剤としては、特に限定されないが、例えば、カルメロース、デンプン、結晶セルロース又は低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等を挙げることができる。滑沢剤としては、特に限定されないが、例えばタルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム又はシリカ等を挙げることができる。安定剤、湿潤剤としては、特に限定されないが、例えば無水クエン酸、ラウリン酸ナトリウム又はグリセロール等を挙げることができる。これら添加剤は、単独で用いることもでき、また２種以上を併用して用いることもできる。内服用固形剤は、常法、例えば第１４改正日本薬局方製剤総則に記載の方法等に従って、例えば分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体と添加剤等が混合され、製剤化され得る。具体的には、顆粒剤は、例えば分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体に上記賦形剤、結合剤、崩壊等を加えて均等に混和した後、例えば圧縮造粒、転動造粒、噴霧乾燥造粒、押出し造粒、解砕造粒、流動層造粒又は撹拌造粒等で粒状とすることが好ましい。また、錠剤は、例えば分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体に上記賦形剤、結合剤、崩壊等を加えて均等に混和したものを、直接圧縮成型して製造するか、又は分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体と賦形剤、結合剤、崩壊等で予め製した顆粒をそのまま、又は上記添加剤を加えて均等に混和した後、圧縮成型して製造することができる。顆粒剤又は錠剤には、所望により適当なコーティング剤（ゼラチン、白糖、アラビアゴム、カルナバロウ等）又は腸溶性コーティング剤（例えば酢酸フタル酸セルロース、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロースフタレート、カルボキシメチルエチルセルロース等）等で剤皮を施してもよい。また、カプセル剤は、例えば分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体に上記賦形剤、結合剤、崩壊等を加えて均等に混和したもの、又は所望により粒状としたもの、あるいは粒状としたものにコーティング剤で剤皮を施したものを、カプセルに充填することにより製造できる。【００２４】
内服用固形剤における分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体の含有割合は、特に限定されないが、分岐鎖アミノ酸の合計量が、固形製剤全体に対して約１〜９０質量％であることが好ましい。【００２５】
経口投与のための内服用液剤としては、例えば水剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤又はエリキシル剤等が挙げられる。このような液剤に使用し得る添加剤としては、例えば、精製水、エタノール又はそれらの混液等の溶剤等が挙げられる。さらにこの内服用液剤には、懸濁化剤（例えば、アラビアゴム、カンテン、カルメロース、ヒドロキシプロピルセルロース等）、乳化剤（例えば、ポリソルベート８０、アラビアゴム等）、矯味剤（例えば、単シロップ、ハチミツ、白糖、酒石酸等）、芳香剤（例えば、サリチル酸メチル、ウイキョウ油、オレンジ油、メントール等）、保存剤（例えば、安息香酸、安息香酸ナトリウム等）、緩衝剤（例えば、クエン酸、炭酸水素等）などを含有していてもよい。これら添加剤は、単独で用いることもでき、また２種以上を併用して用いることもできる。【００２６】
非経口投与のための注射剤に使用し得る添加剤としては、例えば溶剤、安定剤、溶解補助剤、懸濁化剤、界面活性剤、乳化剤、無痛化剤、緩衝剤又は保存剤等が挙げられる。溶剤としては、特に限定されないが、例えば注射用蒸留水、生理食塩水、ゴマ油等の植物油、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール又はポリエチレングリコール等が挙げられる。安定剤、溶解補助剤としては、特に限定されないが、例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸、ポリソルベート８０等が挙げられる。懸濁化剤としては、特に限定されないが、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム若しくはメチルセルロース等のセルロース誘導体又はトラガント若しくはアラビアゴム等の天然ゴム類等が挙げられる。界面活性剤としては、特に限定されないが、例えばソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、水素添加ヒマシ油のポリオキシエチレンエーテル又はレシチン等が挙げられる。乳化剤としては、特に限定されないが、例えば、ステアリン酸ポリオキシル、ラウロマクロゴール、ポリソルベート８０又はアラビアゴム等が挙げられる。無痛化剤としては、特に限定されないが、例えば、アミノ安息香酸エチル、イノシトール、塩酸メプリルカイン、塩酸リドカイン、クロロブタノール、プロピレングリコール又はベンジルアルコール等が挙げられる。緩衝剤としては、特に限定されないが、例えば、クエン酸もしくはその塩、ブドウ糖、リン酸もしくはその塩又は酢酸もしくはその塩等が挙げられる。保存剤としては、特に限定されないが、例えばパラオキシ安息香酸エステル、塩化ベンザルコニウム又はソルビタン酸塩等が挙げられる。これら添加剤は、単独で用いることもでき、また２種以上を併用して用いることもできる。
注射剤は、常法に従って、例えば無菌操作法によって分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体と添加剤等を適宜溶解等して製造される。製造された注射剤は、アンプル、バイアル瓶、又はガラスもしくはポリエチレン製輸液容器（バッグを含む）等に充填され、滅菌される。ポリエチレン製輸液容器（バッグを含む）は、例えば脱酸素剤等と共にガスバリア製外装材で包装されてもよい。また注射剤は、無菌の固形剤、例えば凍結乾燥品を製造し、その使用前に無菌化又は無菌の注射用蒸留水又は他の溶剤に溶解して使用することもできる。【００２７】
分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体の含有割合は、特に限定されないが、例えば輸液製剤の場合、注射剤全体に対して分岐鎖アミノ酸の合計量として約０．１〜１０ｗ／ｖ％程度が好ましい。【００２８】
また、本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤には、さらにビタミン（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン、パントテン酸、葉酸、ビオチン、ビタミンＦ、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ビタミンＵ、コリン、イノシトール、パラアミノ安息香酸等）や分岐鎖アミノ酸以外のアミノ酸（リジン、フェニルアラニン、メチオニン、スレオニン、バリン、ヒスチジン、トリプトファン、アラニン、プロリン、アルギニン、グルタミン酸、セリン等）などの栄養素を添加することができる。【００２９】
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤を含有する上記医薬の投与量は、製剤形態、投与経路、患者の年齢、体重、疾患の程度等に応じて任意に決定でき、特に限定されるものではないが、通常成人１ｋｇ当たり、１日に約１〜１０００ｍｇ、好ましくは約１〜５００ｍｇの範囲となる量とされるのが適当であり、所望により適宜増減することができる。また、１日数回に分けて投与することもできる。【００３０】
本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤を食品形態とする場合は分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体の少なくとも１種、好ましくは少なくともＬ−イソロイシンを、食品衛生法上認められている添加物又はその他の食品に使用される各種成分と混合して飲食物に製造される。製造される食品の形態としては、特に制限はなく、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、内服用液剤、固形食品、クリーム状ないしジャム状の半流動食品、ゲル状食品、飲料等のあらゆる食品形態が可能である。食品の具体例としては、例えば清涼飲料、ジュース若しくは乳酸菌飲料等の飲料、ゼリー、キャンデー、ビスケット又はクッキー等が挙げられる。該食品の製造方法は、特に限定されず、公知の手段を用いることができる。【００３１】
錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤又は内服用液剤は、上記した医薬における錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤又は内服用液剤における添加物の代わりに食品衛生法上認められている添加物（例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、結晶セルロース、酒石酸、マンニトール、サッカリンナトリウム、ステビア、ジメチルポリシロキサン、パラオキシ安息香酸エステル等）を用いる以外は同様に製造し、使用できる。
飲料を製造する場合には、必要に応じて香料、着色料、天然果汁、果肉、チーズ若しくはチョコレート等の風味物質又は合成甘味料等の添加物を配合してもよい。該添加物は単独で、又は２種以上を組み合わせて使用することができる。【００３２】
また、クリーム状ないしジャム状の半流動食品、ゲル状食品、例えばゼリーを製造する場合には、上記飲料における成分に加えて、さらにゲル化剤として、寒天、ゼラチン、カラギナン、ジェランガム、キサンタンガム、ローカストビーンガム、ペクチン、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸カリウム又はその他通常使用される増粘多糖類等の１種または２種以上を添加することが好ましい。ゲル化剤の配合割合は、ゼリー１００質量部に対して約２質量部以下、好ましくは約０．２〜２質量部程度である。
また、食品における分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体の含有割合は、特に限定されないが、分岐鎖アミノ酸の合計量として約１〜６０質量％が好ましい。
この様にして製造される食品は、低血糖症状抑制又は脳細胞内への糖質取り込みを促進する機能性食品として使用し得る。かかる食品には、その包装等に低血糖症状抑制又は脳細胞内への糖質取り込みを促進するために用いられる旨の表示を付することが好ましい。【００３３】
上記食品は、成人（約６０ｋｇ）１日当たり、分岐鎖アミノ酸、その塩、又はそれら誘導体として約０．１〜２０ｇ程度となる量を摂取するのが好ましい。
【実施例】
【００３４】
以下に、製剤例及び試験例に基づいて、本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。【００３５】
＜製造例１＞
Ｌ−イソロイシン３００gを注射用蒸留水に溶解し、水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを６．５０に調節後、更に注射用蒸留水を加えて全量を１０Ｌに調製した。得られた溶液をメンブランフィルターで濾過し、５００ｍＬずつポリエチレン製輸液バッグに充填、密封し、１０５℃で４０分間高圧蒸気滅菌を行なった。これを、脱酸素剤（三菱ガス化学製；商品名エージレス）と共に、ポリビニルアルコール多層フィルム製のガスバリア外装体で包装して注射剤を得た。【００３６】
＜製造例２＞
Ｌ−イソロイシン１５０g及びＬ−バリン１５０gを注射用蒸留水に溶解し、水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを６．５０に調節後、更に注射用蒸留水を加えて全量を１０Ｌに調製した。得られた溶液をメンブランフィルターで濾過し、５００ｍＬずつポリエチレン製輸液バッグに充填、密封し、１０５℃で４０分間高圧蒸気滅菌を行なった。これを、脱酸素剤（三菱ガス化学製；商品名エージレス）と共に、ポリビニルアルコール多層フィルム製のガスバリア外装体で包装して注射剤を得た。【００３７】
＜製造例３＞
Ｌ−イソロイシン３００gを注射用蒸留水に溶解し、水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを６．５０に調節後、更に注射用蒸留水を加えて全量を１０Ｌに調製し、メンブランフィルターで濾過した。
一方、ブドウ糖１０００ｇを注射用蒸留水に溶解し、注射用蒸留水を加えて全量を１０Ｌに調製し、メンブランフィルターで濾過した。
これらの溶液を５００ｍＬずつ、ポリエチレン製２室輸液バッグのそれぞれの室に充填、密封し、１０５℃で４０分間高圧蒸気滅菌を行なった。これを、脱酸素剤（三菱ガス化学製；商品名エージレス）と共に、ポリビニルアルコール多層フィルム製のガスバリア外装体で包装して注射剤を得た。
なお、この注射剤は、使用時に２室のうち１室又は２室共に押圧し、２室を連結して混液を作成し、注射液として使用する。【００３８】
＜製造例４＞
Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシン１０００g、Ｌ−イソロイシン３００g及びＬ−バリン２４０gを注射用蒸留水に溶解し、水酸化ナトリウムで溶液のｐＨを６．５０に調節後、更に注射用蒸留水を加えて全量を１０Ｌに調製した。得られた溶液をメンブランフィルターで濾過し、その液１００ｍＬずつをポリエチレン製輸液バッグに充填、密封し、１０５℃で４０分間高圧蒸気滅菌を行なった。これを、脱酸素剤（三菱ガス化学製；商品名エージレス）と共に、ポリビニルアルコール多層フィルム製のガスバリア外装体で包装して注射剤を得た。【００３９】
＜製造例５＞
まず、精製水１０Ｌに、ヒドロキシプロピルメチルセルロース１２０ｇ及び結晶セルロース・カルメロースナトリウム１０ｇを加え、分散させた。次に、この分散液に酒石酸１００ｇ、マンニトール１０００ｇ、サッカリンナトリウム１０ｇ、ステビア５ｇ、ジメチルポリシロキサン４０ｇ、パラオキシ安息香酸プロピル２ｇ及びパラオキシ安息香酸メチル５ｇを加え、溶解させた。続いて、Ｌ−イソロイシン９５０ｇ、Ｌ−ロイシン１９００ｇ、Ｌ−バリン１１５０ｇを加えてホモジナイザーで懸濁させ、さらに水酸化ナトリウムでｐＨを６．５に調整後、さらにホモジナイザーで均一に懸濁させて、懸濁液を調製した。
一方、カンテン末４０ｇを精製水２Ｌ中に入れ、約８０℃に加温溶解させたものを調製し、そこに、上記懸濁液６０００ｇ、パイナップルフレーバー４０ｇを加え、混合した。得られた混合液を、１００ｇずつ容器に充填し、密封後冷蔵して、ゼリーを調製した。【００４０】
＜製造例６＞
Ｌ−イソロイシン５００ｇ、Ｌ−ロイシン１０００ｇ、バリン６００ｇ、無水クエン酸１００ｇ及びヒドロキシプロピルセルロース５０ｇを均一に混合し、蒸留水３００ｇを添加して造粒した。
造粒物を６０℃で２時間乾燥した後、２４メッシュの篩を通して顆粒を得た。得られた顆粒を４．５ｇずつアルミラミネートスティック袋に充填、密封して、最終製品とした。【００４１】
＜試験例１＞脳における分岐鎖アミノ酸（以下、ＢＣＡＡともいう）経口投与による糖取込み促進作用
（１）被験液の調製
ロイシン群：Ｌ−ロイシン３ｇを生理食塩液１００ｍＬに加え、ホモジナイザーで懸濁したＬ−ロイシン懸濁液をロイシン群の被験液とした。
イソロイシン群：Ｌ−イソロイシン３ｇを生理食塩液１００ｍＬに加え、ホモジナイザーで懸濁したＬ−イソロイシン懸濁液をイソロイシン群の被験液とした。【００４２】
（２）試験方法
雄性６週齢Ｗｉｓｔａｒ  ｒａｔ（日本チャールズ・リバー社）を、精製飼料  ＡＩＮ−９３Ｇ（日本農産工業株式会社製）の自由摂食と自由飲水下１４日間飼育した後８週齢時に体重にて３群（コントロール群、ロイシン群、イソロイシン群）に群分けした。群分け後、エーテル麻酔下にラットの頚部を切開し、頚静脈内にカテーテルを挿入した。カテーテルの他端は皮内を通し背部に露出し、ハーネスを介してシーベルに接続・固定し、ラットを個別代謝ケージに収容した。カテーテルより生理食塩液を１ｍＬ／ｈｒ／ｂｏｄｙの速度でラットに持続注入した。翌日、コントロール群ラットには１５ｍＬ／ｋｇ  ＢＷ（体重）の用量で生理食塩水を経口投与し、ロイシン群及びイソロイシン群ラットには０．４５ｇ／１５ｍＬ／ｋｇ  ＢＷの用量でそれぞれ被験液、すなわちＬ−ロイシン懸濁液及びＬ−イソロイシン懸濁液を経口投与した。被験液投与後２０分後にカテーテルより２−［１，２−３Ｈ］−Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ（２ＤＧ）を３０μＣｉ／ｋｇで約３秒間かけて静脈内投与した。静脈内投与後２、１０、２０、３０及び４０分にカテーテルより３００μＬずつ採血し、血液をヘパリン処理した後、血漿を分離した。分離した血漿を２ＤＧ量と血糖値の測定に供した。血漿２０μＬを液体シンチレーションカウンター測定用のｖｉａｌに入れ、これにシンチレーターを５ｍＬ加えて混合した後、液体シンチレーションカウンターにて血漿中のトリチウム量（カウント）を測定し、２ＤＧ量とした。また、血糖値は、グルコースオキシダーゼ色素法によって測定された。【００４３】
被験液投与１時間後、ラットにペントバルビタールナトリウムを５０ｍｇ／ｋｇ注入されるよう約３秒間かけて静脈内投与し、麻酔下にて腹部大動脈よりヘパリン採血により脱血を行った。脱血後脳組織を摘出し、該脳組織にその重量の４倍量の１Ｎ  ＮａＯＨを加え、ウォーターバスにて６０℃で１時間加熱し脳組織を溶解させた。脳組織の溶解液に前記１Ｎ  ＮａＯＨと同量の１Ｎ  ＨＣｌを加え、中和し、脳組織の中和ホモジネイトとした。
中和ホモジネイト中の２ＤＧ量：４００μＬの０．１５Ｎ  ＺｎＳＯ４溶液に中和ホモジネイトを４００μＬ加え、さらに４００μＬの０．１５Ｎ  Ｂａ（ＯＨ）２溶液を加え混合した。遠心（６０００ｒｐｍ、２０分）後、上清を分離した。分離した上清９００μＬを液体シンチレーションカウンター測定用のｖｉａｌに入れ、これにシンチレーターを５ｍＬ加えて混合した後、液体シンチレーションカウンターにてトリチウム量（カウント）を測定し、２ＤＧ量とした。
中和ホモジネイト中の２ＤＧと２ＤＧ−６Ｐ（２−［１，２−３Ｈ］−Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）の量：４００μＬの中和ホモジネイトに８００μＬの６ｗｔ％ＰＣＡ（過塩素酸）を加え混合した。遠心（６０００ｒｐｍ、２０分）後、上清を分離した。分離した上清９００μＬを液体シンチレーションカウンター測定用のｖｉａｌに入れ、これにシンチレーターを１０ｍＬ加えて混合した後、液体シンチレーションカウンターにてトリチウム量（カウント）を測定し、２ＤＧと２ＤＧ−６Ｐの量とした。
中和ホモジネイト中の２ＤＧ−６Ｐ量：２ＤＧと２ＤＧ−６Ｐの量より２ＤＧ量を差し引き、２ＤＧ−６Ｐ量を算出した。該２ＤＧ−６Ｐ量を、血中２ＤＧ量と血糖値で補正し、脳への糖質の取込み量とした。
統計処理は分散分析の後、コントロール群を対照としたＤｕｎｎｅｔｔ’ｓの多重比較の有意差検定を行い、ｐ＜０．０５を有意差有りとした。【００４４】
（３）試験結果
結果を図１に示す。
結果より、Ｌ−ロイシン懸濁液やＬ−イソロイシン懸濁液の経口投与によって、被験液投与１時間後の脳細胞への糖質の取込み量は、コントロール群の該取り込み量に比し高値を示した。特にイソロイシン群では、コントロール群に比し有意に脳細胞への糖質の取込みが促進されたことがわかった。【００４５】
＜試験例２＞脳におけるＢＣＡＡ経静脈投与による糖取込み促進作用
（１）被験液の調製
コントロール群：精製水にブドウ糖を５質量％となるように溶解した溶液をコントロール群の被験液とした。
混合アミノ酸群：精製水にブドウ糖を５質量％となるように溶解した溶液にアミパレン（登録商標；株式会社  大塚製薬工場製）を１．５質量％となるように溶解した溶液を混合アミノ酸群の被験液とした。
ロイシン群：精製水にブドウ糖を５質量％となるように溶解した溶液にＬ−ロイシンを１．５質量％となるように溶解した溶液をロイシン群の被験液とした。
イソロイシン群：精製水にブドウ糖を５質量％となるように溶解した溶液にＬ−イソロイシンを１．５質量％となるように溶解した溶液を被験液とした。
バリン群：精製水にブドウ糖を５質量％となるように溶解した溶液にＬ−バリンを１．５質量％となるように溶解した溶液をバリン群の被験液とした。
（２）試験方法
雄性７週齢ＳＤ  ｒａｔ（日本クレア）を精製飼料  ＡＩＮ−９３Ｇ（日本農産工業株式会社製）の自由摂食とで自由飲水下１４日間飼育した後、８週齢時に体重にて５群（コントロール群、混合アミノ酸群、ロイシン群、イソロイシン群、バリン群）に群分けした。群分け後、エーテル麻酔下にラットの頚部を切開し、頚静脈内にカテーテルを挿入した。カテーテルの他端は皮内を通し背部に露出し、ハーネスを介してシーベルに接続・固定し、ラットを個別代謝ケージに収容した。カテーテルよりコントロール群ラットには５質量％糖液を、混合アミノ酸群、ロイシン群、イソロイシン群及びバリン群ラットにはそれぞれ被験液を１０ｍＬ／ｋｇ／ｈｒの速度にて投与した。被験液投与２３時間後にカテーテルより２−［１，２−３Ｈ］−Ｄｅｏｘｙ  Ｇｌｕｃｏｓｅ（２ＤＧ）を３０μＣｉ／ｋｇで約３秒間かけて静脈内投与した。静脈内投与後２、１０、２０、３０、４０及び６０分にカテーテルより３００μＬずつ採血し、血液をヘパリン処理した後、血漿を分離した。分離した血漿中の２ＤＧ量と血糖値を試験例１の試験方法と同様に測定した。【００４６】
２−［１，２−３Ｈ］−Ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ投与１時間後、ラットにペントバルビタールナトリウムを５０ｍｇ／ｋｇ注入されるよう約３秒間かけて静脈内投与し、麻酔下にて腹部大動脈よりヘパリン採血により脱血を行った。脱血後脳組織を摘出し、該脳組織にその重量の４倍量の１Ｎ  ＮａＯＨを加え、ウォーターバスにて６０℃で１時間加熱し、脳組織を溶解させた。脳組織の溶解液に上記１Ｎ  ＮａＯＨと同量の１Ｎ  ＨＣｌを加え、中和し、脳組織の中和ホモジネイトとした。中和ホモジネイト中の２ＤＧ−６Ｐ量を試験例１の試験方法と同様の手法にて測定し、脳細胞への糖質の取込み量を求めた。
統計処理は分散分析の後、コントロール群を対照としたＤｕｎｎｅｔｔ’ｓの多重比較の有意差検定を行った。【００４７】
（３）試験結果
結果を図２に示す。結果より、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−バリンの投与によって、投与２４時間後の脳細胞への糖質の取込み量は、コントロール群や混合アミノ酸群に比し高値を示し、特にイソロイシン群とバリン群では、コントロール群に比し脳細胞への糖質の取込みを促進する傾向が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明によれば、脳細胞内への糖質の取り込みを促進することが可能となるため、脳細胞内の糖質レベルの低下を防ぐことができ、その結果低血糖症状を抑えることができるので、本発明は医薬又は機能性食品として有用である。また、本発明の低血糖症状抑制用組成物又は脳細胞内への糖質取り込み促進剤は、血中の糖量をほぼ変化させることなく、脳細胞内の糖量を増加させることができるため、特に糖尿病患者等のインスリン注射後の低血糖や抗糖尿病薬投与後の低血糖等に有効に用いることができる。
【図１】
2007043363.tif 000002
【図２】
2007043363.tif 000003
【国際調査報告】
2007043363.tif 000004
2007043363.tif 000005
2007043363.tif 000006
2007043363.tif 000007
2007043363.tif 000008
2007043363.tif 000009